СВЯЗЫВАЮЩИЕ IL-18 АТИТЕЛА И СПОСОБЫ ИХ ОЧИСТКИ

1. Способ получения препарата антитела IL-18 со сниженным содержанием белка клетки-хозяина (БКХ) из образца смеси, содержащей антитело и по меньшей мере один БКХ, где указанный способ включает:
(a) понижение рН указанного матричного образца, получая, таким образом, первично выделенный образец, при этом указанное понижение рН составляет примерно от 3,0 до примерно 4,0;
(b) доведение рН указанного первично выделенного образца до диапазона примерно от 4,5 до примерно 5,5, с последующим нанесением указанного первично выделенного образца на ионообменную смолу и получением образца после ионного обмена;
(c) нанесение указанного образца после ионного обмена на смолу для хроматографии гидрофобного взаимодействия (ХГВ) и получение образца после ХГВ, где указанный образец после ХГВ содержит указанный препарат антитела со сниженным содержанием БКХ.
2. Способ по п.1, где указанное понижение рН проводят путем смешивания подходящей кислоты с указанной образцом смеси, и где указанную подходящую кислоту выбирают из группы, состоящей из лимонной кислоты, уксусной кислоты, каприловой кислоты и подобного.
3. Способ по п.1, где указанная ионообменная смола представляет собой либо анионообменную, либо катионообменную смолу.
4. Способ по п.3, где указанная ионообменная смола представляет собой катионообменную смолу.
5. Способ по п.4, где указанную катионообменную смолу выбирают из группы, состоящей из фрактогеля, карбоксиметильной (СМ), сульфоэтильной (SE), сульфопропильной (SP), фосфатной (Р) и сульфонатной (S) смолы.
6. Способ по п.5, где указанная катионообменная смола представляет собой фрактогель.
7. Способ по п.3, где указанная ионообменная смола представляет собой анионообменную смолу.
8. Способ по п.7, где указанную анионообменную смолу выбирают из группы, состоящей из Q-сефарозы, смол с диэтиламиноэтильной (DEAE), четвертичной антиноэтильной (QAE) и четвертичной аммониевой (Q) группами.
9. Способ по п.8, где указанная анионообменная смола представляет собой Q-сефарозу.
10. Способ по п.1, где указанная стадия ионного обмена включает первую стадию ионного обмена и вторую стадию ионного обмена.
11. Способ по п.10, где указанная стадия ионного обмена представляет собой стадию катионного обмена с последующей второй стадий анионного обмена.
12. Способ по п.10, дополнительно включающий промежуточную стадию, где указанная промежуточная стадия представляет собой стадию фильтрования между указанной первой и указанной второй стадиями ионного обмена.
13. Способ по п.12, где указанную стадию фильтрования осуществляют посредством ультрафильтрования/диафильтрования с захватом.
14. Способ по п.1, где указанную ХГВ проводят с использованием колонки, включающей одну или несколько гидрофобных групп.
15. Способ по п.14, где указанные одну или несколько гидрофобных групп выбирают из группы, состоящей из алкильных, арильных групп и их комбинаций.
TM
TM
TM
TM
TM
TM
TM
TM
TM
16. Способ по п.14, где указанную колонку выбирают из группы, состоящей из фенилсефарозы (такой как колонка быстрого потока Phenyl Sepharose 6, высокоэффективная колонка Phenyl Sepharose), высокоэффективной колонки с октилсефарозой (Octyl Sepharose), колонки Fractogel EMD-пропил, FractogelEMD-фенил, Macro-Prep метильного, Macro-Prep трет-бутильного носителей; колонки WP HI-Propyl (C3) и эфирной, фенильной или бутильной колонок Toyopearl.
17. Способ по п.16, где указанная колонка включает фенилсефарозу.
18. Способ по п.1, дополнительно включающий стадию фильтрования, где указанный образец после ХГВ подвергают фильтрованию для удаления вирусных частиц и для облегчения буферного обмена.
19. Способ по п.1, где указанный препарат антитела с пониженным содержанием БКХ содержит антитело против IL-18 или его антигенсвязывающую часть.
