КОМПОЗИЦИИ МОДИФИЦИРОВАННЫХ АНТИТЕЛ, СПОСОБЫ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ И ПРИМЕНЕНИЯ

d
d
1. Модифицированное антитело, содержащее антитело или фрагмент антитела (АВ), способные специфически связываться с его мишенью, связанные с маскирующей частью (ММ), в котором присоединение ММ снижает способность АА связываться с его мишенью так, что константа диссоциации (К) АВ, связанного с ММ, в отношении мишени по меньшей мере в 100 раз больше K АВ, не связанного с ММ, в отношении мишени.
d
d
2. Модифицированное антитело по п.1, где К АВ, связанного с ММ, в отношении мишени по меньшей мере в 1000 раз больше К АВ, не связанного с ММ, в отношении мишени.
d
d
3. Модифицированное антитело по п.1, в котором К АВ, связанного с ММ, в отношении мишени по меньшей мере в 10000 раз больше К АВ, не связанного с ММ, в отношении мишени.
4. Модифицированное антитело по п.1, в котором связывание ММ с АВ снижает в присутствии мишени способность АВ связываться с его мишенью по меньшей мере на 90% по сравнению со способностью АВ, не связанного с ММ, связываться с его мишенью при определении с помощью анализа замещения мишени in vitro.
5. Модифицированное антитело по п.4, в котором связывание ММ с АВ снижает способность АВ связываться с его мишенью в течение по меньшей мере 12 часов.
6. Модифицированное антитело по п.4, в котором связывание ММ с АВ снижает способность АВ связываться с его мишенью в течение по меньшей мере 24 часов.
7. Модифицированное антитело по п.4, в котором связывание ММ с АВ снижает способность АВ связываться с его мишенью в течение по меньшей мере 72 часов.
d
d
8. Модифицированное антитело по п.1, где константа диссоциации (К) ММ в отношении АВ по меньшей мере в 100 раз больше К АВ в отношении мишени.
d
9. Модифицированное антитело по п.8, где К ММ в отношении АВ меньше 10 нМ.
d
10. Модифицированное антитело по п.8, где К ММ в отношении АВ меньше 5 нМ.
d
11. Модифицированное антитело по п.8, где К ММ в отношении АВ равна примерно 1 нМ.
12. Модифицированное антитело по п.1, дополнительно связанное с расщепляемой частью (СМ).
13. Модифицированное антитело по п.12, в котором СМ может быть расщеплена ферментом.
14. Модифицированное антитело по п.12, в котором СМ может быть восстановлена восстановителем.
15. Модифицированное антитело по п.12, в котором СМ может быть подвергнута фотолизу.
16. Модифицированное антитело по п.1, в котором ММ может специфически связываться с антигенсвязывающим доменом АВ.
17. Модифицированное антитело по п.16, в котором связывание ММ с антигенсвязывающим доменом является нековалентным.
18. Модифицированное антитело по п.1, в котором ММ аллостерически снижает способность АВ связываться с его мишенью.
19. Модифицированное антитело по п.1, в котором ММ стерически снижает способность АВ связываться с его мишенью.
4
-1
-1
20. Модифицированное антитело по п.12, в котором СМ может быть специфически расщеплена ферментом со скоростью, равной по меньшей мере примерно 1×10 М·с.
4
-1
21. АВ по п.20, в котором СМ может быть специфически расщеплена ферментом со скоростью, равной по меньшей мере 5×10 М·с.
4
-1
22. Модифицированное антитело по п.20, в котором СМ может быть специфически расщеплена ферментом со скоростью, равной по меньшей мере 10×10 М·с.
23. Модифицированное антитело по п.1, где фрагмент антитела выбран из группы, состоящей из Fab'-фрагмента, F(ab')2-фрагмента, scFv, scAB, dAb, антитела с одним доменом тяжелой цепи и антитела с одним доменом легкой цепи.
24. Модифицированное антитело по п.1, где АВ выбрано из группы, состоящей из антител, приведенных в таблице 2.
25. Модифицированное антитело по п.24, где АВ не является алемтузумабом.
26. Модифицированное антитело по п.24, где АВ представляет собой цетуксимаб, панитумумаб, инфликсимаб, адалимумаб, эфализумаб, ипилимумаб, тремелимумаб, адекатумумаб, Нu5c8, алемтузумаб, ранибизумаб, тозитумомаб, ибритумомаб тиуксетан, ритуксимаб, инфликсимаб, бевацизумаб или фигитумумаб.
27. Модифицированное антитело по п.1, где мишень выбрана из группы, состоящей из мишеней, приведенных в таблице 1.
28. Модифицированное антитело по п.1, где мишень не является CD52.
29. Модифицированное антитело по п.27, где мишень представляет собой EGFR, TNFальфа, CD11a, CSFR, CTLA-4, EpCAM, VEGF, CD40, CD20, Notch 1, Notch 2, Notch 3, Notch 4, Jagged 1, Jagged 2, CD52, MUC1, IGF1R, трансферрин, gp130, VCAM-1, CD44, DLL4 или IL4.
30. Модифицированное антитело по п.1, дополнительно содержащее второе АВ, где мишень для второго АВ выбрана из группы, состоящей из мишеней, приведенных в таблице 1.
31. Модифицированное антитело по п.12, в котором СМ расположена в ММ.
