Гепатозащитное действие стимусола при экспериментальном хроническом гепатите

65. №1. - С.41-43.

4. Микроскопическая техника: Руководство / Под ред. Д.С. Саркисова и Ю.Л. Перова. - М., 1996. - 544 с.

5. Николаев С.М. Растительные комплексы при повреждениях гепатобилиарной системы. - Новосибирск, 1992. - 155 с.

6. Онучина Е.В., Рожанский А.А., Казакова Р.В., Пошкайте И.А. Лекарственное поражение печени // Сибирский медицинский журнал (Иркутск). - 2007. - № 3. - С.88-91.

7. Полунина Т.Е., Маев И.В. Медикаментозные гепатиты // Фарматека. - 2006. - Т. 127. №12. - С.34-39.

8. Сергиенко В.И., Бондарева И.Б. Математическая стати-

стика в клинических исследованиях. - М., 2006. - 253 с.

9. Скуя Н.А. Хронические заболевания желчных путей (патогенез и лабораторная диагностика). - Л., 1972. - 229 с.

10. Соколов С.Я. Фитотерапия и фитофармакология: Руководство для врачей. - М., 2000. - 976 с.

11. Чехирова Г.В., Самбуева З.Г., Ербаева Л.В., Асеева Т.А. и др. Способ получения средства, обладающего желчегонной и противовоспалительной активностью // Патент РФ № 215591237от 20.11.2000.

12. Шерлок Н., Дули Дж. Заболевания печени и желчных путей. - М., 1999. - 925 с.

Информация об авторах: Улан-Удэ, ул. Сахьяновой, 6, Институт общей и экспериментальной биологии СО РАН, тел. (3012)433713, е-шаП: 1а1иг75@ mail.ru, Разуваева Янина Геннадьевна - к.б.н., научный сотрудник лаборатории безопасности биологически активных веществ ИОЭБ СО РАН; Николаев Сергей Матвеевич - д.м.н., профессор, заведующий лабораторией экспериментальной фармакологии ИОЭБ СО РАН; Самбуева Зинаида Гомбожаповна - к.б.н., научный сотрудник лаборатории безопасности биологически активных веществ ИОЭБ СО РАН; Занданов Александр Октябревич - к.м.н., доцент, заведующий кафедрой терапии медицинского факультета БГУ; Мархаева Лариса Эдуардовна -старший преподаватель кафедры терапии медицинского факультета БГУ

© МАХМАДАЛИЕВ Х.Ж., КАЛДЫБАЕВА А.О., АБДУСАМАТОВ А.А., НАБИЕВ А.Н. - 2010

ГЕПАТОЗАЩИТНОЕ ДЕЙСТВИЕ СТИМУСОЛА ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ХРОНИЧЕСКОМ ГЕПАТИТЕ

Х.Ж. Махмадалиев1, А.О. Калдыбаева1, А.А. Абдусаматов1, А.Н. Набиев2 ('Ташкентский педиатрический медицинский институт, Республика Узбекистан, и.о. ректора - д.м.н., проф. А.И.

Искандаров, кафедра фармакологии, зав. - д.м.н., проф. А.А. Абдусаматов; Государственный центр экспертизы и стандартизации лекарственных средств Минздрава Республики Узбекистан, директор - д.ф.н.,

проф. Х.К. Жалилов)

Резюме. Изучено влияние стимусола (смесь экстракта корня солодки и мумие) на процессы перекисного окисления липидов, желчеобразовательную и желчевыделительную функцию печени при хроническом гепатите. Установлено, что стимусол у крыс с хроническим гелиотриновым гепатитом оказывал антиоксидантное и антихолестатическое действие. Стимулировал угнетенные гелиотрином холатосинтетические процессы в гепатоцитах. Улучшал экскрецию билирубина и холестерина в желчь. По степени гепатозащитной активности не уступал известному гепатопротектору силибор.

Ключевые слова: стимусол, корень солодки, мумие, силибор, хронический гелиотриновый гепатит, конъюгированные диены, диенкетоны, малоновый диальдегид, каталаза, супероксиддисмутаза, желчевыделение, желчные кислоты, холестерин, билирубин.

