СПОСОБ ПОДГОТОВКИ МЯГКИХ КОНТАКТНЫХ ЛИНЗ К ПРОДЛЕННОМУ НОШЕНИЮ
METHOD OF PREPARING SOFT CONTACT LENSES FOR PROLONGED CARRYING

Изобретение относится к области медицины, в частности к офтальмологии, и касается подготовки мягких контактных линз (МКЛ) к продленному ношению.
В последние десятилетия контактная коррекция зрения стала одним из ведущих методов устранения аномалий рефракции. Достоинства коррекции зрения с помощью МКЛ определяются не только высокой эффективностью их применения, но и безопасностью в сравнении с другими современными методами (лазерная коррекция).
-11
3
2
-11
3
2
Роговица относится к бессосудистым тканям глаза, что предопределяет ее повышенную чувствительность к гипоксии, например, при ограничении доступности кислорода атмосферного воздуха. Поэтому одним из существенных недостатков широко применяемых МКЛ является их малая кислородопроницаемость, выступающая в качестве причины развития хронической гипоксии в ткани роговицы при длительном ношении таких линз [1]. Для адекватного обеспечения кислородом роговицы глаза МКЛ продленного ношения, которые пациент может использовать не снимая на ночь, в течение длительного времени (до 30 суток), должны обладать кислородопроницаемостью при толщине оптического слоя 0,1 мм не менее 125·10 см·см/(см·c·мм рт.ст.) [2]. Расчет показывает, что полиакриламидные МКЛ даже с очень высоким содержанием воды (до 90%) имеют величину кислородопроницаемости порядка 80·10 см·см/см·с·мм рт.ст.) [3]. Следовательно, полиакриламидные МКЛ не могут использоваться в качестве линз продленного ношения. Увеличение кислородопроницаемости может быть достигнуто за счет уменьшения толщины таких линз. Однако реализации данного подхода препятствует малая прочность полиакриламидной МКЛ, имеющей высокое содержание воды.
Известно, что высокая кислородопроницаемость характерна для силоксансодержащих полимеров [4]. Тем не менее, МКЛ, изготовленные из полисилоксанов, создают выраженный дискомфорт у пациентов при продленном ношении. В качестве основного недостатка выступает гидрофобность таких МКЛ, ограничивающая их подвижность на роговице и способствующая отложению протеинов и липидов на поверхности полисилоксановых линз. Многочисленные способы гидрофилизации поверхности [5-11], увеличения водосодержания полисилоксановых полимеров посредством введения в их состав гидрофильных мономеров [12], придав мягким контактным линзам, изготовленным из таких материалов, удовлетворительные гидрофильные свойства, привели к снижению кислородопроницаемости до уровня, не позволяющего использовать их в режиме продленного ношения.
Известно также использование силикон-гидрогелей для изготовления МКЛ, пригодных для продленного ношения [13-17]. Способы придания гидрофильности поверхности [18, 19] или всему объему материала таких линз [20] привели к значительному усложнению технологии, возрастанию трудоемкости производства, потребовали применения дорогостоящих реактивов при синтезе макромеров и проведении полимеризации, что и предопределило высокую стоимость МКЛ с микрогетерогенной структурой при весьма удовлетворительных эксплуатационных характеристиках.
Кроме того, известно, что химическая связь углерод-фтор обладает высокой прочностью и практически не подвержена метаболическим преобразованиям в биологических системах, в том числе и с участием микроорганизмов. При этом жидкие фторорганические соединения могут растворять в себе значительные объемы кислорода и диоксида углерода, что позволяет использовать их в качестве газотранспортных сред в биологии и медицине. И именно поэтому фторуглероды привлекают пристальное внимание специалистов как материал для создания МКЛ. В частности, частично фторированные органические соединения предложено использовать в качестве сшивающего агента [21]. Известно применение композитов, содержащих 15-85 мас.% перфторалкил(алкен)метакрилатов [22]. Перфторполиэфиры с виниловыи сегментами в виде полимеров нашли применение и в качестве основного структурного материала для изготовления МКЛ [23]. С аналогичными целями предложено использовать полимеризуемые перфторалкилэфиры силоксана [24] или эфиры иных соединений с большим количеством полимеризуемых групп [25, 26].
