Дифферонная организация рыхлой соединительной ткани слизистой оболочки двенадцатиперстной кишки и кожи крысы в норме и при экстремальном воздействии

ветеринарных лабораторий / А.Р. Рашидова, А.И. Акмуллин // Ученые записки КГАВМ. / Казань. - 2006. - Т.187. - С. 124-129. 5. Методические рекомендации по изучению и нормированию труда ветеринарных работников промышленных животноводческих комплексов / П.А. Чулков, И.Н. Никитин, ПИ. Гончаров, Л.И. Иванов - М., 1989. - 40с.

ЭФФЕКТИВНОСТЬ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ РАБОЧЕГО ВРЕМЕНИ СПЕЦИАЛИСТОВ ВЕТЕРИНАРНОЙ ЛАБОРАТОРИИ ПТИЦЕФАБРИКИ

Сахапова Л.Р., Рашидова А.Р., Акмуллин А.И.

Резюме

Изучена деятельность производственной ветеринарной лаборатории птицефабрики, структура затрат рабочего времени и эффективность его использования ветеринарными специалистами.

EFFICIENT USE OF TIME PROFESSIONAL VETERINARY LABORATORIES

PTITSEFABRIKI

Sahapova L.R., Rashidova A.R., Akmullin A.I. Summary

Activity of industrial veterinary laboratory of an integrated poultry farm, structure of expenses of working hours and efficiency of its use by veterinary specialists is studied.

УДК 616-018; 616-003.93

ДИФФЕРОННАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ РЫХЛОЙ СОЕДИНИТЕЛЬНОЙ ТКАНИ СЛИЗИСТОЙ ОБОЛОЧКИ ДВЕНАДЦАТИПЕРСТНОЙ

КИШКИ И КОЖИ КРЫСЫ В НОРМЕ И ПРИ ЭКСТРЕМАЛЬНОМ

ВОЗДЕЙСТВИИ

Семченко В.В., Гонохова М.Н., Ланичева А.Х., Степанов С.С.

ФГОУ ВПО «Омский государственный аграрный университет» ГНУ ВНИИБТЖ Россельхозакадемии ГОУ ВПО «Башкирский государственный медицинский университет»

Росздрава

Ключевые слова: рыхлая соединительная ткань, двенадцатиперстная кишка, слизистая оболочка, кожа, сосочковый слой кожи, дифферон.

Key words: friable connecting fabric, duodenal gut, mucous membrane, skin, skin papillary layer, differon.

Соотношение клеток различной степени зрелости в дифферонах рыхлой соединительных тканей организма неодинаково и зависит от локализации закономерных процессов физиологической регенерации, присущих данной ткани. Так, в обновляющихся тканях обнаруживаются все части клеточного дифферона - от стволовой до высокодифференцированных и гибнущих клеток. В развивающихся тканях преобладают процессы пролиферации и роста. Одновременно в тканях присутствуют клетки среднего и конечного звена дифферонов. В гистогенезе митотическая активность клеток постепенно снижается до низкой или крайне низкой. Потомки стволовых клеток некоторое время существуют как пролиферативный пул ткани, но их популяция быстро расходуется в постнатальном онтогенезе. В стабильном типе тканей имеются лишь клетки высокодифференцированной и гибнущей частей дифферона (Репин В.С. и др., 2002).

Структурно-функциональные механизмы реагирования рыхлой соединительной ткани в ответ на повреждение изучены хорошо. При этом восстановительный процесс рассматривается как реализация потенциально возможных адаптивных механизмов комплекса тканей организма в рамках взаимодействующей системы гистиона. Широко обсуждаемая концепция о гистионе позволит по-новому оценить фазность течения раневого процесса с учетом взаимоотношения клеток различных дифферонов в гистионе и его последующей трансформации в процессе репаративной регенерации, что послужит фундаментальным обоснованием разработки методов их коррекции (Данилов Р.К., 2001; Одинцова И.А., 2003; Омельяненко Н.П., Слуцкий Л.И., 2009).

