АНАЛОГ ПАНКРЕАТИЧЕСКОГО ПОЛИПЕПТИДА ЧЕЛОВЕКА (ВАРИАНТЫ), ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ НА ЕГО ОСНОВЕ, СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ ОЖИРЕНИЯ ИЛИ ДИАБЕТА, СПОСОБ СНИЖЕНИЯ АППЕТИТА, УМЕНЬШЕНИЯ ПОГЛОЩЕНИЯ ПИЩИ ИЛИ СНИЖЕНИЯ ПОТРЕБЛЕНИЯ КАЛОРИЙ И СПОСОБ КОСМЕТИЧЕСКОГО СНИЖЕНИЯ МАССЫ ПОСРЕДСТВОМ УКАЗАННОГО АНАЛОГА
ANALOGUE OF HUMAN PANCREATIC POLYPEPTIDE (VERSIONS), PHARMACEUTICAL COMPOSITION BASED THEREON, METHOD OF TREATING OBESITY OR DIABETES, METHOD OF REDUCING APPETITE, REDUCING FOOD INTAKE OR REDUCING CALORIE INTAKE AND METHOD FOR COSMETIC WEIGHT REDUCTION USING SAID ANALOGUE

Область техники, к которой относится изобретение
Данная заявка относится к использованию агентов для контроля аппетита, питания, приема пищи, потребления энергии и поглощения калорий, в частности, в области ожирения.
Уровень техники
Согласно данным Национальной службы здравоохранения и питания (NHANES III, 1988-1994) от одной трети до половины мужчин и женщин в Соединенных Штатах Америки имеют избыточную массу тела. В Соединенных Штатах Америки шестьдесят процентов мужчин и пятьдесят один процент женщин в возрасте 20 лет или старше имеют либо избыточную массу тела, либо ожирение. Кроме того, большая доля детей в Соединенных Штатах Америки имеют избыточную массу тела или ожирение.
Причина ожирения сложна и многофакторна. Растущее число доказательств позволяет предположить, что ожирение представляет собой не простую проблему самоконтроля, а является сложным нарушением, включающим регуляцию аппетита и энергетического обмена. Кроме того, ожирение связано с рядом состояний, связанных с повышенным уровнем заболеваемости и смертности в популяции. Хотя этиология ожирения окончательно не установлена, считают, что в нее вносят вклад генетические, метаболические, биохимические, культурные и психосоциальные факторы. Как правило, ожирение описывают как состояние, при котором избыточный жир в организме приводит к риску для здоровья пациента.
Имеется веское доказательство того, что ожирение связано с повышенным уровнем заболеваемости и смертности. Риск развития заболевания, например, сердечно-сосудистого или диабета 2 типа, независимо повышается с повышением индекса массы тела (BMI). В действительности данный риск количественно оценен как пятипроцентное повышение риска развития сердечного заболевания для женщин и семипроцентное повышение риска развития сердечного заболевания для мужчин для каждой точки ВМ1 выше 24,9 (см. статьи Kenchaiah et al., N. Engl. J. Med. 347:305, 2002; Massie, N. Engl. J. Med. 347:358, 2002). Кроме того, имеется веское доказательство того, что потеря массы у данных пациентов уменьшает важные факторы риска развития заболевания. Даже небольшое снижение массы тела, такое как 10% от исходной массы тела у взрослых, как с избыточной массой тела, так и с ожирением, связано с уменьшением факторов риска, таких как гипертензия, гиперлипидемия и гипергликемия.
Хотя диета и физическая нагрузка представляют собой простой способ уменьшения набора массы тела, пациенты с избыточной массой тела и ожирением часто не могут в достаточной мере контролировать данные факторы с целью эффективной потери массы тела. Доступна фармакотерапия. Администрацией по контролю за продуктами питания и лекарствами одобрен ряд лекарственных препаратов для снижения массы тела, которые можно использовать как часть комплексной программы снижения массы тела. Однако многие из данных лекарственных препаратов имеют серьезные вредные побочные эффекты. Когда менее инвазивные способы терпят неудачу и пациент находится в группе высокого риска заболеваемости и смертности, связанных с ожирением, хирургическое вмешательство, направленное на снижение массы тела, представляет собой альтернативу для тщательно отобранных пациентов с клинически тяжелым ожирением. Однако данные способы лечения входят в группу высокого риска и пригодны для использования только среди ограниченного числа пациентов. Они представляют собой не только пациентов с ожирением, которые хотят уменьшить массу тела. Люди с массой в рекомендуемом интервале, например, находящейся в верхней части рекомендуемого интервала, могут желать уменьшить массу тела, чтобы приблизить ее к идеальной массе. Таким образом, остается потребность в агентах, которые можно использовать для того, чтобы вызвать снижение массы у пациентов с избыточной массой или ожирением.
Панкреатический полипептид (далее - РР) представляет собой кишечный гормон, который высвобождается из поджелудочной железы в ответ на прием пищи. Считают, что РР действует в основном на рецепторы Y4. Показано, что уровень РР в плазме снижается в условиях, связанных с повышенным уровнем поглощения пищи, и повышается при нервной анорексии. В работах Asakawa et al. показано, что периферическое введение мышиного РР мышам (см. статьи Asakawa et al., Gastroenterology, 2003, 124, 1325-1336 и Asakawa et al., Peptides, 1999, 20, 1445-1448) вызывает равновесие отрицательной энергии путем снижения поглощения пищи и стимуляции потребления энергии. Показано, что у человека кратковременное введение человеческого РР детям с синдромом Прейдера-Вилли (см. статью Zipf et al., 1990, 51, 162-166) со скоростью 100 пмоль/кг/час в течение 90 минут не оказывает воздействия на аппетит. Позднее обнаружено, что несколько большее вливание человеческого РР (10 пмоль/кг/мин (т.е. 600 пмоль/кг/час) в течение 90 минут) снижает аппетит и поглощение пищи у здоровых добровольных участников эксперимента (см. статью Batterham, et al., J. Clin. Endrocrinol. Metab., 2003, 88(8), 3989-3992). Вливание вызывает снижение 24-часового кумулятивного потребления энергии на 25%. При более низкой скорости вливания 5 пмоль/кг/мин (т.е. 300 пмоль/кг/час) человеческого РР в течение 90 минут, наблюдают снижение потребления энергии на 11% у здоровых добровольных участников эксперимента (см. статью Jesudason, et al., Br. J. Nutrition, 2007, 97, 426-429). Однако, ясно, что активность нативного РР и его уровень разложения в крови являются слишком низкой и слишком быстрым, соответственно, чтобы соединение представляло жизнеспособный длительный способ лечения человека. Соответственно остается потребность в аналогах панкреатического полипептида с улучшенными свойствами.
4
19-23
4
19-23
Известен ряд аналогов панкреатического полипептида (далее -аналоги). Cabrele et al. синтезировали различные химеры панкреатического полипептида и нейропептида Y (см. статью Cabrele et al., Peptides, 2001, 22, 365-378). Показано, что химеры обладают сильной аффинностью к рецептору Y5. Аналоги 2-36[K, RYYSA]PP, [K] РР и [RYYSA]PP обладают сильной аффинностью к рецептору Y5 и обнаружено, что они имеют сильный стимулирующий эффект на поглощение пищи при интрацеребровентрикулярной инъекции (см. статью МсСгеа et al., 2000, 87, 47-58).
В заявке WO 2005/089786 описаны избирательные антагонисты рецептора Y4, которые представляют собой производные различных кишечных гормонов, включая PP. В WO 2005/089789 и WO 2007/038943 описаны избирательные агонисты рецептора Y2, которые представляют собой производные различных кишечных гормонов, включая PP. В данном контексте агонисты включают ряд производных РР с Glu в положении 4, замененным Lys. В WO 2005/089790 описаны избирательные антагонисты рецептора Y2 и Y4, которые представляют собой производные различных кишечных гормонов, включая РР. В данном контексте агонисты включают ряд производных РР с Pro положении 34, замененным Gln. В WO 2006/091506 описаны различные модифицированные по М-концу производные РР.
Раскрытие изобретения
Настоящее изобретение описывает аналог (I) панкреатического полипептида человека (SEQ. ID No 1), который отличается от нативного панкреатического полипептида по одному или более из следующих положений:
а) он имеет Ala в положении 1,
1-20
2-20
5-10
5-10
1-20
(i) замененный альтернативной аминокислотой, выбранной из D-Ala, Asp, Glu, Gly, His, Tyr, Lys, ацилированного Ala и ацилированного Lys, причем ацильная группа выбрана из: СО-Салкила, СО-Салкенила, СО-Сарила и СО-Сар-Салкила, и/или
1-20
2-20
5-10
5-10
1-20
(ii) снабженный дополнительной аминокислотой в положении 0, выбранной из Gly, Lys, His, Glu, Asp, Pro, lle, Phe, Val, Cys, Tyr, TyrTyrTyr, Ala, D-Ala, и ацилированным Ala, причем ацильная группа выбрана из: СО-Салкила, СО-Слкенила, СО-Сарила и СО-Сар-Салкила; или
(iii) который отсутствует
b) в положениях 3, 4, 5, 6, 7 и 10 он имеет
(i) Leu в положении 3, замененный альтернативной аминокислотой Не или Ser; и/или
(ii) Glu в положении 4, замененный альтернативной аминокислотой Lys; и/или
(iii) Pro в положении 5, замененный альтернативной аминокислотой Ala; и/или
(iv) Val в положении 6, замененный альтернативной аминокислотой, выбранной из Glu, His, He, Leu, Ser, Phe, Cys, Thr, Ala, Arg, Asp, Lys, Tyr и Met; и/или
(v) Tyr в положении 7, замененный альтернативной аминокислотой Ala, Asn или Phe; и/или
(vi) Asp в положении 10, замененный альтернативной аминокислотой Glu;
c) он имеет Asn в положении 11, замененный альтернативной аминокислотой, выбранной из Asp и Tyr; и/или Thr в положении 13, замененный альтернативной аминокислотой Ser;
d) в положениях 14-26 он имеет одну или более нативных аминокислот 14-26 (см. первый ряд, выделены жирным шрифтом), замененных аминокислотой, выбранной из аминокислоте соответствующей колонке ниже ее:
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
<b>Pro</b>
<b>Glu</b>
<b>Gln</b>
<b>Met</b>
<b>Ala</b>
<b>Gln</b>
<b>Tyr</b>
<b>Ala</b>
<b>Ala</b>
<b>Asp</b>
<b>Leu</b>
<b>Arg</b>
<b>Arg</b>
Glu
Gln
Glu
Leu
Asn
Arg
Tyr
Ser
Ala
Met
Lys
His
Asp
NLeu
Val
Lys
Phe
lle
Glu
Cys
NLeu
Lys
Lys-Ацил*
lle
Ser
His
Glu
Val
Ser
NLeu
Arg
Glu
Thr
Gly
Thr
Gln
Gln
lle
Glu
Leu
Lys
NLeu
Val
Val
*ацильная группа выбрана из: СО-С<sub>1-20</sub>алкила, СО-С<sub>2-20</sub>алкенила, СО-С<sub>5-10</sub>арила и СО-С<sub>5-10</sub>ар-С<sub>1-20</sub>алкила
е) в положениях 29, 30 и 31 он имеет:
(i) Met в положении 30, замененный альтернативной аминокислотой, выбранной из Leu, Arg, Glu, His, NLeu (норлейцин), lle, Val, Phe, Thr, Asn, Cys и Lys; и/или
(ii) Leu в положении 31, замененный альтернативной аминокислотой, выбранной из Не и Val; и/или
(iii) Asn в положении 29, замененный Asp
f) в положениях 34, 35 и 36 он имеет:
(i) Pro в положении 34, замененный альтернативной аминокислотой Gln, Asn, DPro, Leu, His или NVa (норвалин); и/или
(ii) Arg в положении 35, замененный альтернативной аминокислотой Gln или HArg (гомоаргинин); и/или
(iii) Tyr в положении 36, замененный альтернативной аминокислотой Phe
g) он димеризуется путем образования дисульфидной связи между парой остатков Cys, введенных в две молекулы по М-концам или в качестве замен Leu в положении 31 в двух молекулах,
h) он циклизуется путем образования дисульфидной связи между парой остатков Cys, введенных в качестве замены остатков аминокислот в паре положений, выбранных из следующего перечня: 8 и 17, 8 и 20, 5 и 24, 2 и 27, или между остатком Cys, введенным для замены аминокислоты в положении 28 или 29, и остатком Cys, введенным в качестве дополнительной аминокислоты в положении 0;
причем когда в аналоге отсутствует Ala1, он имеет по меньшей мере одно дополнительное изменение, отличное от одного или более, выбранных из Nle17 (норлейцин в 17 положении) и Nle30,
причем когда аналог включает один или более из Nle17, Nle30 и His34, то он имеет по меньшей мере одно дополнительное изменение, отличное от одного или более, выбранных из Nle17, Nle30 и His34, и
причем когда аналог включает Gln в положении 34, то он имеет по меньшей мере одно изменение, отличное от одного или более, выбранных из lle31, Val31, Leu30 и NLeu30.
для использования (i) при лечении (включая профилактическое лечение) ожирения или диабета у пациента или (ii) при снижении аппетита у пациента, снижении поглощения пищи у пациента и при снижении потребления калорий у пациента.
Изобретение также предусматривает дополнительные варианты применения соединения формулы (I), способы, в которых используют соединение формулы (I), композиции, включающие соединение формулы (I), и способы получения соединения формулы (I).
Краткое описание чертежей
На фигуре 1 показаны данные, полученные в эксперименте по подавлению аппетита, проведенном с использованием трех аналогов из примеров, представленных в изобретении, в виде гистограммы.
На фигуре 2 показаны данные, полученные в эксперименте по подавлению аппетита, проведенном с использованием трех аналогов из примеров, представленных в изобретении, в виде линейного графика.
Осуществление изобретения
Для облегчения обзора различных вариантов осуществления данного описания приводятся следующие объяснения специальных терминов:
Животное: живые многоклеточные позвоночные организмы, категория, которая включает, например, млекопитающих и птиц. Термин млекопитающее включает человека и млекопитающих, отличных от человека. Аналогично термин "пациент" включает человека и субъектов ветеринарии.
Аппетит: естественное желание или сильное желание пищи. В одном варианте осуществления аппетит измеряют путем обследования с целью оценки желания пищи. Повышенный аппетит, как правило, приводит к повышенному уровню пищевого поведения.
Агенты, подавляющие аппетит: соединения, которые снижают желание пищи. Коммерчески доступные агенты, подавляющие аппетит, включают, но без ограничения перечисленным, амфепрамон (диэтилпропион), фентермин, мациндол и фенилпропаноламин, фенфлурамин, дексфенфлурамин и флуоксетин.
2
2
2
2
Индекс массы тела (ВМ1): Математическая формула для измерения массы тела, иногда называемая также индекс Кветелета. ВМ1 рассчитывают путем деления массы (в кг) на рост (в м). Современными стандартами как для мужчин, так и для женщин, принимаемыми в качестве "нормы", являются ВМ1 20-24,9 кг/м. В одном варианте осуществления ВМ1, превышающий 25 кг/м, может быть использован для выявления субъекта с ожирением.
2
2
2
Ожирение 1 степени соответствует ВМ1 25-29,9 кг/м. Ожирение II степени соответствует ВМ1 30-40 кг/м; и ожирение III степени соответствует ВМ1 выше 40 кг/м (см. статью Jequier, Am. J Clin. Nutr. 45:1035-47, 1987). Идеальная масса тела будет варьировать в зависимости от типов и субъектов, основываясь на росте, телосложении, структуре костей и поле.
Консервативные замены: замена остатка аминокислоты другим, биологически близким остатком в полипептиде. Термин "консервативная вариация" также включает использование замененной аминокислоты, т.е. аминогруппы с одним или более атомов, замещенных другим атомом или группой, вместо исходной аминокислоты при условии, что антитела, возникающие к замещенному полипептиду, также иммунореактивны с незамещенным полипептидом.
Диабет: неспособность клеток транспортировать эндогенную глюкозу через свои мембраны либо вследствие эндогенной недостаточности инсулина и/либо дефекта чувствительности к инсулину. Диабет представляет собой хронический синдром нарушенного углеводного, белкового и жирового обмена вследствие недостаточной секреции инсулина или устойчивости к инсулину целевой ткани. Он проявляется в двух основных формах: инсулинозависимого сахарного диабета (IDDM, типа I) и инсулиннезависимого сахарного диабета (NIDDM, типа II), который отличается по этиологии, патологии, генетике, возрасту, в котором он возникает, и лечению.
Обе из двух основных форм диабета характеризуются неспособностью доставки инсулина в количестве и с точностью во времени, когда он необходим для контроля гомеостаза глюкозы. Диабет типа I или инсулинзависимый сахарный диабет (IDDM) вызывается разрушением β-клеток, которое приводит в результате к недостаточным уровням эндогенного инсулина. Диабет тип II или инсулиннезависимый сахарный диабет появляется в результате дефекта как чувствительности ребенка к инсулину, так и относительной недостаточности продукции инсулина.
Поглощение пищи: количество пищи, потребляемое субъектом. Поглощение пищи можно измерить по объему или по массе. Например, поглощение пищи может представлять собой общее количество пищи, поглощаемое субъектом. В ином случае поглощение пищи может представлять собой количество белков, жира, углеводов, холестерина, витаминов, минералов или любого другого компонента пищи субъекта.
Термин "поглощение белков" относится к количеству белка, потребляемого субъектом. Аналогично термины "поглощение жиров", "поглощение углеводов", "поглощение холестерина", "поглощение витаминов" и "поглощение минералов" относятся к количеству белков, жира, углеводов, холестерина, витаминов или минералов, потребляемых субъектом.
Гиперполяризация: Снижение мембранного потенциала клетки. Ингибирующие нейромедиаторы подавляют передачу нервных импульсов посредством гиперполяризации. Данную гиперполяризацию называют ингибирующим постсинаптическим потенциалом (IPSP). Хотя пороговое напряжение клетки не изменяется, для гиперполяризованной клетки необходим более сильный возбуждающий стимул для достижения порогового значения.
Нормальная суточная диета: среднее поглощение пищи для особи данного вида. Нормальная суточная диета может быть выражена в терминах потребления калорий, потребления белков, потребления углеводов и/или потребления жиров. Нормальная суточная диета у человека в основном включает следующее: приблизительно 2000, приблизительно 2400 или приблизительно 2800 до значительно большего количества калорий. Кроме того, нормальная суточная диета у человека включает от приблизительно 12 г до приблизительно 45 г белка, от приблизительно 120 г до приблизительно 610 г углевода и от приблизительно 11 г до приблизительно 90 г жира. Низкокалорийная диета составляла бы не больше чем приблизительно 85%, и предпочтительно не больше чем приблизительно 70% от нормального потребления калорий для человека.
У животных потребности в калориях и пище варьируют в зависимости от вида и размера животного. Например, у кошек общее потребление калорий/фунт, а также процентное распределение белка, углеводов и жира варьирует с возрастом кошки и репродуктивным состоянием. Однако общая рекомендация для кошек составляет 40 кал./фунт/день (18,2 кал./кг/день). От приблизительно 30% до приблизительно 40% должен составлять белок, от приблизительно 7% до приблизительно 10% должно происходить из углеводов и от приблизительно 50% до приблизительно 62,5% должно быть получено от поглощения жиров. Компетентный специалист в области техники легко может определить нормальную суточную диету особи любого вида.
2
2
2
Ожирение: состояние, при котором избыток жира в организме может подвергнуть риску здоровье пациента (см. статью Barlow и Dietz, Pediatrics 102:Е29, 1998; National Institutes of Health (Национальные институты здравоохранения), National Heart, Lung, и Blood Institute (Национальный институт сердца, легкого и крови) (NHLBI), Obes. Res. 6 (доп.2):51S-209S, 1998). Избыток жира в организме является результатом нарушения равновесия в потреблении энергии и расходовании энергии. Например, индекс массы тела (BMI) можно использовать для оценки ожирения. В соответствии с одной из обычно используемых договоренностей BMI от 25,0 кг/м до 29,9 кг/м означает избыточную массу, тогда как BMI 30 кг/мозначает ожирение.
В соответствии с другой договоренностью для оценки ожирения используют окружность талии. Согласно данной договоренности у мужчин окружность талии 102 см или более считают ожирением, тогда как у женщин окружность талии 89 см или более считают ожирением. Веские доказательства показывают, что ожирение воздействует как на заболеваемость, так и на смертность пациентов. Например, пациент с ожирением находится в группе повышенного риска развития сердечного заболевания, инсулиннезависимого диабета (типа 2), гипертензии, инсульта, рака (например, рака эндометрия, молочной железы, простаты и толстой кишки), дислипидемии, желчно-каменной болезни, апноэ во сне, пониженной фертильности и остеоартрита среди прочих заболеваний (см. статью Lyznicki et al., Am. Fam. Phys. 63:2185, 2001).
2
2
Избыточная масса тела: субъект, который весит больше своей идеальной массы тела. Субъект с избыточной массой тела может иметь ожирение, но необязательно имеет ожирение. Например, субъект с избыточной массой тела представляет собой любого субъекта, который желает снизить свою массу. В соответствии с одной из договоренностей субъект с избыточной массой представляет собой субъекта с BMI от 25,0 кг/м до 29,9 кг/м.
Панкреатический полипептид: термин панкреатический полипептид, как используют в данном контексте, относится к полипептиду поджелудочной железы, гормону, секретируемому в кровь, клетками, выстилающими нижний отдел тонкой кишки (подвздошной кишки) и толстую кишку. Если на термин не накладывают никаких других ограничений, он включает пептид, выделенный у любого вида.
Пегилированный и пегилирование: способ проведения реакции полиалкиленгликоля, предпочтительно активированного полиалкиленгликоля с образованием ковалентной связи. Может быть использован медиатор, например, аминокислота, например, лизин. Хотя "пегилирование" часто осуществляют с использованием полиэтиленгликоля или его производных, таких как метоксиполиэтиленгликоль, термин не ограничен в данном контексте использованием метоксиполиэтиленгликоля, но также включает использование любого другого эффективного полиалкиленгликоля, например, полипропиленгликоля.
Периферическое введение: введение вне центральной нервной системы. Периферическое введение не включает прямое введение в головной мозг. Периферическое введение включает, но без ограничения перечисленным, внутрисосудистое, внутримышечное, подкожное, ингаляционное, пероральное, ректальное, чрескожное или интраназальное введение.
Полипептид: полимер, в котором мономеры представляют собой остатки аминокислот, которые связаны друг с другом посредством амидных связей. Когда аминокислоты представляют собой о-аминокислоты, может быть использован либо L-оптический изомер, либо D-оптический изомер, причем L-изомеры предпочтительны. Термины "полипептид" или "белок", как используют в данном контексте, охватывают последовательность аминокислот и включают модифицированные последовательности, такие как гликопротеины. Термин "полипептид" специально покрывает природные белки, а также те, которые получены рекомбинантным или синтетическим путем. Термин "полипептидный фрагмент" относится к части полипептида, например, фрагменту, который демонстрирует по меньшей мере одну эффективную последовательность при связывании рецептора. Термин "функциональные фрагменты полипептида" относится ко всем фрагментам полипептида, который сохраняет активность полипептида. Биологически функциональные пептиды могут также включать слитые белки, в которых пептид, представляющий интерес, слит с другим пептидом, который не снижает свою требуемую активность.
Терапевтически эффективное количество: доза, достаточная для предупреждения развития, или для того, чтобы вызвать регрессию нарушения, или которая способна облегчить признак или симптом нарушения, или которая способна достигнуть требуемого результата. В ряде вариантов осуществления терапевтически эффективное количество соединения, соответствующего изобретению, представляет собой количество, достаточное для подавления или остановки набора массы, или количество, достаточное для снижения аппетита, или количество, достаточное для уменьшения потребления калорий или поглощения пищи либо для повышения расхода энергии.
Как замечено выше, изобретение предусматривает аналог панкреатического полипептида человека или его вариант или производное, либо его соль или сольват, предназначенные для применения при лечении (включая профилактическое лечение) ожирения или диабета у пациента, либо при снижении аппетита у пациента, снижении поглощения пищи у пациента или при снижении потребления калорий у пациента.
Обнаружено, что аналоги, соответствующие изобретению, обладают улучшенными свойствами относительно нативного панкреатического полипептида. Аналоги имеют более продолжительный полупериод существования в крови, чем нативный (природный) панкреатический полипептид человека, и/или они обладают более сильным связыванием с человеческим рецептором Y4, чем нативный панкреатический полипептид человека.
