КОМПОЗИЦИИ, СОДЕРЖАЩИЕ LACTOBACILLUS CASEI ДЛЯ УЛУЧШЕНИЯ УСТОЙЧИВОСТИ К РАСПРОСТРАНЕННЫМ ИНФЕКЦИОННЫМ ЗАБОЛЕВАНИЯМ
COMPOSITIONS, CONTAINING LACTOBACILLUS CASEI, FOR IMPROVING RESISTANCE TO COMMON INFECTIOUS DISEASES

Данное изобретение относится к композициям для улучшения устойчивости к распространенным инфекционным заболеваниям.
Распространенные инфекционные заболевания (CID), определенные как инфекции нижних и верхних дыхательных путей и гастроэнтерит, являются эндемичными в общей популяции, вызывая значительную степень дискомфорта.
Различные типы распространенных инфекционных заболеваний в каждой категории и основные связанные с ними симптомы, используемые для диагностики, суммированы в таблице 1 ниже.
Таблица 1
Распространенные инфекционные заболевания
Симптомы
Инфекции верхних дыхательных путей (URTI)
Ринофарингит (простуда, острый ринит)
Ринорея, чихание, заложенность носа, головная боль, слабость, болезненные/тугоподвижные мышцы, лихорадка (редко)
Ларингит
Лихорадка (кроме вирусной инфекции), жгучая боль в горле, красные, распухшие, увеличенные миндалины, аденопатия с болью в шее
Острый синусит
Головные боли, боль в пазухах, заложенный нос, гнойная ринорея, боль в горле, кашель, лихорадка
Острый отит
Боль в ухе, ощущение полноты уха, нарушение слуха, выделения
Инфекции нижних дыхательных путей (LRTI)
Острый бронхит
Умеренная лихорадка, кашель, слизистая или гнойная мокрота
Пневмопатия
Как правило, высокая температура, лихорадка, кашель, слизистая или гнойная мокрота, боль в груди, одышка
Грипп и гриппоподобные заболевания
Сильная лихорадка, высокая температура, головные боли, болезненные/тугоподвижные мышцы, артралгия, астения, анорексия, сухой болезненный кашель, красная глотка
Инфекция желудочно-кишечного тракта (GiTi)
Гастроэнтерит
Лихорадка, головные боли, болезненные/тугоподвижные мышцы, боль в животе, диарея, рвота
В 2002 году простуда была ответственна за миллионы дней пропуска работы и школы, и несет ответственность за 27 миллионов визитов врачей в США (Greenberg, 2002), в то время как Feeney показал, что респираторные расстройства и гастроэнтерит несут ответственность за 50-60% всех случаев отсутствия на рабочем месте в Лондоне (Feeney A et al., 1998). Кроме того, инфекции верхних дыхательных путей являются ведущей причиной нецелесообразного применения антибиотиков для детей и взрослых, приводя к увеличению распространения резистентности к антибиотикам. Наконец, для некоторых инфекций, таких как простуда, вызываемых риновирусами, нет одобренных антивирусных лекарственных средств (Greenberg, 2002). Итак, распространенные инфекции представляют большой интерес в контексте здравоохранения и социально-экономических последствий.
По причине своего действия на иммунную систему стресс является одним из факторов, которые могут участвовать в повышении риска инфицирования. В действительности, исследования показывали, что психологический стресс может подавлять иммунный ответ, вызывая дисрегуляцию различных сигналов. Демонстрировали некоторые "пути", посредством которых иммунная система модулируется психологическим стрессом. Например, существует прямая иннервация первичной и вторичной лимфоидной ткани вегетативной нервной системой. Данные "пути" действуют посредством продуцирования биологических медиаторов, которые взаимодействуют с клеточными компонентами иммунной системы и действуют на них (Yang EV & Glaser R., 2000). Таким образом, Yang и Glaser демонстрировали, что психологические стрессоры обладают способностью модулировать клеточный иммунный ответ, что может приводить к повышению индивидуальной восприимчивости к инфекционным патогенам (Yang EV & Glaser R., 2000).
Некоторые ситуации и действия могут вызывать стресс, среди них рабочая активность представляет особый интерес. В действительности, влияние стрессовых условий работы на инфекции демонстрировали в исследованиях, в особенности проводимых на посменных рабочих. В эпидемиологических исследованиях демонстрировали, что случаи простуды, гриппоподобных заболеваний и гастроэнтерита отличаются среди работников с разным режимом работы. Посменная работа значительно ассоциирована с более высокой заболеваемостью всеми тремя распространенными инфекциями (Mohren DC et al., 2002). В нескольких исследованиях сообщали о подавлении функции иммунитета в отношении посменной работы, что может объяснять повышение восприимчивости к инфекциям (Curti R et al., 1982; Kobayashi F et al., 1997).
Lactobacillus reuteri
Lactobacillus gasseri
Bifidobacterium longum
Bifidobacterium bifidum
Среди продуктов, потенциально активных против распространенных инфекций, пробиотики демонстрировали интересные эффекты, в особенности на взрослых работников. Например, показано, что  ATCC55730 уменьшает кратковременный отпуск по болезни, вызванный респираторными или желудочно-кишечными инфекциями, и, таким образом, улучшает благоприятные для здоровья условия на рабочем месте (Tubelius et al. 2005). В других исследованиях противоинфекционное действие пробиотиков коррелировало с модуляцией параметров иммунной системы. Для взрослых показано, что смесь пробиотиков (т.е.  PA 16/8,  SP 07/3 и  MF 20/5) снижает тяжесть и длительность простудных инфекций и количество дней связанной с ними лихорадки. В данном исследовании улучшение исхода заболевания ассоциировано со значительным повышением количества цитотоксических и супрессорных CD8 T-клеток в группе, принимавшей пробиотики (De Vrese et al., 2005).

