СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ТКАНЕВОГО ЛЕЧЕБНОГО ПРЕПАРАТА, ВКЛЮЧАЮЩЕГО В СЕБЯ ЖИДКУЮ ФУНКЦИЮ ИЗ ЯИЧНИКА, И МАТОЧНОГО СОДЕРЖИМОГО ОТ ПЛОДОВ-ТЕЛОЧЕК
METHOD FOR PRODUCING THERAPEUTIC TISSUE PREPARATION CONTAINING LIQUID FRACTION OF OVARY AND UTERINE CONTENTS OF FEMALE CALF FOETUSES

Изобретение относится к ветеринарии, к способу получения лечебного содержимого плодов-телочек, и может быть использовано при лечение коров с болезнями яичников, с послеродовыми заболеваниями половых органов.
Известен способ получения препарата из плаценты, включающий измельчение сырья, проведение слабого кислотного гидролиза, выделение продукта центрифугированием, нейтрализацию над осадочной жидкости, выделение и очистку препарата, сублимацию высушивание (1).
Недостатком этого изобретения является то, что извлечение биостимулирующих, лечебных веществ природного происхождения под действием любой степени кислотного гидролиза, а также сублимационной обработке приводит к извлечению и уменьшению количества или свойств лечебного фактора.
Известен также способ получение препарата ПДЭ (плацента, денатурированная эмульгированная), при изготовлении которого используются ткани детской плаценты: ткань амниона, хориона (2).
Недостатком этого способа является то, что при получении препарата добавляют химические вещества, приводящие к изменению природных свойств белковых молекул, нуклеиновых кислот, а также при использовании диспергирования и эмульгирования происходит выделение капельно-жидкой фазы из раствора, что обычно сопровождается разрывом химических связей. Поэтому изменяются природные лечебные свойства препарата, теряя лечебные, бактерицидные и стимулирующий эффект.
Наиболее близким к настоящему изобретению по технико-биологической сущности и достигаемому результату при использовании является способ получения плацентарного лечебного препарата (3) и способ получения лечебного препарата при использовании яичников крупного рогатого скота для изготовления вещества, восстанавливающего репродукцию (4).
При этих способах лечебная эффективность достигается изготовлением из карункулов, кателидонов, амниотической жидкости, яичников, взятых у стельных коров при их отправке на скотобойни, а гомогенизированные карункулы и кателидоны смешивают с амниотической жидкостью из расчета 10:1 после отстаивания, центрифугирования упаковывают фракции во флаконы.
Недостатками в их способах является то, что изготовленный лечебный препарат авторы предлагают использовать для лечения коров с послеродовыми заболеваниями тела матки, шейки матки, теоретически обосновывая бактерицидным, бактериостатическим, регенеративным свойством получаемые автором препаратов.
Однако плацентарный препарат не нашел особой эффективности гормонального эффекта (эстрогенного, гипофизарного стимулятора окситоцинового фолликулостимулирующего фактора). Поэтому авторы плацентарный препарат использовали только при лечении коров с эндометритом, цервицитами, задержанием последа, субинволюцией матки, но не с болезнями яичников.
Задачей предлагаемого изобретения является разработка способа получения тканевого препарата для лечения коров с нарушением функции яичников (персистентное желтое тело, киста, гипотрофия), оваритом, сельпингитом и эндометритом.
Цель изобретения - повышение лечебной и стимулирующей эффективности препарата на функции яичников изготовляемого из яичников плодов и маточных секретов, взятых из половых органов плодов-телочек, а также выполнение способов адресной доставки полученных фармакологических фетоплацентарных фракций.
Поставленная цель достигается тем, что извлекают методом резекции из 4-5-месячных плодов-телочек яичники (богатые эстрогенными гормонами) внутриматочное содержимое, богатое стволовыми эмбриональными клетками и плодными ферментами.
В эмбриональный и плодные периоды в яичниках плодов-самочек каждый фолликул состоит из фолликулярной жидкости, в которой имеются эстрагеннового характера гормоны (фолликулостимулирующий, окситоцин, роста, вазопрессин и т.д.). Плодное маточное содержимое, а также фракции из гомогенной массы плодных яичников богаты эмбриональными недиффиринцированными гемопоэтическими плюропатентными стволовыми клетками и бактерицидными ферментами.
Выполнение процедур получению лечебного препарата проводится в комнате, подвергнутой кварцеванию.
Выполнение предлагаемого способа состоит в следующем.
Извлекают 4-месячный плод-телочки из матки стельной коровы, орошают плод раствором марганцево-кислотного калия 1:1000. У плода телочки извлекают яичники, а из полости тела матки плода-телочки отсасывают вакуумированием внутриматочное содержимое из бифуркационной части. Измельчают в гомогенизаторе в течение 20 минут собранные яичники, добавляют ранее собранную внутриматочную жидкость из расчета 100:25, медленно перемешивают в течение 10 минут, отстаивают 60 минут. Жидкую часть центрифугируют 3 тыс. об/мин в течение 20 минут, насадочную часть сливают во флаконы.
Полученный препарат испытывают на безвредность, бактекрицидность, эмбрионотоксичность, акт дефекации и мочевыделения, получения эстрогенов, ферментов ядросодержащих нейтрофилов-предшественников стволовых клеток.
