Генитальные инфекции и локальная продукция цитокинов при диспластических процессах шейки матки

© БЕЛОКРИНИЦКАЯ Т.Е., ПОНОМАРЕВА Ю.Н., БУНИНА Е.Н., ЛАДЫГИНА Н.М. —

ГЕНИТАЛЬНЫЕ ИНФЕКЦИИ И ЛОКАЛЬНАЯ ПРОДУКЦИЯ ЦИТОКИНОВ ПРИ ДИСПЛАСТИЧЕСКИХ ИЗМЕНЕНИЯХ ШЕЙКИ МАТКИ

Т.Е. Белокриницкая, Ю.Н. Пономарева, Е.Н. Бунина, Н.М. Ладыгина (Россия, Чита, Государственная медицинская академия, Областной диагностический центр, Областной

центр по профилактике и борьбе со СПИД)

Резюме. Проведено сравнительное исследование содержания цитокинов IL-1ß, TNF-a и TGF-ß в цервикальном секрете 50 здоровых женщин и 180 пациенток с дисплазией шейки матки, ассоциированной с папилломавирусами (HPV), хламидиями (CT), вирусами герпеса (HSV) и цитомегалии (CMV). Концентрации цитокинов определяли методом ИФА, инфекции выявляли с помощью ПЦР. При HPV низкого риска было обнаружено умеренное повышение уровня TGF-ß. HPV высокого риска характеризовались увеличением продукция TGF-ß и IL-1ß. Хламидийная инфекция характеризовалась значительным увеличением продукции TGF-ß на фоне сниженных показателей IL-1ß и TNF-a. При HSV и CMV было отмечено повышение концентрации IL-1ß и TNF-a. Выявленные закономерности содержания цитокинов в цервикальном секрете при дисплазии шейки матки на фоне генитальных инфекций могут быть использованы для оценки локальных иммунных реакций и прогноза развития цервикальной пре-неоплазии.

Ключевые слова: генитальные инфекции, цитокины, цервикальная дисплазия.

Как известно, иммунный ответ на инфицирование характеризуется развитием клеточных и гуморальных реакций, механизм регуляции которых связан с продукцией цитокинов. Одними из основных регуляторов воспалительных процессов являются интерлейкин-lß (IL-1ß) и фактор некроза опухолей-a (TNF-a). IL-1ß и TNF-a активируют эн-дотелиальные клетки и запускают каскад реакций, завершающихся инфильтрацией очага воспаления гранулоцитами и нарушением микроциркуляции [1, 4]. Тканевые реакции на внедрение возбудителя, в частности, пролиферация и фиброз, в большинстве случаев опосредованы ß-трансформирующим фактором роста (TGF-ß). Этот цитокин зенхи-мальные клетки, индуцируя синтез внеклеточных матричных протеинов, составляющих основу волокнистой структуры соединительной ткани [2]. Таким образом, локальная продукция цитокинов имеет определяющее значение в развитии инфекционного поражения, клинических проявлениях и исходе заболевания.

Изучение локальной продукции цитокинов при различных генитальных инфекциях у пациенток с предраковыми поражениями шейки матки может быть перспективным в оценке течения воспалительного и иммунного ответов, а также прогнозировании развития пренеоплазии.

Нами выполнено сравнительное исследование содержания IL-1ß, TNF-a и TGF-ß в цервикальном секрете пациенток с предраковыми изменениями шейки матки, ассоциированными с папилломави-русами (HPV), хламидийной (CT), герпетической (HSV) и цитомегаловирусной (CMV) инфекцией.

Материалы и методы. Проведено проспективное клинико-иммунологическое исследование 180 пациенток с предраком шейки матки, находившихся на обследовании и лечении в Читинском областном онкологическом диспансере в 20012004 гг.

Диагностика предраковых поражений цер-викального эпителия включала в себя клинические, кольпоскопические, цитогистологические и иммуногистохимические методы исследования. Определение патологических процессов церви-

кального эпителия проводилось в соответствии с общепринятой Международной статистической классификацией болезней (1992). Слабая дисплазия шейки матки была диагностирована у 54 (30,0±13,1%) женщин, умеренная - у 59 (32,8±12,5%) и тяжелая - у 67 (37,2±9,8%) больных. Средний возраст обследованных пациенток составил 34,7+6,1 года, варьируя от 19 до 46 лет. Контрольную группу составили 50 здоровых женщин, сопоставимых по возрасту и данным анамнеза, и не имеющих в настоящее время генитальных инфекций и изменений на шейке матки.

Материалом для исследования служили шеечная слизь и соскобы цервикального эпителия, которые забирались в фолликулиновую фазу ова-риального цикла до проведения комплексного обследования и лечения заболеваний шейки матки.

Определение IL-1 р, TNF-a и TGF-^ (пкг/мл) в цервикальной слизи проводили с помощью стандартных коммерческих наборов для иммуно-ферментного анализа компании «Протеиновый контур» (Санкт-Петербург) в клинико-диагностической лаборатории Читинского областного центра СПИД [3].

