СПОСОБ ИММУНОКОРРЕКЦИИ АПИ-ФИТОКОМПОЗИЦИЕЙ
METHOD FOR IMMUNE CORRECTION WITH API-PHYTOCOMPOSITION

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной фармакологии.
По известным литературным источникам - прополис содержит биологически активные вещества, обладающие иммуномодулирующими свойствами (биофлавоноиды, цинк, полисахариды и др.). Это характеризует прополис как перспективное средство для производства иммунных препаратов (Хисматуллина Н.З. Апитерапия. - Пермь: Мобиле, 2005. - С.55).
Биологически активные вещества эхинацеи пурпурной Echinacea purpurea (L.) Moench. широко используются в качестве источников эффективных лекарственных средств с иммуностимулирующей активностью. Максимальная биологическая активность экстракта эхинацеи проявляется в комбинации с биофлавоноидами и аскорбиновой кислотой (Дубинская Г.М., Почерняева В.Ф., Островская Г.Ю., Бобырев В.Н. Клиническое испытание фруктовых соков с включением экстракта эхинацеи пурпурной // Изучение и использование эхинацеи: Матер. Междунар. научн. конф., Полтава, 21-24 сентября 1998 г. - Полтава, 1998. - С.126-128). Витаминный комплекс меда содержит витамины группы B, витамины E, K, аскорбиновую кислоту.
Известен способ коррекции экспериментального иммунодефицита на примере циклофосфановой модели, который характеризуется тем, что в экспериментально-гистологических исследованиях было сформировано пять групп животных (крыс-самцов) в возрасте двух месяцев. Крысы первой группы служили контролем. У крыс второй, третьей, четвертой и пятой групп моделировали иммунодефицит путем введения циклофосфана внутрибрюшинно в дозе 40 мкг/кг однократно. Через 5 дней, на фоне иммунодефицитного состояния крысам третьей группы вводили в течение 5 дней олетим подкожно 1 раз в сутки в дозе 3 мкг/кг, животных четвертой группы лечили хитозаном путем введения внутрь 3%-ного гелевого раствора 1 раз в сутки в течение 5 дней в дозе 0,5 мл/гол, у крыс пятой опытной группы проводили лечение рибавом путем введения препарата внутрь в форме раствора (1:5) 1 раз в сутки в течение 5 дней в дозе 0,25 мл/кг. Забор материала для гистологических исследований (тимус, селезенка, лимфатические узлы брыжейки, печень и др.) осуществляли через 5, 10, 15 дней после начала введения иммуномодуляторов.
Основным недостатком способа является то, что хитозан снижает эффективность масляных лекарственных форм витаминов и лекарств для приема внутрь, а также резко понижает уровень кислотности желудочного сока. Олетим и рибав применяются только в ветеринарной медицине.
Наиболее близким к заявленному решению является способ коррекции экспериментального иммунодефицита на примере циклофосфановой модели (Морозова Е.Н. Изменения морфометрических параметров лимфатических узелков пейеровых бляшек тонкой кишки после коррекции иммунодефицитного состояния имунофаном в эксперименте // Клiнiчна анатомiя та оперативна хiрургiя. - Т.10, №4. - 2011 - С.19-22), который характеризуется тем, что опыты проводили на 36 белых крысах-самцах половозрелого возраста массой 200-250 г. Крысы были разделены на 2 группы по 18 особей. Животным первой группы вводили циклофосфан однократно 200 мг/кг (1-е сутки), затем имунофан по схеме (2-е, 4-е, 6-е, 8-е и 10-е сутки) в дозе 0,7 мкг/кг. Второй группой служили интактные крысы. Животных выводили из эксперимента на 7-е, 30-е и 90-е сутки после завершения введения имунофана. Тонкую кишку фиксировали в 10% растворе формалина, затем подвергали стандартной гистологической проводке. Срезы толщиной 5-6 мкм окрашивали гематоксилином и эозином. При помощи автоматизированного морфометрического комплекса измеряли высоту и ширину лимфатических узелков, их герминативных центров и межузелковых зон.
Основным недостатком способа является то, в эксперименте не проводили сравнение морфометрических параметров лимфатических узелков пейеровых бляшек тонкой кишки в группе с коррекцией иммуносупрессии имунофаном с показателями в группе животных с иммуносупрессией (группой контроля), вследствие чего не получено достоверных различий морфометрических параметров в группе с патологией и группе с коррекцией патологии, что не подтверждает эффективность применения имунофана на модели циклофосфановой иммуносупрессии в эксперименте.
Задачей предлагаемого изобретения является способ иммунокоррекции апи-фитокомпозицией в виде водной суспензии меда, пыльцы, прополиса, экстракта эхинацеи, исключающий недостатки известных решений.
Задача достигается тем, что предложен способ иммунокоррекции апи-фитокомпозицией, включающий воспроизведение иммунодефицита у лабораторных животных путем введения циклофосфана однократно в дозе 200 мг/кг массы тела лабораторного животного (1-е сутки эксперимента) с последующей ее коррекцией, причем коррекцию иммунодефицита проводят апи-фитокомпозицией в виде водной суспензии меда, пыльцы, прополиса, экстракта эхинацеи пурпурной в соотношении 10:1:1:2, которую вводят лабораторному животному внутрижелудочно (через зонд), в дозе 200 мг/кг ежедневно в течение 10 дней на вторые сутки эксперимента.
