Пролиферация и апоптоз лимфоцитов в ответ на стимуляцию боррелиозным антигеном у больных иксодовым клещевым боррелиозом

Пролиферация и апоптоз лимфоцитов в ответ на стимуляцию боррелиозным антигеном у больных иксодовым клещевым боррелиозом

Ильинских Е.Н., Ильинских И.Н., Семёнов А.Г., Файт Е.А., Шайтарова М.В.

Proliferation and apoptosis of lymphocytes in response to borrelia antigen stimulation in Lyme-borreliosis patients

Ilyinskikh Ye.NIlyinskikh I.N., Semyonov A.G., Fait Ye.A., Shaitarova M. V.

Цель настоящей работы заключалась в определении взаимосвязи между особенностями пролиферации и апоптоза клеток в культурах лимфоцитов, стимулированных специфическим антигеном B. garinii, и развитием различных клинических исходов у больных иксодовым клещевым боррелиозом (ИКБ). Установлено, что стимуляция боррелиозным антигеном культур, полученных от больных хроническим ИКБ, приводит к развитию in vitro Т-хелперов типа 1 при одновременном подавлении апоптоза реактивных клеток, что может лежать в основе формирования персистентно активированного Т-клеточного иммунного ответа и хронического воспалительного процесса при этом заболевании.

Ключевые слова: иксодовый клещевой боррелиоз, проточная цитометрия, апоптоз, клеточный цикл, бромдезоксиу-ридин, реакция бластной трансформации лейкоцитов, Borrelia garinii, интерферон-у, интерлейкин-4.

The object of this work was to study the correlation between the lymphocyte proliferation and apoptosis in the cultures stimulated by specific inactivated Borrelia garinii antigen and the different clinical outcomes in Lyme borreliosis patients. It was found that borrelia antigen stimulation of the cultures obtained from chronic patients induced T helper type 1 -like response as well as depression in lymphocyte apoptosis, which may provide the basis of persistent activated T cell immune response and chronic inflammatory in Lyme borreliosis.

Key words: Lyme borreliosis, flow-cytometry, apoptosis, cell cycle, bromodeoxyuridine, lymphocyte transformation test, Borrelia garinii, interferon-у, interleukin-4.

Сибирский государственный медицинский университет, г. Томск

© Ильинских Е.Н., Ильинских И.Н., Семёнов А.Г. и др.

УДК 616.98:579.834.114]-097.1-008.853.2-091.818

Введение

характеризующейся появлением мигрирующей эритемы на месте присасывания клеща, стадии ранней дис-семинированной инфекции, сопровождающейся появлением признаков поражения опорно-двигательного аппарата и внутренних органов, а также стадии перси-стентной поздней диссеминированной инфекции [4]. Как правило, если в острый и подострый периоды развития инфекционного процесса больной получает адекватную антибиотикотерапию, то происходит выздоровление. В других ситуациях заболевание часто переходит в резистентную к лечению современными методами персистентную инфекцию. Патогенетические механизмы хронизации ИКБ до сих пор остаются мало изученными.

Иксодовый клещевой боррелиоз (ИКБ) — острое инфекционное трансмиссивное природно-очаговое заболевание, имеющее тенденцию к хроническому и рецидивирующему течению, поражающее различные органы и системы. Возбудители ИКБ — боррелии, относящиеся к комплексу Borrelia burgdorferi sensu lato (s.l.), объединяющему 12 геновидов этих спирохет [12], из которых на территории Западной Сибири наиболее распространены B. garinii и B. afzelii [3].

Известно, что в клиническом течении ИКБ выделяют острый, подострый и хронический периоды, которые соответствуют трем патогенетическим стадиям заболевания: локализованной (очаговой) инфекции,

Известно, что выраженный пролиферативный ответ Т-клеток на боррелии с доминированием ответа Т-хелперов типа 1 и гиперпродукцией интерферона-у (ИФ-у) в острый период заболевания имеет важное значение для эрадикации возбудителя [11, 13]. Однако для благоприятного исхода заболевания необходимо ограничение воспалительного процесса, обусловленное переключением на преобладание гуморального иммунного ответа и снижением числа реактивных клеток [11].

