ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ ДЛЯ ПРИМЕНЕНИЯ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ИЛИ ПРЕДУПРЕЖДЕНИЯ С5-СВЯЗАННОГО ЗАБОЛЕВАНИЯ И СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ ИЛИ ПРЕДУПРЕЖДЕНИЯ С5-СВЯЗАННОГО ЗАБОЛЕВАНИЯ
PHARMACEUTICAL COMPOSITION FOR USE FOR TREATMENT OR PREVENTION OF C5-RELATED DISEASE AND METHOD FOR TREATMENT OR PREVENTION OF C5-RELATED DISEASE

Область техники, к которой относится изобретение
Настоящее изобретение относится к дозам и схемам введения антитела к С5.
Предпосылки создания изобретения
Система комплемента играет центральную роль в клиренсе иммунных комплексов и иммунных ответах на инфекционные агенты, чужие антигены, инфицированные вирусом клетки и опухолевые клетки. Известно примерно 25-30 белков комплемента, которые присутствуют в виде сложной группы плазматических белков и мембранных кофакторов. Компоненты комплемента осуществляют свои иммунные защитные функции путем участия в ряде сложных ферментативных расщеплений и событий связывания с мембраной. Возникающие в результате этого каскады системы комплемента приводят к получению продуктов, обладающих опсоническими, иммунорегуляторными и литическими функциями.
В настоящее время является общепринятым, что система комплемента может активироваться тремя различными путями: классическим путем, лектиновым путем и альтернативным путем. В этих путях участвует много компонентов, и хотя они различаются своими начальными стадиями, затем они сходятся и включают одни и те же терминальные компоненты системы комплемента (с С5 по С9), которые ответственны за активацию и деструкцию клеток-мишеней.
Классический путь, как правило, активируется при образовании комплексов антиген-антитело. Независимо от этого первая стадия активации лектинового пути представляет собой связывание специфических лектинов, таких как маннан-связывающий лектин (MBL), Н-фиколин, М-фиколин, L-фиколин и лектин С-типа CL-11. В отличие от этого, альтернативный путь подвергается активации спонтанно с низким уровнем турновера, которая легко может повышаться на чужих или других аномальных поверхностях (бактерии, дрожжи, инфицированные вирусом клетки или поврежденная ткань). Эти пути сходятся в точке, в которой происходит расщепление компонента комплемента C3 активной протеазой с образованием C3a и C3b.
C3a представляет собой анафилатоксин. C3b связывается с бактериальными и другими клетками, а также с определенными вирусами и иммунными комплексами, и метит их для удаления из кровотока (играет роль опсонина). C3b формирует также комплекс с другими компонентами с образованием конвертазы С5, которая расщепляет С5 с образованием С5а и C5b.
С5 представляет собой белок с молекулярной массой 190 кДа, который присутствует в сыворотке здорового индивидуума в концентрации примерно 80 мкг/мл (0,4 мкМ). С5 является гликозилированным, при этом примерно 1,5-3% его массы приходится на долю углевода. Зрелый С5 представляет собой гетеродимер, в котором альфа-цепь с молекулярной массой 115 кДа сцеплена дисульфидом с бета-цепью с молекулярной массой 75 кДа. С5 синтезируется в виде одноцепочечного белка-предшественника (предшественник про-С5), состоящего из 1676 аминокислот (см. например, PTL1 и PTL2). Предшественник про-С5 расщепляется с высвобождением бета-цепи в виде аминоконцевого фрагмента и альфа-цепи в виде карбоксиконцевого фрагмента. Полипептидные фрагменты, представляющие собой альфа-цепь и бета-цепь, соединяются друг с другом посредством дисульфидной связи с образованием зрелого белка С5.
Зрелый С5 расщепляется с образованием С5а-фрагмента и C5b-фрагмента в процессе активации путей системы комплемента. В результате воздействия С5-конвертазы С5а отщепляется от альфа-цепи С5 в виде аминоконцевого фрагмента, содержащего первые 74 аминокислоты альфа-цепи. Оставшаяся часть зрелого С5 представляет собой C5b-фрагмент, который содержит остаток альфа-цепи, соединенный дисульфидом с бета-цепью. Примерно 20% массы С5а, составляющей 11 кДа, приходится на долю углевода.
С5а представляет собой другой анафилатоксин. C5b объединяется с С6, С7, С8 и С9 с образованием мембраноатакующего комплекса (MAC, C5b-9, комплекс терминальных компонентов системы комплемента (ТСС)) на поверхности клетки-мишени. Когда в мембраны клеток мишеней встраиваются в достаточном количестве MAC, то поры, образованные MAC, опосредуют быстрый осмотический лизис клеток мишеней.
Как указано выше, C3a и С5а являются анафилатоксинами. Они могут запускать дегрануляцию тучных клеток, что вызывает высвобождение гистамина и других медиаторов воспаления, которые приводят к сокращению гладких мышц, повышению проницаемости сосудов, активации лейкоцитов и другим проявлениям воспаления, включая клеточную пролиферацию, приводящую к повышенному содержанию паренхиматозных клеток. С5а функционирует также в качестве хемотаксического пептида, который служит для привлечения гранулоцитов, таких как нейтрофилы, эозинофилы, базофилы и моноциты, к области активации комплемента.
Активность С5а регулируется плазматическим ферментом карбоксипептидазой N, которая удаляет карбоксиконцевой аргинин из С5а, что приводит к образованию производного C5a-des-Arg. C5a-des-Arg обладает лишь 1% анафилактической активности и полиморфоядерной хемотаксической активности, присущей немодифицированному С5а.
В то время как правильно функционирующая система комплемента обеспечивает эффективную защиту от инфицирующих микроорганизмов, неправильная регуляция или активация системы комплемента участвует в патогенезе различных нарушений, включая, например, ревматоидный артрит (RA); волчаночный нефрит; повреждение, вызываемое ишемией-реперфузией; пароксизмальную ночную гемоглобинурию (PNH); атипичный гемолитико-уремический синдром (aHUS); болезнь плотных депозитов (DDD); дегенерацию желтого пятна (например, возрастную дегенерацию желтого пятна (AMD)); HELLP синдром (гемолиз, повышение активности ферментов печени и тромбоцитопения); тромботическую тромбоцитопеническую пурпуру (ТТР); спонтанную потерю плода; Pauci-иммунный (малоиммунный) васкулит (васкулит с гипокомплементемией); буллезный эпидермолиз; повторяющуюся потерю плода; рассеянный склероз (MS); травматическое повреждение головного мозга; и повреждение, вызванное инфарктом миокарда, сердечно-легочным шунтированием и гемодиализом (см. например, NPL1). Таким образом, ингибирование избыточной или неконтролируемой активации каскада комплемента может оказывать благоприятное клиническое действие на пациентов с указанными нарушениями.
Пароксизмальная ночная гемоглобинурия (PNH) представляет собой редкое нарушение крови, при котором эритроциты имеют дефекты и поэтому разрушаются быстрее, чем здоровые эритроциты. PNH обусловлена клональной экспансией гематопоэтических стволовых клеток с соматическими мутациями в гене PIG-A (фосфатидилинозитолгликан класса А), локализованном на X-хромосоме. Мутации в PIG-A приводят к ранней блокаде синтеза гликозилфосфатидилинозитола (GPI), молекулы, которая требуется для «заякоривания» многих белков на клеточных поверхностях. В результате при PNH кровяные клетки характеризуются дефицитом GPI-заякоренных белков, которые включают комплемент-регулирующие белки CD55 и CD59. В нормальных ситуациях эти комплемент-регулирующие белки блокируют образование MAC на клеточных поверхностях, предупреждая тем самым лизис эритроцитов. Отсутствие GPI-заякоренных белков вызывает опосредуемый системой комплемента гемолиз при PNH.
PNH характеризуется гемолитической анемией (пониженное количество эритроцитов), гемоглобинурией (присутствие гемоглобина в моче, что особенно проявляется после сна) и гемоглобинемией (присутствие гемоглобина в кровотоке). Известно, у что пораженных PNH индивидуумов имеют место пароксизмы, которые в данном случае представляют собой случаи появления темноокрашенной мочи. Гемолитическая анемия обусловлена внутрисосудистой деструкцией эритроцитов компонентами системы комплемента. Другие известные симптомы включают дисплазию, усталость, эректильную дисфункцию, тромбоз и повторяющуюся боль в брюшной области.
Экулизумаб представляет собой гуманизированное моноклональное антитело к белку С5 системы комплемента, который является терапевтическим средством первой линии, которое разрешено для лечения пароксизмальной ночной гемоглобинурии (PNH) и атипического гемолитико-уремического синдрома (aHUS) (см. например, NPL2). Экулизумаб ингибирует расщепление С5 С5-конвертазой с образованием С5а и C5b, что предупреждает образование комплекса терминальных компонентов системы комплемента C5b-9. И С5а, и C5b-9 вызывают опосредуемые терминальным комплексом системы комплемента события, характерные для PNH и aHUS (см. также PTL3, PTL4, PTL5 и PTL6).
7
-1
В нескольких публикациях описаны антитела к С5. Например, в PTL7 описано антитело к С5, которое связывается с альфа-цепью С5, но не связывается с С5а, и блокирует активацию С5, а в PTL8 описано моноклональное антитело к С5, которое ингибирует образование С5а. С другой стороны, в PTL9 описано антитело к С5, которое распознает сайт протеолитического расщепления конвертазой С5 на альфа-цепи С5 и ингибирует превращение С5 в С5а и C5b. В PTL10 описано антитело к С5, которое характеризуется константой аффинности, составляющей по меньшей мере 1×10 M.
Антитела (IgG) связываются с неонатальным Fc-рецептором (FcRn) и характеризуются продолжительными временами удерживания в плазме. Связывание IgG с FcRn, как правило, имеет место в кислых условиях (например, при рН 6,0) и редко происходит в нейтральных условиях (например, при рН 7,4). Как правило, IgG неспецифически встраиваются в клетки посредством эндоцитоза и возвращаются на клеточные поверхности посредством связывания с эндосомальным FcRn в кислых условиях в эндосомах. Затем IgG отделяются от FcRn в результате диссоциации в нейтральных условиях в плазме. IgG, которым не удалось связаться с FcRn, расщепляются в лизосомах. Если способность IgG к связыванию с FcRn в кислых условиях устраняют путем интродукции мутаций в его Fc-область, то IgG не возвращается из эндосом в плазму, что приводит к заметному снижению удерживания IgG в плазме. Опубликован метод, позволяющий повышать его связывание с FcRn в кислых условиях, предназначенный для повышения удерживания IgG в плазме. Когда связывание IgG с FcRn в кислых условиях повышают путем интродукции аминокислотной замены в его Fc-область, то IgG более эффективно возвращается из эндосом в плазму, и в результате повышается его удерживание в плазме. Кроме того, опубликованы также данные о том, что IgG с повышенной способностью к связыванию с FcRn в нейтральных условиях не отделяется путем диссоциации от FcRn в нейтральных условиях в плазме даже в том случае, если он возвращается на клеточную поверхность благодаря его связыванию с FcRn в кислых условиях в эндосомах, и следовательно, его удерживание в плазме не изменяется или, скорее, ухудшается (см. например, NPL3; NPL4; NPL5).
В последние годы были описаны антитела, которые связываются с антигенами рН-зависимым образом (см. например, PTL11 и PTL12). Указанные антитела сильно связываются с антигенами в нейтральных условиях в плазме и отделяются путем диссоциации от антигенов в кислых условиях, которые имеют место в эндосомах. После отделения путем диссоциации от антигенов антитела вновь приобретают способность связываться с антигенами, когда они возвращаются в плазму посредством FcRn. Таким образом, одна молекула антитела может повторно связываться с несколькими молекулами антигена. В целом, время удерживания антигена в плазме намного короче, чем время удерживания антитела, которое обладает указанным выше FcRn-опосредуемым механизмом рециклинга. Таким образом, когда антиген связан с антителом, то антиген в норме характеризуется пролонгированным удерживанием в плазме, что приводит к повышению концентрации антигена в плазме. С другой стороны, было установлено, что описанные выше антитела, которые связываются с антигенами рН-зависимым образом, позволяют элиминировать антигены из плазмы быстрее, чем типичные антитела, поскольку они отделяются путем диссоциации от антигенов в эндосомах в процессе FcRn-опосредуемого рециклинга. В PTL13 описан также основанный на компьютерном моделировании анализ, демонстрирующий, что антитело к С5, обладающее рН-зависимым связыванием, может усиливать выключение антигена.
Перечень ссылок
Патентная литература
[PTL1] патент US 6355245,
[PTL2] патент US 7432356,
[PTL3] WO 2005/074607,
[PTL4] WO 2007/106585,
[PTL5] WO 2008/069889,
[PTL6] WO 2010/054403,
[PTL7] WO 95/29697,
[PTL8] WO 2002/30985,
[PTL9] WO 2004/007553,
[PTL10] WO 2010/015608,
[PTL11] WO2009/125825,
[PTL12] WO 2011/122011,
[PTL13] WO 2011/111007.
Непатентная литература
[NPL1] Holers et al., Immunol. Rev. 223:300-316, 2008,
[NPL2] Dmytrijuk et al., The Oncologist 13(9):993-1000, 2008,
[NPL3] Yeung et al., J Immunol. 182(12):7663-7671, 2009,
[NPL4] Datta-Mannan et al., J Biol. Chem. 282(3): 1709-1717, 2007,
[NPL5] Dall'Acqua et al., J. Immunol. 169(9):5171-5180, 2002.
Краткое изложение сущности изобретения
В настоящем изобретении предложены фармацевтические композиции для применения для лечения или предупреждения С5-связанного заболевания и способы лечения или предупреждения С5-связанного заболевания. В настоящем изобретении предложены также дозы и схемы введения антитела к С5 или фармацевтической композиции, содержащей антитело к С5.
