СРЕДСТВО ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ ГЕПАТОЗА У СВИНЕЙ
AGENT FOR PIG HEPATOSIS PREVENTION

Изобретение относится к ветеринарии и может быть использовано для профилактики гепатоза у свиней.
Известно средство для профилактики гепатоза у свиней в виде 0,037%-ного раствора натрия гипохлорита, который вводят внутрибрюшинно в дозе 5 мл/кг массы тела. (1)
Использование этого средства требует приготовления гипохлорита натрия с использованием специального прибора - электролизера, что значительно усложняет и повышает стоимость профилактики.
Известно средство профилактики гепатоза у свиней в виде сорбента СВ-1, который вводят в рацион ежедневно в течение 9 дней в дозе 1,5 г/гол. (2)
Недостатком данного средства является необходимость ежедневного добавления его в корм, что повышает себестоимость производства.
Известно средство для профилактики гепатоза у свиней - Липамид - амид 6,8-дитиооктановой кислоты. Как активный метаболит он обладает гепатотропным, детоксицирующим и желчегонным действием, увеличивает диурез, стимулирует рост животных.
Препарат поросятам (возраст 2,5-3 месяца) дают с кормом на протяжении 28 дней в дозе 5 мг/кг массы тела.
Было установлено, что у поросят с клиническими признаками гепатоза, получавших липамид, уже на 6-7-й день исчезают признаки диареи, улучшается аппетит. Клинически и по показателям физиологического состояния животные были здоровы. Среднесуточный прирост массы свиней составлял 437 г. (5)
Недостатком данного средства является необходимость ежедневного добавления его в корм и возможные осложнения после применения.
Известны средства профилактики гепатоза у свиней: дипромонит с витамином С, витамин U и С (метавит) и витамины U и Е (токсовит). Препараты дают по следующей схеме: дипромонит и витамин С в соотношении 1:1 с 15-20-го по 60-65-й дни жизни в дозе 20 мг/кг массы тела, метавит в соотношении 1:1 в дозе 0,2 мл/кг массы тела и токсовит в соотношении 1:0,5 в дозе 1 мл/кг массы тела. Случаев заболевания гепатозом подопытных животных не наблюдали. (6)
Недостатком данных комплексных средств является их высокая стоимость и возможность передозировки при применении.
Известно средство профилактики гепатоза у свиней - селенит натрия. В хозяйствах, где отмечено массовое заболевание гепатозом, профилактическую обработку натрия селенитом необходимо проводить дважды. Первый раз в возрасте 5-7 дней, второй - в 30-дневном в дозе 0,1-0,2 мл 0,1%-ного раствора на 1 кг массы тела.
Там, где от гепатоза поросята погибают в самом раннем возрасте, препарат вводят супоросным свиноматкам однократно за 20-25 дней до опороса из расчета 1 мл на 10 кг веса. Поросятам, родившимся от таких свиноматок, натрия селенит вводят один раз в 10-дневном возрасте. (4)
Недостатком данного средства является его высокая токсичность при передозировке и возможная массовая гибель свиней.
Известно средство для профилактики гепатоза свиней - атигепатотоксическая сыворотка. Применение малых доз сыворотки (0,2 ед.) однократно подкожно или внутримышечно позволяет нормализовать нарушенное в результате патологического процесса функциональное состояние печени. (3)
Достоинством данного средства является однократное применение и низкая стоимость.
Данное средство, наиболее близкое по технической сущности и выбранное за прототип, обладает следующим недостатком: для эффективного действия антигепатотоксической сыворотки необходимо определить иммунный статус поголовья и в зависимости от него корректировать дозу антигепатотоксической сыворотки.
Целью изобретения является разработка средства профилактики гепатоза у свиней, позволяющего профилактировать заболевания печени и стимулировать органы иммунной системы. Поставленная цель достигается тем, что дополнительно к антигепатотоксической сыворотке добавляется антиспленотоксическая сыворотка и лейкоцитарная плазма, которые усиливают действие антигепатотоксической сыворотки и повышают естественную резистентность организма, что очень важно при гепатозе.
