СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ ГЕПАТОЗА МОЛОЧНЫХ КОРОВ В УСЛОВИЯХ ТЕХНОГЕННЫХ ПРОВИНЦИЙ С ИЗБЫТКОМ СВИНЦА, НИКЕЛЯ И КАДМИЯ
METHOD OF TREATING HEPATOSIS OF DAIRY COWS IN CONDITIONS OF TECHNOGENIC PROVINCES WITH EXCESS LEAD, NICKEL AND CADMIUM

Изобретение относится к ветеринарии и может быть использовано при лечении гепатоза высокопродуктивных коров в условиях техногенных провинций, где объекты окружающей среды содержат высокий уровень солей никеля, свинца и кадмия.
Насыщенность кормовых рационов животных токсическими элементами в совокупности с другими причинами (белковый перекорм, низкокачественные сочные корма, гиподинамия) способствуют развитию гепатоза. Незаразная патология на Южном Урале имеет широкое распространение. По результатам исследований A.M. Гертмана и др. [2014; 6] установлено, что в хозяйствах Челябинской области на долю болезней печени приходится 14-23% от общего числа всех внутренних незаразных заболеваний животных.
Известно, что токсикоэлементы мигрируют по цепочке «почва -кормовые культуры - организм животного» и способствуют изменению течения всех обменных процессов. По данным A.M. Ежковой, А.Х. Яппарова, М.С. Ежковой [2011; 8], И.А. Шкуратовой [2001; 21] основными органами - «мишенями» в организме являются печень и почки, в которых могут протекать изменения как невоспалительного, так и воспалительного характера. Именно поэтому в молочном скотоводстве на территориях экологического неблагополучия у животных часто регистрируют гепатоз. Особенно настораживает тот факт, что заболеванию в большей степени подвержены те животные, у которых продуктивность превышает 4,5 тыс.кг молока за лактацию.
Жировой гепатоз - заболевание печени, сопровождающееся дистрофическими изменениями печеночной паренхимы невоспалительного характера. Он характеризуется накоплением в гепатоцитах триглицеридов и нарушением функции органа в целом. Болеют все виды животных, особенно при интенсивном их использовании [Г.Г. Щербаков, А.В. Коробов, 2009; 4].
Лечению коров, больных гепатозом посвящено достаточно большое количество работ [И.А. Шкуратова и др., 2005 [2]; И.А. Никулин, 2006 [/6]; И.И. Калюжный и др., 2007 [11]; Б.В. Уша и др., 2011 [19]]. Однако четких и терапевтически эффективных схем, особенно для условий природно-техногенных провинций, до настоящего времени не разработано. В связи с этим ветеринарная практика не имеет возможности проводить лечебно-профилактические мероприятия в условиях техногенного прессинга, что сопровождается выбраковкой значительного количества животных по причине отмеченной патологии и большими экономическими потерями.
1
2
3
6
12
В работах СМ. Сулейманова, B.C. Слободяника, A.M. Самотина и др. [2004; 18] было предложено применение биологически активного препарата растительного происхождения - гувитана. Данный препарат в своем составе содержит ряд биологически активных веществ, среди которых - соли гуминовых кислот, гуматомелановые и сульфокислот, аминокислоты, пептиды, микроэлементы и витамины (В, В, B, В, Β, С, РР, фолиевая кислота, пантотеновая кислота, биотин), амилаза и каталаза. Опытная группа бычков на откорме в возрасте 10-12 месяцев получала препарата из расчета 0,45 л гувитановой вытяжки на 100 кг массы тела в течение 4 месяцев. Данный способ нетехнологичен и трудоемок ввиду неудобства дозирования и введения в состав рациона.
И.А. Шкуратовой и др. [2005; 2] было предложено применение препарата Нутрил-Se, который представляет собой комбинацию 12 витаминов (А, С, D, Е, К, группы В), 3 незаменимых аминокислот (триптофан, лизин, метионин) и селена. Выбор препарата обусловлен тем, что селен обладает высокой детоксикационной активностью, что связано с его способностью вступать в реакцию с тяжелыми металлами. Он восстанавливает дисульфидные связи с белками и SH-группы хорошо улавливают тяжелые металлы. Селен также является антиоксидантом, предупреждая активизацию перекисного окисления липидов. Защитное действие селена дополняется и усиливается витаминами, которые входят в состав препарата. Коровам опытной группы в течение пяти дней скармливали Нутрил-Se в дозе 10 г на голову в сутки. Препарат задавали в виде порошка в смеси с концентратами. Данный метод применения в условиях крупных промышленных предприятий позволит обеспечить желаемый эффект, но он не снижает содержание токсических веществ в организме животного.
Наиболее близким аналогом является способ лечения крупного рогатого скота, больного гепатозом, по схеме, включающей введение 20%-го раствора фитопрепарата Люцэвита, полученного из люцерны посевной путем экстрагирования и последующего концентрирования смеси, в дозе 25 мг/кг массы тела внутримышечно 1 раз в день в течение трех суток, трехкратно с интервалом три дня [И.Ф. Хазимухаметова, P.P. Идрисова, 2008; 20].
Препарат содержит ряд биологически активных веществ (стеролы, витамины, аминокислоты, сахара, макро- и микроэлементы), которые участвуют в нейтрализации пищевых токсинов в печени и тонком кишечнике, регулируют обменные процессы, повышают естественную резистентность организма, нормализуют микрофлору кишечника, обладают гепатопротекторным и желчегонным действием. Однако этот метод лечения гепатоза не технологичен, так как требует индивидуального подхода к животному и не решает проблему детоксикации организма от токсических элементов, не исключает содержания в самом препарате солей тяжелых металлов, которых в избытке содержится в почвах, где выращивается люцерна.
Так, C.B. Васильевой [2011; 1] предложено вводить в рацион коров витаминно-минеральный премикс, содержащий витамины группы В, A, D, Е, H, а также макро- (кальций, фосфор, магний, сера) и микроэлементы (медь, цинк, кобальт, йод, селен). При этом коровам опытной группы в течение двух месяцев перед отелом ежедневно вводили предложенный комплекс из расчета 100 г на голову в сутки. Продолжительный период применение премикса, затраты большого количества препарата, а также отсутствие детоксикационного эффекта не позволяет рекомендовать данный состав для животных, находящихся в зоне экологического неблагополучия.