-11
3
2
Но необходимо принимать во внимание, что применение фторорганических соединений для синтеза полимерного матрикса МКЛ обеспечивает, по сути дела, создание фторопластов - достаточно прочных, весьма гидрофобных, недостаточно эластичных и, в отличие от жидких фторутлеродов, мало проницаемых для кислорода соединений, перспективы применения которых для изготовления МКЛ продленного ношения не очевидны. А природа фторуглеродов, которые используются или могут быть использованы для создания полимерного матрикса МКЛ, такова, что попытки улучшения той, либо иной эксплуатационной характеристики материала линзы с неизбежностью ухудшают его другие показатели. С учетом этого, предложено создавать гибридные контактные линзы, содержащие жесткое газопроницаемое ядро, промежуточный участок и адаптированную к тканям глаза периферийную часть [27]. При этом в качестве основы для создания газопроницаемой центральной части МКЛ могут быть использованы фторированные акрилаты, метакрилаты и стиролы. Однако жесткое ядро таких МКЛ имеет величину коэффициента пропускания кислорода, которая не превышает 30·10 см·см/(см·с·мм рт.ст.) и, следовательно, претендовать на роль линз продленного ношения они не могут.
Таким образом, применение кислородонасыщаемых фторированных органических соединений в качестве заместителей в полимерных структурных основах, пригодных для создания МКЛ, давно апробировано в офтальмологической практике.
Вместе с тем, предлагаемые образцы и способы их получения по экономическим, технологическим и эксплуатационным показателям нельзя признать приемлемыми.
Наиболее близким по технической сущности к заявляемому изобретению является способ подготовки мягких контактных линз к применению [28], принятый в качестве прототипа. Указанный способ заключается в том, что из изотонического раствора натрия хлорида перед применением МКЛ на 20 минут помещают в эмульсию перфтордекалина для насыщения матрикса линзы газопереносящей эмульсией фторуглерода.
Недостатками этого способа являются:
- эмульсия перфтордекалина, увеличивая кислородопроницаемость МКЛ, не обеспечивает адекватной скорости доставки кислорода к роговице глаза и 10% от общего числа пациентов отмечают проявления дискомфорта при ношении линз, подготовленных по способу-прототипу;
- перфторуглеродная эмульсия, не взаимодействуя с полимером оптической среды, не может длительное время удерживаться в матриксе мягкой контактной линзы, вымывается слезной жидкостью и поэтому подготовка по способу-прототипу не обеспечивает возможность продленного ношения МКЛ;
- эмульсия перфтордекалина не препятствует накоплению в составе мягкой контактной линзы белков и инфекционных агентов, что может провоцировать развитие воспалительной реакции со стороны роговицы и конъюнктивы глаза.
Цель изобретения - улучшение эксплуатационных свойств мягких контактных линз посредством увеличения их кислородопроницаемости, биологической совместимости и устойчивости к действию агрессивных сред для обеспечения возможности продленного ношения.
В заявляемом изобретении реализован принцип физико-химического взаимодействия фторорганических соединений и гидрофильного полимера, отличный от ранее использованного ковалентного связывания, позволяющий осуществить насыщение линзы жидкими фторуглеродами, сохраняющими при этом газорастворяющие свойства, и удержание фторированных органических соединений в составе органического матрикса МКЛ.
Возможность достижения цели изобретения демонстрируется следующими примерами.
Пример 1. Содержание способа подготовки мягких контактных линз к продленному ношению.
Реализация способа подготовки мягких контактных линз к продленному ношению схематично проиллюстрирована на фиг.1.
