Средство, обладающее антигипоксическим и адаптогенным действием
REMEDY WITH ANTIHYPOXIC AND ADAPTOGENIC EFFECTS

Изобретение относится к фармации и пищевой промышленности, а именно к созданию средств на базе лекарственных растений, которые в дальнейшем будут использоваться в качестве общеукрепляющих средств, для повышения физической работоспособности и выносливости, двигательной активности, повышения устойчивости к гипоксии и эмоциональному стрессу. Разработка средств из растительного сырья, повышающих резистентность организма к воздействию неблагоприятных факторов окружающей среды, остается актуальным в связи с увеличением числа заболеваний, связанных со снижением естественной устойчивости организма. Известно, что чаще всего на фоне снижения неспецифической резистентности организма для снижения риска развития заболеваний, целесообразно применять средства общеукрепляющей направленности, получаемые из лекарственных растений [11, 12, 14, 15].
Задачей настоящего изобретения является расширение ассортимента профилактических средств, обладающих общеукрепляющим и антигипоксическим действием на основе доступного отечественного сырья. Поставленная задача решается путем разработки новой композиции на основе сбора лекарственных растений и получаемого на его основе настойки, обеспечивающей суммарное адаптогенное действие.
Технический результат достигается тем, что в состав сбора включены: плоды шиповника и рябины обыкновенной, корни и корневища родиолы розовой, левзеи одноцветковой, корни астрагала перепончатого, черных листьев бадана, корней и корневищ солодки уральской и имбиря лекарственного, взятых в соотношении сырья: (в мас. ч.) 20,0:20,0:15,0:15,0:10,0:10,0:5,0,:5,0 со степенью измельчения: листьев 1-3 мм, корневищ и корней 1-2 мм, плодов 0,5-1 мм. Экстракция проведена методом реперколяции в батерее из пяти диффузоров в соотношении сырье - экстрагент (1:10-15) при температуре 18-20°С.
В литературе известен способ получения средства, обладающей адаптогенной активностью, включающий экстракцию корней элеутерококка раствором этанола (ВФС 42-1281-82) [1]. Недостатком указанного способа получения является низкий выход экстрактивных веществ - не более 6%, а также ограниченность ресурсов этого вида сырья. Механизмом адаптогенного воздействия (в том числе гликозидов элеутерококка) обусловлено ослаблением негативных биохимических и функциональных сдвигов при стресс-реакциях и активацией адаптивного синтеза РНК и белков, приводящая к улучшению энергетического обмена и восстановительных процессов. Для развития заметного эффекта требуется продолжительное время и регулярный прием (пик через 4-6 недель при ежедневном приеме).
Известна композиция ингредиентов "Адаптовит", обладающая антигипоксантным действием. В составе композиции: корни элеутерококка, корни аралии, семена лимонника, листья крапивы, плоды рябины, плоды калины, плоды шиповника при следующем соотношении компонентов, мас. %: корни аралии - 8-12; семена лимонника - 8-12; листья крапивы - 13-17; плоды рябины - 3-7; плоды калины - 3-7; плоды шиповника - 3-7; корни элеутерококка - 5-8 [2]. "Адаптовит" используется для коррекции функциональных расстройств и профилактике заболеваний, связанных с воздействием на организм стрессовых и истощающих факторов внешней среды. Спиртовый экстракт готовят следующим образом: указанную выше смесь растительных компонентов экстрагируют водно-спиртовой смесью (соотношение 96% этиловый спирт/вода - 1/1) в объемном соотношении сырье/водно-спиртовая смесь - 1/1 в течение 3 суток, либо углекислым газом в соотношении сырье/газ - 1/1 в течение 3 часов, либо водой в соотношении сырье/вода - 1/10 при температуре воды 35-40° в течение 6-8 часов. Водно-спиртовый экстракт в дальнейшем деалкоголизируют путем отгонки спирта с помощью роторного пленочного испарителя при температуре 30-40°С, добавляют дистиллированную воду до исходного объема, добавляют консервант - бензоат натрия в количестве 0,017 г на литр, выдерживают в течение 7 суток при температуре 10-15°С, фильтруют. Полученная пищевая добавка представляет собой прозрачную жидкость красновато-коричневого цвета, обладающую горьковато-вяжущим вкусом [2].
Целью предлагаемого способа является расширение перечня адаптогенных средств, обеспечивающих активность за счет использования лекарственных растений, широко применяемых в тибетской медицине (левзея одноцветковая, астрагал перепончатый), имеющих сырьевую базу.
Выявленные отличительные признаки соответствуют технологическому решению по критерию «новизна», так как во-первых, подобного состава не было обнаружено ни в одном источнике, во-вторых, доказано, что только указанные в формуле изобретения признаки позволяют достичь поставленной цели.
По данным литературы о химическом составе используемых растений известно, что в предложенном составе содержатся: аминокислоты, тритерпеновые сапонины, эфирные масла, полисахариды, флавоноиды (кверцетин, изорамнетин, кемпферол и их гликозиды), микроэлементы, в том числе селен и витамины А, Е, С.
Доказано, что экстракты полученные из плодов шиповника, родиолы розовой и левзеи обладают общеукрепляющим действием. Экстракт солодки отличается выраженной противовоспалительной и антимикробной активностью [3]. Левзея одноцветковая и родиола розовая включены в состав как компоненты, оказывающие не только общестимулирующее действие, но и положительно влияющий на половую потенцию и сердечно-сосудистую систему [4]; а включение солодки голой позволяет усилить ее адаптогенные, противовоспалительные свойства; включение астрагала в состав многокомпонентного сбора обосновано с целью повышения иммуностимулирующих свойств, удачное сочетание антигипоксических и противовоспалительных свойств, присущих имбирю и являются основанием для включения в число компонентов потенциального средства. Шиповник введен в состав для обеспечения пролонгированного актопротекторного и адаптогенного действия и как источник витаминов [6, 7, 11, 12].
