СРЕДСТВО, НОРМАЛИЗУЮЩЕЕ МИТОХОНДРИИ ПЕЧЕНИ
AGENT NORMALISING LIVER MITOCHONDRIA

Изобретение относится к области медицины, конкретно к фармакологии, и касается применения соединения природного происхождения, в качестве средства, нормализующего митохондрии печени.
В настоящее время остается высокой потребность в гепатопротективных средствах, повышающих резистентность печени к действию химических агентов и нормализующих ее метаболизм в условиях напряжения детоксицирующей функции. Появление в конце прошлого столетия новых препаратов (интерферонов, аналогов нуклеозидов), воздействующих на этиологию заболеваний печени, не ослабило интереса клиницистов к гепатопротекторам. Безопасность, хорошая переносимость, возможность длительного приема нередко являются решающими факторами в пользу их выбора при заболеваниях гепатобилиарной системы [1, 2, 3].
«Идеальный» гепатопротектор должен хорошо всасываться в желудочно-кишечном тракте, обладать способностью к энтерогепатической циркуляции, предупреждать образование токсинов или связывать их в неактивные комплексы, проявлять противовоспалительные свойства, тормозить фиброгенез, стимулировать регенерацию печени, иметь малую токсичность, а также нормализовать митохондриальную функцию печени. К сожалению, большинство имеющихся в настоящее время на фармацевтическом рынке гепатопротекторов не удовлетворяет в полной мере этим требованиям. Эффективность большей части гепатопротективных средств проявляется только при длительном применении, некоторые препараты не улучшают антитоксическую функцию печени, обладают побочным действием [4, 5].
Задачей данного изобретения является расширение арсенала гепатопротективных средств природного происхождения для терапии хронического токсического гепатита.
Поставленная задача решается путем применения экстракта виноградной косточки в дозе 50 мг/кг при внутрижелудочном введении лабораторным животным в течение 14 суток, начиная со второго дня после моделирования токсического гепатита.
Экстракт виноградной косточки известен как мощный антиоксидант, который защищает организм от преждевременного старения, болезней и расстройств здоровья. Антиоксидантный эффект процианидинов в 20 раз больше, чем у витамина Е, и в 50 раз больше, чем у витамина С. Проантоцианидины виноградной косточки помогают защитить организм от повреждений, вызванных солнечной радиацией, улучшают зрение, эластичность артерий, благоприятно воздействуют на сердце [6].
В качестве исходного сырья использовались виноградные косточки (красных сортов винограда, которые относятся к виду Виноград культурный (Vitis vinifera L.)) зрелого винограда, высушенные воздушно-теневым способом. Перед экстракцией косточки винограда очищались от примесей и измельчались на лабораторной мельнице молоткового типа. Отбиралась фракция с размером частиц не более 1 мм. Экстрагирование проводили на стационарном перколяционном фильтре с теплозащитной рубашкой. Через сырье пропускали 40% этанол при 70°С в течение 1 часа, соблюдая соотношение сырье: экстрагент = 1:2. Фильтрат извлекали и повторяли процедуру 4 раза. Объединенные фильтраты подвергались горячему фильтрованию с отсасыванием, после чего растворитель удалялся при температуре не выше 60°С. Выход экстракта 19,5±1,8% от массы сухого сырья. Полученный экстракт содержит липиды, белки, углеводы и 5-8% полифенолов. Полифенолы виноградной косточки представлены галловой кислотой, флавоноидами (катехин, эпикатехин, галлокатехин), димерами, тримерами и более высокополимеризованными процианидинами. Общее содержание полифенолов в экстракте составляет более 50%.
Новым в данном изобретении является применение экстракта виноградной косточки, в качестве средства, нормализующего митохондрии печени.