При создании настоящего изобретения изучены эффективные дозы и схемы введения антитела к С5, предназначенного для применения для лечения и/или предупреждения С5-связанных заболеваний. В результате этого, при создании настоящего изобретения было установлено, что при внутривенном введении антитела концентрация в плазме антитела к С5 быстро возрастает, превышая терапевтически эффективный уровень, и концентрация поддерживается на определенном уровне путем подкожного введения антитела после внутривенного введения.
При создании настоящего изобретения также были изучены подходящие условия дозирования, включая дозу антитела, частоту и интервалы при внутривенных введениях или подкожных введениях, интервал между внутривенном введением и подкожным введением и переход от лечения другими лекарственными средствами.
В частности, в настоящем изобретении предложены:
[1] Фармацевтическая композиция для применения для лечения или предупреждения С5-связанного заболевания, где композиция приготовлена в форме для подкожной инъекции, содержит антитело к С5 и вводится подкожно, при этом начальная доза композиции вводится после дозы другой фармацевтической композиции, которую вводят внутривенно, где другая фармацевтическая композиция приготовлена в форме для внутривенной инъекции и содержит антитело к С5.
[2] Фармацевтическая композиция для применения для лечения или предупреждения С5-связанного заболевания, где композиция приготовлена в форме для внутривенной инъекции, содержит антитело к С5 и вводится внутривенно, при этом доза композиции вводится перед начальной дозой другой фармацевтической композиции, которую вводят подкожно, где другая фармацевтическая композиция приготовлена в форме для подкожной инъекции и содержит антитело к С5.
[3] Фармацевтическая композиция согласно [1] или [2], где начальная доза композиции для подкожной инъекции вводится в этот же день или через 1-28 дней после дозы композиции для внутривенной инъекции.
[4] Фармацевтическая композиция согласно любому из [1]-[3], где композиция для подкожной инъекции вводится один раз каждые 3-42 дня.
[5] Фармацевтическая композиция согласно любому из [1]-[4], где композиция для внутривенной инъекции вводится два или более раз и от одного раза в час до одного раза каждые 14 дней.
[6] Фармацевтическая композиция согласно любому из [1]-[5], где композиция для подкожной инъекции вводится в дозе от 17 до 6000 мг антитела.
[7] Фармацевтическая композиция согласно любому из [1]-[6], где композиция для внутривенной инъекции вводится в дозе от 50 до 5000 мг антитела.
[8] Фармацевтическая композиция согласно любому из [1]-[7], где композиция предназначена для лечения или предупреждения С5-связанного заболевания у индивидуума, которого лечили с использованием по меньшей мере одного фармакологического продукта, предназначенного для применения для лечения или предупреждения этого заболевания, при этом начальная доза композиции для внутривенной инъекции вводится после конечной дозы фармакологического продукта.
[9] Фармацевтическая композиция согласно [8], где начальная доза композиции для внутривенной инъекции вводится на третий день или через 3 дня после конечной дозы фармакологического продукта.
[10] Фармацевтическая композиция согласно [8] или [9], где фармакологический продукт содержит siPHK, мишенью которой является мРНК С5, или антитело к С5, отличающееся от антитела к С5, которое содержится в композиции.
[11] Фармацевтическая композиция согласно любому из [8]-[10], где фармакологический продукт содержит экулизумаб или его производное.
[12] Фармацевтическая композиция для применения для лечения или предупреждения С5-связанного заболевания, где композиция приготовлена в форме для подкожной инъекции, содержит антитело к С5 и вводится подкожно в дозе от 17 до 6000 мг антитела.
[13] Фармацевтическая композиция для применения для лечения или предупреждения С5-связанного заболевания, где композиция приготовлена в форме для внутривенной инъекции, содержит антитело к С5 и вводится внутривенно в дозе от 50 до 5000 мг антитела.
[14] Фармацевтическая композиция согласно любому из [1]-[13], где С5-связанное заболевание представляет собой любое заболевание, выбранное из группы, состоящей из ревматоидного артрита (RA); волчаночного нефрита; повреждения, вызываемого ишемией-реперфузией; пароксизмальной ночной гемоглобинурии (PNH); атипичного гемолитико-уремического синдрома (aHUS); болезни плотных депозитов (DDD); дегенерации желтого пятна; HELLP синдрома (гемолиз, повышение активности ферментов печени и тромбоцитопения); тромботической тромбоцитопенической пурпуры (ТТР); спонтанной потери плода; Pauci-иммунного васкулита; буллезного эпидермолиза; повторяющейся потери плода; рассеянного склероза (MS); травматического повреждения головного мозга; и повреждения, вызванного инфарктом миокарда, сердечно-легочным шунтированием или гемодиализом.
[15] Способ лечения или предупреждения С5-связанного заболевания, включающий внутривенное введение индивидууму первой фармацевтической композиции, которая приготовлена в форме для внутривенной инъекции и содержит антитело к С5, и подкожное введение индивидууму второй фармацевтической композиции, которая приготовлена в форме для подкожной инъекции и содержит антитело к С5, после введения первой композиции.
[16] Способ согласно [15], в котором начальная доза второй композиции вводится в тот же день или через 1-28 дней после конечной дозы первой композиции.
[17] Способ согласно [15] или [16], в котором вторая композиция вводится один раз каждые 3-42 дня.
[18] Способ согласно любому из [15]-[17], в котором первая композиция вводится два или более раз и от одного раза в час до одного раза каждые 14 дней.
[19] Способ согласно любому из [15]-[18], в котором вторая композиция вводится в дозе от 17 до 6000 мг антитела.
[20] Способ согласно любому из [15]-[19], в котором первая композиция вводится в дозе от 50 до 5000 мг антитела.
[21] Способ согласно любому из [15]-[20], который предназначен для лечения или предупреждения С5-связанного заболевания у индивидуума, которого лечили по меньшей мере одним фармакологическим продуктом, предназначенным для применения для лечения или предупреждения этого заболевания, в котором начальная доза первой композиции вводится после введения конечной дозы фармакологического продукта.
[22] Способ согласно [21], в котором начальная доза первой композиции вводится на третий день или через 3 дня после введения конечной дозы фармакологического продукта.
[23] Способ согласно [21] или [22], в котором фармакологический продукт содержит siPHK, мишенью которой является мРНК С5, или антитело к С5, отличающееся от антитела к С5, которое содержится в первой композиции.
[24] Способ согласно любому из [21]-[23], в котором фармакологический продукт содержит экулизумаб или его производное.
[25] Способ лечения или предупреждения С5-связанного заболевания, включающий введение индивидууму фармацевтической композиции, которая содержит антитело к С5, путем подкожной инъекции в дозе от 17 до 6000 мг антитела.
[26] Способ лечения или предупреждения С5-связанного заболевания, включающий введение индивидууму фармацевтической композиции, которая содержит антитело к С5, путем внутривенной инъекции в дозе от 50 до 5000 мг антитела.
[27] Способ согласно любому из [15]-[26], в котором С5-связанное заболевание представляет собой любое заболевание, выбранное из группы, состоящей из ревматоидного артрита (RA); волчаночного нефрита; повреждения, вызываемого ишемией-реперфузией; пароксизмальной ночной гемоглобинурии (PNH); атипичного гемолитико-уремического синдрома (aHUS); болезни плотных депозитов (DDD); дегенерации желтого пятна; HELLP синдрома (гемолиз, повышение активности ферментов печени и тромбоцитопения); тромботической тромбоцитопенической пурпуры (ТТР); спонтанной потери плода; Pauci-иммунного васкулита; буллезного эпидермолиза; повторяющейся потери плода; рассеянного склероза (MS); травматического повреждения головного мозга; и повреждения, вызванного инфарктом миокарда, сердечно-легочным шунтированием или гемодиализом.
[28] Применение антитела к С5 для приготовления фармацевтической композиции, предназначенной для лечения или предупреждения С5-связанного заболевания, где композиция приготовлена в форме для подкожной инъекции, содержит антитело С5 и вводится подкожно, при этом начальная доза этой композиции вводится после дозы другой фармацевтической композиции, которую вводят внутривенно, и где другая фармацевтическая композиция приготовлена в форме для внутривенной инъекции и содержит антитело к С5.
[29] Применение антитела к С5 для приготовления фармацевтической композиции, предназначенной для лечения или предупреждения С5-связанного заболевания, где композиция приготовлена в форме для внутривенной инъекции, содержит антитело С5 и вводится внутривенно, при этом доза этой композиции вводится до начальной дозы другой фармацевтической композиции, которую вводят подкожно, и где другая фармацевтическая композиция приготовлена в форме для подкожной инъекции и содержит антитело к С5.
[30] Применение согласно [28] или [29], где начальная доза композиции для подкожной инъекции вводится в этот же день или через 1-28 дней после дозы композиции для внутривенной инъекции.
[31] Применение согласно любому из [28]-[30], где композиция для подкожной инъекции вводится один раз каждые 3-42 дня.
[32] Применение согласно любому из [28]-[31], где композиция для внутривенной инъекции вводится два или более раз и от одного раза в час до одного раза каждые 14 дней.
[33] Применение согласно любому из [28]-[32], где композиция для подкожной инъекции вводится в дозе от 17 до 6000 мг антитела.
[34] Применение согласно любому из [28]-[33], где композиция для внутривенной инъекции вводится в дозе от 50 до 5000 мг антитела.
[35] Применение согласно любому из [28]-[34], где композиция для внутривенной инъекции и композиция для подкожной инъекции предназначены для лечения или предупреждения С5-связанного заболевания у индивидуума, которого лечили по меньшей мере одним фармакологическим продуктом, предназначенным для лечения или предупреждения этого заболевания, при этом начальная доза композиции для внутривенной инъекции вводится после конечной дозы фармакологического продукта.
[36] Применение согласно [35], где начальная доза композиции для внутривенной инъекции вводится на третий день или через 3 дня после конечной дозы фармакологического продукта.
[37] Применение согласно [35] или п. [36], где фармакологический продукт содержит siPHK, мишенью которой является мРНК С5, или антитело к С5, отличающееся от антитела к С5, которое содержится в композиции.
[38] Применение согласно любому из [35]-[37], где фармакологический продукт содержит экулизумаб или его производное.
[39] Применение антитела к С5 для приготовления первой и второй фармацевтических композиций, предназначенных для лечения или предупреждения С5-связанного заболевания, где первая фармацевтическая композиция приготовлена в форме для внутривенной инъекции, содержит антитело к С5 и вводится внутривенно, где вторая фармацевтическая композиция приготовлена в форме для подкожной инъекции, содержит антитело к С5 и вводится подкожно, и при этом введение первой и второй фармацевтических композиций следует осуществлять в порядке, включающем использование одной или нескольких внутривенных доз первой фармацевтической композиции и одной или нескольких подкожных доз второй фармацевтической композиции.
[40] Применение антитела к С5 для приготовления фармацевтической композиции, предназначенной для лечения или предупреждения С5-связанного заболевания, где композиция приготовлена в форме для подкожной инъекции, содержит антитело к С5 и вводится подкожно в дозе от 17 до 6000 мг антитела.
[41] Применение антитела к С5 для приготовления фармацевтической композиции, предназначенной для лечения или предупреждения С5-связанного заболевания, где композиция приготовлена в форме для внутривенной инъекции, содержит антитело к С5 и вводится внутривенно в дозе от 50 до 5000 мг антитела.
[42] Применение согласно любому из [28]-[41], где С5-связанное заболевание представляет собой любое заболевание, выбранное из группы, состоящей из ревматоидного артрита (RA); волчаночного нефрита; повреждения, вызываемого ишемией-реперфузией; пароксизмальной ночной гемоглобинурии (PNH); атипичного гемолитико-уремического синдрома (aHUS); болезни плотных депозитов (DDD); дегенерации желтого пятна; HELLP синдрома (гемолиз, повышение активности ферментов печени и тромбоцитопения); тромботической тромбоцитопенической пурпуры (ТТР); спонтанной потери плода; Pauci-иммунного васкулита; буллезного эпидермолиза; повторяющейся потери плода; рассеянного склероза (MS); травматического повреждения головного мозга; и повреждения, вызванного инфарктом миокарда, сердечно-легочным шунтированием или гемодиализом.
[43] Продукт, предназначенный для лечения или предупреждения С5-связанного заболевания, который содержит (i) контейнер; (ii) фармацевтическую композицию в контейнере, где фармацевтическая композиция приготовлена в форме для подкожной инъекции, содержит антитело к С5 и предназначена для введения подкожно; и (iii) документ, в котором представлена инструкция о том, что эта фармацевтическая композиция вводится после дозы другой фармацевтической композиции, которая вводится внутривенно, при этом другая фармацевтическая композиция приготовлена в форме для внутривенной инъекции и содержит антитело к С5.
[44] Продукт, предназначенный для лечения или предупреждения С5-связанного заболевания, который содержит (i) контейнер; (ii) фармацевтическую композицию в контейнере, где фармацевтическая композиция приготовлена в форме для внутривенной инъекции, содержит антитело к С5 и предназначена для введения внутривенно; и (iii) документ, в котором представлена инструкция о том, что эта фармацевтическая композиция вводится до начальной дозы другой фармацевтической композиции, которая вводится подкожно, при этом другая фармацевтическая композиция приготовлена в форме для подкожной инъекции и содержит антитело к С5.
