БИЦИКЛО-3.1.1-ГЕПТАН-ЗАМЕЩЕННЫЕ БЕНЗИМИДАЗОЛОН- И ХИНАЗОЛИНОН-ПРОИЗВОДНЫЕ АГОНИСТЫ ORL1 РЕЦЕПТОРОВ ЧЕЛОВЕКА
BICYCLO-3,1,1-HEPTANE-SUBSTITUTED BENZIMIDAZOLONE- AND QUINAZOLINONE-DERIVATIVES AS AGONISTS OF HUMAN ORL1 RECEPTORS

Настоящее изобретение относится к группе гидронопол-замещенных бензимидазолон- и хиназолинон-производных, которые являются агонистами ORL1 рецепторов (ноцирецепторов) человека. Изобретение относится также к способу получения данных соединений, к фармацевтических композициям, содержащим фармакологически активное количество, по меньшей мере, одного из указанных новых бензимидазолон- и хиназолинон-производных в качестве активного ингредиента, а также к способу применения указанных фармацевтических композиций для лечения расстройств, в которые вовлечены ORL1 рецепторы.
FEBS Lett.
341
FEBS Lett
347
Science
270
Nature
Anaesthesist
51
Drug News Perspect
14
Рецептор, подобный опиоидному рецептору 1 (Opioid Receptor-like 1 (ORL1)), идентифицирован из библиотеки комплементарных ДНК человека. Было установлено, что гомология данного «орфан-рецептора» близка к гомологии µ-, κ- и δ-опиоидных рецепторов (Mollereau et al., , , 33-38, 1994; Bunzow et al., ., , 284-288, 1994). Несмотря на близкое последовательное и структурное сходство с опиоидными рецепторами, лиганды классических опиоидных рецепторов не взаимодействуют с ORL1 рецепторами. В 1995 году из экстрактов головного мозга был получен чистый нейропептид, образованный 17 аминокислотами, и затем было показано, что он является природным лигандом G-белок-связанного ORL1 рецептора (Reinscheid et al., , , 792-794, 1995; Meunier et al., , 377, 532-535, 1995). Этот пептид был назван орфанином FQ или ноцицептином, и он не связывается с тремя традиционными опиоидными рецепторами. Полученные результаты послужили импульсом для серьезных исследований функциональной роли и изыскания новых лигандов ORL1 рецептора. Результатом этих исследований стали несколько сотен публикаций, включая несколько обзоров (см., например, Grond et al., , , 996-1005, 2002) и несколько дюжин заявок на патенты, в которых описываются как пептидные, так и непептидные лиганды, отличающиеся по силе и селективности (в отношении ORL1 по сравнению с µ-опиатными). Поскольку µ-опиатные рецепторы широко распространены по всему организму, отсутствие селективности могло бы приводить к ряду нежелательных опиат-подобных побочных эффектов, например седативному эффекту, угнетению дыхания, толерантности и зависимости (, , 335, 2001). Шесть из заявок на патенты, касающихся ORL1, относятся к производным бензимидазолона: WO 98/54168, WO 99/36421, WO 00/006545, WO 00/08013, WO 01/39775 и заявка на патент США 20020128288.
Среди патентных публикаций предшествующего уровня наиболее близкой к настоящему изобретению является WO 01/39775. Однако оказалось, что производные бензимидазолона, описанные в указанной публикации, не удовлетворяют критериям, которые, как общеизвестно, важны для применения в качестве терапевтических средств, связанных с воздействием на ORL1. Они характеризуются следующим:
(1) умеренная активность (сродство в отношении ORL1 рецепторов в интервале от 166 до 1252 нМ);
(2) отсутствие селективности в отношении µ-опиатных рецепторов (сродство в интервале от 19 до 457 нМ);
(3) отсутствие доказательства биологической доступности при пероральном введении,
(4) отсутствие доказательства биологической доступности для ЦНС.
