Производные фенотиазина и способы их применения
PHENOTHIAZINE DERIVATIVES AND METHODS FOR USE THEREOF

РОДСТВЕННЫЕ ЗАЯВКИ
Эта заявка испрашивает приоритет и преимущества на основании заявки США с серийным номером 15/625118, поданной 16 июня 2017 года, которая представляет собой продолжающую заявку для заявки США с серийным номером 15/295769, поданной 17 октября 2016 года, теперь патента США №9695138, содержания каждой из которых включены в данное описание посредством ссылки во всей своей полноте.
ПРЕДШЕСТВУЮЩИЙ УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
Большинство пациентов с немелкоклеточным раком легкого (NSCLC) имеют неоперабельное заболевание, требующее применения системной терапии. Резистентность к химиотерапии, например, ингибитору рецептора эпидермального фактора роста-тирозинкиназы (EGFR-TKI), представляет собой главную проблему в случае системного лечения NSCLC. Например, резистентность к химиотерапии можно объяснить теорией раковых стволовых клеток (CSC). Показано, что CSC обладают характеристиками стволовых клеток, например, способностью к самообновлению, повышенной миграцией и стрессовой и лекарственной резистентностью, и все это вовлечено в рецидив рака и метастазирование рака (Yeh et al., Am. J. Respir. Crit. Care Med., 186, 1180 (2012)). Для лечения рака необходимы новые лекарственные средства.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Согласно одному из аспектов настоящего изобретения предложено фенотиазиновое соединение формулы (Ia):
или его фармацевтически приемлемая соль, где:
2
2
m
2
2
n
2
2
m
2
2
n
2
2
n
2
2
m
1
2
3
1
2
1
2
Олиго представляет собой олигомер или соолигомер, выбранный из группы, состоящей из -[CHCH(OR)СНО]-R, -[CHCHO]-R, -[CHCH(OR)СНО]-[CHCHO]-R и -[CHCHO]-[CHCH(OR)СНО]-R;
1
4
1
4
R представляет собой Н, галоген, С-Салкил, замещенный одним или более чем одним галогеном, или -S-С-Салкил;
1
2
3
1
4
каждый из R, R и R независимо представляет собой Н или С-Салкил;
2
X представляет собой связь, С(О), С(O)O или С(O)CHO;
m представляет собой целое число в диапазоне от 2 до 16, и
2
2
n
2
3
3
n представляет собой целое число в диапазоне от 3 до 16, и когда Олиго представляет собой -[CHCHO]-R, где n равно 12 или 13, и R представляет собой метил, тогда X представляет собой С(О), С(O)O или С(O)CHO.
Согласно другому аспекту настоящего изобретения предложен способ лечения рака (например, рака легкого, такого как немелкоклеточный рак легкого или NSCLC, рака толстой кишки, рака молочной железы или рака поджелудочной железы), включающий введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества соединения формулы (I):
или его фармацевтически приемлемой соли, где:
2
2
m
2
2
n
2
2
m
2
2
n
2
2
n
2
2
m
1
2
3
1
2
1
2
Олиго представляет собой олигомер или соолигомер, выбранный из группы, состоящей из -[CHCH(OR)СНО]-R, -[CHCHO]-R, -[CHCH(OR)СНО]-[CHCHO]-R и -[CHCHO]-[CHCH(OR)СНО]-R;
1
4
1
4
R представляет собой Н, галоген, С-Салкил, замещенный одним или более чем одним галогеном, или -S-С-Салкил;
1
2
3
1
4
каждый из R, R и R независимо представляет собой Н или С-Салкил;
2
X представляет собой связь, С(О), С(O)O или С(O)CHO;
m представляет собой целое число в диапазоне от 2 до 16, и
n представляет собой целое число в диапазоне от 3 до 16.
Согласно другому аспекту настоящего изобретения предложено соединение формулы (I):
или его фармацевтически приемлемая соль, где:
2
2
m
2
2
n
2
2
m
2
2
n
2
2
n
2
2
m
1
2
3
1
2
1
2
Олиго представляет собой олигомер или соолигомер, выбранный из группы, состоящей из -[CHCH(OR)СНО]-R, -[CHCHO]-R, -[CHCH(OR)СНО]-[CHCHO]-R и -[CHCHO]-[CHCH(OR)СНО]-R;
1
4
1
4
R представляет собой Н, галоген, С-Салкил, замещенный одним или более чем одним галогеном, или -S-С-Салкил;
1
2
3
1
4
каждый из R, R и R независимо представляет собой Н или С-Салкил;
2
X представляет собой связь, С(О), С(O)O или С(O)CHO;
m представляет собой целое число в диапазоне от 2 до 16, и
n представляет собой целое число в диапазоне от 3 до 16,
для применения в лечении рака (например, рака легкого, такого как немелкоклеточный рак легкого или NSCLC, рака толстой кишки, рака молочной железы или рака поджелудочной железы).
Согласно другому аспекту настоящего изобретения предложено применение соединения формулы (I):
или его фармацевтически приемлемой соли, где:
2
2
m
2
2
n
2
2
m
2
2
n
2
2
n
2
2
m
1
2
3
1
2
1
2
Олиго представляет собой олигомер или соолигомер, выбранный из группы, состоящей из -[CHCH(OR)СНО]-R, -[CHCHO]-R, -[CHCH(OR)СНО]-[CHCHO]-R и -[CHCHO]-[CHCH(OR)СНО]-R;
1
4
1
4
R представляет собой Н, галоген, С-Салкил, замещенный одним или более чем одним галогеном, или -S-С-Салкил;
1
2
3
1
4
каждый из R, R и R независимо представляет собой Н или С-Салкил;
2
X представляет собой связь, С(О), С(O)O или С(O)CHO;
m представляет собой целое число в диапазоне от 2 до 16, и
n представляет собой целое число в диапазоне от 3 до 16,
в изготовлении лекарственного средства для лечения рака (например, рака легкого, такого как немелкоклеточный рак легкого или NSCLC, рака толстой кишки, рака молочной железы или рака поджелудочной железы).

В некоторых воплощениях соединения формулы (I) или (Ia) обладают цитотоксическим действием по отношению к клеткам NSCLC человека, например, H441GL (АТСС НТВ-174™), А549 (АТСС CCL-185™) или Н1299 (АТСС CCL-5803™).
50
В некоторых воплощениях соединения формулы (I) или (Ia) представляют собой ингибиторы клеток NSCLC со значением IC (концентрация, вызывающая 50%-ное ингибирование) от примерно 15 мкМ или меньше, примерно 10 мкМ или меньше, примерно 5 мкМ или меньше, примерно 1 мкМ или меньше, примерно 500 нМ или меньше, примерно 300 нМ или меньше, примерно 200 нМ или меньше, примерно 100 нМ или меньше, примерно 50 нМ или меньше, примерно 25 нМ или меньше, примерно 10 нМ или меньше, примерно 5 нМ или меньше или примерно 1 нМ или меньше.
В некоторых воплощениях соединения формулы (I) или (Ia) обладают цитотоксическим действием по отношению к раковым клеткам человека, например, НСТ116, DLD1, MCF7, MDA-МВ-231, PANC-1 или SUIT-2.
50
В некоторых воплощениях соединения формулы (I) или (Ia) представляют собой ингибиторы раковых клеток человека (например, клетки рака толстой кишки, клетки рака молочной железы и клетки рака поджелудочной железы) со значением IC примерно 15 мкМ или меньше, примерно 10 мкМ или меньше, примерно 5 мкМ или меньше, примерно 1 мкМ или меньше, примерно 500 нМ или меньше, примерно 300 нМ или меньше, примерно 200 нМ или меньше, примерно 100 нМ или меньше, примерно 50 нМ или меньше, примерно 25 нМ или меньше, примерно 10 нМ или меньше, примерно 5 нМ или меньше либо примерно 1 нМ или меньше.
В некоторых воплощениях соединения формулы (I) или (Ia) представляют собой селективные ингибиторы раковых клеток, подобных стволовых клеткам (CSC). В другом воплощении соединения формулы (I) или (Ia) оказывают противоопухолевые эффекты и ингибируют рост CSC среди клеток NSCLC.
В некоторых воплощениях настоящего изобретения предложены соединения формулы (I) или (Ia), которые способствуют реверсированию CSC-ассоциированной генной экспрессии.
В одном из воплощений соединения формулы (I) или (Ia) способствуют преодолению лекарственной резистентности клеток рака легкого. В другом воплощении соединения формулы (I) или (Ia) способствуют преодолению лекарственной резистентности клеток NSCLC. В еще одном воплощении клетки NSCLC проявляют резистентность к ингибитору рецептора эпидермального фактора роста-тирозинкиназы (EGFR-TKI).
В некоторых воплощениях настоящего изобретения предложено(ы) одно или более соединений формулы (I) или (Ia) в комбинации с другими противораковыми средствами, например, цисплатином или гефитинибом, что обеспечивает проявление синергических цитотоксических эффектов в отношении резистентных клеток рака легкого, например, H441GL, А549 или Н1299.
Кроме того, согласно данному изобретению предложены фармацевтические композиции, содержащие один или несколько фармацевтически приемлемых носителей и одно или более соединений формулы (I) или (Ia), описанных в данной заявке.
В одном из воплощений соединение формулы (I) или (Ia) помечено изотопом.
Например, меченные дейтерием соединения могут быть получены с использованием любого метода из ряда признанных в области техники методов. Например, меченные дейтерием соединения формулы (I) или (Ia), описанные в данной заявке, или соединения, перечисленные в данном описании, обычно могут быть получены в результате выполнения методик, изложенных в данном описании, путем замены не меченного дейтерием реагента на легко доступный меченный дейтерием реагент.
В одном из воплощений рак легкого представляет собой NSCLC. В некоторых воплощениях NSCLC представляет собой аденокарциному, плоскоклеточную карциному или крупноклеточную карциному.
В одном из воплощений рак представляет собой рак толстой кишки, рак молочной железы или рак поджелудочной железы.
В одном из воплощений субъектом является человек или не являющиеся человеком животные.
Если не указано иное, любое описание способа лечения включает применение одного или более соединений формулы (I) или (Ia) либо в комбинации с другими противораковыми средствами, например, цисплатином или гефитинибом, с целью достижения такого лечения, описанного в данной заявке, а также применение одного или более соединений формулы (I) или (Ia) либо в комбинации с другими противораковыми средствами, например, цисплатином или гефитинибом, с целью получения или изготовления лекарственного средства для лечения или предупреждения такого состояния. Данное лечение включает лечение человека или не являющихся человеком животных, в том числе грызунов и других животных как моделей заболевания. Способы, описанные в данной заявке, могут быть использованы для идентификации подходящих кандидатов для лечения или предупреждения рака посредством ингибирования CSC. Например, согласно изобретению также предложены способы определения ингибитора CLC.
Если не указано иное, все технические и научные термины, использованные в данном описании, имеют то же значение, которое обычно понимается специалистом средней квалификации в области техники, к которой относится данное изобретение. Применение в этом описании формы единственного числа также включает форму множественного числа, если контекст ясно не предусматривает иное. Несмотря на то, что при практическом применении или тестировании настоящего изобретения можно использовать способы и материалы, аналогичные или эквивалентные описанным в данной заявке, ниже описаны подходящие способы и материалы. Все публикации, патентные заявки, патенты и другие источники, упомянутые в данном описании, включены посредством ссылки. Источники, указанные в данном описании, не признаются предшествующим уровнем техники по отношению к заявляемому изобретению. В случае противоречия описание настоящего изобретения, включая определения, будет иметь преимущественную силу. Кроме того, материалы, способы и примеры приведены только для иллюстрации и не являются ограничивающими. В случае противоречия между химическими структурами и названиями соединений, описанных в данной заявке, химические структуры будут иметь преимущественную силу.
Другие признаки и преимущества данного изобретения будут очевидны, исходя из приведенных ниже подробного описания и формулы изобретения.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ
Показано, что помимо антигистаминных, противорвотных, седативных и антихолинергических эффектов определенные фенотиазиновые соединения, такие как прохлорперазин (РСР) и трифлуоперазин (ТРР), оказывают противоопухолевые эффекты, ингибируя рост CSC в линиях клеток NSCLC человека (см., например, US 2014/0294994, WO 2013/060305 и WO 2015/184794). В случае РСР продемонстрирована цитотоксичность в отношении клеток NSCLC (см., например, WO 2015/184794). Аналогичным образом, в случае ТРР и N-дезметил-прохлорперазина (10-[3-(1-пиперазинил)пропил]-2-хлор-10Н-фенотиазина (NDP)) также продемонстрирована цитотоксичность в отношении клеток NSCLC (см., например, Yeh et al., Am. J. Respir. Crit. Care Med., 186, 1180 (2012), WO 2013/060305 и WO 2015/184794). Структуры РСР, ТРР, NDP и N-дезметил-трифлуоперазина (NDT) представлены в приведенной ниже таблице.
1
Конъюгаты прометазина синтезировали путем N-алкилирования N-дезметил-прометазина с использованием метоксиполиэтиленгликолей (mPEG) (см., например, US 2012/0046279), и было показано, что они проявляют высокую аффинность связывания с Н-рецептором (гистаминовый рецептор 1 типа). Однако, конъюгирование с полиэтиленгликолем (PEG) приводило к снижению аффинности связывания прометазина. Кроме того, по мере увеличения размера mPEG аффинность связывания уменьшалась. Также сообщалось о получении конъюгатов mPEG с N-дезметил-фенотиазином через амидную связь (см., например, Roberts et al., Adv. Drug Delivery Rev., 2002, 54, 459 и US 2005/0080075).
Согласно настоящему изобретению предложены новые конъюгаты олигомер-фенотиазин, с использованием которых преодолеваются проблемы, связанные с резистентностью к химиотерапевтическим лекарственным средствам. Преимущества конъюгатов олигомер-фенотиазин, описанных в данной заявке, включают повышенную цитотоксичность в отношении резистентных к лекарственным средствам раковых клеток, что приводит к получению улучшенных способов терапии рака.
Согласно настоящему изобретению также предложены способы синтеза для получения соединений, описанных в данной заявке, фармацевтические композиции, содержащие эти соединения, и различные применения этих соединений.
Согласно одному из аспектов настоящего изобретения предложены соединения формулы (Ia):
или их фармацевтически приемлемая соль, где:
2
2
m
2
2
n
2
2
m
2
2
n
2
2
n
2
2
m
1
2
3
1
2
1
2
Олиго представляет собой олигомер или соолигомер, выбранный из группы, состоящей из -[CHCH(OR)СНО]-R, -[CHCHO]-R, -[CHCH(OR)СНО]-[CHCHO]-R и -[CHCHO]-[CHCH(OR)СНО]-R;
1
4
1
4
R представляет собой Н, галоген, С-Салкил, замещенный одним или более чем одним галогеном, и -S-С-Салкил;
1
2
3
1
4
каждый из R, R и R независимо представляет собой Н или С-Салкил;
2
X представляет собой связь, С(О), С(O)O или С(O)CHO;
m представляет собой целое число в диапазоне от 2 до 16, и
2
2
n
2
3
3
n представляет собой целое число в диапазоне от 3 до 16, и когда Олиго представляет собой -[CHCHO]-R, где n равно 12 или 13, и R представляет собой метил, тогда X представляет собой С(О), С(O)O или С(O)CHO.
Соединения формулы (I) или (Ia) могут иметь один или более чем один из приведенных далее признаков, в зависимости от применения.
1
4
Например, R представляет собой галоген или С-Салкил, замещенный одним или более чем одним F.
3
3
Например, R представляет собой Cl, CF, SCH или Н.
Например, R представляет собой Cl.
3
Например, R представляет собой CF.
3
Например, R представляет собой SCH.
Например, X представляет собой связь.
Например, X представляет собой С(O)O.
2
Например, X представляет собой С(O)CHO.
Например, X представляет собой С(О).
2
2
m
2
2
n
1
2
3
Например, Олиго представляет собой олигомер, выбранный из -[СНСН(OR)CHO]-R и -[CHCHO]-R.
2
2
m
2
2
n
2
2
n
2
2
m
1
2
1
2
Например, Олиго представляет собой соолигомер, выбранный из -[CHCH(OR)СНО]-[CHCHO]-R и -[CHCHO]-[CHCH(OR)СНО]-R.
Например, n равно 3, 6, 9, 12 или 16.
Например, n находится в диапазоне от 3 до 11, например, n равно 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или 11.
Например, n находится в диапазоне от 3 до 9, например, n равно 3, 4, 5, 6, 7, 8 или 9.
Например, n находится в диапазоне от 14 до 16, например, n равно 14, 15 или 16.
Например, n равно 3, 6 или 9.
Например, m находится в диапазоне от 2 до 9, например, m равно 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 или 9.
Например, m находится в диапазоне от 2 до 6, например, m равно 2, 3, 4, 5 или 6.
Например, m находится в диапазоне от 6 до 12, например, m равно 6, 7, 8, 9, 10, 11 или 12.
Например, m находится в диапазоне от 12 до 16, например, m равно 12, 13, 14, 15 или 16.
Например, m равно 3, 6 или 9.
Например, m равно 3.
Например, m равно 3 и n находится в диапазоне от 3 до 9 (например, n равно 3, 6 или 9).
Например, когда Олиго представляет собой соолигомер, сумма m и n не превышает 16, не превышает 12 или не превышает 9. Например, сумма тип находится в диапазоне от 5 до 16 (например, сумма равна 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 или 16).
1
Например, каждый R независимо представляет собой Н или метил.
1
Например, каждый R представляет собой Н.
1
Например, каждый R представляет собой метил.
2
Например, R представляет собой Н или метил.
2
Например, R представляет собой Н.
