КОМБИНАЦИЯ РЕГОРАФЕНИБА И ИНГИБИТОРОВ PD-1/PD-L1(2) ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ РАКА
COMBINATION OF REGORAFENIB AND PD-1/PD-L1(2) INHIBITORS FOR THE TREATMENT OF CANCER

Настоящее изобретение относится к фармацевтическим композициям и комбинациям, содержащим регорафениб или его гидрат, сольват, метаболит или фармацевтически приемлемую соль или полиморфную форму, и ингибитор PD-1/PD-L1(2) для лечения, профилактики или контролирования заболеваний и состояний, в том числе гиперпролиферативных расстройств, таких как рак, у людей и других млекопитающих
Регорафениб, который представляет собой 4{4-[3-(4-хлор-3-трифторметилфенил)-уреидо]-3-фторфенокси}-пиридин-2-карбоновой кислоты метиламид, соединение формулы (I),
является высокоактивным противораковым, антиангиогенным и антиметастатическим агентом, который обладает различными видами активности, включая ингибирующую активность в отношении сигнальных молекул VEGFR, PDGFR, киназ raf, р38 и/или flt-3 и может быть использовано при лечении различных заболеваний и состояний, таких как гиперпролиферативные расстройства, такие как раковые заболевания, опухоли, лимфомы, саркомы и лейкозы, как описано в WO 2005/009961. В настоящее время он одобрен для лечения колоректального рака, желудочно-кишечных стромальных опухолей и рака печени в определенных условиях. Более того соли соединения формулы (I), такие как гидрохлорид, мезилат и фенилсульфонат, упоминаются в документе WO 2005/009961. Моногидрат соединения формулы (I) упоминается в документе WO 2008/043446. Усовершенствованный способ производства регорафениба с высокой степенью чистоты описан в документе WO 2011/128261.
В последнее время сигнальный путь PD-1/PD-L1(2) стал важным регулятором активности иммунной системы. При раке опухолевые клетки экспрессируют PD-L1, лиганд PD-1, с помощью которого они могут избежать уничтожения иммунной системой хозяина. Недавно были разработаны ингибиторы PD-1 и его лигандов PD-L1 и PD-L2, которые вмешиваются в этот механизм иммунной супрессии и показали удивительную клиническую эффективность, путем увеличения общей выживаемости пациентов с различными типами рака. Некоторые из этих ингибиторов были одобрены к применению при различных видах рака, таких как меланома, НМРЛ, плоскоклеточный рак головы и шеи (HNSCC), почечно-клеточный рак (RCC), рак мочевого пузыря и неходжкинская лимфома (NHL). Длится большое количество дополнительных клинических исследований с другими видами рака и/или в сочетании с различными другими противоопухолевыми агентами для повышения терапевтической активности (Iwai et al., J. Biomedical Sci. (2017) 24:26, 1-11; Sweis and Luke, Pharm. Res. (2017) 120, 1-9; Bersanelle and Buti, World Journal of Clinical Oncology, (2017) 8(1), 37-53; Park et al., Arch. Pharm. Res. (2016) 39, 1577-1587).
Ингибиторы PD-1 являются биопрепаратами, в первую очередь, иммуноглобулинами подкласса G, которые связываются с белком запрограммированной клеточной смерти 1, также известным как PD-1, и блокируют его активность. Известными ингибиторами PD-1 являются ниволумаб (Opdivo, BMS-936558, MDX1106), пембролизумаб (Keytruda, МК-3475, ламбролизумаб), пидилизумаб (СТ-011), PDR-001, JS001, STI-A1110, АМР-224 и АМР-514 (MEDI0680). Последние два являются слитыми белками PD-L2. (Iwai et al., J. Biomedical Sci. (2017) 24:26, 1-11; Menon et al., Cancers (2016) 8, 106, 1-21)
PD-1 (CD279) представляет собой рецепторный белок, который экспрессируется как мономер на поверхности различных иммунных клеток, главным образом, на активированных CD4+ и CD8+ Т-клетках, на макрофагах и на активированных В-клетках, но также был найден на клетках натуральных киллеров (НК) и антиген-представляющих клеток (АПК). Внеклеточный домен данного мембранного белка типа I состоит из одиночного IgV-подобного домена, за которым следует трансмембранный домен и цитоплазматическая область, которая содержит иммунорецепторный тирозинсодержащий ингибирующий и активирующий мотивы (ITIM и ITSM). После связывания со своим лигандом PD-L1 или PD-L2, фосфатаза SHP-2 рекрутируется, что дефосфорилирует киназу ZAP70, основной компонент сигнального комплекса рецептора Т-клеток (TCR). Это отключает сигнальную систему TCR и ингибирует цитотоксическую активность Т-клеток, продукцию и пролиферацию ими интерферона. Кроме того, лигирование PD-1 активирует Е3-убиквитин-лигазы CBL-в и c-CBL, что приводит к снижению активности рецептора Т-клетки. PD-1 кодируется геном Pdcdl в организме человека и транскрипционно активируется факторами транскрипции NFATc1, IRF9 и FoxO1, которые активируются при активации TCR и с помощью сигналов Т-клеточного истощения, таких как трансформирующий фактор роста β и эомесодермин. Активации индуцированной экспрессии PD-1 предполагает, что этот рецептор регулирует скорее более позднюю стадию иммунного ответа в периферической ткани (эффекторную фазу, вторичный иммунный ответ и хроническую инфекцию). Он отличается от CTLA-4, другого белка контрольной точки иммунной системы, который является более активным в начале фазы примирования иммунного ответа, а ингибиторы CTLA-4 (например, ипилимумаб), по всей видимости, менее хорошо переносятся пациентами. (Iwai et al, J. Biomedical Sci. (2017) 24:26, 1-11; Sweis and Luke, Pharm. Res. (2017) 120, 1-9; Park et al., Arch. Pharm. Res. (2016) 39, 1577-1587).
Ингибиторы PD-L1 являются биопрепаратами, в первую очередь, иммуноглобулинами подкласса G, которые связываются с лигандом PD-1 и блокируют его активность. Известными ингибиторами PD-L1 являются атезолизумаб (Tecentriq, MPDL3280A), дурвалумаб (MEDI4736), авелумаб (MSB0010718C), BMS-936559 (MDX1105) и LY3300054.