32. Модифицированное антитело по п.12, в котором СМ является субстратом для фермента, выбираемого из группы, состоящей из ферментов, приведенных в таблице 3.
33. Модифицированное антитело по п.32, в котором СМ является субстратом для легумаина, плазмина, ТМРRSS-3/4, MMP-9, MT1-MMP, катепсина, каспазы, эластазы нейтрофилов человека, бета-секретазы, uPA или РSA.
34. Модифицированное антитело по п.32, где АВ выбрано из группы, состоящей из антител, приведенных в таблице 2.
35. Модифицированное антитело по п.32, где АВ не является алемтузумабом.
36. Модифицированное антитело по п.34, где АВ представляет собой цетуксимаб, панитумумаб, инфликсимаб, адалимумаб, эфализумаб, ипилимумаб, тремелимумаб, адекатумумаб, Нu5c8, алемтузумаб, ранибизумаб, тозитумомаб, ибритумомаб тиуксетан, ритуксимаб, инфликсимаб, бевацизумаб или фигитумумаб.
37. Модифицированное антитело по п.32, где мишень выбрана из группы, состоящей из мишеней, приведенных в таблице 1.
38. Модифицированное антитело по п.37, где мишень не является CD52.
39. Модифицированное антитело по п.37, где мишень представляет собой EGFR, TNFальфа, CD11a, CSFR, CTLA-4, EpCAM, VEGF, CD40, CD20, Notch 1, Notch 2, Notch 3, Notch 4, Jagged 1, Jagged 2, CD52, MUC1, IGF1R, трансферрин, gp130, VCAM-1, CD44, DLL4 или IL4.
40. Модифицированное антитело по п.12, дополнительно связанное со второй расщепляемой частью (СМ), которая может быть специфически модифицирована ферментом.
41. Модифицированное антитело по п.40, в котором вторая СМ является субстратом для легумаина, плазмина, ТМРRSS-3/4, MMP-9, MT1-MMP, катепсина, каспазы, эластазы нейтрофилов человека, бета-секретазы, uPA или РSA.
42. Модифицированное антитело по п.1, в котором ММ характеризуется не более, чем 50% сходством аминокислотной последовательности с природным партнером связывания АВ.
43. Модифицированное антитело по п.1, дополнительно содержащее линкерный пептид, где линкерный пиптед расположен между АВ и ММ.
44. Модифицированное антитело по п.12, дополнительно содержащее линкерный пептид, где линкерный пептид расположен между ММ и СМ.
45. Модифицированное антитело по п.12, дополнительно содержащее линкерный пептид, где линкерный пептид расположен между АВ и СМ.
46. Модифицированное антитело по п.12, дополнительно содержащее два линкерных пептида, где первый линкерный пептид расположен между АВ и СМ, а второй линкерный пептид расположен между ММ и СМ.
47. Модифицированное антитело по п.43, в котором линкер выбран из группы, состоящей из расщепляемого линкера, нерасщепляемого линкера и линкера с разветвленной цепью.
48. Модифицированное антитело по п.44, в котором линкер выбран из группы, состоящей из расщепляемого линкера, нерасщепляемого линкера и линкера с разветвленной цепью.
49. Модифицированное антитело по п.45, в котором линкер выбран из группы, состоящей из расщепляемого линкера, нерасщепляемого линкера и линкера с разветвленной цепью.
50. Модифицированное антитело по п.46, в котором линкеры выбраны из группы, состоящей из расщепляемого линкера, нерасщепляемого линкера и линкера с разветвленной цепью.
51. Модифицированное антитело по п.1, дополнительно содержащее детектируемую часть.
52. Модифицированное антитело по п.47, дополнительно содержащее расщепляемую часть (СМ), связанную с АВ, которая может быть специфически модифицирована ферментом.
53. Модифицированное антитело по п.47, в котором детектируемая часть является диагностическим средством.
54. Модифицированное антитело по п.1, дополнительно содержащее средство, конъюгированное с АВ.
55. Модифицированное антитело по п.54, в котором средство является терапевтическим средством.
56. Модифицированное антитело по п.54, дополнительно содержащее расщепляемую часть (СМ), связанную с АВ, которая может быть специфически расщеплена.
57. Модифицированное антитело по п.56, в котором средство является противоопухолевым средством.
58. Модифицированное антитело по п.56, где антитело или фрагмент антитела выбраны из группы, состоящей из антител, приведенных в таблице 2.
59. Модифицированное антитело по п.56, где АВ не является алемтузумабом.
60. Модифицированное антитело по п.58, где антитело или фрагмент антитела представляет собой цетуксимаб, панитумумаб, инфликсимаб, адалимумаб, эфализумаб, ипилимумаб, тремелимумаб, адекатумумаб, Нu5c8, алемтузумаб, ранибизумаб, тозитумомаб, ибритумомаб тиуксетан, ритуксимаб, инфликсимаб, бевацизумаб или фигитумумаб.
61. Модифицированное антитело по п.56, где мишень выбрана из группы, состоящей из мишеней, приведенных в таблице 1.
62. Модифицированное антитело по п.56, где мишень не является CD52.
63. Модифицированное антитело по п.61, где мишень представляет собой EGFR, TNFальфа, CD11a, CSFR, CTLA-4, EpCAM, VEGF, CD40, CD20, Notch 1, Notch 2, Notch 3, Notch 4, Jagged 1, Jagged 2, CD52, MUC1, IGF1R, трансферрин, gp130, VCAM-1, CD44, DLL4 или IL4.
