Разработка критериев отбора пробиотических бактерий для расширения спектра доступных противохолерных средств

УДК 616.932

В.Д.Кругликов

РАЗРАБОТКА КРИТЕРИЕВ ОТБОРА ПРОБИОТИЧЕСКИХ БАКТЕРИЙ ДЛЯ РАСШИРЕНИЯ СПЕКТРА ДОСТУПНЫХ ПРОТИВОХОЛЕРНЫХ СРЕДСТВ

ФКУЗ «Ростовский-на-Дону научно-исследовательский противочумный институт», Ростов-на-Дону

Изучена противохолерная активность 40 штаммов различных видов пробиотических бактерий по основным качественным показателям, которые определяли на основе количественных данных. Установлены критерии отбора пробиотических бактерий для использования при холере: антагонистическая активность по отношению к V. cholerae - высокая или средняя, адгезивность - только средняя, кислотообразующая активность - только высокая. На экспериментальной модели холеры доказана профилактическая и лечебная эффективность 5 отобранных штаммов лактобацилл и 1 штамма бифидобактерий. Подчеркнута перспективность применения пробиотиков в качестве дополнительных препаратов выбора при холерной инфекции.

Ключевые слова: пробиотические бактерии, холерные вибрионы, антагонизм, адгезивность, кислотообразова-ние, экспериментальная модель холеры.

V.D.Kruglikov

Development of Criteria for Probiotic Bacteria Selection for Broadening the Spectrum of Available Anti-Cholera Drugs

Rostov-on-Don Research Anti-Plague Institute, Rostov-on-Don

Studied is the anti-cholera activity of 40 strains from different species of probiotic bacteria according to the main qualitative characteristics, which are determined on the basis of quantitative data. Established are the selection criteria for probiotic bacteria to be used for cholera treatment: antagonistic activity against V. cholerae - high or moderate, adhesion - only moderate, acid forming activity - high or moderate. The preventive and medical efficiency of 5 selected strains of lactobacilli and 1 strain of bifidobacterium is demonstrated on the experimental model of cholera. Underlined is the prospective use of probiotics as additional preparations of choice against cholera infection.

Key words: probiotic bacteria, V. cholerae, antagonism, adhesion, acid forming, experimental model of cholera.

Антибиотикорезистентность возбудителя холеры, отсутствие эффективной вакцинопрофилактики, возможность формирования вибрионосительства и негативные последствия перенесенной инфекции обусловливают необходимость совершенствования подходов к профилактике и лечению этого заболевания, ориентированных на разработку препаратов, альтернативных антибиотикам: бактериофагов, бактерио-цинов, пептидов животного и растительного происхождения, веществ, блокирующих активность поверхностных структур бактерий и др. [1, 3, 4]. Для решения этой проблемы могут быть рассмотрены возможности расширения спектра противохолерных средств за счет дополнительного использования недорогих, неантибиотических, потенциально терапевтических и профилактических средств - пробиотиков (лечебнодиетических продуктов и биотерапевтических препаратов) [7, 10]. Перспектива использования того или иного пробиотика и при холерной инфекции диктует необходимость определения критериев отбора пробиотических штаммов для обеспечения противохолерного действия препарата. При этом комплекс биотехнологических свойств пробиотиков определяется не только видом бактерий, но зависит от конкретного штамма [9]. В настоящее время отсутствуют критерии противохолерной активности пробиотических бактерий с учетом биологии возбудителя холеры и особенностей патогенеза этой инфекции.

Цель исследования - тестирование in vitro штам-

мов пробиотических бактерий, составляющих основу коммерческих пробиотиков и штаммов, являющихся перспективными в качестве производственных, по основным параметрам биологической активности с определением критериев соответствия противохолерной эффективности и с подтверждением данных на экспериментальной модели холеры.

Материалы и методы

В работе использовали 40 штаммов пробиотических бактерий, относящихся к родам Lactobacillus (25), Bifidobacterium (8), Bacillus (3), Escherichia (2), Enterococcus (1) и Saccharomyces (1), полученных из Всероссийской коллекции микроорганизмов; 40 музейных и свежевыделенных штаммов холерных вибрионов различных биоваров и серогрупп, в том числе токсигенных. Для экспериментального моделирования холеры применяли штамм V. cholerae eltor 5879. Штаммы холерных вибрионов были предоставлены музеем живых культур РостНИПЧИ.

