Направленная химическая модификация антибиотиков-далбагептидов

УДК 615.332:517.182

НАПРАВЛЕННАЯ ХИМИЧЕСКАЯ МОДИФИКАЦИЯ АНТИБИОТИКОВ-ДАЛБАГЕПТИДОВ

И. Г. Смирнова, Г. С. Катруха*, И. В. Денисова

Обобщены сведения о направленной химической модификации важнейших антибиотиков далбагептидов (гликопептидов). Особое внимание уделено выяснению взаимосвязи между антибактериальной активностью и специфической химической модификацией свободных аминных, карбоксильных и фенольных групп в полипептидной и углеводной частях молекул антибиотиков. Определены наиболее перспективные реагенты и участки для направленной химической модификации этой группы антибиотиков.

Список принятых в работе сокращений

Агл - агликон, ДМСО - диметилсульфоксид, ДМФА - диме-тилфорамид, ДФФА - дифенилфосфорилазид, КМ - карбокси-метил, МПК - минимальная подавляющая концентрация, ПФФ

- пентафторфенол, ПФФЭ - пентафторфеноловые эфиры, ТСХ

- тонкослойная хроматография, ТФУ - трифторуксусная кислота, Вос - третбутиоксикарбонил, Вос20 - третбутилпирокарбо-нат, СБ7 - бензилоксикарбонил, СЪ70Ви - бутиловый эфир бензилоксиугольной кислоты, СТА/2 - тейкопланин А2-2, БЫВ

- 2,5-дигидроксибензойная кислота, ББТБ - ди-Ы-оксисукцини-мидный эфир пробковой кислоты, ЫМ - гидроксиметил, ¡ТИБ

- изотиомочевина, МеЕ - метиловый эфир, ТБ - агликон тей-копланина, ТБ, ТС - частично дегликозилированные производные тейкопланина, Ти - тиомочевина, РуВОР - гексафторфос-фат бензотриазол-1 -ил-гидрокси-триспирролидино- фосфония.

Антибиотики гликопептиды (далбагептиды) имеют особое значение при лечении острых инфекций, вызванных грамположительными бактериями - стафилококками, стрептококками и энтерококками, в том числе и обладающими устойчивостью к Р-лактамным антибиотикам, тет-рациклинам и макролидам. Они находят применение при лечении колитов, пневмоний, абсцессов легких и других тяжелых заболеваний.

Возрастающий интерес к данной группе антибиотиков обусловлен сравнительно редким возникновением устойчивых к ним форм микроорганизмов, что позволяет использовать их в экстренных случаях при лечении инфекций, не поддающихся воздействию со стороны других химиотерапевтических средств. Однако в последнее время в результате широкого применения антибиотиков этой группы участились случаи выделения далбагептид-резистентных штаммов бактерий, что привело к снижению эффективности использования этих препаратов. Опасность широкого распространения резистентных ко многим антибиотикам штаммов болезнетворных бактерий требует развития исследований по выяснению механизма резистентности и поиска соединений, преодолевающих резистентность.

Одним из плодотворных подходов к решению данной задачи является направленная химическая модификация молекулы антибиотика. Поэтому в данном литературном обзоре целесообразно остановиться на некоторых аспектах специфической химической модификации функциональных групп в молекуле антибиотиков-далбагептидов.

Краткая характеристика антибиотиков-далбагептидов

Антибиотики-далбагептиды [1, 2] представляют собой гликопептиды с молекулярной массой 1 400-2000, в которых углеводы связаны с линейным гептапептидом. В качестве обязательных структурных компонентов гептапептид включает трифенокситриаминотрикарбоновую и дифенил-диаминодикарбоновую кислоты, что придает агликонам антибиотиков характерную полициклическую структуру. Все представители группы имеют одинаковую последовательность четырех аминокислотных остатков на С-конце-вом участке гептапептида, где глициновые остатки дифе-ниламинокислоты чередуются с аминокислотными остатками трехъядерной аминокислоты. Отдельные антибиотики различаются строением М-концевого участка пептидной цепи агликона. В зависимости от природы аминокислот, расположенных на конце, выделяют два типа строения агликонов: 1) ванкомициновый: 2-е и 3-е звенья с М-конца представлены остатками моноаминомонокарбо-новых кислот (рис. 1); 2) ристомициновый: 1-е и 3-е звенья - глициновые остатки дифеноксидиаминодикарбоно-вой кислоты (ристомициновой и ее аналогов) (рис. 2). Аг-ликоны ванкомицинового типа имеют трехциклическую структуру, ристомицинового - четырехциклическую. Большинство антибиотиков этой группы имеют агликоны ристомицинового типа (ристомицин А (рис. 2, а), тейкопланин (рис. 2, б), А-40926 (рис. 3)) и др. В углеводной части антибиотиков содержатся нейтральные сахара и ами-носахара класса 2,3,6-тридезокси-3-аминогексоз. У некоторых антибиотиков (тейкопланин, А-40926 и т.д.) аминные группы сахаров ацилированны остатками жирных кислот [1]. Углеводы непосредственно связаны с агликоном или образуют олигосахаридные ветви [3, 4].

* НИИ по изысканию новых антибиотиков РАМН, Москва.

0

Рис. 1. Структура антибиотиков-далбагептидов ванкомициновой группы: а - ванкомицин; б - эремомицин

Действие антибиотиков-далбагептидов состоит в подавлении ими синтеза пептидогликана - основного структурного компонента бактериальной клеточной стенки [5, 6, 7]. В сборке пептидогликана принимают участие молекулы дисахарид-пентапептидов. Дисахарид-пентапептиды встраиваются в растущие цепи пептидогликана в ходе реакции трансгликозилирования. Антибиотики-далбагептиды подавляют реакцию трансгликозилирования, связываясь с С-концевым фрагментом (В-А1а-В-А1а) пентапептида (рис. 4, а) [9]. Именно в воздействии на субстрат, а не на фермент реакции кроется основная причина сравнительно редкого возникновения у микроорганизмов резистентности к далбагептидам, поскольку для ее возникновения требуются множественные мутации, способные обеспечить не только появление модифицированного субстрата, но и его эффективное использование в последующих биохимических процессах.

Появление далбагептидрезистентных штаммов связано с тем, что остаток Э-А1а в С-концевом дипептидном фрагменте пентапептида заменяется на остаток Э-Ьас, в результате чего сродство антибиотика к рецептору уменьшается (рис. 4, б) и В-А1а-В-Ьас практически не связывается с молекулой антибиотика, а бактерия продолжает свой жизненный цикл [10].

Сродство антибиотика к дипептидному фрагменту является не единственным фактором, влияющим на антимикробную активность. Важную роль играет способность

далбагептидных антибиотиков к дополнительной стабилизации комплекса с мишенью за счет использования различных элементов своей вторичной структуры, например, путем образования димеров или заякоривания на мембране жирными липофильными радикалами [11].

В связи с этим задачей химической модификации дал-багептидов является увеличение сродства антибиотиков не только к дипептидному фрагменту, но и к другим элементам мишени.

Химическая модификация аминных групп

Ацилирование

Исследование К-ацильных производных позволяет установить, как влияет изменение гидрофобных и основных свойств молекулы исходного соединения на его биологические свойства.

