НОВЫЕ ТИОФЕНОВЫЕ ПРОИЗВОДНЫЕ В КАЧЕСТВЕ АГОНИСТОВ S1P1/EDG1 РЕЦЕПТОРА
NEW THIOPHENE DERIVATIVES AS S1P1/EDG1 RECEPTOR AGONISTS

Область изобретения
Настоящее изобретение относится к агонистам S1P1/EDG1 рецептора (липидактивируемый, сопряженный с G-белком, специфичный в отношении сфингозин-1-фосфата рецептор) формулы (I) и их применению в качестве активных ингредиентов при получении фармацевтических композиций. Изобретение также касается родственных аспектов, включающих способы получения соединений, фармацевтических композиций, содержащих соединение формулы (I), и их применение в качестве соединений, улучшающих сосудистую функцию, и в качестве иммуномоделирующих агентов, либо самостоятельно, либо в комбинации с другими активными соединениями или методами лечения.
Предпосылки создания изобретения
Человеческая иммунная система призвана защищать организм от посторонних микроорганизмов и субстанций, вызывающих инфекцию или болезнь. Комплексные регуляторные механизмы обеспечивают направленность иммунного ответа против внедрившейся субстанции или организма, но не направленного против хозяина. В некоторых случаях в таких контрольных механизмах нарушается регуляция, что может приводить к возникновению аутоиммунных ответов. Следствием неконтролируемого ответа на воспаление является серьезная опасность для органа, клетки, ткани или сустава. При современных методах лечения иммунная система в таких случаях в целом обычно подавляется, и способность организма реагировать на инфекцию также подвергается при этом серьезному риску. Типичные лекарства, применяемые в этом случае, включают азатиоприн, хлорамбуцил, циклофосфамид, циклоспорин или метотрексат. Кортикостероиды, которые ослабляют воспаление и подавляют иммунный ответ, могут вызывать побочные эффекты при длительном лечении. Нестероидные противовоспалительные препараты (НПВП) могут уменьшать боль и воспаление, однако они также проявляют нежелательные побочные эффекты. Альтернативные методы лечения включают применение агентов, активирующих или блокирующих цитокиновую передачу сигнала.
Перорально активные соединения с иммуномоделирующими свойствами без опасных иммунных ответов и с пониженными побочными эффектами значительно улучшают современные методы лечения воспалительных болезней.
В области трансплантации органов иммунный ответ хозяина должен быть супрессирован для предотвращения отторжения трансплантата. Трансплантируемый орган реципиента может подвергаться риску частичного отторжения даже при использовании иммуносупрессивных лекарств. Отторжение чаще всего происходит в первые несколько недель после трансплантации, но случаи отторжения могут наступить также и после нескольких месяцев или даже лет после трансплантации. Комбинации вплоть до трех или четырех лекарственных препаратов, используемых вместе, максимально защищают от отторжения и при этом минимизируют побочные эффекты. Современные стандартные лекарства, используемые для лечения отторжения трансплантируемых органов, входят во взаимодействие с дискретным метаболизмом при активации Т-типа или В-типа лимфоцитов. Примерами таких лекарств служат циклоспорин, даклицумаб, вазиликсимаб, эверолимус или FK506, которые взаимодействуют с процессами цитокиновой секреции или передачи сигнала; азатиоприн или лефлуномид, которые ингибирует синтез нуклеотидов; или 15-деоксиспергуалин, являющийся ингибитором дифференцировки лейкоцитов.
Наилучшие результаты, полученные при иммуносупрессивной терапии крови, относятся к действию, оказываемому этими лекарственными препаратами; однако генерализованная иммуносупрессия, которая достигается с помощью этих лекарств, ослабляет иммунную защиту организма против инфекции и злокачественных новообразований. Кроме того, стандартные иммуносупрессивные лекарства часто используются в больших дозах и могут быть причиной или ускорять повреждение органа.
Описание изобретения
Настоящее изобретение предлагает новые соединения формулы (I), которые являются агонистами для G белок-сопряженного рецептора S1P1/EDG1 и обладают сильнодействующим и продолжительным иммуномоделирующим эффектом, который достигается посредством сокращения числа циркулирующих и инфильтрацирующих Т- и В-лимфоцитов, без оказания при этом повреждающего воздействия на их созревание, память или экспансию. Сокращение циркуляции Т- и В-лимфоцитов в результате S1P1/EDG1 агонизма возможно в комбинации с наблюдаемым улучшением функции эндотелиального клеточного слоя, ассоциируемого с S1P1/EDG1 активацией, делает возможным применение таких соединений для лечения неконтролируемой воспалительной болезни и улучшения сосудистой функциональности.
Соединения по настоящему изобретению могут применяться самостоятельно или в комбинации со стандартными лекарствами, ингибирующими Т-клеточную активацию, предоставляя новую иммуномоделирующую терапию с пониженной предрасположенностью к инфекциям по сравнению со стандартной иммуносупрессивной терапией. Кроме того, соединения по настоящему изобретению могут применяться в комбинации с пониженными дозами лекарств, традиционно применяемых в иммуносупрессивной терапии для предоставления, иммуномоделирующей активности, что является очень важным, учитывая, с другой стороны, что снижение повреждения пересаженного органа ассоциируется с применением более высоких доз иммуносупрессивных лекарств. Результаты наблюдения по улучшению функции эндотелиального клеточного слоя, ассоциируемого с S1P1/EDG1 активацией, дополнительно свидетельствуют в пользу рассматриваемых соединений в связи с вызываемым ими улучшением сосудистой функции.
50
Нуклеотидная и аминокислотная последовательности для человеческого S1P1/EDG1 рецептора известна из области техники и публикаций, например, в: Нlа, Т., and Maciag, Т.J. Biol. Chem., 265 (1990), 9308-9313; WO 91/15583 (опубликован 17 октября 1991 г.); WO 99/46277 (опубликован 16 сентября 1999 г.). Потенциальная возможность и эффективность соединений формулы (I) исследовались с помощью GTPγS анализа для определения ЕС величин и посредством измерения циркулирующих лимфоцитов у крыс после орального введения, соответственно (см. в примерах).
Общие термины, используемые выше и далее, имеют в этом описании следующие значения, если не указано иначе.
При использовании множественной формы соединений, солей, фармацевтических композиций, болезней и им подобных терминов имеется в виду также единичная форма соединения, соли или им подобных.
Любая ссылка, используемая выше и далее, на соединение формулы (I) подразумевает также ссылку на соли, в частности фармацевтически приемлемые соли соединения формулы (I), как уместную и целесообразную.
1-5
1-5
Термин Салкил, самостоятельно или в комбинации с другими группами, подразумевает насыщенные, разветвленные или, предпочтительно, линейные группы с числом атомов углерода от одного до пяти. Предпочтительные примеры Салкильных групп представляют собой метил, этил, н-пропил, н-бутил, изобутил и н-пентил.
1-4
1-3
Термин Салкил, самостоятельно или в комбинации с другими группами, подразумевает насыщенные, разветвленные или предпочтительно линейные группы с числом атомов углерода от одного до четырех, предпочтительно с числом атомов углерода от одного до трех, например Салкил.
1-4
Предпочтительные примеры Салкильных групп представляют собой метил, этил и н-пропил.
2-5
2-5
Аналогично термин Салкил, самостоятельно или в комбинации с другими группами, подразумевает насыщенные, разветвленные или линейные группы с числом атомов углерода от двух до пяти. Предпочтительные примеры Салкильных групп представляют собой этил, н-пропил, н-бутил, изобутил, н-пентил и изопентил.
1-5
1-4
Термин Салкоксигруппа, самостоятельно или в комбинации с другими группами, подразумевает R-O-группу, где R обозначает Салкил.
1-4
1-4
1-4
Термин Салкоксигруппа, самостоятельно или в комбинации с другими группами, подразумевает R-O-группу, где R обозначает Салкил. Предпочтительные примеры Салкоксигрупп представляют собой метоксигруппу, этоксигруппу, пропоксигруппу, изопропоксигруппу и изобутоксигруппу.
2-5
2-5
Термин Салкоксигруппа, самостоятельно или в комбинации с другими группами, подразумевает R-O-группу, где R обозначает Салкил.
Термин галоген подразумевает фтор, хлор, бром или йод, предпочтительно фтор или хлор.
Соли представляют собой предпочтительно фармацевтически приемлемые соли соединений формулы (I).
Термин "фармацевтически приемлемые соли" относится к нетоксичным, неорганическим или органическим кислотно- и/или основно-аддитивным солям, литература, например: "Salt selection for basic drugs". Int. J. Pharm., (1986), 33, 201-217.
Соединения формулы (I) могут содержать один или более стерео- или асимметрических центров, таких как один или более асимметрический атом углерода. Заместители при двойной связи или кольце могут присутствовать в цис-(=Z-) или транс-(=Е-) форме, если не указано иначе. Соединения формулы (I) могут таким образом присутствовать в виде смеси стереоизомеров или, предпочтительно, в виде чистых стереоизомеров. Смеси стереоизомеров могут быть разделены с использованием методов, известных специалистам в области техники.
i) Изобретение относится к новым тиофеновым соединениям формулы (I)
2
2
где А представляет собой *-СО-СНСН-, *-СО-СН=СН-,
, , ,
, , ,
или
где звездочки указывают на связь, через которую осуществляется соединение с тиофеновой группой формулы (I);
1
2-5
R представляет собой Салкил;
2
R представляет собой водород, метил или этил;
3
1-4
1-4
R представляет собой водород, Салкил, Салкоксигруппу или галоген;
4
1-4
1-4
R представляет собой водород, Салкил, Салкоксигруппу, галоген, трифторметил или трифторметоксигруппу;
5
51
51
52
52
53
54
53
51
51
52
52
1-5
1-4
1-4
2
2
n
2
2
n
2
2
2
2
n
2
n
2
2
2
n
1-5
2-5
1-4
1-4
2
2
m
2
2
2
2
2
2
m
2
2
R представляет собой водород, гидроксиСалкил, 2,3-ди-гидроксипропил, ди-(гидроксиСалкил)Салкил, -CH-(CH)-NHSOR, -(СН)СН(ОН)-СН-NHSOR, -CH-(CH)-NHCOR, -(CH)CH(OH)-CH-NHCOR, -CH-(CH)-CONRR, -CO-NHR, 1-(3-карбоксиазетидинил)-2-ацетил, 1-(2-карбоксипирролидинил)-2-ацетил, 1-(3-карбоксипирролидинил)-2-ацетил, 1-(3-карбоксиазетидинил)-3-пропионил, 1-(2-карбоксипирролидинил)-3-пропионил, 1-(3-карбоксипирролидинил)-3-пропионил, гидроксигруппу, Салкоксигруппу, гидроксиСалкоксигруппу, ди-(гидроксиСалкил)Салкоксигруппу, 2,3-дигидроксипропоксигруппу, 2-гидрокси-3-метоксипропоксигруппу, -OCH-(CH)-NHSOR, -ОСН-СН(ОН)-CH-NHSOR, -OCH-(CH)-NHCOR или -OCH-CH(OH)-CH-NHCOR;
51
1-3
R представляет собой Салкил, метиламиногруппу, этиламиногруппу или ди-метиламиногруппу;
52
R представляет собой гидроксиметил, 2-гидроксиэтил, 2-гидрокси-1-гидроксиметилэтил или 2,3-ди-гидроксипропил;
53
1-3
1-5
1-5
R представляет собой водород, Cалкил, 2-гидроксиэтил, 2-гидрокси-1-гидроксиметилэтил, 2,3-ди-гидроксипропил, карбоксиметил, 1-(Салкилкарбокси)метил, 2-карбоксиэтил или 2-(Салкилкарбокси)этил;
54
R представляет собой водород или метил;
m представляет собой целое число 1 или 2;
n представляет собой 0, 1 или 2; и
6
1-4
R представляет собой водород, Салкил или галоген;
и их соли.
ii) Особый вариант по изобретению относится к тиофеновым производным согласно варианту i), где А представляет собой
, , ,
, , ,
или
где звездочки указывают на связь, через которую осуществляется соединение с тиофеновой группой формулы (I); и их солям.
iii) Другой особый вариант по изобретению относится к тиофеновым производным согласно варианту i), где А представляет собой
, , ,
или
где звездочки указывают на связь, через которую осуществляется соединение с тиофеновой группой формулы (I); и их солям.
iv) Другой особый вариант по изобретению относится к тиофеновым производным согласно варианту i), где А представляет собой
, или
где звездочки указывают на связь, через которую осуществляется соединение с тиофеновой группой формулы (I); и их солям.
v) Другой особый вариант по изобретению относится к тиофеновым производным согласно варианту i), где А представляет собой
или
где звездочки указывают на связь, через которую осуществляется соединение с тиофеновой группой формулы (I); и их солям.
vi) Другой особый вариант по изобретению относится к тиофеновым производным согласно варианту i), где А представляет собой
,
и их солям.
1
vii) Другой особый вариант по изобретению относится к тиофеновым производным согласно одному из вариантов i)-vii), где R представляет собой н-пропил или изобутил, и их солям.
