Оценка параметров свободнорадикального окисления в ликворе и крови у детей с менингококковым менингитом

нов в положительную сторону под влиянием терапии ЦФ свидетельствует о том, что данный препарат является не только индуктором синтеза эндогенного интерферона, но и иммунокорректором (табл. 5).

Выводы

1. Включение циклоферона в комплексное лечение острых респираторных заболеваний вдвое сокращало сроки длительности основных клинических симптомов заболевания.

2. Профилактическое применение ЦФ способствовало снижению уровня заболеваемости респираторными инфекциями в 2 раза по сравнению с приемом поливитаминного комплекса "Ревит" в группе ЧБД.

3. В катамнезе у детей, принимавших циклоферон с лечебной целью, в 4 раза реже регистрируется ОРЗ.

4. Выявлено, что у частоболеющих детей имеет место дисбаланс цитокинов в сыворотке крови — низкая концентрация ИФН- , высокая ИЛ-4, ФИО- .

5. Показано, что через 1 мес. после использования ЦФ происходят позитивные сдвиги в иммунитете: достоверное увеличение концентрации ИФН- и снижение ИЛ-4, ФИО- .

Литература

1. Баранов A.A., Альбицкий В.Ю. Социальные и организационные проблемы педиатрии. М.: Династия, 2003.512 с.

2. Ершов Ф.И. Система интерферона в норме и патологии. М.: Медицина, 1996. 298 с.

3. Исаков В.А. Циклоферон в клинической практике: Метод, рек. для врачей. СПб., 2002. 48 с.

4. Ляпунов A.B., Балаболкин И.И., Ботвиньева В.В. и др. // Педиатрия. 2002. №4. С. 62-66.

5. Романцов М.Г. Респираторные заболевания: эти-опатогенез, клиника, лечение, профилактика: Рук-во для врачей. СПб., 2002. 80 с.

6. Семененко Т.А. // Проблемы инфектологии. М„ 1991. С. 388-391.

УДК 616.831.9 - 002:612.015

В.П. Молочный, Е.С. Новик, O.A. Лебедько, Г.Г. Обухова, Г.П. Березина, И.Е. Митяева

ОЦЕНКА ПАРАМЕТРОВ СВОБОДНОРАДИКАЛЬНОГО ОКИСЛЕНИЯ В ЛИКВОРЕ И КРОВИ У ДЕТЕЙ С МЕНИНГОКОККОВЫМ МЕНИНГИТОМ

Дальневосточный государственный медицинский университет, г. Хабаровск

К настоящему времени накопилось большое количество данных, свидетельствующих об участии свобод-норадикальных процессов в патогенезе рада инфекционных болезней у детей [2,3, 5,8]. Однако в доступной нам литературе сведения о характере свободнорадикаль-ных процессов при менингококковой инфекции у детей ограничены [3, 12], причем свободнорадикальный статус ликвора не изучен. Известно [4,5,11,13,15], что активные формы кислорода (АФК) при накоплении в больших концентрациях обладают цитотоксическнм эффектом, включая повреждение нервных клеток. Представляет интерес выяснить, насколько при менингокок-ковом менингите (ММ) у детей выражена интенсивность свободнорадикальных процессов не только на системном (в крови), но и органном (в ликворе) уровнях.

Цель исследования состояла в определении уровня маркеров свободнорадикального окисления в ликворе и крови у детей с ММ в острый период.

Материалы и методы

Материалом для исследования служили ликвор и сыворотка крови детей с ММ, получавших лечение в МУЗ "Детская инфекционная больница им. А.К. Пи-отровича" г. Хабаровска. Всего было обследовано 52 ребенка: 1 группа — 27 детей с ММ; 2 группа — сравнения — включала 25 детей без воспаления мозговых оболочек. Диагноз ММ был установлен на основании клинико-эпидемиологических данных и подтвержден при бактериологическом исследовании ликвора. Забор ликвора производился в острый период заболе-

вания путем спинно-мозговой пункции в типичном месте, по клиническим показаниям. Средний возраст в группах обследованных детей составил соответственно 2,3+0,6 и 2,9+0,5 г.