Lactobacillus casei
Lactobacillus bulgaricus
Streptococcus thermophilus
DANONE разрабатывал молочный напиток с пробиотиками, ACTIMEL, содержащий  DN-114 001, а также характерные йогуртовые культуры ( и ).

Сообщали, что потребление ACTIMELобладает положительным воздействием на исход желудочно-кишечных заболеваний. У посещавших центры дневного пребывания детей, добавление ACTIMEL снижало заболеваемость острой диареей по сравнению с контрольной группой с добавлением йогурта (Pedone et al., 2000). С такой же диетой у детей также наблюдали значительное снижение продолжительности острой диареи (Pedone et al., 1999, Agarwal et al., 2001).
В другом исследовании (Cobo Sanz et al., 2006) дети от 3 до 12 лет, получавшие Actimel 2 раза в день в течение 20 недель, демонстрировали тенденцию снижения продолжительности и заболеваемости некоторыми инфекционными заболеваниями, в частности, инфекциями нижних дыхательных путей (бронхит или пневмония).

Также проводили исследование в популяции пожилых людей. Исследовали действие 3-недельного потребления ACTIMEL на заболеваемость, продолжительность и связанную с заболеваниями лихорадку при желудочно-кишечных и зимних респираторных инфекциях. В данном исследовании потребление ACTIMEL снижало продолжительность заболевания по сравнению с контрольной группой (Turchet et al., 2003).

+

Также показано, что ACTIMEL модулирует количество и активность некоторых иммунных клеток в нескольких популяциях, в том числе у индивидуумов, подвергнутых стрессу. Потребление ACTIMEL повышает или ингибирует понижение некоторых параметров иммунитета (общие лимфоциты, CD56 клетки, т.е., естественные киллеры + цитотоксические T-клетки) у индивидуумов 18-23 лет, подвергнутых стрессу сдачи университетских экзаменов (Marcos et al., 2004). Таким же образом, на модели сильно тренированных атлетов, у которых физическая активность обладает острыми и хроническими эффектами на иммунную систему, снижение количества NK-клеток значительно ниже после потребления ACTIMEL,чем после потребления молока (Pujol et al., 2000). В течение 8-недельного периода потребления продукта в других исследованиях, выделяющих популяцию среднего возраста (51-58 лет), показали, что ACTIMEL повышает и цитотоксическую активность NK-клеток (Parra et al., 2004a; Parra et al., 2004b), и активность респираторного взрыва моноцитов (Parra et al., 2004b). Таким образом, данные результаты показывают, что ACTIMEL может регулировать клеточный иммунитет, в особенности врожденный, посредством увеличения размера субпопуляций или специфических активностей иммунных клеток.
Lactobacillus casei
Также показывали модуляцию активности NK-клеток для штамма Shirota у новорожденных мышей, зараженных вирусом гриппа (Yasui et al., 2004), и у человека, и у пристрастившихся курильщиков (Morimoto et al. 2005), и у здоровых индивидуумов (Nagao et al. 2000; Takeda et al. 2007).

