СПОСОБ ОЦЕНКИ СОЧЕТАННОГО ДЕЙСТВИЯ ЦИТОСТАТИКА И ВНЕШНЕГО ГАММА-ОБЛУЧЕНИЯ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ
METHOD OF ASSESSMENT OF JOINT EFFECT OF CYTOSTATIC AND EXTERNAL GAMMA RADIATION IN EXPERIMENT

Известен способ оценки постмедикаментозного иммунодефицита посредством разовой внутрибрюшинной инъекции 0,5 мл цитостатика циклофосфана в дозе 4 мг/100 г массы тела животного с последующим определением клеточности (КС) селезенки. При достоверном уровне этого показателя после введения циклофосфана констатируют наличие постмедикаментозного иммунодефицита (Н.И.Демешко, Ю.М.Гринзайд и др. Микроволны миллиметрового диапазона в профилактике экспериментального постмедикаментозного иммунодефицита цитостатического генеза. // Актуальные вопросы восстановительной медицины, курортологии и физиотерапии: Материалы международного симпозиума «Здравница-2006». Сочи, 30 мая - 2 июня 2006 г. - Сочи, 2006. - С.91-92).
Данный способ имеет ряд недостатков, связанных, в первую очередь, с неравномерностью распределения иммунного ответа на цитостатик по различным показателям в реальной ситуации (уровень одних показателей возрастает, других снижается, и наоборот, в связи с чем бывает трудно распознать истинную иммуносупрессию). Он также не предусматривает возможность оценки иммунодефицита сочетанного генеза - после воздействия цитостатика и гамма-облучения - ситуации, реальной для современной онкологической практики. Предлагаемый способ лишен указанных недостатков.
Технический результат предлагаемого способа заключается в возможности объективной оценки иммунодефицита сочетанного генеза - после воздействия цитостатика и гамма-облучения.
Технический результат достигается следующим образом: оценку сочетанного действия цитостатика и внешнего гамма-облучения в эксперименте осуществляют путем однократного проведения экспериментальным животным, например крысам, разовой внутрибрюшинной инъекции цитостатика, например циклофосфана в дозе 4 мг/100 г массы тела животного, с 5 дня после введения цитостатика начинают общее внешнее фракционированное гамма-облучение животных - в разовой дозе 2 Зв, всего 3 процедуры облучения через день при общей эквивалентной дозе 6 Зв, затем на 4 день после последнего сеанса облучения животных забивают и исследуют у них клеточность селезенки (КС), количество лейкоцитов в крови (ЛК), содержание в сыворотке крови тироксина (Т4) и серотонина (СТ), вычисляют индекс супрессии (ИС) по формуле
и при величине ИС, превышающей 1,57 ед., констатируют наличие иммунодефицита сочетанного генеза.
Способ выполняют следующим образом. Вначале животным проводят разовую внутрибрюшинную инъекцию раствор циклофосфана в дозе 4 мг/100 г массы тела животного. С 5 дня после введения циклофосфана начинают общее внешнее гамма-облучение животных - в разовой дозе 2 Зв, общим количеством 6 Зв (3 процедуры облучения через день). На 4 день после последнего сеанса облучения животных забивают и исследуют у них клеточность селезенки, количество лейкоцитов в крови, содержание в сыворотке крови тироксина и серотонина.
Вычисляют индекс супрессии (ИС) по формуле
и при величине ИС, превышающей 1,57 ед., констатируют наличие иммунодефицита сочетанного (цитостатик и внешнее гамма-облучение) генеза.
Данная формула индекса супрессии включает произведение показателей, характеризующих катаболические процессы, в числителе, и произведение количественных показателей иммунокомпетентных клеток в знаменателе, и поэтому величина ИС возрастает с нарастанием иммуносупрессии.
Способ был апробирован в условиях отдела изучения механизмов действия физических факторов Пятигорского государственного НИИ курортологии. Объектом исследования послужили 19 крыс линии Вистар, разделенные на 2 группы. Интактные крысы 1 группы (9) служили контролем для остальных групп. У 10 животных основной группы проводилось моделирование иммунодефицитных нарушений путем однократной инъекции циклофосфана дозой 4 мг/100 г массы тела животного с последующим (на 5 день после инъекции циклофосфана) фракционированным облучением (3 раза по 2 Гр, через день, суммарная доза 6 Гр). На 4 сутки после последнего сеанса облучения проводились забой животных и лабораторные анализы.
Данные исследований представлены в нижеследующей таблице.
Показатель
группа
N
М
m
σ
Интервал М±σ
Т4*Серотонин/ЛК*КС Ед.