В настоящее время было неожиданно установлено, что в ряду гидронопил-замещенных производных бензимидазолона и хиназолинона группа соединений показывает очень высокое сродство в отношении ORL1 рецепторов человека. Кроме того, указанные соединения показали прекрасную селективность в отношении ORL1 рецепторов по сравнению с µ-опиатными рецепторами, они легко доступны при пероральном введении и проникают через гематоэнцефалический барьер.
Настоящее изобретение относится к соединениям общей формулы (1)
где
1
R представляет собой Н, алкил(1-6С), алкил(1-3С)циклоалкил(3-6С), карбалкокси(2-7С) или ацил(2-7С),
m
2
m
[] означает -(СН)-, где m равно 0 или 1,
2
3
3
2
R представляет собой галоген, CF, алкил(1-6С), алкил(1-3С)циклоалкил(3-6С), фенил, амино, аминоалкил(1-3С), алкил(1-3С)амино, диалкил(1-3С)амино, циано, цианоалкил(1-3C), гидрокси, гидроксиалкил(1-3С), (1-3С)алкокси, OCF, ацил(2-7С), трифторацетил, аминокарбоксил, (1-3С)алкилсульфонил или трифторметилсульфонил, и n представляет собой целое число от 0 до 4, при условии, что когда n равно 2, 3 или 4, R заместители могут быть одинаковыми или разными,
А представляет собой насыщенный или частично ненасыщенный цикл,
o
p
2
o
2
р
[] и [] представляют собой -(СН)- и -(СН) соответственно, при условии, что возможно также значение -СН-, когда А представляет собой частично ненасыщенный цикл, и о и р независимо представляют собой 0, 1 или 2,
3
4
5
6
2
3
5
3
6
4
5
4
6
3
5
R, R, R и R независимо представляют собой водород, алкил(1-3С), алкил(1-3С)циклоалкил(3-6С), СНОН, или (R и R), или (R и R), или (R и R), или (R и R) вместе могут образовывать алкиленовый мостик, включающий от 1 до 3 атомов углерода, при условии, что когда o равно 2, R представляет собой водород, и, когда р равно 2, R представляет собой водород,
q
2
q
[] означает -(СН)-, где q представляет собой целое число от 0 до 2,
и их фармацевтически приемлемым солям и пролекарствам.
К изобретению относятся все соединения формулы (1), рацематы, смеси диастереомеров и отдельные стереоизомеры. Таким образом, соединения, в которых заместители на потенциально асимметричных атомах углерода имеют R- или S-конфигурацию, также относятся к настоящему изобретению. Кроме того, к изобретению относятся пролекарства, т.е. соединения, которые при введении людям любым известным способом в ходе обмена веществ превращаются в соединения формулы (1). В частности, изобретение относится к соединениям с первичными или вторичными амино- или гидроксильными группами. Такие соединения могут подвергаться взаимодействию с органическими кислотами с получением соединений формулы (1), в которых присутствует дополнительная группа, легко удаляемая после введения, например, но без ограничения, амидина, енамина, основания Манниха, гидроксиметилен-производного, О-(ацилоксиметиленкарбамат)-производного, карбамата, сложного эфира, амида или енаминона. Пролекарство представляет собой неактивное соединение, которое при абсорбции подвергается превращению в активную форму (Medicinal Chemistry: Principles and Practice, 1994, ISBN 0-85186-494-5, Ed.: F.D. King, p. 216).
Настоящее изобретение, в частности, относится к соединениям формулы (1), где:
А представляет собой насыщенный цикл,
1
R представляет собой водород, алкил(1-3С) или ацил(2-4С),
3
4
5
8
3
5
3
6
4
5
4
6
3
5
2
R, R, R и R независимо представляют собой водород или алкил(1-3С), или (R и R), или (R и R), или (R и R), или (R и R) вместе могут образовывать алкиленовый мостик, включающий от 1 до 3 атомов углерода, при условии, что когда о равно 2, R представляет собой водород, когда р равно 2, R представляет собой водород, и R, m, n, o, p и q принимают значения, указанные выше.