В настоящее время заявители исследуют действие ACTIMEL на устойчивость взрослых к распространенным инфекциям, в особенности иммунокомпетентных взрослых моложе 65 лет, работающих в стрессовых условиях. Как показано в экспериментальной части ниже, они демонстрировали, что действие потребления ACTIMEL выше у потребителей табака, чем у некурящих. Кроме того, заявители показали, что в общей популяции регулярный прием ACTIMEL приводит к более сильному иммунному ответу в случае CID, в связи с тем, что действуют NK-клетки и нейтрофильные лейкоциты.
Lactobacillus casei
Lactobacillus casei
Таким образом, настоящее изобретение относится к применению штамма  для получения композиции для улучшения устойчивости потребителя табака, в частности курильщика, к распространенному инфекционному заболеванию, в особенности к распространенному респираторному инфекционному заболеванию. Оно также относится к применению штамма  для получения композиции для улучшения клеточного иммунного ответа, в частности ответа NK-клеток и/или нейтрофильных лейкоцитов индивидуума в случае распространенного респираторного инфекционного заболевания, такого как ринофарингит или ларингит.
Предпочтительно, указанную композицию требуется вводить индивидууму моложе 65 лет.
Lactobacillus casei
Lactobacillus casei
paracasei
По предпочтительному варианту осуществления изобретения, указанный штамм  является штаммом ssp., предпочтительно штамм хранится в CNCM под номером 1-1518, который описывают, например, в EP0794707 или EP1283714.
5
7
Lactobacillus casei
Lactobacillus casei
Lactobacillus
Lactococcus, Streptococcus
Bifidobacterium
Lactobacillus helveticus
Lactobacillus delbrueckii
bulgaricus
Lactobacillus rhamnosus
Lactobacillus acidophilus
Lactococcus lactis
Streptococcus thermophilus
Bifidobacterium longum
Bifidobacterium breve
Lactobacillus casei
Lactobacillus bulgaricus
Streptococcus thermophilus
Преимущественно, указанная композиция содержит, по меньшей мере, 1×10 КОЕ на миллилитр указанного штамма , более предпочтительно, по меньшей мере, 1×10 КОЕ на миллилитр указанного штамма . Указанный штамм может являться связанным с одним или несколькими другими молочнокислыми бактериями, выбранными из рода ,  и , предпочтительными молочнокислыми бактериями, выбранными из группы, содержащей ,  подвиды , , , , ,  и/или . В особенно предпочтительном варианте осуществления указанный штамм  связан с бактериями  и/или .
В частности, указанная композиция может представлять собой питание или пищевую добавку. Предпочтительно, она является композицией кисломолочного продукта.
Lactobacillus casei
Настоящее изобретение дополнительно иллюстрируют следующим дополнительным описанием, которое относится к примерам, иллюстрирующим свойства композиции, содержащей  для улучшения устойчивости к распространенным инфекционным заболеваниям.
ПРИМЕР 1: МАТЕРИАЛЫ И СПОСОБЫ
1.1: Исследуемая популяция
Демографический состав
Характеристики исследуемой популяции суммированы в таблицах 2 и 3 ниже.
Таблица 2Характеристики исследуемой популяции
ACTIMEL<sup> </sup>N=500
Контроль N=500
Всего N=1000
p-value
Возраст (среднее±SD)Q1-Q3 (50% популяции)
31,8±8,925-37
32,5±8,926-38
32,1±8,925-38
(ANOVA)0,278
ПолЖенскийМужской
57%43%
56%44%
56%44%
(?<sup>2</sup>)0,702
BMI(среднее±SD)Q1-Q3 (50% популяции)
24,0±2,822-26
24,2±2,922-26
24,1±2,922-26
(ANOVA)0,235
Тип активности
Работник на фабрикеМедсестраПожарныйОфицер полицииДругое
4,25%47%5,8%16%27%
4,6%45%6,0%16%28%
4,4%46%5,9%16%28%
(?<sup>2</sup>)0,993
Базовые характеристики
Тип посменной работы
2-сменная работа3-сменная работа
17%83%
18%82%
18%83%
(?<sup>2</sup>)0,803
Привычка к курениюНекурящийКурильщик <10 сиг./д.Курильщик >10 сиг./д.Бывший курильщикДругое
42%21%18%19%<1%
41%18%18%22%1,4%
42%19%18%21%<1%
(?<sup>2</sup>)0,190
Вакцинация против гриппа
ДаНет
7,0%93%
5,4%95%
6,2%94%
(?<sup>2</sup>)0,294
Таблица 3Включение и отзыв из исследования
Количество индивидуумов
ACTIMEL<sup></sup>
Контроль
Всего
Скринированные (скринированная популяция)
N=1523
Зарегистрированы (общая популяция)
Да
1000 (66%)
Нет
523 (34%)
Причины невключения
Неподходящий индивидуум
158 (10%)
Окончание регистрации
252 (17%)
Решение индивидуума
25 (2%)
Несоблюдение
10 (0,6%)
CID (V1 или V2)
72 (5%)
Другое
6 (0,4%)
Рандомизированные
ITT популяция
N=500
N=500
N=1000
PP популяция
N=443
N=457
N=900
Исключение и предварительные отзывы из исследования
Всего 38 индивидуумов из ITT популяции (4%) отзывали до конца исследования, в то время как все индивидуумы, включенные в PP популяцию, завершали исследование (по определению).
Таблица 4Предварительные отзывы из исследования
ACTIMEL<sup></sup>
Контроль
Всего
Количество индивидуумов
(N=500)
(N=500)
(N=1000)
Состояние завершения
Завершили
478 (96%)
484 (97%)
962 (96%)
Исключены
22 (4,4%)
16 (3,2%)
38 (3,8%)
1.2. Особенности исследовательских продуктов
Характеристики продуктов

