СПОСОБЫ ОБНАРУЖЕНИЯ АКТИВНОСТИ ПРОТЕАЗЫ В БИОЛОГИЧЕСКИХ СИСТЕМАХ И КОМПОЗИЦИИ ДЛЯ ИХ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ

1. Способ обнаружения наличия или отсутствия расщепляющего агента и мишени в организме субъекта или образце, который включает:
(а) контактирование субъекта или биологического образца с активируемым антителом, включающим антитело или его антигенсвязывающий фрагмент (АВ), специфически связывающийся с мишенью, маскирующую часть (ММ), ингибирующую связывание АВ активируемого антитела с мишенью в нерасщепленном состоянии, и расщепляемую часть (СМ), связанную с АВ, при этом СМ является полипептидом, функционирующим в качестве субстрата для протеазы; и
(b) измерение уровня активированного активируемого антитела в организме субъекта или биологическом образце;
при этом присутствие активированного активируемого антитела в организме субъекта или биологическом образце на детектируемом уровне указывает на наличие расщепляющего агента и мишени в организме субъекта или биологическом образце и отсутствие активированного активируемого антитела в организме субъекта или биологическом образце на детектируемом уровне указывает на отсутствие или недостаточный уровень расщепляющего агента, мишени или как расщепляющего агента, так и мишени в организме субъекта или биологическом образце.
2. Способ по п. 1, в котором активируемое антитело включает детектируемую метку.
3. Способ по п. 1, в котором уровень активируемого антитела в организме субъекта или образце измеряют при помощи вторичного реагента, специфически связывающегося с активированным антителом, при этом указанный реагент включает детектируемую метку.
4. Способ по п. 2 или 3, в котором детектируемая метка включает визуализирующий агент, контрастное вещество, фермент, флуоресцирующую метку, хромофор, краситель, радиоактивный изотоп, ионы одного или нескольких металлов или метку на основе лиганда.
5. Способ по п. 1, который является способом in vivo.
6. Способ по п. 1, который является способом in situ.
7. Способ по п. 1, который является способом ex vivo.
8. Способ по п. 1, который является способом in vitro.
9. Способ по п. 1, в котором активируемое антитело в нерасщепленном состоянии характеризуется следующим расположением в структуре от N-конца к С-концу: ММ-СМ0АВ или АВ-СМ-ММ.
10. Способ по п. 1, в котором мишень выбирают из группы мишеней, приведенных в таблице 1.
11. Способ по п. 1, в котором АВ является или выделено из антитела, выбираемого из группы антител, приведенных в таблице 2.
2
12. Способ по п. 1, в котором антигенсвязывающий фрагмент антитела выбирают из группы, состоящей из Fab-фрагмента, F(ab')-фрагмента, scFv и scAb.
13. Способ по п. 1, в котором ММ обладает равновесной константой диссоциации для связывания с АВ, которая больше равновесной константы диссоциации АВ в отношении мишени.
14. Способ по п. 1, в котором ММ не препятствует или не конкурирует с АВ активируемого антитела в расщепленном состоянии за связывание с мишенью.
15. Способ по п. 1, в котором ММ является полипептидом, состоящим не более, чем из 40 аминокислот.
16. Способ по п. 1, в котором полипептидная последовательность ММ отличается от полипептидной последовательности мишени, при этом полипептидная последовательность ММ не более, чем на 50% идентична любому природному партнеру связывания АВ.
17. Способ по п. 1, в котором аминокислотная последовательность ММ не более, чем на 25% идентична аминокислотной последовательности мишени.
18. Способ по п. 1, в котором аминокислотная последовательность ММ не более, чем на 10% идентична аминокислотной последовательности мишени.
19. Способ по п. 1, в котором СМ является субстратом для протеазы, выбираемой из группы протеаз, приведенных в таблице 3.
20. Способ по п. 1, в котором СМ является полипептидом
длиной до 15 аминокислот.
21. Способ по а.1, в котором протеаза локализована в ткани вместе с мишенью, при этом протеаза расщепляет СМ в активируемом антителе, когда активируемое антитело подвергается воздействию протеазы.
22. Способ по п. 1, в котором активируемое антитело включает линкерный пептид между ММ и СМ.
23. Способ по п. 1, в котором активируемое антитело включает линкерный пептид между СМ и АВ.
24. Способ по п. 1, в котором активируемое антитело включает первый линкерный пептид (LP1) и второй линкерный пептид (LP2), при этом активируемое антитело в нерасщепленном состоянии характеризуется следующим расположением в структуре от N-конца к С-концу: MM-LP1-CM-LP2-AB или AB-LP2-CM-LP1-MM.
25. Способ по п. 24, в котором два линкерных пептида необязательно являются идентичными друг другу.
n
n
n
n
26. Способ по п. 24, в котором по меньшей мере один из линкерных пептидов LP1 или LP2 включает аминокислотную последовательность, выбираемую из группы, состоящей из (GS), (GGS), (GSGGS), (SEQ ID NO:33) и (GGGS) (SEQ ID NO:34), где n означает целое число, равное по меньшей мере единице.
27. Способ по п. 24, в котором по меньшей мере один из линкерных пептидов LP1 или LP2 включает аминокислотную последовательность, выбираемую из группы, состоящей из GGSG (SEQ ID NO:35), GGSGG (SEQ ID NO:36), GSGSG (SEQ ID NO:37), GSGGG (SEQ ID NO:38), GGGSG (SEQ ID NO:39) и GSSSG (SEQ ID NO:40).
28. Способ по п. 1, в котором активируемое антитело в нерасщепленном состоянии включает спейсер, присоединенный непосредственно к ММ, и характеризуется следующим расположением в структуре от N-конца к С-концу: спейсер-ММ-СМ-АВ.