СЕЛЕКТИВНОЕ ВОССТАНОВЛЕНИЕ ЦИСТЕИНОВЫХ ОСТАТКОВ В АНТИТЕЛАХ ПРОТИВ IL-17

1. Способ селективного восстановления CysL97 в препарате антител против IL-17, которые были рекомбинантно продуцированы клетками млекопитающих, включающий:
а) приведение препарата в контакт по меньшей мере с одним восстанавливающим агентом в системе для образования восстанавливающей смеси; и
L
L
-1
b) инкубацию восстанавливающей смеси при сохранении объемного коэффициента массопереноса кислорода (ka*) в системе, составляющем приблизительно ≤0,37 ч, где указанный ka* вычисляют посредством адаптации кривой растворенного кислорода к кривой насыщения;
H
H
L
L
где каждое антитело против IL-17 содержит вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина (V), содержащий три участка, определяющие комплементарность (CDR) V,как изложено в виде SEQ ID NO:8, и вариабельный домен легкой цепи (V) иммуноглобулина, содержащий три CDR V, как изложено в виде SEQ ID NO:10; и где перед стадией a) начальный процент насыщения кислородом в препарате составляет по меньшей мере приблизительно 60%, как измерено с применением кислородного зонда, откалиброванного при 25°C.
o
2. Способ по п. 1, в котором по меньшей мере один восстанавливающий агент представляет собой тиолсодержащий восстанавливающий агент, имеющий стандартный окислительно-восстановительный потенциал, E, составляющий от приблизительно -0,20 В до приблизительно -0,23 В при pH 7,0, как измерено посредством тиол-дисульфидного обмена.
3. Способ по п. 1, в котором по меньшей мере один восстанавливающий агент представляет собой цистеин.
L
4. Способ по п. 3, в котором ka* в системе во время стадии b) составляет
-1
a. приблизительно ≤0,37 ч, и где молярное соотношение цистеин:антитела против IL-17 в восстанавливающей смеси составляет между приблизительно 56:1 и приблизительно 118:1, и где восстанавливающую смесь инкубируют в соответствии со стадией b) в течение вплоть до приблизительно 240 минут.
-1
b. приблизительно ≤0,37 ч, и где молярное соотношение цистеин:антитела против IL-17 в восстанавливающей смеси составляет между приблизительно 77:1 и приблизительно 118:1, и где восстанавливающую смесь инкубируют в соответствии со стадией b) в течение вплоть до приблизительно 300 минут.
-1
c. приблизительно <0,37 ч, и где молярное соотношение цистеин:антитела против IL-17 в восстанавливающей смеси составляет между приблизительно 46:1 и приблизительно 118:1.
-1
d. приблизительно <0,37 ч, и где молярное соотношение цистеин:антитела против IL-17 в восстанавливающей смеси составляет между приблизительно 54:1 и приблизительно 82:1; или
-1
е. приблизительно <0,27 ч.
5. Способ по п. 4, в котором молярное соотношение цистеин:антитела против IL-17 в восстанавливающей смеси составляет приблизительно 66:1.
6. Способ по п. 3, в котором концентрация цистеина в восстанавливающей смеси составляет от приблизительно 4,0 мМ до приблизительно 8,0 мМ.
7. Способ по любому из предшествующих пунктов, в котором перед стадией a) начальный процент насыщения кислородом в препарате составляет по меньшей мере приблизительно 60%, как измерено с применением кислородного зонда, откалиброванного при 25°C.
L
L
-1
8. Способ по любому из предшествующих пунктов, в котором между стадией a) и стадией b) восстанавливающую смесь нагревают до температуры между приблизительно 32°C и приблизительно 42°C, в течение от приблизительно 45 до приблизительно 90 минут, где ka* в системе во время нагревания составляет ≤ приблизительно 0,69 ч, где указанный ka* вычисляют посредством адаптации кривой насыщения к кривой растворенного кислорода.
9. Способ по любому из предшествующих пунктов, в котором восстанавливающую смесь инкубируют в соответствии со стадией b) при температуре между приблизительно 20°C и приблизительно 42°C, в течение от приблизительно 210 до приблизительно 420 минут.
10. Способ по любому из предшествующих пунктов, в котором в восстанавливающую смесь не добавляют окисленную форму восстанавливающего реагента.
11. Способ по любому из предшествующих пунктов, в котором в восстанавливающую смесь не добавляют денатурирующий агент.
