СПОСОБЫ УЛУЧШЕНИЯ СВОЙСТВ БЕЛКА

1. Способ получения улучшенных вариантов белка, включающий в функциональном порядке:
a) тестирование множества вариантов белка с единичными заменами в первом тесте первого свойства и во втором тесте второго свойства, где свойству родительского белка присваивается значение 1,0 в каждом тесте, благоприятное первое или второе свойство обладает значением, превышающим 1,0, и чрезмерно неблагоприятное первое или второе свойство обладает значением менее чем приблизительно 0,80;
b) идентификацию замены, по меньшей мере, в одном из вариантов белка с единичными заменами, которая связана с благоприятным первым свойством и которая не связана с чрезмерно неблагоприятным вторым свойством;
c) идентификацию замены, по меньшей мере, в одном из вариантов белка с единичными заменами, которая связана с благоприятным вторым свойством и которая не связана с чрезмерно неблагоприятным первым свойством; и
d) введение замены из стадии b) и замены из стадии c) в белок для получения варианта белка с множественными заменами, где указанный вариант белка с множественными заменами представляет собой улучшенный вариант белка.
2. Способ по п.1, дополнительно включающий: стадию e): тестирование варианта белка с множественными заменами в первом тесте и втором тесте, где улучшенный вариант белка достигает значения, превышающего 1,0, как в первом, так и во втором указанных тестах, или значения, превышающего 1,0 в первом тесте и значения от 0,80 до 1,0 во втором тесте.
3. Способ по п.2, где указанный родительский белок представляет собой фермент и где указанные улучшенные варианты белков представляют собой ферменты.
4. Способ по п.3, где указанный фермент выбран из протеаз, амилаз, целлюлаз, полиэстераз, эстераз, липаз, кутиназ, пектиназ, оксидаз, трансфераз и каталаз.
5. Способ по п.4, где указанный фермент представляет собой протеазу или амилазу.
6. Способ по п.3, где указанное первое и указанное второе интересующие свойства включают два или более члена из группы, состоящей из связывания субстрата, ингибирования фермента, экспрессии, стабильности в детергенте, тепловой стабильности, скорости реакции, степени завершенности реакции, тепловой активности, разжижения крахмала, разложения биомассы, осахаривания, гидролиза эфира, ферментативного отбеливания, эффективности стирки и модификации текстиля.
7. Способ по п.3, дополнительно включающий получение улучшенного варианта белка.
8. Способ по п.3, где первое и второе свойства обладают отрицательной корреляцией.
9. Способ по п.3, где указанное благоприятное первое или второе свойство обладает значением больше, чем приблизительно 1,2.
10. Способ по п.3, где указанное чрезмерно неблагоприятное первое или второе свойство обладает значением менее чем приблизительно 0,60.
11. Способ по п.10, где указанное чрезмерно неблагоприятное первое или второе свойство обладает значением менее чем приблизительно 0,40.
12. Способ по п.3, где первое свойство представляет собой стабильность, и второе свойство представляет собой эффективность стирки.
13. Способ по п.12, где указанная стабильность включает стабильность в моющих составах, и эффективность стирки включает эффективность отстирывания крови-молока-чернил (КМЧ).
14. Способ по п.13, где указанную эффективность стирки тестируют в порошке или жидком моющем составе, обладающем pH между приблизительно 5 и приблизительно 12.
15. Способ по п.13, где указанную эффективность стирки тестируют в холодной воде в жидком детергенте, обладающем основным pH.
16. Способ по п.3, где первое свойство представляет собой экспрессию белка, и второе свойство представляет собой ферментативную активность.
17. Способ по п.4, где указанная протеаза выбрана из нейтральной металлопротеазы и сериновой протеазы.
18. Способ по п.13, где указанная сериновая протеаза представляет собой субтилизин.
19. Способ по п.17, где указанная нейтральная металлопротеаза представляет собой нейтральную металлопротеазу, полученную из члена семейства Bacillaceae.
20. Способ по п.4, где указанная амилаза представляет собой α-амилазу, полученную из члена семейства Bacillaceae.
21. Способ по п.3, где, по меньшей мере, одна из замен содержит изменение суммарного заряда, равное 0, -1 или -2 по отношению к родительскому ферменту.
22. Способ по п.3, где, по меньшей мере, одна из замен содержит изменение суммарного заряда, равное +1 или +2 по отношению к родительскому ферменту.
23. Способ по п.3, где, по меньшей мере, одна из замен содержит изменение суммарного заряда, равное 0, -1 или -2 по отношению к родительскому ферменту.
24. Способ по п.3, где, по меньшей мере, одна из замен содержит изменение суммарного заряда, равное +1 или +2 по отношению к родительскому ферменту.
25. Способ по п.3, где указанный улучшенный вариант фермента обладает изменением суммарного заряда, равным +1 или +2 по отношению к родительскому ферменту.
26. Способ по п.3, где замены находятся в родительском ферменте в положениях, обладающих доступной для растворителя поверхностью (ДРП) больше чем приблизительно 25%.
27. Способ по п.3, где замены находятся в родительском ферменте в положениях, обладающих доступной для растворителя поверхностью (ДРП) больше, чем приблизительно 50%, или больше, чем приблизительно 65%.
28. Способ по п.3, где указанный родительский фермент представляет собой фермент дикого типа.
29. Чистящая композиция, содержащая улучшенный вариант белка, полученный в соответствии со способом по п.3.
30. Выделенный вариант нейтральной металлопротеазы, обладающий аминокислотной последовательностью, содержащей, по меньшей мере, одну замену аминокислоты, выполненную в положении, эквивалентном положению в нейтральной металлопротеазе, содержащей аминокислотную последовательность, приведенную SEQ ID NO:3.
31. Выделенная нейтральная металлопротеаза по п.30, где указанная, по меньшей мере, одна замена выполнена в положении, эквивалентном положению 83 указанной аминокислотной последовательности, изложенной в SEQ ID NO:3.
32. Выделенная нейтральная металлопротеаза по п.31, где указанная замена представляет собой L83K.