ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ
PHARMACEUTICAL COMPOSITION

Область изобретения
Настоящее изобретение относится к фармацевтическим композициям на основе неионных эфиров целлюлозы, а более конкретно - к подобным фармацевтическим композициям, содержащим окситоцин и/или его фрагменты, и/или его варианты, как раскрывается в данном документе, причем указанные фармацевтические композиции обладают улучшенной стабильностью. Окситоцин является природным пептидом, который, как хорошо известно из уровня техники, имеет различные терапевтические применения, такие как лечение климактерических расстройств и связанных с ними различных форм рака, особенно предраковых состояний.
Предпосылки изобретения
Окситоцин был одним из первых выделенных и секвенированных пептидных гормонов. Он представляет собой нонапептид с двумя остатками цистеина, которые образуют дисульфидную связь между положениями 1 и 6, и соответствует формуле,
Окситоцин (SEQ ID NO:1).
В течение длительного времени единственными эффектами, приписываемыми окситоцину, были его стимулирующие воздействия на молокоотдачу и сокращения матки, но в последние десятилетия было показано, что окситоцин оказывает широкий спектр воздействий на центральную нервную систему, CNS. Предположительно окситоцин участвует в регуляции памяти и процесса обучения, а также различных типов поведения, таких как питание, локомоция, а также материнское и половое поведение. Также предполагают, что окситоцин участвует в регуляции сердечно-сосудистых функций, терморегуляции, болевого порога и водного баланса, а также в заживлении ран. Также есть подтверждения того, что окситоцин вовлечен в регуляцию различных иммунных процессов. Также было продемонстрировано, что после повторного применения инъекции окситоцина вызывают понижение артериального давления и увеличение привеса с длительными последствиями. В качестве основного стимулирующего вещества окситоцин играет важную роль во взаимодействии матери и потомства у млекопитающих. Его продукты также могут быть использованы для профилактики у детей, т.е. у уже новорожденных или маленьких детей, развития в более позднем возрасте заболеваний, причем заболевания связаны со стрессовыми условиями во время внутриутробного развития. Таким условиями могут быть заболевания сердца/сосудов, такие как удар, инфаркт миокарда, гипертензия и диабет. В организме человека окситоцин продуцируется в паравентрикулярном ядре, PVN, и надзрительном ядре, SON, гипоталамуса. Он отличается от вазопрессина только двумя аминокислотами, который также продуцируется в этих ядрах. Крупноклеточные окситоцинергические нейроны SON и PVN посылают аксоны на заднюю долю гипофиза, откуда окситоцин попадает в кровяное русло. Мелкоклеточные нейроны, берущие начало в PVN, образуют множество областей в пределах CNS. Клетки, продуцирующие окситоцин, иннервируются холинэргическими, катехоламинергическими, серотонинергическими, а также пептидергическими нейронами. Показано присутствие окситоцина в различных тканях помимо мозга, например в тканях матки, яичников, семенников, вилочковой железы, корковом веществе надпочечников и поджелудочной железе, и предположительно окситоцин оказывает в этих органах местные эффекты. Параллельная секреция окситоцина в областях головного мозга и в кровяном русле происходит в ответ на некоторые раздражители, такие как сосание, но другие раздражители могут вызывать автономную активацию окситоцинергических нейронов, оканчивающихся в мозге или гипофизе.
Эфиры целлюлозы названы так, поскольку они получены на основе целлюлозы, которая является возобновляемым веществом и наиболее распространенным химическим соединением в органической природе. На рынке имеется широкий спектр эфиров целлюлозы, как ионных, так и неионных, например, натрий-карбоксиметилцеллюлоза, гидроксиэтилэтилцеллюлоза, гидроксиэтилцеллюлоза, гидроксипропилцеллюлоза, гидроксиэтилметилцеллюлоза и гидроксипропилметилцеллюлоза.
Эфиры целлюлозы применяют в качестве добавок в таких различных областях, как продукты питания, краски, регенерация масла, бумага, косметика, лекарственные препараты, адгезивы, печать, сельское хозяйство, керамика, ткани, моющие средства и строительные материалы. Эфиры целлюлозы повышают качество продукта в этих областях и выступают в роли загустителей, водоудерживающих средств, суспендирующих добавок, защитных коллоидов, пленкообразователей или термопластов в таких различных продуктах, как дисперсионные краски, буровые растворы, мороженое, оболочки таблеток, обойный клей и мастика для приклеивания керамической плитки.
Неионные эфиры целлюлозы, такие как метилцеллюлоза, гидроксипропилметилцеллюлоза (также известная как гипромеллоза) и метилгидроксиэтилцеллюлоза, широко используются в фармацевтической промышленности благодаря своей способности загущать, связывать и удерживать воду, а также эмульгировать и суспендировать частицы и образовывать пленки. Дополнительные сведения о неионных эфирах целлюлозы можно найти, например, в WO92/09307.
Пептидная структура окситоцина делает его уязвимым к деградации, и хорошо известным является тот факт, что фармацевтические композиции, содержащие окситоцин, следует хранить в прохладной среде (примерно при 4°С) во избежание значительной деградации и/или агрегации с последующей потерей биологической функции. Например, рекомендуется хранить Syntocinon (Novartis), концентрированный водный раствор окситоцина для инъекций/инфузий, как правило, при температуре 2-8°С. Срок хранения этого продукта при 25°С уменьшается до 3 месяцев. Другим примером является назальный спрей Syntocinon, который следует хранить при 2-8°С. Эти водные составы включают буферы, консерванты, кислоты, соль, сорастворители и другие водорастворимые добавки, но не содержат гелеобразующего средства.
Как было показано, предыдущие составы с окситоцином, содержащие ионное гелеобразующее средство натрий-карбоксиметилцеллюлозу (CMC), не обеспечивают подходящей среды для окситоцина. Это описано, например, в экспериментальном разделе данной заявки.
Соответственно, в свете проблем, связанных с известными фармацевтическими композициями, содержащими окситоцин, в данной области техники существует необходимость преодолеть или по меньшей мере смягчить недостатки этих составов, предоставив фармацевтические композиции, в которых улучшена стабильность окситоцина. Такие фармацевтические композиции будут обеспечивать удобное хранение, например, при комнатной температуре, а также будут сохранять свою биологическую активность в течение более длительного периода времени.
Краткое описание изобретения
Проблемы, сформулированные выше, теперь решаются настоящим изобретением, как объясняется далее в данном документе.
Соответственно, настоящее изобретение относится к новым фармацевтическим композициям, содержащим окситоцин и/или один или несколько его фрагментов и/или его вариантов, как описано в данном документе, а также его фармацевтически приемлемые соли и по меньшей мере один неионный эфир целлюлозы, как описано в данном документе, причем указанная фармацевтическая композиция имеет рН в диапазоне от приблизительно 3 до 4.
Неожиданно было показано, что нейтральный неионный эфир целлюлозы, такой как гидроксипропилметилцеллюлоза (НРМС), значительно улучшает стабильность окситоцина в фармацевтической композиции, тем самым обеспечивая фармацевтическую композицию, превосходную в фармацевтическом применении. Соответственно, настоящее изобретение относится к фармацевтическим композициям, содержащим окситоцин (SEQ ID NO:1) и/или один или несколько его фрагментов и/или его вариантов в соответствии с SEQ ID NO:2, или иное, как указано в данном документе, а также его фармацевтически приемлемые соли и по меньшей мере один неионный эфир целлюлозы, такой как гидроксипропилметилцеллюлоза (НРМС).
Данный стабилизирующий эффект неионного эфира целлюлозы также поддерживается низким рН указанной фармацевтической композиции, таким как в диапазоне от приблизительно 3 до 4 и от приблизительно 3 до 3,5. Это даст возможность хранить окситоцин при комнатной температуре в течение более длительного периода времени, чем было возможно ранее, если он находится в такой фармацевтической композиции. Благоприятная среда для пептида окситоцина в такой фармацевтической композиции также должна положительно влиять на его биологическую активность, таким образом, улучшая его терапевтический эффект, поскольку в данном составе присутствует больше биологически активного вещества в течение времени.
Следовательно, настоящее изобретение относится к фармацевтическим композициям, содержащим окситоцин (SEQ ID NO:1) и/или один или несколько его фрагментов и/или его вариантов согласно SEQ ID NO:2, а также его фармацевтически приемлемые соли и по меньшей мере один неионный эфир целлюлозы, такой как гидроксипропилметилцеллюлоза (НРМС), причем указанная фармацевтическая композиция имеет рН в диапазоне от приблизительно 3 до 4, например от приблизительно 3 до 3,5, либо иной, как проиллюстрировано в данном документе, при этом стабильность окситоцина и/или одного или нескольких его фрагментов и/или его вариантов была улучшена. Способность неионного эфира целлюлозы, такого как НРМС, стабилизировать окситоцин, ранее неизвестна и является весьма желательной, поскольку в данной области техники давно ощущается потребность предоставления фармацевтических композиций, содержащих окситоцин, которые не всегда требуют хранения в холодной среде и с которыми, таким образом, проще обращаться.
Настоящее изобретение также относится к медицинским применениям фармацевтических композиций, как описывается в данном документе, например при лечении атрофии влагалища. Следовательно, в других аспектах настоящее изобретение также относится к применению окситоцина и/или одного или нескольких его фрагментов и/или его вариантов и по меньшей мере одного неионного эфира целлюлозы, как описано в данном документе, при изготовлении лекарственного препарата, причем указанный лекарственный препарат имеет рН в диапазоне от приблизительно 3 до 4, для лечения климактерических нарушений, таких как атрофия влагалища. Кроме того, настоящее изобретение относится к способу получения указанной фармацевтической композиции, а также к способам лечения пациента фармацевтической композицией в соответствии с настоящим изобретением.
