Изучение нефропротекторного действия травы рапса обыкновенного

9. Role of ATP in the ROS-mediated laryngeal airway hyperreactivity induced by laryngeal acid-pepsin insult in anesthetized rats / T.L. Tsai, S.Y. Chang, C.Y. Ho et al. // J. Appl. Physiol. - 2009. - № 106 (5). -P. 1584-1592.

10. Burnstock G. Historical review: ATP as a neurotransmitter / G. Burnstock // Trends Pharmacol. Sci. - 2006. - V.27. - № 3. -P. 166-176.

11. Altered cytokine production in mice lacking P2X7 receptors / M. Solle, J. Labasi, D. Perregaux et al. // J. Biol. Chem. - 2001. - V. 276. -P. 125-132.

УДК 615.322'254:582.683.2].036:616-092.9 © А.Ю. Терехов, 2011

А.Ю. Терехов

ИЗУЧЕНИЕ НЕФРОПРОТЕКТОРНОГО ДЕЙСТВИЯ ТРАВЫ РАПСА ОБЫКНОВЕННОГО

ГБОУВПО «Пятигорская государственная фармацевтическая академия» Минздравсоцразвития России, г. Пятигорск

Проведено изучение нефропротекторного действия сухого экстракта из травы рапса обыкновенного в условиях экспериментальной сулемовой нефропатии (разовое внутрибрюшинное введение сулемы в дозе 2,0 мг/кг) в сравнении с офици-нальным нефропротектором леспефланом. Эффективность действия оценивали по нормализации показателей функционального состояния почек: содержание в крови мочевины, креатинина, глюкозы, ТБК-активных продуктов в крови и почках, диеновых конъюгатов, нуклеиновых кислот, белка в гомогенате почек. Оценивали интенсивность диуреза, выраженность гликозурии и протеинурии. Установили, что экстракт рапса в условиях острой токсической нефропатии уменьшает проявление гиперазотемии, снижает интенсивность перекисного окисления липидов, нормализует уровень белкового обмена в почках, оказывает положительное влияние на диурез и состав мочи. По сумме показателей, используемых для оценки выраженности защитного действия объектов, эффективность экстракта рапса выше препарата сравнения леспефлана.

Ключевые слова: рапс обыкновенный, нефропротекторное действие, токсическое поражение почек.

A.Yu. Terekhov

STUDY OF RAPE PLANT NEPHROPROTEC TIVE ACTION

The article relates to the study of the nephroprotective action of rape herb dry extract in experimental mercuric chloride-induced nephropathy models (single intraperitoneal introduction of 2 mg/kg of mercuric chloride), as compared to the effect of officinal nephroprotector lespephlane. The therapeutic efficacy was estimated based on kidneys function indices normalization: the level of blood urea, creatinine and glucose, TBA-active products in the blood and kidneys, diene conjugates, nucleic acids, protein content in kidney homogenate. Diuresis rate, glucosuria and proteinuria intensity were assessed. Rape plant extract was found to decrease hyperazotemia intensity in acute toxic nephropathy, to reduce lipid peroxidation rate, to normalize protein metabolism level in kidneys, to have a positive effect on diuresis and urine composition. According to the cumulative findings used for protective action intensity estimation, rape plant extract effectiveness was higher than that of lespephlane.

Key words: rape plant, nephroprotective action, toxic kidney injury.

Несмотря на большой арсенал этио-тропных и симптоматических средств, используемых для терапии заболеваний мочевыделительной системы, применение комплексных препаратов растительного происхождения, сочетающих высокую активность и низкую токсичность даже при длительном применении, не потеряло своей актуальности. Биологически активные соединения растительного происхождения соответствуют ряду требований, предъявляемых к нефропротек-торам: отсутствие нефротоксичности; наличие диуретической, антигипоксической и антиок-сидантной активности, противовоспалительных, ангиопротекторных и мембранопротекторных свойств; эффективность при использовании при нефропатиях различной этиологии. Перспективным в этом отношении сырьем является растение семейства Вга88юасеае (Крестоцветные) - рапс обыкновенный (Втаи-sica парш Ь.).

