ПАНЕЛЬ СЫВОРОТОК, СОДЕРЖАЩИХ АНТИТЕЛА К АНТИГЕНАМ HCV РАЗНЫХ СУБТИПОВ
PANEL OF SERUMS CONTAININS ANTIBODIES TO HCV ANTIGENS OF VARIOUS SUBTYPES

Изобретение относится к области биотехнологии, иммунологии и вакцинологии и может быть использовано в технологии изготовления панелей сывороток, содержащих антитела к вирусам наиболее социально опасных инфекций.
Формируют коллекцию образцов плазмы инфицированных лиц из разных регионов России. Образцы плазмы в России обязательно скринируют на присутствие HBsAg и анти-HIV 1+2, анти-HCV и анти-Тр антител. Приблизительно 2% всех образцов посылается на повторное подтверждение в контрольные лаборатории. Однако эффективность подтверждения результатов зависит не только от качества тест-систем, но и от наличия в контрольных лабораториях стандартных препаратов на анализируемые инфекционные маркеры Recommendations agreed by the Group для серологической диагностики гепатита С.
Приготовить anti-HCV genotype reference panel. Все компоненты панели должны быть инактивированы и должны быть приготовлены из образцов плазмы (сывороток) генотипов 1, 2 и 3. В последующем по мере накопления материала в эту панель можно добавлять реактивные образцы генотипов 4, 5 и в состав панели следует включать образцы, предельно разбавленные в рекальсифицированной плазме, отрицательной на HBsAg, anti-HCV и anti-HIV 1+2 и отрицательные в ПНР анализах на HCV RNA, HIV RNA и HBV DNA [Совещания ECBS WHO 1996, 2000].
При решении проблемы оценки качества диагностики вирусных инфекций в России следует создать Коллекцию плазмы пациентов с установленным диагнозом, главным образом из региональных инфекционных клиник. И на основе этого материала формировать национальные панели сывороток. Этот вывод имеет и статистическое обоснование, т.к. постановка диагноза требует значительных затрат времени и участия квалифицированного персонала.
В соответствии с рекомендациями ECBS национальные панели должны включать образцы плазмы с генотипами и субтипами, характерными для России.
Использование в каждодневной работе препаратов различных субтипов ВГС позволит расширить спектр диагностируемых маркеров и использовать эти материалы для контроля качества выполнения анализов препаратов крови на выявление заражения гепатитом С.
Внешний контроль качества лабораторных исследований является неотъемлемой частью обеспечения информативности и достоверности лабораторной диагностики. Серологическая диагностика анти-ВГС - основной инструмент контроля и профилактики гепатита С. Выявление антител к каждому из антигенов вируса гепатита С имеет самостоятельное диагностическое значение.
Для этой цели наиболее широко используется при скрининге иммуноферментный анализ (ИФА). Для выполнения ИФА используют тест-системы, представляющие собой многокомпонентные наборы антигенов вируса. На эффективность проведения ИФА влияет не только качество этих антигенов, но и профессиональная подготовленность лабораторного персонала, обеспечивающего выполнение теста [4]. Для обеспечения объективной внешней оценки качества лабораторного исследования крайне необходимы специально приготовленные и аттестованные референс материалы.
Известна мастер панель HBsAg. Описан МП. Для формирования панели необходимо иметь представительную выборку плазмы или сывороток, составленную из образцов различных регионов России, и аттестованных по генотипу ВГВ и серотипу HBsAg [2].
Известна национальная панель сывороток (НПС) анти-ВГС [3, прототип]. Активными компонентами набора являются антитела к ВГС, вступающие в реакцию с участками белков разных субтипов ВГС, кодируемыми структурной (core) и неструктурной (NS3, NS4, NS5) областью генома ВГС, образцы разведены в стабилизированной дефибринизированной плазме.
В набор входят 20 образцов сыворотки крови человека, содержащих и не содержащих антитела к субтипам 1a, 1b, 2 и 3а вируса гепатита С, которые можно использовать для контроля качества как скрининговых, так и подтверждающих иммуноферментных тест-систем. Активными компонентами набора являются антитела к ВГС, вступающие в реакцию с участками белков разных субтипов ВГС, кодируемыми структурной (core) и неструктурной (NS3, NS4, NS5) областью генома ВГС, образцы разведены в стабилизированной дефибринизированной плазме.