64. Модифицированное антитело по п.56, в котором СМ является субстратом для фермента, выбираемого из группы, состоящей из ферментов, приведенных в таблице 3.
65. Модифицированное антитело по п.64, в котором СМ является субстратом для легумаина, плазмина, ТМРRSS-3/4, MMP-9, MT1-MMP, катепсина, каспазы, эластазы нейтрофилов человека, бета-секретазы, uPA или РSA.
66. Модифицированное антитело по п.56, в котором СМ может быть расщеплена фотолизом.
67. Модифицированное антитело по п.54, в котором средство конъюгировано с углеводной частью АВ.
68. Модифицированное антитело по п.67, в котором углеводная часть расположена снаружи антигенсвязывающей области АВ.
69. Модифицированное антитело по п.54, в котором средство конъюгировано с сульфгидрильной группой АВ.
70. Модифицированное антитело по п.12, в котором период полувыведения композиции в сыворотке после введения в организм составляет по меньшей мере 5 дней.
71. Модифицированное антитело по п.1, в котором консенсусная последовательность ММ представляет собой CISPRGC, C(N/P)H(HVF)(Y/T)(F/W/T/L)(Y/G/T/S)(T/S/Y/H)CGCISPRGCG, xCxxYQCLxxxxxx, XXQPxPPRVXX, PxPGFPYCxxxx, xxxxQxxPWPP, GxGxCYTILExxCxxxR, GxxxCYxIxExxCxxxx, GxxxCYxIxExWCxxxx, xxxCCxxYxIxxCCxxx или xxxxxYxILExxxxx.
72. Модифицированное антитело по п.57, в котором консенсусная последовательность является специфичной для связывания с антителом против VEGF, антителом против EFGR или антителом против CTLA-4.
73. Модифицированное антитело, содержащее антитело или фрагмент антитела (АВ), способное специфически связываться с его мишенью, связанное с маскирующей частью (ММ), где связывание ММ с АВ снижает способность АВ связываться с мишенью по меньшей мере на 90% по сравнению со способностью АВ, не связанного с ММ, связываться с мишенью при определении с помощью анализа замещения мишени in vitro.
74. Модифицированное антитело по п.73, где связывание АВ с мишенью снижено в течение по меньшей мере 12 часов.
75. Модифицированное антитело по п.73, где связывание АВ с мишенью снижено в течение по меньшей мере 24 часов.
76. Модифицированное антитело по п.73, где связывание АВ с мишенью снижено по меньшей мере в течение 72 часов.
d
d
77. Модифицированное антитело по п.73, где константа диссоциации (К) АВ, связанного с ММ, в отношении мишени по меньшей мере в 100 раз больше К АВ, не связанного с ММ, в отношении мишени.
d
d
78. Модифицированное антитело по п.73, где константа диссоциации (К) ММ в отношении АВ по меньшей мере в 100 раз больше К АВ в отношении мишени.
d
79. Модифицированное антитело по п.78, где К ММ в отношении АВ меньше 10 нМ.
d
80. Модифицированное антитело по п.78, где К ММ в отношении АВ меньше 5 нМ.
d
81. Модифицированное антитело по п.78, где К ММ в отношении АВ равна примерно 1 нМ.
82. Модифицированное антитело по п.73, дополнительно содержащее линкер между АВ и ММ.
83. Модифицированное антитело по п.82, в котором линкер содержит расщепляемую часть (СМ).
84. Модифицированное антитело по п.73, в котором ММ может специфически связываться с антигенсвязывающим доменом АВ.
4
-1
-1
85. Модифицированное антитело по п.83, в котором СМ может быть специфически расщеплена ферментом со скоростью, равной по меньшей мере 1×10 М·с.
4
-1
86. Модифицированное антитело по п.83, в котором СМ может быть специфически расщеплена ферментом со скоростью, равной по меньшей мере 5×10 М·с.
4
-1
87. Модифицированное антитело по п.83, в котором СМ может быть специфически расщеплена ферментом со скоростью, равной по меньшей мере 10×10 М·с.
88. Модифицированное антитело по п.83, в котором СМ может быть расщеплена восстановителем.
89. Модифицированное антитело по п.83, в котором СМ может быть расщеплена фотолизом.
90. Модифицированное антитело по п.73, где фрагмент антитела выбран из группы, состоящей из Fab'-фрагмента, F(ab')2-фрагмента, scFv, scAB, dAb, антитела с одним доменом тяжелой цепи и антитела с одним доменом легкой цепи.
91. Модифицированное антитело по п.73, где АВ выбрано из группы, состоящей из антител, приведенных в таблице 2.
92. Модифицированное антитело по п.91, где АВ представляет собой цетуксимаб, панитумумаб, инфликсимаб, адалимумаб, эфализумаб, ипилимумаб, тремелимумаб, адекатумумаб, Нu5c8, алемтузумаб, ранибизумаб, тозитумомаб, ибритумомаб тиуксетан, ритуксимаб, инфликсимаб, бевацизумаб или фигитумумаб.
93. Модифицированное антитело по п.73, где мишень выбрана из группы, состоящей из мишеней, приведенных в таблице 1.
