СКОНСТРУИРОВАННЫЕ КОМПОНЕНТЫ CASCADE И КОМПЛЕКСЫ CASCADE

1. Эффекторная композиция сконструированного CRISPR-Cas типа I, содержащая
белок субъединицы CRISPR-Cas типа I;
руководящий полинуклеотид типа I; и
сконструированный белок CRISPR mCas3 типа I (mCas3), где указанный сконструированный mCas3 сохраняет активность в образовании одноцепочечного разрыва.
2. Эффекторная композиция сконструированного CRISPR-Cas типа I по п.1, где указанный сконструированный белок mCas3 содержит мутантный вариант АТФазы белка CRISPR Cas3 типа I дикого типа.
3. Эффекторная композиция сконструированного CRISPR-Cas типа I по п.1, в которой указанный сконструированный белок mCas3 выбран из группы, состоящей из белка mCas3 Pseudomonas sp. S-6-2, белка mCas3 Thermobifida fusca, белка mCas3 Saccharomonospora viridis, белка mCas3 Thermomonospora curvata, белка mCas3 Streptomyces avermitilis, белка mCas3 Streptomyces botropensis, белка mCas3 Thermus thermophilus, белка mCas3 Vibrio cholera, белка mCas3 Salmonella enterica, белка mCas3 Geothermobacter sp. EPR-M, белка mCas3 Methanocella arvoryzae MRE50 и белка mCas3 Streptococcus thermophilus (штамма ND07).
4. Эффекторная композиция сконструированного CRISPR-Cas типа I по п.3, где указанный сконструированный белок mCas3 содержит белок mCas3 Pseudomonas sp. S-6-2.
5. Эффекторная композиция сконструированного CRISPR-Cas типа I по п.4, где указанный белок mCas3 Pseudomonas sp. S-6-2 выбран из группы, состоящей из D448A mCas3, D75A mCas3 и D448A D75A mCas3.
6. Эффекторная композиция сконструированного CRISPR-Cas типа I по п.5, где указанный белок mCas3 Pseudomonas sp. S-6-2 содержит SEQ ID NO: 1919.
7. Эффекторная композиция сконструированного CRISPR-Cas типа I по п.1, где указанный сконструированный белок mCas3 содержит белок mCas3 Escherichia coli, выбранный из группы, состоящей из G317A mCas3, S318A mCas3, G319A mCas3, K320N mCas3, T321N mCas3, Q297E mCas3, D452E mCas3, E453N mCas3, R662A mCas3, R665Q mCas3, T346A mCas3, Q347N mCas3, G375A mCas3, K412G mCas3, T423A mCas3, D425H mCas3, Q426T mCas3, H601A mCas3, A602V mCas3, R603Q mCas3, R609S mCas3, T635A mCas3, Q636A mCas3 и Q640H mCas3.
8. Эффекторная композиция сконструированного CRISPR-Cas типа I по п. 1, дополнительно содержащая линкерный полипептид, ковалентно соединяющий указанный сконструированный белок mCas3 и указанный белок субъединицы CRISPR-Cas типа I.
9. Эффекторная композиция сконструированного CRISPR-Cas типа I по п. 1, где указанный белок субъединицы CRISPR-Cas типа I выбран из группы, состоящей из белка Cas8, белка Cas5 и белка Cas7.
10. Эффекторная композиция сконструированного CRISPR-Cas типа I по п. 9, дополнительно содержащая белок CRISPR Cas6 типа I.
11. Эффекторная композиция сконструированного CRISPR-Cas типа I по п. 9, дополнительно содержащая белок CRISPR Cse2 типа I.
12. Клетка, содержащая эффекторную композицию сконструированного CRISPR-Cas типа I по п. 1.
13. Клетка по п. 12, дополнительно содержащая
вторую эффекторную композицию сконструированного CRISPR-Cas типа I, содержащую:
второй белок субъединицы CRISPR-Cas типа I;
второй руководящий полинуклеотид Типа I; и
второй сконструированный белок CRISPR mCas3 типа I, где указанный сконструированный mCas3 сохраняет активность в отношении разрыва.
14. Клетка по п. 12, дополнительно содержащая
донорный полинуклеотид.
15. Клетка по п. 12, где указанная клетка представляет собой эукариотическую клетку.
16. Эукариотическая клетка по п. 15, содержащая индуцированную плюрипотентную стволовую клетку.
17. Способ надрезания двухцепочечной ДНК (дцДНК), включающий
приведение первого сайта одноцепочечного разрыва в первой области-мишени в двухцепочечной ДНК в контакт с первой эффекторной композицией сконструированного CRISPR-Cas типа I, содержащей
первый белок субъединицы CRISPR-Cas типа I;
первый руководящий полинуклеотид Типа I; и
первый сконструированный белок CRISPR mCas3 типа I (mCas3), где указанный первый сконструированный mCas3 сохраняет активность в образовании одноцепочечного разрыва;
что, тем самым, приводит к тому, что указанная первая эффекторная композицией сконструированного CRISPR-Cas типа I связывается с указанной первой областью-мишенью, а указанный первый сконструированный mCas3 связывается и надрезает указанную двухцепочечную ДНК в указанном первом сайте одноцепочечного разрыва.
18. Способ по п. 17, дополнительно включающий
приведение второго сайта одноцепочечного разрыва в контакт со второй областью-мишенью в указанной дцДНК со второй эффекторной композицией сконструированного CRISPR-Cas типа I, содержащей
второй белок субъединицы CRISPR-Cas типа I;
второй руководящий полинуклеотид типа I; и
второй сконструированный белок CRISPR mCas3 типа I, где указанный второй сконструированный mCas3 сохраняет активность в образовании одноцепочечного разрыва;
что, тем самым, приводит к тому, что указаная вторая эффекторная композицией сконструированного CRISPR-Cas типа I связывается с указанной второй областью-мишенью, а указанный второй сконструированный mCas3 связывается и надрезает указанную двухцепочечную ДНК в указанном втором сайте одноцепочечного разрыва.
19. Способ по п. 18, где расстояние между указанным первым сайтом одноцепочечного разрыва и указанным вторым сайтом одноцепочечного разрыва на указанной двухцепочечной ДНК составляет от 1 до 120 пар оснований.
20. Способ по п.17, где указанный способ осуществляют in vitro.