Основным недостатком контрольной панели является малая выборка образцов. 16 положительных образцов НПС не позволяют отобразить все многообразие генотипического и антигенного представительства ВГС в России, что снижает качество контроля тест-систем. Аналогично и специфичность тест-систем должна тестироваться на представительной выборке отрицательных образцов, включая донорские сыворотки и сыворотки лиц из групп риска.
Техническим результатом данного изобретения является:
получение национальной панели сывороток, обеспечивающей более качественный контроль ИФА тест-систем: для практических ситуаций анализа образцов плазмы (сывороток) с наличием и отсутствием вируса гепатита С, с наличием и отсутствием антител к ВГС, но с установленным диагнозом гепатит С или здоровый пациент.
Технический результат достигается созданием панели лиофильно высушенных образцов плазм (сывороток), содержащих и не содержащих антитела к различным субтипам ВГС и к разным антигенам вируса, распространенных в различных регионах России.
Настоящая панель анти-ВГС построена на выборке из 100 первично анти-ВГС положительных образцов плазмы, генотипированных и субтипированных для HCV RNA, и 100 отрицательных образцов плазмы, взятых у здоровых доноров и лиц из групп риска с ревматоидным фактором и аутоиммунными антителами.
Положительная часть панели включает образцы плазмы пациентов, положительных на РНК ВГС, и формируется в виде набора блоков, содержащих отдельно антитела к NS5, NS4, NS3 и к Core антигенам (образцы №1-100).
Отрицательная часть панели включает образцы плазмы доноров, не содержащих антитела к ВИЧ-1/2, ВГВ, ВГС и к сифилису, и к HBsAg, из групп риска, не инфицированных HCV (образцы от №101-200). Для строгого контроля специфичности в отрицательный блок включены гетерофильные сыворотки с ревматоидным фактором (RF) и с аутоиммунными антителами.
Предлагается панель (П анти-ВГС) лиофильно высушенных сывороток, содержащих и не содержащих анти-ВГС, полученных от людей, инфицированных вирусом гепатита С, добровольцев и доноров крови. Положительная часть панели включает образцы плазмы лиц, инфицированных вирусом гепатита С (образцы от №1 до №100), отрицательная часть панели включает образцы плазмы доноров, лиц из групп риска и добровольцев, не инфицированных HCV (образцы от №101-200).
Положительная часть панели состоит из 4-х блоков образцов плазмы, большей частью положительных в ПЦР на РНК ВГС и имеющих высокие уровни аминотрансфераз.
Каждый блок положительной части панели имеет свои особенности.
Образцы блока 1 (№1-25) аттестованы по генотипу и субтипу HCV. Блок 1 включает сыворотки 1, 2 и 3 генотипов различных субтипов (1a, 1b, 2а и 3а), распространенных на территории России. При этом образцы блока 1 обязательно содержат антитела к NS5 антигену наряду с антителами к другим антигенам.
2-й блок сформирован из образцов плазмы, имеющих положительный результат в ПЦР, частично субтипированных. При этом образцы блока 2 обязательно содержат антитела к NS4 антигену наряду с антителами к другим антигенам.
3-й блок составлен из образцов плазмы, имеющих положительный результат в ПЦР, частично субтипированных. При этом образцы блока 3 обязательно содержат антитела к NS3 антигену наряду с антителами к другим антигенам.
4-й блок составлен из образцов плазмы, имеющих положительный результат в ПЦР, частично субтипированных. При этом образцы блока 4 обязательно содержат антитела к core - антигену наряду с антителами к другим антигенам.
Отрицательный блок панели составлен из образцов плазмы доноров, волонтеров и представителей групп риска.
В состав блока включены образцы с гетерофильными антителами, в том числе человечьи антитела к мышиным сывороткам, с ревматоидном фактором и аутоиммунными антителами. Такой состав отрицательного блока дает возможность для строгого контроля специфичности диагностикумов.
