Изучение активности эритроцитарных антигенов респираторно-синцитиального вируса крупного рогатого скота для реакции непрямой гемагглютинации

Уровень физиологических процессов изучаемого органа эндокринной системы является видовой особенностью данных животных.

Литература

1. Балакирев, Н.А. Звероводство / Н.А. Балакирев, Г.А. Кузнецов. - М.: Колос, 2006. - С. 29.

2. Виноградов, В.В. "Скрытая метахромазия" - новый метод гистохимического выявления сиаломуцинов / В.В. Виноградов, В.Б. Потапова // Арх. патологии. - 1961. - Т. 23. - Вып.2. - С. 74-78.

3. Водопьянов, Б.Г. Определение возраста и пола охотничьих зверей: уч. пособие по биотехнии / Б.Г. Водопьянов, В.О. Саловаров. - Иркутск: Изд-во ИрГСХА, 2001. - С. 37-40.

4. Сидорова, О.Г. Морфологические и гистохимические эквиваленты функционального состояния надпочечников млекопитающих / О.Г. Сидорова, Н.Д. Овчаренко // Мат-лы междунар. науч.-практ. конф., по-свящ. 100-летию проф. И.А. Спирюхова. - Улан-Удэ, 2007. - С. 19.

5. Шабадаш, А.Л. Рациональная методика гистохимического обнаружения гликогена и ее теоретическое обоснование / А.Л. Шабадаш // Изв. Ан СССР. Сер. Биол. - 1947. - № 66. - С. 745-760.

6. Шубич, М.Г. Метод элективной окраски кислых (сульфатированных) мукополисахаридов основным коричневым / М.Г. Шубич // Экспериментальная биол. и медицина. - 1961. - № 2. - С. 116-120.

7. Lev, R. Specitic staining jf sulphate groups with alcian dlue at lou pH / R. Lev, S.S. Spicer // J. Histochem. -1964. - V.12. - № 5. - P.303-311.

8. Mowry, R.W. Alcian blu technics for the histochemical study of asid carbohydrates / R.W. Mowry// J. Histo-

chem., Cytochem. - 1956. - № 4. - P. 107.

9. Spicer, S.S. The use of various cations reagent in histochemical differantiation of mucopolysaccharidts

/ S.S. Spicer // Amer. J. Clin. Path. - 1961. - Vol. 36. - № 5. - P. 393-407.

УДК 619:616.988.75:576.807.7:636.22/28 И.Я. Строганова

ИЗУЧЕНИЕ АКТИВНОСТИ ЭРИТРОЦИТАРНЫХ АНТИГЕНОВ РЕСПИРАТОРНО-СИНЦИТИАЛЬНОГО

ВИРУСА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА ДЛЯ РЕАКЦИИ НЕПРЯМОЙ ГЕМАГГЛЮТИНАЦИИ

Изучена активность эритроцитарных антигенов для реакции непрямой гемагглютинации респираторно-синцитиального вируса крупного рогатого скота, культивируемого в разных перевиваемых линиях клеток.

Ключевые слова: эритроцитарный антиген, реакция непрямой гемагглютинации, респираторносинцитиальный вирус, перевиваемые линии клеток.

I.Ya. Stroganova

STUDY OF ERYTHROCYTIC ANTIGENS ACTIVITY OF THE RESPIRATORY AND SYNCYTIAL CATTLE VIRUS FOR INDIRECT HEMAGGLUTINATION REACTION

Erythrocytic antigens activity for indirect hemagglutination reaction of the respiratory and syncytial cattle virus, cultivated in the different transferred cell lines is studied.

Keywords: erythrocytic antigen, indirect hemagglutination reaction, respiratory and syncytial virus, transferred cell lines.

Значительную проблему в ветеринарии представляют собой так называемые «малые» респираторные вирусные инфекции крупного рогатого скота, которые наносят большой экономический ущерб животноводству. Одной из них является респираторно-синцитиальная инфекция крупного рогатого скота - контагиозная болезнь, вызываемая респираторно-синцитиальным вирусом (РС), РНК содержащим, относящимся к семейству парамиксовирусов, роду - пневмовирусы.

