PD1/CTLA4-СВЯЗЫВАЮЩИЕ ВЕЩЕСТВА

1. PD1/CTLA4-связывающее вещество, содержащее одинарный вариабельный домен иммуноглобулина (ISVD), который связывается с PD1 человека, и ISVD, который связывается с CTLA4 человека на одном или более из следующих множеств остатков
VRVTVL (аминокислоты 33-38 в SEQ ID NO: 195),
ADSQVTEVC (аминокислоты 41-49 в SEQ ID NO: 195); и
CKVELMYPPPYYLG (аминокислоты 93-106 в SEQ ID NO: 195);
причем ISVD, который связывается с CTLA4, и/или ISVD, который связывается cPD1, содержит мутацию на остатках 11 и 89, где номера указанных остатков соответствуют номерам остатков по системе Kabat;
где PD1/CTLA4-связывающее вещество необязательно содержит экстендер периода полувыведения и/или С-концевой экстендер.
2. PD1/CTLA4-связывающее вещество, содержащее
один или более ISVD, которые связываются с PD1, содержащих:
CDR1, содержащий аминокислотную последовательность IHAMG (SEQ ID NO: 3) или GSIASIHAMG (SEQ ID NO: 6);
CDR2, содержащий аминокислотную последовательность VITXSGGITYYADSVKG (SEQ ID NO: 4; где X представляет собой W или V) или VITWSGGITY (SEQ ID NO: 7); и
CDR3, содержащий аминокислотную последовательность DKHQSSXYDY (SEQ ID NO: 5; где X представляет собой W или F); и
один или более ISVD, которые связываются с CTLA4, содержащих:
CDR1, содержащий аминокислотную последовательность FYGMG (SEQ ID NO: 10) или GGTFSFYGMG (SEQ ID NO: 13);
CDR2, содержащий аминокислотную последовательность DIRTSAGRTYYADSVKG (SEQ ID NO: 11) или DIRTSAGRTY (SEQ ID NO: 14); и
CDR3, содержащий аминокислотную последовательность EXSGISGWDY (SEQ ID NO: 12; где X представляет собой M или P);
и, необязательно, экстендер периода полувыведения и/или С-концевой экстендер.
3. PD1/CTLA4-связывающее вещество по любому из пп.1 и 2, отличающееся тем, что ISVD, который связывается с PD1, содержит аминокислотную последовательность
DVQLVESGGG VVQPGGSLRL SCAASGSIAS IHAMGWFRQA PGKEREFVAV ITWSGGITYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTVY LQMNSLRPED TALYYCAGDK HQSSWYDYWG QGTLVTVSS
(SEQ ID NO: 135); и
ISVD, который связывается с CTLA4, содержит аминокислотную последовательность:
XVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGGTFSFYGMG
WFRQAPGKEREFVADIRT SAGRTYYADSVKGRFTIS RDNSKNTVYLQMNSLRPE DTALYYCAAEPSGISGWD YWGQGTLVTVSS
(SEQ ID NO: 143), где X представляет собой D или E;
или
1
2
1
2
XVQLVESGGGVVQPGGS LRLSCAASGGTFSFYGM GWFRQAPGKEREFVADIR TSAGRTYYADSVKGRF TISRDXSKNTVYLQMN SLRPEDTALYYCAAEP SGISGWDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 196), где X представляет собой D или E и где X представляет собой S, V, G, R, Q, M, H, T, D, E, W, F, K, A, Y или P;
и, необязательно, экстендер периода полувыведения и/или С-концевой экстендер.
4. PD1/CTLA4-связывающее вещество по любому из пп.1-3, содержащее пептидный линкер между каждым ISVD.
5. PD1/CTLA4-связывающее вещество по любому из пп.1-4, содержащее
PD1 ISVD, содержащий аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 135;
линкер 35GS, содержащий аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 86;
CTLA4 ISVD, содержащий аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 143 (D1E);
линкер 35GS, содержащий аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 86;
HSA ISVD, содержащий аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 144; и
C-концевой аланин.