Антибиотики-далбагептиды являются полифункциональными соединениями, именно поэтому проведение направленной химической модификации по отдельным функциональным группам требует тщательного подбора условий для селективного протекания реакции. Очень важен правильный выбор защитных групп. Особенно это относится к выбору К-защитных групп.

сн2он

б

Рис. 2. Структура антибиотиков-далбагептидов ристомициновой группы: а - ристомицин А; б - тейкопланин А2-2

C х е м а 1

Получение N- и О-ацильных производных эремомицина

Т а б л и ц а 1

Антибактериальная активность in vitro N-Boc- и N-Cbz-производных эремомицина в сравнении с эремомицином и ванкомицином

Соединение Тест-организм Эремомицин Ванко-мицин I II III IV V

B. subtilis 0,08 0,16 4,0 * 4,0 * *

S. aureus 0,5 2,0 32 * 32 * *

* Активность отсутствует.

Антибиотик эремомицин (рис. 1, б), полученный в НИИНА РАМН [12, 13], содержит три аминогруппы, две из которых принадлежат остаткам сахаров, а третья является N-концевой группой N-метилированного D-лейцина, входящего в состав пептидного ядра антибиотика. Для оптимальной защиты аминогрупп [7] в качестве ацили-рующих агентов были выбраны ди-трет-бутилпирокар-бонат (Boc2O) и бутиловый эфир бензиолоксиугольной кислоты (CbzOBu) групп [14, 15]. В ходе модификации получены следующие N-ацильные производные эремомицина: N-трет-бутилоксикарбонил (Boc) эремомицин (I), N,N'-ди-(Boc)-эремомицин (II), N-бензилоксикарбонил (Cbz) эремомицин (III) и N,N',N"-три-(Cbz)-эремомицин (IV). Применение CbzCl позволило получить N,N',N'', O,O',O''-гекса-Cbz-эремомицин (V) (схема 1). Ацилирование аминогрупп происходило в следующем порядке: первой вступала в реакцию ацилирования N-концевая группа остатка аминокислоты, а затем аминогруппы эремозамина дисаха-ридной ветви и второго эремозамина соответственно.

N-Boc-защитные группы удаляли на сульфокатионите СДВ-3 (Н+). Этот способ имеет преимущества перед традиционными методами удаления Boc-группы - обработкой HCl в диоксане или ТФУ приводящими к дегликозили-рованию эремомицина. Было показано, что антимикробная активность N-ацильных производных уменьшилась по

сравнению с исходным антибиотиком в случае Ы-моно-ацильных производных и исчезла в случае ди- и три-ацилпроизводных. Результаты представлены в табл. 1.

Антибиотик ристомицин А, выделенный также во ВНИИНА РАМН [16, 17] (рис. 2, а), содержит две свободные аминогруппы: аминогруппу М-концевой ристомици-новой кислоты и аминосахара ристозамина, связанного с агликоном через Р-оксигруппу трехъядерной дидехлорван-комициновой кислоты. Обладая высокой антимикробной активностью, ристомицин А способен вызывать агрегацию тромбоцитов плазмы крови [18]. Для выяснения роли свободных аминогрупп в проявлении биологической и агрегирующей активности был получен ряд М-ацильных производных этого антибиотика [19, 20, 21, 22].

При ацилировании уксусным ангидридом в 70%-м водном метаноле получены Ы-ацетил-ристомицин А (VI) и Ы,Ы'-ди-ацетилристомицин А VII). Для введения заместителей бопльшего, чем ацетильная группировка, размера применяли ди-трет-бутилпирокарбонат. Модификацией антибиотика ди-Ы-оксисукцинимидным эфиром пробковой кислоты (ОБИ) получены Ы-моносуберинил ристомицин А (VIII) и Ы,Ы'-суберинил-бис-ристомицин А (схема 2). При использовании в качестве ацилирующих агентов активированных пентафторфениловых эфиров жирных кислот: энантовой (С6Н13СООН), миристиновой (С13Н27СООН),

C х е м а 2

Получение N-моносуберинил-ристомицина А и ^№-суберинил-бис-ристомицина А

Т а б л и ц а 2

Антимикробная и агрегирующая активность ристомицина и его N-ацильных производных

Соединение Активность на Bac.subtilis, мкг/мл Степень агрегации тромбоцитов

Ристомицин А 0,8 57-76

N-ацетилристомицин А (VI) 2,4 60

Н№-диацетилристомицин А (VII) 16,0 3,5-10

Н№-дитретбутилоксикарбонил ристомицин А 56,0 0

N-суберинилристомицин А (VIII) 3,2 0

Н№-суберинил-бисристомицин А (IX) 1,6 0

пальмитиновой (С15Н31СООН) - получены соответствующие моно- и ди-Ы-ацильные производные ристомицина А.

Как видно из данных табл. 2, введение небольшой по объему нейтральной ацетильной группировки по одной аминогруппе (ристомициновой кислоты) не влияет на агрегирующую способность антибиотика, несколько уменьшая его антимикробную активность. Однако ацетилирова-ние второй аминогруппы, так же как и модификация объемной t-Boc-группировкой по двум аминогруппам ри-стомицина А лишает его агрегационной способности. Одновременно с этим происходит резкое падение антимикробной активности. Агрегирующая и антимикробная активность антибиотика полностью восстанавливаются после удаления t-Boc-группы обработкой концентрированной трифторуксусной кислотой.

Соединения IX и VIII утрачивают способность к агрегации тромбоцитов крови, а их антимикробная активность уменьшается в 2-4 раза по сравнению с исходным антибиотиком [21].

Аминоацилирование ристомицина проводили с использованием в качестве ацилирующих агентов пентафторфени-ловых и оксисукцинимидных эфиров Boc-защищенных аминокислот (глицина, Р-аланина, орнитина, изолейцина, а

также этилацетилимидата и янтарного ангидрида [19, 21]). Антибактериальная активность полученных производных была близка к активности исходного антибиотика и изменялась в пределах 0,6-10,0 мкг/мл в отношении B. subtilis, B. megaterium, S. aureus, Sarcina lutea в зависимости от типа заместителя и суммарного заряда молекулы модифицированного антибиотика. Наиболее высокая активность обнаружена в случае ^^-ди-изолейцилристоми-цина (суммарный заряд +2), самая низкая - в случае ^^-ди-сукцинилристомицина (суммарный заряд -2).

С х е м а 3

Ацилирование метилированной аминогруппы агликона антибиотика А-40926

HOOC-

Агликон А-40926

NCH3

OH

X - R,

R

COCH3; XI - R

COCH=CHCO2H

XII - R, = SO3H; XIII - R, = Boc

Вильямс и сотр. [23] получили серию октапептидных производных антибиотика тейкопланина А-2-2 (СТА/2) (рис. 2, б) и его агликона (TD) (продукта полного деглико-зилирования) путем аминоацилирования N-оксисукцини-мидными эфирами Boc-замещенных D- и L-аминокислот. Антибактериальная активность этих соединений оказалась сравнима с соответствующими немодифицированными антибиотиками и их N-ацильными производными. Наиболее активны октапептиды с N-концевым глицином и лизином. Хиральность аминокислоты не имеет существенного значения.

