ЛИОФИЛИЗАЦИЯ СИНТЕТИЧЕСКОГО ЛИПОСОМАЛЬНОГО ЛЕГОЧНОГО СУРФАКТАНТА

1. Способ получения лиофилизированного синтетического легочного сурфактанта, имеющего менее выраженное перемещение лепешки или отсутствие перемещения во время процесса, включающий:
введение в лиофилизирующую камеру прелиофилизированной смеси, включающей по меньшей мере один фосфолипид и синтетический пептид, диспергированные в растворителе, содержащем органический растворитель в диапазоне от 3% (об./об.) до менее 20% (об./об.) общего объема прелиофилизированной смеси с остальной водой и/или буфером, где прелиофилизированную смесь заполняют в контейнер, и где синтетический пептид имеет по меньшей мере 10 остатков аминокислот и представлен формулой:
a
b
c
,
(ZU)Z
где Ζ представляет собой остаток гидрофильной аминокислоты, и U представляет собой остаток гидрофобной кислоты; где каждый Ζ представляет собой независимо R, D, Ε или К; и каждый U представляет собой независимо V, I, L, С, Y или F; и где а представляет собой целое число со средним значением от около 1 до около 5; b представляет собой целое число со средним значением от около 3 до около 20; с представляет собой целое число от около 1 до около 10; и d представляет собой целое число от около 1 до около 3; понижение температуры внутри лиофилизирущей камеры для начала охлаждения и отвердевания прелиофилизированной смеси в фазе замораживания; и проведение фазы отжига перед фазой первичной сушки и, таким образом, снижение или устранение перемещения лепешки лиофилизированного синтетического легочного сурфактанта.
2. Способ по п. 1, включающий:
проведение фазы замораживания в процессе снижения температуры внутри лиофилизационной камеры, где прелиофилизированную смесь охлаждают до первой температуры ниже -45°С со скоростью между 0,1 и 1,0°С/мин, и выдерживают прелиофилизированную смесь при первой температуре в течение
первого периода времени, достаточного для отвердевания по меньшей мере 76% растворителя с получением первой отвержденной смеси;
проведение фазы отжига и, таким образом, уменьшения или устранения перемещения лепешки, где отвержденную смесь (i) нагревают до второй температуры, выбираемой для уменьшения или устранения перемещения первой отвержденной смеси, (ii) выдерживают при второй температуре в течение второго периода времени, достаточного для уменьшения или устранения перемещения первой отвержденной смеси, и (iii) охлаждают до третьей температуры ниже -45°С со скоростью между 0,1 и 1,0°С/мин с получением второй отвержденной смеси, где вторую отвержденную смесь выдерживают при третьей температуре в течение третьего периода времени, достаточного для обеспечения отделения незамороженного органического растворителя из второй отвержденной смеси и посредством этого достижения миграции незамороженного органического растворителя к границе раздела между контейнером и второй отвержденной смесью;
проведение фазы первичной сушки при пониженном давлении 30 мТ или выше, где вторую отвержденную смесь выдерживают при четвертой температуре в течение четвертого периода времени, достаточного для удаления по меньшей мере 5% органического растворителя, с последующим нагреванием до четвертой температуры, достаточной для предохранения второй отвержденной смеси от перемещения в контейнере и сохранения структуры, установившейся во время фазы отжига, и дополнительно выдерживание при четвертой температуре в течение пятого периода времени, достаточного для удаления по меньшей мере 70% растворителя, и, таким образом, получение третьей отвержденной смеси; и
проведение фазы вторичной сушки при пониженном давлении в течение шестого периода времени, достаточного для получения лиофилизированного синтетического легочного сурфактанта, имеющего содержание остаточного растворителя максимум 2%.
3. Способ по п. 2, где соотношение объема прелиофилизированной смеси в контейнере к объему контейнера составляет от около 28% до около 68%.
4. Способ по п. 2, где соотношение высоты прелиофилизированной смеси в контейнере к диаметру контейнера находится в диапазоне от около 0,3 до около 0,8.
