АНАЛИЗ АНТИТЕЛОЗАВИСИМОЙ КЛЕТОЧНОЙ ЦИТОТОКСИЧНОСТИ

1. Способ анализа антителозависимой клеточной цитотоксичности (ADCC), включающий:
(a) мониторинг импеданса между электродами на непроводящей подложке, которая способствует росту клеток-мишеней в среде для анализа; и
(b) добавление в среду для анализа эффекторных клеток и антитела, которое связывается с клетками-мишенями;
причем снижение импеданса между электродами на подложке после добавления эффекторных клеток и антитела характерно для действия ADCC, произошедшего в среде для анализа, и причем увеличение или отсутствие изменения импеданса между электродами на подложке после добавления эффекторных клеток и антитела характерно для отсутствия действия ADCC в среде для анализа.
2. Способ по п.1, включающий измерение импеданса через определенные промежутки времени.
3. Способ по п.2, включающий получение клеточного индекса (CI) исходя из каждого измерения импеданса и определение, имело ли место изменение клеточного индекса, причем клеточный индекс получают исходя из каждого измерения импеданса, используя формулу
,
b
cell
где R(f) и R(f) представляют собой частотнозависимые сопротивления электродов без клеток или при наличии клеток соответственно и N представляет собой количество значений частот, при которых измеряют импеданс.

4. Способ по любому из пп.1-3, в котором способ проводят, используя систему RT-CES.
5. Способ по любому из пп.1-3, в котором измерения импеданса проводят каждые 15 мин.
6. Способ по любому из пп.1-3, в котором способ дополнительно включает высевание клеток-мишеней.
7. Способ по п.6, в котором клетки-мишени высевают за от 18 до 24 ч перед добавлением антитела и эффекторных клеток.
8. Способ по любому из пп.1-3, в котором клетки-мишени представляют собой монослой на подложке.
9. Способ по любому из пп.1-3, в котором клетки-мишени высевают при плотности от 2 K до 100 K на лунку.
10. Способ по любому из пп.1-3, в котором клетки-мишени высевают при плотности от 15 K до 25 K на лунку.
11. Способ по любому из пп.1-3, в котором клетки-мишени высевают при плотности приблизительно 20 K на лунку.
12. Способ по любому из пп.1-3, в котором соотношение эффекторных клеток и клеток-мишеней (E:T) составляет 25:1.
13. Способ по любому из пп.1-3, в котором E:T более чем 10:1.
14. Способ по любому из пп.1-3, в котором E:T более чем 50:1.
15. Способ по любому из пп.1-3, в котором E:T более чем 100:1.
16. Способ по любому из пп.1-3, в котором антитело добавляют при концентрации от приблизительно 1 до приблизительно 100 мкг/мл.
17. Способ по любому из пп.1-3, в котором антитело добавляют при концентрации от приблизительно 1 до приблизительно 50 мкг/мл.
18. Способ по любому из пп.1-3, в котором антитело добавляют при концентрации от приблизительно 2 до приблизительно 8 мкг/мл.
19. Способ по любому из пп.1-3, включающий добавление в среду для анализа двух или более антител, которые связываются с клетками-мишенями.
20. Способ по любому из пп.1-3, включающий добавление в среду для анализа трех или более антител, которые связываются с клетками-мишенями.
21. Способ по любому из пп.1-3, включающий добавление в среду для анализа четырех или более антител, которые связываются с клетками-мишенями.
22. Способ по любому из пп.1-3, в котором клетки-мишени экспрессируют апикальные антигены.
23. Способ по п.22, включающий предварительную стадию скрининга клеток-мишеней в отношении экспрессии апикального антигена.
24. Способ по любому из пп.1-3, в котором клетки-мишени представляют собой раковые клетки или зараженные вирусом клетки.
25. Способ по п.24, в котором клетки-мишени представляют собой раковые клетки.
26. Способ по п.25, в котором раковые клетки происходят из клеточной линии.
27. Способ по п.26, в котором раковые клетки представляют собой клетки SKBR3 или клетки MG63.
28. Способ по любому одному из пп.1-3, в котором эффекторные клетки включают в себя мононуклеарные клетки периферической крови (PBMC), естественные киллерные (NK) клетки, моноциты, цитотоксические Т-клетки или нейтрофилы.