Продукты, применяемые в течение данного исследования, принадлежат к семейству свежих молочных продуктов. Настоящее исследование проводили, применяя ACTIMEL в качестве активного продукта.
В таблице 5 представлена композиция активного и контрольного продуктов.
Для соблюдения двойного слепого способа оформление, упаковка и вкус активного и контрольного продукта являлись идентичными.

Активный продукт (ACTIMEL) является подслащенным ароматизированным кисломолочным напитком.
Контрольный продукт является подслащенным ароматизированным неферментированным подкисленным молочным продуктом.
Таблица 5Композиция продукта, КОЕ: Колоние-образующая единица
Продукт
Липиды
Глюциды
Белки
<i>Lactobacillus</i><i>casei</i>
Йогуртовая культура
ACTIMEL<sup></sup>
1,5%
12%
2,8%
Минимально 1×10<sup>8 </sup>КОЕ/мл
Минимально 5×10<sup>7 </sup>КОЕ/мл
Контроль
1,5%
12%
2,8%
-
-
1.3. План исследования
Описание плана исследования

Исследование проводили в 1 центре, оно являлось рандомизированным со стратификацией по типу активностей, двойным слепым, его контролировали в 2 параллельных группах: "продукт ACTIMEL" по сравнению с "контрольным продуктом".
На фигуре 1 показан расчет времени способов исследования (*: В зависимости от участия подгруппы в "Биологических параметрах крови").
После этапа скрининга (V1-V2) экспериментальный этап делили на 2 части: этап потребления продуктов (V2-V5: 12 недель) и последующий этап (V5-V6: 4 недель) без потребления продукта.
Для каждого индивидуума общая продолжительность исследования составляла 4,5 месяца (2 недели ограничения питания, 12-недель потребления продукта и 4 последующих недели).
Критерии оценки
Первичным критерием оценки в исследовании являлось количество всех CID, о которых индивидуум сообщал в течение 12 недельного периода потребления продукта. В данном исследовании, CID делили на 3 основные категории инфекций:
инфекции верхних дыхательных путей (URTI): ринофарингит, ларингит, синуситы, отит;
инфекции нижних дыхательных путей (LRTI): бронхит, пневмопатия и т.д.;
инфекции желудочно-кишечного тракта (GITI).
Первичные параметры оценки
Первичные:
Сравнение между группами по количеству всех CID, о которых сообщали в течение 12 недель потребления исследуемого продукта.
Вторичные
:
- Сравнение между группами по количеству всех CID, о которых сообщали в течение 4 последующих недель и в течение всего этапа исследования [этап потребления + последующие мероприятия].
- Сравнение между группами по количеству URTI, или LRTI, или GITI, или каждого типа CID в течение 12 недель потребления исследуемого продукта, в течение 4 последующих недель и в течение всего этапа исследования [этап потребления + последующие мероприятия].
- Сравнение между группами по количеству индивидуумов, имеющих, по меньшей мере, 1 CID (любой тип), или 1 URTI, или LRTI, или GITI, или один тип CID (например: ринофарингит или ларингит) в течение 12 недель потребления исследуемого продукта, в течение 4 последующих недель и в течение всего этапа исследования [этап потребления + последующие мероприятия].