20. Способ по п.19, где указанное антитело против IL-18 или его антигенсвязывающая часть представляет собой гуманизированное антитело, химерное антитело или многовалентное антитело.
21. Способ по п.20, указанное антитело против IL-18 или его антигенсвязывающая часть представляет собой гуманизированное антитело.
d
off
-4
-1
22. Способ по п.20, указанное антитело против IL-18 или его антигенсвязывающая часть представляет собой изолированное антитело человека, которое диссоциирует из IL-18 человека с Kпримерно 1,34·10М или менее и константой скорости K примерно 0,1 с или менее, обе из которых определены методом поверхностного плазмонного резонанса.
23. Способ по п.19, где указанное антитело против IL-18 или его антигенсвязывающая часть нейтрализует IL-18 как in vivo, так и in vitro.
24. Способ по п.1, где указанный препарат по существу не содержит БКХ.
25. Способ получения препарата антитела с пониженным содержанием белка клетки-хозяина (БКХ) из образцов смеси, содержащей антитело и по меньшей мере один БКХ, где указанный способ включает:
(a) понижение рН указанного матричного образца, получая, таким образом, первично выделенный образец, при этом указанное понижение pH составляет примерно от 3,0 до примерно 4,0;
(b) доведение рН указанного первично выделенного образца до диапазона примерно от 4,5 до примерно 5,5, с последующим нанесением указанного первично выделенного образца на катионообменную смолу и получением образца после катионного обмена;
(c) нанесение указанного образца после катионного обмена на анионообменную смолу и получение образца после анионного обмена; и
(d) нанесение указанного образца после ионного обмена на смолу для хроматографии гидрофобного взаимодействия (ХГВ) и получение образца после ХГВ, где указанный образец после ХГВ включает указанный препарат антитела со сниженным содержанием БКХ.
26. Способ получения препарата антитела с пониженным содержанием белка клетки-хозяина (БКХ) из образцов смеси, содержащей антитело и по меньшей мере один БКХ, где указанный способ включает:
(a) понижение рН указанного матричного образца, получая, таким образом, первично выделенный образец, при этом указанное понижение pH составляет примерно от 3,0 до примерно 4,0;
(b) доведение рН указанного первично выделенного образца до диапазона примерно от 4,5 до примерно 5,5 с последующим нанесением указанного первично выделенного образца на катионообменную смолу и получением образца после катионного обмена;
(c) фильтрование указанного образца после катионного обмена и получение фильтрата;
(d) нанесение указанного фильтрата со стадии (с) на анионообменную смолу и получение образца после анионного обмена; и
(е) нанесение указанного образца после ионного обмена на смолу для хроматографии гидрофобного взаимодействия (ХГВ) и получение образца после ХГВ, где указанный образец после ХГВ включает указанный препарат антитела со сниженным содержанием БКХ.
27. Фармацевтическая композиция, содержащая препарат антитела с пониженным содержанием БКХ, полученный способом по п.1, и фармацевтически приемлемый носитель.
28. Фармацевтическая композиция по п.27, где указанное антитело представляет собой антитело против IL-18 или его антигенсвязывающую часть.
29. Фармацевтическая композиция по п.27, где указанная композиция по существу не содержит БКХ.
30. Фармацевтическая композиция по п.27, применяемая для нейтрализации IL-18, способствующего нарушениям.
31. Фармацевтическая композиция по п.30, где указанные нарушения выбирают из группы, состоящей из аутоиммунных заболеваний, диабета типа I, артрита, ревматоидного артрита, отторжения трансплантатов, воспалительного заболевания кишечника, сепсиса, рассеянного склероза, ишемических болезней сердца (включая острые инфаркты миокарда), ишемического повреждения мозга, хронического гепатита, псориаза, хронического панкреатита, острого панкреатита, алкогольного гепатита, вирусного гепатита, иммунного гепатита, скоротечного гепатита, цирроза печени и первичного желчного цирроза.