Цель нашего исследования - изучение нефропротекторных свойств суммарного извлечения (сухой экстракт) из надземной части рапса обыкновенного.

Материал и методы

Экстракцию сырья проводили 70% этиловым спиртом в соотношении 1:10 в течение 40 минут двукратно (метод дигестии). Затем извлечение упаривали под вакуумом и высушивали при температуре 60 С до сухого состояния. В качестве сырья использовали высушенную в сушилках с искусственным обогревом при температуре 40-5 0°С траву рапса обыкновенного, заготовленную в период цветения на территории Ставропольского края.

Нефропротекторное действие растительных экстрактов изучали на крысах-самках линии *^81аг массой 170-210 г на модели острого отравления дихлоридом ртути (сулема). Экспериментальную патологию воспроизводили путем однократного внутрибрюшинного введения сулемы в дозе 2,0 мг/кг [2]. Исследуемые экстракты вводили перорально за 7 дней до сулемы и затем на фоне воспроизведения острого токсического поражения почек в эффективной дозе, установленной ранее при предварительном скрининге [2] - 200 мг/кг. Забой животных проводили путем декапита-ции на 6-е сутки после инъекции дихлорида

ртути. В качестве препарата сравнения использовали деалкоголизированный леспефлан в дозе 5 мл/кг [2]. Контрольным животным вводили эквивалентные объемы растворителя.

Эффективность нефрозащитного действия оценивали по нормализации показателей функционального состояния почек. Содержание мочевины в крови определяли уреазным методом, креатинина методом Яффе с использованием стандартных наборов «ЬаСЬеша» и «Ольвекс Диагностикум» [1]. Определение содержания ТБК-активных продуктов в крови проводили по реакции с тиобарбитуровой кислотой, а глюкозы - ферментативным методом с использованием диагностического набора «Агат-Мед» [1,5], а в почках за основу был взят метод Ohkawa и соавт. [5], разработанный для гомогенатов ткани. Для оценки количества диеновых конъюгатов (ДК) ацил-гидроперекисей жирных кислот в гомогенатах почек использовали метод [3]. Количество нуклеиновых кислот (НК) и белка в почках устанавливали спектрофотометрически при 270 и 290 нм и 260 и 280 нм соответственно. Статистическую обработку результатов проводили с помощью критерия Стьюдента.

Результаты и обсуждение

Как видно из данных, представленных в табл. 1, введение раствора сулемы привело к развитию острого токсического поражения почек, сопровождающегося выраженной гиперазотемией (увеличение в крови концентрации мочевины и креатинина на 579% и 243% соответственно), стимуляцией интенсивности процессов пероксидации (рост концентрации первичных и вторичных продуктов перекисного окисления липидов (ПОЛ)) и формированием острой воспалительной реакции в почках (достоверное увеличение по сравнению с интактной группой значения весового индекса почек (ВИП)). Кроме того, у

животных контрольной группы отмечали снижение содержания в почках белка на 70%, НК на 37% и концентрации глюкозы в крови на 31% по отношению к показателям интакт-ных животных.

При использовании экстракта рапса (табл. 1) в дозе 200 мг/кг на фоне экспериментальной нефропатии наблюдались достоверное уменьшение значения ВИП, снижение в крови по сравнению с контролем уровня мочевины на 89%, креатинина на 70%, содержания ТБК-активных продуктов крови и почек на 86% и 53% соответственно, ДК на 48%, увеличение содержания в почках белка на 295%, НК на 83%. При этом, такие показатели как содержание мочевины, креатинина, глюкозы в крови, уровень ТБК-активных продуктов, ДК, белка и НК в печени, полностью нормализовались, так как достоверно не отличались от значений здоровых животных, а концентрация ТБК-активных продуктов оказалась даже ниже данного показателя у ин-тактных животных на 83%. Полностью восстановилась реабсорбционная функция почек, что уменьшило потери глюкозы с мочой и привело ее уровень в крови к норме.

