Оценка эффективности эстразина на гормонозависимой аденокарциноме r3327-h и гормононезависимом раке предстательной железы r3327-matlylu крыс линии Copenhagen

40

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ИЗУЧЕНИЕ ПРЕПАРАТОВ

ние per os препарата КС в указанной выше дозе мышам BALB/c вызывало через 4-8 недель статистически достоверное дополнительное образование цитолитических Т-лим-фоцитов (ЦТЛ, Т-киллеров) в СКЛ, цитотоксической активности натуральных киллеров селезенки и перитонеальных макрофагов. В параллельных экспериментах БК, АК и ТФ, введенные мышам BALB/c в различных дозах, вызывали более умеренное изменение цитотоксической активности ЦТЛ и перитонеальных макрофагов, тогда как ТФ в дозе 25 и 50мг/кг практически не оказывал влияния на активность натуральных киллеров селезенки. БК, АК и осо-

бенно препарат КС проявили эффективность при коррекции вторичного иммунодепрессивного состояния у мышей ВАЬВ/с, индуцированных противоопухолевым цитостатиком аранозой. Иммунодепрессия, проявившаяся в снижении пролиферативной активности спленоцитов и образовании Т-киллеров в СКЛ на фоне аранозы, частично или полностью снимались систематическим введением препаратов БК, АК и КС. Назначение препарата КС женщинам с различными формами мастопатии в течение 14-20 дней приводило к коррекции показателей гуморального и клеточного иммунитета.

РАЗРАБОТКА И ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ АПРОБАЦИЯ МЕТОДА КСЕНОВАКЦИНАЦИИ ПРИ МЕЛАНОМЕ

Н. С. Сергеева, С.Е. Северин, И.К. Свиридова, В. К. Сологуб, Е.Ю. Москалева А.В.Родина**, И.А. Родина, В.А. Кирсанова, Н.Н. Волченко*, В.И.Фролов* * Московский научно-исследовательский онкологический институт им. П. А. Герцена, Россия; **Московский научно-исследовательский институт медицинской экологии, Россия.

Задача исследования. Разработка и экспериментальная апробация метода противоопухолевой ксеновакцинации клетками меланомы (Мел) человека, заключенными в полиакриламидный гель (ПААГ), на модели перевивного опухолевого штамма Мел В16 мышей.

Материалы и методы. Мышам - самкам линии ВОР, подкожно вводили 4% ПААГ в объёме 0,5 мл. Через 45-60 дней в гель вводили 2,0х10б клеток Мел человека (первичная клеточная линия 8К.МЕЬ-28 или первичная культура -операционныйг материал клиник МНИОИ им. П. А. Г ер-цена и РОНЦ им. Н. Н.Блохина). Через 60 дней после этого мышам прививали Мел В16 (0,5-1,5х106 клеток). Контролем были группы животных: I - несущих только Мел В16, И- вакцинированных подкожно по той же схеме. На этапах экспериментов изучали цитотоксическую активность (ЦТА) спленоцитов мышей в отношении Мел В16 и проводили гистологические исследования. Эффект ксеновакцинации оценивали по срокам выхода, торможению роста (ТРО) Мел В16 и увеличению средней продолжительности жизни (УСПЖ) животных.

Результаты. Показано, что ксеновакцинация животных клетками Мел человека (первичные или перевивные культуры), заключенными в ПААГ, приводит к двухнедель-

ной задержке выхода 20% Мел В16 и к биологически значимому 050%) ТРО с 7-ых до 24-х суток после прививки В16. Описанный эффект нарастал с уменьшением прививочной дозы В16. Подкожная ксеновакцинация животных оказалась неэффективной. Выявлено, что ксеновакцинация индуцирует ЦТА спленоцитов мышей против В16. Максимальных значений (90%) ЦТА достигает через одну неделю после начала вакцинации животных, а в последующие сроки сохраняется на уровне 45-50%. Мы полагаем, что в течение первых двух недель после вакцинации формируется клон клеток иммунологической памяти, о чем косвенно свидетельствуют данные по исследованию ЦТА рестимулиро-ванных спленоцитов. При морфологическом исследовании геля с заключенными в него клетками - Мел человека, показано формирование соединительнотканной капсулы вокруг геля, обнаружены фиброзные тяжи, разделяющие гель на участки, макрофаги с меланином и лимфоциты.

Выводы. В экспериментальных исследованиях на модели меланомы В16 мышей установлена биологически значимая (по параметру ТРО) противоопухолевая эффективность метода ксеновакцинации путем введения животным ксено-генных опухолевых клеток в ПААГ, вокруг которого предварительно сформирована соединительнотканная капсула.

ОЦЕНКА ЭФФЕКТИВНОСТИ ЭСТРАЗИНА НА ГОРМОНОЗАВИСИМОЙ АДЕНОКАРЦИНОМЕ R3327-H И ГОРМОНОНЕЗАВИСИМОМ РАКЕ ПРЕДСТАТЕЛЬНОЙ ЖЕЛЕЗЫ R3327-MATLYLU КРЫС ЛИНИИ COPENHAGEN

3. С. Смирнова, Т.Ф. Кулагина, И.П. Осетрова, Л.М. Борисова Российский онкологический научный центр им. Н.Н. Блохина РАМН

Целью данного исследования является оценка противоопухолевого действия нового препарата эстразин на перевиваемой гормонозависимой аденокарциноме Dunning R3327-H и низкодифференцированном гормононезависимом раке предстательной железы R3327-MatLyLu крыс линии Copenhagen.