А.А. Концевова [2014; 13] предлагает новый способ коррекции печеночной недостаточности у собак путем применения комплекса методов и средств, в основе которых лежит динамическая электронейростимуляция (ДЭНС) на биологически активные точки и наносуспензии кластерного серебра с добавлением желчи крупного рогатого скота в составе препарата Фаргентум-G. Препарат вводят перорально после кормления 2 раза в день с интервалом 12 часов; дозу препарата для животных назначают из расчета 1 мл/кг массы тела. Курс применения препарата при хронической печеночной недостаточности составляет 19 суток. Сеанс динамической электронейростимуляции проводят 2 раза в день после выпаивания Фаргентум-G. Длительность сеанса 10 минут. Воздействие оказывают на биологически активные точки, которые применяют в диагностике функционального состояния печени. Они располагаются на брюшной стороне тела и относятся к меридианам печени, желудка и селезенки -поджелудочному и переднему срединному. Данный способ требует значительно времени для проведения процедуры, наличия приборов для ДЭНС. Кроме того, тип питания собак разительно отличается от такового высокопродуктивных жвачных животных.
A.M. Савелов, А.Г. Хисамутдинов, А.З. Равилов и др. [2014; 17] получили положительные результаты при применении выветренного экстракта Виватон в бройлерном птицеводстве при целом ряде патологий. В том числе и при токсической дистрофии печени. Экстракт Виватон - фармакопейный препарат растительного происхождения, полученный экстрагированием различных трав (до 28), содержащих в своем составе сбалансированные биологические компоненты. В нем индентифицированно около 200 активных лекарственных ингредиентов, которые содержатся непосредственно в травяном сборе или образуются при гидролизе исходных компонентов в процессе экстракции. Экстракт Виватон в своем составе содержит органические кислоты, аминокислоты, в том числе незаменимые, витамины, фитонциды. Глюкозиды, сапонины, эфирные масла и другие. Кроме того, он содержит железо, кальций, калий, магний, натрий, кобальт, марганец, медь, марганец, хром, цинк, никель, кадмий, свинец, ртуть. В 1 л экстракта Виватона содержится наибольшее количество калия и магния, а содержание ртути, свинца и кадмия не превышает предельно допустимой концентрации, согласно требованиям СанПиН. Его применяли в дозе 2 мл на 1 кг массы цыплят с питьевой водой. Предварительно перед применением из состава экстракта проводили удаление (выветривание) нашатырного спирта, используемого в качестве консерванта. Препарат применяли в период роста птицы и стартового откорма (1-24-ый день выращивания) и в период интенсивного откорма (30-35-ый день) с перерывами на вакцинации. На наш взгляд применение этого экстракта в условиях интенсивных техногенных нагрузок необоснованно, так как будет способствовать большему накоплению солей тяжелых металлов в организме, а также получаемой от этих животных продукции.
Ряд авторов [Е.В. Зинченко, 2000 [9]; Б. Калоев, 2003 [10]] предлагает при гепатопатиях применять препараты растительного происхождения, которые чаще всего содержат в своем составе экстракт флавоноидов расторопши пятнистой. Они защищают мембраны клеток печени от проникновения в них токсинов. Благодаря фенольной структуре способны связывать радикалы и прерывать процессы перекисного окисления липидов в гепатоцитах. Флавоноиды расторопши стимулируют и систему антиоксидантной защиты, повышают содержание восстановленного глутатиона в печени, а также синтез белка; ускоряют регенерацию поврежденных гепатоцитов. Применение препаратов этой группы при болезнях печени может быть целесообразным также при сочетании вирусного поражения печени с токсическим. Сложность представляет то, что до настоящего времени нет четких указаний по способу, дозе, кратности и продолжительности лечения гепатопатий у животных. Ссылка ряда авторов на безвредность препарата не позволяет экстракт широко применять в ветеринарии.
Л.Е. Колкунова [2013; 12] для фармакокоррекции токсического гепатоза у индюков-бройлеров рекомендует применять препарат Овсар в дозе 0,5 г/кг массы тела ежедневно в течение 28 дней (до конца откорма), а для фармакологической коррекции токсического гепатоза цыплят - скармливать Овсар в дозе 0,3 г/кг массы тела в течение 12 суток (до окончания откорма). Возможно применение Овсара в хозяйствах из расчета 3-5% от сухого вещества корма.
Овсар - многокомпонентное фармакологическое средство для фармакокоррекции токсических гепатозов и повышения продуктивности сельскохозяйственной птицы. В своем составе содержит жмых расторопши, пророщенные зерна овса и фосфогипс. Фосфогипс - это комплекс дегидратсульфата кальция (не менее 92%), кремнефторидов щелочных металлов (натрий, калий), фторидов кальция, фосфатов железа и алюминия, фтораппатита кальция, нефелина, силикатов железа и алюминия.
Жмых расторопши получают путем холодного отжима масла из перемолотых семян расторопши и относится к группе растительных гепатопротекторов, которые оказывают защитное и восстанавливающее действие на печень. Действующими активными веществами расторопши являются силимарин и силибин. Семена расторопши пятнистой содержат жирное масло (до 32%), эфирное масло (0,08%), смолы, слизь, биогенные амины (тирамин, гистамин), флавононоллигнаны (2,8-3,8%), силибин, силимарин, макроэлементы (9,2 мг калия, 16,6 - кальция, 4,2 - магния, 0,08 мг/кг - железа), микроэлементы (0,1 мкг марганца, 1,16 - меди, 0,71 - цинка, 0,15 - хрома, 22,9 - селена, 0,09 - йода, 22,4 мкг/кг бора и др.). Концентрируют медь и селен. Силимарин эффективно защищает печень от воздействия токсических веществ, восстанавливая дренажную функцию желчевыводящих путей, способствуя выработке и усилению выведения желчи, оптимальное количество которой обеспечивает полное переваривание жиров и необходимое усвоение жирорастворимых витаминов. Силимарин активизирует перистальтику кишечника и тем самым способствует своевременному выведению его содержимого. Отмечено угнетающее действие силимарина на фермент, ускоряющий процесс перекисного окисления в клетках организма, что является мощным средством защиты печени от негативного действия поступающих в организм токсинов. Силимарин способен нейтрализовать активные формы кислорода и прекращать цепные свободнорадикальные реакции, обрывая цепи. Он подвергает трансформации в печени свободные радикалы, переводя их в менее токсичные формы. Силимарин препятствует разрушению мембран клеток печени; оказывает иммуномодулирующее действие, так как способствуя нормальному функционированию печени, поддерживает всю иммунную систему организма. При участии силимарина нормализуется антитоксическая функция печени, которая нарушается при разрушении липидного слоя клеточных мембран препаратами различных фармакологических групп, токсинами, в том числе и грибкового происхождения.
