КОМПОЗИЦИИ И СООТВЕТСТВУЮЩИЕ СПОСОБЫ ДЛЯ СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА
COMPOSITIONS AND CORRESPONDING METHODS FOR AGRICULTURE

Настоящая заявка испрашивает приоритет по предварительной заявке на патент США № 62/450045, поданной 24 января 2017 г., и предварительной заявке на патент США № 62/583763, поданной 9 ноября 2017 г., содержание которых включено в данный документ посредством ссылки в полном объеме.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
Членистоногие насекомые повсеместно распространены в среде, окружающей человека, и было использовано множество средств в попытке контроля заражения этими вредителями. Потребность в стратегиях контроля вредителей возрастает. Таким образом, в данной области техники имеется необходимость в новых способах и композициях для контроля насекомых, являющихся сельскохозяйственными вредителями.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
В данном документе раскрыты композиции и способы для модулирования приспособленности насекомых для сельского хозяйства. Композиция содержит средство, которое изменяет уровень, активность или метаболизм одного или нескольких микроорганизмов, обитающих в организме хозяина, при этом изменение приводит к модулированию приспособленности хозяина.
В одном аспекте в данном документе предусмотрен способ снижения приспособленности насекомого, являющегося сельскохозяйственным вредителем, при этом способ предусматривает доставку противомикробного пептида, характеризующегося по меньшей мере 90% идентичностью последовательности (например, по меньшей мере 90%, 92%, 94%, 96%, 98% или 100% идентичностью последовательности) с одним или несколькими из следующих: цекропина (SEQ ID NO: 82), мелиттина, копсина, дрозомицина (SEQ ID NO: 93), дермсидина (SEQ ID NO: 81), андропина (SEQ ID NO: 83), морицина (SEQ ID NO: 84), цератотоксина (SEQ ID NO: 85), абецина (SEQ ID NO: 86), апидецина (SEQ ID NO: 87), профенина (SEQ ID NO: 88), индолицидина (SEQ ID NO: 89), протегрина (SEQ ID NO: 90), тахиплезина (SEQ ID NO: 91) или дефензина (SEQ ID NO: 92), насекомому, являющемуся сельскохозяйственным вредителем.
В некоторых вариантах осуществления доставка может включать доставку противомикробного пептида в по меньшей мере одну среду обитания, в которой насекомое, являющееся сельскохозяйственным вредителем, растет, живет, размножается, питается или осуществляет заражение.
В любом из вышеуказанных вариантов осуществления доставка может включать распыление противомикробного пептида на сельскохозяйственную культуру.
В любом из вышеуказанных вариантов осуществления противомикробный пептид может быть доставлен в виде композиции, съедобной для насекомого, для поглощения насекомым, являющимся сельскохозяйственным вредителем.
В любом из вышеуказанных вариантов осуществления противомикробный пептид может быть составлен с приемлемым с точки зрения сельского хозяйства носителем в виде жидкой, твердой, аэрозольной, пастообразной, гелеобразной или газообразной композиции.
В любом из вышеуказанных вариантов осуществления насекомое, являющееся сельскохозяйственным вредителем, может представлять собой тлю.
В другом аспекте в данном документе предусмотрена композиция, содержащая противомикробный пептид, характеризующийся по меньшей мере 90% идентичностью последовательности (например, по меньшей мере 90%, 92%, 94%, 96%, 98% или 100% идентичностью последовательности) с одним или несколькими из следующих: цекропина (SEQ ID NO: 82), мелиттина, копсина, дрозомицина (SEQ ID NO: 93), дермсидина (SEQ ID NO: 81), андропина (SEQ ID NO: 83), морицина (SEQ ID NO: 84), цератотоксина (SEQ ID NO: 85), абецина (SEQ ID NO: 86), апидецина (SEQ ID NO: 87), профенина (SEQ ID NO: 88), индолицидина (SEQ ID NO: 89), протегрина (SEQ ID NO: 90), тахиплезина (SEQ ID NO: 91) или дефензина (SEQ ID NO: 92), составленная для целенаправленного воздействия на микроорганизм в организме насекомого.
В некоторых вариантах осуществления второго аспекта противомикробный пептид может находиться в композиции в концентрации от приблизительно 0,1 нг/г до приблизительно 100 мг/г (от приблизительно 0,1 нг/г до приблизительно 1 нг/г, от приблизительно 1 нг/г до приблизительно 10 нг/г, от приблизительно 10 нг/г до приблизительно 100 нг/г, от приблизительно 100 нг/г до приблизительно 1000 нг/г, от приблизительно 1 мг/г до приблизительно 10 мг/г, от приблизительно 10 мг/г до приблизительно 100 мг/г) или от приблизительно 0,1 нг/мл до приблизительно 100 мг/мл (от приблизительно 0,1 нг/мл до приблизительно 1 нг/мл, от приблизительно 1 нг/мл до приблизительно 10 нг/мл, от приблизительно 10 нг/мл до приблизительно 100 нг/мл, от приблизительно 100 нг/мл до приблизительно 1000 нг/мл, от приблизительно 1 мг/мл до приблизительно 10 мг/мл, от приблизительно 10 мл/мл до приблизительно 100 мг/мл).
В некоторых вариантах осуществления второго аспекта противомикробный пептид может дополнительно содержать нацеливающий домен.
В некоторых вариантах осуществления второго аспекта противомикробный пептид может дополнительно содержать пептид, проникающий в клетку.
В другом аспекте композиция содержит средство, которое изменяет уровень, активность или метаболизм одного или нескольких микроорганизмов, обитающих в организме насекомого–хозяина, при этом изменение приводит к снижению приспособленности насекомого–хозяина.
Candidatus spp, Buchenera spp, Blattabacterium spp, Baumania spp, Wigglesworthia spp, Wolbachia spp, Rickettsia spp, Orientia spp, Sodalis spp, Burkholderia spp, Cupriavidus spp, Frankia spp, Snirhizobium spp, Streptococcus spp, Wolinella spp, Xylella spp, Erwinia spp, Agrobacterium spp, Bacillus spp, Paenibacillus spp, Streptomyces spp, Micrococcus spp, Corynebacterium spp, Acetobacter spp, Cyanobacteria spp, Salmonella spp, Rhodococcus spp, Pseudomonas spp, Lactobacillus spp, Enterococcus spp, Alcaligenes spp, Klebsiella spp, Paenibacillus spp, Arthrobacter spp, Corynebacterium spp, Brevibacterium spp, Thermus spp, Pseudomonas spp, Clostridium spp
Escherichia spp.
Candida, Metschnikowia, Debaromyces, Starmerella, Pichia, Cryptococcus, Pseudozyma, Symbiotaphrina bucneri, Symbiotaphrina kochii, Scheffersomyces shehatae, Scheffersomyces stipites, Cryptococcus, Trichosporon, Amylostereum areolatum, Epichloe spp, Pichia pinus, Hansenula capsulate, Daldinia decipien, Ceratocytis spp, Ophiostoma spp
Attamyces bromatificus.
Buchnera
Buchnera aphidicola
.
В некоторых вариантах осуществления любой из вышеуказанных композиций один или несколько микроорганизмов могут представлять собой бактерию или гриб, обитающие в организме хозяина. В некоторых вариантах осуществления бактерия, обитающая в организме хозяина, представляет собой по меньшей мере одну бактерию, выбранную из группы, состоящей из иВ некоторых вариантах осуществления гриб, обитающий в организме хозяина, представляет собой по меньшей мере один гриб, выбранный из группы, состоящей из и В определенных вариантах осуществления бактерия представляет собой spp. (например, , эндосимбионта тлей)
В любой из вышеуказанных композиций средство, которое далее в данном документе также может называться модулирующим средством, может изменять рост, деление, жизнеспособность, метаболизм и/или продолжительность жизни микроорганизма, обитающего в организме хозяина. В любом из вышеуказанных вариантов осуществления модулирующее средство может снижать жизнеспособность одного или нескольких микроорганизмов, обитающих в организме хозяина. В некоторых вариантах осуществления модулирующее средство повышает темпы роста или жизнеспособность одного или нескольких микроорганизмов, обитающих в организме хозяина.
В любом из вышеуказанных вариантов осуществления модулирующее средство представляет собой фаг, полипептид, малую молекулу, антибиотик, бактерию или любую их комбинацию.
Myoviridae, Siphoviridae, Podoviridae, Lipothrixviridae, Rudiviridae, Ampullaviridae, Bicaudaviridae, Clavaviridae, Corticoviridae, Cystoviridae, Fuselloviridae, Gluboloviridae, Guttaviridae, Inoviridae, Leviviridae, Microviridae, Plasmaviridae
Tectiviridae.
В некоторых вариантах осуществления фаг связывается с белком клеточной поверхности в бактерии, обитающей в организме хозяина. В некоторых вариантах осуществления фаг является вирулентным по отношению к бактерии, обитающей в организме хозяина. В некоторых вариантах осуществления фаг представляет собой по меньшей мере один фаг, выбранный из группы, состоящей из и
В некоторых вариантах осуществления полипептид представляет собой по меньшей мере одно из бактериоцина, бактериоцина R–типа, C–богатого пептида клубеньков, противомикробного пептида, лизина или регуляторного пептида бактериоцитов.
В некоторых вариантах осуществления малая молекула представляет собой метаболит.
В некоторых вариантах осуществления антибиотик представляет собой антибиотик широкого спектра действия. В альтернативных вариантах осуществления антибиотик представляет собой антибиотик узкого спектра действия (например, рифампицин).
Bartonella apis, Parasaccharibacter apium, Frischella perrara, Snodgrassella alvi, Gilliamela apicola, Bifidobacterium spp
Lactobacillus spp.
Candidatus spp, Buchenera spp, Blattabacterium spp, Baumania spp, Wigglesworthia spp, Wolbachia spp, Rickettsia spp, Orientia spp, Sodalis spp, Burkholderia spp, Cupriavidus spp, Frankia spp, Snirhizobium spp, Streptococcus spp, Wolinella spp, Xylella spp, Erwinia spp, Agrobacterium spp, Bacillus spp, Paenibacillus spp, Streptomyces spp, Micrococcus spp, Corynebacterium spp, Acetobacter spp, Cyanobacteria spp, Salmonella spp, Rhodococcus spp, Pseudomonas spp, Lactobacillus spp, Enterococcus spp, Alcaligenes spp, Klebsiella spp, Paenibacillus spp, Arthrobacter spp, Corynebacterium spp, Brevibacterium spp, Thermus spp, Pseudomonas spp, Clostridium spp
Escherichia spp.
В некоторых вариантах осуществления модулирующее средство представляет собой встречающуюся в природе бактерию. В некоторых вариантах осуществления бактерия представляет собой по меньшей мере одну бактерию, выбранную из группы, состоящей из иВ некоторых вариантах осуществления бактерия представляет собой по меньшей мере одну бактерию, выбранную из группы, состоящей из и
В любой из вышеуказанных композиций приспособленность хозяина может быть измерена по выживаемости, размножению или метаболизму хозяина. В любом из вышеуказанных вариантов осуществления модулирующее средство может модулировать приспособленность хозяина посредством повышения восприимчивости хозяина к пестицидам (например, восприимчивости к пестициду, приведенному в таблице 12). В некоторых вариантах осуществления модулирующее средство модулирует приспособленность хозяина посредством повышения восприимчивости хозяина к пестицидам. В некоторых вариантах осуществления восприимчивость к пестицидам представляет собой восприимчивость к бактерицидам или фунгицидам. В некоторых вариантах осуществления восприимчивость к пестицидам представляет собой восприимчивость к инсектицидам.
В любой из вышеуказанных композиций композиция может содержать множество различных модулирующих средств. В некоторых вариантах осуществления композиция содержит модулирующее средство и пестицидное средство (например, пестицид, приведенный в таблице 12). В некоторых вариантах осуществления пестицидное средство представляет собой бактерицидное или фунгицидное средство. В некоторых вариантах осуществления пестицидное средство представляет собой инсектицидное средство.
В любой из вышеуказанных композиций композиция может содержать модулирующее средство и средство, повышающее темпы роста сельскохозяйственной культуры.
В любой из вышеуказанных композиций модулирующее средство может быть связано со вторым фрагментом. В некоторых вариантах осуществления второй фрагмент представляет собой модулирующее средство.
В любой из вышеуказанных композиций модулирующее средство может быть связано с нацеливающим доменом. В некоторых вариантах осуществления нацеливающий домен нацеливает модулирующее средство на участок–мишень в организме хозяина. В некоторых вариантах осуществления нацеливающий домен нацеливает модулирующее средство на один или несколько микроорганизмов, обитающих в организме хозяина.
В любой из вышеуказанных композиций модулирующее средство может содержать инактивирующую пре– или пропоследовательность с образованием тем самым модулирующего средства–предшественника. В некоторых вариантах осуществления модулирующее средство–предшественник превращается в активную форму в организме хозяина.
В любой из вышеуказанных композиций модулирующее средство может содержать линкер. В некоторых вариантах осуществления линкер представляет собой расщепляемый линкер.
В любой из вышеуказанных композиций композиция может дополнительно содержать носитель. В некоторых случаях носитель может представлять собой приемлемый с точки зрения сельского хозяйства носитель.
В любой из вышеуказанных композиций композиция может дополнительно содержать приманку для хозяина, липкое средство или их комбинацию. В некоторых вариантах осуществления приманка для хозяина представляет собой съедобное средство и/или хемоаттрактант.
В любой из вышеуказанных композиций композиция может содержаться в дозе, эффективной для модулирования приспособленности хозяина.
В любой из вышеуказанных композиций композиция может быть составлена для доставки в микроорганизм, обитающий в кишке хозяина.
В любой из вышеуказанных композиций композиция может быть составлена для доставки в микроорганизм, обитающий в бактериоците хозяина и/или кишке хозяина. В некоторых вариантах осуществления композиция может быть составлена для доставки в растение. В некоторых вариантах осуществления композиция может быть составлена для применения в кормушке для хозяина.
В любой из вышеуказанных композиций композиция может быть составлена в виде жидкости, порошка, гранул или наночастиц. В некоторых вариантах осуществления композицию составляют в виде композиции, выбранной из группы, состоящей из липосомы, полимера, бактерии, секретирующей пептид, и синтетической нанокапсулы. В некоторых вариантах осуществления синтетическая нанокапсула доставляет композицию в участок–мишень в организме хозяина. В некоторых вариантах осуществления участок–мишень представляет собой кишку хозяина. В некоторых вариантах осуществления участок–мишень представляет собой бактериоцит в организме хозяина.
Coleoptera
Diptera
Hemiptera, Lepidoptera, Orthoptera, Thysanoptera или Acarina.
В еще одном аспекте в данном документе также предусмотрены хозяева, которые содержат любую из вышеуказанных композиций. В некоторых вариантах осуществления хозяин представляет собой насекомое. В некоторых вариантах осуществления насекомое представляет собой вид, принадлежащий к , , В некоторых вариантах осуществления насекомое представляет собой жука, долгоносика, муху, тлю, белокрылку, цикадку, червеца, моль, бабочку, кузнечика, сверчка, трипса или микроскопического клеща. В определенных вариантах осуществления насекомое представляет собой тлю.
В дополнительном аспекте в данном документе также предусмотрена система для модулирования приспособленности хозяина, содержащая модулирующее средство, которое целенаправленно воздействует на микроорганизм, требуемый для приспособленности хозяина, при этом система является эффективной для модулирования приспособленности хозяина, и при этом хозяин представляет собой насекомое. Модулирующее средство может включать в себя любую из композиций, описанных в данном документе. В некоторых вариантах осуществления модулирующее средство составляют в виде порошка. В некоторых вариантах осуществления модулирующее средство составляют в виде растворителя. В некоторых вариантах осуществления модулирующее средство составляют в виде концентрата. В некоторых вариантах осуществления модулирующее средство составляют в виде разбавителя. В некоторых вариантах осуществления модулирующее средство готовят для доставки посредством объединения любой из предыдущих композиций с носителем.
В еще одном дополнительном аспекте также предусмотрены способы модулирования приспособленности насекомого с помощью любой из композиций, описанных в данном документе. В одном случае способ модулирования приспособленности насекомого–хозяина предусматривает доставку композиции по любому из предыдущих пунктов хозяину, при этом модулирующее средство целенаправленно воздействует на один или несколько микроорганизмов, обитающих в организме хозяина, и тем самым модулирует приспособленность хозяина. В другом случае способ модулирования разнообразия микроорганизмов в организме насекомого–хозяина предусматривает доставку композиции по любому из предыдущих пунктов хозяину, при этом модулирующее средство целенаправленно воздействует на один или несколько микроорганизмов, обитающих в организме хозяина, и тем самым модулирует разнообразие микроорганизмов в организме хозяина.
В некоторых вариантах осуществления любого из вышеуказанных способов модулирующее средство может изменять уровни одного или нескольких микроорганизмов, обитающих в организме хозяина. В некоторых вариантах осуществления любого из вышеуказанных способов модулирующее средство может изменять функцию одного или нескольких микроорганизмов, обитающих в организме хозяина. В некоторых вариантах осуществления один или несколько микроорганизмов может представлять собой бактерию и/или гриб. В некоторых вариантах осуществления один или несколько микроорганизмов требуются для приспособленности хозяина. В некоторых вариантах осуществления один или несколько микроорганизмов требуются для выживаемости хозяина.
В некоторых вариантах осуществления любого из вышеуказанных способов этап доставки может включать предоставление модулирующего средства в дозе и в течение времени, достаточных для воздействия на один или несколько микроорганизмов с модулированием тем самым разнообразия микроорганизмов в организме хозяина. В некоторых вариантах осуществления этап доставки включает местное применение любой из предыдущих композиций в отношении растения. В некоторых вариантах осуществления этап доставки включает предоставление модулирующего средства через генетически модифицированное растение. В некоторых вариантах осуществления этап доставки включает предоставление модулирующего средства хозяину в виде съедобного средства. В некоторых вариантах осуществления этап доставки включает получение хозяина, несущего модулирующее средство. В некоторых вариантах осуществления хозяин, несущий модулирующее средство, может переносить модулирующее средство одному или нескольким дополнительным хозяевам.
В некоторых вариантах осуществления любого из вышеуказанных способов композиция может быть эффективной для повышения восприимчивости хозяина к пестицидному средству (например, пестициду, приведенному в таблице 12). В некоторых вариантах осуществления хозяин является устойчивым к пестицидному средству до доставки модулирующего средства. В некоторых вариантах осуществления пестицидное средство представляет собой аллелохимическое средство. В некоторых вариантах осуществления аллелохимическое средство представляет собой кофеин, цистатин N сои, монотерпены, дитерпеновые кислоты или фенольные соединения. В некоторых вариантах осуществления композиция является эффективной для избирательного уничтожения хозяина. В некоторых вариантах осуществления композиция является эффективной для снижения приспособленности хозяина. В некоторых вариантах осуществления композиция является эффективной для снижения продуцирования незаменимых аминокислот и/или витаминов в организме хозяина.
Coleoptera
Diptera
Hemiptera, Lepidoptera, Orthoptera, Thysanoptera или Acarina.
В некоторых вариантах осуществления любого из вышеуказанных способов хозяин представляет собой насекомое. В некоторых вариантах осуществления насекомое представляет собой вид, принадлежащий к , , В некоторых вариантах осуществления насекомое представляет собой жука, долгоносика, муху, тлю, белокрылку, цикадку, червеца, моль, бабочку, кузнечика, сверчка, трипса или микроскопического клеща. В определенных вариантах осуществления насекомое представляет собой тлю.
В некоторых вариантах осуществления любого из вышеуказанных способов этап доставки включает доставку любой из ранее полученных композиций в растение. В некоторых вариантах осуществления растение представляет собой сельскохозяйственную культуру. В некоторых вариантах осуществления сельскохозяйственная культура представляет собой несобранную сельскохозяйственную культуру на момент доставки. В некоторых вариантах осуществления сельскохозяйственная культура представляет собой собранную сельскохозяйственную культуру на момент доставки. В некоторых вариантах осуществления сельскохозяйственная культура включает в себя собранные фрукты или овощи. В некоторых вариантах осуществления композицию доставляют в количестве и в течение периода времени, эффективных для повышения темпов роста сельскохозяйственной культуры. В некоторых вариантах осуществления сельскохозяйственная культура включает в себя растения кукурузы, сои или пшеницы.
В дополнительном аспекте в данном документе также предусмотрены скрининговые анализы для идентификации модулирующего средства, которое модулирует приспособленность хозяина. В одном случае скрининговый анализ для идентификации модулирующего средства, которое модулирует приспособленность хозяина, включает этапы (a) воздействия на микроорганизм, который может обитать в организме хозяина, одного или нескольких кандидатных модулирующих средств и (b) идентификации модулирующего средства, которое снижает приспособленность хозяина.
В некоторых вариантах осуществления скринингового анализа модулирующее средство представляет собой микроорганизм, обитающий в организме хозяина. В некоторых вариантах осуществления микроорганизм представляет собой бактерию. В некоторых вариантах осуществления бактерия, обитая в организме хозяина, снижает приспособленность хозяина. В некоторых вариантах осуществления скринингового анализа модулирующее средство отрицательно влияет на микроорганизм, расщепляющий аллелохимикат. В некоторых вариантах осуществления модулирующее средство представляет собой фаг, антибиотик или исследуемое соединение. В некоторых вариантах осуществления антибиотик представляет собой тиментин, рифампицин или азитромицин.
В некоторых вариантах осуществления скринингового анализа хозяин может представлять собой беспозвоночное. В некоторых вариантах осуществления беспозвоночное представляет собой насекомое. В некоторых вариантах осуществления насекомое представляет собой тлю. В некоторых вариантах осуществления насекомое представляет собой комара. В некоторых вариантах осуществления насекомое представляет собой сверчка.
В любом из вышеуказанных вариантов осуществления скринингового анализа приспособленность хозяина может быть модулирована путем модулирования микробиоты хозяина.
