Использование мультивоксельной магнитно-резонансной спектроскопии при обследовании больных с когнитивными расстройствами

УДК 616-073,616.83

Вестник СПбГУ. Сер. 4. Т. 3 (61). 2016. Вып. 1

Ю. Г. Хоменко, А. А. Богдан, Г. В. Катаева, Е. М. Чернышёва

ИСПОЛЬЗОВАНИЕ МУЛЬТИВОКСЕЛЬНОЙ МАГНИТНО-РЕЗОНАНСНОЙ СПЕКТРОСКОПИИ ПРИ ОБСЛЕДОВАНИИ БОЛЬНЫХ С КОГНИТИВНЫМИ РАССТРОЙСТВАМИ*

Институт мозга человека им. Н. П. Бехтеревой РАН, Российская Федерация, 197376, Санкт-Петербург, ул. Академика Павлова, 9

Проведена мультивоксельная магнитно-резонансная спектроскопия (МРС) в суправен-трикулярном пространстве и в области базальных ганглиев у 39 больных с деменцией и умеренным когнитивным расстройством (УКР). Оценивались соотношения: NAA/Cr, Cho/Cr, NAA/Cho (NAA — N-ацетиласпартат, Cr — креатин, Cho — холин). По сравнению с УКР, у больных деменцией наблюдалось статистически значимое снижение NAA/Cr и Cho/Cr в белом веществе суправентрикулярного пространства обоих полушарий и в таламусе. Сопоставление МРС с клиническими данными обнаружило снижение NAA/Cr, NAA/Cho и Cho/Cr в белом и сером веществе билатерально при наличии ряда неврологических симптомов. Выявлены статистически значимые положительные корреляции соотношений NAA/Cr и Cho/Cr в белом веществе преимущественно правого полушария с показателями теста MMSE, теста рисования часов, батареи лобных тестов, теста повторения 5 слов. Соотношения основных метаболитов в сером веществе не коррелировали с данными когнитивных тестов. Полученные данные о снижении NAA в суправентрикулярной области у больных деменцией соответствуют представлениям об NAA как маркере нейрональной целостности. Снижение NAA/Cr при деменции и корреляции с результатами когнитивных тестов свидетельствуют о том, что отношение NAA/Cr может иметь диагностическое значение, отражая степень тяжести когнитивных нарушений. Изменения концентрации холина у больных деменцией и его снижение при ухудшении когнитивных показателей могут быть связаны с компенсаторным механизмом синтеза ацетилхолина из продуктов распада мембранных фосфолипидов. Однако подтверждение этого предположения и выяснение диагностической роли отношения Cho/Cr требует дополнительных исследований. Библиогр. 12 назв. Ил. 2. Табл. 3.

Ключевые слова: мультивоксельная магнитно-резонансная спектроскопия, деменция, когнитивные нарушения, N-ацетиласпартат, холин.

Iu. G. Khomenko, A. A. Bogdan, G. V. Kataeva, E. M. Chernysheva

MULTIVOXEL MAGNETIC RESONANCE SPECTROSCOPY IN THE EXAMINATION OF PATIENTS WITH COGNITIVE DISORDERS

N. P. Bechtereva Institute of the Human Brain of the Russian Academy of Sciences

Multivoxel magnetic resonance spectroscopy (MRS) in supraventricular areas in bazal ganglia in 39 patients with dementia and mild cognitive impairment (MCI) was performed. NAA/Cr, Cho/Cr, NAA/Cho (NAA — N-acethylaspartate, Cr — creatine, Cho — choline) ratios were estimated. In comparison with MCI, patients with dementia showed a statistically significant decrease in NAA/Cr and Cho/Cr in supraventricular white matter bilaterally and thalamus.

* По материалам 12-й Зимней молодёжной школы-конференции «Магнитный резонанс и его приложения. Spinus-2015», 15—21 ноября 2015 г., СПбГУ, Санкт-Петербург, Россия, URL: http://nmr.phys.spbu.ru/spinus.

Школа-конференция проведена при финансовой поддержке Российского фонда фундаментальных исследований (проект № 15-32-10480) и OOO «Брукер».

Работа выполнялась в рамках госзадания Института мозга человека им. Н. П. Бехтеревой РАН по поисковым научным исследованиям на 2015 г.

