КОМПОЗИЦИИ И СПОСОБЫ ДЛЯ УЛУЧШЕНИЯ ВНЕШНЕГО ВИДА КОЖИ
COMPOSITIONS AND METHODS FOR IMPROVING THE APPEARANCE OF SKIN

Настоящее изобретение в целом относится к инъекционным композициям и в частности к композициям на основе гиалуроновой кислоты для лечения мелких и тонких морщин на коже.
Существующие в настоящее время варианты инъекционного лечения для улучшения состояния всей поверхности кожи лица или другой значительной области, включают многократные процедуры (как правило, 3-4 процедуры, каждые 3-4 недели) и обладают относительно коротким эффектом.
Кожа состоит из эпидермиса и дермы. Внешний эпидермис представляет собой многослойный плоский эпителий с лежащей в основе базальной мембраной. Эпидермис не содержит кровеносных сосудов и получает питательные вещества за счет диффузии из дермы. Основным типом клеток, образующих эпидермис, являются кератиноциты, также присутствуют меланоциты и клетки Лангерганса. Этот слой кожи отвечает за удержание влаги в организме и защиту от проникновения вредных химических веществ и патогенов.
Дерма расположена под эпидермисом и содержит ряд структур, в том числе кровеносные сосуды, нервы, волосяные фолликулы, гладкие мышцы, железы и лимфатическую ткань. Дерма (или кориум) обычно имеет толщину 3-5 мм и является основным компонентом кожи человека. Она состоит из сети соединительной ткани, преимущественно волокон коллагена, обеспечивающих опорный каркас, и эластичной ткани, придающей упругость. Основными типами клеток являются фибробласты, адипоциты (жиронакапливающие клетки) и макрофаги. Гиалуроновая кислота (ГК) является частью композиции дермы и основным компонентом внеклеточного матрикса.
Старение кожи лица происходит в результате нескольких факторов: естественных изменений кожи, действия силы тяжести, действующих на кожу лицевых мышц (мимические морщины), потери или смещения мягких тканей, потери костной ткани и потери эластичности ткани. Кожа стареет, когда эпидермис начинает истончаться, в результате чего дермо-эпидермальное соединение сглаживается.  По мере старения человека выработка коллагена уменьшается, и пучки коллагена, обеспечивающие тургор кожи, становятся более рыхлыми и теряют силу. Когда кожа теряет эластичность, она в меньшей степени способна сопротивляться растяжению. Сочетание силы тяжести, растяжения мышц и тканевых изменений приводит к тому, что на коже появляются морщины. Потеря влаги и разрушение связей между клетками также снижают барьерную функцию кожи, что может привести к увеличению размера пор кожи.
Известно, что зоной лица, первой демонстрирующей признаки старения, часто являются глаза. Изменения кожи вокруг глаз происходят раньше, чем на остальной части лица, так как кожа вокруг глаз является более тонкой. Кожа в этом месте содержит меньше желез и подвергается постоянному морганию, прищуриванию, трению и растяжению. Средняя зона лица стареет, когда щеки начинают обвисать, вызывая появление носогубных складок. Носогубные складки представляют собой линии, которые проходят от боковых сторон носа до уголков рта. В нижней зоне лица в процессе старения происходит обвисание тканей лица. Это приводит к так называемым «линиям улыбки». Эти и другие складки и морщины в настоящее время обычно лечат с помощью субдермальных и дермальных инъекций эстетических лицевых филлеров, которые восполняют утраченный кожей объем, тем самым уменьшая появление складок и морщин.
Гиалуроновая кислота (ГК), также известная как гиалуронан, в настоящее время является одним из наиболее часто используемых компонентов дермальных филлеров. Гиалуроновая кислота представляет собой природный водорастворимый полисахарид, более конкретно – гликозаминогликан, который является основным компонентом внеклеточного матрикса и широко распространен в тканях животных. Идентичность структуры гиалуроновой кислоты во всех видах и тканях делает этот полисахарид идеально подходящим веществом для использования в качестве биоматериала в области здравоохранения и медицины.
ГК обладает превосходной биосовместимостью и, в отличие от коллагена, не требует проведения какого-либо тестирования кожи перед имплантацией. Кроме того, ГК обладает способностью связываться с большим количеством воды, что придает ей превосходные свойства увеличения объема мягких тканей.
Чтобы повысить ее долговечность in vivo, ГК в дермальных филлерах обычно является поперечно-сшитой. Химически поперечно-сшитая ГК образуется путем взаимодействия не поперечно-сшитой ГК с поперечно-сшивающим агентом в подходящих условиях реакции.
Общепризнано, что дермальные филлеры на основе ГК, обладающие высокой вязкостью, например, те, которые являются поперечно-сшитыми в высокой степени, и/или получены из высокомолекулярной ГК, и/или имеют высокую концентрацию ГК, склонны к более долгому эффекту в организме. Напротив, принято считать, что дермальные филлеры на основе ГК, обладающие низкой вязкостью, например, те, которые являются поперечно-сшитыми в меньшей степени, и/или получены из низкомолекулярной ГК, и/или имеют низкую концентрацию ГК, могут обладать более коротким эффектом в организме. Естественно, инъекция высоковязкого материала с помощью иглы является относительно более сложным процессом и обычно требуется игла меньшего калибра (например, 21 G или 23 G, по сравнению с 27 G или 30 G) по сравнению с инъекцией материала с относительно низкой вязкостью. Разработать композицию на основе ГК, которая легко вводится с помощью иглы высокого калибра (то есть тонкой иглы) и которая обладает продолжительным эффектом в организме, оказалось сложной задачей.
Краткое описание изобретения
Настоящее изобретение относится к инъекционным композициям и в частности к инъекционным композициям для интрадермальной инъекции в кожу. Композиции и способы обеспечивают улучшение внешнего вида и состояния кожи за счет заполнения поверхностных дефектов кожи и/или улучшения состояния и внешнего вида кожи. В одном аспекте композиции и способы обеспечивают по меньшей мере одно из следующего: улучшение текстуры кожи, повышение степени увлажнения кожи и повышение эластичности кожи.
В одном аспекте настоящие композиции основаны на гиалуроновой кислоте (ГК) и фармацевтически приемлемых солях ГК, например гиалуронате натрия (NaГК). Многие из высоко инъекционных композиций продолжительного действия согласно настоящему изобретению включают поперечно-сшитую матрицу ГК, полученную с помощью ГК с относительно низкой молекулярной массой. В некоторых вариантах осуществления композиции имеют относительно низкую концентрацию ГК. Преимущественно, многие из предлагаемых в данном документе композиций обладают продолжительным эффектом. Например, вместо необходимых многократных повторных процедур каждые три-четыре недели, что характерно для стандартных способов лечения путем интрадермальной инъекции, продолжительность эффекта многих из представленных в данном документе композиций и способов составляет три месяца, четыре месяца, шесть месяцев, до года или более.
В широком аспекте изобретения предложена композиция, которая по большей части содержит гель ГК, содержащий или состоящий по существу из материала низкомолекулярной ГК. Компонент ГК включает более чем 50 масс.%, например по меньшей мере 70 масс.%, например приблизительно 90 масс.% низкомолекулярной ГК. Материал низкомолекулярной ГК имеет среднюю молекулярную массу не более чем приблизительно 0,20 МДа и приблизительно 0,99 МДа, как например от приблизительно 0,4 МДа до приблизительно 0,8 МДа.
В некоторых вариантах осуществления гель ГК может дополнительно содержать высокомолекулярную ГК, то есть материал ГК, обладающий молекулярной массой по меньшей мере от приблизительно 1,0 MДа до приблизительно 4,0 MДа. Как правило, в вариантах осуществления изобретения, включающих материал высокомолекулярной ГК, средневесовая молекулярная масса материала высокомолекулярной ГК по меньшей мере в два раза выше, чем у материала низкомолекулярной ГК.
ГК в геле ГК может быть поперечно-сшитой. Например, ГК может быть химически быть поперечно-сшитой подходящим поперечно-сшивающим агентом. В некоторых вариантах осуществления поперечно-сшивающий агент выбирают из группы, состоящей из диглицидилового эфира 1,4-бутандиола (BDDE), или 1,4-бис(2,3-эпоксипропокси)бутана, или 1,4-бисглицидилоксибутана (все они общеизвестны как BDDE), 1,2-бис(2,3-эпоксипропокси)этилена и 1-(2,3-эпоксипропил)-2,3-эпоксициклогексана.