PD-L1 (В7-Н1, CD274) является одним из лигандов PD-1. PD-L1 широко экспрессируется на клеточной поверхности многих различных популяций иммунных клеток (например, Т-, В-, NK-клеток, ДК, моноцитов, макрофагов), на активированных эндотелиальных клетках сосудов, а также на эпителиальных клетках, включая опухолевые клетки различного происхождения таких как меланома, раковые заболевания легких, яичников и толстой кишки. Экспрессия PD-L1 повышается за счет про-воспалительных цитокинов таких как интерферон, интерферон типа I и цепочечных цитокинов (IL-2, -4, -7, -9, -15, -21). Как описано выше, активация Т-клеток ингибируется при взаимодействии с PD-1 и, таким образом, ответ иммунной системы затухает.(Park et al., Arch. Pharm. Res. (2016) 39, 1577-1587; Menon et al., Cancers (2016) 8, 106, 1-21).
PD-L2 (CD273, B7-DC) является вторым лигандом, идентифицированым как связывающийся с PD-1. Это также мембраносвязанный белок и его экспрессия ограничена небольшим подмножеством иммунных клеток (ДК и макрофагов), и происходит в нескольких видах опухолей, таких как раковые заболевания печени, шейки матки и пищевода. В настоящее время PD-L2, используемые как слитые белки, находятся в стадии разработки в качестве терапевтического средства для блокировки активности PD-1 и в конечном счете ингибиторы PD-L2 могут также использоваться в качестве терапевтических агентов.
В первом случае ингибиторы PD-1/PD-L1 включены в состав биопрепаратов антител. Однако более поздние исследования привели к открытию других типов ингибиторов PD-1/PD-L1(2), таких как низкомолекулярные вещества и пептиды. Примерами описанных низкомолекулярных ингибиторов PD-1/PD-L1 являются BMS-202, BMS-8, BMS-37 (Zak et al., Structure. 2017 Aug 1; 25(8):1163-1174; Guzik et al., J Med Chem. 2017 Jul 13; 60(13):5857-5867), CA-170, CA-137 (симпозиум Tuck D ICI март 2017) и соединения кофеилхинной кислоты (Han et al., Anal Biochem. 2018 Apr 15; 547:52-56). Примеры пептидных ингибиторов описаны в Maute et al., (Proc Natl Acad Sci USA. 2015 Nov 24; 112(47):E6506-14). Кроме того, низкомолекулярные ингибиторы, которые влияют на транскрипцию PD-1, такие как ингибитор GSKa/β SB415286, также были идентифицированы (Taylor et al., Cancer Res. 2018 Feb 1; 78(3):706-717).
В документе WO 2015/11993 описана комбинация ингибиторов VEGF и антагонистов PD-1 для лечения рака.
Объектом настоящего изобретения является усовершенствование терапии рака путем введения регорафениба в комбинации с ингибитором PD-1/PD-L1(2).
Неожиданно комбинация регорафениба и ингибитора PD-1/PD-L1(2) показывает значительное улучшение эффективности по сравнению с суммарной эффективностью монотерапий, в частности, в значительное улучшении противоопухолевой и/или антиметастатической эффективности. Кроме того, может быть улучшен профиль побочных эффектов (например, ладонно-подошвенный синдром, повышенное кровяное давление, усталость, диарея и воспаление слизистой оболочки).
Настоящее изобретение относится к комбинации, содержащей регорафениб, который представляет собой соединение формулы (I)
или его гидрат, сольват, метаболит или фармацевтически приемлемую его соль, или его полиморфную форму, и ингибитор PD-1/PD-L1(2).
Термин «соединение формулы (I)» или «регорафениб» относится к 4-{4-[({[4-хлор-3-(трифторметил)фенил]амино}карбонил)амино]-3-фторфенокси}-N-метилпиридин-2-карбоксамиду как показано в формуле (I).
Сольваты для целей настоящего изобретения являются такими формами соединений или их солей, в которых молекулы растворителя образуют стехиометрический комплекс в твердом состоянии, и включают, например, воду, этанол и метанол, но не ограничиваются ими.
Гидраты являются специфической формой сольватов, в которых молекула растворителя является водой. Гидраты соединений по данному изобретению или их соли являются стехиометрическими композициями соединений или солей с водой, такими как, например, геми-, моно- или дигидраты. Предпочтительным является моногидрат регорафениба.
+
+
+
+2
+2
2
Соли для целей настоящего изобретения предпочтительно являются фармацевтически приемлемыми солями соединений согласно настоящему изобретению. Подходящие фармацевтически приемлемые соли хорошо известны специалистам в данной области техники и включают соли неорганических и органических кислот, таких как соляная кислота, бромистоводородная кислота, серная кислота, фосфорная кислота, метансульфоновая кислота, трифторметансульфоновая кислота, бензолсульфоновая кислота, р-толуолсульфоновая кислота (тозилат), 1-нафталинсульфоновая кислота, 2-нафталинсульфоновая кислота, уксусная кислота, трифторуксусная кислота, яблочная кислота, винная кислота, лимонная кислота, молочная кислота, щавелевая кислота, янтарная кислота, фумаровая кислота, малеиновая кислота, бензойная кислота, салициловая кислота, фенилуксусная кислота и миндальная кислота. Кроме того, фармацевтически приемлемые соли включают соли неорганических оснований, такие как соли, содержащие щелочные катионы (например, Li, Na или K), щелочноземельные катионы (например, Mg, Са или Ва), катион аммония, а также кислые соли органических оснований, в том числе алифатический и ароматический замещенный аммоний, и четвертичные аммониевые катионы, такие как те, что получены протонированием или пералкилированием триэтиламина, N,N-диэтиламина, N,N-дициклогексиламина, лизина, пиридина, N,N-диметиламинопиридина (DMAP), 1,4-диазабицикло[2.2.2]октана (DABCO), 1,5-диазабицикло[4.3.0]нон-5-ена (DBN) и 1,8-диазабицикло[5.4.0]ундец-7-ена (DBU). Предпочтительным является гидрохлоридные, мезилатные или фенилсульфонатные соли регорафениба.
Метаболиты регорафениба для целей настоящего изобретения, включают 4-[4-({[4-хлор-3-(трифторметил)фенил]карбамоил}амино)-3-фторфенокси]-]N-метилпиридин-2-карбоксамид 1-оксид, 4-[4-({[4-хлор-3-(трифторметил)фенил]карбамоил}амино)-3-фторфенокси]-N-(гидроксиметил)пиридин-2-карбоксамид, 4-[4-({[4-хлор-3-(трифторметил)фенил]карбамоил}амино)-3-фторфенокси]пиридин-2-карбоксамид и 4-[4-({[4-хлор-3-(трифторметил)фенил]карбамоил}амино)-3-фторфенокси]pyridine-2-карбоксамид 1-оксид.
Предпочтительными являются регорафениб и моногидрат регорафениба в качестве соединения по настоящему изобретению.
