РЕАГЕНТЫ ДЛЯ РАЗМНОЖЕНИЯ КЛЕТОК, ЭКСПРЕССИРУЮЩИХ РЕКОМБИНАНТНЫЕ РЕЦЕПТОРЫ

1. Способ размножения клеток, включающий инкубирование исходной композиции, указанная исходная композиция содержит клетки, экспрессирующие химерный рецептор антигена, содержащий внеклеточный антигенсвязывающий домен, который специфично связывает или распознает антиген, вместе с множеством частиц, которые представляют собой или содержат шарики, где множество частиц имеют средний диаметр в пределах между или примерно между 2 мкм и 5 мкм и имеют присоединенную связывающую молекулу, которая специфично связывает или распознает антигенсвязывающий домен, где связывание связывающей молекулы с антигенсвязывающим доменом индуцирует размножение клеток, содержащих химерный рецептор антигена, тем самым продуцируя выходную композицию, содержащую наращенные клетки.
2. Способ по п.1, в котором связывающая молекула не связывает или не распознает линкерную или спейсерную область химерного рецептора антигена, указанная линкерная или спейсерная область соединяет антигенсвязывающий домен с трансмембранным доменом рецептора антигена.
3. Способ по п.1 или 2, в котором связывающая молекула представляет собой антиидиотипическое антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, который специфично связывается с антигенсвязывающим доменом.
4. Способ по любому из пп.1-3, в котором антиген представляет собой CD19.
5. Способ по п.1 или 2, в котором связывающая молекула содержит рекомбинантный антиген или его часть, распознаваемую антигенсвязывающим доменом.
6. Способ по п.5, в котором рекомбинантный антиген представляет собой BCMA или его часть, распознаваемую антигенсвязывающим доменом.
7. Способ размножения клеток, включающий инкубирование исходной композиции, содержащей клетки, экспрессирующие химерный рецептор антигена (CAR), содержащий антигенсвязывающий домен, который специфично связывает или распознает антиген, вместе с множеством частиц, например, шариков, каждая из множества частиц, например, шариков, содержит связывающую молекулу, которая представляет собой антиидиотипическое антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, который специфично связывается с антигенсвязывающим доменом, где связывание антиидиотипического антитела или его антигенсвязывающего фрагмента с антигенсвязывающим доменом индуцирует размножение клеток, содержащих химерный рецептор антигена, тем самым продуцируя выходную композицию, содержащую наращенные клетки.
8. Способ по любому из пп.5-7, в котором связывающая молекула представляет собой слитый полипептид, содержащий рекомбинантный антиген или его часть, связанную с остатком, где остаток необязательно облегчает присоединение к частице.
9. Способ по п.8, в котором остаток связывается с C-концом рекомбинантного антигена.
10. Способ по п.8 или 9, в котором остаток представляет собой или содержит Fc-домен.
11. Способ размножения клеток, включающий инкубирование исходной композиции, указанная исходная композиция содержит клетки, экспрессирующие химерный рецептор антигена (CAR), содержащий антигенсвязывающий домен, который специфично связывает или распознает CD19, вместе с множеством частиц, содержащих присоединенную связывающую молекулу, которая представляет собой антиидиотипическое антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, который специфично связывается с антигенсвязывающим доменом, где связывание антиидиотипического антитела или его антигенсвязывающего фрагмента с антигенсвязывающим доменом индуцирует размножение клеток, содержащих химерный рецептор антигена, тем самым продуцируя выходную композицию, содержащую наращенные клетки.
12. Способ по пп.3, 4 или 11, в котором антигенсвязывающий домен рецептора антигена представляет собой или содержит антитело SJ25C1 или его антигенсвязывающий фрагмент.
13. Способ по пп.3, 4 или 11, в котором антигенсвязывающий домен рецептора антигена представляет собой или содержит антитело FMC63 или его антигенсвязывающий фрагмент.
14. Способ по любому из пп.7-13, в котором частицы представляют собой синтетические частицы, нерастворимые частицы, твердые частицы или неклеточные частицы.
15. Способ по любому из пп.7-14, в котором множество частиц содержит шарики.
16. Способ по любому из пп.1-15, в котором множество частиц происходит из композиции, имеющей концентрацию связывающей молекулы в пределах между или примерно между 0,5 мкг/мл и 500 мкг/мл, включительно.
