Лабораторные иммуно-гематологические исследования в трансфузиологии

дельного внимания заслуживает участие иммунной системы в этом процессе.

Целью работы стал поиск возможной связи развития остеопороза с хроническими воспалительными заболеваниями желудка и двенадцатиперстной кишки, обусловленными инфицированием H. pylori. В соответствии с целью работы была поставлена задача обследовать различные возрастные группы женщин с диспептическими жалобами и выработать оптимальное сочетание различных маркеров остеопороза с маркерами инфицирования ЖКТ.

Были обследованы 12 женщин в возрасте 30-40 лет (14 женщин 41-48 лет с сохранной репродуктивной функцией, 11 женщин в возрасте 50-57 лет в постменопаузальном периоде) на следующие показатели: паратгормон, 25-гидроксивитамин В (25-OH D), кальцитонин, остеокальцин, C-терминальный телопептид коллагена 1-го типа (ß-CrossLaps), тиреотропный гормон (ТТГ), антитела к тиреопероксидазе (антитела к ТПО), антитела IgG, IgA к H. pylori, циркулирующие иммуноком-плексы (ЦИК), показатели клеточного иммунитета (CD3+4+, 3+8+, 16+56+, 19+). Статистическая обработка полученных данных велась с использованием критерия Манна-Уитни.

У женщин в постменопаузе уровень 25-OH D составлял от 17,8 до 125,5 нг/мл при норме 20-50 нг/мл, и значимой связи с клинической картиной не выявлено. При анализе биохимических параметров метаболизма костной ткани у паци-

ентов, инфицированных H. pylori, обнаружено повышение уровня ß-CrossLaps у 50%, которое достигало 0,77 ± 15 нг/мл, при норме до 0,57 нг/мл. Другие маркеры костного обмена (кальцитонин, остеокальцин) статистически значимых результатов не выявили.

Более половины обследованных женщин предъявили жалобы на диспептические явления со стороны ЖКТ. У женщин в возрасте 30-40 лет антитела к H. pylori класса IgA и IgG были выявлены у 16,7%. В более старшем возрасте антитела к H. pylori класса IgA и IgG были выявлены у 56%.

Уровень CD3+4+ у женщин в постменопаузе составлял 1152 ± 119 кл/мкл, у женщин репродуктивного возраста 1457 ± 251 кл/мкл. Была выявлена слабоположительная корреляционная связь (r = 0,62) между наличием антител IgA к H. pylori, ЦИК и антителами к тиреопероксидазе.

Анализ полученных данных свидетельствует о том, что хроническое инфекционное заболевание может приводить к системным сдвигам в иммунной системе, а параллельно в биохимическом и гормональном гомеостазе. Инфицирование H. pylori может утяжелять течение остеопороза, о чем свидетельствуют изменения в уровнях маркеров ремоделирования костной ткани. Степень корреляции уровней биохимических показателей костного обмена и иммунологических сдвигов при инфекции, обусловленной H. pylori, требует дальнейшего изучения.

лабораторные иммуно-гематологические исследования

в трансфузиологии

В.В. Базарный, Н.В. Гаренских, Е.А. Карбовничая, Е.В. Малухина. Новый подход к оптимизации лабораторного мониторинга кадровых доноров крови. Уральский государственный медицинский университет, Свердловская областная клиническая больница № 1, Екатеринбург

Стандартное тестирование донорской крови не всегда позволяет выявить нарушения в состоянии здоровья кадровых доноров (латентный дефицит железа и др.). Цель исследования заключалась в оценке показателей эритропоэза и обмена железа при различных видах донорства.

Обследованы 120 доноров. Наряду с общепринятыми показателями крови определяли уровень сывороточного железа, ОЖСС (Olympus AU 640) и концентрацию эритропоэтина (ЭПО) методом твердофазного гетерогенного ИФА («Вектор-Бест»). Все обследованные добровольцы были разделены на группы: активных (кадровых) доноров, доноров резерва и доноров тромбоцитов. Контрольную группу составили «первичные» доноры перед первой кроводачей. Для получения тромбоконцентрата использовали технологию автоматического афереза (Haemonetics, устройство MCS+).

