КЛЕТОЧНЫЕ И ГЕННЫЕ СПОСОБЫ УЛУЧШЕНИЯ СЕРДЕЧНОЙ ФУНКЦИИ

1. Способ улучшения сердечной функции у млекопитающего, включающий: трансплантацию кардиомиоцитов в миокард указанного млекопитающего, причем указанные кардиомиоциты содержат первый вектор экспрессии, содержащий первую последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую субъединицу R1 рибонуклеотидредуктазы, и второй вектор экспрессии, содержащий вторую последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую субъединицу R2 рибонуклеотидредуктазы, где указанные первая и вторая последовательности нуклеиновой кислоты функционально связаны с промотором, который индуцирует гиперэкспрессию R1 и R2, что обеспечивает образование дезокси-АТФ и улучшение сердечной функции у млекопитающего.
2. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанный вектор экспрессии представляет собой вирусный вектор.
3. Способ по п.2, отличающийся тем, что указанный вектор экспрессии представляет собой вектор на основе аденоассоциированного вируса.
4. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанный вектор экспрессии дополнительно включает репортер трансдукции.
5. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанные кардиомиоциты происходят из эмбриональных стволовых клеток человека.
6. Способ по п.5, отличающийся тем, что указанные кардиомиоциты происходят из эмбриональных стволовых клеток (ЭСК), индуцированных плюрипотентных стволовых клеток (иПСК) или мезенхимальных стволовых клеток.
7. Способ по п.6, отличающийся тем, что указанные иПСК происходят из клетки, полученной из организма млекопитающего.
8. Способ по п.7, отличающийся тем, что указанная клетка, полученная из организма млекопитающего, представляет собой фибробласт.
9. Способ по п.1, дополнительно включающий до проведения указанного этапа трансплантации:
получение первого вектора экспрессии и второго вектора экспрессии; и трансдукцию указанных кардиомиоцитов указанными первым и вторым векторами экспрессии ex vivo.
10. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанный миокард представляет собой пораженный инфарктом миокард.
11. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанная трансплантация включает доставку кардиомиоцитов с помощью катетера.
12. Способ по п.11, отличающийся тем, что указанная трансплантация включает доставку кардиомиоцитов в не затронутую инфарктом зону пораженного инфарктом миокарда.
13. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанное млекопитающее представляет собой человека.
14. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанный промотор представляет собой кардиоспецифичный промотор.
15. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанный промотор выбран из промотора CK7 и промотора цитомегаловируса (CMV).
16. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанные первый и второй векторы экспрессии являются одинаковыми.
17. Способ доставки дезокси-АТФ в миокард хозяина-млекопитающего, включающий трансплантацию донорских клеток в миокард, причем указанные донорские клетки гиперэкспрессируют субъединицу R1 рибонуклеотидредуктазы и субъединицу R2 рибонуклеотидредуктазы и продуцируют дезокси-АТФ in situ, и указанные донорские клетки образуют щелевые контакты с кардиомиоцитами млекопитающего-хозяина, что обеспечивает доставку дезокси-АТФ в миокард указанного млекопитающего-хозяина.
18. Способ по п.17, отличающийся тем, что указанное млекопитающее-хозяин представляет собой человека.
19. Способ по п.17, отличающийся тем, что миокард представляет собой пораженный инфарктом миокард.
20. Способ по п.17, отличающийся тем, что указанная трансплантация включает доставку донорских клеток с помощью катетера.
21. Способ по п.19, отличающийся тем, что указанная трансплантация включает доставку кардиомиоцитов в не затронутую инфарктом зону пораженного инфарктом миокарда.
22. Способ по п.17, отличающийся тем, что указанные донорские клетки выбраны из кардиомиоцитов и фибробластов.
23. Способ по п.22, отличающийся тем, что указанные кардиомиоциты происходят из эмбриональных стволовых клеток человека.
24. Способ по п.22, отличающийся тем, что указанные кардиомиоциты происходят из эмбриональных стволовых клеток (ЭСК), индуцированных плюрипотентных стволовых клеток (иПСК) или мезенхимальных стволовых клеток.
