УЛУЧШЕННЫЙ СПОСОБ УВЕЛИЧЕНИЯ ЧИСЛА ОПУХОЛЕ-РЕАКТИВНЫХ Т-ЛИМФОЦИТОВ В ИММУНОТЕРАПИИ ОНКОЛОГИЧЕСКИХ БОЛЬНЫХ

1. Способ увеличения количества опухоле-реактивных CD4+ Т-хелперов и/или CD8+ Т-лимфоцитов, причем способ содержит
i) первую фазу стимуляции опухоле-реактивных CD4+ Т-хелперов и/или CD8+ Т-лимфоцитов полученным из опухоли антигеном наряду, по меньшей мере, с одним веществом, обладающим агонистической активностью в отношении рецептора IL-2, для увеличения жизнеспособности опухоле-реактивных CD4+ Т-хелперов и/или CD8+ Т-лимфоцитов; и
ii) вторую фазу активации и усиления роста опухоле-реактивных CD4+ Т-хелперов и/или CD8+ Т-лимфоцитов, где вторую фазу ii) инициируют, когда на CD4+ Т-хелперах и/или CD8+ Т-лимфоцитах подавляется маркер клеточной поверхности CD25, где подавление определяют как то, что 5% или менее популяции Т-лимфоцитов экспрессирует CD25, и где фазу ii) инициируют добавлением к Т-лимфоцитам полученного из опухоли антигена для активации опухоле-реактивных CD25-негативных Т-лимфоцитов.
2. Способ по п.1, в котором первую фазу i) инициируют добавлением, по меньшей мере, одного вещества, обладающего агонистической активностью в отношении рецептора IL-2.
3. Способ по п.2, в котором веществом, обладающим агонистической активностью в отношении рецептора IL-2, является IL-2.
4. Способ по п.1, в котором полученный из опухоли антиген представляет собой денатурированный гомогенат опухоли.
5. Способ по п.4, в котором полученный из опухоли антиген является аутологичным.
6. Способ по п.1, который дополнительно включает добавление к Т-лимфоцитам антиген-представляющих клеток вместе с полученным из опухоли антигеном.
7. Способ по п.6, в котором антиген-представляющими клетками являются облученные лейкоциты периферической крови, содержащие антиген-представляющие В-клетки и/или моноциты.
8. Способ по п.1, в котором вторая фаза ii) включает введение, по меньшей мере, одного вещества, способного активировать IL-12R на Т-лимфоцитах.
9. Способ по п.1, в котором вторая фаза ii) включает введение одного или более веществ, способных противодействовать развитию Т-лимфоцитов типа Th2.
10. Способ по п.9, в котором одним или более веществами, способными противодействовать развитию Т-лимфоцитов типа Th2, являются одно или более веществ, способных нейтрализовать IL-4, IL-5, IL-10 и/или TGF-бета.
11. Способ по п.10, в котором одно или более веществ, способных нейтрализовать IL-4, IL-5, IL-10 и/или TGF-бета, представляют собой антитело против IL-4, антитело против IL-5 и/или антитело против IL-10.
12. Способ по любому из пп.1, 9 или 10, в котором одно или более веществ, способных противодействовать развитию Т-лимфоцитов типа Th2, например одно или более веществ, способных нейтрализовать IL-4, IL-5, IL-10 и/или TGF-бета, добавляют регулярно, на протяжении всей фазы ii).
13. Способ по п.1, в котором вторая фаза ii) включает введение одного или нескольких веществ, стимулирующих развитие Т-лимфоцитов типа Th1.
14. Способ по п.13, в котором одним или более веществами, стимулирующими развитие Т-лимфоцитов типа Th1, являются вещества, обладающие агонистической активностью в отношении рецептора IL-7, IL-12, IL-15 и/или IL-21.
15. Способ по п.14, в котором одно или более веществ выбирают из IL-7, IL-12, IL-15 и IL-21.
16. Способ по п.1, направленный на получение Th1-лимфоцитов памяти и/или эффекторных Th1-лимфоцитов.
17. Способ по п.1, который дополнительно включает мониторинг экспрессии маркеров клеточной поверхности, таких как, например, CD25 и/или CD69 на Т-лимфоцитах непрерывно во время первой фазы i) и второй фазы ii),
в котором Т-лимфоциты собирают при подавлении CD25 на Т-лимфоцитах во второй фазе ii).
18. Способ по п.17, в котором Т-лимфоциты подвергают, по меньшей мере, одному дополнительному циклу фазы ii), когда CD25 на Т-лимфоцитах подавляется.
19. Способ по п.1, в котором Т-лимфоциты получают из лимфатических узлов, куда оттекает лимфа от первичной опухоли и/или метастаза, или их получают из крови.
20. Композиция, включающая опухоле-реактивный CD4+ Т-хелпер и/или CD8+ лимфоциты в изотонической среде.
21. Композиция по п.20, где изотоническая среда представляет собой 0,9% хлорид натрия и среда дополнительно содержит до 3% сывороточного альбумина человека.