Применение экстракта виноградной косточки, в качестве средства, нормализующего митохондрии печени, в литературе не описано. В работе впервые изучено влияние экстракта виноградной косточки в сравнении с референсным гепатопротективным средством силимарином на функциональное состояние митохондрии печени крыс при экспериментальных моделях патологии - активации перекисного окисления липидов и нарушении β-окисления жирных кислот. Препарат сравнения силимарин при обеих моделях патологии печени оказывает умеренный терапевтический эффект: только частично восстанавливает скорости дыхания и сопряженность окислительного фосфорилирования в митохондриях печени. Лучший терапевтический эффект при моделях патологии печени достигается при защите экстрактом виноградной косточки: скорость дыхания и сопряженность окислительного фосфорилирования в митохондриях полностью нормализуются.
Применение экстракта виноградной косточки, в качестве средства, нормализующего митохондрии печени, не очевидно для специалиста и не вытекает из уровня техники в данной области. Экстракт виноградной косточки может быть использован для лечения хронического токсического гепатита.
Таким образом, заявляемое техническое решение соответствует критериям: «Новизна», «Изобретательский уровень», «Промышленная применимость».
Новые свойства препарата были найдены экспериментальным путем. Изобретение будет понятно из следующего описания.
Эксперименты проводили на 200 беспородных крысах-самцах массой 200-220 г, полученных из отдела экспериментального биомоделирования НИИ фармакологии СО РАМН.
Эксперименты проводили в соответствии с правилами лабораторной практики (GLP), согласно федеральному закону от 12.04.2010 N 61-ФЗ «Об обращении лекарственных средств», по правилам лабораторной практики в Российской Федерации (Приказ Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации №708н от 23.08.2010), «Руководством по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ» (Москва, 2005).
3
В работе использовали экспериментальные модели токсического гепатита, вызванные у крыс внутрибрюшинным введением тетрахлорметана [7] и 4-пентеноевой кислоты [8]. При курсовом введении тетрахлорметана высокоактивные свободные радикалы CCl• и Cl•, образующиеся в результате метаболизма в микросомальной системе печени, способны индуцировать процессы перекисного окисления липидов (ПОЛ) в мембранах гепатоцитов. Это приводит к накоплению липидных гидроперекисей, выходу продуктов липопероксидации в кровь, снижению активности антиоксидантной системы. 4-Пентеноевая кислота нарушает β-окисление жирных кислот в печени [7, 8]. Это вещество, связывая карнитин в неактивный комплекс, тормозит транспорт среднецепочечных и длинноцепочечных жирных кислот в митохондрии. Развивается цепь патологических изменений по типу жирового гепатоза с нарушением биоэнергетики дыхания.
С 2-го дня после интоксикации крысам на протяжении 14 суток вводили ежедневно внутрижелудочно сухой экстракт виноградной косточки (50 мг/кг) - одна группа животных или препарат сравнения силимарин (70 мг/кг) - другая группа животных в виде суспензии на 1% крахмальном геле. Дозы гепатопротекторов являются эффективными терапевтическими. Контрольные животные получали 1% крахмальный гель в эквиобъемных количествах.
-3
-3
-3
-3
-3
-3
Функциональное состояние митохондрий гомогената печени крыс исследовали полярографическим методом (полярограф РА-2, Чехия) с помощью закрытого электрода Кларка лабораторного изготовления по скорости потребления кислорода в различных метаболических состояниях по B.Chance [9]. Исследование проводили в термостатируемой (t=26°C) ячейке оригинальной конструкции объемом 1 мл. В качестве субстратов окисления использовали 1·10 М и 5·10 М сукцинат, а также глутамат и малат по 3·10 М. В работе использовали ингибитор аминотрансфераз - аминооксиацетат (АОА) (2·10 М), активатор сукцинатдегидрогеназы (СДГ) - изоцитрат (1,5·10 М) и ее ингибитор - малонат (2·10 М).