25. Способ по п.24, отличающийся тем, что указанные иПСК происходят из клетки, полученной из организма млекопитающего-хозяина.
26. Способ по п.25, отличающийся тем, что указанная клетка, полученная из организма млекопитающего-хозяина, представляет собой фибробласт.
27. Способ по п.22, отличающийся тем, что указанные донорские клетки содержат первый вектор экспрессии, содержащий первую последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую субъединицу R1 рибонуклеотидредуктазы, и второй вектор экспрессии, содержащий вторую последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую субъединицу R2 рибонуклеотидредуктазы, причем указанные первая последовательность нуклеиновой кислоты и вторая последовательности нуклеиновой кислоты функционально связаны с промотором, который индуцирует гиперэкспрессию R1 и R2.
28. Способ по п.27, отличающийся тем, что указанные первый и второй векторы экспрессии представляют собой один и тот же вектор.
29. Способ улучшения сердечной функции у млекопитающего, включающий введение первого вирусного вектора, содержащего первую последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую субъединицу R1 рибонуклеотидредуктазы, и второго вирусного вектора, содержащего вторую последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую субъединицу R2 рибонуклеотидредуктазы, причем указанные первая последовательность нуклеиновой кислоты и вторая последовательность нуклеиновой кислоты функционально связаны с кардиоспецифичным промотором.
30. Способ по п.29, отличающийся тем, что первый и второй вирусные векторы представляют собой аденоассоциированные вирусные векторы.
31. Способ по п.29, отличающийся тем, что млекопитающее представляет собой человека.
32. Способ по п.29, отличающийся тем, что первый и второй вирусные векторы вводят системно.
33. Способ по п.29, отличающийся тем, что первый и второй вирусные векторы вводят внутривенно.
34. Способ по п.29, отличающийся тем, что первый и второй вирусные векторы вводят путем инъекции в миокард.
35. Способ по п.29, отличающийся тем, что по меньшей мере один из указанных первого и второго вирусных векторов дополнительно содержит репортер трансдукции.
36. Способ по п.29, отличающийся тем, что первый и второй вирусные векторы представляют собой один и тот же вектор.
37. Способ улучшения сократимости миокарда и расслабления миокарда у млекопитающего, включающий:
трансплантацию кардиомиоцитов в миокард указанного млекопитающего, причем указанные кардиомиоциты содержат первый вектор экспрессии, содержащий первую последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую субъединицу R1 рибонуклеотидредуктазы, и второй вектор экспрессии, содержащий вторую последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую субъединицу R2 рибонуклеотидредуктазы, где указанные первая последовательность нуклеиновой кислоты и вторая последовательность нуклеиновой кислоты функционально связаны с промотором, который индуцирует гиперэкспрессию R1 и R2, что обеспечивает образование дезокси-АТФ и улучшение сократимости миокарда и расслабления миокарда у млекопитающего.
38. Способ по п.37, отличающийся тем, что указанные первый и второй векторы экспрессии представляют собой вирусные векторы.
39. Способ по п.38, отличающийся тем, что указанные первый и второй векторы экспрессии представляют собой аденовирусные векторы.
40. Способ по п.37, отличающийся тем, что по меньшей мере один из указанных первого и второго векторов экспрессии дополнительно содержит репортер трансдукции.
41. Способ по п.37, отличающийся тем, что указанные первый и второй векторы экспрессии представляют собой один и тот же вектор.
42. Способ по п.37, отличающийся тем, что указанные кардиомиоциты происходят из эмбриональных стволовых клеток человека.
43. Способ по п.37, отличающийся тем, что указанные кардиомиоциты происходят из эмбриональных стволовых клеток (ЭСК), индуцированных плюрипотентных стволовых клеток (иПСК) или мезенхимальных стволовых клеток.
44. Способ по п.43, отличающийся тем, что указанные иПСК происходят из клетки, полученной из организма млекопитающего.
45. Способ по п.44, отличающийся тем, что указанная клетка, полученная из организма млекопитающего, представляет собой фибробласт.
46. Способ по п.37, дополнительно включающий до проведения указанного этапа трансплантации:
получение первого вектора экспрессии и второго вектора экспрессии; и
трансдукцию указанных кардиомиоцитов указанными первым и вторым векторами экспрессии ex vivo.
