Механизмы формирования симбиотических ассоциаций кишечника у ВИЧ-инфицированных детей

СОЦИАЛЬНО-ГИГИЕНИЧЕСКИЙ МОНИТОРИНГ ЗДОРОВЬЯ ДЕТСКОГО НАСЕЛЕНИЯ Г. КЕМЕРОВО

Захарова Ю.В., Леванова Л.А.

Кемеровская государственная медицинская академия,

г. Кемерово

МЕХАНИЗМЫ ФОРМИРОВАНИЯ СИМБИОТИЧЕСКИХ АССОЦИАЦИЙ КИШЕЧНИКА У ВИЧ-ИНФИЦИРОВАННЫХ ДЕТЕЙ

Цель - оптимизация методов коррекции кишечного микробиоценоза для снижения риска развития эндогенных бактериальных инфекций у ВИЧ-инфицированных детей.

Материалы и методы. В работе использованы 269 штаммов, изолированных из кишечника 50 ВИЧ-инфицированных детей. Выделение и идентификацию микроорганизмов проводили общепринятыми методами. Были изучены факторы колонизации доминантной микрофлоры, вирулентность у микросимбионтов из минорных ассоциаций и взаимодействие между микроорганизмами.

Результаты. Установлено, что условно-патогенные микроорганизмы из ассоциаций характеризовались антагонизмом по отношению к доминантной микрофлоре. Показано, что снижение уровня бифидобактерий и лактобацилл коррелировало с их адгезивной и кислотообразующей активностью. В симбиотических ассоциациях оппортунистические микроорганизмы высоко экспрессировали факторы вирулентности. Полученные данные раскрывают патогенетическую основу развития эндогенных инфекций у ВИЧ-инфицированных детей.

КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: механизмы; ассоциативный симбиоз; межбактериальные взаимодействия.

Zakharova J.V., Levanova L.A.

Kemerovo State Medical Academy, Kemerovo

MECHANISMS OF FORMATION INTESTINAL ASSOCIATIVE SYMBIOSIS FROM HIV-INFECTION CHILDREN

Aim - optimization methods of correction intestinal microbiocenosis for to reduce risk of development endogenes bacterial infection in HIV-infection children.

Materials and methods. 269 strains isolated from intestine of 50 HIV-infection children were used for the study. Isolation and indentification of microorganisms were performed by conventional methods. Factors of colonization in dominant microflora, virulent factors in minor associative microsymbionts and interactions between microorganisms were determined. Results. It is revealed that the opportunistic microorganisms from associates an antagonism activity for dominant microflora were characterized. Reduce level of Bifidobacteria and Lactobacillus in intestine correlated with adhesive and acidforming activity was shown. In associative symbiosis opportunistic microorganisms factors of virulent were high expressioned. Obtained data pathogenic basis of development endogens infection HIV-infection children are provided.

KEY WORDS: mechanisms; associative symbiosis; interbacterial interactions.

ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ

Симбиотические ассоциации — это форма существования микрофлоры в экологических нишах тела человека. Самым сложным и густонаселенным биотопом является кишечник. В свете современных достижений в составе кишечной экологической системы выделяют стабильный доминантный микросимбионт с его мутуалистическим влиянием на организм хозяина и ассоциативные минорные ассоциации [1, 2]. Доминантная микрофлора выполняет специализированную функцию по обеспечению колонизационной резистентности, являясь неспецифическим барьером на пути патогенов и экзотоксикантов, тем самым поддерживает гомеостаз в организме хозяина [3]. Включение в этот симбиоз бактерий-ассоциантов может иметь разные последствия для макроорганизма, так как межмик-робные взаимодействия внутри ассоциаций — от синергизма до антагонизма — могут изменять биологические свойства микробов, что отражается на формировании биоценоза человека и нередко является патогенетической основой формирования эндогенных инфекций [4, 5].

Особую значимость приобретает изучение механизмов развития эндогенных инфекций у ВИЧ-инфицированных детей. Развитие вторичных бактериальных осложнений у ослабленных детей нередко является клинической манифестацией ранней ВИЧ-инфекции и, уже на стадии первичных проявлений, они могут приводить к летальному исходу. Сокращение продолжительности жизни ВИЧ-инфицированных детей, инвалидизация, снижение качества жизни как детей, так и их родителей — все это предопределяет необходимость разработки новых подходов в предупреждении развития осложнений или поиске возможностей для их отсроченного наступления. При этом необходимо иметь представление не только о структуре микробных ассоциаций, но и о характере взаимоотношений микросимбионтов друг с другом, свойствах и функциях доминантных и минорных представителей микробиоценоза.

