Изучение на основе нанотехнологий особенностей патогенеза и разработка эффективных способов лечения и диагностики трихинеллеза, описторхоза и трихоцефалеза человека

ИЗУЧЕНИЕ НА ОСНОВЕ НАНОТЕХНОЛОГИЙ ОСОБЕННОСТЕЙ

ПАТОГЕНЕЗА И РАЗРАБОТКА ЭФФЕКТИВНЫХ СПОСОБОВ ЛЕЧЕНИЯ И ДИАГНОСТИКИ ТРИХИНЕЛЛЕЗА, ОПИСТОРХОЗА И ТРИХОЦЕФАЛЕЗА ЧЕЛОВЕКА

Бекиш В.Я., Зорина В.В., Кужель Д.К.

УО “Витебский государственный медицинский университет”, Беларусь

Введение. По данным ВОЗ, паразитарными болезнями в мире поражено более 4,5 миллиардов людей, причем на долю гельминтозов приходится 99% всех паразитозов. Инвазионные заболевания могут способствовать развитию тяжелых осложнений, иногда с летальным исходом.

Цель исследования - изучить на основе ДНК технологий особенности патогенеза и разработать оценку эффективности лечения и диагностики трихинеллеза, описторхоза и трихоцефалеза человека.

Материалы и методы. Объектами исследования были: трихинеллы, их инвазионные личинки; описторхисы, их метацеркарии; власоглавы, их инвазионные яйца; мыши-самцы линии СВА в количестве 140 особей; крысы белые беспородные (самки, самцы) в количестве 213 особей; золотистые хомяки в количестве 305 особей; кровь 36 пациентов с диагнозом -трихинеллез, 28 - описторхоз, 23 - трихоцефалез и 35 доноров крови; кровь, фекалии 88211 пациентов, сыворотка крови 3400 пациентов, обследуемых на гельминтозы. Использовали паразитологические, цитогенетические,

морфологические методы исследований.

Результаты. Установлено, что метаболиты трихинелл во время их высокой биологической активности обладают гено- и цитотоксическим воздействиями на соматические ткани хозяина, вызывая рост одноцепочечных разрывов, щелочно-лабильных сайтов ядерной молекулы ДНК, апоптотических клеток в костном мозге. Изменения наблюдаются при тяжелом трихинеллезе на кишечной, а при легком, среднем, тяжелом - на миграционной стадиях инвазии с максимальной выраженностью этих эффектов. Гено- и цитотоксическое влияния метаболитов трихинелл усиливаются при увеличении дозы введенного инвазионного материала при заражении.

Мариты кошачьего сосальщика обладают генотоксическим воздействием на соматические клетки золотистых хомяков. Генотоксическое воздействие в клетках крови животных наблюдается на 7, 14, 21, 28, 35, 60, 90, 120 и 150-й дни инвазии с максимальной выраженностью в 8,2 раза на 14-21-й дни инвазии. В клетках крови, костного мозга и печени животных при описторхозе повышается уровень апоптотических клеток на 7, 14, 21, 28, 35, 60, 90, 120 и 150-й дни инвазии с наибольшими изменениями на 21-28-й дни инвазии.

Метаболиты власоглавов обладают генотоксическим воздействием на соматические клетки золотистых хомяков с 30 по 60-й день инвазии с максимальным ростом процента поврежденной ДНК клеток крови и костного

33

мозга в 10,35 раз на 30-й день после заражения. В клетках крови и костного мозга животных при экспериментальном трихоцефалезе повышается уровень апоптотических клеток на 30, 40, 60-й дни инвазии с максимальной выраженностью (в 4,3 раза) на 30-й день после заражения.

Трехкратное применение албендазола либо мебендазола для терапии трихинеллеза у беременных самок крыс не снижает гено- и цитотоксических эффектов инвазии в клетках костного мозга и эмбрионов, а также приводит к достоверному повышению как пред-, так и постимплантационной гибели эмбрионов в сравнении с группами интактного контроля и зараженных не леченных животных. Применение албендазола или мебендазола в сочетании с ибупрофеном, фенкаролом и комплексом витаминов антиоксидантного характера с селеном не показало достоверных отличий уровней пред- и постимплантационной гибели от контрольного уровня, снизило гено- и цитотоксический эффекты в соматических и эмбриональных клетках хозяина до показателей интактного контроля.

Однократное применение празиквантела для терапии описторхоза у золотистых хомяков снижает генотоксический эффект инвазии и не изменяет цитотоксическое воздействие паразитов в клетках печени и крови в сравнении с зараженными не леченными животными. Специфическая терапия не нормализует высокие уровни поврежденной ДНК клеток крови и печени и их апоптоза по сравнению с показателями интактного контроля. Применение празиквантела в сочетании с ибупрофеном и комплексом витаминов антиоксидантного характера с селеном при терапии экспериментального описторхоза снижает гено- и цитотоксический эффекты инвазии в соматических клетках хозяина до показателей интактного контроля.

