Получение популяции эктомезенхимных клеток со свойствами стволовых и прогениторных клеток из пульпы постоянных зубов

112

Оригинальные исследования

ПОЛУЧЕНИЕ ПОПУЛЯЦИИ ЭКТОМЕЗЕНХИМНЫХ КЛЕТОК со СВОЙСТВАМИ стволовых И ПРОГЕНИТОРНЫХ КЛЕТОК из пульпы Постоянных зубов

И.И. Сагитов 1, А.К. Шафигуллина 2, Г.Т. Салеева 1, М.О. Гомзикова 2,

А.А. Ризванов 2, А.П. Киясов 2

1 Казанский государственный медицинский университет, Казань, Россия

2 Казанский (Приволжский) федеральный университет Казань, Россия

Deriving population of ectomesenchymal cells with properties of stem cells and progenitor cells from pulp of permanent teeth

I.I. Sagitov1, A.K. Shafigullina 2, G.T. Saleeva 1, M.O. Gomzikova 2, AA. Rizvanov 2, A.P. Kiassov2

1 Kazan State Medical University, Kazan, Russia

2 Kazan (Volga region) Federal University, Kazan, Russia

За последние годы были проведены многочисленные исследования, авторы которых утверждают, что им удалось выделить стволовые клетки пульпы зубов. Большинство клеток, которые были описаны до этого как стволовые клетки пульпы зуба, представляли собой не гомогенную популяцию клеток, а смесь мультипотентных мезенхимальных стволовых клеток (ММСК). В отличие от ММСК костного мозга или жировой ткани, одонтобласты относятся к клеткам так называемой эктомезенхимы. Как показали исследования, ранее проведенные нашей научной группой, одонтобластам присущ ряд признаков, характерных для эктодермальных клеток, такие как экспрессия эпителиального мембранного антигена и цитокератина 18.

Цель работы — получить из пульпы постоянных зубов популяции эктомезенхимных клеток со свойствами стволовых и прогениторных и охарактеризовать их фенотип in vitro.

В качестве материала исследования использовали пульпу постоянных зубов пациентов в возрастной категории 18—29 лет, удаленных по ортодонтическим показаниям (всего 15 зубов). В стерильных условиях пульпу измельчали и переносили в шестилуночный планшет. Фенотип полученных клеток исследовали методом иммуноцитохимического окрашивания антителами к эпителиальному мембранному антигену, C-kit (маркёр стволовых и прогениторных клеток), цитокератину 19, эпителиальному специфическому антигену, а-гладкомышечному актину, десмину, виментину, ядерному антигену пролиферирующих клеток и Bcl-2 (антиапоптотический протеин). Иммунофенотип полученных клеток определяли с помощью метода проточной цитофлуориметрии с использованием конъюгированных с флуорохромами моноклональных антител к поверхностным антигенам клеток человека. Была показана выраженная экспрессия C-kit и виментина на всех пассажах; около половины клеток давали положительную реакцию с антителами к эпителиальному мембранному антигену на всех пассажах. Клетки 1 и 2 пассажей характеризовались стойкой экспрессией цитокератина 18, которая постепенно снижалась и к 5 пассажу окрашивались лишь единичные клетки. Подтверждение экспрессии эпителиального мембранного антигена и цитокератина 18 было проведено методом им-муноблоттинга. Методом проточной цитофлуориметрии установлено, что клетки, полученные нами из пульпы постоянных зубов человека, характеризуются следующим фенотипом: CD29 + , CD90 + , CD10 + , CD54 + , CD56 + , CD166+ / CD14-, CD34-, CD45-.

Ключевые слова: дентин, одонтобласт, стволовые клетки пульпы зуба, эктомезенхимные клетки.

Одним из важных вопросов биологии развития, стоматологии и регенеративной медицины является проблема наличия в пульпе зуба стволовых клеток, потомки которых могут дифференцироваться в одон-тобласты. Интерес к этому вопросу поддерживается тем, что за последние годы были проведены много-

е-mail: Sagitov@me.com

Lately a lot of research has been focused on isolation of tooth stem cells. Our earlier studies showed that odontoblasts have a number of features typical for ectodermal cells, such as expression of epithelial membrane antigen (EMA) and cytokeratin 18. Aim: to obtain populations of ectomesenchymal cells from permanent teeth pulp with properties of stem and progenitor cells and characterize their phenotype in vitro.

