ПРОЦЕССЫ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ В СИСТЕМЕ ПОСЕВНЫХ ФЕРМЕНТЕРОВ И СПОСОБЫ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ

1. Способ культивирования в системе посевных ферментеров, включающий:
(a) помещение некоторого количества рекомбинантных клеток млекопитающих в первую культуральную среду, содержащуюся в сосуде, с получением первой культуры клеток;
6
6
(b) периодическое культивирование первой культуры клеток до диапазона плотности клеток от приблизительно 1,0×10 до приблизительно 5,0×10 клеток/мл;
6
6
(c) помещение некоторого объема первой культуры клеток из стадии (b) во вторую культуральную среду, содержащуюся в перфузионном биореакторе, с получением второй культуры клеток при исходной плотности клеток в диапазоне от приблизительно 0,25×10 до приблизительно 0,5×10 клеток/мл;
6
6
(d) перфузионное культивирование второй культуры клеток до диапазона плотности клеток от приблизительно 5×10до приблизительно 120×10клеток/мл; и
6
6
(e) помещение некоторого объема второй культуры клеток из стадии (d) в третью культуральную среду, содержащуюся в производственном биореакторе, с получением культуры клеток-продуцентов при исходной плотности клеток в диапазоне от приблизительно 0,25×10 до приблизительно 8×10 клеток/мл.
2. Способ по п. 1, где помещение некоторого количества рекомбинантных клеток млекопитающих на стадии (a) включает:
размораживание замороженного клеточного банка и
помещение некоторого объема размороженного клеточного банка в первую культуральную среду.
3. Способ по п. 1, где помещение некоторого количества рекомбинантных клеток млекопитающих на стадии (a) включает помещение некоторого объема третьей культуры клеток, содержащей некоторое количество рекомбинантных клеток млекопитающих, в первую культуральную среду.
4. Способ по п. 3, дополнительно включающий:
(1) помещение некоторого количества рекомбинантных клеток млекопитающих в четвертую культуральную среду, содержащуюся в сосуде, с получением третьей культуры клеток;
6
6
(2) периодическое культивирование третьей культуры клеток из стадии (1) до диапазона плотности клеток от приблизительно 1,0×10 до приблизительно 5,0×10 клеток/мл,
где некоторый объем третьей культуры клеток из стадии (2) помещают в первую культуральную среду на стадии (a).
5. Способ по п. 4, где помещение некоторого количества рекомбинантных клеток млекопитающих на стадии (1) включает:
размораживание замороженного клеточного банка и
помещение некоторого объема размороженного клеточного банка в четвертую культуральную среду.
6. Способ по п. 1, где:
первая культура клеток на стадии (a) характеризуется диапазоном объема от приблизительно 1,0 до приблизительно 50 л;
вторая культура клеток на стадии (с) характеризуется диапазоном объема от приблизительно 5 до приблизительно 600 л; и/или
культура клеток-продуцентов на стадии (e) характеризуется диапазоном объема от приблизительно 50 до приблизительно 20000 л.
7. Способ по п. 1, где:
сосуд на стадии (a) характеризуется диапазоном внутреннего объема от приблизительно 1,5 до приблизительно 100 л;
перфузионный биореактор на стадии (c) характеризуется диапазоном внутреннего объема от приблизительно 7,5 до приблизительно 1000 л; и/или
производственный биореактор на стадии (e) характеризуется диапазоном внутреннего объема от приблизительно 150 до приблизительно 25000 л.
8. Способ по п. 1, где:
6
6
исходная плотность клеток на стадии (e) находится в диапазоне от приблизительно 2,0×10 до приблизительно 8×10 клеток/мл; и/или
исходная плотность клеток на стадии (e) составляет по меньшей мере 10% от плотности клеток-продуцентов на стационарной фазе.
