КОМПОЗИЦИИ И СПОСОБЫ, ВКЛЮЧАЮЩИЕ ВАРИАНТЫ ЦЕЛЛЮЛАЗЫ СО СНИЖЕННЫМ СРОДСТВОМ К НЕЦЕЛЛЮЛОЗНЫМ МАТЕРИАЛАМ

1. Выделенный вариант целлюлазы, который является зрелой формой, обладающей целлюлазной активностью и включающей замену в одном или более положениях, выбираемых из группы, состоящей из 63, 77, 129, 147, 153, 157, 161, 194, 197, 203, 237, 239, 247, 254, 281, 285, 288, 289, 294, 327, 339, 344, 356, 378 и 382, причем положения пронумерованы в соответствии с аминокислотной последовательностью эталонной целлобиогидролазы II (CBH2), представленной в SEQ ID NO:3, а замена в одном или более положениях является причиной того, что вариант целлюлазы имеет более отрицательный результирующий заряд, чем эталонная CBH2.
2. Выделенный вариант целлюлазы по п.1, в котором замена в одном или более положениях включает удаление одного или более положительных зарядов.
3. Выделенный вариант целлюлазы по п.2, в котором удаление одного или более положительных зарядов включает замену лизина или аргинина нейтральной аминокислотой.
4. Выделенный вариант целлюлазы по п.1, в котором замена в одном или более положениях включает добавление одного или более отрицательных зарядов.
5. Выделенный вариант целлюлазы по п.4, в котором добавление одного или более отрицательных зарядов включает замену нейтральной аминокислоты отрицательно заряженной аминокислотой.
6. Выделенный вариант целлюлазы по п.1, в котором замена в одном или более положениях включает удаление одного или более положительных зарядов и добавление одного или более отрицательных зарядов.
7. Выделенный вариант целлюлазы по п.6, в котором удаление одного или более положительных зарядов и добавление одного или более отрицательных зарядов включает замену лизина или аргинина отрицательно заряженной аминокислотой.
8. Выделенный вариант целлюлазы по п.1, в котором замена в одном или более положениях включает одну или более замен, выбираемых из группы, состоящей из K129E, K157E, K194E, K288E, K327E, K356E, R63Q, R77Q, R153Q, R203Q, R294Q, R378Q, N161D, N197D, N237D, N247D, N254D, N285D, N289D, N339D, N344D, N382D, Q147E, Q204E, Q239E и Q281E, причем положения пронумерованы в соответствии с аминокислотной последовательностью эталонной целлобиогидролазы II (CBH2), представленной в SEQ ID NO:3.
9. Выделенный вариант целлюлазы по п.1, который включает дополнительную замену в одном или более дополнительных положениях, выбираемых из группы, состоящей из 146, 151, 189, 208, 211, 244, 277 и 405, причем дополнительные положения пронумерованы в соответствии с аминокислотной последовательностью эталонной целлобиогидролазы II (CBH2), представленной в SEQ ID NO:3.
10. Выделенный вариант целлюлазы по п.9, в котором дополнительная замена в одном или более дополнительных положениях включает замену аспарагиновой кислоты или глутаминовой кислоты нейтральной аминокислотой.
11. Выделенный вариант целлюлазы по п.9, в котором дополнительная замена в одном или более дополнительных положениях включает одну или более замен из группы, состоящей из D151N, D189N, D211N, D277N, D405N, E146Q, E208Q и E244Q, причем положения пронумерованы в соответствии с аминокислотной последовательностью эталонной целлобиогидролазы II (CBH2), представленной в SEQ ID NO:3.
12. Выделенный вариант целлюлазы по п.1, в котором замену в одном или более положениях выбирают из группы, состоящей из 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 и 10 положений.
13. Выделенный вариант целлюлазы по п.1, который происходит из исходной целлюлазы, выбираемой из группы, состоящей из CBH2 Hypocrea jecorina, CBH2 Hypocrea koningii, CBH2 Humicola insolens, CBH2 Acremonium cellulolyticus, CBH2 Agaricus bisporus, EG Fusarium osysporum, CBH2 Phanerochaete chrysosporium, CBH2 Talaromyces emersonii, CBH2 Thermobifida fusca 6B/E3, EG Thermobifida fusca 6A/E2 и EG CenA Cellulomonas fimi.
14. Выделенный вариант целлюлазы по п.1, который происходит из исходной целлюлазы, аминокислотная последовательность которой идентична, по меньшей мере, на 75% члену группы, состоящей из SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:9, SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:11, SEQ ID NO:12 и SEQ ID NO:13.
15. Выделенный вариант целлюлазы по п.1, в котором более отрицательный результирующий заряд по сравнению с эталонной CBH2 составляет -1 или -2.
16. Способ преобразования биомассы в сахара, включающий приведение указанной биомассы в контакт с вариантом целлюлазы по п.1.
17. Способ продуцирования топлива, включающий
приведение композиции биомассы в контакт с ферментной композицией, включающей вариант целлюлазы по п.1, для получения сахарного раствора и
культивирование сахарного раствора с ферментирующим микроорганизмом в условиях, достаточных для продуцирования топлива.
18. Вариант целлюлазы, который является зрелой формой, обладающей целлюлазной активностью и включающей химическую модификацию остатка лизина для удаления положительного заряда остатка лизина.
19. Вариант целлюлазы по п.18, в котором химическая модификация включает обработку соединением, выбираемым из группы, состоящей из янтарного ангидрида, ацетоксиянтарного ангидрида, малеинового ангидрида, диоксиянтарного ангидрида, фталевого ангидрида, тримеллитового ангидрида, цис-аконитового ангидрида, трет-нитрофталевого ангидрида, уксусного ангидрида, масляного ангидрида, изомасляного ангидрида, капронового ангидрида, валерианового ангидрида, изовалерианового ангидрида и триметилуксусного ангидрида.
20. Вариант целлюлазы по п.18, который происходит из исходной целлюлазы, выбираемой из группы, состоящей из целлобиогидролазы I Hypocrea jecorina, целлобиогидролазы II Hypocrea jecorina, эндоглюканазы I Hypocrea jecorina, эндоглюканазы II Hypocrea jecorina и бета-глюкозидазы Hypocrea jecorina.
21. Вариант целлюлазы по п.18, который происходит из исходной целлюлазы, выбираемой из группы, состоящей из CBH2 Hypocrea jecorina, CBH2 Hypocrea koningii, CBH2 Humicola insolens, CBH2 Acremonium cellulolyticus, CBH2 Agaricus bisporus, EG Fusarium osysporum, CBH2 Phanerochaete chrysosporium, CBH2 Talaromyces emersonii, CBH2 Thermobifida fusca 6B/E3, EG Thermobifida fusca 6A/E2 и EG CenA Cellulomonas fimi.
22. Вариант целлюлазы по п.18, который происходит из исходной целлюлазы, аминокислотная последовательность которой идентична, по меньшей мере, на 75% члену группы, состоящей из SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:9, SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:11, SEQ ID NO:12 и SEQ ID NO:13.
23. Вариант целлюлазы по п.18, который включает замену в одном или более положениях, выбираемых из группы, состоящей из 63, 77, 129, 147, 153, 157, 161, 194, 197, 203, 237, 239, 247, 254, 281, 285, 288, 289, 294, 327, 339, 344, 356, 378 и 382, причем положения пронумерованы в соответствии с аминокислотной последовательностью эталонной целлобиогидролазы II (CBH2), представленной в SEQ ID NO:3.