Полупериод существования аналога в крови важен, поскольку увеличенная продолжительность подавления аппетита может быть особенно важной, чтобы избежать эффект, известный как "избежание". Агенты, подавляющие аппетит, короткой продолжительности действия могут уменьшить аппетит в течение времени, покрывающего один прием пищи, в данный прием пищи пациент, как правило, поглощает меньше пищи. Однако, если агент, подавляющий аппетит, затем метаболизируется или иным образом удаляется из кровотока пациента, то ко времени следующего приема пищи пациент может снова обрести свой "нормальный" аппетит. В свете того, что пациент принял мало пищи в предшествующее время приема пищи, у пациента может быть в действительности повышенный аппетит во время второго приема пищи. Если пациент удовлетворяет такой аппетит, возможно, что поглощение пищи во время двух приемов пищи в целом оказывается не ниже, чем было бы поглощение пищи без агента, подавляющего аппетит. Иначе говоря, пациент мог "избежать" эффектов агента, подавляющего аппетит."Избежание" можно уменьшить путем использования дополнительных доз агента, подавляющего аппетит, или путем использования агента, подавляющего аппетит, с более длительной продолжительностью действия. Если пациент имеет пониженный аппетит в течение более длительного периода, то степень, в которой он может компенсировать недостаток пищи в одном приеме пищи, в следующий прием пищи снижается, поскольку существует практическое ограничение общего объема пищи, поглощаемого за определенный прием пищи.
Более того, обнаружено, что длительное постоянное вливание агента, подавляющего аппетит, короткой продолжительности действия менее эффективно, чем введение одной дозы агента, подавляющего аппетит, более длительного действия, даже если уровень агента, подавляющего аппетит, более короткой продолжительности действия поддерживают в кровотоке в течение аналогичного периода времени, что у агента, подавляющего аппетит, более длительного действия при непрерывном дозировании. В данном контексте считают, что соединение имеет более длительный полупериод существования в крови, чем нативный человеческий РР, если он а) обладает более высоким эффектом подавления аппетита, чем нативный человеческий РР в течение четырех часов от конца часа 4 до конца часа 8 после введения соединения тест-животному (например, мыши), или обладает более высоким эффектом, чем нативный человеческий РР в течение первых 24 часов после введения тест-животному (например, мыши), или b) его скорость снижения эффективности во времени ниже, чем у нативного человеческого РР, как оценивают путем сравнения соотношения уменьшения поглощения пищи (относительно нативного человеческого РР) между 0-4 час и 0-1 час ("соотношение 4:1") или между 0-24 час и 0-1 час ("соотношение 24:1") после введения тест-животному (например, мыши).
50
Рецептор Y4 является основным рецептором к панкреатическому полипептиду (см. статью Berglund et al. Experimental Biology и Medicine 2003, 228, 217-244). Связывание с рецептором Y4 можно оценить с помощью стандартных способов. Например, можно использовать ELISA или анализ на основе флуоресценции для оценки связывания соединения с рецептором. Функциональный анализ на клеточной основе можно использовать, чтобы оценить, является ли соединение агонистом или антагонистом рецептора. В данном контексте считают, что соединение является сильным связывающим агентом в отношении человеческого рецептора Y4, если оно имеет более низкий IC связывания, чем нативный человеческий РР.
Как замечено выше, соединения, соответствующие изобретению, отличаются от нативного панкреатического полипептида человека одним или более из следующих положений:
a) оно имеет Ala в положении 1,
1-20
2-20
5-10
5-10
1-20
(i) замененный альтернативной аминокислотой, выбранной из D-Ala, Asp, Glu, Gly, His, Tyr, Lys, ацилированного Ala и ацилированного Lys, причем ацильная группа выбрана из: СО-Салкила, СО-Салкенила, СО-Cарила и CO-Cар-Салкила, и/или
1-20
2-20
5-10
5-10
1-20
(ii) снабженный дополнительной аминокислотой в положении О, выбранной из Gly, Lys, His, Glu, Asp, Pro, lle, Phe, Val, Cys, Tyr, TyrTyrTyr, Ala, D-Ala, и ацилированным Ala, причем ацильная группа выбрана из: СО-Салкила, СО-Салкенила, СО-Cарила и СО-ар-Салкила; или
(iii) который отсутствует,
b) в положениях 3, 4, 5, 6, 7 и 10 он имеет
(i) Leu в положении 3, замененный альтернативной аминокислотой Не или Ser; и/или
(ii) Glu в положении 4, замененный альтернативной аминокислотой Lys; и/или
(iii) Pro в положении 5, замененный альтернативной аминокислотой Ala; и/или
(iv) Val в положении 6, замененный альтернативной аминокислотой, выбранной из Glu, His, He, Leu, Ser, Phe, Cys, Thr, Ala, Arg, Asp, Lys, Tyr и Met; и/или
(v) Tyr в положении 7, замененный альтернативной аминокислотой Ala, Asn или Phe; и/или
(vi) Asp в положении 10, замененный альтернативной аминокислотой Glu;
c) он имеет Asn в положении 11, замененный альтернативной аминокислотой, выбранной из Asp и Tyr; и/или Thr в положении 13, замененный альтернативной аминокислотой Ser;
d) в положениях 14-26 он имеет одну или более нативных аминокислот 14-26 (см. первый ряд, выделены жирным шрифтом), замененных аминокислотой, выбранной из аминокислот в соответствующей колонке ниже ее:
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
<b>Pro</b>
<b>Glu</b>
<b>Gln</b>
<b>Met</b>
<b>Ala</b>
<b>Gln</b>
<b>Tyr</b>
<b>Ala</b>
<b>Ala</b>
<b>Asp</b>
<b>Leu</b>
<b>Arg</b>
<b>Arg</b>
Glu
Gln
Glu
Leu
Asn
Arg
Tyr
Ser
Ala
Met
Lys
His
Asp
NLeu
Val
Lys
Phe
lle
Glu
Cys
NLeu
Lys
Lys-Ацил*
lle
Ser
His
Glu
Val
Ser
NLeu
Arg
Glu
Thr
Gly
Thr
Gln
Gln
lle
Glu
Leu
Lys
NLeu
Val
Val
*ацильная группа выбрана из: СО-С<sub>1-20</sub>алкила, СО-С<sub>2-20</sub>алкенила, СО-С<sub>5-10</sub>арила и СО-С<sub>5-10</sub>ар-С<sub>1-20</sub>алкила
е) в положениях 29, 30 и 31 он имеет:
(i) Met в положении 30, замененный альтернативной аминокислотой, выбранной из Leu, Arg, Glu, His, NLeu, lle, Val, Phe, Thr, Asn, Cys и Lys; и/или
(ii) Leu в положении 31, замененный альтернативной аминокислотой, выбранной из Не и Val; и/или
(iii) Asn в положении 29, замененный Asp,
t) в положениях 34, 35 и 36 он имеет:
(i) Pro в положении 34, замененный альтернативной аминокислотой Gln, Asn, DPro, Leu, His или NVa (норвалин); и/или
(ii) Arg в положении 35, замененный альтернативной аминокислотой Gln или HArg; и/или
(iii) Tyr в положении 36, замененный альтернативной аминокислотой Phe;
g) он димеризуется путем образования дисульфидной связи между парой остатков Cys, введенных в две молекулы по N-концам, или в качестве замен Leu в положении 31 в двух молекулах,
h) он циклизуется путем образования дисульфидной связи между парой остатков Cys, введенных в качестве замены остатков аминокислот в паре положений, выбранных из следующего перечня: 8 и 17, 8 и 20, 5 и 24, 2 и 27, или между остатком Cys, введенным для замены аминокислоты в положении 28 или 29, и остатком Cys, введенным в качестве дополнительной аминокислоты в положении 0;
причем когда в аналоге отсутствует Ala 1, он имеет по меньшей мере одно дополнительное изменение, отличное от одного или более, выбранных из N1e17 и Nle30,
причем когда аналог включает один или более из N1e17, Nle30 и His34, то он имеет по меньшей мере одно дополнительное изменение, отличное от одного или более, выбранных из N1e17, Nle30 и His34, и причем когда аналог включает Gln в положении 34, то он имеет по меньшей мере одно изменение, отличное от одного или более, выбранных из lle31, Val31, Leu30 и NLeu30,
для использования (i) при лечении (включая профилактическое лечение) ожирения или диабета у пациента или (ii) при снижении аппетита у пациента, снижении поглощения пищи у пациента и при снижении потребления калорий у пациента.
В одном варианте осуществления аналоги, которые а) имеют Ala в положении 1
1-20
2-20
5-10
5-10
1-20
(i) замененный альтернативной аминокислотой, выбранной из D-Ala, Lys, Asp, Glu, Gly, His, Tyr, Lys, ацилированного Ala и ацилированного Lys, причем ацильная группа выбрана из: СО-Салкила, СО-Салкенила, СОарила и СО-Сар-Салкила, и/или
1-20
2-20
5-10
5-10
12-20
(ii) снабженный дополнительной аминокислотой в положении О, выбранной из Gly, Lys, His, Glu, Asp, Pro, lle, Phe, Val, Cyc, Tyr, TyrTyrTyr, Ala, D-Ala и ацилированного Ala, причем ацильная группа выбрана из: СО-Салкила, СО-Салкенила, СОарила и СО-Cар-Салкила; или
(iii) который отсутствует,
1-20
2-20
5-10
5-10
1-20
представляют собой аналоги, в которых Ala в положении 1 (i) заменен альтернативной аминокислотой, выбранной из D-Ala, Lys, Asp, Glu, Gly, His, Tyr, Lys, ацилированного Ala и ацилированного Lys, причем ацильная группа выбрана из: СО-Салкила, СО-Салкенила, СОарила и СО-Сар-Салкила. Аналоги имеют более длительный период полусуществования в крови, чем нативный человеческий РР, и/или они обладают более сильным связыванием с рецептором Y4, чем нативный человеческий PP. Например, соединение, соответствующее SEQ ID NO: 11 (код 6435), с Ala в положении 1, замещенным лаурил-лизином, является более сильным связывающим агентом в отношении рецептора Y4, чем нативный человеческий РР; аналогично соединения, соответствующие SEQ ID NO:72 (код 6674) и SEQ ID NO:73 (код 6675), являются более сильными связывающими агентами, чем соединение, соответствующее SEQ ID NO:72 (код 6672). Например, соединение, соответствующее SEQ ID NO:228 (код 4055400), с Ala в положении 1, замещенным D-Ala, имеет более длительный полупериод существования в крови, чем нативный человеческий РР.
1-20
2-20
1-20
Предпочтительные замены аминокислот в положении 1 выбраны из Lys, D-Ala и ацил-Lys, где ацильная группа представляет собой СО-Салкил или СО-Салкенил, например, СО-Салкил. Наиболее предпочтительными являются Lys, D-Ala и Лаурил-Lys.
1-20
2-20
5-10
5-10
1-20
1-20
2-20
1-20
В одном варианте осуществления аналоги, которые а) имеют Ala в положении 1, измененный, как в а) см. выше, имеют Ala, снабженный дополнительной аминокислотой в положении 0, выбранной из Gly, Lys, His, Glu, Asp, Pro, lle, Phe, Val, Cys, Tyr, Tyr-TyrTyr, Ala, D-Ala и ацилированного Ala, причем ацильная группа выбрана из: СО-Салкила, СО-Салкенила, СО-Сарила и СО-Cар-Салкила. Например, соединения, соответствующие SEQ ID NO:9 (код 6433), SEQ ID NO:32 (код 6464), SEQ ID NO:51 (код 6646), SEQ ID NO:54 (код 6651), SEQ ID NO:55 (код 6652) и SEQ ID NO:56 (код 6653), имеют более длительный полупериод существования в крови, чем нативный человеческий РР. Соединения, соответствующие SEQ ID NO:52 (код 6647), SEQ ID NO:53 (код 6650), SEQ ID NO:56 (код 6653) и SEQ ID NO:57 (код 6654), являются более сильными связывающими агентами рецептора Y4, чем нативный человеческий PP. Предпочтительными ацильными группами являются СО-Салкил и СО-Салкенил, например СО-Салкил, в частности, лаурил или стеароил, особенно лаурил. Предпочтительными дополнительными аминокислотами в положении О являются Ala и Pro. В следующем варианте осуществления Ala в положении 1 снабжен дополнительной аминокислотой в положении 0, выбранной из Pro, Gly, His, Ala и Tyr, особенно Pro и Gly.
В предпочтительном варианте осуществления аналоги включают Ala в положении 1, снабженный дополнительной аминокислотой в положении 0, как описано выше. Данные аналоги имеют общую длину 37 аминокислот (пока отсутствуют дальнейшие удлинения или делеции). Обнаружено, что они имеют более длительный полупериод существования в крови, чем нативный человеческий PP. Имеется доказательство, позволяющее предположить, что аналоги, удлиненные в положении 0, менее чувствительны к расщеплению DPP IV, чем пептиды без удлинения. Кроме того, постулируют, что расщепление аналога длиной 37 аминокислот по М-концу посредством DPP IV приводит к генерации аналога из 35 аминокислот, который сохраняет активность в отношении рецептора (данное соединение представляет собой соединение, соответствующее настоящему изобретению, в котором а) Ala в положении 1 (iii) отсутствует). Обнаружено, что аналог РР длиной 34 аминокислоты (продукт отщепления двух М-концевых аминокислот от РР из 36 аминокислот) сохраняет меньшую активность, чем соединение из 35 аминокислот.
В варианте осуществления аналоги, которые а) имеют Ala в положении 1, изменены, как в а) см. выше, причем Ala в положении 1 отсутствует. Соединение, соответствующее примеру 11 (код 6435), имеет более длительный полупериод существования в крови, чем нативный человеческий PP.
В следующем варианте осуществления аналог включает Leu в положении 3, замененный альтернативной аминокислотой Не или Ser. Аналоги имеют более длительный полупериод существования в крови, чем нативный человеческий РР, и/или они обладают более сильным связыванием с рецептором Y4, чем нативный человеческий РР. Например, соединения, соответствующие SEQ ID NO:42 (код 6618) и SEQ ID NO:43 (код 6619), имеют более длительный полупериод существования в крови, чем нативный человеческий РР. Например, соединения, соответствующие SEQ ID NO:586 (код 4057640) и SEQ ID NO:587 (код 4057641), обладают более сильным связыванием с рецептором Y4, чем нативный человеческий РР.
В следующем варианте осуществления аналог включает Glu в положении 4, замененный альтернативной аминокислотой Lys. Аналоги имеют более длительный полупериод существования в крови, чем нативный человеческий РР, и/или они обладают более сильным связыванием с рецептором Y4, чем нативный человеческий РР. Например, соединения, соответствующие SEQ ID NO:19 (код 6446), имеют более длительный полупериод существования в крови, чем нативный человеческий РР. Например, соединения, соответствующие SEQ ID NO:586 (код 4057640) и SEQ ID NO:587 (код 4057641), обладают более сильным связыванием с рецептором Y4, чем нативный человеческий РР.
В следующем варианте осуществления аналог включает Pro в положении 5, замененный альтернативной аминокислотой Ala. Аналоги имеют более длительный полупериод существования в крови, чем нативный человеческий РР, и/или они обладают более сильным связыванием с рецептором Y4, чем нативный человеческий РР. Например, соединение, соответствующее SEQ ID NO:702 (код 4058286), обладает более сильным связыванием с рецептором Y4, чем нативный человеческий РР.
В следующем варианте осуществления аналог включает Val в положении 6, замененный альтернативной аминокислотой, выбранной из Glu, His, lle, Leu, Ser, Cys, Phe, Lys, Thr, Ala, Arg, Asp, Lys, Tyr и Met. Аналоги имеют более длительный полупериод существования в крови, чем нативный человеческий РР, и/или они обладают более сильным связыванием с рецептором Y4, чем нативный человеческий РР. Например, соединения, соответствующие SEQ ID NO:275 (код 4055745) и SEQ ID NO:276 (4055746), имеют более длительный полупериод существования в крови, чем нативный человеческий РР, и они обладают более сильным связыванием с рецептором Y4, чем нативный человеческий РР. Например, соединения, соответствующие SEQ ID NO:256 (код 4055710), SEQ ID NO:257 (код 4055711) и SEQ ID NO:258 (код 4055712), обладают более сильным связыванием с рецептором Y4, чем соединение, соответствующее SEQ ID NO:18 (код 6445). Предпочтительными аминокислотами для замены Val в положении 6 являются Phe и Glu, особенно Phe.
В следующем варианте осуществления аналог включает Tyr в положении 7, замененный альтернативной аминокислотой Ala, Asn или Phe. Аналоги имеют более длительный полупериод существования в крови, чем нативный человеческий РР, и/или они обладают более сильным связыванием с рецептором Y4, чем нативный человеческий РР. Например, соединения, соответствующие SEQ ID NO:1092 (код 4059668), имеют более длительный полупериод существования в крови, чем нативный человеческий РР, и они обладают более сильным связыванием с рецептором Y4, чем нативный человеческий РР. Например, соединения, соответствующие SEQ ID NO:929 (код 4059104), SEQ ID NO:1090 (код 4059937) и SEQ ID NO:1092 (код 4059939), обладают более сильным связыванием с рецептором Y4, чем нативный человеческий РР.
В следующем варианте осуществления аналог включает Asn в положении 11, замененный альтернативной аминокислотой, выбранной из Аsр и Tyr. Например, соединение, соответствующее SEQ ID NO:104 (код 6841), имеет более длительный полупериод существования в крови, чем соединение, соответствующее SEQ ID NO:102 (код 6839).
В следующем варианте осуществления аналог включает одну или более нативных аминокислот 14-26 (см. первый ряд, выделены жирным шрифтом), замененных аминокислотой, выбранной из аминокислот в соответствующей колонке ниже ее:
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
<b>Pro</b>
<b>Glu</b>
<b>Gln</b>
<b>Met</b>
<b>Ala</b>
<b>Gln</b>
<b>Tyr</b>
<b>Ala</b>
<b>Ala</b>
<b>Asp</b>
<b>Leu</b>
<b>Arg</b>
<b>Arg</b>
Glu
Gln
Glu
Leu
Asn
Arg
Tyr
Ser
Ala
Met
Lys
His
Asp
NLeu
Val
Lys
Phe
lle
Glu
Cys
NLeu
Lys
Lys-Ацил*
lle
Ser
His
Glu
Val
Ser
NLeu
Arg
Glu
Thr
Gly
Thr
Gln
Gln
lle
Glu
Leu
Lys
NLeu
Val
Val
*ацильная группа выбрана из: СО-С<sub>1-20</sub>алкила, СО-С<sub>2-20</sub>алкенила, СО-С<sub>5-10</sub>арила и СО-С<sub>5-10</sub>ар-С<sub>1-20</sub>алкил
Аналоги имеют более длительный полупериод существования в крови, чем нативный человеческий РР, и/или они обладают более сильным связыванием с рецептором Y4, чем нативный человеческий РР. Особенно предпочтительным является аналог, включающий одну или более из нативных аминокислот 16-23 (см. первый ряд, выделены жирным шрифтом), замененных аминокислотой, выбранной из аминокислот в соответствующей колонке ниже ее:
16
17
18
19
20
21
22
23
<b>Gln</b>
<b>Met</b>
<b>Ala</b>
<b>Gln</b>
<b>Tyr</b>
<b>Ala</b>
<b>Ala</b>
<b>Asp</b>
Glu
Leu
Asn
Arg
Tyr
Ser
Ala
Asp
Arg
Val
Lys
Glu
His
Ser
Данные аналоги обладают особенно сильным связыванием с рецептором Y4.
Особенно предпочтительные мотивы в области 16-23 включают: Asp Met Ala Arg Tyr Tyr Ser Ala
Glu Leu Asn Arg Tyr Tyr Ser Ala
Glu Leu Val Lys Tyr Tyr Ser Ala
Glu Leu Val Lys Tyr Tyr Ala Ser
Glu Leu Asn Arg Tyr Tyr Ala Ser
Gln Met Ala Arg Tyr Tyr Ser Ala
Gln Met Ala Arg Tyr Ala Ala Ala
Gln Met Ala Arg Tyr Ala Ala Glu
Gln Met Ala Arg Tyr Ala Ala Asp
Gln Met Ala Arg Tyr Tyr Ser Glu
Gln Met Ala Gln Tyr Ala Ala Ala
Gln Met Ala Gln Tyr Ala Ala Glu
Gln Met Ala His Tyr Ala Ala Ala
Gln Met Ala His Tyr Ala Ala Glu
Gln Met Ala Lys Tyr Ala Ala Asp
В частности:
Asp Met Ala Arg Tyr Tyr Ser Ala
Glu Leu Asn Arg Tyr Tyr Ser Ala
Glu Leu Val Lys Tyr Tyr Ser Ala
Glu Leu Val Lys Tyr Tyr Ala Ser
Glu Leu Asn Arg Tyr Tyr Ala Ser
Gln Met Ala Arg Tyr Tyr Ser Ala
Gln Met Ala Arg Tyr Ala Ala Ala
Gln Met Ala Arg Tyr Ala Ala Glu
Gln Met Ala Arg Tyr Tyr Ser Glu
Gln Met Ala Gln Tyr Ala Ala Glu
Gln Met Ala His Tyr Ala Ala Ala
Gln Met Ala His Tyr Ala Ala Glu
Gln Met Ala Lys Tyr Ala Ala Asp
Следующий особенно предпочтительный набор аналогов имеет одну или более из нативных аминокислот 15-25 (см. первый ряд, выделены жирным шрифтом), замененных аминокислотой, выбранной из аминокислот в соответствующей колонке ниже ее:
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
<b>Glu</b>
<b>Gln</b>
<b>Met</b>
<b>Ala</b>
<b>Gln</b>
<b>Tyr</b>
<b>Ala</b>
<b>Ala</b>
<b>Asp</b>
<b>Leu</b>
<b>Arg</b>
Gln
Glu
Leu
Asn
Arg
Tyr
Ser
Ala
Met
Lys
Val
Lys
Glu
His
Ser
Аналоги имеют особенно длинный полупериод существования в крови. Особенно предпочтительные мотивы в области 15-25 включают:
Glu Gln Met Ala Gln Tyr Ala Ala Asp Leu Arg
Glu Gln Met Ala Gln Tyr Ala Ala Ala Leu Arg
Glu Gln Met Ala Lys Tyr Ala Ala Asp Leu Lys
Glu Gln Met Ala Arg Tyr Tyr Ser Glu Leu Arg
Glu Gln Met Ala Arg Tyr Tyr Ser Ala Leu Arg
Glu Gln Met Ala Arg Tyr Ala Ala Asp Leu Lys
Glu Gln Leu Ala Gln Tyr Ala Ala Asp Leu Arg
Glu Glu Leu Asn His Tyr Tyr Ala Ser Leu Arg
Glu Glu Leu Val Lys Tyr Tyr Ala Ser Leu Arg
Gln Gln Met Ala Gln Tyr Ala Ala Glu Leu Arg
Gln Gln Met Ala Gln Tyr Ala Ala Glu Met Arg
В частности:
Glu Gln Met Ala Gln Tyr Ala Ala Asp Leu Arg
Glu Gln Met Ala Lys Tyr Ala Ala Asp Leu Lys
Glu Gln Met Ala Arg Tyr Tyr Ser Glu Leu Arg
Glu Gln Met Ala Arg Tyr Tyr Ser Ala Leu Arg
Glu Gln Met Ala Arg Tyr Ala Ala Asp Leu Lys
Glu Gln Leu Ala Gln Tyr Ala Ala Asp Leu Arg
Glu Glu Leu Asn His Tyr Tyr Ala Ser Leu Arg
Glu Glu Leu Val Lys Tyr Tyr Ala Ser Leu Arg
Gln Gln Met Ala Gln Tyr Ala Ala Glu Leu Arg
Gln Gln Met Ala Gln Tyr Ala Ala Glu Met Arg
Следующий особенно предпочтительный набор аналогов имеет одну или более из нативных аминокислот 15-26 (см. первый ряд, выделены жирным шрифтом), замененных аминокислотой, выбранной из аминокислот в соответствующей колонке ниже ее:
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
<b>Glu</b>
<b>Gln</b>
<b>Met</b>
<b>Ala</b>
<b>Gln</b>
<b>Tyr</b>
<b>Ala</b>
<b>Ala</b>
<b>Asp</b>
<b>Leu</b>
<b>Arg</b>
<b>Arg</b>
Gln
Glu
Leu
Val
Arg
Tyr
Ser
Ala
Lys
Lys
lle
Lys
Glu
Glu
Ser
Аналоги имеют особенно длинный полупериод существования в крови. Особенно предпочтительные мотивы в области 15-26 включают:
Glu Gln Met Ala Gln Tyr Ala Ala Ala Leu Arg Arg
Glu Gln Met Ala Arg Tyr Tyr Ser Ala Leu Arg Arg
Glu Gln Met Ala Glu Tyr Ala Ala Asp Leu Arg Arg
Glu Gln Met Ala Lys Tyr Ala Ala Asp Leu Lys Arg
Glu Gln Leu Ala Gln Tyr Ala Ala Asp Leu Arg Arg
Glu Gln Leu Ala Gln Tyr Ala Ala Asp Leu Arg Lys
Glu Glu lle Val Lys Tyr Tyr Ser Ala Leu Arg Arg
Glu Glu Leu Val Lys Tyr Tyr Ala Ser Leu Arg Arg
Gln Gln Met Ala Gln Tyr Ala Ala Glu Leu Arg Lys
Gln Gln Met Ala Gln Tyr Ala Ala Glu Leu Arg Arg
Gln Gln Leu Ala Gln Tyr Ala Ala Glu Leu Arg Arg
В частности:
Glu Gln Met Ala Arg Tyr Tyr Ser Ala Leu Arg Arg
Glu Gln Met Ala Glu Tyr Ala Ala Asp Leu Arg Arg
Glu Gln Met Ala Lys Tyr Ala Ala Asp Leu Lys Arg
Glu Gln Leu Ala Gln Tyr Ala Ala Asp Leu Arg Arg
Glu Gln Leu Ala Gln Tyr Ala Ala Asp Leu Arg Lys
Glu Glu lle Val Lys Tyr Tyr Ser Ala Leu Arg Arg
Glu Glu Leu Val Lys Tyr Tyr Ala Ser Leu Arg Arg
Gln Gln Met Ala Gln Tyr Ala Ala Glu Leu Arg Lys
Gln Gln Met Ala Gln Tyr Ala Ala Glu Leu Arg Arg
Gln Gln Leu Ala Gln Tyr Ala Ala Glu Leu Arg Arg
В одном варианте осуществления аналог включает в положениях 16-23 последовательность:
Gln Met Ala Lys Tyr Ala Ala Ala
Предпочтительные аналоги далее включают аналоги, содержащие:
- Ala в положении 23
- Arg Tyr Tyr Ser Glu в положениях 19-23
- Lys Tyr Ala Ala Ala в положениях 19-23
- Leu в положении 17
- NIeu в положении 17
- Glu в положении 23
- Arg в положении 19
- Lys в положении 19
- Lys в положении 19 и Ala в положении 23
- Arg в положении 19 и Ala в положении 23
- Arg в положении 19 и Glu в положении 23
- His в положении 19 и Glu в положении 23
В следующем варианте осуществления аналог включает в положениях 29, 30 и 31:
(i) Met в положении 30, замененный альтернативной аминокислотой, выбранной из Leu, Arg, Glu, His, NLeu, lle, Val, Phe, Thr, Asn, Cys и Lys; и/или
(ii) Leu в положении 31, замененный альтернативной аминокислотой, выбранной из lle и Val; и/или
(iii) Asn в положении 29, замененный Asp.