Соединения по изобретению могут быть получены с использованием известных химических реакций и процедур.
Термин «ингибитор PD-1/PD-L1(2)» относится к анти-PD-l антителу, включая ниволумаб (Opdivo, BMS-936558, MDX1106), пембролизумаб (Keytruda, MK-3475, ламбролизумаб), пидилизумаб (СТ-011), PDR-001, JS001, STI-A1110, АМР-224 и АМР-514 (MEDI0680), но не ограничиваясь ими, или относится к анти-PD-L1 антителу, включая атезолизумаб (Tecentriq, MPDL3280A), дурвалумаб (MEDI4736), авелумаб (MSB0010718C), BMS-936559 (MDX1105) и LY3300054, но не ограничиваясь ими, или относится к анти-PD-L2 антителу.
Предпочтительным является ниволумаб или пембролизумаб, или пидилизумаб в качестве анти-PD-1 антитела.
Кроме того, атезолизумаб или дурвалумаб, или авелумаб являются предпочтительными в качестве антитела анти-PD-L1.
Термин «ингибитор PD-1/PD-L1(2)» также относится к низкомолекулярным веществам и пептидам, включая BMS-202, BMS-8, BMS-37, соединениями кофеилхинной кислоты и ингибитора GSKa/β SB415286, но не ограничиваясь ими.
Способ лечения
Настоящее изобретение также относится к способу использования комбинации и композиций на ее основе для лечения гиперпролиферативных расстройств у млекопитающих. Этот способ включает введение млекопитающему, нуждающемуся в этом, в том числе человеку, количества комбинации, которое является эффективным для лечения расстройства. Гиперпролиферативные заболевания включают солидные опухоли, такие как раковые заболевания молочной железы, дыхательного пути, мозга, половых органов, желудочно-кишечного тракта, мочевыводящего тракта, глаза, печени, кожи, головы и шеи, щитовидной железы, паращитовидной железы и их отдаленные метастазы. Эти расстройства включают также лимфомы, саркомы и лейкозы.
Примеры рака молочной железы включают инвазивную протоковую карциному, инвазивную лобулярную карциному, протоковую карциному in situ и лобулярную карциному in situ, но не ограничиваются ими.
Примеры раковых заболеваний дыхательных путей включают мелкоклеточный и немелкоклеточный рак легких, а также бронхиальную аденому и плевролегочную бластому, но не ограничиваются ими.
Примеры раковых заболеваний мозга включают глиому ствола мозга и глиому гипоталамуса, астроцитому мозжечка и церебральную астроцитому, медуллобластому, эпендимому, а также нейроэктодермальную и шишковидную опухоли, но не ограничиваются ими.
Опухоли мужских репродуктивных органов включают рак простаты и рак яичка, но не ограничиваются ими. Опухоли женских репродуктивных органов включают рак эндометрия, шейки матки, яичников, влагалища и вульвы, а также саркому матки, но не ограничиваются ими.
Опухоли желудочно-кишечного тракта включают раковые заболевания анального канала, колоректальный рак, прямой кишки, пищевода, желчного пузыря, желудка, поджелудочной железы, ректальный рак, тонкого кишечника и слюнных желез, но не ограничиваются ими.
Предпочтительным является колоректальный рак.
Предпочтительными также являются желудочно-кишечные стромальные опухоли (GIST).
Опухоли мочевыводящего тракта включают раковые заболевания мочевого пузыря, полового члена, почек, почечных лоханок, мочеточников и рак уретры, но не ограничиваются ими.
Раковые заболевания глаз включают внутриглазную меланому и ретинобластому, но не ограничиваются ими.
Примеры раковых заболеваний печени включают гепатоцеллюлярную карциному (карциномы клеток печени с фиброламеллярным вариантом или без него), холангиокарциному (карцинома внутрипеченочных желчных протоков) и смешанную гепатоцеллюлярную холангиокарциному, но не ограничиваются ими.
Предпочтительным является рак клеток печени.
Раковые заболевания кожи включают плоскоклеточную карциному, саркому Капоши, злокачественную меланому, рак кожи из клеток Меркеля и немеланомный рак кожи, но не ограничиваются ими.
Раковые заболевания головы и шеи включают рак гортани/гипофарингеальный рак/рак носоглотки/рак ротоглотки и рак губы и ротовой полости, но не ограничиваются ими.
Лимфомы включают СПИД-ассоциированная лимфому, неходжкинскую лимфому, кожную Т-клеточную лимфому, болезнь Ходжкина, лимфому центральной нервной системы, но не ограничиваются ими.
Саркомы включают саркому мягких тканей, остеосаркому, злокачественную фиброзную гистиоцитому, лимфосаркому и рабдомиосаркому, но не ограничиваются ими.
Лейкозы включают острый миелоидный лейкоз, острый лимфобластный лейкоз, хронический лимфоцитарный лейкоз, хронический миелоидный лейкоз и лейкоз ворсистых клеток, но не ограничиваются ими.
Эти расстройства были хорошо охарактеризованы в организме человека, но существуют также с аналогичной этиологией у других млекопитающих, и их можно лечить путем введения фармацевтических композиций по настоящему изобретению.
На основе стандартных лабораторных методов, известных для оценки соединений, полезных для лечения гиперпролиферативных расстройств, с помощью стандартных тестов на токсичность и с помощью стандартных фармакологических анализов для определения лечения состояний, указанных выше, у млекопитающих, а также путем сравнения этих результатов с результатами известных лекарственных средств, которые используются для лечения этих состояний, эффективные дозы соединений по данному изобретению могут быть легко определены для лечения каждого требуемого заболевания. Количество активного ингредиента для введения при лечении одного из этих состояний может изменяться в широких пределах в зависимости от таких факторов, как используемое конкретное соединения и единицы дозирования, способ введения, период лечения, возраст и пол пациента, которого лечат, а также природа и степень состояния, которое лечат.
Настоящее изобретение также относится к применению соединения по данному изобретению для приготовления фармацевтических композиций для лечения вышеуказанных расстройств.
Введение
Комбинации по настоящему изобретению можно вводить в любой форме любым эффективным способом, в том числе, например, перорально, парентерально, энтерально, внутривенно, внутрибрюшинно, топически, трансдермально (например, с использованием любого стандартного пластыря), офтальмологически, интраназально, местно, неорально, например аэрозолем, ингаляцией, подкожно, внутримышечно, трансбуккально, сублингвально, ректально, вагинально, внутриартериально и интратекально и т.д. Их можно вводить отдельно или в сочетании с любым ингредиентом(ами), активным или неактивным.
Предпочтительным является пероральное введение регорафениба, например, в виде таблетки.