Каждый образец панели аттестован по иммунобиологическим и биохимическим свойствам. Спектр антител определяли путем постановки образцов панели с образцами панели низкотитражных сывороток PHV106 (7) на одном микропланшете.
Панель предназначена для выполнения государственного контроля качества каждой серии лицензированных анти-ВГС тест-систем и для сертификации вновь создаваемых диагностикумов.
Панель может быть использована при определении титра анти-HCV антител различных субтипов.
Панель сывороток должна храниться при температуре (2-6)°С.
Разведенные сыворотки панели хранятся при температуре (2-6)°С один месяц, при температуре минус 24°С - 6 месяцев. Допускается 3-кратное замораживание и оттаивание сывороток.
Панели сывороток, содержащих и не содержащих антитела к вирусу гепатита С, получают следующим образом.
1. Поступление образцов плазмы.
Образцы плазмы поступают на производство в гемаконах CPDA-1 емкостью 250 мл, герметично укупоренные, замороженные.
Каждая плазма, поступающая на производство для изготовления панели, должна иметь паспорт с характеристиками - ИН (индивидуальный номер) донора, объем сыворотки, дату забора крови, предприятие-изготовитель, а также отвечать следующим требованиям: без признаков гемолиза и гиперлипидиемии, прозрачная, цвет - янтарный или светло-желтый, посторонние механические примеси, взвесь, осадок отсутствуют. Каждому гемакону присваивают кодирующий номер.
Инактивация сывороток здоровых доноров.
Гемаконы с плазмой помещают в термостат при температуре 56°С. Фиксируют время начала инактивации. Инкубирование плазмы проводят 3 ч. По истечении этого времени гемакон достают из термостата, фиксируют время окончания инактивации.
Измерение объема плазмы.
Измеряют объем каждой плазмы с помощью стерильного стеклянного мерного цилиндра.
Фасовка образцов плазмы.
Из каждого гемакона в стерильном боксе в ламинаре автоматической пипеткой отбирают 10 аликвот по (1±0,05) мл плазмы в пластиковые пробирки «Эппендорф» емкостью 1,5 мл для контроля по биохимическим показателям и для исследования вирусных маркеров в ПЦР и в ИФА. Пробирки закрывают, на каждой пробирке перманентным маркером пишут кодовый номер образца плазмы.
Оставшийся объем плазмы фасуют в стерильные пластиковые контейнеры емкостью 25 мл. На каждом контейнере перманентным маркером пишут кодовый номер.
Хранение образцов плазмы.
Гемаконы с донорской плазмой и их аликвоты помещают на хранение в морозильные камеры при температуре от минус 20°С до минус 35°С. Гемаконы до переработки хранят при этих условиях в течение до 10-ти лет. Допускается однократное замораживание и оттаивание сывороток.
Контроль аликвот плазмы методами ПЦР и ИФА.
По 2 аликвоты каждой плазмы передают в ИФА лабораторию для исследования образцов на содержание HBs антигена, антител к ВГС, ВИЧ-1,2 типов и анти-HBs. ИФА анализ проводят на импортных или отечественных, аттестованных ГИСК им. Л.А.Тарасевича, иммуноферментных тест-системах (Таблица 3).
Контроль биохимических показателей.
По одной аликвоте каждого образца плазмы в эппендорфе передают в биохимическую лабораторию для контроля биохимических показателей (цвет, уровень аминотрансфераз, общее содержание белка, рН). Содержание белка определяют микрометодом Лоури (Таблица 3).
Образцы плазм, не соответствующие требованиям по биохимическим показателям, отбраковываются и утилизируются.
Добавление к сыворотке раствора консерванта.
В каждый гемакон с плазмой добавляют 2% раствор мертиолята и гентамицина из расчета по 0,5 мл раствора каждого бактериостатика на 100 мл сыворотки и раствор хлористого кальция для осаждения балластных белков. Сыворотку (рекальсифицированную плазму) тщательно перемешивают. Конечная концентрация мертиолята в сыворотке составляет 0,01% и гентамицина 0,01%.