- Сравнение между группами по развитию гемограммы в каждой группе во время некоторых запланированных визитов и в случае CID (любой тип), или URTI, или LRTI, или GITI, или каждый тип CID в течение 12 недель потребления исследуемого продукта, в течение 4 последующих недель и в течение всего этапа исследования [этап потребления + последующие мероприятия].
- Сравнение между группами по количеству дней лихорадки в течение всех CID (любой тип), или URTI, или LRTI, или GITI, или каждого типа CID, в течение 12 недель потребления исследуемого продукта, в течение 4 последующих недель и в течение всего этапа исследования [этап потребления + последующие мероприятия].
- Сравнение между группами по развитию в каждой группе параметров иммунной системы при анализе крови во время некоторых запланированных визитов (для части индивидуумов) и дополнительных визитов в случае CID (любой тип), или URTI, или LRTI, или GITI, или каждого типа CID, в течение 12 недель потребления исследуемого продукта, в течение 4 последующих недель и в течение всего этапа исследования [этап потребления + последующие мероприятия].
1.4. Статистические способы
Статистический и аналитический планы
План статистического анализа составляли до слепого обзора. Статистический анализ объединял рекомендации Европейского Агентства Лекарственных Средств (ICH Topic E9 - шаг 4-5 февраль 1998).
Определение объема выборки
Определение объема выборки основывалось на первичном исходе: накопленное количество CID, имевших место в течение трех месяцев потребления продукта. Множественные случаи различных инфекционных заболеваний, имевших место совместно (например, инфекция верхних дыхательных путей и гастроэнтерит), подсчитывали раздельно и суммировали в случае, если они имели место в один эпизод инфицирования.

Точное количество эпизодов распространенных инфекционных заболеваний среди посменных рабочих в течение установленного периода времени прогнозировать не просто, т.к. они могут широко варьировать в зависимости от сезонных условий. Однако предполагали, что в контролируемой группе можно наблюдать в среднем 1,5 случая. В группе ACTIMELожидали 15% относительное снижение (т.е. ожидаемое среднее количество случаев составляло 1,275 в рандомизированной группе ACTIMEL). Предполагали, что распределение накопленного количества случаев инфицирования подчиняется распределению Пуассона с избыточной дисперсией; ожидали некоторую избыточную дисперсию, т.к. частота случаев у индивидуума не является независимой.
С ожидаемым количеством в 1,5 случая в течение периода трех месяцев в контролируемой группе и с применением регрессии Пуассона с двусторонним тестом при 5% α-уровне предполагаемой умеренной избыточной дисперсии (параметр масштаба 1.1), ожидали, что приблизительно 450 индивидуумов в каждой группе, остававшихся в исследовании в течение трех месяцев, необходимо для определения 15% снижения количества с, по меньшей мере, 80% мощностью. Ожидали 5% количество выбывания индивидуумов; таким образом, необходимо включать приблизительно 500 индивидуумов в каждой группе. Таким образом, отбирали всего 1000 индивидуумов.
ПРИМЕР 2: КЛИНИЧЕСКИЕ РЕЗУЛЬТАТЫ
2.1: Количество всех CID в субпопуляции курильщиков

