ГЕННЫЙ КОНСТРУКТ (ВАРИАНТЫ), ВЕКТОР И РЕКОМБИНАНТНЫЙ ВИРУСНЫЙ ГЕНОМ НА ЕГО ОСНОВЕ, ВИРИОН, ИХ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ, СПОСОБ IN VITRO ЭКСПРЕССИИ ПОЛИНУКЛЕОТИДА В КЛЕТКЕ ПЕЧЕНОЧНОЙ ПРИРОДЫ, ЛЕКАРСТВЕННОЕ СРЕДСТВО, СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ ЗАБОЛЕВАНИЯ ПЕЧЕНИ (ВАРИАНТЫ), ИНДУЦИРУЕМЫЙ ДВУНАПРАВЛЕННЫЙ ОПЕРАТОР-ПРОМОТОР

1. Генный конструкт для индуцируемой гепатоспецифической экспрессии полинуклеотида в ответ на индуцирующий фактор, включающий индуцируемый двунаправленный оператор-промотор, который содержит по меньшей мере один элемент, чувствительный к указанному индуцирующему фактору, фланкированный последовательностью первого гепатоспецифического промотора и последовательностью второго гепатоспецифического промотора, первую нуклеотидную последовательность, которая содержит последовательность, кодирующую трансактиватор, который способен к активированию указанным индуцирующим фактором, и сигнал полиаденилирования, находящийся в S'-положении относительно участка, который кодирует трансактиватор, и вторую нуклеотидную последовательность, которая содержит полинуклеотид, функционально связанный с последовательностью второго гепатоспецифического промотора, и сигнал полиаденилирования, находящийся в 3'-положении относительно представляющего интерес полинуклеотида, при этом последовательности обоих гепатоспецифических промоторов действуют дивергентным образом, а указанная последовательность, которую кодирует трансактиватор, функционально связана с первой последовательностью гепатоспецифического промотора, причем индукция промоторной активности последовательностей указанного первого и второго гепатоспецифических промоторов происходит посредством связывания трансактиватора с участком оператора оператора-промотора в присутствии индуцирующего фактора.
2. Конструкт по п.1, в котором элемент, чувствительный к индуцирующему фактору, содержит по меньшей мере один тетрациклин-чувствительный элемент, а трансактиватор представляет собой обратный тетрациклиновый трансактиватор.
3. Конструкт по п.2, в котором тетрациклин-чувствительный элемент содержит последовательность нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 1.
4. Конструкт по п.2, в котором обратный тетрациклиновый трансактиватор кодируется полинуклеотидом, содержащим последовательность SEQ. ID. NO: 6.
5. Конструкт по п.1, в котором последовательность первого гепатоспецифического промотора и последовательность второго гепатоспецифического промотора идентичны.
6. Конструкт по п.5, в котором последовательность первого гепатоспецифического промотора и последовательность второго гепатоспецифического промотора содержат промотор гена альбумина или его функционально эквивалентный вариант.
7. Конструкт по п.6, в котором промотор гена альбумина содержит последовательность, выбранную из группы последовательностей, включающей SEQ ID NO: 2 и SEQ ID NO: 3.
8. Конструкт по п.7, в котором индуцируемый двунаправленный оператор-промотор содержит SEQ ID NO: 4.
9. Конструкт по п.1, в котором по меньшей мере один из сигналов полиаденилирования представляет собой двунаправленный сигнал полиаденилирования.
10. Конструкт по п.9, в котором двунаправленный сигнал полиаденилирования представляет собой двунаправленный сигнал полиаденилирования из вируса SV40.
11. Конструкт по любому из пп.1-10, в котором полинуклеотид кодирует тяжелую цепь и/или легкую цепь интрерлейкина-12 или ее функционально эквивалентный вариант.
12. Конструкт по п.11, в котором полинуклеотид кодирует одноцепочечный интерлейкин-12.
13. Вектор, включающий генный конструкт по любому из пп.1-12.
14. Рекомбинантный вирусный геном, включающий генный конструкт по любому из пп.1-12.
15. Геном по п.14, который выделен из рекомбинантного аденоассоциированного вируса.
16. Вирион, полученный экспрессией вирусного генома по п.14 или 15 в соответствующей упаковывающей клетке.
17. Способ in vitro экспрессии полинуклеотида в клетке печеночной природы, включающий контактирование данной клетки с генным конструктом по любому из пп.1-12, вектором по п.13, вирусным геномом по п.14 или 15 или вирионом по п.15, в условиях, подходящих для входа указанных конструкта, вектора или вириона в клетку, и контактирование клетки с индуцирующим фактором в течение времени, необходимого для экспрессии полинуклеотида.
18. Фармацевтическая композиция, включающая генный конструкт по любому из пп.1-12, вектор по п.13, вирусный геном по п.14 или 15 или вирион по п.16, и фармацевтически приемлемый носитель.
