Особенности микробиоценоза толстой кишки цыплят-бройлеров при введении в рацион Chlorella vulgaris Beijer. Ippasc-2014/1

Особенности микробиоценоза толстой кишки цыплят-бройлеров при введении в рацион Chlorella vulgaris Beijer. IPPASC-2014/1

М.В. Сычёва, д.б.н., профессор, ФГБОУ ВО Оренбургский ГАУ; Н.В. Немцева, д.м.н., профессор, ФГБУН ИКВС УрО РАН

В условиях развёртывания программы по им-портозамещению в сельском хозяйстве Российской Федерации запланировано значительное увеличение поголовья продуктивных животных и птиц, что влечёт за собой необходимость наращивания собственного высокотехнологичного и высокоэффективного кормопроизводства. Известно, что доля кормов в себестоимости производства мяса скота, птиц и рыбы достигает 70%. Снижение затрат на корма позволит удешевить себестоимость животноводческой продукции на 30% [1].

В условиях промышленных комплексов для повышения эффективности использования кормов применяют различные кормовые добавки, биостимуляторы отечественного и зарубежного производства. Однако многие из них являются дорогими, небезопасными, а иногда и малоэффективными. В поисках решения задачи по изысканию альтернативных активаторов роста для кормления животных и птицы в последние годы возрос интерес к натуральным добавкам растительного происхождения [2]. Таким компонентом могут явиться зелёные водоросли, в том числе рода Chlorella, хороший рост и высокая урожайность которых являются предпосылкой для их успешного промышленного использования.

Несмотря на несомненные успехи, достигнутые при изучении биологических эффектов хлореллы in vivo [3, 4], недостаточно исследован микроэкологический статус желудочно-кишечного тракта птицы при назначении Chlorella vulgaris. Между тем известно, что обеспечение высокой продуктивности сельскохозяйственной птицы напрямую связано с её здоровьем, а именно с формированием устойчивого микробиоценоза кишечника [5].

Всё вышеизложенное и предопределило цель настоящего исследования — изучить особенности микробиоценоза толстой кишки цыплят-бройлеров при введении в рацион Chlorella vulgaris Beijer. IPPASC-2014/1.

Материал и методы исследования. Исследование проводили на цыплятах-бройлерах кросса ROSS 308. По принципу аналогов были сформированы две группы по 15 гол. в каждой. При формировании групп подопытных птиц и проведении научных изысканий руководствовались «Методикой проведения научных и производственных исследований по кормлению сельскохозяйственной птицы» [6].

Кормление птиц осуществляли сухими сбалансированными комбикормами с параметрами питательности, соответствующими рекомендуемым нормам кормления ВНИТИП. Цыплята имели свободный доступ к корму и воде. Птицы опытной группы к основному рациону добавляли суспензию C. vulgaris Beijer. IPPASC-2014/1 с концентрацией 2,8-1010 клеток/мл.

Экспериментальный период у цыплят-бройлеров продолжался с суточного до 40-дневного возраста, в течение которого отбирали содержимое толстого отдела кишечника в 10-, 20-, 30- и 40-суточном возрасте.

Бактериологическое исследование содержимого толстого отдела кишечника проводили с помощью метода серийных разведений [7]. Анаэробных представителей облигатной микрофлоры толстой кишки (Bifidobacterium spp.) выделяли в полужидком бульоне Шедлера (HiMedia Laboratories Pvt. Ltd., India). Для выделения микроаэрофильных представителей облигатной микрофлоры (Lactobacillus spp.) использовали плотную питательную среду MRS (HiMedia Laboratories Pvt. Ltd., India). Качественный и количественный учёт факультативной микробиоты осуществляли на средах Эндо и висмут-сульфитный агар (ФБУН ГНЦ ПМБ, Россия) (выделение бактерий семейства Enterobacteriaceae); Enterococcosel-Agar (CONDA, Испания) (выделение бактерий рода Enterococcus). Выделенные микроорганизмы идентифицировали по культу-ральным, тинкториальным, морфологическим и биохимическим признакам.

