КОНЪЮГАТЫ, СОДЕРЖАЩИЕ КЛЕТОЧНОСВЯЗЫВАЮЩИЕ АГЕНТЫ И ЦИТОТОКСИЧЕСКИЕ АГЕНТЫ

1. Конъюгат клеточносвязывающего агента с цитотоксическим агентом, представленный следующей структурной формулой:
или его фармацевтически приемлемая соль, где:
CB
СВА представляет собой клеточносвязывающий агент, ковалентно связанный с группой J’;
CB’
J представляет собой фрагмент, полученный взаимодействием альдегидной группы в СВА со способной реагировать с альдегидом группой, связанной с группой L, где указанная альдегидная группа получена окислением 2-гидроксиэтиламинного фрагмента, представленного следующей структурной формулой:
где 2-гидроксиэтиламинный фрагмент представляет собой часть серинового, треонинового, гидроксилизинового, 4-гидроксиорнитинового остатка или остатка 2,4-диамино-5-гидроксивалериановой кислоты;
L представляет собой спейсер или связь;
D’
J представляет собой связывающий фрагмент, соединяющий цитотоксический агент D с группой L, или отсутствует, если L представляет собой связь;
D’
CB’
D представляет собой цитотоксический агент, ковалентно связанный с L через связывающий фрагмент J или с СВА через J, если L представляет собой связь; и
w равен 1, 2, 3 или 4.
2. Конъюгат по п. 1, отличающийся тем, что клеточносвязывающий агент представляет собой антитело или его антигенсвязывающую часть, или миметик антитела, такой как DARPin, центирин, аффитело, аффилин, аффитин, антикалин, авимер, финомер, пептид домена Куница, монотело (или аднектин), триатело или нанофитин.
2
2
3
2
3. Конъюгат по п. 1, отличающийся тем, что клеточносвязывающий агент представляет собой антитело или его антигенсвязывающую часть, например, Fab, Р(ab), F(ab’), F(ab’), F(ab’), Fd, Fv, дисульфид-связанный Fv, dAb или sdAb (или наноантитело), CDR, scFv, (scFv), di-scFv, bi-scFv, tascFv (тандемный scFv), AVIBODY (например, диатело, триатело, тетратело), активатор Т-клеток (BiTE), scFv-Fc, Fcab, mAb2, иммунофармацевтическое средство на основе модульного белка малого размера (SMIP), Genmab / Unibody или Duobody, домен V-NAR, IgNAR, миниантитело, IgGΔCH2, DVD-Ig, проантитело, интраантитело или полиспецифическое антитело.
4. Конъюгат по п. 3, отличающийся тем, что альдегидная группа расположена на N-конце антитела или его антигенсвязывающей части.
5. Конъюгат по п. 4, отличающийся тем, что N-концевая альдегидная группа получена окислением N-концевого серина.
6. Конъюгат по п. 5, отличающийся тем, что N-концевой серии сконструирован в указанном антителе или его антигенсвязывающей части.
7. Конъюгат по п. 6, отличающийся тем, что указанное антитело или его антигенсвязывающая часть представляет собой любое рекомбинантное антитело по любому из пп. 90-93.
8. Конъюгат по п. 4, отличающийся тем, что N-концевой серии естественным образом присутствует в указанном антителе или его антигенсвязывающей части.
9. Конъюгат по п. 3, отличающийся тем, что указанное антитело или его антигенсвязывающая часть содержит последовательность легкой цепи с SEQ ID NO:3.
10. Конъюгат по п. 3, отличающийся тем, что указанное антитело или его антигенсвязывающая часть представляет собой химерное, гуманизированное или человеческое антитело или его антигенсвязывающую часть из мышиного антитела или его антигенсвязывающей части, содержащей последовательность легкой цепи с SEQ ID NO:3.
11. Конъюгат по п. 10, отличающийся тем, что гуманизированное антитело или его антигенсвязывающая часть представляет собой антитело с измененной поверхностью или антитело с привитой CDR, или его антигенсвязывающую часть.
12. Конъюгат по любому из пп. 4-11, отличающийся тем, что N-концевая альдегидная группа расположена на одной или обеих тяжелых цепях антитела или его антигенсвязывающей части, или на одной или обеих легких цепях антитела или его антигенсвязывающей части, или их комбинации.
13. Конъюгат по любому из пп. 1-12, отличающийся тем, что способная реагировать с альдегидом группа представляет собой гидразин, гидразид или гидроксиламин.
14. Конъюгат по любому из пп. 1-13, отличающийся тем, что способная реагировать с альдегидом группа выбрана из:
и
а
2
3
2
b
b
2
с
Z
Z’
Z
где Х представляет собой CH, О или NCH; U’ представляет собой NH, О, S или СН; U представляет собой Н или электронодонорную группу; X и X’, каждый независимо, представляют собой - ОН, -SH или -NH; R и R, каждый независимо, представляют собой Н или алкил (предпочтительно -Me); R” представляет собой Н или алкил; и Х представляет собой N или СН.
15. Конъюгат по п. 14, отличающийся тем, что способная реагировать с альдегидом группа представляет собой ; или .
CB
16. Конъюгат по любому из пп. 1-13, отличающийся тем, что J’ представлен одной из следующих структурных формул:
или
а
2
3
2
b1
b1
Z
Z’
Z
где Х представляет собой СН, О или NCH; U’ представляет собой NH, О, S или СН; U представляет собой Н или электронодонорную группу; X и X’, каждый независимо, представляют собой -О-, -S- или -NH-; R и R, каждый независимо, представляют собой Н или алкил (предпочтительно -Me); и R” представляет собой H или алкил; s1 представляет собой сайт, ковалентно связанный с клеточносвязывающим агентом; и s2 представляет собой сайт, ковалентно связанный с группой L.
CB
17. Конъюгат по п. 16, отличающийся тем, что J’ представляет собой
или .
D
18. Конъюгат по любому из пп. 1-17, отличающийся тем, что -L-J’- представлен следующей структурной формулой:
где:
CB
s3 представляет собой сайт, ковалентно связанный с группой J’;
s4 представляет собой сайт, ковалентно связанный с группой D;
a1
2
9
9
2
9
9
2
2
p
9
9
2
2
p’
2
2
р’
9
9
2
2
p’-
Z отсутствует, представляет собой -SONR-, -NRSO-, -C(=O)-NR-, -NR-С(=O)-, -(CHCH)’ NR-C(=O)-,-C(-O)-NR(CHCH), -(CHCH)-C(=O)NR-, -NRC(=O)(CHCH), -С(=O)-O- или -O-С(=О)-;
a2
2
9
9
2
9
9
9
2
2
p
9
2
2
p
2
2
p
9
2
2
p
9
Z отсутствует, представляет собой -SONR-, -NRSO-, -C(=O)-NR-, -NR-С(=O)-, -С(=O)-O-, -O-С(=O)-, -C(=O)-NR-(CHCHO)-, -NR-C(=O)-(CHCHO)-, -(OCHCH)-C(=O)NR- или -(OCHCH)-NR-C(=O)-;
9
R представляет собой Н или необязательно замещенный алкил;
р и р’, каждый независимо, представляют собой целое число от 1 до 10;
Q представляет собой Н, заряженный заместитель или ионизируемую группу;
a1
a2
a3
a4
R, R, R, R для каждого случая независимо представляют собой Н или необязательно замещенный алкил;
q1 и r1, каждый независимо, представляют собой целое число от 0 до 10, при условии, что q1 и r1 одновременно не равны 0.
3
3
3
2
3
2
3
2
3
2
2
2
11
12
11
12
14
15
16
14
15
16
14
16
+
-
+
-
-
19. Конъюгат по п. 18, отличающийся тем, что Q представляет собой i) H; ii) -SOH, -Z’-SOH, -ОРОН, -Z’-ОРОН, -РОН, -Z’-РОН, -COH, -Z’-COH, -NRR или -Z’-NRR, или его фармацевтически приемлемую соль; или iii) -NRRRX или -Z’-NRRRX; Z’ представляет собой необязательно замещенный алкилен, необязательно замещенный циклоалкилен или необязательно замещенный фенилен; R-R, каждый независимо, представляют собой необязательно замещенный алкил; и X представляет собой фармацевтически приемлемый анион.
3
2
20. Конъюгат по п. 19, отличающийся тем, что Q представляет собой -SOH или -COH, или его фармацевтически приемлемую соль.
a1
a2
9
9
21. Конъюгат по любому из пп. 18-20, отличающийся тем, что Z отсутствует; и Z представляет собой -C(=O)-NR- или -NR-C(=O)-.
9
22. Конъюгат по п. 21, отличающийся тем, что R представляет собой Н.
a1
a2
23. Конъюгат по любому из пп. 18-20, отличающийся тем, что оба Z и Z отсутствуют.
a1
a2
a3
a4
24. Конъюгат по любому из пп. 18-23, отличающийся тем, что все R, R, R и R представляют собой -Н; и q и r, каждый независимо, представляют собой целое число от 0 до 4.
D
25. Конъюгат по п. 18, отличающийся тем, что -L-J’- представлен следующей структурной формулой:
или
3
или его фармацевтически приемлемая соль, где R представляет собой Н или -SOH.
