ЭКСПРЕССИЯ БЕЛКОВ ИНГИБИТОРА СУБТИЛИЗИНА STREPTOMYCES (SSI) У BACILLUS И STREPTOMYCES SP.

1. Клетка-хозяин Bacillus sp., содержащая
рекомбинантную нуклеиновую кислоту, кодирующую слитый белок, содержащий
a) сигнальную последовательность; и
b) белок ингибитора субтилизина Streptomyces (SSI);
причем указанная клетка-хозяин секретирует указанный белок SSI из указанной клетки, причем указанная клетка-хозяин имеет инактивированные гены aprE, nprE, epr, ispA, bpr, vpr, wprA, mpr-ybjF и nprB.
2. Клетка-хозяин по п.1, где указанный белок SSI имеет в присутствии субтилизина повышенную стабильность по сравнению с природным белком SSI.
3. Клетка-хозяин по п.1, где указанный белок SSI имеет пониженное сродство к субтилизину по сравнению с природным белком SSI.
4. Клетка-хозяин по п.1, где указанный белок SSI имеет аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную SEQ ID NO:1, и имеет Lys в положении 62, Не в положении 63, Pro в положении 73, Cys в положении 83 и Glu в положении 98.
5. Клетка-хозяин по п.1, где указанная сигнальная последовательность представляет собой сигнальную последовательность, кодируемую геном aprE В. subtilis.
Hy
6. Клетка-хозяин по п.1, где указанная клетка-хозяин Bacillus sp. имеет генотип degU32, оррА, ΔspoIIE3501, ΔaprE, ΔnprE, Δepr, ΔispA, Δbpr, Δvpr, ΔwprA, Δmpr-ybjF, ΔnprB, amyE::xylRPxylAcomK-ermC.
7. Клетка-хозяин по п.1, где указанная клетка-хозяин Bacillus sp. представляет собой клетку В.subtilis.
8. Клетка-хозяин по п.1, где указанная рекомбинантная нуклеиновая кислота функционально связана с промотором и терминатором, с образованием кассеты экспрессии.
9. Клетка-хозяин по п.1, где указанная рекомбинантная нуклеиновая кислота является кодон-оптимизированной для экспрессии указанного слитого белка SSI в указанной клетке-хозяине Bacillus sp.
10. Клетка-хозяин по п.1, где указанная рекомбинантная нуклеиновая кислота находится в геноме указанной клетки-хозяина или в векторе, автономно реплицирующемся в указанной клетке.
11. Культура клеток, содержащая
множество клеток-хозяев Bacillus sp.по п.1; и
культуральную среду.
12. Культура клеток по п.11, где указанная культуральная среда содержит указанный белок SSI.
13. Способ получения белка SSI, включающий
культивирование клетки по п.1, для того чтобы обеспечить секрецию указанного белка SSI в культуральную среду.
14. Способ по п.13, дополнительно включающий извлечение указанного белка SSI из указанной культуральной среды.
15. Способ по п.13, дополнительно включающий сочетание указанного белка SSI с детергентом для стирки для получения детергента, содержащего как субтилизиновую протеазу, так и указанный белок SSI.
16. Способ по п.13, при котором указанный детергент для стирки не содержит тетраборнокислого натрия.
17. Клетка-хозяин Streptomyces sp., содержащая
рекомбинантную нуклеиновую кислоту, кодирующую слитый белок, содержащий
a) сигнальную последовательность celA; и
b) белок ингибитора субтилизина Streptomyces (SSI);
причем указанная клетка-хозяин секретирует указанный белок SSI из указанной клетки.
18. Клетка-хозяин по п.17, где указанный белок SSI в присутствии субтилизина имеет повышенную стабильность по сравнению с природным белком SSI.
19. Клетка-хозяин по п.17, где указанный белок SSI имеет пониженное сродство к субтилизину по сравнению с природным белком SSI.
20. Клетка-хозяин по п.17, где указанный белок SSI имеет аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную SEQ ID NO:1, и имеет Lys в положении 62, Не в положении 63, Pro в положении 73, Cys в положении 83 и Glu в положении 98.
21. Культура клеток, содержащая
множество клеток-хозяев Streptomyces sp. по п.17; и
культуральную среду.
22. Способ получения белка SSI, включающий
культивирование клетки по п.17 для того, чтобы обеспечить секрецию указанного белка SSI в культуральную среду.
23. Способ по п.22, дополнительно включающий сочетание указанного белка SSI с детергентом для стирки для получения детергента, содержащего и субтилизиновую протеазу, и указанный белок SSI.