СОЛИ 1,3-ДИЭТИЛБЕНЗИМИДАЗОЛИЯ - ИММУНОСТИМУЛИРУЮЩИЕ СРЕДСТВА И ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЕ КОМПОЗИЦИИ НА ИХ ОСНОВЕ
1,3-DIETHYLBENZIMIDAZOLIUM SALTS AS IMMUNOSTIMULATING DRUGS AND BASED PHARMACEUTICAL COMPOSITIONS

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ
Изобретение относится к области иммунологии, в частности к средствам стимуляции иммунитета.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
Известно, что препарат Прокодазол - производное бензимидазола (1Н-бензимидазол-2-пропановая кислота) является неспецифическим активным иммунозащитным средством (Патент RU 2197964, опубл. 10.02.2003).
Недостатком данного препарата является то, что он эффективен только в сочетании с другими бензимидазольными препаратами при лечении вирусных инфекций.
Наиболее близким к предложенному является лекарственное средство дибазол, применяемое в качестве мягкодействующего иммуностимулирующего препарата (Машковский М.Д. 2003. Лекарственные средства. М.: Новая Волна, Т.1, с.398-399), также представляющее собой производное бензимидазола - 2-бензилбензимидазола гидрохлорид. Однако дибазол обладает недостаточной иммуностимулирующей активностью. Кроме того, дибазол не является солью катиона бензимидазолия, обладающего высокой фармакологической активностью.
СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Задачей изобретения, которая определяет его назначение, является создание новых препаратов, а также их приемлемых фармацевтических композиций, обладающих выраженным иммуностимулирующим действием, обладающих высокой терапевтической эффективностью, при одновременном ослаблении нежелательных побочных эффектов, снижении себестоимости лечения.
Техническим результатом заявляемого изобретения, который может быть достигнут при его осуществлении, является создание группы соединений, а также их приемлемых фармацевтических композиций, обладающих высокой активностью при лечении иммунодефицитных заболеваний.
Технический результат достигается обладающими активностью при лечении иммунодефицитных заболеваний веществами из группы солей 1,3-диэтилбензимидазолия общей формулы:
-
где X = анион.
Технический результат также достигается фармацевтической композицией, включающей соль 1,3-диэтилбензимидазолия вышеуказанной общей формулы и, по меньшей мере, одно фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество.
В качестве фармацевтически приемлемых вспомогательных веществ в композиции, обладающей иммуностимулирующей активностью, включающей соль 1,3-диэтилбензимидазолия, могут использоваться следующие вещества:
для таблеток - крахмал картофельный, или стеарат натрия, или тальк, или иные наполнители, или их различные сочетания;
для капсул - желатин (оболочка), крахмал картофельный, или стеарат натрия, или тальк, или иные наполнители, или их различные сочетания;
для инъекционной формы - физиологический раствор или вода для инъекций;
для мазей - полиэтиленгликоль 400, или полиэтиленгликоль 1500, или поливинилпирролидон низкомолекулярный, или иные наполнители, или их различные сочетания;
для суппозиторий - полиэтиленгликоль 400, или полиэтиленгликоль 1500, или поливинилпирролидон низкомолекулярный, или иные наполнители, или их различные сочетания;
для капель для приема внутрь и местного применения - спирт этиловый, или калия йодид, или поливинилпирролидон низкомолекулярный, или иные вспомогательные вещества, или их различные сочетания.
Способ получения солей 1,3-диэтилбензимидазолия и их приемлемых фармацевтических композиций для лечения иммунодефицитных заболеваний является безопасным для физических лиц, участвующих в технологическом процессе.
ПРИМЕРЫ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Предложенные средства получают следующим образом.
Пример 1. Хлорид 1,3-диэтилбензимидазолия
59 г (0,5 М) бензимидазола и 68 г (0,5 М) ацетата натрия трехводного помещают в 150 мл о-ксилола, добавляют 64,5 г (1 М) хлористого этила и кипятят реакционную смесь в течение 3 часов. Охлаждают на льду, полученный кристаллический продукт промывают ледяной водой, отфильтровывают и высушивают 24 часа при +55°С. Мелкие кристаллы от белого до светло-желтого цвета. Выход 72%. Строение полученного соединения подтверждено элементным анализом. Найдено: N 13,4%, Сl 16,8%. Вычислено: N 13,3%, Сl 16,9%.
Пример 2. Йодид 1,3-диэтилбензимидазолия
59 г (0,5 М) бензимидазола и 68 г (0,5 М) ацетата натрия трехводного помещают в 150 мл о-ксилола, добавляют 156 г (1 М) йодистого этила и кипятят реакционную смесь в течение 3 часов. Охлаждают на льду, полученный кристаллический продукт промывают ледяной водой, отфильтровывают и высушивают 24 часа при +55°С. Мелкие кристаллы от белого до светло-желтого или светло-розового цвета. Выход 68%. Строение полученного соединения подтверждено элементным анализом. Найдено: N 9,2%, J 43,7%. Вычислено: N 9,3%, J 42,0%.
