Филогенетический анализ вируса ЕСНО6 - возбудителя серозного менингита на территории г. Екатеринбурга и Свердловской области в период с 2005 по 2012 гг

сентябрь №9 (246) ЗНиСО

35

гитом продолжалось и в 2012 г. Ассоциация вирусов К4 и Е6 составила 30 % от всех случаев выделенных ассоциированных энтеровирусов. Спектр выявленных ассоциаций включал КВ1+КВ4, КВ1+КВ3, КВ4+КВ5, КВ4+Е17, КВ2. КВ4, КВ5, Е6, Е17, энтеровирус 71 (см. таблицу).

Наиболее значимыми в эпидемическом процессе в последние годы оставались вирусы Коксаки группы В. С 2010 г. отмечена активная циркуляция энтеровируса 71 типа. Рост количества нетипированных и ассоциированных вирусов свидетельствует о сложных процессах, происходящих в популяции энтеровирусов, циркулирующих среди населения.

Выводы.

1. Эпидемический процесс серозного менингита обусловлен широким спектром циркулирующих вирусов с увеличением доли смешанного инфицирования детей в последние годы. Это свидетельствует о гетерогенности вирусной популяции и новых взаимодействиях в системе вирус-хозяин.

2. На фоне снижения заболеваемости серозным менингитом у детей младшего возраста, отмечен ее рост у детей 7—14 лет и взрослых.

3. В 2010—2012 гг. выявлен расширенный спектр изолятов Коксаки В вирусов. В сезонный подъем заболеваемости доминировал вирус

Коксаки В в ассоциации с эпидемически значимым серотипом ЕСНО 6.

4. Раздельная регистрация диагностированных случаев энтеровирусной инфекции и вирусного менингита может быть конструктивной, если при вирусном менингите клинические критерии будут дополнены поиском вероятных возбудителей, поражающих ЦНС в виде синдрома серозного менингита.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Беседина Л.Г., Субботина Н.С., Сбитнева Н.Н., Бейкин Я.Б. Особенности циркуляции энтеровирусов в г. Екатеринбурге (1992—2005) //Уральский мед. журнал. 2006. №11. С. 19—22.

2. Слободенюк В.К., Глинских Н.П., Григорьева Ю.В. и др. Эпидемический процесс, ассоциированный с энтеровирусами //Вестник УГМА. 2006. Вып. 15. С. 63—65.

3. Фисенко Е.Г., Амвросьева Т. В., Полонская Н.В. Безручко А.А. Особенности проявления эпидемиологического процесса эн-теровирусной инфекции в Минске //Эпидем. и инфекц. болезни. 2007. № 2. С. 8—11.

4. Antona D., Leveque N., Dobrou S. et al. Surveilance des enterovirus en France metropolitaine, 2000—2004 //Bull. epidemiol. hebdomad. 2005, № 39-40. P. 200—202.

Контактная информация:

Бессергенева Ирина Константиновна, тел.: 8 (953) 006-17-10,

е-mail: bessergeneva_ik_16@66.rospotrebnadzor. ru

Contact Information:

Bessergeneva Irina, phone: 8 (953) 006-17-10,

е-mail: bessergeneva_ik_16@66.rospotrebnadzor. ru

-V-

ФИЛОГЕНЕТИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ ВИРУСА ЕСНО6 - ВОЗБУДИТЕЛЯ СЕРОЗНОГО МЕНИНГИТА НА ТЕРРИТОРИИ Г. ЕКАТЕРИНБУРГА И СВЕРДЛОВСКОЙ ОБЛАСТИ В ПЕРИОД С 2005 ПО 2012 ГГ.

А.В. Устюжанин1, А.В. Резайкин1, Т.Э. Снитковская2, С.В.Скрябина2, А.Г.Сергеев1

PHYLOGENETIC ANALYSIS OF ЕСНО6 VIRUSES ASSOCIATED WITH ASEPTIC MENINGITIS IN YEKATERINBURG AND THE SVERDLOVSK REGION DURING 2005-2012

A.V. Ustyuzhanin, A.V. Rezaykin, T.E. Snitkovskaya, S.V. Scryabina, A.G. Sergeev 'ГБОУ ВПО «Уральская государственная медицинская академия» Минздрава России, г. Екатеринбург; 2ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в Свердловской области», Управление Роспотребнадзора по Свердловской области, г. Екатеринбург Проведен филогенетический анализ нуклеотидных последовательностей, кодирующих белки VP1 и VP2 у 111 штаммов вируса ЕСНО6, изолированных в период с 2005 по 2012 гг. от больных серозным менингитом из Свердловской и Челябинской областей, и от клинически здоровых детей. Установлено, что на территории Свердловской области в течение 8 лет наблюдения регистрируется циркуляция эндемичного субварианта вируса ЕСНО6, вызывающего в отдельные годы эпидемические вспышки, сезонные подъемы заболеваемости и спорадические случаи заболевания серозным менингитом. Ключевые слова: ЕСНО6, филогенетический анализ, серозный менингит.

