СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИБАКТЕРИАЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ АЭРОБНЫХ СПОРОВЫХ МИКРООРГАНИЗМОВ BACILLUS SUBTILIS
METHOD FOR ESTIMATING ANTIBACTERIAL ACTIVITY OF AEROBIC SPOROUS MICROORGANISMS BACILLUS SUBTILIS

Способ определения антибактериальной активности аэробных споровых микроорганизмов рода Bacillus.
Изобретение относится к области ветеринарной микробиологии, в частности к лабораторным методам определения свойств микробов-антагонистов.
Известен способ определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам путем диффузии в мясопептонный агар с бумажного диска в чашках Петри (Справочник по микробиологическим и вирусологическим исследованиям. - М.: Медицина, 1982. - С.180-181).
Известен способ профилактики болезней органов дыхания и повышения продуктивности молодняка оленей путем использования пробиотика «Сахабактисубтил» из штаммов бактерий Bacillus subtilis ТНП-3-ДЕП и Bacillus subtilis ТНП-5-ДЕП, адсорбированных на цеолите (RU 2385729 C1, 10.04.2010 г.). Однако данный способ не применяется для определения антибактериальной активности аэробных споровых микроорганизмов в лабораторных условиях.
В основу изобретения положена задача разработки способа определения антибактериальной активности микробов-антагонистов в отношении патогенных и условно-патогенных микроорганизмов.
Технический результат изобретения - способ эффективного определения антагонистических свойств микробного препарата путем помещения цеолита Хонгуринского месторождения, адсорбировавшего микробы-антагонисты, на Чашки Петри с тест-культурами. В качестве микробов-антагонистов используют штаммы бактерий Bacillus subtilis ТНП-3-ДЕП и Bacillus subtilis ТНП-5-ДЕП. Гранулы цеолита, обработанные суспензией штаммов бактерий, обладают антагонистическими свойствами в отношении тест-культур Е. coli, Str. aureas, Sal. Typhimurium.
Технический результат изобретения достигается следующим образом.
Штаммы бактерий Bacillus subtilis ТНП-3-ДЕП и Bacillus subtilis THП-5-ДЕП адсорбируют на цеолите Хонгуринского месторождения. Гранулы цеолита, адсорбировавшие микроорганизмы, помещают в чашки Петри посеянными с тест-культурами микроорганизмов и учитывают антибактериальную активность микробов-антагонистов по зоне задержки роста условно-патогенных и патогенных микроорганизмов.
Микроорганизмы, адсорбированные на цеолите, задерживают рост и развитие условно-патогенных и патогенных микроорганизмов.
В качестве микроба-антагониста используют штаммы бактерий Bacillus subtilis ТНП-3-ДЕП и Bacillus subtilis THП-5-ДЕП, депонированные в коллекции микроорганизмов Всероссийского государственного института контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов (ВГНКИ). Справки о депонировании выданы 6 февраля 2001 г. за №180/15 и №181/15.
Штаммы бактерий могут быть получены в лаборатории по разработке микробных препаратов ГНУ Якутский научно-исследовательский институт сельского хозяйства Россельхозакадемии и ВГНКИ.
Штаммы бактерий Bacillus subtilis ТНП-3-ДЕП и Bacillus subtilis THП-5-ДЕП выращивают в мясопептонном агаре рН 7,0-7,2 в течение 5 суток при 37°C, а затем суспензируют в равных соотношениях в физиологическом растворе хлористого натрия в концентрации 2 млрд KOE/мл.
Цеолит Хонгуринского месторождения фракции 2-5 мм отмывают, сушат при 150°C. Затем цеолит помещают в суспензию, содержащую 2 млрд KOE/мл штаммов бактерий Bacillus subtilis ТНП-3-ДЕП и Bacillus subtilis THР-5-ДЕП на 60 минут при комнатной температуре из расчета 5 г цеолита на 20 мл суспензии микроорганизмов.
В качестве тест-культур используют штаммы бактерий Е. coli-1257, Str. aureas-209P, Sal. Typhimurium. Посев тест-культур производят по всей поверхности мясопептонного агара в чашках Петри.
Гранулы цеолита после выдержанной экспозиции помещают на середину чашки Петри и ставят в термостат при 37°C. Просмотр роста микроорганизмов в чашках проводят через 72 часа.
В качестве контроля на чашки Петри помещают цеолит, обработанный дистиллированной водой, и бумажные диски с адсорбированными штаммами бактерий-антагонистов Bacillus subtilis ТНП-3-ДЕП и Bacillus subtilis THП-5-ДЕП.
В чашках Петри с микробами-антагонистами, адсорбированными на цеолите, отсутствует рост условно-патогенных и патогенных микроорганизмов. Отмечается рост штаммов бактерий subtilis ТНП-3-ДЕП и Bacillus subtilis THП-5-ДЕП.
В чашках с цеолитом, обработанным только дистиллированной водой, отмечается рост тест-культур. В пробах с бумажными дисками отмечается рост тест-объектов по краям чашек и рост микробов-антагонистов вокруг дисков.
Таким образом, гранулы цеолита Хонгуринского месторождения, адсорбировавшего штаммы бактерий-антагонистов Bacillus subtilis ТНП-3-ДЕП и Bacillus subtilis THП-5-ДЕП, можно использовать для определения антагонистической активности в отношении патогенных и условно-патогенных микроорганизмов.
Результаты по изучению антагонистических свойств штаммов Bacillus subtilis, адсорбированных на цеолите-хонгурине
№
Тест-культуры
Результаты просмотра посевов
2 млрд КОЕ/мл
24 ч
72 ч
5 суток
Цеолит + Bacillus subtilis ТНП-3-ДЕП и Bacillus subtilis ТНП-5-ДЕП
1
E. coli
-
-
-
2
Sal. typhimurium
±
-
-
3
Str. aureas
-
-
-
Контроль (цеолит+вода)
1
E. coli
+
+
+
2
Sal. typhimurium
+
+
+
3
Str. aureas
+
+
+
Контроль (бумажные диски+Bacillus subtilis)
1
E. coli
±
±
±
2
Sal. typhimurium
±
±
±
3
Str. aureus
±
±
±
Обозначение: (-) - сплошной рост микроба антагониста; (+) - рост тест-культуры; (±) - единичный рост колоний тест-культуры и сплошной рост антагониста.