СПОСОБ СБОРА БИОМАТЕРИАЛА ДЛЯ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ ПРИ ПРОВЕДЕНИИ СТОМАТОЛОГИЧЕСКОГО ОБСЛЕДОВАНИЯ ПАЦИЕНТОВ С МУКОВИСЦИДОЗОМ
METHOD FOR COLLECTING BIOMATERIAL FOR MICROBIOLOGICAL RESEARCH DURING DENTAL EXAMINATION OF PATIENTS WITH CYSTIC FIBRIOSIS

Область техники, к которой относится изобретение
Изобретение относится к медицине, а именно к стоматологии и микробиологии, и может быть использовано для сбора биоматериала для микробиологического исследования при проведении стоматологического обследования пациентов с муковисцидозом.
Уровень техники
Известны способы взятия проб материала для изучения микроорганизмов полости рта при котором материал берут тонкими ватными турундами на корневых иглах или плотно скрученными из ваты шариками диаметром от 2 до 5 мм, предварительно простерилизованными в чашках Петри или бумажных пакетиках суховоздушным методом; способ взятия проб материала для микробиологических исследований полости рта и устройство для его осуществления; способ исследования тканей пародонта; способ сбора и первичного посева жидкости назального лаважа от пациентов с муковисцидозом для микробиологического исследования.
Известен способ взятия проб материала для микробиологических исследований полости рта и устройство для его осуществления. Суть способа заключается в том, что пробы на микрофлору берут с локальных участков слизистой оболочки и зубных протезов непосредственно в стерилизованные металлические гильзы с находящейся там питательной средой. Устройство для взятия проб материала для микробиологических исследований полости рта содержит простерилизованную емкость, которая выполнена в виде металлической гильзы, помещенной в гильзодержатель, соединенный с головкой, ручкой, при этом ручка соединена с хвостовиком головки резьбой с возможностью осевого поворота, гильзодержатель прикреплен к головке шарнирно. Головка выполнена упругой с возможностью регулировки трения в шарнире, а гильза имеет элемент локализации пробы в виде носика с острыми краями. Шарнирные соединения головки с гильзодержателем выполнены в виде полукольцевой упругой пластины, внутри которой на двух полуосях подвешен гильзодержатель, при этом одна из осей снабжена резьбой регулировочным винтом [Патент РФ № 2101692].
Недостатками данного способа являются технические сложности, связанные с необходимостью наличия указанного в способе аппарата для сбора проб, а также расходных материалов для него.
Известен способ исследования тканей пародонта. Суть способа заключается в том, что осуществляют забор десневой жидкости из десневых карманов и под опорными элементами несъемных конструкций, при их наличии, с помощью полоски из высокогигроскопичного поролона с развитой впитывающей поверхностью и размерами: длина - 7-10 мм, ширина - 1,8-2,2 мм, толщина - 0,8-1,5 мм. Захват поролоновых полосок осуществляют пинцетом стоматологическим, содержащим две пружинящие бранши с захватными губками в виде округлых пластинок на их рабочих концах и имеющих продолжение бранш в виде шеек с поперечными размерами, меньшими поперечных размеров бранш, и ориентированием обеих шеек в одну сторону под углом, величина которого ограничена величинами от 100° до 145° по отношению к горизонтальному направлению бранш. На предметные стекла помещают несколько нативных проб десневой жидкости, фиксируют цитограммы отпечатков в нескольких полях зрения и обеспечивают сохранность их изображений для последующих сравнений с образцами из библиотеки эталонов ЭВМ [Патент РФ № 2299437].
Недостатками данного способа является отсутствие возможности проведения микробиологического исследования исследуемых образцов, ограничение возможностей исследования рамками микроскопического метода, а также необходимостью наличия программного обеспечения для ЭВМ.