[45] Продукт, предназначенный для лечения или предупреждения С5-связанного заболевания, который содержит (i) первый контейнер; (ii) первую фармацевтическую композицию в первом контейнере, где первая фармацевтическая композиция приготовлена в форме для внутривенной инъекции, содержит антитело к С5 и предназначена для введения внутривенно; (iii) второй контейнер; (iv) вторую фармацевтическую композицию во втором контейнере, где вторая фармацевтическая композиция приготовлена в форме для подкожной инъекции, содержит антитело к С5 и предназначена для введения подкожно; и (v) документ, в котором представлена инструкция о том, что первую фармацевтическую композицию и вторую фармацевтическую композицию следует вводить в порядке, включающем применение одной или нескольких внутривенных доз первой фармацевтической композиции для внутривенной инъекции и одной или нескольких подкожных доз второй фармацевтической композиции для подкожной инъекции.
[46] Продукт согласно любому из [43]-[45], где продукт предназначен для лечения или предупреждения С5-связанного заболевания у индивидуума, которого лечили по меньшей мере одним фармакологическим продуктом, предназначенным для применения для лечения или предупреждения этого заболевания, где документ также содержит инструкции о том, что начальная доза любой из фармацевтических композиций вводится после конечной дозы фармакологического продукта.
[47] Продукт, предназначенный для лечения или предупреждения С5-связанного заболевания, который содержит (i) контейнер; (ii) фармацевтическую композицию в контейнере, где фармацевтическая композиция приготовлена в форме для подкожной инъекции и содержит антитело к С5; и (iii) документ, в котором представлена инструкция о том, что фармацевтическая композиция вводится подкожно и в дозе от 17 до 6000 мг антитела.
[48] Продукт, предназначенный для лечения или предупреждения С5-связанного заболевания, который содержит (i) контейнер; (ii) фармацевтическую композицию в контейнере, где фармацевтическая композиция приготовлена в форме для внутривенной инъекции и содержит антитело к С5; и (iii) документ, в котором представлена инструкция о том, что фармацевтическая композиция вводится внутривенно и в дозе от 50 до 5000 мг антитела.
[49] Продукт согласно любому из [43]-[48], где С5-связанное заболевание представляет собой любое заболевание, выбранное из группы, состоящей из ревматоидного артрита (RA); волчаночного нефрита; повреждения, вызываемого ишемией-реперфузией; пароксизмальной ночной гемоглобинурии (PNH); атипичного гемолитико-уремического синдрома (aHUS); болезни плотных депозитов (DDD); дегенерации желтого пятна; HELLP синдрома (гемолиз, повышение активности ферментов печени и тромбоцитопения); тромботической тромбоцитопенической пурпуры (ТТР); спонтанной потери плода; Pauci-иммунного васкулита; буллезного эпидермолиза; повторяющейся потери плода; рассеянного склероза (MS); травматического повреждения головного мозга; и повреждения, вызванного инфарктом миокарда, сердечно-легочным шунтированием или гемодиализом.
Краткое описание чертежей
На Фиг. 1 показано изменение концентрации 305LO15 в зависимости от времени в плазме обезьян циномолгус при подкожной инъекции (а) или внутривенной инъекции (б) антитела 305LO15. Концентрацию 305LO15 в плазме оценивали с помощью ELISA. Каждая точка соответствует на Фиг. 1а среднему значению для трех самцов или трех самок, а на Фиг. 16 среднему значению для шести самцов или шести самок.
На Фиг. 2 показано изменение концентрации 305LO15 в зависимости от времени в плазме обезьян циномолгус, когда обезьян обрабатывали с использованием начальной внутривенной инъекции и последующих подкожных поддерживающих инъекций антитела 305LO15. Концентрацию 305LO15 в плазме оценивали с помощью ELISA. Каждая точка соответствует среднему значению для пяти самцов или пяти самок.
На Фиг. 3а показан график, на котором представлены концентрации свободного С5 в плазме при каждой концентрации антитела в плазме для каждого указанного дозируемого количества и пути введения (IV - внутривенная инъекция; SC - подкожная инъекция).
На Фиг. 3б показан график, на котором представлены уровни измеренной активности комплемента при каждой концентрации антитела в плазме для каждого указанного дозируемого количества и пути введения (IV - внутривенная инъекция; SC - подкожная инъекция).
На Фиг. 4а показаны смоделированные зависимости концентраций в плазме 305LO15 от времени при режимах дозирования, запланированных для части 1 клинического исследования (IV - внутривенная инъекция; SC - подкожная инъекция),
На Фиг. 4б показаны смоделированные зависимости концентраций в плазме 305LO15 от времени при режимах дозирования, запланированных для части 2 клинического исследования (SC - подкожная инъекция; QW - введение один раз каждую неделю).
На Фиг. 4в показаны смоделированные зависимости концентраций в плазме 305LO15 от времени при режимах дозирования, запланированных для части 3 клинического исследования (SC - подкожная инъекция; QW - введение один раз каждую неделю; Q2W - введение один раз каждые две недели; Q4W - введение один раз каждые четыре недели).
На Фиг. 5 показан профиль иммунокомплексов, образованных экулизумабом (ECZ), человеческим С5 (hC5) и/или 305LO15, проанализированных in vitro с помощью гель-фильтрации при рН 7,4 (верхняя панель) и при рН 6,0 (нижняя панель).
На Фиг. 6 показаны измеренные у индивидуумов и смоделированные профили зависимости концентрации 305LO15 в плазме от времени у здоровых индивидуумов, которые получали 75 мг путем IV-инфузии (в течение 60 мин). Серой затененной областью обозначен 95% интервал предсказания смоделированного профиля зависимости концентрации 305LO15 от времени. Сплошная линия, обозначенная стрелкой, соответствует смоделированному профилю зависимости медианной концентрации 305LO15 от времени. Пунктирной линией обозначена пороговая доза PD, составляющая 40 мкг/г.
На Фиг. 7 показаны измеренные у индивидуумов и смоделированные профили зависимости концентрации 305LO15 в плазме от времени у здоровых индивидуумов, которые получали 125 мг путем IV-инфузии (в течение 60 мин). Серой затененной областью обозначен 95% интервал предсказания смоделированного профиля зависимости концентрации 305LO15 от времени. Сплошная линия, обозначенная стрелкой, соответствует смоделированному профилю зависимости медианной концентрации 305LO15 от времени. Пунктирной линией обозначена пороговая доза PD, составляющая 40 мкг/г.
На Фиг. 8 показаны измеренные у индивидуумов и смоделированные профили зависимости концентрации 305LO15 в плазме от времени у здоровых индивидуумов, которые получали 100 мг SC. Серой затененной областью обозначен 95% интервал предсказания смоделированного профиля зависимости концентрации 305LO15 от времени. Для моделирований, проведенных для однократной SC-дозы 100 мг, ожидается биодоступность, составляющая 90%. Пунктирной линией обозначена пороговая доз PD, составляющая 40 мкг/г.
На Фиг. 9 показана взаимосвязь между концентрациями 305LO15 в плазме и гемолитической активностью (LIA) после однократной IV-инфузии или SC-инъекции у здоровых индивидуумов. Ex vivo кривую дозовой зависимости LIA получали, используя образцы человеческой плазмы, обработанные различными концентрациями 305LO15.
На Фиг. 10а показан временной профиль уровней в сыворотке LDH (лактатдегидрогеназа) у страдающего PNH пациента, пациента X, который получал IV-дозу 375 мг 305LO15 в день 1, IV-дозу 500 мг 305LO15 в день 8, IV-дозу 1000 мг 305LO15 в день 22, SC-дозу 170 мг 305LO15 в день 36 и SC-дозу 170 мг 305LO15 в день 43 в части 2 исследования.
На Фиг. 10б показан временной профиль гемолитической активности (LIA) у страдающего PNH пациента, пациента X, который получал IV-дозу 375 мг 305LO15 в день 1, IV-дозу 500 мг 305LO15 в день 8, IV-дозу 1000 мг 305LO15 в день 22, SC-дозу 170 мг 305LO15 в день 36 и SC-дозу 170 мг 305LO15 в день 43 в части 2 исследования.
Описание вариантов осуществления изобретения
Технологии и процедуры, которые описаны или на которые сделаны ссылки в настоящем описании, в целом, хорошо известны специалистам в данной области и их широко применяют с использованием общепринятых методик, таких, например, как описанные у Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 3-е изд., изд-во Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. 2001; Current Protocols in Molecular Biology, под ред. F.M. Ausubel et al., 2003; серии Methods in Enzymology, изд-во Academic Press, Inc.: PCR 2: A Practical Approach, под ред. M.J. MacPherson, B.D. Hames и G.R. Taylor, 1995, Antibodies, A Laboratory Manual, под ред. Harlow и Lane, 1988 и Animal Cell Culture, под ред. R.I. Freshney, 1987; Oligonucleotide Synthesis, под ред. M.J. Gait, 1984; Methods in Molecular Biology, изд-во Humana Press; Cell Biology: A Laboratory Notebook, под ред. J.E. Cellis, 1998, из-во Academic Press; Animal Cell Culture, под ред. R.I. Freshney, 1987; J. P. Mather и P.E. Roberts, Introduction to Cell and Tissue Culture, изд-во Plenum Press, 1998; Cell and Tissue Culture: Laboratory Procedures, под ред. A. Doyle, J.B. Griffiths и D.G. Newell, изд-во J. Wiley and Sons, 1993-1998; Handbook of Experimental Immunology, под ред. D.M. Weir и С.С.Blackwell; Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells, под ред. J.M. Miller и M.P. Calos, 1987; PCR: The Polymerase Chain Reaction, под ред. Mullis et al., 1994; Current Protocols in Immunology, под ред. J.E. Coligan et al., 1991; Short Protocols in Molecular Biology, изд-во Wiley and Sons, 1999; C.A. Janeway и P. Travers, Immunobiology, 1997; P. Finch, Antibodies, 1997; Antibodies: A Practical Approach, под ред. D. Catty, изд-во IRL Press, 1988-1989; Monoclonal Antibodies: A Practical Approach, под ред. P. Shepherd и С.Dean, изд-во Oxford University Press, 2000; E. Harlow и D. Lane, Using Antibodies: A Laboratory Manual, изд-во Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1999; The Antibodies, под ред. M. Zanetti и J. D. Capra, изд-во Harwood Academic Publishers, 1995; и Cancer: Principles and Practice of Oncology, под ред. V.T. DeVita et al., изд-во J.B. Lippincott Company, 1993.
I. Определение
«Интервал введения» (интервал между отдельными введениями) означает интервал между введением n-ой дозы (n означает целое число 1 или более) и введением (n+1)-ой дозы.
II. Фармацевтическая композиция для подкожной инъекции
Фармацевтическая композиция, приготовленная в форме для подкожной инъекции согласно настоящему изобретению, предназначена для лечения или предупреждения С5-связанного заболевания, содержит антитело к С5 и вводится подкожно. Подкожную инъекцию можно осуществлять с использованием общепринятых устройств и методов введения фармацевтической композиции в подкожную ткань путем инъекции. Можно выбирать также специфические устройства и методы для подкожной инъекции.
Примеры антител к С5
Антитело к С5 не ограничено конкретным вариантом и его можно выбирать соответственно из антител, известных в качестве антител к С5. Понятие «антитело к С5» или «антитело, которое связывается с С5» относится к антителу, которое обладает способностью связываться с С5 с аффинностью, достаточной для того, чтобы антитело можно было применять в качестве терапевтического агента, таргетирующего С5.
Согласно одному из объектов изобретения антитела к С5 ингибируют активацию С5. В некоторых вариантах осуществления изобретения антитела к С5, которые предупреждают расщепление С5, приводящее к образованию С5а и C5b, предупреждая тем самым возникновение анафилатоксической активности, ассоциированной с С5а, а также предупреждая сборку мембраноатакующего комплекса C5b-9 (MAC), ассоциированного с C5b. В некоторых вариантах осуществления изобретения антитела к С5 блокируют превращение С5 в С5а и C5b С5-конвертазой. В некоторых вариантах осуществления изобретения антитела к С5 блокируют доступ С5-конвертазы к сайту расщепления на С5. В некоторых вариантах осуществления изобретения антитела к С5 блокируют гемолитическую активность, обусловленную активацией С5. В других вариантах осуществления изобретения антитела к С5ингибируют активацию С5 классическим путем и/или альтернативным путем.
Согласно одному из объектов изобретения фармацевтические композиции, предлагаемые в настоящем изобретении, можно применять для лечения или предупреждения С5-связанного заболевания, основываясь, по меньшей мере частично, на вышеуказанных видах активности антител к С5, таких как ингибирование активации С5.
В некоторых вариантах осуществления изобретения активность С5 можно оценивать по его способности осуществлять лизис клеток в общей воде индивидуума. Способность С5 осуществлять лизис клеток или ее снижение можно оценивать с помощью методов, хорошо известных в данной области, например, с помощью стандартного гемолитического анализа, такого как гемолитический анализ, описанный в Experimental Immunochemistry, под ред. Kabat и Mayer, 2-е изд., 135-240, изд-во СС Thomas, Springfield, IL, 135-139, 1961, или стандартного варианта этого анализа, такого как метод гемолиза куриных эритроцитов, описанный, например, у Hillmen et al, N. Engl. J. Med. 350(6): 552-559, 2004. В некоторых вариантах осуществления изобретения активность С5 или ее ингибирование оценивают количественно с помощью CH50eq-анализа. CH50eq-анализ представляет собой метод измерения общей активности классического пути комплемента в сыворотке. Этот тест представляет собой анализ литической активности, в котором используют сенсибилизированные антителом эритроциты в качестве активатора классического пути комплемента и применяют различные разведения тестируемой сыворотки для определения количества, необходимого для обеспечения 50%-ного лизиса (СН50). Процент гемолиза можно определять, например, с использованием спектрофотометра. CH50eq-анализ представляет собой средство косвенного измерения образования комплекса терминальных компонентов комплемента (ТСС), поскольку сами ТСС непосредственно ответственны за измеряемый гемолиз. Ингибирование активации С5 можно обнаруживать и/или измерять с помощью методов, изложенных и проиллюстрированных в экспериментальных примерах. Применяя анализы указанных или других пригодных типов, можно осуществлять скрининг антител-кандидатов, обладающих способностью ингибировать активацию С5. В некоторых вариантах осуществления изобретения ингибирование активации С5 включает снижение активации С5 по данным анализа по меньшей мере на 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35% или 40%, или более по сравнению с воздействием отрицательного контроля в сходных условиях. В некоторых вариантах осуществления изобретения оно относится к ингибированию активации С5 по меньшей мере на 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90% или 95%, или более.
