Аллельный полиморфизм гена каппа казеина (CSN3) у коров холмогорской породы татарстанского типа

ЭРИТРОЦИТАРНЫЕ ПАРАМЕТРЫ КРОВИ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА

ЯКУТИИ

Дыдаева Л.Г.

Резюме

Приведены результаты анализа эритроцитарных параметров крови крупного рогатого скота симментальский и холмогорский пород, разводимого в условиях Якутии. Установлено, что они лежат в пределах физиологических норм и являются нормативными.

ERITROTSITARNYE PARAMETERS OF BLOOD OF LARGE CATTLE OF YAKUTIA

Dydaeva L.G.

Summary

Results of the analysis of eritrotsitarnye parameters of blood of large cattle of Simmental and ^olmogor breeds, cultivated in conditions of Yakutia are resulted. It is established, that they lay within the limits of physiological norms and are normative for them in conditions of Yakutia.

УДК 636. 082. 12

АЛЛЕЛЬНЫЙ ПОЛИМОРФИЗМ ГЕНА КАППА - КАЗЕИНА (CSN3) У КОРОВ ХОЛМОГОРСКОЙ ПОРОДЫ ТАТАРСТАНСКОГО ТИПА

Зиннатова Ф.Ф., Алимов А.М., Зиннатов Ф.Ф.

ФГОУ ВПО «Казанская государственная академия ветеринарной

медицины имени Н.Э.Баумана»

Ключевые слова: ДНК, крупный рогатый скот, ПЦР-ПДРФ, генотипы, ген CSN3.

Key words: DNA, cattle, PCR-RFLP, genotypes, gene CSN3.

Основной задачей молочного животноводства является получение высокопродуктивных животных, дающих молоко с большим содержанием белка и обладающее хорошими технологическими свойствами. Однако селекционная работа, построенная на традиционных подходах, имеет, небольшой селекционный эффект. В настоящее же время, с развитием молекулярной генетики и молекулярной биологии, становиться возможным идентификация огромного числа генов. Выявление предпочтительных с точки зрения селекции генотипов позволит

дополнительно к традиционному отбору животных проводить селекцию непосредственно на уровне ДНК.

Качество молока и возможность использования его в сыроварении в значительной степени зависят от аллельных вариантов гена каппа- казеина. [3]. Известно, что аллель «В» положительно коррелирует с содержанием общего белка и казеина в молоке, а также с технологическими свойствами молока при производстве белково-молочных продуктов. [6]

В этой связи нами проведены исследования по изучению полиморфизма и определению частоты встречаемости аллельных вариантов гена каппа- казеина, показателей молочной продуктивности, качественного состава молока.

Материалы и методы. Исследования проводились на образцах ДНК, полученных из цельной крови коров холмогорской породы татарстанского типа (n=208). Образцы крови коров были получены из СХПК им. «Ленина» Атнинского района Республики Татарстан. ДНК выделяли набором реагентов «ДНК- Сорб- В» (фирма ООО «ДНК-технологии») согласно прописям, представленным изготовителем.

Фрагменты IV экзона гена CSN3 длиной 350 пн амплифицировали методом ПЦР, на программируемом термоциклере MyCycler (Bio-Rad, США). Программа амплификации была разработана нами, уже в предварительных опытах.

Для амплификации использовали следующие праймеры:

JK3

JK5 (5I- TTTATTAATAAGTCCATGAATCTTG 3I).

Реакционная смесь для проведения амплификации гена в объеме 20 мкл, содержала 10хTag буфер , 10 мМ dNTPs (смесь нуклеотидов), 25 мM MgCl2 , смесь праймеров (50 пМ/мкл каждого), Tag ДНК полимераза (5 ед./мкл), 100 нг геномной ДНК.

Для тестирования аллельных вариантов гена CSN3 был использован рестрикционный анализ продуктов амплификации. Рестрикционный анализ каждого продукта амплификации проводили в стандартных условиях с использованием эндонуклеазы рестрикции Hinf I (при 37 Со).

Визуализация фрагментов, осуществлялась электрофоретическим разделением продуктов рестрикции в 2% агарозном геле, в присутствии 5 мкл 10% бромистого этидия, фиксировали и документировали с помощью системы GelDoc (Bio-Rad, США).

