КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ РИЗЕДРОНАТА В МОЧЕ ПО ТФЭ/ЖХ-МС/МС

1. Способ количественного определения ризедроната в пробе мочи, включающий:
a) добавление раствора внутреннего стандарта к пробе мочи;
b) нанесение пробы мочи на колонку Oasis HLB, предварительно обработанную метанолом;
c) промывку колонки примерно 1% (об.) триэтаноламина (TEA) в воде и примерно 1% (об.) муравьиной кислоты в метаноле;
d) элюирование ризедроната, по крайней мере однократное, смесью примерно 60% (об.) метанола и примерно 40% (об.) воды, содержащей около 3 мМ этилендиаминтетрауксусной кислоты (EDTA), в вакууме;
4
4
e) упаривание элюированного раствора и разбавление смесью 10% (об.) метанола и 90% (об.) 0,05 M NHAc-NHOH буфера, чтобы получить образец в виде смеси ризедроната и внутреннего стандарта; и
f) анализ образца смеси в системе жидкостная хроматография высокого давления - масс-спектрометрия/масс-спектрометрия (ЖХ-МС/МС).
2. Способ по п.1, в котором пробой мочи является проба мочи мыши или крысы.
3. Способ по п.1, в котором внутренним стандартом является дезоксиризедронат.
4. Способ по п.1, в котором внутренним стандартом является дезоксиризедронат, который добавляется в виде водного раствора.
5. Способ по п.1, в котором внутренним стандартом является дезоксиризедронат, который добавляется в виде водного раствора с концентрацией примерно 10 мкг/мл.
6. Способ по п.1, в котором в качестве колонки Oasis HLB используется колонка Oasis HLB на 30 мг.
7. Способ по п.1, в котором объем пробы мочи составляет примерно 0,4 мл.
8. Способ по п.1, в котором колонку предварительно обрабатывают примерно 1 мл метанола.
9. Способ по п.1, в котором колонку предварительно обработывают примерно 1 мл метанола, а затем примерно 0,5 мл 1% (об.) ТЕА в воде.
10. Способ по п.1, в котором колонку промывают примерно 0,5 мл 1% (об.) TEA в воде и примерно 0,5 мл 1% (об.) муравьиной кислоты в метаноле.
11. Способ по п.1, в котором объем смеси примерно 60% (об.) метанола и примерно 40% (об.) воды, содержащей около 3 мМ EDTA, составляет около 1,5 мл.
12. Способ по п.1, в котором ризедронат элюируют дважды примерно 0,75 мл смеси примерно 60% (об.) метанола и примерно 40% (об.) воды, содержащей около 3 мМ EDTA.
4
4
13. Способ по п.1, в котором объем смеси примерно 10% (об.) метанола и примерно 90% (об.) 0,05 M NHAc-NHOH буфера составляет около 100 мкл.
14. Способ по п.1, в котором внутренним стандартом является дезоксиризедронат и анализ смеси образца в системе ЖХ-МС/МС включает разделение ризедроната и дезоксиризедроната посредством высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) на колонке Inertsil Phenyl-3 градиентным элюированием смесью раствора A и раствора B, при этом объем раствора A увеличивается примерно с 10 до примерно 95% (об.), и где раствор A представляет собой примерно 90% (об.) метанола в воде, а раствор B представляет собой примерно 10 мМ буфера ацетат аммония-уксусная кислота с 2% (об.) триэтиламина.
15. Способ количественного определения ризедроната в пробе мочи мыши или крысы, включающий:
a) добавление примерно 100 мкл примерно 10 мкг/мл водного раствора дезоксиризедроната к примерно 0,4 мл пробы мочи мышей или крыс;
b) нанесение пробы мочи мышей или крыс на колонку Oasis HLB 30 мг, предварительно обработанную примерно 1 мл метанола, а затем примерно 0,5 мл 1% (об.) ТЕА в воде;
c) промывку колонки примерно 0,5 мл 1% (об.) TEA в воде и примерно 0,5 мл 1% (об.) муравьиной кислоты в метаноле;
d) элюирование ризедроната примерно 1,5 мл смеси примерно 60% (об.) метанола и примерно 40% (об.) воды, содержащей около 3 мМ EDTA;
4
4
e) упаривание элюированного раствора и разбавление примерно 100 мкл смеси примерно 10% (об.) метанола и примерно 90% (об.) примерно 0,05 M NHAc-NHOH буфера, чтобы получить образец в виде смеси ризедроната и дезоксиризедроната; и
f) анализ смеси образца в системе ЖХ-МС/МС, где ризедронат и дезоксиризедронат разделяют посредством ВЭЖХ на колонке Inertsil Phenyl-3 градиентным элюированием смесью раствора A и раствора B, при этом объем раствора A увеличивается примерно с 10 до примерно 95% (об.), и где раствор A представляет собой примерно 90% (об.) метанола в воде, а раствор B представляет собой примерно 10 мМ буфера ацетат аммония-уксусная кислота с 2% (об.) триэтиламина.
16. Способ количественного определения ризедроната в пробе мочи мыши или крысы, включающий:
a) добавление примерно 100 мкл примерно 10 мкг/мл водного раствора дезоксиризедроната к примерно 0,4 мл пробы мочи мышей или крыс;
b) нанесение пробы мочи мышей или крыс на колонку Oasis HLB 30 мг, предварительно обработанную примерно 1 мл метанола, а затем примерно 0,5 мл 1% (об.) ТЕА в воде;
c) промывку колонки примерно 0,5 мл 1% (об.) TEA в воде и примерно 0,5 мл 1% (об.) муравьиной кислоты в метаноле;
d) элюирование ризедроната два раза примерно 0,75 мл смеси примерно 60% (об.) метанола и примерно 40% (об.) воды, содержащей около 3 мМ EDTA;
4
4
e) упаривание элюированного раствора и разбавление примерно 100 мкл смеси примерно 10% (об.) метанола и примерно 90% (об.) примерно 0,05 M NHAc-NHOH буфера, чтобы получить образец в виде смеси ризедроната и дезоксиризедроната; и
f) анализ смеси образца в системе ЖХ-МС/MC, где ризедронат и дезоксиризедронат разделяют посредством ВЭЖХ на колонке Inertsil Phenyl-3 градиентным элюированием смесью раствора A и раствора B, при этом объем раствора A увеличивается примерно с 10 до примерно 95% (об.), и где раствор A представляет собой примерно 90% (об.) метанола в воде, а раствор B представляет собой примерно 10 мМ буфера ацетат аммония-уксусная кислота с 2% (об.) триэтиламина.