Для подготовки мягких контактных линз к продленному ношению были использованы химически чистые жидкие частично фторированные органические соединения (фтортензиды):
3
2
n
2
m
фтортензид-1 - СF(СF)СОNН(СН)ОН при n=4-6, m=1-3,
фтортензид-2-  при n=4-6, m=1-3,
и химически чистые жидкие полностью фторированные органические соединения:
2
3
3
3
перфтортрибутиламин - N[(СF)СF],
10
18
перфтордекалин - CF,
перфторполиэфир-1-  при n=13-18, m=1-2,
перфторполиэфир-2-  при m=1-2.
Подготовка МКЛ осуществлялась как с использованием химически чистых жидких частично фторированных и полностью фторированных органических соединений, так и их смесей. Соотношение частично фторированных органических соединений (фтортензид-1 и фтортензид-2) и полностью фторированных органических соединений (перфтортрибутиламин, перфтордекалин, перфторполиэфир-1 и перфторполиэфир-2) в их смесях составляло от 0,1:99,9 до 99,9:0,1 об.%.
Сущность способа заключается в том, что подготовка линз производится последовательно в два этапа: на первом этапе осуществляют полное вытеснение воды из матрикса МКЛ одним из химически чистых жидких частично фторированных органических соединений либо их смесью, а на втором этапе удаляют из матрикса линзы избыток жидкого частично фторированного органического соединения (смеси жидких частично фторированных органических соединений) одним из химически чистых жидких полностью фторированных органических соединений либо смесью жидких полностью фторированных органических соединений.
Вытеснение воды из органического матрикса МКЛ осуществляют при помещении линзы в одно из химически чистых жидких частично фторированных органических соединений (либо их смесь) и нагревании до температуры кипения воды. Нагревание после достижения температуры кипения воды продолжают в течение 10-15 минут до момента, когда прекращается выделение пузырьков паров воды из матрикса линзы.
В процессе вытеснения воды гидрофильные нефторированные участки молекул частично фторированных органических соединений вступают в физико-химическое взаимодействие с полимером матрикса МКЛ. А гидрофобные фторированные сегменты данных молекул, не имеющие тропности к органическим полимерам, ориентируются оппозитно по отношению к их цепям. В последующем фторированные сегменты частично фторированных органических соединений вступают во взаимодействие с жидким перфторуглеродом, удерживая и координируя пространственное расположение его молекул. Удаление избытка частично фторированного органического соединения (смеси частично фторированных органических соединений) из состава линзы обеспечивают на втором этапе подготовки посредством помещения МКЛ в среду жидкого полностью фторированного органического соединения (смеси жидких полностью фторированных органических соединений), нагревания до температуры, равной 100°С, и выдерживания при данной температуре в течение 10-15 минут.
Пример 2. Оценка кислородопроницаемости мягких контактных линз, подготовленных заявляемым способом и по способу-прототипу.
Данные по оценке величины кислородопроницаемости МКЛ, подготовленных с применением заявляемого способа и способа-прототипа, представлены в таблице 1.
-11
3
2
-11
3
2
Из данных таблицы 1 видно, что в зависимости от состава частично или полностью фторированных органических соединений, использованных для подготовки МКЛ, показатели кислородопропускания материала линз несколько различаются. Но для всех представленных вариантов подготовки МКЛ заявляемым способом характерен высокий уровень кислородопроницаемости линз, составляющий (160-195)·10 см·см/см·см·мм рт.ст.) и позволяющий обеспечить адекватное снабжение роговицы кислородом при их продленном ношении. При подготовке МКЛ с использованием способа-прототипа величина коэффициента кислородопроницаемости линз была существенно ниже, чем в случаях подготовки заявляемым способом, и составляла (75-80)·10 см·см/(см·см·мм рт.ст.).
Все использованные для подготовки мягких контактных линз фторированные органические соединения, перечисленные в таблице 1, характеризуются тем, что имеют температуру кипения более 140°С и давление насыщенного пара менее 0,002 МПа при нормальных условиях, то есть являются малолетучими жидкостями.
Пример 3. Оценка способности материала мягких контактных линз, подготовленных к применению заявляемым способом и способом-прототипом, накапливать протеины и бактериальные клетки.
