ШТАММ ГРИБА Phoma complanata (Tode) Desm. 1.40 (ВИЗР), ОБЛАДАЮЩИЙ МИКОГЕРБИЦИДНОЙ АКТИВНОСТЬЮ ПРОТИВ БОРЩЕВИКА СОСНОВСКОГО
STRAINS OF FUNGI Phoma complanata (Tode) Desm 1,40 (AIPP) MYCO-HERBICIDAL ACTIVE AGAINST HOGWEED SOSNOWSKI

Изобретение относится к сельскохозяйственной микробиологии, в частности к области борьбы с нежелательной растительностью. Представляет собой штамм гриба Phoma complanata (Tode) Desm. 1.40 (ВИЗР), выделенный из листьев борщевика Сосновского (Heracleum sosnowskiy Manden.). Штамм депонирован в Государственной коллекции микроорганизмов ВИЗР, ему присвоен коллекционный номер 1.40 (ВИЗР). Штамм предназначен для борьбы с борщевиком Сосновского и близкородственными видами этого растения.
,
Северо-западный регион входит в число проблемных в России по распространению борщевика Сосновского. Растение является инвазивным сорняком, быстро заселяющим различные местообитания и вытесняющим местную растительность. Помимо экологических проблем борщевик Сосновского также представляет угрозу для здоровья человека. Все части растения содержат фотосенсибилизирующие соединения фурокумарины при контакте с человеческой кожей и под воздействием ультрафиолетового излучения сок борщевика вызывает ожоги. В настоящее время для борьбы с борщевиком используются в основном механические и химические методы, которые довольно трудоемки, но не всегда эффективны и безопасны. Новым вкладом в решение этой проблемы может стать использование природных ресурсов: организмов, сдерживающих численность растений в естественных условиях (фитопатогенных микроорганизмов, насекомых-фитофагов) и биологически активных веществ микробного или растительного происхождения (например, фитотоксинов). Среди них фитопатогенные микроскопические грибы изучаются наиболее активно, поскольку они способны вызывать эпифитотии в популяциях растений-хозяев и тем самым контролировать численность сорных растений на определенном уровне.
Несмотря на то что изучению микобиоты борщевика уделялось некоторое внимание, сведения о видовом составе и распространении грибов на борщевике Сосновского и близкородственных видах Heracleum остаются весьма фрагментарными.
По мнению М.K. Seier & N.C. Evans (2007) [8], определенный потенциал как агенты классического контроля Heracleum mantegazzianum могут иметь Phloeospora heraclei (syn.: Cylindrosporium heraclei), Septoria heracleicola, Ramularia heraclei, Ramulariopsis sp., Phomopsis sp., Sclerotinia sclerotiorum. Наиболее подробно изучался фитопатогенный гриб Sclerotinia sclerotiorum. В полевых условиях после обработки растений ранней весной мицелиальной суспензией S. sclerotiorum в конце вегетационного периода отмечалось пожелтение листьев и замедление роста растений по сравнению с контролем (de Voogd et al., 2003, [5]; Emeberg et al., 2003 [6]).
В результате изучения микобиоты видов Heracleum, произрастающих в рудеральных местообитаниях в Ленинградской области, было выявлено 27 видов микромицетов из 19 родов 3-х отделов. На основании результатов экспериментальной работы по изучению патогенности и фитотоксичности выявлен определенный потенциал у штамма 1.40 (ВИЗР) Phoma complanata как агента биологического контроля борщевика Сосновского.
Phoma complanata ранее не изучался как возможный агент биоконтроля борщевика Сосновского. Наиболее близким к предлагаемому и принятому за прототип является Sclerotinia sclerotiorum, патогенность которого к Heracleum mantegazzianum изучалась рядом исследователей (de Voogd et al., 2003 [5]; Erneberg et al., 2003, [6]). Недостатком Sclerotinia sclerotiorum является его широкая специализация, гриб поражает растения многих семейств, что накладывает ограничения на его использование как микогербицида - это возможно только в посевах зерновых культур и злаковых трав, которые к нему устойчивы. Согласно Боерема с соавторами (Boerema et al., 2004, [4]) вид Phoma complanata приурочен к семейству Apiaceae, внутри вида экспериментально установлено наличие специализированных форм.