Аналоги имеют более длительный полупериод существования в крови, чем нативный человеческий РР, и/или они обладают более сильным связыванием с рецептором Y4, чем нативный человеческий РР. Например, соединения, соответствующие SEQ ID NO:259 (код 4055713), SEQ ID NO:262 (код 4055716) и SEQ ID NO:283 (код 4055857), имеют более длительный полупериод существования в крови, чем нативный человеческий РР. Например, соединения, соответствующие SEQ ID NO:259 (код 4055713), SEQ ID NO:260 (код 4055714) и SEQ ID NO:261 (код 4055715), обладают более сильным связыванием с рецептором Y4, чем нативный человеческий PP. Предпочтительные аналоги имеют Met в положении 30, замененный Lys, N-Leu, Val, lle или Leu, например Lys, N-Leu, lle или Leu, особенно Lys. Следующие предпочтительные аналоги имеют Met в положении 30, замененный Lys, N-Leu, lle или Leu, особенно Lys, и имеют Leu в положении 31.
Другие предпочтительные аналоги имеют Asn в положении 29, замененный Asp.
В следующем варианте осуществления аналог включает в положениях 34, 35 и 36:
(i) Pro в положении 34, замененный альтернативной аминокислотой Gln, Asn, DPro, Leu, His или NVa (норвалин); и/или
(ii) Arg в положении 35, замененный альтернативной аминокислотой Gln или HArg; и/или
(iii) Tyr в положении 36, замененный альтернативной аминокислотой Phe.
Аналоги имеют более длительный полупериод существования в крови, чем нативный человеческий РР, и/или они обладают более сильным связыванием с рецептором Y4, чем нативный человеческий РР. Например, соединения, соответствующие SEQ ID NO:24 (код 6453), SEQ ID NO:62 (код 6659), SEQ ID NO:255 (код 4055708) и SEQ ID NO:283 (код 4055857), обладают более сильным связыванием с рецептором Y4, чем нативный человеческий РР, и соединения, соответствующие SEQ ID NO:255 (код 4055708) и SEQ ID NO:283 (код 4055857), имеют более длительный полупериод существования в крови, чем нативный человеческий PP.
Предпочтительные аналоги имеют Gln или NVa в положении 34 и/или Phe в положении 36.
В следующем варианте осуществления аналог димеризуют путем образования дисульфидной связи между парой остатков Cys, введенных в С-концы двух молекул, или в качестве замен для Leu в положении 31 двух молекул.
Например, соединения, соответствующие SEQ ID NO:100 (код 6835) и SEQ ID NO:285 (код 4055860), имеют более длительный полупериод существования в крови, чем нативный человеческий PP.
В предпочтительном варианте осуществления аналог, соответствующий изобретению, включает комбинацию изменений, перечисленных в пунктах а)-g) выше. Особенно предпочтительные аналоги имеют:
- изменение в области 14-26 (см. выше d) и изменение в области 30 и 31 (см. выше е),
- изменение в положении 6 (см. выше b), изменение в положении 11 (см. выше с), изменение в области 14-26 (см. выше d) и изменение в области 30 и 31 (см. выше е),
- изменение в положении 1 (см. выше а) и изменение в области 30 и 31 (см. выше е),
- изменение в положении 1 (см. выше а), изменение в области 14-26 (см. выше d) и изменение в области 30 и 31 (см. выше е).
Например, аналог, соответствующий изобретению, может иметь дополнительный Ala в положении 0 и Lys в положении 30. Соединение, соответствующее SEQ ID NO:171 (код 7218), связывает рецептор Y4 сильнее, чем любое из соединений, соответствующих SEQ ID NO:9 (Ala 0, код 6433) или SEQ ID NO:281 (Lys 30, код 4055855). Например, аналог, соответствующий изобретению, может иметь дополнительный Ala в положении 0, Lys в положении 19 и Lys в положении 30. Соединение, соответствующее SEQ ID NO:348 (Ala 0, Lys19, Lys 30, код 4056385), связывает рецептор Y4 сильнее и имеет более длительный полупериод существования в крови, чем любое из соединений, соответствующих SEQ ID NO:171 (Ala 0, Lys 19, код 7218), SEQ ID NO:9 (Ala 0, код 6433), SEQ ID NO:224 (Lys 19, код 4055291) или SEQ ID NO:281 (Lys 30, код 4055855).
Например, аналог, соответствующий изобретению, может иметь Ala в положении 23 и Lys в положении 30. Соединение, соответствующее SEQ ID NO:167 (код 7214), связывает рецептор Y4 сильнее и имеет более длительный полупериод существования в крови, чем любое из соединений, соответствующих SEQ ID NO:277 (Ala 23, код 4055747) или SEQ ID NO:281 (Lys 30, код 4055855). Например, аналог может, кроме того, включать дополнительный Ala в положении 0. Соединение, соответствующее SEQ ID NO:168 (Ala 0, Ala 23 и Lys 30, код 7215), обладает еще более сильным связыванием с рецептором Y4.
Например, аналог, соответствующий изобретению, может иметь дополнительный Ala в положении 0 и Leu в положении 30. Соединение, соответствующее SEQ ID NO:59 (код 6656), имеет более длительный полупериод существования в крови, чем любое из соединений, соответствующих SEQ ID NO:9 (Ala 0, код 6433), или соединение с Leu в положении 30 и без других изменений относительно нативного РР (данные не показаны).
В следующем предпочтительном варианте осуществления аналог, соответствующий изобретению, включает комбинацию изменений, перечисленных выше в пунктах a)-g), где нативный Gln в положении 19 заменен, в частности, Lys, His или Arg (см. выше а); нативный Met в положении 30 заменен, в частности, Lys, His или Arg (см. выше е) и нативный Asp в положении 23 заменен, в частности, Glu или Ala (см. выше d).
В частности, обнаружено, что аналоги РР, в которых Met в положении 30 заменен Lys, His или Arg, особенно благоприятны в плане того, что имеют более длительный полупериод существования в крови, чем нативный человеческий РР, и/или более сильное связывание с рецептором Y4, чем нативный человеческий РР.
Кроме того, в частности, обнаружено, что аналоги РР, в которых Gln в положении 19 заменен Lys, His или Arg, особенно благоприятны в плане того, что имеют более длительный полупериод существования в крови, чем нативный человеческий РР, и/или более сильное связывание с рецептором Y4, чем нативный человеческий РР.
Соответственно предпочтительный набор аналогов имеет Gln в положении 19 и Met в положении 30, замененные Lys, His или Arg. Предпочтительный набор соединений, таким образом, определен последовательностью аминокислот:
XaaO-Xaa1-Pro-Leu-Glu-Pro-Xaa6-Xaa7-Pro-Gly-Xaa10-Xaa11-Ala-Xaa13-Pro-Xaa15-Хаа16-Хаа17-Хаа18-Хаа19-Tyr-Xaa21-Xaa22-Xaa23-Leu-Arg-Arg-Tyr-lle-Xaa29-Xaa30-Leu-Thr-Arg-Xaa34-Arg-Xaa36-NH2,
где:
ХааО-Хаа1 представляет собой Pro-Ala, Gly-Ala, His-Ala, Ala-Ala, Tyr-Ala, Ala или отсутствует;
Хаа6 представляет собой Glu, Ser, Thr, Val, His, Lys, His, lle или Asp;
Xaa7 представляет собой Tyr или Ala;
Хаа10 представляет собой Asp или Glu;
Хаа11 представляет собой Asn или Asp;
Хаа13 представляет собой Thr или Ser;
Хаа15 представляет собой Glu или Gln;
Хаа16 представляет собой Glu, Gln или Asp;
Хаа17 представляет собой Met, Leu, Lys или lle;
Хаа18 представляет собой Ala или Asn;
Хаа19 представляет собой Arg, Lys или His;
Хаа21 представляет собой Ala или Tyr;
Хаа22 представляет собой Ala или Ser;
Хаа23 представляет собой Glu, Ala или Asp;
Хаа29 представляет собой Asp или Asn;
Хаа30 представляет собой Lys, His или Arg;
Хаа34 представляет собой N-Val или Pro; и
Хаа36 представляет собой Tyr или Phe.
В одном варианте осуществления Хаа0-Хаа1 представляет собой Pro-Ala, Gly-Ala или отсутствует.
В одном варианте осуществления Xaa7 представляет собой Tyr.
В одном варианте осуществления Хаа100 представляет собой Asp.
В одном варианте осуществления Хаа11 представляет собой Asn. В альтернативном варианте осуществления Хаа11 представляет собой Asp.
В одном варианте осуществления Хаа13 представляет собой Thr.
В одном варианте осуществления Хаа15 представляет собой Glu. В альтернативном варианте осуществления Хаа15 представляет собой Gln.
В одном варианте осуществления Хаа16 представляет собой Glu или Gln. Например, Хаа16 может представлять собой Glu, или Хаа16 может представлять собой Gln.
В одном варианте осуществления Хаа17 представляет собой Met, Leu или Lys. Например, Хаа17 может представлять собой Met, Хаа17 может представлять собой Leu, или Хаа17 может представлять собой Lys.
В одном варианте осуществления Хаа18 представляет собой Ala.
В одном варианте осуществления Хаа19 представляет собой Arg. В альтернативном варианте осуществления Хаа19 представляет собой Lys. В альтернативном варианте осуществления Хаа19 представляет собой His.
В одном варианте осуществления Хаа 21 представляет собой Ala. В альтернативном варианте осуществления, Хаа21 представляет собой Tyr.
В одном варианте осуществления Хаа22 представляет собой Ala. В альтернативном варианте осуществления Хаа22 представляет собой Ser.
В одном варианте осуществления Хаа23 представляет собой Glu или Ala. Например, Хаа23 может представлять собой Glu, или Хаа23 может представлять собой Asp. Особенно предпочтительный набор аналогов имеет нативный Gln в положении 19, нативный Met в положении 30, замененный Lys, His или Аrg, и нативный Asp в положении 23, замененный Glu или Ala.
В одном варианте осуществления Хаа29 представляет собой Asp. альтернативном варианте осуществления Хаа29 представляет собой Asn.
В одном варианте осуществления Хаа30 представляет собой Lys или His. Например Хаа 30 может представлять собой Lys, или Хаа30 может
представлять собой Arg.
В одном варианте осуществления Хаа 34 представляет собой Pro.
В одном варианте осуществления Хаа36 представляет собой Tyr. В альтернативном варианте осуществления Хаа представляет собой Phe.
Особенно предпочтительными соединениями, соответствующими изобретению, которые отвечают данным критериям, являются соединения с кодовыми номерами:
4056796, 4056797, 4056801, 4057018, 4057111, 4057113, 4057118, 4057134, 4057136, 4057137, 4057138, 4057151, 4057231, 4057258, 4057269, 4057440, 4057598, 4057603, 4057604, 4057611, 4057612, 4057630, 4057634, 4057637, 4057643, 4057753, 4057766, 4058072, 4058079, 4058149, 4058166, 4058167, 4058281, 4058369, 4058370, 4058371, 4058376, 4058377, 4058379, 4058492, 4058503, 4058505, 4058506, 4058582, 4058667, 4058668, 4058671, 4058676, 4058691, 4058705, 4058911, 4058912, 4059008, 4059013, 4059025, 4059350, 4059351, 4059361, 4059362, 4059363, 4059370, 4059376, 4059384, 4059385, 4059387, 4059468, 4059469, 4059653, 4059665, 4059666, 4060204, 4060272, 4060274, 4060282, 4060284, 4060316, 4060358, 4060680, 4060684, 4060685, 4060686, 4060689, 4060893, 4061090 и 4061236.
Кроме того, изобретение предусматривает соединение, которое представляет собой аналог (II) панкреатического полипептида человека (SEQ. ID No 1), который отличается от нативного панкреатического полипептида человека по одному или более из следующих положений:
a) он имеет Ala в положении 1
1-20
2-20
5-10
5-10
1-20
(i) замененный альтернативной аминокислотой, выбранной из D-Ala, Asp, Glu, Gly, His, Tyr, Lys, ацилированного Ala и ацилированного Lys, причем ацильная группа выбрана из: СО-С-алкила, СО-Салкенила, СО-Сарила и СО-Сар-Салкила, и/или
1-20
2-20
5-10
5-10
1-20
(ii) снабженный дополнительной аминокислотой в положении О, выбранной из Gly, Lys, His, Glu, Asp, Pro, lle, Phe, Val, Cys, Tyr, TyrTyrTyr, Ala, D-Ala и ацилированного Ala, причем ацильная группа выбрана из: СО-Салкила, СО-Салкенила, СОарила и СО-Сар-Салкила, или
(iii) который отсутствует,
b) в положениях 3, 4, 6, 7 и 10, он имеет (i) Leu в положении 3, замененный альтернативной аминокислотой Не или Ser; и/или
(ii) Glu в положении 4, замененный альтернативной аминокислотой Lys;
и/или
(iii) Val в положении 6, замененный альтернативной аминокислотой, выбранной из Glu, His, He, Leu, Ser, Phe, Cys, Thr и Met; и/или
(iv) Tyr в положении 7, замененный альтернативной аминокислотой Ala или Phe; и/или
(v) Asp в положении 10, замененный альтернативной аминокислотой Glu;
c) он имеет Asn в положении 11, замененный альтернативной аминокислотой, выбранной из Asp и Tyr; и/или Thr в положении 13, замененный альтернативной аминокислотой Ser;
d) в положениях 14-26, он имеет одну или более нативных аминокислот 14-26 (см. первый ряд, выделены жирным шрифтом), замененных аминокислотой, выбранной из аминокислот в соответствующей колонке ниже ее:
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
<b>Pro</b>
<b>Glu</b>
<b>Gln</b>
<b>Met</b>
<b>Ala</b>
<b>Gln</b>
<b>Tyr</b>
<b>Ala</b>
<b>Ala</b>
<b>Asp</b>
<b>Leu</b>
<b>Arg</b>
<b>Arg</b>
Glu
Gln
Glu
Leu
Asn
Arg
Tyr
Ser
Ala
Met
Lys
His
Asp
NLeu
Val
Lys
Phe
lle
Glu
Cys
NLeu
Lys
Lys-Ацил*
lle
His
Glu
Val
Ser
Arg
Glu
Thr
Gly
Thr
Gln
Gln
lle
Glu
Leu
Lys
NLeu
Val
*ацильная группа выбрана из: СО-С<sub>1-20</sub>алкила, СО-С<sub>2-20</sub>алкенила, СО-С<sub>5-10</sub>арила и СО-C<sub>5-10</sub>ар-С<sub>1-20</sub>алкила
е) в положениях 30 и 31 он имеет:
(i) Met в положении 30, замененный альтернативной аминокислотой, выбранной из Leu, Arg, Glu, His, NLeu, lle, Val, Phe, Thr, Asn, Cys и Lys; и/или
(ii) Leu в положении 31, замененный альтернативной аминокислотой, выбранной из Не и Val,
f) в положениях 34, 35 и 36 он имеет:
(i) Pro в положении 34, замененный альтернативной аминокислотой Gln, Asn, DPro, Leu, His или NVa (норвалином); и/или
(ii) Arg в положении 35, замененный альтернативной аминокислотой Gln или HArg; и/или
(iii) Tyr в положении 36, замененный альтернативной аминокислотой Phe,
g) он димеризуется путем образования дисульфидной связи между парой остатков Cys, введенных в две молекулы по С-концам, или в качестве замен Leu в положении 31 в двух молекулах,
h) он циклизуется путем образования дисульфидной связи между парой остатков Cys, введенных в качестве замены остатков аминокислот в паре положений, выбранных из следующего перечня: 8 и 17, 8 и 20, 5 и 24, 2 и 27, или между остатком Cys, введенным для замены аминокислоты в положении 28 или 29 и остатком Cys, введенным в качестве дополнительной аминокислоты в положении 0;
причем когда в аналоге отсутствует Ala1, он имеет по меньшей мере одно дополнительное изменение, отличное от одного или более, выбранных из Nle17 и Nle30,
причем когда аналог включает один или более из Nle17, Nle30 и His34, то он имеет по меньшей мере одно дополнительное изменение, отличное от одного или более, выбранных из Nle17, Nle30 и His34, и
причем когда аналог включает Gln в положении 34, то он имеет по меньшей мере одно изменение, отличное от одного или более, выбранных из lle31, Val31, Leu30 и NLeu30
или его вариант либо производное; или его соль либо сольват, и при этом если аналог включает одно или более из следующего:
- Arg в положении 19 (необязательно с Phe в положении 6)
- Tyr или Glu в положении 21 (необязательно с Phe в положении 6)
- Ser в положении 22 (необязательно с Phe в положении 6)
- Ala или Gln в положении 23 (необязательно с Phe в положении 6) или, если аналог включает одно из следующего:
- Glu в положении 23 и Glu в положении 6
- Asp в положении 11, и Gln в положении 15, и Glu в положении 23, и Met в положении 24
- Met в положении 6 и Tyr в положении 11, и Glu в положении 21, и Thr в положении 22, и Gln в положении 23, и Thr в положении 30, то аналог включает по меньшей мере одно следующее отличие от нативного панкреатического полипептида человека.
Изобретение предусматривает соединение формулы (II), предназначенное для применения в качестве лекарственного средства. Предпочтительными соединениями, соответствующими изобретению, являются описанные выше.
Дополнительные специальные варианты осуществления согласно определенным предпочтительным вариантам осуществления изобретения аналог панкреатического полипептида человека (SEQ. ID No 1) отличается от нативного панкреатического полипептида человека по одному или более из следующих положений:
a) он имеет Ala в положении 1
1-20
2-20
5-10
5-10
1-20
(i) замененный альтернативной аминокислотой, выбранной из D-Ala, Asp, Glu, Gly, His, Tyr, Lys, ацилированного Ala и ацилированного Lys, причем ацильная группа выбрана из: СО-Салкила, СО-Салкенипа, СО-Сарила и СО-Сар-Салкила, и/или
1-20
2-20
5-10
5-10
1-20
(ii) снабженный дополнительной аминокислотой в положении О, выбранной из Gly, Lys, His, Glu, Asp, Pro, lle, Phe, Val, Cys, Tyr, TyrTyrTyr, Ala, D-Ala и ацилированного Ala, причем ацильная группа выбрана из: СО-Салкила, СО-Салкенила, СО-Сарила и СО-ар-Салкила, или
(iii) который отсутствует,
b) в положениях 3, 4, 6, 7 и 10 он имеет
(i) Leu в положении 3, замененный альтернативной аминокислотой Не или Ser; и/или
(ii) Glu в положении 4, замененный альтернативной аминокислотой Lys; и/или
(iii) Val в положении 6, замененный альтернативной аминокислотой, выбранной из Glu, His, He, Leu, Ser, Phe, Cys, Thr и Met; и/или
(iv) Tyr в положении 7, замененный альтернативной аминокислотой Ala или Phe; и/или
(v) Asp в положении 10, замененный альтернативной аминокислотой Glu;
c) он имеет Asn в положении 11, замененный альтернативной
аминокислотой, выбранной из Asp и Tyr; и/или Thr в положении 13, замененный альтернативной аминокислотой Ser;
d) в положениях 14-26 он имеет одну или более из нативных аминокислот 14-26 (см. первый ряд, выделены жирным шрифтом), замененных аминокислотой, выбранной из аминокислот в соответствующей колонке ниже ее:
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
<b>Pro</b>
<b>Glu</b>
<b>Gln</b>
<b>Met</b>
<b>Ala</b>
<b>Gln</b>
<b>Tyr</b>
<b>Ala</b>
<b>Ala</b>
<b>Asp</b>
<b>Leu</b>
<b>Arg</b>
<b>Arg</b>
Glu
Gln
Glu
Leu
Asn
Arg
Tyr
Ser
Ala
Met
Lys
His
Asp
NLeu
Val
Lys
Phe
lle
Glu
Cys
NLeu
Lys
Lys-Ацил*
lle
His
Glu
Val
Ser
Arg
Glu
Thr
Gly
Thr
Gln
Gln
lle
Glu
Leu
Lys
NLeu
Val
*ацильная группа выбрана из: СО-С<sub>1-20</sub>алкила, СО-С<sub>2-20</sub>алкенила, СО-С<sub>5-10</sub>арила и СО-С<sub>5-10</sub>ар-С<sub>1-20</sub>алкила
е) в положениях 29, 30 и 31 он имеет:
(i) Met в положении 30, замененный альтернативной аминокислотой, выбранной из Leu, Arg, Glu, His, NLeu, lle, Val, Phe, Thr, Asn, Cys и Lys; и/или
(ii) Leu в положении 31, замененный альтернативной аминокислотой, выбранной из Не и Val; и/или
(iii) Asn в положении 29, замененный Asp,
f) в положениях 34, 35 и 36 он имеет:
(i) Pro в положении 34, замененный альтернативной аминокислотой Gln, Asn, DPro, Leu, His или NVa (норвалином); и/или
(ii) Arg в положении 35, замененный альтернативной аминокислотой Gln или HArg; и/или
(iii) Tyr в положении 36, замененный альтернативной аминокислотой Phe,
g) он димеризуется путем образования дисульфидной связи между парой остатков Cys, введенных в две молекулы по N-концам или в качестве замен Leu в положении 31 в двух молекулах,
h) он циклизуется путем образования дисульфидной связи между парой остатков Cys, введенных в качестве замены остатков аминокислот в паре положений, выбранных из следующего перечня: 8 и 17, 8 и 20, 5 и 24, 2 и 27, или между остатком Cys, введенным для замены аминокислоты в положении 28 или 29, и остатком Cys, введенным в качестве дополнительной аминокислоты в положении 0;
причем когда в аналоге отсутствует Ala в положении 1, он имеет по меньшей мере одно дополнительное изменение, отличное от одного или более, выбранных из М1е17 и Nle30,
причем когда аналог включает один или более из М1е17, Nle30 и His34, то он имеет по меньшей мере одно дополнительное изменение, отличное от одного или более, выбранных из Nle17, Nle30 и His34, и
причем когда аналог включает Gln в положении 34, то он имеет по меньшей мере одно изменение, отличное от одного или более, выбранных из lle31, Val31, Leu30 и NLeu30.
Необязательно, если аналог включает одну или более из следующих замен:
- Arg в положении 19 (необязательно с Phe в положении 6),
- Tyr или Glu в положении 21 (необязательно с Phe в положении 6),
- Ser в положении 22 (необязательно с Phe в положении 6),
- Ala или Gln в положении 23 (необязательно с Phe в положении 6), или если аналог включает одно из следующего:
- Glu в положении 23 и Glu в положении 6,
- Asp в положении 11, и Gln в положении 15, и Glu в положении 23, и Met в положении 24,
- Met в положении 6, и Tyr в положении 11, и Glu в положении 21 и ТПг, в положении 22 и
- Gln в положении 23 и Thr в положении 30, то аналог включает по меньше мере одно из других отличий от нативного панкреатического полипептида человека.