Основные параметры гематологического анализа (содержание лейкоцитов, тромбоцитов, эритроцитов и некоторые расчетные индексы - MCH, MCV) у доноров изученных групп существенно не различались. При этом степень анизо-цитоза (RDW) повышалась у активных доноров крови и доноров тромбоцитов на 10% (p = 0,02). Различий в показателях обмена железа между группами также не обнаружено, но у 13% добровольцев в контрольной группе и у 29% активных доноров крови и тромбоцитов отмечалось снижение коэффициента насыщения трансферрина. Таким образом, несмотря на соблюдение адекватного «донорского режима» у части доноров формируется умеренный латентный дефицит железа.

Концентрация ЭПО в контрольной группе составила 29,3 ± 2,3 мМЕ/мл, у активных доноров она повышена на 90% (p < 0,01), у доноров тромбоцитов - на 80% (p < 0,01). Если «эритропоэзвозмущающий» эффект кроводач в целом понятен, то его причины и патогенетическое значение у доноров тромбоцитов требует дальнейшего анализа.

Таким образом, в проведенном исследовании получены

новые данные о состоянии процессов кроветворения и обмена железа при разных видах донорства. Мы полагаем, что совершенствование лабораторного мониторинга здоровья доноров (прежде всего - тромбоцитов) делает актуальным дальнейший научный поиск в данном направлении с использованием новых лабораторных методических подходов, в частности - определение гемопоэтических факторов роста.

Э.А. Имельбаева, В.Т. Степанова, А.Ж. Гильманов. Оценка риска развития посттрансфузионных осложнений у онкологических больных. ГБОУ ВПО «Башкирский государственный медицинский университет» МЗ РФ, ГБУЗ «Республиканская станция переливания крови», г, Уфа

При возникновении опухоли в организме происходят изменения антигенного состава как самих трансформированных опухолевых клеток, так и клеток крови. Изменения антигенных свойств эритроцитов при опухолях характеризуются в основном снижением агглютинабельности эритроцитов и экспрессии на их поверхности антигенов системы AB0 и H. При остром лейкозе эти процессы обнаруживаются еще до развития лейкемии, особенно выражены при обострении, а в период ремиссии возможен возврат к исходному уровню. В период обострения у больных лейкемией отмечается также подавление экспрессии D-антигена и антигенный химеризм (появление эритроцитов A-и 0-группы). Для эритроцитов опухолевых больных характерна также полиаплютинабельность - феномен Томсона (нестерильно взятые эритроциты, постояв при комнатной температуре более суток, могут агглютинировать со всеми сыворотками AB0-системы). В целом, опухолевая болезнь значительно искажает перекрестную специфичность, способствует синтезу атипичных гликолизил-трансфераз, способных образовывать причудливые АГ - начиная с необычных AB0 и заканчивая специфическими опухолевыми АГ. Перечисленные особенности антигенов эритроцитов создают определенные трудности при определении групп крови у онкологических больных.

Другая сложность связана с приобретенным B-антигеном у лиц с A-группой крови и формированием новой подгруппы A(B). В рутинных тестах эта кровь определяется как принадлежащая к AB-группе, но при переливании крови AB-группы может наступить летальный исход.

Значимость антител в предупреждении гемотрансфузи-онных реакций у онкологических больных также высока. По частоте посттрансфузионных осложнений ABO-система находится на 1-м месте, на 2-м месте - резус-антигены, на 3-м - Kell. Для предупреждения развития осложнений важно вести учет индекса сенсибилизации (ИС) населения - процента лиц с антиэритроцитарными антителами.