Второй флавоноид расторопши - силибин способствует выработке клетками печени глутатиона - одного из собственных сильнейших антиоксидантов организма. Силибин способствует образованию новых гепатоцитов, восстанавливая пораженные токсинами и вирусами клетки печени, стимулируя синтез РНК, белков и фосфолипидов, которые активизируют рост клеток. Состояние животных с заболеваниями печени стабилизируется, нормализуются показатели крови: снижается активность трансаминаз, γ-глутамилтрансферазы, щелочной фосфатазы и уровень билирубина; снижается содержание в желчи холестерина.
В состав препарата Овсар включены пророщенные зерна овса, которые во многом превосходят проростки других злаковых культур. Пророщенные зерна овса характеризуются оптимальным соотношением белков (9-20%), жиров (11%), углеводов (40%) и витаминов группы В. Овес содержит растворимую клетчатку, витамины Ε и К, кальций, магний, серу, железо, кремний, хром, цинк, фтор, йод. Проростки овса обладают обволакивающим, желчегонным и мочегонным действием. Они активизируют выведение токсинов. Часто проростки овса используют как тонизирующее, общеукрепляющее, противовоспалительное и антигипоксическое средство.
Н.А. Кочуева [2007; 14] предлагает больным гепатозом норкам применять отечественный гомеопатический препарат Лиарсин (ООО «Хелвет», г. Москва), эффективно регулирующий обмен веществ у животных и обладающий гепатотропным действием. В составе этого препарата входят три основных компонента, каждый из которых имеет широкое применение в гомеопатической практике: Licopodium (разведение D30), Arsenicum album (разведение D8), Phosphorus (разведение DI 2). Препарат вводили внутримышечно в дозе 0,5 мл двукратно с интервалом 7 дней. Применение данного способа терапии коров, больных гепатозом, неприемлем, так как основу рациона жвачных составляют корма растительного происхождения и генез патологии несколько отличается от такового у плотоядных.
По данным Г.А. Востроиловой [2004; 3] такие оригинальные препараты, как липотон и аминотон, полученные методом криогенной сублимации, являются эффективными гепатопротекторами, превосходящими эталонные средства Сирепар и Эссенциале по степени благоприятного влияния на структурно-метаболические показатели печени на фоне экспериментального гепатоза. Исследования проводились на белых беспородных крысах. Животным опытной группы внутримышечно применяли тканевые препараты: липотон в дозе 0,05 и 0,005 мл/кг, аминотон - 0,1 мл/кг массы тела.
Липотон - препарат фосфолипидов, аминотон содержит аминокислоты. По мнению автора наиболее выраженными гепатопротективными свойствами обладает липотон - липофильная фракция криосублимированных тканей плаценты, полученная методом хладоновой экстракции. В состав липотона входит мионозит, который обладает липотропными свойствами и встраивается в фосфатидилинозитолы клеточных мембран. Фосфатидилинозитол (одно из активно действующих веществ липотона) - важнейший компонент клеточных мембран и липопротеинов, оказывающих мембранопротекторное действие. Одним из эффектов полиненасыщенного фосфатидилхолина, входящего в состав препарата является активация коллагеназ в липоцитах, которые продуцируют коллаген в тканях печени. Таким образом, липотон профилактирует возникновение фиброза и цирроза печени. Механизм гепатопротекторного влияния препаратов аминотон и липотон обусловлен их антиоксидантными свойствами, восстановлением нормального спектра мембранных фосфолипидов, улучшением антитоксической функции печени. Но массовое применение указанных препаратов проблематично из-за их возможных побочных действий, наличия противопоказаний, недостаточности информации о дозировке препарата и длительности курса лечения.
В качестве прототипа заявленного способа использовали метод лечения, предложенный коллективом под руководством A.M. Гертмана [5]. В течение 85-90 суток проводят лечение коров, больных гепатозом комплексным применением вермикулита Потаненского месторождения в дозе 0,1 г/кг массы тела два раза в сутки, в течение 14 суток с интервалом 14 суток и селенсодержащего препарата Деполен в дозе 2 мл в расчете на 100 кг массы тела однократно на весь период лечения. Однако данный способ не обеспечивает нормализации состояния антиоксидантной защиты организма лактирующих животных, что не позволяет добиться восстановления клинико-гематологических и продуктивных качеств.
Целью настоящего изобретения является разработка более эффективного способа лечения гепатоза молочных коров в экологически неблагополучных зонах на фоне избыточного содержания солей свинца, никеля и кадмия в объектах внешней среды (почва, водоисточники, кормовые культуры) введением в кормовой рацион минерального энтеросорбента вермикулита в сочетании с селенсодержащим препаратом Габивит-Se.
Поставленная цель достигается тем, что дойным коровам больных гепатозом в техногенных провинциях внутримышечно вводят селенсодержащий препарат Габивит-Se двукратно с интервалом 6-8 дней (1-е и 7-9-е сутки) в дозе 15-20 мл на голову. Одновременно с этим в кормовой рацион в смеси с концентратами скармливали вермикулит Потаненского месторождения из расчета 0,10-0,15 г/кг массы тела два раза в сутки в течение 14-15 суток с последующим интервалом 14-15 суток. Продолжительность лечения составляла 85-90 дней. Вермикулит обеспечивает детоксикационную терапию путем выведения из организма коров солей свинца, никеля и кадмия через желудочно-кишечный тракт, а Габивит-Se активизирует антиоксидантную защиту организма и нормализует функциональное состояние печени.
Сопоставительный анализ заявленного решения с прототипом показывает, что этот способ отличается от известного тем, что в качестве лечения коров, больных гепатозом, используют сочетание селенсодержащего препарата и минерального энтеросорбента вермикулита Потаненского месторождения Челябинской области, который вводят в рацион лактирующих коров в смеси с концентратами два раза в сутки по определенной схеме в течение 85-90 дней. Вместо селенсодержащего препарата Деполен двукратно применяют Габивит-Se.
Анализ прототипа и других способов терапии в данной области ветеринарии не выявил в них признаки, сходные с заявленным решением, что позволяет сделать вывод о соответствии способа критерию «новизна».
Заявленный способ соответствует критерию изобретения «изобретательский уровень», так как оно явным образом не следует из уровня техники.
Изобретение является промышленно применимым, так как может быть использовано в ветеринарной медицине, в частности при лечении лактирующих коров, больных гепатозом.
Пример выполнения. Способ реализуется следующим образом. Вермикулит вводят в рацион в дозе 0,10 г/кг массы тела 2 раза в день в течение 15 суток с перерывами 15 суток, на протяжении 90 дней.
