СРЕДСТВО, ОБЛАДАЮЩЕЕ АНКСИОЛИТИЧЕСКИМ И АНТИДЕПРЕССИВНЫМ ДЕЙСТВИЕМ, НА ОСНОВЕ ЭКСТРАКТА СЕМЯН ЛОТОСА ОРЕХОНОСНОГО (Nelumbo nucifera)
AGENT OF HINDU LOTOS SEED (Nelumbo nucifera) EXTRACT POSSESSING ANXIOLYTIC AND ANTIDEPRESSIVE ACTION

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к созданию средства на основе экстракта семян Лотоса орехоносного (Nelumbo nucifera), обладающего анксиолитическим и антидепрессивным действием.
По данным ВОЗ, тревожно-депрессивные состояния, являясь широко распространенным проявлением стресс-обусловленных заболеваний центральной нервной системы, встречаются более чем у 120 млн. человек во всем мире. По данным ряда исследователей, в зависимости от предъявляемых критериев, тревога как патологическое состояние встречается в 5-25%, а смешанные тревожно-депрессивные расстройства встречаются у 13% населения [3]. Рост тревожных и тревожно-депрессивных состояний, связанных с увеличением стрессогенных воздействий в современном обществе угрожает не только психическому здоровью населения, но и провоцирует также развитие психосоматических заболеваний. Хорошо известно, что практически всегда психические эквиваленты этого психического расстройства сочетаются с соматическими жалобами, чаще всего с нарушениями функции сердечно-сосудистой, иммунной и эндокринной систем. Поэтому поиск путей коррекции указанных патологических состояний является одной из важнейших задач современной психофармакологии. Несмотря на то, что современная медицина научилась справляться с состоянием повышенной тревожности и депрессией, существуют проблемы терапевтической резистентности к известным психотропным препаратам и формирования серьезных осложнений психофармакотерапии аффективных расстройств. Средства растительного происхождения могут сыграть существенную роль в решении этих проблем.
6
12
1
6
12
В настоящее время известны следующие анксиолитические и антидепрессивные средства природного происхождения: «Деприм» и «Негрустин» (зверобой продырявленный); «Гипер» (зверобой продырявленный, белокудренник, боярышник, витамин С, витамин В, витамин В, витамин В, магния карбонат); «Пассилат» (страстоцвет, боярышник, валериана, витамин B, витамин В, витамин B). Близким к предлагаемому изобретению является средство, обладающее анксиолитическим и антидепрессивным действием из высушенных измельченных надземной и подземной частей видов рода альфредия (Alfredia) или их водных или водно-этанольных экстрактов (патент РФ №2354397). Однако, идентичной совокупности признаков нами не обнаружено в патентной и научно-медицинской литературе.
Задачей настоящего изобретения является создание отечественного средства на растительной основе с анксиолитическим и антидепрессивным действием, обладающего широким спектром терапевтической активности. Впервые установлено, что в качестве средства, обладающего анксиолитическим и антидепрессивным действием, можно использовать водно-спиртовой экстракт семян Лотоса орехоносного (Nelumbo nucifera).
Лотос орехоносный применяют в народной медицине с давних времен. Основные биологически активные вещества экстракта семян лотоса - это флавоноиды (кверцетин, изокверцетин, нелумбозид), лейкоантоцианиды (лейкоцианидин, лейкодельфинидин), алкалоиды (нуцефирин). Плоды лотоса входят в состав более чем двухсот препаратов китайской и индийской медицины. Экстракт семян Лотоса орехоносного обладает гепатопротективным и антиоксидантным действием. Лотос орехоносный обладает мочегонным, жаропонижающим, гипогликемическим видами активности. В литературе отсутствуют данные о применении водно-спиртового экстракта семян Лотоса орехоносного в качестве средства, обладающего анксиолитическим действием.
Способ приготовления экстракта семян Лотоса орехоносного (Nelumbo nucifera), полученного путем водно-спиртового экстрагирования 50%-ным этиловым спиртом при соотношении 3:1 в аппарате Сокслета (согласно протоколу WHO CG-04) [4]:
500 г семян высушивали, измельчали до порошкообразного состояния с размером частиц 0,2 мм и подвергали водно-спиртовому экстрагированию 50%-ным этиловым спиртом в аппарате Сокслета, затем отгоняли спирт в ротационном испарителе, при следующем соотношении компонентов: мас.%
семена Лотоса орехоносного (Nelumbo nucifera)
- 75
спирт этиловый
- 25
Выход активного вещества (суммы алкалоидов) экстракта - около 7% вязкого смолообразного вещества.
Решение задачи настоящего изобретения - использование экстракта семян Лотоса орехоносного по предлагаемому назначению - стало возможным благодаря экспериментальному выявлению его новых свойств, а именно способности нормализовать функции ЦНС за счет анксиолитической и антидепрессивной активности.