Задачей изобретения является получение штамма гриба, обладающего микогербицидной активностью и специфичностью для подавления борщевика Сосновского.
Штамм был выделен Е.Л.Гасич из пораженных пятнистостью листьев Heracleum sosnowskyi Manden., собранных в п.Разметелево, Всеволожского р-на Ленинградской области.
Идентификация штамма проводилась по определителю: Boerema G.H., de Gruyter J., Noordeloos M.E., Hamers M.E.C. Phoma identification manual, CABI Publishing, 2004, 470 p [4].
Штамм депонирован в Государственной коллекции микроорганизмов ВИЗР, ему присвоен коллекционный номер 1.40 (ВИЗР). Штамм предназначен для борьбы с борщевиком Сосновского.
Культурально-морфологические особенности штамма.
На картофельно-сахарозном агаре колонии вначале белые, потом бледно-оливково-серые, с точками оливково-черных, шаровидных пикнид. Пикниды 80-240 мкм, с порой, стенки пикниды сложены из 2-6 слоев клеток. Конидии вариабельны по форме и размеру, эллипсоидальные, цилиндрические, веретеновидные, 3-11×1.5-4 мкм, одноклеточные, в свежих культурах иногда встречаются более крупные конидии с 1 перегородкой, 16×4 мкм.
Физиолого-биохимические признаки.
Штамм хорошо растет как на агаризованных средах (картофельно-сахарозный агар, агар Чапека), так и на жидких средах (в стационарной культуре и на качалке).
7
2
6
2
6
2
5
2
На среде Чапека максимальный рост отмечен на среде с рамнозой, на втором месте по усвояемости находиться мальтоза, глюкоза и маннит. Из источников азота лучше всего усваивается пептон, несколько хуже усваивается аспарагин и мочевина. Среди источников углерода наибольшая интенсивность спороношения (порядка 10 спор/см) отмечена на средах с глюкозой, маннитом и арабинозой. На средах с другими источниками азота (кроме рамнозы и сахарозы) интенсивность спороношения составила порядка 10 спор/см. На средах с рамнозой и сахарозой интенсивность спороношения была на порядок ниже. Интенсивность спороношения на средах с аспарагином, пептоном, мочевиной и нитратом натрия в качестве источников азота составила порядка 10 спор/см, а на среде с нитратом аммония - порядка 10 спор/см (табл.1).
Наибольшая скорость роста штамма 1.40 (ВИЗР) на КСА отмечена при 20°C, несколько ниже она была при 16 и 24°C, при 28°C рост штамма значительно замедлялся, а при 32°C роста не отмечено, при 7°C на 14 сутки диаметр колоний достигал 45,8 мм (табл.2).
9
Штамм характеризуется высокой интенсивностью спороношения на зерновых субстратах, споровая продуктивность на зерновых субстратах (пшено, перловая, овсяная крупа) составляет порядка 10 спор/г субстрата. Не отмечено повышения интенсивности спороношения под воздействием эритемного и люминесцентного освещения (табл.3).
Хранение штамма осуществляется в пробирках на скошенном картофельно-сахарозном агаре в бытовом холодильнике при температуре +5-8°C в течение 1-1.5 лет без пересева.
Методы использования штамма описаны в примерах, а результаты представлены в таблицах.
Пример. 1. Пример культивирования штамма.