Поэтому в исходе заболевания большое значение играют процессы, регулирующие пролиферацию Т-лимфоцитов. Апоптоз активированных лимфоцитов, наблюдаемый в фазы подъема и снижения иммунного ответа, называется активационно-индуцированной клеточной смертью [6]. Известно, что апоптоз Т-лимфо-цитов является важным механизмом иммунорегуля-ции, необходимым для снижения числа реактивных клеток, а его подавление, как правило, наблюдается при хронических инфекциях и аутоиммунных заболеваниях [6]. Поэтому не исключено, что неадекватный воспалительный ответ при затяжном и хроническом течении ИКБ также может быть ассоциирован с нарушением апоптоза реактивных клеток.

Цель настоящей работы заключалась в определении взаимосвязи между особенностями пролиферации и апоптоза клеток в культурах лимфоцитов, стимулированных специфическим корпускулярным антигеном В. garinii, и развитием различных клинических исходов у больных ИКБ.

Материал и методы

Обследовано 12 больных с диагнозом «серопози-тивный вариант острого ИКБ», госпитализированных в клинику инфекционных болезней Сибирского государственного медицинского университета (г. Томск) на 2-й нед заболевания (группа 1А), а также эти же пациенты в период реконвалесценции через 3 мес после эффективного курса антибиотикотерапии (группа 1В). Выздоровление больных было подтверждено отсутствием клинической симптоматики и отрицательными результатами серологического обследования в течение одного года диспансерного наблюдения. Для исключения клещевого энцефалита и лабораторного подтверждения диагноза «ИКБ» использовался метод твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА). Из анамнеза у этих групп пациентов было выяснено,

что никто из них ранее не болел ИКБ или другими клещевыми инфекциями и не подвергался укусам клещей в течение последних 5 лет. Кроме того, было обследовано 11 больных хроническим ИКБ в стадии субкомпенсации заболевания с преимущественным поражением опорно-двигательного аппарата (группа II).

Контрольная группа состояла из 14 здоровых лиц, не подвергавшихся ранее укусам клещей, не болевших иксодовым клещевым боррелиозом и не имевшим в крови специфических антител к антигенам боррелий (группа III).

При поступлении в стационар до назначения антибиотиков у всех обследованных лиц в пробирки с гепарином было взято 10 мл венозной крови. Моно-нуклеарные клетки были выделены с помощью центрифугирования в градиенте плотности Ficoll-Paque (Pharmacia, Швеция). Клетки инкубировали во флаконах (около 1 • 106 клеток в 1 мл) в среде RPMI-1640 («ПанЭко», г. Москва) с добавлением антибиотиков (100 мкг/мл стрептомицина и 100 МЕ/мл пенициллина) при температуре 37 °С и в присутствии 5% СО2 в течение 120 ч для оценки реакции бластной трансформации лимфоцитов (РБТЛ), числа клеток в состоянии апоптоза и уровня пролиферативного ответа лимфоцитов или в течение 24 ч для определения концентрации цитокинов в супернатантах.

Для стимуляции мононуклеарных клеток использовали инактивированный корпускулярный антиген B. ga-rinii, который был получен из коллекции штаммов бор-релий отдела разработки и экспериментального производства препаратов НПО «Вирион» филиала ФГУП «НПО „Микроген"» МЗ РФ в г. Томске. Предварительное определение оптимальной концентрации корпускулярного антигена, необходимого для стимуляции про-лиферативного ответа лимфоцитов in vitro, проводили в РБТЛ, смешивая клетки с инактивированными борре-лиями в соотношениях 1 : 5, 1 : 10, 1 : 20 и 1 : 50 в соответствии с методикой, описанной в работе J. Sjowall [5].

Для оценки РБТЛ в 5-дневных культурах, стимулированных или не стимулированных инактивирован-ным боррелиозным антигеном, применялся морфологический метод с анализом не менее 500 клеток в препаратах, окрашенных красителем Романовского— Гимзы [2].