Phylogenetic analysis of the nucleotide sequences encoding the VP1 and VP2 proteins were performed in 111 strains ЕСНО6. The strains isolated in the period from 2005 to 2012 from patients with serous meningitis from the Sverdlovsk and Chelyabinsk regions and from clinically healthy children Ekaterinburg. Endemic subvariants ЕС-НО6 virus circulates in the Sverdlovsk region for 8 years. ЕСНО6 strain caused in some years, epidemic outbreaks, seasonal rises morbidity and sporadic cases of serous meningitis. Keywords: ЕСНО6, phylogenetic analysis, serous meningitis.

Вирус ЕСНО6 (ЕУ6) является одним из широко циркулирующих энтеровирусов, вызывающих периодические эпидемические подъемы заболеваемости, в основном серозным менингитом, как на территории России, так и в других странах [1]. За последние 15 лет на территории Свердловской области были зарегистрированы 5 крупных эпидемических вспышек энтеровирус-ной инфекции, из которых 3 были вызваны ЕУ6 (Красноуфимск, 1998 г., Североуральск, 2005 г., Алапаевск, 2006 г.). По данным многолетних наблюдений, в межэпидемический период заболеваемость энтеровирусными инфекциями (ЭВИ) в

Свердловской области составляла 3—4 случая на 100 тыс. населения, тогда как во время вспышек наиболее высокий показатель заболеваемости (Алапаевск, 2006 г.) достигал 203 [2]. В этиологии спорадических случаев заболевания серозным менингитом в 2000—2007 гг. на территории области доминировали вирусы Коксаки группы В, а с 2008 г. — вирусы ЕСНО. Вирус ЕСНО6 вновь был выделен от больных серозным менингитом в 2008 г. и в последующие годы его удельный вес среди возбудителей серозного менингита постепенно нарастал, в 2012 г. данный серотип стал доминирующим среди штаммов энтеровирусов,

36

ЗНиСО сентябрь №9

Таблица. Происхождение анализируемых штаммов вируса ЕСНО6

Год Рег. № Диагноз Материал Город/область Кол-во

2005 206 СМ Фекалии Екатеринбург 1

16 СМ Фекалии Свердловская обл. 1

199 СМ Фекалии Свердловская обл. 1

2006 28 СМ Ликвор Свердловская обл. 1

05 СМ Фекалии Свердловская обл. 1

49 СМ Фекалии Свердловская обл. 1

2007 198 Здоровый Фекалии Екатеринбург 1

328 СМ Ликвор Свердловская обл. 1

2008 7,9 СМ Ликвор Екатеринбург 2

2011 5,17,23 СМ Ликвор Екатеринбург 3

580 Здоровый Фекалии Екатеринбург 1

2012 8—748 СМ Ликвор Екатеринбург 70

539, 542, 545 СМ Ликвор Свердловская обл. 3

64—94 СМ Ликвор Челябинская обл. 11

1688—1998 Здоровый Фекалии Екатеринбург 13

Всего 111

СМ — серозный менингит

выделенных как от больных серозным менингитом (33 %), так и от клинически здоровых детей г. Екатеринбурга (47 %) [3].

По данным ряда исследователей, для EV6 свойственна генетическая гетерогенность и последовательная смена вариантов вируса на определенной территории [1]. В связи с высокой эпидемиологической значимостью EV6 для Свердловской области представляется актуальным изучение филогенетических связей штаммов, циркулирующих в текущий период с выделенными от больных во время эпидемических подъемов заболеваемости серозным менингитом и оценка степени их генетической изменчивости.

Цель исследования: проведение анализа филогенетических связей штаммов вируса ЕСНО6, выделенных на территории Свердловской области в период с 2005 по 2012 гг.

Материалы и методы. Исследовано 111 штаммов вируса ЕСНО6, изолированных от больных серозным менингитом из Свердловской обл. (85 проб), Челябинской обл. (11 проб), а также от 15 клинически здоровых детей г. Екатеринбурга в период с 2005 по 2012 гг. (см. таблицу).