Средство для профилактики гепатоза у свиней представляет собой прозрачную розовую жидкость с незначительным осадком, легко разбивающимся при встряхивании. В 1 мл препарата содержится от 0,9-1,15 титровочных единиц антигепатотоксической и антиспленотоксической сывороток по реакции связывания комплемента и лейкоцитарная плазма с актиностью 90-110 эмбриональных единиц активности в 1 мл (ЭЕА/мл), фенол - 0,004-0,005 мг.
Препарат должен быть стерильным, нетоксичным и апирогенным.
Срок годности препарата при хранении в температуре +5 - +7°С - 2 года.
Предлагаемая схема получения средства для профилактики гепатоза у свиней состоит из следующих этапов:
1. Получение антигена из печени. Для приготовления антигена из печени используют печень здоровых свиней. Кусочки печени 4-6 раз отмывают от крови 10-кратным объемом изотонического раствора натрия хлорида. Кусочки измельчают, растирают в ступке со стеклом и разводят 0,85% раствором натрия хлорида до 10%-ной концентрации. Полученную суспензию центрифугируют 9-10 минут при 2500-3000 об/мин и в качестве антигена используют надосадочную жидкость. Антиген осветляют пятикратным замораживанием и оттаиванием с последующим центрифугированием при 7000-8000 об/мин в течение 9-10 минут. Хранят антиген в замороженном состоянии.
2. Получение антигена из селезенки. Для приготовления антигена из селезенки используют селезенку здоровых свиней. Кусочки селезенки 4-6 раз отмывают от крови 10-кратным объемом изотонического раствора натрия хлорида. Кусочки измельчают, растирают в ступке со стеклом и разводят 0,85% раствором натрия хлорида до 10%-ной концентрации. Полученную суспензию центрифугируют 9-10 минут при 2500-3000 об/мин и в качестве антигена используют надосадочную жидкость. Антиген осветляют пятикратным замораживанием и оттаиванием с последующим центрифугированием при 7000-8000 об/мин в течение 9-10 минут. Хранят антиген в замороженном состоянии.
3. Выбор животных-доноров. Для приготовления средства для профилактики гепатоза у свиней в качестве доноров пригодны следующие виды: лошади, кролики, крупный и мелкий рогатый скот. Доноры должны быть свободны от инфекционных заболеваний и пройти карантинирование.
4. Получение антигепатотоксической сыворотки. Антигепатотоксическую сыворотку получают путем гипериммунизации доноров по схеме: первое введение антигена проводят подкожно в области левой лопатки и правой подколенной ямки; второе введение - через 6-8 дней - подкожно в области правой лопатки и левой подколенной ямки; третье введение проводят через такой же срок, как и второе, - внутривенно и подкожно в вышеперечисленные точки. Через 6-8 дней после третьего введения антигена делают пробный забор крови и определяют титр полученной антигепатотоксической сыворотки в реакции связывания комплемента. При наличии титра не менее 1:160-1:200 проводят забор крови. Полученную кровь помещают в термостат на 29-30 минут при 36-37°С, затем в стерильных условиях отделяют сгусток от стенок и оставляют пробирку в холодильнике для лучшей ретракции сгустка до следующего дня. Образовавшуюся сыворотку отсасывают и консервируют фенолом до 0,5%-ной концентрации вещества в сыворотке.
5. Получение антиспленотоксической сыворотки. Антиспленотоксическую сыворотку получают путем гипериммунизации доноров по схеме: первое введение антигена проводят подкожно в области левой лопатки и правой подколенной ямки; второе введение - через 6-8 дней - подкожно в области правой лопатки и левой подколенной ямки; третье введение проводят через такой же срок, как и второе, - внутривенно и подкожно в перечисленные выше точки. Через 6-8 дней после третьего введения антигена делают пробный забор крови и определяют титр полученной антиспленотоксической сыворотки в реакции связывания комплемента. При наличии титра не менее 1:160-1:200 проводят забор крови. Полученную кровь помещают в термостат на 29-30 минут при 36-37°С, затем в стерильных условиях отделяют сгусток от стенок и оставляют пробирку в холодильнике для лучшей ретракции сгустка до следующего дня. Образовавшуюся сыворотку отсасывают и консервируют фенолом до 0,5%-ной концентрации вещества в сыворотке.
