ХИМЕРНЫЕ АНТИГЕННЫЕ РЕЦЕПТОРЫ К КАППА-АНТИГЕНУ МИЕЛОМЫ И ВАРИАНТЫ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ

1. Химерный антигенный рецептор (CAR), содержащий один или больше внутриклеточных сигнальных доменов и внеклеточный антигенсвязывающий домен, при этом указанный внеклеточный антигенсвязывающий домен специфически распознает каппа-антиген миеломы (KMA).
2. Химерный антигенный рецептор по п. 1, в котором указанный один или больше внутриклеточных сигнальных доменов содержит один или больше костимулирующих эндодоменов, при этом указанный один или больше костимулирующих эндодоменов представляет собой что-либо одно или больше из домена CD28, домена CD3ζ, домена 4-1BB, домена OX-40 или их комбинаций.
3. Химерный антигенный рецептор по п. 1, в котором указанный внеклеточный связывающий домен содержит одноцепочечный вариабельный фрагмент (scFv), который специфически распознает KMA.
4. Химерный антигенный рецептор по п. 3, в котором указанный scFv содержит определяющие комплементарность участки (CDR), происходящие из моноклонального антитела KappaMab, при этом участки CDR указанных KappaMAb содержат последовательности SEQ ID NO: 3–8.
5. Химерный антигенный рецептор по п. 3, в котором указанный scFv содержит VL-цепь и VH-цепь KappaMab, при этом VL-цепь содержит SEQ ID NO: 2, а VH-цепь содержит SEQ ID NO: 1.
4
3
6. Химерный антигенный рецептор по п. 5, в котором указанные VL-цепь и VH-цепь KappaMab соединены глицин-сериновым линкером, при этом указанный глицин-сериновый линкер содержит (GlySer).
7. Химерный антигенный рецептор по п. 3, в котором указанный scFv присоединен к одному или больше внутриклеточным сигнальным доменам спейсером, в котором указанный спейсер представляет собой константную область иммуноглобулина или цепь CD8α.
8. Химерный антигенный рецептор по п. 7, в котором указанная константная область иммуноглобулина содержит что-либо одно или больше из шарнирного домена IgG, CH2-домена IgG и CH3-домена IgG.
9. Химерный антигенный рецептор по п. 7 или п. 8, в котором указанная константная область иммуноглобулина содержит комбинацию из шарнирного домена иммуноглобулина, CH2-домена IgG и CH3-домена IgG с последовательностью SEQ ID NO: 24.
4
3
10. Химерный антигенный рецептор по любому из пп. 7–9, в котором указанный спейсер присоединен к scFV глицин-сериновым линкером, в котором указанный глицин-сериновый линкер содержит (GlySer).
11. Генетически модифицированная T-клетка, сконструированная с возможностью экспрессии химерного антигенного рецептора по любому из пп. 1–10.
12. Генетически модифицированная T-клетка по п. 11, сконструированная с дополнительной возможностью экспрессии одной или больше дополнительных биологических молекул, причем указанная одна или больше дополнительных биологических молекул содержит что-либо одно или больше из ИЛ-12, GAL3C, SANT7 или ФРГ-связывающего белка.
4
3
13. Генетически модифицированная T-клетка по п. 12, при этом указанная одна или больше дополнительных биологических молекул представляет собой ИЛ-12, и указанный ИЛ-12 экспрессируется одноцепочечным полипептидом, содержащим одну субъединицу p35 ИЛ-12 и одну субъединицу p40 ИЛ-12, соединенные гибким линкером, при этом указанный гибкий линкер представляет собой линкер (GS).
14. Генетически модифицированная T-клетка по п. 13, при этом указанный одноцепочечный полипептид, содержащий одну субъединицу p35 ИЛ-12 и одну субъединицу p40 ИЛ-12, соединенные гибким линкером, образует биоактивный гетеродимер p70 ИЛ-12.
15. Генетически модифицированная T-клетка по п. 12, сконструированная с возможностью экспрессии одной или больше дополнительных биологических молекул и и селектируемого маркера.
