Аллельный полиморфизм генов интерлейкинов - в выраженности гиполипидемического эффекта розувастатина

http://dx.doi.org/10.26787/nydha-2226-7425-2018-20-3-45-50

УДК: 575.174.015.3:612.017:615.272.4

АЛЛЕЛЬНЫЙ ПОЛИМОРФИЗМ ГЕНОВ ИНТЕРЛЕЙКИНОВ - В ВЫРАЖЕННОСТИ ГИПОЛИПИДЕМИЧЕСКОГО ЭФФЕКТА РОЗУВАСТАТИНА

Грибовская И.А., Удалова С.Н., Болдина Н.В.

ФГБОУ ВО «Курский государственный медицинский университет», г. Курск, Российская Федерация

Аннотация. Оценка изменений липидного профиля пациентов в двух изучаемых группах (больные ишемической болезнью сердца (ИБС) с острой респираторной вирусной инфекцией (ОРВИ)) и больные ИБС без ОРВИ показала, что 6% больных ИБС после верификации у них ОРВИ потеряли достигнутый на амбулаторном этапе наблюдения целевой уровень холестерина. Среди больных ИБС без проявления ОРВИ достигнутый целевой уровень составил — 53%.

Цитокиновый статус больных характеризовался повышением провоспалительных цитокинов (1Ь-1в и 1Ь-6) у больных ИБС при присоединении ОРВИ на II визите до 33,1 пг/мл и 29,4 пг/мл соответственно с дальнейшим снижением к 12-й неделе до 16,8 пг/мл и14,8 пг/мл. Пациенты с ИБС показали стабильный уровень про- и противовоспалительных цитокинов без динамических изменений на всех этапах наблюдения, что характеризует баланс процессов воспаления при хронической ИБС. Проведенное с целью персонализации фармакологической коррекции гиперлипидемии (ГЛП) изучение вклада генетического полиморфизма генов про- и противовоспалительных цитокинов в выраженность гиполипидемического ответа у больных ИБС в условиях ОРВИ показало, что при носительстве генотипа —511СТ гена 1Ь-1@, -17400 гена 1Ь-6 и генотипа —1082АА гена 1Ь-10 для достижения целевого холестерина требовалась доза розувастатина — 20 мг/сут. Ключевые слова: полиморфизм генов, розувастатин, персонализированный подход, ИБС, цитокины.

Введение. Заболевания ССС являются основными в структуре смертности в промышленно-развитых странах [3]. Недостаточную выраженность лекарственного ответа при фармакологической коррекции ГЛП выявляют у 20% больных [3]. Как мультифакториаль-ное заболевание, ИБС соподчинена генетическим факторам и факторам окружающей среды. Результаты эпидемиологических исследований говорят о фактах дестабилизации течения ИБС в различные сезоны года [3]. Некоторые вирусы, благодаря антигенной мимикрии имеют свойства белков цитокинов и могут изменять их эффекты. ОРВИ способствует дисбалансу взаимодействия цитокинов на фоне хронической инфекции (герпетической, цитомегаловирусной), персисти-рующей в атеросклеротической бляшке [4,5]. Эти изменения приводят к активации воспалительного процесса [1], что служит мотивацией к изменению подхода к фармакологической коррекции ГЛП у больных ИБС на фоне инфекционного заболевания. Для поиска наиболее эффективных препаратов с минимальными затратами требуется индивидуализировать подход к лечению данной категории больных с проведением ге-

нетического тестирования для осуществления эффективной терапии, выражающейся в достижении целевого уровня ХС ЛНП.

