Полиморфизм гена CCR5 и резистентность к инфицированию ВИЧ. Молекулярно-генетическое обследование общественного регистра пуповинной крови

«АКТУАЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ ИММУНОГЕНЕТИКИ И ТКАНЕВОГО ТИПИРОВАНИЯ»

Санкт-Петербург 24-25 июня 2015 г.

раженными остеолитическими поражениями костной ткани (III стадия по классификации Du-пе^а1топ); 2-я группа (24 пациента) — с проявлениями остеопороза и единичными очагами лизиса (II стадия по классификации Durie-Sa1mon). Контрольную группу составили 40 здоровых добровольцев (средний возраст — 54 ± 10,1 лет). Все обследованные лица являлись жителями Северо-Западного региона (Санкт-Петербург), считающими себя и своих родителей русскими, и не связанными кровным родством. Геномную ДНК выделяли из ядросодержащих клеток периферической крови. Определение SNP генов Ш-1а и Ш-1Р проводили с помощью стандартного набора реагентов (Invitrogen), используя PCR-SSP. Визуализацию результатов осуществляли посредством горизонтального электрофореза в ага-розном геле.

Результаты. На основании результатов ти-пирования полиморфных участков генов Ш-1а и Ш-1Р у больных ММ и здоровых лиц установлено, что некоторые частоты генотипов в общей когорте обследованных больных отличались от результатов, полученных в контрольной группе. Например, генотип Ш-1а -889ТТ у здоровых лиц встречался в 7 раз реже, чем у больных ММ (0,025 к 0,186 соответственно), а генотип ^-1р + 3962ТТ в 2 раза реже встречался у здоровых лиц, нежели у больных ММ (0,100 к 0,233). При анализе SNP гена Ш-1Р -511 С/Т различия между пациентами с ММ и здоровыми ли-

цами наблюдались в генотипах Ш-1Р -511СС и -511СТ — частоты данных генотипов в группе здоровых составили 0,375 (для -511СС) и 0,525 (для -511СТ), тогда как в группе пациентов, наоборот, частоты этих генотипов были 0,535 и 0,372 соответственно. Сравнительный анализ результатов, полученных в двух выделенных группах больных, показал, что у пациентов с выраженными литическими поражениями (1-я гр.) частота генотипов Ш-1Р -511СС и ^-1р + 3962СС была выше, чем во 2-й гр. пациентов (с проявлениями остеопороза и единичными очагами лизиса) — 0,583 к 0,474 (для Ш-1р -511СС) и 0,542 к 0,369 (для Ш-1Р + 3962СС), соответственно. Генотип Ш-1а -889ТТ в 1-й группе больных выявлялся значительно чаще, чем у здоровых лиц и во 2-й группе больных ММ (0,208 к 0,025 и к 0,158 соответственно). Частота генотипа Ш-1Р + 3962СС в группе пациентов с проявлениями остеопороза была значительно меньше (0,369), чем в группе здоровых лиц (0,575).

Выводы. Таким образом, полученные нами результаты позволяют расценивать следующие генотипы как факторы, предрасполагающие к развитию ММ: Ш-1а -889ТТ, ^-1р -511СС и Ш-1Р + 3962ТТ; тогда как генотипы Ш-1а -889СТ, Ш-1Р -511СТ и Ш-1Р + 3962СС, вероятно, можно рассматривать как протекторы развития заболевания. Генотип Ш-1Р -511СС ассоциирован с развитием тяжелых остеолитических поражений при этом заболевании.

Пирожков И. А.1>2, Смолянинов А. Б.12, Чечеткин А. В.3, Иволгин Д. А.1,2

1 Покровский банк стволовых клеток, Санкт-Петербург

2 Северо-Западный государственный медицинский университет имени И. И. Мечникова, Санкт-Петербург

3 ФГБУ «Российский НИИ гематологии и трансфузиологии ФМБА», Санкт-Петербург

ПОЛИМОРФИЗМ ГЕНА CCR5 И РЕЗИСТЕНТНОСТЬ К ИНФИЦИРОВАНИЮ ВИЧ. МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКОЕ ОБСЛЕДОВАНИЕ ОБЩЕСТВЕННОГО РЕГИСТРА ПУПОВИННОЙ КРОВИ

Введение. Вирус иммунодефицита человека первого типа (ВИЧ-1) был открыт в 1983 году. Однако до настоящего времени пандемия ВИЧ инфекции всё ещё остается одной из самых серьезных проблем здравоохранения. ВИЧ проникает в клетку после взаимодействия гликопроте-ина вирусной оболочки gp120 преимущественно с двумя поверхностными клеточными рецепторами — СБ4 и CCR5. Одновременная экспрессия этих рецепторов встречается на Т-лимфоцитах, моноцитах, макрофагах и дендритных клетках.

