Порошок нитрофурала и цитохрома с как потенциальный источник монооксида азота на ране

Golovanenko A.L., Tret'yakova E.V. Racional'noe ispol'zovanie remineralizuy-uschikh lekarstvennykh sredstv dlya lecheniya kariesa emali i dentina//Aktual'nye problemy mediciny i farmacii: Mat. III Vseros. nauch. prakt. konf. s mezhd. uch., posvyasch. pamyati I.A. Andreeva. Uchenye zapiski Orlovskogo gosudarstven-nogo universiteta. Orel. 2014. № 7 (63), S. 35-36.

11. Рюмина Т.Е., Голованенко А.Л. Изучение влияния наиболее значимых биофармацевтических факторов на высвобождение ЛС из геля для реми-нерализации дентина. Фундаментальные исследования. 2013. № 6. Ч. 1. С. 116-119.

Ryumina T.E., Golovanenko A.L. Izuchenie vliyaniya naibolee znachimykh bio-farmacevticheskikh faktorov na vysvobozhdenie LS iz gelya dlya remineralizacii dentina. Fundamental'nye issledovaniya. 2013. № 6. Ch. 1. S. 116-119.

12. Леонова Л.Е., Павлова Г.А., Першина Р.Г. и др. Использование новой композиции реминерализующего геля при лечении кариеса дентина //

Использование достижений науки в Пермском здравоохранении: мат. регион. конф. Медицина и здоровье. Пермь. 2014. С. 64-69.

Leonova L.E., Pavlova G.A., Pershina R.G. i dr. Ispol'zovanie novoy kompozicii remineralizuyuschego gelya pri lechenii kariesa dentina // Ispol'zovanie dostizheniy nauki v Permskom zdravookhranenii: mat. region. konf. Medicina izdorov'e. Perm'. 2014. S. 64-69.

13. Леонова Л.Е., Павлова Г.А., Першина Р.Г. и др. Комплексная оценка состава и свойств реминерализующего геля при лечении кариеса дентина // Стоматология Большого Урала: мат. III всерос. рабоч. совещания по проблемам фундаментальной стоматологии. Екатеринбург. 2015. С. 46-48.

Leonova L.E., Pavlova G.A., Pershina R.G. idr. Kompleksnaya ocenka sostava i svoystv remineralizuyuschego gelya pri lechenii kariesa dentina // Stoma-tologiya Bol'shogo Urala: mat. III vseros. raboch. soveschaniya po problemam fundamental'noy stomatologii. Ekaterinburg. 2015. S. 46-48.

УДК: 615.453.21:616-001-08

ПОРОШОК НИТРОФУРАЛА И ЦИТОХРОМА С КАК ПОТЕНЦИАЛЬНЫЙ ИСТОЧНИК МОНООКСИДА АЗОТА НА РАНЕ

В.М. Коробко1, А.К. Мартусевич2, С.П. Перетягин2, Н.Б. Мельникова1,

1ГБОУ ВПО «Нижегородская государственная медицинская академия»,

2Отделение экспериментальной медицины ФГБУ «Приволжский федеральный медицинский исследовательский центр», г. Н. Новгород

Мельникова Нина Борисовна - e-mail: melnikovanb@gmail.com

Методом электронной спектроскопии исследовано взаимодействие антибактериальных нитро-содержащих лекарственных веществ и цитохрома с (cyt c3+) в присутствии избытка аскорбиновой кислоты или натрия аскорбата в растворе. Показано образование комплексов цитохрома с (cyt c2+) с нитропрепаратами, аналогично нитрозильным комплексам монооксида азота с цитох-ромом с. Обоснованы и разработаны фармацевтические композиции на основе нитросодержа-щих препаратов и цитохрома с для лечения ожоговых ран. Эффективность вазодилатирующего и регенерирующего действий подтверждена в эксперименте на крысах.

Ключевые слова: монооксид азота, цитохром с, нитропрепараты,

лечение ожогов на крысах, порошок.

The interaction of antibacterial nitromedicines with cytochrome c in the presence of excesses of ascorbic acid or of sodium ascorbate in the solution has been studied by UV-Vis method. The formation of cytochrome c complexes with nitromedicines similar nitrosyl complexes of cytochrome c with nitric oxide was shown. The pharmaceutical composition on the base nitromedicine and cytochrome c has been formulated and developed for treatment of burn wounds. The effectiveness of vasodilatation and regeneration activities was suggested in the experiments by rats.

