Neutrophil granulocyte functional status and expression of apoptosis markers in children with type 1 diabetes

Сахарный диабет

Функциональное состояние нейтрофильных гранулоцитов и маркеры апоптоза при сахарном диабете 1 типа у детей

Барычева Л.Ю., Эрдни-Горяева Н.А., Александрович Г.А.

ГБОУВПО Ставропольский государственный медицинский университет, Ставрополь

В последние годы доказано, что полиморфноядерные лейкоциты играют важную роль в развитии сахарного диабета (СД). Дисфункция нейтрофилов способствует повреждению ткани поджелудочной железы, а также повышенной восприимчивости к инфекции при СД 1 типа (СД1).

Цель. Изучение функциональной активности нейтрофильных гранулоцитов (НГ) при СД1 у детей.

Материалы и методы. Обследовано 25 детей в возрасте от 7 до 15 лет. Для оценки программируемой клеточной гибели выявляли количество НГ, экспрессирующих маркеры апоптоза (СБ95, СБ95Ь, Вс12). Функциональную активность НГопределяли по показателям фагоцитоза, уровню миелопероксидазы, лизосомальных катионных белков, активных радикалов кислорода.

Результаты. Установлено снижение бактерицидной активности НГ с дефицитом поглощения, секреции активныхради-калов кислорода, функционального резерва. Показано увеличение готовности к апоптозу, что сопровождалось повышением экспрессии СБ95, снижением — Вс12. Выявлено увеличение цитотоксического потенциала нейтрофилов в виде повышения уровня миелопероксидазы и лизосомальных катионных белков.

Заключение. Увеличение апоптотического потенциала НГ на фоне функционально-метаболических изменений может являться отражением их активного вовлечения в иммунопатогенез заболевания.

Ключевые слова: сахарный диабет; нейтрофилы; фагоцитоз; миелопероксидаза; лизосомальные катионные белки; оксидаз-ная активность; апоптоз

Neutrophil granulocyte functional status and expression of apoptosis markers in children with type 1 diabetes

Barycheva L.Yu., Erdni-Goryaeva N.E., Aleksandrovich G.A.

Stavropol State Medical University, Stavropol, Russian Federation

In recent years, polymorphonuclear leukocytes have been proven to play an important role in the development of diabetes melli-tus (DM). Neutrophil dysfunction contributes to pancreatic tissue damage as well as an increased susceptibility to infection in type 1 DM (T1DM) patients.

Objective. The objective of this study was to investigate the functional activity of neutrophil granulocytes (NGs) in children with T1DM. Materials and methods. This study involved 25 children aged 7—15 years. To evaluate programmed cell death, the number of NGs expressing apoptosis markers (CD95, CD95L and BCL2) was determined. The functional activity of NGs was determined in terms of phagocytosis and the levels of myeloperoxidase, lysosomal cationic proteins and active oxygen radicals.

Results. A reduction in the bactericidal activity of NGs with deficiencies in phagocytosis, secretion of active oxygen radicals and functional reserve was found. An increase in the apoptotic potential of NGs was demonstrated, which was accompanied by an increase in CD95 expression and a decrease in BCL2 expression. An increase in the cytotoxic potential of neutrophils in the form of enhanced levels of myeloperoxidase and lysosomal cationic proteins was revealed.

Conclusions. Therefore, an increase in the apoptotic potential of NGs associated with functional and metabolic changes may reflect the active involvement of NGs in the immunopathogenesis of T1DM.

Keywords: diabetes mellitus; neutrophils; phagocytosis; myeloperoxidase; lysosomal cationic proteins; oxidase activity; apoptosis DOI: 10.14341/DM2014377-82

В последние годы установлено, что нейтрофиль-ные гранулоциты (НГ) играют важную роль в развитии сахарного диабета (СД) [1, 2, 3]. Доказано участие нейтрофилов в разрушении в-клеток поджелудочной железы (ПЖ), патогенезе микроваску-

77 ^3201^^

лярных повреждений [4]. Зарегистрировано снижение числа периферических полиморфноядерных лейкоцитов (ПМЯЛ), предшествующее дебюту заболевания и сопровождающее развитие СД 1 типа (СД1), что может быть связано с их аккумуляцией в экзокринной части ПЖ [3].

