СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БОТУЛОТОКСИНА

1. Способ получения ботулотоксина, включающий стадии:
(а) обработки культуры штамма-продуцента ботулотоксина кислотой, чтобы осадить ботулотоксин;
(б) добавления буфера к осажденному ботулотоксину с последующей обработкой ингибитором протеазы и нуклеазой тем самым экстрагируя ботулотоксин;
(в) обработки экстрагированного ботулотоксина кислотой, чтобы осадить ботулотоксин, и растворения осадка в буфере; и
(г) очистки ботулотоксина анионообменной хроматографией.
2. Способ по п. 1, в котором штаммом-продуцентом ботулотоксина является Clostridium botulinum.
3. Способ по п. 1, в котором очищенный ботулотоксин является белком ботулотоксина типа А, имеющим чистоту, по меньшей мере, 98%.
4. Способ по п. 1, в котором стадию осаждения кислотой (а) осуществляют добавлением серной кислоты или соляной кислоты в культуру штамма, так что культура достигает рН 3,0-4,5.
5. Способ по п. 1, в котором ингибитор протеазы на стадии (б) является бензамидин⋅НСl.
6. Способ по п. 1, в котором нуклеаза на стадии (б) является ДНКазой и РНКазой.
7. Способ по п. 1, в котором экстракцию ботулотоксина на стадии (б) осуществляют при рН 4,5-6,5.
8. Способ по п. 1, в котором стадию осаждения кислотой (в) выполняют добавлением серной кислоты или соляной кислоты к экстрагированному ботулотоксину, так что рН экстрагированного ботулотоксина достигает 2,5-4,5.
9. Способ по п. 1, в котором буфер на стадии (в) является натрий-фосфатным буфером.
10. Способ по п. 1, в котором анионообменную хроматографию на стадии (г) проводят при рН 3,5-7,5 и проводимости 3-30 мСм/см.
11. Способ по пп. 1-10, дополнительно включающий после стадии (г), следующие стадии:
(д) обработки полученной анионообменной хроматографией фракции, содержащей ботулотоксин, сульфатом аммония для формирования осадка и растворения осадка в буфере; и
(е) очистки ботулотоксина анионообменной хроматографией.
12. Способ по п. 11, в котором сульфат аммония на стадии (д) добавляют до концентрации 10-50% (вес/объем).
13. Способ по п. 11, в котором буфер на стадии (д) является натрий-фосфатным буфером.
14. Способ по п. 11, в котором анионообменную хроматографию на стадии (д) осуществляют при рН 3,5-7,5 и проводимости 3-30 мСм/см.