Пример 3. Сульфат 1,3-диэтилбензимидазолия
59 г (0,5 М) бензимидазола и 20 г (0,5 М) гидроксида натрия помещают в 300 мл спирта этилового, добавляют 77 г (0,5 М) диэтилсульфата и поддерживают температуру реакционной смеси в течение 3 часов в диапазоне +50-60°С. Охлаждают при -20°С, полученный кристаллический продукт промывают ледяной водой, отфильтровывают и высушивают 24 часа при +55°С. Мелкие кристаллы белого цвета. Выход 65%. Строение полученного соединения подтверждено элементным анализом. Найдено: N 12,4%, S 7,1%. Вычислено: N 12,6%, S 7,2%.
Фармацевтические композиции получают следующим образом.
Пример 1.
Мелкоизмельченные кристаллы 1,3-диэтилбензимидазолия хлорида (0,4 г) смешивают с крахмалом картофельным (9,6 г) и под прессом формируют таблетки массой 10 мг для перорального приема.
Пример 2.
Мелкоизмельченные кристаллы 1,3-диэтилбензимидазолия йодида (0,4 г) смешивают с крахмалом картофельным (9,6 г) и под прессом формируют таблетки массой 10 мг для перорального приема.
Пример 3.
Мелкоизмельченные кристаллы 1,3-диэтилбензимидазолия сульфата (200 мг) растворяют в физиологическом растворе (10 мл), полученный 2% раствор для инъекций запаивали в ампулы.
50
Фармакологическую эффективность полученных солей 1,3-диэтилбензимидазолия изучали на белых мышах. Для проведения исследований in vivo был использован вирус гриппа A/Aichi/2/68 (H3N2), предварительно адаптированный к размножению в легких мышей в дозе 100 LD. Инфекционная активность вируса определена по методу Рида и Менча при заражении мышей десятикратными разведениями суспензии в легких.
О способности препарата оказывать иммуностимулирующий эффект судили по изменениям показателей иммунного статуса инфицированных адаптированным вирусом гриппа мышей в опытных группах по сравнению с группой животных не получавших препарат.
Было сформировано 5 групп животных по 10 мышей в каждой группе.
Животных 1-й группы каким-либо воздействиям не подвергали и они составляли группу интактных животных.
Животные 2-й группы были инфицированы, но препаратов не получали.
Использовали заражающую дозу вируса, вызывающую 60-70% летальности у мышей.
Лекарственную композицию 1,3-диэтилбензимидазолия хлорида вводили перорально животным 3-й группы по 1 таблетке (соответствует дозе 20 мг/кг) 2 раза в день за 24 часа до инфицирования мышей вирусом.
Лекарственную композицию 1,3-диэтилбензимидазолия йодида вводили перорально животным 4-й группы по 1 таблетке (соответствует дозе 20 мг/кг) 2 раза в день за 24 часа до инфицирования мышей вирусом.
Животным 5-й группы вводили перорально в виде 2% раствора 1,3-диэтилбензимидазолия сульфат по 0,2 мл (соответствует дозе 20 мг/кг) 2 раза в день за 24 часа до инфицирования мышей вирусом
За животными наблюдали в течение 20 дней после заражения, учитывая гибель мышей от гриппа в группах леченых животных и в контрольной группе (мыши не получавшие препарат).
Для изучения фармакологической активности препарата исследовали кровь и легкие 5 мышей, взятые через 6 и 12 дней после заражения.
Учет результатов экспериментов проводили по показателям иммунной системы инфицированных животных в группах, получавших препарат по отношению к контрольной группе.
Характеристику иммунного статуса осуществляли с помощью комплекса методов, позволяющего оценить как клеточные, так и гуморальные звенья иммунной системы.
Рассчитывали средние значения по каждой группе животных с среднестатистическим отклонением в системе Microcoft Excel.
Цифровой материал подвергался статистической обработке с использованием метода Стьюдента.
Изучение препаратов на фоне заражения животных вирусом гриппа выявило их отчетливое участие в формировании иммунного ответа организма на инфицирование. Необходимо отметить, что соли 1,3-диэтилбензимидазолия оказывали протективное действие в отношении экспериментальной гриппозной инфекции при всех схемах введения препарата.
Выявленный терапевтический эффект препаратов протекал на фоне статистически значимого снижения титра вируса гриппа в легких животных относительно контроля, что было отмечено на 6-й и особенно на 12-й дни эксперимента (таблицы 1,2). То есть необходимо заключить, что соли 1,3-диэтилбензимидазолия обладают протективной активностью в отношении вируса гриппа A/Aichi/1/68 (H3N2).
