Динамика показателей клеток крови телят при криптоспоридиозе

ДИНАМИКА ПОКАЗАТЕЛЕЙ КЛЕТОК КРОВИ ТЕЛЯТ ПРИ КРИПТОСПОРИДИОЗЕ

Якубовский М.В., Пахноцкая О.П.

РУП «Институт экспериментальной ветеринарии им С.Н. Вышелесского»,

Республика Беларусь, Минск

Введение. В последние годы значительно возрос удельный вес криптоспоридиоза (Т.В. Бейер, 1989; В.Ф. Никитин и I.Pavlasek, 1989; М.В. Якубовский и др., с 1988 до наст. вр.; И.И. Бочкарев 1996;

С.Г. Нестерович, 2003; А.В. Мальцев, 2003; Е.Л. Дмитриева и др., 2008; А.Л. Кряжев, 2010; О.С. Мехова, 2012). Это вызвано трудностями профилактики и лечения данной патологии, связанными с

непродолжительностью приобретаемого иммунитета, большой репродуктивной способностью паразита, его устойчивостью к терапевтическим средствам, недостаточным ассортиментом препаратов и способностью простейших постепенно адаптироваться к ним [1, 2, 3].

Известно, что при протозоозах наблюдается снижение иммунитета, однако комплексных исследований по иммунитету при криптоспоридиозе у телят не проводились, хотя это имеет большое теоретическое и практическое значение. Нет четких представлений о механизмах патогенеза криптоспоридий. К настоящему времени отсутствуют достаточно эффективные средства терапии и профилактики криптоспоридиоза.

На основании вышеизложенного, мы поставили задачу разработать новый эффективный иммуномодулирующий препарат и определить его влияние на гематологические и иммунологические показатели телят инвазированных криптоспоридиями.

Материалы и методы. Исследования по изучению влияния нового отечественного иммуностимулирующего препарата янсевит на иммунобиологические показатели телят, спонтанно зараженных криптоспоридиями, в сравнении с лечебной эффективностью зарубежного базового препарата галокур («Интерветинтернэшнл Б.В.», Нидерланды) провели в животноводческом хозяйстве Узденского района Минской области Республики Беларусь. Для этого, по принципу условных аналогов, были сформированы 4 группы телят: группа №1 - опытная, инвазированные

животные, которым в течение 5 дней 1 раз в сутки задавали янсевит по 100 мг на кг живой массы, группа №2 - инвазированные животные, которым задавали галокур в течение 7 дней 1 раз в сутки в дозе 2 мл на 10 кг живой массы, группа № 3 - инвазированные животные, которым препараты не задавали, группа № 4 - интактные телята. Оценку эффективности препаратов осуществляли с учетом состояния больных животных, а также интенсивности выделения криптоспоридий из организма телят. Фекалии исследовали методом нативного мазка с окраской по Циль-Нильсену. От телят опытных групп были

501

отобраны пробы крови для проведения гематологических и иммунологических исследований до введения препаратов и на 7, 14, 28 и 42-й дни наблюдения.

Определение в крови количества эритроцитов и лейкоцитов, уровня гемоглобина проводили с помощью гематологического анализатора Medonic CA-620. Лейкоцитарную формулу выводили на основании подсчета 100 клеток в мазках крови, окрашенных по Романовскому-Г имза согласно рекомендациям А.А. Кудрявцева и Л.А. Кудрявцевой (1974). Определение Т(Е-РОК)- и В(ЭМ) -лимфоцитов проводили по методике Д.К. Новикова, В.И. Новиковой (1996). Статистический анализ полученных данных проводили с помощью прикладных программ MicrosoftExcel.

Результаты. В результате опыта установили, что применение янсевита и галокура с лечебной целью при криптоспоридиозе телят приводит к клиническому выздоровлению животных в течение 5-7 дней. Начиная с 4-го дня опыта, отмечали снижение интенсивности инвазии в опытных группах и затухание клинических признаков. К 7-му дню опыта интенсэффективность применения янсевита с лечебной целью составила 95,57 %, применение галокура - 94,68 %, у всех телят признаки угнетения и расстройства со стороны желудочно-кишечного тракта не наблюдали.

