АНТИСМЫСЛОВЫЕ НУКЛЕИНОВЫЕ КИСЛОТЫ

1. Антисмысловой олигомер длиной от 15 до 30 оснований, где
(a) первая часть олигомера, которая содержит нуклеотидную последовательность, комплементарную первой нуклеотидной последовательности из 7-15 последовательно расположенных оснований в целевом экзоне в гене дистрофина человека; и
(b) вторая часть олигомера, которая содержит нуклеотидную последовательность, комплементарную второй нуклеотидной последовательности из 7-15 последовательно расположенных оснований в целевом экзоне,
соединены, где
первая нуклеотидная последовательность и вторая нуклеотидная последовательность не следуют друг за другом и не перекрываются друг с другом, и
антисмысловой олигомер индуцирует пропуск целевого экзона, или его фармацевтически приемлемая соль или гидрат.
2. Антисмысловой олигомер по п.1, где первая и/или вторая часть олигомера содержит нуклеотидную последовательность, комплементарную части нуклеотидной последовательности интрона рядом с целевым экзоном, или его фармацевтически приемлемая соль или гидрат.
3. (Удален).
4. Антисмысловой олигомер по п.1 или 2, где первая нуклеотидная последовательность является нуклеотидной последовательностью из 7-15 последовательно расположенных оснований, выбираемых из нуклеотидной последовательности, представленной SEQ ID NO: 1, или его фармацевтически приемлемая соль или гидрат.
5. Антисмысловой олигомер по п.1 или 2, где вторая нуклеотидная последовательность является нуклеотидной последовательностью из 7-15 последовательно расположенных оснований, выбираемых из нуклеотидной последовательности, представленной SEQ ID NO: 2, или его фармацевтически приемлемая соль или гидрат.
6. Антисмысловой олигомер по п.1 или 2, где две части олигомера, выбранные из группы, состоящей из следующих пунктов с (c) по (e), соединены:
(c) часть олигомера, которая состоит из нуклеотидной последовательности, комплементарной нуклеотидной последовательности из 7-15 последовательно расположенных оснований, выбираемых из нуклеотидной последовательности, представленной SEQ ID NO: 3;
(d) часть олигомера, которая состоит из нуклеотидной последовательности, комплементарной нуклеотидной последовательности из 7-15 последовательно расположенных оснований, выбираемых из нуклеотидной последовательности, представленной SEQ ID NO: 4; и
(e) часть олигомера, которая состоит из нуклеотидной последовательности, комплементарной нуклеотидной последовательности из 7-15 последовательно расположенных оснований, выбираемых из нуклеотидной последовательности, представленной SEQ ID NO: 5, или его фармацевтически приемлемая соль или гидрат.
7. Антисмысловой олигомер по п.1 или 2, который состоит из нуклеотидной последовательности, выбираемой из группы, состоящей из SEQ ID No с 6 по 9, или его фармацевтически приемлемая соль или гидрат.
8. Антисмысловой олигомер по любому из пп.1, 2 и 4-7, который является олигонуклеотидом, или его фармацевтически приемлемая соль или гидрат.
9. Антисмысловой олигомер по п.8, в котором остаток сахара и/или область соединения через фосфатную группу по меньшей мере одного нуклеотида, входящего в состав олигонуклеотида, модифицированы, или его фармацевтически приемлемая соль или гидрат.
2
2
3
10. Антисмысловой олигомер по п.8 или 9, в котором остаток сахара по меньшей мере одного нуклеотида, входящего в состав олигонуклеотида, является рибозой, в которой 2'-OH-группа заменена любой группой, выбранной из группы, состоящей из OR, R, R'OR, SH, SR, NH, NHR, NR, N, CN, F, Cl, Br и I (где R является алкилом или арилом и R' является алкиленом), или его фармацевтически приемлемая соль или гидрат.
11. Антисмысловой олигомер по любому из пп.8-10, в котором область соединения через фосфатную группу по меньшей мере одного нуклеотида, входящего в состав олигонуклеотида, является любой областью, выбранной из группы, состоящей из тиофосфатной связи, дитиофосфатной связи, алкилфосфонатной связи, фосфорамидатной связи и боранофосфатной связи, или его фармацевтически приемлемая соль или гидрат.