В некоторых вариантах осуществления концентрация ГК в композиции составляет от приблизительно 10,0 мг/г до приблизительно 17,0 мг/г. В некоторых вариантах осуществления концентрация ГК составляет менее чем приблизительно 17,0 мг/г, например менее чем приблизительно 15,0 мг/г. В некоторых вариантах осуществления концентрация ГК составляет от приблизительно 10,0 до приблизительно 14,0 мг/г. В некоторых вариантах осуществления концентрация ГК составляет приблизительно 10,0 мг/г, приблизительно 11,0 мг/г, приблизительно 12,0 мг/г, приблизительно 13,0 мг/г или приблизительно 14,0 мг/г.
В другом аспекте изобретения предложены способы лечения кожи с использованием настоящих композиций. Например, предложены способы улучшения одной или нескольких характеристик кожи, или улучшения внешнего вида или текстуры кожи.
В одном аспекте предложены способы лечения сухости, текстуры или шершавости и/или эластичности кожи. В целом, способы включают обработку участка кожи путем введения в указанный участок многократных пространственно разнесенных инъекций композиции, включающей гель гиалуроновой кислоты (ГК), содержащий поперечно-сшитую ГК, при этом обработанная кожа в результате лечения сохраняет улучшенную степень увлажнения, более гладкую текстуру или повышенную эластичность в течение более продолжительного времени, например в течение по меньшей мере от 3 месяцев до года или более. В особенно предпочтительном варианте осуществления стадию введения осуществляют в ходе только однократной процедуры, тем самым устраняя необходимость повторных процедур для поддержания продолжительности эффекта.
В некоторых вариантах осуществления стадия введения включает введение композиции путем инъекций, разнесенных на расстояние от приблизительно 2 мм до приблизительно 30 мм. Например, стадия введения включает введение композиции путем инъекций, разнесенных на расстояние от приблизительно 5 мм до приблизительно 20 мм или от приблизительно 10 мм до приблизительно 15 мм. В некоторых вариантах осуществления композиции вводят на глубину от приблизительно 500 мкм до приблизительно 2000 мкм, например на глубину приблизительно 1000 мкм. В предпочтительных вариантах осуществления композиции вводят на глубину от приблизительно 0,5 мм до приблизительно 5,0 мм, предпочтительно от приблизительно 1,0 мм до приблизительно 4,0 мм, более предпочтительно от приблизительно 1,5 мм до приблизительно 3,0 мм. Как правило, более глубокая инъекция обеспечивает улучшение результатов увлажнения.
В другом аспекте изобретение относится к способу лечения шершавости кожи, включающему обработку участка кожи путем введения в указанный участок многократных пространственно разнесенных инъекций композиции, содержащей гель гиалуроновой кислоты (ГК), содержащий поперечно-сшитую ГК, где обработанная кожа в результате лечения сохраняет более гладкую текстуру в течение по меньшей мере приблизительно 3 месяцев, по меньшей мере приблизительно 4 месяцев, по меньшей мере приблизительно 6 месяцев или по меньшей мере приблизительно 12 месяцев.
Подробное описание изобретения
Термин «приблизительно» в контексте числовых значений будет понятен специалисту в данной области и предпочтительно означает, что конкретные значения могут быть изменены на +/- 10 %. Что касается граничных значений диапазонов, определение «приблизительно» предпочтительно означает, что значение нижней границы может быть уменьшено на 10 %, а значение верхней границы может быть увеличено на 10 %. Также предполагается, что каждое числовое значение или диапазон, раскрытые в этой заявке, могут быть абсолютными, то есть определение «приблизительно» может быть удалено.
Все числа, обозначающие в данном документе «молекулярную массу» ГК, следует понимать как обозначающие средневесовую молекулярную массу (Mw) в Дальтонах.
Молекулярную массу ГК рассчитывают по измерению характеристической вязкости с использованием следующего уравнения Марка Хоувинка:
3
-5
0,690
Характеристическая вязкость (м/кг) = 9,78 x 10 x Mw
Характеристическую вязкость измеряют в соответствии с процедурой, определенной Европейской Фармакопеей (монография ГК N°1472, 01/2009).
3
3
3
3
3
3
3
3
3
Высокомолекулярная ГК в контексте данного документа обозначает материал ГК, имеющий молекулярную массу по меньшей мере от приблизительно 1,0 млн. Дальтон (Mw ≥ 106 Да или 1 МДа) до приблизительно 5,0 МДа. Например, высокомолекулярная ГК в настоящих композициях может иметь молекулярную массу в диапазоне от приблизительно 1,5 MДа до приблизительно 3,0 MДа, или высокомолекулярная ГК может иметь средневесовую молекулярную массу приблизительно 2,0 MДа. В другом примере высокомолекулярная ГК может иметь молекулярную массу приблизительно 3,0 МДа. В другом примере высокомолекулярная ГК может иметь молекулярную массу приблизительно 1 MДа, что соответствует характеристической вязкости 1,35 м/кг при расчете в соответствии с уравнением Марка Хоувинка, как описано выше, 1,5 MДa (1,35 м/кг), 2 MДа (2,18 м/кг), 3 MДа (2,88 м/кг), 5 MДа (4,10 м/кг), 0,2 MДа (0,44 м/кг), 0,4 MДа (0,72 м/кг), 0,8 MДа (1,1 м/кг), 0,99 МДа (1,34 м/кг).
Низкомолекулярная ГК в контексте данного документа обозначает материал ГК с молекулярной массой менее чем приблизительно 1,0 MДа. Низкомолекулярная ГК может иметь молекулярную массу от приблизительно 200000 Да (0,2 MДа) до менее чем приблизительно 1,0 MДа, например от приблизительно 400000 Да до приблизительно 800000 Да, например от приблизительно 386000 Да (0,386 МДа) до приблизительно 740000 Да (0,74 МДа). В некоторых вариантах осуществления молекулярная масса низкомолекулярной ГК, используемой для получения поперечно-сшитой матрицы ГК, не превышает 0,99 MДа.
Предпочтительно, смесь низкомолекулярной ГК и высокомолекулярной ГК обладает бимодальным распределением молекулярной массы. Смесь также может обладать мультимодальным распределением.
В одном аспекте изобретения композиции содержат ГК с высокомолекулярным компонентом и низкомолекулярным компонентом, и высокомолекулярный компонент имеет средневесовую молекулярную массу, по меньшей мере в два раза превышающую средневесовую молекулярную массу низкомолекулярного компонента. Например, композиция в соответствии с этим аспектом изобретения может включать низкомолекулярный компонент, имеющий средневесовую молекулярную массу приблизительно 500000 Да, и высокомолекулярный компонент, имеющий средневесовую молекулярную массу приблизительно или по меньшей мере приблизительно 1,0 МДа.
В другом примере композиция по изобретению может включать низкомолекулярный компонент, имеющий средневесовую молекулярную массу приблизительно 800000 Да, и высокомолекулярный компонент, имеющий средневесовую молекулярную массу приблизительно или по меньшей мере приблизительно 1,6 MДа.
Степень поперечного сшивания измеряется конечным массовым отношением поперечно-сшивающего агента к дисахаридным звеньям ГК.
Не поперечно-сшитая ГК в контексте данного документа относится к отдельным молекулам полимера ГК, которые не сшиты поперечно друг с другом. Не поперечно-сшитая ГК в целом остается водорастворимой.
В настоящем изобретении представлены композиции для лечения кожи, например инъекционные композиции, которые могут вводиться интрадермально для улучшения внешнего вида или состояния кожи, например для улучшения степени увлажнения, текстуры и/или эластичности. Композиции также могут быть эффективны для лечения мелких и тонких морщин и для устранения поверхностных дефектов кожи. Также предложены способы получения этих композиций, а также способы лечения с применением этих композиций. Композиции основаны на гиалуроновых кислотах (ГК) и фармацевтически приемлемых солях ГК, например гиалуронате натрия (NaГК).