17. Способ по любому из пп.1-16, в котором, в ходе инкубирования, отношение клеток в целом, присутствующих в исходной композиции, ко множеству частиц составляет от или примерно от 5:1 до 1:5, включительно.
18. Способ размножения клеток, включающий инкубирование исходной композиции, указанная исходная композиция содержит клетки, экспрессирующие химерный рецептор антигена, содержащий внеклеточный антигенсвязывающий домен, который специфично связывает или распознаетантиген, вместе с множеством частиц, которые представляют собой или содержат шарики, содержащие присоединенную связывающую молекулу, которая специфично связывает или распознает антигенсвязывающ домен, где:
множество частиц происходит из композиции, имеющей концентрацию связывающей молекулы в пределах между или примерно между 0,5 мкг/мл и 500 мкг/мл, включительно, и, в ходе инкубирования, отношение клеток в целом, присутствующих в исходной композиции, ко множеству частиц составляет от или примерно от 5:1 до 1:5, включительно; и
связывание связывающей молекулы с антигенсвязывающим доменом индуцирует размножение клеток, содержащих химерный рецептор антигена, тем самым продуцируя выходную композицию, содержащую наращенные клетки.
19. Способ по п.18, в котором связывающая молекула не связывает или не распознает линкерную или спейсерную область химерного рецептора антигена, указанная линкерная или спейсерная область соединяет антигенсвязывающий домен с трансмембранным доменом рецептора антигена.
20. Способ по п.18 или 19, в котором связывающая молекула представляет собой антиидиотипическое антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, который специфично связывается с антигенсвязывающим доменом.
21. Способ по п.20, в котором антиген представляет собой CD19.
22. Способ по п.18 или 19, в котором связывающая молекула содержит рекомбинантный антиген или его часть, распознаваемую антигенсвязывающим доменом.
23. Способ по п.22, в котором рекомбинантный антиген представляет собой BCMA или его часть, распознаваемую антигенсвязывающим доменом.
24. Способ по любому из пп.1-23, в котором:
множество частиц происходит из композиции, имеющей концентрацию связывающей молекулы в пределах между или примерно между 1 мкг/мл и 200 мкг/мл или 5 мкг/мл и 100 мкг/мл, каждое, включительно; или
множество частиц происходит из композиции, содержащей концентрацию связывающей молекулы по меньшей мере или по меньшей мере примерно 1 мкг/мл, 5 мкг/мл, 10 мкг/мл, 25 мкг/мл, 50 мкг/мл, 100 мкг/мл или 200 мкг/мл.
25. Способ по любому из пп.1-24, в котором множество частиц происходит из композиции, имеющей концентрацию связывающей молекулы равнуюили примерно равную 5 мкг/мл, 10 мкг/мл, 25 мкг/мл, 50 мкг/мл, 100 мкг/мл или 200 мкг/мл.
26. Способ по любому из пп.1-25, в котором, в ходе инкубирования, отношение клеток в целом, присутствующих в исходной композиции, ко множеству частиц составляет от или примерно от 3:1 до 1:3 или от 2:1до 1:2, каждое, включительно.
27. Способ по любому из пп.1-26, в котором, в ходе инкубирования, отношение клеток в целом, присутствующих в исходной композиции, ко множеству частиц составляет или составляет примерно 1:1.
3
3
28. Способ по любому из пп.15-27, в котором множество шариков имеет средний диаметр в пределах между или примерно между 2 мкм и 5 мкм или среднюю плотность в пределах между или примерно между 1 г/см и примерно 2 г/см.
29. Способ по любому из пп.1-6 и 28, в котором средний диаметр составляет или составляет примерно 2,8 мкм или 4,5 мкм.
30. Способ по любому из пп.3, 4, 11-17, 20, 21 и 24-29, в котором антигенсвязывающий фрагмент представляет собой или содержит scFv.
31. Способ по любому из пп.3, 4 и 11-30, в котором антиидиотипическое антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит по меньшей мере часть константной области иммуноглобулина, необязательно, Fc-область или часть Fc, содержащую домены CH2 и CH3.
32. Способ по любому из пп.3, 4, 11-17, 20, 21, и 24-31, в котором антиидиотипическое антитело или его антигенсвязывающий фрагмент представляет собой интактное антитело или полноразмерное антитело.