Вермикулит - природный минерал Потаненского месторождения Челябинской области из класса гидрослюд, структура которого состоит из перемежающихся слюдяных листов, разделенных между собой двойными слоями воды. В его состав входят соединения кремния, алюминия, железа, марганца, магния, кальция и калия, что позволяет восполнить недостаток эссенциальных элементов в организме животного. Вспученный вермикулит, применяемый в ветеринарии - это легкий пористый минерал с сорбционными, каталитическими и ионообменными свойствами. Благодаря высоким адсорбционным свойствам вермикулит обеспечивает выведение из организма животных солей тяжелых металлов. Вместе с тем, содержащиеся в вермикулите макро- и микроэлементы под действием пищеварительных соков вступают в обмен и всасываются стенкой кишечника.
3
1
2
5
12
Габивит-Se - препарат, содержащий в качестве действующих веществ жиро- и водорастворимые витамины (витамин A, D, Е, В, В, В, В, пантотеновая кислота, никотинамид, инозитол, холина цитрат), селенит натрия, микроэлементы (медь, кобальт, цинк, марганец), гидролизат белка (лактоальбумин), а также нипагин (консервант) и воду для инъекций (растворитель). С лечебной целью крупному рогатому скоту его рекомендуется вводить внутримышечно дважды с интервалом 7 суток в дозе 15-20 мл.
Обоснование выбранной дозы вермикулита служила целая серия научных экспериментов. На первом этапе при предварительном проведении исследований экспериментальным путем было установлено, что дозы минерала 0,2; 0,3; 0,4; 0,5 г/кг живой массы, применяемые дважды в сутки в течение 30 дней без перерыва, вызывают нарушение процессов рубцового пищеварения у жвачных. Чем выше была доза минерала, тем быстрее выявлялись признаки частичной гипотонии преджелудков.
Наряду с этим проводилось исследование образцов рубцового содержимого. Так, на 15-е сутки эксперимента при максимальной дозе вермикулита 0,5 г/кг массы тела дважды в сутки, общее количество инфузорий снизилось на 16,0%, содержание уксусной кислоты - на 14,7%, пропионовой кислоты - на 12,1%, активная кислотность среды повысилась до 7,5 единиц (при норме рН до 7,3). На 30-е сутки исследований у опытных животных было выявлено снижение числа сокращений рубца до 2 в 2′ при норме у клинически здоровых животных 4 в 2′. Сокращения были неритмичные, неполные, вялые. Кроме того, установлено удлинение межжвачных периодов.
Выявленные изменения со стороны рубцового пищеварения послужили основанием для заключения о том, что при дополнительном введении в рацион жвачных животных природных минералов необходимо делать перерывы.
При дополнительном введении вермикулита Потаненского месторождения в дозе 0,10-0,15 г/кг массы тела дважды в день в течение 30 дней были получены следующие результаты. На 15-е сутки эксперимента в рубцовой жидкости коров увеличилось общее количество инфузорий на 9,4%, концентрация уксусной кислоты - на 10,3%, пропионовой - на 7,1% при рН, равном 7,2 единиц.
На 30-е сутки исследований общее количество инфузорий в содержимом рубца относительно данных предыдущего периода (15-е сутки) снизилось на 4,3%, оставаясь выше показателя средних нормативных данных на 5,3%. Активная реакция среды содержимого рубца была в пределах 7,3 единиц, на фоне недостоверного незначительного снижения концентрации уксусной и пропионовой кислот. Полученные данные еще раз подтвердили заключение о необходимости осуществления перерыва при введении в рацион жвачных природных минералов, что связано с особенностями пищеварения в многокамерном желудке животных.
На втором этапе осуществлялась проверка эффективности дозы и кратности применения вермикулита Потаненского месторождения. Минерал применяли в дозе 0,10-0,15 г/кг живой массы два раза в сутки в течение 15 суток с интервалом 15 дней.
Так, на 15-е сутки исследований было выявлено увеличение общего количества инфузорий, концентрации уксусной и пропионовой кислот. Необходимо отметить, что на 30-е сутки исследований число инфузорий в рубцовой жидкости увеличилось на 21,9%, концентрации уксусной кислоты - на 29,4%, пропионовой - на 26,1%.
Таким образом, предлагаемый метод введения вермикулита с интервалом в 15 дней способствует активизации рубцового пищеварения. Проведенные исследования убедительно свидетельствуют о том, что рекомендуемая доза и кратность введение минерального энтеросорбента может быть использована в рационе жвачных.
Для реализации предлагаемого способа все научные исследования проводили на базе ООО «Хлебинка» Верхнеуральского района Челябинской области.
По литературным данным и результатам собственных исследований установлено, что территория Верхнеуральского района является техногенной провинцией естественного и антропогенного происхождения. На территории района производится добыча железоаммонийных руд, промышленного золота, разведаны запасы никелевых руд. Недалеко от границы района располагается гигант черной и цветной металлургии - Магнитогорский металлургический комбинат.
При исследовании образцов почвы землепользования хозяйства было выявлено, что в поверхностном пахотном слое (0-20 см) все образцы содержали соли тяжелых металлов (железо, никель, кадмий) в количествах, превышающих значения предельно допустимой концентрации (ПДК). На этих полях произрастают такие кормовые культуры как костер безостый, кукуруза, ячмень, овес, пшеница. Кроме этого в почвах, где выращиваются однолетние травы, выявлен высокий уровень свинца, который был выше значений на 22,0%. Одновременно с этим было выявлено снижение содержания в почвах эссенциальных микроэлементов. Дефицит меди, цинка и кобальта в образцах почв, на которых выращивали сенажные культуры, составлял соответственно 87,0%, 34,0 и 84,0% относительно значений ПДК. В образцах почвы, где произрастали костер безостый, силосные и зерновые культуры дефицит меди соответственно составил 86,0%; 86,0% и 85,0%, цинка - 33,0%, 35,0 и 37,0%, кобальта - 90,0%, 87,0 и 83,0%.
При исследовании образцов корма было установлено, что все они содержат железо, свинец, никель и кадмий в повышенных концентрациях. Так, в сене кострецовом содержание железа было выше максимально допустимого уровня (МДУ) на 45,4%, зернофураже - на 20,2, ячменной соломе - на 19,7, сенаже - на 8,3%. Исследованиями установлено, что содержание свинца в зернофураже было на 13,2% выше МДУ, кострецовом сене - на 6,0%, сенаже - на 5,6%, ячменной соломе - на 5,6%. Уровень никеля в сенаже был выше МДУ в 2,2 раза, в зернофураже (овес + ячмень) - на 58,7%, ячменной соломе - на 42,0%, кострецовом сене - на 35,3%. Наиболее высокий уровень кадмия был отмечен в образцах таких кормов, как сенаж и кострецовое сено. Содержание токсиканта в отмеченных кормах был выше значений МДУ на 88,0 и 48,0%, соответственно.
