Оценка возможности использования индукторов интерферона для предотвращения поствакцинальных реакций на ТЭОВак в эксперименте на животных

ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ

Оценка возможности использования индукторов интерферона для предотвращения поствакцинальных реакций на ТЭОВак в эксперименте на животных

Н. К. ЧЕРНИКОВА, Т А. БОНДАРЕВА, С. В. БОРИСЕВИЧ, Т. В. ДОРОХИНА, А. Л. ХМЕЛЕВ, Н. В. ШАГАРОВА

Филиал федерального государственного учреждения «48 Центральный научно-исследовательский институт Минобороны России» — «Вирусологический центр», Сергиев Посад

Estimation of Possible Use of Interferon Inductors for Prevention of Postvaccional Reactions to TEOVac in Animal Models

N. K. CHERNIKOVA, T. A BONDAREVA, S. V BORISEVICH, T. V. DOROKHINA, A. L. KHMELEV, N. V. SHAGAROVA Virological Centre, Branch of Central Research Institute No. 48 of the Ministry of Defense of the Russian Federation, Sergiev Posad

В эксперименте на морских свинках показано, что арбидол при пероральном однократном применении за 24 часа и ридо-стин при интраназальном однократном введении на 4 сутки после вакцинации ТЭОВак снижают накопление вируса вакцины в органах и тканях животных, не оказытая влияния на иммуногенность вакцины. Эти данные косвенно свидетельствуют о возможности использования указанных индукторов интерферона для предотвращения поствакцинальных реакций при оспопрививании ТЭОВак.

Ключевые слова: индукторы интерферона, оспенная вакцина, ТЭОВак, побочное действие, вакцинальные реакции, профилактика.

The experiments on guinea pigs showed that arbidol administered orally in a single dose 24 hours prior vaccination with TEOVAC and ridostin administered in a single dose intranasally on the 4th day after the vaccination lowered the vaccine virus accumulation in the animal organs and tissue without any effect on the vaccine immunogeneity. The results are someway indicative of the possible use of the interferon inductors for prevention of postvaccinal reactions to TEOVAC.

Key words: interferon inductors, smallpox vaccine, TEOVac, side effects, vaccinal reactions, prophylaxis.

В последние годы во всём мире всё острее встает вопрос о возобновлении оспопрививания [1—4]. В связи с этим особую актуальность приобретают вопросы повышения безопасности вакцинации против натуральной оспы в условиях отсутствия популяционного иммунитета.

Наиболее эффективными средствами защиты против ортопоксвирусов, патогенных для человека, являются живые вакцины [5]. Однако первичная иммунизация взрослых людей разрешённой для этих целей сухой оспенной вакциной для накожного применения может привести к развитию серьезных реакций и осложнений [6, 7]. Одним из путей снижения реактогенности живых вирусных вакцин является блокирование остаточной вирулентности вакцинных штаммов с помощью неспецифиче-

© Коллектив авторов, 2011

Адрес для корреспонденции: 141306 Московская обл., Сергиев Посад-6. Филиал ФГУ 48 Центральный научно-исследовательский институт Министерства обороны РФ «Вирусологический центр»

ских лекарственных средств, в том числе интерферона и интерфероногенов [8].

Интерферон играет большую роль в первой линии защиты организма. Уникальность его свойств состоит в сочетании противовирусной, иммуномодулирующей и антипролифератичес-кой активности. Он вступает во взаимодействие с вирусом раньше других факторов и, помимо непосредственного действия на системы репродукции вирусов, является важным медиатором иммунитета, относящимся к семейству регуляторных цитокинов [9]. До отмены обязательного оспопрививания было показано положительное влияние интерфероногена — комплекса поли (И) поли (Ц) на течение осповакцинальной реакции и вакцинального кератита у обезьян [10, 11] и получены данные о снижении реактогенности накожной оспенной вакцины при совместном применении с интерфероном [12]. Реаферон на сегодняшний день является единственным отечественным иммуномодулирую-

-е-

Таблица 1. Влияние индукторов интерферона на уровень накопления вируса вакцины в органах и тканях морских свинок при вакцинации ТЭОВак

Схема введения препарата относи-

Препарат

Доза препарата,

Срок Количество исследования, животных

Концентрация вируса вакцины в органах и тканях иммунизированных животнык, ООЕ / г

тельно вакцинации мг/кг массы сутки после вакцинации кровь печень селезёнка лёгкие слизистая мезенте-рта риальныш лимфоузел

