Способ доставки гранзима Б в клетки млекопитающих

2000
3000
1. Способ получения липосом с загруженным в них белком гранзим Б, включающий получение липидного бислоя, растворенного в хлороформе, диспергирование его с раствором протеиназы, встряхивание и выпаривание, отличающийся тем, что для получения липидного бислоя растворенные в неполярном растворителе компоненты берут в следующих диапазонах молярных соотношений: фосфатидилхолин (от 6 до 7): холестерин (от 2 до 4): mPEG-DSPE (от 0,005 до 0,014), и, необязательно: pNP-PEG-DOPE (от 0,0001 до 0,01).
2. Способ по п. 1, где фосфатидилходин представляет собой яичный.
3. Способ по п. 2, где растворитель выпаривают при температуре 37±1°С
4. Способ по п. 1, где фосфатидилходин представляет собой соевый.
5. Способ по п. 4, где растворитель выпаривают при температуре 40±1°С.
6. Способ по п. 1, где полученную пленку липидного бислоя досушивают под вакуумом до постоянной массы и диспергируют с протеолитическим ферментом, растворённым в буфере PBS или в деионизированной воде.
7. Способ по п. 7, где скорость вращения ротора при диспергировании составляет приблизительно 25-30 об/мин.
8. Способ по п. 1, где полученные в результате дисперсии липосомы последовательно пропускают через нейлоновые мембранные фильтры с диаметром пор 1,2 мкм, 0,45 мкм и 0,22 мкм.
9. Способ по п. 1, где на поверхности липосомы размещены молекулы для таргетной доставки везикулы к определенному типу клеток.
10. Способ по п. 9, где прикрепленные молекулы представляют собой антитела или пептиды.
11. Липосомы, содержащие гранзим Б, полученные способом по п. 1.
12. Применение липосом по п. 11 для доставки гранзима Б в клетку млекопитающего и инициации в ней цитотоксической активности.