Полученные в ходе исследования численные материалы были обработаны статистически с определением средних значений, среднего квадратичного отклонения и средней ошибки. Достоверность различий сравниваемых показателей оценивалась по t-критерию Стьюдента [8]. Статистическая обработка данных проводилась с помощью автоматизированной программы «Биостатистика».

Результаты исследования. Анализ кишечного микробиоценоза птицы свидетельствует о значительных различиях в исследуемых группах. У цыплят, в рацион которых была введена микроводоросль хлорелла, количество лактобактерий к 10-м суткам эксперимента было на 17% меньше, чем в контроле. Максимальных значений рассматриваемый показатель у птиц контрольной группы достигал к 20-м суткам эксперимента, составив 1,7-109 КОЕ/г против 1,1 • 109 КОЕ/г у цыплят опытной группы. Но если у цыплят-бройлеров, получавших суспензию хлореллы, количество Lactobacillus spp. постепенно росло и к 30-м сут. составило 2,0-109 КОЕ/г, то у птиц контрольной

группы к концу первого месяца жизни содержание этого микроорганизма значимо снизилось до

5.1-108 КОЕ/г (p<0,01). К концу наблюдений данный показатель оставался на 45% больше у птиц опытной группы, составляя 7,1 • 109 КОЕ/г против 3,9 •Ю9 КОЕ/г в контроле. По-видимому, суспензия хлореллы, попадая в желудочно-кишечный тракт цыплят, прежде всего становится оптимальной питательной средой, на которой бурно развиваются молочнокислые бактерии, в том числе лактобациллы [9]. Аналогичные результаты, свидетельствующие об увеличении численности лактобацилл в кишечном микробиоценозе кур-несушек, получавших хлореллу, были получены P. Janczyk et al. (2009) [10].

Динамика количественного содержания бифи-добактерий в кишечнике птицы изучаемых групп на протяжении всего эксперимента была сходной. Анализ частоты обнаружения Bifidobacterium spp. выявил их появление в кишечнике птицы всех групп к 20-м сут. эксперимента. Начиная с 20-х суток наблюдения у цыплят-бройлеров опытной группы количество бифидобактерий постепенно росло и к 40-м сут. эксперимента достигло максимума — 6,7 -1010 КОЕ/г, в то время как у птиц, не получавших суспензию хлореллы, к концу наблюдения содержание этого микроорганизма было значимо ниже — на 49% (Р< 0,01).

Эшерихии были обнаружены в составе микробиоценоза кишечника 10-дневных цыплят как контрольной, так и опытной групп. Однако у птиц, получавших суспензию хлореллы, их концентрация была в 4,9 раза меньше. В содержимом кишечника цыплят опытной группы на 20-е сутки эксперимента количество E. rnli составило 5,8-107 КОЕ/г против 1,2•Ю8 КОЕ/г в контроле. Значительно сниженным по сравнению с контролем (в 29 раз) оказалось содержание E. mli в кишечнике бройлеров опытной группы на 30-е сут. эксперимента. К концу наблюдения плотность популяции кишечных палочек в кишечном биотопе бройлеров опытной группы не изменялась и составила 5,0^ 106 КОЕ/г, что может свидетельствовать о стабилизации кишечного микробиоценоза у птицы, получавшей суспензию C. vulgaris Beijer. IPPASC-2014/1. У бройлеров контрольной группы к 40-м сут. эксперимента концентрация эшерихий существенно снижалась — до 2,1 •Ю7 КОЕ/г, незначительно превышая аналогичный показатель у птицы опытной группы.

В структуре патологии сельскохозяйственных птиц существенное место занимают инфекционные заболевания, в этиологии которых значительную долю составляют патогенные микроорганизмы рода Salmonella [11]. Численность микроорганизмов этого рода в содержимом толстого отдела кишечника птицы контрольной и опытной групп на 10-е сут. эксперимента практически не отличалась, составив

2.2-102 и 2,3-102 КОЕ/г соответственно. Однако уже

к 20-м суткам наблюдения уровень колонизации кишечного биотопа сальмонеллами был в 2,8 раза выше у птицы контрольной группы. Сопоставлением количественных показателей микрофлоры кишечника у 30-суточных цыплят-бройлеров отмечалась статистически значимое (Р<0,05) уменьшение плотности популяции сальмонелл в кишечном содержимом птицы, получавшей суспензию хлореллы, до 1 • 103 КОЕ/г против 1,3 •Ю3 КОЕ/г в контроле. Максимальных значений рассматриваемый показатель у бройлеров контрольной и опытной групп достигал к концу эксперимента, составляя 17,0 • 104 и 15,5 • 104 КОЕ/г соответственно.