94. Модифицированное антитело по п.93, где мишень представляет собой EGFR, TNFальфа, CD11a, CSFR, CTLA-4, EpCAM, VEGF, CD40, CD20, Notch 1, Notch 2, Notch 3, Notch 4, Jagged 1, Jagged 2, CD52, MUC1, IGF1R, трансферрин, gp130, VCAM-1, CD44, DLL4 или IL4.
95. Модифицированное антитело по п.73, где АВ не является алемтузумабом.
96. Модифицированное антитело по п.73, где мишень не является CD52.
97. Модифицированное антитело по п.83, в котором СМ является субстратом для фермента, выбираемого из группы, состоящей из ферментов, приведенных в таблице 3.
98. Модифицированное антитело по п.97, в котором СМ является субстратом для легумаина, плазмина, ТМРRSS-3/4, MMP-9, MT1-MMP, катепсина, каспазы, эластазы нейтрофилов человека, бета-секретазы, uPA или РSA.
99. Модифицированное антитело по п.83, дополнительно связанное со второй расщепляемой частью (СМ), которая может быть специфически модифицирована ферментом.
100. Модифицированное антитело по п.99, в котором вторая СМ является субстратом для легумаина, плазмина, ТМРRSS-3/4, MMP-9, MT1-MMP, катепсина, каспазы, эластазы нейтрофилов человека, бета-секретазы, uPA или РSA.
101. Модифицированное антитело по п.73, в котором ММ характеризуется не более, чем 50% сходством аминокислотной последовательности с природным партнером связывания АВ.
102. Модифицированное антитело по п.73, дополнительно содержащее детектируемую часть.
103. Модифицированное антитело по п.73, дополнительно содержащее средство, конъюгированное с АВ.
104. Активируемое антитело (АА), содержащее:
(а) антитело или фрагмент антитела (АВ), способные специфически связываться с его мишенью;
(b) маскирующую часть (ММ), связанную с АВ, которая может ингибировать специфическое связывание АВ с его мишенью; и
(с) расщепляемую часть (СМ), связанную с АВ, которая может быть специфически расщеплена ферментом;
при этом, когда АА не находится в присутствии достаточной ферментативной активности для расщепления СМ, ММ снижает специфическое связывание АВ с его мишенью по меньшей мере на 90% по сравнению с тем, когда АА находится в присутствии достаточной ферментативной активности для расщепления СМ и ММ не ингибирует специфического связывания АВ с его мишенью.
105. Активируемое антитело (АА) по п.104, где связывание АВ с его мишенью снижено в течение по меньшей мере 12 часов.
106. Активируемое антитело (АА) по п.104, где связывание АВ с его мишенью снижено в течение по меньшей мере 24 часов.
107. Активируемое антитело (АА) по п.104, где связывание АВ с его мишенью снижено в течение по меньшей мере 72 часов.
d
d
108. Активируемое антитело (АА) по п.104, где константа диссоциации (К) АВ, связанного с ММ и СМ, в отношении мишени по меньшей мере в 100 раз больше К АВ, не связанного с ММ и СМ, в отношении мишени.
d
d
109. Активируемое антитело (АА) по п.104, где константа диссоциации (К) ММ в отношении АВ по меньшей мере в 100 раз больше К АВ в отношении мишени.
d
110. Модифицированное антитело по п.109, где К ММ в отношении АВ меньше 10 нМ.
d
111. Модифицированное антитело по п.109, где К ММ в отношении АВ меньше 5 нМ.
d
112. Модифицированное антитело по п.109, где К ММ в отношении АВ равна примерно 1 нМ.
113. Активируемое антитело (АА) по п.104, где ММ может специфически связываться с антигенсвязывающим доменом АВ.
4
-1
-1
114. Активируемое антитело (АА) по п.104, где СМ может быть специфически расщеплена ферментом со скоростью, равной по меньшей мере примерно 1×10 М·с.
4
-1
115. Активируемое антитело (АА) по п.104, где СМ может быть специфически восстановлена ферментом со скоростью, равной по меньшей мере 5×10 М·с.
4
-1
116. Активируемое антитело (АА) по п.104, где СМ может быть специфически восстановлена ферментом со скоростью, равной по меньшей мере 10×10 М·с.
117. Активируемое антитело (АА) по п.104, где фрагмент антитела выбран из группы, состоящей из Fab'-фрагмента, F(ab')2-фрагмента, scFv, scAB, dAb, антитела с одним доменом тяжелой цепи и антитела с одним доменом легкой цепи.
118. Активируемое антитело (АА) по п.104, где антитело выбрано из группы, состоящей из антител, приведенных в таблице 2.
119. Активируемое антитело (АА) по п.118, где АВ представляет собой цетуксимаб, панитумумаб, инфликсимаб, адалимумаб, эфализумаб, ипилимумаб, тремелимумаб, адекатумумаб, Нu5c8, алемтузумаб, ранибизумаб, тозитумомаб, ибритумомаб тиуксетан, ритуксимаб, инфликсимаб, бевацизумаб или фигитумумаб.
120. Активируемое антитело (АА) по п.104, где мишень выбрана из группы, состоящей из мишеней, приведенных в таблице 1.
121. Активируемое антитело (АА) по п.120, где мишень представляет собой EGFR, TNFальфа, CD11a, CSFR, CTLA-4, EpCAM, VEGF, CD40, CD20, Notch 1, Notch 2, Notch 3, Notch 4, Jagged 1, Jagged 2, CD52, MUC1, IGF1R, трансферрин, gp130, VCAM-1, CD44, DLL4 или IL4.
