ВЕКТОРЫ НА ОСНОВЕ АДЕНОАССОЦИИРОВАННОГО ВИРУСА ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ МУКОЛИПИДОЗА ТИПА II

1. Вектор на основе рекомбинантного аденоассоциированного вируса (rAAV), содержащий нуклеиновую кислоту, кодирующую
N-ацетилглюкозамин-1-фосфаттрансферазу (GNPTAB), и по меньшей мере один инвертированный концевой повтор (ITR) AAV, и где необязательно:
(a) GNPTAB содержит альфа- и бета-субъединицы;
(b) GNPTAB функционально связан с промотором;
(c) GNPTAB представляет собой GNPTAB человека;
(d) GNPTAB содержит аминокислотную последовательность, которая является по меньшей мере на приблизительно 80%, по меньшей мере на приблизительно 85%, по меньшей мере на приблизительно 90% или по меньшей мере на приблизительно 95% идентичной аминокислотной последовательности под SEQ ID NO:1;
(e) GNPTAB содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO:1; и/или
(f) концевой повтор AAV представляет собой ITR серотипа AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAVrh8, AAVrh8R, AAV9, AAV10, AAVrh10, AAV11, AAV12, AAV2R471A, AAV DJ, AAV козы, AAV крупного рогатого скота или AAV мыши.
2. Вектор на основе rAAV по п. 1, где вектор содержит:
(a) составной промотор на основе энхансера CMV/промотора бета-актина курицы (CBA), где необязательно:
(i) промотор CBA представляет собой модифицированный промотор CBA, необязательно усеченный промотор CBA, и/или
(ii) энхансер CMV представляет собой укороченный энхансер CMV;
(b) интрон, необязательно интрон MVM;
(c) последовательность полиаденилирования, необязательно последовательность полиаденилирования бычьего гормона роста; и/или
(d) два ITR.
3. Частица rAAV, содержащая вектор на основе rAAV по п. 1 или 2, где частица rAAV содержит капсид, при этом частица rAAV необязательно содержит:
(a) капсид серотипа AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAVrh8, AAVrh8R, AAV9, AAV10, AAVrh10, AAV11, AAV12, AAV2R471A, AAV2/2-7m8, AAV DJ, AAV2 N587A, AAV2 E548A, AAV2 N708A, AAV V708K, AAV козы, химерный AAV1/AAV2, AAV крупного рогатого скота, AAV мыши или rAAV2/HBoV1; и/или
(b) (1) по меньшей мере один ITR и капсид получены из одного и того же серотипа AAV, или
(2) по меньшей мере один ITR получен из серотипа AAV, отличного от такового для капсида вирусной частицы rAAV, при этом частица rAAV необязательно содержит капсид AAV8 и ITR AAV2.
4. Частица rAAV по п. 3, где частица rAAV получена с помощью трансфекции клетки-хозяина нуклеиновой кислотой, кодирующей вектор на основе rAAV, и нуклеиновой кислотой, кодирующей функциональные элементы rep и cap AAV, и обеспечения нуклеиновой кислоты, кодирующей функциональные элементы помощника AAV, где необязательно функциональные элементы помощника AAV получены путем трансфекции клетки-хозяина нуклеиновой кислотой, кодирующей функциональные элементы помощника AAV, или функциональные элементы помощника AAV получены путем инфицирования клетки-хозяина вирусом-помощником AAV, который обеспечивает функциональные элементы помощника AAV, при этом вирус-помощник AAV необязательно представляет собой аденовирус, вирус простого герпеса или бакуловирус.
5. Частица rAAV по п. 3, где частица rAAV получена с помощью клетки-продуцента AAV, содержащей нуклеиновую кислоту, кодирующую вектор на основе rAAV, и нуклеиновую кислоту, кодирующую функциональные элементы rep и cap AAV, и обеспечения нуклеиновой кислоты, кодирующей функциональные элементы помощника AAV, где необязательно клетка-продуцент AAV содержит нуклеиновую кислоту, кодирующую функциональные элементы помощника AAV, или функциональные элементы помощника AAV получены путем инфицирования клеток-продуцентов AAV вирусом-помощником AAV, который обеспечивает функциональные элементы помощника AAV, при этом вирус-помощник AAV необязательно представляет собой аденовирус, вирус простого герпеса или бакуловирус.
