СПОСОБЫ ЛЕЧЕНИЯ ЗАБОЛЕВАНИЙ, АССОЦИИРОВАННЫХ С ВПЧ

1. Способ лечения заболевания, ассоциированного с вирусом папилломы человека (ВПЧ), у субъекта, включающий введение субъекту эффективного количества композиции, содержащей модифицированные иммунные клетки, где модифицированные иммунные клетки содержат антиген ВПЧ и адъювант, где адъювант присутствует внутриклеточно.
2. Способ профилактики заболевания, ассоциированного с ВПЧ, у субъекта, включающий введение субъекту эффективного количества композиции, содержащей модифицированные иммунные клетки, где модифицированные иммунные клетки содержат антиген ВПЧ и адъювант, где адъювант присутствует внутриклеточно.
3. Способ модуляции иммунного ответа у субъекта с заболеванием, ассоциированным с ВПЧ, включающий введение субъекту эффективного количества композиции, содержащей модифицированные иммунные клетки, где модифицированные иммунные клетки содержат антиген ВПЧ и адъювант, где адъювант присутствует внутриклеточно.
4. Способ лечения заболевания, ассоциированного с ВПЧ, у субъекта, включающий введение субъекту эффективного количества композиции, содержащей модифицированные иммунные клетки, где модифицированные иммунные клетки содержат антиген ВПЧ и адъювант, где адъювант присутствует внутриклеточно;
где модифицированные иммунные клетки получают:
а) пропусканием клеточной суспензии, содержащей входную клетку, через деформирующее клетку сужение, где диаметр сужения является функцией диаметра входной клетки в суспензии, тем самым вызывая пертурбации входной клетки, достаточно большие для того, чтобы антиген и адъювант прошли через них, с образованием пертурбированной входной клетки; и
b) инкубацией пертурбированной входной клетки с антигеном ВПЧ и адъювантом в течение достаточного периода времени для обеспечения проникновения антигена ВПЧ и адъюванта в пертурбированную входную клетку;
с получением, тем самым, модифицированных иммунных клеток.
5. Способ профилактики заболевания, ассоциированного с ВПЧ, у субъекта, включающий введение субъекту эффективного количества композиции, содержащей модифицированные иммунные клетки, где модифицированные иммунные клетки содержат антиген ВПЧ и адъювант, где адъювант присутствует внутриклеточно;
где модифицированные иммунные клетки получают:
а) пропусканием клеточной суспензии, содержащей входную клетку, через деформирующее клетку сужение, где диаметр сужения является функцией диаметра входной клетки в суспензии, тем самым вызывая пертурбации входной клетки, достаточно большие для того, чтобы антиген ВПЧ и адъювант прошли через них, с образованием пертурбированной входной клетки; и
b) инкубацией пертурбированной входной клетки с антигеном ВПЧ и адъювантом в течение достаточного периода времени для обеспечения проникновения антигена ВПЧ и адъюванта в пертурбированную входную клетку;
с получением, тем самым, модифицированных иммунных клеток.
6. Способ модуляции иммунного ответа у субъекта с заболеванием, ассоциированным с ВПЧ, включающий введение субъекту эффективного количества композиции, содержащей модифицированные иммунные клетки, где модифицированные иммунные клетки содержат антиген ВПЧ и адъювант, где адъювант присутствует внутриклеточно;
где модифицированные иммунные клетки получают:
а) пропусканием клеточной суспензии, содержащей входную клетку, через деформирующее клетку сужение, где диаметр сужения является функцией диаметра входной клетки в суспензии, тем самым вызывая пертурбации входной клетки, достаточно большие для того, чтобы антиген ВПЧ и адъювант прошли через них, с образованием пертурбированной входной клетки; и
b) инкубацией пертурбированной входной клетки с антигеном ВПЧ и адъювантом в течение достаточного периода времени для обеспечения проникновения антигена ВПЧ и адъюванта в пертурбированную входную клетку;
с получением, тем самым, модифицированных иммунных клеток.
7. Способ по любому из пп. 4-6, где диаметр сужения меньше диаметра клетки.
8. Способ по любому из пп. 4-7, где диаметр сужения составляет от приблизительно 20% до 99% от диаметра клетки.
9. Способ по любому из пп. 4-8, где диаметр сужения составляет от приблизительно 20% до менее, чем приблизительно 60% от диаметра клетки.
10. Способ по любому из пп. 4-9, где сужение находится в канале.
11. Способ по любому из пп. 4-10, где к входной клетке прикладывается деформирующая сила, когда она проходит через сужение.
12. Способ по любому из пп. 1-11, где антиген ВПЧ и/или адъювант находятся в цитозоле и/или эндосомах.
13. Способ по любому из пп. 1-12, где антиген и/или адъювант находятся во многих компартментах клетки.
14. Способ по любому из пп. 1-13, где модифицированная иммунная клетка дополнительно содержит антиген ВПЧ и/или адъювант вне клетки.
15. Способ по любому из пп. 1-14, где концентрация адъюванта, инкубированного с пертурбированной входной клеткой, составляет от приблизительно 0,1 мкМ до приблизительно 1 мМ.
16. Способ по любому из пп. 1-15, где концентрация антигена ВПЧ, инкубированного с пертурбированной входной клеткой, составляет от приблизительно 0,1 мкМ до приблизительно 1 мМ.
17. Способ по любому из пп. 4-16, где соотношение антигена ВПЧ и адъюванта, инкубированных с пертурбированной входной клеткой, составляет от приблизительно 10000:1 до приблизительно 1:10000.
18. Способ по п.3 или 6, где иммунный ответ усиливается.
19. Способ по п.18, где иммунный ответ на антиген ВПЧ усиливается.
20. Способ по любому из пп. 1-19, где адъювант представляет собой CpG ODN, IFN-α, агонисты STING, агонисты RIG-I или поли I:C.
21. Способ по п.20, где адъювант представляет собой CpG ODN.
22. Способ по п.21, где CpG ODN представляет собой CpG ODN 1018, CpG ODN 1826 или CpG ODN 2006.
23. Способ по любому из пп. 1-22, где модифицированная иммунная клетка содержит более одного адъюванта.
24. Способ по любому из пп. 1-23, где антиген ВПЧ представляет собой пул множества полипептидов, которые вызывают ответ против одного и того же и/или разных антигенов ВПЧ.
25. Способ по п.24, где антиген в пуле множества антигенов не снижает иммунный ответ, направленный на другие антигены в пуле множества антигенов.
26. Способ по любому из пп. 1-25, где антиген ВПЧ представляет собой полипептид, содержащий антигенный эпитоп ВПЧ и одну или более гетерологичных пептидных последовательностей.
27. Способ по любому из пп. 1-26, где антиген ВПЧ образует комплекс с самим собой, с другими антигенами или с адъювантом.
28. Способ по любому из пп. 1-27, где ВПЧ представляет собой антиген, полученный из клеточного лизата.
29. Способ по любому из пп. 1-28, где антиген ВПЧ представляет собой антиген ВПЧ-16 или ВПЧ-18.
