МОДИФИЦИРОВАННЫЙ БИОТИНСВЯЗЫВАЮЩИЙ БЕЛОК

1. Модифицированный биотинсвязывающий белок, включающий аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 2, аминокислотную последовательность, обладающую от одной до нескольких мутаций аминокислот в последовательности, представленной SEQ ID NO: 2, или аминокислотную последовательность, идентичную последовательности, представленной SEQ ID NO: 2, на 80% или более, и обладающий биотинсвязывающей активностью, где
один или более остатков, выбранные из группы, состоящей из:
1) остатка аргинина в положении 104 SEQ ID NO: 2;
2) остатка лизина в положении 141 SEQ ID NO: 2;
3) остатка лизина в положении 26 SEQ ID NO: 2; и
4) остатка лизина в положении 73 SEQ ID NO: 2
заменены остатком кислой аминокислоты или остатком нейтральной аминокислоты.
2. Модифицированный биотинсвязывающий белок по п.1, где аминокислотный остаток, выбранный из от 1) до 4) заменен аминокислотным остатком, обладающим индексом гидрофобности 2 или менее.
3. Модифицированный биотинсвязывающий белок по п.1, где 1) остаток аргинина в положении 104 SEQ ID NO: 2 и/или 2) остаток лизина в положении 141 SEQ ID NO: 2 заменены кислым аминокислотным остатком или нейтральным аминокислотным остатком.
4. Модифицированный биотинсвязывающий белок по п.3, где 1) остаток аргинина в положении 104 SEQ ID NO: 2 и/или 2) остаток лизина в положении 141 SEQ ID NO: 2 заменены кислым аминокислотным остатком.
5. Модифицированный биотинсвязывающий белок по п.3 или 4, где 1) остаток аргинина в положении 104 SEQ ID NO: 2 и/или 2) остаток лизина в положении 141 SEQ ID NO: 2 заменены остатком глутаминовой кислоты.
6. Модифицированный биотинсвязывающий белок по любому из пп.1-4, где остаток аспарагиновой кислоты в положении 40 SEQ ID NO: 2 заменен остатком аспарагина.
7. Модифицированный биотинсвязывающий белок по любому из пп.1-4, который выбран из группы, состоящей из:
модифицированного биотинсвязывающего белка (R104E-K141E), в котором остаток аргинина в положении 104 SEQ ID NO: 2 заменен остатком глутаминовой кислоты, и остаток лизина в положении 141 заменен остатком глутаминовой кислоты;
модифицированного биотинсвязывающего белка (D40N-R104E), в котором остаток аспарагиновой кислоты в положении 40 SEQ ID NO: 2 заменен остатком аспарагина, и остаток аргинина в положении 104 заменен остатком глутаминовой кислоты;
модифицированного биотинсвязывающего белка (D40N-K141E), в котором остаток аспарагиновой кислоты в положении 40 SEQ ID NO: 2 заменен остатком аспарагина, и остаток лизина в положении 141 заменен остатком глутаминовой кислоты; и
модифицированного биотинсвязывающего белка (D40N-R104E-K141E), в котором остаток аспарагиновой кислоты в положении 40 SEQ ID NO: 2 заменен остатком аспарагина, остаток аргинина в положении 104 заменен остатком глутаминовой кислоты и остаток лизина в положении 141 заменен остатком глутаминовой кислоты.
8. Модифицированный биотинсвязывающий белок по любому из пп.1-4, который удовлетворяет, по меньшей мере, одному требованию, выбранному из следующих требований от a) до l):
a) аспарагиновый остаток в положении 14 SEQ ID NO: 2 не модифицирован или заменен глутамином или аспарагиновой кислотой;
b) остаток серина в положении 18 SEQ ID NO: 2 не модифицирован или заменен треонином или тирозином;
c) остаток тирозина в положении 34 SEQ ID NO: 2 не модифицирован или заменен серином, треонином или фенилаланином;
d) остаток серина в положении 36 SEQ ID NO: 2 не модифицирован или заменен треонином или тирозином;
e) остаток аспарагиновой кислоты в положении 40 SEQ ID NO: 2 не модифицирован или заменен аспарагином;
f) остаток триптофана в положении 69 SEQ ID NO: 2 не модифицирован;
g) остаток серина в положении 76 SEQ ID NO: 2 не модифицирован или заменен треонином или тирозином;
h) остаток треонина в положении 78 SEQ ID NO: 2 не модифицирован или заменен серином или тирозином;
i) остаток триптофана в положении 80 SEQ ID NO: 2 не модифицирован;
j) остаток триптофана в положении 96 SEQ ID NO: 2 не модифицирован;
k) остаток триптофана в положении 108 SEQ ID NO: 2 не модифицирован; и
l) остаток аспарагиновой кислоты в положении 116 SEQ ID NO: 2 не модифицирован или заменен глутаминовой кислотой или аспарагином.
9. Модифицированный биотинсвязывающий белок по п.1, включающий аминокислотную последовательность, идентичную на 90% или более последовательности, представленной SEQ ID NO: 2.
10. Модифицированный биотинсвязывающий белок по любому из пп.1-4, который удовлетворяет, по меньшей мере, одному свойству, выбранному из следующих свойств от i) до iv):
i) обладающий изоэлектрической точкой, более низкой, чем изоэлектрическая точка белка, состоящего из аминокислотной последовательности, представленной SEQ ID NO: 2;
ii) проявляющий более низкое неспецифическое связывание с нуклеиновыми кислотами и/или белками по сравнению с белком, состоящим из аминокислотной последовательности, представленной SEQ ID NO: 2;
iii) проявляющий более низкую фибронектинсвязывающую активность по сравнению с белком, состоящим из аминокислотной последовательности, представленной SEQ ID NO: 2; и
iv) проявляющий более высокую биотинсвязывающую активность по сравнению с белком, состоящим из аминокислотной последовательности, представленной SEQ ID NO: 2.
11. Модифицированный биотинсвязывающий белок, включающий аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 2, аминокислотную последовательность, содержащую от одной до нескольких аминокислотных мутаций в последовательности, представленной SEQ ID NO: 2, или аминокислотную последовательность, идентичную на 80% или более последовательности, представленной SEQ ID NO: 2, и обладающий биотинсвязывающей активностью, где
остаток аспарагиновой кислоты в положении 40 SEQ ID NO: 2 заменен остатком аспарагина.
12. Модифицированный биотинсвязывающий белок по п.11, где биотинсвязывающая активность является более высокой, чем у белка, состоящего из аминокислотной последовательности, представленной SEQ ID NO: 2.
13. Нуклеиновая кислота, кодирующая белок по любому из пп.1-12.
14. Вектор, содержащий нуклеиновую кислоту по п.13.
15. Носитель, на котором иммобилизован белок по любому из пп.1-12.