Действие препарата дикарбамин на кинетику популяций опухолевых клеток

УДК 615.3.03:616-006-018

T. G. Nikolaeva, G. A. Sedakova, E. M. Treschalina, Ya. V. Dobrynin

EFFECT OF THE DRUG DICARBAMIN ON THE KINETICS OF TUMOR CELL POPULATIONS

N. N. Blokhin Russian Cancer Research Center RAMS, Moscow

ABSTRACT

We studied the effect of dicarbamin and its combination with cyclophosphan and cisplatin (simultaneously and single administration) on the kinetics of tumor cell cycle in transplantable tumor of mouse Luise lung cancer (LLC) and human melanoma transplanted on nude mice (strain 6).

It was shown that the drug dicarbamin at a single administration at 0.5-1 mg/kg during a 5-10 day course causes cell cycle retardation in stationary phase (G1) in transplantable mouse tumor LLC and heterotransplantable human melanoma-6. We observed simultaneous accumulation of DNA-synthesizing cells in rapidly growing tumors and weakening of the dividing cell fraction. The indicated changes in cytokinetics were observed at least for 48 hours after dicarbamin administration was cancelled. Dicarbamin decreases cytotoxic effect of cytostatics cyclophosphan and cisplatin in a short-term and reverse manner.

Key words: dicarbamin, cell cycle, tumor cell population.

Т. Г. Николаева, Г А. Седакова, Е. М. Трещалина, Я. В. Добрынин

ДЕЙСТВИЕ ПРЕПАРАТА ДПКАРБАМПН НА КИНЕТИКУ ПОПУЛЯЦИЙ ОПУХОЛЕВЫХ КЛЕТОК

ГУ РОНЦ им. Н. Н. Блохина РАМН, Москва

РЕЗЮМЕ

Изучено влияние дикарбамина и его комбинации с циклофосфаном и цисплатином (одновременно и однократно) на кинетику клеточного цикла опухолевых клеток в перевиваемой опухоли легкого Льюис мышей (ЬЬС) и перевиваемой на бестимусных мышах меланоме человека (штамм 6).

Показано, что препарат дикарбамин при однократной дозе 0,5-1,0 мг/кг и 5-10-дневном курсе вызывает в перевиваемой опухоли мышей ЬЬС и гетеротрансплантируемой меланоме-6 человека задержку опухолевых клеток в стационарной фазе (в1) клеточного цикла. Одновременно в быстрорастущих опухолях наблюдается накопление ДНК-синтезирующих клеток и обеднение фракции делящихся клеток. Указанные изменения цитокинетики наблюдаются, по крайней мере, в течение 48 ч после прекращения введения дикарбамина. Дикарбамин кратковременно и обратимо снижает цитотоксический эффект цитостатиков — циклофосфана и цисплатина.

Ключевые слова: дикарбамин, клеточный цикл, опухолевая популяция.

ВВЕДЕНИЕ

Отсутствие способности к дифференцировке у большей части опухолевых клеток приводит к безудержному росту опухоли. Одним из новых подходов к противоопухолевой нецитотоксической терапии является поиск средств как специфической, так и неспецифической индукции дифференцировки клеток. Под последней понимают способность различных веществ восстанавливать (или запускать) утраченные или сниженные в результате различных причин функ-

ции, такие как прохождение клеткой нормального клеточного цикла, синтез биологически активных жизненно важных веществ в ней и др. К неспецифическим индукторам дифференцировки можно отнести вещества или соединения, механизм действия которых не связан с одной конкретной функцией клетки и которые могут вызывать ее дифференцировку по нескольким параметрам. Известно, что производные ретиноевой кислоты приводят к стабилизации роста опухолевых клеток. Политрансретиноевая кислота применяется

в качестве индуктора дифференцировки клеток острого промиелоцитарного лейкоза после индукционной или постремиссионной терапии, как средство продления ремиссии [1]. Имеются сведения о том, что действие а-интерферона при лечении меланомы также связано с индукцией дифференцировки опухолевых клеток. При этом повышается способность опухолевых клеток к адгезии, меняется антигенный профиль, замедляются прогрессирование опухолевого роста, развитие и скорость метастазирования [6]. В последние годы в клиническую практику вошли препараты (цитокины), вызывающие дифференцировку кроветворных клеток, поврежденных в результате цитотокси-ческой терапии [7]. К неспецифическим индукторам дифференцировки предположительно относится препарат дикарбамин, который сейчас активно изучается в этом плане [7, 3, 2, 5].

