СПОСОБ ДЕТЕКЦИИ В РЕЖИМЕ РЕАЛЬНОГО ВРЕМЕНИ СПЕЦИФИЧНЫХ ФРАГМЕНТОВ РНК С ПОМОЩЬЮ ПОЛИМЕРАЗНОЙ ЦЕПНОЙ РЕАКЦИИ БЕЗ ПРИМЕНЕНИЯ ДНКазы

1. Способ детекции в режиме реального времени с помощью обратно-транскрипционной полимеразной цепной реакции специфичных фрагментов РНК с использованием в качестве основного фермента Tth полимеразы, обладающей ревертазной активностью, отличающийся тем, что в нем полностью без использования ДНКазы отсечен вклад изначально могущих присутствовать в анализируемых образцах молекул ДНК, благодаря применению термостабильной РНКазы Н и коротких праймеров, отжигающихся на мишени (на разных цепях) в непосредственной близости друг от друга или даже с перекрытием в 1 нуклеотид, обеспечивая тем самым с одной стороны флуоресцентный резонансный перенос энергии между красителем-донором и красителем-акцептором, входящими соответственно в состав прямого и обратного праймеров (или наоборот), а с другой - наработку ампликонов длиной 22-32 пары нуклеотидов за счет чего температура их денатурации максимально снижена и не приводит к денатурации присутствующих молекул ДНК, при этом детекция накопления целевых продуктов амплификации ведется путем регистрации увеличения свечения акцепторного флуорохрома.
2. Способ по п.1, отличающийся тем, что в состав прямого и обратного праймеров вместо пары красителей донор-акцептор входят флуоресцентный краситель и гаситель флуоресценции и детекция накопления целевых продуктов амплификации ведется путем регистрации снижения свечения флуорохрома за счет возникающего эффекта гашения.
3. Способ по п.1, отличающийся тем, что верхняя и нижняя границы размеров ампликонов (праймеров) могут быть сдвинуты с учетом GC-состава ампликонов (праймеров) и температурой плавления целевых ампликонов и с учетом специфичности отжига коротких праймеров.
4. Способ по п.1, отличающийся тем, что в случае GC-богатых последовательностей в состав праймеров вместо обычного гуанина могут быть включены остатки деаза-гуанина, а в реакционную смесь вместо дГТФ - деаза дГТФ.
5. Способ по п.1, отличающийся тем, что вместо термостабильной ДНК полимеразы, обладающей ревертазной активностью, и термостабильной РНКазы Н могут использоваться любые другие мезофильные ферменты со сходными функциями при условии введения дополнительных стадий обратной транскрипции и разрушения цепи РНК в гетеродуплексах РНК/ДНК, предшествующих полимеразной цепной реакции.