Способ выявления предраковых изменений в молочной железе
METHOD FOR DETECTING PRECANCEROUS CHANGES IN THE MAMMARY GLAND

Изобретение относится к медицине.
Известны способы выявления патологических изменений в молочной железе, к которым относятся:
1. Тонкоигольная биопсия, заключающаяся во взятии пункции из различных участков молочной железы и изучении клеточного состава пунктата. Результат цитологического исследования во многом зависит от того, каким образом и из каких участков молочной железы взят материал и как он обработан, в связи с чем тонкоигольная биопсия только в 30-54% случаев дает объективный результат, а в 46-70% случаев тонкоигольная биопсия оказывается не состоятельной (Jebsen P.W., Hagmar В.М., Nesland J.M. Metaplastic breast carcinoma. A diagnostic problem in fine needle aspiration biopsy // Acta Cytol. 1991. Vol. 35. P. 396-401). Кроме того, тонкоигольная биопсия вызывает микротравму, которая приводит к ускорению опухолевого роста, если есть опухоль (Збицкая М.А. Роль биопсии в прогрессии рака молочной железы / М.А. Збицкая // Здоровье человека как основа национальной безопасности: материалы Сибирского конгресса. - Красноярск, 2006. - С. 311-313).
2. Тканевая биопсия заключается в заборе образца ткани из молочной железы при подозрении на опухоль. Вырезается небольшой кусочек ткани для более детального исследования. После тщательного анализа врач-патоморфолог делает вывод о доброкачественности или злокачественности опухоли (Семиглазов В.Ф. Хирургическое лечение рака молочной железы, история и современность. Практическая онкология. 2002. Т.3. №.1. С. 21-28; Семиглазов В.Ф. Семиглазов В.В. Скрининг рака молочной железы. Практическая онкология. 2010. Т. 11. №2. С. 60-65). Этот способ является травматичным и технически сложным, а взятие кусочка ткани опухоли, особенно повторно, активирует опухолевый рост и может явиться причиной метастазирования (Збицкая М.А. Влияние биопсий опухоли на прогрессирование процесса у больных раком молочной железы / М.А. Збицкая, Уральский медицинский журнал - 2007. - №2. - С. 67-70).
3. При подозрении на опухолевую патологию молочной железы наиболее часто используют определение в крови или плазме ракового эмбрионального антигена (РЭА), который представляет собой гликопротеин с молекулярной массой 180 кДа. Повышенную концентрацию РЭА в сыворотке крови выявляют у 30-50% больных раком молочной железы (Кишкун А.А. Руководство по лабораторным методам диагностики. - М. ГЭОТАР-Медиа, 2009.-800 с.), т.е. этот показатель не является достаточно чувствительным.
Все перечисленные выше способы не позволяют выявить предраковые изменения в молочной железе, к которым относят склерозирующий аденоз, внутрипротоковый, внутридольковые пролифераты, радиальный рубец (Патологическая анатомия Национальное руководство/ гл. редактор М.А. Пальцев, Л.В. Кактурский, О.В. Зайратьянц. - М. ГЭОТАР Медиа, 2011- 1264 с).
Раскрытие изобретения
Предлагаемый способ выявления предраковых изменений в молочной железе характеризуется тем, что определяют концентрацию интерлейкина 1 beta (IL-1β) в супернатанте пробы клеток крови пациента, инкубированных с раково-эмбриональным антигеном (РЭА) и без РЭА, после чего вычисляют индекс влияния (ИВ) раково-эмбрионального антигена (ИВ РЭА) на продукцию IL-1β (ИВ РЭА IL-lβ) по формуле: ИВ РЭА IL-1β=А/Б, где А - уровень продукции цитокина под влиянием РЭА, Б - уровень спонтанной продукции цитокина, и при величине ИВ РЭА IL-1β, не превышающей 13, выявляют предраковые изменений в молочной железе (склерозирующий аденоз или внутрипротоковый, внутридольковый пролифераты).
Предлагаемое изобретение дает возможность выявлять предраковые изменения в молочной железе, основываясь на определении цитокинпродуцирующей функции иммунокомпетентных клеток крови при влиянии на них раково-эмбрионального антигена (РЭА). Способ позволяет своевременно выявить предраковые изменения и начать адекватное лечение.
Предлагаемый способ является высокочувствительным и специфичным. На обследованных группах пациентов предлагаемый способ показал 100%-ю чувствительность и 92% специфичность.
