Способ прижизненной дифференциальной диагностики метацеркарий описторхид
METHOD OF LIFE-TIME DIFFERENTIAL DIAGNOSTICS OF METACERCARIAE OF OPISTHORCHID FLUKES

Изобретение относится к области ветеринарии и медицины.
Из всех видов гельминтов семейства Opisthorchiidae только три Opisthorchis felineus, Pseudamphistomum truncatum и Metorchis bilis представляют опасность для человека и животных и включены в Санитарные Правила и Нормативы [4]. Все эти три вида обладают разной патогенностью для человека. Поэтому для оценки эпидемиологической ситуации при нахождении в рыбах личинок описторхид крайне важно определить их до вида, т.е. провести дифференциальную диагностику.
Известные способы: Из-за сходного строения процесс определения этих метацеркарий представляет значительные трудности [1, 3]. Он базируется на установление разницы в размерах цист и морфометрии метацеркарий путем микроскопирования. У P. truncatum цисты несколько крупнее (0.28-0.43 × 0.36-0.56), чем у О. felineus (0.17-0.28 × 0.25-0.37) мм. Прототипом является способ по определению метацеркарий описторхид, изложенный в Методических указаниях по профилактике описторхоза [2]. Высвобождение метацеркарий из цист проводится вручную препаровальными иглами под контролем стереомикроскопа, либо методом переваривания в искусственном желудочном соке при помещении в термостат в лабораторных условиях. Процесс определения вида из-за высокой подвижности личинок включает помещение их в фиксирующую жидкость с последующим изготовлением постоянных микропрепаратов путем окрашивания, дифференциации, обезвоживания, просветления и заключения под покровное стекло в бальзам с подсушиванием. Затем проводят многочисленные промеры их тела и органов с последующим математическим анализом [3].
Недостатки: Для точного измерения как цист так и метацеркарий под микроскопом требуется специальное оборудование (объект-микрометр, окуляр-микрометр). Сам процесс измерений достаточно трудоемкий и занимает много времени. Извлечение метацеркарий из цист и подготовка из них постоянных препаратов занимает не только много времени (более недели), но и требует высокой квалификации работников.
Техническим результатом изобретения является упрощение процедуры определения видовой принадлежности метацеркарий описторхид, паразитирующих в рыбах за счет исключения трудоемкого процесса многочисленных измерений без извлечения метацеркарий из цист и с сохранением их жизнеспособности
Технический результат достигается в определении видовой принадлежности Opisthorchis felineus и Pseudamphistomum truncatum путем сравнения мерного образца для выявления существующей между ними разницы в размерах путем микроскопирования используют метацеркарию Paracoenogonimus ovatus, одновременно паразитирующую с ними в мышцах рыб, затем дополнительно оценивают светопроницаемость секреторного пузыря, которая присутствует у Opisthorchis felineus и отсутствует у Pseudamphistomum truncatum.
Сущность изобретения поясняется 4 рисунками: Фиг. 1. Цисты метацеркарий Opisthorchis felineus (4 экз.) и Pseudamphistomum truncatum (4 экз.) по краям. Последние заметно крупнее; Фиг. 2. Цисты метацеркарий P. truncatum (4 экз.) сверху и Paracoenogonimus ovatus внизу. Последние заметно мельче и имеют круглую форму; Фиг. 3. Цисты метацеркарий О. felineus (2 экз.) справа и циста P. ovatus (слева) сходного размера, но у последней круглая форма и толстая гиалиновая капсула; Фиг. 4. Полупрозрачный секреторный пузырь у двух метацеркарий О. felineus по сравнению с P. truncatum (справа).
Описание действий. Кусочки спинной мускулатуры рыб и соскобы с внутренней стороны кожи продавливают между двух стекол или компрессория и микроскопируют при разных увеличениях стереомикроскопа МБС разных модификаций. Обнаруженных метацеркарий с помощью препаровальных игл освобождают от окружающих тканей и переносят на предметное стекло в каплю воды и микроскопируют. В случае, если в рыбе одновременно паразитируют два вида описторхидных метацеркарий, то хорошо заметно, что цисты Pseudamphistomum truncatum заметно крупнее (а), чем Opisthorchis felineus (б) (Фиг. 1). При обнаружении в рыбе цист метацеркарий P. truncatum и Paracoenogonimus ovatus, последние заметно мельче и имеют круглую форму (Фиг. 2). В случае, если в рыбе одновременно присутствуют цисты метацеркарий О. felineus и цисты P. ovatus сходного размера, то у последних круглая форма и имеется толстая гиалиновая капсула (Фиг. 3). При сравнении цист метацеркарий О. felineus и P. truncatum у первого вида секреторный пузырь полупрозрачный, зернистой структуры, в то время как у P.truncatum он не только крупнее, но и абсолютно темный и светонепроницаемый (Фиг. 4).
Положительный эффект сводится: 1. К простоте, так как способ не требуют специального оборудования и реактивов и занимает очень мало времени, что позволяет отнести его к разряду экспресс-метода. 2. К прижизненному определению вида на стадии инцистированных метацеркарий, что позволяет потом их использовать при экспериментальном заражении подопытных животных.
Список литературы
1. Беэр С.А. Биология возбудителя описторхоза. М.: Товарищество научных изданий КМК, 2005. - 236 с.
2. Методические указания 3.2.2601-10. Профилактика описторхоза. 3.2. Профилактика паразитарных болезней: утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 21 апреля 2010 г. (Интернет-ресурс).
3. Ромашов Б.В., Описторхоз в бассейне Верхнего Дона (Воронежская область): фауна описторхид, эколого-биологические закономерности циркуляции и очаговость описторхидозов / Б.В. Ромашов, В.А. Ромашов, В.А. Семенов, Л.В. Филимонова - Воронеж: Воронежский государственный университет, 2005. - 201 с.
4. Санитарные Правила и Нормы 3.2.3215-14. Санитарно-эпидемиологические правила и нормативы. Профилактика паразитарных болезней на территории Российской Федерации: утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 22 августа 2014 г. (Интернет-ресурс).