6. PD1/CTLA4-связывающее вещество по любому из пп.1-4, содержащее
PD1 ISVD, содержащий аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 135;
линкер 35GS, содержащий аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 86;
PD1 ISVD, содержащий аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 135 (D1E);
линкер 35GS, содержащий аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 86;
CTLA4 ISVD, содержащий аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 143 (D1E);
линкер 35GS, содержащий аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 86;
HSA ISVD, содержащий аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 144; и
C-концевой аланин.
7. PD1/CTLA4-связывающее вещество по любому из пп.1-4, содержащее
PD1 ISVD, содержащий аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 135;
линкер 35GS, содержащий аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 86;
CTLA4 ISVD, содержащий аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 143 (D1E);
линкер 35GS, содержащий аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 86;
CTLA4 ISVD, содержащий аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 143 (D1E);
линкер 35GS, содержащий аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 86;
HSA ISVD, содержащий аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 144; и
С-концевой аланин.
8. PD1/CTLA4-связывающее вещество по любому из пп.1-4, содержащее
PD1 ISVD, содержащий аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 135;
линкер 35GS, содержащий аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 86;
PD1 ISVD, содержащий аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 135 (D1E);
линкер 35GS, содержащий аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 86;
CTLA4 ISVD, содержащий аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 143 (D1E);
линкер 35GS, содержащий аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 86;
CTLA4 ISVD, содержащий аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 143 (D1E);
линкер 35GS, содержащий аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 86;
HSA ISVD, содержащий аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 144; и
C-концевой аланин.
9. PD1/CTLA4-связывающее вещество по любому из пп.1-4, которое содержит пептидный линкер, где пептидный линкер содержит аминокислотную последовательность GGGGSGGGGSGGGGSGG GGSGGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 86).
10. PD1/CTLA4-связывающее вещество по любому из пп.1-9, содержащее аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 146, 149, 151 или 153.
11. PD1/CTLA4-связывающее вещество по любому из пп.1-4 или 9, которое содержит экстендер периода полувыведения, который представляет собой ISVD сывороточного альбумина человека, который содержит:
CDR1, содержащий аминокислотную последовательность GFTFSSFGMS (SEQ ID NO: 199) или SFGMS (аминокислоты 6-10 в SEQ ID NO: 199);
CDR2, содержащий аминокислотную последовательность SISGSGSDTL (SEQ ID NO: 200) или SISGSGSDTL (аминокислоты 1-10 в SEQ ID NO: 200); и
CDR3, содержащий аминокислотную последовательность GGSLSR (SEQ ID NO: 201).
12. PD1/CTLA4-связывающее вещество по любому из пп.1-11, которое содержит экстендер периода полувыведения, который представляет собой ISVD, который связывается с сывороточным альбумином человека и содержит аминокислотную последовательность:
EVQLVESGGG VVQPGNSLRL SCAASGFTFS SFGMSWVRQA PGKGLEWVSS ISGSGSDTLYADSVKGRFTI SRDNAKTTLY LQMNSLRPED TALYYCTIGG SLSRSSQGTL VTVSSA
(SEQ ID NO: 144).
13. PD1/CTLA4-связывающее вещество по любому из пп.1-4, которое содержит С-концевой экстендер, который представляет собой аланин.
14. PD1/CTLA4-связывающее вещество по любому из пп.1-13, которое связывается с CTLA4 и/или PD1.
15. PD1/CTLA4-связывающее вещество, которое перекресно конкурирует с PD1/CTLA4-связывающим веществом по любому из пп.1-14 за связывание с PD1 и CTLA4.
16. Инъекционное устройство или сосуд, который содержит PD1/CTLA4-связывающее вещество по любому из пп.1-15 необязательно совместно с дополнительным терапевтическим средством.
17. Полинуклеотид, кодирующий PD1/CTLA4-связывающее вещество по любому из пп.1-15.