Предпочтительно ингибитор PD-1/PD-L1(2) можно вводить внутривенно. Комбинации по настоящему изобретению могут быть преобразованы известным способом в обычные составы, которые могут быть жидкими или твердыми составами, например, нормальными и энтеросолюбильными таблетками, капсулами, пилюлями, порошками, гранулами, эликсирами, настойками, растворами, суспензиями, сиропами, твердыми и жидкими аэрозолями и эмульсиями, но не ограничиваясь ими.
Как правило, применение комбинаций по настоящему изобретению, упомянутых ранее, служит для:
(1) лучшей эффективности в снижении роста опухоли или даже устранение опухоли по сравнению с введением любого агента отдельно,
(2) обеспечения введения меньших количеств вводимых химиотерапевтических агентов,
(3) обеспечения химиотерапевтического препарата для лечения, который хорошо переносится пациентом с меньшим количеством вредных фармакологических осложнений, чем наблюдалось с химиотерапией одним агентом и некоторыми другими комбинированными терапиями,
(4) обеспечения лечения более широкого спектра различных видов рака у млекопитающих, особенно у людей,
(5) обеспечения более высокого уровня ответа среди пациентов, которых лечат,
(6) обеспечения более длительного времени выживания среди пациентов по сравнению со стандартными процедурами химиотерапии,
(7) обеспечения более длительного времени для прогрессии опухоли, и/или
(8) эффективности и переносимости результатов, по крайней мере так же хорошо, как те из агентов, которые используются отдельно, по сравнению с известными случаями, когда другие комбинации агентов против рака производят ингибирующие эффекты.
«Комбинация» для целей настоящего изобретения означает не только дозированную форму, которая содержит все компоненты (так называемые фиксированные комбинации), а также комбинированные наборы, содержащие компоненты, отделенные друг от друга, а также компоненты, которые вводят одновременно или последовательно, на протяжении использования для профилактики или лечения той же болезни.
Количество вводимого активного ингредиента может изменяться в широких пределах в зависимости от таких факторов, как используемое конкретное соединения и единицы дозирования, способ и время введения, период лечения, возраст, пол и общее состояние пациента, подвергаемого лечению, природы и степени состояния, подвергаемого лечению, скорости метаболизма препарата и выведения, потенциальных комбинаций лекарственных средств и взаимодействий препаратов, и тому подобное.
Аспект настоящего изобретения, представляющий особый интерес, представляет собой комбинацию, включающую введение регорафениба в количестве от 4 до 400 мг, предпочтительно от 10 до 200 мг, более предпочтительно от 10 до 100 мг и введение ингибитора PD-1/PD-L1(2) в количестве от 0,005 до 10 мг/кг, предпочтительно от 1 до 10 мг/кг веса пациента.
В соответствии с настоящим изобретением регорафениб и ингибитор PD-1/PD-L1(2) могут быть введены одновременно.
В еще одном аспекте настоящего изобретения регорафениб вводят первым с последующим введением ингибитора PD-1/PD-L1(2).
В качестве альтернативы ингибитор PD-1/PD-L1(2) вводят первым с последующим введением регорафениба, что является предпочтительным способом введения.
Фармацевтическую композицию по настоящему изобретению вводят один или более раз, предпочтительно до трех, более предпочтительно до двух раз в день. Предпочтительным является введение регорафениба пероральным способом и ингибитора PD-1/PD-L1(2) внутривенным способом.
Тем не менее, в некоторых случаях может быть выгодным отступать от указанных количеств, в зависимости от веса тела, индивидуального поведения по отношению к активному ингредиенту, типа препарата и времени или интервала, на которые влияет введение. Так, например, меньше чем вышеупомянутые минимальные количества могут быть достаточными в некоторых случаях, в то время как указанный верхний предел должен быть превышен в других случаях. В случае введения относительно больших количеств, может быть целесообразным разделить их на несколько отдельных доз в течение суток.
Комбинация может содержать эффективные количества соединения Формулы I и ингибитор PD-1/PD-L1(2), которые достигают большую терапевтическую эффективность, чем когда каждое соединение использует отдельно.
Относительные соотношения каждого соединения в комбинации, также могут быть выбраны на основе их соответствующих механизмов действия и биологии заболевания. Относительные соотношения каждого соединения может изменяться в широких пределах.
Высвобождение одного или нескольких агентов комбинации можно также контролировать, где это необходимо, чтобы обеспечить желаемую терапевтическую активность единичной дозированной форме, комбинированному набору, набору или отдельным независимым лекарственным формам.
Настоящее изобретение включает фармацевтические композиции, которые включают фармацевтически приемлемый носитель и фармацевтически эффективное количество соединений по настоящему изобретению. Фармацевтически приемлемый носитель представляет собой любой носитель, который является относительно нетоксичным и безвредным для пациента в концентрациях, соответствующих эффективной активности активного ингредиента так, что какие-либо побочные эффекты, приписываемые носителю, не наносят ущерб положительному воздействию активного ингредиента. Фармацевтически эффективное количество соединения представляет собой такое количество, которое приводит к результату или оказывает влияние на конкретное состояние, которое лечат.
Для перорального введения соединения могут быть составлены в виде твердых или жидких препаратов, таких как твердая дисперсия, капсулы, пилюли, таблетки, пастилки, леденцы, расплавы, порошки, растворы, суспензии или эмульсии и могут быть получены в соответствии со способами, известными в данной области техники для изготовления фармацевтических композиций. Твердые лекарственные формы могут представлять собой капсулу, которая может быть желатинового типа с обычной твердой или мягкой оболочкой, содержащей, например, поверхностно-активные вещества, смазывающие вещества и инертные наполнители, такие как лактоза, сахароза, фосфат кальция и кукурузный крахмал.
В другом варианте осуществления, соединения по данному изобретению могут быть таблетированными с обычными основами таблеток, такими как лактоза, сахароза и кукурузный крахмал в комбинации со связывающими веществами, такими как аравийская камедь, кукурузный крахмал или желатин, дезинтегрирующими агентами, предназначенными для помощи в распаде и растворении таблетки после введения, такими как картофельный крахмал, альгиновая кислота, кукурузный крахмал и гуаровая камедь, трагакантовая камедь, аравийская камедь, смазывающими материалами, предназначенными для улучшения грануляции таблетки и для предотвращения адгезии материала таблетки к поверхности таблеточных штампов и пуансонов, например тальком, стеариновой кислотой, или стеаратом магния, кальция или цинка, пигментами, красителями и вкусовыми добавками, такими как мята, масло грушанки, или вишневым ароматизатором, предназначенными для повышения эстетических качеств таблеток и чтобы сделать их более приемлемыми для пациента. Подходящие наполнители для использования в пероральных жидких дозированных формах включают дикальцийфосфат и разбавители, такие как вода и спирты, например, этанол, бензиловый спирт и полиэтиленовые спирты, либо с добавлением фармацевтически приемлемого поверхностно-активного вещества, суспендирующего агента или эмульгатора, либо без добавления. Различные другие материалы могут присутствовать в качестве покрытий или иным образом модифицировать физическую форму единицы дозирования. Например, таблетки, пилюли или капсулы могут быть покрыты шеллаком, сахаром или обоими.
