АНАЛОГИ ГРЕЛИНА
GHRELIN ANALOGUES

Уровень техники
Область техники, к которой относится изобретение
Настоящее изобретение относится к пептидиловым аналогам, которые обладают агонистической или антагонистической активностью грелина, и их терапевтическим применениям.
Описание предшествующего уровня техники
2
Грелин, недавно открытый, стимулирующий аппетит гормон, продуцируется в виде препрогормона, который процессируется протеолитическим путем с образованием пептида следующей последовательности: H-Gly-Ser-Ser-Phe-Leu-Ser-Pro-Glu-His-Gln-Arg-Val-Gln-Gln-Arg-Lys-Glu-Ser-Lys-Lys-Pro-Pro-Ala-Lys-Leu-Gln-Pro-Arg-NH (Kojima M. et al., Nature (1999), 402 (6762): 656-60). Грелин продуцируется эпителиальными клетками дна желудка, и его функция заключается в стимуляции аппетита; его концентрация повышается перед едой и снижается после.
Известны природные структуры грелина от нескольких видов млекопитающих и видов, не относящихся к млекопитающим (Kaiya H. et al., J. Biol. Chem. (2001), 276 (44): 40441-8; и международная заявка на патент PCT/JP00/04907 [WO 01/07475]). Ядро, имеющееся в грелине, ответственно за активность, наблюдаемую на рецепторе GHS, которое содержит четыре N-концевых аминокислоты, где серин в положении 3 в норме модифицирован н-октановой кислотой. В дополнение к ацилированию октановой кислотой нативный грелин может также подвергаться ацилированию н-декановой кислотой (Kaiya H. et al., J. Biol. Chem. (2001), 276 (44): 40441-8).
Концентрации грелина у индивидуумов с ожирением ниже по сравнению с худыми людьми и концентрации грелина повышаются в течение суток от полуночи к рассвету у более худых людей, на основании чего можно предположить о его недостаточности в крови у индивидуумов с ожирением (Yildiz B.O. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA (2004), 101 (28): 10434-9). Было установлено, что у людей, страдающих таким нарушением приема пищи, как нервно-психическая анорексия, и пациентов с индуцированной злокачественным заболеванием кахексией имеются более высокие концентрации грелина в плазме крови (Garcia J.M., et al., J. Clin. Endocrin. Metab. (2005), 90 (5): 2920-6).
У животных и людей грелин эффективно стимулирует секрецию гормона роста (GH) из передней части гипофиза, в основном на уровне гипоталамуса, посредством его взаимодействия с рецептором вещества, стимулирующего секрецию гормона роста (GHS) (GHS-R) (Ukkola O. et al., Ann. Med. (2002), 34 (2): 102-8 и Kojima M. et al., Nature (1999), 402 (6762): 656-60). Способность грелина высвобождать GH опосредуется активацией рецепторов GHS в гипофизе и в основном на уровне гипоталамуса (Kojima M. et al., Nature (1999), 402 (6762): 656-60).
Перед установлением того, что грелин является природным лигандом рецептора GHS, было известно, что пульсирующее высвобождение GH из соматотропов гипофиза регулируется под действием двух нейропептидов гипоталамуса: высвобождающего GH гормона (GHRH) и соматостатина. GHRH стимулирует высвобождение GH, в то время как соматостатин ингибирует секрецию GH (Frohman L.A. et al., Endocrinol. Rev. (1986), 7 (3): 223-53 и Strobl J.S. et al., Pharmacology Review (1994) 46: 1-34). Вероятно, грелин усиливает активность GHRH-секретирующих нейронов, одновременно действуя в качестве функционального антагониста соматостатина (Ghigo E. et al., Eur. J. Endocri. (1997): 136 (5): 445-60).
Высвобождение GH из соматотропов гипофиза может также регулироваться GH-высвобождающими пептидами (GHRH). Было установлено, что гексапептид His-D-Trp-Ala-Trp-D-Phe-Lys-амид (GHRH-6) высвобождает GH из соматотропов в зависимости от дозы у нескольких видов, включая человека (Bowers C.Y. et al., Endocrinology (1984), 114(5): 1537-45). Результаты последующих химических исследований GHRH-6 привели к установлению других эффективных синтетических веществ, стимулирующих секрецию, таких как GHRР-1, GHRР-2 и гексарелин (Cheng K. et al., Endocrinology (1989), 124(6): 2791-8; Bowers C.Y., Novel GH-releasing Peptides, Molecular and Clinical Advances in Pituitary Disorders, Ed.: Melmed S., Endocrine Research and Education, Inc., Los Angeles, CA, USA (1993), 153-7; и Deghenghi R. et al., Life Science (1994), 54(18): 1321-8). Данные три соединения имеют строение:
2
GHRР-1 Ala-His-D-(2')-Nal-Ala-Trp-D-Phe-Lys-NH;
2
GHRР-2 D-Ala-D-(2')-Nal-Ala-Trp-D-Nal-Lys-NH; и
2
гексарелин His-D-2-MeTrp-Ala-Trp-D-Phe-Lys-NH.
GHS может стимулировать секрецию GH посредством иного механизма чем GHRH (Bowers C.Y. et al., Endocrinology (1984), 114(5): 1537-45; Cheng K. et al., Endocrinology (1989), 124(6) 2791-8; Bowers C.Y., Novel GH-releasing Peptides, Molecular and Clinical Advances in Pituitary Disorders, Ed.: Melmed S., Endocrine Research and Education, Inc., Los Angeles, CA, USA (1993), 153-7; и Deghenghi R. et al., Life Science (1994), 54(18): 1321-8).
Низкая биодоступность (<1%) пептидных GHS при пероральном введении стимулировала поиск соединений, отличных от пептидов, с действием, напоминающим действие GHRР-6 в гипофизе. Сообщалось о нескольких производных бензолактамов и спироинданов, стимулирующих высвобождение GH у различных видов животных, включая людей (Smith R.G. et al., Science (1993), 260(5114): 1640-3; Patchett A.A. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1995), 92(15): 7001-5; Chen M.-H. et al., Bioorg. Mod. Chem. Lett. (1996), 6(18): 2163-8). Конкретным примером спироиндана с небольшой молекулой является МК-0677 (Patchett A.A. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1995), 92(15): 7001-5):
Оказалось, что действие GHS (пептида и непептида) опосредуется специфическим рецептором (Howard A.D. et al., Science (1996), 273(5277): 974-7; и Pong S.S. et al., Mol. Endocrin. (1996), 10(1): 57-61). Данный рецептор находится в гипофизе и гипоталамусе различных видов млекопитающих (GHSR1a) и отличается от рецептора GH-высвобождающего гормона. Рецептор GHS также обнаружен в других областях центральной нервной системы и периферических тканях, например в надпочечниках, щитовидной железе, сердце, легких, почках и мышцах (Chen M.-H. et al., Bioorg. Med. Chem. Letts. (1996), 6(18): 2163-9; Howard A.D. et al., Science (1996), 273(5277): 974-7; Pong S.S. et al., Mol. Endocrin. (1996), 10(1): 57-61; Guan X.-M. et al., Mol. Brain Res. (1997), 48(1): 23-9 и McKee K.K. et al., Genomics (1997), 46(3): 426-34). Сообщалось об усеченном варианте GHSR1a (Howard A.D. et al., Science (1996), 273(5277): 974-7).
Рецептор GHS представляет собой сопряженный с G-белком рецептор. Активирующее действие на рецептор GHS включает деполяризацию и ингибирование калиевых каналов, повышение межклеточных концентраций инозинтрифосфата (IP3) и кратковременное увеличение концентрации внутриклеточного кальция (Pong S.S. et al., Mol. Endocrin. (1996), 10(1): 57-61; Guan X.-M. et al., Mol. Brain Res. (1997), 48(1): 23-9 и McKee K.K. et al., Genomics (1997), 46(3): 426-34).
Молекулы GHS, такие как грелин и его аналоги, имеют различные терапевтические (патент США № 6566337; Inui A., FASEB J. (2004), 18(3): 439-56; Muller E.E. et al., Neurobiol. Aging (2002), 23(5): 907-19; Casanueva F.F. et al., Trends Endocrinol. Metab. (1999), 10(1): 30-8 и Ankerson M. et al., Drug Discovery Today (1999), 4: 497-506) и диагностические применения. Соединения, проявляющие агонистическое действие на рецептор GHS, показаны для лечения недостаточности GH (патенты США № 6861409 и 6967237; и Casanueva F.F. et al., Trends Endocrinol. Metab. (1999), 10(1): 30-8), для увеличения мышечной массы (патенты США № 6861409 и 6967237) и/или физической силы (Ankerson M. et al., Drug Discovery Today (1999), 4: 497-506), повышения плотности костей (патенты США № 6861409, 6967237 и 6251902; и Sibilia V. et al., Growth Horm. IGF Res. (1999), 9(4): 219-27), лечения остеопороза (международная заявка на патент № PCT/IB96/01353 [WO 97/24369] и PCT/IB98/00873 [WO 98/58947] и Casanueva F.F. et al., Trends Endocrinol. Metab. (1999), 10(1): 30-8), при половой дисфункции (патент США № 6967237 и Casanueva F.F. et al., Trends Endocrinol. Metab. (1999), 10(1): 30-8), для лечения сердечно-сосудистого заболевания (международная заявка на патент № PCT/IB96/01353 [WO 97/24369] и PCT/IB98/00873 [WO 98/58947]; патент США № 6251902; De Gennaro Colonna V. et al., Eur. J. Pharmacol. (1997), 334(2-3): 201-7 и Casanueva F.F. et al., Trends Endocrinol. Metab. (1999), 10(1): 30-8), ослабления болей при артрите (Granado M., Am. J. Endo. Metab. (2005), 288: 486-92), профилактики или предупреждения начала развития болезни Альцгеймера (патенты США № 6686359 и 6566337) и/или лечения системной красной волчанки или воспалительного заболевания кишечника, например болезни Крона или язвенного колита (публикация патента США № 2002/0013320).
Аналоги-агонисты грелина могут способствовать увеличению массы тела (патент США № 6967237; Tschop M. et al., Nature (2000), 407(6806): 908-13; и Tschop M. et al., Endocrinology (2002), 143(2): 558-68), что, в свою очередь, можно использовать для поддержания желаемой массы тела (патенты США № 6861409 и 6967237) и/или для восстановления физической функции (патенты США № 6967237 и 6251902; и международная заявка на патент № PCT/IB96/01353 [WO 97/24369]).
Грелин также повышает аппетит (патент США № 6967237; и Okada K. et al., Endocrinology (1996), 137(11): 5155-8). В результате этого грелин часто применяют для лечения пациентов, страдающих некоторыми заболеваниями или нарушениями, или проходящими курс лечения, которые, как правило, сопровождаются нежелательной потерей массы тела, такими как анорексия (патент США № 6967237; и Tschop M. et al., Endocrinology (2002), 143(2): 558-68), булимия (патент США № 6967237), кахексия (патенты США № 6967237 и 6251902), в частности кахексия, вызванная злокачественными заболеваниями (патент США № 6967237; международная заявка на патент № PCT/DK2004/000529 [WO 05/014032]) и Tschop M. et al., Endocrinology (2002), 143(2): 558-68), СПИД (патенты США № 6861409 и 6967237; и Tschop M. et al., Endocrinology (2002), 143(2): 558-68), синдром истощения у ослабленных и пожилых людей (патенты США № 6861409 и 6967237; международная заявка на патент № PCT/IB96/01353 [WO 97/24369]; и Ankerson M. et al., Drug Discovery Today (1999) 4: 497-506) и хроническая почечная недостаточность (Casanueva F.F. et al., Trends Endocri. Metab. (1999), 10(1): 30-8). Виды лечения, как правило, сопровождающиеся потерей массы тела, включают химиотерапию, лучевую терапию, временную или постоянную иммобилизацию и/или диализ (патенты США № 6967237 и 6251902).
Ожирение является важным фактором риска для развития диабета, и большая часть пациентов с инсулиннезависимым сахарным диабетом (иначе обозначенным как «NIDDM») страдают ожирением. Оба заболевания характеризуются повышенными концентрациями инсулина в крови и пониженными уровнями GH. Было показано, что лечение GH у взрослых с недостаточностью GH (Jorgensen J.O. et al., Lancet (1989), 1(8649): 1221-5), женщин с ожирением (Richelsen B. et al., Am. J. Physiol. (1994), 266(2 Pt 1): E211-6) и пожилых людей (Rudman D. et al., Horm. Res. (1991), 36 (suppl 1) приводит к увеличению тканей без жира, массы печени и мышц с одновременным снижением массы жира. Следовательно, введение агониста грелина представляет собой весьма привлекательный вид лечения ожирения для проявления диабетогенного действия GH (патент США № 6251902; Ankerson M. et al., Drug Discovery Today (1999) 4: 497-506; и Casanueva F.F. et al., Trends Endocri. Metab. (1999), 10(1): 30-8). Также грелином можно опосредовано лечить осложнения при диабете, такие как ретинопатия, и/или лечить сердечно-сосудистые заболевания (патент США № 6967237 и публикация заявки на патент США № 2003/0211967).
Парадоксально, но антагонисты грелина можно использовать для снижения массы тела у индивидуумов с ожирением, у которых указанное ожирение возникло не за счет NIDDM (патент США № 6967237 и публикация заявки на патент США № 2003/0211967), а также по некоторым другим указанным показаниям. Соединения, проявляющие антагонистическое действие на рецептор GHS с подавлением секреции GH, например антагонисты грелина, показаны для ингибирования избыточной секреции GH (публикация заявки на патент США № 2002/0187938), для снижения массы тела у субъектов без ожирения (патент США № 6967237), для поддержания идеальной массы тела и/или снижения аппетита (патент США № 6967237). Избыточная масса тела вносит свой вклад в развитие многих заболеваний или состояний, таких как повышенное давление, дислипидемия и сердечно-сосудистые заболевания (публикация заявки на патент США № 2003/0211967 и патент США № 6967237), а также образование желчных камней, остеоартрит (патент США № 6967237), некоторые злокачественные заболевания (публикации заявок на патент США № 2003/0211967 и 2004/0157227; и патент США № 6967237) и синдром Прадера-Вилли (патент США № 6950707; международная заявка на патент № РСТ/US2004/008385 [WO 04/084943]; Haqq A.M. et al., J. Clin. Endocri. Metab. (2003), 88(1):174-8 и Cummings D.E. et al., Nat. Med. (2002), 8(7):643-4). Антагонисты грелина, которые способствуют потере массы тела, будут, следовательно, снижать вероятность развития таких заболеваний или состояний, и/или составлять, по меньшей мере, часть лечения таких заболеваний или состояний. Также было установлено, что антагонисты молекул GHS связываются с онкогенной тканью, результатом чего является снижение количества онкогенных клеток в тканях-мишенях, например, опухолях легких, молочной железы или поджелудочной железы (международная заявка на патент № РСТ/ЕР99/08662 [WO 00/29011]).
Также аналоги веществ, стимулирующих секрецию GH, использовали для усиления подвижности желудочно-кишечного тракта, в частности, у пациентов с пониженной подвижностью желудочно-кишечного тракта в результате послеоперационного илеуса или гастропареза, характерного для начала развития диабета или хронического диабета (патент США № 6548501).
Кроме того, грелин является эффективным при лечении воспаления у млекопитающих (международная заявка на патент № РСТ/US2005/016565 [WO 2005/110463]). В частности, воспаление может быть связано с вирусной, бактериальной, паразитарной или грибковой инфекцией. Вирусные инфекции, которые поддаются лечению грелином, могут включать инфекции, вызванные вирусом герпеса простого типа-1, вирусом герпеса простого типа-2, цитомегаловирусом, вирусом Эпштейна-Барра, вирусом ветряной оспы, человеческим герпесвирусом 6, человеческим герпесвирусом 7, человеческим герпесвирусом 8, вирусом натуральной оспы, вирусом везикулярного стоматита, вирусом гепатита А, вирусом гепатита В, вирусом гепатита С, вирусом гепатита D, вирусом гепатита Е, риновирусом, коронавирусом, вирусом гриппа А, вирусом гриппа В, вирусом кори, полиомавирусом, человеческим папиломавирусом, респираторным синцитиальным вирусом, аденовирусом, вирусом Коксаки, вирусом Денге, вирусом паратита, полиовирусом, вирусом бешенства, вирусом саркомы Руса, вирусом желтой лихорадки, вирусом Эбола, вирусом Марбурга, вирусом лихорадки Ласа, вирусом восточного энцефалита лошадей, вирусом японского энцефалита, вирусом энцефалита Сент-Луис, вирусом лихорадки долины Мюррей, вирусом Западного Нила, вирусом лихорадки долины Рифт, ротавирусом А, ротавирусом В, ротавирусом С, вирусом Синдбис, обезьяним вирусом иммунодефицита, вирусом типа-1 человеческой Т-клеточной лейкемии, гантавирусом, вирусом коревой краснухи, обезьяним вирусом иммунодефицита, вирусом типа-1 иммунодефицита человека и вирусом типа-2 иммунодефицита человека (международная заявка на патент № РСТ/US2005/016565 [WO 2005/110463]).
Бактериальные инфекции, вызывающие воспаление, которые можно лечить грелином (международная заявка на патент № РСТ/US2005/016565 [WO 2005/110463], включают инфекции, вызванные M. tuberculosis, M. bovis, M. bovis штаммом BCG, cубштаммами BCG, M. avium, M. intracellulare, M. africanum, M. kansasii, M. marinum, M. ulcerans, M. avium cубштаммами paratuberculosis, Nocardia asteroides, другими видами Nocardia, Legionella pneumophila, другими видами Legionella, Salmonella typhi, другими видами Salmonella, видами Shigella, Yersinia pestis, Pasteurella haemolytica, Pasteurella multocida, другими видами Pasteurella, Actinobacillus pleuropneumoniaе, Listeria monocytogenes, Listeria ivanovii, Brucella abortus, другими видами Brucella, Cowdria ruminantium, Chlamydia pneumoniae, Chlamydia trachomatis, Chlamydia psittaci, Coxiella burnetti, другими видами Rickettsia, видами Ehrlichia, Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, Streptococcus pyogenes, Streptococcus agalactiae, Bacillus anthracis, Escherichia coli, Vibrio cholerae, видами Campylobacter, Neiserria meningitidis, Neiserria gonorrhea, Pseudomonas aeruginosa, другими видами Pseudomonas, Haemophilus influenzae, Haemophilus ducreyi, другими видами Haemophilus, Clostridium tetani, другими видами Clostridium, Yersinia enterolitica и другими видами Yersinia (международная заявка на патент № РСТ/US2005/016565 [WO 2005/110463]).
Воспаление, поддающееся лечению грелином (международная заявка на патент № РСТ/US2005/016565 [WO 2005/110463]), также может быть вызвано паразитами, включая инфекции, вызванные Toxoplasma gondii, Plasmodium, Trypanosoma brucei, Trypanosoma cruzi, Leishmania, Schistosoma и Entamoeba histolytica, или инфекции, вызванные грибами, такими как Candida albicans, Cryptococcus neoformans, Histoplama capsulatum, Aspergillus fumigatus, Coccidiodes immitis, Paracoccidiodes brasiliensis, Blastomyces dermitidis, Pneomocystis carnii, Penicillium marneffi и Alternaria alternatа (международная заявка на патент № РСТ/US2005/016565 [WO 2005/110463]).
Воспаление, причиной которого является токсичность для печени или отторжение трансплантата, также подвергается лечению грелином (международная заявка на патент № РСТ/US2005/016565 [WO 2005/110463]). Токсичность для печени может быть связана с лечением злокачественного заболевания. В некоторых случаях лечение злокачественного заболевания, такое как химиотерапия, может привести к токсичности для печени. Токсичность для печени, возникшая в результате химиотерапии и апоптоза, может подвергаться лечению введением грелина, агонистов грелина или антагонистов грелина (международная заявка на патент № РСТ/US2005/016565 [WO 2005/110463]).
Воспаление, ассоциированное со злокачественными заболеваниями, также поддается лечению грелином (международная заявка на патент № РСТ/US2005/016565 [WO 2005/110463]). Такие злокачественные заболевания включают лимфому, лейкемию, грибовидный микоз, карциному, аденокарциному, саркому, глиому, бластому, нейробластому, плазмоцитому, гистиоцитому, меланому, аденому, гипоксическую опухоль, миелому, связанную со СПИДом лимфому или связанную со СПИДом саркому, метастазирующую злокачественную опухоль, злокачественную опухоль мочевого пузыря, злокачественную опухоль мозга, злокачественную опухоль нервной системы, глиобластому, злокачественную опухоль яичников (международная заявка на патент № РСТ/АU02/00582 [WO 02/090387] и Gaytan F. et al., J. Clin. Endocri. Metab. (2005), 90(3): 1798-804), рак кожи, злокачественную опухоль печени, плоскоклеточные карциномы ротовой полости, горла, гортани и легких, злокачественную опухоль ободочной кишки, рак шейки матки (международная заявка на патент № РСТ/АU02/00582 [WO 02/090387], злокачественную опухоль молочной железы (международная заявка на патент № РСТ/АU02/00582 [WO 02/090387] и Cassoni P. et al., J. Clin. Endocri. Metab. (2001), 86(4): 1738-45), эпителиальную злокачественную опухоль, злокачественную опухоль почек (Jungwirth A. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1997), 94(11): 5810-3), злокачественную опухоль органов половой и мочевой системы, злокачественную опухоль легких (Ghe C. et al., Endocrinology (2002), 143(2): 484-91), карциному пищевода (Nwokolo C.U. et al., Gut (2003), 52(5): 637-40), карциному головы и шеи (Jozkow P. et al., Head Neck (2005), 27(3): 243-7), злокачественное заболевание крови, рак яичка (Gaytan F. et al., J. Clin. Endocrinol. Metab. (2004), 89(1): 400-9), злокачественную опухоль ободочной и прямой кишки (Dagnaes-Hansen H. et al., Anticancer Res. (2004), 24(6): 3735), злокачественную опухоль простаты (Jeffery P.L., et al., Endocrinology (2002), 172: R7-11) и злокачественную опухоль поджелудочной железы (Volante M. et al., J. Clin. Endocri. Metab. (2002), 87(3): 1300-8) и международная заявка на патент № РСТ/US2005/016565 [WO 2005/110463].