30. Способ по п.29, где антиген ВПЧ состоит из HLA-A2-рестриктированного эпитопа.
31. Способ по любому из пп. 1-30, где антиген ВПЧ представляет собой антиген ВПЧ E6 или антиген ВПЧ E7.
32. Способ по любому из пп. 1-31, где модифицированная иммунная клетка содержит антиген ВПЧ E6 и антиген ВПЧ E7.
33. Способ по любому из пп. 1-32, где антиген ВПЧ представляет собой полипептид, содержащий антигенный эпитоп, который фланкирован на N-конце и/или C-конце одной или более гетерологичными пептидными последовательностями.
34. Способ по п.33, где антиген ВПЧ содержит аминокислотную последовательность с по меньшей мере 90% сходством с любой из SEQ ID NO: 18-26.
35. Способ по п.34, где антиген ВПЧ содержит аминокислотную последовательность с по меньшей мере 90% сходством с SEQ ID NO: 23.
36. Способ по любому из пп. 1-35, где антиген ВПЧ способен процессироваться в пептид, рестриктированный классом I MHC.
37. Способ по любому из пп. 1-36, где антиген ВПЧ способен процессироваться в пептид, рестриктированный классом II MHC.
38. Способ по любому из пп. 1-37, где модифицированная иммунная клетка содержит адъювант в концентрации от приблизительно 0,1 мкМ до приблизительно 1 мМ.
39. Способ по любому из пп. 1-38, где модифицированная иммунная клетка содержит антиген ВПЧ в концентрации от приблизительно 0,1 мкМ до приблизительно 1 мМ.
40. Способ по любому из пп. 1-39, где соотношение антигена ВПЧ и адъюванта составляет от приблизительно 10000:1 до приблизительно 1:10000.
41. Способ по любому из пп. 1-40, где модифицированная иммунная клетка дополнительно содержит агент, который повышает жизнеспособность и/или функцию модифицированной иммунной клетки по сравнению с соответствующей модифицированной иммунной клеткой, которая не содержит агента.
42. Способ по п.41, где агент представляет собой соединение, усиливающее эндоцитоз, стабилизирующий агент или кофактор.
43. Способ по п.41, где агент представляет собой альбумин.
44. Способ по п.43, где альбумин представляет собой мышиный, бычий или человеческий альбумин.
45. Способ по п.41, где агент представляет собой катион двухвалентного металла, глюкозу, АТФ, калий, глицерин, трегалозу, D-сахарозу, PEG1500, L-аргинин, L-глутамин или ЭДТА.
46. Способ по п.41, где агент включает сывороточный альбумин мыши (MSA).
47. Способ по любому из пп. 1-46, где модифицированные иммунные клетки дополнительно модифицируют для повышения экспрессии одной или более костимулирующих молекул.
48. Способ по п.47, где костимулирующая молекула представляет собой B7-H2, B7-1, B7-2, CD70, LIGHT, HVEM, CD40, 4-1BBL, OX40L, TL1A, GITRL, CD30L, TIM4, SLAM, CD48, CD58, CD155 или CD112.
49. Способ по п. 47 или 48, где клетка содержит нуклеиновую кислоту, которая приводит к повышенной экспрессии одной или более костимулирующих молекул.
50. Способ по любому из пп. 1-49, где иммунная клетка представляет собой Т-клетку, дендритную клетку, моноцит, макрофаг, миелоидную клетку, гранулоцит, нейтрофил, тучную клетку, естественную клетку-киллер, врожденную лимфоидную клетку, базофил или гемопоэтическую клетку-предшественник.
51. Способ по любому из пп. 1-50, в котором иммунная клетка не является B-клеткой.
52. Способ по любому из пп. 1-50, где иммунная клетка представляет собой В-клетку.
53. Способ по любому из пп. 1-51, где иммунная клетка представляет собой Т-клетку.
54. Способ по любому из пп. 1-49, где иммунные клетки представляют собой смешанную популяцию клеток.
55. Способ по п. 54, где иммунные клетки представляют собой множество PBMC.
56. Способ по п.53, где Т-клетка содержит дополнительную модификацию для модуляции экспрессии молекул MHC класса I.
57. Способ по п.53, где Т-клетка содержит дополнительную модификацию для модуляции экспрессии молекул MHC класса II.
58. Способ по п.56 или 57, где Т-клетка содержит дополнительную модификацию для снижения экспрессии молекул MHC класса I и/или молекул MHC класса II.
59. Способ по п.56 или 57, где дополнительная модификация включает снижение экспрессии молекул MHC класса I и/или молекул MHC класса II с использованием siРНК, shРНК, CRISPR/Cas9, ZFN, TALEN, Cre-рекомбиназы или мегануклеазы.
60. Способ по п.56 или 57, где Т-клетка содержит дополнительную модификацию для повышения экспрессии молекул MHC класса I и/или молекул MHC класса II.
61. Способ по п.56 или 57, где дополнительная модификация включает повышение экспрессии молекул МНС класса I и/или молекул МНС класса II с использованием РНК или плазмидной ДНК.
62. Способ по любому из пп. 53 и 56-59, где в аллогенном контексте врожденный иммунный ответ, развившийся у субъекта в ответ на введение дополнительно модифицированных Т-клеток, снижен, в аллогенном контексте, по сравнению с врожденным иммунным ответом, развившимся у субъекта в ответ на введение соответствующих модифицированных Т-клеток, которые не содержат дополнительную модификацию.
63. Способ по любому из пп. 53 и 56-59, где период полужизни в кровотоке дополнительно модифицированных Т-клеток у субъекта, которому они были введены, модулируется по сравнению с периодом полужизни в кровотоке соответствующих модифицированных Т-клеток, которые не содержат дополнительной модификации у субъекта, которому они были введены.
64. Способ по любому из пп. 53 и 56-63, где Т-клетка включает одно или более из Т-хелперов, цитотоксических Т-клеток, Т-клеток памяти, CIK-клеток и естественных Т-клеток-киллеров.
65. Способ по любому из пп. 53 и 56-63, где Т-клетка включает одно или более из CD3+ Т-клеток, CD4+ Т-клеток, CD8+ Т-клеток, CD45RA+ Т-клеток, CD45RO+ Т-клеток и γδ-Т-клеток.
66. Способ по любому из пп. 1-65, где модифицированная клетка является аллогенной для субъекта.
67. Способ по любому из пп. 1-65, где модифицированная клетка является аутологичной для субъекта.
68. Способ по любому из пп. 1-67, где субъект предварительно кондиционирован к модулированному воспалению и/или модулированному иммунному ответу.
69. Способ по любому из пп. 1-68, дополнительно включающий введение субъекту адъюванта.
70. Способ по п.69, где адъювант представляет собой IFNα или CpG ODN.
71. Способ по п.69 или 70, где композицию, содержащую модифицированные иммунные клетки, и адъювант, вводят одновременно.
72. Способ по п.69 или 70, где композицию, содержащую модифицированные иммунные клетки, и адъювант, вводят последовательно.
73. Способ по п.72, где композицию, содержащую модифицированные иммунные клетки, вводят до введения адъюванта.