THE HEPATOPROTECTIVE EFFECT OF STIMUSOL IN EXPERIMENTAL CHRONIC HEPATITIS

H.J. Mahmadaliev1, A.O. Kaldibaeva1, A.A. Abdusamatov1, A.N. Nabiev2 ('Tashkent Pediatric Medical Institute of Health Ministry of the Republic Uzbekistan, 2Head Department of Drug and

Medical Equipment Quality Control)

Summary. The influence of stimusol (admixture of extract of radix Glycyrrhiza and mumie) on processes of lipid peroxidation , bile protection and bile - excreting functions of liver, in chronic heliotrine hepatitis has been studied. It was determined that stimusol in rats with chronic heliotrine hepatitis rendered antioxidant and choleretic action, stimulated depressed heliotrine bile acidsynthetic processes in hepatocytes, improved excretion of cholesterol and bilirubin in bile. Hepatoprotective activity of stimusol was the same as in well known hepatoprotector Siliborum.

Key words: stimusol, liquorice, mummie, silibor, chronic heliotrine hepatitis, conjugative diens and dien ketones, catalase, superoxiddismutase, jaundice, bile acids, cholesterol, malonaldehyde, bilirubin.

В генезе заболеваний печени и желчевыводящих путей наряду с цитолитическим синдромом значительная роль принадлежит холестазу и нарушению реологических свойств желчи, приводящих к снижению секреторной и метаболической функции печени, нарушению детоксикации экзо- и эндотоксинов [14]. Патогенетическая терапия гепатопротек-торами направлена на коррекцию этих основных звеньев заболевания.

В настоящее время остается высокой потребность в ге-патопротекторных средствах, которые повышают резистентность печени к действию ксенобиотиков, нормализуют метаболические процессы в условиях напряжения детоксицирующей функции. Исследованиями последних лет подтверждена целесообразность применения фитопрепаратов при гепатитах. Они обладают гепатопротекторными свойствами, в механизме которых отмечено уменьшение синдрома цитолиза гепатоцитов, нормализация или существенное улучшение гликогенообразующей способности печени, усиление де-зинтоксикационной, пигментообразующей и экскреторной функций [6].

В связи с этим, изыскание новых лекарственных средств растительного и природного происхождения, сочетающих

гепатопротекторную и желчегонную активность, является одной из актуальных задач современной медицины.

Целью данной работы явилось изучение влияния сти-мусола на процессы перекисного окисления липидов и желчеобразовательную и желчевыделительную функции печени при хроническом гелиотриновом гепатите.

Материалы и методы

Впервые нами проведены исследования антиоксидантного и желчегонного действия стимусола при хроническом гелиотриновом гепатите. Стимусол - препарат, который является биоактивной композицией, состоящий из сухого экстракта корня солодки голой и мумие в соотношении 1:1. Сухой экстракт корня солодки голой выпускается в виде таблеток фармацевтической промышленностью страны. Мумие

- природный смолоподобный продукт, представляющий собой бесформенные куски с неравномерно-ячеистой или гладкой поверхностью, твердой или упругой консистенции, обладающие характерным бальзамическим запахом, производится отечественными фармацевтическими фирмами [11]. Данная биоактивная композиция - стимусол разработана в

Ташкентском Фармацевтическом институте [16].

Эксперименты проведены на 45 белых крысах-самцах массой 150-210 г. Процессы перекисного окисления липидов (ПОЛ) изучены на 21 животных, у остальных исследованы процессыжелчевыделения и желчеобразования. Хронический гепатит вызывали подкожной инъекцией гелиотрина по схеме: в первую неделю вводили 2 раз в дозе 10 мг/кг, затем в аналогичном режиме в дозе 7,5 мг/кг и на третьей неделе - по 5 мг/кг [1]. Действие стиму-сола исследовано в сравнении с классическим гепа-топротектором силибором.

Экспериментальные животные были распределены на 4 группы: 1) интактные, здоровым крысам вводили воду в адекватном объеме и подкожно инъецировали физиологический раствор хлорида натрия в течение одного месяца; 2) контрольные, животным подкожно вводили гелиотрин по схеме;

3) опытные, внутрь вводили стимусол в дозе 10 мг/кг и гелиотрин по схеме; 4) опытная, внутрь вводили силибор в дозе 100 мг/кг и гелиотрин по схеме.

Эксперименты проводили в соответствии с «Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных» (Приложение к приказу МЗ СССР №755 от 12.08.1977 г.) и «Правилами Европейской конвенции по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и иных научных целей».

Исследуемые препараты вводили в виде водного раствора внутрь атравматическим зондом ежедневно предварительно до гепатотоксемии в течение 5 дней затем одновременно с гелиотрином в течение 25 дней. После последнего введения препаратов животных декапитировали, соблюдая условия эвтаназии, извлекали печень общепринятыми методами. В гомогенате ткани печени определяли содержание диеновых конъюгатов [15], малонового диальдегида [5] и активность ферментов антиоксидантной защиты (АОЗ) - каталазы (КТ) [4] и суперок-сиддисмутазы (СОД) [2].