Изучение пробиотических штаммов по основным биотехнологическим параметрам (антагонизм, адгезивность и кислотообразующая активность) проводили в соответствии с МУК 4.2.2602-10 с адаптацией методик специфике исследований. Так, при выявлении антагонистической активности пробиотических бактерий по отношению к холерным вибрионам методом отсроченного антагонизма использовали ав-

торскую плотную питательную среду на основе автолизата селезенки крупного рогатого скота. Это обеспечивало получение сравнимых результатов оценки выраженности антагонизма пробиотиков (различной родовой принадлежности) к холерным вибрионам, что не представлялось возможным при использовании плотной питательной среды МРС-5 (рН 7,4±0,1), рекомендованной для изучения антагонизма пробиотиков [8], так как на этой среде штаммы V. cholerae не росли. Учет результатов антагонистической активности производили с использованием авторской качественной шкалы оценки на основе количественных показателей: низкая степень антагонизма - зона ингибирования < 6,0 -15,0 мм; средняя - 15,1-29,0 мм и высокая - > 29,1 мм [6].

Адгезивность оценивали только по одному из рекомендуемых показателей - по среднему показателю адгезивности (СПА) к эпителиальным клеткам кишечника белых мышей с применением соответствующей шкалы оценки (число микробов на 1 эпителиальную клетку): слабая адгезивность СПА = 1-5, средняя - СПА = 5-10, высокая - СПА выше 10. Кислотообразующую активность лактобацилл и бифидобактерий определяли в градусах Тернера (°Т) объемным методом нейтрализации кислоты в присутствии индикатора и оценивали по авторской шкале: < 99,9 °Т - слабая, 100,0-149,9 °Т - средняя, > 150,0 °Т - сильная [6].

Оценку результатов тестирования in vitro штаммов пробиотических бактерий по основным параметрам биологической активности проводили по сочетанию качественных показателей, которые определяли на основе количественных данных.

Профилактическую и лечебную эффективность отобранныхштаммовизучали по известнымметодикам на модели кроликов-сосунков [2]. В обоих случаях использовали 2-суточные культуры пробиотиков на обезжиренном молоке, которые вводили внутрижелудоч-но (в/ж) в дозе 1,0 мл, концентрации (3,0±0,3)-107 м.к./ мл. Заражение производили штаммом V. cholerae el-tor 5879 в/ж в дозе 1,0 мл (18 ч агаровой культурой в 3 % растворе соды), в концентрации (1,0±0,1)^08 м.к./ мл. При изучении профилактического действия пробиотических бактерий их культуры вводили перед заражением в течение 7 сут, 1 раз в день, а заражали на 8-е сутки (рис. 1). При оценке лечебного действия пробиотических бактерий их культуры вводили троекратно - через 6, 12 и 24 ч после заражения (рис. 2). Контроль - стерильное обезжиренное молоко в той же дозе, кратности и режиме введения.

Результаты и обсуждение

Антагонистическая активность пробиотических бактерий и степень ее выраженности по отношению к штаммам холерных вибрионов различного происхождения являлась одним из основных биотехнологических параметров, определяющим целесообразность и объем последующих исследований. В результате проведенного скрининга культур пробиотических бактерий по степени выраженности антагонистиче-

Эффективность профилактического действия,

70

70

0 10-[---------------1----------------------------------------1--------------- -1

*

* 8- --------------- ------------ ------------- ------------ -------------

1 CL

о

Ї 6- --------------- ------------ ------------- ------------ -------------

о

ю

03

h И I

L. acidophilus L. acidophilus L. acidophilus L. plantarum B. bifidum контроль BKMB 2020B 126 NK5 8-RA-3 №1

Рис. 1. Профилактическое действие пробиотических бактерий на модели кроликов-сосунков:

| - число взятых в исследование животных, Ц - число павших животных, Ц - с холерогенным эффектом