12. Антисмысловой олигомер по любому из пп.1, 2 и 4-7, который является морфолино-олигомером, или его фармацевтически приемлемая соль или гидрат.
13. Антисмысловой олигомер по п.12, который является морфолино-олигомером, или его фармацевтически приемлемая соль или гидрат.
14. Антисмысловой олигомер по п.12 или 13, в котором 5'-конец имеет любую из приведенных ниже химических формул (1)-(3), или его фармацевтически приемлемая соль или гидрат.
[Формула 26]
15. Фармацевтическая композиция для лечения мышечной дистрофии, которая содержит в качестве активного ингредиента антисмысловой олигомер по любому из пп.1, 2 и 4-14, или его фармацевтически приемлемую соль или гидрат.
16. Фармацевтическая композиция по п.15, которая содержит фармацевтически приемлемый носитель.
17. Способ лечения мышечной дистрофии, который включает введение пациенту с мышечной дистрофией антисмыслового олигомера или его фармацевтически приемлемой соли или гидрата по любому пп.1, 2 и 4-12, или фармацевтической композиции по п.1 или 16.
18. Способ лечения по п.17, где у пациента с мышечной дистрофией есть мутация (мутации), на которую действует пропуск экзона 44 в гене дистрофина.
19. Способ лечения по п.17 или 18, где пациентом является человек.
20. Применение антисмыслового олигомера или его фармацевтически приемлемой соли или гидрата по любому из пп.1, 2 и 4-14 для получения фармацевтической композиции для лечения мышечной дистрофии.
21. Антисмысловой олигомер или его фармацевтически приемлемая соль или гидрат по любому из пп.1, 2 и 4-14 для применения в лечении мышечной дистрофии.
22. Антисмысловой олигомер или его фармацевтически приемлемая соль или гидрат по п.21, где у пациента с мышечной дистрофией в указанном лечении есть мутация (мутации), на которую действует пропуск экзона 44 в гене дистрофина.
23. Антисмысловой олигомер или его фармацевтически приемлемая соль или гидрат по п.21 или 22, где пациентом является человек.
24. Способ получения антисмыслового олигомера по п.1, который включает
соединение
(a) первой части олигомера, которая содержит нуклеотидную последовательность, комплементарную первой нуклеотидной последовательности из 7-15 последовательно расположенных оснований в целевом экзоне в гене дистрофина человека; и
(b) второй части олигомера, которая содержит нуклеотидную последовательность, комплементарную второй нуклеотидной последовательности из 7-15 последовательно расположенных оснований в целевом экзоне,
с образованием антисмыслового олигомера длиной от 15 до 30 оснований, где
первая нуклеотидная последовательность и вторая нуклеотидная последовательность не следуют друг за другом и не перекрываются друг с другом.
25. Способ по п.24, который также включает:
измерение эффективности пропуска при использовании полученного антисмыслового олигомера; и
отбор антисмыслового олигомера, который обладает эффективностью пропуска экзона, превышающей референтное значение.
26. Способ скрининга антисмыслового олигомера, который включает:
(a) отбор
(i) первой части олигомера, которая содержит нуклеотидную последовательность, комплементарную первой нуклеотидной последовательности из 7-15 последовательно расположенных оснований в целевом экзоне в гене дистрофина человека; и
(ii) второй части олигомера, которая содержит нуклеотидную последовательность, комплементарную второй нуклеотидной последовательности из 7-15 последовательно расположенных оснований в целевом экзоне, где
первая нуклеотидная последовательность и вторая нуклеотидная последовательность не следуют друг за другом и не перекрываются друг с другом;
(b) соединение первого и второго олигомеров с образованием антисмыслового олигомера длиной от 15 до 30 оснований;
(c) измерение эффективности пропуска экзона при использовании антисмыслового олигомера, полученного на стадии (b); и
(d) отбор антисмыслового олигомера, который обладает эффективностью пропуска экзона, превышающей референтное значение.