Подробное описание изобретения
Определения
Во всех случаях, когда в данном документе упоминаются "окситоцин", "пептид окситоцина" и/или "молекула окситоцина", данные выражения включают окситоцин (SEQ ID NO:1) и/или один или несколько его фрагментов и/или его вариантов, как определено в данном документе в соответствии с общей формулой SEQ ID NO:2, или любой другой его вариант и/или фрагмент, как упомянуто в данном документе, а также его аналоги и/или гомологи. В любом случае, когда упоминают фрагмент, вариант или гомолог молекулы/пептида окситоцина, должно подразумеваться, что такой вариант, фрагмент или гомолог проявляет биологическую активность, сравнимую с таковой у молекулы собственно окситоцина (SEQ ID NO:1). Например, можно показать, что вещество проявляет активность окситоцина, путем проведения испытаний, демонстрируя активность исследуемого вещества, например, путем применения двойного слепого рандомизированного протокола, как описано в WO 0178758 (пример 1).
Соответственно, "вариант" окситоцина, как упоминается в данном документе, относится к пептиду, в котором была изменена аминокислотная структура по сравнению с молекулой окситоцина, то есть некоторые положения аминокислот могли заменять путем введения в такие положения других аминокислот, таких как природные или синтетические аминокислоты, как проиллюстрировано в данном документе, либо молекула могла удлиняться путем присоединения одной или нескольких природных или искусственных аминокислот(ы) к обоим концам пептида. Кроме того, могут осуществляться и другие модификации упомянутых пептидов, например, синтетические модификации. Упомянутые "варианты" все же проявляют биологическую активность, аналогичную окситоцину, и указанный вариант также стабилизируется, входя в состав фармацевтической композиции в соответствии с настоящим изобретением.
Далее, "фрагмент" окситоцина, как упоминается в данном документе, представляет собой пептид, который содержит часть аминокислотной последовательности окситоцина, но в котором одна или более аминокислот могли удаляться с одного или обоих концов. Данное выражение также относится к фрагменту варианта окситоцина, как определено в SEQ ID NO:2, следовательно, в настоящее изобретение также включается любой фрагмент пептида, представленный в SEQ ID NO:2.
"Регулирующим рН средством" является любое средство, например, жидкое средство, такое как водная жидкость, способная регулировать и/или поддерживать рН указанной фармацевтической композиции, в которой указанный рН сохраняется приблизительно на выбранном уровне, проиллюстрированном в данном документе.
Таким регулирующим рН средством может быть, например, буфер, такой как цитратный, лактатный или фосфатный. "Буфер" является ионным соединением, обычно солью слабой кислоты или основания, добавляемым в раствор для предотвращения изменения его кислотности или основности и, таким образом, стабилизации его рН. Буферный раствор представляет собой раствор, содержащий такое соединение. Другими примерами регулирующих рН средств являются органические и неорганические кислоты и основания, такие как уксусная кислота, лимонная кислота, фосфорная кислота, соляная кислота и гидроксид натрия.
Известно, что окситоцин подвержен проблемам, связанным с деградацией и/или агрегацией, из-за чего предпочтительно хранить фармацевтические композиции, содержащие окситоцин, в прохладной среде во избежание потери их биологической активности. Неожиданно было показано, что возможно получение фармацевтических композиций, содержащих окситоцин и/или один или несколько его фрагментов и/или его вариантов, как проиллюстрировано в SEQ ID NO:1 и SEQ ID NO:2, с улучшенной стабильностью при использовании по меньшей мере одного неионного эфира целлюлозы в качестве фармацевтического носителя указанной молекулы окситоцина, в комбинации с низким рН. Соответственно, настоящее изобретение относится к фармацевтическим композициям, содержащим окситоцин (SEQ ID NO:1) и/или один или несколько его фрагментов и/или его вариантов в соответствии с SEQ ID NO:2, или иное, как определено в данном документе, а также его фармацевтически приемлемые соли и по меньшей мере один неионный эфир целлюлозы, такой как гидроксипропилметилцеллюлоза (НРМС).
Под улучшенной стабильностью указанной фармацевтической композиции подразумевается улучшенная стабильность биологического вещества, т.е. окситоцина и/или одного или нескольких его фрагментов и/или его вариантов, как определено в данном документе. Следовательно, биологическая активность и терапевтический эффект фармацевтической композиции, как представлено в данном документе, должны улучшаться, избегая чрезмерной деградации и/или агрегации либо другого структурного изменения вещества окситоцина.
Не привязываясь к какой-либо определенной теории, неионный эфир целлюлозы, являясь незаряженной молекулой, по-видимому, стабилизирует молекулу окситоцина, избегая ненужного взаимодействия с ней, то есть с упомянутой молекулой окситоцина. Кроме того, применение подходящего рН в диапазоне от приблизительно 3 до 4, в таком диапазоне как от приблизительно 3 до 3,5, дополнительно вносит свой вклад в стабилизирующее воздействие неионного эфира целлюлозы на окситоцин. Следовательно, снова не привязываясь к какой-либо определенной теории, низкий рН, по-видимому, не только стабилизирует собственно окситоцин, но и также является желательным для части неионного эфира целлюлозы композиции.
В комбинации это обеспечивает превосходную композицию для фармацевтического применения, в которой биологическая и/или терапевтическая активность окситоцина и/или одного или нескольких его фрагментов и/или его вариантов, как проиллюстрировано в данном документе, должна быть увеличена и пролонгирована. Также данную фармацевтическую композицию легче использовать потребителю, так как благодаря своей улучшенной стабильности ее не всегда нужно хранить в холодной среде, а можно более удобно хранить при комнатной температуре, например при применении или складском хранении, без потери биологической активности.
Стабилизирующее действие неионного эфира целлюлозы на молекулу окситоцина в фармацевтической композиции в соответствии с настоящим изобретением отличается от других применяемых фармацевтических носителей, таких как, например, натрий-карбоксиметилцеллюлоза (CMC), в составах с которой, как показано, окситоцин быстрее деградирует и/или агрегирует (см., например, сравнительные примеры в экспериментальном разделе). Не привязываясь к какой-либо определенной теории, это может объясняться тем фактом, что СМС-полимер отрицательно заряжен и может рассматриваться как полианион, способный неблагоприятно взаимодействовать с пептидом окситоцина.
Соответственно, настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей
a) окситоцин (SEQ ID NO:1) и/или один или несколько его фрагментов и/или его вариантов в соответствии с SEQ ID NO:2, а также его фармацевтически приемлемые соли и
b) по меньшей мере один неионный эфир целлюлозы,
где SEQ ID NO:2 является
1
2
3
4
5
6
7
8
2
X-X-X-X-Asn-Cys-X-X-X-X-NH,
где
1
X выбран из группы, состоящей из Cys и отсутствия;
2
X выбран из группы, состоящей из Tyr, Phe и отсутствия;
3
Х выбран из группы, состоящей из Ile, Val, Hoph, Phe, Cha и отсутствия;
4
Х выбран из группы, состоящей из Gln, Ser, Thr, Cit, Arg и Daba;
5
X выбран из группы, состоящей из Pro и отсутствия;
6
Х выбран из группы, состоящей из Ile, Leu, пробел, Val, Hos, Daba, Thr, Arg и Cit;
7
Х выбран из группы, состоящей из Gly, пробел и Ala;
8
Х выбран из группы, состоящей из Gly и отсутствия,
где указанная фармацевтическая композиция имеет рН в диапазоне от приблизительно 3 до приблизительно 4.
1
1
В одном аспекте настоящего изобретения, когда X является Cys, то дисульфидная связь образуется между X и Cys.
1
1
5
Соответственно, следует понимать, что когда X в формуле (I) является цистеином (Cys), то тиольная группа X может образовывать дисульфидную связь с тиольной группой цистеина, расположенного между аспарагином (Asn) и X, таким образом образуя циклическую структуру формулы (Ia):
В дополнительном аспекте обеспечивается фармацевтическая композиция, содержащая окситоцин (SEQ ID NO:1) и гидроксипропилметилцеллюлозу, в которой рН указанной фармацевтической композиции находится в диапазоне от приблизительно 3 до 4, например от приблизительно 3 до 3,5, или иное, как указано в данном документе.
Кроме того, настоящее изобретение также относится к фармацевтической композиции, состоящей из неионного эфира целлюлозы и окситоцина (SEQ ID NO:1) и/или его варианта(ов), и/или его фрагмента(ов), как представлено в данном документе (SEQ ID NO:2), а также его фармацевтически приемлемых солей и регулирующего рН средства, где указанная фармацевтическая композиция имеет рН в диапазоне от приблизительно 3 до 4, например, от приблизительно 3 до приблизительно 3,5. В одном аспекте указанная фармацевтическая композиция состоит из окситоцина (SEQ ID NO:1), гидроксипропилметилцеллюлозы (НРМС), и регулирующего рН средства, где указанная фармацевтическая композиция имеет рН в диапазоне от приблизительно 3 и 4, как, например, от приблизительно 3 до приблизительно 3,5, или иное, как иллюстрируется в данном документе. В одном аспекте указанное регулирующее рН средство представляет собой буфер, например лактатный или цитратный буфер.