Приготовление пула донорских сывороток.
Из нативных сывороток крови, не содержащих маркеры вирусных инфекций, готовят пул не менее чем от 10 доноров.
Стабилизированный пул сывороток используют в качестве матрикса - разводящего раствора (РР) для приготовления положительных образцов МП. Доводят рН раствора до 6.8-7.2 при комнатной температуре с помощью 0.1 N NaOH или 0.1 N HCl. Растворы разливают стерильно в емкости по 250-500 мл и хранят при 2-8°С в течение не более 1 месяца. В замороженном виде при температуре минус 35°С растворы можно хранить в течение 10-ти лет.
1 Стабилизированный пул сывороток нормализуют по общему белку и вязкости относительно донорской сыворотки человека и получают РР. Контроль вязкости РР проводят с использованием стеклянного вискозиметра по классической методике с использованием калиброванного капилляра. Юстируют вязкость препаратов к вязкости НЧС с помощью 10%-ного раствора БСА или фосфатно-солевого буфера (ФСБ).
2. Титрование препаратов анти-ВГС.
Титрование препаратов анти-ВГС проводят с использованием РР на одном планшете в трех повторах в скрининге и в подтверждающих тестах - «Спектр анти-ВГС» компаний ЗАО Вектор Бест (Новосибирск), ЗАО МБС (Новосибирск) и НПК ДС (Н. Новгород) (фиг.1).
Референс-препараты анти-ВГС. Для выполнения аттестационных определений в работе используют панели анти-ВГС, аттестованные в относительных единицах в международных испытаниях:
- Низкотитражная панель сывороток PHV 106 BBI (Boston, USA).
3. Приготовление положительных образцов панели.
Для формирования 1, 2, 3 и 4 блоков положительной части панели изучают результаты исследований положительных образцов в ПНР, в скриннинговом и в подтверждающем ИФА, и определяют уровень содержания аминотрансфераз.
Образцы сывороток, содержащих анти-NS5 антитела и положительные в ПЦР (с определенным генотипом и субтипом ВГС), формируют блок 1; образцы сывороток, содержащие анти-NS4 антитела, положительные в ПЦР, формируют блок 2; образцы сывороток, содержащие анти-NSS антитела, положительные в ПЦР или с высоким уровнем аминотрансфераз, формируют 3-й блок; образцы сывороток, содержащие анти-Соге антитела, положительные в ПЦР или с высоким уровнем аминотрансфераз, формируют 4-й блок положительной части панели.
крит
С помощью РР сыворотки блоков с 1-го до 4-го нормируют в диапазоне 1,5-5 ОП для искомого антитела (фиг.1).
крит
крит
ОП - На шкале оптического спектрометра весь диапазон значений оптической плотности (ОП) занимает от 0 до 4 о.е. Образцы сывороток крови человека разбивают этот диапазон на 2 области: область ОП здоровых доноров и область инфицированных пациентов. Граница между областью значений ОП доноров и инфицированных пациентов определяет значение ОП, при котором образец тестируемой крови (сыворотки) с равной вероятностью может быть аттестован как положительный (инфекционный), так и отрицательный (здоровый донор). Это граничное значение ОП называют в ИФА диагностике критическое ОП и обозначают сокращенно ОП или в международном обозначении - Cut off.
крит
крит
В соответствии с этим определением все образцы панелей сывороток должны иметь в ИФА значение ОП>ОП (положительные образцы) или меньше ОП (отрицательные образцы).
крит
При изготовлении кандидатов в положительные образцы низкотитражной стандартной панели разработчик подбирает коэффициенты разведения нативных сывороток такими, чтобы в ИФА ОП разведенных сывороток превышало ОП в 1,5-2,0 раза.
крит
Аналогично при выборе кандидатов в отрицательные образцы панели разработчик подбирает сыворотки с ОП<ОП.
крит
Вычисляют ОП по формуле, приведенной в Инструкции по применению используемой тест-системы.
Всего таким образом подготавливают 120 образцов для положительной части панели.
4. Приготовление отрицательных образцов панели.
