Паттерны генной экспрессии в мононуклеарной фракции периферической крови больных раком предстательной железы

Динамика содержания VE-кадгерина в сыворотке крови при осложненном течении ГЛПС характеризуется плавным спадом от периода лихорадки к периоду восстановления диуреза. В период лихорадки его уровень составил (в нг/мл) 0,75 (p=0,02), в олигоанурический - 0,66 (p=0,02), в полиурический - 0,52 (p=0,01), в период восстановленного диуреза - 0,34 (p=0,009), контроль - 1,07. Усиленное отслоение эндотелиоцитов от базальной мембраны сосудов большей части исследованных органов является свидетельством их значительного повреждения хантавирусом. При значительной вирусной атаке, проявляющейся в тяжелой форме ГЛПС с осложнениями, наиболее эффективным способом противодействия вирусу, вероятнее всего, оказывается снижение синтеза эндотелиоцитами VE-кадгерина. Это ведет к ослаблению межклеточных контактов в интиме сосудов, что препятствует персистированию вируса между эндотелиоцитами и дальнейшим его переходам в клетки подлежащей ткани. Следовательно, снижение экспрессии VE-кадгерина в данной ситуации носит вероятнее всего адаптивный характер. Если бы уменьшение уровня данной субстанции в крови было связано только со снижением синтетической активности клеток внутренней выстилки сосоудов, то его концентрация не только бы не снижалась, но и, возможно, повышалась, т.к. повреждение плазматической мембраны этих клеток сопровождалось бы протеолитическим отщепление с ее поверхности молекул VE-кадгерина, и это поддерживало бы пул исследуемой адгезивной молекулы в крови на определенном, достаточно высоком уровне.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Пальцев М.А., Иванов А. А. Межклеточные взаимодействия / М.: Медицина. - 1995. - 224 с.

2. Perez-Moreno M., Jamora C., Fuchs C.E. Sticky business: orchestrating cellular signals at cadherens junctions // Cell. - 2003. - Vol. 112, № 4. - P. 535-548.

Байгильдина Асия Ахметовна, кандидат медицинских наук, доцент ГОУ ВПО «Башкирский государственный медицинский университет» Минздравсоцразвития России, 450000, Республика Башкортостан, г. Уфа, ул. Ленина, д. 3. тел. (347) 272-41-73, e-mail: baigildinaasia@mail.ru

УДК 616-006.66; 616.15-008.1

© Д.И. Водолажский, Н.Н. Тимошкина, М.И. Коган, М.Б. Чибичян, Д.Г. Матишов, 2011

Д.И. Водолажский1, Н.Н. Тимошкина1, М.И. Коган2, М.Б. Чибичян2, Д.Г. Матишов1

ПАТТЕРНЫ ГЕННОЙ ЭКСПРЕССИИ В МОНОНУКЛЕАРНОЙ ФРАКЦИИ

ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ БОЛЬНЫХ РАКОМ ПРЕДСТАТЕЛЬНОЙ ЖЕЛЕЗЫ

1 Южный научный центр РАН 2ГОУ ВПО «Ростовский государственный медицинский университет» Минздравсоцразвития России

Методом RT-PCR проведено сравнительное исследование экспрессии 10 генов в мононуклеарной фракции клеток периферической крови (МНФ) пациентов с диагнозами рак предстательной железы, доброкачественная гиперплазия предстательной железы и здоровых мужчин. Выявленные закономерности динамики уровня экспрессии исследованных локусов позволили предложить паттерн маркеров МНФ, потенциально информативных для дифференцировки групп больных РПЖ: bax, bcl2 и tnf-a.

Ключевые слова: рак, простата, мононуклеары.

D.I. Vodolazhskiy, N.N. Timoshkina, M.I. Kogan, M.B. Chibichyan, D.G. Matishov

GENE EXPRESSION PATTERNS IN MONONUCLEAR FRACTION OF PERIPHERAL BLOOD OF PROSTATE

CANCER PATIENTS

A comparative research of 10 genes expression in mononuclear cell fraction of peripheral blood obtained from patients with prostate cancer, benign prostatic hyperplasia and from healthy donors was performed using RT-PCR. The discovered alterations in the studied gene level expression let us suggest a pattern of markers potentially informative for differentiating patient groups: bax, bcl2 and tnf-a.