Для интегральной оценки процессов свободнора-дикального окисления (СРО) использовали метод хемилюминесценции (ХМЛ). Регистрацию ХМЛ осуществляли на люминесцентном спектрометре LS-50B фирмы "Perkin Elmer" (Швейцария). Стандартизацию сигнала и математическую обработку кривых выполняли с помощью встроенной программы Finlab.

Спонтанную и индуцированную Fe2+ ХМЛ исследовали по методу Ю.А. Владимирова и соавт. [2]. Определяли светосумму за 1 мин спонтанной ХМЛ (S,), величина которой коррелирует с интенсивностью сво-боднорадикальных процессов; максимум "быстрой" вспышки (h), индуцированной ХМЛ, свидетельствующий о содержании гидроперекисей липидов; светосумму (S2) за 2 мин, после "быстрой" вспышки, отражающую скорость образования перекисных радикалов.

Кинетику ХМЛ, инициированную Н202 в присутствии люминола [1], анализировали по следующим параметрам: светосумме люминол-зависимого свечения в течение 1 мин (S3), величина которой пропорциональна содержанию гидроксильных радикалов [2], максимуму свечения (Н), указывающему на потенциальную способность биологического объекта к пере-кисному окислению и светосумме за 2 мин ХМЛ (S4), величина которой свидетельствует об активности ан-тиоксидантной антирадикальной защиты (АОРЗ). Интенсивность ХМЛ выражали в относительных единицах.

Интенсивность процессов пероксидации липидов на промежуточном этапе оценивали спектрофотомет-рически — по содержанию малонового диальдегида (МДА) методом И.Д. Стальной [7]. Уровень МДА выражали в нмоль/л.

Помимо анализа показателей ХМЛ мы оценивали уровень общей антиокислительной активности (АОА) крови и ликвора спектрофотометрическим методом по Е.Б. Спектор и др. [6]. Оценка АОА исследуемой жидкости осуществлялась посредством определения ее ингибирующего действия на свободнорадикальное

Таблица 1

Показатели свободнорадикалыюго статуса ликвора у детей, больных менингококковым менингитом

Резюме

Проведено изучение процессов свободнорадикалыюго окисления в ликворе и крови у 27 детей с менингококковым менингитом в острый период. Выявлено нарушение этих процессов, проявляющееся развитием окснда-тивного стресса на органном и системном уровнях. Более выраженные изменения отмечались в ликворе.

V.P. Molochniy, E.S. Novik, О.А. Lebedko, G.G. Obukhova, G.P. Berezina, I.E. Mityaeva

FREE RADICALS OXIDATION PARAMETERS ASSESSMENT IN LIQUOR AND BLOOD IN CHILDREN WITH MENINGOCOCCAL MENINGITIS

FESMU, Khabarovsk Summary

We have studied the process of free radicals oxidation in liquor and blood in 27 children with meningococcal meningitis in an acute period. We have revealed that these processes impairment manifested as the development of oxidation stress at the organ (liquor) and systemic (blood) levels. More marked changes were observed in liquor.

окисление мембран эритроцитов, в которых окисление индуцировалось УФ-светом. Уровень АОА выражали в процентах.

Для оценки ферментативного звена АОРЗ мы использовали определение уровня супероксиддисмута-зы (СОД) по методу З.П. Черемисиной [9]. Оценка активности СОД осуществлялась по способности фермента подавлять люцигенинзависимую хемилюми-несценцию (ХЛ), специфичную для супероксидных радикалов, образующихся при окислении адреналина в щелочных условиях. Активность фермента выражали в процентах.

При исследовании состояния неферментативного звена АОРЗ проводили флуориметрическое определение содержания основного жирорастворимого ан-тиоксиданта -токоферола (вит. Е) по методу L.D. Hansen [ 14] в крови и ликворе. Уровень -токоферола выражали в мкмоль/л.

Результаты и обсуждение

Результаты исследования свободнорадикального статуса ликвора и крови у детей с ММ представлены в табл. 1 и 2.

