Способ подготовки образцов биологических тканей в парафиновых блоках с дефектами проводки для гистологического исследования
METHOD FOR PREPARING BIOLOGICAL TISSUE SAMPLES IN PARAFFIN BLOCKS WITH WIRING DEFECTS FOR HISTOLOGICAL EXAMINATION

Изобретение относится к области гистологического исследования, патологоанатомической и гистологической диагностики образцов нормальных и патологических тканей человека или животных при микроскопической диагностики окрашенных парафиновых срезов ткани на одном предметном стекле.
Решаемая изобретением техническая проблема состоит в том, что непременным и важным условием гистологической диагностики является максимальное и качественное сохранение образца биологической ткани при лабораторной обработке.
Гистологическая техника изготовления гистологических микропрепаратов является многоэтапным процессом и состоит из следующих этапов лабораторной обработки образцов биологических тканей: 1) фиксация 2) проводка, 3) заливка в парафин с изготовлением парафиновых блоков, 4) микротомия - изготовление парафиновых срезов, монтирование их на предметные стекла и высушивание), 5) окраска парафиновых срезов на предметном стекле, 6) заключение их под покровное стекло и высушивание готовых гистологических микропрепаратов.
Одной из серьезных проблем, затрудняющей гистологическую диагностику является микроскопия, связанная с дефектами лабораторной обработки биологических тканей на первых двух этапах: фиксации и проводки. Так некачественная фиксация и проводка образцов биологических тканей являются причиной изготовления микропрепаратов с различными дефектами ткани, которые затрудняют гистологическую диагностику и могут быть причиной диагностических ошибок.
Известен способ подготовки образцов биологических тканей к гистологическим исследованиям по патенту РФ №2499242, включающий последовательную обработку образцов биологической ткани раствором фиксатора, промывку в воде, дегидратацию в нескольких порциях изопропанола, просветление в двух порциях промежуточных смесей, содержащих изопропанол и минеральное масло, просветление в минеральном масле, пропитывание и заливку образцов парафином, отличающийся тем, что в качестве фиксатора используют 10%-ный раствор формалина, забуференного фосфатами натрия, обработку в промежуточных смесях ведут при комнатной температуре, при этом первая порция промежуточной смеси содержит пять частей изопропанола и одну часть минерального масла, а вторая порция содержит две части изопропанола и одну часть минерального масла, образцы биологических тканей пропитывают расплавленным парафином, в который добавляют 5% пчелиного воска, 0,8% диметилсульфоксида и 0,5% бутилкаучука.
Данный способ, принятый в качестве прототипа, предназначен для качественно фиксированных в растворе фиксатора образцов биологических тканей и предлагается как способ качественной проводки биологических тканей для получения качественных парафиновых блоков тканей и гистологических микропрепаратов.
Недостатком данного способа является то, что им могут быть ошибочно обработаны и образцы биологических тканей, которые были как недостаточно и некачественно фиксированы в растворе фиксатора, так и с нарушением условий проводки. В результате дефекты некачественной фиксации и проводки выявляются только после изготовления из парафиновых блоков гистологических микропрепаратов при микроскопическом исследовании.
На сегодняшний день отсутствует способ устранения дефектов некачественной проводки образцов биологических тканей. Изготовленные микропрепараты из таких образцов биологических тканей залитых в парафиновые блоки имеют дефекты, которые затрудняют гистологическую диагностику, могут быть причиной диагностических ошибок. Ошибки лабораторной обработки образцов биологических тканей могут выявляться на любом из этапов изготовления гистологических препаратов. Одной из трудных ошибок, которая не имеет решения и усложняет гистологическую диагностику является микроскопия, связанная с дефектами некачественной фиксации и проводки образцов биологических тканей.
Задачей заявляемого изобретения является создание способа подготовки образцов биологических тканей в парафиновых блоках с дефектами проводки для гистологического исследования, который обеспечит восстановление образцов биологических тканей до состояния, соответствующего требованиям, предъявляемым к исходным биоматериалам для гистологического исследования.