Уровень эссенциальных микроэлементов (медь, кобальт, цинк, марганец) во всех образцах кормов был значительно ниже МДУ.
В пробах воды, взятых из поилок животноводческого помещения, а также из естественных водоемов было установлено повышенное содержание железа, свинца, никеля и кадмия относительно значений ПДК.
Таким образом, проведенный мониторинг объектов внешней среды хозяйства (почва, вода, корма) убедительно свидетельствуют о том, что территория землепользования ООО «Хлебинка» Верхнеуральского района Челябинской области является биогеохимической провинцией с выраженным дефицитом эссенциальных (медь, кобальт, марганец, цинк) и избытком токсических (железо, свинец, никель, кадмий) элементов. Постоянная контаминация организма животных токсикантами оказывает негативное воздействие на все органы и системы в целом, и на печеночные клетки в частности.
В хозяйстве широкое распространение среди лактирующих коров имеет гепатоз, что подтверждается результатами комплексной диспансеризации стада.
В рамках диспансеризации был проведен тщательный анализ рациона. Было установлено, что в структуре 10,3% от общей питательности составляют грубые корма (сено), 50,2% - сочные (сенаж, силос) и 39,5 - концентрированные (дерть зерновых злаковых). Тип кормления - концентратно-сенажно-силосный. В рационе выявлен дефицит простых легко переваримых углеводов, каротина, клетчатки, избыток - сырого и переваримого протеина, обменной энергии и сухого вещества. В рационе выявлен дефицит таких важных минеральных веществ как кальций, магний, цинк и марганец. Содержание кальция в рационе было меньше нормы, рекомендованной ВИЖ, на 41,6%, магния - на 8,5%, цинка - на 58,9%, марганца - на 30,8%. В желудочно-кишечный тракт животных с кормами поступало больше железа в 3,8 раза, меди - в 2,4 раза, кобальта - в 5 раз. Общее поступление в организм животного (в среднем) составило 214,0 мг свинца, 217,8 мг никеля, 23,3 мг кадмия.
Таким образом, анализ рациона больных гепатозом коров убедительно свидетельствует о том, что сочетание дефицита простых углеводов, избытка сырого и переваримого протеина, дисбаланса минерального состава кормов и наличия солей тяжелых металлов в значительных количествах является основным этиологическим фактором заболеваний печени (гепатоз) на техногенно-загрязненной территории.
При клиническом обследовании 296 животных у 53 (17,9%) коров были выявлены симптомы гепатоза: снижение аппетита, нарушение процесса жвачки и отрыжки, частичная гипотония преджелудков (движение рубца - ДР - 2 в 2′), ослабление перистальтики кишечника, увеличение перкуторных границ печени. У отдельных из них болезненность участка печеночного притупления, а видимые слизистые оболочки были слабо иктеричными. Следует отметить, что все больные гепатозом коровы имели среднюю и выше средней упитанность.
Клиническое проявление гепатоза были подтверждены патологоанатомической экспертизой и гистологическими исследованиями образцов печени, полученными от выбракованных животных по причине потери продуктивности. Макроскопически печень, больных гепатозом коров, увеличена в объеме, дряблой консистенции, с разного рода окраской: или равномерная глинисто-желтая окраска, или пестрая с чередованием желтоватого фона участков красного цвета различного размера. При гистологическом исследовании, доминирующими патологическими изменениями были жировая декомпозиция и простое ожирение гепатоцитов. Кроме того, отмечалась зернистая дистрофия гепатоцитов, очаги некроза, расстройства гемодинамики и пролиферативные изменения. Обширные альтеративные изменения в печени при жировом и токсическом гепатозе, вызванном действием солей тяжелых металлов и эндогенными токсинами, вызывают развитие хронического воспаления, что подтверждается наличием в печени некоторых животных сосудистой и пролиферативной реакций. То есть у данной группы коров отмечается не только гепатоз, но хроническое течение воспалительного процесса. Наличие в составе клеточного инфильтрата большого количества эозинофилов позволяет предположить, что в генезе гепатоза, наряду с другими факторами определенную роль играет аутоиммунная реакция.
При исследовании химического состава крови больных гепатозом коров было выявлено, что уровень железа, свинца, никеля и кадмия превышал нормативные данные на 53,3; 27,0; 38,0 и 52,5%, соответственно. При этом содержание меди, цинка и кобальта было ниже на 55,5; 58,4 и 77,5% нормы.
При исследовании показателей крови, характеризующие различные виды обмена у коров, было установлено, что основные из метаболических процессов нарушены. Так, уровень глюкозы крови коров на 37,3% снижен относительно средних нормативных данных. Также в сыворотки крови больных животных отмечали диспротеинемию: на фоне снижения уровня альбуминов и α-глобулинов на 21,4 и 40,0%, соответственно, повышена концентрация β- и γ-глобулинов на 45,4 и 37,0%. При этом у коров регистрировали высокую активность основных ферментов переаминирования (AcAT, АлАТ), превышение которых составило 56,9 и 29,3%, относительно средних нормативных данных.
Основные показатели, характеризующие обмен липидов (холестерол, общий билирубин, общие липиды) значительно превышали нормативные данные. Так, содержание холестерола было выше нормы на 32,5%, общего билирубина - на 55,1%, общих липидов - на 22,7%. Все это сопровождалось избыточным образованием и накоплением малонового диальдегида - продукта перекисного окисления липидов, на фоне снижения антиоксидантной защиты организма (на примере низкой концентрации церулоплазмина в сыворотке крови).
Таким образом, проведенные исследования убедительно свидетельствуют о том, что среди лактирующих высокопродуктивных коров гепатоз имеет широкое распространение. Основными причинами заболевания являются высокий уровень токсических элементов в кормах и рационе животных, белковый перекорм. Диагноз на исследуемую патологию поставлен комплексно на основании анамнестических данных, характерных симптомов заболевания, результатов лабораторных исследований крови, а также патологоанатомической экспертизы и исследования образцов печени больных животных.
Следует отметить, что комплексного лечения коров, больных гепатозом, в данном хозяйстве нет. В далеко зашедших случаях проводят симптоматическое лечение путем внутривенного введения 10-20%-го раствора глюкозы в дозе 250-300 мл, 10%-го раствора кальция хлорида в дозе 100-150 мл. Однако это лечение не всегда дает положительные результаты и не позволяет восстановить продуктивные качества животных.