2
viii) Другой особый вариант по изобретению относится к тиофеновым производным согласно одному из вариантов i)-vii), где R представляет собой водород или метил, и их солям.
2
ix) Предпочтительный вариант по изобретению относится к тиофеновым производным согласно одному из вариантов i)-vii), где R представляет собой водород, и их солям.
3
4
6
х) Другой предпочтительный вариант по изобретению относится к тиофеновым производным согласно одному из вариантов i)-ix), где Rпредставляет собой метоксигруппу, и R и R обозначают водород, и их солям.
3
4
6
xi) Другой предпочтительный вариант по изобретению относится к тиофеновым производным согласно одному из вариантов i)-ix), где R представляет собой водород, R представляет собой метил, этил или метоксигруппу, и R представляет собой метил, этил или галоген, и их солям.
3
4
6
xii) Другой предпочтительный вариант по изобретению относится к тиофеновым производным согласно одному из вариантов i)-ix), где Rпредставляет собой водород, и R и R представляют собой метальную группу, и их солям.
3
4
6
xiii) Особенно предпочтительный вариант по изобретению относится к тиофеновым производным согласно одному из вариантов i)-ix), где R представляет собой водород, R представляет собой метильную группу, и R представляет собой этильную группу, и их солям.
3
4
6
xiv) Особенно предпочтительный вариант по изобретению относится к тиофеновым производным согласно одному из вариантов i)-ix), где R представляет собой водород, R представляет собой метоксигруппу и R представляет собой атом хлора, и их солям.
3
4
6
xv) Особенно предпочтительный вариант по изобретению относится к тиофеновым производным согласно одному из вариантов i)-ix), где R представляет собой водород, R представляет собой метильную группу, и R представляет собой атом хлора, и их солям.
5
52
52
52
52
2
2
n
2
n
2
2-5
1-4
1-4
2
2
m
2
2
xvi) Другой предпочтительный вариант по изобретению относится к тиофеновым производным согласно одному из вариантов i)-xv), где Rпредставляет собой 2,3-ди-гидроксипропил, -CH-(CH)-NHCOR, -CH)CH(OH)-CH-NHCOR, гидроксигруппу, гидроксиСалкоксигруппу, ди-(гидроксиСалкил)-Салкоксигруппу, 2,3-ди-гидроксипропоксигруппу, 2-гидрокси-3-метоксипропоксигруппу, -OCH-(CH)-NHCOR или -ОСН-СН(ОН)-СН-NHCOR, и их солям.
5
52
52
2-5
1-4
1-4
2
2
m
2
2
xvii) Другой предпочтительный вариант по изобретению относится к тиофеновым производным согласно одному из вариантов i)-xv), где R представляет собой гидроксигруппу, гидроксиСалкоксигруппу, ди-(гидроксиСалкил)-Салкоксигруппу, 2,3-ди-гидроксипропоксигруппу, 2-гидрокси-3-метоксипропоксигруппу, -OCH-(CH)-NHCOR или -ОСН-СН(ОН)-СН-NHCOR, и их солям.
5
xviii) Другой предпочтительный вариант по изобретению относится к тиофеновым производным согласно одному из вариантов i)-xv), где R представляет собой 3-гидрокси-2-гидроксиметилпропоксигруппу, 2,3-ди-гидроксипропоксигруппу или
2
2
52
-OCH-CH(OH)-CH-NHCOR, и их солям.
5
52
52
2
2
xix) Другой предпочтительный вариант по изобретению относится к тиофеновым производным согласно одному из вариантов i)-xv), где R представляет собой 2,3-ди-гидроксипропоксигруппу или -ОСН-СН(ОН)-СН-NHCOR, где R представляет собой гидроксиметил, и их солям.
хх) Особенно предпочтительный вариант по изобретению относится к тиофеновым производным согласно варианту i), где А представляет собой
, или ,
1
2
3
4
5
где звездочки указывают на связь, через которую осуществляется соединение с тиофеновой группой формулы (I); R представляет собой н-пропил или изобутил; R представляет собой водород; R представляет собой водород или метоксигруппу; R представляет собой водород, метил, этил или метоксигруппу; R представляет собой 3-гидрокси-2-гидроксиметилпропоксигруппу, 2,3-ди-гидроксипропоксигруппу или
2
2
52
6
-ОСН-CH(OH)-CH-NHCOR; и R представляет собой водород, метил, этил или хлор; и их солям.
xxi) Другой особенно предпочтительный вариант по изобретению относится к тиофеновым производным согласно варианту i), где
2
2
А представляет собой *-СО-СНСН-, *-СО-СН=СН-,
или ,
где звездочки указывают на связь, через которую осуществляется соединение с тиофеновой группой формулы (I);
1
2-5
R представляет собой Салкил;
2
3
R и R оба представляют собой водород;
4
1-4
R представляет собой Салкил;
5
R представляет собой гидроксигруппу, 2,3-ди-гидроксипропоксигруппу или
2
2
52
-OCH-CH(OH)-CH-NHCOR;
52
R представляет собой гидроксиметил; и
6
1-4
R представляет собой Салкил;
и их солям.
xxii) Особенно предпочтительными тиофеновыми соединениями согласно формуле (I) являются:
(2R)-N-(3-{4-[5-(5-этилтиофен-2-ил)-[1,2,4]оксадиазол-3-ил]-2,6-диметилфенокси}-2-гидроксипропил)-2-гидроксиацетамид (
(2S)-N-(3-{4-[5-(5-этилтиофен-2-ил)-[1,2,4]оксадиазол-3-ил]-2,6-диметилфенокси}-2-гидроксипропил)-2-гидроксиацетамид (
(2R)-N-(3-{2,6-диметил-4-[5-(5-бутилтиофен-2-ил)-[1,2,4]оксадиазол-3-ил]фенокси}-2-гидроксипропил)-2-гидроксиацетамид (
(2S)-N-(3-{2,6-диметил-4-[5-(5-бутилтиофен-2-ил)-[1,2,4]оксадиазол-3-ил]фенокси}-2-гидроксипропил)-2-гидроксиацетамид (
(2R)-N-(3-{2,6-диметил-4-[5-(5-изобутилтиофен-2-ил)-[1,2,4]оксадиазол-3-ил]фенокси}-2-гидроксипропил)-2-гидроксиацетамид (
(2S)-N-(3-{2,6-диметил-4-[5-(5-изобутилтиофен-2-ил)-[1,2,4]оксадиазол-3-ил]фенокси}-2-гидроксипропил)-2-гидроксиацетамид, (
(2R)-N-(3-{2-этил-6-метил-4-[5-(5-изобутилтиофен-2-ил)-[1,2,4]оксадиазол-3-ил]-фенокси}-2-гидроксипропил)-2-гидроксиацетамид (
(2S)-N-(3-{2-этил-6-метил-4-[5-(5-изобутилтиофен-2-ил)-[1,2,4]оксадиазол-3-ил]фенокси}-2-гидроксипропил)-2-гидроксиацетамид (
(2R)-N-(3-{2,6-диметил-4-[5-(5-пропилтиофен-2-ил)-[1,2,4]оксадиазол-3-ил]фенокси}-2-гидроксипропил)-2-гидроксиацетамид (
(2S)-N-(3-{2,6-диметил-4-[5-(5-пропилтиофен-2-ил)-[1,2,4]оксадиазол-3-ил]фенокси}-2-гидроксипропил)-2-гидроксиацетамид (
(2R)-N-(3-{2-этил-6-метил-4-[5-(5-пропилтиофен-2-ил)-[1,2,4]оксадиазол-3-ил]фенокси}-2-гидроксипропил)-2-гидроксиацетамид (
(2S)-N-(3-{2-этил-6-метил-4-[5-(5-пропилтиофен-2-ил)-[1,2,4]оксадиазол-3-ил]фенокси}-2-гидроксипропил)-2-гидроксиацетамид (
(2R)-N-(3-{2-этил-4-[5-(5-изобутилтиофен-2-ил)-[1,2,4]оксадиазол-3-ил]-6-метил-фенокси}-2-гидроксипропил)-2-гидроксиацетамид (
(2S)-N-(3-{2-этил-4-[5-(5-изобутилтиофен-2-ил)-[1,2,4]оксадиазол-3-ил]-6-метилфенокси}-2-гидроксипропил)-2-гидроксиацетамид (
(2R)-3-{4-[5-(5-изобутилтиофен-2-ил)-[1,3,4]оксадиазол-2-ил]-2,6-диметилфенокси}пропан-1,2-диол (
(2S)-3-{4-[5-(5-изобутилтиофен-2-ил)-[1,3,4]оксадиазол-2-ил]-2,6-диметилфенокси}пропан-1,2-диол (
(2R)-2-гидрокси-N-(2-гидрокси-3-{4-[5-(5-изобутилтиофен-2-ил)-[1,3,4]оксадиазол-2-ил]-2,6-диметилфенокси} пропил)ацетамид (
(2S)-2-гидрокси-N-(2-гидрокси-3-{4-[5-(5-изобутилтиофен-2-ил)-[1,3,4]оксадиазол-2-ил]-2,6-диметилфенокси}пропил)ацетамид (
(2R)-2-гидрокси-N-(2-гидрокси3-{4-[5-(5-изобутилтиофен-2-ил)-[1,3,4]оксадиазол-2-ил]-2-этил-6-метилфенокси}пропил)ацетамид (
(2S)-2-гидрокси-N-(2-гидрокси-3-{4-[5-(5-изобутилтиофен-2-ил)-[1,3,4]оксадиазол-2-ил]-2-этил-6-метилфенокси}пропил)ацетамид (и соли этих соединений.
xxiii) Кроме того, особенно предпочтительными тиофеновыми соединениями согласно формуле (I) являются:
2-гидрокси-N-((2S)-2-гидрокси-3-{4-[5-(5-изобутилтиофен-2-ил)-[1,3,4]оксадиазол-2-ил]-2,6-диметилфенокси}пропил)ацетамид (
N-((2S)-3-{2-этил-6-мeтил-4-[5-(5-пpoпилтиoфeн-2-ил)-[l,3,4]oкcaдиaзoл-2-ил]фенокси}-2-гидроксипропил)-2-гидроксиацетамид (
(2R)-3-{2-этил-4-[5-(5-изобутил-4-метилтиофен-2-ил)-[1,3,4]оксадиазол-2-ил]-6-метилфенокси}пропан-1,2-диол (
(2S)-3-{2-этил-4-[5-(5-изобутил-4-метилтиофен-2-ил)-[1,3,4]оксадиазол-2-ил]-6-метилфенокси}пропан-1,2-диол (
N-((2R)-3-{2-этил-4-[5-(5-изобутил-4-метилтиофен-2-ил)-[1,3,4]оксадиазол-2-ил]-6-метилфенокси}-2-гидроксипропил)-2-гидроксиацетамид (
N-((2S)-3-{2-этил-4-[5-(5-изобутил-4-метилтиофен-2-ил)-[1,3,4]оксадиазол-2-ил]-6-метилфенокси}-2-гидроксипропил)-2-гидроксиацетамид
и соли этих соединений.
Соединения формулы (I) и их фармацевтически приемлемые соли могут быть использованы в качестве лекарственных средств, например, в форме фармацевтических композиций для энтерального или парентерального введения.
Получение фармацевтических композиций может осуществляться методом, известным любому специалисту в области техники (см., например: Mark Gibson, Editor, Pharmaceutical Preformulation and Formulation, IHS Health Group, Englewood, CO, USA, 2001; Remington, The Science and Practice of Pharmacy, 20th Edition, Philadelphia College of Pharmacy and Science) посредством введения соединений формулы (I) или их фармацевтически приемлемых солей, необязательно в комбинации с другими терапевтически полезными субстанциями, в лекарственно вводимую форму вместе с соответствующим, нетоксичным, инертным, фармацевтически приемлемым твердым или жидким веществом, используемым в качестве носителя, и, если необходимо, стандартными фармацевтическими наполнителями.
Фармацевтические композиции, включающие соединение формулы (I), применяются для профилактики и/или лечения болезней и заболеваний, ассоциируемых с активированной иммунной системой.
