Разработка и валидация методики теста «Растворение» для таблеток римантадина

Хирургия. — 2001. — №3. — С. 34-35.

10. Нузов Б.Г. Комплексное лечение гнойных ран с использованием ненасыщенных жирных кислот и растительных стероидов (экспериментально-клиническое исследование): авто-реф. дис.... д-ра мед. наук. — М., 1991. — 43с.

11. Нузов Б.Г., Стадников А.А., Нузова О.Б. Оптимизация ре-паративной регенерации тканей. — М.: Медицина, 2012. — 200 с.

12. Оболенский В.Н. Хроническая рана: обзор современных методов лечения // Российский медицинский журнал. —

13. Олифсон Л.Е., Осадная Н.Д., Нузов Б.Г. Состав экстракта из просяной мучели // Пищевая промышленность. — 1989. —

14. Conley ]. Biofilm formation by group A streptococci: is there a relationship with treatment failure? // J. Clin. Microbiol. — 2003. — Vol 41, N 9. — P. 4043-4048.

15. Koseoglu H. Ultrastructural stages of biofilm development of Escherichia coli on urethral catheters and effects of antibiotics on biofilm formation // Urology. — 2006. — Vol. 68, N 5. — P. 942946.

REFERENCES

1.Blatun L.A., Mitish V.A., Paskhalova Yu.S., et.al. Rational systematic antibacterial therapy in patients with diabetes mellitus and surgical processes // Diabetes Mellitus and Surgical Infections: materials of the International scientific-practical congress devoted to the 40th anniversary of the Department of Wounds and Wound Infections of the Institute of Surgery named after A.V. Vishnevsky. — Moscow, 2013. — P. 24-25.

2. Bordunovskij V.N., Tertyshnik C.C., Yeremin I.V. Vacuum therapy of wounds // Collection of scientific-practical works devoted to the 70th anniversary of the South-Urals Railways and the 60th anniversary of the Chelyabinsk Medical Academy. — Chelyabinsk, 2004. — P. 349-353.

3. Bukharin O. V., Kurlaev P.P., Chernov O.L. Prognostication of the course of post-infectious abscesses by means of mathematical modeling // Khirurgiya. — 1999. — № 7. — P. 46-48.

4. Valysheva I.V. Antilactoferrin activity of microorganisms: Thesis PhD. — Orenburg, 2005. — 24 p.

5. Yegorov V.A. Organizational and economic studies to substantiate the creation and practical introduction of new, home-produced, antimicrobial phyto-preparations. — Moscow, 2001. — 562 p.

6. Yepifanov M.V., Yusupov Yu.N., Danilin V.N. Programmed irrigation and drainage use in the treatment of patients with local purulent infection of soft tissues. // Vestnik Khirurgii. — 2000. —

7. Zhadinsky N.V., Kondratenko G.P., Rudenko A.A. On the mechanism of post-injection abscesses occurance // Zhurnal

mikrobiologii, epidemiologii i immunologii. — 1989. — P. 80-83.

8. Kurlaev P.P. 'tte role of factors of bacterial persistence in pathogenesis, prediction and substantiation of treatment choice of patients with purulent — inflammatory diseases of soft tissues: Thesis DSc. — Orenburg, 2001. — 35 p.

9. Lokhvitsky S.V. Surgery of purulent wounds on foots // Khirurgiya. — 2001. — №3. — P. 34-35. (in Russian).

10. Nuzov B. G. Complex treatment of purulent wounds applying unsaturated fatty acids and vegetable steroids (experimental-clinical study): Thesis DSc. — Moscow, 1991. — 43 p. (in Russian).

11. Nuzov B.G., Stadnikov A.A., Nuzova O.B. Optimization of reparative tissues regeneration — Moscow: Meditsina, 2012. — 200 p.