Авторы отмечают, что аминоацилирование N-концевой аминогруппы аминокислотного остатка антибиотика не приводит к значительному увеличению in vitro активности по отношению к стафилококкам и энтерококкам, но в ряде случаев наблюдается резкое повышение активности против коагулазотрицательных стафилококков (табл. 3).

Герман с сотр. [24] синтезировали N-ацильные производные агликона природного антибиотика А-40926 (рис. 3), проявляющего активность как в отношении грам-положительных микроорганизмов, так и в отношении гра-мотрицательных бактерий Neisseria gonorrhoear. Результаты работы отражены в схеме 3 и табл. 4.

Ни одно из полученных производных не проявило бопльшей активности, чем исходный агликон в отношении Neisseria gonorrhaeae. Важно также отметить, что введе-

Рис. 3. Структура антибиотика А-40926 и его агликона

C х е м а 4

Ацилирование эремомицина хлорангидридами уксусной и пеларгоновой кислот

n'h2

n"h2

i-F

HOOC -I I— NHCH3

R-Cl

HOOC

n'h2

N'HR

N''H2 r—i N''H2 r—i

C -l I— NRCH3 + HOOC -I I— NRCH3

R = Ac, CH3(CH2)7CO

Т а б л и ц а 3

Антибактериальная активность in vitro N-амино-ацильных производных антибиотика тейкопланина А-2-2 и

его агликона

' Тест-микроб Соединение _ МПК

S.aureus S. epidermis S. haemolyticus S. pyogenes E. faecalis E.coli

СТА 0,25 8,0 8,0 0,125 0,125 >128

Ацетил 0,5 8,0 8,0 0,125 1,0 >128

СТА 0,25 4,0 4,0 0,063 0,125 >128

Gly-СТА 0,5 1,0 4,0 0,063 0,25 >128

L-Lys-СТА 0,5 4,0 8,0 0,063 0,25 >128

D-Lys-CTA 1,0 32 64 0,125 0,5 >128

L-Gln-CTA 0,125 0,063 0,25 0,125 0,125 64

TD 0,125 0,125 0,5 0,125 0,5 >128

Ацетил-TD 0,25 0,125 0,5 0,5 0,25 >128

Gly-TD 0,125 0,063 0,25 0,125 0,125 32

L-Lys-TD 0,125 0,125 0,5 0,125 0,25 64

D-Lys-TD 0,25 0,125 1 0,25 0,5 >128

L-Gln-TD - - - - -

Т а б л и ц а 4

Антибактериальная активность in vitro N-ацильных производных агликона А-40926

МПК

^*ч<Соединение

А-40926 Агликон Х XI XII XIII

Тест-орг>ч^

S. aureus 0,13 0,13 0,25 0,25 0,5 0,25

S. epidermis 0,13 0,13 0,5 0,25 0,5 0,13

S. haemolyticus 4,0 0,5 4,0 4,0 16 1,0

S. pyogenes 0,03 0,5 0,13 1,0 0,13 0,25

E. faecalis 0,13 0,25 1,0 2,0 4,0 1,0

E. coli >128 128 - >128 >128 >128

Neisseria g. 0,5 16 64 4,0 128 64

ние сульфатной группы, изменяющее суммарный заряд молекулы, не увеличивало антибактериальной активности антибиотика. При ацилировании эремомицина (рис. 1, б) хлорангидридами уксусной и пеларгоновой кислот [25] были получены соответственно N-моно-ацетил-эре-момицин, ^^-ди-ацетил-эремомицин и N-моно-пелар-гонил-эремомицин (схема 4). Показано, что первой в реакцию ацилирования вступает аминогруппа остатка N-метиллейцина.

Изучение биологической активности производных на штаммах B. subtilis, S. aureus позволило авторам сделать вывод, что при введении ацильных заместителей в молекулу эремомицина активность в отношении грамположи-тельных микроорганизмов снижается на 1-2 порядка, причем резко уменьшается при степени замещения >1 (табл. 5).

Для введения в молекулу антибиотика ванкомицина (рис. 1, а) различных алифатических и ароматических остатков, сходных с остатками, обнаруженными в природных липогликопептидах, например в тейкопланине (рис. 2, б), Нагараян с сотр. [26] использовали в качестве ацилирующих агентов 2,4,5-трихлорфенильные эфиры (ТСР) ароматических и алифатических кислот. В результате получены три серии производных: N-моноацильные производные по остатку ванкозамина (XIV), моноациль-ные производные по N-концевой группе остатка N-метил-лейцина (XV) и ^^-диацильные по обеим аминогруппам (XVI) (схема 5).

Т а б л и ц а 5

Антибактериальная активность in vitro производных эремомицина в сравнении с эремомицином и ванкомицином

Тест-микроб Соединение B. subtilis, МПК, мкг/мл S. aureus, МПК50, мкг/мл

Эремомицин 0,08 0,5

N-моно-ацетил-эремомицин 4,0 -

Н№ди-ацетил-эремомицин >48 -

Ванкомицин 0,16 2,0

Соединения XIV ряда оказались на порядок активнее XV и XVI. Причем наибольшую активность среди серии XIV показали арилацильные производные.

Анализ литературных данных позволяет предположить, что ацилирование аминогрупп антибиотиков-гликопептидов не приводит к увеличению антимикробной активности по сравнению с исходными препаратами, а в ряде случаев существенно ее снижает, особенно при введении в молекулу групп кислого характера [20, 27]. По-видимому, это связано с тем, что в результате ацилирования уменьшается основность молекулы и как следствие сродство антибиотика к дипептидному фрагменту D-Ala-D-Ala. Введение в молекулу антибиотика-далбагептида гидрофобных радикалов определенных размеров позволяет не только сохранить антимикробную активность и преодолеть резистентность, но и расширить спектр действия препарата [28, 29, 30, 31]. По-видимому, это может быть обусловлено изменившимся механизмом действия антибиотика, когда главную роль играет связывание не с D-Ala-D-Ala, а с мембранными структурами мишени (гидрофобный радикал выступает в роли мембранного якоря).

Алкилирование

На основе антибиотика эремомицина (рис. 1, б) методом восстановительного алкилирования уксусным ангидридом в присутствии боргидрида или цианборгидрида натрия получены N-моно-, N^'-ди- и ^№,№'-триэтильные производные по аминогруппам [25]. Установлено, что последовательно образуются N-этил-эремомицин, N^'-ди-этилэремомицин, ^№,^'-триэтилэремомицин. Первой в

С х е м а 5

Ацилирование ванкомицина с помощью ТСР

Cl

N'H, о n'hr2

st

к  NHCH »НООС-Ванкомицин -NCH3

R,

НООС-Вн1омиции|-NHCH

ДМФА

XIV - R1 = H, R2 = R-CO-

XV - R1 = R-CO-, R2 = H

XVI - R1 = R2 = R-CO

Рис. 4. Схема связывания антибиотика эремомицина с моделями С-концевого фрагмента предшественника пептидогликана бактериальной стенки

С х е м а 6

Восстановительное алкилирование эремомицина

n'h2

n'hoh2r2

n."h2 [= T-F

HOOC-I |-R

R = N(CH3)2, R = N(CH3)NO, R = N+(CH3)3I-

N"HGH2R2|-1

C-  -Ri

R2CHO, NaCNBH3

H2O-MeOH (1:1), 20°C, 8 ч

HOOC-

R1 = N(CH3)2, R2

H;

R,

R

N(CH3)2CHC6H5, R2 = C6H5;

N(CH3)NO, R2 = H; R1 = N(CH3)NO, R2 = C6H5; R1 = N'(CH3)3I-, R2 = H; R1 = N'(CH3)3I-, R2 = C6H5

С х е м а 7

Продукты реакции эремомицина с алкил-и арилгалогенидами

n'hr4

N''H.

