ПРОСТОЙ СПОСОБ ОЧИСТКИ ЛАКТО-N-НЕОТЕТРАОЗЫ (LNnT) ОТ УГЛЕВОДОВ, ПОЛУЧЕННЫХ ПОСРЕДСТВОМ МИКРОБНОЙ ФЕРМЕНТАЦИИ

1. Способ очистки лакто-N-неотетраозы от других углеводов, отличающийся тем, что указанный способ включает стадии подвергания водного раствора, содержащего лакто-N-неотетраозу, двум стадиям мембранной фильтрации с использованием разных мембран, где
одна мембрана имеет порог отсечения по молекулярной массе от примерно 300 до примерно 500 Дальтон, и
другая мембрана имеет порог отсечения по молекулярной массе от примерно 600 до примерно 800 Дальтон.
2. Способ по п. 1, в котором водный раствор получен в результате ферментации или ферментативного процесса получения лакто-N-неотетраозы.
3. Способ по п. 1 или п. 2, в котором водная среда получена в результате ферментации посредством отделения биомассы от ферментационного бульона.
4. Способ по п. 3, в котором отделение биомассы от ферментационного бульона включает по меньшей мере одну стадию ультрафильтрации, предпочтительно две стадии ультрафильтрации, более предпочтительно первую ультрафильтрацию с использованием мембраны, имеющей порог отсечения по молекулярной массе примерно 500 кДа, и вторую ультрафильтрацию с использованием мембраны, имеющей порог отсечения по молекулярной массе примерно 150 кДа.
+
-
5. Способ по любому из пп. 1-4, в котором водную среду обрабатывают катионообменной смолой, предпочтительно в форме Н, и анионообменной смолой, предпочтительно в форме Cl, более предпочтительно перед подверганием водного раствора стадиям мембранной фильтрации.
6. Способ по любому из пп. 1-5, где указанный способ дополнительно включает стадию диализа, предпочтительно электродиализа.
7. Способ очистки лакто-N-неотетраозы от других углеводов, отличающийся тем, что указанный способ включает стадии подвергания водного раствора, содержащего лакто-N-неотетраозу, стадии мембранной фильтрации с использованием мембраны, имеющей порог отсечения по молекулярной массе от примерно 300 до примерно 500 Дальтон, и подвергания водного раствора непрерывной хроматографии для удаления из указанного водного раствора углеводов, имеющих молекулярную массу, больше чем молекулярная масса LNnT.
8. Способ по п. 7, в котором ретентат стадии мембранной фильтрации подвергают непрерывной хроматографии.
9. Способ очистки лакто-N-неотетраозы от других углеводов, отличающийся тем, что указанный способ включает стадии подвергания водного раствора, содержащего лакто-N-неотетраозу, стадии мембранной фильтрации с использованием мембраны, имеющей порог отсечения по молекулярной массе от примерно 600 до примерно 800 Дальтон, и подвергания водного раствора непрерывной хроматографии для удаления из указанного водного раствора углеводов, имеющих молекулярную массу, меньше чем молекулярная масса LNnT.
10. Способ по п. 9, в котором элюат непрерывной хроматографии подвергают стадии мембранной фильтрации.
11. Способ по любому из пп. 7-10, в котором водный раствор получен в результате ферментации или ферментативного процесса получения лакто-N-неотетраозы.
12. Способ по любому из пп. 7-11, в котором водная среда получена в результате ферментации посредством отделения биомассы от ферментационного бульона.
13. Способ по п. 12, в котором отделение биомассы от ферментационного бульона включает по меньшей мере одну стадию ультрафильтрации, предпочтительно две стадии ультрафильтрации, более предпочтительно первую ультрафильтрацию с использованием мембраны, имеющей порог отсечения по молекулярной массе примерно 500 кДа, и вторую ультрафильтрацию с использованием мембраны, имеющей порог отсечения по молекулярной массе примерно 150 кДа.
+
-
14. Способ по любому из пп. 7-13, в котором водный раствор обрабатывают катионообменной смолой, предпочтительно в форме Н, и анионообменной смолой, предпочтительно в форме Cl, более предпочтительно перед подверганием водной среды стадиям мембранной фильтрации.
15. Способ по любому из пп. 7-14, где указанный способ дополнительно включает стадию диализа, предпочтительно электродиализа.
16. Способ по любому из пп. 1-15, в котором чистота лакто-N-неотетраозы в водном растворе составляет 70% или меньше, 60% или меньше, 50% или меньше, 40% или меньше, 30% или меньше, 20% или меньше; 10% или меньше или 5% или меньше перед очисткой, и/или водный раствор содержит лакто-N-неотетраозу с чистотой 80% или больше, предпочтительно 85% или большее или более предпочтительно 90% или больше после очистки.
17. Способ по любому из пп. 1-16, где указанный способ включает применение по меньшей мере одной гликозидазы для гидролиза одного или более углеводов, отличных от LNnT, в ферментационном бульоне.
18. Способ по любому из пп. 1-17, в котором второй микроорганизм добавляют в ферментационный бульон после ферментативной продукции LNnT, при этом указанный второй микроорганизм экспрессирует β-галактозидазу, предпочтительно LacZ Е. coli, и/или N-ацетилгексозаминидазу, предпочтительно Bbhl В. bifidum.