Для изготовления отрицательных образцов панели используют нативные сыворотки здоровых доноров, привитых и лиц из групп риска, стабилизированных и фильтрованных через 0,45 мкм. В состав МП включены 100 отрицательных сывороток (№201-301).
Очистка образцов панели фильтрацией.
3
Тонкую очистку образцов проводят в ламинарном боксе путем фильтрации с помощью одноразовых шприцов емкостью 10 мл и одноразовых шприцевых насадок Minisart с размером пор мембраны 0,8 и 0,45 мкм. Сыворотки каждого номера после фильтрации помещают в стерильный стеклянный флакон емкостью 150 см и укупоривают пробкой.
Розлив образцов панели во флаконы для лиофильного высушивания.
3
Из боксов в кассеты укладывают 350 флаконов вместимостью 2-3 см. Кассеты помещают в ламинар-бокс, в котором производят розлив дозатором (Diluter model 203, Beckman, USA) сывороток во флаконы. Загрузочную емкость с сывороткой №1 помещают в ледяную баню и перемешивают сыворотку в процессе розлива. На шкале дозатора устанавливают объем дозы 0,8 мл. Далее сыворотку разливают во флаконы, помещенные в кассеты с надписью "сыворотка №1". После опорожнения загрузочной емкости дозатор и загрузочную емкость промывают от остатков сыворотки №1 и стерилизуют. В промытую стерильную загрузочную емкость загружают сыворотку №2 и начинают розлив во флаконы, помещенные кассеты с надписью "сыворотка №2". Таким образом разливают все 200 сывороток панели, предназначенные для одновременного лиофильного высушивания на установке. Флаконы с разлитой сывороткой прикрывают плотно резиновыми пробками для того, чтобы ограничить доступ воздуха во флаконы.
В кассету с флаконами помещают бирку, в которой указывают:
наименование препарата, объем раствора во флаконе, номер сыворотки, общее количество флаконов, дату, фамилию и роспись аппаратчика, производившего розлив. Кассеты с флаконами передают на стадию лиофилизации.
Лиофильное высушивание образцов панели.
Лиофильное высушивание образцов проводят на установке TG-50 (Германия). Включают компрессор установки для охлаждения конденсатора и полок сушильной камеры. Устанавливают на задатчике температуры полок температуру -35°С. По истечении 2,0-2,5 ч, при достижении температуры конденсатора минус (75-80)°С, а температуры полок минус (35)°С, в установку загружают кассеты с флаконами с растворами сывороток. Время загрузки кассет с флаконами в сушильную камеру должно быть минимальным и не должно превышать 10-15 минут.
На каждую полку помещают по флакону с сывороткой с погруженным в нее датчиком измерения температуры. Дверь камеры установки закрывают и закручивают запорные винты. Замораживание проводят в течение 8 ч. Температура в процессе замораживания поддерживается автоматически и контролируется аппаратчиком через каждый час с внесением данных температуры в журнал. По истечении времени процесса замораживания проводят стадию лиофильной сушки.
Управление температурным режимом сублимации производят вручную, задавая необходимую температуру полок с помощью регулятора температуры.
Заданная температура на всем протяжении сушки поддерживается автоматически с погрешностью 3-5°С. Значения температуры полки и температуры материала, а также температуры конденсатора записываются постоянно самописцем и периодически регистрируются аппаратчиком в журнале сушки 1 раз в час. Вакуум в камере контролирует по вакуумметру.
Через 8 ч после начала заморозки включают вакуум-насос установки. Температура материала в момент включения вакуум-насоса не должна превышать минус 30°С. Через четыре часа после того, как давление остаточного воздуха в камере достигнет значения 20 Па, включают нагрев полок и устанавливают на задатчике температуры полок температуру 0°С.
Через восемь часов после этого устанавливают задатчиком температуру полок плюс 10°С. Через два часа после достижения на полках температуры 10°С устанавливают задатчиком температуры полок температуру 25°С. Материал выдерживают при этой температуре 6-8 ч.