12. Obolensky V.N. Chronic wounds: survey of modern treatment methods // Rossiyskiy Meditsinskiy Zhurnal. — 2013. —

13. Olifson L.E., Osadchaya N.D., Nuzov B.G. Composition of millet waste meal // Pishchevaya promyshlennoct'. — 1989. — №

14. Conley J. Biofilm formation by group A streptococci: is there a relationship with treatment failure? // J. Clin. Microbiol. —

15. Koseoglu H. Ultrastructural stages of biofilm development of Escherichia coli on urethral catheters and effects of antibiotics on biofilm formation // Urology. — 2006. — Vol. 68, N 5. — P. 942946.

e-mail: stydenikinl8@rambler.ru; Нузова Ольга Борисовна — д.м.н., профессор кафедры факультетской хирургии, e-mail: nuzova_27@mail.ru; Стадников Александр Абрамович — д.б.н., профессор, заслуженный деятель науки РФ, заведующий кафедрой гистологии, цитологии и эмбриологии, e-mail: k_histology@orgma.ru, тел. (3532) 772275.

Information About the Authors: Studenikin Alexander Viktorovich — postgraduate student at the Department of Faculty Surgery, e-mail: stydenikinl8@rambler.ru; Nuzova Olga Borisovna — MD, PhD, DSc, Professor of the Department of Faculty Surgery e-mail: nuzova _27@mail.ru; Stadnikov Alexander Abramovich — MD, PhD, DSc, Professor, Honoured Scientist of the Russian Federation, Head of the Department of Histology, Cytology and Embryology, e-mail: k_histology@

orgma.ru, (3532) 772275.

© ТЫЖИГИРОВА B.B. — 2015 УДК 615.281.8-073.585

РАЗРАБОТКА И ВАЛИДАЦИЯ МЕТОДИКИ ТЕСТА «РАСТВОРЕНИЕ» ДЛЯ ТАБЛЕТОК РИМАНТАДИНА

Валентина Викторовна Тыжигирова

Резюме. Разработана методика определения римантадина в среде растворения фотометрическим методом. Проведенные валидационные исследования показывают ее пригодность для оценки качества таблеток римантадина по тесту «Растворение».

Ключевые слова: римантадин, тест «Растворение», фотометрическое определение, валидация.

DEVELOPMENT AND VALIDATION OF DISSOLUTION PROCEDURE FOR RIMANTADINE TABLETS

V.V. Tyzhigirova

Summary. ^e method of determination of rimantadine in the dissolution medium by the photometric method has been developed. ^e performed validation studies indicate its adaptability for assessing the quality of rimantadine tablets by "dissolution" test.

Key words: rimantadine, dissolution test, photometric determination, validation.

70

Для твердых дозированных лекарственных форм (таблетки, капсулы, драже) тест «Растворение» является одним из важнейших критериев качества. Данное испытание позволяет моделировать высвобождение лекарственного вещества из лекарственной формы (ЛФ) в желудочно-кишечном тракте и в первом приближении характеризовать биологическую доступность лекар-

При проведении испытания создают условия высвобождения активного вещества из ЛФ, максимально приближенные к таковым в желудочно-кишечном тракте. В качестве среды растворения используют 0,1 М раствор хлористоводородной кислоты и буферные растворы с рН 6,8-7,6. В некоторых случаях допускается применение воды очищенной, а также водных раство-

поверхностно-активных веществ (натрия додецилсуль-фат, твин-80) или органических растворителей. Объем среды растворения обычно составляет 900 мл, но не может быть менее 500 мл, температура среды растворения поддерживается на уровне (37,0 ± 0,5) °С. Определение проводится в аппарате «Вращающаяся корзинка», «Лопастная мешалка» или «Проточная ячейка» [5].

Важным моментом является выбор аналитического метода для количественного определения высвободившегося активного вещества в среду растворения. Такой метод должен обладать высокой чувствительностью,

В соответствии с нормативной документацией (НД), регламентирующей качество ЛП Ремантадин таблетки 50 мг, определение растворения проводят на 6 произвольно выбранных таблетках. В течение 45 минут из каждой таблетки в раствор должно перейти не менее 75% римантадина относительно его заявленного содержания [3]. Количество римантадина, перешедшего в раствор, определяют аргентометрическим методом Фольгарда. Метод основан на титровании хлорид-ионов, образующихся при диссоциации римантадина в водном растворе.