33. Способ по любому из пп.1-32, в котором связывающая молекула присоединена к каждой из множества частиц на С-концевом аминокислотном остатке связывающей молекулы или вблизи него.
34. Способ по любому из пп.1-33, в котором множество частиц является монодисперсным.
35. Способ по любому из пп.1-34, в котором связывающая молекула ковалентно присоединена к частице посредством поверхностно экспонируемой функциональной группы.
36. Способ по п.35, в котором поверхностно экспонируемая функциональная группа представляет собой амино группу, карбоксильную группу, тиольную группу, альдегидную группу, хлорметильную группу, эпокси группу, гидроксильную группу, тозильную группу или гидразиновую группу.
37. Способ по п.35 или 36, в котором поверхностно экспонируемая функциональная группа представляет собой тозильную группу.
38. Способ по любому из пп.1-37, в котором множество частиц содержит частицы, содержащие стекло, диоксид кремния, сложные полиэфиры гидроксикарбоновых кислот, полиангидриды дикарбоновых кислот, сополимеры гидроксикарбоновых кислот, сополимеры дикарбоновых кислот или металл.
39. Способ по любому из пп.1-38, в котором частицы имеют поверхность, содержащую полимер, полисахарид, диоксид кремния, жирную кислоту, углерод или их сочетание.
40. Способ по п.39, в котором полимер представляет собой полиэтиленгликоль, сополимер молочная кислота - гликолевая кислота, полиглутаральдегид, полиуретан, полистирол и поливиниловый спирт или их сочетания.
41. Способ по любому из пп.1-40, в котором множество частиц содержит частицы, имеющие гидрофобную поверхность.
42. Способ по любому из пп.1-41, в котором множество частиц содержит частицы, содержащие полистирольную поверхность.
43. Способ по любому из пп.1-42, в котором множество частиц содержит частицы, которые являются магнитными и/или содержат магнитную сердцевину, парамагнитную сердцевину или суперпарамагнитную сердцевину.
44. Способ по любому из пп.1-43, в котором по меньшей мере часть инкубирования осуществляют в присутствии агента, который специфично связывается с дополнительной молекулой на клетке для обеспечения дополнительного сигнала и/или для блокировки ингибиторного сигнала.
45. Способ по п.44, в котором агент предлагается вместе с частицами, необязательно, агент присоединен к каждой из множества частиц или их подмножества.
46. Способ по п.44 или п.45, в котором агент присоединен к частицам, и агент специфично связывается с дополнительной молекулой на клетке для обеспечения дополнительного сигнала и/или для блокировки ингибиторного сигнала.
47. Способ по любому из пп.44-46, в котором агент представляет собой лиганд или представляет собой антитело или его антигенсвязывающий фрагмент.
48. Способ по любому из пп.44-47, в котором дополнительная молекула:
представляет собой костимуляторную молекулу или представляет собой активирующий корецептор, необязательно, OX-40, ICOS, DAP10, B7-1, B7-2, CD28 или 4-1BB; или
представляет собой ингибиторный рецептор, необязательно, CTLA-4, PD-1, LAG-3, Tim-3, BTLA или TIGIT; или
представляет собой поверхностный белок Т-лимфоцита, необязательно, CD2 или CD3.
49. Способ по любому из пп.44-48, в котором дополнительная молекула представляет собой CD2 или CD28.
50. Способ по любому из пп.44-49, в котором частицы содержат одно или оба из антитела анти-CD2 и антитела анти-CD28
51. Способ по п.50, в котором связывающая молекула представляет собой антиидиотипическое антитело анти-CD19.
52. Способ по п.50, в котором связывающая молекула представляет собой рекомбинантный антиген, который распознается химерным рецептором антигена, необязательно, где рекомбинантный антиген представляет собой BCMA или представляет собой его часть, распознаваемую антигенсвязывающим доменом.
53. Способ по любому из пп.45-52, в котором агент является ковалентно присоединенным к частицам.
54. Способ по любому из пп.45-53, в котором отношение, необязательно, молярное или массовое отношение, связывающей молекулы и агента, присоединенного к частицам, составляет или составляет примерно 1:1.