Key words: nitric oxide, cytochrome c, nitromedicine, treatment burn on rats, powder.

Введение

В настоящее время большое внимание привлекают медицинские технологии лечения онкологических, сердечнососудистых заболеваний и раневых процессов, использующие монооксид азота либо в газообразном состоянии, либо получаемого из сложных комплексов азот- и серосодержащих соединений в присутствии ионов железа [1, 2].

Монооксид азота является одним из важнейших регуляторов процессов in vivo, таких как эндотелиальная релаксация, передача нервных сигналов, транскрипция и трансляция генов [3], улучшение микроциркуляции крови, агрегации тромбоцитов. Монооксид азота оказывает опосредованное благоприятное действие на раневой и воспалительный процессы, усиливая секрецию цитокинов, индуцируя фагоцитоз бактерий и некротического детрита нейтрофи-лами и макрофагами [4-6]. Он может взаимодействовать во внутриклеточной жидкости с различными веществами -тиолами, ионами металлов, сахарами, гемами протеинов,

образуя различные типы нитрозильных комплексов, среди которых наиболее важными являются железо-нитрозиль-ные комплексы [7].

Известны многочисленные примеры создания «депо» монооксида азота из нитрозильных железосодержащих комплексов, лигандами которых являлись, например, диэ-тилдитиокарбаматный и тиолатный, с улучшенными фармакологическими свойствами по сравнению с монооксидом азота [1, 2]. Большой вклад в разработку новых доноров монооксида азота в виде нитрозильных комплексов железа с функциональными серосодержащими лиганда-ми, многие из которых являются лекарственными веществами (ЛВ), внесли работы русских ученых С.М. Алдоши-на, Н.А. Саниной и др. [7, 8].

Для создания новых ЛВ как депо монооксида азота особо важны нитрозильные комплексы цитохрома с, образующиеся в организме человека [9, 10]. Цитохром с обладает антиокси-дантными и антигипоксантными свойствами, что обусловлено

его уникальными биокаталитическими функциями: переносчика электронов при фотосинтезе, дыхании, окислительного фосфорилирования и других окислительно-восстановительных процессов [11]. Следует ожидать расширение фармакологического спектра действия ЛВ и цитохрома с за счет способности железопорфиринового гема металлопротеина к ком-плексообразованию с монооксидом азота, генерированного из ЛВ, и, соответственно, ингибирование апоптоза.

Ранее на примере препаратов нитрофуранового ряда [12] было доказано, что фурановый цикл может раскрываться под действием нуклеофильных реагентов, а также возможна в восстановительных условиях дезароматизация производных нитрофурана, которая приводит к образованию соединений, генерирующих монооксид азота.

Восстановление лекарственных препаратов нитрофуранового ряда, таких как 5-нитрофурал, фурагин, фуразолидон, было изучено с использованием системы калия ферроциа-нид - аскорбиновая кислота [13]. Радикалы, образующиеся в результате восстановления 5-нитрофуранов, способны претерпевать нитро^нитроэфирную перегруппировку, которая в конечном итоге приводит к генерации N0 (рис. 1).

Целью настоящей работы является разработка противоожоговых фармацевтических композиций на основе антибактериальных нитропрепаратов, эффективных в отношении грамположительных и грамотрицательных бактерий, способных генерировать монооксид азота или образовывать нитрозильные комплексы с цитохромом с.

В работе решались следующие задачи:

1) исследование образования комплексов цитохрома с с газообразным монооксидом азота и нитросодержащими препаратами;

2) разработка и обоснование оптимального состава и лекарственной формы новых фармацевтических композиций для лечения ожоговых ран;

3) доказательство повышения микроциркуляции фармацевтической композиции в виде порошка при лечении ожоговой раны на крысах.

В качестве объектов исследования были использованы ЛВ:

г::. ...

СП

tijN

4 ?'

<4

О.Г, > „сл. п L1—С -а I

5-нитрофурал метронидазол 5-нитроксолин

Экспериментальная часть

Реактивы

В работе использовали следующие материалы и реактивы: цитохром с (из сердца лошади) (>95%, lot STBB7839V, «Fluka» (USA) «Sigma-Aldrich»), нитрофурал (>97%, Product Number: 59870, «Aldrich» (USA) «Sigma-Aldrich»), натрия аскорбат (>99%, lot BCBJ1585V, «Fluka» (USA) «Sigma-Aldrich»), оксид цинка (ГОСТ 10262-73), крахмал (>95%, Product Number: 9005-25-8, «Fluka» (USA) «Sigma-Aldrich»), воду очищенную, полученную на установке «Elix-3» фирмы «MILLIPORE», удельное сопротивление менее 0,2 цСм.

