МАТЕРИАЛЫ И СПОСОБЫ ЛЕЧЕНИЯ РАКА

1. Способ получения Т-клетки с химерным антигенным рецептором, имеющей пониженный уровень полипептидов гранулоцитарно-макрофагального колониестимулирующего фактора (GM-CSF), включающий:
введение конструкции нуклеиновой кислоты в Т-клетку ex vivo, причем указанная конструкция нуклеиновой кислоты включает: а) нуклеиновую кислоту, кодирующую гидовую РНК, причем указанная гидовая РНК комплементарна матричной РНК GM-CSF; b) нуклеиновую кислоту, кодирующую нуклеазу Cas, и с) нуклеиновую кислоту, кодирующую указанный химерный антигенный рецептор.
2. Способ по п.1, в котором указанная гидовая РНК содержит последовательность нуклеиновой кислоты, приведенную в SEQ ID NO: 1.
3. Способ по любому из пп. 1, 2, в котором указанная нуклеаза Cas представляет собой нуклеазу Cas9.
4. Способ по любому из пп. 1-3, в котором указанная нуклеиновая кислота, кодирующая указанный химерный антигенный рецептор, включает последовательность нуклеиновой кислоты, приведенную в SEQ ID NO: 2.
5. Способ по любому из пп. 1-4, в котором указанная конструкция нуклеиновой кислоты представляет собой вирусный вектор.
6. Способ по п.5, в котором указанный вирусный вектор представляет собой лентивирусный вектор.
7. Способ по любому из пп. 1-6, в котором указанный химерный антигенный рецептор нацелен на ассоциированный с опухолью антиген.
8. Способ по п.7, в котором указанный ассоциированный с опухолью антиген представляет собой CD19.
9. Способ по любому из пп. 1-8, в котором указанная стадия введения включает трансдукцию.
10. Способ получения Т-клетки с химерным антигенным рецептором, имеющей пониженный уровень полипептидов гранулоцитарно-макрофагального колониестимулирующего фактора (GM-CSF), включающий:
введение комплекса в Т-клетку ex vivo, где указанный комплекс включает: а) гидовую РНК, причем указанная гидовая РНК комплементарна матричной РНК GM-CSF; и b) нуклеазу Cas; и
введение в указанную Т-клетку ex vivo нуклеиновой кислоты, кодирующей указанный химерный антигенный рецептор.
11. Способ по п.10, в котором указанная гидовая РНК содержит последовательность нуклеиновой кислоты, приведенную в SEQ ID NO: 1.
12. Способ по любому из пп. 10, 11, в котором указанная нуклеаза Cas представляет собой нуклеазу Cas9.
13. Способ по любому из пп. 10-12, в котором указанная нуклеиновая кислота, кодирующая указанный химерный антигенный рецептор, включает последовательность нуклеиновой кислоты, приведенную в SEQ ID NO: 2.
14. Способ по любому из пп. 10-13, в котором указанный комплекс представляет собой рибонуклеопротеин.
15. Способ по любому из пп. 10-14, в котором указанный химерный антигенный рецептор нацелен на ассоциированный с опухолью антиген.
16. Способ по п.15, в котором указанный ассоциированный с опухолью антиген представляет собой CD19.
17. Способ по любому из пп. 10-16, в котором указанные стадии введения включают электропорацию.
18. Способ лечения страдающего раком млекопитающего, включающий введение указанному млекопитающему Т-клеток с химерным антигенным рецептором, имеющих пониженный уровень полипептидов гранулоцитарно-макрофагального колониестимулирующего фактора (GM-CSF).
19. Способ по п.18, в котором указанное млекопитающее является человеком.
20. Способ по любому из пп. 18, 19, в котором указанный рак представляет собой лимфому.
21. Способ по п.20, в котором указанная лимфома представляет собой диффузную крупноклеточную В-клеточную лимфому.
22. Способ по любому из пп. 18, 19, в котором указанный рак представляет собой лейкоз.
23. Способ по п.22, в котором указанный лейкоз представляет собой острый лимфобластный лейкоз.
24. Способ по любому из пп. 18-23, в котором указанный химерный антигенный рецептор нацелен на ассоциированный с опухолью антиген.
25. Способ по п.24, в котором указанный ассоциированный с опухолью антиген представляет собой CD19.
26. Способ получения Т-клетки с химерным антигенным рецептором, имеющей пониженный уровень полипептидов-цитокинов, включающий:
введение конструкции нуклеиновой кислоты в Т-клетку ex vivo, причем указанная конструкция нуклеиновой кислоты включает: а) нуклеиновую кислоту, кодирующую гидовую РНК, причем указанная гидовая РНК комплементарна матричной РНК цитокина; b) нуклеиновую кислоту, кодирующую нуклеазу Cas, и с) нуклеиновую кислоту, кодирующую указанный химерный антигенный рецептор.
27. Способ по п.26, в котором указанные полипептиды-цитокины содержат полипептиды гранулоцитарно-макрофагального колониестимулирующего фактора (GM-CSF) и/или полипептиды интерлейкина 6 (IL-6).
