СПОСОБЫ ПОЛУЧЕНИЯ ВОЛОСЯНЫХ МИКРОФОЛЛИКУЛОВ И DE NOVO СОСОЧКОВ И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ ДЛЯ IN VITRO ТЕСТОВ И IN VIVO ИМПЛАНТАЦИЙ

1. Способ получения волосяного микрофолликула млекопитающего, включающий этапы, на которых:
(a) обеспечивают, по меньшей мере, один de novo сосочек,
(b) обеспечивают, по меньшей мере, одну другую клеточную популяцию, выбранную из группы, включающей фибробласты, кератиноциты и/или меланоциты, и
(c) совместно культивируют de novo сосочек, по меньшей мере, с одной другой клеточной популяцией при условиях неприкрепленной культуры.
2. Способ по п.1, отличающийся тем, что, по меньшей мере, одна другая клеточная популяция является получаемой и/или полученной из волосяного фолликула млекопитающего, которая выбрана из группы, включающей фибробласты соединительнотканевой оболочки, кератиноциты и/или меланоциты.
3. Способ по п.1 или 2, отличающийся тем, что de novo сосочек этапа (а) покрывают внеклеточными матричными белками, предпочтительно коллагеном IV, фибронектином и/или ламинином.
4. Способ по одному из пп.1 или 2, отличающийся тем, что de novo сосочек получают по одному из способов любого одного из пп.6-10.
5. Волосяные микрофолликулы, полученные способом по одному из пп.1-4.
6. Способ получения de novo сосочков, применяемых в способе по одному из пп.1-4, включающий этапы, на которых:
(a) обеспечивают, по меньшей мере, один кожный сосочек, по меньшей мере, из одного волосяного фолликула млекопитающего,
(b) выделяют фибробласты кожного волосяного сосочка из кожного сосочка механическим фиксированием указанного кожного сосочка на поверхности сосуда для клеточной культуры, посредством чего базальная пластинка перфорируется, чтобы позволить указанным кожным волосяным сосочкам выходить,
(c) наращивают выделенные кожные волосяные сосочки в монослойной культуре без коллагенового покрытия, где указанные кожные волосяные сосочки пересевают, по меньшей мере, один раз,
2
(d) сгущают нарощенные кожные волосяные сосочки в клеточные совокупности, которые проявляют размер и форму физиологического кожного сосочка, где указанные кожные волосяные сосочки дифференцируются в сосудах с отсутствием адгезии культуры при концентрации клеток на поверхности сосуда от 1000 до 100000 кожных волосяных сосочков /см, и
(e) покрывают de novo сосочки внеклеточными матричными белками, предпочтительно коллагеном IV, фибронектином и/или ламинином.
7. Способ получения de novo сосочков, применяемых в способе по одному из пп.1-4, включающий этапы, на которых:
(a) обеспечивают, по меньшей мере, один кожный сосочек из, по меньшей мере, одного волосяного фолликула млекопитающего,
(b) выделяют фибробласты кожного волосяного сосочка из кожного сосочка механическим фиксированием указанного кожного сосочка на поверхности сосуда для клеточной культуры, посредством чего базальная пластинка перфорируется, чтобы позволить указанным кожным волосяным сосочкам выходить,
(c) наращивают выделенные кожные волосяные сосочки в монослойной культуре без коллагенового покрытия, где указанные кожные волосяные сосочки пересевают, по меньшей мере, один раз,
2
(d) сгущают нарощенные кожные волосяные сосочки в клеточные совокупности, которые проявляют размер и форму физиологического кожного сосочка, где указанные кожные волосяные сосочки дифференцируются в сосудах с отсутствием адгезии культуры при концентрации клеток на поверхности сосуда от 1000 до 100000 кожных волосяных сосочков /см, и где нарощенные кожные волосяные сосочки сгущаются в течение, по меньшей мере, 48 ч.
8. Способ по п.7, отличающийся тем, что нарощенные кожные волосяные сосочки сгущают в течение 2-21 или 3-15 дней.
9. Способ по п.7 или 8, отличающийся тем, что он включает дополнительный этап, на котором:
(e) покрывают de novo сосочки внеклеточными матричными белками, предпочтительно коллагеном IV, фибронектином и/или ламинином.
10. Способ по п.7 или 8, отличающийся тем, что на этапе (d) сгущают неиндуктивные кожные волосяные сосочки.
11. Способ по п.9, отличающийся тем, что на этапе (d) сгущают неиндуктивные кожные волосяные сосочки.
12. Способ по п.6, отличающийся тем, что на этапе (d) сгущают неиндуктивные кожные волосяные сосочки.
13. De novo сосочки, полученные способом по одному из пп.6-12.
14. Кожный эквивалент, включающий волосяные микрофолликулы по п.5 или de novo сосочки по п.13.
15. Имплантат, включающий как активный ингредиент волосяные микрофолликулы по п.5 и/или de novo сосочки по п.13, факультативно вместе с фармацевтически допустимыми адъювантами.
16. Трансплантат, включающий как активный ингредиент эффективное количество кожного эквивалента по п.14, факультативно вместе с фармацевтически допустимыми адъювантами.
17. Способ лечения состояние снижения количества волос, отличающийся тем, что волосяные микрофолликулы по п.5, de novo сосочки по п.13 и/или кожные эквиваленты по п.14 включены в кожу млекопитающего, нуждающегося в таком лечении.
18. Способ высокопроизводительного скрининга веществ, которые модулируют свойства волос, включающий этапы, на которых:
- обеспечивают образец de novo сосочков по п.13, волосяных микрофолликулов по п.5 и/или кожного эквивалента по п.14,
- делят соответствующий образец на части,
- инкубируют, по меньшей мере, одну часть с веществами, подлежащими скринингу, и
- сравнивают параметры свойств волоса в части с другой частью, которая не инкубировалась с веществами.