Цель исследования — оптимизация методов коррекции кишечного микробиоценоза для снижения риска развития эндогенных бактериальных инфекций у ВИЧ-инфицированных детей.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ

Были изучены структура и колонизационный уровень микросимбионтов кишечника у 50 ВИЧ-инфицированных детей в возрасте 2 ± 2 года. Исследование кишечного микробиоценоза проводили с помощью количественного бактериологического метода. Для выделения облигатно-анаэробных бактерий применяли анаэростаты и газогенерирующие пакеты. Иденти-

Корреспонденцию адресовать:

ЗАХАРОВА Юлия Викторовна,

650029, г. Кемерово, ул. Ворошилова, 22а,

ГБОУ ВПО КемГМА Минздравсоцразвития России. Тел.: 8 (3842) 73-28-71.

E-mail: micro@kemsma.ru

фикацию бактерий и грибов осуществляли с использованием коммерческих тест систем ANAERO-TEST 23, ПБДС, STREPTO-TEST 16, AUXOCOLOR, СИБ для энтеробактерий набор № 2. Интерпретацию результатов исследования кишечного микробиоценоза вели согласно региональным значениям нормы. Было идентифицировано до вида 269 культур микроорганизмов. Проведено 886 опытов по изучению биологических свойств участников симбиотических ассоциаций.

Адгезивные свойства микроорганизмов изучали согласно методике В.И. Брилиса. Для этого культуры выращивали в течение 24 часов на скошенном мясо-пептонном агаре с учетом типа дыхания. Взвесь микроорганизмов готовили на стерильном изотоническом растворе хлорида натрия в концентрации 109КОЕ/мл. Клеточным субстратом служили формализированные эритроциты человека 0(1) группы Rh(+), густотой 100 млн/мл. Эритроциты и взвесь микроорганизмов в равных объемах по 50 мкл соединяли в пробирках и инкубировали при 37°С в течение 1 часа, регулярно встряхивая смесь. После этого готовили мазок, высушивали, фиксировали 96 % спиртом 15 минут и окрашивали по Романовскому-Гимза. Изучение адгезии проводили под световым микроскопом, подсчет вели на 50 эритроцитах. Оценку результатов опыта вели по индексу адгезивности микроорганизма (ИАМ), который характеризует среднее количество микробных клеток на одном участвующем в адгезивном процессе эритроците. Микроорганизмы считали неадгезивными при ИАМ < 1,75; низкоадгезивными — от 1,76 до 2,5; среднеадгезивными — от 2,51 до 4,0, высокоадгезивными — при ИАМ > 4,0.

Активность кислотообразования бифидобактерий определяли титрометрическим методом. С этой целью к суточным культурам бифидобактерий, выращенных на среде Блаурокка в объеме 5 мл, добавляли по 2 капли индикатора фенол-фталеина и титровали 0,1н №ОН. Количество щелочи, пошедшей на титрование, соответствует количеству образуемой кислоты в 5 мл культуральной жидкости. Окончательный результат выражали в градусах Тернера: Т° = А х К х 20, где А — количество 0,1н щелочи, пошедшее на титрование 5 мл исследуемой жидкости, К — поправка к титру, определяемая при титровании 0,1н раствора щелочи 0,1н янтарной кислотой, Т° — величина, выражающая количество 0,1н щелочи, пошедшей на титрование 100 мл исследуемого образца.

Антагонистическую активность микроорганизмов определяли методом перпендикулярных штрихов на плотной питательной среде. На чашку с плотной питательной средой петлей 2 мм наносили полоску культуры бактерий и инкубировали 24-48 часов с учетом типа дыхания. Далее к выросшей культуре подсевали участников ассоциаций, предварительно выращенных на скошенном мясо-пептонном агаре в течение 18 часов. Посев производили петлей диаметром 1 мм в направлении от зоны роста изучаемых бактерий, не касаясь ее и перпендикулярно ей. Чашки инкубировали при температуре 37°С 24 часа. Учет ре-

МЕХАНИЗМЫ ФОРМИРОВАНИЯ СИМБИОТИЧЕСКИХ АССОЦИАЦИЙ КИШЕЧНИКА У ВИЧ-ИНФИЦИРОВАННЫХ ДЕТЕЙ

зультатов вели по величине зоны отсутствия роста микроба-ассоцианта в мм.

