БЕЛКИ И БЕЛКОВЫЕ КОНЪЮГАТЫ С ПОВЫШЕННОЙ ГИДРОФОБНОСТЬЮ

1. Микросферы, содержащие биоразлагаемый полимер и белковую смесь, выбираемую из группы, состоящей из: конъюгат белок-полиэтиленгликоль и гидрофобный анион органической кислоты; белок и гидрофобный анион органической кислоты; их комбинации.
2. Микросферы по п. 1, в котором белок в конъюгате белок-полиэтиленгликоль или белок сам по себе представляет собой человеческий гормон роста.
3. Микросферы по п. 1, в котором белок в конъюгате белок-полиэтиленгликоль или белок сам по себе является глюкагоноподобным пептидом 1.
4. Микросферы по п. 3, содержащие также конъюгат инсулин-полиэтиленгликоль.
5. Микросферы по п. 1, в котором белок в конъюгате белок-полиэтиленгликоль или белок сам по себе выбирают из группы, состоящей из инсулина, гормона околощитовидной железы, фрагмента гормона околощитовидной железы, энфувиртида и октреотида.
6. Микросферы по п. 1, в котором органическая кислота является памоевой кислотой, диоктилсульфоянтарной кислотой (докузатом), пирослизевой кислотой или их смесями.
7. Микросферы по п. 1, в котором белковая смесь содержит гидрофобный анион органической кислоты и этот гидрофобный анион органической кислоты представляет собой анион жирной кислоты, фосфолипидный анион, полистиролсульфонат-ион или их смеси.
8. Микросферы по п. 7, в котором анион гидрофобной кислоты представляет собой фосфолипидный анион, причем фосфолипид является фосфатидилхолином, фосфатидилсерином, фрсфатидилинозитом, фосфатидилэтаноламином, фосфохолином или их смесями.
9. Микросферы по п. 1, в котором белковая смесь содержит конъюгат белок-полиэтиленгликоль и полиэтиленгликоль в конъюгате белок-полиэтиленгликоль представляет собой метоксиполиэтиленгликольальдегид.
10. Микросферы по п. 1, в котором белковая смесь содержит гидрофобный анион органической кислоты и органическая кислота является памоевой кислотой, а гидрофобный анион является памоат-ионом.
11. Микросферы по п. 1, в котором белковая смесь содержит конъюгат белок-полиэтиленгликоль и гидрофобный анион органической кислоты, причем молярное отношение гидрофобный анион органической кислоты:конъюгат белок-полиэтиленгликоль составляет от 1:1 до 11:1.
12. Микросферы по п. 1, в котором белковая смесь содержит конъюгат белок-полиэтиленгликоль и конъюгат белок-полиэтиленгликоль является моноПЭГилированным.
13. Микросферы по п. 1, в котором биоразлагаемый полимер выбирают из группы, состоящей из полилактида, полигликолида, поли(d,1-лактид-ко-гликолида), поликапролактона, полиортоэфира, сополимера сложного и простого полиэфиров; сополимера полилактида и полиэтиленгликоля.
14. Микросферы по п. 1, в котором биоразлагаемый полимер является поли(d,1-лактид-ко-гликолидом).
15. Микросферы по п. 1, в котором биоразлагаемый полимер имеет молекулярную массу от 7000 Да до 17 000 Да.
16. Способ получения соли конъюгата белок-полиэтиленгликоль с повышенной гидрофобностью, включающий:
- получение водного белкового раствора, содержащего белок и буферный раствор, обеспечивающий определенный рН;
- взаимодействие полиэтиленгликоля с белком, в результате которого образуется конъюгат белок-полиэтиленгликоль; и
- протонирование аминогруппы в конъюгате белок-полиэтиленгликоль за счет гидрофобной органической аминокислоты, причем в результате этого протонирования образуется соль конъюгата белок-полиэтиленгликоль, содержащая гидрофобный анион, из-за чего увеличивается гидрофобность соли конъюгата белок-полиэтиленгликоль.