При морфологическом и иммунологическом анализе венозной крови у подопытных телят был обнаружен ряд патофизиологических изменений исследуемых показателей.

У телят, инвазированных криптоспоридиями на начало опыта нами отмечены признаки дегидратации: относительное повышенное количество эритроцитов на 13,5% (Р<0,0б) - 18,3 (Р< 0,01), гемоглобина - на 21,7% - 27,0% (Р<0,01), лейкоцитов - на 36,4% - 41,1 (Р< 0,01), в сравнении с интактными животными. Количество лимфоцитов у животных, инвазированных

криптоспоридиями, было достоверно ниже на 31,1% - 33,2% по сравнению с показателями незараженных животных (Р<0,01), а палочкоядерных нейтрофилови эозинофилов было вышев 1,51 - 1,67 раза (Р<0,01) и 5,0 -4,3 раза (Р<0,01), соответственно. Следует отметить что, лимфопения при одновременном возрастании количества лейкоцитов указывает на снижение естественной резистентности организма и тяжелое течение болезни.

После курса применения лечебных препаратов животным, установили снижение содержания эритроцитов и гемоглобина у них в крови, что клинически сопровождалось сокращением числа дефекаций и уменьшения признаков дегидратации. Количество эритроцитов к 14-у дню наблюдения приблизилось к уровню интактных животных и было ниже, чем у инвазированных телят, на 23,5% (Р< 0,01) при применении янсевита и на 21,4% (Р< 0,05) при применении галокура, лейкоцитов - на 19,9% (Р<0,05) и на 29,3% (Р< 0,01) соответственно. В лейкоцитарной формуле процент палочкоядерных нейтрофилов уменьшился и был ниже, чем у больных животных на 25,8% (Р< 0,05) и 18,1% (Р<0,05), количество эозинофилов было на уровне интактных животных. Исследование крови показало отсутствие признаков воспаления и

502

обезвоживания, что совпадало с клиническим состоянием подопытных животных.

Изучение динамики Т(Е-РОК)-лимфоцитов показало, что содержание их в крови телят, больных криптоспоридиозом, с 1-го по 28-й день было ниже на 29,2% (Р<0,05) - 29,6% (Р<0,01), чем в крови интактных животных (рис. 1), в результате чего происходит ослабление иммунной защиты организма. Следует отметить, что к 14-му дню опыта в группе телят, которым задавали янсевит, количество Т-лимфоцитов увеличилось в 1,59 раз (Р<0,01), по сравнению с инвазированными животными, и достигало показателей интактных телят. Количественные показатели Т-лимфоцитов у телят, пролеченных галокуром за весь период наблюдения не достигли уровня интактных животных, однако они достоверно превысили показатели инвазированных животных в 1,42 раза (Р < 0,05).

Рис. 1. Динамика содержания Т (Е-РОК)-лимфоцитов в крови телят

Исследование количества розеткообразующих В-клеток в динамике является важным моментом в оценке иммунологической реактивности организма животного, так как В-лимфоциты являются предшественниками антителосинтезирующих плазматических клеток, обеспечивающих гуморальные реакции иммунитета.

503

Рис. 2. Динамика содержания В (ЭМ)-лимфоцитов в крови телят

Как видно на диаграмме, у инвазированных телят отмечали наименьшие показатели содержания В (ЭМ)-лимфоцитов в крови, и максимальное снижение отмечалось на 7-й день наблюдения на 46,6 % (Р<0,05) в сравнении с

контрольной группой (рис.2). В группе телят после применения янсевита наивысшие показатели отмечены на 28-й день наблюдения (21,0 ± 1,82%), которые были на уровне интактных контрольных животных и выше на 43,8 % (Р<0,05), чем у инвазированных телят. Количество В (ЭМ)-лимфоцитов в крови телят, пролеченных галокуром, приблизилось к показателям контрольной группы к 14-му дню наблюдения и достоверно превышало показатели инвазированных животных на 66,7% (Р<0,05).