Известен вид полиморфизма гена CCR5, представляющий собой делецию 32 пар нуклеотидов в кодирующей области гена (CCR5 delta 32). У лиц с генотипом CCR5 delta 32/ delta 32 выявлена практически полная резистентность к инфицированию ВИЧ-1. Аллельный полиморфизм CCR5 delta 32 в гомозиготном состоянии определяется у 1 % представителей европеоидной расы, гетерозиготами являются в среднем 10—15 % европейцев. Известен успешный случай трансплантации гемопоэтических стволовых клеток

ВЕСТНИК ГЕМАТОЛОГИИ, том XI, № 2, 2015

(ТГСК) с генотипом CCR5 delta 32/ delta 32 ВИЧ-инфицированному пациенту с острым ми-елоидным лейкозом в 2007 году в Германии. После трансплантации пациент прекратил приём противовирусных препаратов. При этом по настоящее время вирусная нагрузка остаётся неопределяемой, а при анализе периферической крови и биоптатов различных тканей не удаётся выявить наличия провирусной ДНК. Перспективы применения пуповинной крови (ПК) при лечении ВИЧ-инфекции связаны с возможностью проведения ТГСК ПК ВИЧ-инфицированному реципиенту от донора, являющегося гомозиготным носителем мутации CCR5 delta 32.

Цель работы. Оценка научно-организационных возможностей создания общественного регистра ПК с генотипом CCR5 delta 32/delta 32 для лечения ВИЧ-инфицированных пациентов.

Материалы и методы. Скрининговое обследование ПК для детекции полиморфизма гена CCR5 производилось с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР). HLA-типирование CCR5 delta 32/delta 32 образцов ПК выполнялось методом SSP (sequence-specific priming) (Protrans, Германия). Исследована длина теломер CCR5 delta 32/delta 32 образцов ПК методом ПЦР в реальном времени.

Результаты работы. Всего обследовано 4000 образцов ПК, находящихся на хранении в общественном регистре Покровского банка стволовых клеток. В результате исследования отобрано 40 образцов с генотипом CCR5 delta 32/delta 32, что составило 1 % в относительном количестве. В 721 образцах полиморфизм CCR5 delta 32

присутствовал в гетерозиготном состоянии или 18,03 % в относительном количестве. Проведён сравнительный анализ распределения HLA-аллелей у доноров ПК с диким типом гена CCR5, подобранных методом случайной выборки, и среди доноров ПК с генотипом CCR5 delta32/ delta32. Отмечена высокая встречаемость наиболее распространённых на Северо-Западе России HLA-аллелей среди доноров ПК обеих групп. Средняя длина теломер CCR5 delta 32/delta 32 клеток ПК составила 8,72 т.п.н. (возрастная норма составляет 8,4-11,8 т.п.н.).

Выводы.

1. Частота встречаемости генотипа CCR5 delta 32/delta 32 в Северо-Западном регионе Российской Федерации составляет около 1 %.

2. Выявлена высокая встречаемость наиболее распространённых на Северо-Западе России HLA-аллелей у доноров ПК с диким типом гена CCR5 и среди CCR5 delta 32/ delta 32 доноров ПК, то есть существует значительно большая вероятность нахождения совместимого образца для ТГСК в региональном регистре доноров.

3. Исследование длины теломер показало нормальный пролиферативный потенциал клеток CCR5 delta 32/delta 32 образцов ПК.

4. Обнаруженные в результате скрининга CCR5 delta 32/delta 32 образцы позволят организовать собственное региональное хранилище подобного рода образцов ПК.

Полякова А. П., Волкова О. Я., Трескина Н. А., Петренко Ю. В., Иванов Д. О.

ФГБУ «Северо-Западный Федеральный медицинский исследовательский центр» Минздрава России, Санкт-Петербург

МИКРОХИМЕРИЗМ ГЕНОВ СИСТЕМЫ HLA У МАТЕРЕЙ И НОВОРОЖДЕННЫХ С ПАТОЛОГИЕЙ ПЕРИНАТАЛЬНОГО ПЕРИОДА

Микрохимеризм представляет собой присутствие в организме человека не более 1 % чужеродных клеток от всех клеток индивидуума. Он может наблюдаться во время беременности, после переливания крови, трансплантации стволовых клеток и солидных органов. Перенос чужеродных клеток осуществляется посредством кровотока и, во время беременности, возможен в двух направлениях: от матери к плоду — «материнский микрохимеризм — МХ», и от плода

к матери — «фетальный микрохимеризм — ФХ». По данным литературы известно, что повышенная частота МХ характерна для детей с синдромом задержки внутриутробного развития (ЗВУР), гемолитической болезнью новорожденных (ГБН), а также после операции «наружный поворот плода».

Целью настоящего исследования было изучить возможность выявления феномена микро-химеризма по генам системы человеческого лей-