8
9
Штамм культивировали по стандартной методике (Наумов, 1937 [2]) на агаризованной картофельно-сахарозной среде (КСА) в чашках Петри при 7, 16, 20, 24, 28, 32°C или на среде Чапека с различными источниками азота и углерода при 24°C в темноте в течение 2-х недель. Зерновые субстраты (пшено, овсяная или перловая крупа) насыпали по 2 г в стеклянные пробирки с ватно-марлевыми пробками, добавляли 2 мл воды и стерилизовали при 1 атмосфере 30 минут, после автоклавирования субстрат перемешивали и инокулировали мицелиально-агаровым блоком, взятым из 14 суточной культуры гриба на КСА. Культуры инкубировали в течение 2-х недель при переменном (12/12 часов) эритемном или люминесцентном освещении, а также в темноте. Споровую суспензию получали методом смыва конидий водой с поверхности культуры, количество спор в суспензии подсчитывали при помощи камеры Горяева. При выращивании на картофельно-сахарозной агаризованной среде при 24°C в темноте в течение 2-х недель с одной чашки Петри выход спор может достигать 3.8×10. На зерновых субстратах интенсивность спороношения составляет порядка 10 спор/г субстрата.
6
Для получения мицелия штамм культивировали на модифицированной среде Чапека или соевой среде в 250 мл колбах с 50 мл среды на качалке при 200 об/мин в течение 3-7 суток. Среду инокулировали 3 мицелиальными агаровыми блоками (диаметр 0.5 см), вырезанными при помощи бура из 14 суточной культуры гриба на картофельно-сахарозной агаризованной среде. Мицелий отфильтровывали через мельничный газ и высушивали до постоянного веса для определения продуктивности, либо для получения мицелиальной суспензии измельчали при помощи блендера. На модифицированной среде Чапека штамм образует многочисленные крупные и мелкие бурые пеллеты, ободок хорошо развит, на ободке и пеллетах многочисленные пикниды, культуральная жидкость бледно-коричневого цвета, споровая продуктивность составляет порядка 10 спор/мл, выход сухой биомассы на 7 сутки культивирования составляет 0.5 г на колбу.
Пример 2. Пример использования штамма.
Патогенность штамма определялась методом искусственного заражения растений борщевика Сосновского. Молодые растения борщевика Сосновского в стадии 2-3 листьев выкапывали в природных условиях и пересаживали в вегетационные сосуды (объемом 200 мл) с почвой. Растения выращивали в лабораторных условиях на светоустановке. Заражение растений проводили через 2 недели после их пересадки. Споровую или мицелиальную суспензию наносили на растения при помощи пульверизатора (5 мл суспензии на сосуд). После инокуляции растения помещали во влажные камеры на 24-48 часов, а затем переносили на светоустановку.
7
Влияние продолжительности периода повышенной влажности оценивали путем инокуляции растений споровой суспензией с концентрацией 6×10 спор/мл. После инокуляции растения помещали во влажные камеры на 0, 6, 24 и 48 часов, а затем переносили на светоустановку.
Оценку патогенности мицелия, полученного в жидкой культуре, осуществляли для целых растений в контролируемых и полевых условиях. Для инокуляции использовали 3-суточную культуру штамма на соевой среде, полученную при глубинном культивировании на качалке. Использовали следующие концентрации инокулюма: 20, 50, 75 и 100 мг/мл. В лабораторных условиях сосуды с растениями после инокуляции помещались на 24 часа во влажные камеры. В полевых условиях после инокуляции сосуды помещали на поверхность почвы, влажные камеры в полевых условиях не создавались.
6
Оценку патогенности жидкой культуры штамма проводили на целых растениях. Штамм культивировали на модифицированной среде Чапека в стационарных условиях в течение 7 суток. Содержимое колб растирали в фарфоровой ступке, процеживали через мельничный газ и опрыскивали растения при помощи пульверизатора (Коломбет, 2006, [1]). В жидкой культуре штамм образовывал пикниды со спорами, концентрация спор в КЖ составила 1x10 спор/мл, концентрация мицелия 10 мг/мл.
