ОЧИСТКА АНТИТЕЛ

1. Способ очистки антитела, включающий:
A) введение препарата антитела в загрузочный буфер на гидроксиапатитную (HA) смолу, где:
препарат антитела содержит: I) интактное интересующее антитело и II) клиппированную версию интересующего антитела, где клиппированная версия интересующего антитела является продуктом деградации интактного интересующего антитела и имеет массу, отличающуюся на менее чем 10% от массы интактного интересующего антитела; и
B) элюцию интактного интересующего антитела из HA-смолы с использованием элюирующего буфера, содержащего ион, где во время элюции повышают концентрацию иона в элюирующем буфере.
2. Способ очистки биспецифического антитела, содержащего:
A) введение препарата антитела в загрузочный буфер на гидроксиапатитную (HA) смолу, где:
препарат антитела содержит: I) интактное интересующее биспецифическое антитело; и II) по меньшей мере один вид примесей, где вид примесей выбран из группы, состоящей из: a) клиппированной версии интересующего биспецифического антитела, где клиппированная версия интересующего биспецифического антитела является продуктом деградации интактного интересующего биспецифического антитела и имеет массу, отличающуюся на менее чем 10% от массы интактного интересующего биспецифического антитела; b) первое родительское антитело, где первое родительское антитело является моноспецифическим антителом, имеющим ту же антигенную специфичность, что и первое плечо интактного биспецифического антитела; c) второе родительское антитело, где второе родительское антитело является моноспецифическим антителом, имеющим ту же антигенную специфичность, что и второе плечо интактного биспецифического антитела; и d) высокомолекулярные соединения (HMMS); и
B) элюцию интактного интересующего биспецифического антитела из HA-смолы с использованием элюирующего буфера, содержащего ион, где во время элюции повышают концентрацию иона в элюирующем буфере.
3. Способ очистки биспецифического антитела, включающий:
A) введение препарата антитела в загрузочный буфер на гидроксиапатитную (HA) смолу, где:
I) препарат антитела содержит: a) интактное интересующее биспецифическое антитело и b) клиппированную версию интересующего биспецифического антитела, где клиппированная версия интересующего антитела является продуктом деградации интактного интересующего биспецифического антитела и имеет массу, отличающуюся на менее чем 10% от массы интактного интересующего биспецифического антитела; и
II) соотношение молекул клиппированного биспецифического антитела и молекул интактного биспецифического антитела в препарате антитела составляет от по меньшей мере 1:50 до не более чем 1:5;
B) элюцию интактного биспецифического антитела из HA-смолы с использованием элюирующего буфера, содержащего ион, где во время элюции повышают концентрацию иона в элюирующем буфере, и, необязательно,
C) сбор очищенной фракции, элюируемой из HA-смолы, где очищенная фракция содержит интактное биспецифическое антитело.
4. Способ по п.1, где антитело является гетеродимерным биспецифическим антителом.
5. Способ по п.1 или 2, дополнительно включающий сбор очищенной фракции, элюируемой из HA-смолы, где очищенная фракция содержит интактное интересующее антитело, и где очищенная фракция содержит по меньшей мере 95%, 96%, 97%, 98% или 99% масс. интактного интересующего антитела.
6. Способ по п.3, где очищенная фракция содержит интактное биспецифическое антитело и клиппированное биспецифическое антитело, где соотношение молекул клиппированного биспецифического антитела и молекул интактного биспецифического антитела в очищенной фракции составляет не более 1:100.
7. Способ по п.1, где интересующее антитело является антителом против CD3, и где антитело содержит по меньшей мере одно из следующего: i) область VH, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 1; ii) тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 2; iii) область VH, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 1, и область VL, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 3; или iv) тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 2, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 4.
8. Способ по любому из пп.2-6, где биспецифическое антитело является: i) биспецифическим антителом против BCMA/против CD3, содержащим плечо против BCMA и плечо против CD3, или ii) биспецифическим антителом против FLT3/против CD3, содержащим плечо против FLT3 и плечо против CD3.
9. Способ по п.8, где плечо против CD3 содержит по меньшей мере одно из следующего: i) область VH, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 1; ii) тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 2; iii) область VH, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 1 и область VL, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 3; или iv) тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 2, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 4.
10. Способ по п.8 или 9, где плечо против BCMA содержит по меньшей мере одно из следующего: i) область VH, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 5; ii) тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 6; iii) область VH, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 5, и область VL, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 7; или iv) тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 6, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 8.
11. Способ по п.8 или 9, где плечо против FLT3 содержит по меньшей мере одно из следующего: i) область VH, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 9; ii) тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 10; iii) область VH, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 9, и область VL, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 11; или iv) тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 10, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 12.
12. Способ по любому из пп.1-11, где препарат антитела вводят в HA-смолу до плотности на смоле от 5 г/л до 20 г/л.
13. Способ по любому из пп.1-12, где в HA-смолу вводят по меньшей мере 1 грамм препарата антитела.
14. Способ по любому из пп.1-13, где препарат антитела содержит по меньшей мере 50%, но менее 95% масс. интактного интересующего антитела.
15. Способ по любому из пп.1-14, где клиппированное антитело имеет массу, отличающуюся на менее чем 1% от массы интактного антитела.
16. Способ по любому из пп.1-15, где клиппированное антитело имеет массу, составляющую на приблизительно от 5 до 100 Да больше, чем масса интактного антитела.
17. Способ по любому из пп.1-16, где клиппированное антитело содержит расщепленную пептидную связь в полипептидной цепи антитела, и где расщепленная пептидная связь находится в тяжелой цепи антитела.
18. Способ по любому из пп.1-17, где клиппированное антитело содержит то же количество аминокислот и те же аминокислотные последовательности, что и интактное антитело.
19. Способ по любому из пп.1-17, где клиппированное антитело содержит иное количество аминокислот, чем интактное антитело.
20. Способ по любому из пп.1-19, где интересующее антитело содержит домены VH и VL, специфически связывающиеся с CD3, и где клиппированное антитело содержит расщепленную пептидную связь в домене VH, специфически связывающемся с CD3.
21. Способ по любому из пп.1-20, где HA-смола является керамической гидроксиапатитной (cHA) смолой.
22. Способ по любому из пп.1-21, где после введения препарата антитела в HA-смолу, но перед элюцией интактного биспецифического антитела смолу промывают промывочным буфером, содержащим ионы фосфата в концентрации от 10 до 50 мМ.
23. Способ по любому из пп.1-22, где ион в элюирующем буфере является фосфатом.
24. Способ по любому из пп.1-23, где концентрацию иона фосфата повышают во время элюции приблизительно от 40 мМ до 100 мМ.
25. Способ по любому из пп.1-24, где pH по меньшей мере одного из загрузочного буфера, промывочного буфера и элюирующего буфера составляет от pH 7,0 до 8,0 или приблизительно от pH 7,0 до 8,0.
26. Способ по любому из пп.1-25, где препарат антитела содержит белки, ранее введенные в по меньшей мере одну из: i) смолы с протеином A и ii) ионообменной смолы и элюированные из нее.
27. Способ по любому из пп.1-26, где антитело выделяют и/или очищают для применения в качестве фармацевтических средств или получении фармацевтических средств.