СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КОМПЛЕКСНОГО ИММУНОТРОПНОГО АНТИСЕПТИЧЕСКОГО ПРЕПАРАТА ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ И ПРОФИЛАКТИКИ ИНФЕКЦИОННЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ ЖИВОТНЫХ
METHOD OF RECEPTION COMPLEX IMMUNOTROPIC ANTISEPTIC PREPARATION FOR TREATMENT AND PREVENTION OF INFECTIOUS DISEASES OF ANIMALS

Изобретение относится к ветеринарии и касается способа получения иммунотропных антисептических препаратов.
Наиболее близким по технической сущности, выбранным в качестве прототипа, является способ получения препарата «янтарный биостимулятор» для повышения резистентности организма животных, включающий в своем составе 1% янтарной кислоты, 4% антисептика - стимулятора Дорогова второй фракции, 0,25% новокаина. Данный препарат имеет нейтральную реакцию, технически прост в изготовлении, обладает высоким иммуностимулирующим действием при инъекционном методе введения (патент РФ №2303979 от 10.08.2007 г.).
Комплексный препарат оказался весьма эффективным средством, быстро нормализующим все нарушенные обменные процессы в организме животных, что обеспечивает выраженный клинический эффект успешной терапии инфекционных заболеваний в сочетании с антимикробными препаратами, в частности с антибиотиками. Однако нейтрализация щелочности препарата АСД №2 янтарной кислотой привела к утрате его бактерицидного действия. Для устранения указанного недостатка предлагается способ получения комплексного препарата, обладающего свойствами янтарного биостимулятора на фоне выраженного антимикробного действия.
Новым является то, что состав комплексного препарата, помимо янтарной кислоты, АСД второй фракции, новокаина, в качестве антимикробного компонента входят формалин в 0,4% концентрации. Включение формалина в состав комплексного препарата обусловлено его исключительно высокой антисептической активностью. Так, в концентрации 1:6000 он прекращает рост тифозных бацилл, а в абсолютно низкой концентрации 1:30000 останавливает гниение бульона (Мозгов И.Е. Фармакология. Москва - «Колос», 1979, С.303). Уникальность формалина - обезвреживать микроорганизмы и инактивировать их токсические продукты жизнедеятельности - реализуется в изготовлении практически всех «убитых» вакцинных препаратов.
Как известно, концентрация формалина в вакцинных препаратах чаще всего находится в пределах 0,2-0,4%. Известно, что внутримышечное (парентеральное) введение формалина в концентрации 0,1-0,2% позволяет обеспечить снижение вирулентности возбудителя вирусного трансмиссивного гастроэнтерита свиней непосредственно в организме животных и одновременно стимулировать специфическую иммунную защиту (Ласкавый В.Н. Способ профилактики трансмиссивного гастроэнтерита свиней. Патент РФ №2028804 от 20.02.1995 г.).
С учетом вышеизложенного вполне оправданной является возможность включения в состав комплексного препарата формалина, который мог бы обеспечить антимикробную активность при инъекционном методе ведения.
Определение оптимальной концентрации формалина провели по результатам изучения безвредности и бактериальной активности опытных образцов комплексного препарата. С этой целью были изготовлены экспериментальные образцы янтарного биостимулятора, содержание 0,2%; 0,3%; 0,4% и 0,5% формалина.
Бактерицидную активность определили в опыте in vitro, стандартным методом, по тесту задержки роста микроорганизмов вокруг бумажных дисков, пропитанных вышеуказанными растворами комплексного препарата. В качестве тест-объекта использовали культуру золотистого стафилококка, засеянного в бактериологические чашки на мясопептонный агар. После 24-часовой выдержки в термостате при 37°С диаметр зон задержки роста микроорганизмов составил: вокруг дисков, пропитанных комплексным препаратом, содержащим формалина 0,2% 5-7 мм; 0,3% 10-12 мм; 0,4% 15-17 мм; 0,5% 20-22 мм. Диаметр зон задержки 15 мм и более свидетельствовал о высокой бактерицидной активности.
Испытание безвредности провели на белых мышах. Ежедневное на протяжении 5 дней внутрибрюшинное введение в объеме 0,5 мл испытуемых образцов препарата, содержащего 0,2%, 0,3% и 0,4% формалина не сопровождалось угнетением общего состояния подопытных животных. Введение препарата, содержащего 0,5% формалина, на 5 суток привело к снижению активности животных, тем не менее гибели их не наблюдалось.
Таким образом, по результатам экспериментальных опытов установлено, что для обеспечения антисептической активности комплексного препарата наиболее оптимальной является концентрация формалина не ниже 0,4%, но и не выше 0,5%.
Способ получения комплексного препарата осуществляется следующим образом.
Для приготовления комплексного препарата 10 г янтарной кислоты, 2,5 г новокаина растворили в 35 мл дистиллированной воды. Добавлением 40 мл АСД №2 обеспечивается получение нейтрального раствора (рН 6,9-7). В нейтральный раствор добавили 10 мл формалина, что обеспечивало его концентрацию, равную 0,4% (из расчета 40% формальдегида). Довели объем до 1000 мл добавлением воды. Полученный препарат расфасовали по флаконам емкостью 100 мл и для обеспечения стерильности подвергли автоклавированию в режиме 1 атм в течение 20 минут.
Полученный комплексный препарат проверили в тесте изучения протективной, антисептической и иммуностимулирующей активности. Для сравнения использовали комплексный препарат «янтарный биостимулятор».
Испытание протективных свойств сравниваемых препаратов провели на белых мышах при моделировании у них острого сепсиса культурой кишечной палочки.