В группе животных, леченных леспеф-ланом, выявлено достоверное по сравнению с контролем уменьшение уровня мочевины в крови на 72%, креатинина на 60%, увеличение содержания белка в почках на 178%, но эти показатели полностью не восстановились до уровня здоровых животных.

От интактного уровня достоверно не отличалось только содержание ТБК-активных продуктов в крови и почках, глюкозы в крови, НК в почках, а изменения значений ВИП и уровня ДК не были достоверными по отношению к контролю.

Таблица 1

Влияние экстракта рапса и леспефлана на некоторые показатели сыворотки крови и почек при сулемовом нефрозе

Биохимические показатели Группы животных

Интактные, п=6 Контроль (сулемовый нефроз), п=8 Экстракт рапса 200 мг/кг, п=8 Леспефлан 5 мл/кг, п=5

ВИП, г/100 г массы тела Правая почка 0,30±0,010 0,47±0,035 *+57% 0,38±0,040 **-19% 0,50±0,081 *+67%

Левая почка 0,28±0,017 0,48±0,034 *+71% 0,36±0,031 **-25% 0,50±0,084 *+79%

Мочевина сыворотки крови, ммоль/л 6,8±0,86 49,9±10,94 *+579% 5,7±1,66 **-89% 13,9±1,69 **-72% *+104%

Креатинин сыворотки крови, мкмоль/л 121,5±1,49 416,9±75,17 *+243% 125,5±16,06 **-70% 168,3±8,57 **-60% *+39%

ТБК-активные продукты сыворотки крови, мкмоль/л 3,23±0,087 3,95±0,338 0,54±0,070 **-86% *-83% 3,93±1,17

ТБК-активные продукты почек, нмоль/мг белка 0,2968±0,0421 0,6840±0,04586 *+130% 0,3245±0,02870 *-53% 0,3820±0,04249 **-44%

ДК почек, нмоль/мг белка 1,12±0,159 3,16±0,358 *+182% 1,65±0,391 **-48% 2,64±0,621 *+136%

Белок почек, мг/г 92,3±11,73 28,1±2,21 *-70% 111,0±8,07 **+295% 78,0±7,71 **+178%

НК почек, мг/г 36,3±4,92 22,7±1,88 *-37% 41,6±2,61 **+83% 40,3±2,65 **+78%

Глюкоза крови, ммоль/л 4,9±0,25 3,4±0,33 *-31% 4,7±0,46 **+38% 5,6±0,38 **+65%

Примечание. Здесь и в таблице 2 * - р<0,05 в сравнении с интактными животными; ** р<0,05 - в сравнении с контролем; п -количество животных в группе

Таблица 2

Влияние экстракта рапса и леспефлана на некоторые показатели сыворотки крови и почек при сулемовом нефрозе

Показатели мочи Группы животных

интакт- ные п=6 контроль (сулемовый нефроз) n=8 Экстракт рапса 200 мгІкг n=8 Леспефлан 5 млІкг n=5

Объем мочи за 3 часа, мл/100 г 0,95 ±0,032 0,55±0,030 *-42 0,79±0,031 **+44% *-17% 0,б5±0,023 **+18% *-32%

рН б,1±0,10 5,8±0,19 5,7±0,23 5,9±0,37

Глюкоза, ммоль/л 0 б,б±0,87 0,б7±0,0б1 **-90% 1,3±0,22 **-80%

Белок, г/л 0,038 ±0,0041 0,30±0,024 *+689% 0,041±0,049 **-86% 0,22±0,014 **-36% *+479%

Из данных, приведенных в таблице 2, видно, что введение животным сулемы сопровождается развитием олигурии (снижение диуреза на 42%), гликозурией и протеинури-ей. Введение на этом фоне исследуемого экстракта и леспефлана по сравнению с контролем достоверно увеличивает количество выделившейся мочи, уменьшает интенсивность

гликозурии. Уровень протеинурии наименее выражен при использовании экстракта рапса, применение которого привело к полному восстановлению содержания белка в моче до уровня здоровых животных, в то время как при введении референтного средства этот показатель достоверно превышал норму на 479%.