74. Способ по п.72, где композицию, содержащую модифицированные иммунные клетки, вводят после введения адъюванта.
75. Способ по любому из пп. 1-74, где композицию, содержащую модифицированные иммунные клетки, вводят в комбинации с введением ингибитора иммунных контрольных точек.
76. Способ по п.75, где композицию, содержащую модифицированные иммунные клетки, и ингибитор иммунных контрольных точек вводят одновременно.
77. Способ по п.75, где композицию, содержащую модифицированные иммунные клетки, и ингибитор иммунных контрольных точек вводят последовательно.
78. Способ по п.77, где композицию, содержащую модифицированные иммунные клетки, вводят до введения ингибитора иммунных контрольных точек.
79. Способ по п.77, где композицию, содержащую модифицированные иммунные клетки, вводят после введения ингибитора иммунных контрольных точек.
80. Способ по любому из пп. 75-79, где ингибитор иммунных контрольных точек нацелен на одно или более из PD-1, PD-L1, CTLA-4, LAG3, TIM-3, TIGIT, VISTA, TIM1, B7-H4 (VTCN1) или BTLA.
81. Способ по любому из пп. 1-80, где композицию, содержащую модифицированные иммунные клетки, вводят в комбинации с введением химиотерапевтического средства.
82. Способ по п.81, где композицию, содержащую модифицированные иммунные клетки, и химиотерапевтическое средство вводят одновременно.
83. Способ по п.81, где композицию, содержащую модифицированные иммунные клетки, и химиотерапевтическое средство вводят последовательно.
84. Способ по п.83, где композицию, содержащую модифицированные иммунные клетки, вводят до введения химиотерапевтического средства.
85. Способ по п.83, где композицию, содержащую модифицированные иммунные клетки, вводят после введения химиотерапевтического средства.
86. Способ по любому из пп. 81-85, где химиотерапия включает препарат на основе платины.
87. Способ по любому из пп. 81-86, где химиотерапия включает цисплатин.
88. Способ по любому из пп. 1-87, где введение композиции, содержащей модифицированные иммунные клетки, субъекту приводит к активации и/или экспансии цитотоксических Т-лимфоцитов (CTL), специфических для антигена ВПЧ.
89. Способ по любому из пп. 1-87, где введение композиции, содержащей модифицированные иммунные клетки, субъекту приводит к активации и/или экспансии Т(Th)-хелперов, специфических для антигена.
6
12
90. Способ по любому из пп. 1-89, где эффективное количество композиции содержит от приблизительно 1×10 до приблизительно 1×10 модифицированных иммунных клеток.
91. Способ по любому из пп. 1-90, где способ включает многократные введения композиции, содержащей модифицированные иммунные клетки.
92. Способ по п.91, где способ включает первое введение композиции, содержащей модифицированные иммунные клетки, с последующим вторым введением композиции, содержащей модифицированные иммунные клетки.
93. Способ по п.92, где второе введение проводят приблизительно через один месяц после первого введения.
94. Способ по любому из пп. 1-93, где заболевание, ассоциированное с ВПЧ, представляет собой собой рак, ассоциированный с ВПЧ.
95. Способ по п.94, где рак, ассоциированный с ВПЧ, представляет собой рак шейки матки, рак анального канала, орофарингеальный рак, рак влагалища, рак вульвы, рак полового члена, рак кожи или опухоли головы и шеи.
96. Способ по любому из пп. 1-95, где заболевание, ассоциированное с ВПЧ, представляет собой инфекционное заболевание, ассоциированное с ВПЧ.
97. Способ лечения заболевания, ассоциированного с вирусом папилломы человека (ВПЧ), у субъекта, включающий введение субъекту эффективного количества композиции, содержащей модифицированные иммунные клетки, где модифицированные иммунные клетки содержат антиген ВПЧ, содержащий аминокислотную последовательность с по меньшей мере 90% сходством с любой из SEQ ID NO: 18-25.
98. Способ профилактики заболевания, ассоциированного с ВПЧ, у субъекта, включающий введение субъекту эффективного количества композиции, содержащей модифицированные иммунные клетки, где модифицированные иммунные клетки содержат антиген ВПЧ, содержащий аминокислотную последовательность с по меньшей мере 90% сходством с любой из SEQ ID NO: 18-25.
99. Способ модуляции иммунного ответа у субъекта с заболеванием, ассоциированным с ВПЧ, включающий введение субъекту эффективного количества композиции, содержащей модифицированные иммунные клетки, где модифицированные иммунные клетки содержат антиген ВПЧ, содержащий аминокислотную последовательность с по меньшей мере 90% сходством с любой из SEQ ID NO: 18-25.
100. Способ лечения заболевания, ассоциированного с ВПЧ, у субъекта, включающий введение субъекту эффективного количества композиции, содержащей модифицированные иммунные клетки, где модифицированные иммунные клетки содержат антиген ВПЧ, содержащий аминокислотную последовательность с по меньшей мере 90% сходством с любой из SEQ ID NO: 18-25;
где модифицированные иммунные клетки получают:
а) пропусканием клеточной суспензии, содержащей входную клетку, через деформирующее клетку сужение, где диаметр сужения является функцией диаметра входной клетки в суспензии, тем самым вызывая пертурбации входной клетки, достаточно большие для того, чтобы антиген прошел через них, с образованием пертурбированной входной клетки; и
b) инкубацией пертурбированной входной клетки с антигеном ВПЧ в течение достаточного периода времени для обеспечения проникновения антигена ВПЧ в пертурбированную входную клетку;
с получением, тем самым, модифицированных иммунных клеток.
101. Способ профилактики заболевания, ассоциированного с ВПЧ, у субъекта, включающий введение субъекту эффективного количества композиции, содержащей модифицированные иммунные клетки, где модифицированные иммунные клетки содержат антиген ВПЧ, где модифицированные иммунные клетки содержат антиген ВПЧ, содержащий аминокислотную последовательность с по меньшей мере 90% сходством с любой из SEQ ID NO: 18-25;
где модифицированные иммунные клетки получают:
а) пропусканием клеточной суспензии, содержащей входную клетку, через деформирующее клетку сужение, где диаметр сужения является функцией диаметра входной клетки в суспензии, тем самым вызывая пертурбации входной клетки, достаточно большие для того, чтобы антиген ВПЧ прошел через них, с образованием пертурбированной входной клетки; и
b) инкубацией пертурбированной входной клетки с антигеном ВПЧ в течение достаточного периода времени для обеспечения проникновения антигена ВПЧ в пертурбированную входную клетку;
с получением, тем самым, модифицированных иммунных клеток.
102. Способ модуляции иммунного ответа у субъекта с заболеванием, ассоциированным с ВПЧ, включающий введение субъекту эффективного количества композиции, содержащей модифицированные иммунные клетки, где модифицированные иммунные клетки содержат антиген ВПЧ, содержащий аминокислотную последовательность с по меньшей мере 90% сходством с любой из SEQ ID NO: 18-25;
где модифицированные иммунные клетки получают:
а) пропусканием клеточной суспензии, содержащей входную клетку, через деформирующее клетку сужение, где диаметр сужения является функцией диаметра входной клетки в суспензии, тем самым вызывая пертурбации входной клетки, достаточно большие для того, чтобы антиген ВПЧ прошел через них, с образованием пертурбированной входной клетки; и
b) инкубацией пертурбированной входной клетки с антигеном ВПЧ в течение достаточного периода времени для обеспечения проникновения антигена ВПЧ в пертурбированную входную клетку;
с получением, тем самым, модифицированных иммунных клеток.
