Использование показателей углеводного обмена крови и стекловидного тела глаза для постмортальной диагностики механической асфиксии

экспериментов (9 крыс). Условия были стандартные (глюкоза 10 мМ), но еще присутствовала глюкоза меченная изотопом С14 в 6-ом положении. Сравнили количество включенной метки в глицерол ТАГ в условиях стимуляции липолиза адреналином с количеством метки, влюченной при адреналин-стимулированном липолизе, но на фоне активации ПОЛ (50 мкМ Бе2+). Получили следующие данные (табл.1).

Таблица 1

Влияние адреналина (10 мкМ) и ионов Fe2+ (50 мкМ) на включение С 14-6-глюкозы в глицерол ТАГ

Добавки Бк х103 Изменения (%) Достоверность

Контроль 4,61 ±0,43 100

Адреналин 4,31 ±0,42 93

Адреналин +Fe2+ 9,70±0,92 210 p<0,01

Примечание: Бк х103 - радиоактивность атомов С14 глюкозы, выраженная в единицах Беккерель.

Таким образом, при наибольшей активации липолиза пере-кисным окислением (концентрация Бе2+ 50 мкМ ) примерно вдвое больше глицерола из глюкозы С14 включается в ТАГ и, следовательно, больше ЖК реэтерифицируется обратно в ТАГ по сравнению с показателями в отсутствии активации ПОЛ.

В 6 группе экспериментов (7 крыс) было исследовано поглощение глюкозы жировой тканью. Исходя из того, что в условиях нашего эксперимента при максимальной активности ПОЛ ингибируется липолиз - один из основных метаболических путей жировой ткани, была выдвинута гипротеза, что и другие метаболические пути тоже будут ингибироваться.

Рис.5. Поглощение глюкозы из инкубационной среды жировой тканью в зависимости от концентрации Fe2+

Однако, как представлено на рис.5, оказалось, что при максимальной активации ПОЛ (концентрация Fe2+ 200мкМ), и соответственно наибольшем ингибировании липолиза, поглощение глюкозы оказывается наивысшем. Добиться ингибирования поглощения глюкозы удалось активацией ПОЛ только при концентрации Fe 2+ 500 мкМ. Поэтому можно сделать вывод, что в нашем эксперименте внутриклеточный метаболизм глюкозы «переключается» в некоторой мере с ресинтеза ЖК в ТАГ на другие метаболические пути.

Таким образом, при исследовании in vitro влияние ПОЛ на липолиз жировой ткани, измеряемый по накоплению в инкубационной среде глицерола и ЖК, оказалось, что в зависимости от степени активации ПОЛ, накопление в инкубационной среде конечных продуктов липолиза - глицерола и ЖК ведут себя по-разному. Продукция глицерола при слабой активации ПОЛ увеличивается, а при высокой активности ПОЛ - ингибируется. Продукция ЖК равномерно ингибируется с ростом активности ПОЛ. Выяснилось, что такая разница в кинетике продуктов липо-лиза связана с тем, что с ростом активности ПОЛ увеличивается поглощение глюкозы жировой тканью. Это приводит к усилению реэтерификации ЖК обратно в ТАГ. Также обнаружилось, что при максимальной, в нашем экспериментей, активности ПОЛ, когда липолиз в целом, измеряемый по глицеролу и ЖК ингибируется, поглощение глюкозы становится наибольшим. Следовательно, внутриклеточный метаболизм глюкозы в некоторой мере переключается с реэтерификации ЖК в ТАГ на другие пути, что требует дальнейших исследований.

Литература

1. Владимиров Ю.А. Перекисное окисление липидов в биологических мембранах/Владимиров Ю.А., Арчаков А.И. М.: Наука, 1972. 252 с.

2. Меерсон Ф.З. Адаптация, стресс и профилактика / Меер-сон Ф.З. М.: Наука,1981. 258 с.

3. Окислительный стресс. Прооксиданты и антиоксидан-ты./Меньшикова Е.Б., Ланкин В.З., Зенков Н.К.(и др.). М.:Слово, 2006. 556 с.

4. Стояновский Д.А. Изучение механизма ингибирующего действия аскорбино кислоты при перекисном окислении липодов./ Стояновский Д.А.// Свободнве радикалы и биостабилизаторы: тез.докл. 1-ого болгаро-советского симпозиума. София,1987. С.131.