© Санкт-Петербургский государственный университет, 2016

Comparison of MRS to clinical data found decrease in NAA/Cr, NAA/Cho and Cho/Cr in white and gray matter in both hemispheres in the presence of a number of neurological symptoms. Statistically significant positive correlations of NAA/Cr and Cho/Cr ratios in white matter of right hemisphere with the MMSE test scores, clock drawing test, frontal assessment battery, the test of the 5 words repetition were revealed. Ratios of the basic metabolites in gray substance did not correlate with the results of cognitive tests. The obtained data on NAA concentration decrease in supraventricular area in patients with dementia correspond to the assumption of NAA as a marker of neuronal integrity. Decrease in NAA/Cr in dementia and correlation with the results of cognitive tests testify that NAA/Cr ratio can have the diagnostic value, reflecting severity of cognitive impairment. Changes of choline concentration in patients with dementia and its connection with cognitive tests scores can be connected with the compensatory mechanism of acetylcholine synthesis from products of membrane phospholipids disintegration. However, confirmation of this assumption and clarification of a diagnostic role of the Cho/Cr ratio demands additional researches. Refs 12. Figs 2. Tables 3.

Keywords: multivoxel magnetic resonance spectroscopy, dementia, cognitive disorders, N-ace-thylaspartate, choline.

Введение. Магнитно-резонансная спектроскопия (МРС) даёт исследователю уникальную возможность получения данных о содержании метаболитов в мозговой ткани in vivo, что в сочетании с изучением клинических особенностей течения болезни представляет большой интерес в плане раскрытия патогенетических механизмов развития патологического процесса при нейродегенеративных заболеваниях.

При рутинной протонной МРС определяют, как правило, содержание N-ацетилас-партата (NAA), холина (Cho) и креатина (Cr), при этом оценивают не абсолютные их концентрации, а отношения NAA и Cho к креатину.

Самый большой пик после пика воды в ЯМР-спектре тканей головного мозга соответствует N-ацетиласпартату — одной из наиболее распространённых аминокислот в ЦНС. Его содержание считается маркером нейрональной целостности, так как он содержится в телах нейронов, аксонах и дендритах. При заболеваниях, сопровождающихся разрушением нервной ткани (инсульты, опухоли, рассеянный склероз и др.), наблюдается его снижение. Это может происходить как при необратимом поражении нервной ткани, так и при преходящих функциональных расстройствах, которые могут затем компенсироваться под влиянием лечения или проходить самостоятельно [1, 2].

Пик холина (Cho) состоит из пиков триметиламиновых групп фосфохолина и гли-церофосфохолина и небольшого количества свободного холина. Соединения являются важными промежуточными продуктами липидного метаболизма, они связаны с распадом и синтезом мембран, и содержание их повышено при заболеваниях, при которых наблюдается ускоренное обновление мембран. Усиленный рост клетки может сопровождаться увеличением количества промежуточных продуктов липидного метаболизма. Большое количество их обнаружено также в глиальных клетках. Повышение холина характерно для активной демиелинизации, нейровоспаления и пр. — процессов, при которых происходит распад мембран. Повышение пика холина в спектре ЯМР является характерным для многих типов опухолей. Низкий уровень холина обнаружен при печёночных энцефалопатиях. Существует вариабельность содержания холина в головном мозге: в белом веществе его содержится больше, чем в сером.

Комбинированный пик креатина и фосфокреатина часто используется в качестве реперного сигнала, так как его концентрация в головном мозге достаточно постоянна. Креатин участвует в энергетическом обмене в мышечных и нервных клетках. Фосфо-креатин, вероятно, играет роль энергетического буфера. Обнаружена достаточно большая вариабельность содержания креатина: в белом веществе значительно меньше, чем в сером [1].

Согласно литературным данным, для деменции характерно снижение отношения NAA/Cr в височной и задней поясной извилине, медиальной затылочной коре, гиппо-кампах и др. [2]. В процессе развития заболевания изменения NAA становятся более распространёнными и обнаруживаются в теменных, височных и лобных долях [3]. Снижение NAA/Cr является неспецифическим и может определяться при разных типах деменции [4].

Представления о значении холина при деменциях более противоречивы. Ряд исследований продемонстрировали повышенный уровень холина при болезни Альцгеймера [4, 5]. В других работах не обнаружено изменений уровня холина по сравнению с контрольной группой [6]. Сообщается также и о снижении Cho/H^O в медиальной височной коре при болезни Альцгеймера [7].