Задачи исследования — изучить влияние дикарбамина на популяционный состав и кинетику клеточного цикла опухолевых клеток в перевиваемой опухоли животных и гетеротрансплантируемой меланоме человека, а также комбинированное действие дикарбамина, циклофосфана и цисплатина на популяцию опухолевых клеток в перевиваемой опухоли.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Опыты ставили на перевиваемой опухоли легких Льюис (LLC) мышей и перевиваемой на бестимусных мышах меланоме человека (штамм 6). Штамм опухоли Льюис (LLC) представляет собой эпидермоидную карциному легких мышей линии C57Bl. Средняя продолжительность жизни мышей после перевивки опухоли — 24 дня.

Штамм меланома-6 представляет собой меланоти-ческую меланому ребенка, поддерживаемую путем перевивки бестимусным мышам на основе линии Balb разводки РОНЦ РАМН. Перевивается подкожно в оба бока животного. Рост опухоли медленный.

Методика проточной ДНК-цитометрии

ДНК-цитометрический анализ проводили в импульсном проточном цитофлюориметре ICP-22 (фирма «Фиве», ФРГ). Изучали распределение содержания в клетках ДНК. ДНК окрашивали специфическими флюоресцентными красителями. Уровень люминесценции окрашенных клеток (ядер) был пропорционален содержанию ДНК.

В качестве стандарта применяли нормальные лимфоциты человека или спленоциты мыши. Принималось, что лимфоциты или спленоциты содержат количество ДНК, соответствующее нормальному диплоидному кариотипу. С помощью этого стандарта определяли канал, в зоне которого регистрировались клетки с содержанием ДНК, близким нормальному. Путем пересчета (удвоения) определяли зону, где должны регистрироваться клетки с удвоенным количеством ДНК (тетраплоидные). В промежутке между этими зонами в пролиферирующей популяции располагаются клетки, синтезирующие ДНК. В соответ-

ствии с поступающей информацией для каждого из зарегистрированных анализатором каналов производили расчет распределения клеток по фазам клеточного цикла (Go/1, S, G2/M). Результат выражали в процентах. В каждом измерении анализировалось 20-100 тыс. клеток и более.

Подготовка образцов для ДНК-цитометричес-кого анализа

Ткань опухолей помещали в среду 199 и замораживали при температуре -20 °С. При указанной температуре образцы хранились и накапливались. Перед обработкой образцы размораживали и растирали в стеклянном гомогенизаторе в трис-буфере (рН=7,5) с сахарозой (0,5 М/л). После нескольких промывок центрифугированием к конечному осадку ядер добавляли тритон Х-100 до конечной концентрации 0,1-0,2 %. Затем прибавляли краситель, состоящий из смеси (1:1) этидиума бромида (10 мг/л) и митрамици-на (25 мг/л) в трис-буфере. Окрашивали в течение 20-30 мин при комнатной температуре. Перед анализом пробы пропускали через нейлоновый фильтр (50 мкм) и доводили до конечной концентрации 105 кл./мл. Конечные результаты обрабатывали статистически, вычисляли средние значения с учетом среднего квадратического отклонения. Достоверность различия средних величин оценивали по методике Стью-дента с учетом 95% вероятности.

РЕЗУЛЬТАТЫ

Опыты с опухолью Льюис

Было изучено влияние препарата дикарбамин (Д) на распределение опухолевых клеток по содержанию ДНК на разных сроках после введения препарата. Изучено также влияние Д на действие цитостатиков — циклофосфана и цисплатина (ЦЦ) на перераспределение популяций клеток в опухоли.

