Морфологические характеристики белой пульпы и дендритных клеток селезенки при экспериментальном канцерогенезе

© Коллектив авторов, 2019

Арлашкина О.М., Стручко Г.Ю., Меркулова Л.М., Михайлова М.Н.

Морфологические характеристики белой пульпы и дендритных клеток селезенки при экспериментальном канцерогенезе

ФГБОУ ВО «Чувашский государственный университет им. И.Н. Ульянова», 428015, г. Чебоксары, Россия

Посредством гистологических методов изучена морфология и иммуногистохимия структур селезенки после курсового введения 1,2-диметилгидразина. Установлено, что через 1 мес после введения канцерогена в селезенке крыс регистрируется увеличение количества 8100+-клеток в герминативных центрах лимфоидных узелков на фоне сокращения площади узелков и центров размножения, ширины маргинальных зон и периартериальных лимфоидных муфт. Кроме того, увеличивается общее количество вторичных лимфоидных узелков на фоне уменьшения их соотношения к первичным лимфоидным узелкам. Через 4 мес после курса инъекций канцерогена отмечается недостоверное уменьшение количества дендритных клеток в герминативных центрах по сравнению с интактными животными того же возрастного периода. Изменения морфологического фенотипа селезенки на этом сроке носят достоверный характер и заключаются в более выраженном сокращении площади лимфоидных узелков с их герминативными центрами, шириной периар-териальных лимфоидных муфт и маргинальных зон, а также в увеличении количества вторичных лимфоидных узелков.

Ключевые слова: селезенка; канцерогенез; 1,2-диметилгидразин; белая пульпа; дендритные клетки

Статья поступила 05.08.2018. Принята в печать 16.11.2018.

Для цитирования: Арлашкина О.М., Стручко Г.Ю., Меркулова Л.М., Михайлова М.Н. Морфологические характеристики белой пульпы и дендритных клеток селезенки при экспериментальном канцерогенезе. Иммунология. 2019; 40 (2): 17-22. <1ог 10.24411/0206-4952-2019-12003.

Финансирование. Исследование не имело спонсорской поддержки.

Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

Для корреспонденции

Арлашкина Ольга Михайловна -аспирант кафедры инструментальной диагностики с курсом фтизиатрии ФГБОУ ВО «Чувашский государственный университет им. И.Н. Ульянова», Чебоксары, Россия

E-mail: olgaruz1202@mail.ru http://orcid.org/0000-0001-7686-5914

Arlashkina O.M., Struchko G.Yu., Merkulova L.M., Mikhaylova M.N.

Morphological characteristics of white pulp and spleen dendritic cells at the experimental carcinogenesis

I.N. Ul'yanov Chuvash State University, 428015, Cheboksary, Russia

By means of histological methods the morphology and an immunohistochemistry of structures of a lien after course introduction 1,2-dimethylhydrazines is studied. It is established that in 1 month after administration of carcinogen in a lien of rats the augmentation of quantity of S100+-cells in the germinative the centers of lymphoid nodules against the background of reduction of both the area of nodules, and the centers of reproduction, width of marginal zones and periarterial lymphoid couplings is registered. Besides, the total of secondary lymphoid nodules against the background of decrease of their ratio to primary lymphoid nodules is enlarged. In 4 months after the termination of a course of injections of carcinogen doubtful decrease of quantity of dendritic cells in the germinative the centers in comparison with intact animals of the same age period becomes perceptible. Changes of a morphological phenotype of a lien on this term have reliable character and width of periarterial lymphoid couplings and marginal zones, and also augmentation of quantity of secondary lymphoid nodules consist in more expressed reduction of the areas of lymphoid nodules with their germinative centers.

Keywords: lien; carcinogenesis; 1,2-dimethylhydrazine; whitepulp; dendriticcells

Received 05.09.2018. Accepted for publication 16.11.2018.

For citation: Arlashkina O.M., Struchko G.Yu., Merkulov L.M., Mikhaylova M.N. Morphological characteristics of white pulp and spleen dendritic cells at the experimental carcinogenesis. Immunologiya. 2019; 40 (2): 17-22. doi: 10.24411/02064952-2019-12003.

Acknowledgments. The study had no sponsorship. Conflict of interest. The authors declare no conflict of interest.

