СПОСОБ УНИЧТОЖЕНИЯ СПОР БАЦИЛЛ В ВОДНЫХ СУСПЕНЗИЯХ
METHOD FOR BACILLI SPORES DESTRUCTION IN WATER SUSPENSIONS

Изобретение относится к области медицинской, пищевой и биотехнологической промышленности, а именно разработке метода уничтожения споровых форм бацилл.
Стерилизацию в настоящее время проводят под давлением при температуре 131°C и экспозиции не менее 30 минут (1, 2).
Известно, что в популяции спор бацилл присутствуют «суперпокоящиеся» формы, устойчивые к действию высоких температур и повышенному давлению (3). Поэтому даже при таких жестких условиях процесс стерилизации не всегда приводит к 100% гибели спор бацилл. Кроме того, в ряде случаев твердые включения органического происхождения в водных суспензиях разлагаются в условиях стерилизации, проводимой в жестких условиях. Это снижает ее свойства, необходимые для использования в последующих технологических процессах. Высокие температуры неблагоприятно воздействуют и на оборудование, сокращая сроки его эксплуатации.
Целью настоящего изобретения является повышение эффективности уничтожения наиболее устойчивых форм микроорганизмов - спор бацилл и проведение процесса в более мягких условиях, позволяющих стерилизовать водные суспензии, содержащие лабильные органические вещества.
Поставленная задача достигается тем, что в водные суспензии перед термообработкой добавляют активаторы, ускоряющие процесс уничтожения спор бацилл. В качестве таковых используют катионные, анионные или амфолитные ПАВ (поверхностно-активные вещества) в концентрации 0,000005-0,05 мас. %.
Обеззараживание проводится в условиях атмосферного давления. Это позволяет значительно упростить процесс стерилизации, так как при этом не требуется использования специальной аппаратуры.
3
7
В качестве объектов исследования использовались споры Bacillus cereus, штамм 96 и Bacillus subtilis, штамм 7, устойчивые более 6 часов к 10%-ному раствору хлорамина и не менее 7 минут к текущему пару. Водные суспензии готовили путем добавления к дистиллированной воде - мелассы, в количестве 2,5 г/л, с последующей ее гомогенизацией. Первоначальная обсемененность водных суспензий спорами бацилл составляла 3-4×10-5×10 спор/мл. Изучение спороцидного действия проводилось суспензионным методом, с последующим высевом данной водной суспензии на 1,5%-ный казеиновый агар. Жизнеспособность спор бацилл определялась по количеству колоний, выросших на плотной питательной среде (казеиновый агар), после высева на него контрольных и опытных суспензий. Отсутствие на питательной среде колоний принималось за 100% гибель спор бацилл.
Изобретение иллюстрируется примерами выполнения.
7
Пример 1. К водной суспензии, обсемененной спорами Bacillus cereus, штамм 96 в концентрации 5×10 спор/мл, добавляют четвертичное аммониевое соединение - алкилдиметилбензиламмоний хлориды (Катамин АБ) - катионный ПАВ, таким образом, чтобы конечная его концентрация в водной суспензии составляла 0,000005 мас. %. Суспензию, с катионным ПАВ, выдерживают 15 минут при комнатной температуре, затем нагревают 30 минут при 100°C. Гибель спор B.cereus в результате обработки была 100%.
7
Пример 2. К водной суспензии, обсемененной спорами Bacillus cereus, штамм 96 в концентрации 5×10 спор/мл, добавляют 0,000005 мас. % Катамина АБ. Суспензию, с катионным ПАВ, выдерживают 15 минут при комнатной температуре, затем нагревают 30 минут при 80°C. Гибель спор B.cereus в результате обработки была 100%.
7
Пример 3. К водной суспензии, обсемененной спорами Bacillus cereus, штамм 96 в концентрации 5×10 спор/мл, добавляют 0,000005 мас. % Катамина АБ. Суспензию, с катионным ПАВ, выдерживают 15 минут при комнатной температуре, затем нагревают в течение 1 часа при 60°C. Гибель спор B.cereus в результате обработки была 100%.
7
Пример 4. К водной суспензии, обсемененной спорами Bacillus cereus, штамм 96 в концентрации 5×10 спор/мл, добавляют 0,0005 мас % Катамина АБ. Суспензию, с катионным ПАВ, выдерживают 15 минут при комнатной температуре, затем нагревают 30 минут при 80°C. Гибель спор B.cereus в результате обработки была 100%.