Цель представляемой работы — проанализировать результаты МРС у больных, страдающих когнитивными нарушениями: деменцией и умеренным когнитивным расстройством (УКР), сопоставив их с результатами нейропсихологического обследования и неврологическими симптомами.

Материалы и методы. Проведено стандартное неврологическое и нейропсихо-логическое обследование (тест MMSE (Mini Mental State Examination), батарея лобных тестов (БЛТ), тест рисования часов, тест повторения 5 слов для оценки кратковременной памяти) 39 больных (21 — деменцией, 18 — УКР). Мультивоксельная МРС в суправентрикулярной области головного мозга и на уровне базальных ганглиев осуществлялась по программе 2D-PRESS (2D-Point Resolved Spectroscopy) H-МРС (TE/TR = 144/2000 мс, размер воксела 10 х 10 х 15 мм). Для подавления сигнала от костей черепа были использованы 10 блоков насыщения (по встроенной методике регионарного насыщения), исследование проводилось с использованием автоматического шиммирования PencilBeam-auto (PB-auto) и подавлением воды. Для оценки и экспорта полученных спектроскопических данных использован предустановленный программный пакет SpectroView. Оценивались соотношения: NAA/Cr, Cho/Cr, NAA/Cho.

Область спектроскопического исследования суправентрикулярных пространств составила 8 х 9 вокселов (в объёме 80 х 90 х 15 мм соответственно размерам воксела) и включала белое и серое вещество медиальной коры больших полушарий (рис. 1).

Для однородности результатов в каждой области интереса вокселы, попадающие на границу раздела тканей, не учитывались. При анализе данных спектроскопии учиты-

Рис. 1. Анатомическое расположение вокселов 2D-мультивоксельной спектроскопии в суправентрикулярных пространствах

валось анатомическое расположение воксела: область исследования разбивалась на 9 областей интереса, 6 из которых включали белое вещество, по три области в каждом полушарии, и 3 области включали медиальную кору суправентрикулярных пространств больших полушарий (рис. 1, б). Сравнительная оценка соотношений метаболитов проводилась отдельно для каждой области интереса.

Область исследования мультивоксельной МРС в срезе на уровне базальных ганглиев (рис. 2) составляла 10 х 10 вокселов (в объёме 100 х 100 х 15 мм соответственно размерам воксела) и включала базальные ганглии, а также частично островковую и зрительную кору. Соотношения метаболитов определялись в хвостатом ядре, скорлупе, таламусе, зрительной и островковой коре.

Рис. 2. Анатомическое расположение вокселов на уровне базальных ганглиев

Статистическая обработка проводилась с помощью программы Statistica for Windows 11.0.

Результаты и обсуждение. Были выявлены статистически значимые различия соотношения NAA/Cr и Cho/Cr в белом веществе правого (ПП) и левого (ЛП) полушарий в группах больных УКР и деменцией (табл. 1).

Таблица 1

Различия соотношений основных метаболитов (^ЛЛ, Сг и СЬо) по данным МРС в группах больных деменцией и УКР

Анатомо-функциональная Значения отношений метаболитов

зона в группах больных P

головного мозга УКР Деменция

(область) * Среднее Станд. откл. Среднее Станд. откл.

NAA/Cr

Белое вещество ЛП (4) 1,92 0,15 1,66 0,15 р < 0,001

Белое вещество ЛП (5) 2,08 0,14 1,83 0,20 р < 0,01

Белое вещество ПП (2) 1,98 0,17 1,80 0,15 р < 0,01

Белое вещество ПП (3) 1,96 0,19 1,78 0,18 р < 0,05

Таламус ПП 1,69 0,13 1,47 0,18 р < 0,05

Cho/Cr

Белое вещество ПП (3) 0,91 0,10 0,78 0,12 р < 0,01

Таламус ПП 0,95 0,10 0,80 0,16 р < 0,05

* Здесь и далее в таблицах в скобках указан номер области интереса согласно рис. 1; ЛП — левое полушарие, ПП — правое полушарие.

Сопоставление данных МРС с клиническими данными обнаружило статистически значимые различия NAA/Cr, NAA/Cho и Cho/Cr в белом и сером веществе правого и левого полушарий при наличии ряда неврологических симптомов (табл. 2).