29. Способ по п.28, в котором эффекторные клетки представляют собой PBMC.
30. Способ по любому одному из пп.1-3, в котором стадия (b) включает в себя добавление к клеткам-мишеням цельной крови, которую частично обогатили эффекторными клетками.
31. Способ по любому одному из пп.1-3, в котором стадия (b) включает в себя добавление цельной крови к эффекторным клеткам и в котором цельная кровь содержит эффекторные клетки.
32. Способ скрининга антитела-кандидата в отношении способности индуцировать ADCC против клеток-мишеней, включающий:
(a) мониторинг импеданса между электродами на непроводящей подложке, которая способствует росту клеток-мишеней в среде для анализа; и
(b) добавление эффекторных клеток и антитела-кандидата, которое связывается с клетками-мишенями, в среду для анализа;
причем снижение импеданса между электродами на подложке после добавления эффекторных клеток и антитела характерно для способности антитела-кандидата влиять на действие ADCC против клеток-мишеней и причем увеличение или отсутствие изменения импеданса между электродами на подложке после добавления эффекторных клеток и антитела может быть характерно для неспособности антитела-кандидата влиять на действие ADCC против клеток-мишеней.
33. Способ выявления пациента, страдающего заболеванием, ассоциированным с клетками-мишенями, который подходит для лечения антителом-кандидатом, способ, включающий:
(a) мониторинг импеданса между электродами на непроводящей подложке, которая способствует росту клеток-мишеней, ассоциированных с заболеванием;
(b) добавление выделенных у пациента PBMC и антитела-кандидата к клеткам-мишеням и
(c) определение, имеет ли место изменение импеданса между электродами на подложке после добавления PBMC и антитела, причем снижение импеданса между электродами характерно для пригодности пациента для лечения при помощи антитела и причем увеличение или отсутствие изменения импеданса между электродами на подложке после добавления PBMC и антитела характерно для непригодности пациента для лечения при помощи антитела.
34. Способ скрининга соединения-кандидата в отношении способности модулировать ADCC, включающий:
(a) мониторинг импеданса между электродами на непроводящей подложке, которая способствует росту клеток-мишеней в среде для анализа;
b) добавление в среду для анализа эффекторных клеток и антитела в присутствии и при отсутствии соединения-кандидата, причем антитело связывается с клетками-мишенями; и
(c) сравнение любого изменения импеданса между электродами на подложке после добавления эффекторных клеток и антитела в присутствии соединения-кандидата с любым изменением импеданса между электродами на подложке после добавления эффекторных клеток и антитела при отсутствии соединения-кандидата, где изменение импеданса в присутствии соединения-кандидата, которое больше, чем любое изменение импеданса при отсутствии соединения-кандидата, показывает, что соединение-кандидат обладает способностью модулировать ADCC.
35. Способ скрининга по п.34, в котором соединение для скрининга модулирует связанную с аутоиммунными состояниями ADCC.
36. Способ по любому из пп.1-3, 32-35, который представляет собой высокопроизводительный анализ и в котором непроводящая подложка содержит две или более лунок титровального микропланшета, причем каждая лунка содержит, по меньшей мере, два электрода и включает в себя мониторинг импеданса между электродами в каждой лунке.
37. Способ по п.1, в котором антитело получают от пациента с аутоиммунным нарушением.
38. Анализ для контроля качества антитела, включающий:
(a) мониторинг импеданса между электродами на непроводящей подложке, которая способствует росту клеток-мишеней в среде для анализа; и
(b) добавление эффекторных клеток и антитела в среду для анализа, причем антитело связывается с клетками-мишенями;
причем снижение импеданса между электродами на подложке после добавления эффекторных клеток и антитела показывает, что антитело подходит для производства с целью применения при индукции ADCC, и причем увеличение или отсутствие изменения импеданса после добавления эффекторных клеток и антитела показывает, что антитело не подходит для производства с целью применения при индукции ADCC.