D
26. Конъюгат по любому из пп. 1-17, отличающийся тем, что -L-J’- представлен следующей структурной формулой:
где:
CB
s3 представляет собой сайт, ковалентно связанный с группой J’;
s4 представляет собой сайт, ковалентно связанный с группой D;
b1
b2
2
9
9
2
9
Z и Z, каждый независимо, отсутствуют, представляют собой -SONR-, -NRSO-, -C(=O)-NR-,
9
2
2
2
2
p
2
2
р’
9
2
2
9
-NR-C(=O)-, -С(=O)-O-, -O-C-(=О)-, -СН-О-, -О-CH-, -(CHCHO)- или -(ОСНСН)-, -NR-C(=O)-CH- или -CH-C(=O)-NR-, где р и р’ независимо представляют собой целое число от 1 до 1000;
1
2
9
1
2
9
один из E и Е представляет собой -С(=O)-, а другой представляет собой -NR-; или один из E и Е представляет собой -С(=O)- или -NR-, а другой отсутствует;
9
R представляет собой Н или необязательно замещенный алкил;
1-10
2
2
s
m
Р представляет собой [XX], где каждый XX представляет собой остаток независимо выбранной аминокислоты, или Р представляет собой -(NR-CHCH)-;
s представляет собой целое число от 1 до 5;
m
R представляет собой Н или алкил, необязательно замещенный заряженным заместителем или ионизируемой группой;
b1
b2
b3
b4
b5
b6
R, R, R, R, R и R для каждого случая, каждый независимо, представляют собой Н или необязательно замещенный алкил;
m1 и n1 для каждого случая независимо представляют собой целое число от 0 до 10.
JD
27. Конъюгат по п. 26, отличающийся тем, что - L-’- представлен следующей структурной формулой:
где:
b1
b2
b1
b2
2
2
оба Z и Z отсутствуют, или один из Z и Z отсутствует, а другой представляет собой -СН-О- или -O-CH-; и
n1 представляет собой целое число от 1 до 6.
b1
b2
28. Конъюгат по п. 27, отличающийся тем, что оба R и R представляют собой Н.
D
29. Конъюгат по п. 26, отличающийся тем, что -L-J’- представлен следующей структурной формулой:
где:
b1
b2
2
2
9
2
2
9
Z и Z, каждый независимо, отсутствуют, представляют собой -СН-О-, -О-СН-, -NR-C(=O)-CH- или CH-C(=O)-NR-; и
n1 и m1, каждый независимо, представляют собой целое число от 1 до 6.
b1
b2
30. Конъюгат по п. 29, отличающийся тем, что оба Z и Z отсутствуют.
b1
2
b2
31. Конъюгат по п. 29, отличающийся тем, что Z представляет собой -СН-О-; и Z отсутствует.
b1
2
9
b2
2
32. Конъюгат по п. 29, отличающийся тем, что Z представляет собой -CH-C(=O)-NR-; и Z представляет собой -O-CH- или отсутствует.
9
33. Конъюгат по п. 26, 29 или 32, отличающийся тем, что R представляет собой -Н.
2-4
34. Конъюгат по любому из пп. 26 и 29-33, отличающийся тем, что Р представляет собой [ХХ].
2
3
35. Конъюгат по п. 34, отличающийся тем, что Р представляет собой [ХХ] или [ХХ].
36. Конъюгат по пп. 26 и 29-35, отличающийся тем, что каждый XX представляет собой остаток независимо выбранной аминокислоты, выбранной из: природной аминокислоты, синтетической аминокислоты, аналога аминокислоты или миметика аминокислоты, который действует таким же образом, как природные аминокислоты.
37. Конъюгат по п. 36, отличающийся тем, что каждый XX представляет собой остаток независимо выбранной аминокислоты, выбранной из группы, состоящей из: гистидина, аланина, изолейцина, аргинина, лейцина, аспарагина, лизина, аспарагиновой кислоты, метионина, цистеина, фенилаланина, глутаминовой кислоты, треонина, глутамина, триптофана, глицина, валина, пролина, серина, тирозина, N-метил-гистидина, N-метил-аланина, N-метил-изолейцина, N-метил-аргинина, N-метил-лейцина, N-метил-аспарагина, N-метил-лизина, N-метил-аспарагиновой кислоты, N-метил-метионина, N-метил-цистеина, N-метил-фенилаланина, N-метил-глутаминовой кислоты, N-метил-треонина, N-метил-глутамина, N-метил-триптофана, N-метил-глицина, N-метил-валина, N-метил-пролина, N-метил-серина, N-метил-тирозина, гидроксипролина, γ-карбоксиглутамата, селеноцистеина, О-фосфосерина, гомосерина, норлейцина, метионинсульфоксида, метил-метионин-сульфония, цитруллина, орнитина, цистеинсульфоновой кислоты, цистеинсульфиновой кислоты, 3-аминоаланина, 3-диметиламиноаланина, 2-амино-4-(диметиламино)бутановой кислоты, 2,4-диаминобутановой кислоты, 2-амино-6-(диметиламино)гексановой кислоты, 2-амино-5-(диметиламино)пентановой кислоты и β-аланина, каждый независимо в виде L или D изомера.
38. Конъюгат по п. 37, отличающийся тем, что каждый XX независимо представляет собой остаток глицина или аланина.
39. Конъюгат по пп. 26 и 29-38, отличающийся тем, что Р представляет собой пептид, расщепляемый протеазой.
40. Конъюгат по п. 39, отличающийся тем, что Р представляет собой пептид, расщепляемый протеазой, экспрессируемой в опухолевой ткани.
41. Конъюгат по п. 39, отличающийся тем, что Р представляет собой пептид, расщепляемый лизосомальной протеазой.
9
9
42. Конъюгат по пп. 26, 29-34 и 36-41, отличающийся тем, что Р выбран из группы, состоящей из: Val-Cit, Val-Lys, Phe-Lys, Lys-Lys, Ala-Lys, Phe-Cit, Leu-Cit, Lle-Cit, Trp, Cit, Phe-Ala, Phe-N-тозил-Arg, Phe-N-нитро-Arg, Phe-Phe-Lys, D-Phe-Phe-Lys, Gly-Phe-Lys, Leu-Ala-Leu, Ile-Ala-Leu, Val-Ala-Val, Ala-Leu-Ala-Leu (SEQ ID NO:17), β-Ala-Leu-Ala-Leu (SEQ ID NO:18), Gly-Phe-Leu-Gly (SEQ ID NO:19), Val-Arg, Arg-Val, Arg-Arg, Val-D-Cit, Val-D-Lys, Val-D-Arg, D-Val-Cit, D-Val-Lys, D-Val-Arg, D-Val-D-Cit, D-Val-D-Lys, D-Val-D-Arg, D-Arg-D-Arg, Ala-Ala, Ala-D-Ala, D-Ala-Ala и D-Ala-D-Ala,Gly-Gly-Gly, Ala-Ala-Ala, d-Ala-Ala-Ala, Ala-d-Ala-Ala, Ala-Ala-d-Ala, Ala-Val-Cit и Ala-Val-Ala.
43. Конъюгат по пп. 26 и 28-41, отличающийся тем, что Р представляет собой Gly-Gly-Gly, Ala-Ala-Ala, d-Ala-Ala-Ala, Ala-d-Ala-Ala, Ala-Val-Ala, Gly-Gly или Ala-Ala.
D
44. Конъюгат по любому из пп. 26 и 34-43, отличающийся тем, что -L-J’- представлен следующей структурной формулой:
или
D
45. Конъюгат по любому из пп. 1-17, отличающийся тем, что -L-J’- представлен следующей структурной формулой:
CB
s3 представляет собой сайт, ковалентно связанный с группой J’;
s4 представляет собой сайт, ковалентно связанный с группой D;
c1
2
9
9
2
9
9
2
2
2
2
p
2
2
p’
Z отсутствует, представляет собой -SONR-, -NRSO-, -C(=O)-NR, -NR-С(=O)-, -С(=O)-O-, -O-С(=O)-, -СН-О-, -О-СН-, -(CHCHO)- или -(ОСНСН)-, где р и р’ независимо представляют собой целое число от 1 до 1000;
D’
J представляет собой , ,  или, где s1’ представляет собой сайт, ковалентно связанный с цитотоксическим агентом D, s2’ представляет собой сайт, ковалентно связанный с группой А';
А и А’, каждый независимо, представляют собой необязательно замещенный алкилен, необязательно замещенный алкенилен, необязательно замещенный алкинилен, необязательно замещенный циклоалкилен. необязательно замещенный циклоалкенилен или необязательно замещенный циклоалкинилен;
1
2
Q представляет собой -Z-P-Z-;
1
2
Q’ представляет собой -Z’-P’-Z’-;
1
2
h
один из Z и Z представляет собой -С(=O)-, а другой представляет собой -NR-;
1
2
h’
один из Z’ и Z’ представляет собой -С(=O)-, а другой представляет собой -NR-;
2
2
j
2
2
j
1-10
Р и Р’, каждый независимо, отсутствуют, представляют собой необязательно замещенный алкилен, -(CH-CH-O)-, -(O-CH-CH)- или [XX], где каждый XX представляет собой остаток независимо выбранной аминокислоты;
j представляет собой целое число от 1 до 500;
k равен 0 или 1;
5
6
v
7
8
q
9
10
r
7
8
q
9
10
r
11
12
s
13
14
t
15
16
u
g
a
g
g
g’
L представляет собой -(CRR)-, -(CRR)-N(R)-(CRR)-, -(CRR)- C(R)(R)-(CRR) или -(CRR)-N(R)-(CRR)-N(R)-(CRR)-,;
g
g’
17
18
p
R и R, каждый независимо, представляют собой -(CRR)-Z-V;
р представляет собой целое число от 1 до 5;
V представляет собой Н, заряженный заместитель или ионизируемую группу;
h
h
Z отсутствует, представляет собой -C(=O)NR- алкилен- или -NR-C(=O)-алкилен-;
h
h’
R и R для каждого случая независимо представляют собой Н или необязательно замещенный алкил;
5
18
R-R для каждого случая независимо представляют собой H или необязательно замещенный алкил;
q, r, s, t, u и v, каждый независимо, представляют собой целое число от 0 до 10.