For correspondence

Arlashkina Olga M. -Post-Graduate Student, Department of the Instrumental Diagnostics Department with a course of Phthisiology, I.N. Ul'yanov Chuvash State University, Cheboksary, Russia E-mail: olgaruz1202@mail.ru http://orcid.org/0000-0001-7686-5914

В связи с появлением новых методов исследования в морфологии и усовершенствованием уже известных методик неуклонно растет интерес иммунологов к строению селезенки как важного и самого большого периферического органа иммунной системы [1]. Селезенка является органом иммуногенеза и лимфопоэза, в котором происходят антигензависимая дифференцировка имму-нокомпетентных клеток, образование эффекторных клеток и клеток памяти, а также элиминация отживших и поврежденных кроветворных клеток [2]. Она имеет сложное анатомическое строение иммунокомпетентной белой пульпы, включая периартериальные лимфоидные муфты, лимфоидные узелки с герминативными центрами, пери-артериальной, мантийной и маргинальной зонами. Такое строение создает благоприятные условия для эффективного кооперированного взаимодействия клеток, участвующих в иммунном ответе [3]. Кроме Т- и В-лимфоцитов, формирующих соответствующие Т- и В-зависимые зоны, в белой пульпе селезенки присутствуют макрофаги, ретикулярные и дендритные клетки (ДК). В селезенке имеются ДК двух типов: интердигитирующие (в периар-териальных зонах лимфоидных узелков) - клетки миело-идного происхождения, взаимодействующие с наивными Т-лимфоцитами и активизирующие Т-хелперы, а также супрессоры Т- и В-лимфоцитов; фолликулярные - клетки некостномозгового происхождения, находятся в герминативных центрах лимфоидных узелков, не способны к передвижению, обеспечивают рост и дифференцировку В-лимфоцитам, принимают участие в образовании первичных лимфоидных узелков, образуя густую прочную сеть для них[4]. Некоторые авторы особо выделяют ДК центров размножения, которые также являются клетками не костномозгового происхождения, в отличие от фолликулярных, они способны к миграции [5].

В литературе имеются данные о том, что ДК селезенки активно принимают участие в противоопухолевом иммунном надзоре. Однако существуют противоречивые данные о функциональной направленности этих клеток в противоопухолевом иммунном ответе. Некоторые авторы считают, что селезеночные ДК обладают высоким противоопухолевым потенциалом и способны подавлять рост опухолевых клеток, тогда как дендритные клетки тимуса не обладают такой активностью [6]. Другие считают, что ДК селезенки, напротив, могут способствовать ускользанию опухоли от иммунного надзора [7].

Известно, что введение канцерогена запускает ряд процессов в организме, приводящих к определенным нарушениям в органах иммуногенеза [8]. Однако экспериментальные работы по изучению влияния канцерогена (1,2-диметилгидразина) на морфологию и ДК селезенки в частности проводятся сравнительно недавно, поэтому актуально углубленное изучение морфологической и иммуногистохимической картины тканей селезенки при экспериментальном канцерогенезе, индуцированном 1,2-диметилгидразином.

Цель исследования - изучить ДК и основные морфологические изменения тканей селезенки при введении 1,2-диметилгидразина через 1 и 4 мес после воздействия.

Материал и методы

Исследования выполнены на 70 белых нелинейных крысах-самцах. Животные содержались в виварии по нормам и правилам проведения работ с лабораторными животными согласно принципам Хельсинской декларации о гуманном отношении к животным. Работа выполнена с сентября 2013 г. по февраль 2017 г. на базе ФГБОУ ВО «Чувашский государственный университет им. И.Н. Ульянова».

Животных разделили на 2 группы: 1-я - интактные (n = 30); 2-я - крысы с внутрибрюшинным введением 1,2-диметиггидразина 1 раз в неделю, 20 мг/кг, в течение 1 мес согласно модели R.F. Jacoby и соавт. (1991) (n = 40). Интактным животным для контроля вводили также внутрибрюшинно 1 раз в неделю в течение 1 мес изотонический раствор хлорида натрия. Животных выводили из эксперимента через 1 и 4 мес после окончания курса инъекций путем декапитации. В работе использовали селезенку только тех крыс, у которых аденокарцинома толстой кишки была подтверждена патоморфологически.

В работе использовали следующие методы:

1. Иммуногистохимический метод с использованием коммерческого поликлонального антитела к белку S100 (DAKO, Дания). Исследование выполняли в соответствии со стандартными протоколами. Тканевые срезы толщиной 3 мкм наносили на высокоадгезивные стекла с полилизиновым покрытием и высушивали при комнатной температуре в течение 24 ч. Окрашивали ручным способом с использованием систем визуализации LeicaChromoPlex™ 1 DualDetectionfor BOND. Для контроля чувствительности и специфичности реакции использовали неиммунизированные сыворотки.