Методика определения римантадина в среде растворения обладает невысокой чувствительностью, поэтому титрование проводят в микроварианте с использованием разбавленных стандартных растворов, что затрудняет фиксирование точки конца титрования. Метрологическая оценка методики на модельных смесях показала, что она отягощена систематической ошибкой (табл.1). Источником систематической ошибки является различие в произведениях растворимости осадков серебра хлорида и серебра тиоцианата (ПРДпГ| = 1,78-10 , ПРДп<;гм = 1,00-10 Осадок серебра хлорида более растворим, чем осадок серебра тиоцианата. Поэтому при титровании раствором аммония тиоцианата осадок серебра хлорида частично растворяется, что приводит к систематической ошибке, занижающей результаты анализа.

Цель нашего исследования заключалась в разработке новой методики количественного определения римантадина в среде растворения, отличающейся высокой чувствительностью и точностью.

Материалы и методы

В работе использовали субстанцию римантадина, ЛП Ремантадин таблетки 50 мг производства АО Олайнфарм (Латвия) и ОАО Биохимик (Россия), удовлетворяющие требованиям НД [3, 7]. Титрованные растворы серебра нитрата, аммония тиоцианата, индикатор и реактивы готовили и стандартизовали в соответствии с требованиями Государственной фармакопеи [1]. Для разработки методики использовали фотометрический метод в видимой области спектра. Оптическую плотность растворов регистрировали на спектрофотометре СФ-26 и фотоколориметре КФК-2. Величину рН буферных растворов измеряли с помощью универсального иономера ЭВ-74. Определение теста «Растворение» проводили по унифицированной методике [5] на приборе «Вращающаяся корзинка» фирмы Егмгека (Германия).

Валидность разработанной методики устанавливали в соответствии с требованиями ОФС «Валидация аналитических методик» [4].

Результаты и обсуждение

Римантадин по химическому строению представляет собой производное насыщенного углеводорода ада-мантана и не поглощает УФ-излучение. Поэтому исследования проводили в видимой области спектра после переведения римантадина в окрашенное соединение. В качестве цветореагента был выбран кислотный краситель бромтимоловый синий, образующий с римантади-ном комплексное соединение интенсивно желтого цвета. Спектр поглощения окрашенного продукта имеет максимум при длине волны 412 ± 2 нм. Были подобраны оптимальные условия образования и экстрагирования окрашенного продукта: pH буферного раствора 7,2; соотношение объемов водной и органической фаз 1:2; время экстрагирования 2 мин; однократная экстракция 10 мл хлороформа. Вспомогательные вещества таблеток (лактоза, крахмал картофельный, стеариновая кислота, поливинилпирролидон) не взаимодействуют с бромти-моловым синим и не мешают определению.

Проведенные исследования позволили разработать методику определения римантадина в среде растворения. В сосуд аппарата «Вращающаяся корзинка» помещают 900 мл воды очищенной и доводят температуру растворителя до 37,0±0,5 °С. В корзинку аппарата помещают одну таблетку, содержащую 50 мг римантадина. Опускают корзинку в среду растворения (вода очищенная) и включают мотор, вращающий корзинку со скоростью 100 об/мин. Через 45 мин после начала испытания отбирают 10 мл раствора и фильтруют через плотный бумажный фильтр, отбрасывая первую порцию фильтрата.

1 мл фильтрата переносят в делительную ворон-

1 мл 0,04% раствора бромтимолового синего, 10 мл хлороформа и экстрагируют в течение 2 минут. Хлороформное извлечение отделяют и фотометрируют на приборе КФК-2 при 400 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм относительно хлороформа. Параллельно проводят испытание с 1 мл раствора рабочего стандартного образца (PCO) римантадина с содержанием 50 мкг/мл.