Сахарный диабет. 2014;(3):77-82

Установлено, что на ранних этапах развития инсулитов происходит направленная миграция в ПЖ лейкоцитарных клеток, способных к локальной секреции провоспалитель-ных цитокинов, а также цитотоксических ферментов, активных форм кислорода, инициирующих апоптоз и некроз в-клеток [5]. При этом гипергликемия считается одним из факторов, повышающих деструктивный потенциал НГ [6]. Показана роль полиморфноядерных лейкоцитов в развитии диабетической ангиопатии, ретинопатии [7, 8]. Получены данные об участии нейтрофилов в патогенезе диабетической нефропатии. Установлено, что тубулярные и мезенхимальные клетки почек при диабете продуцируют большое количество хемокинов, потенцирующих приток лейкоцитов и их адгезию с последующим синтезом провос-палительных цитокинов, склерозом гломерул и фиброзом интерстициальной ткани [9].

У больных СД1 выявляются дефектный хемотаксис, низкая бактерицидная активность нейтрофилов, аномальная продукция супероксида, лейкотриенов, секреция лизосомальных ферментов, а также изменение базального уровня внутриклеточного кальция [10, 11].

Очень мало известно об апоптозе ПМЯЛ при СД1. Ранние исследования выявили увеличение скорости апоптоза нейтрофилов [12] и были сосредоточены на неспособности отложить апоптоз этих клеток у больных СД1 при стимуляции липополисахаридом [12, 13]. Высказывалось мнение о том, что гипергликемия увеличивает апоптоз НГ [1]. В последующем было показано снижение апоптоза ПМЯЛ в клинических и экспериментальных исследованиях, что, вероятно, способствовало накоплению нейтрофилов в воспалительном экссудате и повреждению тканей, а также предрасполагало к затяжным стафилококковым инфекциям при СД1 [1, 2].

НГ являются основными клетками врожденного иммунитета. Изменение их структурно-метаболического статуса является основой низкой резистентности больных СД, их подверженности инфекционным заболеваниям [2, 3, 14]. Частой причиной обращения за медицинской помощью становятся инфекции ЛОР-органов и дыхательных путей, мочеполового и желудочно-кишечного трактов, инфекции кожи и мягких тканей [14].

Несмотря на очевидную значимость проблемы, роль ПМЯЛ в развитии СД1 у детей окончательно не установлена. Дискутируется участие НГ в возникновении и развитии заболевания. Имеющиеся в литературе данные демонстрируют нарушение клеточной функции нейтро-филов как в сторону активации, так и в сторону ингибирования. Дальнейшее изучение маркеров апоптоза нейтрофилов крови и их функционального состояния имеет большое клиническое значение, поскольку их нарушение способствует повреждению ткани ПЖ, а также повышенной восприимчивости к инфекции при СД1.

Цель

Цель исследования состояла в изучении функциональной активности и маркеров апоптоза НГ при СД1 у детей.

Материалы и методы

Обследовано 25 детей с СД1 в возрасте 7—15 лет (табл. 1). Пациенты были разделены на группы в зависимости от длительности заболевания. В группу I вошли 12 детей с длительностью заболевания менее 3 лет. Средний возраст пациентов составил 9,7±0,42 лет, средняя длительность заболевания — 1,7±0,49 лет. В группу II включены 13 детей с длительностью СД1 более 3 лет. Средний возраст детей составил 13,3+0,99 лет, средняя длительность заболевания — 7,1+0,88 лет. Показатели гликированного гемоглобина в группе I достигали 11,3+0,90%, в группе II - 10,0+0,71%.

Контрольную группу составили 15 здоровых детей в возрасте 7-15 лет.

Всеми пациентами и их родителями были подписаны информированные согласия на участие в исследовании.

Для оценки программируемой клеточной гибели выявляли количество НГ, экспрессирующих маркеры апоптоза. Нейтрофилы выделяли на двойном градиенте плотности Ficoll-Paque и фиколл-урографин (GE Healthcare, Швеция). Суспензию клеток трижды отмывали в среде RPMI-1640 («Вектор-Бест», Россия). В культурах нейтрофилов оценивали количество клеток, экспрессирующих рецепторы CD95, CD95L, Bcl2 методом проточной цитометрии с использованием моноклональных антител (Invitrogen, США).