Результаты. После провидения амплификации с парой праймеров JK3 и JK5, при анализе электрофореграмм обнаруживалась одна полоса, подвижность которой соответствовала длине заданного амплифицируемого фрагмента равной -350 пн (рис. 1).

1. Электрофореграмма результата амплификации геномной ДНК коровы

1- маркер для проведения электрофоретического анализа (100,400,850, 1000,1500 п.н.);

2- ампликон полученной в результате амплификации ДНК, размером 350 п.н.

После проведения реакции рестрикции и оценки полиморфизма длин рестрикционных фрагментов (ПДРФ) распределение животных по генотипам локуса гена каппа-казеина было следующим: 55,3% коров имели генотип АА, 40,4% - генотип АВ и только 4,3% - ВВ. По сравнению с 2008 годом произошло сокращение животных носителей аллеля «В»: (частота аллеля) с - 0,26, до - 0.22 или на 15,4% (Таблица 1). Уменьшение частоты втречаемости аллеля «В» обусловлено использованием в данном хозяйстве семенного материала быков-производителей, среди которых преобладали животные гомозиготные по аллелю «А». Так, например, в данном хозяйстве использовалось семя четырех быков с генотипами АА (3 быка) и АВ (1 бык).

1. Полиморфизм гена каппа-казеина коров в СХПК им. Ленина

Года Кол- во АА АВ ВВ Частота аллелей

кол. % кол. % кол. % А В

2008 г 219 111 50,7 99 45,2 9 4,1 0,74 0,26

2009 г 208 115 55,3 84 40,4 9 4,2 0,78 0,22

Статистическая обработка полученных данных не выявила каких-либо достоверных различий между генотипами гена СБ№ и молочной продуктивности коров. Полученные данные согласуются с ранее проведенными нами исследованиями. (таб.2).

2. Продуктивность коров с различными генотипами каппа-казеина

Генотип Удой, кг Жирность молока, % Молочный жир, кг Белок, % Молочный белок, кг

АА n=115 6192±117,8 3,62±0,03 224,1 3,0 199,3

АВ n=84 6010±136,9 3,61±0,06 225,2 3,04 182,7

ВВ n=8 6240±179,2 3,81±0,04 228,9 3,22 187,2

ВВ к АА +48 +0,19 +4,8 +0,22 +12,1

ВВ к АВ +230 +0,2 +3,7 + 0,18 + 4,5

2. Электрофореграмма результатов анализа полиморфизма гена CSN3 13 исследуемых образцов

1-маркер для проведения электрофоретического анализа (100,400,850, 1000,1500 n.H.)Fast Ruler (Helikon);

2,4,9,11,14- генотип АВ фрагменты, которого соответствуют 84п.н, 132п.н. и 260п.н;

3,5,7,8,10,12,13- генотипы АА фрагменты, которого соответствуют 84п.н., 132 п.н.;

6- генотип ВВ фрагменты, которого соответствуют 84 п.н., 260п.н.

Заключение. В результате исследований коров холмогорской породы татарстанского типа, методом ДНК-диагностики, выявлены три генотипа по локусу CSN3 (АА, АВ, ВВ) (рис.2) .При этом частота встречаемости нежелательного гомозиготного генотипа АА составила 55,3%. Таким образом частота аллеля «А» каппа -казеина составила 0,78, аллеля «В» - 0,22, а значит генное равновесие смещено в сторону нежелательного генотипа АА. Животные гомозиготные по локусу CSN3 (ВВ) имели преимущество по сравнению с генотипами АА и АВ по

содержанию и выходу жира, белка в молоке, а так же молочной

продуктивности.

ЛИТЕРАТУРА: 1. Калашникова Л.А., Стрелкова Н. А., Голубина Е. П. полиморфизм гена каппа- казеина крупного рогатого скота красн-пестрой породы // Современные достижения и проблемы биотехнологии сельскохозяйственных животных. Дубровицы, 2002. Сю 137-138. 2. Сулимова Г.Е., Шайхаев Г.О., Берберов Э.М. Генотипирование локуса каппа-казеина у крупного рогатого скота с помощью полимеразной цепной реакции // Генетика.-1991.-Т.27.-№ 12. - С. 2053-2062. 3. Alexander L.J., Stewart A.F., Mackinlay A.G., Kapelynskaya T.V.,Tkach T.M., Gorodetsky S.I. Isolation and characterization of the bovine k-kazeine gene // European Journal of biochemistry. - 1988. - V.178. - P. 395-401. 4. Damiani G., Ferretti L, Rognoni G., Sgaramella W. Restriction fragment length polymorphism analysis of the kappa-casein locus in cattle // Animal Genetics. - 1990.- V.21. - 107-114. 5. Denicourt D., Sabour M.P., McAllister A.J. Detection of bovine k-casein genomic variants by the polymerase chain reaction method // Animal Genetics. -1990.- V.21. - P. 215-216. 6. Schaar J., Hansson B., Petterson H. Effects of genetic variants of k- casein and beta- lactoglobulin on cheesemaking // J. Dairy Res. 1985. V. 52. P.429- 437.

