Нарушение строения печени крыс холестазом и его коррекция тауцином

вследствие реинфицирования или релапса ИМП на всем протяжении периода наблюдения от начала исследования до 48 недели (1 год). У пациенток, принимавших Фурамаг происходило уменьшение дизурии на фоне постепенного увеличения числа пациенток без клинической симптоматики. Динамика роста числа пациенток с поллакиурией объясняется тем, что при наличии дизурии вначале исчезала боль, а затем происходила нормализация числа мочеиспусканий.

На 12-й неделе наблюдения имеются также различия по лейкоцитурии с преимуществом в исследуемой группе по сравнению с контрольной. К моменту окончания приема Фурамага в исследуемой группе лейкоцитурия наблюдалась у 8 (18,2%) пациенток, в контрольной - у 20 (90,9%).

Заметно различие в изучаемых группах по степени бактериурии. Так, менее 104 КОЕ/мл в моче было у 35 (80%) пациенток в исследуемой группе, в контрольной -лишь у 2 (9%) пациенток. Микроорганизмы не выделены в моче у 19 (43%) женщин на 12 неделе, и у 4 (13%) пациенток на 48 неделе в группе приема Фурамага.

Динамика жалоб и изменений в моче обеспечила изменения качества жизни па-

циенток на протяжении лечения. Отмечено, что отсутствие рецидива существенно поднимает общий балл суммарной оценки этого показателя.

Таким образом, полученные в результате исследования данные позволяют утверждать, что прием капсул фуразидина калиевой соли с магния гидрокарбонатом (Фурамаг АО «Олайнфарм», Латвия) по 50 мг (1 капсула 1 раз в день (на ночь) в течение трех месяцев) эффективно снижает риск рецидивирования ИМП у пациенток исследуемой группы по сравнению с контрольной на фоне лечения и продолжается в течение 12 месяцев наблюдения. Также Фурамаг улучшает симптоматику заболевания, снижает число случаев лейкоцитурии, степень микробной нагрузки и улучшает качество жизни женщин с рецидивирующей ИМП. Отрицательная динамика перечисленных выше показателей в периоде наблюдения (неделя 24-48) диктует необходимость проведения повторного курса профилактического лечения с целью снижения микробной нагрузки и получения более выраженного и длительного безрецидивного периода и

достойного качества жизни пациенток с рецидивирующей ИМП.

Л И Т Е Р А Т У Р А

1. Коц Я.И., Либис Р.А. // Кардиология. - 1993. -№5. - С.66-72.

2. Объективизация оценки качества жизни больных ишемической болезнью сердца /Д.А. Осипов и др. // Саратов. науч.-мед. журн. - 2010. - Т.6, №3. - С.585-588.

3. Перепанова Т.С, Хазан П.Л. Применение нитро-

^уранов при инфекции мочевых путей // Эффект. армакотер. в урол. - 2007. - №4. - С.20-29.

4. Перепанова Т.С, Козлов Р.С, Дехнич А.В. и др. // Эксперим. и клинич. урология. - 2012. - №2. - C.78-83.

5. Проблемы лечения рецидивирующей инфекции нижних мочевых путей / Т.С.Перепанова и др. // Эф-

ективная Фармакотерапия: Урология, 2011. - №3. -.38-44. - http://eftj.ru/arhiv/ 2011/u/2011-U3. pdf

6. Синякова Л.А., Косова И.В. Неосложненные инфекции мочевых путей у женщин // Фарматека. -2008. - №1. - С.17-21.

7. http://www.preference-pro.com/

8. European Association of Urology: Guidelines. -2011. - Urological infections.

9. Lange J.N., Wood K.D., Wong H. // Urology. - 2012. -Vol.79 (6). - P.1286-1289.

10. Sheskin D.J. Handbook of parametric and nonparametric statistical procedures. - Boca Raton: Chapman &Hall/CRC, 2004.

11. Urogenital Infections / Kurt G. Naber et al. - 2010. - 1182c.

Поступила 11.03.2015 г. Статья размещена на сайте www.mednovosti.by (Архив МН) и может быть скопирована в формате Word.