Возбудитель очень чувствителен к воздействию факторов внешней среды, в частности к замораживанию и оттаиванию.

Вирус представлен одним серотипом, проявляющим перекрестную активность со штаммами респираторно-синцитиальной инфекции человека, овец и коз [1-3].

Клиническая болезнь проявляется в основном поражением нижних отделов респираторного тракта, повышением температуры, затрудненным дыханием, сильным кашлем с последующим развитием бронхопневмонией и интерстициальных эмфизем.

В 1957 году R.M. Chanock et al. выделили PC-вирус человека и только в 1970 году M.F. Paccaud et al. Был выделен PC-вирус крупного рогатого скота. В настоящее время РС-инфекция крупного рогатого скота зарегистрирована во многих странах мира: Бельгии, Японии, Англии, США, Нидерландах, Венгрии, Чехословакии, Болгарии, а с 1975 года и в нашей стране.

Однако, в отличие от других вирусных респираторных инфекций, - это заболевание остается изученным недостаточно, что связано со сложностью выделения и культивирования РС-вируса. Трудности культивирования, в свою очередь, затрудняют получение вирусного сырья в достаточном количестве и с необходимой инфекционной активностью для изготовления диагностических препаратов и средств специфической профилактики.

В нашей стране для диагностики PC-инфекции был предложен набор диагностикумов (Халенев Г.А., Гуненков В.В., 1975) для индикации специфического PC-антигена в реакции связывания комплимента, реакции диффузионной преципитации, методом иммунофлуоресценции и выявления антител к PC-вирусу в сыворотках крови крупного рогатого скота в РДП.

Так как авторы не располагали штаммом PC-вируса крупного рогатого скота, для изготовления диагностикумов использовали штамм «Рэндалл» PC-вируса человека, который антигенно родственен PC-вирусу крупного рогатого скота, но не идентичен ему. В связи с этим, особенно когда речь идет об иммунологических реакциях, остается весьма важной задача разработки средств и методов лабораторной диагностики с использованием гомологичного вируса [4].

Целью настоящего исследования являлось изучение активности эритроцитарных антигенов PC-вируса крупного рогатого скота, накопленного в разных культурах клеток.

Материалы и методы исследования

Исследования проводились в лаборатории вирусологии Московской академии ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И. Скрябина и на кафедре эпизоотологии и паразитологии ИПБиВМ КрасГАУ.

В 1976 году А. Денером и др. [5] был разработан метод изготовления антигена для серологической диагностики PC-инфекции человека в реакции непрямой гемагглютинации (РНГА). В 1983 году Н.Г. Martin [6] в Англии была разработана методика для серодиагностики PC-инфекции крупного рогатого скота в РНГА.

В нашей стране Г.Д. Метревели и др. [7] был разработан метод получения эритроцитарного антигена для серодиагностики PC-инфекции крупного рогатого скота с использование штамма PC-вируса человека, основу которого составил метод Денера.

Разрабатывая изготовление специфического антигена для серодиагностики PC-инфекции крупного рогатого скота, овец, коз, были апробированы методы Денера и Martin в модификации их применительно к нашим исследованиям (Васильев А.В. и др.) [8].

В работе использовали штамм «PC- Б» PC-вируса крупного рогатого скота, который культивировали в перевиваемых линиях клеток: почки крупного рогатого скота (МДВК); легкого эмбриона крупного рогатого скота (ПЛЭК эпитолиоидная); почки теленка (Т-1), почки зеленой мартышки (46I47); почки эмбриона овцы (FLK').

