СПОСОБ ОЧИСТКИ БАКТЕРИАЛЬНОГО ЦИТОЛИЗИНА

1. Способ очистки бактериального цитолизина, включающий стадии:
а) выращивани  культуры клеток, экспрессирующих бактериальный цитолизин,
б) приготовлени  экстракта из культуры, содержащей бактериальный цитолизин,
в) св зывани  растворимого агрегированного бактериального цитолизина, содержащегос  в экстракте, с гидрофобным хроматографическим сорбентом в присутствии детергента при высокой концентрации соли (предпочтительно 0,6-2 М соли),
г) элюции бактериального цитолизина в присутствии детергента при низкой концентрации соли (предпочтительно 0-0,2 М соли).
2. Способ по п.1, дополнительно включающий стадии
д) удалени  детергента из бактериального цитолизина,
е) растворени  бактериального цитолизина путем добавлени  денатурирующего агента,
ж) удалени  денатурирующего агента из бактериального цитолизина.
3. Способ по п.1 или 2, где бактериальный цитолизин представл ет собой пневмококковый пневмолизин.
4. Способ по п.1, где стади  (б) включает механическое разрушение клеток.
5. Способ по п.1, где стади  (б) включает обработку детергентом.
6. Способ по п.1, где на стади х (в) и (г) присутствует один и тот же детергент.
7. Способ по п.5, где на стади х (б), (в) и (г) присутствует один и тот же детергент.
8. Способ по п.1, где детергент присутствует в концентрации 0,1-5% (мас./об.).
9. Способ по п.1, где стади  (б) включает центрифугирование разрушенного клеточного материала и сбор супернатанта в виде экстракта стадии (в).
10. Способ по п.1, где гидрофобный хроматографический сорбент, используемый на стадии (в), содержит ароматические группы.
11. Способ по п.10, где гидрофобный хроматографический сорбент представл ет собой фенил-сефарозу.
12. Способ по п.1, где детергент, присутствующий в растворе, используемом на стадии (в) и/или (г), представл ет собой алифатический детергент.
13. Способ по п.1, где детергент представл ет собой лауроилсаркозинат натри .
14. Способ по п.1, где услови  высокой концентрации соли на стадии (в) включают 0,6-2 М соли.
15. Способ по п.1, где раствор, используемый на стадии (в) и/или (г), содержит соль, выбранную из группы, состо щей из хлорида натри , хлорида магни , хлорида аммони , сульфата натри , сульфата магни , сульфата аммони , фосфата натри , фосфата магни , фосфата аммони .
16. Способ по п.1, где услови , используемые на стадии (в) и/или (г), включают рН 6-8, предпочтительно рН около 7.
17. Способ по п.1, где услови , используемые на стадии (г), включают 0-0,1 М соли.
18. Способ по п.17, где услови , используемые на стадии (г), включают 0-40 мМ соли.
19. Способ по п.2, где стади  (д) включает удаление детергента диафильтрацией или диализом.
20. Способ по п.19, где диафильтрацию/диализ осуществл ют против низкосолевого буфера с рН 8-10, предпочтительно с рН около 9.
21. Способ по п.2, где стади  (е) включает денатурацию бактериального цитолизина посредством добавлени  денатурирующего агента, и стади  (ж) включает ренатурацию бактериального цитолизина путем постепенного удалени  денатурирующего агента.
22. Способ по п.2, где денатурирующий агент, используемый на стадии (е), представл ет собой гуанидингидрохлорид.
23. Способ по п.22, где используют 5-8 М гуанидингидрохлорида.
24. Способ по п.22, где бактериальный цитолизин привод т в контакт с 5-9 М мочевины на стадии (е).
25. Способ по п.24, где стади  (е) включает приведение бактериального цитолизина в контакт с 5-8 М гуанидингидрохлорида с последующим заменой гуанидингидрохлорида на 5-9 М мочевины.
26. Способ по п.21, где восстанавливающий агент присутствует по меньшей мере частично на стади х (е) и (ж).
27. Способ по п.26, где восстанавливающий агент представл ет собой 0,1-10 мМ ДТТ (дитиотреитола), предпочтительно примерно 1 мМ ДТТ.
28. Способ по п.2, где стади  (ж) включает удаление денатурирующего агента диафильтрацией или диализом.