За 24 час* Арбидол 10 6 2 0 0 61 35 600 0

30 2 0 0 0 0 0 0

Не вводили — 2 25 35 15 240 1100 25

Одновременно ** Арбидол 10 5 2 9 28 39 38 75 Не исследовали

Ридостин 5 2 16 50 65 19 119 То же

Не вводили — 2 38 33 60 57 251 —//—

Арбидол 10 7 2 29 72 28 43 241 —//—

Ридостин 5 2 16 53 22 9 38 —//—

Не вводили — 2 30 54 37 55 287 —//—

4 сутки после ** Ридостин 5 6 3 0 4 8 0 0 —//—

Не вводили — 3 76 29 17 33 39 —//—

Примечание. Здесь и в табл. 3: * - иммунизирующая доза 8Х106 ООЕ; ** - иммунизирующая доза 1 х 107 ООЕ.

щим средством защиты от патогенных для человека ортопоксвирусов [13].

С. Я. Логиновой с соавторами в целях решения проблемы возобновления оспопрививания в условиях отсутствия популяционного иммунитета показана возможность предотвращения поствакцинальных реакций на внутри-кожное введение вируса вакцины (штаммы Л-ИВП и Нейровакцина-92) с помощью двух новых индукторов интерферона: арбидола и ридостина [14].

Зарегистрированная и разрешённая для ревакцинации взрослых людей отечественная таблети-рованная эмбриональная живая оспенная вакцина для орального применения (ТЭОВак) в условиях ревакцинации более безвредна по сравнению с накожной вакциной, эпидемически безопасна и менее реактогенна [15, 16]. Тем не менее для внедрения ТЭОВак в практику вакцинации как препарата для первичной иммунизации людей проблема снижения её реактогенности также является актуальной [17]. Изучение возможности использования новых индукторов интерферона для снижения реактогенности ТЭОВак является целью настоящей работы.

Поскольку ТЭОВак — препарат для перо-ральной массовой иммунизации, изучая возможность снижения его реактогенности, целесообразно оценить влияние лекарственных средств при мукозальном применении в условиях однократного введения. Особенностью штамма Б-51, на основе которого разработана вакцина, является полное отсутствие остаточной вирулентности для животных, поэтому её введение не приводит к развитию никаких клинических реакций. В связи с этим действие лекарственных средств можно оценить только по косвенному вирусологическому признаку — снижению уровня накопления вируса вакцины в органах и тканях животных [18].

Материал и методы

Вирусы. В работе использована таблетированная эмбриональная живая вакцина для орального применения ТЭОВак, приготовленная на основе штамма Б-51.

Лабораторные животные. Эксперименты проводили на беспородных морских свинках массой 200—250 г.

Исследуемые препараты. Низкомолекулярный индуктор интерферона арбидол в капсулах по 100 мг (ОАО «Фарма-Стандарт-Лекарства», Россия). Высокомолекулярный индуктор интерферона ридостин в ампулах по 8 мг (ЗАО «Вектор-Медика», Россия).

Арбидол давали животным в виде суспензии перорально в дозах 10 и 30 мг/кг массы, а раствор ридостина закапывали интраназально в дозе 5 мг/кг массы. Профилактическое действие препаратов испытывали при нескольких схемах введения: за 24 часа до вакцинации, одновременно с иммунизацией и на 4 сутки после нее (на момент начала скрытого развития возможных вакцинальных реакций).

Иммунизировали животных перорально с помощью поролоновой губки, смоченной суспензией вакцины, в дозе от 8х106 до 1х107 ООЕ. В каждой серии опытов в качестве контрольной группы использовали животных, иммунизированных той же дозой вакцины, без введения лекарственных средств.

Эффективность препаратов оценивали по косвенному признаку — снижению уровня накопления вируса вакцины в органах и тканях животных. Определение концентрации вируса в пробах проводили титрованием на ХАО 12-суточных РКЭ. Влияние лекарственных средств на иммуноген-ность ТЭОВак оценивали по величине титров сывороточных вируснейтрализующих антител в сравнении с данным показателем в контрольной группе, в которой иммунизацию проводили без применения лекарственных препаратов. В каждой группе иммунизировали по 5—7 морских свинок. Пробы органов и тканей забирали в период с 5 по 7 сутки после иммунизации у 2—3 животных из каждой группы. Кровь для определения титра сывороточных ВНА исследовали на 14, 30 и 45 сутки после вакцинации у 3—5 животных из каждой группы. В некоторых случаях на 3 сутки у животных брали смывы из ротовой полости.

