Морфологические изменения слизистой оболочки полости рта крыс под влиянием эллаготанинов при действии патогенных факторов

вакуолярной дистрофии, которые несколько крупнее других. В то же время, показатель размера зоны ороговения (ЗРС) значительно снижался (на 37 %, р<0,001) по сравнению с ин-тактной группой (табл. 2).

Коллагеновые волокна в рыхлой волокнистой СТ несколько утолщены, образуют четко выраженную сеть, в ячейках которой расположены клеточные элементы. Кроме типичных клеток фибробластического ряда чаще, чем в интактной группе, встречались преимущество лимфоциты. Большинство клеток встречались рядом с кровеносными сосудами. Стенки кровеносных сосудов МЦР утолщены в основном за счет набухания присутствующих здесь клеток и волокон. В то же время, морфометрические показатели КСС мик-роциркуляторного русла СОЩ свидетельствуют о его незначительном увеличении, что может рассматриваться как тенденция: 3,3±0,39 усл.ед против 3,1±0,29 усл.ед в интактной группе (табл. 3). Просвет сосудов внешне выглядел суженным. Подобную картину имела и СТ подслизистой и прослойки СТ в мышечной оболочке.

Заключение. Суммируя вышеизложенное, следует констатировать неоднородность и расслоение структуры эпителия СОЩ под действием варфарина. Так, коэффициент эрозии эпите-

лиального пласта увеличивался в 6,4 раза по сравнению с интактной группой. Значительно снижалось количество митотически делящихся клеток. Показатели зоны клеточных слоев под действием варфарина возрастали за счет появления клеток более крупных размеров, в то время как размеры зоны ороговения существенно снижались. Рыхлая волокнистая СТ характеризовалась выраженной отечностью. Отмеченные особенности изменений в слизистой оболочке щеки крыс под влиянием варфарина свидетельствуют о наличии реактивных изменений в эпителии и в подлежащей соединительной ткани.

Список литературы

1. Сокольников А. А. Функциональная роль витамина К / А.Сокольников, В. Коденцова // Вопросы медицинской химии. - 1999. - Т. 45. - С. 453-461.

2. Шараев П. Н. Роль витамина К в обмене биополимеров соединительной ткани (обзор) / П. Н. Шараев // Вопросы медицинской химии. - 1983. - № 1. - С. 13-17.

3. Меркулов Г. А. Курс патологической техники / Меркулов Г.А. - Л.: - 1969. - 423 с.

4. Яцковский А. Н. Оценка активности клеточных ядер / А. Н. Яцковский. // Архив АГЭ. - 1987. - № 1. - С.76-79.

Поступила 02.11.15

УДК 577.15.016+616.31:599.323

С. А. Шнайдер, д. мед. н.

Государственное учреждение «Институт стоматологии Национальной Академии Медицинских Наук Украины»

МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ СЛИЗИСТОЙ ОБОЛОЧКИ ПОЛОСТИ РТА КРЫС ПОД ВЛИЯНИЕМ ЭЛЛАГОТАНИНОВ ПРИ ДЕЙСТВИИ ПАТОГЕННЫХ ФАКТОРОВ

В опытах на 21 белой крысе линии Вистар стадного разведения изучена коррекция альтаном структурно -функциональных нарушений в слизистой оболочке полости рта крыс в условиях сочетанного действия лекарственного ксенобиотика делагила и хронического эмоционально-болевого стресса при алиментарной недостаточности пищевых полифенолов. Альтан вызвал снижение количества эрозий, очагов деструкции, нормализацию структуры эпителиоцитов.

Ключевые слова: морфологические исследования, слизистая оболочка щеки, эллаготанины, патогенные факторы, белые крысы.

© Шнайдер С. А., 2015.

С. А. Шнайдер

Державна установа «1нститут стоматологи Надюнально! академп медичних наук Украни»

МОРФОЛОГ1ЧН1 ЗМ1НИ СЛИЗОВО1 ОБОЛОНКИ ПОРОЖНИНИ РОТА ЩУР1В П1Д ВПЛИВОМ ЕЛЛАГОТАН1Н1В В УМОВАХ Д11 ПАТОГЕНИХ ФАКТОР1В

В doanidax на 21 бтому щурi лти Bicmap стадного розведення вивчена корекщя альтаном структурно -функцiонaльних порушень в слизовт оболонцi порожнини рота щуpiв в умовах взаемного впливу лкарського ксенобютику делагшу та хротчного емоцшно-больового стресу при aлiменmapнiй неcmaчi харчових полiфено-лiв. Альтан викликав зниження ^bm^i ерозт, очaгiв деструкцш, ноpмaлiзaцiю структури епimелiоциmiв. Ключовi слова: моpфологiчнi до^дження, слизова оболонка щоки, елаготанти, патогент чинники, бш щури.