Наконец, было показано, что грелин лечит воспалительные заболевания (международная заявка на патент № РСТ/US2005/016565 [WO 2005/110463]), такие как астма, реактивный артрит, гепатит (Wallace J.D. et al., J. Clin. Endocri. Metab. (2002), 87(6): 2751-9), спондиартрит, синдром Шергена, болезнь Альцгеймера (патенты США № 6686359 и 6566337; и Obermayr R.P. et al., Gerontology (2003), 49(3): 191-5) и атопический дерматит, или воспалительные заболевания, связанные с аутоиммунным заболеванием, такие как системная красная волчанка, ревматоидный артрит (Otero M. et al., Rhеumatology (Oxford) (2004), 43(3): 306-10), системный васкулит, инсулинзависимый сахарный диабет (Nieves-Riviera F. et al., Growth Regul. (1993), 3: 235-44), рассеянный склероз и мышечная дистрофия (публикация патента США № 2003/0139348), экспериментальный аллергический энцефаломиелит (Ikushima H. et al., J. Immunol. (2003), 171: 2769-72), псориаз (Edmondson S.R. et al., Endocri. Rev. (2003), 24(6): 737-64), болезнь Крона (Slonim A.E. et al., N. Engl. J. Med. (2000), 342(22): 1633-7), воспалительное заболевание кишечника (Chen K. et al., Surgery (1997), 121(2): 212-8), язвенный колит, болезнь Аддисона (Arvat E. et al., Neuroendocrinology (1999), 70(3): 200-6), гнездную алопецию, заболевание органов брюшной полости (Peracchi M. et al., Am. J. Gastroenterology (2003), 98(11): 2474-8) и Capristo E. et al., Scand. J. Gastroenterol. (2005), 40(5): 430-6), заболевание щитовидной железы (Riis A.L. et al., J. Clin. Endocrin. Metab. (2003), 88(2): 853-7) и склеродерму. Также воспаление, развившееся в результате ожога, можно лечить грелином, как и воспаление легких (международная заявка на патент № РСТ/US2005/016565 [WO 2005/110463]). Воспаление также может привести к потере аппетита у субъекта, особенно когда воспаление является низкой степени и/или имеет место у пожилого субъекта (международная заявка на патент № РСТ/US2005/016565 [WO 2005/110463]).
Можно также использовать антагонисты грелина для достижения лечебного действия у пациента (публикация патента США № 2002/187938, 2003/0211967 и 2004/0157227; и патент США № 6967237). Например, антагонист грелина можно использовать для уменьшения массы тела или снижения аппетита, для поддержания идеальной массы тела, для лечения ожирения, для контроля диабета, включая его осложнения, такие как ретинопатия, и/или лечения сердечно-сосудистых расстройств. Избыточная масса тела вносит свой вклад в развитие многих заболеваний или состояний, таких как повышенное давление, диабет, дислипидемия и сердечно-сосудистые заболевания, образование желчных камней, остеоартрит и синдром Прадера-Вилли, а также некоторые формы злокачественных опухолей. Снижение массы тела, будет, следовательно, снижать вероятность развития таких заболеваний или составлять часть лечения таких заболеваний.
С учетом широкого ряда лечебных эффектов, которые можно получить при использовании GHS, в данной области имеется потребность в эффективном агонисте или антагонисте молекул аналогов грелина.
Сущность изобретения
15
16
17
18
19
20
9
8
14
15
14
17
11
10
7
6
4
5
12
13
17
17
2
2
2
n
Было установлено, что аналоги грелина, в которых аминокислоты в остатках А, А, А, А, Аили Азамещены на Asp(NH-R), Asp(O-R), Cys(S-R), Cys(R), hCys(S-R), hCys(R), Dab(S(O)-R), Dap(S(O)-R), Glu(NH-R), Glu(O-R), Gly(миристил), Ser(C(O)-R), Thr(C(O)-R) или HN-CH((CH)-N(RR))-C(O) или, в частности, Lys(биотинил) или Lys(миристил), проявляют более высокую аффинность связывания с клеточной мембраной и, как было установлено, более эффективно взаимодействуют со связанными с мембраной рецепторами и, таким образом, являются более сильными в биологическом отношении по сравнению с природным грелином.
15
16
17
18
19
20
9
8
14
15
16
17
11
10
7
6
1
17
17
4
5
12
13
2
2
2
n
В свете данного установленного факта настоящее относится к аналогам грелина, активным на рецепторе GHS, в которых остатки А, А, А, А, Аили Азамещены на Asp(NH-R), Asp(O-R), Cys(S-R), Cys(R), hCys(S-R), hCys(R), Dab(S(O)-R), Dap(S(O)-R), Glu(NH-R), Glu(O-R), Gly(миристил), Lys(биотинил), Lys(миристил), Ser(C(O)-R), Thr(C(O)-R) или HN-CH((CH)-N(RR))-C(O).
1
28
2
Таким образом, первый аспект настоящего изобретения относится к аналогу грелина формулы (I), в которой первая аминокислота, перечисленная при определении А-А, представляет аминокислоту, обнаруженную в таком же положении в последовательности природного грелина, т.е. H-Gly-Ser-Ser-Phe-Leu-Ser-Pro-Glu-His-Gln-Arg-Val-Gln-Gln-Arg-Lys-Glu-Ser-Lys-Lys-Pro-Pro-Ala-Lys-Leu-Gln-Pro-Arg-NH;
2
3
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
28
1
(RR)-A-A-A-A-A-A-A-A-A-A-A-A-A-A-A-A-A-A-A-A-A-A-A-A-A-A-A-A-R
(I)
в которой:
1
A представляет Gly, Acс, Aib, Ala или β-Ala;
2
A представляет Ser, Abu, Acс, Act, Aib, Ala, Ava, Thr или Val;
3
9
8
14
11
10
7
6
4
5
12
13
2
2
2
n
A представляет Ser, Asp(NH-R), Asp(O-R), Cys(S-R), Dab(S(О)-R), Dap(S(O)-R), Glu(NH-R), Glu(O-R), Ser(C(O)-R), Thr(C(O)-R) или HN-CH((CH)-N(RR))-C(O);
4
1
2
3
4
5
A представляет Phe, Acс, Aic, Cha, 2-Fua, 1-Nal, 2-Nal, 2-Pal, 3-Pal, 4-Pal, hPhe, (X,X,X,X,X)Phe, Taz, 2-Thi, 3-Thi, Trp или Tyr;
5
A представляет Leu, Abu, Acс, Aib, Ala, Cha, Ile, hLeu, Nle, Nva, Phe, Tle или Val;
6
A представляет Ser, Abu, Acс, Act, Aib, Ala, Gly, Thr или Val;
7
A представляет Pro, Dhp, Dmt, 3-Hyp, 4-Hyp, Inc, Ktp, Oic, Pip, Thz или Tic;
8
12
13
2
n
A представляет Glu, Acс, Aib, Arg, Asn, Asp, Dab, Dap, Gln, Lys, Orn или HN-CH((CH)-N(RR))-C(O);
9
1
2
3
4
5
A представляет His, Acс, Apс, Aib, 2-Fua, 2-Pal, 3-Pal, 4-Pal, (X,X,X,X,X)Phe, Taz, 2-Thi или 3-Thi;
10
A представляет Gln, Acс, Aib, Asn, Asp или Glu;
11
12
13
2
n
A представляет Arg, Apс, hArg, Dab, Dap, Lys, Orn или HN-CH((CH)-N(RR))-C(O);
12
A представляет Val, Abu, Acс, Aib, Ala, Cha, Gly, Ile, Leu, Nle, Nva или Tle;
13
A представляет Gln, Acс, Aib, Asn, Asp или Glu;
14
A представляет Gln, Acс, Aib, Asn, Asp или Glu;
15
9
8
14
15
16
17
11
10
7
6
4
5
12
13
2
2
2
n
A представляет Arg, Acс, Aib, Apc, hArg, Dab, Dap, Lys, Orn, Asp(NH-R), Asp(O-R), Cys(S-R), Cys(R), hCys(S-R), hCys(R), Dab(S(O)-R), Dap(S(O)-R), Glu(NH-R), Glu(O-R), Ser(C(O)-R), Thr(C(O)-R) или HN-CH((CH)-N(RR))-C(O);
16
9
8
14
15
16
17
11
10
7
6
4
5
12
13
2
2
2
n
A представляет Lys, Acс, Aib, Apc, Arg, hArg, Dab, Dap, Orn, Asp(NH-R), Asp(O-R), Cys(S-R), Cys(R), hCys(S-R), hCys(R), Dab(S(O)-R), Dap(S(O)-R), Glu(NH-R), Glu(O-R), Ser(C(O)-R), Thr(C(O)-R), HN-CH((CH)-N(RR))-C(O) или подвергается делеции;
17
9
8
14
15
16
17
11
10
7
6
4
5
12
13
2
2
2
n
A представляет Glu, Arg, Asn, Asp, Dab, Dap, Gln, Lys, Orn, Asp(NH-R), Asp(О-R), Cys(S-R), Cys(R), hCys(S-R), hCys(R), Dab(S(O)-R), Dap(S(O)-R), Glu(NH-R), Glu(O-R), Lys(биотинил), Ser(C(O)-R), Thr(C(O)-R), HN-CH((CH)-N(RR))-C(O) или подвергается делеции;
18
9
8
14
15
16
17
11
10
7
6
4
5
12
13
2
2
2
n
A представляет Ser, Abu, Acс, Act, Aib, Ala, Thr, Val, Asp(NH-R), Asp(O-R), Cys(S-R), Cys(R), hCys(S-R), hCys(R), Dab(S(O)-R), Dap(S(O)-R), Glu(NH-R), Glu(O-R), Ser(C(O)-R), Thr(C(O)-R), HN-CH((CH)-N(RR))-C(O) или подвергается делеции;
19
9
8
14
15
16
17
11
10
7
6
4
5
12
13
2
2
2
n
A представляет Lys, Acс, Aib, Apс, Arg, hArg, Dab, Dap, Orn, Asp(NH-R), Asp(O-R), Cys(S-R), Cys(R), hCys(S-R), hCys(R), Dab(S(O)-R), Dap(S(O)-R), Glu(NH-R), Glu(O-R), Ser(C(O)-R), Thr(C(O)-R), HN-CH((CH)-N(RR))-C(O) или подвергается делеции;
20
9
8
14
15
16
17
11
10
7
6
4
5
12
13
2
2
2
n
A представляет Lys, Acс, Aib, Apс, Arg, hArg, Dab, Dap, Orn, Asp(NH-R), Asp(O-R), Cys(S-R), Cys(R), hCys(S-R), hCys(R), Dab(S(O)-R), Dap(S(O)-R), Glu(NH-R), Glu(O-R), Ser(C(O)-R), Thr(C(O)-R), HN-CH((CH)-N(RR))-C(O) или подвергается делеции;
21
A представляет Pro, Dhp, Dmt, 3-Hyp, 4-Hyp, Inc, Ktp, Oic, Pip, Thz, Tic или подвергается делеции;
22
A представляет Pro, Dhp, Dmt, 3-Hyp, 4-Hyp, Inc, Ktp, Oic, Pip, Thz, Tic или подвергается делеции;
23
A представляет Abu, Acс, Act, Aib, Ala, Apс, Gly, Nva, Val или подвергается делеции;
24
12
13
2
n
A представляет Lys, Acс, Aib, Apс, Arg, hArg, Dab, Dap, Orn, HN-CH((CH)-N(RR))-C(O) или подвергается делеции;
25
A представляет Leu, Abu, Acс, Aib, Ala, Cha, Ile, hLeu, Nle, Nva, Phe, Tle, Val или подвергается делеции;
26
A представляет Gln, Aib, Asn, Asp, Glu или подвергается делеции;
27
A представляет Pro, Dhp, Dmt, 3-Hyp, 4-Hyp, Inc, Ktp, Oic, Pip, Thz, Tic или подвергается делеции;
28
12
13
2
n
A представляет Acс, Aib, Apc, Arg, hArg, Dab, Dap, Lys, Orn, HN-CH((CH)-N(RR))-C(O) или подвергается делеции;
1
6
0
6
0
2
1
30
2
1
12
2
12
2
2
R представляет -OH, -NH, -(C-C)алкокси или NH-X-CH-Z, где X представляет (C-C)алкил или (C-C)алкенил, и Z представляет -H, -OH, -COH или -C(O)-NH;
2
3
1
30
1
30
1
30
2
30
2
30
1
30
1
30
1
30
1
30
2
30
2
30
1
30
2
30
1
30
каждый из Rи Rнезависимо в каждом случае выбран из группы, состоящей из Н, (С-С)алкила, (С-С)гетероалкила, (С-С)ацила, (С-С)алкенила, (С-С)алкинила, арил(С-С)алкила, арил(С-С)ацила, замещенного (С-С)алкила, замещенного (С-С)гетероалкила, замещенного (С-С)ацила, замещенного (С-С)алкенила, замещенного арил(С-С)алкила, замещенного (С-С)алкинила и замещенного арил(С-С)ацила;
4
5
6
7
8
9
10
11
14
15
16
17
1
40
2
40
1
40
2
40
каждый из R, R, R, R, R, R, R, R, R, R, Rи R независимо в каждом случае выбран из группы, состоящей из (С-С)алкила, (С-С)алкенила, замещенного (С-С)алкила, замещенного (С-С)алкенила, алкиларила, замещенного алкиларила, арила и замещенного арила;
12
13
1
40
1
40
1
40
2
40
2
40
1
40
1
40
1
40
1
40
1
40
2
40
2
40
1
40
1
40
1
40
2
каждый из Rи Rнезависимо в каждом случае выбран из группы, состоящей из Н, (С-С)алкила, (С-С)гетероалкила, (С-С)ацила, (С-С)алкенила, (С-С)алкинила, арил(С-С)алкила, арил(С-С)ацила, замещенного (С-С)алкила, замещенного (С-С)гетероалкила, замещенного (С-С)ацила, замещенного (С-С)алкенила, замещенного (С-С)алкинила, замещенного арил(С-С)алкила, замещенного арил(С-С)ацила, (С-С)алкилсульфонила, -C(NH)-NH и биотинила;
n независимо в каждом случае представляет 1, 2, 3, 4 или 5;
1
2
3
4
5
1
10
1
10
2
2
каждый из Х, Х, Х, Х и Хв каждом случае независимо выбран из группы, состоящей из Н, F, Cl, Br, I, (C-C)алкила, замещенного (C-C)алкила, арила, замещенного арила, ОН, NH, NO и CN;
при условии, что:
2
3
1
30
1
30
2
30
1
30
1
30
1
30
2
30
1
30
1
30
1
30
2
30
2
30
1
30
(I) когда Rпредставляет (С-С)ацил, арил(С-С)ацил, замещенный (С-С)ацил или замещенный арил(С-С)ацил, то тогда Rявляется Н, (С-С)алкилом, (С-С)гетероалкилом, (С-С)алкенилом, арил(С-С)алкилом, замещенным (С-С)алкилом, замещенным (С-С)гетероалкилом, замещенным (С-С)алкенилом, замещенным (С-С)алкинилом или замещенным арил(С-С)алкилом;
12
13
1
40
1
40
1
40
1
40
1
40
2
1
40
1
40
2
40
2
40
1
40
1
40
1
40
2
40
2
40
1
40
(II) когда Rпредставляет (С-С)ацил, арил(С-С)ацил, замещенный (С-С)ацил, замещенный арил(С-С)ацил, (С-С)алкилсульфонил или -C(NH)-NH, то тогда Rявляется Н или (С-С)алкилом, (С-С)гетероалкилом, (С-С)алкенилом, (С-С)алкинилом, арил(С-С)алкилом, замещенным (С-С)алкилом, замещенным (С-С)гетероалкилом, замещенным (С-С)алкенилом, замещенным (С-С)алкинилом или замещенным арил(С-С)алкилом;
15
16
17
18
19
20
9
8
14
15
16
17
11
10
7
6
4
5
12
13
2
2
2
n
(III) по меньшей мере, одна из A, A, A, A, A или Aуказанного аналога грелина выбрана из группы, состоящей из Asp(NH-R), Asp(O-R), Cys(S-R), Cys(R), hCys(S-R), hCys(R), Dab(S(O)-R), Dap(S(O)-R), Glu(NH-R), Glu(O-R), Ser(C(O)-R), Thr(C(O)-R) или HN-CH((CH)-N(RR))-C(O); и
15
16
17
19
20
12
13
12
2
n
(IV) когда любая группа, состоящая из A, A, A, A или A, представляет HN-CH((CH)-N(RR))-C(O), то тогда R должен быть биотинилом;
или его фармацевтически приемлемой соли.
Предпочтительной группой соединений формулы (I), названной группой соединений 1, является та, где:
1
А представляет Gly или Aib;
2
А представляет Ser, Act, Aib, Ava или A5c;
3
11
10
7
6
4
2
2
А представляет Dab(S(O)-R), Dap(S(O)-R), Glu(NH-R), Glu(O-R) или Ser(C(O)-R) ;
4
А представляет Phe;
5
А представляет Leu, Acc, Aib, Cha или hLeu;
6
А представляет Ser, Abu, Act, Aib или Thr;
7
А представляет Pro, Dhp, Dmt, 4-Hyp, Ktp, Pip или Thz;
8
А представляет Glu или Aib;
9
А представляет His, Aib, Apc, 2-Fua, 2-Pal, 3-Pal, 4-Pal, Taz или 2-Thi;
10
А представляет Gln или Aib;
11
А представляет Arg;
12
А представляет Val или Acc;
13
А представляет Gln;
14
А представляет Gln;
15
А представляет Arg или Orn;
16
А представляет Lys или Apc;
17
А представляет Glu;
18
А представляет Ser;
19
А представляет Lys;
20
А представляет Lys;
21
А представляет Pro;
22
А представляет Pro;
23
А представляет Ala;
24
А представляет Lys;
25
А представляет Leu;
26
А представляет Gln;
27
А представляет Pro; и
28
А представляет Arg;
или их фармацевтически приемлемая соль.
Другой предпочтительной группой соединений формулы (I), названной группой соединений 2, является та, где:
2
3
каждый из R и Rнезависимо в каждом случае выбран из группы, состоящей из Н, ацила, н-бутирила, изобутирила и н-октаноила;
4
Rпредставляет гептил;
6
Rпредставляет гексил;
7
Rпредставляет гексил;
10
Rпредставляет октил;
11
Rпредставляет гептил; и
при условии, что когда имеется Асс вместо одного из природных остатков, то она независимо в каждом случае выбрана из А3с, А4с, А5с или А6с;
или их фармацевтически приемлемая соль.
Еще одной предпочтительной группой соединений формулы (I), названной группой соединений 3, является та, где:
3
2
9
3
А представляет Asp(NH-гексил), Asp(1-гептанол), Cys(S-(CH)CH), Dap(октансульфонил), Glu(NH-гексил) или Glu(1-гептанол);
5
А представляет Leu;
6
А представляет Ser;
7
А представляет Pro, Dhp, 4-Hyp, Pip, Thz или Tic;
9
А представляет His, 3-Pal, 4-Pal, Taz или 2-Thi;
12
А представляет Val;
15
А представляет Arg, Glu(NH-гексил) или Ser(н-октаноил);
16
А представляет Lys, Glu(NH-гексил) или Ser(н-октаноил);
17
2
9
3
А представляет Glu, Lys(биотинил), Asp(NH-гексил), Asp(1-гептанол), Cys(S-(CH)CH), Dap(октансульфонил), Glu(NH-гексил), Glu(1-гептанол) или Ser(н-октаноил);
18
А представляет Ser, Glu(NH-гексил) или Ser(н-октаноил);
19
А представляет Lys, Glu(NH-гексил) или Ser(н-октаноил);
20
А представляет Lys, Glu(NH-гексил) или Ser(н-октаноил);
или их фармацевтически приемлемая соль.