В предпочтительных вариантах осуществления изобретения эпитоп антитела к С5 отличается от эпитопа экулизумаба.
В некоторых вариантах осуществления изобретения антитело к С5, предлагаемое в настоящем изобретении, связывается с эпитопом в бета-цепи С5. В некоторых вариантах осуществления изобретения антитело к С5 связывается с эпитопом в MG1-MG2-домене бета-цепи С5. В некоторых вариантах осуществления изобретения антитело к С5 связывается с эпитопом во фрагменте, состоящем из аминокислот 19-180 бета-цепи С5. В некоторых вариантах осуществления изобретения антитело к С5 связывается с эпитопом в MG1-домене (аминокислоты 20-124 SEQ ID NO: 1) бета-цепи С5. В некоторых вариантах осуществления изобретения антитело к С5 связывается с эпитопом во фрагменте, состоящем из аминокислот 33-124 бета-цепи С5 (SEQ ID NO: 1).
В некоторых вариантах осуществления изобретения антитело к С5, предлагаемое в настоящем изобретении, связывается с эпитопом в бета-цепи С5, который состоит из MG1-домена. В некоторых вариантах осуществления изобретения антитело к С5 связывается с эпитопом в бета-цепи (SEQ ID NO: 1) С5, который содержит по меньшей мере один фрагмент, выбранный из группы, которая состоит из аминокислот 47-57, 70-76 и 107-110. В некоторых вариантах осуществления изобретения антитело к С5 связывается с эпитопом во фрагменте бета-цепи (SEQ ID NO: 1) С5, который содержит по меньшей мере одну аминокислоту, выбранную из группы, которая состоит из Thr47, Glu48, Ala49, Phe50, Asp51, Ala52, Thr53, Lys57, His70, Val71, His72, Ser74, Glu76, Val107, Ser108, Lys109 и His110. В некоторых вариантах осуществления изобретения антитело к С5 связывается с эпитопом во фрагменте бета-цепи (SEQ ID NO: 1) С5, который содержит по меньшей мере одну аминокислоту, выбранную из группы, которая состоит из Glu48, Asp51, His70, His72, Lys109 и His110. В некоторых вариантах осуществления изобретения связывание антитела к С5 с мутантом С5 снижено по сравнению с его связыванием с С5 дикого типа, где мутант С5 имеет по меньшей мере одну аминокислотную замену в положении, выбранном из группы, которая состоит из Glu48, Asp51, His72 и Lys109. В другом варианте осуществления изобретения рН-зависимое связывание (описанное ниже) антитела к С5 с мутантом С5 снижено по сравнению с его рН-зависимым связыванием с С5 дикого типа, где мутант С5 имеет по меньшей мере одну аминокислотную замену в положении, выбранном из группы, которая состоит из His70, His72 и His110. В следующем варианте осуществления изобретения в мутанте С5 аминокислота в положении, выбранном из Glu48, Asp51 и Lys109, заменена на аланин и аминокислота в положении, выбранном из His70, His72 и His110, заменена на тирозин.
В другом объекте изобретения антитела к С5, предлагаемые в настоящем изобретении, могут обладать рН-зависимыми характеристиками связывания. В контексте настоящего описания понятие «рН-зависимое связывание» означает, что антитело обладает «пониженной способностью связываться с С5 при кислом рН по сравнению с его связыванием при нейтральном рН» (для целей настоящего описания оба понятия можно использовать взаимозаменяемо). Например, антитела с «рН-зависимыми характеристиками связывания» включают антитела, которые связываются с С5 с более высокой аффинностью при нейтральном рН, чем при кислом рН. В некоторых вариантах осуществления изобретения антитела связываются с С5 с аффинностью, по меньшей мере в 2, 3, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 200, 400, 1000, 10000 или более раз более высокой при нейтральном рН, чем при кислом рН. В некоторых вариантах осуществления изобретения антитела связываются с С5 с более высокой аффинностью при рН 7,4, чем при рН 5,8. В других вариантах осуществления изобретения антитела связываются с С5 с аффинностью, по меньшей мере в 2, 3, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 200, 400, 1000, 10000 или более раз более высокой при рН 7,4, чем при рН 5,8.
-7
-8
-9
-10
-11
-12
-9
-8
-7
-6
Для целей настоящего описания «аффинность» антитела к С5 выражают в понятиях KD антитела. KD антитела означает константу равновесия диссоциации взаимодействия антитело-антиген. Чем выше величина KD, характеризующая связывание антитела с его антигеном, тем слабее его аффинность связывания с указанным конкретным антигеном. Таким образом, в контексте настоящего описания понятие «более высокая аффинность при нейтральном рН, чем при кислом рН» (или эквивалентное понятие «рН-зависимое связывание») означает, что KD, характеризующая связывание антитела с С5 при кислом рН, выше, чем KD, характеризующая связывание антитела с С5 при нейтральном рН. Например, в контексте настоящего изобретения считается, что антитело связывается с С5 с более высокой аффинностью при нейтральном рН, чем при кислом рН, если KD, характеризующая связывание антитела с С5 при кислом рН, по меньшей мере в 2 раза выше, чем KD, характеризующая связывание антитела с С5 при нейтральном рН. Таким образом, антитела к С5, предлагаемые в настоящем изобретении, включают антитела, связывание которых с С5 при кислом рН характеризуется величиной KD, которая по меньшей мере в 2, 3, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 200, 400, 1000, 10000 или более раз превышает KD, характеризующую связывание с С5 при нейтральном рН. В другом варианте осуществления изобретения величина KD антитела при нейтральном рН может составлять 10, 10, 10, 10, 10, 10 М или менее. В другом варианте осуществления изобретения величина KD антитела при кислом рН может составлять 10 М, 10 М, 10М, 10 М или более.
-7
-8
-9
-10
-11
-12
-9
-8
-7
-6
В других вариантах осуществления изобретения считается, что антитело связывается с С5 с более высокой аффинностью при нейтральном рН, чем при кислом рН, если величина KD, характеризующая связывание антитела с С5 при рН 5,8, по меньшей мере в 2 раза выше, чем KD, характеризующая связывание антитела с С5 при рН 7,4. В некоторых вариантах осуществления изобретения связывание антител с С5 при рН 5,8 характеризуется величиной KD, которая по меньшей мере в 3, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 200, 400, 1000, 10000 или более раз превышает KD, характеризующую связывание антитела с С5 при рН 7,4. В другом варианте осуществления изобретения величина KD антитела при рН 7,4 может составлять 10, 10, 10, 10, 10, 10 М или менее. В другом варианте осуществления изобретения величина KD антитела при рН 5,8 может составлять 10, 10, 10, 10 М или более.
-1
-2
-3
-4
-5
-6
-3
-2
-1
-2
-3
-4
-5
-6
-3
-2
-1
Характеристики связывания антитела с конкретным антигеном можно выражать также в виде kd антитела. Величина kd антитела означает константу скорости диссоциации антитела относительно конкретного антигена и ее выражают в виде величин, обратных секунде (т.е. с). Повышенная величина kd означает более слабое связывание антитела с его антигеном. Таким образом, настоящее изобретение включает антитела, связывание которых с С5 характеризуется более высокой величиной kd при кислом рН, чем при нейтральном рН. Антитела, предлагаемые в настоящем изобретении, включают антитела, связывание которых с С5 при кислом рН характеризуется величиной kd, которая по меньшей мере в 2, 3, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 200, 400, 1000, 10000 или более раз превышает kd, характеризующую связывание антитела с С5 при нейтральном рН. В другом варианте осуществления изобретения величина kd антитела при нейтральном рН может составлять 10, 10, 10, 10, 10 1/с или менее. В другом варианте осуществления изобретения величина kd антитела при кислом рН может составлять 10, 10, 10 1/с или более. Антитела, предлагаемые в настоящем изобретении, включают также антитела, связывание которых с С5 характеризуется более высокой величиной kd при рН 5,8, чем при рН 7,4. Антитела, предлагаемые в настоящем изобретении, включают антитела, связывание которых с С5 при рН 5,8 характеризуется величиной kd, которая по меньшей мере в 3, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 200, 400, 1000, 10000 или более раз превышает kd, характеризующую связывание антитела с С5 при рН 7,4. В другом варианте осуществления изобретения величина kd антитела при рН 7,4 может составлять 10, 10, 10, 10, 10 1/с или менее. В другом варианте осуществления изобретения величина kd антитела при рН 5,8 может составлять 10, 10, 10 1/с или более.
-7
-8
-9
-10
-11
-12
-9
-8
-7
-6
-7
-8
-9
-10
-11
-12
-9
-8
-7
-6
В некоторых случаях «пониженную способность связываться с С5 при кислом рН по сравнению со способностью связываться при нейтральном рН» выражают в виде соотношения величины KD, характеризующей связывание антитела с С5 при кислом рН, и величины KD, характеризующей связывание антитела с С5 при нейтральном рН (или наоборот). Например, антитело может рассматриваться как обладающее «пониженной способностью связываться с С5 при кислом рН по сравнению со способностью связываться при нейтральном рН» для целей настоящего изобретения, если для антитела соотношение KD при кислом/нейтральном рН составляет 2 или более. В некоторых вариантах осуществления изобретения соотношение KD при рН 5,8/рН 7,4 для антитела составляет 2 или более. В некоторых вариантах осуществления изобретения соотношение KD при кислом/нейтральном рН для антитела может составлять 2, 3, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 200, 400, 1000, 10000 или более. В другом варианте осуществления изобретения величина KD антитела при нейтральном рН может составлять 10, 10, 10, 10, 10, 10 М или менее. В другом варианте осуществления изобретения величина KD антитела при кислом рН может составлять 10,10, 10, 10 М или более. В других случаях антитело может рассматриваться как обладающее «пониженной способностью связываться с С5 при кислом рН по сравнению со способностью связываться при нейтральном рН», если для антитела характерно соотношение KD при рН 5,8/рН 7,4, составляющее 2 или более. В некоторых приведенных в качестве примеров вариантах осуществления изобретения соотношение KD при рН 5,8/рН 7,4 для антитела может составлять 3, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 200, 400, 1000, 10000 или более. В другом варианте осуществления изобретения величина KD антитела при рН 7,4 может составлять 10, 10, 10, 10, 10, 10 М или менее. В другом варианте осуществления изобретения величина KD антитела при рН 5,8 может составлять 10, 10, 10, 10 М или более.
-2
-3
-4
-5
-6
-3
-2
-1
-2
-3
-4
-5
-6
-3
-2
-1
В некоторых случаях «пониженную способность связываться с С5 при кислом рН по сравнению со способностью связываться при нейтральном рН» выражают в виде соотношения величины kd, характеризующей связывание антитела с С5 при кислом рН, и величины kd, характеризующей связывание антитела с С5 при нейтральном рН (или наоборот). Например, антитело может рассматриваться как обладающее «пониженной способностью связываться с С5 при кислом рН по сравнению со способностью связываться при нейтральном рН» для целей настоящего изобретения, если для антитела соотношение kd при кислом/нейтральном рН составляет 2 или более. В некоторых вариантах осуществления изобретения соотношение kd при рН 5,8/рН 7,4 для антитела к С5 составляет 2 или более. В некоторых приведенных в качестве примеров вариантах осуществления изобретения соотношение kd при кислом/нейтральном рН для антитела может составлять 2, 3, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 200, 400, 1000, 10000 или более. В других приведенных в качестве примеров вариантах осуществления изобретения соотношение kd при рН 5,8/рН 7,4 для антитела может составлять 2, 3, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 200, 400, 1000, 10000 или более. В другом варианте осуществления изобретения величина kd антитела при нейтральном рН может составлять 10, 10, 10, 10, 10 1/с или менее. В другом варианте осуществления изобретения величина kd антитела при кислом рН может составлять 10, 10, 10 1/с или более. В некоторых приведенных в качестве примеров вариантах осуществления изобретения соотношение kd при рН 5,8/рН 7,4 для антитела может составлять 2, 3, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 200, 400, 1000, 10000 или более. В другом варианте осуществления изобретения величина kd антитела при рН 7,4 может составлять 10, 10, 10, 10, 10 1/с или менее. В другом варианте осуществления изобретения величина kd антитела при рН 5,8 может составлять 10, 10, 10 1/с или более.
В контексте настоящего описании понятие «кислый рН» означает рН от 4,0 до 6,5. Понятие «кислый рН» включает одно из следующих значений рН 4,0, 4,1, 4,2, 4,3, 4,4, 4,5, 4,6, 4,7, 4,8, 4,9, 5,0, 5,1, 5,2, 5,3, 5,4, 5,5, 5,6, 5,7, 5,8, 5,9, 6,0, 6,1, 6,2, 6,3, 6,4 и 6,5. В конкретных объектах изобретения «кислый рН» соответствует 5,8.
В контексте настоящего описании понятие «нейтральный рН» означает рН от 6,7 до примерно 10,0. Понятие «нейтральный рН» включает одно из следующих значений рН 6,7, 6,8, 6,9, 7,0, 7,1, 7,2, 7,3, 7,4, 7,5, 7,6, 7,7, 7,8, 7,9, 8,0, 8,1, 8,2, 8,3, 8,4, 8,5, 8,6, 8,7, 8,8, 8,9, 9,0, 9,1, 9,2, 9,3, 9,4, 9,5, 9,6, 9,7, 9,8, 9,9, и 10,0. В конкретных объектах изобретения «нейтральный рН» соответствует 7,4.