Выделение вирусной РНК проводили методом сорбции на силикагелевом носителе. Для проведения реакции обратной транскрипции использовали ревертазу M-MLV и гексануклео-тидные праймеры со случайной последовательностью нуклеотидов. Наличие энтеровирусной РНК в пробе подтверждали с помощью полиме-разной цепной реакции (комплекты реагентов «РИБО-сорб», «PEBEPTA-L-100», «АмплиСенс Энтеровирус-207» производства ФГУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора, Москва). Молекулярно-эпидемиологический анализ проводили путем сравнения последовательностей участков генома, кодирующих белки VP1 и VP2 [4]. Определение первичной структуры выбранных участков генома осуществляли на генетическом анализаторе ABI Prism 310 по описанной

ранее методике [3].Для выравнивания полученных нуклеотидных последовательностей и филогенетического анализа использовали программное обеспечение MEGA 5.05 .

Филограммы были построены по алгоритму «ближайшего соседа» (Neighbor-Joining). Расчет эволюционных дистанций между последовательностями производили согласно двух-параметрической модели М. Кимуры (Kimura 2-parameter). Достоверность топологии фило-грамм оценивали методом повторных выборок на основании анализа 1 000 псевдореплик. Достоверными считали построения при индексе поддержки не менее 70 %. Для определения филогенетических связей с ранее описанными штаммами использовали референтные нуклео-тидные последовательности вируса ЕСНО6, представленные в базе данных GenBank (EF397641, EF397642, EF397646, EF397649, EF397657, EF397653, HQ674746, AB688666, HQ674748).

Результаты и их обсуждение. В результате проведенного филогенетического анализа установлено, что большинство штаммов EV6, выделенных от больных серозным менингитом в 2005, 2006, 2011 и 2012 гг., а также от клинически здоровых детей в 2012 г., имели общее происхождение (кластер I), что свидетельствует о длительной циркуляции данного субварианта на территории Свердловской области (рис. 1).

Штаммы аналогичного происхождения были выделены в 2012 г. от больных серозным менингитом на территории, сопредельной Челябинской области (рис. 2).

Несколько штаммов, выделенных от больных серозным менингитом в 2008, 2011 и 2012 гг., имели иное происхождение. Следует отметить, что наряду со штаммами, объединенными в кластер II и имеющими генетическое родство с вариантом EV6, выделенном на сопредельной территории (EF397646 Тюмень, 2006 г.), были

сентябрь №9 (246) ЗНиСО

37

Рис. 1. Филогенетические взаимоотношения штаммов ЕСНО6 в области генома УР1, выделенных от больных серозным менингитом и здоровых детей на территории Свердловской области в 2005—2012 гг. Зд. — здоровые,СМ — серозный менингит

Рис. 2. Филогенетические взаимоотношения штаммов ЕСНО6 в области генома УР2, выделенных от больных серозным менингитом и здоровых детей на территории Свердловской области (2005—2012 гг.) и от больных серозным менингитом из Челябинской области (2012 г.). Зд. — здоровые,СМ — серозный менингит

38

ЗНиСО сентябрь №9

идентифицированы субварианты (штаммы 7 Екатеринбург, 2008 г. и 9 Екатеринбург, 2008 г.), достоверно не кластеризующиеся с описанными ранее штаммами, выделенными на территории Российской Федерации.

Полученные результаты позволяют сделать заключение о том, что подавляющее большинство случаев заболевания серозным менингитом на территории Свердловской области, ассоциированных с ЕУ6, в течение срока наблюдения было вызвано эндемичными близкородственными штаммами.

По данным А.Н. Лукашева и соавт. [3], характерной особенностью ЕУ6 является высокая изменчивость, в результате которой степень отличия нуклеотидных последовательностей штаммов, выделенных на одной территории с интервалом около 3 месяцев значительно выше, чем у штаммов, изолированных в разных частях света.

Полученные результаты сопоставления нукле-отидных последовательностей участков генома, кодирующих структурные белки УР1 и УР2 у эндемичных штаммов, циркулировавших на территории Свердловской области в 2005—2012 гг., напротив, свидетельствуют об их сравнительно низкой изменчивости. Так, штаммы, изолированные от больных серозным менингитом с интервалом в один год (№ 16, г. Североуральск Свердловской области, 2005 г. и № ЕБ397649, г. Екатеринбург, 2006 г.), имели практически идентичные нуклео-тидные последовательности исследованной области генома, а степень различия нуклеотидных последовательностей штаммов, выделенных в 2005 и 2012 гг., составляла 5 %.