Нарушение строения печени крыс с холестазом и его коррекция тауцином*

Пашко А.Ю.1, Сенчук В.В.2, Кравчук Р.И.1, Бушма К.М.1, Борисенок О.А.1, Бушма М.И.1

Тродненский государственный медицинский университет, Беларусь 2Белорусско-голландское совместное предприятие ООО «Фармлэнд», Минск, Беларусь

Pashko A.U.1, Sentchouk V.V.2, Kravchuk R.I.1, Bushma K.M.1, Borisenok O.A.1, Bushma M.I.1

Grodno State Medical University, Belarus 2Belarusian-Dutch Joint Venture Pharmland LLC, Minsk, Belarus

Disturbance of the structure of the liver in rats with cholestasis and the correction by taucin

Резюме. В опытах на 42 беспородных крысах-самцах показано, что перевязка общего желчного протока в течение 21 дня сопровождается структурными нарушениями печени. Тауцин (таурин (20 г/моль) 2,5 г плюс цинка диаспартат (1 г/моль) 0,35 г), вводимый в желудок в дозе 0,5 г/кг в день в течение 19 дней, оказывает гепатозащитное действие.

Ключевые слова: крысы, холестатическое поражение печени, комбинация таурина с цинка диаспартатом, гепатозащитное действие, тауцин.

Медицинские новости. — 2015. — №4. — С. 53—56. Summary. In experiments on 42 outbred male rats it is shown that ligation of the common bile duct within 21 days is accompanied by structural disorders of the liver.«Taucin»(taurine (20 g/mole) 2,5 g + zinc diaspartate (1 g/mole) 0,35 g) was inserted into the stomach in a dose of 0,5 g/kg in day for 19 days, has hepatoprotective action.

Keywords: rats, cholestatic liver disease, combination of taurine with zinc diaspartate, hepatoprotective action, taucin. Meditsinskie novosti. - 2015. - N4. - P. 53-56.

Холестатические поражения печени широко распространены в клинической практике [1, 2]. В механизме их

развития играет роль нарушение эвакуации желчи. Сдавление ею прилегающей паренхимы органа, а также высокие

концентрации желчных кислот, обладающих детергентным действием, оказывают цитотоксическое действие на гепатоциты.

Исследование выполнено в рамках ГНТП РБ «Фармацевтические субстанции и лекарственные средства»

ЛИЦаП Влияние тауцина на некоторые особенности строения печени крыс с холестазом

Изучаемый показатель Условия опыта

Ложная операция, n=8 Холестаз, n=8 Холестаз + тауцин, n=8

Площадь некрозов, % 0,00

Площадь соединительной ткани,% 0,97

Количество сечений желчных канальцев вокруг 1 триады, шт. 1,07

П р и м е ч а н и е : первая строка цифр: перед скобками - значения Ме; в скобках -25% и 75% квартилей. Вторая и третья строки цифр: перед скобками - и - значения критерия Манна-Уитни, в скобках - р. Его значения (с учетом поправки Бонферрони) приведены по отношению к ложнооперированным животным (вторая строка) и крысам с холестазом (третья строка). Полужирным шрифтом выделены статистически значимые различия.

Повреждаются богатые фосфолипидами плазматические мембраны. Из цитозоля в плазму выходят ферменты (АлАТ АсАТ ГГТП, Щф) и билирубин. Установлено, что при развитии холестаза прогрессивно обедняется внутриклеточный пул тиолов и сульфатов, обладающих антиоксидантны-ми свойствами. В этих условиях активируются процессы генерации активных форм кислорода, повреждающих внутриклеточные структуры [9].

Для ослабления проявлений холеста-тических поражений печени используют комплексный подход. Наряду с хирургическим устранением застоя желчи, применяют лекарственные средства, обладающие гепатопротекторным действием [б].

Цель исследования - оценка гепато-защитных свойств комбинации таурина с цинка диаспартатом («тауцин») у крыс с холестатическим (перевязка общего желчного протока) поражением печени, судя по структурным изменениям органа.

Материалы и методы

Проведено две серии опытов.