Газообразный NO получали по методике [14].

Получение порошков. Нитропрепараты для приготовления порошка подвергались предварительному кондиционированию путем обработки препаратов этанольным раствором аскорбилпальмитата (на 1 г субстанции несколько капель насыщенного раствора аскорбилпальмитата) с последующим удалением растворителя. Порошок получали растиранием в ступке всех ингредиентов.

Технологические характеристики порошков (сыпучесть и насыпная плотность) оценивали в соответствии с ГФ 12 ч.2 [15].

Электронные спектры поглощения водных растворов (нитропрепаратов, цитохрома с и их смесей) получали на приборе «Bioline Specord S - 100» (Analytik Jena), толщина кварцевой кюветы 10 мм.

Медико-биологические исследования. Эксперимент был выполнен в соответствии с руководством по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ (А.Н. Миронов, 2012) на 20 крысах-самцах линии Вистар массой (M±s) 200±2,6 г. Сформированы две группы животных, которым под наркозом был нанесен контактный термический ожог (площадь - 20% поверхности тела) [16]. После моделирования термической травмы животным основной группы (n=10) в течение 10 дней на раневую поверхность наносили комбинированную фармацевтическую композицию: водный гель крахмала + порошок (0,5% 5-нитрофурал, 0,05% цитохром с, 0,1% натрия аскорбат, 0,1% цинка оксид). Животных контрольной группы (n=10) лечили с применением нитрофуралсодержащей мази.

Состояние микроциркуляторного русла оценивали в месте воздействия сразу же по его завершении методом лазерной допплеровской флуометрии с помощью аппарата ЛАКК-02. Изучали интенсивность микроциркуляции по показателю микроциркуляции в перфузионных единицах [17-19].

Статистическую обработку проводили по программе Statistica 7.0 (р<0.05).

Результаты и их обсуждение

Изучение водной реакционной смеси с нитропрепарата-ми, генерирующие NO-содержащие комплексы.

Рисунок 2а показывает изменение в электронном спектре водного раствора цитохрома с (cyt c) при добавлении газообразного NO в течение 15 минут: наблюдается сдвиг у-полосы от 410 к 415 нм, характеризующей восстановленную форму cyt с. Кроме этого, появляется новая интенсивная полоса при 358 нм и две слабые полосы при 520 нм (ß) и 550 нм (а), характерные для cyt c2+. Ранее нами показано, что восстановленная форма cyt c2+ появляется также при воздействии аскорбиновой кислоты или натрия аскорбата (NaAsc) -наличие у- (415 нм) полосы, слабых полос а- (550 нм), ß- (520 нм), однако полоса в области 358 нм отсутствует [20].

РИС. 2.

Электронные спектры 2,410-6 М растворов cyt с и его реакционных смесей с монооксидом азота (рис. 2а) и с 5-нитрофуралом (5-NO2F) в присутствии натрия аскорбата (рис. 2б): 1 - водный раствор cyt с; 2 - сyt с + N0 газ; 3 - смесь сyt с, 5-N02F и тАс; 4 - 1,5 М раствор 5-N02F; 5 - 510-5 М раствор Na-Asc. Врезка на рис. 1а показывает а- и р- полосы восстановленной формы cyt с. Врезка на рис. 1б показывает зависимость изменения оптической плотности при 1=415 нм от концентрации 5-N02F в реакционной смеси сyt с, 5-N02F и Na-Asc.

л .. л

1 I : иг pi-нн 11 ' .|йг:  ' " I - j-l; h.i M--

J.UULi I'.'LiJ ILL

РИС. 3.

Электронные спектры восстановленной формы 1,0510-5 М раствора цитохрома с (cyt c3+ + NaAsc) - кривая 1, и реакционной смеси cyt c2+, содержащей 1,810-5 М раствор метронидазола, -кривая 2.