6. Фармацевтическая композиция, содержащая частицу rAAV по любому из пп. 3-5.
7. Способ лечения муколипидоза типа II (ML II) или муколипидоза типа III (ML III) у млекопитающего, включающий введение млекопитающему эффективного количества частицы rAAV по любому из пп. 3-5 или фармацевтической композиции по п. 6, где необязательно лечение уменьшает интенсивность или замедляет прогрессирование одного или нескольких симптомов ML II или ML III, где один или несколько симптомов ML II или ML III представляют собой дефекты скелета, когнитивные нарушения, задержки в развитии общей и мелкой моторики, тугоухость, отсутствие мышечного тонуса, выступающий живот, пупочные грыжи, прогрессирующее утолщение слизистой оболочки дыхательных путей, частые респираторные инфекции, утолщение и недостаточность митрального клапана, запор или диарею.
8. Способ сохранения, предупреждения снижения или увеличения размера тела, содержания минеральных веществ в костной ткани или минеральной плотности костной ткани у млекопитающего с муколипидозом типа II (ML II) или муколипидозом типа III (ML III), включающий введение млекопитающему эффективного количества частиц rAAV, где частицы rAAV содержат вектор на основе rAAV, где вектор на основе rAAV содержит нуклеиновую кислоту, кодирующую N-ацетилглюкозамин-1-фосфаттрансферазу (GNPTAB), и по меньшей мере один ITR AAV, где экспрессия GNPTAB приводит к сохранению, предупреждению снижения или увеличению веса тела; сохранению или увеличению роста; и/или сохранению, предупреждению снижения или увеличению содержания минеральных веществ в костной ткани или минеральной плотности костной ткани.
9. Способ уменьшения интенсивности или замедления прогрессирования одного или нескольких симптомов ML II или ML III у млекопитающего, включающий введение млекопитающему эффективного количества частиц rAAV, где частицы rAAV содержат вектор на основе rAAV, где вектор на основе rAAV содержит нуклеиновую кислоту, кодирующую GNPTAB, и по меньшей мере один ITR AAV; где один или несколько симптомов ML II или ML III представляют собой дефекты скелета, когнитивные нарушения, задержки в развитии общей и мелкой моторики, тугоухость, отсутствие мышечного тонуса, выступающий живот, пупочные грыжи, прогрессирующее утолщение слизистой оболочки дыхательных путей, частые респираторные инфекции, утолщение и недостаточность митрального клапана, запор или диарею.
10. Способ по любому из пп. 7-9, где:
(a) GNPTAB функционально связан с промотором;
(b) GNPTAB представляет собой GNPTAB человека;
(c) GNPTAB содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на приблизительно 80% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID NO:1;
(d) GNPTAB содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO:1; и/или
(e) концевой повтор AAV представляет собой ITR серотипа AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAVrh8, AAVrh8R, AAV9, AAV10, AAVrh10, AAV11, AAV12, AAV2R471A, AAV DJ, AAV козы, AAV крупного рогатого скота или AAV мыши.
11. Способ по п. 10, где вектор содержит:
(a) составной промотор на основе энхансера CMV/промотора бета-актина курицы (CBA), где необязательно:
(i) промотор CBA представляет собой модифицированный промотор CBA, необязательно усеченный промотор CBA, и/или
(ii) энхансер CMV представляет собой укороченный энхансер CMV;
(b) интрон, необязательно интрон MVM;
(c) последовательность полиаденилирования, необязательно последовательность полиаденилирования бычьего гормона роста; и/или
(d) два ITR.