Указанные в настоящем описании величины KD и kd можно определять с помощью биосенсора на основе метода поверхностного плазмонного резонанса для характеризации взаимодействий антитело-антиген. Величины KD и величины kd можно определять при 25°С или 37°С.
В другом объекте изобретения антитело к С5 содержит последовательность вариабельного домена тяжелой цепи (VH), которая по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах осуществления изобретения последовательность VH представляет собой аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах осуществления изобретения последовательность VH, идентичная по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99%, содержит замены (например, консервативные замены), инсерции или делеции относительно референс-последовательности, но антитело к С5, содержащее указанную последовательность, сохраняет способность связываться с С5. В некоторых вариантах осуществления изобретения в целом от 1 до 10 аминокислот заменено, встроено и/или удалено путем делеции в SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах осуществления изобретения замены, инсерции или делеции затрагивают области вне HVR (т.е. FR). Необязательно антитело к С5 содержит последовательность VH, представленную в SEQ ID NO: 2, включая пост-трансляционные модификации указанной последовательности. В конкретном варианте осуществления изобретения VH содержит один, два или три HVR, выбранных из: (a) HVR-H1, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 3, (б) HVR-H2, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4, и (в) HVR-H3, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5.
В контексте настоящего описания понятие «HVR» обозначает «гипервариабельный участок», а понятие «FR» обозначает «каркасный участок».
Понятие «каркасный участок» или «FR», означает остатки вариабельного домена, отличные от остатков гипервариабельного участка (HVR). FR вариабельного домена, как правило, состоит из четырех FR-доменов: FR1, FR2, FR3 и FR4. Таким образом, последовательности HVR и FR, как правило, имеют следующее расположение в VH (или VL): FR1-H1(L1)-FR2-H2(L2)-FR3-H3(L3)-FR4.
Понятие «гипервариабельный участок» или «HVR» в контексте настоящего описания относится к каждому из участков вариабельного домена антитела, последовательности которых являются гипервариабельными («определяющие комплементарность участки» или «CDR») и/или формируют петли определенной структуры («гипервариабельные петли»), и/или содержат контактирующие с антигеном остатки («контакты с антигеном»). Как правило, антитела содержат шесть HVR; три в VH (H1, Н2, Н3) и три в VL (L1, L2, L3). Согласно настоящему описанию примеры HVR включают (а) гипервариабельные петли, включающие аминокислотные остатки 26-32 (L1), 50-52 (L2), 91-96 (L3), 26-32 (H1), 53-55 (Н2) и 96-101 (Н3) (Chothia и Lesk, J. Mol. Biol. 196: 901-917, 1987); (6) CDR, включающие аминокислотные остатки 24-34 (L1), 50-56 (L2), 89-97 (L3), 31-35b (H1), 50-65 (Н2) и 95-102 (Н3) (Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5-ое изд., изд-во Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1991, публикация NIH 91-3242); (в) области контакта с антигеном, включающие аминокислотные остатки 27 с-36 (L1), 46-55 (L2), 89-96 (L3), 30-35b (H1), 47-58 (Н2) и 93-101 (Н3) (MacCallum et al., J. Mol. Biol. 262: 732-745, 1996); и (г) комбинации остатков, указанных в подпунктах (а), (б) и/или (в), включающие аминокислотные остатки HVR 46-56 (L2), 47-56 (L2), 48-56 (L2), 49-56 (L2), 26-35 (H1), 26-35b (H1), 49-65 (Н2), 93-102 (Н3) и 94-102 (Н3). Остатки в HVR и другие остатки в вариабельном домене (например, остатки в FR) нумеруют согласно Kabat et al., выше.
В другом объекте изобретения антитело к С5 содержит последовательность вариабельного домена легкой цепи ((VL), которая по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 6. В некоторых вариантах осуществления изобретения последовательность VL представляет собой аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6. В некоторых вариантах осуществления изобретения последовательность VL, идентичная по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99%, содержит замены (например, консервативные замены), инсерции или делеции относительно референс-последовательности, но антитело к С5, содержащее указанную последовательность, сохраняет способность связываться с С5. В некоторых вариантах осуществления изобретения в целом от 1 до 10 аминокислот заменено, встроено и/или удалено путем делеции в SEQ ID NO: 6. В некоторых вариантах осуществления изобретения замены, инсерции или делеции затрагивают области вне HVR (т.е. FR). Необязательно антитело к С5 содержит последовательность VL, представленную в SEQ ID NO: 6, включая пост-трансляционные модификации указанной последовательности. В конкретном варианте осуществления изобретения VL содержит один, два или три HVR, выбранных из: (a) HVR-L1, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7, (б) HVR- L2, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8, и (в) HVR- L3, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9.
В другом варианте осуществления изобретения антитело представляет собой полноразмерное антитело, например, интактное антитело IgG1-, IgG2-, IgG3- или IgG4-подклассса, или антитело, сконструированное так, чтобы оно имело области из двух или большего количества IgG, выбранных из IgG1, IgG2, IgG3 и IgG4, в области(ях), которая/которые являются гомологичными среди IgG-подклассов, с помощью рекомбинации. Антитело может содержать приемлемую Fc-область, содержащую последовательность человеческой Fc-области (например, Fc-области человеческого IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4).
Варианты Fc-области
В некоторых вариантах осуществления изобретения антитело к С5, предлагаемое в настоящем изобретении, содержит вариант Fc-области, в котором в нативную последовательность Fc-области антитела интодуцирована(ы) одна или несколько аминокислотных модификаций. Вариант Fc-области может содержать последовательность человеческой Fc-области (например, Fc-области человеческого IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4), включающую аминокислотную модификацию (например, замену) в одном или нескольких аминокислотных положениях.
Некоторые варианты осуществления изобретения относятся к варианту антитела, который обладает некоторыми, но не всеми эффекторными функциями, что делает его перспективным кандидатом для путей применения, для которых является важным время полужизни антитела in vivo, однако некоторые эффекторные функции (такие как комплементзависимая цитотоксичность (CDC) и ADCC) не являются необходимыми или являются вредными. Можно осуществлять анализы цитотоксичности in vitro и/или in vivo для подтверждения снижения/истощения CDC- и/или ADCC-активности. Например, можно осуществлять анализы связывания Fc-рецептора (FcR) для гарантии того, что у антитела отсутствует способность к связыванию с Fc-гамма R (и поэтому, вероятно, отсутствует ADCC-активность), но сохраняется способность связываться с FcRn. Первичные клетки, опосредующие ADCC, т.е. NK-клетки, экспрессируют только Fc-гамма RIII, в то время как моноциты экспрессируют Fc-гамма RI, Fc-гамма RII и Fc-гамма RIII. Данные об экспрессии FcR на гематопоэтических клетках обобщены в таблице 3 на с. 464 у Ravetch и Kinet, Annu. Rev. Immunol. 9: 457-492, 1991. Примерами анализов in vitro ADCC-активности представляющей интерес молекулы являются (но не ограничиваясь только ими) анализы, описанные в US 5500362 (см. например, Hellstrom et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 83: 7059-7063, 1986 и Hellstrom et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 82: 1499-1502, 1985); US 5821337 (см. Bruggemann et al., J. Exp. Med. 166: 1351-1361, 1987). В альтернативном варианте можно применять нерадиоактивные методы анализа (см. например, нерадиоактивный анализ цитотоксичности ACTI™ на основе проточной цитометрии (фирма CellTechnology, Inc. Маунтин-Вью, шт. Калифорния); и нерадиоактивный анализ цитотоксичности CytoTox 96 (фирма Promega, Мэдисон, шт. Висконсин). Пригодными для таких анализов эффекторными клетками являются мононуклеарные клетки периферической крови (РВМС) и естественные клетки-киллеры (NK). В альтернативном или дополнительном варианте ADCC-активность представляющей интерес молекулы можно оценивать in vivo, например, на животной модели, например, как описано у Clynes et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 95: 652-656, 1998. Можно осуществлять также анализы связывания C1q для подтверждения того, что антитело не может связывать C1q и поэтому у него отсутствует CDC-активность (см. например, описание ELISA для оценки связывания C1q и C3c в WO 2006/029879 и WO 2005/100402). Для оценки активации комплемента можно осуществлять анализ CDC (см. например, Gazzano-Santoro et al., J. Immunol. Methods 202: 163-171, 1996; Cragg et al., Blood 101: 1045-1052, 2003; и Cragg, Blood 103: 2738-2743, 2004). Определение FcRn-связывания и клиренса/времени полужизни in vivo можно осуществлять также с использованием методов, известных в данной области (см. например, Petkova et al., Int'l. Immunol. 18(12): 1759-1769, 2006).
Антитела с пониженной эффекторной функцией включают антитела с заменой одного или нескольких следующих остатков Fc-области, таких как 238, 265, 269, 270, 297, 327 и 329 (см. например, US 6737056). К указанным мутантам Fc относятся мутанты Fc с заменами в двух или большем количестве из следующих аминокислотных положений: 265, 269, 270, 297 и 327, включая так называемый мутант «DANA» Fc-области, несущий замену остатков 265 и 297 на аланин (US 7332581).
Описаны некоторые варианты антител с повышенной или пониженной способностью связываться с FcR (см. например, US 6737056; WO 2004/056312 и Shields et al., J. Biol. Chem. 276: 6591-6604, 2001).
Согласно конкретным вариантам осуществления изобретения вариант антитела содержит Fc-область с одной или несколькими аминокислотными заменами, которые повышают ADCC, например, замены в положениях 298, 333, и/или 334 Fc-области (EU-нумерация остатков).
В некоторых вариантах осуществления изобретения в Fc-области осуществляют изменения, которые приводят к измененной (т.е. либо повышенной, либо пониженной) способности связывать C1q и/или комплементзависимой цитотоксичности (CDC), что описано, например, в US 6194551, WO 1999/51642 и у Idusogie et al., J. Immunol. 164: 4178-4184, 2000.
Антитела с удлиненным временем полужизни и повышенной способностью к связыванию с неонатальным Fc-рецептором (FcRn), который ответствен за перенос материнских IgG эмбриону (Guyer et al., J. Immunol. 117: 587-593, 1976 и Kim et al., J. Immunol. 24: 2429-2434, 1994), описаны в US 2005/0014934A1 (Hinton et al.). Эти антитела содержат Fc-область с одной или несколькими заменами, которые повышают связывание Fc-области с FcRn. Указанные варианты Fc-области включают варианты с заменами одного или нескольких следующих остатков Fc-области: 238, 256, 265, 272, 286, 303, 305, 307, 311, 312, 317, 340, 356, 360, 362, 376, 378, 380, 382, 413, 424 или 434, например, замену остатка 434 в Fc-области (US 7371826).
Дополнительные примеры, касающиеся других вариантов Fc-области, описаны также у Duncan, Nature 322: 738-740, 1988; в патентах US 5648260 и US 5624821 и в WO 1994/29351.
В некоторых вариантах осуществления изобретения антитело к С5, предлагаемое в настоящем изобретении, содержит VH, представленную выше в качестве одного из вариантов осуществления изобретения, и константную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, представленную в одной из SEQ ID NO: 10, 11, 12, 13, 14 и 15. В некоторых вариантах осуществления изобретения антитело к С5 содержит VL, представленную выше в качестве одного из вариантов осуществления изобретения, и константную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, представленную в одной из SEQ ID NO: 16, 17 и 18.
В некоторых вариантах осуществления изобретения антитело к С5, предлагаемое в настоящем изобретении, представляет собой любое из антител, описанных в WO 2016/098356, WO 2017/123636 и WO 2017/132259.
В некоторых вариантах осуществления изобретения в случае, когда фармацевтическую композицию вводят путем подкожной инъекции индивидууму многократно, композицию вводят каждые 3-42 дня. Пригодный интервал между введениями подкожных инъекций можно определять в приемлемом диапазоне в зависимости от состояния индивидуума или пациента. Конкретный интервал между введениями подкожных инъекций составляет 3 дня, 4 дня, 5 дней, 6 дней, 7 дней, 8 дней, 9 дней, 10 дней, 11 дней, 12 дней, 13 дней, 14 дней, 15 дней, 16 дней, 17 дней, 18 дней, 19 дней, 20 дней, 21 день, 22 дня, 23 дня, 24 дня, 25 дней, 26 дней, 27 дней, 28 дней, 29 дней, 30 дней, 31 день, 32 дня, 33 дня, 34 дня, 35 дней, 36 дней, 37 дней, 38 дней, 39 дней, 40 дней, 41 день или 42 дня. В предпочтительных вариантах осуществления настоящего изобретения интервал между введениями составляет 4-35 дней. В других предпочтительных вариантах осуществления изобретения интервал между введениями составляет 5-31 день. В наиболее предпочтительных вариантах осуществления изобретения интервал между введениями составляет 7, 14 или 28 дней или 1 месяц. Фармацевтическую композицию можно вводить один раз каждую неделю (еженедельно), один раз каждые 2 недели (раз в две недели или с двухнедельным интервалом) или один раз каждые 4 недели (раз в четыре недели или ежемесячно). Более длительный интервал позволяет снижать (лекарственную) нагрузку (бремя) на пациента или его страдания.
