Новая форма IL33, мутировавшие формы IL33, антитела, анализы и способы их применения

1. Выделенный белок IL-33 или его активный фрагмент, стабилизированные в восстановленной форме с помощью модификации, которая снижает или устраняет образование дисульфидных мостиков между нативными остатками цистеина в пределах белка IL-33.
2. Выделенный белок IL-33 или его активный фрагмент, стабилизированные в восстановленной форме с помощью модификации, где
(i) один или несколько нативных остатков цистеина замещены альтернативной аминокислотой;
(ii) один или несколько нативных остатков цистеина удалены;
(iii) один или несколько нативных остатков цистеина конъюгированы с химической структурной единицей.
3. Выделенный белок IL-33 или его активный фрагмент по п. 1 или п. 2, где белок мутирован таким образом, что один или несколько остатков цистеина замещены аминокислотой, отличной от цистеина, например, при этом замещены один, два, три или четыре остатка цистеина, выбранные из Cys-208, Cys-227, Cys-232 и Cys-259.
4. Выделенный белок IL-33 или его активный фрагмент по п. 3, где один или несколько цистеиновых остатков замещен/замещены сериновым остатком.
5. Связывающая молекула, которая ослабляет или ингибирует активность белка redIL-33.
6. Связывающая молекула по п. 5, которая катализирует окисление redIL-33 в IL-33-DSB.
7. Связывающая молекула по п. 6, где молекула связывает IL-33-DSB.
8. Связывающая молекула по любому из пп. 5-7, которая предусматривает антитело или его антиген-связывающий фрагмент.
9. Связывающая молекула по любому из пп. 5-8, содержащая вариабельный домен тяжелой цепи (VH) и вариабельный домен легкой цепи (VL) с VHCDR 1-3 под SEQ ID NO:183, SEQ ID NO: 184 и SEQ ID NO: 185, где один или несколько VHCDR содержат 3 или меньше замен одной аминокислоты.
10. Связывающая молекула по п. 8, содержащая VHCDR 1-3 под SEQ ID NO:183, SEQ ID NO: 184 и SEQ ID NO: 185.
11. Связывающая молекула по любому из пп. 5-10, содержащая VL и VH с VLCDR 1-3 под SEQ ID NO:188, SEQ ID NO: 189 и SEQ ID NO: 190, где один или несколько VLCDR содержат 3 или меньше замен одной аминокислоты.
12. Связывающая молекула по п. 11, содержащая VLCDR 1-3 под SEQ ID NO:188, SEQ ID NO: 189 и SEQ ID NO: 190.
13. Связывающая молекула по любому из пп. 5-12, содержащая VHCDR1 с последовательностью под SEQ ID NO: 183, VHCDR2 с последовательностью под SEQ ID NO: 184, VHCDR3 с последовательностью под SEQ ID NO: 185, VLCDR1 с последовательностью под SEQ ID NO: 188, VLCDR2 с последовательностью под SEQ ID NO: 189 и VLCDR3 с последовательностью под SEQ ID NO: 190.
14. Выделенное антитело или его антиген-связывающий фрагмент, которые специфически связываются с IL-33, где VH и VL указанного антитела или его антиген-связывающего фрагмента содержат аминокислотные последовательности, которые по меньшей мере на 95%, 90% или 85% идентичны SEQ ID NO: 182 и SEQ ID NO: 187 соответственно.
15. Антитело или его антиген-связывающий фрагмент по п. 14, содержащие VH с последовательностью под SEQ ID NO: 182 и VL с последовательностью под SEQ ID NO: 187.
16. Связывающая молекула по п. 5, где указанная молекула связывается с белком IL-33 по любому из пп. 1-4.
17. Связывающая молекула по п. 5 или 16, где указанная молекула является перекрестно реактивной в отношении redIL-33 дикого типа.
18. Связывающая молекула по п. 17, которая специфически связывает redIL-33 дикого типа.