I

CH3

Ri R2 R3 R4

H H H H

H CH3 CH3 H

CH3 CH3 CH3 H

H CH2=CHCH2 H H

H CH2=CHCH2 CH2=CHCH2 H

C6H5CH2 C6H5CH2 H H

C6H5CH2 C6H5CH2 H C6H5CH2

реакцию вступает аминогруппа аминосахара (эремозами-на) дисахаридной ветви, затем N-концевая аминогруппа пептида и в последнюю очередь - аминогруппа эремоза-мина, связанного непосредственно с агликоном. Антибактериальная активность полученных соединений снизилась незначительно по сравнению с исходным антибиотиком (табл. 6).

В работе [32] было продолжено изучение реакции восстановительного алкилирования эремомицина, а также ранее синтезированных [14] N-нитрозоэремомицина и N,N'-диметилэремомицина [25]. Обработкой исходного соединения соответствующими альдегидами в присутствии цианборгидрида натрия в водном метаноле получены ^^^"-триметилэремомицин, ^^^"-трибензил-эремо-мицин, ^^-диметил-Ы-нитрозоэремомицин, ^^-дибен-зил-N-нитрозоэремомицин,N,N,N,N'-тетраметилэремоми-цин, N,N'-дибензил-N,N'-диметилэремомицин (схема 6). Условия селективного протекания реакции подобрать не удалось. Алкилирование происходило одновременно по всем аминогруппам.

Данные по антибактериальной активности показали, что введение в молекулу эремомицина алкильных заместителей по всем трем аминогруппам одновременно приводит к снижению активности, тогда как активность N,N'-дибензил-, N-нитрозоэремомицина и ^N'-дибензил-, ^^-диметилэремомицина равны или меньше в два раза активности исходного антибиотика.

В отличие от восстановительного алкилирования реакция эремомицина с алкилгалогенидами в щелочной среде приводит в основном к алкилированию остатка N-метил-лейцина [14]. Полученные производные (схема 7) в 4-8 раз менее активны, чем эремомицин в отношении мети-циллин-устойчивых стафилококков и неактивны в отношении ванкомицин-устойчивых энтерококков.

Сотрудниками фирмы «Eli Lilly» [33, 34] проводилась модификация аналога эремомицина, антибиотика А-82846В, отличающегося от эремомицина наличием атома хлора в ароматическом ядре 6 (рис. 5). Показано, что также как и в случае эремомицина [25, 32], только

Рис. 5. N-алкильные производные А-82846В

R1OOC

моноалкилирование аминогруппы в дисахариде дает наиболее активные производные антибиотика в отношении энтерококков и стафилококков. Оказалось, что наибольшей активностью обладает производное LY 307599, содержащее и-фенилбензильную группу, и LY 333328, содержащее и-хлорфенилбензильную группу (рис. 5). Эти про-изодные сохраняли высокий уровень активности в отношении метициллин-устойчивых и коагулазотрицательных стафилококков и, что особенно важно, были активны в отношении различных ванкомицин-устойчивых энтерококков. Их активность к этим штаммам возросла на два порядка по сравнению с родительским препаратом [табл. 7].

Было показано, что производные такого типа дей-ствильно ингибируют синтез пептидогликана бактериальной стенки, не связываясь при этом с рецептором ^ацил^-А1а^^ас1а1е. По-видимому, главную роль в данном случае играет не сродство антибиотика к дипеп-тиду, а взаимодействие с другими компонентами мишени, в частности с мембранными структурами (боковая цепь выступает в роли мембранного якоря) и образование ди-меров [11, 30, 33, 34].

Восстановительное алкилирование ванкомицина позволило синтезировать ряд производных более активных in vitro, чем исходный антибиотик. Так, например, N'-бен-зил-, N'-децил- и N'-и-бутилоксиванкомицины, замещенные по аминогруппе аминосахара (ванкозамина), по активности in vitro на порядок превосходили ванкомицин и проявили активность по отношению к ванкомицин-устой-чивым энтерококкам. Показано, что моноалкилирование по остатку ванкозамин дает наиболее активные производные [35].

Большинство алкилированных производных тейкопла-нина (рис. 2, б), его агликона (TD) и различных псевдо-агликонов - продуктов частичного дегликозилирования -ТВ, ТС и т.д. (рис. 6) сохраняют активность, сравнимую с исходным антибиотиком [36] в опытах in vitro и in vivo. Увеличение активности в отношении ряда микроорганизмов наблюдалось только в случае N-монолаурил-(ТВ - продукт частичного дегликозилирования тейкопла-нина (рис. 6)) и N-моно-октил-ТС (ТС - продукт частичного дегликозилирования тейкопланина (рис. 6) (табл. 8) [37]. Алкилированием с помощью бензилбромида в присутствии триэтиламина получено N-бензильное производное агликона А-40926, аналога тейкопланина (рис. 3) [24]. Активность полученного производного ока-

залась равной активности исходного агликона (табл. 4) в отношении S. aureus, S. haemolyticus и в два раза превосходила активность агликона в отношении и S.

pyogenes.

Некоторые другие методы модификации свободных

аминогрупп

Были изучены реакции карбамоилирования и нитро-зирования (схема 8) эремомицина [14]. При взаимодействии эремомицина с NaNCO в диметилсульфоксиде в присутствии уксусной кислоты были получены N-карба-моилэремомицин и ^N'-дикарбамоилэремомицин. Порядок замещения аминогрупп совпадал с порядком замещения при ацилировании. Активность N-монопроиз-водного была на порядок ниже активности исходного антибиотика. ^^-дипроизводное оказалось неактивным.

Основной продукт реакции нитрозирования - N-нитро-зопроизводное по N-концевой аминогруппе пептидного ядра. Активность производного в отношении B. subtilis исходного антибиотика в два раза ниже активности.

Реакцией тейкопланина (СТА) (рис. 2, б) и его агликона (TD) (рис. 6) с изотиоцианатами при последующем S-алкилировании были получены производные тиомоче-вины (TU) и солей изотиомочевины (ITUS) [38]. TU- и ITUS-производные сохраняли активность in vitro против грамположительных бактерий близкую к активности исходных антибиотиков.

Высокая активность TU-производных, по всей вероятности, обусловлена их возросшей способностью к диффузии через клеточную стенку.