Таблица 2

Изменения отношений основных метаболитов по данным МРС при наличии неврологических симптомов

Симптом Данные MPC

Белое вещество Серое вещество

Нарушение подбора слов | NAA/Cr, Cho/Cr

Нарушение письма | Cho/Cr (3) -

Нарушение счёта | Cho/Cr (2, 3) -

Нарушение навыков самообслуживания | NAA/Cr

Амнестическая афазия | NAA/Cr

Тревога Î Cho/Cr (6) -

Головные боли | NAA/Cho

Дезориентация в месте | NAA/Cr (4), Cho/Cr (2, 4, 5) -

Дезориентация во времени | NAA/Cr

Брадипсихия | NAA/Cr (4), Cho/Cr (2, 4) -

Снижение инициативы | NAA/Cr

Как видно из табл. 1, соотношение NAA/Cr было выше в ряде областей ЛП и ПП на суправентрикулярном уровне и в таламусе в группе УКР по сравнению с группой больных деменцией, что соответствует представлениям об NAA как маркере нейрональ-ной целостности [1] и совпадает с литературными данными о его содержании в других областях мозга при деменции и УКР [2-4]. ^ижение NAA при ряде неврологических симптомов также вписывается в представления о его роли в ЦНС.

Что касается отношения Cho/Cr, то литературные данные о нём более противоречивые: разные исследователи обнаруживали и снижение, и повышение его концентрации при деменции [1, 2].

Холин в головном мозге содержится в фосфолипидах. Пик холина включает цито-плазматический глицерофосфохолин и продукты распада фосфатидилхолина [8]. Таким образом, повышение пика холина может быть связано с ускоренным метаболизмом в мембранах. Предполагается, что распад фосфолипидов мембран позволяет нервной ткани при болезни Альцгеймера синтезировать холин для компенсации сниженной концентрации ацетилхолина [9].

Согласно катамнестическим исследованиям, отношение Cho/Cr повышается при ам-нестическом УКР в тех случаях, если оно прогрессирует в болезнь Альцгеймера, однако уровень его снижается, если когнитивные процессы остаются стабильными [10]. Применение при лечении селективных агонистов холина (М-холиномиметиков) приводит к значительному снижению соотношения Cho/Cr, что возможно связано с редукцией компенсаторных механизмов, связанных с продукцией ацетилхолина из продуктов распада мембранных фосфолипидов [11]. Однако наблюдаемым нами больным исследование методом МРС проводилось до начала лекарственной терапии. Таким образом, изменения содержания холина при деменции требуют более подробного изучения.

При сопоставлении соотношений основных метаболитов (табл. 3) с показателями психологических тестов были получены следующие результаты.

Соотношения метаболитов были выявлены статистически значимые положительные корреляции соотношений NAA/Cr и Cho/Cr в белом веществе (преимущественно правого полушария) с баллами по тесту MMSE, тесту рисования часов, батареи лобных тестов, тесту повторения 5 слов (при отсроченном воспроизведении 5 слов). Соотношения основных метаболитов в сером веществе не коррелировали с данными когнитивных тестов.

Таблица 3

Корреляции показателей когнитивных тестов с данными МРС

MMSE Тест «часы» БЛТ Тест «5 слов»

NAA/Cr (1) r = 0,5; p < 0,01 г = 0,45; p < 0,05 г = 0,41; р < 0,05 г = 0,63; р < 0,001

Cho/Cr (1) r = 0,4; p < 0,05 - г = 0,43; р < 0,05 -

NAA/Cr (2) r = 0,5; p < 0,01 г = 0,44; p < 0,05 - г = 0,58; р = 0,001

Cho/Cr (2) r = 0,4; p < 0,05 - г = 0,53; р < 0,01 -

NAA/Cr (3) r = 0,44; p < 0,05 г = 0,4; p < 0,05 - г = 0,4; р < 0,05

Cho/Cr (3) r = 0,52; p < 0,01 г = 0,45; p < 0,05 г = 0,59; р = 0,001 г = 0,4; р < 0,05

NAA/Cr (4) r = 0,6; p < 0,001 г = 0,54; p < 0,01 - г = 0,49; р < 0,01

Cho/Cr (4) - - - -

NAA/Cr (5) r = 0,5; p < 0,01 г = 0,5; p < 0,01 г = 0,45; р = 0,01 г = 0,58; р = 0,001

Cho/Cr (5) - - - -

NAA/Cr (6) - - - -

Cho/Cr (6) - - - -

В литературе также встречаются сообщения о том, что отношение NAA/Cr коррелирует с когнитивными тестами при деменциях. В одном из исследований NAA/Cr в медиальной височной доле, первичной моторной и сенсорной коре при болезни Альц-геймера коррелировал с результатами MMSE и когнитивной части Шкалы оценки болезни Альцгеймера (Alzheimer Disease Assessment Scale) [12]. Было также показано, что NAA/Cr коррелирует с результатами тестов вербальной памяти и общими когнитивными способностями [4].