2
Например, R представляет собой метил.
3
Например, R представляет собой Н.
3
Например, R представляет собой метил.
Согласно другому аспекту настоящего изобретения предложена фармацевтическая композиция, содержащая соединение формулы (I) или (Ia) и фармацевтически приемлемый носитель.
Согласно еще одному аспекту настоящего изобретения предложен способ лечения рака, включающий введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества соединения формулы (Ia). Согласно другому аспекту настоящего изобретения предложено применение соединений формулы (Ia) для лечения рака.
Согласно другому аспекту настоящего изобретения предложены соединения формулы (Ia) для применения в изготовлении лекарственного средства для лечения рака.
Помимо этого, согласно настоящему изобретению также предложен способ лечения рака, включающий введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества соединения формулы (I):
или его фармацевтически приемлемой соли, где:
2
2
m
2
2
n
2
2
m
2
2
n
2
2
n
2
2
m
1
2
3
1
2
1
2
Олиго представляет собой олигомер или соолигомер, выбранный из группы, состоящей из -[CHCH(OR)СНО]-R, -[CHCHO]-R, -[CHCH(OR)СНО]-[CHCHO]-R и -[CHCHO]-[CHCH(OR)СНО]-R;
1
4
1
4
R представляет собой Н, галоген, С-Салкил, замещенный одним или более чем одним галогеном, или -S-С-Салкил;
1
2
3
1
4
каждый из R, R и R независимо представляет собой Н или С-Салкил;
2
X представляет собой связь, С(О), С(O)O или С(O)CHO;
m представляет собой целое число в диапазоне от 2 до 16, и
n представляет собой целое число в диапазоне от 3 до 16.
Согласно другому аспекту настоящего изобретения предложено применение соединений формулы (I) для лечения рака.
Согласно другому аспекту настоящего изобретения предложены соединения формулы (I) для применения в изготовлении лекарственного средства для лечения рака.
Способы, применения или соединения для применения, описанные в данной заявке, могут иметь один или более чем один из приведенных далее признаков, в зависимости от применения.
Например, рак представляет собой рак легкого.
Например, рак представляет собой немелкоклеточный рак легкого.
Например, немелкоклеточный рак легкого представляет собой аденокарциному, плоскоклеточную карциному или крупноклеточную карциному.
Например, рак представляет собой рак толстой кишки.
Например, рак представляет собой рак молочной железы.
Например, рак представляет собой рак поджелудочной железы.
Например, субъектом является человек.
Например, способ по изобретению дополнительно включает введение субъекту противоракового средства. Например, соединение для применения по изобретению пригодно для введения в комбинации с дополнительным противораковым средством. Например, лекарственное средство по изобретению пригодно для введения в комбинации с дополнительным противораковым средством.
Например, дополнительным противораковым средством является цисплатин или гефитиниб.

50
Например, соединение формулы (I) или (Ia) обладает цитотоксическим действием в отношении клеток NSCLC. Например, соединение формулы (I) или (Ia) представляет собой ингибитор клеток NSCLC, таких как H441GL (АТСС НТВ-174™), А549 (АТСС CCL-185™) или Н1299 (АТСС CCL-5803™), при этом значение IC, характеризующее ингибирование клеток, составляет примерно 15 мкМ или меньше, примерно 10 мкМ или меньше, примерно 5 мкМ или меньше, примерно 1 мкМ или меньше, примерно 500 нМ или меньше, примерно 300 нМ или меньше, примерно 200 нМ или меньше, примерно 100 нМ или меньше, примерно 50 нМ или меньше, примерно 25 нМ или меньше, примерно 10 нМ или меньше, примерно 5 нМ или меньше или примерно 1 нМ или меньше.
Согласно другому аспекту настоящего изобретения предложен способ лечения рака, например, рака легкого (такого как NSCLC), включающий введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества соединения формулы (I) или (Ia). Согласно другому аспекту настоящего изобретения предложено соединение формулы (I) или (Ia) для применения в лечении рака, например, рака легкого (такого как NSCLC). Согласно другому аспекту настоящего изобретения предложено применение соединения формулы (I) или (Ia) в изготовлении лекарственного средства для лечения рака, например, рака легкого (такого как NSCLC).
Например, соединение формулы (I) или (Ia) ингибирует клетки NSCLC, например, клетки H441GL, А549 или Н1299. Например, клетки NSCLC проявляют резистентность к EGFR-TKI. Например, клетки немелкоклеточного рака легкого (NSCLC) проявляют экспрессию генов, ассоциированных с раковыми стволовоподобными клетками (CSC).
В одном из воплощений соединение формулы (I) или (Ia) используют в комбинации с другими противораковыми средствами, например, цисплатином или гефитинибом.

50
Например, соединение формулы (I) или (Ia) проявляет цитотоксическое действие в отношении раковых клеток. Например, соединение формулы (I) или (Ia) является ингибитором клеток рака толстой кишки, таких как НСТ116 (АТСС CCL-247™) или DLD1 (АТСС CCL-221™), клеток рака молочной железы, таких как MCF7 (АТСС НТВ-22™) или MDA-МВ-231 (АТСС НТВ-26™), и клеток рака поджелудочной железы, таких как PANC-1 (АТСС CCL-1469™) или SUIT-2, с величиной IC для ингибирования клеток, составляющей примерно 15 мкМ или меньше, примерно 10 мкМ или меньше, примерно 5 мкМ или меньше, примерно 1 мкМ или меньше, примерно 500 нМ или меньше, примерно 300 нМ или меньше, примерно 200 нМ или меньше, примерно 100 нМ или меньше, примерно 50 нМ или меньше, примерно 25 нМ или меньше, примерно 10 нМ или меньше, примерно 5 нМ или меньше или примерно 1 нМ или меньше.
Без связи с какой-либо теорией полагают, что рассматриваемые соединения формулы (I) или (Ia), описанные в данной заявке, могут лечить рак (например, NSCLC, рак толстой кишки, рак молочной железы или рак поджелудочной железы) путем избирательного ингибирования CSC.
Согласно еще одному аспекту настоящего изобретения предложен способ получения соединения формулы (I) или (Ia).
Согласно настоящему изобретению также предложена фармацевтическая композиция, содержащая соединение формулы (I) или (Ia) либо его фармацевтически приемлемую соль и фармацевтически приемлемый носитель.
Репрезентативные соединения по настоящему изобретению включают соединения, приведенные в Таблице 1, или их соли.
Использование форм единственного числа в следующих далее и описании, и формуле изобретения должно толковаться как включение форм как единственного, так и множественного числа, если в данном описании не указано иное или это явно не противоречит контексту. Термины «содержащий», «имеющий», «включающий» и «входящий в состав» должны толковаться как неограничивающие термины (т.е. означающие «включая, но не ограничиваясь этим»), если не указано иное. Кроме того, всякий раз, когда в одном из воплощений используется термин «содержащий» или другой неограничивающий термин, следует понимать, что это же воплощение может быть заявлено более узко с использованием промежуточного термина «состоящий по существу из» или близкого термина «состоящий из».
Термин «и/или» используется в этом описании для обозначения варианта либо «и», либо «или», если не указано иное.
1
2
3
4
5
6
1
6
1
2
3
4
5
6
3
4
5
6
1
6
1
2
3
4
5
6
Подразумевается, что использованные в данном описании термины «алкил», «С-, С-, С-, С-, С- или Салкил» или «С-Салкил» включают в себя насыщенные алифатические углеводородные С, С-, С-, С-, С- или С-группы с прямой цепью (линейные) и разветвленные насыщенные алифатические углеводородные С-, С-, С- или С-группы. Например, подразумевается, что С-Салкил включает в себя С-, С-, С-, С-, С- или Салкильные группы. Примеры алкила включают группировки, имеющие от одного до шести атомов углерода, такие как, но не ограничиваясь этим, метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, втор-бутил, трет-бутил, н-пентил, втор-пентил или н-гексил.
1
6
3
6
В некоторых воплощениях алкил с прямой цепью или разветвленный алкил имеет шесть или меньшее число атомов углерода (например, С-С для прямой цепи, С-С для разветвленной цепи), и в другом воплощении алкил с прямой цепью или разветвленный алкил имеет четыре атома углерода или меньшее число атомов углерода.
Использованный в данном описании термин «галоген» или «атом галогена» относится к фтору, хлору, брому и йоду. Термин «пергалоидированный» обычно относится к группировке, в которой все атомы водорода заменены на атомы галогена. Термин «галогеналкил» или «галогеналкоксил» относится к алкилу или алкоксилу, замещенному одним или несколькими атомами галогена.
Термин «замещенный», использованный в данном описании, означает, что какой-либо один или более чем один атом водорода на отмеченном атоме заменен на атом, выбранный из указанных групп, при условии, что нормальная валентность отмеченного атома не превышена, и что в результате данной замены образуется стабильное соединение. Когда заместителем является группа оксо или кето (т.е. =O), тогда на данном атоме заменяются 2 атома водорода. Подразумевается, что термины «стабильное соединение» и «стабильная структура» обозначают соединение, которое является достаточно устойчивым, чтобы «выдержать» процедуру выделения из реакционной смеси до необходимой степени чистоты и приготовления на его основе эффективного терапевтического агента.
1
2
3
1
1
1
1
Когда какая-либо переменная (например, R, R, R или R) встречается в каком-либо компоненте или формуле соединения более одного раза, ее определение в каждом случае не зависит от ее определения в каждом другом случае. Так, например, если показано, что группа замещена группировками R в количестве 0-2, то данная группа возможно может быть замещена группировками R в количестве до двух включительно, и R в каждом случае выбирается независимо от определения R. Кроме того, допустимы комбинации заместителей и/или переменных, но только, если в результате такого комбинирования получаются стабильные соединения.
Термин «изомерия» означает соединения, которые имеют одинаковые молекулярные формулы, но отличаются друг от друга последовательностью связывания своих атомов или расположением своих атомов в пространстве. Изомеры, которые отличаются друг от друга расположением своих атомов в пространстве, называются «стереоизомерами». Стереоизомеры, которые не являются зеркальными отображениями друг друга, называются «диастереоизомерами», а стереоизомеры, не совпадающие с зеркальными отображениями друг друга, называются «энантиомерами» или иногда оптическими изомерами. Смесь, содержащая равные количества отдельных энантиомерных форм с противоположной хиральностью, называется «рацемической смесью».
Атом углерода, связанный с четырьмя неидентичными заместителями, называется «хиральным центром».
«Хиральный изомер» означает соединение по меньшей мере с одним хиральным центром. Соединения более чем с одним хиральным центром могут существовать либо в виде отдельного диастереомера, либо в виде смеси диастереомеров, называемой «диастереомерной смесью». Если имеется один хиральный центр, то стереоизомер может быть охарактеризован абсолютной конфигурацией (R или S) этого хирального центра. Абсолютная конфигурация относится к расположению в пространстве заместителей, присоединенных к хиральному центру. Заместители, присоединенные к рассматриваемому хиральному центру, ранжированы в соответствии с правилом последовательности Кана, Ингольда и Прелога (Cahn et al., Angew. Chem. Inter. Edit., 1966, 5, 385; errata 511; Cahn et al., Angew. Chem., 1966, 78, 413; Cahn and Ingold, J. Chem. Soc., 1951 (London), 612; Cahn et al., Experientia, 1956, 12, 81; Cahn, J. Chem. Educ., 1964, 41, 116).
Следует понимать, что соединения по настоящему изобретению могут быть представлены в виде разных хиральных изомеров или геометрических изомеров. Также следует понимать, что, если соединения имеют хиральные изомерные или геометрические изомерные формы, то подразумевается, что все изомерные формы включены в объем настоящего изобретения, и что название соединений не исключает каких-либо изомерных форм.
Соединения по настоящему изобретению включают сами соединения, а также их соли и их сольваты при необходимости. Соль, например, может быть образована при взаимодействии между анионом и положительно заряженной группой (например, амино) в арил- или гетероарил-замещенном бензольном соединении. Пригодные анионы включают хлорид, бромид, иодид, сульфат, бисульфат, сульфамат, нитрат, фосфат, цитрат, метансульфонат, трифторацетат, глутамат, глюкуронат, глутарат, малат, малеат, сукцинат, фумарат, тартрат, тозилат, салицилат, лактат, нафталинсульфонат и ацетат (например, трифторацетат). Термин «фармацевтически приемлемый анион» относится к аниону, пригодному для образования фармацевтически приемлемой соли. Аналогичным образом, соль также может быть образована при взаимодействии между катионом и отрицательно заряженной группой (например, карбоксилатом) в арил- или гетероарил-замещенном бензольном соединении. Пригодные катионы включают ион натрия, ион калия, ион магния, ион кальция и катион аммония, такой как ион тетраметиламмония. Арил- или гетероарил-замещенные бензольные соединения также включают такие соли, которые содержат четвертичные атомы азота. Очевидно, что в случае солевой формы отношение соединения к катиону или аниону соли может составлять 1:1 или любое отношение, отличающееся от 1:1, например, 3:1, 2:1, 1:2 или 1:3.
Кроме того, соединения по настоящему изобретению, например, соли этих соединений, могут существовать или в гидратированной, или в негидратированной (безводной) форме либо в виде сольватов, содержащих молекулы других растворителей. Неограничивающие примеры гидратов включают моногидраты, дигидраты и так далее. Неограничивающие примеры сольватов включают сольваты с этанолом, сольваты с ацетоном и так далее.
2
Термин «сольват» означает формы присоединения растворителя, которые содержат молекулы растворителя либо в стехиометрических, либо в нестехиометрических количествах. Некоторые соединения в твердом кристаллическом состоянии имеют тенденцию удерживать молекулы растворителя в фиксированном молярном соотношении, образуя таким образом сольват. Если растворителем является вода, то образуемый сольват представляет собой гидрат; а если растворителем является спирт, то образуемый сольват представляет собой алкоголят. Гидраты образуются в результате объединения одной или более молекул воды с одной молекулой вещества, при этом вода сохраняет свое молекулярное состояние в виде НО.
Подразумевается, что настоящее изобретение включает все изотопы атомов, присутствующих в соединениях по настоящему изобретению. Изотопы представляют собой такие атомы, которые имеют одинаковый атомный номер, но разные массовые числа. В качестве общего примера и без ограничения, изотопы водорода включают тритий и дейтерий, а изотопы углерода включают С-13 и С-14.
В некоторых воплощениях подразумевается, что термин «комбинированная терапия» включает в себя введение двух или более терапевтических агентов последовательно друг за другом, при этом каждый терапевтический агент вводят в разные моменты времени, а также введение этих терапевтических агентов или по меньшей мере двух из этих терапевтических агентов одновременно или по существу одновременно. Одновременное введение может быть осуществлено, например, путем введения субъекту одной капсулы, содержащей каждый терапевтический агент в фиксированном соотношении, или нескольких отдельных капсул для каждого из терапевтических агентов. Последовательное или по существу одновременное введение каждого терапевтического агента может быть осуществлено любым соответствующим путем, включая, но не ограничиваясь этим, пероральные пути, внутривенные пути, внутримышечные пути и путем непосредственного всасывания через ткани слизистой оболочки. Терапевтические агенты можно вводить одним и тем же путем или разными путями. Например, первый терапевтический агент выбранной комбинации можно вводить путем внутривенной инъекции, в то время как другие терапевтические агенты комбинации можно вводить перорально. Альтернативно, например, все терапевтические агенты можно вводить перорально или все терапевтические агенты можно вводить путем внутривенной инъекции. Терапевтические агенты также могут быть введены поочередно.
Согласно некоторым аспектам изобретения термин «комбинированная терапия» также включает в себя введение терапевтических агентов, описанных выше, в дополнительной комбинации с другими биологически активными ингредиентами и нелекарственными видами терапии (например, с хирургическим вмешательством или лучевой терапией).
Согласно некоторым аспектам изобретения комбинированные терапии, предложенные в описании настоящего изобретения, могут приводить к синергетическому эффекту при лечении какого-либо заболевания или рака. «Синергетический эффект» определяют как случай, когда эффективность комбинации терапевтических агентов превышает сумму эффектов, вызываемых любым из агентов, вводимых по отдельности. Синергетическим эффектом также может быть эффект, которого невозможно достичь посредством введения любого из соединений или других терапевтических агентов в виде отдельных агентов. Синергетический эффект может включать, но не ограничивается этим, эффект лечения рака посредством уменьшения размера опухоли, ингибирования роста опухоли или увеличения времени выживания субъекта. Синергетический эффект также может включать снижение жизнеспособности раковых клеток, индуцирование гибели раковых клеток и ингибирование или задержку роста раковых клеток.
Комбинированная терапия может быть осуществлена путем введения двух или более агентов, например, одного или более соединений формулы (I) или (Ia) и одного или более чем одного другого терапевтического агента, каждый из которых готовят и вводят по отдельности, или путем введения двух или более агентов в единой композиции. Другие комбинации также охватываются комбинированной терапией. Например, на основе двух агентов может быть приготовлена совместная композиция, которую можно вводить вместе с отдельной композицией, содержащей третий агент. Несмотря на то, что эти два или более агентов при комбинированной терапии можно вводить совместно, необходимости в таком их введении нет. Например, введение первого агента (или комбинации агентов) может предшествовать введению второго агента (или комбинации агентов) на несколько минут, часов, суток или недель. Так, два или более агентов можно вводить в интервале нескольких минут друг от друга, или в интервале 1, 2, 3, 6, 9, 12, 15, 18 или 24 часов друг от друга, или в интервале 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 14 суток друг от друга, или в интервале 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 недель друг от друга. В некоторых случаях возможны даже более продолжительные интервалы. Несмотря на то, что во многих случаях желательно, чтобы два или более агентов, используемых при комбинированной терапии, присутствовали в организме пациента одновременно, строгой необходимости в этом нет.
