Лабораторные исследования в стоматологии

ЛАБОРАТОРНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ В СТОМАТОЛОГИИ

имел место подъём содержания ангиогенных провоспалитель-ных цитокинов - ИЛ-12, ФНОа и МСР-1. Особенно высокие концентрации данного белка выявлены в стекловидном теле у пациентов с пролиферативной диабетической ретинопатией (939,3-3346 пг/мл), с ревматогенной отслойкой сетчатки (935,63129 пг/мл). Значимых изменений МСР-1 (625-912,8 пг/мл) у пациентов с травматической отслойкой сетчатки (группа сравнения) не выявлено. Следствием воспалительных процессов становилось повышение содержания ФРЭС в стекловидном теле у пациентов с пролиферативной диабетической ретинопатией. При этом значимых изменений содержания ФРЭС у пациентов с гематогенной отслойкой сетчатки и с травматической отслойкой сетчатки не наблюдалось.

Установленное высокое содержание в стекловидном теле у пациентов с пролиферативной диабетической ретинопатией основных провоспалительных цитокинов еще раз подтверждает, что прежде всего при сахарном диабете одной из наиболее повреждаемых тканевых структур становится стекловидное тело. Накопление медиаторов воспаления в нем можно считать, с одной стороны, одним из показаний к витреоретинальным вмешательствам, с другой - показателем развития осложнений: витреальной пролиферации, геморрагических проявлений, трак-ционной отслойки сетчатки, ее ишемии.

Л.Б. Степанова, Е.А. Кирякина, Л.В. Курашвили. Лабораторная диагностика токсокароза глаз методом ИФА. ГБУЗ Пензенская ЦР

Цель исследования - показать на конкретном клиническом примере важность совместной работы врача клинико-диагностической лаборатории и клинициста.

Задача исследования - своевременно поставить правильный диагноз.

Больная В., 48 лет, обратилась к врачу-офтальмологу с жалобами на снижение зрения правого глаза, появление пятна перед взором правого глаза, больна 2 месяца.

Заболевание связывает с приобретением породистой собаки. Через 2 месяца проживания собаки в доме снизилось зрение у матери семейства. Осмотр окулиста: правый глаз - острота зрения 0,05 с коррекцией -1,5 D = 0,06, а до заболевания была 0,2 с коррекцией сферы -2 OD=0,9. В стекловидном теле диффузные помутнения. На глазном дне - гиперемия диска зрительного нерва, в макулярной области проминирующий очаг желто-белого цвета с нечеткими границами размером 2 диаметра диска. В поле зрения центральная скотамия. Сопутствующие заболевания: регионарный шейный лимфаденит, хронический эрозивный гастрит, хронический панкреатит, хронический гепатит, хронический пиелонефрит. При обследовании в общем анализе крови лейцоцитоз до 11109/л и зинофилия 12%. Поставлен диагноз:

центральный хориоретинит правого глаза. Проведено местное и общее противовоспалительное и противоотечное лечение - без заметного эффекта. В последующем проконсультирована инфекционистом, заподозрен паразитоз и проведено 2 курса лечения минтезолом и дитразином в течение 0,5 года. Зрение улучшилось: помутнение в стекловидном теле рассосалось, очаг стал плоским, появилась пигментация, но образовалось помутнение в задней капсуле хрусталика, сформировался тяж в стекловидном теле. Острота зрения правого глаза 0,05, не корригируется, в поле зрения осталась относительная скотома. В анализе крови лейкоцитоз снизился (8-109/л), нормализовалась эозинофилия до 5%. При проведении серодиагностики методом ИФА на токсока-роз начальный титр антител 1:400, после лечения минтезолом и дитразином титры в ИФА 1:200.