Известно, что плоды шиповника содержат аскорбиновую кислоту (до 2,5-5,2%), каротиноиды (10 мг%): α, β, γ-каротины, ликопин; витамины В2, К, Р, Е; флавоноиды (кверцетин, кемпферол, изоквекрцетин) антоцианы; сахара (до 24%); пектиновые вещества (14%); жирное масло; дубильные вещества (4,4%); органические кислоты (не менее 2,6%) [6]. Препараты из плодов шиповника благотворно влияют на углеводный обмен, функции костного мозга, печени, желчного пузыря; входят в состав лекарств, рекомендуемых при хронических заболеваниях желудка, печени [12].
Плоды рябины содержат органические кислоты 1,9-3,9%: лимонная, винная, яблочная, сорбиновая; антоцианы: цианидин и его гликозиды, лейкоцианидин; витамины: С (70 мг %), Ρ, В1 (0,05 мг %) В2 (0,05 мг %), РР (0,5 мг %), Е; каротиноиды (9 мг %); флавоноиды: мератин, кверцитин, рутин, гиперозид, кверцитрин, изокверцитрин; тритерпеноиды (1,58-1,91%): урсоловая, олеаноловая кислоты; катехины: (-)-эпикатехин, (-)-эпикатехингаллат, галлокатехин, эпигаллокатехин, (-)-эпигаллокатехингаллат; фенолкарбоновые кислоты: кофейная, хлорогеновая, псевдохлорогеновая, неохлорогеновая, феруловая, кумаровая, транскофейная, транс-феруловая, транс-кумаровая; углеводы: 5,1-7,5%: глюкоза, фруктоза, сахароза, L-сорбоза, сорбит 10,4-25,3% (от общей массы Сахаров); манит; клетчатка 3,2%; фосфолипиды: кефалин, лецитин; гетероциклические кислородсодержащие соединения: парасорбиновая кислота; глюкозид парасорбиновой кислоты; дубильные вещества. В плодах содержится: зола - 3,23%, макроэлементы (мг/г): K - 16,50, Са - 2,20, Μn - 1,00, Fe - 0,04; микроэлементы (мкг/г): Mg - 81,70, Cu - 4,96, Zn - 8,64, Со - 0,08, Мо - 0,16, Cr-0,16, Al - 26,96, Ва - 18,32, V - 0,80, Se - 0,14, Sr - 4,40, Pb - 1,04, В - 4,80, Ni - 1,04. не обнаружены Cd, Li, Au, Ag, I, Br [5]. Благодаря наличию тритерпеновых кислот, плоды рябины применяются при заболеваниях сердечно-сосудистой системы: аритмии, гипертонии, сердечной недостаточности, при болях в сердце, нарушениях коронарного кровообращения, плоды рябины снижают уровень холестерина в крови, повышают резистентность кровеносных сосудов [9, 10, 11].
В официнальной медицине применяется астрагал шерстистоцветковый - Astragalus membranaceus. Водный настой корней А. шерстистоцветкового обладает седативным, гипотензивным, антиоксидантным и гепатозащитным действием. Важной особенностью астрагалов является способность накапливать органический селен из почвы в количестве примерно в 5000 раз большем, чем это доступно другим растениям того же региона. Кроме того, в корнях астрагала кроме селена содержится почти весь спектр необходимых человеку минералов и антиоксидантов: витамины (А, Е, С); аминокислоты, биофлавоноиды, полисахариды, терпены и т.д. [11]. Для расширения сырьевой базы нами использованы корни астрагала перепончатого. Установлено, что химический состав астрагала перепончатого сходен с А. шерстистоцветковым, а содержание суммы флавоноидов в пересчете на рутин и абсолютно сухое сырье, по данным анализа, колеблется от 1,23 до 2,54%. С использованием методов БХ, ТСХ, ВЭЖХ, ГЖХ идентифицированы: гиперозид, рутин, кверцетин; кофейная, феруловая, п-оксибензойная, аскорбиновая, яблочная и гексадекановая кислоты; непредельные алканы; идентифицированы 25 свободных и 16 связанных аминокислот, среди которых обнаружено 9 незаменимых аминокислот. Определено количественное содержание БАВ: флавоноиды (1,22±0,06%), дубильные вещества (1,78±0,07%), восстанавливающие моносахара (0,73±0,02%), водорастворимые полисахариды до (5,10%), пектиновые вещества до (4,56%), органические кислоты (9,81±0,15%), аскорбиновая кислота (1,78±0,05%).[7, 8, 9].
В корнях левзеи сафлоровидной содержатся девять веществ экдистероидного характера: экдистерон, 24(28)-дегидромакистерон А, интегристерон А, 22-дезоксиэкдистерон, 2,3-моноацетонид экдистерона, 20,22-моноацетонид экдистерона, рапистерон, аюгастерон С, полиподин В. Основные действующие вещества (экдистерон и их аналоги экдистероидов), обладают анаболическим эффектом и перспективны для спорта, животноводства и медицины. В медицине корневища с корнями левзеи (как в виде растительного сырья, экдистена, так и экстракта из него) производится в качестве общеукрепляющего и адаптогенного лекарственного средства. Нами установлено, что в корнях левзеи одноцветковой содержатся экдистероиды, суммарное содержание их составляет от 1,19 до 1,33% [4, 5].
Родиола розовая содержит углеводы (глюкоза, фруктоза, сахароза, седогептулоза); органические кислоты: щавелевая, яблочная, янтарная, лимонная; герпеноиды: розиридин, розиридол; эфирное масло 0,8-0,9%, в его составе коричный альдегид, цитраль, фенилэтиловый спирт, фенилэтилацетат; стероиды: β-ситостерин; ароматические соединения: розавин 1-2,5%, коричный спирт, розин, розарии, фенолы: тирозол, салидрозид; фенолкарбоновые кислоты: галловая, метиловый эфир галловой кислоты; дубильные вещества 15,9-20,25%; флавоноиды (кемпферол, астрагалин, трицин, родионин, родиозин, родиолин) [7, 11]. В официнальной медицине спиртовый экстракт используется в качестве средства, стимулирующее ЦНС, при астенических и неврастенических состояниях, повышенной утомляемости, пониженной работоспособности, вегетативно-сосудистой дистонии.
