ВАРИАНТЫ АЛЬФА-АМИЛАЗЫ С ИЗМЕНЕННЫМИ СВОЙСТВАМИ

1. Композиция, содержащая
a) по меньшей мере один вариант альфа-амилазы, содержащий аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную аминокислотной последовательности исходной AmyS-подобной альфа-амилазе и имеющую замену в положении аминокислоты, соответствующем положению 242 референсной альфа-амилазы, причем указанный вариант имеет детектируемую альфа-амилазную активность, и
b) по меньшей мере один дополнительный фермент, детергент, одно поверхностно-активное вещество, один комплексообразователь, окислитель, подкислитель, подщелачивающий агент, источник пероксида, источник жесткости, соль, детергентный комплексообразующий агент, полимер, стабилизирующий агент или кондиционер.
2+
2. Композиция по п.1, где вариантная альфа-амилаза является измененной, в сравнении с исходной AmyS-подобной альфа-амилазой или референсной альфа-амилазой, в одном или нескольких из таких свойств, как: (a) общий заряд, (b) субстратная специфичность, (c) расщепление субстрата, (d) связывание субстрата, (e) термостабильность, (f) активность при одном или нескольких pH, (g) стабильность при одном или нескольких рН, (h) стабильность в условиях окисления, (i) потребности Ca, (j) удельная активность, (k) каталитическая скорость, (l) каталитическая эффективность, (m) активность в присутствии комплексообразователя, (n) термо- или pH-стабильность в присутствии комплексообразователя, (o) применимость для расшлихтовки или применимость для процесса очистки или (p) величина экспрессии в системе экспрессии белков.
3. Композиция по п.1, где референсная альфа-амилаза является SEQ ID NO:  1 или 2.
4. Композиция по п.1, которая является компонентом продукта для применения в стирке, очистке посуды или твердых поверхностей, расшлихтовке или обработке ткани или пятен.
5. Композиция по любому из пп.1-4, где дополнительный фермент является протеазой, липазой, амилазой, целлюлазой, пероксидазой, оксидазой, пектиназой, лиазой, кутиназой, лакказой или их комбинацией.
6. Композиция по любому из пп.1-4, где поверхностно-активное вещество является неионогенным, анионогенным, катионогенным или цвиттерионным.
7. Композиция по любому из пп.1-4, где вариантная альфа-амилаза является вариантом S242A, S242D, S242E, S242F, S242G, S242H, S242L, S242M, S242N, S242Q или S242T.
8. Композиция по п.7, где вариантная альфа-амилаза имеет измененную устойчивость к окислению и вариантная альфа-амилаза дополнительно включает делецию или замену одного или нескольких остатков метионина, в том числе остатков, расположенных в положениях аминокислот 8, 9, 96, 200, 206, 284, 307, 311, 316 и 438 исходной AmyS-подобной альфа-амилазы, где референсная альфа-амилаза показана в SEQ ID NO:  2.
9. Композиция по п.7, где вариантная альфа-амилаза дополнительно содержит модификацию последовательности в одном или нескольких положениях аминокислот, соответствующих положениям аминокислот 97, 179, 180, 193, 319, 349, 358, 416, 428 или 443 референсной альфа-амилазы.
10. Композиция по п.9, где вариантная альфа-амилаза содержит одну или несколько замен в следующих положениях: цистеин в положении 349, цистеин в положении 428, глутаминовую кислоту в положении 97, аргинин в положении 97, глутаминовую кислоту в положении 319, аргинин в положении 319, глутаминовую кислоту в положении 358, аргинин в положении 358, глутаминовую кислоту в положении 443 или аргинин в положении 443.
11. Композиция по п.7, где вариантная альфа-амилаза содержит замену N193 или V416 или обе эти замены.
12. Композиция по п.11, содержащая замену N193F или V416G или обе.
13. Композиция по п.7, дополнительно содержащая делецию одной или нескольких аминокислот в положениях F178, R179, G180, I181, G182 и K183.
14. Композиция по п.13, где вариантная альфа-амилаза имеет измененную зависимость от ионов металлов или измененную стабильность или активность в отсутствие добавленного кальция или в присутствии комплексообразователя.