Фагоцитарный индекс определяли по способности НГ поглощать частицы меламиноформальдегидных ла-тексов. Уровень кислородзависимой бактерицидности НГ оценивали в тесте восстановления нитросинего те-тразолия (НСТ-тест) по числу клеток, содержащих фар-мазан (фармазанположительные клетки). Содержание лизосомальных катионных белков (ЛКБ) определяли методом Шубича М.Г., уровень миелопероксидазы (МП) — методом Грэхема-Кнолля. Рассчитывали средний цитохимический коэффициент по принципу Астальди.

Оценку сопутствующих инфекционно-воспалительных заболеваний проводили на основании клинического обследования в специализированном отделении и анализа амбулаторных карт из детской поликлиники, принимая во внимание результаты диспансерного наблюдения у педиатра, отоларинголога, дерматолога.

Для статистического анализа данных использовали пакет программ Primer of Biostat 4,0, At-testat 10.5.1. Для оценки межгрупповых различий применяли дисперсионный анализ повторных изме-

Таблица 1

Характеристика клинических групп

Показатель I группа

Средний возраст, лет 9,7±0,42 13,3±0,99

Средняя длительность заболевания, лет 1,7±0,49* 7,1±0,88

НЬА,с, % 11,3±0,90 10,0±0,71

* р<0,05 - достоверность различий по сравнению с группой II

Дз/204^ 78

Сахарный диабет. 2014;(3):77-82 Таблица 2

Показатели функциональной активности НГ у детей с СД1

Показатели Длительность СД1 менее 3 лет (I) Длительность СД1 более 3 лет (II) Контрольная группа

Фагоцитоз, % 82,6±2,33 72<9±2<35* ** 81<0±1<65

КБ (СЦК), усл. ед. 1,8±0,04* 1<7±0<05* 1<4±0<03

МП (СЦК), усл. ед. 2,5±0,03* 2<7±0<07* ** 2<1±0<02

НСТ, % 3,0±0,41* 3<6±0<58* 7<7±0<7

ИС НСТ, усл. ед. 2,5±0,37 1<7±0<36*** 2<6±0<05

КБ - катионные белки, МП - миелопероксидаза, НСТ - фармазанположительные клетки, ИС НСТ - индекс стимуляции в НСТ-тесте; *р<0,05 - достоверность различий по сравнению с контрольной группой, **р<0,05 - достоверность различий по сравнению с группой I (критерий Ньюмена-Кейлса, критерий Данна).

Таблица 3

Показатели апоптоза НГ у детей с СД1

Показатели Длительность СД1 менее 3 лет (I) Длительность СД1 более 3 лет (II) Контрольная группа

CD95, % 77,6

CD95L, % 9,5

Вс12, % 3,99

CD95 - рецептор, опосредующий апоптоз, CD95L - лиганд CD95 рецептора, ВсІ2 - рецептор резистентности к апоптозу; *р<0,05 - достоверность различий по сравнению с контрольной группой; **р<0,05 - достоверность различий по сравнению с группой I (критерий Ньюмена-Кейлса, критерий Данна).

рений с вычислением критериев Ньюмена-Кейлса, Данна. Анализ качественных признаков выполнялся с использованием критерия х2. Количественные значения с нормальным распределением были представлены как среднее+стандартная ошибка средней (Х+Бх); признаки, характеризующиеся ненормальным распределением — в виде медианы и интерквартильного (25 и 75 процентили) размаха (Ме ^1^)). Достоверными считали различия при р<0,05.

Результаты

При изучении функциональной активности ПМЯЛ установлено снижение уровня фагоцитоза у детей с длительностью заболевания более 3 лет (72,9+2,35, р<0,05). У пациентов с длительностью СД1 менее 3 лет показатели фагоцитоза не отличались от контрольной группы (табл. 2).

Показатели оксидазной активности НГ по данным спонтанного НСТ-теста достоверно уменьшались по сравнению с контрольной группой, уровень функционального резерва (ИС НСТ) был снижен у детей с длительностью заболевания более 3 лет.