Точнее, настоящее изобретение относится к соединениям формулы (1), где:
1
2
3
3
3
3
4
5
6
4
5
А представляет собой насыщенный цикл, m=0, n=0 или 1, о=1, р=1, q=0, R=H или ацетил, R представляет собой галоген, CF, алкил(1-3С), амино, гидрокси, циано, ОСН или OCF, R, R, R и R независимо представляют собой водород или алкил(1-2С), или (R и R) вместе могут образовывать алкиленовый мостик, включающий от 1 до 2 атомов углерода.
Более предпочтительным является соединение формулы (2) и все его стереоизомеры.
Соединения настоящего изобретения и их соли могут быть получены согласно общему способу, представленному ниже.
Исходные соединения для данного общего способа получены следующим образом.
J.Med. Chem.
30
Chem. Pharm. Bull.
33
Бензимидазолоны (m=0) могут быть синтезированы в соответствии со способами, описанными в публикациях , , 814-819, 1987 и WO 99/36421 (Pfizer). Хиназолоны (m=1) могут быть синтезированы в соответствии с методикой публикации , , 1116-1128, 1985. Гидронопол-производные, содержащие Х в качестве удаляемой группы (галоген, мезилат, тозилат), могут быть синтезированы из соответствующих спиртов с помощью стандартных методик. Соответствующие спирты могут быть синтезированы следующим образом:
J. Amer. Chem. Soc
68
- для цис-аналога с q=0 - из (-)-β-пинена, как описано в публикации . , 638, 1946 и в патентах США №№ 2427343 и 2427345;
Bull. Soc. Chim. Fr.
196
- для транс-аналога с q=0 - из транс-миртанола, как описано в публикации , , 1958, или в соответствии со слегка измененной методикой (бромирование спирта, замещение циано-группой, превращение в сложный этиловый эфир и восстановление до целевого спирта);
- для цис- и транс-аналогов с q=1 или 2 - посредством одного или двух циклов методики гомологизации аналогов, как описано для синтеза транс-аналога с q=0 из транс-миртанола.
Фармацевтически приемлемые соли могут быть получены с использованием стандартных методик, хорошо известных в данной области техники, например смешением соединения настоящего изобретения с подходящей кислотой, например неорганической кислотой, такой как соляная кислота, или с органической кислотой.
Соединения настоящего изобретения общей формулы (1), а также их соли обладают ORL1 антагонистической активностью. Они могут применяться для лечения расстройств, в которые вовлечены ORL1 рецепторы или которые могут лечиться посредством воздействия на данные рецепторы. Например, при острой и хронической боли, расстройствах центральной нервной системы, особенно, но без ограничения, для облегчения симптомов расстройств, связанных с состоянием беспокойства и стресса, депрессии, различных форм эпилепсии, удара, расстройств, характеризующихся ухудшением познавательной способности и памяти, таких как болезнь Альцгеймера, болезнь Крейтцфельда-Якоба, болезнь Хантингтона, болезнь Паркинсона, нейрореабилитация (посттравматические повреждения головного мозга); острое повреждение головного или спинного мозга; расстройства, связанные с некоторыми веществами, включая расстройства, вызванные их неправильным применением (такие как зависимость и злоупотребление), и расстройства, вызванные веществами (такие как абстинентный синдром); расстройства питания, такие как анорексический невроз и булимический невроз, ожирение; при желудочно-кишечных расстройствах, в частности синдроме раздраженной толстой кишки, воспалении толстой кишки (болезнь Крона и неспецифический язвенный колит), воспалении мочевых путей, почечные расстройства, характеризующиеся нарушением равновесия удержания/выделения воды или выделения соли; при сердечно-сосудистых расстройствах, таких как инфаркт миокарда, аритмия, гипертензия, тромбоз, анемия, атеросклероз, стенокардия; при кожных заболеваниях, таких как крапивница, красная волчанка и зуд; при офтальмологических расстройствах, таких как глаукома; при респираторных расстройствах, включая кашель, хроническое обструктивное заболевание легких, бронхит и муковисцидоз; при заболеваниях иммунной системы и вирусных инфекциях.