122. Активируемое антитело (АА) по п.104, где АВ не является алемтузумабом.
123. Активируемое антитело (АА) по п.104, где мишень не является CD52.
124. Активируемое антитело (АА) по п.104, где СМ является субстратом для фермента, выбираемого из группы, состоящей из ферментов, приведенных в таблице 3.
125. Активируемое антитело (АА) по п.124, где СМ является субстратом для легумаина, плазмина, ТМРRSS-3/4, MMP-9, MT1-MMP, катепсина, каспазы, эластазы нейтрофилов человека, бета-секретазы, uPA или РSA.
126. Активируемое антитело (АА) по п.104, дополнительно связанное со второй расщепляемой частью (СМ), которая может быть специфически модифицирована ферментом.
127. Активируемое антитело (АА) по п.126, в котором вторая СМ является субстратом для легумаина, плазмина, ТМРRSS-3/4, MMP-9, MT1-MMP, катепсина, каспазы, эластазы нейтрофилов человека, бета-секретазы, uPA или РSA.
128. Активируемое антитело (АА) по п.104, в котором СМ расположена в ММ.
129. Активируемое антитело (АА) по п.104, в котором ММ характеризуется не более, чем 50% сходством аминокислотной последовательности с природным партнером связывания АВ.
130. Активируемое антитело (АА) по п.104, дополнительно содержащее линкерный пептид, где линкерный пептид расположен между ММ и СМ.
131. Активируемое антитело (АА) по п.104, дополнительно содержащее линкерный пептид, где линкерный пептид расположен между АВ и СМ.
132. Активируемое антитело (АА) по п.104, дополнительно содержащее детектируемую часть.
133. Активируемое антитело (АА) по п.104, дополнительно содержащее средство, конъюгированное с АВ.
134. Комплекс активируемого антитела (ААС), содержащий:
(а) два антитела или фрагмента антитела (АВ1 и АВ2), каждое из которых способно специфически связываться с его мишенью;
(b) по меньшей мере одну маскирующую часть (ММ), связанную либо с АВ1, либо с АВ2, которая может ингибировать специфическое связывание АВ1 и АВ2 с их мишенями; и
(с) по меньшей мере одну расщепляемую часть (СМ), связанную либо с АВ1, либо с АВ2, которая может быть специфически расщеплена ферментом, активирующим композицию ААС;
при этом, когда ААС находится в нерасщепленном состоянии, ММ ингибирует специфическое связывание АВ1 и АВ2 с их мишенями, а когда ААС находится в расщепленном состоянии, ММ не ингибирует специфическое связывание АВ1 и АВ2 с их мишенями.
135. Композиция по п.134, в которой комплекс является биспецифическим.
136. Композиция по п.134, где АВ1 и АВ2 связываются с одним и тем же эпитопом на одной и той же мишени.
137. Композиция по п.134, где АВ1 и АВ2 связываются с разными эпитопами на одной и той же мишени.
138. Композиция по п.134, где АВ1 и АВ2 связываются с разными эпитопами на разных мишенях.
4
-1
-1
139. Композиция по п.134, в которой СМ может быть специфически расщеплена ферментом со скоростью, равной по меньшей мере примерно 1×10 М·с.
140. Композиция по п.134, в которой фрагмент антитела выбран из группы, состоящей из Fab'-фрагмента, F(ab')2-фрагмента, scFv, scAB, dAb, антитела с одним доменом тяжелой цепи и антитела с одним доменом легкой цепи.
141. Композиция по п.134, в которой АВ1 и/или АВ2 выбраны из группы, состоящей из антител, приведенных в таблице 2.
142. Композиция по п.134, в которой АВ1 и/или АВ2 представляют собой цетуксимаб, панитумумаб, инфликсимаб, адалимумаб, эфализумаб, ипилимумаб, тремелимумаб, адекатумумаб, Нu5c8, алемтузумаб, ранибизумаб, тозитумомаб, ибритумомаб тиуксетан, ритуксимаб, инфликсимаб, бевацизумаб или фигитумумаб.
143. Композиция по п.134, где мишень выбрана из группы, состоящей из мишеней, приведенных в таблице 1.
144. Композиция по п.134, в которой АВ1 и/или АВ2 представляют собой EGFR, TNFальфа, CD11a, CSFR, CTLA-4, EpCAM, VEGF, CD40, CD20, Notch 1, Notch 2, Notch 3, Notch 4, Jagged 1, Jagged 2, CD52, MUC1, IGF1R, трансферрин, gp130, VCAM-1, CD44, DLL4 или IL4.
145. Композиция по п.134, в которой АВ1 и АВ2 могут связываться с EGFR и VEGF, рецептором Notch и EGFR, лигандом Jagged и EGFR или сМЕТ и VEGF, соответственно.
146. Композиция по п.134, в которой СМ является субстратом для фермента, выбранного из группы, состоящей из ферментов, приведенных в таблице 3.
147. Композиция по п.134, в которой СМ является субстратом для легумаина, плазмина, ТМРRSS-3/4, MMP-9, MT1-MMP, катепсина, каспазы, эластазы нейтрофилов человека, бета-секретазы, uPA или РSA.
148. Композиция по п.134, дополнительно связанная со второй расщепляемой частью (СМ), которая может быть специфически расщеплена ферментом.