Как представлено в таблице 6, статистически значимое действие продукта на количество всех CID в пользу группы ACTIMEL в течение этапа потребления исследуемого продукта в субпопуляции курильщиков (среднее=0,6 для ACTIMEL по сравнению с 0,8 для Контроля; p=0,033 для ITT популяции), принимая во внимание то, что данное действие не наблюдали в популяции некурящих (p=0,687 для ITT популяции) (Таблица 7)
Таблица 6Популяция всех пациентов, прошедших рандомизацию - курильщики (Этап=Этап потребления - 12 недель потребления исследуемого продукта)
ACTIMEL<sup></sup>
Контроль
Всего
Количество индивидуумов
(N=194)
(N=186)
(N=380)
Количество CID
0
120 (62%)
91 (49%)
211
(56%)
1
39 (20%)
59 (32%)
98 (26%)
2
23 (12%)
22 (12%)
45 (12%)
3
8 (4,1%)
8 (4,3%)
16 (4,2%)
4
3 (1,5%)
3 (1,6%)
6 (1,6%)
5
1 (<1%)
2 (1,1%)
3 (<1%)
6
0 (0,0%)
1 (<1%)
1 (<1%)
N
194
186
380
Среднее
0,694
0,833
0,739
SD
1,003
1,100
1,054
SEM
0,0072
0,081
0,054
Таблица 7Популяция всех пациентов, прошедших рандомизацию - некурящие (Этап=Этап потребления - 12 недель потребления исследуемого продукта)
ACTIMEL<sup></sup>
Контроль
Всего
Количество индивидуумов
(N=306)
(N=314)
(N=620)
Количество CID
0
167 (55%)
153 (49%)
320 (52%)
1
73 (24%)
105 (33%)
178 (29%)
2
40 (13%)
35 (11%)
75 (12%)
3
16 (5,2%)
15 (4,8%)
31 (5,0%)
4
7 (2,3%)
5 (1,6%)
12 (1,9%)
5
1 (<1%)
0 (0,0%)
1 (<1%)
6
2 (<1%)
1 (<1%)
1 (<1%)
N
306
186
380
Среднее
0,804
0,783
0,794
SD
1,128
0,984
1,057
SEM
0,064
0,056
0,042
2.2: Частота CID в течение этапа потребления продукта
Таблица 8Частота CID в течение этапа потребления продукта - 12 недель потребления исследуемого продукта, популяция всех пациентов, прошедших рандомизацию
ACTIMEL<sup></sup>
Контроль
Всего
Количество индивидуумов
(N=500)
(N=500)
(N=1000)
Частота CID
Да
213 (43%)
256 (51%)
469 (47%)
Нет
287 (57%)
244 (49%)
531 (53%)
Модель логистической регрессии - Среднеквадратичные значения и отличия: ACTIMEL - Контроль: p=0,005
ПРИМЕР 3: БИОЛОГИЧЕСКИЕ РЕЗУЛЬТАТЫ
Представленные ниже результаты по всем биологическим данным получали посредством ковариационного анализа. Более точно, статистический анализ является изменением по сравнению с базовым значением, вычисленным по базовому значению (в соответствии с рекомендациями ICH). Групповое изменение выражали как: биологическую ценность CID - базовую биологическую ценность, вычисляемую для каждого индивидуума и статистической модели, применяют к доступным данным. Кроме того, базовое описание предоставляют для информации по всей ITT популяции с CID.
3.1. Клетки-естественные киллеры: NK-клетки CD16+/56+/3- изменение по сравнению с базовым значением в случае CID (параметр = NK-клетки CD16+/56+/3- абсолютное количество).

