СПОСОБЫ КРИСТАЛЛИЗАЦИИ ДЛЯ ОЧИСТКИ МОНОКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ

1. Способ получения моноклональных антител в кристаллической форме, где способ включает:
a) предоставление бесклеточного супернатанта клеточной культуры, содержащего моноклональные антитела,
b) введение буфера с низкой ионной силой в бесклеточный супернатант клеточной культуры в количестве, достаточном, чтобы способствовать кристаллизации указанного антитела,
c) регулирование pH указанного раствора для предварительной кристаллизации с получением кристаллов и
d) выделение кристаллов, образовавшихся на стадии с),
где по меньшей мере 50% указанного антитела, содержащегося в бесклеточном супернатанте клеточной культуры, выделяют на стадии d.
2. Способ получения очищенных моноклональных антител, где способ включает:
a) диализирование композиции, содержащей моноклональные антитела, против буфера с низкой ионной силой, где примеси осаждаются из композиции;
b) удаление осадка с получением первой осветленной композиции;
c) необязательно диализирование осветленной композиции против буфера с низкой ионной силой, где примеси осаждаются из композиции, с получением второй осветленной композиции;
d) удаление осадка из композиции стадии с);
e) регулирование pH первой или второй осветленной композиции до приблизительно значения pI моноклонального антитела и необязательно введение одной или более добавок для получения кристаллов; и,
f) выделение кристаллов, образовавшихся на стадии е).
3. Способ получения моноклональных антител в кристаллической форме непосредственно из супернатанта клеточной культуры, где способ включает:
а) диализирование бесклеточного супернатанта клеточной культуры, содержащего моноклональное антитело, против буфера с низкой ионной силой;
b) удаление осадка, образовавшегося на стадии а) из супернатанта, если осадок там присутствует, с получением осветленного супернатанта;
c) необязательно концентрирование осветленного супернатанта;
d) необязательно диализирование осветленного супернатанта со стадии b) или c) против буфера с низкой ионной силой с получением предварительно обработанного раствора;
e) удаление осадка из предварительно обработанного раствора со стадии d), если осадок там присутствует;
f) регулирование pH предварительно обработанного раствора со стадии d) или e) до приблизительно значения pI моноклонального антитела и необязательно введение одной или более добавок с получением кристаллов; и,
g) выделение кристаллов, образовавшихся на стадии f).
4. Способ по п. 3, включающий концентрирование бесклеточного супернатанта клеточной культуры перед стадией b).
-1
5. Способ по любому предшествующему пункту, где буфер с низкой ионной силой обеспечивает проводимость, менее чем или равную приблизительно 12 мС см.
6. Способ по любому из пп. 1-3, где pH буфера с низкой ионной силой перед стадией регулирования равен приблизительно pH, при котором антитело является растворимым и не кристаллизуется или осаждается.
7. Способ по любому. из пп. 1-3, где буфер с низкой ионной силой представляет собой гистидиновый буфер.
8. Способ по любому из пп. 1-3, где буфер с низкой ионной силой содержит по меньшей мере одну или более солей.
9. Способ по любому из пп. 1-3, где буфер с низкой ионной силой содержит по меньшей мере один или более сахаров.
10. Способ по любому из пп. 1-3, где pH регулируют с использованием Трис-буфера.
11. Способ по любому из пп. 1-3, где pH регулируют с использованием буфера, содержащего одну или более добавок, выбранных из группы, состоящей из хлорида натрия, полиэтиленгликоля и сахара.
12. Способ по любому из пп. 1-3, где по меньшей мере приблизительно 50% антитела, содержащегося в бесклеточном супернатанте культуры, выделяют на стадии выделения.
13. Способ по любому из пп. 1-3, где чистота кристаллизованного антитела составляет по меньшей мере приблизительно 90%.
14. Способ по любому из пп. 1-3, дополнительно включающий растворение выделенных кристаллов в растворе.
15. Способ по любому из пп. 1-3, дополнительно включающий перекристаллизацию моноклонального антитела посредством регулирования pH раствора до приблизительно значения pI моноклонального антитела.
16. Способ по любому из пп. 1-3, дополнительно включающий регулирование размера кристаллов посредством регулирования исходной концентрации белка супернатанта клеточной культуры.
17. Способ по любому из пп. 1-3, дополнительно включающий в себя регулирование размера кристаллов посредством перемешивания субстрата при определенной скорости.
-1
18. Способ по любому из пп. 1-3, где кристаллизация происходит при перемешивании при потребляемой мощности на объем, равной менее чем 1 Вт л.
max
-1
-1
19. Способ по п. 17, где значение максимальной локальной диссипации энергии (ε) находится в интервале от приблизительно 0,009 Вт кг до приблизительно 1,3 Вт кг.
max
-1
20. Способ по п. 19, где значение максимальной локальной диссипации энергии (ε) находится в интервале от приблизительно 0,1 до приблизительно 0,4 Вт кг.
21. Способ по п. 17, где для перемешивания применяют трехлопастную мешалку.