п
о
4п
4o
3
3
4п
3
о
Моделирование метаболических состояний митохондрий сводится к варьированию содержания в среде инкубации субстрата, акцептора фосфата и кислорода. Мы рассматривали преимущественно два метаболических состояния - четвертое и третье. Их принято считать соответственно состояниями метаболического покоя и активности. Основываясь на разработанной М.Н.Кондрашовой концепции о градациях метаболических состояний [10], мы рассматривали отдельно состояние 4 до внесения АДФ (50 мкМ) и после окончания ее фосфорилирования: соответственно 4 покоя (4) и 4 отдыха (4). Во всех измерениях абсолютные значения скоростей потребления кислорода митохондриями представлены в нг атомарного кислорода в мин (нг ат. О/мин). Регистрировали скорость дыхания митохондрий до (V), после (V) и во время цикла фосфорилирования добавленной АДФ (V). АДФ вносили в ячейку в количестве 200 мкМоль. Для оценки энергетического статуса рассчитывали коэффициенты стимуляции дыхания (СД=V/V), дыхательного контроля (ДК=V/V4) и сопряженности окислительного фосфорилирования (АДФ/О) [11].
2+
Содержание в сыворотке крови глюкозы определяли натощак глюкозооксидазным методом, общего белка - биуретовым методом, общего и конъюгированного билирубина - модифицированным методом Йендрашика-Грофа, общего холестерина - энзиматическим колориметрическим методом, липопротеинов высокой плотности (ЛПВП) - путем разделения липопротеинов в присутствии Mn. Активность аланинаминотрансферазы (АлАТ) и аспартатаминотрансферазы (АсАТ) измеряли динитрофенилгидразиновым методом, γ-глутамилтранспептидазы (ГТП) - L-γ-глутамил-нитроанилиновым методом, щелочной фосфатазы (ЩФ) - по расщеплению n-нитрофенилфосфата в глициновом буфере, кислой фосфатазы (КФ) - по расщеплению n-нитрофенилфосфата в цитратном буфере [12].
Активность перекисного окисления липидов (ПОЛ) исследовали по скорости образования спонтанного и аскорбатзависимого малонового диальдегида (МДА), содержанию диеновых конъюгатов и оснований Шиффа [12].
Результаты обрабатывали методом парных сравнений по критерию Манна-Уитни [13].
Пример 1
Экспериментальные модели токсического гепатита вызывали у крыс внутрибрюшинным введением тетрахлорметана и 4-пентеноевой кислоты. С 2-го дня после интоксикации крысам на протяжении 14 суток вводили ежедневно внутрижелудочно сухой экстракт виноградной косточки (50 мг/кг) - одной группе животных или препарат сравнения силимарин (70 мг/кг) - другой группе животных в виде суспензии на 1% крахмальном геле. Дозы гепатопротекторов являются эффективными терапевтическими. Контрольные животные получали 1% крахмальный гель в эквиобъемных количествах.
Проведенные эксперименты показали, что при интоксикации тетрахлорметаном биохимические показатели нарушались по сравнению с показателями интактных животных. В крови активность АсАТ, АлАТ, ГТП, КФ и ЩФ увеличивалась в 1,3-1,9 раза; концентрация глюкозы снижалась на 13%, общего белка - повышалась на 9% (р<0,05). Содержание общего холестерина достоверно не изменялось, количество ЛПВП возрастало в 2,2 раза, общего и прямого билирубина - в 2,3 и 3,6 раза соответственно. Скорость аскорбатзависимого и спонтанного образования МДА в печени повышалась в 1,5 и 2,4 раза. Концентрация диеновых конъюгатов стала больше в 2,6 раза, оснований Шиффа - на 30% (см. табл.1).
