КУЛЬТУРАЛЬНАЯ СРЕДА СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК

1. Культуральная среда для увеличения в количестве или дифференцировки популяции взрослых стволовых клеток, где указанная культуральная среда содержит:
i. любой из R-спондина 1-4 и/или миметика R-спондина; и
ii. один или несколько ингибиторов TGF-бета, где ингибитор представляет собой ингибитор TGF-бета, если он может ингибировать передачу сигнала TGF-бета в клеточном анализе, в котором клетки стабильно трансфицированы репортерной конструкцией, содержащей промотор PAI-1 человека.
2. Культуральная среда по п. 1, где один или несколько ингибиторов связываются и снижают активность одной или нескольких серин/треониновых протеинкиназ, выбранных из группы, состоящей из ALK5, ALK4 и ALK7.
3. Культуральная среда по п. 1 или 2, где один или несколько ингибиторов, которые прямо или непрямо отрицательно регулируют передачу сигнала TGF-бета, выбраны из группы, состоящей из A83-01, SB-431542, SB-505124, SB-525334, SD-208, LY-36494 и SJN-2511.
4. Культуральная среда по п. 1 или 2, где ингибитор добавлен в концентрации от 1 нМ до 100 мкМ, от 10 нМ до 100 мкМ, от 100 нМ до 10 мкМ или приблизительно 1 мкМ, например, где общая концентрация одного или нескольких ингибиторов составляет от 10 нМ до 100 мкМ, от 100 нМ до 10 мкМ или приблизительно 1 мкМ.
5. Культуральная среда по п. 1 или 2, где культуральная среда содержит один или несколько дополнительных компонентов, выбранных из: ингибитора BMP, агониста Wnt, лиганда рецепторной тирозинкиназы, никотинамида, ингибитора p38, ингибитора Rock, гастрина, активатора каскада передачи сигнала простагландинов и тестостерона.
TM
6. Композиция, содержащая культуральную среду по любому из пп. 1-5 и внеклеточный матрикс или 3D-матрикс, который имитирует внеклеточный матрикс путем его взаимодействия с белками клеточной мембраны, такими как интегрины, например, содержащий ламинин внеклеточный матрикс, такой как Matrigel (BD Biosciences).
7. Герметично закрытая емкость, содержащая культуральную среду или композицию по любому из предшествующих пунктов.
8. Применение культуральной среды по любому из пп. 1-5 для увеличения в количестве или дифференцировки стволовой клетки, популяции стволовых клеток, фрагмента ткани или органоида.
9. Способ увеличения в количестве единичной стволовой клетки, популяции стволовых клеток или фрагмента ткани, предпочтительно для получения органоида, где способ включает культивирование единичной стволовой клетки или популяции стволовых клеток в культуральной среде по любому из пп. 1-5.
10. Способ по п. 9, где способ включает:
предоставление стволовой клетки, популяции стволовых клеток или выделенного фрагмента ткани;
предоставление культуральной среды по любому из пп. 1-5;
контактирование стволовых клеток с культуральной средой и
культивирование клеток в подходящих условиях.
TM
11. Способ по п. 9, где способ включает приведение стволовой клетки, популяции стволовых клеток или выделенного фрагмента ткани и культуральной среды в контакт с внеклеточным матриксом или 3D-матриксом, который имитирует внеклеточный матрикс путем его взаимодействия с белками клеточной мембраны, такими как интегрины, например, содержащим ламинин внеклеточным матриксом, таким как Matrigel (BD Biosciences).
12. Способ по любому из пп. 9-11, где способ включает:
культивирование стволовой клетки, популяции стволовых клеток или фрагментов ткани в первой среде для увеличения в количестве;
продолжение культивирования стволовой клетки, популяции стволовых клеток или фрагментов ткани и восполнение среды средой для дифференцировки, где среда для дифференцировки не содержит одного или нескольких, предпочтительно всех, из факторов, выбранных из: ингибитора TGF-бета, ингибитора p38, никотинамида и Wnt.
13. Способ по любому из пп. 9-11, где ингибитор Rock добавляют в культуральную среду в течение первых 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 суток, необязательно, раз в двое суток.
14. Органоид или популяция клеток, которые могут быть получены способом по любому из пп. 9-13.
15. Органоид или популяция клеток по п. 14, где органоид или популяцию клеток культивировали в течение по меньшей мере 3 месяцев, например, по меньшей мере 4 месяцев, по меньшей мере 5 месяцев, по меньшей мере 6 месяцев, по меньшей мере 7 месяцев, по меньшей мере 9 месяцев, или по меньшей мере 12 месяцев, или более.
16. Органоид или популяция клеток по любому из пп. 14 или 15, где органоид или популяция клеток увеличиваются в количестве со скоростью по меньшей мере в 3 раза, по меньшей мере в 4 раза, по меньшей мере в 5 раз, по меньшей мере в 6 раз, по меньшей мере в 7 раз, по меньшей мере в 8 раз, по меньшей мере в 9 раз или по меньшей мере в 10 раз в неделю.
17. Органоид или популяция клеток по любому из пп. 14-16, которые замораживают и хранят при температуре ниже -5°C, ниже -10°C, ниже -20°C, ниже -40°C, ниже -60°C, ниже -80°C, ниже -100°C или ниже -150°C, например, при приблизительно -180°C.
18. Композиция, содержащая:
i) один или несколько органоидов или популяцию клеток по любому из пп. 14-17; и
ii) культуральную среду по любому из пп. 1-5 и/или внеклеточный матрикс.
19. Применение органоида по любому из пп. 14-17, или популяции клеток по любому из пп. 14-17, или композиции по п. 6 или 18 в скрининге лекарственных средств, подтверждении мишени, выявлении мишени, токсикологии, токсикологических скринингах, персонализированной медицине, регенеративной медицине или в моделях клеток/органов ex vivo, например, в качестве модели заболевания.
20. Применение по п. 19, где регенеративная медицина или персонализированная медицина включают трансплантацию указанного органоида, популяции клеток или композиции млекопитающему, предпочтительно человеку.
21. Способ скрининга терапевтического или профилактического лекарственного средства или косметического средства, где способ включает:
культивирование органоида или популяции клеток по любому из пп. 14-17, например, с культуральной средой по пп. 1-5;
воздействие на указанный органоид или популяцию клеток одной или библиотеки молекул-кандидатов;
оценку указанного органоида или популяции клеток в отношении каких-либо эффектов, например, любого изменения в клетке, такого как снижение или утрата пролиферации, морфологическое изменение и/или гибель клеток; и
идентификацию молекулы-кандидата, которая вызывает указанные эффекты, в качестве потенциального лекарственного средства или косметического средства.