СПОСОБ НЕСПЕЦИФИЧЕСКОЙ СЕРОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ СЕРОНЕГАТИВНЫХ ФОРМ ТЕЧЕНИЯ ЗАБОЛЕВАНИЯ СИФИЛИСОМ
MEANS OF NONSPECIFIC SERODIAGNOSIS OF SYPHILIS SERONEGATIVE FORMS

Изобретение относится к области медицины, а именно к диагностике заболевания сифилисом, и может быть использовано при серологической диагностике серонегативных форм заболевания сифилисом по результатам определения в организме наличия неспецифических (антикардиолипиновых) антител.
Изобретение решает задачу неспецифической серологической диагностики серонегативных (при отсутствии в организме антитрепонемных и антикардиолипиновых антител) форм течения сифилитической инфекции.
Известны способы лабораторной диагностики заболевания сифилисом [приказ МЗ РФ №87 от 26.03.2001 «О совершенствовании серологической диагностики сифилиса»]. Наиболее убедительным доказательством наличия Treponema pallidum pallidum в организме является его прямая визуализация - микроскопический способ выявления возбудителя. Однако использование данного способа диагностики возможно только при отдельных формах течения сифилитической инфекции, а отсутствие визуально наблюдаемых трепонем не означает отсутствие заболевания.
Известны способы серологической диагностики сифилиса, основанные на определении результата взаимодействия в реакциях антигенов - индикаторов с сывороткой крови, содержащей специфические и неспецифические антитела к Т. pallidum pallidum. Течение заболевания сифилисом сопровождается выработкой в организме двух видов антител: антикардиолипиновых (реагинов) и специфических - антитрепонемных. Реагины продуцируются и определяются в сыворотке крови организма, больного сифилисом, и их наличие, совместно с антитрепонемными антителами, указывает на наличие заболевания сифилисом и присутствие в организме вегетативных форм патогенной Т. pallidum pallidum.
В качестве антигена при постановке специфических реакций используется широкий спектр специфических антигенов патогенных и культуральных бледных трепонем, а в качестве антигена при постановке неспецифических реакций - кардиолипин [приказ МЗ РФ №87 от 26.03.2001 «О совершенствовании серологической диагностики сифилиса»].
Наиболее близким к заявляемому способу является способ неспецифической серологической диагностики сифилиса, включающий при постановке диагноза заболевания определение в организме при помощи неспецифических серологических реакций на сифилис наличия неспецифических (антикардиолипиновых) антител.
В связи с тем, что сифилис относится к социально значимым и представляющим опасность для окружающих заболеваниям, особую остроту приобретает вопрос исключения ложноотрицательных результатов неспецифических серологических реакций, используемых в качестве отборочного теста на сифилис и при контроле качества лечения.
Нетрепонемными тестами, определяющими наличие в организме антикардиолипиновых антител, являются реакция связывания комплимента с кардиолипиновым антигеном (РСК-К), микрореакция преципитации с кардиолипином (РМП-К), которая используется в качестве отборочного теста при массовых обследованиях населения на сифилис, а также при определении эффективности проведенного лечения, и различные зарубежные аналоги этих реакций (RPR, TRUST, VDRL) и др. [приказ МЗ РФ №87 от 26.03.2001 «О совершенствовании серологической диагностики сифилиса», стр.5-6].
Однако недостатком данного способа неспецифической серологической диагностики сифилиса является невозможность диагностировать с его помощью серонегативные формы течения сифилитической инфекции в связи с отсутствием в организме при данных формах сифилиса антитрепонемных и антикардиолипиновых антител.
Наличие серонегативных латентных и поздних форм сифилиса, репозитивация с течением времени серологических реакций у лиц, ранее леченных в связи с заболеванием вторичным рецидивным и скрытым сифилисом [Суворов А.П., Бакулев А.Л., Румянцева Е.В. Случаи рецидива сифилиса после лечения бензатин - бензилпенициллином G // Рос. ж. кож. и венер. болезней. - 2000. - №3. - С.46-48, Кошкин С.В., Зайцева Г.А. Чершных Г.В. Некоторые показатели иммунитета у больного с вторичным сифилисом с отрицательными серологическим реакциями // Вестн. дерм-тол. и венерол. - 2003. - №6. - С.53-54, Милич М.В., Сущенко Л.В. Куршакова Т.С. и др. Случаи вторичного рецидивного сифилиса с отрицательным стандартным серологическим комплексом // Вестн. дерматол. и венерол. - 1988. - №9. - С.68-69] позволяет сделать вывод о том, что при отрицательных результатах серологических реакций в организме может находиться в той или иной форме жизни возбудитель заболевания сифилисом [Беднова В.Н. К вопросу о биологии возбудителя сифилиса (аналитический обзор) // Вестн. последипломного мед. образования. - 2001. - №4. - С.24-27]. Данный вывод подтверждается результатами изучения экспериментального сифилиса у кроликов [Овчинников Н.М. Экспериментальный сифилис. - 1955. М.: Медгиз. - 388 с., стр.351], которые указывают на наличие в их организме патогенных бледных трепонем после негативации специфических реакций с трепонемным антигеном и неспецифических реакций с кардиолипином на сифилис.