Антагонистические свойства соединений данного изобретения в отношении ORL1 рецептора в условиях in vitro и in vivo были изучены с использованием способов, представленных ниже.
Сродство в отношении ORL1 рецепторов человека
Mol. Pharmacol
51
3
-6
50
1
50
Сродство соединений в отношении ORL1 рецепторов человека определяют с использованием метода количественной оценки связывания рецептора in vitro, описанного в публикации Ardati et al., ., , 816, 1997. Кратко, мембранные препараты получают из клеток яичника китайского хомячка (Chinese Hamster Ovary (CHO)), в которые был стабильно экспрессирован ORL1 рецептор человека. Мембраны инкубируют с [Н]-ноцицептином в отсутствие или в присутствии опытных соединений, взятых в различных концентрациях, с разбавлением в подходящем буфере. Неспецифическое связывание определяют как связывание, сохранившееся в присутствии 10М ноцицептина. Разделение связанной и свободной радиоактивностей выполняют фильтрованием через фильтры из стекловолокна Packard GF/B и несколькими промывками буфером, охлажденным льдом, с использованием сборщика клеток Packard. Связанную радиоактивность количественно определяют с помощью сцинтилляционного счетчика (Topcount, Packard) с использованием жидкого сцинтилляционного коктейля (Microscint 0, Packard). Результаты количественного определения радиоактивности представляют в виде графика зависимости от концентрации замещающих опытных веществ, и кривые замещения вычисляют с использованием логистической регрессии с четырьмя параметрами, получая значения IC, т.е. концентрации замещающего соединения, при которой замещается 50% радиолиганда. Значения сродства рК вычисляют корректировкой значений IC с учетом концентрации радиолиганда и его сродства в отношении ORL1 рецептора человека в соответствии с уравнением Ченга-Прусоффа:
1
50
d
рК = -log(IC/(1+S/K)),
50
d
3
3
в котором IC имеет значение, описанное выше, S представляет собой концентрацию [H]-ноцицептина, используемую в испытании и выраженную в моль/л (обычно 0,2 нМ), и К представляет собой константу равновесной диссоциации [H]-ноцицептина для ORL1 рецепторов человека (0,4 нМ).
Соединения настоящего изобретения демонстрируют высокое сродство в отношении ORL1 рецепторов в биологическом испытании, описанном выше. Это свойство делает их применимыми для лечения расстройств, в которые вовлечены ORL1 рецепторы или которые могут лечиться воздействием на эти рецепторы.
Сродство в отношении µ-опиатных рецепторов
Eur. J. Pharm.,
55
3
-7
3
Сродство соединений в отношении µ-опиатных рецепторов определяют с использованием биологического испытания связывания рецептора in vitro, описанного в публикации Childers et al., , 11, 1979. Кратко, мембранные препараты получают из СНО клеток, в которые был стабильно экспрессирован µ-опиатный рецептор, и инкубируют с [Н]-налоксоном в отсутствие или в присутствии опытных соединений при разбавлении до концентраций в интервале от 10 мкМ до 0,1 нМ подходящим буфером. Неспецифическое связывание определяют как связывание, сохранившееся в присутствии 10М леваллорфан-тартрата. Разделение связанной и свободной радиоактивностей осуществляют, как описано выше, и сродство соединений вычисляют аналогичным образом, используя концентрацию (S) 1 нМ [H]-налоксона и значение Kd, равное 1,3 нМ.
Большинство соединений настоящего изобретения проявляют низкое сродство в отношении µ-опиатных рецепторов в биологическом испытании связывания, описанном выше: обычно фактор 100 ниже их сродства в отношении ORL1 рецепторов. Следовательно, маловероятно, что они вызывают нежелательные побочные эффекты, которые, как известно, имеют место с опиатами, подобными морфину.