Липолитическую и ДНКазную активность условно-патогенных бактерий и грибов исследовали методом посева на Trybuthirit Base Agar (HiMedia) и DNA Base Agar (HiMediа). Изучение гемолитической активности микроорганизмов проводили на МПА с добавлением эритроцитов человека.

На начальном этапе статистической обработки полученной информации применяли программы Microsoft Office Excel 2003 (лицензионное соглашение 74017-640-0000106-57177). С использованием названной программы осуществляли формирование базы данных, включающей информацию о видовом составе и количественном уровне кишечных микросимбионтов, их адгезивных характеристиках, характере взаимоотношений, а также о распространенности и уровне экспрессии факторов вирулентности среди условно-патогенных бактерий. Для статистического анализа использовали пакет прикладных программ Sta-tistica (версия 6.1 лицензионное соглашение BXXR 006В092218 FAN 11). Статистическая обработка информации строилась с учетом характера распределения данных, которое не соответствовало нормальному. Характер распределения переменных величин в рассматриваемой совокупности определяли с помощью построения гистограмм. Для анализа связей между колонизационным уровнем бактерий и их адгезивной активностью применяли коэффициент корреляции Спирмена.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Регуляторная система симбиоза между доминантной микрофлорой и макроорганизмом реализуется за счет колонизационной резистентности. Это придает индивидуальную и анатомическую стабильность микрофлоре, обеспечивает предотвращение заселения биотопа посторонними микроорганизмами и распространение нормофлоры за пределы их естественного места обитания [1, 2]. Среди многочисленных механизмов поддержания колонизационной резистентности ведущими признаются антагонистическая активность, а также конкуренция за рецепторы. В связи с этим у доминантных микросимбионтов кишечника ВИЧ-инфицированных детей были изучены свойства, позволяющие обеспечивать колонизационную резистентность.

Установлено, что бифидобактерии характеризовались средней адгезивной активностью, так как среднее значение ИАМ в выборке составило 3,29 (от 1,19 до 7,48). Среди бифидобактерий только 16,25 % были отнесены к высокоадгезивным штаммам, тогда как большинство из них проявляли низкую (40,85 %) или среднюю (42,9 %) способность к адгезии. Распрос-

траненность антагонистической активности среди би-фидофлоры достигала 64 на 100 штаммов, однако антагонизм, в большинстве случаев, был выявлен по отношению к факультативно-анаэробной индиген-ной микрофлоре — к Escherichia coli lac+ (38 на 100 штаммов) и Enterococcus faecalis (24 на 100 штаммов). Это свидетельствует об ослаблении распространения регулирующей функции бифидофлоры у ВИЧ-инфицированных детей на всех представителей кишечного микробиоценоза и сохранении ее только в отношении индигенных представителей. Возможно, это обусловлено изменением видовой структуры этих микросимбионтов, так как на долю Bifidobacterium bifidum, которые должны доминировать среди бифидофлоры, приходилось только 7,69 %.

В структуре видового состава бифидобактерий наибольший удельный вес занимали B.breve (34,62 %). На долю B.dentium приходилось 30,76 %, B.longum — 29,92 %. Изменение видовой структуры бифидофлоры в сторону преобладания «дисбактериозных» видов и появление в кишечнике резидентов парадонталь-ных карманов обуславливает низкую кислотообразующую активность данных микросимбионтов, которая не превышала 58,24°Т, что объясняет снижение антагонистических свойств бифидобактерий.

Лактобациллы, как и бифидобактерии, характеризовались среднеадгезивными характеристиками. ИАМ в выборке составил 2,78 (от 2,01 до 6,5). К микроорганизмам со средней адгезивной активностью были отнесены 54,43 % лактобацилл, к низкоадгезивным — 42,8 %. Только 2,77 % штаммов проявляли высокую способность к адгезии. Лактобациллы обладали выраженной способностью к антагонизму, так как распространенность этого признака достигала 88 на 100 культур, хотя кислотообразующая активность не превышала 86,7°Т. Антагонистическая активность была выражена в отношении условно-патогенных микросимбионтов: Candida albicans (21 на 100 культур), Staphylococcus spp. (19 на 100 культур), Klebsiella spp. (16 на 100 культур лактобацилл). Таким образом, у детей с ВИЧ-инфекцией регуляция числа условно-патогенных бактерий в кишечном биотопе осуществляется в основном лактобациллами.