5. A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding/M.M.Bradford //Anal.Biochem.1976.Vol.72.P. 248-254.

6. A simply method for the isolation and purification of total lipids from animal tissues / J.Folch, L.M.Sloane-Stanley // J.Biol.Chem.1957. Vol. 226, N1. P. 497-509.

7. Effect of hormones on the rate of triacylglycerol / fatty acid substrate cycle in adipocyte and epididymal fat pads/ Brooks B.// FEBS Letters.1982. Vol. 146, №2. P.327-330.

8. Insulin-like activity of dilute human serum assayed by an

isolate adipose cell method / J.Gliemann, N.York //

Diabetes.1965.Vol.14, N10. P.643-649.

9. Microdetermination of long-cain fatty acids in plasma and

tissues / Dole V.P., Мeinertz M. // Journal of Biological

Chemistry.1960. Vol.235, № 9. P.2595-2599.

10. Rapid and sensetive assay for free fatty acids using

rhodamine 6G / Anderson, M.M., McCarty R.E. //

Anal.Biochem.1972. Vol.45. P.260-270.

11. Rapid method for estimation of glycerol in fermentation solutions / M.Lambert, A.C.Neish // Can.J.Res., 1950. Vol. 28, №1. sect.B. P.83-89.

12. Studies on rat adipose tissue in vitro/ G.F. Cahill., B. Leboeuf, A.E.Renold. // The Journal of Biological Chemistry. 1959. Vol.10, № 10. P.2541-2543.

13. Turnover of adipose tissue triglycerides measured by the rates of synthesis and release of triglyceride-glycerol / Gorin E., Shafrir E. // Biochimica et Biophisica Acta. 1963. Vol.70, P.109-117.

THE EFFECT OF VARIOUS ION CONCENTRATIONS OF IRON ON LIPOLYSIS AND LIPID PEROXIDATION IN RATS ADIPOSE TISSUE

I.V. KOMOV, V.V. IVANOV, T.S. FEDOROVA, V.I. SHARAPOV, T.P.YUZENAS

Novosibirsk State Medical University

In this article in vitro effect of lipid peroxidation (LP) on the lipolysis of adipose tissue, and measured by the accumulation of glycerol in the incubation medium and free fatty acides (FFA). It turned out that depending on the activation degree of LP accumulation in the medium end products of lipolysis - glycerol and FFA work differently. The products of glycerol with a small activation of LP increases, and are inhibited with the further activation of the LP. The products of the same FFA are inhibited evenly with the activity growth of the LP. It was found out that the difference in the kinetics of lipolysis products was connected with the fact that the increase of the activity of LP is accompanied with the increase of glucose absorption by adipose tissue. This leads to increased re-etherification from FFA back to triacilglycerides (TAG). Also it was found out that at the maximal activity of LP when lipolysis altogether, measured by glycerol and the LCD, is inhibited, the absorption of glucose becomes largest. Therefore, intracellular glucose metabolism to some extent switches from FFA re-etherification to TAG to other metabolic ways.

Key words: lipid peroxidation, lipolysis.

УДК 340.626.3:617.53-001.35-07:616.15-074

ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ПОКАЗАТЕЛЕЙ УГЛЕВОДНОГО ОБМЕНА КРОВИ И СТЕКЛОВИДНОГО ТЕЛА ГЛАЗА ДЛЯ ПОСТМОРТАЛЬНОЙ ДИАГНОСТИКИ МЕХАНИЧЕСКОЙ АСФИКСИИ

П.А. АКИМОВ, Н.А. ТЕРЁХИНА*

Проведено исследование содержания глюкозы в стекловидном теле глаза от 106 трупов лиц, не страдавших при жизни сахарным диабе-

Кафедра биохимии ГОУ ВПО «Пермская государственная медицинская академия имени академика Е.А. Вагнера Росздрава» (зав. - проф. Н.А. Терёхина), 614990 г. Пермь, ул. Петропавловская, 26, тел.(342) 217-10-31; электронная почта: rector@psma.ru

том. Определение суммарного содержания глюкозы и лактата в периферической крови проведено от 20 трупов людей, причиной смерти которых явилась механическая асфиксия в результате сдавления органов шеи петлей, а также от 12 трупов, скончавшихся в результате сердечной патологии. Предложен метод постмортальной диагностики механической асфиксии в результате сдавления органов шеи петлей. Разница в суммарном содержании глюкозы и лактата (в пересчете на глюкозу) между кровью из бедренной вены и кровью из синусов твердой мозговой оболочки, превышающая 4,5 ммоль/л свидетельствует о наступлении смерти в результате сдавления органов шеи петлей. Для дифференциальной диагностики вида смерти от механической асфиксии в результате сдавления органов шеи петлей между суицидом и убийством может быть использован биохимический анализ стекловидного тела глаза.