Для оценки числа клеток в состоянии апоптоза и уровня пролиферативного ответа лимфоцитов был

использован метод лазерной проточной цитометрии с детекцией иммунофлуоресцентно окрашенных клеток, инкорпорировавших бромдезоксиуридин (БДУ) с использованием набора FITC BrdU Flow Kit (BD Phar-mingen, США) [9]. БДУ был добавлен в конечной концентрации 10 мкмоль/мл в 5-дневные культуры мононуклеарных клеток, стимулированных или не стимулированных боррелиозным антигеном, в срок за 24 ч до конца инкубации. Подготовка проб для анализа проводилась согласно инструкции производителя набора. Анализ числа (%) клеток, одновременно окрашенных 7-амино-актиномицином D (7-AAD) и анти-БДУ FITC-меченными моноклональными антителами проводился с помощью проточного цитометра FACSAria и программы FACSDiVA (Becton Dickinson).

Спонтанные и стимулированные антигенами уровни продукции интерлейкина-4 (ИЛ-4) и ИФ-у (пг/мл) в супернатантах 24-часовых культур мононук-леарных клеток периферической крови были определены с помощью твердофазного ИФА в соответствии с инструкциями, предлагаемыми производителем тест-систем (ООО «Протеиновый контур», г. Санкт-Петербург; BioSource, США). Оптическую плотность регистрировали с помощью иммунологического анализатора «Униплан» (ЗАО «Пикон», Россия) при длине волны 450 нм.

Для статистической обработки данных использовали стандартный пакет программ Statistica 7.0. Полученные результаты представлены как выборочное среднее арифметическое M и стандартное квадратичное отклонение с. Для определения статистической значимости различий между независимыми группами (IA, IB или II группы от III контрольной группы; IA или IB группы от II группы) был использован непараметрический ^-критерий Манна—Уитни. Для определения достоверности различий между зависимыми группами (между IA и IB группами; между спонтанными и стимулированными уровнями в каждой из групп) применялся критерий Вилкоксона [1]. Для выявления зависимостей между изучаемыми параметрами проводили ранговую корреляцию Спирмена. Критический уровень значимости p при проверке статистических гипотез в исследовании принимался равным 0,05.

Результаты и обсуждение

В результате предварительного подбора концентрации корпускулярного антигена для стимуляции культур мононуклеарных клеток было установлено, что соотношение клеток и боррелий 1 : 20 является оптимальным для пролиферативного ответа лимфоцитов in vitro. При анализе результатов РБТЛ (рис. 1) было установлено, что 120-часовая стимуляция инак-тивированным корпускулярным антигеном боррелий культур, полученных от больных в острый и хронический периоды заболевания, а также от реконвалесцен-тов ((13,83 + 5,26), (5,61 + 3,97) и (19,45 + 4,64)% для групп IA, IB и II соответственно) приводила к существенному росту трансформации лимфоцитов в бласт-ные клетки по сравнению с соответствующими показателями в контроле ((0,31 + 0,27)% для группы III, p < 0,01). У больных острым и хроническим ИКБ, а также в группе реконвалесцентов стимуляция культур мононуклеарных клеток сопровождалась существенным повышением числа бласттрансформированных клеток по сравнению с соответствующими спонтанными значениями ((13,83 + 5,26) против (0,60 + 1,05)% для группы IA, p < 0,01; (5,61 + 3,97) против (0,43 + 1,18)% для группы IB, p < 0,01; (19,45 + 4,64) против (1,65 + 1,27)% для группы II, p < 0,01).

Рис. 1. Показатель реакции бластной трансформации лимфоцитов в не стимулированных (среда КРМЫ640) и в стимулированных инактивированным корпускулярным антигеном боррелий В. garinii (БАГ) с соотношением 1 : 20 клеток и бактерий в 120-часовых культурах периферической крови больных острым ИКБ (группа 1А), здоровых реконвалесцентов ИКБ (группа 1В), больных хроническим ИКБ (группа II) и контроля (группа III). Здесь и на рис. 2 для определения достоверности различий между независимыми группами

был использован критерий Манна—Уитни, а между зависимыми группами — критерий Вилкоксона: р — значимость различий между исследуемыми группами; р1 — отличие 1А, 1В или II групп от III группы (контроля); р2 — между спонтанным и стимулированным уровнями показателя в каждой группе; р3 — отличие !А или Ш групп от II группы; р4 — различие между !А и Ш группами. Горизонтальная

