Влияние милиацина на структурную реорганизацию печени мышей (CBAxC57Bl6)F1, подвергнутых воздействию метотрексата

Таким образом, питательные среды, в которых проводили оплодотворение и культивирование эмбрионов, усиливают генерацию радикалов кислорода в модельных системах. Это может свидетельствовать об ускорении метаболических процессов. В среде, применяемой при оплодотворении, уровень СРО был выше, чем в средах, используемых при культивировании эмбрионов. Уровень ОАА во всех исследуемых средах после проведения оплодотворения и культивирования эмбрионов понижался, а содержание МДА повышалось. При хороших эмбриологических показателях влияние исследуемых сред на интенсивность ХЛ модельной системы, генерирующей АФК, было выше.

Выводы

1. Среды, применяемые при оплодотворении и культивировании эмбрионов, повышают интенсивность хемилюминесценции

в модельной системе, генерирующей активные формы кислорода.

2. После проведения экстракорпорального оплодотворения и дальнейшего культивирования эмбрионов в питательной среде снижается уровень общей антиокси-дантной активности, а уровень ТБК-активных продуктов увеличивается. Одновременно повышается влияние исследуемых сред на интенсивность хемилюминесценции модельной системы, генерирующей активные формы кислорода.

3. После проведения оплодотворения и культивирования эмбрионов влияние сред на интенсивность хемилюминесценции модельной системы, генерирующей активные формы кислорода, было выше при хороших эмбриологических показателях: высокой частоте оплодотворения, хорошем дроблении и выходе в бластоцисты.

Сведения об авторах статьи: Исхаков Ильдар Ринатович - аспирант ЦНИЛ ГБОУ ВПО БГМУ Минздрава России. Адрес: 450000, г. Уфа, ул. Ленина, 3. E-mail: i1987@rambler.ru.

Исхакова Римма Сагдулловна - эмбриолог медицинского центра «Семья». Адрес: 450006, г. Уфа, ул. Салавата, 13. Фархутдинов Рафагат Равильевич - д.м.н., профессор, зав. ЦНИЛ ГБОУ ВПО БГМУ Минздрава России. Адрес: 450000, г. Уфа, ул. Ленина, 3.

ЛИТЕРАТУРА

Фархутдинов, Р.Р. Воздействие биофлафоноидов прополиса на процессы липопероксидации в гонадах крыс при интоксикации полихлорированными бифенилами / Р.Р. Фархутдинов, Д.С. Громенко // Вопросы питания. - 2006. - №6. Elder, K. In vitro fertilization / K. Elder, B. Dale. - М.: МЕДпресс-информ, 2008. - 304 с.

Global variations in the uptake of single embryo transfer / Maheshwari A. [et al.] // Human reproduction update. - 2011. - Vol. 17, №1. - P. 107-120.

Single blastocyst transfer: a prospective randomized trial / Gardner D.K. [et al.] // Fertil.Steril. - 2004. - Vol. 81, №3. - P. 551-555.

1.

4.

УДК 61 1.36:615.277.3:615.32

© О.В. Калинина, B.C. Полякова, A.M. Шехтман, Б.А. Фролов, 2014

О.В. Калинина1, B.C. Полякова1, A.M. Шехтман2, Б.А. Фролов1 ВЛИЯНИЕ МИЛИАЦИНА НА СТРУКТУРНУЮ РЕОРГАНИЗАЦИЮ ПЕЧЕНИ МЫШЕЙ (CBAXC57BL6)F1, ПОДВЕРГНУТЫХ ВОЗДЕЙСТВИЮ МЕТОТРЕКСАТА

'ГБОУ ВПО «Оренбургская государственная медицинская академия»

Минздрава России, г. Оренбург 2ГУЗ «Оренбургская областная клиническая больница», г. Оренбург

Проведена экспериментальная оценка гепатопротекторного действия милиацина в условиях гепатотоксичности, индуцируемой метотрексатом. На основании изучения морфометрических и морфологических показателей прослежена динамика патологического процесса в органе, характеризующаяся нарастанием повреждений гепатоцитов в течение 2-х недель после введения метотрексата и незавершенностью репаративной регенерации к концу 3 недели наблюдения. Милиацин демонстрировал защитный эффект, уменьшая выраженность клеточных повреждений и обеспечивая полное восстановление структуры печени к концу наблюдения.

