СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ДОСТИЖЕНИЯ ПОЛНЫХ МОРФОЛОГИЧЕСКИХ РЕГРЕССИЙ У БОЛЬНЫХ ТРИПЛ-НЕГАТИВНЫМ РАКОМ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ, ПОЛУЧАВШИХ КУРСЫ ХИМИОТЕРПИИ ПО СХЕМЕ САХ
METHOD OF PREDICTING ACHIEVEMENT OF COMPLETE MORPHOLOGICAL REGRESSIONS IN PATIENTS WITH TRIPLE-NEGATIVE BREAST CANCER, WHO OBTAINED CHEMOTHERAPY COURSES IN CAX REGIMEN

Изобретение относится к области медицины, конкретно к онкологии, и касается способов прогнозирования достижения полных морфологических регрессий у больных трипл-негативным раком (ТНР) молочной железы, получающих курсы химиотерапии по схеме САХ.
На сегодняшний день химиотерапия в системном лечении больных трипл-негативным раком активно используется в неоадъювантном режиме, что, прежде всего, позволяет оценить чувствительность опухоли к проводимой терапии за достаточно короткий период. Наиболее важным показателем, учитываемым при этом, является достижение полной морфологической регрессии (ПМР), которая является предикторами благоприятного исхода у данного типа рака молочной железы, имеющего достаточно агрессивное клиническое течение и неблагоприятный прогноз заболевания.
В отсутствие таргетных мишеней в настоящее время активно ведется поиск наиболее эффективных цитостатиков [1, 2], использование которых позволяло бы достигать большее количество ПМР у больных операбельным трипл-негативным раком молочной железы [3, 4]. Наиболее часто используются схемы с включением антрациклинов (FAC, FEC), таксанов (Т-FAC, АС-Т, таксотер в монорежиме) и препаратов платины (в монорежиме, в сочетании с другими цитостатиками) [5, 6].
В последние годы активно изучается эффективность препарата капецитабин (кселода), применяемого в различных схемах химиотерапии для лечения больных операбельными формами ТНР МЖ. Он активируется в ткани опухоли и оказывает селективное цитотоксическое действие под воздействием фермента тимидилатсинтетазы, которая осуществляет превращение капецитабина в активное вещество 5-фторурацил [7, 8].
В изученных литературных источниках не обнаружен способ прогнозирования достижения полных морфологических регрессий у больных трипл-негативным раком молочной железы, получавших курсы химиотерапии по схеме САХ.
Новый технический результат - создание способа прогнозирования достижения полных морфологических регрессий у больных трипл-негативным раком, получивших курсы химиотерапии по схеме САХ.
Для достижения нового технического результата в способе прогнозирования достижения полных морфологических регрессий у больных трипл-негативным раком молочной железы, получающих курсы химиотерапии по схеме САХ, характеризующийся тем, что проводят иммунногистохимическое исследование ткани опухоли биопсийного материала у больных с отрицательным рецепторным фенотипом и определяют такие молекулярные параметры, как маркер клеточной пролиферации Ki-67, эпидермальный фактор роста EGFR1, рецепторы к эндотелиальному фактору роста и экспрессию фермента тимидилатфосфорилазы в цитоплазме опухолевой клетки, для всех параметров оценивают уровень экспрессии: к низкому уровню Ki-67 относят показатели менее 20%, к высокому - 20% и более, к низкому уровню EGFR1 относят показатели менее 10%, высокому - 10% и выше, к низкому уровню VEGFR-2 относят показатели менее 70%, к высокому - 70% и более, к низкому уровню тимидилатфосфорилазы относят показатели менее 20%, к высокому- 20% и более, рассчитывают значение уравнения регрессии Y по формуле
Y=5,38-16,2X1-11,2Х2+5,98Х3+12,4X4-5,39Х5,
где Y - значение уравнения регрессии;
5.38 - значение коэффициента регрессии свободного члена;
X1 - состояние регионарного лимфатического аппарата, равное 0, - при отсутствии метастатического поражения лимфатических узлов, 1 - при поражении до 4 лимфатических узлов, 2 - при поражении 4-9 лимфатических узлов, 3 - при поражении 10 и более лимфатических узлов,
16,2 - значение коэффициента регрессии этого признака;
Х2 - уровень экспрессии EGFR1 в биопсийном материале опухолевой ткани, равный 1, - при уроне менее 10%, 2 - при уровне 10% и более,
11,2 - значение коэффициента регрессии этого признака.
Х3 - уровень экспрессии тимидилатфосфорилазы в цитоплазме опухолевой клетки в биопсийном материале, равный 1, - при уровне менее 20%, 2 - при уровне 20% и более,
5,98 - значение коэффициента регрессии этого признака.