В некоторых вариантах осуществления изобретения фармацевтическую композицию вводят подкожно в дозе от 17 до 6000 мг антитела. Пригодную дозу можно определять в приемлемом диапазоне в зависимости от состояния индивидуума или пациента. В случае, когда фармацевтическую композицию вводят путем подкожной инъекции индивидууму многократно, дозы не должны быть одинаковыми в течение всего времени и их можно определять произвольно, если дозы находятся в приемлемом диапазоне. Например, дозу можно постепенно снижать. В предпочтительных вариантах осуществления изобретения диапазон доз составляет от 25 до 4000 мг антитела. В других предпочтительных вариантах осуществления изобретения диапазон доз составляет от 50 до 2000 мг антитела. В наиболее предпочтительных вариантах осуществления изобретения диапазон доз составляет от 75 до 1000 мг антитела. Конкретными предпочтительными дозами являются дозы 100, 170, 340, 600 и 680 мг. Другими предпочтительными дозами являются дозы 170, 340, 600 и 680 мг. Когда фармацевтическую композицию вводят еженедельно (с интервалом примерно 7 дней), то предпочтительной является доза 170 мг. Когда фармацевтическую композицию вводят один раз в 2 недели (с интервалом примерно 14 дней), то предпочтительной является доза 340 мг. Когда фармацевтическую композицию вводят один раз в 4 недели (с интервалом примерно 28 дней), то предпочтительной является доза 600 мг или 680 мг. Режим дозирования 600 мг или 680 мг один раз в 4 недели может являться особенно предпочтительным, поскольку он снижает нагрузку на пациента или его страдания.
В конкретном варианте осуществления изобретения в фармацевтическую композицию можно включать фармацевтически приемлемый носитель, пригодный для обычной композиции для подкожной инъекции. Тип носителя для подкожной инъекции можно выбирать из носителей, известных в целом в данной области.
В конкретном варианте осуществления изобретения фармацевтическая композиция может представлять собой любую, выбранную из группы, которая включает жидкую, полутвердую и твердую композицию. Твердую композицию получают, как правило, путем лиофилизации из жидкой препаративной формы. Лиофилизированную композицию, как правило, восстанавливают с помощью воды или соляного раствора непосредственно перед подкожной инъекцией.
Когда композицию вводят подкожно, концентрация антитела к С5 в жидкой препаративной форме композиции определяется в общепринятом диапазоне, известным в данной области. В конкретном варианте осуществления изобретения объем подкожной инъекции определяется обычным диапазоном, известным в данной области.
В некоторых вариантах осуществления изобретения С5-связанное заболевание представляет собой опосредуемое комплементом заболевание или состояние, которое включает избыточную или неконтролируемую активацию С5. В некоторых вариантах осуществления изобретения С5-связанное заболевание представляет собой по меньшей мере одно заболевание, выбранное из группы, которая состоит из ревматоидного артрита (RA); волчаночного нефрита; повреждения, вызываемого ишемией-реперфузией; пароксизмальной ночной гемоглобинурии (PNH); атипичного гемолитико-уремического синдрома (aHUS); болезни плотных депозитов (DDD); дегенерации желтого пятна; HELLP синдрома (гемолиз, повышение активности ферментов печени и тромбоцитопения); тромботической тромбоцитопенической пурпуры (ТТР); спонтанной потери плода; Pauci-иммунного васкулита; буллезного эпидермолиза; повторяющейся потери плода; рассеянного склероза (MS); травматического повреждения головного мозга; и повреждения, вызванного инфарктом миокарда, сердечно-легочным шунтированием или гемодиализом; устойчивой генерализованной миастении Гравис (gMG); нейромиелита зрительного нерва (NMO). В предпочтительном варианте осуществления изобретения С5-связанное заболевание представляет собой по меньшей мере одно, выбранное из группы, которая состоит из PNH, aHUS, gMG и NMO.
В некоторых объектах изобретения начальная доза композиции для подкожной инъекции вводится после дозы другой фармацевтической композиции, которая вводится внутривенно. Фармацевтическая композиция для внутривенной инъекции представляет собой композицию, указанную выше в настоящем описании.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения композиция для подкожной инъекции вводится подкожно в тот же день или через один или несколько дней после дозы композиции для внутривенной инъекции, которая вводится внутривенно. Одну или несколько доз композиции для внутривенной инъекции можно вводить индивидууму или пациенту до введения начальной дозы композиции для подкожной инъекции. В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения начальная доза композиции для подкожной инъекции вводится после конечной дозы композиции для внутривенной инъекции.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения начальная доза композиции для подкожной инъекции вводится в тот же день или через 1-28 дней после дозы композиции для внутривенной инъекции. Конкретный интервал между введением дозы композиции для внутривенной инъекции и начальной дозы композиции для подкожной инъекции составляет 0 дней (т.е. находится в пределах 24 ч), 1 день, 2 дня, 3 дня, 4 дня, 5 дней, 6 дней, 7 дней, 8 дней, 9 дней, 10 дней, 11 дней, 12 дней, 13 дней, 14 дней, 15 дней, 16 дней, 17 дней, 18 дней, 19 дней, 20 дней, 21 день, 22 дня, 23 дня, 24 дня, 25 дней, 26 дней, 27 дней или 28 дней. В предпочтительных вариантах осуществления настоящего изобретения интервал составляет 1-14 дней. В других предпочтительных вариантах осуществления настоящего изобретения интервал составляет 3-10 дней. В наиболее предпочтительных вариантах осуществления изобретения интервал составляет 5-8 дней.
III. Фармацевтическая композиция для внутривенной инъекции
Фармацевтическая композиция, приготовленная в форме для внутривенной инъекции, предлагаемая в настоящем изобретении, предназначена для применения для лечения или предупреждения С5-связанного заболевания, содержит антитело к С5 и вводится внутривенно. Внутривенную инъекцию можно осуществлять с использованием общепринятых устройств и методов введения фармацевтической композиции в вену путем инъекции. Можно выбирать также специфические устройства и методы для внутривенной инъекции.
Антитело к С5, применяемое для внутривенной инъекции, может представлять собой любое антитело, описанное выше для фармацевтических композиций для подкожной инъекции. Фармацевтическая композиция для внутривенной инъекции и фармацевтическая композиция для подкожной инъекции может содержать одно и то же антитело к С5 или может содержать другое антитело к С5. В предпочтительных вариантах осуществления изобретения антитело к С5, применяемое для внутривенной инъекции, представляет собой такое же антитело, что и описанное выше антитело, применяемое для подкожной инъекции.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения фармацевтическая композиция вводится внутривенно в дозе 50-5000 мг антитела. Пригодную дозу можно определять в приемлемом диапазоне в зависимости от состояния индивидуума или пациента. В случае, когда фармацевтическая композиция вводится внутривенно индивидууму многократно, дозы не должны быть одинаковыми в течение всего времени и их можно определять произвольно, если дозы находятся в приемлемом диапазоне. Например, дозу можно постепенно снижать. В предпочтительных вариантах осуществления настоящего изобретения диапазон доз составляет от 55 до 4000 мг антитела. В других предпочтительных вариантах осуществления настоящего изобретения диапазон доз составляет от 60 до 2500 мг антитела. В наиболее предпочтительных вариантах осуществления настоящего изобретения диапазон доз составляет от 70 до 1500 мг антитела. Конкретными предпочтительными дозами являются дозы, содержащие 75, 125, 150, 300, 375, 500 и 1000 мг. Другими предпочтительными дозами являются дозы в 37, 500 и 1000 мг, и среди них наиболее предпочтительной является доза в 1000 мг.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения количество введений фармацевтической композиции, которая вводится путем внутривенной инъекции, не ограничено конкретно и может представлять собой одно или несколько введений. В предпочтительных вариантах осуществления изобретения количество введений может представлять собой одно, два или три введения. В других предпочтительных вариантах осуществления изобретения количество введений представляет собой одно или два введения. В наиболее предпочтительном варианте осуществления изобретения количество введений представляет собой одно введение. Уменьшение количества введений позволяет снижать нагрузку на пациента или его страдания.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения, в том случае, когда фармацевтическая композиция вводится многократно внутривенно индивидууму или пациенту, композицию вводят один раз в час или каждые 14 дней. Пригодный интервал между внутривенными инъекциями можно определять в приемлемом диапазоне в зависимости от состояния индивидуума или пациента. Конкретный интервал между внутривенными инъекциями составляет 1 ч, 2 ч, 3 ч, 4 ч, 5 ч, 6 ч, 7 ч, 8 ч, 9 ч, 10 ч, 11 ч, 12 ч, 13 ч, 14 ч, 15 ч, 16 ч, 17 ч, 18 ч, 19 ч, 20 ч, 21 ч, 22 ч, 23 ч, 24 ч, 25 ч, 26 ч, 27 ч, 28 ч, 29 ч, 30 ч, 31 ч, 32 ч, 33 ч, 34 ч, 35 ч, 36 ч, 37 ч, 38 ч, 39 ч, 40 ч, 41 ч, 42 ч, 43 ч, 44 ч, 45 ч, 46 ч, 47 ч, 48 ч, 3 дня, 4 дня, 5 дней, 6 дней, 7 дней, 8 дней, 9 дней, 10 дней, 11 дней, 12 дней, 13 дней или 14 дней. В предпочтительных вариантах осуществления изобретения интервал между введениями составляет от 24 ч до 10 дней. В других предпочтительных вариантах осуществления изобретения интервал между введениями составляет от 48 ч до 7 дней. В наиболее предпочтительных вариантах осуществления изобретения интервал между введениями составляет от 3 до 5 дней.
В конкретном варианте осуществления изобретения в фармацевтическую композицию можно включать фармацевтически приемлемый носитель, пригодный для обычной композиции для внутривенной инъекции. Тип носителя для внутривенной инъекции можно выбирать из носителей, известных в целом в данной области.
В некоторых вариантах осуществления изобретения препаративная форма фармацевтической композиции может представлять собой любую, выбранную из группы, которая включает жидкую, полутвердую и твердую препаративную форму. Твердую композицию получают, как правило, путем лиофилизации из жидкого препарата. Лиофилизированную композицию, как правило, восстанавливают с помощью воды или соляного раствора непосредственно перед внутривенной инъекцией. Препаративная форма фармацевтической композиции для внутривенной инъекции может быть такой же или отличаться от препаративной формы фармацевтической композиции для подкожной инъекции. В предпочтительных вариантах осуществления изобретения препаративная форма фармацевтической композиции для внутривенной инъекции является такой же, что и препаративная форма фармацевтической композиции для подкожной инъекции, что способствует снижению стоимости производства. Когда композицию вводят внутривенно, концентрация антитела к С5 в жидкой препаративной форме композиции определяется общепринятым диапазоном, известным в данной области. В конкретном варианте осуществления изобретения объем внутривенной инъекции определяется обычным диапазоном, известным в данной области.
В некоторых объектах изобретения доза композиции для внутривенной инъекции вводится до начальной дозы другой фармацевтической композиции, которая вводится подкожно. Фармацевтическая композиция для подкожной инъекции представляет собой одну из описанных выше композиций.
В некоторых вариантах осуществления изобретения композиция для внутривенной инъекции вводится внутривенно в тот же день или за один или несколько дней до начальной дозы композиции для подкожной инъекции, которая вводится подкожно. Одну или несколько доз композиции для внутривенной инъекции можно вводить индивидууму или пациенту до введения начальной дозы композиции для подкожной инъекции. В предпочтительном варианте осуществления изобретения конечная доза композиции для внутривенной инъекции вводится до начальной дозы композиции для подкожной инъекции.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения доза композиции для внутривенной инъекции вводится в тот же день или за 1-28 дней до введения начальной дозы композиции для подкожной инъекции. Конкретный интервал между введением дозы композиции для внутривенной инъекции и начальной дозы композиции для подкожной инъекции составляет 0 дней (т.е. находится в пределах 24 ч), 1 день, 2 дня, 3 дня, 4 дня, 5 дней, 6 дней, 7 дней, 8 дней, 9 дней, 10 дней, 11 дней, 12 дней, 13 дней, 14 дней, 15 дней, 16 дней, 17 дней, 18 дней, 19 дней, 20 дней, 21 день, 22 дня, 23 дня, 24 дня, 25 дней, 26 дней, 27 дней или 28 дней. В предпочтительных вариантах осуществления изобретения интервал составляет 1-14 дней. В других предпочтительных вариантах осуществления изобретения интервал составляет 3-10 дней. В наиболее предпочтительных вариантах осуществления изобретения интервал составляет 5-8 дней.
IV. Переход с применения другого фармакологического продукта Фармацевтические композиции для подкожной или внутривенной инъекции согласно настоящему изобретению можно применять для лечения или предупреждения С5-связанного заболевания у индивидуума, которого лечили один или несколько раз с использованием по меньшей мере одного фармакологического продукта, предназначенного для применения для лечения или предупреждения этого заболевания. Например, фармацевтические композиции, предлагаемые в настоящем изобретении, можно применять для лечения С5-связанного заболевания у пациента, которого ранее лечили с использованием по меньшей мере одного фармакологического продукта, предназначенного для лечения этого заболевания, но для которого ожидается улучшенный ответ на лечение с помощью фармацевтических композиций, предлагаемых в настоящем изобретении. В таких случаях медикаментозное лечение можно переключать с фармакологического продукта на фармацевтическую композицию, предлагаемую в настоящем изобретении. В предпочтительных вариантах осуществления изобретения начальная доза композиции для внутривенной инъекции, предлагаемой в настоящем изобретении, вводится после конечной дозы фармакологического продукта, применяемого для предшествующего лечения.
В некоторых вариантах осуществления изобретения фармакологический продукт содержит действующее вещество, которое отличается от антитела к С5, применяемого в описанной выше композиции для подкожной и внутривенной инъекции. В некоторых вариантах осуществления изобретения действующее вещество фармакологического продукта представляет собой siPHK, мишенью которой является мРНК С5, или антитело к С5, отличающееся от антитела к С5, которое содержится в описанной выше композиции для подкожной и внутривенной инъекции. В предпочтительных вариантах осуществления изобретения фармакологический продукт содержит антитело, которое отличается от антител в описанной выше композиции для подкожной и внутривенной инъекции. В наиболее предпочтительном варианте осуществления изобретения антитело, входящее в фармакологический продукт, который применяли для предшествующего лечения, представляет собой экулизумаб или его производное.
