КЛЕТОЧНЫЕ ЛИНИИ, КОТОРЫЕ СЕКРЕТИРУЮТ КОНСТРУКЦИИ "АНТИАНГИОГЕННОЕ АНТИТЕЛО-КАРКАСЫ" И РАСТВОРИМЫЕ РЕЦЕПТОРЫ, И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ

1. Клеточная линия, содержащая клетки ARPE-19, генетически сконструированные для продуцирования терапевтически эффективного количества одной или более конструкций «антиангиогенное антитело - каркас» или антиангиогенных молекул, где указанные одна или более конструкций «антиангиогенное антитело - каркас» или антиангиогенных молекул вводят в клетки ARPE-19 с применением метода итеративной трансфекции, где указанная итеративная трансфекция включает одну трансфекцию, две трансфекци или три трансфекции.
6
2. Клеточная линия по п. 1, где указанная клеточная линия продуцирует одну или более конструкций «антиангиогенное антитело - каркас» или антиангиогенных молекул в количестве 10000-30000 нг/день/10 клеток, если итеративной трансфекцией является одна трансфекция.
6
3. Клеточная линия по п. 2, где указанная клеточная линия продуцирует одну или более конструкций «антиангиогенное антитело - каркас» или антиангиогенных молекул в количестве 15000 нг/день/10 клеток.
6
4. Клеточная линия по п. 1, где указанная клеточная линия продуцирует одну или более конструкций «антиангиогенное антитело - каркас» или антиангиогенных молекул в количестве 30000-50000 нг/день/10 клеток, если итеративной трансфекцией являются две трансфекции.
6
5. Клеточная линия по п. 4, где указанная клеточная линия продуцирует одну или более конструкций «антиангиогенное антитело - каркас» или антиангиогенных молекул в количестве 35000 нг/день/10 клеток.
6
6. Клеточная линия по п. 1, где указанная клеточная линия продуцирует одну или более конструкций «антиангиогенное антитело - каркас» или антиангиогенных молекул в количестве 50000-75000 нг/день/10 клеток, если итеративной трансфекцией являются три трансфекции.
6
7. Клеточная линия по п. 6, где указанная клеточная линия продуцирует одну или более конструкций «антиангиогенное антитело - каркас» или антиангиогенных молекул в количестве 70000 нг/день/10 клеток.
8. Клеточная линия по п. 1, где клетки ARPE-19 были генетически сконструированы с использованием вектора, содержащего растворимый рецептор VEGF, кодируемый последовательностью нуклеиновой кислоты SEQ ID NO. 1.
9. Клеточная линия по п. 1, где клетки ARPE-19 были генетически сконструированы с использованием вектора, содержащего растворимый рецептор VEGF, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO. 2.
6
10. Клеточная линия, содержащая клетки ARPE-19, генетически сконструированные так, чтобы они продуцировали терапевтически эффективное количество одной или более конструкций «антиангиогенное антитело - каркас» или антиангиогенных молекул, где указанное терапевтически эффективное количество составляет по меньшей мере 10000 нг/день/10 клеток.
11. Имплантируемое устройство с клеточной культурой, где указанное устройство включает:
a. сердцевину, содержащую клеточную линию по п. 1 или клеточную линию по п. 10; и
b. полупроницаемую мембрану, окружающую клеточную линию или клетку, где указанная мембрана позволяет диффундировать указанным одной или более конструкциям «антиангиогенное антитело - каркас» или антиангиогенным молекулам.
6
12. Устройство по п. 11, где указанная сердцевина содержит 0,5-1,0×l0 клеток ARPE-19.
13. Устройство по п. 11, где указанная сердцевина также содержит матрицу, находящуюся в полупроницаемой мембране.
14. Устройство по п. 13, где указанная матрица включает множество моноволокон, где указанные моноволокна
a. скручены в пряжу или вплетены в пространство между нитями, либо
b. скручены в пряжу, которая представляет собой нетканые нити,
и где указанные клетки распределены по этой матрице.
15. Устройство по п. 14, где указанные моноволокна включают биосовместимый материал, выбранный из группы, состоящей из акриловой кислоты, полиэфира, полиэтилена, полипропилена, полиацетонитрила, полиэтилентерефталата, найлона, полиамидов, полиуретанов, сложного эфира полибутадиена, шелка, хлопчатобумажной ткани, хитина, углерода и биологически совместимых металлов.