Гиалуроновая кислота (ГК) в контексте данного документа может относиться к любой из ее гиалуронатных солей и включает, но не ограничиваясь указанным, гиалуронат натрия (NaГК), гиалуронат калия, гиалуронат магния, гиалуронат кальция и их комбинации. В настоящем изобретении могут использоваться как ГК, так и их фармацевтически приемлемые соли.
Как правило, концентрация ГК в некоторых из настоящих композиций составляет от приблизительно 10,0 мг/г до приблизительно 17,0 мг/г. В некоторых вариантах осуществления концентрация ГК составляет менее чем приблизительно 17,0 мг/г, например менее чем приблизительно 15,0 мг/г. В некоторых вариантах осуществления концентрация ГК составляет от приблизительно 10,0 до приблизительно 14,0 мг/г. В некоторых вариантах осуществления концентрация ГК составляет приблизительно 10,0 мг/г, приблизительно 11,0 мг/г, приблизительно 12,0 мг/г, приблизительно 13,0 мг/г или приблизительно 14,0 мг/г.
Некоторые из композиций по изобретению включают дополнительные агенты, например анестетики, в количестве, эффективном для уменьшения боли, возникающей при инъекции композиции. Анестетик может быть выбран из группы, состоящей из амбукаина, амоланона, амилокаина, беноксината, бензокаина, бетоксикаина, бифенамина, бупивакаина, бутакаина, бутамбена, бутаниликаина, бутетамина, бутоксикаина, картикаина, хлорпрокаина, кокаэтилена, кокаина, циклометикаина, дибукаина, диметизохина, диметокаина, диперодона, дицикломина, экгонидина, экгонина, этилхлорида, этидокаина, бета-эукаина, эуроцина, феналкомина, формокаина, гексилкаина, гидрокситетракаина, изобутил-пара-аминобензоата, лейцинокаина мезилата, левоксадрола, лидокаина, мепивакаина, меприлкаина, метабутоксикаина, метилхлорида, миртекаина, наепаина, октокаина, ортокаина, оксетазаина, парэтоксикаина, фенакаина, фенола, пиперокаина, пиридокаина, полидоканола, прамоксина, прилокаина, прокаина, пропанокаина, пропаракаина, пропипокаина, пропоксикаина, псевдококаина, пиррокаина, ропивакаина, салицилового спирта, тетракаина, толикаина, тримекаина, золамина и их солей. В одном варианте осуществления по меньшей мере один анестетик представляет собой лидокаин, например, в форме лидокаина HCl. Композиции, описанные в данном документе, могут включать лидокаин в концентрации от приблизительно 0,1 масс.% до приблизительно 5 масс.% композиции, например от приблизительно 0,2 масс.% до приблизительно 1,0 масс.% композиции. В одном варианте осуществления композиция включает лидокаин в концентрации приблизительно 0,3 масс.% (масс./масс.%) композиции.
В некоторых вариантах осуществления композиции дополнительно содержат полезную добавку, например антиоксидант. В некоторых вариантах осуществления композиции включают, например, маннит. Маннит может присутствовать в количестве от приблизительно 0,1 масс.% до приблизительно 2,0 масс.% или от приблизительно 0,3 масс.% до приблизительно 0,9 масс.%. В некоторых вариантах осуществления маннит присутствует в количестве менее чем, не более чем или приблизительно 1,0 масс.%. В некоторых вариантах осуществления маннит присутствует в количестве приблизительно 0,9 масс.%. В других вариантах осуществления маннит присутствует в количестве приблизительно 0,1 масс.%, или приблизительно 0,2 масс.%, или приблизительно 0,3 масс.%, или приблизительно 0,4 масс.%, или приблизительно 0,5 масс.%, или приблизительно 0,6 масс.%, или приблизительно 0,7 масс.%, или приблизительно 0,8 масс.%, или приблизительно 0,9 масс.%, или приблизительно 1,0 масс.%. В других вариантах осуществления маннит присутствует в количестве более чем приблизительно 1,0 масс. %. В некоторых вариантах осуществления маннит присутствует в количестве от приблизительно 1,0 масс.% до приблизительно 5,0 масс.%.
В некоторых вариантах осуществления композиции дополнительно содержат витамин, например витамин С. В более предпочтительном варианте осуществления витамин представляет собой производное или стабилизированную форму витамина С, например 2-глюкозид аскорбиновой кислоты. Витамин может присутствовать в количестве от приблизительно 0,1 масс.% до приблизительно 2,0 масс.%, или от приблизительно 0,2 масс.% до приблизительно 1,0 масс.%, или от приблизительно 0,3 масс.% до приблизительно 0,6 масс.%. В некоторых вариантах осуществления витамин С присутствует в количестве приблизительно 0,6 масс.%. В других вариантах осуществления производное витамина С присутствует в количестве приблизительно 0,1 масс.%, или приблизительно 0,2 масс.%, или приблизительно 0,3 масс.%, или приблизительно 0,4 масс.%, или приблизительно 0,5 масс.%, или приблизительно 0,6 масс.%, или приблизительно 0,7 масс.%, или приблизительно 0,8 масс.%, или приблизительно 0,9 масс.%, или приблизительно 1,0 масс.%. В других вариантах осуществления производное витамина С присутствует в количестве более чем 1,0 масс.%. В некоторых вариантах осуществления производное витамина С присутствует в количестве от приблизительно 1,0 масс.% до приблизительно 5,0 масс.%.
В некоторых вариантах осуществления композиции дополнительно содержат комбинацию маннита и 2-глюкозида аскорбиновой кислоты. В некоторых из этих вариантов осуществления маннит присутствует в количестве не более чем 1,0 масс.%, например 0,9 масс.%, и 2-глюкозид аскорбиновой кислоты присутствует в количестве приблизительно 0,6 масс.%.
В некоторых вариантах осуществления композиции не включают антиоксидант или витамин. Например, в некоторых вариантах осуществления композиции содержат или состоят по существу из гиалуроновой кислоты, поперечно-сшитой поперечно-сшивающим агентом и водой. Эти композиции могут включать или не включать анестетик, такой как лидокаин.
Настоящие продукты и композиции предпочтительно предоставляются в стерильной форме. Композиции можно стерилизовать общеизвестными способами, например автоклавированием. Например, композиции могут быть стерилизованы путем воздействия на композиции температур, составляющих по меньшей мере от приблизительно 120 °С до приблизительно 130 °С, и/или давления, составляющего по меньшей мере от приблизительно 12 фунтов на квадратный дюйм (PSI) (82740 Па) до приблизительно 20 фунтов на квадратный дюйм (137900 Па) в течение периода по меньшей мере от приблизительно 1 минуты до приблизительно 15 минут.
Способ получения композиции включает стадии обеспечения неочищенного материала ГК в виде сухих волокон ГК или порошка. Неочищенный материал ГК может представлять собой ГК, ее соли и/или их смеси. В предпочтительном варианте осуществления материал ГК содержит волокна или порошок NaГК, например волокна NaГК бактериального происхождения. В некоторых аспектах настоящего описания материал ГК может быть животного происхождения. Материал ГК может представлять собой комбинацию неочищенных материалов, включающих ГК и по меньшей мере один другой полисахарид, например гликозаминогликан (GAG).
В широком аспекте изобретения материал ГК композиций может содержать поперечно-сшитую матрицу ГК, полученную с помощью от приблизительно 5 % до приблизительно 95 % низкомолекулярной ГК, причем оставшаяся часть материала ГК включает высокомолекулярную ГК.
В некоторых вариантах осуществления изобретения материал ГК, используемый для получения настоящих композиций, почти целиком содержит  или состоит из низкомолекулярной ГК. В некоторых вариантах осуществления, почти 100 % материала ГК, используемого для получения настоящих композиций, может представлять собой низкомолекулярную ГК, как определено выше. В других вариантах осуществления материал ГК, используемый для получения композиций, содержит комбинацию относительно высокомолекулярной ГК и относительно низкомолекулярной ГК, как определено выше. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере приблизительно 50 масс.%, например по меньшей мере приблизительно 70 масс.%, например по меньшей мере приблизительно 90 масс.% или более материала ГК в композициях представляет собой низкомолекулярную ГК, как определено выше, при этом остальная часть ГК представляет собой высокомолекулярную ГК. В одном варианте осуществления композиции получены с использованием отношения 90:10 низкомолекулярной ГК к высокомолекулярной ГК. То есть, композиции этих вариантов осуществления получены путем комбинации высокомолекулярной и низкомолекулярной ГК, причем приблизительно 90 масс.% ГК представляет собой низкомолекулярную ГК.