Агонизм в отношении ORL1 рецептора in vitro
Proc. Natl. Acad. Sci. USA
97
50
i
Активация G-белок-связанного ORL1 рецептора ингибирует активность аденилатциклазы и снижает внутриклеточную концентрацию второго информационного АМФ. Количественное определение активности соединений в отношении ORL1 рецепторов проводят в соответствии с методикой, описанной в публикации Jenck et al., , , 4938-4943, 2000. Полученные результаты показывают, что соединения являются сильными агонистами со значениями рЕС, соответствующими их значениям рК.
Агонизм в отношении ORL1 рецептора in vivo
Psychopharmacolo
Соединения настоящего изобретения при испытании в соответствии с методикой кондиционированной ультразвуковой дистресс-вокализации, описанной в публикации Molewijk et al., gy, 117, 32-40, 1995, при интраперитонеальном и/или пероральном введении проявляют высокую активность. Это показывает не только то, что соединения обладают хорошей биодоступностью после перорального введения, но также и то, что они преодолевают гематоэнцефалический барьер. Пептид ноцицептин также активен в данном биологическом опыте, но для демонстрации его эффекта необходимо вводить его прямо в мозг (посредством интрацеребро-вентикулярной инъекции).
КОНКРЕТНЫЕ ПРИМЕРЫ СИНТЕЗА
Пример синтеза 1 (см. таблицу, представленную ниже)
Стадия 1
. Раствор (-)-цис-гидронопола (20 г, 0,12 моль) и триэтиламина (41,6 мл, 0,30 моль) в дихлорметане (150 мл) охлаждают до 0°C и при охлаждении на ледяной бане по каплям добавляют раствор мезилхлорида (11,2 мл, 0,15 моль) в дихлорметане (50 мл). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 16 часов, после чего добавляют раствор HCl (1N, 100 мл). Водный слой промывают дважды 70 мл дихлорметана, объединенные органические слои сушат над сульфатом магния и концентрируют в вакууме. Мезилат получают в виде масла желтовато-оранжевого цвета (27,7 г, 11 моль, выход 92%).
Стадия 2.
2
3
4
+
Раствор 4-(1-бензимидазолон)пиперидина (ACROS, 6,51 г, 30 ммоль), мезилата, полученного на предыдущей стадии (8,9 г, 36 ммоль), карбоната калия (16,8 г, 120 ммоль) и йодида натрия (5,4 г, 36 ммоль) в метилэтилкетоне (800 мл) при перемешивании нагревают в атмосфере N до 80°C и выдерживают при данной температуре в течение 16 часов. Реакционную смесь концентрируют в вакууме, затем добавляют дихлорметан (500 мл) и водный NaHCO (5%, 300 мл). Водный слой промывают дихлорметаном (2 раза, 80 мл) и объединенные органические слои сушат над MgSO и концентрируют в вакууме. Сырой продукт очищают колоночной хроматографией (силикагель), используя смесь дихлорметан:метанол:аммиак (94,5:5:0,5) в качестве элюента. Раствор чистого продукта, полученный после концентрирования в вакууме (7,5 г, 20 ммоль, выход 68%), растворяют в растворе HCl в абсолютированном этаноле (60 мл). Концентрирование в вакууме полученного раствора при 30°C приводит к получению HCl соли соединения примера 1 (8,25 г, 20 ммоль, количественный выход) в виде твердого белого аморфного вещества с M 368 m/z и температурой плавления 167-174°C.
Пример синтеза 43
Стадия 1
2
. Трифенилфосфин (116 г, 0,44 моль) растворяют в ацетонитриле (1 литр) и охлаждают на ледяной бане в атмосфере N. К полученному раствору по каплям добавляют бром (22,5 мл, 0,44 моль). Температуру экзотермической реакции поддерживают ниже 10°C. После завершения добавления ледяную баню удаляют и медленно добавляют (-)-транс-миртанол (68,8 г, 0,44 моль, Aldrich), растворенный в 250 мл ацетонитрила. После завершения добавления раствор светло-желтого цвета кипятят с обратным холодильником в течение 3 часов при использовании насадки Дина-Старка с удалением из водоотделителя 200 мл растворителя. Полученную реакционную смесь концентрируют в вакууме. Сырой продукт очищают колоночной хроматографией (силикагель) с использованием смеси дихлорметан-диэтиловый эфир (1:1 об./об.) в качестве элюента. Чистый продукт получают в виде масла светло-желтого цвета (87,8 г, 41 ммоль, выход 93%).