7
Ощущения дискомфорта при ношении МКЛ в определенной степени обусловлены тем, что в материале линзы накапливаются протеины и бактериальные клетки. Для подтверждения возможности продленного ношения МКЛ, подготовленной заявляемым способом, были проведены исследования способности образцов таких линз накапливать в своем составе белки и микроорганизмы. Образцы МКЛ, подготовленных заявляемым способом и способом-прототипом, погружали в 5% раствор альбумина или в жидкую питательную среду, содержащую кишечную палочку в количестве 1·10 КОЕ/мл, и выдерживали в термостате при 37°С в течение 24 часов. Через сутки линзы трижды промывали 2% раствором бикарбоната натрия и споласкивали стерильным физиологическим раствором хлорида натрия, измельчали скальпелем и гомогенизировали в гомогенизаторе «стекло-стекло» с добавлением кварцевого песка в физиологическом растворе хлорида натрия. Гомогенат центрифугировали при 2000 g в течение 15 минут и определяли содержание белка в супернатанте (в случае, когда образцы МКЛ выдерживались в 5% растворе альбумина) или использовали его для бактериологического посева (в случае, когда образцы МКЛ находились в контакте с бактериальной культурой). Результаты экспериментов представлены в таблицах 2 и 3.
Как видно из данных таблиц 2 и 3, материал МКЛ, подготовленных к ношению заявляемым способом, не способен накапливать ни белок, ни бактериальные клетки.
Пример 4. Оценка устойчивости материала мягких контактных линз, подготовленных заявляемым способом и по способу-прототипу, к действию агрессивных сред.
Образцы МКЛ, подготовленных заявляемым способом и по способу-прототипу, одновременно помещали в стерильные растворы щавелевой кислоты (рН 3,0) и натриевой щелочи (рН 10,0), а также в перевиваемую бульонную культуру β-гемолитического стрептококка. Сохранность МКЛ оценивали через три года посредством микроскопии с определением степени узурированности контура и поверхности линз. Результаты экспериментов приведены в таблице 4.
Как видно из данных таблицы 4, материал МКЛ, подготовленных к применению заявляемым способом, не претерпел значимых изменений под влиянием длительного воздействия агрессивных сред и бактериальной культуры.
Таким образом, полученные экспериментальные доказательства устойчивости материала мягкой контактной линзы, подготовленной к ношению заявляемым способом, к действию агрессивных сред и отсутствия у него способности накапливать белок и бактериальные клетки указывают на возможность применения МКЛ в варианте продленного ношения.
Пример 5. Клиническая оценка эксплуатационных свойств МКЛ, подготовленных заявляемым способом и по способу-прототипу, на экспериментальных моделях.
Исследования эксплуатационных свойств подготовленных заявляемым способом МКЛ проведены на 72 кроликах (самцах) породы шиншилла массой тела 2,5-3,0 кг. Животные были разделены на группы по 6 особей в каждой. В качестве контроля служил правый глаз. Для удержания МКЛ на левом глазу использовались синтетические маски с фиксацией их за ушные раковины животных. Маски не ограничивали приема пищи и воды.
Наблюдения за животными производили ежедневно: изучали поведение животных, осуществляли осмотр глаз в проходящем свете и биомикроскопию роговицы, оценивали состояние сосудов конъюнктивы и лимба, степень неоваскуляризации, выраженность отека роговицы по сравнению с контрольным глазом, подвижность МКЛ.
Результаты наблюдений позволяют заключить, что, несмотря на высокую кислородопроницаемость МКЛ, подготовленных заявляемым способом, в период адаптации к ним, т.е. в течение первых трех суток ношения, наблюдаются отдельные случаи минимальных проявлений обратимых гипоксических феноменов и сосудистых реакций со стороны роговицы и конъюнктивы у экспериментальных животных. В течение последующих двух недель никаких проявлений гипоксии и воспалительных изменений не фиксировали. В отличие от этого, ношение МКЛ, подготовленных по способу-прототипу, индуцировало манифестацию проявлений гипоксии и воспалительной реакции со стороны роговицы, постепенно усиливавшиеся в течение четырех недель.