2
Известен способ сбора и первичного посева жидкости назального лаважа от пациентов с муковисцидозом для микробиологического исследования. Суть способа заключается в том, что полость носа промывается стерильным 1,5-2% раствором NaCl с помощью индивидуального назального душа с последующим сбором свободно вытекающей лаважной жидкости в стерильный одноразовый контейнер. Собранный материал транспортируется в лабораторию не позднее 2 ч после сбора и вортексирируется. Посев 200 мкл собранного материала производят стерильным тампоном на 5 питательных сред, включающих 5% кровяной агар, шоколадный агар, универсальную хромогенную среду, селективную среду для Burkholderia cepacia (OFPBL-агар), а также агар Сабуро с использованием техники посева «газоном». Чашки с 5% кровяным агаром, универсальной хромогенной средой инкубируются в термостате при температуре 37°С в течение 24-48 ч с ежедневным просмотром посевов. Чашки с шоколадным агаром инкубируются при 35°С в атмосфере 5-7% СО в течение 24-48 ч с ежедневным просмотром посевов. Засеянные чашки с селективной средой для Burkholderia cepacia (OFPBL-агар) и агаром Сабуро инкубируются 24-48 ч при температуре 37°С, далее инкубируются до 14 сут. при комнатной температуре с ежедневным просмотром посевов, их последующей идентификацией и пересчетом КОЕ на 1 мл лаважной жидкости. Изобретение обеспечивает адекватное получение биоматериала из жидкости назального лаважа больных муковисцидозом с последующей качественной и количественной оценкой микробиоценоза назальных пазух пациента[Патент РФ № 2659155].
Недостатками данного метода является отсутствие возможности сбора материала из локусов полости рта пациентов с мковисцидозом.
За прототип принимается способ взятия проб материала для изучения микроорганизмов полости рта, при котором материал берут тонкими ватными турундами на корневых иглах или плотно скрученными из ваты шариками диаметром от 2 до 5 мм, предварительно простерилизованными в чашках Петри или бумажных пакетиках суховоздушным методом. Стандартные условия стерилизации: 165-170°C (не выше, иначе слои бумаги и ваты могут стать хрупкими) в течение 1 ч, или 155-160°C в течение 2 ч. Турунду или ватный шарик непосредственно перед взятием пробы слегка увлажняют прикосновением к стерильному физраствору в пробирке. Немедленно после взятия пробы турунду, снятую пинцетом с корневой иглы, ватный шарик опускают в пробирку с питательной средой. Далее изучают микробную флору слюны [журнал "Стоматология", N 4, М.1971, с. 57-60, авт. Кускова В.Ф. Ребреева Л.И.].
Недостатками данного метода является технически сложная подготовка инструмента для взятия проб, а также отсутствие схемы сбора материала при стоматологическом обследовании пациентов с муковисцидозом с четким обозначением исследуемых локусов для сбора проб.
Раскрытие изобретения
Capnocytophaga
., Eikenella
, Veilonella
., Actinomyces
., Aggregatibacter
, Streptococcus
Porphyromonas
.,
Pseudomonas
, Burkholderia
, Acinetobacter
, Stenotrophomonas
, Achromobacter
, Chryseobacterium
, Brevundimonas
, Inquilinus
, Kingella
, Staphylococcus
, Mycobacterium
Задачей изобретения является улучшение диагностики инфекционных стоматологических осложнений путем сбора материала с восьми различных локусов полости рта для повышения качества обследования у пациентов с муковисцидозом. Технический результат изобретения заключается в том, что заявленный способ сбора материала позволяет повысить вероятность выделения возбудителей, имеющих значение как в развитии стоматологических заболеваний, таких как sppspp.sppsppsppspp., sppтак и выявить в полости рта потенциально возможные локусы для первичной адаптации значимых для развития бронхолегочных осложнений при муковисцидозе возбудителей, таких как  spp. spp. spp. spp. spp. spp. spp. spp. spp. spp. spp.
материала с восьми локусов полости рта
Это достигается тем, что в отличие от известных способов сбора биоматериала для микробиологического исследования при проведении стоматологического обследования пациентов с муковисцидозом, производится взятие , включая: жидкость десневой борозды или пародонтнального кармана, секрет выводных протоков правых и левых околоушной и подъязычной слюнных желез, поверхности слизистой оболочки щеки, спинки языка, материал фрагментов зубных отложений.
Осуществление изобретения
Сущность предложенного метода заключается в следующем: с поверхности слизистой оболочки щеки, с поверхности спинки языка стерильными пластиковыми зондами с ватным тампоном вращательным движением производится сбор биоматериала; с щечной поверхности первых моляров верхней челюсти и язычной поверхности центральных резцов нижней челюсти стоматологическим скалером производится снятие минерализованных и неминерализованных зубных отложений; выделенный из выводных протоков околоушных и подъязычных слюнных желез слева и справа секрет собирается стерильным пластиковыми зондами; эндодонтическим бумажным штифтом размера 15.02 производится сбор десневой жидкости или экссудата из пародонтального кармана; все собранные пробы биоматериала помещаются в предварительно промаркированные пробирки с жидкой тиогликолевой средой.