Сущность заявленного технического решения выражается в следующей совокупности существенных признаков, достаточной для решения указанной заявителем технической проблемы и получения обеспечиваемого изобретением технического результата.
Согласно изобретению способ подготовки образцов биологических тканей в парафиновых блоках с дефектами проводки для гистологического исследования, включающий обработку дефектных образцов биологической ткани в парафиновых блоках, отличающийся тем, что он включает три этапа обработки дефектных образцов биологической ткани в парафиновых блоках, при этом на первом этапе выполняют депарафинизация и удаляют парафин из образцов биологических тканей путем расплавления парафиновых блоков и обработке в ксилоле, затем на втором этапе восстанавливают первичную структуру биологической ткани путем высокотемпературной обработки в трис-эдта буферном растворе с рН 9.0, после чего на третьем этапе восстановленные образцы биологической ткани подвергают повторной стандартной лабораторной обработке с соблюдением стандартов фиксации, проводки, заливки в парафиновые блоки и изготовлением гистологических микропрепаратов.
Заявленная совокупность существенных признаков обеспечивает достижение технического результата, который заключается в том, что заявленный способ позволяет устранить наиболее трудно исправляемые ошибки и дефекты гистологического процесса обработки биоматериала, которые могут выявляться в процессе изготовления гистологических препаратов, а также избежать диагностических ошибок и назначения повторной необоснованной биопсии. В частности, заявленный способ позволяет устранить следующие микроскопические ошибки, связанные с дефектами некачественной фиксации и проводки тканевых биоматериалов.
Сущность изобретения поясняется микрофотографиями образцов биологических тканей при некачественной проводки и после обработки этих образцов заявленным новым способом, где на фиг. 1 представлен гистологический микропрепарат эндометрия (соскоб из полости матки) после некачественной фиксации и проводки (белые неокрашенные структуры ткани, плохо просматривается архитектоника ткани, образец ткани неадекватный для диагностического анализа), на фиг. 2 - тот же препарат, подготовленный заявленным способом (ткань с четкой архитектоникой, качественным окрашиванием гематокислином и эозином, образец ткани адекватный для диагностического анализа).
Пример реализации заявленного способа.
Для восстановления заявленным способом были выбраны 18 соскобов из полости матки после некачественной фиксации и проводки Имелись следующие дефекты: крупные кусочки были мягкими и плохо резались, слабая элективность окрашивания гематоксилином и эозином, которая проявлялась в виде белых неокрашенных участков, «проплешин», плохо различалась типовая архитектоника ткани, что затрудняло гистологическую диагностику патологического процесса.
Способ подготовки образцов данных некачественных биологических тканей к гистологическим исследованиям осуществляли следующим образом.
На первом этапе удаляли парафин из тканевых блоков путем расплавления биоптатов в горячем лотке заливочной станции и обработке в ксилоле.
На втором этапе восстанавливали первичную структуру тканевых биоптатов путем их высокотемпературной обработки в трис-эдта буферном растворе с рН 9.0.
Затем на третьем этапе осуществляли стандартную обработку восстановленных тканевых биоптатов для приготовления гистологических парафиновых блоков, а именно, фиксировали биоптаты в 10% нейтральном забуференном формалине в течение 24 часов, после чего осуществляли проводку в серии спиртов и пропитывание в парафине, из парафиновых блоков изготавливали гистологические микропрепараты.
После восстановления образцы ткани предложенным способом все перечисленные дефекты были устранены во всех препаратах и полностью восстановлены с хорошими свойствами окрашивания и гистоархитектоники.
Заявленный способ восстановления тканевых биоптатов позволяет устранить дефекты фиксации и проводки тканевых биоптатов, повысить точность гистологической диагностики, а в ряде случаев и предотвратить выполнение повторной биопсии пациентам.