Способ дифференциальной диагностики абстинентного синдрома при опийной наркомании, сочетанной с ВИЧ-инфекцией
METHOD FOR DIFFERENTIAL DIAGNOSTICS OF ABSTINENCE SYMPTOMS IN CASE OPIUM ADDICTION COMBINED WITH HIV INFECTION

Изобретение относится к области медицины, а именно к наркологическим и инфекционным болезням. Может быть использовано для диагностики абстинентного синдрома при опийной наркомании, сочетанной с ВИЧ-инфекцией.
Распространение наркоманий носит эпидемический характер. По данным 2012 года 210 миллионов употребляют наркотики, т.е. 3% людей являются наркозависимыми. В РФ на 2012 год под наблюдением находятся 332659 с установленным диагнозом наркомания. Несмотря на тенденцию к снижению болезненности наркоманией последние десять лет, пораженность населения в Приморском крае составила на 2012 год 412,6 на 100 тыс. чел., что практически в два раза превышает показатели по РФ (232,5 на 100 тыс. чел.) и в 1,5 раза по ДВФО (281,2 на 100 тыс. чел.). Уровень заболеваемости в Приморском крае также превышает среднероссийский показатель практически в 2 раза.
Наркомания тесно связана с проблемами ВИЧ-инфекции: чем выше фиксируется уровень распространения наркомании, тем выше оказывается и подверженность ВИЧ-инфекции. Коморбидность данной патологии ведет к усилению тяжести течения заболеваний, ухудшает прогноз заболевания, формирует ВИЧ-наркоэнцефалопатию [3, 2, 5].
Известно, что динамика продукции цитокинов модулируется непосредственным влиянием психоактивных веществ на иммунокомпетентные клетки, отражает динамику воспаления в структуре абстинентного синдрома [1, 6, 8, 4]. При этом отмечено, что имеется и связь продукции цитокинов с вирусными инфекциями, в том числе и ВИЧ-инфекцией [7].
Клинические проявления опийной наркомании при сочетанной патологии разнообразны, что создает определенные трудности в своевременной и правильной диагностике, а также при дифференциально-диагностическом разграничении его клиники сопутствующих заболеваний.
Методы диагностики опийной наркомании не стандартизированы. Наиболее распространенным методом диагностики опийной наркомании является метод иммуноферментного анализа (ИФА). Но серологическое обследование имеет существенные недостатки. Одним из них является невозможность установления диагноза при развернутом синдроме отмены опиоидов и отсутствие опия в анализах.
Известен способ диагностики опийной наркомании, сочетанной с основным заболеванием, а именно с гепатитом С, основанный на исследовании и оценке показателей цитокинов сыворотки крови с использованием твердофазного иммуноферментного «сэндвичевого» метода.
Согласно этому способу у больных хроническим вирусным гепатитом С, в котором определяют базальный, стимулированный уровень и индекс стимуляции фактора некроза опухоли-α (ФНОα-), базальный и стимулированный уровень IFNγ, индекс стимуляции IL-2 и базальный уровень IL-4 и при значении базального ФНОα - от 12 до 50 пг/мл, стимулированного ФНОα - от 15 до 80 пг/мл, индекса стимуляции ФНОα - от 0,65 до 1,78, базального IFNγ - от 20 до 22 пг/мл, стимулированного IFNγ - от 20 до 22 пг/мл, индекса стимуляции IL-2 - от 1 до 1,45, базального IL-4 - от 9,1 до 11,8 пг/мл, диагностируют действующую опийную наркоманию (Патент Рф №2417759).
Однако этот способ не может использоваться при наличии ВИЧ-инфекции.
Авторам заявляемого способа не удалось обнаружить сведения о ранней диагностике абстинентного синдрома при опийной наркомании, сочетанного с ВИЧ-инфекцией на основе анализа цитокинов.
Задача изобретения - создание простого и доступного применения в клинических условиях способа дифференциальной диагностики абстинентного синдрома при опийной наркомании, сочетанного с ВИЧ-инфекцией, позволяющего своевременно назначить необходимую терапию.
Для решения поставленной задачи в способе дифференциальной диагностики абстинентного синдрома при опийной наркомании, сочетанного с ВИЧ-инфекцией, согласно изобретению, методом иммуноферментного анализа в крови взятой из локтевой вены выявляют наличие комплекса сывороточных цитокинов - IL-1β, IL-2, IL-6, IL-18, IFNα, IFNγ с последующим определением их уровней, при значениях IFNα - от 2,9 до 10,3 пг/мл, IFNγ - от 7,5 до 10,9 пг/мл, IL-1β - от 2,2 до 12,6 пг/мл, IL-2 - от 1,7 до 7,5 пг/мл, IL-6 - от 1,4 до 9,4 пг/мл, IL-18 - от 847 до 1353 пг/мл диагностируют абстинентный синдром при опийной наркомании, сочетанный с ВИЧ-инфекцией.