Таблица 1
Влияние силимарина и экстракта виноградной косточки на перекисное окисление липидов в гомогенате печени на фоне введения тетрахлорметана (М±m)
Экспериментальные группы
МДА, нмоль/(мг белка-мин)
Диеновые конъюгаты, ед. оптич. пл./мг липидов
Основания Шиффа, отн. ед./мг липидов
Аскорбат-зависимое
Спонтанное
Интактные животные
0,25±0,03
0,13±0,01
0,24±0,03
1,85±0,10
Тетрахлорметан в течение 4 сут
0,67±0,03<sup>1</sup>
0,31±0,07<sup>1</sup>
0,62±0,04<sup>1</sup>
2,40±0,09<sup>1</sup>
Тетрахлорметан спустя 14 сут после окончания инъекций
1,14±0,07<sup>1,2</sup>
0,47±0,03<sup>1,2</sup>
1,32±0,09<sup>1,2</sup>
2,96±0,12<sup>1,2</sup>
Силимарин
0,53±0,05<sup>1-3</sup>
0,27±0,05<sup>1,3</sup>
0,62±0,07<sup>1,3</sup>
2,14±0,14<sup>1-3</sup>
Экстракт виноградной косточки
0,28±0,03<sup>2</sup>
0,14±0,02<sup>2</sup>
0,31±0,04<sup>2</sup>
1,88±0,09<sup>2</sup>
Примечание к табл.1-2: р<0,05: <sup>1</sup> - по отношению к интактным животным, <sup>2</sup> - по отношению к гепатотоксину в остром периоде интоксикации, <sup>3</sup> - по отношению к гепатотоксину спустя 14 сут после окончания инъекций, <sup>4</sup> - по отношению к силимарину. Приведены средние данные 10 определений.
Спустя 2 нед. после завершения инъекций тетрахлорметана функциональное состояние печени частично восстанавливалось. Активность АлАТ снижалась на 13%, КФ - на 34%, активность ГТП увеличивалась на 29% (р<0,05) по сравнению с активностью ферментов, определенной сразу после окончания инъекций гепатотоксина. Активность АсАТ достоверно не изменялась. Содержание глюкозы становилось выше в 1,5 раза, концентрация общего белка нормализовалась. Содержание общего холестерина и ЛПВП снижалось на 29 и 42% соответственно. Количество общего и прямого билирубина в крови уменьшалось в 1,5-1,8 раза. Липопероксидация в печени активировалась по сравнению с интенсивностью в остром периоде интоксикации. Образование МДА при аскорбатзависимом ПОЛ ускорялось дополнительно в 1,7 раза, при спонтанном ПОЛ - в 1,5 раза. Количество диеновых конъюгатов и оснований Шиффа стало больше в 2,1 и 1,2 раза соответственно (см. табл.1).
Препарат сравнения гепатопротектор силимарин, введенный крысам на протяжении 14 сут после последней инъекции тетрахлорметана, оказывал терапевтическое воздействие, хотя нормализовались не все метаболические процессы. Лечение силимарином сопровождалось снижением активности ЩФ и ГТП на 22-24% по сравнению с активностью у животных, не получавших силимарин. Концентрация прямого билирубина повышалась на 17% (р<0,05). Остальные биохимические показатели под влиянием терапии силимарином статистически значимо не изменялись. Скорость продукции МДА в печени снижалась в 1,4-1,5 раза. Количество диеновых конъюгатов и оснований Шиффа становилось в 1,3-1,5 раза меньше, чем в отдаленный период интоксикации тетрахлорметаном у крыс, не получавших силимарин (см. табл.1).
При действии экстракта виноградной косточки на печень крыс после нарушений тетрахлорметаном активность АлАТ, ЩФ и ГПТ в крови уменьшалась на 18, 46 и 48% соответственно. Концентрация глюкозы и ЛПВП снижалась на 13 и 24%, общего холестерина - повышалась на 34%. Количество общего билирубина в сыворотке крови становилось меньше на 8% (р<0,05), прямого - увеличивалось на 38% по сравнению с показателями, определенными у крыс, оставленных без лечения после интоксикации тетрахлорметаном. Все биохимические показатели крови при терапии экстрактом виноградной косточки нормализовались. Экстракт виноградной косточки как сильный антиоксидант эффективно подавлял ПОЛ в печени. МДА при аскорбатзависимом ПОЛ продуцировался медленнее в 1,8 раза, при спонтанном - в 1,7 раза. Количество диеновых конъюгатов уменьшалось в 1,8 раза, оснований Шиффа - на 36% (см. табл.1).