16. Способ получения генетически модифицированной T-клетки, включающий введение в T-клетку экспрессионного вектора, кодирующего CAR, содержащий один или больше внутриклеточных сигнальных доменов и внеклеточных антигенсвязывающих доменов, при этом указанный внеклеточный антигенсвязывающий домен специфически распознает каппа-антиген миеломы (KMA).
17. Способ по п. 16, в котором указанный экспрессионный вектор представляет собой экспрессионную систему на основе транспозируемого вектора.
18. Способ по п. 16, в котором указанный один или больше внутриклеточных сигнальных доменов содержит один или больше костимулирующих эндодоменов, при этом указанный один или больше костимулирующих эндодоменов представляет собой что-либо одно или больше из домена CD28, домена CD3ζ, домена 4-1BB или домена OX-40 или их комбинаций.
19. Способ по п. 16, в котором указанный внеклеточный связывающий домен содержит scFv, который специфически распознает KMA.
20. Способ по п. 19, в котором указанный scFv содержит определяющие комплементарность участки (CDR), происходящие из моноклонального антитела KappaMab, при этом указанные CDR содержат последовательности SEQ ID NO: 3–8.
21. Способ по п. 20, в котором указанный scFv содержит VL-цепь и VH-цепь моноклонального антитела KappaMab, при этом указанная VL-цепь содержит SEQ ID NO: 2, а указанная VH-цепь содержит SEQ ID NO: 1.
4
3
22. Способ по п. 21, в котором указанные участки CDR VL и участки CDR VH соединены глицин-сериновым линкером, при этом указанный глицин-сериновый линкер содержит (GlySer).
23. Способ по п. 19, в котором указанный scFv присоединен к одному или больше внутриклеточным сигнальным доменам спейсером, при этом указанный спейсер представляет собой константную область иммуноглобулина или цепь CD8α.
24. Способ по п. 23, в котором указанная константная область иммуноглобулина содержит что-либо одно или больше из шарнирного домена IgG, CH2-домена IgG и CH3-домена IgG.
25. Способ по п. 24, в котором указанная константная область иммуноглобулина содержит комбинацию из шарнирного домена иммуноглобулина, CH2-домена IgG и CH3-домена IgG с SEQ ID NO: 24.
4
3.
26. Способ по п. 23, в котором указанный спейсер присоединен к scFV глицин-сериновым линкером, при этом указанный глицин-сериновый линкер содержит (GlySer)
27. Способ по п. 16, дополнительно включающий введение одного или больше дополнительных экспрессионных векторов, способных экспрессировать одну или больше дополнительных биологических молекул, при этом одна или больше дополнительных биологических молекул содержит что-либо одно или больше из ИЛ-12, GAL3C, SANT7 или ФРГ-связывающего белка.
4
3
28. Способ по п. 27, в котором указанная одна или больше дополнительных биологических молекул представляет собой ИЛ-12, и указанный ИЛ-12 экспрессируется одноцепочечной конструкцией, содержащей субъединицу p35 ИЛ-12 и субъединицу p40 ИЛ-12, соединенные гибким линкером, при этом указанный гибкий линкер представляет собой (GS)-линкер.
29. Способ по п. 28, в котором указанная одноцепочечная конструкция, содержащая субъединицу p35 ИЛ-12 и субъединицу p40 ИЛ-12, соединенные гибким линкером, образует биоактивный гетеродимер p70 ИЛ-12.
30. Способ по п. 25, в котором указанный один или больше дополнительных биологических агентов экспрессируется конструкцией, дополнительно кодирующей селективный маркер, при этом указанная конструкция кодирует один или больше дополнительных биологических агентов и селектируемый маркер, при этом кодирующие последовательности указанного селективного маркера и одного или больше дополнительных биологических агентов соединены последовательностью, кодирующей элемент «рибосомального перепрыгивания» 2A.
31. Применение генетически модифицированных T-клеток в получении лекарственного препарата для лечения KMA-экспрессирующего злокачественного новообразования у нуждающегося в этом субъекта, в котором генетически модифицированные Т-клетки сконструированы с возможностью экспрессии одного или больше внутриклеточных сигнальных доменов и внеклеточных антигенсвязывающих доменов, при этом указанный внеклеточный антигенсвязывающий домен специфически распознает каппа-антиген миеломы (KMA).