В экспериментальные исследования по изучению эффективности вермикулита в сочетании с Габивит-Se при лечении больных гепатозом коров было включено 30 животных черно-пестрой породы, живой массой 500-550 кг на втором-третьем месяце лактации со среднесуточным удоем 15,0-15,9 кг молока. Животных по принципу сбалансированных групп разделили на 3 группы по 10 голов в каждой.
Первая группа животных служила контролем и получала основной рацион. В качестве патогенетической терапии больным гепатозом коровам внутривенно вводили 100-150 мл 10%-го раствора глюкозы и 100-150 мл 10%-го раствора кальция хлорида. Отмеченную терапию проводили 1 раз в 15 суток.
Коровам второй группы дополнительно к рациону вводили природный минерал вермикулит Потаненского месторождения из расчета 0,10-0,15 г/кг массы тела дважды в сутки в смеси с концентрированным кормом по схеме в течение 15 суток с интервалом 15 дней. Также животные второй группы получали симптоматическое лечение: внутривенно 10%-ый раствор глюкозы в дозе 100-150 мл и 10%-ый раствор кальция хлорида в дозе 100-150 мл. Отмеченную терапию проводили 1 раз в 15 суток. Одновременно с этим больным животным внутримышечно вводили селенсодержащий препарат Габивит-Se в дозе 15-20 мл двукратно с интервалом 7 дней на весь период лечения.
Коровам третьей группы дополнительно к рациону добавляли природный минерал вермикулит Потаненского месторождения из расчета 0,10-0,15 г/кг массы тела дважды в сутки. Вермикулит скармливали в смеси с концентратами в течение 15 суток с интервалом 15 дней. Также животные третьей группы получали симптоматическое лечение: внутривенно 10%-ый раствор глюкозы в дозе 100-150 мл и 10%-ый раствор кальция хлорида в дозе 100-150 мл. Отмеченную терапию проводили 1 раз в 15 суток. Животным этой группы однократно на весь период лечения вводили селенсодержащий препарат Деполен в дозе 2 мл на 100 кг массы тела. Этот способ лечения коров, больных гепатозом, был взят за прототип заявленного.
Общая продолжительность эксперимента составила 90 суток.
Биохимические исследования крови подопытных коров проводили в динамике на 30-е, 60-е и 90-е сутки эксперимента и сравнивали с показателями, полученными до опыта (1-е сутки, фоновые) и нормативными данными [Г.П. Грибовский, 1996 [7]; И.П. Кондрахин и др., 2004 [75]].
В основу биохимических исследований были положены данные, характеризующие в крови уровень токсических элементов (свинец, никель и кадмий), обмен белковых соединений и функциональное состояние печени, антиоксидантной защиты организма животных. Содержание тяжелых металлов в крови коров, больных гепатозом, в динамике лечения представлено в таблице 1.
По материалам таблицы 1 видно, что содержание токсикоэлементов (свинец, никель, кадмий) в крови подопытных коров в начале эксперимента значительно превышало нормативные данные.
В крови коров контрольной группы, которые получали только симптоматическое лечение (глюкоза, кальция хлорид), уровень свинца на 30-е сутки лечения снизился на 4,1%, на 60-е - на 6,9% относительно фоновых результатов. По завершению эксперимента он был выше нормы на 18,8%. Сочетанное применение вермикулита и Габивит-Se сопровождалось снижением концентрации свинца в крови животных на всем протяжении эксперимента. Так, на 30-е сутки содержание токсикоэлемента снизилось на 9,2%, на 60-е - на 16,8%, а к концу лечения - на 21,3% относительно фоновых значений. В конечном результате уровень свинца составил 0,247±0,003 мг/л, что соответствовало среднему нормативному уровню. Содержание свинца в крови коров третьей опытной группы на фоне сочетанного применения вермикулита и Деполена также снижалось. Так, на 30-е сутки опыта уровень свинца снизился на 6,9%, на 60-е - на 10,4, на 90-е - на 17,0% относительно исходного уровня.
Таким образом, применение вермикулита обеспечивает снижение уровня свинца в крови коров, но наиболее значительно при применении селенсодержащего препарата Габивит-Se.
В ходе эксперимента были выявлены изменения по содержанию никеля в крови подопытных животных. У животных контрольной группы уровень токсикоэлемента в крови имел тенденцию к повышению и к концу эксперимента был выше фоновых показателей на 3,7%, нормативных данных - на 64,2%.
Введение в рацион вермикулита Потаненского месторождения в сочетании с селенсодержащим препаратом Габивит-Se сопровождалось снижением содержания токсиканта в крови животных на всем протяжении лечения. Уже на 30-е сутки его уровень снизился до 0,152±0,002 мг/л, что на 20,0% ниже фоновых показателей. К завершению лечения уровень никеля практически достиг нормативных данных.
У коров третьей опытной группы на фоне сочетанного применения вермикулита и Деполена также установлена тенденция к снижению содержания никеля в крови. Наиболее значимые результаты выявлены на 90-е сутки эксперимента, когда содержание токсикоэлемента в крови коров был на 14,7% ниже фоновых.
Таким образом, более эффективные результаты получены при сочетанном применении минерального энтеросорбента вермикулита и Габивит-Se.
В ходе проведенного лечения в крови всех подопытных коров, больных гепатозом, было зарегистрировано снижение уровня высокотоксичного элемента кадмия. Так, в контрольной группе коров снижение токсиканта на 30-е и 60-е сутки было несущественным. По завершению эксперимента его концентрация в крови животных составляла 0,0670±0,0002 мг/л, что на 4,3% ниже фоновых, но на 34,0% выше средних нормативных данных.
Сочетанное применение вермикулита и Габивит-Se сопровождалось снижением содержания кадмия в крови коров на всем протяжении экспериментального периода. Так, на 60-е сутки лечения уровень токсикоэлемента снизился на 13,0%, а к завершению эксперимента - на 26,1% относительно фоновых показателей и составил 0,0510±0,0003 мг/л, что практически соответствует норме.
Уровень кадмия в крови коров третьей опытной группы под действием сочетанного применения вермикулита и селенсодержащего препарата Деполена также снижался. На 90-е сутки опыта содержание кадмия в крови коров составил 0,0550±0,003 мг/л, что было выше нормативных данных на 10,0%, но ниже фоновых значений на 21,4%. Полученные результаты подтверждают сорбционные свойства вермикулита в отношении кадмия.
Таким образом, вермикулит обладает выраженными сорбционными свойствами в отношении солей тяжелых металлов (свинец, никель, кадмий), особенно в сочетании с селенсодержащим препаратом Габивит-Se.