В некоторых вариантах осуществления изобретения начальная доза композиции для внутривенной инъекции, предлагаемой в настоящем изобретении, вводится в тот же день или через один или несколько дней после введения конечной дозы фармакологического продукта. Конкретный интервал между введением конечной дозы фармакологического продукта и начальной дозы композиции для внутривенной инъекции, предлагаемой в настоящем изобретении, составляет 0 дней (это означает, что начальную дозу композиции для внутривенной инъекции вводят в тот же день, что и конечную дозу фармакологического продукта), 1 день, 2 дня, 3 дня, 4 дня, 5 дней, 6 дней, 7 дней, 8 дней, 9 дней, 10 дней, 11 дней, 12 дней, 13 дней, 14 дней, 15 дней, 16 дней, 17 дней, 18 дней, 19 дней, 20 дней или 21 день. В предпочтительных вариантах осуществления изобретения композиция для внутривенной инъекции, предлагаемая в настоящем изобретении, вводится через 3 или более дней после конечной дозы фармакологического продукта. В более предпочтительных вариантах осуществления изобретения композиция для внутривенной инъекции, предлагаемая в настоящем изобретении, вводится через 7 или более дней после конечной дозы фармакологического продукта. В других предпочтительных вариантах осуществления изобретения композиция для внутривенной инъекции, предлагаемая в настоящем изобретении, вводится через 14 или более дней после конечной дозы фармакологического продукта. В наиболее предпочтительных вариантах осуществления изобретения композиция для внутривенной инъекции, предлагаемая в настоящем изобретении, вводится через 21 или более дней после конечной дозы фармакологического продукта.
V. Способ лечения или предупреждения
Другими объектами настоящего изобретения являются способы лечения или предупреждения С5-связанного заболевания.
В одном из вариантов осуществления изобретения способ включает внутривенное введение первой фармацевтической композиции, которая приготовлена в форме для внутривенной инъекции и содержит антитело к С5, и подкожное введение второй фармацевтической композиции, которая приготовлена в форме для подкожной инъекции и содержит антитело к С5, после введения первой композиции.
Условия и заболевания, представляющие собой мишень для фармацевтической композиции для подкожной или внутривенной инъекции в указанном способе, являются такими же, что и упомянутые выше в разделах «II. Фармацевтическая композиция для подкожной инъекции» и «III. Фармацевтическая композиция для внутривенной инъекции».
VI. Вакцинация
У индивидуума, которому вводят антитело к С5, могут встречаться инфекционные заболевания, например, менингококковые инфекции. Для предупреждения указанных инфекционных заболеваний индивидуума можно иммунизировать с помощью вакцины, у которой известна способность лечить или предупреждать заболевание, до, после или при введении композиции для подкожной и внутривенной инъекции.
VII. Изделие
Другим объектом изобретения является изделие или продукт, содержащее/содержащий материалы, которые можно применять для лечения или предупреждения связанных с С5 заболеваний, указанных выше. Изделие или продукт содержит один или несколько контейнеров и этикетку или листовку-вкладыш в упаковку, которые размещены на контейнере или вложены в него. Приемлемыми контейнерами являются, например банки, пузырьки, шприцы, пакеты для IV-раствора, шприцы с SC-раствором и т.д. Контейнеры можно изготавливать из различных материалов, таких как стекло или пластмасса. Контейнер содержит композицию, которая индивидуально или в сочетании с другой композицией является эффективной для лечения или предупреждения состояния, и может иметь стерильный порт доступа (например, контейнер может представлять собой пакет для внутривенного раствора или пузырек, снабженный пробкой, которую можно прокалывать с помощью иглы для подкожных инъекций). По меньшей мере одно действующее вещество в композиции представляет собой антитело к С5, описанное выше. На этикетке, листовке-вкладыше в упаковку или аналогичном документе указано, что композицию можно применять для лечения выбранного состояния.
В некоторых вариантах осуществления изобретения композиция, находящаяся в контейнере изделия или продукта, приготовлена в форме для подкожной инъекции. Согласно этому варианту осуществления изобретения изделие или продукт может дополнительно включать листовку-вкладыш в упаковку с информацией о том, что композиция вводится после дозы другой фармацевтической композиции, предназначенной для внутривенного введения. Согласно этому варианту осуществления настоящего изобретения, другая фармацевтическая композиция содержит антитело к С5 и приготовлена в форме для внутривенной инъекции.
В некоторых вариантах осуществления изобретения композиция, находящаяся в контейнере изделия или продукта, приготовлена в форме для внутривенной инъекции. Согласно этому варианту осуществления настоящего изобретения, изделие или продукт может дополнительно включать листовку-вкладыш в упаковку, с информацией о том, что композиция вводится до начальной дозы другой фармацевтической композиции, предназначенной для подкожного введения. Согласно этому варианту осуществления изобретения другая фармацевтическая композиция содержит антитело к С5 и приготовлена в форме для подкожной инъекции.
Согласно некоторым другим вариантам осуществления изобретения изделие или продукт может содержать (а) первый контейнер с первой композицией, где композиция содержит антитело к С5 и приготовлена в форме для внутривенной инъекции, и (b) второй контейнер со второй композицией, где композиция содержит антитело к С5 и приготовлена в форме для подкожной инъекции. В этом варианте осуществления изобретения изделие может содержать также листовку-вкладыш в упаковку с информацией о том, что композиции можно применять для лечения конкретного состояния, такого как С5-связанное заболевание, и дополнительную информацию о том, что введение первой фармацевтической композиции и второй фармацевтической композиции следует осуществлять в порядке, предусматривающем одно или несколько внутривенных введений первой фармацевтической композиции для внутривенной инъекции и одно или несколько подкожных введений второй фармацевтической композиции для подкожной инъекции.
Кроме того, изделие или продукт может содержать дополнительный контейнер с находящейся в нем композицией, которая содержит дополнительный цитотоксический или обладающим другим действием терапевтический агент. Согласно этому варианту осуществления изобретения изделие может дополнительно содержать листовку-вкладыш в упаковку с информацией о том, что композиции можно применять для лечения конкретного состояния. В альтернативном или дополнительном варианте изделие может дополнительно включать еще один дополнительный контейнер с фармацевтически приемлемым буфером, таким как бактериостатическая вода для инъекций (BWFI), забуференный фосфатом физиологический раствор, раствор Рингера и раствор декстрозы. Кроме того, оно может включать другие продукты, необходимые с коммерческой точки зрения и с точки зрения потребителя, в частности, другие буферы, разбавители, фильтры, иглы и шприцы.
Примеры
Ниже приведены примеры методов и композиций, предлагаемых в изобретении. Как должно быть очевидно, различные другие варианты осуществления изобретения можно применять на практике на основе общего описания изобретения, представленного выше.
Пример 1
Создание антитела к С5
Антитело к С5 305LO15, описанное в WO 2016/098356, получали стандартным методом. В целом метод состоял в следующем. Объединяли гены, кодирующие вариабельный домен тяжелой цепи (VH) 305LO15, с генами, кодирующими модифицированный вариант SG115 (SEQ ID NO: 13) константного домена тяжелой цепи (СН) человеческого IgG1. Гены, кодирующие вариабельный домен легкой цепи (VL) 305LO15, объединяли с генами, кодирующими человеческий константный домен легкой цепи (CL) (SKI, SEQ ID NO: 18). Антитела экспрессировали в клетках HEK293, котрансфектированных комбинацией экспрессионных векторов для тяжелой и легкой цепей, и очищали с использованием белка А.
Пример 2
Фармацевтические средства на основе белков, например, лекарственные средства на основе антител, как правило, вводят внутривенно, поскольку белки трудно концентрировать. Так, экулизумаб, который в настоящее время является единственным антителом, разрешенным для лечения, вводят внутривенно. Если появится возможность использовать подкожную инъекцию, то это должно облегчить бремя для пациента, например, в отношении амбулаторного лечения и продолжительности времени пребывания в клинике для осуществления внутривенной инъекции, поскольку станет возможным осуществлять себе инъекцию самостоятельно.
Для изучения возможности осуществления подкожного введения антитела к С5 было выбрано антитело 305LO15, описанное в WO 2016/098356, вследствие его высокой растворимости. Предполагалось, что более высокая растворимость даст возможность введения фармацевтического средства на основе белка в меньшем объеме, позволяющем использовать подкожную инъекцию.
Для сравнения фармакокинетических характеристик 305LO15 после подкожной инъекции или внутривенной инъекции обезьян циномолгус разделяли на две группы, группу, которой осуществляли подкожную инъекцию, и группу, которой осуществляли внутривенную инъекцию. 305LO15 вводили подкожно животным в первой группе (три самца и три самки) один раз каждую неделю в общей сложности 22 раза, вводя каждый раз антитело в дозе 40 мг/кг. Концентрацию 305LO15 в плазме этих животных измеряли с помощью ELISA в моменты времени, указанные на Фиг. 1a. 305LO15 вводили внутривенно животным во второй группе (шесть самцов и шесть самок) один раз каждую неделю в общей сложности пять раз, вводя каждый раз антитело в дозе 40 мг/кг.
Концентрацию 305LO15 в плазме животных измеряли с помощью ELISA в моменты времени, указанные на Фиг. 1б.
Как продемонстрировано на Фиг. 1а, концентрация 305LO15 в плазме обезьян циномолгус повышалась при подкожных инъекциях, это подтверждает, что 305LO15 можно вводить путем подкожной инъекции в терапевтических целях. Скорость первоначального повышения концентрации в плазме при подкожном введении (Фиг. 1а), была ниже, чем при внутривенной инъекции (Фиг. 1б).
Пример 3
Затем проводили исследование того, можно ли компенсировать относительно низкую скорость повышения концентрации в плазме после начальной подкожной инъекции с помощью внутривенной инъекции 305LO15. Пяти самцам и пяти самкам обезьян циномолгус осуществляли однократное введение внутривенным путем начальной дозы антитела 305LO15, составляющей 100 мг/кг. Через одну неделю после начального внутривенного введения начинали осуществлять подкожную инъекцию 305LO15. Подкожную инъекцию осуществляли в общей сложности 26 раз с частотой один раз каждую неделю, вводя при каждом дозировании антитело в дозе 40 мг/кг.
Как продемонстрировано на Фиг. 2, скорость повышения концентрации 305LO15 в плазме была больше в том случае, когда начальную дозу антитела вводили путем внутривенной инъекции перед введением поддерживающих доз путем подкожной инъекции, чем в том случае, когда не вводили начальную дозу путем внутривенной инъекции. Концентрация 305LO15 в плазме достигала уровня, сопоставимого с уровнем, представленным на Фиг. 1а, и поддерживалась на этом уровне. Можно предположить, что указанное более быстрое повышение концентрации 305LO15 в плазме вносит вклад в более быстрое достижение терапевтического действия лекарственного средства.
Пример 4
Для оценки эффективной концентрации 305LO15 в плазме определяли соотношение между концентрацией свободного антигена (С5) в плазме или активностью комплемента и концентрацией антитела (305LO15) в плазме у обезьян циномолгус.305LO15 вводили внутривенно (0,8, 4 или 20 мг/кг) или подкожно (4 мг/кг). Концентрацию антитела и свободного С5 в плазме измеряли с помощью ELISA. Активность комплемента измеряли с помощью гемолитического анализа эритроцитов (RBC). Как продемонстрировано на фиг. 3, концентрация свободного С5 снижалась до уровня, составляющего менее чем несколько мкг/мл, когда концентрация 305LO15 в плазме поддерживалась на уровне выше 40 мкг 305ЕО15/мл (Фиг. 3а) и концентрация 305LO15 в плазме, составляющая 40 мкг/мл или выше, ингибировала активность комплемента (гемолиз) до уровня, составляющего менее 20% от исходного уровня (т.е. в отсутствии антитела) (Фиг. 3б). Установлено, что активность комплемента подавлялась до уровня, составляющего менее 20% от исходного уровня (т.е. в отсутствии инъекции антитела), когда концентрация 305LO15 в плазме поддерживалась на уровне, составляющем 40 мкг/мл или выше.
Пример 5
Для определения доз и схем введения 305LO15, пригодных для поддержания эффективной концентрации 305LO15 в клинических испытаниях, прогнозировали путем моделирования зависимость концентрации 305LO15 в плазме человека. Во-первых, измеряли концентрации 305LO15 в плазме в зависимости от времени после введения антитела обезьянам циномолгус в дозах, составляющих 0,8, 4, 20 мкг антитела/кг при каждом введении дозы. ФК-параметры в случае обезьян циномолгус оценивали путем анализа данных с использованием 2-компартментной модели. ФК-параметры для человека оценивали на основе ФК-параметров для обезьян цинтомолгус с использованием аллометрического масштабирования. Полученные путем оценки ФК-параметры для человека представлены в Таблице 1 (сокращения, использованные для обозначения параметров в таблице 1: BW - вес тела; CL - общий клиренс лекарственного средства; F - биодоступность или относительное количество введенного лекарственного средства, поступившая в кровоток; Ка - константа скорости абсорбции; МАт - моноклональное антитело; ФК - фармакокинетический параметр; Q - межкомпартментный клиренс; SC -подкожно; Vc - объем распределения в центральном компартменте; Vp - объем распределения в периферическом компартменте).