The pulp of permanent teeth of 15 patients (age 18— 29) was removed according to the orthodontic indications and used for stem cells isolation. The phenotype of derived cells was studied using the immunocytochemical staining method. Antibody staining for EMA, C-kit, cytokeratine 19, ESA, aSMA, Desmin, Vimentin, PCNA, Bcl-2. EMA and cytoceratine 18 expression was also confirmed by western blotting. The immunophenotype of obtained stem cells was determined by flow cytometry

Significant expression of C-kit and Vimentin was observed at all times of cultivation as demonstrated by immunocytochemical staining. About a half of cells expressed EMA on all passages. First and second passages cells were characterized by expression of cytoceratine 18 which gradually decreased and to the fifth passage only single cells were positively stained. EMA and cytokeratin 18 expression was confirmed by western blotting. Flow cytometry revealed that cells obtained by us from human permanent teeth pulp were positive for CD29, CD90, CD10, CD54, CD56, CD166 and negative for CD14, CD34, CD45.

Key words: odontoblast, dentin, dental pulp stem cell, ectomesenchymal cells.

численные исследования, в которых авторы утверждают, что им удалось выделить стволовые клетки пульпы зуба.

Стволовые клетки были получены из пульпы временных зубов [1], зубного зачатка [2] и его оболочки

[3], пульпы постоянных зубов [4, 5]. Во всех этих

Гены & Клетки Том IX, № 3, 2014

Оригинальные исследования

113

исследованиях были получены клетки с фенотипом мультипотентных мезенхимальных стволовых клеток (ММСК). В частности, полученные клетки экспрессировали CD44, CD106 [4], STRO-1, CD146 [1], нестин и виментин [3]. При культивировании этих клеток с добавлениями различных ростовых факторов или факторов дифференцировки — костный морфогенетический белок (КМБ), фосфопротеин дентинного матрикса 1 [5], КМБ-2 [3], КМБ-4 [1] добивались дифференцировки клеток в остеогенном и адипогенном направлениях. Одонтогенная диффе-ренцировка наблюдалась только в том случае, когда в культуру добавляли кислый фосфопротеин дентинного матрикса 1 [5] и КМБ-4 [1].

Большинство клеток, которые были описаны до этого как стволовые клетки пульпы зуба, представляли собой гетерогенную популяцию ММСК, источником развития которой является как мезодерма, так и нервный гребень [6].

В отличие от ММСК костного мозга или жировой ткани, одонтобласты не являются истинно мезенхимальными клетками и относятся к клеткам, так называемой, эктомезенхимы [7], то есть к производным мезенхимных клеток, берущих начало из региона нервного гребня. Кроме свойственных нервной ткани маркеров, в частности нестина [8], дифференцирующиеся одонтобласты экспрессируют цитокератин (ЦКР) 19 [9] — белок промежуточных филаментов цитоскелета эпителиальных клеток. Как показали ранее проведенные исследования, одонтобластам присущ ряд признаков, характерных для эктодермальных клеток, такие как экспрессия эпителиального мембранного антигена (ЭМА) и цитокератина 18. Более того, было обнаружено, что клетки промежуточного слоя, прилежащего к одонтобластам, наряду с эпителиальными маркерами экспрессируют ряд маркеров стволовых клеток, в частности C-kit — рецептор фактора стволовых клеток [10].

Цель работы — получить из пульпы постоянных зубов популяции эктомезенхимных клеток со свойствами стволовых и прогениторных клеток и охарактеризовать их фенотип in vitro.

Материал и методы

В качестве материала исследования использовали пульпу постоянных зубов пациентов в возрастной категории 18—29 лет, удаленных по ортодонтическим показаниям (всего 15 зубов). Удаленные зубы помещали в раствор фосфатно-солевого буфера со смесью антибиотиков (100 ЕД/мл пенициллина, 100 мкг/мл стрептомицина (ПанЭко, Россия)). Затем равномерной механической нагрузкой зубы раскалывали с помощью молоточка и свинцовой пластинки и в последующем осторожно стерильным пинцетом извлекали цельную пульпу. В стерильных условиях пульпу измельчали и переносили в шестилуночный планшет. Культивирование клеток было проведено в питательной среде аМЕМ (ПанЭко, Россия) с 10% содержанием сыворотки плодов коровы (FBS, ПанЭко, Россия), 100 Ед/мл пенициллина-100 мкг/мл стрептомицина (ПанЭко, Россия) и 146 мг L-глутамина (ПанЭко, Россия) в инкубаторе при 37°C во влажной атмосфере 5% СО2.