32. Применение по п. 31, в котором указанное KMA-экспрессирующее злокачественное новообразование представляет собой множественную миелому, макроглобулинемию Вальденстрема, диффузную В-крупноклеточную лимфому (ДВККЛ) или амилоидоз.
33. Применение по п. 31, в котором указанный один или больше внутриклеточных сигнальных доменов содержит один или больше костимулирующих эндодоменов, при этом указанный один или больше костимулирующих эндодоменов представляет собой что-либо одно или больше из домена CD28, домена CD3ζ, домена 4-1BB или домена OX-40 или их комбинаций.
34. Применение по п. 31, в котором указанный внеклеточный связывающий домен содержит scFv, который специфически распознает KMA.
35. Применение по п. 34, в котором указанный scFv распознает KMA и содержит определяющие комплементарность участки (CDR), происходящие из моноклонального антитела KappaMab, при этом указанные участки CDR содержат последовательности SEQ ID NO: 3–8.
36. Применение по п. 34, в котором указанный scFv содержит VL-цепь и VH-цепь моноклонального антитела KappaMab, при этом указанная VL-цепь содержит SEQ ID NO: 2, а указанная VH-цепь содержит SEQ ID NO:1.
4
3
37. Применение по п. 36, в котором VL из SEQ ID NO: 2 и VH из SEQ ID NO: 1 соединены глицин-сериновым линкером, при этом указанный глицин-сериновый линкер содержит (GlySer).
38. Применение по п. 34, в котором указанный scFv присоединен к одному или больше внутриклеточным сигнальным доменам спейсером, при этом указанный спейсер представляет собой константную область иммуноглобулина или цепь CD8α.
39. Применение по п. 38, в котором указанная константная область иммуноглобулина содержит что-либо одно или больше из шарнирного домена IgG, и CH2-домена IgG, и CH3-домена IgG.
40. Применение по п. 39, в котором указанная константная область иммуноглобулина содержит комбинацию из шарнирного домена иммуноглобулина, CH2-домена IgG и CH3-домена IgG с SEQ ID NO: 24.
4
3.
41. Применение по п. 38, в котором указанный спейсер присоединен к scFV глицин-сериновым линкером, в котором линкер из 15 аминокислот содержит (GlySer)
42. Применение по п. 31, в котором указанные генетически модифицированные T-клетки сконструированы с дополнительной возможностью экспрессии одной или больше дополнительных биологических молекул, в котором указанная одна или больше дополнительных биологических молекул содержит что-либо одно или больше из ИЛ-12, GAL3C или ФРГ-связывающего белка.
4
3
43. Примение по п. 41, в котором указанная одна или больше дополнительных биологических молекул представляет собой ИЛ-12, и указанный ИЛ-12 экспрессируется в виде одноцепочечного полипептида, содержащего субъединицу p35 ИЛ-12 и субъединицу p40 ИЛ-12, соединенные гибким линкером, при этом указанный гибкий линкер представляет собой (GS)-линкер.
44. Применение по п. 43, в котором указанный одноцепочечный полипептид, содержащий субъединицу p35 ИЛ-12 и субъединицу p40 ИЛ-12, соединенные гибким линкером, образует биоактивный гетеродимер p70 ИЛ-12.
45. Применение по п. 42, в котором указанные CAR-T-клетки сконструированы с возможностью экспрессии одной или больше дополнительных биологических молекул и селективного маркера.
46. Применение по п. 31, дополнительно включающее введение одного или больше дополнительных биологически или фармацевтически активных агентов.
47. Применение по п. 46, в котором указанный один или больше дополнительных биологически активных агентов содержит ИЛ-12, антагонист рецептора ИЛ-6 или SANT7.
48. Применение по п. 46, в котором указанные дополнительные фармацевтически активные агенты содержат один или больше химиотерапевтических агентов, иммуномодулирующих лекарственных средств или ингибиторов гистондеацетилазы.
49. Генетически модифицированная T-клетка по п. 12, где указанный ФРГ-связывающий белок представляет собой антитело к ФРГ или его фрагмент.
50. Способ по п. 27, в котором указанный ФРГ-связывающий белок представляет собой антитело к ФРГ или его фрагмент.