15. Композиция по п.1, где вариантная альфа-амилаза имеет по меньшей мере 95% гомологию относительно SEQ ID NO: 2 и содержит замену аминокислоты 242 относительно нумерации в референсной альфа-амилазе, содержащей SEQ ID NO: 1, причем вариантная альфа-амилаза имеет альфа-амилазную активность.
16. Композиция по п.1, где исходная AmyS-подобная альфа-амилаза является SEQ ID NO: 1, 2, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 15 или 16, а референсная альфа-амилаза является SEQ ID NO: 1 или 2.
17. Композиция по п.1, где вариантная альфа-амилаза имеет улучшенную эффективность в процессе мойки при рН ≥ приблизительно 8, относительно исходной AmyS-подобной альфа-амилазы.
18. Композиция по п.10, где вариантная альфа-амилаза содержит ряд замен a) Q97E, Q319E, Q358E, Q443E; b) Q97E, Q319R, Q358E, Q443R; c) Q97E, Q319R, Q358E; d) Q97E, Q319R, Q443E; e) Q97E, Q319R, Q443R; f) Q97E, Q358R; g) Q97E, Q443E; h) Q319R, Q358E, Q443E или i) Q319R, Q358R, Q443E.
19. Детергент или чистящий препарат, содержащий композицию по любому из пп.1-18 или по меньшей мере одну вариантную альфа-амилазу, содержащую аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную аминокислотной последовательности исходной AmyS-подобной альфа-амилазы и имеющую замену в положении аминокислоты, соответствующем положению 242 референсной альфа-амилазы, причем вариантная альфа-амилаза имеет детектируемую альфа-амилазную активность; где референсной амилазой является SEQ ID NO: 1 или 2.
20. Детергент или чистящий препарат по п.19, где вариантная альфа-амилаза является вариантной альфа-амилазой S242, содержащей по меньшей мере замену S242A, S242D, S242E, S242F, S242G, S242H, S242L, S242M, S242N, S242Q или S242T.
21. Способ расшлихтовки тканого материала после процесса ткачества, предусматривающий контактирование тканого материала с композицией по любому из пп.1-18 или с вариантной альфа-амилазой, содержащей аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную аминокислотной последовательности исходной AmyS-подобной альфа-амилазы, и имеющую замену в положении аминокислоты, соответствующем положению 242 референсной альфа-амилазы, причем указанная вариантная альфа-амилаза имеет детектируемую альфа-амилазную активность, в условиях и в течение времени, которые являются эффективными по меньшей мере для частичного удаления шлихты из этого тканого материала.
22. Способ по п.21, где вариантная альфа-амилаза является измененной, в сравнении с исходной AmyS-подобной альфа-амилазой или референсной альфа-амилазой, в одном или нескольких из таких свойств, как: (a) общий заряд, (b) субстратная специфичность, (c) расщепление субстрата, (d) связывание субстрата, (e) термостойкость, (f) активность при одном или нескольких pH, (g) стабильность при одном или нескольких рН, (h) стабильность в условиях окисления, (i) потребности
2+
Ca, (j) удельная активность, (k) каталитическая скорость, (l) каталитическая эффективность, (m) активность в присутствии комплексообразователя, (n) термо- или pH-стабильность в присутствии комплексообразователя, (o) эффективность в отношении расшлихтовки или (p) величина экспрессии в системе экспрессии белков.
23. Способ по п.21, где исходная AmyS-подобная альфа-амилаза является SEQ ID NO: 1, 2, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 15 или 16, а референсная альфа-амилаза является SEQ ID NO: 1 или 2.
24. Способ по п.21, где вариантная альфа-амилаза является вариантом S242A, S242D, S242E, S242F, S242G, S242H, S242L, S242M, S242N, S242Q или S242T.
25. Способ по п.24, где вариантная альфа-амилаза содержит одну или несколько замен в следующих положениях: цистеин в положении 349, цистеин в положении 428, глутаминовую кислоту в положении 97, аргинин в положении 97, глутаминовую кислоту в положении 319, аргинин в положении 319, глутаминовую кислоту в положении 358, аргинин в положении 358, глутаминовую кислоту в положении 443 или аргинин в положении 443, где референсной амилазой является SEQ ID NO: 1 или 2.