Стадия 2.
2
4
Полученный миртанилбромид (87,8 г, 0,41 моль) растворяют в 1 литре диметилформамида. В полученный раствор добавляют цианид натрия (40 г, 0,81 моль) и полученную смесь кипятят с обратным холодильником при перемешивании в течение 5 часов. После охлаждения смесь разбавляют водой (3 литра) и экстрагируют метил-трет-бутиловым эфиром (3 раза, 1,5 литра). Органический слой промывают насыщенным раствором соли (300 мл), сушат над NaSO и концентрируют в вакууме. Сырой продукт очищают колоночной хроматографией (силикагель) с использованием смеси дихлорметан-гептан (1:1 об./об.) в качестве элюента. Чистый продукт получают в виде бесцветной жидкости (52,4 г, 0,32 моль, выход 78%).
Стадия 3.
3
2
4
Серную кислоту (190 мл) по каплям добавляют к 500 мл этанола, охлажденного на ледяной бане. К раствору добавляют раствор полученного выше миртанилцианида (52,4 г, 0,32 моль) в этаноле (100 мл) и полученную смесь кипятят с обратным холодильником при перемешивании в течение 16 часов. После охлаждения и добавления 1,5 литра воды смесь экстрагируют три раза 1,5 литрами метил-трет-бутилового эфира. Органический слой промывают насыщенным водным раствором NaHCO(1 литр), сушат над NaSO и концентрируют в вакууме. Сырой сложный эфир (54,2 г, 0,26 моль, выход 81%) получают в виде почти бесцветной жидкости.
Стадия 4.
2
4
-2
Сложный эфир, полученный на предыдущей стадии (54,2 г, 0,26 моль), добавляют к суспензии алюмогидрида лития (20 г, 0,52 моль) в тетрагидрофуране (1 литр). После завершения добавления смесь кипятят с обратным холодильником в течение 1 часа. Реакционную смесь охлаждают на ледяной бане, затем осторожно добавляют 1 литр водной HCl (1N). После завершения добавления смесь разбавляют 1 литром воды и три раза экстрагируют метил-трет-бутиловым эфиром (1,5 л). Органический слой промывают насыщенным раствором соли (250 мл), сушат над NaSO и концентрируют в вакууме. Сырую смесь очищают перегонкой Kugelrohr (т.кип. 85°C при 3,10 мбар), получая 35 г (0,17 моль, 65%) (-)-транс-гидронопола в виде бесцветного масла.
Стадия 5.
Раствор полученного (-)-транс-гидронопола (5 г, 28 ммоль) и триэтиламина (9,4 мл, 68 ммоль) в дихлорметане (50 мл) охлаждают до 0°C. К полученному раствору при охлаждении на ледяной бане по каплям добавляют раствор мезилхлорида (2,7 мл, 35 ммоль) в дихлорметане (13 мл). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 16 часов, после чего добавляют раствор HCl (1N, 50 мл). Водный слой промывают дихлорметаном (2 раза, 30 мл), объединенные органические слои сушат над сульфатом магния и концентрируют в вакууме. Полученный мезилат очищают колоночной хроматографией (силикагель) с использованием смеси дихлорметан-метанол (90:10) в качестве элюента. Чистый продукт получают в виде бесцветной жидкости (5,6 г, 23 ммоль, выход 81%).
Стадия 6.