При сравнении функционального состояния печени на следующий день после окончания 7 введений 4-пентеноевой кислоты и у интактных животных отмечалось увеличение в крови активности аминотрансфераз на 35-53%. Активность ЩФ повышалась вдвое, КФ - в 1,5 раза, ГТП - на 67%. Содержание в крови глюкозы, общего белка и общего холестерина оставалось таким же, как в норме. Содержание ЛПВП, общего и прямого билирубина увеличивалось в 2,3-3,7 раза. Продукция МДА в гомогенате печени крыс при спонтанном ПОЛ ускорялась вдвое, при аскорбатзависимом - в 2,3 раза. Количество диеновых конъюгатов возрастало в 2,1 раза, оснований Шиффа - в 1,3 раза (см. табл.2).
Таблица 2
Влияние силимарина и экстракта виноградной косточки на перекисное окисление липидов в гомогенате печени на фоне экспериментального нарушения β-окисления жирных кислот, вызванного 4-пентеноевой кислотой (М±m)
Экспериментальные группы
МДА, нмоль/(мг белка·мин)
Диеновые конъюгаты, ед. оптич. пл./мг липидов
Основания Шиффа, отн. ед./мг липидов
Аскорбатзависимое
Спонтанное
Интактные животные
0,25±0,03
0,13±0,01
0,24±0,03
1,85±0,10
4-пентеноевая кислота в течение 7 сут
0,58±0,01<sup>1</sup>
0,28±0,02<sup>1</sup>
0,51±0,07<sup>1</sup>
2,38±0,12<sup>1</sup>
4-пентеноевая кислота, спустя 14 сут после окончания инъекций
0,98±0,05<sup>1,2</sup>
0,36±0,04<sup>1,2</sup>
1,15±0,09<sup>1,2</sup>
2,85±0,10<sup>1,2</sup>
Силимарин
0,44±0,02<sup>1-3</sup>
0,18±0,02<sup>1-3</sup>
0,50±0,06<sup>1-3</sup>
2,05±0,07<sup>1-3</sup>
Экстракт виноградной косточки
0,31±0,02<sup>1</sup>
0,15±0,01<sup>2</sup>
0,37±0,05<sup>1</sup>
1,94±0,08<sup>2,3</sup>
Через 2 недели после прекращения инъекций 4-пентеноевой кислоты функциональное состояние печени крыс изменялось по сравнению с состоянием в остром периоде интоксикации. В крови активность АлАТ уменьшалась на 16%, КФ - на 37%, при этом активность КФ становилась такой же, как у интактных животных. Активность ГТП дополнительно увеличивалась на 20%, содержание общего белка не изменялось, содержание глюкозы возрастало на 47%. Количество в крови общего холестерина, ЛПВП, общего и прямого билирубина снижалось на 27-78%. Скорости образования МДА в печени при аскорбатзависимом и спонтанном ПОЛ дополнительно увеличивались на 67 и 29% соответственно. Содержание диеновых конъюгатов и оснований Шиффа повышалось соответственно в 2,3 раза и на 20% (см. табл.2).
У животных, получавших препарат сравнения силимарин при интоксикации 4-пентеноевой кислотой, функциональное состояние печени существенно не улучшалось. В крови активность ЩФ и ГТП снижалась на 17 и 24% соответственно, содержание глюкозы уменьшалось на 7% (р<0,05). Уровень прямого билирубина повышался на 13% (р<0,05). ПОЛ в гомогенате печени под воздействием силимарина протекало с меньшей интенсивностью, чем в отдаленном периоде интоксикации 4-пентеноевой кислотой. Скорость образования МДА снижалась на 50-55%, содержание диеновых конъюгатов становилось меньше на 57%, оснований Шиффа - на 28% (см. табл.2).