Х4- уровень экспрессии Ki-67 в биопсийном материале опухолевой ткани, равный 1, - при уровне экспрессии менее 20%, 2 - при уровне 20% и более,
12,4 - значение коэффициента регрессии этого признака;
Х5 - уровень экспрессии VEGFR-2 в биопсийном материале опухолевой ткани, равный 1 - при уровне экспрессии менее 70%, 2 - при уровне экпрессии 70% и более,
5.39 - значение коэффициента регрессии этого признака;
значение вероятности достижения полных морфологических регрессий Р рассчитывают по формуле
Р=eY/(l+eY),
где е - математическая константа, равная 2,72,
и при Р<0,5 прогнозируют низкую, а при Р>0,5 - высокую вероятность достижения ПМР у больных, получавших схему САХ.
Способ осуществляется следующим образом
У больных трипл-негативным раком молочной железы, получающих курсы химиотерапии по схеме САХ, оценивается состояние лимфатического аппарата. С помощью иммунногистохимического исследования ткани опухоли биопсийного материала у больных с отрицательным рецепторным фенотипом определяют такие молекулярные параметры, как маркер клеточной пролиферации Ki-67, эпидермальный фактор роста EGFR1, рецепторы к эндотелиальному фактору роста и экспрессию фермента тимидилатфосфорилазы в цитоплазме опухолевой клетки. Для всех параметров оценивают уровень экспрессии: для Ki-67 к низкому уровню относят показатели менее 20%, к высокому - 20% и более, для EGFR к низкому - менее 10%, высокому - 10% и выше, для VEGFR-2 к низкому - менее 70%, высокий - 70% и более, для тимидилатфосфорилазы к низкому - менее 20%, высокому - 20% и более. Рассчитывают значение уравнения регрессии Y по формуле
Y=5,38-16,2X1-11,2Х2+5,98Х3+12,4X4-5,39Х5,
где Y - значение уравнения регрессии;
5.38 - значение коэффициента регрессии свободного члена;
X1 - состояние регионарного лимфатического аппарата, равное 0, - при отсутствии метастатического поражения лимфатических узлов, 1 - при поражении до 4 лимфатических узлов, 2 - при поражении 4-9 лимфатических узлов, 3 - при поражении 10 и более лимфатических узлов,
16,2 - значение коэффициента регрессии этого признака;
Х2 - уровень экспрессии EGFR1 в биопсийном материале опухолевой ткани, равный 1, -при уроне менее 10%, 2 - при уровне 10% и более,
11,2 - значение коэффициента регрессии этого признака.
Х3 - уровень экспрессии тимидилатфосфорилазы в цитоплазме опухолевой клетки в биопсийном материале, равный 1, - при уровне менее 20%, 2 - при уровне 20% и более,
5,98 - значение коэффициента регрессии этого признака.
X4 - уровень экспрессии Ki-67 в биопсийном материале опухолевой ткани, равный 1, - при уровне экспрессии менее 20%, 2 - при уровне 20% и более,
12,4 - значение коэффициента регрессии этого признака;
Х5 - уровень экспрессии VEGFR-2 в биопсийном материале опухолевой ткани, равный 1, - при уровне экспрессии менее 70%, 2 - при уровне экпрессии 70% и более,
5.39 - значение коэффициента регрессии этого признака;
значение вероятности достижения полных морфологических регрессий Р рассчитывают по формуле
Р=eY/(l+eY),
где е - математическая константа, равная 2,72, и при Р<0,5 прогнозируют низкую, а при Р>0,5 - высокую вероятность достижения ПМР у больных, получавших схему САХ.
Сущность предлагаемого способа иллюстрируется следующими примерами.
Пример 1. Больная Л., 39 лет с трипл-негативным раком молочной железы IIA стадия (T2N0M0) без вовлечения в процесс лимфатических узлов (0) получила 4 курса НАХТ по схеме САХ (2). При ретроспективном анализе результатов иммуногистохимического исследования опухоль характеризовалась высоким уровнем экспрессии EGFR1 (2) и Ki-67 (2) и низкими показателями VEGFR-2 (1) и ТФ (1).
Значение уравнения регрессии оценивали по формуле
1
2
3
4
5
Y=(5,38-16,2X-11,2X+5,98X+12,4X-5,39X)=5,38-16,2×0-11,2×2+5,98×2+12,4×1+5,39×1=0,24.
Y
Y
0,24
0,24
Значение вероятности достижения ПМР определяли по формуле Р=e/(1+e)=2,72/(1+2,72)=0,99.