Пример 6. Морфологические исследования биологической совместимости МКЛ, подготовленных заявляемым способом и по способу-прототипу.
Избранный экспериментальный метод морфологических исследований обладал высокой чувствительностью и позволял провести сравнение эксплуатационных свойств МКЛ, подготовленных заявляемым способом и по способу-прототипу.
При проведении морфологических исследований оценивали общую структуру роговицы, состояние интерстициального матрикса и клеток соединительной ткани собственной пластинки, а также изменения плоского неороговевающего и десцеметова эпителия. При гистохимическом исследовании степень дистрофических изменений эпителия определяли по накоплению рибонуклеопротеидов (реакция Эйнарсона), характеризующих процессы биосинтеза белка. О развитии гипоксических изменений в клетках при продленном ношении мягких контактных линз судили по соотношению активностей дегидрогеназ лактата и сукцината. Контролем служили интактные животные.
Микрофотографии роговицы после продленного ношения МКЛ, подготовленных заявляемым способом и по способу-прототипу, представлены на фиг.2, а сводные данные о морфологических изменениях и активности дегидрогеназных ферментов представлены в таблицах 5 и 6 соответственно.
Из представленных на фиг.2 и в таблицах 5 и 6 данных видно, что при продленном ношении МКЛ, подготовленных заявляемым способом, в отличие от применения МКЛ, подготовленных по способу-прототипу, в роговице кроликов отмечаются лишь минимальные морфологические изменения, при отсутствии признаков гипоксии. В частности, применение МКЛ, подготовленных заявляемым способом, не приводит к повышению активности лактатдегидрогеназы в клетках эпителия роговицы и не сопровождается снижением активности сукцинатдегидрогеназы вследствие разрушения митохондрий, как это наблюдается при применении МКЛ, подготовленных по способу-прототипу.
Пример 7. Исследование неферментативного окисления влаги передней камеры глаза кроликов при продленном ношении мягких контактных линз, подготовленных заявляемым способом и по способу-прототипу.
Исследование интенсивности свободнорадикального окисления во влаге передней камеры глаза у экспериментальных животных производили с помощью биохемилюминометра БХЛ-06 (Россия) по общепринятой методике [29]. Результаты исследования приведены в таблице 7.
Использование мягких контактных линз, подготовленных к ношению заявляемым способом, у кроликов в течение семи суток привело к возрастанию интенсивности свободнорадикального окисления во влаге передней камеры глаза на 15% и величины общей окислительной активности на 11%. Данные показатели, характеризующие интенсивность неферментативного окисления, имели тенденцию к снижению в течение эксперимента, достигли контрольных значений к 30 суткам ношения МКЛ и оставались на уровне контроля после их снятия. Изменения, индуцированные МКЛ, подготовленными по способу-прототипу, были более выраженными и усиливались на протяжении четырех недель эксперимента. Полученные результаты позволили констатировать тот факт, что при продленном ношении МКЛ, подготовленных заявляемым способом, умеренную стимуляцию интенсивности свободнорадикального окисления, отражающую наличие минимальной гипоксии, наблюдали только в течение первых двух недель использования МКЛ.
Таким образом, МКЛ, подготовленная к ношению заявляемьм способом, обладает лучшими эксплуатационными характеристиками в сравнении с МКЛ, подготовленной по способу-прототипу. Например, как видно из таблицы 1, величина кислородопроницаемости МКЛ, подготовленной к применению заявляемым способом, вдвое превышает аналогичный показатель МКЛ, подготовленной по способу-прототипу. Материал МКЛ, подготовленной с применением заявляемого способа, не накапливает в своем составе белок, бактериальные клетки (таблица 2 и таблица 3), устойчив к длительному воздействию различных агрессивных сред (таблица 4) и, обладая приемлемой биологической совместимостью, оказывает лишь минимальное влияние на роговицу глаза при продленном ношении (фиг.2, таблицы 5-7). Следовательно, проведенные исследования показали, что по критериям гипоксических проявлений, морфологических изменений тканей, манифестации токсико-аллергических реакций МКЛ, подготовленные к применению заявляемым способом, могут быть использованы в варианте продленного ношения при сохранении их эксплуатационных свойств в течение нескольких лет и это доказывает возможность реализации заявляемого изобретения.
