Области ядрышковых организаторов в ворсинах хориона в норме и при позднем гестозе

УДК 616.3 - 008.6 : 616-018

ОБЛАСТИ ЯДРЫШКОВЫХ ОРГАНИЗАТОРОВ В ВОРСИНАХ ХОРИОНА В НОРМЕ И ПРИ ПОЗДНЕМ ГЕСТОЗЕ

А.Ю. Криворучко

Ставропольский государственный аграрный университет, кафедра физиологии и хирургии, г. Ставрополь.

Изучена активность областей ядрышковых организаторов (ОЯОР) и площадь ядер синцитиотрофобласта ворсин хориона, полученных из плацент здоровых женщин и больных поздним гестозом (ПГ). Обнаружено, что в плацентах здоровых женщин ОЯОР малого размера и округлой формы. Она расположена в центре ядра площадью 8.44±0Л4 мкм2 и составляет 0.46±0.01 мкм2. При легкой форме ПГ площадь ядер синцитиотрофобласта увеличивается до 12.84±0.20 мкм , они содержат одну-две ОЯОР, расположенных в центральной зоне, суммарной площадью 0.91±0.02 мкм2. У больных тяжелой формой ПГ количество ОЯОР также доходит до двух, они располагаются в центре или на противоположных сторонах ядра, имеют круглую или овальную форму. Суммарная площадь ОЯОР в этой группе 0.99±0.03 мкм2, площадь ядер составляет 12.02±0.27 мкм2. Увеличение площади ядер и ОЯОР у больных ПГ, по сравнению со здоровыми, указывает на выраженную активизацию белкового синтеза в синци-тиотрофобласте ворсин хориона, связанную с процессами перестройки транспортных систем плаценты в условиях нарушения маточно-плацентарного кровообращения. Интенсивность этих процессов зависит от степени тяжести ПГ.

Ключевые слова: плацента, гипоксия, ядрышковые организаторы, гестоз. Принятые сокращения: ОЯОР - области ядрышковых организаторов; ПГ -поздний гестоз.

Основной функцией плаценты является адекватное снабжение плода кислородом и питательными веществами на протяжении всей беременности. Обеспечивает эти функции комплекс транспортных белковых систем и ферментов, синтез которых непрерывно осуществляется в синцитиотрофобласте хориаль-ных ворсин - основном месте обмена между матерью и плодом (Милованов, 1999). При нарушении маточно-плацентарного кровотока и возникающей гипоксии плаценты, являющихся главными причинами возникновения позднего гестоза (ПГ) (Саш§§1а & а1., 2000), в ворсинах хориона наблюдаются структурные изменения, развитие которых напрямую связано с состоянием белкового обмена (МауЬеш, 1998).

Активность синтеза белков во многом определяется количеством рибосо-мальной РНК, формирующей ядрышко и рибосомы шероховатого эндоплазма-тического ретикулума. Участки хромосом, на которых происходит образование рибосомальной РНК, выявляются в виде связывающих коллоидное серебро областей ядрышковых организаторов (ОЯОР), впервые описанных в 1931 году Е.

Heitz (Дубенская, Баженов, 1992). По количеству и размеру ОЯОР определяют состояние белково-синтезирующего аппарата (Devilee et al., 1988), что нашло достаточно широкое применение при диагностике состояний, связанных с нарушением пролиферации и дифференцировки клеток (Crocker, Skilbeck, 1987; Боташева, 2000).

Исследования активности ОЯОР в ткани плаценты крайне малочисленны и касаются только опухолевого заболевания хориона - хориоэпителиомы (Neudeck et al., 1997; Watanabe et al., 1998). Отсутствуют данные о состоянии ОЯОР в плаценте при доношенной беременности в норме и при плацентарной патологии. В связи с этим для количественной оценки белково-синтетичеекой функции в плаценте нами была изучена активность ОЯОР в ядрах синцитиотрофоб-ласта терминальных ворсин хориона здоровых женщин и больных ПГ. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДИКА. Для исключения сочетанных форм ПГ, на основании клинического обследования нами были выбраны 20 здоровых родильниц, 20 родильниц с легкой и 20 с тяжелой формой заболевания.