Более предпочтительная группа соединений формулы (I), названная группой соединений 4, включает соединения формулы:
15
2
(Ser(н-октаноил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:1)
15
2
(Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:2)
3,15
2
(Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:3)
3
15
2
(Glu(NH-гексил),Ser(н-октаноил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:4)
2
15
2
(Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:5)
2
3,15
2
(Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:6)
2,8
15
2
(Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:7)
2,8
3,15
2
(Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:8)
2,10
15
2
(Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:9)
2,10
3,15
2
(Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:10)
16
2
(Ser(н-октаноил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:11)
16
2
(Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:12)
3,16
2
(Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:13)
3
16
2
(Glu(NH-гексил),Ser(н-октаноил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:14)
2
16
2
(Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:15)
2
3,16
2
(Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:16)
2,8
16
2
(Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:17)
2,8
3,16
2
(Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:18)
2,10
16
2
(Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:19)
2,10
3,16
2
(Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:20)
17
2
(Ser(н-октаноил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:21)
17
2
(Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:22)
3,17
2
(Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:23)
3
17
2
(Glu(NH-гексил),Ser(н-октаноил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:24)
17
2
(Dap(октансульфонил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:25)
3,17
2
(Dap(октансульфонил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:26)
3
17
2
(Dap(октансульфонил),Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:27)
3
17
2
(Dap(октансульфонил),Ser(н-октаноил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:28)
3
17
2
(Glu(NH-гексил),Dap(октансульфонил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:29)
2
9
3
2
17
(Cys(S-(CH)CH))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:30)
2
9
3
2
3,17
(Cys(S-(CH)CH))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:31)
3
17
2
9
3
2
(Glu(NH-гексил),Cys(S-(CH)CH))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:32)
2
9
3
2
3
17
(Cys(S-(CH)CH)),Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:33)
2
9
3
2
3
17
(Cys(S-(CH)CH)),Ser(н-октаноил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:34)
2
17
2
(Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:35)
2
3,17
2
(Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:36)
2
7
17
2
(Aib,Thz,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:37)
2
7
17
2
(Aib,4-Hyp,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:37)
2
7
17
2
(Aib,Dhp,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:37)
2
7
17
2
(Aib,Pip,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:37)
2
7
17
2
(Aib,Tic,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:37)
2
3,17
7
2
(Aib,Glu(NH-гексил),Thz)hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:38)
2
3,17
7
2
(Aib,Glu(NH-гексил),4-Hyp)hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:38)
2
3,17
7
2
(Aib,Glu(NH-гексил),Dhp)hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:38)
2
3,17
7
2
(Aib,Glu(NH-гексил),Pip)hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:38)
2
3,17
7
2
(Aib,Glu(NH-гексил),Tic)hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:38)
2,8
17
2
(Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:39)
2,8
3,17
2
(Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:40)
2
9
17
2
(Aib,3-Pal,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:41)
2
9
17
2
(Aib,4-Pal,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:41)
2
9
17
2
(Aib,Taz,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:41)
2
9
17
2
(Aib,2-Thi,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:41)
2
3,17
9
2
(Aib,Glu(NH-гексил),3-Pal)hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:42)
2
3,17
9
2
(Aib,Glu(NH-гексил),4-Pal)hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:42)
2
3,17
9
2
(Aib,Glu(NH-гексил),Taz)hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:42)
2
3,17
9
2
(Aib,Glu(NH-гексил),2-Thi)hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:42)
2,10
17
2
(Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:43)
2,10
3,17
2
(Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:44)
8
17
2
(Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:45)
9
17
2
(Taz,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:46)
9
17
2
(3-Pal,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:46)
9
17
2
(4-Pal,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:46)
9
17
2
(2-Thi,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:46)
3,17
8
2
(Glu(NH-гексил),Aib)hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:47)
3,17
9
2
(Glu(NH-гексил),Taz)hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:48)
3,17
9
2
(Glu(NH-гексил),3-Pal)hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:48)
3,17
9
2
(Glu(NH-гексил),4-Pal)hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:48)
3,17
9
2
(Glu(NH-гексил),2-Thi)hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:48)
1,2,10
17
2
(Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:49)
1,2,10
3,17
2
(Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:50)
2
17
2
(A5c,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:51)
2
3,17
2
(A5c,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:52)
3,17
2
(Glu(1-гептанол))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:53)
3,17
2
(Asp(1-гептанол))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:54)
3,17
2
(Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:55)
3,17
2
(Asp(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:56)
2
3,17
2
(Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:57)
17
2
(Lys(биотинил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:58)
18
2
(Ser(н-октаноил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:59)
18
2
(Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:60)
3,18
2
(Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:61)
3
18
2
(Glu(NH-гексил),Ser(н-октаноил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:62)
2
18
2
(Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:63)
2
3,18
2
(Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:64)
2,8
18
2
(Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:65)
2,8
3,18
2
(Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:66)
2,10
18
2
(Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:67)
2,10
3,18
2
(Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:68)
19
2
(Ser(н-октаноил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:69)
19
2
(Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:70)
3,19
2
(Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:71)
3
19
2
(Glu(NH-гексил),Ser(н-октаноил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:72)
2
19
2
(Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:73)
2
3,19
2
(Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:74)
2,8
19
2
(Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:75)
2,8
3,19
2
(Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:76)
2,10
19
2
(Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:77)
2,10
3,19
2
(Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:78)
20
2
(Ser(н-октаноил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:79)
20
2
(Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:80)
3,20
2
(Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:81)
3
20
2
(Glu(NH-гексил),Ser(н-октаноил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:82)
2
20
2
(Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:83)
2
3,20
2
(Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:84)
2,8
20
2
(Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:85)
2,8
3,20
2
(Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:86)
2,10
20
2
(Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:87)
2,10
3,20
2
(Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:88)
1
17
2
(Ac-Gly,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:89)
1
17
2
(Ac-Gly,Ser(н-октаноил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:90)
1
3,17
2
(Ac-Gly,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:91)
1
3
17
2
(Ac-Gly,Glu(NH-гексил),Ser(н-октаноил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:92)
1
17
2
(Ac-Gly,Dap(октансульфонил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:93)
1
3,17
2
(Ac-Gly,Dap(октансульфонил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:94)
1
3
17
2
(Ac-Gly,Dap(октансульфонил),Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:95)
1
3
17
2
(Ac-Gly,Dap(октансульфонил),Ser(н-октаноил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:96)
1
3
17
2
(Ac-Gly,Glu(NH-гексил),Dap(октансульфонил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:97)
1
17
2
9
3
2
(Ac-Gly,Cys(S-(CH)CH))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:98)
1
3,17
2
9
3
2
(Ac-Gly,Cys(S-(CH)CH))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:99)
1
3
17
2
9
3
2
(Ac-Gly,Glu(NH-гексил),Cys(S-(CH)CH))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:100)
1
3
17
2
9
3
2
(Ac-Gly,Cys(S-(CH)CH),Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:101)
1
3
17
2
9
3
2
(Ac-Gly,Cys(S-(CH)CH),Ser(н-октаноил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:102)
1
2
17
2
(Ac-Gly,Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:103)
1
2
3,17
2
(Ac-Gly,Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:104)
1
2
7
17
2
(Ac-Gly,Aib,Thz,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:105)
1
2
7
17
2
(Ac-Gly,Aib,4-Hyp,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:105)
1
2
7
17
2
(Ac-Gly,Aib,Dhp,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:105)
1
2
7
17
2
(Ac-Gly,Aib,Pip,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:105)
1
2
7
17
2
(Ac-Gly,Aib,Tic,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:105)
1
2
3,17
7
2
(Ac-Gly,Aib,Glu(NH-гексил),Thz)hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:106)
1
2
3,17
7
2
(Ac-Gly,Aib,Glu(NH-гексил),4-Hyp)hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:106)
1
2
3,17
7
2
(Ac-Gly,Aib,Glu(NH-гексил),Dhp)hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:106)
1
2
3,17
7
2
(Ac-Gly,Aib,Glu(NH-гексил),Pip)hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:106)
1
2
3,17
7
2
(Ac-Gly,Aib,Glu(NH-гексил),Tic)hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:106)
1
2,8
17
2
(Ac-Gly,Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:107)
1
2,8
3,17
2
(Ac-Gly,Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:108)
1
2
9
17
2
(Ac-Gly,Aib,3-Pal,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:109)
1
2
9
17
2
(Ac-Gly,Aib,4-Pal,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:109)
1
2
9
17
2
(Ac-Gly,Aib,Taz,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:109)
1
2
9
17
2
(Ac-Gly,Aib,2-Thi,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:109)
1
2
3,17
9
2
(Ac-Gly,Aib,Glu(NH-гексил),3-Pal)hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:110)
1
2
3,17
9
2
(Ac-Gly,Aib,Glu(NH-гексил),4-Pal)hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:110)
1
2
3,17
9
2
(Ac-Gly,Aib,Glu(NH-гексил),Taz)hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:110)
1
2
3,17
9
2
(Ac-Gly,Aib,Glu(NH-гексил),2-Thi)hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:110)
1
2,10
17
2
(Ac-Gly,Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:111)
1
2,10
3,17
2
(Ac-Gly,Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:112)
1
8
17
2
(Ac-Gly,Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:113)
1
9
17
2
(Ac-Gly,Taz,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:114)
1
9
17
2
(Ac-Gly,3-Pal,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:114)
1
9
17
2
(Ac-Gly,4-Pal,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:114)
1
9
17
2
(Ac-Gly,2-Thi,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:114)
1
3,17
8
2
(Ac-Gly,Glu(NH-гексил),Aib)hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:115)
1
3,17
9
2
(Ac-Gly,Glu(NH-гексил),Taz)hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:116)
1
3,17
9
2
(Ac-Gly,Glu(NH-гексил),3-Pal)hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:116)
1
3,17
9
2
(Ac-Gly,Glu(NH-гексил),4-Pal)hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:116)
1
3,17
9
2
(Ac-Gly,Glu(NH-гексил),2-Thi)hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:116)
1
2,10
17
2
(Ac-Aib,Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:117)
1
2,10
3,17
2
(Ac-Aib,Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH;(SEQ ID NO:118)
1
2
17
2
(Ac-Gly,A5c,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH;(SEQ ID NO:119)
1
2
3,17
2
(Ac-Gly,A5c,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH;(SEQ ID NO:120)
1
3,17
2
(Ac-Gly,Glu(1-гептанол))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:121)
1
3,17
2
(Ac-Gly,Asp(1-гептанол))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:122)
1
3,17
2
(Ac-Gly,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:123)
1
3,17
2
(Ac-Gly,Asp(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:124)
1
2
3,17
2
(Ac-Gly,Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:125)
1
2,10
3
17
2
(Ac-Gly,Aib,Glu(NH-гексил),Lys(биотинил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:126)
1
15
2
(Ac-Gly,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:127)
1
15
2
(Ac-Gly,Ser(н-октаноил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:128)
1
3,15
2
(Ac-Gly,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:129)
1
3
15
2
(Ac-Gly,Glu(NH-гексил),Ser(н-октаноил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:130)
1
2
15
2
(Ac-Gly,Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH: (SEQ ID NO:131)
1
2
3,15
2
(Ac-Gly,Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:132)
1
2,8
15
2
(Ac-Gly,Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:133)
1
2,8
3,15
2
(Ac-Gly,Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:134)
1
2,10
15
2
(Ac-Gly,Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:135)
1
2,10
3,15
2
(Ac-Gly,Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:136)
1
16
2
(Ac-Gly,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:137)
1
16
2
(Ac-Gly,Ser(н-октаноил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:138)
1
3,16
2
(Ac-Gly,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:139)
1
3
16
2
(Ac-Gly,Glu(NH-гексил),Ser(н-октаноил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:140)
1
2
16
2
(Ac-Gly,Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:141)
1
2
3,16
2
(Ac-Gly,Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:142)
1
2,8
16
2
(Ac-Gly,Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH: (SEQ ID NO:143)
1
2,8
3,16
2
(Ac-Gly,Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:144)
1
2,10
16
2
(Ac-Gly,Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:145)
1
2,10
3,16
2
(Ac-Gly,Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:146)
1
18
2
(Ac-Gly,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:147)
1
18
2
(Ac-Gly,Ser(н-октаноил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:148)
1
3,18
2
(Ac-Gly,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:149)
1
3
18
2
(Ac-Gly,Glu(NH-гексил),Ser(н-октаноил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:150)
1
2
18
2
(Ac-Gly,Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:151)
1
2
3,18
2
(Ac-Gly,Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:152)
1
2,8
18
2
(Ac-Gly,Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH: (SEQ ID NO:153)
1
2,8
3,18
2
(Ac-Gly,Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:154)
1
2,10
18
2
(Ac-Gly,Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:155)
1
2,10
3,18
2
(Ac-Gly,Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:156)
1
19
2
(Ac-Gly,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:157)
1
19
2
(Ac-Gly,Ser(н-октаноил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:158)
1
3,19
2
(Ac-Gly,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:159)
1
3
19
2
(Ac-Gly,Glu(NH-гексил),Ser(н-октаноил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:160)
1
2
19
2
(Ac-Gly,Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:161)
1
2
3,19
2
(Ac-Gly,Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:162)
1
2,8
19
2
(Ac-Gly,Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:163)
1
2,8
3,19
2
(Ac-Gly,Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:164)
1
2,10
19
2
(Ac-Gly,Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:165)
1
2,10
3,19
2
(Ac-Gly,Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:166)
1
20
2
(Ac-Gly,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:167)
1
20
2
(Ac-Gly,Ser(н-октаноил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:168)
1
3
20
2
(Ac-Gly,Glu(NH-гексил),)hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:169)
1
3
20
2
(Ac-Gly,Glu(NH-гексил),Ser(н-октаноил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:170)
1
2
20
2
(Ac-Gly,Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:171)
1
2
3,20
2
(Ac-Gly,Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:172)
1
2,8
20
2
(Ac-Gly,Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:173)
1
2,8
3,20
2
(Ac-Gly,Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:174)
1
2,10
20
2
(Ac-Gly,Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:175) и
1
2,10
3,20
2
(Ac-G1y,Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:176)
или их фармацевтически приемлемые соли.
Еще более предпочтительная группа соединений формулы (I), названная группой соединений 5, включает соединения формулы:
17
2
(Ser(н-октаноил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:21)
17
2
(Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:22)
3,17
2
(Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:23)
3
17
2
(Glu(NH-гексил),Ser(н-октаноил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:24)
17
2
(Dap(октансульфонил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:25)
3,17
2
(Dap(октансульфонил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:26)
3
17
2
(Dap(октансульфонил),Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:27)
3
17
2
(Dap(октансульфонил),Ser(н-октаноил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:28)
3
17
2
(Glu(NH-гексил),Dap(октансульфонил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:29)
2
9
3
2
17
(Cys(S-(CH)CH))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:30)
2
9
3
2
3,17
(Cys(S-(CH)CH))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:31)
3
17
2
9
3
2
(Glu(NH-гексил),Cys(S-(CH)CH))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:32)
2
9
3
2
3
17
(Cys(S-(CH)CH),Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:33)
2
9
3
2
3
17
(Cs(S-(CH)CH),Ser(н-октаноил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:34)
2
17
2
(Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:35)
2
3,17
2
(Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:36)
2
7
17
2
(Aib,Thz,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:37)
2
7
17
2
(Aib,4-Hyp,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:37)
2
7
17
2
(Aib,Dhp,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:37)
2
7
17
2
(Aib,Pip,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:37)
2
7
17
2
(Aib,Tic,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:37)
2
3,17
7
2
(Aib,Glu(NH-гексил),Thz)hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:38)
2
3,17
7
2
(Aib,Glu(NH-гексил),4-Hyp)hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:38)
2
3,17
7
2
(Aib,Glu(NH-гексил),Dhp)hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:38)
2
3,17
7
2
(Aib,Glu(NH-гексил),Pip)hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:38)
2
3,17
7
2
(Aib,Glu(NH-гексил),Tic)hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:38)
2,8
17
2
(Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:39)
2,8
3,17
2
(Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:40)
2
9
17
2
(Aib,3-Pal,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:41)
2
9
17
2
(Aib,4-Pal,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:41)
2
9
17
2
(Aib,Taz,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:41)
2
9
17
2
(Aib,2-Thi,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:41)
2
3,17
9
2
(Aib,Glu(NH-гексил),3-Pal)hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:42)
2
3,17
9
2
(Aib,Glu(NH-гексил),4-Pal)hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:42)
2
3,17
9
2
(Aib,Glu(NH-гексил),Taz)hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:42)
2
3,17
9
2
(Aib,Glu(NH-гексил),2-Thi)hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:42)
2,10
17
2
(Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:43)
2,10
3,17
2
(Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:44)
8
17
2
(Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:45)
9
17
2
(Taz,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:46)
9
17
2
(3-Pal,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:46)
9
17
2
(4-Pal,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:46)
9
17
2
(2-Thi,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:46)
3,17
8
2
(Glu(NH-гексил),Aib)hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:47)
3,17
9
2
(Glu(NH-гексил),Taz)hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:48)
3,17
9
2
(Glu(NH-гексил),3-Pal)hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:48)
3,17
9
2
(Glu(NH-гексил),4-Pal)hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:48)
3,17
9
2
(Glu(NH-гексил),2-Thi)hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:48)
1,2,10
17
2
(Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:49)
1,2,10
3,17
2
(Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:50)
2
17
2
(A5c,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:51)
2
3,17
2
(A5c,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:52)
3,17
2
(Glu(1-гептанол))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:53)
3,17
2
(Asp(1-гептанол))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:54)
3,17
2
(Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:55)
3,17
2
(Asp(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:56)
2
3,17
2
(Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:57)
17
2
(Lys(биотинил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:58)
1
17
2
(Ac-Gly,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:89)
1
17
2
(Ac-Gly,Ser(н-октаноил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:90)
1
3,17
2
(Ac-Gly,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:91)
1
3
17
2
(Ac-Gly,Glu(NH-гексил),Ser(н-октаноил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:92)
1
17
2
(Ac-Gly,Dap(октансульфонил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:93)
1
3,17
2
(Ac-Gly,Dap(октансульфонил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:94)
1
3
17
2
(Ac-Gly,Dap(октансульфонил),Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:95)
1
3
17
2
(Ac-Gly,Dap(октансульфонил),Ser(н-октаноил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:96)
1
3
17
2
(Ac-Gly,Glu(NH-гексил),Dap(октансульфонил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:97)
1
17
2
9
3
2
(Ac-Gly,Cys(S-(CH)CH))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:98)
1
3,17
2
9
3
2
(Ac-Gly,Cys(S-(CH)CH))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:99)
1
3
17
2
9
3
2
(Ac-Gly,Glu(NH-гексил),Cys(S-(CH)CH))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:100)
1
3
17
2
9
3
2
(Ac-Gly,Cys(S-(CH)CH),Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:101)
1
3
17
2
9
3
2
(Ac-Gly,Cys(S-(CH)CH),Ser(н-октаноил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:102)
1
2
17
2
(Ac-Gly,Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:103)
1
2
3,17
2
(Ac-Gly,Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:104)
1
2
7
17
2
(Ac-Gly,Aib,Thz,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:105)
1
2
7
17
2
(Ac-Gly,Aib,4-Hyp,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:105)
1
2
7
17
2
(Ac-Gly,Aib,Dhp,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:105)
1
2
7
17
2
(Ac-Gly,Aib,Pip,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:105)
1
2
7
17
2
(Ac-Gly,Aib,Tic,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:105)
1
2
3,17
7
2
(Ac-Gly,Aib,Glu(NH-гексил),Thz)hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:106)
1
2
3,17
7
2
(Ac-Gly,Aib,Glu(NH-гексил),4-Hyp)hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:106)
1
2
3,17
7
2
(Ac-Gly,Aib,Glu(NH-гексил),Dhp)hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:106)
1
2
3,17
7
2
(Ac-Gly,Aib,Glu(NH-гексил),Pip)hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:106)
1
2
3,17
7
2
(Ac-Gly,Aib,Glu(NH-гексил),Tic)hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:106)
1
2,8
17
2
(Ac-Gly,Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:107)
1
2,8
3,17
2
(Ac-Gly,Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:108)
1
2
9
17
2
(Ac-Gly,Aib,3-Pal,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:109)
1
2
9
17
2
(Ac-Gly,Aib,4-Pal,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:109)
1
2
9
17
2
(Ac-Gly,Aib,Taz,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:109)
1
2
9
17
2
(Ac-Gly,Aib,2-Thi,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:109)
1
2
3,17
9
2
(Ac-Gly,Aib,Glu(NH-гексил),3-Pal)hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:110)
1
2
3,17
9
2
(Ac-Gly,Aib,Glu(NH-гексил),4-Pal)hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:110)
1
2
3,17
9
2
(Ac-Gly,Aib,Glu(NH-гексил),Taz)hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:110)
1
2
3,17
9
2
(Ac-Gly,Aib,Glu(NH-гексил),2-Thi)hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:110)
1
2,10
17
2
(Ac-Gly,Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:111)
1
2,10
3,17
2
(Ac-Gly,Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:112)
1
8
17
2
(Ac-Gly,Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:113)
1
9
17
2
(Ac-Gly,Taz,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:114)
1
9
17
2
(Ac-Gly,3-Pal,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:114)
1
9
17
2
(Ac-Gly,4-Pal,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:114)
1
9
17
2
(Ac-Gly,2-Thi,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:114)
1
3,17
8
2
(Ac-Gly,Glu(NH-гексил),Aib)hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:115)
1
3,17
9
2
(Ac-Gly,Glu(NH-гексил),Taz)hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:116)
1
3,17
9
2
(Ac-Gly,Glu(NH-гексил),3-Pal)hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:116)
1
3,17
9
2
(Ac-Gly,Glu(NH-гексил),4-Pal)hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:116)
1
3,17
9
2
(Ac-Gly,Glu(NH-гексил),2-Thi)hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:116)
1
2,10
17
2
(Ac-Aib,Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:117)
1
2,10
3,17
2
(Ac-Aib,Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH;(SEQ ID NO:118)
1
2
17
2
(Ac-Gly,A5c,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH;(SEQ ID NO:119)
1
2
3,17
2
(Ac-Gly,A5c,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH;(SEQ ID NO:120)
1
3,17
2
(Ac-Gly,Glu(1-гептанол))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:121)
1
3,17
2
(Ac-Gly,Asp(1-гептанол))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:122)
1
3,17
2
(Ac-Gly,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:123)
1
3,17
2
(Ac-Gly,Asp(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:124)
1
2
3,17
2
(Ac-Gly,Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:125) и
1
2,10
3
17
2
(Ac-Gly,Aib,Glu(NH-гексил),Lys(биотинил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:126)
или их фармацевтически приемлемые соли.
