КЛЕТКА

1. Клетка, содержащая химерный антигенный рецептор (CAR) и белок, модифицирующий передачу сигнала, выбранный из одного из следующих:
укороченного белка, содержащего домен SH2 из белка, связывающегося с фосфорилированным иммунорецепторным тирозиновым активирующим мотивом (ITAM), но в котором отсутствует киназный домен;
укороченного белка, содержащего домен SH2 из белка, связывающегося с фосфорилированным иммунорецепторным тирозиновым ингибирующим мотивом (ITIM), но в котором отсутствует фосфатазный домен;
слитого белка, содержащего (a) домен SH2 из белка, связывающегося с фосфорилированным иммунорецепторным тирозиновым активирующим мотивом (ITAM), или из белка, связывающегося с фосфорилированным иммунорецепторным тирозиновым ингибирующим мотивом (ITIM); и (ii) гетерологичный домен.
2. Клетка по п.1, где белок, модифицирующий передачу сигнала, является укороченным белком, содержащим домен SH2 ZAP70, но в котором отсутствует киназный домен ZAP70.
3. Клетка по п.1, где белок, модифицирующий передачу сигнала, является укороченным белком, содержащим SH2 PTPN6, но в котором отсутствует фосфатазный домен PTPN6.
4. Клетка по п.1, где белок, модифицирующий передачу сигнала, является укороченным белком, содержащим домен SH2 SHP-2, но в котором отсутствует фосфатазный домен SHP-2.
5. Клетка по п.1, где белок, модифицирующий передачу сигнала, является слитым белком, содержащим (i) домен SH2 из белка, связывающегося с фосфорилированным иммунорецепторным тирозиновым активирующим мотивом (ITAM); и (ii) фосфатазный домен.
6. Клетка по п.5, где слитый белок содержит домен SH2 ZAP70.
7. Клетка по п.5 или 6, где слитый белок содержит фосфатазный домен PTPN6 или SHP-2.
8. Клетка по п.1, где белок, модифицирующий передачу сигнала, является слитым белком, содержащим (i) домен SH2 из белка, связывающегося с фосфорилированным иммунорецепторным тирозиновым ингибирующим мотивом (ITIM); и (ii) киназный домен.
9. Клетка по п.8, где слитый белок содержит домен SH2 из PTPN6 или SHP-2.
10. Клетка по п.8 или 9, где слитый белок содержит киназный домен Zap70.
11. Клетка по п.8 или 9, где слитый белок содержит киназный домен AKT или JAK.
12. Клетка по п.1, где белок, модифицирующий передачу сигнала, является слитым белком, содержащим (i) домен SH2 из белка, связывающегося с фосфорилированным иммунорецепторным тирозиновым активирующим мотивом (ITAM), или из белка, связывающегося с фосфорилированным иммунорецепторным тирозиновым ингибирующим мотивом (ITIM); и (ii) гетерологичный сигнальный домен.
13. Клетка по п.12, где слитый белок содержит домен SH2 из ZAP70, PTPN6 или SHP-2.
14. Клетка по п.12 или 13, где гетерологичный сигнальный домен получают из сигнальной молекулы, как правило, не активированной ITAM- или ITIM-содержащим рецептором.
15. Клетка по пп.12, 13 или 14, где гетерологичный сигнальный домен является костимуляторным доменом.
16. Клетка по п.15, где слитый белок содержит костимуляторный домен CD28, OX40 или 41BB.
17. Клетка по пп.12, 13 или 14, где гетерологичный сигнальный домен является ингибиторным доменом.
18. Клетка по п.17, где ингибиторный домен содержит эндодомен CD148 или CD45.
19. Клетка по п.17, где гетерологичный сигнальный домен является эндодоменом ICOS, CD27, BTLA, CD30, GITR или HVEM или содержит его.
20. Клетка по п.1, где белок, модифицирующий передачу сигнала, является слитым белком, содержащим (i) домен SH2 из белка, связывающегося с фосфорилированным иммунорецепторным тирозиновым активирующим мотивом (ITAM); и (ii) ITAM-содержащий домен.
21. Клетка по п.20, где слитый белок содержит домен SH2 ZAP70.
22. Клетка по п.20 или 21, где ITAM-содержащий домен является эндодоменом CD3 дзета или содержит его.
23. Клетка по п.1, где белок, модифицирующий передачу сигнала, является слитым белком, содержащим (i) домен SH2 из белка, связывающегося с фосфорилированным иммунорецепторным тирозиновым ингибирующим мотивом (ITIM); и (ii) ITIM-содержащий домен.
24. Клетка по п.23, где слитый белок содержит домен SH2 из PTPN6 или SHP-2.