Определения
Используемый в данном документе термин "бактериоцин" относится к пептиду или полипептиду, который обладает противомикробными свойствами. Встречающиеся в природе бактериоцины продуцируются определенными прокариотами и действуют против организмов, родственных штамму–продуценту, но не против самого штамма–продуцента. Бактериоцины, предусмотренные в данном документе, включают в себя без ограничения встречающиеся в природе бактериоцины, такие как бактериоцины, продуцируемые бактериями, и их производные, такие как сконструированные бактериоцины, рекомбинантно экспрессируемые бактериоцины и химически синтезируемые бактериоцины. В некоторых случаях бактериоцин представляет собой функционально активный вариант бактериоцинов, описанных в данном документе. В некоторых случаях вариант бактериоцина является на по меньшей мере 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичным, например, в определенной области или во всей последовательности, последовательности бактериоцина, описанного в данном документе, или встречающегося в природе бактериоцина.
Используемый в данном документе термин "бактериоцит" относится к специализированной клетке, встречающейся в определенных насекомых, в которой обитают внутриклеточные бактерии со свойствами симбиотических бактерий.
Используемый в данном документе термин "эффективное количество" относится к количеству модулирующего средства (например, фага, лизина, бактериоцина, малой молекулы или антибиотика) или композиции, содержащей указанное средство, достаточному для получения указанного результата, например, для снижения или ослабления приспособленности организма–хозяина (например, насекомого); для достижения целевого уровня (например, предварительно определенного или порогового уровня) концентрации модулирующего средства в организме хозяина–мишени; для достижения целевого уровня (например, предварительно определенного или порогового уровня) концентрации модулирующего средства в кишке хозяина–мишени; для достижения целевого уровня (например, предварительно определенного или порогового уровня) концентрации модулирующего средства в бактериоците хозяина–мишени; для модулирования уровня или активности одного или нескольких микроорганизмов (например, эндосимбионтов) в организме хозяина–мишени.
Используемый в данном документе термин "приспособленность" относится к способности организма–хозяина выживать, расти и/или давать жизнеспособное потомство. Приспособленность организма может быть измерена с помощью одного или нескольких параметров, в том числе без ограничения продолжительности жизни, скорости размножения, подвижности, массы тела и скорости метаболизма. Приспособленность может быть дополнительно измерена на основании показателей активности (например, у животных, наносящих укусы, или людей) или переноса заболевания (например, переноса от переносчика переносчику или переноса от переносчика животному).
Используемый в данном документе термин "кишка" относится к любой части кишки хозяина, в том числе передней кишке, средней кишке или задней кишке хозяина.
Используемый в данном документе термин "хозяин" относится к организму (например, насекомому), несущему обитающие в нем микроорганизмы (например, эндогенные микроорганизмы, эндосимбиотические микроорганизмы (например, первичных или вторичных эндосимбионтов), организмы–комменсалы и/или патогенные микроорганизмы).
Используемый в данном документе термин "снижение приспособленности хозяина" относится к любому нарушению физиологических процессов хозяина или любой активности, осуществляемой указанным хозяином, вследствие введения модулирующего средства, в том числе без ограничения любому одному или нескольким из следующих желаемых эффектов: (1) уменьшению популяции хозяина на приблизительно 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99%, 100% или больше; (2) снижению скорости размножения хозяина (например, насекомого) на приблизительно 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99%, 100% или больше; (3) снижению подвижности хозяина (например, насекомого) на приблизительно 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99%, 100% или больше; (4) снижению массы тела хозяина (например, насекомого) на приблизительно 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99%, 100% или больше; (5) снижению скорости метаболизма или активности хозяина (например, насекомого) на приблизительно 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99%, 100% или больше или (6) уменьшению заражения растения хозяином (например, насекомым) на приблизительно 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99%, 100% или больше. Снижение приспособленности хозяина может быть определено по сравнению с организмом–хозяином, которому модулирующее средство не было введено.
Arthropoda
Insecta
Arachnida
Термин "насекомое" включает любой организм, принадлежащий к типу и классу  или классу , на любой стадии развития, т. е. неполовозрелых и взрослых насекомых.
Используемый в данном документе термин "лизин", также известный как эндолизин, аутолизин, муреингидролаза, пептидогликангидролаза или гидролаза клеточной стенки, относится к гидролитическому ферменту, который может лизировать бактерию посредством расщепления пептидогликана в клеточной стенке бактерии. Лизины, предусмотренные в данном документе, включают в себя без ограничения встречающиеся в природе лизины, такие как лизины, продуцируемые фагами, лизины, продуцируемые бактериями, и их производные, такие как сконструированные лизины, рекомбинантно экспрессируемые лизины и химически синтезируемые лизины. Функционально активный вариант бактериоцина может являться на по меньшей мере 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичным, например, в определенной области или во всей последовательности, последовательности синтетического, рекомбинантного или встречающегося в природе бактериоцина, в том числе любого описанного в данном документе.
Используемый в данном документе термин "микроорганизм" относится к бактериям или грибам. Микроорганизмы могут относиться к микроорганизмам, обитающим в организме–хозяине (например, эндогенным микроорганизмам, эндосимбиотическим микроорганизмам (например, первичным или вторичным эндосимбионтам)), или микроорганизмам, экзогенным для хозяина, в том числе микроорганизмам, которые могут выступать в качестве модулирующих средств. Используемый в данном документе термин "микроорганизм–мишень" относится к микроорганизму, который обитает в организме хозяина и подвергается воздействию модулирующего средства прямо или косвенно.
Используемый в данном документе термин "средство" или "модулирующее средство" относится к средству, которое способно изменять уровни и/или функционирование микроорганизмов, обитающих в организме–хозяине (например, насекомом), и тем самым модулировать (например, снижать) приспособленность организма–хозяина (например, насекомого).
Используемый в данном документе термин "пестицид" или "пестицидное средство" относится к веществу, которое можно применять для контроля вредителей, значимых для сельского хозяйства, окружающей среды и домашнего хозяйства/быта, таких как насекомые, грибы, бактерии и вирусы. Термин "пестицид" понимают как охватывающий встречающиеся в природе или синтетические инсектициды (ларвициды или адультициды), регуляторы роста насекомых, акарициды (майтициды), нематоциды, эктопаразитициды, бактерициды, фунгициды или гербициды (вещества, которые можно применять в сельском хозяйстве для контроля или модификации роста растений). Дополнительные примеры пестицидов или пестицидных средств приведены в таблице 12. В некоторых случаях пестицид представляет собой аллелохимикат. Используемый в данном документе термин "аллелохимикат" или "аллелохимическое средство" означает вещество, продуцируемое организмом, который может воздействовать на физиологическую функцию (например, зарождение, рост, выживаемость или размножение) другого организма (например, насекомого–хозяина).
Используемый в данном документе термин "пептид", "белок" или "полипептид" охватывает любую цепь из встречающихся в природе или не встречающихся в природе аминокислот (как D–, так и L–аминокислот), независимо от длины (например, по меньшей мере 2, 3, 4, 5, 6, 7, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 25, 30, 40, 50, 100 или больше аминокислот), наличия или отсутствия посттрансляционных модификаций (например, гликозилирования или фосфорилирования) или наличия, например, одной или нескольких не являющихся аминоацильными групп (например, углеводных, липидных и т. д.), ковалентно связанных с пептидом, и включает, например, природные белки, синтетические или рекомбинантные полипептиды и пептиды, гибридные молекулы, пептоиды или пептидомиметики.
Как используется в данном документе, "процент идентичности" между двумя последовательностями определяют с помощью алгоритма BLAST 2.0, который описан в Altschul et al., (1990) J. Mol. Biol. 215:403–410. Программное обеспечение для проведения анализов BLAST общедоступно благодаря Национальному центру биотехнологической информации.
Используемый в данном документе термин "бактериофаг" или "фаг" относится к вирусу, который инфицирует бактерии и реплицируется в них. Бактериофаги реплицируются в бактериях после введения их генома в цитоплазму и осуществляют это с помощью литического цикла, который приводит к лизису бактериальной клетки, или лизогенного (не являющегося литическим) цикла, при котором бактериальная клетка остается интактной. Фаг может представлять собой изолят встречающегося в природе фага или сконструированный фаг, в том числе векторы или нуклеиновые кислоты, которые кодируют частичный геном фага (например, в том числе по меньшей мере все важнейшие гены, необходимые для осуществления жизненного цикла фага в бактерии–хозяине) или полный геном фага.
Используемый в данном документе термин "растение" относится к целым растениям, органам растений, растительным тканям, растительным клеткам, семенам и их потомству. Растительные клетки включают в себя без ограничения клетки из семян, суспензионных культур, зародышей, участков меристемы, каллюсной ткани, листьев, корней, побегов, гаметофитов, спорофитов, пыльцы и микроспор. Части растений включают в себя дифференцированные и недифференцированные ткани, в том числе без ограничения: корни, стебли, побеги, листья, пыльцу, семена, опухолевую ткань и различные формы клеток и культуры (например, отдельные клетки, протопласты, зародыши и каллюсную ткань). Растительная ткань может находиться в растении или в органе, ткани или культуре клеток растения. Кроме того, растение может быть генетически модифицированным таким образом, что в нем продуцируется гетерологичный белок или РНК, например, любого из модулирующих средств в способах и композициях, описанных в данном документе.
Другие характеристики и преимущества настоящего изобретения будут очевидны из следующего подробного описания и формулы изобретения.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ
Фигуры предусмотрены для иллюстрации одной или нескольких характеристик, аспектов или вариантов осуществления настоящего изобретения и не предполагаются как ограничивающие.
На фиг. 1A–1G показаны изображения различных систем доставки антибиотиков. Тлей LSR–1 на стадии личинок первого возраста обрабатывали различными терапевтическими растворами путем доставки через растения (фиг. 1A), покрытия листьев (фиг. 1B), микроинъекции (фиг. 1C), местной доставки (фиг. 1D), заливания в листья и разрезания листьев (фиг. 1E), заливания в листья и через растение (фиг. 1F) и комбинированной обработки посредством распыления как на растение, так и на тлю и доставки через растение (фиг. 1G).
На фиг. 2A–2C показана задержка развития тлей во время обработки рифампицином тлей LSR–1 на стадии личинок первого возраста с использованием трех различных условий: искусственного рациона без незаменимых аминокислот (только AD), искусственного рациона без незаменимых аминокислот со 100 мкг/мл рифампицина (AD+Rif) и искусственного рациона со 100 мкг/мл рифампицина и незаменимыми аминокислотами (AD+Rif+EAA). На фиг. 2A представлена серия графиков, на которых показан процент живых тлей на каждой стадии развития (размер выборки=33 тлей/группа). На фиг. 2B показаны иллюстративные изображения после каждой обработки, полученные через 12 дней. Масштабные метки соответствуют 2,5 мм. На фиг. 2C показаны измерения площади тела тлей, демонстрирующие существенный эффект обработки рифампицином. Добавление незаменимых аминокислот обратно частично устраняло дефекты развития.
На фиг. 3 показано, что обработка рифампицином приводила к гибели тлей. Выживаемость отслеживали ежедневно в случае тлей LSR–1, обработанных путем доставки через растения искусственного рациона без незаменимых аминокислот (только AD), искусственного рациона без незаменимых аминокислот со 100 мкг/мл рифампицина (AD+Rif) и искусственного рациона со 100 мкг/мл рифампицина и (AD+Rif+EAA). Число в скобках обозначает число тлей в каждой группе. Статистическую значимость определяли с помощью логарифмического рангового критерия, и определяли следующие статистически значимые различия: только AD по сравнению с AD+Rif, p<0,0001 и AD+Rif по сравнению с AD+Rif+EAA, p=0,017.
На фиг. 4 представлен график, на котором показано, что обработка рифампицином приводила к утрате способности к размножению у тлей. Тлей LSR–1 на стадии личинок первого возраста обрабатывали путем доставки через растения искусственного рациона без незаменимых аминокислот (только AD), искусственного рациона без незаменимых аминокислот со 100 мкг/мл рифампицина (AD+Rif) и искусственного рациона со 100 мкг/мл рифампицина и (AD+Rif+EAA), и измеряли число потомков, образующихся в каждый день после того, как тли достигали зрелого возраста. Показано среднее число потомков, образующихся за день, ± S.D. после того, как тли достигали зрелого возраста.
Buchnera
Buchnera
Buchnera
На фиг. 5 представлен график, на котором показано, что обработка рифампицином приводила к устранению эндосимбиотических . Титр симбионтов определяли для различных условий через 7 дней после обработки. ДНК из тлей экстрагировали, и для определения соотношения количества ДНК и ДНК тлей проводили qPCR. Показано среднее соотношение количества ДНК  и ДНК тлей ± SD для 3 тлей на группу. Статистически значимые различия определяли с помощью однофакторного ANOVA с последующим применением апостериорного критерия Тьюки; *, p<0,05.
На фиг. 6A и 6B показано, что обработка рифампицином, доставляемым посредством покрытия листьев, приводила к задержке развития тлей. Тлей eNASCO на стадии личинок первого возраста обрабатывали путем покрытия листьев 100 мкл двух различных растворов: контрольного растворителя (0,025% Silwet L–77) и 50 мкг/мл рифампицина. На фиг. 6A представлена серия графиков, на которых показана динамика стадий развития для каждого условия. Показан процент живых тлей на каждой стадии развития (размер выборки=20 тлей/группа). На фиг. 6B представлен график, на котором показаны измерения площади тела тлей, демонстрирующие существенный эффект листьев, покрытых рифампицином, в отношении размера тлей. Статистически значимые различия определяли с помощью однофакторного ANOVA с последующим применением апостериорного критерия Тьюки; *, p<0,05.
На фиг. 7 показано, что обработка рифампицином, доставляемым посредством покрытия листьев, приводила к гибели тлей. Выживаемость отслеживали ежедневно в случае тлей eNASCO, обработанных путем покрытия листьев 100 мкл двух различных растворов: контрольного растворителя (Silwet L–77) и 50 мкг/мл рифампицина. Обработка отрицательно влияла на показатель выживаемости тлей.
Buchnera
Buchnera
Buchnera
На фиг. 8 показано, что обработка рифампицином, доставляемым посредством покрытия листьев, приводила к устранению эндосимбиотических . Титр симбионтов определяли для двух условий через 6 дней после обработки. ДНК из тлей экстрагировали, и для определения соотношения количества ДНК и ДНК тлей проводили qPCR. Показано среднее соотношение количества ДНК  и ДНК тлей ± SD. Статистически значимые различия определяли с помощью однофакторного ANOVA с последующим применением апостериорного критерия Тьюки; *, p<0,05.
Buchnera
Buchnera
Buchnera
На фиг. 9 представлен график, на котором показано, что обработка рифампицином путем микроинъекции приводила к устранению эндосимбиотических . Титр симбионтов определяли через 4 дня после инъекции при указанных условиях. Контрольный образец представлял собой растворитель, 0,025% Silwet L–77, описанный выше. ДНК из тлей экстрагировали, и для определения соотношения количества ДНК и ДНК тлей проводили qPCR. Показано среднее соотношение количества ДНК  и ДНК тлей ± SD. Статистически значимые различия определяли с помощью однофакторного ANOVA с последующим применением апостериорного критерия Тьюки; *, p<0,05.
Buchnera
Buchnera
Buchnera
На фиг. 10 представлен график, показывающий, что обработка рифампицином, доставляемым посредством местного применения, приводила к устранению эндосимбиотических . Титр симбионтов определяли через 3 дня после распыления растворителя (Silwet L–77) или раствора рифампицина, разведенного в растворителе. ДНК из тлей экстрагировали, и для определения соотношения количества ДНК и ДНК тлей проводили qPCR. Показано среднее соотношение количества ДНК  и ДНК тлей ± SD. Статистически значимые различия определяли с помощью однофакторного ANOVA с последующим применением апостериорного критерия Тьюки; *, p<0,05.
–го
–го
На фиг. 11 представлена панель графиков, на которых показано, что тлей LSR–1 на стадии личинок 1 и 2возраста помещали на листья, залитые водой с пищевым красителем или 50 мкг/мл рифампицина в воде с пищевым красителем. Определяли динамику стадий развития для каждого условия. Показан процент живых тлей на каждой стадии развития (размер выборки=74–81 тля/группа).
–го
–го
На фиг. 12 представлен график, на котором показана выживаемость тлей LSR–1 на стадии личинок 1 и 2возраста, помещенных на листья, залитые водой с пищевым красителем или 50 мкг/мл рифампицина в воде с пищевым красителем. Число в скобках обозначает число тлей в каждой группе. Статистическую значимость определяли с помощью логарифмического рангового критерия.
Buchnera
Buchnera
На фиг. 13 представлен график, на котором показан титр симбионтов, определенный через 8 дней после обработки листьев, залитых водой с пищевым красителем или рифампицином с водой и пищевым красителем. ДНК из тлей экстрагировали, и для определения соотношения количества ДНК и ДНК тлей проводили qPCR. Показано среднее соотношение количества ДНК  и ДНК тлей ± SD. Число в прямоугольнике обозначает медиану для экспериментальной группы.
–го
–го
На фиг. 14 представлена панель графиков, на которых показано, что тлей LSR–1 на стадии личинок 1 и 2возраста обрабатывали посредством инъекции в листья и через растение воды с пищевым красителем или 100 мкг/мл рифампицина в воде с пищевым красителем. Определяли динамику стадий развития для каждого условия. Показан процент живых тлей на каждой стадии развития (размер выборки=49–50 тлей/группа).
–го
–го
На фиг. 15 представлен график, на котором показана выживаемость тлей LSR–1 на стадии личинок 1 и 2возраста, помещенных на листья, залитые и обработанные водой с пищевым красителем или 100 мкг/мл рифампицина в воде с пищевым красителем. Число в скобках обозначает число тлей в каждой группе. Рассчитывали логарифмический ранговый критерий и определяли, что статистически значимые различия между группами отсутствовали.
Buchnera
Buchnera
На фиг. 16А и 16В представлены графики, на которых показан титр симбионтов, определенный через 6 (16А) и 8 (16В) дней после обработки у тлей, вскармливаемых на листьях, залитых и обработанных водой и пищевым красителем или рифампицином с водой и пищевым красителем. ДНК экстрагировали из тлей, и для определения соотношения количества ДНК и ДНК тлей проводили qPCR. Показано среднее соотношение количества ДНК  и ДНК тлей ± SD. Число в прямоугольнике обозначает медиану для экспериментальной группы.
–го
–го
На фиг. 17 представлена панель графиков, на которых показано, что тлей LSR–1 на стадии личинок 1 и 2возраста обрабатывали контрольными растворами (водой и Silwet L–77) или комбинацией средств обработки со 100 мкг/мл рифампицина. Определяли динамику стадий развития для каждого условия. Показан процент живых тлей на каждой стадии развития (размер выборки=76–80 тлей/группа).
На фиг. 18 представлен график, показывающий, что тлей LSR–1 на стадии личинок 1–го и 2–го возраста обрабатывали контрольными растворами или комбинацией средств обработки, включающей рифампицин. Число в скобках обозначает число тлей в каждой группе. Рассчитывали логарифмический ранговый критерий и определяли, что статистически значимые различия между группами отсутствовали.
Buchnera
Buchnera
На фиг. 19 представлен график, на котором показан титр симбионтов, определенный через 7 дней после обработки контрольными растворами или растворами рифампицина. ДНК из тлей экстрагировали, и для определения соотношения количества ДНК и ДНК тлей проводили qPCR. Показано среднее соотношение количества ДНК  и ДНК тлей ± SD. Число в прямоугольнике обозначает медиану для экспериментальной группы. Статистически значимые различия определяли с помощью t–критерия.
A. pisum
На фиг. 20 представлено изображение, на котором показана система доставки хитозана. Тлей  обрабатывали терапевтическим раствором путем доставки с помощью заливания в листья и через растения, как показано.
A. pisum
На фиг. 21 представлена панель графиков, на которых показано, что обработка хитозаном приводила к задержке развития тлей. Тлей  на стадии личинок первого и второго возраста обрабатывали путем доставки через растения и заливания в листья контрольного раствора (воды), а также 300 мкг/мл хитозана в воде. Стадии развития отслеживали в ходе всего эксперимента. Показан процент тлей на каждой стадии развития (личинка 1–го возраста, личинка 2–го возраста, личинка 3–го возраста, личинка 4–го возраста, личинка 5–го возраста или личинка 5R, что обозначает размножающуюся личинку 5–го возраста) на группу обработки.
A. pisum
На фиг. 22 представлен график, на котором показано снижение выживаемости насекомых при обработке хитозаном. Тлей на стадии личинок первого и второго возраста обрабатывали путем доставки через растения и заливания в листья только воды или раствора хитозана, и выживаемость отслеживали ежедневно в течение эксперимента. Число в скобках обозначает общее число тлей в группе обработки.
Buchnera
A. pisum
Buchnera
Buchnera
На фиг. 23 представлен график, на котором показано, что обработка хитозаном приводила к снижению количества эндосимбиотических . Тлей  на стадии личинок первого и второго возраста обрабатывали путем доставки через растения и заливания в листья воды или 300 мкг/мл хитозана в воде. Через 8 дней после обработки ДНК из тлей экстрагировали, и для определения соотношения количества ДНК и ДНК тлей проводили qPCR. Показано среднее соотношение количества ДНК  и ДНК тлей ± SD для 6 тлей/группа. Медианное значение для каждой группы показано в прямоугольнике.
A. pisum
На фиг. 24 представлена панель графиков, на которых показано, что обработка низином приводила к задержке развития тлей. Тлей  LSR–2 на стадии личинок первого и второго возраста обрабатывали водой (контроль) или 1,6 или 7 мг/мл низина путем доставки с помощью инъекции в листья и через растение, и определяли динамику развития. Показан процент тлей на каждой стадии развития (стадия личинок 1–го возраста, 2–го возраста, 3–го возраста, 4–го возраста, 5–го возраста и 5R (размножающиеся личинки 5–го возраста)) в указанный момент времени. N=56–59 тлей/группа.
A. pisum
На фиг. 25 представлен график, на котором показано дозозависимое снижение выживаемости насекомых при обработке низином. Тлей  LSR–1 на стадии личинок первого и второго возраста обрабатывали водой (контроль) или 1,6 или 7 мг/мл низина путем доставки с помощью инъекции в листья и через растение, и выживаемость отслеживали в динамике. Число в скобках обозначает число тлей/группа. Статистически значимые различия определяли с помощью логарифмического рангового критерия (Кокса–Мантеля).