В работе [21] по изучению пероксидазной активности cyt c наблюдались такие же спектральные эффекты, как при взаимодействии cyt c с нитритом при pH 3. Под действием нитрита при этих pH, как полагают авторы, происходит образование комплекса геминовое железо - монооксид азота, приводящего к уменьшению пероксидазной активности cyt c. Аналогичные спектральные изменения были описаны Orii и Shimada (1978), а также Butt и Keilin (1962).

Подобные изменения в структуре гема cyt c были показаны с помощью спектров поглощения в УФ и видимой области в альтернативной системе, содержащей смесь cyt c, нитрита натрия и аскорбата натрия в кислой среде, способной к генерации оксида азота [20].

В сложной изучаемой реакционной смеси возможны не только изменения гема cyt c3+ до cyt c2+, но и образование различных нитрозильных комплексов cyt c с монооксидом азота, нитрит (NO2-), нитрозо- (NO-) или нитроксил (NO+) ионами [3].

Взаимодействие cyt c с системой нитрит-аскорбат в кислой среде, вероятно, приведет к двум типам комплексов NO - cyt c2+ и нитрозильный cyt tf+-NO+, но NO-cyt c2+-

комплекс нестабилен и превращается в NO-cyt с3+ комплекс. В дальнейшем нами был использован избыток NaAsc, позволяющий длительное время стабилизировать восстановленную форму cyt с.

Методом электронной спектроскопии нами установлено, что антибактериальные нитропрепараты (5-нитрофу-рал, 5-нитроксолин, метронидазол) также образуют комплексы с цитохромом с в присутствии натрия аскорбата при рН 7.

Показано, что для всех изучаемых ЛВ оптическая плотность cyt с в области 270 нм (С=0 аскорбата) резко уменьшалась, а в области поглощения у-полосы cyt с3+ его положение изменялось с 410 до 415 нм для всех нитропрепа-ратов, что типично для cyt с2+, при этом оптическая плотность линейно увеличивалась при увеличении концентрации нитропрепаратов. На рисунке 1б эти наблюдения демонстрируют образование N0 - cyt с2+-комплексов из цитохрома с и 5-нитрофурала в качестве примера. Изменение положения полос, характеризующих нитрозильные комплексы, было следующим: NaN02 или N0 (358 нм), 5-нитрофурал (375 нм), метронидазол (320 нм), 5-ни-троксолин (320 нм). Более существенно изменялась интенсивность поглощения полос в этой области при взаимодействии с cyt с, что косвенно характеризует комплек-сообразование. Показано, что интенсивность поглощения полосы нитрозильных комплексов cyt с в ряду изученных соединений изменяется следующим образом:

нитрит натрия > метронидазол > 5-нитрофураны >> 5-нитроксолин.

На рисунке 3 продемонстрировано изменение поглощения полосы нитрогруппы в метронидазоле под действием восстановленной формы cyt с.

Комплексообразование cyt с2+ с нитропрепаратами и позже с N0 в реакционной смеси в течение первых 10 минут было подтверждено определением общей концентрации ^0Х], которая равна 15±5,4 рМ при С5_п|^ига| = 30 рМ и 22±5,8 рМ при С5-М02Р = 60 рМ, соотвественно.

Необходимо отметить, что образующиеся комплексы N0-cyt с2+ стабильны: оптическая плотность реакционных растворов не изменялась в течение месяца.

Таким образом, нами установлено, что взаимодействие нитросодержащих лекарственных веществ и цитохрома с (cyt с3+) в присутствии избытка аскорбиновой кислоты или натрия аскорбата в растворе приводит к комплексам цитохрома с (cyt с2+) в восстановленной форме. Комплексы cyt с2+ и ЛВ, вероятно, близки по природе нитрозиль-ным комплексам, образованным монооксидом азота и обусловлены его генерацией при реакции cyt с2+ с нитро-группой препарата.

Разработка состава фармацевтической композиции в виде порошка.

Вульнеросорбция является одним из востребованных направлений в комбустиологии, поскольку наряду с основными фармакологическими эффектами (антибактериальными, противовоспалительными, ранозаживляющи-ми) способствует эффективному удалению экссудата, микроорганизмов и их токсинов из раны, используя компоненты лекарственных средств в качестве сорбентов. В связи с этим для лечения ожоговых ран нами предложена лекарственная форма в виде порошка.