Еще более предпочтительная группа соединений формулы (I), названная группой соединений 6, включает соединения формулы:
17
2
(Ser(н-октаноил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:21)
17
2
(Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:22)
3,17
2
(Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:23)
3
17
2
(Glu(NH-гексил),Ser(н-октаноил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:24)
2
17
2
(Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:35)
2
3,17
2
(Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:36)
2,8
17
2
(Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:39)
2,8
3,17
2
(Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:40)
2,10
17
2
(Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:43)
2,10
3,17
2
(Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:44)
1,2,10
17
2
(Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:49)
1,2,10
3,17
2
(Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:50)
2
17
2
(A5c,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:51)
2
3,17
2
(A5c,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:52)
3,17
2
(Glu(1-гептанол))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:53)
3,17
2
(Asp(1-гептанол))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:54)
3,17
2
(Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:55)
3,17
2
(Asp(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:56)
2
3,17
2
(Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:57)
17
2
(Lys(биотинил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:58)
1
17
2
(Ac-Gly,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:89)
1
17
2
(Ac-Gly,Ser(н-октаноил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:90)
1
3,17
2
(Ac-Gly,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:91)
1
3
17
2
(Ac-Gly,Glu(NH-гексил),Ser(н-октаноил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:92)
1
2
17
2
(Ac-Gly,Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:103)
1
2
3,17
2
(Ac-Gly,Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:104)
1
2,8
17
2
(Ac-Gly,Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:107)
1
2,8
3,17
2
(Ac-Gly,Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:108)
1
2,10
17
2
(Ac-Gly,Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:111)
1
2,10
3,17
2
(Ac-Gly,Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:112)
1
2,10
17
2
(Ac-Aib,Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:117)
1
2,10
3,17
2
(Ac-Aib,Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH;(SEQ ID NO:118)
1
2
17
2
(Ac-Gly,A5c,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH;(SEQ ID NO:119)
1
2
3,17
2
(Ac-Gly,A5c,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH;(SEQ ID NO:120)
1
3,17
2
(Ac-Gly,Glu(1-гептанол))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:121)
1
3,17
2
(Ac-Gly,Asp(1-гептанол))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:122)
1
3,17
2
(Ac-Gly,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:123)
1
3,17
2
(Ac-Gly,Asp(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:124)
1
2
3,17
2
(Ac-Gly,Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:125) и
1
2,10
3
17
2
(Ac-Gly,Aib,Glu(NH-гексил),Lys(биотинил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:126)
или их фармацевтически приемлемые соли.
Еще более предпочтительная группа соединений формулы (I), названная группой соединений 7, включает соединения формулы:
17
2
(Ser(н-октаноил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:21)
17
2
(Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:22)
3,17
2
(Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:23)
3
17
2
(Glu(NH-гексил),Ser(н-октаноил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:24)
2
17
2
(Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:35)
2
3,17
2
(Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:36)
2,8
17
2
(Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:39)
2,8
3,17
2
(Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:40)
2,10
17
2
(Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:43)
2,10
3,17
2
(Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:44)
1,2,10
3,17
2
(Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:50)
2
17
2
(A5c,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:51)
2
3,17
2
(A5c,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:52)
2
3,17
2
(Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:57)
17
2
(Lys(биотинил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:58)
1
17
2
(Ac-Gly,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:89)
1
17
2
(Ac-Gly,Ser(н-октаноил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:90)
1
3,17
2
(Ac-Gly,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:91)
1
3
17
2
(Ac-Gly,Glu(NH-гексил),Ser(н-октаноил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:92)
1
2
17
2
(Ac-Gly,Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:103)
1
2
3,17
2
(Ac-Gly,Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:104)
1
2,8
17
2
(Ac-Gly,Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:107)
1
2,8
3,17
2
(Ac-Gly,Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:108)
1
2,10
17
2
(Ac-Gly,Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:111)
1
2,10
3,17
2
(Ac-Gly,Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:112)
1
2,10
17
2
(Ac-Aib,Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:117)
1
2,10
3,17
2
(Ac-Aib,Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH;(SEQ ID NO:118)
1
2
17
2
(Ac-Gly,A5c,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH;(SEQ ID NO:119)
1
2
3,17
2
(Ac-Gly,A5c,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH;(SEQ ID NO:120)
1
2
3,17
2
(Ac-Gly,Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:125) и
1
2,10
3
17
2
(Ac-Gly,Aib,Glu(NH-гексил),Lys(биотинил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:126)
или их фармацевтически приемлемые соли.
Предпочтительная группа соединений формулы (I), названная группой соединений 8, включает соединения формулы:
1
А представляет Ac-Gly, Ac-Aib или Aib;
2
А представляет Aib;
3
А представляет Glu(NH-гексил);
8
А представляет Aib;
10
А представляет Aib; и
17
А представляет Glu(NH-гексил) или Lys(биотинил);
или их фармацевтически приемлемые соли.
2
3
1
2
Более предпочтительная группа только что приведенных соединений формулы (I), названная группой соединений 9, включает соединения, в которых каждый из R и R независимо в каждом случае выбран из Н, ацила, н-бутирила, изобутирила и н-октаноила, и Rявляется NH;
или их фармацевтически приемлемые соли.
Еще более предпочтительная группа только что приведенных соединений формулы (I), названная группой соединений 10, включает соединения формулы:
2
3,17
2
(Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:40)
1,2,10
3,17
2
(Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:50)
17
2
(Lys(биотинил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:58)
1
2
3,17
2
(Ac-Gly,Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:104)
1
2,8
3,17
2
(Ac-Gly,Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:108)
1
2,10
3,17
2
(Ac-Gly,Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:112)
1
2,10
3,17
2
(Ac-Aib,Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH;(SEQ ID NO:118) и
1
2,10
3
17
2
(Ac-Gly,Aib,Glu(NH-гексил),Lys(биотинил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:126)
или их фармацевтически приемлемые соли.
И еще более предпочтительная только что приведенная группа соединений формулы (I), названная группой соединений 11, включает соединения формулы:
2,8
3,17
2
(Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:40)
1,2,10
3,17
2
(Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:50)
17
2
(Lys(биотинил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:58) и
1
2,10
3,17
2
(Ac-Aib,Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH;(SEQ ID NO:118)
или их фармацевтически приемлемые соли.
И еще более предпочтительная только что приведенная группа соединений формулы (I), названная группой соединений 12, включает соединение формулы:
17
2
(Lys(биотинил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:58)
или его фармацевтически приемлемую соль.
Второй аспект настоящего изобретения относится к аналогу грелина формулы (II):
2
3
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
28
1
(RR)-A-A-A-A-A-A-A-A-A-A-A-A-A-A-A-A-A-A-A-A-A-A-A-A-A-A-A-A-R
(II)
в которой:
1
A представляет Gly, Acс, Aib, Ala, β-Ala или Gly(миристил);
2
A представляет Ser, Abu, Acс, Act, Aib, Ala, Ava, Thr или Val;
3
9
8
14
11
10
7
6
4
5
12
13
2
2
2
n
A представляет Ser, Asp(NH-R), Asp(O-R), Cys(S-R), Dab(S(О)-R), Dap(S(O)-R), Glu(NH-R), Glu(O-R), Ser(C(O)-R), Thr(C(O)-R) или HN-CH((CH)-N(RR))-C(O);
4
1
2
3
4
5
A представляет Phe, Acс, Aic, Cha, 2-Fua, 1-Nal, 2-Nal, 2-Pal, 3-Pal, 4-Pal, hPhe, (X,X,X,X,X)Phe, Taz, 2-Thi, 3-Thi, Trp или Tyr;
5
A представляет Leu, Abu, Acс, Aib, Ala, Cha, Ile, hLeu, Nle, Nva, Phe, Tle или Val;
6
A представляет Ser, Abu, Acс, Act, Aib, Ala, Gly, Thr или Val;
7
A представляет Pro, Dhp, Dmt, 3-Hyp, 4-Hyp, Inc, Ktp, Oic, Pip, Thz или Tic;
8
12
13
2
n
A представляет Glu, Acс, Aib, Arg, Asn, Asp, Dab, Dap, Gln, Lys, Orn или HN-CH((CH)-N(RR))-C(O);
9
1
2
3
4
5
A представляет His, Acс, Aib, Apc, 2-Fua, 2-Pal, 3-Pal, 4-Pal, (X,X,X,X,X)Phe, Taz, 2-Thi или 3-Thi;
10
A представляет Gln, Acc, Aib, Asn, Asp или Glu;
11
12
13
2
n
A представляет Arg, Apc, hArg, Dab, Dap, Lys, Orn или HN-CH((CH)-N(RR))-C(O);
12
A представляет Val, Abu, Acc, Aib, Ala, Cha, Nva, Gly, Ile, Leu, Nle или Tle;
13
A представляет Gln, Acc, Aib, Asn, Asp или Glu;
14
A представляет Gln, Acc, Aib, Asn, Asp или Glu;
15
9
8
14
15
16
17
11
10
7
6
4
5
12
13
2
2
2
n
A представляет Arg, Acс, Aib, Apc, hArg, Dab, Dap, Lys, Orn, Asp(NH-R), Asp(O-R), Cys(S-R), Cys(R), hCys(S-R), hCys(R), Dab(S(O)-R), Dap(S(O)-R), Glu(NH-R), Glu(O-R), Ser(C(O)-R), Thr(C(O)-R) или HN-CH((CH)-N(RR))-C(O);
16
9
8
14
15
16
17
11
10
7
6
4
5
12
13
2
2
2
n
A представляет Lys, Acс, Aib, Apc, Arg, hArg, Dab, Dap, Orn, Asp(NH-R), Asp(O-R), Cys(S-R), Cys(R), hCys(S-R), hCys(R), Dab(S(O)-R), Dap(S(O)-R), Glu(NH-R), Glu((O-R), Ser(C(O)-R), Thr(C(O)-R), HN-CH((CH)-N(RR))-C(O) или подвергается делеции;
17
9
8
14
15
16
17
11
10
7
6
4
5
12
13
2
2
2
n
A представляет Glu, Arg, Asn, Asp, Dab, Dap, Gln, Lys, Orn, Asp(NH-R), Asp(О-R), Cys(S-R), Cys(R), hCys(S-R), hCys(R), Dab(S(O)-R), Dap(S(O)-R), Glu(NH-R), Glu(O-R), Lys(биотинил), Lys(миристил), Ser(C(O)-R), Thr(C(O)-R), HN-CH((CH)-N(RR))-C(O) или подвергается делеции;
18
9
8
14
15
16
17
11
10
7
6
4
5
12
13
2
2
2
n
A представляет Ser, Abu, Acс, Act, Aib, Ala, Thr, Val, Asp(NH-R), Asp(O-R), Cys(S-R), Cys(R), hCys(S-R), hCys(R), Dab(S(O)-R), Dap(S(O)-R), Glu(NH-R), Glu(O-R), Ser(C(O)-R), Thr(C(O)-R), HN-CH((CH)-N(RR))-C(O) или подвергается делеции;
19
9
8
14
15
16
17
11
10
7
6
4
5
12
13
2
2
2
n
A представляет Lys, Acс, Aib, Apc, Arg, hArg, Dab, Dap, Orn, Asp(NH-R), Asp(O-R), Cys(S-R), Cys(R), hCys(S-R), hCys(R), Dab(S(O)-R), Dap(S(O)-R), Glu(NH-R), Glu(O-R), Ser(C(O)-R), Thr(C(O)-R), HN-CH((CH)-N(RR))-C(O) или подвергается делеции;
20
9
8
14
15
16
17
11
10
7
6
4
5
12
13
2
2
2
n
A представляет Lys, Acс, Aib, Apc, Arg, hArg, Dab, Dap, Orn, Asp(NH-R), Asp(O-R), Cys(S-R), Cys(R), hCys(S-R), hCys(R), Dab(S(O)-R), Dap(S(O)-R), Glu(NH-R), Glu(O-R), Ser(C(O)-R), Thr(C(O)-R), HN-CH((CH)-N(RR))-C(O) или подвергается делеции;
21
A представляет Pro, Dhp, Dmt, 3-Hyp, 4-Hyp, Inc, Ktp, Oic, Pip, Thz, Tic или подвергается делеции;
22
A представляет Pro, Dhp, Dmt, 3-Hyp, 4-Hyp, Inc, Ktp, Oic, Pip, Thz, Tic или подвергается делеции;
23
A представляет Abu, Acс, Act, Aib, Ala, Apc, Gly, Nva, Val или подвергается делеции;
24
12
13
2
n
A представляет Lys, Acс, Aib, Apс, Arg, hArg, Dab, Dap, Orn, HN-CH((CH)-N(RR))-C(O) или подвергается делеции;
25
A представляет Leu, Abu, Acс, Aib, Ala, Cha, Ile, hLeu, Nle, Nva, Phe, Tle, Val или подвергается делеции;
26
A представляет Gln, Aib, Asn, Asp, Glu или подвергается делеции;
27
A представляет Pro, Dhp, Dmt, 3-Hyp, 4-Hyp, Inc, Ktp, Oic, Pip, Thz, Tic или подвергается делеции;
28
12
13
2
n
A представляет Acс, Aib, Apc, Arg, hArg, Dab, Dap, Lys, Orn, HN-CH((CH)-N(RR))-C(O) или подвергается делеции;
1
6
0
6
0
2
1
30
2
1
12
2
12
2
2
R представляет -OH, -NH, -(C-C)алкокси или NH-X-CH-Z, где X представляет (C-C)алкил или (C-C)алкенил, и Z представляет -H, -OH, -COH или -C(O)-NH;
2
3
1
30
1
30
1
30
2
30
2
30
1
30
1
30
1
30
1
30
2
30
2
30
1
30
2
30
1
30
каждый из Rи Rнезависимо в каждом случае выбран из группы, состоящей из Н, (С-С)алкила, (С-С)гетероалкила, (С-С)ацила, (С-С)алкенила, (С-С)алкинила, арил(С-С)алкила, арил(С-С)ацила, замещенного (С-С)алкила, замещенного (С-С)гетероалкила, замещенного (С-С)ацила, замещенного (С-С)алкенила, замещенного арил(С-С)алкила, замещенного (С-С)алкинила и замещенного арил(С-С)ацила или может быть удален;
4
5
6
7
8
9
10
11
14
15
16
17
1
40
2
40
1
40
2
40
каждый из R, R, R, R, R, R, R, R, R, R, Rи R независимо в каждом случае выбран из группы, состоящей из (С-С)алкила, (С-С)алкенила, замещенного (С-С)алкила, замещенного (С-С)алкенила, алкиларила, замещенного алкиларила, арила и замещенного арила;
12
13
1
40
1
40
1
40
2
40
2
40
1
40
1
40
1
40
1
40
1
40
2
40
2
40
1
40
1
40
1
40
2
каждый из Rи Rнезависимо в каждом случае выбран из группы, состоящей из Н, (С-С)алкила, (С-С)гетероалкила, (С-С)ацила, (С-С)алкенила, (С-С)алкинила, арил(С-С)алкила, арил(С-С)ацила, замещенного (С-С)алкила, замещенного (С-С)гетероалкила, замещенного (С-С)ацила, замещенного (С-С)алкенила, замещенного (С-С)алкинила, замещенного арил(С-С)алкила, замещенного арил(С-С)ацила, (С-С)алкилсульфонила, -C(NH)-NH и биотинила;
n независимо в каждом случае представляет 1, 2, 3, 4 или 5;
1
2
3
4
5
1
10
1
10
2
2
каждый из Х, Х, Х, Х и Хнезависимо в каждом случае выбран из группы, состоящей из Н, F, Cl, Br, I, (C-C)алкила, замещенного (C-C)алкила, арила, замещенного арила, ОН, NH, NO и CN;
при условии, что:
2
3
1
30
1
30
2
30
1
30
1
30
1
30
2
30
1
30
1
30
1
30
2
30
2
30
1
30
(I) когда Rпредставляет (С-С)ацил, арил(С-С)ацил, замещенный (С-С)ацил или замещенный арил(С-С)ацил, то тогда Rявляется Н, (С-С)алкилом, (С-С)гетероалкилом, (С-С)алкенилом, арил(С-С)алкилом, замещенным (С-С)алкилом, замещенным (С-С)гетероалкилом, замещенным (С-С)алкенилом, замещенным (С-С)алкинилом или замещенным арил(С-С)алкилом;
12
13
1
40
1
40
1
40
1
40
1
40
2
1
40
1
40
2
40
2
40
1
40
1
40
1
40
2
40
2
40
1
40
(II) когда Rпредставляет (С-С)ацил, арил(С-С)ацил, замещенный (С-С)ацил, замещенный арил(С-С)ацил, (С-С)алкилсульфонил или -C(NH)-NH, то тогда Rявляется Н или (С-С)алкилом, (С-С)гетероалкилом, (С-С)алкенилом, (С-С)алкинилом, арил(С-С)алкилом, замещенным (С-С)алкилом, замещенным (С-С)гетероалкилом, замещенным (С-С)алкенилом, замещенным (С-С)алкинилом или замещенным арил(С-С)алкилом;
15
16
17
18
19
20
9
8
14
15
16
17
11
10
7
6
4
5
12
13
2
2
2
n
(III) по меньшей мере, одна из A, A, A, A, A или Aуказанного аналога грелина выбрана из группы, состоящей из Asp(NH-R), Asp(O-R), Cys(S-R), Cys(R), hCys(S-R), hCys(R), Dab(S(O)-R), Dap(S(O)-R), Glu(NH-R), Glu(O-R), Ser(C(O)-R), Thr(C(O)-R) или HN-CH((CH)-N(RR))-C(O); и
15
16
17
19
20
12
13
12
2
n
(IV) когда любая группа, состоящая из A, A, A, A или A, представляет HN-CH((CH)-N(RR))-C(O), то тогда R должен быть биотинилом;
или их фармацевтически приемлемая соль.
Предпочтительной группой соединений формулы (II), названной группой соединений 13, является та, где:
1
А представляет Gly или Gly(миристил);
2
А представляет Ser или Aib; и
17
А представляет Ser(н-октаноил) или Lys(миристил);
или их фармацевтически приемлемая соль.
Еще одной предпочтительной группой соединений формулы (II), названной группой соединений 14, является та, где:
17
А представляет Lys(миристил).
Еще одной предпочтительной группой соединений формулы (II), названной группой соединений 15, является та, где:
2
R выбран из группы, состоящей из Н, ацила, н-бутирила, изобутирила, н-октаноила и миристила;
3
Rудаляется;
4
Rпредставляет гептил;
6
Rпредставляет гексил;
7
Rпредставляет гексил;
10
Rпредставляет октил; и
11
Rпредставляет гептил;
при условии, что когда имеется Асс вместо одного из природных остатков, то она независимо в каждом случае выбрана из А3с, А4с, А5с или А6с;
или их фармацевтически приемлемые соли.
Еще более предпочтительная группа соединений формулы (II), названной группой соединений 16, включает соединения формулы:
2
17
2
(Aib,Lys(миристил)hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:177) и
1
2
17
2
(Gly(миристил),Aib,Lys(миристил))hгрелин(1-28)-NH; (SEQ ID NO:178)
или их фармацевтически приемлемые соли.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей эффективное количество соединения формул (I) или (II), более предпочтительно соединения из одной или более группы 1, группы 2, группы 3, группы 4, группы 5, группы 6, группы 7, группы 8, группы 9, группы 10, группы 11, группы 12, группы 13, группы 14, группы 15 и/или группы 16, имеющих значения, определенные выше, или его фармацевтически приемлемых солей, и фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель.
Аналоги грелина, описанные в данном документе, являются активными на рецепторе GHS. Аналоги могут связываться с рецептором и стимулировать или ингибировать активность рецептора. Аналоги грелина имеют различные применения, включая, но не ограничиваясь этим, использование в качестве исследовательского инструмента или терапевтического средства.
Как правило, применения в качестве исследовательского инструмента включают использование аналога грелина и присутствие рецептора GHS или его фрагмента. Рецептор GHS может находиться в различных средах, таких как организм млекопитающего, цельная клетка или фрагмент мембраны. Примеры применений в качестве исследовательского инструмента включают, но не ограничиваются этим, скрининг соединений на активность в отношении рецептора GHS, определение присутствия рецептора GHS в пробе или препарате, и исследование роли или действия грелина.
Аналоги грелина можно использовать для скрининга как агонистов грелина, так и антагонистов грелина. Скрининг агонистов грелина можно проводить, например, с использованием аналога грелина в конкурентном опыте с тестируемыми соединениями. Скрининг антагонистов грелина можно проводить, например, с использованием аналога грелина для воспроизведения активности рецептора GHS и затем определения способности соединения изменять активность рецептора GHS.
Другой аспект настоящего изобретения относится к способу скрининга соединения, способного связываться с рецептором GHS. Способ включает стадию определения способности соединения воздействовать на связывание аналога грелина с рецептором, фрагментом рецептора, содержащим сайт связывания с грелином, полипептидом, содержащим фрагмент, или производным полипептида. Соединения, пригодные для скрининга, включают соединения формул (I) или (II), более предпочтительно соединение из одной или более группы 1, группы 2, группы 3, группы 4, группы 5, группы 6, группы 7, группы 8, группы 9, группы 10, группы 11, группы 12, группы 13, группы 14, группы 15 и/или группы 16, имеющих значения, определенные выше, или его фармацевтически приемлемые соли, и фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель.