В одном варианте осуществления чистые, сухие волокна NaГК гидратируют в щелочном растворе для получения не поперечно-сшитого геля NaГК. Любой подходящий щелочной раствор можно использовать для гидратации NaГК на этой стадии, например, но не ограничиваясь указанным, водные растворы, содержащие гидроксид натрия (NaOH), гидроксид калия (КОН), бикарбонат натрия (NaHCO3), гидроксид лития (LiOH) и тому подобное. В другом варианте осуществления подходящим щелочным раствором являются водные растворы, содержащие NaOH. Полученный щелочной гель будет иметь рН выше 7,5. Полученный щелочной гель может иметь рН выше 9, или рН выще 10, или рН выше 11, или рН выше 12, или рН выше 13.
Следующая стадия в процессе получения включает стадию поперечного сшивания гидратированного щелочного геля NaГК с помощью подходящего поперечно-сшивающего агента. Поперечно-сшивающим агентом может быть любой агент, известный в качестве подходящего для поперечного сшивания полисахаридов и их производных посредством их гидроксильных групп. Подходящие поперечно-сшивающие агенты включают, но не ограничиваясь указанным, диглициновый эфир 1,4-бутандиола (или 1,4-бис(2,3-эпоксипропокси)бутан, или 1,4-бисглицидилоксибутан, известные под общим названием BDDE), 1,2-бис(2,3-эпоксипропокси)этилен и 1-(2,3-эпоксипропил)-2,3-эпоксициклогексан. Использование более чем одного поперечно-сшивающего агента или другого поперечно-сшивающего агента не исключается из объема настоящего изобретения. В одном варианте осуществления гели ГК, описанные в настоящем документе, поперечно сшиты с использованием BDDE.
Стадию поперечного сшивания осуществляют с использованием любых средств, известных специалистам в данной области техники. Специалисты в данной области техники понимают, как оптимизировать условия поперечного сшивания в соответствии с природой ГК и как осуществлять поперечное сшивание в оптимальной степени.
В другом варианте осуществления поперечное сшивание ГК осуществляют в ходе гидратации волокон ГК путем гидратации комбинированных высокомолекулярных и низкомолекулярных волокон в щелочном растворе, содержащем поперечно-сшивающий агент, например BDDE.
Степень поперечного сшивания в компоненте ГК настоящих композиций составляет по меньшей мере от приблизительно 1 масс.% до приблизительно 20 масс.% BDDE/ГК, например от приблизительно 4 масс.% до приблизительно 12 масс.%, например приблизительно 10 масс.%, например приблизительно 8 масс.%, например приблизительно 6 масс.%, например приблизительно 5 масс.%, например, приблизительно 4 масс.%.
Гидратированные поперечно-сшитые гели ГК могут быть подвержены набуханию для получения желаемой концентрации ГК. Эта стадия может быть осуществлена путем нейтрализации поперечно-сшитого гидратированного геля ГК, например путем добавления водного раствора, содержащего кислоту, такую как HCl. Затем гели оставляют набухать в фосфатно-солевом буферном растворе (PBS).
Гели могут быть очищены общеизвестными средствами, такими как диализ против фосфатного буфера или осаждением с помощью спирта, для восстановления поперечно-сшитого материала, для стабилизации рН материала и для удаления любого непрореагировавшего поперечно-сшивающего агента. Композиции смешивают для достижения гомогенности. Предпочтительно, стадия гомогенизации включает смешивание, перемешивание или измельчение гелей с контролируемой силой сдвига с получением по существу гомогенных смесей. В некоторых вариантах осуществления во время или после смешивания добавляют фосфатный буфер для достижения нужной концентрации ГК в конечной композиции.
3
В некоторых вариантах осуществления к композициям добавляют лидокаин (например, в виде лидокаина HCl) или другой подходящий анестетик. Например, рН очищенного по существу рН-нейтрального геля регулируют так, чтобы гель был слегка щелочным и имел рН более чем приблизительно 7,2, например от 7,5 до 8,0. Альтернативно, рН геля регулируют так, чтобы гель был щелочным и имел рН более 9, например от 10,0 до 11,0. Эта стадия может быть осуществлена с помощью любого подходящего средства, например путем добавления к гелям подходящего количества разбавленного NaOH, КОН, NaHCOили LiOH или любой другой щелочной молекулы, раствора и/или буферной композиции, известных специалисту в данной области. Например, в некоторых вариантах осуществления лидокаин HCl предоставлен в виде порошка, который солюбилизируют с использованием воды для инъекций (WFI). Затем лидокаин добавляют в (слегка) щелочной гель. Затем, если необходимо, в гель, содержащий лидокаин, может быть добавлена не поперечно-сшитая ГК. Например, в одном варианте осуществления желаемая концентрация ГК составляет приблизительно 12,0 мг/г. Композиции, содержащие лидокаин, могут иметь концентрацию лидокаина от приблизительно 0,1 масс.% до приблизительно 5 масс.% композиции, например приблизительно 0,3 масс.% (или % масс./масс.) относительно общей массы композиции. Композиции, содержащие не поперечно-сшитую ГК, могут иметь концентрацию не поперечно-сшитой ГК менее 10 масс.% или менее 5 масс.%, например предпочтительно от приблизительно 0,5 масс.% до приблизительно 1,5 масс.% композиции, например от 0,9 масс.% до 1,0 масс.% в расчете на общую массу композиции. Не поперечно-сшитая ГК предпочтительно является высокомолекулярной.
Композиции вводят в устройства для доставки, например шприцы. Шприцы, пригодные в соответствии с настоящим описанием, включают любой шприц, известный в данной области техники, способный доставлять вязкие композиции дермального филлера. Шприцы могут иметь внутренний объем от приблизительно 0,4 мл до приблизительно 3 мл, от приблизительно 0,5 до приблизительно 1,5 мл или от приблизительно 0,8 мл до приблизительно 1,0 мл.
В других вариантах осуществления композиции вводят в инъекционные устройства для доставки композиций с использованием многократных инъекций, образующих «микродепо», в относительно неглубокие поверхностные участки кожи.
Калибры игл, используемых для доставки настоящих композиций, включают калибры от приблизительно 18 G до приблизительно 40 G. В некоторых вариантах осуществления калибры игл для доставки композиций находятся в диапазоне от приблизительно 25 G до приблизительно 33 G, например от приблизительно 31 G до приблизительно 33 G или от приблизительно 32 G до приблизительно 33 G. В некоторых вариантах осуществления композиции доставляют с использованием иглы, имеющей калибр 28 G, 29 G, 30 G, 32 G или 33 G.
В другом аспекте изобретения предложены способы лечения кожи с использованием настоящих композиций. Например, предложены способы улучшения одной или нескольких характеристик кожи или улучшения внешнего вида или текстуры кожи.
В одном аспекте предложены способы лечения сухости, текстуры или шершавости и/или эластичности кожи. В основном способы включают обработку участка кожи путем введения в указанный участок многократных пространственно разнесенных инъекций композиции, включающей гель гиалуроновой кислоты (ГК), содержащий поперечно-сшитую ГК, где обработанная кожа сохраняет улучшенную степень увлажнения, более гладкую текстуру или повышенную эластичность, например в течение по меньшей мере от 3 месяцев до около года или более.
В особенно предпочтительном варианте осуществления стадию введения осуществляют в ходе только одной процедуры, тем самым устраняя необходимость повторных обработок для поддержания продолжительности эффекта.
В одном аспекте изобретения предложен способ лечения кожи, включающий введение композиции в кожу в ходе процедуры, включающей многократные инъекции композиции в участок кожи.
В одном варианте осуществления процедура включает однократное посещение пациентом практикующего врача. В ходе процедуры могут быть введены многократные инъекции в кожу, например в конкретный участок кожи.