Согласно настоящему изобретению также предложены фармацевтические композиции, содержащие соединение по изобретению или их фармацевтически приемлемые соли и один или более чем один другой терапевтический агент, описанный в данной заявке, в смеси с фармацевтически пригодным(ими) носителем(ями) или эксципиентом(ами), в дозах, подходящих для лечения или предупреждения рака (например, рака легкого, рака толстой кишки, рака молочной железы или рака поджелудочной железы), как изложено в данном описании. Согласно одному из аспектов настоящего изобретения также предложены фармацевтические композиции, содержащие любое соединение по настоящему изобретению или их фармацевтически приемлемые соли и один или более чем один другой терапевтический агент в смеси с фармацевтически пригодным(ими) носителем(ями) или эксципиентом(ами), в дозах, подходящих для лечения или предупреждения рака легкого, как изложено в данном описании. Фармацевтические композиции по настоящему изобретению также могут быть применены в комбинации с другими терапевтическими агентами или терапевтическими методами одновременно, последовательно или поочередно. В некоторых воплощениях фармацевтическую композицию соединения формулы (I) или (Ia) вводят в комбинации с другими противораковыми средствами, например, цисплатином или гефитинибом.
«Фармацевтическая композиция» представляет собой композицию, содержащую соединение по настоящему изобретению в форме, пригодной для введения субъекту. На основе каждого соединения по настоящему изобретению и каждого одного или нескольких других терапевтических агентов, описанных в данной заявке, могут быть приготовлены отдельные композиции или несколько фармацевтических композиций в любых комбинациях активных ингредиентов. Соответственно, с учетом лекарственной формы каждой фармацевтической композиции можно выбрать надлежащим образом один или несколько путей введения. Альтернативно, на основе соединения по настоящему изобретению и одного или нескольких других терапевтических агентов, описанных в данной заявке, может быть приготовлена единая фармацевтическая композиция.
В некоторых воплощениях фармацевтическая композиция представлена в нерасфасованной форме или в единичной дозированной форме. Единичная дозированная форма представляет собой любую из множества форм, включая, например, капсулу, пакет для внутривенного введения (в.в.), таблетку, одну помпу в аэрозольном ингаляторе или флакон. Количество активного ингредиента (например, в композиции описанных соединения или его соли, гидрата, сольвата или изомера) в единичной дозе композиции составляет эффективное количество и варьирует в соответствии с конкретным применяемым лечением. Специалисту в данной области техники будет очевидно, что иногда необходимо вносить обычные изменения в дозировку в зависимости от возраста и состояния пациента. Дозировка также будет зависеть от пути введения. Предусмотрены различные пути, в том числе пероральный, легочный, ректальный, парентеральный, трансдермальный, подкожный, внутривенный, внутримышечный, внутрибрюшинный, ингаляционный, трансбуккальный, сублингвальный, интраплевральный, интратекальный, интраназальный и тому подобное. Лекарственные формы для местного или трансдермального введения соединения по данному изобретению включают порошки, спреи, мази, пасты, кремы, лосьоны, гели, растворы, пластыри и средства для ингаляции. В некоторых воплощениях активное соединение смешано в стерильных условиях с фармацевтически приемлемым носителем и с любыми необходимыми консервантами, буферами или пропеллентами.
Фраза «фармацевтически приемлемый» используется в данном описании в отношении таких соединений, анионов, катионов, веществ, композиций, носителей и/или лекарственных форм, которые с медицинской точки зрения пригодны для применения в контакте с тканями человека и животных без чрезмерных токсичности, раздражения, аллергической реакции или другой проблемы или другого осложнения, в соответствии с разумным соотношением польза/риск.
«Фармацевтически приемлемый носитель» означает эксципиент, который полезен для приготовления фармацевтической композиции, то есть, как правило является безопасным, нетоксичным и не является нежелательным ни в биологическом, ни в каком-либо ином отношении, и включает в себя эксципиент, приемлемый для применения в ветеринарии, а также для фармацевтического применения для людей.
Фармацевтическую композицию по изобретению готовят с возможностью совместимости с предполагаемым путем введения. Примеры путей введения включают парентеральное, например, внутривенное, интрадермальное, подкожное, пероральное (например, ингаляционное), трансдермальное (местное) и трансмукозальное введение. Растворы или суспензии, используемые для парентерального, интрадермального или подкожного применения, могут содержать следующие компоненты: стерильный разбавитель, такой как вода для инъекций, физиологический раствор, нелетучие масла, полиэтиленгликоли, глицерин, пропиленгликоль или другие синтетические растворители; антибактериальные агенты, такие как бензиловый спирт или метилпарабены; антиоксиданты, такие как аскорбиновая кислота или бисульфит натрия; хелатирующие агенты, такие как этилендиаминтетрауксусная кислота; буферы, такие как ацетатные, цитратные или фосфатные, и агенты для регулирования тоничности, такие как хлорид натрия или декстроза. Значение рН можно регулировать с использованием кислот или оснований, таких как соляная кислота или гидроксид натрия. Парентеральный препарат может быть помещен в ампулы, одноразовые шприцы или изготовленные из стекла или пластика многодозовые флаконы.
Композицию по настоящему изобретению можно вводить субъекту многими хорошо известными способами, используемыми в настоящее время для химиотерапевтического лечения. Например, для лечения рака соединение по настоящему изобретению можно вводить путем инъекции непосредственно в опухоли, вводить путем инъекции в кровоток либо полости тела, или принимать перорально, или вводить через кожу с помощью пластырей. Выбранная доза должна быть достаточной для обеспечения эффективного лечения, но не настолько высокой, чтобы вызывать неприемлемые побочные эффекты. Предпочтительно, во время лечения и в течение разумного периода времени после лечения необходимо проводить всесторонний мониторинг статуса болезненного состояния (например, рака, предракового состояния и тому подобного) и состояния здоровья пациента.
Термин «терапевтически эффективное количество», использованный в данном описании, относится к количеству фармацевтического агента, необходимого для лечения, уменьшения интенсивности симптомов или предотвращения установленного заболевания или состояния либо для проявления обнаруживаемого терапевтического или ингибирующего эффекта. Такой эффект может быть обнаружен с использованием любого метода анализа, известного в данной области техники. Точное эффективное количество для субъекта будет зависеть от массы тела, размера и здоровья субъекта; характера и степени данного состояния; и терапевтического средства или комбинации терапевтических средств, выбранных для введения. Терапевтически эффективные количества для заданной ситуации могут быть определены путем проведения обычного экспериментирования, которое находится в компетенции и на усмотрении лечащего врача.
В некоторых воплощениях терапевтически эффективное количество каждого фармацевтического агента, используемого в комбинации, будет ниже при сравнении случая использования в комбинации относительно монотерапии с использованием каждого агента в отдельности. Такое более низкое терапевтически эффективное количество может позволить снизить токсичность данной схемы лечения.
50
50
50
50
Для любого соединения формулы (I) или (Ia) терапевтически эффективное количество может быть изначально оценено либо в анализах на культурах клеток, например, CSC, либо на животных моделях, обычно на крысах, мышах, кроликах, собаках, свиньях или обезьянах. Животную модель также можно использовать для определения соответствующего диапазона концентраций и пути введения. Такую информацию затем можно использовать для определения полезных доз и путей для введения людям. Терапевтическая/профилактическая эффективность и токсичность могут быть определены с использованием стандартных фармацевтических методик на культурах клеток или экспериментальных животных, например, как ED (доза, терапевтически эффективная для 50% популяции) и LD (доза, летальная для 50% популяции). Соотношение доз, соответствующих токсическому и терапевтическому эффектам, представляет собой терапевтический индекс, и он может быть выражен в виде соотношения LD/ED. Предпочтительны фармацевтические композиции, которые демонстрируют высокие терапевтические индексы. Дозировка может варьировать в этом диапазоне в зависимости от используемой лекарственной формы, чувствительности пациента и пути введения.
Дозировку и введение корректируют для обеспечения достаточных уровней активного(ых) агента(ов) или для поддержания желаемого эффекта. Факторы, которые можно учитывать, включают тяжесть болезненного состояния, общее состояние здоровья субъекта, возраст, массу тела и пол субъекта, питание, время и частоту введения, комбинацию(и) лекарственных средств, аллергические реакции и переносимость терапии/ответ на терапию. Длительно действующие фармацевтические композиции можно вводить каждые 3-4 дня, каждую неделю или один раз каждые две недели в зависимости от периода полувыведения и скорости выведения конкретной композиции.
Фармацевтические композиции, содержащие активные соединения по настоящему изобретению, могут быть приготовлены общеизвестным способом, например, посредством традиционных методов смешивания, растворения, гранулирования, изготовления драже, растирания в порошок, эмульгирования, инкапсулирования, захвата или лиофилизации. Фармацевтические композиции могут быть приготовлены традиционным образом с использованием одного или нескольких фармацевтически приемлемых носителей, включающих эксципиенты и/или вспомогательные вещества, которые облегчают переработку активных соединений в препараты, подходящие для фармацевтического применения. Несомненно, соответствующая композиция зависит от выбранного пути введения.
Для приготовления композиций, содержащих активные соединения, могут быть использованы фармацевтически приемлемые носители, которые будут защищать соединение от быстрого выведения из организма, как например, композиция с регулируемым высвобождением, в том числе имплантаты и микроинкапсулированные системы доставки. Можно использовать биоразлагаемые, биосовместимые полимеры, такие как этиленвинилацетат, полиангидриды, полигликолевая кислота, коллаген, сложные полиортоэфиры и полимолочная кислота. Способы приготовления таких композиций будут очевидны специалистам в данной области техники.
2
При терапевтических применениях дозировка соединений формулы (I) или (Ia), описанных в данной заявке, других терапевтических агентов, описанных в данной заявке, композиций, содержащих соединение по изобретению и один или более чем один другой терапевтический агент, или фармацевтических композиций, применяемых в соответствии с данным изобретением, варьирует в зависимости от агента, возраста, массы тела и клинического состояния пациента-реципиента, а также от опыта и проницательности лечащего врача или практикующего врача, осуществляющего терапию, наряду с другими факторами, влияющими на выбираемую дозировку. В общем случае, доза должна быть достаточной для того, чтобы привести к замедлению и предпочтительно регрессии роста опухолей, а также предпочтительно к полной регрессии рака. Дозировки могут находиться в диапазоне от примерно 0,017 мг/кг в сутки до примерно 10 мг/кг в сутки. Согласно предпочтительным аспектам дозировки могут находиться в диапазоне от примерно 0,067 мг/кг в сутки до примерно 5 мг/кг в сутки, в виде однократных, разделенных или непрерывно вводимых доз (при этом доза может быть скорректирована с учетом массы тела пациента в кг, площади поверхности тела в м и возраста в годах). Эффективным количеством фармацевтического агента является количество, обеспечивающее улучшение, которое можно определить объективно, которое отмечается лечащим врачом или другим квалифицированным наблюдателем. Например, регрессию опухоли у пациента можно измерить на основании диаметра опухоли. Уменьшение диаметра опухоли указывает на регрессию. На регрессию также указывает отсутствие повторного появления опухолей после прекращения лечения. Использованный в данном описании термин «эффективный способ дозировки» относится к количеству активного соединения, необходимого для получения желаемого биологического эффекта у субъекта или клетки.
Фармацевтические композиции могут быть заключены в контейнер, упаковку или диспенсер вместе с инструкциями по введению.
Соединения по настоящему изобретению также способны образовывать соли. Все эти формы также включены в объем заявляемого изобретения.
Использованный в данном описании термин «фармацевтически приемлемые соли» относится к производным соединений по настоящему изобретению, при этом исходное соединение модифицируют путем получения его солей или с кислотами, или с основаниями. Примеры фармацевтически приемлемых солей включают, но не ограничиваются этим, образованные с неорганическими или органическими кислотами соли основных остатков таких соединений, как амины, образованные с щелочами или органическими основаниями соли кислотных остатков таких соединений, как карбоновые кислоты, и тому подобное. Фармацевтически приемлемые соли включают традиционные нетоксичные соли или четвертичные аммониевые соли исходного соединения, образованные, например, из нетоксичных неорганических или органических кислот. Например, такие традиционные нетоксичные соли включают, но не ограничиваются этим, соли, происходящие из неорганических и органических кислот, выбранных из 2-ацетоксибензойной, 2-гидроксиэтансульфоновой, уксусной, аскорбиновой, бензолсульфоновой, бензойной, бикарбоновой, угольной, лимонной, эдетовой, этандисульфоновой, 1,2-этансульфоновой, фумаровой, глюкогептоновой, глюконовой, глутаминовой, гликолевой, гликолиларсаниловой, гексилрезорциновой, гидрабаминовой, бромистоводородной, соляной, йодистоводородной, гидроксималеиновой, гидроксинафтойной, изэтионовой, молочной, лактобионовой, лаурилсульфоновой, малеиновой, яблочной, миндальной, метансульфоновой, напсиловой, азотной, щавелевой, памовой, пантотеновой, фенилуксусной, фосфорной, полигалактуроновой, пропионовой, салициловой, стеариновой, подуксусной, янтарной, сульфаминовой, сульфаниловой, серной, дубильной, винной, толуолсульфоновой, и часто встречающихся аминокислот, например, глицина, аланина, фенилаланина, аргинина и так далее.
Следует понимать, что все ссылки на фармацевтически приемлемые соли включают формы присоединения растворителя (сольваты) или кристаллические формы (полиморфы) этой же соли, которые определены в данном описании.
Соединения по настоящему изобретению также могут быть получены в виде сложных эфиров, например, фармацевтически приемлемых сложных эфиров. Например, спиртовая группа в соединении может быть преобразована в группу соответствующего ей сложного эфира, например, ацетата, пропионата или другого сложного эфира.
Соединения или их фармацевтически приемлемые соли вводят перорально, назально, трансдермально, через легкие, путем ингаляции, трансбуккально, сублингвально, внутрибрюшинно, подкожно, внутримышечно, внутривенно, ректально, интраплеврально, интратекально и парентерально. В одном из воплощений соединение вводят перорально. Специалисту в данной области техники известны преимущества конкретных путей введения.
th
Способы приготовления композиций и введения описанных соединений по изобретению можно найти в Remington: the Science and Practice of Pharmacy, 19 edition, Mack Publishing Со., Easton, РА (1995). В одном из воплощений соединения, описанные в данной заявке, и их фармацевтически приемлемые соли применяют в фармацевтических препаратах в комбинации с фармацевтически приемлемым носителем или разбавителем. Пригодные фармацевтически приемлемые носители включают инертные твердые наполнители или разбавители и стерильные водные или органические растворы. Соединения будут присутствовать в таких фармацевтических композициях в количествах, достаточных для обеспечения дозировки желаемой величины в диапазоне, приведенном в данном описании.
Все процентные доли и соотношения, использованные в данном описании, если не указано иное, приведены по массе. Другие признаки и преимущества настоящего изобретения станут очевидны из различных примеров. В приведенных примерах описываются различные компоненты и методология, подходящие для практического применения настоящего изобретения. Данные примеры не ограничивают заявляемое изобретение. С учетом описания настоящего изобретения специалист в данной области может идентифицировать и использовать другие компоненты и методологию, подходящие для практического применения настоящего изобретения.
Использованный в данном описании термин «нуждающийся в этом субъект» относится к субъекту, имеющему рак легкого, или субъекту, подвергающемуся повышенному риску развития такого расстройства относительно популяции в целом. Субъект, нуждающийся в этом, может иметь предраковое состояние. Термин «субъект» включает в себя млекопитающее. Таким млекопитающим может быть, например, любое млекопитающее, например, человек, примат, птица, мышь, крыса, домашняя птица, собака, кошка, корова, лошадь, коза, верблюд, овца или свинья. Предпочтительно, млекопитающим является человек.
Субъект по настоящему изобретению включает любого субъекта-человека, у которого диагностирован рак легкого, который имеет симптомы или риск развития рака легкого. Субъект по настоящему изобретению включает любого субъекта-человека, проявляющего резистентность к химиотерапии, например, резистентность к ингибитору рецептора эпидермального фактора роста-тирозинкиназы (EGFR-TKI).
У «нуждающегося в этом субъекта» может быть рефракторный или резистентный рак (т.е. рак, который не отвечает на лечение или пока еще не дал ответа на лечение). Рак может быть резистентным в начале лечения или может стать резистентным в ходе лечения. В некоторых воплощениях нуждающийся в этом субъект демонстрирует рецидив рака после ремиссии по окончании самой последней терапии. В некоторых воплощениях нуждающийся в этом субъект получал все известные эффективные виды терапии для лечения рака, и они на него не подействовали. В некоторых воплощениях нуждающийся в этом субъект получал по меньшей мере одну предшествующую терапию. В некоторых воплощениях предшествующая терапия представляет собой монотерапию. В некоторых воплощениях предшествующая терапия представляет собой комбинированную терапию.
Использованный в данном описании термин «лечение» или «лечить» описывает оказание помощи пациенту и уход за ним с целью борьбы с заболеванием, состоянием или расстройством и включает в себя введение соединения по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемой соли либо их сольвата для облегчения симптомов или осложнений заболевания, состояния или расстройства либо для устранения данного заболевания, состояния или расстройства. Термин «лечить» также может включать в себя обработку клетки in vitro или животной модели.
Рак представляет собой группу заболеваний, которые могут быть причиной практически любого признака или симптома. Такие признаки и симптомы будут зависеть от того, где локализована раковая опухоль, от размера раковой опухоли и от того, насколько это влияет на находящие поблизости органы или структуры. Если рак распространяется (метастазирует), симптомы могут проявиться в разных частях тела, например, при раке легкого, распространяющегося в находящиеся поблизости органы или структуры.