Анализ полученных данных свидетельствует, что в ликворе детей с ММ имеет место повышение продукции свободных радикалов (CP): величина S( превышает аналогичный показатель у детей группы сравнения в 3,6 раза. При этом отмечается активизация первичного и промежуточного этапов процесса пере-кисного окисления липидов, о чем свидетельствует увеличение содержания гидроперекисей липидов (h) в 2,4 раза и МДА — в 4,8 раза по сравнению с аналогичными показателями, выявленными у детей из группы сравнения. Одним из механизмов гиперпродукции свободных радикалов, зарегистрированной у детей с ММ, является увеличение скорости образования перекисных радикалов липидной природы (S2 превыша-

Показатель Обследуемые группы детей Р

Больные менингококковым менингитом, п-27 Группа сравнения, п-25

S,, отн. ед. 1,54±0,12 0,435±0,045 <0,001

h, отн. ед. 1,895±0,16 0,765±0,054 <0,001

S2, отн. ед. 3,49±0,27 1,397±0,09 <0,001

S,, отн. ед. 1,98±0,195 0,692±0,048 <0,001

Н, отн. ед. 2,26+0,2.3 1,024±0,105 <0,001

S4, отн. ед. 3,895±0,38 1,277+0,091 <0,001

МДА, нмоль/л 3,26±0,31 0,68±0,057 <0,001

АОА, % 88±6,2 111±8,5 <0,05

СОД, % 25,29±2,47 38,63±3,51 <0,01

-токоферол, мкмоль/л 6,04±0,55 15,57±1,49 <0,001

Таблица 2

Показатели свободнорадикального статуса крови у детей с мениш ококковым менингитом

Показатель Обследуемые группы детей Р

Больные менингококковым менингитом, п-27 Группа сравнения, п-25

Б,, отн. ед. 1,37±0,12 0,51 ±0,04 <0,001

Ь, отн. ед. 1,55±0,09 0,88+0,08 <0,001

82, отн. ед. 2,88±0,23 1,49±0,14 <0,001

83, отн. ед. 1,21±0,13 0,68±0,07 <0,002

Н, отн. ед. 2,44+0,18 1,64±0,14 <0,002

5(, отн. ед. 3,23±0,28 2,01±0,22 <0,002

МДА, нмоль/л 2,77±0,12 0,92±0,07 <0,001

АОА, % 104,2±3,88 132,0±8,63 <0,05

СОД,% 31,99±3,05 49,02±2,41 <0,001

-токоферол, мкмоль/л 10,42±0,90 44,46±3,86 <0,001

ет в 2,4 раза данный показатель у детей группы сравнения). Содержание гидроксильных радикалов в лик-воре у детей с ММ было достоверно выше аналогичного показателя, обнаруженного у детей из группы сравнения, на что указывает превышение 53 в 2,9 раза.

При этом выявлено ослабление АОРЗ ликвора (Б,, у детей с ММ было больше в 3,1 раза) на фоне снижения резистентности организма к перекисному окислению (Н выше в 2,2 раза). Полученные нами данные при использовании спектрофотометрического метода исследования также свидетельствуют о снижении резервной емкости общей АО А. Общая АОА ликвора у детей с ММ была в 1,35 раза ниже аналогичного показателя, полученного у детей группы сравнения.

В этих процессах значимую роль играет угнетение активности неферментативного и ферментативного звеньев АОРЗ. Так, в ликворе детей с ММ содержание основного жирорастворимого антиоксиданта — -токоферола было снижено в 2,5 раза, а функциональная активность фермента СОД была снижена в 1,5 раза. По данным М.П. Шерстнева [10], величина амплитуды вспышки перекисной хемилюминесценции Н обратна каталазной активности исследуемого биосубстрата. Полученные нами данные (величина Н была в 2,2 раза выше у детей с ММ) свидетельствуют об одновременном угнетении активности каталазы в ликворе у детей с ММ. В табл. 2 представлены результаты исследования показателей свободнорадикальных процессов в крови детей, больных ММ.