Многократные инъекции в рамках однократной процедуры могут содержать, например, от 2 до приблизительно 500 инъекций, от приблизительно 50 до приблизительно 200 инъекций. В некоторых вариантах осуществления процедура включает, например, по меньшей мере 2 инъекции, по меньшей мере 10 инъекций, по меньшей мере 20 инъекций, по меньшей мере 40 инъекций, по меньшей мере 60 инъекций, по меньшей мере 80 инъекций, по меньшей мере 100 инъекций, по меньшей мере 140 инъекций, по меньшей мере 180 инъекций, по меньшей мере 200 инъекций, по меньшей мере 300 инъекций, по меньшей мере 400 инъекций, по меньшей мере 500 инъекций или более в указанный участок кожи.
В некоторых вариантах осуществления процедура занимает не более 45 минут, не более 30 минут, не более 15 минут или не более чем приблизительно 10 минут на область лечения. Область лечения определена как участок кожи, обрабатываемый с помощью настоящих композиций и способов. Область лечения может включать или состоять из по меньшей мере одного из участка кожи лица, шеи или декольте. Область лечения может также состоять из или включать участки кожи, отличные от лица, шеи или декольте, например участок кожи верхней части руки, колена, локтя, предплечья, задней части голени, бедра, спины или любой другой участок кожи, который может быть обработан с использованием настоящих композиций и способов, и может быть таким образом улучшен.
В некоторых вариантах осуществления стадия введения включает введение композиции путем инъекций, разнесенных на расстояние от приблизительно 2 мм до приблизительно 30 мм. Например, стадия введения включает введение композиции путем инъекций, разнесенных на расстояние от приблизительно 5 мм до приблизительно 20 мм. В некоторых вариантах осуществления стадия введения включает введение композиции путем инъекций, разнесенных на расстояние от приблизительно 10 мм до приблизительно 15 мм.
В некоторых вариантах осуществления инъекции вводят на очень небольшую глубину в кожу. Например, в некоторых вариантах осуществления композиции вводят на глубину не более чем приблизительно 2000 мкм. Например, инъекции могут быть введены на глубину от приблизительно 500 мкм до приблизительно 2000 мкм, от приблизительно 800 до приблизительно 1600 мкм, от приблизительно 1000 мкм до приблизительно 1200 мкм. В предпочтительных вариантах осуществления композиции вводят на глубину от приблизительно 0,5 мм до приблизительно 5,0 мм, предпочтительно от приблизительно 1,0 мм до приблизительно 4,0 мм, более предпочтительно от приблизительно 1,5 мм до приблизительно 3,0 мм.
В одном варианте осуществления изобретения инъекции вводят в количестве от приблизительно 1 мкл до приблизительно 200 мкл, например от приблизительно 5 мкл до приблизительно 100 мкл на инъекцию, например от приблизительно 20 мкл до приблизительно 80 мкл, например от приблизительно 40 мкл до приблизительно 60 мкл на инъекцию. В некоторых вариантах осуществления изобретения инъекции вводят в количестве от приблизительно 5 мкл до приблизительно 500 мкл на инъекцию, от приблизительно 10 мкл до приблизительно 400 мкл, от приблизительно 50 мкл до приблизительно 200 мкл или приблизительно 100 мкл на инъекцию.
В некоторых вариантах осуществления инъекции вводят с помощью иглы, имеющей калибр по меньшей мере 27 G, например 28 G, 30 G или 32 G.
Преимущественно, способ лечения может включать или состоять из однократной процедуры, которая длится относительно короткий промежуток времени. В некоторых вариантах осуществления процедура, охватывающая участок кожи, подвергаемый обработке, включает многократные интрадермальные инъекции в указанный участок кожи и занимает не более чем приблизительно 45 минут. В некоторых вариантах осуществления процедура занимает не более чем приблизительно 30 минут. В других вариантах осуществления процедура занимает не более чем приблизительно 20 минут, или занимает не более чем приблизительно 15 минут, или не более чем приблизительно 10 минут.
Также предложен способ лечения шершавости кожи, включающий обработку участка кожи путем введения в указанный участок многократных пространственно разнесенных инъекций композиции, включающей гель гиалуроновой кислоты (ГК), содержащий поперечно-сшитую ГК, где обработанная кожа сохраняет более гладкую текстуру в результате лечения в течение по меньшей мере приблизительно 3 месяцев, по меньшей мере приблизительно 4 месяцев, по меньшей мере приблизительно 6 месяцев, по меньшей мере приблизительно 9 месяцев или по меньшей мере приблизительно 12 месяцев.
В конкретном варианте осуществления композиции по изобретению содержат стерильный физиологический раствор геля гиалуроновой кислоты (ГК) неживотного происхождения, поперечно-сшитой с диглицидиловым эфиром 1,4-бутандиола (BDDE), в концентрации 12 мг/мл. Композиции пригодны для лечения поверхностных дефектов кожи, которое оценивается по улучшению текстуры кожи и улучшению характеристик кожи, таких как гладкость, степень увлажнения и эластичность, по сравнению с необработанными поверхностными дефектами кожи. В конкретном варианте осуществления способы лечения включают инъекции, например инъекции, образующие депо, в дерму с использованием иглы калибра 32 G в целевую анатомическую область (области). Целевые анатомические области включают области кожи лица и области кожи шеи. Улучшение внешнего вида кожи, например уменьшение появления дефектов, мелких и тонких морщин и неровной или шершавой текстуры по сравнению с необработанной кожей может быть явным образом заметным для пациента, и улучшение может продолжаться в течение по меньшей мере 4 месяцев, 6 месяцев, 9 месяцев или даже 12 месяцев, после одной процедуры продолжительностью всего 45 минут, или всего 30 минут, или всего 20 минут, или всего 15 минут или менее. Улучшение текстуры кожи можно оценить с использованием соответствующих шкал. Оценка характеристик кожи, степени увлажнения и эластичности может быть осуществлена с использованием соответствующих инструментов и сравнением с изначальным состоянием, то есть необработанной кожей. Другие методы оценки, например FACE Q и GAIS (шкала общего эстетического улучшения), могут быть использованы для оценки удовлетворенности испытуемых и исследователей, соответственно. В конкретном варианте осуществления продолжительность действия продукта после лечения составляет по меньшей мере приблизительно 4 месяца, например приблизительно 6 месяцев.
Добавление лидокаина в композиции в некоторых вариантах осуществления уменьшает боль в области лечения. Однако в некоторых вариантах осуществления композиции не включают лидокаин в целях удовлетворения потребностей пациентов в отношении аллергии на лидокаин и болевой чувствительности.
В другом варианте осуществления предложен способ улучшения по меньшей мере одного из гладкости, степени увлажнения и эластичности кожи, включающий введение в участок кожи на глубину от приблизительно 500 мкм до приблизительно 5000 мкм в ходе однократной процедуры многократных пространственно разнесенных инъекций композиции, содержащей гель гиалуроновой кислоты (ГК), содержащий BDDE-поперечно-сшитую ГК и не поперечно-сшитую ГК, где инъекции вводят в количестве от приблизительно 5 мкл до приблизительно 100 мкл на инъекцию, где инъекции доставляют с помощью иглы калибром от 28 G до 33 G, где инъекции разнесены на расстояние от приблизительно 5 мм до приблизительно 20 мм.
В некоторых вариантах осуществления участок кожи в результате лечения сохраняет улучшенную гладкость, степень увлажнения и/или эластичность в течение по меньшей мере приблизительно 3 месяцев, приблизительно 4 месяцев, приблизительно 5 месяцев, приблизительно 6 месяцев, 9 месяцев, 12 месяцев или дольше.
