ПЛАЗМИДА, СОДЕРЖАЩАЯ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ, КОДИРУЮЩУЮ мРНК С СЕГМЕНТИРОВАННЫМ ХВОСТОМ ПОЛИ(А)

1. ДНК плазмиды, включающая последовательность ДНК, которая содержит
(i) первую нуклеотидную последовательность, которая кодирует молекулу мРНК, и расположенную ниже по цепи от нее
(ii) вторую нуклеотидную последовательность, которая кодирует модифицированный хвост поли(А), причем указанная вторая нуклеотидная последовательность отличается тем, что состоит из
(а) по меньшей мере двух элементов А, каждый из которых является нуклеотидной последовательностью, включающей от 55 до 65 нуклеотидов Т, и
(б) по меньшей мере одного элемента S, причем каждый элемент S состоит из
(б1) одного нуклеотида, не являющегося нуклеотидом Т, или
(б2) от 2 до 10 нуклеотидов, предпочтительно 6 нуклеотидов, причем каждый из двух концевых нуклеотидов не является нуклеотидом Т;
где общее число элементов А на единицу больше общего числа элементов S, и
где любые два элемента А разделены одним элементом S.
2. ДНК плазмиды по п. 1, в которой любой один из указанных элементов S состоит из одного нуклеотида С или одного нуклеотида А, предпочтительно из одного нуклеотида С.
3. ДНК плазмиды по п. 1 или 2, в которой число элементов А равно двум, трем или четырем.
4. ДНК плазмиды по пп. 1-3, в которой число элементов А равно четырем и в которой указанные нуклеотидные последовательности четырех элементов А вместе в среднем имеют в длину 240 нуклеотидов, предпочтительно каждый элемент А имеет в длину 60 нуклеотидов.
5. ДНК плазмиды по пп. 1-3, в которой число элементов А равно двум и в которой указанные нуклеотидные последовательности двух элементов А вместе в среднем имеют в длину 120 нуклеотидов, предпочтительно каждый элемент А имеет в длину 60 нуклеотидов.
6. Бактериальная клетка-хозяин, включающая ДНК плазмиды по одному из пп. 1-5.
-
7. Бактериальная клетка-хозяин по п. 6, которая является клеткой Е. coli, предпочтительно клеткой Е. coli recA.
8. Применение нуклеотидной последовательности, которая кодирует модифицированный хвост поли(А), согласно указанному в п. 1 (ii) и в пп. 2-5, для получения ДНК плазмиды, проявляющей пониженную рекомбинацию в ходе амплификации в бактериальной клетке-хозяине, причем указанная нуклеотидная последовательность расположена ниже по цепи от нуклеотидной последовательности, кодирующей молекулу мРНК.
9. Применение нуклеотидной последовательности, которая кодирует модифицированный хвост поли(А), согласно указанному в п. 1 (ii) и в пп. 2-5, для понижения рекомбинации в ходе амплификации ДНК плазмиды в бактериальной клетке-хозяине.
10. Способ понижения рекомбинации ДНК плазмиды, включающей последовательность ДНК, кодирующую молекулу мРНК, и расположенный ниже от нее по цепи хвост поли(А), в ходе амплификации в бактериальной клетке-хозяине, причем указанное понижение достигают путем замены части последовательности ДНК, которая кодирует хвост поли(А), последовательностью нуклеотидов, которая кодирует модифицированный хвост поли(А), согласно описанному в п. 1 (ii) и в пп. 2-5.
11. Способ получения полирибонуклеотида, включающего последовательность, которая кодирует аминокислотную последовательность и модифицированный хвост поли(А), которая кодируется нуклеотидной последовательностью согласно описанному в п. 1 (ii) и в пп. 2-5, указанный способ включает стадию получения указанного полирибонуклеотида путем транскрипции in vitro плазмидной ДНК по любому из пп. 1-5.
12. Способ по п. 11, в котором указанный полирибонуклеотид вырабатывается путем транскрипции in vitro в присутствии немодифицированных и/или модифицированных нуклеотидов.
13. Полирибонуклеотид, получаемый способом по п. 11 или 12.
14. Полирибонуклеотид по п. 13, в котором полирибонуклеотид включает один или несколько типов модифицированных нуклеотидов.
15. Фармацевтическая композиция, содержащая полирибонуклеотид по любому из пп. 13 и 14, вместе с фармацевтически приемлемым носителем.