Адгезивные характеристики бактерий определяют не только способность бифидо- и лактофлоры защищать слизистую кишечника от колонизации нетипичной микрофлорой, но и популяционный уровень данных микросимбионтов. Установлена прямая корреляционная связь между ИАМ и интенсивностью колонизации слизистой кишечника бифидобактериями и лактобациллами (г = 0,56; p = 0,00). При этом преобладание среднеадгезивной активности у данных микроорганизмов обуславливает у ВИЧ-инфицированных детей невысокий популяционный уровень бифидобактерий (7,62 lgKOE/г) и лактобацилл

Сведения об авторах:

ЗАХАРОВА Юлия Викторовна, канд. мед. наук, доцент, кафедра микробиологии, иммунологии и вирусологии, ГБОУ ВПО КемГМА Минздрав-соцразвития России, г. Кемерово, Россия. E-mail: yvz@bk.ru

ЛЕВАНОВА Людмила Александровна, доктор мед. наук, зав. кафедрой микробиологии, иммунологии и вирусологии, ГБОУ ВПО КемГМА Минз-дравсоцразвития России, г. Кемерово, Россия.Е-mail: micro@kemsma.ru

ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ

(6,42 lgKOE/г), при региональных значениях нормы 9-10 lgKOE/г и 8-9 lgKOE/г, соответственно. Дефицит анаэробной части доминантных микросимбионтов у детей с ВИЧ-инфекцией компенсируется избыточным ростом типичных кишечных палочек, количественный уровень которых составил 8,3 lgKOE/г, при норме не более 8 lgKOE/г. Однако, в популяции Escherichia coli lac+ преобладали низкоадгезивные штаммы, доля которых достигала 52,94 %. Средней адгезивной активностью обладали 29,41 % штаммов, на высокоадгезивные эшерихии приходилось только 17,65 % культур. Распространенность антагонизма к условно-патогенной микрофлоре среди эшерихий составила только 6,7 на 100 культур. Указанные характеристики не позволяют типичным кишечным палочкам адекватно обеспечивать колонизационную резистентность, даже если их количественный уровень повышается, что свидетельствует о специализации у микроорганизмов выполняемых в биотопе функций.

По данным литературы, к доминантным микросимбионтам, помимо бифидобактерий, лактобацилл и типичных кишечных палочек, относят Enterococ-cus faecalis [1, 2]. Интенсивность колонизации слизистой кишечника данными бактериями составила 6,46 lgKOE/г, что свидетельствует о недостаточном популяционном уровне энтерококков в биоценозе ВИЧ-инфицированных детей, так как в норме их количество должно достигать 7-8 lgKOE/г фекалий. При этом установлено, что связь между адгезивной активностью E.faecalis и интенсивностью колонизации слизистой отсутствовала (г = 0,14; p = 0,72), что позволяет говорить о наличии специфических механизмов поддержания определенного популяционного уровня у данных микроорганизмов. Фекальные энтерококки антагонизмом по отношению к другим представителям микробиоценоза не обладали, но среди них были выявлены штаммы, проявляющие липолитическую и гемолитическую активность, распространенность которых составила 26,54 и 34,5 на 100 культур, соответственно. В связи с этим фекальные энтерококки у детей с ВИЧ-инфекцией можно позиционировать как условно-патогенную микрофлору, которая может играть этиологическую роль в возникновении гнойно-воспалительных процессов.

Нарушение колонизационной резистентности слизистой кишечника у детей с ВИЧ-инфекцией сопровождалось формированием многокомпонентных ассоциаций, состоящих из условно-патогенных бактерий и дрожжевых грибов. Доминировали трехкомпонентные ассоциации микробов, состоящие из Candida spp. + Staphylococcus spp. + Enterobacteriaceae, их доля составила 28 %. В 18 % случаев были выделены четырехкомпонентные ассоциации Candida spp. + Staphylococcus spp. + Enterococcus spp. + Enterobac-teriaceae. Пяти и шестикомпонентные бактериально-

грибковые сожительства (14 %) включали, помимо членов четырехкомпонентных ассоциаций, представителей рода Actinomyces spp.

