СПОСОБ ПРОИЗВОДСТВА ПРОТИВОВИРУСНЫХ ВАКЦИН В СУСПЕНЗИОННЫХ ЛИНИЯХ ПТИЧЬИХ ЭМБРИОНАЛЬНЫХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК

1. Способ репликации вируса, который выбирают из группы, состоявшей из аденовирусов, гепаднавирусов, вирусов герпеса, ортомиксовирусов, паповавирусов, парамиксовирусов, пикорнавирусов, поксвирусов, реовирусов и ретровирусов, в птичьих эмбриональных стволовых клетках ЕВх, включающий стадии:
a) пролифирации указанных клеток ЕВх в сосудах для культивирования, в суспензии, в свободной от сыворотки среде №1;
b) инфицирования указанных клеток выбранным вирусом при плотности клеток, по меньшей мере, примерно 1.5 миллиона клеток/мл;
c) добавления к клеточной культуре свободной от сыворотки среды №2 незадолго до инфицирования, одновременно с инфицированием или сразу после инфицирования; и
d) дальнейшего культивирования указанных инфицированных клеток с целью создать условия для репликации вируса; и
e) необязательно, сбора указанного вируса.
2. Способ по п.1, согласно которому в качестве сосуда для культивирования используют непрерывно перемешиваемый резервуар-биореактор.
3. Способ по п.1, согласно которому свободная от сыворотки среда №1 и свободная от сыворотки среда №2 являются одной и той же средой.
4. Способ по п.1, согласно которому свободная от сыворотки среда №1 и свободная от сыворотки среда №2 имеют разный состав.
5. Способ по п.1, согласно которому от 0.25 до 10 объемов свободной от сыворотки среды №2 добавляли к свободной от сыворотки среде №1.
6. Способ по п.1, согласно которому свободная от сыворотки среда №1 и/или свободная от сыворотки среда №2 дополняют, по меньшей мере, одним ингредиентом, который выбирают из группы, состоящей из аминокислот, липидов, жирных кислот, холестерина, углеводов, гидролизатов белков неживотного происхождения и их смесей.
7. Способ по п.1, включающий дополнительную стадию подкормки клеток, по меньшей мере, одним ингредиентом, который выбирают из группы, состоящей из аминокислот, жирных кислот, углеводов, гидролизатов белков неживотного происхождения и их смесей.
8. Способ по п.7, согласно которому подкормку проводят в ходе стадий от а) до d), предпочтительно, в ходе стадий от b) до d).
9. Способ по п.8, согласно которому подкормку проводят ежедневно.
10. Способ по п.6, согласно которому аминокислоты выбирают из группы, состоящей из аспарагина и глутамина или их смеси.
11. Способ по п.10, согласно которому подкормку глутамином проводят в ходе стадий от а) до d), для поддержания концентрации глутамина в среде от 0,5 до 5 мМ, предпочтительно, примерно 2 мМ.
12. Способ по п.6, согласно которому углеводы выбирают из группы, состоящей из D-глюкозы и D-галактозы или их смеси.
13. Способ по п.12, согласно которому подкормку D-глюкозой проводят в ходе стадий от b) до d) для поддержания концентрации D-глюкозы в среде примерно от 0,5 г/л до 25 г/л D-глюкозы, предпочтительно, примерно 2 г/л D-глюкозы.
14. Способ по п.6, согласно которому жирные кислоты выбирают из группы, состоящей из пальмитиновой кислоты, пальмитолеиновой кислоты, стеариновой кислота, олеиновой кислоты, линолевой кислоты, линоленовой кислоты и их производных или их смеси.
15. Способ по п.6, согласно которому белковые гидролизаты неживотного происхождения выбирают из группы, состоящей из бактериального триптона, дрожжевого триптона, гидролизатов растений, таких как гидролизаты сои или их смеси.
16. Способ по п.1, согласно которому клетки ЕВх культивируют в суспензии в виде комочков клеток.
