СПОСОБ ДЕЗИНВАЗИИ ЯИЦ СТРОНГИЛЯТ ЛОШАДЕЙ С ПРИМЕНЕНИЕМ ШТАММОВ БАКТЕРИЙ Bacillus subtilis THП-3, Bacillus subtilis-THП-5
METHOD FOR EQUINE STRONGYLE EGG DISINVASION WITH USE OF BACTERIAL STRAIN Bacillus subtilis TNP-3, Bacillus subtilis-TNP-5

Изобретение относится к области ветеринарной микробиологии и биотехнологии, в частности к методам обеззараживания навоза от яиц стронгилят.
Известны спорообразующие кристаллофорные штаммы бактерий Bacillus thuringiensis, различные подвиды которых обладают избирательным действием в отношении не только насекомых, но и некоторых микроорганизмов (Юдина и Бурцева, 1987, Смирнов О.В., 2000).
Имеются данные о неспецифическом действии дельта-эндотоксинов представителей родов Micrococcus, Bacillus, Streptomyces (Юдина и соавт., 1988, 1997), а также различных бактерий рода Bacillus на фитопатогенные грибы (Смирнов, 2000, Мелентьев, 2000).
Штамм бактерий «Bacillus subtilis ТНП-3-ДЕП» применяется для обеззараживания птичьего помета и навоза от патогенных микроорганизмов (патент РФ на изобретение №2105810, C12N 1/20, В09С 1/0, опубл. 27.02.1998, бюл. №6). Однако нет сведений о применении штаммов бактерий Bacillus subtilis «ТНП-3» и Bacillus subtilis «ТНП-5» для дезинвазии яиц стронгилят лошадей.
Технической задачей заявляемого изобретения является использование штамма бактерий Bacillus subtilis «ТНП-3» или Bacillus subtilis «ТНП-5» для дезинвазии яиц стронгилят лошадей.
В основу изобретения положена задача разработки способа борьбы с яйцами стронгилят с использованием культуральной жидкости штамма бактерий Bacillus subtilis «ТНП-3» или Bacillus subtilis «ТНП-5».
Штаммы бактерий Bacillus subtilis ТНП-3-ДЕП и Bacillus subtilis ТНП-5-ДЕП депонированы в коллекции микроорганизмов Всероссийского государственного института контроля стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов (ВГНКИ) (справки о депонировании штаммов от 6 февраля 2001 г., №180/15 и №181/15).
Штаммы могут быть получены в лаборатории по разработке микробных препаратов Якутского НИИ сельского хозяйства СО РАСХН и ВГНКИ.
Штаммы бактерий Bacillus subtilis ТНП-3-ДЕП и Bacillus subtilis ТНП-5-ДЕП выращивают в мясопептонном бульоне pH 7,0-7,2 в течение 5 суток при температуре 37°C, затем суспензируют в физиологическом растворе хлористого натрия в концентрации 5 млрд. микробных клеток в 1 мл. Затем фильтруют через миллипоровые фильтры.
Технический результат изобретения - способ дезинвазии яиц стронгилят лошадей с применением культуральной жидкости штамма бактерий Вас. subtilis ТНП-3 или Вас. subtilis ТНП-5.
Для определения действия культуральной жидкости штаммов бактерий в бактериологические чашки с 0,75%-ным агаром наливают 10 мл культуральной жидкости штамма бактерий Вас. subtilis ТНП-3 или Вас. subtilis ТНП-5. В качестве тест-объектов при определении антагонистической активности штаммов бактерий используют яйца стронгилят, выделенные из проб фекалий лошадей.
Для выделения яиц стронгилят пробы фекалий исследуют методом Фюллеборна (1927). Всплывшие на поверхность яйца стронгилят снимают проволочной петлей и переносят на чашки Петри (по 200 яиц в каждой чашке Петри). В контрольной чашке Петри вместо культуральной жидкости штаммов бактерий наливают 10 мл дистиллированной воды.
Чашки Петри с яйцами стронгилят помещают в термостат с режимом культивирования 30°C. В течение 10 суток после внесения яиц на средах проводят микроскопию образцов проб и фотосъемку, а также подсчет яиц стронгилят в опытных и контрольных чашках Петри.
При просмотре микроскопом на 7 сутки обнаруживают:
В средах с культуральной жидкостью штамма бактерий Bacillus subtilis ТНП-3 - 200 экз. яиц стронгилят округлой или деформированной формы, внешняя оболочка лизирована или истончена.
В средах с культуральной жидкостью штамма бактерий Bacillus subtilis ТНП-5 - 200 экз. яиц стронгилят деформированной или округлой формы, уменьшенного размера, внешняя оболочка истончена.
В контрольной чашке Петри отмечают 100 подвижных личинок стронгилят, 100 экз. яиц стронгилят без изменений или в них происходит формирование личинок.
Для изучения эффективности культуральной жидкости штаммов бактерий Bacillus subtilis ТНП-3 и Bacillus subtilis ТНП-5 используют навоз лошадей, содержащий яйца стронгилят. Для испытания берут 2 опытные и контрольную пробы, общее число яиц стронгилят в опытных пробах составляет - 11308 экз., в контрольной - 11120 экз. Для опыта используют пол денника с площадью 1 кв. м, содержащий 4,5 кг навоза. В опытной пробе навоза с 11308 экз. яиц стронгилят опрыскивают 400 мл культуральной жидкости штамма бактерий Bacillus subtilis ТНП-3 или Bacillus subtilis ТНП-5. В контрольной пробе навоза с 11120 экз. яиц стронгилят наливают 400 мл дистиллированной воды. Пробы с навозом выдерживают в хорошо вентилируемом помещении при температуре 18-20°C в течение 10 суток.
При просмотре микроскопом на 10 сутки обнаруживают:
Из пробы с культуральной жидкостью штамма бактерий Bacillus subtilis ТНП-3 или Bacillus subtilis ТНП-5 берут по 5 грамм фекалий. При исследовании проб с культуральной жидкостью штамма бактерий Bacillus subtilis ТНП-3 обнаруживают 200 экз. яиц стронгилят округлой или деформированной формы, внешняя оболочка которых лизирована или истончена. При микроскопии пробы с культуральной жидкостью штамма бактерий Bacillus subtilis ТНП-5 отмечают 250 экз. яиц стронгилят.
В контрольных пробах при исследовании фекалий обнаруживают 1200 подвижных личинок стронгилят, 1500 экз. яиц стронгилят без изменений или в них происходит формирование личинок.
Таким образом, культуральные жидкости штаммов бактерий Bacillus subtilis «ТНП-3» и Bacillus subtilis «ТНП-5» губительно действуют на яйца стронгилят лошадей и могут быть использованы для обеззараживания навоза и окружающей среды, обсемененных яйцами стронгилят.