Для культивирования вируса использовали среды ГЛА, Игла, Игла МЭМ с добавлением 2 % фиталь-ной сыворотки крупного рогатого скота и без нее, антибиотиков в общепринятой концентрации 100 ЕД!мл. Вирус «снимали» после проявления более четкого цитопатического действия (ЦПД). Титровали по ЦПД мак-ро- и микрометодами в соответствующих культурах клеток. Титр вируса рассчитывали по методу Рида Мен-ча (1937) и выражали в ^ТЦД, 50!мл. Активность эритроцитарных антигенов определили со специфической сывороткой к РС-вирусу в РНГА.

Результаты исследования

В связи с возникшими в нашей стране экономическими переменами, вирусологи были вынуждены работать с перевиваваемыми линиями клеток.

Из вируса, накопленного в перевиваемых линиях клеток МДВК'; ПЛЭК'; Т-1; 46I47; FLK готовили эрит-роцитарные антигены по методу, изложенному во «Временной инструкции по изготовлению и контролю набора эритроцитарного диагностикума для серодиагностики респираторно-синцитиальной инфекции крупного рогатого скота, овец и коз в реакции непрямой гемагглютинации» и технических условий к ней.

Данные по конструированию специфического эритроцитарного антигена с использованием штамма «РС-Б» РС-вируса крупного рогатого скота, полученного в разных перевиваемых линиях клеток, представлены в таблице.

Перевиваемая линия клеток Титр вируса ^ТЦД 50!мл х±іті; р<0,05 Количество приготовленных микросерий Активность антигена со специфической сывороткой к PC-вирусу в титрах log2

МДВК 1,65±0,10 4 1:16

ПЛЭК эпитолиоиды 2,14±0,21 2 1632

Т-1 3,63±0,11 2 1:128

46I47 3,64±0,11 2 1:128

FLK' 3,92±0,27 2 1:256

FLK' 4,76±0,13 3 1:512

Смесь 1,79±0,14 4 1:32

Смесь 3,50±0,33 4 1:128

23

Из данных таблицы следует, что активность эритроцитарных антигенов зависела от титра вируса, который использовали для их получения. С повышением титра вируса повышался и титр антигена, что связано с линией клеток, в которой культивировали вирус. Так, в МДВК титр вируса составил 1,65±0,10 !дТЦД 50/мл, а активность эритроцитарного антигена 1:16. В ПЛЭК' титр вируса составил 2,14±0,21 !дТЦД50/мл, активность эритроцитарного антигена 1:32.

В Т-1 титр вируса составил 3,63±1,11 !дТЦД50/мл, в 46/47 - 3,64±0,11 !дТЦД50/мл, а активность эритроцитарного антигена составила 1:128 и 1:128. В FLK' вируса составил 3,92±0,13 !дТЦД50/мл и 4,76±0,13 !дТЦД50/мл, а активность эритроцитарного антигена - 1:256 и 1:512.

Таким образом, было показано, что из перевиваемых линией клеток, применяемых для репродукции штамма «РС-Б» PC-вируса крупного рогатого скота с целью получения эритроцитарного антигена, наиболее подходящими оказались FLK'; Т-1; 47/47.

В дальнейшем данные эритроцитарные антигены использовали для выявления антител к PC-вирусу в сыворотках крови крупного рогатого скота, овец и коз в РНГА.

Выводы

1. Наиболее активные эритроцитарные антигены для РНГА, титры которых со специфической к PC-вирусу сывороткой составили: 1:512; 1:256; 1:128, были получены из вируса, культивируемого в перевиваемых линиях клеток FLK'; T-1; 46/47.

Литература

1. Глотов, А.Г. Респираторные болезни телят вирусно-бактериальной этиологии / А.Г. Гпотов, Т.Н. Гпотова; РАСХН. Сиб. от-ние. ГНУ ИЭВСи ДВ . - Новосибирск, 2008. - 256 с.

2. Baher, J.C. The characteristics of respiratory syncytial viruses / J.C. Baher // vet. Clin. N. Am. Food Anim. Pract. - 1997. - Vol. 13. - P. 425- 454.

3. Stott, E.J. Respiratory syncytial virus: brief review / E.J. Stott, Y. Taylor// Arch. Vird. - 1985. - Vol. 84. - P. 1-52.