Опыты были начаты на 6-й день после перевивки опухолей животным. С 6-го дня мыши в течение 10 дней получали по 0,5 мг/кг массы тела Д энтераль-но (per os). Забой животных с последующим изучением опухолевого материала осуществляли на 10, 12, 16 и 18-й день после перевивки, т. е. соответственно на 5-й и 7-й день введения Д, а также через 2 и 4 дня после прекращения его 10-дневного введения. Контрольных животных забивали в указанные сроки: 10, 12, 16 и 18-й день после перевивки опухолей.

В опытах с цитостатиками препараты были введены одновременно и однократно (циклофосфан — 200 мг/кг, цисплатин — 6 мг/кг) внутрибрюшинно на 10-й день после прививки и на 5-й день введения Д. Забой животных производили на 12, 16 и 18-й день после прививки опухолей, что соответствовало:

а) 2 сут после введения ЦЦ на фоне 7-дневной дачи Д;

б) 6 сут после введения ЦЦ и через 2 сут после окончания 10-дневной дачи Д;

в) 8 сут после введения ЦЦ и через 4 сут после окончания 10-дневной дачи Д.

ДНК-цитометрическая характеристика перевиваемой опухоли легкого Льюис

В принципиальном плане распределение клеток по содержанию ДНК в опухоли LLC представляет собой трехпиковую кривую с максимальными значениями в ди-, трех- и гипертетраплоидной зонах. Содержание клеток в указанных зонах примерно одинаково. Учитывая стабильное положение 1-го пика в диплоидной зоне (ИДНК ~ 1,0), представленные им клетки можно рассматривать как диплоидные и трактовать как нормальные клетки стромы опухоли. Трехплоид-ный пик (ИДНК ~ 1,5) можно рассматривать как представленный анеуплоидными опухолевыми клетками. Третий пик, располагающийся за зоной тетраплоид-ных клеток (ИДНК > 2,0), видимо, представляет собой ДНК-синтезирующие, готовые к делению и делящиеся трехплоидные опухолевые клетки (IIS + IIG2). Доля интерфазных (IG1) диплоидных (нормальных) клеток в опухоли слабо возрастает (с 34 до 48 %) по мере «старения» опухоли, что может быть связано с более интенсивной гибелью опухолевых клеток по мере роста опухоли (табл. 1). Последнее согласуется со слабым снижением доли интерфазных (IIG1) опухолевых клеток к концу наблюдения (с 28 до 24 %).

Таблица 1

Влияние дикарбамина (Д) на популяционный состав и распределение клеток по фазам клеточного цикла в перевиваемой опухоли LLC

Фаза клеточ- ного цикла Параметр Сроки наблюдения после перевивки, сут

10 12 16 18

Контроль Опыт Контроль Опыт Контроль Опыт Контроль Опыт

Юг Ср. арифм. 34,8 36,2 32,9 30,3 38,2 27,9 48,2 42,3

Станд. откл. 3,4 2,4 2,9 1 1,6 1,8 2,4 3,5

Значимость — — — — — 0,01 — —

IIGi Ср. арифм. 28,3 33,4 30,5 37,2 30 41,3 24,5 30,4

Станд. откл. 2,7 2,4 2,3 2,8 1,5 1,9 1,6 1,8

Значимость — 0,05 — 0,01 — 0,01 — 0,01

ns Ср. арифм. 10,1 15,6 10,1 15,0 10,0 15,6 9,0 15,0

Станд. откл. 0,6 0,6 0,4 0,6 0,5 0,7 0,4 0,3

Значимость — 0,01 0,01 — 0,01 0,01

iig2 Ср. арифм. 24,2 14,3 23,5 14,1 19,5 12,0 15,7 9,0

Станд. откл. 1,5 1,7 0,8 1,7 0,8 1,0 1,0 0,4

Значимость — 0,01 — 0,01 — 0,01 — 0,01

Фракция пролиферирующих опухолевых клеток подразделяется на фракцию ДНК-синтезирующих клеток (IIS) и фракцию готовых к делению и делящихся опухолевых клеток (IIG2). Фракция клеток в S-фазе цикла за весь период наблюдения практически не изменялась (~10 %), в то время как доля клеток в IIG2-фазе по мере «старения» опухоли снижалась с 24 до

15 %. Описанные параметры были характерными для контрольных опухолей в период с 10-го по 18-й день после перевивки.