1
2
3
4
5
6
7
8
2
В одном аспекте настоящего изобретения указанная фармацевтическая композиция содержит окситоцин, т.е. когда X является Cys, X является Tyr, Х является Ile, X является Gln, X является Pro, Х является Leu, Х является Gly, а Х отсутствует в SEQ ID NO:2, (Cys-Tyr-Ile-Gln-Asn-Cys-Pro-Leu-Gly-NH) (SEQ ID NO:1).
Один или несколько вариант(ов) и/или фрагмент(ов) окситоцина в упомянутой фармацевтической композиции (SEQ ID NO:2) также могут быть выбраны из группы, состоящей из следующих соединений и их фармацевтически приемлемых солей:
2
Мезотоцин: Cys-Tyr-Ile-Gln-Asn-Cys-Pro-Ile-Gly-NH (SEQ ID NO:3)
1
2
3
4
5
6
7
8
X является Cys, X является Tyr, Х является Ile, X является Gln, X является Pro, Х является Ile, Х является Gly, a X отсутствует;
2
Изотоцин: Cys-Tyr-Ile-Ser-Asn-Cys-Pro-Ile-Gly-NH (SEQ ID NO:4)
1
2
3
4
5
6
7
8
X является Cys, X является Tyr, Х является Ile, X является Ser, X является Pro, Х является Ile, Х является Gly, а Х отсутствует;
2
Аннетоцин: Cys-Phe-Val-Arg-Asn-Cys-Pro-Thr-Gly-NH (SEQ ID NO:5)
1
2
3
4
5
6
7
8
X является Cys, X является Phe, Х является Val, X является Arg, X является Pro, X является Thr, X является Gly, a X отсутствует;
2
Вазотоцин: Cys-Tyr-Ile-Gln-Asn-Cys-Pro-Arg-Gly-NH (SEQ ID NO:6)
1
2
3
4
5
6
7
8
X является Cys, X является Tyr, Х является Ile, X является Gln, X является Pro, Х является Arg, Х является Gly, а Х отсутствует;
2
Вазопрессин: Cys-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys-Pro-Arg-Gly-NH (SEQ ID NO:7)
1
2
3
4
5
6
7
8
X является Cys, X является Tyr, Х является Phe, X является Gln, X является Pro, Х является Arg, X является Gly, a X отсутствует;
2
Cys-Tyr-Ile-Gln-Asn-Cys-NH (SEQ ID NO:8)
1
2
3
4
5
8
X является Cys, X является Tyr, Х является Ile, X является Gln, a X-Xотсутствует;
2
Cys-Tyr-Ile-Gln-Asn-Cys-Pro-NH (SEQ ID NO:9)
1
2
3
4
5
6
8
X является Cys, Х является Tyr, Х является Ile, X является Gln, X является Pro, a Х-Х отсутствует;
2
Cys-Tyr-Ile-Gln-Asn-Cys-Pro-Leu-NH (SEQ ID NO:10)
1
2
3
4
5
6
7-8
X является Cys, X является Tyr, Х является Ile, Х является Gln, X является Pro, Х является Leu, а Х отсутствует;
2
Tyr-Ile-Gln-Asn-Cys-Pro-Leu-Gly-NH (SEQ ID NO:11)
1
2
3
4
5
6
7
8
X отсутствует, Х является Tyr, Х является Ile, Х является Gln, X является Pro, X является Leu, X является Gly, a X отсутствует;
2
Ile-Gln-Asn-Cys-Pro-Leu-Gly-NH (SEQ ID NO:12)
1
2
3
4
5
6
7
8
X-X отсутствуют, Х является Ile, X является Gln, X является Pro, X является Leu, Х является Gly, а Х отсутствует;
2
Gln-Asn-Cys-Pro-Leu-Gly-NH (SEQ ID NO:13)
1
3
4
5
6
7
8
X-Х отсутствуют, X является Gln, X является Pro, X является Leu, X является Gly, а Х отсутствует;
2
Ile-Gln-Asn-Cys-Pro-NH (SEQ ID NO:14)
1
2
3
4
5
6
8
X-X отсутствуют, Х является Ile, X является Gln, X является Pro, a X-X отсутствуют;
2
Cys-Tyr-Ile-Gln-Asn-Cys-Pro-Leu-Gly-Gly-NH (SEQ ID NO:15)
1
2
3
4
5
6
7
8
X является Cys, X является Tyr, Х является Ile, Х является Gln, X является Pro, Х является Leu, Х является Gly, a X является Gly;
2
Gln-Asn-Cys-Pro-Leu-Leu-NH (SEQ ID NO:16)
1
3
4
5
6
7
8
X-Х отсутствуют, X является Gln, X является Pro, X является Leu, X является Leu, а Х отсутствует;
2
Cys-Tyr-Val-Thr-Asn-Cys-Pro-Leu-Gly-NH (SEQ ID NO:17)
1
2
3
4
5
6
7
8
X является Cys, Х является Tyr, Х является Val, Х является Thr, X является Pro, Х является Leu, X является Gly, а Х отсутствует;
2
Cys-Tyr-Hoph-Thr-Asn-Cys-Pro-Val-Gly-NH (SEQ ID NO:18)
1
2
3
4
5
6
7
8
X является Cys, X является Tyr, Х является Hoph, Х является Thr, X является Pro, X является Val, Х является Gly, Х отсутствует;
2
Cys-Tyr-Phe-Cit-Asn-Cys-Pro-Leu-Gly-NH (SEQ ID NO:19)
1
2
3
4
5
6
7
8
X является Cys, Х является Tyr, Х является Phe, X является Cit, X является Pro, Х является Leu, Х является Gly, a Х отсутствует;
2
Cys-Tyr-Cha-Arg-Asn-Cys-Pro-Hos-Ala-NH (SEQ ID NO:20)
1
2
3
4
5
6
7
8
X является Cys, X является Tyr, Х является Cha, X является Arg, X является Pro, Х является Hos, X является Ala, а Х отсутствует;
2
Cys-Tyr-Val-Daba-Asn-Cys-Pro-Daba-Ala-NH (SEQ ID NO:21)
1
2
3
4
5
6
7
8
X является Cys, Х является Tyr, Х является Val, X является Daba, X является Pro, Х является Cit, Х является Ala, а Х отсутствует;
2
Cys-Tyr-Hoph-Daba-Asn-Cys-Pro-Cit-Ala-NH (SEQ ID NO:22)
1
2
3
4
5
6
7
8
X является Cys, Х является Tyr, Х является Hoph, X является Daba, X является Pro, Х является Cit, Х является Ala, а Х отсутствует;
2
Cys-Tyr-Phe-Arg-Asn-Cys-Pro-Val-Ala-NH (SEQ ID NO:23)
1
2
3
4
5
6
7
8
X является Cys, Х является Tyr, Х является Phe, Х является Arg, X является Pro, Х является Val, Х является Ala, а Х отсутствует; и
2
Cys-Tyr-Cha-Cit-Asn-Cys-Pro-Arg-Gly-NH (SEQ ID NO:24)
1
2
3
4
5
6
7
8
X является Cys, X является Tyr, Х является Cha, X является Cit, Х является Pro, Х является Arg, Х является Gly, X отсутствует.
Соответственно, в одном аспекте настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, в которой указанный один или несколько фрагментов и/или вариантов окситоцина выбран(ы) из группы, состоящей из пептидов, соответствующих SEQ ID NO:3 - SEQ ID NO:24.
Синтетические аминокислоты в указанных веществах имеют следующие структуры:
Циклогексилаланин в данном документе обозначен Cha,
,
Гомофенилаланин в данном документе обозначен Hoph,
,
Цитруллин в данном документе обозначен Cit,
,
Диаминобутировая кислота в данном документе обозначена Daba, и
,
Гомосерин в данном документе обозначен Hos,
.
Когда положение в SEQ ID NO:2 обозначено как "отсутствие", это означает, что оно представляет одинарную связь между составляющими (символом, атомом или группой).
Другие варианты окситоцина также могут применяться в фармацевтических композициях согласно настоящему изобретению, таких как встречающиеся в природе или искусственно модифицированные варианты, аналоги и/или производные окситоцина, мезотоцина, изотоцина и/или аннетоцина. Такие варианты могут быть получены добавлением, вставкой, удалением или замещением по меньшей мере одной аминокислоты в этих гормонах. Другие вещества представляют собой предшественники, метаболиты, такие как метаболические производные, т.е. метаболические продукты распада, антагонисты или аналоги веществ, упомянутых в данном документе, проявляющие одинаковые с ними свойства.
Метаболические производные или метаболические продукты распада могут являться окситоцин-подобными пептидами, например состоять из 9 аминокислот, так же как окситоцин, мезотоцин, изотоцин и аннетоцин, но в которых удалены одна или несколько аминокислот с карбоксильного конца или аминного конца, или как с карбоксильного конца, так и с аминного конца, например 1-3 аминокислоты с каждого конца. В определенном аспекте могут быть удалены одна, две или три аминокислоты с карбоксильного конца, т.е. только Gly, Gly и Leu или Gly, Leu и Pro. Предпочтительно с аминного могут быть удалены одна, две или три аминокислоты, т.е. только Cys, Cys и Tyr или Cys, Tyr и Ile.