Таким образом, полученные нами данные о корреляции NAA/Cr с лучшими когнитивными показателями не противоречат литературным данным. Однако положительные корреляции Cho/Cr с когнитивными тестами, как и более высокий показатель Cho/Cr при УКР по сравнению с деменцией, не так легко объяснимы. Можно предположить, что снижение концентрации холина у пациентов с худшими когнитивными показателями связано с истощением компенсаторных механизмов, связанных с продукцией ацетилхолина из продуктов распада мембранных фосфолипидов [9].

Заключение. Результаты, свидетельствующие о снижении содержания NAA у больных деменцией в белом и сером веществе суправентрикулярных областей, соответствуют представлениям об NAA как маркере нейрональной целостности и совпадают с литературными данными о содержании его в других областях мозга при деменции и УКР. ^ижение NAA при ряде неврологических симптомов и корреляции с когнитивными показателями также вписываются в представления о его роли в ЦНС.

Более выраженное снижение NAA/Cr при деменции по сравнению с УКР и корреляции с результатами когнитивных тестов свидетельствуют о том, что отношение

NAA/Cr может иметь диагностическое значение, отражая степень тяжести когнитивных нарушений.

Изменения концентрации холина у больных деменцией и связь его снижения с ухудшением когнитивных показателей, возможно, могут быть следствием истощения при деменции компенсаторных механизмов, связанных с продукцией ацетилхолина из продуктов распада мембранных фосфолипидов. Однако подтверждение этого предположения и выяснение диагностической роли отношения Cho/Cr требует дополнительных исследований.

Литература

1. Barker P. B., BizziA., De Stefano N., Gullapalli R. P., LinD.M. Clinical MR spectroscopy: Techniques and applications. Cambridge: University Press, 2009.

2. Kantarci K., Jack C. R., XuY. C. Regional metabolic patterns in mild cognitive impairment and Alzheimer's disease: A 1H MRS study // Neurology. 2000. Vol. 55, N 2. P. 210-217.

3. Frederick B. B., SatlinA., Yurgelun-Todd D. A., RenshawP.F. In vivo proton magnetic resonance spectroscopy of Alzheimer's disease in the parietal and temporal lobes // Biol. Psychiatry. 1997. Vol. 42, N 2. P. 147-150.

4. Graff-Radford J., Kantarci K. Magnetic resonance spectroscopy in Alzheimer's disease // Neuropsychiatry Disease and Treatment. 2013. P. 687-696.

5. Kantarci K., Petersen R. C., Boeve B. F. 1H-MR spectroscopy in common dementias // Neurology. 2004. Vol. 63, N 8. P. 1393-1398.

6. Krishnan K. R., Charles H. C., Doraiswamy P. M. Randomized, placebo-controlled trial of the effects of donepezil on neuronal markers and hippocampal volumes in Alzheimer's disease // Am. J. Psychiatry.

2003. Vol. 160, N 11. P. 2003-2011.

7. ChantalS., Labelle M., Bouchard R. W., Braun C. M., BoulangerY. Correlation of regional proton magnetic resonance spectroscopic metabolic changes with cognitive deficits in mild Alzheimer disease // Arch. Neurol. 2002. Vol. 59, N 6. P. 955-962.

8. Klein J. Membrane breakdown in acute and chronic neurodegeneration: focus on choline-containing phospholipids //J. Neural. Transm. 2000. Vol. 107, N 8-9. P. 1027-1063.

9. Wurtman R. J., Marie J. C. "Autocannibalism" of choline-containing membrane phospholipids in the pathogenesis of Alzheimer's disease // Neurochem. Int. 1985. Vol. 7. P. 369-372.

10. KantarciK., WeigandS.D. Petersen R. C. Longitudinal 1H MRS changes in mild cognitive impairment and Alzheimer's disease // Neurobiol. Aging. 2007. Vol. 28, N 9. P. 1330-1339.