Первая серия (световая микроскопия печени). Опыты проведены на 24 беспородных белых крысах-самцах массой 250-300 граммов в соответствии с Хельсинской декларацией о гуманном обращении с животными. Холестаз, длительностью 21 день, моделировали путем перевязки общего желчного протока выше мест впадения протоков поджелудочной железы. «Тауцин» (комбинация таурина (20 г/моль) 2,5 г с цинка диаспартатом (1 г/моль) 0,35 г) начинали вводить через 24 часа после перевязки протока (в желудок в виде

взвеси в слизи крахмала в дозе 0,5 г/кг в день - 19 дней). Контрольным крысам с холестазом вводили слизь крахмала. Ложнооперированным животным производили те же манипуляции, за исключением перевязки протока, и вводили слизь крахмала. Через 24 часа после последнего введения веществ крыс лишали корма в течение 1 суток, декапити-ровали и брали образцы печени. Кусочки органа фиксировали в жидкости Карнуа и заключали в парафин. Парафиновые срезы окрашивали гематоксилином-эозином и использовали для гистологических исследований [4].

Вторая серия (электронная микроскопия печени). Опыты проведены на 18 беспородных белых крысах-самцах массой 400-450 граммов. Детали эксперимента - как в первой серии. Образцы печени (1x1 мм) фиксировали в растворе четырехокиси осмия на буфере Миллонига [11]. После дегидратации в спиртах восходящей концентрации и ацетоне их заливали в эпоксидную смесь [7,8]. Полутонкие срезы окрашивали метиленовым синим, изучали в световом микроскопе и выбирали участки для детального анализа ультраструктурных изменений. Ультратонкие срезы, толщиной 30 нм, контрастировали раствором уранилацетата на метаноле и затем цитратом свинца [3, 13]. Препараты изучали в электронном микроскопе JEМ-1011 фирмы JEOL (Япония) при ускоряющем напряжении 80 кВт при увеличениях 4000-40000. Для получения снимков использовали комплекс из вмонтированной цифровой камеры

Olympus MegaView III (Германия) и программы iTEM для анализа изображений.

Количественную оценку полученных результатов проводили методом непараметрической статистики Манна-Уитни, применяя поправку Бонферрони с использованием пакета программ «Statistical 6.0.437.0 для Windows (StatSoft, Inc., США) [5].

Результаты и обсуждение

Нарушение строения печени крыс с холестазом.

Световая микроскопия. Через 21 день после перевязки общего желчного протока регистрируется поражение печени. Об этом свидетельствует резкое расширение переполненных желчью холангиол и меж-дольковых желчных протоков. Кубический эпителий, образующий их стенку, чаще уплощен. Гепатоциты полиморфны, иногда с крупными гиперхромными ядрами. Цитоплазма клеток центральной части долек гомогенно оксифильная, периферической части - базофильная. Между портальными трактами и центральными венами регистрируются участки (0,318,16% поля зрения) некрозов паренхимы печени, представленные лизированными гепатоцитами, детритом и лейкоцитарной инфильтрацией. Площадь, занимаемая соединительной тканью, увеличена приблизительно в 17 раз. Она связывает меж-дольковые печеночные триады с формированием мостовидного порто-портального фиброза. Количество новообразованных холангиол возрастает приблизительно в

20 раз. Больше всего они обнаруживаются вокруг триад. Выражена лейкоцитарная инфильтрация (табл. 1).

Фоновая окраска структурных липи-дов умеренная. Размеры и количество капель увеличены. Они локализованы преимущественно под плазмолеммой, чаще на периферии дольки в области триад. В гепатоцитах некоторых крыс выявляются более мелкие капли. В области фиброзов и некрозов липиды регистрируются в виде очень светлой фоновой окраски с небольшим количеством диффузно расположенных крупных липидных капель.

Содержание гликогена в гепатоцитах резко снижено. Обнаруживается только фоновая окраска гликопротеинов как в гепатоцитах, так и в элементах стромы.