Диспергируемые порошки и гранулы являются пригодными для приготовления водной суспензии. Они содержат активный ингредиент в смеси с диспергирующим или смачивающим агентом, суспендирующим агентом и одним или более консервантами. Подходящие диспергирующие или смачивающие агенты и суспендирующие агенты представлены теми, которые уже упоминались выше. Дополнительные наполнители, например, такие как подсластители, вкусовые добавки и красители, описанные выше, могут также присутствовать.
Фармацевтические композиции по данному изобретению могут также быть в виде эмульсий масло-в-воде. Масляная фаза может представлять собой растительное масло, такое как жидкий парафин или смесь растительных масел. Подходящие эмульгаторы могут представлять собой (1) природные смолы, такие как аравийская камедь и трагакантовая камедь, (2) природные фосфатиды, такие как соевые бобы и лецитин, (3) сложные эфиры или неполные сложные эфиры, полученные из жирных кислот и ангидридов гексита, например, сорбитанмоноолеат, (4) продукты конденсации указанных неполных сложных эфиров с этиленоксидом, например, моноолеат полиоксиэтиленсорбитана. Эмульсии могут также содержать подсластители и вкусовые добавки.
Масляные суспензии могут быть приготовлены суспендированием активного ингредиента в растительном масле, таком как, например, арахисовое масло, оливковое масло, кунжутное масло или кокосовое масло, или в минеральном масле, таком как жидкий парафин. Масляные суспензии могут содержать загуститель, такой как, например, пчелиный воск, твердый парафин или цетиловый спирт. Суспензии могут также содержать один или несколько консервантов, например, этиловый эфир пара-гидроксибензойной кислоты или n-пропиловый эфир пара-гидроксибензойной кислоты; один или более красителей; одну или более вкусовые добавки; и один или более подсластителей, таких как сахароза или сахарин.
Сиропы и эликсиры могут быть составлены с подсластителями, такими как, например, глицерин, пропиленгликоль, сорбит или сахароза. Такие составы могут также содержать средство, уменьшающее раздражение, а также консервант, такой как метил- и пропил-парабены, и вкусовые добавки и красители.
Соединения по данному изобретению могут быть также введены парентерально, то есть подкожно, внутривенно, внутриглазно, внутрисуставно, внутримышечно или внутрибрюшинно, в инъецируемых дозированных формах соединения в физиологически приемлемом разбавителе с фармацевтическим носителем, который может быть стерильной жидкостью или смесью жидкостей, таких как вода, физиологический раствор, водный раствор декстрозы и схожие растворы сахаров, спирт, такой как этанол, изопропиловый спирт или гексадециловый спирт, гликоли, такие как пропиленгликоль или полиэтиленгликоль, кетали глицерина, такие как 2,2-диметил-1,1-диоксолан-4-метанол, простые эфиры, такие как поли(этиленгликоль) 400, масло, жирная кислота, сложный эфир жирной кислоты или глицерид жирной кислоты, или ацетилированный глицерид жирной кислоты, с добавлением или без добавления фармацевтически приемлемого поверхностно-активного вещества, такого как мыло или детергент, суспендирующего агента, такого как пектин, карбомеры, метилцеллюлоза, гидроксипропилметилцеллюлоза или карбоксиметилцеллюлоза, или эмульгирущего агента и других фармацевтических адъювантов.
Примерами масел, которые могут быть использованы в парентеральных составах по данному изобретению, являются масла из нефти, животного, растительного или синтетического происхождения, например, арахисовое масло, соевое масло, кунжутное масло, хлопковое масло, кукурузное масло, оливковое масло, вазелин и минеральное масло. Подходящие жирные кислоты включают олеиновую кислоту, стеариновую кислоту, изостеариновую кислоту и миристиновую кислоту. Подходящими сложными эфирами жирных кислот являются, например, этилолеат и изопропилмиристат. Подходящие мыла включают соли жирных кислот и щелочных металлов, аммония и триэтаноламина и подходящие детергенты включают катионные детергенты, например диметил диалкил аммония галогениды, алкилпиридиний галогениды и алкиламин ацетаты; анионные детергенты, например, алкил, арил и олефинсульфонаты, алкил, олефин, этер- и моноглицеридсульфаты, и сульфосукцинаты; неионные детергенты, например, оксиды жирных аминов, алканоламиды жирных кислот, и поли(оксиэтилен-оксипропилен)ов или сополимеры оксида этилена или оксида пропилена; и амфотерные детергенты, например, алкил-бета-аминопропионаты, и четвертичные аммониевые соли 2-алкилимидазолина, а также смеси.
Парентеральные композиции по данному изобретению обычно содержат от примерно 0,5% до примерно 25% по весу активного ингредиента в растворе. Консерванты и буферы также могут быть успешно использованы. Для того чтобы свести к минимуму или устранить раздражение в месте инъекции, такие композиции могут содержать неионное поверхностно-активное вещество, имеющее гидрофильно-липофильный баланс (ГЛБ) от примерно 12 до примерно 17. Количество поверхностно-активного вещества в таком составе составляет от примерно 5% до примерно 15% по весу. Поверхностно-активное вещество может быть единственным компонентом, имеющим вышеуказанный ГЛБ, или может представлять собой смесь двух или более компонентов, имеющих нужный ГЛБ.
Примерами поверхностно-активных веществ, используемых в парентеральных составах, являются класс сложных эфиров полиэтилен сорбитана и жирных кислот, например, сорбитанмоноолеат и высокомолекулярных аддуктов оксида этилена с гидрофобным основанием, образованных конденсацией оксида пропилена с пропиленгликолем.