Buchnera
A. pisum
Buchnera
Buchnera
На фиг. 26 представлен график, на котором показано, что обработка низином приводила к снижению количества эндосимбиотических . Тлей  LSR–1 на стадии личинок первого и второго возраста обрабатывали водой (контроль) или 1,6 мг/мл низина путем доставки с помощью инъекции в листья и через растение, и ДНК экстрагировали из некоторых тлей через восемь дней после обработки и использовали в qPCR для определения числа копий . Показаны средние соотношения /тля для каждой обработки +/– SEM. Число в прямоугольнике над каждой экспериментальной группой обозначает медианное значение для этой группы. Каждая точка данных обозначает одну тлю.
A. pisum
–го
–го
–го
–го
–го
На фиг. 27 представлена панель графиков, на которых показано, что обработка левулиновой кислотой приводила к задержке развития тлей. Тлей  eNASCO на стадии личинок первого и второго возраста обрабатывали водой (контроль) или 0,03 или 0,3% левулиновой кислотой путем доставки с помощью инъекции в листья и через растение, и определяли динамику развития. Показан процент тлей на каждой стадии развития (стадия личинок 1 возраста, 2 возраста, 3 возраста, 4 возраста и 5 возраста) в указанный момент времени. N=57–59 тлей/группа.
A. pisum
На фиг. 28 представлен график, на котором показано снижение выживаемости насекомых при обработке левулиновой кислотой. Тлей eNASCOна стадии личинок первого и второго возраста обрабатывали водой (контроль) или 0,03 или 0,3% левулиновой кислотой путем доставки с помощью инъекции в листья и через растение, и выживаемость отслеживали в динамике. N=57–59 тлей/группа. Статистически значимые различия определяли с помощью логарифмического рангового критерия (Кокса–Мантеля); **, p<0,01.
Buchnera
A. pisum
Buchnera
На фиг. 29 представлена панель графиков, на которых показано, что обработка левулиновой кислотой приводила к снижению количества эндосимбиотических .Тлей  eNASCO на стадии личинок первого и второго возраста обрабатывали водой (контроль) или 0,03 или 0,3% левулиновой кислотой путем доставки с помощью инъекции в листья и через растение, и ДНК экстрагировали из некоторых тлей через семь и одиннадцать дней после обработки и использовали в qPCR для определения числа копий Buchnera. Показаны средние соотношения /тля для каждой обработки +/– SEM. Статистически значимые различия определяли с помощью однофакторного ANOVA и критерия множественных сравнений Даннетта; *, p<0,05. Каждая точка данных обозначает одну тлю.
A. pisum
На фиг. 30A и 30B представлены графики, на которых показано, что обработка госсиполом приводила к задержке развития тлей. Тлей  на стадии личинок первого и второго возраста обрабатывали путем доставки через растения искусственного рациона без незаменимых аминокислот (только AD) и искусственного рациона без незаменимых аминокислот с различными концентрациями госсипола (0,05%, 0,25% и 0,5%). Стадии развития отслеживали в ходе всего эксперимента. На фиг. 30А представлена серия графиков, на которых показано среднее число тлей на каждой стадии развития (личинка 1–го возраста, личинка 2–го возраста, личинка 3–го возраста, личинка 4–го возраста, личинка 5–го возраста или личинка 5R, что обозначает размножающуюся личинку 5–го возраста) на группу обработки. В указанное время тлей визуализировали, и их размер определяли с использованием Image J. На фиг. 30B представлен график, на котором показана средняя площадь тлей ± SD для тлей, обработанных искусственным рационом (контроль) или обработанных госсиполом. Статистическую значимость определяли с помощью однофакторного ANOVA с последующим применением апостериорного критерия Тьюки. *, p<0,05. **, p<0,01.
A. pisum
На фиг. 31 представлен график, на котором показано дозозависимое снижение выживаемости тлей при обработке аллелохимикатом госсиполом. Тлей на стадии личинок первого и второго возраста обрабатывали путем доставки через растения искусственного рациона без незаменимых аминокислот (AD без EAA), искусственного рациона без незаменимых аминокислот с 0,5% госсиполуксусной кислотой (0,5% госсиполом), искусственного рациона без незаменимых аминокислот с 0,25% госсиполуксусной кислотой (0,25% госсиполом) и искусственного рациона без незаменимых аминокислот с 0,05% госсиполуксусной кислотой (0,05% госсиполом), и выживаемость отслеживали ежедневно в течение эксперимента. Число в скобках обозначает число тлей в каждой группе применения среды без незаменимых аминокислот. Статистически значимые различия определяли с помощью логарифмического рангового критерия, и группы AD без EAA и 0,5% госсипола статистически значимо различаются, p=0,0002.
A. pisum
На фиг. 32A и 32B представлены два графика, на которых показано, что обработка 0,25% госсиполом приводила к снижению плодовитости. Тлей  на стадии личинок первого и второго возраста обрабатывали с помощью доставки через растения искусственного рациона без незаменимых аминокислот (AD5–2 без EAA) или искусственного рациона без незаменимых аминокислот с 0,25% госсиполуксусной кислотой (AD5–2 без EAA+0,25% госсипол), и плодовитость определяли на протяжении всего эксперимента. На фиг. 32A показано, что определяли средний день ± SD, на который тли начинают давать потомство, и обработка госсиполом приводила к задержке образования потомства. На фиг. 32B показано, что определяли среднее число потомков ± SD, образуемых после того, как тля становилась взрослой размножающейся особью, и обработка госсиполом приводила к снижению числа образуемых потомков. Каждая точка данных обозначает одну тлю.
Buchnera
A. pisum
Buchnera
Buchnera
На фиг. 33 представлен график, на котором показано, что обработка госсиполом в различных концентрациях приводила к снижению количества эндосимбиотических . Тлей  на стадии личинок первого и второго возраста обрабатывали путем доставки через растения искусственного рациона без незаменимых аминокислот (контроль) или искусственного рациона без незаменимых аминокислот с 0,5%, 0,25% и 0,05% госсиполом. Через 5 или 13 дней после обработки ДНК из тлей экстрагировали, и для определения соотношения количества ДНК и ДНК тлей проводили qPCR. Показано среднее соотношение количества ДНК  и ДНК тлей ± SD для 2–6 тлей/группа. Статистически значимые различия определяли с помощью непарного t–критерия; *, p<0,05.
Buchnera
A. pisum
Buchnera
Buchnera
На фиг. 34 представлен график, на котором показано, что микроинъекция госсипола приводила к снижению уровней  у тлей. Тлям  LSR–1 на стадии личинок < 3–го возраста (нимфам) инъецировали 20 нл искусственного рациона без незаменимых аминокислот (AD) или искусственного рациона без незаменимых аминокислот с 0,05% госсиполом (госсипол (0,05%)). Через три дня после инъекции ДНК экстрагировали из тлей, и уровни  определяли с помощью qPCR. Показаны средние соотношения количества ДНК /тлей ± SD. Каждая точка данных обозначает одну тлю.
A. pisum
На фиг. 35 представлена панель графиков, на которых показано, что обработка транс–коричным альдегидом приводила к задержке развития тлей. Тлей  на стадии личинок первого или второго возраста обрабатывали путем доставки через растения воды и воды с различными концентрациями транс–коричного альдегида (TC, 0,05%, 0,5% и 5%). Стадии развития отслеживали в ходе всего эксперимента. Показано среднее число тлей на каждой стадии развития (личинка 1–го возраста, личинка 2–го возраста, личинка 3–го возраста, личинка 4–го возраста, личинка 5–го возраста или личинка 5R, что обозначает размножающуюся личинку 5–го возраста) на группу обработки. N=40–49 тлей/экспериментальная группа.
A. pisum
На фиг. 36 представлен график, на котором показано, что имело место дозозависимое снижение выживаемости при обработке природным противомикробным средством транс–коричным альдегидом. Тлей  на стадии личинок первого или второго возраста обрабатывали путем доставки через растения воды и воды с различными концентрациями транс–коричного альдегида (TC, 0,05%, 0,5% и 5%). Выживаемость отслеживали на протяжении всей обработки. Статистически значимые различия определяли с помощью логарифмического рангового критерия. N=40–49 тлей/группа.
Buchnera
A. pisum
Buchnera
Buchnera
На фиг. 37 представлен график, на котором показано, что обработка транс–коричным альдегидом в различных концентрациях приводила к снижению количества эндосимбиотических . Тлей  на стадии личинок первого или второго возраста обрабатывали путем доставки через растения воды и воды с различными концентрациями транс–коричного альдегида (0,05%, 0,5% и 5%). Через 3 дней после обработки ДНК из тлей экстрагировали, и для определения соотношения количества ДНК  и ДНК тлей проводили qPCR. Показано среднее соотношение количества ДНК  и ДНК тлей ± SD для 2–11 тлей/группа. Медиана для каждой группы обработки показана в прямоугольнике над точками данных. Статистически значимые различия определяли с помощью непарного t–критерия; *, p<0,05. Имело место статистически значимое различие между группой контроля c водой и 0,5% транс–коричного альдегида.
A. pisum
На фиг. 38 представлена панель графиков, на которых показано, что обработка пептидом скорпиона Uy192 приводила к задержке развития тлей. Тлей  на стадии личинок первого и второго возраста обрабатывали путем доставки через растения и заливания в листья контрольного раствора (воды), а также 100 мкг/мл Uy192 в воде. Стадии развития отслеживали в ходе всего эксперимента. Показан процент тлей на каждой стадии развития (личинка 1–го возраста, личинка 2–го возраста, личинка 3–го возраста, личинка 4–го возраста, личинка 5–го возраста или личинка 5R, что обозначает размножающуюся личинку 5–го возраста) на группу обработки.
A. pisum
На фиг. 39 представлен график, на котором показано снижение выживаемости насекомых при обработке с помощью AMP скорпиона Uy192. Тлей на стадии личинок первого и второго возраста обрабатывали путем доставки через растения и заливания в листья только воды или раствора Uy192, и выживаемость отслеживали ежедневно в течение эксперимента. Число в скобках обозначает общее число тлей в группе обработки.
Buchnera
A. pisum
Buchnera
Buchnera
На фиг. 40 представлен график, на котором показано, что обработка с помощью Uy192 приводила к снижению количества эндосимбиотических . Тлей на стадии личинок первого и второго возраста обрабатывали путем доставки через растения и заливания в листья воды или 100 мкг/мл Uy192 в воде, через 8 дней после обработки ДНК из тлей экстрагировали, и для определения соотношения количества ДНК и ДНК тлей проводили qPCR. Показано среднее соотношение количества ДНК  и ДНК тлей ± SD для 2–6 тлей/группа. Медианное значение для каждой группы показано в прямоугольнике.
A. pisum
На фиг. 41 представлен график, на котором показано снижение выживаемости тлей, которым вводили микроинъекцию пептидов скорпиона D10 и D3. Тлям  LSR–1 вводили микроинъекцию воды (контроль) или 100 нг пептида скорпиона D3 или D10. После инъекции тлей выпускали на листья конских бобов, и выживаемость отслеживали на протяжении всего эксперимента. Число в скобках обозначает число тлей в каждой экспериментальной группе обработки.
A. pisum
Buchnera
На фиг. 42 представлен график, на котором показано снижение титров эндосимбионтов при инъекции пептидов скорпиона D3 и D10. Тлям  LSR–1 вводили микроинъекцию воды (контроль) или 100 нг пептида скорпиона D3 или D10. После инъекции тлей выпускали на листья конских бобов, и через 5 дней после обработки ДНК экстрагировали из оставшихся живых тлей, и для определения соотношения количества ДНК /тлей проводили qPCR. Показано среднее значение ± SD для каждой группы обработки. N=2–9 тлей/группа. Число над каждой группой обработки в прямоугольнике обозначает медиану для совокупности данных.
На фиг. 43 представлен график, на котором показано снижение выживаемости насекомых при обработке коктейлем AMP скорпиона. Тлей eNASCO на стадии личинок первого и второго возраста обрабатывали путем доставки с помощью заливания в листья и через растения коктейля пептидов скорпиона (40 мкг/мл каждого из Uy17, D3, UyCt3 и D10), и выживаемость отслеживали в течение эксперимента. Число в скобках обозначает число тлей в каждой группе обработки.
A. pisum
На фиг. 44 представлена панель графиков, на которых показано, что обработка пептидом скорпиона, слитым с пептидом, проникающим в клетку, приводила к задержке развития тлей. Тлей  LSR–2 на стадии личинок первого возраста обрабатывали водой (контроль) или 100 мкг/мл Uy192+CPP+FAM путем доставки с помощью инъекции в листья и через растение, и определяли динамику развития. Показан процент тлей на каждой стадии развития (стадия личинок 1–го возраста, 2–го возраста, 3–го возраста, 4–го возраста, 5–го возраста и 5R (размножающиеся личинки 5–го возраста)) в указанный момент времени. N=90 тлей/группа.
A. pisum
На фиг. 45 представлен график, на котором показано, что обработка тлей пептидом скорпиона, слитым с пептидом, проникающим в клетку, повышала смертность. Тлей  LSR–1 на стадии личинок первого возраста обрабатывали водой или 100 мкг/мл UY192+CPP+FAM (пептида) в воде, доставляемых путем инъекции в листья и через растение. Выживаемость отслеживали в динамике. Число в скобках обозначает число тлей/группа. Статистически значимые различия определяли с помощью логарифмического рангового критерия (Кокса–Мантеля), и имело место статистически значимое различие между двумя экспериментальными группами (p=0,0036).
Buchnera
A. pisum
Buchnera
Buchnera
На фиг. 46 представлен график, на котором показано, что обработка с помощью Uy192+CPP+FAM приводила к снижению количества эндосимбиотических . Тлей  LSR–1 на стадии личинок первого возраста обрабатывали водой или 100 мкг/мл Uy192+CPP+FAM (пептида) в воде, доставляемых путем инъекции в листья и через растение. ДНК экстрагировали из некоторых тлей через пять дней после обработки и использовали в qPCR для определения числа копий . Показаны средние соотношения /тля для каждой обработки +/– SEM. Число в прямоугольнике над каждой экспериментальной группой обозначает медианное значение для этой группы. Каждая точка данных обозначает одну тлю. Статистически значимые различия определяли с помощью t–критерия Стьюдента; ****, p<0,0001.
На фиг. 47 представлена панель изображений, на которых показано, что Uy192+CPP+FAM проникали через мембраны бактериоцитов. Бактериоциты извлекали из тлей и инкубировали с 250 мкг/мл пептида Uy192+CPP+FAM в течение 30 минут. После промывания и визуализации Uy192+CPP+FAM можно наблюдать в больших количествах внутри бактериоцитов.
На фиг. 48A и фиг. 48B представлена панель графиков, на которых показано, что обработка пантотенолом приводила к задержке развития тлей. Тлей eNASCO на стадии личинок первого и второго возраста обрабатывали путем доставки через растения трех различных условий: искусственного рациона без незаменимых аминокислот (AD без EAA), искусственного рациона без незаменимых аминокислот с 10 мкM пантотенола (10 мкМ пантотенола) и искусственного рациона без незаменимых аминокислот со 100 мкM пантотенола (100 мкM пантотенола), искусственного рациона без незаменимых аминокислот со 100 мкM пантотенола и искусственного рациона без незаменимых аминокислот с 10 мкM пантотенола. На фиг. 48A показаны стадии развития, динамика которых отслеживается для каждого условия. На фиг. 48B представлены измерения относительной площади тела тлей, демонстрирующие существенный эффект обработки пантотенола.
На фиг. 49 представлен график, на котором показано, что обработка пантотенолом приводила к повышению смертности тлей. Выживаемость отслеживали ежедневно в случае тлей eNASCO, обработанных путем доставки через растения искусственного рациона без незаменимых аминокислот или искусственного рациона без незаменимых аминокислот, содержащего 10 или 100 мкМ пантотенола. Число в скобках обозначает число тлей в каждой группе.
На фиг. 50A, 50B и 50C представлена панель графиков, на которых показано, что обработка пантотенолом приводила к утрате способности к размножению. Тлей eNASCO на стадии личинок первого и второго возраста обрабатывали путем доставки через растения искусственного рациона без незаменимых аминокислот или искусственного рациона без незаменимых аминокислот с 10 или 100 мкМ пантотенола. На фиг. 50A показана доля тлей, доживших до зрелого возраста и появления способности к размножению. На фиг. 50B показан средний день, в который тли в каждой группе начинали размножаться. Показан средний день ± SD, в который тли начинали размножаться. На фиг. 50C показано среднее число потомков, образующихся за день, после того, как тля начинала размножаться. Показано среднее число потомков/день ± SD.
Buchnera
Buchnera
Buchnera
На фиг. 51 представлен график, на котором показано, что обработка пантотенолом не влияла отрицательно на эндосимбиотические . Титр симбионтов определяли для различных условий через 8 дней после обработки. ДНК из тлей экстрагировали, и для определения соотношения количества ДНК и ДНК тлей проводили qPCR. Показано среднее соотношение количества ДНК  и ДНК тлей ± SD для 6 тлей на группу.
На фиг. 52 представлена панель графиков, на которых показано, что обработка пантотенолом, доставляемым через растения, не влияла отрицательно на развитие тлей. Тлей eNASCO на стадии личинок первого возраста обрабатывали путем покрытия листьев 100 мкл двух различных растворов: контрольного растворителя (0,025% Silwet L–77) и 10 мкМ пантотенола, и определяли динамику стадий развития для каждого условия. Показан процент живых тлей на каждой стадии развития (размер выборки=20 тлей/группа).
На фиг. 53 представлен график, на котором показано, что обработка пантотенолом, доставляемым посредством покрытия листьев, приводила к гибели тлей. Выживаемость отслеживали ежедневно в случае тлей eNASCO, обработанных путем покрытия листьев 100 мкл двух различных растворов: контрольного растворителя (Silwet L–77) и 10 мкМ пантотенола. Обработка отрицательно влияла на показатель выживаемости тлей. Размер выборки=20 тлей/группа. Логарифмический ранговый критерий Кокса–Мантеля использовали для определения наличия статистически значимых различий между группами и выявления того, что две группы статистически значимо различаются (p=0,0019).
На фиг. 54A и 54B представлена панель графиков, на которых показано, что обработка коктейлем аналогов аминокислот приводила к задержке развития тлей. Тлей LSR–1 на стадии личинок первого возраста обрабатывали путем доставки с помощью заливания в листья и через растения воды или коктейля аналогов аминокислот в воде (коктейля AA). На фиг. 54A показаны стадии развития, динамика которых определяется для каждого условия. Показан процент живых тлей на каждой стадии развития. На фиг. 54B показаны измерения площади тела тлей, демонстрирующие существенный эффект обработки коктейлем аналогов аминокислот (коктейлем AA). Статистически значимые различия определяли с помощью t–критерия Стьюдента; ****, p<0,0001.
Buchnera
Buchnera
Buchnera
На фиг. 55 представлен график, на котором показано, что обработка коктейлем аналогов аминокислот приводила к устранению эндосимбиотических . Титр симбионтов определяли для различных условий через 6 дней после обработки. ДНК из тлей экстрагировали, и для определения соотношения количества ДНК и ДНК тлей проводили qPCR. Показаны средние соотношения количества ДНК  и ДНК тлей ± SD для 19–20 тлей на группу. Каждая точка данных обозначает отдельную тлю. Статистически значимые различия определяли с помощью t–критерия Стьюдента; *, p<0,05.
На фиг. 56A и 56B представлена панель графиков, на которых показано, что обработка комбинацией трех средств приводила к задержке развития тлей. Тлей LSR–1 на стадии личинок первого возраста обрабатывали путем доставки с помощью заливания в листья и через растения воды или комбинации трех средств в воде (пептид–рифампицин–хитозан). На фиг. 56A показаны стадии развития, динамика которых определяется для каждого условия. Показан процент живых тлей на каждой стадии развития. На фиг. 56B показаны измерения площади тела тлей, демонстрирующие существенный эффект обработки комбинацией трех средств обработки (пептид–рифампицин–хитозан). Статистически значимые различия определяли с помощью t–критерия Стьюдента; ****, p<0,0001.
На фиг. 57 представлен график, на котором показано, что обработка комбинацией пептида, антибиотика и природного противомикробного средства приводила к повышению смертности тлей. Тлей LSR–1 обрабатывали водой или комбинацией трех средств обработки (пептид–рифампицин–хитозан), и после обработки ежедневно отслеживали выживаемость.
Buchnera
Buchnera
Buchnera
На фиг. 58 представлен график, на котором показано, что обработка комбинацией пептида, антибиотика и природного противомикробного средства приводила к устранению эндосимбиотических . Титр симбионтов определяли для различных условий через 6 дней после обработки. ДНК из тлей экстрагировали, и для определения соотношения количества ДНК и ДНК тлей проводили qPCR. Показаны средние соотношения количества ДНК  и ДНК тлей ± SD для 20–21 тли на группу. Каждая точка данных обозначает отдельную тлю.
E. coli
E. coli
На фиг. 59A и 59B представлена панель изображений, на которых показаны зерна кукурузы, которыебыли покрыты ципрофлоксацином и в которые проник ципрофлоксацин. Зерна кукурузы замачивали в воде (без антибиотика) или указанной концентрации ципрофлоксацина в воде, и целые зерна или зерно исследовали с целью обнаружения того, могут ли они ингибировать рост DH5α . На фиг. 59A показан рост бактерий в присутствии зерна кукурузы, замоченного в воде без антибиотиков, а на фиг. 59B показано ингибирование роста бактерий в случае, если целые зерна или половинки зерен кукурузы, которые замачивали в антибиотиках, помещали на чашку, по которой была распределена .
На фиг. 60 представлен график, на котором показано, что зрелых долгоносиков S. zeamais обрабатывали ципрофлоксацином (250 мкг/мл или 2,5 мг/мл) или подвергали ложной обработке водой. Через 18 дней после обработки геномную ДНК выделяли из долгоносиков, и количество первичного эндосимбионта Sitophilus определяли с помощью qPCR. Показано среднее значение ± SEM для каждой группы. Каждая точка данных обозначает одного долгоносика. Медиана для каждой группы указана над совокупностью данных.