Диагноз легкой формы ПГ был выставлен при наличии у беременной отеков любой локализации, не исчезающих после 12-часового отдыха в горизонтальном положении; протеинурии 0,033 - 1,0 г/л в разовой пробе мочи, при повторном анализе в течение суток; повышения систолического и диастолическо-го АД после 20 недель беременности более чем на 15 %, по сравнению с исходным до беременности. Тяжелую форму ПГ, соответствующую нефропатии III и преэклампсии, диагностировали при наличии, кроме клиники легкой формы, хотя бы одного из следующих признаков: устойчивого повышения систолического АД более 160 мм. рт. ст. или диастолического более 110 мм. рт. ст.; массивной протеинурии более 5 г за 24 часа; олигурии менее 500 мл/сут; неврологической симптоматики в виде головной боли, боли в эпигастральной области, нарушений зрения; синдрома задержки развития плода по данным ультразвуковой фетометрии (Абрамченко, Хугаева, 1992; Mroz, 1999). Критерием подбора клинических групп являлась оценка тяжести ПГ на момент родоразре-шения в условиях, когда медикаментозная терапия или еще не проводилась, или была недостаточно эффективна и не приводила к улучшению состояния больных.

Объектом исследования служила плацента, полученная сразу после родов и во время операций кесарева сечения. После осмотра материнской поверхности плаценты в случайном порядке иссекали 3 неповрежденных котиледона. Каждый из них разделяли на две части и из места разреза с одной стороны вырезали кусочки сечением 5x5 мм через все слои плаценты, которые затем фиксировали в 10 % нейтральном формалине и заливали в парафиновые блоки. На ротационном микротоме приготавливали срезы толщиной 10 мкм. Срезы расправляли на поверхности теплой дистиллированной воды (не более 40°С) и наклеивали на химически чистые предметные стекла без применения белка.

Оценку параметров активности зон ядрышковых организаторов проводили в срезах после депарафинирования ксилолом и доведения до воды в батарее спиртов нисходящей концентрации с последующей импрегнацией азотнокис-

лым серебром, по модифицированной методике, описанной Туриловой с сотрудниками (1998).

Гистологическое строение срезов изучали с использованием полифункционального светового микроскопа ЛЮМАМ Р-8. С помощью собранной нами компьютерной микротелефотометрической приставки с каждого препарата выполняли по 10 цифровых снимков случайно выбранных полей зрения на увеличении 1000 раз. Морфометрические показатели, такие, как площадь ядер (10 измерений на каждом снимке), количество и площадь областей ядрышковых организаторов (в 10 ядрах на каждом снимке), определяли при использовании программы ВидеоТест Мастер 4.0 для Windows'95 производства АОЗТ «ИСТА», Россия, г. Санкт-Петербург, на IBM-совместимом компьютере согласно рекомендациям Автандилова (1996).

Статистический анализ полученных результатов проводили с помощью двустороннего критерия Стьюдента в программе Primer of Biostatistics 4.03 для Windows'95 на IBM-совместимом компьютере. Достоверными считали различия при р<0,05.

РЕЗУЛЬТАТЫ.Синцитиотрофобласт терминальных специализированных ворсин, полученных из плацент здоровых женщин, содержит ядра небольших размеров (таблица). Они имеют овальную или веретенообразную форму и включают одну, крайне редко две малого размера ОЯОР округлой формы, которые расположены в центральной области ядра. Площадь ОЯОР составляет 5,5 % от площади ядра.