6. Получение лейкоцитарной плазмы. От здоровых свиней массой 100-110 кг при убое собирают кровь в стерильные стеклянные литровые цилиндры, предварительно добавив туда 100 мл 2%-ного раствора трилона Б.
Для ускорения оседания эритроцитов к крови добавляют 70 мл 5%-ного раствора поливинилового спирта, аккуратно смешивают и отстаивают смесь в течение часа.
После оседания эритроцитов плазму со взвешенными в ней лейкоцитами отсасывают и разливают в стерильные колбы, куда добавляют для устранения возможного бактериального загрязнения по 150-200 ЕД пенициллина и стрептомицина на 1 мл плазмы. При этом в плазме должно содержаться от 16 до 20 тыс. лейкоцитов в 1 мл.
Колбы со взвесью лейкоцитов в плазме помещают в термостат и инкубируют при температуре 38-39°С в течение 48-72 часов.
Затем инкубированную плазму центрифугируют при 2,5-3,0 тыс.об/мин в течение 20 минут и проверяют активность на развивающихся 10-дневных куриных эмбрионах. Активность плазмы в эмбриональных единицах активность должна составлять не менее 90-110 ЭЕА/мл.
7. Получение средства для профилактики гепатоза у свиней. Для получения средства для профилактики гепатоза у свиней антигепатотоксическую, антиспленотоксическую сыворотки и лейкоцитарную плазму смешивают со стерильным физиологическим раствором, консервированным фенолом до 0,5%-ной концентрации с таким расчетом, чтобы в 1,0 мл его содержалось по 0,9-1,15 титровочных единиц антигепатотоксической и антиспленотоксической сывороток по реакции связывания комплемента и лейкоцитарная плазма с активностью 90-110 ЭЕА/мл.
Сравнительный анализ заявленного препарата со средством, выбранным за прототип, показал, что средство для профилактики гепатоза у свиней обладает следующими отличительными признаками:
- дополнительно включает антиспленотоксическую сыворотку в количестве 0,9-1,15 титровочных единиц по реакции связывания комплемента и лейкоцитарную плазму с активностью 90-110 ЭЕА/мл, а антигепатотоксическая сыворотка используется с активностью 0,9-1,15 титровочных единиц по реакции связывания комплемента.
Наличие отличительных от прототипа признаков обеспечивает соответствие заявляемого технического решения критерию «новизна»: из уровня техники неизвестны такие биологически активные препараты, содержащие одновременно в 1,0 мл по 0,9-1,15 титровочных единиц антигепатотоксической и антиспленотоксической сывороток по реакции связывания комплемента и лейкоцитарную плазму с активностью 90-110 ЭЕА/мл.
Проведенные испытания средства для профилактики гепатоза у свиней подтверждают его преимущества перед препаратом-прототипом.
Пример выполнения: схема получения средства для профилактики гепатоза у свиней.
1. Получение антигена из печени. Для приготовления антигена из печени использовали печень здоровых свиней. Кусочки печени 5 раз отмывали от крови 10-кратным объемом изотонического раствора натрия хлорида. Кусочки измельчали, растирали в ступке со стеклом и разводили 0,85% раствором натрия хлорида до 10%-ной концентрации. Полученную суспензию центрифугировали 10 минут при 3000 об/мин и в качестве антигена использовали надосадочную жидкость. Антиген осветляли пятикратным замораживанием и оттаиванием с последующим центрифугированием при 8000 об/мин в течение 10 минут. Хранили антиген в замороженном состоянии.
2. Получение антигена из селезенки. Для приготовления антигена из селезенки использовали селезенку здоровых свиней. Кусочки селезенки 5 раз отмывали от крови 10-кратным объемом изотонического раствора натрия хлорида. Кусочки измельчали, растирали в ступке со стеклом и разводили 0,85% раствором натрия хлорида до 10%-ной концентрации. Полученную суспензию центрифугировали 10 минут при 3000 об/мин и в качестве антигена использовали надосадочную жидкость. Антиген осветляли пятикратным замораживанием и оттаиванием с последующим центрифугированием при 8000 об/мин в течение 10 минут. Хранили антиген в замороженном состоянии.
3. В качестве донора использовали здоровых кроликов, прошедших карантинирование.