Через 3 мес от начала заболевания матери к врачу-окулисту обратился ее сын Р. в возрасте 20 лет, с жалобами на снижение остроты зрения левого глаза. При осмотре: острота зрения левого глаза 0,2 не корригирует (до заболевания 0,5 с коррекцией - 0,75 D = 1,0). На глазном дне на 19 часах по периферии очаг бело-желтого цвета с нечеткими границами размером в 2 диаметра диска, помутнение стекловидного тела, отсутствие макулярных рефлексов, гиперемия диска зрительного нерва, венозное полнокровие, относительная скотома. Был проконсультирован и пролечен у инфекциониста, в течение 0,5 года получил 2 курса лечения. После проведенного лечения состояние левого глаза у сына улучшилось, очаг на периферии стал плоским с четкими границами с пигментацией, но появился тяж в стекловидное тело. Острота зрения 0,2 с коррекцией -1-OD = 0,3. При проведении ИФА- диагностики начальный титр антител у сына 1:300, после лечения 1:100. Диагностический титр антител при токсокарозе при использовании метода ИФА составляет 1:800. У наблюдаемых пациентов (мать и сын) с клиникой токсокароза глаз низкий положительный результат в ИФА связан со слабым антигенным воздействием.

Так как человек является промежуточным хозяином при токсокарозе, у него протекает только личиночная стадия и не формируется взрослая особь, яиц токсокар обнаружить в кале, мокроте нельзя. Метод ИФА остается единственным, позволяющим диагностировать токсокароз.

Клинические проявления токсокароза у человека зависят от интенсивности заражающей дозы, частоты реинфекции и связаны с локализацией личинок в определенных органах и тканях, а также от состояния иммунного статуса пациента. Только тесный контакт врача КЛД и офтальмолога мог бы помочь своевременно выйти на истинный диагноз и провести патогенетическую терапию заболевания.

ЛАБОРАТОРНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ В СТОМАТОЛОГИИ

А.С. Алейников, И.В. Гайдук, Е.С. Герштейн, О.И. Косты-лева, А.М. Панин. Молекулярно-биологические маркеры воспаления в слюнном секрете околоушной слюнной железы больных хроническим протоковым сиаладенитом. ГБОУ ВПО Московский государственный медико-стоматологический университет им. А. И.Евдокимова Минздрава РФ; ФГБУ Российский онкологический научный центр им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва

Хронический сиаладенит - воспалительное заболевание околоушной слюнной железы с неясной этиологией и до конца не изученным патогенезом. В настоящее время выделяют три формы хронического сиаладенита по преимущественному поражению различных анатомических отделов слюнной железы: ин-терстициальный, паренхиматозный и протоковый. Хроническим поражением системы выводных протоков околоушной слюнной железы (протоковый сиаладенит, сиалодохит) обычно страдают люди пожилого возраста (77%), несколько чаще - женщины (57%). В патогенетических механизмах сиаладенитов особое внимание исследователи уделяют изучению секреции различ-

ных молекулярно-биологических маркеров - медиаторов острой фазы воспаления.

Цель исследования - сравнительное изучение уровней ТОТа и ИЛ-6 в слюнном секрете околоушной слюнной железы с учетом основных клинико-лабораторных показателей у больных хроническим протоковым сиаладенитом.

В исследование включены 18 пациентов в возрасте от 26 до 67 лет с хроническим протоковым сиаладенитом (женщин - 14, мужчин - 4) и 7 практически здоровых людей соответствующего возраста. У всех пациентов исследуемой группы в анамнезе выявлено обострение хронического воспалительного процесса в виде одностороннего болезненного увеличения околоушной слюнной железы и выделения гноя из выводного протока. Острые воспалительные явления купировали при проведении стандартной комплексной терапии, которая включала антибактериальную, противовоспалительную, десенсибилизирующую, иммунокорригирующую, а также местное лечение в виде компресса с 30% димексидом, новокаиновые блокады по Вишневскому, внутрипротоковое введение стерильного 0,9%