Ключевые слова: постмортальная диагностика, повешение, кровь, стекловидное тело глаза, глюкоза, молочная кислота.

Биохимические анализы используются в судебной медицине для диагностики причины смерти. Известен способ диагностики механической асфиксии в результате сдавления органов шеи петлей путём определения глюкозы в крови трупа [4,5]. Биохимические изменения при этом виде смерти обусловлены прекращением мозгового кровообращения. Характерным признаком считается снижение уровня глюкозы в крови, оттекающей от головного мозга. Вместе с тем известно, что после наступления смерти наблюдается стойкое снижение глюкозы, вплоть до её полного отсутствия к концу 2-3 суток [1,3,9]. Снижение уровня глюкозы в крови зависит от темпа метаболических процессов в форменных элементах крови, главным образом, в эритроцитах, что связано с темпом охлаждения трупа. Наибольшая концентрация глюкозы установлена в печеночной вене, а наименьшая - в крови из бедренной вены [8]. В описанном способе используют для сравнения не равнозначные отделы венозной сети - правую половину сердца (где содержание глюкозы резко повышено ввиду поступления глюкозы из печеночной вены, в результате процессов образования глюкозы) и синус твердой мозговой оболочки (содержание глюкозы крови снижено, отток крови из тканей, потребляющих глюкозу). В постмортальном периоде утилизация глюкозы в разных отделах венозной системы проходит не равномерно, поэтому не всегда возможно установить разницу в содержании глюкозы.

Ранее нами было установлено, что содержание глюкозы в стекловидном теле глаза не зависит от длительности постморталь-ного периода. Биохимический анализ стекловидного тела был использован для дифференциальной диагностики диабетических ком [1,9]. Высокое содержание глюкозы отмечено у больных сахарным диабетом, а при наступлении смерти в результате диабетической комы с гипергликемией отмечается резкое увеличение глюкозы в стекловидном теле, что является диагностическим критерием.

Цель исследования - использовать биохимический анализ крови и стекловидного тела глаза для разработки способа диагностики механической асфиксии в результате сдавления органов шеи петлей, не зависящий от длительности постмортального периода.

Материалы и методы исследования. Стекловидное тело (1,0-2,0 мл) получали после прокола оболочек глазного яблока у наружного угла глаза одноразовым шприцом. Взятие стекловидного тела осуществляли медленно, так как оно очень вязкое. Все биологические жидкости получали одноразовыми шприцами на вскрытии и сразу доставляли в лабораторию. Кровь (5,0-10,0 мл) забирали из двух разных отделов периферической венозной системы - бедренной (подвздошной) вены и из синусов твердой мозговой оболочки одноразовыми шприцами.

Стекловидное тело перед исследованием центрифугировали 20 мин. в пластиковых пробирках при 5600 g. Кровь центрифугировали для получения сыворотки при 400 g в течение 15-20 минут. Гемолизированную сыворотку обрабатывали [6] добавлением равного количества 1,2 М хлорной кислоты для осаждения белков, центрифугировали 15 мин. при 1600 g. Надосадочную жидкость нейтрализовали добавлением 2 М карбоната калия из расчета 0,2 мл на 1,0 мл хлорной кислоты. Затем вновь центрифугировали при 150-200 g в течение 3 мин. Вновь полученную на-досадочную жидкость использовали для анализа.

Количественное определение глюкозы проводили стандартным унифицированным глюкозооксидазным методом (набор реагентов «Фотоглюкоза» фирмы «Импакт» - Москва). Количественное определение лактата проводили энзиматическим колориметрическим методом (набор реагентов «Lactic Acid» фирмы «Vital Diagnostics SPb» - Санкт-Петербург).