Состав модифицированной среды Чапека
2
4
KHPO-1 г
KCl - 0.5 г
4
MgSO - 0.5 г
Глюкоза - 20 г
Пептон - 1 г
Дрожжевой экстракт - 5 г
Вода - 1 л
1
2
3
4
5
6
Учет проводили на 2-7, 14 и 21 сутки после инокуляции. Определяли площадь пораженной поверхности каждого листа растения по 0-6-балльной шкале (0=нет симптомов, 1=0-5%; 2=6-25%; 3=26-75%; 4=76-95%; 5>95%; 6=гибель листа). Площадь пораженной поверхности растения определяли по формуле: 2.5xn+15xn+50xn+85xn+97.5xn+100xn/N, nx - число листьев с данным баллом, N - общее число листьев (Pfirter, Defago, 1998 [7]).
7
Штамм проявляет высокую патогенность для борщевика Сосновского. На 7 сутки после обработки растений в контролируемых условиях споровой суспензией штамма при 24 ч продолжительности росяного периода и концентрации инокулюма 6×10 спор/мл интенсивность развития заболевания превысила 45%, а при обработке мицелиальной суспензией составила более 60%. В полевых условиях обработка растений мицелиальной суспензией штамма приводила к 40% поражению растений (табл.4, 5, 6).
Жидкая культура штамма, включающая мицелий, споры и культуральную жидкость, была высоко агрессивна для растений борщевика Сосновского и приводила при 48 ч продолжительности периода повышенной влажности к 75% поражению растений на 7 сутки (табл.7).
Пример 3. Пример оценки специфичности штамма.
Из листьев растений пробочным сверлом вырезали диски диаметром 1 см. Диски помещали рядами нижней стороной вверх по 12 штук в пластиковые контейнеры на увлажненную стерильной водой фильтровальную бумагу. В центр каждого листового диска при помощи автоматической пипетки помещали каплю (объемом 10 мкл) споровой суспензии гриба. Контейнер накрывали крышкой и помещали на 24 часа в термостат (24°C), а затем выставляли на светоустановку. Диаметр некрозов измеряли на 3 и 7 сутки после инокуляции (Berestetskiy et al., 2007 [3]).
Оценено 37 видов растений из 20 семейств (Apiaceae, Asteraceae, Brassicaceae, Caryophyllaceae, Convolvulaceae, Cucurbitaceae, Fabaceae, Lamiaceae, Onagraceae, Oxalidaceae, Plantaginaceae, Poaceae, Polemoniaceae, Polygonaceae, Ranunculaceae, Rosaceae, Rubiaceae, Scrophulariaceae, Solanaceae, Violaceae).
Phoma complanata характеризуется узкой специализацией и приуручен к семейству Apiaceae. Из представителей семейства Apiaceae штамм был патогенен для Heracleum sosnowskyi и Petroselinum sativum, а также в слабой степени для Aegopodium podagraria и Angelica sylvestris. Среди видов других семейств отмечено незначительное поражение Aquilegia vulgaris, Digitalis purpurea, Brassica rapa, Raphanus sativus (табл.8).