Такие болезни или заболевания выбирают из группы, включающей: отторжение пересаженных органов, тканей или клеток; болезни «трансплантат против хозяина», возникающие при трансплантации; аутоиммунные синдромы, включая ревматоидный артрит; системную красную волчанку; антифосфолипидный синдром; тироидит Хашимото; лимфотический тироидит; рассеянный склероз; тяжелую псевдопаралитическую миастению; диабет типа I; увеит (воспаление сосудистой оболочки глаза); эписклерит; склерит; болезнь Кавасаки, увеоритинит; задний увеит; увеит, связанный с болезнью Бехчета; синдром увеоменингита; аллергический энцефаломиелит; хроническую аллотрансплантатную васкулопатию; постинфекционные аутоиммунные болезни, включая ревматическую лихорадку и постинфекционный гломерулонифрит; воспалительные и гиперпролиферативные кожные болезни; псориаз; псориатический артрит; атопический дерматит; миопатию; миозит; остеомиелит; контактный дерматит; экзематозный дерматит; себоррейный дерматит; плоский лишай; пузырчатку; буллезную пузырчатку; врожденный буллезный эпидермолиз; крапивницу; ангиодему; васкулит; эритему; кожную эозинофилию; угри; склеродерму; гнездную алопецию; кератоконьюктивит; хронический двухсторонний коньюктивит; кератит; герпический кератит; эпителиальную дистрофию роговицы; лейкому роговицы; глазную пузырчатку; язву Мурена; язвенный керотит; склерит; офтальмопатию Гравса; синдром Вогта-Коунаги-Харада; саркоидоз; сенную лихорадку; обратимую обструктивную болезнь дыхательных путей; бронхиальную астму; аллергическую астму; врожденную астму; полученную извне астму; пылевую астму; хроническую или застарелую астму; позднюю астму и гипервосприимчивость дыхательных путей; бронхиолит; бронхит; эндометриоз; орхит; язву желудка; ишемические болезни кишечника; воспалительные болезни кишечника; некротический энтероколит; повреждения кишечного тракта, связанные с термальными ожогами; болезнь брюшины; проктит; эозинофильный гастроэнтерит; мастоцитоз; болезнь Крона; язвенный колит; сосудистые повреждения, вызванные ишемической болезнью и тромбозом; атеросклероз; тучное сердце; миокардит; инфаркт миокарда; синдром воспаленной аорты; общий упадок сил, вызванный вирусной болезнью; тромбоз сосудов; мигрень; ринит; экзему; интерстициальный нефрит; IgA-индуцированную нефропатию; синдром Гудрасчера; гемолитико-уремический синдром; диабетическую нефропатию; гломерулосклероз; гломерулонефрит; табулоинтерстициальный нефрит; интерстициальный цистит; дерматомиозит; синдром Гийена-Барре; болезнь Миньера; полиневрит; мультиплетный неврит; миелит; мононеврит; радикулопатию; гипертиоридизм; Базедову болезнь; тиротоксикоз; беспримесную красноклеточную аплазию; апластическую анемию; гипопластическую анемию; идиопатическую тромбоцитопеническую пурпуру; аутоиммунную гемолитическую анемию; аутоиммунную тромбоцитопению; агранулоцитоз; злокачественную анемию; мегалобластическую анемию; анеритроплазию; остеопороз; фиброидное легкое; идиопатическую интерстициальную пневмонию; дерматит; лейкодерму vulgaris; диффузную кератому vulgaris; фотоаллергическую чувствительность; кожную Т-клеточную лимфому; нодозный полиартрит; хорею Хантингтона; хорею Сиденхама; миокардоз; миокардит; склеродерму; гранулему Вегенера; синдром Шегрена; адипоз; эозинофильный фасцит; повреждения десен, периодонта, альвеольной соединительной ткани, зубной субстанции при лечении; мужскую очаговую алопецию или старческую алопецию; мускульную дистрофию; пиодерму; синдром Сезари; гипофизит; хроническую недостаточность надпочечников; болезнь Аддисона; ишемически-реперфузионное повреждение органов, имеющее место при хранении; эндотоксический шок; псевдомембранный колит; колит, вызываемый лекарством или радиацией; острую ишемическую почечную недостаточность; хроническую почечную недостаточность; рак легкого; злокачественность лимфоидного происхождения; острую или хроническую лимфотическую лейкемию; лимфому; энфизему легких; катаракту; сидероз; воспаление сетчатой оболочки глаза; старческую пятнистую дегенерацию; рубцевание стекловидного тела; щелочной ожог роговицы; дерматитную эритему; буллезный дерматит; цементный дерматит; воспаление десен; периодонтит; сепсис; панкреатит; болезнь периферийных артерий; карциогенез; твердые раковые опухоли; метастаз карциномы; гепербаропатию; аутоиммунный гепатит; первичный цирроз печени; склеротический холангит; частичную резекцию печени; острый некроз печени; цирроз; алкогольный цирроз; печеночную недостаточность; скоротечную печеночную недостаточность; скрытую печеночную недостаточность; и "нацеленную на хроническую" печеночную недостаточность.
Предпочтительные болезни и заболевания, подлежащие лечению и/или профилактике с помощью соединений формулы (I), выбирают из группы, включающей отторжение пересаженных органов таких, как почка, печень, сердце, легкое, поджелудочная железа, роговица и кожа; болезни «трансплантат против хозяина», возникающие при трансплантации клеток спинного мозга; аутоиммунные синдромы, включающие ревматоидный артрит, рассеянный склероз, воспалительные заболевания кишечника такие, как болезнь Крона и язвенный колит, псориаз, псориатический артрит, тироидит такой, как тироидит Хашимото, увеоретинит; атопические болезни такие, как ринит, коньюктивит, дерматит; астму; диабет типа I; постинфекционные аутоиммунные болезни, включая ревматоидную лихорадку, и постинфекционный гломерулонефрит; твердые раковые опухоли и опухолевое метастазирование.
Особенно предпочтительные болезни или заболевания, подлежащие лечению и/или профилактике с помощью соединений формулы (I), выбирают из группы, включающей отторжение пересаженных органов таких, как почка, печень, сердце и легкое; болезнь «трансплантат против хозяина», возникающую при трансплантации клеток спинного мозга; аутоиммунные синдромы, включающие ревматоидный артрит, рассеянный склероз, псориаз, псориатический артрит, болезнь Крона и тироидит Хашимото; и атопический дерматит.
Настоящее изобретение относится также к способу профилактики или лечения болезни или заболевания, упомянутых в описании выше, заключающемуся во введении субъекту фармацевтически активного количества соединения формулы (I).
Кроме того, соединения формулы (I) также применяются в комбинации с одним или несколькими иммуномоделирующими агентами, используемыми для профилактики и/или лечения болезней или заболеваний, упомянутых в описании выше. Согласно предпочтительному варианту по изобретению названные агенты выбираются из группы, включающей иммуносупрессанты, кортикостероиды, НПВП, цитотоксические лекарства, ингибиторы молекулярной адгезии, цитокины, ингибиторы цитокинов, антагонисты рецептора цитокина и рекомбинантные рецепторы цитокина.
Настоящее изобретение относится также к применению соединения формулы (I) для получения фармацевтической композиции, необязательно для применения в комбинации с одним или несколькими иммуномоделирующими агентами, используемыми для профилактики и/или лечения болезней или заболеваний, упомянутых в описании выше.
Соединения формулы (I) могут быть получены методами, приведенными ниже, методами, приведенными в примерах, или аналогичными методами. Оптимальные реакционные условия варьируются в зависимости от применяемых реагентов или растворителей, причем такие условия могут быть выбраны специалистом в области техники с помощью ряда оптимизирующих методик.
Соединения формулы (I) по настоящему изобретению могут быть получены согласно общей последовательности реакций, представленной ниже. Далее описаны только несколько из возможных синтетических путей, приводящих к соединениям формулы (I).
3
6
2
2
2
В случае когда А представляет собой -СО-СН=СН-, соединения формулы (I) могут быть получены путем реакции соединения структуры (1) с соединением структуры (2) в присутствии основания или кислоты. Функциональные группы, присутствующие в остатках R-R, могут нуждаться во временной защите или могут быть даже введены на дополнительных стадиях, которые следуют за реакцией конденсации. Соединения формулы (I), где А представляет собой -СО-СН-СН-, могут быть получены с помощью реакции соединения формулы (I), где А представляет собой -СО-СН=СН-, с водородом в присутствии катализатора такого, как Pd/C, Pt/C, PtO, и им подобного, в растворителе таком, как этанол, метанол, ТГФ, и им подобные, или в их смесях.
Соединение структуры (1) может быть получено с помощью реакции соединения структуры (3) с метиловым реагентом Гриньяра или путем обработки соединения структуры (4) 2 эквивалентами метиллития в растворителе таком, как диэтиловый эфир, ТГФ и им подобные, в температурном интервале от -20 до 50°С. Амид Вайнреба структуры (3) получают обработкой соединения структуры (4) гидрохлоридом N,O-диметилгидроксиламина в присутствии конденсирующего реагента такого, как ЭДК, ДЦК и им подобных (литература: М.Mentzel, H.M.R.Hoffmann, N-Methoxy-N-метил amides (Weinreb amides) in modern organic synthesis. Journal for Praktische Chemie/Chemiker-Zeitung 339 (1997), 517-524; J.Singh, N.Satyamurthi, I.S.Aidhen, The growing synthetic utility of Weinreb's amide. Journal for Praktische Chemie (Weinheim, Germany) 342 (2000) 340-347; V.К.Khiestkin, D.G.Mazhukin, Recent advances in the application of N,O-dialkylhydroxylamins in organic chemistry, Current Organic Chemistry, 7 (2003), 967-993).
2
3
2
3
3
5
4
10
Соединения формулы (I), представляющие собой производные 5-тиенил-[1,2,4]оксадиазола, получают с помощью реакции соединения структуры (5) в растворителе, таком как ксилол, толуол, бензол, пиридин, ДМФ, дихлорэтан, уксусная кислота, трифторуксусная кислота и им подобные, при комнатной или повышенной температурах в присутствии или отсутствии вспомогательных веществ таких, как кислоты (например, ТФК, уксусная кислота, НСl и им подобные), основания (например, NaH, NaOAc, NаСО, КСО, триэтилэтиламин и подобные им), тетраалкиламмонийные соли, или дегидратирующие агенты (например, оксалилхлорид, ангидрид карбоновой кислоты, РОСl, РСl, РO, молекулярные сита, гидроксид метоксикарбонилсульфамоилтриэтиламмония (реагент Бургесса) и т.д.) (литература, например: A.R.Gangloff, J.Litvak, Е.J.Shelton, D.Sperandio, V.R.Wang, K.D.Rice, Tetrahedron Lett., 42 (2001), 1441-1443; Т.Suzuki, К.Iwaoka, N.Imanishi, Y.Nagakura, K.Miyta, H.Nakahara, M.Ohta, T.Mase, Chem. Pharm. Bull., 47 (1999), 120-122; R.F.Poulain, A.L.Tartar, B.P.Deprez, Tetrahedron Lett., 42 (2001), 1495-1498; R.M.Srivastava, F.J.S.Oliveira, D.S.Machado, R.M.Souto-Maior, Synthetic Commun., 29 (1999), 1437-1450; Е.О.John, J.M.Shreeve, Inorganic Chemistry, 27 (1988), 3100-3104; В.Kaboudin, K.Navaee, Heterocycles, 60 (2003), 2287-2292).
2
3
Соединения структуры (5) могут быть получены с помощью реакции соединения структуры (4) с соединением структуры (6) в растворителе таком, как ДМФ, ТГФ, ДХМ и им подобные, в присутствии или отсутствии одного или более конденсирующих агентов таких, как ТБТУ, ДЦК, ЭКД, ГБТУ, HOBt, КДИ и им подобные, и в присутствии или отсутствии основания такого, как триэтиламин, основание Хюнига, NaH, КСО, и т.п. (литература, например: А.Hamze, J.-F.Hernandez, P.Fulcrand, J.Martinez, J.Org. Chem., 68 (2003) 7316-7321; и литература, цитируемая выше).
Соединения формулы (I), представляющие собой производные 3-тиенил-[1,2,4]оксадиазола, получают аналогичным образом (литература, например: С.Т.Brain, J.M.Paul, Y.Loong, P.J.Oakley, Tetrahedron Lett., 40 (1999) 3275-3278) с помощью реакции соединения структуры (7) с соединением структуры (8) и последующей циклизации соответствующего промежуточного гидроксиамидинового эфира.
2
3
2
3
Соединения структуры (6) и (7) могут быть получены с помощью реакции соединения структуры (9) и (10), соответственно, с гидроксиламином или одной из его солей в растворителе таком, как метанол, этанол, пиридин и им подобном, в присутствии или отсутствие основания такого, как NаСО, КСО, трет-бутилат калия, триэтиламин и им подобные (литература, например: Т.Suzuki, К.Iwaoka, N.Imanishi, Y.Nagakura, К.Miyta, H.Nakahara, M.Ohta, T.Mase, Chem. Pharm. Bull., 47 (1999), 120-122; J.Cui, D.Crich. D.Wink, M.Lam, A.L.Rheingold, D.A.Case, W.T.Fu, Y.Zhou, M.Rao, A.J.Olson, M.E.Johnson, Bioorg. Med. Chem., 11 (2003), 3379-3392; R.Miller, F.Lang, Z.J.Song, D.Zewge, WO 2004/035538 (Merck & Co., Inc., USA); B.Kaboudin, K.Navaee, Heterocycles. 60 (2003), 2287-2292).
3
6
х
3
6
5
В зависимости от природы функциональных групп, присутствующих в остатках R-R в структурах (2), (5), (6), (8) и (9), эти функциональные группы могут нуждаться во временной защите. Подходящие защитные группы известны специалистам в области техники и включают, например: бензильную или триалкилсилильную группу для защиты спирта, кетальную группу для защиты диола, и т.д. Эти защитные группы могут использоваться в соответствии с известными методами (например, Т.W.Greene, P.G.M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 3 Edition, Wiley New York, 1991; P.J.Kocienski, Protecting Groups, Thieme Stuttgart, 1994). Альтернативно, нужные остатки R-R, в частности R, могут быть также введены на поздних стадиях, которые следуют за конденсацией тиофеновых соединений структуры (1), (4), (7) или (10) с фенильными производными структуры (2), (6), (8) или (9) с использованием соответствующего предшественника соединения структуры (2), (6), (8) и (9). Фенильные соединения структуры (2), (6), (8) и (9) или их предшественники либо коммерчески доступны, либо могут быть получены согласно методам, известным специалистам из области техники.