Трихинеллез средней тяжести у человека сопровождается гено- и цитотоксическим эффектами в лимфоцитах периферической крови больных, который характеризуется ростом количества поврежденной ядерной ДНК до 9,84% и апоптотических клеток до 8,15%. Применение мебендазола или албендазола в течение 14 дней для терапии трихинеллеза средней тяжести, не полностью элиминирует симптомы инвазии (эозинофилия, мышечные боли, аллергическая сыпь, отеки), приводит к снижению генотоксических и цитотоксических эффектов в лимфоцитах крови больных, но эти величины достоверно превышают показатели доноров крови. Комбинированное лечение албендазолом (7 дней) с ибупрофеном (5 дней) и комплексом витаминов с Se (7 дней) больных трихинеллезом средней степени тяжести служит эффективным способом защиты генома человека, так как приводит к снижению уровней первичных повреждений ДНК и апоптотических клеток до показателей доноров крови, а также приводит к полной элиминации основных симптомов заболевания.

Инвазия кошачьими сосальщиками у человека сопровождается гено- и цитотоксическим эффектами в лимфоцитах периферической крови пациентов, которае характеризуется ростом количества одноцепочечных разрывов, щелочно-лабильных сайтов ядерной ДНК до 5,16% и апоптотических клеток до

34

3,4 %. Монотерапия празиквантелом при лечении описторхоза не снижает гено-и цитотоксические эффекты в лимфоцитах крови пациентов, а также в 50% случаев для устранения основных симптомов заболевания, требует повторного назначения антигельминтика. Комбинированное лечение описторхоза празиквантелом с ибупрофеном и комплексом витаминов С, Е, Р-каротин с Se приводит к полной элиминации клинических и лабораторных проявлений инвазии, не требует проведения повторных курсов лечения, а также эффективно защищает геном пациентов с описторхозом, так как приводит к снижению уровней первичных повреждений ДНК и апоптотических клеток до показателей доноров крови.

Лечение трихоцефалеза мебендазолом с ибупрофеном и комплексом витаминов с селеном не может полностью снизить генотоксический эффект инвазии власоглавами в лимфоцитах крови человека, а также добиться полной дегельминтизации и устранения симптомов заболевания. Комбинированное лечение пациентов с трихоцефалезом албендазолом с ибупрофеном и комплексом витаминов С, Е, Р-каротин с селеном наиболее эффективный способ защиты генома. Эта схема терапии приводила к снижению уровней первичных повреждений ДНК и апоптотических клеток до показателей доноров крови, а также к полной элиминации клинических и лабораторных проявлений инвазии.

При серологическом обследовании лиц, трихинеллез легкой степени или перекрестные реакции наблюдаются в 0,74% случаев и 4,5% пациентов являются сероположительными по трихинеллезу. Среди сероположительных пациентов (титр 1:800 и выше) только 89,7% имеют клинически подтвержденный диагноз «трихинеллез средней тяжести».

При копроовоскопическом обследовании лиц, яйца кошачьего сосальщика выявляются в 0,16% случаев. У всех пациентов диагноз «описторхоз средней тяжести» был выставлен клинически. При серологическом обследовании лиц, в 0,63% выявляется хронический описторхоз или проявление перекрестных реакций и в 0,77% случаев описторхозу. У пациентов с подтвержденным копроовоскопически и клинически диагнозом «описторхоз средней тяжести» титры антител 1:800 и более выявляются только в 57,5% случаев. Среди жителей г. Витебска, Витебской области, а также пациентов Гомельской областной клинической инфекционной больницы и Жлобинской ЦРБ в 2008-2012 гг. трихоцефалез встречался в 0,27% случаев. Частота встречаемости трихоцефалеза, установленная нами, соответствует общереспубликанской за последние 10 лет, что показывает высокую значимость копроовоскопической диагностики заболевания.

Based on nanotechnologies investigation of pathogenesis peculiarities and development of effective methods of medication and diagnostics of Trichinella spiralis, Opisthorchis felineus and Trichocephalus trichiurus infections. Bekish V.Ya., Zorina V.V., Kuzhel D.K. Vitebsk State Medical University, Byelorussia.

35

Summary. One represent the analysis of data on pathogenesis investigation using DNA thechnology as well as development of evaluation of results of medication and diagnosis of T. spiralis, O. felineus and T. trichiurus infections of humans.

36