Полученные нами данные согласуются с результатами исследований иностранных авторов. Так, на увеличение концентрации лактобацилл и снижение показателя обсеменённости содержимого кишечника сальмонеллами и E. coli на фоне введения в рацион птиц хлореллы указывают

H.K. Kang et al. (2017) [12].

Изучение динамики Proteus spp. выявило раннее заселение ими пищеварительного тракта цыплят-бройлеров контрольной группы (с 10-суточного возраста) и максимальное количественное содержание в толстом отделе кишечника на 20-е сутки жизни, не превышающее 105 КОЕ/г. У птиц опытной группы бактерии рода Proteus были обнаружены только на 30-е сутки эксперимента.

Выявленное нами снижение численности условно-патогенных микроорганизмов в толстой кишке цыплят-бройлеров может быть связано не только с усилением колонизационной резистентности кишечного биотопа за счёт увеличения представителей мутуалистической микрофлоры, но и с наличием антагонистической активности у штамма C. vulgaris Beijer. IPPASC-2014/1 в отношении бактерий родов Salmonella и Proteus.

Бактерии рода Enterococcus в кишечном биотопе обследуемых цыплят разных возрастов обеих групп не обнаружены.

Выводы.

1. Выпаивание цыплятам-бройлерам суспензии хлореллы существенно регулирует микроэкологический статус желудочно-кишечного тракта птицы, создавая благоприятные условия для развития представителей мутуалистической микрофлоры родов Lactobacillus, Bifidobacterium и сдерживая колонизацию кишечника Escherichia spp., Salmonella spp. и Proteus spp.

2. Полученные результаты открывают перспективы использования C. vulgaris Beijer. IPPASC-2014/1 не только в качестве кормовой биодобавки, но и в качестве средства коррекции микробиоценоза кишечника птиц.

Литература

I. Растрыгин В.С. Кормопроизводство в условиях импорто-

замещения // Новая наука: Опыт, традиции, инновации.

2016. № 5-3 (83). С. 7-9.

2. Langhout P. New additives for broiler chickens // World Poultry.

2000. No. 16(3). P. 22-27.

3. Queiroz J. de S., Barbosa C.M., Rocha M.C. et al.Chlorella vulgaris treatment ameliorates the suppressive effects of single and repeated stressors on hematopoiesis // Brain Behav. Immun.

2013. No. 29. P. 39-50.

4. An B.K., Kim K.E., Jeon J.Y. et al. Effect of dried Chlorella vulgaris and Chlorella growth factor on growth performance, meat qualities and humoral immune responses in broiler chickens // Springerplus. 2016. Vol. 5 (1). P. 718.

5. Каминськая М.В., Стефанышин О.М., Нечай Г.И. и др. Сравнительная возрастная динамика становления микро-боценоза слепой кишки кур и перепелов // Бюлоия тварин.

2014. Т. 16. № 4. С. 50-58.

6. Егоров И.А., Околелова Т.М., Тишенков А.Н. и др. Методика проведения научных и производственных исследований по кормлению сельскохозяйственной птицы: рекомендации. Сергиев Посад: ВНИ ТИП. 2004. С. 17-25.

7. Минушкин О.Н. Методика определения микробиоценоза кишечника // Академия. 1999. № 2. С. 17.

8. Ашмарин И.П., Воробьев А.А. Статистические методы в микробиологических исследованиях. Л.: Гос. изд-во мед. лит., 1962. 180 с.

9. Зинченко Е.В., Панин А.Н. Иммунобиотики в ветеринарной практике. Пущино: ОНТИ ПНЦ РАН, 2000. 164 с.

10. Janczyk P., Halle B., Souffrant W.B. Microbial community composition of the crop and ceca contents of laying hens fed diets supplemented with Chlorella vulgaris // Poult. Sci. 2009. Vol. 88(11). P. 2324-2332.