19. Связывающая молекула по любому из пп. 5 или 16-18, содержащая вариабельный домен тяжелой цепи (VH) и вариабельный домен легкой цепи (VL) с VHCDR под SEQ ID NO: 543, SEQ ID NO: 544 и SEQ ID NO: 545, где один или несколько из VHCDR содержат 3 или меньше замен одной аминокислоты.
20. Связывающая молекула по п. 19, содержащая VHCDR 1-3 под SEQ ID NO: 543, SEQ ID NO: 544 и SEQ ID NO: 545.
21. Связывающая молекула по любому из пп. 5, 16-20, содержащая VL и VH с VLCDR 1-3 под SEQ ID NO: 548, SEQ ID NO: 549 и SEQ ID NO: 550, где один или несколько VLCDR содержат 3 или меньше замен одной аминокислоты.
22. Связывающая молекула по п. 21, содержащая VLCDR 1-3 под SEQ ID NO: 548, SEQ ID NO: 549 и SEQ ID NO: 550.
23. Связывающая молекула по п. 20 или 22, содержащая VHCDR1 с последовательностью под SEQ ID NO: 543, VHCDR2 с последовательностью под SEQ ID NO: 544, VHCDR3 с последовательностью под SEQ ID NO: 545, VLCDR1 с последовательностью под SEQ ID NO: 548, VLCDR2 с последовательностью под SEQ ID NO: 549 и VLCDR3 с последовательностью под SEQ ID NO: 550.
24. Выделенное антитело или его антиген-связывающий фрагмент, которые специфически связываются с IL-33, где VH и VL указанного антитела или его антиген-связывающего фрагмента содержат аминокислотные последовательности, которые по меньшей мере на 95%, 90% или 85% идентичны SEQ ID NO: 542 и SEQ ID NO: 547 соответственно.
25. Антитело или его антиген-связывающий фрагмент по п. 24, содержащие VH с последовательностью под SEQ ID NO: 542 и VL с последовательностью под SEQ ID NO: 547.
26. Связывающая молекула, которая ослабляет активность белка IL-33-DSB.
27. Связывающая молекула по п. 26, которая предотвращает или снижает связывание IL-33-DSB с рецептором конечных продуктов усиленного гликирования (RAGE).
28. Связывающая молекула по п. 26 или 27, которая предусматривает антитело или его антиген-связывающий фрагмент.
29. Связывающая молекула по любому из пп. 25-27, где связывающая молекула представляет собой молекулу по любому из пп. 5-8 и пп. 16-25.
30. Связывающая молекула по любому из пп. 5-29 или ее антиген-связывающий фрагмент, которые выбраны из группы, состоящей из антитела человека, химерного антитела и гуманизированного антитела.
31. Связывающая молекула по любому из пп. 5-29, или антитело, или их антиген-связывающий фрагмент, которые выбраны из группы, состоящей из встречающегося в природе антитела, scFv-фрагмента, Fab-фрагмента, F(ab')2-фрагмента, минитела, диатела, триатела, тетратела и одноцепочечного антитела.
32. Связывающая молекула по любому из пп. 5-29, или антитело, или их антиген-связывающий фрагмент, которые представляют собой моноклональное антитело.
33. Полинуклеотид, кодирующий связывающую молекулу по любому из пп. 5-32, или антитело, или их антиген-связывающий фрагмент.
34. Полинуклеотид, кодирующий VH связывающей молекулы по любому из пп. 5-32, ее антиген-связывающего фрагмента.
35. Полинуклеотид, кодирующий VL связывающей молекулы по любому из пп. 5-32, ее антиген-связывающего фрагмента.
36. Вектор, содержащий полинуклеотид по любому из пп. 33-35.
37. Композиция, содержащая полинуклеотид по любому из пп. 33-35 или вектор по п. 36.
38. Клетка-хозяин, содержащая полинуклеотид по любому из пп. 33-35 или вектор по п. 36.
