СПОСОБ МОДЕЛИРОВАНИЯ ОТЕКА КАПСУЛ БОЛЬШИХ СЛЮННЫХ ЖЕЛЕЗ
WAY OF MODELLING OF EDEMA OF CAPSULES OF BIG SIALADENS

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной морфологии. Оно может быть использовано для изучения патоморфологии больших слюнных желез белых крыс, для разработки лекарственных средств - термопротекторов и определения эффективности их терапевтического действия на доклиническом этапе исследования данных фармацевтических средств.
Методы моделирования отека капсул больших слюнных желез в доступной литературе не обнаружены.
Сущность способа моделирования отека капсул больших слюнных желез состоит в том, что экспериментальных животных подвергают острой внешней гипертермии при температуре 45°С в течение 9-36 минут.
В зависимости от времени перегревания получают модель отека капсул исследуемых органов разной степени выраженности.
В результате проведенного эксперимента на макроскопическом уровне был установлен отек названных структур. Большие слюнные железы ярко-розового цвета и находятся в прозрачной, бесцветной жидкости.
Предложенный способ осуществляется следующим образом.
Половозрелых белых крыс самцов весом от 180 до 200 г помещали в тепловую камеру с температурой воздуха +45°С. Температура в камере регулировалась автоматически по контрольному термометру. Точность поддержания температуры - не менее ±0,75°С. Отклонение температуры любой точки рабочего объема от заданной температуры по контрольному термометру - ±1,5°С.
3
В качестве камеры использовали отечественный термостат для парафиновых заливок с электроподогревом и водяной рубашкой (Ц-1281). Размеры внутренней рабочей камеры термостата - 250 мм × 250 мм × 400 мм, объем - 0,025 м.
Экспериментальных животных перегревали всегда в утренние часы суток (с 9.00 до 12.00). Длительность пребывания крысы в термостате зависела от задач эксперимента и состояния животного и составила 9-36 минут. По общему состоянию подопытных крыс (физиологии поведения животного) и повышению их ректальной температуры судили о степени гипертермии животных. Всех использованных в работе подопытных животных подразделили на 6 групп: контрольная группа (Ко), включающая 15 животных, и 5 экспериментальных групп, каждая из которых состоит из 17 животных: животные, выведенные из эксперимента на стадии безразличия (Ст.Б, в термокамере находились 9-10 минут), стадии возбуждения (Ст.В, в термокамере находились 14-18 минут), начальной стадии теплового удара (НТУ, в термокамере находились 21-25 минут), разгаре теплового удара (РТУ, в термокамере находились 28-32 минуты), и крысы, погибшие от теплового удара (ТУ, в термокамере находились 34-36 минут). Градацию стадий эксперимента проводили на основании литературных данных (Фаращук Н.Ф., Рахманин Ю.А., 2004) и физиологии поведения животного. Животных выводили из эксперимента с учетом правил проведения работ с использованием экспериментальных животных (приказ Минздрава №724 от 13 ноября 1984 г.).
Фотографировали субмандибулярную область шеи, затем препарировали шкурку этой области и снова фотографировали эту область с помощью цифрового аппарата «Nikon coolpix 4600». Далее удаляли фасцию шеи и обнажали субмандибулярный комплекс желез. Фотографировали и изучали его с помощью лупы. После удаления кожи в субмандибулярной области обнаружили отек подлежащей соединительной ткани. После удаления этой ткани и поверхностной фасции был выявлен резко выраженный отек соединительнотканных структур больших слюнных желез и особенно их субмандибулярного комплекса: а - контроль; б - стадия безразличия; в - стадия возбуждения, г - начальная стадия ТУ; д - разгар ТУ; е - смерть от ТУ (фиг.1). Производили экстирпацию всего блока слюнных желез, затем разрезали этот блок в продольном и поперечном направлениях, стараясь, чтобы в одном кусочке были фрагменты всех трех БСЖ. Это хорошо получалось на поперечных разрезах. Кусочки слюнных желез одновременно фиксировали в жидкости Буэна, жидкости Карнуа. Срезы окрашивали гематоксилином Бемера - эозином; гематоксилином Ганзена - эозином; альдегид-фуксином по Гомори с докраской смесью Хальми; импрегнировали серебром по Гомори.
Морфометрические исследования проводили с помощью окуляр-микрометра (MOB 1-15*): измеряли толщину капсул больших слюнных желез (в микрометрах) в местах их наибольших и наименьших размеров (контрольная выборка n=90; экспериментальные выборки n=102).
Предложенным способом произведена качественная и количественная морфометрическая оценка динамики морфологических изменений в капсулах больших слюнных желез белых крыс на разных стадиях острого перегревания организма.
