ПОЛИПЕПТИД, ОБЛАДАЮЩИЙ АКТИВНОСТЬЮ D-ЛАКТАТДЕГИДРОГЕНАЗЫ, ПОЛИНУКЛЕОТИД, КОДИРУЮЩИЙ ЭТОТ ПОЛИПЕПТИД, И СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ D-МОЛОЧНОЙ КИСЛОТЫ

1. Полипептид, который представляет любой из указанных ниже полипептидов (а)-(с):
(а) полипептид с аминокислотной последовательностью, показанной в SEQ ID NO:1 или 2;
(b) полипептид с аминокислотной последовательностью, показанной в SEQ ID NO:1 или 2, с тем исключением, что в нем одна или несколько аминокислот замещены, делетированы, встроены и/или добавлены, где указанный полипептид обладает D-лактатдегидрогеназной активностью; и
(c) полипептид с аминокислотной последовательностью, которая характеризуется идентичностью по последовательности на уровне не менее 80% с аминокислотной последовательностью, показанной в SEQ ID NO:1 или 2, где указанный полипептид обладает D-лактатдегидрогеназной активностью.
2. Полинуклеотид, который представляет любой из указанных ниже полинуклеотидов (а)-(е):
(а) полинуклеотид с нуклеотидной последовательностью, показанной в SEQ ID NO:3 или 4;
(b) полинуклеотид с нуклеотидной последовательностью, показанной в SEQ ID NO:3 или 4, с тем исключением, что в нем один или несколько нуклеотидов замещены, делетированы, встроены и/или добавлены, где указанный полинуклеотид кодирует полипептид, который обладает D-лактатдегидрогеназной активностью;
(c) полинуклеотид, который гибридизуется в жестких условиях с полноразмерным полинуклеотидом или его частью, где указанный полинуклеотид имеет нуклеотидную последовательность, показанную в SEQ ID NO:3 или 4, или его комплементарной цепи, где указанный полинуклеотид кодирует полипептид, обладающий D-ЛДГ активностью;
(d) полинуклеотид с нуклеотидной последовательностью, которая характеризуется идентичностью по последовательности на уровне не менее 80% с нуклеотидной последовательностью, показанной в SEQ ID NO:3 или 4, где указанный полинуклеотид кодирует полипептид, обладающий D-лактатдегидрогеназной активностью; и
(e) полинуклеотид, кодирующий полипептид по п.1.
3. Конструкция ДНК, в которой связаны полинуклеотид по п.2 и промотор, способный осуществлять экспрессию указанного полинуклеотида.
4. Конструкция ДНК по п.3, отличающаяся тем, что указанный промотор представляет собой промотор гена пируватдекарбоксилазы 1 (ген PDC1), гена супрессии экспоненциального дефекта 1 (ген SED1) или гена глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы 3 (ген TDH3).
5. Конструкция ДНК по п.3 или 4, отличающаяся тем, что указанный промотор выбран из любого указанного ниже промотора (I)-(III):
(I) промотор с нуклеотидной последовательностью, показанной в любой из SEQ ID NO: 5-7;
(II) промотор с нуклеотидной последовательностью, которая гибридизуется в жестких условиях с нуклеотидной последовательностью, показанной в любой из SEQ ID NO: 5-7, или с нуклеотидной последовательностью, включающей ее часть; и
(III) промотор с нуклеотидной последовательностью, показанной в любой из SEQ ID NO: 5-7, с тем исключением, что в нем один или несколько нуклеотидов замещены, делетированы, встроены и/или добавлены.
6. Трансформант, в который введен/введена полинуклеотид по п.2 или конструкция ДНК по любому из пп.3-5.
7. Трансформированные дрожжи, в которые введен/введена полинуклеотид по п.2 или конструкция ДНК по любому из пп.3-5.
8. Трансформированные дрожжи по п.7, где по меньшей мере один ген из указанных ниже: ген пируватдекарбоксилазы 1 (ген PDC1), ген супрессии экспоненциального дефекта 1 (ген SED1) или ген глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы 3 (ген TDH3) в указанных трансформированных дрожжах замещен полинуклеотидом по п.2 или конструкцией ДНК по любому из пп.3-5.
9. Трансформированные дрожжи по п.8, где по меньшей мере один из указанных ниже генов представляет собой ген PDC1.
10. Способ получения D-молочной кислоты, который включает стадию культивирования трансформанта по п.6 и трансформированных дрожжей по любому из пп.7-9.
11. Трансформант, в который введен/введена полинуклеотид, кодирующий D-лактатдегидрогеназу, полученный из семейства Limulidae, или конструкция ДНК, в которой связаны указанный полинуклеотид и промотор, способный осуществлять экспрессию указанного полинуклеотида.
Limulus,
12. Трансформированные дрожжи, в которые введен/введена полинуклеотид, кодирующий D-лактатдегидрогеназу из рода или конструкция ДНК, в которой связаны указанный полинуклеотид и промотор, способный осуществлять экспрессию указанного полинуклеотида.
13. Трансформированные дрожжи по п.12, где по меньшей мере один ген из указанных ниже: ген пируватдекарбоксилазы 1 (ген PDC1), ген супрессии экспоненциального дефекта 1 (ген SED1) и ген глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы 3 (ген TDH3) в указанных трансформированных дрожжах замещен введенным в них полинуклеотидом, кодирующим указанную D-лактатдегидрогеназу из семейства Limulidae, или введенной в них конструкцией ДНК, в которой связаны указанный полинуклеотид и промотор, способный осуществлять экспрессию указанного полинуклеотида.
14. Способ получения D-молочной кислоты, который включает стадию культивирования трансформанта по п.11 или трансформированных дрожжей по п.12 или 13.