Целью настоящей работы был анализ особенностей антигенов и антител у онкологических больных в Республике Башкортостан для определения степени риска развития посттрансфу-зионных осложнений. В результате проведенных исследований установлено, что частота выявления антиэритроцитарных ау-тоантител в группе доноров Республики Башкортостан составляет в среднем 0,20 ± 0,03%, достигая в период с мая по июль 0,40 ± 0,03%. У опухолевых больных аутоантитела выявляются в 1,8-2% случаев. Наиболее частой причиной аутосенсибили-зации антигенами эритроцитов является «слабый» антиген Du системы Резус (1,12 ± 0,08% от общего числа доноров Уфы).

Согласно полученным нами данным, ИС у доноров Республики Башкортостан равен 0,2%, риск гемотрансфузионных осложнений составляет 1:500. При ИС 0,4% (весной) риск возрастает до 1:250; при ИС 1,8% - до 1:55,5; при ИС 4,2-6,6%

- до 1:24-1:15. Эти данные свидетельствуют о том, что для онкологических больных характерен высокий риск развития посттрансфузионных осложнений, что требует их минимизаций, тщательного выполнения соответствующих лабораторных исследований и учета анамнестических данных.

Е.Р. Кулюцина, О.А. Левашова, Е.В. Кривченкова. Исследование протромботических полиморфизмов у доноров

- шаг навстречу персонализированной и предиктивной медицине. ГБОУ ДПО «Пензенский институт усовершенствования врачей» Минздрава России

Цель исследования - изучение распространенности четырех основных генетических полиморфизмов, ассоциированных с риском развития тромбофилии, у доноров Пензы и Пензенской области.

Кафедрой клинической лабораторной диагностики ГБОУ ДПО «Пензенский институт усовершенствования врачей» Минздрава России на базе ГБУЗ Пензенская областная станция переливания крови проведено комплексное клинико-лабораторное обследование доноров, поддержанное грантом ФГБУ «Российский фонд фундаментальных исследований» (проект № 12-07-97009/12-р_поволжье_а «Алгоритмы и программное обеспечение медицинской информационно-аналитической системы в области гематологии»). Данная работа выполнена в рамках научных исследований по договору о совместной научно-технической деятельности с Алтайским филиалом ФГБУ «Гематологический научный центр» Минздрава России и лабораторией гематологии ЦНИЛ ГБОУ ВПО «Алтайский государственный медицинский университет» Минздрава России (г. Барнаул) по теме «Новые лабораторные технологии обеспечения эффективности трансфузий гемокомпонентов».

Были исследованы образцы крови 258 доноров. Исследования проводились методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени на амплификаторе DT-lite («ДНК-технология») с использованием стандартизованных комплектов реагентов для определения генетических полиморфизмов производства НПО «ДНК-технология».

При исследовании полиморфизма 20210 G>A гена F2 , кодирующего синтез протромбина (фактор II свертывания крови) выявлены следующие генотипы: G/G - у 252 человек (97,7%), G/A у 6 человек (2,3%), A/A не было ни у кого. Частота встречаемости полиморфизма 1691 G>A (Arg506Gln) гена F5 - проакцелерин (фактор V свертывания крови, белкового кофактора при образовании тромбина из протромбина) была следующая: генотип G/G определялся у 254 (98,5%) человек, G/A - у 4 (1,5%) человек, гомозиготного сочетания A/A не было ни у кого. Полиморфизм 10976 G>A (Arg353Gln) гена F7

- проконвертин, или конвертин (фактор VII свертывания крови - белок, который участвует в образовании тканевой про-тромбиназы и превращении протромбина в тромбин) распре-

делялся следующим образом: G/G у 184 человек (71,3%), G/A у 70 человек (27,1%), гомозиготное сочетание A/A у 4 (1,5%). Определение полиморфизма 103 G>T (Val35Leu) гена F13A1, кодирующего фибриназу (фактор XIII свертывания крови), которая обусловливает димеризацию и полимеризацию фибрина и участвует в стабилизации клеточной поверхности мембран, выявило следующее распределение генотипов: G/G у 138 человек (53,5%), G/T у 114 человек (44,2%), гомозиготное сочетание T/T у 24 (9,3%).