Контроль окончания процесса сушки осуществляют по показаниям датчика остаточного давления. При достижении в камере остаточного давления менее 20 Па процесс сушки считается законченным. Общая продолжительность сушки 32 ч.
Укупорка флаконов под вакуумом.
Укупорка флаконов производится внутри камеры лиофильной установки с помощью прижимных плит. По окончании процесса сушки прижимные плиты опускают с помощью гидравлического устройства вручную. Процесс укупорки контролируют визуально через смотровое окно двери камеры сушки. После звукового сигнала процесс опускания прижимных плит прекращают и поднимают прижимные плиты в исходное положение. Уравнивают давление в камере с атмосферным и открывают дверь сушильной камеры установки. Флаконы с сыворотками передают на операцию обжима флаконов колпачками.
Аттестация образцов панели, содержащих и не содержащих HBsAg.
По завершении получения лиофилизированных сывороток (200 образцов), предназначенных для формирования панели, изготовитель передает 2 набора панелей в ГИСК им Л.А.Тарасовича для государственных испытаний. Вместе с наборами изготовитель передает собственные результаты испытаний специфических и физико-химических свойств сывороток панели, а также данные изучения стабильности сывороток при различных температурных режимах.
Описание фигур
Фиг.1. Кривые титрования образцов панели в разводящем растворе.
Далее следуют примеры конкретного применения мастер-панели.
Пример 1. Получение панели.
1. Заготовка образцов плазмы инфицированных лиц с диагнозом гепатит В и здоровых доноров выполнялась в 7-ми удаленных регионах России. Образцы кодируются по городам:
Краснодар - 1
Нижний Новгород - 2
Горно-Алтайск - 3
С.Петербург - 4
Новосибирск - 5
Хабаровск - 6
Барнаул - 7.
Заготовку плазмы проводят методом плазмафореза с письменного согласия пациента.
2. Образцы плазмы кодируют, аттестуют по 10 показателям (табл.1), разливают во флаконы по 25 мл и переносят в специализированное хранилище. Плазму хранят до использования при -35°С.
3. По литературным прописям [10] плазму переводят в сыворотку, инактивируют и аттестуют в PCR и ИФА для приготовления анти-HCV панели.
4. По результатам 3-й аттестации образцы позитивных сывороток используют для формирования положительной части панели.
В блок 1 включают сыворотки, которые генотипируют и субтипируют и уверенно идентифицируют в ИФА по наличию 2-полос в иммуноблоте или «Спектре» [9], одна из которых обязательно анти-К85. Всего набирают 26 образцов (Таблица 1).
В блок 2 включают сыворотки, положительные или отрицательные в ПЦР, но имеющие повышенное содержание аминотрансфераз. В блок 2 включают сыворотки, которые уверенно идентифицируют в ИФА по наличию 2-полос в иммуноблоте или «Спектре», одна из которых обязательно анти-М84. Набирают 25 образцов (Таблица 2).
В блок 3 включают сыворотки, положительные или отрицательные в ПЦР, но имеющие повышенное содержание аминотрансфераз. В блок 3 включают сыворотки, которые уверенно идентифицируют в ИФА по наличию 2-полос в иммуноблоте или «Спектре», одна из которых обязательно анти-М84. Набирают 25 образцов (Таблица 4).
В блок 4 включают сыворотки, положительные или отрицательные в ПЦР, но имеющие повышенное содержание аминотрансфераз. В блок 4 включают сыворотки, которые уверенно идентифицируют в ИФА по наличию 2-полос в иммуноблоте или «Спектре», одна из которых обязательно анти-Core. Набирают 25 образцов.
крит
Для включения в панель сыворотки каждого блока калибруют по результатам титрования образцов плазмы относительно каждого антигена: Core, NS3, NS4 и NS5. Высокотитражные образцы разводят в диапазоне от 5 до 1,5 ОП. В качестве разводящего раствора используют пул отрицательных сывороток, стабилизированных введением ЭДТА, гентамицина и мертиолята в качестве бактериостатика (РР).
Пример 2. Применение панели для контроля качества иммуноферментных тест-систем для выявления анти-HCV антител.
