СПОСОБ ВЫРАЩИВАНИЯ МИЦЕЛИЯ Lentinula edodes Berk.
METHOD OF GROWING Lentinula edodes Berk. MYCELIUM

Изобретение относится к биотехнологии и сельскохозяйственному производству, в частности к грибоводству. Известен способ выращивания мицелия Boletus edulis, предусматривающий высевание базидиоспор белого гриба Boletus edulis на питательную среду, инкубирование их до образования первичного мицелия, отбирают образованный первичный мицелий, вносят его в емкость с питательной средой и инкубируют в темноте при температуре 20-24°С до 30 дней с образованием на поверхности среды мицелия. Недостатком данного способа является длительность технологического процесса. Известен способ выращивания мицелия высших грибов, включающий высевание базидиоспор на питательную среду и инкубирование их до образования мицелия. Предварительно пастеризованный или стерилизованный субстрат смешивают с мицелием и вносят в жесткую емкость для культивирования, выстланную изнутри гибкой прокладкой, обладающей водостойкими свойствами. Проращивание мицелия происходит внутри замкнутого гибкой прокладкой пространства в условиях повышенной влажности и микроаэрофильных условий, что является оптимальным для развития субстратного мицелия (RU, патент 2101913, кл. А01G 1/04, 1998 г.). Недостатком данного способа является его значительная трудоемкость и технологическая сложность прохождения этапов данного способа, что в значительной степени увеличивает продолжительность способа и увеличивает материальные затраты. Наиболее близким является способ выращивания гриба Lentinula edodes Berk., включающий приготовление мицелия на твердой агаризованной питательной среде (см. Stamets P. Growing gourmet and medical mushrooms. Oxford. 1993). Недостатком данного способа является длительность технологического процесса и его высокая себестоимость.
Задачей настоящего изобретения является разработка способа выращивания мицелия Lentinula edodes Berk., сокращение сроков выращивания первичного мицелия, а также увеличение воздушно-сухой массы мицелия без каких-либо химических добавок, что позволяет выращивать экологически чистый продукт с конкурентоспособными свойствами.
Объектом наших исследований стал гриб Шиитаке (Lentinula edodes Berk.) - традиционный деликатесный гриб в странах Юго-Восточной Азии. В настоящее время популярность шиитаке возросла в связи с его ценными лечебными свойствами. Шиитаке содержит уникальный набор микро- и макроэлементов, незаменимых аминокислот, клетчатку, хитин, белки, полисахариды и витамины группы В, С, D, PP. Витамина D в этом грибе может содержаться в 4 раза больше, чем в печени трески.
Для современной медицины этот вид интересен сильным иммуномодулирующим действием, а полисахариды, такие как лентинан и эмитанин, проявляют сильнейшее противоопухолевое действие, и последний запатентован в Японии как средство против рака. Употребление этих грибов в пищу существенно снижает риск заболевания атеросклерозом за счет их способности снижать уровень холестерина в крови, замедляет развитие злокачественных опухолей, регулирует иммунную систему. Содержащиеся в них вещества, ко всему прочему, обладают антивирусными, антибактериальными и антигрибковыми свойствами (Medicinal Mushrooms, 1995).
Предлагаемый способ выращивания мицелия реализуется следующим образом: В заявленном изобретении используют стандартную, агаризованную питательную среду (Malt Extract Agar фирмы Mycomedia), которая готовится путем добавления в нее необходимого количества дистиллированной воды и автоклавирования 15-30 мин при 1-1,5 атм.
Для выращивания мицелия используют стеклянные чашки Петри, после предварительной стерилизации в сухожаровом шкафу 2 ч 20 мин при 160°С, остужают их и разливают питательную среду так, чтобы дно чашки было полностью покрыто на 1-2 мм, эту и все дальнейшие процедуры проводим в стерильных условиях (ламинарном боксе).
Чашки оставляют на некоторое время в ламинарном боксе (на 10-15 минут), для того, чтобы среда застыла. На застывшую питательную среду, в центр чашки Петри высаживают мицелий определенного штамма Lentinula edodes Berk. После посева чашки Петри закрывают парафилмом (пленкой для герметизации открытых сосудов), и экспанируют сутки в темноте при температуре 24-26°С. Следующим этапом является стимуляция роста селективным светом с длиной волны 430-480 нм, по 1-60 минут ежедневно, при температуре 24-26°С, чашки при этом выставляют на специальные световые установки (световая установка представляет собой стеллаж с полками, регулируемыми по высоте, каждая из которых имеет подсветку, лампы располагаются в горизонтальной плоскости, сверху, установка закрыта темной, не проницаемой тканью со всех сторон, исключая этим проникновение дневного или любого другого света во время проведения эксперимента), остальное время чашки находятся в темноте при той же температуре. Эта процедура продолжается до полного обрастания поверхности субстрата (10-12 дней). На рисунке 1 изображена разница показаний воздушно-сухой массы мицелия Lentinula edodes Berk., выращенного при 30 минутном освещении синим селективным светом. На рисунке 2 представлены данные 10-12 дневного эксперимента с мицелием Lentinula edodes Berk., выращенного при ежедневном освещении синим селективным светом, который отличается от данных контроля выросшего в темноте.
Ниже приведены примеры конкретного осуществления изобретения.
2
Пример 1. Культуру гриба Шиитаке (Lentinula edodes Berk.) выращивают в чашках Петри на агаризованной питательной среде (Malt Extract Agar фирмы Mycomedia), при температуре 24-26°С. В качестве инокулята используют кусочек агаризованной среды с культурой 5×5 мм, который помещают в центре чашки Петри со средой. Культуру инкубируют в темноте, ежедневно освещая по 1 мин синим селективным светом (430 нм), интенсивностью 70 мкМоль/см·с., при температуре 24-26°С до полного зарастания поверхности субстрата. Продолжительность выращивания 10-12 дней.
2
Пример 2. Культуру гриба Шиитаке (Lentinula edodes Berk.) выращивают в чашках Петри на агаризованной питательной среде (Malt Extract Agar фирмы Mycomedia), при температуре 24-26°С. В качестве инокулята используют кусочек агаризованной среды с культурой 5×5 мм, который помещают в центре чашки Петри со средой. Культуру инкубируют в темноте, ежедневно освещая по 60 мин синим селективным светом (480 нм), интенсивностью 150 мкМоль/см·с, при температуре 24-26°С до полного зарастания поверхности субстрата. Продолжительность выращивания 10-12 дней.
Использование данного способа выращивания позволяет существенно ускорить выход мицелия, без поражения его на этапе разрастания низшими грибами, за счет полной стерильности процесса, а также отсутствия химических добавок для культивирования позволяет обеспечить его экологическую чистоту, а также увеличить выход воздушно-сухой массы мицелия.