Аналоги могут быть необязательно предназначены для использования для лечения (включая профилактическое лечение) ожирения или диабета у пациента или для снижения аппетита у пациента, для снижения поглощения пищи у пациента или для снижения потребления калорий у пациента.
Следующие конкретные варианты осуществления изобретения направлены на аналог панкреатического полипептида человека (SEQ. ID No 1), который отличается от нативного панкреатического полипептида человека по одному или более из следующих положений:
a) он имеет Ala в положении 1
1-20
2-20
5-10
5-10
1-20
(i) замененный альтернативной аминокислотой, выбранной из D-Ala, Lys, ацилированного Ala и ацилированного Lys, причем ацильная группа выбрана из: СО-Салкила, СО-Салкенила, CO-Cарила и СО-Сар-Салкила, и/или
1-20
2-20
5-10
5-10
1-20
(ii) снабженный дополнительной аминокислотой в положении О, выбранной из Gly, Lys, His, Glu, Asp, Pro, Tyr, TyrTyrTyr, Ala, D-Ala и ацилированного Ala, причем ацильная группа выбрана из: СО-Салкила, СО-Салкенила, CO-Cарила и СОар-Салкила, или
(iii) который отсутствует,
b) он имеет Val в положении 6, замененный альтернативной аминокислотой, выбранной из Glu, Phe, Lys, Thr и Met;
c) он имеет Asn в положении 11, замененный альтернативной аминокислотой, выбранной из Asp и Tyr;
d) в положениях 14-26 он имеет одну или более нативных аминокислот 14-26 (см. первый ряд, выделены жирным шрифтом), замененных аминокислотой, выбранной из аминокислот в соответствующей колонке ниже ее:
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
<b>Pro</b>
<b>Glu</b>
<b>Gln</b>
<b>Met</b>
<b>Ala</b>
<b>Gln</b>
<b>Tyr</b>
<b>Ala</b>
<b>Ala</b>
<b>Asp</b>
<b>Leu</b>
<b>Arg</b>
<b>Arg</b>
Glu
Gln
Glu
Leu
Asn
Arg
Tyr
Ser
Ala
Met
Lys
His
Asp
NLeu
Val
Lys
Phe
lle
Glu
NLeu
Lys
Lys-Ацил*
lle
His
Glu
Val
Ser
Arg
Glu
Thr
Gly
Thr
Gln
*ацильная группа выбрана из: СО-С<sub>1-20</sub>алкила, СО-С<sub>2-20</sub>алкенила, СО-С<sub>5-10</sub>арила и СО-С<sub>5-10</sub>ар-С<sub>1-20</sub>алкила
e) в положениях 30 и 31 он имеет:
(i) Met в положении 30, замененный альтернативной аминокислотой, выбранной из Leu, NLeu, lle, Val, Phe, Thr, Asn, Cys и Lys; и/или
(ii) Leu в положении 31, замененный альтернативной аминокислотой, выбранной из lle и Val,
f) в положениях 34, 35 и 36 он имеет:
(i) Pro в положении 34, замененный альтернативной аминокислотой Gln, His или NVa (норвалином); и/или
(ii) Arg в положении 35, замененный альтернативной аминокислотой Gln или HArg; и/или
(iii) Tyr в положении 36, замененный альтернативной аминокислотой Phe,
g) он димеризуется посредством образования дисульфидной связи между парами остатков Cys, введенных в две молекулы по С-концам, или в виде замен Leu в положении 31 в двух молекулах, причем когда в аналоге отсутствует А1а1, то он имеет по меньшей мере одно
дополнительное изменение, отличное от одного или более, выбранных из Nle17 и Nle30,
причем когда аналог включает один или более из Nle17, Nle30 и His34, то он имеет по меньшей мере одно следующее изменение, отличное от одного или более, выбранных из Nle17, Nle30 и His34, и
причем когда аналог включает Gln в положении 34, то он имеет по меньшей мере одно следующее изменение, отличное от одного или более, выбранных из lle31, Val31, Leu30 и NLeu30.
Необязательно, если аналог включает одно или более из следующего:
- Arg в положении 19 (необязательно с Phe в положении 6),
- Tyr или Glu в положении 21 (необязательно с Phe в положении 6),
- Ser в положении 22 (необязательно с Phe в положении 6),
- Ala или Gln в положении 23 (необязательно с Phe в положении 6), или если аналог включает одно из следующего:
- Glu в положении 23 и Glu в положении 6,
- Asp в положении 11, и Gln в положении 15, и Glu в положении 23, и Met в положении 24,
- Met в положении 6, и Tyr в положении 11, и Glu в положении 21, и Thr в положении 22 и
- Gln в положении 23 и Thr в положении 30,
то аналог включает по меньшей мере одно дополнительное отличие от нативного панкреатического полипептида человека.
Аналоги могут быть необязательно предназначены для использования (i) для лечения (включая профилактическое лечение) ожирения или диабета у пациента или (ii) для снижения аппетита у пациента, для снижения поглощения пищи у пациента или для снижения потребления калорий у пациента.
Варианты:
Остальные части молекулы РР могут представлять собой варианты нативных частей, например, они могут представлять собой варианты эквивалентных нативных человеческих частей. Варианты включают части РР с делециями, инсерциями, инверсиями, повторами и заменами (например, консервативными заменами и неконсервативными заменами; см., например, нижеприведенную таблицу 1), которые сохраняют по меньшей мере некоторую активность соответствующей молекулы неварианта, когда находятся в молекуле, соответствующей изобретению. Больше чем одна аминокислота (например, 2, 3 или 4) может быть исключена или введена либо заменена другой аминокислотой. Соответственно, части РР, как присутствуют в соединении формулы (I), предпочтительно включают по меньшей мере 25 аминокислот нативной последовательности панкреатического РР, более предпочтительно по меньшей мере 28 аминокислот нативной последовательности человеческого РР, например по меньшей мере 30 аминокислот нативной последовательности человеческого РР, например по меньшей мере 32 или по меньшей мере 34 аминокислоты нативной последовательности человеческого РР.
Например, соединение формулы (I) предпочтительно включает по меньшей мере 25 аминокислот нативной последовательности человеческого РР, более предпочтительно по меньшей мере 28 аминокислот нативной последовательности человеческого РР, например по меньшей мере 30 аминокислот нативной последовательности человеческого РР, например по меньшей мере 32 или по меньшей мере 34 аминокислоты нативной последовательности человеческого РР.
Как правило, консервативные замены представляют собой замены одной на другую алифатических аминокислот Ala, Val, Leu и lle; взаимозамены Ser и Thr, содержащих гидроксиостатки, взаимозамену кислых аминокислот Asp и Glu, взаимозамену между амидными остатками Asn и Gln, взаимозамену основных остатков Lys и Аrg, взаимозамену ароматических остатков Рhе и Tyr и взаимозамену аминокислот маленького размера Ala, Ser, Thr, Met и Gly. Указание относительно того, как сделать фенотипически молчащие замены аминокислот, т.е. замены, которые не изменяют экспрессируемый фенотип, представлены в статье Bowie et al., Science 247:1306-1310, 1990.
Таблица 1:
Неограничивающие примеры консервативных замен аминокислот
Исходный остаток
Консервативные замены
Ala
Ser
Arg
Lys
Asn
Gln, His
Asp
Glu
Cys
Ser
Gln
Asn
Исходный остаток
Консервативные замены
Glu
Asp
His
Asn; Gln
lle
Leu, Val
Leu
lle; Val
Lys
Arg; Gln
Met
Leu; lle
Phe
Met; Leu; Tyr
Ser
Thr
Thr
Ser
Trp
Tyr
Tyr
Trp; Phe
Val
lle; Leu
Следующим примером варианта является соединение с Glu в положении 4, замененным Lys. В одном варианте осуществления варианты не включают соединения с Glu в положении 4, замененным Lys. Следующим примером варианта является соединение с Не в положении 28, замененным Leu. Следующим примером варианта является соединение с Arg в положении 33, замененным Lys.
Варианты РР далее включают варианты, в которых одна или более аминокислот (например, 2, 3 или 4) РР одного вида заменена аминокислотой, находящейся в эквивалентном положении в РР, выделенном у различных видов. Известны последовательности РР разных видов.
В одном воплощении изобретения аналог не является вариантом.
Производные
Соединение, соответствующее изобретению, может включать структуру формулы (I), модифицированную хорошо известными способами, включая амидирование, гликозилирование, карбамилированием, ацилирование, например ацетилирование, сульфатирование, фосфорилирование, циклизация, липидизация и пегилирование. Структуру формулы (I) можно модифицировать в случайных положениях внутри молекулы, или в предварительно заданных положениях в молекуле, и она может включать одну, две, три или более присоединенных химических групп. Производные включают соединения, в которых N-концевая NH2-группа заменена другой группой, например метокси-группой.
Соединение, соответствующее изобретению, может представлять собой слитый белок, в котором структура формулы (I) слита с другим белком или полипептидом (партнером слияния) с использованием рекомбинантных способов, известных в области техники. Альтернативно данный слитый белок можно синтезировать синтетическим путем любым известным способом. Данный слитый белок включает структуру формулы (I). Любой подходящий пептид или белок можно использовать в качестве партнера слияния (например, сывороточный альбумин, углеродангидраза, глутатион-8-трансфераза или тиоредоксин и т.п.). Предпочтительные партнеры слияния не будут иметь вредную биологическую активность in vivo. Данные слитые белки можно получить связыванием карбоксиконца партнера слияния с аминоконцом структуры формулы (I) или наоборот. Необязательно можно использовать расщепляемый линкер для связывания структуры формулы (I) с партнером слияния. Полученный в результате расщепляемый слитый белок может расщепляться in vivo, так что высвобождается активная форма соединения, соответствующего изобретению. Примеры данных расщепляемых линкеров включают, но без ограничения перечисленным, линкеры D-D-D-D-Y, G-P-R, A-G-G и H-P-F-H-L, которые могут расщепляться энтерокиназой, тромбином, ферментом, расщепляющим убиквитин и ренином, соответственно (см., например, патент США No. 6410707).
Соединение, соответствующее изобретению, может представлять собой физиологически функциональное производное структуры формулы (I). Термин "физиологически функциональное производное" используют в данном контексте для обозначения химического производного соединения формулы (I), имеющего такую же физиологическую функцию, как соответствующее немодифицированное соединение формулы (I). Например, физиологически функциональное производное может превращаться в организме в соединение формулы (I). Согласно настоящему изобретению примеры физиологически функциональных производных включают сложные эфиры, амиды и карбаматы; предпочтительно сложные эфиры и амиды.
1-20
2-20
5-10
5-10
1-20
Фармацевтически приемлемые сложные эфиры и амиды соединений, соответствующих изобретению, могут включать Салкил-, Салкенил-, Сарил-, Cар-Cалкил-, или аминокислота-сложный эфир или -амид, присоединенные в подходящему участку, например кислотной группе.
12
23
15
31
15
29
17
35
Примерами подходящих групп являются гидрофобные заместители с 4-26 атомами углерода, предпочтительно 5-19 атомами углерода. Подходящие липидные группы включают, но без ограничения перечисленным, следующие: лауроил (СН) пальмитил (СН), олеил (СН), стеарил (CH), холат и дезоксихолат.
Способы липидизации сульфгидрил-содержащих соединений производными жирных кислот описаны в Патенте США No. 5936092, Патенте США No. 6093692 и Патенте США No. 6225445. Производные жирных кислот соединения, соответствующего изобретению, включающие соединение, соответствующее изобретению, связанное с жирной кислотой посредством дисульфидной связи, можно использовать для доставки соединения, соответствующего изобретению, в нервные клетки и ткани. Липидизация заметно повышает всасывание соединений относительно скорости всасывания соответствующих нелипидизированных соединений, а также пролонгирует удерживание соединений в крови и ткани. Более того, дисульфидная связь в липидизированном производном относительно лабильна в клетках и, таким образом, способствует внутриклеточному высвобождению молекулы из группы жирной кислоты. Подходящие липидсодержащие группы представляют собой гидрофобные заместители с 4-26 атомами углерода, предпочтительно 5-19 атомами углерода,
15
31
15
29
17
35
Подходящие липидные группы включают, но без ограничения перечисленным, следующие: пальмитил (СН), олеил (CH), стеарил (СН), холат и дезоксихолат.
Способы циклизации включают циклизацию посредством формирования дисульфидного мостика и циклизацию типа "голова-в-хвост" с использованием смолы для циклизации. Циклизованные пептиды могут обладать повышенной стабильностью, включая повышенную устойчивость к ферментному разложению, в результате своих конформационных ограничений. Циклизация может, в частности, быть целесообразной, когда нециклизованный пептид включает М-концевую цистеиновую группу.
Походящие циклизованные пептиды включают мономерные и димерные циклизованные голова-в-хвост структуры. Циклизованные пептиды могут включать один или более дополнительных остатков, особенно дополнительный цистеин, включенный с целью формирования дисульфидной связи, или боковую цепь, включенную с целью циклизации на основе смолы.
Соединение, соответствующее изобретению, может представлять собой пегилированную структуру формулы (I). Пегилированные соединения, соответствующие изобретению, могут представлять дополнительные преимущества, такие как повышенная растворимость, стабильность и время циркуляции в кровотоке полипептида или пониженная иммуногенность (см. Патент США No. 4179337).
Химические группы для дериватизации соединения согласно изобретению могут быть также выбраны из водорастворимых полимеров, таких как полиэтиленгликоль, сополимеры этиленгликоля/пропиленгликоля, карбоксиметилцеллюлоза, декстран, поливиниловый спирт и т.п. Молекула полимера для дериватизации соединения по изобретению может быть любой молекулярной массы и может быть разветвленной или неразветвленной. Для простоты манипуляций и получения предпочтительная молекулярная масса полиэтиленгликоля для дериватизации соединения, соответствующего изобретению, составляет от приблизительно 1 кД до приблизительно 100 кД, причем термин "приблизительно" показывает, что в препаратах полиэтиленгликоля некоторые молекулы будут весить больше, некоторые меньше, чем установленная молекулярная масса. Могут быть использованы полимеры с другими молекулярными массами в зависимости от требуемого терапевтического профиля, например, требуемой продолжительности замедленного высвобождения, эффектов, если они имеются, на биологическую активность, простоты манипуляций, степени или отсутствия антигенности и других известных эффектов полиэтиленгликоля на терапевтический белок или аналог. Например, полиэтилен гликоль может иметь среднюю молекулярную массу приблизительно 200, 500, 1000, 1500, 2000, 2500, 3000, 3500, 4000, 4500, 5000, 5500, 6000, 6500, 7000, 7500, 8000, 8500, 9000, 9500, 10000, 10500, 11000, 11500, 12000, 12500, 13000, 13500, 14000, 14500, 15000, 15500, 16000, 16500, 17000, 17500, 18000, 18500,19000, 19500, 20000, 25000, 30000, 35000, 40000, 50000, 55000, 60000, 65000, 70000, 75000, 80000, 85000, 90000, 95000 или 100000 кД.
Соли и сольваты соединений, соответствующих изобретению, которые подходят для использования в лекарственном препарате, представляют собой такие, в которых противоион или связанный растворитель является фармацевтически приемлемым. Однако соли и сольваты, имеющие фармацевтически неприемлемые противоионы или связанные растворители, входят в объем настоящего изобретения, например, для использования в качестве промежуточных продуктов при получении соединений формулы (I) и их фармацевически приемлемых солей или сольватов.
Подходящие соли, соответствующие изобретению, включают такие, которые образованы органическими или неорганическими кислотами или основаниями. Фармацевтически приемлемые кислотно-аддитивные соли включают такие, которые образованы хлористоводородной, бромистоводородной, серной, азотной, лимонной, винной, уксусной, фосфорной, молочной, виноградной, трифторуксусной, янтарной, хлорной, фумаровой, малеиновой, гликолевой, салициловой, щавелевоуксусной, метансульфоновой, этансульфоновой, п-толуолсульфоновой, муравьиной, бензойной, малоновой, нафталин-2-сульфоновой, бензолсульфоновой и изетионовой кислотами. Другие кислоты, такие как щавелевая, не будучи сами фармацевтически приемлемыми, могут быть использованы в качестве промежуточных продуктов при получении соединений, соответствующих изобретению, и их фармацевтически приемлемых солей. Фармацевтически приемлемые соли с основаниями включают соли аммония, соли щелочных металлов, например соли калия и натрия, соли щелочноземельных металлов, например соли кальция и магния, и соли с органическими основаниями, например, дициклогексиламином и N-метил-D-глюкомином.
Компетентные специалисты в области органической химии будут иметь в виду, что многие органические соединения могут образовывать комплексы с растворителями, в которых они реагируют или из которых их осаждают или кристаллизуют. Данные комплексы известны как "сольваты". Например, комплекс с водой известен как "гидрат". Настоящее изобретение предусматривает сольваты соединений, соответствующих изобретению.
Состояния:
Изобретение предусматривает фармацевтическую композицию, включающую соединение формулы (I). Изобретение далее предусматривает соединение формулы (I), предназначенное для использования в качестве лекарственного средства.
Изобретение также предусматривает соединение формулы (I), предназначенное для лечения (включая профилактическое лечение) ожирения и диабета. Изобретение, кроме того, предусматривает соединение формулы (I), предназначенное для снижения аппетита у пациента, для применения при снижении поглощения пищи у пациента или для применения при снижении потребления калорий у пациента.
Изобретение, кроме того, предусматривает применение соединения формулы (I) для изготовления лекарственного средства для лечения (включая профилактическое лечение) ожирения и диабета. Изобретение также предусматривает применение соединения формулы (I) для изготовления лекарственного средства для снижения аппетита у пациента, для снижения поглощения пищи у пациента или для снижения потребления калорий у пациента.
Изобретение, кроме того, предусматривает способ лечения (включая профилактическое лечение) ожирения и диабета у нуждающегося в этом пациента, включающий введение пациенту эффективного количества соединения формулы (I). Изобретение также предусматривает способ снижения аппетита у пациента, снижения поглощения пищи у пациента или снижения потребления калорий у пациента, включающий введение пациенту эффективного количества соединения формулы (I).
Пациент, которому вводят соединение, может иметь избыточную массу тела, например ожирение. Альтернативно или дополнительно у пациента может быть диабет, например, он может иметь резистентность к инсулину или непереносимость глюкозы. или и то, и другое вместе. У пациента может быть сахарный диабет, например II типа. Пациент может иметь избыточную массу тела, например, ожирение, и иметь сахарный диабет, например диабет типа II. Кроме того или дополнительно, у пациента может быть или он может находиться в группе риска развития нарушения, при котором ожирение или избыточная масса являются фактором риска. Данные нарушения включают, но без ограничения перечисленным, сердечно-сосудистое заболевание, например гипертензию, атеросклероз, застойную сердечную недостаточность, и дислипидемию, инсульт, желчно-каменную болезнь, остеоартрит, апноэ во сне, репродуктивные нарушения, например синдром поликистоза яичников, формы рака, например рак молочной железы, простаты, толстой кишки, эндометрия, почки и пищевода, варикоз вен, черный акантоз, экзему, непереносимость физических нагрузок, устойчивость к инсулину, гипертензию, гиперхолестеринемию, холитиоз, остеоартрит, ортопедическое повреждение, устойчивость к инсулину, например, диабет типа II и синдром X, и тромбоэмболическую болезнь (см. статьи Kopelman, Nature 404:635-43; Rissanen et al., British Med. J. 301, 835, 1990).
Другие нарушения, связанные с ожирением, включают депрессию, тревогу, приступы паники, головные боли типа мигрени, PMS, состояния хронической боли, фибромиалгию, бессонницу, импульсивность, обсессивно-компульсивное расстройство и миоклонус. Более того, ожирение является признанным фактором риска повышенной вероятности осложнений общей анестезии (см., например, статью Kopelman, Nature 404:635-43,2000). Как правило, ожирение уменьшает продолжительность жизни и несет серьезный риск сопутствующих заболеваний, таких как вышеперечисленные.
Другими заболеваниями или нарушениями, связанными с ожирением, являются врожденные дефекты, причем ожирение у матери связано с повышенной вероятностью дефектов нервных трубок, кистевым туннельным синдромом (CTS); хроническая венозная недостаточность (CVI); сонливость в дневное время; тромбоз глубоких вен (DVT); конечная стадия заболевания почек (ESRD); подагра; сердечные нарушения; нарушенный иммунный ответ;
нарушение респираторной функции; бесплодие; болезнь печени; боль в нижней части спины; акушерские и гинекологические осложнения; панкреатит, а также грыжи брюшной стенки; черный акантоз; эндокринные нарушения;
хроническая гипоксия и гиперкапния; дерматологические эффекты; слоновая болезнь; гасто-эзофагеальный рефлюкс; пяточные шпоры; отек нижних конечностей; маммогалия, которая вызывает значительные проблемы, такие как боль от бретелей бюстгальтера, повреждение кожи, боль у шейки матки, хронические запахи и инфекции в кожных складках под молочными железами и т.п.; большие массы передней брюшной стенки, например, абдоминальный панникулит с частым целлюлитом, затрудненная походка, оно служит причиной частых инфекций, запахов, трудностей в одевании, боли в нижней спины; мышечно-скелетное заболевание; псевдоопухоль головного мозга (или доброкачественная внутричерепная гипертензия) и скользящая хиатальная грыжа.
Настоящее изобретение, кроме того, предусматривает способ повышения потребления энергии у пациента. Способ включает, например, периферическое введение терапевтически эффективного количества соединения, соответствующего изобретению, пациенту, изменяя тем самым потребление энергии. Энергия сжигается во всех физиологических процессах. Организм может непосредственно изменить скорость потребления энергии путем модуляции эффективности данных процессов или путем изменения количества и природы процессов, которые происходят. Например, во время переваривания организм расходует энергию, продвигая пиццу через кишечник и переваривая пищу, и в клетках, причем эффективность клеточного метаболизма можно изменить с образованием большего или меньшего количества тепла.
В одном аспекте способ, соответствующий изобретению, включает манипуляции с дуговидной схемой, которые согласованно изменяют поглощение пищи и взаимоизменяют потребление энергии. Потребление энергии является результатом клеточного метаболизма, синтеза белка, скорости обмена веществ и использования калорий. Таким образом в данном аспекте изобретения введение соединения формулы (I) приводит в результате к повышенному потреблению энергии и пониженной эффективности использования калорий.
Изобретение также предусматривает способ улучшения липидного профиля у пациента. Изобретение также предусматривает способ облегчения состояния или нарушения, которое можно облегчить снижением доступности питательных веществ.
Аппетит можно измерить любыми средствами, известными компетентному специалисту в области техники. Например пониженный аппетит можно оценить с помощью психологического теста. Например введение соединения, соответствующего изобретению, приводит в результате к изменению в испытываемом чувстве голода, насыщения и/или сытости.
Чувство голода можно оценить любыми средствами, известными компетентному специалисту в области техники. Например, чувство голода можно оценить с помощью психологических тестов, таких как по оценки ощущений голода и чувственного восприятия с использованием вопросника, такого как, но без ограничений перечисленным, вопросник Visual Analog Score (визуальная аналоговая оценка) (VAS). В одном специальном неограничивающем примере чувство голода оценивают по ответам на вопросы, относящиеся к желанию есть, пить, предстоящему приему пищи, тошноте и ощущениям, относящимся к запаху или вкусу.
Соединение, соответствующее изобретению, можно использовать для контроля массы тела и лечения, например снижения или предупреждения ожирения, в частности, любого одного или более из следующего:
предупреждения и снижения набора массы; индукции и стимуляции снижения массы и снижения ожирения, как измеряют по индексу массы тела. Соединение, соответствующее изобретению, можно использовать для контроля одного или более из следующего: аппетит, чувство насыщения и чувство голода, в частности, одного или более из следующего: снижения, подавления и ингибирования аппетита; индукции, повышения, усиления и стимуляции чувства насыщения и ощущения насыщения, и снижения, ингибирования и подавления чувства голода и ощущений голода. Соединение, соответствующее изобретению, можно использовать для поддержания одного или более из следующего: требуемой массы тела, требуемого индекса массы тела и требуемой внешности и хорошего состояния здоровья.
Пациент может являться пациентом, который желает уменьшить массу тела, например женщиной и мужчиной, которые хотят изменить свою внешность. Пациент может хотеть уменьшить чувство голода, например пациент может являться человеком, принимающим участие в длительной работе, которая требует высокого уровня концентрации, например солдаты на действительной службе, авиадиспетчеры или водители грузовых автомобилей на длинных маршрутах и т.п.