черта соответствует медиане

В контрольной группе лиц, не болевших ранее ИКБ (группа III), в отличие от больных людей показатели стимулированной трансформации лимфоцитов после добавления в культуры антигена были сопоставимы со спонтанными значениями ((0,31 + 0,27) против (0,20 + + 0,17)%, р > 0,05). У больных в период реконвалесцен-ции острого ИКБ (группа Ш) по сравнению с периодом разгара заболевания (группа !А) спонтанные уровни трансформации лимфоцитов достоверно не отличались между собой или от спонтанного уровня в контрольной группе III ((0,60 + 1,05) против (0,43 + 1,18)%, р > 0,05). Вместе с тем после стимуляции антигеном культур лимфоцитов реконвалесцентов ((5,61 + 3,97)%, группа Ш), пролиферативный ответ клеток был существенно ниже, чем в соответствующих культурах, полученных от больных с острым и особенно с хроническим течением заболевания ((13,83 + 5,26)% для группы !А и (19,45 + 4,64)% для группы II, р < 0,02). Таким образом, наиболее высокие показатели спонтанной и стимулированной РБТЛ были характерны для больных с хроническим течением ИКБ. В отличие от больных острым ИКБ и реконвалесцентов спонтанный уровень бластной трансформации лимфоцитов в культурах мононуклеар-ных клеток больных хроническим ИКБ был значительно выше соответствующих спонтанных значений в контроле ((1,65 + 1,27) против (0,20 + 0,17)%, р < 0,01).

Активная пролиферация мононуклеарных клеток через 120 ч культивирования в ответ на антиген борре-лий у больных острым и хроническим ИКБ по сравнению с контрольной группой была также выявлена при использовании метода проточной цитометрии имму-нофлуоресцентно окрашенных клеток, инкорпорировавших БДУ (рис. 2). Поскольку аналог тимидина БДУ инкорпорируется в синтезируемую ДНК в течение фазы синтеза (8) клеточного цикла, то пул клеток, окрашенный анти-БДУ-антителами, соответствует этой фазе клеточного цикла. Одновременная окраска клеток на общее содержание ДНК с использованием 7-ААБ позволяет с помощью двухцветной лазерной проточной

цитометрии определить число мононуклеарных клеток in vitro, инкорпорировавших БДУ и находящихся в состоянии апоптоза или в разных фазах клеточного цикла (G0/Gi, S-фазе или G2/M). Поэтому клетки, находящиеся в фазах покоя G0 или G1, можно рассматривать как не отвечающие на антигенный стимул, а клетки в фазах синтеза S, G2 и митоза M являются активно пролиферирующими.

В стимулированных культурах лимфоцитов (рис. 2, б, в), полученных от больных острым и хроническим ИКБ, было отмечено увеличение популяций клеток, находящихся в фазах G2/M ((4,40 + 2,03)% для группы IA и (6,16 + 2,74)% для группы II) или в S-фазе ((18,11 + 4,50)% для группы IA и (26,81 + 8,09)% для группы II), по сравнению с соответствующими контрольными значениями ((1,04 + 0,70) и (2,51 + 2,03)% для группы III, p < 0,02). Одновременно в этих группах больных было установлено существенное уменьшение числа клеток в фазах G0/G1 (рис. 2,а) по сравнению с контролем ((52,29 + 7,74) против (75,82 + 9,77)% для группы IA, p < 0,02; (56,61 + 9,91)% против (75,82 + + 9,77)% для группы II, p < 0,02).

Кроме того, в культурах больных хроническим бор-релиозом, в которые не был добавлен антиген (спонтанный уровень), число клеток в S-фазе было достоверно выше ((4,72 + 2,53)%) по сравнению с соответствующими культурами реконвалесцентов ((1,31 + 1,15)%, p < 0,02) и контрольной группы ((1,60 + 1,33)%, p < 0,02).