Поскольку свободные аминогруппы антибиотиков-дал-багептидов непосредственно участвуют в связывании молекулы с дипептидным фрагментом D-Ala-D-Ala (рис. 4), их модификация оказывает существенное влияние на биологическую активность препарата. Причем модификация аминогрупп, направленная на снижение основности молекулы антибиотика в целом, приводит к уменьшению антимикробной активности, тогда как увеличение суммарного положительного заряда, очевидно, благоприятствует более быстрому и прочному связыванию антибиотика с поверхностной оболочкой клетки, содержащей кислые группировки. В ряде случаев введение гидрофобных радикалов в молекулу антибиотика способствует возрастанию активности и преодолению резистентности клинических штаммов бактерий.

Т а б л и ц а 6

Соединение Тест-организм Эремомицин Ванкомицин N-этил-эремомицин Н№,№'-триэтил-эремомицин

B. subtilis 0,08 0,16 0,33 0,16

S. aureus 0,5 2,0 2,0 2,0

Антибактериальная активность in vitro производных эремомицина в сравнении с эремомицином

и ванкомицином

Т а б л и ц а 7

Антибактериальная активность in vitro и in vivo LY 307599

^\Тест-Организм S.aureus S. epidermis S. haemolyticus Ванкомицин-устойчивые энтерококки S. pyogenes

Соединение ^^

In vitro

A82846B 50,6 50,6 0,25 64-16 н.а.

LY 307599 0,125 0,25 - 3,6 0,06

In vivo

LY 307599 0,25 - - - 0,06

Нитрозирование эремомицина

n'h2

С х е м а 8

N'H2

HOOC-I 1-NH

CH3

HNO2, 20 °C, 6 ч, H2O ->

N H I

HOOC-I -NNO I

CH3

Модификация карбоксильной группы

Карбоксильная группа непосредственно не участвует в связывании антибиотиков-далбагептидов с концевым фрагментом D-Ala-D-Ala. Ее модификация в ряде случаев позволяет получить производные более активные, чем исходный антибиотик. В основном это сложные эфиры и амиды. Следует отметить, что увеличение суммарного заряда и липофильности производного приводит в большинстве случаев к возрастанию активности.

Амиды

Метил- и этиламиды агликона и псевдоагликонов тей-копланина (ТВ и ТС) (рис. 6) были синтезированы при взаимодействии цианметиловых активированных эфиров ТВ и ТС с метиламином и с этиламином соответственно [39, 40] (схема 9).

Активность метиламидов агликонов in vitro была равна активности исходных антибиотиков. Метиламид тей-копланина превосходил по активности исходный антибиотик против стафилококков и обнаружил активность в отношении грамотрицательных бактерий: МПК50 (E. coli) 32 мкг/мл (для тейкопланина > 128 мкг/мл). Получена серия амидных производных СТА и TD [41, 42]

/

С— T=CTA,td

-nxy

стафилококков и, что особенно важно, обнаружил активность в отношении ванкомицин-устойчивых энтерококков (табл. 9).

Из серии амидов агликона TD наиболее интересными оказались производные MDL 62766 и MDL 62708, Z = -NH-(CH2)3-NH-(CH2)3-NH-(CH2)3-NH2 и -NH-(CH2)3-N-N((CH2)3-NH2)2 соответственно. Их активность in vitro была сравнима с MDL 62873 в отношении грам-положительных кокков, к тому же эти производные проявляли некоторую активность в отношении грамотрица-тельных бактерий. У наиболее активного амида MDL 62766 значения МПК составили от 0,25 до 8 мкг/мл для клинических изолятов E. coli, Enterobacter, Klebsiella, Salmonella. Это свидетельствует о некотором изменении механизма действия TD, его способности проникать через внешнюю мембрану бактериальной клетки [39].

Получен ряд амидов N-алкил- и ^^-диалкил-тейкоп-ланина и его агликона [43, 44]. Все синтезированные производные сохраняли активность в отношении грампо-ложительных бактерий, сравнимую с активностью исходных антибиотиков. Например, для производного СТА, где Z = NH(CH2)3N(CH3)2, X = H, Y = CH2OCH2CH2OCH3, МПК изменялась в интервале 0,06-4,0 мкг/мл (S. aureus и т. д.). Увеличение активности наблюдалось также для амидов N-гидроксибутил-СТА и TD.

Путем конденсации R-yI (34-деацетил-34-деокси-тейкоп-ланина) (рис. 6) с первичными аминами были получены соответствующие амиды [33]. Наиболее активным оказался амид с разветвленной полиаминной ветвью -NE^K^N^E^-NH^. Значения его МПК для S. pyogenes менялись в пределах от 0,004 до 0,016 мкг/мл,

где Z = NH2, NH-алкил, NH-алкиламин, NH-алкиламиноал-кил, NH-полиалкиламин, N^N-диалкил, X = Y = H. Среди СТА амидов наиболее активным оказался амид MDL 62873 (мидепланин), Z = NH(CH2)3N(CH3)2, который сохранял высокий уровень in vitro и in vivo активности в отношении грамположительных микроорганизмов, имел высокую активность в отношении коагулазотрицательных

Рис. 6. Продукты частичного дегликозилирования тейкопланина А2-2

o

Т а б л и ц а 8

Антибактериальная активность in vitro N-алкильных производных СТА в сравнении с исходными

антибиотиками

^^^^ Тест-микроб

S. aureus S. epidermis S. haemolyticus S. pyogenes E. faecalis E. coli

Соединение

CTA 0,25 0,25 8,0 0,125 0,125 >128

TB 0,25 0,25 8,0 0,5 2,0 64

TC 0,5 0,125 0,125 0,5 1,0 >128

N-^-CnH^-TB 2,0 0,125 - 0,063 2,0 >128

N-^-CgH^-TC 0,063 0,063 0,5 0,063 0,063 >128

тогда как для всех амидов СТА МПК > 0,06 мкг/мл in vitro. Все полученные амиды R-yI, в отличие от аналогичных амидов тейкопланина, проявляли активность в отношении ванкомицин-устойчивых энтерококков.

Методом активированных эфиров синтезированы Мб3-амид и метиламид агликона антибиотика А-40926 (рис. 3), аналога тейкопланина [24]. Активность производных близка к активности исходного антибиотика. Амиды А-40926 с восстановленной карбоксильной группой у сахарного остатка (MDL 63246 и MDL 63042) (рис. 7) [37] оказались значительно более активны in vitro, чем текопланин и ванкомицин в отношении большого числа стафилококков, включая коагулаз-отрицательные стафилококки, и проявляли активность в отношении ван-комицин-устойчивых энтерококков (табл. 9).

MDL 63246 и MDL 63042 проявляли более высокую активность in vivo в отношении S. pneumoniae, S. pyogenes, S. aureus, чем тейкопланин и ванкомицин (табл. 10).

Обработкой эремомицина дифенилфосфорилазидом (ДФФА) и соответствующим амином или его солью в присутствии триэтиламина в диметилсульфоксиде получена серия амидов [14, 45] (схема 10).

С х е м а 9

С х е м а 10

Получение амидов эремомицина

W

C/

HO

Эремомицин

RR1NH, ДФФА, ДМСО

20°C, 24-48 ч

C/

Эремомицин

H; RR.N

1N = О

NCH3; RR1N

1N = N^-C

Активность in vitro этих производных была близка к активности эремомицина.