3
4
4
2
5
3
2
5
Соединения формулы (I), представляющие собой производные 3-тиенил-[1,2,4]оксадиазола или 2-тиенил-[1,3,4]тиадиазола, получают аналогично с помощью реакции соединения структуры (4) с гидразином (с использованием конденсирующего реагента такого, как ТБТУ, ДЦК, ЭКД, ГБТУ, HOBt, РуБОФ КДИ и т.п) с образованием соединения структуры (11), которое затем вводят в реакцию конденсации с соединением структуры (8), получая соединение структуры (12). Соединение структуры (12) может также быть получено посредством обратной реакционной последовательности, например, начиная с конденсации соединения структуры (8) с гидразином, а затем ввода в реакцию соответствующего промежуточного производного гидразида с соединением структуры (4). Дегидратация соединения структуры (12) с образованием нужного производного 2-тиенил-[1,3,4]оксадиазола осуществляется путем обработки соединения структуры (12) с помощью такого реагента, как РОСl, ССl или СВr в комбинации с трифенилфосфином, PO, реагентом Бургесса и им подобными в растворителе таком, как толуол, ацетонитрил, диоксан, ТГФ или СНСl, в температурном интервале от 20 до 120°C с использованием или без использования микроволнового облучения (литература, например: М.A.Garcia, S.Martin-Santamaria, М.Cacho, F.Moreno de la Llave, М.Julian, A.Martinez, B. De Pascual-Teresa, A.Ramos, J.Med. Chem., 48 (2005) 4068-4075; С.Т.Brain, J.М.Paul, Y.Loong, P.J.Oakley, Tetrahedron Lett., 40 (1999) 3275-3278). Подобным же образом, производные 2-тиенил-[1,3,4]тиадизола получают циклизацией соединения структуры (12) с реагентом Лавессона, необязательно в комбинации с PS, в отсутствие или присутствии растворителя такого, как пиридин, толуол, ТГФ или ацетонитрил, при повышенных температурах с использованием или без использования микроволнового облучения (литература, например: А.А.Kiryanov, P.Sampson, A.J.Seed, J.Org. Chem., 66 (2001) 7925-7929).
3
5
2
2
5
Соединения формулы (I), представляющие собой производные 5-тиенилоксазола или 5-тиенилтиазола, получают с помощью реакции соединения структуры (13) либо с РОСl, РСl, I в комбинации с трифенилфосфином и триэтиламином, реагентом Бургесса, ангидридом трифторуксусной кислоты в растворителе таком, как толуол, бензол, диоксан или ТГФ, при температурах в интервале от 20 до 120°С, либо с реагентом Лавессона, необязательно в комбинации с PS, в отсутствие или присутствии растворителя такого, как пиридин, толуол, ТГФ или ацетонитрил, при повышенных температурах с использованием или без использования микроволнового облучения, как описано выше (литература, например: N.Sato, Т.Shibata, M.Jitsuoka, Т.Ohno, Т.Takahashi, Т.Hirohashi, Т.Kanno, H.Iwaasa, A.Kanatani, Т.Fukami, Takehiro, Bioorg. & Med. Chem. Lett., 14 (2004) 1761-1764). Соединения структуры (13) получают с помощью реакции соединения структуры (14) с соединением структуры (9). Аминокетонная структура (14) может быть получена из соединения структуры (1) методом, описанным в литературе (например, J.L.LaMattina, J.Heterocyclic Chem., 20 (1983) 533-538; M.Pesson, M.Antoine, P.Girard, J.L.Benichon, S.Chabassier, P.De Lajudie, S.Patte, F.Roquet, G.Montay, Eur. J.Med. Chem., 15 (1980) 263-268). Соединения формулы (I), представляющие собой производные 2-тиенилоксазола или 2-тиенилтиазола, получают аналогичным образом из соединения структуры (15) и соединения структуры (4).
Альтернативно, связи между тиофеновым или фенильным кольцом и центральным 5-членным гетероароматическим кольцом также могут быть образованы с использованием катализируемой палладием конденсации.
Соединения структуры (4) могут быть получены посредством алкилирования тиофен-2-карбоновой кислоты структуры (16) согласно литературным методикам (например, D.W.Knight, A.P.Nott, J.Chem. Soc. Perkin Trans., 1 1983 791-794). Тиофен-2-карбоновые кислоты структуры (16) или их метиловый или этиловый эфиры либо коммерчески доступны, либо могут быть получены согласно литературным методикам (например, S.Gronowitz, Т.Klingstedt, L.Svensson, U.Hansson, Lipids, 28 (1993) 889-897).
a
b
Соединения структуры (4) могут быть также получены с помощью реакции соединения структуры (17), где R представляет собой метил, этил, трет-бутил и т.п. с 2,4,6-триалкенилциклотрибороксаном в уловиях реации Судзуки (литература, например: F.Kerins, D.F.O'Shea, J.Org. Chem., 67 (2002) 4968-4971) с получением соединения структуры (18), где R представляет собой метил, этил, трет-бутил и им подобные, и R и R оба независимо представляют собой водород, метил, этил и им подобные, которое при гидрировании с последующим расщеплением сложного эфира превращается в соединение структуры (4). Соединения структуры (17) либо коммерчески доступны, либо могут быть получены согласно литературным методикам.
2
c
3
Соединения структуры (4), где R представляет собой метил или этил, могут быть также получены с помощью реакции соединения структуры (19), где R представляет собой этил или н-пропил, с РОСl в ДМФ в условиях реакции Вилсмейера с образованием соединения структуры (20) (литература, например: G.Alvernhe, D.Greif, В.Langlois, A.Laurent, I.Le Drean, M.Pulst, A.Selmi, M.Weissenfels, Bull. Soc. Chim. Fr., 131 (1994) 167-172). Соединения структуры (20) обрабатывают эфиром меркаптоуксусной кислоты в присутствии такого основания, как NaH, NaOEt, NaOMe, трет-бутоксид калия, и им подобные, в ТГФ, диоксане, ДМФ, этаноле, метаноле и им подобных, или их смесях, с образованием промежуточной структуры (21). Циклизация в щелочных условиях с использованием безводных оснований таких, как NaOMe, NaOEt, KOtBu, ДБУ и им подобных, в растворителе таком, как метанол, этанол, ТГФ, ДМФ и им подобные, или их смеси, предпочтительно при повышенных температурах, с последующим омылением с использованием водной щелочи, такой как NaOH, водный раствор LiOH, водный раствором КОН и им подобные, или кислоты такой, как НСl, ТФК и им подобные, в растворителе таком, как вода, этанол, метанол, ТГФ и им подобные, или их смеси, приводит к соединениям структуры (4). Обработка соединения структуры (20) меркаптоацетонитрилом, который может быть получен in situ из S-цианометилового эфира тиоуксусной кислоты, приводит к соединению структуры (10).
Методы, приводящие к превращению соединения структуры (4) в соединение структуры (10), или наоборот, известны специалистам в области техники.
Примеры
Следующие примеры иллюстрируют изобретение, не лимитируя его объема.
1 H
13
R
254
Все температуры измерены в °C. Соединения охарактеризованы с помощью -ЯМР (300 МГц) или С-ЯМР (75 МГц) (Varian Oxford; химические сдвиги приведены в м.д. относительно используемого растворителя; мультиплеты: s = одиночный, d = дублет, t = триплет; p = пентлет, hex = гексет, hept = гептет, m = мультиплет, br = расширенный, константы сопряжения приведены в Гц); с помощью ЖХ-МС (Finnigan Navigator with HP 1100 Binary Pump и DAD, колонка: 4,6×50 мм, Zorbax SB-AQ, 5 мкм, 120 Å, градиент: 5-95% ацетонитрила в воде, 1 мин, с 0,04% трифторуксусной кислоты, скорость течения: 4,5 мл/мин), t (время удерживания) приведено в мин; с помощью ТСХ (ТСХ-пластины от фирмы Merck, Silica gel 60 F); или температурой плавления. Соединения очищают с помощью препаративной ВЭХЖ (колонка: X-terra RP18, 50×19 мм, 5 мкм, градиент: 10-95% ацетонитрила в воде, содержащих 0,5% муравьиной кислоты) или с помощью СДЖХ (жидкостная хроматография среднего давления) (Labomatic MD-80-100 насос. Linear UVIS-201 детектор, колонка: 350×18 мм, Labogel-RP-18-5s-100, градиент: от 10% метанола в воде до 100% метанола).
Аббревиатуры (используемые в данном описании):
R
водн. - водный, БСА - бычий сывороточный альбумин, Вu - бутил, КХ - колоночная хроматография, СДИ - карбонилдиимидазол, ДБУ - 1,8-диазабицикло[5.4.0]ундец-7-ен, ДЦК - дициклогексилкарбодиимид, ДХМ - дихлорметан, ДИРЭА - диизопропилэтиламин, основание Хюнига, этилдиизопропиламин, ДМЭ - 1,2-диметоксиэтан, ДМФ - диметилформамид, ДМСО - диметилсульфоксид, ЕА - этилацетат, ЭДК - N-(3-диметиламинопропил)-N'-этилкарбодиимид, Et - этил, EtOH - этанол, ч - час(ы), ГБТУ - гексафторфосфат O-(бензотриазол-1-ил)-N',N,N',N'-тетраметилурония, ГОБТ - 1-гидроксибензотриазол, ВЭХЖ - высокоэффективная жидкостная хроматография, KOtBu - трет-бутоксид калия, ЖХ-МС - жидкостная хроматография - массспектрометрия, ЛДА - диизопропиламид лития, Лит. - литературная ссылка Me - метил, мин - минута(ы), СДЖХ - жидкостная хроматография среднего давления, NaOAc - ацетат натрия, N-MO - N-метилморфолин-N-оксид, орг. - органический, Ph - фенил, преп. - препаративный РуБОФ - гексафторфосфат бензотриазол-1-илокси-трис-пирролидинфосфония, КТ - комнатная температура, насыщ. - насыщенный, S1P - сфингозин 1-фосфат, ТБМЭ - трет-бутилметиловый эфир, ТБТУ - тетрафторборат 2-(1 Н-бензотриазол-1-ил)-1,2,3,3-тетраметилурония, ТФК - трифторуксусная кислота, ТГФ - тетрагидрофуран, ТСХ - тонкослойная хроматография, t - время удерживания.
5-Этилтиофен-2-карбоновая кислота
4
Раствор тиофенкарбоновой кислоты (4,00 г, 30,9 ммолей) в ТГФ (24 мл) добавляют по каплям через шприц к перемешиваемому раствору литийдиизопропиламида (32,5 мл, 2-молярный раствор в толуоле) в ТГФ (40 мл), охлажденному до температуры -78°С. Температуру реакции поддерживают при -78°С в течение 10 мин, после чего добавляют йодэтан (4,87 г, 30,9 ммолей). Смесь перемешивают при температуре -78°С в течение 1 ч и затем оставляют самопроизвольно нагреваться до комнатной температуры в течение ночи, после чего реакцию гасят добавлением воды. Затем смесь подкисляют и трижды экстрагируют диэтиловым эфиром. Органические экстракты высушивают над MgSO, фильтруют и выпаривают. Сырой продукт очищают с помощью обращенно-фазовой СДЖХ на силикагеле, получая названное в заголовке соединение (1,10 г) в виде коричневатого твердого вещества;
R
3
1 H
ЖХ-МС: t=0,80 мин,  ЯМР (CDCl): δ 1.34 (t, J=7,3 Гц, 3 Н), 2,90 (q, J=7,6 Гц, 2 Н), 6,84 (d, J=3,5 Гц, 1 Н), 7,73 (d, J=3,8 Гц, 1 Н).
5-н-Пропилтиофен-2-карбоновая кислота
Названное в заголовке соединение получают аналогично синтезу 5-этилтиофен-2-карбоновой кислоты, исходя из 2-тиофенкарбоновой кислоты и 1-йодпропана;
R
3
1 Н
ЖХ-МС: t=0.87 мин,  ЯМР (CDCl): δ 0,99 (t, J=7,0 Гц, 3 Н), 1,74 (гексет, J=7,3 Гц, 2 Н), 2,83 (t, J=7,6 Гц, 2 Н), 6,82 (d, J=3,5 Гц, 1 Н), 7,73 (d, J=3,8 Гц, 1 Н).
5-н-Бутилтиофен-2-карбоновая кислота
Названное в заголовке соединение получают аналогично синтезу 5-этилтиофен-2-карбоновой кислоты, исходя из 2-тиофенкарбоновой кислоты и 1-йодбутана;
R
ЖХ-МС: t=0,92 мин.