19. Применение генного конструкта по любому из пп.1-12, вектора по п.13, вирусного генома по п.14 или 15, вириона по п.16 или фармацевтической композиции по п.18 в качестве лекарственного средства.
20. Применение генного конструкта по любому из пп.1-12, вектора по п.13, вирусного генома по п.14 или 15, вириона по п.16 или фармацевтической композиции по п.18 для лечения заболевания печени.
21. Применение генного конструкта по любому из пп.1-12, вектора по п.13, вирусного генома по п.14 или 15, вириона по п.16 или фармацевтической композиции по п.18, в которых полинуклеотид кодирует интерлейкин-12 или его функционально эквивалентный вариант для лечения рака печени.
22. Индуцируемый двунаправленный оператор-промотор для индуцируемой гепатоспецифической экспрессии двух полинуклеотидов посредством индуцирующего фактора, включающий по меньшей мере один элемент, чувствительный к данному индуцирующему фактору, последовательность первого гепатоспецифического промотора и последовательность второго гепатоспецифического промотора, причем последовательности первого и второго гепатоспецифического промотора действуют дивергентным образом в отношении элемента, чувствительного к индуцирующему фактору и промоторная активность последовательностей первого и второго гепатоспецифических промоторов повышается в присутствии указанного индуцирующего фактора и в присутствии трансактиватора, который связывается с чувствительным элементом.
23. Оператор по п.22, в котором элемент, чувствительный к индуцирующему фактору, содержит по меньшей мере один тетрациклин-чувствительный элемент.
24. Оператор по п.23, в котором тетрациклин-чувствительный элемент содержит последовательность нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 1.
25. Оператор по любому из пп.22-24, в котором последовательность первого гепатоспецифического промотора и последовательность второго гепатоспецифического промотора идентичны.
26. Оператор по п.25, в котором последовательность первого гепатоспецифического промотора и последовательность второго гепатоспецифического промотора содержат промотор гена альбумина или его функционально эквивалентный вариант.
27. Оператор по п.26, в котором промотор гена альбумина содержит последовательность, выбранную из группы последовательностей, включающей SEQ ID NO: 2 и SEQ ID NO: 3.
28. Оператор по п.27, который содержит нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 4.
29. Генный конструкт для индуцируемой гепатоспецифической экспрессии полинуклеотида с помощью индуцирующего фактора, включающий индуцируемый двунаправленный оператор-промотор, который содержит по меньшей мере один элемент, чувствительный к указанному индуцирующему фактору, последовательность первого гепатоспецифического промотора и последовательность второго гепатоспецифического промотора, нуклеотидную последовательность, кодирующую трансактиватор, который способен к активированию указанным индуцирующим фактором, функционально связанным с последовательностью первого гепатоспецифического промотора и сигналом полиаденилирования, находящемся в З'-положении относительно участка, кодирующего трансактиватор, причем последовательности первого и второго гепатоспецифического промотора действуют дивергентным образом в отношении элемента, чувствительного к индуцирующему фактору, а промоторная активность последовательностей первого и второго гепатоспецифических промоторов возрастает в присутствии указанного индуцирующего фактора и в присутствии трансактиватора, который связывается с чувствительным элементом в индуцируемом двунаправленном операторе-промоторе.
30. Конструкт по п.29, в котором элемент, чувствительный к индуцирующему фактору содержит по меньшей мере один тетрациклин-чувствительный элемент, а трансактиватор представляет собой обратный тетрациклиновый трансактиватор.
31. Конструкт по п.30, в котором тетрациклин-чувствительный элемент содержит последовательность нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 1.
32. Конструкт по п.30, в котором обратный тетрациклиновый трансактиватор кодируется полинуклеотидом, содержащим последовательность SEQ ID NO: 2.
33. Конструкт по п.29, в котором последовательность первого гепатоспецифического промотора и последовательность второго гепатоспецифического промотора идентичны.
34. Конструкт по п.33, в котором последовательность первого гепатоспецифического промотора и последовательность второго гепатоспецифического промотора содержат промотор гена альбумина или его функционально эквивалентный вариант.
35. Конструкт по п.34, в котором промотор гена альбумина содержит последовательность, выбранную из группы последовательностей, включающей SEQ ID NO: 2 и SEQ ID NO: 3.
36. Конструкт по п.35, в котором нуклеотидная последовательность индуцируемого двунаправленного оператора-промотора содержит SEQ ID NO: 4.
37. Конструкт по любому из пп.29-36, в котором сигнал полиаденилирования представляет собой двунаправленный сигнал полиаденилирования.
38. Конструкт по п.37, в котором двунаправленный сигнал полиаденилирования представляет собой двунаправленный сигнал полиаденилирования из вируса SV40.