ВИРУСНАЯ ВАКЦИНА И СПОСОБЫ ЕЕ ПРОИЗВОДСТВА

1. Вирусная вакцинная композиция для профилактики инфекций, вызываемых индийским штаммом Kolar вируса японского энцефалита, содержащая вакцинный антиген, где вакцинный антиген представляет собой инактивированный штамм Kolar вируса японского энцефалита, адаптированный для роста в клетках Vero в одноразовом биореакторе для сбора живой массы вируса японского энцефалита.
2. Вакцинная композиция по п.1, где указанный вакцинный антиген выращивают в одноразовом биореакторе в клетках Vero для сбора живой массы вируса японского энцефалита и указанную вирусную массу собирают многократно (многократный сбор вируса) от по меньшей мере более чем одного раза вплоть до пяти раз или по меньшей мере три раза с одной культуры клеток Vero и после однократного инфицирования штаммом Kolar вируса японского энцефалита.
3. Вакцинная композиция по п.1, где одноразовый биореактор поддерживают с растворенным кислородом в диапазоне 50-70 м.д., диапазоном температур от 35,5 до 37,5°C при поддержании pH от 7,2 до 7,6, при встряхивании от 260 до 280 об/мин, при скорости входящего потока 80-150 мл/мин и скорости выходящего потока 84-156 мл/мин.
4. Вакцинная композиция по п.2, где полученные многократные вирусные сборы далее очищают и инактивируют посредством стадий:
(a) очистки сбора вируса с использованием 0,45-мкм мембраны для удаления клеточного дебриса из сбора вируса;
(b) концентрирования объема сбора по меньшей мере в 4 раза с использованием 300-кДа кассеты с мембраной для получения концентрированного ретентата;
(c) очистки на колонке концентрированного собранного ретентата стадии (b) с использованием матрикса на основе сульфата Celufine, где указанный матрикс состоит из матрикса с целлюлозной подложкой в присутствии сульфатного сложного эфира с активированной группой для сбора элюата, содержащего желаемый вирус, высокое количество солей клеточных белков и материал нуклеиновых кислот;
(d) диафильтрации и замена буфера с использованием 300-кДа кассеты с мембраной против фосфатно-солевого буфера элюата стадии (c) в течение по меньшей мере 5-6 раз для сбора ретентата для удаления нежелательного высокого количества солей клеточных белков и материала нуклеиновых кислот из представляющего интерес вируса для сбора очищенной концентрированной массы вируса;
(e) проведения фильтрации очищенной концентрированной вирусной массы стадии (d) через 0,45-мкм мембрану для устранения каких-либо примесей в процессе;
(f) одновременной стабилизации и инактивации очищенного вируса стадии (e) формалином в соотношении от 1:1500 до 1:2500 об./об. (т.е. на 2500 объемов живого JE добавляют 1 объем формалина) вместе со стабилизаторами, где указанные стабилизаторы состоят из глицина и сорбита, в течение 7 суток при 22°C или с бета-пропиолактоном в соотношении от 1:1500 до 1:2500 об./об. (т.е. на 2500 объемов живого JE добавляют 1 объем формалина) вместе со стабилизаторами, где указанные стабилизаторы состоят из глицина и сорбита, в течение 7 суток при 5°C±3°C;
(g) диафильтрации и замены буфера инактивированной очищенной вирусной массы стадии (f) с использованием 300-кДа кассеты с мембраной против фосфатно-солевого буфера по меньшей мере 5-6 раз для удаления только формалина в случае инактивации формалином;
(h) фильтрации через 0,22-мкм мембрану очищенной инактивированной вирусной массы стадии (g) для получения конечной и стабилизированной массы JEV при 5°C±3°C в течение по меньшей мере от 24 до 36 месяцев, свободной от каких-либо примесей, пригодной для составления вакцины против японского энцефалита.