Цель работы. Изучить дифферонную организацию рыхлой соединительной ткани слизистой оболочки двенадцатиперстной кишки (СОДК) и сосочкового слоя кожи крысы в норме и при экстремальном воздействии.

Материалы и методы. Эксперимент проведен на 150 половозрелых беспородных белых крысах в соответствии с международными рекомендациями по использованию животных в биологических и медицинских исследованиях. Все животные содержались в стандартных условиях вивария с учетом требований к работе с экспериментальными животными (Лоскутова З.Ф., 1980). Повреждение двенадцатиперстной кишки (группа I) осуществляли путем механической травмы ее стенки. Механическую травму кожи бедра белой крысы (группа II) вызывали с помощью специальной установки (Мурзабаев Х.Х., Кашапов И.Г., 2001).

Забой животных производили под эфирным наркозом путем декапитации. Для морфологического исследования в перифокальной зоне у животных группы I брали участок двенадцатиперстной кишки (0,5 см), а у животных группы II - участок кожи бедра размером 0,5 х 1,0 см, через 6 ч, 1, 3, 7, 14 и 25 сут после травмы. Образцы ткани фиксировали в 10%

нейтральном растворе формалина на фосфатном буфере фирмы ООО «Биовитрум» (Санкт-Петербург). Материал заливали в парафин (Семченко В.В. и др., 2006). На ротационном микротоме LaboCut 4055 (фирма Slee, Германия) с помощью одноразовых микротомных лезвий А35 (фирма Feather, Япония) готовили поперечные срезы кожи и двенадцатиперстной кишки толщиной 4-5 мкм, которые окрашивали гематоксилином и эозином и по Ван-Гизону. Микрофотосъемку гистологических препаратов проводили на микроскопе Axio Scope 40 (Carl Zeiss) и Axio Star (Carl Zeiss) с встроенным ТУ-адаптером и цифровой видеокамерой Carl Zeiss Imager. С помощью программы ImageJ осуществляли морфометрическую оценку клеточных элементов рыхлой соединительной ткани.

Иммуногистохимические методы. Для более детального изучения процессов пролиферации и дифференцировки клеток использовали иммуногистохимические методы окраски с помощью меченых моноклональных антител. Выявляли следующие белки: 1) CD-68 (макрофаги), 2) СD-34 (эндотелиальные клетки сосудов), 3) Col-4 (базальная мембрана эпителия) и 4) Ki-67 (маркер ядер активно пролиферирующих клеток), с использованием реактивов и методик, рекомендованные фирмами-производителями (Labvision, США). Визуализацию результатов выполняли с использованием системы детекции Ultra Vision ONE Detection System HRP Polymer. Системный статистический анализ проводили при помощи программ Statistica for Windows (Версия 6.0, StatSoft, Inc.) (Реброва О.Ю., 2002) с помощью критерия Манна-Уитни, Колмогорова-Смирнова и дисперсионного анализа ANOVA Краскела-Уоллиса, точного критерия Фишера, коэффициента корреляции Спирмена. Нулевая гипотеза отвергалась, а альтернативная принималась при p<0,05, мощность статистического исследования была в пределах 0,70-0,90.

Результаты исследований. Через 6 ч и 1 сутки после травматического воздействия в зоне повреждения СОДК выявлялись гемодинамические, диффузно-очаговые, дистрофические,

некробиотические и некротические изменения. В перифокальной соединительной ткани собственной пластинки слизистой обнаруживались прогрессирующие изменения тонуса сосудов, опустошение одних капилляров, полнокровие и парез других, дистония, стаз и сладжирование эритроцитов, отёк, плазморрагии, набухание стенки сосудов. Вышеназванные изменения сопровождались морфологическими признаками внутрисосудистого свёртывания крови с образованием тромбоцитарных, эритроцитарных, глобулярных, лейкоцитарных микротромбов и геморрагией. Микроциркуляторные изменения проявлялись на фоне отёка, локальных реактивных клеточных деструктивных изменений обратимого характера. Все это свидетельствовало о дисфункции и дисбалансе всех компонентов гемо-,

лимфоциркуляции, циркуляции интерстициальной жидкости и трансэпителиального переноса.