При исследовании препаратов больших слюнных желез на первой стадии перегревания, стадии безразличия выявлен незначительный отек капсулы: например, в капсуле околоушной слюнной железы и междолевой соединительной ткани на препарате, окрашенном альдегид-фуксином по Гомори с докраской смесью Хальми, - незначительный отек, увеличение 7×8 (фиг.2). Определяется разволокнение коллагеновых волокон, истончение эластических и ретикулиновых волокон, наиболее выраженное в наружном и внутреннем слоях капсулы. На последующих стадиях перегревания наблюдается усиление всех вышеописанных морфологических изменений в строении капсул больших слюнных желез, которое максимально проявляется у животных, погибших от теплового удара. Так, в околоушной слюнной железе в разгар теплового удара определяется резкий отек капсулы, который представлен на микрофотографии препарата, окрашенного альдегид-фуксином по Гомори с докраской смесью Хальми, увеличение 7×40 (фиг.3)
2
Отек ведет к достоверному увеличению толщины капсулы: как минимального, так и максимального размеров. Количественные данные изменения толщины капсул в местах их наибольших и наименьших размеров рассчитаны с помощью определения статистических показателей результативного признака для каждой группы животных: среднее значение (М), дисперсия (σ), стандартная ошибка среднего (m), 95% доверительный интервал для среднего значения, коэффициент вариации (CV %) (Автандилов Г.Г., 2002), проводили дисперсионный анализ, вычисляли F-критерий (Медик В.А., Токмачев М.С., Фишман Б.Б., 2000).
Пример 1
Крыса №19, вес - 190 г, перегрета до стадии безразличия, находилась в термокамере в течение 9 минут, вела себя спокойно, ректальная температура до перегревания - 36,8°С, после перегревания - 39,5°С. После выведения животного из эксперимента определен слабовыраженный отек субмандибулярного комплекса слюнных желез (фиг.1, б), на препаратах, окрашенных гематоксилином Ганзена-эозином, гематоксилином Бемера-эозином, альдегид-фуксином по Гомори с докраской смесью Хальми, импрегнированных серебром, - незначительный отек капсул больших слюнных желез: околоушной слюнной железы (ОКЖ), подчелюстной слюнной железы (ПЧЖ), подъязычной слюнной железы (ПЯЖ). На стадии безразличия при остром перегревании организма имеет место начинающийся отек и разволокнение капсул больших слюнных желез и соединительной ткани, окружающей эти органы, особенно их субмандибулярный комплекс (фиг.1б, 2), проявляющийся увеличением максимального и минимального размеров толщины капсул больших слюнных желез (табл.1).
Пример 2
Крыса №1, вес - 180 г, перегрета до смерти от теплового удара, находилась в термокамере в течение 36 минут, ректальная температура до перегревания - 36,6°С, после перегревания - 44°С. Определен резкий отек субмандибулярного комплекса слюнных желез (фиг.1е), на препаратах, окрашенных гематоксилином Ганзена-эозином, гематоксилином Бемера-эозином, альдегид-фуксином по Гомори с докраской смесью Хальми, импрегнированных серебром, - значительный отек капсул больших слюнных желез. У животных, погибших от теплового удара, имеет место резкий отек и разволокнение капсул больших слюнных желез и соединительной ткани, окружающей эти органы, особенно их субмандибулярный комплекс, проявляющийся увеличением максимального и минимального размеров толщины капсул больших слюнных желез (табл.2).
Результаты оценки количественных параметров толщины капсул контрольной и экспериментальных групп представлены в таблицах 3-8. Они свидетельствуют, что острое перегревание организма приводит к отеку капсул больших слюнных желез и соединительной ткани, окружающей их. Степень выраженности этого отека нарастает по мере перегревания организма и достигает максимальной величины у животных, погибших от теплового удара.
Таким образом, острое внешнее перегревание организма может использоваться в качестве способа моделирования отека капсул больших слюнных желез белых крыс и соединительной ткани, окружающей эти органы, особенно их субмандибулярного комплекса.