17. Способ по п. 16, в котором взаимодействие полиэтиленгликоля с белком представляет собой образование связи с участием аминогруппы, амидной связи, эфирной связи или дисульфидной связи между молекулой белка и молекулой полиэтиленгликоля или присоединение полиэтиленгликоля, способного к взаимодействию с тиоловой группой, к остатку цистеина в белке.
18. Способ получения конъюгата белок-полиэтиленгликоль с повышенной гидрофобностью, включающий:
- получение водного белкового раствора, содержащего белок и буферный раствор, обеспечивающий определенный рН;
- взаимодействие полиэтиленгликоля с белком, в результате которого образуется конъюгат белок-полиэтиленгликоль, причем этот конъюгат белок-полиэтиленгликоль обладает большей гидрофобностью, чем белок сам по себе.
19. Способ по п. 18, который не включает протонирование аминогруппы в белке за счет гидрофобной органической кислоты.
20. Способ получения микросфер, обеспечивающих контролируемое высвобождение активного агента, которые содержат соль конъюгата белок-полиэтиленгликоль, причем этот способ включает:
- получение водного белкового раствора, содержащего белок и буферный раствор, обеспечивающий определенный рН;
- взаимодействие полиэтиленгликоля с белком, в результате которого образуется конъюгат белок-полиэтиленгликоль;
- протонирование аминогруппы в конъюгате белок-полиэтиленгликоль за счет гидрофобной органической аминокислоты, причем в результате этого протонирования образуется соль конъюгата белок-полиэтиленгликоль, содержащая гидрофобный анион;
- смешивание соли конъюгата белок-полиэтиленгликоль в органическом растворителе с биоразлагаемым полимером, в результате чего образуется смесь, в которой благодаря наличию гидрофобного аниона органической кислоты в составе соли конъюгата белок-полиэтиленгликоль увеличивается растворимость этой соли конъюгата белок-полиэтиленгликоль в органическом растворителе;
- эмульгирование смеси соли конъюгата белок-полиэтиленгликоль и биоразлагаемого полимера в водном растворе, в результате чего образуется эмульгированная смесь; и
- отверждение эмульгированной смеси соли конъюгата белок-полиэтиленгликоль и биоразлагаемого полимера, в результате чего образуются микросферы, обеспечивающие контролируемое высвобождение активного агента.
21. Композиция, содержащая биоразлагаемый полимер, органический растворитель и белковую смесь, выбираемую из группы, состоящей из: конъюгат белок-полиэтиленгликоль и гидрофобный анион органической кислоты; белок и гидрофобный анион органической кислоты; их комбинации, причем указанная композиция представлена раствором или суспензией.
22. Композиция по п. 21, в которой она представлена раствором.
23. Композиция по п. 21, в которой она представлена суспензией.
24. Композиция по п. 21, в которой белок, входящий в состав конъюгата белок-полиэтиленгликоль, или белок сам по себе выбирают из группы, состоящей из человеческого гормона роста, глюкагоноподобного пептида 1, инсулина, гормона околощитовидной железы, фрагмента гормона околощитовидной железы, энфувиртида и октреотида.
25. Композиция по п. 21, в которой органическая кислота является памоевой кислотой, диоктилсульфоянтарной кислотой (докузатом), пирослизевой кислотой или их смесью.
26. Композиция по п. 21, в которой белковая смесь содержит белок и гидрофобный анион органической кислоты, который представляет собой анион жирной кислоты, фосфолипидный анион, полистиролсульфонат-ион или их смесь.
27. Композиция по п. 21, в которой органический растворитель представляет собой N-метилпирролидон, диметилсульфоксид, пропиленгликоль, этилбензоат, бензилбензоат, триацетин, полиэтиленгликоль-400 или их смесь.