Приторно-сладкий вкус солодки (лакричного корня) обусловлен именно присутствием глицирризиновой кислоты, соли которой слаще сахара в 50-100 раз. Среди 27 разнообразных флавоноидов наиболее важны флавонолы и халконы, а также их изоформы - ликуразид, кемпферол, ликвиритозид, ликвиритин, изоликвиритин, уралозид и др.; полисахариды (крахмал до 34%, пектиновые вещества - 4-6%); дубильные вещества (до 14%); кумарины (до 2,6%); органические кислоты (до 4,6%); горькие вещества - 2,4%; стероиды (β-ситостерин, эстриол) [15]. Препараты солодки обладают противовоспалительным, мочегонным, слабительным, антигистаминным, отхаркивающим, потогонным и болеутоляющим действием. Так же они обладают общеукрепляющим, антимикробным, противоаллергическим, обезвреживающим и расслабляющим гладкую мускулатуру действием [14, 15]. Ее используют для лечения желчекаменной болезни, хронических запоров, начальных форм сахарного диабета и при незначительном артериальном давлении [11]. Благодаря наличию сапонинов, которые способствуют снижению уровня холестерина в крови, препятствуют атеросклеротическим изменениям стенок сосудов, они эффективно снижают артериальное давление, а также оказывают противоопухолевое действие, способствуют повышению иммунитета [12].
В имбире в большом количестве содержатся витамины С, B1, В2, А, которые являются основными для человеческого организма и нужными для усвоения других веществ. Минеральный ряд включает необходимые человеку магний, фосфор, натрий, медь, кальций, цинк, железо и калий. В составе имбиря присутствуют аминокислоты, липиды, лизин, эфирные масла, фенолы, сахара. Всего в имбире более четырехсот биоактивных веществ и соединений. Имбирь используют при плохом аппетите и расстройстве пищеварения (с тошнотой и рвотой), метеоризме, хроническом энтерите, понижает артериальное давление и уровень холестерина в крови. Обладает противовоспалительным, ветрогонным, спазмолитическим, болеутоляющим действием. В целом имбирь благоприятно действует на организм, устраняет усталость, продлевает молодость, помогает пище лучше усваиваться. Те, кто употребляют имбирь, имеют острый ум и хорошую память, всегда полны энергией [9].
Бадан хорошо вписывается в многокомпонентные чаи, особенно в тонизирующие. Содержит свободные полифенолы, гликозид бергенин, сахара, крахмал, аскорбиновую кислоту (до 260 мг %), и другие вещества. В листьях обнаружена галловая кислота, до 22% арбутина и до 4% свободного гидрохинона, значительные количества марганца, железа и меди. По содержанию арбутина бадан является самым богатым источником его в растительном мире [8].
Изучен качественный фитохимический анализ заявленного средства, который показал наличие следующих биологически активных веществ [10, 12].
Дубильные вещества:
1) Реакция на дубильные вещества с 1%-м раствором желатина. К 2-3 мл водно-спиртового раствора прибавляем 2 мл 1%-й раствором желатина 10%-ном растворе хлорида натрия. Появляется хлопьевидный осадок, растворимый в избытке желатина;
2) Реакция с 10% раствором свинца ацетата среднего (одновременно добавляют 10% раствор уксусной кислоты). Образуется белый осадок, нерастворимый в уксусной кислоте, который доказывает присутствие дубильных веществ гидролизуемой группы;
3) Реакция с железоаммонийными квасцами. Появляется черно-синее окрашивание, свидетельствующее о наличие дубильных веществ гидролизуемой группы.
Флавоноиды:
1) Цианидиновая проба (проба Синода): к водно-спиртовому раствору добавляют несколько капель концентрируемой хлористоводородной кислоты и 20-30 мг порошка магния. Появлялось желто-оранжевое окрашивание.
2) С 1-2% спиртовым раствором алюминия хлористого - появляется желтое или желто-зеленое окрашивание.
Углеводы:
1) Реакция Молиша. В пробирку берут 1 мл водно-спиртового раствора заявленного средства, добавляют 2 капли 10%-ного спиртового раствора α-нафтола и по стенке пробирки приливают осторожно, без встряхивания, 2 мл концентрированной серной кислоты. Серная кислота опускается на дно пробирки, и на границе двух жидкостей образуется кольцо красно-фиолетового цвета.
2) Нафторезорциновая проба (проба Толленса): к 5-6 мл водно-спиртового раствора прибавляют 1 мл 1% спиртового раствора нафторезорцина и 1 мл концентрированной соляной кислоты. Смесь осторожно нагревают до кипения и кипятят 1 мин. Охлаждают и взбалтывают с эфиром. Эфирный слой окрашивается в фиолетовый цвет.
Аминокислоты:
Реакция с нингидрином: к 1-2 мл водно-спиртового раствора приливают 3-4 капли 1%-ного раствора нингидрина в 95%-ном растворе ацетона. Раствор перемешивают и ставят в водяную баню при 70°С на несколько минут, появляется сине-фиолетовое окрашивание.
Аскорбиновая кислота:
Реакция с раствором 2,6-дихлорфенолиндофенолятом натрия. К 1 мл водно-спиртовому раствору прибавляют 1 мл 0,02%-ного раствора 2,6-дихлорфенолиндофенол. Происходит обесцвечивание раствора.
Сапонины:
Готовят водный раствор (1:10).