ПЦР-диагностику HPV 6, 11, 16, 18, 31, 33 типов, Chlamydia trachomatis, CMV-500, HSV-430 I и II типов, проводили по общепринятой методике с применением соответствующих тест-систем «АмплиСенс-100-R» (Москва) в лаборатории молекулярной диагностики областного диагностического центра г. Читы [5].

Данные представлены в виде M±m, где M - среднее арифметическое, m - ошибка среднего. Использовали метод расчета парных корреляций по Спирмену. Для оценки статистически значимых различий полученных данных использовали критерий Стьюдента, критический уровень значимости принимался равным 0,05.

Результаты и обсуждение. Нами обнаружено, что частота изучаемых генитальных инфекций среди обследованных женщин в среднем составила 51,7±14,1%. Встречаемость инфекций цервикального биотопа при диспластических изменениях шейки матки представлена в таблице 1.

Наиболее часто предраковые поражения шейки матки были ассоциированы с HPV-инфицирова-нием. Превалирующим было поражение шейки матки 16, 18, 31 и 33 типами HPV, которые принято считать канцерогенными [7]. HPV низкого онко-генного риска 6 и 11 типов при предраковых изменениях шейки матки составили лишь 9,4±3,8%. Нами была отмечена прямая корреляция между выявлением высокоонкогенных типов HPV в цервикальном эпителии и степенью тяжести предраковых изменений шейки матки. Так, коэффициент корреляции между инфицированием HPV и тяжестью поражения эпителиального пласта при слабой дисплазии составил r=0,592 (р=0,003), при умеренной дисплазии - r=0,601 (р=0,025) и при тяжелой дисплазии - r=0,635 (р=0,073).

При исследовании содержания цитокинов в му-козальном секрете пациенток с дисплазией церви-кального эпителия были выявлены существенные различия в зависимости от характера инфекционного поражения шейки матки (табл. 2).

При HPV низкого онкогенного риска продукция TGF-ß возросла по сравнению с контролем в 1,5 раза, достоверных отличий между показателями lL-1ß и TNF-a у инфицированных пациенток и здоровых женщин обнаружено не было.

При HPV высокого риска было выявлено однократное увеличение продукции TGF-ß и IL-1ß по сравнению с показателями здоровых женщин, уровень TNF-a соответствовал показателям контрольной группы. Возможно, что повышение уровня IL-1ß при канцерогенных типах HPV связано со способностью инфицированных клеток

автономно продуцировать 1Ь-1^ [4].

Хламидийное поражение шейки матки сопровождалось увеличением содержания TGF-p в 4,5 раза и однократным снижением концентрации 1Ь-1р и ТОТ-а по сравнению со здоровыми женщинами. Высокие уровни TGF-p при хламидийной инфекции могут быть связаны с продукцией СТ белков теплового шока, которые активируют синтезируемый в латентной форме TGF-p в течение всего периода персистенции хламидийной инфекции [6]. Увеличение продукции TGF-p, нивелирующего цитотоксическую активность макрофагов, в свою очередь, могло инициировать подавление экспрессии ТОТ-а [2].

Герпетическая и цитомегаловирусная инфекция характеризовались однонаправленным повышением уровня провоспалительных цитокинов - 1Ь-1р и ТОТ-а в 2 раза по сравнению с контролем, концентрации TGF-p при этих инфекциях не отличались от показателей здоровых женщин.

Таким образом, выявленные изменения содержания цитокинов в цервикальном секрете при дисплазии шейки матки на фоне генитальных инфекций, отражают выраженные нарушения местных защитных реакций, что, возможно, впоследствии может инициировать прогрессию предраковых поражений шейки матки в более тяжелые состояния. Обнаруженные закономерности содержания цитокинов в цервикальном секрете, на наш взгляд, могут быть использованы для оценки течения воспалительных и иммунных реакций, а также прогнозирования развития цервикальной пренеоплазии.

ЛИТЕРАТУРА

1. Бережная М.Н., Чехун В.Ф. Система интер-лейкинов и рак — Киев: ДИА, 2000. - 224 с.

2. Зубова С.Г., Окулов В.Б. Молекулярные механизмы действия фактора некроза опухолей-а и трансформирующего фактора роста-Р в процессе ответа макрофага на активацию // Иммунология. - 2001. — № 5. - С. 18-21.

3. Иммуноферментный анализ / Под ред. Т. Т. Нго, Г.М. Ленхофф. - М.: Мир, 1988. - 444 с.

4. Кадагидзе З.Г. Цитокины // Практическая онкология. - 2003. - Т. 4, № 3. - С. 131-139.

5. Хейди М.Б., Грир Е., Мано М. Применение

ПЦР для диагностики папилломавирусных инфекций гениталий // Молекулярная клиническая диагностика. Методы. / Под ред. С Херрингтон, Дж. Макги. — Пер. с англ. - М.: Мир, 1999. - 558 с.