Оптимизация состава порошка была выполнена, принимая во внимание следующие моменты: 1) доступность, цена, эффективность и минимальное побочное действие нитропрепарата; 2) количественное содержание нитро-препарата должно быть в большом избытке по отношению к cyt с, выполняющего роль не только антиоксиданта и антигипоксанта, но и катализатора генерации монооксида азота в восстановленной форме. Избыток нитропрепарата необходим для усиления антибактериальных свойств фармацевтической композиции; 3) введение компонента - кератолитика с антисептическими свойствами; в качестве последнего предложено использовать оксид цинка; 4) основной компонент - наполнитель, должен обеспечивать необходимые технологические свойства порошка как сорбента для комбустиологии: способность сорбировать экссудат, обеспечивать необходимую сыпучесть, не вызывать аллергических реакций.

Предложен следующий состав фармацевтической композиции (масс. %):

- метронидазол, или 5-нитрофурал, или их смесь 0,5-5,0

- цитохром с 0,05-0,1

- аскорбиновая кислота или натрия аскорбат 0,1-1,0

- цинка оксид 0,1-1,0

- крахмал картофельный до 100 г.

Показано, что порошок удовлетворяет требованиям ГФ 12 ч. 2 по сыпучести - от 3,93 до 4,05 г/с; насыпной массе - 0,885-0,890 г/см3; степени измельчения порошка, определенного по ситовому анализу (очень мелкий порошок - 96% массы порошка проходит через сито номер 125 и 38% массы порошка проходит через сито номер 90).

Оценка эффективности противоожоговой фармацевтической композиции в эксперименте на крысах была проведена с использованием комбинированной лекарственной формы: водный гель крахмала + порошок 5-нитро-фурала, цитохрома с, натрия аскорбата и цинка оксида. Непосредственно перед экспериментом порошок всыпался в водный гель крахмала, был тщательно перемешен при нагревании. Дизайн эксперимента был обусловлен тем, что травмированная кожа большинства животных после термического ожога является очень сухой, вследствие чего порошок не может быть нанесен на поверхность раны.

Заживление ожоговых ран при лечении предлагаемой комбинированной лекарственной формы на 3-, 7-, 10-е сутки происходило быстрее, чем при лечении мази с 5-ни-трофуралом. Наибольшее различие наблюдалось на 3-й и 7-й день: площадь ожоговой раны на 3-й день сократилась с 94% (контроль) до 83% (порошок); на 7-й день -с 80% (контроль) до 69% (порошок).

На основании оценки локальной микроциркуляции было установлено, что применение тестируемой фармацевтической композиции обеспечивает поддержание показателя микроциркуляции в околораневой зоне на повышенном уровне как на третьи, так и на десятые сутки по-слеожогового периода (рис. 4). В то же время у животных контрольной группы на 3-и сутки наблюдали выраженное угнетение микроциркуляции (р<0,05 по отношению к уровню интактных животных и представителей основной группы) с частичным восстановлением лишь к 10-му дню после термической травмы. В то же время именно в ран-

РИС. 4.

Уровень показателя микроциркуляции у животных с термической травмой в зависимости от применного варианта местного лечения.

День Уровень микроцикуляции, ПМ, перф. ед. RSD, %

Контроль 3 6,18±0,02 0,25

Фарм.композиция 3 10,65±0,02 0,19

Контроль 10 9,25±0,05 0,38

Фарм. композиция 10 11,90±0,02 1,30

ний период обеспечивается наиболее эффективная стимуляция регенераторных процессов, запускаемая через NO-зависимые механизмы [5, 22, 23].

Следует отметить, что на десятые сутки послеожогового периода уровень показателя микроциркуляции у крыс контрольной группы практически возвращался к значениям, характерным для интактных животных, тогда как в основной группе он оставался повышенным (p<0,05), оптимизируя условия для регенерации кожного покрова.

Выводы

1. Взаимодействие нитросодержащих лекарственных веществ и цитохрома с (cyt c3+) в присутствии избытка аскорбиновой кислоты или натрия аскорбата в растворе приводит к комплексам цитохрома с (cyt c2+) в восстановленной форме (данные электронной спектроскопии). Высказано предположение, что комплексы cyt c2+ и ЛВ близки по природе нитрозильным комплексам, образованным монооксидом азота. Показано, что интенсивность поглощения полосы нитрозильных комплексов цитохрома с в ряду изученных соединений изменяется следующим образом:

нитрит натрия > метронидазол > 5-нитрофураны >> 5-нитроксолин

2. Обоснован состав противоожоговой фармацевтической композиции, способный в присутствии аскорбиновой кислоты или натрия аскорбата генерировать монооксид азота in situ на основе нитропрепарата и цитохрома с. Рекомендуемый состав (масс. %): метронидазол, или 5-нитрофурал, или их смесь 0,5-5,0; цитохром с 0,050,1; аскорбиновая кислота или натрия аскорбат - 0,1-1,0; цинка оксид 0,1-1,0; крахмал до 100 г.