В другом варианте осуществления предложена композиция для улучшения по меньшей мере одного из гладкости, степени увлажнения и эластичности кожи, содержащая гель гиалуроновой кислоты (ГК), содержащий поперечно-сшитую матрицу ГК, полученную с помощью материала низкомолекулярной ГК, имеющей средневесовую молекулярную массу приблизительно 400000 Да и приблизительно 800000 Да; где концентрация ГК композиции составляет от приблизительно 10,0 мг/г до приблизительно 14,0 мг/г; и где кожа в результате лечения сохраняет повышенную гладкость, степень увлажнения и/или эластичность в течение по меньшей мере приблизительно 6 месяцев после введения в кожу в ходе однократной процедуры, включающей многократные пространственно разнесенные инъекции композиции, где инъекции вводят в количестве от приблизительно 5 мкл до приблизительно 100 мкл на инъекцию, с помощью иглы калибра от 28 G до 33 G, и инъекции разнесены на расстояние от приблизительно 5 мм до приблизительно 20 мм. Участок кожи в результате лечения может сохранять повышенную гладкость, степень увлажнения и/или эластичность в течение по меньшей мере приблизительно 3 месяцев, приблизительно 4 месяцев, приблизительно 5 месяцев, приблизительно 6 месяцев, 9 месяцев, 12 месяцев или дольше. Композиции могут дополнительно содержать по меньшей мере одно из маннита и витамина С. В некоторых вариантах осуществления в композициях присутствуют как маннит, так и производное витамина С.
Композиции связаны с твердостью геля G' от приблизительно 50 до 200 Па, такой как 100 – 150 Па или 120 Па, при измерении при 0,1 Гц, или от приблизительно 100 до 300 Па, такой как от 150 до 200 Па или 175 Па, при измерении при 5 Гц. Способ измерения твердости геля известен в данной области техники. Твердость геля является показателем мягкости дермального филлера.
Композиции дополнительно связаны с вязкостью геля G'' от приблизительно 10 до 100 Па, такой как 15 – 40 Па или 20 Па, при измерении при 0,1 Гц, или от приблизительно 10 до 100 Па, такой как 20 – 40 Па или 30 Па, при измерении при 5 Гц. Способ измерения вязкости известен в данной области техники.
Композиции также связаны со сжатием от приблизительно 5 до 20 Н, таком как 10 – 15 Н или 12 Н. Способ измерения сжатия известен в данной области техники. Cжатие является показателем устойчивости дермального филлера к деформации. Как правило, чем меньше сжатие, тем меньше подъемная растекаемость филлера, то есть филлер в этом случае больше подходит для лечения поверхностных морщин и складок на лице или шее по сравнению с филлерами, имеющими более сильное сжатие, которые подходят для более глубоких инъекций и восполнений объема.
Пример 1
Испытание на разрушение свободными радикалами позволяет оценить устойчивость образца геля к разрушению цепей ГК свободными радикалами (один из основных путей разрушения ГК). Испытания на разрушение свободными радикалами проводили на 3 разных партиях настоящих композиций. Полученные результаты представлены в Таблице 1. Было установлено, что все измерения соответствуют (CVr  менее 10 %).
Гель
Исходная вязкость (Па⋅с)
Время разрушения(с)
Коэффициент соответствия
LBA2-214
17,7
4572
CF
15,5
4858
16,1
5044
Среднее
16,4
4825
Ст. откл.
1,1
238
CVr (%)
7 %
5 %
LBA2-263
12,5
5377
CF
13,8
5009
13,9
4882
Среднее
13,4
5090
Ст. откл.
0,8
257
CVr (%)
6 %
5 %
LBA2-288
13,7
5057
CF
14,1
5189
13,7
4878
Среднее
13,8
5041
Ст.откл.
0,2
156
CVr (%)
2 %
3 %
Таблица 1. Результаты испытания разрушения настоящих композиций свободными радикалами
Изменчивость между партиями составляет приблизительно 3 % для трех разных партий, а среднее значение времени разрушения составляет 4985 с (Таблица 2).
LBA2-214
LBA2-288
LBA2-263
mes1
4572
5057
5377
mes2
4858
5189
5009
mes3
5044
4878
4882
среднее
4825
5041
5089
4985
Ст. откл.
238
156
257
141
CVr
5 %
3 %
5 %
3 %
Таблица 2. Изменчивость между партиями времени разрушения настоящих композиций
Пример 2
Представлена 37-летняя женщина с шершавой, сухой кожей лица вследствие старения, сухого климата и/или воздействия солнца и ветра на протяжении жизни. Врач вводит путем интрадермальных инъекций, образующих «микро депо», композиции, описанные в данном документе. Обработка включает от 10 до приблизительно 100 неглубоких инъекций в участок кожи, сделанных иглой калибра 32 G/4 мм. Областями лечения кожи являются лицо, шея и область декольте. Процедура на всех участках кожи пациента длится приблизительно 40 минут от начальной инъекции до конечной инъекции. В каждую область лечения вводят соответствующее количество композиции путем пространственно разнесенных инъекций. Например, в лицевой участок вводят от приблизительно 2 мл до приблизительно 3 мл композиции, которую вводят путем неглубоких однократных инъекций, разнесенных на расстояние от приблизительно 10 до приблизительно 15 мм. Шею обрабатывают от приблизительно 1 мл до 2 мл композиции, причем инъекции разнесены на расстояние от приблизительно 15 мм до приблизительно 20 мм. После обработки участки кожи оценивают зрительно, прикосновением и надавливанием. Фотографическую оценку проводят в начале и в конце обработки. Пациент сообщает врачу, что лечение вызвало лишь минимальный дискомфорт. Пациент возвращается к своим повседневным делам сразу после лечения. На небольшом участке на коже обработанной правой руки обнаружен экхимоз, но это проблема устранена через несколько дней после применения противовоспалительного крема. Пациент возвращается к врачу через 4 месяца после лечения для повторного осмотра. Перед повторным осмотром пациент не получает дополнительных инъекций филлеров или сеансов мезотерапии. Объективный осмотр при повторном посещении показал, что лечение привело к улучшению эпидермальной текстуры, уменьшению сухости и усилению яркости кожи. Эти улучшения частично подтверждены фотографической документацией. Обработанные участки кожи мягко пальпируются и, по всей видимости, имеют улучшенную степень увлажнения, упругости, эластичности и тонуса. Пациент выражает высокую степень удовлетворенности лечением, заполняя анкету по самооценке. Пациент утверждает, что состояние обработанных участков улучшилось, и он очень доволен результатами. Примечательно, что эти хорошие результаты достигнуты в результате всего лишь однократной процедуры без повторных инъекций, «дополнительных инъекций», или дальнейшего лечения инъекциями между временем процедуры и последующим визитом.
Пример 3
Увлажнение инъекционными композицями эпидермальных и дермальных структур живых эксплантатов кожи человека оценивали с помощью корнеометрических измерений: с помощью датчика Corneometer CM 825 (COURAGE & KHAZAKA) определяли уровень влажности самых внешних кожных слоев рогового слоя кожи. Принцип действия датчика Corneometer основан на изменении электрических емкостей детектора, который сконструирован в виде конденсатора. Поверхность измерительной головки при контакте с кожей изменяет свою электрическую емкость в соответствии с уровнем влажности кожи. В С0 (сутки 0) электрическая эпидермальная емкость, выраженная в AU (условных единицах), является показателем степени увлажнения кожи. Была исследована следующая композиция по настоящему изобретению:
Композиция согласно настоящему изобретению (P)
NaГК концентрация (мг/г)
10,5 – 13,5
Содержание лидокаина (масс.%)
0,27 – 0,33
Содержание не поперечно-сшитой ГК, имеющей высокую молекулярную массу (масс.%)
0,95
Таблица 3
Продукт хранили при комнатной температуре в течение всего времени исследования.
Получение эксплантата: в ходе абдоминопластики от 45-летней белой женщины были получены 9 эксплантатов. Эксплантаты поддерживали живыми в среде BEM (среда
для эксплантатов BIO-EC) при 37 °C во влажной атмосфере с 5 % CO2. Эксплантаты распределяли на 3 партии (Nb – Число):
Анализ
Партия
Наименование
Обработка
Число и размер эксплантатов
Время отборапроб
Корнеометрия
T-C1
Необработанный контроль (бланковый)
/
3; 1,5 x 2 см
С9
P-C1
Продукт P
Композиция согласно настоящему изобретению
3; 1,5 x 2 см
С9
P-C2
Продукт P
Композиция согласно настоящему изобретению
3; 1,5 x 2.5 см
С9
Таблица 4
Применение продукта: Эксплантаты партии С1, используемые для корнеометрии, обрабатывали 4 × 10 мкл инъекционного продукта (инъекции в виде квадрата), при этом расстояние между каждой точкой инъекции составляло 0,5 см (см. Фиг. 1). Эксплантаты партии С2, используемые для корнеометрии, обрабатывали 4 × 10 мкл инъекционного продукта (инъекции в виде квадрата), при этом расстояние между каждой точкой инъекции составляло 1 см (см. Фиг. 1). Необработанные контроли не получали никакого лечения.