55. Способ по любому из пп.1-54, в котором инкубирование осуществляется в течение больше или больше примерно 2 часов, 4 часов, 8 часов, 12 часов, 24 часов, 2 дней, 3 дней, 4 дней, 5 дней, 6 дней, 7 дней, 8 дней, 9 дней, 10 дней, 11 дней или 12 дней.
56. Способ по любому из пп.1-55, в котором инкубирование осуществляется в течение больше или больше примерно 24 часов, 2 дней, 3 дней, 4 дней, 5 дней, 6 дней, 7 дней, 8 дней, 9 дней, 10 дней, 11 дней или 12 дней.
57. Способ по любому из пп.1-56, в котором инкубирование осуществляется в течение больше, чем или больше, чем 10 дней, 11 дней, 12 дней, 13 дней, 14 дней, 15 дней или 16 дней.
58. Способ по любому из пп.1-57, в котором клетки содержат иммунные клетки или индуцированные плюрипотентные стволовые клетки (iPSC).
59. Способ по любому из пп.1-58, в котором иммунная клетка представляет собой Т-лимфоцит или NK-клетку.
60. Способ по любому из пп.1-59, в котором клетки содержат один или оба из Т-лимфоцита CD4+ и Т-лимфоцита CD8+.
61. Способ по любому из пп.1-60, в котором отношение клеток CD4+ к клеткам CD8+ находится в пределах между или примерно между 1:2 и 2:1 или 1:3 и 3:1 или составляет или примерно составляет 1:1,
62. Способ по любому из пп.1-61, в котором клетки представляют собой первичные клетки, полученные от субъекта, необязательно, субъекта человека.
63. Способ по любому из пп.1-62, где исходную композицию получают с помощью способа, включающего приведение в контакт композиции клеток с молекулой нуклеиновой кислоты, кодирующей химерный рецептор антигена, при условиях для введения молекулы нуклеиновой кислоты в одну или несколько клеток в композиции.
64. Способ генной инженерии клеток, включающий:
(a) приведение в контакт композиции клеток с молекулой нуклеиновой кислоты, кодирующей химерный рецептор антигена, при условиях для введения молекулы нуклеиновой кислоты в одну или несколько клеток в композиции, тем самым продуцируя исходную композицию; и
(b) инкубирование клеток исходной композиции согласно способу по любому из пп.1-63.
65. Способ по п.63 или 64, в котором по меньшей мере часть приведения в контакт и инкубирования осуществляют одновременно.
66. Способ по любому из пп.63-65, в котором приведение в контакт осуществляют посредством трансдуцирования вирусным вектором, необязательно, когда вирусный вектор представляет собой ретровирусный вектор, гамма-ретровирусный вектор или лентивирусный вектор.
67. Способ по любому из пп.62-66, в котором композиция клеток содержит множество Т-лимфоцитов, и до приведения в контакт, способ не включает стимуляции или активации Т-лимфоцитов.
68.Способ по любому из пп.63-67, где композиция клеток содержит множество Т-лимфоцитов, и до приведения в контакт, способ не включает инкубирования композиции в присутствии агента или агентов, которые могут индуцировать сигнал через комплекс TCR, и/или инкубирования в присутствии агента или агентов, которые могут индуцировать пролиферацию Т-лимфоцитов, Т-лимфоцитов CD4+ и/или Т-лимфоцитов CD8+; и/или CD3-связывающих молекул, CD28-связывающих молекул, рекомбинантного IL-2, рекомбинантного IL-15 и рекомбинантного IL-7 или их сочетания, необязательно, способ не включает стимуляции Т-лимфоцитов в присутствии антитела анти-CD3 и/или антитела анти-CD28 .
69. Способ по любому из пп.1-68, в котором поверхностное экспрессирование маркера активации или маркера истощения клеток, присутствующих в выходной композиции, меньше, чем поверхностное экспрессирование маркера в композиции клеток, продуцируемой после сходного инкубирования, но в присутствии поликлональной стимуляторной молекулы, которая может активировать один или несколько внутриклеточных сигнальных доменов одного или нескольких компонентов комплекса TCR, необязательно, где поликлональная стимуляторная молекула содержит антитело анти-CD3 или его фрагмент и/или антитело анти-CD28 или его фрагмент.