12. Способ по любому из пп. 7-11, где частица AAV содержит капсид, при этом частица rAAV необязательно содержит:
(a) капсид серотипа AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAVrh8, AAVrh8R, AAV9, AAV10, AAVrh10, AAV11, AAV12, AAV2R471A, AAV2/2-7m8, AAV DJ, AAV2 N587A, AAV2 E548A, AAV2 N708A, AAV V708K, AAV козы, химерный AAV1/AAV2, AAV крупного рогатого скота, AAV мыши или rAAV2/HBoV1; и/или
(b) (1) по меньшей мере один ITR и капсид получены из одного и того же серотипа AAV, или
(2) по меньшей мере один ITR получен из серотипа AAV, отличного от такового для капсида вирусной частицы rAAV, при этом частица rAAV необязательно содержит капсид AAV8 и ITR AAV2.
13. Способ по любому из пп. 7-12, где частица rAAV получена с помощью трансфекции клетки-хозяина нуклеиновой кислотой, кодирующей вектор на основе rAAV, и нуклеиновой кислотой, кодирующей функциональные элементы rep и cap AAV, и обеспечения нуклеиновой кислоты, кодирующей функциональные элементы помощника AAV, где необязательно функциональные элементы помощника AAV получены путем трансфекции клетки-хозяина нуклеиновой кислотой, кодирующей функциональные элементы помощника AAV, или функциональные элементы помощника AAV получены путем инфицирования клетки-хозяина вирусом-помощником AAV, который обеспечивает функциональные элементы помощника AAV, при этом вирус-помощник AAV необязательно представляет собой аденовирус, вирус простого герпеса или бакуловирус.
14. Способ по любому из пп. 7-12, где частица rAAV получена с помощью клетки-продуцента AAV, содержащей нуклеиновую кислоту, кодирующую вектор на основе rAAV, и нуклеиновую кислоту, кодирующую функциональные элементы rep и cap AAV, и обеспечения нуклеиновой кислоты, кодирующей функциональные элементы помощника AAV, где необязательно клетка-продуцент AAV содержит нуклеиновую кислоту, кодирующую функциональные элементы помощника AAV, или функциональные элементы помощника AAV получены путем инфицирования клеток-продуцентов AAV вирусом-помощником AAV, который обеспечивает функциональные элементы помощника AAV, при этом вирус-помощник AAV необязательно представляет собой аденовирус, вирус простого герпеса или бакуловирус.
15. Способ по любому из пп. 7-14, где млекопитающее представляет собой человека, необязательно педиатрического субъекта или взрослого субъекта молодого возраста.
16. Способ по любому из пп. 7-15, где:
(a) частицу rAAV вводят внутривенно, внутрибрюшинно, внутриартериально, внутримышечно, подкожно или внутрипеченочно;
(b) частицу rAAV вводят в более чем одно местоположение;
(c) введение повторяют; и/или
(d) вирусные частицы rAAV находятся в фармацевтической композиции.
17. Применение частицы rAAV по любому из пп. 3-5 или фармацевтической композиции по п. 6 при изготовлении лекарственного препарата для лечения ML II или ML III у млекопитающего, необязательно человека, необязательно с помощью способа по любому из пп. 7-16.
18. Применение частицы rAAV по любому из пп. 3-5 или фармацевтической композиции по п. 6 для лечения ML II или ML III у млекопитающего, необязательно человека, необязательно с помощью способа по любому из пп. 7-16.
19. Применение частицы rAAV по любому из пп. 3-5 или фармацевтической композиции по п. 6 при изготовлении лекарственного препарата для уменьшения интенсивности одного или нескольких симптомов ML II или ML III у млекопитающего, необязательно человека, или замедления прогрессирования одного или нескольких симптомов ML II или ML III у млекопитающего, необязательно человека, где один или несколько симптомов ML II или ML III необязательно представляют собой дефекты скелета, когнитивные нарушения, задержки в развитии общей и мелкой моторики, тугоухость, отсутствие мышечного тонуса, выступающий живот, пупочные грыжи, прогрессирующее утолщение слизистой оболочки дыхательных путей, частые респираторные инфекции, утолщение и недостаточность митрального клапана, запор или диарею.