Материалы и методы. В исследование включено 170 мужчин и женщин в возрасте от 40 до 60 лет: 120 из них - больные с полиморбидной патологией (ОРВИ и ИБС стабильная стенокардия напряжения 1-11 ФК с изолированной или сочетанной гиперхолестеринемией (ГХС)) и 50 больных ИБС без признаков вирусной инфекции. Всем пациентам проводилось стандартное общеклиническое обследование. В каждой точке исследования определялся уровень параметров липид-транспортной системы в сыворотке крови энзиматиче-ским калориметрическим методом с использованием диагностических наборов фирмы «Виталаб Флексор Е» (Нидерланды). Концентрацию интерлейкинов сыворотки крови определяли методом ИФА на анализаторе «Текан» (Австрия). Геномную ДНК выделяли из замороженной (-20°С) венозной крови методом фе-нольно-хлороформной экстракции. Генотипирование полиморфизмов 11-1 в —511С> Т (ге16944), И-6 -174G>C (ге1800795), 11-4 -589С> Т (ге2243250), 11-10

-1082G> А (rs1800896) проведено методом полиме-разно-цепной реакции (ПЦР) в реальном времени с помощью TaqMan зондов для дискриминации аллелей на амплификаторе CFX96 Bio-Rad Laboratories.

Статистическая обработка проведена в программе Excel Office 2007, («Microsoft»). Характер распределения количественных признаков и нормальность оценивали с помощью t-критерия Стъюдента. Статистически значимыми показателями считали значения уровня p <0,05. Для выявления силы и направления связи между исследуемыми признаками использовали процедуру корреляционного анализа с расчетом коэффициента корреляции (r).

Результаты исследования. В течение 12-ти недель всем больным осуществлялась фармакологическая коррекция ГЛП розувастатином.

Больные ИБС на I визите, получающие розуваста-тин 10 мг/сут., показали достижение целевого ХС ЛНП в 67,6%, среди них с изолированной ГХС - 38%, с со-четанной ГХС - 29,6%. Статистически значимых особенностей фармакологической коррекции по достижению целевого уровня ХС ЛНП у больных с учетом ген-дерных и возрастных отличий не было выявлено (р >0,05).

Через месяц от начала исследования (II визит) часть больных была выявлена ОРВИ, что сопровождалось снижением достигнутого целевого уровня ХС ЛНП.

6% больных ИБС с изолированой ГХС на фоне ОРВИ при выбранной стандартной дозе розувастатина 10 мг/сут. потеряли достигнутый уровень ХС ЛНП. У больных ИБС с сочетанной ГХС на II визите проявлением дестабилизации течения ишемической болезни потеря достигнутого целевого уровня составило 5,6%.

Полученные данные, свидетельствующие о дестабилизации течения атеросклероза при присоединении острого инфекционного процесса, способствовали изменению проводимой терапии с титрацией используемой дозы розувастатина до 20 мг/сут. Далее все пациенты с ИБС и ОРВИ получали розувастатин 20 мг/сут.

Наблюдение за больными, переносящими ОРВИ, осуществлялось через 7, 14, 28 и 3 месяца от момента заболевания ОРВИ, в соответствии с этапами развития инфекционного заболевания.

Фармакологическая коррекция ГЛП у больных ИБС с ОРВИ розувастатином 20мг/сут. привела к достижению целевого ХС ЛНП у 47% на III визите- период ранней реконвалесценции при ОРВИ, что соответствовало 7 дню болезни. Далее на последующих точках наблюдения было получено достижение целевого уровня холестерина у 50% (IV визит- 14 день после заболевания), 56% (V визит-1 месяц) и 62% больных (VI визит- 3 месяца) при сочетанной ГХС. Больные ИБС с изолированной ГХС достигли целевого уровня ХС ЛНП в 52% (III визит), 56% (IV визит), 60% (V визит) и 64% (VI визит) соответственно. Процент достижения целевого уровня ХС ЛНП на каждом этапе исследования у больных ИБС с ОРВИ с изолированной ГХС превышало таковой по сравнению с больными с сочетанной ГХС.

Выбранный дозовый режим (20 мг/сут.) способствовал усилению гиполипидемического эффекта ро-зувастатина.