Пример 1.
Был проведен химический анализ полученного экстракта семян Лотоса орехоносного. Методом высокоэффективной жидкостной хроматографии изучен состав алкалоидов, содержащихся в экстракте. Согласно проведенному нами химическому анализу основным активными компонентами семян Лотоса орехоносного при используемом способе экстрагирования были следующие алкалоиды (в % соотношении):
Дигидроремерин 27,14
Ремерин 21,87
Нуциферин 14,73
Лиензинин 14,25
Изолиензинин 11,02
Неферин 6,21
Процианидин 4,78
Оценку анксиолитической активности экстракта семян Лотоса орехоносного проводили на 92 белых беспородных половозрелых крысах-самках по изучению особенностей поведения в «Суок-тесте». Животные содержались в виварии при свободном доступе к воде и пищи.
Суок-тест представляет собой «гибрид» нескольких поведенческих моделей, что позволяет вести регистрацию широкого диапазона поведенческих реакций, от локомоции и исследовательской активности до вегетативных маркеров поведения. Как совершенно новая поведенческая модель, Суок-тест рекомендуется в психофармакологии для скрининга психотропных эффектов препаратов [2]. Об анксиолитической активности экстракта судили по следующим показателям: латентному периоду выхода из центра; времени, проведенном в темном и светлом отсеках Суок-теста; количеству и продолжительности грумингов; числу падений вниз; числу соскальзывания задних лап; числу остановок возле границы между черным и белым отсеком. Дополнительными показателями, характеризующими условно-рефлекторную, эмоциональную и смещенную активность, служили число посещенных сегментов; стойки; число и продолжительность остановок; число исследовательских заглядываний вниз; количество направленных в стороны движений головой при вытянутом положении тела.
Раствор экстракта семян Лотоса орехоносного (0,5%-ный), приготовленный на физиологическом растворе, вводили животным внутрижелудочно с помощью зонда в дозе 50 мг/кг массы тела. Животные были разделены на три группы: I - интактный контроль, II - животные, получавшие внутрижелудочно физиологический раствор, III - животные, получавшие внутрижелудочно раствор экстракта семян Лотоса орехоносного. Животные получали раствор экстракта семян Лотоса орехоносного и физиологический раствор ежедневно в одно и то же время с 10 до 12 часов. Экстракт семян Лотоса орехоносного и физиологический раствор вводили животным в течение 1, 2, 3, 4 и 6 недель и соответственно подразделяли животных на 1-, 2-, 3-, 4- и 5-ю группы. Каждую группу животных тестировали в Суок-тесте однократно через 30 минут после последнего введения растворов.
Полученные экспериментальные данные обрабатывали статистически с использованием t критерия Стьюдента с поправкой Бонферрони. Различия считали достоверными при р≤0,05.
Проведенные нами исследования (Табл.1, 2) показали, что экстракт семян Лотоса орехоносного приводит к снижению времени латентности выхода из центра; уменьшению количества соскальзывания лап; уменьшению дефекации, начиная с первой недели внутрижелудочного введения экстракта семян Лотоса орехоносного по сравнению с интактными животными. При этом у животных, получавших физиологический раствор, происходит повышение уровня тревожности в ответ на процедуру внутрижелудочного введения (манипуляции с животными, взятие в руки), особенно на первой и второй неделях введения физиологического раствора. Это проявляется в снижение двигательной и исследовательской активности, повышении времени груминга и длительности остановок, появлении падений и особенно в светлом отсеке.