В этот период превалировали изменения пространственных взаимоотношений клеточных элементов соединительной ткани СОДК на фоне очень низкой экспрессии СБ-68, СБ-34, Со1-4 и пролиферативной активности (К1-67) незрелых клеток дифферонов. В зоне повреждения преобладали нейтрофильные гранулоциты. Через 3 сут в зоне повреждения снижалась доля нейтрофилов, а содержание макрофагов возрастало. В соединительной ткани перифокальной зоны увеличивалась пролиферативная активность фибробластов, макрофагов и эндотелиальных клеток. Происходило формирование нового типа гистиона с существенно измененными внутри- и междифферонными отношениями, которые определяют последующее формирование регенерационного гистиона. Через 7 суток отмечался пик экспрессии изученных белков и пролиферативной активности. Существенное выраженное восстановление слизистой оболочки двенадцатиперстной кишки происходило через 14 суток и сопровождалось снижением внутри- и междифферонной гетероморфии.

В рыхлой соединительной ткани кожи у животных контрольной группы общая численная плотность клеток варьировала в пределах 10501320 на 1 мм (95% ДИ средней), однако преобладало содержание фибробластов - 74,8 (66,12-82,8)%, фиброциты составляли 15,2 (9,7-23,8)%, макрофаги - 4,3 (1,7-10,2)%, тучные клетки - 2,6 (0,83-7,8)%, лимфоциты -2,2 (0,64-7,3)%, гранулоциты - 0,9 (0,15-5,3)%. По данным иммуногистохимического анализа, в соединительной ткани кожи отмечалась высокая междифферонная гетероморфия за счет наличия различных клеточных дифферонов - преобладающего фибробластического, а также макрофагального, эндотелиального дифферонов. Однако функциональная (анализ экспрессии Со1-4) и пролиферативная (анализ экспрессии К1-67) активность различных клеточных дифферонов определялась низкой, миоидные фибробласты не обнаруживались.

В течение 1 суток после травмы клетки крови и рыхлой соединительной ткани формировали гистион фазы воспаления. Ведущими клеточными дифферонами его являлись нейтрофильные гранулоциты, тучные клетки и эндотелиоциты кровеносных сосудов. Через 3 суток лейкоцитарный вал инфильтрата расширялся до 450-500 мкм, в нем снижалась доля нейтрофилов, тучных клеток, а содержание мононуклеаров возрастало. Следовательно, через 3 суток формировался макрофагальный гистион - происходила трансформация раннего гистиона фазы воспаления в поздний гистион фазы воспаления (эндотелиально-тучноклеточно-макрофагальный), в котором ведущими элементами становились макрофаги.

Формирование регенерационного гистиона (через 7-14 суток) происходило в рыхлой соединительной ткани перифокальной зоны на фоне интенсивного образования межклеточного вещества, неоангиогенеза в грануляционной ткани, ускоренной миграции и деления эпителиоцитов. Регенерационный гистогенез включал несколько этапов: 1) активация и пролиферация камбиальных элементов (через 3 суток); 2) их дифференцировка (через 3-7 суток) и 3) адаптация клеточных элементов к новым условиям существования (7-14 суток). Макрофаги и фибробласты составляли ведущее звено регенерационного гистиона.

Через 3 сут в соединительной ткани кожи с помощью маркера СБ-34 выявлялись миоидные клетки, которые обеспечивали контракцию раны в первые дни восстановительного периода. Их максимальное количество обнаруживалось через 3 и 7 суток, а миодных фибробластов - через 7 суток после травмы. Следовательно, в восстановительном периоде клетки рыхлой соединительной ткани паранекротической зоны проявляют свои широкие потенции, дифференцируясь для выполнения более разнообразных, чем в норме, функций, что проявляется гетероморфией, гетерохронией и гетерокинезом клеточных элементов.