Сочетание прополиса, меда и экстракта эхинацеи пурпурной в апи-фитокомпозиции обеспечивает взаимное усиление иммуномодулирующих свойств данных компонентов (синергизма).
Основным преимуществом предлагаемого способа является то, что в эксперименте проводили сравнение морфометрических параметров лимфатических узелков пейеровых бляшек тонкой кишки в группе с коррекцией иммуносупрессии апи-фитокомпозицией с показателями в группе животных с иммуносупрессией (группой контроля), вследствие чего выявлена выраженная иммунокоррекця апи-фитокомпозицией на модели циклофосфановой иммуносупрессии в эксперименте.
СПОСОБ ОСУЩЕСТВЛЯЕТСЯ СЛЕДУЮЩИМ ОБРАЗОМ
Опыты проводят на 30 белых крысах-самцах половозрелого возраста массой 200-250 г. Крысы были разделены на 3 группы по 10 особей: 1) интактные крысы, 2) крысы с иммуносупрессией, 3) крысы с коррекцией иммуносупрессии. Животным второй группы вводили циклофосфан однократно в дозе 200 мг/кг массы тела животного (1-е сутки эксперимента). В третьей группе животных проводится коррекция иммунодефицита внутрижелудочным введением (через зонд) водной суспензии меда, пыльцы, прополиса, экстракта эхинацеи пурпурной (10:1:1:2) ежедневно, начиная со второго дня эксперимента, в дозе 200 мг/кг массы тела животного в течение 10 дней. Животных выводили из эксперимента на 11-е сутки эксперимента. Тонкую кишку фиксировали в 10%-ном растворе формалина, затем подвергали стандартной гистологической проводке. Срезы толщиной 5-6 мкм окрашивали гематоксилином и эозином. При помощи автоматизированного морфометрического комплекса (световой микроскоп Olympus CX 41, цифровая фотокамера, персональный компьютер с набором прикладных программ) измеряли высоту и ширину лимфатических узелков, их герминативных центров.
Достоверность наблюдавшихся при действии апи-фитокомпозиции изменений параметров определяли разностным методом описательной статистики с нахождением средних значений сдвигов (M), средней ошибки средней арифметической (±m) и вероятности возможной ошибки (p). Различия оценивали как достоверные при p<0,05. Статистические расчеты проводились с использованием программы Microsoft Excel 2003.
ПРИМЕР КОНКРЕТНОГО ВЫПОЛНЕНИЯ
В иммунном аппарате тонкой кишки выделяют B-зависимую (лимфатические узлы (ЛУ) с герминативным центром) зону. Изменение их морфометрических параметров может отражать функциональные особенности периферического иммунного аппарата. При недостаточности гуморального и клеточного иммунитета периферические лимфоузлы уменьшаются или отсутствуют.
Показатели высоты ЛУ у животных с моделированием иммуносупрессии уменьшались к 11-м суткам эксперимента на 20,6% по сравнению со значениями в группе интактных животных, что статистически достоверно значимо. В группе с коррекцией иммунодефицита апи-фитокомпозицией достоверных отличий значений данных показателей от группы интактных животных не выявлено. Параметры ширины узелков к 11-м суткам уменьшались в группе контроля на 20,2% по сравнению с интактными животными, что статистически достоверно значимо. В группе с коррекцией патологии апи-фитокомпозицией статистически достоверных отличий значений данных показателей от группы интактных крыс не выявлено. На 11-е сутки эксперимента показатели высоты герминативных центров уменьшались в группе с иммуносупрессией на 14,8%, а показатели ширины уменьшались на 21,2% по сравнению с интактными животными, что статистически достоверно значимо. В группе с коррекцией иммунодефицита апи-фитокомпозицией значения морфометрических параметров герминативных центров (ГЦ) статистически достоверно не отличались от значений в группе интактных крыс.
Таким образом, полученные результаты свидетельствуют о выраженной иммунокоррекции в условиях модели циклофосфановой иммуносупрессии у крыс предлагаемой апи-фитокомпозицией. Морфометрические параметры лимфатических узелков пейеровых бляшек тонкой кишки крыс на 11-е сутки эксперимента, M±m (n=30), мкм приведены в Таблице 1.
Таблица 1
Параметры
Интактные крысы
Крысы с иммуносупрессией (контроль)
Крысы с коррекцией иммуносупрессии
Высота ЛУ
951,0±14,5
755,0±16,3*
938,0±9,3**
Ширина ЛУ
1076,0±25,6
859,0±26,0*
961,3±14,8**
Высота ГЦ
620,0±18,2
528,5±13,1*
600,2±11,2**
Ширина ГЦ
737,2±17,5
581,0±4,9*
730,1±14,5**
Примечание: ** - p<0,05 в сравнении с группой контрольных животных, * - p<0,05 в сравнении с группой интактных животных.