В те же сроки наблюдения у больных ИБС с изолированной и сочетанной ГХС без признаков ОРВИ проводилась оценка достижения целевого уровня ХС ЛНП. На II визите больные, получающие розувастатин 10 мг/сут., достигли целевого уровня ХС ЛНП в 56% случаев с изолированной ГХС и в 50% при сочетанной ГХС, что способствовало переводу больных, не достигших целевого ХС ЛНП, переводу на прием розувастатина 20 мг/сут. У больных ИБС достижение целевого ХС ЛНП у больных ИБС без ОРВИ с сочетанной ГХС на III визите составило 54%, 55% на IV визите, 60% на V визите и 64% на VI визите. Больные ИБС с изолированной ГХС при динамическом наблюдении достигли целевого уровня ХС ЛНП в 60% - на III визите, 64% - на IV визите, 68% - на V визите, и 72% -на VI визите соответственно.

С целью индивидуализации подходов к фармакологической коррекции ГЛП у больных ИБС при оценке различий в достижении целевого уровня ХС ЛНП при различных дозовых режимах статинотерапии необходимо оценить вклад процессов воспаления в активации атеросклероза у больных ИБС.

Показатель Ш-1р у больных с коморбидной патологией составил 33,1 пг/мл, что превышало таковой в сравнении больными без проявления ОРВИ (13,3 пг/мл), и имело статистическую значимость (р <0,05) (рисунок 1).

Рис. 1. Динамика уровня провоспалительных цитокинов у больных ИБС с ОРВИ и без ОРВИ на фоне монотерапии розувастатином.

*-p <0,05 для критерия t-Стъюдента.

Динамический контроль показателей цитокинового профиля у больных ИБС с ОРВИ отмечалось снижение провоспалительных интерлейкинов на каждом этапе исследования до 16,8 пг/мл, для ГЬ-1р и 14,8 пг/мл для ГЬ-6 (р <0,05). Данные изменения цитокинового статуса связаны с активацией процессов воспаления при заболевании вирусной инфекцией. Снижение исследуемых параметров связано со стиханием воспалительного процесса и реализацией плейотропных эффектов

розувастатина (р <0,05). Больные ИБС, перенесшие вирусную инфекцию, к 3 месяцу достигли уровня цито-кинов, сопоставимых с данными, полученными у больных ИБС без сопутствующей вирусной инфекции (р >0,05).

Цитокиновый профиль больных ИБС без ОРВИ на всех точках наблюдения в течение 12 недель оставались стабильным (р >0,05), что связано с компенсаторными механизмами для поддержания равновесия в ате-

росклеротической бляшке [5].

35 30 25 20 15 10 5

34

29,2

31,4

14,3

I

+ + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +

16,7

Р

I

ГГ +

-+

+ + +

-+

* *

19,1

+

é /s /s

VA

m

*

23,8

I

I

+ + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +

ж

DIL-

4

IL-

10

fa II визит p

III визит IV визит VI визит

*

*

0

Рис. 2. Динамика уровня противовоспалительных цитокинов у больных ИБС с ОРВИ и без ОРВИ на фоне монотерапии розувастатином.

*- p <0,05 для критерия t-Стъюдента.

У больных ИБС с ОРВИ уровень Ш-4 варьировал от 14, 3 пг/мл до 23,8 пг/мл, а Ш-10 - с 29,2 пг/мл до 34 пг/мл к концу наблюдения (к 12 неделе) (р <0,05) (рисунок 2).

Уровень противовоспалительных интерлейнов у больных ИБС без признаков вирусной инфекции характеризовался повышением Ш-4 и Ш-10 (р<0,05). 1Ь-4 составил 20, 7 пг/мл, а ГЬ-10 - 37 пг/мл соответственно на II визите.

Показатели противовоспалительных интерлейки-нов у больных ИБС с вирусной инфекцией имел тенденцию к повышению на всех последующих этапах, что связано с угасанием воспалительных реакций.