Под воздействием Д в перевиваемых опухолях LLC были выявлены следующие изменения (см. табл. 1).

На 10-й день после перевивки (после 5 введений Д) доля интерфазных диплоидных клеток (IG1) существенно не отличается от контроля, в то время как доли

интерфазных опухолевых клеток (1Ю1) и Б-фазных клеток существенно возрастают, а доля 1Ю2-фазных клеток снижается.

На 12-16-й день после прививки (после 7-10 введений Д) принципиальная картина перераспределения клеток по фракциям (фазам цикла) сохраняется. При этом различия показателей с контролями остаются существенными (р=0,01).

На 18-й день после прививки (через 4 дня после последнего из 10 введений Д) все показатели для опухолевых клеток снижаются, продолжая существенно отличаться от соответствующих контролей.

Рассматривая в общем виде динамику перестройки популяций клеток в опухоли ЬЬС под влиянием Д, можно отметить следующее. Д вызывает существенное увеличение доли интерфазных опухолевых клеток (1Ю1) с 33 до 41 % (~25 %). При этом при неизменной доле пролиферирующих клеток (~30 %) отмечается увеличение доли ПБ-клеток (~15 %) и снижение доли 1Ю2-клеток (12-14 %). В соответствии с указанным доля нормальных клеток стромы (Ю1) в образцах компенсаторно снижается. Указанные изменения наиболее ярко выражены после 5, 7 и 10-го введения Д, причем в последнем случае 2-дневный интервал после прекращения введения Д существенно не влиял на результаты. В то же время после 4-дневного интервала (опыт 18 сут) показатели опыта снижались.

По результатам опыта можно заключить следующее. Курсовое введение Д в указанных дозах вызывает перестройку кинетики популяции опухолевых клеток. Отмечается задержка клеток в синтетической (Б-фазе) цикла с компенсаторным уменьшением доли готовых к делению и делящихся клеток (в2-фаза). Одновременно происходит накопление опухолевых клеток в стационарной в1-фазе.

Таким образом, Д, снижая уровень пролиферативной активности популяции опухолевых клеток, способствует задержке и накоплению клеток в стационарной (непролиферирующей) фазе клеточного цикла. Можно предположить, что Д может замедлить рост опухоли и способствовать переходу клеток в более дифференцированное состояние.

Опыты с цитостатиками

Подопытная группа мышей была разделена на подгруппы: одна предварительно в течение 5 дней получала Д, другая его не получала. Обеим группам животных на 5-й день введения Д были одномоментно введены цитостатики ЦЦ. После введения ЦЦ группа подопытных животных в последующие 5 дней продолжала получать Д. В контроле к этому опыту животные его не получали. Забой животных производили на 12,

16 и 18-й день после прививки опухолей, что соответствовало 2, 6 и 8 сут после введения ЦЦ.

У контрольных и подопытных животных, получавших ЦЦ, отмечены резкие изменения популяционной структуры опухолей (табл. 2). Кривая распределения клеток по содержанию ДНК приобрела характер однопиковой кривой с максимальным значением в области

диплоидии и пологим спуском в области триплоидии и гипертетраплоидии. При такого рода кривых возможно лишь вычисление доли диплоидных (нормальных) клеток и суммарного значения доли анеуплоид-ных клеток, включающего опухолевые клетки в фазах 1Ю1 + 11Б + 1Ю2. После воздействия одними ЦЦ по мере развития эффекта наблюдалось падение доли опухолевых клеток с ~50-60 % в интактных контролях (см. табл. 1) до 31-15 % на 2-8-е сутки после введения ЦЦ. При этом относительная доля клеток диплоидной стромы нарастала с ~30-50 % в интактных контролях (см. табл. 1) до 69-84 % на 2-8-е сутки после введения ЦЦ (см. табл. 2).