интактная
7
0,71
0,326
0,86
-0,15
-
1,57
Цф+обл
8
17,4
4,24
12,0
5,0
-
29,4
Т4 нмоль/л
интактная
7
11,6
1,6
4,23
7,37
-
15,83
Цф+обл
8
49,4
9,23
26,1
23,3
-
75,5
Серотонин нг/мл
интактная
7
7,94
1,95
5,16
2.78
-
13,10
Цф+обл
8
5,20
0,91
2,57
2,63
-
7,77
ЛК·10<sup>9</sup> кл/л
интактная
7
6,43
0,95
2,51
3,92
-
8,94
Цф+обл
8
0,35
0,07
0,200
0,15
-
0,55
КС мг
интактная
7
92,2
37,7
99,72
-7,52
-
191,9
Цф+обл
8
44,2
13,21
37,37
6,83
-
81,57
Нормальные значения ИС, исчисленные согласно методике Л.С.Каминского (1967) как М±σ, составили по максимуму 0,71+0,86=1,57. Меньшие значения ИС свидетельствовали об отсутствии иммуносупрессии (в частности, в интактной группе), большие, приближающиеся к значениям опытной группы, - ее наличие.
Способ может быть проиллюстрирован следующими примерами.
9
6
1. У интактной крысы №2 не производилось никаких воздействий. В сроки, соответствующие эксперименту в основной группе, проведены ее лабораторные исследования. Уровни в сыворотке крови Т4 составили - 8,89 нмоль/л, серотонина - 1,53 нг\мл, количество лейкоцитов крови (ЛК) - 8,5·10 кл/л, количество лейкоцитов селезенки - клеточность селезенки (КС) 226,9·10кл/100 мг массы органа. Индекс супрессии ИС = Т4·Серотонин/ЛК·КС = 0,007.
9
6
2. У интактной крысы №4 также не производилось никаких воздействий. В соответствующие сроки проведены лабораторные исследования. Уровни в сыворотке крови Т4 составили - 1,67 нмоль/л, серотонина - 11,86 нг\мл, количество лейкоцитов крови (ЛК) - 5,0·10 кл/л, клеточность селезенки (КС) - 26,6·10 кл/100 мг. Индекс супрессии ИС = Т4·Серотонин/ЛК·КС = 1,33.
9
6
3. У крысы №24 моделировались иммунодефицитные нарушения путем инъекции циклофосфана дозой 4 мг/100 г массы тела животного с последующим (на 5 день после инъекции циклофосфана) фракционированным облучением (3 раза по 2 Гр, через день, суммарная доза 6 Гр). На 4 сутки после последнего сеанса облучения при лабораторном исследовании животного обнаружено следующее. Уровни в сыворотке крови Т4 составили - 79,4 нмоль/л, серотонина - 2,27 нг\мл, количество лейкоцитов крови (ЛК) - 0,5·10 кл/л, клеточность селезенки (КС) - 12,7·10 кл/100 мг. Индекс супрессии ИС = T4·Серотонин/ЛК·КС = 28,39.
Результат расценен как иммуносупрессия.
6
4. У крысы №29 моделировались иммунодефицитные нарушения путем инъекции циклофосфана дозой 4 мг/100 г массы тела животного с последующим (на 5 день после инъекции циклофосфана) фракционированным облучением (3 раза по 2 Гр, через день, суммарная доза 6 Гр). На 4 сутки после последнего сеанса облучения при лабораторном исследовании животного обнаружено следующее. Уровни в сыворотке крови Т4 составили - 36,1 нмоль/л, серотонина - 4,97 нг\мл, количество лейкоцитов крови (ЛК) - 0,7·10 кл/л, клеточность селезенки (КС) - 22,8·10 кл/100 мг. Индекс супрессии ИС = T4·Серотонин/ЛК·КС = 11,22.
Результат расценен как иммуносупрессия.
6
5. У крысы №27 моделировались иммунодефицитные нарушения путем инъекции циклофосфана дозой 4 мг/100 г массы тела животного с последующим (на 5 день после инъекции циклофосфана) фракционированным облучением (3 раза по 2 Гр, через день, суммарная доза 6 Гр). На 4 сутки после последнего сеанса облучения при лабораторном исследовании животного обнаружено следующее: клеточность селезенки (КС) - 59,4·10 кл/100 мг. Индекс супрессии ИС = Т4·Серотонин/ЛК·КС = 24,65. Результат расценен как иммуносупрессия.
6
6. У крысы №30 моделировались иммунодефицитные нарушения путем инъекции циклофосфана дозой 4 мг/100 г массы тела животного с последующим (на 5 день после инъекции циклофосфана) фракционированным облучением (3 раза по 2 Гр, через день, суммарная доза 6 Гр). На 4 сутки после последнего сеанса облучения при лабораторном исследовании животного обнаружено следующее, клеточность селезенки (КС) - 11,2·10 кл/100 мг. Индекс супрессии ИС = Т4·Серотонин/ЛК·КС = 33,60. Результаты расценены как иммуносупрессия.