5-Изобутилтиофен-2-карбоновая кислота
4
К раствору 2-тиофен-карбоновой кислоты (4,16 г, 32,1 ммолей) в ТГФ (200 мл) медленно добавляют трет-бутиллитий (49 мл, 1,7-молярный раствор в пентане, 83,6 ммолей) при температуре -78°С. Смесь перемешивают при -78°С в течение 30 мин, после чего осторожно добавляют изобутилбромид (22,7 г, 160,7 ммолей) и перемешивают при температуре -78°С в течение 5 ч, а затем при комнатной температуре в течение 16 ч. Реакционную смесь гасят добавлением воды (400 мл). Смесь затем подкисляют и экстрагируют этилацетатом. Органический экстракт высушивают над MgSO, фильтруют и выпаривают. Сырой продукт очищают с помощью обращенно-фазовой СДЖХ на силикагеле, получая названное в заголовке соединение (1,67 г) в виде коричневатого масла;
R
3
1 Н
ЖХ-МС: t=0,91 мин,  ЯМР (СDСl): δ 0,96 (d, J=6,7 Гц, 6 Н), 1,94 (гептет, J=6,7 Гц, 1 Н), 2,72 (d, J=7,0 Гц, 2 Н), 6,80 (d, J=3,8 Гц, 1 Н), 7,73 (d, J=3,8 Гц, 1 Н).
5-(2-Метилпропенил)-4-метилтиофен-2-карбоновая кислота
2
3
3
4
3
4
а) К раствору метил 5-бром-4-метилтиофен-2-карбоксилата (3,65 г, 15,53 ммолей) в диметоксиэтане (30 мл) добавляют вначале 2,4,6-трис-(2-метилпропенил)циклотрибороксан (5,04 г, 15,53 ммолей) (F. Kerins, D.F.O'Shea, J.Org. Chem., 67 (2002), 4968-4971), а затем 2-молярный водный раствор КСО (12 мл). Раствор дегазируют, продувают аргоном и добавляют Рd(РРh) (366 мг, 0,317 ммолей). Смесь перемешивают при температуре 80°С в течение 10 ч, после чего охлаждают до комнатной температуры, разбавляют диэтиловым эфиром (50 мл) и промывают насыщенным водным раствором NаНСО (дважды по 30 мл). Органический экстракт высушивают над MgSO, фильтруют и концентрируют, получая метиловый эфир 4-метил-5-(2-метилпропенил)тиофен-2-карбоновой кислоты (4,08 г) в виде желтого масла;
R
+
ЖХ-МС: t=1,04 мин, [М+1]=211,04.
4
б) Раствор метилового эфира 4-метил-5-(2-метилпропенил)тиофен-2-карбоновой кислоты (4,08 г, 19,4 ммолей) в метаноле (33 мл) обрабатывают 2-нормальным водным раствором LiOH (10 мл). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 ч, а затем при температуре 45°С в течение 3 ч. Реакционную смесь разбавляют диэтиловым эфиром, органический слой отделяют и экстрагируют водой. Объединенную водную фазу подкисляют 1-молярным водным раствором НСl и дважды экстрагируют диэтиловым эфиром. Объединенные вторичные органические экстракты высушивают над MgSO, фильтруют и концентрируют, получая 4-метил-5-(2-метилпропенил)тиофен-2-карбоновую кислоту (3,05 г) в виде грязно-белого твердого вещества;
R
+
ЖХ-МС: t=0,92 мин, [M+1]=196,98.
1 -(5-Изобутилтиофен-2-ил)этанон
4
К раствору 5-изобутилтиофен-2-карбоновой кислоты (550 мг, 2,99 ммолей) в диэтиловом эфире (20 мл) медленно добавляют раствор метиллития (3,75 мл, 1,6-молярный раствор в диэтиловом эфире) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 1 ч, а затем дважды осторожно промывают водой, высушивают над MgSO, фильтруют и выпаривают, получая названное в заголовке соединение (336 мг) в виде слегка желтого масла;
R
+
ЖХ-МС: t=0,91 мин, [M+1]=183,07.
4,N-Дигидрокси-3,5-диметилбензамидин
Названное в заголовке соединение получают из коммерчески доступного 4-гидрокси-3,5-диметилбензонитрила согласно литературной методике (например, Е.Meyer, А.С.Joussef, Н.Gallardo, Synthesis, 2003, 899-905);
1 H
3
ЯМР (CDOD): δ 7,20 (s, 2 H), 2,20 (s, 6 H).
4-Аллилокси-N-гидрокси-3,5-диметилбензамидин
Названное в заголовке соединение получают посредством аллилирования коммерчески доступного 4-гидрокси-3,5-диметилбензонитрила аллилбромидом в присутствии NaOH в изопропаноле при комнатной температуре. Нитрил превращают затем в гидроксиамидин согласно литературным методикам (например, Е.Меуеr, А.С.Joussef, Н.Gallardo, Synthesis, 2003, 899-905);
1 H
3
ЯМР (CDOD): δ 7,27 (s, 2 Н), 6,10 (m, 1 Н), 5,42 (m, 1 Н), 5,26 (m, 1 H), 4,31 (dt, J=5,6, 1,5 Гц, 2 H), 2,29 (s, 6 H).
3-Этил-4,N-дигидрокси-5-метилбензамидин
R
Названное в заголовке соединение получают из коммерчески доступного 2-этил-6-метилфенола, используя методики из следующих литературных источников (G.Trapani, A.Latrofa, M.Franco, С.Altomare, E.Sanna, M.Usala, G.Biggio, G.Liso, J.Med. Chem., 41 (1998) 1846-1854; А.К.Chakraborti, G.Kaur, Tetrahedron, 55 (1999) 13265-13268; E.Meyer, A.C.Joussef, H.Gallardo, Synthesis, 2003, 899-905); ЖХ-МС: t=0.55 мин;
1 Н
6
ЯМР (D-ДМСО): δ 9,25 (s расширенный, 1 Н), 7,21 (s, 2 H), 5,56 (s, 2 H), 2,55 (q, J=7,6 Гц, 2 H), 2,15 (s, 3 Н), 1,10 (t, J=7,6 Гц, 3 Н).
4-Аллилокси-3-этил-N-гидрокси-5-метилбензамидин
Названное в заголовке соединение получают аллилированием 3-этил-4-гидрокси-5-метилбензальдегида, который, в свою очередь, получают из 2-этил-6-метилфенола, используя следующие литературные методики (см. получение 3-этил-4,N-дигидрокси-5-метилбензамидина). Альдегид превращают затем в соответствующий гидроксиамидин согласно литературным методикам (см. 3-этил-4,N-дигидрокси-5-метилбензамидин);
R
3
+
1 Н
ЖХ-МС: t=0,72 мин, [M+1]=235,09;  ЯМР(СDОD): δ 7,31 (s, 1  H), 7,29 (s, 1 H), 6,10 (m, 1 H), 5,43 (dd, J=17,0, 1,5 Гц, 1 H), 5,27 (dd, J=10,3, 1.2 Гц, 1 H), 4,81 (s расширенный, 3 Н), 4,31 (d, J=5,6 Гц, 2 H), 2,67 (q, J=7,6 Гц, 2 H), 2,30 (s, 3 H), 1,23 (t, J=7,6 Гц, 4 H).
3,5-Диэтил-4,N-дигидроксибензамидин
Названное в заголовке соединение получают из коммерчески доступного 2,6-диэтиланилина, используя следующие литературные методики (G.G.Ecke, J.Р.Napolitano, A.H.Filbey, A.J.Kolka, J.Org. Chem., 22 (1957) 639-642; и литературные ссылки для синтеза 3-этил-4,N-дигидрокси-5-метилбензамидина).
4-Аллилокси-N-гидрокси-2-метоксибензамидин
Названное в заголовке соединение получают из коммерчески доступного 4-гидрокси-2-метоксибензальдегида, используя следующие литературные методики (ссылки даны для синтеза 3-этил-4,N-дигидрокси-5-метилбензамидин);
R
6
+
1 H
ЖХ-МС: t=0,64 мин; [M+1]=223,24;  ЯМР (D-ДМСО): δ 9,33 (s расширенный, 1 Н), 7,30 (d, J=8,2 Гц, 1 Н), 6,60 (d, J=2,3 Гц, 1 Н), 6,50 (dd, J=2,3, 8,2 Гц, 1 Н), 6,10-5,94 (m, 1 Н), 5,50 (s, 2 H), 5,40 (d, J=17,0 Гц, 1 Н), 5,24 (d, J=10,6 Гц, 1 Н), 4,57 (d, J=4,7 Гц, 2 H), 3,76 (s, 3 Н).
Гидразид 4-аллилокси-3,5-диметилбензойной кислоты
2
4
2
4
а) Смесь 4-бром-2,6-диметилфенола (20,1 г, 100 ммолей) и аллилхлорида (32,7 г, 428 ммолей) в 3-нормальном водном растворе NaOH (100 мл) и изопропаноле (250 мл) перемешивают при температуре 60°С в течение 15 ч, после чего разбавляют 1-нормальным водным раствором NaOH (100 мл). Смесь экстрагируют диэтиловым эфиром (300 мл, 150 мл) и объединенные органические экстракты промывают 1-нормальным водным раствором. NaOH (дважды по 100 мл), 1-молярным водным раствором NaHPO (50 мл), высушивают над NaSO, фильтруют и концентрируют, получая 2-аллилокси-5-бром-1,3-диметилбензол (23,6 г) в виде желтого масла,
R
+
ЖХ-МС: t=1,08 мин, [M+1]=241,20.
2
4
R
б) К раствору 2-аллилокси-5-бром-1,3-диметилбензола (23,6 г, 98,0 ммолей) в ТГФ (150 мл) добавляют при температуре -75°С раствор н-BuLi (90 мл, 1,5-молярный раствор в диэтиловом эфире). Поддерживая температуру смеси при -75°С, перемешивают ее в течение 30 мин, а затем переносят с помощью сдвоенного шприца в охлажденный (0°С) раствор диметилкарбоната (21,4 г, 238 ммолей) в ТГФ (90 мл). Смесь перемешивают в течение 2 ч при 0°С, затем нагревают до комнатной температуры в течение 15 ч. Растворитель выпаривают из смеси, растворяют ее в этаноле и затем вновь выпаривают из этанола (200 мл), чтобы выделить наибольшее количество бутилацетата, являющегося побочным продуктом. Смесь переносят в 2-нормальный водный раствор LiOH (150 мл) и EtOH (200 мл) и перемешивают при комнатной температуре в течение 2 ч, а затем при 60°С в течение 1 ч. Этанол выпаривают, а оставшуюся смесь разбавляют 0,5-нормальным водным раствором NaOH и экстрагируют диэтиловым эфиром (200 мл). Органические экстракты промывают 1-молярным водным раствором NaOH (пять раз по 50 мл) и объединенные водные промывные растворы экстрагируют эфиром (100 мл). Водную фазу подкисляют 25%-ным водным раствором НСl и экстрагируют ДХМ (пять раз по 50 мл). Объединенные органические экстракты высушивают над NaSO, фильтруют, выпаривают и высушивают остаток в вакууме при температуре 60°С в течение 15 ч, получая 4-аллилокси-3,5-диметилбензойную кислоту (8,0 г) в виде желто-коричневого твердого вещества. ЖХ-МС: t=0,90 мин.
3
2
4
в) К раствору 4-аллилокси-3,5-диметилбензойной кислоты (5,26 г, 25,5 ммолей) в СНСl (75 мл) добавляют при комнатной температуре тионилхлорид (7,5 мл, 103 ммолей). Смесь нагревают с обратным холодильником в течение 2 ч, а затем растворитель выпаривают, получая сырой хлорангидрид 4-аллилокси-3,5-диметилбензойной кислоты в виде коричневатого масла. К раствору хлорангидрида 4-аллилокси-3,5-диметилбензойной кислоты в ДХМ (50 мл) добавляют гидразин (75 мл 1-молярного раствора в ТГФ) в ДХМ (250 мл) при 0°С. Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 15 ч, разбавляют диэтиловым эфиром и экстрагируют 1-нормальным водным раствором НСl (75 мл, затем пять раз по 50 мл). Объединенные водные экстракты подщелачивают, добавляя 33%-ный водный раствор КОН, и экстрагируют ДХМ (пять раз по 50 мл). Объединенные ДХМ экстракты высушивают над NaSO, фильтруют и выпаривают, получая гидразид 4-аллилокси-3,5-диметилбензойной кислоты (5,39 г) в виде белого твердого вещества;
R
6
+
1 Н
ЖХ-МС: t=0,71 мин; [М+1]=221,20;  ЯМР (D-ДМСО): δ 2,22 (s, 6 H), 4,28-4,37 (m, 2 H), 4,39 (s, 2 H), 5,19-5,28 (m, 1 H), 5,36-5,47 (m, 1 H), 6,00-6,15 (m, 1 H), 7,49 (s, 2 H), 9,55 (s, 1 H).
Гидразид 4-бензилокси-3,5-диметилбензойной кислоты
Гидразид 4-бензилокси-3,5-диметилбензойной кислоты получают аналогично синтезу гидразида 4-аллилокси-3,5-диметилбензойной кислоты, исходя из 4-бензилокси-3,5-диметилбензойной кислоты;
R
+
ЖХ-МС: t=0,81 мин; [M+1]=271,41.
