СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ НАТИВНОГО БИОЛОГИЧЕСКОГО ПРЕПАРАТА ЛИКВОРА

Полезная модель относится к области экспериментальной медицины, ветеринарии, и может быть использована для заготовки большого количества ликвора для производства иммунобиологического препарата на его основе.
В качестве прототипа выбран способ получения нативного биологического препарата ликвора (Патент № 62850. Украша. МПК А61К 35/24, А61К 35/12. Спосиб одержання цильного ликворного препарата /Закрите акционерне товариство "Институт Кримагропроект". - Заявка № 2003087820. - Заявл. 18.08.2003. - Опубл. 15.12.2003. - Бюл. №12), который включает прижизненное субокципитальное взятие цереброспинальной жидкости коров с последующей ее стерилизацией и запаиванием в ампулы, причем полученное сырье предварительно криоконсервируют жидким азотом при t - 196°С, а через 6-8 дней осуществляют стерилизащи гамма-лучами с последующим двукратным размораживанием при температуре +18+20°С и замораживанием при температуре -40-70°С, причем как доноров используют нетельных коров второго-четвертого месяцев лактации.
Признаками, совпадающими с существенными признаками заявляемого способа, являются: прижизненное субокципитальное взятие цереброспинальной жидкости коров, криоконсерация жидким азотом полученного сырья и его размораживание с последующей стерилизацией и запаиванием в ампулы.
Причинами, препятствующими достижению ожидаемого технического результата ( повышение качества препарата), являются: высокий риск получения некачественного ликвора ввиду инфицирования, попадания в ликвор крови, возможность разгерметизации системы, трудоемкость обработки субстрата, длительность заготовки препарата за счет двукратной заморозки и оттаивания.
В основу полезной модели поставлена задача усовершенствования способа получения нативного биологического препарата ликвора путем изменения процесса стерилизации, а именно - пропусканием ликвора через антибактериальные фильтры "Миллипор", что позволяет получить необходимую стерильность препарата, при этом упрощает и минимизирует сроки его изготовления, что позволяет достичь ожидаемого технического результата, то есть повысить качество ликвора как
субстрата для производства иммунобиологического препарата для ветеринарии и медицины.
Поставленная задача решается тем, что в способе получения нативного биологического препарата ликвора, включающего прижизненное субокципитальное взятие цереброспинальной жидкости коров, криоконсервацию жидким азотом полученного сырья и его размораживание с последующей стерилизацией и запаиванием в ампулы, согласно полезной модели, стерилизацию полученного сырья осуществляют пропусканием его через антибактериальные фильтры, а размораживание сырья проводят в один этап.
Между совокупностью существенных признаков предложенного способа и ожидаемым техническим результатом, который может быть достигнут, проявляется следующая причинно-следственная связь: проведение стерилизации полученного сырья путем пропускания его через антибактериальные фильтры и осуществление размораживания в один этап позволяет получить препарат, очищенный от бактерий, крупнодисперсных молекул белков, содержащихся в ликворе, а также клеток ликвора, что обеспечивает стерильность спинномозговой жидкости, отсутствие антигенных свойств при одновременном сохранении биологически активных веществ, подтвержденные результатами исследований эффективности введения такого препарата.
Способ осуществляют следующим образом.
Первоначально отбирают здоровых лактирующих коров и фиксируют их в стойле. В состоянии гиперфлексии головы выполняют дезинфекцию места пункции у шейной связки и вводят толстую иглу с мандреном в большую цистерну мозга. При этом контролируют точность попадания в цистерну по ощущению провала иглы. Затем быстро извлекают мандрен и в толстую иглу вводят тонкую иглу, насаженную на шприц емкостью 100 мл (шрицы "Люэр", "Рекорд", "Жане" и т.п.).
Движением поршня вновь проверяют правильность попадания в большую цистерну по наличию светло-желтого прозрачного ликвора в шприце.
За один раз у одного животного возможно получить до 100 мл ликвора без вреда для животного. Полученная спинномозговая жидкость не должна содержать
примеси крови и кусочков ткани. После получения необходимого количества ликвора, извлекают сначала шприц с тонкой иглой, затем толстую иглу и обрабатывают место укола. Жидкость из шрица вводят в стерильный пластикатный мешок типа "Компопласт" через резиновую пробку мешка, маркируют мешок и погружают в сосуд Дьюара с жидким азотом при температуре - 196°С. Доставляют сосуды Дьюара на станцию переливания крови, где осуществляют размораживание спинномозговой жидкости и пропускание ее через антибактериальные фильтры "Миллипор". Затем осуществляют проверку полученного препарата на стерильность и запаивают в ампулы.
Стерилизацию ликвора осуществляют через антибактериальные фильтры "Миллипор", которые включают осветительные фильтры с размером пор 0,8 мкм, осветительные стерилизирующие фильтры с диаметром пор 0,45 мкм, и стерилизирующие фильтры с размером пор 0,22 мкм. Для грубого очищения ликвора можно использовать только осветительные и осветительные стерилизирующие поры. Время фильтрации зависит от объема стерилизированного ликвора и от размера пор антибактериального фильтра, и может составлять от 2-3 часов до суток. Такой препарат ликвора годится к применению в ветеринарной медицине для коррекции патологий различного происхождения.
Применяют полученный ликворный препарат в ветеринарной медицине для коррекции различных патологий животных, включая анемии, дистрофии, респираторные, кишечные инфекции животных, для получения мясного прироста веса.
Способ, который заявляется, позволяет с минимальными затратами получать ценное биологическое сырье для препарата, обладающего мощными иммунологическими и адаптогенными свойствами.
Пример 1.
В лаборатории микробиологии проводили исследования стерильности спинномозговой жидкости (СМЖ) крупного рогатого скота. Исследовали образцы СМЖ на стерильность, включающее посев по 2 мл образцов СМЖ в среды обогащения - сахарный бульон, инкубацию в данной ростовой среде в течение 24
часов с последующим отбором по 0,1 мл каждого образца и посевом на различные питательные среды. Учёт выросших колоний бактерий проводился визуально. Идентификация выделенных культур проводилась стандартными микробиологическими методами в соответствии с определителем Берджи. Результаты исследования показали отсутствие контаминации СМЖ.
Пропускание ликвора через антибактериальные фильтры "Миллипор" позволяют обеспечить стерильность спинномозговой жидкости при сохранении биологически активных веществ, что подтверждено результатами исследований эффективности введения такого препарата. Пропускание ликвора через антибактериальные фильтры "Миллипор" позволяет обеспечить сохранение мелкодисперсных биологически активных веществ в составе СМЖ.
Предложенной способ позволяет получить препарат ликвора, который не уступает ближайшему аналогу по стерильности и обеспечивает отсутствие контаминации СМЖ - загрязнение бактериями при выполнении всех условий, заявленных в способе.
Преимуществами способа являются получение более качественного препарата ликвора, нежели в ближайшем аналоге, позволяет снизить себестоимость его производства, минимизировать сроки и упростить процедуру изготовления препарата.
Предложенный способ позволяет исключить попадание крови и мягких тканей в получаемый препарат ликвора, повысить давление в системе для облегчения выведения ликвора, обеспечить герметичность системы в целом. Обеспечение данных условий повысит качество ликвора как субстрата для производства иммунобиологического препарата для ветеринарии и медицины.
Данный способ не требует специального оборудования. Предложенный способ быстрый, дешевый и простой в использовании.