Результаты и обсуждение

Представленные в табл. 1 и 2 данные свидетельствуют о том, что при профилактическом применении арбидола в концентрации 30 мг/кг массы за 24 ч до иммунизации ТЭОВак морских

ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ

Таблица 2. Влияние лекарственных препаратов на уровень накопления вируса вакцины в органах и тканях морских свинок после иммунизации ТЭОВак

Срок введения относительно

Препарат

Срок исследования,

Снижение концентрации вируса по сравнению с контролем, %

ТЭОВак, сутки сут кровь печень селезёнка лёгкие слизистая рта

За 24 ч Арбидол 6 100,0 100,0 0 85,5 45,5

Одновременно Арбидол 5 76,2 15,3 35,0 33,3 70,6

Ридостин 58,3 0 0 66,7 52,4

Арбидол 7 3,3 0 24,3 23,1 16,0

Ридостин 46,7 0 41,2 83,6 86,8

На 4-е сутки после Ридостин 6 100 86,2 52,9 100 100

Таблица 3. Влияние индукторов интерферона на иммуногенность ТЭОВак

Схема введения Препарат Доза Уровень ВНА, Сероконверсия с титром

препарата относи- препарата, Ме (195) через ... суток ВНА > 1:5, процент (195) через ... суток

тельно вакцинации мг/кг массы 30 45 30 45

За 24 час * Арбидол 10 1:125 (1:25—1:125) Не исследовали 100(48-100) Не исследовали

30 1:25 (<1:5—1:125) То же 60 (15-95) То же

Не вводили — 1:125 (1:125—1:125) —//— 100 (48-100) —//—

Одновременно ** Арбидол 10 1:75

Ридостин 5 1:25

Не вводили — 1:25

На 4 сутки после ** Ридостин 5 1:25

Не вводили — 1:25

свинок подавлялась репродукция вируса вакцины во всех исследованныгх органах и тканях до уровня минимальной чувствительности биологического метода титрования, а в дозе 10 мг/кг массы его противовирусное действие выражено слабее: он полностью подавляет размножение вируса в крови, печени и мезентериальных лимфоузлах, но лишь снижает его накопление по сравнению с контролем в 2 и 7 раз в слизистой рта и лёгком соответственно. При этом в концентрации 30 мг/кг массы он угнетает антителообразование к вирусу вакцины на 14 и 30 сутки после вакцинации, в то время как приём 10 мг/кг массы незначительно задерживает формирование вируснейтрализую-щих антител на 14 сутки и практически не влияет на их уровень к 30 суткам после иммунизации по сравнению с контролем. В таблице 3 представлены титры антител на 30 сутки после пероральной иммунизации животных.

При введении одновременно с вакцинацией (табл. 1 и 2) арбидол и ридостин не влияли на концентрацию вируса в смывах из ротовой полости на 3 сутки. На 5 сутки ридостин и арбидол достоверно (в два и четыре раза соответственно) снижали уровень вируса вакцины в крови. Кроме того, у животных, получавших арбидол, в 3 раза снизилось содержание вируса в слизистой рта; в группе, получавшей ридостин, — в три раза в лёгких и в два раза в слизистой рта, что, возможно, связано с интраназальным способом его введения. К 7 суткам действие арбидола практически прекратилось, а ридостин по-прежнему сущест-

венно снижал концентрацию вируса в слизистой рта и лёгких. В целом можно отметить, что при одновременном введении с вакцинацией действие лекарственных средств на уровень накопления вируса в органах и тканях морских свинок ниже, чем при профилактическом применении арбидола. При этом арбидол и ридостин не тормозят формирование гуморального иммунного ответа, а, напротив, стимулируют его (табл. 3).

В исследованиях также оценили действие ри-достина при введении на 4 сутки после иммунизации животных ТЭОВак (табл. 1 и 2), поскольку до отмены обязательного оспопрививания такая схема применения лекарственного химиопрепарата метисазона повышала безопасность вакцинации против оспы контингентов риска [19]. При введении по предложенной схеме препарат показал очень хорошую эффективность. Ридостин значительно снижал концентрацию вируса во всех органах, в том числе в трёх из них — до уровня минимальной чувствительности метода титрования, что косвенно свидетельствует о блокировании остаточной вирулентности вируса вакцины и повышении безопасности оспопрививания животных ТЭОВак. Введение препарата после приживления вируса вакцины позволило полностью исключить его влияние на иммуногенность ТЭОВак (табл. 3).