Оценку пригодности разработанной методики для аналитических целей проводили посредством процедуры валидации по таким параметрам, как линейность, правильность, повторяемость (сходимость) результатов анализа, специфичность, аналитическая область методики [4].

Линейность методики определяли на модельных смесях с точным содержанием римантадина от 25 до 65 мкг/мл. Как видно из рис.1, разработанная методика отвечает требованиям линейности. В выбранном интервале концентрации наблюдается прямопропорцио-

D

0.6

0.5 О» 0.J 0.2 0.1 о

15 25 35 45 55 65

С, нк г/дел

Рис. 1. Зависимость оптической плотности окрашенного комплекса от содержания римантадина в пробе.

71

Таблица 1

Результаты валидации аргентометрической и фотометрической методик

Параметры валидации Критерии приемлемости Результаты валидации

Аргентометрия Фотометрия

Правильность Доверительный интервал среднего результата, включающий истинное значение (100%) 83,99 ± 4,53 100,5 ± 1,59

Сходимость Коэффициент вариации 1^0 < 2,0% 6,85% 2,0%

Специфичность Способность методики определять содержание активного вещества в присутствии сопутствующих компонентов Специфична Специфична

Линейность Коэффициент корреляции г > 0,99 г = 0,996 г = 0,990

Аналитическая область 50-120% от ожидаемой концентрации вещества в среде растворения 0,7-1,7 мг/мл 25-65 мкг/мл

нальная зависимость между оптическои плотностью и содержанием римантадина в пробе.

Для определения правильности и сходимости методики строили трехуровневый эксперимент по 3

Таблица 2

Результаты определения теста «Растворение» в таблетках римантадина

Наименование ЛП Высвобождение римантадина из таблеток, %

Определено аргентометрическим методом (НД) Определено фотометрическим методом

Таблетки Ремантадин 50 мг (АО Олайнфарм) 88,05 92,32

89,63 95,34

80,62 92,78

91,20 92,55

88,05 94,77

89,63 95,57

Таблетки Ремантадин 50 мг

80,19 91,86

83,34 89,30

75,48 81,88

82,35 91,86

83,34 84,43

78,62 87,68

опыта на каждом уровне в диапазоне 50- 120% от ожидаемой концентрации римантадина в среде растворения. Полученные данные подвергали статистической обработке в соответствии с требованиями ОФС «Статистическая обработка результатов химического эксперимента и биологических испытаний» [2]. Параллельно проводили валидацию методики аргенто-метрического титрования римантадина в среде растворения, изложенной в НД [3, 7]. Результаты валидации обеих методик представлены в табл. 1.

Как видно из таблицы 1, обе методики специфичны (вспомогательные вещества таблеток не мешают определению), линейны, коэффициент корреляции не ниже допустимого значения 0,99. Фотометрическая методика является правильной, так как значение, принимаемое за истинное (100%), лежит внутри доверительного интервала среднего результата. Напротив, в аргентометрической методике истинное значение находится за пределами доверительного интервала. Следовательно, она не является правильной, так как отягощена систематической ошибкой. Методика отличается и худшей сходимостью результатов анализа, о чем свидетельствует высокий коэффициент вариации (6,85%). Аналитическая область фотометрической методики исчисляется в мкг, а аргентометрической — в мг. Следовательно, фотометрическая методика является более чувствительной.

При испытании методик на серийных образцах таблеток римантадина двух производителей были получены результаты, представленные в табл. 2.

Как видно из таблицы 2, результаты анализа арген-тометрическим методом получаются заниженными как в таблетках АО Олайнфарм, так и в таблетках ОАО Биохимик. Это объясняется влиянием систематической ошибки, выявленной нами при валидации методики.

Полученные результаты также показывают, что таблетки отличаются по скорости растворения. Из таблеток первого производителя АО Олайнфарм высвобождается за 45 минут большее количество римантадина, чем из таблеток второго производителя ОАО Биохимик. Это обусловлено влиянием вспомогательных веществ, используемых в производстве таблеток ОАО Биохимик. Помимо лактозы, крахмала и стеариновой кислоты, в состав таблеточной массы входит поливилпирролидон, который выполняет роль пролонгатора и замедляет скорость высвобождения римантадина из таблеток.

