Выделенный модифицированный белок VPI капсида аденоассоциированного вируса 9 серотипа (AAV9), капсид и вектор на его основе

1. Выделенный модифицированный белок VP1 капсида аденоассоциированного вируса 9 серотипа (AAV9) для высокоэффективной продукции инкапсидированных вирусных векторов на основе рекомбинантного аденоассоциированного вируса 9 серотипа (rAAV9), содержащий аминокислотную последовательность белка VP1 капсида AAV9 дикого типа, кодируемую геном Сар, с одой или несколькими заменами, которые выбраны из группы:
F422W,
F422W и Y446F,
I601M,
где аминокислотная последовательность белка VP1 капсида AAV9 дикого типа имеет аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 1.
2. Выделенный модифицированный белок VP1 капсида AAV9 по п. 1, который включает замену в положении F422W.
3. Выделенный модифицированный белок VP1 капсида AAV9 по п. 2, который имеет аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 2.
4. Выделенный модифицированный белок VP1 капсида AAV9 по п. 1, который включает замены F422W и Y446F.
5. Выделенный модифицированный белок VP1 капсида AAV9 по п. 4, который имеет аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 3.
6. Выделенный модифицированный белок VP1 капсида AAV9 по п. 1, который включает замену I601M.
7. Выделенный модифицированный белок VP1 капсида AAV9 по п. 6, который имеет аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 4.
8. Выделенная нуклеиновая кислота, кодирующая модифицированный белок VP1 капсида аденоассоциированного вируса 9 серотипа по любому из пп. 1-7, который используется для высокоэффективной продукции инкапсидированных вирусных векторов на основе рекомбинантного аденоассоциированного вируса 9 серотипа.
9. Выделенная нуклеиновая кислота по п. 8, кодирующая модифицированный белок VP1 капсида аденоассоциированного вируса 9 серотипа с аминокислотной заменой F422W, которая представлена нуклеиновой последовательностью с SEQ ID NO: 6 или любой другой последовательностью, кодирующей соответствующую аминокислотную последовательность.
10. Выделенная нуклеиновая кислота по п. 8, кодирующая модифицированный белок VP1 капсида аденоассоциированного вируса 9 серотипа с аминокислотными заменами F422W и Y446F, которая представлена нуклеиновой последовательностью с SEQ ID NO: 7 или любой другой последовательностью, кодирующей соответствующую аминокислотную последовательность.
11. Выделенная нуклеиновая кислота по п. 8, кодирующая модифицированный белок VP1 капсида аденоассоциированного вируса 9 серотипа с аминокислотной заменой I601M, которая представлена нуклеиновой последовательностью с SEQ ID NO: 8 или любой другой последовательностью, кодирующей соответствующую аминокислотную последовательность.
12. Выделенный капсид для высокоэффективной продукции инкапсидированных вирусных векторов на основе рекомбинантного аденоассоциированного вируса 9 серотипа, который включает модифицированный белок VP1 капсида аденоассоциированного вируса 9 серотипа по любому из пп. 1-7.
13. Выделенный капсид по п. 12, который включает модифицированный белок VP1 капсида аденоассоциированного вируса 9 серотипа по любому из пп. 1-7, белок VP2 капсида AAV9 или его модифицированный вариант и белок VP3 капсида AAV9 или его модифицированный вариант.
14. Выделенный капсид по п. 13, который включает белок VP2 капсида AAV9 дикого типа.
15. Выделенный капсид по п. 14, который включает белок VP2 капсида AAV9 дикого типа, который имеет аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 9.
16. Выделенный капсид по п. 13, который включает модифицированный белок VP2 капсида аденоассоциированного вируса 9 серотипа.
17. Выделенный капсид по п. 16, который включает модифицированный белок VP2 капсида AAV9, который содержит замену F285W.
18. Выделенный капсид по п. 17, который включает модифицированный белок VP2 капсида AAV9, который содержит замену F285W, и имеет аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 10.