Клинически соответствующее и статистически значимо более высокое абсолютное количество NK-клеток CD16+/56+/3- наблюдали в группе ACTIMEL в течение этапа потребления продукта в случае CID, для всех CID (изменение по сравнению с базовым значением= +45,048 клеток/мкл для ACTIMEL по сравнению с -14,500 клеток/мкл для Контроля; p<0,001), для URTI (p=0,016), для LRTI (p=0,009), для ринофарингита (p=0,011) и для ларингита (p=0,032) в ITT популяции (Таблица 9)
Таблица 9Популяция всех пациентов, прошедших рандомизацию, ограниченная до субпопуляции с CID/тест Anova
ACTIMEL<sup></sup>
КОНТРОЛЬ
ВСЕГО
Время=базовое значение (v2)
N
52
63
115
Абсолютное количество NK-клетки CD16+/56+/3- (/мкл)
Среднее
175,88
181,64
179,03
p value=0,503
SD
74,21
83,04
78,88
Изменения по сравнению с базовыми значениями, Этап = Этап потребления, все образцы крови, относящиеся к CID
ACTIMEL<sup></sup>
КОНТРОЛЬ
ВСЕГО
Все CID
N
42
50
92
Абсолютное количество NK-клетки CD16+/56+/3- (/мкл)
Среднее
+45,048
-14,500
+12,685
p value<0,001
SD
80,846
68,99
79,987
Категория=URTI
N
34
39
73
Абсолютное количество NK-клетки CD16+/56+/3- (/мкл)
Среднее
+34,882
-15,590
+7,918
p value=0,016
SD
91,826
70,633
84,501
Категория=LRTI
N
13
17
30
Абсолютное количество NK-клетки CD16+/56+/3- (/мкл)
Среднее
+37,462
-33,353
-2,667
p value=0,009
SD
48,349
59,634
64,832
Тип=1 - ринофарингит
N
23
27
50
Абсолютное количество NK-клетки CD16+/56+/3- (/мкл)
Среднее
+36,609
-30,148
+0,560
p value=0,011
SD
100,580
65,341
89,090
Тип=1 - ларингит
N
17
19
36
Абсолютное количество NK-клетки CD16+/56+/3- (/мкл)
Среднее
+23,412
-23,368
-1,278
p value=0,032
SD
81,050
73,445
79,612
Заявители также наблюдали (данные не приводятся):

- Клинически соответствующее и статистически значимо более высокое процентное содержание NK-клеток CD16+/56+/3- в группе ACTIMEL в случае CID, для всех CID в течение этапа потребления продукта (изменение по сравнению с базовым значением = +1,95% для ACTIMEL по сравнению с +0,08% для контроля; p=0,007, для базовых значений=10,35+/-4,67 для ACTIMEL по сравнению с 9,56+/-4,29 для Контроля) и для LRTI в течение всего этапа исследования (p=0,008) в ITT популяции.
- Статистически значимо более высокую литическую активность NK-клеток в группе ACTIMEL в случае CID, для ларингита в течение этапа потребления продукта (p=0,047 для базальной активности; p=0,013 для стимулированной IL-2 активности) в ITT популяции.
Таким образом, представляется, что абсолютное количество NK-клеток (CD16+CD56+CD3-) статистически различается между группами и выше по изменению в группе ACTIMEL по сравнению с базовым значением в случае CID. Это наблюдали в течение этапа потребления продукта для всех CID, URTI и LRTI, и ринофарингита и ларингита. Все результаты подтверждали, т.к. учитывали только образцы, собранные в течение CID (все со значимым P).
3.2. Изменение лейкоцитов и нейтрофилов по сравнению с базовым значением в случае CID в течение этапа потребления продукта

Клинически соответствующее и статистически значимо более высокое абсолютное количество лейкоцитов наблюдали в группе ACTIMEL [изменение по сравнению с базовым значением = +1248 клеток/мкл для ACTIMEL по сравнению с +165 клеток/мкл для Контроля] в течение этапа потребления продукта в случае CID, для всех CID (p=0,034) и для ринофарингита (p=0,002) в ITT популяции.
Таблица 10Лейкоциты (изменения по сравнению с базовыми значениями) в течение этапа потребления продукта в случае CID, URTI, LRTI, ринофарингита и ларингита
Лейкоциты (10E3/мкл)
ACTIMEL<sup></sup>
КОНТРОЛЬ
ВСЕГО
Время=базовое значение (v2)
N
52
63
115
Среднее
6,33
6,60
6,48
p value =0,430
SD
1,83
1,79
1,81
Изменения по сравнению с базовыми значениями, Этап=Этап потребления, все образцы крови, относящиеся к CID
Все CID
N
42
51
93
Среднее
+1,248
+0,165
+0,654
p value =0,034
SD
2,630
2,239
2,470
URTI
N
34
40
74
Среднее
+1,235
+0,275
+0,716
p value =0,109
SD
2,468
2,199
2,360
LRTI
N
13
17
30
Среднее
-0,338
+0,006
-0,143
p value =0,319
SD
2,000
2,858
2,489
Тип=1 - ринофарингит
N
23
28
51
Среднее
+1,287
-0,354
+0,386
p value =0,002
SD
2,451
1,608
2,172
Тип=2 - ларингит
N
17
20
37
Среднее
+0,624
+0,500
+0,557
p value =0,682
SD
2,544
2,485
2,478

