4-[(4-БРОМФЕНИЛ)((4-НИТРОФЕНИЛ)АМИНО)МЕТИЛИДЕН]-5-ГИДРОКСИ-5-(ТРИХЛОРМЕТИЛ)ДИГИДРОФУРАН-2,3-ДИОН, ОБЛАДАЮЩИЙ ПРОТИВОМИКРОБНОЙ АКТИВНОСТЬЮ
4-[(4-BROMOPHENYL)((4-NITROPHENYL)AMINO)METHYLIDENE]-5-HYDROXY-5-(TRICHLOROMETHYL)DIHYDROFURAN-2,3-DIONE WITH ANTIMICROBIAL ACTIVITY

Изобретение относится к области органической химии, к новым биологически активным веществам класса замещенных 4,5-дигидрофуран-2,3-дионов, а именно к 4-[(4-бромфеннл)((4-нигрофенил)амино)метилиден]-5-гидрокси-5-(трихлорметил)дигидрофуран-2,3-диону (1), формулы:
обладающему противомикробной активностью, что позволяет предположить его использование в медицине в качестве противомикробного препарата.
Аналогом по структуре заявляемому соединению является 3-[(таен-2-ил) (4-этоксифенил)метил]дигидрофуран-2,5-дион, проявляющий противомикробную активность [Raghavendra K. R An accessible route for the synthesis of novel lignin derivatives and their biological evaluation / K. R Raghavendra, N. Renuka, K. A. Kumar, S. Shashikanth // Pharm. Chem. J. - 2017 - Vol. 51, №. 8 - P. 661-669] формулы:
В качестве эталона сравнения противомикробной активности выбран антибактериальный препарат диоксидин [Падейская Е.Н. Антибактериальный препарат диоксидин: особенности биологического действия и значение в терапии различных форм гнойной инфекции // Инфекции и антимикробная терапия. - 2001. - №. 5. - С. 105-155] и противогрибковый препарат, известный в медицинской практике, флуконазол, производителя ООО «Озон», Самарская область, г. Жигулевск.
Целью предлагаемого изобретения является поиск в ряду замещенных 4,5-дигидрофуран-2,3-дионов веществ с выраженной противомикробной активностью.
Поставленная задача достигается получением 4-[(4-бромфенил)((4-нитрофенил)амино)метилиден]-5-гидрокси-5-(трихлорметил)дигидрофуран-2,3-диона, который обладает противомикробной активностью.
Заявляемое вещество (1) синтезируют взаимодействием 5-(4-бромфенил)-4-(2,2,2-трихлорацетил)фуран-2,3-днона (.) с 4-нитроанилином при перемешивании в среде абсолютного хлороформа с последующим выделением целевого продукта известными методами по схеме:
Технический результат заключается в расширении арсенала средств воздействия на живой организм.
Изобретение иллюстрируется следующими примерами:
Пример 1. Получение соединения (1).
разл.
6
аром
аром
6
18
10
3
2
6
-1
2
3
1
13
К раствору 1 ммоль 5-(4-бромфенил)-4-(2,2,2-трихлорацетил)фуран-2,3-диона в 5 мл абсолютного хлороформа при перемешивании прикапывают раствор 1 ммоль 4-нитроанилина в 5 мл абсолютного хлороформа. Реакционную смесь оставляют при перемешивании на 3-5 часов. По истечении времени осадок отфильтровывают и перекристаллизовывают из толуола. Выход 60%. Т = 170-172°С. (ИК спектр (ФСМ 1202, вазелиновое масло, ν, см): 3196 (NH, ОН), 1715 (C=O), 1675 (C=O). Спектр ЯМР H, (BrukerAvanceIIIHD (рабочая частота 400 MHz), внутренний стандарт - ТМС, ДМСО-d, δ, м.д.): 4.25 уш. с (1H, ОН), 7.78-7,83 м (6Н), 8.35 д (2H, J 8 Гц), 11.21 с (1H, NH). Спектр ЯМР С, (BrukerAvanceIIIHD (рабочая частота 100 MHz), внутренний стандарт - ТМС, ДМСО-d, δ, м.д.): 98.2, 113.5, 120.8, 124.5, 127.8, 128.2, 129.3, 131.6, 136.8, 141.6, 144.2, 146.8, 164.4, 189.2. Найдено, %: С 40.33; Н 1.90; Br 14.85; Cl 19.80; N 5.26. CH BrClNO. Вычислено, %: С 40.29; Н 1.88; Br 14.89; Cl 19.82; N 5.22. М 536.54.