D
46. Конъюгат по п. 45, отличающийся тем, что -L-J’- представлен следующей структурной формулой:
или
где:
19
22
R-R для каждого случая независимо представляют собой Н или необязательно замещенный алкил,
каждый m и n независимо равен от 0 до 10.
19
22
47. Конъюгат по п. 46, отличающийся тем, что каждый R-R представляет собой Н;
5
6
7
10
каждый R и R представляет собой Н; и каждый R-R представляет собой Н; и
11
16
каждый R-R представляет собой Н.
1-10
48. Конъюгат по пп. 45-47, отличающийся тем, что Р и Р’ для каждого случая независимо представляют собой [ХХ].
49. Конъюгат по пп. 45-48, отличающийся тем, что каждый XX представляет собой остаток независимо выбранной аминокислоты, выбранной из: природной аминокислоты, синтетической аминокислоты, аналога аминокислоты или миметика аминокислоты, который действует таким же образом, как природные аминокислоты.
50. Конъюгат по п. 49, отличающийся тем, что каждый XX представляет собой остаток независимо выбранной аминокислоты, выбранной из группы, состоящей из: гистидина, аланина, изолейцина, аргинина, лейцина, аспарагина, лизина, аспарагиновой кислоты, метионина, цистеина, фенилаланина, глутаминовой кислоты, треонина, глутамина, триптофана, глицина, валина, пролина, серина, тирозина, N-метил-гистидина, N-метил-аланина, N-метил-изолейцина, N-метил-аргинина, N-метил-лейцина, N-метил-аспарагина, N-метил-лизина, N-метил-аспарагиновой кислоты, N-метил-метионина, N-метил-цистеина, N-метил-фенилаланина, N-метил-глутаминовой кислоты, N-метил-треонина, N-метил-глутамина, N-метил-триптофана, N-метил-глицина, N-метил-валина, N-метил-пролина, N-метил-серина, N-метил-тирозина, гидроксипролина, γ-карбоксиглутамата, селеноцистеина, О-фосфосерина, гомосерина, норлейцина, метионинсульфоксида, метил-метионин-сульфония, цитруллина, орнитина, цистеинсульфоновой кислоты, цистеинсульфиновой кислоты, 3-аминоаланина, 3-диметиламиноаланина, 2-амино-4-(диметиламино)бутановой кислоты, 2,4-диаминобутановой кислоты, 2-амино-6-(диметиламино)гексановой кислоты, 2-амино-5-(диметиламино)пентановой кислоты и β-аланина, каждый независимо в виде L или D изомера.
51. Конъюгат по п. 50, отличающийся тем, что каждый XX представляет собой остаток независимо выбранного глицина или аланина.
52. Конъюгат по любому из пп. 45-51, отличающийся тем, что каждый из Р и Р’ представляют собой пептид, расщепляемый протеазой.
53. Конъюгат по п. 52, отличающийся тем, что каждый Р и Р’ представляют собой пептид, расщепляемый протеазой, экспрессируемой в опухолевой ткани.
54. Конъюгат по п. 52, отличающийся тем, что каждый Р и Р’ представляют собой пептид, расщепляемый лизосомальной протеазой.
9
9
55. Конъюгат по любому из пп. 45-54, отличающийся тем, что каждый Р и Р’ выбраны из группы, состоящей из: Val-Cit, Val-Lys, Phe-Lys, Lys-Lys, Ala-Lys, Phe-Cit, Leu-Cit, Lle-Cit, Trp, Cit, Phe-Ala, Phe-N-тозил-Arg, Phe-N-нитро-Arg, Phe-Phe-Lys, D-Phe-Phe-Lys, Gly-Phe-Lys, Leu-Ala-Leu, Ile-Ala-Leu, Val-Ala-Val, Ala-Leu-Ala-Leu (SEQ ID NO:17), β-Ala-Leu-Ala-Leu (SEQ ID NO:18), Gly-Phe-Leu-Gly (SEQ ID NO:19), Val-Arg, Arg-Val, Arg-Arg, Val-D-Cit, Val-D-Lys, Val-D-Arg, D-Val-Cit, D-Val-Lys, D-Val-Arg, D-Val-D-Cit, D-Val-D-Lys, D-Val-D-Arg, D-Arg-D-Arg, Ala-Ala, Ala-D-Ala, D-Ala-Ala и D-Ala-D-Ala,Gly-Gly-Gly, Ala-Ala-Ala, D-Ala-Ala-Ala, Ala-D-Ala-Ala, Ala-Ala-D-Ala, Ala-Val-Cit, Ala-Val-Ala и β-Ala-Gly-Gly-Gly.
56. Конъюгат по любому из пп. 45-54, отличающийся тем, что каждый Р и Р’ представляют собой Gly-Gly-Gly, Ala-Ala-Ala, D-Ala-Ala-Ala, Ala-D-Ala-Ala, Ala-Val-Ala или β-Ala-Gly-Gly-Gly.
57. Конъюгат по любому из пп. 1-56, отличающийся тем, что D представляет собой майтанзиноид.
58. Конъюгат по любому из пп. 1-25 и 45-56, отличающийся тем, что D представляет собой майтанзиноид, представленный следующей структурной формулой:
где:
M
M
M
R, R’ и R” для каждого случая независимо представляют собой Н или необязательно замещенный алкил;
1
2
3
4
R', R', R' и R' для каждого случая независимо представляют собой Н, необязательно замещенный алкил, необязательно замещенный алкенил. необязательно замещенный циклоалкил, необязательно замещенный гетероциклил, необязательно замещенный арил или необязательно замещенный гетероарил;
i представляет собой целое число от 0 до 15; и
D
s5 представляет собой сайт, ковалентно связанный с группой J’.
59. Конъюгат по п. 58, отличающийся тем, что D представлен следующей структурной формулой:
или
60. Конъюгат по любому из пп. 1-17 и 26-44, отличающийся тем, что D представляет собой майтанзиноид, представленный следующей структурной формулой:
M
M
M
D
где: R, R’ и R” для каждого случая независимо представляют собой Н или необязательно замещенный алкил; и s5 представляет собой сайт, ковалентно связанный с группой J’.
61. Конъюгат по п. 60, отличающийся тем, что D представлен следующей структурной формулой:
62. Конъюгат по любому из пп. 1-56, отличающийся тем, что D представляет собой бензодиазепиновое соединение.
63. Конъюгат по любому из пп. 1-17 и 45-56, отличающийся тем, что D представлен следующей структурной формулой:
где:
двойная линия  между N и С представляет собой одинарную связь или двойную связь, в случае, если она представляет собой двойную связь, то X отсутствует, и Y представляет собой -Н, и если она представляет собой одинарную связь, то X выбран из -Н, линкерной группы с реакционноспособной группой, связанной с ней, или аминозащитную группу (предпочтительно X представляет собой -Н);
3
2
3
+
+
Y выбран из -Н, -OR, -OCOR’, -SR, -NR’R,” -SOM, -SOM или -OSOM, где М представляет собой -Н или катион, такой как Na или К;
2
2
n
c
c
R представляет собой -Н, необязательно заметенный линейный, разветвленный или циклический алкил, алкенил или алкинил, содержащий от 1 до 10 атомов углерода, или ПЭГ группу -(CHCHO)-R, где n представляет собой целое число от 1 до 24, и R представляет собой линейный или разветвленный алкил, содержащий от 1 до 4 атомов углерода;
g’
c
g’
c
2
2
n
2
2
R’ и R” являются одинаковыми или различными и выбраны из -Н, -ОН, -OR, -NRR, -COR, необязательно замещенного линейного, разветвленного или циклического алкила, алкенила или алкинила, содержащего от 1 до 10 атомов углерода, необязательно замещенного арила, содержащего от 6 до 18 атомов углерода, необязательно замещенного 3-18-членного гетероциклического кольца, содержащего от 1 до 6 гетероатомов, выбранных из О, S, N и Р, и ПЭГ группы -(CHCHO)-R, где n представляет собой целое число от 1 до 24, предпочтительно n равен 2, 4 или 8; и R представляет собой -Н, необязательно замещенный линейный, разветвленный или циклический алкил, алкенил или алкинил, содержащий от 1 до 10 атомов углерода, или ПЭГ группу -(CHCHO)n-R;
X’ выбран из группы, состоящей из -Н, -ОН, замещенного или незамещенного линейного, разветвленного или циклического алкила, алкенила или алкинила, содержащего от 1 до 10 атомов углерода, фенила и аминозащитной группы;
Y’ выбран из группы, состоящей из -Н, оксо-группы, замещенного или незамещенного линейного, разветвленного или циклического алкила, алкенила или алкинила, содержащего от 1 до 10 атомов углерода;
А и А’ выбраны из -О- и -S-;
e
e
e
e
2
2
W отсутствует или выбран из -О-, -N(R)-, -N(R)-C(=O)-, -N(C(=O)R)-, -S-или -CH-S-, -CHNR-;
x
R отсутствует или выбран из линейного, разветвленного или циклического алкила, содержащего от 1 до 10 атомов углерода;
e
k
k
101
101
102
101
102
2
2
n
R представляет собой -Н, линейный, разветвленный или циклический алкил, алкенил или алкинил, содержащий от 1 до 10 атомов углерода, или -(СН-CH-O)-R, где R представляет собой -Н, линейный, разветвленный, циклический алкил, содержащий от 1 до 6 атомов углерода, необязательно содержащий вторичную аминогруппу (например, -NHR) или третичную аминогруппу (-NRR), или 5- или 6-членный азотсодержащий гетероцикл, такой как пиперидин или морфолин, где R и R, каждый независимо, представляют собой линейный, разветвленный или циклический алкил, алкенил или алкинил. содержащий от 1 до 10 атомов углерода; и
G выбран из -CH- или -N-;
2
n’
2
X” и X’” являются одинаковыми или различными и независимо выбраны из -(CH)-, -NR’-, -СО-, -ВН-, -SO- или -SO-;
2
n’
Y” и Y’” являются одинаковыми или различными и независимо выбраны из -О, -(СН)-, -NR’- или -S-;
2
n’
7
8
9
Z” и Z’” являются одинаковыми или различными и независимо выбраны из -(CH)-, -CR'R’-, -NR'-, -О- и -S-;
n’ выбран из 0, 1, 2 и 3;
7
8
2
2
n
R' и R' являются одинаковыми или различными, и каждый независимо выбран из -Н, -ОН, -SH, -СООН, -NHR’, полиэтиленгликолевого звена -(ОСНСН)-, аминокислоты, пептидного звена, содержащего от 2 до 6 аминокислот, необязательно замещенного линейного, разветвленного или циклического алкила, содержащего от 1 до 10 атомов углерода;
9
2
2
n
R' независимо выбран из -Н, необязательно замещенного линейного, разветвленного или циклического алкила, содержащего от 1 до 10 атомов углерода, полиэтиленгликолевого звена -(ОСНСН)-;
A
A’
B
B’
A
A’
B
B’