Заключение. При киптоспоридиозе телят отмечается относительный эритроцитоз, лейкоцитоз, эозинофилия, нейтрофилия с регенеративным сдвигом ядра влево и лимфопения, снижением уровня розеткообразующих Т- и В-лимфоцитов. Применение нового отечественного иммуностимулирующего препарата янсевит при криптоспоридиозе телят в дозе 100 мг на кг живой массы в течение 5 дней 1 раз в сутки нормализует гематологические показатели: количество эритроцитов, лейкоцитов и палочкоядерных

нейтрофилов уменьшилось по отношению к инвазированным животным на 23,5% (Р< 0,01), 19,9% (Р<0,05) и на 25,8% (P<0,05) соответственно, а также выявлено повышение количества розеткообразующих Т-лимфоцитов в 1,59 раза (Р<0,01), В-лимфоцитов - в 1,44 раза (Р<0,05).

Литература: 1. Кряжев А.Л., Лемехов П.А. Криптоспоридиоз телят в хозяйствах молочной специализации Северо-Запада России: монография -Вологда-Молочное: ИЦ ВГМХА, 2010. -111с. 2. Никитин В.Ф.

Криптоспоридиоз домашних животных: (возбудители, клиническая картина, эпизоотология, диагностика, профилактика и терапия) Всерос. ин-т гельминтологии им. К.И. Скрябина. - Москва: [б.и.],2007.-36с. 3. Якубовский

504

М.В. и др. Паразитарные зоонозы /под.ред. М.В. Якубовского. - Минск: НашаИдея, 2012. - 384с.

Blood cell dynamics in calves infected by Cryposporidium. Yakubovsly M.V., Pachnockaya O.P. S.N. Vishelevsky Institute of Experimental Veterinary Medicine, Republic of Byeloruss.

Summary. The relative erythrocytosis, leukocytosis, eosinophilia, neutrophilia with regenerative deviation to the left and lymphopenia, decrease of rosette-forming T-cell and B-cell were noted in calves infected by Cryptosporidium. Application of Yansevit at dose level of 100 mg per kg over 5 days once a day normalized the hematological indices: number of erythrocytes, leukocytes and stab neutrophils decreased compared with infected animals by 23,5% (p<0,01), 19,9% (p<0,05) and 25,8% (p<0,05) respectively. One revealed increase of rosette-forming T-lymphocytes by 1,59-fold and B-lymphocytes by 1,44-fold (p<0,05).

505

К ВОПРОСУ О ЮВЕНИЛЬНОМ ДЕМОДЕКОЗЕ СОБАК

Ястреб В.Б.

ФГБНУ «Всероссийский НИИ фундаментальной и прикладной паразитологии животных и растений им. К.И. Скрябина»