Key words: cancer, prostate, mononuclear cells.

Рак предстательной железы (РПЖ) относится к одному из наиболее распространенных онкологических заболеваний мужчин зрелого и пожилого возраста. В нашей работе был исследован паттерн экспрессии генов в мононуклеарной фракции периферической крови (МНФ) пациентов с РПЖ. Была изучена экспрессия генов, играющих критическую роль в клеточном цикле, апоптозе и малигнизации тканей [1].

Материалы и методы. В исследование вошли 58 мужчин в возрасте от 50 до 80 лет, прошедших обследование на базе урологической клиники Ростовского государственного медицинского университета (РГМУ). Материалом для исследований служила фракция МНФ венозной крови, полученная методом дифференциального гемолиза [2]. Экстракцию суммарной РНК из МНФ проводили по Хомчинскому [3]. ПЦР-РВ в присутствии красителя SYBR Green I осуществляли по стандартной методике для определения экспрессии 9 ядерных (vegfA, vegfB, bcl2, bax, p53, tnf, gstp1, tert, malat1) генов и некодирующего митохондриального локуса (hv2). Количественную оценку уровня экспрессии генов рассчитывали относительно референтного гена ß-актина (actb) по методу 2A4Ct согласно протоколу Bio-Rad.

Результаты. Сравнение величин генной экспрессии в исследованных группах позволили наиболее наглядно дискриминировать пациентов с доброкачественной гиперплазией предстательной железы (ДГПЖ) и условно здоровых мужчин: статистически достоверные различия были зафиксированы по семи из десяти исследованных генов (vegfA, hv2, bcl2, bax, p53, gstp1, tert). Обращает на себя внимание значительное увеличение экспрессии большинства генов в группе ДГПЖ по сравнению и с контрольной, и с группой РПЖ (кроме gstp1, tnf-a). В остальных вариантах сравнения групп также были отмечены статистически значимые различия за исключением РПЖ Т1-2 и РПЖ Т3-4 (табл.).

Экспрессия гена hv2 достоверно увеличивалась в группе с диагнозом ДГПЖ и падала у больных РПЖ (рис.). Угнетение генной экспрессии митохондриального локуса hv2 соответствует процессу перехода при он-котрансформации к гликолитическому метаболизму (эффект Варбурга) [4].

Таблица

Значения вероятностей U-критерия Манна-Уитни для попарно сравниваемых групп

Локусы Группы сравнения

Контроль -ДГПЖ Контроль -РПЖ Т1-2 Контроль -РПЖ Т3-4 ДГПЖ -РПЖ Т1-2 ДГПЖ -РПЖ Т3-4 РПЖ Т1-2 -РПЖ Т3-4

vegfA 0,045 0,441 0,440 0,300 0,392 0,972

vegfB 0,577 0,057 0,111 0,138 0,179 0,885

hv2 0,391S 0,894 0,562 0,635 0,584 0,457

bcl2 0,001KS 0,004KS 0,002 0,303 0,824 0,562

bax 0,001 0,409S 0,070KS 0,051S 0,484 0,325

p53 0,001 0,099 0,002 0,094 0,297 0,356

gstp1 0,205S 0,200 0,395 0,841 0,472 0,546

tert 0,013KS 0,071 0,615 0,213 0,019KS 0,117

malat1 0,074 0,251 0,142 0,823 0,164 0,327

tnf-a 0,142 0,886 0,009 0,468S 0,164 0,187

Кол-во отличий 7 2 4 2 1 0

Отметим высокую информативность отношения величин экспрессии анти- фЫ2) и проапоптозного (bax) генов. Увеличение отношения 2ЛСt(bcl2)/2ЛCt(bax) при малигнизации тканей предстательной железы было статистически достоверным.

Рис. Изменение генной экспрессии в экспериментальных группах по отношению к соответствующим показателям контрольной группы

Таким образом, представляются перспективными для идентификации РПЖ человека паттерн маркеров МНФ, продемонстрировавших хороший предиктивный уровень: bax, bcl2 и tnf-a. Прогностическим фактором малигнизации тканей предстательной железы может служить изменение отношения экспрессии анти- и про-апоптозных генов семейства Bcl2 [5].

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Водолажский Д.И., Тимошкина Н.Н. 2009. Молекулярно-генетические маркеры рака предстательной железы // Вестн. Южного научного центра. - № 5 - С.36-52.