Заявители также наблюдали клинически соответствующее и статистически значимо более высокое по сравнению с базовым значением абсолютное количество нейтрофилов в группе ACTIMEL [изменение по сравнению с базовым значением = +1050 клеток/мкл для ACTIMEL по сравнению с +210 клеток/мкл для Контроля] в случае CID, для всех CID в течение всего этапа исследования (p=0,037) и для ринофарингита (p=0,002) в течение этапа потребления продукта в ITT популяции. В случае ринофарингита среднее изменение значения составляло +1279 клеток/мкл в группе ACTIMEL и -231 клеток/мкл в контрольной группе для базовых значений 3740 и 3800, соответственно (Таблица 11).

Клинически соответствующее и статистически значимо более высокое процентное содержание нейтрофилов наблюдали в группе ACTIMEL [изменение по сравнению с базовым значением = +5,3% для ACTIMEL по сравнению с +1,5% для Контроля] в случае CID, для всех CID в течение всего этапа исследования (p=0,038) и для ринофарингита (p=0,017) в течение этапа потребления продукта в ITT популяции (Таблица 12). Таким образом, описанное выше отклонение количества лейкоцитов является следствием изменения количества нейтрофилов, т.к. ни одна другая субпопуляция клеток в гемограмме не изменялась значимо.
Таблица 11Нейтрофилы (абсолютное количество) в течение этапа потребления продукта в случае CID; популяция всех пациентов, прошедших рандомизацию, ограниченная до биологической субпопуляции - с CID/тест Anova
Абсолютное количество нейтрофилов (10E3/мкл)
ACTIMEL<sup></sup>
КОНТРОЛЬ
ВСЕГО
Время=базовое значение (v2)
N
52
63
115
Среднее
3,74
3,80
3,77
p value =0,829
SD
1,45
1,26
1,35
Изменения по сравнению с базовыми значениями, все образцы крови, относящиеся к CIDЭтап = Этап потребления
Тип = 1 - ринофарингит
N
23
28
51
Среднее
+1,279
-0,231
+0,450
p value =0,002
SD
2,339
1,433
2,023
Таблица 12Нейтрофилы (процентное содержание) в течение этапа потребления продукта в случае CID; популяция всех пациентов, прошедших рандомизацию, ограниченная до биологической субпопуляции - с CID/тест Anova
Нейтрофилы (%)
ACTIMEL<sup></sup>
КОНТРОЛЬ
ВСЕГО
Время=базовое значение (v2)
N
52
63
115
Среднее
57,85
57,19
57,49
p value =0,591
SD
7,78
8,36
8,08
Изменения по сравнению с базовыми значениями, все образцы крови, относящиеся к CIDЭтап = Этап потребления
Тип=1 - ринофарингит
N
23
28
51
Среднее
+6,609
-0,071
+2,941
SD
10,659
8,641
10,079
p value =0,017
ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В высокочувствительной к респираторным инфекциям субпопуляции, такой как курильщики, ACTIMEL снижает количество всех CID. В общей исследуемой популяции наблюдали статистически значимое различие (Таблица 8) в пользу ACTIMEL по частоте CID в течение этапа потребления продукта в исследовании (и в ITT, и в PP популяции).

В случае CID, потребление ACTIMEL также увеличивало время первого появления инфекции и снижало общую продолжительность связанной с ним лихорадки (только в течение всего этапа исследования для лихорадки).

Данные клинические эффекты связаны с действием ACTIMEL на некоторые субпопуляции иммунных клеток, т.к. ACTIMEL значительно повышает количество лейкоцитов, нейтрофилов и NK-клеток в крови.

Действие ACTIMEL на иммунологические показатели согласуются с его наблюдаемой способностью улучшать клинические исходы в случае CID, и это может составлять интересную основу результатов для дальнейшего исследования механизмов действия ACTIMEL.