39. Клетка-хозяин, содержащая по меньшей мере первый и второй вектор, где указанный первый и указанный второй векторы являются неидентичными, при этом указанный первый вектор содержит полинуклеотид по п. 34, который кодирует вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, и при этом указанный второй вектор содержит полинуклеотид по п. 35, который кодирует вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина.
40. Способ получения антитела к IL33 или его антиген-связывающего фрагмента, включающий культивирование клетки-хозяина по п. 38 или 39 и извлечение указанного антитела или его антиген-связывающего фрагмента.
41. Антитело к IL33 или его антиген-связывающий фрагмент, полученные с помощью способа по п. 40.
42. Способ обнаружения экспрессии redIL-33 в образце, включающий:
(a) выделение образца, содержащего клетки;
(b) приведение указанного образца в контакт со связывающей молекулой по любому из пп. 5-32 или с ее антиген-связывающим фрагментом и
(c) обнаружение связывания указанной связывающей молекулы в указанном образце.
43. Фармацевтическая композиция, содержащая связывающую молекулу по любому из пп. 5-32 или ее антиген-связывающий фрагмент и носитель.
44. Комбинированный продукт, содержащий связывающую молекулу по любому из пп. 5-32 или ее антиген-связывающий фрагмент и второе терапевтическое средство.
45. Применение связывающей молекулы по любому из пп. 5-32, или ее антиген-связывающего фрагмента, или фармацевтической композиции по п. 43, или комбинированного продукта по п. 44 в терапии.
46. Способ лечения субъекта с воспалительным состоянием, включающий введение субъекту эффективного количества связывающей молекулы или ее антиген-связывающего фрагмента по любому из пп. 5-32, или композиции по п. 43.
47. Способ лечения субъекта по п. 46, где связывающая молекула или ее антиген-связывающий фрагмент ингибируют управляемую IL-33 выработку цитокинов.
48. Способ лечения субъекта по п. 46 или 47, где связывающая молекула или ее антиген-связывающий фрагмент ингибируют эффекты, опосредованные RAGE.
49. Способ предупреждения воспалительного ответа у субъекта по любому из пп. 46-48, где связывающая молекула или ее антиген-связывающий фрагмент ингибируют управляемую IL-33 выработку цитокинов и/или эффекты, опосредованные RAGE.
50. Способ по любому из пп. 46-49, где указанное воспалительное состояние представляет собой аллергическое нарушение.
51. Способ по любому из пп. 46-49, где указанное воспалительное состояние представляет собой астму или COPD.
52. Способ по любому из пп. 46-49, где указанный воспалительный ответ наблюдается в дыхательных путях указанного субъекта.
53. Способ идентификации терапевтического антитела или его антиген-связывающего фрагмента, включающий отбор антитела или его антиген-связывающего фрагмента, которые связываются с redIL-33, где указанное антитело или его антиген-связывающий фрагмент ослабляют активность белка redIL-33.
54. Способ по п. 53, где указанное терапевтическое антитело или его антиген-связывающий фрагмент выбраны из группы, состоящей из антитела человека, химерного антитела и гуманизированного антитела.
55. Способ по п. 53 или 54, где указанное терапевтическое антитело или его антиген-связывающий фрагмент выбраны из группы, состоящей из встречающегося в природе антитела, scFv-фрагмента, Fab-фрагмента, F(ab')2-фрагмента, минитела, диатела, триатела, тетратела и одноцепочечного антитела.
56. Способ по любому из пп. 53-55, где указанное терапевтическое антитело или его антиген-связывающий фрагмент представляют собой моноклональное антитело.
57. Способ по любому из пп. 53-56, где указанное терапевтическое антитело или его антиген-связывающий фрагмент являются эффективными для лечения или предупреждения воспалительного состояния у субъекта.
58. Способ по п. 57, где указанное воспалительное состояние представляет собой астму или хроническое обструктивное заболевание легких.