Анализ свободнорадикального статуса крови детей с ММ показал, что, как и в ликворе, наблюдается интенсификация продукции СР: величина Б, превышает аналогичный показатель у детей из группы сравнения в 2,7 раза. Свидетельством активизации первичного и промежуточного этапов процесса перекисного окисления липидов является увеличение содержания гидроперекисей липидов (Ь) в 1,8 раза и МДА — в 3 раза по сравнению с аналогичными показателями, полученными у детей из группы сравнения. У детей с ММ зарегистрировано увеличение скорости образования перекис-ных радикалов липидной природы (Б2 превышает в 1,9 раза данный показатель, полученный у детей группы

сравнения). Содержание гидроксильных радикалов в крови у детей с ММ достоверно выше аналогичного показателя, выявленного у детей из группы сравнения, на что указывает превышение 83 в 1,8 раза. При этом также отмечается ослабление АОРЗ в целом (84 у детей с М М больше в 1,6 раза), в том числе за счет снижения резистентности к перекисному окислению (Н выше в 1,5 раза). Показатели общей АОА крови у детей с ММ были в 1,3 раза ниже аналогичного показателя, полученного у детей из группы сравнения. Уровень СОД в крови был снижен в 1,5 раза, уровень -токоферола — в 4,3 раза по сравнению с показателями, полученными у детей из группы сравнения. Увеличение амплитуды Н, обнаруженное в крови у детей с ММ (в 1,5 раза выше по сравнению с показателями, выявленными у детей из группы сравнения), отражает угнетение активности фермента каталазы.

Полученные нами результаты указывают на однонаправленные изменения показателей свободнорадикального статуса крови и ликвора у детей с ММ в остром периоде, причем более выраженные изменения были обнаружены в ликворе.

На фоне усиления процессов СРО в организме детей, больных ММ, выявлено ослабление АОРЗ за счет снижения как ферментативного звена (СОД и каталазы), так и вследствие снижения концентрации основного жирорастворимого антиоксиданта -токоферола.

Смещение баланса в системе "генерация СР — дезактивация СР" в сторону повышения свидетельствует о накоплении в крови и ликворе детей с ММ токсичных продуктов СРО радикальной (гидроксил-ра-дикал, перекисные радикалы липидной природы) и нерадикальной природы (гидроперекиси липидов, малоновый диальдегид).

Известно, что генерация АФК связана с состоянием "респираторного взрыва" нейтрофилов [4, 5]. При ММ наблюдается значительное увеличение числа нейтрофилов в ликворе и крови, особенно в зоне бактериального воздействия. По нашим данным, у детей с ММ среднее количество нейтрофилов составило 2410±200 в 1 мкл ликвора, 9,8±1,01 109/л в крови, в то время как у детей группы сравнения среднее число нейтрофилов было 3,17±0,35 в 1 мкл ликвора и 2,48±0,26 109/л крови.

Мы посчитали важным проверить наличие корреляции между числом нейтрофилов в соответствующих субстратах и величиной светосуммы спонтанной ХМЛ (Б,), отражающей интенсивность свободнорадикальных процессов, и величиной 53, отражающей содержание гидроксильных радикалов. Была установлена сильная положительная связь между количеством нейтрофилов и величиной (г=0,67) и сильная положительная связь между числом нейтрофилов и величиной Б3 (г=0,66), обнаруженных при исследовании ликвора. При анализе этих показателей, обнаруженных в крови у детей, больных ММ, коэффициент корреляции составил 0,73 и 0,44 соответственно.

На основании полученных нами данных мы посчитали возможным предположить, что воспалительная реакция при ММ сопровождается активацией процессов СРО в ликворе и крови на фоне угнетения АОРЗ. Можно также допустить, что многократное увеличение уровней показателей СРО, параллельное с увели-

чением числа нейтрофильиых лейкоцитов в крови и ликворе, не только является взаимосвязанным процессом, но и что нейтрофильные лейкоциты принимают непосредственное участие в продукции активных кислородных метаболитов у этих больных.