Таким образом, процедура валидации показала, что аргентометрическая методика не отражает истинное содержание римантадина в среде растворения. Разработанная фотометрическая методика является более чувствительной и правильной, следовательно, пригодной для аналитических целей. Она может быть рекомендована для оценки качества таблеток римантадина по тесту «Растворение».

Конфликт интересов. Автор заявляет об отсутствии конфликта интересов.

Прозрачность исследования. Исследование не имело спонсорской поддержки. Исследователь несет полную ответственность за предоставление окончательной версии рукописи в печать.

Декларация о финансовых и иных взаимодействиях. Автор разрабатывал концепцию и дизайн исследования, готовил рукопись. Окончательная версия рукописи была им одобрена. Автор не получал гонорар за исследование.

Работа поступила в редакцию: 28.01.2015 г. ЛИТЕРАТУРА

во «Научный центр экспертизы средств медицинского приме-

2. Государственная Фармакопея СССР. Общие методы ана-

3. НД-7274-05. Ремантадин таблетки 50 мг.

4. ОФС 42-0113-09. Валидация аналитических методик.

5. ОФС 42-0003-04. Растворение.

6. Пантелеева Н.М., Илларионова Е.А. Определение теста «Растворение» таблеток ломефлоксацина спектрофото-метрическим методом с использованием внешнего образца сравнения калия хромата // Сибирский медицинский журнал

7. ФСП 42-0048626305. Ремантадин таблетки 50 мг.

REFERENCES

1. State Pharmacopoeia of the RF. — XII ed. — Moscow: Publishing house "Scientific Centre of Medical

Products", 2008. — Part 1. — 704 p. (in Russian). 2. State Pharmacopoeia of the USSR. Common methods of

72

3. ND-7274-05. Rimantadine, tablets 50 mg. (in Russian).

4. OFS 42-0113-09. Validation of analytical methods, (in Russian).

5. OFS 42-0003-04. Dissolution, (in Russian).

6. Panteleeva N.M., Illarionova E.A. Definition of the test dissolution of tablets of lomefloxacin by spectrophotometric method with use of the external sample of comparison of potassium chromate // Sibirskij Medicinskij Zurnal (Irkutsk). — 2009. — Vol.

7. FSP 42-0048626305. Rimantadine tablets 50 mg. (in Russian).

Информация об авторах: Тыжигирова Валентина Викторовна — к.ф.н., доцент, 664003, г. Иркутск, ул. Красного Восстания, 1, ИГМУ, кафедра фармацевтической и токсикологической химии.

тел.: (3952) 24-34-47; e-mail: olga.mormoeva@mail.ru.

Information About the Authors: Tyzhigirova Valentina Viktorovna — PhD, assistant professor, Russia, 664003, Irkutsk, Krasnogo Vosstaniya str., 1, ISMU, department of Pharmaceutical and Toxicological Chemistry,

tel. (3952) 243447; e-mail: olga.mormoeva@mail.ru.

© ПОПОВА Е.К., АРХИПОВА Н.С., ТОМСКИЙ М.И. — 2015 УДК 616.12-008.331.1-053.9

ЧАСТОТА АРТЕРИАЛЬНОЙ ГИПЕРТЕНЗИИ В ГРУППЕ БОЛЬНЫХ ИШЕМИЧЕСКОЙ БОЛЕЗНЬЮ СЕРДЦА ПОЖИЛОГО ВОЗРАСТА, ПРОЖИВАЮЩИХ В УСЛОВИЯХ КРАЙНЕГО СЕВЕРА

Елена Капшпоновна Попова1-2, Наталия Спартаковна Архипова1, Михаил Иннокентьевич Томский1 ('Якутский научный центр комплексных медицинских проблем, директор — д.м.н. М.И. Томский, лаборатория медико-социальных исследований и изучения функционального резерва человека, зав. — к.м.н. Н.П. Матвеева; -Северо-Восточный Федеральный университет им. М.К. Аммосова, ректор — д.п.н., проф., член-корр. РАО Е.И. Михайлова, кафедра пропедевтической и факультетской терапии с курсом эндокринологии и ЛФК,