Заявляемое изобретение удовлетворяет критерию «новизна», так как впервые предлагается способ подготовки мягких контактных линз, основанный на физико-химической фиксации фторуглеродов на сетке органического матрикса линзы, что придает качественно новые эксплуатационные характеристики оптическому материалу и обеспечивает  продленное ношение МКЛ.
Заявляемое изобретение удовлетворяет критерию «изобретательский уровень», так как в известных и доступных источниках информации, содержащих описание кислородопроницаемых контактных линз на основе применения фторированных полимеров или эмульсии фторуглерода, нет сведений, из которых была бы очевидна возможность реализации метода физико-химической фиксации на сетке органического матрикса мягкой контактной линзы частично фторированных органических соединений и удержания последними перфторуглеродов, обеспечивающих линзам высокую кислородопроницаемость и пригодность для продленного ношения.
Соответствие критерию промышленное применение доказывается результатами приведенных лабораторных и клинических исследований, из которых видно, что заявляемый способ подготовки мягких контактных линз позволяет обеспечить достаточно высокий уровень кислородопроницаемости МКЛ, сохранить их эксплуатационные свойства на протяжении 3 лет, избежать дистрофические изменения эпителия роговицы при ношении таких линз в течение нескольких недель, т.е. обеспечить возможность их продленного ношения. Используемые при реализации заявляемого способа подготовки МКЛ фторуглероды относительно недороги и коммерчески доступны в Российской Федерации [30]. Заявляемый способ подготовки мягких контактных линз к ношению отличается простотой, не требует сложного и дорогостоящего оборудования и может проводиться в качестве заключительной стадии существующей промышленной технологии.
Таблица 2
Определение способности материала мягких контактных линз, подготовленных заявляемым способом и способом-прототипом, аккумулировать белок (альбумин).
Способ подготовки мягких контактных линз
Содержание белка, мг/г массы линзы
Способ-прототип
17,2±0,65
Заявляемый способ
не обнаружено
Таблица 3
Определение способности материала мягких контактных линз, подготовленных заявляемым способом и способом-прототипом, накапливать Escherichia coli
Способ подготовки мягких контактных линз
Рост бактерий
Способ-прототип
бурный рост
Заявляемый способ
нет роста
Таблица 4
Сохранность мягких контактных линз, подготовленных заявляемым способом и способом-прототипом, через 3 года после хранения в агрессивных средах по данным микроскопии
Способ подготовки мягких контактных линз
Сохранность мягких контактных линз в агрессивной среде
кислотный раствор
щелочной раствор
бактериальная культура
Способ-прототип
выраженная узурация края, выщерблены на поверхности МКЛ и ее помутнение
омыление МКЛ, снижение ее упругости и помутнение
субтотальное разрушение МКЛ
Заявляемый способ
отсутствие изменений
слабое омыление поверхности МКЛ, преодолеваемое промыванием в дистиллированной воде
сохранение формы изделий, отсутствие узурации контуров и выщерблин на поверхности
Таблица 6
Динамика активности дегидрогеназных ферментов в клетках роговицы кроликов при продленном ношении мягких контактных линз, подготовленных заявляемым способом и способом-прототипом
Способ подготовки мягких контактных линз
Продолжительность ношения, сутки
Продолжительность восстановительного периода, сутки
Динамика активности дегидрогеназных ферментов
Сукцинатдегидрогеназы, ед. опт. плотн.
Лактатдегидрогеназы, ед. опт. плотн.