103. Способ по любому из пп. 100-102, где диаметр сужения меньше диаметра клетки.
104. Способ по любому из пп. 100-103, где диаметр сужения составляет от приблизительно 20% до 99% от диаметра клетки.
105. Способ по любому из пп. 100-104, где диаметр сужения составляет от приблизительно 20% до менее, чем приблизительно 60% от диаметра клетки.
106. Способ по любому из пп. 100-105, где сужение находится в канале.
107. Способ по любому пп. 100-106, где к входной клетке прикладывается деформирующая сила, когда она проходит через сужение.
108. Способ по любому из пп. 86-107, дополнительно включающий введение субъекту адъюванта.
109. Способ по п.108, где адъювант представляет собой IFNα или CpG ODN.
110. Способ по п.108 или 109, где композицию, содержащую модифицированные иммунные клетки, и адъювант вводят одновременно.
111. Способ по п.108 или 109, где композицию, содержащую модифицированные иммунные клетки, и адъювант вводят последовательно.
112. Способ по п.111, где композицию, содержащую модифицированные иммунные клетки, вводят до введения адъюванта.
113. Способ по п.111, где композицию, содержащую модифицированные иммунные клетки, вводят после введения адъюванта.
114. Способ по любому из пп. 97-113, где модифицированная иммунная клетка дополнительно содержит адъювант.
115. Способ по любому из пп. 100-113, где пертурбированную иммунную клетку на стадии b инкубируют с антигеном ВПЧ и адъювантом.
116. Способ по п.114 или 115, где антиген ВПЧ и/или адъювант находятся в цитозоле и/или эндосомах.
117. Способ по любому из пп. 114-116, где антиген и/или адъювант находятся во многих компартментах клетки.
118. Способ по любому из пп. 114-117, где модифицированная иммунная клетка дополнительно содержит антиген ВПЧ и/или адъювант вне клетки.
119. Способ по любому из пп. 115-118, где концентрация адъюванта, инкубированного с пертурбированной входной клеткой, составляет от приблизительно 0,1 мкМ до приблизительно 1 мМ.
120. Способ по любому из пп. 115-119, где концентрация антигена ВПЧ, инкубированного с пертурбированной входной клеткой, составляет от приблизительно 0,1 мкМ до приблизительно 1 мМ.
121. Способ по любому из пп. 115-120, где соотношение антигена ВПЧ и адъюванта, инкубированных с пертурбированной входной клеткой, составляет от приблизительно 10000:1 до приблизительно 1:10000.
122. Способ по п.99 или 102, где иммунный ответ усиливается.
123. Способ по п.122, где иммунный ответ на антиген ВПЧ усиливается.
124. Способ по любому из пп. 114-123, где адъювант представляет собой CpG ODN, IFN-α, агонисты STING, агонисты RIG-I или поли I:C.
125. Способ по п.124, где адъювант представляет собой CpG ODN.
126. Способ по п.125, где CpG ODN представляет собой CpG ODN 1018, CpG ODN 1826 или CpG ODN 2006.
127. Способ по любому из пп. 114-126, где модифицированная иммунная клетка содержит более одного адъюванта.
128. Способ по любому из пп. 97-127, где антиген ВПЧ представляет собой пул множества полипептидов, которые вызывают ответ против одного и того же и/или разных антигенов ВПЧ.
129. Способ по п.128, где антиген в пуле множества антигенов не снижает иммунный ответ, направленный на другие антигены в пуле множества антигенов.
130. Способ по любому из пп. 97-129, где антиген ВПЧ представляет собой полипептид, содержащий антигенный эпитоп ВПЧ и одну или более гетерологичных пептидных последовательностей.
131. Способ по любому из пп. 97-130, где антиген ВПЧ образует комплекс с самим собой, с другими антигенами или с адъювантом.
132. Способ по любому из пп. 97-131, где антиген ВПЧ состоит из HLA-A2-рестриктированного эпитопа.
133. Способ по любому из пп. 97-132, где антиген ВПЧ способен процессироваться в пептид, рестриктированный классом I MHC.
134. Способ по любому из пп. 97-133, где антиген ВПЧ способен процессироваться в пептид, рестриктированный классом II MHC.
135. Способ по любому из пп. 114-134, где модифицированная иммунная клетка содержит адъювант в концентрации от приблизительно 0,1 мкМ до приблизительно 1 мМ.
136. Способ по любому из пп. 97-135, где модифицированная иммунная клетка содержит антиген ВПЧ в концентрации от приблизительно 0,1 мкМ до приблизительно 1 мМ.
137. Способ по любому из пп. 114-136, где соотношение антигена ВПЧ и адъюванта составляет от приблизительно 10000:1 до приблизительно 1:10000.
138. Способ по любому из пп. 97-137, где модифицированная иммунная клетка дополнительно содержит агент, который повышает жизнеспособность и/или функцию модифицированной иммунной клетки по сравнению с соответствующей модифицированной иммунной клеткой, которая не содержат агента.
139. Способ по п.138, где агент представляет собой соединение, усиливающее эндоцитоз, стабилизирующий агент или кофактор.
140. Способ по п.138, где агент представляет собой альбумин.
141. Способ по п.140, где альбумин представляет собой мышиный, бычий или человеческий альбумин.
142. Способ по п.138, где агент представляет собой катион двухвалентного металла, глюкозу, АТФ, калий, глицерин, трегалозу, D-сахарозу, PEG1500, L-аргинин, L-глутамин или ЭДТА.
143. Способ по п.138, где агент включает MSA.
144. Способ по любому из пп. 97-143, где клетки дополнительно модифицированы для повышения экспрессии одной или более костимулирующих молекул.
145. Способ по п.144, где костимулирующая молекула представляет собой B7-H2 (ICOSL), B7-1 (CD80), B7-2 (CD86), CD70, LIGHT, HVEM, CD40, 4-1BBL, OX40L, TL1A, GITRL, CD30L, TIM4, SLAM, CD48, CD58, CD155 или CD112.
146. Способ по п. 144 или 145, где клетка содержит нуклеиновую кислоту, которая приводит к повышенной экспрессии одной или более костимулирующих молекул.
147. Способ по любому из пп. 97-146, где иммунная клетка представляет собой Т-клетку, дендритную клетку, моноцит, макрофаг, миелоидную клетку, гранулоцит, нейтрофил, тучную клетку, естественную клетку-киллер, врожденную лимфоидную клетку, базофил или гемопоэтическую клетку-предшественник.
148. Способ по любому из пп. 97-147, где иммунная клетка не является B-клеткой.
149. Способ по любому из пп. 97-148, где иммунная клетка представляет собой B-клетку.