1) В 2 пробирки, в одну из них налили 5 мл 0,1 н хлористоводородной кислоты, в другую - 0,1 н едкого натра. Затем в обе пробирки добавили по 2-3 капли водного раствора экстракта, затем сильно встряхивали, в обеих пробирках образовалась пена, равная по объему и стойкости.
2) К 2 мл водного настоя прибавили капель свинца ацетата среднего, образуется осадок.
Количественное определение биологически активных веществ
Определение содержания кислоты аскорбиновой
Около 2,0 г (точная навеска) растительного сырья измельченного до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 1 мм, помещали в коническую колбу вместимостью 200 мл, прибавляли 50 мл воды очищенной и взвешивали с погрешностью ±0,01 г. Далее проводили экстракцию на вибрационном встряхивателе в течение 1 часа при комнатной температуре. После экстракции колбу с содержимым вновь взвешивали и доводили до первоначальной массы. Содержимое колбы фильтровали через бумажный фильтр в сухую колбу, отбрасывая первые 10 мл фильтрата (раствор А).
К 5 мл раствора А прибавляли 20 мл спирта 95% перемешивали и фильтровали через бумажный фильтр (раствор Б).
10 мл раствора Б помещали в мерную колбу вместимостью 50 мл доводили объем раствора водой до метки и перемешивали (раствор В).
В три пробирки с притертыми пробками отмеривали: в первую 5 мл раствора В, во вторую 5 мл раствора Б РСО кислоты аскорбиновой, в третью 5 мл воды. В каждую из пробирок прибавляли по 5 мл реактива и нагревали на водяной бане в течение 10 мин. Затем пробирки с содержимым быстро охлаждали под струей холодной воды и измеряли оптическую плотность испытуемого раствора на спектрофотометре при длине волны 700 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм.
Параллельно в тех же условиях измеряли оптическую плотность раствора Б РСО кислоты аскорбиновой.
В качестве раствора сравнения используют раствор, содержащий 5 мл воды.
Содержание кислоты аскорбиновой в % (X) вычисляли по формуле:
0
0
где: D - оптическая плотность испытуемого раствора; D - оптическая плотность раствора Б РСО аскорбиновой кислоты; m - масса навески, г; m - масса РСО кислоты аскорбиновой, г; W - влажность, %.
Приготовление раствора РСО кислоты аскорбиновой.
Около 0,05 г (точная навеска) РСО кислоты аскорбиновой высушенной до постоянной массы, растворяли в мерной колбе вместимостью 100 мл в 70 мл воды, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают (раствор А).
5 мл раствора А переносят в мерную колбу вместимостью 100 м, доводили объем раствора водой до метки и перемешивали (раствор Б), растворы А и Б используют свежеприготовленными
Содержание аскорбиновой кислоты в заявленном средстве составляет 3,04%.
Определение содержания суммы гидроксикоричных кислот
Около 2,0 г (точная навеска) растительного сырья помещали в колбу со шлифом вместимостью 100 мл, прибавляли 60 мл 70% этилового спирта и взвешивали с погрешностью ±0,01 г. Колбу присоединяли к обратному холодильнику, нагревали на кипящей водяной бане в течение 35 мин, периодически встряхивая для смывания частиц сырья со стенок. Затем колбу с содержимым охлаждали до комнатной температуры, взвешивали и при необходимости доводили до первоначальной массы 70% этиловым спиртом. Извлечение фильтровали через вату, отбрасывая первые 10 мл фильтрата.
2 мл полученного раствора (или извлечения) помещали в мерную колбу вместимостью 25 мл. Объем раствора доводили 96% спиртом до метки. Оптическую плотность полученного раствора измеряли на спектрофотометре при длине волны 328±2 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм относительно 96% этанола.
Содержание суммы гидроксикоричных кислот в процентах (X) в пересчете на кислоту хлорогеновую и абсолютно сухое сырье вычисляли по формуле:
х
а
Где: А - оптическая плотность испытуемого раствора;  - масса навески, г; W - влажность, %.
Содержание суммы гидроксикоричных кислот в заявленном способе составляет 2,13%
Определение содержания дубильных веществ
Около 1,0 г (точная навеска) растительного сырья, измельченного до размера частиц, проходящих сквозь сито с диаметром отверстий 2 мм, помещали в колбу вместимостью 100 мл, прибавляли 50 мл 40% спирта этилового и нагревали на кипящей водяной бане с обратным холодильником в течение 1 часа. Извлечение охлаждали, фильтровали в мерную колбу вместимостью 100 мл через складчатый бумажный фильтр, и объем раствора доводили 50% спиртом этиловым до метки (раствор А).
5 мл раствора А помещали в мерную колбу вместимостью 50 мл, и объем раствора доводили до метки спиртом этиловым 70% и перемешивали (раствор Б).
Оптическую плотность раствора Б измеряли на спектрофотометре при длине волны 276 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. В качестве раствора сравнения использовали 70% спирт этиловый. Параллельно измеряли оптическую плотность раствора РСО кислоты галловой.
Приготовление РСО кислоты галловой.
Около 0,05 г (точная навеска) кислоты галловой помещали в мерную колбу вместимостью 100 мл, прибавляли 50 мл 70% спирта этилового и перемешивали до растворения, затем объем раствора доводили до метки 70% спиртом этиловым. 2 мл полученного раствора помещали в мерную колбу вместимостью 100 мл и доводили объем раствора тем же растворителем до метки.
Содержание дубильных веществ в пересчете на кислоту галловую и абсолютно сухое сырье в процентах (X) вычисляли по формуле:
0
0
Где: D - оптическая плотность испытуемого раствора; D - оптическая плотность раствора СО кислоты галловой; m - масса навески, г; m - масса навески СО кислоты галловой, г; W - влажность, %
Содержание дубильных веществ в заявленном средстве составляет 18,64%.
