СПОСОБЫ ПОЛУЧЕНИЯ И ПРИМЕНЕНИЯ МУЛЬТИШАПЕРОН-АНТИГЕННЫХ КОМПЛЕКСОВ

1. Способ получения мультишаперон-антигенных комплексов, предусматривающий:
(a) приведение в контакт биологического образца с твердой фазой, с которой ковалентно связаны НОР-аффинные молекулы, в условиях, при которых мультишаперон-антигенные комплексы в биологическом образце связываются с указанными НОР-аффинными молекулами;
(b) удаление несвязавшихся компонентов в биологическом образце с твердой фазы;
(c) элюирование мультишаперон-антигенных комплексов с твердой фазы; и
(d) выделение элюированных мультишаперон-антигенных комплексов.
2. Способ по п.1, где образец представляет собой экстракт клеток млекопитающего.
3. Способ по п.2, где образец представляет собой экстракт клеток человека.
4. Способ по п.1, где образец представляет собой экстракт опухолевых клеток.
5. Способ по п.1, где образец представляет собой экстракт инфицированных клеток.
6. Способ по п.1, где образец представляет собой экстракт генно-инженерно измененной клетки.
7. Способ по п.1, где указанный биологический образец представляет собой проскок, полученный в результате контакта экстракта опухолевых клеток, экстракта инфицированных патогеном клеток или экстракта клеток, трансфицированных и экспрессирующих нуклеиновую кислоту, кодирующую опухоле-ассоциированный антиген или опухолеспецифический антиген, или антиген инфекционного заболевания, которые содержат клеточные белки, с твердой фазой, с которой связан участник пары связывания для белка теплового шока.
8. Способ по п.7, где указанная твердая фаза, с которой связан указанный участник пары связывания, является иммуноаффинной колонкой, специфичной к gp96, а указанным белком теплового шока является gp96.
9. Способ по п.1, где мультишаперон-антигенные комплексы содержат комбинацию по меньшей мере двух различных белков теплового шока, выбранных из группы, состоящей из HSP40, HSP70, HSP90, HSP110, HIP, BIP и калретикулина.
10. Способ по п.9, где белки теплового шока являются белками теплового шока человека.
11. Способ по п.1, где твердая фаза содержит гранулы.
12. Способ по п.11, где гранулы помещены в колонку.
13. Способ по п.11, где гранулы являются магнитными.
14. Способ по п.1, где твердая фаза представляет собой мембрану.
15. Способ по п.1, где твердая фаза имеет поверхность, содержащую поликарбонат, полистирол, полипропилен, полиэтилен, стекло, нитроцеллюлозу, декстран, нейлон, полиакриламид или агарозу.
16. Способ по п.1, где указанные НОР-аффинные молекулы присоединены к твердой фазе посредством бифункционального сшивающего агента.
17. Способ по п.1, где НОР-аффинные молекулы содержат НОР-аффинный фрагмент или его вариант, выбранный из группы, состоящей из HOP TPR1 или его варианта, HOP TPR2a или его варианта, HOP TPR1/2a или его варианта, а также комбинации какого-либо одного или нескольких из предыдущего.
18. Способ по п.1, где указанная твердая фаза, с которой ковалентно связаны указанные НОР-аффинные молекулы, представляет собой смешанный слой смолы, содержащий первую гранулу/смолу, с которой ковалентно связана НОР-аффинная молекула, содержащая НОР TPR1 или его вариант, и вторую гранулу/смолу, с которой ковалентно связана НОР-аффинная молекула, содержащая НОР TPR1/2a или его вариант.
19. Способ по п.1, где НОР-аффинные молекулы содержат НОР-аффинный фрагмент млекопитающего или его вариант.
20. Способ по п.19, где НОР-аффинные молекулы содержат НОР-аффинный фрагмент человека или его вариант.