Экстракт виноградной косточки при интоксикации 4-пентеноевой кислотой улучшал функции печени более выраженно, чем гепатопротектор силимарин. Только у животных, защищенных экстрактом виноградной косточки, активность аминотрансфераз в крови снижалась на 17-19% и становилась такой же, как у интактных крыс. Активность ГТП и ЩФ уменьшалась на 45-47%, активность КФ увеличивалась на 15% (р<0,05). Содержание глюкозы и ЛПВП становилось ниже на 19-23% и приближалось к норме. Концентрация общего холестерина возрастала на 24%. Уровень общего и прямого билирубина не отличался от нормы. Терапия экстрактом виноградной косточки замедляла на 32-58% (до нормы) образование в печени МДА при спонтанном ПОЛ и снижала концентрацию оснований Шиффа. Скорость продукции МДА при аскорбатзависимом ПОЛ уменьшалась на 32% и была ниже, чем при введении силимарина. Содержание диеновых конъюгатов снижалось на 68% (см. табл.2).
4п
3
4о
При активации ПОЛ под влиянием тетрахлорметана энергопродукция в митохондриях печени переключалась на преимущественное образование и использование сукцината. При окислении эндогенных субстратов скорости дыхания митохондрий в состояниях покоя (V), активного фосфорилирования (V) и отдыха (V) были на 19-34% выше показателей интактной группы, при окислении экзогенного сукцината они увеличивались на 18-33%, при окислении НАД-зависимых субстратов малата и глутамата - не изменялись. Время фосфорилирования АДФ возрастало в среднем на 20%, коэффициент АДФ/О оставался таким же, как в норме (см. табл.3).
4п
3
4о
После прекращения инъекций 4-пентеноевой кислоты значительно нарушалась биоэнергетика печени крыс. Скорости дыхания V, V и V при окислении эндогенных субстратов снижались на 10-20%, при окислении экзогенного сукцината - на 32-38%, при окислении НАД-зависимых субстратов малата и глутамата - на 33-48%. Время фосфорилирования АДФ становилось на 10-41% меньше, чем в контроле. Коэффициент АДФ/О увеличивался в среднем на 24%. Малонат, добавленный в среду инкубации с НАД-зависимыми субстратами, лишь незначительно снижал скорости дыхания митохондрий (см. табл.4). Такие отклонения свидетельствуют о нарушении процессов окислительного фосфорилирования и снижении активности СДГ - ключевого фермента реакций быстрого метаболического кластера митохондрий.
4п
3
4o
Через 2 недели после прекращения введения тетрахлорметана скорости дыхания митохондрий V, V и V становились на 31-43% меньше, чем в остром периоде интоксикации. Время фосфорилирования удлинялось в среднем на 47%, коэффициент АДФ/О не изменялся (см. табл.3). В отдаленном периоде поражения печени 4-пентеноевой кислотой скорости дыхания во всех метаболических состояниях при окислении эндогенных субстратов, экзогенного сукцината и НАД-зависимых субстратов возрастали на 14-36% по сравнению со скоростями в группе животных с острой интоксикацией. Фосфорилирование АДФ незначительно замедлялось, коэффициент АДФ/О уменьшался на 10-23% (см. табл.3). Нарушения биоэнергетики при ингибировании β-окисления 4-пентеноевой кислотой и усилении ПОЛ тетрахлорметаном несмотря на разнонаправленный характер обусловлены низкой энергизованностью митохондрий и разобщением окислительного фосфорилирования. При обеих моделях патологии печени ослаблялась способность митохондрий окислять сукцинат и НАД-зависимые субстраты вследствие значительного ингибирования СДГ оксалоацетатом - продуктом окисления сукцината.
4п
3
4о
При интоксикации тетрахлорметаном терапия гепатопротектором силимарином приводила к увеличению на 12-18% (р<0,05) скоростей дыхания V, V и V в экспериментах с окислением эндогенных субстратов, добавленных сукцината и смеси глутамат + малат. Время фосфорилирования АДФ и коэффициент АДФ/О оставались на низком уровне (см. табл.3, 4).