Для оценки вклада цитокиновой системы в различия гиполипидемического ответа у больных ИБС в

условиях ОРВИ при приеме розувастатина было проведено генетическое тестирование полиморфизмов генов провоспалительных (1Ь-1в, 1Ь-6) и противовоспалительных (1Ь-4,1Ь-10) цитокинов.

Полученные генотипы генов цитокинов в процентном соотношении были сопоставимы. Распределение частот генотипов соответствовало закону Харди -Вайнберга.

Анализ корреляционных связей носительства выявленных генотипов с уровнем продуцируемых цитоки-нов и липидных фракций, показал связь генотипа -511СТ гена 1Ь-1р с повышением синтеза самого интер-лейкина (р <0,05). По данным исследований у носителей данного генотипа в промоторе гена 1Ь-1р выявлялась избыточная продукция цитокина [1,2] (таблица 1).

Таблица 1

Зависимости генотипов про- и противовоспалительных цитокинов и синтеза интерлейкинов и липидов у

больных ИБС с ОРВИ

Генотип

1L-6 IL ХС ТГ ЛВП ЛНП С-РБ

-174GG 31±0,1 4,68±0,82 2,16±0,85 0,83±0,17 2,51±0,76 5,57±2,81

-174GC 28,7±0,02 4,82±1,01 2,28±0,89 0,82±0,2 2,49±0,82 4,94±2,65

-174CC 27±0,05 4,78±0,88 2,48±0,88 0,78±0,19 2,46±0,94 4,89±2,47

p* 0,37 0,81 0,36 0,58 0,84 0,53

1L-ie

-511CC 33,6±0,06 4,77±0,89 2,34±0,87 0,81±0,2 2,53±0,86 5,02±2,45

-511CT 37± 0,09 4,85±0,97 2,39±0,85 0,78±0,17 2,54±0,84 4,94±2,38

-511TT 37±0,17 4,99±0,85 2,07±0,99 0,92±0,18 2,51±0,89 6,04±3,83

p* 0,66 0,41 0,45 0,03 0,99 0,34

1L-4

-589СС 13,8±1,07 5,5±0,5 2,56±0,10 0,66±0,5 2,62±0,03 10,56±0,5

-589CT 14,4±0,57 5,41±0,67 2,6±0,13 0,69±0,63 2,66±0,06 10,63±0,7

-589ТТ 15± 0,72 5,63±0,18 2,6±0,35 0,6±0,43 2,78±0,17 14,95±1,8

p* 0,66 0,39 0,36 0,12 0,4 0,15

1L-10

-1082AA 30±0,5 5,6±1,2 2,29±0,8 0,8±1,3 2,59±0,76 3,2±0,43

-1082AG 27,8±0,8 5,57±0,12 2,38±0,05 0,79±2,05 2,65±0,2 3,4±0,98

-1082GG 29±0,42 5,5±0,06 2,23±1,9 0,83±0,9 2,62±0,6 3,37±0,1

p* 0,004 0,003 0,24 0,24 0,69 0,64

Изучение влияния количественного уровня ГЬ-1 на содержание липидов характеризовалось прямой положительной связью (г=0,46, р <0,05) между уровнями ХС и 1Ь-1. Носители гетерозиготного генотипа -511СТ имели наиболее высокие значения ЛНП - 2,54 ммоль/л (р <0,05).

Вклад генетического полифиморфизма провоспа-лительного гена 1Ь-6 в продукцию липидов и ГЬ-6 показал, что носительство генотипа -174GG связано с повышением уровня ХС ЛНП (2,51ммоль/л) по сравнению с другими генотипами (р <0,05), что свидетель-

ствует о дестабилизации хронического воспалительного процесса в атеросклеротической бляшке при остром воспалении [3]. ГЬ-6 является регулятором ответа острой фазы воспаления [1,4]. У носителей генотипа -174GG продукция ГЬ-6, составившая 31 пг/мл, была выше по сравнению с другими генотипами (р <0,05). Полиморфизм -589 С/Т гена 1Ь-4 способствует активации процессов транскрипции. В исследовании отмечено повышение продукции ГЬ-4 и С-РБ при носи-тельстве генотипа -589ТТ по сравнению с другими генотипами (р <0,05).