Резюме. Целью исследования явилось изучение этнических различий по частоте артериальной гипертонии (АГ) у 505 больных гериатрического возраста с ишемической болезнью сердца (ИБС) и без ИБС, проживающих в условиях Крайнего Севера. Выявлено, что в группе лиц с ИБС отмечались более высокие уровни систолического и диастолического артериального давления, а также преобладала более тяжелая форма АГ III степени в сравнении с контрольной группой, независимо от этнической принадлежности (р<0,001). Обнаружены этнические различия по частоте АГ в зависимости от возраста: в группе больных некоренного этноса АГ чаще наблюдалась у больных пожилого возраста, у них встречались более высокие показатели индекса массы тела, в сравнении с якутами, у которых

Ключевые слова: артериальная гипертензия, ишемическая болезнь сердца, якуты, пожилой и старческий возраст, долгожители.

FREQUENCY OF ARTERIAL HYPERTENSION IN GROUPS OF PATIENTS WITH ISCHEMIC HEART DISEASE ELDERLY LIVING IN THE FAR NORTH

E.K. Popova1,2, N.S. Arkhipova1, M.I. Tomskii1 ('Yakutsk Science Centre of Complex Medical Problems, Russia;

2Medical Institute of North-Eastern Federal University, Yakutsk, Russia)

Summary, ^e aim of the study was to examine ethnic differences in the frequency of hypertension in 505 patients with geriatric age with CHD and without CHD who live in the Far North. Revealed that in the group with CHD had higher SBP and DBP, and prevailed more severe form of hypertension III degree, compared with the control group, regardless of ethnicity (p <0,00l). Found ethnic differences in frequency of hypertension according to age: in patients non-indigenous ethnic group of hypertension was more common in elderly patients, they met a higher BMI compared to Yakuts, who have the highest incidence of hypertension was in old age (p<0,0oi ).

Key words: hypertension, coronary heart disease, Yakuts, elderly and senile age, centenarians.

В современном обществе наблюдается неуклонный рост количества людей пожилого возраста, что не может не отражаться в увеличении доли сердечно-сосудистых заболеваний (ССЗ) в общей структуре заболеваемости. Более 80% смертности пациентов от ишемической болезни сердца (ИБС) наблюдается в возрасте старше 65

Известно, что у населения, проживающего в условиях Крайнего Севера, состояние здоровья определяется дополнительными факторами: длительным периодом низких температур воздуха, выраженными циклоническими колебаниями атмосферного давления, влажности и повышенной гелиомагнитной активностью [3, 11, 14]. Проведенные исследования показали, что у народов Крайнего Севера и других регионов с экстремальными климато-географическими условиями формируется во многом необычное для жителей средних широт пони-

Выявление основных факторов риска у лиц с ИБС в пожилом, старческом возрасте и у долгожителей приобретает особую актуальность в связи с увеличением доли

пожилых и старых людей в общей численности населения и с возможностью повлиять на продолжительность жизни [4, 8, 12, 13].

Целью исследования явилось изучение этнических, возрастных различий частоты артериальной гипертен-зии (АГ) и ее связь с основными факторами риска ИБС у мужчин некоренного этноса и якутов пожилого, старческого возраста и долгожителей, проживающих в условиях Крайнего Севера.

Материалы и методы

Данная работа выполнена в рамках совместной программы ФГБУ «НИИ терапии» СО РАМН и ФГБУ «ЯНЦ КМП» СО РАМН «Атеросклероз: эпидемиология, этио-патогенез и разработка мер профилактики, диагностики и лечения у жителей Крайнего Севера на примере населения Якутии». Дизайн исследования был одобрен локальным этическим комитетом Якутского научного центра комплексных медицинских проблем СО РАМН.

В исследование было включено 505 пациен-

73