S. A. Shnaider

State Establishment "The Institute of Stomatology of the National academy of medical science of Ukraine

THE MORPHOLOGIC CHANGES IN ORAL MUCOUS MEMBRANE IN RATS AT THE AFFECTION WITH ELLAGOTANNINS UNDER THE INFLUENCE OF PATHOGENIC FACTORS

The aim of the investigation is the study of the correction with Altan of structural and functional disorders in oral mucous membrane of rats, caused by the affection with combined pathogenic factors at insufficient vegetative nutrition.

The materials and the methods. 21 white rats at the age of 1.5 months, divided by 7 ones, was taken for the experiment. The intact animals were kept to the full diet of vivarium. The 2nd group was kept to vegetative-free diet for a month, and in the second month underwent the affection with chloroquine and emotional painful stress. Chloroquine was introduced per os dosed at 5 mg/kg of weight 5 times a week. The chronic EPS was restored 3 times a week for 4 hours. In the 3rd group simultaneous to pathogen affection Altan was introduced per os dosed at 1 mg/kg during 30 days of the second month of the experiment. The experiment lasted for 60 days.

The conclusion. The preparation on the basis of ellagotannins caused the reduction of the injuries of oral cavity, reduced the number of erosions and the foci of destruction.

Key words: morphological studies, cheek mucous membrane, ellagotannins, pathogenic factors, white rats

Эпителий слизистой оболочки полости рта (СОПР) в значительной степени испытывает разнообразные воздействия повреждающих факторов. К ним относятся стрессы, токсиканты. Так, прооксидант делагил оказывает ингибирующее действие на содержание в цитозоле центрального компонента антиоксидантной системы - восстановленного глутатиона [1, 2].

Ранее было показано выраженное защитное действие препарата альтан на основе эллагота-нинов при язвенных и воспалительных заболеваниях желудочно-кишечного тракта [3, 4].

Целью настоящего исследования явилось изучение коррекции альтаном структурно-функциональных нарушений в слизистой оболочке полости рта крыс, вызванных воздействием сочетанных патогенных факторов - влияния делагила и хронического эмоционально-болевого стресса в условиях недостаточности растительной пищи.

Материалы и методы. В опыт были взяты 21 белая крыса 1,5-мес. возраста, которые были распределены по 7 крыс в 3-х группах. 1-ю группу составили интактные крысы, которые содер-

жались на полноценном стандартном рационе вивария. Во 2-й группе крысы 1 месяц содержались на диете, лишенной растительной пищи -бесполифенольном рационе (БПР) [5]. На втором месяце опыта крысы 2-й группы подвергались комбинированному действию делагила и эмоционально-болевому стрессу (ЭБС) в клетке конструкции Дезидерато [6]. Делагил (хлороквин фосфат производства «Алкалоида», Венгрия) ввводили per os в дозе 5 мг/кг массы тела крыс 5 раз в неделю. Хронический ЭБС воспроизводили 3 раза в неделю по 4 часа. В 3-й группе крысам на фоне вышеперечисленных патогенных воздействий вводили полифенольный комплекс «Альтан» (производства Борщаговского ХФЗ, Украина) per os в дозе 1 мг/кг в протяжении 30 дней второго месяца эксперимента. Продолжительность опыта составила 60 дней. По завершению эксперимента крыс умерщвляли путем тотального кровопускания из сердца под тиопента-ловым наркозом (40 мг/кг).

Слизистую оболочку щеки (СОЩ) иссекали, фиксировали в формалине и заключали в парафин. Срезы толщиной 6-8 мкм (тонкие использо-

вали для фотометрии) окрашивали гематоксилином и эозином, пикрофуксином по Ван Гизону и толуидиновым синим [7]. Подсчет митозов эпи-телиоцитов проводили в базальном и шиповатых слоях слизистой оболочки щеки при увеличении 15^40. Митотический индекс (МИ) вычисляли, исходя из общего количества учтенных клеток (3000) и выражали в процентах. Двуядерные эпителиоциты определяли в шиповатом слое на ограниченной площади среза при таком же увеличении. Степень эрозирования эпителиального пласта учитывали с помощью шкалы микрометра при увеличении 8^20. Коэффициент эрозии эпителия вычисляли по соотношению протяженности: эпителий поврежденный /эпителий исследованный в усл. ед., что позволяло судить о высоте эпителия в целом. На зарисовках кровеносных сосудов микроциркуляторного русла (МЦР), выполненных при увеличении 15x40, точечным методом определяли удельную площадь стенки кровеносного сосуда с образующими ее клетками и удельную площадь его просвета. По соотношению площадь стенки/площадь просвета рассчитывали коэффициент стеноза сосудов

(КСС).