В некоторых аспектах две или три аминокислоты могли быть удалены как с карбоксильного конца, т.е. только Gly, Gly и Leu или Gly, Leu и Pro, так и одна, две или три аминокислоты - с аминного конца, т.е. только Cys, Cys и Tyr или Cys, Tyr и Ile. Установить, что эти варианты являются аналогами окситоцина, мезотоцина, изотоцина или аннетоцина, можно с помощью иммунологических методов, т.е. RIA (радиоиммунного анализа), IRMA (радиометрических способов), RIST (радиоиммуносорбентного теста) и RAST (радиоаллергосорбентного теста). Настоящее изобретение также включает варианты окситоцина, характеризующиеся идентичностью аминокислотной последовательности с таковой окситоцина по меньшей мере 50, 60, 70, 80, 90, 95, 96, 97, 98 или 99%, причем указанные варианты проявляют активность окситоцина, как определено в данном документе.
Аннетоцин выделяли из дождевого червя, как описано у Oumi Т, Ukena K, Matsushima О, Ikeda Т, Fujita Т, Minakata H, Nomoto K, Annetocin: an oxytocin-related peptide isolated from the earthworm, Eisenia foetida, Biochem Biophys Res Commun 1994, January 14; 198(1); 393-399.
Также существует возможность создавать новые соединения с активностью окситоцина методами компьютерного моделирования. Методы компьютерного моделирования известны специалистам в данной области, например, как описаны в ЕР 0660210 А2.
Настоящее изобретение также относится к фармацевтической композиции, содержащей окситоцин или его вариант как в D-, так и в L-форме, а также его рацематы. В определенном аспекте настоящее изобретение относится к L-форме. С помощью инверсии его последовательности пептида D-форма может быть превращена в L-форму. Эти и названные выше пептиды могут быть синтезированы способами, известными специалистам в данной области техники, например в соответствии с Merrifield, P.В., "Solid Phase Synthesis", Angew. Chemie, 1985, No. 97, p.801.
2
Фармацевтические композиции в соответствии с настоящим изобретением могут при определенных обстоятельствах содержать вещества, продлевающие или усиливающие действие окситоцина. Такие вещества могут повышать высвобождение окситоцина и/или количество единиц, или сродство рецепторов окситоцина, таких как эстроген и/или лекарственные средства, проявляющие [альфа]-агонистический эффект, такие как клонидин.
Следует отметить, что фармацевтически приемлемые соли составов в соответствии с настоящим изобретением включены в объем изобретения. Примерами солей соединения являются фармацевтически приемлемые соли присоединения кислот и оснований.
Под выражением "фармацевтически приемлемые соли присоединения кислот" подразумевают любые нетоксичные соли присоединения органических или неорганических кислот соединений SEQ ID NO:1 или SEQ ID NO:2, и/или любых других вариантов и/или фрагментов окситоцина, как описано в данном документе. Иллюстративными примерами неорганических кислот, образующих подходящие соли, являются соляная кислота, бромная кислота, серная кислота, фосфорная кислота и кислые соли металлов, такие как моногидроортофосфат натрия и гидросульфат калия. Иллюстративными примерами органических кислот, которые образуют подходящие соли, являются моно-, ди- и трикарбоновые кислоты. Примерами таких кислот являются уксусная кислота, гликолевая кислота, молочная кислота, пировиноградная кислота, малоновая кислота, янтарная кислота, глутаровая кислота, яблочная кислота, тартаровая кислота, лимонная кислота, аскорбиновая кислота, малеиновая кислота, гидроксималеиновая кислота, бензойная кислота, гидроксибензойная кислота, фенилуксусная кислота, коричная кислота, салициловая кислота, 2-феноксибензойная кислота и сульфоновые кислоты, такие как п-толуолсульфоновая кислота, метансульфоновая кислота и 2-гидроксиэтансульфоновая кислота. Такие соли могут находиться как в гидратной, так и безводной форме. Соли присоединения кислот таких соединений, как правило, растворимы в воде и различных гидрофильных органических растворителях и, по сравнению с их свободными основаниями, как правило, проявляют более высокие температуры плавления.
Под выражением "фармацевтически приемлемые соли присоединения оснований" подразумеваются любые нетоксичные органические или неорганические соли присоединения оснований соединений SEQ ID NO:1 или SEQ ID NO:2, и/или любых вариантов и/или фрагментов окситоцина, как описано в данном документе. Примерами иллюстративных неорганических оснований, образующих подходящие соли, являются гидроксиды и карбонаты щелочных и щелочно-земельных металлов, таких как гидроксид натрия, карбонат натрия, гидроксид калия, карбонат калия, гидроксид кальция, карбонат кальция, гидроксид магния, карбонат магния и аммиак. Примерами иллюстративных органических оснований, образующих приемлемые соли, являются метиламин, диметиламин, триметиламин и пиколин. Такими соединениями могут образовываться как моно-, так и двухосновные соли. Соли присоединения оснований таких соединений, как правило, растворимы в воде и различных гидрофильных органических растворителях и, по сравнению с их свободными основаниями, как правило, проявляют более высокие температуры плавления.
Неионные эфиры целлюлозы фармацевтической композиции в соответствии с настоящим изобретением получены на основе целлюлозы, которая была химически модифицирована путем замещения различных групп на целлюлозном скелете с целью получения растворимости в воде. Для заместителей характерно отсутствие электрического заряда при растворении в воде при нейтральном рН.
Свойства неионных эфиров целлюлозы определяются молекулярной массой (т.е. степенью полимеризации), типом заместителей, а также числом и распределением заместителей в молекуле. Следовательно, в зависимости от окситоцина и/или его фрагментов и/или его вариантов, присутствующих в фармацевтической композиции, неионный эфир целлюлозы может обладать различными свойствами и будет определяться в соответствии с преобладающими обстоятельствами.
Эфиры целлюлозы в соответствии с настоящим изобретением являются неионными, причем в них алкильные и/или гидроксиалкильные группы присоединены к мономерам ангидроглюкозы эфирными связями, образующими гидроксиалкилалкилцеллюлозы, где в алкильных группах содержится от 1 до 4 атомов углерода.
Типичными эфирами целлюлозы для применения в фармацевтических композициях в соответствии с настоящим изобретением являются метилцеллюлоза (МС), гидроксиэтилметилцеллюлоза (НЕМС), гидроксипропилметилцеллюлоза (НРМС), гидроксиэтилэтилцеллюлоза (НЕЕС) и гидроксипропилцеллюлоза (НРС). В этих полимерах заместители являются либо неполярными (например метил), либо имеют незначительную полярность (например гидроксиэтил), которые в комбинации с гидрофильным целлюлозным скелетом образуют амфифильный полимер.
Соответственно, настоящее изобретение относится к фармацевтическим композициям, в которых по меньшей мере один из неионных эфиров целлюлозы выбран из одного или нескольких следующих эфиров целлюлозы: МС, НРМС, НЕЕС, НЕМС и/или НРС, или как дополнительно приводится в данном документе. В одном аспекте в фармацевтической композиции в соответствии с настоящим изобретением упомянутый неионный эфир целлюлозы является гидроксипропилметилцеллюлозой (НРМС).
Показатель рН фармацевтической композиции в соответствии с настоящим изобретением и применительно ко всем его вариантам осуществления и аспектам, как определено в данном документе, может находиться в диапазоне от приблизительно 3 до 4,5, таком как от приблизительно 3,5 до приблизительно 4,5, от приблизительно 3,5 до 4, от приблизительно 3 до 4, от приблизительно 3 до 3,5, от приблизительно 3 до 3,1, от приблизительно 3 до 3,2, от приблизительно 3 до 3,3, от приблизительно 3 до 3,4, от приблизительно 3 до 3,6, от приблизительно 3 до 3,7, от приблизительно 3 до 3,8, от приблизительно 3 до 3,9, от приблизительно 3,1 до 3,2, от приблизительно 3,1 до 3,3, от приблизительно 3,1 до 3,4, от приблизительно 3,1 до 3,5, от приблизительно 3,1 до 3,6, от приблизительно 3,1 до 3,7, от приблизительно 3,1 до 3,8, от приблизительно 3,1 до 3,9, от приблизительно 3,2 до 3,3, от приблизительно 3,2 до 3,4, от приблизительно 3,2 до 3,5, от приблизительно 3,2 до 3,6, от приблизительно 3,2 до 3,7, от приблизительно 3,2 до 3,8, от приблизительно 3,2 до 3,9, от приблизительно 3,3 до 3,5, от приблизительно 3,3 до 3,6, от приблизительно 3,3 до 3,7, от приблизительно 3,3 до 3,8 или от приблизительно 3,3 до 4. Следует отметить, что эти значения являются не совсем точными, что означает, что они могут незначительно варьировать в пределах представленных значений.
Показатель рН фармацевтической композиции, как определено в данном документе, можно регулировать путем добавления к указанной фармацевтической композиции регулирующего рН средства, такого как буфер. В контексте настоящего изобретения указанный буфер может представлять собой лактатный буфер, цитратный буфер, фосфатный буфер или их смесь, но без ограничения таковыми.
Концентрация буфера, добавляемого в фармацевтическую композицию в соответствии с настоящим изобретением, может находиться от приблизительно 20 до 100 мМ, например, от приблизительно 25 мМ до 100 мМ или от приблизительно 25 до 50 мМ, или от приблизительно 25 мМ до 75 мМ, или от приблизительно 50 до 70 мМ в водном растворе, но без ограничения таковыми. Следует отметить, что эти значения являются не совсем точными, что означает, что они могут незначительно варьировать в пределах представленных значений. В зависимости от требуемого рН и буфера, применяемого в фармацевтической композиции в соответствии с настоящим изобретением, концентрация буфера будет варьироваться в соответствии с вышеупомянутым.