150. Способ по любому из пп. 97-148, где иммунная клетка представляет собой Т-клетку.
151. Способ по любому из пп. 97-148, где иммунная клетка представляет собой смешанную популяцию клеток.
152. Способ по п.151, где иммунная клетка представляет собой множество PBMC.
153. Способ по п.150, где Т-клетка содержит дополнительную модификацию для модуляции экспрессии молекул MHC класса I.
154. Способ по п.150, где Т-клетка содержит дополнительную модификацию для модуляции экспрессии молекул MHC класса II.
155. Способ по п.153 или 154, где Т-клетка содержит дополнительную модификацию для уменьшения экспрессии молекул MHC класса I и/или молекул MHC класса II.
156. Способ по п.153 или 154, где дополнительная модификация включает снижение экспрессии молекул MHC класса I и/или молекул MHC класса II с использованием siРНК, shРНК, CRISPR/Cas9, ZFN, TALEN, Cre-рекомбиназы или мегануклеазы.
157. Способ по п.153 или 154, где Т-клетка содержит дополнительную модификацию для увеличения экспрессии молекул MHC класса I и/или молекул MHC класса II.
158. Способ по п.153 или 154, где дополнительная модификация включает повышение экспрессии молекул МНС класса I и/или молекул МНС класса II с использованием РНК или плазмидной ДНК.
159. Способ по любому из пп. 150 и 153-156, где в аллогенном контексте врожденный иммунный ответ, развившийся у субъекта в ответ на введение дополнительно модифицированных Т-клеток, снижен, в аллогенном контексте, по сравнению с врожденным иммунным ответом, развившимся у субъекта в ответ на введение соответствующих модифицированных Т-клеток, которые не содержат дополнительную модификацию.
160. Способ по любому из пп. 150 и 153-156, где период полужизни в кровотоке дополнительно модифицированных Т-клеток у субъекта, которому они были введены, модулируется по сравнению с периодом полужизни в кровотоке соответствующих модифицированные Т-клетки, которые не содержат дополнительной модификации у субъекта, которому они были введены.
161. Способ по любому из пп. 150 и 153-160, где Т-клетка включает одно или более из Т-хелперов, цитотоксических Т-клеток, Т-клеток памяти, CIK-клеток и естественных Т-клеток-киллеров.
162. Способ по любому из пп. 150 и 153-160, где Т-клетка включает одно или более из CD3+ Т-клеток, CD4+ Т-клеток, CD8+ Т-клеток, CD45RA+ Т-клеток, CD45RO+ Т-клеток и γδ-Т-клеток.
163. Способ по любому из пп. 97-162, где модифицированная клетка является аллогенной для субъекта.
164. Способ по любому из пп. 97-162, где модифицированная клетка является аутологичной для субъекта.
165. Способ по любому из пп. 97-164, где субъект предварительно кондиционирован к модулированному воспалению и/или модулированному иммунному ответу.
166. Способ по любому из пп. 97-165, где композицию, содержащую модифицированные иммунные клетки, вводят в комбинации с введением ингибитора иммунных контрольных точек.
167. Способ по п.166, где композицию, содержащую модифицированные иммунные клетки, и ингибитор иммунных контрольных точек вводят одновременно.
168. Способ по п.166, где композицию, содержащую модифицированные иммунные клетки, и ингибитор иммунных контрольных точек вводят последовательно.
169. Способ по п.168, где композицию, содержащую модифицированные иммунные клетки, вводят до введения ингибитора иммунных контрольных точек.
170. Способ по п.168, где композицию, содержащую модифицированные иммунные клетки, вводят после введения ингибитора иммунных контрольных точек.
171. Способ по любому из пп. 152-156, где ингибитор иммунных контрольных точек нацелен на одно или более из PD-1, PD-L1, CTLA-4, LAG3, TIM-3, TIGIT, VISTA, TIM1, B7-H4 (VTCN1) или BTLA.
172. Способ по любому из пп. 97-171, где композицию, содержащую модифицированные иммунные клетки, вводят в комбинации с введением химиотерапевтического средства.
173. Способ по п.172, где композицию, содержащую модифицированные иммунные клетки, и химиотерапевтическое средство вводят одновременно.
174. Способ по п.172, где композицию, содержащую модифицированные иммунные клетки, и химиотерапевтическое средство вводят последовательно.
175. Способ по п.174, где композицию, содержащую модифицированные иммунные клетки, вводят до введения химиотерапевтического средства.
176. Способ по п.174, где композицию, содержащую модифицированные иммунные клетки, вводят после введения химиотерапевтического средства.
177. Способ по любому из пп. 172-176, где химиотерапия включает цисплатин.
178. Способ по любому из пп. 97-177, где введение композиции, содержащей модифицированные иммунные клетки, субъекту приводит к активации и/или экспансии цитотоксических Т-лимфоцитов (CTL), специфических для антигена ВПЧ.
179. Способ по любому из пп. 97-177, где введение композиции, содержащей модифицированные иммунные клетки, субъекту приводит к активации и/или экспансии T(Th)-хелперов, специфических для антигена ВПЧ.
6
12
180. Способ по любому из пп. 97-179, где эффективное количество композиции включает от приблизительно 1×10 до приблизительно 1×10 модифицированных иммунных клеток.
181. Способ по любому из пп. 97-180, где способ включает многократные введения композиции, содержащей модифицированные иммунные клетки.
182. Способ по п.181, где способ включает первое введение композиции, содержащей модифицированные иммунные клетки, с последующим вторым введением композиции, содержащей модифицированные иммунные клетки.
183. Способ по п.182, где второе введение проводят приблизительно через один месяц после первого введения.
184. Способ по любому из пп. 97-183, где заболевание, ассоциированное с ВПЧ, представляет собой собой рак, ассоциированный с ВПЧ.
185. Способ по п.184, где рак, ассоциированный с ВПЧ, представляет собой рак шейки матки, рак анального канала, орофарингеальный рак, рак влагалища, рак вульвы, рак полового члена, рак кожи или опухоли головы и шеи.
186. Композиция, содержащая модифицированные иммунные клетки, где модифицированные иммунные клетки содержат внутриклеточно CpG ODN и антиген ВПЧ с по меньшей мере 90% сходством с любой из SEQ ID NO: 18-25.
187. Композиция по п.186, где антиген ВПЧ содержит аминокислотную последовательность с по меньшей мере 90% сходством с SEQ ID NO: 23.
188. Композиция по п.186 или 187, где модифицированные иммунные клетки получают:
а) пропусканием клеточной суспензии, содержащей входную клетку, через деформирующее клетку сужение, где диаметр сужения является функцией диаметра входной клетки в суспензии, тем самым вызывая пертурбации входной клетки, достаточно большие для того, чтобы антиген ВПЧ и CpG ODN прошли через них, с образованием пертурбированной входной клетки; и
b) инкубацией пертурбированной входной клетки с антигеном ВПЧ и CpG ODN в течение достаточного периода времени для обеспечения проникновения антигена ВПЧ и CpG ODN в пертурбированную входную клетку;
с получением, тем самым, модифицированных иммунных клеток.
