СПОСОБ И РЕАГЕНТ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ МЕТАБОЛИТОВ ВИТАМИНА D

1. Способ высвобождения витамина D in vitro, включающий в себя следующие этапы:
а) приведение в контакт содержащей связанный витамин D пробы с реагентом для его высвобождения, содержащим:
i) по меньшей мере, одно гидротропное вещество,
ii) по меньшей мере, одну соль переходного металла,
б) высвобождение связанного витамина D.
2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что исследуемая проба является биологической жидкостью, выбираемой из крови, сыворотки, плазмы или молока.
3. Способ по п. 1 или 2, отличающийся тем, что гидротропным веществом служит ароматическая кислота и/или сложный эфир, амид или ее соль, предпочтительно N,N-диметилбензамид, диметилбензойная кислота, 1,2-нафтохинонсульфоновая кислота, толуолсульфоновая кислота, сульфаниловая кислота, антрахинон-2-сульфоновая кислота, анилин-2-сульфоновая кислота и/или ее соль, особо предпочтительно пара-толуолсульфоновая кислота и/или сложный эфир, амид или ее соль.
4. Способ по п. 1, отличающийся тем, что солью переходного металла является соль металла из группы 5, 6, 7, 8, 10 и/или 12, предпочтительно соль ванадия, хрома, марганца, железа, кобальта, никеля и/или цинка, особо предпочтительно соль железа (III), наиболее предпочтительно хлорид железа (III) или цитрат железа (III).
5. Способ по п. 1, отличающийся тем, что высвобождающий реагент дополнительно содержит комплексообразователь, предпочтительно цитрат, этилендиаминтетрауксусную кислоту и/или ее соль.
6. Способ по п. 1, отличающийся тем, что высвобождающий реагент вводится в пробу в таком количестве, при котором задается конечная концентрация гидротропного вещества от 200 до 1000 мМ и/или конечная концентрация соли переходного металла от 5 до 100 мМ.
7. Способ определения витамина D in vitro, включающий в себя следующие этапы:
а) и б) способом по любому из пп. 1-6 для высвобождения связанного витамина D,
с) определение высвободившегося витамина D.
8. Способ по п. 1, отличающийся тем, что витамин D выбирается из группы, состоящей из 25-гироксивитамина D3, 25-гидроксивитамина D2, 1,25-дигидроксивитамина D3, 1,25-дигироксивитамина D3, витамина D3, витамина D2 и их смесей, при этом витамином D является предпочтительно 25-гидроксивитамин D3 и/или 25-гидроксивитамин D2.
9. Способ по п. 1, отличающийся тем, что определение витамина D проводится без отделения высвобождающего реагента.
10. Способ по п. 1, отличающийся тем, что определение концентрации витамина D на этапе в) проводится иммунологическим способом, предпочтительно конкурентным иммунологическим способом.
11. Реагент для высвобождения витамина D, содержащий:
а) по меньшей мере, одно гидротропное вещество,
б) по меньшей мере, одну соль переходного металла,
в) необязательно, по меньшей мере, один комплексообразователь,
при этом реагент содержит 5-30 вес. %, предпочтительно 10-25 вес. %, по меньшей мере, одного гидротропного вещества и 0,1-5 вес. %, предпочтительно 0,2-2 вес. %, по меньшей мере, одной соли переходного металла от общего веса реагента в водной жидкости.
12. Реагент по п. 11, отличающийся тем, что гидротропным веществом является ароматическая кислота и/или сложный эфир, амид или ее соль, предпочтительно N,N-диметилбензамид, диметилбензойная кислота, 1,2-нафтохинонсульфоновая кислота, пара-толуолсульфоновая кислота, сульфаниловая кислота, антрахинон-2-сульфоновая кислота, анилин-2-сульфоновая кислота и/или ее соль, особо предпочтительно толуолсульфоновая кислота и/или сложный эфир, амид или ее соль.
13. Реагент по п. 11, отличающийся тем, что солью переходного металла служит соль металла из группы 5, 6, 7, 8, 10 и/или 12, предпочтительно соль ванадия, хрома, марганца, железа, кобальта, никеля и/или цинка, особо предпочтительно соль железа (III), наиболее предпочтительно хлорид железа (III) или цитрат железа (III).
14. Реагент для определения витамина D, содержащий высвобождающий реагент по п. 12 или 13 и реагент для определения витамина D.
15. Применение реагента по любому из пп. 11-14 для высвобождения связанного витамина D, в частности, способом по любому из пп. 7-10.