Выводы. На территории Свердловской области в течение 8 лет наблюдения регистрируется циркуляция эндемичного субварианта вируса ЕСНО6, вызывавшего в отдельные годы эпидемические вспышки (2005—2006 гг.), сезонные подъемы заболеваемости (2011—2012 гг.) и спорадические случаи заболевания серозным менингитом (2009—2010 гг.).

Результаты сопоставления нуклеотидных последовательностей участков генома, кодирующих структурные белки VP1 и VP2 у эндемичных штаммов, циркулировавших на территории Свердловской области в 2005—2012 гг., свидетельствуют об их сравнительно низкой изменчивости.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Лукашев А.Н., Резник В.И., Иванова О.Е. и соавт. / Молекулярная эпидемиология вируса ECHO 6 — возбудителя вспышки серозного менингита в Хабаровске в 2006 г. //Вопросы вирусологии. 2008. Т. 53. №1. С. 16—21.

2. Снитковская Т. Э., Скрябина С. В. Характеристика энтеро-вирусных инфекций в Свердловской области // Уральский медицинский журнал. 2008. № 8. С. 146—149.

3. Устюжанин А.В., Резайкин А.В., Снитковская Т.Э. и др. Анализ филогенетических связей энтеровирусов, выделенных от больных серозным менингитом в г. Екатеринбурге и Свердловской области в 2008 г. //Уральский медицинский журнал. 2011. № 13. С. 19—24.

4. Casas I., Palacios G.F., Trallero G. et al. Molecular characterization of human enteroviruses in clinical samples: comparison between VP2, VP1, and RNA polymerase regions using RT nested PCR assays and direct sequencing of products //Journal of Medical Virology. 2002, Vol. 65. P. 138—148.

Контактная информация:

Устюжанин Александр Владимирович, тел.: 8 (908) 924-94-19, e-mail: ust103@yandex.ru

Contakt Information:

Ustyuzhanin Alexander, рhone: 8 (908) 924-94-19, e-mail: ust103@yandex.ru

-

РАСПРОСТРАНЕННОСТЬ РЕЦИДИВОВ ПНЕВМОЦИСТНОЙ ПНЕВМОНИИ СРЕДИ ВИЧ-ИНФИЦИРОВАННЫХ ПОТРЕБИТЕЛЕЙ ВНУТРИВЕННЫХ НАРКОТИЧЕСКИХ СРЕДСТВ

В.В. Белоусов, В.М. Борзунов, П.Л. Кузнецов, В.К. Веревщиков

PREVALENCE OF RECURRENCE OF PNEUMOCYSTIS PNEUMONIA AMONG HIV-INFECTED OF CONSUMERS OF INTRAVENOUS DRUGS

V.V. Belousov, V.M. Borzunov, P.L. Kuznetsov, V.K. Verevschikov ГБОУ ВПО «Уральская государственная медицинская академия» Минздрава России, г. Екатеринбург

Определено влияние статуса потребителя внутривенных наркотиков на распространенность рецидивов пневмоцистной пневмонии. В результате выявлено значительное увеличение числа рецидивов среди ВИЧ-инфицированных потребителей инъекционных наркотиков. Высокая частота осложнений свидетельствует о невозможности ранней отмены профилактики пневмоцистной пневмонии ТМП-СМЗ. Ключевые слова: пневмоцистная пневмония, ВИЧ-инфицированные.

The aim of the study was to determine the effect of intravenous drug user status on the prevalence of recurrence of PCP. The result showed a significant increase in the number of relapses among HIV-infected injection drug users. The high rate of complications indicates also the impossibility of an early withdrawal of PCP prophylaxis TMP-SMZ.

Keywords: Pneumocystis pneumonia, trimethoprim-sulfamethoxazole, HIV-infected.

Несмотря на успехи в лечении и профилактике пневмоцистной пневмонии (ПП), связанные с внедрением высокоактивной антиретровирус-ной терапии, первичной и вторичной профилактики ПП, пониманием роли здоровых носителей Pneumocystis jirovecii, пневмоцистная пневмония остается одной из ведущих причин госпитализации среди ВИЧ-инфицированных пациентов в стадии СПИД [3]. Заболеваемость ПП среди ВИЧ-инфицированных в настоящее вре-

мя составляет 0,3 на 100 ВИЧ-инфицированных в год [3].

Одним из важных компонентов профилактики ПП является вторичная профилактика триметопримом - сульфаметоксазолом (ТМП-СМЗ) в дозе 1 таблетка (480 мг) в сутки [1]. Длительность назначения профилактики в настоящее время активно обсуждается, и в связи с этим появляется все больше рекомендаций о ранней отмене ТМП-СМЗ [4]. Тем не менее ряд авторов