Настоящее изобретение можно также использовать для лечения, предупреждения, улучшения или облегчения состояний или нарушений, вызываемых, осложняемых или обостряемых относительно высокой доступностью питания. Термин "состояние или нарушения, которое можно облегчить путем уменьшения доступности калорий (или питания)" используют в данном контексте для обозначения любого состояния или нарушения у пациента, которое либо вызывается, осложняется, либо обостряется относительно высокой доступностью питания, или которое можно облегчить уменьшением доступности питания, например, снижением поглощения пищи.
Пациенты с резистентностью к инсулину, непереносимостью глюкозы или имеющие какую-либо форму сахарного диабета, например, типа I, II  или гестационный диабет, также могут получить положительный эффект при использовании способов, соответствующих настоящему изобретению.
Состояния или нарушения, связанные с повышенным поглощением калорий включают, но без ограничения перечисленным, устойчивость к инсулину, непереносимость глюкозы, ожирение, диабет, включая диабет типа II, нарушения питания, синдромы резистентности к инсулину и болезнь Альцгеймера.
Согласно настоящему изобретению предпочтительно, когда соединение формулы (I) используют при лечении человека. Однако, в то время как соединения, соответствующие изобретению, будут, как правило, использовать для лечения человека, их можно также использовать для лечения аналогичных и идентичных состояний у других позвоночных, например других приматов, сельскохозяйственных животных, например свиней, крупного рогатого скота и птицы, спортивных животных, например лошадей, животных-компаньонов, например собак и кошек. Композиции
Хотя возможно вводить активный ингредиент в виде монокомпонента, предпочтительно, чтобы он находился в фармацевтическом препарате или композиции. Соответственно изобретение предусматривает фармацевтический препарат, включающий соединение формулы (I) или его вариант, либо производное или его соль, либо сольват, как определено выше, и фармацевтически приемлемый наполнитель. Фармацевтические композиции, соответствующие изобретению, могут принимать форму фармацевтического препарата, как описано ниже.
Фармацевтические препараты, соответствующие изобретению, включают препараты, подходящие для перорального, парентерального (в том числе подкожного, внутрикожного, внутримышечного, внутривенного и внутрисуставного), ингаляционного (включая пылевидные препараты тонких частиц или аэрозоли, которые можно получить с помощью различных типов дозированных аэрозолей под давлением, распылителей или инсуффляторов), ректального и местного (в том числе кожного, чрескожного, через слизистые, защечного, подъязычного и внутриглазного) введения, хотя наиболее подходящий путь может зависеть, например, от состояния и нарушения у реципиента.
Препараты удобно могут быть представлены в унифицированной лекарственной форме и могут быть получены любым из способов, хорошо известных в области фармации. Все способы включают стадию приведения активного ингредиента в ассоциацию с носителем, который состоит из одного или более вспомогательных ингредиентов. Как правило, препараты получают путем равномерного и тесного приведения в ассоциацию активного ингредиента с жидкими носителями, или тонко измельченными твердыми носителями, или теми и другими и затем, если необходимо, формовании продукта в требуемом препарате.
Препараты, соответствующие настоящему изобретению, подходящие для перорального введения, могут быть представлены: в виде отдельных единиц, таких как капсулы, крахмальные капсулы или таблетки, каждая из которых включает заданное количество активного ингредиента; в виде порошка или гранул; в виде раствора или суспензии в водной жидкости или неводной жидкости, или в виде жидкой эмульсии типа масло в воде либо жидкой эмульсии типа вода в масле. Активный ингредиент может быть также представлен в виде болюса, электуария или пасты. Различные фармацевтически приемлемые носители и их состав описаны в монографиях по стандартным составам, например, в справочнике Remington's Pharmaceutical Sciences (Справочник по фармацевтическим наукам Ремингтона), Е.W. Martin. См. также статью Wang, Y.J. and Hanson, M.A., Journal of Parenteral Science and Technology, Technical Report No. 10, доп.42: 2S, 1988.
Таблетку можно получить прессованием или формованием, необязательно с одним или более вспомогательными ингредиентами. Прессованные таблетки можно получить прессованием в подходящем оборудовании активного ингредиента в сыпучей форме, такой как порошок или гранулы, необязательно смешанного со связующим агентом, смазывающим агентом, инертным разбавителем, смазывающим, поверхностно-активным или диспергирующим агентом. Формованные таблетки можно получить в подходящем оборудовании смеси порошкового соединения, увлажненного инертным жидким разбавителем. Таблетки необязательно могут быть покрыты или иметь насечки и могут быть изготовлены так, чтобы получить в них замедленное или контролируемое высвобождение активного агента. Настоящие соединения можно, например, ввести в форме, подходящей для немедленного высвобождения или пролонгированного высвобождения. Немедленное высвобождение или пролонгированное высвобождение может быть достигнуто путем использования подходящих фармацевтических композиций, включающих настоящие соединения, или, особенно в случае пролонгированного высвобождения, путем использования таких устройств, как подкожные имплантаты или осмотические насосы. Настоящие соединения можно также ввести липосомально.
Примеры композиций для перорального введения включают суспензии, которые могут содержать, например, микрокристаллическую целлюлозу для придания объема, альгиновую кислоту или альгинат натрия в качестве суспендирующего агента, метилцеллюлозу в качестве агента, повышающего вязкость, и подсластителей или вкусовых добавок, таких как известные в области техники, и таблетки с немедленным высвобождением, которые могут содержать, например, микрокристаллическую целлюлозу, дикальцийфосфат, крахмал, стеарат магния и/или лактозу, и/или другие наполнители, связующие агенты, наполнители, замедляющие высвобождение, разрыхлители, разбавители и смазывающие агенты, такие как известные в области техники. Соединения формулы (I) можно также доставлять через полость рта путем подъязычного и/или защечного введения. Формованные таблетки, прессованные таблетки или таблетки, полученные сублимационной сушкой, представляют собой примеры форм, которые могут быть использованы. Пример композиций включают те, в состав которых входят настоящее соединение(я) с быстрорастворимыми разбавителями, такими как манит, лактоза, сахароза и/или циклодекстрины. Кроме того, в данные препараты могут быть включены высокомолекулярные наполнители, такие как целлюлозы (avicel) или полиэтиленгликоли (ПЭГ). Данные препараты могут также включать наполнитель, способствующий адгезии к слизистой, такой как гидроксипропилцеллюлоза(НРС), гидроксипропилметилцеллюлоза (НРМС), натрий карбоксиметилцеллюлоза (SCMC), сополимер малеинового ангидрида (например, Gantrez), и агенты для контроля высвобождения, такие как полиакриловый сополимер (например, Carbopol 934). Для легкости изготовления и использования могут быть также добавлены смазывающие агенты, скользящие агенты, вкусовые добавки, красители и стабилизаторы. Препараты для парентерального введения включают водные и неводные стерильные инъекционные растворы, которые могут включать антиоксиданты, буферы, бактериостатики и растворенные вещества, которые делают препарат изотоническим относительно крови намеченного реципиента, и водные, и неводные стерильные суспензии, которые могут включать суспендирующие агенты и сгустители. Препараты могут находиться в однодозных или многодозных контейнерах, например запечатанных ампулах и флаконах, и могут храниться в сублимационном высушенном (лиофилизированном) состоянии, требующем только добавления стерильного жидкого носителя, например солевого раствора или воды для инъекций непосредственно перед использованием. Приготовленные непосредственно перед введением инъекционные растворы и суспензии можно получить из стерильных порошков, гранул и таблеток ранее описанного типа. Примеры композиций для парентерального введения включают  инъекционные растворы или суспензии, которые могут содержать, например, подходящие нетоксичные приемлемые для парентерального введения разбавители или растворители, такие как маннит, 1,3-бутандиол, вода, раствор Рингера, изотонический раствор хлорида натрия, или другие подходящие диспергирующие или смачивающие и суспендирующие агенты, включая синтетические моно- или диглицериды, и жирные кислоты, включая олеиновую кислоту, или Cremaphor. Водный носитель может представлять собой, например, изотонический буферный раствор с рН от приблизительно 3,0 до приблизительно 8,0, предпочтительно с рН от приблизительно 3,5 до приблизительно 7,4, например от 3,5 до 6,0, например от 3,5 до приблизительно 5,0. Используемые буферы включают буферы на основе цитрата натрия - лимонной кислоты и фосфата натрия - фосфорной кислоты и ацетата натрия/уксусной кислоты. Предпочтительно, когда композиция не включает окислители и другие соединения, которые, как известно, вредны для PP.
Наполнители, которые могут быть включены, представляют собой, например, другие белки, такие как человеческий сывороточный альбумин или препараты плазмы. При необходимости фармацевтическая композиция может также включать минимальные количества нетоксичных вспомогательных субстанций, таких как смачивающие агенты или эмульгаторы, консерванты и забуферивающие рН агенты и т.п., например ацетат натрия или сорбитанмонолаурат.
Примеры композиций для назального аэрозоля или ингаляционного введения включают растворы в солевом растворе, который может содержать, например, бензиловый спирт или другие подходящие консерванты, агенты, способствующие всасыванию, для повышения биодоступности и/или другие солюбилизирующие или диспергирующие агенты, такие как известные в области техники. В композициях для назального аэрозоля или ингаляционного введения удобно, когда соединение, соответствующее изобретению, доставляют в форме, представленной аэрозольным спреем из упаковки под давлением или распылителем, с использованием подходящего пропеллента, например дихлордифторметана, трихлорфторметана, дихлортетрафторэтана, диоксида углерода или другого подходящего газа. В случае аэрозоля под давлением унифицированную дозу можно определить с помощью клапана, доставляющего дозированное количество. Можно изготовить капсулы и картриджи, например, из желатина, предназначенные для использования в ингаляторе или инсуффляторе, так, чтобы они содержали порошковую смесь соединения и подходящей порошковой основы, например лактозы или крахмала. В одном специальном неограничивающем примере соединение, соответствующее изобретению, вводят в аэрозоле из дозирующего клапана через аэрозольный адаптер, известный также как исполнительный механизм клапана. Необязательно включают также стабилизатор и/или включают пористые частицы для глубокой доставки в легкие (например, см. Патент США No. 6447743).
Препараты для ректального введения могут быть представлены в виде удерживающей клизмы или суппозитория с обычными носителями, такими как масло какао, синтетические сложные глицеридные эфиры или полиэтилен гликоль. Данные носители, как правило, являются твердыми при обычных температурах, но разжижающимися или растворяющимися в полости прямой кишки с высвобождением лекарственного препарата.
Препараты для местного введения в полости рта, например защечного или подъязычного, включают лепешки, содержащие активный ингредиента в основе с вкусовой добавкой, такой как сахароза и акация или трагакант, и пастилки, содержащие активный ингредиент в такой основе, как желатин и глицерин или сахароза и акация. Примеры композиций для местного применения включают носитель для наружного нанесения, такой как Plastibase (минеральное масло, гелированное полиэтиленом).
Предпочтительные унифицированные лекарственные препараты представляют собой препараты, содержащие эффективную дозу активного ингредиента, как ранее указано, или ее соответствующую часть.
Следует иметь в виду, что в дополнение к ингредиентам, конкретно упомянутым выше, препараты, соответствующие данному изобретению, могут включать другие агенты, принятые в области техники, соответствующие типу рассматриваемого препарата, например, препараты, подходящие для перорального введения, могут включать вкусовые добавки.
Соединения, соответствующие изобретению, кроме того, удобно вводить в виде систем с замедленным высвобождением. Подходящие примеры систем с замедленным высвобождением, соответствующих изобретению, включают подходящие полимерные материалы, например полупроницаемые полимерные матрицы в виде формованных изделий, например пленки или микрокапсулы; подходящие гидрофобные материалы, например в виде эмульсии в приемлемом масле, или ионообменные смолы, и труднорастворимые производные соединения, соответствующего изобретению, например труднорастворимую соль. Системы с замедленным высвобождением можно вводить перорально, ректально, парентерально, интрацистернально, внутривагинально, внутрибрюшинно, местно, например, в виде порошка, мази, геля, капель или чрескожного пластыря, защечно или в виде орального, или назального спрея.
Препараты для введения могут быть удобно приготовлены так, чтобы обеспечивать контролируемое высвобождение соединений, соответствующих изобретению. Например, фармацевтические композиции могут находиться в форме частиц, включающих один или более биоразрушаемых полимеров, полисахаридных желирующих и/или биоадгезивных полимеров, амфифильных полимеров, агентов, способных модифицировать свойства поверхности раздела частиц соединения формулы (I). Данные композиции проявляют некоторые свойства биосовместимости, которые дают возможность контролируемого высвобождения активной субстанции (см. Патент США No. 5700486).
Соединение, соответствующее изобретению, можно доставлять с помощью насоса (см. статьи Langer, выше; Sefton, CRC Crit. Ref. Biomed. Eng. 14:201, 1987; Buchwald et al., Surgery 88:507, 1980; Saudek et al., N. Engl. J. Med. 321:574, 1989) или посредством непрерывных подкожных инфузий, например, с использованием мини-насоса. Можно также использовать раствор для внутривенных вливаний в пакетах. Ключевым фактором в выборе соответствующей дозы является полученный результат, как измеряют по снижению общей массы тела или соотношению жировой и нежировой массы, либо по другим критериям, предназначенным для измерения, контроля или предупреждения ожирения или предупреждения связанных с ожирением состояний, как практический врач считает подходящим. Другие системы с контролируемым высвобождением обсуждают в обзоре Langer (см. Science 249: 1527-1533, 1990). В другом аспекте описания соединения, соответствующие изобретению, доставляют с помощью имплантированного насоса, описанного, например, в патенте США No. 6436091, патенте США No. 5939380, патенте США No. 5993414.
Имплантируемые устройства для инфузии лекарственного препарата используют для обеспечения пациентов постоянной и длительной дозой или инфузией лекарственного препарата или какого-либо другого терапевтического агента. В основном данные устройства можно разделить на активные и пассивные. Соединение, соответствующее настоящему изобретению, можно изготовить в виде депо-препарата. Данный депо-препарат длительного действия можно ввести посредством имплантации, например подкожно или внутримышечно, или путем внутримышечной инъекции. Таким образом, например, соединения можно изготовить с использованием подходящих полимерных или гидрофобных материалов, например, в виде эмульсии в приемлемом масле, или ионообменных смол либо в виде труднорастворимых производных, например, в виде труднорастворимой соли.
Терапевтически эффективное количество соединения, соответствующего изобретению, можно вводить в виде одноимпульсной дозы, в виде болюсной дозы или в виде импульсных доз, вводимых в течение времени. Таким образом, в импульсных дозах предусматривают болюсное введение соединения, соответствующего изобретению, с последующим периодом времени, когда никакое соединение, соответствующее изобретению, не вводят пациенту, за которым следует второе болюсное введение. В специальных неограничивающих примерах импульсные дозы соединения, соответствующего изобретению, вводят в течение дня, в течение недели или в течение месяца.
В одном варианте осуществления терапевтически эффективное количество соединения, соответствующего изобретению, вводят с терапевтически эффективным количеством другого агента, например, дополнительного агента, подавляющего аппетит, агента, снижающего поглощение пищи, снижающего уровень глюкозы в плазме или изменяющего уровень липидов в плазме. Специальные неограничивающие примеры дополнительного агента, подавляющего аппетит, включают амфепрамон (диэтилпропион), фентермин, мациндол и фенилпропаноламин, фенфлурамин, дексфенфлурамин и флуоксетин. Соединение, соответствующее изобретению, можно ввести одновременно с дополнительным агентом, подавляющим аппетит, или его можно ввести последовательно. Таким образом в одном варианте осуществления соединение, соответствующее изобретению, можно изготовить и ввести с агентом, подавляющим аппетит, в виде одной дозы.
Соединение, соответствующее изобретению, можно ввести, когда требуется эффект, например, подавление аппетита, уменьшенное поглощение пищи или пониженное потребление калорий, или незадолго до того, как потребуется данный эффект, например, но без ограничения перечисленным, приблизительно за 10 минут, приблизительно за 15 минут, приблизительно за 30 минут, приблизительно за 60 минут, приблизительно за 90 минут или приблизительно за 120 минут до времени, когда требуется эффект.
Терапевтически эффективное количество соединения, соответствующего изобретению, будет зависеть от используемой молекулы, пациента, которого лечат, тяжести и типа поражения и способа и пути введения. Например, терапевтически эффективное количество соединения, соответствующего изобретению, может варьировать от приблизительно 0,01 мкг/килограмм (кг) массы тела до приблизительно 1 г/кг массы тела, например от приблизительно 0,1 мкг до приблизительно 20 мг/кг массы тела, например от приблизительно 1 мкг до приблизительно 5 мг/кг массы тела или от приблизительно 5 мкг до приблизительно 1 мг/кг массы тела.
В одном варианте осуществления изобретения соединение, соответствующее изобретению, можно вводить пациенту в дозе от 5 до 1000 нмоль/кг массы тела, например от 10 до 750 нмоль/кг массы тела, например от 20 до 500 нмоль/кг массы тела, в частности от 30 до 240 нмоль/кг массы тела. Для пациента массой 75 кг данные дозы соответствуют дозировкам от 375 нмоль до 75 мкмоль, например от 750 нмоль до 56,25 мкмоль, например от 1,5 до 37,5 мкмоль, в частности от 2,25 до 18 мкмоль.
В альтернативном варианте осуществления соединение, соответствующее изобретению, можно ввести пациенту в дозе от 0,5 до 135 пикомоль (пмоль) на кг массы тела, например, от 5 до 100 пикомоль (пмоль) на кг массы тела, например от 10 до 90 пикомоль (пмоль) на кг массы тела, например, приблизительно 72 пмоль/кг массы тела. В одном специальном неограничивающем примере соединение, соответствующее изобретению, вводят в дозе приблизительно 1 нмоль или более, 2 нмоль или более либо 5 нмоль или более. В данном примере доза соединения, соответствующего изобретению, составляет, как правило, не больше чем 100 нмоль, например, доза составляет 90 нмоль или меньше, 80 нмоль или меньше, 70 нмоль или меньше, 60 нмоль или меньше, 50 нмоль или меньше, 40 нмоль или меньше, 30 нмоль или меньше, 20 нмоль или меньше, 10 нмоль. Например, интервал доз может включать любую комбинацию любого из определенных интервалов более низких доз с любым из определенных интервалов более высоких доз. Таким образом примеры неограничивающих интервалов доз соединений, соответствующих изобретению, лежат в диапазоне от 1 до 100 нмоль, от 2 до 90 моль, от 5 до 80 нмоль.
В одном специальном неограничивающем примере вводят от приблизительно 1 до приблизительно 50 нмоль соединения, соответствующего изобретению, например вводят от приблизительно 2 до приблизительно 20 нмоль, например приблизительно 10 нмоль в виде подкожной инъекции. Точную дозу легко определяет компетентный специалист в области техники, основываясь на активности используемого специфического соединения, пути доставки соединения и возраста, массы тела, пола и физиологического состояния пациента.
Подходящие дозы соединений, соответствующих изобретению, включают также дозы, которые приводят в результате к снижению потребления калорий, поглощения пищи или аппетита либо увеличению потребления энергии, которые эквивалентны снижению потребления калорий, поглощения пищи или аппетита либо увеличению потребления энергии, вызываемого нормальным уровнем РР после приема пищи. Примеры доз включают, но без ограничения перечисленным дозы, которые дают эффект, демонстрируемый когда сывороточные уровни РР составляют от 35 до 120 пмоль/л, например, от 40 до 100 пмоль/л, например, от 50 до 80 пмоль/л. Дозы соединения можно вводить один раз в день или более часто. Например, их можно вводить два раза в день, три раза в день или четыре раза в день. Для подавления аппетита введение три раза в день особенно благоприятно, поскольку оно соответствует обычному типу питания с тремя приемами пищи. Описание иллюстрируют следующими неограничивающими примерами.
Примеры
Синтез пептидов:
Синтез пептидов, соответствующих изобретению, проводят на смоле с трициклическим амидным линкером с аминокислотами, присоединенными с помощью стратегии Fmoc. Каждую аминокислоту последовательно вводят от С- к N-концу. Связывания пептидов опосредуют с помощью реагента TBTU. Отщепление пептида от смолы осуществляют с использованием трифторуксусной кислоты в присутствии акцепторов радикалов. Возможен также синтез с использованием смолы с трициклическим амидом и химических способов с Fmoc.
Пептиды очищают обращенно-фазовой ВЭЖХ (высокоэффективной жидкостной хроматографией). Показано, что пептиды имеют чистоту больше 90% при использовании ВЭЖХ.
Пептиды, соответствующие примеру 1-1206, имеют последовательности, раскрытые в перечне последовательностей как SEQ ID NO:1-SEQ ID NO:1206. Результаты экспериментов с использованием данных последовательностей приведены в таблице 2. Пример 1 (в котором используют пептид, имеющий последовательность SEQ ID NO. 1 перечня последовательностей) представляет собой сравнительный пример, иллюстрирующий активность нативного человеческого PP.
Анализ замещения человеческого рецептора Y-4:
Основой анализа замещения является конкуренция фиксированного количества лиганда с радиоактивной меткой с варьирующими дозами 'холодного' (немеченого) лиганда за ограниченное число сайтов связывания рецептора, делая возможной количественную оценку аффинности холодного лиганда к рецептору.
Человеческий рецептор Y4 приобретают в фирме UMR cDNA Resource Centre (номер по каталогу NPYR400000). Клоном кДНК трансформируют подходящую E.coli, чтобы можно было получить больше препарата ДНК, которой трансфицируют клетки НЕК-293Т. Используя фон антибиотиков, отбирают клетки, экспрессирующие трансфицированную кДНК, и данные клетки, содержащие плазмиду с рецептором, размножают для получения препарата клеточных мембран. Клетки собирают из колб для культивирования посредством соскоба и затем гомогенизируют и отделяют мембраны от другого клеточного материала дифференцированным центрифугированием. Клеточные мембраны ресуспендируют в слабом буфере ЧЕРЕЗ, содержащем ингибиторы протеазы, перед отбором аликвот и хранят препарат при -70°С до использования.
4
2
I125
Для анализа замещения все реагенты готовят в буфере для анализа замещения (25 мМ HEPES рН 7,4, 2 мМ MgCl, 4 мМ CaCl, 1% BSA, 4 мМ), содержащем ингибиторы протеазы (2 мМ фенилметансульфонилфторид, 0,5 мМ дипротин А и 0,5 мМ фосфорамидон). Одну тысячу импульсов/сек/пробирку PP (йодинированного прямым йодогенным способом) используют в качестве пептида с радиоактивной меткой и тестируют конкурирующий пептид при варьирующих концентрациях от 10 мкМ до 0,02 пМ, причем каждую концентрацию тестируют минимум в двух повторностях. В каждую пробирку для анализа вводят объем полученных мембран, достаточный для получения общих импульсов (когда не присутствует никакой конкурирующий пептид) 10000-15000 импульсов/240 секунд. Реагенты добавляют в следующем порядке: буфер, меченый конкурирующий пептид и клеточная мембрана, причем общий объем составляет 500 мкл.
125
125
50
Анализ инкубируют при комнатной температуре в течение 90 минут перед отделением комплекса рецептор-PP от свободной метки центрифугированием при 15600g в течение 3 минут. Супернатант удаляют и отбрасывают и пеллету ресуспендируют и промывают 500 мкл свежего буфера для анализа и повторно центрифугируют. После центрифугирования и удаления супернатанта измеряют радиоактивность пеллеты в течение 240 секунд, используя γ-счетчик. Специфическое связывание рассчитывают как разницу между количеством I-PP, связанного в отсутствие (общее) и в присутствии (неспецифическое) немеченого пептида. По данным связывания рассчитывают IC для конкурирующего пептида. Каждый пептид тестируют минимум в двух раздельных случаях.
Эксперименты по поглощению пищи in vivo
Во всех экспериментах с мышами используют самцов мышей C57BL/6 (20-30 г). Мышей помещают отдельно в клетки IVC. Животных рандомизируют по массе и подвергают голоданию в течение ночи в течение 16 часов до внутрибрюшинной инъекции в 9 часов утра. Все растворы пептидов готовят свежими утром в день исследования и инъецируют по 100 мкл. Поглощение пищи измеряют через 1, 2, 3, 4, 6, 8 и 24 часа после инъекции. Пептид вводят в дозе 30 нмоль/кг, 50 нмоль/кг, 100 нмоль/кг, 120 нмоль/кг, 150 нмоль/кг, 300 нмоль/кг, 600 нмоль/кг или 1000 нмоль/кг в зависимости от активности.
В каждом случае ставят контроль с солевым раствором и контроль с немодифицированным человеческим полипептидом железы. Все статистические данные рассчитывают, используя односторонний ANOVA с повторным тестом Даннета или односторонний ANOVA с повторным тестом Бонферрони.
Результаты:
А: Связывание человеческого рецептора Y-4
50
50
Обнаруживают, что нативный человеческий полипептид железы связывает рецептор Y4 с IC 0,23 нМ. В таблице 2 под обозначением "Y4" приводят IC аналогов в нМ. Число ниже чем 0,23 нМ представляет более сильное связывание, чем у нативного человеческого PP.