9. Способ получения рекомбинантного белка, включающий:
(a) помещение некоторого количества рекомбинантных клеток млекопитающих в первую культуральную среду, содержащуюся в сосуде, с получением первой культуры клеток;
6
6
(b) периодическое культивирование первой культуры клеток до диапазона плотности клеток от приблизительно 1,0×10 до приблизительно 5,0×10клеток/мл;
6
6
(c) помещение некоторого объема первой культуральной среды с клетками из стадии (b) во вторую культуральную среду, содержащуюся в перфузионном биореакторе, с получением второй культуры клеток при исходной плотности клеток в диапазоне от приблизительно 0,25×10 до приблизительно 0,5×10 клеток/мл;
6
6
(d) перфузионное культивирование второй культуры клеток до диапазона плотности клеток от приблизительно 5×10 до приблизительно 60×10 клеток/мл;
6
6
(e) помещение некоторого объема второй культуры клеток из стадии (d) в третью культуральную среду, содержащуюся в производственном биореакторе, с получением культуры клеток-продуцентов при исходной плотности клеток в диапазоне от приблизительно 0,25×10 до приблизительно 8×10 клеток/мл;
(f) перфузионное культивирование культуры клеток-продуцентов в условиях, которые позволяют рекомбинантным клеткам млекопитающих секретировать рекомбинантный белок; и
(g) сбор рекомбинантного белка из культуры клеток-продуцентов.
10. Способ по п. 9, где помещение некоторого количества рекомбинантных клеток млекопитающих на стадии (a) включает:
размораживание замороженного клеточного банка и
помещение некоторого объема размороженного клеточного банка в первую культуральную среду.
11. Способ по п. 9, где помещение некоторого количества рекомбинантных клеток млекопитающих на стадии (a) включает помещение некоторого объема третьей культуры клеток, содержащей некоторое количество рекомбинантных клеток млекопитающих, в первую культуральную среду.
12. Способ по п. 11, дополнительно включающий:
(1) помещение некоторого количества рекомбинантных клеток млекопитающих в четвертую культуральную среду, содержащуюся в сосуде, с получением третьей культуры клеток;
6
6
(2) периодическое культивирование третьей культуры клеток на стадии (1) до диапазона плотности клеток от приблизительно 1,0×10 до приблизительно 5,0×10 клеток/мл,
где некоторый объем третьей культуры клеток из стадии (2) помещают в первую культуральную среду на стадии (a).
13. Способ по п. 12, где помещение некоторого количества рекомбинантных клеток млекопитающих на стадии (1) включает:
размораживание замороженного клеточного банка и
помещение некоторого объема размороженного клеточного банка в четвертую культуральную среду.
14. Способ по п. 9, где:
первая культура клеток на стадии (a) характеризуется диапазоном объема от приблизительно 1,0 до приблизительно 50 л;
вторая культура клеток на стадии (с) характеризуется диапазоном объема от приблизительно 5 до приблизительно 600 л; и/или
культура клеток-продуцентов на стадии (e) характеризуется диапазоном объема от приблизительно 50 до приблизительно 20000 л.
15. Способ по п. 9, где:
сосуд на стадии (a) характеризуется диапазоном внутреннего объема от приблизительно 1,5 до приблизительно 100 л;
перфузионный биореактор на стадии (c) характеризуется диапазоном внутреннего объема от приблизительно 7,5 до приблизительно 1000 л; и/или
производственный биореактор на стадии (e) характеризуется диапазоном внутреннего объема от приблизительно 150 до приблизительно 25000 л.
16. Способ по п. 9, где:
6
6
исходная плотность клеток на стадии (e) находится в диапазоне от приблизительно 2,0×10 до приблизительно 8×10 клеток/мл; и/или
исходная плотность клеток на стадии (e) составляет по меньшей мере 10% от плотности клеток-продуцентов на стационарной фазе.
17. Способ по п. 9, где перфузионное культивирование на стадии (f) приводит к получению культуры клеток-продуцентов, достигающей плотности клеток-продуцентов на стационарной фазе за период от приблизительно 1 дня до приблизительно 10 дней.
18. Способ по п. 9, где сбор на стадии (g) включает удаление культуральной среды из производственного биореактора.
19. Способ по п. 18, дополнительно включающий выделение рекомбинантного белка из удаленной культуральной среды.
20. Способ по п. 19, дополнительно включающий составление выделенного рекомбинантного белка в фармацевтическое средство.