Совершенствование подходов к отбору соединений, обладающих антиметастатической активностью: инвазивный тест

20

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ОНКОЛОГИЯ

держания злокачественного фенотипа, причин лекарственной устойчивости, патогенеза процесса метаста-зирования. Это позволило выявить новые молекулярные мишени для препаратов, в том числе специфичные для опухолевой клетки. Расшифровка генома человека с последующим анализом данных методами биоинформатики, системной биологии приведет в ближайшем будущем к значительному увеличению количества потенциальных мишеней для действия препаратов. Это потребует нового подхода к поиску перспективных фармакологических агентов. Другая причина необходимости изменения в подходах к разработке препаратов - экономическая. Уже сейчас для разработки нового препарата требуется 10-15 лет и около 500 миллионов долларов США. При этом до 80 % этих средств могут быть потрачены на неудачные решения в процессе доклинического и клинического этапов разработки препарата.

В докладе будет представлена новая организация начальных этапов отбора соединений с противоопухолевой активностью, учитывающая современные

представления о рациональном подходе к созданию новых препаратов:

• оценка перспективности предлагаемых для изучения соединений in silico с использованием компьютерных баз данных по противоопухолевым соединениям; прогнозирование их фармакологических эффектов с помощью специальных компьютерных систем; составление программы скрининга;

• тестирование соединений in vitro-in vivo в специальных тест-системах с идентифицированными мишенями (оценка цитотостатических и токсических свойств, индукция апоптоза, индукция дифферен-цировки, антиангиогенные и другие эффекты);

• разработка препарата на основе отобранного перспективного соединения, ориентированного на определен-ныемолекулярныемишени(предклиническоеизучение противоопухолевыхитоксическихэффектов).

Все этапы исследований контролируются Советом Экспертов по разработке новых противоопухолевых лекарств, в состав которого входят ведущие специалисты РОНЦ РАМН.

СОВЕРШЕНСГВОВАНИЕПОДХОДОВКОТБОРУ СОЕДИНЕНИИ, ОБЛАДАЮЩИХ АШНМЕТАСТА1ИЧЕ(ЖОЙАКТИВНОСГЬЮ: ИНВАЗИВНЫЙТЕСГ

С. М. Киселев1, Н.В. Хонинова1, Л.Ф. Морозова1, А. В. Аклеев2, А.М. Козлов1, А.Ю. Барышников1 1 ГУ РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва 2ФГУ Уральский научно-практический центр радиационной медицины

Цель и задачи. Разработка модифицированной методики проведения инвазивного теста для оценки антиметастатической активности противоопухолевых препаратов и отбора потенциальных ингибиторов метастазирования с патогенетической направленностью действия.

Материалы и методы. В экспериментах использованы клетки меланомы человека, выделенные из образцов тканей больных при хирургической операции. Тест проводили в 24-луночных планшетах со вставочными ячейками, разделяющими лунку на две половины полупроницаемой полимерной РЕТ-мемб-раной (диаметр пор - 8 мкм). В качестве субстанции, формирующей барьер, использовали матригель (смесь соединительнотканных белков - ламинина, фибро-нектина, коллагена-IV типа и т.д.). Опухолевые клетки, прошедшие через мембрану, покрытую полиме-ризованным матригелем, фиксировали и окрашивали по Лейшману. Число опухолевых клеток, прошедших через барьер, подсчитывали под микроскопом.

Результаты и обсуждение. Моделирование процесса инвазии опухолевых клеток через исскусственно созданную базальную мембрану - одна из наиболее информативных in vitro тест-систем, которая позволяет провести интегральную оценку активности соедине-

ний в отношении совокупности биологических процессов, задействованных в процессе метастазирования. Модифицирована методика подготовки полимерных мембран с матригелем (смесью соединительнотканных белков, которая при полимеризации в соответствующих условиях образует структуру, сходную со структурой базальной мембраны), что позволяет получать равномерный слой геля, исключающий прямую миграцию клеток через поры. Оптимизированы условия подготовки клеток к тесту, включая плотность клеток (30 тыс. на 1 см2 поверхности мембраны), высаживаемых на мембрану для предотвращения кластеризации. Изучено влияние различных хемоаттрактан-тов (сыворотки, ростовых факторов и кондиционных сред) на временные характеристики проведения теста. На основе модифицированной методики отобрана линия клеток меланомы человека, обладающая наибольшей инвазивной активностью, которая будет использована в качестве модельной для проведения скрининга соединений на предмет выявления антиметастатической активности.

Выводы. Модифицирована методика проведения инвазивного теста, позволяющая на более рациональной основе подходить к отбору соединений, обладающих антиметастатической активностью.

РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ

№2/томЗ/2004