СПОСОБЫ ДЕТЕКЦИИ АПОЛИПОПРОТЕИНОВ

1. Способ детекции и/или количественного определения in vitro аполипопротеина, выбранного из группы, состоящей из apoAI, apoAIV, apoCI, apoCII, apoCIII, apoE и apoJ (кластерин), или его изоформы в образце, который включает:
(i) приведение в контакт образца с полистироловой или поликарбонатной поверхностью при подходящих условиях для связывания аполипопротеина или его изоформы с поверхностью, где поверхность не содержит антитела со специфичностью к указанному аполипопротеину или его изоформе, связанным с ней,
(ii) приведение в контакт поверхности, с которой связывают аполипопротеин или его изоформу, сформированной на стадии (i), с антителом со специфичностью к указанному аполипопротеину или к указанной его изоформе при подходящих условиях для формирования комплекса между антителом и аполипопротеином или его изоформой, и
(iii) детекцию комплексов, сформированных на стадии (ii),
где полистироловую поверхность или поликарбонатную поверхность не обрабатывают перед приведением в контакт с образцом или блокируют альбумином перед приведением в контакт с образцом.
2. Способ по п.1, в котором изоформа аполипопротеина представляет собой apoE4.
3. Способ определения in vitro относительного количества изоформы заданного аполипопротеина, выбранного из группы, состоящей из apoAI, apoAIV, apoCI, apoCII, apoCIII, apoE и apoJ (кластерин) относительно общего содержания указанного аполипопротеина в образце, который включает:
(i) приведение в контакт образца с полистироловой или поликарбонатной поверхностью при подходящих условиях для связывания аполипопротеина с поверхностью, где поверхность не содержит антитела со специфичностью к указанному аполипопротеину, связанному с ней,
(ii) приведение в контакт поверхности, с которой связывают аполипопротеин, сформированной на стадии (i), с первым антителом со специфичностью к указанной изоформе аполипопротеина и со вторым антителом, которое способно к связыванию со всеми изоформами указанного аполипопротеина, присутствующими в образце, где указанное приведение в контакт осуществляют в условиях, подходящих для формирования первого комплекса, содержащего первое антитело и изоформу аполипопротеина, и для формирования второго комплекса, содержащего второе антитело и все изоформы указанного аполипопротеина,
(iii) детекцию первого и второго комплексов, сформированных на стадии (ii) и
(iv) определение относительных количеств изоформы относительно общего содержания аполипопротеинов на основании уровней первого и второго комплекса, получаемых на стадии (iii)
где полистироловую поверхность или поликарбонатную поверхность не обрабатывают перед приведением в контакт с образцом или блокируют альбумином перед приведением в контакт с образцом.
4. Способ по п.3, в котором поверхность, используемую на стадии (i), формируют с помощью множества объектов, где приведение в контакт на стадии (ii) с первым антителом и со вторым антителом осуществляют в отдельных контейнерах, каждый контейнер содержит часть множества объектов, формирующих поверхность, и где обнаружение на стадии (iii) осуществляют отдельно в каждом контейнере.
5. Способ по п. 3 или 4, в котором аполипопротеин представляет собой apoE и изоформа аполипопротеина представляет собой apoE4.
6. Способ определения аллельной дозы гаплотипов, связанных с экспрессией изоформы аполипопротеина для аполипопротеина, выбранного из группы, состоящей из apoAI, apoAIV, apoCI, apoCII, apoCIII, apoE и apoJ (кластерин), у пациента, который включает
(i) приведение в контакт белок-содержащего образца от указанного пациента, полученного из ткани, в которой экспрессирована изоформа аполипопротеина, с полистироловой или поликарбонатной поверхностью при подходящих условиях для связывания изоформы аполипопротеина с поверхностью, где поверхность не содержит антитела со специфичностью к указанной изоформе аполипопротеина, связанной с ней,
(ii) приведение в контакт поверхности, с которой связывают аполипопротеин, сформированной на стадии (i), с по меньшей мере одним антителом со специфичностью к изоформе аполипопротеина при подходящих условиях для формирования комплекса между антителом и изоформой аполипопротеина,
(iii) определение аллельной дозы изоформы аполипопротеина с помощью корреляции количества комплекса, формируемого на стадии (ii), с числом аллелей, кодирующих указанный генетический вариант,
где полистироловую поверхность или поликарбонатную поверхность не обрабатывают перед приведением в контакт с образцом или блокируют альбумином перед приведением в контакт с образцом.
7. Способ по п.6, в котором генетический вариант, кодирующий изоформу аполипопротеина, представляет собой ген, кодирующий изоформу аполипопротеина apoE4.
8. Способ по любому из пп. 1-7, в котором полистироловую поверхность блокируют перед стадией связывания (i) и в котором альбумин представляет собой бычий сывороточный альбумин (BSA).
9. Способ по любому из пп. 1-8, в котором полистироловую поверхность обрабатывают промывающим раствором после стадии связывания (i).
10. Способ определения вероятности того, что у пациента развивается нейродегенеративное заболевание, который включает определение в образце от указанного пациента уровней изоформы E4 apoE посредством способа по любому из пп. 1-9, в котором, если уровни apoE E4 выше эталонного значения, то это указывает на то, что пациент имеет высокую вероятность развития нейродегенеративного заболевания.
11. Способ определения вероятности того, что у пациента развивается нейродегенеративное заболевание, который включает определение у указанного пациента аллельной дозы гаплотипа, кодирующего изоформу E4 apoE, посредством способа в соответствии с любым из пп. 6-10, где присутствие одного или двух аллелей apoE E4 в геноме пациента указывает на то, что пациент имеет высокую вероятность развития нейродегенеративного заболевания, и где отсутствие аллелей apoE E4 в геноме пациента указывает на то, что пациент имеет низкую вероятность развития нейродегенеративного заболевания.
12. Способ по любому из пп. 10 или 11, в котором нейродегенеративное заболевание выбирают из группы, состоящей из болезни Альцгеймера (AD), церебральной амилоидной ангиопатии (CAA), ассоциированной с синдромом Дауна деменции, сосудистой деменции, болезни Паркинсона, деменции с тельцами Леви и болезни Крейцфельда-Якоба.
13. Набор, содержащий полистироловую или поликарбонатную поверхность и антитело со специфичностью к аполипопротеину или его изоформе, где набор не содержит второе антитело со специфичностью к указанному аполипопротеину или его изоформе.
14. Набор по п.13, в котором, если антитело, присутствующее в наборе, обладает специфичностью к изоформе аполипопротеина, набор дополнительно содержит второе антитело, которое способно к связыванию со всеми изоформами указанного аполипопротеина.
15. Применение набора по любому из пп. 13 или 14 для детекции и/или количественного определения аполипопротеина, выбранного из группы, состоящей из apoAI, apoAIV, apoCI, apoCII, apoCIII, apoE и apoJ (кластерин), или его изоформы, где полистироловую или поликарбонатную поверхность блокируют альбумином.
16. Применение по п.15, где альбумин представляет собой бычий сывороточный альбумин (BSA).