Введение. Демодекоз - широко распространенное заболевание животных и человека, вызываемое железничными клещами рода Demodex. Клещи Demodex являются строго видоспецифичными паразитами: у каждого вида животных и у человека обитают свои виды, которые не развиваются у других хозяев. Возбудитель демодекоза собак клещ Demodex canis локализуется в волосяных фолликулах и сальных железах кожи. У собак описаны еще две морфологические формы клещей: удлиненная форма D. injai, которая обитает в волосяных луковицах и сальных железах, и укороченная форма D. cornei, которая обитает непосредственно на поверхности кожи. Однако самостоятельность этих видов окончательно не доказана [3, 4]. Передача клещей от матери к щенкам происходит, главным образом, в подсосный период, когда имеется тесный непосредственный контакт между матерью и потомством. Развитию демодекоза нередко способствуют несбалансированное кормление (дефицит протеина, серосодержащих аминокислот и витаминов, избыток липидов), перенесенные инфекционные и инвазионные заболевания, стресс, иммуносупрессивная (химио- и глюкокортикоидная) терапия или длительное лечение антибиотиками. Обычно инвазия развивается на фоне иммунодефицита, нередко врожденного. Среди первичных иммунодефицитов, на фоне которых возникает демодекоз, выделяют дефицит IgA, а также наследственный дефицит иммунитета, опосредованного Т-лимфоцитами. Клещи проводят свой полный жизненный цикл на хозяине, и как только оказываются вне хозяина или даже на поверхности кожи быстро погибают вследствие высыхания. Болеют демодекозом собаки всех возрастов, но максимальный процент заболеваемости отмечается у животных от 6 месяцев до 1 года [1, 2] — это так называемый ювенильный демодекоз. Он возникает обычно у щенков в возрасте до года, и вызван наследственным дефектом в иммунной системе, вследствие чего она становится неспособной контролировать численность клещей. В таком случае количество клещей увеличивается, и они вызывают заболевание.

В зависимости от степени поражения животного различают две формы демодекоза - локальную и генерализованную. Локальная форма (наличие 5 или менее очагов поражения) чаще встречается у щенков и молодых собак не старше 2-х лет. Чаще всего поражения возникают вокруг глаз (образуя весьма характерные демодекозные «очки»), в уголках губ, на морде, шее и передних конечностях. Часто на пораженных участках наблюдается эритема, кожа шелушится, гиперпигментирована, формируются камедоны. Зуд или пиодермия наблюдаются редко, только в тех случаях, когда заболевание развивается в генерализованную форму. При генерализованной форме поражаются

506

значительно большие участки кожи, и процесс часто осложняется бактериальной инфекцией (пиодемодекоз). Пиодерма может быть поверхностной (фолликулит) или глубокой (фурункулез). Глубокая пиодерма может сопровождаться признаками септицемии (лимфаденопатия, лихорадка, анорексия, апатия, почечная недостаточность).

Поражение конечностей (пододемодекоз) может протекать самостоятельно или как часть генерализованного процесса. Кожа пальцев утолщена, гиперпигментирована, в случае фурункулеза образуются фистулы, часто с геморрагическим экссудатом, собака хромает. Кроме того, клещи Dеmodex могут вызывать воспаление наружного уха - отодемодекоз. У собак отодемодекоз является, в основном, частью генерализованного процесса.

По мнению многих зарубежных исследователей, локальная форма ювенильного демодекоза (от 1 до 5 пораженных участков кожи) у молодых собак не требует лечения и проходит самопроизвольно [3, 5]. Целью нашей работы было проследить за развитием локальной формы ювенильного демодекоза без лечения на протяжении 4 месяцев.

Материалы и методы. Работу провели в 2010 — 2014 гг. на 75 домашних собаках разных пород в возрасте от 5 месяцев до 1 года, спонтанно инвазированных демодексами, на базе ветклиники Центра экстренной ветеринарной помощи «Тигренок» в г. Москве. Предварительную зараженность собак определяли по исследованию кожного покрова. Для этого определяли: а) индекс количества клещей; б) клинические признаки у каждого животного.

а) Индекс количества клещей. Для определения уровня инвазии клещом Demodex canis брали глубокие соскобы кожи из 4 - 10 участков тела каждого животного. Дни взятия соскобов: 0, 30, 60, 90 и 120. Участки кожи, с которых брали первые соскобы, регистрировали схематично. Каждый последующий соскоб брали с тех же участков и/или новых появившихся пораженных мест. Соскобы кожи выполняли разовым скальпелем до появления сочащейся из капилляров крови. Каждый кожный соскоб помещали на индивидуальное предметное стекло с минеральным маслом. Стекла имели регистрационные коды - животного и области тела. Каждый образец исследовали под микроскопом на наличие взрослых живых и мертвых клещей, личинок, нимф и яиц.