Контроль (интактные)
-
-
0,26±0,08
0,39±0,09
Способ-прототип
7
0
0,29±0,13
0,42±0,13
15
0
0,36±0,14
0,77±0,18*
30
0
0,12±0,04
0,89±0,07*
7
0,19±0,08
0,64±0,07*
15
0,28±0,07
0,49±0,16
30
0,27±0,08
0,45±0,11
Заявляемый способ
7
0
0,21±0,07
0,41±0,14
15
0
0,26±0,09
0,45±0,08
30
0
0,35±0,12
0,50±0,12
7
0,29±0,09
0,49±0,13
15
0,26±0,06
0,45±0,09
30
0,21±0,05
0,32±0,07
Примечание: * - отличия достоверны по отношению к контрольной группе животных при р<0,05
Таблица 7
Динамика интенсивности свободнорадикального окисления и общей окислительной активности влаги передней камеры глаза кроликов при продленном ношении мягких контактных линз, подготовленных заявляемым способом и способом-прототипом
Способ подготовки мягких контактных линз
Продолжительность ношения, суток
Продолжительность восстановительного периода, суток
Динамика активности дегидрогеназных ферментов
Сукцинатдегидрогеназы, ед. опт. плотн.
Лактатдегидрогеназы, ед. опт. плотн.
Контроль (интактные)
-
-
2,35±0,06
6,58±0,08
Способ-прототип
7
0
3,17±0,09*
8,36±0,13*
15
0
3,24±0,11*
8,48±0,12*
30
0
3,43±0,1*
8,69±0,15*
7
2,93±0,09*
7,51±0,11*
15
2,68±0,07*
7,07±0,1*
Заявляемый способ
7
0
2,71±0,07*
7,31±0,1*
15
0
2,59±0,06*
7,17±0,07*
30
0
2,49±0,05
6,84±0,09
7
2,41±0,06
6,63±0,07
15
2,40±0,06
6,56±0,08
Примечание: * - отличия достоверны по отношению к контрольной группе животных при р<0,05
Список литературы
1. Даниличев В.Ф. [и соавт.] // Усовершенствование методов и аппаратуры, применяемых в учебном процессе, медико-биологических исследованиях и клинической практике. - 1998. - Вып.29. - С.28-29.
2. Harvitt D.V., Bonnano J.A. // Optometry and Vision Science - 1998. - №12. -P.189.
3. Тиге Б. // Вестник оптометрии. - 2001. - №1. - С.52-60.
4. Энциклопедия полимеров. T.1. - М.: Советская энциклопедия, 1972. -С.589.
5. US Patent 5364918, 15.11.1994.
6. US Patent 5525691, 11.06.1996.
7. US Patent 5219965, 15.06.1993.
8. US Patent 5135297, 4.08.1992.
9. US Patent 4055378, 25.10.1977.
10. US Patent 4122942, 31.10.1978.
11. US Patent 4214014, 22.06.1980.
12. US Patent 4139513, 13.02.1979.
13. US Patent 5070215, 3.12.1991.
14. US Patent 6367929, 9.04.2002.
15. US Patent 5352714, 4.10.1994.
16. US Patent 5260000, 9.11.1993.
17. US Patent 5321108, 14.06.1994.
18. WO Patent 0134312, 17.05.2001.
19. US Patent 6348507, 19.02.2002.
20. Патент РФ 2269552, 23.12.2004.
21. Патент РФ 96111006 (7.06.1995, USA).
22. US Patent 4954587, 4.09.1990.
23. WO Patent 96/31791, 4.04.1995.
24. WO Patent 96/31547, 4.04.1995.
25. WO Patent 96/31546, 4.04.1995.
26. WO Patent 96/31545, 4.04.1995.
27. Патент РФ 2006132488 (13.02.1004. USA).
28. Патент РФ 2120281, 16.04.1996 (прототип).
29. Арутюнян А.В., Дубинина Е.Е., Зыбина Н.Н. Методы оценки свободнорадикального окисления и антиоксидантной системы организма: Методические рекомендации. - СПб.: ИКФ Фолиант.- 2000. -104 с.
30. Промышленные фторорганические продукты: справ, изд. / Б.Н.Максимов, В.Г.Барабанов, И.Л.Серушкин [и соавт.]. - СПб.: Химия. - 1996. - 554 с.