Проведенные исследования позволяют сделать заключение о том, что предлагаемый способ лечения коров, больных гепатозом, более предпочтителен в отношении контрольной группы и существующего прототипа (вермикулит и Деполен), так как его применение позволяет не только осуществить детоксикационную терапию в отношении солей тяжелых металлов (свинец, никель, кадмий), но и на этом фоне активизировать обмен белковых соединений и антиоксидантную защиту в организме опытных животных.
Проведенное лечение больных гепатозом кров оказало существенное влияние на течение обменных процессов в организме и функциональное состояние центрального органа обмена - печень, о чем свидетельствуют данные таблицы 2.
По материалам таблицы видно, что несбалансированность рациона, концентратный тип кормления сопровождается высоким содержанием в сыворотке крови больных гепатозом коров общего белка, уровень которого превышал средние нормативные данные на 12,1-12,7%.
В ходе проведенного лечения в сыворотке крови контрольной группы коров концентрация общего белка на 90-е сутки снизилась на 2,4%, в то время как у животных второй группы - на 10,2%, третьей группы - на 8,0%.
Снижение содержания общего белка в сыворотке крови опытных коров сопровождалось повышением уровня транспортных белков альбуминов на 90-е сутки лечения относительно фоновых показателей. Так, во второй группе, где применяли вермикулит в сочетании Габивит-Se, концентрация альбуминов увеличилась на 26,4%, в третьей на фоне сочетанного действия вермикулита и Деполена - на 16,0%. У животных контрольной группы к концу лечения содержание альбуминов в сыворотке крови осталась на прежнем уровне.
Особое внимание необходимо обратить на содержание сывороточных белков фракций β- и γ-глобулинов. Их концентрация в сыворотке крови всех подопытных коров, больных гепатозом, до начала лечения значительно превышала границы референтных величин. Увеличение массовой доли белков отмеченных фракций в сыворотке крови подопытных групп свидетельствует о жировом перерождении гепатоцитов и о нарушении белковосинтетической функции печени в целом. Это явление подтверждается высокой активностью аспартат- и аланинаминотрансферазы относительно нормативных значений.
На фоне проведенного лечения уровень β-глобулинов в сыворотке крови коров контрольной группы снизился на 7,4%, третьей опытной группе, которым вводили вермикулит в сочетании с селенсодержащим препаратом Деполен - на 17,5%, а второй опытной группе на фоне применения вермикулита и Габивит-Se - на 27,0% относительно исходного значения. Кроме того, в сыворотке крови которой опытной группы коров было зарегистрировано закономерное снижение массовой доли белков γ-глобулиновой фракции на 27,0% относительно фоновых значений. Данная закономерность свидетельствует о нормализации функционального состояния печени и подтверждается снижением активности АсАТ и АлАТ на 32,0 и 18,5%, соответственно.
У животных второй опытной группы, которым применяли вермикулит в сочетании с Габивит-Se, отмечали нормализацию мочевинобразующей функции печени, что характеризуется снижением уровня мочевины в сыворотке крови на 25,7% относительно фоновых значений.
В сыворотке крови коров третьей опытной группы (вермикулит + Деполен) была выявлена подобная тенденция, однако изменения были менее выражены чем в крови животных второй опытной группы.
Делая общее заключение по результатам проведенных исследований необходимо отметить, что предлагаемый способ лечения коров больных гепатозом с включением вермикулита и селенсодержащего препарата Габивит-Se имеет наиболее выраженную терапевтическую эффективность, которая подтверждается биохимическими результатами, характеризующими функциональное состояние печени.
На фоне проводимой терапии у подопытных животных отмечали изменения показателей жирового, пигментного обменов, а также антиоксидантной защиты организма. Результаты представлены в таблице 3.
Анализ данных таблицы 3 свидетельствует о нарушении жирового, пигментного обменов, снижении антиоксидантной защиты у больных гепатозом коров. Так, содержание общих липидов в сыворотке крови коров контрольной группы превышало нормативные данные на 24,3%. К завершению эксперимента на 90-е сутки этот показатель составил 4,445±0,003 г/л, что на 0,6% ниже фоновых значений и 23,3% выше нормативных.
В сыворотке крови второй опытной группы коров на фоне сочетанного применения вермикулита и Габивит-Se отмечалось достоверное снижение уровня общих липидов на всем протяжении эксперимента, наиболее выраженное на 90-е сутки. В этот период их содержание составило 3,653±0,010 г/л, что на 18,4% ниже фоновых значений. Подобная биохимическая картина была установлена у коров третьей опытной группы. Однако положительная тенденция была менее выражена. На фоне снижения концентрации общих липидов в сыворотке крови коров опытных групп отмечали закономерное уменьшение содержания основного окислителя жиров - холестерола. На 90-е сутки лечения в сыворотке крови коров второй опытной группы, где применяли вермикулит в сочетании с Габивит-Se, уровень холестерола был ниже фоновых показателей на 26,2%, а третьей группы, на фоне сочетанного использования вермикулита и Деполена, - на 8,5%. Таким образом, можно сделать заключение о более выраженной нормализации жирового обмена у коров второй группы. Этот факт согласуется с результатами коллоидно-осадочной пробы по Постникову, которая по окончанию эксперимента у коров второй опытной группы стала отрицательной, третьей опытной - слабо положительной, а в контроле осталась резко выраженной положительной.
В сыворотке крови коров второй опытной группы, которым вводили вермикулит и Габивит-Se, отмечалось снижение содержания общего билирубина в сыворотке крови на всем протяжении лечения. Однако на 90-е сутки было установлено более выраженное изменение, когда уровень билирубина был ниже фоновых значений на 33,3%. Этот факт свидетельствует о нормализации пигментного обмена в организме животных, восстановлении обезвреживающей функции гепатоцитов путем присоединения глюкуроновой кислоты.
У больных гепатозом коров выраженное нарушение имеет антиоксидантная защита, так как уровень малонового диальдегида выше референтных величин на 58,9-64,4%, а содержание церулоплазмина ниже - на 40,0-40,5%.
В сыворотке крови коров контрольной группы, которым применяли только симптоматическое лечение, отмечали снижение антиоксидантной защиты организма, так как уровень малонового диальдегида на 90-е сутки опыта был выше исходных данных на 9,1%, концентрация церулоплазмина ниже - на 28,5%.
На фоне применения селенсодержащих препаратов отмечали нормализацию показателей антиоксидантной защиты, наиболее выраженную в конце лечения. Так, на фоне сочетанного применения коровам вермикулита и Габивит-Se уровень малонового диальдегида был ниже фоновых значений на 48,6%, а церулоплазмина выше - на 62,9%, в то время как при применении комплекса вермикулита и Деполена - соответственно на 32,2 и 39,1%.