Определение содержания флавоноидов
Около 1,0 г (точная навеска) растительного сырья, измельченного до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 1 мм, помещали в колбу со шлифом вместимостью 100 мл, прибавляли 50 мл 40% спирта, колбу закрывали пробкой и взвешивали с точностью до ±0,01 г. Колбу присоединяли к обратному холодильнику и нагревали на кипящей водяной бане в течении 30 минут. Затем колбу закрывали той же пробкой, снова взвешивали и восполняли недостающий экстрагент до первоначальной массы. Извлечения фильтровали через бумажный фильтр и охлаждали в течении 30 минут.
2 мл полученного раствора помещали в мерную колбу вместимостью 25 мл, прибавляли 2 мл 3% спиртовой раствор алюминия хлорида и доводили объем раствора до метки 40% спиртом (раствор А); В качестве раствора сравнения использовали раствор, приготовленный в тех же условиях, но без добавления алюминия хлорида (раствор сравнения А). Измерения оптической плотности проводили на спектрофотометре при длине волны 400 нм, через 30 мин после приготовления всех растворов.
Параллельно измеряли оптическую плотность раствора ГСО лютеолин-7-гликозид. Раствор ГСО лютеолин-7-гликозида готовили по следующей методике: около 0,0025 г (точная навеска) лютеолин-7-гликозида помещали в мерную колбу на 50 мл, растворяли в 30 мл 40% спирта при нагревании на водяной бане. После охлаждения до комнатной температуры доводили объем 40% спиртом этиловым до метки (раствор А лютеолин-7-гликозид). 1 мл раствора А лютеолин-7-гликозид помещали в мерную колбу на 25 мл, прибавляли 1 мл 3% спиртового раствора алюминия хлорида и доводили объем раствора 40% спиртом (испытуемый раствор Б лютеолин-7-гликозид). В качестве раствора сравнения использовали раствор, состоящий из 1 мл раствора лютеолин-7-гликозида, помещенный в мерную колбу на 25 мл и доведенный 40% спиртом до метки (раствор сравнения Б лютеолин-7-гликозид).
Содержание суммы флавоноидов в пересчете на лютеолин-7-гликозид и абсолютно сухое сырье в % (Х) вычисляли по формуле:
0
0
Где: D - оптическая плотность испытуемого раствора; D - оптическая плотность раствора ГСО лютеолин-7-гликозид; m - масса ГСО лютеолин-7-гликозид, г; m - масса новески, г; W - влажность, %
Содержание суммы флавоноидов в пересчете на лютеолин-7-гликозид составляло 3,15%.
Предлагаемый способ получения достаточно прост, не требует сложной схемы очистки, позволяет получить продукт постоянного состава. Технология получения может быть внедрена на предприятиях по выпуску лекарственных препаратов и пищевой промышленности.
Изучены влияние состава и природы экстрагента, его соотношение с сырьем, температурного режима, степени измельчения сырья, продолжительности и кратности числа экстракций на выход экстрактивных веществ из исследуемого растительного сбора. Количественная оценка велась по методике Государственной фармакопеи 14 изд. [10].
Подбор оптимального экстрагента является одним из основных моментов при получении извлечений. Для подбора типа экстрагента изучены процессы экстрагирования сырья водой, этиловым спиртом различной концентрации: 20, 40, 50, 60, 70, 95 (Табл. 1).
Установлено, что максимальный выход экстрактивных веществ получен при экстракции сырья 30-50% раствором этанола (оптимальная 40%). Результаты исследований приведены в таблице 1.
Коэффициент водопоглощения полученной смеси лекарственных растений составляет 2,6. Наиболее оптимальным измельчением растительной композиции является степень измельчения от 1-3 мм (табл. 2).
Исследовано влияние способа экстрагирования на выход суммы флавоноидов и экстрактивных веществ, изучена возможность получения жидкого экстракта методами мацерации, дробной мацерации и перколяции. Результаты исследований представлены в таблице 3.
Для более полного истощения сырья нами предлагается использовать способ реперколяции с батареей из пяти диффузоров.
Предложенный способ позволяет получить жидкий экстракт, обладающий выраженной антигипоксической и адаптогенной активностью.
Примеры конкретного выполнения:
Пример 1. Измельченные и просеянные плоды шиповника майского - 20,0; и рябины обыкновенной - 20; черных листьев бадана - 10; корневища и корни родиолы розовой - 15,0; левзеи одноцветковой - 15, солодки голой - 5,0; и имбиря лекарственного - 5,0; корни астрагала перепончатого - 10; смешивали, экстракцию проводили при комнатной температуре.
Экстракция сырья проводилась методом реперколяции с законченным циклом в батарее из 5 перколяторов (диффузоров), экстрагент - 35% спирт этиловый, соотношение сырья и экстрагента 1:12,6 с учетом коэффициента водопоглощения. Настаивание на каждой ступени осуществляли трехкратно по 24 часа. Готовые вытяжки после слива из 5-го диффузора собирали в одну емкость.
1-й день. В 1-й диффузор загружали 20,0 г исходного сбора, заливали 240 мл 35% спирта этилового и оставляли для настаивания на 24 часа.
2-й день. Во второй диффузор загружали 20,0 г сырья. Из первого диффузора сливали извлечение и переносили ее во второй диффузор, оставляли для настаивания на 24 часа. В первый диффузор вновь заливали 240 мл экстрагента и настаивали в течение 24 часов.
3-й день. В третий диффузор помещали 20,0 г сырья, и переносили в него извлечение из 2-го диффузора. Извлечение из 1-го диффузора использовали для настаивания сырья во 2-ом диффузоре. В первый диффузор снова добавляли свежий экстрагент - 200 мл 40% спирта этилового и оставляли для настаивания на 24 часа.
4-й день. В четвертый диффузор помещали 20,0 г сырья и последовательно из 3-го диффузора сливали извлечение и помещали его в 4-й, из 2-го в 3-й, из 1-го во 2-й. Сырье в 1-ом диффузоре считается истощенным и идет на рекуперацию этанола, диффузор выходит из схемы.