ской активности было установлено, что все взятые в исследование культуры пробиотиков, кроме дрожжей Saccharomyces boulardii, обладали антагонизмом по отношению к V. cholerae. Однако степень интенсивности антагонистического действия существенно различалась. Антагонистическая активность культур рода Escherichia, Enterococcus и Bacillus была оценена как низкая, поэтому указанные микроорганизмы не вошли в число пробиотических бактерий, перспективных для дальнейшего изучения возможности их использования при холере. Как показано в таблице, высоко- и среднеактивные антагонисты холерных вибрионов преимущественно относились к роду Lactobacillus и виду L. acidophilus, а из представителей рода Bifidobacterium - только к виду B. bifidum. Только штаммы L. acidophilus ВКМ В 2020 Д, L. acidophilus 12б, L. acidophilus NK5, L. plantarum 8 RA-3 и B. bifidum № 1 проявили высокую и среднюю степень антагонистической активности ко всем серогруппам холерных вибрионов. Среди остальных штаммов лактобацилл и бифидобактерий отмечалась низкая активность к тем или иным биоварам и серогруппам вибрионов. Наиболее чувствительными к исследуемым пробиотическим культурам оказались штаммы холерных вибрионов О1 серогруппы классического биовара, наименее - холерные вибрионы О139 серогруппы, а штаммы V cholerae О1 eltor и V. cholerae non O1/O139

Эффективность профилактического действия,

L. acidophilus L. acidophilus L acidophilus L. plantarum B. bifidum контроль BKMB 2020B 126 NK5 8-RA-3 №1

Рис. 2. Лечебное действие пробиотических бактерий на модели кроликов-сосунков:

| | - число взятых в исследование животных, Ц - число павших животных, Ц - с холерогенным эффектом

Результаты тестирования пробиотических бактерий по параметрам антагонистической активности по отношению к холерным вибрионам различных биоваров и серогрупп, адгезивности и активности кислотообразования*

Зона угнетения роста холерных вибрионов мм Адгезивность СПА ЭКК** Активность

Штамм V. cholerae classica V cholerae eltor V cholerae О139 V cholerae non 01/О139 кислотообразо-вания, °Т

Lactobacillus acidophilus BKM B 2020 £ 31,1±0,9 29,3±1,4 18,8±1,0 28,7±1,3 5,7±0,3 219,8±0,2