Показано, что порошок удовлетворяет требованиям ГФ 12 ч. 2 по сыпучести и степени измельчения порошка (ситовый анализ).

3. В эксперименте на крысах на модели ожоговой раны установлен вазодилатирующий эффект комбинированной лекарственной формы «гель крахмала + порошок

5-нитрофурала, цитохрома с, натрия аскорбата и цинка оксида», обуславливающий на раннем этапе лучшее заживление раны за счет стимуляции регенераторных процессов.

ЛИТЕРАТУРА

1. Vanin A.F. Dinitrosyl iron complexes with thiolate ligands: physico-chemistry, biochemistry and physiology. Nitric Oxide Biol. Chem. 2009. № 21. P. 1-13.

2. Vanin A.F., Chazov E.I. Prospects of designing medicines with diverse therapeutic activity on the basis of dinitrosyl iron complexes with thiol-containing ligands. Biophysics. 2011. № 56. P. 268-275.

3. Осипов А.Н., Борисенко Г.Г., Владимиров Ю.А. Биологическая роль нитрозильных комплексов гемопротеинов. Успехи биологической химии. 2007. № 47. С. 259-292.

Osipov A.N., Borisenko G.G., Vladimirov Ju.A. Biologicheskaja rol' nitrozil'nyh kompleksov gemoproteinov. Uspehi biologicheskoj himii. 2007. № 47. S. 259-292.

4. Culotta K., Koshland D.E. NO news is good news. Science. 1992. № 258. P. 1862-1865.

5. Oplander C., Romer A., Paunel-Gorgulu A. et al. Dermal application of nitric oxide in vivo: kinetics, biological responses, and therapeutic potential in humans. Clin. Pharmacol. Ther. 2012. № 91. P. 1074-1082.

6. Берченко Г.Н., Шальнев А.Н., Рыкунов А.В., Татаренков В.И. Экспериментально-морфологическое обоснование использования экзогенного монооксида азота при лечении огнестрельных ран. Вестник травматологии и ортопедии им. Н.Н. Приорова. 2009. № 4. C. 49-55.

Berchenko G.N., SHal'nev A.N., Rykunov A.V., Tatarenkov V.I. Eksperimental'no-morfologicheskoe obosnovanie ispol'zovanija ekzogen-nogo monooksida azota pri lechenii ognestrel'nyh ran. Vestnik travmatolo-giiiortopediiim. N.N. Priorova. 2009. №4. S. 49-55.

7. Rakova O.A., Sanina N.A., Shulga Yu.M., Kulikov A.V., Aldoshin S.M. Novel «Roussin esters» [Fe2( 2-SR)2(NO)4] as NO donors: synthesis, structural and spectroscopic characterization. J. Inorg. Biochem. 2001. № 85. P. 390.

8. Aldoshin S.M., Sanina N.A., Rakova O.A. et al. New class of neutral paramagnetic binuclear sulfur-containing iron nitrosyl complexes. Russ. Chem. Bull., Int. Ed. 2003. № 52. P. 1702-1708.

9. Stone J.R., Sands R.H., Dunham W.R., Marletta M.A. Electron paramagnetic resonance spectral evidence for the formation of a pentacoordinate nitrosyl-heme complex on soluble guanylate cyclase. Biochem. Biophys. Res. Commun. 1995. № 207. P. 572.

10. Osipov A.N., Stepanov G.O., Vladimirov Yu.A., Kozlov A.V., Kagan V.E. Regulation of cytochrome c peroxidase activity by nitric oxide and laser irradiation. Biochemistry. 2006. № 71. P. 222.

11. Диксон М., Уэбб Э. Ферменты / пер. с англ.; под ред. В.К. Антонова, А.Е. Браунштейна. М.: Мир, 1982. Т. 2. С. 515.

Dikson M, Ujebb E. Fermenty / per. s angl.; pod red. V.K. Antonova, A.E. Braunshtejna. M.: Mir, 1982. T. 2. S. 515.