16. Устройство по п. 15, где указанные моноволокна включают волокна из полиэтилентерефталата (ПЭТ), который составляет 40-85% от внутреннего объема устройства.
17. Устройство по п. 11, где указанное устройство также включает фиксирующий якорь.
18. Устройство по п. 17, где указанный фиксирующий якорь включает якорную петлю.
19. Устройство по п. 18, где указанная якорная петля адаптирована для прикрепления указанного устройства к структуре глаза.
20. Устройство по п. 11, где указанное устройство имплантировано в глаза или в другую область-мишень, выбранную из группы, состоящей из селезенки, уха, сердца, толстой кишки, печени, почек, молочной железы, сустава, костного мозга, подкожного и внутрибрюшинного пространства.
21. Устройство по п. 20, где указанное устройство имплантировано в стекловидное тело, во внутриглазную жидкость, в пространство под теноновой капсулой, в периокулярное пространство, в заднюю камеру или в переднюю камеру глаза.
22. Устройство по п. 11, где указанная полупроницаемая мембрана включает иммунопротективную мембрану с избирательной проницаемостью.
23. Устройство по п. 11, где указанная полупроницаемая мембрана включает мембрану для ультрафильтрации или мембрану для микрофильтрации.
24. Устройство по п. 22 или 23, где указанная полупроницаемая мембрана имеет средний размер пор 100 нм.
25. Устройство по п. 11, где указанная полупроницаемая мембрана содержит непористый мембранный материал.
26. Устройство по п. 25, где указанный непористый мембранный материал представляет собой гидрогель или полиуретан.
27. Устройство по п. 11, где отсечка номинальной молекулярной массы (MWCO) полупроницаемой мембраны составляет 500 кДа.
28. Устройство по п. 11, где указанная полупроницаемая мембрана имеет толщину 90-120 мкм.
29. Устройство по п. 11, где капсула имеет конфигурацию полого волокна или плоского листа.
30. Устройство по п. 11, где длина указанного устройства составляет 4-11 мм.
31. Устройство по п. 11, где указанное устройство имеет внутренний диаметр 0,9-1,2 мм.
32. Устройство по п. 11, где концы указанного устройства герметично запаяны с использованием метилметакрилата.
33. Устройство по п. 11, где из указанного устройства доставляется по меньшей мере одна дополнительная биологически активная молекула.
34. Устройство по п. 11, где указанная по меньшей мере одна дополнительная биологически активная молекула происходит от неклеточного источника.
35. Устройство по п. 11, где указанная по меньшей мере одна дополнительная биологически активная молекула происходит от клеточного источника.
36. Устройство по п. 35, где указанная по меньшей мере одна дополнительная биологически активная молекула продуцируется одной или несколькими генетически сконструированными клетками ARPE-19, присутствующими в сердцевине.
37. Устройство по п. 11, которое также обладает одним или несколькими дополнительными свойствами, выбранными из группы, состоящей из следующих свойств, где:
6
a. сердцевина содержит 0,5-1,0·10 клеток ARPE-19;
b. длина устройства составляет 4-11 мм;
c. внутренний диаметр устройства составляет 0,9-1,2 мм;
d. концы указанного устройства запаяны с использованием метилметакрилата;
e. полупроницаемая мембрана имеет средний размер пор приблизительно 100 нм;
f. номинальная предельная молекулярная масса (MWCO) полупроницаемой мембраны составляет 500 кДа;
g. полупроницаемая мембрана имеет толщину 90-120 мкм;
h. сердцевина содержит внутренний каркас, где указанный каркас включает волокна из полиэтилентерефталата (ПЭТ), который составляет 40-85% от внутреннего объема устройства; и
i. любые их комбинации.
38. Устройство по п. 37, где указанное устройство имеет 2, 3, 4, 5, 6, 7 или все указанные дополнительные свойства.
39. Применение устройства по п. 11 для доставки соответствующей терапевтической дозы одной или нескольких конструкций «антиангиогенное антитело - каркас» или антиангиогенных молекул в глаза индивидуума, где указанная терапевтическая доза составляет по меньшей мере 100 нг/день/глаз.