L. acidophilus 12 6 25,7±1,7 26,2±1,3 18,0±0,8 24,9±1,3 5,3±0,2 180,0±0,0

L. acidophilus K3ffl24 20,9±0,8 19,9±1,5 9,7±0,2 16,6±0,9 10,0±0,0 175,2±0,1

L. acidophilus NK5 25,1±1,7 24,6±0,8 18,9±0,3 24,6± 0,7 5,5±0,3 150,6±0,1

L. acidophilus NK12 18,9±0,3 20,1±1,8 11,4±0,3 17,3±1,0 4,7±0,2 130,2±0,1

L. acidophilus NK1 23,1±2,2 19,9±1,9 10,3±0,2 18,0±1,0 5,3±0,2 105,5±0,0

L. acidophilus NK2 22,7±2,1 18,6±0,4 10,2±0,1 15,8±1,4 5,7±0,2 94,8±0,1

L. acidophilus BKM -D 1660 19,9±1,5 12,1±1,1 10,3±0,2 16,1±1,1 10,7±0,1 151,4±0,8

L. acidophilus Ep 317/402 23,9±1,8 19,0±1,2 13,5±0,2 15,7±1,0 6,7±0,2 120,0±0,1

L. acidophilus NCIB 4504 18,4±0,7 17,0±1,8 10,6±0,4 17,0±0,6 5,0±0,0 130,3±0,0

L. acidophilus 100 H 19,8±0,4 17,8±1,6 9,8±0,2 16,7±0,6 10,3±0,2 143,0±0,1

L. acidophilus La-14 20,9±0,4 13,8±1,7 11,5±0,2 7,8±0,2 5,7±0,2 150,6±0,1

L. delbrueckii NCDO 213 20,5±1,8 15,5±1,7 7,5±0,1 12,2±1,0 1,3±0,2 120,0±0,1

L. plantarum ATCC 10241 20,4± 0,6 13,6±1,0 12,1±0,1 16,1±0,9 6,0±0,3 90,2±0,1

L. plantarum 8 RA-3 25,3±0,7 23,9±1,7 15,6±0,9 25,4±1,8 6,0±0,3 120,0±0,1

L. johnsonii La1/Lj 12,9±1,3 10,7±1,1 8,6±0,2 12,4±1,1 2,3±0,2 94,8±0,1

L. casei Lc-11 23,4±0,5 10,7±0,1 9,8±0,3 7,7±0,2 1,0±0,0 89,7±0,1

L. buchneri 1310 22,3±0,9 9,7±0,1 8,6±0,2 8,5±0,2 1,7±0,2 120,0±0,0

L. helveticus ATCC 150 23,2±0,7 8,7±0,1 7,5±0,1 8,2±0,2 5,0±0,0 95,2±0,1

L. rhamnosus GG 19,8±0,4 8,7±0,1 12,7±0,2 11,5±0,2 8,0±0,2 130,3±0,1

L.fermentum 16,5±0,4 8,3±0,1 7,7±0,2 8,0±0,4 4,7±0,3 115,0±0,3

L. lactis ATSS 8000 15,7±0,3 8,6±0,3 8,7±0,3 8,6±0,3 1,3±0,2 100,0±0,3

L. zeae B-57 11,0±0,4 10,3±0,2 8,7±0,5 8,5±0,4 1,0±0,3 80,0±0,0

L. reuteri SD 2112/MM2 14,3±0,5 17,8±1,9 8,6±0,3 8,6±0,3 2,0±0,0 105,5±0,0

L. bulgaricus LB-51 12,6±0,4 13,2±1,0 9,8±0,2 9,1±0,3 3,7±0,2 99,5±0,1

Bifidobacterium bifidum .HBA-3 10,3±0,3 9,0±0,6 10,9±0,4 10,1±0,2 5,7±0,2 90,2±0,1

B. bifidum № 1 24,7±1,3 20,2±1,9 15,7±1,0 20,6±1,3 7,7±0,2 100,3±0,1

B. bifidum 791 10,7±1,1 6,8±0,2 14,2±0,7 12,2±0,5 10,0±0 78,8±0,2

B. breve 79119 9,8±0,8 7,3±0,1 9,2±0,3 9,1±0,2 0,3±0,2 *** 55,0±0,0

B. lactis BI-04 13,8±1,1 9,8±0,3 5,3±0,2 5,6±0,2 1,7±0,2 50,0±0,0

B. adolescetis B-1 94-EHM 10,1±0,5 9,8±0,9 6,8±0,2 6,7±0,2 4,0±0,0 80,5±0,1

B. longum B 379M 13,3±0,1 9,2±0,3 5,4±0,1 5,7±0,2 2,7±0,2 45,7±0,1

B. longum ATCC 15707 11,1±0,1 7,4±0,1 7,4±0,2 7,2±0,1 3,3±0,2 60,4±0,1

B. infantis T 73-15 10,6±0,2 5,4±0,1 9,8±0,9 10,0±0,5 3,7±0,3 70,3±0,1

* Приведены средние значения по результатам трех опытов; количественные показатели, соответствующие средней и высокой степени выраженности активности того, или иного параметра выделены жирным шрифтом, а соответствующие низкой - обычным шрифтом.

** Средний показатель адгезивности к эпителиальным клеткам кишечника белых мышей (число микробов на 1 эпителиальную клетку).

*** Недостоверный результат (р > 0,05).

серогрупп занимали промежуточное положение.

Адгезивность пробиотических бактерий рассматривалась нами как с точки зрения ее биологического значения в механизмах, обеспечивающих приживление микроорганизмов и формирование нормальной микрофлоры организма, так и участия в предотвращении начальных этапов развития инфекционного процесса, что особенно актуально в контексте патогенеза холеры. При изучении адгезивно-сти 34 штаммов-пробиотиков (таблица), отобранных с учетом результатов изучения по предыдущему параметру, было установлено, что высокоадгезивными были штаммы L. acidophilus 100 H и L. acidophilus BKM -D 1660. К среднеадгезивными относились: L. acidophilus - ВКМ В 2020 Д, 12б, К3Ш24, NK5, NK1, NK2, La-14, Ер 317/402; L. plantarum - 8 RA-3 и ATCC 10241, L. helveticus ATCC 150, L. rham-nosus GG, а также B. bifidum - ЛВА-3, 791 и № 1. Остальные испытуемые штаммы являлись низкоад-

гезивными. Интерпретация полученных результатов носила некоторый полемический характер, когда, на первый взгляд, желательные характеристики потенциального пробиотика могут служить в организме человека фактором патогенности. Так, рассматривая адгезивные свойства пробиотических бактерий как один из критериев выбора препарата в лечебнопрофилактической практике, некоторые исследователи считают, что благоприятная колонизация кишечника задаваемыми пробиотическими штаммами возможна только в том случае, когда они обладают высокой адгезией к эпителиоцитам хозяина [5, 8]. Однако, учитывая сложный характер взаимоотношений микрофлоры человека, нельзя не принимать во внимание тезис о потенциальной патогенности (в определенных клинических ситуациях) любого компонента пристеночной микрофлоры [10, 11]. В этой связи в трактовке результатов изучения адгезивности пробиотических бактерий мы исходили из требова-

ний МУК 4.2.2602-10: штаммы с высокой и низкой адгезивной активностью не следует рекомендовать для производственного использования [8].