12. Способ селективного восстановления CysL97 в препарате антител против IL-17, которые были рекомбинантно продуцированы клетками млекопитающих, включающий:
a) приведение препарата в контакт с набором окислительно-восстановительных реагентов, выбранных из цистеин:цистин и цистеин:цистамин для образования восстанавливающей смеси; и
b) инкубацию восстанавливающей смеси при температуре, составляющей:
i. приблизительно 37°C в анаэробных условиях в течение по меньшей мере приблизительно 4 часов, или
ii. приблизительно 18-24°C в течение приблизительно 16-24 часов;
H
H
L
L,
где каждое антитело против IL-17 содержит вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина (V), содержащий три участка, определяющие комплементарность (CDR) V,как изложено в виде SEQ ID NO:8, и вариабельный домен легкой цепи (V) иммуноглобулина, содержащий три CDR V как изложено в виде SEQ ID NO:10.
13. Способ по п. 12, в котором молярное соотношение окислительно-восстановительных реагентов в восстанавливающей смеси составляет между приблизительно 4:1 и приблизительно 80:1.
14. Способ по п. 12, в котором набор окислительно-восстановительных реагентов представляет собой цистеин:цистин или цистеин:цистамин.
15. Способ по п. 14, в котором молярное соотношение цистеин:антитела против IL-17 в восстанавливающей смеси составляет между приблизительно 21:1 и приблизительно 296:1.
16. Способ по любому из предшествующих пунктов, в котором:
H
L
i. три CDR V,как изложено в виде SEQ ID NO:8, представляют собой, в последовательности, аминокислотные последовательности, как изложено в виде SEQ ID NO: 1, 2, и 3, или аминокислотные последовательности, как изложено в виде SEQ ID NO: 11, 12 и 13, и три CDR V, как изложено в виде SEQ ID NO:10, представляют собой, в последовательности, аминокислотные последовательности, как изложено в виде SEQ ID NO: 4, 5 и 6;
L
H
ii. каждое антитело против IL-17 содержит V, как изложено в виде SEQ ID NO:10, и V, как изложено в виде SEQ ID NO:8; или
iii. каждое антитело против IL-17 содержит полноразмерную легкую цепь, изложенную в виде SEQ ID NO:14, и полноразмерную тяжелую цепь, изложенную в виде SEQ ID NO:15, с С-концевым лизином или без него.
1
17. Способ по любому из предшествующих пунктов, в котором антитела против IL-17 представляют собой человеческие антитела изотипа IgG.
18. Способ по любому из предшествующих пунктов, в котором антитела против IL-17 представляют собой антитела секукинумаб.
19. Способ по любому из предшествующих пунктов, в котором уровень активности антител против IL-17 в препарате возрастает по меньшей мере на 10 процентных пунктов в течение приблизительно 60 минут после стадии b), как измерено посредством катионообменной хроматографии с цистамином.
20. Способ селективного восстановления CysL97 в препарате антител секукинумаб, которые были рекомбинантно продуцированы клетками млекопитающих, включающий:
а) регулирование концентрации секукинумаба в препарате до между приблизительно 4 мг/мл - приблизительно 19,4 мг/мл;
b) регулирование процентного насыщения кислорода в препарате до по меньшей мере приблизительно 60%;
c) регулирование рН препарата до приблизительно 7,4 - приблизительно 8,5;
d) приведение препарата в контакт с цистеином в сосуде для образования восстанавливающей смеси, где концентрация цистеина в восстанавливающей смеси составляет приблизительно 4,0 мМ - приблизительно 8,0 мМ;
e) нагревание восстанавливающей смеси до температуры между приблизительно 32°C - приблизительно 42°C;
L
L
-1
f) инкубацию восстанавливающей смеси из стадии e) при температуре между приблизительно 20°C - приблизительно 42°C, где указанная инкубация происходит в течение приблизительно 210 - приблизительно 420 минут при сохранении объемного коэффициента массопереноса кислорода (ka*) в сосуде, составляющем ≤0,37 ч, где указанный ka* вычисляют посредством адаптации кривой насыщения к кривой растворенного кислорода,
g) охлаждение смеси, полученной в результате стадии f), до температуры между приблизительно 16°C - приблизительно 28°C, где указанное охлаждение происходит в течение приблизительно 45 - приблизительно 90 минут; и
h) регулирование рН смеси, полученной после стадии g), до между приблизительно 5,1 - приблизительно 5,3.
21. Очищенный препарат антител против IL-17, полученный по любому из предшествующих пунктов.
22. Очищенный препарат секукинумаба, в котором уровень интактного секукинумаба в препарате составляет по меньшей мере приблизительно 90%, как измерено посредством капиллярного электрофореза с додецилсульфатом натрия (CE-SDS), и в котором уровень активности секукинумаба в препарате составляет по меньшей мере приблизительно 90%, как измерено посредством катионообменной хроматографии с цистамином.