У больных хроническим ИКБ в нестимулированных культурах в отличие от других обследованных групп было также отмечено значительное увеличение по сравнению с контролем уровня клеток в фазах G2/M ((1,92 + 1,10) против (0,51 + 0,58)%, p < 0,02). У здоровых реконвалесцентов стимуляция культуры антигеном приводила к увеличению числа пролифери-рующих клеток, которые главным образом находились в фазе синтеза, но полученные значения были существенно ниже соответствующих стимулированных уровней у больных острым и особенно хроническим ИКБ ((7,86 + 3,46) против (18,11 + 4,50)% для группы IA, p < 0,02; (7,86 + 3,46) против (26,81 + 2,69)% для группы II, p < 0,02). Наиболее высокие уровни клеток в фазах S и G2/M были характерны для больных с хроническим течением заболевания (рис. 2, б, в).

Полученные данные свидетельствуют о том, что мононуклеарные клетки больных хроническим ИКБ in vivo находятся в активированном состоянии. Об этом говорит существенное повышение числа клеток, находящихся в фазах S и G2/M клеточного цикла, в нести-мулированных культурах. Не исключено, что этот «спонтанный» пролиферативный ответ лимфоцитов

обусловлен присутствием боррелий и их антигенов в плазме больных хроническим ИКБ.

Полученные результаты во многом совпадают с данными других исследователей, которые наблюдали существенно повышенный пролиферативный ответ лимфоцитов на стимуляцию антигенами B. burgdorferi в культурах, полученных от больных острой или хронической формами заболевания [8, 10].

в г

Рис. 2. Количественный анализ популяций лимфоцитов в различных фазах клеточного цикла или в состоянии апоптоза в не стимулированных (среда RPMI-1640) и стимулированных инактивированным корпускулярным антигеном боррелий B. garinii (БАГ) с соотношением 1 : 20 клеток и бактерий в 120-часовых культурах периферической крови больных острым ИКБ (группа IA), здоровых реконвалесцентов ИКБ (группа IB),

больных хроническим ИКБ (группа II) и контроля (группа III): а — число клеток в фазах Go/Gi; б

клеток в фазе S; г — число клеток в состоянии апоптоза

число клеток в фазах С2/М; в — число

Главной особенностью ответа лимфоцитов в культурах больных хроническим ИКБ (рис. 2,г) было значительное подавление стимулированного антигеном бор-релий апоптоза лимфоцитов ((7,33 + 2,51)%) как по сравнению с контролем ((16,40 + 6,03)%, р < 0,02), так и по сравнению с соответствующими значениями этого

и у реконвалесцентов

((22,10 + 2,86)%, р < 0,02) ((18,05 + 2,64)%, р < 0,02).

Кроме изучения особенностей бластной трансформации лимфоцитов в стимулированных культурах больных ИКБ было проведено определение концентрации ИФ-у и ИЛ-4 в супернатантах этих культур (таблица).

показателя в группе больных острым ИКБ

Продукция цитокинов ИФ-у и ИЛ-4 в не стимулированных или стимулированных инактивированным корпускулярным антигеном В.

%агти

24-часовых культурах лимфоцитов периферической крови больных ИКБ

Группа Уровень ИФ-у, пг/мл ИЛ-4, пг/мл

M ± G Ме (min—max) Р M ± G Ме (min —max) Р

IA Спонтанный 39,9 ± 32,17 23 (18—105) Р1 > 0,05 Р3 < 0,01 4,7 ± 4,64 4 (0— -10) Р1 > 0,05

Стимулированный 268,27 ± 285,76 65 (30—730) Р1 < 0,01 Р2 < 0,01 Р3 > 0,05 5,34 ± 4,65 3,5 (0— -16) Р1 > 0,05 Р2 > 0,05 Р3 < 0,01

IB Спонтанный 21,09 ± 11,29 18 (15—43) Р3 < 0,01 2,25 ± 2,86 1,5 (0 —8) Р1 > 0,05

Стимулированный 37,45 ± 27,16 25 (20—109) Р2 > 0,05 Р3 < 0,01 Р4 < 0,01 4,38 ± 3,30 3 (0— -10) Р2 > 0,05 Р3 < 0,01 Р4 > 0,05

