СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ТОКСИЧЕСКОГО ГЕПАТИТА В ЭКСПЕРИМЕНТЕ
METHOD OF DIAGNOSING TOXIC HEPATATIS IN EXPERIMENT

Изобретение относится к медицине и может быть использовано в эксперименте и клинической медицине для диагностики токсического гепатита.
Известен способ определения диагностики токсического гепатита в эксперименте, при котором животное забивают, а для выявления токсического гепатита проводят гистологическое исследование печени. Материал фиксируют 10% раствором нейтрального формалина, заливают в парафин, приготавливают гистологические срезы и окрашивают гематоксилином и эозином. Затем под микроскопом оценивают ультраструктуру паренхимы печени, и если в морфологической картине ткани выявляют выраженную тотальную жировую дистрофию, появление лимфоидно-гистиоцитарной инфильтрации по всей площади долек, полнокровие вен портального тракта и лейкостаз в них, снижение уровня гликогена, то говорят о токсическом ее поражении (Фаращук Н.Ф. Мексидол и гепатит: результаты в эксперименте и перспективы в клинике // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины, 2006, приложение 1).
Метод является трудоемким, предполагает забой лабораторных животных. Кроме того, используя вышеописанную методику, не возможно динамическое наблюдение за процессом развития токсического гепатита у одного и того же животного.
Задачей изобретения является разработка прижизненного малоинвазивного способа диагностики токсического гепатита в эксперименте.
Сущность предложенного способа состоит в том, что проводят динамическую биоимпедансометрию (БИМ) ткани печени, измеряя импеданс интактной печени троекратно с последующим расчетом средней величины Zинт, сравнивают его со средним значением импеданса печени того же животного, измеренного троекратно на третьи сутки после введения токсического агента Zтox, и если Zинт меньше, чем Zтox, то говорят о возникновении токсического гепатита.
Различные патологические процессы приводят к изменению размеров, формы и взаимного расположения клеток в биологической ткани. Соответственно, изменяется микроархитектоника биологической ткани, интенсивность кровоснабжения и метаболизма клеток. При этом меняются электрофизические свойства биообъектов, в частности импеданс. Что легло в основу данного изобретения.
1
2
3
2
Пример. Крысе весом 180 г под эфирным рауш-наркозом производили верхнесрединную лапаротомию длиной 1 см, вывихивали хвостатую долю печени в рану, осуществляли биоимпедансометрию интактной печени (частота тока 2 кГц, напряжение IV) при помощи игольчатых электродов, которые вводили в ткань печени на глубину 2 мм. Импеданс печени замеряли в разных точках (Z, Z, Z) на площади 10 мм. Затем вычисляли среднее значение (Zинт).
1
2
3
На 4 сутки после операции внутрибрюшинно вводили 50% масляный раствор четыреххлористого углерода (ЧХУ) в дозе 0,25 мл на 100 г веса. На 3 сутки после введения ЧХУ была проведена повторная лапаротомия с последующей биоимпедансометрией хвостатой доли печени. Импеданс печени замеряли в разных точках (Z Z, Z) на площади 10 мм. Затем вычисляли среднее значение (Zтox).
1
2
3
При измерении импеданса интактной печени получили: Z=2069 Ом, Z=2177 Ом, Z=2237 Ом, тогда Zинт=2161 Ом.
1
2
3
При измерении импеданса печени после введения ЧХУ получили: Z=2337 Ом, Z=2791 Ом, Z=2187 Ом, тогда Zтox=2438 Ом.
Таким образом, Zинт меньше, чем Zтox, следовательно, у данного животного диагностируется токсическое поражение печени.
Далее крысу забили, на гистологическое исследование взяли фрагмент хвостатой доли печени. Материал фиксировали в 10% растворе нейтрального формалина, заливали в парафин, приготавливали гистологические срезы и окрашивали их гематоксилином и эозином. Затем под микроскопом оценивали ультраструктуру паренхимы печени.
При гистологическом исследовании выявили выраженную тотальную жировую дистрофию, появление лимфоидно-гистиоцитарной инфильтрации по всей площади долек, полнокровие вен портального тракта и лейкостаз в них, снижение уровня гликогена, что является признаком токсического поражения печени.
Провели эксперимент на 15 крысах-самцах весом от 145 до 185 г. Были сформированы 2 группы: опытная группа животных в количестве 10 шт. и контрольная 5 шт.
В опытной группе животных моделировали токсический гепатит и измеряли импеданс ткани печени по описанной выше методике. В результате у всех животных Zинт был меньше, чем Zтox, что говорит о развитии токсического гепатита (табл.1, 2). Диагноз подтверждался гистологическим исследованием ткани печени.
Таблица 1Способ диагностики токсического гепатита в эксперименте
№ крысы
Zинт, Ом
Zтox, Ом
Сравнение
1
2178
2300
Zинт < Zтох
2
2265
2665
Zинт < Zтох
3
2161
2438
Zинт < Zтox
4
2053
2624
Zинт < Zтox
5
2388
2602
Zинт < Zтох
6
1816
2923
Zинт < Zтох
7
2981
3313
Zинт < Zтох
8
2172
2225
Zинт < Zтox
9
2480
2822
Zинт < Zтох
10
2216
2448
Zинт < Zтox
Таблица 2
№ крысы
Zинт, Ом
Zтox, Ом
Сравнение
1
3173
1793
Zинт > Zтox
2
2806
1828
Zинт > Zтox
3
3146
2355
Zинт > Zтox
4
2889
1769
Zинт > Zтox
5
2637
1728
Zинт > Zтox
В контрольной группе крыс проводили измерение импеданса ткани печени в те же сроки, что и у опытной группы животных, но ЧХУ не вводили. В результате у всех контрольных животных Zинт был больше, чем Zтox, что подтверждает отсутствие токсического поражения печени. Результаты биоимпедансометрии были подтверждены гистологическим исследованием.
Таким образом, предложенный способ диагностики токсического гепатита является объективным и надежным, может быть широко использован в экспериментальной медицине для исследования влияния различных токсических агентов на ткань печени и оценки эффективности лекарственных препаратов при токсическом поражении печени.