ЦЕЛЬНОКЛЕТОЧНЫЙ БИОКАТАЛИЗАТОР

1. Способ получения продукта реакции, катализируемой нитрилазой, включающий стадии:
(i) обеспечения микроорганизма, содержащего указанную нитрилазу, расположенную на его поверхности, и/или мембранного препарата указанного микроорганизма,
(ii) приведения микроорганизма и/или его мембранного препарата в контакт с одним или более субстратами нитрилазы в условиях, совместимых с активностью нитрилазы, причем нитрилаза слита с транспортерным доменом аутотранспортера.
2. Способ по п. 1, в котором продукт реакции, катализируемой нитрилазой, представляет собой карбоновую кислоту, и, по меньшей мере, один субстрат нитрилазы представляет собой нитрил.
3. Способ по п. 1 или 2, в котором нитрилаза рекомбинантно экспрессирована в микроорганизме и перенесена на его поверхность.
4. Способ по п. 1 или 2, в котором стадия (i) включает
(a) обеспечение микроорганизма, содержащего последовательность нуклеиновой кислоты, функционально связанную с последовательностью контроля экспрессии, причем указанная последовательность нуклеиновой кислоты содержит:
(1) часть, кодирующую сигнальный пептид,
(2) часть, кодирующую рекомбинантную нитрилазу, которая будет экспонирована,
(3) необязательно, часть, кодирующую сайт узнавания протеазы,
(4) часть, кодирующую трансмембранный линкер, и
(5) часть, кодирующую транспортерный домен аутотранспортера,
(b) культивирование микроорганизма в условиях, при которых последовательность нуклеиновой кислоты со стадии (a) экспрессируется, и продукт экспрессии последовательности нуклеиновой кислоты экспонируется на поверхности микроорганизма.
5. Способ по п. 4, дополнительно включающий стадию
(c) получения мембранного препарата из микроорганизма со стадии (b).
6. Способ по п. 1 или 2, в котором транспортерный домен аутотранспортера выбирают из группы, включающей Ssp, Ssp-h1, Ssp-h2, PspA, PspB, Ssa1, SphB1, AspA/NaIP, VacA, AIDA-I, IcsA, MisL, TibA, Ag43, ShdA, AutA, Tsh, SepA, EspC, EspP, Pet, Pic, SigA, Sat, Vat, EpeA, EatA, EspI, EaaA, EaaC, пертактин, BrkA, Tef, Vag8, PmpD, Pmp20, Pmp21, протеазу IgA1, App, Hap, rOmpA, rOmpB, ApeE, EstA, Lip-1, McaP, BabA, SabA, AlpA, Aae, NanB, а также их варианты.
Alcaligenes
Klebsiella
Saccharomyces
7. Способ по п. 1 или 2, в котором нитрилазу выбирают из группы, включающей нитрилазы , нитрилазы  и нитрилазы .
Escherichia coli
8. Способ по п. 1 или 2, в котором микроорганизм представляет собой грамотрицательную бактерию, в частности, .
9. Способ по п. 1 или 2, в котором стадию (ii) выполняют при pH в диапазоне от приблизительно 6,5 до приблизительно 7,5.
10. Способ по п. 1 или 2, в котором стадию (ii) выполняют в аэробных и/или окислительных условиях.
11. Способ по п. 2, в котором нитрил выбирают из группы, включающей нитрил миндальной кислоты, пруназин, бромоксинил, йоксинил, хлороксинил, анизонитрил, 3-бром-4-гидроксибензонитрил, 3-фтор-4-гидроксибензонитрил, 4-гидрокси-3,5-диметобензонитрил, бензонитрил, фенилпропионитрил, фенилглицинонитрил, н-бутиронитрил, н-валеронитрил, изобутиронитрил и сукцинонитрил.
12. Способ по п. 1 или 2, в котором продукт реакции, катализируемой нитрилазой, представляет собой карбоновую кислоту, и указанная карбоновая кислота производится в энантиомерном избытке, по меньшей мере, приблизительно 70%.
13. Способ по п. 1 или 2, дополнительно включающий стадию (iii) извлечения микроорганизма, используемого на стадии (ii).
14. Микроорганизм, экспонирующий рекомбинантную нитрилазу на своей поверхности, причем нитрилаза слита с транспортерным доменом аутотранспортера.
15. Мембранный препарат, содержащий рекомбинантную нитрилазу, полученную из микроорганизма по п. 14.
16. Применение микроорганизма по п. 14 и/или мембранного препарата по п. 15 для получения продукта реакции, катализируемой нитрилазой.
17. Способ получения микроорганизма, экспонирующего рекомбинантную нитрилазу на своей поверхности, включающий введение последовательности нуклеиновой кислоты в указанный микроорганизм, причем последовательность нуклеиновой кислоты содержит:
(1) часть, кодирующую сигнальный пептид,
(2) часть, кодирующую рекомбинантную нитрилазу, которая будет экспонирована,
(3) необязательно, часть, кодирующую сайт узнавания протеазы,
(4) часть, кодирующую трансмембранный линкер, и
(5) часть, кодирующую транспортерный домен аутотранспортера,
причем последовательность нуклеиновой кислоты функционально связана с последовательностью контроля экспрессии.