Каждые 2 дня проводили замену питательной среды. Всего было выполнено 5 пассажей. Фенотип полученных клеток исследовали на 3 день каждого пассажа методом иммуноцитохимического окрашивания. Окрашивание антителами к ЭМА, C-kit, и ЦКР19 проводили во всех пассажах, антителами к эпителиальному специфическому антигену (ЭСА), а-гладкомышечному актину (аГМА), десмину, ви-ментину, ядерному антигену пролиферирующих клеток (ЯАПК) и Bcl-2 в 3 и 5 пассажах. Для проведения иммуноцитохимического анализа использовались антитела, которые представлены в таблице.

Антитела, использованные для анализа клеток, выделенных из пульпы постоянных зубов человека, методами иммуноцитохимии и проточной цитофлуориметрии

Антиген Клон, разведение Фирма- производитель

Виментин - белок промежуточных филаментов цитоскелета мезодермальных клеток 3В4, 1:75 Dako, Дания

Десмин - белок промежуточных филаментов цитоскелета мышечных клеток D33, 1:30 Dako, Дания

а-ГМА - альфа-гладкомышечный актин, маркёр миофибробластов, гладкомышечных клеток 1A4, 1:50 Dako, Дания

ЯАПК (PCNA) - ядерный антиген пролиферирующих клеток PC10, 1:50 Dako, Дания

C-kit (CD117) - рецептор к фактору стволовых клеток, маркёр стволовых и прогениторных клеток T595, 1:400 Novocastra, Великобритания

ЭСА - эпителиальный специфический антиген VU-1D9, 1:10 Novocastra, Великобритания

ЭМА - эпителиальный мембранный антиген GF1.4, 1:100 Novocastra, Великобритания

ЦКР18 - белок промежуточных филаментов цитоскелета эпителиальных клеток DC10, 1:20 Dako, Дания

* — данные не предоставлены фирмой-производителем, окрашивание осуществляли согласно рекомендациям фирмы-производителя.

Гены & Клетки Том IX, № 3, 2014

114

Оригинальные исследования

Окончание таблицы

Антиген Клон, разведение Фирма- производитель

ЦКР19 - белок промежуточных филаментов цитоскелета эпителиальных клеток BA17, 1:20 Dako, Дания

Bcl2 - антиапоптотический протеин, маркёр стволовых и прогениторных клеток 124, 1:30 Dako, Дания

CD10 - FITC (маркер фибробластов, гранулоцитов, В-лимфоцитов, а также почечного эпителия) * Sorbent

CD14 - FITC (маркер макрофагов, нейтрофилов, дендритных клеток) * Sorbent

CD29 - APC (маркер лимфоцитов, моноцитов, а также один из маркеров МСК) MAR4 BD, США

CD34 - Alexa 647 (маркер эндотелиальных клеток, стромальных клеток костного мозга) ICO115 SantaCruz, США

CD45 - PE/Cy5 (маркер лейкоцитов, а также гематопоэтических стволовых клеток) HI30 BD, США

CD54 (ICAM-1) - Alexa 647 (маркер эндотелиальных клеток, лимфоцитов, моноцитов) 15.2 SantaCruz, США

CD56 (NCAM) - PE (маркер натуральных киллеров и цитотоксических лимфоцитов, кроме того обнаружен на некоторых популяциях МСК, выделенных из костного мозга и пульпы молочных зубов [10] -* Sorbent

CD90 (Thy-1) - APC (маркер прогениторных клеток, один из маркеров МСК) 5E10 BD, США

CD166 (ALCAM) - PE (маркер активированных Т-клеток, моноцитов, фибробластов, эпителиальных клеток, а также один из маркеров МСК) 3A6 BD, США

Подтверждение экспрессии ЭМА и ЦКР18 было подтверждено методом иммуноблоттинга. Для этого в лунку геля наносили лизат клеток, полученных на 3, 5, 7 и 12 сут. культивирования. В качестве контроля при иммуноблоттинге использовали антитела к Р-актину. Визуализацию иммунного преципитата проводили с помощью набора для хемилюминесцентной детекции белка Amersham TMECLTM Prime Western Blotting Detection Reagent (GE HealthcareBio — Sciences AB). Детекцию люминесценции проводили на приборе ChemiDoc XRS+ System (Bio-Rad, Сингапур).