При легкой форме ПГ площадь ядер синцитиотрофобласта в полтора раза больше, чем в терминальных ворсинах хориона здоровых женщин. Они содержат расположенные около центра ядра одну-две округлых ОЯОР, суммарная площадь которых в два раза больше, чем в группе здоровых женщин. Количество ядер, содержащих две области, достоверно больше, чем в синцитиотро-фобласте плацент здоровых женщин на 34 %. Отношение площади ядра к площади ОЯОР у больных легкой формой ПГ уменьшено на 28 % по сравнению со здоровыми.

Таблица. Активность областей ядрышковых организаторов в синцитиотрофоб-ласте терминальных ворсин

Показатель Здоровые, М±т (п=2000) Больные ПГ

Легкая, М±т

Площадь ядер, мкм2 8.44±0.14 12.84±0.20** 12.02±0.27**#

Количество ОЯОР 1.03±0.01 1.38±0.04** 1,30±0.04**

Площадь ОЯОР, мкм2 0.46±0.01 0.91±0.02** 0,99±0.03**##

Отношение площади ядра к площади ОЯОР 18.4±0.32 14.33±0.29** 14.77±0.33**

Примечание: статистическая значимость различий с данными группы здоровых обозначена: ** - р<0,01. Статистическая значимость различий с данными 1руппы больных легкой формой ПГ обозначена: # - р<0,05, ## - р<0,01.

В плацентах больных тяжелой формой ПГ ядра сиицитиотрофобласта имеют площадь, меньшую на 7 % , чем в ворсинах хориона больных легкой формой. В каждом ядре имеется не более двух ОЯОР, расположенных в центре или на противоположных сторонах ядра. Их суммарная площадь на 9 % больше, чем в группе больных легкой формой ПГ. Зоны могут иметь не только круглую, но и овальную форму. Количество ядер сиицитиотрофобласта с двумя зонами достоверно не отличается от группы больных легкой формой ПГ. Отношение площади ядра к суммарной площади ОЯОР также достоверно не отличается от таковой у больных легкой формой ПГ.

ОБСУЖДЕНИЕ.Синцитиотрофобласт терминальных специализированных ворсин в плацентах здоровых женщин функционирует в оптимальных условиях, адекватно обеспечивая плод кислородом и питательными веществами. Об этом свидетельствует небольшой размер ядер овальной формы, содержащих одну, крайне редко две (не больше одного-двух на сотню ядер), ОЯОР правильной формы малого размера (>УасЫ1ег е1 а!., 1986). Определение соотношения площади ядра к площади ОЯОР показывает, что она занимает самую меньшую часть ядра, по сравнению с плацентами в других группах обследованных. Таким образом, при нормально протекающей беременности интенсивность синтеза белка в синцитиотрофобласте находится на низком, но достаточном для полноценного функционирования плаценты, уровне.

При легкой форме ПГ, как правило, не наблюдается нарушений в развитии плода. Это свидетельствует о достаточности комплекса мероприятий, направленных на активацию трансплацентарного переноса для обеспечения основных функций плаценты в полном объеме. Однако анализ белково-синтетической функции сиицитиотрофобласта позволяет отметить выраженную напряженность обеспечивающих ее систем, что подтверждается увеличением в полтора раза площади ядер сиицитиотрофобласта и в два раза - ОЯОР. Также увеличивается количество ядер, содержащих две ОЯОР, они занимают большую площадь внутри ядра, по сравнению с плацентами здоровых женщин. Это указывает на то, что синтез рибосомальной РЖ, и, соответственно, белка в синцитиотрофобласте значительно возрастает при развитии даже легкой формы ПГ.

Дальнейшее прогрессирование ПГ характеризуется все большим дисбалансом между потребностями плода и возможностями трансплацентарного переноса, что часто сопровождается нарушением роста и развития плода. При этом наблюдается предельное напряжение, а в ряде случаев (при патологии со стороны плода), и декомпенсация процессов, обеспечивающих активацию основных функций сиицитиотрофобласта (Яатт, 1999). Площадь ядер синцития мало отличается от таковой у больных легкой формой ПГ, однако площадь ОЯОР увеличивается, что указывает на еще более интенсивный, по сравнению с легкой формой ПГ, синтез транспортных белков и ферментов.