Для сертификации тест-системы для выявления анти-HCV используют определенный набор образцов панели в соответствии с целью испытаний:
Испытания активности антигенов тест-системы. Используют набор образцов из 4-х блоков и несколько отрицательных образцов.
Испытания чувствительности тест-системы. Используют набор образцов с самым низким уровнем анти-HCV и несколько отрицательных образцов.
Испытания специфичности тест-системы. Используют набор образцов отрицательной части панели, не менее 90 штук.
В каждый флакон с лиофильно высушенной сывороткой панели вносят по 300 мкл дистиллированной воды. Содержимое флакона тщательно перемешивают до полного растворения сыворотки. Сыворотки выдерживают при комнатной температуре в течение 15 минут. Далее ИФА ставят в соответствии с Инструкцией по применению на аттестуемую тест-систему.
Учет результатов по образцам сывороток панели следует проводить только в том случае, если величины ОП контроля коньюгата, положительного (К+) и отрицательного (К-) контролей набора укладываются в пределы, регламентированные фармакопейной статьей на испытуемую тест-систему.
Социально-экономическая эффективность
1. Выявление инфекции гепатита С на более ранней стадии ускоряет излечение пациента и сокращает нетрудоспособный период пациента.
2. Использование панели значительно повышает уровень оценки качества лицензируемых тест-систем.
3. Национальная панель позволяет унифицировать процедуру лицензирования различных тест-систем, поступающих на российский рынок, и является юридической основой для государственного контроля.
4. Практическое значение имеет создание национальной панели сывороток для оценки качества иммуноферментных тест-систем по основным показателям: чувствительности к различным генотипам ВГС и к различным антигенам - процент выявляемое™ позитивных сывороток панели; специфичности - процент выявляемое™ отрицательных сывороток, и сроку годности - длительность времени сохранения неизменными специфических характеристик образцов панели, хранившейся при температуре (2-8)°С; разработать методику применения национальной панели сывороток для выполнения аттестационных испытаний качества тест-систем скриннинговых и подтверждающих для выявления антител к ВГС.
Источники информации
1. WHO Working Group on Reference Preparations for testing Diagnostic Kits used for detection of HBsAg, Anti-HCV and Anti-HIV antibodies in blood screening // Report of the third meeting: Geneva, Switzerland, 3-6 October 2003.
2. The principles for production and approval of international and other standards and reference biological preparations // WHO Expert Committee on Biological Standardization. Rep.37, WHO, Geneva, 1990.
3. WHO Working Group on Reference Preparations for testing Diagnostic Kits used for detection of HBsAg, Anti-HCV and Anti-HIV antibodies in blood screening // Report of the third meeting: Geneva, Switzerland, 17-19 January 2000.
4. Канев А.Н., Шалунова Н.В., Нетесов С.В и др. Разработка референс панелей ВГС с нормированным уровнем IgG антител // Вопросы вирусологии 2000, 45(4), 42-47.
5. Патент РФ №2314540 «Мастер панели сывороток, содержащих и не содержащих HBsAg, и способ ее получения».
6. Информационный бюллетень фирмы Boston Biomedica, Inc., Anti-HCV Low Titer Performance Panel. PHV 106. BBI Diagnostics. A Sera Care Company. 02.2006.
7. Потапова А.А., Богуш П.Г., Редченко Е.Б., Дронова В.М. Способы оптимизации внутрилабораторного контроля качества при массовом скриннинговом исследовании на антитела к вирусу гепатита С // Клин. Лабор. Диагностика 2008, 3, 35-38.
8. Alter MJ, Kuhnert WL, Finelli L. Guidelines for laboratory testing and result reporting antibody to hepatitis С virus. Centers for Disease Control and Prevention. MMWR Recomm Rep 2003, 52: 1013, 15.
9. Development of Control Serum for Microbial Antibody Tests // Biologicals (2001) 29, 39-43.
Постановки панели 1 высушенной
1. Вектор анти-ВГС от 02.06.09
2. Бест анти-ВГС - Спектр с.1838 от 05.06.09
3. ВГС - ДСМ скрин, с.31 от 17.09.09