70. Способ по п.69, в котором маркер истощения представляет собой ингибиторный рецептор, необязательно, PD-1, CTLA-4, TIM-3, LAG-3, BTLA или TIGIT.
71. Способ по п.69, в котором маркер активации представляет собой HLA-DR, CD25, CD69, CD71, CD40L или 4-1BB.
72. Способ по любому из пп.1-71, в котором количество клеток в выходной композиции, содержащих химерный рецептор антигена, повышается или обогащается 1,2-кратно, 2,0-кратно, 3,0-кратно, 4,0-кратно, 5,0-кратно, 6,0-кратно, 7,0-кратно, 8,0-кратно, 9,0-кратно, 10-кратно или больше по сравнению с количеством клеток, содержащих рецептор антигена, в исходной композиции.
in vitro
ex vivo
73. Способ по любому из пп.1-72, который осуществляется  или .
74. Способ по любому из пп.1-73, в котором CAR содержит внеклеточный антигенсвязывающий домен, который специфично связывается с антигеном, трансмембранной областью или внутриклеточной сигнальной областью, содержащей ITAM.
75. Способ по п.74, в котором внутриклеточный сигнальный домен содержит внутриклеточный домен цепи CD3-зета (CD3ζ).
76. Способ по п.74 или 75, в котором CAR дополнительно содержит костимуляторную сигнальную область, содержащую сигнальный домен CD28 или 4-1BB.
77. Способ по любому из пп.1-76, дополнительно включает удаление множества шариков из выходной композиции.
78. Композиция клеток, полученная с помощью способа по любому из пп.1-77.
79. Поверхностно модифицированная частица, содержащая (i) частицу, которая представляет собой шарик, имеющий диаметр в пределах между или примерно между 2 мкм и 5 мкм, и (ii) связывающую молекулу, присоединенную к поверхности шарика, где связывающая молекула специфично связывается с внеклеточным антигенсвязывающим доменом химерного рецептора антигена.
80. Поверхностно модифицированная частица по п.79, где связывающая молекула не связывает или не распознает линкерную или спейсерную область рекомбинантного рецептора антигена, где указанная линкерная или спейсерная область соединяет антигенсвязывающий домен с трансмембранным доменом рецептора антигена.
81. Поверхностно модифицированная частица по п.79 или 80, где связывающая молекула содержит рекомбинантный антиген или его часть, распознаваемую антигенсвязывающим доменом.
82. Поверхностно модифицированная частица по п.81, где рекомбинантный антиген представляет собой BCMA или представляет собой его часть, распознаваемую антигенсвязывающим доменом.
83. Поверхностно модифицированная частица, содержащая частицу и связывающую молекулу, присоединенную к поверхности частицы, где связывающая молекула содержит внеклеточный домен или его часть из рекомбинантного антигена, который представляет собой антиген созревания В-клеток(BCMA).
84. Поверхностно модифицированная частица по любому из пп.81-83, где связывающая молекула представляет собой слитый полипептид, содержащий рекомбинантный антиген или его часть, связанную с остатком, где остаток необязательно облегчает присоединение к частице.
85. Поверхностно модифицированная частица по п.84, где остаток связывается с C-концом рекомбинантного антигена.
86. Поверхностно модифицированная частица по п.84 или 85, где остаток представляет собой или содержит Fc-домен.
87. Поверхностно модифицированная частица по п.79 или 80, где связывающая молекула содержит антиидиотипическое антитело или его антигенсвязывающий фрагмент.
88. Поверхностно модифицированная частица по любому из пп.79, 80 и 87, где антиген, распознаваемый антигенсвязывающим доменом, представляет собой CD19.
89. Поверхностно модифицированная частица по п.87 или 88, где антигенсвязывающий домен химерного рецептора антигена представляет собой или содержит антитело SJ25C1 или его антигенсвязывающий фрагмент.
90. Поверхностно модифицированная частица по п.87 или 88, где антигенсвязывающий домен химерного рецептора антигена представляет собой или содержит антитело FMC63 или его антигенсвязывающий фрагмент.
91. Поверхностно модифицированная частица по п.89 или 90, где антигенсвязывающий фрагмент представляет собой или содержит scFv.
92. Поверхностно модифицированная частица по любому из пп.87-91, где антиидиотипическое антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит по меньшей мере часть константной области иммуноглобулина, необязательно, Fc-область или часть Fc, содержащую домены CH2 и CH3.