Серьезные трудности представляет серодиагностика нейросифилиса. Так по данным [Киселёва Г.А. Ликвордиагностика сифилиса методом ИФА с тест - системой ЗАО «Вектор - Бест», предназначенной для выявления иммуноглобулинов класса G // ИППП. - 2003. - №2. - С.27-31] при диагностике нейросифилиса при помощи РМП-К чувствительность реакции составляет от 21% до 35,3%.
Целью изобретения является повышение достоверности неспецифической серологической диагностики серонегативных форм течения заболевания сифилисом.
Поставленная цель достигается тем, что при неспецифической серологической диагностике серонегативных форм течения заболевания сифилисом, в организм на фоне отрицательных серологических реакций на сифилис предварительно вводят высокоспецифичный антиген культуральных бледных трепонем, а наличие неспецифических (антикардиолипиновых) антител определяют при помощи неспецифической серологической реакции с кардиолипином через интервал времени активизации сифилитической инфекции.
По отношению к вышеописанному прототипу заявленный способ имеет следующие отличительные признаки.
Предварительное введение в организм на фоне отрицательных результатов серологических реакций на сифилис высокоспецифичного антигена культуральных бледных трепонем, что приводит, как известно [Пожарская В.О., Гуртовой Е.А. Новая технология производства положительных сывороток для диагностики сифилиса // Роль иммунобиологических препаратов в современной медицине: Матер. междун. симпозиума. - Уфа. - 1995. - Ч.2. - С.194], к активизации сифилитического процесса при наличии в организме возбудителя сифилиса, связанной с переходом патогенных бледных трепонем под воздействием специфического антигена из невегетативных форм жизни (цист и зерен) в вегетативные (извитые) формы.
2
Определение через интервал времени активизации сифилитической инфекции присутствие в организме неспецифических (антикардиолипиновых) антител. Установлено, что в результате активизации сифилитической инфекции патогенная бледная трепонема переходит в вегетативную форму жизнедеятельности, начинает размножаться, что приводит к распаду клеток в организмах человека и животных и появлению антикардиолипиновых антител, которые, как известно [Уфимцева М.А., Герасимова Н.М., Лесняк В.И. Антитела к кардиолипину и β-гликопротеину I при скрытом сифилисе и хронических ложноположительных реакциях на сифилис // Рос. журн. кож. венер. болезней. - 2005. - №4. - С.23-27, Беднова В.Н., Борисенко К.К. Неспецифические положительные результаты серологических реакций на сифилис. Количественные модификации современных серологических реакций // Методич. рекомендации. - МЗ СССР ЦКВИ. - 1990. - М., 1990. - 20 с.], являются антителами к митохондральным мембранам распавшихся клеток.
Введение высокоспецифичных антигенов культуральных бледных трепонем в организм больных серонегативными формами сифилиса приводит к выработке в нем, как специфических (антитрепонемных), так и неспецифических (антикардиолипиновых) антител. Однако доказано [Пожарская В.О. Особенности иммунного ответа кроликов на введение антигенов из бледных трепонем // 7-й Рос. съезд дерматол. и венерол.: Тез. докл. - Казань, 1996. - Ч.3. - С.72], что в организме, свободном от сифилитической инфекции, при введении высокоспецифичных антигенов культуральных бледных трепонем антикардиолипиновые антитела не вырабатываются. Данный факт при неспецифической серологической диагностике сифилиса позволяет дифференцировать по результату определения присутствия в организме антикардиолипиновых антител наличие или отсутствие в организме возбудителя сифилиса, т.е. наличие или отсутствие заболевания сифилисом.
Возможность практического использования предлагаемого способа подтверждается примерами конкретной его реализации.
