МУЛЬТИВАЛЕНТНАЯ ВАКЦИНА ИЗ НАТИВНЫХ ВЕЗИКУЛ НАРУЖНОЙ МЕМБРАНЫ МЕНИНГОКОККОВ, СПОСОБЫ ЕЕ ПОЛУЧЕНИЯ И ПРИМЕНЕНИЯ

1. Вакцина, содержащая нативные везикулы наружной мембраны, полученные по меньшей мере из двух штаммов менингококков, которые были генетически модифицированы для широкого спектра защиты, где нативные везикулы наружной мембраны включают три различных набора антигенов на основе PorA, LOS и консервативных белков наружной мембраны; где генетически модифицированные штаммы были модифицированы для повышения безопасности путем инактивации генов lpxL1, synX и lgtA; и где по меньшей мере один генетически модифицированный штамм экспрессирует по меньшей мере два различных подтипа белков или подтипа эпитопов PorA.
2. Вакцина по п.1, где LOS, экспрессированный каждым штаммом, имеет отличающуюся коровую структуру LOS и имеет альфа-цепь, состоящую из глюкозы и галактозы.
3. Вакцина по п.1, где каждый подтип белков или подтип эпитопов PorA содержит по меньшей мере один, наиболее преобладающий подтип PorA из изолятов группы В.
4. Вакцина по п.1, где в каждом штамме сверхэкспрессирован другой консервативный поверхностный белок с известной способностью индуцировать бактерицидные антитела и он выбран из группы, состоящей из варианта 1 FHBP, варианта 2 FHBP и варианта 3 FHBP; NadA; App; NspA; TbpA и TbpB.
5. Комбинация NOMV трех генетически модифицированных штаммов Neisseria meningitidis с антигенной изменчивостью, где по меньшей мере один из штаммов выбран из:
(1) штамма Н44/76 HOPS-DL со следующими генетическими модификациями или характеристиками:
инактивацией генов synX, lpxL1 и lgtA;
инсерцией второго гена porA (подтип Р1.7-1,1) вместо opaD;
повышенной экспрессией NadA; и
стабильной высокой экспрессией Орс и PorA;
A
(2) штамма 8570 HOPS-GL со следующими генетическими модификациями или характеристиками:
инактивацией генов synX, lpxL1 и lgtA;
инсерцией второго гена porA вместо opaD;
повышенной экспрессией варианта 1 белка, связывающего фактор Н; и
стабильной высокой экспрессией PorA и Орс; и
2
(3) штамма В16В6 HPS-GA со следующими генетическими модификациями или характеристиками:
инактивацией генов synX, lpxL1 и lgtA;
инсерцией второго гена porA вместо opaD;
повышенной экспрессией варианта 2 белка, связывающего фактор Н; и
стабильной высокой экспрессией PorA и Орс.
6. Комбинация вакцинных штаммов по п.5, где штамм Н44/76 HOPS-DL получен из штамма дикого типа ЕТ-5 Н44/76 (В:15:P1.7,16:L,3,7:P5.5,C).
1
7. Комбинация вакцинных штаммов по п.5, где штамм 8570 HOPS-GL получен из штамма дикого типа ЕТ-5 8570 (В:4:P1.19,15:L3,7v:P5.5,11,C).
2
8. Комбинация вакцинных штаммов по п.5, где штамм В16В6 HPS-GL получен из штамма дикого типа ЕТ-37 В16В6 (В:2а:Р1.5,2:L2:P5.1,2,5).
9. Вакцина по п.1, где NOMV получены без обработки детергентом или денатурирующими растворителями из клеточной массы или истощенной культуральной среды.
10. Вакцина по п.1, где вакцину суспендируют в 5%-ой глюкозе, используемой в качестве наполнителя.
11. Вакцина по п.1, где NOMV комбинируют с одним или несколькими адъювантами, например гидроксидом алюминия или фосфатом алюминия, MF 59, CPG-ODN или MPLA.
12. Вакцина по п.1, где композиция против менингококковой инфекции, содержит нативные везикулы наружной мембраны менингококков (NOMV) одного или нескольких генетически модифицированных штаммов Neisseria meningitidis, где один или несколько генетически модифицированных штаммов модифицированы путем:
i. инактивации гена synX,
ii. инактивации гена lpxL1,
iii. инактивации гена lgtA в каждом штамме, что приводит к экспрессии укороченных или усеченных липоолигосахаридов (LOS) без тетрасахарида лакто-N-неотетраозы, и
iv. инсерции по меньшей мере одного второго гена porA, отличающегося антигенными свойствами, вместо гена ора.
13. Вакцина по п.12, где генетически модифицированный штамм дополнительно стабильно экспрессирует по меньшей мере один минорный консервативный белок наружной мембраны или его экспрессия повышена.
14. Вакцина по п.12, где генетически модифицированный штамм дополнительно стабильно экспрессирует по меньшей мере один белок наружной мембраны, где белок наружной мембраны выбран из группы, содержащей Орс и PorA.
15. Вакцина по п.12, где по меньшей мере один второй ген porA, отличающийся антигенными свойствами, экспрессирует по меньшей мере один подтип белка или подтип эпитопа PorA, выбранный из распространенных подтипов PorA изолятов Meningitidis группы В.
16. Вакцина по п.13, где по меньшей мере один минорный консервативный белок наружной мембраны выбран из группы, состоящей из: вариантов 1 FHBP (GNA 1870), варианта 2 FHBP, варианта 3 FHBP; NadA; App, NspA, TbpA и В.
17. Вакцина по п.1, где вакцина содержит генетически модифицированный вакцинный штамм из штамма Neisseria meningitidis подтипа В, включая штамм Н44/76 HOPS-D.