АЛЛЕЛЬНЫЙ ПОЛИМОРФИЗМ ГЕНА КАППА - КАЗЕИНА (CSN3) У КОРОВ ХОЛМОГОРСКОЙ ПОРДЫ ТАТАРСТАНСКОГО ТИПА

Зиннатова Ф.Ф., Алимов А.М., Зиннатов Ф.Ф.

Резюме

Определены генотипы у коров холмогорской породы татарстанского типа по локусу гена каппа- казеина в СХПК им. «Ленина». При анализе образцов крови коров, методом ПЦР- ПДРФ, установлено три генотипа АА, АВ, ВВ с процентным соотношением 55,3 : 40,4 : 4,3 соответственно. Распределение частот аллелей было следующим: А аллель составил 0,78, В аллель - 0,22. Также проведена корреляция между различными генотипами гена CSN3 и качественным составом молока, а также молочной продуктивностью.

ALLELE POLY-MORPHISM OF KAPPA-CASEIN (CSN3) GENE IN COWS OF TATARSTAN TYPE OF KHOLMOGOR BREED

Zinnatova F.F., Alimov A.M., Zinnatov F.F.

Summary

Kholmogor breed cows of Tatarstan type genotypes on kappa-casein gene locus at agro-industrial complex named by Lenin was defined. PCR-PDRF methods of cows blood analysis showed 3 genotypes such as AA,AB,BB with

the following percentage 55,3:40,4:4,3 accordingly. Allele frequency distribution was the following: A allele was 0,78, B allele-0,22.The correlation between various genotypes of CSN3 gene and qualitative milk content and also between milk productivity was established.

УДК:591.1:577.15:612.35

АКТИВНОСТЬ АМИНОТРАНСФЕРАЗ В ТКАНЯХ ПЕЧЕНИ У РАЗНОВОЗРАСТНЫХ ПОРОСЯТ

Иванова Н. Н., Игнатьев Н. Г.

ФГОУ ВПО «Чувашская государственная сельскохозяйственная академия»

Ключевые слова: печень, поросята, белая порода, аминотрансфераз.

Key words: liver, pigs, white rock, aminotransferases.

Как известно, роль печени не ограничивается ее желчеобразовательной функцией и участием в пищеварении. Одной из главных функций этой железы внешней секреции является обезвреживание различных соединений, образующихся в результате пищеварения в желудочно-кишечном тракте. С участием желчных кислот ядовитые вещества превращаются в сравнительно индифферентные соединения, которые выводятся почками. В печени постоянно происходят процессы переаминирования, дезаминирования, декарбоксилирования, в результате которых перестраиваются аминокислоты. В этой железе из аминокистот формируются такие белки крови как альбумины, а также белки, участвующие при свертывании крови: фибриноген и протромбин. В ней синтезируется мочевина из аммиака, депонируются жиры, липиды, витамин А и вода.

В клетках печени образуются такие ферменты как аминотрансферазы, фосфатазы и а-амилаза, уровень которых отражает активность обменных процессов, происходящих в ней. В связи с этим определение особенностей возрастных изменений названных ферментов в тканях главной пищеварительной железы имеет важное теоретическое и практическое значение.

Определению характера возрастных изменений активности аминотрансфераз, фосфатаз и а-амилазы в тканях печени у разновозрастных поросят была посвящена работа [1], авторами которой являются Т. Е. Костина и В. Г. Степанов. В своих исследованиях авторы использовали поросят крупной белой породы, полученных в условиях свиноф (свиноферма) УНПЦ «Студгородок» Чувашской ГСХА.