7
Пример 5. К водной суспензии, обсемененной спорами Bacillus cereus, штамм 96 в концентрации 5×10 спор/мл, добавляют четвертичное аммониевое соединение - алкилдиметилбензиламмоний хлориды (Катамин АБ) таким образом, чтобы конечная его концентрация в водной суспензии составляла 0,0005 мас. %. Суспензию, с катионным ПАВ, выдерживают 15 минут при комнатной температуре, затем нагревают 5 минут при 100°C. Гибель спор B.cereus в результате обработки была 96,5%.
7
Пример 6. Водную суспензию, обсемененную спорами B.cereus, штамм 96 в концентрации 5×10 спор нагревают при 80°C в течение 30 минут. Гибель спор в данном случае была на 86,8%.
7
Пример 7. К водной суспензии, обсемененной спорами Bacillus subtilis, штамм 7 в концентрации 5×10 спор/мл, добавляют Катамин АБ в концентрации 0,00005 мас. %., выдерживают смесь при комнатной температуре 15 минут, затем 1 час при 60°C. Гибель спор данной популяции происходит на 100%.
7
Пример 8. Водную суспензию, обсемененную спорами Bacillus subtilis, штамм 7 в концентрации 5×10 спор/мл, нагревают 1 час при 60°C. Уничтожение спор бацилл данной популяции происходит при этом лишь на 50%.
7
10
18
Пример 9. К водной суспензии, обсемененной спорами Bacillus subtilis, штамм 7 в концентрации 5×10 спор/мл, добавляют 0,00005 мас. % гидророхлоридов алкил (C-C) диметиламинов, выдерживают смесь при комнатной температуре 15 минут, затем 30 минут при 100°C. Гибель спор данной популяции происходит на 100%.
7
10
13
Пример 10. К водной суспензии, обсемененной спорами Bacillus cereus, штамм 96 в концентрации 5×10 спор/мл, добавляют 0,00005 мас. %. фосфатов алкилметиламинов (алкил-C-C), выдерживают смесь при комнатной температуре 15 минут, затем 1 час при 80°C. Гибель спор данной популяции происходит на 100%.
7
10
16
Пример 11. К водной суспензии, обсемененной спорами Bacillus subtilis, штамм 7 в концентрации 5×10 спор/мл, добавляют 0,00005 мас. % нитратов алкил (C-C) аминов, выдерживают смесь при комнатной температуре 15 минут, затем 30 минут при 100°C. Гибель спор данной популяции происходит на 100%.
7
Пример 12. К водной суспензии, обсемененной спорами Bacillus subtilis, штамм 7 в концентрации 5×10 спор/мл, добавляют 0,00005 мас. % натриевых солей алкиларилсульфонатов (сульфонола), выдерживают смесь при комнатной температуре 15 минут, затем 30 минут при 100°C. Гибель спор данной популяции происходит на 100%.
7
Пример 13. К водной суспензии, обсемененной спорами Bacillus cereus, штамм 96 в концентрации 5×10 спор/мл, добавляют 0,00005 мас. % натрий алкансульфонатов (волгоната), выдерживают смесь при комнатной температуре 15 минут, затем 60 минут при 80°C. Гибель спор данной популяции происходит на 100%.
7
Пример 14. К водной суспензии, обсемененной спорами Bacillus subtilis, штамм 7 в концентрации 1×10 спор/мл, добавляют 0,005 мас. % амфолитный ПАВ ТЕГО-51 В (гидророхлориды алкилдиаминоэтилглицинов), выдерживают смесь при комнатной температуре 15 минут, затем 30 минут при 100°C. Гибель спор данной популяции происходит на 100%.
7
Пример 15. К водной суспензии, обсемененной спорами Bacillus subtilis, штамм 7 в концентрации 1×10 спор/мл, добавляют 0,001 мас. % Амфолан - смесь амфолитных и катионных ПАВ, выдерживают смесь при комнатной температуре 15 минут, затем 30 минут при 100°C. Гибель спор данной популяции происходит на 100%.
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВ
1. Стерилизация и дезинфекция изделий медицинского назначения. Методы, средства и режимы ГОСТ 42-21-2-85.
2. Стерилизация медицинской продукции. Национальный стандарт Российской Федерации ГОСТ Р ИСО 14937-2012.
3. Васильев Д.А., Калдыркаев А.И., Феоктистов Н.А., Алешин A.B. Идентификация бактерий Bacillus cereus на основе их фенотипической характеристики. Научное издание. - Ульяновск: НИИЦМиБ УлМиБ УлГСХА им. П.А. Столипина, 2013. - 98 с.: Ил. 49. ISBN: 978-5-905970-10-8.