18. Вакцина по п.17, где вакцина содержит генетически модифицированный вакцинный штамм Neisseria meningitidis подтипа В, полученный из штамма Н44/76, который имеет следующие генетические модификации:
i) ген synX инактивирован,
ii) ген lpxL1 инактивирован,
iii) ген lgtA инактивирован,
iv) проведена инсерция второго гена porA вместо гена opaD,
v) повышена экспрессия NadA по сравнению с нативным штаммом, и
vi) отмечается стабильная повышенная экспрессия белков Орс и PorA.
19. Вакцина по п.17, где генетически модифицированный штамм Н44/76 HOPS-DL получен из штамма дикого типа ЕТ-5 Н44/76 (В:15:P1.7,16:L,3,7:P5.5,C).
20. Вакцина по п.1, где вакцина содержит генетически модифицированный вакцинный штамм Neisseria meningitidis подтипа В, включая штамм 8570 HOS-G1.
21. Вакцина по п.20, где генетически модифицированный вакцинный штамм Neisseria meningitidis подтипа В получен из 8570, который имеет следующие генетические модификации:
i) ген synX инактивирован,
ii) ген lpxL1 инактивирован,
iii) ген lgtA инактивирован,
iv) проведена инсерция второго гена porA вместо opaD;
v) повышена экспрессия варианта 1 белка, связывающего фактор Н; и
vi) отмечается стабильная повышенная экспрессия белков PorA и Орс.
22. Вакцина по п.20, где генетически модифицированный штамм получен из штамма дикого типа ЕТ-5 8570 (В:4:Р1.19,15:L3,7v:P5.5,11C).
2
23. Вакцина по п.1, где вакцина содержит генетически модифицированный вакцинный штамм Neisseria meningitidis подтипа В, включая штамм В16В6 HPS-GA.
24. Вакцина по п.23, где генетически модифицированный вакцинный штамм Neisseria meningitidis подтипа В получен из В16В6, который имеет следующие генетические модификации:
i) ген synX инактивирован,
ii) ген lpxL1 инактивирован,
iii) ген lgtA инактивирован,
iv) проведена инсерция второго гена porA (подтип Р1.22-1,4) вместо opaD;
v) повышена экспрессия варианта 2 белка, связывающего фактор Н; и
vi) отмечается стабильная повышенная экспрессия белков PorA и Орс.
25. Вакцина по п.23, где генетически модифицированный штамм получен из штамма дикого типа ЕТ-37 В16В6 (В:2а:Р1.5,2:L2:P5.1,2,5).
26. Вакцина по любому из пп.17-25, где штамм выращивают на среде с дефицитом железа.
27. Вакцина по любому из пп.17-25, где инактивацию гена synX, гена lpxL1 или гена lgtA осуществляют посредством вставки гена устойчивости к лекарственному средству в последовательность инактивированного гена.
28. Композиция вакцины, содержащая NOMV из одного или нескольких генетически модифицированных штаммов Neisseria meningitidis подтипа В, выбранный из группы, состоящей из:
а) генетически модифицированного вакцинного штамма Neisseria meningitidis подтипа В, полученного из: штамма Н44/76, содержащего генетические модификации:
i) ген synX инактивирован,
ii) ген lpxL1 инактивирован,
iii) ген lgtA инактивирован,
iv) встроен второй ген porA вместо гена opaD,
v) повышена экспрессия NadA по сравнению с природным штаммом, и
vi) стабилизирована повышенная экспрессия белков Орс и PorA;
b) генетически модифицированного вакцинного штамма Neisseria meningitidis подтипа В, полученного из 8570, содержащего следующие генетические модификации:
i) ген synX инактивирован,
ii) ген lpxL1 инактивирован,
iii) ген lgtA инактивирован,
iv) встроен второй ген porA (подтип P1.22-1,4) вместо гена opaD,
v) повышена экспрессия варианта 2 белка, связывающего фактор Н; и
vi) стабилизирована повышенная экспрессия белков PorA и Орс; и
c) генетически модифицированного вакцинного штамма Neisseria meningitidis подтипа В, полученного из В16В6, содержащего следующие генетические модификации:
i) ген synX инактивирован,
ii) ген lpxL1 инактивирован,
iii) ген lgtA инактивирован,
iv) проведена инсерция второго гена porA (подтип P1.22-1,4) вместо opaD;
v) повышена экспрессия варианта 2 белка, связывающего фактор Н; и
vi) отмечается стабильная повышенная экспрессия белков PorA и Орс.
29. Композиция вакцины по п.28, где композиция вакцины содержит NOMV из двух или более генетически модифицированных штаммов.
30. Композиция вакцины по п.28, где композиция вакцины содержит NOMV из трех или более генетически модифицированных штаммов.
31. Композиция вакцины по любому из пп.1-4 и 9-30, где NOMV получают из клеточной массы или из истощенной культуральной среды без обработки детергентом или денатурирующим растворителем.
32. Композиция вакцины по любому из пп.1-4 и 9-30, где композицию вакцины суспендируют в 5%-ой глюкозе, используемой в качестве наполнителя.
33. Композиция вакцины по любому из пп.1-4 и 9-30, где NOMV комбинируют с одним или несколькими адъювантами.
34. Композиция вакцины по любому из пп.1-4 и 9-30, где генетически измененный штамм модифицирован так, что экспрессирует белки накопления железа.
35. Способ стимуляции иммунного ответа на менингококковую инфекцию у животного или человека, включающий введение композиции по любому из пп.1-4 и 9-30 животному или человеку для иммунизации против менингококковой инфекции.
36. Способ по п.35, где вакцину используют для иммунизации против инфекции, вызываемой менингококками группы В.
37. Способ по п.35, где вакцину вводят внутримышечно и/или интраназально для иммунизации против менингококковой инфекции.