5. Вакцинная композиция по п.2, где полученные многократные вирусные сборы далее очищают и инактивируют посредством стадий:
(a) очистки сбора вируса с использованием 0,45-мкм мембраны для удаления клеточного дебриса из сбора вируса;
(b) очистки на колонке с использованием комбинированной эксклюзионной и аффинной хроматографии с матриксом Capto Core-700, где указанный матрикс состоит из в высокой степени сшитого агарозного матрикса с функциональной активной лигандной октиламиновой группой для сбора прошедшей фракции, содержащей очищенный вирус;
(c) концентрирования и диафильтрации прошедшей фракции стадии (b) с использованием 300-кДа кассет с мембранами с получением очищенной концентрированной вирусной массы;
(d) проведения фильтрации очищенной концентрированной вирусной массы стадии (с) через 0,45-мкм мембрану для устранения каких-либо примесей в процессе;
(e) одновременной стабилизации и инактивации очищенного вируса стадии (d) формалином в соотношении от 1:1500 до 1:2500 об./об. (т.е. на 2500 объемов живого JE добавляют 1 объем формалина) вместе со стабилизаторами, где указанные стабилизаторы состоят из глицина и сорбита, в течение 7 суток при 22°C или с бета-пропиолактоном в соотношении от 1:1500 до 1:2500 об./об. (т.е. на 2500 объемов живого JE добавляют 1 объем формалина) вместе со стабилизаторами, где указанные стабилизаторы состоят из глицина и сорбита, в течение 7 суток при 5°C±3°C;
(f) диафильтрации и замены буфера инактивированной очищенной вирусной массы стадии (e) с использованием 300-кДа кассеты с мембраной против фосфатно-солевого буфера по меньшей мере 5-6 раз для удаления только формалина в случае инактивации формалином;
(g) фильтрации через 0,22-мкм мембрану очищенной инактивированной вирусной массы стадии (f) для получения конечной и стабилизированной инактивированной массы JEV при 5°C±3°C в течение по меньшей мере от 24 до 36 месяцев, свободной от каких-либо примесей, пригодной для составления вакцины против японского энцефалита.
6. Способ адаптации штамма Kolar вируса японского энцефалита к клеткам Vero, способных к промышленному продуцированию в одноразовом биореакторе, для сбора живой массы вируса японского энцефалита и указанную вирусную массу собирают многократно (многократный сбор вируса) от по меньшей мере более чем одного вплоть до пяти раз или по меньшей мере три раза с одной культуры клеток Vero и при однократном инфицировании штаммом Kolar вируса японского энцефалита.
7. Способ по п.6, где многократный сбор вируса массы вируса японского энцефалита масштабируют от партий лабораторного масштаба в одноразовом биореакторе размером, эквивалентным 4 клеточным фабрикам, для продуцирования размера партий в одноразовом биореакторе размером, эквивалентным приблизительно 200 клеточным фабрикам.
8. Способ по п.6 и 7, где одноразовый биореактор поддерживают с растворенным кислородом в диапазоне 50-70 м.д., диапазоном температур от 35,5 до 37,5°C при поддержании pH от 7,2 до 7,6, при встряхивании от 260 до 280 об./мин, при скорости входящего потока 80-150 мл/мин и скорости выходящего потока 84-156 мл/мин.
9. Способ по п.7, где многократные сборы массы вируса японского энцефалита получают по меньшей мере три раза в одноразовом биореакторе размером, эквивалентным приблизительно 200 клеточным фабрикам, в течение по меньшей мере 35-40 суток.