При дефекте β-окисления жирных кислот, вызванном 4-пентеноевой кислотой, гепатопротектор силимарин повышал энергизованность митохондрий печени, особенно в ответ на увеличенную субстратную нагрузку. При терапии силимарином скорости дыхания в митохондриях во всех метаболических состояниях повышались на 11-26% (р<0,05) по сравнению со скоростями, измеренными через 2 нед. после завершения инъекций гепатотоксина у не защищенных гепатопротектором животных. Время фосфорилирования увеличивалось на 21-36% (см. табл.3, 4).
Экстракт виноградной косточки оказался наиболее эффективным корректором нарушений биоэнергетики печени при ингибировании β-окисления жирных кислот и активации ПОЛ. При введении этого экстракта дыхательная функция митохондрий печени и окислительное фосфорилирование в максимальной степени изменялись в сторону нормы. Скорости дыхания возрастали на 18-38%. Время фосфорилирования добавленной АДФ сокращалось на 9-21% (см. табл.3, 4). Экстракт виноградной косточки не усиливал реакцию СДГ на увеличение субстратной нагрузки, а также уменьшал вклад НАД·Н-дегидрогеназы в дыхание митохондрий в тесте с добавлением малоната, что свидетельствует о тенденции к истощению системы энергопродукции. Судя по этим результатам, экстракт виноградной косточки нормализовал только окислительное фосфорилирование, не устраняя дефицит субстратов, в том числе ацетилкоэнзима А.
Таким образом, экстракт виноградной косточки в максимальной степени улучшал биоэнергетику печени животных, получавших тетрахлорметан и 4-пентеноевую кислоту, увеличивал активность сукцинатдегидрогеназы, скорость утилизации кислорода митохондриями и сопряженность окислительного фосфорилирования.
Экстракт виноградной косточки является эффективным средством, оказывающим нормализующее влияние на митохондрии печени на модели экспериментального хронического токсического гепатита.
Источники литературы, принятые во внимание
1. Доркина Е.Г. Изучение гепатозащитного действия природных флавоноидных соединений // Эксперим. и клин. фармакол. - 2004. - Т.67. - №6. - С.41-44.
2. Шульпекова Ю.О. Препараты растительного происхождения в лечении заболеваний печени // Русский медицинский журнал. - 2006. - Т.14. - №4. - С.337-340.
3. Новиков В.Е., Климкин Е.И. Фармакология гепатопротекторов // Обзоры по клинической фармакологии лекарственной терапии. - 2005. - Т.4. - №1. - С.2-20.
4. Ушкалова Е.А. Проблемы применения гепатопротекторов // Фарматека. - 2004. - №4. - С.45-55.
5. Brinker F. Herbal-drug interactions and adverse effects // Herbal Gram. - 2004. - Vol.64. - №1. - P.66-68.
6. Duthie G., Crozier A. Plant-derived phenolic antioxidants // J. Curr. Opin. Lipidol. - 2000. - Vol.11. - №1. - P.43-47.
7. Владимиров Ю.А. Свободные радикалы и антиоксиданты // Вестник РАМН. - 1998. - №7. - С.43-51.
8. Glasgow A., Chase H. Production of the features of Reye's syndrome in rats with 4-pentenoic acid // Pediatr. Res. - 1975. - Vol.9. - №3. - P.133-138.
9. Chance В., Hollunger G. The interaction of energy and electron transfer reactions in mitochondria // J. Biol. Chem. - 1961. - Vol.236. - №5. - P.1562-1568.
10. Кондрашова М.Н. Накопление и использование янтарной кислоты в митохондриях // Митохондрии. - М.: Наука, 1972. - С.141-158.
11. Chance В., Williams G.R. Respiratory enzyme in oxidative phosphorylation. IV. The respiratory chain // J. Biol. Chem. - 1955. - Vol.217. - №1. - P.429-438.
12. Камышников В.С. Справочник по клинико-биохимической лабораторной диагностике: в 2-х томах. - Минск: Беларусь, 2000. - С.134-165.
13. Хафизьянова Р.Х., Бурыкин И.М., Алеева Г.Н. Математическая статистика в экспериментальной фармакологии. - Казань: Медицина, 2006. - С.167-215.