Генотип G/G локуса G-1082A ассоциирован с противовоспалительным иммунитетом [2]. Носительство генотипа -1082GG коррелировало со сниженным уровнем С-РБ и холестерина (r=0,6, p=0,003), что обусловлено активацией противовоспалительных реакций у больных с хронической ИБС.

Анализ влияния генетического полиморфизма генов цитокинов на выраженность лекарственного ответа при приеме розувастатина с целью достижения целевого ХС ЛНП у больных ИБС без ОРВИ показал слабую прямую корреляционную связь между показателями IL-ip и IL-6 в сыворотке и генотипами -511TT и -174GC соответственно (12,8 пг/мл и 14 пг/мл) (r=0,46, p=0,001). Носители генотипа -511TT характеризовались низким уровнем ХС ЛНП (2,51 ммоль/л) и высоким - ХС ЛВП (0,92 ммоль/л) (p <0,05), что говорит о реализации гиполипидемического эффекта розуваста-тина.

Выводы:

1. Монотерапия розувастатином 10 мг/сут. при носительстве гетерозиготного генотипа -511CT по полиморфизму -511C> T (rs16944) гена IL-1fi, гомозиготного -174GG по полиморфизму -174G>C (rs1800795) гена IL-6 и гомозиготного -1082AA по полиморфизму -1082G> A(rs1800896) гена IL-10 не привела к достижению целевого уровня ХС ЛНП, таким образом больные, являющиеся носителями данных генотипов должны получать в качестве гиполипидемической терапии -розувастатин 20 мг/сут.

2. Выявление взаимосвязи генетических полиморфизмов с эффективностью дозового режима розувастатина при фармакологической коррекции ГЛП способствует индивидуализации режима терапии у больных ИБС в условиях острого инфекционного процесса.

БИБЛИОГРАФИЧЕСКИИ СПИСОК

[1] Байке Е.В., Байке Е.Е. Полиморфизм генов 1L-1B, 1L-6, 1L-10 И TNF-A у больных разными формами хронического гнойного среднего отита [Электронный ресурс] / Е.В. Байке, Е.Е. Байке // Современные проблемы науки и образования. - 2015. - № 4. - Режим доступа: http://science-education.ra/ru/article/view?id=21205.-Дата обращения: 27.04.2016г.

[2] Голышко В.С., Снежицкий В.А., Ершова М.В., Кузнецов О.Е. Влияние полиморфизма генов TNF - а (G 308 A) и 1L - 10 (G -108 2A) при инфаркте миокарда на экспрессию про- и противовоспалительных цитокинов // Журнал Гродненского медицинского университета. - 2012. - №3. - С. 55-58.

[3] Грибовская И.А., Маль Г.С., Болдина Н.В., Удалова С.Н. Оценка сравнительной эффективности ингибиторов синтеза холестерина у больных ишемической болезнью сердца при дезадаптации сердечно-сосудистой системы в условиях воспаления и инфекции [Электронный ресурс] / И.А. Грибовская, Г.С. Маль, Н.В. Болдина, С.Н. Удалова // Современные проблемы науки и образования. - 2015. - №6. - Режим доступа: http://science-education.ru/ru/article/view?id=23493. - Дата обращения: 27.04.2016г.

[4] Зыков М.В. Использование биомаркеров-цитокинов в диагностике и прогнозировании течения инфаркта миокарда: методические рекомендации для врачей-кардиологов / Зыков М.В. Барбараш О.Л., Каретникова В.Н. - Кемерово, 2012. - 24 с.

[5] Серик С.А. Про- и противовоспалительные цитокины у больных c ишемической болезнью сердца при прогрес-сировании хронической сердечной недостаточности [Электронный ресурс] / С.А. Серик, С.В. Степанова, В.И. Волков // Украинский кардиологический журнал. - 2004. - № 4. - С. 18-21. - Режим доступа: http://www.rql.kiev.ua/cardio_j /2004/4/serik.htm. - Дата обращения: 10.03.2011г.