R, R, R и R являются одинаковыми или различными и независимо выбраны из группы, состоящей из -Н, галогенида или необязательно замещенного разветвленного, линейного или циклического алкила, содержащего от 1 до 10 атомов углерода; или R и R и/или R и R вместе образуют группу, содержащую двойную связь, =В и =В’, соответственно;
=В и =В’ являются одинаковыми или различными и независимо выбраны из необязательно замещенного разветвленного или линейного алкенила или карбонильной группы;
A
A1
A2
Q представляет собой Q-Ar-Q;
A’
A1
A2
Q представляет собой Q’-Ar’-Q’;
A1
A1
Q и Q’, каждый независимо, отсутствуют, представляют собой линейный, разветвленный или циклический алкил, содержащий от 1 до 6 атомов углерода, или звено -СН=СН;
Ar и Ar’, каждый независимо, отсутствуют или представляют собой арильную группу;
A2
A2
2
2
n
2
2
2
3
3
2
c’
c
Q и Q’, каждый независимо, выбраны из -Н, линкерной группы, содержащей реакционноспособную группу, связанную с ней, замещенного или незамещенного линейного, разветвленного или циклического алкила, алкенила или алкинила, содержащего от 1 до 10 атомов углерода, полиэтиленгликолевого звена -R-(OCHCH)-R, или заместителя, выбранного из галогена, гуанидиния [-NH(C=NH)NH], -OR, -NR’R’’, -NO, -NCO, -NR’COR’’, -SR, сульфоксида, представленного формулой -SOR’, сульфона, представленного формулой -SOR’, сульфоната -SOM, сульфата -OSOM, сульфонамида, представленного формулой SONR’R’’, циано, азидо, -COR’, -OCOR’ или -OCONR’R’’; и
c’
R отсутствует или выбран из линейного или разветвленного алкила, алкенила или алкинила, содержащего от 1 до 5 атомов углерода.
64. Конъюгат по п. 63, отличающийся тем, что D представлен следующей структурной формулой:
A
B
или его фармацевтически приемлемая соль, где R” и R” являются одинаковыми или различными и выбраны из -H и -Me.
65. Конъюгат по п. 63, отличающийся тем, что:
3
двойная линия  между N и С представляет собой одинарную связь или двойную связь, в случае, если она представляет собой двойную связь, то X отсутствует, и Y представляет собой -Н, и если она представляет собой одинарную связь, то X представляет собой -Н; Y представляет собой -ОН или -SOM;
+
М представляет собой -H или фармацевтически приемлемый катион (например, Na);
оба X’ и Y’ представляют собой -Н;
оба А и А’ представляют собой -О-;
6
R представляет собой -ОМе; и
x
R представляет собой линейный или разветвленный алкил, содержащий от 1 до 6 атомов углерода.
66. Конъюгат по п. 65, отличающийся тем, что D представлен следующей структурной формулой:
3
+
или его фармацевтически приемлемая соль, где Y представляет собой -Н или -SOM, и М представляет собой Н или катион.
3
+
+
+
67. Конъюгат по любому из пп. 63-66, отличающийся тем, что Y представляет собой -SOM, и М представляет собой H, Na или К.
D
68. Конъюгат по любому из пп. 1-17, отличающийся тем, что -L-J’- представляет собой связь; и D представлен следующей структурной формулой:
или его фармацевтически приемлемая соль, где:
один из L’, L” и L”’ представлен следующей формулой:
2
2
n
2
2
2
3
3
2
c
а другие два являются одинаковыми или различными и независимо выбраны из -Н, необязательно замещенного линейного, разветвленного или циклического алкила, алкенила или алкинила, содержащего от 1 до 10 атомов углерода, полиэтиленгликолевого звена -(OCHCH)-R, галогена, гуанидиния [-NH(C=NH)NH], -OR, -NR’R’’, -NO, -NR’COR’’,-SR, -SOR’, -SOR’,-SOH, -OSOH, -SONR’R’’, циано, азидо, -COR’, -OCOR’ и -OCONR’R’’;
d1
9
9
Z отсутствует, представляет собой -C(=O)-NR- или -NR-C(=O)-;
P представляет собой аминокислотный остаток или пептид, содержащий от 2 до 20 аминокислотных остатков;
a
b
1
3
R и R для каждого случая независимо представляют собой -Н, (C-С)алкил или заряженный заместитель, или ионизируемую группу Q;
r и r’, каждый независимо, представляют собой целое число от 1 до 6;
двойная линия  между N и С представляет собой одинарную связь или двойную связь, в случае, если она представляет собой двойную связь, то X отсутствует, и Y представляет собой -H или линейный или разветвленный алкил, содержащий от 1 до 4 атомов углерода, и если она представляет собой одинарную связь, то X представляет собой -Н или аминозащитный фрагмент;
3
3
2
2
2
5
3
3
2
2
2
3
2
4
2
2
2
3
2
3
2
4
2
2
2
2
3
3
i
i
i
i
i
i
k’
k’
-
i
J
i
j
k’
Y представляет собой уходящую группу, выбранную из -OR, -OCOR’, -OCOOR’, -OCONR’R’’, -NR’R’’, -NR’COR’’, -NR’NR’R’’, необязательно замещенного 5- или 6-членного азотсодержащего гетероцикла (например, пиперидина, тетрагидропиррола, пиразола, морфолина и т.д., присоединенного через атом азота), гуанидиния, представленного формулой -NR’(C=NH)NR’R’’, аминокислоты или пептида, представленного формулой -NRCOP’, -SR, -SOR’, галогена, циано, азидо, -OSOH, сульфита (-SOH или -SOH), метабисульфита (HSO), моно-, ди-, три- и тетратиофосфата (POSH, POSH, POSH, PSH), тиофосфатного сложного эфира (RO)PS(OR), RS-, RSO, RSO, RSO, тиосульфата (HSO), дитионита (HSO), дитиофосфата (P(=S)(OR)(S)(OH)), гидроксамовой кислоты (RC(=O)NOH) и формальдегидсульфоксилата (HOCHSO) или их смеси, где R представляет собой линейный или разветвленный алкил, содержащий от 1 до 10 атомов углерода и замещенный по меньшей мере одним заместителем, выбранным из -N(R), -COH, -SOH и -РОН; R может быть дополнительно необязательно замещен заместителем для алкила, описанным в настоящем документе; R представляет собой линейный или разветвленный алкил, содержащий от 1 до 6 атомов углерода; R представляет собой линейный, разветвленный или циклический алкил, алкенил или алкинил, содержащий от 1 до 10 атомов углерода, арил, гетероциклил или гетероарил;
Р’ представляет собой аминокислотный остаток или полипептид, содержащий от 2 до 20 аминокислотных остатков,
2
2
n
c
R в каждом случае независимо выбран из группы, состоящей из -Н, необязательно замещенного линейного, разветвленного или циклического алкила, алкенила или алкинила, содержащего от 1 до 10 атомов углерода, полиэтиленгликолевого звена -(CHCHO)-R, необязательно замещенного арила, содержащего от 6 до 18 атомов углерода, необязательно замещенного 5-18-членного гетероарильного кольца, содержащего один или более гетероатомов, независимо выбранных из азота, кислорода и серы, или необязательно замещенного 3-18-членного гетероциклического кольца, содержащего от 1 до 6 гетероатомов, независимо выбранных из О, S, N и Р;
2
2
2
n
c
R’ и R’’, каждый независимо, выбраны из -Н, -ОН, -OR, -NHR, -NR, -COR необязательно замещенного линейного, разветвленного или циклического алкила, алкенила или алкинила, содержащего от 1 до 10 атомов углерода, полиэтиленгликолевого звена -(CHCHO)-R и необязательно замещенного 3-18-членного гетероциклического кольца, содержащего от 1 до 6 гетероатомов, независимо выбранных из О, S, N и Р;
c
R представляет собой -Н или необязательно замещенный линейный или разветвленный алкил, содержащий от 1 до 4 атомов углерода;
n представляет собой целое число от 1 до 24;
2
2
n
c
X’ выбран из -Н, аминозащитной группы, необязательно замещенного линейного, разветвленного или циклического алкила, алкенила или алкинила, содержащего от 1 до 10 атомов углерода, полиэтиленгликолевого звена -(CHCHO)-R, необязательно замещенного арила, содержащего от 6 до 18 атомов углерода, необязательно замещенного 5-18-членного гетероарильного кольца, содержащего один или более гетероатомов, независимо выбранных из азота, кислорода и серы, и необязательно замещенного 3-18-членного гетероциклического кольца, содержащего от 1 до 6 гетероатомов, независимо выбранных из О, S, N и Р;
Y’ выбран из -Н, оксо-группы, необязательно замещенного линейного, разветвленного или циклического алкила, алкенила или алкинила, содержащего от 1 до 10 атомов углерода, необязательно замещенного 6-18-членного арила, необязательно замещенного 5-18-членного гетероарильного кольца, содержащего один или более гетероатомов, независимо выбранных из азота, кислорода и серы, необязательно замещенного 3-18-членного гетероциклического кольца, содержащего от 1 до 6 гетероатомов;
1
2
3
4
1
2
3
4
2
2
n
2
2
2
3
3
2
c
-
R, R, R, R, R’, R’, R’ и R’, каждый независимо, выбраны из группы, состоящей из -Н, необязательно замещенного линейного, разветвленного или циклического алкила, алкенила или алкинила. содержащего от 1 до 10 атомов углерода, полиэтиленгликолевого звена -(OCHCH)-R, галогена, гуанидиния [-NH(C=NH)NH], -OR,-NR’R’’,-NO,-NCO, -NR’COR’’,-SR, -SOR’,-SOR’, -SOH, -OSOH,-SONR’R’’, циано, азидо, -COR’, -OCOR’ и -OCONR’R’’:
6
2
R представляет собой -H, -R, -OR. -SR, -NR’R’’, -NO или галоген;
5
5
А и А’ являются одинаковыми или различными и независимо выбраны из -О-, оксо (-С(=O)-), -CRR’O-, -CRR’-, -S-, -CRR’S-, -NR и -CRR’N(R)-; и
5
9
ом
R и R, каждый независимо, представляют собой -Н или необязательно замещенный линейный или разветвленный алкил, содержащий от 1 до 10 атомов углерода; и остальные переменные являются такими, как описано выше во втором варианте реализации или в 1 конкретном варианте реализации.
