Изменение электрофоретической подвижности и формы эритроцитов при действии озона на эритроцитарную массу

МЕДИНА ЛЬ

изменение электрофоретической подвижности и формы эритроцитов при действии озона на эритроцитарную массу

Целью работы являлось исследование динамики морфофункциональных свойств эритроцитов при действии озона на эритроцитарную массу разных сроков хранения. Изучали эритроцитарную массу из крови человека, стабилизированную гемоконсервантом ЦФДА 1. В ходе осуществления способа предтрансфузионной реабилитации эритроцитарная масса смешивалась с озонированным раствором натрия хлорида 0,9% (ОФР) в эквивалентном объеме, содержащем различные концентрации озона (0,5, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 мг/л). Озонирование физиологического раствора производили на установке озонаторной терапевтической автоматической УОТА-60-01-«Медозон». Через

1 час после воздействия измеряли электрофоретическую подвижность эритроцитов (ЭФПЭ) и МДА. Морфологию эритроцитов исследовали в мазках крови, окрашенных по Романовскому. Установлено, что при озонировании эритроцитарной массы следует учитывать дозы озона и сроки хранения эритроцитов. Дозами озона, эффективно увеличивающими ЭФПЭ, являются 1, 2 и 10 мг/л. При этом использование озона в концентрациях 1, 2 мг/л вызывает максимальное увеличение ЭФПЭ при всех сроках хранения эритроцитарной массы, в концентрации 10 мг/л рост ЭФПЭ наиболее выражен при хранении эритроцитарной массы 7 суток.

Ключевые слова: электрофоретическая подвижность, эритроциты, озон.

The purpose of the study was put the electrophoretic mobility of erythrocytes (EPME) and their morphology under the influence of ozone on erythrocyte mass of different periods of storage. We studied stabilized gemokonservantom TSFDA 1 packed red blood cells in human blood. In the course of ozonation packed red blood cells mixed with ozonized sodium chloride 0,9% in an equal volume containing various concentrations of ozone (0.5, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 mg/ml). Ozonation saline Manufactured on ozonizer therapeutic automatic Wat-60-01-«Medozone Ltd.». 1 hour after exposure was measured EPME and MDA. Studied the morphology of red blood cells in blood smears stained by Romanovsky. Thus, when ozonation red cells should be considered ozone dose and shelf-life of red blood cells. Doses of ozone effectively increases EPME are 1, 2 and 10 mg / L, with the use of ozone in concentrations of 1 and 2 mg /l is the maximum increase RBCEM at all stages of red cell storage in a concentration of 10 mg /l increase EPME most pronounced during storage red cells 7 days.

Key words: electrophoretic, mobility, erythrocytes, ozone.

И.С. Симутис1, А.В. Дерюгина2, Г.А. Бояринов1, А.И. Сенюрина2, Н.А. Андреева2,

1ГБУЗ НО «Городская клиническая больница № 40», г. Н. Новгород, 2ФГБОУ ВПО «Нижегородский государственный университет им. Н.И. Лобачевского»

Симутис Ионас Стасио -e-mail: simutis@mail.ru

ВВЕДЕНИЕ

Несмотря на критическую оценку, данную в работах многих авторов, потенциала эритроцитарной массы по коррекции процессов газотранспорта, микроциркуляции и текучести крови у пациентов с тяжелыми анемиями различного генеза, принятые стандарты интенсивной терапии и соответствующая нормативная документация регламентируют использование эритроцитов вплоть до 35 суток хранения. В этой связи в настоящее время ведется активный поиск средств и методов улучшения морфофункциональных характеристик консервированных эритроцитов [1, 2, 3]. Нами был предложен способ предтранс-фузионной реабилитации эритроцитарной массы с помощью озонированного физиологического раствора. Безопасность и эффективность применения окислителя в отношении морфологически и функционально дискредитированных консервированных клеток оценены нами по

критерию изменения электрофоретической подвижности эритроцитов (ЭФПЭ), характеризующему поверхностный заряд клеток и, соответственно, их морфофункциональ-ное состояние [5, 6].

ЦЕЛЬЮ ИССЛЕДОВАНИЯ являлось исследование динамики морфофункциональных свойств эритроцитов при действии озона на эритроцитарную массу разных сроков хранения.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Исследовали эритроцитарную массу из крови человека, стабилизированную гемоконсервантом ЦФДА 1 в соотношении 1:4, хранившуюся при t +40С 7, 14, 21 и 30 суток. Эритроцитарная масса различных доноров в опытах не смешивалась. Донорскую кровь получали на станции переливания крови.

