Интернализация липосом, несущих углеводные детерминанты, клетками меланомы

ИНТЕРНАЛИЗАЦИЯ ЛИПОСОМ, НЕСУЩИХ УГЛЕВОДНЫЕ ДЕТЕРМИНАНТЫ, КЛЕТКАМИ МЕЛАНОМЫ

Е.Л. Водовозова, A.B. Феофанов, А.И. Назарова, Р.В. Холоденко, Г.П. Гаенко, Н.В. Бовин, Юл.Г. Молотковский Институт биоорганической химии им. М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН, Москва

Ранее мы использовали явление суперэкспрессии мембранных лектинов на поверхности малигнизирован-ных клеток для адресной доставки цитотоксических ли-посом. Получены положительные результаты лечения (увеличение продолжительности жизни, торможение скорости роста опухоли) на моделях мышей с экспериментальным лейкозом Р-388, карциномой легкого Льюис, а также на модели мышей с высокой частотой спонтанного развития аденокарциномы молочной железы. В данной работе проведено сравнительное изучение процессов интернализации опухолевыми клетками in vitro липосом, несущих на поверхности специфические углеводные детерминанты (векторы), и контрольных ЛИПОСОМ с неактивным пентаолом аминоглюцитом. Механизм эн-доцитоза влияет на внутриклеточный транспорт и метаболизм лекарственных липосом, что определяет эффективность действия доставленного ими препарата. Мы включаем препараты в липидный биспой липосом в виде синтетических биодеградируемыхлипофильных предшественников, которые при взаимодействии с клеткой, очевидно, ведут себя аналогично другим липидным компонентам мембраны липосом.

Углеводную специфичность клеток мышиной меланомы М3 определяли визуальным скринингом связывания с флюоресцеинмечеными полиакриламидными гликоконъюгатами. В качестве векторов для липосом синтезированы липофильные гликоконъюгаты,

несущие трисахарид А и тетрасахарид сиалил-Ье-шэ X. Флюоресцентномеченные по липидному бислою липосомы диаметром 100-120 нм получали экструзией смеси из природных фосфолипидов, мембранного ро-даминильного зонда (0,5 мол %) и углеводных векторов или контрольного гликоконъюгата (2 мол %). По данным проточной цитофлуориметрии, векторные липосомы (эффективнее контрольных примерно на 20 %) связывались с клетками меланомы на первых минутах инкубации. С помощью конфокальной микроспектроф-люориметрии показано, что эндоцитоз векторных липосом также происходит быстрее (в 1,5 раза через 30 мин в среде с сывороткой). Влияние векторов на связывание и эндоцитоз липосом опухолевыми клетками показано в экспериментах с ингибированием эндоци-тоза метил-Ь-циклодекстрином. При нагружении липидного бислоя (10 мол %) диглицеридным производным метотрексата цитотоксическая активность векторных липосом существенно (до 10 раз) превышала таковую для контрольных. Таким образом, механизм интернализации опухолевыми клетками липосом, оснащенных углеводными векторами, обеспечивает высокую эффективность действия препарата, доставленного в виде липофильного предшественника в мембране липосом.

Работа выполнена при поддержке Международного научно-технического центра, проект N0. 1781.

НОВАЯ СИСТЕМА ОРГАНИЗАЦИИ СКРИНИНГА НА ПРОТИВООПУХОЛЕВУЮ АКТИВНОСТЬ

Г.К. Герасимова, Г.Н. Апрышко, А.Ю. Барышников ГУРОНЦим. H.H. Блохина РАМН, Москва

С 1980 г. в РОНЦ им. H.H. Блохина РАМН существует трехступенчатая система отбора новых веществ с противоопухолевыми свойствами: 1) прескрининг in vitro на культурах опухолевых клеток человека разного гистогенеза; 2) скрининг in vivo на перевиваемых опухолях мышей или крыс; 3) углубленное изучение in vivo с использованием перевиваемых, индуцированных опухолей животных и гетеротрансплантатов опухолей человека на бестимусных мышах. Для соединений, специфическая активность которых требует специального изучения, создано 5 модификаций основной скрининговой системы:

1) система отбора веществ природного происхождения;

2) система отбора веществ для лечения гормоночувствительных опухолей;

3) система выявления антиметастатической активности препаратов;

4) система отбора препаратов для лечения опухолей головного мозга;

5) система отбора in vitro-in vivo соединений для фотодинамической терапии.

Эта методология позволила разработать и передать на клинические испытания 10 отечественных противоопухолевых препаратов в современных лекарственных формах. Успехи молекулярной биологии последнего времени существенно расширили понимание процессов злокачественной трансформации и под-

№2/томЗ/2004

РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