Фармацевтические композиции могут быть в форме стерильных инъецируемых водных суспензий. Такие суспензии могут быть составлены в соответствии с известными способами с использованием подходящих диспергирующих или смачивающих агентов и суспендирующих агентов, таких как, например, карбоксиметилцеллюлоза натрия, метилцеллюлоза, гидроксипропилметилцеллюлоза, альгинат натрия, поливинилпирролидон, трагакантовая камедь и аравийская камедь; диспергирующих или смачивающих агентов, которые могут быть природными фосфатидами, таких как лецитин, продукт конденсации алкиленоксида с жирной кислотой, например, полиоксиэтиленстеарат, продукт конденсации этиленоксида с длинноцепочечным алифатическим спиртом, например, гептадека-этиленоксицетанол, продукт конденсации оксида этилена с неполным сложным эфиром, полученным из жирной кислоты и гексита, таким как моноолеат полиоксиэтиленсорбита, или продукт конденсации оксида этилена с неполным сложным эфиром, полученным из жирной кислоты и гекситол ангидрида, например, полиоксиэтиленсорбитанмоноолеат.
Стерильная инъекционная форма может также быть стерильным инъекционным раствором или суспензией в нетоксичном парентерально приемлемом разбавителе или растворителе. Разбавители и растворители, которые могут быть использованы, представляют собой, например, воду, раствор Рингера, изотонические растворы хлорида натрия и изотонические растворы глюкозы. Кроме того, стерильные нелетучие масла обычно используют в качестве растворителей или суспендирующих сред. Для этой цели может быть использовано любое мягкое, нелетучее масло, в том числе синтетические моно- или диглицериды. Кроме того, могут быть использованы жирные кислоты, такие как олеиновая кислота, при приготовлении инъецируемых форм.
А композиции по настоящему изобретению также можно вводить в форме суппозиториев для ректального введения лекарственного средства. Эти композиции могут быть приготовлены смешиванием лекарственного средства с подходящим не вызывающим раздражение эксципиентом, который является твердым при обычных температурах, но жидким при ректальной температуре и, следовательно, будет плавиться в прямой кишке с высвобождением лекарственного средства. Таким материалом является, например, масло какао и полиэтиленгликоль.
Составы с контролируемым высвобождением для парентерального введения включают липосомальные составы, составы с полимерные микросферами и составы с полимерным гелем, которые известны в данной области техники.
Фармацевтические композиции по данному изобретению могут также быть в виде твердой дисперсии. Твердая дисперсия может быть твердым раствором, стеклообразным раствором, стеклообразной суспензией, аморфным осадком в кристаллическом носителе, эвтектической или монотектической, соединением или образованием комплекса и их комбинацией.
Аспект настоящего изобретения, представляющий особый интерес, представляет собой фармацевтическую композицию, содержащую твердую дисперсию, в которой матрица содержит фармацевтически приемлемый полимер, такой как поливинилпирролидон, сополимер винилпирролидона/винилацетата, полиалкиленгликоль (т.е. полиэтиленгликоль), гидроксиалкилцеллюлоза (т.е. гидроксипропилцеллюлоза), гидроксиалкилметилцеллюлоза (т.е. гидроксипропилметилцеллюлоза), карбоксиметилцеллюлоза, натрийкарбоксиметилцеллюлоза, этилцеллюлоза, полиметакрилаты, поливиниловый спирт, поливинилацетат, сополимер винилового спирта/винилацетата, полигликолизированные глицериды, ксантановая камедь, каррагинан, хитозан, хитин, полидекстрин, декстрин, крахмал и белки.
Другим аспектом настоящего изобретения является фармацевтическая композиция, содержащая твердую дисперсию, в которой матрица содержит сахар и/или сахарный спирт, и/или циклодекстрин, например, сахарозу, лактозу, фруктозу, мальтозу, рафинозу, сорбитол, лактит, маннит, мальтит, эритрит, инозит, трегалозу, изомальт, инулин, мальтодекстрин, -циклодекстрин, гидроксипропил-циклодекстрин или сульфобутилового эфира циклодекстрин.
Дополнительные подходящие носители, которые могут быть использованы при формировании матрицы твердой дисперсии, включают спирты, органические кислоты, органические основания, аминокислоты, фосфолипиды, воски, соли, сложные эфиры жирных кислот, сложные эфиры полиоксиэтиленсорбитана и жирных кислот, и мочевину, но не ограничиваются ими.
Твердая дисперсия регорафениба в матрице может содержать некоторые дополнительные фармацевтически приемлемые ингредиенты, такие как поверхностно-активные вещества, наполнители, разрыхлители, ингибиторы рекристаллизации, пластификаторы, пеногасители, антиоксиданты, агенты, снижающие вязкость, рН-модификаторы, глиданты и смазывающие вещества.
Твердую дисперсию по настоящему изобретению получают в соответствии со способами, известными в данной области техники для изготовления твердых дисперсий, такими как технология слияние/расплава, экструзия горячего расплава, упаривание растворителя (т.е. лиофилизация, высушивание распылением или наслоение гранулята), совместное осаждение, технология сверхкритической жидкости и способ электростатического спиннинга.
Композиции по данному изобретению могут также по необходимости или по желанию содержать другие обычные фармацевтически приемлемые ингредиенты смеси, обычно относящиеся к носителям или разбавителям. Для получения таких композиций в соответствующих дозированных формах могут быть использованы обычные способы.