Общепризнанной моделью заболевания сифилисом являются кролики с экспериментальным сифилисом, полученным путем их интратестикулярного заражения патогенной бледной трепонемой шт. Nikols. Установлена на генетическом уровне патогенной бледной трепонемы прочная связь между патогенами возбудителя сифилиса человека и кролика, зараженного штаммом Nikols [Stronhal M., Smajs D., Vatejkova P. Genome differences between Treponema pallidum subsp. pallidum strain Nichols and T. paraluisculi strain Cunikuli: A. // Infekt Immun. - 2007. - 75 (12). - P.5859-66]. Установлено, что антиген клеточных структур культуральных бледных трепонем, содержащий клеточные стенки с фрагментами цитоплазматических мембран и наружные фибриллы КБТ является высокоспецифичным антигеном [Пожарская В.О., Гуртовой Е.А. Новая технология производства положительных сывороток для диагностики сифилиса // Роль иммунобиологических препаратов в современной медицине: Матер. междун. симпозиума. - Уфа. - 1995. - Ч.2. - С.194].
Пример реализации предлагаемого способа серологической неспецифической диагностики серонегативных форм течения заболевания сифилисом.
Опытная группа №1 кроликов с экспериментальным сифилисом (10 голов). Через 9,5 месяцев после заражения кроликов патогенной бледной трепонемой шт. Nikols по результатам реакции связывания комплимента с ультраозвученным трепонемным антигеном, реакции связывания комплимента и реакции микропреципитации с кардиолипином установлено отсутствие в организме всех кроликов антитрепонемных и антикардиолипиновых антител. Через 11 месяцев после повторно подтвержденной в указанных выше реакциях у всех кроликов стойкой негативации в сыворотке крови специфических и неспецифических антител, кроликам предварительно внутривенно ввели 0,023 г высокоспецифичного антигена из клеточных структур культуральных бледных трепонем, содержащего клеточные стенки с фрагментами цитоплазматических мембран и наружные фибриллы КВТ. Через 30 дней после введения антигена при серологической диагностике на сифилис РСК-УЗТА, РСК и РМП с кардиолипином дали с сыворотками крови этих кроликов резко положительные результаты (++++). Установленное наличие у всех кроликов резко положительных результатов РСК и РМП с кардиолипином после введения высокоспецифичного трепонемного антигена подтверждает известные данные о наличии возбудителя сифилиса в организме кроликов при отрицательных первоначальных (до введения антигена) всех результатах серологических реакций, так как известно, что само выздоровление кроликов с экспериментальным сифилисом не происходит.
Опытная группа №2 здоровых кроликов с отрицательными серологическими реакциями на сифилис (10 голов). Здоровым кроликам одновременно с опытной группой №1 внутривенно ввели 0,023 г высокоспецифичного антигена клеточных структур культуральных бледных трепонем. Через 30 дней после введения антигена, одновременно с опытной группой №1, в группе №2 провели серологическую диагностику кроликов на сифилис: у всех кроликов РСК-УЗТА дала резко положительные результаты (++++), РСК и РМП с кардиолипином остались отрицательными, так как в организме здоровых кроликов антикардиолипиновые антитела не вырабатываются, что подтверждает известный заранее диагноз об отсутствии заболевания сифилисом в данной группе кроликов.
Контрольная группа №3 кроликов с экспериментальным сифилисом (10 голов). Через 9,5 месяцев после заражения кроликов патогенной бледной трепонемой шт. Nikols по результатам реакции связывания комплимента с ультраозвученным трепонемным антигеном, реакции связывания комплимента и реакции микропреципитации с кардиолипином у всех кроликов в сыворотке крови установлено отсутствие в организме антитрепонемных и антикардиолипиновых антител. Через 11 месяцев и при последующих постановках эти серологические реакции на сифилис в данной группе кроликов показали отрицательные результаты, что говорит о наличии стойкой негативации специфических и неспецифических антител в сыворотке крови кроликов с экспериментальным сифилисом. Данный факт подтверждает недостоверность отрицательных результатов серологической диагностики сифилиса в контрольной группе кроликов, так как при экспериментальном сифилисе кроликов не происходит их само выздоровление.
Таким образом, изобретение реально осуществимо, между совокупностью существенных признаков заявляемого объекта и достигаемым положительным результатом существует причинно-следственная связь, использование предлагаемого способа повышает достоверность неспецифической серологической диагностики серонегативных форм течения заболевания сифилисом.