2. Окраска гематоксилином и эозином для исследования морфологии селезенки и проведения морфометри-ческих измерений. Ткань селезенки фиксировали в 10% нейтральном забуференном формалине в течение 24 ч, промывали проточной водой, затем выполняли стандартную проводку на тканевом гистопроцессоре Leica ASP 200. После проводки кусочки ткани селезенки заливали в парафин и готовили парафиновые блоки. Парафиновые срезы селезенки толщиной 4 мкм наносили на отрицательно заряженные стекла Mentzel Glasses super frost и окрашивали гематоксилином и эозином по стандартной методике.

3. Компьютерная морфометрия. Цифровые снимки микропрепаратов получены с применением системы архивирования на базе микроскопа «МИКРОМЕД 3 ЛЮМ» с использованием цифровой фотокамеры и персонального компьютера с набором прикладных программ. Микрофотографии для проведения морфо-метрических измерений получены при увеличениях в 100 и 400 раз. Количественные морфометрические измерения выполнены с применением лицензионной программы «Микро-Анализ». Площадь мембранной и цитоплазматической иммуногистохимической реакции оценивали методом автоматического выделения и подсчета площади интересующего цветового спектра (окрашенного DAB) по отношению к площади снимка.

Затем числовые значения площади позитивной иммуно-гистохимической реакции переводили в процентное отношение к общей площади снимка. Для каждого среза выполнены измерения не менее чем в 10 интересующих полях зрения.

4. Определение индексов, характеризующих морфо-функциональное состояние изучаемых структур белой пульпы селезенки [9]:

а) герминативно-фолликулярный индекс (ГФИ) - для определения степени развития герминативных центров: Бгц

ГФИ=

Блф

где Бгц - диаметр герминативных центров, Блф - диаметр лимфоидных узелков;

б) индекс Керногана

ИК=

D

где Ь - толщина стенки центральной артериолы, Б -внутренний диаметр центральной артериолы;

в) лимфоидный коэффициент (ЛК) - для определения соотношения Т- и В-зависимых зон:

Блф

ЛК=

Ьпм

где Dлф - диаметр лимфоидных узелков, Ьпм - ширина периартериальных лимфоидных муфт.

5. Статистическую обработку цифровых данных проводили с помощью лицензионного пакета Microsoft Office 2003 (Word и Excel) и программы G-Stat, достоверность определяли по /-критерию Стьюдента. В работе приводятся следующие показатели: М - средняя арифметическая величина; m - средняя ошибка средней арифметической величины. Достоверными считали отличия при p < 0,05 [10].

Результаты и обсуждение

В результате исследования выявлено, что канцерогенез, индуцированный введением 1,2-диметигидразина, приводит к уменьшению массы крыс: через 1 мес после введения канцерогена на 20%, а через 4 мес - 24% (табл. 1). Изменение других антропометрических данных (длина тела, хвоста, ушей) носит недостоверный характер на обоих сроках воздействия канцерогена. Введение 1,2-диметилгидразина сопровождается уменьшением массы селезенки: через 1 мес после инъекций на 22%, а через 4 мес - на 27% (табл. 1).

При окраске срезов селезенки крыс гемотоксили-ном и эозином визуализируется красная и белая пульпа. При этом доля красной пульпы от общей массы органа в среднем составляет 75-85%. В лимфоидных узелках белой пульпы интактных животных определяются центральная артерия, чаще расположенная эксцентрично и окруженная периартериально Т-зависимой зоной, герминативный центр, мантийная и маргинальная зоны. Среди лимфоидных узелков встречаются первичные узелки без герминативных центров и вторичные с центрами размножения, появляющиеся только после антигенной стимуляции (рис. 1, А). Соотношение между вторичными и первичными лимфоидными узелками составляет 2,6 : 1 в одном поле зрения. При иммуно-гистологическом исследовании в герминативных центрах вторичных лимфоидных узелков определяются 8100+-дендритные клетки, которые образуют стромаль-ный каркас центров размножения (рис. 2).

