СПОСОБ ИДЕНТИФИКАЦИИ ГЕНОТИПОВ ДРЕВЕСНЫХ РАСТЕНИЙ

1. Способ идентификации генотипов древесных растений на основе маркеров, включающий отбор пробы каждого исследуемого генотипа, выделение ДНК из каждого генотипа отдельно стандартным методом, отбор и синтез праймеров для полимеразной цепной реакции, проведение амплификации ДНК поочередно с каждым праймером, разделение продуктов амплификации на фракции методом электрофореза в геле, визуализацию продуктов амплификации в лучах ультрафиолетового света, определение длин аллелей по каждому генотипу с помощью стандартного маркера, выбор присущих для каждого генотипа профилей в качестве его маркера, отличающийся тем, что амплификацию ДНК проводят по следующему набору ISSR локусов с использованием праймеров:
ISSR локус
Последовательность праймеров
PR4
CACACACACACAAGCT
PR5
CACACACACACAAGG
PR6
CACACACACACAGT
PR7
САСАСАСАСАСААС
PR11
AGAGAGAGAGAGAGAGT
PR14
AGAGAGAGAGAGAGAGGCT
причем температура отжига праймеров от 55 до 65°C.
2. Способ по п.1, отличающийся тем, что идентификация проводится на основе маркеров, отражающих изменчивость участков ДНК, рассеянных по всему геному.
3. Способ по п.1, отличающийся тем, что отбор пробы каждого исследуемого генотипа проводят путем высверливания в стволе дерева 5-10 кернов стерильным сверлом диаметром 5-10 мм на глубину 1-1,5 см.
4. Способ по п.1, отличающийся тем, что выделение ДНК осуществляют из древесной стружки.
5. Способ по п.1, отличающийся тем, что производят синтез праймеров представляющие собой комплементарные к повторяющимся элементам генома олигонуклеотиды с произвольной парой оснований на 3'-конце.
6. Способ по п.1, отличающийся тем, что полимеразную цепную реакцию проводят при следующем режиме: предварительная денатурация - 5 мин; 45 циклов: денатурация - 30 с, отжиг праймеров - 45 с, элонгация - 2 мин; финальная элонгация - 7 мин.
7. Способ по п.1, отличающийся тем, что в результате электрофореза получают присущий для каждого генотипа профиль (ISSR - фингерпринт) в качестве его маркера, отражающий дискретное расположение 3 и более фрагментов ДНК различной длины в агарозном геле.
8. Способ по п.1, отличающийся тем, что составляют формулу для каждого генотипа путем анализа профиля (ISSR - фингерпринта) и присвоения обозначения «1» каждому присутствующему в геле фрагменту ДНК и обозначения «0» каждому отсутствующему фрагменту ДНК.
9. Способ по п.1, отличающийся тем, что идентификацию генотипов проводят путем выявления идентичных профилей (ISSR - фингерпринта), имеющих набор совпадающих по длине фрагментов ДНК, и сравнения формул, присущих для каждого генотипа.
10. Способ по п.1, отличающийся тем, что проверка идентичности генотипов осуществляется методом кластерного анализа.