93. Поверхностно модифицированная частица по любому из пп.87-92, где антиидиотипическое антитело или его антигенсвязывающий фрагмент представляет собой интактное антитело или полноразмерное антитело.
94. Поверхностно модифицированная частица по любому из пп.79-93, где связывающая молекула присоединена к частице на С-концевом аминокислотном остатке связывающей молекулы или вблизи него.
95. Поверхностно модифицированная частица по любому из пп.83-94, где частица представляет собой синтетическую частицу, нерастворимую частицу, твердую частицу или неклеточную частицу.
96. Поверхностно модифицированная частица по любому из пп.83-95, где частица представляет собой шарик.
97. Поверхностно модифицированная частица по любому из пп.79-96, где частица имеет диаметр в пределах между или примерно между 2 мкм и 5 мкм.
98. Поверхностно модифицированная частица по любому из пп.79-97, где частица имеет диаметр равный или примерно равный2,8 мкм или 4,5 мкм.
99. Поверхностно модифицированная частица по любому из пп.79-98, где связывающая молекула ковалентно присоединена к частицам.
100. Поверхностно модифицированная частица по любому из пп.79-99, где связывающая молекула ковалентно присоединена к частице посредством поверхностно экспонируемой функциональной группы.
101. Поверхностно модифицированная частица по п.100, где поверхностно экспонируемая функциональная группа представляет собой амино группу, карбоксильную группу, тиольную группу, альдегидную группу, хлорметильную группу, эпокси группу, гидроксильную группу, тозильную группу или гидразиновую группу.
102. Поверхностно модифицированная частица по п.101, где поверхностно экспонируемая функциональная группа представляет собой тозильную группу.
103. Поверхностно модифицированная частица по любому из пп.79-102, где частица представляет собой или содержит стекло, диоксид кремния, сложные полиэфиры гидроксикарбоновых кислот, полиангидриды дикарбоновых кислот, сополимеры гидроксикарбоновых кислот, сополимеры дикарбоновых кислот или металл.
104. Поверхностно модифицированная частица по любому из пп.79-103, где частица содержит поверхность, содержащую полимер, полисахарид, диоксид кремния, жирную кислоту, углерод или их сочетание.
105. Поверхностно модифицированная частица по п.104, где полимер представляет собой полиэтиленгликоль, сополимер молочная кислота - гликолевая кислота, полиглутаральдегид, полиуретан, полистирол и поливиниловый спирт или их сочетания.
106. Поверхностно модифицированная частица по любому из пп.79-105, где частица имеет гидрофобную поверхность.
107. Поверхностно модифицированная частица по любому из пп.79-106, где частица имеет полистирольную поверхность.
108. Поверхностно модифицированная частица по любому из пп.79-107, частица является магнитной и/или содержит магнитную сердцевину, парамагнитную сердцевину или суперпарамагнитную сердцевину.
2
3
4
5
6
109. Поверхностно модифицированная частица по любому из пп.79-108, где частица содержит по меньшей мере или примерно по меньшей мере 10 копий, 10 копий, 10 копий, 10копий, 10 копий или 10 копий связывающей молекулы.
110. Поверхностно модифицированная частица по любому из пп.79-109, где частица дополнительно содержит по меньшей мере один агент, присоединенный к поверхности частицы, где по меньшей мере один агент специфично связывается с дополнительной молекулой на клетке для обеспечения дополнительного сигнала и/или для блокировки ингибиторного сигнала.
111. Поверхностно модифицированная частица по п.110, где по меньшей мере один агент представляет собой лиганд или представляет собой антитело или его антигенсвязывающий фрагмент.
112. Поверхностно модифицированная частица по п.110 или 111, где дополнительная молекула представляет собой костимуляторную молекулу или активирующий корецептор, необязательно, OX-40, ICOS, DAP10, B7-1, B7-2, CD28 или 4-1BB.
113. Поверхностно модифицированная частица по п.110 или 111, где дополнительная молекула представляет собой ингибиторный рецептор, необязательно, CTLA-4, PD-1, LAG-3, Tim-3, BTLA или TIGIT.
114. Поверхностно модифицированная частица по п.110 или 111, где дополнительная молекула представляет собой поверхностный белок Т-лимфоцита, необязательно, CD2 или CD3.