4. Получение антигепатотоксической сыворотки. Антигепатотоксическую сыворотку получали путем гипериммунизации доноров по схеме: первое введение антигена проводили подкожно в области левой лопатки и правой подколенной ямки в дозе 40 мг белка в 1 мл; второе введение - через 7 дней - подкожно в области правой лопатки и левой подколенной ямки в дозе 60 мг белка в 1 мл; третье введение проводили через такой же срок, как и второе, - внутривенно в дозе 80 мг белка в 1 мл и подкожно в дозе 50 мг в 1 мл в перечисленные выше точки. Через 7 дней после третьего введения антигена делали пробный забор крови и определяли титр полученной антигепатотоксической сыворотки в реакции связывания комплемента. При наличии титра не менее 1:160-1:200 проводили забор крови у кролика в количестве 50 мл. Полученную кровь помещали в термостат на 30 минут при 37°С, затем в стерильных условиях отделяли сгусток от стенок и оставляли пробирку в холодильнике для лучшей ретракции сгустка до следующего дня. Образовавшуюся сыворотку отсасывали, консервировали фенолом до 0,5%-ной концентрации вещества в сыворотке.
5. Получение антиспленотоксической сыворотки. Антиспленотоксическую сыворотку получали путем гипериммунизации доноров по схеме: первое введение антигена проводили подкожно в области левой лопатки и правой подколенной ямки в дозе 40 мг белка в 1 мл; второе введение - через 7 дней - подкожно в области правой лопатки и левой подколенной ямки в дозе 60 мг белка в 1 мл; третье введение проводили через такой же срок, как и второе, - внутривенно в дозе 80 мг белка в 1 мл и подкожно в дозе 50 мг в 1 мл в перечисленные выше точки. Через 7 дней после третьего введения антигена делали пробный забор крови и определяли титр полученной антиспленотоксической сыворотки в реакции связывания комплемента. При наличии титра не менее 1:160-1:200 проводили забор крови у кролика в количестве 50 мл. Полученную кровь помещали в термостат на 30 минут при 37°С, затем в стерильных условиях отделяли сгусток от стенок и оставляли пробирку в холодильнике для лучшей ретракции сгустка до следующего дня. Образовавшуюся сыворотку отсасывали и консервировали фенолом до 0,5%-ной концентрации вещества в сыворотке.
6. Получение лейкоцитарной плазмы. От здоровых свиней массой 100-110 кг при убое собирали кровь в стерильные стеклянные литровые цилиндры, предварительно добавив туда 100 мл 2%-ного раствора трилона Б.
Для ускорения оседания эритроцитов к крови добавляли 70 мл 5%-ного раствора поливинилового спирта, аккуратно смешивали и отстаивали смесь в течение часа.
После оседания эритроцитов плазму со взвешенными в ней лейкоцитами отсасывали и разливали в стерильные колбы, куда добавляли для устранения возможного бактериального загрязнения по 200 ЕД пенициллина и стрептомицина на 1 мл плазмы. При этом в плазме должно содержаться от 16 до 20 тыс. лейкоцитов в 1 мл.
Колбы со взвесью лейкоцитов в плазме помещали в термостат и инкубировали при температуре 38,5°С в течение 72 часов.
Затем инкубированную плазму центрифугировали при 3,0 тыс. об/мин в течение 20 минут и проверяли активность на развивающихся 10-дневных куриных эмбрионах. Активность плазмы в эмбриональных единицах активность должна составлять не менее 100 ЭЕА/мл.
7. Получение средства для профилактики гепатоза у свиней. Для получения средства для профилактики гепатоза у свиней антигепатотоксическую, антиспленотоксическую сыворотки и лейкоцитарную плазму смешивали со стерильным физиологическим раствором, консервированным фенолом до 0,5%-ной концентрации с таким расчетом, чтобы в 1,0 мл его содержалось по 1,0 титровочных единиц антигепатотоксической и антиспленотоксической сывороток по реакции связывания комплемента и лейкоцитарная плазма с активностью 100 ЭЕА/мл.
Для определения оптимальной дозы средства для профилактики гепатоза у свиней был поставлен опыт.
С этой целью 100 поросят разделили по принципу пар-аналогов на четыре группы по 25 голов в каждой группе. Все поросята находились в одинаковых условиях кормления и содержания.
Поросята первой группы служили контролем, им средство для профилактики гепатоза у свиней не вводили.