29. Способ по п.28, где диафильтрацию или диализ осуществл ют против раствора с рН 7-9.
30. Способ по п.2, включающий дополнительную стадию детоксикации бактериального цитолизина посредством химической обработки сшивающим агентом.
31. Способ по п.30, где химическа  обработка включает применение сшивающего агента, который взаимодействует с амино- и сульфгидрильными группами.
32. Способ по п.30, где сшивающий агент содержит одно или более чем одно химическое соединение, выбранное из группы, состо щей из формальдегида, глутаральдегида, N-гидроксисукцинимидных эфиров и GMBS (N-(гамма-малеимидобутирилокси)сукцинимидого эфира).
33. Способ по п.2, включающий дополнительную стадию конъюгировани  бактериального цитолизина с бактериальным капсульным полисахаридом.
34. Способ по п.2, включающий дополнительную стадию приготовлени  бактериального цитолизина в виде вакцинной композиции с фармацевтически приемлемым эксципиентом.
35. Способ по п.34, где бактериальный цитолизин приготовлен с холин-св зывающим белком А или его иммуногенным фрагментом.
36. Способ по п.34 или 35, где бактериальный цитолизин приготовлен с одним или более чем одним из PhtA, PhtB, PhtD или PhtE или его иммуногенным фрагментом.
37. Способ по п.34, где бактериальный цитолизин приготовлен с антигеном из нетипируемого штамма Haemophilus influenzae (NtHi).
38. Способ по п.34, где бактериальный цитолизин приготовлен с антигеном из Moraxella catarrhalis.
39. Способ по п.34, где бактериальный цитолизин приготовлен с антигеном из RSV (респираторно-синцитиального вируса).
40. Способ по п.34, где бактериальный цитолизин приготовлен с антигеном из вируса парагриппа.
41. Способ по п.34, где бактериальный цитолизин приготовлен с антигеном из вируса гриппа.
42. Способ детоксикации бактериального токсина, включающий обработку токсина химическим соединением, которое взаимодействует с первичными аминогруппами, где более 50% токсина сохран ет молекул рную массу в пределах 20% от его первоначальной молекул рной массы после обработки, как определено с помощью электрофореза в ПААГ (полиакриламидном геле) с ДСН (додецилсульфатом натри ).
43. Бактериальный цитолизин, очищенный способом по п.31.
44. Бактериальный цитолизин по п.43, который представл ет собой пневмолизин.
45. Бактериальный цитолизин по п.43 или 44, который подвергают конъюгированию с бактериальным полисахаридом с образованием бактериального цитолизин-полисахаридного конъюгата или пневмолизин-полисахаридного конъюгата.
46. Иммуногенна  композици , содержаща  пневмолизин или пневмолизин-полисахаридный конъюгат по п.44 или 45.
47. Иммуногенна  композици  по п.46, дополнительно содержаща  холин-св зывающий белок А или его иммуногенный фрагмент.
48. Иммуногенна  композици  по п.46 или 47, дополнительно содержаща  один или более чем один из PhtA, PhtB, PhtD или PhtE или его иммуногенный фрагмент.
49. Иммуногенна  композици  по п.46, дополнительно содержаща  антиген из нетипируемого штамма Haemophilus influenzae (NtHi).
50. Иммуногенна  композици  по п.46, дополнительно содержаща  антиген из Moraxella catarrhatis.
51. Иммуногенна  композици  по п.46, дополнительно содержаща  антиген из RSV (респираторно-синцитиального вируса).
52. Иммуногенна  композици  по п.46, дополнительно содержаща  антиген из вируса парагриппа.
53. Иммуногенна  композици  по п.46, дополнительно содержаща  антиген из вируса гриппа.
54. Вакцина, содержаща  пневмолизин или пневмолизин-полисахаридный конъюгат по п.44 или 45 и фармацевтически приемлемый эксципиент.
55. Вакцина, содержаща  иммуногенную композицию по любому из пп.46-53 и фармацевтически приемлемый эксципиент.
56. Способ лечени  или предупреждени  инфекции Streptococcus pneumoniae, включающий введение вакцины по п.54 или 55 реципиенту, нуждающемус  в этом.
57. Применение пневмолизина или пневмолизин-полисахаридного конъюгата по п.44 или 45 в изготовлении вакцины дл  лечени  или предупреждени  инфекции Streptococcus pneumoniae.