Корнеометрия: Индекс увлажнения кожи, электрическую эпидермальную емкость оценивали с использованием датчика Corneometer CM825 (COURAGE & KHAZAKA) на эксплантатах в С0, С2, С7 и С9. Измерения проводили в центре квадратных эксплантатов с использованием зонда диаметром 1 см. Выполняли десять измерений и среднее значение рассчитывали с помощью корнеометра.
Отбор проб: В С0 три эксплантата из партии T0 отбирали и разрезали на 2 части: половину замораживали при - 80 °С и половину фиксировали в формалине. В С2, С7 и С9 по три эксплантата из каждой партии собирали и обрабатывали таким же образом.
Статистический анализ. Статистический анализ проводили в соответствии с t-критерием Стьюдента. t-критерий Стьюдента показывает вероятность «p» значимого различия между двумя партиями. Различие между двумя партиями является значимым, если p  менее 0,05 (*), то есть вероятность 95 % для двух партий является значимой; или если p менее 0,01 (**), то есть вероятность 99 % для двух партий является значимой.
Результаты: Корнеометрические измерения для каждой партии (см. также Фиг. 2 и 3):
С0
С2
С7
С9
Среднее
Ст.откл.
Среднее
Ст.откл.
Среднее
Ст.откл.
Среднее
Ст.откл.
T
78,9
1,7
82,7
1,3
82,5
1,0
79,5
3,9
Pc1
77,6
1,1
115,5
2,9
108,3
2,4
112,0
2,2
Pc2
77,1
0,8
104,6
6,8
110,5
3,7
110,1
5,0
Таблица 5: Корнеометрические данные
Корнеометрия показывает, что значения корнеометрии для продукта Pc1 выше на 44,0 % ** по сравнению с T в С2, выше на 34,9 % ** по сравнению с T в день С7, и выше на 43,6 % ** по сравнению с T в С9. Показатели корнеометрии для продукта Pc2 выше на 30,7 %* по сравнению с T в С2, на 38,6 %** по сравнению с Т в С7 и на 41,9 % ** по сравнению с T в С9. (Согласно t-критерию Стьюдента: * значимо при p менее 0,05 (95 %); ** значимо при p  менее 0,01 (99 %)). Композиции согласно настоящему изобретению демонстрируют хорошую увлажняющую активность независимо от исследуемого состояния (4 инъекции по 10 мкл каждая, разнесенные на 0,5 см или 1 см для Pc1 и Pc2 соответственно), это вызывает сильное увеличение значений эпидермальной емкости, что увеличивает степень увлажнения кожи.
Пример 3
Увлажнение кожи инъекционными композициями согласно настоящему изобретению на эпидермальных и дермальных структурах живых эксплантатов кожи человека оценивали с помощью дополнительных корнеометрических измерений. Были определены следующие композиции:
Композиция, содержащая только не поперечно-сшитую ГК (P1)
Композиция согласно настоящему изобретению (P2)
Концентрация NaГК (мг/г)
11,5 – 15,5
10,5 – 13,5
Содержание лидокаина
/
0,27 % – 0,33 %
Содержание маннита
0,70 % – 1,10 %
/
Содержание не поперечно-сшитой ГК, имеющей высокую молекулярную массу (масс.%)
100 %
0,95 %
Таблица 6
Продукты хранили при комнатной температуре в течение всего периода исследования.
Получение эксплантатов: от первого донора – 59-летней белой женщины, в ходе абдоминопластики было получено 9 эксплантатов размером 1,5 см х 2 см. От второго донора – 42-летней белой женщины в ходе абдоминопластики было получено 9 эксплантатов размером 1,5 см х 2 см. От третьего донора – 59-летней белой женщины в ходе абдоминопластики было получено 9 эксплантатов размером 1,5 см х 2 см. Для каждого донора 9 эксплантатов распределяли на 3 партии следующим образом:
Партия
Наименование
Обработка
Число эксплантатов
Время отборапроб
T
Необработанный контроль (бланковый)
/
3
С8
P1
Продукт 1
Композиция согласно настоящему изобретению
3
С8
Р2
Продукт 2
Композиция, содержащая только не поперечно-сшитую ГК
3
С8
Таблица 7
Применение продукта: На С0 3 x 50 мкл продуктов P1 или P2 вводили иглой в дерму прямоугольных эксплантатов (1,5 x 2 см). Необработанные контроли не получали никакого лечения.
Половину культуральной среды (1 мл) обновляли на сутки С1, С2, С5 и С7.
Корнеометрия: Индекс увлажнения кожи, эпидермальную емкость оценивали с использованием датчика Corneometer CM825 (COURAGE & KHAZAKA) на эксплантатах на сутки С0, С1, С2 и С8.
Результаты: Результаты корнеометрических измерений для трех доноров представлены как среднее трех значений (см. также Фиг. 4 и 5):
Сутки измерений
продукт
AU
С0
С1
С2
С8
Т
61,00(Ст. откл: 5,9)
63,45(Ст. откл: 6,0)
62,42(Ст. откл: 5,6)
61,98(Ст. откл: 7,5)
P1
64,76(Ст. откл: 4,3)
74,64(Ст. откл: 7,3)
76,54(Ст. откл: 5,6)
79,03(Ст. откл: 8,2)
P2
64,10(Ст. откл: 5,5)
87,90(Ст. откл: 10,5)
92,88(Ст. откл: 8,1)
95,37(Ст. откл: 10,1)
AU (условные единицы корнеометрических измерений)
Таблица 8
Для 3 доноров корнеометрия показывает, что при применении продукта P1 показатель корнеометрии увеличивается на 15 % на сутки С1 по сравнению с сутками С0, продолжает увеличиваться до 18 % на сутки С2 и увеличивается до 22 % на сутки С8. При применении продукта P2 показатели корнеометрии быстро увеличиваются на 37 % с С0 до С1, и продолжают увеличиваться с С2 до С8 до 49 %. В соответствии с этими экспериментальными условиями и по сравнению с контрольной партией на сутки С8 (TJ8) можно сделать следующий вывод:
Относительно TJ8
P1
P2
Корнеометрия С8
+ 22 %
+ 49 %
Таблица 9
В целом, в экспериментальных условиях этого исследования результаты показывают, что продукт согласно настоящему изобретению (Р2) демонстрирует повышенное увлажнение рогового слоя кожи на 8-ые сутки (С8) по сравнению с продуктом Р1 и необработанным контролем T.
Хотя изобретение было описано и проиллюстрировано с определенной степенью конкретности, понятно, что настоящее описание приведено только в качестве примера, и что специалисты в данной области техники могут вносить многочисленные изменения в комбинацию и распределение частей, стадий и элементов, не отступая от объема изобретения, как заявлено далее.
Изобретение может быть дополнительно проиллюстрировано следующими вариантами осуществления:
1. Инъекционная композиция, пригодная для уменьшения появления поверхностных дефектов на коже, содержащая:
гель гиалуроновой кислоты (ГК), содержащий поперечно-сшитую матрицу ГК, полученную с помощью материала низкомолекулярной ГК, имеющей средневесовую молекулярную массу от приблизительно 0,20 МДа до приблизительно 0,99 МДа;
где концентрация ГК в композиции составляет менее чем приблизительно 17,0 мг/г;
где композиция обеспечивает уменьшение появления поверхностных дефектов кожи в течение по меньшей мере приблизительно 3 месяцев после введения в кожу.
2. Композиция по пункту 1, где композиция обеспечивает уменьшение появления поверхностных дефектов кожи в течение по меньшей мере приблизительно 6 месяцев после введения в кожу.