Ключевые слова: морфология печени; гепатопротекция; цитостатики; тритерпеноиды.

O.V. Kalinina, V.S. Polyakova, A.M. Shekhtman, B.A. Frolov MILIACIN INFLUENCE ON STRUCTURAL REORGANIZATION OF MICE LIVER (CBAXC57BL6)F1 EXPOSED TO METHOTREXATE EFFECT

The experimental assessment of hepatoprotective miliacin action in conditions of hepatotoxity induced by methotrexate was performed. The dynamics of the pathological process in the liver was characterized by an increase of hepatocyte damage within 2 weeks after methotrexate injection and by incomplete reparative regeneration by the end of 3 week' s observation. The dynamics

was studied on base of morphometrical and morphological findings. Miliacin showed a protective effect, reduced the severity of cell damage evidence and ensured the complete restoration of the liver structure by the end of observation. Key words: liver morphology, hepatoprotection, cytostatics, triterpenoids.

Структурно-функциональные поражения печени в виде гепатопатий, токсических гепатитов и циррозов являются наиболее распространенными и тяжелыми осложнениями противоопухолевой терапии [3,11]. Наиболее часто регистрируются гепатопатии, имеющие место у 1/3-2/3 лечившихся больных, а при высокой моно- и полихимиотерапии практически в 100% случаев [2].

Морфологическая картина гепатоток-сичности при химиотерапии достаточно вариабельна и проявляется обычно печеночно-клеточными и холестатическими нарушениями. В качестве универсальных структурных маркеров гепатотоксичности выделяют [4]: центральный (метаболический) и перисину-соидальный фиброзы, центролобулярные некрозы, микровезикулярную липидную инфильтрацию гепатоцитов и интрагепатоцел-люлярный холестаз. Указанные поражения печени служат серьезным препятствием в достижении должного лечебного эффекта, поскольку определяют необходимость увеличения интервалов между курсами химиотерапии и снижение дозировки препаратов вплоть до их полной отмены. В связи с этим актуальность дальнейшего поиска гепатопротекторов остается высокой [5,6].

В последние годы в рамках решения этой проблемы внимание исследователей привлекают тритерпеноиды и их производные, демонстрирующие значительную анти-оксидантную активность [12] и способность ограничивать повреждения печени при действии различных токсических факторов [10], в том числе антибластомных лекарственных средств [8]. К тритерпеноидам растительного происхождения относится милиацин, защищающий гепатоциты при отравлении четы-реххлористым углеродом, и проявляющий мембранопротекторную активность [7]. Вместе с тем вопрос о защитном влиянии милиа-цина в отношении гепатотоксичных химио-препаратов не исследован.

Целью настоящей работы являлась экспериментальная оценка милиацина как гепа-топротектора на основе изучения особенностей структурной реорганизации печени и динамики восстановления органных нарушений у мышей, подвергшихся воздействию мето-трексата.

Материал и методы

Исследования выполнены на 198 мышах-самцах (СВАхС57В16)р! массой 18-22 г,

поставленных из питомника РАМН «Столбовая». Эксперименты проведены в соответствии с этическими нормами и рекомендациями по гуманизации работы с лабораторными животными (Страсбург, 1985). Эвтаназию мышей осуществляли дислокацией шейных позвонков под эфирным наркозом.

Метотрексат (МТХ; «Ebeve», Австрия) вводили внутрибрюшинно однократно в дозе 10 мг/кг [9]. В работе использован милиацин, который вводили трехкратно внутрибрюшин-но в разовой дозе 2 мг/кт на протяжении 3 дней: через 1 час, 24 и 48 часов после инъекции МТХ.