4. Строганова, И.Я. Культивирование респираторно-синцитиального вируса крупного рогатого скота с

целью получения диагностических препаратов: автореф. дис. ... канд. вет. наук: 16.00.03I И.Я. Строганова; МВА. - М., 1990 . - 16 с.

б. Разработка метода получения высокоактивного респираторно-синцитиального вирусного диагности-

кума для не прямой реакции гемагглютинации I Л. Денер [и др.] II Вопр. вирусологии. - 1976. - № 6. -С.739-745.

6. Martin, H.T. Indirect haemagglutination test for the detection and assay of antibody to bovine respiratory sуncytiae virus I H.T. MartinII Vet.Rec. - 1983. - Vol. 113. - № 3. - P.290-293.

7. Метревели, Г.Д. Биологические свойства вируса и серологическая диагностика PC-инфекции крупного рогатого скота: автореф. дис. ... канд. биол. наук: 03.00.16 I Г.Д. Метревели; ВГНКИ. - М., 1989. - 19 с.

8. РНГА в серодиагностике респираторно-синцитиальной инфекции крупного рогатого скота I А.В. Васильев [и др.] II Ветеринария. - 1988. - № 10. - С.33-34.

'--------♦-----------

УДК: 619:616.988:75:636.22/28 И.Я. Строганова

СПЕЦИФИЧЕСКИЕ ГИПЕРИММУННЫЕ СЫВОРОТКИ К ВИРУСУ РЕСПИРАТОРНО-СИНЦИТИАЛЬНОЙ ИНФЕКЦИИ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА

Представлены результаты исследований по получению специфических гипериммунных сывороток к респираторно-синцитиальному вирусу крупного рогатого скота на белых мышах и морских свинках. Ключевые слова: гипериммунные сыворотки, респираторно-синцитиальный вирус.

I.Ya. Stroganova SPECIFIC HYPERIMMUNE SERUMS TO THE VIRUS OF RESPIRATORY AND SYNCYTIAL CATTLE INFECTION

The results of research conducted on the white mice and cavies in order to receive specific hyperimmune serums to the respiratory and syncytial cattle virus are given.

Keywords: hyperimmune serums, respiratory and syncytial virus.

В настоящее время в Российской Федерации изменилась стратегия видения животноводства, в связи с этим возможны изменения в проявлении болезней животных. С сокращением количества крупных промышленных комплексов по откорму молодняка крупного рогатого скота актуальным остается изучение проявления вирусных болезней в племенных, товарных хозяйствах молочного, мясного направления и других.

Среди многообразия вирусных агентов, циркулирующих среди поголовья животных, необходимо отметить и респираторно-синцитиальный вирус крупного рогатого скота (РС).

Респираторно-синцитиальная инфекция - остропротекающая вирусная болезнь телят, характеризующаяся лихорадкой и поражением респираторных органов. В стадах крупного рогатого скота у молодняка с респираторными поражениями на долю РС-инфекции приходится около 40%.

Впервые респираторно-синцитиальный вирус выделили в 1969 году Веллеманс и Мунен в Бельгии. Болезнь зарегистрирована во многих странах мира, в том числе в нашей стране и Красноярском крае [1].

Болезнь вызывает РНК-содержащий вирус из семейства парамиксовирусов. В антигеном отношении все штаммы РС-вируса крупного рогатого скота родственны между собой и РС-вирусом человека [2].

Однако в отличие от других вирусных респираторных инфекций это заболевание остается изученным недостаточно, что связано со сложностью выделения и культивирования РС-вируса. Трудности культивирования, в свою очередь, затрудняют получение вирусного сырья в достаточном количестве и с необходимой инфекционной активностью для изготовления диагностических препаратов и средств специфической профилактики.

При разработке и использовании диагностических препаратов необходимо наличие специфических гипериммунных сывороток к РС-вирусу крупного рогатого скота, что и явилось целью настоящего исследования.