2
+
Раствор 4-(1-бензимидазолон)пиперидина (ACROS, 1,8 г, 8,3 ммоль), мезилата, полученного на предыдущей стадии синтеза (2,5 г, 10 ммоль), карбоната калия (4,7 г, 34 ммоль) и йодида натрия (1,5 г, 10 ммоль) в метилэтилкетоне (300 мл) нагревают в атмосфере N до 80°C и выдерживают при данной температуре в течение 16 часов. Реакционную смесь концентрируют в вакууме, затем добавляют диизопропиловый эфир (300 мл). Образующийся осадок светло-желтого цвета отфильтровывают, промывают петролейным эфиром (100 мл) и сушат в вакууме. Осадок снова растворяют в кипящем эфире (300 мл) и фильтруют для удаления исходного вещества. Осадок, полученный после охлаждения, собирают фильтрованием и сушат в вакууме, получая 1,85 г (5 ммоль, выход 61%) чистого продукта в виде твердого белого аморфного вещества с M 368 m/z и температурным интервалом плавления 220-239°C.
Пример синтеза 17
Стадия 1.
2
3
2
Раствор 3-фтор-4-нитротолуола (Aldrich, 4,65 г, 30 ммоль), 4-амино-1-бензилпиперидина (Aldrich, 6,1 мл, 30 ммоль) и KCO (6,63 г, 48 ммоль) в диметилформамиде (50 мл) перемешивают при 65°C в атмосфере N в течение 18 часов. После охлаждения до комнатной температуры смесь выливают в смесь воды (200 мл) и дихлорметана (350 мл). Водный слой экстрагируют дихлорметаном (два раза, 70 мл), объединенные органические слои промывают водой (два раза, 50 мл), сушат над
4
MgSO и концентрируют в вакууме. Полученный сырой продукт очищают колоночной хроматографией (силикагель) с использованием смеси дихлорметан-метанол (97:3) в качестве элюента. После концентрирования в вакууме чистый продукт получают в виде маслянистого вещества желтого цвета (9,1 г, 28 ммоль, выход 93%).
Стадия 2.
2
Порцию никеля Ренея (Aldrich R 2800 [7440-02-0], приблизительно 600 мг) промывают 96% этанолом (дважды, 10 мл) и затем в атмосфере N добавляют к раствору продукта, полученному на предыдущей стадии синтеза (9,1 г, 28 ммоль), в 96% этаноле (200 мл). Раствор гидрируют при комнатной температуре и давлении 1 атмосфера в течение 18 часов. Смесь фильтруют через Hyflo, промывают 96% этанолом (3 раза, 100 мл), фильтрат концентрируют в вакууме и дважды подвергают совместному выпариванию с этилацетатом с получением восстановленного продукта в виде маслянистого вещества пурпурного цвета (8,3 г, 28 ммоль, выход 100%).
Стадия 3.
К раствору продукта, полученного на предыдущей стадии синтеза (8,3 г, 28 ммоль), в ацетонитриле (100 мл), перемешивая в атмосфере азота при комнатной температуре, добавляют порцию 1,1'-карбонилдиимидазола (ACROS, 6,5 г, 40 ммоль). Осадок, который начинает образовываться через 5 минут и образуется в течение 3 часов, собирают фильтрованием, промывают ацетонитрилом (20 мл) и диизопропиловым эфиром (100 мл) и сушат в вакууме. Сырой продукт (5,5 г) очищают колоночной хроматографией (силикагель) с использованием смеси дихлорметан-метанол (95:5) в качестве элюента. После концентрирования в вакууме чистый продукт получают в виде твердого белого вещества (5,0 г, 15 ммоль, выход 55%).
Стадия 4.
2
К раствору 5,0 г (15 ммоль) продукта, полученного на предыдущей стадии синтеза, в 300 мл метанола при перемешивании в атмосфере Nдобавляют 1N спиртовой раствор HCl (полученный из 1,22 г (15 ммоль) ацетилхлорида в 50 мл абсолютированного этанола). После добавления 10% Pd/C (приблизительно 500 мг) смесь гидрируют при комнатной температуре и давлении 1 атмосфера в течение 2,5 часов. Смесь фильтруют через Hyflo, промывают метанолом (2 раза, 100 мл) и фильтрат концентрируют в вакууме, получая 4,15 г (15 ммоль, выход 100%) продукта в виде твердого белого вещества.