При определении морфометрических показателей выявлено, что через 1 мес после курсового введения 1,2-диметилгидразина белая пульпа селезенки сохраняет зональное строение. Границы лимфоидных узелков и периартериальных лимфоидных муфт сохраняются, однако становятся менее отчетливыми. Количество вторичных лимфоидных узелков изменяется недостоверно,

Таблица 1. Масса крыс и селезенки, морфометрические показатели белой пульпы селезенки и экспрессия белка Б100 в структурах селезенки интактных крыс и животных через 1 и 4 мес после введения 1,2-диметилгидразина

Показатель Интактные животные Животные после введения 1,2-диметилгидразина

1 мес 4 мес 1 мес 4 мес

Масса крыс, г 175,25 ± 9,9 313,81 ± 19,4 136,83 ± 11,6** 237,57 ± 17,0**

Масса селезенки, мг 694,7 ± 27,7 818,54 ± 49,6 537,2 ± 61,2* 596,7 ± 61,4**

Площадь лимфоидных узелков, 103,мкм 470,21 ± 20,71 530,3 ± 31,2 402,77 ± 14,69** 394,21 ± 30,19***

Диаметр лимфоидных узелков (Блф), мкм 620,85 ± 23,5 561,87 ± 22,9 502,33 ± 18,4*** 437,71 ± 14,3***

Площадь герминативных центров, 103, мкм 49,31 ± 3,36 60,76 ± 3,5 38,9 ± 1,98** 49,45 ± 4,1*

Диаметр герминативных центров (Бгц), мкм 218,53 ± 8,5 202,025 ± 9,2 191,59 ± 8,3* 171,78 ± 5,9**

Ширина периартериальных муфт (Ьпм), мкм 118,31 ± 4,8 119,33 ± 3,3 125,06 ± 4,8 111,11 ± 3,9

Ширина маргинальных зон, мкм 121,36 ± 6,02 122,85 ± 2,7 118,35 ± 2,2 109,73 ± 2,1***

8100+-клетки, % 21,82 ± 1,64 32,41 ± 2,42 44,57 ± 3,04*** 31,72 ± 1,56

ГФИ 35,198 35,95 38,14 39,24

ЛК 5,24 4,7 4,01 3,93

Примечание. Здесь и в табл. 2: * -p<0,05; ** -p< 0,01; *** - p < 0,001 по сравнению с интактными животными.

Рис. 1. Селезенка. Окраска гематоксилином и эозином, х100

А — селезенка интактной крысы: 1 — первичный лимфоидныйузелок; 2 — вторичный лимфоидный узелок; 3 — периартериальная лимфоидная муфта; Б — селезенка крысы через 1 мес после введения 1,2-диметилгидразина: 1 — уменьшение соотношения между первичными и вторичными лимфоидными узелками; В — селезенка крысы через 4 мес после введения канцерогена: 1 — уменьшение количества первичных и увеличение количества вторичных лимфоидных узелков

а соотношение между первичными и вторичными составляет 1,7 : 1 (рис. 1, Б). ГФИ увеличивается, а ЛК, напротив, уменьшается, отражая напряженность гуморального иммунитета и отчасти Т-клеточного звена иммунного ответа, что может быть обусловлено преждевременной инволюцией тимуса при химическом канцерогенезе [11]. Однако на этом фоне происходит незначительное (на 14%) сокращение площади лимфоидных узелков, а их диаметр уменьшается на 19%. Площадь герминативных центров вторичных узелков уменьшается на 21%, а диаметр - на 12%. Замечено, что ширина маргинальной зоны и периартериальных лим-фоидных муфт изменяется недостоверно (см. табл. 1). Диаметр центральной артерии уменьшается, а толщина стенок, напротив, увеличивается на 12%, что приводит к увеличению ИК (табл. 2), свидетельствующего о снижении пропускной способности центральной артерии.

При иммуногистохимическом исследовании были выявлены Б100+-клетки как в герминативных центрах лимфоидных узелков, так и в небольшом количестве в мантийной зоне. Отмечено, что через 1 мес после введения канцерогена на фоне уменьшения площади и диаметра лимфоидных узелков происходит значительное увеличение ДК в них (рис. 3), вероятно, это может привести к уменьшению числа плазмацитов и В-лимфоцитов (см. табл. 1). В литературе до сих пор встречаются противоречивые данные о распределении белка Б100 в органах иммуногенеза. Одни авторы выделяют Б100-отрицательные фолликулярные ДК и Б100+-клетки периартериальных лимфоидных муфт [12]. В других исследованиях показано, что белок Б100 об-

наруживается как в фолликулярных ДК, так и в интер-дигитирующих клетках, однако Б100+-клетки все же доминируют в герминативных центрах [13].