2. Berteau P., Dumas F., Gala J-L. [et al.]. Molecular Detection of Circulating Prostate Cells in Cancer II: Comparison of Prostate Epithelial Cells Isolation Procedures // Clinical Chemistry - 1998. - № 44. -Р. 1750-1753.

3. Chomczynski P., Sacchi N. Single-step method of RNA isolation by acid guanidinium thiocyanate-phenol-chloroform extraction // Anal. Biochem. - 1987. - № 162. - Р. 156-159.

4. Kim J.W. Cancer's molecular sweet tooth and the Warburg effect // Cancer Res. - 2006. - № 66. - Р. 89278930.

5. Catz S.D., Johnson J.L. BCL-2 in prostate cancer: a minireview // Apoptosis. - 2003. - № 8. - Р. 29-37.

Водолажский Дмитрий Игоревич, кандидат биологических наук, старший научный сотрудник Института аридных зон Южного научного центра РАН, Россия, 344006, г. Ростов-на-Дону, ул. Чехова, 41., тел. 8-928-361-56-11, e-mail: ssc-ras@ssc-ras.ru

Тимошкина Наталья Николаевна, кандидат биологических наук, научный сотрудник Института аридных зон Южного научного центра РАН, Россия, 344006, г. Ростов-на-Дону, ул. Чехова, 41., тел. 8-928-361-56-11, e-mail: ssc-ras@ssc-ras.ru

Коган Михаил Иосифович, доктор медицинских наук, Заслуженный Деятель науки РФ, профессор, заведующий кафедрой урологии ФПК и ППС с курсом детской урологии и андрологии, директор НИИ урологии и нефрологии ГОУ ВПО «Ростовский государственный медицинский университет» Минздравсоцразвития России, 344022, Россия, г. Ростов-на-Дону, пер. Нахичеванский, 29, тел. (8632)-50-40-88.

Чибичян Михаил Борисович, кандидат медицинских наук, кафедры урологии ФПК и ППС с курсом детской урологии и андрологии ГОУ ВПО «Ростовский государственный медицинский университет» Минздравсоцразвития России, Россия, 344022, г. Ростов-на-Дону, пер. Нахичеванский, 29, тел. (8632)-50-40-88.

Матишов Дмитрий Геннадьевич, доктор географических наук, член-корр. РАН, заместитель Председателя Южного научного центра РАН, Россия, 344006, г. Ростов-на-Дону, ул. Чехова, 41., тел. (8632)-63-77-51, e-mail: ssc-ras@ssc-ras.ru

УДК 615.099-056.2

© М.Ю. Воронкова, Д.М. Никулина, П.А. Иванов, В.С. Кальной, 2011

М.Ю. Воронкова, Д.М. Никулина, П.А. Иванов, В.С. Кальной

МОНИТОРИНГ МЕТАБОЛИЧЕСКОГО СТАТУСА У НАРКОЗАВИСИМЫХ В ПРОЦЕССЕ СТАЦИОНАРНОГО ЛЕЧЕНИЯ

ГОУ ВПО «Астраханская государственная медицинская академия» Минздравсоцразвития России

Показаны особенности гомеостаза больных опийной наркоманией на фоне проводимого традиционного лечения в условиях стационара. Лабораторные показатели, отражающие изменения основных патогенетических звеньев токсикозави-симости, не имеют тенденции к снижению.

Ключевые слова: наркомания, метаболизм, маркеры.

M.Y. Voronkova, D.M. Nikulina, P.A. Ivanov, V.S. Kalnoy MONITORING METABOLIC STATUS IN DRUG ADDICTS IN INPATIENT TREATMENT

Study of the change homeostasis is presented in work beside sick opium drug addiction on background conducted traditional treatment in condition of the permanent establishment. The laboratory factors, reflecting change main section pathogenetic tocsicologi addicts, have a no trends to reduction.

Key words: drug, metabolism, markers.

Теоретически обосновано и практически доказано, что при различных видах наркотизации качественно и количественно изменяются взаимоотношения между параметрами биохимического гомеостаза. При этом формируется новая корреляционная матрица компонентов крови, которая достоверно отражает токсикоманический гомеостаз и несет диагностическую информацию [1, 2, 3].