Другой аспект настоящего изобретения относится к способу достижения лечебного эффекта у субъекта, включающему введение указанному субъекту эффективного количества одного или более соединения формул (I) или (II), более предпочтительно соединения из одной или более группы 1, группы 2, группы 3, группы 4, группы 5, группы 6, группы 7, группы 8, группы 9, группы 10, группы 11, группы 12, группы 13, группы 14, группы 15 и/или группы 16, или его фармацевтически приемлемых солей, в котором указанное эффективное количество является эффективным для получения лечебного эффекта при лечении (например, излечении или уменьшении тяжести) или профилактике (например, снижении вероятности начала развития или тяжести) заболевания или нарушения.
Грелин индуцирует высвобождение GH из первичной культуры клеток гипофиза в зависимости от дозы без стимуляции высвобождения других гормонов гипофиза. Введенный внутривенно находящимся под анестезией крысам, грелин стимулирует пульсирующее высвобождение GH (Kojima M. et al., Nature (1999), 402(6762: 656-60), и таким образом, другой аспект настоящего изобретения относится к способу стимуляции секреции GH у субъекта, нуждающегося в этом, включающему введение эффективного количества одного или более соединения формул (I) или (II), более предпочтительно соединения из одной или более группы 1, группы 2, группы 3, группы 4, группы 5, группы 6, группы 7, группы 8, группы 9, группы 10, группы 11, группы 12, группы 13, группы 14, группы 15 и/или группы 16, или его фармацевтически приемлемых солей, в котором указанное эффективное количество является, по меньшей мере, количеством, достаточным для получения детектируемого увеличения секреции GH и, предпочтительно, является количеством, достаточным для достижения лечебного эффекта у пациента.
Предпочтительным вариантом осуществления только что приведенного способа является тот, в котором указанная стимуляция секреции GH показана для лечения дефицитного по GH состояния, увеличения мышечной массы и/или плотности костей, лечения половой дисфункции, увеличения массы тела и/или поддержания идеальной массы тела, поддержания и/или восстановления физической функции, и/или повышения аппетита.
Предпочтительным вариантом осуществления только что приведенного способа является тот, в котором указанное увеличение массы тела или ее поддержание, или повышение аппетита показаны для пациента с заболеванием или нарушением, или получающего лечение, которые сопровождаются потерей массы тела.
Предпочтительным вариантом осуществления только что приведенного способа является тот, в котором указанное заболевание, сопровождаемое потерей массы тела, связано с началом кахексии, которое включает, но не ограничивается этим, анорексию, булимию, злокачественное заболевание, СПИД и хроническое обструктивное заболевание легких (COPD). Другой аспект только что приведенного способа представляет таковой, в котором указанная потеря массы тела связана с началом синдрома истощения, в частности, у ослабленных или пожилых людей. Дополнительный предпочтительный вариант осуществления приведенного способа предназначен для увеличения массы тела после не поддающейся объяснению потери массы тела у здорового пожилого пациента или профилактики, лечения или подавления начала развития болезни Альцгеймера. Еще один предпочтительный вариант осуществления только что приведенного способа является таковым, в котором указаны виды лечения, сопровождающиеся потерей массы тела, включают химиотерапию, лучевую терапию, временную иммобилизацию, постоянную иммобилизацию и диализ.
Другим предпочтительным варианте осуществления только что приведенного способа является тот, в котором указанное увеличение массы тела или ее поддержание, или повышение аппетита показаны для здорового пациента, не страдающего конкретным заболеванием или нарушением, или не получающего указанные выше виды лечения.
Аналоги грелина, описанные в данном документе, могут также обладать антагонистическим действием в отношении эффектов грелина в условиях in vitro и in vivo, и таким образом, другой аспект настоящего изобретения относится к способу подавления секреции GH у субъекта, нуждающегося в этом, введением эффективного количества одного или более соединения формул (I) и (II), более предпочтительно соединения из одной или более группы 1, группы 2, группы 3, группы 4, группы 5, группы 6, группы 7, группы 8, группы 9, группы 10, группы 11, группы 12, группы 13, группы 14, группы 15 и/или группы 16, или его фармацевтически приемлемых солей, в котором указанное эффективное количество является, по меньшей мере, количеством, достаточным для получения детектируемого снижения секреции GH и, предпочтительно, является количеством, достаточным для достижения лечебного эффекта у пациента.
Другим предпочтительным вариантом осуществления только что приведенного способа является тот, в котором указанное подавление секреции GH показано для лечения избыточной секреции GH, снижения массы тела, снижения аппетита, поддержания идеальной массы тела, лечения ожирения, регуляции диабета и его осложнений, таких как ретинопатия, и/или лечения сердечно-сосудистого заболевания.
Только что приведенный способ является предпочтительным в том случае, когда избыточное увеличение массы тела является фактором, вносящим свой вклад в развитие заболевания или состояния, включая, но не ограничиваясь этим, повышенное давление, диабет, дислипидемия, сердечно-сосудистое заболевание, образование желчных камней, остеоартрит и некоторые злокачественные заболевания, в частности, когда указанная потеря массы тела снижает вероятность развития таких заболеваний или состояний, и/или составляет, по меньшей мере, часть лечения таких заболеваний или состояний.
Агонисты или аналоги грелина формул (I) и (II), более предпочтительно соединение из одной или более группы 1, группы 2, группы 3, группы 4, группы 5, группы 6, группы 7, группы 8, группы 9, группы 10, группы 11, группы 12, группы 13, группы 14, группы 15 и/или группы 16, можно использовать для достижения лечебного эффекта у субъекта, такого как одно или более из следующего: лечение дефицитного по GH состояния, увеличение мышечной массы тела и/или плотности костей, лечение половой дисфункции, увеличение массы тела, поддержание идеальной массы тела, лечение и/или восстановление нормальных физических функций, и/или повышение аппетита. Увеличение массы тела, поддержание массы тела и/или повышение аппетита являются особенно пригодными для лечения пациента, страдающего кахексией или синдромом истощения, связанных с заболеванием или нарушением, или проходящего курс лечения или терапии, которые обычно сопровождаются потерей массы тела. Примеры заболеваний или нарушений, сопровождающихся потерей массы тела в результате кахексии, включают анорексию, булимию, злокачественное заболевание или СПИД. Увеличение массы тела, поддержание идеальной массы тела или повышение аппетита особенно пригодны для пациентов, страдающих синдромом истощения, особенно ослабленные и пожилые люди. Примеры видов лечения, которые сопровождаются потерей массы тела, включают химиотерапию, лучевую терапию, временную или постоянную иммобилизацию и/или диализ.
Агонисты или аналоги грелина формул (I) и (II), более предпочтительно соединение из одной или более группы 1, группы 2, группы 3, группы 4, группы 5, группы 6, группы 7, группы 8, группы 9, группы 10, группы 11, группы 12, группы 13, группы 14, группы 15 и/или группы 16, являются эффективными при лечении субъекта, страдающего послеоперационным илеусом или хроническим обструктивным заболеванием легких.
Кроме того, грелин является эффективным при лечении воспаления у млекопитающего. Таким образом, в одном аспекте изобретение относится к способу лечения воспаления у субъекта, нуждающегося в этом, введением эффективного количества одного или более соединения формул (I) и (II), более предпочтительно соединения из одной или более группы 1, группы 2, группы 3, группы 4, группы 5, группы 6, группы 7, группы 8, группы 9, группы 10, группы 11, группы 12, группы 13, группы 14, группы 15 и/или группы 16, или его фармацевтически приемлемых солей, в котором указанное эффективное количество является, по меньшей мере, количеством, достаточным для получения детектируемого подавления воспаления и предпочтительно является количеством, достаточным для достижения лечебного эффекта у пациента.
В одном аспекте только что приведенного способа воспаление связано с вирусной, бактериальной, паразитарной или грибковой инфекцией. В одном аспекте указанного выше способа воспаление ассоциировано с вирусной инфекцией. Вирусные инфекции, которые поддаются лечению грелином, аналогами грелина и/или агонистами грелина, включают, но не ограничиваются этим, инфекции, вызванные вирусом герпеса простого типа-1, вирусом герпеса простого типа-2, цитомегаловирусом, вирусом Эпштейна-Барра, вирусом ветряной оспы, человеческим герпесвирусом 6, человеческим герпесвирусом 7, человеческим герпесвирусом 8, вирусом натуральной оспы, вирусом везикулярного стоматита, вирусом гепатита А, вирусом гепатита В, вирусом гепатита С, вирусом гепатита D, вирусом гепатита Е, риновирусом, коронавирусом, вирусом гриппа А, вирусом гриппа В, вирусом кори, полиомавирусом, человеческим папиломавирусом, респираторным синцитиальным вирусом, аденовирусом, вирусом Коксаки, вирусом Денге, вирусом паратита, полиовирусом, вирусом бешенства, вирусом саркомы Руса, вирусом желтой лихорадки, вирусом Эбола, вирусом Марбурга, вирусом лихорадки Ласа, вирусом восточного энцефалита лошадей, вирусом японского энцефалита, вирусом энцефалита Сент-Луис, вирусом лихорадки долины Мюррей, вирусом Западного Нила, вирусом лихорадки долины Рифт, ротавирусом А, ротавирусом В, ротавирусом С, вирусом Синдбис, обезьяним вирусом иммунодефицита, вирусом типа-1 человеческой Т-клеточной лейкемии, гантавирусом, вирусом коревой краснухи, обезьяним вирусом иммунодефицита, вирусом типа-1 иммунодефицита человека и вирусом типа-2 иммунодефицита человека.
В другом аспекте указанного выше способа воспаление ассоциировано с бактериальной инфекцией. Бактериальные инфекции, вызывающие воспаление, которые поддаются лечению грелином, одним или более аналогом грелина и/или агонистом грелина, включают, но не ограничиваются этим, инфекции, вызванные M. tuberculosis, M. bovis, M. bovis штаммом BCG, cубштаммами BCG, M. avium, M. intracellulare, M. africanum, M. kansasii, M. marinum, M. ulcerans, M. avium cубштаммами paratuberculosis, Nocardia asteroides, другими видами Nocardia, Legionella pneumophila, другими видами Legionella, Salmonella typhi, другими видами Salmonella, видами Shigella, Yersinia pestis, Pasteurella haemolytica, Pasteurella multocida, другими видами Pasteurella, Actinobacillus pleuropneumoniae, Listeria monocytogenes, Listeria ivanovii, Brucella abortus, другими видами Brucella, Cowdria ruminantium, Chlamydia pneumoniae, Chlamydia trachomatis, Chlamydia psittaci, Coxiella burnetti, другими видами Rickettsia, видами Ehrlichia, Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, Streptococcus pyogenes, Streptococcus agalactiae, Bacillus anthracis, Escherichia coli, Vibrio cholerae, видами Campylobacter, Neiserria meningitidis, Neiserria gonorrhea, Pseudomonas aeruginosa, другими видами Pseudomonas, Haemophilus influenzae, Haemophilus ducreyi, другими видами Haemophilus, Closridium tetani, другими видами Closridium, Yersinia enterolitica и/или другими видами Yersinia.
В еще одном аспекте указанного выше способа воспаление ассоциировано с паразитарной или грибковой инфекцией. Паразитарные инфекции, поддающиеся лечению грелином, аналогами грелина и/или агонистами грелина, включают, но не ограничиваются этим, инфекции, вызванные Toxoplasma gondii, Plasmodium, Trypanоsoma brucei, Trypanоsoma cruzi, Leishmania, Schistosoma и/или Entamoeba histolytica. Грибковые инфекции, поддающиеся лечению грелином, аналогами грелина и/или агонистами грелина, включают, но не ограничиваются этим, инфекции, вызванные Сandida albicans, Cryptococcus neoformans, Histoplama capsulatum, Aspergillus fumigatus, Coccidiodes immitis, Paracoccidiodes brasiliensis, Blastomyces dermitidis, Pneomocystis carnii, Penicillium marneffi и/или Alternaria alternatа.
В еще одном аспекте изобретения воспаление, вызванное токсичностью для печени или отторжением трансплантата, также подвергается лечению введением эффективного количества одного или более соединения формул (I) и (II), более предпочтительно соединения из одной или более группы 1, группы 2, группы 3, группы 4, группы 5, группы 6, группы 7, группы 8, группы 9, группы 10, группы 11, группы 12, группы 13, группы 14, группы 15 и/или группы 16, или его фармацевтически приемлемых солей, где указанное эффективное количество является, по меньшей мере, количеством, достаточным для получения детектируемого подавления воспаления и предпочтительно является количеством, достаточным для достижения лечебного эффекта у пациента. Токсичность для печени может быть связана с лечением злокачественного заболевания. В некоторых случаях лечение злокачественного заболевания, такое как химиотерапия, может привести к токсичности для печени. Токсичность для печени, возникшая в результате химиотерапии и апоптоза, может подвергаться лечению введением грелина, агонистов грелина и/или антагонистов грелина.
В еще одном аспекте изобретения воспаление, ассоциированное со злокачественными заболеваниями, также поддается лечению введением эффективного количества одного или более соединения формул (I) и (II), более предпочтительно соединения из одной или более группы 1, группы 2, группы 3, группы 4, группы 5, группы 6, группы 7, группы 8, группы 9, группы 10, группы 11, группы 12, группы 13, группы 14, группы 15 и/или группы 16, или его фармацевтически приемлемых солей, где указанное эффективное количество является, по меньшей мере, количеством, достаточным для получения детектируемого подавления воспаления и предпочтительно является количеством, достаточным для достижения лечебного эффекта у пациента. Такие злокачественные заболевания включают, но не ограничиваются этим, лимфому, лейкемию, грибовидный микоз, карциному, аденокарциному, саркому, глиому, бластому, нейробластому, плазмоцитому, гистиоцитому, меланому, аденому, гипоксическую опухоль, миелому, связанную со СПИДом лимфому или связанную со СПИДом саркому, метастазирующую злокачественную опухоль, злокачественную опухоль мочевого пузыря, злокачественную опухоль мозга, злокачественную опухоль нервной системы, глиобластому, злокачественную опухоль яичников, рак кожи, злокачественную опухоль печени, плоскоклеточные карциномы ротовой полости, горла, гортани и легких, злокачественную опухоль ободочной кишки, рак шейки матки, злокачественную опухоль молочной железы, эпителиальную злокачественную опухоль, злокачественную опухоль почек, злокачественную опухоль органов половой и мочевой системы, злокачественную опухоль легких, карциному пищевода, карциному головы и шеи, злокачественное заболевание крови, рак яичка, злокачественную опухоль ободочной и прямой кишки, злокачественную опухоль простаты и злокачественную опухоль поджелудочной железы.
В еще одном аспекте изобретения воспалительные заболевания также поддаются лечению введением эффективного количества одного или более соединения формул (I) и (II), более предпочтительно соединения из одной или более группы 1, группы 2, группы 3, группы 4, группы 5, группы 6, группы 7, группы 8, группы 9, группы 10, группы 11, группы 12, группы 13, группы 14, группы 15 и/или группы 16, или его фармацевтически приемлемых солей, где указанное эффективное количество является, по меньшей мере, количеством, достаточным для получения детектируемого подавления воспаления и предпочтительно является количеством, достаточным для достижения лечебного эффекта у пациента. Воспалительные заболевания, поддающиеся лечению грелином, одним или более агонистами грелина и/или антагонистами грелина по изобретению, включают, но не ограничиваются этим, астму, реактивный артрит, гепатит, спондиартрит, синдром Шергена, болезнь Альцгеймера и атопический дерматит, или воспалительные заболевания, связанные с аутоиммунным заболеванием, такие как системная красная волчанка, ревматоидный артрит, системный васкулит, инсулинзависимый сахарный диабет, рассеянный склероз, мышечная дистрофия, экспериментальный аллергический энцефаломиелит, псориаз, болезнь Крона, воспалительное заболевание кишечника, язвенный колит, болезнь Аддисона, гнездную алопецию, заболевание органов брюшной полости, заболевание щитовидной железы и/или склеродерму. Также воспаление, развившееся в результате ожога, можно лечить грелином, одним или более агонистами грелина и/или одним или более антагонистами грелина. Воспаление легких также можно лечить грелином, одним или более агонистами грелина и/или одним или более антагонистами грелина. Воспаление также может привести к потере аппетита у субъекта, особенно, когда воспаление является воспалением низкой степени и/или имеет место у пожилого субъекта.
Антагонисты грелина также можно применять для достижения лечебного эффекта у пациента. Например, антагонист грелина можно использовать для стимуляции снижения массы тела и/или снижения аппетита, поддержания идеальной массы тела, лечения ожирения, лечения диабета и его осложнений, таких как ретинопатия, и/или лечения сердечно-сосудистых заболеваний. Избыточная масса тела вносит свой вклад в развитие различных заболеваний, включая, но не ограничиваясь этим, повышенное давление, диабет, дислипидемия, сердечно-сосудистое заболевание, образование желчных камней, остеоартрит, синдром Прадера-Вилли и некоторые формы злокачественных заболеваний. Доказано, что потеря массы тела снижает вероятность развития таких заболеваний, когда является частью назначенного лечения таких заболеваний.
Другие признаки и преимущества настоящего изобретения станут очевидными из дополнительных приведенных в данном документе описаний, включая различные примеры. Приведенные примеры иллюстрируют различные составные части и методологию, пригодные для практики настоящего изобретения. Примеры не ограничивают заявленное изобретение. На основе настоящего описания специалист в данной области может установить и использовать другие составные части и методологию, пригодные для практики настоящего изобретения.
Подробное описание изобретения
Настоящее изобретение относится к аналогам грелина, активным на рецепторе GHS. Человеческий грелин представляет собой модифицированный пептид из 28 аминокислот, в котором гидроксильная группа серина эстерифицирована н-октановой кислотой (Kojima M. et al., Nature (1999), 402(6762): 656-60 и Kojima M. (Abstract), Third International Symposium on Growth Hormone Secretagogues, Keystone, Colorado, USA 2000, February 17-19).
Как уже подробно указывалось выше, аналоги по настоящему изобретению являются пригодными для лечения широкого ряда заболеваний у субъекта. В том смысле, в котором он используется в данном документе, термин «субъект» относится к млекопитающему или отличному от млекопитающего животному, включая, например, и без ограничения, человека, крысу, мышь или сельскохозяйственное животное. Обращение к субъекту не обязательно означает указание на наличие заболевания или нарушения. Термин «субъект» включает, например, млекопитающего или отличного от млекопитающего животного, которому вводят аналог грелина в качестве части опыта, млекопитающего или отличного от млекопитающего животного, которого подвергают лечению для ослабления проявления заболевания или нарушения, и млекопитающего или отличного от млекопитающего животного, которого подвергают лечению в профилактических целях для замедления или предупреждения начала развития заболевания или нарушения.
«Терапевтически приемлемое количество» соединения или композиции по изобретению, независимо от лекарственной формы или пути введения, представляет такое количество, которое вызывает проявление желаемой биологической ответной реакции у субъекта. Биологическое действие терапевтического количества может проявиться или быть оценено на многих уровнях в организме. Например, биологическое действие терапевтического количества может проявиться или быть определено на клеточном уровне при оценке ответа в рецепторе, который связывается с грелином и/или аналогом грелина, или биологическое действие терапевтического количества может проявиться или быть определено на системном уровне, в частности, в виде воздействия на повышение/снижение концентрации гормона роста в крови. Биологическое действие терапевтического количества может проявиться или быть определено на уровне организма, например, в виде ослабления симптома(ов) или прогрессирования заболевания или состояния у субъекта. Терапевтически приемлемое количество соединения или композиции по изобретению, независимо от лекарственной формы или пути введения, может привести к проявлению одной или более биологических ответных реакций у субъекта. В том случае, когда соединение или композиция по изобретению предназначены для тестирования в системе in vitro, то терапевтически приемлемое количество соединения или композиции можно рассматривать в качестве количества, которое дает оцениваемую ответную реакцию в выбранной системе in vitro.
Если не указано иначе, то все используемые в данном документе технические и научные термины, имеют то же значение, которое обычно понимается специалистами в данной области, к которой относится данное изобретение. Также все публикации, заявки на патент, патенты и другие источники, упомянутые в данном документе, включены здесь для сведения.