Таблица 2

Сравнительные данные о влиянии циклофосфана с цисплатином (ЦЦ) и комбинации ЦЦ с дикарба-мином (ДЦЦ) на популяционный состав и распределение клеток по фазам клеточного цикла в перевиваемой опухоли ЬЬС

День после перевивки (сроки наблюдения) Режим введения препарата Параметр Популяция клеток

Диплоидная | Опухолевая

Препарат

ЦЦ ДЦЦ ЦЦ ДЦЦ

12-й 5 раз В 1 раз ЦЦ 2 раза В Ср. арифм. 69 45,4 31 54,6

Станд. откл. 6,7 4,7 6,7 4,7

Значимость /7=0,01 />=0,01

16-й 5 раз В 1 раз ЦЦ 5 раз В плюс 2 ДНЯ Ср. арифм. 82,1 89,5 17,9 10,5

Станд. откл. 5,5 2,6 5,5 2,6

Значимость />>0,05 /?>0,05

18-й 5 раз В 1 раз ЦЦ 5 раз В плюс 4 ДНЯ Ср. арифм. 84,8 91,1 15,2 8,9

Станд. откл. 4,7 6,7 4,7 8,7

Значимость />>0,05 />>0,05

Дача цитостатиков на фоне дикарбамина (ДЦЦ) вызывала качественно сходные изменения в кинетике популяций клеток опухоли. Однако имели место некоторые количественные различия. Так, в группе ДЦЦ через 2 сут после воздействия цитостатиками доля присутствовавших опухолевых клеток была достоверно выше (54 %), чем в группе ЦЦ (31 %). На последующих сроках (6 и 8 сут после воздействия) убыль опухолевых клеток в группе ДЦЦ обгоняла аналогичные контроли группы ЦЦ. Тем не менее эти различия были недостоверными. Создается впечатление, что Д в некоторой степени защищает опухолевые клетки от цитотоксиче-ского действия цитостатиков. Однако эффект защиты оказывается частичным и кратковременным. Вероятно, этот эффект связан с задержкой Д опухолевых клеток в стационарной фазе и при переходе в Б-фазу Такой тормозящий эффект Д является обратимым, реализуется лишь в его присутствии и через 2 сут после его элиминации идет на убыль или прекращается. Вопрос о том, защищает ли Д нормальные клетки стромы от

токсического действия цитостатиков, в настоящем опыте однозначно решен быть не может.

Таким образом, Д в некоторой степени защищает опухолевые клетки от однократного повреждающего воздействия цитостатиков. Указанный эффект является кратковременным и быстро сменяется противоположным. Имеются сведения о защите Д гемопоэтичес-ких клеток костного мозга от апоптоза в экспериментальных условиях под действием циклофосфана [8].

Опыты с гетеротрансплантируемой меланомой-6 человека

Было изучено влияние Д на кинетику клеточных популяций гетеротрансплантируемой меланомы человека, обладающей маркером уровня дифференцировки опухолевых клеток — меланинообразованием. Одной из задач опыта было определение продолжительности действия Д после его курсового введения.

Опухоль меланома-6 была перевита подкожно бес-тимусным мышам и после формирования опухолевых узлов (24 дня) использована в опытах. Подопытные животные с указанного срока в течение 5 дней получали Д per os из расчета 1 мг/кг массы тела. Забой подопытных животных осуществляли через 12, 24 и 48 ч после последней дачи Д. Одновременно в те же сроки забивались интактные контрольные животные.

Исследование кривых распределения клеток по содержанию ДНК в контрольных опухолях меланомы-6 показало следующее (табл. 3).