Таблица 1
Влияние источников азота и углерода на рост и развитие Phoma complanata штамм 1.40 (ВИЗР)
Источник C или N
Диаметр колоний, мм
Интенсивность спороношения, спор/см<sup>2</sup>
Морфология колоний
На 7 сутки
На 14 сутки
Мочевина
56.2±2.1
87.8±1.3
(7.2±1.4)×10<sup>6</sup>
Войлочные, сверху светло-бежевые, снизу светло-оливковые с крапинами, пикниды немногочисленные преимущественно по периферии колонии
Аспарагин
53.2±1.1
90.0
(10.7±4.2)×10<sup>6</sup>
Войлочные, сверху и снизу светло-бежевые, пикниды немногочисленные, равномерно рассеянные
Пептон
64.3±0.8
90.0
(9.1±0.7)×10<sup>6</sup>
Зернисто-волосистые, сверху и снизу светло-оливковые, пикниды многочисленные, равномерно рассеянные
NaNO<sub>3</sub>
48.5±0.4
85.011.4
(9.8±3.6)×10<sup>6</sup>
Клочковато-войлочные, сверху и снизу светло-бежевые с крапинами многочисленных пикнид, расположенных по периферии колонии
NH<sub>4</sub>NO<sub>3</sub>
12.2±0.6
20.7±1.3
(3.7±1.7)×10<sup>5</sup>
Войлочные, сверху белые, снизу светло-оливковые, край зубчатый
Сахароза
50.7±4.3
82.6±1.2
(2.8±1.4)×10<sup>5</sup>
Войлочные, сверху светло-бежевые, снизу бледно-коричневые с крапинами пикнид, расположенных по краю колонии
Мальтоза
58.7±0.8
90.0
(5.5±1.8)×10<sup>6</sup>
Клочковато-войлочные, сверху и снизу светло-бежевые, с крапинами пикнид, расположенных по краю колонии
Лактоза
49.5±1.4
84.2±2.1
(7.6±2.9)×10<sup>6</sup>
Войлочно-клочковатые, сверху и снизу светло-бежевые с крапинами немногочисленных равномерно рассеянных пикнид
Рамноза
63.0±1.0
90.0
(5.3±2.6)×10<sup>5</sup>
Клочковато-войлочные, сверху и снизу светло-бежевые с крапинами немногочисленных рассеянных пикнид
Арабиноза
52.5±2.2
88.4±0.7
(17.4±7.7)×10<sup>6</sup>
Клочковато-войлочные, сверху светло-бежевые, снизу светло-охряные с крапинами немногочисленных равномерно рассеянных пикнид
Глюкоза
58.0±0.6
90.0
(14.1±2.9)×10<sup>6</sup>
Клочковато-войлочные, сверху и снизу бежевые с крапинами многочисленных рассеянных пикнид
Галактоза
48.8±2.1
86.0±3.1
(1.2±0.4)×10<sup>6</sup>
Войлочные, сверху и снизу светло-бежевые, с крапинами многочисленных пикнид, расположенных преимущественно по краю колонии
Манит
53.5+2.0
90.0
(14.6±2.1)×10<sup>6</sup>
Клочковатые, сверху и снизу светло-бежевые с крапинами многочисленных рассеянных пикнид
Таблица 2
Влияние температуры на рост Phoma complanata штамм 1.40 (ВИЗР) на картофельно-сахарозной агаризованной среде
Температура, °C
Диаметр колоний, мм
На 7 сутки
На 14 сутки
7
17.9±0.3
45.811.0
16
67.5±0.2
90.0
20
84.2±0.8
90.0
24
53.7±1.1
90.0
28
29.3±4.9
Не измер.