189. Композиция по п.188, где диаметр сужения меньше диаметра клетки.
190. Композиция по п.188 или 189, где диаметр сужения составляет от приблизительно 20% до приблизительно 99% от диаметра клетки.
191. Композиция по любому из пп. 188-190, где диаметр сужения составляет от приблизительно 20% до менее, чем приблизительно 60% от диаметра клетки.
192. Композиция по любому из пп. 188-191, где сужение находится в канале.
193. Композиция по любому из пп. 188-192, где к входной клетке прикладывается деформирующая сила, когда она проходит через сужение.
194. Композиция по любому из пп. 186-193, где композиция дополнительно содержит адъювант.
195. Композиция по любому из пп. 186-194, где антиген ВПЧ и/или CpG ODN находится в цитозоле и/или эндосомах.
196. Композиция по любому из пп. 186-195, где антиген и/или CpG ODN находится во многих компартментах клетки.
197. Композиция по любому из пп. 186-196, где модифицированная иммунная клетка дополнительно содержит антиген ВПЧ и/или CpG ODN на поверхности клетки.
198. Композиция по любому из пп. 188-197, где концентрация CpG ODN, инкубированного с пертурбированной входной клеткой, составляет от приблизительно 0,1 мкМ до приблизительно 1 мМ.
199. Композиция по любому из пп. 188-198, где концентрация антигена ВПЧ, инкубированного с пертурбированной входной клеткой, составляет от приблизительно 0,1 мкМ до приблизительно 1 мМ.
200. Композиция по любому из пп. 188-199, где соотношение антигена ВПЧ и CpG ODN, инкубированных с пертурбированной входной клеткой, составляет от приблизительно 10000:1 до приблизительно 1:10000.
201. Композиция по любому из пп. 186-200, где CpG ODN представляет собой CpG ODN 1018, CpG ODN 1826 или CpG ODN 2006.
202. Композиция по любому из пп. 186-201, где модифицированная иммунная клетка содержит более одного адъюванта.
203. Композиция по п.202, где адъювант включает CpG ODN, IFN-α, агонисты STING, агонисты RIG-I или поли I:C.
204. Композиция по любому из пп. 186-203, где антиген ВПЧ представляет собой пул множества полипептидов, которые вызывают ответ против одного и того же или разных антигенов ВПЧ.
205. Композиция по п.204, где антиген в пуле множества антигенов не снижает иммунный ответ, направленный на другие антигены в пуле множества антигенов.
206. Композиция по любому из пп. 186-205, где антиген ВПЧ представляет собой полипептид, содержащий антигенный эпитоп ВПЧ и одну или более гетерологичных пептидных последовательностей.
207. Композиция по любому из пп. 186-206, где антиген ВПЧ образует комплекс с самим собой, с другими антигенами, с адъювантом или с CpG ODN.
208. Композиция по пп. 186-207, где антиген ВПЧ состоит из HLA-A2-рестриктированного эпитопа.
209. Композиция по любому из пп.186-208, где антиген ВПЧ представляет собой полипептид, содержащий антигенный эпитоп, фланкированный на N-конце и/или C-конце одной или более гетерологичными пептидными последовательностями.
210. Композиция по любому из пп. 186-209, где модифицированная иммунная клетка содержит CpG ODN в концентрации от приблизительно 0,1 мкМ до приблизительно 1 мМ.
211. Композиция по любому из пп. 186-210, где модифицированная иммунная клетка содержит CpG ODN в концентрации от приблизительно 0,1 мкМ до приблизительно 1 мМ.
212. Композиция по любому из пп. 186-211, где соотношение антигена ВПЧ и CpG ODN составляет от приблизительно 10000:1 до приблизительно 1:10000.
213. Композиция, содержащая модифицированные иммунные клетки, где модифицированные иммунные клетки содержат антиген ВПЧ, где антиген ВПЧ содержит аминокислотную последовательность с по меньшей мере 90% сходством с любой из SEQ ID NO: 18-25.
214. Композиция по п.213, где антиген ВПЧ содержит аминокислотную последовательность с по меньшей мере 90% сходством с SEQ ID NO: 23.
215. Композиция по п.213 или 214, где модифицированные иммунные клетки получают:
а) пропусканием клеточной суспензии, содержащей входную клетку, через деформирующее клетку сужение, где диаметр сужения является функцией диаметра входной клетки в суспензии, тем самым вызывая пертурбации входной клетки, достаточно большие для того, чтобы антиген ВПЧ прошел через них, с образованием пертурбированной входной клетки; и
b) инкубацией пертурбированной входной клетки с антигеном ВПЧ в течение достаточного периода времени для обеспечения проникновения антигена ВПЧ в пертурбированную входную клетку;
с получением, тем самым, модифицированных иммунных клеток.
216. Композиция по п.215, где диаметр сужения меньше диаметра клетки.
217. Композиция по любому из пп. 215-216, где диаметр сужения составляет от приблизительно 20% до приблизительно 99% от диаметра клетки.
218. Композиция по любому из пп. 215-217, где диаметр сужения составляет от приблизительно 20% до менее, чем приблизительно 60% от диаметра клетки.
219. Композиция по любому из пп. 215-218, где сужение находится в канале.
220. Композиция по любому из пп. 215-219, где к входной клетке прикладывается деформирующая сила, когда она проходит через сужение.
221. Композиция по любому из пп. 213-220, где композиция дополнительно содержит адъювант.
222. Композиция по любому из пп. 213-221, где антиген ВПЧ и/или адъювант находится в цитозоле и/или эндосомах.
223. Композиция по любому из пп. 213-222, где антиген и/или адъювант находится во многих компартментах клетки.
224. Композиция по любому из пп. 213-223, где модифицированная иммунная клетка дополнительно содержит антиген ВПЧ и/или адъювант на поверхности клетки.
225. Композиция по любому из пп. 215-224, где концентрация адъюванта, инкубированного с пертурбированной входной клеткой, составляет от приблизительно 0,1 мкМ до приблизительно 1 мМ.
226. Композиция по любому из пп. 215-225, где концентрация антигена ВПЧ, инкубированного с пертурбированной входной клеткой, составляет от приблизительно 0,1 мкМ до приблизительно 1 мМ.
227. Композиция по любому из пп. 215-226, где соотношение антигена ВПЧ и адъюванта, инкубированных с пертурбированной входной клеткой, составляет от приблизительно 10000:1 до приблизительно 1:10000.
228. Композиция по любому из пп. 213-227, где адъювант представляет собой CpG ODN, IFN-α, агонисты STING, агонисты RIG-I или поли I:C.
229. Композиция по п.228, где адъювант представляет собой CpG ODN.
230. Композиция по п.229, где CpG ODN представляет собой CpG ODN 1018, CpG ODN 1826 или CpG ODN 2006.
231. Композиция по любому из пп. 213-230, где модифицированная иммунная клетка включает более одного адъюванта.
232. Композиция по любому из пп. 213-231, где антиген ВПЧ представляет собой пул множества полипептидов, которые вызывают ответ против одного и того же или разных антигенов ВПЧ.