19. Выделенный капсид по п. 16, который включает модифицированный белок VP2 капсида AAV9, который содержит замены F285W и Y309F.
20. Выделенный капсид по п. 19, который включает модифицированный белок VP2 капсида AAV9, который содержит замены F285W и Y309F, и имеет аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 11.
21. Выделенный капсид по п. 16, который включает модифицированный белок VP2 капсида AAV9, который содержит замену I464M.
22. Выделенный капсид по п. 21, который включает модифицированный белок VP2 капсида AAV9, который содержит замену I464M, и имеет аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 12.
23. Выделенный капсид по п. 13, который включает белок VP3 капсида AAV9 дикого типа.
24. Выделенный капсид по п. 23, который включает белок VP3 капсида AAV9 дикого типа, который имеет аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 17.
25. Выделенный капсид по п. 13, который включает модифицированный белок VP3 капсида аденоассоциированного вируса 9 серотипа.
26. Выделенный капсид по п. 25, который включает модифицированный белок VP3 капсида AAV9, который содержит замену F220W.
27. Выделенный капсид по п. 26, который включает модифицированный белок VP3 капсида AAV9, который содержит замену F220W, и имеет аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 18.
28. Выделенный капсид по п. 25, который включает модифицированный белок VP3 капсида AAV9, который содержит замены F220W и Y244F.
29. Выделенный капсид по п. 28, который включает модифицированный белок VP3 капсида AAV9, который содержит замены F220W и Y244F, и имеет аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 19.
30. Выделенный капсид по п. 25, который включает модифицированный белок VP3 капсида AAV9, который содержит замену I399M.
31. Выделенный капсид по п. 30, который включает модифицированный белок VP3 капсида AAV9, который содержит замену I399M, и имеет аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 20.
32. Выделенная нуклеиновая кислота, кодирующая капсид по любому из пп. 12-31, который используется для высокоэффективной продукции инкапсидированных вирусных векторов на основе рекомбинантного аденоассоциированного вируса 9 серотипа.
33. Вектор на основе рекомбинантного аденоассоциированного вируса 9 серотипа для доставки субъекту гетерологичной последовательности нуклеиновой кислоты, который включает:
1) модифицированный белок VP1 капсида аденоассоциированного вируса 9 серотипа по любому из пп. 1-7 или капсид по любому из пп. 12-31, и
2) гетерологичную последовательность нуклеиновой кислоты, содержащую регуляторные последовательности, которые обеспечивают экспрессию продукта, кодируемого гетерологичной последовательностью нуклеиновой кислоты, в целевых клетках.
34. Вектор на основе rAAV9 по п. 33, где продукт экспрессии гетерологичной последовательности нуклеиновой кислоты представляет собой терапевтический полипептид или репортерный полипептид.
35. Фармацевтическая композиция для доставки генного продукта нуждающемуся в этом субъекту, содержащая:
a) вектор на основе rAAV9 по любому из пп. 33, 34; и
b) фармацевтически приемлемый эксципиент.
36. Способ доставки генного продукта нуждающемуся в этом субъекту, который включает введение субъекту вектора на основе rAAV9 по любому из пп. 33, 34 или фармацевтической композиции по п. 35.
37. Применение вектора на основе rAAV9 по любому из пп. 33, 34 или фармацевтической композиции по п. 35 для лечения заболевания у нуждающегося в этом субъекта.
38. Применение по п. 37, где заболевание выбирают из группы: заболевания крови; заболевания центральной нервной системы; заболевания метаболизма; заболевания мышц; наследственные заболевания.
39. Способ получения вектора на основе rAAV9 по любому из пп. 33, 34, который включает трансфекцию клеток-продуцентов, соответственно, нуклеиновой кислотой, содержащей последовательность, кодирующую модифицированный белок VP1 капсида аденоассоциированного вируса 9 серотипа, по любому из пп. 8-11 или нуклеиновой кислотой, кодирующей капсид, по п. 32.