Электронная микроскопия. Через

21 день после перевязки общего желчного протока в печени крыс регистрируются изменения цитоархитектоники гепатоцитов: от незначительных ультраструктурных изменений до цитолиза гепатоцитов с нарушением межклеточных взаимодействий. Нарушается балочное строение долек,

ПНЯ Влияние тауцина на некоторые показатели митохондрий гепатоцитов крыс с холестазом

Изучаемые показатели Условия опыта

Ложная операция, п=6 Холестаз, п=6 Холестаз + тауцин, п=6

Средняя относительная площадь сечения 1 митохондрии, мкм2 0,30

Относительное количество митоходрий в клетках, на100 мкм2 67,65

Фактор элонгации 1,76

Относительная электронная плотность матрикса митохондрий 91,10

Доля атипичных митохондрий, % 0,53

Доля делящихся митохондрий, % 2,96

П р и м е ч а н и е : первая строка цифр: перед скобками - значения Ме; в скобках -25% и 75% квартилей. Вторая и третья строки цифр: перед скобками - и - значения критерия Манна-Уитни, в скобках - р. Его значения (с учетом поправки Бонферрони) приведены по отношению к ложнооперированным животным (вторая строка) и крысам с холестазом (третья строка). Полужирным шрифтом выделены статистически значимые различия.

появляются очаги фиброза и внутридоль-ковой воспалительной инфильтрации.

Местами наблюдается резкое уменьшение числа микроворсинок со стороны гепатоцитов и сужение пространства Диссе. Увеличивается количество клеток Ито и фибробластов, ассоциирующееся с усилением перикапиллярного фиброза.

Регистрируется пролиферация эпителия, выстилающего просвет желчных протоков. Об этом свидетельствует увеличение количества их профилей на срезе в области портального тракта. Просветы последних чаще сужены с уплощенным кубическим эпителием. Их ядра инваги-нированы. С 1 (в норме) до 3-4 увеличивается количество желчных капилляров между двумя соседними гепатоцитами. Регистрируется редукция, отек и вздутие их микроворсинок, нередко с формированием «блэб-образований» (морфологический маркер холестаза). В некоторых желчных капиллярах ворсинки более многочисленны. В участках межклеточных взаимодействий регистрируется отложение электронно-плотного материала. Это можно расценивать как адаптивный механизм, направленный на усиление барьера, препятствующего проникновению компонентов желчи в межклеточную щель и далее в пространство Диссе и синусоид-ный капилляр.

Анализ печеночных долек свидетельствует об усилении межклеточных взаимодействий, проявляющихся в виде многочисленных впячиваний/вы-пячиваний цитомембран латеральных поверхностей соседних гепатоцитов. Отмечается вакуольная дистрофия ядер и, как следствие, инвагинация их мембраны с захватыванием участков близлежащей цитоплазмы. В дальнейшем инвагинат углубляется, отшнуровывается и утрачивает связь с цитоплазмой. Такие ядра напоминают аутофагийные вакуоли и свидетельствуют о развитии дистрофических процессов в гепатоцитах при холестазе. Количество липидных включений в дольке незначительно увеличено. Лишь в отдельных гепатоцитах наблюдается выраженная мелкокапельная липидная инфильтрация.

Гранулярная эндоплазматическая сеть (ГрЭС) пролиферирована. На ее многочисленных цистернах содержится большое количество связанных рибосом. Это может свидетельствовать об активизации в гепа-тоцитах биосинтетических процессов «на экспорт». Параллельно происходит дегра-нуляция - сползание рибосом с цистерн в виде спиральных цепочек с последующим

высвобождением полисом и свободных рибосом в цитоплазму.

Значительно активируется гладкая эндоплазматическая сеть (ГлЭС), участвующая в синтезе липидов, метаболизме гликогена и стероидов, детоксикации ксенобиотиков. Ее профили нормальных размеров и заполняют значительную часть цитоплазмы гепатоцитов. Пероксисомы увеличены в размерах с хорошо выраженной крупной сердцевиной.

Митохондрии с умеренно электронно-плотным матриксом. Они полиморфны, увеличены в размерах и многочисленны. Их кристы четко выражены. Это свидетельствует о высоком биосинтетическом и энергетическом потенциале органеллы. В небольшом проценте гепатоцитов преобладают митохондрии с электронно-светлым матриксом, редуцированными кристами, что свидетельствует о низкой скорости фосфорилирования. У некоторых животных митохондрии имеют атипичный баранкообразный вид или резко удлиненную форму с дезориентированными кристами вдоль продольной оси. Средняя относительная площадь сечения 1 митохондрии снижена на 43%,

в то время как относительное количество митоходрий в клетке увеличено на 58%. Фактор элонгации и относительная электронная плотность матрикса митохондрий возрастают на 14 и 15% соответственно. Доля атипичных и делящихся митохондрий увеличивается в 17,4 и 3,5 раза соответственно (табл. 2).