КЛИНИЧЕСКАЯ ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА, № 9, 2013

физиологического раствора в объеме 0,1-0,2 мл. После стихания воспалительных явлений первый забор секрета из пораженной слюнной железы проводили через 20 (±7) сут, второй забор секрета проводили через 90 (±7) сут. Слюнные железы обследовали через 20 (±7) сут с использованием стандартных и специальных методов: цитологического исследования секрета, УЗИ, сиалографии (с рентгенконтрастным веществом Омнипак 350). Установили стадии хронического сиаладенита: начальная - расширение главного выводного протока составило 0,24 ± 0,07 см (n = 6); клинически выраженная - 0,34 ± 0,03 см (n = 10); поздняя - 0,55 ± 0,09 см (n = 2). Сиалометрию выполняли с помощью капсулы Лешли-Ющенко-Красногорского в течение 5 мин при периодической стимуляции 3% раствором аскорбиновой кислоты. Содержание TNFa и ИЛ-6 в слюнном секрете определяли методом ELISA реактивами фирм «Invitrogen» (США) и «R&D Systems» (США) соответственно. Оптическую плотность измеряли на ридере для микропланшет ELx 800, Bio-Tek Instruments, США, при длине волны X = 450 нм. Концентрацию TNFa и ИЛ-6 в слюнном секрете выражали в пг/мл. В качестве центральной характеристики использовали медиану, для сравнения групп использовали непараметрические критерии.

TNFa. Не обнаружено достоверных различий в содержании TNFa в слюнном секрете больных хроническим протоковым сиаладенитом и у практически здоровых людей. Достоверных корреляционных связей уровней TNFa в слюнном секрете с возрастом пациентов (r = -0,2) и данными сиалометрии (r = -0,34; p = 0,2) не выявлено. Уровни TNFa, превышающие 5 пг/мл, чаще всего выявляли при таком факторе, как «солоноватый привкус» (44,4%), а также при таких неблагоприятных факторах, как большое количество пораженных протоков (50%), наличие болей (25%) и «включений» в слюнном секрете (25%), подострая (28%) и поздняя стадии (25%), возраст пациентов более 50 лет (25-40%). Различия более выражены при определенном сочетании вышеуказанных признаков. Так, в 8 пробах больных хроническим протоковым сиаладенитом при сочетании таких признаков, как боль + «солоноватый привкус» + включения в секрете слюны, частота выявления нулевых значений TNFa равнялась 37,5% (3 пациента), а показатели TNFa >5 пг/мл обнаружены у 4 больных (50%). В 14 пробах больных без сочетания вышеуказанных признаков нулевые уровни маркера обнаружены у 25 (80%) пациентов, а уровни TNFa > 5 пг/мл вообще не найдены (р = 0,0048). При сравнении уровней TNFa в слюнном секрете пациентов с хроническим протоковым сиаладенитом в период подострой стадии и в состоянии ремиссии выявлено, что у 12 больных с положительными показателями TNFa в состоянии ремиссии его уровни были достоверно ниже, чем в подострой стадии (р = 0,028, парный критерий Вилкоксона). Из 11 пациентов с нулевыми показателями TNFa в состоянии ремиссии при переходе в подострую стадию у 6 больных уровень фактора роста не изменился, у 3 - уровень TNFa возрос, но составил менее 5 пг/мл, и у 2-х больных TNFa составил 5 пг/мл и более.

ИЛ-6. В слюнном секрете практически здоровых людей уровни ИЛ-6 не превышали 3,5 пг/мл (верхнее значение 95% ДИ равнялось 3,45 пг/мл и принято за пороговое). В слюнном секрете больных хроническим протоковым сиаладенитом уровни ИЛ-6 варьировали в широких пределах - от 0,26 до 683 пг/мл. Сопоставление показателей ИЛ-6 в контроле и у больных выявило достоверные различия (р = 0,025), при этом медиана концентрации ИЛ-6 составляла 0,72 пг/мл в контроле и 3,5 пг/мл у больных. Установлено, что превышение порогового значения ИЛ-6 наблюдается у 48,5% больных (16 из 33; р = 0,019). В группе больных уровни ИЛ-6 в слюнном секрете положительно взаимосвязаны с возрастом пациентов (r = 0,36; p = 0,04). При этом частота превышения порогового уровня ИЛ-6 у больных в возрасте до 50 лет составила 37,5%, тогда как в возрасте после 50 лет она равнялась 77,7% (р = 0,039). Частота превышения порогового значения ИЛ-6 в группе контроля (3,5 пг/мл и более) была достоверно выше при следующих неблагоприятных факторах: непрозрачности слюны (многократно), наличии болей (в 3,2 раза), в подострой стадии (в 3,2 раза), наличии «солоноватого привкуса» (в 2,7 раза) и припухлости (59,3%), поражении протоков главного, второго и третьего порядка (в 4 раза), выраженной и поздней стадии (в 3,7 раза), показателях сиалометрии менее 1,3 мл (в 2,7 раза) и недостоверно вы-