Необходимо отметить, что предлагаемый ранее способ лечения коров, больных гепатозом с применением Деполена [A.M. Гертман и др., 2010 [5]] имел важный недостаток - активизация системы антиоксидантной защиты организма происходила медленнее, не в полном объеме, что позволяет высказать предположение о недостаточной обеспеченности организма животных селеном.
Таким образом, предлагаемый способ лечения коров больных гепатозом путем сочетанного применения вермикулита и селенсодержащего препарата Габивит-Se в отношении нормализации антиоксидантной защиты более физиологичный и терапевтически эффективный в сравнении с другими.
Обобщая полученные данные, можно сделать вывод о том, что заявленный способ в сравнении с прототипом и другими предложенными в этой области способами позволяет рекомендовать минеральный энтеросорбент вермикулит Потаненского месторождения при лечении лактирующих коров больных гепатозом в техногенных провинциях с избытком свинца, никеля и кадмия из расчета 0,10-0,15 г на 1 кг живой массы два раза в сутки в течение 14-15 дней с интервалом в 14-15 дней в сочетании с двукратным введением селенсодержащего препарата Габивит-Se в дозе 15-20 мл с интервалом 6-8 суток. Продолжительность лечения составляет 85-90 дней.
ЛИТЕРАТУРА
1. Васильева C.B. Влияние витаминно-минерального комплекса на антиоксидантный статус сухостойных коров / C.B. Васильева // Актуальные проблемы ветеринарной фармакологии, токсикологии и фармации: Материалы III съезда фармакологов и токсикологов России. - Санкт-Петербург: СПбГАВМ, 2011. - С. 56-59.
2. Влияние Нутрил Se на клинико-биохимический статус коров при гепатозе / И.А. Шкуратова [и др.] // Научные основы профилактики и лечения больных животных: Сборник научных трудов ведущих ученых России, СНГ и других стран. - Екатеринбург: Уральское издательство, 2005. - С. 578-581.
3. Востроилова Г.А. Интенсивность процессов перекисного окисления липидов при примени тканевых препаратов на фоне экспериментального гепатоза / Г.А. Востроилова // Свободные радикалы, антиоксиданты и здоровье животных: Материалы научно-практической конференции. -Воронеж: Воронежский государственный университет, 2004. - С. 330-334.
4. Внутренние болезни животных / Под ред. Г.Г. Щербакова, А.В. Коробова. - Санкт-Петербург: Лань, 2009. - С. 199-203.
5. Гертман A.M. Способ лечения гепатоза молочных коров в условиях техногенных провинций с избытком никеля и свинца / A.M. Гертман [и др.]. - Патент на изобретение №2402323 от 27.10.2010.
6. Гертман A.M. Способы коррекции обменных процессов при незаразной патологии продуктивных коров в условиях техногенных провинций Южного Урала / A.M. Гертман, Т.С. Самсонова // Известия Оренбургского государственного аграрного университета. - Оренбург, 2014. - №1. - С. 65-68.
7. Грибовский Г.П. Ветеринарно-санитарная оценка основных загрязнителей окружающей среды на Южном Урале / Г.П. Грибовский. - Челябинск, 1996. - 224 с.
8. Ежкова A.M. Структурно-функциональная характеристика печени и почек дойных коров в зависимости от условий техногенной нагрузки / A.M. Ежкова [и др.] // Ученые записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана. - Казань: КГАВМ, 2011. - Т. - 207. - С. 231-235.
9. Зинченко Е.В. Иммунобиотики в ветеринарной практике / Е.В. Зинченко, А.Н. Панин. - Пущино: ОНТИ ПНЦ РАН, 2000. - 164 с.
10. Калоев Б. Оптимизация микрофлоры кишечника у цыплят и кур / Б. Калоев // Птицеводство. - 2003. - №3. - С. 11.
11. Калюжный И.И. Информативность некоторых показателей крови в диагностике гепатоза собак / И.И. Калюжный [и др.] // Современные проблемы ветеринарной терапии и диагностики болезней животных: Материалы юбилейной международной научно-практической конференции ветеринарных терапевтов и диагностов, посвященную 90-летию профессор А.А. Кабыша. - Троицк: УГАВМ, 2007. - С. 47-48.
12. Колкунова Л.Е. Клинико-фармакотоксикологическое обоснование применения препарата «Овсар» при токсических гепатозах птицы: Автореферат дисс…канд. вет. наук. - Воронеж: Воронежский государственный университет, 2013. - 22 с.
13. Концевова А.А. Применение методов и средств нанобиотехнологии и электростимуляции для диагностики и коррекции печеночной недостаточности у собак: Автореферат дисс. докт. вет. наук. - Санкт-Петербург: СПбГАВМ, 2014. - 46 с.
14. Кочуева Н.А. Функциональное состояние печени у самок норок при гепатозе в разные периоды эмбриогенеза и под действием Лиарсин / Н.А. Кочуева // Современные проблемы ветеринарной терапии и диагностики болезней животных: Материалы юбилейной международной научно-практической конференции ветеринарных терапевтов и диагностов, посвященную 90-летию профессора А.А. Кабыша. - Троицк: УГАВМ, 2007. - С. 58-60.
15. Методы ветеринарной клинической лабораторной диагностики: справочник / Под ред. профессора И.П. Кондрахина. - Москва: КолосС, 2004. - 520 с.
16. Никулин И.А. Лечение собак при гепатозе, осложненном миокардиодистрофией / И.А. Никулин [и др.] // Ветеринария. - 2006. - №7. - С. 56.
17. Савелов A.M. Производственные испытания экстракта «Виватон» в животноводстве / A.M. Савелов [и др.] // Ученые записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана. -Казань: КГАВМ, 2014. - Т. 220. - С. 198-202.
18. Сулейманов СМ. Морфологическая характеристика печени у молодняка животных при профилактике гепатодистрофии / СМ. Сулейманов [и др.] // Свободные радикалы, антиоксиданты и здоровье животных: Материалы научно-практической конференции. - Воронеж: Воронежский государственный университет, 2004. - С. 486-489.
19. Уша Б.В. Разработка методов и средств для лечения печеночной недостаточности у животных / Б.В. Уша [и др.] // Ветеринария и кормления. - 2011. - №5. - С 25-26.
20. Хазимухаметова И.Ф. Лечение коров при гепатозе / И.Ф. Хазимухаметова, P.P. Идрисова //Ветеринария. - 2008. - №5. - С. 39-42.
21. Шкуратова И.А.Состояние крупного рогатого скота на территории техногенного загрязнения / И.А. Шкуратова // Материалы научно-практической конференции по актуальным проблемам ветеринарии и зоотехнии. - Казань, 2001. - Ч. 2. - С 125-126.