Вероятность достижения ПМР была высокая и составила 99%. Это соответствовало данным, которые были получены после проведения НАХТ, эффективность составила 100% (полная морфологическая регрессия).
Пример 2. Больная С., 50 лет с трипл-негативным раком молочной железы IIB стадия (T2N1M0) с вовлечением в опухолевый процесс 1 лимфатического узла (1) получила 4 курса НАХТ по схеме САХ. При ретроспективном анализе результатов иммуногистохимического исследования опухоль характеризовалась высокими показателями EGFR1 (2), Ki-67 (2), VEGFR-2 (2) и ТФ (2).
Значение уравнения регрессии оценивали по формуле
1
2
3
4
5
Y=(5,38-16,2X-11,2X+5,98X+12,4X-5,39X)=5,38-16,2×1-11,2×2+5,98×2+12,4×2+5,39×2=0,00.
Y
Y
0,00
0,00
Значение вероятности достижения ПМР определяли по формуле Р=e/(1+e)=2,72/(1+2,72)=0,00.
Вероятность достижения ПМР была низкая и составила 0%. Это соответствовало данным, которые были получены после проведения НАХТ, эффективность НАХТ - прогрессирование опухолевого процесса.
Способ основан на анализе данных клинических наблюдений.
2
2
2
В исследование было включено 43 больных операбельным трипл-негативным раком молочной железы (T2-3N0-2M0), получивших по 2-4 курса НАХТ по схеме САХ (циклофосфан 100 мг/м, внутримышечно в течение 14 дней, адриамицин 30 мг/м внутривенно в 1-й и 8-й дни, капецитабин 1000 мг/м 2 раза в день, per os, в течение 14 дней, через 21 день) на базе отделения общей онкологии ФГБУ НИИ Онкологии СО РАМН в период с 2007 по 2013 гг. Средний возраст пациенток составил 50±7,4 лет.
После курсов НАХТ следовал хирургический этап в объеме секторальной резекции, аксиллярной лимфаденэктомии или радикальной мастэктомии. Всем больным в адъювантном режиме проводилось по 2-4 курса химиотерапии по схеме FAC, лучевая терапия назначалась по показаниям.
Морфологическое и иммуногистохимическое исследование биопсийного материала опухоли осуществлялось по стандартной методике.
Для выявления тройного отрицательного фенотипа (РЭ, РП-, Her-2/neu-) использовались антитела фирмы «Dako» к рецепторам эстрогена (клон 1D5, RTU, мышиные), к рецепторам прогестерона (клон PgR636, RTU, мышиные), к онкопротеину с - erbB - 2 (HER2/neu статус) (рабочее разведение 1:500, кроличьи).
Всем больным определялся уровень маркера клеточной пролиферации Ki67 (клон MIB-1, RTU, мышиные) (к низкому уровню относились показатели менее 20%, к высокому - 20% и более). Также оценивалась экспрессия эпидермального фактора роста EGFR1 (клон SP9, рабочее разведение 1:600, кроличьи, фирмы Diagnostic BioSystems), рецептора к эндотелиальному фактору роста-2 VEGFR-2 и фермента тимидилатсинтетазы в цитоплазме опухолевой клетки. Экспрессия оценивалась в процентном содержании положительно окрашенных клеток в 10 полях зрения на 1000 клеток при увеличении ×400.
К низкому уровню Ki-67 относились показатели менее 20%, к высокому - 20% и более. К низкому уровню экспрессии EGFR1 относились показатели менее 10%, к высокому - 10% и более. К низкому уровню экспрессии VEGFR-2 относились показатели менее 70%, к высокому - 70% и более. К низкому уровню экспрессии тимидилатсинтетазы - показатели менее 20%, к высокому - 20% и более.
Непосредственная эффективность НАХТ оценивалась по шкале RECIST на основании данных клинического осмотра, УЗИ молочных желез и маммографии. Статистическая обработка результатов выполнялась с помощью пакета программ «Statistica 7.0 for Windows».
Для прогнозирования достижения полных морфологических регрессий у больных трипл-негативным раком молочной железы, получающих курсы химиотерапии по схеме САХ, использовался метод логистической регрессии. Была определена формула
1
2
3
4
5
Y=(5,38-16,2X-11,2X+5,98X+12,4X-5,39X),
Где Y - значение уравнения регрессии;
(5,38) - значение коэффициента регрессии свободного члена;
1
X - состояние регионарного лимфатического аппарата (0 - отсутствие метастатического поражения лимфатических узлов, 1 - поражение до 4 лимфатических узлов, 2 - поражение 4-9 лимфатических узлов, 3 - поражение 10 и более лимфатических узлов), (16,2) - значение коэффициента регрессии этого признака.