При сравнительной характеристике показателей функциональной активности НГ в группе детей, страдающих СД1 более 3 лет, установлены более низкие показатели фагоцитоза (р<0,05) и ИС НСТ-теста (р<0,05) (табл. 2) по сравнению с детьми, болеющими менее 3 лет.

У пациентов обеих групп выявлено увеличение цито-энзимохимических показателей — уровня МП и лизосо-мальных катионных белков по сравнению с контрольной группой (с более высокими значениями МП у детей с длительностью заболевания более 3 лет).

При исследовании маркеров апоптоза установлено увеличение экспрессии проапоптотических маркеров

3/2 014

CD95, снижение антиапоптотических — Вс12 (табл. 3). Максимальные показатели CD95 зарегистрированы у детей с длительностью заболевания более 3 лет.

Установлено увеличение процента ПМЯЛ, имеющих на своей поверхности CD95L. Наиболее высокие показатели выявлены у детей с длительностью заболевания более 3 лет.

Развитие сопутствующих инфекционно-воспалительных заболеваний отмечено у 72% включенных в исследование детей, что превышало аналогичные показатели в контрольной группе (20%), p<0,05.

Частые респираторные инфекции регистрировались у детей обеих групп (табл. 4). Хронический тонзиллит диагностировался у 33,4% в группе I и у 30,8% в группе II. Хронический гайморит встречался только в группе II (23,1%).

Инфекции мочевыводящих путей верифицировались в единичных случаях. Цистит был выявлен в 8,3% в группе I и в 7,7% в группе II. Хронический пиелонефрит был диагностирован только в группе II (15,4%).

Заболевания кожи встречались у 16,7% детей в группе I и у 41,7% — в группе II. В структуре патологии имели место стрептодермии — у 16,7% детей в группе I и у 15,4% в группе II, рецидивирующий herpes в группе II — 23,1%, аллергический дерматит — у 8,3% и 23,1% соответственно.

В единичных случаях у детей группы I (8,3%) отмечался кандидоз слизистой полости рта. У школьников длительностью СД1 более 3 лет наблюдались повторные эпизоды стоматита (23,1%).

При сравнительной характеристике частоты инфекционно-воспалительных заболеваний в зависимости от длительности заболевания более высокие показатели отмечались у детей II группы. Однако достоверных меж-групповых различий получено не было, что, вероятно, связано с небольшим объемом выборок.

Сахарный диабет. 2014;(3):77-82

Таблица 4

Сопутствующие заболевания у школьников с СД 1 в зависимости о! длительности заболевания

Уровень поражения Патология %

I группа

Инфекции верхних Частые ОРВИ 58,3

дыхательных путей Рецидивирующий бронхит 16,7 (2) 23,1 (3) -

Инфекции ЛОР-органов Хронический тонзиллит 33,4

Хронический гайморит - 23,1 (3) -

Аллергический дерматит 8,3 (1) 23,1 (3) -

Заболевания кожи и подкожной клетчатки Пиодермия 16,7 (2) 15,4 (2) -

Кожно-слизистый герпес - 23,1

Хронический пиелонефрит - 15,4

Цистит 8,3 (1) 7,7 (1) -

Лямблиоз кишечника 8,3 (1) - -

Инфекции мочевых путей Функциональная диспепсия 16,7

Кандидоз слизистых рта 16,7 (2) 15,4 (2) -

Стоматит - 23,1 (3) -

Обсуждение

Известно, что структурно-метаболический статус ПМЯЛ неразрывно связан с выполнением их физиологических задач и складывается из активации, адгезии, хемотаксиса клеток, поглощения антигена, его киллинга и расщепления. Нами установлено снижение количества фагоцитирующих клеток у детей с длительностью заболевания более 3 лет, что согласуется с результатами большинства исследований, посвященных фагоцитарной активности при СД1 [2, 10, 11].

Известно, что нарушению поглотительной и хемотак-сической функции ПМЯЛ при СД могут способствовать гипергликемия и гиперкетонемия, под действием которых нейтрофилы приобретают сферическую форму и в значительной мере теряют способность образовывать псевдоподии. В результате снижаются адгезивные и эмиграционные свойства НГ, затрудняется поглощение, кэпинг [4].