Более значимые изменения наблюдаются через 4 мес после окончания курса инъекций канцерогена: лимфоидные узелки теряют правильную форму, контуры между зонами становятся более размытыми, стертыми. Количество вторичных лимфоидных узелков достоверно увеличивается в 2 раза, однако соотношение между ними и первичными узелками сокращается и составляет 1,5 : 1, что, возможно, свидетельствует об уменьшении антигенной стимуляции (рис. 1, В). ГФИ увеличивается более значимо по сравнению с предыдущим сроком, а ЛК изменяется незначительно (см. табл. 1). Площадь лимфоидных фолликулов сокращается, составляя 25%, что более значимо по сравнению с изменениями у предыдущего срока. Площадь герминативных центров вторичных фолликулов сокращается на 18%, а их диаметр - на 15%, однако количество Б100+-клеток в них достоверно не изменяется. Ширина маргинальной зоны у животных через 4 мес после воздействия канцерогена достоверно сокращается на 11%, а ширина периартериальных лимфоидных муфт изменяется недостоверно (см. табл. 1). Диаметр центральной артерии уменьшается на 21%, а толщина стенок - на 28%, что, приводит к увеличению ИК, как и в предыдущем случае, (см. табл. 2). Такое нарушение микроциркуляции может свидетельствовать о снижении поступления клеток в селезенку в результате ак-цидентальной инволюции тимуса на введение 1,2-ди-метилгидразина [14].

Таблица 2. Морфологические характеристики центральной артерии лимфоидных узелков селезенки интактных крыс и животных через 1 и 4 мес после введения 1,2-диметилгидразина

Показатель Интактные животные Животные после введения 1,2-диметилгидразина

1 мес 4 мес 1 мес 4 мес

Внутренний диаметр (П), мкм 21,61 ± 1,2 16,47 ± 19,4 18,98 ± 1,3 13,28 ± 0,7*

Толщина стенки (V), мкм 15,9 ± 0,7 20,78 ± 1,5 17,82 ± 0,51* 15,6 ± 0,4***

ИК 1,47 2,52 1,87 2,83

Рис. 2. Селезенка интактной крысы

1 — скопление 8100+-клеток в герминативных центрах лимфоидных узелков (окрашены коричневым). Иммуногистохимиче-ская реакция клеток к белку S100, х400

Таким образом, курсовое введение 1,2-диметилгидразина в дозе, эквивалентной развитию аденокарци-номы толстой кишки, оказывает на селезенку значимое воздействие с разной степенью выраженности у исследуемых групп крыс. Через 1 мес после курса инъекций канцерогена происходит сокращение площади и диаме-тра лимфоидных узелков селезенки, уменьшение диаметрагерминативных центров с увеличением количества S100+-клеток в них, ширина периатериальных лимфоидных муфт и маргинальной зоны сокращается

Литература

1. Mebius R.E., Kraal G. Structure and function of the spleen. Nat. Pev. Immunal. 2005; 5: 606-16.

2. Шапкин Ю.Г., Масляков В.В. Селезенка и иммунный статус организма. Вестн. хир. 2009; 168 (2): 110-3.

3. Balogh P., Horvath G., Szakal A.K. Immunoarhitecture of distinct reticular fibroblastic domains in the white pulp of mouse spleen. J. Histochem. Cytochem. 2004; 52 (1287): 98.

4. Хаитов Р.М. Физиология иммунной системы. Рос. физиол. журн. им. И.М. Сеченова. 2000; 86 (3): 252-6.

5. Воробьев А.А., Быков А.С., Караулов А.В. Иммунология и аллергология: цветной атлас. М. : Практическая медицина. 2006; 64-74.

6. Shibazaki M., Nakamura M., Nitta Y., Endo Y. Immunopharmacology. 1998; 39 (1): 1-7.

7. Mailloux A.W., Young M.R. Regulatory T-cell trafficking: from thymic development to tumor-induced immune suppression. Crit. Rev. Immunol. 2010; 30 (5): 435-47.

8. Михайлова М.Н., Стручко Г.Ю., Меркулова Л.М., Кострова О.Ю. и др. Участие дендритных и нейроэндокринных клеток тимуса в развитии его инволюции при формировании экспериментальной опухоли толстой кишки. Вестн. Чувашского ун-та. 2011; 3: 377-83.

References

1. Mebius R.E., Kraal G. Structure and function of the spleen. Nat. Pev. Immunal. 2005; 5: 606-16.

2. Shapkin Yu.G., Maslyakov V.V. Lien and immune status of an organism. Vestnik khirurgii. 2009; 168

3. Balogh P., Horvath G., Szakal A.K. Immunoarhitecture of distinct reticular fibroblastic domains in the white pulp of mouse spleen. J. Histochem. Cytochem. 2004; 52 (1287): 98.