12. Григорьев Н.Б., Чечекин Г.В., Арзамасцев А.П., Левина В.И., Граник В.Г. Генерация оксида азота при восстановлении антибактериальных препаратов нитрофуранового ряда. Химия гетероцикл. соед. 1999. № 7. С. 902.

Grigoriev N.B., Chechekin G.V., ArzamaztsevA.P., Levina V.I., Granik V.G. Generacija oksida azota pri vosstanovlenii antibakterial'nyh preparatov ni-trofuranovogo rjada. Himija geterocikl. soed. 1999. № 7. S. 902.

13. Граник В.Г. Метаболизм экзогенных соединений. М.: Вузовская книга. 2006. С. 528.

Granik V.G. Metabolizm jekzogennyh soedinenij. M.: Vuzovskaja kniga. 2006. S. 528.

14. Sharpe M.A., Cooper C.E. Reactions of nitric oxide with mitochondrial cytochrome c: a novel mechanism for the formation of nitroxyl anion and peroxynitrite. J. Biochem. 1998. № 332. P. 9-19.

15. Государственная фармакопея РФ. Вып. 2. МЗСР РФ. 12-е изд. М.: Научный центр экспертизы средств медицинского применения. 2010. C. 431.

Gosudarstvennaja farmakopeja RF. Vyp. 62. MZSR RF. 12-e izd. M.: Nauch-nyj centr jekspertizy sredstv medicinskogo primenenija. 2010. S. 431.

16. Перетягин С.П., Мартусевич А.К., Вазина И.Р. с соавт. Разработка нового способа моделирования комбинированной ожоговой травмы. Современные технологии в медицине. 2011. № 2. С. 106-109.

Peretyagin S.P., Martusevich A.K., Vazina I.R. s soavt. Razrabotka novogo sposoba modelirovanija kombinirovannoj ozhogovoj travmy. Sovremennye tehnologii v medicine. 2011. № 2. S. 106-109.

17. Мартусевич А.К., Ларионова К.Д., Перетягин С.П., Перетягин П.В., Давыдюк А.В. Экспериментальная оценка влияния лекарственных композиций на состояние микроциркуляции в раннем послеожоговом периоде. Фундаментальные исследования. 2013. № 3. С. 332-336.

MartusevichA.K., Larionova K.D., PeretyaginS.P., PeretyaginP.V., Davyduk A.V. Experimental'naja ocenka vlijanija lekarstvennyh kompozicij na sosto-janie mikrocirkuljacii v rannem posleozhogovom periode. Fundamental'nye issledovanija. 2013. № 3. S. 332-336.

18. Bajrovic F. et al. The contribution of lumbal sympathetic neurones activity to rats skin blood flow oscillation. Eur. J. Physiol. 2000. Vol. 439. P. 158-159.

19. Мартусевич А.К., Соловьева А.Г., Мартусевич А.А., Перетягин П.В. Особенности функционально-метаболической адаптации организма в условиях травматического стресса. Медицинский альманах. 2012. № 5. С. 175-178.

Martusevich A.K., Solovieva A.G., Martusevich А.А., Peretyagin P.V. Oso-bennosti funkcional'no-metabolicheskoj adaptacii organizma v uslovijah travmaticheskogo stressa. Medicinskij al'manah. 2012. № 5. S. 175-178.

20. Korobko V.M., Melnikova N.B., Panteleev D.A., Martusevich A.K., Peretyagin S.P. The Study of the Complexes of Nitromedicine with Cytochrome c and NO-containing Aqueous Dosage Form in the Wound Treatment of Rats. Nitric Oxide. 2014. № 42. P. 62-69.

21. Kambayashi Y., Hitomi Y., Kodama N. et al. pH Profile of cytochrome c-catalyzed tyrosine nitration. Acta Biochimica Polonica. 2006. № 3. P. 577-784.

22. Martusevich A.K., Solovieva A.G., Martusevich А.А., Peretyagin P.V. The peculiarities of functional-metabolic adaptation of the organism in case of traumatic stress. Medical Almanac. 2012. № 5. P. 175-178.

23. Dahmus J.D., Bruning R.S., Kenney W.L., Alexander L.M. Oral clopidogrel improves cutaneuos microvascular function through EDHF-dependent mechanisms in middle-aged humans. Am. J. Physiol. Regul. Integr. Comp. Physiol. 2013. № 305. P. 452-458. [J^