18. Полинуклеотид по п.17, содержащий нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 145, 148, 150 или 152.
19. Вектор, содержащий полинуклеотид по любому из пп.17-18.
20. Клетка-хозяин, содержащая полинуклеотид или вектор по любому из пп. 17-19.
21. Способ получения PD1/CTLA4-связывающего вещества по любому из пп.1-15, включающий введение полинуклеотида, кодирующего PD1/CTLA4-связывающее вещество, в клетку-хозяина и культивирование клетки-хозяина в среде в условиях, благоприятных для экспрессии указанного PD1/CTLA4-связывающего вещества из указанного полинуклеотида и, необязательно, очистку PD1/CTLA4-связывающего вещества от указанной клетки-хозяина и/или указанной среды.
22. PD1/CTLA4-связывающее вещество, полученное способом по п.21.
23. Способ предотвращения связывания PD1 с PD-L1 и/или PD-L2, включающий контактирование указанного PD1 с PD1/CTLA4-связывающим веществом по любому из пп.1-15 и 22, необязательно совместно с дополнительным терапевтическим средством.
24. Способ предотвращения связывания CTLA4 с CD80 и/или CD86, включающий контактирование указанного CTLA4 с PD1/CTLA4-связывающим веществомпо любому из пп.1-15 и 22, необязательно совместно с дополнительным терапевтическим средством.
25. Способ усиления иммунного ответа у субъекта, включающий введение эффективного количества PD1/CTLA4-связывающего вещества по любому из пп.1-15 и 22 субъекту, необязательно совместно с дополнительным терапевтическим средством.
26. Способ лечения или профилактики злокачественной опухоли или инфекционного заболевания у субъекта, включающий введение субъекту эффективного количества PD1/CTLA4-связывающего вещества по любому из пп.1-15 и 22, необязательно совместно с дополнительным терапевтическим средством.
27. Способ по п.26, отличающий тем, что злокачественная опухоль представляет собой метастатическую злокачественную опухоль, твердую опухоль, гематологическую злокачественную опухоль, лейкемию, лимфому, остеосаркому, рабдомиосаркому, нейробластому, злокачественную опухоль почек, лейкемию, переходно-клеточная злокачественную опухоль почек, злокачественную опухоль мочевого пузыря, опухоль Вильма, злокачественную опухоль яичников, злокачественную опухоль поджелудочной железы, злокачественную опухоль молочной железы, злокачественную опухоль простаты, злокачественную опухоль костей, злокачественную опухоль легких, немелкоклеточную злокачественную опухоль легкого, злокачественную опухоль желудка, злокачественную опухоль толстой и прямой кишки, злокачественную опухоль шейки матки, синовиальную саркому, злокачественную опухоль головы и шеи, плоскоклеточную карциному, множественную миелому, почечно-клеточную злокачественную опухоль, ретинобластому, гепатобластому, гепатоцеллюлярную карциному, меланому, рабдоидную опухоль почки, саркому Юинга, хондросаркому, злокачественную опухоль мозга, глиобластому, менингиому, аденому гипофиза, вестибулярную шванному, примитивную нейроэктодермальную опухоль, медуллобластому, астроцитому, анапластическую астроцитому, олигодендроглиому, эпендимому папиллому хориоидного сплетения, полицитемию, тромбоцитемию, идиопатический миелофиброз, саркому мягких тканей, злокачественную опухоль щитовидной железы, злокачественную опухоль эндометрия, карциноидную злокачественную опухоль или злокачественную опухоль печени, злокачественную опухоль молочной железы или злокачественную опухоль желудка.
28. Способ по п.26, отличающийся тем, что инфекционное заболевание представляет собой бактериальную инфекцию, вирусную инфекцию или грибковую инфекцию.
29. Способ по любому из пп.26-28, где субъекту вводят дополнительное терапевтическое средство, или в отношении субъекта осуществляют терапевтическую процедуру, совместно с PD1/CTLA4-связывающим веществом.