Расчет проводили по суммарному содержанию глюкозы и лактата (в пересчете на глюкозу) в каждом отделе венозной сис-

темы: глюкоза + 1/2 лактата (так как в процессе гликолиза из 1 моля глюкозы образуется 2 моля молочной кислоты). Оценивали конечный результат по разнице суммарного содержания указанных метаболитов углеводного обмена между исследованными отделами венозной системы: из суммарного показателя в бедренной вене вычитали суммарный показатель из синуса твердой мозговой оболочки.

Определение содержания глюкозы в стекловидном теле проведено от 106 трупов лиц, не страдавших при жизни сахарным диабетом. Определение суммарного содержания глюкозы и лактата в периферической крови проведено от 20 трупов людей, причиной смерти которых явилась механическая асфиксия в результате сдавления органов шеи петлей, а также от 12 трупов, скончавшихся в результате сердечной патологии (контрольная группа).

Результаты и их обсуждение. Наименьший уровень глюкозы в стекловидном теле отмечен в группах лиц, скончавшихся в результате соматических заболеваний, отравлений (за исключением отравления алкоголем) и механический асфиксии при повешении (суицид). Процент отсутствия глюкозы в этих группах составил более 80% (табл. 1). В 60% случаев глюкоза отсутствует в стекловидном теле глаза людей, скончавшихся в результате сердечной патологии. Наличие глюкозы в стекловидном теле глаза лиц, скончавшихся от сердечной патологии, может быть связано с длительным ишемическим приступом. В группе людей, скончавшихся в результате травм, отсутствие глюкозы выявлено в 45% случаев. Повышение глюкозы у лиц этой группы связано с длительностью посттравматического периода: чем длительнее переживание, тем больший уровень гликемии и, соответственно, большее содержание глюкозы в стекловидном теле. При механической асфиксии в результате утопления в воде, процент отсутствия глюкозы минимальный. Наличие глюкозы у данной группы пострадавших связан с эмоциональным стрессом. При остром отравлении алкоголем в большинстве случаев отмечается наличие глюкозы в стекловидном теле. Данный факт нуждается в дальнейшем изучении.

Таблица 1

Содержание глюкозы в стекловидном теле глаза (ммоль/л) в зависимости от причины смерти

Сердечная патология Соматиче- ские заболева- ния Травмы Отравле- ние алкоголем Прочие отравле- ния Утопление в воде Повеше- ние

n 41 9 20 8 5 4 12 7

M±m 0,17±0,04 0,14±0,10 0,38±0,19 0,60±0,22 0,14±0,14 0,48±0,21 0,08±0,06 4,01±1,46

min-max 0,0-0,8 0,0-1,3 0,0-3,4 0,0-1,8 0,0-0,7 0,0-1,0 0,0-0,6 0,6-9,4

n Отсутствия глюкозы

В группе лиц, скончавшихся в результате механической асфиксии при повешении (суицид) отсутствие глюкозы выявлено более чем в 80% всех случаев. Содержание глюкозы в стекловидном теле остальных лиц этой группы оказалось минимальным.

Резкое, почти в 10 раз, повышение содержания глюкозы в стекловидном теле выявлено в случаях убийств путем удавления петлей. При этом, наличие глюкозы в стекловидном теле выявлено во всех наблюдениях, а в половине случаев содержание глюкозы превысило 2,0 ммоль/л. Полученные данные свидетельствуют о явном эмоциональном и физическом стрессе перед наступлением смерти. Аналогично высокое содержание глюкозы в стекловидном теле ранее нами было выявлено только в группе больных сахарным диабетом [1,9]. Для дифференциальной диагностики вида смерти от механической асфиксии в результате сдавления органов шеи петлей между суицидом и убийством может быть использован биохимический анализ стекловидного тела глаза.

В контрольной группе содержание глюкозы в крови из синусов твердой мозговой оболочки практически не отличалось от содержания в крови из бедренной вены. При наступлении смерти от механической асфиксии вследствие сдавления органов шеи петлей наблюдалось резкое снижение содержания глюкозы в крови из синусов твердой мозговой оболочки, вплоть до полного исчезновения. В крови из бедренной вены в некоторых случаях отмечено повышение содержания глюкозы. При этом, разница в содержании глюкозы крови между указанными отделами венозной системы была резко выражена. Указанный параметр прослеживался только в первые двое суток постмортального периода. В более позднем сроке, в связи с утилизацией глюкозы и различ-

ным темпом утилизации, данный параметр был неинформативен.