Таким образом, у больных ПГ, по сравнению со здоровыми, регистрируется увеличение площади ядер и ОЯОР, что указывает на выраженную активизацию белкового синтеза в синцитиотрофобласте ворсин хориона в процессе перестройки транспортных систем плаценты при нарушении маточно-

плацентарного кровообращения. Интенсивность этих процессов зависит от степени тяжести ПГ.

Литература

1. Абрамченко В.В., Хугаева Ю.П. Поздний токсикоз беременных. Владикавказ. - 1992,- 268 с.

2. Автандилов Г.Г. Компьютерная микротелефотометрия в диагностической гистоцитопатологии. М.; РМАПО.- 1996,- 256 с.

3. Боташева B.C. Показатели активности ядрышковых организаторов при патологии щитовидной железы. \\ Архив патологии,- 2000.-№ 62.-С.- 2124.

4. Дубенская Л.И., Баженов С.М. Белки, ассоциированные с зонами ядрыш-кового организатора: практическое применение в онкоморфологии и связь с биологическими особенностями опухоли. \\Архив патологии,- 1992.- № 54.-С,- 40-43.

5. Милованов А.П. 1999. Патология системы мать-плацента-плод: Руководство для врачей. -М; Медицина, 448 с.

6. Турилова В.И., Смирнова Т.Д., Самойлович М.П., Сухих Т.Р. Функциональная морфология ядрышкообразующих районов хромосом и ядрышек в клетках линии множественной миеломы человека. 1. Изменение морфологии и характера серебрения ядрышкообразующих районов хромосом клеточных линий RPMI 8226 и U 266, различающихся по степени диффе-ренцировки, на протяжении 7 сут. после пересева клеток.\\ Цитология.-

1998.-№40.- С.- 536-547.

7. Caniggia I., Winter J., Lye S.J., Post M. Oxygen and placental development during the first trimester: implications for the pathophysiology of preeclampsia. \\ Placenta. - 2000.-21: 25-30.

8. Crocker J., Skilbeck N. Nucleolar organiser region associated proteins in cutaneous melanotic lesions: a quantitative study. \\ J. Clin. Pathol.- 1987.- 40: 885889.

9. Devilee P., Thierry R.F., Kievits T. Detection of chromosome aneuploidy in interphase nuclei from human primary breast tumors using chromosome-specific repetitive DNA probes. WCancer Res.- 1988.- 48 : 5825-5830.

10.Mayhew T.M. Thinning of the intervascular layers of the human placenta is an adaptive response to passive diffusion in vivo and may help to predict the origin of fetal hypoxia. \\ Eur. J. Obstet. Gynecol. Reprod. Biol.- 1998.- 81: 101-109.

1 l.Mroz L.A. Hypertensive disorders of pregnancy. \\ Anesth. Clin. North Am. -

1999.-17: 679-691.

12.Neudeck H., Unger M., Hufnagl P., Eiben В., Peters K., Kalla J., Graf R., Vogel M. Villous cytotrophoblast proliferating potential in complete and partial hydatidiform mole: diagnostic value of silver-stained nucleolar organizer region (AgNOR)-associated proteins.W Gen. Diagn. Pathol.- 1997.-143: 179-184.

13.Ramin K.D. The prevention and management of eclampsia. \\ Obstet. Gynecol. Clin. - 1999.-26: 489-503.

14.Watanabe M., Ghazizadeh M., Konishi H., Araki T. Interphase cytogenetic and AgNOR analyses of hydatidiform moles.W J. Clin. Pathol- 1998.-51: 438-443.

15.Wachtler ¥., Hopman A.H., Wiegant J. On the position of nucleolus organizer regions (NORs) in interphase nuclei.W Exp. Cell. Res.- 1986,- 167: 227-240.