ИСКУССТВЕННО СОЗДАННАЯ СИСТЕМА УПРАВЛЕНИЯ ФУНКЦИЕЙ ШК

1. Композиция, способная редактировать регуляторную область гена PMP22, имеющую последовательность-мишень, в клетке, содержащая:
белок Cas9 или нуклеиновую кислоту, кодирующую белок Cas9; и
гидовую РНК, включающую crРНК и tracrРНК, или нуклеиновую кислоту, кодирующую гидовую РНК,
где указанный белок Cas9 происходит из Streptococcus pyogenes или Campylobacter jejuni,
где указанная последовательность-мишень расположена в регуляторной области гена PMP22,
где указанная регуляторная область выбрана из области ТАТА-бокса, области энхансера, области дистального энхансера В и области дистального энхансера С,
где crРНК содержит гидовый домен, способный нацеливаться на последовательность-мишень, и первый комплементарный домен,
где указанный гидовый домен и первый комплементарный домен связаны последовательно в направлении от 5’ к 3’,
где указанный первый комплементарный домен и tracrРНК способны взаимодействовать с белком Cas9 с образованием комплекса гидовая РНК-Cas.
2. Композиция по п.1,
где белок Cas9 представляет собой белок Cas9, полученный из Streptococcus pyogenes,
где первый комплементарный домен crРНК имеет последовательность 5’- GUUUUAGAGCUA -3’,
где tracrRNA имеет последовательность, которая состоит из 5’- UAGCAAGUUAAAAU-3’, 5’-AAGGCUAGUCCG-3’ и 5’- UUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGC-3’, которые последовательно связаны от 5’-конца к 3’-концу.
3. Композиция по п.1,
где белок Cas9 представляет собой белок Cas9, полученный из Campylobacter jejuni,
где первый комплементарный домен crРНК имеет последовательность 5’-AAGAAAUUUAAAAAGGGACUAAAAU-3’,
где tracrRNA имеет последовательность, которая состоит из 5’- AAGAAAUUUAAAAAGGGACUAAAAU -3’, 5’-AAAGAGUUUGC-3’ и 5’- GGGACUCUGCGGGGUUACAAUCCCCUAAAACCGCUUUU-3’, которые последовательно связаны от 5’-конца к 3’-концу.
4. Композиция по п.2 или 3,
где гидовая РНК представляет собой одну гидовую РНК, которая состоит из crРНК, линкер и tracrРНК, которые последовательно связаны от 5’-конца к 3’-концу,
где линкер представляет собой 5’-GAAA-3’.
5. Композиция по п.2,
где гидовый домен crРНК имеет последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 41-53 и SEQ ID NO: 143-150.
6. Композиция по п.3, где гидовый домен crРНК имеет последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 54-66.
7. Композиция по п.1, где указанная композиция включает гидовую РНК и белок Cas9 в форме рибонуклеопротеина.
8. Композиция по п.1, где указанная композиция находится в форме вектора, содержащего нуклеиновую кислоту, кодирующую гидовую РНК, и нуклеиновую кислоту, кодирующую белок Cas9.
9. Композиция по п.8, где указанный вектор выбран из группы, состоящей из плазмидного вектора, ретровируса, лентивируса, аденовируса, аденоассоциированного вируса (AAV), вируса осповакцины, поксвируса и вируса простого герпеса.
10. Способ редактирования регуляторной области, выбранной из области ТАТА-бокса, энхансерной области, дистальной энхансерной области В и дистальной энхансерной области С гена PMP22 в клетке, включающий:
введение в клетку композиции CRISPR/Cas9,
где указанная композиция CRISPR/Cas9 содержит:
белок Cas9 или нуклеиновую кислоту, кодирующую белок Cas9; и
гидовую РНК, включающую crРНК и tracrРНК, или нуклеиновую кислоту, кодирующую гидовую РНК,
где указанный белок Cas9 происходит из Streptococcus pyogenes или Campylobacter jejuni,
где указанная последовательность-мишень расположена в регуляторной области гена PMP22,
где указанная регуляторная область выбрана из области ТАТА-бокса, области энхансера, области дистального энхансера В и области дистального энхансера С,
где crРНК содержит гидовый домен, способный нацеливаться на последовательность-мишень, и первый комплементарный домен,
где указанный гидовый домен и первый комплементарный домен связаны последовательно в направлении от 5’ к 3’,
где указанный первый комплементарный домен и tracrРНК способны взаимодействовать с белком Cas9 с образованием комплекса гидовая РНК-Cas.
11. Способ по п.10,
где белок Cas9 представляет собой белок Cas9, полученный из Streptococcus pyogenes,
где первый комплементарный домен crРНК имеет последовательность 5’-GUUUUAGAGCUA-3’,
где tracrRNA имеет последовательность, которая состоит из 5’-UAGCAAGUUAAAAU-3’, 5’-AAGGCUAGUCCG-3’ и 5’-UUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGC-3’, которые последовательно связаны от 5’-конца к 3’-концу.
12. Способ по п.10,
где белок Cas9 представляет собой белок Cas9, полученный из Campylobacter jejuni,
где первый комплементарный домен crРНК имеет последовательность 5’-AAGAAAUUUAAAAAGGGACUAAAAU-3’,
где tracrRNA имеет последовательность, которая состоит из 5’-AAGAAAUUUAAAAAGGGACUAAAAU-3’, 5’-AAAGAGUUUGC-3’ и 5’-GGGACUCUGCGGGGUUACAAUCCCCUAAAACCGCUUUU-3’, которые последовательно связаны от 5’-конца к 3’-концу.
13. Способ по п.11 или 12,
где гидовая РНК представляет собой одну гидовую РНК, которая состоит из crРНК, линкер и tracrРНК, которые последовательно связаны от 5’-конца к 3’-концу,
где линкер представляет собой 5’-GAAA-3’.
14. Способ по п.11,
где гидовый домен crРНК имеет последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 41-53 и SEQ ID NO: 143-150.
15. Способ по п.12, где гидовый домен crРНК имеет последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 54-66.
16. Способ по п.10, где указанная композиция включает гидовую РНК и белок Cas9 в форме рибонуклеопротеина.
17. Способ по п.10, где указанная композиция находится в форме вектора, содержащего нуклеиновую кислоту, кодирующую гидовую РНК, и нуклеиновую кислоту, кодирующую белок Cas9.
18. Способ по п.17, где указанный вектор выбран из группы, состоящей из плазмидного вектора, ретровируса, лентивируса, аденовируса, аденоассоциированного вируса (AAV), вируса осповакцины, поксвируса и вируса простого герпеса.