Гидразид 4-бензилокси-3-этил-5-метилбензойной кислоты
2
3
а) К раствору 3-этил-4-гидрокси-5-метилбензальдегида (34,9 г, 0,213 моля, полученного из 2-этил-6-метилфенола согласно литературной методики для синтеза 3-этил-4,N-дигидрокси-5-метилбензамидина) в ацетонитриле (350 мл) добавляют КСО (58,7 г, 0,425 моля) и бензилбромид (36,4 г, 0,213 моля). Смесь перемешивают при температуре 60°С в течение 2 ч, после чего охлаждают до комнатной температуры, разбавляют водой и дважды экстрагируют этилацетатом. Органические экстракты промывают водой и концентрируют, получая сырой 4-бензилокси-3-этил-5-метилбензальдегид (45 г) в виде оранжевого масла.
1 H
3
ЯМР (CDCl): δ 1,29 (t, J=7,5 Гц, 3 Н), 2,40 (s, 3 H), 2,77 (q, J=7,8 Гц, 2 Н), 4,90 (s, 2 H), 7,31-7,52 (m, 5 H), 7,62 (d, J=1,5 Гц, 1 Н), 7,66 (d, J=1,8 Гц, 1 Н), 9,94 (s, 1 H).
2
4
2
2
б) К смеси 4-бензилокси-3-этил-5-метилбензальдегида (132 г, 0,519 моля) и 2-метил-2-бутена (364 г, 5,19 моля) в трет-бутаноле (1500 мл) добавляют раствор NaHPO 2 HO (249 г, 2,08 моля) в воде (1500 мл). В эту смесь вносят порциями NaClO (187,8 г, 2,08 моля). При этом температуру реакционной смеси поддерживают ниже 30°С, удаляя образующийся газ. После окончательного добавления оранжевую 2-х-фазную смесь энергично перемешивают в течение 3 ч, после чего разбавляют ТБМЭ (1500 мл). Органический слой отделяют и промывают 20%-ным водным раствором NaHS (1500 мл) и водой (500 мл). Затем органическую фазу трижды экстрагируют 0,5-нормальным водным раствором NaOH (1000 мл), водную фазу подкисляют 25%-ным водным раствором НСl (500 мл) и дважды экстрагируют ТБМЭ (1000 мл). Эти органические экстракты объединяют и упаривают без досушивания, получая 4-бензилокси-3-этил-5-метилбензойную кислоту;
1 Н
6
ЯМР (D-ДМСО): δ 1,17 (t, J=7,5 Гц, 3 Н), 2,31 (s, 3 H), 2,67 (q, J=7,5 Гц, 2 Н), 4,86 (s, 2 H), 7,34-7,53 (m, 5 H), 7,68 (s, 2 H), 12,70 (s, 1 H).
в) 4-Бензилокси-3-этил-5-метилбензойную кислоту превращают в гидразид 4-бензилокси-3-этил-5-метилбензойной кислоты, применяя методику стадии в), используемую для синтеза гидразида 4-аллилокси-3,5-диметилбензойной кислоты;
R
+
ЖХ-МС: t=0,82 мин, [M+1]=285,44.
2,2-Диметил[1.3]диоксан-5-илметиловый эфир метансульфоновой кислоты
Названное в заголовке соединение получают, используя методики, приведенные в публикации: В.Xu, A.Stephens, G.Kirschenheuter, A.F.Greslin, X.Cheng, J.Sennelo, M.Cattaneo, M.L.Zighetti, A.Chen, S.-A.Kim, H.S.Kim, N.Bischofberger, G.Cook, K.A.Jacobson, J.Med. Chem., 45 (2002) 5694-5709.
Примеры
Пример 1
3
4
а) К раствору 5-этилтиофен-2-карбоновой кислоты (502 мг, 3,21 ммолей) и ДИПЭА (1,04 г, 8,03 ммолей) в ДХМ (16 мл) добавляют ТБТУ (1,13 г, 3,53 ммолей) при температуре 0°С. Смесь перемешивают при 0°С в течение 1 ч, после чего реакцию гасят добавлением воды (2 мл). Затем ДХМ выпаривают, а остаток разбавляют этилацетатом, промывают насыщенным водным раствором NаНСО и водой, высушивают над MgSO, фильтруют и выпаривают. Сырой продукт очищают посредством кристаллизации из ацетонитрила, получая 4,N-дигидрокси-3,5-диметилбензамидиновый эфир 5-этилтиофен-2-карбоновой кислоты (600 мг) в виде белого твердого вещества;
R
+
ЖХ-МС: t=0,94 мин, [M+1]=319,02.
б) Раствор 4,N-дигидрокси-3,5-диметилбензамидинового эфира 5-этилтиофен-2-карбоновой кислоты (600 мг, 1,88 ммолей) в диоксане (40 мл) перемешивают при температуре 100°С в течение 18 ч. Затем растворитель выпаривают, а остаток отделяют с помощью колоночной хроматографии на силикагеле, элюируя смесью гептан:этилацетат в соотношении 4:1 и получая 4-[5-(5-этилтиофен-2-ил)-[1,2,4]оксадиазол-3-ил]-2,6-диметилфенол (525 мг) в виде бледно-желтого масла;
R
+
ЖХ-МС: t=1,09 мин, [М+1]=301,11.
Пример 2
2,6-Диметил-4-[5-(5-пропилтиофен-2-ил)-[1,2,4]оксадиазол-3-ил]фенол получают аналогично примеру 1;
R
+
ЖХ-МС: t=1,10 мин, [M+1]=315,35.
Пример 3
4-[5-(5-Бутилтиофен-2-ил)-[1,2,4]оксадиазол-3-ил]-2,6-диметилфенол получают аналогично примеру 1;
R
+
ЖХ-МС: t=1,15 мин, [M+1]=329,15.
Пример 4
4-[5-(5-Изобутилтиофен-2-ил)-[1,2,4]оксадиазол-3-ил]-2,6-диметилфенол получают аналогично примеру 1;
R
+
ЖХ-МС: t=1,15 мин, [М+1]=329,09.
Пример 5
4
3
К раствору 4-[5-(5-этилтиофен-2-ил)-[1,2,4]оксадиазол-3-ил]-2,6-диметилфенола (79 мг, 0,263 ммолей) в изопропаноле (3 мл) и 3-нормальном водном растворе NaOH (0,6 мл) добавляют (R)-3-хлорпропан-1,2-диол (148 мг, 1,31 ммолей). Затем смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 ч и далее при температуре 65°С в течение 16 ч, после чего добавляют дополнительную порцию (R)-3-хлорпропан-1,2-диола (119 мг, 1,05 ммолей) и перемешивание продолжают при температуре 65°С в течение 24 ч. Реакционную смесь затем разбавляют водой и экстрагируют диэтиловым эфиром. Органические экстракты высушивают над MgSO, фильтруют и выпаривают. Сырой продукт очищают с помощью препаративной ТСХ, используя в качестве элюента ДХМ, содержащий 4% 7-нормального раствора NН в метаноле, и получая (2R)-3-{4-[5-(5-этилтиофен-2-ил)-[1,2,4]оксадиазол-3-ил]-2,6-диметилфенокси}пропан-1,2-диол в виде грязно-белого твердого вещества;
R
3
+
1 H
ЖХ-МС: t=0,99 мин; [M+1]=375,13;  ЯМР (CDCl): δ 7,83 (s, 2 H), 7,80 (d, J=3,8 Гц, 1 H), 6,93 (d, J=3,8 Гц, 1 H), 4,20-4,11 (m, 1 H), 3,97-3,93 (m, 1 H), 3,91 (dd, J=11,5, 4,3 Гц, 1 H), 3,85 (dd, J=11,5, 5,5 Гц, 1 H), 2,97 (q, J=7,5 Гц, 2 Н), 2,39 (s, 6 Н), 1,41 (t, J=7,5 Гц, 3 Н).
Примеры 6-12
Соединения следующих примеров получают аналогично примеру 5, исходя из примеров, указывающих на применение или (R)- или (S)-3-хлорпропан-1,2-диола:
Пример
Исходя из примера
R<sup>a</sup>
R<sup>b</sup>
ЖХ-МСt<sub>R</sub> (мин) [M+H]<sup>+</sup>
6
1
этил
<img file="00000053.tif" he="13" wi="24" img-content="undefined" img-format="tif" />
0,99
375,01
7
2
н-пропил
<img file="00000054.tif" he="13" wi="24" img-content="undefined" img-format="tif" />
1,03
389,20
8
2
н-пропил
<img file="00000055.tif" he="12" wi="23" img-content="undefined" img-format="tif" />
1,00
389,38
9
3
н-бутил
<img file="00000056.tif" he="12" wi="23" img-content="undefined" img-format="tif" />
1,04
403,40
10
3
н-бутил
<img file="00000057.tif" he="12" wi="23" img-content="undefined" img-format="tif" />
1,06
403,11
11
4
изобутил
<img file="00000058.tif" he="13" wi="24" img-content="undefined" img-format="tif" />
1,03
403,40
12
4
изобутил
<img file="00000059.tif" he="12" wi="22" img-content="undefined" img-format="tif" />
1,06
403,05
Пример 12
1 Н
3
ЯМР(СDСl): δ 0,98 (d, J=6,4 Гц, 6 Н), 1,96 (гептет, J=6,5 Гц, 1 H), 2,35 (s, 6 Н), 2,76 (d, J=7,0 Гц, 2 Н), 3,76-3,94 (m, 4 Н), 4,09-4,18 (m, 1 Н), 6,86 (d, J=3,5 Гц, 1 Н), 7,77 (d, J=3,5 Гц, 1 Н), 7,80 (s, 2 Н).
Пример 13
3
4
а) Смесь 4-[5-(5-этилтиофен-2-ил)-[1,2,4]оксадиазол-3-ил]-2,6-диметилфенола (367 мг, 1,22 ммолей) и эпихлоргидрина (565 мг, 6,10 ммолей) в изопропаноле (20 мл) и 3-нормальном водным растворе NaOH (6 мл) перемешивают при температуре 40°С в течение 15 ч. Смесь затем разбавляют диэтиловым эфиром, промывают насыщенным водным раствором NаНСО и водой, высушивают над MgSO, фильтруют и выпаривают. Сырой продукт очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле, элюируя смесью гептан:этилацетат в соотношении 9:1 и получая 3-(3,5-диметил-4-оксиранилметоксифенил)-5-(5-этилтиофен-2-ил)-[1,2,4]оксадиазол (123 мг) в виде бледно-желтого масла;
R
+
ЖХ-МС: t=1,15 мин, [M+1]=357,11.
3
б) Раствор 3-(3,5-диметил-4-оксиранилметоксифенил)-5-(5-этилтиофен-2-ил)-[1,2,4]оксадиазола (123 мг, 0,345 ммоля) в 7-нормальном растворе NН в метаноле (10 мл) перемешивают при температуре 45°C в течение 16 ч. Растворитель выпаривают и остаток отделяют с помощью препаративной ТСХ, используя в качестве элюента ДХМ, содержащий 6% 7-нормального NH3 в метаноле, и получая 1-амино-3-{4-[5-(5-этилтиофен-2-ил)-[1,2,4]оксадиазол-3-ил]-2,6-диметилфенокси}пропан-2-ол (35 мг) в виде белого твердого вещества;
R
+
ЖХ-МС: t=0,84 мин, [M+1]=374,14.
4
в) К охлажденному (0°С) раствору 1-амино-3-{4-[5-(5-этилтиофен-2-ил)-[1,2,4]оксадиазол-3-ил]-2,6-диметилфенокси}пропан-2-ола (32 мг, 86 мкмоля) в ДХМ (1 мл) добавляют ДИПЭА (45 мг, 345 мкмоля), гликолевую кислоту (13 мг, 172 мкмоля) и в конце ТБТУ (33 мг, 101 мкмоля). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 1 ч, после чего разбавляют этилацетатом и промывают водой. Водную фазу затем снова экстрагируют этилацетатом. Объединенные органические экстракты высушивают над MgSO, фильтруют и выпаривают. Сырой продукт очищают с помощью кристаллизации из ацетонитрила, получая N-(3-{4-[5-(5-этилтиофен-2-ил)-[1,2,4]оксадиазол-3-ил]-2,6-диметилфенокси}-2-гидроксипропил)-2-гидроксиацетамид (7 мг) в виде белого твердого вещества;
R
+
ЖХ-МС: t=0,95 мин, [M+1]=432,16.
Примеры 14-16
Соединения следующих примеров получают аналогично примеру 13, исходя из соединений указанных примеров:
Пример
Исходя из примера
R<sup>a</sup>
ЖХ-МСt<sub>R</sub> (мин) [M+H]<sup>+</sup>
14
2
н-пропил
0,99
446,14
15
3
н-бутил
1,02
460,26
16
4
изобутил
1,01
460,18
Пример 15
1 Н
6
ЯМР(D-ДМСО): δ 0,93 (t, J=7,3 Гц, 3 Н), 1,33-1,44 (m, 2 Н), 1,63-1,72 (m, 2 Н), 2,33 (s, 6 Н), 2,93 (t, J=7,5 Гц, 2 Н), 3,20-3,30 (m, 1 Н), 3,37-3,48 (m, 1 Н), 3,69-3,80 (m, 2 Н), 3,84 (d, J=5,8 Гц, 2 Н), 3,91-3,99 (m, 1 Н), 5,30 (d, J=5,3 Гц, 1 Н), 5,56 (t, J=5,8 Гц, 1 Н), 7,12 (d, J=3,8 Гц, 1 Н), 7,69 (t, J=6,0 Гц, 1 Н), 7,72 (s, 2 Н), 7,90 (d, J=3,5 Гц, 1 Н).