Технический результат настоящего изобретения состоит в том, что разработан простой и доступный для применения в клинических условиях способ дифференциальной диагностики абстинентного синдрома при опийной наркомании, сочетанного с ВИЧ-инфекцией, что является крайне важным для диагностики и позволяет своевременно, уже в ранние сроки заболевания, назначить необходимую этиотропную и патогенетическую терапию; также способ экономически выгоден.
Согласно изобретению диагностика осуществляется сразу при поступлении в клинику на основе комплексного анализа цитокинового статуса, тогда как простое повышение количества определяемых цитокинов не дает дополнительных качественных результатов и увеличивает финансовые затраты. Существенным является выбор для анализа цитокинов: IL-1β, IL-2, IL-6, IL-18, IFNα, IFNγ и определение их количественных параметров для достоверности диагностики.
Поскольку вся совокупность существенных признаков заявляемого изобретения не выявлена из уровня техники, то, по мнению заявителя, оно соответствует критерию изобретения «новизна».
Заявленное техническое решение, по мнению заявителя, соответствует критерию изобретения «изобретательский уровень», поскольку в результате проведенных исследований в отношении уровня техники не выявлены решения, имеющие признаки, совпадающие с его отличительными признаками.
Заявленное техническое решение соответствует критерию изобретения «промышленная применимость», поскольку оно может быть использовано в здравоохранении по указанному назначению.
Для обоснования признаков заявленного изобретения был выполнен ряд аналитических исследований, результаты которых представлены в таблице.
Способ осуществляют следующим образом.
Выполняются иммунологические исследования с целью выявления нарушений гуморального звена иммунитета, цитокинового профиля организма при употреблении опиоидов лицами с ВИЧ-инфекцией, проводится определение в сыворотке крови содержания цитокинов IL-1β, IL-2, IL-6, IL-18, IFNα, IFNγ.
Материалом для исследования служит кровь, взятая из вены в изделия медицинские полимерные лабораторные одноразовые для взятия и исследования проб крови с коагулянтами и антикоагулянтами производства «Саршедт АГ & Ко.», Германия, регистрационное удостоверение № ФСЗ 2009/04702, разрешено к применению на территории РФ приказом Росздравнадзора от 13.08.2009 г №6490-Пр/09. Образцы венозной крови брали у пациента.
Для получения плазмы крови супернатант центрифугировали. Для этого 5 мл крови с добавлением конъюгата центрифугировали при 5000 об/мин на холоде в течение 10 мин. В полученном образце выделяли сыворотку и распределяли по 1 мл в эпиндорфы, замораживали и хранили до использования при -76°С.
Исследование цитокинпродуцирующей способности мононуклеаров включало определение уровней IL-1β, IL-2, IL-6, IL-18, IFNα, IFNγ, в супернатантах культивирование мононуклеаров проводили с использованием твердофазного иммуноферментного «сэндвичевого» метода. Процедуру выполнения иммуноферментного анализа проводили по инструкциям, предлагаемым производителями тест-систем. Учет результатов иммуноферментного анализа производили с помощью фотометра для микропланшетов «Multiscan ЕХ» («ThermoLabSystems», Финляндия) при длине волны 450 (для IL-1β, IL-2, IL-6, IL-18, IFNα, IFNγ,). Концентрацию цитокинов вычисляли по калибровочной кривой. Количество интерлейкинов IL-1β, IL-2, IL-6, IL-18, IFNα, IFNγ определяли с использованием наборов ЗАО «Вектор-бест» (г. Новосибирск) по методике производителя. Метод основан на «сэндвич»-варианте твердофазного иммуноферментного анализа с применением двух типов моноклональных антител с различной эпитопной специфичностью к интерлейкинам. На первой стадии анализа исследуемые и контрольные образцы инкубируют в лунках с иммобилизованными антителами. Имеющийся в образцах интерлейкин связывается с иммобилизованными антителами. Связавшийся интерлейкин взаимодействует при инкубации с конъюгатом антител к интерлейкинам человека с биотином. На третьей стадии связавшийся конъюгат взаимодействует при инкубации с конъюгатом. Количество связавшегося конъюгата определяют цветной реакцией, интенсивность желтого окрашивания пропорциональна концентрации ИЛ в анализируемых объектах. Расчеты количества цитокинов проводили путем построения калибровочной кривой с помощью компьютерной программы и выражали в пг/мл. В качестве контроля при исследовании указанных показателей использовались образцы крови добровольцев, не имеющих хронических заболеваний и маркеров инфицирования ВИЧ.