Животные были разделены на 4 группы: I - интактные (положительная группа сравнения); II - получавшие внутрибрюшинно однократно МТХ (отрицательная группа сравнения); III - получавшие МТХ с последующим 3-кратным введением растворителя для милиа-цина твин 21 в конечной концентрации 1,6* 107 моль/кг (контроль); IV - получавшие МТХ с последующим 3-кратным введением милиаци-на (опыт). Животных II - IV групп выводили из эксперимента на 4, 7, 10, 14 и 21-е сутки после введения МТХ. В эти же сроки осуществляли эвтаназию интактных мышей (группа I). Печень животных после взвешивания фиксировали в 10% нейтральном формалине с последующими приготовлением гистологических препаратов и окраской гематоксилином и эозином по стандартной методике. Морфомет-рию проводили при увеличении микроскопа *400, определяли плотность гепатоцитов и количество двуядерных клеток по результатам подсчетов в 10 выборочных полях зрения (окулярная сетка 70*70 мкм) [1]. Полученные количественные показатели обрабатывали с использованием статистического пакета MS Exel (Microsoft, США). Различия считались значимыми по критерию Стъюдента при р<0,05.

Результаты и обсуждение

Установлено, что введение МТХ на 4-е сутки эксперимента (группа II) приводит к снижению массы печени на 34,3±3,9% по сравнению с интактными животными (табл. 1).

Морфометрически в этот период отмечается повышение плотности клеток (на 61,8±1,6%), что могло быть обусловлено сдавлением гепатоцитов на фоне венозного полнокровия и/или их фрагментацией при апоптотической гибели, а морфологически -очаговая дистрофия гепатоцитов с пикнотиче-ским изменением ядер. К 7-м суткам масса

печени восстанавливается на фоне снижения плотности гепатоцитов, показатели которой, однако, все еще превосходят значения ин-тактных животных (на 18,0±1,8%). На данном сроке наблюдения регистрируются более обширный характер гидропической дистрофии гепатоцитов, появление очагов некроза и внутридольковой лейкоцитарной инфильтрации. В последующие сроки описанные изме-

нения нарастали, достигая максимальных проявлений к 14-м суткам. В этот период плотность гепатоцитов была минимальной, а их дистрофия приобретала диффузный характер с обилием очагов некроза в сочетании со значительной мелкоочаговой внутридолько-вой лейкоцитарной инфильтрацией, расширением синусоидальных капилляров и периси-нусоидальных пространств Диссе.

Таблица 1

Влияние милиацина на морфометрические показатели печени мышей

ИССЛЕДУЕМЫЕ ПОКАЗАТЕЛИ

Группы животных масса печени, мг

4-е сутки 7-е сутки 10-е сутки 14-е сутки 21-е сутки

I интактные 1232,4±62,7 (7)1

II МТХ 809,0±43,7*

III МТХ+растворитель 788,0±29,0*

IV МТХ+милиацин 1214,2±40,3 А°

плотность гепатоцитов

I интактные 80,72±0,86 (5/50)2

II МТХ 130,62±1,30*

III МТХ+растворитель 122,44±2,90*

IV МТХ+милиацин 80,62±0,80 А°

двуядерные клетки, %

I интактные 7,60±0,4

II МТХ 7,56±0,50

III МТХ+растворитель 7,33±0,60

IV МТХ+милиацин 6,23±0,30*

1 В скобках указано количество животных.

2 В числителе указано количество животных, в знаменателе - количество исследованных полей зрения. * Достоверность с группой I (при р<0,05).

А Достоверность между группами IV и II (при р<0.05). ° Достоверность между группами IV и III (при р<0,05).

Существенно, что на данном сроке наблюдения продолжают обнаруживаться дву-ядерные гепатоциты, что может свидетельствовать о протекающих параллельно процессах регенерации. К 21-м суткам регенераторные процессы приобретают более отчетливый характер, проявляясь значимым нарастанием плотности гепатоцитов (на 25,9±6,1%), увеличением количества двуядерных клеток (на 44,8±4,5%) по сравнению с интактными животными и восстановлением компактного расположения гепатоцитов в центрах долек. Вместе с тем даже к указанному сроку у мышей данной группы в печени сохранялись диффузные очаги гидропической дистрофии и очаги некроза.