Обычно используемые фармацевтические ингредиенты, которые могут быть использованы в зависимости от обстоятельств, чтобы составить композицию для предполагаемого пути введения, включают:
подкисляющие агенты (примеры включают, уксусную кислоту, лимонную кислоту, фумаровую кислоту, соляную кислоту, азотную кислоту, но не ограничиваются ими);
подщелачивающие агенты (примеры включают раствор аммиака, карбонат аммония, диэтаноламин, моноэтаноламин, гидроксид калия, борат натрия, карбонат натрия, гидроксид натрия, триэтаноламин, троламин, но не ограничиваются ими);
адсорбенты (примеры включают порошкообразную целлюлозу и активированный уголь, но не ограничиваются ими);
2
2
2
2
3
аэрозольные пропелленты (примеры включают двуокись углерода, CClF, FClC-CClF и CClF, но не ограничиваются ими);
агенты, вытесняющие воздух (примеры включают азот и аргон, но не ограничиваются ими);
противогрибковые консерванты (примеры включают бензойную кислоту, бутилпарабен, этилпарабен, метилпарабен, пропилпарабен, бензоат натрия, но не ограничиваются ими);
противомикробные консерванты (примеры включают хлорид бензалкония, хлорид бензетония, бензиловый спирт, хлорид цетилпиридиния, хлорбутанол, фенол, фенилэтиловый спирт, нитрат фенилртути и тимеросал, но не ограничиваются ими);
антиоксиданты (примеры включают аскорбиновую кислоту, аскорбилпальмитат, бутилированный гидроксианизол, бутилированный гидрокситолуол, гипофосфористую кислоту, монотиоглицерин, пропилгаллат, аскорбат натрия, натрия бисульфит, натрия формальдегидсульфоксилат, натрия метабисульфит, но не ограничиваются ими);
связывающие материалы (примеры включают блок-полимеры, природный и синтетический каучук, полиакрилаты, полиуретаны, силиконы, полисилоксаны и стирол-бутадиен-сополимеры, но не ограничиваются ими);
буферные агенты (примеры включают калия метафосфат, дикалийфосфат, ацетат натрия, безводный цитрат натрия и дигидрат цитрата натрия, но не ограничиваются ими);
агенты-носители (примеры включают сироп акации, ароматизирующий сироп, ароматизирующий эликсир, вишневый сироп, сироп какао, апельсиновый сироп, сироп, кукурузное масло, минеральное масло, арахисовое масло, кунжутное масло, бактериостатический физиологический раствор для инъекций и бактериостатическую воду для инъекций, но не ограничиваются ими);
хелатирующие агенты (примеры включают динатрия эдетат и этилендиаминтетрауксусную кислоту, но не ограничиваются ими);
красители (примеры включают краситель FD&C красный № 3, краситель FD&C красный № 20, краситель FD&C желтый № 6, краситель FD&C синий № 2, краситель D&C зеленый № 5, краситель D&C оранжевый № 5, краситель D&C красный № 8, карамель и оксид железа красный, но не ограничиваются ими);
осветляющие агенты (примеры включают бентонит, но не ограничиваются им);
эмульгирующие агенты (примеры включают аравийскую камедь, цетомакрогол, цетиловый спирт, глицерилмоностеарат, лецитин, сорбитанмоноолеат, полиоксиэтилен 50 моностеарат, но не ограничиваются ими);
инкапсулирующие агенты (примеры включают желатин и ацетатфталат целлюлозы, но не ограничиваются ими);
ароматизаторы (примеры включают анисовое масло, коричное масло, какао, ментол, апельсиновое масло, масло перечной мяты и ванилин, но не ограничиваются ими);
увлажнители (примеры включают глицерин, пропиленгликоль и сорбит, но не ограничиваются ими);
агенты для растирания в порошок (примеры включают минеральное масло и глицерин, но не ограничиваются ими);
масла (примеры включают арахидное масло, минеральное масло, оливковое масло, арахисовое масло, кунжутное масло и растительное масло, но не ограничиваются ими);
мазевые основы (примеры включают ланолин, мазь-эмульсию, мазь на основе полиэтиленгликоля, вазелин, гидрофильный вазелин, белую мазь, желтую мазь и мазь на основе розовой воды, но не ограничиваются ими);
усилители проникновения (трансдермальная доставка) (примеры включают одноатомные спирты или многоатомные спирты, моно- или поливалентные(атомные) спирты, насыщенные или ненасыщенные спирт жирного ряда, насыщенные или ненасыщенные жирные сложные эфиры, насыщенные или ненасыщенные дикарбоновые кислоты, эфирные масла, производные фосфатидила, цефалин, терпены, амиды, простые эфиры, кетоны и мочевины, но не ограничиваются ими);
пластификаторы (примеры включают диэтилфталат и глицерин, но не ограничиваются ими);
растворители (примеры включают этанол, кукурузное масло, хлопковое масло, глицерин, изопропанол, минеральное масло, олеиновую кислоту, арахисовое масло, очищенную воду, воду для инъекций, стерилизованную воду для инъекций и стерилизованную воду для орошения, но не ограничиваются ими);
агенты, увеличивающие жесткость смеси (примеры включают цетиловый спирт, воск цетиловых эфиров, микрокристаллический воск, парафин, стеариловый спирт, белый воск и желтый воск, но не ограничиваются ими);
основы для суппозиториев (примеры включают масло какао и полиэтиленгликоли (смеси), но не ограничиваются ими);
поверхностно-активные вещества (примеры включают хлорид бензалкония, ноноксинол 10, октоксинол 9, полисорбат 80, лаурилсульфат натрия и сорбитан монопальмитат, но не ограничиваются ими);
суспендирующие агенты (примеры включают агар, бентонит, карбомеры, натрий карбоксиметилцеллюлозу, гидроксиэтилцеллюлозу, гидроксипропилцеллюлозу, гидроксипропилметилцеллюлозу, каолин, метилцеллюлозу, трагакантовую камедь и вигум, но не ограничиваются ими);
подсластители (примеры включают аспартам, декстрозу, глицерин, маннит, пропиленгликоль, сахарин натрия, сорбит и сахарозу, но не ограничиваются ими);
антиадгезивы для таблеток (примеры включают стеарат магния и тальк, но не ограничиваются ими);
связывающие вещества для таблеток (примеры включают аравийскую камедь, альгиновую кислоту, натрийкарбоксиметилцеллюлозу, прессованный сахар, этилцеллюлозу, желатин, сироп глюкозы, метилцеллюлозу, несшитый поливинилпирролидон и предварительно желатинизированный крахмал, но не ограничиваются ими);
разбавители для таблеток и капсул (примеры включают двухосновный фосфат кальция, каолин, лактозу, маннит, микрокристаллическую целлюлозу, порошкообразную целлюлозу, осажденный карбонат кальция, карбонат натрия, фосфат натрия, сорбит и крахмал, но не ограничиваются ими);
покрывающие агенты для таблеток (примеры включают сироп глюкозы, гидроксиэтилцеллюлозу, гидроксипропилцеллюлозу, гидроксипропилметилцеллюлозу, метилцеллюлозу, этилцеллюлозу, ацетатфталат целлюлозы и шеллак, но не ограничиваются ими);
эксципиенты для прямого прессования таблеток (примеры включают двухосновный фосфат кальция, но не ограничиваются им);
разрыхлители для таблеток (примеры включают альгиновую кислоту, карбоксиметилцеллюлозу кальция, микрокристаллическую целлюлозу, полакрилин калия, поперечносшитый поливинилпирролидон, альгинат натрия, натрия крахмалгликолят и крахмал, но не ограничиваются ими);
глиданты для таблеток (примеры включают коллоидный диоксид кремния, кукурузный крахмал и тальк, но не ограничиваются ими);
смазывающие вещества для таблеток (примеры включают стеарат кальция, стеарат магния, минеральное масло, стеариновую кислоту и стеарат цинка, но не ограничиваются ими);
непрозрачные вещества для таблеток/капсул (примеры включают диоксид титана, но не ограничиваются им);
полирующие агенты для таблеток (примеры включают карнаубский воск и белый воск, но не ограничиваются ими);
загустители (примеры включают пчелиный воск, цетиловый спирт и парафин, но не ограничиваются ими);
регуляторы тоничности (примеры включают декстрозу и хлорид натрия, но не ограничиваются ими);
повышающие вязкость агенты (примеры включают альгиновую кислоту, бентонит, карбомеры, натрий карбоксиметилцеллюлозу, метилцеллюлозу, поливинилпирролидон, альгинат натрия и трагакантовую камедь, но не ограничиваются ими); и
смачивающие агенты (примеры включают гептадекаэтилен оксицетанол, лецитин, сорбит моноолеат, полиоксиэтиленсорбит моноолеат и полиоксиэтилен стеарат, но не ограничиваются ими).
