ЭКЗОНОВЫЙ МЕТОД ПОЛУЧЕНИЯ РЕКОМБИНАНТНЫХ ГЕНОВ

Способ получения эукариотического гена, состоящего из трех и более экзонов, с матрицы нативной ДНК методом ПЦР без дополнительной очистки ПЦР-фрагментов, включающий получение тотальной ДНК организма, содержащую целевой эукариотический ген, путем многораундовой амплификации синтеза отдельных экзонов, с последующим их объединения в целый рекомбинантный ген с использованием универсального подбора специфичных целевому эукариотическому гену олигонуклеотидных праймеров общее число конструируемых праймеров равняется удвоенному количеству экзонов, входящих в целевой эукариотический ген, прямые праймеры состоят из 35-40 нуклеотидов, включающие концевую последовательность предыдущего экзона 20+/-3 нуклеотида и начальную последовательность этого же экзона той же длины, обратные праймеры длиной 20+/-3 нуклеотида включают комплементарную концевую последовательность данного экзона, фланкирующие области начального прямого и концевого обратного праймеров содержат до 15 нуклеотидов, которые включают сайты рестрикции необходимые для встраивания в плазмидный вектор.