28. Способ по п.27, в котором указанные полипептиды-цитокины представляют собой полипептиды GM-CSF, и причем указанная гидовая РНК содержит последовательность нуклеиновой кислоты, приведенную в SEQID NO: 1.
29. Способ по любому из пп. 26-28, в котором указанная нуклеаза Cas представляет собой нуклеазу Cas9.
30. Способ по любому из пп. 26-29, в котором указанная нуклеиновая кислота, кодирующая указанный химерный антигенный рецептор, включает последовательность нуклеиновой кислоты, приведенную в SEQ ID NO: 2.
31. Способ по любому из пп. 26-30, в котором указанная конструкция нуклеиновой кислоты представляет собой вирусный вектор.
32. Способ по п.31, в котором указанный вирусный вектор представляет собой лентивирусный вектор.
33. Способ по любому из пп. 26-32, в котором указанный химерный антигенный рецептор нацелен на ассоциированный с опухолью антиген.
34. Способ по п.32, в котором указанный ассоциированный с опухолью антиген представляет собой CD19.
35. Способ по любому из пп. 26-33, в котором указанная стадия введения включает трансдукцию.
36. Способ получения Т-клетки с химерным антигенным рецептором, имеющей пониженный уровень полипептидов-цитокинов, причем указанный способ включает:
введение комплекса в Т-клетку ex vivo, причем указанный комплекс включает: а) гидовую РНК, причем указанная гидовая РНК комплементарна матричной РНК цитокина; и b) нуклеазу Cas; и
введение в указанную Т-клетку ex vivo нуклеиновой кислоты, кодирующей указанный химерный антигенный рецептор.
37. Способ по п.36, в котором указанные полипептиды-цитокины включают полипептиды гранулоцитарно-макрофагального колониестимулирующего фактора (GM-CSF) и/или полипептиды интерлейкина 6 (IL-6).
38. Способ по п.37, в котором указанные полипептиды-цитокины представляют собой полипептиды GM-CSF, причем указанная гидовая РНК содержит последовательность нуклеиновой кислоты, приведенную в SEQ ID NO: 1.
39. Способ по любому из пп. 36-38, в котором указанная нуклеаза Cas представляет собой нуклеазу Cas9.
40. Способ по любому из пп. 36-39, в котором указанная нуклеиновая кислота, кодирующая указанный химерный антигенный рецептор, включает последовательность нуклеиновой кислоты, приведенную в SEQ ID NO: 2.
41. Способ по любому из пп. 36-40, в котором указанный комплекс представляет собой рибонуклеопротеин.
42. Способ по любому из пп. 36-41, в котором указанный химерный антигенный рецептор нацелен на ассоциированный с опухолью антиген.
43. Способ по п.42, в котором указанный ассоциированный с опухолью антиген представляет собой CD19.
44. Способ по любому из пп. 36-43, в котором указанные стадии введения включают электропорацию.
45. Способ лечения страдающего раком млекопитающего, включающий введение указанному млекопитающему Т-клеток с химерным антигенным рецептором, имеющих пониженный уровень полипептидов-цитокинов.
46. Способ по п.45, в котором указанные полипептиды-цитокины включают полипептиды гранулоцитарно-макрофагального колониестимулирующего фактора (GM-CSF) и/или полипептиды интерлейкина 6 (IL-6).
47. Способ по п.46, в котором указанные полипептиды цитокинов представляют собой полипептиды GM-CSF, и причем указанная гидовая РНК содержит последовательность нуклеиновой кислоты, приведенную в SEQ ID NO: 1.
48. Способ по любому из пп. 45-47, в котором указанное млекопитающее является человеком.
49. Способ по любому из пп. 45-48, в котором указанный рак представляет собой лимфому.
50. Способ по п.49, в котором указанная лимфома представляет собой диффузную крупноклеточную В-клеточную лимфому.
51. Способ по любому из пп. 45-48, в котором указанный рак представляет собой лейкоз.
52. Способ по п.51, в котором указанный лейкоз представляет собой острый лимфобластный лейкоз.
53. Способ по любому из пп. 45-52, в котором указанный химерный антигенный рецептор нацелен на ассоциированный с опухолью антиген.
54. Способ по п.53, в котором указанный ассоциированный с опухолью антиген представляет собой CD19.
55. Способ улучшения Т-клеточных эффекторных функций Т-клетки с химерным антигенным рецептором, включающий:
введение конструкции нуклеиновой кислоты в Т-клетку ex vivo, причем указанная конструкция нуклеиновой кислоты включает: а) нуклеиновую кислоту, кодирующую гидовую РНК, причем указанная гидовая РНК комплементарна матричной РНК GM-CSF; b) нуклеиновую кислоту, кодирующую нуклеазу Cas, и с) нуклеиновую кислоту, кодирующую указанный химерный антигенный рецептор.
56. Способ улучшения Т-клеточных эффекторных функций Т-клетки с химерным антигенным рецептором, включающий:
введение комплекса в Т-клетку ex vivo, причем указанный комплекс включает: а) гидовую РНК, причем указанная гидовая РНК комплементарна матричной РНК GM-CSF; и b) нуклеазу Cas; и
введение в указанную Т-клетку ex vivo нуклеиновой кислоты, кодирующей указанный химерный антигенный рецептор.