69. Конъюгат по п. 68, отличающийся тем, что L’ представлен формулой (А), и оба L’’ и L’’’ представляют собой -Н.
70. Конъюгат по п. 68 или 69, отличающийся тем, что:
3
двойная линия  между N и С представляет собой одинарную связь или двойную связь, в случае, если она представляет собой двойную связь, то X отсутствует, и Y представляет собой -Н, и если она представляет собой одинарную связь, то X представляет собой -Н, Y представляет собой -ОН или -SOM;
1
2
3
4
1
2
3
4
все R, R, R, R, R’, R’, R’ и R’ представляют собой -Н;
6
R представляет собой -ОМе;
оба X’ и Y’ представляют собой -Н;
оба А и А’ предс тавляют собой -О-; и
+
+
+
М представляет собой Н, Na или К.
a
b
71. Конъюгат по любому из пп. 68-70, отличающийся тем, что оба R и R представляют собой Н.
5
9
72. Конъюгат по любому из пп. 68-71, отличающийся тем, что R и R, каждый независимо, представляют собой Н или Me.
5
9
73. Конъюгат по п. 72, отличающийся тем, что оба R и R представляют собой Н.
74. Конъюгат по любому из пп. 68-73, отличающийся тем, что Р представляет собой пептид, содержащий от 2 до 10 аминокислотных остатков.
75. Конъюгат по п. 74, отличающийся тем, что Р представляет собой пептид, содержащий от 2 до 5 аминокислотных звеньев.
9
9
76. Конъюгат по п. 75, отличающийся тем, что Р выбран из Gly-Gly-Gly, Ala-Val, Val-Ala, Val-Cit, Val-Lys, Phe-Lys, Lys-Lys, Ala-Lys, Phe-Cit, Leu-Cit, Lle-Cit, Trp, Cit, Phe-Ala, Phe-N-тозил-Arg, Phe-N-нитро-Arg, Phe-Phe-Lys, D-Phe-Phe-Lys, Gly-Phe-Lys, Leu-Ala-Leu, Ile-Ala-Leu, Val-Ala-Val, Ala-Leu-Ala-Leu (SEQ ID NO:17), β-Ala-Leu-Ala-Leu (SEQ ID NO:18) и Gly-Phe-Leu-Gly (SEQ ID NO:19), Val-Arg, Arg-Val, Arg-Arg, Val-D-Cit, Val-D-Lys, Val-D-Arg, D-Val-Cit, D-Val-Lys, D-Val-Arg, D-Val-D-Cit, D-Val-D-Lys, D-Val-D-Arg, D-Arg-D-Arg, Ala-Ala, Ala-D-Ala, D-Ala-Ala и D-Ala-D-Ala.
77. Конъюгат по п. 76, отличающийся тем, что P представляет собой Gly-Gly-Gly, Ala-Val, Ala-Ala, Ala-D-Ala, D-Ala-Ala и D-Ala-D-Ala.
D’
78. Конъюгат по п. 68, отличающийся тем, что -L-J-D представлен следующей структурной формулой:
или
3
+
+
+
или его фармацевтически приемлемая соль, где Y представляет собой Н или -SOM, и М представляет собой Н, Na или К.
79. Конъюгат по п. 1, отличающийся тем, что конъюгат представлен следующей структурной формулой:
или
или его фармацевтически приемлемая соль, где DM представлен следующей структурной формулой:
3
+
+
+
и Y представляет собой H или -SOM, и М представляет собой Н, Na или К.
80. Конъюгат по любому из пп. 1-79, отличающийся тем, что w равен 2 или 4.
81. Композиция, содержащая конъюгат антитела с цитотоксическим агентом по любому из пп. 1-79, где w равен 2 или 4 в по меньшей мере 70%, 80%, 90%, 95% или более конъюгатов.
82. Композиция по п. 81, отличающаяся тем, что w равен 1 не более чем в около 10% или 5% конъюгатов.
83. Тяжелая цепь (НС), легкая цепь (LC) рекомбинантного антитела или его антигенсвязывающая часть, содержащая гетерологичный сигнальный пептид, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:1.
84. Тяжелая цепь (НС), легкая цепь (LC) рекомбинантного антитела или его антигенсвязывающая часть по п. 83, отличающаяся тем, что указанный гетерологичный сигнальный пептид слит с N-концом зрелой процессированной последовательности тяжелой цепи (НС), легкой цепи (LC) рекомбинантного антитела или его антигенсвязывающей части.
ым
85. Тяжелая цепь (НС), легкая цепь (LC) рекомбинантного антитела или его антигенсвязывающая часть по п. 83, отличающаяся тем, что указанный гетерологичный сигнальный пептид слит со 2 аминокислотным остатком N-конца зрелой процессированной последовательности тяжелой цепи (НС), легкой цепи (LC) рекомбинантного антитела или его антигенсвязывающей части.
86. Тяжелая цепь (НС), легкая цепь (LC) рекомбинантного антитела или его антигенсвязывающая часть, содержащая остаток Ser или Thr непосредственно на С-конце последнего остатка сигнального пептида тяжелой цепи (НС), легкой цепи (LC) или их антигенсвязывающей части.
87. Тяжелая цепь (НС), легкая цепь (LC) рекомбинантного антитела или его антигенсвязывающая часть по п. 86, отличающаяся тем, что остаток Ser или Thr является непосредственно N-концевым для первого остатка зрелой процессированной последовательности тяжелой цепи (НС), легкой цепи (LC) рекомбинантного антитела или его антигенсвязывающей части.
88. Тяжелая цепь (НС), легкая цепь (LC) рекомбинантного антитела или его антигенсвязывающая часть по п. 86, отличающаяся тем, что остаток Ser или Thr заменяет один или более N-концевых аминокислотных остатков зрелой процессированной последовательности тяжелой цепи (НС), легкой цепи (LC) рекомбинантного антитела или его антигенсвязывающей части.
89. Тяжелая цепь (НС), легкая цепь (LC) рекомбинантного антитела или его антигенсвязывающая часть по и. 86, имеющая последовательность: SEQ ID NO:10 или 14.
90. Рекомбинантное антитело, содержащее зрелую процессированную последовательность тяжелой цепи, легкой цепи или их антигенсвязывающей части, полученную из тяжелой цепи (НС), легкой цепи (LC) или их антигенсвязывающей части по любому из пп. 86-89.
2
2
3
2
91. Рекомбинантное антитело по п. 90, которое представляет собой Fab, F(ab), F(ab’), F(ab’), F(ab’), Fd, Fv, дисульфид-связанный Fv, dAb или sdAb (или наноантитело), CDR, scFv, (scFv), di-scFv, bi-scFv, tascFv (тандемный scFv), AVIBODY (например, диатело, триатело, тетратело), активатор Т-клеток (BiTE), scFv-Fc, Fcab, mAb2, иммунофармацевтическое средство на основе модульного белка малого размера (SMIP), Genmab / Unibody или Duobody, домен V-NAR, IgNAR, миниантитело, IgGΔCH2, DVD-Ig, проантитело, интраантитело или полиспецифическое антитело.
92. Рекомбинантное антитело по п. 91, которое представляет собой sdAb (однодоменное антитело или наноантитело).
93. Рекомбинантное антитело по п. 90, содержащее 1, 2, 3 или 4 зрелые процессированные последовательности тяжелой цепи, легкой цепи или их антигенсвязывающей части, каждая из которых получена из тяжелой цепи (НС), легкой цепи (LC) рекомбинантного антитела или его антигенсвязывающей части по любому из пп. 86-89.
94. Модифицированное антитело, окисленное из антитела, содержащего N-концевой Ser или Thr в зрелой процессированной последовательности тяжелой цепи, легкой цепи или их антигенсвязывающей части, где N-концевой Ser или Thr окислен до альдегидной группы в модифицированном антителе.