Часть крыс, наркотизировали этаминалом натрия (вну-трибрюшинно,

40 мг/кг) и в течение 4-х часов собирали желчь через канюлю, вставленную в желчный проток [7]. В желчи животных определяли концентрацию желчных кислот, холестерина и билирубина в мг% [3,7]. Высчитывали интенсивность желчевыделения в мг/мин/на 100 г массы крыс и общее количество желчи за 4 часа в мг/100 г. Холатохолестериновый коэффициент рассчитывали как отношение концентрации желчных кислот к концентрации холестерина.

Полученные результаты обрабатывали методом вариационной статистики с использованием программного пакета Statistica V. 6.0 (StatSoft, ША, 1999). Статистически значимыми считались различия при р<0,05 [6,8].

Результаты и обсуждение

Полученные результаты проведенных исследований показали, что у животных с хроническим токсическим гепатитом в контрольной группе, отмечается общая слабость, взъе-рошенность и уменьшение блеска шерсти, вздутие живота, развитие асцита, и в этом случае отмечается летальность

40-45% животных. Под влиянием гепатотоксина-гелиотрина наряду с нарушениями общего состояние животных в ткани печени отмечается повышение содержание диеновых конъюгатов и малонового диальдегида на 63,5% и 97,5% соответственно (р<0,001). Одновременно с накоплением продуктов перекисного окисления липидов наблюдается значимое снижение активности АОЗ-СОД и КТ соответственно на 64,3% и 42,0% (р<0,001) при сравнении с данными интактной группы

(табл. 1). Снижение активности энзимов антиоксидантной защиты, в свою очередь, приводит к образованию радикала супероксидного аниона, который, вступая в реакцию с перекисью водорода, увеличивает образование реактогенного кислорода и гидроксильного радикала. Образовавшиеся радикалы вызывают деструкцию биомембран гепатоцитов и приводят к развитию белковой и жировой дистрофии клеток печени [12]. Данные результаты свидетельствуют о том, что гелиотрин обладает прооксидантным действием, усиливает цитолиз гепатоцитов и приводит к нарушению метаболических процессов печени.

Наряду с усилением процессов ПОЛ и снижением анти-оксидантной защиты организма у контрольных крыс отмечается нарушение желчеобразовательной функции печени вследствие развития синдрома внутрипеченочного холеста-за. У животных этой группы отмечается снижение интенсив-

ности выделения желчи как по часам и так за весь период сбора желчи. Общее количество выделенной желчи за 4 часа снижалось на 51,3% (р<0,001) по отношению к показателям животных интактной группы. Основные показатели вну-трипеченочного холестаза содержание желчных кислот снизилось на 54,8% (р<0,05), холестерина - 55,5% и показатель пигментного обмена - содержание билирубина уменьшилось на 70,6% (р<0,05) (табл. 2, 3). Эти нарушения под действием гелиотрина как показано ранее, связаны с угнетением синтеза желчных кислот, экскреции холестерина и билирубина вследствие ингибирования фермента уридиндифосфатглю-куронилтрансферазы [13].

Предварительное введение стимусола и силибора, а также в течение всего периода токсемии препятствует резким нарушениям антиоксидантной системы и желчеобразовательной функции печени. В результате лечебно-профилактического применения стимусола в течение одного месяца отмечалось уменьшение содержания конъюгированных диенов на 33,7% и диенкетонов на 38,3% (р<0,001). Снижался уровень

Таблица 1

Влияние стимусола на показатели перекисного окисления липидов в ткани печени крыс

Исследуемые показатели Условия эксперимента

Интактная (физ. р-р) Контроль (гелиотрин) Стимусол + гелиотрин Силибор + гелиотрин

Конъюгированные диены D/1 мг липида 0,450±0,023 0,736±0,0217* 0,488±0,03х 0,560±0,024х

Конъюгированные диенкетоны, D/1 мг липида 0,224±0,014 0,397±0,028* 0,245±0,02х 0,254±0,021х

МДА, нмоль/1г ткани 36,1±1,01 71,3±1,14* 42,2±1,2х 46,8±1,74х

СОД, усл. ЕД/мин.мг. белка 1,45±0,08 0,52±0,042* 0,91±0,037х 0,89±0,07х

Каталаза, нмоль/мин. мг. белка 0,43±0,016 0,25±0,019* 0,38±0,019х 0,34±0,02х

Примечание здесь и в табл. 2: * - значимость различий при р<0,05 в сравнении с интактными; х - значимость различий при р<0,001 в сравнении с контролем.

