СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ МЕМБРАННОГО БЕЛКА

1. Способ получения мембранного белка, включающий следующие стадии:
a. экспрессирование мембранного белка в организме хозяина, присутствующем в водной среде,
b. высвобождение мембранного белка из организма-хозяина,
c. добавление раствора детергента для солюбилизации мембранного белка,
d. выделение жидкой фракции солюбилизированного мембранного белка в виде супернатанта при центрифугировании,
e. проведение хроматографии жидкой фракции для связывания или удержания мембранного белка на неподвижной фазе и
f. элюирование мембранного белка из неподвижной фазы элюирующим буфером,
причем центрифугирование на стадии d проводится при от 500 g до 30000 g.
2. Способ по п. 1, при этом водная среда, содержащая организм хозяина из стадии a, фильтруется перед высвобождением организма хозяина на стадии b.
3. Способ по п. 2, при этом водная среда, содержащая организм хозяина из стадии a, фильтруется через микрофильтрационную мембрану с диаметром пор 0,5 мкм или меньше.
4. Способ по любому из пп. 1-3, при этом организм хозяина выделяют, необязательно после фильтрования, путем центрифугирования водной среды, содержащей организм хозяина.
5. Способ по любому из пп. 1-4, при этом центрифугирование проводится при от 500 g до 30000 g, предпочтительно при от 1000 g до 10000 g.
6. Способ по любому из пп. 1-5, при этом выделенный организм хозяина промывают изотоническим солевым раствором для растворения примесных солей, а затем центрифугируют для выделения промытого организма хозяина.
7. Способ по любому из пп. 1-6, при этом перед стадией b добавляется буфер для разведения.
8. Способ по любому из пп. 1-7, при этом для высвобождения мембранного белка из организма хозяина добавляют водный лизирующий раствор.
9. Способ по любому из пп. 1-8, при этом водный лизирующий буфер представляет собой раствор детергента, который одновременно солюбилизирует мембранный белок.
10. Способ по любому из пп. 1-9, при этом клетки хозяина подвергают воздействию детергента с перемешиванием.
11. Способ по любому из пп. 1-7, при этом высвобождение мембранного белка из клеток хозяина проводится при помощи гомогенизатора.
12. Способ по любому из пп. 1-11, при этом к высвобожденному мембранному белку добавляют катионный флокулянт для образования суспензии.
13. Способ по любому из пп. 1-12, при этом катионным флокулянтом является полиаминное соединение типа Superfloc C581.
14. Способ по любому из пп. 1-13, при этом катионный флокулянт оставляют реагировать с клеточным содержимым суспензии с осторожным перемешиванием для образования хлопьев.
15. Способ по любому из пп. 1-14, при этом жидкую фракцию из стадии d извлекают в виде супернатанта от центрифугирования суспензии, содержащей хлопья.
16. Способ по любому из пп. 1-7, при этом жидкую фракцию из стадии d извлекают из ресуспендированной твердой фракции, причем твердую фракцию ресуспендируют в растворе детергента для солюбилизации мембранного белка.
17. Способ по п. 16, при этом жидкую фракцию из стадии d собирают в виде супернатанта при центрифугировании.
18. Способ по любому из пп. 1-17, при этом детергент выбран из группы, состоящей из N-оксида лаурилдиметиламина (LDAO), октилглюкозида (OG), додецилмальтозида (DDM) либо их комбинаций.
19. Способ по любому из пп. 1-18, при этом центрифугирование проводится при от 500 g до 30000 g, предпочтительно от 1000 g до 10000 g.
20. Способ по любому из пп. 1-19, при этом неподвижная фаза, способная связывать или удерживать мембранный белок, находится в колонке.
21. Способ по любому из пп. 1-20, при этом мембранный белок связывается с первой частью аффинной пары, а неподвижная фаза связывается со второй частью аффинной пары.
22. Способ по любому из пп. 1-21, при этом первая часть аффинной пары представляет собой гистидиновую метку.
23. Способ по любому из пп. 1-22, при этом гистидиновая метка содержит 8 или больше молекул гистидина.
24. Способ по любому из пп. 1-23, при этом элюирующий буфер содержит имидазол.
25. Способ по любому из пп. 1-24, при этом колонку перед пропусканием элюирующего буфера промывают промывочным буфером, содержащим имидазол в концентрации, составляющей 40% или менее, в элюирующем буфере.
26. Способ по любому из пп. 1-25, при этом концентрация имидазола в элюирующем буфере составляет 400 мМ или более.