Таблица 3

Влияние Д на популяционный состав и распределение клеток по фазам клеточного цикла в гетеротрансплантируемой меланоме-6 человека

Фаза клеточ- ного цикла Параметр Сроки наблюдения после 5 введений Д, ч

12 24 48

Контроль Опыт Контроль Опыт Контроль Опыт

IGj Ср. арифм. 57,1 45,9 53,2 42,9 57,8 48,4

Станд. откл. 1,2 4,9 3,0 2,9 1,3 3,9

Значимость 0,01 0,01 0,01

HGi Ср. арифм. 27,3 35,9 30,4 39,0 2,7 35,1

Станд. откл. 2,5 2,9 2,2 2,3 2,8 4,5

Значимость 0,01 0,01 0,05

ns + G2 Ср. арифм. 15,6 18,2 16,4 18,0 15,1 16,4

Станд. откл. 1,6 2,3 2,0 1,9 3,5 3,1

Значимость 0,2 0,3 0,6

Кривые по своему характеру были двухпиковыми. Первый пик располагался в диплоидной области (ИДНК ~ 1,0) и представлял собой диплоидные (нормальные) клетки стромы опухоли. Определить видовую принадлежность указанных клеток (мыши или человека) не представляется возможным. Доля этих клеток (в1) в контроле составляла 53-57 %.

Второй пик кривой располагался в области трех-плоидии (ИДНК ~ 1,5) и, по-видимому, был представлен опухолевыми клетками меланомы-6. Их доля со-

ставляла 43-47 %. Доля пролиферирующих клеток опухоли (11Б + 1Ю2) составила 15-16 %. Следовательно, доля опухолевых клеток в контроле в стационарной фазе (1Ю1) составила около 30 %. Относительно небольшая доля опухолевых клеток опухоли и низкий пролиферативный пул (~15 %) согласуются с низкой скоростью роста опухолей.

В опыте под влияние Д было отмечено следующее. На всех сроках наблюдалось существенное увеличение доли интерфазных (1Ю1) опухолевых клеток по сравнению с контролем (с 27,3 до 35-39 %). Тем не менее перестройка этой популяции слабо коснулась пролиферативной фракции, небольшое различие в которой по сравнению с контролем было несущественным (р>0,05). В связи с существенным увеличением в пробах доли опухолевых клеток по понятным причинам относительная доля диплоидных клеток соответственно значимо снижалась (р=0,01).

Обращает внимание, что если на сроках 12 и 24 ч различие в доле опухолевых клеток было высокозначимым (р=0,01), то на сроке 48 ч оно снижалось до 0,05. Особенно заметным на разных сроках было падение значимости различий для пролиферирующей фракции (11Б + в2) опухолевых клеток. Если на сроке 12 ч р=0,2, то к 24 ч р=0,3, а к 48 ч р=0,6. Очевидно, что в примененной системе эффект действия Д после прекращения его введения продолжался на сроках 12 и 24 ч и несколько убывал к сроку 48 ч.

Приведенные опыты с гетеротрансплантируемой меланомой-6 человека показали, что Д при ежедневном 5-разовом курсовом введении вызывал достоверное накопление опухолевых клеток в стационарной (в1) фазе клеточного цикла. Слабые изменения в пролиферативной фракции популяции опухолевых клеток не были статистически достоверными. После прекращения введения Д его задерживающий эффект прослеживается, по крайней мере, в течение 48 ч в интерфазных клетках.

Сравнивая результаты приведенных выше опытов, можно отметить следующее. Д в дозе 0,5-1,0 мг/кг при 5-10-дневном курсе обладает способностью задерживать опухолевые клетки в стационарной фазе клеточного цикла. Эта способность, возможно, не является специфичной для конкретного вида опухолей. Способность влиять на фракцию пролиферирующих клеток вероятно связана с величиной пролиферативной активности популяции и достоверно не проявляется при медленнорастущих опухолях. Отмеченное под воздействием Д замедление прохождения опухолевых клеток по фазам клеточного цикла с обеднением доли делящихся клеток можно рассматривать как нетоксичный дифференцирующий эффект, способствующий созреванию отдельных клеток и повышению уровня дифференцировки популяции в целом. Указанный эффект препарата после 5-кратного введения сохраняется, по крайней мере, в течение 48 ч после прекращения его введения.