Поросятам второй группы вводили средство для профилактики гепатоза у свиней в дозе 0,1 мл/кг живой массы.
Поросятам третьей группы вводили средство для профилактики гепатоза у свиней в дозе 0,2 мл/кг живой массы.
Поросятам четвертой группы вводили средство для профилактики гепатоза у свиней в дозе 0,4 мл/кг живой массы.
Наблюдение за животными проводили в течение 1 месяца, при этом учитывались количество павших поросят и особенности патолого-анатомического вскрытия трупов.
Результаты проведенного опыта отражены в таблицах 1 и 2.
1. Результаты определения оптимальной дозы средства для профилактики гепатоза у свиней
Группа
Количество животных
Доза средство для профилактики гепатоза у свиней в мл/кг
Пало
Количество павших с диагнозом гепатоз
1 группа
25
-
1
1
2 группа
25
0,1
1
1
3 группа
25
0,2
-
-
4 группа
25
0,4
-
-
Из данных таблицы следует, наиболее оптимальными дозами средства для профилактики гепатоза у свиней являются дозы 0,2 и 0,4 мл/кг. В данных группах падежа подопытных поросят не было. В то время как в первой опытной (доза 0,1 мл/кг) и контрольной группах пало по одному поросенку.
2. Результаты биохимического исследования сыворотки крови поросят при применении различных доз средства для профилактики гепатоза у свиней
Показатель
Группы животных
1 группа
2 группа
3 группа
4 группа
Общий белок, г/л
73,0±0,3
86,0±2,0*
89,0±0,3**
88,0±1,0*
Альбумины, %
33,7±0,2
36,5±1,3
39,8±0,4**
38,8±0,7*
Альфа-глобулины, %
14,8±0,6
16,7±0,1
16,5±0,1
16,40±0,09
Бета-глобулины, %
12,10±0,08
14,8±0,2**
15,2±0,2**
14,6±0,2*
Гамма-глобулины, %
31,9±0,1
28,9±0,2**
28,2±0,6*
28,3±0,7*
Соотношение А/Г
0,5
0,6
0,7
0,6
* - p<0,05, ** - p<0,01
При исследовании содержания общего белка и белковых фракций в сыворотке крови подопытных животных установлено повышение содержания общего белка во всех опытных группах по отношению к контрольной. В первой опытной группе оно составило +17,9% (p<0,05), во второй - +21,9% (p<0,01), в третьей 20,5% (p<0,05). Также в опытных группах, по сравнению с контрольной, произошло увеличение содержания альбуминов. Максимально их количество увеличилось во второй опытной группе +18,1% (p<0,01), в первой опытной группе +8,0% и в третьей группе - +15,1% (p<0,05). Во всех опытных группах произошло достоверное увеличение содержания бета-глобулинов от 20,6% до 25,6%. Содержание в сыворотке крови гамма-глобулинов в опытных группах снизилось по сравнению с контролем. Максимальным снижение было во второй опытной группе на 11,6%, в третьей группе на 11,3% и в первой на 9,4%. Все изменения носили достоверный характер. Соотношение альбуминов к глобулинам, определяющее функциональное состояние печени было в пределах нормы только у поросят второй опытной группы.
Таким образом, на основании клинико-биохимических исследований установлено, что оптимальной и экономически оправданной дозой средства для профилактики гепатоза у свиней является 0,2 мл/кг.
Сравнение эффективности действия средства для профилактики гепатоза у свиней по отношению к антигепатотоксической сыворотке проводили в опыте на боровках возрастом 30 дней, массой 9 кг.
С этой целью 50 поросят разделили по принципу пар-аналогов на две группы по 25 голов в каждой группе. Все поросята находились в одинаковых условиях кормления и содержания.
Поросята первой группы служили контролем, им вводили антигепатотоксическую сыворотку в дозе 0,2 мл/кг с содержанием антигепатотоксической сыворотки 1,0 тировочных единиц в 1 мл.
Поросятам второй группы вводили средство для профилактики гепатоза у свиней в дозе 0,2 мл на 1 кг живой массы.
Наблюдение за животными проводили в течение 1 месяца, при этом учитывались количество павших поросят и особенности патолого-анатомического вскрытия трупов.