ФК-профиль для человека оценивали для каждой когорты, участвующей в фазе 1/2 исследования (Фиг. 4). Часть 1 исследования была запланирована так, чтобы она включала три группы индивидуумов. Первая группа представляла собой группу индивидуумов, которым 305LO15 вводили внутривенно однократно в дозе 75 мг/человека. Вторая группа представляла собой группу индивидуумов, которым 305LO15 вводили внутривенно однократно в дозе 150 мг/человека. Третья группа представляла собой группу индивидуумов, которым 305LO15 вводили подкожно однократно в дозе 170 мг/человека. Было спрогнозировано, что концентрация 305LO15 в плазме индивидуумов, которым вводили любую одну из указанных выше доз, не будет поддерживаться на уровне выше порогового (40 мкг/мл) в течение более чем одной недели (Фиг. 4а).
Часть 2 исследования была запланирована так, чтобы она включала группу индивидуумов, которым 305LO15 вводили внутривенно трижды (сначала в дозе 300 мг/человека, затем 500 мг/человека через одну неделю после первого введения и, наконец, 1000 мг/человека через две недели после второго введения) и, через две недели после конечного внутривенного введения вводили 305LO15 подкожно один раз в неделю в дозе 170 мг/человека. Было спрогнозировано, что при использовании режима дозирования, запланированного для части 2 исследования, концентрация 305LO15 будет поддерживаться на уровне выше порогового ФК-уровня (40 мкг/мл) (Фиг. 4б).
Часть 3 исследования была запланирована так, чтобы она включала три группы индивидуумов. Сначала 305LO15 вводили индивидуумам во всех группах внутривенно один раз в дозе 500 мг/человека. Начиная со дня, следующего после дня начального введения, 305LO15 вводили подкожно индивидуумам в первой группе один раз каждую неделю в дозе 170 мг/человека, индивидуумам во второй группе один раз каждые две недели в дозе 340 мг/человека и индивидуумам в третьей группе один раз каждые четыре недели в дозе 600 мг/человека. Было спрогнозировано, что концентрация 305LO15 будет поддерживаться на уровне выше ФД-порога (40 мкг/мл) во всех трех группах, участвовавших в части 3 исследования (Фиг. 4в).
Пример 6
Экулизумаб применяли для лечения пациентов с PNH или aHUS. В том случае, если было спрогнозировано, что 305LO15 должен оказывать более благоприятное действие, чем экулизумаб, на пациента с PNH или aHUS, пациента можно было переводить с лекарственной терапии с использованием экулизумаба на терапию с использованием 305LO15. Следует принимать во внимание, что существует возможность того, что 305LO15 образует иммунный комплекс с С5 и экулизумабом в организме, поскольку эпитоп для 305LO15 отличен от эпитопа для экулизумаба, что означает то, что 305LO15 связывается с бета-цепью С5, в то время как экулизумаб связывается с альфа-цепью С5. Образование такого иммунного комплекса может вызывать аномальную активацию и, следовательно, этого следует максимально избегать.
Для исследования того, образует ли 305LO15 иммунный комплекс с экулизумабом (ECZ, последовательность тяжелой цепи представлена в SEQ ID NO: 19, а последовательность легкой цепи представлена в SEQ ID NO: 20) и человеческим С5 (hC5, SEQ ID NO: 21), проводили анализ in vitro с помощью гель-фильтрации (SEC). hC5 получали согласно методу, описанному в WO 2016/098356. Осуществляли диализ ECZ, hC5 и 305LO15 в противотоке D-ЗФР, рН 7,4, для обмена буфера. Затем смешивали ECZ и hC5 и инкубировали при 37°С в течение 3-4 ч. После инкубации к смеси, содержащей ECZ и hC5, добавляли 305LO15. Конечную концентрацию ECZ и hC5 доводили до 200 мкг/мл, а концентрацию 305LO15 доводили до 0, 25, 125, 250 или 1250 мкг/мл. После инкубации указанных смесей при 37°С в течение 3-4 ч, проводили SEC-анализ при рН 7,4 и рН 6,0. Конкретные условия для SEC указаны ниже:
система для ЖХВР: система Waters Alliance е2695 HPLC
колонка: TSKgel G4000SWXL температура колонки: 25°С
элюент: 50 мМ Na-PB/300 мМ NaCl, рН 7,4 или рН 6,0
скорость потока: 0,5 мл/мин
обнаружение: УФ-абсорбция при 220 нм
инъекция:10 мкл.
В результате было установлено, что 305LO15 в концентрациях от 125 до 1250 мкг/мл не оказывал влияния на SEC-профиль при рН 6,0, но оказывал влияние на профиль при рН 7,4. Более конкретно, когда 305LO15 смешивали с ECZ и hC5, то пики крупных иммунных комплексов ECZ/hC5/305LO15, которые не выявлялись при рН 6,0, были обнаружены при рН 7,4 (см. пики, указанные стрелками на Фиг. 5, верхняя панель), в дополнение к пикам, соответствующим малым комплексам (см. пики, обозначенные как '2Ag+Ab' и 'Ag+Ab', на Фиг. 5, верхняя панель). При рН 6,0 были обнаружены только пики, соответствующие малым комплексам (см. пики, представленные на Фиг. 5, нижняя панель, соответствующие '2Ag+Ab' 'Ag+Ab' на фиг. 5, верхняя панель). Это означает, что 305LO15 связывается с комплексом ECZ/hC5 при рН 7,4, но не при рН 6,0, что согласуется с характеристиками связывания 305LO15 (наличие связывания с hC5 при рН 7,4, но не при рН 6,0). На основе этих результатов было сделано предположение о том, что одновременное введение 305LO15 и ECZ индивидууму может приводить к образованию крупных иммунных комплексов в плазме.
Пример 7
Исследование ВР39144, представляющее собой адаптивную фазу I/II исследования по оценке безопасности, эффективности, фармакокинетических характеристик (ФК) и фармакодинамических характеристик (ФД) 305LO15 на здоровых добровольцах и пациентах с пароксизмальной ночной гемоглобинурией (PNH).
При проведении части 1 исследования ВР39144 (рандомизированное, слепое для исследователя/индивидуума, адаптивное, плацебо-контролируемое, проводимое на параллельных группах исследование) оценивали безопасность и переносимость однократных доз 305LO15 на здоровых добровольцах. При каждом уровне доз в каждой когорте случайным образом отбирали в общей сложности по 5 здоровых добровольцев для однократного введения 305LO15 или плацебо внутривенно (IV; когорты 1 и 2) или подкожно (SC; когорта 3). Исследование имело адаптивный дизайн, в соответствии с которым постоянно осуществляли оценку достаточной безопасности, переносимости, ФК и ФД перед началом следующего введения. Запланированные уровни доз для когорт 1, 2 и 3 составляли 75 мг IV, 150 мг IV и 170 мг SC соответственно (Фиг. 4а). На основе предварительного анализа ФК- и ФД-данных, полученных для когорты 1, дозы для когорт 2 и 3 были снижены до 125 мг IV (когорта 2) и 100 мг SC (когорта 3).
При осуществлении IV-инфузии образцы крови собирали перед введением дозы, после окончания IV-инфузии (1 ч), через 2, 6, 12, 24, 48, 72, 96 и 144 ч после введения дозы и в дни 14, 21, 28, 35, 42, 56, 84 и 91. При осуществлении SC-введения образцы крови собирали перед введением дозы, через 12, 24, 48, 72, 96 и 144 ч после введения дозы и в дни 14, 21, 28, 35, 42, 56, 84 и 91.
Предварительные результаты оценки безопасности, полученные при проведении части 1 исследования ВР39144 показали, что 305LO15 хорошо переносился при всех изученных уровнях доз (75 и 125 мг IV и 100 мг SC). Доступная информация о клинической безопасности не вызывала значительных опасений с точки зрения безопасности, и не было обнаружено свидетельств, позволяющих предположить наличие нежелательных явлении или аномалий при проведении лабораторных тестов. Не было выявлено заслуживающих внимания данных или трендов касательно жизненно важных признаков или в электрокардиограммах с 12-отведениями во всех группах обработки.
1/2
1/2
Предварительные результаты оценки ФК в сыворотке и смоделированные профили: концентрация 305bO15-время представлены на Фиг. 6, Фиг. 7 и Фиг. 8. Эти данные свидетельствуют о том, что ФК 305LO15 в организме здоровых индивидуумов согласовались с ФК для человека, ранее предсказанными на основе данных о ФК в организме обезьян циномолгус (пример 5). По-видимому, после IV-введения доз экспозиция должна быть пропорциональна дозе в диапазоне от 75 до 125 мг. Согласно оценкам конечное время полужизни (tm) для типичного пациента с весом тела 70 кг должно составлять примерно 25 дней. Предварительные результаты оценки ФК после SC-введений свидетельствуют о том, что экспозиция 305LO15 достигала пика примерно в день 7, а биодоступность составляла примерно 90%. После абсорбции t было сопоставимо с t в случае IV-инфузии.
Предварительные оценки зависимости экспозиция-ответ подтвердили полученный ранее прогноз, а именно, что для обеспечения полного ингибирования комплемента требуется примерно 40 мкг 305LO15 на миллилитр крови (Фиг. 9).
Пример 8
При проведении части 2 исследования ВР39144 (открытое многодозовое глобальное многоцентровое внутрииндивидуальное исследование с повышением дозы) оценивали безопасность и переносимость в течение в общей сложности 5 месяцев, и фармакодинамическое действие многократных доз 305LO15 на активность комплемента при лечении пациентов с PNH, ранее не получавших лечение. В этом исследовании участвовали шесть пациентов с PNH. Участвовавших в исследовании пациентов не лечили никаким ингибитором комплемента или их ранее лечили, но лечение было прекращено вследствие отсутствия эффективности, что было обусловлено единичной гетерозиготной миссенс-мутацией С5, и у них были выявлены повышенные уровни LDH в сыворотке (>1,5 × ULN) при скрининге (ULN: верхний предел нормального диапазона).
Один пациент (пациент X) из шести пациентов представлял собой пациента с PNH и он был кандидатом для лечения ингибиторами комплемента. Пациенту X вводили IV три однократные возрастающие дозы; путем однократной инфузии 375 мг 305LO15 в день 1, затем путем однократной инфузии 500 мг 305LO15 в день 8, и затем путем однократной инфузии 1000 мг 305LO15 в день 22. Первое SC-введение (170 мг) начинали в день 36, затем осуществляли еженедельно (QW) SC-инъекции (170 мг) 305LO15, которые должны были продолжаться в течение всего периода лечения, составлявшего 5 месяцев.
Предварительные результаты оценки фармакодинамических характеристик для пациента X представлены в Таблице 2 и на Фиг. 10. Уровни LDH, служащего фармакодинамическим маркером гемолиза, снижались до уровней, находящихся в пределах нормального диапазона, ко дню 15, продолжали снижаться далее до дня 36, и поддерживались на нормализованном уровне до дня 43 (Таблица 2 и Фиг. 10а). Как продемонстрировано в Таблице 2 и на Фиг. 106, результаты липосомного иммуноанализа (LIA) свидетельствуют о том, что активность комплемента полностью ингибировалась по окончании инфузии в день начала исследования, день 1. Доза 305LO15, составлявшая 375 мг, которую вводили в день 1, поддерживала полное ингибирование комплемента вплоть до введения следующей дозы 305LO15, составлявшей 500 мг, в день 8. Доза 305LO15, составлявшая 500 мг, которую вводили в день 8, поддерживала полное ингибирование комплемента вплоть до введения следующей дозы 305LO15, составлявшей 1000 мг, в день 22. Доза 305LO15, составлявшая 1000 мг, которую вводили в день 22, поддерживала полное ингибирование комплемента вплоть до введения следующей SC-дозы 305LO15, составлявшей 170 мг, в день 36. SC-доза, которую вводили в день 36, поддерживала полное ингибирование комплемента до дня 43.
305LO15 хорошо переносился, была отмечена лишь слабая боль в брюшной области, не связанная с лечением.
Пример 9
При проведении части 3 исследования ВР39144 (открытое многодозовое глобальное многоцентровое исследование) оценивали безопасность и переносимость в течение в общей сложности 5 месяцев, и фармакодинамическое действие многократных доз 305LO15 на активность комплемента на пациентах с PNH, подвергающихся в рассматриваемый период времени лечению экулизумабом. В этом исследовании участвовали 18 пациентов с PNH. Участвующих в исследовании пациентов подвергали непрерывному лечению экулизумабом в течение по меньшей мере 3 месяцев до включения в опыт и пациентам регулярно осуществляли инфузии экулизумаба.
Один пациент (пациент Y) из 18 пациентов представлял собой пациента с PNH, которого лечили экулизумабом, при этом экулизумаб вводили последний раз за 14 дней до первой IV-инфузии 305LO15. Пациенту Y вводили путем однократной инфузии ударную дозу; осуществляли однократную инфузию 1000 мг 305LO15 в день 1. Первое SC-введение (680 мг) осуществляли в день 8, затем каждые 4 недели (Q4W) осуществляли SC-инъекции (680 мг) 305LO15, которые продолжали в течение всего периода лечения, составлявшего 5 месяцев.
Предварительные результаты оценки фармакодинамических характеристик для пациента Y представлены в Таблице 3. Уровни LDH, служащего в качестве фармакодинамического маркера гемолиза, сохранялись на исходных уровнях, начиная с введения первой дозы, до дня 43 (Таблица 3). Как продемонстрировано в Таблице 3, результаты липосомного иммуноанализа (LIA) свидетельствуют о том, что активность комплемента полностью ингибировалась по окончании инфузии в день начала исследования, день 1. Доза 305LO15, составлявшая 1000 мг, которую вводили в день 1, поддерживала полное ингибирование комплемента вплоть до SC-введения дозы 305LO15, составлявшей 680 мг, в день 8. SC-доза, введенная в день 8, поддерживала полное ингибирование комплемента до дня 43.