Sitophilus
На фиг. 61A и 61B представлены графики, на которых показано развитие долгоносиков после обработки ципрофлоксацином. На фиг. 61A показаны отдельные зерна кукурузы, вскрытые через 25 дней после того, как зрелые особи были удалены, из одной повторности каждой из групп исходных зерен кукурузы, замоченных в воде/покрытых водой (контролем) или ципрофлоксацином (250 мкг/мл или 2,5 мг/мл) и исследованные на наличие личинок, куколок или почти полностью развившихся (зрелых) долгоносиков. Показана процентная доля каждой стадии жизненного цикла, обнаруженная в зернах из каждой группы обработки. Общее число потомков, обнаруженных в зернах из каждой группы обработки, указано над каждой совокупностью данных. На фиг. 61B показана геномная ДНК, выделенная из потомков, извлеченных из зерен кукурузы из контрольной группы (вода) и группы обработки 2,5 мг/мл ципрофлоксацина; для измерения количества присутствующего первичного эндосимбионта  проводили qPCR. Показано среднее значение ± SD для каждой группы. Статистически значимые различия определяли с помощью непарного t–критерия; *, p<0,001.
На фиг. 62A и 62B представлены графики, на которых показаны две оставшиеся повторности зерен кукурузы, подвергнутых ложной обработке (водой) или обработанных 250 мкг/мл или 2,5 мг/мл ципрофлоксацина, в которых отслеживалось появление потомства после того, как спаривающиеся пары были удалены (через 7 дней после обработки). На фиг. 62A показано среднее число ± SD вновь появившихся долгоносиков в динамике для каждой группы обработки. На фиг. 62B показано среднее число ± SEM появившихся долгоносиков для каждой группы обработки через 43 дня после того, как спаривающиеся пары были удалены.
На фиг. 63 представлена панель графиков, на которых показано, что обработка рифампицином и доксициклином приводила к смертности микроскопических клещей. Выживаемость отслеживали ежедневно в случае необработанных двупятнистых паутинных клещиков и микроскопических клещей, обработанных 250 мкг/мл рифампицина и 500 мкг/мл доксициклина в 0,025% Silwet L–77.
E. coli
S. marcescens
На фиг. 64 представлена панель графиков, на которых показаны результаты анализа внеклеточного потока Seahorse в отношении дыхания бактерий. Бактерии выращивали до логарифмической фазы и загружали в планшеты Seahorse XFe96 для временных измерений скорости потребления кислорода (OCR) и скорости закисления внеклеточной среды (ECAR), как описано в способах. Средства обработки вводили в лунки примерно через 20 минут, и бактерии отслеживали для выявления изменений роста. Рифампицин=100 мкг/мл; хлорамфеникол=25 мкг/мл; фаги (T7 в случае  и ΦSmVL–C1 в случае ) представляли собой лизаты, разведенные 1:2 или 1:100 в буфере SM. Отметки на каждой линии предусмотрены исключительно в качестве индикаторов состояния, которым каждая линия соответствует, и не указывают на точки данных.
S. marcescens
S. marcescens
S. marcescens
На фиг. 65 представлен график, на котором показано, что фаг, противодействующий , приводил к снижению смертности мух. Все мухи, которым вводили путем прокола , погибали в течение дня, в том время как значительная часть мух, которым вводили путем прокола как , так и фаг, выживали в течение пяти дней после обработки. Почти все из контрольных мух, которых никак не обрабатывали, выживали до конца эксперимента. Логарифмический ранговый критерий использовали для сравнения кривых для определения статистической значимости, звездочка обозначает p<0,0001.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
В данном документе предусмотрены способы и композиции для контроля сельскохозяйственных вредителей, например, для изменения уровня, активности или метаболизма одного или нескольких микроорганизмов, обитающих в организме насекомого–хозяина (например, сельскохозяйственного вредителя), при этом данное изменение приводит к снижению приспособленности хозяина. В настоящем изобретении описана композиция, содержащая модулирующее средство (например, фаг, пептид, малую молекулу, антибиотик или их комбинации), которое может изменять микробиоту хозяина таким образом, что это является пагубным для хозяина. Модулирующее средство, описанное в данном документе, может снижать приспособленность ряда насекомых, которые считаются сельскохозяйственными вредителями, посредством нарушения уровней микроорганизмов, активности микроорганизмов, метаболизма микроорганизмов и/или разнообразия микроорганизмов.
Buchnera
Способы и композиции, описанные в данном документе, основаны отчасти на примерах, которые иллюстрируют то, как различные средства, например, выделенные природные фаги, антибиотики (например, рифампицин, окситетрациклин, ципрофлоксацин, доксициклин или их комбинацию), противомикробные пептиды (AMP, например, полимиксин B, мелиттин, цекропин A, дрозоцин или пептиды скорпиона), аллелохимикаты (например, госсиполуксусную кислоту) или природные противомикробные соединения (например, транс–коричный альдегид, хитозан, пропионовую кислоту, левулиновую кислоту или низин) можно применять для целенаправленного воздействия на симбиотические микроорганизмы у насекомых–хозяев (например, эндосимбиотическую  у тлей) для снижения приспособленности этих хозяев путем изменения уровня, активности или метаболизма микроорганизмов у этих хозяев. Рифампицин, окситетрациклин, ципрофлоксацин и доксициклин являются иллюстративными примерами антибиотиков, и другие антибиотики могут быть применимыми в настоящем изобретении. Аналогичным образом, полимиксин B, мелиттин, цекропин A, дрозоцин или пептиды скорпиона являются иллюстративными примерами AMP, применимых в настоящем изобретении. Кроме того, госсиполуксусная кислота является иллюстративным примером малых молекул, применимых в настоящем изобретении. Дополнительно, транс–коричный альдегид, хитозан, пропионовая кислота, левулиновая кислота или низин являются иллюстративными примерами применимых природных противомикробных соединений. На основании этого в настоящем изобретении описан ряд различных подходов к применению средств, которые изменяют уровень, активность или метаболизм одного или нескольких микроорганизмов, обитающих в организме хозяина, при этом изменение приводит к снижению приспособленности хозяина.
Хозяева
Насекомые
Хозяином согласно любым способам и композициям, предусмотренным в данном документе, может являться любой организм, принадлежащий к типу Arthropoda, который считается вредителем, например, сельскохозяйственным вредителем, в том числе любые членистоногие, описанные в данном документе. Используемый в данном документе термин "вредитель" относится к насекомым, которые причиняют вред растениям или другим организмам или в иных отношениях являются пагубными для людей, например, для способов или продуктов сельского хозяйства людей. Используемый в данном документе термин "насекомое" описывает любое насекомое и означает любой организм, принадлежащий к царству животных, более конкретно к типу Arthropoda и к классу Insecta или классу Arachnida.
Drosophila
В некоторых случаях насекомое может принадлежать к следующим отрядам: Acari, Araneae, Anoplura, Coleoptera, Collembola, Dermaptera, Dictyoptera, Diplura, Diptera (например, пестрокрылая ), Embioptera, Ephemeroptera, Grylloblatodea, Hemiptera (например, тли, тепличная белокрылка), Homoptera, Hymenoptera, Isoptera, Lepidoptera, Mallophaga, Mecoptera, Neuroptera, Odonata, Orthoptera, Phasmida, Plecoptera, Protura, Psocoptera, Siphonaptera, Siphunculata, Thysanura, Strepsiptera, Thysanoptera, Trichoptera или Zoraptera.
Acarus
Aceria sheldoni, Aculops
Aculus
Amblyomma
Amphitetranychus viennensis, Argas
Boophilus
Brevipalpus
Bryobia graminum, Bryobia praetiosa, Centruroides
Chorioptes
Dermanyssus gallinae, Dermatophagoides pteronyssinus, Dermatophagoides farinae, Dermacentor
Eotetranychus
Epitrimerus pyri, Eutetranychus
Eriophyes
Glycyphagus domesticus, Halotydeus destructor, Hemitarsonemus
Hyalomma
Ixodes
Latrodectus
Loxosceles
Metatetranychus
Neotrombicula autumnalis, Nuphersa
Oligonychus
Ornithodorus
Ornithonyssus
Panonychus
Phyllocoptruta oleivora, Polyphagotarsonemus latus, Psoroptes
Rhipicephalus
Rhizoglyphus
Sarcoptes
Scorpio maurus, Steneotarsonemus
Steneotarsonemus spinki, Tarsonemus
Tetranychus
Trombicula alfreddugesi, Vaejovis
Vasates lycopersici.
В некоторых случаях насекомое относится к классу Arachnida, например, spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp.,
Geophilus
Scutigera
В некоторых случаях насекомое относится к классу Chilopoda, например, spp., spp.
Onychiurus armatus.
В некоторых случаях насекомое относится к отряду Collembola, например,
Blaniulus guttulatus;
Blattella asahinai, Blattella germanica, Blatta orientalis, Leucophaea maderae, Panchlora
Parcoblatta
Periplaneta
Supella longipalpa.
В некоторых случаях насекомое относится к классу Diplopoda, например, к классу Insecta, например, к отряду Blattodea, например, spp., spp., spp.,
Acalymma vittatum, Acanthoscelides obtectus, Adoretus
Agelastica alni, Agriotes
Alphitobius diaperinus, Amphimallon solstitialis, Anobium punctatum, Anoplophora
Anthonomus
Anthrenus
Apion
Apogonia
Atomaria
Attagenus
Bruchidius obtectus, Bruchus
Cassida
Cerotoma trifurcata, Ceutorhynchus
Chaetocnema
Cleonus mendicus, Conoderus
Cosmopolites
Costelytra zealandica, Ctenicera
Curculio
Cryptolestes ferrugineus, Cryptorhynchus lapathi, Cylindrocopturus
Dermestes
Diabrotica
Dichocrocis
Dicladispa armigera, Diloboderus
Epilachna
Epitrix
Faustinus
Gibbium psylloides, Gnathocerus cornutus, Hellula undalis, Heteronychus arator, Heteronyx
Hylamorpha elegans, Hylotrupes bajulus, Hypera postica, Hypomeces squamosus, Hypothenemus
Lachnosterna consanguinea, Lasioderma serricorne, Latheticus oryzae, Lathridius
Lema
Leptinotarsa decemlineata, Leucoptera
Lissorhoptrus oryzophilus, Lixus
Luperodes
Lyctus
Megascelis
Melanotus
Meligethes aeneus, Melolontha
Migdolus
Monochamus
Naupactus xanthographus, Necrobia
Niptus hololeucus, Oryctes rhinoceros, Oryzaephilus surinamensis, Oryzaphagus oryzae, Otiorhynchus
Oxycetonia jucunda, Phaedon cochleariae, Phyllophaga
Phyllophaga helleri, Phyllotreta
Popillia japonica, Premnotrypes
Prostephanus truncatus, Psylliodes
Ptinus
Rhyzobius ventralis, Rhyzopertha dominica, Sitophilus
Sitophilus oryzae, Sphenophorus
Stegobium paniceum, Sternechus
Symphyletes
Tanymecus
Tenebrio molitor, Tenebrioides mauretanicus, Tribolium
Trogoderma
Tychius
Xylotrechus
Zabrus
Aedes
Agromyza
Anastrepha
Anopheles
Asphondylia
Bactrocera
Bibio hortulanus, Calliphora erythrocephala, Calliphora vicina, Ceratitis capitata, Chironomus
Chrysomyia
Chrysops
Chrysozona pluvialis, Cochliomyia
Contarinia
Cordylobia anthropophaga, Cricotopus sylvestris, Culex
Culicoides
Culiseta
Cuterebra
Dacus oleae, Dasyneura
Delia
Dermatobia hominis, Drosophila
Echinocnemus
Fannia
Gasterophilus
Glossina
Haematopota
Hydrellia
Hydrellia griseola, Hylemya
Hippobosca
Hypoderma
Liriomyza
Lucilia
Lutzomyia
Mansonia
Musca
Musca domestica)
Oestrus
Oscinella frit, Paratanytarsus
Paralauterborniella subcincta, Pegomyia
Phlebotomus
Phorbia
Phormia
Piophila casei, Prodiplosis
Psila rosae, Rhagoletis
Sarcophaga
Simulium
Stomoxys
Tabanus
Tetanops
Tipula
В некоторых случаях насекомое относится к отряду Coleoptera, например, spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp. (например, злаковый корневой червь), spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp.; к отряду Diptera, например, spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp. (например, , spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp.
Anasa tristis, Antestiopsis
Boisea
Blissus
Calocoris
Campylomma livida, Cavelerius
Cimex
Collaria
Creontiades dilutus, Dasynus piperis, Dichelops furcatus, Diconocoris hewetti, Dysdercus
Euschistus
Eurygaster
Heliopeltis
Horcias nobilellus, Leptocorisa
Leptocorisa varicornis, Leptoglossus phyllopus, Lygus
Macropes excavatus, Miridae, Monalonion atratum, Nezara
Oebalus
Pentatomidae, Piesma quadratum, Piezodorus
Psallus
Pseudacysta perseae, Rhodnius
Sahlbergella singularis, Scaptocoris castanea, Scotinophora
Stephanitis nashi, Tibraca
Triatoma
В некоторых случаях насекомое относится к отряду Heteroptera, например, spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp.
Acizzia acaciaebaileyanae, Acizzia dodonaeae, Acizzia uncatoides, Acrida turrita, Acyrthosiphon
Acrogonia
Aeneolamia
Agonoscena
Aleyrodes proletella, Aleurolobus barodensis, Aleurothrixus floccosus, Allocaridara malayensis, Amrasca
Anuraphis cardui, Aonidiella
Aphanostigma pini, Aphis
Apis gossypii)
Arboridia apicalis, Arytainilla
Aspidiella
Aspidiotus
Atanus
Aulacorthum solani, Bemisia tabaci, Blastopsylla occidentalis, Boreioglycaspis melaleucae, Brachycaudus helichrysi, Brachycolus
Brevicoryne brassicae, Cacopsylla
Calligypona marginata, Carneocephala fulgida, Ceratovacuna lanigera, Cercopidae, Ceroplastes
Chaetosiphon fragaefolii, Chionaspis tegalensis, Chlorita onukii, Chondracris rosea, Chromaphis juglandicola, Chrysomphalus ficus, Cicadulina mbila, Coccomytilus halli, Coccus
Cryptomyzus ribis, Cryptoneossa
Ctenarytaina
Dalbulus
Dialeurodes citri, Diaphorina citri, Diaspis
Drosicha
Dysaphis
Dysmicoccus
Empoasca
Eriosoma
Erythroneura
Eucalyptolyma
Euphyllura
Euscelis bilobatus, Ferrisia
Geococcus coffeae, Glycaspis
Heteropsylla cubana, Heteropsylla spinulosa, Homalodisca coagulata, Homalodisca vitripennis, Hyalopterus arundinis, Icerya
Idiocerus
Idioscopus
Laodelphax striatellus, Lecanium
Lepidosaphes
Lipaphis erysimi, Macrosiphum
Macrosteles facifrons, Mahanarva
Melanaphis sacchari, Metcalfiella
Metopolophium dirhodum, Monellia costalis, Monelliopsis pecanis, Myzus
Nasonovia ribisnigri, Nephotettix
Nettigoniclla spectra, Nilaparvata lugens, Oncometopia
Orthezia praelonga, Oxya chinensis, Pachypsylla
Parabemisia myricae, Paratrioza
Parlatoria
Pemphigus
Peregrinus maidis, Phenacoccus
Phloeomyzus passerini, Phorodon humuli, Phylloxera
Pinnaspis aspidistrae, Planococcus
Prosopidopsylla flava, Protopulvinaria pyriformis, Pseudaulacaspis pentagona, Pseudococcus
Psyllopsis
Psylla
Pteromalus
Pyrilla
Quadraspidiotus
Quesada gigas, Rastrococcus
Rhopalosiphum
Saissetia
Scaphoideus titanus, Schizaphis graminum, Selenaspidus articulatus, Sogata
Sogatella furcifera, Sogatodes
Stictocephala festina, Siphoninus phillyreae, Tenalaphara malayensis, Tetragonocephela
Tinocallis caryaefoliae, Tomaspis
Toxoptera
Trialeurodes vaporariorum, Trioza
Typhlocyba
Unaspis
Viteus vitifolii, Zygina
Acromyrmex
Athalia
Atta
Diprion
Hoplocampa
Lasius
Monomorium pharaonis, Sirex
Solenopsis invicta, Tapinoma
Urocerus
Vespa
Xeris
В некоторых случаях насекомое относится к отряду Homoptera, например, spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp. (например,, spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp.; к отряду Hymenoptera, например, spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp.
Armadillidium vulgare, Oniscus asellus, Porcellio scaber.
В некоторых случаях насекомое относится к отряду Isopoda, например,
Coptotermes
Cornitermes cumulans, Cryptotermes
Incisitermes
Microtermes obesi, Odontotermes
Reticulitermes
В некоторых случаях насекомое относится к отряду Isoptera, например, spp., spp., spp., spp., spp.
Achroia grisella, Acronicta major, Adoxophyes
Aedia leucomelas, Agrotis
Alabama
Amyelois transitella, Anarsia
Anticarsia
Argyroploce
Barathra brassicae, Borbo cinnara, Bucculatrix thurberiella, Bupalus piniarius, Busseola
Cacoecia
Caloptilia theivora, Capua reticulana, Carpocapsa pomonella, Carposina niponensis, Cheimatobia brumata, Chilo
Choristoneura
Clysia ambiguella, Cnaphalocerus
Cnaphalocrocis medinalis, Cnephasia
Conopomorpha
Conotrachelus
Copitarsia
Cydia
Dalaca noctuides, Diaphania
Diatraea saccharalis, Earias
Ecdytolopha aurantium, Elasmopalpus lignosellus, Eldana saccharina, Ephestia
Epinotia
Epiphyas postvittana, Etiella
Eulia
Eupoecilia ambiguella, Euproctis
Euxoa
Feltia
Galleria mellonella, Gracillaria
Grapholitha
Hedylepta
Helicoverpa
Heliothis
Hofmannophila pseudospretella, Homoeosoma
Homona
Hyponomeuta padella, Kakivoria flavofasciata, Laphygma
Laspeyresia molesta, Leucinodes orbonalis, Leucoptera
Lithocolletis
Lithophane antennata, Lobesia
Loxagrotis albicosta, Lymantria
Lyonetia
Malacosoma neustria, Maruca testulalis, Mamestra brassicae, Melanitis leda, Mocis
Monopis obviella, Mythimna separata, Nemapogon cloacellus, Nymphula
Oiketicus
Oria
Orthaga
Ostrinia
Oulema oryzae, Panolis flammea, Parnara
Pectinophora
Perileucoptera
Phthorimaea
Phyllocnistis citrella, Phyllonorycter
Pieris
Platynota stultana, Plodia interpunctella, Plusia
Plutella xylostella, Prays
Prodenia
Protoparce
Pseudaletia
Pseudaletia unipuncta, Pseudoplusia includens, Pyrausta nubilalis, Rachiplusia nu, Schoenobius
Scirpophaga
Scirpophaga innotata, Scotia segetum, Sesamia
Sesamia inferens, Sparganothis
Spodoptera
Spodoptera praefica, Stathmopoda
Stomopteryx subsecivella, Synanthedon
Tecia solanivora, Thermesia gemmatalis, Tinea cloacella, Tinea pellionella, Tineola bisselliella, Tortrix
Trichophaga tapetzella, Trichoplusia
Tryporyza incertulas, Tuta absoluta, Virachola
В некоторых случаях насекомое относится к отряду Lepidoptera, например, spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp., spp.
Acheta domesticus, Dichroplus
Gryllotalpa
Hieroglyphus
Locusta
Melanoplus
Schistocerca gregaria.
В некоторых случаях насекомое относится к отряду Orthoptera или Saltatoria, например, spp., spp., spp., spp., spp.,
Damalinia
Haematopinus
Linognathus
Pediculus
Phthirus pubis, Trichodectes
В некоторых случаях насекомое относится к отряду Phthiraptera, например, spp., spp., spp., spp., spp.
Lepinatus
Liposcelis
В некоторых случаях насекомое относится к отряду Psocoptera, например, spp., spp.
Ceratophyllus
Ctenocephalides
Pulex irritans, Tunga penetrans, Xenopsylla cheopis.
В некоторых случаях насекомое относится к отряду Siphonaptera, например, spp., spp.,
Anaphothrips obscurus, Baliothrips biformis, Drepanothrips reuteri, Enneothrips flavens, Frankliniella
Heliothrips
Hercinothrips femoralis, Rhipiphorothrips cruentatus, Scirtothrips
Taeniothrips cardamomi, Thrips
В некоторых случаях насекомое относится к отряду Thysanoptera, например, spp., spp., spp., spp.
Ctenolepisma
Lepisma saccharina, Lepismodes inquilinus, Thermobia domestica.
В некоторых случаях насекомое относится к отряду Zygentoma (=Thysanura), например, spp.,
Scutigerella
В некоторых случаях насекомое относится к классу Symphyla, например, spp.
Phytonemus pallidus, Polyphagotarsonemus latus, Tarsonemus bilobatus
Penthaleus erythrocephalus, Penthaleus major
Oligonychus shinkajii, Panonychus citri, Panonychus mori, Panonychus ulmi, Tetranychus kanzawai, Tetranychus urticae
Acaphylla theavagrans, Aceria tulipae, Aculops lycopersici, Aculops pelekassi, Aculus schlechtendali, Eriophyes chibaensis, Phyllocoptruta oleivora
Rhizoglyphus robini, Tyrophagus putrescentiae, Tyrophagus similis
Varroa jacobsoni
Varroa destructor
Boophilus microplus, Rhipicephalus sanguineus, Haemaphysalis longicornis, Haemophysalis flava, Haemophysalis campanulata, Ixodes ovatus, Ixodes persulcatus, Amblyomma
Dermacentor
Cheyletiella yasguri, Cheyletiella blakei
Demodex canis, Demodex cati
Psoroptes ovis
Sarcoptes scabiei, Notoedres cati, Knemidocoptes
В некоторых случаях насекомое представляет собой микроскопического клеща, включая без ограничения микроскопических клещей из семейства Tarsonemidae, таких как  и т. п.; микроскопических клещей из семейства Eupodidae, таких как  и т. п.; паутинных клещиков, таких как  и т. п.; микроскопических клещей из семейства Eriophyidae, таких как  и т. п.; микроскопических клещей из семейства Acaridae, таких как  и т. п.; микроскопических клещей, поражающих расплод пчел, таких как , и т. п.; иксодовых клещей, таких как spp., spp. и т. п.; Cheyletidae, таких как  и т. п.; Demodicidae, таких как  и т. п.; Psoroptidae, таких как  и т. п.; Sarcoptidae, таких как spp. и т. п.