Некоторые аминокислоты, присутствующие в соединениях по изобретению, могут быть представлены следующим образом:
Номенклатура и обозначения
Обозначение
Значение
Abu
α-аминомасляная кислота
Acc
1-амино-1-цикло(С<sub>3</sub>-С<sub>9</sub>)алкилкарбоновая кислота
A3c
1-амино-1-циклопропанкарбоновая кислота
A4c
1-амино-1-циклобутанкарбоновая кислота
A5c
1-амино-1-циклопентанкарбоновая кислота
A6c
1-амино-1-циклогексанкарбоновая кислота
<img file="00000002.tif" he="27" wi="34" img-content="undefined" img-format="tif" />
Act
означает структуру:
Aib
α-аминоизомасляная кислота
Aic
2-аминоиндан-2-карбоновая кислота
Ala или А
аланин
β-Ala
бета-аланин
<img file="00000003.tif" he="30" wi="34" img-content="undefined" img-format="tif" />
Aрс
означает структуру:
Arg или R
аргинин
hArg
гомоаргинин
Asn или N
аспарагин
Asp или D
аспарагиновая кислота
Ava
5-амино-н-валериановая кислота
Cha
β-циклогексилаланин
Cys или С
цистеин
hCys
L-гомоцистеин
Dab
2,4-диаминомасляная кислота
Dap
2,3-диаминопропионовая кислота
Dhp
3,4-дегидропролин
Dmt
5,5-диметилтиазолидин-4-карбоновая кислота
2-Fua
β-(2-фурил)аланин
Gln или Q
глутамин
Glu или Е
глутаминовая кислота
Gly или G
глицин
His или H
гистидин
3-Hyp
транс-3-гидрокси-L-пролин, т.е. (2S,3S)-3-гидроксипирролидин-2-карбоновая кислота
4-Hyp
4-гидроксипролин, т.е. (2S,4R)-4-гидроксипирролидин-2-карбоновая кислота
Ile или I
изолейцин
Inc
индолин-2-карбоновая кислота
Inp
изонипекотиновая кислота
Ktp
4-кетопролин
Leu или L
лейцин
hLeu
гомолейцин
Lys или K
лизин
Met или M
метионин
1-Nal
β-(1-нафтил)-L-аланин
2-Nal
β-(2-нафтил)-L-аланин
Nle
норлейцин
Nva
норвалин
Oic
октагидроиндол-2-карбоновая кислота
Orn
орнитин
2-Pal
β-(2-пиридинил)аланин
3-Pal
β-(3-пиридинил)аланин
4-Pal
β-(4-пиридинил)аланин
Phe или F
фенилаланин
hPhe
гомофенилаланин
Pip
пипеколиновая кислота
Pro или P
пролин
Ser или S
серин
<img file="00000004.tif" he="30" wi="38" img-content="undefined" img-format="tif" />
Taz
β-(4-тиазолил)аланин, т.е.
2-Thi
β-(2-тиенил)аланин
3-Thi
β-(3-тиенил)аланин
Thp
4-амино-4-карбокситетрагидропиран
Thr или T
треонин
Thz
тиазолидин-4-карбоновая кислота
Tic
1,2,3,4-тетрагидроизохинолин-3-карбоновая кислота
Tle
трет-лейцин
Trp или W
триптофан
Tyr или Y
тирозин
Val или V
валин
В тех случаях, когда аминокислота имеет изомерные формы, то в данном случае приведена L-форма аминокислоты, если не указано иначе.
3
Номенклатура, использованная для определения пептидов, представляет таковую, которая, как правило, применяется в данной области, в которой аминогруппа в N-конце приведена слева и карбоксильная группа в С-конце приведена справа, т.е. соответствует формуле -NH-CI(R')-CO-, в которой каждый R и R' независимо представляет атом водорода или боковую цепь аминокислоты (например, R=СН и R'=Н для Ala), или R и R' могут быть объединены с образованием циклической системы. Для N-концевой аминокислоты обозначения соответствуют формуле:
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
Пептид по настоящему изобретению также обозначается в данном документе в другом формате, например, (Aib)hгрелин(1-28)-NH, с замещенной аминокислотой(ами) из природной последовательности, помещенной в первых скобках (например, Aibвместо Ser в hгрелине). Числа во вторых скобках относятся к числу аминокислот в пептиде (например, hгрелин (1-18) относится к аминокислотам от 1 до 18 в пептидной последовательности человеческого грелина). Обозначение «NH», например, в (Aib)hгрелин(1-28)-NHуказывает, что С-конец пептида амидирован. (Aib)hгрелин(1-28)-NHили альтернативно (Aib)hгрелин(1-28)-ОН указывает, что С-конец является свободной кислотой. Маленькая буква перед словом «грелин» указывает на его источник или происхождение, т.е. «h» указывает, что грелин является гомологом формы грелина, обнаруженной у человека.
Если не указано иначе, то аминокислоты с хиральным центром приведены в виде L-энантиомера. Обращение к выражению «ее производное» относится к модифицированной аминокислоте, такой как соответствующая D-аминокислота, N-алкиламинокислота, β-аминокислота или содержащая метку аминокислота.
В том смысле, в котором он используется в данном документе, термин «Асс» включает аминокислоту, выбранную из группы 1-амино-1-циклопропанкарбоновой кислоты (А3с); 1-амино-1-циклобутанкарбоновой кислоты (А4с); 1-амино-1-циклопентанкарбоновой кислоты (А5с); 1-амино-1-циклогексанкарбоновой кислоты (А6с); 1-амино-1-циклогептанкарбоновой кислоты (А7с) и 1-амино-1-циклооктанкарбоновой кислоты (А9с).
«Ацил» относится к группе R”-C(O)-, в которой R” представляет Н, алкил, замещенный алкил, гетероалкил, замещенный гетероалкил, алкенил, замещенный алкенил, арил, алкиларил или замещенный алкиларил.
«Алкил» относится к углеводородной группе, содержащей один или более атомов углерода, в которой, если присутствует много атомов углерода, то они соединены простыми связями. Алкильная углеводородная группа может быть с прямой цепью или может содержать одну или более разветвленных или циклических групп.
2
3
2
1-20
3
3
3
2
0-20
2
0-20
2
0-20
«Замещенный алкил» относится к алкилу, в котором один или более атомов водорода углеводородной группы замещены одним или более заместителями, выбранными из группы, состоящей из атома галогена (т.е. атомов фтора, хлора, брома и иода), -ОН, -CN, -SH, -NH, -NHCH, -NO, -C алкила, замещенного 1-6 атомами галогена, -CF, -OCH, -OCF и -(CH)-COOH. В других вариантах осуществления присутствует 1, 2, 3 или 4 заместителя. Наличие -(CH)-COOH приводит к образованию алкиловой кислоты. Примеры алкиловых кислот, содержащих или состоящих из -(CH)-COOH, включают, но не ограничиваются этим, 2-норборнануксусную кислоту, трет-масляную кислоту и 3-циклопентилпропионовую кислоту.
«Гетероалкил» относится к алкилу, в котором один или более атомов углерода в углеводородной группе, замещены на одну или более из следующих групп: амино, амидо, -О-, -S- или карбонил. В других вариантах осуществления присутствуют 1-2 гетероатома.
2
3
2
1-20
3
3
3
2
0-20
«Замещенный гетероалкил» относится к гетероалкилу, в котором один или более атомов водорода в углеводородной группе замещены одним или более заместителями, выбранными из группы, состоящей из атома галогена (т.е. атомов фтора, хлора, брома и иода), -ОН, -CN, -SH, -NH, -NHCH, -NO, -C алкила, замещенного 1-6 атомами галогена, -CF, -OCH, -OCF и -(CH)-COOH. В других вариантах осуществления присутствуют 1, 2, 3 или 4 заместителя.
«Алкенил» относится к углеводородной группе из двух или более атомов углерода, в которой присутствует одна или более углерод-углеродных двойных связей. Алкенильная углеводородная группа может быть с прямой цепью или может содержать одну или более разветвленных или циклических групп.
2
3
2
1-20
3
3
3
2
0-20
«Замещенный алкенил» относится к алкенилу, в котором один или более атомов водорода, замещены одним или более заместителями, выбранными из группы, состоящей из атома галогена (т.е. атомов фтора, хлора, брома и иода), -ОН, -CN, -SH, -NH, -NHCH, -NO, -Cалкила, замещенного 1-6 атомами галогена, -CF, -OCH, -OCF и -(CH)-COOH. В других вариантах осуществления присутствуют 1, 2, 3 или 4 заместителя.
1-20
1-20
2
2
1-20
3
3
2
0-20
«Арил» относится к необязательно замещенной ароматической группе, по меньшей мере, с одним циклом, имеющим сопряженную π-электронную систему, содержащей до двух конъюгированных или конденсированных циклических систем. Арил включает, но не ограничивается этим, карбоксильный арил, гетероциклический арил и биарильные группы. Предпочтительно арил представляет 5- или 6-членный цикл. Предпочтительными атомами гетероциклического арила являются один или более атомов серы, кислорода и/или азота. Примеры арила включают, но не ограничиваются этим, фенил, 1-нафтил, 2-нафтил, индол, хинолин, 2-имидазол и 9-антрацен. Арильные заместители выбраны из группы, состоящей из -Салкила, -Салкокси, атома галогена (т.е. атома фтора, хлора, брома и иода), -ОН, -CN, -SH, -NH, -NO, -Cалкила, замещенного 1-5 атомами галогена, -CF, -OCF и -(CH)-COOH. В других вариантах осуществления присутствуют 0, 1, 2, 3 или 4 заместителя.
Термин «галоген» включает атом фтора, хлора, брома и иода.
1
12
2
12
Термин «(С-С)углеводородная группа» включает алкил, алкенил и алкинил, и в случае алкенила и алкинила они представляют С-С.
«Алкиларил» относится к «алкилу», соединенному с «арилом».
То, что подразумевается под Glu(О-гексилом), представляет
То, что подразумевается под Asp(1-гептанолом), представляет
То, что подразумевается под Glu(1-гептанолом), представляет
То, что подразумевается под Asp(NH-гексилом), представляет
То, что подразумевается под Glu(NH-гексилом), представляет
То, что подразумевается под Ser(н-октаноилом) или Ser(С(О)-гептилом), представляет
То, что подразумевается под Dap(1-октансульфонилом), представляет
15
То, что подразумевается под Cys(R), представляет
То, что подразумевается под Cys(S-гептилом), представляет
То, что подразумевается под Dap(октаноилом), представляет
То, что подразумевается под биотинилом, представляет
То, что подразумевается под миристилом, представляет
То, что подразумевается под Lys(биотинилом), представляет
То, что подразумевается под Lys(миристилом), представляет
То, что подразумевается под Gly(миристилом), представляет
Настоящее изобретение включает диастереоизомеры, а также их рацемические и разделенные энантиомерно чистые формы. Аналоги грелина могут содержать D-аминокислоты, L-аминокислоты или их комбинацию. Предпочтительно аминокислоты, присутствующие в аналоге грелина, являются L-энантиомерами.
Предпочтительные производные аналогов по изобретению содержат D-аминокислоты, N-алкиламинокислоты, β-аминокислоты и/или аминокислоты, включающие одну или более меток (включая меченый вариант D-аминокислоты, N-алкиламинокислоты или β-аминокислоты). Меченые производные указывают на измененные аминокислоты или производного аминокислоты посредством детектируемой метки. Примеры детектируемых меток включают люминесцентную, ферментативную и радиоактивную метки. Тип метки и положение метки может оказывать влияние на активность аналога. Следует выбирать и располагать метки таким образом, чтобы они не оказывали существенного влияния на активность аналога грелина в рецепторе GHS. Влияние конкретной метки и ее положения на активность грелина можно определить при использовании тестов для оценки активности и связывания грелина.
Защитная группа, ковалентно связанная с С-концевой карбоксильной группой, снижает реакционную способность карбоксильного конца в условиях in vivo. С-концевую защитную группу предпочтительно присоединяют к α-карбонильной группе последней аминокислоты. Предпочтительные С-концевые защитные группы включают амид, метиламид и этиламид.
Некоторые другие обозначения, используемые в данном документе, определяются следующим образом:
Номенклатура и обозначения
Обозначение
Значение
Boc:
трет-бутилоксикарбонил
BSА:
бычий сывороточный альбумин
Bzl:
бензил
DCM:
дихлорметан
DIC:
N,N-диизопропилкарбодиимид
DIFA:
диизопропилэтиламин
Dmab:
4-{N-(1-(4,4-диметил-2,6-диоксоциклогексилиден)-3-метилбутил)амино}бензил
DMAP:
4-(диметиламино)пиридин
ДМФА:
диметилформамид
DNP:
2,4-динитрофенил
ЭДТА:
этилендиаминтетрауксусная кислота
Fmoc:
флуоренилметоксикарбонил
HBTU:
2-(1Н-бензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметилуроний гексафторфосфат
cHex:
циклогексил
HOAT:
О-(7-азабензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметилуроний гексафторфосфат
HOBt:
1-гидроксибензотриазол
ВЭЖХ:
высокоэффективная жидкостная хроматография
MBHA:
4-метилбензгидриламин
Mmt:
4-метокситритил
NMP:
N-метилпирролидон
Pbf:
2,2,4,6,7-пентаметилдигидробензофуран-5-сульфонил
PhiPr:
γ-2-фенилизопропиловый спирт
PyAOP:
7-азабензотриазол-1-илокситрис(пирролидино)фосфоний гексафторфосфат
tBu:
трет-бутил
TIS:
триизопропилсилан
TOS:
тозил
trt:
тритил
TFA:
трифторуксусная кислота
TFFH:
тетраметилфторфорамидиний гексафторфосфат
Z:
бензилоксикарбонил
Способы синтеза
nd
Соединения по изобретению можно получить с использованием способов, в раскрытых в данном документе в примерах, а также методов, которые являются хорошо известными в данной области. Например, полипептидный фрагмент аналога грелина можно синтезировать или модифицировать химическим или биохимическим путем. Примеры способов биохимического синтеза, включающие введение нуклеиновой кислоты в клетку и экспрессию нуклеиновых кислот, приведены Ausubell, Current Рrotocols in Molecular Biology, John Wiley, 1987-1998 и Sambrook et al., in Molecular Cloning, A Laboratory Manual, 2 Edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989. В данной области также хорошо известны способы химического синтеза полипептидов (Vincent in Peptide and Protein Drug Delivery, New York, N.Y., Dekker, 1990). Например, пептиды по данному изобретению можно получить обычным твердофазным синтезом пептидов (Stewart J.M. et al., Solid Phase Synthesis, Pierce Chemical Co., 2d ed., 1984).
2
3
1
1
1
30
1
30
Заместители R и Rв приведенной выше общей формуле можно присоединить к свободной аминогруппе N-концевой аминокислоты обычными методами, известными в данной области. Например, алкильные группы, в частности, (С-С)алкил, можно присоединить с использованием восстановительного алкилирования. Гидроксиалкильные группы, например, (С-С)гидроксиалкил, можно также присоединить с использованием восстановительного алкилирования, при котором свободную гидроксильную группу защищают с помощью трет-бутилового эфира. Ацильные группы, например, СОЕ, можно присоединить сочетанием свободной кислоты, например, ЕСООН, со свободной аминогруппой N-концевой аминокислоты смешиванием обработанной смолы с 3 молярными эквивалентами свободной кислоты и диизопропилкарбодиимида в метиленхлориде в течение 1 ч. Если свободная кислота содержит свободную гидроксильную группу, например, п-гидроксифенилпропионовую кислоту, то тогда присоединение проводят с 3 дополнительными молярными эквивалентами НОВТ.
1
2
0
2
1
2
0
2
2
2
2
2
2
2
2
В том случае, когда R представляет NH-X-CH-CONH (т.е. Z=CONH), то синтез пептида начинают с Fmoc-HN-X-CH-CONH, присоединенного к смоле Rink Amide-MBHA (амид-4-метилбензилгидриламин производства Novabiochem, San Diego, CA). Если R представляет NH-X-CH-COОН (т.е. Z=COОН), то синтез пептида начинают с Fmoc-HN-X-CH-COОН, присоединенной к смоле Wang.
В синтезе аналога грелина по данному изобретению, содержащего А5с, А6с и/или Aib, время присоединения составляет 2 ч для данных остатков и остатка, непосредственно следующего за ними.
Ниже приведены примеры для дополнительной иллюстрации различных признаков настоящего изобретения. В примерах также описана пригодная методология для практики изобретения. Данные примеры не ограничивают заявленное изобретение.
Пример 158: (Ac-Aib
,Aib
,Glu(NH-гексил)
)hгрелин(1-28)-NH
(SEQ ID NO:118)
1
2,10
3,17
2
Указанный в заголовке пептид синтезировали на синтезаторе пептидов Applied Biosystems модель 433А (производства Applied Biosystems, Foster City, CA, США) с использованием химии флуоренилметилоксикарбонила (Fmoc). Использовали смолу амид-4-метилбензилгидриламин (MBHA) Rink (производства Novabiochem, San Diego, CA) с замещением 0,64 ммоль/г. Использованными Fmoc-производными аминокислот (производства AnaSpec, San Jose, CA, США) были Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Aib-OH, Fmoc-Glu(Trt)-OH, Fmoc-Glu(tBu)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Phe-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH и Fmoc-Val-OH. Кроме того, использовали Fmoc-Glu(O-2-PhiPr)-OH (производства Novabiochem, San Diego, CA) для аминокислот в 3 и 17 положениях. Синтез проводили в объеме 0,1 ммоль. Fmoc-группы удаляли обработкой смолы 20% раствором пиперидина в N-метилпирролидоне (NМР) в течение примерно 30 мин. На каждой стадии присоединения Fmoc-аминокислоту (3 экв, 0,3 ммоль) вначале предварительно активировали в 2 мл раствора 0,45 М 2-(1-Н-бензотриазол-1-ил)-1,1,2,3-тетраметилуроний гексафторфосфат/гидроксибензотриазол (HBTU/HOBT) в NMP. Раствор, содержащий активированный эфир аминокислоты, вместе с 1 мл диизопропилэтиламина (DIEA) и 1 мл NMP, наносили на смолу. Синтезатор пептидов ABI 433A программировали с воспроизведением следующего реакционного цикла:
1) промывание NMP;
2) удаление Fmoc-защитной группы 20% пиперидином в NMP в течение 30 мин;
3) промывание NMP; и
4) сочетание с предварительно активированной Fmoc-аминокислотой в течение примерно 1-3 ч.
Смола эффективно присоединяется согласно последовательности указанного в заголовке пептида. После «сборки» пептидной цепи смолу полностью отмывали N,N-диметилформамидом (ДМФА) и дихлорметаном (DCM).
1
В конце «сборки» пептидной цепи на синтезаторе пептидов ABI 433A (без остатка Fmoc-Aib в А) продукт пептид-смола переносили в реакционный сосуд на встряхивателе и Fmoc удаляли с использованием 25% пиперидина в ДМФА в течение 30 мин. Затем смолу промывали ДМФА. Fmoc-Aib-ОН (0,4 ммоль) присоединяли с использованием TFFH (тетраметилфторформамидиния гексафторфосфата) (производства Perceptive Biosystems, Warrington, Великобритания) (0,4 ммоль), HOAt (0,4 ммоль), DMAP (диметиламинопиридина) (0,1 г) и DIEA (1,2 ммоль) один раз в течение 4 ч и один раз в течение ночи.
2
2
2
3
17
Fmoc-группу удаляли, как описано выше, и пептид «кэппировали» с использованием АсО (уксусного ангидрида) (5 ммоль) и DIEA (5 ммоль) в ДМФА в течение примерно 30 мин. PhiPr-(γ-2-фенилизопропиловый эфир) группы удаляли от остатков глутамина в А и Апромыванием 3% раствором ТФК в DCM дважды в течение 10 мин для каждого промывания. Вос, который частично удаляли от боковой цепи лизина, замещали с использованием ВосО (0,8 ммоль) и DIEA (0,8 ммоль) в DCM в течение ночи. Смолу обрабатывали PyAOP (7-азабензотриазол-1-илокситрис(пирролидино)фосфонием гексафторфосфатом) (производства Applied Biosystems, Foster City, CA, США) (0,6 ммоль), HOAt (0,6 ммоль), DMAP (0,1 г) и DIEA (1,8 ммоль) в течение 10 мин. Затем добавляли гексил-NH(гексиламин) (производства Sigma-Aldrich Chemicals, St. Louis, MO, США) (2,0 ммоль) к раствору смолы, который встряхивали и выдерживали в течение ночи.
2
18
0
Для отщепления пептида от смолы продукт пептид-смола обрабатывали смесью ТФК, НО и триизопропилсилана (TIS) (соответственно 9,5 мл/0,85 мл/0,8 мл) примерно в течение 4 ч. Отщепленную смолу отфильтровывали и оставшийся фильтрат выливали в 200 мл эфира. Затем образовавшийся осадок собирали центрифугированием. Сырой продукт растворяли в смеси ацетонитрил-вода, которую очищали обратнофазовой препаративной ВЭЖХ на колонке СDYNAMAX -100А (4×43 см) (производства Varian Walnut Creek, CA, США). Колонку элюировали в течение примерно 1 ч в линейном градиенте 85% А:15% В до 60% А:40% В, где А представляет 0,1% ТФК в воде, и В представляет 0,1% ТФК в ацетонитриле. Фракции анализировали ВЭЖХ и фракции, содержащие чистый продукт, объединяли и лиофилизовали досуха. Получали примерно 27,1 мг (6,3%) белого твердого вещества, которое анализировали с использованием ВЭЖХ, и была установлена чистота примерно 97,5%. С использованием масс-спектрометрии с электрораспылительной ионизацией (ESI-MS) было установлено, что молекулярная масса составляет 3477,4, значение которой совпадало с рассчитанной молекулярной массой, равной 3477,19.
Пример 70: (Aib
,Glu(NH-гексил)
)hгрелин(1-28)-NH
(SEQ ID NO:50)
1,2,10
3,17
2
1
2,10
3,17
3
17
2
2
2
Указанный в заголовке пептид синтезировали способом, описанным для примера 158, т.е. (Ac-Aib,Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH) со следующим исключением: после присоединения последней Fmoc-Aib-OH в положении 1 на встряхивателе, защитные PhiPr-группы удаляли от остатков глутамина в Аи Апромыванием 3% раствором ТФК в DCM дважды с интервалом примерно 10 мин. Вос, который частично удаляли от боковой цепи лизина, замещали с использованием ВосО (0,8 ммоль) и DIEA (0,8 ммоль) в DCM в течение ночи. После встряхивания и выдерживания в течение ночи смолу обрабатывали раствором PyAOP (7-азабензотриазол-1-илокситрис(пирролидино)фосфония гексафторфосфата) (производства Applied Biosystems, Foster City, CA, США) (0,6 ммоль), HOAt (0,6 ммоль), DMAP (0,1 г) и DIEA (1,8 ммоль) в течение 10 мин, затем добавляли гексил-NH(гексиламин) (производства Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, США) (2,0 ммоль) к раствору, который затем встряхивали и выдерживали в течение ночи. Fmoc-защитную группу удаляли с использованием 25% пиперидина в ДМФА. Пептид отщепляли от смолы и очищали ВЭЖХ, как подробно описано для синтеза в примере 158 выше.
