СПОСОБ ОЦЕНКИ НАРУШЕНИЯ МИКРОВЯЗКОСТИ МЕМБРАН ЭРИТРОЦИТОВ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ БЕРЕМЕННЫХ НА ТРЕТЬЕМ ТРИМЕСТРЕ ГЕСТАЦИИ, ПРИ ОБОСТРЕНИИ ЦИТОМЕГАЛОВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИИ
METHOD OF ESTIMATING IMPAIRMENT OF MICROVISCOSITY OF MEMBRANES OF PERIPHERAL BLOOD ERYTHROCYTES IN PREGNANT WOMEN IN THIRD TRIMESTER OF GESTATION IN CASE OF CYTOMEGALOVIRUS INFECTION AGGRAVATION

В эритроцитах периферической крови источником энергии является аденозинтрифосфат, который образуется при участии аденилатциклазы путем превращения АМФ в АТФ и, включаясь в реакции гликолиза, переходит в макроэргическое соединение - аденозинтрифосфат (АТФ).
АТФ имеет для эритроцитов большое значение, поскольку его энергия используется для активного транспорта катионов через клеточную мембрану и поддержания соотношения между ними калия и натрия [6]. АТФ обеспечивает целостность мембран, поскольку взаимоотношения между липид-белковыми элементами выполняются за счет энергии АТФ эритроцитов [1, 5]. В доступной литературе нет сведений, касающихся влияния цитомегаловирусной инфекции на микровязкость мембран эритроцитов при снижении аденозинтрифосфата в эритроцитах в период гестации.
Цель исследования - выяснить влияние цитомегаловирусной инфекции на энергетическую функцию эритроцитов периферической крови у беременных, которая отражается на изменении микровязкости мембран эритроцитов.
Заявленный способ имеет следующие приемы:
1. Обследовано 40 беременных на сроке гестации 20-22 недели в возрасте 18-25 лет с хронической цитомегаловирусной инфекцией (ЦМВИ) в стадии обострения (основная группа) и 15 беременных на тех же сроках гестации без патологии (контрольная группа). У беременных симптоматически ЦМВИ проявлялась в виде острого респираторного заболевания, сопровождающегося ринофарингитом. Клинический диагноз - обострение ЦМВИ - устанавливался при комплексном исследовании периферической крови на наличие IgM или четырехкратного и более нарастания титра антител IgG в парных сыворотках в динамике через 10 дней, индекса авидности - более 65%, а также ДНК ЦМВ. Исследования проводились с учетом требований Хельсинкской декларации Всемирной медицинской ассоциации «Этические принципы проведения научных исследований с учетом человека» с поправками 2000 г. и правилами клинической практики в Российской Федерации, утвержденными приказом Министерства РФ №266 от 19.06.2003 г.
Верификация ЦМВ, определение типоспецифических антител, индекса авидности осуществлялись методами ИФА на спектрофотометре «Stat Fax 2100» (USA) с использованием тест-систем ЗАО «Вектор-Бест» (Новосибирск); выявление ДНК ЦМВ методами ПЦР на аппарате ДТ-96 с использованием наборов НПО «ДНК-технология» (Москва).
ЭКС
470
395
2. Измерение микровязкости мембран эритроцитов проводили методом латеральной диффузии гидрофобного флюоресцентного зонда пирена. Определение микровязкости основано на образовании эксимеров (активных димеров) пирена в липидном окружении [2, 3]. Флюоресценцию пирена измеряли спектрофлюорометрически на спектрофлюориметре «Hitachi» (Япония). Для определения микровязкости липидного бислоя находили интенсивность флюоресценции или свечение пирена при длине волны возбуждения 334 нм, длина волны мономеров - 395 нм, длина волны эксимеров - 470 нм. Для определения микровязкости зоны липид-белковых контактов длина волны возбуждения - 286 нм, длина волны мономеров - 395 нм, длина волны эксимеров - 470 нм. Оценка микровязкости основывается на вычислении коэффициента эксимеризации пирена (К=F/F), который равен отношению интенсивности флюоресценции эксимеров к интенсивности флюоресценции мономеров. Коэффициент эксимеризации находится в обратной зависимости от микровязкости и обозначается как Fэ/Fм.
3. Содержание АТФ определяли по прописи Лугановой И.С. и Блиновой М.Н. [4].
В наших исследованиях отмечалось, что снижение содержания в эритроцитах АТФ оказывало влияние на микровязкость мембран. При обострении цитомегаловирусной инфекции в третьем триместре гестации до титра 1:1600 количество АТФ в эритроцитах снижалось до 0,40±0,08 мкмоль/мл (контроль - 0,98±0,07 мкмоль/мл). При таком подавлении энергетического запаса в эритроцитах отмечалось повышение микровязкости в их мембранах. Коэффициент эксимеризации пирена, определяющий микровязкость, составил в липидном бислое 0,59±0,006 Fэ/Fм (контроль - 0,86±0,003 Fэ/Fм); в белок-липидном слое до 0,70±0,004 F3/Fм (контроль - 1,1±0,005 Fэ/Fм), что создает угрозу нарушения устойчивости мембран эритроцитов.
Литература
1. Ворбьев А.И. Руководство по гематологии. // -М: Изд. «Ньюдиамед», 2007.
2. Добрецов Г.Е. Флуоресцентные зонды в исследовании клеток, мембран и липопротеинов // -М.: Наука, 1989. - С.206.
3. Ишутина Н.А., Дорофиенко Н.Н., Андриевская И.А., Довжикова И.В., Болелова С.М. Изменение микровязкости мембран эритроцитов крови у беременных, инфицированных вирусом герпеса. // Бюл. Физиол. и патол. Дыхания СО РАМН, -Благовещенск, 2006. - Вып. 23 (приложение). - С.16-18.
4. Луганова И.С. Блинова М.Н. Определение 2,3-дифосфоглицериновой кислоты неэкзиматическим методом и содержание 2,3-дифосфоглицерата и АТФ в эритроцитах больных хроническим лимфолейкозом. // Лабораторное дело. - 1975. №11. - С.625-654.
5. Покровский А.А. Биохимические методы исследования. // Справочник. - М.: «Медицина», 1969. - С.337.
6. Федоров Н.А. Нормальное кроветворение и его регуляция. // -М.: «Медицина», 1976. - С.541.
7. Bishop Ch. Overall red cell metabolism. In: The red blood cell. Ed. Bishop Ch. and Surgenor D. New York, 1964, P. 147.