Пример 16
1 H
6
ЯМР (D-ДМСО): δ 0,92 (d, J=6,4 Гц, 5 Н), 1,83-2,00 (m, 1 H), 2,30 (s, 5 Н), 2,78 (d, J=7,0 Гц, 2 H), 3,14-3,27 (m, 2 H), 3,36-3,48 (m, 2 H), 3,65-3,78 (m, 2 H), 3,81 (d, J=5,6 Гц, 2 H), 3,87-3,99 (m, 1 H), 5,26 (d, J=5,0 Гц, 1 H), 5,52 (t, J=5,6 Гц, 1 H), 7,07 (d, J=3,5 Гц, 1 H), 7,66 (m, 3 H), 7,89 (d, J=3,5 Гц, 1 H).
Пример 17
(2R)-N-(3-{2,6-Диметил-4-[5-(5-пропилтиофен-2-ил)-[1,2,4]оксадиазол-3-ил]-фенокси}-2-гидроксипропил)-2-гидроксиацетамид получают аналогично примеру 13, исходя из методики примера 2 и используя (R)-2-хлорметилоксиран в качестве алкилирующего агента;
R
+
ЖХ-МС: t=0,98 мин, [M+1]=446,20.
Пример 18
(2S)-N-(3-{2,6-Диметил-4-[5-(5-пропилтиофен-2-ил)-[1,2,4]оксадиазол-3-ил]фенокси}-2-гидроксипропил)-2-гидроксиацетамид получают аналогично примеру 13, исходя из соединения примера 2 и используя (S)-2-хлорметилоксиран в качестве алкилирующего агента;
R
3
+
1
ЖХ-МС: t=0,98 мин, [М+1]=446,19, H ЯМР (CDCl): δ 1,04 (t, J=7,3 Гц, 3 Н), 1,72-1,84 (m, 2 H), 2,36 (s, 6 H), 2,89 (t, J=7,5 Гц, 2 Н), 3,19 (s расширенный, 1 Н), 3,47-3,56 (m, 1 H), 3,60 (s расширенный, 1 Н), 3,73-3,92 (m, 3 H), 4,18 (s, 2 H), 6,90 (d, J=3,8 Гц, 1 Н), 7,12 (t, J=5,8 Гц, 1 Н), 7,78 (d, J=3,8 Гц, 1 Н), 7,80 (s, 2 H)
Пример 19
2-Этил-4-[5-(5-изобутилтиофен-2-ил)-[1,2,4]оксадиазол-3-ил]-6-метилфенол получают аналогично примеру 1, используя 3-этил-4,N-дигидрокси-5-метилбензамидин;
R
+
ЖХ-МС: t=1,16 мин, [М+1]=343,02.
Пример 20
N-(3-{2-Этил-4-[5-(5-изобутилтиофен-2-ил)-[1,2,4]оксадиазол-3-ил]-6-метилфенокси}-2-гидроксипропил)-2-гидроксиацетамид получают аналогично примеру 13, исходя из соединения примера 19;
R
3
1 H
ЖХ-МС: t=1.01 мин;  ЯМР (CDCl): δ 0,99 (d, J=6,7 Гц, 3 H), 1,29 (t, J=7,6 Гц, 3 H), 1,90-2,05 (m, 1 H), 2,35 (s, 3 H), 2,57 (s расширенный, 1 Н), 2,67-2,80 (m, 4 H), 3,23 (s расширенный, 1 Н), 3,44-3,56 (m, 1 H), 3,72-3,92 (m, 3 H), 4,14-4,22 (m, 3 Н), 6,87 (d, J=3,5 Гц, 1 H), 6,97 (t расширенный, 1 H), 7,78 (d, J=3,8 Гц, 1 H), 7,82 (s, 1 Н), 7,84 (s, 1 H).
Пример 21
4
а) К раствору 5-изобутилтиофен-2-карбоновой кислоты (830 мг, 4,51 ммолей) и ДИПЭА (680 мг, 5,27 ммолей) в ДХМ (20 мл) добавляют ТБТУ (1,59 г, 4,96 ммолей) при комнатной температуре. Смесь затем перемешивают при комнатной температуре в течение 45 мин, после чего добавляют гидразид 4-аллилокси-3,5-диметилбензойной кислоты (993 мг, 4,50 ммолей). Перемешивание продолжают в течение 2 ч, затем смесь разбавляют диэтиловым эфиром (200 мл) и промывают 1-молярным водным раствором НСl (трижды по 50 мл), 1-молярным водным раствором NaOH (трижды по 50 мл) и рассолом (50 мл). Органические экстракты высушивают над MgSO, фильтруют и выпаривают, получая сырой N'-(5-изобутилтиофен-2-карбонил)гидразид 4-аллилокси-3,5-диметилбензойной кислоты (1,40 г) в виде желтого, медленно затвердевающего масла;
R
+
ЖХ-МС: t=1,02 мин, [М+1]=387,10.
4
б) Раствор N'-(5-изобутилтиофен-2-карбонил)гидразида 4-аллилокси-3,5-диметилбензойной кислоты (1,40 г, 3,62 ммолей) и реагента Бургесса (1,12 г, 4,71 ммолей) в ТГФ (15 мл) перемешивают при температуре 110°С в течение 3 мин при нагревании с помощью микроволнового облучения. Смесь затем разбавляют диэтиловым эфиром, промывают водой, высушивают над MgSO, фильтруют и выпаривают. Сырой продукт очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле, элюируя смесью гептан:этилацетат в соотношении 9:1 и получая 2-(4-аллилокси-3,5-диметилфенил)-5-(5-изобутилтиофен-2-ил)-[1,3,4]оксадиазол (1,02 г) в виде бесцветного масла;
R
+
ЖХ-МС: t=1,21 мин, [М+1]=369,15.
4
2
4
в) К раствору 2-(4-аллилокси-3,5-диметилфенил)-5-(5-изобутилтиофен-2-ил)-[1,3,4]оксадиазола (1,02 г, 2,77 ммолей) в ацетоне (24 мл) и воде (2,4 мл) добавляют N-MO (1,85 г, 13,7 ммолей) и OsO (128 мг, 13 мкмолей, в виде 2,5%-ного раствора в бутаноле) при комнатной температуре. Смесь перемешивают при этой температуре в течение 16 ч, после чего разбавляют водой (50 мл) и экстрагируют этилацетатом (дважды по 100 мл). Объединенные органические экстракты высушивают над NaSO, фильтруют и выпаривают. Сырой продукт очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле, элюируя этилацетатом и получая 3-{4-[5-(5-изобутилтиофен-2-ил)-[1,3,4]оксадиазол-2-ил]-2,6-диметилфенокси}пропан-1,2-диол (680 мг) в виде бесцветного масла;
R
+
ЖХ-МС: t=0,99 мин, [M+1]=403,14.
Пример 22
4
а) К раствору 3-{4-[5-(5-изобутилтиофен-2-ил)-[1,3,4]оксадиазол-2-ил]-2,6-диметилфенокси}пропан-1,2-диола (627 мг, 1,56 ммолей) и ДИПЭА (311 мг, 2,41 ммолей) в ДХМ (10 мл) добавляют хлорангидрид метансульфоновой кислоты (207 мг, 1,81 ммолей), затем смесь перемешивают при комнатной температуре, после чего добавляют еще одну порцию ДИПЭА (40 мг, 0,31 ммолей) и хлорангидрида метансульфоновой кислоты (36 мг, 0,31 ммолей). Смесь перемешивают в течение 1 ч, затем реакцию гасят водой, экстрагируют ДХМ и органические экстракты промывают водой, высушивают над MgSO, фильтруют и выпаривают. Сырой продукт очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле, элюируя смесью гептан:этилацетат в соотношении 7:3 и получая 2-гидрокси-3-{4-[5-(5-изобутилтиофен-2-ил)-[1,3,4]оксадиазол-2-ил]-2,6-диметилфенокси}пропиловый эфир метансульфоновой кислоты (220 мг) в виде бесцветного масла;
R
+
ЖХ-МС: t=1,08 мин, [M+1]=481,09.
3
3
б) Раствор 2-гидрокси-3-{4-[5-(5-изобутилтиофен-2-ил)-[1,3,4]оксадиазол-2-ил]-2,6-диметилфенокси}пропилового эфира метансульфоновой кислоты (220 мг, 0,458 ммолей) в ТГФ (10 мл) и 7-нормальный раствор NН в метаноле (10 мл) перемешивают при температуре 65°С в течение 15 ч. Растворитель выпаривают, а остаток отделяют с помощью препаративной ТСХ, используя в качестве элюента ДХМ, содержащий 6% 7-нормального раствора NН в метаноле, и получая 1-амино-3-{4-[5-(5-изобутилтиофен-2-ил)-[1,3,4]оксадиазол-2-ил]-2,6-диметилфенокси}пропан-2-ол (110 мг) в виде желтого масла;
R
+
ЖХ-МС: t=0,83 мин, [М+1]=402,48.
4
3
в) К раствору 1-амино-3-{4-[5-(5-изобутилтиофен-2-ил)-[1,3,4]оксадиазол-2-ил]-2,6-диметилфенокси}пропан-2-ола (109 мг, 271 мкмоля) в ДХМ (10 мл) добавляют ДИПЭА (140 мг, 1,086 ммолей) и гликолевую кислоту (41 мг, 543 мкмоля), после чего добавляют ТБТУ (102 мг, 319 мкмоля) при 0°С. Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 1 ч, а затем разбавляют этилацетатом и промывают водой. Водную фазу отделяют и экстрагируют один раз этилацетатом. Объединенные органические экстракты высушивают над MgSO, фильтруют и выпаривают. Сырой продукт очищают с помощью препаративной ТСХ, используя в качестве элюента ДХМ, содержащий 4% 7-нормального раствора NH в метаноле, и получая 2-гидрокси-N-(2-гидрокси3-{4-[5-(5-изобутилтиофен-2-ил)-[1,3,4]оксадиазол-2-ил]-2,6-диметилфенокси}пропил)ацетамид (31 мг) в виде белого твердого вещества;
R
+
ЖХ-МС: t=0,94 мин, [M+1]=460,51.
Пример 23
3
4
К раствору 1-(5-изобутилтиофен-2-ил)этанона (336 мг, 1,84 ммолей) и 3,5-диметил-4-гидроксибензальдегида (277 мг, 1,84 ммолей) в этаноле (6 мл) добавляют 5-нормальный раствор НСl в изопропаноле (2,5 мл). Темный раствор перемешивают при комнатной температуре в течение 6 ч, после чего растворитель удаляют в вакууме. Остаток растворяют в этилацетате (80 мл) и промывают насыщенным водным раствором NаНСО (25 мл) и рассолом. Промывные воды снова экстрагируют этилацетатом и объединенные органические экстракты высушивают над MgSO, фильтруют и выпаривают, получая 3-(4-гидрокси-3,5-диметилфенил)-1-(5-изобутилтиофен-2-ил)пропенон (682 мг) в виде желтого порошка;
R
+
ЖХ-МС: t=1,10 мин, [М+1]=315,15.
Пример 24
К раствору 3-(4-гидрокси-3,5-диметилфенил)-1-(5-изобутилтиофен-2-ил)пропенона (660 мг) в ТГФ (10 мл) и этаноле (5 мл) добавляют Pd/C (150 мг, 10% Pd) и суспензию перемешивают при комнатной температуре под давлением водорода (5 бар) в течение 23 ч. Затем добавляют следующую порцию Pd/C (150 мг) и продолжают перемешивание при комнатной температуре под давлением водорода (5 бар) в течение 8 ч. После этого катализатор отфильтровывают и фильтрат выпаривают, получая 3-(4-гидрокси-3,5-диметилфенил)-1-(5-изобутилтиофен-2-ил)пропан-1-он (554 мг) в виде оранжевого масла;
R
+
ЖХ-МС: t=1,10 мин, [M+1]=317,04.
Пример 25
2-Гидрокси-N-(2-гидрокси-3-{4-[3-(5-изобутилтиофен-2-ил)-3-оксопропил]-2,6-диметилфенокси}пропил)ацетамид получают из соединения, синтезированного в примере 24 аналогично примеру 13;
R
+
ЖХ-МС: t=0,97 мин, [M+1]=448,21.
Пример 26
2-Этил-6-метил-4-[5-(5-пропилтиофен-2-ил)-[1,2,4]оксадиазол-3-ил]фенол получают аналогично примеру 1, исходя из 5-пропилтиофен-2-карбоновой кислоты и 3-этил-4,N-дигидрокси-5-метилбензамидина;
R
+
ЖХ-МС: t=1,12 мин, [М+1]=329,14.