Выводы

1. У детей с ММ в острый период выявляется активизация процессов свободнорадикального окисления в крови и ликворе на фоне снижения антиоксидантной антирадикальной защиты, проявляющейся развитием локального и системного оксидативного стресса.

2. Выявленные нарушения свободнорадикального статуса крови и ликвора могут иметь патогенетическое значение в развитии ММ у детей и служить диагностическим критерием воспалительного процесса в оболочках мозга.

3. Интенсивность процессов СРО в ликворе и крови коррелирует с количеством нейтрофильных лейкоцитов, что позволяет предположить их патогенетическую взаимосвязь.

Литература

1. Арутюнян A.B. Методы оценки свободнорадикального окисления и антиоксидантной системы организма: Мет. рек. СПб.: Наука, 2000.198 с.

2. Владимиров Ю.А. // ВИНИТИ АН СССР: Итоги науки и техники. Сер. Биофизика. М., 1991. Т. 29. 147 с.

3. Львовский Л.М. // Актуальные вопросы инфекционной патологии у детей: Мат-лы II Конгресса педиатров-инфекционистов России, Москва, 8-10 дек. 2003. СПб.: Спец. лит., 2003. С. 105-106.

4. Меньшикова Е.Б., Ланкин В.З., Зенков Н.К. и др. Окислительный стресс. Прооксиданты и антиок-сиданты. М.: Фирма "Слово", 2006. 556 с.

5. Оценка интенсивности свободнорадикального окисления в клетках и плазме крови для дифференцированного подхода к назначению антиоксидантной терапии: Пос. для врачей. СПб., 2002.30 с.

6. Спектор Е.Б., Ананенко A.A., Политова Л.Н. // Лабораторное дело. 1984. №1. С. 26-28.

7. Стальная И.Д., Гаришвили Т.Г. // Современные методы в биохимии / Под ред. В.П. Ореховича. М.: Медицина, 1977.68 с.

8. Учайкин Г.Ф., Сапега Е.Ю., Дубинин Е.С. и др. // Дальневосточный журнал инфекционной патологии. 2003. №2. С. 78-80.

9. Черемисина З.П., Суслова Т.Б., Коркина Л.Г. // Клиническая лабораторная диагностика. 1994. №1. С. 22-23.

10. Шерстнев М.П. Разработка хемилюминесцен-тных методик исследования плазмы и клеток крови для оценки состояния больных: Автореф. дис.... д-ра мед. наук. М., 1997.43 с.

11. Bayir H., Kagan V.E, Tyurina Y.Y. // Pediatr Res. 2002. Vol. 51, P. 571-578.

12. Grifantini R., Frigimelica E., Delany I. et al. // Mol. Microbiol. 2004. Vol. 54, P. 96.

13. Ringel F., Bieringer F., Baethmann A. et al. //J. Neurotrauma. 2006. Vol. 24. P. 163.

14. Hansen L.D., Warioric W.T. // Amer. J. Clin. Pathol. 1966. Vol. 46, P. 117.

15. Loh К., Huang S., Silva R. et al. // Curr Alzheimer Res. 2006. Vol. 9, P.327.

УДК 577.17.049:616 - 053/2]

П.Г. Петрова, Н.В. Борисова, У.Д. Антипина, Г.А. Егорова

СОСТОЯНИЕ ЗДОРОВЬЯ И ЭЛЕМЕНТНЫЙ СТАТУС ДЕТЕЙ АЛМАЗОДОБЫВАЮЩЕГО РЕГИОНА РЕСПУБЛИКИ САХА

Медицинский институт Якутского государственного университета, г. Якутск

Несмотря на чрезвычайно низкую концентрацию микроэлементов в организме (менее 0,01% массы), их роль в росте, развитии и обмене чрезвычайно велика. Будучи специфическими металлокомпонентами либо неспецифическими активаторами различных фермен-

тных систем, микроэлементы находятся в тесной связи с витаминами, гормонами, нуклеиновыми кислотами и участвуют во всех функциях организма. При этом стабильность химического состава организма является одним из обязательных и важнейших усло-