Способ определения заселенности почв грибами родов Pythium, Fusarium и Helminthosporium с использованием модифицированного метода флотации
METHOD OF DETERMINING SOIL POPULATION WITH FUNGI OF GENERA PYTHIUM, FUSARIUM AND HELMINTHOSPORIUM USING MODIFIED FLOTATION TECHNIQUE

Изобретение относится к области сельского хозяйства и может быть использовано для определения уровня заселенности почв грибами родов Pythium, возбудителей питиозной корневой гнили, Fusarium возбудителей фузариозной корневой тили и Helminthosporium возбудителей обыкновенной корневой гнили сельскохозяйственных культур. Это позволит заблаговременно планировать защитные мероприятия или отменить их.
Известен способ определения в почве конидий гриба Bipolaris sorokiniana - возбудителя корневых гнилей с применением метода флотации. Способ определения предусматривает отбор проб почвы, извлечение конидий гриба из почвы путем приготовления из образца почвы водно-масляной эмульсии, его встряхивания с последующим микроскопированием капель масла из поверхностного слоя эмульсии с последующим подсчетом конидий (Под ред. СОКОЛОВА М.С., ЧУЛКИНОЙ В.А., Интегрированная защита растений: Фитосанитарные системы и технологии, М, Колос, 2009, с. 580-583). Основным недостатком данного способа является то, что с его помощью невозможно точно определить заселенность почв грибами родов Pythium, Fusarium и Helminthosporium.
Техническая задача изобретения - обеспечение точности определения заселенности почв грибами Pythium, Fusarium и Helminthosporium. Техническим результатом изобретения является повышение точности определения спор данных грибов в почве. Для достижения данной технической задачи были поставлены специальные опыты, выведена формула для расчета количества ооспор, конидий и склероциев родов Pythium, Fusarium и Helminthosporium в образце почвы.
Поставленная задача решается описываемым способом определения заселенности почв грибами родов Pythium, Fusarium и Helminthosporium, включающим отбор проб почвы, добавление дистиллированной воды, перемешивание, добавление к пробам вазелинового масла, перемешивание, добавление 0,1% раствора пирофосфата калия, встряхивание, отстаивание до четкого расслоения жидкостей, отбор пробы из масляной фазы суспензии и нанесение ее в виде капель на предметное стекло с последующим микроскопированием и подсчетом количества ооспор, конидий и склероциев грибов родов Pythium, Fusarium и Helminthosporium и определением их численности в 1 г воздушно-сухой почвы по формуле:
где: N - количество ооспор, конидий и склероциев в 1 г воздушно-сухой почвы (шт.);
cp
n - среднее количество ооспор, конидий и склероциев в одной капле (шт.);
эм
V - общий объем эмульсии вазелинового масла (мл);
к
V - объем одной капли (мл);
п
М - масса навески почвы (г).
4
2
7
Пример. Опыты проводили следующим образом: из отобранных и просеянных образцов почвы отвешивают навеску в 10 г, помещают ее в фарфоровую ступку, увлажняют 1 мл дистиллированной воды и затем тщательно перемешивают. После добавления 5 мл вазелинового масла содержимое ступки снова тщательно перемешивают. Затем почву переносят в пробирку 20×200 мм с притертой пробкой, приливают 29 мл 0,1% раствора пирофосфата калия (КРO) и интенсивно встряхивают вертикальными движениями руки в течение 5 мин. Встряхивание пробирок возможно проводить на электрической качалке в течение 15 минут (с частотой 120 колебаний в минуту). После встряхивания почвенную суспензию оставляют на 1,5-3 часа до четкого расслоения раствора пирофосфата калия и вазелинового масла. Затем из слоя масла отбирают пипеткой по 0,1 мл суспензии и наносят на два предметных стекла по три капли. Капли просматривают под микроскопом, подсчитывают количество ооспор, конидий и склероциев грибов pp. Pythium, Fusarium и Helminthosporium.
Для определения количества ооспор, конидий и склероциев в образце почвы вели подсчет по вышеприведенной формуле:
где: N - количество ооспор и склероциев в 1 г воздушно-сухой почвы (шт.);
cp
n - среднее количество ооспор, конидий и склероциев в одной капле (шт.);
эм
V - общий объем эмульсии (вазелинового масла, мл);
к
V - объем одной капли (мл);
п
М - масса навески почвы (г).
ср
1
2
3
1
2
3
Пример расчета. Сначала определяют n из нескольких значений (например, n, n, n). Для этого просматривают три капли под микроскопом и подсчитывают в каждой число ооспор, конидий и склероциев питиевых, фузариевых и гельминтоспориозных грибов. Например, получено: в первой капле, то есть, n=2 шт., во второй - n=0 шт., третьей - n=6 шт. Среднее количество ооспор, конидий и склероциев грибов pp. Pythium, Fusarium и Helminthosporium в одной капле будет равно:
ЭM
К
П
Общий объем эмульсии (V) в экспериментах составлял 5 мл, объем одной капли (V) - 0,025 мл, масса навески почвы (М) - 10 г. Подставляя данные величины в формулу (1) получаем:
В результате проведенных нами многолетних исследований была определена пороговая численность возбудителей питиозной, фузариозной и гельминтоспориозной корневых гнилей, результаты которых представлены в таблицах 1-3.
1. - Шкала классификации почв по их заселенности возбудителями питиозной корневой гнили
2. - Шкала классификации почв по их заселенности возбудителями фузариозной корневой и прикорневой гнили
3. - Шкала классификации почв по их заселенности возбудителями обыкновенной корневой гнили
Таким образом, модифицированным методом флотации определена заселенность почвы возбудителями питиозной, обыкновенной и фузариозной прикорневой и корневой гнили, выявлена их пороговая численность, рекомендованы способы расчета количества ооспор, конидий и склероциев в 1 г воздушно - сухой почвы.
Эффективность применения данного способа выражается в более точном определении заселенности почвы грибами родов Pythium, Fusarium и Helminthosporium по сравнению с традиционным методом флотации и использовании оценочной шкалы.
Список литературы
1. Чулкина В.А. и др. Агротехнический метод защиты растений. Учебное пособие. - М.: ИВЦ «МАРКЕТИНГ», Новосибирск. - 2000.
2. Чулкина В.А. и др. Интегрированная защита растений: фитосанитарные системы и технологии. - М.; Колос. - 2009.