Прогностическая значимость маркеров пролиферации, ангио- и лимфангиогенеза при гиперкератозе и плоскоклеточном раке нижней губы

МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ»

9

страта для тимидинкиназы — маркера пролиферации. Действительно, установлена прямая связь анаболической активности ТФ с уровнями экспрессии Ki-67 в АК (показатель корреляции Спирмена р = 0,415; p < 0,05). В ряде опухолей (преимущественно при раке легкого), где, наоборот, преобладала катаболическая активность ТФ, создавались индивидуальные условия для накопления продуктов реакции — тимина и 2-дезокси-Б-рибозы (стимуляторов ангиогенеза). Между индивидуальными значениями катаболической активности ТФ в этой выборке и уровнями экспрессии CD34 установлена прямая корреляционная связь (р = 0,668; p < 0,05).

Заключение. Одновременное исследование видов активности ТФ индивидуально в АК различной локализации может служить биохимическим критерием выбора фтор-пиримидина. Так, АК с высокой анаболической активностью ТФ способны активно метаболизировать 5-ФУ. В то же время преобладание фосфорилазной активности обеспечит трансформацию, эффекты предшественников, например капецитабина. Также может быть показана и ан-тиангиогенная терапия, так как катаболическая активность ТФ коррелирует с активацией ангиогенеза.

А.А. Балакина, В.А. Мумятова, В.Д. Сень, А.А. Терентьев ВЛИЯНИЕ АМИНОНИТРОКСИЛЬНЫХ КОМПЛЕКСОВ ПЛАТИНЫ (IV) НА ОКСИДАТИВНЫЙ СТАТУС КЛЕТОК ЛИНИИ MCF-7 ПРИ ИНГИБИРОВАНИИ ФУНКЦИЙ БЕЛКА Р53

ФГБУНИПХФ РАН, Черноголовка, Московская область

Введение. В настоящее время побочные эффекты и высокую токсичность противоопухолевых препаратов платиновой группы связывают с нарушениями про- и антиокси-дантного баланса и накоплением активных форм кислорода (АФК). Нитроксильные радикалы являются антиоксидан-тами и проявляют разнообразную биологическую активность: способны реагировать с активными радикалами, выступать в качестве катализаторов редокс-реакций и ми-метиков ферментативных систем. В связи с этим актуальным является изучение роли нитроксильных радикалов в составе платина (IV) — нитроксильных комплексов в механизмах противоопухолевого действия.

Цель исследования — изучение активности антиокси-дантной системы в ответ на действие аминонитроксильных комплексов платины различной структуры в условиях подавления функций супрессора опухолей р53.

Материалы и методы. Методология работы включает использование культуры клеток аденокарциномы молочной железы человека MCF-7. Клетки обрабатывали исследуемыми комплексами в присутствии пифитрина-а — ингибитора р53, а затем исследовали экспрессию генов SOD2, GPX1, P21 и определяли содержание маркеров окислительного стресса. Экспрессию генов изучали методом полимеразной цепной реакции в реальном времени, восстановленный глу-татион определяли по реакции с 5,5'-дитиобис(2-нитробен-зойной кислотой), малоновый диальдегид (МДА) — по реакции с тиобарбитуровой кислотой.

Результаты. Показано, что все изученные комплексы вызывали накопление МДА в опухолевых клетках после 12 ч действия. Обнаруженное увеличение показателя в 3—4 раза по сравнению с контролем говорит об индукции обра-

зования АФК и развитии окислительного стресса. Выявлено, что комплексы платины (IV) не оказывают существенного влияния на содержание восстановленного глутатиона в опухолевых клетках. Однако ингибирование белка р53 вызывало значительное снижение концентрации глутати-она как в контроле, так и в экспериментальных образцах. Обнаружено, что изученные комплексы индуцировали существенное увеличение экспрессии генов GPX1, SOD2 и P21. Подавление функций р53 приводило к значительному снижению экспрессии изученных генов.

Заключение. Выявленная взаимосвязь между подавлением функций р53 и изменениями в функционировании антиоксидантной системы говорит о важной роли белка р53 в механизмах клеточного ответа на уровне окислительно-восстановительного баланса при действии аминони-троксильных комплексов платины.

