СПОСОБЫ ВЫДЕЛЕНИЯ И ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОЛИЧЕСТВЕННОГО СОДЕРЖАНИЯ АНТИГЕНА В ВАКЦИНАХ

1. Способ выделения антигена из композиции вакцины, включающий стадии:
(а) солюбилизации антигена в композиции вакцины без детергента и без алкилирующего агента; и
(б) выделения антигена или подтипа антигена фракционированием.
2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что стадию солюбилизации проводят путем восстановления.
3. Способ по п. 2, отличающийся тем, что восстановление включает обработку композиции вакцины дитиотреитолом.
4. Способ по п. 2, отличающийся тем, что стадия солюбилизации дополнительно включает денатурацию хаотропным агентом.
5. Способ по п. 2, отличающийся тем, что восстановление дополнительно осуществляют подкислением антигена или подтипа антигена для предотвращения образования дисульфидной связи между отдельными подтипами антигена.
6. Способ определения количественного содержания антигена или подтипа антигена в композиции вакцины, включающей антиген, и такой способ включает способ по любому из пп. 1-5 с последующей стадией определения количественного содержания антигена или подтипа антигена.
7. Способ по п. 6, отличающийся тем, что стадию определения количественного содержания проводят без использования стандарта антигена.
8. Способ по п. 6, отличающийся тем, что стадию определения
количественного содержания проводят с использованием стандарта антигена.
9. Способ по любому из пп. 7-8, отличающийся тем, что стадия определения количественного содержания включает определение количественного содержания антигена аминокислотным анализом.
10. Способ по любому из пп. 3-8, отличающийся тем, что восстановление включает инкубационный период от примерно 5 мин до примерно 20 ч.
11. Способ по любому из пп. 3-8, отличающийся тем, что восстановление включает инкубационный период от примерно 30 мин до примерно 2 ч.
12. Способ по любому из пп. 3-8, отличающийся тем, что восстановление включает инкубационный период примерно 1 ч.
o
o
13. Способ по любому из пп. 3-8, отличающийся тем, что восстановление включает температуру инкубации от примерно 20С до примерно 100С.
o
o
14. Способ по любому из пп. 3-8, отличающийся тем, что восстановление включает температуру инкубации от примерно 50С до примерно 90С.
o
15. Способ по любому из пп. 3-8, отличающийся тем, что восстановление включает температуру инкубации примерно 85C.
16. Способ по любому из пп. 4-8, отличающийся тем, что хаотропный агент является гуанидина гидрохлоридом, мочевиной, тиомочевиной, литием, перхлоратом или тиоцианатом.
17. Способ по любому из пп. 5-8 отличающийся тем, что подкисление проводят фосфорной кислотой, соляной кислотой, серной кислотой, трифторуксусной кислотой, пентафторпропионовой кислотой, гептафтормасляной кислотой или муравьиной кислотой.
18. Способ по любому из пп. 1-8, отличающийся тем, что фракционирование осуществляют с помощью хроматографии.
19. Способ по п. 18, отличающийся тем, что хроматография является высокоэффективной жидкостной хроматографией (ВЭЖХ), обращенно-фазовой ВЭЖХ (ОФ-ВЭЖХ), ионобменной-ВЭЖХ (ИО-ВЭЖХ), аффинной хроматографией, хроматографией с гидрофобным взаимодействием (HIC) или эксклюзионной хроматографией (SEC).
20. Способ по п. 19, отличающийся тем, что хроматография является ОФ-ВЭЖХ.
21. Способ по любому из пп. 1-8 и 19, отличающийся тем, что антиген является вирусным или бактериальным.
22. Способ по любому из пп. 1-8 и 19, отличающийся тем, что антиген является гемагглютинином (HA).
23. Способ по п. 22, отличающийся тем, что НА получен из композиции вакцины вируса гриппа, композиции вакцины вируса кори, композиции вакцины вируса парагриппа или композиции вакцины вируса паротита.
24. Способ по п. 23, отличающийся тем, что композиция вакцины является композицией вакцины вируса гриппа.
25. Способ по п. 24, отличающийся тем, что композиция вакцины вируса гриппа обеспечивает защиту от вируса гриппа, выбранного из группы, состоящей из гриппа А и гриппа B.
26. Способ по п. 25, отличающийся тем, что подтип антигена является любым подтипом гриппа А, HA1, HA2, HA3, HA4, HA5, HA6, HA7, HA8, HA9, HA10, HA11, HA12, HA13, HA14, HA15 и HA16, и HA гриппа B.
27. Способ по п. 26, отличающийся тем, что подтип антигена является подтипом НА гриппа А, HA1, HA2, HA3, HA5, HA7, HA9, HA10, или HA гриппа B.
28. Способ по п. 27, отличающийся тем, что подтипом НА гриппа А является НА1.
29. Способ по п. 26, отличающийся тем, что композиция вакцины вируса гриппа обеспечивает защиту от типа гриппа, выбранного из группы, состоящей из гриппа А H1N1, H1N2, H2N2, H3N2, H5N1, H7N1, H7N2, H7N3, H7N7, H9N2, H10N7 и вируса гриппа В.
30. Способ по любому из пп. 5-8, 19 и 23-29, отличающийся тем, определяют количественное содержание антигена с относительным стандартным отклонением (ОСО) менее чем примерно 2,5%.
31. Способ по п. 30, отличающийся тем, что ОСО составляет примерно 2,2%.
32. Способ по п. 30, отличающийся тем, что ОСО составляет примерно 1,3%.