II Спонтанный Стимулированный 179,63 ± 158,88 495,45 ± 319,0 115 (53—430) 500 (55—860) Р1 < 0,01 Р1 < 0,01 Р2 < 0,02 3,09 ± 4,36 0,60 ± 0,78 2 (0— 0 (0— -12) 2,0) Р1 > 0,05 Р1 < 0,02 Р2 < 0,01

III Спонтанный Стимулированный 28,27 ± 10,18 32,36 ± 13,38 22 (20—45) 23 (18—51) Р2 > 0,05 2,81 ± 2,22 4,18 ± 4,42 2 (0— 2 (0— 5,1) 12,3) Р2 > 0,05

Примечание. р — значимость различий между исследуемыми группами; р1 — отличие 1А, 1В или II групп от III группы (контроля); р2 — между спонтанным и стимулированным уровнями показателя в каждой группе; р3 — отличие !А или Ш групп от II группы; р4 — различие между !А и !В группами.

В результате установлено, что стимулированная антигеном боррелий трансформация лимфоцитов у больных с острым и хроническим течением заболевания в отличие от контроля и реконвалесцентов сопровождалась значительным повышением содержания ИФ-у в супернатантах по сравнению с соответствующими спонтанными значениями ((268,27 + 285,76) против (39,9 + 32,17) пг/мл, р < 0,01 в группе !А и (495,45 + + 319,0) против (179,63 + 158,88) пг/мл, р < 0,02 в группе II). Уровни стимулированной продукции ИФ-у в культурах больных острым и хроническим ИКБ ((268,27 + 285,76) и (495,45 + 319,00) пг/мл) были существенно выше соответствующих значений в группе реконвалесцентов (37,45 + 27,16, р < 0,01) и в контроле (32,36 + 13,38, р < 0,01). Кроме того, у больных острым и хроническим боррелиозом были выявлены значимые положительные корреляционные зависимо-

сти между значениями числа лимфоцитов, находящихся в фазах 8 и в2/М клеточного цикла, и концентрацией ИФ-у в супернатантах соответствующих культур (г = +0,70 и +0,72 при р < 0,01 для группы !А и г = +0,83 и +0,77 прир < 0,01 для группы II).

С другой стороны, у больных острым ИКБ уровни спонтанной и стимулированной продукции ИЛ-4 в культурах не отличались от контроля (р > 0,05), а у больных с хронической формой заболевания концентрации стимулированной секреции этого цитокина были даже существенно ниже, чем в контрольной группе ((0,60 + 0,78) против (4,18 + 4,42) пг/мл,р < 0,02).

Поэтому было высказано предположение о том, что стимуляция антигеном боррелий культур, полученных от больных с острым и особенно с хроническим течением заболевания приводит к Т-хелпер типа 1-подобному ответу и сопровождается активной продукцией ИФ-у.

В формировании хронического течения ИКБ боль- response to lire ¡ípiro^tesí // Qin. Exp. Immun°l. 2°°5.

V. 141, № i. P. 89—98.

шое значение придают наследственной или приобретенной дисрегуляции инициального врожденного иммунного ответа с последующим развитием нарушений приобретенного T-клеточного ответа [13]. Полученные данные подтверждают предположение о том, что в культурах лимфоцитов больных хроническим ИКБ наблюдается повышенный пролиферативный ответ T-лимфоцитов на антигены возбудителя при одновременном подавлении апоптоза реактивных клеток, что, по-видимому, отражает нарушение механизмов активаци-онно-индуцирован-

ной клеточной смерти и может лежать в основе развития персистентно активированного T-клеточного иммунного ответа и хронического воспалительного процесса при этом заболевании [б, 7, 11, 13].

Выводы

1. В культурах лимфоцитов больных хроническим ИКБ наблюдается повышенный T-хелпер типа i-подоб-ный ответ на антигены возбудителя при одновременном подавлении апоптоза реактивных клеток, что может лежать в основе формирования персистентно активированного T-клеточного иммунного ответа и хронического воспалительного процесса при этом заболевании.