Результаты проведенного опыта отражены в таблицах 3 и 4.
3. Влияние средства для профилактики гепатоза у свиней и антигепатотоксической сыворотки на сохранность и профилактику гепатоза у свиней
Группа
Количество животных
Пало
Диагноз при вскрытии
1 группа
25
3
3 головы - гепатоз
2 группа
25
1
1 голова - гастроэнтерит
Из данных таблицы видно, что за период наблюдения в контрольной группе сохранность составила 88%, при этом причиной падежа в контрольной группе служил гепатоз. В опытной группе пала одна голова с диагнозом гастроэнтерит.
4. Результаты биохимического исследования сыворотки крови свиней при применении средства для профилактики гепатоза у свиней и антигепатотоксической сыворотки
Показатель
Группы животных
1 группа
2 группа
Общий белок, г/л
75,0±0,9
87,8±4,0*
Альбумины, %
33,28±0,89
41,53±1,63*
Альфа-глобулины, %
18,77±0,78
16,34±0,41
Бета-глобулины, %
15,11±0,85
11,95±0,75**
Гамма-глобулины, %
32,85±0,61
30,18±1,25
Соотношение А/Г
0,5
0,7
* - p<0,05, ** - p<0,01
При исследовании содержания общего белка и белковых фракций в сыворотке крови подопытных животных установлено повышение содержания общего белка в опытной группе по отношению к контрольной на 17,1% (p<0,01). Также в опытной группе, по сравнению с контрольной, произошло увеличение содержания альбуминов. Их количество увеличилось на +24,8% (p<0,01). В опытной группе произошло достоверное уменьшение содержания бета-глобулинов на 20,9%. Содержание в сыворотке крови гамма-глобулинов в опытной группе снизилось по сравнению с контролем. Это снижение составило 8,1%. Соотношение альбуминов к глобулинам, определяющее функциональное состояние печени в опытной группе, было больше, чем в контрольной на 40% и находилось в пределах нормы в отличии от контрольной.
Указанные изменения говорят об усилении белоксинтезирующей функции печени, повышении ее метаболической активности и снижении риска возникновения гепатоза.
Средство для профилактики гепатоза у свиней вводится свиньям в дозе 0,2 мл/кг массы тела подкожно или внутримышечно.
Средство для профилактики гепатоза у свиней представляет собой прозрачную жидкость с незначительным осадком, легко разбивающимся при встряхивании. Срок годности препарата при хранении в температуре +5 - +7°С - 2 года.
Экономическая эффективность от применения средства для профилактики гепатоза у свиней составила 3,5 рублей, от применения антигепатотоксической сыворотки 0,8 рубля.
Источники информации
1. Абрамов С.С. Влияние натрия гипохлорита на нормализацию биохимических показателей крови поросят, больных гастроэнтеритом / С.С.Абрамов, В.В.Петров // Незаразные болезни животных: Матер. международ. науч. конф. - Казань, 2000. - С.60-62.
2. Великанов В.В. Натрия гипохлорит и энтеросорбент СВ-1 при токсической гепатодистрофии поросят / В.В.Великанов, С.С.Абрамов // Ветеринария. - 2000. - №12. - С.45-47.
3. Действие специфических цитотоксических сывороток на половые железы / Ю.А.Спасокукотский, Н.В.Ильчевич, Л.И.Барченко, О.В.Нищименко, Т.М.Зеленская, А.Г.Гоноровский. - К.: Наукова думка, 1977. - 216 с.
4. Кудрявцев А.П. Опыт ликвидации токсической дистрофии печени у поросят в совхозе «Ленинский» / Профилактика заболеваний сельскохозяйственных животных. Паразитарные и незаразные болезни: Сб. науч. работ СибНИВИ, вып.26. - Омск, 1976. - С.172-177.
5. Кузнецов Н. Эффективность применения липамида при гепатозе молодняка свиней / Н.Кузнецов, Т.Елизарова, А.Вислогузов, Е.Чеботарев // Свиноводство. - 2003. - №4. - С.24.
6. Кузнецов Н.И. Профилактика гепатоза у поросят / Н.И.Кузнецов, В.М.Шаронин, С.Р.Мелешкина // Ветеринария. - 1999. - №4. - С.37.