Раком по изобретению может быть рефракторный или резистентный рак (т.е. рак, который не отвечает на лечение или пока еще не дал ответа на лечение. Рак по изобретению может быть резистентным или рефракторным по меньшей мере к одной предшествующей терапии. Например, рак по изобретению может быть резистентным к химиотерапии.
В результате лечения рака может наблюдаться уменьшение опухоли в размере. Уменьшение опухоли в размере также может быть названо как «регрессия опухоли». Предпочтительно, чтобы после лечения размер опухоли уменьшался на 5% или больше относительно ее размера до лечения; более предпочтительно, размер опухоли уменьшался на 10% или больше; более предпочтительно, уменьшался на 20% или больше; более предпочтительно, уменьшался на 30% или больше; более предпочтительно, уменьшался на 40% или больше; еще более предпочтительно, уменьшался на 50% или больше; и наиболее предпочтительно, уменьшался более чем на 75% или больше. Размер опухоли может быть определен с использованием любого дающего воспроизводимые результаты средства измерения. Размер опухоли может быть определен на основании измерения диаметра опухоли.
В результате лечения рака может наблюдаться уменьшение объема опухоли. Предпочтительно, чтобы после лечения объем опухоли уменьшался на 5% или больше относительно ее размера до лечения; более предпочтительно, чтобы объем опухоли уменьшался на 10% или больше; более предпочтительно, уменьшался на 20% или больше; более предпочтительно, уменьшался на 30% или больше; более предпочтительно, уменьшался на 40% или больше; еще более предпочтительно, уменьшался на 50% или больше; и наиболее предпочтительно, уменьшался более чем на 75% или больше. Объем опухоли может быть определен с использованием любого дающего воспроизводимые результаты средства измерения.
В результате лечения рака может наблюдаться снижение числа опухолей. Предпочтительно, чтобы после лечения число опухолей уменьшалось на 5% или больше относительно числа до лечения; более предпочтительно, чтобы число опухолей уменьшалось на 10% или больше; более предпочтительно, уменьшалось на 20% или больше; более предпочтительно, уменьшалось на 30% или больше; более предпочтительно, уменьшалось на 40% или больше; еще более предпочтительно, уменьшалось на 50% или больше; и наиболее предпочтительно, уменьшалось более чем на 75%. Число опухолей может быть определено с использованием любого дающего воспроизводимые результаты средства измерения. Число опухолей может быть определено путем подсчета опухолей, видимых невооруженным глазом или при специальном увеличении. Предпочтительно, чтобы специальное увеличение составляло 2×, 3×, 4×, 5×, 10× или 50×.
В результате лечения рака может наблюдаться снижение числа метастатических поражений в других тканях или органах, находящихся в удалении от первичного местоположения опухоли. Предпочтительно, чтобы после лечения число метастатических поражений уменьшалось на 5% или больше относительно числа до лечения; более предпочтительно, чтобы число метастатических поражений уменьшалось на 10% или больше; более предпочтительно, уменьшалось на 20% или больше; более предпочтительно, уменьшалось на 30% или больше; более предпочтительно, уменьшалось на 40% или больше; еще более предпочтительно, уменьшалось на 50% или больше; и наиболее предпочтительно, уменьшалось более чем на 75%. Число метастатических поражений может быть определено с использованием любого дающего воспроизводимые результаты средства измерения. Число метастатических поражений может быть определено путем подсчета метастатических поражений, видимых невооруженным глазом или при специальном увеличении. Предпочтительно, чтобы специальное увеличение составляло 2×, 3×, 4×, 5×, 10× или 50×.
В результате лечения рака может наблюдаться увеличение среднего времени выживания популяции подвергаемых лечению субъектов по сравнению с популяцией не подвергаемых лечению субъектов. Предпочтительно, чтобы среднее время выживания увеличивалось более чем на 30 дней; более предпочтительно, более чем на 60 дней; более предпочтительно, более чем на 90 дней; и наиболее предпочтительно, более чем на 120 дней. Увеличение среднего времени выживания популяции может быть определено с использованием любого дающего воспроизводимые результаты средства измерения. Увеличение среднего времени выживания популяции может быть определено, например, путем подсчета средней продолжительности выживания для популяции после начала лечения активным соединением. Увеличение среднего времени выживания популяции также может быть определено, например, путем расчета средней продолжительности выживания для популяции после завершения первого раунда лечения активным соединением.
В результате лечения рака может наблюдаться увеличение среднего времени выживания популяции подвергаемых лечению субъектов по сравнению с популяцией, получающей монотерапию лекарственным средством, не являющимся соединением по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемыми солью, сольватом, аналогом или производным. Предпочтительно, чтобы среднее время выживания увеличивалось более чем на 30 дней; более предпочтительно, более чем на 60 дней; более предпочтительно, более чем на 90 дней; и наиболее предпочтительно, более чем на 120 дней. Увеличение среднего времени выживания популяции может быть определено с использованием любого дающего воспроизводимые результаты средства измерения. Увеличение среднего времени выживания популяции может быть определено, например, путем подсчета средней продолжительности выживания для популяции после начала лечения активным соединением. Увеличение среднего времени выживания популяции также может быть определено, например, путем расчета средней продолжительности выживания для популяции после завершения первого раунда лечения активным соединением.
В результате лечения рака может наблюдаться уменьшение скорости роста опухоли. Предпочтительно, чтобы после лечения скорость роста опухоли уменьшалась по меньшей мере на 5% относительно этого показателя до лечения; более предпочтительно, чтобы скорость роста опухоли уменьшалась по меньшей мере на 10%; более предпочтительно, уменьшалась по меньшей мере на 20%; более предпочтительно, уменьшалась по меньшей мере на 30%; более предпочтительно, уменьшалась по меньшей мере на 40%; более предпочтительно, уменьшалась по меньшей мере на 50%; еще более предпочтительно, уменьшалась по меньшей мере на 50%; и наиболее предпочтительно, уменьшалась по меньшей мере на 75%. Скорость роста опухоли может быть определена с использованием любого дающего воспроизводимые результаты средства измерения. Скорость роста опухоли может быть определена на основании изменения диаметра опухоли за единицу времени.
В результате лечения рака может наблюдаться уменьшение повторного роста опухоли. Предпочтительно, чтобы после лечения повторный рост опухоли составлял меньше 5%; более предпочтительно, повторный рост опухоли составлял меньше 10%; более предпочтительно, меньше 20%; более предпочтительно, меньше 30%; более предпочтительно, меньше 40%; более предпочтительно, меньше 50%; еще более предпочтительно, меньше 50%; и наиболее предпочтительно, меньше 75%. Повторный рост опухоли может быть определен с использованием любого дающего воспроизводимые результаты средства измерения. Повторный рост опухоли определяют, например, путем измерения увеличения диаметра опухоли после предшествующего случая уменьшения размера опухоли, обусловленного лечением. На уменьшение повторного роста опухоли указывает отсутствие повторного появления опухолей после прекращения лечения.
В результате лечения рака или клеточного пролиферативного расстройства может наблюдаться гибель клеток, и предпочтительно гибель клеток приводит к уменьшению числа клеток в популяции по меньшей мере на 10%. Более предпочтительно, гибель клеток означает уменьшение по меньшей мере на 20%; более предпочтительно, уменьшение по меньшей мере на 30%; более предпочтительно, уменьшение по меньшей мере на 40%; более предпочтительно, уменьшение по меньшей мере на 50%; наиболее предпочтительно, уменьшение по меньшей мере на 75%. Число клеток в популяции может быть определено с использованием любого дающего воспроизводимые результаты средства измерения, известного специалистам в данной области техники.
Согласно настоящему изобретению также предложены способы синтеза соединений формулы (I) или (Ia), описанных в данной заявке. Согласно настоящему изобретению также предложены подробно рассмотренные способы синтеза различных описываемых соединений по настоящему изобретению в соответствии с приведенными далее схемами, а также показанными в разделе Примеры.
По всему описанию в случае, когда композиции описываются как имеющие, включающие или содержащие конкретные компоненты, подразумевается, что композиции также состоят или по существу состоят из перечисленных компонентов. Аналогичным образом, в случае, когда методы или способы описываются как имеющие, включающие или содержащие конкретные стадии способа, данные способы также состоят или по существу состоят из перечисленных стадий способов получения. Кроме того, следует понимать, что порядок стадий или порядок выполнения определенных действий не имеет значения при условии, что данное изобретение остается реализуемым. Более того, две или более стадий или действий можно осуществлять одновременно.
Способы синтеза по изобретению могут допускать широкий спектр функциональных групп, поэтому можно использовать различные замещенные исходные вещества. Такие способы, в целом, позволяют получить желаемое конечное соединение в конце или ближе к концу общего способа, хотя в некоторых случаях может быть желательным дальнейшее превращение соединения в его фармацевтически приемлемую соль.
th
rd
Соединения по настоящему изобретению могут быть получены различными способами с использованием имеющихся в продаже исходных веществ, соединений, известных из литературных источников, или из легко получаемых промежуточных соединений путем применения стандартных методов и процедур синтеза, которые либо известны специалистам в данной области техники, либо будут очевидны специалисту в данной области благодаря разъяснениям, приведенным в данном описании. Стандартные методы и процедуры синтеза для получения органических молекул и преобразований функциональных групп и манипуляций с ними можно найти в соответствующей научной литературе или в стандартных руководствах в данной области. Несмотря на отсутствие ограничений каким-либо одним или несколькими источниками, полезными и общепризнанными эталонными руководствами по органическому синтезу, известными специалистам в данной области техники, являются классические источники, такие как Smith, М.В., March, J., March's Advanced Organic Chemistry: Recreations, Mechanisms, and Structure, 5 edition, John Wiley & Sons: New York, 2001; Greene, Т.W., Wuts, Р.G.М., Protective Groups in Organic Synthesis, 3 edition, John Wiley & Sons: New York, 1999; R. Larock, Comprehensive Organic Transformations, VCH Publishers (1989); L. Fieser апе М. Fieser, Fieser апй Fieser's Reagents for Organic Synthesis, John Wiley & Sons (1994); и L. Paquette, ed., Encyclopedia of Reagents for Organic Synthesis, John Wiley & Sons (1995), включенные в данное описание посредством ссылки. Приведенные далее описания способов синтеза предназначены для иллюстрации, а не для ограничения, общих методик получения соединений по настоящему изобретению.
Соединения по настоящему изобретению подходящим образом могут быть получены рядом способов, известных специалистам в данной области техники. Соединения формулы (I) или (Ia), описанные в данной заявке, могут быть получены согласно методикам, проиллюстрированным ниже на схемах 1-7, исходя из имеющихся в продаже исходных веществ или исходных веществ, которые могут быть получены с использованием методики из литературы. Переменные (например, R и n и т.д.) на схемах 1-7 являются такими, как определено в любой формуле, описанной в данной заявке, если не указано иное.
Специалист средней квалификации в данной области техники отметит, что при выполнении последовательностей реакций и схем синтеза, изложенных в данном описании, может быть изменен порядок выполнения некоторых стадий, таких как введение и удаление защитных групп.
rd
Специалисту средней квалификации в данной области техники будет известно, что для некоторых групп может потребоваться защита в условиях реакции посредством использования защитных групп. Защитные группы также можно использовать для различения схожих функциональных групп в молекулах. Список защитных групп и информацию относительно введения и удаления этих групп можно найти в Greene, Т.W., Wuts, Р.G.М., Protective Groups in Organic Synthesis, 3 edition, John Wiley & Sons: New York, 1999.
Предпочтительные защитные группы включают, но не ограничиваются этим:
для гидроксильной группировки: TBDPS (дареда-бутилдифенилсилил), бензил, ТНР (тетрагидропиранил).
По реакционным схемам, описанным в данной заявке, могут быть получены многие стереоизомеры. Если не указан конкретный стереоизомер, то понятно, что имеются в виду все возможные стереоизомеры, которые могли быть получены согласно этой реакции. Специалисту средней квалификации в данной области техники будет известно, что данные реакции могут быть оптимизированы для получения предпочтительно одного изомера, или могут быть разработаны новые схемы для получения единственного изомера. Если получаются смеси, то для разделения изомеров могут быть использованы такие методы, как препаративная тонкослойная хроматография, препаративная высокоэффективная жидкостная хроматография (HPLC), препаративная хиральная HPLC или препаративная сверхкритическая жидкостная хроматография (SFC).
На приведенной ниже схеме 1 проиллюстрировано получение соединений 1-1, 1-2, 1-3, 1-4, 1-5, 2-1, 2-2, 2-3, 2-4, 3-1, 3-2, 3-3 и 3-4
Схема 1
3
2
2
n
Как проиллюстрировано выше на схеме 1, к раствору СНО-[CHCHO]-Н (n=3, 6, 9, 12 или 16) в органическом растворителе, например, (1) в дихлорметане (DCM) или смеси тетрагидрофуран (THF)/вода добавляют тозилхлорид (TsCl) и гидроксид калия, (2) в пиридине (Py) в безводном DCM добавляют 4-нитрофенилхлорформиат или (3) в бромуксусной кислоте в THF добавляют гидрид натрия (NaH), например, при 0°С. Реакционную смесь перемешивают, например, при комнатной температуре. После разделения и очистки получают соединение 1-1, 1-2, 1-3, 1-4, 1-5, 2-1, 2-2, 2-3, 2-4, 3-1, 3-2, 3-3 или 3-4.
На приведенной ниже схеме 2 проиллюстрировано получение некоторых конъюгатов NDT или NDP.
Схема 2
2
2
n
3
3
2
3
2
2
n
3
Как проиллюстрировано выше на схеме 2, (1) к перемешиваемому раствору NDP или NDT и Ts-O-[CHCHO]-СН (т.е. соединения 1-1 (n=3), 1-2 (n=6), 1-3 (n=12) или 1-4 (n=16)) в безводном ацетоне или ацетонитриле (CHCN) добавляют карбонат калия (KCO), например, при комнатной температуре в атмосфере аргона, (2) к перемешиваемому раствору NDP или NDT и 4-нитрофенил-[CHCHO]-СН карбоната (т.е. соединения 2-1 (n=3), 2-2 (n=6), 2-3 (n=12) или 2-4 (n=16)), например, в THF, добавляют диизопропилэтиламин (DIPEA), например, при комнатной температуре в атмосфере аргона, или (3) к раствору NDP или NDT и соединения 3-1 (n=3), 3-2 (n=6), 3-3 (n=12) или 3-4 (n=16), например, в DCM, добавляют 1-этил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимид (EDC) и 4-диметиламинопиридин (DMAP), например, при 0°С. После выделения из реакционной смеси и очистки получают соединение 4-1а, 4-2а, 4-3а, 4-4а, 4-1b, 4-2b, 4-3b, 4-4b, 5-1а, 5-2а, 5-3а, 5-4а, 5-1b, 5-2b, 5-3b, 5-4b, 6-1а, 6-2а, 6-3а, 6-4а, 6-1b, 6-2b, 6-3b или 6-4b.
2
3
2
m
3
На схеме 3 показано получение Ts-O-[СНСН(ОСН)CHO]-СН.
Схема 3
2
3
2
m
3
Как показано выше на схеме 3, соединение 7 подвергают метилированию в щелочных условиях с получением соединения 8. Глобальное удаление защитных групп выполняют в кислотных условиях, получая соединение 9. В результате введения силильных защитных групп по концевым спиртовым группам с последующим метилированием соединения 10 в соответствии со стандартным протоколом получают соединение 11. После глобального удаления защитных групп с применением тетрабутиламмонийфторида (TBAF) получают соединение 12; в результате последующего введения одной защитной группы ТНР получают соединение 13. В результате метилирования соединения 13 с последующим удалением защитной группы в кислотных условиях получают соединение 15. После тозилирования соединения 15 получают Ts-O-[СНСН(ОСН)CHO]-СН (соединение 16).
2
2
n
2
3
2
3
3
На приведенной ниже схеме 4 проиллюстрировано получение Ts-O-[CHCHO]-[СНСН(ОСН)CHO]-СН (соединения 19-1 (n=3) и соединения 19-2 (n=9)).
Схема 4
2
Как показано выше на схеме 4, проводят реакцию сочетания для соединения 15 в щелочных условиях с получением соединения 17. Удаление защитных групп осуществляют в кислотных условиях, получая соединение 18-1. В результате тозилирования соединения 18-1 получают соединение 19-1. В результате сочетания в щелочных условиях получают соединение 20. После удаления защитных групп с использованием Н и Pd/С получают соединение 18-2. В результате тозилирования соединения 18-2 получают соединение 19-2.
3
2
2
n
2
3
2
3
На приведенной ниже схеме 5 показана общая методика получения СН-О-[CHCHO]-[СНСН(ОСН)CHO]-Ts (соединений 23-1 (n=3) и 23-2 (n=9)).
Схема 5
Как показано выше на схеме 5, проводят реакцию сочетания для соединения 13 в щелочных условиях с получением соединения 21-1 (n=3) или 21-2 (n=9). Удаление защитных групп осуществляют в кислотных условиях, получая соединение 22-1 (n=3) или 22-2 (n=9). В результате тозилирования соединения 22-1 (n=3) или 22-2 (n=9) получают соединение 23-1 (n=3) или 23-2 (n=9), соответственно.