Заключение

Таким образом, проведённые исследования по возможности использования лекарственных

средств для повышения безопасности первичного перорального оспопрививания показали, что наибольшего профилактического блокирующего эффекта остаточной вирулентности вируса вакцины в составе ТЭОВак можно достичь при профилактическом однократном пероральном при-

ЛИТЕРАТУРА

1. Онищенко Г. Г., Максимов В. А., Воробьев А. А. и др. Актуальность возврата к оспопрививанию: Проблемы и перспективы. Вестн РАМН 2006; 7: 32-38.

2. Львов Д. К., Зверев В. В., Гинзбург А. Л. и др. Натуральная оспа — дремлющий вулкан. Вопр вирусол 2008; 4: 4—8.

3. Rimoin A. W, Kisalu N., Kibela-Ilunga et al. Endemic human monkey, Democratic Republic of Congo, 2001—2004. Emerg Infect Dis 2007; 13: 6: 934—937.

4. Campe H, Zimmermann P., Glos K. et al. Cowpox virus transmission from Pet Rats to humans, France. Ibid 2009; 15: 5: 781—784.

5. Онищенко Г. Г. Иммунопрофилактика — достижения и задачи по дальнейшему совершенствованию. Журн микробиол 2006; 3: 58—62.

6. Frieden T, Mostashari F., Schwartz S. P. et al. Cardiac deaths after a mass smallpox vaccination — New York, 1947. MMWR 2003; 52: 39: 933—936.

7. Wiser I., Balicer R. D., Cohen D. An update on smallpox vaccine candidates and their role in bioterrorism related vaccination strategies. Vaccine 2007; 25: 976—984.

8. Костиков М. П. Иммунокоррекция вакцинального процесса у лиц с нарушенным состоянием здоровья. М.: 2006; 176.

9. Афанасьев С. С, Алешкин В. А., Воробьев А. А. и др. Интерфероно-терапия инфекционных заболеваний — состояние проблемы и перспективы. Журн микробиол 2005; 6: 94—99.

10. Анджапаридзе О. Г., Бектемиров Т. А., Бургасова М. П. Влияние комплекса поли (И) — поли (Ц) с поли-Ь-лизином на течение осповакцинальной инфекции у обезьян. Вопр вирусол 1977; 3: 339—343.

11. Анджапаридзе О. Г., Бектемиров Т. А., Бургасова М. П. Влияние комплекса поли (И) — поли (Ц) с поли-Ь-лизином на вакцинальный кератит у обезьян. Там же; 1977; 1: 116—118.

менении арбидола в дозе 10 мг/кг массы за 24 ч до вакцинации, или при однократном интраназаль-ном введении ридостина в дозе 5 мг/кг массы на 4 сутки после неё. Действие арбидола и ридостина при применении одновременно с вакцинаций было значительно слабее.

12. Бектемиров Т. А., Бургасова М. П., Кузнецова В. П. и др. Противо-воспенная вакцинация под защитой интерферона и его индуктора. Там же 1980; 1: 76—78.

13. Логинова С. Я., Богатиков Г. В., Приходько А. В. и др. Изучение эффективности рекомбинантного интерферона и его индукторов на приматах при ортопоксвирусной инфекции. Там же 1997; 4: 186—188.

14. Логинова С. Я., Борисевич С. В., Максимов В. А. и др. Купирование поствакцинальных осложнений после оспопрививания индукторами интерферона: Антибиотики и химиотер 2010; 53: 1—2: 6—11.

15. ТЭОВак (Вакцина оспенная эмбриональная живая), таблетки жевательные: ФСП 42-0906-07 и таблетки, покрытые оболочкой делимые ФСП: 42-8420-07 / ФГУ «48 ЦНИИ Минобороны России». Введ. 19.02.2007 г.

16. Воробьев А. А., Подкуйко В. Н., Михайлов В. В. Итоги фундаментальных и прикладных исследований по пероральной иммунизации против натуральной оспы. Журн микробиол 2002; 1: 12—18.

17. Бондарев В. П., Борисевич И. В., Мельников С. А. и др. Опыт применения антибиотиков для лечения язвенно-некротических тонзиллитов, развившихся на фоне вакцинации ТЭОВак. Антибиотики и химиотер 2010; 55: 3—4: 21—23.

18. Гурвич Э. Б., Мовсесянц А. А., Степанкова Л. Г. Об участии вируса вакцины в патогенезе различных клинических форм поствакцинальных осложнений. Сообщение I. Частота обнаружения вируса вакцины у привитых с обычной и осложненной реакцией на вакцинацию: Журн микробиол 1979; 11: 73—78.

19. Марежикова С. С. Вакцинопрофилактика оспы в современных условиях. Вест АМН СССР 1975; 1: 33—37.

-Q-