Таблица 2

Влияние стимусола на интенсивность секреции желчи крыс при гелиотриновом поражение печени

Условия эксперимента Интенсивность секреции желчи мг/мин. 100 г массы Общее количество выделенной желчи (мг/100 г) за 4 ч

1-час 2-час 3-час 4-час

1. Интактная (физ. р-р) 4,0±0,23 4,2±0,23 4,2±0,22 4,1±0,22 985,0±56,0

2. Контроль (гелиотрин) 2,0±0,16* 2,1±0,18* 2,2±0,11* 2,0±0,13* 505,0±32,0*

3. Стимусол + гелиотрин 4,4±0,25х 4,8±0,18х 4,8±0,18х 5,1±0,16х 1144,0±29,0 х

4. Силибор + гелиотрин 2,8±0,22 3,0±0,41 3,9±0,52х 3,8±0,45х 811,0±69,0 х

Таблица 3

Влияние стимусола на химический состав желчи ^±m; п=6)

Условия эксперимента Общее количество мг/мин. 100 г за 4 часа Холато/холесте-риновый коэффициент, ед.

Желчные кислоты Холестерин Билирубин

1. Интактная (физ. р-р) 16,42±0,61 0,144±0,006 0,058±0,003 114,0±5,0

2. Контроль (гелиотрин в течение 1 мес.) 5,42±0,58* 0,064±0,007* 0,017±0,002* 83,0±1,4*

3. Стимусол + гелитрин 11,26±0,83х 0,113±0,007х 0,057±0,002х 100±10,36

4. Силибор + гелиотрин 7,2±0,67х 0,079±0,011 0,034±0,0042х 93±8,96

Примечание:* - значимость различий при р<0,001 в сравнение с интактными; х - значимость различий при р<0,001 в сравнении с контролем.

малонового диальдегида на 40,4% (р<0,001). Уменьшение содержания продуктов ПОЛ связано с активацией ферментов СОД и КТ соответственно на 75,0% и 52,0% по отношению к результатам животных контрольной группы (табл. 1). Тогда как, под влиянием гепатопротектора - силибора активность этих энзимов усиливалась в меньшей степени, и эффект составил на 71,0% и 3б,0% (р<0,001). Если учесть тот факт, что стимусол, состоящий из экстракта корня солодки и мумие, аналогично силибору оказывает активизирующее действие на систему антиоксидантной защиты и препятствует усилению интенсивности процесса ПОЛ. Антиоксидантное действие стимусола, по-видимому, связано с наличием в составе биологически активных веществ, так как в составе корня солодки и мумие содержатся активные биолиганды, флавоноидные соединения, аминокислоты и витаминные вещества. Большинство этих ингридиентов обладают прямым и косвенным антиоксидантным действием. Видимо, эти вещества приводят к усилению активности ферментов и повышению функции системы антиоксидантной защиты организма. Помимо этого, они обладают противовоспалительным, желчегонным, иммуномодулирующим действиями, а также

повышают регенераторный потенциал клеток печени [11,1б].

Стимусол подобно сили-бору оказывал выраженное гепатопротекторное действие, уменьшая синдром внутрипеченочного холе-стаза. Под влиянием этого препарата общее количество выделенной желчи за 4 часа увеличилось на 12б,0% (р<0,001), значимо повышалась секреция желчных кислот на 107,0%, холестерина

- 7б,5% и билирубина - на 235,0% по сравнению показателями животных контрольной группы (табл. 2, 3). Под действием гепатопротектора силибо-ра эти показатели были менее выражены.

Гепатопротекторная и желчегонная активность стиму-сола, вероятно, связана с синергизмом биоактивных лиганд, содержащих в составе корень солодки и мумие. Биоактивная лиганда - глицирризин, основное вещество солодки, образует комплекс с цитохромом Р450, ингибируя инактивацию изолированного цитохрома P450KLM2 и вызывая образование гемопротеина. Наряду с этим, данный биофлаваноид предотвращает разрушение естественного антиоксиданта

- глютатиона [10]. По-видимому, стимусол повышает активность микросомальных ферментов печени и стимулирует синтез желчных кислот, холестерина и повышает конъюгацию билирубина.

Таким образом, биоактивная композиция из экстракта корня солодки и мумие - препарат стимусол - обладает выраженным гепатозащитным и антихолестатическим действием при хроническом токсическом гепатите. По данной активности он не уступает гепатопротектору - силибор.