2
3
2
3
3
2
3
2
3
3
2
2
n
2
3
2
3
3
2
2
n
2
3
2
3
3
2
3
2
3
2
2
n
3
2
3
2
3
2
2
n
3
На приведенной ниже схеме 6 проиллюстрировано получение NDP-[СНСН(ОСН)CHO]-СН, NDT-[СНСН(ОСН)CHO]-СН, NDP-[CHCHO]-[СНСН(ОСН)CHO]-СН, NDT-[CHCHO]-[СНСН(ОСН)CHO]-СН, NDP-[СНСН(ОСН)CHO]-[CHCHO]-СН или NDT-[СНСН(ОСН)CHO]-[CHCHO]-СН.
Схема 6
2
3
2
3
3
2
3
2
3
3
2
2
n
2
3
2
3
3
2
2
n
2
3
2
3
3
2
3
2
3
2
2
n
3
2
3
2
3
2
2
n
3
Как показано выше на схеме 6, проводят реакцию сочетания для NDP или NDT в щелочных условиях с получением NDP-[CHCH(ОСН)CHO]-СН, NDT-[СНСН(ОСН)CHO]-СН, NDP-[CHCHO]-[CHCH(OCH)CHO]-CH, NDT-[CHCHO]-[СНСН(ОСН)CHO]-СН, NDP-[CHCH(OCH)CHO]-[CHCHO]-CH или NDT-[CHCH(OCH)CHO]-[CHCHO]-CH.
2
2
3
2
2
3
На приведенной ниже схеме 7 проиллюстрировано получение NDP-[СНСН(ОН)CHO]-Н и NDT-[CHCH(OH)CHO]-H.
Схема 7
2
2
2
3
2
2
3
Как показано выше на схеме 7, в защищенный бензильными группами триглицерин вводят одну защитную группу ТНР, получая соединение 28. Далее в соединение 28 можно ввести защитные группы с получением соединения 29. ТНР можно удалить в соответствии со стандартным протоколом с получением соединения 30, которое после этого можно подвергнуть тозилированию с получением соединения 31. Глобальное удаление защитных групп можно осуществить, используя Н и Pd/C, с получением соединения 32. Реакцию сочетания соединения 32 с NDP или NDT проводят в щелочных условиях, получая NDP-[CHCH(OH)CHO]-H или NDT-[СНСН(ОН)CHO]-Н.
Теперь, после представления данного изобретения в письменной форме, специалистам в данной области техники будет известно, что изобретение может быть применено на практике во множестве воплощений и что приведенное выше описание и приведенные ниже примеры предназначены для иллюстрации и не ограничивают следующую за ними формулу изобретения.
ПРИМЕРЫ
Данное изобретение дополнительно иллюстрируются приведенными далее примерами, которые не следует истолковывать как ограничивающие объем или сущность этого изобретения конкретными методиками, приведенными в данном описании. Следует понимать, что примеры приводятся с целью иллюстрации определенных воплощений и что никакого ограничения объема изобретения не подразумевается. Кроме того, следует понимать, что могут быть применены различные другие воплощения, их модификации и эквиваленты, которые могут предложить сами специалисты в данной области техники без отклонения от сущности настоящего изобретения и/или объема прилагаемой формулы изобретения.
Пример 1. Получение соединений 1-1, 1-2, 1-3, 1-4, 1-5, 2-1, 2-2, 2-3, 2-4, 3-1, 3-2, 3-3 и 3-4
2
2
n
3
2
2
16
3
mPEG, такие как Н-[CHCHO]-СН (n=3, 6, 9 или 12), получали в соответствии с WO 2002098949 A1, a H-[CHCHO]-CH приобретали у Alfa Aesar. TFP, РСР, NDP и NDT получали в соответствии с опубликованной методикой (патент США №2902484). Выше на схеме 1 показано получение соединений 1-1, 1-2, 1-3, 1-4, 1-5, 2-1, 2-2, 2-3, 2-4, 3-1, 3-2, 3-3 и 3-4
2
2
n
3
Пример 2. Общая методика получения Ts-O-[CHCHO]-CH (n=3, 6, 12, 16 или 9; соединений 1-1, 1-2, 1-3, 1-4 или 1-5)
2
2
n
3
2
4
2
2
n
3
К раствору Н-[CHCHO]-СН (n=3, 6, 12, 16 или 9; 2,00 ммоль) в дихлорметане (DCM, 6 мл) или смеси тетрагидрофуран (THF)/вода (4,6 мл/1,4 мл) добавляли тозилхлорид (TsCl; 2,10 ммоль) и гидроксид калия (8,02 ммоль) при 0°С. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 22 ч, затем разбавляли DCM (30 мл) и НО (20 мл). Водный слой отделяли и экстрагировали DCM (30 мл × 2). Объединенные органические слои промывали рассолом, сушили над MgSO, фильтровали и упаривали при пониженном давлении. После очистки остатка на колонке с силикагелем получали Ts-O-[CHCHO]-CH (n=3, 6, 12, 16 или 9, соединения 1-1, 1-2, 1-3, 1-4 или 1-5).
2
2
3
3
3
1
Ts-O-[CHCHO]-CH (соединение 1-1): Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 2.43 (s, 3Н), 3.35 (s, 3Н), 3.50-3.53 (m, 2Н), 3.57-3.61 (m, 8Н), 3.67 (t, J=4,8 Гц, 2Н), 4.14 (t, J=4,8 Гц, 2Н), 7.31 (d, J=8,0 Гц, 2Н), 7.78 (d, J=8,0 Гц, 2Н).
2
2
6
3
3
1
Ts-O-[CHCHO]-CH (соединение 1-2): Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 2.42 (s, 3Н), 3.35 (s, 3Н), 3.51-3.70 (m, 22Н), 4.13 (d, J=4,8 Гц, 2Н), 7.31 (d, J=8,0 Гц, 2Н), 7.77 (d, J=8,0 Гц, 2Н).
2
2
12
3
3
1
Ts-O-[CHCHO]-CH (соединение 1-3): Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 2.41 (s, 3Н), 3.34 (s, 3Н), 3.50-3.80 (m, 46Н), 4.12 (t, J=4,8 Гц, 2Н), 7.31 (d, J=8,0 Гц, 2Н), 7.76 (d, J=8,0 Гц, 2Н).
2
2
16
3
3
1
Ts-O-[CHCHO]-CH (соединение 1-4): Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 2.42 (s, 3Н), 3.35 (s, 3Н), 3.50-3.80 (m, 62Н), 4.13 (t, J=4,8 Гц, 2Н), 7.32 (d, J=8,0 Гц, 2Н), 7.77 (d, J=8,0 Гц, 2Н).
2
2
9
3
3
1
Ts-O-[CHCHO]-CH (соединение 1-5): Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 2.42 (s, 3Н), 3.35 (s, 3Н), 3.51-3.67 (m, 34Н), 4.13 (t, J=4,8 Гц, 2Н), 7.31 (d, J=8,0 Гц, 2Н), 7.77 (d, J=8,0 Гц, 2Н).
2
2
n
3
Пример 3. Общая методика получения 4-нитрофенил-[CHCHO]-СН карбонатов (n=3, 6, 12 или 16; соединений 2-1, 2-2, 2-3 или 2-4)
3
2
2
n
4
2
2
n
3
К перемешиваемому раствору CHO-[CHCHO]-Н (n=3, 6, 12 или 16; 2,00 ммоль) и пиридина (Ру; 4,0 ммоль) в безводном DCM (5 мл) добавляли 4-нитрофенилхлорформиат (2,80 ммоль) в виде одной порции при 0°С в атмосфере аргона. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 5 ч. Смесь разбавляли DCM (40 мл), промывали 1 н. раствором HCl (20 мл) и рассолом, сушили над MgSO и фильтровали. Растворитель выпаривали при пониженном давлении. После очистки остатка на колонке с силикагелем получали 4-нитрофенил-[CHCHO]-СН карбонат (n=3, 6, 12 или 16; соединения 2-1, 2-2, 2-3 или 2-4).
2
2
3
3
3
1
4-Нитрофенил-[CHCHO]-СН карбонат (соединение 2-1): Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 3.35 (s, 3Н), 3.53-3.55 (m, 2Н), 3.63-3.70 (m, 6Н), 3.78-3.81 (m, 2Н), 4.41-4.43 (m, 2Н), 7.37 (d, J=9,2 Гц, 2Н), 8.26 (d, J=9,2 Гц, 2Н).
2
2
6
3
3
1
4-Нитрофенил-[CHCHO]-СН карбонат (соединение 2-2): Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 3.35 (s, 3Н), 3.51-3.53 (m, 2Н), 3.60-3.69 (m, 18Н), 3.78-3.80 (m, 2Н), 4.41-4.43 (m, 2Н), 7.37 (d, J=9,2 Гц, 2Н), 8.26 (d, J=9,2 Гц, 2Н).
2
2
12
3
3
1
4-Нитрофенил-[CHCHO]-СН карбонат (соединение 2-3): Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 3.35 (s, 3Н), 3.52-3.80 (m, 46Н), 4.41-4.43 (m, 2Н), 7.38 (d, J=7,2 Гц, 2Н), 8.27 (d, J=7,2 Гц, 2Н).
2
2
16
3
3
1
4-Нитрофенил-[CHCHO]-СН карбонат (соединение 2-4): Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 3.35 (s, 3Н), 3.52-3.80 (m, 62Н), 4.41-4.43 (m, 2Н), 7.37 (d, J=8,8 Гц, 2Н), 8.27 (d, J=8,8 Гц, 2Н).
2
2
2
n
3
Пример 4. Общая методика получения уксусная кислота-СНО-[CHCHO]-СН (n=3, 6, 12 или 16; соединений 3-1, 3-2, 3-3 или 3-4)
3
2
2
n
4
2
2
2
n
3
К раствору CHO-[CHCHO]-Н (n=3, 6, 12 или 16; 12,18 ммоль) и бромуксусной кислоты (13,4 ммоль) в THF (24 мл) добавляли гидрид натрия (NaH, 57-63%-ный в масле; 48,72 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 5 ч при комнатной температуре. Избыток гидрида натрия гасили, добавляя 1 н. раствор соляной кислоты (50 мл). Органический растворитель выпаривали при пониженном давлении. Водный раствор экстрагировали этилацетатом (30 мл × 3). Объединенные органические слои сушили с использованием MgSO и концентрировали при пониженном давлении, получая соединения уксусная кислота-CHO-[CHCHO]-СН (n=3, 6, 12 или 16; соединения 3-1, 3-2, 3-3 или 3-4).
2
2
2
3
3
3
1
Уксусная кислота-CHO-[CHCHO]-СН (соединение 3-1): Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 3.37 (s, 3Н), 3.55-3.73 (m, 12Н), 4.12 (s, 2Н).
2
2
2
6
3
3
1
Уксусная кислота-CHO-[CHCHO]-СН (соединение 3-2): Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 3.36 (s, 3Н), 3.52-3.77 (m, 24Н), 4.12 (s, 2Н).
2
2
2
12
3
3
1
Уксусная кислота-CHO-[CHCHO]-СН (соединение 3-3): Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 3.26 (s, 3Н), 3.43-3.62 (m, 48Н), 4.03 (s, 2Н).
2
2
2
16
3
3
1
Уксусная кислота-CHO-[CHCHO]-СН (соединение 3-4): Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 3.35 (s, 3Н), 3.45-3.79 (m, 64Н), 4.11 (s, 2Н).
Пример 5. Получение конъюгатов NDP или NDT
Выше на схеме 2 показано получение конъюгатов NDP или NDT.
Пример 6
2
2
n
3
3
2
3
К перемешиваемому раствору NDP или NDT (3,99 ммоль) и Ts-O-[CHCHO]-СН (4,30 ммоль; соединения 1-1 (n=3), 1-2 (n=6), 1-3 (n=12) или 1-4 (n=16)) в безводном ацетоне или ацетонитриле (CHCN) (50 мл) добавляли карбонат калия (KCO, 20 ммоль) при комнатной температуре в атмосфере аргона. После кипячения с обратным холодильником (rfx) в течение 20 ч смесь разбавляли ацетоном и осадок извлекали фильтрованием. Растворитель выпаривали при пониженном давлении. Остаток очищали на колонке с силикагелем, получая соединение 4-1а, 4-2а, 4-3а, 4-4а, 4-1b, 4-2b, 4-3b или 4-4b
1
3
Соединение 4-1а: Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 1.91 (t, J=6,8 Гц, 2Н), 2.45 (t, J=6,8 Гц, 8Н), 2.57 (t, J=6,8 Гц, 2Н), 3.35 (s, 3Н), 3.51-3.68 (m, 12Н), 3.92 (t, J=6,8 Гц, 2Н), 6.82-7.14 (m, 7Н).
1
3
Соединение 4-2а: Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 1.91 (t, J=6,8 Гц, 2Н), 2.45 (t, J=6,8 Гц, 8Н), 2.57 (t, J=6,8 Гц, 2Н), 3.35 (s, 3Н), 3.51-3.68 (m, 24Н), 3.92 (t, J=6,8 Гц, 2Н), 6.82-7.14 (m, 7Н).
1
3
Соединение 4-3а: Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 1.91 (t, J=6,8 Гц, 2Н), 2.45 (t, J=6,8 Гц, 8Н), 2.57 (t, J=6,8 Гц, 2Н), 3.35 (s, 3Н), 3.51-3.68 (m, 48Н), 3.92 (t, J=6,8 Гц, 2Н), 6.82-7.14 (m, 7Н).
1
3
Соединение 4-4а: Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 1.91 (t, J=6,8 Гц, 2Н), 2.44 (t, J=6,8 Гц, 8Н), 2.55 (t, J=6,8 Гц, 2Н), 3.35 (s, 3Н), 3.51-3.70 (m, 64Н), 3.86 (t, J=6,8 Гц, 2Н), 6.82-7.12 (m, 7Н).
1
3
Соединение 4-1b: Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 1.91 (t, J=6,8 Гц, 2Н), 2.45 (t, J=6,8 Гц, 8Н), 2.57 (t, J=6,8 Гц, 2Н), 3.35 (s, 3Н), 3.51-3.68 (m, 12Н), 3.92 (t, J=6,8 Гц, 2Н), 6.88-7.18 (m, 7Н).
1
3
Соединение 4-2b: Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 1.91 (t, J=6,8 Гц, 2Н), 2.45 (t, J=6,8 Гц, 8Н), 2.57 (t, J=6,8 Гц, 2Н), 3.35 (s, 3Н), 3.51-3.68 (m, 24Н), 3.92 (t, J=6,8 Гц, 2Н), 6.88-7.18 (m, 7Н).
1
3
Соединение 4-3b: Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 1.91 (t, J=6,8 Гц, 2Н), 2.45 (t, J=6,8 Гц, 8Н), 2.57 (t, J=6,8 Гц, 2Н), 3.35 (s, 3Н), 3.51-3.68 (m, 48Н), 3.92 (t, J=6,8 Гц, 2Н), 6.88-7.18 (m, 7Н).
1
3
Соединение 4-4b: H ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 1.91 (t, J=6,8 Гц, 2Н), 2.45 (t, J=6,8 Гц, 8Н), 2.54 (t, J=6,8 Гц, 2Н), 3.35 (s, 3Н), 3.44-3.80 (m, 64Н), 3.92 (t, J=6,8 Гц, 2Н), 6.88-7.17 (m, 7Н).
Пример 7
2
2
n
3
К перемешиваемому раствору NDP или NDT (3,0 ммоль) и 4-нитрофенил-[CHCHO]-СН карбоната (2,5 ммоль, соединение 2-1 (n=3), 2-2 (n=6), 2-3 (n=12) или 2-4 (n=16)) в THF (10 мл) добавляли диизопропилэтиламин (DIPEA) (4,6 ммоль) при комнатной температуре в атмосфере аргона и реакционную смесь кипятили с обратным холодильником в течение 20 ч. Растворитель выпаривали при пониженном давлении. Остаток очищали на колонке с силикагелем, получая соединение 5-1а, 5-2а, 5-3а, 5-4а, 5-1b, 5-2b, 5-3b или 5-4b
2
2
3
3
3
1
NDP-CO-O-[CHCHO]-CH (соединение 5-1а): Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 1.92 (t, J=6,8 Гц, 2Н), 2.30-2.36 (m, 4Н), 2.45 (t, J=6,8 Гц, 2Н), 3.35 (s, 3Н), 3.39-3.42 (m, 4Н), 3.51-3.68 (m, 10Н), 3.91 (t, J=6,8 Гц, 2Н), 4.19-4.21 (m, 2Н), 6.83-7.15 (m, 7Н).
2
2
6
3
3
1
NDP-CO-O-[CHCHO]-CH (соединение 5-2а): Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 1.92 (t, J=6,8 Гц, 2Н), 2.30-2.36 (m, 4Н), 2.45 (t, J=6,8 Гц, 2Н), 3.35 (s, 3Н), 3.39-3.42 (m, 4Н), 3.51-3.68 (m, 22Н), 3.91 (t, J=6,8 Гц, 2H), 4.19-4.21 (m, 2Н), 6.83-7.15 (m, 7Н).
2
2
12
3
3
1
NDP-CO-O-[CHCHO]-CH (соединение 5-3а): Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 1.92 (t, J=6,8 Гц, 2Н), 2.30-2.36 (m, 4Н), 2.45 (t, J=6,8 Гц, 2Н), 3.35 (s, 3Н), 3.39-3.42 (m, 4Н), 3.51-3.68 (m, 46Н), 3.91 (t, J=6,8 Гц, 2H), 4.19-4.21 (m, 2Н), 6.83-7.15 (m, 7Н).
2
2
16
3
3
1
NDP-CO-O-[CHCHO]-CH (соединение 5-4а): Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 1.92 (t, J=6,8 Гц, 2Н), 2.30-2.36 (m, 4Н), 2.45 (t, J=6,8 Гц, 2Н), 3.35 (s, 3Н), 3.39-3.42 (m, 4Н), 3.51-3.68 (m, 62Н), 3.91 (t, J=6,8 Гц, 2H), 4.19-4.21 (m, 2Н), 6.83-7.15 (m, 7Н).
