Изучение иммунологических механизмов фотодинамической терапии опухолей

молекулы и цитотоксического агента. Из цитотоксичес-ких агентов наиболее часто применяются растительные рибосоминактивирующие белки второго типа (РИБП), к которым относят рицин (1160) и вискумин (МЬI). Несмотря на то, что Я60 синтезируются в семенах клещевины, а МЫ - в листьях омелы белой, оба белка имеют сходную третичную структуру и механизм действия. В состав МЬ1 и 1160 входит связывающая (В) и каталитическая (А) субъединицы. В-субъединица имеет галактозосвязывающие центры и взаимодействует с клеточными рецепторами, содержащими терминальную галактозу. Каталитическая субъединица токсинов проникает в цитоплазму и модифицируете Б РНК эукариотических клеток, останавливая синтез белка на уровне трансляции. Замена В-цепи на векторную молекулу в ряде случаев позволяет получить высокоэффективный препарат направленного действия.

Цель работы: Иследование специфической цитоток-сической активности полученных иммунотоксинов на основе МА против высокомолекулярного меланомо-ас-социироваиного антигена (НМ\№) и А-цепей растительных токсинов.

Для достижения цели были поставлены следующие задачи:

1. Исследование специфичности взаимодействия ИТ с клетками - мишенями при помощи непрямой реакции иммунофлуоресценцип.

2. Изучение циготоксической активности ИТ при помощи цитотоксического МТТ-теста.

Материалы и методы. Четыре иммунотоксина получены в 1998 г. коныогированием моноклональных антител 763.74 изотипа ^01 и МА225.28 изотипа \gG2z против высокомолекулярного меланомо-ассоциированного антигена (получены и любезно предоставлены нам проф. Солдано Ферроне, Нью-Йоркский медицинский колледж) и А-цепей растительных токсинов вискумина и рицина.

В работе были использованы клеточные линии меланомы человека: Ме1иг, Со1о38, Ро1, любезно предоставленные нам проф. Солдано Ферроне (Ныо-Йоркский медицинский колледж, США), ЯМ 30, любезно предоставленная членом датского онкологического общества Киркиным А.ф. В качестве контрольных — антигеннега-тивных — клеточных линий были использованы лимфоб-ластоидные культуры НЬ60, Ы4.

Непрямая иммунофлуоресценция на стеклах использовалась для проверки специфичности взаимодействия иммунотоксинов с клетками-мишенями. Реакцию оценивали при помощи флуоресцентного микроскопа (Ьепг, Германия), при 250х или400х увеличении.

Цитотоксическое действие препаратов оценивали по выживаемости клеток согласно методике, описанной ранее [МоэБтап, 1983]. Для сравнения активности различных препаратов определяли дозу токсического агента, вызывающую гибель 50% клеток или ЛД50. За 100% принимали интенсивность окрашивания клеток, которые культивировались без токсинов.

Результаты. Методом непрямой иммунофлуоресценции было показано, что иммунотоксины связыва-

ются с поверхностью клеток-мишеней (100% мембранная окраска клеток линий Ме1иг, Со1о38. Ро 1, Г:М 30) н не взаимодействуют с контрольными линиями. Цитоток-сический тест показал, что полученные нами конъюгаты обладают избирательным цнтотоксическим действием по отношению к клеткам-мишеням. В качестве мишеней были выбраны клетки линии РМ 30. ЛД50 для иммунотоксинов 763.7411ТА, 763.74МЬА, 225.28ЯТА. 225.28МЬА равнялись соответственно: 10 'М, 2х 10 "’М, Ю'*М, 2х 10_УМ. ЛД50 нативных токсинов рицина и вискумина— Ю'|2М и 10'11 соответственно. При сравнении показателей видно, что ИТ на основе МА 763.74 и Д-цепи вискумина сопоставимы по активности с цельными токсинами, что делает его перспективным объектом в дальнейших исследованиях, связанных с созданием им-мунотерапевтических препаратов направленного действия. Другие ИТ из группы исследованных показали меньшую цитотоксичность. И тем не менее, эти белки в дальнейшем, также планируется использовать в исследованиях.

Изучение иммунологических механизмов фотодинамической терапии опухолей

Огурцов Р.П., Рыльков В.В., Пузырёва В.П.,

Стуков А.Н., Ивашкова Е.В., Кузнецова С.В.

Научно-исследовательский институт экспериментальной медицины РА МН, ВИЦ Государственный оптический институт им. С. И. Вавилова

Для лечения онкологических больных применяют фо-тодинамическую терапию (ФДТ). В основе метода ФДТ лежит идея о фотохимической деструкции опухолевых клеток. Для этого в организм вводят краситель-фотосеи-сибилизатор (ФС), избирательно накапливающийся в опухолевых клетках. В момент максимального накопления ФС производится облучение опухоли светом в полосе поглощения красителя. Фотовозбужденный краситель оказывает токсическое действие на опухолевые клетки, и опухоль рассасывается. Однако может существовать и другая причина положительного эффекта ФДТ. Так, нами получен дистанционный эффект ФДТ. При введении ФС и местном воздействии оптического излучения (ОИ) на опухоль (карцинома Эрлиха) одной из задних лай мыши наблюдали деградацию опухоли и на другой, необлученной лапе. Можно думать, что наблюдаемый эффект не связан с прямым действием ОИ на опухолевые клетки, а опосредован через систему противоопухолевого иммунитета.