Применение растворителя на фоне введения МТХ (группа III) не сказывалось на выраженности и динамике выявленных изменений массы органа, его морфометрических параметров и морфологических нарушений на всех сроках исследования по сравнению с животными, получавшими только МТХ (группа II).

В противоположность этому применение милиацина (группа IV) оказало существенное влияние на характер изменений исследуемых показателей.

Милиацин предотвращал падение массы органа и значимые сдвиги плотности гепатоцитов на протяжении 7 суток наблюдения. На 10- и 14-е сутки плотность гепатоцитов снижалась, но менее значимо (соответственно на 4,1±1,4 и 4,5±1,6% по сравнению с группой I), чем у животных II (на 13,8±0,8% и 23,5±2,1%) и III групп (на 16,8±1,8% и 20,4±3,5%). На 21-е сутки регистрировалось возрастание этого показателя с превышением уровня интактных животных на 6,1±2,7%. К этому же сроку отмечается и повышение количества двуядер-ных клеток. Структурные нарушения печени у данной группы мышей на 4-е сутки были минимальными и характеризовались наличием единичных гепатоцитов в состоянии гидропи-ческой дистрофии, которая к 7-10-м суткам приобретала очаговый характер, выявляясь преимущественно по периферии долек. На 14-е сутки обнаруживался уже диффузный характер дистрофии в сочетании с очагами микронекрозов и лейкоцитарной инфильтрацией при значительно меньшей выраженности этих изменений по сравнению с животными II и III групп. К 21-м суткам эксперимента структура печени у мышей опытной группы полностью восстанавливалась.

Результаты работы свидетельствуют о нарастающем характере повреждения печени под действием МТХ на протяжении двух недель после его применения. Реализация ре-паративных процессов отчетливо регистрировалась лишь к концу 3-й недели наблюдения в виде повышения количества двуядерных клеток, увеличения плоидности ядер и повторного возрастания плотности гепатоцитов как проявления их гиперплазии. Вместе с тем по-

лученные данные демонстрируют гепатопро-теторную активность милиацина, обеспечивающего регресс морфологических и морфо-метрических нарушений и ускоряющего развитие регенераторных процессов. Этот аспект биологического действия тритерпеноида позволяет рассматривать возможность его использования для ограничения гепатотоксич-ности ксенобиотиков, в том числе и в условиях цитостатической терапии.

Сведения об авторах статьи: Калинина Ольга Вячеславовна - заочный аспирант, ассистент кафедры патологической физиологии ГБОУ ВПО ОрГМА Минздрава России. Адрес: 460000, г. Оренбург, Парковый проспект 7. E-mail: k_pathphys@orgma.ru.

Полякова Валентина Сергеевна - д.м.н., профессор, зав. кафедрой патологической анатомии ГБОУ ВПО ОрГМА Минздрава России. Адрес: 460000, г. Оренбург, Парковый проспект 7. Тел./факс: 8(3532)77-62-22. E-mail: k_patanat@orgma.ru. Шехтман Александр Михайлович - к.м.н., зав. патологоанатомическим отделением ГУЗ «Оренбургская областная клиническая больница». Адрес: 460000, г. Оренбург, Аксакова, 23. Тел./факс: 8(3532)55-05-03.

Фролов Борис Александрович - д.м.н., профессор, зав. кафедрой патологической физиологии ГБОУ ВПО ОрГМА Минздрава России. Адрес: 460000, г. Оренбург, Парковый проспект 7. Тел./факс: 8(3532)77-96-07. E-mail: k_pathphys@orgma.ru.

ЛИТЕРАТУРА

1. Автандилов, Г. Г. Морфометрия в патологии. - М.: Медицина, 1973. - 248 с.

2. Гепатотоксическое действие лекарственных препаратов некоторых фармакологических групп / Ю.А. Кинзирская [и др.] // Клиническая медицина. - 2003. - Т. 66, № 4. - С. 56-59.

