ВЫДЕЛЕНИЕ И ОЧИСТКА АНТИТЕЛ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ АФФИННОЙ ХРОМАТОГРАФИИ НА ОСНОВЕ БЕЛКА А

1. Способ получения препарата антител с уменьшенным содержанием белков клеток-хозяев (БКХ) из смеси-образца, содержащей антитело и, по меньшей мере, один БКХ, причем указанный способ включает:
(а) снижение рН в указанной смеси-образце, в результате чего образуется первичный выделенный образец, причем указанное снижение рН составляет от примерно 3 до примерно 4;
(б) подведение рН указанного первичного выделенного образца до значений от примерно 6,0 до примерно 8, за которым следует приведение первичного выделенного образца в контакт со смолой для аффинной хроматографии и сбор образца после аффинной хроматографии;
(в) приведение указанного образца после аффинной хроматографии в контакт с ионообменной смолой и сбор образца после ионообмена;
(г) приведение указанного образца после ионообмена в контакт со смолой для хроматографии гидрофобных взаимодействий (ХГВ) и сбор образца после ХГВ, причем указанный образец после ХГВ содержит указанный препарат антитела с уменьшенным содержанием БКХ.
2. Способ по п.1, в котором указанное снижение рН выполняют смешиванием подходящей кислоты с указанной смесью-образцом, и в котором указанная подходящая кислота выбрана из группы, состоящей из лимонной кислоты, уксусной кислоты, каприловой кислоты и им подобных.
3. Способ по п.1, в котором указанной смолой для аффинной хроматографии является смола на основе белка А.
4. Способ по п.3, в котором указанной смолой на основе белка А является смола MabSelect™.
5. Способ по п.1, в котором указанной ионообменной смолой является либо анионообменная смола, либо катионообменная смола.
6. Способ по п.5, в котором указанной ионообменной смолой является катионообменная смола.
7. Способ по п.6, в котором указанная катионная смола выбрана из группы, состоящей из смолы Fractogel с карбоксиметильными (CM), сульфоэтильными (SE), сульфопропильными (SP), фосфатными (P) и сульфонатными (S) группами.
3
-
8. Способ по п.7, в котором указанной катионообменной смолой является Fractogel™ SO .
9. Способ по п.5, в котором указанной ионообменной смолой является анионообменная смола.
10. Способ по п.9, в котором указанная анионообменная смола выбрана из группы, состоящей из Q-сефарозы с диэтиламиноэтильными (DEAE), четвертичными аминоэтильными (QAE) и четвертичными амино (Q) группами.
11. Способ по п.10, в котором указанной анионообменной смолой является Q-сефароза.
12. Способ по п.1, в котором указанная стадия ионообмена включает первую ионообменную стадию и вторую ионообменную стадию.
13. Способ по п.1, в котором указанную ХГВ выполняют с использованием колонки, содержащей одну или более гидрофобных групп.
14. Способ по п.13, в котором указанные одна или более гидрофобных групп выбраны из группы, состоящей из алкильных, арильных групп и их комбинации.
3
15. Способ по п.14, в котором указанная колонка выбрана из группы, состоящей из фенил-сефарозы (такой как колонка Phenyl Sepharose™ 6 Fast Flow, колонка Phenyl Sepharose™ High Performance), колонки Octyl Sepharose™ High Performance, колонок Fractogel™ EMD Propyl, Fractogel™ EMD Phenyl, носителей Macro-Prep™ Methyl, Macro-Prep™ t-Butyl, колонки WP HI-Propyl (C)™ и колонок Toyopearl™ с эфирными, фенильными или бутильными заместителями.
16. Способ по п.15, в котором указанная колонка содержит фенил-сефарозу.
17. Способ по п.1, дополнительно включающий стадию фильтрации, где указанный образец ХГВ фильтруют для удаления вирусных частиц и для облегчения смены буфера.
18. Способ по п.1, в котором указанный препарат антител с уменьшенным содержанием БКХ содержит либо антитело к IL-12 или его антигенсвязывающий участок, либо антитело к TNFα или его антигенсвязывающий участок.
19. Способ по п.18, в котором указанным препаратом антитела с уменьшенным содержанием БКХ является антитело к IL-12 или его антигенсвязывающий участок.
20. Способ по п.18, в котором указанным препаратом антитела с уменьшенным содержанием БКХ является антитело к TNFα или его антигенсвязывающий участок.
21. Способ по п.19, в котором указанным антителом к IL-12 или его антигенсвязывающим участком является гуманизированное антитело, химерное антитело или мультивалентное антитело.
22. Способ по п.20, в котором указанным антителом к TNFα или его антигенсвязывающим участком является гуманизированное антитело, химерное антитело или мультивалентное антитело.
23. Способ по п.21, в котором указанным антителом к IL-12 или его антигенсвязывающим участком является гуманизированное антитело.
24. Способ по п.22, в котором указанным антителом к TNFα или его антигенсвязывающим участком является гуманизированное антитело.
25. Способ по п.1, в котором указанный препарат, по существу, свободен от БКХ.
26. Способ по п.1, дополнительно включающий глубинную фильтрацию.
27. Фармацевтическая композиция, содержащая препарат антитела с уменьшенным содержанием БКХ, полученный способом по п.1, и фармацевтически приемлемый носитель.
28. Фармацевтическая композиция по п.27, в которой указанным антителом является либо антитело к IL-12 или его антигенсвязывающий участок, либо антитело к TNFα или его антигенсвязывающий участок.
29. Фармацевтическая композиция по п.27, в которой указанная композиция, по существу, свободна от БКХ.