Изучение содержания глюкозы совместно с содержанием лактата повысило диагностическую и доказательную ценность теста. Следует отметить, что содержание лактата в крови трупов в 20-30 раз выше, чем у живых людей и связано это с гипоксией в агональном периоде [9]. В контрольной группе разница в содержании глюкозы и лактата изменялась от отрицательного значения -1,1 ммоль/л, до положительного 0,8 ммоль/л. В группе скончавшихся от механической асфиксии в результате сдавления органов шеи петлей разница в суммарном содержании глюкозы и лактата в крови из бедренной вены и в крови из синуса твердой мозговой оболочки составила 11,0±2,1 ммоль/л (4,6-29,0 ммоль/л). При этом ценность теста сохранялась длительный постмортальный период - до двух недель [2,7]. Данные исследования особенно целесообразно проводить в случаях убийств при удушении мягкой петлей (шарфом и др.) со слабо выраженной странгуляцион-ной бороздой. Возможно проведение данного исследования при дифференциальной диагностике прижизненного сдавления шеи или имитации этого вида смерти.

Таким образом, биохимический анализ крови из двух разных отделов периферической венозной системы (синусов твердой мозговой оболочки и подвздошной вены) и стекловидного тела глаза может быть использован в целях дифференциальной диагностики механической асфиксии от сдавления органов шеи петлей, что представляет особый интерес для судебно-медицинской экспертизы.

Выводы.

1. Наличие глюкозы в стекловидном теле свидетельствует об антемортальной гипергликемии. Повышенное содержание глюкозы в стекловидном теле у лиц, не страдавших при жизни сахарным диабетом, свидетельствует о физическом или эмоциональном стрессе перед наступлением смерти.

2. Разница в суммарном содержании глюкозы и лактата (в пересчете на глюкозу) между кровью из бедренной вены и кровью из синусов твердой мозговой оболочки, превышающая 4,5 ммоль/л свидетельствует о наступлении смерти в результате сдавления органов шеи петлей.

3. Для дифференциальной диагностики вида смерти от механической асфиксии в результате сдавления органов шеи петлей между суицидом и убийством может быть использован биохимический анализ стекловидного тела глаза.

Литература

1. Акимов П. А., Терёхина Н. А. // Проблемы экспертизы в медицине. 2001. № 1. С. 30-33.

2. Акимов П. А. // Проблемы экспертизы в медицине. 2007. № 2. С. 35-37.

3. Качина Н. Н. // Судебно-медицинская экспертиза. 1991. № 4. С. 7-10.

4. Литвак А. С., Чвалун А. В. // Судебно-медицинская экспертиза. 1979. № 4. С. 34-34.

5. Любовицкий А. В., Коротун В. Н., Чемурзиева Н. В. // Всероссийский съезд судебных медиков, 3-й: Мат. Саратов, 1992.

Ч. 2. С. 312-314.

6. Николайчик В. В., Моин В.М., Кирковский В.В. и др. // Лаб. Дело. 1991. № 10. С. 13-18.

7. Акимов П.А., Терёхина НА. Способ диагностики механической асфиксии в результате сдавления органов шеи петлей // патент на изобретение № 2302001 RU. 2007. №. 18. С. 674.

8. Потёмкина С. А. Значение биохимического исследования трупной крови в патоморфологической диагностике: Дис...канд. мед. наук. М.. 1975.

9. Терёхина Н. А., Акимов П. А. // Патологическая физиология и экспериментальная терапия. 2005. № 2. С. 24-25.

THE USE OF INDICES OF CARBOHYDRATE ARTERIAL

INTERCHANGE AND VITREOUS BODY FOR POSTMORTAL DIAGNOSTICS OF MECHANICAL ASPHYXIA

P. A. AKIMOV, N. A. TEREKHINA

Perm State Medical Academy after Academician E.A. Wagner,

Chair of Biochemistry

The study of the maintenance of glucose in vitreous body of 106 corpses of the persons who did not suffer from diabetes during lifetime is conducted. The estimation of the total content of glucose and a lactate in peripheral blood is carried out at 20 corpses of the people

whose cause of death was mechanical asphyxia in the result of compression of neck organs with a loop, and also at 12 corpses of people who died as a result of cardiac pathology. The method postmortal diagnostics in the result of compression of neck organs with a loop is offered. The difference in the total content of glucose and a lactate (considering glucose) between the blood from the femoral vein and the blood from sinuses of dura mater, exceeding 4,5 mmol/l proves that death is the result of compression of neck organs with a loop. For differential diagnostics of the kind of death from a mechanical asphyxia in the result of compression of neck organs with a loop - a suicide or murderis possible to identify by means of the biochemical analysis vitreous body.