б) Клинические признаки. Оценку клинических признаков и степени поражения каждого животного проводили в дни взятия соскобов с кожи. Для каждой собаки были оценены и схематично нанесены на силуэты справа и слева следующие параметры: участки тела, покрытые камедонами; участки тела, покрытые чешуйками и корочками; участки тела, потерявшие волосяной покров; покрасневшие и пигментированные участки тела.

При наличии от 1 до 5 пораженных участков кожи у собаки форму демодекоза считали локальной, более 5 — генерализованной.

Результаты. Результаты наблюдений отражены в таблице. За 5 лет мы провели наблюдение за 75 собаками в возрасте до года с локальной формой

507

ювенильного демодекоза и не наблюдали ни одного случая самоизлечения. Наоборот, наши наблюдения показали, что без применения терапии локальная форма демодекоза переходит в генерализованную — через месяц — 25,2%, через 2 месяца — 48,0%, через 3 месяца - 62,7% и через 4 месяца — 82,7% соответственно. Необходимо отметить, что у 73 (97,3%) собак развивалась

Таблица

Развитие локальной формы ювенильного демодекоза у собак в возрасте до года за 4 месяца наблюдений

Год иссле- дова- ния Результаты соскобов с кожи

0-й день 30-й день 60-й день 90-й день 120-й день

Локальная Локальная § X X аЗ СО о со К Ч аЗ Он <D X <D u Локальная § X X аЗ СО о со К Ч аЗ Он <D X <D u Локальная § X X аЗ СО о со К Ч аЗ Он <D X <D u Локальная § X X аЗ СО о со К Ч аЗ Он <D X <D u

2010 12 10 2 7 5 4 8 2 10

2011 21 17 4 12 9 9 12 4 17

2012 10 8 2 6 4 5 5 2 8

2013 15 11 4 8 7 6 9 2 13

2014 17 10 7 6 11 4 13 3 14

Всего за 5 лет(случаев) 75 56 19 39 36 28 47 13 62

в % 100 74,8 25,2 52,0 48,0 37,3 62,7 17,3 82,7

чешуйчатая форма демодекоза, которая относительно легко (в течение 2 — 4 месяцев) поддавалась лечению. И только у 2 (2,7%) собак развивалась пустулезная форма, осложненная бактериальной инфекцией, срок лечения которой составил 9 — 12 месяцев.

Заключение. Локальная форма ювенильного демодекоза у собак самопроизвольно не излечивается, а требует акарицидной терапии. При наблюдении развития локальной формы демодекоза у 75 собак в возрасте до года в течение 4 месяцев без терапии в 82,7% случаев она перешла в генерализованную форму.

508

Литература: 1. Белху Т.Н. //Ветеринарная газета. - 1998, № 23-24 (приложение).- С. 14. 2. Василевич Ф.И., Кириллов А.К. Демодекоз собак: Учебное пособие для высших учебных заведений. - М., 1997. - 49с. 3. Bouerdeau P.J.//Vet. Dermatology. - 2010 - V. 21, N 2. - P. 213 (Abstract). 4. Mueller R.S., Bensignort E., Ferrer L. et al. //Veterinary Dermatology. - 2012. - V. 23, N 2. - P. 86 - 96, E 20 - 21. 5. Scott D.W., Miller W.H., Griffin C.E. Canine demodecosis. In: Muller & Kirk's Small Animal Dermatology, Philadelphia, W.B. Saunders. -2001. - P. 457 - 474.

To the question of juvenile Demodex spp. infection of dogs. Yastreb V.B. All-Russian K.I. Skryabin Scientific Research Institute of Fundamental and Applied Parasitology of Animals and Plants.

Summary. The localized form of juvenile Demodex spp. infection in dogs doesn’t be cured spontaneously and needs acaricidal therapy. According to observations of 75 dogs aged up to 1 year the localized form without therapy in 82,7% of cases has transformed to the generalized form over 4 months.

509