Результаты опытов обрабатывали статистическим методом с определением t критериев достоверности по Стьюденту.

Результаты исследований. Слизистая оболочка щеки интактных крыс построена из многослойного плоского ороговевающего эпителия и собственной пластинки. В эпителии четко видны базальный и шиповатый слои клеток. Базалиоци-ты характеризуются выраженной способностью к митотическому делению. Шиповатый слой состоит из нескольких рядов крупных клеток различной формы с крупным ядром и светлой цитоплазмой. В поверхностных рядах клетки укрупнялись, в их цитоплазме обнаруживались гранулы кератогиалина. Собственная пластинка представлена волокнистой соединительной тканью, содержащей клетки и межклеточные структуры. Среди клеток часто встречались фибробласты, гистиоциты, а также единичные макрофаги, тучные клетки и полиморфноядерные лейкоциты. Ткань слизистой оболочки была обильно васку-ляризирована и без резкой границы переходила в подслизистую оболочку.

Таблица 1

Влияние альтана на морфометрические показатели эпителиоцитов лизистой оболочки щеки

крыс (М±т; р; р^

Группы животных Коэффициент эрозии эпителия

Интактная 1,50±0,22 15,0±1,1

Контрольная 0,35±0,060 0,70±0,17 25,0±1,4

(К) р=0,04 р=0,005

К+альтан 0,17±0,040 0,90±0,17 26,5±1,4

р1=0,05 р=0,08 р=0,003

Примечание : В табл. 1 и 2 показатель достоверности р рассчитан по сравнению с интактной группой; р! - по сравнению с контрольной.

При сочетанном влиянии прооксиданта де-лагила и хронического ЭБС в условиях алиментарной недостаточной полифенолов (БПР + дела-гил + ЭБС) эпителий слизистой оболочки щеки характеризовался значительной неоднородностью по высоте, истончаясь в одних участках и заметно утолщаясь в других. В то же время средняя высота эпительного пласта в целом существенно не отличаясь от данных интактной группы. Коэффициент эрозии эпителия оказался значительным: 0,35 усл.ед. ±0,06 (табл. 1).

Клетки базального слоя эпителия были дистрофически изменены, характеризовались набуханием ядер и цитоплазмы, а иногда и перицел-люлярными отеками. По структуре и количеству рядов шиповатый слой клеток был неоднородным. Клетки в нем набухшие, иногда содержали вакуоли. Гидропические изменения эпителия

проявлялись в виде крупных и гигантских эпите-лиоцитов. Наблюдались очаговые отслойки рогового слоя вследствие межклеточного отека и нарушения сцепленности клеток. В базальном слое различали фигуры митозов, в числе которых встречались атипичные. Митотический индекс уменьшился на 53 %. В то же время количество двуядерных клеток увеличивалось на 67 % (р=0,005; табл. 1).

Альтан, перорально вводимый в дозе 1 мг/кг массы, тела крыс на фоне патогенных факторов (БПР+делагил+ЭБС+альтан) вызвал менее выраженную, чем в контрольной группе неравномерность высоты эпителального пласта СОЖ. Многослойный эпителий слизистой щеки характеризовался большей однородностью по высоте, а степень структурных повреждений в нем существенно уменьшалась. Коэффициент эрозии эпи-

телия при введении альтана снижался в 2 раза (р1= 0,05; табл. 1).

Гидропические и деструктивные изменения нивелировались и приобретали мелкоочаговый характер. Очаги гидропии характеризовались наличием крупных и гигантских клеток-баллонов, первичных пузырьков, экстрацеллюлярных отеков, локальными отслоениями рогового слоя и расслоением его на отдельные пласты. Количество митотически делящихся клеток увеличивалось на 29 % по сравнению с контрольной группой, не достигая, однако, уровня интактной (табл. 1). Количество двуядерных клеток увеличивалось по сравнению с интактной группой на 77 % (р=0,003; табл. 1). Увеличение количества гипертрофированных эпителиоцитов (двуядер-ных клеток) указывает на весомый вклад компенсаторной гипертрофии клеток в репаратив-ную регенерацию многослойного эпителия СОПР.