С использованием анализа ВЭЖХ чистота полученного продукта составила примерно 96,5%. С использованием масс-спектрометрии с электрораспылительной ионизацией (ESI-MS) было установлено, что молекулярная масса равняется 3435,00, значение которой совпадало с рассчитанной молекулярной массой, равной 3435,16.
Специалисты в данной области могут получить следующие пептиды по изобретению с использованием способов синтеза, в основном аналогичных описанным выше:
15
2
Пример 1: (Ser(н-октаноил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:1)
15
2
Пример 2: (Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:2)
3,15
2
Пример 3: (Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:3)
3
15
2
Пример 4: (Glu(NH-гексил),Ser(н-октаноил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:4)
2
15
2
Пример 5: (Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:5)
2
3,15
2
Пример 6: (Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:6)
2,8
15
2
Пример 7: (Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:7)
2,8
3,15
2
Пример 8: (Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:8)
2,10
15
2
Пример 9: (Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:9)
2,10
3,15
2
Пример 10: (Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:10)
16
2
Пример 11: (Ser(н-октаноил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:11)
16
2
Пример 12: (Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:12)
3,16
2
Пример 13: (Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:13)
3
16
2
Пример 14: (Glu(NH-гексил),Ser(н-октаноил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:14)
2
16
2
Пример 15: (Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:15)
2
3,16
2
Пример 16: (Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:16)
2,8
16
2
Пример 17: (Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:17)
2,8
3,16
2
Пример 18: (Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:18)
2,10
16
2
Пример 19: (Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:19)
2,10
3,16
2
Пример 20: (Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:20)
17
2
Пример 21: (Ser(н-октаноил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:21)
17
2
Пример 22: (Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:22)
3,17
2
Пример 23: (Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:23)
3
17
2
Пример 24: (Glu(NH-гексил),Ser(н-октаноил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:24)
17
2
Пример 25: (Dap(октансульфонил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:25)
3,17
2
Пример 26: (Dap(октансульфонил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:26)
3
17
2
Пример 27: (Dap(октансульфонил),Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:27)
3
17
2
Пример 28: (Dap(октансульфонил),Ser(н-октаноил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:28)
3
17
2
Пример 29: (Glu(NH-гексил),Dap(октансульфонил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:29)
2
9
3
2
17
Пример 30: (Cys(S-(CH)CH))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:30)
2
9
3
2
3,17
Пример 31: (Cys(S-(CH)CH))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:31)
3
17
2
9
3
2
Пример 32: (Glu(NH-гексил),Cys(S-(CH)CH))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:32)
2
9
3
2
3
17
Пример 33: (Cys(S-(CH)CH),Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:33)
2
9
3
2
3
17
Пример 34: (Cys(S-(CH)CH),Ser(н-октаноил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:34)
2
17
2
Пример 35: (Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:35)
2
3,17
2
Пример 36: (Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:36)
2
7
17
2
Пример 37: (Aib,Thz,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:37)
2
7
17
2
Пример 38: (Aib,4-Hyp,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:37)
2
7
17
2
Пример 39: (Aib,Dhp,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:37)
2
7
17
2
Пример 40: (Aib,Pip,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:37)
2
7
17
2
Пример 41: (Aib,Tic,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:37)
2
3,17
7
2
Пример 42: (Aib,Glu(NH-гексил),Thz)hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:38)
2
3,17
7
2
Пример 43: (Aib,Glu(NH-гексил),4-Hyp)hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:38)
2
3,17
7
2
Пример 44: (Aib,Glu(NH-гексил),Dhp)hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:38)
2
3,17
7
2
Пример 45: (Aib,Glu(NH-гексил),Pip)hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:38)
2
3,17
7
2
Пример 46: (Aib,Glu(NH-гексил),Tic)hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:38)
2,8
17
2
Пример 47: (Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:39)
2,8
3,17
2
Пример 48: (Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:40)
2
9
17
2
Пример 49: (Aib,3-Pal,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:41)
2
9
17
2
Пример 50: (Aib,4-Pal,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:41)
2
9
17
2
Пример 51: (Aib,Taz,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:41)
2
9
17
2
Пример 52: (Aib,2-Thi,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:41)
2
3,17
9
2
Пример 53: (Aib,Glu(NH-гексил),3-Pal)hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:42)
2
3,17
9
2
Пример 54: (Aib,Glu(NH-гексил),4-Pal)hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:42)
2
3,17
9
2
Пример 55: (Aib,Glu(NH-гексил),Taz)hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:42)
2
3,17
9
2
Пример 56: (Aib,Glu(NH-гексил),2-Thi)hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:42)
2,10
17
2
Пример 57: (Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:43)
2,10
3,17
2
Пример 58: (Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:44)
8
17
2
Пример 59: (Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:45)
9
17
2
Пример 60: (Taz,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:46)
9
17
2
Пример 61: (3-Pal,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:46)
9
17
2
Пример 62: (4-Pal,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:46)
9
17
2
Пример 63: (2-Thi,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:46)
3,17
8
2
Пример 64: (Glu(NH-гексил),Aib)hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:47)
3,17
9
2
Пример 65: (Glu(NH-гексил),Taz)hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:48)
3,17
9
2
Пример 66: (Glu(NH-гексил),3-Pal)hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:48)
3,17
9
2
Пример 67: (Glu(NH-гексил),4-Pal)hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:48)
3,17
9
2
Пример 68: (Glu(NH-гексил),2-Thi)hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:48)
1,2,10
17
2
Пример 69: (Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:49)
2
17
2
Пример 71: (A5c,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:51)
2
3,17
2
Пример 72: (A5c,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:52)
3,17
2
Пример 73: (Glu(1-гептанол))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:53)
3,17
2
Пример 74: (Asp(1-гептанол))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:54)
3,17
2
Пример 75: (Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:55)
3,17
2
Пример 76: (Asp(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:56)
2
3,17
2
Пример 77: (Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:57)
17
2
Пример 78: (Lys(биотинил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:58)
18
2
Пример 79: (Ser(н-октаноил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:59)
18
2
Пример 80: (Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:60)
3,18
2
Пример 81: (Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:61)
3
18
2
Пример 82: (Glu(NH-гексил),Ser(н-октаноил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:62)
2
18
2
Пример 83: (Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:63)
2
3,18
2
Пример 84: (Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:64)
2,8
18
2
Пример 85: (Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:65)
2,8
3,18
2
Пример 86: (Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:66)
2,10
18
2
Пример 87: (Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:67)
2,10
3,18
2
Пример 88: (Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:68)
19
2
Пример 89: (Ser(н-октаноил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:69)
19
2
Пример 90: (Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:70)
3,19
2
Пример 91: (Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:71)
3
19
2
Пример 92: (Glu(NH-гексил),Ser(н-октаноил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:72)
2
19
2
Пример 93: (Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:73)
2
3,19
2
Пример 94: (Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:74)
2,8
19
2
Пример 95: (Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:75)
2,8
3,19
2
Пример 96: (Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:76)
2,10
19
2
Пример 97: (Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:77)
2,10
3,19
2
Пример 98: (Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:78)
20
2
Пример 99: (Ser(н-октаноил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:79)
20
2
Пример 100: (Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:80)
3,20
2
Пример 101: (Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:81)
3
20
2
Пример 102: (Glu(NH-гексил),Ser(н-октаноил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:82)
2
20
2
Пример 103: (Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:83)
2
3,20
2
Пример 104: (Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:84)
2,8
20
2
Пример 105: (Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:85)
2,8
3,20
2
Пример 106: (Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:86)
2,10
20
2
Пример 107: (Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:87)
2,10
3,20
2
Пример 108: (Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:88)
1
17
2
Пример 109: (Ac-Gly,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:89)
1
17
2
Пример 110: (Ac-Gly,Ser(н-октаноил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:90)
1
3,17
2
Пример 111: (Ac-Gly,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:91)
1
3
17
2
Пример 112: (Ac-Gly,Glu(NH-гексил),Ser(н-октаноил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:92)
1
17
2
Пример 113: (Ac-Gly,Dap(октансульфонил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:93)
1
3,17
2
Пример 114: (Ac-Gly,Dap(октансульфонил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:94)
1
3
17
2
Пример 115: (Ac-Gly,Dap(октансульфонил),Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:95)
1
3
17
2
Пример 116: (Ac-Gly,Dap(октансульфонил),Ser(н-октаноил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:96)
1
3
17
2
Пример 117: (Ac-Gly,Glu(NH-гексил),Dap(октансульфонил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:97)
1
17
2
9
3
2
Пример 118: (Ac-Gly,(Cys(S-(CH)CH))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:98)
1
3,17
2
9
3
2
Пример 119: (Ac-Gly,(Cys(S-(CH)CH))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:99)
1
3
17
2
9
3
2
Пример 120: (Ac-Gly,Glu(NH-гексил),(Cys(S-(CH)CH))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:100)
1
3
17
2
9
3
2
Пример 121: (Ac-Gly,(Cys(S-(CH)CH),Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:101)
1
3
17
2
9
3
2
Пример 122: (Ac-Gly,(Cys(S-(CH)CH),Ser(н-октаноил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:102)
1
2
17
2
Пример 123: (Ac-Gly,Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:103)
1
2
3,17
2
Пример 124: (Ac-Gly,Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:104)
1
2
7
17
2
Пример 125: (Ac-Gly,Aib,Thz,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:105)
1
2
7
17
2
Пример 126: (Ac-Gly,Aib,4-Hyp,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:105)
1
2
7
17
2
Пример 127: (Ac-Gly,Aib,Dhp,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:105)
1
2
7
17
2
Пример 128: (Ac-Gly,Aib,Pip,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:105)
1
2
7
17
2
Пример 129: (Ac-Gly,Aib,Tic,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:105)
1
2
3,17
7
2
Пример 130: (Ac-Gly,Aib,Glu(NH-гексил),Thz)hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:106)
1
2
3,17
7
2
Пример 131: (Ac-Gly,Aib,Glu(NH-гексил),4-Hyp)hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:106)
1
2
3,17
7
2
Пример 132: (Ac-Gly,Aib,Glu(NH-гексил),Dhp)hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:106)
1
2
3,17
7
2
Пример 133: (Ac-Gly,Aib,Glu(NH-гексил),Pip)hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:106)
1
2
3,17
7
2
Пример 134: (Ac-Gly,Aib,Glu(NH-гексил),Tic)hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:106)
1
2,8
17
2
Пример 135: (Ac-Gly,Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:107)
1
2,8
3,17
2
Пример 136: (Ac-Gly,Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:108)
1
2
9
17
2
Пример 137: (Ac-Gly,Aib,3-Pal,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:109)
1
2
9
17
2
Пример 138: (Ac-Gly,Aib,4-Pal,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:109)
1
2
9
17
2
Пример 139: (Ac-Gly,Aib,Taz,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:109)
1
2
9
17
2
Пример 140: (Ac-Gly,Aib,2-Thi,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:109)
1
2
3,17
9
2
Пример 141: (Ac-Gly,Aib,Glu(NH-гексил),3-Pal)hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:110)
1
2
3,17
9
2
Пример 142: (Ac-Gly,Aib,Glu(NH-гексил),4-Pal)hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:110)
1
2
3,17
9
2
Пример 143: (Ac-Gly,Aib,Glu(NH-гексил),Taz)hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:110)
1
2
3,17
9
2
Пример 144: (Ac-Gly,Aib,Glu(NH-гексил),2-Thi)hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:110)
1
2,10
17
2
Пример 145: (Ac-Gly,Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:111)
1
2,10
3,17
2
Пример 146: (Ac-Gly,Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:112)
1
8
17
2
Пример 147: (Ac-Gly,Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:113)
1
9
17
2
Пример 148: (Ac-Gly,Taz,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:114)
1
9
17
2
Пример 149: (Ac-Gly,3-Pal,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:114)
1
9
17
2
Пример 150: (Ac-Gly,4-Pal,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:114)
1
9
17
2
Пример 151: (Ac-Gly,2-Thi,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:114)
1
3,17
8
2
Пример 152: (Ac-Gly,Glu(NH-гексил),Aib)hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:115)
1
3,17
9
2
Пример 153: (Ac-Gly,Glu(NH-гексил),Taz)hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:116)
1
3,17
9
2
Пример 154: (Ac-Gly,Glu(NH-гексил),3-Pal)hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:116)
1
3,17
9
2
Пример 155: (Ac-Gly,Glu(NH-гексил),4-Pal)hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:116)
1
3,17
9
2
Пример 156: (Ac-Gly,Glu(NH-гексил),2-Thi)hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:116)
1
2,10
17
2
Пример 157: (Ac-Aib,Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:117)
1
2
17
2
Пример 159: (Ac-G1y,A5c,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH;(SEQ ID NO:119)
1
2
3,17
2
Пример 160: (Ac-G1y,A5c,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH;(SEQ ID NO:120)
1
3,17
2
Пример 161: (Ac-G1y,Glu(1-гептанол))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:121)
1
3,17
2
Пример 162: (Ac-G1y,Asp(1-гептанол))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:122)
1
3,17
2
Пример 163: (Ac-G1y,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:123)
1
3,17
2
Пример 164: (Ac-G1y,Asp(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:124)
1
2
3,17
2
Пример 165: (Ac-G1y,Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:125)
1
2,10
3
17
2
Пример 166: (Ac-G1y,Aib,Glu(NH-гексил),Lys(биотинил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:126)
1
15
2
Пример 167: (Ac-G1y,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:127)
1
15
2
Пример 168: (Ac-G1y,Ser(н-октаноил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:128)
1
3,15
2
Пример 169: (Ac-G1y,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:129)
1
3
15
2
Пример 170: (Ac-G1y,Glu(NH-гексил),Ser(н-октаноил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:130)
1
2
15
2
Пример 171: (Ac-G1y,Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH: (SEQ ID NO:131)
1
2
3,15
2
Пример 172: (Ac-G1y,Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:132)
1
2,8
15
2
Пример 173: (Ac-G1y,Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:133)
1
2,8
3,15
2
Пример 174: (Ac-G1y,Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:134)
1
2,10
15
2
Пример 175: (Ac-G1y,Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:135)
1
2,10
3,15
2
Пример 176: (Ac-G1y,Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:136)
1
16
2
Пример 177: (Ac-G1y,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:137)
1
16
2
Пример 178: (Ac-G1y,Ser(н-октаноил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:138)
1
3,16
2
Пример 179: (Ac-G1y,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:139)
1
3
16
2
Пример 180: (Ac-G1y,Glu(NH-гексил),Ser(н-октаноил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:140)
1
2
16
2
Пример 181: (Ac-G1y,Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:141)
1
2
3,16
2
Пример 182: (Ac-G1y,Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:142)
1
2,8
16
2
Пример 183: (Ac-G1y,Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH: (SEQ ID NO:143)
1
2,8
3,16
2
Пример 184: (Ac-G1y,Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:144)
1
2,10
16
2
Пример 185: (Ac-G1y,Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:145)
1
2,10
3,16
2
Пример 186: (Ac-G1y,Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:146)
1
18
2
Пример 187: (Ac-G1y,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:147)
1
18
2
Пример 188: (Ac-G1y,Ser(н-октаноил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:148)
1
3,18
2
Пример 189: (Ac-G1y,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:149)
1
3
18
2
Пример 190: (Ac-G1y,Glu(NH-гексил),Ser(н-октаноил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:150)
1
2
18
2
Пример 191: (Ac-G1y,Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:151)
1
2
3,18
2
Пример 192: (Ac-G1y,Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:152)
1
2,8
18
2
Пример 193: (Ac-G1y,Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH: (SEQ ID NO:153)
1
2,8
3,18
2
Пример 194: (Ac-G1y,Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:154)
1
2,10
18
2
Пример 195: (Ac-G1y,Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:155)
1
2,10
3,18
2
Пример 196: (Ac-G1y,Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:156)
1
19
2
Пример 197: (Ac-G1y,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:157)
1
19
2
Пример 198: (Ac-G1y,Ser(н-октаноил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:158)
1
3,19
2
Пример 199: (Ac-G1y,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:159)
1
3
19
2
Пример 200: (Ac-G1y,Glu(NH-гексил),Ser(н-октаноил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:160)
1
2
19
2
Пример 201: (Ac-G1y,Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:161)
1
2
3,19
2
Пример 202: (Ac-G1y,Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:162)
1
2,8
19
2
Пример 203: (Ac-G1y,Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:163)
1
2,8
3,19
2
Пример 204: (Ac-G1y,Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:164)
1
2,10
19
2
Пример 205: (Ac-G1y,Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:165)
1
2,10
3,19
2
Пример 206: (Ac-G1y,Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:166)
1
20
2
Пример 207: (Ac-G1y,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:167)
1
20
2
Пример 208: (Ac-G1y,Ser(н-октаноил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:168)
1
3
20
2
Пример 209: (Ac-G1y,Glu(NH-гексил),)hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:169)
1
3
20
2
Пример 210: (Ac-G1y,Glu(NH-гексил),Ser(н-октаноил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:170)
1
2
20
2
Пример 211: (Ac-G1y,Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:171)
1
2
3,20
2
Пример 212: (Ac-G1y,Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:172)
1
2,8
20
2
Пример 213: (Ac-G1y,Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:173)
1
2,8
3,20
2
Пример 214: (Ac-G1y,Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:174)
1
2,10
20
2
Пример 215: (Ac-G1y,Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:175)
1
2,10
3,20
2
Пример 216: (Ac-G1v,Aib,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)- NH (SEQ ID NO:176)
2
17
2
Пример 217: (Aib,Lys(миристил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:177)
1
2
17
2
Пример 218: (Gly(миристил),Aib,Lys(миристил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:178)
2,8
3
17
2
Пример 219: (Aib,Ser,Glu(NH-гексил))hгрелин(1-28)-NH (SEQ ID NO:180) и
Выбранные предпочтительные варианты осуществления, перечисленные выше, анализировали масс-спектрометрией с электрораспылительной ионизацией (ESI-MS) с целью определения молекулярной массы. В таблице 1 приведены данные, полученные при постановке данного анализа. Также в таблицах 1А, 1В, 1С и 1D приведены данные по чистоте каждого из выбранных соединений, анализированных с использованием ВЭЖХ.
<u>Таблица 1А</u>
Молекулярная масса и чистота выбранных соединений
Пример #
Соединение
Молекулярная масса (рассчи-танная)
Молекулярная масса (масс-спектрометрия с электрораспылительной ионизацией)
Чистота (%)
#48 (SEQ ID NO:40)
(Aib<sup>2,8</sup>,Glu(NH-гексил)<sup>3,17</sup>)hгрелин(1-28)-NH<sub>2</sub>
3406,12
3405,70
99,9%
#136 (SEQ ID NO:108)
(Ac-Gly<sup>1</sup>,Aib<sup>2,8</sup>,Glu(NH-гексил)<sup>3,17</sup>)hгрелин(1-28)-NH<sub>2</sub>
3448,16
3447,98
98,0%
#124 (SEQ ID NO:104)
(Ac-Gly<sup>1</sup>,Aib<sup>2</sup>,Glu(NH-гексил)<sup>3,17</sup>)hгрелин(1-28)-NH<sub>2</sub>
3492,17
3492,00
99,0%
#166 (SEQ ID NO:126)
(Ac-Gly<sup>1</sup>,Aib<sup>2,10</sup>,Glu(NH-гексил)<sup>3</sup>,Lys(биотинил)<sup>17</sup>)hгрелин(1-28)-NH<sub>2</sub>
3591,32
3591,50
98,4%
#70 (SEQ ID NO:50)
(Aib<sup>1,2,10</sup>,Glu(NH-гексил)<sup>3,17</sup>)hгрелин(1-28)-NH<sub>2</sub>
3435,16
3435,00
96,5%
#158(SEQ ID NO:118)
(Ac-Aib<sup>1</sup>,Aib<sup>2,10</sup>,Glu(NH-гексил)<sup>3,17</sup>)hгрелин(1-28)-NH<sub>2</sub>
3477,19
3477,40
97,5%
#146 (SEQ ID NO:112)
(Ac-Gly<sup>1</sup>,Aib<sup>2,10</sup>, Glu(NH-гексил)<sup>3,17</sup>)hгрелин(1-28)-NH<sub>2</sub>
3449,14
3449,20
99,0%
#78 (SEQ ID NO:58)
(Lys(биотинил)<sup>17</sup>)hгрелин(1-28)-NH<sub>2</sub>
3595,27
3594,90
97,7%
<u>Таблица 1В</u>
Молекулярная масса и чистота выбранных соединений
Пример #
Соединение
Молекулярная масса (рассчи-танная)
Молекулярная масса (масс-спектрометрия с электрораспылительной ионизацией)
Чистота (%)
#217 (SEQ ID NO:177)
(Aib<sup>2</sup>,Lys(миристил)<sup>17</sup>) hгрелин(1-28)-NH<sub>2</sub>
3577,35
3577,2
99,2%
#218 (SEQ ID NO:178)
(Gly(миристил)<sup>1</sup>,Aib<sup>2</sup>,Lys(миристил)<sup>17</sup>)hгрелин(1-28)-NH<sub>2</sub>
3787,71
3788,2
98,6%
<u>Таблица 1С</u>
Молекулярная масса и чистота выбранных соединений
Пример #
Соединение
Молекулярная масса (рассчи-танная)
Молекулярная масса (масс-спектрометрия с электрораспылительной ионизацией)
Чистота (%)
#58 (SEQ ID NO:44)
(Aib<sup>2,10</sup>Glu(NH-гексил)<sup>3,17</sup>)hгрелин(1-28)-NH<sub>2</sub>
3407,10
3407,20
100%
Определение биологической активности
Тест определения связывания с рецептором GHS
50
50
Активность соединений по изобретению на рецепторе GHS имеет место и ее можно определить с использованием методов, описанных в примерах, приведенных ниже. В различных вариантах осуществления аналог грелина обладает, по меньшей мере, примерно 50%, по меньшей мере, примерно 60%, по меньшей мере, примерно 70%, по меньшей мере, примерно 80%, по меньшей мере, примерно 90%, по меньшей мере, примерно 95%, по меньшей мере, примерно 98% или более функциональной активностью относительно грелина по данным одного или более тестов определения функциональной активности, описанных ниже; и/или имеет значение IC выше чем примерно 1000 нМ, выше чем примерно 100 нМ или выше чем примерно 50 нМ, значение которой определено с использованием теста оценки связывания с рецептором, описанного ниже. В отношении IC, то этот показатель в большей степени относится к эффективности и таким образом, указывает, что требуется меньшее количество для достижения ингибирования связывания.