3. Композиция по пункту 1, где композиция обеспечивает уменьшение появления поверхностных дефектов кожи в течение по меньшей мере приблизительно 9 месяцев после введения в кожу.
4. Композиция по пункту 1, дополнительно содержащая по меньшей мере одно из маннита и производного витамина С.
5. Композиция по пункту 4, где маннит присутствует в количестве от приблизительно 0,3 масс.% до приблизительно 0,9 масс.%.
6. Композиция по пункту 4, где производное витамина С представляет собой 2-глюкозид аскорбиновой кислоты.
7. Композиция по пункту 6, где 2-глюкозид аскорбиновой кислоты присутствует в количестве от приблизительно 0,3 масс. % до приблизительно 0,6 масс.%.
8. Композиция по пункту 1, дополнительно содержащая приблизительно 0,9 масс.% маннита и приблизительно 0,6 масс.% 2-глюкозида аскорбиновой кислоты.
9. Композиция по пункту 1, где средневесовая молекулярная масса материала низкомолекулярной ГК составляет от приблизительно 400000 Да до приблизительно 800 000 Да.
10. Композиция по пункту 1, где поперечно-сшитая матрица ГК поперечно сшита с помощью поперечно-сшивающего агента, выбранного из группы, состоящей из диглицилового эфира 1,4-бутандиола (BDDE), 1,4-бис(2,3-эпоксипропокси)бутана, 1,4-бисглицидилоксибутана, 1,2-бис(2,3-эпоксипропокси)этилена и 1-(2,3-эпоксипропил)-2,3-эпоксициклогексана.
11. Композиция по пункту 1, где концентрация ГК составляет от приблизительно 10,0 мг/г до приблизительно 14,0 мг/г.
12. Композиция по пункту 1, где концентрация ГК составляет приблизительно 12,0 мг/г.
13. Инъекционная композиция, пригодная для уменьшения появления поверхностных дефектов кожи или для улучшения состояния кожи, содержащая:
гель гиалуроновой кислоты (ГК), содержащий поперечно-сшитую матрицу ГК;
по меньшей мере одно из маннита и производного витамина С;
где концентрация ГК композиции составляет менее чем приблизительно 17,0 мг/г;
где композиция обеспечивает уменьшение появления поверхностных дефектов кожи или улучшение состояния кожи в течение по меньшей мере приблизительно 3 месяцев после введения в кожу.
14. Композиция по пункту 13, где композиция обеспечивает уменьшение появления поверхностных дефектов кожи или улучшение состояния кожи в течение по меньшей мере приблизительно 6 месяцев после введения в кожу.
15. Композиция по пункту 13, где композиция обеспечивает уменьшение появления поверхностных дефектов кожи или улучшение состояния кожи в течение по меньшей мере приблизительно 9 месяцев после введения в кожу.
16. Композиция по пункту 13, где маннит присутствует в количестве от приблизительно 0,3 масс.% до приблизительно 0,9 масс.%.
17. Композиция по пункту 13, где производное витамина С представляет собой 2-глюкозид аскорбиновой кислоты.
18. Композиция по пункту 17, где 2-глюкозид аскорбиновой кислоты присутствует в количестве от приблизительно 0,3 масс. % до приблизительно 0,6 масс.%.
19. Композиция по пункту 13, где по меньшей мере одно из маннита и производного витамина С содержит как маннит в количестве приблизительно 0,9 масс.%, так и производное витамина С в количестве приблизительно 0,6 масс.%.
20. Композиция по пункту 19, где производное витамина С представляет собой 2-глюкозид аскорбиновой кислоты.
21. Композиция по пункту 13, где концентрация ГК составляет от приблизительно 10,0 мг/г до приблизительно 14,0 мг/г.
22. Композиция по пункту 13, где концентрация ГК составляет приблизительно 12,0 мг/г.
23. Способ улучшения по меньшей мере одного из текстуры, степени увлажнения и эластичности, включающий:
обработку участка кожи путем введения в указанный участок кожи в ходе однократной процедуры многократных разнесенных инъекций композиции, содержащей гель гиалуроновой кислоты (ГК), содержащий поперечно-сшитую ГК;
где концентрация ГК композиции составляет менее чем приблизительно 17,0 мг/г;
где обработанная кожа в результате лечения сохраняет по меньшей мере одно из улучшенной текстуры, степени увлажнения и эластичности в течение по меньшей мере приблизительно 3 месяцев.
24. Способ по пункту 23, где обработанная кожа в результате лечения сохраняет по меньшей мере одно из улучшенной текстуры, степени увлажнения и эластичности в течение по меньшей мере приблизительно 6 месяцев.
25. Способ по пункту 23, где обработанная кожа в результате лечения сохраняет по меньшей мере одно из улучшенной текстуры, степени увлажнения и эластичности в течение по меньшей мере приблизительно 12 месяцев.
26. Способ по пункту 23, где концентрация ГК составляет от приблизительно 10,0 мг/г до приблизительно 14,0 мг/г.
27. Способ по пункту 23, где концентрация ГК составляет приблизительно 12,0 мг/г.
28. Способ по пункту 23, где инъекции разнесены на расстояние от приблизительно 5 мм до приблизительно 20 мм.
29. Способ по пункту 23, где инъекции вводят в количестве от приблизительно 5 мкл до приблизительно 100 мкл на инъекцию.
30. Способ по пункту 23, где обработка занимает не более чем 45 минут.
31. Способ по пункту 23, где инъекции доставляют с помощью иглы, имеющей калибр от 28 G до 33 G.
32. Способ по пункту 23, где композиция дополнительно содержит по меньшей мере одно из маннита и производного витамина С.
33. Способ по пункту 23, где маннит присутствует в количестве от приблизительно 0,3 масс.% до приблизительно 0,9 масс.%.
34. Способ по пункту 23, где производное витамина С представляет собой 2-глюкозид аскорбиновой кислоты.
35. Способ по пункту 34, где 2-глюкозид аскорбиновой кислоты присутствует в количестве от приблизительно 0,3 масс.% до приблизительно 0,6 масс.%.
36. Способ увеличения по меньшей мере одного из гладкости, степени увлажнения и эластичности кожи, включающий:
введение в участок кожи на глубину от приблизительно 0,5 до приблизительно 4,0 мм или от приблизительно 0,5 до приблизительно 5,0 мм в ходе одной процедуры многократных пространственно разнесенных инъекций композиции, содержащей гель гиалуроновой кислоты (ГК), содержащий BDDE-поперечно-сшитую ГК и не поперечно-сшитую ГК;
где инъекции вводят в количестве от приблизительно 5 мкл до приблизительно 100 мкл на инъекцию;
где инъекции доставляют с помощью иглы, имеющей калибр от 28 G до 33 G;
где инъекции разнесены на расстояние от приблизительно 5 мм до приблизительно 20 мм; и
где участок кожи в результате лечения сохраняет повышенную гладкость, степень увлажнения и/или эластичность в течение по меньшей мере приблизительно 6 месяцев.
37. Способ по пункту 36, где композиция дополнительно содержит по меньшей мере одно из маннита и производного витамина С.
38. Композиция для повышения по меньшей мере одного из гладкости, степени увлажнения и эластичности кожи, содержащая:
гель гиалуроновой кислоты (ГК), содержащий поперечно-сшитую матрицу ГК, полученную с помощью материала низкомолекулярной ГК, имеющего средневесовую молекулярную массу от приблизительно 400000 Да до приблизительно 800000 Да;
где концентрация ГК в композиции составляет от приблизительно 10,0 мг/г до приблизительно 14,0 мг/г; и
где композиция обеспечивает повышенную гладкость, степень увлажнения и/или эластичность в результате лечения в течение по меньшей мере, приблизительно 6 месяцев после введения в кожу в ходе одной процедуры, включающей многократные пространственно разнесенные инъекции композиции, где инъекции вводят в количестве от приблизительно 5 мкл до приблизительно 100 мкл на инъекцию, инъекции доставляют с помощью иглы калибра от 28 G до 33 G и инъекции разнесены на расстояние от приблизительно 5 мм до приблизительно 20 мм.
39. Композиция по пункту 38, где композиция дополнительно содержит по меньшей мере одно из маннита и производного витамина С.