149. Композиция по п.148, в которой вторая СМ является субстратом для легумаина, плазмина, ТМРRSS-3/4, MMP-9, MT1-MMP, катепсина, каспазы, эластазы нейтрофилов человека, бета-секретазы, uPA или РSA.
150. Композиция по п.134, в которой ММ характеризуется не более, чем 50% сходством аминокислотной последовательности с природным партнером связывания АВ.
151. Композиция по п.134, дополнительно содержащая детектируемую часть.
152. Композиция по п.134, дополнительно содержащая средство, конъюгированное с АВ.
153. Способ лечения или диагностики состояния у субъекта, содержащий введение субъекту композиции, содержащей:
(а) антитело или фрагмент антитела (АВ), способное специфически связываться с его мишенью;
(b) маскирующую часть (ММ), связанную с АВ, которая может ингибировать специфическое связывание АВ с его мишенью; и
(с) расщепляемую часть (СМ), связанную с АВ, которая может быть специфически расщеплена ферментом;
при этом, когда при введении субъекту АА не находится в присутствии достаточной ферментативной активности для расщепления СМ, ММ снижает специфическое связывание АВ с его мишенью по меньшей мере на 90% по сравнению с тем, когда АА находится в присутствии достаточной ферментативной активности для расщепления СМ и ММ не ингибирует специфического связывания АВ с его мишенью.
154. Способ по п.153, где АВ выбрано из группы, состоящей из Fab'-фрагмента, F(ab')2-фрагмента, scFv, scAB, dAb, антитела с одним доменом тяжелой цепи и антитела с одним доменом легкой цепи.
155. Способ по п.153, где состояние представляет собой рак.
156. Способ по п.153, где ММ не является природным партнером связывания АВ.
157. Способ по п.153, где АВ выбрано из группы, состоящей из антител, приведенных в таблице 2.
158. Способ по п.157, где АВ представляет собой цетуксимаб, панитумумаб, инфликсимаб, адалимумаб, эфализумаб, ипилимумаб, тремелимумаб, адекатумумаб, Нu5c8, алемтузумаб, ранибизумаб, тозитумомаб, ибритумомаб тиуксетан, ритуксимаб, инфликсимаб, бевацизумаб или фигитумумаб.
159. Способ по п.153, где мишень выбрана из группы мишеней, приведенных в таблице 1.
160. Способ по п.159, где мишень представляет собой EGFR, TNFальфа, CD11a, CSFR, CTLA-4, EpCAM, VEGF, CD40, CD20, Notch 1, Notch 2, Notch 3, Notch 4, Jagged 1, Jagged 2, CD52, MUC1, IGF1R, трансферрин, gp130, VCAM-1, CD44, DLL4 или IL4.
161. Способ по п.153, где АВ не является алемтузумабом.
162. Способ по п.153, где мишень не является CD52.
163. Способ по п.153, где СМ является субстратом для фермента, выбираемого из группы, состоящей из ферментов, приведенных в таблице 3.
164. Способ по п.163, где СМ является субстратом для легумаина, плазмина, ТМРRSS-3/4, MMP-9, MT1-MMP, катепсина, каспазы, эластазы нейтрофилов человека, бета-секретазы, uPA или РSA.
165. Способ ингибирования ангиогенеза у млекопитающего, включающий введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества фармацевтической композиции по п.12.
166. Способ по п.165, где мишень представляет собой EGFR, TNFальфа, CD11a, CSFR, CTLA-4, EpCAM, VEGF, CD40, CD20, Notch 1, Notch 2, Notch 3, Notch 4, Jagged 1, Jagged 2, CD52, MUC1, IGF1R, трансферрин, gp130, VCAM-1, CD44, DLL4 или IL4.
167. Способ по п.165, где АВ представляет собой цетуксимаб, панитумумаб, инфликсимаб, адалимумаб, эфализумаб, ипилимумаб, тремелимумаб, адекатумумаб, Нu5c8, алемтузумаб, ранибизумаб, тозитумомаб, ибритумомаб тиуксетан, ритуксимаб, инфликсимаб, бевацизумаб или фигитумумаб.
168. Способ по п.165, в котором СМ является субстратом для легумаина, плазмина, ТМРRSS-3/4, MMP-9, MT1-MMP, катепсина, каспазы, эластазы нейтрофилов человека, бета-секретазы, uPA или РSA.
169. Способ получения композиции активируемого антитела (АА), включающий:
(а) получение антитела или фрагмента антитела (АВ), способного специфически связываться с его мишенью;
(b) связывание маскирующей части (ММ) с АВ, способной ингибировать специфическое связывание АВ с его мишенью; и
(с) связывание расщепляемой части (СМ), которая может быть специфически расщеплена ферментом с АВ;
d
d
при этом константа диссоциации (К) АВ, связанного с ММ, в отношении мишени по меньшей мере в 100 раз больше К АВ, не связанного с ММ, в отношении мишени.
170. Способ по п.166, в котором АВ является антителом, выбираемым из группы, состоящей из антител, приведенных в таблице 2, или получено из указанного антитела.
171. Способ по п.166, где АВ представляет собой цетуксимаб, панитумумаб, инфликсимаб, адалимумаб, эфализумаб, ипилимумаб, тремелимумаб, адекатумумаб, Hu5c8, алемтузумаб, ранибизумаб, тозитумомаб, ибритумомаб тиуксетан, ритуксимаб, инфликсимаб, бевацизумаб или фигитумумаб или получено из указанных антител.