В работе показано уменьшение показателей спонтанного и стимулированного НСТ-теста у детей с СД1, что может быть связано с нарушением процесса дегрануляции — слияния специфических и азурофильных гранул ПМЯЛ с их фагосомами. Известно, что дегрануляция — энергозатратный процесс. В экспериментальных условиях выявлено, что при СД в ПМЯЛ значительно сокращаются запасы гликогена, тормозится его синтез, снижается активность ключевых ферментов анаэробного окисления глюкозы и пентозного цикла, что приводит к уменьшению внутриклеточных запасов АТФ [15].

При сравнительной характеристике показателей функциональной активности НГ в группе детей, страдающих СД1 более 3 лет, были установлены более низкие показатели фагоцитоза и НСТ-теста по сравнению с детьми, болеющими менее 3 лет, что, вероятно, связано с длительностью заболевания и функциональным истощением НГ [16].

У пациентов обеих групп выявлено увеличение цито-энзимохимических показателей — уровня МП и лизосо-мальных катионных белков по сравнению с контрольной

группой с более высокими значениями МП у детей с длительностью заболевания более 3 лет. Полученные нами данные, вероятно, могут свидетельствовать об увеличении биоагрессивного потенциала нейтрофилов периферической крови у детей с СД1 вследствие увеличения продукции НОС1 и катионных белков. Известно, что наиболее цитотоксичными продуктами миелоперок-сидазной системы являются гипохлорная кислота и гипохлорит-анион, которым принадлежит роль основных повреждающих агентов в биологических системах [17].

Нами установлено, что течение СД у детей сопровождается увеличением процента нейтрофилов, экспрессирующих маркеры апоптоза (СБ95), и уменьшением доли клеток, имеющих на своей поверхности антиапоптоти-ческие белки. Наиболее выраженная активация апоптоза отмечена в группе детей с длительностью заболевания более 3 лет.

По данным литературы, интенсивность апоптоза нейтрофилов при СД может быть как низкой [18, 19], так и высокой [12, 13, 20]. Установлено, что ПМЯЛ больных СД не демонстрируют замедление апоптоза, индуцированное бактериями и липополисахаридом [13]. Существует мнение, что нарушение утилизации глюкозы и глютамина может быть фактором, предрасполагающим к повышенному апоптозу ПМЯЛ [2].

Однако в литературе имеются сведения и о снижении скорости апоптоза НГ при СД, что, вероятно, инициирует процессы хронического воспаления с повреждением ткани ПЖ [18, 19].

В исследовании выявлено увеличение процента клеток, имеющих на своей поверхности CD95L, что может способствовать усилению процессов запрограммированной клеточной гибели в островковых в-клетках ПЖ, инфильтрированных лейкоцитарными клетками. Наиболее высокие показатели отмечены у детей с длительностью заболевания более 3 лет.

Таким образом, увеличение апоптотического потенциала НГ на фоне функционально-метаболических изменений является отражением активного вовлечения НГ в иммунопатогенез заболевания.

Установлено, что гиперэкспрессия отдельных факторов биоцидности ПМЯЛ в виде увеличения МП и ЛКБ сопровождается усилением их апоптоза, что может быть связано с изменением метаболизма глютамина в НГ при развитии и прогрессировании СД.

Вместе с тем установлено снижение бактерицидной активности нейтрофилов с дефицитом поглощения, секреции активных радикалов кислорода, функционального резерва. Степень функциональной недостаточности зависит от длительности заболевания и увеличивается у детей, болеющих СД1 более 3 лет.

Известно, что ПМЯЛ являются связующим звеном между врожденным и адаптивным иммунитетом и выполняют главенствующую роль в антибактериальной защите. Нарушение их функциональной компетенции у детей с СД1 становится одним из факторов, предрасполагающих к развитию инфекционных заболеваний. У детей, страдающих СД1, отмечена повышенная чувствительность к инфекционным заболеваниям, что согласуется с данными зарубежных исследователей [2, 3, 14].