Н.П. Бгатова, И. С. Куликова, Ю.С. Гаврилова, Ю.И. Бородин, В. И. Коненков

ПРОГНОСТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ МАРКЕРОВ ПРОЛИФЕРАЦИИ, АНГИО- И ЛИМФАНГИОГЕНЕЗА ПРИ ГИПЕРКЕРАТОЗЕ И ПЛОСКОКЛЕТОЧНОМ РАКЕ НИЖНЕЙ ГУБЫ

НИИКЭЛ, Новосибирск

Введение. В последнее время возросла заболеваемость плоскоклеточным раком нижней губы (РНГ). По данным статистики, рак губы диагностируется чаще всего на III— IV стадиях. Неблагоприятный прогноз плоскоклеточного РНГ связан с метастазированием в регионарные лимфатические узлы. Для данной онкопатологии актуальной является ранняя диагностика злокачественного роста, которая позволит избежать травмирующих оперативных вмешательств и возможного метастазирования.

Цель исследования — выявление лимфангиогенеза, ан-гиогенеза и пролиферативной активности клеток при гиперкератозе, плоскоклеточном ороговевающем и неорого-вевающем РНГ.

Материалы и методы. В исследование были включены 3 группы больных: 1-я группа была представлена 22 пациентами с гиперкератозом нижней губы; 2-я состояла из 15 больных с плоскоклеточным неороговевающим РНГ I стадии (T1N0M0); 3-я группа была образована 34 лицами с плоскоклеточным ороговевающим РНГ I стадии (T1N0M0). Биоптаты нижней губы из очага поражения обрабатывали по стандартной методике для получения парафиновых срезов для иммуногистохимического окрашивания. Для выявления маркеров пролиферации, кровеносных и лимфатических сосудов использовали моноклональные антитела к К1-67 (Novocastra), CD34, Podoplanin (Monosan), LYVE-1 (Abcam). Оценивали объемную плотность кровеносных и лимфатических сосудов, численную плотность пролифе-рирующих клеток.

Результаты. Наименьшие значения объемной плотности CD34+-кровеносных, LYVE-1+- и Podoplanin+-лимфа-тических сосудов и численной плотности пролиферирующих клеток (Кь67+-клеток) были выявлены при гиперкератозе (предраке) нижней губы. Было показано, что при неорого-вевающей форме плоскоклеточного РНГ в опухолевом узле на 88 % больше объемная плотность CD34+-кровенос-

№1 / том 15 / 2016

РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ

10 МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ»