Считается, что специалист в данной области техники, используя предыдущую информацию, может использовать настоящее изобретение в полном объеме.
Примеры
Пример 1
Комбинаторная активность регорафениба и анти-мышиного PD-1 антитела (RMP1-14, Peng et al., Cancer Res., (2012) 72(20), 5209-5218) была исследована на сингенной мышиной модели CRC МС38.
Методы
Сингенные опухоли МС38 выращивали подкожно в мышах и лечили регорафенибом и/или анти-мышиным PD-1 антителом (RMP1-14) в соответствии со следующими схемами:
а) только регорафениб в дозе 3 мг/кг в день один раз в день в течение 15 дней в виде PluronicF68/ПЭГ400/пропиленгликоль (15/42,5/42,5+20% воды) п/о (перорального) состава и 10 мг/кг несвязывающего rIgG2a как изотипического контроля (клон 2А3), вводят каждый третий день пять раз в день в PBS (забуференном фосфатом физиологическом растворе) как в/б (внутрибрюшинный) состав,
б) только анти-мышиное PD-1 антитело (RMP1-14) в дозе 10 мг/кг каждый третий день пять раз в день в виде в/б состава в PBS и PluronicF68/ПЭГ400/пропиленгликолевый (15/42,5/42,5+20% воды) носитель один раз в день в течение 15 дней в виде п/о состава,
в) сопутствующим образом, регорафениб в дозе 3 мг/кг в день один раз в день в течение 4 дней в виде PluronicF68/ПЭГ400/пропиленгликоль (15/42,5/42,5+20% воды) п/о состава и анти-мышиное PD-1 антитело (RMP1-14) в дозе 10 мг/кг каждый третий день пять раз в день в виде в/б состава в PBS,
г) последовательно, сначала регорафениб в дозе 3 мг/кг в день один раз в день в течение 4 дней в виде PluronicF68/ПЭГ400/пропиленгликоль (15/42,5/42,5+20% воды) п/о состава, а затем на 5-й день после рандомизации анти-мышиное PD-1 антитело (RMP1-14) в дозе 10 мг/кг каждый третий день четыре раза в день в виде в/б состава в PBS,
д) последовательно, сначала анти-мышиное PD-1 антитело (RMP1-14) в дозе 10 мг/кг каждый третий день два раза в день в виде в/б состава в PBS, а затем на 5-й день после рандомизации регорафениб в дозе 3 мг/кг в день один раз в день в течение 10 дней в виде PluronicF 68/ПЭГ400/пропиленгликоль (15/42,5/42,5) п/о состава.
Контрольным животным вводили сопутствующим образом регорафениб с носителем (PluronicF68/ПЭГ400/пропиленгликоль (15/42,5/42,5+20% воды) и с несвязывающим изотипическим контрольным антителом (IgG2a крысы, клон 2А3). Рост опухоли контролировали путем измерения толщины, а площадь опухоли рассчитывали, используя формулу «а × b», где а и b являются длиной и шириной опухоли, соответственно. Вес опухолей измеряли после завершения исследования. Показатель опухоли по сравнению с контролем (Т/С) рассчитывали с использованием животных, которым вводили носитель, как эталона.
Результаты
Как регорафениб, так и анти-мышиное PD-1 антитело ингибируют рост опухолей МС38 по сравнению с контролем, и этот эффект был значительно повышен сопутствующим лечением или приемом регорафениба после анти-PD1 антитела.
Фигура 1. Противоопухолевая активность регорафениба и анти PD-1 по отдельности и в комбинации на сингенной мышиной модели CRC МС38: н+и=носитель+изотипическое антитело, а)=схема а), б)=схема б), в)=схема в), г)=схема г), д)=схема д).
Пример 2
Комбинаторная активность регорафениба и анти-мышиного PD-1 антитела (RMP1-14, Peng et al., Cancer Res., (2012) 72(20), 5209-5218) была исследована на сингенной мышиной модели CRC СТ26.
Сингенные опухоли СТ26 выращивали ортотопически у мышей (Abou-Elkacem et al., Mol Cancer Ther. 2013 Jul; 12(7):1322-31) и лечили регорафенибом и/или анти-мышиным PD-1 антителом (RMP1-14) в соответствии со следующими схемами:
а) только регорафениб в дозе 30 мг/кг в день один раз в день в течение 10 дней в виде PluronicF68/ПЭГ400/пропиленгликоль/вода (12/34/34/20) п/о (перорально) состава с использованием только носителя как контроля или в комбинации с неспецифическим контрольным антителом, вводимым внутрибрюшинно (в/б) в дозе 20 мг/кг в PBS каждый третий день,
б) только анти-мышиное PD-1 антитело (RMP1-14) в дозе 20 мг/кг каждый третий день четыре раза в день в виде в/б состава в PBS и как контроль использовали неспецифическое антитело,
в) в комбинации, регорафениб в дозе 20 мг/кг в день один раз в день в течение 10 дней в виде PluronicF68/ПЭГ400/пропиленгликоль/вода (12/34/34/20) п/о состава и аанти-мышиное PD-1 антитело (RMP1-14) в дозе 20 мг/кг каждый третий день четыре раза в день в виде в/б состава в PBS.
После прекращения лечения некоторых мышей наблюдали в течение еще 11 дней для того, чтобы исследовать возобновление роста опухоли (данные не показаны) и появление метастазов в печени (таблица 2). Мышей умерщвляли в конце лечения или в конце периода наблюдения, и печень подвергали макроскопическому скринингу на метастазы на их поверхности. Количество мышей с метастазами в печени затем соотносили с общим количеством мышей в соответствующих группах исследования.
Д: день; п/в: после введения
В таблице 2 знаком «+» отмечена тест-система, которую использовали. После 14 дней лечения в группе с регорафенибом 0 животных из 6, а в группе PD-1 4 животных из 6 имели метастазы. В то время как после 25 дней лечения в группе с комбинацией регорафениба и контрольного антитела 8 животных из 8 имели метастазы, в группе, которую лечили комбинацией регорафениба и PD-1, на удивление ни одно животное не имело метастазы.