115. Поверхностно модифицированная частица по п.110 или 111, где дополнительная молекула представляет собой CD2 или CD28.
116. Поверхностно модифицированная частица по п.115, где частица содержит одно или оба антитела из антитела анти-CD2 и антитела анти-CD28.
117. Поверхностно модифицированная частица по любому из пп.110-116, где по меньшей мере один агент ковалентно присоединен к частице.
118. Поверхностно модифицированная частица по любому из пп.110-117, где отношение, необязательно, молярное или массовое отношение, связывающей молекулы и по меньшей мере одного агента, удерживаемого частицей, составляет или составляет примерно 1:1.
119. Композиция, содержащая множество поверхностно модифицированных частиц по любому из пп.79-118.
120. Композиция по п.119, где:
концентрация связывающей молекулы в композиции находится в пределах между или примерно между 0,5 мкг/мл и 500 мкг/мл, 1 мкг/мл и 200 мкг/мл или 5 мкг/мл и 100 мкг/мл L; или
концентрация связывающей молекулы в композиции составляет по меньшей мере или по меньшей мере примерно 1 мкг/мл, 5 мкг/мл, 10 мкг/мл, 25 мкг/мл, 50 мкг/мл, 100 мкг/мл или 200 мкг/мл.
121. Композиция по п.119 или 120, где множество поверхностно модифицированных частиц является монодисперсным.
122. Набор, содержащий поверхностно модифицированную частицу по любому из пп.79-118 или композицию по любому из пп.119-121 и инструкции для применения.
123. Набор по п.122, где имеются инструкции для селекции или обогащения популяции клеток, клеток, экспрессирующих химерный рецептор антигена, содержащий антигенсвязывающий домен, специфично распознаваемый связывающей молекулой.
124. Набор по п.122, где инструкции предназначены для стимуляции или размножения в популяции клеток, клеток, экспрессирующих химерный рецептор антигена, содержащий антигенсвязывающий домен, специфично распознаваемый связывающей молекулой.
125. Способ размножения клеток, включающий инкубирование популяции клеток вместе с поверхностно модифицированной частицей по любому из пп.79-118 или с композицией по любому из пп.119-121.
126. Способ селекции или обогащения клетки, включающий приведение в контакт популяции клеток вместе с поверхностно модифицированной частицей по любому из пп.79-118 или с композицией по любому из пп.119-121,
127. Способ долговременной стимуляции для оценки композиции клеток, способ включает:
инкубирование в течение периода времени по меньшей мере 10 дней, исходной композиции при условиях стимуляции CAR-зависимой активности клеток в исходной композиции, указанная исходная композиция содержит Т-лимфоциты, экспрессирующие химерный рецептор антигена (CAR), содержащий внеклеточный антигенсвязывающий домен, который специфично связывает или распознает антиген, тем самым продуцируя выходную композицию; и
и оценку одного или нескольких факторов из фенотипа или активности одной, или нескольких клеток выходной композиции.
128. Способ по п.127, где условия стимуляции CAR-зависимой активности включают присутствие связывающей молекулы, которая специфично связывается с антигенсвязывающим доменом CAR.
129. Способ по п.128, где связывающая молекула присоединяется к подложке.
130. Способ по п.129, где подложка представляет собой твердую подложку.
131. Способ по п.130, где твердая подложка представляет собой поверхность лунки микропланшета или шарик.
132. Способ по п.130 или 131, где твердая подложка представляет собой микропланшет, имеющий связывающую молекулу, присоединенную к микропланшету, и инкубирование осуществляется на микропланшете.
133. Способ по п.130 или 131, где твердая подложка представляет собой шарик, содержащий присоединенную связывающую молекулу, и инкубирование осуществляется в присутствии множества шариков.
134. Способ по любому из пп.128-133, где связывающая молекула представляет собой или содержит рекомбинантный антиген или его часть, распознаваемую антигенсвязывающим доменом.
135. Способ по п.134, где рекомбинантный антиген или его часть представляет собой BCMA или его часть, распознаваемую антигенсвязывающим доменом.
136. Способ по любому из пп.128-133, где связывающая молекула представляет собой или содержит антиидиотипическое антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, который специфично связывается с антигенсвязывающим доменом.