32. Фармацевтическая композиция по п.31, где указанный артрит выбирают из группы, состоящей из анкилозного спондилита, боли в спине, синдрома отложения солей в запястьях, синдрома Элерса-Данлоса, подагры, ювенильного артрита, системной красной волчанки, миозита, остеопсатироза, остеопороза, полиартрита, полимиозита, псориатического артрита, синдрома Рейтера, склеродермы, артрита с заболеванием кишечника, болезни Беккета, детского артрита, дегенеративного заболевания сустава, фибромиалгии, инфекционного артрита, болезни Лайма, синдрома Марфана, остеоартрита, остеонекроза, болезни Паджета, ревматической полимиалгии, псевдоподагры, рефлекторной симпатетической дистрофии, ревматоидного артрита, ревматизма, синдрома Шегрена, наследственного аденоматозного полипоза и подобного.
33. Фармацевтическая композиция по п.27, дополнительно содержащая нестероидное или стероидное противовоспалительное лекарственное средство.
34. Фармацевтическая композиция по п.33, содержащая нестероидное противовоспалительное лекарственное средство.
35. Фармацевтическая композиция по п.34, где указанное нестероидное противовоспалительное лекарственное средство выбирают из группы, состоящей из ибупрофена, кортикостероидов, преднизолона и подобного.
36. Фармацевтическая композиция по п.33, содержащая стероидное противовоспалительное лекарственное средство.
37. Фармацевтическая композиция по п.27, дополнительно содержащая одно или несколько других антител или их антигенсвязывающих частей.
38. Фармацевтическая композиция по п.27, дополнительно содержащая фармацевтический агент.
TM
39. Фармацевтическая композиция по п.38, где указанный фармацевтический агент выбирают из группы, состоящей из метотрексата, 6-МР, азатиопринсульфасалазина, мезалазина, олсалазинхлорхинин/гидроксихлороквина, пенцилламина, ауротиомалата, азатиоприна, кохицина, кортикостероидов, агонистов β-2 адренорецептора (сальбутамол, тербуталин, салметерал), ксантинов (теофиллин, аминофиллин), хромогликата, недокромила, кетотифена, ипратропия и окситропия, циклоспорина, FK506, рапамицина, микофенолята мофетила, лефлуномида, ингибиторов фосфодиэстеразы, аденозиновых агонистов, антитромбитических агентов, ингибиторов комплемента, адренергических агентов, агентов, влияющих на передачу сигнала посредством провоспалительных цитокиснов, таких как TNFα или IL-1 (например ингибиторы IRAK, NIK, IKK, p38 или МАР киназы), ингибиторов IL-1β превращающего фермента (например Vx740), анти P7s, лиганда р-селектингликопротеина (PSGL), ингибиторов TNFα-превращающего фермента (ТАСЕ), ингибиторов Т-клеточной передачи сигнала, таких как ингибиторы киназы, ингибиторов металлопротеиназы, сульфасалазина, азатиоприна, 6-меркаптопуринов, ингибиторов ангиотензин-превращающего фермента, растворимых цитокиновых рецепторов и их производных (например растворимые рецепторы TNF р55 или р75 и производные p75TNFRIgG (Enbrel) и p55TNFRIgG (Lenercept), sIL-1 RI, sIL-1RII, sIL-6R, растворимые рецепторы IL-13 (sIL-13)) и противовоспалительных цитокинов (например IL-4, IL-10, IL-11, IL-13 и TGFβ).
40. Способ по п.п.1, 25 и 26, где указанный препарат антитела с пониженным содержанием БКХ содержит одно или несколько антител против IL-18 или их антигенсвязывающих частей, и они являются мечеными.
41. Способ по п.40, где указанная метка является радиоактивной.
125
131
35
3
42. Способ по п.41, где указанную радиоактивную метку выбирают из группы, состоящей из I, I, S и Н.
43. Способ по п.40, где указанная метка является нерадиоактивной.
44. Способ по пп.1, 25 и 26, где указанный препарат антитела с пониженным содержанием БКХ содержит одно или несколько антител против IL-18 или их антигенсвязывающих частей, и они являются пэгилированными.