172. Способ по п.166, где АВ не является алемтузумабом.
173. Способ по п.166, где мишень не является CD52.
174. Способ по п.166, где СМ является субстратом для фермента, выбираемого из группы, состоящей из ферментов, приведенных в таблице 3.
175. Способ по п.166, где СМ является субстратом для легумаина, плазмина, ТМРRSS-3/4, MMP-9, MT1-MMP, катепсина, каспазы, эластазы нейтрофилов человека, бета-секретазы, uPA или РSA.
176. Способ скрининга пептидов-кандидатов для идентификации пептида маскирующей части (ММ), способного связываться с антителом или фрагментом антитела (АВ), включающий:
(а) конструирование библиотеки пептидных остовов, в которой каждый пептидный остов содержит:
(i) трансмембранный белок (ТМ); и
(ii) пептид-кандидат;
(b) контактирование АВ с библиотекой;
(с) идентификацию по меньшей мере одного пептида-кандидата, способного связываться с АВ; и
d
(d) определение того, находится ли константа диссоциации (К) пептида-кандидата в отношении АВ в пределах 1-10 нМ.
177. Способ по п.176, где библиотека содержит вирусы, клетки или споры.
178. Способ по п.176, где библиотека содержит E. coli.
179. Способ по п.176, где пептидный остов дополнительно содержит детектируемую часть.
180. Способ скрининга пептидов-кандидатов для идентификации пептида маскирующей части (ММ), способного маскировать антитело или фрагмент антитела (АВ) с оптимальной эффективностью маскировки, включающий:
(а) конструирование библиотеки, включающей множество АВ, каждое из которых связано с пептидом-кандидатом, где АВ способны специфически связываться с мишенью;
(b) инкубацию каждого члена библиотеки с мишенью; и
(с) сравнение сродства связывания к мишени каждого члена библиотеки со сродством связывания к мишени каждого АВ, не связанного с пептидом-кандидатом.
181. Способ по п.180, стадия (с), где оптимальная эффективность связывания имеет место в том случае, когда сродство связывания к мишени члена библиотеки равно 10% по сравнению со сродством связывания к мишени немодифицированного АВ.
182. Способ по п.180, где АВ являются одинаковыми.
183. Терапевтическое средство на основе антитела, обладающее улучшенной биологической доступностью, где сродство связывания терапевтического средства на основе антитела к его мишени меньше в первой ткани по сравнению со связыванием терапевтического средства на основе антитела с его мишенью во второй ткани.
184. Терапевтическое средство на основе антитела по п.183, где мишень представляет собой EGFR, TNFальфа, CD11a, CSFR, CTLA-4, EpCAM, VEGF, CD40, CD20, Notch 1, Notch 2, Notch 3, Notch 4, Jagged 1, Jagged 2, CD52, MUC1, IGF1R, трансферрин, gp130, VCAM-1, CD44, DLL4 или IL4.
185. Терапевтическое средство на основе антитела по п.183, где первая ткань является здоровой тканью, а вторая ткань является больной тканью.
186. Терапевтическое средство на основе антитела по п.183, где первая ткань является опухолью на ранней стадии, а вторая ткань является опухолью на поздней стадии.
187. Терапевтическое средство на основе антитела по п.183, где первая ткань является доброкачественной опухолью, а вторая ткань является злокачественной опухолью.
188. Терапевтическое средство на основе антитела по п.183, где первая ткань и вторая ткань пространственно отделены друг от друга.
189. Терапевтическое средство на основе антитела по п.183, где первая ткань является эпителиальной тканью, а вторая ткань является тканью молочной железы, головы, шеи, легкого, поджелудочной железы, нервной системы, печени, предстательной железы, мочеполовой системы или шейки матки.
190. Терапевтическое средство на основе антитела по п.183, дополнительно связанное со средством.
191. Терапевтическое средство на основе антитела по п.190, где средство является противоопухолевым средством.
192. Фармацевтическая композиция, содержащая:
(а) антитело или фрагмент антитела (АВ), способное специфически связываться с его мишенью; и
(b) фармацевтически приемлемый наполнитель;
при этом сродство антитела или фрагмента антитела к мишени в первой ткани меньше сродства антитела или фрагмента антитела к мишени во второй ткани.
193. Композиция по п.192, где сродство в первой ткани в 10-1000 раз меньше сродства во второй ткани.
194. Композиция по п.192, где АВ связано с маскирующей частью (ММ), способной снижать связывание АВ с его мишенью, и расщепляемой частью (СМ), которая может быть специфически расщеплена ферментом.
195. Композиция по п.192, где мишень представляет собой EGFR, TNFальфа, CD11a, CSFR, CTLA-4, EpCAM, VEGF, CD40, CD20, Notch 1, Notch 2, Notch 3, Notch 4, Jagged 1, Jagged 2, CD52, MUC1, IGF1R, трансферрин, gp130, VCAM-1, CD44, DLL4 или IL4.
196. Композиция по п.192, где первая ткань является здоровой тканью, а вторая ткань является больной тканью.
197. Композиция по п.192, где первая ткань является опухолью на ранней стадии, а вторая ткань является опухолью на поздней стадии.
198. Композиция по п.192, где первая ткань является доброкачественной опухолью, а вторая ткань является злокачественной опухолью.