Выводы

1. НГ при СД у детей характеризуются высокой готовностью к апоптозу, низкой бактерицидной активно-

Сахарный диабет. 2014;(3):77-82

стью с дефицитом фагоцитоза, продукции активных радикалов кислорода, функционального резерва.

2. Увеличение экспрессии CD95L на НГ при СД1 может способствовать усилению процессов запрограммированной гибели в-клеток в островках ПЖ, инфильтрированных иммунокомпетентными клетками.

3. Признаки антигенной стимуляции ПМЯЛ и увеличения их цитотоксического потенциала при СД1 выявляются в виде активации метаболической активности с повышением уровня МП и лизосомальных катионных белков.

Информация о финансировании и конфликте интересов

Работа выполнена в рамках федеральной целевой научной программы. Номер государственной регистрации 01200954364.

Выполнение настоящего исследования одобрено Локальным этическим комитетом ГБОУВПО «Ставропольский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения РФ (ул. Мира, 310). Протокол №16 от 14 мая 2012 г.

Авторы декларируют отсутствие явных и потенциальных конфликтов интересов, связанных с проведенным исследованием и публикацией настоящей статьи.

1. Alba-Loureiro TC, Hirabara SM, Mendonga JR, Curi R, Pithon-Curi TC. Diabetes causes marked changes in function and metabolism of rat neutrophils. Journal of Endocrinology 2006;188(2):295-303. doi: 10.1677/joe.1.06438

2. Alba-Loureiro TC, Munhoz CD, Martins JO, Cer-chiaro GA, Scavone C, Curi R, et al. Neutrophil function and metabolism in individuals with diabetes mellitus. Braz J Med Biol Res 2007;40(8):1037-1044. doi: 10.1590/S0100-879X2006005000143

3. Valle A, Giamporcaro GM, Scavini M, Stabilini A, Grogan P, Bianconi E, et al. Reduction of Circulating Neutrophils Precedes and Accompanies Type 1 Diabetes. Diabetes 2013;62(6):2072-2077. doi: 10.2337/db12-1345

4. Tong PC, Lee KF, So WY, Ng MH, Chan WB, Lo MK, et al.

White Blood Cell Count Is Associated With Macro- and Microvascular Complications in Chinese Patients With Type 2 Diabetes. Diabetes Care 2004;27(1):216-222. doi: 10.2337/diacare.27.1.216

5. Lo H, Lin S, Wang Y. The relationship among serum cytokines, chemokine, nitric oxide, and leptin in children with type 1 diabetes mellitus. Clinical Biochemistry 2004;37(8):666-672. doi: 10.1016/j.clinbiochem.2004.02.002

6. Karima M, Kantarci A, Ohira T, Hasturk H, Jones VL, Nam B, et al. Enhanced superoxide release and elevated protein kinase C activity in neutrophils from diabetic patients: association with periodontitis. Journal of Leukocyte Biology 2005;78(4):862-870. doi: 10.1189/jlb.1004583

7. Балаболкин МИ, Клебанова ЕА, Креминская ВМ. Патогенез ангиопатий при сахарном диабете. Сахарный диабет. 1999;(1):2-8. [ Balabolkin MI, Klebanova EM, Kremins-kaya VM. Patogenez angiopatiy pri sakharnom diabete. Diabetes mellitus. 1999;(1):2-8.] doi: 10.14341/2072-0351-5725

Hayasaka S, Zhang X, Cui H, Yanagisawa S,

Chi Z, Hayasaka Y, et al. Chemokines and Sho (Zheng in Chinese) of Chinese-Korean-Japanese medicine in patients with diabetic vitreoretinopathy.