95. Модифицированное антитело по п. 94, отличающееся тем, что антитело получено из тяжелой цепи (НС), легкой цепи (LC) рекомбинантного антитела или его антигенсвязывающей части, включая:
(1) гетерологичный сигнальный пептид, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:1;
(2) остаток Ser или Thr, непосредственно N-концевой для первого остатка зрелой процессированной последовательности тяжелой цепи (НС), легкой цепи (LC) рекомбинантного антитела или его антигенсвязывающей части; или
(3) остаток Ser или Thr, заменяющий один или более N-концевых аминокислотных остатков зрелой процессированной последовательности тяжелой цепи (НС), легкой цепи (LC) рекомбинантного антитела или его антигенсвязывающей части.
96. Модифицированное антитело по п. 94, отличающееся тем, что антитело представляет собой мышиное антитело или его антигенсвязывающую часть, содержащую последовательность легкой цепи SEQ ID NO:3.
97. Модифицированное антитело по п. 94, отличающееся тем, что антитело представляет собой химерное, гуманизированное или человеческое антитело или его антигенсвязывающую часть из мышиного антитела или его антигенсвязывающей части, содержащей последовательность легкой цепи SEQ ID NO:3.
98. Модифицированное антитело по п. 97, отличающееся тем, что гуманизированное антитело или его антигенсвязывающая часть представляет собой антитело с измененной поверхностью или антитело с привитой CDR, или его антигенсвязывающую часть.
99. Полинуклеотид, кодирующий тяжелую цепь (НС), легкую цепь (LC) рекомбинантного антитела или его антигенсвязывающую часть по любому из пп. 86-89.
100. Полинуклеотид по п. 99, который является кодон-оптимизированным для экспрессии в системе экспрессии млекопитающих.
101. Способ получения тяжелой цепи (НС), легкой цепи (LC) рекомбинантного антитела или его антигенсвязывающей части, включающий экспрессию полинуклеотида по п. 99 в системе экспрессии.
102. Способ по п. 101, отличающийся тем, что система экспрессии представляет собой систему экспрессии млекопитающего.
103. Способ получения конъюгата клеточносвязывающего агента с цитотоксическим агентом, включающий стадии, в которых:
(а) окисляют 2-гидроксиэтиламинный фрагмент клеточносвязывающего агента окислительным агентом с получением окисленного клеточносвязывающего агента, содержащего альдегидную группу; где 2-гидроксиэтиламинный фрагмент является частью серинового, греонинового, гидроксилизинового, 4-гидроксиорнитинового остатка или остатка 2,4-диамино-5-гидроксивалериантовой кислоты, и представлен следующей структурной формулой:
и
(b) приводят в контакт окисленный клеточносвязывающий агент с:
(i) соединением цитотоксического агента и линкера, содержащим способную реагировать с альдегидом группу, или цитотоксическим агентом, содержащим способную реагировать с альдегидом группу, с получением конъюгата клеточносвязывающего агента с цитотоксическим агентом; или
(ii) линкерным соединением, содержащим способную реагировать с альдегидом группу, с получением модифицированного антитела или его модифицированной антигенсвязывающей части, содержащей линкер, связанный с ней, с последующим взаимодействием модифицированного антитела или его модифицированной антигенсвязывающей части с цитотоксическим агентом с получением конъюгата клеточносвязывающего агента с цитотоксическим агентом; или
(iii) цитотоксическим агентом, с последующим добавлением линкерного соединения, содержащего способную реагировать с альдегидом группу и реакционноспособную группу, которая может образовывать ковалентную связь с цитотоксическим агентом, с образованием конъюгата клеточносвязывающего агента с цитотоксическим агентом.
104. Способ по п. 103, отличающийся тем, что клеточносвязывающий агент представляет собой антитело или его антигенсвязывающую часть, или миметик антитела, такой как DARPin, центирин, аффитело, аффилин, аффитин, антикалин, авимер, финомер, пептид домена Куница, монотело (или аднектин), триатело или нанофитин.
2
2
3
2
105. Способ по п. 103, отличающийся тем, что клеточносвязывающий агент представляет собой антитело или его антигенсвязывающую часть, например, Fab, F(ab), F(ab’), F(ab’), F(ab’), Fd, Fv, дисульфид-связанный Fv, dAb или sdAb (или наноантитело), CDR, scFv, (scFv), di-scFv, bi-scFv, tascFv (тандемный scFv), AVIBODY (например, диатело, триатело, тетратело), активатор Т-клеток (BiTE), scFv-Fc, Fcab, mAb2, иммунофармацевтическое средство на основе модульного белка малого размера (SMIP), Genmab / Unibody или Duobody, домен V-NAR, IgNAR, миниантитело, IgGΔCH2, DVD-Ig, проантитело, интраантитело или полиспецифическое антитело.
106. Способ по п. 103, отличающийся тем, что способ включает стадии, в которых:
(а) окисляют 2-гидроксиэтиламинный фрагмент антитела или его антигенсвязывающей части окислительным агентом с получением окисленного антитела или его окисленной антигенсвязывающей части, содержащей альдегидную группу,
где 2-гидроксиэтиламинный фрагмент представляет собой часть N-концевого серинового, треонинового, гидроксилизинового, 4-гидроксиорнитинового остатка или остатка 2,4-диамино-5-гидроксивалериановой кислоты; и
(b) приводят в контакт окисленное антитело или его окисленную антигенсвязывающую часть с соединением цитотоксического агента с линкером, содержащим способную реагировать с альдегидом группу, или с цитотоксическим агентом, содержащим способную реагировать с альдегидом группу, с получением конъюгата антитела с цитотоксическим агентом
или
где:
CB
J представляет собой способную реагировать с альдегидом группу;
L представляет собой спейсер или связь;
D
J’ представляет собой связывающий фрагмент, соединяющий цитотоксический агент D с группой L, или отсутствует, если L представляет собой связь;
D
D представляет собой цитотоксический агент, ковалентно связанный с L через связывающий фрагмент J’; и
w равен 1, 2, 3 или 4.
107. Способ по п. 103, отличающийся тем, что способ включает стадии, в которых:
(а) окисляют N-концевой 2-гидроксиэтиламинный фрагмент антитела или его антигенсвязывающей части окислительным агентом с получением окисленного антитела или его окисленной антигенсвязывающей части, содержащей N-концевую альдегидную группу,
где 2-гидроксиэтиламинный фрагмент представляет собой часть N-концевого серинового, треонинового, гидроксилизинового, 4-гидроксиорнитинового остатка или остатка 2,4-диамино-5-гидроксивалериановой кислоты;
(b) приводят в контакт окисленное антитело или его окисленную антигенсвязывающую часть с линкерным соединением, содержащим способную реагировать с альдегидом группу, с получением модифицированного антитела или его модифицированной антигенсвязывающей части, содержащей связанный с ней линкер, и далее приводят в контакт модифицированное антитело или его модифицированную антигенсвязывающую часть с цитотоксическим агентом с получением конъюгата антитела с цитотоксическим агентом
где:
CB
J представляет собой способную реагировать с альдегидом группу;
L представляет собой спейсер или связь;
D’ представляет собой цитотоксический агент;
D
J представляет собой реакционноспособную группу, которая может образовывать ковалентную связь с цитотоксическим агентом D’;
D
D
J’ представляет собой связывающий фрагмент, образованный взаимодействием связывающей группы J с цитотоксическим агентом D’;
D
D представляет собой цитотоксический агент, ковалентно связанный с L через связывающий фрагмент J’; и
w равен 1, 2, 3 или 4.
108. Способ по п. 103, отличающийся тем, что способ включает стадии, в которых:
(а) окисляют N-концевой 2-гидроксиэтиламинный фрагмент антитела или его антигенсвязывающей части окислительным агентом с получением окисленного антитела или его окисленной антигенсвязывающей части, содержащей N-концевую альдегидную группу,
где 2-гидроксиэтиламинный фрагмент представляет собой часть N-концевого серинового, треонинового, гидроксилизинового, 4-гидроксиорнитинового остатка или остатка 2,4-диамино-5-гидроксивалериановой кислоты; и
(b) приводят в контакт окисленное антитело или его окисленную антигенсвязывающую часть с цитотоксическим агентом, и далее добавляют линкерное соединение, содержащее способную взаимодействовать с альдегидом группу, с получением конъюгата антитела с цитотоксическим агентом
где:
CB
J представляет собой способную реагировать с альдегидом группу;
L представляет собой спейсер или связь;
D’ представляет собой цитотоксический агент;
D
J представляет собой реакционноспособную группу, которая может образовывать ковалентную связь с цитотоксическим агентом D’;
D
D
J’ представляет собой связывающий фрагмент, образованный взаимодействием связывающей группы J с цитотоксическим агентом D’;
D
D представляет собой цитотоксический агент, ковалентно связанный с L через связывающий фрагмент J’; и
w равен 1, 2, 3 или 4.
109. Способ по любому из пп. 105-108, отличающийся тем, что 2-гидроксиэтиламинный фрагмент представляет собой часть N-концевого серина или треонина.
110. Способ по п. 109, отличающийся тем, что N-концевой серии естественным образом присутствует в указанном антителе или его антигенсвязывающей части.
111. Способ по п. 109, отличающийся тем, что N-концевой серии сконструирован в указанном антителе или его антигенсвязывающей части.
112. Способ по п. 111, отличающийся тем, что указанное антитело или его антигенсвязывающая часть представляет собой любое рекомбинантное антитело по любому из пп. 90-93.
113. Способ по любому из пп. 103-108, отличающийся тем, что указанное антитело или его антигенсвязывающая часть получена посредством экспрессии полинуклеотида, кодирующего тяжелую цепь (НС), легкую цепь (LC) рекомбинантного антитела или его антигенсвязывающую часть, включая:
(1) гетерологичный сигнальный пептид, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1;
(2) остаток Ser или Thr, непосредственно N-концевой для первого остатка зрелой процессированной последовательности тяжелой цепи (НС), легкой цепи (LC) рекомбинантного антитела или его антигенсвязывающей части; или
(3) остаток Ser или Thr, заменяющий один или более N-концевых аминокислотных остатков зрелой процессированной последовательности тяжелой цепи (НС), легкой цепи (LC) рекомбинантного антитела или его антигенсвязывающей части.