Предлагаемый способ позволяет получать более точные качественные и количественные характеристики состояния микробиоценоза полости рта пациентов с муковисцидозом для улучшения качества стоматологического обследования, прогнозирования рисков развития стоматологических заболеваний, а также проведения комплекса профилактических мероприятий у данной группы пациентов.
Это может быть необходимо для проведения регулярного стоматологического мониторинга пациентов с муковисцидозом, как находящихся в группе риска по развитию инфекционных осложнений полости рта ввиду генетических особенностей заболевания, а также осложнений проводимой терапии.
Capnocytophaga
, Eikenella
, Veilonella
, Actinomyces
, Aggregatibacter
., Streptococcus
Porphyromonas
.,
Pseudomonas
, Burkholderia
, Acinetobacter
, Stenotrophomonas
, Achromobacter
, Chryseobacterium
, Brevundimonas
, Inquilinus
, Kingella
, Staphylococcus
, Mycobacterium
В предложенном способе сбора биоматериала для микробиологического исследования при проведении стоматологического обследования пациентов с муковисцидозом предусмотрены следующие отличия: использование расширенного перечня локусов для сбора материала, включающих в себя жидкость десневой борозды или пародонтального кармана, секрет выводных протоков правых и левых околоушной и подъязычной слюнных желез, поверхности слизистой оболочки щеки, спинки языка, материал фрагментов зубных отложений позволяет выявлять при проведении стоматологического обследования не только возбудителей, имеющих значение в развитии стоматологических заболеваний, таких как spp.spp.spp.spp.sppspp., sppно и выявить в полости рта потенциально возможные локусы для первичной адаптации значимых для развития бронхолегочных осложнений при муковисцидозе возбудителей, таких как  spp. spp. spp. spp. spp. spp. spp. spp. spp. spp. spp.
Осуществление предлагаемого способа можно продемонстрировать на следующих примерах пациентов.
Предлагаемый нами способ был апробирован на 45 пациентах с муковисцидозом Самарской области.  В результате проведенного исследования были получены следующие результаты.
Локус
Микрофлора, имеющая значение в развитии стоматологических заболеваний (в %, доля  пациентов)
Микрофлора, имеющая значение при муковисцидозе(в %, доля  пациентов)
<b>ОТДЕЛЯЕМОЕ ДЕСНЕВОЙ БОРОЗДЫ</b>
48,9%
17,8%
<b>СЕКРЕТ ВЫВОДНОГО ПРОТОКА ПРАВОЙ ПОДЪЯЗЫЧНОЙ СЛЮННОЙ ЖЕЛЕЗЫ</b>
37,8%
20,0%
<b>СЕКРЕТ ВЫВОДНОГО ПРОТОКА ЛЕВОЙ ПОДЪЯЗЫЧНОЙ СЛЮННОЙ ЖЕЛЕЗЫ</b>
42,2%
15,6%
<b>СЕКРЕТ ВЫВОДНОГО ПРОТОКА ПРАВОЙ ОКОЛОУШНОЙ СЛЮННОЙ ЖЕЛЕЗЫ</b>
40,0%
11,1%
<b>СЕКРЕТ ВЫВОДНОГО ПРОТОКА ЛЕВОЙ ОКОЛОУШНОЙ СЛЮННОЙ ЖЕЛЕЗЫ</b>
33,3%
13,3%
<b>МАТЕРИАЛ ЗУБНЫХ ОТЛОЖЕНИЙ</b>
26,7%
8,9%
<b>МАЗОК СО СПИНКИ ЯЗЫКА</b>
22,2%
33,3%
<b>МАЗОК СО СЛИЗИСТОЙ ОБОЛОЧКИ ЩЕКИ</b>
26,7%
31,1%
<b>Итого суммарно при использовании способа посева с 8 локусов</b>
<b>64,4%</b>
<b>55,6%</b>
Из представленной таблицы видно, что использование предлагаемого нами способа повышает вероятность выявления клинически значимых штаммов микроорганизмов у пациентов с муковисцидозом, что способствует улучшению качества обследования пациентов с муковисцидозом.
Таким образом, использование предлагаемого нами способа сбора материала для микробиологического исследования позволяет повысить вероятность выявления микроорганизмов, имеющих значение в развитии стоматологических заболеваний, а также возбудителей бактериальных осложнений дыхательных путей при муковисцидозе.