Синергетическое действие SMN1 и miR-23a при лечении спинальной мышечной атрофии

1. Выделенная нуклеиновая кислота для получения генотерапевтического вирусного препарата, которая содержит нуклеиновую кислоту, которая кодирует белок SMN1 (белок выживаемости моторных нейронов) с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 1, и нуклеиновую кислоту, которая кодирует микроРНК miR-23a.
2. Выделенная нуклеиновая кислота по п. 1, где нуклеиновую кислоту, которая кодирует белок SMN1 с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 1, включает нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 2.
3. Выделенная нуклеиновая кислота по п. 1, где микроРНК miR-23a имеет нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 3.
4. Выделенная нуклеиновая кислота по п. 1, где нуклеиновая кислота, которая кодирует микроРНК miR-23a, включает нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 4.
5. Экспрессионная кассета, которая включает нуклеиновую кислоту по любому из пп. 1-4.
6. Экспрессионная кассета по п. 5, включающая следующие элементы в направлении от 5'-конца к 3'-концу:
левый (первый) ITR (инвертированные концевые повторы);
CMV (цитомегаловирусный) энхансер;
CMV (цитомегаловирусный) промотер;
интрон гена hBG1 (ген субъединицы гемоглобина гамма-1);
нуклеиновую кислоту, которая кодирует белок SMN1;
сигнал полиаденилирования hGH1 (сигнал полиаденилирования гена гормона роста человека);
SV40 промотор (промотор вируса обезьяны 40); нуклеиновую кислоту, которая кодирует микроРНК miR-23a;
сигнал полиаденилирования SV40 (сигнал полиаденилирования вируса обезьяны 40) и правый (второй) ITR.
7. Экспрессионная кассета по п. 6, которая включает нуклеиновую кислоту с SEQ ID NO: 6.
8. Экспрессионный вектор, который включает нуклеиновую кислоту по любому из пп. 1-4 или кассету по любому из пп. 5-7.
9. Рекомбинантный вирус на основе AAV9 (аденоассоциированный вирус 9 серотипа) для экспрессии гена SMN1 в целевых клетках, который включает капсид и экспрессионную кассету по любому из пп. 5-7.
10. Рекомбинантный вирус на основе AAV9 по п. 9, где капсид включает белок VP1 AAV9.
11. Рекомбинантный вирус на основе AAV9 по п. 10, где капсид включает белок VP 1 AAV9, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7.
12. Рекомбинантный вирус на основе AAV9 по п. 10, где капсид включает белок VP1 AAV9, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7 с одной или несколькими точечными мутациями.
13. Рекомбинантный вирус на основе AAV9 по пп. 9-12, где капсид включает белок VP1 AAV9, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7 или аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7 с одной или несколькими точечными мутациями, а экспрессионная кассета включает следующие элементы в направлении от 5'-конца к 3'-концу:
левый (первый) ITR (инвертированные концевые повторы);
CMV (цитомегаловирусный) энхансер;
CMV (цитомегаловирусный) промотер;
интрон гена hBG1 (ген субъединицы гемоглобина гамма-1);
нуклеиновую кислоту, которая кодирует белок SMN1;
сигнал полиаденилирования hGH1 (сигнал полиаденилирования гена гормона роста человека);
SV40 промотор (промотор вируса обезьяны 40); нуклеиновую кислоту, которая кодирует микроРНК miR-23a;
сигнал полиаденилирования SV40 (сигнал полиаденилирования вируса обезьяны 40) и правый (второй) ITR.
14. Рекомбинантный вирус на основе AAV9 по п. 10, где капсид включает белок VP1 AAV9, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7 или аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7 с одной или несколькими точечными мутациями, а экспрессионная кассета включает нуклеиновую кислоту с SEQ ID NO: 6.
15. Фармацевтическая композиция для доставки гена SMN1 в целевые клетки, включающая рекомбинантный вирус на основе AAV9 по пп. 9-14 в сочетании с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми эксципиентами.
16. Применение рекомбинантного вируса на основе AAV9 по пп. 9-14 или композиции по п. 15 для доставки гена SMN1 в целевые клетки.
17. Применение рекомбинантного вируса на основе AAV9 по пп. 9-14 или композиции по п. 15 для выживаемости субъекта, который имеет спинальную мышечную атрофию и/или не имеет полнофункциональных копий гена SMN1.
18. Применение рекомбинантный вируса на основе AAV9 по пп. 9-14 или композиции по п. 15 для обеспечения белком SMN1 субъекта, который имеет спинальную мышечную атрофию и/или не имеет полнофункциональных копий гена SMN1.
19. Применение рекомбинантного вируса на основе AAV9 по пп. 9-14 или композиции по п. 15 для лечения спинальной мышечной атрофии у субъекта, который имеет спинальную мышечную атрофию.
20. Способ модуляции двигательной функции у субъекта с нарушением двигательных нейронов, включающий введение терапевтически эффективного количества рекомбинантного вируса на основе AAV9 по пп. 9-14 или композиции по п. 15 в клетки субъекта.
21. Способ обеспечения белком SMN субъекта со спинальной мышечной атрофией, включающий введение терапевтически эффективного количества рекомбинантного вируса на основе AAV9 по пп. 9-14 или композиции по п. 15 в клетки субъекта, нуждающегося в этом.
22. Способ доставки гена SMN1 в целевые клетки субъекта со спинальной мышечной атрофией, включающий введение рекомбинантного вируса на основе AAV9 по пп. 9-14 или композиции по п. 15 в клетки субъекта.
23. Способ лечения спинальной мышечной атрофии у субъекта, который включает ведение терапевтически эффективного количества рекомбинантного вируса на основе AAV9 по пп. 9-14 или композиции по п. 15 субъекту со спинальной мышечной атрофией.