Рис. 3. Селезенка крысы через 1 мес после введения 1,2-диметил-гидразина

1 — увеличение количества 8100+-клеток в герминативных центрах лимфоидных узелков (окрашены коричневым). Иммуноги-стохимическаяреакция клеток к белку Б100, х400

при уменьшении пропускной способности центральной артерии. Такие изменения сопровождаются напряжением гуморального и клеточного звеньев иммунного надзора, которое в свою очередь приводит к недостаточности противоопухолевого иммунного ответа. Более выраженные изменения через 4 мес после курса введения канцерогена могут свидетельствовать не только о более грубом нарушении противоопухолевого иммунного надзора, но и о возможном прогрессировании неопластических процессов.

9. Волков В.П. Новый алгоритм морфометрической оценки функциональной иммуноморфологии селезёнки. Universum: Медицина и фармакология: электрон. науч. журн. 2015; 5-6

10. Реброва О.Ю. Статистический анализ медицинских данных. Применение пакета прикладных программ STATISTICA. М. : Медиа Сфера, 2002.

11. Стручко Г.Ю, Меркулова Л.М., Москвичев Е.В., Кострова О.Ю. и др. Морфологическая и иммуногистохимическая характеристика опухолей желудочно-кишечного тракта на фоне иммунной недостаточности. Вестн. Чувашского ун-та. 2011; 3: 450-6.

12. Wood G.S., Turner N.R., Shiurba R.A., Eng L. et al. Human dendritic cells and macrophages: ill sitll immunophenotypic definition of subsets that exhibit specific morphologic and microenv ironmenta l characteristics. Am. J. Pathol. 1985; 119: 73-82.

13. Alos L., Navarrete P., Morente V. et al. Mod. Pathol. 2005; 18 (1): 127-36.

14. Москвичев Е.В., Меркулова Л.М., Стручко Г.Ю., Михайлова М. Н. и др. Иммуногистохимическая характеристика акци-дентальной инволюции тимуса после спленэктомии. Вестн. нац. мед.-хир. центра Н.И. Пирогова. 2012; 7 (2): 40-3.

4. Khaitov R.M. Physiology of the immune system. Rossiyskiy fiziologicheskiy zhurnal im. I.M. Sechenova. 2000; 86

5. Vorob'ev A.A., Bykov A.S., Karaulov A.V. Immunology and allergology: a color atlas. Moscow: Prakticheskaya meditsina, 2006: 64-74.

6. Shibazaki M., Nakamura M., Nitta Y., Endo Y. Immunopharmacology. 1998; 39 (1): 1-7.

7. Mailloux A.W., Young M.R. Regulatory T-cell trafficking: from thymic development to tumor-induced immune suppression. Crit. Rev. Immunol. 2010; 30 (5): 435-47.

8. Mikhaylova M.N., Struchko G.Yu., Merkulova L.M., Kostrova O.Yu., et al. The involvement of dendritic and neuroendocrine cells of the thymus in the development of its involution in the formation of an experimental colon tumor. Vestnik Chuvashskogo universiteta. 2011; 3: 377-83.

9. Volkov V.P. A new algorithm for the morphometric evaluation of the functional immunomorphology of the spleen. Universum: Meditsina i farmakologiya: elektronniy nauchniy zhurnal. 2015; 5-6

10. Rebrova O.Yu. Statistical analysis of medical data. Application of the STATISTICA software package. Moscow: Media Sfera, 2002.

11. Struchko G.Yu., Merkulova L.M., Moskvichev E.V., Kostrova O.Yu., et al. The morphological and immunohistochemical characteristic of tumors of digestive tract against the background of an immune failure. Vestnik Chuvashskogo universiteta. 2011; 3: 450-6.

12. Wood G.S., Turner N.R., Shiurba R.A., Eng L., et al. Human dendritic cells and macrophages: ill sitll immunophenotypic definition of subsets that exhibit specific morphologic and microenv ironmenta l characteristics. Am. J. Pathol. 1985; 119: 73-82.

13. Alos L., Navarrete P., Morente V., et al. Mod. Pathol. 2005; 18 (1): 127-36.

14. Moskvichev E.V., Merkulova L.M., Struchko G.Yu., Mikhaylova M.N., et al. The immunohistochemical characteristic of an aktsidentalny involution of a thymus after a splenectomy. Vestnik Natsional'nogo mediko-khirurgicheskogo tsentra N.I. Pirogova. 2012; 7