В тестах определения способности соединения связываться с рецептором GHS используют рецептор GHS, фрагмент рецептора, содержащий сайт связывания грелина, полипептид, содержащий такой фрагмент, или производное полипептида. Предпочтительно в тесте применяется рецептор GHS или его фрагмент.
Полипептид, содержащий фрагмент рецептора GHS, который связывается с грелином, может также содержать одну или более областей полипептида, которые не обнаружены в рецепторе GHS. Производное такого полипептида содержит фрагмент рецептора GHS, который связывается с грелином, наряду с одним или более непептидным компонентом.
Аминокислотную последовательность рецептора GHS, принимающую участие в связывании грелина, можно легко установить с использованием меченых грелина или аналогов грелина и различных фрагментов рецептора. Можно использовать различные стратегии для выбора фрагментов для тестирования с целью сужения связывающей области. Примеры таких стратегий включают, но не ограничиваются этим, тестирование последовательных фрагментов длиной примерно из 15 аминокислот, начиная с N-конца, и тестирование более длинных фрагментов. Если тестированию подвергаются более длинные фрагменты, то фрагмент связывания грелина можно дополнительно подразделить для определения локализации связывающей области. Фрагменты, использованные для анализа связывания, можно получить с применением методов рекомбинантных нуклеиновых кислот.
Тесты по определению связывания можно проводить с использованием индивидуальных соединений или препаратов, содержащих различное количество соединений. Препарат, содержащий различное количество соединений, обладающих способностью связываться с рецептором GHS, можно разделить на меньшие группы соединений, которые можно тестировать для идентификации соединения(й), связывающегося с рецептором GHS. В одном варианте осуществления настоящего изобретения в тесте анализа связывания используют исследуемый препарат, содержащий, по меньшей мере, 10 соединений.
Тесты связывания можно проводить с использованием полипептидов рецептора GHS, полученных рекомбинантным путем, присутствующих в различных средах. Такие среды включают, например, клеточные экстракты и очищенные клеточные экстракты, содержащие полипептид рецептора GHS, экспрессированный из рекомбинантной нуклеиновой кислоты или природной нуклеиновой кислоты; и они также включают, например, применение очищенного полипептида рецептора GHS, полученного рекомбинантными методами или из природной нуклеиновой кислоты, которая введена в другую среду.
Скрининг соединений, активных по отношению к рецептору GHS
Скрининг соединений, активных по отношению к рецептору GHS, проводят с использованием экспрессированного рекомбинантным путем рецептора. Экспрессированный рекомбинантным путем рецептор имеет несколько преимуществ, таких как возможность экспрессировать рецептор в определенной клеточной системе, так чтобы ответ на соединение в рецепторе GHS можно было бы легко отличить от ответных реакций в других рецепторах. Например, рецептор GHS можно экспрессировать в клеточной линии, такой как НЕК 293, COS 7 и СНО, в норме не экспрессирующих рецептор, с помощью экспрессирующего вектора, где та же клеточная линия без экспрессирующего вектора может функционировать в качестве контроля.
Скрининг соединений с ингибирующим действием в отношении активности рецептора GHS проводят с использованием аналога грелина в тесте, который обеспечивает активность рецептора GHS. Можно определить действие тестируемых соединений на такую активность, например, для идентификации аллостерических модуляторов и антагонистов.
2+
2+
2+
Активность рецептора GHS можно оценить с использованием различных методов, таких как детектирование изменения во внутриклеточной конформации рецептора GHS, в сопряженной с G-белком активности и/или во внутриклеточных медиаторах. Предпочтительно активность рецептора GHS оценивают с использованием таких методов, как определение внутриклеточного Са. Примеры методов, хорошо известных в данной области, которые можно использовать для определения Са, включают применение красок, таких как Fura-2 и применение Са-биолюминесцентных чувствительных репортерных белков, таких как экворин. Примером клеточной линии, для которой применятся экворин в целях оценки сопряженной с G-белком активности, является НЕК293/aeq17 (Button D. et al., Cell Calcium (1993), 14(9): 663-71; и Feighner S.D. et al., Science (1999), 284(5423): 2184-8).
Также можно использовать химерные рецепторы, содержащие связывающую грелин область, функционально сопряженную с другим G-белком, для определения активности рецептора GHS. Химерный рецептор GHS содержит N-концевой внеклеточный домен, трасмембранный домен из трансмембранных областей, внеклеточную петлю и внутриклеточную петлю, и внутриклеточный карбоксильный конец. Методы получения химерных рецепторов и определения сопряженных с G-белком ответных реакций описаны, например, в международной заявке на патент PCT/US96/12336 [WO 97/05252] и патенте США № 5264565, приведенных в данном документе для сведения.
Стимуляция активности рецептора GHS
Аналоги грелина можно использовать для стимуляции активности рецептора GHS, например, для изучения эффекта модуляции рецептора GHS и/или секреции GH, для идентификации антагонистов грелина и/или получения лечебного эффекта у субъекта, страдающего заболеванием или состоянием, таким как дефицит гормона роста, пониженная мышечная масса и/или плотность костей, половая дисфункция, аномальная масса тела, пониженная двигательная активность и/или физическая функция, и/или отсутствие нормального аппетита.
Повышение массы тела или аппетита являются критическими факторами в поддержании идеальной, здоровой массы тела у индивидуума, склонного к потере массы тела, такого как ослабленный или пожилой человек. Снижение массы тела или аппетита у субъекта с пониженной массой тела может привести к серьезным проблемам со здоровьем. У пациента, страдающего заболеванием или проходящим медицинское лечение, которые приводят к потере массы тела и/или потере аппетита, эффективность лечения указанного заболевания или состояния зависит от способности пациента поддерживать постоянную массу тела. К пациентам с пониженной массой тела относятся таковые с массой тела примерно на 10% или ниже, 20% или ниже или 30% или ниже от нижней границы пределов «нормальной» массы тела или индекса массы тела («BMI»), который определяют делением массы тела в кг на рост в м. Пределы «нормальных» значений BMI, которые хорошо известны в данной области, составляют 19-22. Индивидуумы со значением индекса массы тела ниже «нормальных» пределов являются более восприимчивыми к развитию заболеваний и чувствительными к некоторым видам медицинского лечения, таким как химиотерапия, по сравнению с индивидуумами с субнормальным значением BMI.
Биологические тесты - примеры
1. Тест связывания рецептора
А. Получение клеток СНО-К1, экспрессирующих человеческий рекомбинантный рецептор GHS
кДНК рецептора вещества, стимулирующего секрецию человеческого GH (hGHS-R или рецептора грелина) клонировали с использованием полимеразной цепной реакции (ПЦР), хорошо известной специалистам в данной области, в которой человеческую РНК из мозговой ткани использовали в качестве матрицы (получена от Clontech, Palo Alto, CA, США), ген-специфических праймеров, фланкирующих полноразмерную кодирующую последовательность hGHS-R (S: 5'-ATGTGGAACGCGACGCCCAGCGAAGAG-3' и AS: 5'-TCATGTATTAATACTAGATTCTGTCCA-3') и набора Advantage 2 PCR (производства Clontech, Palo Alto, CA, США). Продукт ПЦР клонировали в вектор рCR2.1 с использованием набора Original TA Cloning (производства Invitrogen, Carlsbad, CA, США). Полноразмерный человеческий GHS-R субклонировали в экспрессирующий вектор млекопитающих pcDNA 3.1 (Invitrogen, Carlsbad, CA, США). Плазмиду трасфектировали в клетки яичника китайского хомяка, СНО-К1 (предоставленные Американской коллекцией типовых культур, Rockville, MD, США) c использованием методов с кальцием фосфатом, описанных Wigler M. et al., Cell (1977), 11(1): 223-32. Получали единичные клеточные клоны, стабильно экспрессирующие hGHS-R, при отборе трансфектированных клеток, выросших в клонзапирающих кольцах на среде RPMI 1640 с добавлением 10% фетальной бычьей сыворотки и 1 мМ пирувата натрия, содержащей 0,8 мг/мл G418 (производства Gibco, Grand Island, NY, США).
В. Тест связывания GHS-R
2
125
125
125
125
Мембраны для проведения тестов по оценке связывания с радиолигандом готовили гомогенизацией указанных выше клеток СНО-К1, экспрессирующих человеческий рекомбинантный рецептор GHS примерно в 20 мл охлажденного на льду 50 мМ Трис-HCl на гомогенизаторе Brinkman Рolytron (Brinkman, Westbury, NY, США), установленном в режиме 6, в течение примерно 15 сек. Гомогенаты промывали дважды при центрифугировании (39000g/10 мин) и конечные осадки после центрифугирования ресуспендировали в примерно 50 мМ Трис-HCl, содержащем 2,5 мМ MgCl и 0,1% бычьего сывороточного альбумина (BSA). Для выбранного анализа аликвотные порции объемом примерно 0,4 мл инкубировали с 0,05 нМ (I)грелина (≈2000 кюри/ммоль; Perkin Еlmer Life Sciences, Boston, MA, США) с и без 0,05 мл не содержащего метку конкурентного тестируемого пептида. Примерно через 60 мин при 4°С связанный (I)грелин отделяли от свободного грелина быстрой фильтрацией через фильтры GF/C (производства Brandel, Gaitherburg, MD, США), которые предварительно пропитывали смесью 0,5% полиэтиленимин/0,1% BSA. Затем фильтры промывали 3 раза порциями по 5 мл охлажденного на льду 50 мМ Трис-HCl и 0,1% BSA. Подсчитывали связанную на фильтрах радиоактивность гамма-спектрометрией (с использованием спектрометра производства Wallace LKB, Gaithersburg, MD, США). Специфическое связывание определяли вычитанием связанного (I)грелина в присутствии 1000 нМ грелина (производства Bachem, Torrence, CA, США) из общего связанного (I)грелина.
Выбранные предпочтительные варианты осуществления тестировали с использованием теста связывания рецептора, описанного выше, и результаты приведены в таблицах 2А и 2В, представленных ниже.
<u>Таблица 2A</u>
Значения Ki в тесте связывания рецептора для выбранных соединений
Пример #
Соединение
Ki (нM)
#48 (SEQ ID NO:40)
(Aib<sup>2,8</sup>,Glu(NH-гексил)<sup>3</sup>'<sup>17</sup>)hгрелин(1-28)-NH<sub>2</sub>
0,45
#136 (SEQ ID NO:108)
(Ac-Gly<sup>1</sup>,Aib<sup>2,8</sup>,Glu(NH-гексил)<sup>3,17</sup>)hгрелин(1-28)-NH<sub>2</sub>
2,94
#124 (SEQ ID NO:104)
(Ac-Gly<sup>1</sup>,Aib<sup>2</sup>,Glu(NH-гексил)<sup>3,17</sup>)hгрелин(1-28)-NH<sub>2</sub>
1,68
#166 (SEQ ID NO:126)
(Ac-Gly<sup>1</sup>, Aib<sup>2,10</sup>,Glu(NH-гексил)<sup>3</sup>,Lys(биотинил)<sup>17</sup>)hгрелин(1-28)-NH<sub>2</sub>
1,28
#70 (SEQ ID NO:50)
(Aib<sup>1,2,10</sup>,Glu(NH-гексил)<sup>3,7</sup>)hгрелин(1-28)-NH<sub>2</sub>
0,63
#158 (SEQ ID NO:118)
(Ac-Aib<sup>1</sup>,Aib<sup>2,10</sup>,Glu(NH-гексил)<sup>3,17</sup>)hгрелин(1-28)-NH<sub>2</sub>
24,44
#146 (SEQ ID NO:112)
(Ac-Gly<sup>1</sup>,Aib<sup>2,10</sup>,Glu(NH-гексил)<sup>3,17</sup>)hгрелин(1-28)-NH<sub>2</sub>
0,99
#78 (SEQ ID NO:58)
(Lys(биотинил)<sup>17</sup>)hгрелин(1-28)-NH<sub>2</sub>
0,07
<u>Таблица 2В</u>
Значения Ki в тесте связывания рецептора для выбранных соединений
Пример #
Соединение
Ki (нM)
#58 (SEQ ID NO:44)
(Aib<sup>2,10</sup>,Glu(NH-гексил)<sup>3,17</sup>)hгрелин(1-28)-NH<sub>2</sub>
0,40
#217 (SEQ ID NO:177)
(Aib<sup>2</sup>,Lys(миристил)<sup>17</sup>)hгрелин(1-28)-NH<sub>2</sub>
0,16
#219 (SEQ ID NO:180)
(Aib<sup>2,8</sup>,Ser<sup>3</sup>,Glu(NH-гексил)<sup>17</sup>)hгрелин(1-28)-NH<sub>2</sub>
214
2. Тесты определения функциональной активности GHS-R
А. Внутриклеточная активация iCa
, опосредованная рецептором GSН, в условиях in vitro
2+
2+
6
2+
Получали указанные выше клетки СНО-К1, экспрессирующие человеческий рецептор GSН, инкубацией в смеси 0,3% ЭДТА/забуференный фосфатом физиологический раствор при 25°С; затем клетки промывали 2 раза при центрифугировании. Промытые клетки ресуспендировали в забуференном фосфатом растворе Хэнкса (HBSS) для включения флуоресцентного индикатора Ca Fura-2АМ. Клеточные суспензии с титром примерно 10 клеток/мл инкубировали с 2 мкМ Fura-2АМ примерно в течение 30 мин примерно при 25°С. Не связанный Fura-2АМ удаляли центрифугированием дважды в HBSS и конечные суспензии переносили в спектрофлуорометр (модель Hitachi F-2000 Tokyo, Япония), снабженный магнитным перемешивающим механизмом и термостатируемой кюветой. После уравновешивания при 37°С добавляли аналоги грелина для определения внутриклеточной активации Ca. Длина волны возбуждения и эмиссии равнялись соответственно 340 и 510 нм. С использованием данного аналитического метода было установлено, что соединения из примеров 124 и 136 проявляют антагонистическую активность на рецепторе грелина.
В. Супрессия/высвобождение GH в условиях in vivo
Как это хорошо известно в данной области, соединения можно тестировать на их способность стимулировать или подавлять высвобождение GH в условиях in vivo (Deghenghi R. et al., Life Sciences (1994), 54(18): 1321-8; и международная заявка на патент PCT/EP01/07929 [WO 02/08250]. Для оценки способности соединения стимулировать высвобождение GH в условиях in vivo выбранное соединение в дозе, составляющей примерно 300 мг/кг, вводят подкожно 10-дневным крысятам. Примерно через 15 мин после введения определяют GH в крови и проводят сравнение концентраций GH у крыс после введения контрольного растворителя.
Аналогично выбранные соединения можно тестировать на их способности оказывать антагонистическое действие в отношении индуцированной грелином секреции GH в условиях in vivo. Соединение по настоящей заявке в дозе 300 мг/кг следует вводить подкожно 10-дневным крысятам вместе с грелином. Затем примерно через 15 мин после инъекции определяют концентрацию GH в крови у крыс и сравнивают с уровнем GH у крыс после введения одного грелина.
Введение
th
nd
Аналоги грелина можно формулировать и вводить субъекту с использованием приведенных здесь указаний наряду с методами, хорошо известными в данной области. Предпочтительный путь введения обеспечивает то, что эффективное количество соединения достигает мишени. Руководства для фармацевтического введения в общем описаны, например, в Remington's Pharmaceutical Sciences 18 Edition, Ed. Gennaro, Mack Publishing, 1990, и Modem Pharmaceutics 2 Edition, Eds. Banker and Rhodes, Marcel Dekker, Inc., 1990, оба эти источника включены в данном документе для сведения.
Аналоги грелина можно получить в виде кислых или основных солей. Фармацевтически приемлемые соли (в виде водорастворимых или растворимых в масле или диспергируемых продуктов) включают обычные, не токсичные соли или соли четвертичного аммония, полученные из неорганических или органических кислот или оснований. Примеры таких солей включают, но не ограничиваются этим, аддитивные соли кислоты, такие как ацетат, адипат, альгинат, аспартат, бензоат, бензолсульфонат, бисульфат, бутират, цитрат, камфорат, камфорсульфонат, циклопентанпропионат, диглюконат, додецилсульфат, этансульфонат, фумарат, глюкогептаноат, глицерофосфат, гемисульфат, гептаноат, гексаноат, гидрохлорид, гидробромид, гидроиодид, 2-оксиэтансульфонат, лактат, малеат, метансульфонат, 2-нафталинсульфонат, никотинат, оксалат, памоат, пектинат, персульфат, 3-фенилпропионат, пикрат, пивалат, пропионат, сукцинат, тартрат, тиоцианат, тозилат и ундеканоат; и основные соли, такие как соли аммония, соли щелочных металлов, такие как соли натрия и калия, соли щелочно-земельных металлов, такие как соли кальция и магния, соли органических оснований, такие как соли дициклогексиламина, N-метил-D-глюкамина, и соли аминокислот, таких как аргинина и лизина.
Аналоги грелина можно вводить с использованием различных путей, включая пероральный и интраназальный, или введение через кожу и слизистые. Активные ингредиенты для перорального введения в виде суспензии можно получить, следуя методам, хорошо известным в области фармацевтической формуляции, и они могут содержать микрокристаллическую целлюлозу для придания объема, альгиновую кислоту или альгинат натрия в качестве суспендирующего вещества, метилцеллюлозу в качестве вещества, увеличивающего вязкость, и подсластители/вкусовые вещества. В виде таблеток с немедленным высвобождением фармацевтические композиции могут содержать микрокристаллическую целлюлозу, дикальций фосфат, крахмал, стеарат магния и лактозу и/или другие вспомогательные вещества, связующие вещества, наполнители, разрыхлители, разбавители и скользящие вещества.
Можно приготовить композиции для интраназального аэрозольного или ингаляционного введения, например, в виде растворов на физиологическом растворе с использованием бензилового спирта или других подходящих консервантов, усилителей всасывания в целях повышения биодоступности, с использованием фторуглеродов и/или использованием других солюбилизирующих или диспергирующих веществ.
Аналоги грелина также можно вводить внутривенно (в виде болюса и инфузии), внутрибрюшинно, подкожно, местно, с или без окклюзии, или внутримышечно. При инъекционном введении инъекционный раствор или суспензию можно формулировать с использованием подходящих, не токсичных, приемлемых для парентерального введения разбавителей или растворителей, таких как раствор Рингера или изотонический раствор хлорида натрия, или подходящих диспергирующих или смачивающих веществ, таких как стерильные, мягкие, жирные масла, включая синтетические моно- или диглицериды и жирные кислоты, например олеиновую кислоту.
Подходящие схемы введения предпочтительно устанавливают, принимая во внимание факторы, хорошо известные в данной области, включая тип субъекта, которому проводят введения; возраст, массу, пол и физическое состояние субъекта; путь введения; функцию почек и печени у субъекта; желаемый эффект и конкретное используемое соединение.
Для точного определения оптимальных концентраций лекарственного препарата в пределах, обеспечивающих эффективность без проявления токсичности, необходима схема, основанная на кинетике доступности лекарственного препарата в местах-мишенях. Это включает определение распределения, равновесия и выделения препарата. Полагается, что суточная доза для субъекта находится в пределах от 0,01 до 1000 мг на субъекта в сутки.
Аналоги грелина можно обеспечить в наборе. Как правило, такой набор содержит активное соединение в лекарственных формах для введения. Лекарственная форма содержит достаточное количество активного соединения так, чтобы желаемое действие можно было получить при введении субъекту через регулярные интервалы времени, например, от 1 до 6 раз в сутки, курсом продолжительностью 1 или более суток. Предпочтительно набор содержит инструкции с указаниями по применению лекарственной формы для достижения желаемого эффекта и количества лекарственной формы для приема в течение указанного периода времени.
Изобретение описано в иллюстративной форме и следует понимать, что использованная терминология предназначена для описания словами в большей степени, чем ограничения. Очевидно, с учетом приведенных выше наставлений возможны многие модификации и вариации. Следовательно, следует понимать, что в объеме прилагаемой формулы изобретение можно использовать на практике иначе, чем конкретно описано в данном документе.
Патенты и научная литература, приведенные в данном документе, представляют знания, известные специалистам в данной области. Все патенты, публикации патентов и другие публикации, цитированные в данном документе, в полном объеме включены здесь для сведения.