Препарат представляет собой беловато с желтым оттенком цвет, жидкость, что отвечает лечебным требованиям препарата.
При лечении коров с болезнями яичников с персистентным желтым телом, с нарушением полового цикла проводят инъекции препарата в паренхиму яичников, с послеродовыми заболеваниями яйцеводов вводят в тазовую полость - неширокие маточные связки. Лекарственное вещество в жидкой фракции помещают в биоконтейнер (в отрезок пуповинной вены размером 2 см).
Троакар с биоконтейнером вводят в средней части прямой линии, мнимо проведенной между корнем хвоста и маклока между большой седалищной вырезкой подвздошной кости и крестцовой костью.
Практическое испытание предлагаемого препарата
В процессе трансплантации биоконтейнера создают репаративную регенерацию слизистой оболочки и мышечных слоев. Матку после патологических родов на уровне компенсаторной гипертрофии улучшаются условия фракционирования слизистого и мышечного слоя яйцепроводов, рассасыванию желтого тела, в яичнике способствую нормализации и инволюционного процесса полового цикла.
Изготовленный биологический контейнер мы ввели в тазовую полость коровам с серозно катаральным послеродовым эндометритом, с персистентным желтым телом, с нарушением функции яичников. Биоконтейнеры вводили в тазовую полость на широкие маточные связки 3 раза через 24 часа. Результаты лечения отображены в таблице 1.
Таблица 1
Эффективность лечения коров биопрепаратом с болезнями яичников и матки
Лечебная процедура
Коров (количество)
Из них выздоровело
число
%
ЭндометритОпыт
9
8
88,8±3,6
Контроль
12
8
66,6±1,2
Персистентное желтое телоОпыт
10
7
70,0±2,3
Контроль
14
9
64,2±1,2
Гипофункция яичниковОпыт
7
5
71,4±1,4
Контроль
11
7
63,6±2,3
Из таблицы 1 видно, что после лечения коров с болезнями половых органов (эндометрит, персистентное желтое тело, нарушение функции яичников), после патологических родов коровам в тазовую полость вводили биологический контейнер, наполненный препаратом. Успешно выздоровело из 9 больных коров 8, что составило 88.8%, а в опытной группе, когда коров лечили с персистентным желтым телом, выздоровело 70% коров. В опытной группе после введения шприцем в паренхиму яичников 1 мл препарата пришли в половую охоту 70% коров, в среднем через 28-32 дня, а коровы контрольных групп, которым вводили окситоцин, пришли в половую охоту 64,3% после отела через 40-45 дней. Стадию выздоровления определяли по яркому проявлению половой охоты и оплодотворяемости после осеменения коров. Следует особо отметить, что при нарушении функции яичников, с персистентным желтым телом в яичниках проводимое лечение коров привело к выздоровлению 71,4% коров, а в контрольной группе 63,3% коров.
Примение лечебного препарата для восстановления функции яичника у коров
Эффективность применения разных способов введения препарата коровам с гипофункцией яичников отражена в таблице 2.
Таблица 2
Лечебная эффективность препарата на коровах с болезнями яичников
Способ лечения коров с болезнями яичников
Коровы (количество)
Пришли в половую охоту
Стали стельными
Число
%
Число
%
Введение биоконтейнера в тазовую полость
12
10
83,3
8
80
Введение препарата в яичник с персистентным желтым телом
14
12
85,7
10
83,3
Введение препарата внутримышечно (контроль)
13
10
76,9
7
70
Без стимуляции (контроль)
6
2
33,3
-
-
Практика показала, что после введения коровам в тазовую полость на широкие связки биоконтейнера с препаратом в полноценную половую охоту пришло 83,3% коров (см. Таблицу 2)
Наивысшее проявление стадии возбуждения полового цикла у коров после введения лечебного препарата непосредственно в яичники пришло в половую охоту 85,7% коров. Несколько ниже было проявление ярких признаков половой охоты, когда препарат вводили коровам внутримышечно - 76,9%. Из испытуемых способов введения препарата инъекция в яичник была эффективнее на 2,4% чем после введения биоконтейнера на широкие маточные связки и на 8,8% выше чем после внутримышечного способа введения препарата.
В контрольной группе стадия возбуждения полового цикла была у 33,3% коров, которым стимуляцию не проводили. Следует отметить, что явной эффективностью является оплодотворяемость животных после лечебных процедур с помощью предлагаемого лечебного препарата.
Но после лечения коров с гипофункцией яичников способом введения препарата в биоконтейнере на широкие связки в тазовую полость стало стельными 80% коров. После инъекции препарата непосредственно в яичники стельными было 83,3% коров, т.е. на 3,3% больше чем после использования для лечения биоконтейнеров с лечебным препаратом.
Литература
1. Патент США №4054648 МПК 6 А61к 35/50.
2. Беляев В.И., Нежданов А.Г., Лободин К.А., Семинихин И.П., Тюренков И.Т. «Биологическая активность препаратов из плаценты», Ветеринарная практика, №7, 2006 г., стр.58-61, Журнал 3.
3. Небогатиков Г.В. и др. Патент RU 2400241 С1, 27.09.2010.
4. Патент RU №2056853 C1, 27.03.1996.