25. Клетка по п.23 или 24, где ITIM-содержащий домен является эндодоменом из PD1, PDCD1, BTLA4, LILRB1, LAIR1, CTLA4, KIR2DL1, KIR2DL4, KIR2DL5, KIR3DL1 или KIR3DL3 или содержит его.
26. Клетка по п.1, где белок, модифицирующий передачу сигнала, является слитым белком, содержащим (i) домен SH2 из белка, связывающегося с фосфорилированным иммунорецепторным тирозиновым активирующим мотивом (ITAM), или из белка, связывающегося с фосфорилированным иммунорецепторным тирозиновым ингибирующим мотивом (ITIM); и (ii) протеазный домен.
27. Клетка по п.26, где слитый белок содержит домен SH2 из ZAP70, PTPN6 или SHP-2.
28. Клетка по п.26 или 27, где протеазный домен является протеазой вируса гравировки табака (TeV) или содержит ее.
29. Клетка по любому по пп.26-28, также содержащая мембраносвязанный фактор транскрипции, содержащий участок расщепления протеазой.
30. Клетка по п.29, где расщепление по участку расщепления протеазой высвобождает фактор транскрипции, что приводит к повышенной экспрессии гена-мишени.
31. Клетка по п.30, где ген-мишень кодирует цитокин.
32. Клетка по п.31, где цитокин выбран из следующей группы: ИЛ-2, ИЛ-7, ИЛ-15 и ИЛ-12.
33. Клетка по любому по пп.26-28, где химерный антигенный рецептор (CAR) является целевым CAR, содержащим внутриклеточный участок расщепления протеазой.
34. Клетка по п.33, где целевой CAR содержит активирующий или костимуляторный эндодомен, и расщепление по участку расщепления протеазой приводит к удалению эндодомена из целевого CAR.
35. Клетка по п.33, где целевой CAR содержит ингибиторный эндодомен, и расщепление по участку расщепления протеазой приводит к удалению ингибиторного эндодомена из целевого CAR.
36. Клетка по п.35, где ингибиторный эндодомен содержит эндодомен CD148 или CD45.
37. Клетка по п.1, содержащая два CAR: активирующий CAR, содержащий ITAM-содержащий эндодомен; и целевой CAR по любому из пп.33-36.
38. Клетка по п.1, содержащая два CAR: ингибиторный CAR, содержащий ITIM-содержащий эндодомен; и целевой CAR по любому из пп.33-36.
39. Конструкция нуклеиновой кислоты, содержащая:
первую последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую химерный антигенный рецептор; и
вторую последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую укороченный белок или слитый белок по любому из предшествующих пп.
40. Конструкция нуклеиновой кислоты по п.39, также содержащая третью последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую мембраносвязанный фактор транскрипции по любому из пп.29-32.
41. Конструкция нуклеиновой кислоты по п.39, также содержащая третью последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую целевой CAR по любому из пп.33-36.
42. Конструкция нуклеиновой кислоты по п.41, также содержащая четвертую последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую активирующий CAR по п.37 или ингибиторный CAR по п.38.
43. Вектор, содержащий конструкцию нуклеиновой кислоты по любому по пп.39-42 или первую и вторую и, необязательно, третью и/или четвертую последовательности нуклеиновой кислоты по любому из пп.39-42.
44. Набор векторов, содержащий первую и вторую и, необязательно, третью и/или четвертую последовательности нуклеиновой кислоты по любому из пп.39-42.
45. Вектор или набор векторов по п.43 или 44, являющиеся ретровирусными или лентивирусными векторами.
46. Фармацевтическая композиция, содержащая множество клеток по любому по пп.1-38.
47. Фармацевтическая композиция по п.46 для применения в лечении и/или профилактике заболевания.
48. Способ лечения и/или профилактики заболевания, включающий стадию введения индивидууму фармацевтической композиции по п.46.
49. Способ по п.48, включающий следующие стадии:
выделение образца, содержащего клетки, из индивидуума;
трансдукция или трансфекция клеток с использованием конструкции нуклеиновой кислоты по п.41 или 42, вектора или набора векторов по любому по пп.43-45; и
введение индивидууму клетки по п.(ii).
50. Применение фармацевтической композиции по п.46 в производстве лекарственного средства для лечения и/или профилактики заболевания.
51. Фармацевтическая композиция для применения по п.47, или способ по п.48 или 49, или применение по п.50, где заболевание является злокачественным новообразованием.
52. Способ получения клетки по любому по пп.1-38, включающий стадию встраивания конструкции нуклеиновой кислоты по п.41 или 42, вектора или набора векторов по любому по пп.43-45 в клетку.
53. Способ по п.52, где клетку получают из образца, выделенного из индивидуума.