21. Способ по п.1, где НОР-аффинные молекулы содержат НОР-аффинный фрагмент или его вариант, который присутствует в виде конкатамера двух или более из HOP TPR1 или его варианта, НОР TPR2a или его варианта, и/или НОР TPR1/2a или его варианта.
22. Способ по п.1, где НОР-аффинные молекулы содержат НОР-аффинный фрагмент или его вариант, который присутствует в виде слитого белка двух или более из НОР TPR1 или его варианта, НОР TPR2a или его варианта, и/или НОР TPR1/2a или его варианта.
23. Способ по п.1, где стадия элюирования включает элюирование буферным раствором, содержащим 150 мМ - 1,5 М хлорида натрия при рН 3-11.
24. Способ по п.1, где НОР-аффинная молекула содержит НОР TPR1 или его вариант, а стадия элюирования включает элюирование буферным раствором, содержащим 500 мМ NaCl при рН 9.
25. Способ по п.1, где НОР-аффинная молекула содержит НОР TPR2a или его вариант, а стадия элюирования включает элюирование буферным раствором, содержащим 300 мМ NaCl при рН 7,2.
26. Способ по п.1, где НОР-аффинная молекула содержит НОР TPR1/2a или его вариант, а стадия элюирования включает элюирование буферным раствором, содержащим 500 мМ NaCl при рН 7,2.
27. Способ по п.1, где НОР-аффинная молекула содержит НОР TPR1/2a или его вариант, а стадия элюирования включает элюирование буферным раствором, содержащим 500 мМ NaCl при рН 9.
28. Способ по п.1, где твердая фаза представляет собой смешанный слой смолы, содержащий: (а) НОР-аффинную молекулу, содержащую НОР TPR1 или его вариант; и (b) НОР-аффинную молекулу, содержащую НОР TPR1/2a или его вариант; и где стадия элюирования включает элюирование буферным раствором, содержащим 20 мМ Трис и 500 мМ NaCl при рН 9.
29. Способ по п.1, дополнительно предусматривающий комбинирование выделенных мультишаперон-антигенных комплексов с очищенными комплексами белков теплового шока-антигенов.
30. Способ по п.1, дополнительно предусматривающий комбинирование выделенных мультишаперон-антигенных комплексов с очищенными комплексами gp96-антигена.
31. Способ по п.1, где мультишаперон-антигенные комплексы очищены так, что белки HSP, которые присутствуют в препарате, содержащем мультишаперон-антигенные комплексы, составляют большую долю интенсивности белковой полосы на геле ДСН-ПААГ.
32. Способ, предусматривающий:
(i) приведение в контакт колонки с экстрактом опухолевых клеток человека или экстрактом инфицированных клеток человека, или экстрактом клеток, трансфицированных и экспрессирующих нуклеиновую кислоту, кодирующую опухоле-ассоциированный антиген или опухолеспецифический антиген, или антиген инфекционного заболевания, в условиях, при которых комплексы gp96-антигена в экстракте связываются с колонкой;
(ii) сбор проскока с указанной колонки;
(iii) промывку указанной колонки;
(iv) элюирование комплексов gp96-антигена с указанной колонки;
(v) приведение в контакт указанного проскока, собранного на стадии (ii), с твердой фазой, с которой ковалентно связаны НОР-аффинные молекулы, в условиях, при которых мультишаперон-антигенные комплексы в биологическом образце связываются с указанными НОР-аффинными молекулами;
(vi) удаление несвязавшихся компонентов в биологическом образце с твердой фазы;
(vii) элюирование мультишаперон-антигенных комплексов с твердой фазы; и
(viii) комбинирование указанных комплексов gp96-антигена, элюированных на стадии (iv), с мультишаперон-антигенными комплексами, элюированными на стадии (vii).
33. Способ по п.32, где колонка представляет собой иммуноаффинную колонку, специфичную к gp96, которая необязательно представляет собой колонку с scFv против gp96.