114. Способ по любому из пп. 103-108, отличающийся тем, что указанное антитело или его антигенсвязывающая часть содержит последовательность легкой цепи с SEQ ID NO:3.
115. Способ по любому из пп. 103-108, отличающийся тем, что указанное антитело или его антигенсвязывающая часть представляет собой химерное, гуманизированное или человеческое антитело или его антигенсвязывающую часть из мышиного антитела или его антигенсвязывающей части, содержащей последовательность легкой цепи с SEQ ID NO:3.
116. Способ по п. 115, отличающийся тем, что гуманизированное антитело или его антигенсвязывающая часть представляет собой антитело с измененной поверхностью или антитело с привитой CDR, или его антигенсвязывающую часть.
117. Способ по любому из пп. 103-116, отличающийся тем, что реакцию на стадии (b) проводят в присутствии анилинового катализатора.
118. Способ по п. 117, отличающийся тем, что анилиновый катализатор представляет собой 4-аминофенетиловый спирт.
119. Способ по любому из пп. 103-118, отличающийся тем, что молярное отношение способной реагировать с альдегидом группы к окисленному антителу или его окисленной антигенсвязывающей части составляет около 4:1.
120. Способ по любому из пп. 103-119, отличающийся тем, что окислительный агент на стадии (а) представляет собой перйодат.
121. Способ по любому из пп. 103-120, отличающийся тем, что стадию (b) проводят при рН 5-6 или рН 5.
122. Способ по любому из пп. 103-121, отличающийся тем, что конъюгат клеточносвязывающего агента с цитотоксическим агентом представляет собой конъюгат по любому из пп. 1-80.
123. Фармацевтическая композиция, содержащая конъюгат по любому из пп. 1-80 и фармацевтически приемлемый носитель.
124. Способ ингибирования патологического клеточного роста или лечения пролиферативного расстройства, аутоиммунного расстройства, деструктивного поражения костей, инфекционного заболевания, вирусного заболевания, фибротического заболевания, нейродегенеративного расстройства, панкреатита или болезни почек у млекопитающего, включающий стадию, в которой вводят указанному млекопитающему терапевтически эффективное количество конъюгата по любому из пп. 1-80 и необязательно химиотерапевтический агент.
125. Способ по п. 124, отличающийся тем, что указанный способ предназначен для лечения патологического состояния, выбранного из группы, состоящей из: рака, ревматоидного артрита, рассеянного склероза, болезни «трансплантат против хозяина» (GVHD), отторжения трансплантата, волчанки, миозита, инфекции и иммунодефицита.
126. Способ по п. 125, отличающийся тем, что указанный способ предназначен для лечения рака.
127. Способ по п. 126, отличающийся тем, что рак представляет собой лейкоз, лимфому, меланому, рак легких (такой как немелкоклеточный рак легких (НМРЛ)), рак предстательной железы, рак яичников, рак эндометрия, рак поджелудочной железы, рак молочной железы, перитонеальный рак, плоскоклеточную карциному головы и шеи, миелодиспластический синдром (MDS) и рак шейки матки.
128. Способ по п. 126, отличающийся тем, что рак представляет собой острый миелоидный лейкоз (AML).
129. Способ по п. 126, отличающийся тем, что рак представляет собой немелкоклеточный рак легких.
130. Цитотоксическое соединение, представленное следующей структурной формулой:
или его фармацевтически приемлемая соль, где:
D
D
D
один из L’, L’’ и L’’’ представлен следующей формулой:
2
2
n
2
2
2
3
3
2
c
а другие два являются одинаковыми или различными и независимо выбраны из -Н, необязательно замещенного линейного, разветвленного или циклического алкила, алкенила или алкинила, содержащего от 1 до 10 атомов углерода, полиэтиленгликолевого звена -(OCHCH)-R, галогена, гуанидиния [-NH(C=NH)NH], -OR, -NR’R’’, -NO, -NR’COR’’,-SR, -SOR’, -SOR’,-SOH, -OSOH, -SONR’R’’, циано, азидо, -COR’, -OCOR’ и-OCONR’R’’;
d1
9
9
Z отсутствует, представляет собой -C(=O)-NR- или -NR-C(=O)-;
P представляет собой аминокислотный остаток или пептид, содержащий от 2 до 20 аминокислотных остатков;
a
b
1
3
R и R для каждого случая независимо представляют собой -Н, (С-С)алкил или заряженный заместитель, или ионизируемую группу Q;
r и r’, каждый независимо, представляют собой целое число от 1 до 6;
двойная линия  между N и С представляет собой одинарную связь или двойную связь, в случае, если она представляет собой двойную связь, то X отсутствует, и Y представляет собой -Н или линейный или разветвленный алкил, содержащий от 1 до 4 атомов углерода, и если она представляет собой одинарную связь, то X представляет собой -Н или аминозащитный фрагмент;
3
3
2
2
2
5
3
3
2
2
2
3
2
4
2
2
2
3
2
3
2
4
2
2
2
2
3
3
i
i
i
i
i
i
k’
k’
-
i
j
i
j
k’
Y представляет собой уходящую группу, выбранную из -OR, -OCOR’, -OCOOR’, -OCONR’R’’, -NR’R’’, -NR’COR’’, -NR’NR’R’’, необязательно замещенного 5- или 6-членного азотсодержащего гетероцикла (например, пиперидина, тетрагидропиррола, пиразола, морфолина и т.д., присоединенного через атом азота), гуанидиния, представленного формулой -NR’(C=NH)NR’R’’, аминокислоты или пептида, представленного формулой -NRCOP’, -SR, -SOR’, галогена, циано, азидо, -OSOH, сульфита (-SOH или -SOH), метабисульфита (HSO), моно-, ди-, три- и тетратиофосфата (POSH, POSH, POSH, PSH), тиофосфатного сложного эфира (RO)PS(OR), RS-, RSO, RSO, RSO, тиосульфата (HSO), дитионита (HSO), дитиофосфата (P(=S)(OR)(S)(OH)), гидроксамовой кислоты (RC(=O)NOH) и формальдегидсульфоксилата (HOCHSO) или их смеси, где R представляет собой линейный или разветвленный алкил, содержащий от 1 до 10 атомов углерода и замещенный по меньшей мере одним заместителем, выбранным из -N(R), -СОН, -SOH и -РОН; R может быть дополнительно необязательно замещен заместителем для алкила, описанным в настоящем документе; R представляет собой линейный или разветвленный алкил, содержащий от 1 до 6 атомов углерода; R представляет собой линейный, разветвленный или циклический алкил, алкенил или алкинил, содержащий от 1 до 10 атомов углерода, арил, гетероциклил или гетероарил;
Р’ представляет собой аминокислотный остаток или полипептид, содержащий от 2 до 20 аминокислотных остатков,
2
2
n
c
R в каждом случае независимо выбран из группы, состоящей из -Н, необязательно замещенного линейного, разветвленного или циклического алкила, алкенила или алкинила, содержащего от 1 до 10 атомов углерода, полиэтиленгликолевого звена -(CHCHO)-R, необязательно замещенного арила, содержащего от 6 до 18 атомов углерода, необязательно замещенного 5-18-членного гетероарильного кольца, содержащего один или более гетероатомов, независимо выбранных из азота, кислорода и серы, или необязательно замещенного 3-18-членного гетероциклического кольца, содержащего от 1 до 6 гетероатомов, независимо выбранных из О, S, N и Р;
2
2
2
n
c
R’ и R’’, каждый независимо, выбраны из -Н, -ОН, -OR, -NHR, -NR, -COR необязательно замещенного линейного, разветвленного или циклического алкила, алкенила или алкинила, содержащего от 1 до 10 атомов углерода, полиэтиленгликолевого звена -(CHCHO)-R и необязательно замещенного 3-18-членного гетероциклического кольца, содержащего от 1 до 6 гетероатомов, независимо выбранных из О, S, N и Р;
c
R представляет собой -Н или необязательно замещенный линейный или разветвленный алкил, содержащий от 1 до 4 атомов углерода;
n представляет собой целое число от 1 до 24;
2
2
n
c
X’ выбран из -Н, аминозащитной группы, необязательно замещенного линейного, разветвленного или циклического алкила, алкенила или алкинила, содержащего от 1 до 10 атомов углерода, полиэтиленгликолевого звена -(CHCHO)-R, необязательно замещенного арила, содержащего от 6 до 18 атомов углерода, необязательно замещенного 5-18-членного гетероарильного кольца, содержащего один или более гетероатомов, независимо выбранных из азота, кислорода и серы, и необязательно замещенного 3-18-членного гетероциклического кольца, содержащего от 1 до 6 гетероатомов, независимо выбранных из О, S, N и Р;
Y’ выбран из -Н, оксо-группы, необязательно замещенного линейного, разветвленного или циклического алкила, алкенила или алкинила, содержащего от 1 до 10 атомов углерода, необязательно замещенного 6-18-членного арила, необязательно замещенного 5-18-членного гетероарильного кольца, содержащего один или более гетероатомов, независимо выбранных из азота, кислорода и серы, необязательно замещенного 3-18-членного гетероциклического кольца, содержащего от 1 до 6 гетероатомов;
1
2
3
4
1
2
3
4
2
2
n
2
2
2
3
3
2
c
-
R, R, R, R, R’, R’, R’ и R’, каждый независимо, выбраны из группы, состоящей из -Н, необязательно замещенного линейного, разветвленного или циклического алкила, алкенила или алкинила, содержащего от 1 до 10 атомов углерода, полиэтиленгликолевого звена -(OCHCH)-R, галогена, гуанидиния [-NH(C=NH)NH], -OR, -NR’R’’, -NO, -NCO, -NR’COR’’, -SR, -SOR’,-SOR’, -SOH, -OSOH,-SONR’R’’, циано, азидо, -COR’, -OCOR’ и -OCONR’R’’;
6
2
R представляет собой -H, -R, -OR, -SR, -NR’R’’, -NO или галоген;
5
5
А и А’ являются одинаковыми или различными и независимо выбраны из -О-, оксо (-С(=O)-), -CRR’O-, -CRR’-, -S-, -CRR’S-, -NR и -CRR’N(R)-;
5
9
R и R, каждый независимо, представляют собой -Н или необязательно замещенный линейный или разветвленный алкил, содержащий от 1 до 10 атомов углерода;
CB
J представляет собой способную реагировать с альдегидом группу.
