Микрохимеризм генов системы HLA у матерей и новорожденных с патологией перинатального периода

ВЕСТНИК ГЕМАТОЛОГИИ, том XI, № 2, 2015

(ТГСК) с генотипом CCR5 delta 32/ delta 32 ВИЧ-инфицированному пациенту с острым ми-елоидным лейкозом в 2007 году в Германии. После трансплантации пациент прекратил приём противовирусных препаратов. При этом по настоящее время вирусная нагрузка остаётся неопределяемой, а при анализе периферической крови и биоптатов различных тканей не удаётся выявить наличия провирусной ДНК. Перспективы применения пуповинной крови (ПК) при лечении ВИЧ-инфекции связаны с возможностью проведения ТГСК ПК ВИЧ-инфицированному реципиенту от донора, являющегося гомозиготным носителем мутации CCR5 delta 32.

Цель работы. Оценка научно-организационных возможностей создания общественного регистра ПК с генотипом CCR5 delta 32/delta 32 для лечения ВИЧ-инфицированных пациентов.

Материалы и методы. Скрининговое обследование ПК для детекции полиморфизма гена CCR5 производилось с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР). HLA-типирование CCR5 delta 32/delta 32 образцов ПК выполнялось методом SSP (sequence-specific priming) (Protrans, Германия). Исследована длина теломер CCR5 delta 32/delta 32 образцов ПК методом ПЦР в реальном времени.

Результаты работы. Всего обследовано 4000 образцов ПК, находящихся на хранении в общественном регистре Покровского банка стволовых клеток. В результате исследования отобрано 40 образцов с генотипом CCR5 delta 32/delta 32, что составило 1 % в относительном количестве. В 721 образцах полиморфизм CCR5 delta 32

присутствовал в гетерозиготном состоянии или 18,03 % в относительном количестве. Проведён сравнительный анализ распределения HLA-аллелей у доноров ПК с диким типом гена CCR5, подобранных методом случайной выборки, и среди доноров ПК с генотипом CCR5 delta32/ delta32. Отмечена высокая встречаемость наиболее распространённых на Северо-Западе России HLA-аллелей среди доноров ПК обеих групп. Средняя длина теломер CCR5 delta 32/delta 32 клеток ПК составила 8,72 т.п.н. (возрастная норма составляет 8,4-11,8 т.п.н.).

Выводы.

1. Частота встречаемости генотипа CCR5 delta 32/delta 32 в Северо-Западном регионе Российской Федерации составляет около 1 %.

2. Выявлена высокая встречаемость наиболее распространённых на Северо-Западе России HLA-аллелей у доноров ПК с диким типом гена CCR5 и среди CCR5 delta 32/ delta 32 доноров ПК, то есть существует значительно большая вероятность нахождения совместимого образца для ТГСК в региональном регистре доноров.

3. Исследование длины теломер показало нормальный пролиферативный потенциал клеток CCR5 delta 32/delta 32 образцов ПК.

4. Обнаруженные в результате скрининга CCR5 delta 32/delta 32 образцы позволят организовать собственное региональное хранилище подобного рода образцов ПК.

Полякова А. П., Волкова О. Я., Трескина Н. А., Петренко Ю. В., Иванов Д. О.

ФГБУ «Северо-Западный Федеральный медицинский исследовательский центр» Минздрава России, Санкт-Петербург

МИКРОХИМЕРИЗМ ГЕНОВ СИСТЕМЫ HLA У МАТЕРЕЙ И НОВОРОЖДЕННЫХ С ПАТОЛОГИЕЙ ПЕРИНАТАЛЬНОГО ПЕРИОДА

Микрохимеризм представляет собой присутствие в организме человека не более 1 % чужеродных клеток от всех клеток индивидуума. Он может наблюдаться во время беременности, после переливания крови, трансплантации стволовых клеток и солидных органов. Перенос чужеродных клеток осуществляется посредством кровотока и, во время беременности, возможен в двух направлениях: от матери к плоду — «материнский микрохимеризм — МХ», и от плода

к матери — «фетальный микрохимеризм — ФХ». По данным литературы известно, что повышенная частота МХ характерна для детей с синдромом задержки внутриутробного развития (ЗВУР), гемолитической болезнью новорожденных (ГБН), а также после операции «наружный поворот плода».