В некоторых случаях насекомое представляет собой тлю. В некоторых случаях насекомое представляет собой долгоносика. В определенных случаях насекомое представляет собой двупятнистого паутинного клещика. В некоторых случаях насекомое представляет собой травяную совку. В некоторых случаях насекомое представляет собой микроскопического клеща из рода Varroa (например, микроскопического клеща из рода Varroa, который заражает пчел).
Приспособленность хозяев
Способы и композиции, предусмотренные в данном документе, можно применять для снижения приспособленности любого из хозяев, описанных в данном документе. Снижение приспособленности может возникать в результате любых изменений в микроорганизмах, обитающих в организме хозяина, при этом изменения представляют собой следствие введения модулирующего средства и оказывают пагубные воздействия на хозяина.
В некоторых случаях снижение приспособленности хозяина может проявляться в виде нарушения или ухудшения физиологических процессов хозяина (например, ослабления здоровья или выживаемости) вследствие введения модулирующего средства. В некоторых случаях приспособленность организма может быть измерена с помощью одного или нескольких параметров, в том числе без ограничения скорости размножения, продолжительности жизни, подвижности, плодовитости, массы тела, скорости метаболизма или активности или выживаемости по сравнению с организмом–хозяином, которому модулирующее средство не было введено. Например, способы или композиции, предусмотренные в данном документе, могут быть эффективными для снижения общего состояния здоровья хозяина или для снижения общей выживаемости хозяина. В некоторых случаях снижение выживаемости хозяина составляет приблизительно 2%, 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100% или более чем 100% по сравнению с эталонным уровнем (например, уровнем, обнаруживаемым у хозяина, который не получает модулирующее средство). В некоторых случаях способы и композиции являются эффективными для снижения интенсивности размножения хозяина (например, скорости размножения) по сравнению с организмом–хозяином, которому модулирующее средство не было введено. В некоторых случаях способы и композиции являются эффективными дляснижения других физиологических параметров, таких как подвижность, масса тела, продолжительность жизни, плодовитость или скорость метаболизма, на приблизительно 2%, 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100% или более чем на 100% по сравнению с эталонным уровнем (например, уровнем, обнаруживаемым у хозяина, который не получает модулирующее средство).
В некоторых случаях снижение приспособленности хозяина может проявляться в виде снижения продуцирования одного или нескольких питательных веществ в организме хозяина (например, витаминов, углеводов, аминокислот или полипептидов) по сравнению с организмом–хозяином, которому модулирующее средство не было введено. В некоторых случаях способы или композиции, предусмотренные в данном документе, могут быть эффективными для снижения продуцирования питательных веществ в организме хозяина (например, витаминов, углеводов, аминокислот или полипептидов) на приблизительно 2%, 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100% или более чем на 100% по сравнению с эталонным уровнем (например, уровнем, обнаруживаемым у хозяина, который не получает модулирующее средство). В некоторых случаях способы или композиции, предусмотренные в данном документе, могут снижать содержание питательных веществ в организме хозяина путем снижения продуцирования питательных веществ одним или несколькими микроорганизмами (например, эндосимбионтами) в организме хозяина по сравнению с организмом–хозяином, которому модулирующее средство не было введено.
В некоторых случаях снижение приспособленности хозяина может проявляться в виде повышения восприимчивости хозяина к пестицидному средству (например, пестициду, приведенному в таблице 12) и/или снижения устойчивости хозяина к пестицидному средству (например, пестициду, приведенному в таблице 12) по сравнению с организмом–хозяином, которому модулирующее средство не было введено. В некоторых случаях способы или композиции, предусмотренные в данном документе, могут быть эффективными для повышениявосприимчивости хозяина к пестицидному средству (например, пестициду, приведенному в таблице 12) на приблизительно 2%, 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100% или более чем на 100% по сравнению с эталонным уровнем (например, уровнем, обнаруживаемым у хозяина, который не получает модулирующее средство). Пестицидное средство может представлять собой любое пестицидное средство, известное в данной области техники, в том числе инсектицидные средства. В некоторых случаях способы или композиции, предусмотренные в данном документе, могут повышать восприимчивость хозяина к пестицидному средству (например, пестициду, приведенному в таблице 12) посредством снижения способности хозяина метаболизировать пестицидное средство или расщеплять его на пригодные к использованию субстраты.
В некоторых случаях снижение приспособленности хозяина может проявляться в виде повышения восприимчивости хозяина к аллелохимическому средству и/или снижения устойчивости хозяина к аллелохимическому средству по сравнению с организмом–хозяином, которому модулирующее средство не было введено. В некоторых случаях способы или композиции, предусмотренные в данном документе, могут быть эффективными для снижения устойчивости хозяина к аллелохимическому средству на приблизительно 2%, 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100% или более чем на 100% по сравнению с эталонным уровнем (например, уровнем, обнаруживаемым у хозяина, который не получает модулирующее средство). В некоторых случаях аллелохимическое средство представляет собой кофеин, цистатин N сои, монотерпены, дитерпеновые кислоты или фенольные соединения. В некоторых случаях способы или композиции, предусмотренные в данном документе, могут повышать восприимчивость хозяина к аллелохимическому средству посредством снижения способности хозяина метаболизировать аллелохимическое средство или расщеплять его на пригодные к использованию субстраты по сравнению с организмом–хозяином, которому модулирующее средство не было введено.
В некоторых случаях способы или композиции, предусмотренные в данном документе, могут быть эффективными для снижения устойчивости хозяина к паразитам или патогенам (например, грибным, бактериальным или вирусным патогенам или паразитам) по сравнению с организмом–хозяином, которому модулирующее средство не было введено. В некоторых случаях способы или композиции, предусмотренные в данном документе, могут быть эффективными для снижения устойчивости хозяина к патогену или паразиту (например, грибным, бактериальным или вирусным патогенам или паразитическим микроскопическим клещам) на приблизительно 2%, 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100% или более чем на 100% по сравнению с эталонным уровнем (например, уровнем, обнаруживаемым у хозяина, который не получает модулирующее средство).
В некоторых случаях снижение приспособленности хозяина может проявляться в виде других недостатков приспособленности, таких как сниженная переносимость определенных факторов окружающей среды (например, переносимость высокой или низкой температуры), сниженная способность к выживанию в определенных средах обитания или сниженная способность к поддержанию определенного рациона по сравнению с организмом–хозяином, которому модулирующее средство не было введено. В некоторых случаях способы или композиции, предусмотренные в данном документе, могут быть эффективными для снижения приспособленности хозяина множеством способов, описанных в данном документе. Кроме того, модулирующее средство может снижать приспособленность хозяина в любом количестве классов, отрядов, семейств, родов или видов хозяев (например, у 1 вида хозяев, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150, 200, 200, 250, 500 или больше видов хозяев). В некоторых случаях модулирующее средство действует на один класс, отряд, семейство, род или вид хозяев.
Приспособленность хозяина может быть оценена с помощью любых стандартных способов в данной области техники. В некоторых случаях приспособленность хозяина может быть оценена посредством оценки отдельного хозяина. В качестве альтернативы, приспособленность хозяина может быть оценена посредством оценки популяции хозяев. Например, снижение приспособленности хозяина может проявляться в виде снижения степени успешного конкурирования по сравнению с другими насекомыми, что тем самым приводит к уменьшению размера популяции хозяев.
Насекомые–хозяева в сельском хозяйстве
Благодаря ослаблению приспособленности вредоносных насекомых модулирующие средства, предусмотренные в данном документе, могут быть эффективными для способствования росту растений, которые обычно повреждаются указанными хозяевами. Модулирующее средство может быть доставлено в растение с помощью любых составов и способов доставки, описанных в данном документе, в количестве и в течение периода времени, эффективных для снижения приспособленности хозяина, что тем самым производит благоприятный эффект на растение, например, в виде повышения темпов роста сельскохозяйственной культуры, повышения урожайности сельскохозяйственной культуры, снижения заражения вредителями и/или уменьшения вреда, причиняемого растениям. Это может предусматривать или не предусматривать непосредственное применение модулирующего средства в отношении растения. Например, в случаях, когда первоначальная среда обитания хозяина отличается от региона, в котором растет растение, модулирующее средство может применяться в отношении одного из первоначальной среды обитания хозяина либо растений, представляющих интерес, или комбинации того и другого.
В некоторых случаях растение может представлять собой продовольственную сельскохозяйственную культуру, такую как злаковая, зерновая, бобовая, фруктовая или овощная сельскохозяйственная культура, или непродовольственную сельскохозяйственную культуру, например, травянистые растения, цветочные растения, хлопчатник, сенокосные культуры, коноплю. Композиции, описанные в данном документе, могут быть доставлены в сельскохозяйственную культуру в любое время до или после сбора урожая злаковой, зерновой, бобовой, фруктовой, овощной или другой сельскохозяйственной культуры. Урожайность сельскохозяйственной культуры представляет собой количественный показатель, часто используемый в отношении культурных растений, и обычно измеряется в метрических тоннах с гектара (или килограммах с гектара). Урожайность сельскохозяйственной культуры также может относиться к фактическому образованию семян растением. В некоторых случаях модулирующее средство может быть эффективным для повышения урожайности сельскохозяйственной культуры (например, увеличения количества метрических тонн злаковой, зерновой, бобовой, фруктовой или овощной культуры, собираемых с гектара, и/или увеличения образования семян) на приблизительно 2%, 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100% или больше по сравнению с эталонным уровнем (например, у сельскохозяйственной культуры, в которую модулирующее средство не было введено).
В некоторых случаях растение (например, сельскохозяйственная культура) может иметь риск развития заражения вредителем (например, насекомым), или у него уже может развиться заражение вредителем. Способы и композиции, описанные в данном документе, можно применять для снижения или предупреждения заражения вредителями таких сельскохозяйственных культур путем ослабления приспособленности насекомых, заражающих растения. В некоторых случаях модулирующее средство может быть эффективным для снижения заражения сельскохозяйственной культуры (например, уменьшения количества зараженных растений, уменьшения размера популяции вредителя, уменьшения вреда, причиняемого растениям) на приблизительно 2%, 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100% или больше по сравнению с эталонным уровнем (например, у сельскохозяйственной культуры, в которую модулирующее средство не было введено). В других случаях модулирующее средство может быть эффективным для предупреждения или снижения вероятности заражения сельскохозяйственной культуры на приблизительно 2%, 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100% или больше по сравнению с эталонным уровнем (например, у сельскохозяйственной культуры, в которую модулирующее средство не было введено).
Композиции и способы, описанные в данном документе, могут производить благоприятный эффект на любые подходящие растительные ткани, в том числе без ограничения на соматические зародыши, пыльцу, листья, стебли, каллюсы, столоны, микроклубни и побеги. Способы, описанные в данном документе, могут включать обработку покрытосеменных и голосеменных растений, таких как акация, люцерна, яблоня, абрикос, артишок, ясень, спаржа, авокадо, банан, ячмень, разновидности фасоли, свекла, береза, бук, ежевика, черника, брокколи, разновидности брюссельской капусты, кочанная капуста, канола, дыня мускусная, морковь, маниок съедобный, цветная капуста, кедр, злаковое растение, сельдерей, каштан, вишня, пекинская капуста, цитрусовое растение, клементин, клевер, кофейное дерево, кукуруза, хлопчатник, хвойные деревья, вигна китайская, огурец, кипарис, баклажан, вяз, цикорий салатный, эвкалипт, разновидности конских бобов, фенхель, разновидности инжира, пихта, фруктовые и орехоплодные деревья, герань, виноград, грейпфрут, разновидности земляного ореха, физалис, тсуга канадская, конопля, гикори, кудрявая капуста, актинидия, кольраби, лиственница, латук, лук–порей, лимон, лайм, робиния, сосна, курчавый папоротник, маис, манго, клен, дыня обыкновенная, просо, шампиньон, горчица, орехоплодные растения, дуб, разновидности овса, абельмош съедобный, лук репчатый, апельсин, декоративное растение или цветочное растение или дерево, папайя, пальма, петрушка, пастернак посевной, горох, персик, арахис, груша, торфообразующее растение, перец, хурма, голубиный горох, сосна, ананас, плантан, слива, гранат, картофель, тыква, итальянский цикорий, редька, рапс, малина, рис, рожь посевная, сорго, ива, соя, шпинат, ель, кабачок, земляника, сахарная свекла, сахарный тростник, подсолнечник, сладкий картофель, сахарная кукуруза, танжерин, чайный куст, табак, томат, древесные растения, тритикале, дернообразующие травянистые растения, разновидности турнепса, виноград культурный, грецкий орех, жеруха лекарственная, арбуз обыкновенный, пшеница, разновидности ямса, тис и цукини.
Микроорганизмы–мишени
Микроорганизмы, на которые целенаправленно воздействует модулирующее средство, описанное в данном документе, могут включать в себя любой микроорганизм, обитающий в организме хозяина или на нем, в том числе без ограничения любые бактерии и/или грибы, описанные в данном документе. Микроорганизмы, обитающие в организме хозяина, могут включать в себя, например, симбиотические микроорганизмы (например, эндосимбиотические микроорганизмы, которые предоставляют полезные питательные вещества или ферменты хозяину), микроорганизмы–комменсалы, патогенные или паразитические микроорганизмы. Эндосимбиотический микроорганизм может являться первичным эндосимбионтом или вторичным эндосимбионтом. Симбиотический микроорганизм (например, бактерия или гриб) может являться облигатным симбионтом хозяина или факультативным симбионтом хозяина. Микроорганизмы, обитающие в организме хозяина, могут быть приобретены с помощью любого пути переноса, в том числе вертикального, горизонтального переноса или переноса множественного происхождения.
Бактерии
Xenorhabdus spp, Photorhabdus spp, Candidatus spp, Buchnera spp, Blattabacterium spp, Baumania spp, Wigglesworthia spp, Wolbachia spp, Rickettsia spp, Orientia spp, Sodalis spp, Burkholderia spp, Cupriavidus spp, Frankia spp, Sinorhizobium spp, Streptococcus spp, Wolinella spp, Xylella spp (например, Xylella fastidiosa
, Erwinia spp, Agrobacterium spp, Bacillus spp, Commensalibacter spp. (например, Commensalibacter intestine), Paenibacillus spp, Streptomyces spp, Micrococcus spp, Corynebacterium spp, Acetobacter spp (например, Acetobacter pomorum), Cyanobacteria spp, Salmonella spp, Rhodococcus spp, Pseudomonas spp, Lactobacillus spp (например, Lactobacillus plantarum), Lysobacter spp., Herbaspirillum spp., Enterococcus spp, Gluconobacter spp. (например, Gluconobacter morbifer), Alcaligenes spp, Hamiltonella spp., Klebsiella spp, Paenibacillus spp, Serratia spp., Arthrobacter spp, Azotobacter spp., Corynebacterium spp, Brevibacterium spp, Regiella spp. (например, Regiella insecticola), Thermus spp, Pseudomonas spp, Clostridium spp, Mortierella spp. (например, Mortierella elongata)
Escherichia spp.
Agrobacterium
Иллюстративные бактерии, на которые можно целенаправленно воздействовать в соответствии со способами и композициями, предусмотренными в данном документе, включают без ограничения )иВ некоторых случаях бактерии, на которые целенаправленно воздействуют с помощью модулирующего средства, могут представлять собой бактерии, которые могут переноситься от насекомого в растение, в том числе без ограничения бактериальные патогены растений (например, spp.). Неограничивающие примеры бактерий, на которые можно целенаправленно воздействовать с помощью способов и композиций, предусмотренных в данном документе, показаны в таблице 1. В некоторых случаях последовательность 16S рРНК бактерий, на которые целенаправленно воздействуют с помощью модулирующего средства, на по меньшей мере 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 99%, 99,9% или 100% идентична последовательности, приведенной в таблице 1.