ше у больных в возрасте старше 50 лет (в 2 раза). При этом более высокие медианные показатели уровня ИЛ-6 обнаружены у больных с поражением протоков главного, второго и третьего порядка (217 пг/мл), при наличии «солоноватого привкуса» (108 пг/мл), поздней стадии (54,8 пг/мл), при болях (17,8 пг/мл) и включениях в слюнном секрете (9,5 пг/мл). В то же время уровни ИЛ-6 у пациентов с полной «прозрачностью» слюны практически не отличались от таковых в группе контроля - у всех 9 больных уровни ИЛ-6 были менее 3,5 пг/мл. Таким образом, на начальном этапе хронического протокового сиаладенита экспрессия ИЛ-6 может быть незначительной, но она усиливается при большей длительности заболевания и его клинической выраженности. Многофакторный анализ показал, что из таких факторов, как припухлость, боль, количество пораженных протоков и «солоноватый привкус», содержание ИЛ-6 в наибольшей степени связано с наличием «солоноватого привкуса» (р = 0,007). Выявлена обратная корреляционная взаимосвязь показателей сиалометрии и содержания ИЛ-6 в слюнном секрете (r = -0,45; p = 0,027) в группе пациентов с хроническим протоковым сиаладенитом в возрасте до 50 лет. В то же время у 7 практически здоровых людей достоверной корреляции этих показателей не обнаружено. В группе больных хроническим протоковым сиаладенитом выявлена также достоверная положительная корреляционная связь между уровнями ИЛ-6 и TNFa в слюнном секрете (r = 0,83; p = 0,01). При сравнении уровней ИЛ-6 в слюнном секрете 12 больных хроническим протоковым сиаладенитом в ремиссии и в подострой стадии выявлено достоверное повышение ИЛ-6 у всех пациентов (р = 0,0022). Этот факт свидетельствует о том, что измерение концентрации ИЛ-6 в про-токовом слюнном секрете больных хроническим протоковым сиа-ладенитом надежно отражает клинические изменения в состоянии больного. Эти данные позволяют рекомендовать определение уровня ИЛ-6 в слюнном секрете пациентов с хроническим про-токовым сиаладенитом для контроля лечения заболевания и оценки состояния больного. Следует отметить, что, если в состоянии ремиссии у 8 из 16 (50%) пациентов уровни ИЛ-6 не превышали 1,3 пг/мл, то в подострой стадии ни в одном из 17 наблюдений значения ИЛ-6 менее 1,3 пг/мл не обнаружены (р = 0,004). Таким образом, для контроля эффективности лечения больных хроническим протоковым сиаладенитом возможно использование и более низкого порогового уровня ИЛ-6 в слюнном секрете, равного 1,3 пг/мл. Известно, что сиалометрия не всегда является отражением тяжести и наиболее важных клинических особенностей заболевания. В связи с этим полезным может оказаться определение соотношения содержания ИЛ-6 в слюнном секрете больных к показателям сиалометрии. Так, медиана этого соотношения равнялась 1 у больных в состоянии ремиссии и 15,3 - в подострой стадии (р = 0,003).

Полученные нами данные свидетельствуют о том, что показатель TNFa достоверно не различался в слюнном секрете больных хроническим протоковым сиаладенитом и в контроле, однако частота выявления уровней TNFa > 5 пг/мл достоверно выше в образцах слюнного секрета больных хроническим протоковым сиаладенитом в подострой стадии, а также при наличии фактора «солоноватый привкус», чем при его отсутствии. Кроме того, у практически здоровых людей содержание ИЛ-6 в слюнном секрете было достоверно ниже, чем у пациентов с хроническим протоковым сиаладенитом. Содержание ИЛ-6 достоверно отражало стадию заболевания, клинический характер воспалительного процесса (состояние ремиссии или подострую стадию), а также жалобы больных (на «солоноватый привкус»). Полученные данные свидетельствуют о высокой информативности уровней ИЛ-6 в слюнном секрете больных хроническим протоковым сиаладенитом, что позволяет рекомендовать определение этого цитокина в практической стоматологии для динамического наблюдения за этими пациентами.