Целью настоящего исследования было изучить возможность выявления феномена микро-химеризма по генам системы человеческого лей-

«АКТУАЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ ИММУНОГЕНЕТИКИ И ТКАНЕВОГО ТИПИРОВАНИЯ»

Санкт-Петербург 24-25 июня 2015 г.

коцитарного антигена (HLA) локусов А, В, С, DRB1, DQB1 методом ПЦР с сиквенс-специфи-ческими праймерами (SSP) и проанализировать частоту этого явления у матерей и новорожденных с патологией перинатального периода.

В исследование были включены 49 пар мать-новорожденный с патологией перинатального периода, в том числе 21 пара с ЗВУР плода, 20 пар с ГБН и 8 пар после операции внутриутробного поворота плода. Группу контроля составили 23 пары без патологии перинатального периода. Анализ микрохимеризма генов системы HLA локусов А, В, С, DRB1, DQB1 выполнялся методом ПЦР-SSP с использованием коммерческих тест-систем. Оценка значимости различий в ча-

стоте выявления химерных генов выполнялась на основании точного критерия Фишера.

В результате исследования микрохимеризм был выявлен в группе пациентов в 38,8 % случаев (38 человек) и в 19,2 % (5 человек) случаев в группе контроля ф = 0,03). При этом более часто данное явление встречалось среди пар с ГБН (47,5 % против 19,2 % в контрольной группе, р = 0,013). Отличия встречаемости химерных генов системы HLA в других исследуемых группах не были статистически значимыми по сравнению с группой контроля. Частота выявления микрохимеризма по генам системы HLA в исследуемых группах представлена в таблице.

Таблица.

Частота выявления микрохимеризма по генам системы HLA в исследуемых группах.

Исследуемая группа Количество человек в группе Химеризм общий Локус HLA Химеризм, %

A B C DRB1 DQB1 Комбинация локусов

ЗВУР 42 14 1 1 12 2 0 1 33,33 %

ГБН 40 19 0 2 15 4 1 3 47,50 %

Наружный поворот 16 5 1 0 3 1 0 0 31,25 %

Контроль 26 5 1 1 2 0 1 0 19,23 %

Во всех исследуемых группах чаще выявлялся микрохимеризм генов в локусе HLA-C, а у пациентов с ЗВУР и ГБН еще и в локусе HLA-DRB1. Кроме того, в ряде случаев у пациентов из групп ЗВУР и ГБН отмечалось сочетание нескольких химерных генов из разных локусов. Изучение распределения химерных генов у матерей и их детей в исследуемых группах и контроле показало, что частота выявления материнского и фе-тального микрохимеризма не имела значимых отличий как среди пар с перинатальной патологией (МХ = 40,8 % и ФХ=32,6 %), так и у здоровых лиц (МХ = 23,1 % и ФХ = 15,4 %).

Полученные данные подтвердили наше предположение о возможности выявления микрохи-меризма по генам системы HLA локусов А, В, С, DRB1 и DQB1 в образцах крови матерей и их новорожденных детей методом ПЦР-SSP. При этом явление микрохимеризма генов HLA нами чаще наблюдалось среди пациентов с перинатальной патологией, чем у здоровых лиц и было более распространено, по нашим данным, среди пар с ГБН, что согласуется с данными литературы. Материнский и фетальный микрохимеризм выявлялся в исследуемых группах примерно с одинаковой частотой.

Преймачук Е. А., Степанов А. А., Коротаев Е. В. Пономарев С. А.

АУ «Югорский научно-исследовательский институт с банком стволовых клеток», Ханты-Мансийск

РАСПРЕДЕЛЕНИЕ АЛЛЕЛЕЙ HLA У ЖИТЕЛЕЙ ХАНТЫ-МАНСИЙСКОГО АВТОНОМНОГО ОКРУГА

Введение. Необходимым условием для проведения аллогенной трансплантации гемопоэ-тических стволовых клеток (ГСК) является наличие гистосовместимого донора. Вероятность найти HLA-идентичных сиблингов внутри семьи составляет только 25 %. Поиск неродствен-

ного донора в существующих российских регистрах заканчивается результативно пока только в единичных случаях. Успешность поиска доноров для пациентов, проживающих в национальных регионах России, зависит от особенностей распределения HLA-аллелей среди населения.