Таблица 1. Примеры бактерий–мишеней и насекомых–хозяев
<b>Первичный эндосимбионт</b>
<b>Хозяин</b>
<b>Местополо</b><b>жение</b>
<b>16S рРНК</b>
Гамма–протеобактерии
<i>Carsonella ruddii</i>
Листоблошки (Psylloidea)
Бактериоциты
TATCCAGCCACAGGTTCCCCTACAGCTACCTTGTTACGACTTCACCCCAGTTACAAATCATACCGTTGTAATAGTAAAATTACTTATGATACAATTTACTTCCATGGTGTGACGGGCGGTGTGTACAAGGCTCGAGAACGTATTCACCGTAACATTCTGATTTACGATTACTAGCGATTCCAACTTCATGAAATCGAGTTACAGATTTCAATCCGAACTAAGAATATTTTTTAAGATTAGCATTATGTTGCCATATAGCATATAACTTTTTGTAATACTCATTGTAGCACGTGTGTAGCCCTACTTATAAGGGCCATGATGACTTGACGTCGTCCTCACCTTCCTCCAATTTATCATTGGCAGTTTCTTATTAGTTCTAATATATTTTTAGTAAAATAAGATAAGGGTTGCGCTCGTTATAGGACTTAACCCAACATTTCACAACACGAGCTGACGACAGCCATGCAGCACCTGTCTCAAAGCTAAAAAAGCTTTATTATTTCTAATAAATTCTTTGGATGTCAAAAGTAGGTAAGATTTTTCGTGTTGTATCGAATTAAACCACATGCTCCACCGCTTGTGCGAGCCCCCGTCAATTCATTTGAGTTTTAACCTTGCGGTCGTAATCCCCAGGCGGTCAACTTAACGCGTTAGCTTTTTCACTAAAAATATATAACTTTTTTTCATAAAACAAAATTACAATTATAATATTTAATAAATAGTTGACATCGTTTACTGCATGGACTACCAGGGTATCTAATCCTGTTTGCTCCCCATGCTTTCGTGTATTAGTGTCAGTATTAAAATAGAAATACGCCTTCGCCACTAGTATTCTTTCAGATATCTAAGCATTTCACTGCTACTCCTGAAATTCTAATTTCTTCTTTTATACTCAAGTTTATAAGTATTAATTTCAATATTAAATTACTTTAATAAATTTAAAAATTAATTTTTAAAAACAACCTGCACACCCTTTACGCCCAATAATTCCGATTAACGCTTGCACCCCTCGTATTACCGCGGCTGCTGGCACGAAGTTAGCCGGTGCTTCTTTTACAAATAACGTCAAAGATAATATTTTTTTATTATAAAATCTCTTCTTACTTTGTTGAAAGTGTTTTACAACCCTAAGGCCTTCTTCACACACGCGATATAGCTGGATCAAGCTTTCGCTCATTGTCCAATATCCCCCACTGCTGCCTTCCGTAAAAGTTTGGGCCGTGTCTCAGTCCCAATGTGGTTGTTCATCCTCTAAGATCAACTACGAATCATAGTCTTGTTAAGCTTTTACTTTAACAACTAACTAATTCGATATAAGCTCTTCTATTAGCGAACGACATTCTCGTTCTTTATCCATTAGGATACATATTGAATTACTATACATTTCTATATACTTTTCTAATACTAATAGGTAGATTCTTATATATTACTCACCCGTTCGCTGCTAATTATTTTTTTAATAATTCGCACAACTTGCATGTGTTAAGCTTATCGCTAGCGTTCAATCTGAGCTATGATCAAACTCA(SEQ ID NO: 1)
<i>Portiera aleyrodidarum</i><i>BT–B</i>
Белокрылки (Aleyrodoidea)
Бактериоциты
AAGAGTTTGATCATGGCTCAGATTGAACGCTAGCGGCAGACATAACACATGCAAGTCGAGCGGCATCATACAGGTTGGCAAGCGGCGCACGGGTGAGTAATACATGTAAATATACCTAAAAGTGGGGAATAACGTACGGAAACGTACGCTAATACCGCATAATTATTACGAGATAAAGCAGGGGCTTGATAAAAAAAATCAACCTTGCGCTTTTAGAAAATTACATGCCGGATTAGCTAGTTGGTAGAGTAAAAGCCTACCAAGGTAACGATCCGTAGCTGGTCTGAGAGGATGATCAGCCACACTGGGACTGAGAAAAGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTGGACAATGGGGGGAACCCTGATCCAGTCATGCCGCGTGTGTGAAGAAGGCCTTTGGGTTGTAAAGCACTTTCAGCGAAGAAGAAAAGTTAGAAAATAAAAAGTTATAACTATGACGGTACTCGCAGAAGAAGCACCGGCTAACTCCGTGCCAGCAGCCGCGGTAAGACGGAGGGTGCAAGCGTTAATCAGAATTACTGGGCGTAAAGGGCATGTAGGTGGTTTGTTAAGCTTTATGTGAAAGCCCTATGCTTAACATAGGAACGGAATAAAGAACTGACAAACTAGAGTGCAGAAGAGGAAGGTAGAATTCCCGGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGATATCTGGAGGAATACCAGTTGCGAAGGCGACCTTCTGGGCTGACACTGACACTGAGATGCGAAAGCGTGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCTGTAAACGATATCAACTAGCCGTTGGATTCTTAAAGAATTTTGTGGCGTAGCTAACGCGATAAGTTGATCGCCTGGGGAGTACGGTCGCAAGGCTAAAACTCAAATGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGATGCAACGCGCAAAACCTTACCTACTCTTGACATCCAAAGTACTTTCCAGAGATGGAAGGGTGCCTTAGGGAACTTTGAGACAGGTGCTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTTGTGAAATGTTGGGTTAAGTCCCGTAACGAGCGCAACCCTTGTCCTTAGTTGCCAACGCATAAGGCGGGAACTTTAAGGAGACTGCTGGTGATAAACCGGAGGAAGGTGGGGACGACGTCAAGTCATCATGGCCCTTAAGAGTAGGGCAACACACGTGCTACAATGGCAAAAACAAAGGGTCGCAAAATGGTAACATGAAGCTAATCCCAAAAAAATTGTCTTAGTTCGGATTGGAGTCTGAAACTCGACTCCATAAAGTCGGAATCGCTAGTAATCGTGAATCAGAATGTCACGGTGAATACGTTCTCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCATGGAAGTGAAATGCACCAGAAGTGGCAAGTTTAACCAAAAAACAGGAGAACAGTCACTACGGTGTGGTTCATGACTGGGGTGAAGTCGTAACAAGGTAGCTGTAGGGGAACCTGTGGCTGGATCACCTCCTTAA(SEQ ID NO: 2)
<i>Buchnera aphidicola, штамм APS (Acyrthosiphon pisum) </i>
Тли (Aphidoidea)
Бактериоциты
AGAGTTTGATCATGGCTCAGATTGAACGCTGGCGGCAAGCCTAACACATGCAAGTCGAGCGGCAGCGAGAAGAGAGCTTGCTCTCTTTGTCGGCAAGCGGCAAACGGGTGAGTAATATCTGGGGATCTACCCAAAAGAGGGGGATAACTACTAGAAATGGTAGCTAATACCGCATAATGTTGAAAAACCAAAGTGGGGGACCTTTTGGCCTCATGCTTTTGGATGAACCCAGACGAGATTAGCTTGTTGGTAGAGTAATAGCCTACCAAGGCAACGATCTCTAGCTGGTCTGAGAGGATAACCAGCCACACTGGAACTGAGACACGGTCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTGCACAATGGGCGAAAGCCTGATGCAGCTATGCCGCGTGTATGAAGAAGGCCTTAGGGTTGTAAAGTACTTTCAGCGGGGAGGAAAAAAATAAAACTAATAATTTTATTTCGTGACGTTACCCGCAGAAGAAGCACCGGCTAACTCCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGGAGGGTGCAAGCGTTAATCAGAATTACTGGGCGTAAAGAGCGCGTAGGTGGTTTTTTAAGTCAGGTGTGAAATCCCTAGGCTCAACCTAGGAACTGCATTTGAAACTGGAAAACTAGAGTTTCGTAGAGGGAGGTAGAATTCTAGGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGATATCTGGAGGAATACCCGTGGCGAAAGCGGCCTCCTAAACGAAAACTGACACTGAGGCGCGAAAGCGTGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCATGCCGTAAACGATGTCGACTTGGAGGTTGTTTCCAAGAGAAGTGACTTCCGAAGCTAACGCATTAAGTCGACCGCCTGGGGAGTACGGCCGCAAGGCTAAAACTCAAATGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGATGCAACGCGAAAAACCTTACCTGGTCTTGACATCCACAGAATTCTTTAGAAATAAAGAAGTGCCTTCGGGAGCTGTGAGACAGGTGCTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTTGTGAAATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTATCCCCTGTTGCCAGCGGTTCGGCCGGGAACTCAGAGGAGACTGCCGGTTATAAACCGGAGGAAGGTGGGGACGACGTCAAGTCATCATGGCCCTTACGACCAGGGCTACACACGTGCTACAATGGTTTATACAAAGAGAAGCAAATCTGCAAAGACAAGCAAACCTCATAAAGTAAATCGTAGTCCGGACTGGAGTCTGCAACTCGACTCCACGAAGTCGGAATCGCTAGTAATCGTGGATCAGAATGCCACGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCATGGGAGTGGGTTGCAAAAGAAGCAGGTATCCTAACCCTTTAAAAGGAAGGCGCTTACCACTTTGTGATTCATGACTGGGGTGAAGTCGTAACAAGGTAACCGTAGGGGAACCTGCGGTTGGATCACCTCCTT(SEQ ID NO: 3)
<i>Buchnera aphidicola, штамм Sg (Schizaphis graminum)</i>
Тли (Aphidoidea)
Бактериоциты
AAACTGAAGAGTTTGATCATGGCTCAGATTGAACGCTGGCGGCAAGCCTAACACATGCAAGTCGAGCGGCAGCGAAAAGAAAGCTTGCTTTCTTGTCGGCGAGCGGCAAACGGGTGAGTAATATCTGGGGATCTGCCCAAAAGAGGGGGATAACTACTAGAAATGGTAGCTAATACCGCATAAAGTTGAAAAACCAAAGTGGGGGACCTTTTTTAAAGGCCTCATGCTTTTGGATGAACCCAGACGAGATTAGCTTGTTGGTAAGGTAAAAGCTTACCAAGGCAACGATCTCTAGCTGGTCTGAGAGGATAACCAGCCACACTGGAACTGAGACACGGTCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTGCACAATGGGCGAAAGCCTGATGCAGCTATGCCGCGTGTATGAAGAAGGCCTTAGGGTTGTAAAGTACTTTCAGCGGGGAGGAAAAAATTAAAACTAATAATTTTATTTTGTGACGTTACCCGCAGAAGAAGCACCGGCTAACTCCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGGAGGGTGCGAGCGTTAATCAGAATTACTGGGCGTAAAGAGCACGTAGGTGGTTTTTTAAGTCAGATGTGAAATCCCTAGGCTTAACCTAGGAACTGCATTTGAAACTGAAATGCTAGAGTATCGTAGAGGGAGGTAGAATTCTAGGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGATATCTGGAGGAATACCCGTGGCGAAAGCGGCCTCCTAAACGAATACTGACACTGAGGTGCGAAAGCGTGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCATGCCGTAAACGATGTCGACTTGGAGGTTGTTTCCAAGAGAAGTGACTTCCGAAGCTAACGCGTTAAGTCGACCGCCTGGGGAGTACGGCCGCAAGGCTAAAACTCAAATGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGATGCAACGCGAAAAACCTTACCTGGTCTTGACATCCACAGAATTTTTTAGAAATAAAAAAGTGCCTTCGGGAACTGTGAGACAGGTGCTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTTGTGAAATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTATCCCCTGTTGCCAGCGGTTCGGCCGGGAACTCAGAGGAGACTGCCGGTTATAAACCGGAGGAAGGTGGGGACGACGTCAAGTCATCATGGCCCTTACGACCAGGGCTACACACGTGCTACAATGGTTTATACAAAGAGAAGCAAATCTGTAAAGACAAGCAAACCTCATAAAGTAAATCGTAGTCCGGACTGGAGTCTGCAACTCGACTCCACGAAGTCGGAATCGCTAGTAATCGTGGATCAGAATGCCACGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCATGGGAGTGGGTTGCAAAAGAAGCAGATTTCCTAACCACGAAAGTGGAAGGCGTCTACCACTTTGTGATTCATGACTGGGGTGAAGTCGTAACAAGGTAACCGTAGGGGAACCTGCGGTTGGATCACCTCCTTA(SEQ ID NO: 4)
<i>Buchnera aphidicola, штамм Bp (Baizongia pistaciae)</i>
Тли (Aphidoidea)
Бактериоциты
ACTTAAAATTGAAGAGTTTGATCATGGCTCAGATTGAACGCTGGCGGCAAGCTTAACACATGCAAGTCGAGCGGCATCGAAGAAAAGTTTACTTTTCTGGCGGCGAGCGGCAAACGGGTGAGTAACATCTGGGGATCTACCTAAAAGAGGGGGACAACCATTGGAAACGATGGCTAATACCGCATAATGTTTTTAAATAAACCAAAGTAGGGGACTAAAATTTTTAGCCTTATGCTTTTAGATGAACCCAGACGAGATTAGCTTGATGGTAAGGTAATGGCTTACCAAGGCGACGATCTCTAGCTGGTCTGAGAGGATAACCAGCCACACTGGAACTGAGATACGGTCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTGCACAATGGGCTAAAGCCTGATGCAGCTATGCCGCGTGTATGAAGAAGGCCTTAGGGTTGTAAAGTACTTTCAGCGGGGAGGAAAGAATTATGTCTAATATACATATTTTGTGACGTTACCCGAAGAAGAAGCACCGGCTAACTCCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGGAGGGTGCGAGCGTTAATCAGAATTACTGGGCGTAAAGAGCACGTAGGCGGTTTATTAAGTCAGATGTGAAATCCCTAGGCTTAACTTAGGAACTGCATTTGAAACTAATAGACTAGAGTCTCATAGAGGGAGGTAGAATTCTAGGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGATATCTAGAGGAATACCCGTGGCGAAAGCGACCTCCTAAATGAAAACTGACGCTGAGGTGCGAAAGCGTGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCATGCTGTAAACGATGTCGACTTGGAGGTTGTTTCCTAGAGAAGTGGCTTCCGAAGCTAACGCATTAAGTCGACCGCCTGGGGAGTACGGTCGCAAGGCTAAAACTCAAATGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGATGCAACGCGAAGAACCTTACCTGGTCTTGACATCCATAGAATTTTTTAGAGATAAAAGAGTGCCTTAGGGAACTATGAGACAGGTGCTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTTGTGAAATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCCTATCCTTTGTTGCCATCAGGTTATGCTGGGAACTCAGAGGAGACTGCCGGTTATAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAGTCATCATGGCCCTTACGACCAGGGCTACACACGTGCTACAATGGCATATACAAAGAGATGCAACTCTGCGAAGATAAGCAAACCTCATAAAGTATGTCGTAGTCCGGACTGGAGTCTGCAACTCGACTCCACGAAGTAGGAATCGCTAGTAATCGTGGATCAGAATGCCACGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCATGGGAGTGGGTTGCAAAAGAAGCAGGTAGCTTAACCAGATTATTTTATTGGAGGGCGCTTACCACTTTGTGATTCATGACTGGGGTGAAGTCGTAACAAGGTAACCGTAGGGGAACCTGCGGTTGGATCACCTCCTTA(SEQ ID NO: 5)
<i>Buchnera aphidicola BCc</i>
Тли (Aphidoidea)
Бактериоциты
ATGAGATCATTAATATATAAAAATCATGTTCCAATTAAAAAATTAGGACAAAATTTTTTACAGAATAAAGAAATTATTAATCAGATAATTAATTTAATAAATATTAATAAAAATGATAATATTATTGAAATAGGATCAGGATTAGGAGCGTTAACTTTTCCTATTTGTAGAATCATTAAAAAAATGATAGTATTAGAAATTGATGAAGATCTTGTGTTTTTTTTAACTCAAAGTTTATTTATTAAAAAATTACAAATTATAATTGCTGATATTATAAAATTTGATTTTTGTTGTTTTTTTTCTTTACAGAAATATAAAAAATATAGGTTTATTGGTAATTTACCATATAATATTGCTACTATATTTTTTTTAAAAACAATTAAATTTCTTTATAATATAATTGATATGCATTTTATGTTTCAAAAAGAAGTAGCAAAGAGATTATTAGCTACTCCTGGTACTAAAGAATATGGTAGATTAAGTATTATTGCACAATATTTTTATAAGATAGAAACTGTTATTAATGTTAATAAATTTAATTTTTTTCCTACTCCTAAAGTAGATTCTACTTTTTTACGATTTACTCCTAAATATTTTAATAGTAAATATAAAATAGATAAACATTTTTCTGTTTTAGAATTAATTACTAGATTTTCTTTTCAACATAGAAGAAAATTTTTAAATAATAATTTAATATCTTTATTTTCTACAAAAGAATTAATTTCTTTAGATATTGATCCATATTCAAGAGCAGAAAATGTTTCTTTAATTCAATATTGTAAATTAATGAAATATTATTTGAAAAGAAAAATTTTATGTTTAGATTAA(SEQ ID NO: 6)
<i>Buchnera aphidicola (Cinara tujafilina)</i>
Тли (Aphidoidea)
Бактериоциты
TTATCTTATTTCACATATACGTAATATTGCGCTGCGTGCACGAGGATTTTTTTGAATTTCAGATATATTTGGTTTAATACGTTTAATAAAACGTATTTTTTTTTTTATTTTTCTTATTTGCAATTCAGTAATAGGAAGTTTTTTAGGTATATTTGGATAATTACTGTAATTCTTAATAAAGTTTTTTACAATCCTATCTTCAATAGAATGAAAACTAATAATAGCAATTTTTGATCCGGAATGTAATATGTTAATAATAATTTTTAATATTTTATGTAATTCATTTATTTCTTGGTTAATATATATTCGAAAAGCTTGAAATGTTCTCGTAGCTGGATGTTTAAATTTGTCATATTTTGGGATTGATTTTTTTATGATTTGAACTAACTCTAACGTGCTTGTTATGGTTTTTTTTTTTATTTGTAATATGATGGCTCGGGATATTTTTTTTGCGTATTTTTCTTCGCCAAAATTTTTTATTACCTGTTCTATTGTTTTTTGGTTTGTTTTTTTTAACCATTGACTAACTGATATTCCAGATTTAGGGTTCATACGCATATCTAAAGGTCCATCATTCATAAATGAAAATCCTCGGATACTAGAATTTAACTGTATTGAAGAAATACCTAAATCTAATAATATTCCATCTATTTTATCTCTATTTTTTTCTTTTTTTAATATTTTTTCAATATTAGAAAATTTACCTAAAAATATTTTAAATCGCGAATCTTTTATTTTTTTTCCGATTTTTATAGATTGTGGGTCTTGATCAATACTATATAACTTTCCATTAACCCCTAATTCTTGAAGAATTGCTTTTGAATGACCACCACCTCCAAATGTACAATCAACATATGTACCGTCTTTTTTTATTTTTAAGTATTGTATGATTTCTTTTGTTAAAACAGGTTTATGAATCAT(SEQ ID NO: 7)
<i>Buchnera aphidicola, штамм G002 (Myzus persicae)</i>
Тли (Aphidoidea)
Бактериоциты
ATGAAAAGTATAAAAACTTTTAAAAAACACTTTCCTGTGAAAAAATATGGACAAAATTTTCTTATTAATAAAGAGATCATAAAAAATATTGTTAAAAAAATTAATCCAAATATAGAACAAACATTAGTAGAAATCGGACCAGGATTAGCTGCATTAACTGAGCCCATATCTCAGTTATTAAAAGAGTTAATAGTTATTGAAATAGACTGTAATCTATTATATTTTTTAAAAAAACAACCATTTTATTCAAAATTAATAGTTTTTTGTCAAGATGCTTTAAACTTTAATTATACAAATTTATTTTATAAAAAAAATAAATTAATTCGTATTTTTGGTAATTTACCATATAATATCTCTACATCTTTAATTATTTTTTTATTTCAACACATTAGAGTAATTCAAGATATGAATTTTATGCTTCAAAAAGAAGTTGCTGCAAGATTAATTGCATTACCTGGAAATAAATATTACGGTCGTTTGAGCATTATATCTCAATATTATTGTGATATCAAAATTTTATTAAATGTTGCTCCTGAAGATTTTTGGCCTATTCCGAGAGTTCATTCTATATTTGTAAATTTAACACCTCATCATAATTCTCCTTATTTTGTTTATGATATTAATATTTTAAGCCTTATTACAAATAAGGCTTTCCAAAATAGAAGAAAAATATTACGTCATAGTTTAAAAAATTTATTTTCTGAAACAACTTTATTAAATTTAGATATTAATCCCAGATTAAGAGCTGAAAATATTTCTGTTTTTCAGTATTGTCAATTAGCTAATTATTTGTATAAAAAAAATTATACTAAAAAAAATTAA(SEQ ID NO: 8)
<i>Buchnera aphidicola, штамм Ak (Acyrthosiphon kondoi)</i>
Тли (Aphidoidea)
Бактериоциты
ATTATAAAAAATTTTAAAAAACATTTTCCTTTAAAAAGGTATGGACAAAATTTTCTTGTCAATACAAAAACTATTCAAAAGATAATTAATATAATTAATCCAAACACCAAACAAACATTAGTGGAAATTGGACCTGGATTAGCTGCATTAACAAAACCAATTTGTCAATTATTAGAAGAATTAATTGTTATTGAAATAGATCCTAATTTATTGTTTTTATTAAAAAAACGTTCATTTTATTCAAAATTAACAGTTTTTTATCAAGACGCTTTAAATTTCAATTATACAGATTTGTTTTATAAGAAAAATCAATTAATTCGTGTTTTTGGAAACTTGCCATATAATATTTCTACATCTTTAATTATTTCTTTATTCAATCATATTAAAGTTATTCAAGATATGAATTTTATGTTACAGAAAGAGGTTGCTGAAAGATTAATTTCTATTCCTGGAAATAAATCTTATGGCCGTTTAAGCATTATTTCTCAGTATTATTGTAAAATTAAAATATTATTAAATGTTGTACCTGAAGATTTTCGACCTATACCGAAAGTGCATTCTGTTTTTATCAATTTAACTCCTCATACCAATTCTCCATATTTTGTTTATGATACAAATATCCTCAGTTCTATCACAAGAAATGCTTTTCAAAATAGAAGGAAAATTTTGCGTCATAGTTTAAAAAATTTATTTTCTGAAAAAGAACTAATTCAATTAGAAATTAATCCAAATTTACGAGCTGAAAATATTTCTATCTTTCAGTATTGTCAATTAGCTGATTATTTATATAAAAAATTAAATAATCTTGTAAAAATCAATTAA(SEQ ID NO: 9)