3. Ларионова, В.Б. Гепатотоксичность лекарственных препаратов у онкологических больных / В.Б. Ларионова, Э.Г. Горожанская, О. А. Коломейцев // Вестник интенсивной терапии. - 2004. - № 3. - С. 1-10.

4. Универсальные структурные маркеры гепатотоксического воздействия лекарственных препаратов / Г.И. Непомнящих [и др.] // Бюллетень Сибирского отделения Российской академии медицинских наук. - 2008. - № 6. - С. 86 -92.

5. Гепатопротекторы / С.В. Оковитый [и др.]. - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2010. - 112 с.

6. Черешнев, В.А. Гепатопротекция при химических воздействиях / В.А. Черешнев, В.А. Мышкин, Д.А. Еникеев. - Москва-Уфа: Полиграфдизайн, 2012. - 201 с.

7. Чернов A.M., Павлова М.М., Олифсон Л.Е. Средство, стабилизирующее биологические мембраны/ а.с. № 1043860 СССР: А 61 К 35/78. - М., 1983. - 5 с.

8. Шарапов, И.В. Влияние производных бетулина на антиоксидантный гомеостаз и метаболизм ксенобиотиков в печени при экспериментальной полихимиотерапии: автореф. дис.... канд. мед. наук. - Томск, 2009. - 24 с.

9. Alam, S.S. Protective role of taurine against genotoxic damage in mice treated with methotrexate and tamoxfine / S.S. Alam, N.A. Hatiz, El-Rahim A.H. Abd // Environ Toxicol Pharmacol. - 201 1. - Vol. 31. - P. 143 -152.

10. Antioxidant and hepatoprotective actions of medicinal herb, Terminalia catappa L. from Okinawa Island and its tannin corilagin / S. Kinoshita [et al.]- 2007. - Vol.14, № 11. - P. 755-762.

11. Ramadori, G. Effects of systemic chemotherapy on the liver / G. Ramadori, S. Cameron //Ann. Hepatol. - 2010. - Vol.9, № 2. - P. 133143.

12. Saravanan, R. Impact of ursolic acid on chronic ethanolinduced oxidative stress in the rat heart / R. Saravanan, V. Pugalendi // Pharmacol. Repts. - 2006. - Vol. 58, № l. - P. 41 -47.

УДК 616.133.3 - 08

© А.Л. Кузьмин, М.О. Пузырев, А.Н. Терехов, М.П. Чернявин, Н.В. Самохин, В.И. Демидов, Е.А. Конкина, 2014

А.Л. Кузьмин, М.О. Пузырев, А.Н. Терехов, М.П. Чернявин, Н.В. Самохин, В.И. Демидов, Е.А. Конкина СТРУКТУРНО-ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ ОЦЕНКА ЭФФЕКТИВНОСТИ ЭКСТРАВАЗАЛЬНОГО АРМИРОВАНИЯ СОННЫХ АРТЕРИЙ

В ЭКСПЕРИМЕНТЕ ГБОУ ВПО «Ивановская государственная медицинская академия» Минздрава России, г. Иваново

Цереброваскулярная болезнь остается ведущей причиной инвалидизации и смертности в нашей стране и в мире. Одной из наиболее частых причин развития ишемического инсульта являются каротидные атеросклеротические стенозы. Операцией выбора является открытая каротидная эндартерэктомия с вшиванием аутовенозной заплаты, что повышает риск формирования аневризмы в послеоперационном периоде. Предложена методика экстравазального армирования сонных артерий полипропиленовой сеткой после эндартерэктомии. Прооперировано 22 кролика одной линии с последующим выведением животных из эксперимента через 1, 3, 6, 9 и 12 месяцев. Морфологический анализ секционного материала показал формирование соединительнотканной капсулы вокруг синтетических волокон, которая сливается с адвентициальной оболочкой артерии, образуя прочный паравазальный каркас без существенного изменения величины просвета сосуда. Полученные результаты позволяют минимизировать риск послеоперационных осложнений каротидной эндартерэктомии в клинической практике.

Ключевые слова: каротидная эндартерэктомия, аневризма сонных артерий, экстравазальное армирование, эксперимент, патоморфология.