Таблица 1
Динамика показателей поведенческих реакций в Суок-тесте при введении экстракта семян Лотоса орехоносного
1 неделя
2 неделя
3 неделя
4 неделя
6 неделя
контроль
Латентность выхода, сек
3,9±0,56 *
2,7±0,47 *
4,0±0,60 *
18,9±11,48
24,5±18,83
11,8±3,05
Длительность остановки, сек, ПО/О
61,2±27,45
34,5±9,81
33,67±11,38
11,5±7,64
62,0±18,94
20,1±10,23
Горизонтальная активность
14,0±5,01
16,5±3,39
16,22±4,99#
10,3±5,66 
12,75±4,46
24,3±4,73
20,6±5,12
26,5±5,83
14,3±3,95 #
40,0±1,17
28,4±7,29
Вертикальная активность
0
0,3±0,15
0,22±0,22
0,1±0,1
0
0,8±0,36
0,3±0,21
0,3±0,15
0
0
0,6±0,44
Остановки
1,9±0,70
2,4±0,65
1,7±0,48#
0,8±0,61  
1,8±0,32
2,8±0,95
3,0±0,76
2,3±0,68
3,1±0,95
3,2±0,61
2,4±1,00
Заглядывания вниз
3,3±0,99
5,3±1,18
5,4±1,95
3,6±1,38
5,2±1,33
6,9±1,75
4,5±1,44
4,7±1,22
5,1±1,17
4,4±1,40
6,4±1,55
Ориентация
0,4±0,31 *
3,1±0,71 о
1,22±0,36
0,8±0,42 *
0,6±0,31 **
2,4±0,64
3,5±1,10
4,04-1,02
1,33±0,47
1,5±0,56
2,2±0,78
Проведенное время в отсеке, сек
64,9±18,76 **
139,3±29,64
117,2±24,41 #
69,6±35,93
117,8±28,52
160,3±28,38
134,7±31,06
127,9±28,75
147,4±32,76
152,7±40,03
120,2±29,32
Смещенная активность, груминг, сек
12,0±6,41
11,5±4,99
18,56±6,44
3,0±2,79
4,42±4,15
4,3±2,08
9,8±5,05
7,0±3,81
15,6±6,56
22,4±17,7
5,8±3,88
Дефекация, количество болюсов
0,3±0,21
1,4±0,99
0,44±0,34
0,3±0,21
0,25±0,18
0,6±0,27
0
0,6±0,34
0,1±0,11
1,3±0,49
0,1±0,10
Продолжительность остановок, сек
21,0±9,9
51,3±7,89
60,6±24,14
34,0±24,65
58,7±24,12
41,8±12,38
31,8±9,08
32,1±13,93
58,0±21,97
87,4±29,32
26,1±11,47
Падения
0
0
0
0
0
0,1±0,10
0
0
0
0
0
0
Соскальзывания лап
0,7±0,42
0,6±0,29 
1,2±0,32
0,6±0,34
1,6±0,45
1,2±0,36
1,5±0,56
0,5±0,22
1,0±0,44
1,2±0,39
2,0±0,60
Таблица 2
Динамика показателей поведенческих реакций в Суок-тесте при введении физиологического раствора
1 неделя
2 неделя
3 неделя
4 неделя
6 неделя
контроль
Латентность выхода, сек
6,0±1,76
3,5±0,67 *
23,0±9,81
5,3±1,36
11,8±4,97
11,8±3,05
Длительность остановки, сек, ПО/О
22,6±1,01
28,1±10,42
27,6±22,26
22,3±8,72
94,4±23,21 *
20,1±10,23
Горизонтальная активность
22,0±10,52
22,3±4,41
4,4±3,97 **
9,5±3,28 *
11,9±5,73 *
24,3±4,73
22,2±9,64
14,3±3,24
3,8±2,85 **
27,4±5,53
28,4±7,29
Вертикальная активность
0
0,6±0,27
0
0,3±0,21
0,3±0,15
0,8±0,36
0,8±0,62
0,5±0,30
0
0,3±0,30
0,6±0,44
Остановки
2,66±1,01
2,3±0,62
0,2±0,13 **
0
1,6±0,65
2,8±0,95
4,2±1,44
1,5±0,82
1,3±0,58
4,4±0,73
2,4±1,00
Заглядывания вниз
2,4±0,87 **
7,6±1,76
2,9±0,95 *
4,3±0,97
7,7±1,32
6,9±1,75
4,9±2,74
3,6±0,73
0,7±0,37
6,9±1,38
6,4±1,55
Ориентация
1,7±0,69
2,2±0,55
1,1±0,48
1,2±0,42
2,4±0,92
2,4±0,64
3,4±1,19
4,5±0,56
0,4±0,34
6,3±1,4
2,2±0,78
Проведенное время в отсеке, сек
116,7±37,47
156,2±30,55
38,4±27,36 **
23,2±7,32 **
115,9±26,85
160,3±28,38
108,1±42,48
116,8±32,83
21,33±21,33
215,7±26,64
120,2±29,32
Смещенная активность, груминг, сек
7,9±7,28
4,51±3,01
3,7±2,56
0
7,0±3,42
4,3±2,08
4,88,±3,23
4,1±4,10
0
9,6±4,74
5,8±3,88
Дефекация, количество болюсов
0,7±0,37
0,5±0,27
1,6±1,16
0,3±0,28
1,4±0,75 *
0,6±0,27
0,2±0,16
0,6±0,49
0
0,7±0,42
0,1±0,10
27,1±16,23
41,4±13,32
29,0±26,85
0
29,2±13,24
41,8±12,38
Продолжительность остановок, сек
22,0±7,76
31,8±19,44
71,0±36,11
47,8±12,47
26,1±11,47
Падения
0
0,2±0,13
0
0
0,2±0,13
0,1±0,10
0
0
0
0
0
Соскальзывания лап
1,1±0,54
2,3±0,58 #
1,1±0,46
1,4±0,39
3,3±0,75 *
1,2±0,36
1,5±0,65
0,8±0,33
0
2,7±0,68
2,0±0,60
* - по сравнению с контролем;  - между черным и белым отсеком; о - по сравнению с предыдущей группой; # - между лотос и физ. раствор
Тогда как экстракт семян Лотоса орехоносного, проявляет анксиолитическое действие, при этом поведенческие реакции изменяются не только относительно реакций животных, получающих физиологический раствор, но и относительно интактных крыс, что указывает на эффективность экстракта семян Лотоса орехоносного в качестве анксиолитического средства.