Полученное соединение (1) представляет собой светло-желтое кристаллическое вещество, хорошо растворимое в этилацетате, ацетоне и ДМСО, трудно растворимое в хлороформе, ацетонитриле и толуоле и нерастворимое в гексане и воде.
Пример 2.Противомикробная активность соединения (1). Для изучения антимикробной активности заявляемого соединения (1) использовали общепринятый метод двукратных серийных разведений в жидкой питательной среде микрометодом [Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ - М.: И-во Медицина, 2005].
В качестве тест-микроорганизмов использовали Staphylococcus aureus(штамм 906), Escherichia coli (штамм 1257), полученных в Федеральном государственном бюджетном учреждении «Научный центр экспертизы средств медицинского применения» (ФГБУ «НЦЭСМП» Минздрава России, г. Москва); Candida albicans, РКПГ Y 1353/1277, полученный в НИИ медицинской микологии им. П.Н. Кашкина ФГБОУ ВО СЗГМУ им. И.И. Мечникова Минздрава России.
5
Культуры выращивали в пробирках на скошенной питательной среде (мясопептонный агар, Сабуро). Для приготовления рабочей взвеси микроорганизмов производили смыв выросшей культуры изотоническим раствором хлорида натрия и устанавливали плотность по стандарту мутности (ОСО) на 5 ME с использованием денситометра. После ряда разведений конечная концентрация клеток в опыте составляла 2,5×10 клеток/мл.
В лунках стерильного 96 луночного плоскодонного микропланшета готовили два параллельных ряда двукратных серийных разведений заявляемого соединения (1), в бульоне МПБ, Сабуро. В каждой лунке содержалось 150 мкл определенной концентрации испытуемого вещества, и 150 мкл инокулята культуры. В последних рядах содержалась питательная среда и культура в равных объемах (контроль). Максимально испытанная концентрация соответствовала 1000,0 мкг/мл, минимальная - 1,0 мкг/мл. Микропланшет помещали в термостат спектрофотометра Epoch и замеряли оптическую плотности (ОП) при длине волны 540 нм. Через 24 часа и 7 суток вновь регистрировали ОП культуральной жидкости.
Результаты оценивали с помощью программного обеспечения Gen 5 спектрофотометра для микропланшет Epoch. Последняя лунка ряда с задержкой роста и показателями ОП равной оптической плотности контрольной лунки соответствует минимальной подавляющей концентрацией соединения.
Анализ полученных данных показал, что соединение I обладает противомикробным действием в отношении всех исследуемых культур.
Торможение роста культуры S. aureus от воздействия соединения (I) наступает в концентрации 3,9 мкг/мл, бактерицидный эффект достигнут в концентрации 31,2 мкг/мл, что активнее препарата сравнения в несколько раз.
Противомикробные свойства в отношении Е. coli были проявлены в следующих концентрациях: МИК - 125,0 мкг/мл, МБК - 250,0 мкг/мл.
Ингибирующее действие заявленного соединения I на дрожжевые грибы С. albicans наблюдалось в концентрации 62,5 мкг/мл, фунгицидное - в концентрации 250,0 мкг/мл.
Заявленное соединение 4-[(4-бромфенил)((4-нитрофенил)амино)метилиден]-5-гидрокси-5-(трихлорметил)дигидрофуран-2,3-дион (1), обладающее противомикробной активностью, может найти применение в фармакологии, медицине и ветеринарии.