Заключение. Таким образом, реакция соединительной ткани собственной пластинки слизистой оболочки двенадцатиперстной кишки и сосочкового слоя кожи белых крыс на механическое повреждение сопровождается формированием и последовательным переходом гранулоцитарно-макрофагального гистиона в эндотелиально-тучноклеточно-макрофагальный и регенерационный (фибробластический) гистион, что сопровождается выраженными фазными изменениями внутри- и междифферонной гетероморфии соединительной ткани, позволяющими осуществить восстановление целостности структуры органа.

ЛИТЕРАТУРА: 1. Данилов Р.К. Общие принципы клеточной организации, развития и классификации тканей. Руководство по гистологии. - 2001. - Т. 1. СПб.: СпецЛит. - 495 с. 2. Мурзабаев Х.Х., Кашапов И.Г. Способ дозированной передачи кинетической энергии снаряда повреждаемым тканям // Морфология. - 2001. - Т. 120, № 6. - С. 83 - 84. 3. Одинцова И.А. Закономерности процессов регенерационного гистогенеза в кожно-мышечной ране // Анатомия и военная медицина. -СПб.: ВМедА, 2003. - С. 41 - 43. 4. Омельяненко Н.П., Слуцкий Л.И. Соединительная ткань (гистофизиология и биохимия). М.: Известия. -2009. - 380 с. 5. Реброва О.Ю. Статистический анализ медицинских данных. Применение пакета прикладных программ 8ТЛТ18Т1СЛ. - М.: МедиаСфера, 2002. - 305 с. 6. Репин В.С., Ржанинова А.А., Шаменков Д.А. Эмбриональные стволовые клетки. Фундаментальная биология и медицина. - Из-во: РеМеТэкс. - 2002. - 225 с.7. Семченко В.В., Барашкова

С.А., Ноздрин В.И., Артемьев В.Н. Гистологическая техника. - Омск: Омская областная типография, 2006. - 290 с.

ДИФФЕРОННАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ РЫХЛОЙ СОЕДИНИТЕЛЬНОЙ ТКАНИ СЛИЗИСТОЙ ОБОЛОЧКИ ДВЕНАДЦАТИПЕРСТНОЙ КИШКИ И КОЖИ КРЫСЫ В НОРМЕ И ПРИ ЭКСТРЕМАЛЬНОМ ВОЗДЕЙСТВИИ

Семченко В.В., Гонохова М.Н., Ланичева А.Х., Степанов С.С.

Резюме

В эксперименте на 150 белых крысах установлено, что реакция рыхлой соединительной ткани слизистой оболочки двенадцатиперстной кишки и сосочкового слоя кожи на механическое воздействие проявляется формированием и последовательным переходом гранулоцитарно-макрофагального гистиона в эндотелиально-тучноклеточно-макрофагальный и регенерационный гистион, что сопровождается выраженными фазными изменениями степени внутри- и междифферонной гетероморфии соединительной ткани, позволяющими осуществить восстановление целостности структуры органа.

CELL-DIFFERON ORGANIZATION OF THE FRIABLE CONNECTING FABRIC OF THE DUODENAL GUT MUCOUS AND THE SKIN OF THE RAT IN NORM AND AT EXTREME INFLUENCE

Semchenko V.V., Gonohova M. N, Lanicheva A.H., Stepanov S.S.

Summary

In experiment on 150 white rats it is spent histologic and Immunohistochemical research of a connecting fabric of own plate of a duodenal gut and skin papillary layer after mechanical damage. It is established, that reaction of a connecting fabric to mechanical damage is accompanied by formation and consecutive transition granulocyte-macrophagal gistion in endotelial-labrocyte-macrophagal and reclaiming gistion. This transition is accompanied by natural phase changes of degree intra- and betweendifferon heteromorphine of a connecting fabric that allows to carry out fast restoration of structure of body.