Были обследованы четыре группы пациентов с опийной наркоманией с абстинентным синдромом, сочетанным с ВИЧ-инфекцией: 24 пациентов с абстинентным синдромом при опийная наркомании, 22 пациента с абстинентным синдромом при опийной наркомании, сочетанной с ВИЧ-инфекцией, 18 здоровых лиц и 18 лиц с ВИЧ-инфекцией без опийной наркомании.
Оценку результатов проводили с использованием статистических приемов для малых выборок. Статистическая обработка полученных материалов произведена с применением прикладной программы Statistica 6,0. с использованием непараметрических критериев Манна-Уитни и коэффициента ранговой корреляции Спирмена.
Проведен сравнительный анализ цитокинового спектра при опийной наркомании, сочетанной с ВИЧ+ в состоянии абстинентного синдрома (2-3 дня после последнего приема опийного наркотика) с уровнем сывороточных цитокинов здоровых лиц, выявлены статистически достоверные изменения в синтезе почти всех исследуемых иммуномодулирующих цитокинов: IFNα (увеличение в 1,6 раза до 6,6±3,7 пг/мл, p≤0,05), IFNγ (увеличение в 1,1 раз до 9,2±1,7 пг/мл, p≤0,05), IL-1в (увеличение в 1,9 раз до 7,4±5,2 пг/мл, p≤0,05), IL-2 (увеличение в 1,8 раз до 4,6±2,9 пг/мл, p≤0,05), IL-6 (увеличение в 2,6 раз до 5,4±4 пг/мл, p≤0,05), IL-18 (увеличение в 1,5 раза до 1100±253 пг/мл, p≤0,05). Статистически достоверных изменений не выявлено лишь у IL-4. Сравнение с уровнем сывороточных цитокинов больных с ВИЧ-инфекцией (без наркомании) выявило ту же тенденцию (таблица).
Из приведенных в таблице данных следует, что состояние абстинентного синдрома при опийной наркомании, сочетанной с ВИЧ-инфекцией, влечет за собой увеличение уровня интерлейкинов, подтверждающееся статистической достоверностью.
Исследованиями определены статистически достоверные различия в секреции IL-1β, IL-2, IL-6, IL-18, IFNα, IFNγ у больных с абстинентным синдромом при опийной наркомании, сочетанной с ВИЧ-инфекцией, с наиболее выраженными изменениями уровней IL-1β, IL-2, IL-6 относительно здоровых лиц, что позволяет проводить диагностику данного заболевания.
Примеры выполнения способа
Пример 1
В амбулаторное отделение СПИД-центра г. Владивостока обратился больной 31 год с жалобами на слабость, боли в суставах, нарушения сна, является ВИЧ-инфицированным с 26 лет. Употребление опиатов отрицает, в возрасте 26 лет диагностирована ВИЧ-инфекция. Злоупотебление алкоголем, лекарственными препаратами отрицал, противовирусное лечение не получал. Пациент обратился с целью назначения ему противовирусной терапии. При объективном исследовании выявлены гепатомегалия. В биохимическом анализе крови выявлено повышение АсАТ до 43 Е/л. В сыворотке крови определялись маркеры вирусных гепатитов как В, так и С с наличием активной HCV-инфекции в сочетании с серологическими маркерами HBV в виде «изолированных» Hbcor AT (IgG). При изучении показателей иммунитета обнаружен Т-клеточный иммунодефицит (лимфопения, низкое содержание зрелых Т-лимфоцитов), снижение иммунорегуляторного индекса, угнетение неспецифического звена защиты (низкое число натуральных киллеров), увеличение количества лимфоцитов с повышенной апоптотической готовностью и высокая активность гуморального звена иммунитета (IgM 1,3 г/л). Показатели цитокинового обмена были следующими: IL-1β - 6,8 пг/мл, IL-2 - 4,7 пг/мл, IL-6 - 5,7 пг/мл, IL-18 - 1163 пг/мл, IFNα - 6,4 пг/мл, IFNγ - 8,9 пг/мл.
Согласно предлагаемому способу у данного пациента диагностирована действующая опийная наркомания, которая была подтверждена положительным тестом на обнаружение опиатов в моче, данными анамнеза, полученными впоследствии от родственников. С помощью разработанного способа был диагностирован синдром отмены опийной наркомании, что послужило причиной отказа в назначении противовирусной терапии пациенту. Больному объяснили о необходимости пройти курс лечения опийной наркомании.