2. Стимуляция боррелиозным антигеном культур лимфоцитов, полученных от реконвалесцентов острого ИКБ, при благоприятном исходе заболевания приводила к росту числа клеток в состоянии апоптоза, что, по-видимому, отражает сохранение механизмов активационно-индуцированной клеточной смерти, способствующих снижению числа реактивных T-лимфоцитов в период выздоровления при остром ИКБ.

Литература

1. Гланц С. Медико-биологическая статистика. М.: Практика, 1998. 459 с.

2. Новиков Д.К., Новикова В.И. Оценка иммунного статуса. М.: Витебск — Москва, 1996. 286 с.

3. Рябченко А.В. Получение рекомбинантных белков западносибирских изолятов Borrelia burgdorferi sensu lato и изучение их антигенных свойств: автореф. дис. ... канд. мед. наук. Новосибирск, 2009. 21 с.

4. Asbrink E., Hovmark A. Comments on the course and classification of Lyme borreliosis // Scand. J. Infect. Dis. Suppl. i99i. V. 77. P. 4i—43.

5. Sjöwall J., Carlsson A., Vaarala O. et al. Innate immune responses in Lyme borreliosis: enhanced tumour necrosis factor-alpha and interleukin-i2 in asymptomatic individuals in

6. Budd R.C. Activation-induced cell death // Curr. Opin. Immunol. 2001. V. 13, № 3. P. 356—362.

7. Grygorczuk S., Osada J., Swierzbinska R. et al. Expression of Fas receptor on human T lymphocytes under stimulation with Borrelia burgdorferi sensu lato — preliminary results // Adv. Med. Sci. 2010. V. 55, № 2. P. 228—234.

8. Krause A., Brade V., Schoerner C. et al. T cell proliferation induced by Borrelia burgdorferi in patients with Lyme borreliosis. Autologous serum required for optimum stimulation // Arthritis Rheum. 1991. V. 34, № 4. P. 393—402.

9. Lacombe F., Beloc F., Bernard P., Boisseau M.R. Evaluation of four methods of DNA distribution data analysis based on bromdeoxyuridine / DNA bivariante data // Cytometry. 1988. V. 9, № 3. P. 245—253.

10. Oksi J., Savolainen J., Pene J. et al. Decreased interleu-kin-4 and increased gamma interferon production by peripheral blood mononuclear cells of patients with Lyme

borreliosis // Infect. Immun. 1996. V. 64, № 9. P. 3620— 3623.

11. Pohl-Koppe A., Balashov K., Steere A.C. et al. Identification of a T cell subset capable of both IFN-y and IL-10 secretion in patients with chronic Borrelia burgdorferi infection // J. Immunol. 1998. V. 160, № 4. P. 1804— 1810.

12. Postic D., Assous M.V., Grimont P.A. et al. Diversity of Borrelia burgdorferi sensu lato evidenced by restriction fragment length polymorphism of rrf (5S)-rrl (23S) intergenic spacer amplicons // Int. J. Syst. Bacteriol. 1994. V. 44, № 4. P. 743—752.

13. Widhe M., Jarefors S., Ekerfelt C. et al. Borrelia-specific interferon-y and interleukin-4 secretion in cerebrospinal fluid and blood during Lyme borreliosis in humans: association with clinical outcome // J. Infect. Dis. 2004. V. 189, № 10. P. 1881—1891.

Поступила в редакцию 06.10.2011 г.

Утверждена к печати 05.03.2012 г.

Сведения об авторах

И.Н. Ильинских — д-р биол. наук, профессор кафедры микробиологии и вирусологии СибГМУ (г. Томск).

Е.Н. Ильинских — д-р мед. наук, профессор кафедры инфекционных болезней и эпидемиологии СибГМУ (г. Томск).

А.Г. Семёнов — аспирант кафедры микробиологии и вирусологии СибГМУ (г. Томск).

Е.А. Файт — науч. сотрудник сектора гематологии, иммунологии и морфологии ЦНИЛ СибГМУ (г. Томск).

М.В. Шайтарова — ординатор кафедры инфекционных болезней и эпидемиологии СибГМУ (г. Томск).

Для корреспонденции

Ильинских Екатерина Николаевна, тел.: 8-903-954-8817, 8 (382-2) 41-75-63; e-mail: infconf2009@mail.ru