На билиарном полюсе гепатоцитов выявляются многочисленные компоненты комплекса Гольджи, представленные 4-5 стопками диктиосом и несколькими зрелыми концевыми мешочками. Это характеристика метаболически активной органеллы. Число лизосом увеличено.

В эндотелии значительной части си-нусоидных капилляров регистрируются выраженные дегенеративные изменения: фрагментация и отек, дезориентация и укорочение отростков. В некоторых участках это приводит к оголению ге-патоцитов.

На основании результатов вышеприведенных исследований можно сделать заключение о том, что перевязка общего желчного протока у крыс в течение 21 дня приводит к выраженным ультраструктурным нарушениям строения печени, что

является следствием как патологии, так и (некоторые из них) компенсаторных адаптивных механизмов, направленных на улучшение функции сохранившихся жизнеспособных гепатоцитов.

Коррекция тауцином нарушений строения печени крыс с холестазом.

Световая микроскопия. Тауцин (в желудок в виде взвеси в слизи крахмала, 0,5 г/кг в день - 19 дней) оказывает гепатозащитное действие у крыс с хо-лестазом, проявляющееся улучшением строения поврежденной печени. В расчете на единицу площади соединительной ткани печени резко увеличивается относительное количество холангиол. Исчезает гиперхромная окраска ядер гепатоцитов. Участки некрозов не регистрируются. Количество соединительной ткани снижено на 57%. Менее выражен жировой гепатоз и лейкоцитарная инфильтрация (см. табл. 1).

Электронная микроскопия. Сравнительный анализ результатов электронномикро-скопического исследования печени крыс с холестазом, получавших и не получавших тауцин, свидетельствует о его гепатозащит-ном действии. Снижена как площадь, так и интенсивность очагов внутридольковой воспалительной инфильтрации, с преобладанием в них эозинофилов.

Эпителий, выстилающий желчные протоки, нормальной кубической и призматической формы. Наряду с редуцированными и набухшими регистрируются многочисленные неповрежденные микроворсинки желчных капилляров.

Строение ядер приближается к норме. У некоторых животных сохраняются дистрофические изменения в виде вакуольных включений.

Жировая дистрофия цитоплазмы ге-патоцитов менее выражена. Выявляются единичные липидные включения.

Митохондрии и ГрЭС в активном функциональном состоянии. Последняя у части

гепатоцитов гиперплазирована. Это свидетельствует об активных биосинтетических процессах. Количество ГлЭС снижено, что может свидетельствовать об ослаблении эндотоксемии. Регистрируется гиперплазия пероксисом.

Полиморфизм и гипертрофия митохондрий менее выражены. Форма большинства органелл соответствует таковой у ложнооперированных крыс. В цитоплазме отдельных гепатоцитов выявляются единичные митохондрии с более электронно-светлым матриксом. Атипичные баранко-образные митохондрии не регистрируются. Средняя относительная площадь сечения 1 митохондрии увеличена на 41%. Относительное количество митоходрий в гепатоцитах снижено на 21%. Фактор элонгации и относительная электронная плотность матрикса митохондрий снижены на 14-15%. Доля атипичных и делящихся митохондрий уменьшена в 3,8 и 2,6 раза (см. табл. 2).

Функциональная активность клеток Купфера повышена. В их цитоплазме увеличено число электронно-плотных гранул (лизосом). Последние, по-видимому, участвуют в обезвреживании компонентов желчи путем их захвата из крови.

Таким образом, результаты проведенных исследований свидетельствуют о том, что при холестазе у крыс (перевязка общего желчного протока в течение 21 дня) нарушается строение печени. При этом появляются участки некроза, порто-портального фиброза, воспаления, жировой дистрофии и пролиферацией холангиол. Регистрируются изменения митохондрий и, в меньшей степени, других органелл гепатоцитов.