Пробиотические бактерии продуцируют различные кислоты, изменяющие pH среды их пребывания как in vitro - субстратов и питательных сред, так in vivo - в кишечнике [10]. Изучение штаммов пробиотических бактерий по показателю кислотообразующей активности имело существенное значение для отбора критериев селекции пробиотиков по комплексу признаков в связи с известным фактом кислото-чувствительности V. cholerae. Как видно из приведенной таблицы, активность кислотообразования in vitro, равная или превышающая 100,0 °Т, определялась у 19 штаммов (55,9 %). Из них 18 относились к роду Lactobacillus и один штамм - к роду Bifidobacterium. Отобранные в предшествующих исследованиях штаммы лактобацилл вошли в категорию сильных кислотообразователей (L. acidophilus ВКМ В 2020 Д, 12 б, N^), а штаммы L. plantarum 8 RA-3 и B. bifidum № 1- средних. Остальные бифидобактерии проявили слабую активность.

Полученные данные стали основой для проведения исследований, подтверждающих противохолерную активность, на экспериментальной модели холеры.

Всего исследовано 10 отобранных штаммов, в состав которых не вошли высокоадгезивные, слабые антагонисты, а также штаммы, обладающие низкой адгезивной и кислотообразующей активностью. Профилактическое действие 5 штаммов пробиотиков выражалось в защите лабораторных животных на 70100 % (рис. 1), а лечебное - на 20-50 % (рис. 2). Не вошедшие в иллюстрацию данные по штаммам L. acidophilus ( K3TTT24 и Ер 317/402) были на 2-3 порядка ниже, а изучение in vivo штаммов L. acidophilus ( N^. N^2 и NCIB 4504) дало отрицательные результаты.

Таким образом, установлено, что пробиотические бактерии, перспективные для использования при холере, должны соответствовать следующим критериям: антагонистическая активность по отношению к холерным вибрионам - высокая или средняя, адге-зивность - только средняя, кислотообразующая активность - высокая или средняя. По разработанным критериям отобраны штаммы L. acidophilus ВКМ В 2020Д, L. acidophilus 12б, L. acidophilus N^, L. plantarum 8 RA-3 и B. bifidum № 1. На экспериментальной модели холеры доказана их профилактическая и лечебная эффективность. Показано преимущество противохолерного действия лактобацилл и бифидобактерий по сравнению с другими пробиотическими бактериями. Определено, что штаммы V. cholerae clas-sica наиболее чувствительны к действию штаммов-пробиотиков, а штаммы, принадлежащие к V. cholerae О139 серогруппы, - наименее. Следовательно, отбор штаммов пробиотических бактерий по разработанным критериям будет способствовать расширению спектра противохолерных средств за счет дополнительных препаратов выбора, а именно: существующих коммерческих пробиотиков и создаваемых на их основе новых препаратов и диетических продуктов.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Андрусенко И.Т., Подосинникова Л.С., Бардых И.Д. Поиск новых методов лечения холеры. Эпидемиол. и инф. бол. 2007; 5:49-52.

2. Бардых И.Д., Кругликов В.Д., Мазрухо Б.Л., Рыжко И.В., Москвитина Э.А., Цураева Р.И. и др. Экспериментальная оценка эффективности использования лактобацилл для профилактики и лечения холеры. Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 2001; 2:68-71.

3. Гаевская Н.Е., Кудрякова Т.А., Македонова Л.Д., Качкина Г.В., Алиева А.А., Саямов С.Р. Отбор бактериофагов для лечения экспериментальной холеры, вызванной классическими вибрионами. Совр. наукоемкие технол. 2004; 3:11-15.

4. Дудина Н.А. Множественная лекарственная устойчивость штаммов холерного вибриона eltor, выделенных от людей в России в 2005 г. Клин. микробиол. и антимикробиол. химиотерапия. 2006; 8(2):16-17.

5. Кравцов Э.Г., Ермолаев А.В., Анохина И.В., Яшина Н.В., Чеснокова В.Л., Долин М.В. Адгезивные свойства лактобактерий как один из критериев выбора пробиотика. Бюл. эксп. биол. и медицины. 2008; 145(2):192-5.