47. Способ по п.37, отличающийся тем, что указанный миокард представляет собой пораженный инфарктом миокард.
48. Способ по п.37, отличающийся тем, что указанная трансплантация включает доставку кардиомиоцитов с помощью катетера.
49. Способ по п.48, отличающийся тем, что указанная трансплантация включает доставку кардиомиоцитов в не затронутую инфарктом зону пораженного инфарктом миокарда.
50. Способ по п.37, отличающийся тем, что указанное млекопитающее представляет собой человека.
51. Способ по п.37, отличающийся тем, что указанный промотор представляет собой кардиоспецифичный промотор.
52. Способ по п.37, отличающийся тем, что указанный промотор выбран из промотора CK7 и промотора CMV.
53. Способ улучшения сократимости и расслабления миокарда у млекопитающего, включающий введение первого вирусного вектора, содержащего первую последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую субъединицу R1 рибонуклеотидредуктазы, и второго вирусного вектора, содержащего вторую последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую субъединицу R2 рибонуклеотидредуктазы, причем указанные первая последовательность нуклеиновой кислоты и вторая последовательность нуклеиновой кислоты функционально связаны с кардиоспецифичным промотором.
54. Способ по п.53, отличающийся тем, что указанные первый и второй вирусные векторы представляют собой аденовирусные векторы.
55. Способ по п.53, отличающийся тем, что млекопитающее представляет собой человека.
56. Способ по п.53, отличающийся тем, что указанные первый и второй вирусные векторы вводят системно.
57. Способ по п.53, отличающийся тем, что указанные первый и второй вирусные векторы вводят внутривенно.
58. Способ по п.53, отличающийся тем, что указанные первый и второй вирусные векторы вводят путем инъекции в миокард.
59. Способ по п.53, отличающийся тем, что указанные первый и второй вирусные векторы являются одинаковыми.
60. Способ по п.53, отличающийся тем, что по меньшей мере один из указанных первого и второго вирусных векторов дополнительно включает репортер трансдукции.
61. Способ по п.53, отличающийся тем, что указанные первый и второй вирусные векторы дополнительно содержат последовательность, кодирующую нацеливающий агент, который, специфично связывается с кардиоспецифичным маркером.
2+
62. Способ по п.53, дополнительно включающий введение вирусного вектора экспрессии, содержащего последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую вариант cTnC, содержащий аминокислотную замену L48Q, причем указанный вариант cTnC обладает повышенной аффинностью связывания Са, и при этом указанная последовательность нуклеиновой кислоты функционально связана с кардиоспецифичным промотором.
63. Фармацевтическая композиция, содержащая первый вирусный вектор, содержащий первую последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую субъединицу R1 рибонуклеотидредуктазы, и второй вирусный вектор, содержащий вторую последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую субъединицу R2 рибонуклеотидредуктазы, причем указанные первая последовательность нуклеиновой кислоты и вторая последовательность нуклеиновой кислоты функционально связаны с кардиоспецифичным промотором.
64. Фармацевтическая композиция по п.63, отличающаяся тем, что указанные первый и второй вирусные векторы являются одинаковыми.
2+
65. Фармацевтическая композиция, содержащая вирусный вектор, содержащий последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую вариант cTnC, содержащий аминокислотную замену L48Q, причем указанный вариант cTnC обладает повышенной аффинностью связывания Са.
2+
66. Фармацевтическая композиция, содержащая вирусный вектор, содержащий последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую вариант cTnC, содержащий аминокислотную замену, выбранную из I61Q и L57Q, причем указанный вариант cTnC обладает пониженной аффинностью связывания Са.
67. Фармацевтическая композиция по п.65 или 66, отличающаяся тем, что указанный вирусный вектор представляет собой вектор на основе аденоассоциированного вируса.
68. Фармацевтическая композиция по п.67, отличающаяся тем, что указанный вектор дополнительно содержит промотор CMV, функционально связанный с последовательностью нуклеиновых кислот, кодирующей вариант cTnC.