Пример 27
(2R)-N-(3-{2-Этил-6-метил-4-[5-(5-пропилтиофен-2-ил)-[1,2,4]оксадиазол-3-ил]фенокси}-2-гидроксипропил)-2-гидроксиацетамид получают аналогично примеру 13, исходя из соединения, синтезированного в примере 26;
R
+
ЖХ-МС: t=0,95 мин, [M+1]=460,15.
Пример 28
(2S)-N-(3-{2-Этил-6-метил-4-[5-(5-пропилтиофен-2-ил)-[1,2,4]оксадиазол-3-ил]-фенокси}-2-гидроксипропил)-2-гидроксиацетамид получают аналогично примеру 13 исходя из соединения, синтезированного в примере 26;
R
+
ЖХ-МС: t=0,95 мин, [M+1]=460,13.
Пример 29
R
+
2-(4-Бензилокси-3,5-диметилфенил)-5-(5-изобутилтиофен-2-ил)-[1,3,4]оксадиазол получают аналогично примеру 21 (стадии а и б) посредством конденсации и циклизации 5-изобутилтиофен-2-карбоновой кислоты с гидразидом 4-бензилокси-3,5-диметилбензойной кислоты, ЖХ-МС: t=1,06 мин, [М+1]=437,17. К раствору этого соединения (2,83 г, 6,75 ммолей) в этаноле (50 мл) и ТГФ (50 мл) добавляют Pd/C (10% Pd, 400 мг) и перемешивают суспензию при комнатной температуре в течение 48 ч под давлением водорода (5 бар). Смесь фильтруют, фильтрат концентрируют и сырой продукт очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле, элюируя смесью гептан:этилацетат в соотношении 8:25 и получая 4-[5-(5-изобутилтиофен-2-ил)-[1,3,4]оксадиазол-2-ил]-2,6-диметилфенол (943 мг) в виде белого порошка;
R
+
ЖХ-МС: t=1,09 мин, [M+1]=329,36.
Пример 30
Исходя из 4-[5-(5-изобутилтиофен-2-ил)-[1,3,4]оксадиазол-2-ил]-2,6-диметилфенола, 2-гидрокси-N-((2R)-2-гидрокси-3-{4-[5-(5-изобутилтиофен-2-ил)-[1,3,4]оксадиазол-2-ил]-2,6-диметилфенокси}пропил)ацетамид получают аналогично примеру 13;
R
+
ЖХ-МС: t=0,95 мин, [M+1]=460,18.
Пример 31
Исходя из 4-[5-(5-изобутилтиофен-2-ил)-[1,3,4]оксадиазол-2-ил]-2,6-диметилфенола, 2-гидрокси-N-((2S)-2-гидрокси-3-{4-[5-(5-изобутилтиофен-2-ил)-[1,3,4]оксадиазол-2-ил]-2,6-диметилфенокси}пропил)ацетамид получают аналогично примеру 13;
R
+
1
ЖХ-МС: t=0,95 мин, [М+1]=460,18, Н ЯМР δ 0,99 (d, J=6,5 Гц, 6 Н), 1,90-2,01 (m, Н 1), 2,31 (s, 5 Н), 2,75 (d, J=7,0 Гц, 2 Н), 3,46-3,54 (m, 1 Н), 3,73-3,91 (m, 3 H), 4,15-4,23 (m, 3 H), 4,26 (s расширенный, 1 Н), 4,45 (s расширенный, 1 H), 6,84 (d, J=3,3 Гц, 1 H), 7,42 (t расширенный, J=5,5 Гц, 1 H), 7,64 (d, J=3,5 Гц, 1 H), 7,68 (s, 2 H).
Пример 32
2-Этил-6-метил-4-[5-(5-пропилтиофен-2-ил)-[1,3,4]оксадиазол-2-ил]фенол получают аналогично примеру 29, исходя из гидразида 4-бензилокси-3-этил-5-метилбензойной кислоты и 5-пропилтиофен-2-карбоновой кислоты;
R
+
ЖХ-МС: t=0,99 мин, [M+1]=329,13.
Пример 33
N-((2R)-3-{2-Этил-6-метил-4-[5-(5-пропилтиофен-2-ил)-[1,3,4]оксадиазол-2-ил]фенокси}-2-гидроксипропил)-2-гидроксиацетамид получают аналогично примеру 13 из соединения, синтезированного в примере 32;
R
+
ЖХ-МС: t=0,85 мин, [М+1]=460,08.
Пример 34
N-((2S)-3-{2-Этил-6-мeтил-4-[5-(5-пpoпилтиoфeн-2-ил)-[l,3,4]oкcaдиaзoл-2-ил]фенокси}-2-гидроксипропил)-2-гидроксиацетамид получают аналогично примеру 13, исходя из соединения, синтезированного в примере 32;
R
+
ЖХ-МС: t=0,85 мин, [М+1]=460,08.
Пример 35
2-Этил-4-[5-(5-изобутилтиофен-2-ил)-[1,3,4]оксадиазол-2-ил]-6-метилфенол получают аналогично примеру 29 из 5-изобутилтиофен-2-карбоновой кислоты и гидразида 4-бензилокси-3-этил-5-метилбензойной кислоты;
R
+
ЖХ-МС: t=1,03 мин, [М+1]=343,22.
Пример 36
N-((2R)-3-{2-Этил-6-метил-4-[5-(5-изобутилтиофен-2-ил)-[1,3,4]оксадиазол-2-ил]фенокси}-2-гидроксипропил)-2-гидроксиацетамид получают аналогично примеру 13, исходя из соединения, синтезированного в примере 35;
R
+
ЖХ-МС: t=0,91 мин, [М+1]=474,18.
Пример 37
N-((2S)-3-{2-Этил-6-метил-4-[5-(5-изобутилтиофен-2-ил)-[1,3,4]оксадиазол-2-ил]фенокси}-2-гидроксипропил)-2-гидроксиацетамид получают аналогично примеру 13, исходя из соединения, синтезированного в примере 35;
R
+
ЖХ-МС: t=0,91 мин, [M+1]=474,17.
Пример 38
2-Этил-4-[5-(5-изобутил-4-метилтиофен-2-ил)-[1,3,4]оксадиазол-2-ил]-6-метилфенол получают из 4-метил-5-(2-метилпропенил)тиофен-2-карбоновой кислоты и гидразида 4-бензилокси-3-этил-5-метилбензойной кислоты аналогично примеру 29;
R
+
ЖХ-МС: t=1,13 мин, [M+1]=357,49.
Пример 39
(2R)-3-{2-Этил-4-[5-(5-изобутил-4-метилтиофен-2-ил)-[1,3,4]оксадиазол-2-ил]-6-метилфенокси}пропан-1,2-диол получают в виде белого твердого вещества, исходя из соединения, синтезированного в примере 38, аналогично примеру 5;
R
3
+
1 Н
ЖХ-МС: t=1,05 мин, [М+1]=431,13;  ЯМР (CDCl): δ 1,01 (d, J=6,8 Гц, 5 Н), 1,31 (t, J=7,5 Гц, 3 Н), 1,91-2,02 (m, 1 H), 2,22 (s, 3 H), 2,39 (s, 3 H), 2,68 (d, J=7,0 Гц, 2 Н), 2,75 (q, J=7,3 Гц, 2 Н), 3,82-3,97 (m, 4 H), 4,14-4,22 (m, 1 H), 7,55 (s, 1 H), 7,78 (s, 1 H), 7,80 (s, 1 H).
Пример 40
(2S)-3-{2-Этил-4-[5-(5-изобутил-4-метилтиофен-2-ил)-[1,3,4]оксадиазол-2-ил]-6-метилфенокси}пропан-1,2-диол получают в виде белого твердого вещества, исходя из соединения, синтезированного в примере 38, аналогично примеру 5;
R
+
ЖХ-МС: t=1,05 мин, [M+1]=431,14.
Пример 41
N-((2R)-3-{2-Этил-4-[5-(5-изобутил-4-метилтиофен-2-ил)-[1,3,4]оксадиазол-2-ил]-6-метил-фенокси}-2-гидроксипропил)-2-гидроксиацетамид получают, исходя из соединения, синтезированного в примере 38, аналогично примеру 13;
R
+
ЖХ-МС: t=1,00 мин, [M+1]=488,19.
Пример 42
N-((2S)-3-{2-Этил-4-[5-(5-изобутил-4-метилтиофен-2-ил)-[1,3,4]оксадиазол-2-ил]-6-метилфенокси}-2-гидроксипропил)-2-гидроксиацетамид получают, исходя из соединения, синтезированного в примере 38, аналогично примеру 13;
R
+
1
ЖХ-МС: t=1,00 мин, [M+1]=488,17; Н ЯМР δ 1,00 (d, J=6,5 Гц, 6 Н), 1,27 (t, J=7,5 Гц, 3 Н), 1,90-2,01 (m, 1 Н), 2,21 (s, 3 Н), 2,34 (s, 3 Н), 2,67 (d, J=7,3 Гц, 2 Н), 2.71 (q, J=7,5 Гц, 2 H), 3,46-3,56 (m, 1 Н), 3,75-3,91 (m, 3 Н), 4,08 (s расширенный, 2 Н), 4,20 (s, 3 Н), 7,33 (t расширенный, J=5,5 Гц, 1 Н), 7,54 (s, 1 Н), 7.72 (s, 1 Н), 7,74 (s, 1 Н).
50
Пример 43: GTPγS анализ определения EC величин
2
2 H
4
2
4
35
35
35
35
Анализы GTPγS-связывания проводят в 96-ячеистых титровальных планшетах (Nunc, 442587) с конечным объемом 200 мкл, с использованием мембранных препаратов СНО клеток, экспрессирующих рекомбинантный человеческий S1P1 рецептор. Условия проведения анализа: 20 мМ Hepes (фирма Fluka, 54461), 100 мМ NaCl (фирма Fluka, 71378), 5 мМ MgCl (фирма Fluka, 63064), 0,1% БСА (фирма Calbiochem, 126609), 1 мкМ GDP (фирма Sigma, G-7127), 2,5% ДМСО (фирма Fluka, 41644), 50 pM S-GTPγS (фирма Amersham Biosciences, SJ1320), pH 7,4. Тестируемые соединения растворяют и разбавляют в 100% ДМСО и предварительно инкубируют при комнатной температуре в течение 30 мин в 150 мкл названного выше буфера для анализа, в отсутствие S-GTPγS. После добавления 50 мкл S-GTPγS анализируемую смесь инкубируют в течение 1 ч при комнатной температуре. Анализ останавливают посредством переноса реакционной смеси в Multiscreen планшет (Millipore, MAHFC1 H60, используя коллектор клеток от фирмы Packard Biosciences, после чего планшеты промывают охлажденным льдом раствором 10 мМ NaPO/NaHPO (в соотношении 70%: 30%), высушивают, герметизируют в нижнем отделе и, после добавления 25 мкл MicroScint20 (Packard Biosciences, order# 6013621) герметизируют в верхней части. Мембранное связывание S-GTPγS измеряют с помощью TopCount от фирмы Packard Biosciences.
50
35
ЕС представляет собой концентрацию агониста, включающую 50% максимального специфического S-GTPγS связывания. Специфическое связывание определяется вычитанием неспецифического связывания из максимального связывания. Максимальное связывание представляет собой число импульсов в мин, связанных с Multiscreen планшетом в присутствии 10 мкМ S1P. Неспецифическое связывание представляет собой число связываний в отсутствие агониста при анализе.
50
50
В таблице 1 представлены ЕС величины некоторых соединений по настоящему изобретению. ЕС величины были определены с помощью метода, описанного выше.
Таблица 1
Соединение примера
ЕС<sub>50</sub> [нМ]
16
2,6
17
0,6
22
2,8
28
2,4
31
3,3
42
0,6
Пример 44: Оценка эффективности в условиях in vivo
Эффективность соединений формулы (I) оценивалась измерением циркулирующих лимфоцитов после орального введения от 3 до 30 мг/кг соединения формулы (I) нормотензивным мужским особям крыс Wistar. Животные содержались в условиях с контролируемым климатом с 12-часовым свет/темнота-циклом, и имели доступ к нормальной крысиной пище и питьевой воде. Кровь отбиралась перед и через 3, 6 и 24 ч после введения лекарства. Вся кровь подвергалась гематологическому анализу с использованием Advia Hematology system (Bayer Diagnostics, Zürich, Switzerland).
Все данные представлены, как средние ± SEM. Статистические анализы проводились с помощью вариантного анализа (ANOVA) с использованием Statistica (StatSoft) и Student-Newman-Keuls метода для мультиплетных сравнений. Сводящаяся к нулю гипотеза отбрасывалась, когда p<0,05.
В виде примера в таблице 2 представлен эффект, оказываемый на лимфоциты, через 6 ч после введения 10 мг/кг некоторых соединений по настоящему изобретению нормотензивным мужским особям крыс Wistar по сравнению с группой животных, обрабатываемых только растворителем.
Таблица 2
Соединение примера
Количество лимфоцитов
17
-59±4%
37
-67±3%
40
-58±3%