11. Ленченко Е.М., Мансурова Е.А., Моторыгин А.В. Характеристика токсигенности энтеробактерий, выделенных при желудочно-кишечных болезнях сельскохозяйственных животных // Сельскохозяйственная биология. 2014. № 2. C. 94-104.

12. Kang H.K., Park S.B., Kim C.H. Effects of dietary supplementation with a chlorella by-product on the growth performance, immune response, intestinal microflora and intestinal mucosal morphology in broiler chickens // J. Anim. Physiol. Anim. Nutr. 2017. No. 101. Vol. 2. P. 208-214.

Гематологические показатели перепелов после лечения их лекарственным соединением «С-16»

С.А. Зеленская, аспирантка, М.Х. Лутфуллин, д.в.н, профессор, Р.Р. Галяутдинова, аспирантка, ФГБОУ ВО Казанская ГАВМ; З.Х. Терентьева, д.б.н, профессор, ФГБОУ ВО Оренбургский ГАУ

Гематологическое исследование крови является одним из важнейших диагностических методов, отражающих реакцию кроветворных органов при воздействии на организм различных физиологических и патологических факторов. Во многих случаях оно играет большую роль в постановке диагноза, а при заболеваниях системы кроветворения ему отводится ведущая роль [1].

Развивающийся рынок фармации не обошёл стороной и ветеринарную фармакологию. В настоящее время идёт расширение ассортимента отечественных ветеринарных препаратов, в частности противопаразитарных средств.

Эффективность различных антигельминтных препаратов при гельминтозах птиц нельзя полностью оценивать только на основании изучения интенс- и экстенсэффективности, поэтому при разработке лекарственных средств очень важно учитывать их влияние на гематологические показатели крови.

В Казанском химическом институте А.М. Бутлерова (Казанский (Приволжский) федеральный университет) был разработан препарат «Соль фосфония С-16», на который получен патент № 2629316 «Средство для лечения нематодозов и эймериозов в ветеринарии», обладающий противо-паразитарными свойствами в отношении кишечных паразитов животных и птиц [2—5].

Положительные результаты исследований, полученные при изучении лечебной эффективности лекарственного соединения «С-16» при кишечных паразитозах птиц, явились основой для изучения фармакодинамики данного соединения.

Цель исследования — изучить гематологические показатели у экспериментально инвазированных

аскаридиями перепелов при лечении их новым лекарственным соединением «С-16».

Материал и методы исследования. Работа была выполнена на базе лаборатории кафедры эпизоотологии и паразитологии Казанской ГАВМ им. Н.Э. Баумана в 2017 г. Объектом исследования служили перепела техасской породы (Белый фараон), женского пола, с массой тела 370—420 г. Птицы были получены из благополучного по инвазионным болезням хозяйства. Проведённое копроскопическое исследование показало отрицательные результаты.

В опыте по изучению сравнительной эффективности препаратов для лечения инвазированных аскаридиозом птиц использовали 100 перепелов, клинически здоровых и свободных от кишечных паразитов, в возрасте 3 мес. 80 перепелов заражали инвазионными яйцами нематоды Ascaridia gaШ в дозе 500 яиц на гол.

Для приготовления инвазионного материала брали свежий помёт от перепелов из хозяйства, неблагополучного по инвазионным болезням. Помёт помещали в пробирку и увлажняли 2-процентным раствором двухромовокислого калия. Материал перекладывали в бактериологические чашки и ставили для созревания яиц в термостат с температурой 25°С и при влажности 90% на 20 суток. После того как в среднем 60% яиц стали инвазионными из помёта готовили взвесь на насыщенном растворе сахара (плотность 1,28), которую фильтровали и центрифугировали при 1500 оборотах в течение 2 мин. Из надосадочной жидкости производили подсчёт инвазионных яиц в счётной камере ВИГИС, и с помощью зонда взвесь вводили каждому перепелу в пищевод.

Перепела каждой группы во время эксперимента содержались в индивидуальных клетках. Условия содержания и кормления во время проведения опыта соответствовали зоогигиеническим нормам. Кормили птиц специализированным сухим кормом для перепелов. После 2-недельного карантина 5