34. Способ по п.1, где НОР-аффинные молекулы не содержат белок НОР дикого типа.
35. Фармацевтическая композиция, содержащая: (а) мультишаперон-антигенные комплексы человека и (b) НОР-аффинные молекулы млекопитающего, с условием, что НОР-аффинные молекулы содержат НОР-аффинный фрагмент или его вариант, который не присутствует в виде слитого белка, слитого с последовательностью белка, которая не является последовательностью НОР-аффинного фрагмента или его варианта, и где НОР-аффинные молекулы не содержат белок НОР дикого типа.
36. Фармацевтическая композиция по п.35, где мультишаперон-антигенные комплексы содержат комбинацию по меньшей мере двух различных белков теплового шока, выбранных из группы, состоящей из HSP40, HSP70, HSP90, HSP110, HIP, BIP и калретикулина.
37. Фармацевтическая композиция по п.35 или 36, где НОР-аффинные молекулы содержат НОР-аффинный фрагмент или его вариант, выбранный из группы, состоящей из HOP TPR1 или его варианта, HOP TPR2a или его варианта, HOP TPR1/2a или его варианта, а также комбинации какого-либо одного или нескольких из предыдущего.
38. Фармацевтическая композиция по п.35 или 36, где НОР-аффинные молекулы содержат НОР-аффинный фрагмент человека или его вариант.
39. Фармацевтическая композиция по п.35 или 36, где НОР-аффинные молекулы содержат НОР-аффинный фрагмент или его вариант, который присутствует в виде конкатамера двух или более из HOP TPR1 или его варианта, HOP TPR2a или его варианта, и/или HOP TPR1/2a или его варианта.
40. Фармацевтическая композиция по п.35 или 36, где НОР-аффинные молекулы содержат НОР-аффинный фрагмент или его вариант, который присутствует в виде слитого белка двух или более из HOP TPR1 или его варианта, НОР TPR2a или его варианта, и/или НОР TPR1/2a или его варианта.
41. Фармацевтическая композиция по п.35 или 36, где мультишаперон-антигенные комплексы очищены так, что белки HSP, которые присутствуют в препарате, содержащем мультишаперон-антигенные комплексы, составляют большую долю интенсивности белковой полосы на геле ДСН-ПААГ.
42. Фармацевтическая композиция по п.35 или 36, дополнительно содержащая фармацевтически приемлемый носитель.
43. Фармацевтическая композиция по п.35 или 36, содержащая терапевтически эффективное количество указанных мультишаперон-антигенных комплексов, для лечения рака, где указанные мультишаперон-антигенные комплексы содержат эпитоп опухолеспецифического антигена или опухоле-ассоциированного антигена.
44. Фармацевтическая композиция по п.35 или 36, содержащая терапевтически эффективное количество указанных мультишаперон-антигенных комплексов, для лечения инфекционного заболевания, где указанные мультишаперон-антигенные комплексы содержат эпитоп, который проявляет антигенные свойства возбудителя, вызывающего указанное инфекционное заболевание.
45. Композиция, содержащая НОР-аффинные молекулы млекопитающего, ковалентно связанные с твердой фазой, где НОР-аффинные молекулы не содержат НОР-белок дикого типа.
46. Композиция по п.45, где НОР-аффинные молекулы содержат НОР-аффинный фрагмент или его вариант, выбранный из группы, состоящей из HOP TPR1 или его варианта, HOP TPR2a или его варианта, HOP TPR1/2a или его варианта, а также комбинации какого-либо одного или нескольких из предыдущего.
47. Композиция по п.45 или 46, где НОР-аффинные молекулы содержат НОР-аффинный фрагмент или его вариант, который присутствует в виде конкатамера двух или более из HOP TPR1 или его варианта, НОР TPR2a или его варианта, и/или НОР TPR1/2a или его варианта.