<i>Buchnera aphidicola, штамм Ua (Uroleucon ambrosiae)</i>
Тли (Aphidoidea)
Бактериоциты
ATGATACTAAATAAATATAAAAAATTTATTCCTTTAAAAAGATACGGACAAAATTTTCTTGTAAATAGAGAAATAATCAAAAATATTATCAAAATAATTAATCCTAAAAAAACGCAAACATTATTAGAAATTGGACCGGGTTTAGGTGCGTTAACAAAACCTATTTGTGAATTTTTAAATGAACTTATCGTCATTGAAATAGATCCTAATATATTATCTTTTTTAAAGAAATGTATATTTTTTGATAAATTAAAAATATATTGTCATAATGCTTTAGATTTTAATTATAAAAATATATTCTATAAAAAAAGTCAATTAATTCGTATTTTTGGAAATTTACCATATAATATTTCTACATCTTTAATAATATATTTATTTCGGAATATTGATATTATTCAAGATATGAATTTTATGTTACAACAAGAAGTGGCTAAAAGATTAGTTGCTATTCCTGGTGAAAAACTTTATGGTCGTTTAAGTATTATATCTCAATATTATTGTAATATTAAAATATTATTACATATTCGACCTGAAAATTTTCAACCTATTCCTAAAGTTAATTCAATGTTTGTAAATTTAACTCCGCATATTCATTCTCCTTATTTTGTTTATGATATTAATTTATTAACTAGTATTACAAAACATGCTTTTCAACATAGAAGAAAAATATTGCGTCATAGTTTAAGAAATTTTTTTTCTGAGCAAGATTTAATTCATTTAGAAATTAATCCAAATTTAAGAGCTGAAAATGTTTCTATTATTCAATATTGTCAATTGGCTAATAATTTATATAAAAAACATAAACAGTTTATTAATAATTAA(SEQ ID NO: 10)
<i>Buchnera aphidicola (Aphis glycines)</i>
Тли (Aphidoidea)
Бактериоциты
ATGAAAAAGCATATTCCTATAAAAAAATTTAGTCAAAATTTTCTTGTAGATTTGAGTGTGATTAAAAAAATAATTAAATTTATTAATCCGCAGTTAAATGAAATATTGGTTGAAATTGGACCGGGATTAGCTGCTATCACTCGACCTATTTGTGATTTGATAGATCATTTAATTGTGATTGAAATTGATAAAATTTTATTAGATAGATTAAAACAGTTCTCATTTTATTCAAAATTAACAGTATATCATCAAGATGCTTTAGCATTTGATTACATAAAGTTATTTAATAAAAAAAATAAATTAGTTCGAATTTTTGGTAATTTACCATATCATGTTTCTACGTCTTTAATATTGCATTTATTTAAAAGAATTAATATTATTAAAGATATGAATTTTATGCTACAAAAAGAAGTTGCTGAACGTTTAATTGCAACTCCAGGTAGTAAATTATATGGTCGTTTAAGTATTATTTCTCAATATTATTGTAATATAAAAGTTTTATTGCATGTGTCTTCAAAATGTTTTAAACCAGTTCCTAAAGTAGAATCAATTTTTCTTAATTTGACACCTTATACTGATTATTTCCCTTATTTTACTTATAATGTAAACGTTCTTAGTTATATTACAAATTTAGCTTTTCAAAAAAGAAGAAAAATATTACGTCATAGTTTAGGTAAAATATTTTCTGAAAAAGTTTTTATAAAATTAAATATTAATCCCAAATTAAGACCTGAGAATATTTCTATATTACAATATTGTCAGTTATCTAATTATATGATAGAAAATAATATTCATCAGGAACATGTTTGTATTTAA(SEQ ID NO: 11)
<i>Annandia pinicola</i>
(Phylloxeroidea)
Бактериоциты
AGATTGAACGCTGGCGGCATGCCTTACACATGCAAGTCGAACGGTAACAGGTCTTCGGACGCTGACGAGTGGCGAACGGGTGAGTAATACATCGGAACGTGCCCAGTCGTGGGGGATAACTACTCGAAAGAGTAGCTAATACCGCATACGATCTGAGGATGAAAGCGGGGGACCTTCGGGCCTCGCGCGATTGGAGCGGCCGATGGCAGATTAGGTAGTTGGTGGGATAAAAGCTTACCAAGCCGACGATCTGTAGCTGGTCTGAGAGGACGACCAGCCACACTGGAACTGAGATACGGTCCAGACTCTTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTGCACAATGGGCGCAAGCCTGATGCAGCTATGTCGCGTGTATGAAGAAGACCTTAGGGTTGTAAAGTACTTTCGATAGCATAAGAAGATAATGAGACTAATAATTTTATTGTCTGACGTTAGCTATAGAAGAAGCACCGGCTAACTCCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGGGGGGTGCTAGCGTTAATCGGAATTACTGGGCGTAAAGAGCATGTAGGTGGTTTATTAAGTCAGATGTGAAATCCCTGGACTTAATCTAGGAACTGCATTTGAAACTAATAGGCTAGAGTTTCGTAGAGGGAGGTAGAATTCTAGGTGTAGCGGTGAAATGCATAGATATCTAGAGGAATATCAGTGGCGAAGGCGACCTTCTGGACGATAACTGACGCTAAAATGCGAAAGCATGGGTAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCATGCTGTAAACGATGTCGACTAAGAGGTTGGAGGTATAACTTTTAATCTCTGTAGCTAACGCGTTAAGTCGACCGCCTGGGGAGTACGGTCGCAAGGCTAAAACTCAAATGAATTGACGGGGGCCTGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGATGCAACGCGTAAAACCTTACCTGGTCTTGACATCCACAGAATTTTACAGAAATGTAGAAGTGCAATTTGAACTGTGAGACAGGTGCTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTTGTGAAATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTGTCCTTTGTTACCATAAGATTTAAGGAACTCAAAGGAGACTGCCGGTGATAAACTGGAGGAAGGCGGGGACGACGTCAAGTCATCATGGCCCTTATGACCAGGGCTACACACGTGCTACAATGGCATATACAAAGAGATGCAATATTGCGAAATAAAGCCAATCTTATAAAATATGTCCTAGTTCGGACTGGAGTCTGCAACTCGACTCCACGAAGTCGGAATCGCTAGTAATCGTGGATCAGCATGCCACGGTGAATATGTTTCCAGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCATGGAAGTGGATTGCAAAAGAAGTAAGAAAATTAACCTTCTTAACAAGGAAATAACTTACCACTTTGTGACTCATAACTGGGGTGA(SEQ ID NO: 12)
<i>Moranella endobia</i>
(Coccoidea)
Бактериоциты
TCTTTTTGGTAAGGAGGTGATCCAACCGCAGGTTCCCCTACGGTTACCTTGTTACGACTTCACCCCAGTCATGAATCACAAAGTGGTAAGCGCCCTCCTAAAAGGTTAGGCTACCTACTTCTTTTGCAACCCACTTCCATGGTGTGACGGGCGGTGTGTACAAGGCCCGGGAACGTATTCACCGTGGCATTCTGATCCACGATTACTAGCGATTCCTACTTCATGGAGTCGAGTTGCAGACTCCAATCCGGACTACGACGCACTTTATGAGGTCCGCTAACTCTCGCGAGCTTGCTTCTCTTTGTATGCGCCATTGTAGCACGTGTGTAGCCCTACTCGTAAGGGCCATGATGACTTGACGTCATCCCCACCTTCCTCCGGTTTATCACCGGCAGTCTCCTTTGAGTTCCCGACCGAATCGCTGGCAAAAAAGGATAAGGGTTGCGCTCGTTGCGGGACTTAACCCAACATTTCACAACACGAGCTGACGACAGCCATGCAGCACCTGTCTCAGAGTTCCCGAAGGTACCAAAACATCTCTGCTAAGTTCTCTGGATGTCAAGAGTAGGTAAGGTTCTTCGCGTTGCATCGAATTAAACCACATGCTCCACCGCTTGTGCGGGCCCCCGTCAATTCATTTGAGTTTTAACCTTGCGGCCGTACTCCCCAGGCGGTCGATTTAACGCGTTAACTACGAAAGCCACAGTTCAAGACCACAGCTTTCAAATCGACATAGTTTACGGCGTGGACTACCAGGGTATCTAATCCTGTTTGCTCCCCACGCTTTCGTACCTGAGCGTCAGTATTCGTCCAGGGGGCCGCCTTCGCCACTGGTATTCCTCCAGATATCTACACATTTCACCGCTACACCTGGAATTCTACCCCCCTCTACGAGACTCTAGCCTATCAGTTTCAAATGCAGTTCCTAGGTTAAGCCCAGGGATTTCACATCTGACTTAATAAACCGCCTACGTACTCTTTACGCCCAGTAATTCCGATTAACGCTTGCACCCTCCGTATTACCGCGGCTGCTGGCACGGAGTTAGCCGGTGCTTCTTCTGTAGGTAACGTCAATCAATAACCGTATTAAGGATATTGCCTTCCTCCCTACTGAAAGTGCTTTACAACCCGAAGGCCTTCTTCACACACGCGGCATGGCTGCATCAGGGTTTCCCCCATTGTGCAATATTCCCCACTGCTGCCTCCCGTAGGAGTCTGGACCGTGTCTCAGTTCCAGTGTGGCTGGTCATCCTCTCAGACCAGCTAGGGATCGTCGCCTAGGTAAGCTATTACCTCACCTACTAGCTAATCCCATCTGGGTTCATCTGAAGGTGTGAGGCCAAAAGGTCCCCCACTTTGGTCTTACGACATTATGCGGTATTAGCTACCGTTTCCAGCAGTTATCCCCCTCCATCAGGCAGATCCCCAGACTTTACTCACCCGTTCGCTGCTCGCCGGCAAAAAAGTAAACTTTTTTCCGTTGCCGCTCAACTTGCATGTGTTAGGCCTGCCGCCAGCGTTCAATCTGAGCCATGATCAAACTCTTCAATTAAA(SEQ ID NO: 13)
<i>Ishikawaella capsulata Mpkobe</i>
(Heteroptera)
Бактериоциты
AAATTGAAGAGTTTGATCATGGCTCAGATTGAACGCTAGCGGCAAGCTTAACACATGCAAGTCGAACGGTAACAGAAAAAAGCTTGCTTTTTTGCTGACGAGTGGCGGACGGGTGAGTAATGTCTGGGGATCTACCTAATGGCGGGGGATAACTACTGGAAACGGTAGCTAATACCGCATAATGTTGTAAAACCAAAGTGGGGGACCTTATGGCCTCACACCATTAGATGAACCTAGATGGGATTAGCTTGTAGGTGGGGTAAAGGCTCACCTAGGCAACGATCCCTAGCTGGTCTGAGAGGATGACCAGCCACACTGGAACTGAGATACGGTCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATCTTGCACAATGGGCGCAAGCCTGATGCAGCTATGTCGCGTGTATGAAGAAGGCCTTAGGGTTGTAAAGTACTTTCATCGGGGAAGAAGGATATGAGCCTAATATTCTCATATATTGACGTTACCTGCAGAAGAAGCACCGGCTAACTCCGTGCCAGCAGCCGCGGTAACACGGAGGGTGCGAGCGTTAATCGGAATTACTGGGCGTAAAGAGCACGTAGGTGGTTTATTAAGTCATATGTGAAATCCCTGGGCTTAACCTAGGAACTGCATGTGAAACTGATAAACTAGAGTTTCGTAGAGGGAGGTGGAATTCCAGGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGATATCTGGAGGAATATCAGAGGCGAAGGCGACCTTCTGGACGAAAACTGACACTCAGGTGCGAAAGCGTGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCTGTAAACAATGTCGACTAAAAAACTGTGAGCTTGACTTGTGGTTTTTGTAGCTAACGCATTAAGTCGACCGCCTGGGGAGTACGGCCGCAAGGTTAAAACTCAAATGAATTGACGGGGGTCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGATGCAACGCGAAAAACCTTACCTGGTCTTGACATCCAGCGAATTATATAGAAATATATAAGTGCCTTTCGGGGAACTCTGAGACGCTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTTGTGAAATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCCCTTATCCTCTGTTGCCAGCGGCATGGCCGGGAACTCAGAGGAGACTGCCAGTATTAAACTGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAGTCATCATGGCCCTTATGACCAGGGCTACACACGTGCTACAATGGTGTATACAAAGAGAAGCAATCTCGCAAGAGTAAGCAAAACTCAAAAAGTACATCGTAGTTCGGATTAGAGTCTGCAACTCGACTCTATGAAGTAGGAATCGCTAGTAATCGTGGATCAGAATGCCACGGTGAATACGTTCTCTGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCATGGGAGTAAGTTGCAAAAGAAGTAGGTAGCTTAACCTTTATAGGAGGGCGCTTACCACTTTGTGATTTATGACTGGGGTGAAGTCGTAACAAGGTAACTGTAGGGGAACCTGTGGTTGGATTACCTCCTTA(SEQ ID NO: 14)
<i>Baumannia cicadellinicola</i>
Цикадки (Cicadellinae)
Бактериоциты
TTCAATTGAAGAGTTTGATCATGGCTCAGATTGAACGCTGGCGGTAAGCTTAACACATGCAAGTCGAGCGGCATCGGAAAGTAAATTAATTACTTTGCCGGCAAGCGGCGAACGGGTGAGTAATATCTGGGGATCTACCTTATGGAGAGGGATAACTATTGGAAACGATAGCTAACACCGCATAATGTCGTCAGACCAAAATGGGGGACCTAATTTAGGCCTCATGCCATAAGATGAACCCAGATGAGATTAGCTAGTAGGTGAGATAATAGCTCACCTAGGCAACGATCTCTAGTTGGTCTGAGAGGATGACCAGCCACACTGGAACTGAGACACGGTCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATCTTGCACAATGGGGGAAACCCTGATGCAGCTATACCGCGTGTGTGAAGAAGGCCTTCGGGTTGTAAAGCACTTTCAGCGGGGAAGAAAATGAAGTTACTAATAATAATTGTCAATTGACGTTACCCGCAAAAGAAGCACCGGCTAACTCCGTGCCAGCAGCCGCGGTAAGACGGAGGGTGCAAGCGTTAATCGGAATTACTGGGCGTAAAGCGTATGTAGGCGGTTTATTTAGTCAGGTGTGAAAGCCCTAGGCTTAACCTAGGAATTGCATTTGAAACTGGTAAGCTAGAGTCTCGTAGAGGGGGGGAGAATTCCAGGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGAGATCTGGAAGAATACCAGTGGCGAAGGCGCCCCCCTGGACGAAAACTGACGCTCAAGTACGAAAGCGTGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCTGTAAACGATGTCGATTTGAAGGTTGTAGCCTTGAGCTATAGCTTTCGAAGCTAACGCATTAAATCGACCGCCTGGGGAGTACGACCGCAAGGTTAAAACTCAAATGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGATACAACGCGAAAAACCTTACCTACTCTTGACATCCAGAGTATAAAGCAGAAAAGCTTTAGTGCCTTCGGGAACTCTGAGACAGGTGCTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTTGTGAAATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTATCCTTTGTTGCCAACGATTAAGTCGGGAACTCAAAGGAGACTGCCGGTGATAAACCGGAGGAAGGTGAGGATAACGTCAAGTCATCATGGCCCTTACGAGTAGGGCTACACACGTGCTACAATGGTGCATACAAAGAGAAGCAATCTCGTAAGAGTTAGCAAACCTCATAAAGTGCATCGTAGTCCGGATTAGAGTCTGCAACTCGACTCTATGAAGTCGGAATCGCTAGTAATCGTGGATCAGAATGCCACGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCATGGGAGTGTATTGCAAAAGAAGTTAGTAGCTTAACTCATAATACGAGAGGGCGCTTACCACTTTGTGATTCATAACTGGGGTGAAGTCGTAACAAGGTAACCGTAGGGGAACCTGCGGTTGGATCACCTCCTTACACTAAA(SEQ ID NO: 15)
<i>Sodalis–подобные симбионты</i>
Rhopalus sapporensis
Более широкий тропизм к тканям
ATTGAACGCTGGCGGCAGGCCTAACACATGCAAGTCGAGCGGCAGCGGGAAGAAGCTTGCTTCTTTGCCGGCGAGCGGCGGACGGGTGAGTAATGTCTGGGGATCTGCCCGATGGAGGGGGATAACTACTGGAAACGGTAGCTAATACCGCATAACGTCGCAAGACCAAAGTGGGGGACCTTCGGGCCTCACACCATCGGATGAACCCAGGTGGGATTAGCTAGTAGGTGGGGTAATGGCTCACCTAGGCGACGATCCCTAGCTGGTCTGAGAGGATGACCAGTCACACTGGAACTGAGACACGGTCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTGCACAATGGGGGAAACCCTGATGCAGCCATGCCGCGTGTGTGAAGAAGGCCTTCGGGTTGTAAAGCACTTTCAGCGGGGAGGAAGGCGATGGCGTTAATAGCGCTATCGATTGACGTTACCCGCAGAAGAAGCACCGGCTAACTCCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGGAGGGTGCGAGCGTTAATCGGAATTACTGGGCGTAAAGCGTACGCAGGCGGTCTGTTAAGTCAGATGTGAAATCCCCGGGCTCAACCTGGGAACTGCATTTGAAACTGGCAGGCTAGAGTCTCGTAGAGGGGGGTAGAATTCCAGGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGAGATCTGGAGGAATACCGGTGGCGAAGGCGGCCCCCTGGACGAAGACTGACGCTCAGGTACGAAAGCGTGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCTGTAAACGATGTCGATTTGAAGGTTGTGGCCTTGAGCCGTGGCTTTCGGAGCTAACGTGTTAAATCGACCGCCTGGGGAGTACGGCCGCAAGGTTAAAACTCAAATGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGATGCAACGCGAAGAACCTTACCTACTCTTGACATCCAGAGAACTTGGCAGAGATGCTTTGGTGCCTTCGGGAACTCTGAGACAGGTGCTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTTGTGAAATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTATCCTTTATTGCCAGCGATTCGGTCGGGAACTCAAAGGAGACTGCCGGTGATAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAGTCATCATGGCCCTTACGAGTAGGGCTACACACGTGCTACAATGGCGCATACAAAGAGAAGCGATCTCGCGAGAGTCAGCGGACCTCATAAAGTGCGTCGTAGTCCGGATTGGAGTCTGCAACTCGACTCCATGAAGTCGGAATCGCTAGTAATCGTGGATCAGAATGCCACGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCATGGGAGTGGGTTGCAAAAGAAGTAGGTAGCTTAACCTTCGGGAGGGCGCTTACCACTTTGTGATTCATGACTGGGGTG(SEQ ID NO: 16)
<i>Hartigia pinicola</i>
Хермес сосновой древесины
Бактериоциты
AGATTTAACGCTGGCGGCAGGCCTAACACATGCAAGTCGAGCGGTACCAGAAGAAGCTTGCTTCTTGCTGACGAGCGGCGGACGGGTGAGTAATGTATGGGGATCTGCCCGACAGAGGGGGATAACTATTGGAAACGGTAGCTAATACCGCATAATCTCTGAGGAGCAAAGCAGGGGAACTTCGGTCCTTGCGCTATCGGATGAACCCATATGGGATTAGCTAGTAGGTGAGGTAATGGCTCCCCTAGGCAACGATCCCTAGCTGGTCTGAGAGGATGATCAGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTGCACAATGGGCGAAAGCCTGATGCAGCCATGCCGCGTGTATGAAGAAGGCTTTAGGGTTGTAAAGTACTTTCAGTCGAGAGGAAAACATTGATGCTAATATCATCAATTATTGACGTTTCCGACAGAAGAAGCACCGGCTAACTCCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGGAGGGTGCAAGCGTTAATCGGAATTACTGGGCGTAAAGCGCACGCAGGCGGTTAATTAAGTTAGATGTGAAAGCCCCGGGCTTAACCCAGGAATAGCATATAAAACTGGTCAACTAGAGTATTGTAGAGGGGGGTAGAATTCCATGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGAGATGTGGAGGAATACCAGTGGCGAAGGCGGCCCCCTGGACAAAAACTGACGCTCAAATGCGAAAGCGTGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCATGCTGTAAACGATGTCGATTTGGAGGTTGTTCCCTTGAGGAGTAGCTTCCGTAGCTAACGCGTTAAATCGACCGCCTGGGGGAGTACGACTGCAAGGTTAAAACTCAAATGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGATGCAACGCGAAAAACCTTACCTACTCTTGACATCCAGATAATTTAGCAGAAATGCTTTAGTACCTTCGGGAAATCTGAGACAGGTGCTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTTGTGAAATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTATCCTTTGTTGCCAGCGATTAGGTCGGGAACTCAAAGGAGACTGCCGGTGATAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAGTCATCATGGCCCTTACGAGTAGGGCTACACACGTGCTACAATGGCATATACAAAGGGAAGCAACCTCGCGAGAGCAAGCGAAACTCATAAATTATGTCGTAGTTCAGATTGGAGTCTGCAACTCGACTCCATGAAGTCGGAATCGCTAGTAATCGTAGATCAGAATGCTACGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCATGGGAGTGGGTTGCAAAAGAAGTAGGTAACTTAACCTTATGGAAAGCGCTTACCACTTTGTGATTCATAACTGGGGTG(SEQ ID NO: 17)
<i>Wigglesworthia glossinidia</i>
Муха цеце (Diptera: Glossinidae)
Бактериоциты
Бета–протеобактерии
<i>Tremblaya phenacola</i>
Phenacoccus avenae (TPPAVE).