А.В. Лепилин, Н.Б. Захарова, Н.Л. Ерокина, Д.В. Воробьев. Оценка клинико-диагностического значения параметров десневой жидкости у пациентов, находящихся на ортодонти-ческом лечении. ГБОУ ВПО Саратовский ГМУ им. В.И. Разумовского Минздрава России

До настоящего времени для оценки эффективности ортодон-тического лечения практически не используются исследования биомаркеров, характеризующих состояние тканей пародонта.

ЛАБОРАТОРНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ В ПРОФПАТОЛОГИИ

Вместе с тем установка ортодонтической аппаратуры может выступать фактором, провоцирующим заболевания пародонта. Выдвинуто предположение, что изменения взаимодействия в локальной сети цитокинов сопровождают обострение воспалительного процесса в тканях пародонта.

Для оценки клинико-диагностического значения параметров десневой жидкости у пациентов в динамике ортодонтического лечения у 40 подростков и взрослых в возрасте от 14 до 30 лет определяли гигиенические и пародонтальные индексы, проводили взятие десневой жидкости для определения цитокинов до начала ортодонтического лечения, через 1 и 12 мес после начала ортодонтического лечения. Определение содержания про-, противовоспалительных (ИЛ-1в, ИЛ-6, ИЛ-8, ФНОа, ИЛ-4) и остеогенных(Ил-18 и ИЛ-17) цитокинов в десневой жидкости выполняли методом твердофазного иммуноферментного анализа с использованием наборов реактивов фирмы «Вектор Бест» (Новосибирск). Контрольную группу пациентов составили 20 практически здоровых лиц без ортодонтической патологии с ин-тактным пародонтом. Во вторую группу вошли 20 подростков и взрослых, проходящих курс ортодонтического лечения с применением несъемной назубной аппаратуры (брекет-систем). В исследование включались подростки и взрослые с зубочелюст-ными аномалиями I-го класса по классификации Энгля.

Для ортодонтического лечения использовалась несъемная эджуайс-техника: металлические брекеты с ангулированным пазом Equilibrium фирмы Dentaurum (Германия), дуги на основе никелида титана с эффектом памяти формы Lazium и Nitanium, а также стальные дуги Proform.

Установлено, что в течение года после начала ортодонти-ческого лечения у пациентов с зубочелюстными аномалиями (2-группа) развивается снижение значений гигиенических индексов полости рта, в десневой жидкости увеличивается концентрация основной группы провоспалительных и остеогенных цитокинов.

Динамика индексных показателей у пациентов в течение первого месяца лечения свидетельствовала о развитии воспаления легкой степени тяжести в околозубных тканях. Через год после установки брекет-систем у пациентов отсутствовали жалобы на болезненность в области зубных рядов и какие-либо серьезные затруднения при осуществлении гигиены полости рта. Несмотря на снижение показателя глубины зубодесневой борозды, сохранение высокого значения индекса РМА подтверждало наличие в краевом пародонте воспаления легкой степени тяжести.

В группе пациентов с зубочелюстными аномалиями через месяц после фиксации брекет-систем в десневой жидкости увеличивалось содержание таких цитокинов, как ИЛ-6 и ИЛ-8. Через год в десневой жидкости сохранялся достаточно высокий уровень ИЛ-6 и нарастало содержание ИЛ-4 или противовоспалительных цитокинов. Через 12 месяцев у пациентов данной группы на фоне высокого содержания ИЛ-6 возрастал уровень ИЛ-4. Отмечался подъем уровня ИЛ-17 и ИЛ-18 в десневой жидкости. Это дает основание считать, что изменение концентрации в десневой жидкости провоспалительных и остеогенных цито-кинов может быть использована для оценки процессов ремоде-лирования тканей пародонта и развития осложнений в процессе ортодонтического лечения.

ЛАБОРАТОРНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ В ПРОФПАТОЛОГИИ

Л.А. Андриенко1, С.А. Песков'2, Е.Л. Потеряева2. Прогностическая значимость оценки цитокинового профиля у рабочих пылеопасных профессий. ТБУЗ НСО Государственный новосибирский областной клинический диагностический центр, 2ГБОУ ВПО Новосибирский государственный медицинский университет Минздрава России

Пылевое воздействие определяет различные нарушения здоровья за счет снижения защитно-компенсаторных реакций, приводящих к регуляторным, метаболическим и структурным изменениям в организме, и как следствие к развитию профессиональной и производственно-обусловленной патологии. Ци-токины активно участвуют в процессах формирования и регуляции защитных реакций организма, оказывая плейотропные эффекты на различные типы клеток.