20. Применение частицы rAAV по любому из пп. 3-5 или фармацевтической композиции по п. 6 для уменьшения интенсивности одного или нескольких симптомов ML II или ML III у млекопитающего, необязательно человека, или замедления прогрессирования одного или нескольких симптомов ML II или ML III у млекопитающего, необязательно человека, где один или несколько симптомов ML II или ML III необязательно представляют собой дефекты скелета, когнитивные нарушения, задержки в развитии общей и мелкой моторики, тугоухость, отсутствие мышечного тонуса, выступающий живот, пупочные грыжи, прогрессирующее утолщение слизистой оболочки дыхательных путей, частые респираторные инфекции, утолщение и недостаточность митрального клапана, запор или диарею.
21. Набор, содержащий вектор на основе rAAV по п. 1 или 2, частицу rAAV по любому из пп. 3-5 или фармацевтическую композицию по п. 6, необязательно дополнительно содержащий один или несколько буферов или фармацевтически приемлемых вспомогательных веществ и/или инструкции по применению при лечении ML II и/или ML III.
22. Набор для лечения ML II или ML III в соответствии со способом по любому из пп. 7-16, где набор содержит вектор на основе rAAV по п. 1 или 2, частицу rAAV по любому из пп. 3-5 или фармацевтическую композицию по п. 6.
23. Способ получения животной модели муколипидоза II (ML II), включающий введение делеции между экзонами 12 и 20 по меньшей мере в одном аллеле гена GNPTAB у животного, где необязательно по меньшей мере один аллель гена GNPTAB содержит делецию, охватывающую экзон 12 и экзон 20, и/или часть гена GNPTAB заменена геном, кодирующим репортер и/или селектируемый маркер, при этом селектируемый маркер необязательно придает резистентность к неомицину, дополнительно, где в отношении животного необязательно:
(a) осуществляют разведение с получением такового, гомозиготного по делеции в гене GNPTAB;
(b) осуществляют разведение с получением такового, гетерозиготного по делеции в гене GNPTAB; и/или
(c) оно является млекопитающим, необязательно грызуном, необязательно мышью, при этом дополнительно мышь необязательно характеризуется генетическим фоном, полученным от 129/Sv и/или C57Bl/6.
24. Животная модель муколипидоза II (ML II), при этом необязательно животная модель получена с помощью способа по п. 23, где по меньшей мере один аллель гена N-ацетилглюкозамин-1-фосфаттрансферазы (GNPTAB) содержит делецию, расположенную между экзоном 12 и экзоном 20, необязательно по меньшей мере один аллель гена GNPTAB содержит делецию, охватывающую экзон 12 и экзон 20, и/или часть гена GNPTAB заменена геном, кодирующим репортер и/или селектируемый маркер, при этом селектируемый маркер необязательно придает резистентность к неомицину, дополнительно, где животное необязательно является:
(a) гомозиготным или гетерозиготным по делеции в гене GNPTAB; и/или
(b) млекопитающим, необязательно грызуном, необязательно мышью, при этом дополнительно мышь необязательно характеризуется генетическим фоном, полученным от 129/Sv и/или C57Bl/6.
25. Способ оценки средства для лечения муколипидоза II (ML II), включающий введение средства, необязательно небольшой молекулы, полипептида, антитела, нуклеиновой кислоты или рекомбинантной вирусной частицы, животной модели по любому из пп. 96-106, где уменьшение интенсивности одного или нескольких симптомов ML II указывает на то, что средство может обеспечивать эффективное лечение ML II, где симптом ML II необязательно представляет собой снижение веса тела, снижение плотности костной ткани, снижение содержания минеральных веществ в костной ткани, дефекты скелета, когнитивные нарушения, задержки в развитии общей и мелкой моторики, тугоухость, отсутствие мышечного тонуса, выступающий живот, пупочные грыжи, прогрессирующее утолщение слизистой оболочки дыхательных путей, частые респираторные инфекции, утолщение и недостаточность митрального клапана, запор и/или диарею.