В одном аспекте настоящего изобретения фармацевтическая композиция содержит окситоцин (SEQ ID NO:1) и гидроксипропилметилцеллюлозу (НРМС), необязательно в комбинации с буферами, другими регулирующим рН средствами или дополнительными компонентами, как представлены в данном документе, такими как консервант, таким как бензойная кислота. В одном аспекте рН указанной композиции окситоцина и НРМС находится в диапазоне от приблизительно 3 до 4, например, от приблизительно 3 до 3,5, от приблизительно 3,1 до 3,6 или от приблизительно 3 до 3,8, или как дополнительно определяется в данном документе.
В фармацевтической композиции в соответствии с настоящим изобретением концентрация окситоцина и/или его фрагмента, и/или его варианта, как определено в данном документе, может находиться в диапазоне от приблизительно 0,1 до 1,5 мг/г, например, от приблизительно 0,5 до приблизительно 1,5 мг/г, от приблизительно 0,5 до приблизительно 1 мг/г, от приблизительно 0,5 до приблизительно 1,2 мг/г, от приблизительно 0,2 до приблизительно 0,5 мг/г, от приблизительно 0,1 до приблизительно 0,8 мг/г, или от приблизительно 0,2 до приблизительно 1,2 мг/г всей фармацевтической композиции, как определено в данном документе.
В данном документе мг/г может считаться приблизительно эквивалентным мг/мл в связи с применяемой фармацевтической композицией. Соответственно, концентрация окситоцина и/или его фрагмента, и/или его варианта, как определено в данном документе, может составлять от приблизительно 0,1 до 1,5 мг/мл, например, от приблизительно 0,5 до приблизительно 1,5 мг/мл, от приблизительно 0,5 до приблизительно 1 мг/мл, от приблизительно 0,5 до приблизительно 1,2 мг/мл, от приблизительно 0,2 до приблизительно 0,5 мг/мл, от приблизительно 0,1 до приблизительно 0,8 мг/мл или от приблизительно 0,2 до приблизительно 1,2 мг/мл всей фармацевтической композиции, как определено в данном документе. Следовательно, это означает, что в 1 мл всей фармацевтической композиции может содержаться от приблизительно 0,1 до 1,5 мг/мл окситоцина.
В одном аспекте фармацевтическая композиция в соответствии с настоящим изобретением содержит приблизительно 1 мг/г окситоцина, приблизительно 2 вес.% гидроксипропилметилцеллюлозы в приблизительно 25 мМ цитратном или лактатном буфере и необязательно приблизительно 1 мг/г бензойной кислоты.
В другом аспекте фармацевтическая композиция в соответствии с настоящим изобретением содержит приблизительно 0,9 мг/г окситоцина, приблизительно 1,1 мг/г бензойной кислоты и приблизительно 2 вес.% гидроксипропилметилцеллюлозы (НРМС) в приблизительно 25 мМ лактатном буфере.
Показатель рН фармацевтических композиций, описанных выше, находится в диапазоне от приблизительно 3 до 4, например, от приблизительно 3 до приблизительно 3,5 или от приблизительно 3,1 до приблизительно 3,6, или от приблизительно 3,2 до приблизительно 3,5, или как дополнительно представлено в данном документе.
Концентрация по меньшей мере одного неионного эфира целлюлозы, такого как гидроксипропилметилцеллюлоза (НРМС), обеспечивается относительно регулирующего рН средства фармацевтической композиции, такого как буфер, как представлено в данном документе, например 2 вес.% или 3 вес.% неионного эфира целлюлозы в 25 мМ буфере обеспечивает определенную вязкость за счет присутствия по меньшей мере одного неионного эфира целлюлозы в указанном буфере. Соответственно, концентрация неионного эфира целлюлозы в указанном буфере или другом регулирующем рН средстве представлена в весовых % (вес.%). Во всей фармацевтической композиции количество неионного эфира целлюлозы немного меньше из-за внесения в указанную композицию терапевтического вещества (окситоцина и/или одного или нескольких его фрагментов и/или его вариантов, как раскрыто в данном документе).
Концентрация окситоцина и/или одного или нескольких его фрагментов и/или его вариантов, как определено в данном документе, определяется относительно всей фармацевтической композиции, т.е. буфера и неионного эфира целлюлозы, а также необязательно других добавок, таких как консервант. Следовательно, 1 мг/г окситоцина означает, что 1 мг окситоцина присутствует в 1 г всей фармацевтической композиции. Кроме того, как уже упоминалось в данном документе, 1 мг/мл означает, что 1 мг окситоцина присутствует в 1 мл всей фармацевтической композиции.
В контексте настоящего изобретения готовая лекарственная форма окситоцина и/или одного или нескольких его фрагментов и/или его вариантов, вводимая пациенту, в случае необходимости, может содержать от приблизительно 50 до 600 ME окситоцина и/или одного или нескольких его фрагментов и/или его вариантов, как определено в данном документе, например, приблизительно 100, 200, 250, 300, 350 или 400 ME. Одна международная единица (ME) окситоцина эквивалентна приблизительно 1,67 микрограммам чистого пептида. Соответственно, композиция из 1 г окситоцинового геля, 400 ME, эквивалентна приблизительно 0,67 мг/г (Ph Eur).
Настоящее изобретение также относится к фармацевтическим композициям, как раскрыто в данном документе, применяемым в качестве лекарственных препаратов. В одном аспекте настоящего изобретения настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей окситоцин (SEQ ID NO:1) и/или один или несколько его фрагмент(ы), и/или его вариант(ы) в соответствии с SEQ ID NO:2, а также его фармацевтически приемлемые соли и гидроксипропилметилцеллюлозу (НРМС), необязательно в комбинации с буферами, другими регулирующим рН средствами и/или дополнительными компонентами, как указано в данном документе, такими как консерванты, такие как бензойная кислота, применяемой в качестве лекарственного препарата. Такая фармацевтическая композиция имеет рН в диапазоне, как представлен в данном документе. Примером медицинского применения композиций настоящего изобретения является вагинальное применение, например, при атрофии влагалища. Подобное медицинское применение показано авторами настоящего изобретения в WO 0178758.
Что касается примеров другого медицинского применения окситоцина, при котором фармацевтические композиции в соответствии с настоящим изобретением являются применимыми, мы ссылаемся на WO 02102832, WO 02067974, WO 03017922, WO 0018424, WO 9843661, WO 9843662 и WO 9843660. Следовательно, настоящее изобретение также относится к фармацевтической композиции, как представлено в данном документе, предназначенной для медицинского применения, как поясняется в любом из вышеуказанных патентных документов. Такими медицинскими применениями являются, например применения при достижении гомеостаза, раке in situ и цервиците, воспалении, регенерации клеток, лечении ран, предпочтительно также при достижении приемлемости, а также лечении боли, когда фармацевтическая композиция в соответствии со значением в настоящем изобретении подходит для лечения болезненных состояний, например, когда топическое лечение подходит для их лечения.
Под выражением "гомеостаз" понимают психофизиологическое состояние, т.е. комбинацию психологического и физиологического состояний. Физиологическое состояние характеризуется мягкими и положительными социальными взаимодействиями, как, например, доверие, например при кормлении грудью. Физиологическое состояние характеризуется миорелаксацией, сниженной активностью сердечно-сосудистой системы и повышенной активностью желудочно-кишечного тракта. Кроме того, частота пульса и артериальное давление остаются на низком, здоровом и сбалансированном уровне, а работа желудочно-кишечного тракта, контролируемого блуждающим нервом, активизируется, ускоряя пищеварение и сохранение питательных веществ.
Под выражением "рак in situ и цервицит" понимают последствия заболеваний влагалища и шейки матки, начинающихся с инфекций, а также с воспалений. В контексте настоящего изобретения рак in situ относится к шейке матки. Такие заболевания включают, помимо рака in situ и цервицита, также и предраковые болезненные состояния, плоскоклеточную карциному и койлоцитоз. Под раком in situ подразумевают опухолевое новообразование, при котором опухолевые клетки по происхождению относятся к эпителию, без проникновения в базальную мембрану. Под цервицитом понимают воспаление шейки матки, т.е. нижнего и узкого края матки, между перешейком матки и устьем матки. Эпителий шейки матки заметно отличается от такового остальной части матки. Койлоцитоз является последствием инфекции вирусом герпеса.
Все фармацевтические композиции, как определено в данном документе, предназначены для местного применения, такого как вагинальное. Вагинальное применение может представлять собой лечение климактерических расстройств, таких как атрофия влагалища, или любых других расстройств, упомянутых в WO 0178758. Следовательно, в одном аспекте настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей окситоцин (SEQ ID NO:1) и/или один или несколько его фрагментов и/или его вариантов в соответствии с SEQ ID NO:2, а также его фармацевтически приемлемые соли и гидроксипропилметилцеллюлозу (НРМС) необязательно в комбинации с буферами, другими регулирующим рН средствами или дополнительными компонентами, как представлено в данном документе, такими как бензойная кислота, для вагинального применения, такого как для лечение климактерических расстройств, например, атрофии влагалища. Показатель рН такой фармацевтической композиции может находиться в диапазоне от приблизительно 3 до приблизительно 4, таком как от приблизительно 3 до приблизительно 3,5, от приблизительно 3,1 до приблизительно 3,6 или от приблизительно 3,1 до приблизительно 3,8, или ином, как представлено в данном документе.