Пример 2.
Оценку антидепрессивного действия экстракта семян Лотоса орехоносного проводили на 24 белых беспородных половозрелых крысах-самках в тесте «Порсолт» (плавательный тест «отчаяния»). Животные содержались в виварии при свободном доступе к воде и пищи.
Тест «Порсолт», рекомендуемый при проведении психофармакологических исследований с целью выявления антидепрессивных свойств фармакологических веществ [1]. Установка представляет собой стеклянный цилиндр d=20 см и высотой 40 см, на 2/3 заполненный водой (t=25±1°С). Животное помещаются в цилиндр и регистрируются следующие параметры: время активного и пассивного (дрейф+полная неподвижность) плавания, латентный период (ЛП) до проявления первой иммобильности и первого движения, продолжительность иммобильности. Время наблюдения: 3 мин.
Раствор экстракта семян Лотоса орехоносного (0,5%-ный), приготовленный на физиологическом растворе, вводили животным внутрижелудочно с помощью зонда в дозе 100 мг/кг массы тела. Животные были разделены на три группы: I - интактный контроль, II - животные, получавшие внутрижелудочно физиологический раствор, III - животные, получавшие внутрижелудочно раствор экстракта семян Лотоса орехоносного. Животные получали раствор экстракта семян Лотоса орехоносного и физиологический раствор ежедневно в одно и то же время с 10 до 12 часов. Продолжительность введения экстракта семян Лотоса орехоносного и физиологического раствора составила 8 недель. Каждую группу животных тестировали в тесте «Порсолт» однократно через 30 минут после последнего введения растворов.
Полученные экспериментальные данные обрабатывали статистически с использованием t критерия Стьюдента с поправкой Бонферрони. Различия считали достоверными при р≤0,05.
Проведенные нами исследования (Табл. 3) показали, что экстракт семян Лотоса орехоносного приводит к достоверному снижению латентного периода до первого движения и первой иммобильности, а также изменению соотношения «активное/пассивное плавание» за счет увеличения активного компонента по сравнению с интактными животными, что говорит о повышении на фоне введения экстракта семян Лотоса орехоносного физической выносливости в «аверсивной» водной среде и о проявлении им выраженных антидепрессивных свойств.
Таблица 3
Изучение антидепрессивной активности экстракта семян Лотоса орехоносного в тесте «Порсолт»
Группы
ЛП до 1-го движения, М±m, с
ЛП до 1-ой иммобильности, М±m, с
Время активного плавания, М±m, с
Время пассивного плавания, М±m, с
Иммобильность, М±m, с
Контроль 1
5,2±0,6
59,2±6,2
120,3±3,5
41,3±2,7
16,7±1,3
Контроль 2 (физ. р-р)
16,4±2,1Δ
60,5±5,9
117,4±4,3
60,0±6,4Δ
18,8±1,2
Семена Nelumbo nucifera (100 мг/кг)
7,8±1,5*
87,8±9,4*
131,2±4,3*
27,4±3,5*
21,4±1,9
Обозначения: Δ и * - р<0,05 - достоверность различий по сравнению с контролем 1 и 2 соответственно (t-критерий Стьюдента с поправкой Бонферрони)
Таким образом, как показывают полученные нами экспериментальные данные, экстракт семян Лотоса орехоносного (Nelumbo nucifera) обладает выраженным анксиолитическим и антидепрессивным действием и может быть рассмотрен как основа для создания нового лекарственного препарата с последующим применением в клинической практике.
Литература
1. Андреева Н.И. Методические указания по изучению антидепрессивной активности фармакологических веществ / Н.И. Андреева // Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / Под общей редакцией чл.-корр. РАМН, профессора Р.У. Хабриева. - М.: ОАО «Издательство «Медицина», 2005. - С.244-252.
2. Калуев А.В. Суок-тест - новая поведенческая модель тревоги / А.В. Калуев, П. Туохимаа // Нейронауки. - 2005. - №1. - С.17-23.
3. Santana L. A review of studies concerning treatment adherence of patients with anxiety disorders / L. Santana, L.F. Fontenelle // Patient Prefer Adherence. - 2011. - №5. - P.427-439.
4. WHO: protocol CG-04. Preparation of alcoholic extract for bioassay and phytochemical studies (APJF/IP, 1001 A). Geneva, World Health Organization, 1983.