48. Композиция по п.45 или 46, где НОР-аффинные молекулы содержат НОР-аффинный фрагмент или его вариант, который присутствует в виде слитого белка двух или более из НОР TPR1 или его варианта, НОР TPR2a или его варианта, и/или НОР TPR1/2a или его варианта.
49. Композиция по п.45, где НОР-аффинные молекулы содержат НОР-аффинный фрагмент человека или его вариант.
50. Композиция по п.45, где твердая фаза содержит гранулы.
51. Композиция по п.50, где гранулы помещены в колонку.
52. Композиция по п.50, где гранулы не помещены в колонку.
53. Композиция по п.52, где гранулы являются магнитными.
54. Композиция по п.45, где твердая фаза представляет собой мембрану.
55. Композиция по п.45, где твердая фаза имеет поверхность, содержащую поликарбонат, полистирол, полипропилен, полиэтилен, стекло, нитроцеллюлозу, декстран, нейлон, полиакриламид или агарозу.
56. Композиция по п.45, где указанные НОР-аффинные молекулы присоединены к твердой фазе посредством бифункционального сшивающего агента.
57. Композиция по п.45, где HOP-аффинные молекулы нековалентно связаны с мультишаперон-антигенными комплексами млекопитающего.
58. Композиция по п.57, где мультишаперон-антигенные комплексы содержат комбинацию по меньшей мере двух различных белков теплового шока, выбранных из группы, состоящей из HSP40, HSP70, HSP90, HSP110, HIP, BIP и калретикулина.
59. Композиция по п.58, где белки теплового шока являются белками теплового шока человека.
60. Композиция по п.45, где твердая фаза находится в контакте с экстрактом клеток.
61. Композиция по п.60, где образец является экстрактом клеток млекопитающего.
62. Композиция по п.60, где образец является экстрактом клеток человека.
63. Композиция по п.60, где образец является экстрактом опухолевых клеток.
64. Композиция по п.60, где образец является экстрактом инфицированных клеток.
65. Композиция по п.60, где образец является экстрактом генно-инженерно измененной клетки.
66. Набор, содержащий в одном или нескольких контейнерах композицию по любому из пп.45-56.
67. Фармацевтическая композиция, содержащая выделенные мультишаперон-антигенные комплексы человека, где мультишаперон-антигенные комплексы человека содержат следующие белки теплового шока: HSP70, HSP90 и HSP110, с условием, что отсутствует белок gp96.
68. Фармацевтическая композиция, содержащая выделенные мультишаперон-антигенные комплексы человека, где мультишаперон-антигенные комплексы человека содержат следующие белки теплового шока: HSP70, HSP90, gp96 и HSP110, с условием, что отсутствует белок HSP60.
69. Способ лечения или профилактики типа рака, предусматривающий введение индивиду, при необходимости лечения или профилактики, фармацевтической композиции по любому из пп.35-43, 67 и 68, где мультишаперон-антигенные комплексы проявляют антигенные свойства опухолеспецифического антигена или опухоле-ассоциированного антигена, относящихся к тому типу рака, который подвергают лечению.
70. Способ лечения или профилактики типа инфекционного заболевания, предусматривающий введение индивиду, при необходимости лечения или профилактики, фармацевтической композиции по любому из пп.35-42, 44, 67 и 68, где мультишаперон-антигенные комплексы проявляют антигенные свойства антигена возбудителя, вызывающего данный тип инфекционного заболевания.
71. Способ индукции у индивида иммунного ответа против антигена, предусматривающий введение индивиду некоторого количества иммуногенной фармацевтической композиции по любому из пп.35-44, 67 и 68, где мультишаперон-антигенные комплексы содержат пептид, проявляющий антигенные свойства указанного антигена.
72. Композиция, содержащая (а) мультишаперон-антигенные комплексы человека и (b) НОР-аффинные молекулы, которые не являются НОР-белком дикого типа, где НОР-аффинные молекулы находятся в следовых количествах, составляющих менее 5% общего белка, присутствующего в композиции.