2
2
3
3
3
1
NDT-CO-O-[CHCHO]-CH (соединение 5-1b): Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 1.91 (t, J=6,8 Гц, 2Н), 2.30-2.36 (m, 4Н), 2.46 (t, J=6,8 Гц, 2Н), 3.35 (s, 3Н), 3.39-3.42 (m, 4Н), 3.51-3.68 (m, 10Н), 3.95 (t, J=6,8 Гц, 2Н), 4.19-4.21 (m, 2Н), 6.88-7.18 (m, 7Н).
2
2
6
3
3
1
NDT-CO-O-[CHCHO]-CH (соединение 5-2b): Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 1.90 (t, J=6,8 Гц, 2Н), 2.30-2.36 (m, 4Н), 2.45 (t, J=6,8 Гц, 2Н), 3.35 (s, 3Н), 3.39-3.42 (m, 4Н), 3.51-3.68 (m, 22Н), 3.95 (t, J=6,8 Гц, 2H), 4.19-4.21 (m, 2Н), 6.88-7.18 (m, 7Н).
2
2
12
3
3
1
NDT-CO-O-[CHCHO]-CH (соединение 5-3b): Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 1.90 (t, J=6,8 Гц, 2Н), 2.30-2.36 (m, 4Н), 2.45 (t, J=6,8 Гц, 2Н), 3.35 (s, 3Н), 3.39-3.42 (m, 4Н), 3.51-3.68 (m, 46Н), 3.95 (t, J=6,8 Гц, 2H), 4.19-4.21 (m, 2Н), 6.88-7.18 (m, 7Н).
2
2
16
3
3
1
NDT-CO-O-[CHCHO]-CH (соединение 5-4b): Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 1.90 (t, J=6,8 Гц, 2Н), 2.30-2.36 (m, 4Н), 2.45 (t, J=6,8 Гц, 2Н), 3.35 (s, 3Н), 3.37-3.40 (m, 4Н), 3.51-3.68 (m, 62Н), 3.96 (t, J=6,8 Гц, 2H), 4.17-4.20 (m, 2Н), 6.88-7.18 (m, 7Н).
Пример 8
2
2
2
n
3
4
К раствору NDP или NDT (2,77 ммоль) и соединения уксусная кислота-CHO-[CHCHO]-СН (3,66 ммоль; соединение 3-1 (n=3), 3-2 (n=6), 3-3 (n=12) или 3-4 (n=16)) в DCM (14 мл) добавляли 1-этил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимид (EDC; 4,1 ммоль) и 4-диметиламинопиридин (DMAP; 0,262 ммоль) при 0°С. Полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 21 ч, выливали в воду и экстрагировали DCM. Объединенные органические слои промывали рассолом, сушили над MgSO и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении. После очистки остатка на колонке с силикагелем получали соединение 6-1а, 6-2а, 6-3а, 6-4а, 6-1b, 6-2b, 6-3b или 6-4b
2
2
3
3
3
1
NDP-CO[CHCHO]-CH (соединение 6-1а): Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 1.91 (t, J=6,8 Гц, 2Н), 2.35-2.47 (m, 6Н), 3.35-3.39 (m, 5Н), 3.51-3.63 (m, 14Н), 3.91 (t, J=6,8 Гц, 2H), 4.15 (s, 2Н), 6.88-7.19 (m, 7Н).
2
2
6
3
3
1
NDP-CO[CHCHO]-CH (соединение 6-2а): Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 1.90 (t, J=6,8 Гц, 2Н), 2.36-2.46 (m, 6Н), 3.35-3.41 (m, 5Н), 3.52-3.64 (m, 26Н), 3.91 (t, J=6,8 Гц, 2H), 4.15 (s, 2Н), 6.83-7.14 (m, 7Н).
2
2
12
3
3
1
NDP-CO[CHCHO]-CH (соединение 6-3а): Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 1.90 (t, J=6,8 Гц, 2Н), 2.34-2.46 (m, 6Н), 3.35-3.41 (m, 5Н), 3.51-3.63 (m, 50Н), 3.91 (t, J=6,8 Гц, 2H), 4.15 (s, 2Н), 6.83-7.13 (m, 7Н).
2
2
16
3
3
1
NDP-CO[CHCHO]-CH (соединение 6-4а): Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 1.90 (t, J=6,8 Гц, 2Н), 2.34-2.47 (m, 6Н), 3.35-3.38 (m, 5Н), 3.50-3.62 (m, 66Н), 3.91 (t, J=6,8 Гц, 2H), 4.15 (s, 2Н), 6.83-7.13 (m, 7Н).
2
2
3
3
3
1
NDT-CO[CHCHO]-CH (соединение 6-1b): Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 1.91 (t, J=6,8 Гц, 2H), 2.35-2.47 (m, 6Н), 3.35-3.39 (m, 5Н), 3.51-3.63 (m, 14Н), 3.91 (t, J=6,8 Гц, 2H), 4.15 (s, 2H), 6.88-7.19 (m, 7H).
2
2
6
3
3
1
NDT-CO[CHCHO]-CH (соединение 6-2b): Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 1.91 (t, J=6,8 Гц, 2H), 2.35-2.47 (m, 6H), 3.35-3.39 (m, 5H), 3.50-3.64 (m, 26H), 3.91 (t, J=6,8 Гц, 2H), 4.15 (s, 2H), 6.88-7.18 (m, 7H).
2
2
12
3
3
1
NDT-CO[CHCHO]-CH (соединение 6-3b): Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 1.90 (t, J=6,8 Гц, 2H), 2.34-2.47 (m, 6H), 3.35-3.39 (m, 5H), 3.51-3.63 (m, 50H), 3.91 (t, J=6,8 Гц, 2H), 4.15 (s, 2H), 6.88-7.19 (m, 7H).
2
2
16
3
3
1
NDT-CO[CHCHO]-CH (соединение 6-4b): Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 1.90 (t, J=6,8 Гц, 2H), 2.34-2.47 (m, 6H), 3.35-3.38 (m, 5H), 3.50-3.62 (m, 66H), 3.91 (t, J=6,8 Гц, 2H), 4.15 (s, 2H), 6.88-7.18 (m, 7H).
2
3
2
m
3
Пример 9. Методика получения Ts-O-[СНСН(ОСН)CHO]-СН
2
3
2
m
3
2
3
2
3
3
Выше на схеме 3 показано получение Ts-O-[СНСН(ОСН)CHO]-СН. Соединение 7 подвергали метилированию в щелочных условиях с получением соединения 8. Глобальное удаление защитных групп выполняли в кислотных условиях, получая соединение 9. В результате введения силильных защитных групп по концевым спиртовым группам с последующим метилированием соединения 10 в соответствии со стандартным протоколом получали соединение 11. После глобального удаления защитных групп с применением TBAF получали соединение 12; в результате последующего введения одной защитной группы ТНР получали соединение 13. В результате метилирования соединения 13 с последующим удалением защитной группы в кислотных условиях получали соединение 15. После тозилирования соединения 15 получали Ts-O-[CHCH(OCH)CHO]-CH (соединение 16).
Пример 10. Получение соединения 7 (1,2,10,11-бис(изопропилидендиокси)-4,8-диоксаундекан-6-ола)
2
2
3
6
3
3
1
Соединение 7 получали из триглицерина (НО-[СНСН(ОН)CHO]-Н) в соответствии с опубликованной методикой) (Nemoto et al., Chem. Lett., 2010, 39, 856-857). H ЯМР (400 МГц, [D]ацетон): δ 1.28 (s, 6H, CH), 1.33 (s, 6H, CH), 2.83 (s, 1H, OH), 3.50 (ddd, J=31,8; 10,1; 5,5 Гц, ddd, J=17,4; 11,9; 6,3 Гц, 8H), 3.75 (td, J=4,9; 1,5 Гц, 1H), 3.69 (dd, J=8,2; 6,3 Гц, 2H), 4.00 (dd, J=8,2; 6,4 Гц, 2H), 3.84 (m, 1H), 4.19 (q, J=11,9; 6,3 Гц, 2H).
Пример 11. Получение соединения 8
3
4
3
1
К раствору соединения 7 (10 г; 31,21 ммоль) в THF (104 мл) добавляли NaH (2,25 мг; 56,25 ммоль) при 0°С. После перемешивания смеси в течение 30 минут при комнатной температуре медленно добавляли метилиодид (CHI; 2,6 мл; 41,76 ммоль) при 0°С. Полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 18 ч, выливали в воду и экстрагировали DCM. Объединенные органические слои промывали рассолом, сушили над MgSO и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении. После очистки остатка на колонке с силикагелем с элюированием смесью EtOAc/гексан (об./об. = 1:2 и 1:1) получали соединение 8 (10,2 г; выход 98%). Н ЯМР (400 МГц, CDCl): δ 1.33 (s, 6Н), 1.39 (s, 6Н), 3.73-3.33 (m, 14Н), 4.04-4.01 (m, 2Н), 4.26-4.22 (m, 2Н).
+
1
3
К раствору соединения 8 (10,2 г; 30,5 ммоль) в МеОН (60 мл) добавляли DOWEX Н (4,8 г) при комнатной температуре. Полученный раствор перемешивали при температуре дефлегмации в течение 17 ч и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении, получая соединение 9 (7,66 г; выход 99%). Н ЯМР (400 МГц, CDOD): δ 3.31-3.75 (m, 18Н).
Пример 13. Получение соединения 10
3
4
3
1
К раствору соединения 9 (7,66 г; 30,12 ммоль) в DCM (280 мл) добавляли триметиламин (EtN; 17,6 мл; 126,27 ммоль) и 4-диметиламинопиридин (DMAP; 1,84 г; 15,06 ммоль) при комнатной температуре и затем трет-бутил(хлор)дифенилсилан (TBDPSCl; 16,66 мл; 64,07 ммоль) при 0°С. Полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 18 ч, выливали в воду и экстрагировали DCM. Объединенные органические слои промывали рассолом, сушили над MgSO и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении. После очистки остатка на колонке с силикагелем с элюированием смесью EtOAc/гексан (об./об. = 1:3, 1:2 и 1:1) получали соединение 10 (16,9 г; выход 77%). Химические сдвиги для Н ЯМР (400 МГц, CDCl): δ 1.01 (s, 18Н), 2.72 (s, 1H), 3.88-3.30 (m, 19Н), 7.42-7.34 (m, 12Н), 7.64-7.62 (m, 8H).
Пример 14. Получение соединения 11
2
4
3
1
К раствору соединения 10 (16,9 г; 23,11 ммоль) в THF (80 мл) добавляли NaH (3 г; 75 ммоль) при 0°С. После перемешивания смеси в течение 30 минут при комнатной температуре медленно добавляли метилиодид (3,6 мл; 57,83 ммоль) при 0°С. Полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 20 ч, выливали в воду и экстрагировали DCM. Объединенные органические слои промывали рассолом, сушили над NaSO и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении. После очистки остатка на колонке с силикагелем с элюированием смесью EtOAc/гексан (об./об. = 2:7) получали соединение 11 (15,3 г; выход 87%). Н ЯМР (400 МГц, CDCl): δ 1.01 (s, 18Н), 3.27-3.75 (m, 24Н), 7.34-7.40 (m, 12Н), 7.64-7.66 (m, 8H).
Пример 15. Получение соединения 12
1
3
К раствору соединения 11 (15,3 г; 20,15 ммоль) в THF (100 мл) медленно добавляли 1,0 М раствор тетрабутиламмоний фторида (TBAF) в THF (60 мл; 60,0 ммоль) при 0°С. Раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 7 ч. Полученный раствор концентрировали при пониженном давлении. После очистки остатка на колонке с силикагелем с элюированием смесью EtOAc/гексан (об./об. = 1:1), EtOAc/ацетон (об./об. = 1:4) и DCM/MeOH (об./об. = 9:1) получали соединение 12 (5,5 г; выход 97%). Н ЯМР (400 МГц, CDCl): δ 3.28-3.73 (m, 26Н).
Пример 16. Получение соединения 13
3
4
3
1
К перемешиваемому раствору соединения 12 (5,03 г; 17,82 ммоль) в DCM (37 мл) медленно добавляли дигидропиран (DHP; 1,3 мл; 16,88 ммоль) и n-толуолсульфоновую кислоту (n-TSA, 598 мг; 3,14 ммоль) при 0°С в атмосфере аргона. Раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 22 ч, выливали в воду и экстрагировали раствором NaHCO (водн.) и DCM. Объединенные органические слои промывали рассолом, сушили над MgSO и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении. После очистки остатка на колонке с силикагелем с элюированием смесью ацетон : гексан (об./об. = 1:1,5 и 1:1) и MeOH : DCM (об./об. = 1:9) получали соединение 13 (2,98 г; выход 57%). Н ЯМР (400 МГц, CDCl): δ 1.59-1.80 (m, 6Н), 2.35-2.36 (m, 1H), 3.33-3.82 (m, 26Н), 4.58 (m, 1Н).
Пример 17. Получение соединения 14
3
4
3
1
К раствору соединения 13 (3,2 г; 8,73 ммоль) в THF (44 мл) добавляли NaH (700 мг; 17,5 ммоль) при 0°С. После перемешивания смеси в течение 30 минут при комнатной температуре медленно добавляли CHI (0,82 мл; 13,17 ммоль) при 0°С. Раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 18 ч, выливали в воду и экстрагировали DCM. Объединенные органические слои промывали рассолом, сушили над MgSO и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении. После очистки остатка на колонке с силикагелем с элюированием смесью EtOAc/гексан (об./об. = 1:1) и ацетон/гексан (об./об. = 1:2) получали соединение 14 (3,27 г; выход 98%). Н ЯМР (400 МГц, CDCl): δ 1.51-1.81 (m, 6Н), 3.33-3.82 (m, 29Н), 4.58 (m, 1H).
Пример 18. Получение соединения 15
3
4
3
1
К раствору соединения 14 (3,27 г; 8,59 ммоль) в МеОН (40 мл) добавляли n-TSA (165 мг; 0,87 ммоль) при 0°С. Полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 20 ч, выливали в воду и экстрагировали раствором NaHCO (водн.) и DCM. Объединенные органические слои промывали рассолом, сушили над MgSO и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении, получая соединение 15 в виде бесцветного масла (2,39 г; выход 94%). Н ЯМР (400 МГц, CDCl): δ 2.31-2.32 (m, 1H), 3.33-3.82 (m, 27Н).
Пример 19. Получение соединения 16
4
2
3
2
3
3
3
1
К раствору соединения 15 (529 мг; 1,78 ммоль) в THF (6 мл) и воде (2 мл) добавляли KOH (410 мг; 6,21 ммоль) и TsCl (510 мг; 2,68 ммоль) при 0°С. Раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 17 ч, выливали в воду и экстрагировали DCM. Объединенные органические слои промывали рассолом, сушили над MgSO и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении. После очистки остатка на колонке с силикагелем с элюированием смесью EtOAc/гексан (об./об. = 1,5:1 и 4:1) получали соединение 16 (Ts-O-[CHCH(OCH)CHO]-CH; 780 мг; выход 97%). Н ЯМР (400 МГц, CDCl): δ 2.43 (s, 3Н), 3.30-3.61 (m, 25Н), 4.00-4.04 (m, 1H), 4.12-4.15 (m, 1H), 7.32 (d, 2Н), 7.77 (d, 2Н).
2
2
n
2
3
2
3
3
Пример 20. Методики получения Ts-O-[CHCHO]-[CHCH(OCH)CHO]-СН (соединения 19-1 (n=3) и соединения 19-2 (n=9))
2
2
n
2
3
2
3
3
2
Выше на схеме 4 показано получение Ts-O-[CHCHO]-[CHCH(OCH)CHO]-СН (соединения 19-1 (n=3) и соединения 19-2 (n=9). Реакцию сочетания для соединения 15 проводили в щелочных условиях, получая соединение 17. Удаление защитных групп осуществляли в кислотных условиях, получая соединение 18-1. После тозилирования соединения 18-1 получали соединение 19-1. После сочетания в щелочных условиях получали соединение 20. После удаления защитных групп с использованием Н и Pd/C получали соединение 18-2. После тозилирования соединения 18-2 получали соединение 19-2.
Пример 21. Получение соединения 17
2
2
3
4
3
1
К раствору соединения 15 (1,8 г; 6,07 ммоль) в THF (20 мл) добавляли NaH (465 мг; 11,63 ммоль) при 0°С. После перемешивания смеси в течение 30 минут при комнатной температуре медленно добавляли 2-(2-(2-(тетрагидро-2Н-пиран-2-илокси)этокси)этокси)этил-4-метилбензолсульфонат (Ts-O-[CHCHO]-THP; 3,58 мл; 9,22 ммоль) в THF (10 мл) при 0°С. Раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 20 ч, выливали в воду и экстрагировали DCM. Объединенные органические слои промывали рассолом, сушили над MgSO и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении. После очистки неочищенного продукта на колонке с силикагелем с элюированием смесью EtOAc/гексан (об./об. = 3:1) и ацетон/гексан (об./об. = 1:2 и 1:1) получали соединение 17 (2,78 г; выход 89%). Н ЯМР (400 МГц, CDCl): δ 1.55-1.82 (m, 6Н), 3.33-3.87 (m, 41Н), 4.60-4.61 (m, 1Н).
