Способы детектирования 5Т4-положительных циркулирующих опухолевых клеток и способы диагностики 5Т4-положительного рака у млекопитающего

1. Способ детектирования 5T4-положительных циркулирующих опухолевых клеток у млекопитающего, предположительно имеющего 5T4-положительный рак, включающий:
тестирование образца крови от млекопитающего, где образец крови содержит популяцию клеток;
закрепление образца крови на подложке;
детектирование наличия или отсутствия в образце крови первого маркера, который избирательно связывается с ядросодержащими клетками;
детектирование наличия или отсутствия в образце крови второго маркера, который связывается с циркулирующими опухолевыми клетками;
детектирование наличия или отсутствия в образце крови третьего маркера, который связывается с популяцией клеток или субпопуляцией популяции клеток, которые не определены как опухолевые клетки;
определение уровня экспрессии четвертого маркера в образце крови, который избирательно связывается с циркулирующими опухолевыми клетками, где четвертый маркер представляет собой человеческий антиген 5T4; и,
анализ популяции клеток, выявленной при помощи первого, второго, третьего и четвертого маркеров, для распознавания и характеристики циркулирующих опухолевых клеток.
2. Способ по п. 1, где наличие циркулирующих опухолевых клеток в образце крови указывает на наличие ранней стадии 5T4-положительного рака у млекопитающего.
3. Способ по п. 1, где отсутствие циркулирующих опухолевых клеток в образце крови указывает на отсутствие заболевания или неизмеряемые проявления заболевания у млекопитающего.
4. Способ по п. 1, где наличие или отсутствие циркулирующих опухолевых клеток в образце крови служит контролем лечения во время лечения 5T4-положительного рака или выздоровления от рака.
5. Способ по п. 1, где популяция клеток представляет собой смешанную популяцию клеток.
6. Способ по п. 1, где подложка представляет собой плоскую подложку.
7. Способ по п. 1, где подложка представляет собой микроструйное устройство.
8. Способ по п. 1, где подложка представляет собой картридж, который удерживает обогащенную популяцию клеток.
9. Способ по п. 1, где закрепление образца крови на подложке приводит к формированию биологического монослоя.
10. Способ по п. 1, где первый маркер, второй маркер, третий маркер или четвертый маркер представляют собой флуоресцентный маркер.
11. Способ по п. 1, где первый маркер применяют в анализе популяции клеток по деталям ядра, контуру ядра, наличию или отсутствию ядрышек, качеству цитоплазмы или количеству цитоплазмы.
12. Способ по п. 11, где в анализе применяют DAPI (4′,6-диамидино-2-фенилиндол).
13. Способ по п. 11, дополнительно включающий анализ популяции клеток путем определения интактных клеток с высоким ядерно-цитоплазматическим отношением, интактных клеток с низким ядерно-цитоплазматическим отношением, ранних апоптотических клеток или поздних апоптотических клеток и распознавания циркулирующих опухолевых клеток и кластеров циркулирующих опухолевых клеток.
14. Способ по п. 1, где второй маркер или третий маркер представляет собой клеточноспецифичный маркер.
15. Способ по п. 14, где клеточноспецифичный маркер представляет собой цитокератин, CD45, M30, хемокиновый рецептор, CXCR1 (C-X-C хемокиновый рецептор 1), CXCR4, CD44, CD24, VEGFR-1 (рецептор фактора роста эндотелия сосудов-1), VEGFR-2, VEGFR-3, EGFR (рецептор эпидермального фактора роста) или HuR (человеческий антиген R).
16. Способ по п. 15, где клеточноспецифичный маркер представляет собой цитокератин.
17. Способ по п. 15, где клеточноспецифичный маркер представляет собой CD45.
18. Способ по п. 1, где первый маркер представляет собой цитологический краситель для распознавания циркулирующей опухолевой клетки по морфологии, размеру или ядерно-цитоплазматическому отношению.
19. Способ по п. 18, где цитологический краситель представляет собой краситель Райта-Гимзы.
20. Способ по п. 1, где детектирование наличия первого маркера, наличия второго маркера, наличия третьего маркера или наличия четвертого маркера дополнительно включает анализ популяции клеток по прикреплению клеток к подложке, сканирование популяции клеток на подложке и визуализацию клеток посредством цифровой микроскопии с использованием перемещения.
21. Способ по п. 1, где детектирование 5T4-положительных циркулирующих опухолевых клеток в образце крови указывает на 5T4-положительный рак.
22. Способ по п. 21, где 5T4-положительный рак выбран из группы, состоящей из карцином мочевого пузыря, молочной железы, шейки матки, толстой кишки, эндометрия, почки, легкого, пищевода, яичника, предстательной железы, поджелудочной железы, кожи, желудка и яичек.