233. Композиция по п.232, где антиген в пуле множества антигенов не снижает иммунный ответ, направленный на другие антигены в пуле множества антигенов.
234. Композиция по любому из пп. 213-233, где антиген ВПЧ представляет собой полипептид, содержащий антигенный эпитоп ВПЧ и одну или более гетерологичных пептидных последовательностей.
235. Композиция по любому из пп. 213-234, где антиген ВПЧ образует комплекс с самим собой, с другими антигенами или с адъювантом.
236. Композиция по пп. 213-235, где антиген ВПЧ состоит из HLA-A2-рестриктированного эпитопа.
237. Композиция по любому из пп. 213-236, где модифицированная иммунная клетка содержит адъювант в концентрации от приблизительно 0,1 мкМ до приблизительно 1 мМ.
238. Композиция по любому из пп. 213-237, где модифицированная иммунная клетка содержит антиген ВПЧ в концентрации от приблизительно 0,1 мкМ до приблизительно 1 мМ.
239. Композиция по любому из пп. 213-238, где соотношение антигена ВПЧ и адъюванта составляет от приблизительно 10000:1 до приблизительно 1:10000.
240. Композиция по любому из пп. 186-239, где антиген ВПЧ способен процессироваться в пептид, рестриктированный классом I MHC.
241. Композиция по любому из пп. 186-240, где антиген ВПЧ способен процессироваться в пептид, рестриктированный классом II MHC.
242. Композиция по любому из пп. 186-241, где модифицированная иммунная клетка дополнительно содержит агент, который повышает жизнеспособность и/или функцию модифицированной иммунной клетки по сравнению с соответствующей модифицированной иммунной клеткой, которая не содержат агента.
243. Композиция по п.242, где агент представляет собой соединение, усиливающее эндоцитоз, стабилизирующий агент или кофактор.
244. Композиция по п.242, где агент представляет собой альбумин.
245. Композиция по п.244, где альбумин представляет собой мышиный, бычий или человеческий альбумин.
246. Композиция по п.242, где агент представляет собой двухвалентный катион металла, глюкозу, АТФ, калий, глицерин, трегалозу, D-сахарозу, PEG1500, L-аргинин, L-глутамин или ЭДТА.
247. Композиция по п.242, где агент включает MSA.
248. Композиция по любому из пп. 186-247, где клетки дополнительно модифицированы для повышения экспрессии одной или более костимулирующих молекул.
249. Композиция по п.248, где костимулирующая молекула представляет собой B7-H2 (ICOSL), B7-1 (CD80), B7-2 (CD86), CD70, LIGHT, HVEM, CD40, 4-1BBL, OX40L, TL1A, GITRL, CD30L, TIM4, SLAM, CD48, CD58, CD155 или CD112.
250. Композиция по п. 248 или 249, где клетка содержит нуклеиновую кислоту, которая приводит к повышенной экспрессии одной или более костимулирующих молекул.
251. Композиция по любому из пп. 186-250, где иммунная клетка представляет собой Т-клетку, дендритную клетку, моноцит, макрофаг, миелоидную клетку, гранулоцит, нейтрофил, тучную клетку, естественную клетку-киллер, врожденную лимфоидную клетку, базофил или гемопоэтическую клетку-предшественник.
252. Композиция по любому из пп. 186-251, где иммунная клетка не является В-клеткой.
253. Композиция по любому из пп. 186-252, где иммунная клетка представляет собой Т-клетку.
254. Композиция по п.253, где Т-клетка содержит дополнительную модификацию для модуляции экспрессии молекул MHC класса I.
255. Композиция по п.253, где Т-клетка содержит дополнительную модификацию для модуляции экспрессии молекул MHC класса II.
256. Композиция по п.254 или 255, где Т-клетка содержит дополнительную модификацию для уменьшения экспрессии молекул MHC класса I и/или молекул MHC класса II.
257. Композиция по п.254 или 255, где дополнительная модификация включает снижение экспрессии молекул MHC класса I и/или молекул MHC класса II с использованием siРНК, shРНК, CRISPR/Cas9, ZFN, TALEN, Cre-рекомбиназы или мегануклеазы.
258. Композиция по п.254 или 255, где Т-клетка содержит дополнительную модификацию для увеличения экспрессии молекул MHC класса I и/или молекул MHC класса II.
259. Композиция по п.254 или 255, где дополнительная модификация включает повышение экспрессии молекул MHC класса I и/или молекул MHC класса II с использованием РНК или плазмидной ДНК.
260. Композиция по любому из пп. 253-257, где в аллогенном контексте врожденный иммунный ответ, развившийся у субъекта в ответ на введение дополнительно модифицированных Т-клеток, снижен, в аллогенном контексте, по сравнению с врожденным иммунным ответом, развившимся у субъекта в ответ на введение соответствующих модифицированных Т-клеток, которые не содержат дополнительную модификацию.
261. Композиция по любому из пп. 253-257, где период полужизни в кровотоке дополнительно модифицированных Т-клеток у субъекта, которому они были введены, модулируется по сравнению с периодом полужизни в кровотоке соответствующих модифицированных Т-клеток, которые не содержат дополнительной модификации у субъекта, которому они были введены.
262. Композиция по любому из пп. 253-261, где Т-клетка включает одно или более из Т-хелперов, цитотоксических Т-клеток, Т-клеток памяти, CIK-клеток и естественных Т-клеток-киллеров.
263. Композиция по любому из пп. 253-261, где Т-клетка включает одно или более из CD3+ Т-клеток, CD4+ Т-клеток, CD8+ Т-клеток, CD45RA+ Т-клеток, CD45RO+ Т-клеток и γδ-Т-клеток.
264. Композиция по любому из пп. 186-263, где модифицированная клетка является аллогенной для субъекта.
265. Композиция по любому из пп. 186-263, где модифицированная клетка является аутологичной для субъекта.
266. Композиция по любому из пп. 186-265, где субъект предварительно кондиционирован к модулированному воспалению и/или модулированному иммунному ответу.
267. Композиция по любому из пп. 186-266, где композиция дополнительно содержит ингибитор иммунных контрольных точек.
268. Композиция по п.267, где ингибитор иммунных контрольных точек нацелен на одно или более из PD-1, PD-L1, CTLA-4, LAG3, TIM-3, TIGIT, VISTA, TIM1, B7-H4 (VTCN1) или BTLA.
269. Композиция по любому из пп. 186-268, где введение композиции, содержащей модифицированные иммунные клетки, субъекту приводит к активации и/или экспансии цитотоксических Т-лимфоцитов (CTL), специфических для антигена ВПЧ.
270. Композиция по любому из пп. 186-268, где введение композиции, содержащей модифицированные иммунные клетки, субъекту приводит к активации и/или экспансии Т(Th)-хелперов, специфических для антигена.
6
12
271. Композиция по любому из пп. 186-270, где эффективное количество композиции включает от приблизительно 1×10 до приблизительно 1×10 модифицированных иммунных клеток.
272. Композиция, содержащая антиген, где антиген содержит аминокислотную последовательность с по меньшей мере 90% сходством с SEQ ID NO: 23.