Пример 22. Получение соединения 18-1
3
4
3
1
К раствору соединения 17 (2,78 г; 5,42 ммоль) в МеОН (30 мл) добавляли n-TSA (110 мг; 0,578 ммоль) при 0°С. Полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 20 ч, выливали в воду и экстрагировали раствором NaHCO (водн.) и DCM. Объединенные органические слои промывали рассолом, сушили над MgSO и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении, получая соединение 18-1 (2,24 г; выход 97%). Н ЯМР (400 МГц, CDCl): δ 3.33-3.71 (m, 37Н), 2.00 (m, 1H).
Пример 23. Получение соединения 19-1
4
3
1
К раствору соединения 18-1 (2,24 г; 5,23 ммоль) в THF (22 мл) и воде (7 мл) добавляли KOH (1,38 г; 20,9 ммоль) и TsCl (1,5 г; 7,87 ммоль) при 0°С. Раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 18 ч, выливали в воду и экстрагировали DCM. Объединенные органические слои промывали рассолом, сушили над MgSO и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении. После очистки полученного остатка на колонке с силикагелем с элюированием смесью EtOAc/гексан (об./об. = 3:1 и 4:1) и ацетон/DCM (об./об. = 1:2) получали соединение 19-1 (2,95 г; выход 97%). Н ЯМР (400 МГц, CDCl): δ 2.42 (s, 3Н), 3.33-3.67 (m, 10Н), 3.33-3.67 (m, 37Н), 4.13 (t, J=4,8 Гц, 2H), 7.31 (d, 2Н), 7.77 (d, 2Н).
Пример 24. Получение соединения 20
2
2
6
4
3
1
К раствору 1-фенил-2,5,8,11,14,17-гексаоксанонадекан-19-ола (Bn-О-[CHCHO]-Н; 913 мг; 2,45 ммоль) в THF (8 мл) добавляли NaH (202 мг; 5,05 ммоль) при 0°С. Смесь перемешивали в течение 30 минут при комнатной температуре. К смеси медленно добавляли соединение 19-1 (1,74 г; 2,99 ммоль) в THF (5 мл) при 0°С. Раствор перемешивали при 35°С в течение 20 ч, выливали в воду и экстрагировали DCM. Объединенные органические слои промывали рассолом, сушили над MgSO и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении. После очистки остатка на колонке с силикагелем с элюированием смесью ацетон/DCM (об./об. = 1:2) и MeOH/DCM (об./об. = 1:15, 1:10 и 1:8) получали соединение 20 (1,88 г; выход 98%). Н ЯМР (400 МГц, CDCl): δ 3.33-3.65 (m, 63Н), 4.54 (s, 2Н), 7.26-7.32 (m, 5Н).
Пример 25. Получение соединения 18-2
1
3
Соединение 20 (1,88 г; 0,085 ммоль) в МеОН (1,8 мл) обрабатывали 10%-ным палладием на активированном угле (10 масс. %; 200 мг) в атмосфере водорода при атмосферном давлении и комнатной температуре в течение 18 ч. Катализатор удаляли фильтрованием через целит. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении, получая соединение 18-2 (1,64 г; выход 99%). Н ЯМР (400 МГц, CDCl): δ 3.33-3.71 (m, 63Н).
Пример 26. Получение соединения 19-2
4
3
1
К раствору соединения 18-2 (1,64 г; 2,37 ммоль) в THF (9 мл) и воде (3 мл) добавляли KOH (619 г; 9,38 ммоль) и TsCl (727 мг; 3,81 ммоль) при 0°С. Полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 19 ч, выливали в воду и экстрагировали DCM. Объединенные органические слои промывали рассолом, сушили над MgSO и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении. После очистки остатка на колонке с силикагелем с элюированием смесью EtOAC/ацетон (об./об. = 3:1) и MeOH/DCM (об./об. = 1:15, 1:10 и 1:8) получали соединение 19-2 (1,85 г; выход 93%). Н ЯМР (400 МГц, CDCl): δ 2.42 (s, 3Н), 3.33-3.67 (m, 61Н), 4.13 (t, J=4,4 Гц, 2H), 7.31 (d, 2Н), 7.77 (d, 2Н).
3
2
2
n
2
3
2
3
Пример 27. Общая методика получения СН-O-[CHCHO]-[СНСН(ОСН)CHO]-Ts (соединения 23-1 (n=3) и 23-2 (n=9))
3
2
2
n
2
3
2
3
Выше на схеме 5 показана общая методика получения СН-O-[CHCHO]-[CHCH(OCH)CHO]-Ts (соединения 23-1 (n=3) и 23-2 (n=9)). Реакцию сочетание для соединения 13 проводили в щелочных условиях, получая соединение 21-1 (n=3) или 21-2 (n=9). Удаление защитных групп осуществляли в кислотных условиях, получая соединение 22-1 (n=3) или 22-2 (n=9). После тозилирования соединения 22-1 (n=3) или 22-2 (n=9) получали соединение 23-1 (n=3) или 23-2 (n=9), соответственно.
Пример 28. Общая методика (получения соединений 21-1 и 21-2
4
К раствору соединения 13 (1,45 г; 3,96 ммоль) в THF (15 мл) добавляли NaH (320 мг; 8,0 ммоль) при 0°С. После перемешивания смеси в течение 30 минут при комнатной температуре медленно добавляли соединение 1-1 (n=3) или 1-5 (n=9) (5,97 ммоль) в THF (5 мл) при 0°С. Раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 20 ч, выливали в воду и экстрагировали DMF. Объединенные органические слои промывали рассолом, сушили над MgSO и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении. После очистки остатка на колонке с силикагелем получали соединение 21-1 или 21-2.
1
3
Соединение 21-1: Н ЯМР (400 МГц, CDCl): δ 1.55-1.68 (m, 6Н), 3.33-3.81 (m, 41Н), 4.58 (m, 1Н).
1
3
Соединение 21-2: Н ЯМР (400 МГц, CDCl): δ 1.54-1.68 (m, 6Н), 3.33-3.80 (m, 65Н), 4.58 (m, 1H).
Пример 29. Общая методика получения соединений 22-1 и 22-2
3
4
К раствору соединения 21-1 или 21-2 (3,76 ммоль) в МеОН (19 мл) добавляли n-TSA (90 мг; 0,47 ммоль) при 0°С. Полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 20 ч, выливали в воду и экстрагировали раствором NaHCO (водн.) и DCM. Объединенные органические слои промывали рассолом, сушили над MgSO и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении, получая соединение 22-1 или 22-2.
1
3
Соединение 22-1: Н ЯМР (400 МГц, CDCl): δ 2.45 (m, 1H), 3.29-3.72 (m, 39Н).
1
3
Соединение 22-2: Н ЯМР (400 МГц, CDCl): δ 2.46 (m, 1H), 3.33-3.70 (m, 63Н).
Пример 30. Общая методика получения соединений 23-1 и 23-2
4
К раствору соединения 22-1 или 22-2 (3,73 ммоль) в THF (15 мл) и воде (5 мл) добавляли KOH (1,0 г; 15,22 ммоль) и TsCl (1,09 г; 5,72 ммоль) при 0°С. Полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 18 ч, выливали в воду и экстрагировали DCM. Объединенные органические слои промывали рассолом, сушили над MgSO и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении. После очистки остатка на колонке с силикагелем получали соединение 23-1 или 23-2.
1
3
Соединение 23-1: Н ЯМР (400 МГц, CDCl): δ 2.43 (s, 3Н), 3.30-3.63 (m, 37Н), 4.00-4.14 (m, 2Н), 7.32 (d, J=8,0 Гц, 2H), 7.77 (d, J=8,0 Гц, 2H).
1
3
Соединение 23-2: Н ЯМР (400 МГц, CDCl): δ 2.42 (s, 3Н), 3.29-3.79 (m, 61Н), 3.99-4.14 (m, 2Н), 7.32 (d, J=7,6 Гц, 2H), 7.77 (d, J=7,6 Гц, 2H).
2
3
2
3
3
2
3
2
3
3
2
2
n
2
3
2
3
3
2
2
n
2
3
2
3
3
2
3
2
3
2
2
n
3
2
3
2
3
2
2
n
3
Пример 31. Методики получения NDP-[СНСН(ОСН)CHO]-СН (соединения 24а), NDT-[СНСН(ОСН)CHO]-СН (соединения 24b), NDP-[CHCHO]-[СНСН(ОСН)CHO]-СН (соединений 25-1а (n=3) и 25-2а (n=9)), NDT-[CHCHO]-[СНСН(ОСН)CHO]-СН (соединений 25-1b (n=3) и 25-2b (n=9)), NDP-[CHCH(OCH)CHO]-[CHCHO]-CH (соединений 26-1а (n=3) и 26-2а (n=9)), NDT-[CHCH(OCH)CHO]-[CHCHO]-CH (соединений 26-1b (n=3) и 26-2b (n=9))
2
3
2
3
3
2
3
2
3
3
2
2
n
2
3
2
3
3
2
2
n
2
3
2
3
3
2
3
2
3
2
2
n
3
2
3
2
3
2
2
n
3
2
3
2
3
3
2
3
2
3
3
2
2
n
2
3
2
3
3
2
2
n
2
3
2
3
3
2
3
2
3
2
2
n
3
2
3
2
3
2
2
n
3
Выше на схеме 6 показано получение NDP-[CHCH(OCH)CHO]-CH, NDT-[СНСН(ОСН)CHO]-СН, NDP-[CHCHO]-[CHCH(OCH)CHO]-CH, NDT-[CHCHO]-[CHCH(OCH)CHO]-CH, NDP-[CHCH(OCH)CHO]-[CHCHO]-CH или NDT-[CHCH(OCH)CHO]-[CHCHO]-CH. Реакцию сочетания с NDP или NDT проводили в щелочных условиях, получая NDP-[СНСН(ОСН)CHO]-СН, NDT-[СНСН(ОСН)CHO]-СН, NDP-[CHCHO]-[CHCH(OCH)CHO]-CH, NDT-[CHCHO]-[СНСН(ОСН)CHO]-СН, NDP-[CHCH(OCH)CHO]-[CHCHO]-CH или NDT-[CHCH(OCH)CHO]-[CHCHO]-CH. Соединения 24а, 24b, 25-1а, 25-2а, 25-1b, 25-2b, 26-1а, 26-2а, 26-1b и 26-2b получали в соответствии со схемой 6.
Пример 32. Получение соединения 24а
2
3
3
1
К раствору соединения 16 (447 мг; 0,99 ммоль) и NDP (486 мг; 1,35 ммоль) в ацетонитриле (5 мл) добавляли KCO (685 мг; 4,96 ммоль) при комнатной температуре. Раствор перемешивали при температуре дефлегмации в течение 22 ч и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении. После очистки остатка на колонке с силикагелем с элюированием смесью ацетон/DCM (об./об. = 1:2) и MeOH/DCM (об./об. = 1:12 и 1:9) получали соединение 24а (375 мг; выход 59%). H ЯМР (400 МГц, CDCl): δ 1.92 (t, J=6,8 Гц, 2Н), 2.42-2.45 (m, 10Н), 3.33-3.65 (m, 27Н), 3.87 (t, J=6,8 Гц, 2Н), 6.82-7.13 (m, 7Н).
Пример 33. Получение соединения 24b
2
3
3
1
К раствору соединения 16 (327 мг; 0,726 ммоль) и NDT (430 мг; 1,09 ммоль) в ацетонитриле (5 мл) добавляли KCO (505 мг; 3,65 ммоль) при комнатной температуре. Раствор перемешивали при температуре дефлегмации в течение 22 ч и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении. После очистки остатка на колонке с прямой фазой с элюированием смесью EtOAc/гексан (об./об. = 3:1) и MeOH/DCM (об./об. = 1:12 и 1:9) получали соединение 24b (168 мг; выход 34%). Н ЯМР (400 МГц, CDCl): δ 1.91 (t, J=6,8 Гц, 2Н), 2.41-2.46 (m, 10Н), 3.33-3.65 (m, 27Н), 3.92 (t, J=6,8 Гц, 2Н), 6.88-7.18 (m, 7Н).
Пример 34. Получение соединения 25-1а
2
3
3
1
К раствору соединения 19-1 (607 мг; 1,04 ммоль) и NDP (492 мг; 1,37 ммоль) в ацетонитриле (5 мл) добавляли KCO (752 мг; 5,44 ммоль) при комнатной температуре. Раствор перемешивали при температуре дефлегмации в течение 20 ч и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении. После очистки остатка на колонке с силикагелем с элюированием смесью ацетон/DCM (об./об. = 2:3) и MeOH/DCM (об./об. = 1:15, 1:12 и 1:8) получали соединение 25-1а (550 мг; выход 68%). Н ЯМР (400 МГц, CDCl): δ 1.91 (t, J=6,8 Гц, 2Н), 2.42-2.57 (m, 10Н), 3.33-3.61 (m, 39Н), 3.86 (t, J=6,8 Гц, 2Н), 6.82-7.14 (m, 7Н).
Пример 35. Получения соединения 25-1b
2
3
3
1
К раствору соединения 19-1 (606 мг; 1,04 ммоль) и NDT (541 мг; 1,37 ммоль) в ацетонитриле (5 мл) добавляли KCO (735 мг; 4,96 ммоль) при комнатной температуре. Раствор перемешивали при температуре дефлегмации в течение 20 ч и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении. После очистки остатка на колонке с силикагелем с элюированием смесью ацетон/DCM (об./об. = 1:2 и 2:3) и MeOH/DCM (об./об. = 1:12 и 1:8) получали соединение 25-1b (702 мг; выход 84%). Н ЯМР (400 МГц, CDCl): δ 1.91 (t, J=6,8 Гц, 2Н), 2.43-2.56 (m, 10Н), 3.33-3.65 (m, 39Н), 3.92 (t, J=6,8 Гц, 2Н), 6.88-7.17 (m, 7Н).
Пример 36. Получение соединения 25-2а
2
3
3
1
К раствору соединения 19-2 (898 мг; 1,027 ммоль) и NDP (524 мг; 1,456 ммоль) в ацетонитриле (5 мл) добавляли KCO (751 мг; 5,433 ммоль) при комнатной температуре. Полученный раствор перемешивали при температуре дефлегмации в течение 20 ч и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении. После очистки полученного остатка на колонке с силикагелем с элюированием смесью ацетон/DCM (об./об. = 1:1) и MeOH/DCM (об./об. = 1:20, 1:12 и 1:8) получали соединение 25-2а в виде бесцветного масла (738 мг; выход 69%). Н ЯМР (400 МГц, CDCl): δ 1.91 (t, J=6,8 Гц, 2Н), 2.42-2.56 (m, 10Н), 3.33-3.61 (m, 63Н), 3.86 (t, J=6,8 Гц, 2Н), 6.82-7.14 (m, 7Н).
Пример 37. Получение соединения 25-2b
2
3
3
1
К раствору соединения 19-2 (905 мг; 1,035 ммоль) и NDT (558 мг; 1,418 ммоль) в ацетонитриле (5 мл) добавляли KCO (760 мг; 5,5 ммоль) при комнатной температуре. Полученный раствор перемешивали при температуре дефлегмации в течение 20 ч и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении. После очистки полученного остатка на колонке с силикагелем с элюированием смесью ацетон/DCM (об./об. = 1:2) и MeOH/DCM (об./об. = 1:15, 1:10 и 1:8) получали соединение 25-2b в виде бесцветного масла (1,01 г; выход 91%). Н ЯМР (400 МГц, CDCl): δ 1.91 (t, J=6,4 Гц, 2Н), 2.43-2.56 (m, 10Н), 3.34-3.62 (m, 63Н), 3.92 (t, J=6,8 Гц, 2Н), 6.88-7.17 (m, 7Н).
Пример 38. Получение соединения 26-1а
1
3
К раствору соединения 23-1 (1,1 г; 1,89 ммоль) и NDP (980 мг; 2,72 ммоль) в ацетонитриле (10 мл) добавляли карбонат калия (1,31 г; 9,48 ммоль) при комнатной температуре. Раствор перемешивали при температуре дефлегмации в течение 1 суток, затем фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении. После очистки остатка на колонке с силикагелем с элюированием смесью ацетон/DCM (об./об. = 1:2 и 1:1) и MeOH/DCM (об./об. = 1:22, 1:15 и 1:8) получали соединение 26-1а (711 мг; выход 49%). Н ЯМР (400 МГц, CDCl): δ 1.91 (t, J=6,4 Гц, 2Н), 2.41-2.45 (m, 10Н), 3.33-3.63 (m, 39Н), 3.86 (t, J=6,4 Гц, 2H), 6.82-7.12 (m, 7Н).
Пример 39. Получение соединения 26-1b
2
3
3
1
К раствору соединения 23-1 (1,3 г; 2,23 ммоль) и NDT (1,14 г; 2,90 ммоль) в ацетонитриле (12 мл) добавляли KCO (1,55 г; 11,21 ммоль) при комнатной температуре. Полученный раствор перемешивали при температуре дефлегмации в течение 20 ч и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении. После очистки остатка на колонке с силикагелем с элюированием смесью EtOAc/гексан (об./об. = 3:1), ацетон/DCM (об./об. = 1:2) и MeOH/DCM (об./об. = 1:15 и 1:8) получали соединение 26-1b (649 мг; выход 36%). Н ЯМР (400 МГц, CDCl): δ 1.91 (t, J=6,4 Гц, 2Н), 2.42-2.44 (m, 10Н), 3.33-3.63 (m, 39Н), 3.92 (t, J=6,4 Гц, 2Н), 6.88-7.18 (m, 7Н).