Волокнистая соединительная ткань характеризовалась огрубением коллагеновых волокон, выраженной отечностью межклеточного матрик-са структур стенок кровеносных сосудов. Просвет кровеносных сосудов существенно уменьшился за счет набухания и округления эндотели-альных и адвентициальных клеток. Коэффициент стеноза сосудов (КСС) увеличился по сравнению с контрольной группой в 2,3 раза (табл. 2). Поперечнополосатые мышечные волокна и эндомизий мышечного слоя были дистрофически изменены и отечны.

Таблица 2

Влияние альтана на изменения просвета кровеносных сосудов микроциркуляторного русла оболочки щеки крыс. Коэффициент стеноза сосудов

Собственная пластинка слизистой с ее межклеточным веществом была значительно менее отечной, чем в контрольной группе. В перива-скулярных пространствах отеки были незначительными. КСС снижался на 39 % по сравнению с контрольной группой (р1<0,001; табл. 2) .

Эндотелиоциты и адвентициальные клетки кровеносных сосудов, а также поперечнополосатые мышечные волокна и окружающий их эндотелий мышц слизистой оболочки щеки приближались к нормальному строению, однако наблюдалось их некоторое набухание и отечность. Таким образом, позитивное действие альтана осуществлялось за счет нормализации структурно-функциональных свойств стенок капилляров.

Проведенные морфологические исследования показали, что препарат на основе эллагота-нинов в избранных экспериментальных условиях в целом вызывал уменьшение повреждений слизистой оболочки полости рта крыс. Позитивные сдвиги при действии альтана выразились снижением количества эрозий и очагов деструкции, нормализацией структуры клеток. Полученные результаты согласуются с данными литературы о действии альтана преимущественно путем стабилизации мембран [8] и гиперплазии внутриклеточных структур [4]. Гипертрофированные двуядерные клетки с повышенной функциональной активностью частично компенсируют утрату клеток эпителиального пласта и восполняют функциональные свойства эпителиоцитов при действии патогенных факторов [9].

Список литературы

1. Danpure C. The effect of chloroquine on the metabolism of [35S] cystine in normal and cystinotic skin fibroblasts / C. Danpure // Biochem. J. - 1981. - V.200. - P. 555-563.

2. Blay I. Functional reseptors for epidermal growth factor in an epithelial-cell line derived from the rat small intestine / I. Blay, K. D. Brown // Biochem. J. - 1985. - V.225. - P.85-94.

3. Камшський В. Я. Змши рiвня прозапальних цито-шшв тд впливом альтану та бшосорбу у хворих на хрошч-ний невиразковий колгг / В. Я. Камшський // Украшський мед. альманах. - 2003. - №2. - С. 63-66.

4. Яковлева Л. В. Перспективы применения альтана в проктологии / Л. В. Яковлева, И. В, Карбушева, Н. Д. Бу-нятян, В. П. Невзоров // Клшчна фармащя. - 2000. - №1. -С. 55-60.

5. Прохончуков А. А. Руководство по терапевтической стоматологии / А. А. Прохончуков, Н. К. Жижина // Под ред. А. И. Евдокимова. - М.: Медицина, 1967. - 572 с.

6. Desiderato O. Development of gastric ulcers in rats following stress termination / J. McKinnon, H. Hissom // J. Comp. Phisiol. Phychol. - 1974. - V. 87 - P. 208-214.

7. Меркулов Г. А. Курс патологической техники / Меркулов Г. А. - Л.:- 1969. - 423 с.

8. Сопоставление антиоксидантных свойств новых препаратов, производных биофлаваноидов и дубильных веществ / Л. В. Яковлева, О. А. Герасимова, И. В. Карбушева [и др.] // Экспериментальная и клиническая фармакология. - 2001. - № 2. - С. 55-59.

9. Структурные основы адаптации и компенсации нарушенных функций / Под редакцией Д. С. Саркисова. -М.: Медицина, 1977. - 352 с.

Поступила 03.11.15

Площадь стенки сосуда /

Группы животных площадь просвета сосуда (в

усл.ед.)

Интактная 2,80±0,18

Контрольная 6,40±0,060

(К) р<0,001

К+альтан 3,88±0,25

р:<0,001