ALLELE POLYMORPHISM OF GENES OF INTERLEUKINS - IN THE SEVERITY OF THE LIPID-LOWERING EFFECT OF ROSUVASTATIN

Gribovskaya I.A., Udalova S.N., Boldina N. V.

Kursk state medical university, Kursk, Russian Federation

Annotation. Assessment of changes in the lipid profile ofpatients in the two study groups (patients with coronary heart disease (CHD) with acute respiratory viral infection (ARI)) and patients with IHD without SARS showed that 6% of CHD patients after verification of their acute respiratory viral infection lost the ambulatory cholesterol level. Among patients with IHD without manifestation of ARI, the achieved target level was 53%.

The cytokine status of patients was characterized by an increase in proinflammatory cytokines (IL-1 ft and IL-6) in patients with coronary artery disease who joined ARI on their second visit to 33.1 pg / ml and 29.4 pg / ml, respectively, with a further decline to 12 weeks to 16 , 8 pg / ml and 14.8 pg / ml. Patients with IHD showed a stable level of pro- and anti-inflammatory cytokines without dynamic changes at all stages of the observation, which characterizes the balance of inflammation processes in chronic CAD. The study of the contribution of genetic polymorphism of pro and anti-inflammatory cytokines to the severity of lipid-lowering response in patients with coronary artery disease under conditions of acute respiratory viral infection showed that when carrying the genotype -511CT of the gene IL-1 ft, -174GG gene IL-6 and genotype -1082AA of the IL-10 gene to achieve the target cholesterol required a dose of rosuvastatin - 20 mg / day.

Key words: polymorphism of genes, rosuvastatin, personalized approach, IHD, cytokines.

----—

Журнал включен в Перечень рецензируемых научных изданий ВАК

~ 49 ~

REFERENCES

[1] Baike E., Baike E.E. Polymorphism of IL-1B, IL-6, IL-10 and TNF-A genes in patients with different forms of chronic suppurative otitis media [Electronic resource] / E.B. Baike, E.E. Baike // Modern problems of science and education. - 2015. - № 4. - Access mode: http://science-education.ru/en/article/view?id=21205. - Date of circulation: 27.04.2016.

[2] Golyshko V.S., Snezhitsky V.A., Ershova M.V., Kuznetsov O.E. Influence of polymorphism of TNF - a (G 308 A) and IL - 10 (G-108 2A) genes in myocardial infarction on the expression of pro- and anti-inflammatory cytokines // Journal of Grodno Medical University. - 2012, № 3. - P. 55-58.

[3] Gribovskaya I.A., Mal G.S., Boldina N.V., Udalova S.N. Evaluation of the comparative effectiveness of inhibitors of cholesterol synthesis in patients with coronary heart disease with disadaptation of the cardiovascular system in

conditions of inflammation and infection [Electronic resource] / I.A. Gribovskaya, G.S. Mal, N.V. Boldina, S.N. Udalova // Modern problems of science and education. -2015. - № 6. - Access mode: http://science-education.ru/en/article/view?id=23493. - Date of circulation: 27.04.2016.

[4] Zykov M.V. Use of biomarkers-cytokines in the diagnosis and prognosis of the course of myocardial infarction: methodological recommendations for cardiologists / Zykov M.V., Barbarash O.L., Karetnikova V.N. - Kemerovo, 2012. - 24 p.

[5] Serik S.A. Pro-and anti-inflammatory cytokines in patients with ischemic heart disease with progression of chronic heart failure [Electronic resource] / SA Serik, S. V. Stepanova, V. I. Volkov // Ukrainian Cardiology Journal. -2004. - N. 4. - P. 18-21. - Access mode: http://www.rql.kiev.ua/cardio_j /2004/4/serik.htm.- Date of circulation: 10.03.2011.