40. Способ лечения глазных расстройств, включающий имплантацию имплантируемого устройства с клеточной культурой по п.11 в глаза пациента и обеспечение диффузии одной или нескольких конструкций «антиангиогенное антитело - каркас» или антиангиогенных молекул из указанного устройства для связывания с VEGF, PDGF или VEGF и PDGF в глазах в целях лечения глазного расстройства.
41. Способ по п. 40, где указанное глазное расстройство выбрано из группы, состоящей из ретинопатии у недоношенных, диабетического отека желтого пятна, диабетической ретинопатии, возрастной дегенерации желтого пятна, глаукомы, пигментозного ретинита, катаракты, ретинобластомы и ишемии сетчатки.
42. Способ по п. 41, где указанная возрастная дегенерация желтого пятна представляет собой мокрую возрастную дегенерацию желтого пятна.
43. Способ по п. 40, где указанным глазным расстройством является диабетическая ретинопатия.
44. Способ по п. 40, где 0,1 пг - 1000 мкг на глаз пациента в день конструкции «антиангиогенное антитело - каркас» или антиангиогенной молекулы диффундируют в глаза, где указанной антиангиогенной молекулой является растворимый рецептор VEGF или растворимый рецептор PDGF.
45. Способ ингибирования пролиферации или васкуляризации эндотелиальных клеток, включающий имплантацию имплантируемого устройства с клеточной культурой по п. 11 пациенту, страдающему расстройством, ассоциированным с пролиферацией клеток, и обеспечение диффузии одной или нескольких конструкций «антиангиогенное антитело - каркас» или антиангиогенных молекул из указанного устройства для связывания с VEGF, PDGF или VEGF и PDGF, где указанное связывание ингибирует пролиферацию или васкуляризацию эндотелиальных клеток у пациента.
46. Способ по п. 45, где указанное расстройство выбрано из группы, состоящей из гематологических расстройств, атеросклероза, воспаления, повышенной сосудистой проницаемости и злокачественного заболевания.
47. Способ по п. 45, где терапевтически эффективное количество конструкции «антиангиогенное антитело - каркас» или антиангиогенной молекулы на пациента в день диффундирует из указанного устройства.
48. Способ доставки конструкций «антиангиогенное антитело - каркас» или антиангиогенной молекулы реципиенту-хозяину, где указанный способ включает имплантацию имплантируемого устройства с клеточной культурой по п. 11 в нужный участок реципиента-хозяина, где одна или несколько инкапсулированных клеток ARPE-19 секретируют конструкцию «антиангиогенное антитело - каркас» или антиангиогенную молекулу в области-мишени.
49. Способ по п. 48, где указанная область-мишень выбрана из группы, состоящей из центральной нервной системы, включая головной мозг, желудочек и спинной мозг, а также из водной части и жидкой части стекловидного тела глаза, селезенки, уха, сердца, толстой кишки, печени, почек, молочной железы, сустава, костного мозга, подкожного и внутрибрюшинного пространства.
50. Способ по п. 48, где терапевтически эффективное количество конструкции «антиангиогенное антитело - каркас» или антиангиогенной молекулы на пациента в день диффундирует в указанную область-мишень.
51. Способ изготовления имплантируемого устройства с клеточной культурой по п. 11, где указанный способ включает:
a. генетическое конструирование по меньшей мере одной клетки ARPE-19, секретирующей одну или более конструкций «антиангиогенное антитело - каркас» или антиангиогенных молекул; и
b. инкапсуляцию указанных генетически модифицированных клеток ARPE-19 в полупроницаемой мембране, где указанная мембрана позволяет одной или более конструкциям «антиангиогенное антитело - каркас» или антиангиогенных молекул диффундировать через указанную полупроницаемую мембрану.
52. Способ по п. 51, где указанные одна или несколько конструкций «антиангиогенное антитело - каркас» или антиангиогенных молекул кодируются последовательностью нуклеиновой кислоты, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:9, SEQ ID NO:11, SEQ ID NO:13, SEQ ID NO:15, SEQ ID NO:17, SEQ ID NO:19, SEQ ID NO:21, SEQ ID NO:23, SEQ ID NO:25, SEQ ID NO:27, SEQ ID NO:29 и SEQ ID NO:31.