17. Способ по п.1, согласно которому на стадии а), по меньшей мере, один пассаж, предпочтительно, по меньшей мере, все пассажи культуры клеток ЕВх из одного культурального сосуда в другой проводят путем разведения без разрушения комочков клеток ЕВх.
18. Способ по п.1, согласно которому на стадии а), по меньшей мере, один пассаж, предпочтительно, по меньшей мере, все пассажи культуры клеток ЕВх из одного культурального сосуда в другой не включают стадию центрифугирования и/или разрушения комочков клеток.
19. Способ по п.1, согласно которому стадию с) проводят после стадии инфицирования b), предпочтительно, примерно через 1 час после стадии b).
-6
-3
-5
-4
20. Способ по п.1, согласно которому стадию инфицирования b) проводят при m.o.i (множественности инфекции) примерно от 10 до 10, предпочтительно примерно от 10 до 10 и более предпочтительно примерно 10.
21. Способ по п.1, согласно которому вирус представляет собой природный поксвирус или рекомбинантный поксвирус, который выбирают из группы, состоящей из модифицированного осповакцинного вируса Анкара (MVA), вируса оспы птиц, вируса оспы канареек (например, ALVAC), вируса оспы юнко, вируса оспы майны, вируса оспы голубей, вируса оспы попугаев, вируса оспы перепелов, вируса оспы воробьев, вируса оспы скворцов, вируса оспы индеек.
22. Способ по п.1, согласно которому вирус представляет собой природный вирус или рекомбинантный вирус, который выбирают из группы, состоящей из вируса кори и вируса эпидемического паротита.
23. Способ по п.1, согласно которому вирус выбирают из вируса гриппа человека, вируса гриппа птиц, вируса гриппа свиней, вируса гриппа лошадей, вируса гриппа кошек.
24. Способ по п.23, согласно которому указанный вирус гриппа человека был штаммом А, который выбирают из штаммов H1N1, H2N2, H3N2, H4N2, H4N6, H5N1, H7N7 и H9N2.
25. Способ по п.1, согласно которому стадию культивирования а) осуществляют как периодическую культуру клеток, выращиваемую в замкнутом объеме, как многократную культуру клеток, выращиваемую в замкнутом объеме, как подпитываемую культуру или как перфузируемую культуру.
26. Способ по п.1, согласно которому инфицирование на стадии b) проводят при плотности клеток примерно, по меньшей мере, 4 миллиона клеток/мл в способе с периодической культурой клеток, выращиваемой в замкнутом объеме, или в способе с подпитываемой культурой, предпочтительно, 6 миллионам клеток/мл.
27. Способ по п.1, согласно которому инфицирование на стадии b) проводят при плотности клеток примерно, по меньшей мере, 8 миллиона клеток/мл в способе с перфузируемой культурой предпочтительно примерно от 9 до 10 миллионов клеток/мл.
28. Способ по п.1, согласно которому рН свободной от сыворотки культуральной среды на стадиях а), b), с) и d) составляет от 6,5 до 7,8.
29. Способ по любому из пп.1-28, согласно которому стадия d) продолжается от 2 до 10 дней перед сбором клеток.
30. Способ по п.1, согласно которому культивирование клеток проводили при температуре от 30 до 39°С, предпочтительно примерно при 37°С.
31. Вирус, полученный согласно способу по любому из пп.1-30.
32. Вакцина, содержащая вирус по п.31, необязательно, в комбинации с веществами, которые увеличивают иммунный ответ.
33. Вакцина по п.32, в которой вирус присутствует в виде интактных вирусных частиц.
34. Вакцина по п.32, в которой вакцина содержит изолированные белки этого вируса.
35. Вакцина, включающая линию инфицированных клеток ЕВх, полученную способом по любому из пп.1-30, в которой линию инфицированных клеток ЕВх собирали на стадии d).
36. Диагностическая композиция, содержащая вирус по п.31 или его компоненты.