Цель работы - оценить уровень про- и противовоспалительных цитокинов (ИЛ-1Р, ФНОа, ИЛ-4) при воздействии пылевых аэрозолей.

Обследовано 30 малостажированных (стаж работы менее 10 лет) и высокостажированных (стаж работы более 10 лет) рабочих пылеопасных профессий, 56 больных пневмокониозом. Содержание цитокинов ИЛ-1Р, ФНОа, ИЛ-4 определяли им-муноферментным методом в сыворотке крови («Вектор-Бест») (нормальные значения для ФНОа до 6 пг/мл ; ИЛ-1Р до 11 пг/мл; ИЛ-4 до 13 пг/мл)).

В системе цитокиновой регуляции определялся дисбаланс в сторону усиления секреции про- и противовоспалительных ци-токинов (ФНОа, ИЛ-1Р, ИЛ-4) как у малостажированных (3,0 пг/мл; 22,1 пг/мл; 55,9 пг/мл соответственно), так и высокоста-жированных рабочих (3,9 пг/мл; 23,4 пг/мл; 84,1 пг/мл соответственно). У больных пневмокониозом выявлялась гиперпродукция исследуемых цитокинов (концентрация ФНОа составила 9,8 пг/мл; ИЛ-1Р - 27,8 пг/мл; ИЛ-4 - 154,4 пг/мл).

Пылевые аэрозоли вызывают нарушение механизмов цито-киновой регуляции уже на ранних сроках воздействия фактора, что подтверждает значимость мониторинга уровня цитокинов в прогностической оценке состояния здоровья рабочих пылеопас-ных профессий.

И.В. Кудаева, Л.А. Бударина. К вопросу о формировании стандартов обследования лиц, контактирующих с ртутью.

ФГБУ ВСНЦ ЭЧ СО РАМН, Ангарск

Действующий в настоящее время приказ № 302н от 12.04.11, регламентирующий объемы обследований для работников, подвергающихся в производственной деятельности воздействию вредных факторов, расширил по отдельным видам вредностей спектр исследований. В то же время остается актуальным рассмотрение вопросов, связанных с диагностикой неспецифических нарушений, имеющих патогенетическую значимость для формирования социально-значимой сопутствующей патологии.

Цель исследования заключается в обосновании включения в перечень исследований для лиц, экспонированных ртутью, показателей липидного обмена. Для этого в динамике были исследованы показатели липидограммы 1-го уровня у 77 работников производства каустика (возраст 45 ± 1,1 года, стаж 17,1 ± 1,1). Когортный анализ показателей холестеринового обмена у обследуемых с разным стажем выявил статистически значимое увеличение уровня общего холестерина (ОХ) у лиц, проработавших 5-9 лет, на 9,0% (1,3; 18,0). В то же время снижение уровня антиатерогенной фракции холестерина и увеличение значений индекса атерогенности (ИА) наблюдалось во всех группах. Наиболее высоких значений ИА достигал у лиц со стажем работы более 15 лет. В группе работающих со стажем с 5 до 9 лет наличие сопряженности концентрации ОХ с возрастом обследуемых и экспозиционной нагрузкой ртутью г = 0,43; р = 0,01 и г = 0,37; р = 0,04 соответственно. Уровни триглицеридов и липопротеи-нов высокой плотности имели среднюю по силе связь с нагрузкой (г = 0,44; р = 0,01 и г = -0,39; р = 0,03), которая выступала в качестве предиктора для данных показателей. Таким образом, хроническое воздействие ртути вызывало у работающих изменение показателей обмена холестерина проатерогенной направленности, максимально выраженное при контакте с токсикантом в период с 5 до 9 лет. В первую очередь данные изменения касались фракций холестерина высокой плотности и ИА. При этом уровень изучаемых показателей в 30% случаев был детерминирован экспозиционной нагрузкой и возрастом, что свидетель-