Подавляющее большинство дрожжевых грибов, выделенных из ассоциаций, относилось к виду Candida albicans (83,4 %), а доля non-albicans видов (C.parapsilosis, C.zelanoides, C.krusei) не превышала

16.5 %. Среди стафилококков-ассоциантов наибольший удельный вес приходился на S.aureus (30,6 %), S.xylosus (25 %), S.simulans и S.epidermidis (по 13,9 %), остальные виды (S.lentus, S.intermedius, S.cohnii) в структуре стафилококков составляли

16.6 %. Условно-патогенные энтеробактерии были представлены в 59,1 % случаев E.coli Hly+, в 36,4 % случаев Klebsiella pneumoniaе и в 4,6 % Citrobacter freundii. Actinomyces naeslundii и A.israelii входили в состав многокомпонентных ассоциаций в 24,1 % случаев.

При изучении количественного уровня условнопатогенной микрофлоры было установлено, что содержание стафилококков в кишечнике детей с ВИЧ-инфекцией в среднем составило 3,21 lgKOE/г (от 2 до 6 lg), грибов рода Candida 3,14 lgKOE/г (от 2 до 5 lg), условно-патогенных энтеробактерий — 6,94 lgKOE/г (от 4 до 9 lg), актиномицетов 7,2 lgKOE/г (от 4 до 10 lg). При этом связи между адгезивной активностью и количественным уровнем данных микросимбионтов выявлено не было (r = 0,14; p = 0,47), что свидетельствует о наличии отличных от доминантной микрофлоры механизмов поддержания популяционного уровня, в том числе и формирование ассоциативных сожительств микробов. Было установлено, что микроорганизмы, входящие в состав ассоциаций, не проявляют друг к другу антагонистических взаимоотношений, более того, дрожжевые грибы рода Candida потенцируют рост клебсиелл. Распространенность синергизма между C.albicans и Klebsiella spp. составила 28 на 100 культур. Бактерии, входящие в состав минорных ассоциаций, проявляли антагонизм только по отношению к доминантной микрофлоре. В антагонистические взаимоотношения с типичной кишечной палочкой вступали гемолизинпродуцирующие эшерихии (распространенность признака составила 18,2 на 100 культур), а с фекальными энтерококками разные виды стафилококков, входящие в ассоциации (22,2 на 100 культур).

Формирование ассоциативных сожительств микроорганизмов способствует не только поддержанию определенного популяционного уровня условно-патогенных бактерий, но и более высокой экспрессии факторов вирулентности у отдельных представителей. Так, распространенность ДН^зной, липазной и гемолитической активности среди стафилококков в ассоциациях составила 27,78; 80,56 и 88,89 на 100 культур соответственно. Eсли стафилококки бы-

Information about authors:

ZAKHAROVA Julia Viktorovna, candidate of medical sciences, docent, chair of microbiology, immunology and virology, Kemerovo State Medical Academy, Kemerovo, Russia. E-mail: yvz@bk.ru

LEVANOVA Liudmila Alexandrovna, doctor of medical sciences, professor, head of the chair of microbiology, immunology and virology, Kemerovo State Medical Academy, Kemerovo, Russia. E-mail: micro@kemsma.ru

МЕХАНИЗМЫ ФОРМИРОВАНИЯ СИМБИОТИЧЕСКИХ АССОЦИАЦИЙ КИШЕЧНИКА У ВИЧ-ИНФИЦИРОВАННЫХ ДЕТЕЙ

ли выделены в монокультурах, то распространенность ДН^зной и липазной активности не превышала 10,34 и 35,6 на 100 культур, соответственно, а гемолитической — 28,56 на 100 штаммов.

У грибов рода Candida, входящих в ассоциации, регистрировали проявление гемолитической и липаз-ной активности, распространенность которых составила 39,29 и 71,43 на 100 культур, соответственно. В связи с тем, что грибы были выделены только в составе ассоциаций с условно-патогенными бактериями, не приходится говорить о влиянии ассоциативных со-жительств на экспрессию факторов вирулентности микромицетов, что открывает дальнейшие перспективы для исследований.