ных сосудов по сравнению с ороговевающей формой рака. Также было отмечено отсутствие темновой токсичности При обеих формах плоскоклеточного РНГ обнаружена на культуре клеток HeLa как для исходных ППФ, так и для большая выявляемость Ройоркш^-лимфатических сосу- диад в действующих концентрациях вплоть до 2-10-4 М. дов по сравнению с LYVE-1+-сосудами. При плоскоклеточ- Заключение. Наблюдаемые эффекты увеличения фоном неороговевающем РНГ отмечены большие значения тодинамической активности диад фуллерен — краситель объемных плотностей Ройор1ашп+-лимфатических сосудов показывают перспективность подобных ковалентных по сравнению с ороговевающей формой рака. В то же вре- конъюгатов как новых эффективных фотосенсибилиза-мя численная плотность Ю-67+-клеток была больше торов для применения в фотодинамической терапии. при ороговевающей форме плоскоклеточного РНГ. Исследования поддержаны Программой Президиума РАН № 1 Заключение. При плоскоклеточном неороговевающем «Наноструктуры: физика, химия, биология, основы технологий» игран-РНГ отмечены большие значения объемных плотностей том РФФИ № 16-34-01156мола. СВ34+-кровеносных и Ройор1атп+-лимфатических сосудов по сравнению с гиперкератозом и ороговевающей формой А.А. Белоглазкина, А.А. Барашкин, А.Г. Мажуга, рака губы, что может быть структурной основой для более Е.К. Белоглазкина, Н.В. Зык выраженной прогрессии опухолевого роста и метастазиро- ИМИДАЗОЛ-4-ОНЫ вания. И ИХ ДИСПИРОПРОИЗВОДНЫЕ - НОВЫЙ КЛАСС ПОТЕНЦИАЛЬНЫХ А.Ю. Белик, А.Ю. Рыбкин, Н.С. Горячев, ПРОТИВООПУХОЛЕВЫХ ПРЕПАРАТОВ И.И. Пархоменко, А.А. Терентьев, Е.А. Хакина, Химический факультет ФГБОУВО О. А. Краевая, П. А. Трошин, А. И. Котельников «МГУ им. М.В. Ломоносова», Москва ФОТОДИНАМИЧЕСКОЕ ДЕЙСТВИЕ Введение. Онкологические заболевания уносят огром-ВОДОРАСТВОРИМЫХ КОВАЛЕНТНЫХ КОНЪЮГАТОВ ное число человеческих жизней и занимают 2-е место ФУЛЛЕРЕН — ФЛУОРЕСЦЕИН И ФУЛЛЕРЕН — по смертности после сердечно-сосудистой патологии. Еже-ЭОЗИН В МОДЕЛЬНОЙ СРЕДЕ И НА КУЛЬТУРЕ годно в мире умирают от онкологических заболеваний бо-КЛЕТОК HELA лее 70 млн человек. Лечение и диагностика этих заболева-ФГБУНИПХФ РАН, Черноголовка, Московская область ний являются одними из наиболее важных направлений Введение. Производные фуллерена представляют ин- современной медицины. Последние 15 лет наблюдается терес для применения с точки зрения создания новых пре- повышенный интерес к поиску непептидных низкомолеку-паратов для фотодинамической терапии, так как способны лярных соединений, способных препятствовать взаимодей-с высоким квантовым выходом (~1) переходить в триплет- ствию клеточных белков р53 — MDM2. Белок р53 — опухо-ное состояние и эффективно генерировать синглетный левый супрессор, играющий важную роль в жизненном кислород 1O2. Однако эффективность фотодинамического цикле клетки и апоптозе, а MDM2 является его эндоген-действия фуллеренов ограничивается их слабым поглоще- ным ингибитором. Если блокировать взаимодействие этих нием в красной области спектра, наиболее удобной для фо- белков, то высвобождающийся р53 активирует процесс тодинамической терапии. Одним из путей решения данной разрушения опухоли, что является новым направлением проблемы является создание гибридных диад путем при- в терапии онкологических заболеваний. соединения к фуллерену красителя, эффективно поглоща- Цель исследования — разработка перспективного клас-ющего в видимой области спектра. са ингибиторов белков р53 — MDM2 в качестве новых неЦель исследования — определение фотодинамической пептидных низкомолекулярных противоопухолевых пре-активности водорастворимых поликатионной и полиани- паратов. онной диад фуллерен — флуоресцеин, а также полианион- Материалы и методы. Для синтеза целевых диспиросо-ной диады фуллерен — эозин. единений использованы доступные саркозин и изатин, Материалы и методы. Водорастворимые диады и ис- а кроме того, производные N, O-содержащих гетероцикли-ходные полизамещенные производные фуллерена (ППФ) ческих соединений, также легко синтезируемые с высоким синтезированы в ИПХФ РАН, структура соединений до- выходом в 1—2 синтетические стадии, исходя из коммер-казана методами инфракрасной и ультрафиолетовой спек- чески доступных препаратов. Структуры полученных со-троскопии, спектроскопии ядерного магнитного резонан- единений однозначно установлены с помощью комплекса са на ядрах 1Н и 13С и электроспрей-масс-спектрометрии. физико-химических методов (ядерный магнитный резо-Фотодинамическая активность соединений оценивалась нанс, инфракрасная масс-спектроскопия, элементный на культуре клеток HeLa по методу МТТ, а также в модель- анализ, в случае необходимости — рентгеноспектральный ной системе с помощью красителя НСТ. Разработаны ме- анализ). Биологическая активность синтезируемых соеди-тоды определения концентрации ППФ и диад в исследуе- нений определена в стандартном МТТ-тесте на цитоток-мых системах методом люминесценции и методом сичность на клеточных линиях LNCap, PC3, HCT р53 (+/+) спектроскопии гигантского комбинационного рассеяния. и HCT р53(-/-). Результаты. Было показано существенное усиление Результаты. Разработаны синтетические подходы к со-фотодинамической активности диад по сравнению с ис- зданию диспиропроизводных на основе различных гетеро-ходными соединениями как в модельной среде (в 3 раза для циклических производных, а именно: 2-тиогидантоинов, диады фуллерен — эозин и в 9 раз для диады фуллерен — их S-алкилированных производных, гидантоинов и окса-флуоресцеин), так и на культуре клеток HeLa (в 3 раза). золонов. Получена библиотека соединений с различными

№1 / том 15 / 2016 РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