26. Способ мойки или очистки, предусматривающий контактирование одного или нескольких изделий, подлежащих мойке или очистке, с детергентом по п.19 или композицией, содержащей вариантную альфа-амилазу, содержащую аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную аминокислотной последовательности исходной AmyS-подобной альфа-амилазы и имеющую замену в положении аминокислоты, соответствующем положению 242 референсной альфа-амилазы, причем указанная альфа-амилаза имеет детектируемую альфа-амилазную активность, в условиях и в течение времени, эффективных по меньшей мере для частичной мойки или очистки этих одного или нескольких изделий.
27. Способ по п.26, где по меньшей мере одно изделие загрязнено по меньшей мере одним крахмалсодержащим материалом, удаление которого улучшается этой вариантной альфа-амилазой.
28. Способ по п.26, где композиция дополнительно содержит один или несколько из дополнительных компонентов, таких как фермент, детергент, поверхностно-активное вещество, окислитель, подкислитель, подщелачивающий агент, источник пероксида, источник жесткости, соль, детергентный комплексообразующий агент, полимер, стабилизирующий агент или кондиционер.
29. Способ по п.26, где исходная AmyS-подобная альфа-амилаза является SEQ ID NO: 1, 2, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 15 или 16, а референсная альфа-амилаза является SEQ ID NO: 1 или 2.
30. Способ по п.29, где вариантная альфа-амилаза является вариантом S242A, S242D, S242E, S242F, S242G, S242H, S242L, S242M, S242N, S242Q или S242T.
31. Способ по п.30, где вариантная альфа-амилаза имеет улучшенную эффективность в процессе мойки при рН ≥ приблизительно 8, относительно исходной AmyS-подобной альфа-амилазы.
32. Способ по п.30, где вариантная альфа-амилаза содержит одну или несколько замен в следующих положениях: цистеин в положении 349, цистеин в положении 428, глутаминовую кислоту в положении 97, аргинин в положении 97, глутаминовую кислоту в положении 319, аргинин в положении 319, глутаминовую кислоту в положении 358, аргинин в положении 358, глутаминовую кислоту в положении 443 или аргинин в положении 443.
33. Способ по п.32, где вариантная альфа-амилаза содержит набор замен a) Q97E, Q319E, Q358E, Q443E; b) Q97E, Q319R, Q358E, Q443R; c) Q97E, Q319R, Q358E; d) Q97E, Q319R, Q443E; e) Q97E, Q319R, Q443R; f) Q97E, Q358R; g) Q97E, Q443E; h) Q319R, Q358E, Q443E или i) Q319R, Q358R, Q443E.
34. Способ по п.30, где вариантная альфа-амилаза содержит делецию одной или нескольких аминокислот в положениях F178, R179, G180, I181, G182 или K183.
35. Способ по п.34, где вариантная альфа-амилаза имеет измененную зависимость от ионов металлов или измененную стабильность или активность в отсутствие добавленного кальция или в присутствии комплексообразователя.
36. Набор, содержащий
а) одну или несколько вариантных альфа-амилаз, содержащих аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную аминокислотной последовательности исходной AmyS-подобной альфа-амилазы и имеющую замену в положении аминокислоты, соответствующем положению 242 референсной альфа-амилазы, причем указанная вариантная альфа-амилаза имеет детектируемую альфа-амилазную активность, или композицию по любому из пп.1-18; и
b) по меньшей мере один дополнительный фермент, детергент, поверхностно-активное вещество, комплексообразователь, окислитель, подкислитель, подщелачивающий агент, источник пероксида, источник жесткости, соль, детергентный комплексообразующий агент, полимер, стабилизирующий агент или кондиционер.
37. Набор по п.36, дополнительно содержащий инструкции для применения этого набора в процессе расшлихтовки тканого материала или для мойки или очистки одного или нескольких изделий, загрязненных крахмалсодержащим веществом.