273. Композиция по п.272, где антиген содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 23.
274. Способ лечения или профилактики заболевания, ассоциированного с ВПЧ, у субъекта, включающий введение субъекту эффективного количества композиции, содержащей модифицированные иммунные клетки, где модифицированные иммунные клетки содержат антиген ВПЧ и адъювант, где адъювант присутствует внутриклеточно;
где модифицированные иммунные клетки получают:
а) пропусканием клеточной суспензии, содержащей входную клетку, содержащую антиген ВПЧ, через деформирующее клетку сужение, где диаметр сужения является функцией диаметра входной клетки в суспензии, тем самым вызывая пертурбации входной клетки, достаточно большие для того, чтобы антиген и адъювант прошли через них, с образованием пертурбированной входной клетки; и
b) инкубацией пертурбированной входной клетки с адъювантом в течение достаточного периода времени для обеспечения проникновения адъюванта в пертурбированную входную клетку;
с получением, тем самым, модифицированных иммунных клеток.
275. Способ лечения или профилактики заболевания, ассоциированного с ВПЧ, у субъекта, включающий введение субъекту эффективного количества композиции, содержащей модифицированные иммунные клетки, где модифицированные иммунные клетки содержат антиген ВПЧ и адъювант, где адъювант присутствует внутриклеточно;
где модифицированные иммунные клетки получают:
а) пропусканием клеточной суспензии, содержащей входную клетку, содержащую адъювант, через деформирующее клетку сужение, где диаметр сужения является функцией диаметра входной клетки в суспензии, тем самым вызывая пертурбации входной клетки, достаточно большие для того, чтобы антиген ВПЧ прошел через них, с образованием пертурбированной входной клетки; и
b) инкубацией пертурбированной входной клетки с антигеном ВПЧ и адъювантом в течение достаточного периода времени для обеспечения проникновения антигена ВПЧ в пертурбированную входную клетку;
с получением, тем самым, модифицированных иммунных клеток.
276. Способ по п.274 или 275, где диаметр сужения меньше диаметра клетки.
277. Способ по любому из пп. 274-276, где диаметр сужения составляет от приблизительно 20% до 99% от диаметра клетки.
278. Способ по любому из пп. 274-277, где диаметр сужения составляет от приблизительно 20% до менее, чем приблизительно 60% от диаметра клетки.
279. Способ по любому из пп. 274-278, где сужение находится в канале.
280. Способ по любому из пп. 274-279, где к входной клетке прикладывается деформирующая сила, когда она проходит через сужение.
281. Способ по любому из пп. 274-280, где антиген ВПЧ и/или адъювант находятся в цитозоле и/или эндосомах.
282. Способ по любому из пп. 274-281, где антиген и/или адъювант находятся во многих компартментах клетки.
283. Способ по п.274, где концентрация адъюванта, инкубированного с пертурбированной входной клеткой, составляет от приблизительно 0,1 мкМ до приблизительно 1 мМ.
284. Способ по п.275, где концентрация антигена ВПЧ, инкубированного с пертурбированной входной клеткой, составляет от приблизительно 0,1 мкМ до приблизительно 1 мМ.
285. Способ по любому из пп. 274-285, где адъювант представляет собой CpG ODN, IFN-α, агонисты STING, агонисты RIG-I или поли I:C.
286. Способ по п.285, где адъювант представляет собой CpG ODN.
287. Способ по п.286, где CpG ODN представляет собой CpG ODN 1018, CpG ODN 1826 или CpG ODN 2006.
288. Способ по любому из пп. 274-287, где антиген ВПЧ происходят из клеточного лизата.
289. Способ по любому из пп. 274-288, где антиген ВПЧ представляет собой антиген ВПЧ-16 или ВПЧ-18.
290. Способ по любому из пп. 274-289, где антиген ВПЧ представляет собой антиген ВПЧ E6 или антиген ВПЧ E7.
291. Способ по п.290, где антиген ВПЧ содержит аминокислотную последовательность с по меньшей мере 90% сходством с любой из SEQ ID NO: 18-25.
292. Способ по п.289, где антиген ВПЧ содержит аминокислотную последовательность из любой из SEQ ID NO: 18-25.
293. Способ по п.290, где антиген ВПЧ содержит аминокислотную последовательность с по меньшей мере 90% сходством с SEQ ID NO: 23.
294. Способ по п.290, где антиген ВПЧ содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 23.
295. Способ лечения или профилактики заболевания, ассоциированного с ВПЧ, у субъекта, включающий введение субъекту модифицированной иммунной клетки, ассоциированной с антигеном ВПЧ, где модифицированная иммунная клетка получена с помощью способа, включающего стадии:
а) инкубация входной клетки с антигеном ВПЧ и/или адъювантом в течение достаточного периода времени для обеспечения связывания антигена ВПЧ с входной клеткой;
с получением, тем самым, модифицированной иммунной клетки, ассоциированной с антигеном.
296. Способ по п.295, где антиген ВПЧ содержит аминокислотную последовательность с по меньшей мере 90% сходством с любой из SEQ ID NO: 18-25.
297. Способ по п.296, где антиген ВПЧ содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 23.
298. Способ по любому из пп. 295-297, где адъювант представляет собой CpG ODN.
299. Способ по п.298, где CpG ODN представляет собой CpG ODN 1018, CpG ODN 1826 или CpG ODN 2006.
300. Композиция, содержащая модифицированные иммунные клетки по любому из пп. 186-273, для применения в качестве лекарственного средства.
301. Композиция, содержащая модифицированные иммунные клетки по любому из пп. 186-273, для применения в способе лечения организма человека или животного хирургическим путем, терапии или диагностики.
302. Композиция, содержащая модифицированные иммунные клетки по любому из пп. 186-273, для применения в лечении рака, инфекционного заболевания или заболевания, ассоциированного с вирусом.
303. Композиция, содержащая модифицированные иммунные клетки по любому из пп. 186-273, где рак представляет собой опухоли головы и шеи, рак шейки матки, рак вульвы, рак влагалища, рак полового члена, рак анального канала, рак перианальной области, аногенитальный рак, рак ротовой полости или рак слюнной железы.
304. Композиция, содержащая модифицированные иммунные клетки по любому из пп. 300-303, где модифицированные PBMC вводят до, одновременно или после введения ингибитора иммунных контрольных точек.
305. Композиция по п.304, где ингибитор иммунных контрольных точек нацелен на любое из PD-1, PD-L1, CTLA-4, LAG3, VISTA и TIM-3.
306. Композиция по п.305, где ингибитор иммунных контрольных точек нацелен на PD-1.
307. Композиция по п.305, где ингибитор иммунных контрольных точек нацелен на PD-L1.
308. Композиция по любому из пп. 300-307, где модифицированные PBMC вводят до, одновременно или после введения терапевтического агента.
309. Композиция по п.308, где терапевтический агент представляет собой химиотерапевтический препарат.
310. Композиция по п.309, где инфекционное заболевание ассоциировано с ВИЧ, ВПЧ, EBV, MCV, HBV или HCV.