Во всех аспектах настоящего изобретения следует понимать, что во всех случаях при упоминании определенного медицинского применения указанной фармацевтической композиции, такого как применение при лечении атрофии влагалища, оно также относится к применению окситоцина и/или одного или нескольких его фрагментов и/или его вариантов, как определено в данном документе, и по меньшей мере одного неионного эфира целлюлозы при изготовлении лекарственного препарата, предназначенного для лечения определенного заболевания, такого как представлено в данном документе, причем указанный лекарственный препарат имеет рН в диапазоне от приблизительно 3 до 4, как, таком как от приблизительно 3 до 3,5, или как дополнительно представлено в данном документе.
Как показано в данном документе, присутствие по меньшей мере одного неионного эфира целлюлозы в фармацевтической композиции эффективно улучшает в нем стабильность молекулы окситоцина. Следовательно, настоящее изобретение также относится к применению по меньшей мере одного неионного эфира целлюлозы для стабилизации, альтернативно, для улучшения стабильности фармацевтической композиции, содержащей окситоцин (SEQ ID NO:1) и/или один или несколько его фрагментов и/или его вариантов, как определено в SEQ ID NO:2, или иное, как указано в данном документе. В одном аспекте, настоящее изобретение относится к применению по меньшей мере одного неионного эфира целлюлозы гидроксипропилметилцеллюлозы (НРМС) для стабилизации, альтернативно, для улучшения стабильности фармацевтической композиции, содержащей окситоцин (SEQ ID NO:1) и/или его фрагмента, и/или его варианта, а также его фармацевтически приемлемые соли, как определено в SEQ ID NO:2, или иное, как определено в данном документе, причем указанная фармацевтическая композиция необязательно дополнительно содержит буфер, другие регулирующие рН средства или дополнительные компоненты, как указано в данном документе, такие как консервант. Как ранее упоминалось в данном документе, комбинация применения низкого уровня рН в фармацевтической композиции дополнительно улучшает стабилизирующий эффект по меньшей мере одного неионного эфира целлюлозы. Не привязываясь к какой-либо определенной теории, оказывается, что по меньшей мере один неионный эфир целлюлозы стабилизирует молекулу окситоцина и/или один или несколько его фрагментов и/или его вариантов, как определено в данном документе, делая его менее подверженным деградации и/или агрегации или другим структурным изменениям, возможно, не взаимодействуя с молекулой окситоцина.
Во всех случаях, когда в данном документе упоминают улучшенную стабильность/стабилизирующий эффект, это может означать уменьшение агрегации и/или деградации или других структурных изменений молекулы окситоцина в фармацевтической композиции, определенной в данном документе, но это не привязывает нас ни к какой определенной теории. Согласно такой теории, уменьшение агрегации и/или деградации или другие структурные изменения сопровождаются улучшением стабильности молекулы окситоцина. Улучшение стабильности с помощью фармацевтической композицией по меньшей мере одного неионного эфира целлюлозы дополнительно иллюстрируется в экспериментальном разделе, включающем сравнение образцов, содержащих гель CMC.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к способу получения фармацевтической композиции с улучшенной стабильностью, включающему этапы:
a) получение буферного раствора и регуляции его рН,
b) добавления окситоцина (SEQ ID NO:1) и/или одного или нескольких его фрагментов и/или его вариантов согласно SEQ ID NO:2, или иного, как определено в данном документе, а также его фармацевтически приемлемых солей к указанному буферу, и
c) добавление по меньшей мере одного неионного эфира целлюлозы в раствор, полученный на этапе b);
при этом в буферный раствор с этапа а) необязательно добавляют консервант, такой как бензойная кислота, перед тем как указанный окситоцин (SEQ ID NO:1) и/или один или несколько его фрагментов и/или его вариантов согласно SEQ ID NO:2 или иное, как обозначено в данном документе, вводят в указанный буферный раствор, а рН указанной фармацевтической композиции регулируют до снижения в диапазоне от приблизительно 3 до приблизительно 4, таком диапазоне как от приблизительно 3 до приблизительно 3,5, или иного, как представлено в данном документе. После этапа с) раствор оставляют, пока не образуется вязкий раствор или гель. Как правило, указанный вязкий раствор или гель получают через приблизительно 1-2 дня. Указанный способ также в некоторых аспектах направлен на применение других регулирующих рН средств, отличных от буферов, таких как органические и неорганические кислоты, а также основания, такие уксусная кислота, лимонная кислота, фосфорная кислота и соляная кислота, а также гидроксид натрия, которые, следовательно, применяются на этапе а) указанного способа.
В способе в соответствии с настоящим изобретением предполагается, что стабильность окситоцина и/или одного или нескольких его фрагментов и/или его вариантов, как раскрыто в данном документе, улучшают путем получения композиции вместе с по меньшей мере одним неионным эфиром целлюлозы. В одном аспекте способа в соответствии с настоящим изобретением указанный по меньшей мере один неионный эфир целлюлозы является гидроксипропилметилцеллюлозой (НРМС). В одном аспекте способ в соответствии с настоящим изобретением относится к получению фармацевтической композиции, содержащей окситоцин (SEQ ID NO:1) и гидроксипропилметилцеллюлозу (НРМС).
Введение молекулы окситоцина может в некоторых аспектах облегчаться применением пальпации, давления, массажа, тепла или инфракрасного света, воздействующего на кожу, что вызывает повышение проницаемости кожи. В Hirvonen, J, Kalia, Y N, and Gay, R H. Transdermal delivery of peptides by iontophoresis. Nat Biotechnol December 1996; 14(13):1710-1713, описано, как повысить транспорт вещества через кожу с применением движущих сил применяемого электрического поля. Ионтофорез можно осуществлять при слабощелочном рН.
Описаны различные способы синтетического получения окситоцина; промышленные способы, например, описаны в патентах США №№2938991 и 3076797.
В одном аспекте, настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей
а. окситоцин (SEQ ID NO:1) и/или один или несколько его фрагментов и/или его вариантов согласно SEQ ID NO:2, а также его фармацевтически приемлемые соли и
b. по меньшей мере один неионный эфир целлюлозы;
где SEQ ID NO:2 является
1
2
3
4
5
6
7
8
2
X-X-X-X-Asn-Cys-X-X-X-X-NH,
где
1
X выбран из группы, состоящей из Cys и отсутствия;
2
Х выбран из группы, состоящей из Tyr, Phe и отсутствия;
3
Х выбран из группы, состоящей из Ile, Val, Hoph, Phe, Cha и отсутствия;
4
Х выбран из группы, состоящей из Gln, Ser, Thr, Cit, Arg и Daba;
5
X выбран из группы, состоящей из Pro и отсутствия;
6
Х выбран из группы, состоящей из Ile, Leu, отсутствия, Val, Hos, Daba, Thr, Arg и Cit;
7
Х выбран из группы, состоящей из Gly, отсутствия и Ala;
8
X выбран из группы, состоящей из Gly и отсутствия;
где окситоцин и/или один или несколько его фрагментов и/или его вариантов присутствует в количестве от приблизительно 0,1 до 1,5 мг/г, например, от 0,5 до приблизительно 1,5 мг/г, от приблизительно 0,5 до приблизительно 1 мг/г, от приблизительно 0,5 до приблизительно 1,2 мг/г, от приблизительно 0,2 до приблизительно 0,5 мг/г, от приблизительно 0,1 до приблизительно 0,8 мг/г или от приблизительно 0,2 до приблизительно 1,2 мг/г всей фармацевтической композиции, и где упомянутый по меньшей мере один неионный эфир целлюлозы присутствует в количестве от приблизительно 1 до 3 вес.%, например, от приблизительно 2 вес.% до 3 вес.%, в регулирующем рН средстве, таком как буфер, причем концентрация указанного буфера составляет от приблизительно 25 мМ до приблизительно 100 мМ. В одном аспекте указанный по меньшей мере один неионный эфир целлюлозы является гидроксипропилметилцеллюлозой.
В некоторых аспектах фармацевтические композиции в соответствии с настоящим изобретением могут необязательно содержать другие компоненты, такие как инертные компоненты или компоненты, выполняющие физическую или биологическую функцию. В некоторых аспектах в фармацевтической композиции в соответствии с настоящим изобретением дополнительно присутствуют антибиотик или анальгетик.
Настоящее изобретение также относится к способам лечения климактерических нарушений, таких как атрофия влагалища, у пациентов, нуждающихся в этом, включая введение подходящего количества фармацевтической композиции, содержащей
а. окситоцин (SEQ ID NO:1) и/или один или несколько его фрагментов и/или его вариантов в соответствии с SEQ ID NO:2, а также его фармацевтически приемлемые соли и
b. по меньшей мере один неионный эфир целлюлозы;
пациенту, нуждающемуся в этом, причем рН указанной фармацевтической композиции находится в диапазоне от приблизительно 3 до 4, или ином, как указано в данном документе. Указанная фармацевтическая композиция для применения в способе лечения климактерических нарушений может представлять собой любую фармацевтическую композицию, как раскрыто в данном документе. В одном аспекте указанная фармацевтическая композиция, которую вводят пациенту, нуждающемуся в этом, содержит окситоцин и гидроксипропилметилцеллюлозу (НРМС).