В ходе осуществления способа предтрансфузионной реабилитации эритроцитарная масса смешивалась

20 мели \ь № 4 (9) сентябрь 2013

МЕДИНА ЛЬ

с озонированным раствором натрия хлорида 0,9% (ОФР) в эквивалентном объеме, содержащем различные концентрации озона. Используемые концентрации озона: 0,5, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 мг/л. Было проведено 15 серий с каждой концентрацией озона. Озонирование физиологического раствора производили непосредственно перед введением его в эритроцитарную массу. Озонирование физиологического раствора производили на установке озонаторной терапевтической автоматической УОТА-60-01-«Медозон». Через 1 час после воздействия измеряли ЭФПЭ и МДА. Измерение ЭФПЭ производили методом микроэлектрофореза [4, 5]. Морфологию эритроцитов исследовали в мазках крови, окрашенных по Романовскому [6].

Полученные данные были обработаны с помощью пакетов прикладных программ Statistica 6.0 и Microsoft Excel с использованием методов одномерной статистики.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

В ходе проведенных исследований было показано, что наиболее высокая ЭФПЭ регистрировалась при сроках хранения эритроцитарной массы 7 суток (составив 1,16±0,02 мкм •см / В •с), с понижением данного показателя в зависимости от сроков хранения. Исследование формы эритроцитов в мазках показало, что 94% эритроцитов являются дискоцитами и 4% составляют атипичные формы клеток при сроках хранения эритроцитарной массы 7 суток. Увеличение сроков хранения приводило к появлению эхиноцитов и стоматоцитов. Так, на 21-е сутки регистрировалось максимальное количество эхиноцитов (до 95% в мазке), тогда как к 30-ым суткам наблюдалось появление стоматоцитов и эхиноцитов (42% и 47% соответственно).

Действие озона на эритроцитарную массу вызывало фазное изменение ЭФПЭ. Так, при действии озона в концентрации 1 и 2 мг/л регистрировалось увеличение ЭФПЭ при всех сроках хранения эритроцитарной массы на 8-15% в зависимости от «старости» эритроцитарной массы. Второй пик увеличения ЭФПЭ наблюдался при действии озона в концентрации 10 мг/л. Следует отметить, что при концентрациях озона 3 и 4 мг/л, 8 и 9 мг/л ЭФПЭ понижалась. Наиболее выраженно уменьшение данного параметра регистрировалось при сроках хранения 14 и 21 день, достигая 0,87±0,02 мкм •см / В •с. Оценка морфологиче-

ской картины эритроцитов показала, что при действии использованных нами концентраций и доз озонированного физиологического раствора достоверного изменения формы эритроцитов к 7-21 суткам не выявлено, вместе с тем, особенно на 7-е и 14-е сутки хранения имелась тенденция к увеличению количества дискоцитов, прежде всего за счет пула эхиноцитов. При увеличении сроков хранения эритроцитарной массы при действии озона количество дегенеративно измененных форм не изменялось.

ВЫВОДЫ

Известно, что снижение отрицательного заряда и, как следствие, ЭФПЭ определяет повышение агрегации эритроцитов, что оказывает непосредственное влияние на микроциркуляцию, увеличивает вязкость крови. Агрегаты заполняют просвет капилляров, не оставляя места для пристеночного слоя плазмы, являются непосредственной причиной стаза крови, что в итоге вызывает тканевую гипоксию. Таким образом, при озонировании эритроцитарной массы следует учитывать дозы озона и сроки хранения эритроцитов. Дозами озона, эффективно увеличивающими ЭФПЭ, являются 1, 2 и 10 мг/л, при этом использование озона в концентрациях 1, 2 мг/л вызывает максимальное увеличение ЭФПЭ при всех сроках хранения эритроцитарной массы, в концентрации 10 мг/л рост ЭФПЭ наиболее выражен при хранении эритроцитарной массы 7 суток. Применение ОФР по предложенной методике в отношении консервированных эритроцитов, в т. ч. и со значительными сроками хранения, не приводит к ухудшению их морфологического состояния. мф

ЛИТЕРАТУРА

1. Гуревич К.Я., Портной О.А. Перспективы применения активированных углеродных волокон для улучшения характеристик консервированной крови. Гематол. и трансфузиол. 1987. № 11. С. 58-61.

2. Способ предтрансфузионной обработки консервированной эритроцитарной массы / Левин Г.Я., Баталова М.И., Соснина Л.Н., Морозова Н.В.; № 2157219; Заявл. 99115412/14, 14.07.1999 // Изобретения (Заявки и патенты). 2000. № 10. С. 10.

3. Способ предтрансфузионной обработки консервированной эритроцитарной массы / Левин Г.Я., Морозова Н.В.; № 2133613; Заявл. 97110440/14, 18.06.1997 // Изобретения (Заявки и патенты). 1999. № 7. С. 27.

4. Харамоненко С.С., Ракитянская А.А. Электрофорез клеток крови в норме и патологии. Минск: Беларусь, 1974. 125 с.

5. Krylov V.N., Goustov A.V., Antipenko E.A. Erythrocytes functional paramétrés changing under apitherapy of neurological patients. Mellifera. 2007. V. 7. Р. 27-32.

6. Камышников В.С. Справочник по клинико-химической лабораторной диагностике: в 2 т. Т. 2. Минск: Беларусь, 2002. 463 с.

21 меди@ ль № 4 (9) сентябрь 2013