Данные о протективном эффекте препарата объясняются результатами изучения иммунного статуса животных. Так, на 6-е сутки после инфицирования животных у мышей, получавших соли 1,3-диэтилбензимидазолия, уровень в крови иммуноглобулинов IgM, с которыми связан первичный иммунный ответ, статистически значимо превышал их концентрацию у нелеченных животных (табл.1).
Кроме того, отмечено достоверное превышение на 6-й и особенно на 12-й день эксперимента у мышей опытных групп по сравнению с контрольными животными содержания в крови иммуноглобулинов IgG (табл.1, 2), играющих главную роль в обеспечении длительного гуморального иммунитета при инфекционных заболеваниях.
Таблица 1
Показатели иммунной системы мышей через 6 дней после инфицирования животных вирусом и введения препаратов
Показатель иммунного статуса
Интактные мыши
Контрольная группа: вирус без лечения
Опытные группы: применение солей 1,3-диэтилбензимидазолия
хлорид
йодид
сульфат
Моноциты
1,4±0,5
1,2±0,4
3,0±0,7*
4,4±1,0*
3,5±0,2*
Т-лимфоциты - CD3+, %
63,8±3,6
45,8±1,7
63,7±1,2*
60,7±2,3*
55,6±1,1*
В-лимфоциты - CD20+, %
14,2±1,33
11,8±2,0
15,4±1,2*
14,4±1,0*
15,1±1,4*
Т-хелперы/индукторы - CD4+
52,2±3,92
29,6±1,9
48,8±1,7*
49,1±1,7*
42,8±5,4*
Иммуноглобулины IgM, г/л
0,5±0,4
2,2±0,8
4,2±0,8*
3,8±0,7*
4,7±0,6*
Иммуноглобулины IgG общие, г/л
3,0±0,9
4,2±0,8
5,6±0,5
5,0±0,6
5,4±0,8
Инфекционный титр вируса в легких (lg)
-
2,0±0,7
1,0±0,8*
1.0±0,5*
0,8±0,4*
Таблица 2
Показатели иммунной системы мышей через 12 дней после инфицирования животных вирусом и введения препаратов
Показатель иммунного статуса
Интактные мыши
Контрольная группа: вирус без лечения
Опытные группы: применение солей 1,3-диэтилбензимидазолия
хлорид
йодид
сульфат
Моноциты
1,4±0,5
2,2±0,4
1,2±0,1
2,6±0,5
1,3±0,5
Т-лимфоциты - CD3+, %
63,8±3,6
59,2±3,2
67,2±2,4*
67,8±1,0*
63,8±4,2
В-лимфоциты - CD20+, %
14,2±1,33
14,8±1,3
15,1±1,2
14,6±0,8
14,7±1,3
Т-хелперы/индукторы - CD4+
52,2±3,92
47,2±2,8
56,5±3,1*
56,4±0,5*
52,0±1,4
Иммуноглобулины IgM, г/л
0,5±0,4
1,4±0,5
3,5±0,2*
2,9±0,8*
3,6±1,1*
Иммуноглобулины IgG общие, г/л
3,0±0,9
5,6±1,4
11,0±1,0*
10,7±0,7*
12,3±1,5*
Инфекционный титр вируса в легких (lg)
-
0,8±0,4
0,2±0,2*
0,1±0,2*
0,2±0,1*
* - Достоверные отличия от контрольной группы (р<0,05).
Применение препаратов повышало показатели маркеров CD4+ относительно контрольной группы (табл.1, 2), что свидетельствует об увеличении количества Т-хелперов/индукторов. Эти клетки подразделяются на подтипы. Th1-клетки активируют специфический клеточный иммунитет. Th2-клетки активируют специфический гуморальный иммунный ответ, стимулируя к пролиферации и дифференцировке В-лимфоциты в антителообразующие клетки. Отмеченная выше активация синтеза иммуноглобулинов при применении препаратов может обеспечиваться за счет увеличения уровня Т-хелперов/индукторов Th2-типа.
Также было отмечено воздействие препаратов на относительное содержание в периферической крови моноцитов преимущественно на 6-й день эксперимента (табл.1). Обнаружено увеличение уровня этого типа лейкоцитов, являющихся наиболее активными фагоцитами, относительно контрольной группы.
Таким образом, проведенные исследования показали несомненное активирующее влияние солей 1,3-диэтилбензимидазолия на показатели иммунитета при инфицировании животных вирусом гриппа. Существенная разница между опытными и контрольными результатами свидетельствует о выраженном иммуностимулирующем эффекте фармацевтических композиций солей 1,3-диэтилбензимидазолия.
При использовании изобретения выполняются следующие условия.
Вещества заявленной структуры могут быть получены химическим, а их приемлемые фармацевтические композиции могут быть получены технологическим способом. Заявленные средства могут быть применены в качестве лекарственных средств для лечения иммунодефицитных заболеваний в медицине.