Как видно из данных, приведенных в таблице 2, многие из соединений, соответствующих изобретению, обладают более сильной аффинностью связывания с рецептором, чем нативный человеческий PP.
В: Уменьшение поглощения пищи у мышей
Эффекты аналогов РР сравнивают с нативным человеческим РР после одной инъекции. Используют контроль в виде солевого раствора. Детальные результаты, полученные в примерах 5, 8 и 49, показаны на гистограммах зависимости времени от интервала, приведенных на фигуре 1 и на сравнительном графике на фигуре 2. Для остальных соединений данные по питанию показаны в таблице 2. Колонка, озаглавленная "4-8 часов", представляет собой уменьшение количества пищи, потребленной между часом 4 и часом 8, по сравнению с солевым раствором, выраженное как относительный рост снижения поглощения пищи по сравнению с нативным человеческим PP. Колонка, озаглавленная "0-24 часов", аналогично представляет собой уменьшение поглощенной пищи между часом 0 и часом 24 по сравнению с контролем в виде солевого раствора, выраженное как относительный рост снижения поглощения пищи по сравнению с нативным человеческим PP. Например, если одна и та же доза аналога дает в результате такое же снижение уровня питания, как контроль в виде нативного РР, введенное в колонки данное будет составлять 1,0. Если одна и та же доза аналога приводит в результате к более высокому снижению уровня питания, чем контроль в виде нативного РР, введенное в колонки данное будет больше чем 1. Результат, превышающий 1, означает, что общее поглощение пищи за период ниже при использовании аналога, чем при использовании нативного человеческого РР. Предполагают, что это является возможным результатом более сильной активности в отношении рецептора и более продолжительной активности.
Колонка, озаглавленная "4:1", представляет собой соотношение (снижения питания, наблюдаемого в течение первых 4 часов, выражаемого как относительный рост снижения поглощения пищи по сравнению с нативным человеческим РР в течение того же периода времени) и (снижения питания, наблюдаемого в течение 1 часа, выражаемого как относительный рост снижения поглощения пищи по сравнению с нативным человеческим РР в течение того же периода времени). Аналогично колонка, озаглавленная "24:1", представляет собой соотношение (снижения питания, наблюдаемого в течение первых 24 часов, выражаемого как относительный рост снижения поглощения пищи по сравнению с нативным человеческим РР в течение того же периода времени) и (снижения питания, наблюдаемого в течение 1 часа, выражаемого как относительный рост снижения поглощения пищи по сравнению с нативным человеческим РР в течение того же периода времени). Соотношение "4:1" или "24:1", превышающее 1, показывает, что уменьшение активности во времени для пептида у мыши более медленное, чем уменьшение активности нативного человеческого РР у мыши, показывая, таким образом, что пептид действует более длительно, чем нативный человеческий РР, независимо от уровня активности в отношении рецептора. Мышь представляет собой хорошую модель скоростей разложения у человека независимо от того факта, что РР у мышей отличается от человеческого рецептора.
Таблица 2
Пример
Код
Y4
4-8 ч
0-24 ч
4:1
24:1
Пример
Код
Y4
4-8 ч
0-24 ч
4:1
24:1
native
30
6462
0.180
0.1
0.3
0.7
0.3
1
hPP
0.230
1
1
1.0
1.0
31
6463
0.670
1.0
0.3
0.3
0.3
2
5913
1.500
1.0
0.8
5.0
8.0
32
6464
0.740
2.0
0.7
1.0
7.0
3
5916
0.430
0.3
0.4
1.0
0.6
33
6465
0.850
1.0
0.3
0.8
0.8
4
5920
4.500
0.1
0.5
1.0
1.3
34
6466
1.290
0.1
0.1
1.0
1.0
5
6429
0.550
2.0
1.2
1.0
1.3
35
6601
0.110
0.1
0.1
0.1
0.1
6
6430
0.410
0.5
0.4
1.1
0.5
36
6602
0.120
0.1
0.1
0.1
0.1
7
6431
0.470
1.1
1.0
0.7
0.6
37
6603
0.150
0.1
0.1
1.0
1.0
8
6432
0.360
1.5
1.1
0.9
1.0
38
6604
0.180
0.1
0.1
1.0
1.0
9
6433
0.370
1.3
1.0
1.3
1.0
39
6605
0.130
0.1
0.2
0.6
0.2
10
6434
0.250
0.1
0.8
7.0
8.0
40
6606
0.160
0.1
0.7
-0.9
0.9
11
6435
0.130
0.1
0.1
0.5
0.5
41
6611
0.300
2.5
1.5
0.9
0.9
12
6436
0.480
0.8
0.7
1.0
7.0
42
6618
0.950
0.5
0.3
1.5
1.5
13
6437
0.300
1.0
1.0
0.9
0.9
43
6619
0.290
0.7
0.9
1.2
1.5
14
6438
0.490
0.6
1.0
1.7
3.3
44
6621
16.000
0.1
0.1
1.0
1.0
15
6440
0.260
0.1
1.0
0.8
1.0
45
6622
1.200
1.5
0.4
4.0
4.0
16
6441
0.300
0.1
0.2
1.0
0.4
46
6636
0.600
0.2
0.2
1.5
1.0
17
6443
4.000
0.1
0.1
1.0
1.0
47
6638
0.500
1.1
0.5
0.3
0.2
18
6445
0.170
0.1
0.1
0.5
0.5
48
6639
0.180
0.2
0.1
0.3
0.3
19
6446
0.430
1.0
0.5
5.0
5.0
49
6640
0.150
0.1
0.6
0.3
1.0
20
6448
0.320
0.1
1.4
1.8
1.4
50
6644
0.230
0.1
0.1
1.0
1.0
21
6449
2.200
0.1
0.1
1.0
1.0
51
6646
0.230
0.1
1.5
0.5
1.0
22
6450
8.800
0.1
0.1
1.0
1.0
52
6647
0.210
0.1
0.1
0.4
0.1
23
6452
0.420
2.0
0.4
0.4
0.4
53
6650
0.170
0.2
0.5
0.9
0.6
24
6453
0.170
0.1
0.6
0.5
0.3
54
6651
0.350
1.0
1.2
1.0
1.2
25
6457
0.130
1.1
0.8
1.2
0.7
55
6652
0.360
12.
1.2
1.3
1.5
26
6458
0.180
0.7
0.5
1.0
0.4
56
6653
0.210
3.0
2.0
1.3
2.0
27
6459
0.230
0.3
0.5
0.9
0.6
57
6654
0.200
0.4
0.6
1.7
1.0
28
6460
0.200
0.1
0.1
0.1
0.1
58
6655
0.280
0.4
1.0
0.7
0.9
29
6461
0.230
0.1
0.7
0.8
0.9
59
6656,
0.220
1.3
2.0
1.5
2.5
Пример
Код
Y4
4-8 ч
0-24 ч
4:1
24:1
Пример
Код
Y4
4-8 ч
0-24 ч
4:1
24:1
60
6657
0.250
3.0
2.5
2.2
4.2
90
6824
0.081
0.5
0.7
1.3
1.2
61
6658
0.160
0.1
0.7
1.4
1.0
91
6825
0.090
0.1
0.1
0.3
0.3
62
6659
0.170
0.1
0.1
0.8
0.1
92
6826
0.087
0.1
2.0
1.7
3.3
63
6664
0.090
1.3
0.5
2.5
1.3
93
6827
0.070
1.0
0.7
0.5
0.6
64
6665
0.120
0.1
0.3
0.9
0.4
94
6828
0.120
1.2
1.0
0.3
2.5
65
6666
0.110
0.7
0.3
1.1
0.4
95
6829
0.200
1.0
1.1
0.6
1.6
66
6667
0.180
1.0
2.5
0.7
1.7
96
6830
0.140
1.5
1.1
1.1
1.6
67
6668
0.280
1.0
1.3
1.0
1.4
97
6831
0.240
0.1
0.3
1.0
1.0
68
6669
0.320
1.2
1.2
1.4
1.5
98
6833
0.083
0.5
0.1
0.6
0.2
69
6671
0.110
0.1
0.1
0.4
0.2
99
6834
0.067
0.5
0.8
1.3
0.9
70
6672
0.200
0.1
0.1
0.3
0.3
100
6835
0.260
2.0
1.8
-1.0
1.5
71
6673
0.160
0.1
0.1
0.2
0.2
101
6836
0.690
0.1
0.5
1.8
1.0
72
6674
0.076
0.1
0.4
0.8
1.0
102
6839
0.120
0.1
0.5
0.6
1.0
73
6675
0.089
0.1
0.1
0.2
0.2
103
6840
0.170
0.1
0.1
0.7
0.1
74
6801
0.065
0.6
0.1
0.3
0.3
104
6841
0.160
1.2
1.4
1.6
2.0
75
6803
0.200
0.4
0.1
0.2
0.2
105
6843
0.170
1.1
0.1
1.0
1.0
76
6806
0.190
0.5
1.0
0.6
0.8
106
6844
0.190
2.0
0.1
1.0
1.0
77
6807
0.190
1.2
0.4
1.1
0.3
107
6846
0.150
2.0
0.8
0.5
2.0
78
6808
0.150
0.1
0.9
0.5
0.8
108
6847
0.230
0.1
0.1
1.0
1.0
79
6809
0.210
0.1
1.2
0.3
4.0
109
6848
0.120
0.1
0.3
0.3
1.0
80
6810
0.110
0.3
0.2
1.0
0.3
110
6849
0.150
0.1
0.3
2.0
1.5
81
6811
0.200
1.5
0.1
0.3
0.3
111
6850
0.170
1.0
0.3
0.6
0.6
82
6812
0.240
1.5
1.5
1.0
1.3
112
6851
0.110
0.1
1.0
1.3
1.4
83
6814
0.220
3.0
0.1
1.0
0.1
113
6857
0.220
0.1
0.2
1.0
0.3
84
6815
0.130
0.1
0.3
0.6
0.4
114
6859
0.150
0.1
0.7
1.7
1.0
85
6816
0.150
1.5
0.3
0.5
1.5
115
6860
0.110
0.1
0.1
3.3
0.3
86
6817
0.200
2.0
0.6
0.3
1.5
116
6861
0.100
1.1
0.5
3.7
1.7
87
6818
0.150
0.1
0.1
0.1
0.1
117
6862
0.110
0.1
1.0
2.8
2.5
88
6819
0.140
0.1
0.6
0.9
0.4
118
6863
0.160
0.1
0.6
1.4
1.2
89
6823
0.130
1.4
0.9
1.0
0.8
119
6865
0.290
0.5
1.5
1.5
1.9
Пример
Код
Y4
4-8 ч
0-24 ч
4:1
24:1
Пример
Код
Y4
4-8 ч
0-24 ч
4:1
24:1
120
6866
0.170
0.3
1.3
1.4
2.6
150
7144
0.216
0.1
0.6
0.3
1.5
121
7101
0.069
0.1
0.1
1.0
1.0
151
7145
0.165
1.0
0.1
1.1
0.1
122
7102
0.114
0.1
1.0
0.7
3.3
152
7146
0.149
0.5
0.4
0.3
0.5
123
7103
0.200
0.1
0.6
0.4
0.8
153
7147
0.148
1.0
1.4
0.4
1.6
124
7104
0.225
3.0
1.1
3.0
2.8
154
7148
0.160
1.0
0.1
0.4
0.1
125
7105
0.150
1.0
1.0
0.5
5.0
155
7149
0.119
2.5
3.2
1.3
3.6
126
7108
0.250
2.0
1.5
20.0
15.0
156
7150
0.169
5.0
4.8
0.7
2.1
127
7109
0.083
0.1
0.1
0.4
0.2
157
7151
0.091
0.1
0.5
0.4
0.6
128
7110
0.110
3.0
2.0
1.2
2.0
158
7152
0.154
1.0
0.1
1.5
0.2
129
7111
0.077
0.1
0.4
0.3
1.3
159
7158
0.146
1.4
0.8
0.8
0.7
130
7112
0.095
0.5
1.0
1.4
1.4
160
7159
0.165
1.0
0.8
-0.8
0.7
131
7113
0.084
0.5
1.0
3.3
3.3
161
7160
0.150
1.0
0.9
0.6
1.8
132
7114
0.166
1.0
0.4
0.7
0.3
162
7161
0.188
2.0
4.0
1.1
3.3
133
7115
0.229
3.0
2.0
0.5
0.8
163
7162
0.219
134
7117
0.351
2.0
1.4
1.0
1.2
164
7163
0.146
0.1
0.4
0.8
0.5
135
7121
0.120
0.1
2.0
0.1
2.9
165
7164
0.223
136
7122
0.118
0.3
0.1
0.2
0.2
166
7165
0.183
1.0
4.0
1.0
4.0
137
7123
0.090
0.1
0.1
1.3
0.3
167
7214
0.106
3.0
3.0
1.8
2.7
138
7124
0.310
1.5
2.0
1.0
3.3
168
7215
0.057
1.5
1.5
0.9
1.0
139
7125
0.100
0.1
1.5
0.5
3.8
169
7216
0.109
4.0
7.0
1.0
4.4
140
7133
0.173
0.1
0.3
0.9
0.4
170
7217
0.066
2.0
2.0
1.6
2.0
141
7135
0.180
1.0
0.3
1.2
0.6
171
7218
0.150
3.0
3.0
0.8
2.0
142
7136
0.149
2.0
0.1
1.5
0.2
172
7219
0.220
3.0
3.0
0.9
2.3
143
7137
0.072
1.0
2.3
1.4
2.3
173
7220
0.100
2.0
1.9
1.0
1.6
144
7138
0.130
0.1
0.1
0.3
0.3
174
7227
0.230
0.1
0.1
1.0
1.0
145
7139
0.137
2.0
0.1
2.0
0.5
175
7228
0.122
2.0
0.1
0.7
0.3
146
7140
0.094
1.0
0.6
1.0
6.0
176
7229
0.070
1.5
0.1
2.0
0.3
147
7141
0.080
0.1
0.5
0.9
0.6
177
7230
0.210
0.1
0.2
1.3
0.7
148
7142
0.093
3.0
1.0
1.0
0.9
178
7231
0.089
3.0
1.0
1.7
1.7
149
7143
0.188
0.3
1.0
1.1
1.1
179
7232
0.189
Пример
Код
Y4
4-8 ч
0-24 ч
4:1
24:1
Пример
Код
Y4
4-8 ч
0-24 ч
4:1
24:1
180
7234
0.155
210
4054983
0.150
0.3
0.5
3.3
1.7
181
7235
0.104
0.7
3.0
0.6
1.5
211
4054984
0.280
0.1
0.4
1.0
0.4
182
7242
0.140
0.1
0.1
1.0
1.0
212
4054985
0.170
0.1
0.3
0.4
0.3
183
7243
0.058
1.5
1.3
1.5
0.8
213
4054987
0.720
0.1
0.1
1.0
1.0
184
7244
0.106
1.5
1.0
1.4
1.0
214
4054990
0.670
1.2
0.9
0.6
0.9
185
7245
0.090
1.8
0.1
1.5
0.2
215
4055195
0.860
0.1
0.3
1.3
1.0
186
7246
0.210
216
4055196
0.330
0.9
1.0
2.0
2.5
187
7247
0.105
8.0
2.0
0.4
2.9
217
4055197
0.620
1.1
1.2
1.0
1.2
188
7248
0.131
0.5
0.7
0.3
1.8
218
4055245
0.500
0.4
0.4
3.0
4.0
189
7249
0.089
0.1
1.1
0.4
1.6
219
4055246
0.460
0.1
0.1
1.0
1.0
190
7250
0.099
0.5
0.4
1.2
0.4
220
4055247
0.300
0.1
0.1
8.0
1.0
191
7251
0.096
4.0
2.1
1.1
1.8
221
4055248
0.380
0.6
0.6
8.0
6.0
192
7252
0.082
4.0
2.0
2.2
1.5
222
4055287
0.500
0.1
1.3
1.2
1.1
193
7253
0.095
2.0
1.4
2.0
2.8
223
4055289
0.500
0.9
1.0
0.5
1.7
194
7254
0.109
2.5
6.0
1.0
4.3
224
4055291
0.320
1.0
1.2
1.1
1.3
195
7255
0.091
0.5
2.0
2.0
2.0
225
4055292
0.400
0.9
0.8
1.4
1.0
196
7256
0.132
0.1
0.1
0.8
0.3
226
4055398
0.150
0.8
1.0
0.6
0.8
197
7257
0.142
2.0
0.1
1.7
0.2
227
4055399
0.280
1.1
1.1
0.8
0.8
198
7258
0.068
2.5
3.0
1.5
1.5
228
4055400
0.300
2.0
1.2
2.4
2.4
199
7259
0.075
0.1
1.0
0.6
1.3
229
4055403
0.500
0.2
0.3
1.0
1.0
200
7268
0.127
0.5
0.1
1.0
1.0
230
4055405
0.240
0.9
0.8
1.1
1.1
201
7269
0.187
0.1
0.1
0.2
0.2
231
4055406
0.170
0.7
0.2
1.0
0.7
202
7270
0.171
0.1
0.1
1.0
0.1
232
4055407
0.290
2.0
1.2
0.9
0.9
203
7271
0.220
0.1
0.5
1.3
0.8
233
4055408
0.252
0.1
0.1
1.0
1.0
204
7272
0.127
1.7
2.0
1.3
1.8
234
4055409
0.900
0.1
0.1
1.0
1.0
205
7274
0.107
1.0
0.1
0.9
0.1
235
4055524
0.300
0.1
1.2
0.7
0.7
206
4054976
1.400
0.1
0.1
1.0
1.0
236
4055525
0.110
0.2
0.6
0.7
0.4
207
4054977
1.800
0.1
0.2
1.0
2.0
237
4055549
0.200
2.0
1.8
1.2
1.6
208
4054981
0.380
1.0
1.0
0.5
0.6
238
4055550
0.130
0.1
0.1
0.2
0.1
209
4054982
0.230
0.1
1.0
1.3
1.0
239
4055555
0.100
0.1
0.3
0.3
0.4
Пример
Код
Y4
4-8 ч
0-24 ч
4:1
24:1
Пример
Код
Y4
4-8 ч
0-24 ч
4:1
24:1
240
4055556
0.210
1.0
0.7
1.3
0.9
270
4055740
0.240
1.2
1.5
0.9
0.8
241
4055557
0.240
0.7
0.2
1.1
0.2
271
4055741
0.190
2.0
3.2
1.3
2.7
242
4055559
0.070
0.3
0.1
0.5
0.5
272
4055742
0.080
1.3
0.3
0.3
1.0
243
4055581
0.220
1.0
0.1
2.0
0.3
273
4055743
0.064
1.0
0.1
0.3
0.3
244
4055582
0.340
1.8
1.2
1.6
1.7
274
4055744
0.090
1.8
1.0
1.0
10.0
245
4055583
0.250
1.0
1.1
1.2
1.2
275
4055745
0.170
0.8
1.4
1.4
2.8
246
4055584
0.200
0.1
0.1
0.1
0.1
276
4055746
0.160
0.9
1.4
1.2
1.6
247
4055585
0.080
0.1
0.1
0.3
0.3
277
4055747
0.079
0.4
0.7
1.1
1.0
248
4055586
0.080
1.0
0.5
0.2
0.8
278
4055841
0.099
1.0
2.0
2.9
2.9
249
4055587
0.170
1.4
0.8
2.2
1.3
279
4055842
0.063
0.1
1.0
3.3
1.1
250
4055603
0.170
0.4
0.6
0.9
0.8
280
4055843
0.120
1.5
2.0
-3.3
2.2
251
4055604
0.250
0.1
0.8
7.5
7.5
281
4055855
0.160
3.0
3.0
1.3
2.5
252
4055606
0.160
0.1
0.1
1.3
0.3
282
4055856
0.370
0.7
1.0
0.3
0.8
253
4055610
0.119
2.5
0.1
0.7
0.1
283
4055857
0.130
2.0
1.5
1.1
1.9
254
4055700
0.092
3.0
4.0
0.9
1.1
284
4055859
0.500
0.1
0.4
2.0
0.8
255
4055708
0.160
2.0
1.6
0.4
0.9
285
4055860
0.570
2.5
3.0
1.5
2.5
256
4055710
0.074
0.5
0.8
1.0
1.3
286
4055878
0.140
0.1
1.0
0.8
0.9
257
4055711
0.043
0.1
0.1
1.0
1.0
287
4055879
0.120
1.1
0.6
1.4
0.9
258
4055712
0.047
0.5
0.6
1.0
2.0
288
4055880
0.077
0.1
0.1
1.5
0.3
259
4055713
0.220
3.0
4.0
1.9
2.7
289
4055881
0.110
0.2
1.0
1.8
1.7
260
4055714
0.090
0.1
2.2
0.9
1.6
290
4056189
0.230
3.5
1.6
1.5
2.0
261
4055715
0.130
1.0
0.1
0.2
0.2
291
4056191
0.250
1.5
0.5
3.0
1.3
262
4055716
0.250
2.0
3.0
0.5
0.8
292
4056192
0.110
0.1
0.1
0.3
0.3
263
4055717
0.150
0.2
1.3
1.3
1.4
293
4056193
0.065
0.1
0.2
1.0
0.5
264
4055733
0.150
0.1
0.1
0.4
0.1
294
4056194
0.077
2.0
2.0
1.4
1.4
265
4055734
0.120
0.4
0.5
0.4
1.0
295
4056195
0.120
2.0
0.5
4.0
1.7
266
4055735
0.180
1.0
0.1
0.4
0.1
296
4056196
0.160
0.5
0.2
1.0
0.4
267
4055736
0.240
1.5
1.2
0.7
0.8
297
4056197
0.197
1.0
0.6
1.1
0.8
268
4055738
0.100
1.1
1.4
1.3
1.1
298
4056198
0.150
0.1
1.2
1.8
2.4
269
4055739
0.160
1.0
2.0
1.3
1.7
299
4056199
0.085
1.0
1.2
2.5
1.5
Пример
Код
Y4
4-8 ч
0-24 ч
4:1
24:1
Пример
Код
Y4
4-8 ч
0-24 ч
4:1
24:1
300
4056200
0.099
1.0
1.4
1.0
1.2
330
4056346
0.075
2.5
0.1
1.0
1.0
301
4056201
0.160
4.0
1.4
4.3
4.7
331
4056347
0.080
0.1
0.1
0.1
0.1
302
4056205
0.220
1.0
1.0
0.1
0.8
332
4056348
0.088
0.5
1.0
1.6
1.4
303
4056208
0.470
0.5
2.0
0.7
0.7
333
4056364
0.181
0.1
0.1
0.5
0.5
304
4056285
0.084
1.3
0.8
1.0
0.8
334
4056366
0.079
0.5
3.0
1.0
4.3
305
4056289
0.089
0.3
0.6
1.3
1.0
335
4056367
0.100
3.0
3.3
1.0
3.3
306
4056291
0.090
3.0
2.5
2.1
3.6
336
4056368
0.102
0.5
1.0
0.2
2.0
307
4056292
0.077
0.1
2.0
1.1
1.7
337
4056369
0.078
0.5
1.5
0.4
1.9
308
4056293
0.112
0.9
0.1
1.3
0.1
338
4056370
0.130
0.1
3.0
1-0
2.5
309
4056294
0.128
0.1
1.2
1.0
2.0
339
4056373
0.070
0.5
1.0
0.9
1.0
310
4056295
0.118
0.1
1.8
0.5
9.0
340
4056376
0.230
3.0
1.9
1.3
2.1
311
4056296
0.118
1.0
1.0
0.4
1.4
341
4056377
0.041
2.0
0.1
0.5
0.1
312
4056298
0.103
0.5
1.0
1.3
1.3
342
4056378
0.086
0.3
2.0
0.6
1.0
313
4056299
0.097
0.7
0.7
0.9
1.0
343
4056379
0.081
0.8
1.0
0.8
1.1
314
4056301
0.085
0.1
0.3
1.4
0.4
344
4056380
0.156
2.0
1.6
1.8
2.0
315
4056302
0.081