Настоящее изобретение также относится к способу лечения любых расстройств, как указано выше в данном документе, включая введение подходящего количества фармацевтической композиции, содержащей:
а. окситоцин (SEQ ID NO:1) и/или один или несколько его фрагментов и/или его вариантов в соответствии с SEQ ID NO:2, а также его фармацевтически приемлемые соли и
b. по меньшей мере один неионный эфир целлюлозы;
пациенту, нуждающемуся в этом, причем рН указанной фармацевтической композиции находится в диапазоне от приблизительно 3 до 4, или ином, как представлено в данном документе. Указанная фармацевтическая композиция для применения в способе лечения любого расстройства, как упомянуто выше в данном документе, может представлять собой любую фармацевтическую композицию, как раскрыто в данном документе. В одном аспекте указанная фармацевтическая композиция, которую вводят пациенту, нуждающемуся в этом, содержит окситоцин и гидроксипропилметилцеллюлозу (НРМС).
В другом аспекте настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей приблизительно 1 мг/г окситоцина, приблизительно 2 вес.% гидроксипропилметилцеллюлозы (НРМС) в приблизительно 25 мМ цитратном или лактатном буфере и необязательно приблизительно 1 мг/г бензойной кислоты, где рН указанной композиции составляет приблизительно 3.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей приблизительно 1 мг/г окситоцина, приблизительно 2 вес.% гидроксипропилметилцеллюлозы (НРМС) в приблизительно 25 мМ лактатном буфере, где рН указанной композиции составляет приблизительно 3,8.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей приблизительно 0,9 мг/г окситоцина, приблизительно 1,1 мг/г бензойной кислоты, приблизительно 2 вес.% гидроксипропилметилцеллюлозы (НРМС) в приблизительно 25 мМ лактатном буфере, где рН указанной композиции составляет приблизительно 3,8.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей окситоцин, гидроксипропилметилцеллюлозу, цитратный или лактатный буфер и необязательно бензойную кислоту. В одном аспекте указанная фармацевтическая композиция содержит приблизительно 1 мг/г окситоцина, приблизительно 2 вес.% гидроксипропилметилцеллюлозы в приблизительно 25 мМ цитратном или лактатном буфере и необязательно приблизительно 1 мг/г бензойной кислоты.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей приблизительно 1 мг/г окситоцина, 2 вес.% гидроксипропилметилцеллюлозы в 25 мМ лактатном буфере и необязательно 1 мг/г бензойной кислоты.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей приблизительно 0,8 мг/г окситоцина, 3 вес.% гидроксипропилметилцеллюлозы в 22 мМ лактатном буфере и необязательно 1 мг/г бензойной кислоты.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей приблизительно 0,4 мг/г окситоцина, 3 вес.% гидроксипропилметилцеллюлозы в 22 мМ лактатном буфере и необязательно 1 мг/г бензойной кислоты.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей приблизительно 0,2 мг/г окситоцина, 3 вес.% гидроксипропилметилцеллюлозы в 22 мМ лактатном буфере и необязательно 1 мг/г бензойной кислоты.
Как указано выше в данном документе, лекарственная форма фармацевтической композиции, содержащей окситоцин (SEQ ID NO:1) и/или один или несколько его фрагментов и/или его вариантов, как определено в данном документе, может содержать от приблизительно 50 до 600 ME окситоцина и/или одного или нескольких его фрагментов и/или его вариантов, как определено в данном документе, например, приблизительно 100, 200, 250, 300, 350 или 400 ME.
Настоящее изобретение также относится к набору, содержащему фармацевтическую композицию, содержащую
а. окситоцин (SEQ ID NO:1) и/или один или несколько его фрагментов и/или его вариантов в соответствии с SEQ ID NO:2, а также его фармацевтически приемлемые соли и
b. по меньшей мере один неионный эфир целлюлозы;
и дозатор для распределения указанной фармацевтической композиции необязательно в комбинации с инструкцией по применению указанной фармацевтической композиции, причем рН указанной фармацевтической композиции находится в диапазоне от приблизительно 3 до 4, или ином, как указано в данном документе. В наборе, как представлено в данном документе, может применяться любая фармацевтическая композиция, как раскрыто в данном документе. Указанный дозатор, присутствующий в указанном наборе, может иметь форму, например, пластмассовой тубы. Набор также может содержать один или несколько контейнеров, в каждом из которых содержится один или несколько из фармацевтически приемлемого носителя, адъюванта и/или вспомогательного вещества.
Фармацевтическая композиция, раскрытая в данном документе, может, например, представлять собой водную композицию, содержащую окситоцин и неионный эфир целлюлозы.
Настоящее изобретение иллюстрируется следующим экспериментальным разделом, не предназначенным ограничивать его.
Экспериментальный раздел
Исследования окситоцина в цитратном/лактатном буферах с Na-CMC/HPMC при 70°С в экстремальных условиях
Краткое описание
Стабильность окситоцина в цитратном буфере с бензойной кислотой или без нее и с Na-CMC или без нее при 70°С изучали в течение двух недель.
В другой серии образцов стабильность окситоцина в цитратном буфере с бензойной кислотой или без нее и с НРМС (гипромеллозой или гидроксипропилметилцеллюлозой) или без нее при 70°С изучали в течение 3 недель.
В третьей серии образцов стабильность окситоцина в лактатном буфере с НРМС и без бензойной кислоты при 70°С изучали в течение двух недель.
Предпосылки
1
2
Стабильность окситоцина в водных растворах с различным значением рН уже изучали ранее. В данном исследовании сделали вывод, что наилучшая стабильность достигалась при рН 4,5. В недавнем изучении стабильности было показано, что стабильность окситоцина значительно зависит от состава и условий хранения.
3
4
В третьем исследовании была изучена стабильность окситоцина в лактатном буфере и цитратном буфере, соответственно, с бензойной кислотой в качестве консерванта вместо парабенов, применяемых в предыдущих исследованиях. Парабены могут вызывать деградацию гелеобразующего средства Na-CMC. Однако уменьшение вязкости наблюдали также и в случае применения бензойной кислоты.
В данном исследовании изучается эффект гелеобразующего средства (Na-СМС/НРМС) в цитратном/лактатном буфере, а также с бензойной кислотой в качестве консерванта или без нее.
Оборудование
ВЭЖХ-система в соответствии с Ph. Eur. 2.2.29
ВЭЖХ-система; Alliance 2695 от Waters, УФ детектирование при 220 нм
Колонка: YMC.-PAC ODS-A С18 250* 4,6 мМ, 5 мкм
Подвижная фаза: А: 15,6 г/л дигидрофосфат натрия
В: Ацетонитрил:вода (50:50)
Программное обеспечение для хроматографии: MassLynx version 4.1 от Waters
рН-метр: Jenway 370
Химические вещества
Ацетонитрил класса HPLC S (ACN), Rathburn chemicals
Стерильная вода, Baxter.
Дигидрофосфат натрия, Merck, 6346
Окситоцин был получен от Grindeks, Рига, Латвия
Получение образцов
Буферный раствор получали путем растворения соответствующего количества лимонной кислоты или молочной кислоты в дистиллированной воде, приблизительно 90% от общего объема. Регулировали рН до желаемого значения путем добавления по каплям 5 М NaOH (водн.) при магнитном перемешивании. Наконец, раствор перелили в мерную колбу и довели объем до конечного значения дистиллированной водой.
Консервант бензойную кислоту взвешивали в стеклянной колбе и добавляли требуемое количество буферного раствора. После того как колбу закрыли, бензойную кислоту растворили путем нагревания колбы на теплой (приблизительно 50°С) ультразвуковой бане в течение приблизительно 30 мин. После охлаждения до комнатной температуры в прозрачный раствор добавляли окситоцин и осторожно перемешивая растворяли его. Наконец в смесь добавляли требуемое количество неионного эфира целлюлозы и смесь встряхивали рукой, затем оставляли для набухания и растворения при комнатной температуре до получения вязкого раствора/геля.
Конечные образцы хранили в стеклянных флаконах с пробками из бутилкаучука и алюминиевыми обжимными крышками.
Образец
Композиция
АСА101108-1
1,0 мг/г окситоцина в 100 мМ цитратном буфере, рН 3,1
АСА101108-2
1,2 мг/г окситоцина + 1,0 мг/г бензойной кислоты в 100 мМ цитратном буфере, рН 3,1
АСА101108-3
1,0 мг/г окситоцина + 1,0 мг/г бензойной кислоты + 2,6% Na-CMC в 100 мМ цитратном буфере, рН 3,1
АСА101108-4
1,0 мг/г окситоцина + 2,6% Na-CMC в 100 мМ цитратном буфере, рН 3,1
АСА101123-1
1,0 мг/г окситоцина в 25 мМ цитратном буфере, рН 3,10
АСА101123-2
1,0 мг/г окситоцина + 1,0 мг/г бензойной кислоты в 25 мМ цитратном буфере, рН 3,10
АСА101123-3
1,0 мг/г окситоцина + 1,0 мг/г бензойной кислоты+2,0% НРМС в 25 мМ цитратном буфере, рН 3,10
АСА101123-4
1,0 мг/г окситоцина + 2,0% НРМС в 25 мМ цитратном буфере, рН 3,10
АСА101207-1
1,0 мг/г окситоцина + 2,0% НРМС в 25 мМ лактатном буфере, рН 3,79
АСА101207-2
0,9 мг/г окситоцина + 1,1 мг/г бензойной кислоты+2,0% НРМС в 25 мМ лактатном буфере, рН 3,79
Экспериментальная процедура
Образцы хранили при различных температурах и брали для анализа в соответствии со схемой стабильности, приведенной ниже. Перед анализом 30 мг каждого жидкого образца растворяли с помощью 1,00 мл подвижной фазы А и затем помещали в ВЭЖХ-систему.