11. SatlinA., BodickN., OffenW. W., RenshawP.F. Brain proton magnetic resonance spectroscopy (1H-MRS) in Alzheimer's disease: Changes after treatment with xanomeline, an M1 selective cholinergic agonist // Am. J. Psychiatry. 1997. Vol. 154, N 10. P. 1459-1461.

12. JessenF., Block W., TraberF. Proton MR spectroscopy detects a relative decrease of N-acetylaspar-tate in the medial temporal lobe of patients with AD // Neurology. 2000. Vol. 55, N 5. P. 684-688.

References

1. Barker P. B., Bizzi A., De Stefano N., Gullapalli R. P., Lin D. M. Clinical MR spectroscopy: Techniques and applications. Cambridge, University Press, 2009.

2. Kantarci K., Jack C. R., Xu Y. C. Regional metabolic patterns in mild cognitive impairment and Alzheimer's disease: A 1H MRS study. Neurology, 2000, vol. 55, no 2, pp. 210-217.

3. Frederick B. B., Satlin A., Yurgelun-Todd D.A., RenshawP.F. In vivo proton magnetic resonance spectroscopy of Alzheimer's disease in the parietal and temporal lobes. Biol. Psychiatry, 1997. Vol. 42, no 2, pp. 147-150.

4. Graff-Radford J., Kantarci K. Magnetic resonance spectroscopy in Alzheimer's disease. Neuropsychi-atric Disease and Treatment, 2013, pp. 687-696.

5. Kantarci K., Petersen R. C., Boeve B. F. 1H-MR spectroscopy in common dementias. Neurology,

2004, vol. 63, no 8, pp. 1393-1398.

6. Krishnan K.R., Charles H.C., Doraiswamy P.M. Randomized, placebo-controlled trial of the effects of donepezil on neuronal markers and hippocampal volumes in Alzheimer's disease. Am. J. Psychiatry, 2003, vol. 160, no 11, pp. 2003-2011.

7. Chantai S., Labelle M., Bouchard R. W., Braun C. M., Boulanger Y. Correlation of regional proton magnetic resonance spectroscopic metabolic changes with cognitive deficits in mild Alzheimer disease. Arch. Neurol., 2002, vol. 59, no 6, pp. 955-962.

8. Klein J. Membrane breakdown in acute and chronic neurodegeneration: focus on choline-containing phospholipids. J. Neural. Transm., 2000, vol. 107, no 8-9, pp. 1027-1063.

9. Wurtman R. J., Marie J. C. "Autocannibalism" of choline-containing membrane phospholipids in the pathogenesis of Alzheimer's disease. Neurochem. Int., 1985, vol. 7, pp. 369-372.

10. Kantarci K., Weigand S.D. Petersen R. C. Longitudinal 1H MRS changes in mild cognitive impairment and Alzheimer's disease. Neurobiol. Aging, 2007, vol. 28, no 9, pp. 1330-1339.

11. Satlin A., Bodick N., Offen W. W., RenshawP. F. Brain proton magnetic resonance spectroscopy (1H-MRS) in Alzheimer's disease: Changes after treatment with xanomeline, an M1 selective cholinergic agonist. Am.. J. Psychiatry, 1997, vol. 154, no 10, pp. 1459-1461.

12. Jessen F., Block W., Traber F. Proton MR spectroscopy detects a relative decrease of N-acetylas-partate in the medial temporal lobe of patients with AD. Neurology, 2000, vol. 55, no 5, pp. 684-688.

Статья поступила в редакцию 30 ноября 2015 г.

Контактная информация

Хоменко Юлия Геннадьевна — кандидат психологических наук; e-mail: julkhom@rambler.ru Богдан Андрей Александрович — старший лаборант; e-mail: andrey.a.bogdan@gmail.com Катаева Галина Вадимовна — кандидат биологических наук; e-mail: kataevagalina@mail.ru Чернышёва Елена Михайловна — кандидат медицинских наук.

Khomenko Iuliia Gennadievna — Ph.D.; e-mail: julkhom@rambler.ru

Bogdan Andrey Aleksandrovich — research technician; e-mail: andrey.a.bogdan@gmail.com Kataeva Galina Vadimovna — Ph. D.; e-mail: kataevagalina@mail.ru Chernysheva Elena Mikhailovna — Ph. D.