6. Di Felice V., David S., Capello F., et al. Is chlamydial heat shock protein 60 a risk factor for oncogenesis // Cell Mol. Life Sci. - 2005. - Jan; 62(1). - P. 4-9.

7. Tyring S.K. Human papillomavirus infections: epidemiology, pathogenesis, and host immune response // J. Amer. Acad. Dermatol. - 2000. - Vol. 43. - P. 218-226.

GENITAL INFECTIONS AND LOCAL SECRETION OF CYTOKINES FROM CERVICAL INTRAEPITHELIAL NEOPLASIA

T.E. Belokrinitskaya, Y.N. Ponomaryova, E.N. Bunina, N.M. Ladygina

There was a comparative investigation of cytokines IL-1ß, TNF-a and TGF-ß in cervical slime from 50 healthy women and in 180 patients with cervical intraepithelial neoplasia (CIN), associated with Human Papilloma Virus (HPV), Chlamydia trachomatis (CT), herpes simplex virus (HSV) and cytomegalovirus (CMV). ELISA cytokines defined and infections were detected with PCR. There was found a moderate increase of TGF-ß under HPV of low degree risk. HPV of high degree risk was determined with the increase of TGF-ß and IL-1ß. Chlamydial infection was connected with significantly increased level of TGF-ß under diminished markers of IL-1ß and TNF-a. There was the increase of IL-1ß and TNF-a under HSV and CMV. The exposed features of cytokines in cervical slime from CIN with genital infections can be used for appreciation of the local immune reactions and for prognosis of the development of CIN.

Таблица 1

Частота выявления генитальных инфекций при дисплазии шейки матки

Группы обследованных n Частота инфекции, %

HPV 16, 18, 31, 33 HPV 6, 11 CT HSV CMV

Цервикальная дисплазия

слабая умеренная тяжелая 54 59 67 8/14,8±12,9 20/33,9±19,4 р=0,000 42/62,5±11,9 Pj=0,000 9/16,7±5,2 7/11,9±4,5 р=0,000 1/1,5±0,9 pj=0,000 8/14,8±4,8 7/11,9±5,1 р=0,002 8/11,9±4,0 Pj=1,000 4/7,4±2,5 4/6,8±2,7 р=0,224 7/10,5±4,2 Pj=0,000 9/16,7±5,8 13/22,0±9,1 р=0,000 13/19,4±5,9 Pj=0,057

р - статистическая значимость различий по сравнению со слабой дисплазией; р1 - статистическая значимость различий по сравнению с умеренной дисплазией.

Содержание исследуемых цитокинов в цервикальном секрете при генитальных инфекциях, ассоциированных с предраком шейки матки

Таблица 2

Генитальные n Цитокины, пкг/мл

инфекции IL-1ß TNF-a TGF-ß

Здоровые женщины 50 67,5±21,5 48,1±15,4 72,8 ± 20,4

HPV 6,11 17 70,0±19,1 р=0,672 46,2±12,6 р=0,648 102,2±41,5 р=0,000

HPV 16, 18, 31,33 70 91,4±61,9 р=0,043 44,9±11,5 р=0,195 84,4±25,8 р=0,009

CT 23 51,4±30,0 р=0,011 34,0±16,4 р=0,019 349,0±95,2 р=0,000

HSV 15 125,9±44,2 р=0,000 117,7±32,5 р=0,000 80,0±36,0 р=0,242

CMV 35 139,5±41,5 р=0,000 98,6±21,0 р=0,007 74,6±26,9 р=0,067

р - статистическая значимость различий по сравнению с контрольной группой.

© ОДАРЕЕВА Е.В., ПРОТОПОПОВА Н.В. —

КОЛЬПОСКОПИЧЕСКИЕ КАРТИНЫ ЭПИТЕЛИЯ ШЕЙКИ МАТКИ В РАЗЛИЧНЫЕ СРОКИ ГЕСТАЦИИ

Е.В. Одареева, Н.В. Протопопова

Резюме. Проведено сравнение кольпоскопических картин эпителия шейки матки в разные сроки гестации у 207 беременных женщин, наблюдавшихся в условиях Областного перинатального центра. Согласно результатам обследования, частота встречаемости атипических процессов шейки матки (аце-тобелый эпителий, пунктуация, мозаика, йод-негативные зоны, лейкоплакия) на фоне прогрессирующей плоскоклеточной метаплазии во второй половине беременности превосходит таковую в первой половине. Кроме того, в более поздние сроки гестации сильнее выражено неблагоприятное влияние вирусной инфекции, о чем свидетельствует выявляемые кондиломы шейки матки и влагалища.

Ключевые слова: кольпоскопия, беременность

Известно, что на опухоли репродуктивной находится рак шейки матки, частота которого системы (рак шейки матки — РШМ, молочной при беременности, по данным разных авторов, железы, яичников), приходится 67,5% всех соче- колеблется от 23,5 до 30% [1,2,4,5,7]. Кроме того, таний с беременностью. Причем, на первом месте уникальность проблемы заключается в сочетании