69. Фармацевтическая композиция, содержащая кардиомиоциты, содержащие первый вектор экспрессии, содержащий первую последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую субъединицу R1 рибонуклеотидредуктазы, и второй вектор экспрессии, содержащий вторую последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую субъединицу R2 рибонуклеотидредуктазы, причем указанные первая последовательность нуклеиновой кислоты и вторая последовательность нуклеиновой кислоты функционально связаны с промотором, который индуцирует гиперэкспрессию R1 и R2.
70. Фармацевтическая композиция по п.69, отличающаяся тем, что указанные первый и второй векторы экспрессии являются одинаковыми.
71. Способ улучшения сердечной функции у субъекта, нуждающегося в этом, включающий:
2+
введение вирусного вектора, содержащего последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую вариант cTnC, содержащий аминокислотную замену L48Q, причем указанный вариант cTnC обладает повышенной аффинностью связывания Са, где указанная последовательность нуклеиновой кислоты функционально связана с кардиоспецифичным промотором.
72. Способ по п.71, отличающийся тем, что указанный субъект страдает состоянием сердца, приводящим к снижению сократимости.
73. Способ по п.71, отличающийся тем, что у указанного субъекта диагностирована ишемическая болезнь сердца, кардиомиопатия или инфаркт миокарда.
74. Способ по п.73, отличающийся тем, что кардиомиопатия выбрана из первичной кардиомиопатии, генетически обусловленной кардиомиопатии и дилатационной кардиомиопатии.
75. Способ по п.71, отличающийся тем, что у указанного субъекта диагностировано снижение систолической функции.
76. Способ по п.71, отличающийся тем, что указанный субъект имеет генетическую мутацию, связанную с гипертрофическим фенотипом.
77. Способ улучшения сердечной функции у субъекта, имеющего генетическую мутацию в саркомерном белке, выбранном из тяжелой цепи бета сердечного миозина, сердечного актина, сердечного тропонина Т, альфа-тропомиозина, сердечного тропонина I, сердечного миозинсвязывающего белка С и легкой цепи миозина, причем указанный способ включает:
2+
введение вирусного вектора, содержащего последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую вариант cTnC, содержащий аминокислотную замену L57Q или I61Q, где указанный вариант cTnC обладает пониженной аффинностью связывания Са, причем указанная последовательность нуклеиновой кислоты функционально связана с кардиоспецифичным промотором.
78. Способ по п.71 или 77, отличающийся тем, что вектор вводят путем липофекции, в виде покрытия на стенте или путем прямой инъекции.
79. Способ по п.71 или 77, отличающийся тем, что вектор вводят с помощью катетера.
80. Способ по п.71 или 77, отличающийся тем, что вектор представляет собой вектор на основе аденоассоциированного вируса.
81. Способ по п.77, отличающийся тем, что у указанного субъекта диагностирована кардиомиопатия.
82. Способ по п.81, отличающийся тем, что кардиомиопатия представляет собой гипертрофическую кардиомиопатию.
83. Кассета экспрессии, содержащая полинуклеотидную последовательность, характеризующуюся по меньшей мере 90% идентичностью последовательности с последовательностью нуклеиновых кислот, приведенной на фиг. 40, причем указанный полинуклеотид функционально связан с геном, кодирующим терапевтический белок.
84. Кассета экспрессии по п.83, отличающаяся тем, что указанный терапевтический белок выбран из субъединицы рибонуклеотидредуктазы и варианта cTnC.
85. Кассета экспрессии по п.83, отличающаяся тем, что указанный полинуклеотид имеет последовательность нуклеиновой кислоты, изображенную на фиг. 40.
86. Вектор на основе аденоассоциированного вируса, содержащий кассету экспрессии по п.83, причем указанный вирусный вектор представляет собой вектор на основе аденоассоциированного вируса AAV6.
87. Способ усиления кардиоспецифичной экспрессии терапевтического белка у млекопитающего, причем указанный способ включает введение вирусного вектора, содержащего кассету экспрессии по любому из пп.83-85.
88. Способ по п.87, отличающийся тем, что указанный вирусный вектор представляет собой вектор на основе аденоассоциированного вируса AAV6.