ЛИТЕРАТУРА

1. Абдуллаев Н.Х., Каримов Х.Я. Печень при интоксикациях гепатотропными ядами. - Ташкент: Медицина, 1989. - 98 с.

2. Гуревич В.С., Конторщикова К.Н., Шатилина Л.В. Сравнительный анализ двух методов определения активности супероксиддисмутазы // Лабораторное дело. - 1990. - №4.

- С.44-47.

3. Дроговоз С.М. Нарушение интенсивности желчеотделения и химического состава при дистрофии печени, вызванной CCI4 // Вопросы медицинской химии. - 1971. - №4.

- С.397-401.

4. Королюк М. А., Иванова Л.И., Майорова И.Г. и др. Метод определения активности каталазы // Лабораторное дело. -1988. - №1. - С.16-18.

5. Кричевская А.А., Лукаш А.И., Кесельман Н.А. Изменение перекисного окисления и содержание фосфолипидов в мозге при гипероксии и защитное действие // Украинский биохимический журнал. - 1976. - №2. - С.190-194.

6. Крылова С.Г., Ефимова Л.А., Вымятнина З.К., Зуева Е.П. Влияние экстракта корня цикория на морфофункциональное состояние печени у крыс с токсическим гепатитом // Экспериментальная и клиническая фармакология. - 2006.

- №6. - С.34-36.

7. Майборода А.А., Калягин А.Н., Зобнин Ю.В., Щербатых А.В. Современные подходы к подготовке оригинальной статьи в журнал медико-биологической направленности в свете концепции «доказательной медицины» // Сибирский медицинский журнал (Иркутск). - 2008. - Т. 76. №1. - С.5-8.

8. Набиев А.Н., Тулаганов Р.Т., Вахабов А.А. Методические рекомендации по экспериментальному изучению новых фармакологических веществ с желчегонной и гепатопротектор-ной активностью. - Ташкент, 2006. - 26 с.

9. Стрелков Р.Б. Статистические таблицы для ускоренной количественной оценки фармакологического эффекта // Фармакология и токсикология. - М., 1986. - №4. - С.100-104.

10. Токаев Э.С., Блохина Н.П., Некрасов Е.А. Биологически активные вещества, улучшающие функциональное состояние печени // Вопросы питания. - 2007. - №4. - С.4-9.

11. Фролова Л.Н., Киселева Т.Л. Химический состав, методы определения подлинности и доброкачественности мумие (обзор) // Химико-фармацевтический журнал. - 1996. - №8.

- С.49-53.

12. Хакимов З.З., Зуева Е.Б., Рахманов А.Х. Сравнительное изучение влиянии гепатопротекторов на активность супе-роксиддисмутазы и каталазы печени при хроническом гепатите // Доклады АН Республики Узбекистан. - 1990. - №10.

- С.56-57.

13. Хакимов З.З., Лубенцова О.В., Аскарова Ш.Д. Влияние гелиотрина на экскреторную функцию печени и химический состав желчи // Медицинский журнал Узбекистана. - 1988. -№4. - С.44-46.

14. Чучалин В.С., Теплякова Е.М. Коррекция патологий гепатобилиарной системы комплексным растительным средством // Бюллетень сибирской медицины. - 2007. - №4. -С.52-57.

15. Шилина Н.К., Чернавина Г.В., Маслова Л.А. Количественное определение продуктов перекисного окисления липидов сыворотки крови практически здоровых лиц методом спектроскопии // Лабораторное дело. - 1978. - №3.

- С.140-142.

16. Эрназаров О.М., Джалилов Х.К., Юнусова Х.М. и др. Положительное решение от 26.08.1996 г. на выдачу предварительного патента Республики Узбекистан по заявке IHDP 96006371. «Таблетки стимусола».

Информация об авторах: Республика Узбекистан, г. Ташкент, 100002, ул. Усманходжаева пр. К. Умарова. д. 16; Государственный центр экспертизы и стандартизации лекарственных средств МЗ РУз. Тел. (998712) 494793, факс: 2444823, e-mail: farmaco_toxik@mail.ru, tashpmi@rambler.ru; Набиев Абдували Набиевич - старший научный сотрудник, к.м.н. кафедры; Абдусаматов Абдулазиз Абдулатипович - заведующий кафедрой, д.м.н., профессор; Калдыбаева Ахмарал Орынбасаровна - ассистент; Махмадалиев Холмурод Жавлиевич - соискатель.