Перечень фигур иллюстративного материала
Фиг. 1. Показатель ROC-анализа при сравнении группы пациентов с предраковыми состояниями молочной железы и группы пациентов с фиброаденомой (ФАМ) молочной железы. Площадь под кривой равна 0,985, что соответствует отличному качеству модели.
Предлагаемый способ осуществляют следующим образом. Цельную кровь, взятую из вены пациента в количестве 1 мл, помещают в стерильный флакон с 4 мл среды (стерильная питательная среда DMEM), содержащей гепарин 2,5 МЕ/мл и гентамицин 100 мкг/мл. Аккуратно перемешивают содержимое флакона, затем из него в стерильных условиях забирают 0,980 мл разбавленной крови и помещают ее в стерильный флакон, содержащий 0,020 мл РЭА (Canceroembryonic Antigen Human Colon Adenocarcinoma Cell Line) производства Calbiochem, Германия; концентрация РЭА после добавления крови составляет 2 мкг/мл.
Содержимое флакона аккуратно перемешивают и помещают в термостат при 37°С на 24 часа. Параллельно в тех же условиях инкубируют клетки крови в той же питательной среде без РЭА (для определения спонтанной продукции цитокинов).
В течение первого часа инкубации содержимое флаконов аккуратно перемешивают 1 раз. После инкубации путем центрифугирования при 3000 об./мин в течение 10 минут осаждают клетки крови и отбирают супернатант из пробы клеток, инкубированных с РЭА (продукция под влиянием РЭА) и из пробы клеток, инкубированных без РЭА (спонтанная продукция). В супернатантах с помощью твердофазного иммуноферментного анализа определяют концентрацию IL-1β.
ИВ РЭА IL-1β высчитывают по формуле: ИВ РЭА=А/Б, где А - уровень продукции цитокина под влиянием РЭА, Б - уровень спонтанной продукции цитокина.
Определение ИВ РЭА IL-1β проводили у 23 пациентов, у 12 из которых была выявлена доброкачественная опухоль - ФАМ, у 11 - предраковые изменения (у четырех - склерозирующий аденоз и у семи -внутрипротоковый или внутридольковый пролиферат).
Статистический анализ полученных данных проводили по критерию Манна-Уитни. Определяли медиану (Me), процентили (5; 95) и достоверность различия р.
У 12 пациентов с ФАМ Me равнялась 31,81 (8,74; 126,49). У 11 женщин этой группы значение ИВ РЭА IL-1β было выше 13,00.
У 11 женщин со склерозирующим аденозом и внутрипротоковым или внутридольковым пролифератом, относящимся к предраковым изменениям, Me равнялась 2,44 (0,14; 10,28). У всех женщин этой группы значение ИВ РЭА IL-1β было ниже 13,00 условных единиц. Достоверность различий (р) ИВ РЭА IL-1β между группами женщин с ФАМ и с предраковыми изменениями (склерозирующим аденозом и внутрипротоковым или внутридольвым пролифератом) составила 0,0001, что отражает высокую степень различия величин ИВ РЭА IL-1β в этих группах.
Выявлено, что в 100% случаев значения ИВ РЭА IL-1β у пациентов с предраковыми состояниями не превышал 13.
У пациентов с ФАМ значения ИВ РЭА IL-1β в 91,67% случаев превышали 13 условных единиц.
Критерий ϕ согласно угловому методу Фишера равен 0,00001.
Наличие предраковых изменений и доброкачественной опухоли молочной железы контролировали путем тщательного патогистологического исследования биоптатов.
У пациентов с наличием предраковых изменений в молочной железе, установленным в результате патогистологического исследования биоптатов, предлагаемый способ позволяет их выявить в 100% случаев.
Клинические примеры
1. Больная П-а, 48 лет. Заключение патологоанатома: склерозирующий аденоз молочной железы. Величина ИВ РЭА IL-1β составила 0,90.
2. Больная Б-а, 47 лет. Заключение патологоанатома: склерозирующий аденоз молочной железы. Величина ИВ РЭА IL-1β составила 0,14.
3. Больная Ж-а, 46 лет. Заключение патологоанатома: внутрипротоковый пролиферат молочной железы. Величина ИВ РЭА IL-1β составила 5,70.
4. Больная К-о, 57 лет. Заключение патологоанатома: ФАМ молочной железы. Величина ИВ РЭА IL-1β составила 13,38.
5. Больная Г-н, 21 год. Заключение патологоанатома: ФАМ молочной железы. Величина ИВ РЭА IL-1β составила 84,50.
6. Больная С-а, 49 лет. Заключение патологоанатома: ФАМ молочной железы. Величина ИВ РЭА IL-1β составила 126,49.