ОБСУЖДЕНИЕ

Результаты исследований показали, что в основе нарушений колонизационной резистентности у ВИЧ-инфицированных детей лежит снижение адгезивной активности, а также кислотообразования у бифидобактерий и лактобацилл. Нарушение способности к адгезии не позволяет бифидо- и лактофлоре достичь необходимого популяционного уровня, что ведет к снижению их содержания в кишечнике. Бифидобактерии утрачивают способность регулировать численность условно-патогенных микроорганизмов в биотопе за счет антагонистических взаимоотношений, поэтому данную функцию выполняют только лактобациллы. Oднако низкая кислотообразующая активность не позволяет лактофлоре сохранять стабильность микробиоценоза, вследствие этого формируются многокомпонентные ассоциации из условнопатогенных бактерий и грибов. Микробы-ассоцианты начинают проявлять антагонизм по отношению к доминантным микросимбионтам — к типичным кишечным палочкам и фекальным энтерококкам. В связи с этим, страдает популяционный уровень этих бактерий, что в еще большей степени приводит к нарушению колонизационной резистентности. В итоге «порочный круг» замыкается, в кишечном биотопе развиваются стойкие микроэкологические нарушения.

Антагонизм ассоциантов с последующей интерференцией (вытеснением) доминантного микросимбионта — это не единственное последствие формирования ассоциативных сожительств условно-патогенной микрофлоры, так как данные микроорганизмы на-

чинают изменять не только свои биологические свойства, но и свойства индигенной микрофлоры. Так, фекальные энтерококки, вовлеченные в состав ассоциаций, ведут себя как микробы-оппортунисты, экспрессируя факторы вирулентности. Для стафилококков пребывание в составе ассоциативного симбиоза является основой высокого уровня продукции таких ферментов вирулентности, как гемолизин, липаза и ДНКаза. Между участниками ассоциаций преобладают взаимоотношения по типу нейтрализма или синергизма. Грибы рода Candida усиливают рост Klebsiella spp., благодаря чему последние достигают высокого количественного уровня в кишечном микробиоценозе, тогда как адгезивная активность бактерий не влияет на их титр. В итоге роль формирования бактериальных ассоциаций условно-патогенных микробов в исходе симбиоза трудно переоценить, так как возникновение эндогенных инфекций во многом зависит только от них.

ВЫВОДЫ:

У ВИЧ-инфицированных детей установлено нарушение колонизационной резистентности кишечника за счет снижения способности бифидобактерий и лактобацилл к адгезии и колонизации данного биотопа. Нарушение продукции органических кислот, как основного фактора антагонизма доминантной микрофлоры, обуслfвливает формирование многокомпонентных бактериально-грибковых ассоциаций.

Межбактериальные взаимодействия по типу синергизма в ассоциативных сожительствах способствуют тому, что микробы-оппортунисты достигают высокого популяционного уровня и начинают экспрессировать факторы вирулентности, имеющие патогенетическое значение в формировании дисфункции слизистой кишечника.

Для снижения риска развития эндогенных бактериальных инфекций у ВИЧ-инфицированных детей целесообразно проводить, в первую очередь, восстановление колонизационной резистентности на основе высокоадгезивных пробиотических штаммов, обладающих активным кислотообразованием. Уменьшить число условно-патогенных бактерий, высоко экспрессирующих факторы вирулентности, можно путем элиминации одного или нескольких участников микробных ассоциаций.

ЛИТЕРАТУРА:

1. Бондаренко, В.М. Роль дисфункции кишечного барьера в поддержании хронического воспалительного процесса различной локализации /В.М. Бондаренко, Е.В. Рябиченко //Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. - 2010. - № 1. - С. 92-100.

2. Бухарин, О.В. Инфекция - модельная система ассоциативного симбиоза /О.В. Бухарин //Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. - 2009. - № 1. - С. 83-86.

3. Видовая характеристика и факторы персистенции бифидофлоры кишечника в норме и при дисбиозах /Е.В. Иванова, Н.Б. Перунова, А.В. Валышев и др. //Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. - 2009. - № 2. - С. 89-93.

4. Прияткин, Р.Г. Секретируемые белки Staphylococcus aureus /Р.Г. Прияткин, О.М. Кузьменко //Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. - 2010. - № 4. - С. 118-124.

5. Beighton, D. Oral Bifidobacteria: Caries-associated bacteria in older adults /D. Beighton, M. Al-Haboubi, M. Matzourani //J. of Dental Research. - 2010. - V. 89(9). - P. 970-974.

Работа выполнена на средства Гранта Президента РФ МК-971.2010.7.