БЕЛОК АРТЕРИВИРУСА И МЕХАНИЗМ ЭКСПРЕССИИ

1. Артеривирус, содержащий нуклеиновую кислоту, кодирующую ORF1a или его функциональную часть, где указанная нуклеиновая кислота содержит по меньшей мере одну мутацию, приводящую к пониженной трансляции домена TF nsp2TF и/или измененной трансляции одного или более нижележащих продуктов, транслируемых с указанной нуклеиновой кислоты в клетке, инфицированной указанным артеривирусом, по сравнению с диким типом указанного артеривируса.
2. Артеривирус по п. 1, где указанная мутация препятствует рибосомному сдвигу рамки считывания -2 на участке сдвига рамки считывания -2, локализованным в последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей белок nsp2.
3. Артеривирус по п. 1 или 2, где по меньшей мере одна из указанных мутаций находится на участке сдвига рамки считывания GGU(U/C)U(U/C)U и/или в консервативном мотиве CCCANCUCC.
4. Артеривирус по п. 1, где по меньшей мере одна из указанных мутаций находится в последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей белок nsp1β, и приводит к пониженному рибосомному сдвигу рамки считывания -2.
5. Артеривирус, в котором функция nsp2TF является пониженной и/или отсутствует в клетке, инфицированной указанным артеривирусом по сравнению с диким типом указанного артеривируса.
6. Артеривирус по п. 5, содержащий нуклеиновую кислоту, кодирующую ORF1 или его функциональную часть, где аминокислотная последовательность nsp2TF артеривируса является измененной, усеченной или отсутствует.
7. Артеривирус по п. 5 или 6, где аминокислотная последовательность домена TF nsp2TF является модифицированной, и где указанная модифицированная аминокислотная последовательность необязательно обеспечивает эпитопы, которые отсутствуют в артеривирусе дикого типа и являются иммуногенными, и где рамка считывания ORF1a является ненарушенной.
8. Артеривирус по п. 1 или 5, где артеривирус представляет собой автономно реплицирующийся артеривирус.
9. Артеривирус по п. 1 или 5, где артеривирус представляет собой PRRSV 1 типа (европейский генотип), PRRSV II типа (северо-американский генотип) или их сочетание.
10. Артеривирус по п. 1 или 5, где артеривирус представляют собой вирус, повышающий уровень лактатдегидрогеназы (LDV), или вирус геморрагической лихорадки обезьян (SHFV).
11. РНК, ДНК или кДНК, кодирующие артеривирус по любому из пп. 1-10.
12. Вакцина или иммуногенная композиция, содержащая артеривирус по пп. 1-10 или РНК или ДНК по п. 11, или их сочетание и фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель.
13. Вакцина или иммуногенная композиция по п. 12, содержащая pL1a (SEQ ID NO: 1), pLnsp2-8 (SEQ ID NO: 2), pLnsp1-2 (SEQ ID NO: 3), pLnsp1β-2 (SEQ ID NO: 4), pLnsp1βcc-2 (SEQ ID NO: 5), pLnsp2 (SEQ ID NO: 6), pLnsp1-3 (SEQ ID NO: 7), pLnsp1β-3 (SEQ ID NO: 8), pLnsp2-3 (SEQ ID NO: 9), pLnsp2-3-IFC (SEQ ID NO: 10), pLnsp1β (SEQ ID NO: 11), pL1a-IFC (SEQ ID NO: 12), pL1a-KO1 (SEQ ID NO: 13), pL1a-KO2 (SEQ ID NO: 15), pL1a-SS (SEQ ID NO: 17), pL1a-CC1 (SEQ ID NO: 18), pL1a-CC2 (SEQ ID NO: 20), pSD01-08-IFC (SEQ ID NO: 22), pSD01-KO1 (SEQ ID NO: 25), pSD01 KO2 (SEQ ID NO: 26), pSD01-08-KO1 (SEQ ID: 92), pSD01-08-KO2 (SEQ ID NO: 93), pSD01-08-KO3 (SEQ ID NO: 94), pSD95-21-KO1 (SEQ ID NO: 95), pSD95-21-KO2 (SEQ ID NO: 96) и pSD95-21-KO3 (SEQ ID NO: 97).
14. Вакцина или иммуногенная композиция по п. 12 или 13, где композиция дополнительно содержит адъювант, эксципиент или их сочетание.
15. Способ индукции иммунного ответа против артеривируса у животного, включающий введение животному эффективного количества композиции по любому из пп. 12-14.
16. Выделенный или рекомбинантный белок, содержащий полноразмерный или неполный домен TF белка nsp2TF артеривируса.