6. Кругликов В. Д., Рыжко И.В., ЦураеваР.И., Дроботковская Н.В., Пушкарева Н.Д., Бардых И.Д. Изучение влияния приобретенной устойчивости к рифампицину на стабильность биологических свойств штамма Lactobacillus acidophilus ВКМ В - 2020 Д. Биотехнология. 1996; 7:32-5.

7. Маевская М.В. Возможности применения пробиотиков в гастроэнтерологии. Рос. журн. гастроэнтерол., гепатол., коло-проктол. 2009; 19(6):65-72.

8. Методы контроля. Биологические и микробиологические факторы. Система предрегистрационного доклинического изучения безопасности препаратов. Отбор, проверка и хранение производственных штаммов, используемых при производстве пробиотиков. Методические указания МУК 4.2.2602-10. 4.2. М.; 2010.

9. Шевелева М.А., Раменская Г.В. Современные представления о применении различных групп пробиотических средств при антибиотикотерапии. Антибиот. и химиотерапия. 2009; 54(3-4):61-8.

10. Янковский Д.С., Дымент Г.С. Бифидобактерии и лактобациллы как оптимальная основа современных пробиотиков. Совр. педиатрия. 2006; 10(3):1-10.

11. Boirivant M, Strober W. The mechanism of action of probiotics. Curr. Opin. Gastroenterol. 2007; 23(6):679-92.

References

1. Andrusenko I.T., Podosinnikova L.S., Bardykh I.D. [Search for new methods of cholera treatment]. Epidemiol. Infek. Bol. 2007; 5:49-52.

2. BardykhI.D., Kruglikov V.D., MazrukhoB.L., RyzhkoI.V., Moskvitina E.A., TsuraevaR.I. et al. [Experimental evaluation of efficacy of Lactobacilli in prophylaxis and treatment of cholera]. Zh. Mikrobiol. Epidemiol. Immunobiol. 2001; 2:68-71.

3. Gaevskaya N.E., Kudryakova T.A., Makedonova L.D., Kachkina G.V, Alieva A.A., Sayamov S.R. [Selection of bateriophages for treatment of experimental cholera, caused by classical cholera vibrions]. Sovrem. Naukoemkie Tekhnol. 2004; 3:11-5.

4. Dudina N.A. [Multidrug resistance of strains of Vibrio cholerae El Tor, isolated from people in Russia in 2005]. Klin. Mikrobiol. Antimikrob. Khimioter. 2006; 8(2):16-7.

5. Kravtsov E.G., Ermolaev A.V., Anokhina I.V., Yashina N.V, Chesnokova V.L., Dolin M.V. [Adhesion characteristics of lactobacillus is a criterion of the probiotic choice]. Byul. Eks. Biol. Med. 2008; 145(2):192-5.

6. Kruglikov VD., Ryzhko I.V., Tsuraeva R.I., Drobotkovskaya N.V, Pushkareva N.D., Bardykh I.D. [Examination of influence of acquired resistance to rifampicine on stability of biological properties of Lactobacillus acidophilus BKM B-2020 D strain]. Biotekhnologia. 1996; 7:32-5.

7.Mayevskaya M.V. [Application of probiotics in gastroenterology]. Ros. Zh. Gastroenterol. Gepatol. Koloproktol. 2009; 19(6):65-72.

8. [Control methods. Biological and microbiological factors. Preregistration system for pre-clinical drug safety studies. Selection, control and storage of industrial strains, used in probiotics production. MR 4.2.2602-10. 4.2]. M.; 2010.

9. Sheveleva M.A., Ramenskaya G.V. [Modern concept of the use of various groups of probiotics in antibiotic therapy]. Antibiotik. Chimioter. 2009; 54(3-4):61-8.

10. Yankovsky D.S., Dyment G.S. [Bifidobacteria and lactobacilli as the optimal basis for modern probiotics]. Sovr. Pediatriya. 2006; 10(3):1—10.

Authors:

Kruglikov V.D. Rostov-on-Don Research Anti-Plague Institute. 117/40, M.Gor'kogo St., Rostov-on-Don, 344002, Russia. E-mail: plague@aaanet.ru

Об авторах:

Кругликов В.Д.Ростовский-на-Дону научно-исследовательский противочумный институт. 344002, Ростов-на-Дону, ул. М.Горького, 117/40. E-mail: plague@aaanet.ru

Поступила 14.03.12.