5-й день. В пятый диффузор помещали 20,0 г сырья и переливали извлечение из 4-го диффузора, извлечение из 3-го в 4-й, из 2-го в 3-й диффузоры. Сырье во 2-ом диффузоре считается истощенным и идет на рекуперацию этанола, диффузор выходит из схемы.
6-й день. Из 5-го диффузора сливаем первую порцию готового продукта (Г.П.-1) в объеме равном массе сырья в этом диффузоре. Извлечение из 4-го переливали в 5-й, из 3-го в 4-й. Сырье во 3-м диффузоре считается истощенным и идет на рекуперацию этанола, диффузор выходит из схемы.
7-й день. Вновь из 5-го диффузора собирали порцию готового продукта (Г.П.-2). Извлечение из 4-го диффузора переливается в 5-й. Сырье в 4-м диффузоре считается истощенным и идет на рекуперацию этанола. Диффузор выключается из схемы.
8-й день. Из 5-го диффузора сливаем последнюю порцию готового продукта (Г.П.-3). Сырье в 5-м диффузоре считается истощенным и идет на рекуперацию этанола, диффузор выходит из схемы. Процесс экстракции растительного сырья завершен.
Общий объем готовой настойки экстракта составил 1000 мл. Полученную настойку очищали путем отстаивания в течение 2 суток при температуре не выше 10°С. Затем пропускали через фильтровальный аппарат или тройной слой марли с ватой, натянутый на воронку, в сборник. Получали прозрачную жидкость светло-коричневого цвета. После фильтрации и анализа готовый продукт подавали на расфасовку. Выход экстрактивных веществ составляет 27,5%.
Пример 2. Измельченные и просеянные просеянные плоды шиповника майского - 20,0; и рябины обыкновенной - 20; черных листьев бадана - 10; корневища и корни родиолы розовой - 15,0; левзеи одноцветковой - 15, солодки голой - 5,0; и имбиря лекарственного - 5,0; корни астрагала перепончатого - 10; смешивали, экстракцию проводили при комнатной температуре. Соотношение сырья и экстрагента составляет 1:12,6 с учетом коэффициента водопоглощения (К=2,6).
Экстракция сырья проводилась методом реперколяции с законченным циклом в батарее из 5 перколяторов (диффузоров), экстрагент - 40% спирт. Настаивание на каждой ступени осуществляли трехкратно по 24 часа. Готовые вытяжки после слива из 5-го диффузора собирали в одну емкость.
1-й день. В 1-й диффузор загружали 20,0 г исходного сбора, заливали 240 мл (с учетом коэффициента водопоглощения) 40% спирта этилового и оставляли для настаивания на 24 часа.
2-й день. Во второй диффузор загружали 20,0 г сырья. Из первого диффузора сливали извлечение и переносили ее во второй диффузор, оставляли для настаивания на 24 часа. В первый диффузор вновь заливали 240 мл экстрагента и настаивали в течение 24 часов.
3-й день. В третий диффузор помещали 20,0 г сырья, и переносили в него извлечение из 2-го диффузора. Извлечение из 1-го диффузора использовали для настаивания сырья во 2-ом диффузоре. В первый диффузор снова добавляли свежий экстрагент - 200 мл 40% спирта этилового и оставляли для настаивания на 24 часа.
4-й день. В четвертый диффузор помещали 20,0 г сырья и последовательно из 3-го диффузора сливали извлечение и помещали его в 4-й, из 2-го в 3-й, из 1-го во 2-й. Сырье в 1-ом диффузоре считается истощенным и идет на рекуперацию этанола, диффузор выходит из схемы.
5-й день. В пятый диффузор помещали 20,0 г сырья и переливали извлечение из 4-го диффузора, извлечение из 3-го в 4-й, из 2-го в 3-й диффузоры. Сырье во 2-ом диффузоре считается истощенным и идет на рекуперацию этанола, диффузор выходит из схемы.
6-й день. Из 5-го диффузора сливаем первую порцию готового продукта (Г.П.-1) в объеме равном массе сырья в этом диффузоре. Извлечение из 4-го переливали в 5-й, из 3-го в 4-й. Сырье во 3-м диффузоре считается истощенным и идет на рекуперацию этанола, диффузор выходит из схемы.
7-й день. Вновь из 5-го диффузора собирали порцию готового продукта (Г.П.-2). Извлечение из 4-го диффузора переливается в 5-й. Сырье в 4-м диффузоре считается истощенным и идет на рекуперацию этанола. Диффузор выключается из схемы.
8-й день. Из 5-го диффузора сливаем последнюю порцию готового продукта (Г.П.-3). Сырье в 5-м диффузоре считается истощенным и идет на рекуперацию этанола, диффузор выходит из схемы. Процесс экстракции растительного сырья завершен
Полученную настойку очищали путем отстаивания в течение 2 суток при температуре не выше 10°С. Затем пропускали через фильтровальный аппарат или тройной слой марли с ватой, натянутый на воронку, в сборник. Получали прозрачную жидкость светло-коричневого цвета. После фильтрации и анализа готовый продукт подавали на расфасовку. Выход экстрактивных веществ составляет 31,9%.
Пример 3. Измельченные и просеянные плоды шиповника майского -20,0; и рябины обыкновенной - 20; черных листьев бадана - 10; корневища и корни родиолы розовой - 15,0; левзеи одноцветковой - 15, солодки голой - 5,0; и имбиря лекарственного - 5,0; корни астрагала перепончатого - 10; смешивали, экстракцию проводили при комнатной температуре.
Экстракция сырья проводилась методом реперколяции с законченным циклом в батарее из 5 перколяторов (диффузоров), экстрагент - 45% спирт этиловый, соотношение сырья и экстрагента 1:12,6 с учетом коэффициента водопоглощения. Настаивание на каждой ступени осуществляли трехкратно по 24 часа. Готовые вытяжки после слива из 5-го диффузора собирали в одну емкость.