17. Выделенное или рекомбинантное антитело, которое может специфически связываться с доменом TF белка nsp2TF артеривируса, белка по п. 16 или белка, содержащего аминокислотную последовательность, как проиллюстрировано в SEQ ID NO: 63, 64 или 65, или которая является по меньшей мере на 70% идентичной им.
18. Способ проведения отличия индивидуума, инфицированного артеривирусом дикого типа и/или вакцинированного немодифицированным штаммом артеривируса, от индивидуума, вакцинированного вакциной по пп. 12-14, где указанный способ включает:
a) предоставление образца от индивидуума;
b) определение в указанном образце, качественно или количественно, или качественно и количественно содержания или отсутствия мутаций, влияющих на рибосомный сдвиг рамки считывания -2 на участке сдвига рамки считывания -2, локализованном на 5΄-конце TF ORF, или модификаций кодирующей TF ORF области и/или
c) определение в указанном образце наличия антител против иммуногенного эпитопа, специфического для указанной вакцины, и/или
d) определение в указанном образце наличия антител против эпитопа, экспрессируемого указанным артеривирусом дикого типа или немодифицированным артеривирусом, но не содержащимся в указанной вакцине.
19. Способ типирования артеривируса в биологическом образце, где указанный способ включает:
a) определение наличия и/или последовательности участка сдвига рамки считывания -2, локализованного в кодирующей области белка nsp2, и/или
b) определение наличия и/или последовательности кодирующей nsp2TF области в указанном артеривирусе.
20. Нуклеиновая кислота, содержащая участок сдвига рамки считывания -2 артеривируса, функционально связанный с последовательностью нуклеиновой кислоты, кодирующей белок, где указанный белок не является белком артеривируса, где указанная нуклеиновая кислота дополнительно содержит рибосомный стартовый кодон трансляции 5΄ указанного участка сдвига рамки считывания -2.
21. Нуклеиновая кислота по п. 20, где указанный участок сдвига рамки считывания -2 артеривируса содержит последовательность GGU(U/C)U(U/C)U и/или CCCANCUCC.
22. Нуклеиновая кислота по п. 20 или 21, содержащая:
a) последовательность нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 35;
b) нуклеиновую кислоту, которая кодирует аминокислоту, из одной или более SEQ ID NO: 45, 36 или 76;
c) последовательность нуклеиновой кислоты, гибридизующуюся в условиях высокой жесткости с (a) или (b);
d) функциональный фрагмент любой из (a), (b) или (c).
23. Экспрессирующая система, содержащая нуклеиновую кислоту по любому из пп. 20-22, где указанная экспрессирующая система дополнительно содержит nsp1β или его функциональную часть.
24. Способ определения, является ли средство способным нарушать рибосомный сдвиг рамки считывания на участке сдвига рамки считывания -2, локализованном в последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей белок nsp2, где указанный способ включает:
a) предоставление системы трансляции, которая допускает сдвиг рамки считывания на указанном участке с нуклеиновой кислотой, кодирующей генетический маркер или репортер, функционально связанный с указанным участком;
b) приведение указанной системы трансляции в контакт с указанным средством;
c) инкубацию системы и средства после этапа b) для обеспечения трансляции указанной нуклеиновой кислоты и
d) определение наличия или отсутствия продукта трансляции, кодируемого указанной нуклеиновой кислотой.
25. Способ по п. 24, где указанная система трансляции содержит белок nsp1-бета артеривируса или его функциональную часть и/или представляет собой клетку.
26. Способ по п. 24 или п. 25, где указанное средство выбирают из группы, состоящей из антисмысловой ДНК, антисмысловой РНК, миРНК, микроРНК, аналогов нуклеиновой кислоты, пептидов, низкомолекулярных соединений или химических соединений, или их сочетания.
27. Фармацевтическая композиция, содержащая эффективное количество средства, способного препятствовать сдвигу рамки считывания -2 в артеривирусе, и необязательно фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель.
28. Способ лечения животного, инфицированного артеривирусом, включающий введение животному эффективного количества фармацевтической композиции по п. 27.
29. Экспрессирующая кассета, содержащая нуклеиновую кислоту, кодирующую белок nsp2TF артеривируса, функционально связанную с гетерологичным промотором.
30. Клетка, содержащая экспрессирующую кассету по п. 29.
31. Клетка по п. 30, где указанную экспрессирующую кассету интегрируют в хромосому указанной клетки.
32. Клетка по п. 30 или 31, дополнительно содержащая артеривирус по любому из пп. 1-10 или кДНК по п. 11.
33. Упаковывающая артеривирус линия клеток, содержащая клетку по любому из пп. 30-32.