Am. J. Chin. Med. 2006;34(04):537-543. doi: 10.1142/S0192415X06004077

9. Morii T, Fujita H, Narita T, Shimotomai T, Fujishima H,

Yoshioka N, et al. Association of monocyte chemoattrac-tant protein-1 with renal tubular damage in diabetic nephropathy. J. Diabetes Complications 2003;17(1):11-15. doi: 10.1016/S1056-8727(02)00176-9

10. Nabi AHMN, Islam LN, Rahman MM, Biswas KB. Polymorphonuclear Neutrophil Dysfunctions Streptozotocin-induced Type

1 Diabetic Rats. Journal of Biochemistry and Molecular Biology 2005;38(6):661-667. PubMed PMID: 16336780

11. Kannan Y, Tokunaga M, Moriyama M, Kinoshita H,

Nakamura Y. Diabetic neutrophil dysfunction and tro-glitazone. Clin Exp Immunol 2004;137(2):263-271. doi: 10.1111/j.1365-2249.2004.02532.x

12. Chanchamroen S, Kewcharoenwong C, Susaengrat W,

Ato M, Lertmemongkolchai G. Human polymorphonuclear neutrophil responses to Burkholderia pseudomallei in healthy and diabetic subjects. Infect Immun 2008;77(1):456-463. doi: 10.1128/IAI.00503-08

13. Tennenberg SD. Absence of Lipopolysaccharide-Induced Inhibition of Neutrophil Apoptosis in Patients With Diabetes. Arch Surg 1999;134(11):1229-1233. doi: 10.1001/archsurg.134.11.1229

14. Casqueiro J, Casqueiro J, Alves C. Cresio Infections in patients with diabetes mellitus: A review of pathogenesis. Indian J Endocrinol Metab 2012;16 Suppl 1(l1):27. doi: 10.4103/2230-8210.94253

Список литературы 8.

81

3/2

Сахарный диабет. 2014;(3):77-82

15. Walrand S, Guillet C, Boirie Y, Vasson M. In vivo evidences that insulin regulates human polymorphonuclear neutrophil functions. Journal of Leukocyte Biology 2004;76(6):1104-1110. doi: 10.1189/jlb.0104050

16. Kaczmarek M, Lewandowicz-Uszynska A, Iwanicka Z, Jankowski A. Whole blood neutrophil chemilumines-cence in children with diabetes depending on their clinical condition. Centr Eur J Immunol 2012;4(4):345-349. doi: 10.5114/ceji.2012.32723

17. Ziegler D, Sohr CG, Nourooz-Zadeh J. Oxidative stress and antioxidant defense in relation to the severity of diabetic poly-neuropathy and autonomic neuropathy. Diabetes Care 2004;27(9):2178-2183. doi: 10.2337/diacare.27.9.2178

18. Seo KH, Na JO, Moon SH, Uh ST, Kim YH, Park CS. Neutrophil Apoptosis and H2O2 Release by LPS in Diabetics. Tuber-

culosis and Respiratory Diseases. 2004; 57 (3): 250-256. Available from: http://www.e-trd.org/abstract/view_article. php?year=2008&no=707&page_list=abslist

19. Zhang B, Hirahashi J, Cullere X, Mayadas TN. Elucidation of Molecular Events Leading to Neutrophil Apoptosis following Phagocytosis: cross-talk between caspase 8, reactive oxygen species, and MAPK/ERK activation. Journal of Biological Chemistry 2003;278(31):28443-28454. doi: 10.1074/jbc.M210727200

20. Glowacka E, Banasik M, Lewkowicz P, Tchorze-wski H. The effect of LPS on neutrophils from patients with high risk of type 1 diabetes mellitus in relation to IL-8, IL-10 and IL-12 production and apoptosis in vitro. Scand J Immunol 2002;55(2):210-217. doi: 10.1046/j.1365-3083.2002.01046.x

Барычева Людмила Юрьевна д.м.н., профессор кафедры детских инфекционных болезней, ГБО ВПО «Ставропольский

государственный медицинский университет», Ставрополь, Российская Федерация Е-mаil: for_ludmila@inbox.ru

Эрдни-Горяева Наталья Эдуардовна врач-эндокринолог Ставропольского краевого клинического диагностического центра,

соискатель кафедры детских инфекционных болезней, ГБО ВПО «Ставропольский государственный медицинский университет», Ставрополь, Российская Федерация Александрович Галина Алексеевна к.м.н., доцент, заслуженный врач России, зав. кафедрой эндокринологии, детской

эндокринологии и диабетологии, ГБО ВПО «Ставропольский государственный медицинский университет», Ставрополь, Российская Федерация

DOI: 10.14341/DM2014377-82

014 82