Иммунофенотипирование клеток, выделенных из пульпы постоянных зубов человека. Иммунофенотип полученных клеток определяли с помощью метода проточной цитофлуориметрии с использованием конъюгированных с флуорохромами моноклональных антител к поверхностным антигенам клеток человека (см. табл.) как описано ранее [11]. Клетки с чашки Петри снимали с помощью 0,25% раствора трипсина-ЭДТА (Sigma, США). Отмывали один раз в фосфатно-солевом буфере (ФСБ) в режиме центрифугирования 1400 об./мин, 5 мин, при комнатной температуре. Ресуспендировали осадок клеток в ФСБ, добавляли конъгированные с флуорохромами антитела и инкубировали 20 мин при комнатной температуре без доступа света. Далее клетки отмывали один раз в ФСБ, ресуспендировали осадок клеток в ФСБ. Анализ проводили на проточном цитометре Guava easyCyte 8HT (Millipore, США).

Результаты

На 3 сутки мы наблюдали миграцию клеток из культивируемых кусочков пульпы зуба на периферию. Вся периферия вокруг эксплантата на 12 день была занята клетками веретенообразной формы (рис. 1).

При проведении иммуноцитохимического окрашивания наблюдали в клетках экспрессию C-kit (рис. 2) и виментина (рис. 3) на всех сроках культивирования.

Рис. 1. Культура клеток, полученных из пульпы постоянных зубов человека, 12 сут. после эксплантации. Ув. х10

Гены & Клетки Том IX, № 3, 2014

Оригинальные исследования

115

Рис. 2. Культура клеток пульпы зуба (3 пассаж), иммуноцитохимическая реакция с антителами к c-kit. Докраска: гематоксилин. Ув. х20

Рис. 3. Культура клеток пульпы зуба (3 пассаж), иммуноцитохимическая реакция с антителами к виментину. Докраска: гематоксилин. Ув. х20

Рис. 4. Культура клеток пульпы зуба (3 пассаж), иммуноцитохимическая реакция с антителами к ЭМА. Докраска: гематоксилин. Ув. х20

5. Культура клеток пульпы зуба (3 пассаж), иммуноцитохимическая реакция с антителами к ЦКР19. Докраска: гематоксилин. Ув. х20

Примерно половина клеток иммуноцитохимически окрашивалась антителами к ЭМА на всех пассажах (рис. 4). Клетки 1 и 2 пассажа характеризовались стойкой экспрессией ЦКР18, однако количество окрашенных клеток с каждым последующим пассажем уменьшалось и к 5 пассажу окрашивались лишь единичные клетки. Подтверждение экспрессии ЭМА и ЦКР18 было проведено методом иммуноблоттинга. Клетки ранних пассажей не экспрессировали ЦКР19. Начиная с 3 пассажа, обнаруживались единичные ЦКР19 позитивные клетки, тогда как все клетки 5 пассажа экспрессировали ЦКР19 (рис. 5).

Окрашивание клеток против ЯАПК на 3 и 5 пассажах происходило лишь в единичных клетках. Иммуноцитохимическое окрашивание с антителами против ЭСА, аГМА, десмина и Bcl-2 не выявило клеток, в которых присутствовали бы данные антигены. Подтверждение экспрессии ЭМА и ЦКР18 было проведено методом иммуноблоттинга (рис. 6).

Методом проточной цитофлуориметрии установлено, что клетки, полученные нами из пульпы постоянных зубов человека, характеризуются следующим фенотипом: CD29 + , CD90 + , CD10 + , CD54+, CD56 + , CD166+ / CD14-, CD34-, CD45- (рис. 7).

Р2

Р3

Р4

Р2 Р3 Р4

169 кДа

112 кДа 92 кДа

67 кДа 59 кДа

36.5 кДа

31.5 кДа

ЕМА

b-actin

Рис. 6. Иммуноблоттинг. Контроль — антитела к в-актину

Гены & Клетки Том IX, № 3, 2014

116

Оригинальные исследования

100 101 102 103 104

CD10-FITC

100 101 102 103 104

CD54-Alexa 647

Интенсивность флуоресценции

100 101 102 103 104

CD29-APC

100 101 102 103 104

CD56-PE

100 101 102 103 104

CD34-Alexa647

100 101 102 103 104

CD166-PE

Рис. 7. Результат проточной цитофлюорометрии с определением антител CD10-FITC; CD29-APC; CD90-APC; CD54-Alexa 647; CD56-PE; CD166-PE; CD14-FITC; CD34-Alexa647; CD45-PE/Cy5; контроль — зеленые пики

Обсуждение

Пять различных типов клеток со свойствами стволовых клеток рассматриваются как потенциальные стволовые клетки пульпы зуба:

1) стволовые клетки, полученные из зубных зачатков;

2) стволовые клетки, полученные из пульпы молочных зубов;

3) стволовые клетки сверхкомлектных зубов;

4) стволовые клетки из апикального сосочка;

5) стволовые клетки, полученные из тканей периодонта.