Производные амидного типа

При обработке эремомицина гидразином в метаноле при 37о в течение 6 ч был получен гидразид эремомицина [14, 45].

N H 2

N H 2

NH2NHOC — N H CH

Синтез Cbz-замещенных цианметиловых эфиров и метиламидов тейкопланинов

CbzCl, NaHCO3 HOOC- ]T] -NH2 -» HOOC- |T| -N-Cbz

I

H

O

II ,_,

NœH2O-C- [_Tj -N-Cbz

H

OO

II ----MeNH2 II -

NСCH2O-C- [t] -N-Cbz -> MeHN-C- |_t] -N-Cbz-

H H

O

MeHN-C- [T| -NH2

T = CTA, TB, TC, TD

Активность этого соединения по сравнению с исходным антибиотиком уменьшилась в четыре раза в отношении B. subtilis и S. aureus в опытах in vitro. В ходе изучения тейкопланина и его агликона [49] были получены гидразиды агликона тейкопланина (TD): (Z = NH-NH2; NH-NH-алкил, ^алкил-ЫН-алкил, ^ЫН-^^диалкил, N-ал-кил-^^диалкил). Биологические испытания показали, что положительно заряженные производные по карбоксильной группе в основном более активны, чем исходный аг-ликон в отношении грамотрицательных бактерий.

Сложные эфиры

При обработке СТА метанолом, этанолом и н-бутано-лом, насыщенными сухим хлористым водородом, получены, соответственно, метиловый, этиловый и н-бутиловый эфиры ТС и TD. В этих условиях реакции этерификации предшествовало отщепление N-ацилглюкозамина и остатка маннозы [48]. Чтобы избежать дегликозилирования, метиловые эфиры СТА и ТВ синтезировали путем взаимодействия карбоксильной группы N-Cbz защищенного СТА

»

RR1N

R = -NH2, R1 = H; R = R1 = H; R = -CH3, R1 = H; R = -CH2C6H5, R1

NСCH2Cl, Et3N

»

H2, Pd/C

Т а б л и ц а 9

Антибактериальная активность in vitro мидепланина в сравнении с тейкопланином

и ванкомицином

Соединение Мидепланин Тейкопланин Ванкомицин

Бактерии ^^

S. aureus 0,25-0,5 0,25-0,5 0,5-4

S. epidermis 0,06-0,5 0,25-32 1-2

S. haemolyticus 0,125-4 0,25-64 0,5-4

E. faecalis 0,06-0,5 0,13 0,5-4

E. faceium Van B 0,06-0,5 0,13-4 8-1024

С х е м а 11

Получение карбодиимидных производных эремомицина

nh2

nh2

NH

H2 [Щ

Í-F

HOOC-I l-NHCH

R-N=C=N-R1, ДМСО ->

20°C, 4-12 ч

NH ГЦ1

T-F

I l-NHCH,

rr1= -O

R = (CH2)3N(CH3)2; R1 = C2H5

I

R-NHCON-C-I II

R1O

С х е м а 12

Получение 38-декарбокси-38-гидроксиметилпроизводных Т (СТА, ТВ, ТС, TD).

Получены 3 8-декарбокси-38-гидроксиметилпроизводные Т (СТА, ТВ, ТС и TD) путем восстановления эфирной группы N -Cbz-T-MeE -соединений боргидридом натрия в этаноле с последующим снятием N-концевой защиты (схема 12) [50].

Восстановление карбоксигруппы привело в случае НМ-СТА к увеличению активности в отношении стафилококков даже по сравнению с СТА-МеЕ, и к появлению активности в отношении грамотрицательных микроорганизмов, в то время как НМ-производные ТВ и TD сохранили in vitro активность, близкую к активности исходных антибиотиков.

Тейкопланины с восстановленной карбоксильной группой были значительно более активны in vivo, чем алкиль-ные и арильные эфиры и исходные метиловые эфиры (табл. 11).

Большинство эфиров агликона антибиотика А-40926 может быть получено непосредственно при взаимодействии антибиотика с соответствующим спиртом в присутствии кислоты [24]. Авторы синтезировали ряд сложных эфиров агликона А-40926.

OH

_I_

Ox

/

Агликон А-40926

R2

I

-NCH3

OH

R

1 2 3 4

R1 OCH3 OHC2H5 OC3H7 O(CH2)2OH

R2 H H H H

5 6 7

R1 O(CH2)4OH OC3H6Br OC3H6Br

R2 H Bzl H

или ТВ с йодистым метилом (таким же образом могут быть получены и другие сложные эфиры).

Метиловые эфиры (MeE) СТА, ТВ и TD сохранили такую же активность in vitro, как и исходные антибиотики, тогда как ТС-МеЕ оказался значительно более активным, чем ТС в отношении большинства грамположительных кокков. Более липофильный бензиловый эфир TD, полученный по той же схеме, был, по крайней мере, в два раза активнее, чем исходный антибиотик в отношении E. coli, а у 2-бромэтилового эфира обнаружена активность в отношении Proteus vulgaris (МПК 32 мкг/мл) и Pseudomonas aeruginosa (МПК 64 мкг/мл). Все эфиры проявляли малую активность in vivo на мышах, вероятно, из-за их плохой растворимости в воде при физиологических значениях рН.

В случае производных 1, 3-6 активность in vitro в отношении грамположительных стафилококков по сравнению с исходным препаратом практически не изменилась, а для 2 и 7 в среднем увеличилась в два раза, соединение 2 также проявило некоторую активность в отношении E. coli (32 мкг/мл).

Для оптимизации условий синтеза сложных эфиров другого антибиотика-гликопептида - эремомицина применяли метод этерификации с помощью диазоалканов [46, 47]. При введении в реакцию с эремомицином избытка диазометана, фенилдиазометана или дифенилдиа-зометана были получены соответственно метиловый

Т а б л и ц а 10

Антибактериальная активность in vitro MDL 63246 и MDL 63042 в сравнении с тейкопланином

и ванкомицином

^^^^ Антибиотик MDL 63246 MDL 63042 Тейкопланин Ванкомицин

Тест-микроб

S. aureus 0,13 0,5 <0,03 0,13 0,25 0,5 0,5 4

S. epidermis <0,03 0,5 <0,03 0,25 0,25 32 1 2

Другие коагулаз-отрицательные стафилококки (37) <0,03 0,5 <0,03 0,25 0,13 4 0,5 2

0,13 1 0,03 0,25 0,13 0,5 0,5 4

E. faceium 0,06 1 0,06 0,5 0,13 1 0,25 2

E. faceium Van B 0,13 0,5 0,06 0,5 0,13 4 1 1024

S. pyogenes <0,03 <0,03 <0,03 0,25 0,5

S. pneumoniae <0,03 <0,03 <0,03 0,06 0,5 2

С х е м а 13

Синтез эфиров эремомицина методом диазоалканов

nh2 nh2 "

HOOC-Г н3

nh2

nh2

o 4

RR.OOC^I |-NHCH3

20°C, 4-8 ч

С х е м а 14

Модификация ристомицина А путем азсосочетания

(H2N)2- ристомицин I -(-ОН)4

№--X)n

щ

N=N-@ -X)„

n = 1 - 3

X = COOH, -SO3H, -nhch2cooh, -n=n- , -no2

С х е м а 15

Аминометилирование эремомицина

RRjNH, CH2O (37% aq),

wvw

HO-03-^1'

4 OH OH

20°C, 2-18 ч, pH 10

vww

RR1NCH2 oh oh

NRR1 = NH2, NHC7H15, NHC9H19, NHC10H21, NHC12H25, NHC18H37, N(CH2CH2)2NHCH3, N(CH3)2, NH(CH2)4NH2, NH(CH2)2COOH, N(CH3)CH2(CHOH)4CH2OH

(его не удалось получить с помощью диметилсульфата), бензиловый (2) и дифениловый (3) эфиры (схема 13).