При введении цитостатиков ЦЦ на фоне 5-10дневного курса Д отмечается некоторое кратковремен-

ное обратимое снижение их цитотоксического эффекта. Последнее, видимо, связано со снижением доли пролиферирующих клеток, наиболее уязвимых для действия цитостатиков. Предположение о дифференцирующем действии Д требует подтверждения в специальных опытах, позволяющих доказательно регистрировать проявления специфической дифференцировки клеток (например, меланинообразование и др.). Доказательства увеличения степени дифференцировки опухолевых клеток меланомы-6 по увеличению клеток, содержащих меланосомы и числа меланосом в них, по интенсивности меланинообразования получены в работах Райхлина и соавт. (2001). Имеются сведения о действии Д на дифференцировку эритроблас-тоза Френд [4].

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Препарат дикарбамин при однократной дозе 0,5-1,0 мг/кг и 5-10-дневном курсе вызывает в перевиваемой опухоли мышей LLC и гетеротрансплантируемой меланоме-6 человека задержку опухолевых клеток в стационарной фазе (G1) клеточного цикла. Одновременно в быстрорастущих опухолях наблюдается накопление ДНК-синтезирующих клеток и обеднение фракции делящихся клеток. Указанные изменения цитокинетики наблюдаются, по крайней мере, в течение 48 ч после прекращения введения дикарбамина. Дикарбамин кратковременно и обратимо снижает цито-токсический эффект цитостатиков циклофосфана и цисплатина.

ЛИТЕРАТУРА

Абелев Г. И. Дифференцировка и опухолевый фенотип в клетках лейкозов и лимфом. В кн.: Клиническая онкогематология /Под ред. М. А.Волковой. — М.: Медицина, 2001. — С. 116-123.

Миндра Н. В., Горбунова В. А., Бычков М. Б. и др. Дикарбамин как новый протектор гематологической токсичности у онкологических больных, получающих цитостатическую терапию // Рос. онкол. журнал. — 2003 (в печати).

Райхлин Н. Е., Горбунова В. А., Трещалина Е. М. и др. Индукция дифференцировки гемопоэтических клеток дикарбамином у больных в условиях миелосу-прессивной химиотерапии // Рос. биотерапевт. журнал. — 2003. — Т. 2, № 3. — С. 61-66.

Райхлин Н. Т., Трещалин И. Д., Бодягин Д. А. и др. Защита препаратом дикарбамин гемопоэтических клеток костного мозга от апоптоза, развивающегося в экспериментальных условиях под действием циклофосфана (морфологическое исследование) // Рос. биотерапевт. журнал. — 2003. — Т. 2, № 1. — С. 36.

Райхлин Н. Т., Трещалина Е. М., Седакова Л. А. и др. Действие дикарбамина на дифференцировку клеток эритробластоза Френд (гистологическое и электронно-микроскопическое исследование) //Рос. биотерапевт. журнал. — 2003. — Т. 2, № 1. — С. 37.

Atzpodien J., Kirchner H. Cancer, cytokins, and cytotoxic cells: interleukin-2 in the immunotherapy of

human neoplasms // Klin. Wocherschr. — 1990. — Vol. 68. — P. 1-7.

Crawford J., Ozer H., Stoller R. et al. Phase II of clinical investigation of GM-CSF by the patients of SCLC with the dose-intensive chemotherapy // N. Engl. J. Med. J. Med. — 1991. — Vol. 325, No. 3. — P. 164-170.

Mindra N. B., Gorbunova V. A., Topchieva S. V. et al. Efficacy of new agent dicarbamin in prevention of hematological toxicity in patients with advanced ovarian cancer receiving myelosupressive chemotherapy (CT) // Abstr. 14th Int. Congress on Anti-Cancer Treatment, France, Paris, 2003. — P. 257.