Сочетание протромботических полиморфизмов является наиболее неблагоприятным и увеличивает риск тромбозов в несколько раз. Так, сочетание F710976 G/A (Arg353Gln) и F13A1103 G/T (Val35Leu) определялось наиболее часто - в 33 случаях, что составляет 12,8%, F710976 G/A (Arg353Gln) и F13A1103 T/T (Val35Leu) - в 4 (1,5%), A/A (Arg353Gln) и F13A1103 G/T (Val35Leu) - в 1 (0,4%), F51691 G/A (Arg506Gln) и F13A1103 G/T (Val35Leu) - в 1 (0,4%), F51691 G/A (Arg506Gln) и F710976 G/A (Arg353Gln) - в 1 (0,4%).

Таким образом, изучение распространенности протром-ботических полиморфизмов у доноров может стать началом составления генетического паспорта населения Пензенской области, необходимого для выявления групп риска сердечнососудистой и перинатальной патологии для наиболее эффективных профилактических мероприятий в рамках персонализированной и предиктивной медицины региона.

Е.Р. Кулюцина, Т.В. Крылова, С.С. Козак, О.А. Левашова, С.В. Железнякова, И.В. Шапошникова, Е.В. Кривченкова. Инновационный подход к клинико-лабораторному обследованию доноров. ГБОУ ДПО «Пензенский институт усовершенствования врачей» Минздрава России; ГБУЗ Пензенская областная станция переливания крови

Цель исследования - провести анализ уровня С-реактив-ного белка (СРБ) плазмы крови в составе комплексного клинико-лабораторного обследования доноров, включающего современные лабораторные тесты для донозологической диагностики тромбофилии, синдрома эндогенной интоксикации и анемического синдрома. Данная работа выполнена в рамках научных исследований по договору о совместной научно-технической деятельности с Алтайским филиалом ФГБУ «Гематологический научный центр» Минздрава России и лабораторией гематологии ЦНИЛ ГБОУ ВПО «Алтайский государственный медицинский университет» Минздрава России (Барнаул) по теме «Новые лабораторные технологии обеспечения эффективности трансфузий гемокомпонентов».

Обследованы 282 донора крови и плазмы (164 мужчин и 118 женщин) на базе ГБУЗ Пензенская областная станция переливания крови. Преобладали мужчины и доноры самой молодой (18-31 год) возрастной группы. Обследовались те доноры плазмы, которые пришли на донацию после перерыва (отдыха) от 1 мес и более. Все доноры крови были первичные. Обследуемые были сгруппированы по возрасту (18-31 год, 32-45, 46-60 лет) и полу. Исследование СРБ проводили иммуноферментным методом.

Было выявлено, что нормальные базовые значения СРБ (до 8 мг/л) определялись практически одинаково как у мужчин (75,5%), так и у женщин (76,6%) в наиболее многочисленной группе (18-31 год). Однако в более старших возрастных группах мужчин (32-45 и 46-60 лет) уровень СРБ в норме был у 82,9 и 79,6% соответственно, т. е. чаще, чем у женщин (54 и 66,7% соответственно).

В ультрачувствительном диапазоне (8-10 мг/л) в группах как мужчин, так и женщин в возрасте 18-31 года и 46-60 лет СРБ повышался практически одинаково часто (мужчины - 6,3 и 9,1% соответственно, женщины 6,4 и 9,5%). Обращает на себя внимание, что у женщин 32-45 лет в 5 раз чаще (12%) повышены показатели высокочувствительного СРБ, чем у мужчин (2,4%).