Выводы

Экстракт рапса обладает защитным действием в условиях острой токсической нефропатии, уменьшает проявление гиперазотемии, снижает интенсивность ПОЛ, нормализует уровень белкового обмена в почках, оказывает положительное влияние на диурез и состав мочи.

По сумме показателей, используемых для оценки выраженности защитного действия объектов, эффективность экстракта рапса выше препарата сравнения леспефлана.

Сведения об авторе статьи:

Терехов Александр Юрьевич - к.фарм.н., старший преподаватель кафедры биологической химии и микробиологии ПГФА.

Адрес: 357532, г. Пятигорск, пр. Калинина, 11 Тел. (8793)32-44-74. E-mail: tau200@yandex.ru

ЛИТЕРАТУРА

1. Камышников В.С. Справочник по клинико-биохимической лабораторной диагностике: в 2 т. - Минск: Беларусь. - 2000. - 2 т.

2. Лесиовская, Е.Е. [и др.] Методические подходы к доклинической оценке эффективности нефропротекторов / Е.Е.Лесиовская, К.В.Сивак, В.О.Николаев [и др.]//Ведомости научного центра экспертизы средств медицинского применения.- 2007.- №2.-С.91-102.

3. Методы исследований в профпатологии (биохимические)/ под ред. О.Г. Архиповой. - М.: Медицина, 1988. - 208 с.

4. Uchiyama M. Determination of Malonaldehyde Precursor in Tissues by Thiobarbituric Acid Test / M. Uchiyama, M. Mihara // Anal. Biochem. - 1978. - Vol.94. - № 86. - P. 271 - 278.

5. Ohkawa H. Assay for lipid peroxides in animal tissues by thyobarbituric acid reaction / H. Ohkawa, N. Ochihi, K. Vagi // Anal. Biochem. - 1979. - Vol.95. - № 2. - P. 351-358.

УДК 616.411-089.87-089.168.1-06:616.94]-091.8-092.9

© В.М. Тимербулатов, Р.Р. Фаязов, Б.Ф. Чанышев, Ш.В. Тимербулатов, Ф.А. Каюмов, 2011

В.М. Тимербулатов, Р.Р. Фаязов, Б.Ф. Чанышев, Ш.В. Тимербулатов, Ф.А. Каюмов МОРФОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ЛЕТАЛЬНЫХ СЛУЧАЕВ ПОСЛЕ СПЛЕНЭКТОМИИ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ

ГБОУ ВПО «Башкирский государственный медицинский университет» Минздравсоцразвития России, г. Уфа

Проведенное экспериментальное исследование показало, что в ранние сроки после спленэктомии летальность белых крыс составила 16,25%. Морфологическое исследование свидетельствует, что у животных определяется постинфекцион-ный гепатит, а также начальная фаза воспаления легочной ткани. Мезентериальные лимфатические узлы как органы гемо -и иммуноцитопоэза оказались в условиях выраженного функционального напряжения в ответ на инфицирование организма.

Ключевые слова: клеточная инфильтрация, лейкоциты, спленэктомия.

V.M. Timerbulatov, R.R. Fayazov, B.F. Chanyshev, Sh.V. Timerbulatov, F.A. Kayumov MORPHOLOGICAL PROFILE OF LETHAL OUTCOMES FOLLOWING SPLENECTOMY UNDER EXPERIMENT

The performed investigation revealed post-splenectomy mortality rate in white rats within a short-term follow-up to be 16.25%. Post-infectious hepatitis and first-stage pulmonary tissue inflammation were found in the animals by means of a morphological investigation. Mesenteric lymphatic nodes, as the organs of hemo- and immunocytopoiesis, appeared to be in the condition of pronounced functional tension in response to ingress of infection.

Key words: cell infiltration, leucocytes, splenectomy.

По мнению большинства исследовате- ный дефицит, что предрасполагает к генера-

лей, после спленэктомии развивается иммун- лизации инфекции и возникновению синдро-