Все эти типы клеток способны к самоподдержанию, обладают хорошим пролиферативным потенциалом и при изменении условий культивирования могут дифференцироваться в различных направлениях.

Стойкая экспрессия маркера стволовых клеток C-kit во всех пассажах является признаком того, что культивированные нами клетки обладают фенотипом стволовых и прогениторных клеток, и, следовательно, обладают пролиферативным потенциалом, могут быть использованы в тканевой инженерии и регенеративной медицине. C-kit — это рецептор, с которым связывается фактор стволовых клеток (stem cell factor, SCF). Их взаимодействие играет важную роль в пролиферации, дифференцировке и активации прогениторных клеток в различных биологических системах. Оба — и фактор, и его рецептор — были

обнаружены в клетках пульпы, причём есть клетки, которые одновременно экспрессируют и лиганд, и рецептор [12]. При помощи проточной цитометрии и сортинга клеток группа итальянских исследователей под руководством G. Papaccio (1988) выделила из постоянных и молочных зубов популяцию c-kit+/CD34+/CD45- клеток [13]. Эти клетки при создании определенных условий in vitro дифференцируются в остеобласты, мышечные трубочки, жировые или эндотелиальные клетки [14—19]. По своим свойствам и фенотипу полученные из пульпы клетки были очень близки к ММСК, которые в настоящий момент с успехом получают из самых различных органов и тканей.

На всех сроках нашего исследования мы наблюдали стойкое специфическое иммуноцитохимическое окрашивание полученных нами клеток из пульпы постоянных зубов человека к маркеру мезенхимальных клеток — виментину. Методом проточной цитофлюо-рометрии нами показано, что полученные клетки экспрессируют основные маркеры ММСК (CD29, CD56, CD90, CD166), кроме того, у полученных клеток отсутствует экспрессия маркеров не характерных для ММСК (CD14, CD34), а также маркера, характерного для гемопоэтических стволовых клеток (CD45) [20, 21]. При этом клетки оказались положительны в отношении маркеров, характерных для широкого круга клеток, в том числе для эпителиальных клеток (CD10, CD54).

Гены & Клетки Том IX, № 3, 2014

Оригинальные исследования

117

Более интересным на наш взгляд является то, что часть клеток, высеявшихся из пульпы зуба, на своей поверхности экспрессировали ЭМА, который, безусловно, может рассматриваться как маркер эпителиальных клеток, хотя экспрессия ЭМА описана для некоторых популяций лимфоцитов [21]. Дополнительными доказательствами того, что в ходе наших экспериментов мы получили из пульпы зуба именно эктомезенхимные клетки, являются наличие в культивированных клетках белков промежуточных филаментов цитоскелета эпителиальных клеток цитокератинов 18 и 19. Недавно опубликованы данные о возможности образования предшественников одонтобластов из глиальных клеток, которые в составе нервов входят в пульпу зуба [22] и которые по своей природе являются, как и эктомезенхима, производными нервного гребня.

ЛИТЕРАТУРА:

1. Miura M., Gronthos S., Zhao M. et al. SHED: stem cells from human exfoliated deciduous teeth. PNAS USA 2003; 100: 5807—12.

2. Ramazanoglu M., Rizvanov A.A., Sahin F. et al. Isolation and characterization of stem cells derived from human third molar tooth germs of young adults: implications in neo-vascularization, osteo-, adipo- and neuro-genesis. Pharmacogenomics J. 2010; 10(2): 105-13.

3. Morsczeck C., Gotz W., Schierholz J. et al. Isolation of precursor cells (PCs) from human dental follicle of wisdom teeth. Matrix. Biol. 2005; 24: 155-65.

4. Gronthos S., Mankani M., Brahim J. et al. Postnatal human dental pulp stem cells (DPSCs) in vitro and in vivo. PNAS USA. 2000; 97: 13625-30.

5. Prescott R.S., Alsanea R., Fayad M.I. et al. In vivo generation of dental pulp-like tissue by using dental pulp stem cells, a collagen scaffold, and dentin matrix protein 1 after subcutaneous transplantation in mice. Endod. 2008; 34(4): 421-6

6. Komada Y., Yamane T., Kadota D. et al. Origins and properties of dental, thymic, and bone marrow mesenchymal cells and their stem cells. PLoSOne 2012; 7(11): e46436.