10. Способ одновременной очистки и инактивации сбора массы вируса японского энцефалита по п.7, включающий стадии:
(a) очистки сбора вируса с использованием 0,45-мкм мембраны для удаления клеточного дебриса из сбора вируса;
(b) концентрирования объема сбора по меньшей мере в 4 раза с использованием 300-кДа кассеты с мембраной для получения концентрированного ретентата;
(c) очистки на колонке концентрированного собранного ретентата стадии (b) с использованием матрикса на основе сульфата Celufine, где указанный матрикс состоит из матрикса с целлюлозной подложкой в присутствии сульфатного сложного эфира с активированной группой для сбора элюата, содержащего желаемый вирус, высокое количество солей клеточных белков и материал нуклеиновых кислот;
(d) диафильтрации и замены буфера с использованием 300-кДа кассеты с мембраной против фосфатно-солевого буфера элюата стадии (c) в течение по меньшей мере 5-6 раз для сбора ретентата для удаления нежелательного высокого количества солей клеточных белков и материала нуклеиновых кислот из представляющего интерес вируса для сбора очищенной концентрированной массы вируса;
(e) проведения фильтрации очищенной концентрированной вирусной массы стадии (d) через 0,45-мкм мембрану для устранения каких-либо примесей в процессе;
(f) одновременной стабилизации и инактивации очищенного вируса стадии (e) формалином в соотношении от 1:1500 до 1:2500 об./об. (т.е. на 2500 объемов живого JE добавляют 1 объем формалина) вместе со стабилизаторами, где указанные стабилизаторы состоят из глицина и сорбита, в течение 7 суток при 22°C или с бета-пропиолактоном в соотношении от 1:1500 до 1:2500 об./об. (т.е. на 2500 объемов живого JE добавляют 1 объем формалина) вместе со стабилизаторами, где указанные стабилизаторы состоят из глицина и сорбита, в течение 7 суток при 5°C±3°C;
(g) диафильтрации и замены буфера инактивированной очищенной вирусной массы стадии (f) с использованием 300-кДа кассеты с мембраной против фосфатно-солевого буфера по меньшей мере 5-6 раз для удаления только формалина в случае инактивации формалином;
(h) фильтрации через 0,22-мкм мембрану очищенной инактивированной вирусной массы стадии (g) для получения конечной и стабилизированной массы JEV при 5°C±3°C в течение по меньшей мере от 24 до 36 месяцев, свободной от каких-либо примесей, пригодной для составления вакцины против японского энцефалита.
11. Способ одновременной очистки и инактивации сбора вируса массы вируса японского энцефалита по п.7, включающий стадии:
(a) очистки сбора вируса с использованием 0,45-мкм мембраны для удаления клеточного дебриса из сбора вируса;
(b) очистки на колонке с использованием комбинированной эксклюзионной и аффинной хроматографии с матриксом Capto Core-700, где указанный матрикс состоит из в высокой степени сшитого агарозного матрикса с функциональной активной лигандной октиламиновой группой для сбора прошедшей фракции, содержащей очищенный вирус;
(c) концентрирования и диафильтрации прошедшей фракции стадии (b) с использованием 300-кДа кассет с мембранами с получением очищенной концентрированной вирусной массы;
(d) проведения фильтрации очищенной концентрированной вирусной массы стадии (с) через 0,45-мкм мембрану для устранения каких-либо примесей в процессе;
(e) одновременной стабилизации и инактивации очищенного вируса стадии (d) формалином в соотношении от 1:1500 до 1:2500 об./об. (т.е. на 2500 объемов живого JE добавляют 1 объем формалина) вместе со стабилизаторами, где указанные стабилизаторы состоят из глицина и сорбита, в течение  7 суток при 22°C, или с бета-пропиолактоном в соотношении от 1:1500 об./об. до 1:2500 об./об. (т.е. на 2500 объемов живого JE добавляют 1 объем формалина) вместе со стабилизаторами, где указанные стабилизаторы состоят из глицина и сорбита, в течение 7 суток при 5°C±3°C;
(f) диафильтрации и замены буфера инактивированной очищенной вирусной массы стадии (e) с использованием 300-кДа кассеты с мембраной против фосфатно-солевого буфера по меньшей мере 5-6 раз для удаления только формалина в случае инактивации формалином;
(g) фильтрации через 0,22-мкм мембрану очищенной инактивированной вирусной массы стадии (f) для получения конечной и стабилизированной инактивированной массы JEV при 5°C±3°C в течение по меньшей мере от 24 до 36 месяцев, свободной от каких-либо примесей, пригодной для составления вакцины против японского энцефалита.
12. Способ увеличения коммерческой продукции очищенной инактивированной массы JEV размером в одну партию очищенной инактивированной массы вируса японского энцефалита (JEV) в одноразовом биореакторе вплоть до по меньшей мере от 8 до 10 раз с использованием комбинированной эксклюзионной и аффинной хроматографии с матриксом Capto Core-700, где указанный матрикс состоит из в высокой степени сшитого агарозного матрикса с функциональной активной лигандной октиламиновой группой, в течение 35-40 суток, по сравнению с очищенной инактивированной массой JEV, полученной при коммерческой продукции размером в одну партию JEV в 30 клеточных фабриках в течение того же времени - 35-40 суток.