23. Способ диагностики 5T4-положительных циркулирующих опухолевых клеток у млекопитающего, предположительно имеющего 5T4-положительный рак, включающий:
тестирование образца крови от млекопитающего, где образец крови содержит популяцию клеток;
закрепление образца крови на подложке;
детектирование наличия или отсутствия в образце крови первого маркера, который избирательно связывается с ядросодержащими клетками;
детектирование наличия или отсутствия в образце крови второго маркера, который связывается с циркулирующими опухолевыми клетками;
детектирование наличия или отсутствия в образце крови третьего маркера, который связывается с популяцией клеток или субпопуляцией популяции клеток, которые не определены как опухолевые клетки;
детектирование наличия или отсутствия в образце крови четвертого маркера, который избирательно связывается с циркулирующими опухолевыми клетками, где четвертый маркер представляет собой человеческий антиген 5T4;
анализ и количественная оценка популяции клеток, выявленной при помощи первого, второго, третьего и четвертого маркеров, для идентификации и характеристики циркулирующих опухолевых клеток.
24. Способ по п. 23, где количественное измерение человеческого антигена 5T4 на циркулирующих опухолевых клетках используют для генерирования H-индекса (H-score), который применяют для выбора группы пациентов с 5T4-положительным раком.
25. Способ скрининга активности или эффективности конъюгата антитело-лекарственное средство для лечения 5T4-положительного рака у млекопитающего, предположительно имеющего рак, включающий:
введение терапевтически эффективного количества конъюгата антитело-лекарственное средство млекопитающему;
тестирование образца крови от млекопитающего, где образец крови содержит популяцию клеток;
закрепление образца крови на подложке;
детектирование наличия или отсутствия в образце крови первого маркера, который избирательно связывается с ядросодержащими клетками;
детектирование наличия или отсутствия в образце крови второго маркера, который связывается с циркулирующими опухолевыми клетками;
детектирование наличия или отсутствия в образце крови третьего маркера, который связывается с популяцией клеток или субпопуляцией популяции клеток, которые не определены как опухолевые клетки;
детектирование наличия или отсутствия в образце крови четвертого маркера, который избирательно связывается с циркулирующими опухолевыми клетками, где четвертый маркер представляет собой человеческий антиген 5T4; и,
анализ популяции клеток, выявленной при помощи первого, второго, третьего и четвертого маркеров, для распознавания и характеристики циркулирующих опухолевых клеток в образце крови до лечения конъюгатом антитело-лекарственное средство по сравнению с образцом крови после лечения конъюгатом антитело-лекарственное средство,
где изменение в соотношении 5T4-положительных циркулирующих опухолевых клеток и 5T4-отрицательных циркулирующих опухолевых клеток в образце крови после лечения по сравнению с соотношением 5T4-положительных циркулирующих опухолевых клеток и 5T4-отрицательных циркулирующих опухолевых клеток в образце крови до лечения может показывать эффективность конъюгата антитело-лекарственное средство в уменьшении количества 5T4-положительных циркулирующих опухолевых клеток.
26. Способ по п. 25, где конъюгат антитело-лекарственное средство представляет собой анти-5T4-A1-mcMMAF.
27. Способ детектирования 5T4-положительных циркулирующих опухолевых клеток у млекопитающего, предположительно имеющего 5T4-положительный рак, включающий:
тестирование образца крови от млекопитающего, где образец крови содержит популяцию клеток;
закрепление образца крови на подложке;
детектирование наличия или отсутствия в образце крови первого маркера, который избирательно связывается с ядросодержащими клетками, где первый маркер представляет собой DAPI;
детектирование наличия или отсутствия в образце крови второго маркера, который связывается с циркулирующими опухолевыми клетками, где второй маркер представляет собой цитокератин;
детектирование наличия или отсутствия в образце крови третьего маркера, который связывается с популяцией клеток или субпопуляцией популяции клеток, которые не определены как опухолевые клетки, где третий маркер представляет собой CD45;
детектирование наличия или отсутствия в образце крови четвертого маркера, который избирательно связывается с циркулирующими опухолевыми клетками, где четвертый маркер представляет собой человеческий антиген 5T4; и,
анализ и количественную оценку популяции клеток, выявленной при помощи первого, второго, третьего и четвертого маркеров, для распознавания и характеристики циркулирующих опухолевых клеток.
28. Способ по п. 27, где анализ популяции клеток, выявленной при помощи первого, второго, третьего и четвертого маркеров, используют для определения включения млекопитающих в лечение 5T4-положительного рака или исключения из него.