В механизме поражения печени играет роль нарушение эвакуации желчи. Сдавление ею прилегающей паренхимы органа, а также высокие концентрации желчных кислот обладающих детергентным действием, оказывают цитотоксическое действие на гепатоциты. Установлено, что при развитии холестаза

прогрессивно обедняется внутриклеточный пул тиолов и сульфатов, обладающих антиоксидантными свойствами. В этих условиях активируются процессы генерации активных форм кислорода, повреждающих внутриклеточные структуры [9].

Комбинация таурина с цинка диа-спартатом обладает гепатозащитным действием, судя по улучшению строения печени. Известна способность таурина обезвреживать гепатотоксичные желчные кислоты с образованием нетоксичных таурохолатов. Кроме того, таурин (2-ами-ноэтансульфоновая кислота) эффективно восполняет истощенный пул внутриклеточного сульфата [10]. Как следствие, повышается функция антиоксидантной системы гепатоцитов.

Цинк является кофактором более 200 ферментов внутриклеточного метаболизма, в том числе ферментов антиоксидант-ной защиты клеток (супероксиддисмутаза, глутатионпероксидаза) [12]. Он дополняет гепатозащитные свойства таурина.

Л И Т Е Р А Т У Р А

1. Бадретдинова А.Р. // Практическая медицина. -2011. - №50. - С.60.

2. Винник Ю.С., Пахомова Р.А. // Сибирский медицинский журнал. - 2012. - №3. - С.116-119.

3. Гайер Г. Электронная гистохимия. Справочник. -Москва: Мир, 1974. - 488 с.

4. Пирс Э. Гистохимия теоретическая и прикладная. Справочник. - Москва: Иностранная литература, 1962. - 962 с.

5. Реброва О.Ю. Статистический анализ медицинских данных. Применение пакета прикладных программ STATISTICA. - Москва: МедиаСфера, 2002. - 312 с.

6. Cobos M.J. // Curr. Opin. Clin. Nutr. Metab. Care. -2014. - Vol.17. - Р.105.

7. Glauert A.M. // American Elsevier. - 1975. - Vol.3. -P.129-134.

8. Glauert R.H. // J.Biophys. Biochem. Cytol. - 1958. -Vol.4. - P.409-414.

9. tto S. // BMC Gastroenterology. - 2013. - Vol.13. - P.116.

10. Manovttskaa AW Vopr Pitan. - 2011. - Vol.80. - P.57-61.

11. Millonig G.A. // J. Appl. Physics. - 1961. - Vol.32. -P.1637-1643.

12. Truong-Tran A.Q. // Biometals. - 2001. -Vol.14. -P.315-330.

13. Watson M.L. // J. Biophys. Biochem. Cyt. - 1958. -Vol.4. - P.475-478.

Поступила 06.03.2015г.

ЧИТАЙТЕ В СЛЕДУЮЩЕМ НОМЕРЕ

ПРОБЛЕМНЫЕ СТАТЬИ И ОБЗОРЫ

Смычек В.Б., Чапко И.Я., Филиппович А.Н., Стахейко Н.В., Черевко Т.В., Фрид О.Н., Перкова В.Е. Медицинская экспертиза пациентов с симптоматической эпилепсией

Балаян А.З. Современные возможности диагностики острого холецистита Универсальные терапевтические возможности мелатонина / Арушанян Э.Б.

ВОПРОСЫ АТТЕСТАЦИИ И ПОВЫШЕНИЯ КВАЛИФИКАЦИИ

Новикова И.А. Современные аспекты клинического применения иммуномодуляторов

ПРОБЛЕМЫ ОБЩЕСТВЕННОГО ЗДОРОВЬЯ И РЕФОРМИРОВАНИЕ ЗДРАВООХРАНЕНИЯ

Антипова С.И., Антипов В.В., Савина И.И. Проблемы пожилых людей Беларуси в свете медицинской статистики АНТИВОЗРАСТНАЯ МЕДИЦИНА

Донцов В.И., Крутько В.Н., Потемкина Н.С. Принципы профилактических, оздоровительных и биоактивирующих мероприятий в антивозрастной медицине