Key words: postmortem diagnosis, hanging, vitreous body,

lood, glucose, lactic add.

УДК 616.379-008.64-092.9:611-018.74:615.45

СРАВНИТЕЛЬНАЯ ОЦЕНКА ВЛИЯНИЯ НЕБИВОЛОЛА И БИСОПРОЛОЛА НА ВАЗОДИЛАТИРУЮЩУЮ И АНТИТРОМБОТИЧЕСКУЮ ФУНКЦИИ ЭНДОТЕЛИЯ МОЗГОВЫХ СОСУДОВ У ЖИВОТНЫХ С САХАРНЫМ ДИАБЕТОМ

И.Н. ТЮРЕНКОВ, А.В. ВОРОНКОВ*

В статье приводятся данные о том, что на фоне экспериментального сахарного диабета уменьшается эндотелий-зависимая вазодилатация мозговых сосудов, снижается тромборезистентность эндотелия, повышается уровень фактора Виллебранта. Установлено, что применение небиволола и бисопролола приводит к улучшению вазодила-тирующей и антитромботической функции эндотелия, что свидетельствует об их эндотелиопротективном действии в условиях сахарного диабета.

Ключевые слова: эндотелиальная дисфункция, сахарный диабет, небиволол, бисопролол

В последние годы значительно расширились представления об эндотелиальной дисфункции, лежащей в основе многих сердечно-сосудистых заболеваний. На сегодняшний день одной из лидирующих групп фармакологических средств, применяющихся для лечения сердечно-сосудистых заболеваний, являются b-адреноблокаторы. Исходя из того, что b-адреноблокаторы обладают антиадренергическим действием, подавляют активность РААС, проявляют антигипертензивный эффект, можно предположить, что курсовое применение препаратов этой группы будет приводить к улучшению функции эндотелия. Однако, сведения об эндотелиопротективных эффектах b-блокаторов противоречивы. Стоит отметить, что среди всей группы b-адреноблокаторов специфический прямой стимулирующий эффект на продукцию NO доказан только для небиволола. В последнее время в работах отечественных и зарубежных клинических фармакологов появляются данные о достаточно выраженном влиянии на функцию эндотелия другого b-блокатора - бисопролола. Так, например, результаты применения бисопролола беременным с артериальной гипертензией убедительно демонстрируют улучшение эндотелиальной функции у этой категории больных, хотя механизм его эндотелиопротекторного действия остается до конца не выясненным [5]. Стоит отметить и то, что проведение сравнительной оценки эффективности препаратов и выраженности их эндотели-опротективного действия внутри фармакологической группы при выполнении клинических исследований достаточно сложно. В связи с этим целью нашего исследования послужило сравнительное изучение влияния небивалола и бисопролола на вазодилати-рующую и антитромботическую функции эндотелия мозговых сосудов у животных с экспериментальным сахарным диабетом.

Материалы и методы исследования. Исследование выполнено на 56 крысах - самках линии Wistar, массой 200-210 гр., разделенных на 4 равные группы, одна из которых была интакт-ной. Сахарный диабет моделировался путем внутривенного введения стрептозотоцина в дозе 50 мг/кг. Через трое суток после введения стрептозотоцина у животных определялся уровень сахара в крови, в дальнейший эксперимент отбирались животные с уровнем сахара крови не ниже 12 ммоль/л. После чего формировались 3 экспериментальные группы (в среднем с равной гипергликемией), двум из которых ежедневно, на протяжении 4 недель,

* Волгоградский государственный медицинский университет, Кафедра фармакологии и биофармации ФУВ, 400131, Россия, г. Волгоград, пл. Павших борцов, 1, тел.: (8442) 97-81-80, е-таП: prohor.77@mail.ru