0.1
1.5
0.7
1.2
345
4056381
0.130
0.1
0.5
1.0
0.4
316
4056303
0.124
0.8
0.1
1.0
0.1
346
4056382
0.289
1.5
2.2
2.3
2.8
317
4056304
0.183
1.0
2.0
0.8
1.8
347
4056384
0.120
2.0
3.0
1.6
3.8
318
4056305
0.144
1.0
2.2
0.8
1.8
348
4056385
0.051
2.0
4.0
1.2
3.6
319
4056306
0.133
1.0
1.3
1.0
1.9
349
4056386
0.110
0.1
0.1
0.5
0.2
320
4056307
0.153
0.5
0.5
0.2
1.0
350
4056387
0.054
1.0
2.0
1.8
1.4
321
4056308
0.160
3.0
3.3
1.6
4.7
351
4056388
0.045
0.1
0.1
0.6
0.1
322
4056309
0.150
0.1
0.6
0.7
1.0
352
4056389
0.128
1.3
3.0
0.9
2.1
323
4056340
0.136
0.1
0.1
0.3
0.3
353
4056390
0.063
2.0
3.5
1.5
2.7
324
4056341
0.104
0.1
0.5
0.3
1.7
354
4056391
0.127
0.1
0.3
0.7
0.5
325
4056342
0.118
0.1
0.5
0.5
0.8
355
4056449
0.133
2.0
0.1
0.8
0.1
326
4056343
0.076
3.0
1.0
0.2
1.7
356
4056450
0.130
1.2
1.1
1.0
2.8
327
4056344
0.180
0.1
0.6
1.0
6.0
357
4056451
0.101
1.2
0.1
0.8
0.2
328
4056345
0.082
0.1
0.2
0.9
0.2
358
4056452
0.081
0.1
1.0
0.3
0.8
329
4056346
0.059
3.0
1.5
1.3
1.0
359
4056453
0.069
1.0
0.1
0.2
0.2
Пример
Код
Y4
4-8 ч
0-24 ч
4:1
24:1
Пример
Код
Y4
4-8 ч
0-24 ч
4:1
24:1
360
4056454
0.042
0.1
1.0
0.2
0.7
390
4056584
0.085
1.0
0.1
0.5
0.5
361
4056455
0.070
0.1
0.2
0.2
0.3
391
4056585
0.070
0.1
0.1
1.0
0.3
362
4056456
0.052
0.1
1.0
0.5
1.7
392
4056599
0.060
0.4
0.3
1.0
1.0
363
4056457
0.049
0.1
0.1
0.2
0.2
393
4056600
0.096
1.5
0.5
0.9
0.4
364
4056486
0.088
1.1
0.4
1.0
0.4
394
4056603
0.051
2.0
0.2
0.4
0.3
365
4056487
0.112
0.1
0.4
1.0
0.4
395
4056604
0.156
0.3
0.1
0.3
0.2
366
4056488
0.052
0.1
0.1
0.8
0.2
396
4056605
0.095
1.0
0.1
0.4
0.2
367
4056489
0.137
0.1
0.1
0.3
0.2
397
4056606
0.089
1.0
1.0
0.3
3.3
368
4056490
0.169
0.1
0.1
0.3
0.3
398
4056607
0.175
2.0
1.2
0.5
6.0
369
4056491
0.145
1.3
0.1
0.4
0.2
399
4056608
0.129,
1.0
0.1
0.5
0.5
370
4056564
0.056
0.3
0.1
1.4
0.2
400
4056609
0.136
1.5
0.4
-0.2
0.8
371
4056565
0.057
1.3
0.1
1.0
0.3
401
4056611
0.127
1.2
0.6
0.6
0.5
372
4056566
0.066
2.0
0.2
0.5
0.5
402
4056612
0.231
0.1
1.2
0.6
0.6
373
4056567
0.059
1.5
0.1
0.3
0.3
403
4056662
0.050
0.1
0.1
0.8
0.3
374
4056568
0.071
0.1
0.1
0.3
0.3
404
4056663
0.060
0.1
1.1
0.9
1.2
375
4056569
0.035
0.1
0.1
0.5
0.3
405
4056664
0.097
2.0
0.7
0.8
0.6
376
4056570
0.063
1.2
0.8
0.8
1.0
406
4056665
0.051
3.0
3.0
1.1
2.1
377
4056571
0.097
0.1
0.1
0.2
0.2
407
4056666
0.063
3.0
1.8
1.2
1.4
378
4056572
0.077
2.0
0.1
0.4
0.1
408
4056667
0.150
3.0
5.0
1.1
3.8
379
4056573
0.083
1.0
0.1
0.5
0.3
409
4056670
0.142
0.1
0.1
0.4
0.1
380
4056574
0.089
0.3
1.3
1.3
3.3
410
4056704
0.135
1.9
0.1
1.5
0.3
381
4056575
0.215
1.0
0.1
1.0
0.3
411
4056705
0.102
0.1
1.4
0.8
3.5
382
4056576
0.039
0.1
0.1
0.2
0.2
412
4056707
0.187
383
4056577
0.053
4.0
2.5
1.4
2.1
413
4056708
0.141
2.0
0.1
1.0
1.0
384
4056578
0.049
2.5
1.5
3.3
5.0
414
4056710
0.138
1.0
0.1
1.3
0.2
385
4056579
0.048
2.0
0.6
0.3
1.5
415
4056711
0.060
1.5
0.5
1.3
0.8
386
4056580
0.051
0.1
0.5
1.0
0.6
416
4056712
0.112
0.1
0.1
0.3
0.3
387
4056581
0.076
0.1
0.1
0.3
0.3
417
4056714
0.061
0.1
0.1
2.1
0.1
388
4056582
0.060
0.1
0.1
1.3
0.1
418
4056715
0.064
3.0
1.5
1.4
2.1
389
4056583
0.058
1.0
0.2
0.3
0.7
419
4056733
0.069
5.0
3.5
1.2
3.5
Пример
Код
Y4
4-8 ч
0-24 ч
4:1
24:1
Пример
Код
Y4
4-8 ч
0-24 ч
4:1
24:1
420
4056734
0.064
5.0
2.8
1.3
2.5
450
4056984
0.087
1.2
0.1
2.0
0.5
421
4056735
0.058
4.5
2.0
1.2
1.7
451
4056985
0.056
1.3
1.4
1.2
0.9
422
4056736
0.171
1.8
3.5
1.0
2.7
452
4056986
0.076
1.0
1.5
0.9
1.3
423
4056737
0.068
3.0
4.0
0.9
3.6
453
4056987
0.096
1.5
3.0
1.2
2.3
424
4056794
0.058
1.5
2.5
0.8
0.8
454
4056989
0.200
3.0
4.0
1.0
3.1
425
4056795
0.086
0.1
2.4
1.1
1.8
455
4056990
0.148
3.0
6.0
1.0
4.3
426
4056796
0.079
6.0
5.0
1.7
2.8
456
4056991
0.114
4.0
3.0
1.3
1.3
427
4056797
0.076
5.0
4.0
1.2
1.3
457
4057008
0.093
2.0
2.3
0.9
1.0
428
4056798
0.120
4.0
4.0
2.3
3.6
458
4057009
0.113
1.5
2.0
1.0
1.5
429
4056799
0.169
1.5
0.5
0.3
0.6
459
4057010
0.198
1.5
2.5
1.0
2.1
430
4056800
0.088
2.5
3.0
0.7
1.0
460
4057011
0.064
3.5
3.0
-2.3
3.0
431
4056801
0.072
4.3
5.5
0.9
1.1
461
4057012
0.214
1.0
2.0
2.0
2.5
432
4056926
0.195
1.5
2.0
1.2
1.8
462
4057013
0.093
2.0
2.0
2.1
1.7
433
4056927
0.220
2.0
2.2
1.8
3.7
463
4057014
0.230
2.5
0.9
2.4
1.8
434
4056928
0.158
0.5
1.5
1.8
1.5
464
4057015
0:244
4.0
1.0
3.3
1.7
435
4056929
0.172
1.0
0.1
0.9
0.1
465
4057016
0.120
5.0
2.7
1.3
2.1
436
4056931
0.092
0.1
0.1
1.0
0.1
466
4057017
0.265
1.5
1.0
1.4
1.1
437
4056932
0.131
0.1
0.1
1.0
0.1
467
4057018
0.074
6.0
4.3
2.0
2.9
438
4056933
0.062
4.0
3.5
1.1
2.7
468
4057019
0.266
3.0
2.6
1.9
3.7
439
4056934
0.087
2.0
0.7
1.2
0.8
469
4057111
0.044
6.0
3.8
0.8
0.6
440
4056935
0.322
2.5
2.5
1.4
2.8
470
4057112
0.134
5.0
3.5
1.0
1.0
441
4056938
0.182
2.5
4.0
1.0
2.7
471
4057113
0.060
3.5
5.3
0.7
1.0
442
4056939
0.189
0.1
2.0
0.7
1.4
472
4057114
0.061
0.1
0.1
0.6
0.2
443
4056941
0.058
2.0
0.1
1.0
0.1
473
4057115
0.055
1.5
3.0
1.3
3.0
444
4056942
0.164
2.0
2.4
1.0
1.7
474
4057116
0.158
3.0
5.5
0.8
2.4
445
4056944
0.057
0.1
0.1
0.8
0.1
475
4057117
0.192
2.0
2.0
1.1
1.0
446
4056945
0.129
2.0
3.0
1.7
2.5
476
4057118
0.133
2.0
8.0
1.7
2.7
447
4056946
0.099
1.5
0.3
0.5
0.4
477
4057119
0.102
2.0
2.0
1.4
1.5
448
4056982
0.108
0.1
0.1
0.4
0.1
478
4057120
0.195
0.1
1.0
0.5
0.3
449
4056983
0.069
1.1
0.1
1.3
0.2
479
4057134
0.083
3.0
2.0
1.2
0.8
Пример
Код
Y4
4-8 ч
0-24 ч
4:1
24:1
Пример
Код
Y4
4-8 ч
0-24 ч
4:1
24:1
480
4057135
0.097
4.0
3.5
0.9
1.1
510
4057256
0.073
2.0
5.0
1.0
1.3
481
4057136
0.064
4.5
4.0
1.0
1.0
511
4057257
0.083
2.0
5.0
0.6
1.0
482
4057137
0.092
4.5
5.4
1.2
1-8
512
4057258
0.078
8.0
7.5
0.7
1.3
483
4057138
0.086
5.0
5.5
1.0
1.4
513
4057259
0.083
3.0
3.0
1.0
1.2
484
4057139
0.078
3.0
3.7
1.0
2.6
514
4057260
0.209
485
4057140
0.126
1.0
7.5
0.8
2.5
515
4057261
0.056
4.0
3.0
1.0
2.0
486
4057141
0.114
3.5
4.5
1.9
3.0
516
4057268
0.050
0.1
1.5
1.7
2.1
487
4057144
0.083
2.0
4.5
2.0
4.5
517
4057269
0.058
4.0
1.5
2.0
2.5
488
4057145
0.070
4.0
4.0
1.3
3.6
518
4057270
0.085
1.5
2.0
2.5
2.5
489
4057146
0.080
3.0
3.5
0.9
2.3
519
4057271
0.062
1.6
2.2
2.0
2.2
490
4057147
0.199
520
4057272
0.142
3.0
1.5
4.0
3.0
491
4057148
0.069
2.5
3.5
0.8
2.1
521
4057273
0.061
1.0
1.2
2.1
1.7
492
4057149
0.068
3.5
3.5
1.2
3.5
522
4057274
0.103
2.5
1.5
0.8
0.8
493
4057150
0.147
523
4057275
0.162
494
4057151
0.056
7.0
5.0
1.0
2.5
524
4057276
0.085
1.5
1.5
1.5
1.2
495
4057152
0.141
4.5
5.0
1.2
4.5
525
4057277
0.093
1.0
3.0
1.0
1.5
496
4057153
0.057
4.0
4.0
0.9
2.7
526
4057279
0.080
2.0
1.0
2.5
1.3
497
4057159
0.053
3.5
2.5
1.3
2.5
527
4057280
0.049
3.0
2.0
1.0
1.0
498
4057160
0.059
3.0
5.5
0.9
1.4
528
4057334
0.082
3.0
5.0
0.8
1.7
499
4057161
0.125
529
4057335
0.080
1.5
6.0
1.0
1.7
500
4057162
0.060
3.0
3.0
1.5
2.0
530
4057336
0.090
2.5
3.5
1.2
1.4
501
4057163
0.088
5.0
3.5
1.0
1.4
531
4057337
0.109
3.0
3.5
1.0
0.9
502
4057228
0.068
2.0
3.0
1.1
1.7
532
4057338
0.078
5.0
1.7
2.3
1.7
503
4057229
0.143
2.5
5.0
1.3
1.7
533
4057440
0.089
8.0
5.5
1.0
1.2
504
4057231
0.049
3.0
4.0
0.9
1.1
534
4057441
0.088
5.0
2.7
2.4
2.7
505
4057232
0.128
3.0
2.5
2.1
1.8
535
4057442
0.101
3.0
2.0
2.1
1.8
506
4057233
0.130
3.0
2.3
0.8
1.4
536
4057443
0.078
3.5
2.0
1.9
1.7
507
4057234
0.077
3.0
4.0
1.4
2.2
537
4057444
0.116
3.3
1.7
2.2
1.9
508
4057235
0.059
1.7
4.5
0.8
2.0
538
4057445
0.107
5.0
2.3
2.4
2.3
509
4057255
0.220
539
4057446
0.109
6.0
3.0
1.5
1.5
Пример
Код
Y4
4-8 ч
0-24 ч
4:1
24:1
Пример
Код
Y4
4-8 ч
0-24 ч
4:1
24:1
540
4057564
0.090
3.0
4.6
1.0
1.5
570
4057610
0.131
541
4057579
0.077
1.3
2.0
1.5
1.0
571
4057611
0.095
8.0
5.5
1.2
1.8
542
4057580
0.112
0.5
1.5
1.4
0.9
572
4057612
0.072
7.0
5.0
1.0
2-0
543
4057582
0.171
573
4057613
0.109
1.0
4.0
0.6
0.7
544
4057583
0.086
0.1
1.0
2.1
1.4
574
4057614
0.087
0.1
3.0
3.8
3.8
545
4057584
0.066
1.0
2.0
1.4
2.2
575
4057615
0.127
546
4057585
0.194
576
4057616
0.098
0.8
3.0
1.2
1.0
547
4057586
0.069
1.5
0.1
1.7
0.1
577
4057617
0.103
2.5
5.0
0.6
0.6
548
4057587
0.048
1.5
1.0
1.2
0.4
578
4057630
0.098
5.0
8.0
1.0
2.0
549
4057588
0.066
1.0
1.0
1.8
0.9
579
4057631
0.097
3-0
0.1
1.3
0.1
550
4057589
0.069
1.0
1.0
1.5
1:0
580
4057632
0.073
2.7
0.4
1.3
0.4
551
4057590
0.048
3.0
2.5
1.6
2.5
581
4057633
0.063
4.0
1.0
2.2
1.1
552
4057591
0.062
0.1
1.5
1.9
1.9
582
4057634
0.104
7.0
5.0
1.7
1.7
553
4057592
0.066
1.0
1.0
1.0
1.0
583
4057637
0.091
6.0
6.0
1.0
1.0
554
4057593
0.129
584
4057638
0.211
555
4057594
0.083
8.0
1.0
2.0
0.5
585
4057639
0.160
3.0
0.1
1.0
0.0
556
4057595
0.059
2.0
2.0
1.0
0.5
586
4057640
0.079
1.0
0.1
0.3
0.3
557
4057596
0.096
3.0
1.0
4.0
2.0
587
4057641
0.080
3.0
0.1
0.6
0.1
558
4057597
0.081
4.0
1.0
2.0
0.5
588
4057642
0.083
6.0
0.1
3.3
0.1
559
4057598
0.075
6.5
4.3
3.3
4.3
589
4057643
0.088
7.0
9.0
1.0
1.8
560
4057599
0.063
2.0
2.0
0.4
0.5
590
4057644
0.065
0.4
2.5
1.1
1.1
561
4057600
0.061
1.3
2.5
1.1
1.7
591
4057645
0.069
4.0
2.0
2.2
2.2
562
4057601
0.076
2.5
3.0
1.6
2.5
592
4057646
0.050
4.5
1.4
1.8
1.3
563
4057603
0.055
3.0
3.0
1.3
2.0
593
4057647
0.054
4.0
1.9
1.2
0.9
564
4057604
0.064
6.0
5.0
1.5
2.5
594
4057648
0.072
4.0
2.6
1.8
1.3
565
4057605
0.092
0.1
3.0
0.9
1.3
595
4057649
0.066
4.0
1.0
1.0
0.5
566
4057606
0.108
4.0
0.1
1.0
0.0
596
4057741
0.082
0.1
1.5
2.3
1.9
567
4057607
0.064
1.5
3.0
0.9
1.4
597
4057742
0.064
0.1
1.4
1.1
1.6
568
4057608
0.133
9.0
1.0
0.5
1.0
598
4057743
0.090
0.8
2.0
0.9
1.3
569
4057609
0.172
599
4057744
0.088
8.0
2.0
0.9
0.6
Пример
Код
Y4
4-8 ч
0-24 ч
4:1
24:1
Пример
Код
Y4
4-8 ч
0-24 ч
4:1
24:1
600
4057745
0.086
1.0
1.5
0.3
2.5
630
4057879
0.134
601
4057746
0.072
1.0
3.0
1.8
2.7
631
4057891
0.146
602
4057747
0.066
0.5
1.0
1.2
0.7
632
4057893
0.144
603
4057748
0.105
6.5
1.0
0.5
0.5
633
4057897
0.070
3.0
2.0
1.5
1.0
604
4057749
0.098
1.5
0.7
1.5
1.2
634
4057898
0.063
2.0
3.0
0.5
1.0
605
4057750
0.124
635
4057899
0.064
1.0
1.0
0.5
0.5
606
4057751
0.065
1.0
0.5
0.9
0.3
636
4057900
0.090
4.0
3.0
1.2
0.6
607
4057752
0.071
4.0
5.0
1.5
5.0
637
4057902
0.064
2.0
4.0
1.0
1.3
608
4057753
0.070
6.0
2.0
1.7
1.7
638
4057903
0.090
3.0
4.5
1.0
1.1
609
4057754
0.156
639
4057904
0.054
2.0
2.0
0.5
1.0
610
4057755
0.145
640
4057905
0.111
2.0
5.0
2.0
5.0
611
4057756
0.124
0.1
1.3
0.6
0.3
641
4057906
0.060
2.0
3.0
1.0
3.0
612
4057758
0.190
642
4057907
0.052
0.1
1.0
1.3
0.7
613
4057762
0.167
643
4057908
0.097
3.0
2.0
0.6
0.4
614
4057763
0.174
644
4057909
0.056
3.0
2.0
0.7
0.7
615
4057764
0.094
3.0
1.5
" 0.5
0.8
645
4058052
0.085
0.1
3.5
1.8
1.8
616
4057765
0.075
5.0
1.0
2.0
0.7
646
4058053
0.042
0.1
1.8
1.0
0.9
617
4057766
0.089
6.5
4.0
1.4
1.6
647
4058054
0.137
618
4057769
0.117
5.0
5.3
1.2
1.3
648
4058055
0.110
619
4057770
0.081
6.0
1.0
1.2
0.3
649
4058056
0.100
0.1
1.5
0.1
0.8
620
4057774
0.227
650
4058057
0.111
0.1
0.1
1.7
0.2
621
4057777
0.088
3.0
5.0
0.7
1.0
651
4058058
0.134
622
4057779
0.071
0.1
2.5
1.8
1.3
652
4058059
0.156
623
4057781
0.132
653
4058060
0.105
1.0
0.1
0.3
0.3
624
4057782
0.078
0.1
2.0
2.5
5.0
654
4058061
0.119
625
4057783
0.154
655
4058062
0.072
0.1
0.5
7.5
2.5
626
4057784
0.102
5.0
1.0
1.0
0.3
656
4058063
0.075
0.1
2.0
2.0
5.0
627
4057785
0.134
657
4058064
0.091
0.1
1.2
5.0
6.0
628
4057788
0.155
658
4058065
0.039
1.3
2.0
0.3
5.0
629
4057789
0.164
659
4058066
0.143
Пример
Код
Y4
4-8 ч
0-24 ч
4:1
24:1
Пример
Код
Y4
4-8 ч
0-24 ч
4:1
24:1
660
4058067
0.047
0.1
2.0
1.0
0.7
690
4058164
0.058
0.3
0.1
1.9
0.1
661
4058068
0.026
1.5
2.0
0.3
0.6
691
4058165
0.063
1.7
1.0
0.5
0.3
662
4058069
0.070
0.1
1.3
0.8
0.7
692
4058166
0.056
10.0
4.5
1.0
1.1
663
4058070
0.030
2.0
2.5
2.8
2.5
693
4058167
0.060
6.0
5.0
0.8
0.9
664
4058071
0.143
694
4058168
0.048
4.0
2.5
2.5
2.5
665
4058072
0.051
4.0
4.0
2.0
2.0
695
4058169
0.099
666
4058073
0.131
696
4058278
0.056
5.0
3.5
4.0
5.8
667
4058074
0.116
697
4058280
0.042
0.5
0.5
1.0
0.5
668
4058075
0.058
3.0
5.0
0.8
2.0
698
4058281
0.040
4.5
4.0
1.2
1.3
669
4058076
0.048
2.0
1.0
1.0
1.0
699
4058282
0.106
670
4058077
0.059
2.0
2.0
1.2
0:4
700
4058283
0.077
1.5
1.0
2.2
1.1
671
4058078
0.072
3.0
1.0
2.2
1.1
701
4058285
0.210
672
4058079
0.071
10.0
7.0
1.5
2.3
702
4058286
0.093
673
4058080
0.262
8.0
3.0
3.6
4.3
703
4058289
0.071
2.0
4.0
0.9
1.0
674
4058081
0.062
0.1
0.5
0.8
1.0
704
4058290
0.072
5.0
4.0
1.1
1.1
675
4058082
0.110
705
4058295
0.059
2.0
0.5
1.9
0.6
676
4058146
0.046
1.0
0.1
1.1
0.1
706
4058296
0.053
1.0
2.0
4.2
3.3
677
4058147
0.057
2.5
2.0
1.8
1.0
707
4058297
0.043
3.0
2.5
2.5
2.5
678
4058148
-0.051
1.0
0.5
2.0
1.0
708
4058298
0.072
0.1
2.0
1.7
2.2
679
4058149
0.070
5.0
4.0
3.3
4.4
709
4058299
0.067
4.0
3.0
2.7
10.0
680
4058150
0.113
710
4058300
0.076
0.1
1.0
5.0
3.3
681
4058151
0.058
0.1
1.7
0.5
0.4
711
4058301
0.081
0.1
2.5
1.8
6.3
682
4058152
0.088
0.1
1.0
2.5
1.3
712
4058361
0.046
0.5
1.3
2.1
1.9
683
4058153
0.107
713
4058362
0.059
4.0
3.5
1.9
5.0
684
4058154
0.105
714
4058363
0.047
0.1
4.0
0.5
2.0
685
4058155
0.125
715
4058364
0.051
3.0
4.0
6.3
10.0
686
4058158
0.047
2.0
0.5
4.0
1.0
716
4058365
0.044
1.0
4.0
3.3
6.7
687
4058159
0.106
717
4058366
0.121
4.0
7.0
7.0
14.0
688
4058160
0.052
3.5
4.0
1.2
1.6
718
4058367
0.086
7.0
3.5
15.0
17.5
689
4058163
0.087
4.0
3.5
2.0
3.5
719
4058368
0.114
2.5
3.0
5.0
7.5
Пример
Код
Y4
4-8 ч
0-24 ч
4:1
24:1
Пример
Код
Y4
4-8 ч
0-24 ч
4:1
24:1
720
4058369
0.049
3.5
3.0
2.0
2.0
750
4058504
0.068
1.0
4.5
1.3
2.3
721
4058370
0.073
6.0
5.0
2.0
5.0
751
4058505
0.062
4.5
4.0
2.3
2.0
722
4058371
0.051
8.0
5.0
1.3
1-7
752
4058506
0.045
12.0
2.0
1.8
0.5
723
4058372
0.054
6.0
1.5
2.0
1.5
753
4058507
0.067
0.1
2.0
1.0
1.0
724
4058374
0.057
9.0
1.5
2.1
2.1
754
4058559
0.044
2.0
4.0
0.8
2.4
725
4058375
0.041
1.5
0.5
1.4
0.7
755
4058560
0.095
726
4058376
0.049
3.5
3.5
2.5
4.4
756
4058561
0.070
1.7
1.3
1.3
0.7
727
4058377
0.060
6.0
2.0
4.0
2.0
757
4058562
0.100
2.0
4.5
1.3
1.5
728
4058378
0.042
8.0
1.5
1.4
2.1
758
4058563
0.114
729
4058379
0.073
6.0
5.0
1.7
3.3
759
4058564
0.109
730
4058380
0.045
6.0
0.1
0.8
0.0
760
4058565
0.178
731
4058381
0.098
8.0
4.0
1.0
2.7
761
4058566
0.118
732
4058382
0.046
7.0
0.5
2.1
0.7
762
4058567
0.089
2.0
1.0
1.0
0.3
733
4058486
0.051
5.0
2.0
1.0
0.8
763
4058568
0.207
734
4058487
0.064
0.1
1.5
1.0
0.4
764
4058569
0.130
735
4058488
0.123
765
4058570
0.074
1.0
2.0
2.9
2.9
736
4058489
0.050
4.0
0.1
3.0
0.1
766
4058571
0.073