В острофазном воспалительном диапазоне (более 10 мг/л) в обеих группах возраста 18-31 года повышенный СРБ был у 17,7% мужчин и 17,02% женщин. В других возрастных группах у женщин он был повышен значительно чаще более чем в 2

раза. Так, в группах мужчин 32-45 и 46-60 лет его уровень был увеличен в 14,6 и 11,4% случаев соответственно, а аналогичных группах женщин - в 32 и 23,8% случаев соответственно.

Таким образом, отмечается тенденция к росту СРБ в следующих случаях:

1) в высокочувствительном диапазоне в средней возрастной группе женщин;

2) в острофазном воспалительном диапазоне во всех группах в 2 раза чаше, чем в ультрачувствительном, причем более чем в 2 раза чаще у женщин в возрасте 32-60 лет.

Полученные результаты динамики СРБ особенно важно использовать для более тщательного освидетельствования доноров перед донациями. В совокупности с другими тестами клинико-лабораторного обследования доноров они позволят разработать и научно обосновать целевые программы профилактических мер, направленных на улучшение не только качества жизни и здоровья доноров, но и в целом населения Пензенской области.

М.Ю. Ланцова', Т.А. Старовойтова', А.Б. Туголуков2, В.В. Зайко2, Ю.Ю. Венгеров2. Аппаратно-программный комплекс «Эксперт-Лаб» для документирования и автоматизации иммуногематологических исследований на поверхности. Тородская клиническая больница № 1 им. Н.И Пирогова, 2Институт биохимии им. А.Н. Баха РАН, Москва

Разработаны методики и программное обеспечение (ПО) для регистрации результатов иммуногематологических исследований с применением аппаратно-программного комплекса (АПК) «Эксперт-Лаб». Методики и ПО адаптированы и апробированы для проведения исследований в специализированных планшетах 6x7 круглых ячеек и 10x8 овальных ячеек, распространенных в клинико-диагностических лабораториях и станциях переливания крови РФ.

После проведения реакции планшеты помещаются в сканирующее устройство и с помощью простого в обращении ПО нажатием одной кнопки производится регистрация и автоматическая оценка результатов. ПО предоставляет пользователям все возможности видеоцифровой регистрации, т. е.:

- сохранение в базе данных изображений планшетов и лунок, относящихся к конкретному пациенту, что позволяет подвергнуть результат повторной проверке;

- обеспечение врача-оператора компьютерными возможностями увеличения и обработки изображений индивидуальных лунок для оценки и валидации полученных результатов в сложных случаях;

- опцию дистанционной технической и методической поддержки;

- ведение компьютерных лабораторных журналов и распечатку результатов на бумажных носителях в соответствии со стандартными утвержденными формами.

Показана адекватная работа регистрирующей системы с реагентами различных производителей. Применение видеоцифровой системы и в особенности документирование и сохранение результатов в базе данных с изображениями планшетов в цифровом виде, позволяет повысить достоверность результатов и ответственность персонала при проведении жизненно-важных изосерологических определений. Самые распространенные в малых и средних ЛПУ визуальные методики определения групп крови на плоскости с использованием видеоцифровой регистрации выводятся на современный уровень, не уступающий гораздо более дорогостоящим исследованиям с применением гелевых технологий, оценка результатов которых также часто производится визуально из-за недоступности по ценам соответствующего регистрирующего оборудования.