32
0
0
Таблица 3
Интенсивность спороношения Phoma complanata штамм 1.40 (ВИЗР) на зерновых субстратах при различных источниках освещения
Освещение
Интенсивность спороношения, спор/г субстрата
Пшено
Перловая крупа
Овсяная крупа
Люминесцентное
(6.2±3.0)×10<sup>9</sup>
(13.7±3.5)×10<sup>9</sup>
(6.8±3.0)×10<sup>9</sup>
Эритемное
(6.6±0.8)×10<sup>9</sup>
(8.7±2.9)×10<sup>9</sup>
(13.7×2.2)×10<sup>9</sup>
Без освещения
(19.6±18.9)×10<sup>9</sup>
(5.9±1.7)×10<sup>9</sup>
(7.2±0.9)×10<sup>9</sup>
Таблица 4
Влияние продолжительности периода повышенной влажности на патогенность споровой суспензии Phoma complanata штамм 1.40 (ВИЗР) для растений борщевика Сосновского
Продолжительность периода повышенной влажности, ч
Степень поражения растений, %
На 3 сутки
На 7 сутки
На 14 сутки
0
0
1.9±1.1
1.9±1.1
6
24.7±13.9
33.5±16.5
19.4±10.0
24
16.±+8.8
48.0±7.5
46.8±7.1
48
35.6±14.3
48.6±8.0
42.8±10.8
Контроль
0
0
8.3±8.3
Таблица 5
Патогенность мицелиального инокулюма Phoma complanata штамм 1.40 (ВИЗР) для растений борщевика Сосновского в контролируемых условиях
Вариант
Степень поражения растений, %
Ha 1 сутки
На 2 сутки
На 4 сутки
На 7 сутки
На 14 сутки
20 мг/мл
10.3±3.2
27.7±5.2
56.2±7.1
64.1±2.8
52.6±5.5
50 мг/мл
19.3±6.5
39.8±9.3
80.6±10.6
76.8±10.6
69.6±2.0
75 мг/мл
26.3±5.8
42.0±7.8
72.2±7.8
62.6±3.1
54.7±7.4
100мг/мл
35.8±7.0
52.2±10.4
78.2±9.7
64.9±12.8
69.8±4.6
Контроль вода
0
0
2.8±1.5
25.0±15.6
39.6±6.25
Таблица 6
Патогенность мицелиального инокулюма Phoma complanata штамм 1.40 (ВИЗР) для растений борщевика Сосновского в полевых условиях
Вариант
Степень поражения растений, %
На 1 сутки
На 2 сутки
На 4 сутки
На 7 сутки
На 14 сутки
75 мг/мл
0
7.0±4.5
10.8±1.7
45.3±3.8
61.6±8.2
100 мг/мл
<1
8.4±3.3
30.4±8.6
39.6±13.8
69.9±3.2
Контроль вода
0
0
0
<1
5.3±4.0
Таблица 7
Патогенность жидкой культуры Phoma complanata штамм 1.40 (ВИЗР) для растений борщевика Сосновского в контролируемых условиях
Вариант
Степень поражения растений, %
На 2 сутки
На 7 сутки
На 14 сутки
На 21 сутки
32.12<sub>1</sub>
21.4±3.4
75.1±5.8
61.0±10.7
55.0±8.6
Контроль
0
0
16.918.4
15.2±7.7
Таблица 8
Специализация Phoma complanata штамм 1.40 (ВИЗР)
Семейство
Вид растения
Время учета, сутки
1.40 (ВИЗР)
Apiaceae
Aegopodium podagraria
3
<1
7
1.2±0.5
Angelica sylvestris
3
2.0
7
2.0
Coriandrum sativum
3
0
7
1.0±0.5
Daucus sativus
3
0
7
<1
Petroselinum sativum
3
1.3±0.6
7
3.2±1.2
Heracleum sosnowskyi
3
2.0±0.5
7
3.3±1.4
Asteraceae
Calendula officinalis
3
0
7
0
Cirsium arvense
3
0
7
0
Lactuca sativa
3
0
7
0
Sonchus arvensis
3
0
7
0
Taraxacum officinale
3
0
7
0
Tussilago farfara
3
0
7
0
Brassicaceae
Brassica rapa
3
0
7
1.0±0.4
Raphanus sativus
3
0
7
1.0±0.3
Caryophyllaceae
Lychnis chalcedonica
3
0
7
0
Convolvulaceae
Convolvulus arvensis
3
0
7
0
Cucurbitaceae
Cucumis sativus
3
0
7
0
Cucurbita pero
3
0
7
0
Fabaceae
Lupinus polyphyllus
3
0
7
0
Pisum sativum
3
0
7
0
Lamiaceae
Mentha piperita
3
0
7
0
Galeopsis tetrachit
3
0
7
0
Origanum vulgare
3
0
7
0
7
0
Onagraceae
Epilobium angustifolium
3
0
7
0
Oenothera glazioviana
3
0
7
0
Oxalidaceae
Oxalis corniculata
3
0
7
<1
Plantaginaceae
Plantago major
3
0
7
0
Poaceae
Triticum aestivum
3
0
7
0
Polemoniaceae
Phlox paniculata
3
0
7
0
Polygonaceae
Rumex acetosa
3
0
7
0
Ranunculaceae
Aquilegia vulgaris
3
1.7±0.4
7
1.7±0.4
Rosaceae
Fragaria vesca
3
0
7
0
Geum rivale
3
0
7
0
Rubiaceae
Galium boreale
3
0
7
<1
Scrophulariaceae
Digitalis purpurea
3
1.0±0.5
7
1.0±0.5
Solanaceae
Solanum tuberosum
3
<1
7
He учит.