Табл.1
ОКЖ №19
Min, мкм
Max, мкм
ПЧЖ №19
Min, мкм
Max, мкм
ПЯЖ №19
Min, мкм
Max, мкм
поле зрения 1
34,89
192,04
поле зрения 1
25,23
167,66
поле зрения 1
21,65
144,13
2
33,05
192,38
2
25,65
166,34
2
20,56
144,25
3
33,58
190,67
3
27,18
166,87
3
21,72
144,89
4
31,08
193,67
4
27,56
166,03
4
21,71
145,12
5
32,17
189,99
5
29,45
166,07
5
21,84
145,11
6
31,43
189,06
6
29,34
165,99
6
21,45
145,01
Табл.2
ОКЖ №1
Min, мкм
Max, мкм
ПЧЖ №1
Min, мкм
Max, мкм
ПЯЖ №1
Min, мкм
Max, мкм
поле зрения 1
38,08
266,12
поле зрения 1
45,18
314,56
поле зрения 1
34,71
226,84
2
38,09
265,12
2
44,67
310,56
2
35,62
220,02
3
39,24
257,34
3
43,23
310,31
3
35,78
220,56
4
39,71
257,54
4
45,12
311,23
4
35,12
227,89
5
40,01
258,12
5
45,67
311,45
5
34,71
230,45
6
40,03
264,76
6
45,78
311,76
6
34,83
227,65
Табл.3
Стадия опыта
ОКЖ, Min М±m, мкм
Cv, %
95% доверительный интервал
σ<sup>2</sup>
Нижняя граница
Верхняя граница
Ко
30,81±0,16
4,92
30,49
31,13
2,29
Ст.Б
34,08±0,16*
4,62
33,78
34,39
2,48
Ст.В
35,87±0,05*
1,35
35,78
35,97
0,24
НТУ
37,03±0,09*
2,37
36,85
37,2
0,77
РТУ
38,29±0,08*
2,04
38,15
38,45
0,61
ТУ
39,45±0,08*
1,94
39,30
39,60
0,58
Примечание: * - уровень значимости р<0,05 по сравнению с контролем и предыдущей стадией
Табл.4
Стадия опыта
ПЧЖ, Min М±m, мкм
Cv, %
95% доверительный интервал
σ<sup>2</sup>
Нижняя граница
Верхняя граница
Ко
23,98±0,09
3,66
23,79
24,17
0,77
Ст.Б
27,46±0,16*
5,88
27,14
27,78
2,61
Ст.В
36,51±0,13*
3,47
36,26
36,76
1,61
НТУ
38,88±0,06*
1,48
38,77
38,99
0,33
РТУ
41,31±0,09*
2,37
41,12
41,50
0,33
ТУ
45,01±0,07*
1,55
44,87
45,15
0,49
Примечание: * - уровень значимости р<0,05 по сравнению с контролем и предыдущей стадией
Табл.5
Стадия опыта
ПЯЖ, Min М±m, мкм
Cv, %
95% доверительный интервал
σ<sup>2</sup>
Нижняя граница
Верхняя граница
Ко
20,16±0,08
3,78
19,99
20,32
0,58
Ст.Б
21,18±0,04*
1,83
21,10
21,26
0,15
Ст.В
25,13±0,03*
1,25
25,07
25,19
0,09
НТУ
30,98±0,06*
2,07
30,86
31,11
0,41
РТУ
33,49±0,06*
1,82
33,37
33,61
0,37
ТУ
34,97±0,04*
1,22
34,89
35,06
0,18
Примечание: * - уровень значимости р<0,05 по сравнению с контролем и предыдущей стадией
Табл.6
Стадия опыта
ОКЖ, Мах М±m, мкм
Cv, %
95% доверительный интервал
σ<sup>2</sup>
Нижняя граница
Верхняя граница
Ко
167,0±0,33
1,88
166,34
167,66
9,89
Ст.Б
187,57±0,38*
2,06
186,81
188,33
14,94
Ст.В
196,77±0,33*
1,69
196,12
197,42
11,03
НТУ
204,98±0,29*
1,45
204,39
205,57
8,84
РТУ
216,62±0,93*
4,33
214,77
218,46
88,05
ТУ
262,59±0,26*
1,02
262,06
263,11
7,10
Примечание: * - уровень значимости р<0,05 по сравнению с контролем и предыдущей стадией
Табл.7
Стадия опыта
ПЧЖ, Мах М±m,мкм
Cv, %
95% доверительный интервал
σ<sup>2</sup>
Нижняя граница
Верхняя граница
Ко
141,17±0,17
1,12
140,84
141,49
2,48
Ст.Б
166,53±0,11*
0,657
166,32
166,74
1,19
Ст.В
182,3±0,12*
0,686
182,06
182,55
1,56
НТУ
213,31±0,13*
0,61
213,05
213,56
1,69
РТУ
278,79±0,22*
0,79
278,36
279,22
4,86
ТУ
312,66±0,15*
0,477
312,37
312,95
2,22
Примечание: * - уровень значимости р<0,05 по сравнению с контролем и предыдущей стадией
Табл.8
Стадия опыта
ПЯЖ, Мах М±m, мкм
Cv, %
95% доверительный интервал
σ<sup>2</sup>
Нижняя граница
Верхняя граница
Ко
134,41±0,05
0,38
134,31
134,52
0,26
Ст.Б
144,94±0,07*
0,49
144,79
145,08
0,52
Ст.В
149,33±0,12*
0,82
149,09
149,57
1,51
НТУ
151,43±0,09*
0,61
151,25
151,61
0,85
РТУ
206,17±0,11*
0,53
205,95
206,39
1,18
ТУ
223,51±0,28*
1,27
222,95
224,06
8,02
Примечание: * - уровень значимости р<0,05 по сравнению с контролем и предыдущей стадией