39. Анализ для контроля качества антитела, включающий:
(a) мониторинг импеданса между электродами на непроводящей подложке, которая способствует росту клеток-мишеней в среде для анализа;
(b) добавление эффекторных клеток и антитела в среду для анализа, причем антитело связывается с клетками-мишенями; и
(c) сравнение любого изменения импеданса между электродами на подложке после добавления эффекторных клеток и антитела с любым изменением импеданса для контрольного образца после добавления эффекторных клеток и контрольного антитела;
причем снижение импеданса между электродами на подложке после добавления эффекторных клеток и антитела, которое больше, чем любое снижение импеданса для контрольного образца после добавления эффекторных клеток и контрольного антитела, показывает, что антитело подходит для производства с целью применения при индукции ADCC, и причем отсутствие снижения импеданса после добавления эффекторных клеток и антитела, которое больше, чем любое снижение импеданса для контрольного образца после добавления эффекторных клеток и контрольного антитела, показывает, что антитело не подходит для производства с целью применения при индукции ADCC.
40. Анализ для контроля качества по п.39, в котором снижение импеданса после добавления эффекторных клеток и антитела, которое, по меньшей мере, на 25% больше, чем снижение импеданса для контрольного образца после добавления эффекторных клеток и контрольного антитела, показывает, что антитело подходит для производства с целью применения при индукции ADCC.
41. Способ скрининга соединения-кандидата для применения в качестве терапевтического средства против аутоиммунного заболевания, включающий:
(a) мониторинг импеданса между электродами на непроводящей подложке, которая способствует росту клеток-мишеней в среде для анализа, причем клетки-мишени представляют собой здоровые клетки;
(b) добавление в среду для анализа эффекторных клеток и антитела в присутствии и отсутствие соединения-кандидата, причем антитело связывается с клетками-мишенями, и причем эффекторные клетки представляют собой РВМС субъекта с диагнозом аутоиммунного заболевания; и
(c) сравнение любого изменения импеданса в присутствии соединения-кандидата с любым изменением импеданса при отсутствии соединения-кандидата, причем снижение импеданса при отсутствии соединения-кандидата, которое больше, чем любое снижение импеданса в присутствии соединения-кандидата, показывает, что соединение-кандидат подходит в качестве терапевтического средства против аутоиммунного заболевания, и причем отсутствие снижения импеданса при отсутствии соединения-кандидата, которое больше, чем любое снижение импеданса в присутствии соединения-кандидата, показывает, что соединение-кандидат не подходит в качестве терапевтического средства против аутоиммунного заболевания.
42. Способ определения, подходит ли антитело-кандидат для лечения субъекта, страдающего аутоиммунным заболеванием, включающий:
(a) мониторинг импеданса между электродами на непроводящей подложке, которая способствует росту клеток-мишеней, ассоциированных с аутоиммунным заболеванием; и
(b) добавление антитела-кандидата и выделенных у субъекта PBMC к клеткам-мишеням; и
(c) определение, имеет ли место изменение импеданса между электродами на подложке после добавления PBMC и антитела-кандидата, причем снижение импеданса между электродами показывает, что антитело подходит для лечения субъекта, и причем отсутствие снижения импеданса между электродами показывает, что антитело не подходит для лечения субъекта.
43. Способ определения оптимальной концентрации антитела для индукции реакции ADCC, включающий:
(a) мониторинг импеданса между электродами на непроводящей подложке, которая способствует росту двух или более образцов клеток-мишеней в среде для анализа; и
(b) добавление эффекторных клеток и антитела к двум или более образцам клеток-мишеней, причем антитело связывается с клетками-мишенями и причем антитело добавляют к двум или более образцам клеток-мишеней в различных концентрациях;
причем снижение импеданса между электродами на подложке после добавления эффекторных клеток и антитела характерно для действия ADCC, произошедшего в среде для анализа, и причем концентрация антитела, которая приводит к наибольшему снижению импеданса, как определяют, является оптимальной концентрацией.
44. Способ определения, связывается ли антитело с апикальным антигеном на клетке-мишени, включающий:
(a) мониторинг импеданса между электродами на непроводящей подложке, которая способствует росту клеток-мишеней в среде для анализа; и
(b) добавление эффекторных клеток и антитела к клеткам-мишеням;
причем снижение импеданса между электродами на подложке после добавления эффекторных клеток и антитела показывает, что антитело связывается с апикальным антигеном на клетках-мишенях.