1.0
2.0
1.1
2.2
737
4058490
0.054
3.0
3.0
1.3
1.5
767
4058572
0.041
2.0
1.0
1.0
0.3
738
4058492
.0.040
9.0
10.0
1.0
2.5
768
4058573
0.110
0.5
2.0
0.5
0.7
739
4058493
0.087
4.5
2.0
2.5
2.0
769
4058574
0.074
4.0
2.5
2.0
1.3
740
4058494
0.122
770
4058575
0.142
4.5
3.5
1.0
1.2
741
4058495
0.081
3.0
6.0
0.7
1.0
771
4058576
0.092
4.0
6.0
0.7
1.1
742
4058496
0.126
772
4058577
0.084
1.0
2.5
1.0
1.3
743
4058497
0.056
0.1
0.1
2.1
0.1
773
4058578
0.064
1.0
2.0
0.5
1.0
744
4058498
0.081
5.0
4.5
2.8
5.0
774
4058579
0.062
2.0
3.0
2.0
3.0
745
4058499
0.049
2.0
0.1
1.3
0.3
775
4058580
0.159
0.1
0.1
1.0
0.3
746
4058500
0.068
3.0
2.0
3.0
2.0
776
4058582
0.075
6.0
4.0
3.9
4.4
747
4058501
0.059
2.5
2.0
2.0
4.0
777
4058583
0.068
4.0
5.0
3.3
8.3
748
4058502
0.100
778
4058584
0.065
3.5
1.5
3.0
1-5
749
4058503
0.061
5.0
3.5
1.2
1.2
779
4058667
0.068
8.0
5.0
1.7
1.7
Пример
Код
Y4
4-8 ч
0-24 ч
4:1
24:1
Пример
Код
Y4
4-8 ч
0-24 ч
4:1
24:1
780
4058668
0.074
6.0
6.0
0.7
1.2
810
4058702
0.086
5.0
3.5
0.9
0.9
781
4058669
0.043
3.0
3.0
1.7
2.0
811
4058703
0.059
0.2
1.0
1.1
1.4
782
4058670
0.080
3.0
0.5
1.6
1.0
812
4058704
0.094
1.5
4.0
1.0
1.3
783
4058671
0.105
6.0
5.5
0.8
0.9
813
4058705
0.097
7.0
7.0
1.3
2.3
784
4058673
0.091
2.0
2.0
0.9
0.4
814
4058706
0.084
3.0
0.5
2.0
0.5
785
4058674
0.082
2.5
4.0
0.6
0.7
815
4058707
0.089
4.0
1.0
1.2
0.4
786
4058675
0.095
816
4058708
0.079
6.0
3.0
0.8
1.0
787
4058676
0.061
5.5
5.5
1.5
1.8
817
4058709
0.083
4.0
5.5
3.0
5.5
788
4058677
0.138
818
4058710
0.129
789
4058678
0.090
0.5
4.0
1.5
2.0
819
4058738
0.055
6.0
2.0
1.8
2.2
790
4058679
0.078
0.1
1.0
0.7
0.7
820
4058741
0.068
3.5
3.5
0.7
0.6
791
4058680
0.069
0.1
0.1
0.3
0.1
821
4058742
0.141
792
4058681
0.087
4.0
5.0
1.5
1.3
822
4058743
0.166
793
4058682
0.076
3.0
4.0
1.0
2.0
823
4058744
0.067
0.4
1.2
0.7
4.0
794
4058683
0.081
4.5
1.0
0.6
0.2
824
4058745
0.204
795
4058684
0.087
3.0
3.5
1.5
1.8
825
4058746
0.076
4.0
0.1
1.1
0.1
796
4058685
0.090
3.0
2.0
0.8
0.5
826
4058747
0.097
797
4058686
0.076
3.3
3.3
3.3
4.7
827
4058748
0.123
798
4058687
0.096
5.0
6.0
1.8
12.0
828
4058749
0.034
1.3
0.5
1.5
0.6
799
4058688
0.089
4.0
1.5
0.5
0.3
829
4058750
0.036
0.1
2.0
1.4
2.2
800
4058689
0.098
830
4058751
0.093
801
4058690
0.071
3.0
0.9
0.8
0.4
831
4058752
0.144
802
4058691
0.098
6.5
5.5
1.5
1.8
832
4058753
0.063
3.5
4.0
15.0
40.0
803
4058692
0.131
6.0
6.0
1.0
2.0
833
4058754
0.073
0.1
2.0
0.3
1.3
804
4058693
0.077
3.0
4.0
0.7
0.4
834
4058755
0.064
0.8
0.9
1.6
1.1
805
4058696
0.045
0.2
2.5
1.0
1.4
835
4058757
0.067
2.0
4.0
0.5
1.0
806
4058697
0.095
836
4058758
0.089
4.0
2.5
0.8
1.0
807
4058698
0.072
3.0
3.5
1.1
1.0
837
4058759
0.041
0.1
0.8
0.7
0.8
808
4058699
0.092
2.5
4.5
0.8
1.1
838
4058760
0.049
3.0
0.1
7.0
1.0
809
4058701
0.099
839
4058761
0.047
0.1
0.1
0.4
0.2
Пример
Код
Y4
4-8 ч
0-24 ч
4:1
24:1
Пример
Код
Y4
4-8 ч
0-24 ч
4:1
24:1
840
4058762
0.060
5.0
3.0
1.0
1.5
870
4058935
0.056
0.2
0.4
1.0
0.6
841
4058763
0.071
3.0
0.9
1.9
1.3
871
4058936
0.113
842
4058764
0.045
2.5
2.0
1.7
2.2
872
4058937
0.054
0.2
0.2
0.9
0.3
843
4058765
0.049
4.0
3.0
2.5
5.0
873
4058938
0.056
0.1
0.1
0.3
0.3
844
4058766
0.0624
2.5
2.0
2.1
2.9
874
4059008
0.077
8-0
5-0
1.3
1.7
845
4058767
0.098
3.5
2.5
2.9
3.6
875
4059009
0.091
2.0
1.0
0.9
0.3
846
4058911
0.077
4.0
5.0
0.8
1.0
876
4059010
0.097
5.0
4.0
0.3
0.9
847
4058912
0.0495
4.0
5.0
0.8
1.1
877
4059011
0.098
848
4058913
0.0775
4.5
5.0
0.9
1.3
878
4059012
0.164
4.0
6.0
1.3
2.0
849
4058914
0.081
7.0
3.0
0.6
1.2
879
4059013
0.107
7.0
4.3
0.9
1.1
850
4058915
0.071
3.8
3.7
0.8
0.8
880
4059014
0.098
851
4058916
0.095
3.5
3.7
1.0
1.2
881
4059015
0.088
4.0
3.0
1.1
0.9
852
4058917
0.087
4.5
5.0
0.8
0.8
882
4059016
0.060
1.7
1.4
1.3
1.8
853
4058918
0.099
883
4059017
0.064
1.0
1.6
0.6
0.8
854
4058919
0.098
884
4059018
0.056
1.0
1.0
0.9
1.1
855
4058920
0.109
885
4059019
0.045
2.0
1.3
2.5
3.3
856
4058921
0.097
886
4059020
0.059
3.0
0.7
2.2
0.8
857
4058922
0.082
3.0
2.0
1.1
0.8
887
4059021
0.085
2.0
2.0
2.0
2.0
858
4058923
0.067
3.0
2.5
2.0
5.0
888
4059022
0.074
1.0
1.2
2.5
1.5
859
4058924
0.045
0.1
2.0
2.0
2.9
889
4059023
0.071
3.0
1.5
2.0
1.5
860
4058925
0.050
0.2
0.5
10.0
5.0
890
4059024
0.054
3.0
3.3
3.0
3.3
861
4058926
0.049
3.5
2.0
5.0
5.0
891
4059025
0.071
7.0
4.0
3.3
4.4
862
4058927
0.050
1.5
0.5
0.8
0.4
892
4059026
0.055
4.5
2.0
2.6
2.1
863
4058928
0.062
2.0
1.5
1.4
2.1
893
4059027
0.089
4.0
2.0
1.2
0.8
864
4058929
0.082
2.0
2.0
4.0
2.0
894
4059028
0.090
4.0
3.0
0.6
0.8
865
4058930
0.068
6.0
1.0
2.3
1.3
895
4059029
0.081
5.0
0.5
1.4
1.0
866
4058931
0.065
4.3
0.8
2.5
1.0
896
4059030
0.130
867
4058932
0.064
7.0
2.0
2.1
2.5
897
4059031
0.127
868
4058933
0.085
4.0
3.0
1.0
1.0
898
4059032
0.098
869
4058934
0.096
899
4059033
0.128
Пример
Код
Y4
4-8 ч
0-24 ч
4:1
24:1
Пример
Код
Y4
4-8 ч
0-24 ч
4:1
24:1
900
4059034
0.106
930
4059105
0.054
2.5
3.0
1.7
2.0
901
4059035
0.107
931
4059106
0.093
902
4059036
0.089
0.5
1.5
1.0
1.5
932
4059107
0.082
2.5
4.0
1.1
1.1
903
4059037
0.088
5.0
2.5
1.1
0.7
933
4059108
0.081
7.0
2.0
0.6
0.3
904
4059038
0.197
934
4059109
0.067
0.5
1.5
0.4
0.3
905
4059039
0.123
935
4059110
0.087
0.5
1.5
1.0
1.5
906
4059040
0.118
936
4059111
0.116
907
4059041
0.134
937
4059112
0.102
908
4059042
0.1
938
4059113
0.054
0.1
0.1
0.1
0.1
909
4059043
0.122
939
4059114
0.071
0.4
2.0
0.0
0.8
910
4059044
0.069
2.0
0.8
3.3
0.9
940
4059115
0.048
0.7
1.3
1.4
1.9
911
4059045
0.061
0.2
3.3
3.0
5-5
941
4059116
0.041
0.2
0.2
1.4
0.3
912
4059046
0.055
3.0
2.5
3.3
4.2
942
4059117
0.074
4.0
4.0
1.3
2.0
913
4059047
0.064
0.3
0.1
2.9
0.1
943
4059118
0.169
914
4059048
0.05
0.5
0.5
1.1
0.7
944
4059119
0.111
915
4059049
0.069
0.3
0.1
0.7
0.1
945
4059120
0.066
3.0
4.0
4.0
8.0
916
4059050
0.054
2.0
0.9
1.8
1.8
946
4059121
0.052
3.0
3.0
1.5
1.5
917
4059051
0.059
5.0
1.4
2.5
3.5
947
4059122
0.046
2.0
1.8
1.4
1.4
918
4059052
0.061
3.0
0.1
2.5
0.3
948
4059123
0.102
919
4059053
0.086
0.5
2.5
1.0
1.0
949
4059124
0.074
5.0
3.0
0.8
3.0
920
4059054
0.085
1.0
1-0
0.8
0.4
950
4059125
0.068
0.5
1.0
1.9
1.3
921
4059056
0.147
951
4059126
0.107
922
4059097
0.044
1.0
1.3
1.4
1.6
952
4059127
0.065
0.2
0.2
1.9
0.3
923
4059098
0.046
1.0
1-3
1.1
1.4
953
4059128
0.065
0.1
0.1
0.3
0.0
924
4059099
0.089
0.5
3.0
0.8
1.0
954
4059129
0.110
925
4059100
0.093
955
4059130
0.072
5.0
2.5
1.3
1.7
926
4059101
0.125
956
4059131
0.070
5.0
3.0
1.0
1.2
927
4059102
0.104
957
4059132
0.074
0.5
4.0
1.8
2.0
928
4059103
0.084
3.5
4.0
1.5
2.0
958
4059134
0.069
2.5
0.8
25.0
8.0
929
4059104
0.068
2.0
0.7
0.3
0.1
959
4059135
0.056
1.0
1.5
1.5
1.5
Пример
Код
Y4
4-8 ч
0-24 ч
4:1
24:1
Пример
Код
Y4
4-8 ч
0-24 ч
4:1
24:1
960
4059136
0.083
6.0
3.5
1.7
2.3
990
4059373
0.078
1.0
0.5
0.7
0.3
961
4059137
0.054
4.0
2.0
1.1
0.5
991
4059374
0.063
1.0
2.0
0.7
0.6
962
4059138
0.120
992
4059375
0.072
6.0
4.0
1.0
2.0
963
4059343
0.079
5.0
2.0
0.8
0.7
993
4059376
0.068
11.0
10.0
1.3
3.3
964
4059344
0.069
1.5
0.7
7.5
3.5
994
4059377
0.105
965
4059345
0.071
2.0
4.0
6.7
13.3
995
4059378
0.090
7.0
4.0
1.4
1.6
966
4059347
0.069
2.0
2.0
1.5
1.0
996
4059379
0.049
1.0
1.0
0.5
0.5
967
4059348
0.076
5.0
2.0
2.5
2.0
997
4059380
0.076
1.0
1.0
0.8
0.5
968
4059349
0.047
1.0
4.0
2.5
4.0
998
4059381
0.058
0.1
0.1
0.5
0.1
969
4059350
0.065
7.0
6.0
2.0
4.0
999
4059382
0.057
5.0
1.5
1.0
0.6
970
4059351
0.068
8.0
4.0
1.0
2:0
1000
4059383
0.062
2.0
2.0
1.5
1.0
971
4059352
0.057
3.0
3.3
2.0
2.2
1001
4059384
0.051
6.0
3.0
1.3
1.5
972
4059353
0.057
3.5
3.7
2.0
2.5
1002
4059385
0.072
7.0
7.0
0.8
1.2
973
4059355
0.098
3.0
4.0
2.0
2.0
1003
4059386
0.062
1.0
2.0
1.0
0.8
974
4059356
0.066
4.0
2.0
1.2
0.8
1004
4059387
0.052
6.0
4.0
1.1
1.0
975
4059357
0.068
4.0
3.0
1.3
1.5
1005
4059388
0.062
1.5
3.5
1.0
1.2
976
4059358
0.051
2.0
2.0
1.8
1.0
1006
4059389
0.065
4.0
2.0
1.3
0.7
977
4059360
0.065
6.5
2.5
1.3
1.3
1007
4059390
0.057
3.0
3.0
1.3
1.5
978
4059361
D.070
7.0
6.0
1.3
1.5
1008
4059468
0.121
12.0
10.0
1.5
2.5
979
4059362
0.070
8.0
6.0
1.3
2.0
1009
4059469
0.112
10.0
6.0
4.0
6.0
980
4059363
0.071
6.5
6.0
1.4
1.7
1010
4059470
0.083
5.5
3.7
2.0
1.9
981
4059364
0.059
4.0
2.0
1.2
0.8
1011
4059471
0.155
0.1
2.0
0.0
0.5
982
4059365
0.059
3.0
3.0
0.8
0.8
1012
4059472
0.187
983
4059366
0.082
1.0
2.0
0.8
0.7
1013
4059474
0.140
6.0
2.0
0.1
2.0
984
4059367
0.049
4.5
2.0
1.7
1.3
1014
4059475
0.152
985
4059368
0.057
4.2
3.0
2.0
2.0
1015
4059486
0.081
6.0
2-0
2.0
2.0
986
4059369
0.064
2.0
5.0
1.3
1.3
1016
4059487
0.057
9.0
2.0
0.8
0.8
987
4059370
0.050
2.0
4.0
0.7
1.3
1017
4059488
0.051
1.0
4.0
1.0
0.7
988
4059371
0.060
3.0
4.0
0.8
1.3
1018
4059489
0.056
0.5
1.0
3.0
1.0
989
4059372
0.090
0.1
0.1
1.0
0.1
1019
4059490
0.042
1.0
2.0
1.0
0.7
Пример
Код
Y4
4-8 ч
0-24 ч
4:1
24:1
Пример
Код
Y4
4-8 ч
0-24 ч
4:1
24:1
1020
4059644
0.191
1050
4059722
0.071
2.0
1.5
1.0
1.5
1021
4059645
0.196
1051
4059723
0.068
2.0
4.0
1.3
1.3
1022
4059646
0.084
3.5
1.5
0.6
0.6
1052
4059724
0.147
1023
4059647
0.109
5.0
6.0
0.7
2.0
1053
4059725
0.122
1024
4059652
0.063
2.0
2.0
2.0
1.0
1054
4059727
0.174
1025
4059653
0.096
8.0
6.0
1.3
2.0
1055
4059728
0.085
2.0
3.0
4.0
6.0
1026
4059654
0.073
2.0
2.0
0.8
0.5
1056
4059729
0.143
1027
4059655
0.132
1057
4059730
0.109
1028
4059656
0.074
2.0
3.5
0.8
0.9
1058
4059731
0.123
1029
4059657
0.066
1.5
4.0
1.2
1.6
1059
4059732
0.108
1030
4059658
0.172
1060
4059733
0.092
1031
4059659
0.048
3.0
2.5
1.3
1.3
1061
4059734
0.134
1032
4059660
0.137
1062
4059735
0.177
1033
4059661
0.061
2.0
3.0
2.5
3.0
1063
4059736
0.121
6.0
5.0
0.6
1.0
1034
4059662
0.041
2.5
1.0
0.5
0.5
1064
4059815
0.129
1.0
1.0
0.8
0.5
1035
4059663
0.161
1065
4059816
0.144
1036
4059664
0.092
1066
4059837
0.158
1037
4059665
0.107
6.0
5.0
0.9
0.9
1067
4059838
0.144
1038
4059666
.0.095
9.0
5.0
0.8
0.8
1068
4059839
0.147
1039
4059667
0.088
5.0
3.5
1.2
1.2
1069
4059840
0.156
1040
4059668
0.101
1070
4059841
0.150
1041
4059669
0.095
1071
4059843
0.215
1042
4059670
0.119
1072
4059845
0.212
1043
4059715
0.043
2.0
3.0
0.5
1.5
1073
4059847
0.160
1044
4059716
0.098
1074
4059850
0.131
1045
4059717
0.060
2.0
6.0
1.0
2.0
1075
4059851
0.123
1046
4059718
0.089
2.0
1.5
1.7
1.0
1076
4059852
0.204
1047
4059719
0.060
2.0
2.0
0.3
0.5
1077
4059853
0.147
1048
4059720
0.073
2.0
3.0
1.5
0.8
1078
4059854
0.163
1049
4059721
0.110
1079
4059855
0.211
Пример
Код
Y4
4-8 ч
0-24 ч
4:1
24:1
Пример
Код
Y4
4-8 ч
0-24 ч
4:1
24:1
1080
4059856
0.080
3.0
0.3
0.1
0.2
1110
4059974
0.097
0.1
4.0
0.6
0.7
1081
4059859
0.108
1111
4059976
0.122
1082
4059861
0.100
3.0
3.0
0.1
3.0
1112
4059977
0.095
3.0
3.5
0.5
0.6
1083
4059862
0.071
1.0
1.0
1.0
10.0
1113
4060130
0.072
3.0
3.0
0.7
0.6
1084
4059863
0.068
2.0
2.5
0.2
5.0
1114
4060134
0.143
1085
4059864
0.070
1.0
0.5
0.1
0.5
1115
4060135
0.197
1086
4059932
0.085
0.5
1.0
0.8
0.3
1116
4060138
0.136
1087
4059934
0.108
1117
4060139
0.121
1088
4059935
0.081
2.0
3.0
0.8
0.7
1118
4060141
0.151
1089
4059936
0.118
1119
4060142
0.143
1.5
4.0
0.8
0.8
1090
4059937
0.209
1120
4060143
0.095
1091
4059938
0.128
1121
4060144
0.101
1092
4059939
0.090
3.0
4.5
0.9
1.0
1122
4060145
0.173
1093
4059940
0.115
1123
4060146
0.106
1094
4059942
0.073
1.0
3.5
1.3
1.2
1124
4060147
0.077
2.5
2.5
1.3
1.3
1095
4059943
0.077
2.0
2.5
0.8
0.6
1125
4060148
0.095
1.5
2.0
0.6
0.4
1096
4059947
0.066
3.0
3.5
1.0
0.9
1126
4060202
0.061
2.0
3.0
1.0
1.0
1097
4059951
0.093
1.5
2.0
0.7
0.4
1127
4060203
0.067
3.5
3.5
1.2
1.2
1098
4059953
0.045
0.1
1.0
0.5
0.5
1128
4060204
0.073
7.0
6.5
1.0
1.4
1099
4059954
0.115
1129
4060205
0.112
1100
4059955
0.044
0.2
2.0
0.5
2.0
1130
4060207
0.090
5.0
3.8
1.8
1.9
1101
4059956
0.058
2.5
2.0
1.4
0.8
1131
4060208
0.126
1102
4059958
0.069
4.0
3.0
1.2
1.2
1132
4060210
0.106
1103
4059965
0.083
0.2
0.1
1.4
0.0
1133
4060211
0.075
3.0
1.5
1.5
0.8
1104
4059966
0.053
0.5
1.0
1.0
1.0
1134
4060212
0.067
3.0
3.0
3.0
3.0
1105
4059967
0.064
3.0
2.0
4.0
4.0
1135
4060213
0.051
2.0
0.2
1.0
0.4
1106
4059969
0.050
0.1
0.5
1.4
0.7
1136
4060214
0.035
1.0
1.0
1.5
1.0
1107
4059971
0.228
1137
4060272
0.095
5.0
4.0
1.6
0.8
1108
4059972
0.090
3.0
1.0
1.3
0.5
1138
4060273
0.118
5.0
3.8
1.3
1.3
1109
4059973
0.171
1139
4060274
0.128
6.5
6.0
0.7
1.0
Пример
Код
Y4
4-8 ч
0-24 ч
4:1
24:1
Пример
Код
Y4
4-8 ч
0-24 ч
4:1
24:1
1140
4060275
0.106
2.0
4.5
0.9
1.3
1170
4060680
0.109
6.0
4.8
1.4
1.9
1141
4060276
0.073
4.2
3.5
1.7
1.8
1171
4060681
0.136
1142
4060277
0.076
5.0
5.0
1.0
1.7
1172
4060682
0.131
1143
4060278
0.062
3.0
3.0
0.8
1.0
1173
4060684
0.076
6.0
5.3
1.2
1.1
1144
4060279
0.067
4.5
4.0
0.8
0.8
1174
4060685
0.065
6.0
6.5
1.7
2.2
1145
4060280
0.064
5.0
0.1
1.8
0.1
1175
4060686
0.055
5.0
4.5
1.0
0.9
1146
4060281
0.150
1176
4060687
0.171
1147
4060282
0.092
5.0
4.3
1.3
1.4
1177
4060689
0.081
6.0
4.4
1.3
1.5
1148
4060283
0.073
4.5
1.0
1.5
0.5
1178
4060690
0.171
1149
4060284
0.055
6.0
7.0
1.9
3.5
1179
4060691
0.153
1150
4060301
0.036
3.0
1.0
0.6
0:3
1180
4060693
0.172
1151
4060306
0.098
1181
4060694
0.079
5.5
0.7
0.4
0.3
1152
4060308
0.117
5.0
2.8
1.3
0.9
1182
4060695
0.091
2.0
2.0
1.2
0.7
1153
4060309
0.046
3.0
1.8
0.8
0.6
1183
4060696
0.151
1154
4060311
0.099
1184
4060893
0.110
8.0
6.0
1.7
2.0
1155
4060312
0.101
2.5
4.0
0.7
0.8
1185
4060894
0.126
6.0
4.3
5.0
4.3
1156
4060313
0.097
1186
4060895
0.121
5.5
3.8
1.2
1.0
1157
4060314
0.084
6.0
2.5
1.8
1.3
1187
4060896
0.114
1158
4060315
0.097
5.0
3.5
1.8
1.8
1188
4060897
0.137
1159
4060316
0.101
7.0
4.8
1.2
1.6
1189
4060899
0.153
1160
4060356
0.091
1190
4061080
0.105
5.0
4.4
1.3
1.3
1161
4060358
0.080
5.5
4.3
0.9
1.1
1191
4061081
0.210
1162
4060359
0.099
1192
4061082
0.158
1163
4060360
0.101
1193
4061083
0.124
1164
4060601
0.088
5.0
4.5
0.9
1.1
1194
4061084
0.174
1165
4060602
0.173
6.0
3.0
1.6
1.2
1195
4061085
0.159
1166
4060603
0.102
6.5
3.2
2.0
1.6
1196
4061086
0.213
6.0
3.0
1.2
1.0
1167
4060604
0.121
5.5
3.0
3.3
3.0
1197
4061087
0.218
1168
4060605
0.140
1198
4061090
0.100
6.0
4.7
1.1
0.8
1169
4060606
0.131
1199
4061091
0.107
5.5
3.0
1.4
0.8
Пример
Код
Y4
4-8 ч
0-24 ч
4:1
24:1
Пример
Код
Y4
4-8 ч
0-24 ч
4:1
24:
1200
4061235
0.054
3.0
3.0
0.7
0.5
1201
4061236
0.052
4.3
5.0
0.9
1.0
1202
4061237
0.160
1203
4061238
0.138
2.5
3.5
0.8
0.7
1204
4061239
0.054
2.5
2.8
0.5
1.4
1205
4068672
0.059
10.0
1.0
1.0
0.7
1206
4457895
0.145