С.А. Луговская, А.И. Костин, М.Е. Почтарь, И.Ю. Бугров, Ф.А. Дюков, Е.В. Наумова. Возможности расширенного дифференциального подсчета лейкоцитов с использованием CYTODIFF в скрининге доноров. ГБОУ ДПО «Российская медицинская академия последипломного образования» Минздрава России; Городская клиническая больница им. С.П. Боткина, Москва

Автоматизированный общий анализ крови с полной лей-

коцитарной формулой является наиболее распространенным первичным скрининговым тестом, который используется в диагностике и мониторировании многих заболеваний (воспалительные процессы, сепсис, инфекции, злокачественные опухоли, лейкозы, лимфомы и др.). Современные гематологические анализаторы обладают высокой чувствительностью обнаружения аномальных клеток, что отражается в виде патологических флагов и требует дальнейшего анализа окрашенных препаратов с использованием световой микроскопии. Многоцветная проточная цитофлюориметрия сегодня является привлекательной альтернативой световой микроскопии, обладая возможностью анализа десятков тысяч лейкоцитов, объективной иммунологической классификацией лейкоцитов, выделению дополнительные субпопуляций (провоспалительные моноциты). HematoFlow - новая технология дифференциации лейкоцитов с использованием проточной цитофлюориметрии с реагентом CytoDiff (Beckman Coulter, Brea, CA, США), представляющего 5-цветный коктейль из 6 антител, позволяющий подсчитать 18 клеточных популяций. Помимо стандартных популяций лейкоцитов - нейтрофилов, лимфоцитов, моноцитов, эозинофилов и базофилов, CytoDiff позволяет определять дополнительные клеточные популяции - B-лимфоциты, T- и NK-лимфоциты, незрелые гранулоциты и бласты. Кроме того, определяется содержание иммунологических популяций - CD16-позитивные моноциты, CDl6-негативные моноциты, CD16-позитивные T- и NK-лимфоциты и CD16-негативные T- и NK-лимфоциты. В настоящее время перед кроводачей достаточной является оценка параметров красной крови донора, в то время как другие показатели гемограммы в обязательное предварительное обследование не входят.

Целью исследования явилась оценка возможности использования технологии HematoFlow в качестве предварительного скрининга крови донора перед донацией.

Исследование проведено у 334 доноров (76 женщин и 256 мужчин) в возрасте 19-59 лет. Кровь, стабилизированная K2-EDTA, анализировалась в течение 8 ч с момента взятия на проточном цитометре (Beckman Coulter) с использованием панели CytoDiff (CD36-FITC, (CD2+CD294)-PE, CD19-ECD, CD16-PC5 и CD45-PC7). После 15-минутной инкубации в темноте эритроциты лизировались с помощью ферментного реагента Versalyse™ (Beckman Coulter, США). Анализ и подсчет абсолютного количества клеток проводились после регистрации 20 тыс. лейкоцитов с использованием программы автоматического гейтирования CytoDiff CXP.

Получены референсные интервалы лейкоцитов и субпопуляций лимфоцитов и моноцитов. Отмечалось незначительное повышение верхней границы абсолютного числа лимфоцитов до 3765 кл/мкл. В процессе исследования крови доноров с целью получения референсных значений были выявлены два патологических образца крови. В одном случае (первичный донор, 44 года) отмечалось повышенное содержание B-лимфоцитов (43,75%; #8997 в 1 мкл). В общем анализе крови количество лейкоцитов было 8,56 • 109/л, лц. 56,3%. Дальнейшее проведение расширенного иммунофенотипирования этого образца крови позволило установить диагноз B-клеточного хронического лимфолейкоза, впервые выявленного у донора. В другом случае обращало внимание большое число CD16-негативных грану-лоцитов (45,65%, #8836 в 1 мкл) при нормальных показателях общего анализа крови. Исследование иммунограммы этого донора выявило снижение абсолютного числа CD4+-клеток, однако ВИЧ-инфекция не подтверждена. По результатам скрининга принято решение не использовать данные компоненты крови в клинике, в первом случае они были переведены в брак по признаку наличия у донора онкопатологии, во втором случае компоненты крови были переданы в лабораторию контроля качества.

Предварительный скрининг показателей гемограммы с использованием многоцветной проточной цитофлюориме-трии и панели CytoDiff может повысить объективность селекции доноров по медицинским показаниям, безопасность донации, качество заготавливаемых компонентов и в конечном итоге безопасность реципиента.