СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ СУЛЬФАМИДНЫХ ПРЕПАРАТОВ В ЛЕКАРСТВЕННЫХ ФОРМАХ
METHOD OF QUANTITATIVE DETERMINATION OF SULPHA PREPARATIONS IN DRUG FORMS

Изобретение относится к аналитической химии, может быть использовано для контроля за содержанием сульфамидных препаратов в различных объектах.
Целью изобретения является создание высокочувствительной экспресс-методики определения содержания сульфамидных препаратов в лекарственных формах. Сульфамидные препараты со свободной первичной аминогруппой легко диазотируются в кислой среде. В результате азосочетания образовавшихся диазосоединений с щелочным раствором β-нафтола в присутствии ацетата Na образуются интенсивно окрашенные азосоединения. Методика рекомендована Государственной Фармакопеей как общегрупповое испытание на подлинность лекарственных веществ, содержащих первичную ароматическую аминогруппу [Фармацевтическая химия. Под ред. проф. А.П.Арзамасцева. М.: ГЭОТАР-Медиа, 2006, 640 с.] [1].
Вместе с тем, при азосочетании диазотированных сульфамидных препаратов с β-нафтолом формируются окрашенные осадки, а скорость их формирования сильно зависит от концентрации сульфамидов. Это обстоятельство является препятствием к дальнейшему использованию данной реакции.
4
Целью изобретения является создание высокочувствительной экспресс-методики определения содержания сульфамидных препаратов в лекарственных формах. Поставленная задача достигается тем, что диазотированные по свободной аминогруппе сульфамиды сочетают с хромотроповой кислотой, в результате чего образуются воднорастворимые окрашенные в красный цвет азосоединения с молярным коэффициентом светопоглощения 4,5·10 при 530 нм. Азосоединения формируются быстро, они не меняют своих оптических характеристик во времени.
Образование соли диазония. Сульфамиды общей формулы
в солянокислой среде в присутствии нитрита натрия образуют соли диазония
В присутствии хромотроповой кислоты и соли диазония образуется азосоединение, окрашенное в яркий алый цвет (λ=530 нм).
3
3
3
3
3
3
2
3
2
Выполнение определения. Навеску сульфамидного препарата 0,01 г, взятого после измельчения таблетки, растворяют в HCl и доливают воду до 10 см. Отдельно приготавливают раствор нитрита натрия (0,01 г в 10 см воды) и хромотроповой кислоты (0,03 г в 10 см воды +2 кристаллика NaCO·10 HO). Мелко дробят лед, помещают в стакан емкостью 100 см 20 г льда, вносят раствор сульфамида и нитрита натрия. Через 1 мин добавляют хромотроповую кислоту и доводят объем раствора до 50 см водой. Формируется азосоединение, окрашивающее раствор в алый цвет. В зависимости от интенсивности окраски отбирают в кюветы толщиной от 0,1 до 1,0 см полученный раствор и измеряют оптическую плотность его при 530 нм.
3
3
Градуированные графики. В серию стаканчиков отбирают разбавленный в 100 раз исходный раствор: 0; 0,05; 0,1; 0,20; 0,40; 0,60; 1,0; 2,0; 5,0 см, вносят, как в прописи для определения лед, нитрит натрия, соляную кислоту и через 1 мин хромотроповую кислоту и доводят объем до 50 см водой. Измеряют оптические плотности при 530 нм в кювете толщиной 1 см относительно воды. Градуировочные графики для определения сульфамидов в индивидуальных препаратах приведены на чертеже.
Результаты определения индивидуальных сульфамидных препаратов в их растворах приведены в таблице 1.
Таблица 1.Метрологические характеристики методики определения азосоединений сульфамидов в индивидуальных препаратах фотометрическим методом, n=6. P=0,95; t<sub>p</sub>=2,57.
Препарат
Внесено в воду, мг/дм<sup>3</sup>
Найдено, мг/дм<sup>3</sup>
Данным методом
По методике [1]
Стрептоцид
0,01
0,01±0,005
0,01±0,01
0,10
0,10±0,01
0,10±0,05
1,00
1,00±0,15
1,00±0,25
Норсульфазол
0,01
0,01±0,005
0,01±0,01
0,10
0,10±0,01
0,10±0,05
1,00
1,00±0,10
1,00±0,30
Этазол
0,01
0,01±0,005
0,01±0,01
0,10
0,10±0,01
0,10±0,05
1,00
1,00±0,15
1,00±0,30
Сульфадимезин
0,01
0,01±0,005
0,01±0,01
0,10
0,10±0,01
0,10±0,05
1,00
1,00±0,15
1,00±0,30
Как видно из табл.1, разработанная методика по метрологическим характеристикам превосходит широко используемую.
Тонкослойная хроматография соединений. Образующиеся соединения хорошо растворимы в воде и водно-этанольных смесях до содержания этанола на уровне 60%. Соединения хорошо адсорбируются силикагелями (например, силикагелем А-60), на крахмале и целлюлозе, что обеспечивает возможность разделения их с помощью хроматографии, в том числе и тонкослойной хроматографии (ТСХ). Было проверено ТСХ разделение полученных азосоединений на пластинках Sorbfil ПТСХ-АВ-В (ТУ 26-11-17-89).
3
-3
f
Выполнение разделения. На пластинку Sorbfil ПТСХ-АВ-В через 1 см на линии старта вносят по 0,03 см (1 капля) 10 М раствора каждого из азопроизводных сульфамидов. Пластинку опускают в стакан, на дно которого на высоту 0,5 см налита смесь этанола, уксусной кислоты и воды в соотношении 50:1:49. Стакан накрывают колпаком. После того как подвижная фаза достигнет верхней отметки пластины (1 см от верхнего края), пластинку вынимают, подсушивают в токе воздуха (вентилятор) и измеряют расстояния, пройденные отдельными компонентами. Эти расстояния достаточно близки, однако они различаются. Рассчитывают коэффициент разделения R
0
x
где h - расстояние, пройденное подвижной фазой, h - расстояние, пройденное азосоединением. Результаты разделения приведены в таблице 2.
Таблица 2.Хроматографические характеристики (R<sub>f</sub>) азопроизводных сульфамидных препаратов.
Производные сульфамидов
R<sub>f</sub>
Цвет пятна
Смесь производных
R<sub>f</sub>
Стрептоцид
0,65
Алый
Стрептоцид,
0,65
Норсульфазол
0,45
Алый
норсульфазол, этазол,
0,45
Этазол
0,55
Алый
сульфадимазин пятна хорошо
0,55
Сульфадимазин
0,60
Алый
разделяются и различаются
0,60
Таким образом, при диазотировании смеси сульфамидов получают смесь их азопроизводных, которые при ТСХ хроматографировании хорошо разделяются. По отдельным пятнам можно легко судить о наличии в смеси различных сульфамидов.