Материалы и методы. Эстразин в лекарственной фор-

ме - свечи для ректального введения вводили внутрибрю-шинно, предварительно растворив их в дистиллированной воде. Исследование проводилось в сравнении с препаратом эстрацит и кастрацией. Аденокарциному R3327-H перевивали подкожно в правый бок крысам-самцам линии Copenhagen. R3327-MATLyLu также перевивали подкожно суспензией, содержащей 200000 клеток в 0,2 мл среды

РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ

№1/том1/2003

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ИЗУЧЕНИЕ ПРЕПАРА ТОВ

199. Терапевтический эффект оценивали по торможению роста опухоли (ТРО,%).

Результаты. С целью прогнозирования эффективности эстразина в клинике была использована аденокарцинома К.3327-Н, которая является адекватной моделью аденокарциномы предстательной железы человека и содержит рецепторы эстрогенов (12,1±1,3 фмоль/мг белка) и андрогенов (39,7±1,7 фмоль/мг белка). На І13327-Н эстразин в дозе 100 мг/кг при введении в течение 5 дней на 8 неделе опыта проявил статистически значимый терапевтический эффект (ТРО=64%). Постепенно терапевтический эффект эстразина нарастал и к 17 неделе опыта составлял 88% ТРО. Противоопухолевый эффект эстрацита во время его введения был несколько выше действия эстразина. Однако максимальный терапевтический эффект этого препарата был выявлен на 17 неделе опыта и составлял 70% торможения роста опухоли, который стати-стичеки был ниже действия эстразина. Кастрация приво-

дила к торможению роста Ю327-Н уже через 2 недели после хирургического вмешательства. Торможение роста опухоли после кастрации на всем протяжении опыта составляло 63-76%).

Кроме того показано, что эстразин оказывал пограничный противоопухолевый эффект в отношении низкодифференцированного гормононезависимого рака предстательной железы К3327-МАТЬуІді (ТРО=43%), тогда как эстрацит тормозил рост этой опухоли только на 20%.

Заключение. Таким образом, результаты настоящего исследования показывают, что эстразин обладает отсроченным и пролонгированным противоопухолевым действием на гормонозависимой аденокарциноме предстательной железы К3327-Н. По терапевтическому эффекту на Я3327-Н эстразин превосходит действие эстрогеноцитос-татика эстрацит и кастрации. Эти данные позволяют рекомендовать его для лечения гормонозависимой аденокарциномы предстательной железы человека.

СИНТЕЗ И ИЗУЧЕНИЕ ЦИТОТОКСИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ МОДИФИЦИРОВАННЫХ ФРАГМЕНТОВ СИГНАЛЬНОГО БЕЛКА ОКВ-2

Л.И. Смирнова, А.П. Смирнова, С.В. Устинкина, Н.К. Власенкова, Г. К. Герасимова Российский онкологический научный центр им. Н.Н. Блохина РАМН

Успехи фундаментальной медико-биологической науки в изучении механизма злокачественной трансформации клеток открыли новые мишени воздействия потенциальных противоопухолевых средств. Данные о важной роли белка Grb-2 в запуске так называемых Ras-зависимых сигнальных путей, связанных с активацией протоонкогенов, послужили основанием для настоящей работы.

Белок Grb-2 способен к высокоаффинному связыванию с фосфотирозиновыми участками рецепторов, специфичность которого определяется небольшой последовательностью аминокислотных остатков. Генетические исследования показали, что направленные мутации доменов Grb-2 белка или фосфотирозиновых участков их лигандов могут ослабить или полностью блокировать Ras-зависимые сигнальные пути в опухолевых клетках.

В этой связи кажется возможной блокада передачи сигнала от рецептора к Ras-белку с помощью коротких олигопептидов.

Проанализировав литературные данные о взаимодействии белка Grb-2 с фосфотирозиновыми участками рецепторов, мы остановили свой выбор на фрагменте Ь,Зацепи аминокислотной последовательности SH2 домена Grb-2, содержащей 7 аминокислот.

Модификация этого фрагмента предполагала замену аминокислот по принципу их комплиментарности, а с целью увеличения ферментативной устойчивости пептида замену Ь-фенилаланина в положении 2 на неприродную аминокислоту Б-фенил аланина.

В целом классическими методами пептидной химии синтезировано и охарактеризовано 11 коротких пептидов, содержащих от 3-х до 7-ми аминокислот. Цитоток-сические свойства синтезированных соединений были изучены в РОНЦ РАМН на культурах клеток меланомы человека линии МБ и рака яичника СаОу. Было показано, что гептапептиды - это наименьшая аминокислотная последовательность, которая привела к появлению цитотоксичности.

Эти наблюдения, а также литературные данные о взаимодействии положительно заряженных групп фрагментов сигнального белка ОгЬ-2 с отрицательно заряженными фосфатными группами участков рецепторов являются предпосылками для продолжения поиска.

Предполагается модификация исследуемого фрагмента за счет дополнительного введения в него аминокислот основного характера аргинина и лизина и при необходимости удлинения аминокислотной последовательности.

ПРОЛОНГИРОВАННАЯ И МНОГОКУРСОВАЯ ФОТО ДИНАМИЧЕСКАЯ ТЕРАПИЯ.

В. В. Соколов, В. И. Чиссов, Е.В. Филоненко, Д.Г. Су хин, Е.С. Карпова, Л. В. Телегина, Р. И. Якубовская Московский научно-исследовательский онкологический институт им. П.А.Герцена.

В МНИОИ им. П.А. Герцена в 1993 году были начаты ние фотосенсибилизатора и фракционирование световой исследования по разработке и клиническому применению дозы с ежедневным повторением сеансов ФДТ в течение 7 -методов пролонгированной (ПрФДТ) и многокурсовой 10 и более дней. Целью многократного низкодозного све-(МкФДТ) ФДТ. ПрФДТ предполагает однократное введе- тового воздействия является усиление апоптоза, селектив-

Ш/том1/2003

РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