137. Способ по п.136, где антигенсвязывающий домен рецептора антигена представляет собой или содержит антитело SJ25C1 или его антигенсвязывающий фрагмент.
138. Способ по п.136, где антигенсвязывающий домен рецептора антигена представляет собой или содержит антитело FMC63 или его антигенсвязывающий фрагмент.
in vitro
ex vivo
139. Способ по любому из пп.127-138, где способ осуществляется  или .
140. Способ по любому из пп.127-139, где исходная композиция инкубируется в присутствии среды, которая не содержит рекомбинантных цитокинов.
141. Способ по любому из пп.127-140, где инкубирование осуществляется непрерывно или не прерывается в течение периода времени.
142. Способ по любому из пп.127-140, где в ходе инкубирования, клетки не пересевают, среды не заменяют и связывающей молекулы не добавляют.
143. Способ по любому из пп.127-142, включающий оценку одного или нескольких фенотипов из состояния активации, истощения или дифференциации одной или нескольких клеток выходной композиции.
144. Способ по п.143, где фенотип представляет собой истощение и оценка включает измерение экспрессирования, необязательно, поверхностного экспрессирования одного или нескольких маркеров, выбранных из CTLA-4, FOXP3, PD-1, TIGIT, LAB-3, 2B4, BTLA, TIM3, VISTA или CD96.
145. Способ по п.143, где фенотип представляет собой активацию, и оценка включает измерение экспрессирования, необязательно, поверхностного экспрессирования, одного или нескольких маркеров, выбранных из CD25, CD26, CD27, CD28, CD30, CD71, CD154, CD40L, CD127, LAG3 или Ki67.
146. Способ по п.143, где фенотип представляет собой состояние дифференциации и оценка включает измерение одного или нескольких маркеров, выбранных из (i) одного или нескольких из маркеров, выбранных из (i) одного или нескольких из CD25, CD45RO, CD56, KLRG1, CD95 и/или (ii) одного из CD45RA, CD27, CD28, CD62L и CCR7, необязательно, при этом один или несколько маркеров представляют собой маркеры, которые положительно или, наоборот, отрицательно ассоциируются с наивно-подобными Т-лимфоцитами.
147. Способ по любому из пп.127-146, включающий оценку одной или нескольких активностей одной или нескольких клеток выходной композиции.
148. Способ по любому из пп.127-147, где одна или несколько активностей включают CAR-зависимую активность, необязательно, антиген-стимулирующую активность.
149. Способ по п.147 или 148, где одна или несколько активностей включают цитолитическую активность или продуцирование цитокинов.
150. Способ по любому из пп.127-149, где период времени составляет по меньшей мере или по меньшей мере примерно 11 дней, 12 дней, 13 дней, 14 дней или 15 дней.
151. Способ по любому из пп.127-149, где период времени составляет или составляет примерно 11 дней, 12 дней, 13 дней, 14 дней или 15 дней.
152. Способ по любому из пп.127-151, где исходная композиция содержит клетки, которые экспонируются или вступают в контакт с исследуемым агентом или соединением до инкубирования, необязательно, при этом экспонирование или приведение в контакт осуществляется в ходе одной или нескольких стадий способа получения исходной композиции, содержащей Т-лимфоциты, экспрессирующие CAR.
153. Способ по любому из пп.127-152, где способ осуществляется на множестве исходных композиций, каждая указанная исходная композиции из множества получается с помощью иного способа.
154. Способ по любому из пп.127-153, дополнительно включающий сравнение фенотипа или активности выходной композиции с фенотипом или активностью контрольной композиции, при этом, необязательно, контрольная композиция представляет собой композицию Т-лимфоцитов, которые инкубируют в течение по меньшей мере 10 дней при таких же условиях для стимуляции CAR-зависимой активности, указанная композиция Т-лимфоцитов не получается в присутствии исследуемого агента или соединения или получается с помощью альтернативного способа по сравнению с исходной композицией.
155. Способ по любому из пп.127-154, дополнительно включающий идентификацию выходной композиции, которая демонстрирует уменьшение истощения, уменьшение активации или уменьшение дифференциации, необязательно, при этом уменьшение дифференциации включает увеличение экспрессирования одного или нескольких маркеров наивно-подобных Т-лимфоцитов.