2
X - уровень экспрессии EGFR1 в биопсийном материале опухолевой ткани (1 - менее 10%, 2 - 10% и более), (11,2) - значение коэффициента регрессии этого признака.
3
X - уровень экспрессии тимидилатфосфорилазы в цитоплазме опухолевой клетки в биопсийном материале (1 - менее 20%, 2 - 20% и более), (5,98) - значение коэффициента регрессии этого признака.
4
X - уровень экспрессии Ki-67 в биопсийном материале опухолевой ткани (1 - менее 20%, 2 - 20% и более), (12,4) - значение коэффициента регрессии этого признака.
5
X - уровень экспрессии VEGFR-2 в биопсийном материале опухолевой ткани (1 - менее 70%, 2 - 70% и более), (5,39) - значение коэффициента регрессии этого признака.
Значение вероятности достижения полных морфологических регрессий определяется по формуле
Y
Y
Р=e(1+e),
где е - математическая константа, равная 2,72.
и при P<0,5 прогнозируют низкую вероятность достижения ПМР, а при P>0,5 - высокую у больных, получавших схему САХ.
Чувствительность - 100%; специфичность - 100%.
При анализе достижения полных морфологических регрессий у больных операбельным трипл-негативным раком в зависимости от параметров, вошедших в прогностическую модель, оказалось, что достижение ПМР наиболее часто отмечалось при отсутствии метастатического поражения регионарных лимфатических узлов (p=0,0000) (табл. 1), высокой экспрессии EGFR1 (p=0,0007) (табл. 2), Ki-67 (p=0,0001) (табл. 3), фермента тимидилатфосфорилазы в цитоплазме опухоли (p=0,017) (табл. 4) и VEGFR-2 (р-0,017) (табл. 5).
Таким образом, предлагаемый способ позволяет с высокой точностью и информативностью прогнозировать достижение ПМР у больных трипл-негативным раком молочной железы при использовании схемы химиотерапии с включением капецитабина, что позволит оптимизировать планирование и подходы к лечению данной категории пациентов.
Источники информации
1. Amos K.D., Adamo В., Anders C.K. «Triple-negative Breast Cancer: An Update on Neoadjuvant Clinical Trials» International Journal of Breast Cancer 2012.
2. Smith I.E. «Neoadjuvant/presurgical treatment» Breast Cancer Research 2008, 10.
3. Reis-Filho J.S., Tutt A.N. «Triple-negative tumors: a critical review» Histopathology 2008, 52, 108-118.
4. Liedtke C., Mazouni С., Hess K.R. et al. «Response to Neoadjuvant therapy and Long-Term survival in patients with Triple-negative breast cancer» Journal of Clinical Oncology 2008, Volume.
5. Hawk N., O`Regan R. «Treatment of Triple-negative breast cancer» Community Oncology 2010; 7: 328-332.
6. Gluz O., Liedtke C., Gottscchalk N., Pusztai L., Nitz U., Harbeck N. Triple-negative breast cancer - current status and future directions. Annals of Oncology 2009; 20: 1913-1927.
7. Lindman H., Kellokumpu-Lehtinen P-L., Huovinen R. Integration of capecitabine into anthracycline- and taxane-based adjuvant therapy for triple-negative early breast cancer: final subgroup analysis of the FinXX study. SABCS 2010. Abstract PD01-02.
8. Steger G.G., Barrios C., O'Shaughnessy J., Martin M., Gnant M. Abstract PD01-03: Review of Capecitabine for the Treatment of Triple-Negative Early Breast Cancer. Cancer Res 2010. 70 (24 Suppl): Abstract nr PD01-03.
Приложение
Таблица 1
Достижение полных морфологических регрессий у больных, получавших НАХТ по схеме САХ в зависимости от состояния регионарных л/у
Таблица 2
Достижение полных морфологических регрессий у больных, получавших НАХТ по схеме САХ в зависимости от уровня EGFR1
Таблица 3
Достижение полных морфологических регрессий у больных, получавших НАХТ по схеме САХ в зависимости от уровня Ki-67
Таблица 4
Достижение полных морфологических регрессий у больных, получавших НАХТ по схеме САХ в зависимости от уровня тимидилатфосфорилазы в цитоплазме опухоли
Таблица 5
Достижение полных морфологических регрессий у больных, получавших НАХТ по схеме САХ в зависимости от уровня тимидилатфосфорилазы в цитоплазме опухоли