Метилирование фенольных групп происходило как побочная реакция. В случае фенил- и дифенилдиазометана образование побочных продуктов было невелико, видимо, из-за пространственных затруднений. Активность производных незначительно уменьшилась по сравнению с исходным эремомицином (табл. 13).

Среди эфиров эремомицина заметное снижение активности происходит с увеличением объема заместителей. Эта зависимость подтверждается результатами взаимодействия эремомицина с некоторыми алкилгалогенидами [14]. Порядок замещения функциональных групп эремо-мицина определяется природой исходного алкилгалогени-да. Так, при алкилировании эремомицина йодистым метилом или йодистым аллилом предпочтительно замещалась N-концевая аминогруппа пептида вплоть до образования четвертичных солей, а при взаимодействии эремо-мицина с хлористым бензилом образовывались бензило-вый эфир N-бензилэремомицина и бензиловый эфир N^'-дибензилэремомицина в соотношении 2:1. Активность in vitro бензильных производных была несколько ниже исходной, причем дизамещенное по аминогруппе производное оказалось менее активным, чем монозаме-щенное. При алкилировании алкилгалогенидами, которые имеют более низкую реакционную способность, замещение происходило в первую очередь по карбоксильной группе, затем по аминогруппе пептида и наконец по аминогруппе эремозамина дисахаридной ветви. Были подобраны условия селективного протекания реакции по карбоксильной группе.

Получены следующие производные:

N H R4

R1 = C6H5CH2, C3H7, C7H15,

R2 = H, C6H5CH2, C3H7, C7H1:

R3 = H;

RiOOC — — N R 2R 3CH

R = R1 = H; R = -C6H5, R1 = H; R = R1 = -C6H5

H2O/AcCN

C12H25, C18H37

3

R4 = C6H5CH2, C3H7, C7H15

Т а б л и ц а 11

Антибактериальная активность in vivo МDL 63246 и MDL 63042 в сравнении с тейкопланином и ванкомицином

" ^^ Антибиотик

МЭЬ 63246 MDL 63042 Тейкопланин Ванкомицин

Тест-микроб ^

S. aureus 0,06 0,03 0,5 0,5

E. faecalis 0,06 0,06 4 -

S. pyogenes 0,016 0,016 0,03 0,13

S. pneumoniae 0,016 0,08 0,06 0,5

Т а б л и ц а 12

Антибактериальная активность in vivo метиловых эфиров (МеЕ) и декарбоксигидроксиметил-тейкопланинов

S^ Соединение Тест-микроб СТА ТВ ТС TD MeE HM

СТА ТВ ТС TD СТА ТВ ТС TD

S. aureus 0,125 0,25 0,5 0,063 0,5 0,25 0,125 0,063 0,063 0,5 0,25 0,063

S. epidermis 0,25 0,25 0,125 0,016 0,25 0,25 0,032 0,032 0,063 0,5 0,063 0,063

S. pyogenes 0,063 0,063 0,5 1 0,125 0,063 0,25 0,125 0,125 0,063 1 0,125

E. faecalis 0,125 2 1 0,125 0,25 2 0,25 0,125 0,125 2 2 0,25

E. coli >128 >12 >12 64 >128 >128 >12 128 16 >12 >12 >12

Т а б л и ц а 13

Антибактериальная активность in vitro эфиров эремомицина

Рис. 7. Структуры МБЬ 63246 и МБЬ 63042

Обнаружено, что наибольшей активностью обладают производные с малообъемными заместителями.

Модификация ароматического ядра антибиотиков дал-

багептидов

Молекулу антибиотика ристомицина А модифицировали по ароматическим ядрам с помощью реакции азосо-четания, вводя заместители, имеющие различные стери-ческие размеры и заряд [21]. В качестве диазокомпонен-тов использовали диазониевые соли п-аминобензойной, сульфаниловой и М-(п-аминобензоил)глутаминовой кислот, п-аминобензола и п-нитроанилина. Реакцию проводили в пиридин-ацетатном буфере с рН 6,5. В зависимости от соотношения реагентов получали производные с разной степенью замещения (схема 14).

Антимикробная активность полученных производных была на порядок меньше по сравнению с исходным антибиотиком.

Новый тип химической модификации эремомицина, позволивший синтезировать производные с улучшенными антибактериальными свойствами, был разработан авторами [48]. С помощью аминометилирования (реакция Ман-ниха) эремомицина были получены производные по положению Б4 ароматического кольца актиноидиновой кислоты. Реакция протекала по схеме 15.

Показано, что существует зависимость между длиной цепи алифатических алкильных заместителей алкиламино-метил-производных эремомицина и их активностью. Как в случае М'-ацил- и М'-алкил-эремомицинов, замещенных по остатку эремозамина дисахаридной ветви [32], наибольшая активность наблюдалась у производного, содержащего десять атомов углерода в МЯ^ -группе, как в отношении некоторых стафилококков и стрептококков, так и в отношении ванкомицин-устойчивых энтерококков, в то

Тест-микроб Антибиотик B. subtilis S. aureus

Эремомицин 0,08 0,5

1 0,32 1,0

2 0,64 4,0

3 0,64 4,0

но он

СН2ОН

MDL 63,246 Y = MDL 63,042 Y =

NH2

время как уменьшение или увеличение числа углеродных атомов, приводило к снижению активности относительно С10-производных.

Необходимо отметить, что производное NHC10H21 проявляло значительную активность (16 мкг/мл) в отношении грамотрицательных Neisseria gonnorrhoeae ISM 68/126 и в отношении ванкомицин-устойчивых энтерококков (8 мкг/мл против E. faecalis и E. faecium), тогда как другие полученные соединения были неактивны в отношении этих бактерий.

Остальные производные имели сходную или даже бопль-шую активность, чем исходный антибиотик, в отношении

клинического изолята S. epidermis, но большинство оказалось менее активно в отношении к S. aureus.

Таким образом, анализ литературных данных, накопленных более чем за десять лет работы по модификации ан-тибиотиков-далбагептидов, показывает, что наиболее перспективными направлениями в области синтеза новых активных препаратов являются модификации ароматического кольца аминокислоты 7 (актиноидиновой), С-конца пептидного ядра антибиотиков (амидирование) и восстановительное алкилирование аминогрупп. Причем большое значение имеет баланс между липофильностью вводимых заместителей и основностью полученных соединений.

СТИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Гейл Э., Кандлифф Э., Рейнолдс П., Ричмонд М., Уоринг М. Молекулярные основы действия антибиотиков. М., 1975.

2. Антибиотики-полипептиды / Под ред. Н.С.Егорова. М., 1987.

3. Parenti F., Cavalleri B. // Drugs of future. 1990. 15. P. 57.

4. Cavalleri B., Parenti F. Glycopeptides (dalbaheptides) Encyclopedia of Chem. Technology. 1992. 2. P. 995.

5. Франклин Т., Сноу Дж. Биохимия антимикробного действия. М., 1984.

6. Barna J.C.J., Williams D.H. // Ann. Rev. Microbiol. 1984. 38. P. 339.

7. Reynolds P.E. // Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis. 1989. 8. P. 943.

8. Selva E., Goldstein B.P., Ferrari P. et al. // J. Antibiotics. 1988. 41.

P. 1243.

9. Nagarajan R. // Antimicrob. Agents. Chemother. 1991. 35. P. 605.

10. Allen N.E., Hobbs J.N. // FEMS Microbiol. Lett. 1995. 132. P. 107.

11. Тренин А.С., Олсуфьева Е.Н. // Биоорг. хим. 1997. 23. С. 851.

12. Гаузе Г.Ф., Бражникова М.Г., Ломакина Н.Н., Бердникова Т.Ф., Федорова Г.Б. и др. // J. Antibiotics. 1989. 42. P. 1790.

13. Гаузе Г.Ф., Бражникова М.Г., Ломакина Н.Н. и др. // Антибиотики и химиотерапия. 1989. 34. С. 348.

14. Павлов А.Ю. Химическая модификация гликопептидного антибиотика эремомицина. // Дис. ... канд. хим. наук. М, 1993.

15. Pavlov A.Y., Berdnikova T.F., Olsufyeva E.N., Lazhko E.I., Malkova I. V., Preobrazhenskaja M.N., Testa R.T., Peterson P.J. / / J. Antibiotics. 1993. 46. P. 1731.

16. Ломакина Н.Н. // Дис. ... канд. хим. наук. М., 1969.

17. Ломакина Н.Н., Катруха Г.С., Бражникова М.Г., Силаев А.Б., Трифонова Ж.П., Диарра Б. // Антибиотики. 1982. 27. С. 8.

18. Рак К., Бода З., Старичкаи Ф. // Антибиотики. 1980. 25. С. 595.

19. Катруха Г.С., Смирнова И.Г., Трифонова Ж.П., Смеянова Г.И., Федорова Г.Б. // Антибиотики и медицинская биотехнология. 1986. 31. С. 588.

20. Смирнова И.Г., Катруха Г.С. // Symposium "Chemistry and Biological action of peptides". Sofia. Bulgaria. 1987. P. 22.

21. Стурман Н.В. // Дис. ... канд. хим. наук. М., 1997.

22. Денисова И.В., Смирнова И.Г., Бердникова Е.Ф., Катруха Г.С. // Вестн. Моск. ун-та. Сер. 2. Химия. 1998. 39. С. 352.

23. Barna C.J., Williams P.H. // J. Chem. Soc. Chem. Commun. 1985. P. 254.

24. Hermann R., Ripamonti G. et al. // J. Antibiotics. 1996. 49. P. 1236.

25. Олсуфьева Е.Н., Бердникова Т.Ф., Докшина Н.Ю., Ломакина Н.Н. // Антибиотики и химиотерапия. 1989. 34. С. 352.

26. Nagarajan R., Schabel A. et al. // J. Antibiotics. 1989. 42. P. 63.

27. Katrukha G.S., Silaev A.B. / Chemistry of Peptides and Proteins. 1986. 3. P. 286.

28. Allen N.E., Le Tourneu D.L. et al. // J. Antibiotics. 1997. 50. P. 677.

29. Nicas T.I., Mullen D.L. et al. // Antimicrob. Agents Chemother.

1996. 40. P. 2194.

30. Schwalbe R.S., McIntosh A.C. et al. // Antimicrob. Agents Chemother. 1996. 40. P. 2416.

31. Allen N.E., Le Tourneau D.L., Hobbs J.N. // Antimicrob. Agents Chemother. 1997. 41. P. 66.

32. Павлов А.Ю., Бердникова Е.Ф., Олсуфьева Е.Н., Орлова Г.И., Преображенская М.Н. // Хим.-фармацевт. журн. 1995. 25. С. 46.

33. Nicas T.I., Mullen D.L., Flokovitsch J.E., Preston D.A., Snhyder N.J. et al. // Antimicrob. Agents. Chemother. 1996. 40. P. 2194.

34. Nicas T.I., Cole C.T., Preston D.A., Schabel A.A., Nagarajan R. / / Antimicrob. Agents Chemother. 1989. 33. P. 1477.

35. Cooper R., Snyder N. et al. // J. Antibiotics. 1996. 49. P. 575.

36. Malabarba A., Trami A., Kettenring J., Gerli E., Pallanza R., Berti M., Cavalleri B. // J. Antibiotics. 1990. 43. P. 1107.

37. Malabarba A., Nicas T.I, Thompson R.C. // Med. Res. Rev. 1997. 17. P. 69.

38. Trani A., Ferrary P. et al. // J. Antibiotics. 1989. 42. P. 1268.

39. Malabarba A., Trani A., Tarzia G., Ferrari P., Pallanza R., Berti M. // J. Med. Chem. 1989. 32. P. 783.

40. Malabarba A., Giabatti R., Kettenring J., Surti R., Candiani G., Pallanza R., Berti M., Goldstein B.P. // J. Med. Chem. 1992. 35. P. 4054.

41. Biavasco F., Lupidi R., Varaldo P.E. // Antimicrob. Agents Chemother. 1992. 36. P. 331.

42. Berti M., Candiani G., Borgonovi С. // Antimicrob. Agents Chemother. 1992. 36. P. 446.

43. Malabarba A., Ciabatti R., Scotti R., Goldstein B.P. // J. Antibiotics. 1993. 46. P. 661.

44. Malabarba A., Trani A. et al. // EP 352538. 1990.

45. Pavlov A.Y., Berdnikova T.F., Olsufyeva E.N. et al. // J. Antibiotics. 1996. V. 49. P. 194.

46. Павлов А.Ю., Олсуфьева Е.Н., Бердникова Е.Ф. и др. // Биоорг. химия. 1991. 17. С. 849.

47. Павлов А.Ю., Олсуфьева Е.Н., Бердникова Е.Ф. и др. // Тез. докл. IX Всесоюз. симпоз. по целенаправленному изысканию лекарственных веществ. Рига, 1991. С. 70.

48. Pavlov A., Lazhko E.L., Preobrazhenskaya M.N. // J. Antibiotics.

1997. 50. P. 509.

49. Trani A., Malabarba A., Ferrari P. et al. // J. Antibiotics. 1990. 43. P. 1471.

50. Malabarba A., Gabatti R. // Jnt. Pat. WO 9210517. 1992.

Поступила в редакцию 12.01.2000