7. Trubiani O., Di Primio R., Triani T. et al. Morphological and cytoflurometric analysis of adult mesenchymal stem cells expanded ex vivo from periodontal ligament. Int. J. Immunopathol. Pharmacol. 2005; 18: 213-21.

8. Laino G., Graziano A., d'Aquino R. et al. An approachable human adult stem cell source for hard-tissue engineering. J. Cell Physiol. 2006; 206(3): 693-7.

9. d'Aquino R., Graziano A., Sampaolesi M. et al. Human postnatal dental pulp cells co-differentiate into osteoblasts and endotheliocytes: a pivotal synergy leading to adult bone tissue formation. Cell Death Differ. 2007; 14(6): 1162-71.

10. Шамсутдинов М.И. Стволовые и прогениторные клетки пульпы и их характеристики после ортопедического препарирования твердых тканей зуба. Автореферат дисс. ... кандидата мед. наук. Казань: Казанский ГМУ, 2009.

11. Соловьева В.В., Блатт Н.Л., Шафигуллина А.К., Ризванов. Исследование эндогенной секреции сосудистого эндотелиального фактора роста мультипотентными мезенхимными стромальными клетками из зачатков третьих моляров человека. Клеточная транс-плантол. и тканевая инженерия 2012; 7(3): 155-8.

Благодарности

Работа выполнена в рамках государственной программы повышения конкурентоспособности Казанского (Приволжского) федерального университета среди ведущих мировых научно-образовательных центров и субсидии, выделенной Казанскому федеральному университету для выполнения государственного задания в сфере научной деятельности.

А.А. Ризванов поддержан грантом Президента Российской Федерации для государственной поддержки молодых российских ученых докторов наук МД-433.2013.4. Работа частично выполнена на оборудовании Междисциплинарного центра коллективного пользования и Научно-образовательного центра фармацевтики Казанского (Приволжского) федерального университета.

12. Alipour R., Sadeghi F., Hashemi-Beni B. Phenotypic characterizations and comparison of adult dental stem cells with adipose-derived stem cells. Int. J. Prev. Med. 2010; 1(3): 164-71.

13. Orstavik D. Antibacterial properties of endodontic materials. Int. Endod J. 1988; 21: 61-169.

14. Johnson W.B. A new guttapercha technique. J. Endod. 1978; 4: 184-8.

15. Asmussen E., Peutzfeldt A., Heitmann Т. Stiffness, elastic limit, and strength of newer types of endodontic posts. J. Dent. 1999; 27: 275-8.

16. Browne R.M. The in vitro assessment of the cytotoxicity of dental materials: does it have a role? Int. Endod. J. 1988; 21: 50-8.

17. Cox C.F., Hafez A.A. Biocomposition and reaction of pulp tissues to restorative treatments. Dent. Clin. North Am. 2001; 45: 31-48.

18. Ida K., Maseki T., Yamasaki M. et al. The pH values of pulp capping agents. J. Endod. 1989; 15: 365-8.

19. Trubiani O., Di Primio R., Triani T. et al. Morphological and cytoflurometric analysis of adult mesenchymal stem cells expanded ex vivo from periodontal ligament. Int. J. Immunopathol. Pharmacol. 2005; 18: 213-21.

20. Juskeviciute E., Vadigepalli R., Hoek J.B. Temporal and functional profile of the transcriptional regulatory network in the early regenerative response to partial hepatectomy in the rat. BMC Genomics 2008; 9: 527.

21. Mafi P., Hindocha S., Mafi R. et al. Adult Mesenchymal Stem Cells and Cell Surface Characterization - A Systematic Review of the Literature. The Open Orthop. J. 2011; 5: 253-60.

22. Dominici M., Le Blanc K., Dominici M. Minimal criteria for defining multipotent mesenchymal stromal cells. The International Society for Cellular Therapy position statement. Cytotherapy 2006; 8(4): 315-7.

23. Самцов А.В., Белоусова И.Э. Клинические, гистологические и иммуногистохимические особенности лимфом кожи на современном этапе. Вестник дерматологии и венерологии 2006; 1: 3-6.

24. Kaukua N., Shahidi M.K., Konstantinidou C. et al. Glial origin of mesenchymal stem cells in a tooth model system. Nature 2014; 513(7519): 551-4.

Поступила: 20.07.2014

Гены & Клетки Том IX, № 3, 2014