Стадия 5.
2
3
4
+
Раствор продукта, полученного на предыдущей стадии синтеза (4,15 г, 15 ммоль), мезилата, полученного на стадии 1 примера 1 (8,9 г, 16 ммоль), карбоната калия (10,4 г, 75 ммоль) и йодида натрия (2,4 г, 16 ммоль) в метилэтилкетоне (250 мл) при перемешивании нагревают в атмосфере N до 80°C и выдерживают при данной температуре в течение 16 часов. После концентрирования реакционной смеси в вакууме добавляют дихлорметан (500 мл) и водный NaHCO (5%, 300 мл). Водный слой промывают дихлорметаном (2 раза, 80 мл), объединенные органические слои сушат над MgSO и концентрируют в вакууме. Сырой продукт очищают колоночной хроматографией (силикагель) с использованием смеси дихлорметан- метанол-аммиак (92:7,5:0,5) в качестве элюента. Концентрирование в вакууме приводит к получению чистого продукта (5,0 г, 13 ммоль) в виде маслянистого вещества. После добавления к полученному продукту 100 мл диизопропилового эфира и перемешивания смеси при комнатной температуре в течение 30 минут продукт выпадает в осадок в виде твердого белого вещества. Твердый продукт собирают фильтрованием и сушат в вакууме, получая 3,3 г (8,6 ммоль, выход 57%) с M 382 m/z и температурой плавления 214-217°C.
С помощью описанных выше и аналогичных способов синтезируют 45 специфических примеров соединений. Они предназначены для более подробного дополнительного пояснения изобретения и поэтому, как подразумевается, никоим образом не ограничивают область настоящего изобретения. Структуры этих соединений общей формулы (1) представлены в таблице, приведенной ниже.
ПРИМЕР ПРЕПАРАТА СОЕДИНЕНИЯ, ИСПОЛЬЗУЕМОГО В ИССЛЕДОВАНИИ НА ЖИВОТНЫХ
Препарат соединения примера 1
Для перорального (р.о.) введения
: к нужному количеству (0,5-5 мг) твердого соединения примера 1 в стеклянной пробирке добавляют несколько стеклянных шариков и твердое вещество измельчают вихревым перемешиванием в течение 2 минут. После добавления 1 мл раствора 1% метилцеллюлозы в воде и 2% (об./об.) Poloxamer 188 (Lutrol F68) соединение суспендируют вихревым смешением в течение 10 минут. Значение рН доводят до 7 добавлением нескольких капель водного раствора NaOH (0,1N). Частицы, сохранившиеся в суспензии, дополнительно суспендируют с использованием ультразвуковой бани.
Для интраперитонеального (i.p.) введения:
к нужному количеству (0,5-15 мг) твердого соединения примера 1 в стеклянной пробирке добавляют несколько стеклянных шариков и твердое вещество измельчают вихревым перемешиванием в течение 2 минут. После добавления 1 мл раствора, содержащего 1% метилцеллюлозы и 5% маннита в воде, соединение суспендируют вихревым смешением в течение 10 минут. И наконец, значение рН доводят до 7.
ФАРМАКОЛОГИЧЕСКИЕ ДАННЫЕ
Сродство
Антагонизм в опыте in vitro
Антагонизм в опыте in vivo
ORL1
µ-опиатный рецептор
Опыт с цАТФ
C.U.D.V.<sup>*</sup>
i.p.
p.o.
Пр.
рК<sub>1</sub>
рК<sub>1</sub>
рЕС<sub>50</sub>
ED<sub>50</sub>
ED<sub>50</sub>
1
8,4
7,2
8,6
1,4
6,0
2
7,8
7,3
8,5
7,4
* C.U.D.V.=кондиционированная ультразвуковая дистресс-вокализация;i.p.=интраперитонеальное введение; p.o.=пероральное введение.