CB
131. Соединение по п. 130, где J представляет собой гидразин, гидразид или гидроксиламин.
CB
132. Соединение по п. 130, где J выбран из:
и
а
2
3
2
b
b
2
с
Z
Z’
Z
где Х представляет собой CH, О или NCH; U’ представляет собой NH, О, S или СН; U представляет собой Н или электронодонорную группу; X и X’, каждый независимо, представляют собой -ОН, -SH или -NH; R и R, каждый независимо, представляют собой Н или алкил (предпочтительно -Me); R’’ представляет собой Н или алкил; и Х представляет собой N или СН.
CB
133. Соединение по п. 132, где J представляет собой ; или .
D
D
D
1
6
2
134. Соединение по любому из пп. 130-133, где один из L’, L’’ и L’’’ представлен формулой (А), а остальные, каждый независимо, представляют собой -Н, линейный или разветвленный алкил, содержащий от 1 до 6 атомов углерода, галоген, -ОН, (С-С)алкокси или -NO.
D
D
D
135. Соединение по п. 134, где один из L’, L’’ и L’’’ представлен формулой (А), а остальные представляют собой -Н.
D
136. Соединение по п. 135, где L’ представлен формулой (А), а остальные представляют собой -Н.
3
2
3
137. Соединение по любому из пп. 130-136, где двойная линия  между N и С представляет собой одинарную связь, X представляет собой -Н или аминозащитную группу; и Y выбран из -Н, -OR, -OCOR’, -SR, -NR’R’’, необязательно замещенного 5- или 6-членного азотсодержащего гетероцикла, -SOH, -SOH и -OSOH.
3
+
+
138. Соединение по п. 137, где Y выбран из -Н, -SOM, -ОН, -ОМе, -OEt или -NHOH, где М представляет собой -Н, Na или К.
3
139. Соединение по п. 138, где Y представляет собой -Н, -SOM или -ОН.
140. Соединение по любому из пп. 130-139, где X’ выбран из группы, состоящей из -Н, -ОН, необязательно замещенного линейного, разветвленного или циклического алкила, алкенила или алкинила, содержащего от 1 до 10 атомов углерода, и фенила.
1
3
1
3
141. Соединение по п. 140, где X’ представляет собой -Н, -ОН, (C-С)алкил, галоген(С-С)алкил или фенил.
142. Соединение по п. 141, где X’ представляет собой -Н, -ОН или -Me.
143. Соединение по п. 142, где X’ представляет собой -Н.
144. Соединение по любому из пп. 130-143, где Y’ выбран из группы, состоящей из -Н, оксо-группы, необязательно замещенного линейного, разветвленного или циклического алкила, алкенила или алкинила, содержащего от 1 до 10 атомов углерода.
1
3
1
3
145. Соединение по п. 144, где Y’ представляет собой -Н, оксо-группу, (C-С)алкил или галоген(С-С)алкил.
146. Соединение по п. 144, где Y’ представляет собой -Н или оксо.
147. Соединение по п. 144, где Y’ представляет собой -Н.
5
148. Соединение по любому из пп. 130-147, где А и А’ являются одинаковыми или различными и выбраны из -О-, -S-, -NR- и оксо -(С=O)-.
149. Соединение по п. 148, где А и А’ являются одинаковыми или различными и выбраны из -О- и -S-.
150. Соединение по п. 149, где А и А’ представляют собой -О-.
6
151. Соединение по любому из пп. 130-150, где R представляет собой -ОМе.
1
2
3
4
1
2
3
4
2
1
3
1
3
1
3
152. Соединение по любому из пп. 130-151, где R, R, R, R, R’, R’, R’ и R’ независимо представляют собой -Н, галоген, -NO, -ОН, (С-С)алкил, галоген(С-С)алкил или (С-С)алкокси.
1
2
3
4
1
2
3
4
153. Соединение по п. 152, где все R, R, R, R, R’, R’, R’ и R’ представляют собой -H.
5
1
3
154. Соединение по любому из пп. 130-153, где R, R’, R’’ и R, каждый независимо, представляют собой -Н или (С-С)алкил.
155. Соединение по любому из пп. 130-136, где:
3
двойная линия  между N и С представляет собой одинарную связь или двойную связь, в случае, если она представляет собой двойную связь, то X отсутствует, и Y представляет собой -Н, и если она представляет собой одинарную связь, то X представляет собой -Н, Y представляет собой -ОН или -SOM;
1
2
3
4
1
2
3
4
все R, R, R, R, R’, R’, R’ и R’ представляют собой -Н;
6
R представляет собой -ОМе;
оба X’ и Y’ представляют собой -Н;
А и А’ представляют собой -О-; и
+
+
М представляет собой Н, Na или К.
a
b
156. Соединение по любому из пп. 130-155, где оба R и R представляют собой Н.
5
9
157. Соединение по любому из пп. 130-156, где R и R, каждый независимо, представляют собой Н или Me.
5
9
158. Соединение по п. 157, где оба R и R представляют собой Н.
159. Соединение по любому из пп. 130-158, где Р представляет собой пептид, содержащий от 2 до 10 аминокислотных остатков.
160. Соединение по п. 159, где Р представляет собой пептид, содержащий от 2 до 5 аминокислотных остатков.
9
9
161. Соединение по п. 160, где Р выбран из Gly-Gly-Gly, Ala-Val, Val-Ala, Val-Cit, Val-Lys, Phe-Lys, Lys-Lys, Ala-Lys, Phe-Cit, Leu-Cit, Lle-Cit, Trp, Cit, Phe-Ala, Phe-N-тозил-Arg, Phe-N-нитро-Arg, Phe-Phe-Lys, D-Phe-Phe-Lys, Gly-Phe-Lys, Leu-Ala-Leu, Ile-Ala-Leu, Val-Ala-Val, Ala-Leu-Ala-Leu (SEQ ID NO:17), β-Ala-Leu-Ala-Leu (SEQ ID NO:18) и Gly-Phe-Leu-Gly (SEQ ID NO: 19), Val-Arg, Arg-Val, Arg-Arg, Val-D-Cit, Val-D-Lys, Val-D-Arg, D-Val-Cit, D-Val-Lys, D-Val-Arg, D-Val-D-Cit, D-Val-D-Lys, D-Val-D-Arg, D-Arg-D-Arg, Ala-Ala, Ala-D-Ala, D-Ala-Ala и D-Ala-D-Ala.
162. Соединение по п. 160, где P представляет собой Gly-Gly-Gly, Ala-Val, Ala-Ala, Ala-D-Ala, D-Ala-Ala и D-Ala-D-Ala.
163. Соединение по п. 130, где соединение представлено следующей структурной формулой:
3
+
+
+
или его фармацевтически приемлемая соль, где Y представляет собой Н или - SOM, и М представляет собой Н, Na или К.
164. Способ по п. 126, отличающийся тем, что рак представляет собой рак яичников.
165. Конъюгат по любому из пп. 1-6 и 13-80, отличающийся тем, что клеточносвязывающий агент (СВА) представляет собой антитело или его антигенсвязывающую часть, которая специфически связывается с антигенами FOLR1, CD37, EGFR, CD19, CD33, CD 123 или Mucl, где Ser или Thr заменяет один или более N-концевых аминокислотных остатков тяжелой цепи (НС), легкой цепи (LC) антитела или его антигенсвязывающей части.
166. Конъюгат по любому из пп. 1-6 и 13-80, отличающийся тем, что антитело содержит 6 CDR или последовательностей вариабельной области тяжелой цепи (HCVR), или последовательностей вариабельной области легкой цепи (LCVR) антитела, выбранного из группы, состоящей из huMOV19, huCD37-3, huCD37-50, huEGFR-7R, huML66, huB4, huMy9-6 и huDS6.
167. Конъюгат по п. 165, отличающийся тем, что антитело против фолатного рецептора, которое специфически связывается с FOLR1, содержит:
a) CDR1 тяжелой цепи с SEQ ID NO:45; CDR2 тяжелой цепи с SEQ ID NO:46 и CDR3 тяжелой цепи с SEQ ID NO:47; и
b) CDR1 легкой цепи с SEQ ID NO:48; CDR2 легкой цепи с SEQ ID NO:49; и CDR3 легкой цепи с SEQ ID NO:50.
168. Конъюгат по п. 165, отличающийся тем, что антитело против фолатного рецептора, которое специфически связывается с FOLR1, содержит:
a) вариабельную область тяжелой цепи (HCVR), имеющую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на около 90%, 95%, 99% или на 100% идентична SEQ ID NO:55; и
b) вариабельную область легкой цепи (LCVR), имеющую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на около 90%, 95%, 99% или на 100% идентична SEQ ID NO:56 или SEQ ID NO:57.
169. Конъюгат по п. 167 или 168, отличающийся тем, что антитело против фолатного рецептора, которое специфически связывается с FOLR1, представляет собой антитело huMOV19.