Анализ
Все образцы исследовались визуально, а их значения рН измеряли перед проведением анализа.
ВЭЖХ
Подвижная фаза
А: 15,6 г/л дигидрофосфат натрия.
В: Ацетонитрил:вода (50:50).
Параметры профиля градиента:
Время (мин.)
А (%)
В (%)
0
95,0
5,0
1
95,0
5,0
30,0
5,0
95,0
40,0
5,0
95,0
45,0
95,0
5,0
Поток: 1,00 мл.
Объем вводимой пробы: 20 мкл.
Раствор для промывки инжектора: вода:ацетонитрил.
Определение
Все образцы сначала проверяли визуально и изучали изменения цвета или тенденции к преципитации и изменения вязкости. Затем измеряли рН и проводили дальнейший анализ образцов в отношении содержания окситоцина и бензойной кислоты. Концентрации определяли относительно кривых внешнего стандарта для окситоцина и бензойной кислоты, соответственно. Все образцы были получены в двух повторностях и последовательно проанализированы с помощью ВЭЖХ с одним впрыском (EXP-11-AJ1634).
Результаты
Таблица 1а)-с): pH, содержание окситоцина и бензойной кислоты в образцах серии АСА101108 после 2 недель хранения. ND = не определено
Таблица 1а)
Образец
Время 0
pH
Бензойная кислота мг/г
%
Окситоцин мг/г
%
АСА101108-1
3,15
X
X
0,93
100
АСА101108-2
3,12
7,30
108
7,78
100
АСА101108-3
3,73
7,27
127
0,96
100
АСА101108-4
3,8
X
X
0,93
100
Таблица 1b)
Образец
1 неделя 70°
pH
Бензойная кислота мг/г
%
Окситоцин мг/г
%
АСА101108-1
3,10
X
X
0,36
38,7
АСА101108-2
3,07
1,11
93
0,47
39,8
АСА101108-3
3,81
1,07
107
0,23
24
АСА101108-4
3,82
X
X
0,24
25,8
Таблица 1c)
Образец
2 недели 70°
pH
Бензойная кислота мг/г
2 недели 70°%
Окситоцин мг/г
%
АСА101108-1
ND
X
X
0,29
31,1
АСА101108-2
ND
1,12
112
0,34
28,8
АСА101108-3
ND
1,13
113
0,15
15,6
АСА101108-4
ND
X
X
0,20
21,5
Таблица 2a)-d): pH, содержание окситоцина и бензойной кислоты в образцах серии АСА101123 после 3 недель хранения
Таблица 2а)
Образец
Время 0
pH
Бензойная кислота мг/г
%
Окситоцин мг/г
%
АСА101123-1
3,25
X
X
0,98
100
АСА101123-2
3,22
0,95
95
0,94
100
АСА101123-3
3,25
0,87
87
0,88
100
АСА101123-4
3,31
X
X
0,86
100
Таблица 2b)
Образец
1 неделя 70°
pH
Бензойная кислота мг/г
%
Окситоцин мг/г
%
АСА101123-1
ND
X
X
0,75
76,5
АСА101123-2
ND
1,20
120
0,77
81,9
АСА101123-3
ND
1,12
112
0,74
84,1
АСА101123-4
ND
X
X
0,78
90,7
Таблица 2c)
Образец
2 недели 70°
pH
Бензойная кислота мг/г
%
Окситоцин мг/г
%
АСА101123-1
3,31
X
X
0,52
53,1
АСА101123-2
3,29
1,04
109
0,52
55,3
АСА101123-3
3,25
0,98
112
0,50
56,8
АСА101123-4
3,32
X
X
0,50
58,1
Таблица 2d)
Образец
3 недели 70°
pH
Бензойная кислота мг/г
%
Окситоцин мг/г
%
АСА101123-1
3,30
X
X
0,46
46,9
АСА101123-2
3,25
1,18
124
0,51
54,3
АСА101123-3
3,31
0,82
94,3
0,43
48,9
АСА101123-4
3,33
X
X
0,47
54,7
Таблица 3а)-с): рН, содержание окситоцина и бензойной кислоты в образцах серии АСА101207 после 2 недель хранения
Таблица 3а)
Образец
Время 0
pH
Бензойная кислота мг/г
%
Окситоцин мг/г
%
АСА101207-1
4,17
Х
Х
0,98
100
АСА101207-2
3,88
1,06
100
0,95
100
Таблица 3b)
Образец
1 неделя 70°
pH
Бензойная кислота мг/г
%
Окситоцин мг/г
%
АСА101207-1
3,98
X
X
0,58
59,2
АСА101207-2
3,78
1,00
94,3
0,58
61,1
Таблица 3c)
Образец
2 недели 70°
pH
Бензойная кислота мг/г
%
Окситоцин мг/г
%
АСА101207-1
3,75
X
X
0,50
51,0
АСА101207-2
3,67
1,06
100,00
0,51
53,7
Таблица 4
Внешний вид и вязкость образцов после 3 недель хранения
Хранение
АСА101108-1
АСА101108-2
Внешний вид
Вязкость
Внешний вид
Вязкость
Температура
Время
70°С
2 недели
Прозрачный
NA
Прозрачный
NA
Хранение
АСА101108-3
АСА101108-4
Внешний вид
Вязкость
Внешний вид
Вязкость
Температура
Время
70°С
2 недели
Светло-желтый
Очень низкая вязкость
Прозрачный
Очень низкая вязкость
Хранение
АСА101123-1
АСА101123-2
Внешний вид
Вязкость
Внешний вид
Вязкость
Температура
Время
70°С
3 недели
Прозрачный
NA
Прозрачный
NA
Хранение
АСА101123-3
АСА101123-4
Внешний вид
Вязкость
Внешний вид
Вязкость
Температура
Время
70°С
3 недели
Светло-желтый
Очень низкая вязкость
Очень светло-желтый
Очень низкая вязкость
Хранение
АСА101207-1
АСА101207-2
Внешний вид
Вязкость
Внешний вид
Вязкость
Температура
Время
70°С
2 недели
Очень светло-желтый
Низкая вязкость
Светло-желтый
Низкая вязкость
Обсуждение
В более ранних исследованиях стабильности окситоцина степень деградации изучалась при различных значениях рН. Данное исследование показало, что деградация окситоцина в буферном водном растворе с рН 3, хранящемся при 70°С в течение 7 дней, составила приблизительно 15% (% площади). Соответственно деградация при значении рН 4 составила приблизительно 35% (% площади). Выше, в таблице 1, показано, что деградация окситоцина значительно больше при сопоставимых значениях рН приблизительно 60% и 75%, соответственно. Эти данные означают, что стабильность окситоцина должна зависеть не только от рН, но и от типа кислоты, применяемой забуферивания. Кроме того, данные предполагают, что Na-CMC сама по себе имеет отрицательное воздействие на стабильность.
В таблице 2 приведены данные анализа растворов окситоцина, в которых Na-CMC заменили на нейтральное производное целлюлозы, НРМС, а буфером являлся 25 мМ цитратный буфер. Эти данные повторно доказывают значительно лучшую стабильность окситоцина, а соответствующая деградация составляет приблизительно 20%. В таблице 3 показана соответствующая деградация окситоцина в НРМС-содержащем составе, в котором в качестве буферного средства использован лактатный буфер. Эти данные указывают на то, что стабильность окситоцина аналогична в лактатном и цитратном буферах при сопоставимых показателях рН. В предыдущих составах, в которых лактатный буфер использовали в комбинации с Na-CMC, в результате наблюдалось выпадение осадка и помутнение. Данное явление не наблюдалось в составах, в которых применяли НРМС в сочетании с лактатным буфером, таблица 4.
Из таблицы 4 можно сделать вывод, что составы с бензойной кислотой слегка более желтоваты, чем составы без данного консерванта. После хранения при 70°С составы на основе лактатного буфера немного более вязкие, чем составы на основе цитратного буфера.
Представленные выше исследования также указывают на то, что бензойная кислота совместима с окситоцином и применяемыми ингредиентами.
Выводы
Данное исследование показывает, что стабильность окситоцина в кислой среде преимущественно следует примеру, приведенному выше, т.е. лучшая стабильность наблюдается при рН 3, чем при рН 4. Был сделан вывод, что окситоцин более стабилен в составах с НРМС в качестве гелеобразующего средства, чем с Na-CMC. Вязкость составов уменьшается при хранении при 70°С при использовании обоих гелеобразующих средств. Стабильность окситоцина аналогична в лактатном и цитратном буферах при сопоставимых значениях рН. Был сделан вывод, что бензойная кислота является подходящим консервантом.
Ссылки
1. Hawe A. et al., Towards heat-stable oxytocin formulations: Analysis of degradation kinetics and identification of degradation products, Pharmaceutical Research, 2009, 26:1679-1688.
2. Stability study of oxytocin in aqueous solutions and dry powder, La bag on AB, 2010.
3. Fawcett JP, et al., Binding of parabens to sodium carboxymethylcellulose in oral liquid formulations, Aust. J. Hosp. Pharm., 1996, 26:552-554.
4. WO/92/09307
5. Hirvonen, J, Kalia, Y N, and Gay, R H. Transdermal delivery of peptides by iontophoresis. Nat Biotechnol December 1996; 14(13):1710-1713.