1-й день. В 1-й диффузор загружали 20,0 г исходного сбора, заливали 240 мл (с учетом коэффициента водопоглощения) 45% спирта этилового и оставляли для настаивания на 24 часа.
2-й день. Во второй диффузор загружали 20,0 г сырья. Из первого диффузора сливали извлечение и переносили ее во второй диффузор, оставляли для настаивания на 24 часа. В первый диффузор вновь заливали 240 мл экстрагента и настаивали в течение 24 часов.
3-й день. В третий диффузор помещали 20,0 г сырья, и переносили в него извлечение из 2-го диффузора. Извлечение из 1-го диффузора использовали для настаивания сырья во 2-ом диффузоре. В первый диффузор снова добавляли свежий экстрагент - 200 мл 45% спирта этилового и оставляли для настаивания на 24 часа.
4-день. В четвертый диффузор помещали 20,0 г сырья и последовательно из 3-го диффузора сливали извлечение и помещали его в 4-й, из 2-го в 3-й, из 1-го во 2-й. Сырье в 1-ом диффузоре считается истощенным и идет на рекуперацию этанола, диффузор выходит из схемы.
5-й день. В пятый диффузор помещали 20,0 г сырья и переливали извлечение из 4-го диффузора, извлечение из 3-го в 4-й, из 2-го в 3-й диффузоры. Сырье во 2-ом диффузоре считается истощенным и идет на рекуперацию этанола, диффузор выходит из схемы.
6- й день. Из 5-го диффузора сливаем первую порцию готового продукта (Г.П.-1) в объеме равном массе сырья в этом диффузоре. Извлечение из 4-го переливали в 5-й, из 3-го в 4-й. Сырье во 3-м диффузоре считается истощенным и идет на рекуперацию этанола, диффузор выходит из схемы.
7-й день. Вновь из 5-го диффузора собирали порцию готового продукта (Г.П.-2). Извлечение из 4-го диффузора переливается в 5-й. Сырье в 4-м диффузоре считается истощенным и идет на рекуперацию этанола. Диффузор выключается из схемы.
8-й день. Из 5-го диффузора сливаем последнюю порцию готового продукта (Г.П.-3). Сырье в 5-м диффузоре считается истощенным и идет на рекуперацию этанола, диффузор выходит из схемы. Процесс экстракции растительного сырья завершен.
Полученную настойку очищали путем отстаивания в течение 2 суток при температуре не выше 10°С. Затем полученный продукт пропускали через фильтровальный аппарат или тройной слой марли с ватой, натянутый на воронку, в сборник. Получали прозрачную жидкость светло-коричневого цвета. После фильтрации и анализа готовый продукт подавали на расфасовку. Выход экстрактивных веществ составляет 29,6%.
Определение острой токсичности средства, обладающего антигипоксической и адаптогенной, активностью.
Эксперименты проведены на мышах линии СВА обоего пола массой 18-20 г.Острую токсичность средства определяли по методу Кербера [17] при его однократном внутрижелудочном и внутрибрюшинном введении в виде деалкоголизированного водного раствора в объемах от 1,0 до 395,0 мл/кг массы животного. (*Примечание: перед экспериментами, с целью исключения влияния этанола, адаптогенное средство деалкоголизировали на роторном испарителе при 37°С до 1/10 от исходного объема и полученный объем доводили дистиллированной водой до первоначального объема. Полученный водно-спиртовый раствор повторно упаривали на роторном испарителе, а остаток доводили водой очищенной до заданного объема.)
Животные контрольных групп получали эквиобъемное количество воды очищенной. В качестве прототипа использовали экстракт жидкий элеутерококка. Наблюдение за животными осуществляли в течение 14 дней с момента введения испытуемого средства. В течение всего периода эксперимента наблюдали за общим состоянием и поведением животных, регистрировали видимые признаки интоксикации и количество погибших животных с осмотром внутренних органов и гистологическим исследованием жизненно важных органов при гибели животных.
Установлено, что внутрижелудочное и внутрибрюшинное введение средства, обладающего антигипоксической и адаптогенной активностью в объемах 1,0-3,0 мл/кг не вызывало гибели животных в течение всего периода наблюдения. Кроме этого, у мышей, получавших испытуемое средство, не отмечалось видимых признаков интоксикации; поведенческие реакции и общее состояние не отличалось от такового у животных контрольной группы; животные опытных групп оставались активными, хорошо принимали корм, стул у них был нормальным в течение всего периода наблюдения.
Полученные данные позволяют отнести средство, обладающее антигипоксической и адаптогенной активностью, к группе практически не токсичных веществ по классификации Сидорова К.К. (1973) [19].
50
Острая токсичность экстракта элеутерококка жидкого (DL) при внутрибрюшинном введении составляет 10- 0 г/кг.
Влияние средства, обладающего антигипоксической и адаптогенной активностью, на общую физическую выносливость крыс
Эксперименты проведены на крысах линии Wistar обоего пола массой 180-200 г.Общую физическую выносливость определяли общепринятым методом по длительности плавания животных в бассейне с грузом, составляющим 7% от массы тела. Животным опытной группы внутрижелудочно вводили полученное деалкоголизированное средство в объеме 5,0 мл/кг однократно за 30 минут до тестирования, а также многократно в течение 7 дней (1 раз в сутки за 30 минут до кормления). Животные контрольной группы получали эквиобъемное количество воды очищенной. В качестве препарата сравнения использовали деалкоголизированный водный раствор экстракта элеутерококка в объеме 5,0 мл/кг. Через 7 суток от начала введения средств определяли общую физическую выносливость путем плавания животных до полного утомления, критерием которого служило 10-ти секундное погружение животного под воду. Статистическую обработку полученных данных осуществляли общепринятым методом с использованием U-критерия Уилксона-Манна-Уитни [16, 18]. Различия считали достоверными при вероятности 95% (Р<0,05). Полученные данные приведены в таблице 4.