199. Композиция по п.192, где первая ткань и вторая ткань пространственно отделены друг от друга.
200. Композиция по п.192, где первая ткань является эпителиальной тканью, а вторая ткань является тканью молочной железы, головы, шеи, легкого, поджелудочной железы, нервной системы, печени, предстательной железы, мочеполовой системы или шейки матки.
201. Композиция по п.194, где СМ является субстратом для легумаина, плазмина, ТМРRSS-3/4, MMP-9, MT1-MMP, катепсина, каспазы, эластазы нейтрофилов человека, бета-секретазы, uPA или РSA.
202. Композиция по п.192, где антитело или фрагмент антитела представляет собой цетуксимаб, панитумумаб, инфликсимаб, адалимумаб, эфализумаб, ипилимумаб, тремелимумаб, адекатумумаб, Нu5c8, алемтузумаб, ранибизумаб, тозитумомаб, ибритумомаб тиуксетан, ритуксимаб, инфликсимаб, бевацизумаб или фигитумумаб.
203. Композиция по п.192, дополнительно содержащая средство, связанное с АВ.
204. Композиция по п.203, где средство является противоопухолевым средством.
205. Композиция, содержащая активируемое легумаином антитело или фрагмент антитела (АВ), связанное с маскирующей частью (ММ).
206. Композиция, содержащая активируемое плазмином антитело или фрагмент антитела (АВ), связанное с маскирующей частью (ММ).
207. Композиция, содержащая активируемое каспазой антитело или фрагмент антитела (АВ), связанное с маскирующей частью (ММ).
208. Композиция, содержащая TMPRSS-3/4-активируемое антитело или фрагмент антитела (АВ), связанное с маскирующей частью (ММ).
209. Композиция, содержащая PSA-активируемое антитело или фрагмент антитела (АВ), связанное с маскирующей частью (ММ).
210. Композиция, содержащая активируемое катепсином антитело или фрагмент антитела (АВ), связанное с маскирующей частью (ММ).
211. Композиция, содержащая активируемое эластазой нейтрофилов человека антитело или фрагмент антитела (АВ), связанное с маскирующей частью (ММ).
212. Композиция, содержащая активируемое бета-секретазой антитело или фрагмент антитела (АВ), связанное с маскирующей частью (ММ).
213. Композиция, содержащая uPA-активируемое антитело или фрагмент антитела (АВ), связанное с маскирующей частью (ММ).
214. Композиция, содержащая TMPRSS-3/4-активируемое антитело или фрагмент антитела (АВ), связанное с маскирующей частью (ММ).
215. Композиция, содержащая МТ1-ММР-активируемое антитело или фрагмент антитела (АВ), связанное с маскирующей частью (ММ).
216. Композиция, содержащая активируемое антитело к EGFR или фрагмент антитела (АВ), связанное с маскирующей частью (ММ).
217. Композиция, содержащая активируемое антитело к TNFальфа или фрагмент антитела (АВ), связанное с маскирующей частью (ММ).
218. Композиция, содержащая активируемое антитело к CD11a или фрагмент антитела (АВ), связанное с маскирующей частью (ММ).
219. Композиция, содержащая активируемое антитело к CSFR или фрагмент антитела (АВ), связанное с маскирующей частью (ММ).
220. Композиция, содержащая активируемое антитело к CTLA-4 или фрагмент антитела (АВ), связанное с маскирующей частью (ММ).
221. Композиция, содержащая активируемое антитело к EpCAM или фрагмент антитела (АВ), связанное с маскирующей частью (ММ).
222. Композиция, содержащая активируемое антитело к CD40L или фрагмент антитела (АВ), связанное с маскирующей частью (ММ).
223. Композиция, содержащая активируемое антитело к Notch1 или фрагмент антитела (АВ), связанное с маскирующей частью (ММ).
224. Композиция, содержащая активируемое антитело к Notch3 или фрагмент антитела (АВ), связанное с маскирующей частью (ММ).
225. Композиция, содержащая активируемое антитело к Jagged1 или фрагмент антитела (АВ), связанное с маскирующей частью (ММ).
226. Композиция, содержащая активируемое антитело к Jagged2 или фрагмент антитела (АВ), связанное с маскирующей частью (ММ).
227. Композиция, содержащая активируемое антитело цетуксимаб или фрагмент антитела (АВ), связанное с маскирующей частью (ММ).
228. Композиция, содержащая активируемое антитело вектибикс или фрагмент антитела (АВ), связанное с маскирующей частью (ММ).
229. Композиция, содержащая активируемое антитело инфликсимаб или фрагмент антитела (АВ), связанное с маскирующей частью (ММ).
230. Композиция, содержащая активируемое антитело адалимумаб или фрагмент антитела (АВ), связанное с маскирующей частью (ММ).
231. Композиция, содержащая активируемое антитело эфализумаб или фрагмент антитела (АВ), связанное с маскирующей частью (ММ).
232. Композиция, содержащая активируемое антитело ипилимумаб или фрагмент антитела (АВ), связанное с маскирующей частью (ММ).
233. Композиция, содержащая активируемое антитело тремелимумаб или фрагмент антитела (АВ), связанное с маскирующей частью (ММ).
234. Композиция, содержащая активируемое антитело адекатумумаб или фрагмент антитела (АВ), связанное с маскирующей частью (ММ).