28. Композиция по п. 21, в которой биоразлагаемый полимер выбирают из группы, состоящей из полилактида, полигликолида, поли(d,1-лактид-ко-гликолида); поликапролактона, полиортоэфира, сополимера сложного и простого полиэфиров; сополимера полилактида и полиэтиленгликоля.
29. Композиция по п. 21, в которой биоразлагаемый полимер представляет собой поли(d,1-лактид-ко-гликолид).
30. Композиция по п. 21, в которой биоразлагаемый полимер имеет молекулярную массу от 24 000 Да до 38 000 Да.
31. Композиция по п. 21, в которой биоразлагаемый полимер содержит около 50% или меньше лактида и около 50% или больше гликолида.
32. Способ получения раствора или суспензии биоразлагаемого полимера и соли конъюгата белок-полиэтиленгликоль, включающий:
- получение конъюгата белок-полиэтиленгликоль, не содержащего соли конъюгата белок-полиэтиленгликоль;
- смешивание биоразлагаемого полимера, конъюгата белок-полиэтиленгликоль, гидрофобной органической кислоты и органического растворителя;
- образование соли конъюгата белок-полиэтиленгликоль, содержащей конъюгат белок-полиэтиленгликоль и анион гидрофобной органической кислоты;
- перемешивание полученной смеси, в результате чего образуется раствор или суспензия.
33. Способ по п. 32, в котором органический растворитель представляет собой N-метилпирролидон, диметилсульфоксид, пропиленгликоль, этилбензоат, бензилбензоат, триацетин, полиэтиленгликоль-400 или их смесь.
34. Способ по п. 32, в котором:
- конъюгат белок-полиэтиленгликоль – это первый конъюгат белок-полиэтиленгликоль;
- конъюгат белок-полиэтиленгликоль является конъюгатом глюкагоноподобного пептида 1 и полиэтиленгликоля;
- смешивание также включает смешивание второго конъюгата белок-полиэтиленгликоль с биоразлагаемым полимером, конъюгатом белок-полиэтиленгликоль, гидрофобной органической кислотой и органическим растворителем; и
- второй конъюгат белок-полиэтиленгликоль является конъюгатом инсулин-полиэтиленгликоль.
35. Способ получения раствора или суспензии биоразлагаемого полимера и соли конъюгата белок-полиэтиленгликоль, включающий:
- растворение биоразлагаемого полимера в органическом растворителе с образованием смеси;
- прибавление конъюгата белок-полиэтиленгликоль и гидрофобной органической кислоты к полученной смеси;
- протонирование аминогрупп в конъюгате белок-полиэтиленгликоль за счет гидрофобной органической кислоты, в результате чего образуется соль конъюгата белок-полиэтиленгликоль, содержащая гидрофобный анион;
-перемешивание полученной смеси с образованием раствора или суспензии.
36. Способ по п. 35, в котором этот способ не включает растворение соли конъюгата белок-полиэтиленгликоль в органическом растворителе.
37. Способ по п. 35, в котором конъюгат белок-полиэтиленгликоль содержит белок, выбираемый из группы, состоящей из человеческого гормона роста, глюкагоноподобного пептида 1, инсулина, гормона околощитовидной железы, фрагмента гормона околощитовидной железы, энфувиртида и октреотида.
38. Способ по п. 35, в котором гидрофобная органическая кислота представляет собой памоевую кислоту, диоктилсульфоянтарную кислоту (докузат), пирослизевую кислоту или их смеси.
39. Способ по п. 35, в котором органический растворитель представляет собой N-метилпирролидон, диметилсульфоксид, пропиленгликоль, этилбензоат, бензилбензоат, триацетин, полиэтиленгликоль-400 или их смесь.
40. Способ по п. 35, в котором конъюгат белок-полиэтиленгликоль содержит:
- амидную связь, эфирную связь или дисульфидную связь между полиэтиленгликолем и белком или
- полиэтиленгликоль, способный к взаимодействию с тиоловой группой, присоединен к остатку цистеина в белке.