Таким образом, предлагаемый способ позволяет диагностировать абстинентный синдром при опийной наркомании, что дает возможность выбрать правильную врачебную тактику в отношении лечения этой категории пациентов.
Пример 2
В стационарное отделение СПИД-центра г. Владивостока обратился больной 28 лет с жалобами на слабость, субфебрильную температуру, нарушения сна, является ВИЧ-инфицированным с 24 лет. Употребление опиатов отрицает, в возрасте 24 лет диагностирована ВИЧ-инфекция. Злоупотебление алкоголем, лекарственными препаратами отрицал, противовирусное лечение не получал. Пациент обратился с целью назначения ему противовирусной терапии. При объективном исследовании выявлены гепатомегалия. В биохимическом анализе крови выявлено повышение AcAT до 35 Е/л. В сыворотке крови определялись маркеры вирусных гепатитов как В, так и С с наличием активной HCV-инфекции в сочетании с серологическими маркерами HBV в виде «изолированных» Hbcor AT (IgG). При изучении показателей иммунитета обнаружен Т-клеточный иммунодефицит (лимфопения, низкое содержание зрелых Т-лимфоцитов), снижение иммунорегуляторного индекса, угнетение неспецифического звена защиты (низкое число натуральных киллеров), увеличение количества лимфоцитов с повышенной апоптотической готовностью и высокая активность гуморального звена иммунитета (IgM 1,1 г/л). Показатели цитокинового обмена были следующими: IL-1β - 6,6 пг/мл, IL-2 - 4,9 пг/мл, IL-6 - 5,3 пг/мл, IL-18 - 1017 пг/мл, IFNα - 6,1 пг/мл, IFNγ - 8,2 пг/мл. Согласно предлагаемому способу у данного пациента диагностирована действующая опийная наркомания, которая была подтверждена положительным тестом на обнаружение опиатов в моче, данными анамнеза, полученными впоследствии от родственников. С помощью разработанного способа был диагностирован синдром отмены опийной наркомании, что послужило причиной отказа в назначении противовирусной терапии пациенту. Больному объяснили о необходимости пройти курс лечения опийной наркомании.
Таким образом, разработанным способом диагностирован абстинентный синдром при опийной наркомании, что дало возможность выбрать правильную врачебную тактику в отношении лечения этого пациента.
Из приведенных сведений о заявляемом способе следует, что он доступен для использования в обычных клиниках и позволяет в ранние сроки выявлять абстинентный синдром при опийной наркомании, сочетанной с ВИЧ-инфекцией. Это крайне важно для прогноза развития заболевания и позволяет своевременно назначить необходимую терапию.
Источники информации
1. Батухтина Е.И., Невидимова Т.И., Коконова Д.Н. Продукция цитокинов, сенсорная чувствительность и тендерная самоидентификация у лиц мужского пола с наркотической зависимостью // Сибирский вестник психиатрии и наркологии. - 2010. - №6. - С. 33-36.
2. Беспалова Л.Ю. Ипохондрические расстройства у ВИЧ-инфицированных наркозависиммых пациентов // Медицинский вестник Башкортостана. - 2012. - Т. 7. - №4. - С. 18-21.
3. Гайкова О.Н., Литвинцев Б.С, Трофимова А.В. Изменения коры и белого вещества головного мозга у умерших с сочетанием наркомании и ВИЧ-инфекции // Лучевая диагностика и терапия. - 2011. - №1 (2). - С. 72-77.
4. Коконова Д.Н., Батухтина Е.И., Невидимова Т.И., Найденова Н.Н. Особенности продукции цитокинов при формировании психических и поведенческих расстройств, вызванных употреблением ПАВ // Сибирский вестник психиатрии и наркологии. - 2009. - №3. - С. 10-13.
5. Магаева С.В., Морозов С.Г. Нейроиммунофизиология. - М.: ПИК ВИНИТИ, 2005. - 160 с.
6. Мотавкина Н.С., Шаркова В.А. Тенденции в иммунологических сдвигах у больных наркоманией как показатели их иммуногенетического статуса // Тихоокеанский медицинский журнал. - 2002. - №1 (8). - С. 89-90.
7. Сотниченко С.А. ВИЧ-инфекция, сочетанная с туберкулезом, в Приморском крае. / С.А., Сотниченко, Е.В. Маркелова, Л.Ф. Скляр, А.А. Яковлев. - Владивосток: Дальнаука, 2009. - 165 с.
8. Шаркова В.А., Панова А.Е. Состояние иммунной системы у больных наркоманией: Методические рекомендации. / Под общ. ред.. Н.С. Мотавкиной. - 2007. - С. 16-29.