Пример 40. Получение соединения 26-2а
2
3
3
1
К раствору соединения 23-2 (1,1 г; 1,3 ммоль) и NDP (688 мг; 2,90 ммоль) в ацетонитриле (7 мл) добавляли KCO (898 мг; 6,5 ммоль) при комнатной температуре. Полученный раствор перемешивали при температуре дефлегмации в течение 1 суток и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении. После очистки остатка на колонке с силикагелем с элюированием смесью ацетон/DCM (об./об. = 1:1 и MeOH/DCM (об./об. = 1:20, 1:12 и 1:8) получали соединение 26-2а (564 мг; выход 42%). Н ЯМР (400 МГц, CDCl): δ 1.91 (t, J=6,4 Гц, 2Н), 2.43-2.56 (m, 10Н), 3.33-3.62 (m, 63Н), 3.86 (t, J=6,4 Гц, 2Н), 6.82-7.13 (m, 7Н).
Пример 41. Получение соединения 26-2b
2
3
3
1
К раствору соединения 23-2 (1,14 г; 1,346 ммоль) и NDT (737 мг; 2,0 ммоль) в ацетонитриле (7 мл) добавляли KCO (930 мг; 6,7 ммоль) при комнатной температуре. Полученный раствор перемешивали при температуре дефлегмации в течение 1 суток и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении. После очистки остатка на колонке с силикагелем с элюированием смесью ацетон/DCM (об./об. = 1:1) и MeOH/DCM (об./об. = 1:20, 1:12 и 1:8) получали соединение 26-2b (623 мг; выход 43%). Н ЯМР (400 МГц, CDCl): δ 1.92 (t, J=6,4 Гц, 2Н), 2.43-2.56 (m, 10Н), 3.33-3.62 (m, 63Н), 3.93 (t, J=6,4 Гц, 2Н), 6.88-7.16 (m, 7Н).
2
2
3
2
2
3
Пример 42. Методики получения NDP-[CHCH(OH)CHO]-H (соединения 33а), NDT-[CHCH(OH)CHO]-H (соединения 33b)
2
Выше на схеме 7 показано получение соединений 33а и 33b. В защищенный бензильными группами триглицерин вводили одну защитную группу ТНР, получая соединение 28. Далее в соединение 28 вводили защищенные группы с получением соединения 29. Удаление ТНР выполняли в соответствии со стандартным протоколом, получая соединение 30, которое затем подвергали тозилированию с получением соединения 31. Используя Н и Pd/C, выполняли общее удаление защитных групп с получением соединения 32. Реакцию сочетания соединения 32 с NDP или NDT проводили в щелочных условиях, получая соединение 33а или соединение 33b.
Пример 43. Получение соединения 27 (2,6,10-трис(бензилокси)-4,8-диоксаундекан-1,11-диола)
1
3
Соединение 27 получали из соединения 7 в соответствии с опубликованной методикой (Hamada, М. et al., Synthesis, 2008, 22, 3663-3669). Н ЯМР (400 МГц, CDCl): δ 2.25 (br, 2Н), 3.56-3.72 (m, 15Н), 4.54-4.70 (m, 6H), 7.25-7.38 (m, 15H).
Пример 44. Получение соединения 28
4
3
1
К раствору соединения 27 (9,50 г; 18,6 ммоль) и n-TSA (0,586 г; 3,08 ммоль) в DCM (120 мл) медленно добавляли 3,4-дигидро-2Н-пиран (1,40 мл; 15,4 ммоль) в DCM (30 мл) при 0°С и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 18 ч. Реакционную смесь разбавляли водой и DCM. Водный слой экстрагировали DCM (150 мл × 3) и объединенные органические слои промывали рассолом и сушили над MgSO. Сушильный агент удаляли фильтрованием и растворитель выпаривали при пониженном давлении. После очистки остатка на колонке с силикагелем с элюированием смесью гексан/EtOAc (об./об. = 2:1, 1:1 и 1:4), EtOAc/ацетон (об./об. = 4:1) и DCM/MeOH (об./об. = 9:1) получали соединение 28 (5,18 г; 57%). Н ЯМР (CDCl, 400 МГц): δ 1.47-1.58 (m, 4Н), 1.65-1.69 (m, 4Н), 1.79 (d, J=9,6 Гц, 4Н), 3.44-3.59 (m, 11Н), 3.72-3.84 (m, 8Н), 4.45 (s, 2Н), 4.66 (s, 6Н), 7.23-7.34 (m, 15Н).
Пример 45. Получение соединения 29
4
3
1
К раствору соединения 28 (5,18 г; 8,71 ммоль) в THF (60 мл) добавляли гидрид натрия (0,871 г; 21,8 ммоль) при 0°С и реакционную смесь перемешивали в течение 30 минут при комнатной температуре. К суспензии медленно добавляли бензилбромид (1,35 мл; 11,3 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 20 ч. Реакцию гасили водой и реакционную смесь разбавляли DCM. Водный слой экстрагировали DCM (100 мл × 3) и объединенные органические слои промывали рассолом и сушили над MgSO. Сушильный агент удаляли фильтрованием и растворитель выпаривали при пониженном давлении. После очистки остатка на колонке с силикагелем с элюированием смесью гексан/EtOAc (об./об. = 5:1, 3:1 и 1:1) получали соединение 29 (5,59 г; 94%): Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 1.41-1.82 (m, 6Н), 3.40-3.90 (m, 17Н), 4.50-4.52 (m, 2Н), 4.57-4.60 (m, 1H), 4.65-4.70 (m, 6Н), 7.20-7.38 (m, 20Н).
Пример 46. Получение соединения 30
3
4
3
1
К раствору соединения 29 (5,58 г; 8,15 ммоль) в МеОН (55 мл) добавляли n-TSA (0,155 г; 0,815 ммоль) при комнатной температуре и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 18 ч. Реакционную смесь гасили насыщ. раствором NaHCO (водн.) и экстрагировали DCM (60 мл × 3). Объединенные органические слои промывали рассолом и сушили над MgSO. Сушильный агент удаляли фильтрованием и растворитель выпаривали при пониженном давлении, получая соединение 30 (4,87 г; 99%): Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 2.12-2.20 (m, 1H), 3.40-3.80 (m, 15Н), 4.50-4.80 (m, 8Н), 7.20-7.38 (m, 20Н).
Пример 47. Получение соединения 31
2
4
3
1
К раствору соединения 30 (4,86 г; 8,09 ммоль) в DCM (25 мл) добавляли тозилхлорид (2,31 г; 12,1 ммоль) и гидроксид калия (1,82 г; 32,4 ммоль) при 0°С и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 18 ч. Реакционную смесь разбавляли DCM (100 мл) и HO (80 мл). Водный слой отделяли и экстрагировали DCM (100 мл × 2). Объединенные органические слои промывали рассолом и сушили над MgSO. Сушильный агент удаляли фильтрованием и растворитель выпаривали при пониженном давлении. После очистки остатка на колонке с силикагелем с элюированием смесью гексаны/EtOAc (об./об. = 4:1, 3:1 и 2:1) получали соединение 31 в виде бесцветного масла (5,31 г; выход 87%): Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 2.38 (s, 3Н), 3.40-3.80 (m, 13Н), 4.00-4.10 (m, 1H), 4.10-4.20 (m, 1H), 4.40-4.80 (m, 8Н), 7.20-7.38 (m, 22Н), 7.73 (d, J=8,0 Гц, 2Н).
Пример 48. Получение соединения 32
2
3
1
К раствору соединения 31 (0,573 г; 0,759 ммоль) в МеОН (5 мл) добавляли Pd/C (0,081 г; 0,076 ммоль) при комнатной температуре и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в атмосфере Н (1 ат) в течение 22 ч. Реакционную смесь разбавляли МеОН и фильтровали. Растворитель выпаривали при пониженном давлении, получая соединение 32 (299 мг; колич.): Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 2.20 (brs, 3Н), 2.42 (s, 3Н), 3.40-4.10 (m, 15H), 4.55 (brs, 1H), 7.33 (d, J=8,0 Гц, 2H), 7.76 (d, J=8,0 Гц, 2H).
Пример 49. Получение соединения 33а
2
3
3
1
К перемешиваемому раствору NDP (0,355 г; 0,987 ммоль) и соединения 32 (0,284 г; 0,720 ммоль) в ацетонитриле (4 мл) добавляли KCO (0,525 г; 3,80 ммоль) при комнатной температуре в атмосфере аргона. Реакционную смесь кипятили с обратным холодильником в течение 18 ч, разбавляли DCM и фильтровали. Растворитель выпаривали при пониженном давлении. После очистки остатка на колонке с силикагелем с элюированием смесью EtOAc/МеОН (об./об. = 2:1 и 1:1) получали соединение 33а (243 мг; выход 58%): Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 1.89 (t, J=6,4 Гц, 2Н), 2.20-2.50 (m, 14Н), 3.30-4.00 (m, 17Н), 6.82-7.14 (m, 7Н).
Пример 50. Получение соединения 33b
2
3
3
1
К перемешиваемому раствору NDT (0,550 г; 1,40 ммоль) и соединения 32 (0,424 г; 1,07 ммоль) в ацетонитриле (8 мл) добавляли KCO (0,739 г; 5,35 ммоль) при комнатной температуре в атмосфере аргона. Реакционную смесь кипятили с обратным холодильником в течение 20 ч, разбавляли ацетоном, фильтровали и промывали DCM. Растворитель выпаривали при пониженном давлении. После очистки остатка на колонке с силикагелем с элюированием смесью EtOAc/МеОН (об./об. = 2:1 и 1:1) получали соединение 33b (310 мг; выход 47%): Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 1.90 (t, J=6,8 Гц, 2Н), 2.20-2.50 (m, 14Н), 3.36-3.90 (m, 15Н), 3.93 (t, J=6,8 Гц, 2Н), 6.87-7.17 (m, 7Н).
Пример 51. Клеточная культура и химические реагенты
В исследованиях цитотоксичности использовали линии клеток немелкоклеточного рака легкого человека (NSCLC) (например, А549, H441GL и H1299), линии клеток рака толстой кишки (например, НСТ116 и DLD1), линии клеток рака молочной железы (например, MCF7 и MDA-MB-231) и линии клеток рака поджелудочной железы (например, PANC-1 и SUIT-2). Эти клеточные линии NSCLC обладают внутренней резистентностью к ингибиторам рецептора эпидермального фактора роста (EGFR), например, гефитинибу. А549 и H441GL представляют собой несущие ген EGFR дикого типа линии клеток аденокарциномы. H1299 представляет собой несущую ген EGFR дикого типа линию клеток крупноклеточной карциномы. НСТ116 и DLD1 представляют собой линии клеток метастазирующего рака толстой кишки. MCF7 представляет собой линию клеток гормоночувствительного рака молочной железы. MDA-MB-231 представляет собой линию клеток рака молочной железы с тройным негативным фенотипом. PANC-1 представляет собой линию клеток метастазирующей аденокарциномы. SUIT-2 представляет собой линию клеток протоковой аденокарциномы поджелудочной железы.
Все клеточные линии растили и поддерживали в среде RPMI (Мемориальный институт Розуэлла Парка), дополненной 10% фетальной телячьей сыворотки (FBS, Invitrogen), 2 мМ L-глутамином, пенициллином (100 ед./мл) и стрептомицином (100 мкг/мл). Для эксперимента по культивированию клеток готовили концентрированный раствор (10 мМ) каждого тестируемого соединения путем растворения в диметилсульфоксиде (DMSO; Sigma).
Пример 52. Цитотоксичность и анализ с использованием сульфородамина В
Клетки высевали в трех повторах в 96-луночные планшеты с плотностью 2000 клеток на одну лунку. Клетки в каждой лунке обрабатывали на третий день (для обеспечения надлежащей эффективности посева и жизнеспособности) тестируемым соединением в разных концентрациях (0-50 мкМ) в течение 48 ч.
50
Жизнеспособность клеток оценивали в анализе с использованием сульфородамина В (SRB). Среду отбрасывали и прикрепившиеся клетки фиксировали в течение 1 ч при 4°С, используя по 100 мкл холодной 10%-ной трихлоруксусной кислоты (масс./об.) на каждую лунку. После фиксации клетки окрашивали в течение 30 мин при комнатной температуре, используя 0,4%-ный (масс./об., в 1%-ной уксусной кислоте) раствор SRB из расчета по 100 мкл/лунка, и затем промывали 5 раз 1%-ной уксусной кислотой. После высушивания на воздухе в каждую лунку добавляли по 100 мкл 10 мМ раствора триса в форме основания и измеряли поглощение на 530 нм. Цитотоксичность выражают как процент клеток в обработанных лекарственным средством лунках относительно количества клеток в контроле, содержащем только растворитель (принимается за 100%). Каждый эксперимент проводили независимо в трех повторах и показатель цитотоксичности IC для каждого тестируемого соединения рассчитывали на основании данных по цитотоксичности, полученных при различных концентрациях.
50
Показатели цитотоксичности (IC) для конъюгатов олигомеров с NDP и NDT представлены в Таблице 2 и Таблице 3.
2
2
n
3
2
2
n
3
2
2
2
n
3
2
3
2
3
3
2
3
2
3
3
2
2
n
2
3
2
3
3
2
2
n
2
3
2
3
3
2
3
2
3
2
2
n
3
2
3
2
3
2
2
n
3
2
2
3
2
2
3
В Таблице 2 показано, что РСР, TFP, NDP, NDT, -[CHCHO]-CH карбаматные конъюгаты NDP и NDT (соединения 5-1а, 5-2а, 5-3а, 5-4а, 5-1b, 5-2b, 5-3b и 5-4b), -[CHCHO]-CH ПЭГилированные конъюгаты NDP и NDT (соединения 4-1a, 4-2а, 4-3а, 4-4а, 4-1b, 4-2b и 4-3b), -СОСН[CHCHO]-СН амидные конъюгаты NDP и NDT (соединения 6-1а, 6-2а, 6-3а, 6-1b и 6-2b), NDP-[CHCH(OCH)CHO]-CH (соединение 24а), NDT-[CHCH(OCH)CHO]-CH (соединение 24b), NDP-[CHCHO]-[СНСН(ОСН)CHO]-СН (соединения 25-1а (n=3) и 25-2а (n=9)), NDT-[CHCHO]-[СНСН(ОСН)CHO]-СН (соединения 25-1b (n=3) и 25-2b (n=9)), NDP-[CHCH(OCH)CHO]-[CHCHO]-CH (соединения 26-1а (n=3) и 26-2а (n=9)), NDT-[CHCH(OCH)CHO]-[CHCHO]-CH (соединения 26-1b (n=3) и 26-2b (n=9)), NDP-[CHCH(OH)CHO]-H (соединение 33а) и NDT-[CHCH(OH)CHO]-H (соединение 33b) ингибируют клеточную пролиферацию клеток рака легкого. NA указывает на отсутствие активности.
Приведенные в Таблице 3 данные указывают на то, что почти все протестированные конъюгаты NDP и NDT ингибируют клеточную пролиферацию различных раковых клеток.
Пример 53. Изучение in vivo противораковых эффектов в случае рака легкого, опосредованных тестируемыми соединениями
Как показано в исследовании 1 и исследовании 2, обработка тестируемыми соединениями подавляла онкогенез у гефитиниб-резистентного Н441 в мышиной модели рака легкого.
Исследование 1
6
Клетки H441GL (1×10 клеток в 100 мкл забуференного фосфатом физиологического раствора/инъекция) вводили подкожной инъекцией в правый бок мышей NOD/SCID (с диабетом без ожирения/тяжелым комбинированным иммунодефицитом) (самок в возрасте 4-6 недель). Мышей оставляли на 2 недели для развития опухолей. В первые сутки 3-й недели после инъекции опухоленесущих мышей случайным образом распределяли на контрольную группу (разбавитель DMSO, внутрибрюшинная (в.б.) инъекция) и группу, обрабатываемую тестируемым соединением (5 мг/кг/сутки, 5 суток/неделя, в.б. инъекция). В течение 10 недель в обеих группах один раз в неделю измеряли размер опухолей, используя штангенциркуль. Изменение размера опухоли выражали как кратное изменение относительно 3-й недели. В этом исследовании в конце каждой недели исследования также регистрировали массу тела каждой мыши.
Результаты воздействия соединений на размер опухолей в исследованиях на мышах суммированы в Таблице 4. Как показано в Таблице 4, все тестируемые соединения подавляли и задерживали рост опухоли по сравнению с контролем-разбавителем. Среди этих соединений соединение 5-2b оказывало наибольший эффект подавления опухолевого роста. Кроме того, значения массы тела у обрабатываемых тестируемыми соединениями мышей не отличались существенно от таковых в контрольной группе (данные не показаны).
Исследование 2
Для оценки соединений, перечисленных в Таблице 5, проводили исследование на мышах аналогично исследованию 1. В этом исследовании суточная доза составляла 0,0127 ммоль/кг вместо 5 мг/кг. Результаты воздействия соединений на размер опухоли в исследованиях на мышах суммированы в Таблице 5. Как показано в Таблице 5, все тестируемые соединения подавляли и задерживали рост опухоли по сравнению с контролем-разбавителем по данным на 13-й неделю. Среди этих соединений соединение 4-2b оказывало наибольший эффект подавления опухолевого роста. Кроме того, значения массы тела у обрабатываемых тестируемыми соединениями мышей не отличались существенно от таковых в контрольной группе (данные не показаны).
Данное изобретение может быть воплощено в других конкретных формах без отклонения от его сущности или существенных признаков. Поэтому приведенные выше воплощения следует рассматривать во всех отношениях как иллюстративные, а не ограничивающие изложенное в данной заявке изобретение. Таким образом, объем изобретения задается прилагаемой формулой изобретения, а не приведенным выше описанием, и подразумевается, что все изменения, которые попадают в пределы значения и диапазона эквивалентности формулы изобретения, включены в нее.