50
В первой серии опытов всем подопытным белым мышам в количестве 15 особей внутрибрюшинно ввели оттитрованную смертельную (2LD) дозу вышеуказанной культуры. Спустя 3 часа одной группе (n=5) внутрибрюшинно в объеме 0,5 мл ввели янтарный биостимулятор с формалином; другой группе (n=5) - янтарный биостимулятор; третей группе (n=5) в качестве плацебо - 0,25% раствор новокаина. Спустя сутки в первой группе пала одна мышь; во второй - пали 3 особи; в третьей пали все подопытные животные. При исследовании биоматериала от павших мышей были выделены исходные культуры кишечной палочки. При биохимическом исследовании выделенные культуры имели одинаковые свойства и равную вирулентность. Оставшихся в живых мышей усыпили спустя 48 часов после заражения. При бактериологическом исследовании биоматериала были выделены культуры кишечной палочки лишь от 2-х мышей из второй группы. При этом вирулентность выделенных культур снизилась не менее чем на 50% от исходной.
Во второй серии опытов за 12 часов до заражения провели предварительную внутрибрюшинную иммунизацию белых мышей первой группы (n=5) - янтарным биостимулятором с формалином, а второй группы (n=5) - янтарным биостимулятором. Объем вводимых препаратов был одинаковым и составил 0,5 мл. Спустя сутки после заражения во всех подопытных группах пало по 2 мыши. Остальные особи благополучно перенесли заражение и остались живы (срок наблюдения 5 дней). При бактериологическом исследовании биоматериала от павших мышей были выделены исходные культуры кишечной палочки, имевшие вирулентность фактически равную исходной.
Результаты проведенных исследований свидетельствуют о том, что включение в состав янтарного биостимулятора формалина обусловило выраженное антимикробное действие вскоре после заражения животных. Введение янтарного биостимулятора с формалином за 12 часов до заражения не имело столь выраженного протективного эффекта, что может быть обусловлено фактически полным выведением формалина из организма за этот период.
Изучение антисептической активности
Опыт провели на коровах с клиническими признаками мастита по окончании лактационного периода. Подопытные животные были разделены по принципу аналогов на две группы. Коровам первой группы (n=3) с 7-ю больными долями молочной железы внутрицистернально в объеме 5 мл ввели янтарный биостимулятор, содержащий 0,4% формалина. Животным второй группы (n=3) с 5 больными долями, внутрицистернально был введен янтарный биостимулятор в аналогичном объеме. Контроль антибактериальной активности препаратов при лечении мастита провели в день их введения и спустя 5 и 10 дней после введения. Результаты проведенного опыта представлены в табл.1.
Результаты исследований свидетельствуют о том, что включение в состав препарата формалина обусловило более ускоренный процесс обезвреживания микрофлоры в больных маститом долях молочной железы.
Изучение лечебной эффективности заявляемого препарата провели в производственном опыте при лечении больных отечной болезнью поросят. Для лечения применяли на одной группе (n=7) янтарный биостимулятор с формалином, на другой (n=5) янтарный биостимулятор и на третьей (n=7) янтарный биостимулятор в сочетании с антибиотиком гентамицин. Препараты применяли внутримышечно, в объеме 5,0 мл. Эффективность лечения оценивали прижизненно по клиническим признакам течения заболевания и оценивали прижизненно по клиническим признакам течения заболевания и кратности применения препаратов. В результате проведенного опыта установлено, что однократное введение янтарного биостимулятора с добавлением 0,4% формалина обеспечило клиническое выздоровление 4 поросят, двукратное еще 3 особей.
Для обеспечения клинического выздоровления 3 больных поросят второй группы потребовалось два введения препарата. Две особи из этой группы пали спустя 12 часов после начала лечения.
Для обеспечения клинического выздоровления 5 больных поросят третьей группы потребовалось провести две инъекции препарата и 3 инъекции еще для двух особей.
Результаты данного опыта свидетельствуют о том, что заявляемый препарат обладает более выраженной лечебной эффективностью в клинике лечения острого септического процесса при отечной болезни поросят.
Иммуностимулирующее действие заявляемого препарата было изучено на телятах гипотрофиках 20-25-дневного возраста в сравнении с янтарным биостимулятором и 1% раствором сукцината натрия (1% янтарной кислоты нейтрализованный гидроокисью натрия). Указанные препараты вводились однократно внутримышечно в объеме 2.0 мл. Число животных в каждой группе составляло по 3 особи. Оценку влияния препаратов на гематолитические показатели и факторы неспецифической резистентности провели на 7 сутки.
Результаты проведенных исследований представлены в табл.2.
Представленные в табл.2 данные свидетельствуют о том, что янтарный биостимулятор с формалином оказал позитивное влияние на гемопоэз, выраженное стимулирующее воздействие на факторы неспецифической резистентности.
На основании проведенных исследований следует, что заявляемый комплексный препарат на основе янтарной кислоты, антисептика - стимулятора Дорохова второй фракции - и формалина обладает выраженной антисептической и иммуностимулирующей активностью, что делает возможным его применение для лечения инфекционных заболеваний без применения антибиотиков.
Результаты исследований иммунотропных и антисептических свойств препарата, полученного заявленным способом, а также результаты профилактики и лечения инфекционных заболеваний животных подтвердили обоснованность введения в состав препарата формалина в качестве антисептического компонента и оптимальности его процентного содержания. Он хорошо сочетается с остальными компонентами, повышая антисептическую активность препарата, при сохранении его иммуномодулирующего действия, что в целом повышает эффективность препарата, то есть получен предполагаемый положительный эффект.
Проведенные исследования показали, что в отличие от антибиотиков препарат, полученный заявляемым способом, не вызывает устойчивости к нему патогенных микроорганизмов, что позволяет использовать препарат неоднократно без побочных эффектов.