Violaceae
Viola canina
3
0
7
0
Таким образом, приведенные данные свидетельствуют в сравнении с прототипом о высокой специализации Phoma complanata штамм 1.40 (ВИЗР), позволяющей применять его для борьбы с борщевиком Сосновского в посевах большинства культурных растений, на пастбищах и охраняемых природных зонах. В то время как штаммы фитопатогена Sclerotinia sclerotiorum могут применяться только в посевах зерновых культур и злаковых трав. Кроме того, из данных следует высокая агрессивность гриба Phoma complanata штамм 1.40 (ВИЗР) в отношение борщевика Сосновского, сопоставимая, а в контролируемых условиях и превышающая биологическую активность взятого за прототип штамма Sclerotinia sclerotiorum.
Литература
1. Коломбет Л.В. Научное обоснование и практическая реализация технологии создания грибных препаратов для защиты растений от болезней // Автореф. дисс. д.б.н. Москва, 2006. 47 с.
2. Наумов Н.А. Методы микологических и фитопатологических исследований. М.-Л.: Госиздат колхозной и совхозной литературы, 1937, 272 с.
3. Berestetskiy А.О., Fyodorova A.F., Kustova S. A laboratory technique for the evalution of pathogenicity of Septoria cirsii for Cirsium arvense, XV Congress of European mycologists, 2007, p.242.
4. Boerema G.H., de Gruyter J., Noordeloos M.E., Hamers M.E.C. Phoma identification manual, CABI Publishing, 2004, 470 p.
5. de Voogd В., de Jong M., Nielsen C. Use of Sclerotinia sclerotiorum as a mycoherbicide to control the spread of giant hogweed (Heracleum mantegazzianum) in the Netherlands and Denmark. Manuscript cross-posted to Botanical Electronic News, no. 318, and International Bioherbicide Group Newsletter (IBG Newsletter). 2003. Vol.12, no. 2.11.
6. Erneberg M., Strandberg В., Jensen B.D. Susceptibility of a plant invader to a pathogenic fungus: An experimental study of Heracleum mantegazzianum and Sclerotinia sclerotiorum. In: L.E.Child, J.H.Brock, G.Brundu, K.Prach, P.Pysek, P.M.Wade and M.Williamson (eds.) Plant Invasions: Ecological Threats and Management Solutions. Backhuys Publishers, Leiden, The Netherlands. 2003. P.355-372.
7. Pfirter H., Defago G. The potential of Stagonospora sp. as a mycoherbicide for field bindweed // Biocontrol Science and technology. 1998. 8. P.93-101.
8. Seier M., Evans H. Fungal pathogens associated with Heracleum mantegazzianum in its native and invaded distribution range. In: P.Pysek, M.J.W.Cock, W.Nentwig, H.P.Ravn (eds.) Ecology and management of giant hogweed (Heracleum mantegazzianum). CABI UK Center (Ascot) Silwood Park, Buckhurst Road, Ascot, Berkshire SL5 7 ТА, UK. 2007. 25 p.