Как следует из приведенной таблицы, однократное введение заявленного средства сопровождается лишь тенденцией к повышению общей физической выносливости животных. Семидневное превентивное введение средства, обладающего антигипоксической и адаптогенной активностью, в объеме 5,0 мл/кг сопровождалось более существенным повышением общей физической выносливости, о чем свидетельствует увеличение продолжительности плавания животных опытной группы в среднем на 44% по сравнению с показателями животных контрольной группы.
Влияние экстракта на продолжительность бега животных в третбане
Семидневное превентивное введение средства, обладающего антигипоксической и адаптогенной активностью, в объеме 5,0 мл/кг сопровождалось более существенным повышением общей физической выносливости, о чем свидетельствует увеличение продолжительности бега животных опытной группы в среднем на 32% по сравнению с показателями животных контрольной группы. Адаптогенную активность средств оценивали по интегральному критерию, используя показатели продолжительности бега животных в третбане.
Результаты свидетельствуют что полученное средство превосходит по активности действия экстракт элеутерококка.
Влияние средства, обладающего антигипоксической и адаптогенной активностью, на устойчивость к гипобарической гипоксии
Эксперименты проведены на белых крысах линии Wistar обоего пола массой 160-200 г. Гипобарическую гипоксию воспроизводили общепринятым методом [17] путем «подъема» животных на «высоту» 10000 м (атм. давление - 196,8 мм рт. ст., парциальное напряжение кислорода - 50 мм рт. ст.). Средство животным вводили внутрижелудочно в дозе 5,0 мл /кг однократно за 1 ч до тестирования, а также многократно в указанном объеме в течение 7 дней 1 раз в день за 1 ч до приема пищи. Животным контрольной группы внутрижелудочно вводили аналогичный объем воды очищенной. В качестве препарата сравнения использовали экстракт элеутерококка в объеме 5,0 мл/кг. Устойчивость животных к действию гипобарической гипоксии определяли по продолжительности жизни животных на высоте 10000 м. Полученные данные приведены в таблице 6.
Как следует из данных, приведенных в таблице 6, однократное введение адаптогенного средства в дозе 5,0 мл/кг на фоне гипобарической гипоксии сопровождается повышением продолжительности жизни крыс в среднем на 25% по сравнению с данными животных контрольной группы. Более выраженное антигипоксическое действие установлено при многократном введении испытуемого средства: продолжительность жизни животных опытной группы возрастала практически в 2 раза по сравнению с контролем. При этом антигипоксическая активность испытуемого средства была аналогичной таковой у препарата сравнения экстракта Адаптовит.
Источники информации
1. ВФС 42-1281-82. Спиртовый экстракт элеутерококка, Μ. 1982, 4 с.
2. Удинцев С.Н. // Удинцев С.Н., Вахрушев В.В. Патент РФ №2114628. Дата регистрации 14.05. 2013.
3. Машковский М.Д. Лекарственные средства. Т. 1 С. 134, 141, 361.
4. Чериковская Т.Я. Жидкий экстракт из корневищ левзеи сафлоровидной, как новое стимулирующее средство - Аптечное дело, 1952, №5.
5. Минаева В.Г. Лекарственные растения Сибири - Новосибирск: Наука, сиб отд, 1991. - 431 с.
6. Раститедьные ресурсы СССР Цветковые растении, их химический состав, использование хемейство Caprifolifoiacae - Plantaginaceae Ленинград, Наука, 1990.
7. Буданцев Е.Е. Дикорастущие полезные растения Сидбири // Буданцев А.Л., Лесиовская Е.Е. СПб; Изд-во СПХФА2001. - 663 с.
8. Баторова С.М. Справочник лекарственных растений традиционной тибетской медицины - Новосибирск, наука, 2013 - С. 150.
9. Муравьева Д.А. Тропические и субтропические лекарственные растения, М, Медицина, 1983. С 100-101.
10. Государственная фармакопея 14 изд.
11. Растения для нас. Справочное изд. / Блинова К.Ф., Вандышев В.В., Комарова М.Н.. Под ред. Яковлевав Г.П. и Блиновой К.Ф. - БПб: Учебная книга, 1996. - 654 с.
12. Гринкевич, Н.И. Химический анализ лекарственных растений / Н.И. Гринкевич, Л.Н. Сафронич. - М.: Высшая школа, 1983. - 176 с.
13. Кудрин А.Н. О рациональном составлении лекарственных композиций// Материалы 17-ой научной конференции. Рязанский медицинский институт им. Павлова. - Рязань, 1956, с. 24-29.
14. Макаров В.Г. К механизму действия природных адаптогенов/ В.Г. Макаров, В.Е. Рыженков // Фармация в XXI веке: инновации и традиции: Матер, междунар. конф. - С-Пб., 1999., С. 176-177.
15. Максютина Н.П. и др. Поиск противовоспалительных средств и иммуномодуляторов среди растительных полифенолов, терпеноидов и полисахаридов / Тез. докл. 4 Всесоюзн. съезда фармацевтов, 18-20 нояб., 1986, Казань, с. 428-429.
16. Беленький М.Л. элементы количественной оценки фармакологического эффекта. - Л., 1963. - 148 с.
17. Методические рекомендации по изучению антигипоксических свойств соединений в эксперименте. М. - Фармакологический комитет МЗ СССО. 1990 г.
18. Сергиенко В.И., Бондарева И.Б. Математическая статистика в клинических исследованиях. М. - 2000. - 236 с.
19. Сидоров К.К. О классификации токсичности ядов при парентеральных способах введения. - В кн.: Токсикология новых промышленных химических веществ. - М. - 1973. - с. 47-51.
20. Соколов С.Я. Фитотерапия и фитофармакология: Руководство для врачей. - М., 2000. - 976 с.