5. Способ по п. 2, включающий получение прелиофилизированной смеси, где органический растворитель находится в диапазоне от около 3% до около 15%.
6. Способ по п. 2, включающий обеспечение прелиофилизированной смеси, где органический растворитель содержится в диапазоне от около 5% до около 10%.
7. Способ по п. 2, включающий обеспечение прелиофилизированной смеси, где органический растворитель содержится в диапазоне от около 7% до около 10%.
8. Способ по любому из пп. 2-7, включающий:
проведение фазы замораживания, где прелиофизированную смесь охлаждают до первой температуры -50°С±5°С со скоростью между 0,1 и 1,0°С/мин;
проведение фазы отжига, где первую отвержденную смесь (i) нагревают до второй температуры -22°С±5°С со скоростью от 0,1 до 1,0°С/мин, (ii) выдерживают при второй температуре в течение второго периода времени между 4 и 8 ч, (iii) охлаждают до третьей температуры -50°С±5°С со скоростью между 0,1 до 1,0°С/мин; и (iv) выдерживают при третьей температуре в течение третьего периода времени в течение около 3-8 ч;
проведение фазы первичной сушки при давлении, выбираемом из диапазона от около 30 мТ до около 200 мТ, и температуре первичной сушки, выбираемой из диапазона от около -25°С до 0°С, с изменением от -50°С±5°С, и дополнительное выдерживание при первичной сушке в течение по меньшей мере 10 ч.
9. Способ по любому из пп. 2-7, включающий проведение фазы вторичной сушки при давлении, выбираемом из диапазона от около 30 мТ до около 200 мТ, и температуре максимум 46°С±5°С.
10. Способ по п. 1, где прелиофилизированная смесь содержит
2
SEQ ID NO: 1 (KL4 полипептид), дипальмитоилфосфатидилхолин (DPPC), пальмитоилолеоилфосфатидилглицерин (POPG) и пальмитиновую кислоту и где лиофилизированный синтетический легочный сурфактант имеет удельную площадь поверхности по меньшей мере 2,2 м/г.
2
2
11. Способ по п. 10, где удельная площадь поверхности находится в диапазоне от около 3,7 м/г до около 2,2 м/г.
12. Способ по п. 10, где лиофилизированный синтетический легочный сурфактант имеет пористость выше 40% по объему общей площади лиофилизированного синтетического легочного сурфактанта.
13. Композиция лиофилизированного синтетического легочного сурфактанта, включающая:
по меньшей мере один фосфолипид и синтетический полипептид, имеющий по меньшей мере 10 остатков аминокислот, и представленная формулой:
a
b
c
d ,
(ZU)Z
2
где Ζ представляет собой остаток гидрофильной аминокислоты, и U представляет собой остаток гидрофобной аминокислоты/ где каждый Ζ представляет собой независимо R, D, Ε или К; и каждый U представляет собой независимо V, I, L, С, Y или F; и где а представляет собой целое число со средним значением от около 1 до около 5; b представляет собой целое число со средним значением от около 3 до около 20; с представляет собой целое число от около 1 до около 10; и d представляет собой целое число от около 1 до около 3, где композиция лиофилизированного синтетического легочного сурфактанта имеет удельную площадь поверхности по меньшей мере 2,2 м/г.
2
2
14. Лиофилизированный синтетический легочный сурфактант по п. 13, где удельная площадь поверхности находится в диапазоне от около 3,7 м/г до около 2,2 м/г.
15. Лиофилизированный синтетический легочный сурфактант по п. 13, где лиофилизированный синтетический легочный сурфактант имеет пористость выше 40% по объему общей площади лиофилизированного синтетического легочного сурфактанта.
16. Лиофилизированный синтетический легочный сурфактант по любому из пп. 13-15, где лиофилизированный синтетический легочный сурфактант содержит SEQ ID NO: 1 (KL4 полипептид), дипальмитоилфосфатидилхолин (DPPC), пальмитоилолеоилфосфатидилглицерин (POPG) и пальмитиновую кислоту.