Исследование проводили при внутрикожном введении клеток карциномы Эрлиха в подушечки задних лап мышей СВА, использовании ФС хлорина Р6, или фото-сана, (50мкг/мл) и облучении криптон-ионовым лазером (647 нм, 90 Дж/см). Коэффициент торможения развития опухоли при использовании хлорина Р6, или фо-тосана составил 0,062 день-1 и 0,059 день-1 против 0,101

день-1 в контрольной группе, не получавшей ФС. При этом отмечали усиление активности естественных киллеров и продукции фактора некроза опухоли (ФИО) мо-нонуклеарами в организме облученных мышей. Наблюдали также подобный ингибирующий эффект на пролиферацию клеток мислолейкоза человека (К-562) за счет усиления активности естественных киллеров и продукции мононуклеарами ФНО при облучении смешанной культуры клеток К-562 и спленоцитов мышей СВА или мононуклеаров человека. При этом стимуляцию естественных киллеров отмечали при дозе ФС 1мкг/мл, начиная с интенсивности ОИ 0,65 Дж/см, а при дозе 3 мкг/ мл — 0,195 Дж/см.

Изучение воздействия хлорина Р6, или фотосана, на спонтанный синтез ФНО — в том случае, если после инкубации клеток-мишеней и мононуклеаров человека с ФС были облучены только мононуклеары показало, что спонтанная продукция ФНО при облучении “красным” светом усиливается при использовании ФС в дозе 1-3 мкг/мл и интенсивности излучения 0,9359 — 3,1197 Дж/см и 0,312 Дж/см соответственно.

Определение простат-специфического антигена в комплексной диагностике новообразований предстательной железы

Панин А.Г., ГаПковая Л.Б., Ковыршина Л.А.,

Батько А.Б., СтецшсО.В.,Топузов М.Э.,Крапнвка H.A.

Санкт-Петербургская Государственная медицинская академия им. И. И. Мечникова

Рак предстательной железы (РПЖ) в настоящее время занимает второе место среди причин смерти мужчин от злокачественных новообразований. Уровень смертности от РПЖ колеблется в мировой популяции от 1,3 до 22,1 на 100000 мужчин. В большинстве развитых стран на это заболевание приходится 1% всех смертей среди мужчин и около 13% всей смертей от рака. В России за 1995 год выявлено 7798 больных РПЖ, в том числе в Санкт-Петербурге - 368 (5% всех опухолевых заболеваний мужчин). Сложность диагностики РПЖ обусловлена тем, что на начальных стадиях (Т,,Т2) заболевание имеет скудные клинические проявления, и для установления диагноза требуются специальные исследования. Ранняя диагностика РПЖ включает определение уровня простат-специфического антигена (ПСА).

В клинике урологии СПбГМА им. И.И. Мечникова у всех больных с новообразованиями предстательной железы (ПЖ), наряду с обязательными урологическими исследованиями, производится определение уровня общего ПСА в сыворотке крови. Определение производилось с помощью имуноферментной тест-системы фирмы VEDALAB (Франция). В период с 1997 по 1998 годы было проведено 118 таких исследований. Ряду

больных (15%) в дальнейшем было выполнено оперативное вмешательство (аденомэктомия, эпицистосто-мия с трансвезикальной биопсией ПЖ) с последующим гистологическим исследованием материала. 5 больным, у которых уровень ПСА превышал показатели нормы, была проведена пункционная биопсия ПЖ при помощи аппарата 11готац, а также исследование соотношения свободного и связанного ПСА. В 3 случаях выявлен РПЖ.

Определенный интерес представляет сравнение уровня ПСА с данными гистологических исследований. При концентрации ПСА в пределах от 0,83 до 7,29 морфологически определяется нодулярная гиперплазия ПЖ. В некоторых случаях повышение уровня ПСА достигало 43,63, однако данных за малипшзацию процесса при гистологическом исследовании выявлено не было. Такое увеличение ПСА связано с сопутствующим воспалительным процессом в ткани ПЖ (гистологически — нодулярная гиперплазия + хронический простатит), с наличием постоянного уретрального катетера или эпицистостомы, а также с проведением исследования после ректального исследования. У больных с уровнем ПСА выше 53,01 гистологически подтверждено наличие РПЖ (лимфоплазмоцитарный и (или) солидный железистый рак). При этом клинических проявлений РПЖ у больных не было.

Таким образом, исследование ПСА позволяет на ранних стадиях выявить РПЖ. С особой осторожч гостью следует подходить к интерпретации анализов у больных с большим объемом остаточной мочи и эпицистостомн-ей, так как наличие хронического воспаления приводит к увеличению ПСА в 2-3 и более раз.

Иммунофенотипическая характеристика лимфоцитов костного мозга при гиперплазии лимфатических узлов различной природы

Пантелеева Е.С., Кузьмина Е.Г.,Непрмна Г.С., Богатырева Т.И..

Медицинский радиологический научный центр РАМН Обнинск, Россия

Цель работы — изучение особенностей фенотипа поверхностных маркеров лимфоидных элементов костного мозга и периферической крови у 26 больных с гиперплазией периферических лимфатических узлов различной природы, поступивших в гематологическое отделение МРНЦРАМН с подозрением на гемобластоз, из них у 12 пациентов установлен окончательный диагноз: лимфаденит (у 7 — реактивный , у 5 — туберкулезный), у 7 выявлены соматические заболевания (пиелонефрит, язвенная болезнь и т.д.), и у 7 — метастазы рака в лимфатические узлы.

Иммунофенотипнрование нативных лимфоидных элементов костного мозга и периферической крови про-