Бактериомы
AGGTAATCCAGCCACACCTTCCAGTACGGCTACCTTGTTACGACTTCACCCCAGTCACAACCCTTACCTTCGGAACTGCCCTCCTCACAACTCAAACCACCAAACACTTTTAAATCAGGTTGAGAGAGGTTAGGCCTGTTACTTCTGGCAAGAATTATTTCCATGGTGTGACGGGCGGTGTGTACAAGACCCGAGAACATATTCACCGTGGCATGCTGATCCACGATTACTAGCAATTCCAACTTCATGCACTCGAGTTTCAGAGTACAATCCGAACTGAGGCCGGCTTTGTGAGATTAGCTCCCTTTTGCAAGTTGGCAACTCTTTGGTCCGGCCATTGTATGATGTGTGAAGCCCCACCCATAAAGGCCATGAGGACTTGACGTCATCCCCACCTTCCTCCAACTTATCGCTGGCAGTCTCTTTAAGGTAACTGACTAATCCAGTAGCAATTAAAGACAGGGGTTGCGCTCGTTACAGGACTTAACCCAACATCTCACGACACGAGCTGACGACAGCCATGCAGCACCTGTGCACTAATTCTCTTTCAAGCACTCCCGCTTCTCAACAGGATCTTAGCCATATCAAAGGTAGGTAAGGTTTTTCGCGTTGCATCGAATTAATCCACATCATCCACTGCTTGTGCGGGTCCCCGTCAATTCCTTTGAGTTTTAACCTTGCGGCCGTACTCCCCAGGCGGTCGACTTGTGCGTTAGCTGCACCACTGAAAAGGAAAACTGCCCAATGGTTAGTCAACATCGTTTAGGGCATGGACTACCAGGGTATCTAATCCTGTTTGCTCCCCATGCTTTAGTGTCTGAGCGTCAGTAACGAACCAGGAGGCTGCCTACGCTTTCGGTATTCCTCCACATCTCTACACATTTCACTGCTACATGCGGAATTCTACCTCCCCCTCTCGTACTCCAGCCTGCCAGTAACTGCCGCATTCTGAGGTTAAGCCTCAGCCTTTCACAGCAATCTTAACAGGCAGCCTGCACACCCTTTACGCCCAATAAATCTGATTAACGCTCGCACCCTACGTATTACCGCGGCTGCTGGCACGTAGTTTGCCGGTGCTTATTCTTTCGGTACAGTCACACCACCAAATTGTTAGTTGGGTGGCTTTCTTTCCGAACAAAAGTGCTTTACAACCCAAAGGCCTTCTTCACACACGCGGCATTGCTGGATCAGGCTTCCGCCCATTGTCCAAGATTCCTCACTGCTGCCTTCCTCAGAAGTCTGGGCCGTGTCTCAGTCCCAGTGTGGCTGGCCGTCCTCTCAGACCAGCTACCGATCATTGCCTTGGGAAGCCATTACCTTTCCAACAAGCTAATCAGACATCAGCCAATCTCAGAGCGCAAGGCAATTGGTCCCCTGCTTTCATTCTGCTTGGTAGAGAACTTTATGCGGTATTAATTAGGCTTTCACCTAGCTGTCCCCCACTCTGAGGCATGTTCTGATGCATTACTCACCCGTTTGCCACTTGCCACCAAGCCTAAGCCCGTGTTGCCGTTCGACTTGCATGTGTAAGGCATGCCGCTAGCGTTCAATCTGAGCCAGGATCAAACTCT(SEQ ID NO: 18)
<i>Tremblaya princeps</i>
Мучнистый червец виноградный Planococcus citri
Бактериомы
AGAGTTTGATCCTGGCTCAGATTGAACGCTAGCGGCATGCATTACACATGCAAGTCGTACGGCAGCACGGGCTTAGGCCTGGTGGCGAGTGGCGAACGGGTGAGTAACGCCTCGGAACGTGCCTTGTAGTGGGGGATAGCCTGGCGAAAGCCAGATTAATACCGCATGAAGCCGCACAGCATGCGCGGTGAAAGTGGGGGATTCTAGCCTCACGCTACTGGATCGGCCGGGGTCTGATTAGCTAGTTGGCGGGGTAATGGCCCACCAAGGCTTAGATCAGTAGCTGGTCTGAGAGGACGATCAGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATCTTGGACAATGGGCGCAAGCCTGATCCAGCAATGCCGCGTGTGTGAAGAAGGCCTTCGGGTCGTAAAGCACTTTTGTTCGGGATGAAGGGGGGCGTGCAAACACCATGCCCTCTTGACGATACCGAAAGAATAAGCACCGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGGTGCGAGCGTTAATCGGAATCACTGGGCGTAAAGGGTGCGCGGGTGGTTTGCCAAGACCCCTGTAAAATCCTACGGCCCAACCGTAGTGCTGCGGAGGTTACTGGTAAGCTTGAGTATGGCAGAGGGGGGTAGAATTCCAGGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGATATCTGGAGGAATACCGAAGGCGAAGGCAACCCCCTGGGCCATCACTGACACTGAGGCACGAAAGCGTGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCCTAAACCATGTCGACTAGTTGTCGGGGGGAGCCCTTTTTCCTCGGTGACGAAGCTAACGCATGAAGTCGACCGCCTGGGGAGTACGACCGCAAGGTTAAAACTCAAAGGAATTGACGGGGACCCGCACAAGCGGTGGATGATGTGGATTAATTCGATGCAACGCGAAAAACCTTACCTACCCTTGACATGGCGGAGATTCTGCCGAGAGGCGGAAGTGCTCGAAAGAGAATCCGTGCACAGGTGCTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCATAACGAGCGCAACCCCCGTCTTTAGTTGCTACCACTGGGGCACTCTATAGAGACTGCCGGTGATAAACCGGAGGAAGGTGGGGACGACGTCAAGTCATCATGGCCTTTATGGGTAGGGCTTCACACGTCATACAATGGCTGGAGCAAAGGGTCGCCAACTCGAGAGAGGGAGCTAATCCCACAAACCCAGCCCCAGTTCGGATTGCACTCTGCAACTCGAGTGCATGAAGTCGGAATCGCTAGTAATCGTGGATCAGCATGCCACGGTGAATACGTTCTCGGGTCTTGTACACACCGCCCGTCACACCATGGGAGTAAGCCGCATCAGAAGCAGCCTCCCTAACCCTATGCTGGGAAGGAGGCTGCGAAGGTGGGGTCTATGACTGGGGTGAAGTCGTAACAAGGTAGCCGTACCGGAAGGTGCGGCTGGATTACCT(SEQ ID NO: 19)
Vidania
Бактериомы
<i>Nasuia deltocephalinicola</i>
Вредоносное насекомое–хозяин Macrosteles quadripunctulatus (Hemiptera: Cicadellidae)
Бактериомы
AGTTTAATCCTGGCTCAGATTTAACGCTTGCGACATGCCTAACACATGCAAGTTGAACGTTGAAAATATTTCAAAGTAGCGTATAGGTGAGTATAACATTTAAACATACCTTAAAGTTCGGAATACCCCGATGAAAATCGGTATAATACCGTATAAAAGTATTTAAGAATTAAAGCGGGGAAAACCTCGTGCTATAAGATTGTTAAATGCCTGATTAGTTTGTTGGTTTTTAAGGTAAAAGCTTACCAAGACTTTGATCAGTAGCTATTCTGTGAGGATGTATAGCCACATTGGGATTGAAATAATGCCCAAACCTCTACGGAGGGCAGCAGTGGGGAATATTGGACAATGAGCGAAAGCTTGATCCAGCAATGTCGCGTGTGCGATTAAGGGAAACTGTAAAGCACTTTTTTTTAAGAATAAGAAATTTTAATTAATAATTAAAATTTTTGAATGTATTAAAAGAATAAGTACCGACTAATCACGTGCCAGCAGTCGCGGTAATACGTGGGGTGCGAGCGTTAATCGGATTTATTGGGCGTAAAGTGTATTCAGGCTGCTTAAAAAGATTTATATTAAATATTTAAATTAAATTTAAAAAATGTATAAATTACTATTAAGCTAGAGTTTAGTATAAGAAAAAAGAATTTTATGTGTAGCAGTGAAATGCGTTGATATATAAAGGAACGCCGAAAGCGAAAGCATTTTTCTGTAATAGAACTGACGCTTATATACGAAAGCGTGGGTAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCCTAAACTATGTCAATTAACTATTAGAATTTTTTTTAGTGGTGTAGCTAACGCGTTAAATTGACCGCCTGGGTATTACGATCGCAAGATTAAAACTCAAAGGAATTGACGGGGACCAGCACAAGCGGTGGATGATGTGGATTAATTCGATGATACGCGAAAAACCTTACCTGCCCTTGACATGGTTAGAATTTTATTGAAAAATAAAAGTGCTTGGAAAAGAGCTAACACACAGGTGCTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCCTACTCTTAGTTGCTAATTAAAGAACTTTAAGAGAACAGCTAACAATAAGTTTAGAGGAAGGAGGGGATGACTTCAAGTCCTCATGGCCCTTATGGGCAGGGCTTCACACGTCATACAATGGTTAATACAAAAAGTTGCAATATCGTAAGATTGAGCTAATCTTTAAAATTAATCTTAGTTCGGATTGTACTCTGCAACTCGAGTACATGAAGTTGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCATGCCGCGGTGAATAGTTTAACTGGTCTTGTACACACCGCCCGTCACACCATGGAAATAAATCTTGTTTTAAATGAAGTAATATATTTTATCAAAACAGGTTTTGTAACCGGGGTGAAGTCGTAACA(SEQ ID NO: 20)
<i>Zinderia insecticola CARI</i>
Пенница <i>Clastoptera arizonana</i>
Бактериоциты
ATATAAATAAGAGTTTGATCCTGGCTCAGATTGAACGCTAGCGGTATGCTTTACACATGCAAGTCGAACGACAATATTAAAGCTTGCTTTAATATAAAGTGGCGAACGGGTGAGTAATATATCAAAACGTACCTTAAAGTGGGGGATAACTAATTGAAAAATTAGATAATACCGCATATTAATCTTAGGATGAAAATAGGAATAATATCTTATGCTTTTAGATCGGTTGATATCTGATTAGCTAGTTGGTAGGGTAAATGCTTACCAAGGCAATGATCAGTAGCTGGTTTTAGCGAATGATCAGCCACACTGGAACTGAGACACGGTCCAGACTTCTACGGAAGGCAGCAGTGGGGAATATTGGACAATGGGAGAAATCCTGATCCAGCAATACCGCGTGAGTGATGAAGGCCTTAGGGTCGTAAAACTCTTTTGTTAGGAAAGAAATAATTTTAAATAATATTTAAAATTGATGACGGTACCTAAAGAATAAGCACCGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGGTGCAAGCGTTAATCGGAATTATTGGGCGTAAAGAGTGCGTAGGCTGTTATATAAGATAGATGTGAAATACTTAAGCTTAACTTAAGAACTGCATTTATTACTGTTTAACTAGAGTTTATTAGAGAGAAGTGGAATTTTATGTGTAGCAGTGAAATGCGTAGATATATAAAGGAATATCGATGGCGAAGGCAGCTTCTTGGAATAATACTGACGCTGAGGCACGAAAGCGTGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCCTAAACTATGTCTACTAGTTATTAAATTAAAAATAAAATTTAGTAACGTAGCTAACGCATTAAGTAGACCGCCTGGGGAGTACGATCGCAAGATTAAAACTCAAAGGAATTGACGGGGACCCGCACAAGCGGTGGATGATGTGGATTAATTCGATGCAACACGAAAAACCTTACCTACTCTTGACATGTTTGGAATTTTAAAGAAATTTAAAAGTGCTTGAAAAAGAACCAAAACACAGGTGCTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTGTTATTATTTGCTAATAAAAAGAACTTTAATAAGACTGCCAATGACAAATTGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAGTCCTCATGGCCCTTATGAGTAGGGCTTCACACGTCATACAATGATATATACAATGGGTAGCAAATTTGTGAAAATGAGCCAATCCTTAAAGTATATCTTAGTTCGGATTGTAGTCTGCAACTCGACTACATGAAGTTGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCATGCCGCGGTGAATACGTTCTCGGGTCTTGTACACACCGCCCGTCACACCATGGAAGTGATTTTTACCAGAAATTATTTGTTTAACCTTTATTGGAAAAAAATAATTAAGGTAGAATTCATGACTGGGGTGAAGTCGTAACAAGGTAGCAGTATCGGAAGGTGCGGCTGGATTACATTTTAAAT(SEQ ID NO: 21)
<i>Profftella armatura</i>
<i>Diaphorina citri</i>, азиатская цитрусовая листоблошка
Бактериомы
Альфа–протеобактерии
Hodgkinia
Цикада
<i>Diceroprocta semicincta</i>
Бактериом
AATGCTGGCGGCAGGCCTAACACATGCAAGTCGAGCGGACAACGTTCAAACGTTGTTAGCGGCGAACGGGTGAGTAATACGTGAGAATCTACCCATCCCAACGTGATAACATAGTCAACACCATGTCAATAACGTATGATTCCTGCAACAGGTAAAGATTTTATCGGGGATGGATGAGCTCACGCTAGATTAGCTAGTTGGTGAGATAAAAGCCCACCAAGGCCAAGATCTATAGCTGGTCTGGAAGGATGGACAGCCACATTGGGACTGAGACAAGGCCCAACCCTCTAAGGAGGGCAGCAGTGAGGAATATTGGACAATGGGCGTAAGCCTGATCCAGCCATGCCGCATGAGTGATTGAAGGTCCAACGGACTGTAAAACTCTTTTCTCCAGAGATCATAAATGATAGTATCTGGTGATATAAGCTCCGGCCAACTTCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGAGGGGAGCGAGTATTGTTCGGTTTTATTGGGCGTAAAGGGTGTCCAGGTTGCTAAGTAAGTTAACAACAAAATCTTGAGATTCAACCTCATAACGTTCGGTTAATACTACTAAGCTCGAGCTTGGATAGAGACAAACGGAATTCCGAGTGTAGAGGTGAAATTCGTTGATACTTGGAGGAACACCAGAGGCGAAGGCGGTTTGTCATACCAAGCTGACACTGAAGACACGAAAGCATGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCATGCCCTAAACGTTGAGTGCTAACAGTTCGATCAAGCCACATGCTATGATCCAGGATTGTACAGCTAACGCGTTAAGCACTCCGCCTGGGTATTACGACCGCAAGGTTAAAACTCAAAGGAATTGACGGAGACCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCTACACGAAGAACCTTACCAGCCCTTGACATACCATGGCCAACCATCCTGGAAACAGGATGTTGTTCAAGTTAAACCCTTGAAATGCCAGGAACAGGTGCTGCATGGCTGTTGTCAGTTCGTGTCGTGAGATGTATGGTTAAGTCCCAAAACGAACACAACCCTCACCCATAGTTGCCATAAACACAATTGGGTTCTCTATGGGTACTGCTAACGTAAGTTAGAGGAAGGTGAGGACCACAACAAGTCATCATGGCCCTTATGGGCTGGGCCACACACATGCTACAATGGTGGTTACAAAGAGCCGCAACGTTGTGAGACCGAGCAAATCTCCAAAGACCATCTCAGTCCGGATTGTACTCTGCAACCCGAGTACATGAAGTAGGAATCGCTAGTAATCGTGGATCAGCATGCCACGGTGAATACGTTCTCGGGTCTTGTACACGCCGCCCGTCACACCATGGGAGCTTCGCTCCGATCGAAGTCAAGTTACCCTTGACCACATCTTGGCAAGTGACCGA(SEQ ID NO: 22)
<i>Wolbachia sp. wPip</i>
Комар
<i>Culex quinquefasciatus</i>
Бактериом
AAATTTGAGAGTTTGATCCTGGCTCAGAATGAACGCTGGCGGCAGGCCTAACACATGCAAGTCGAACGGAGTTATATTGTAGCTTGCTATGGTATAACTTAGTGGCAGACGGGTGAGTAATGTATAGGAATCTACCTAGTAGTACGGAATAATTGTTGGAAACGACAACTAATACCGTATACGCCCTACGGGGGAAAAATTTATTGCTATTAGATGAGCCTATATTAGATTAGCTAGTTGGTGGGGTAATAGCCTACCAAGGTAATGATCTATAGCTGATCTGAGAGGATGATCAGCCACACTGGAACTGAGATACGGTCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTGGACAATGGGCGAAAGCCTGATCCAGCCATGCCGCATGAGTGAAGAAGGCCTTTGGGTTGTAAAGCTCTTTTAGTGAGGAAGATAATGACGGTACTCACAGAAGAAGTCCTGGCTAACTCCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGGAGAGGGCTAGCGTTATTCGGAATTATTGGGCGTAAAGGGCGCGTAGGCTGGTTAATAAGTTAAAAGTGAAATCCCGAGGCTTAACCTTGGAATTGCTTTTAAAACTATTAATCTAGAGATTGAAAGAGGATAGAGGAATTCCTGATGTAGAGGTAAAATTCGTAAATATTAGGAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGTCTATCTGGTTCAAATCTGACGCTGAAGCGCGAAGGCGTGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCTGTAAACGATGAATGTTAAATATGGGGAGTTTACTTTCTGTATTACAGCTAACGCGTTAAACATTCCGCCTGGGGACTACGGTCGCAAGATTAAAACTCAAAGGAATTGACGGGGACCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGATGCAACGCGAAAAACCTTACCACTTCTTGACATGAAAATCATACCTATTCGAAGGGATAGGGTCGGTTCGGCCGGATTTTACACAAGTGTTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTCATCCTTAGTTGCCATCAGGTAATGCTGAGTACTTTAAGGAAACTGCCAGTGATAAGCTGGAGGAAGGTGGGGATGATGTCAAGTCATCATGGCCTTTATGGAGTGGGCTACACACGTGCTACAATGGTGTCTACAATGGGCTGCAAGGTGCGCAAGCCTAAGCTAATCCCTAAAAGACATCTCAGTTCGGATTGTACTCTGCAACTCGAGTACATGAAGTTGGAATCGCTAGTAATCGTGGATCAGCATGCCACGGTGAATACGTTCTCGGGTCTTGTACACACTGCCCGTCACGCCATGGGAATTGGTTTCACTCGAAGCTAATGGCCTAACCGCAAGGAAGGAGTTATTTAAAGTGGGATCAGTGACTGGGGTGAAGTCGTAACAAGGTAGCAGTAGGGGAATCTGCAGCTGGATTACCTCCTTA(SEQ ID NO: 23)
Bacteroidetes
<i>Uzinura diaspidicola</i>
Щитовки
Бактериоциты
AAAGGAGATATTCCAACCACACCTTCCGGTACGGTTACCTTGTTACGACTTAGCCCTAGTCATCAAGTTTACCTTAGGCAGACCACTGAAGGATTACTGACTTCAGGTACCCCCGACTCCCATGGCTTGACGGGCGGTGTGTACAAGGTTCGAGAACATATTCACCGCGCCATTGCTGATGCGCGATTACTAGCGATTCCTGCTTCATAGAGTCGAATTGCAGACTCCAATCCGAACTGAGACTGGTTTTAGAGATTAGCTCCTGATCACCCAGTGGCTGCCCTTTGTAACCAGCCATTGTAGCACGTGTGTAGCCCAAGGCATAGAGGCCATGATGATTTGACATCATCCCCACCTTCCTCACAGTTTACACCGGCAGTTTTGTTAGAGTCCCCGGCTTTACCCGATGGCAACTAACAATAGGGGTTGCGCTCGTTATAGGACTTAACCAAACACTTCACAGCACGAACTGAAGACAACCATGCAGCACCTTGTAATACGTCGTATAGACTAAGCTGTTTCCAGCTTATTCGTAATACATTTAAGCCTTGGTAAGGTTCCTCGCGTATCATCGAATTAAACCACATGCTCCACCGCTTGTGCGAACCCCCGTCAATTCCTTTGAGTTTCAATCTTGCGACTGTACTTCCCAGGTGGATCACTTATCGCTTTCGCTAAGCCACTGAATATCGTTTTTCCAATAGCTAGTGATCATCGTTTAGGGCGTGGACTACCAGGGTATCTAATCCTGTTTGCTCCCCACGCTTTCGTGCACTGAGCGTCAGTAAAGATTTAGCAACCTGCCTTCGCTATCGGTGTTCTGTATGATATCTATGCATTTCACCGCTACACCATACATTCCAGATGCTCCAATCTTACTCAAGTTTACCAGTATCAATAGCAATTTTACAGTTAAGCTGTAAGCTTTCACTACTGACTTAATAAACAGCCTACACACCCTTTAAACCCAATAAATCCGAATAACGCTTGTGTCATCCGTATTGCCGCGGCTGCTGGCACGGAATTAGCCGACACTTATTCGTATAGTACCTTCAATCTCCTATCACGTAAGATATTTTATTTCTATACAAAAGCAGTTTACAACCTAAAAGACCTTCATCCTGCACGCGACGTAGCTGGTTCAGAGTTTCCTCCATTGACCAATATTCCTCACTGCTGCCTCCCGTAGGAGTCTGGTCCGTGTCTCAGTACCAGTGTGGAGGTACACCCTCTTAGGCCCCCTACTGATCATAGTCTTGGTAGAGCCATTACCTCACCAACTAACTAATCAAACGCAGGCTCATCTTTTGCCACCTAAGTTTTAATAAAGGCTCCATGCAGAAACTTTATATTATGGGGGATTAATCAGAATTTCTTCTGGCTATACCCCAGCAAAAGGTAGATTGCATACGTGTTACTCACCCATTCGCCGGTCGCCGACAAATTAAAAATTTTTCGATGCCCCTCGACTTGCATGTGTTAAGCTCGCCGCTAGCGTTAATTCTGAGCCAGGATCAAACTCTTCGTTGTAG(SEQ ID NO: 24)
<i>Sulcia muelleri</i>
Сине–зеленые цикадки и несколько других видов цикадок
Бактериоциты
CTCAGGATAAACGCTAGCGGAGGGCTTAACACATGCAAGTCGAGGGGCAGCAAAAATAATTATTTTTGGCGACCGGCAAACGGGTGAGTAATACATACGTAACTTTCCTTATGCTGAGGAATAGCCTGAGGAAACTTGGATTAATACCTCATAATACAATTTTTTAGAAAGAAAAATTGTTAAAGTTTTATTATGGCATAAGATAGGCGTATGTCCAATTAGTTAGTTGGTAAGGTAATGGCTTACCAAGACGATGATTGGTAGGGGGCCTGAGAGGGGCGTTCCCCCACATTGGTACTGAGACACGGACCAAACTTCTACGGAAGGCTGCAGTGAGGAATATTGGTCAATGGAGGAAACTCTGAACCAGCCACTCCGCGTGCAGGATGAAAGAAAGCCTTATTGGTTGTAAACTGCTTTTGTATATGAATAAAAAATTCTAATTATAGAAATAATTGAAGGTAATATACGAATAAGTATCGACTAACTCTGTGCCAGCAGTCGCGGTAAGACAGAGGATACAAGCGTTATCCGGATTTATTGGGTTTAAAGGGTGCGTAGGCGGTTTTTAAAGTCAGTAGTGAAATCTTAAAGCTTAACTTTAAAAGTGCTATTGATACTGAAAAACTAGAGTAAGGTTGGAGTAACTGGAATGTGTGGTGTAGCGGTGAAATGCATAGATATCACACAGAACACCGATAGCGAAAGCAAGTTACTAACCCTATACTGACGCTGAGTCACGAAAGCATGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCATGCCGTAAACGATGATCACTAACTATTGGGTTTTATACGTTGTAATTCAGTGGTGAAGCGAAAGTGTTAAGTGATCCACCTGAGGAGTACGACCGCAAGGTTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAATCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGATGATACACGAGGAACCTTACCAAGACTTAAATGTACTACGAATAAATTGGAAACAATTTAGTCAAGCGACGGAGTACAAGGTGCTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGCCGTGAGGTGTAAGGTTAAGTCCTTTAAACGAGCGCAACCCTTATTATTAGTTGCCATCGAGTAATGTCAGGGGACTCTAATAAGACTGCCGGCGCAAGCCGAGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAATCATCACGGCCCTTACGTCTTGGGCCACACACGTGCTACAATGATCGGTACAAAAGGGAGCGACTGGGTGACCAGGAGCAAATCCAGAAAGCCGATCTAAGTTCGGATTGGAGTCTGAAACTCGACTCCATGAAGCTGGAATCGCTAGTAATCGTGCATCAGCCATGGCACGGTGAATATGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCAAGCCATGGAAGTTGGAAGTACCTAAAGTTGGTTCGCTACCTAAGGTAAGTCTAATAACTGGGGCTAAGTCGTAACAAGGTA(SEQ ID NO: 25)
Дрожжеподобные симбионты
<i>Symbiotaphrina buchneri</i>, контрольный штамм JCM9740
Жуки–точильщики <i>Stegobium paniceum</i>
Мицетома между передней и средней кишкой
AGATTAAGCCATGCAAGTCTAAGTATAAGNAATCTATACNGTGAAACTGCGAATGGCTCATTAAATCAGTTATCGTTTATTTGATAGTACCTTACTACATGGATAACCGTGGTAATTCTAGAGCTAATACATGCTAAAAACCCCGACTTCGGAAGGGGTGTATTTATTAGATAAAAAACCAATGCCCTTCGGGGCTCCTTGGTGATTCATGATAACTTAACGAATCGCATGGCCTTGCGCCGGCGATGGTTCATTCAAATTTCTGCCCTATCAACTTTCGATGGTAGGATAGTGGCCTACCATGGTTTTAACGGGTAACGGGGAATTAGGGTTCGATTCCGGAGAGGGAGCCTGAGAAACGGCTACCACATCCAAGGAAGGCAGCAGGCGCGCAAATTACCCAATCCCGACACGGGGAGGTAGTGACAATAAATACTGATACAGGGCTCTTTTGGGTCTTGTAATTGGAATGAGTACAATTTAAATCCCTTAACGAGGAACAATTGGAGGGCAAGTCTGGTGCCAGCAGCCGCGGTAATTCCAGCTCCAATAGCGTATATTAAAGTTGTTGCAGTTAAAAAGCTCGTAGTTGAACCTTGGGCCTGGCTGGCCGGTCCGCCTAACCGCGTGTACTGGTCCGGCCGGGCCTTTCCTTCTGGGGAGCCGCATGCCCTTCACTGGGTGTGTCGGGGAACCAGGACTTTTACTTTGAAAAAATTAGAGTGTTCAAAGCAGGCCTATGCTCGAATACATTAGCATGGAATAATAGAATAGGACGTGCGGTTCTATTTTGTTGGTTTCTAGGACCGCCGTAATGATTAATAGGGATAGTCGGGGGCATCAGTATTCAATTGTCAGAGGTGAAATTCTTGGATTTATTGAAGACTAACTACTGCGAAAGCATTTGCCAAGGATGTTTTCATTAATCAGTGAACGAAAGTTAGGGGATCGAAGACGATCAGATACCGTCGTAGTCTTAACCATAAACTATGCCGACTAGGGATCGGGCGATGTTATTATTTTGACTCGCTCGGCACCTTACGAGAAATCAAAGTCTTTGGGTTCTGGGGGGAGTATGGTCGCAAGGCTGAAACTTAAAGAAATTGACGGAAGGGCACCACCAGGAGTGGAGCCTGCGGCTTAATTTGACTCAACACGGGGAAACTCACCAGGTCCAGACACATTAAGGATTGACAGATTGAGAGCTCTTTCTTGATTATGTGGGTGGTGGTGCATGGCCGTTCTTAGTTGGTGGAGTGATTTGTCTGCTTAATTGCGATAACGAACGAGACCTTAACCTGCTAAATAGCCCGGTCCGCTTTGGCGGGCCGCTGGCTTCTTAGAGGGACTATCGGCTCAAGCCGATGGAAGTTTGAGGCAATAACAGGTCTGTGATGCCCTTAGATGTTCTGGGCCGCACGCGCGCTACACTGACAGAGCCAACGAGTAAATCACCTTGGCCGGAAGGTCTGGGTAATCTTGTTAAACTCTGTCGTGCTGGGGATAGAGCATTGCAATTATTGCTCTTCAACGAGGAATTCCTAGTAAGCGCAAGTCATCAGCTTGCGCTGATTACGTCCCTGCCCTTTGTACACACCGCCCGTCGCTACTACCGATTGAATGGCTCAGTGAGGCCTTCGGACTGGCACAGGGACGTTGGCAACGACGACCCAGTGCCGGAAAGTTGGTCAAACTTGGTCATTTAGAGGAAGTAAAAGTCGTAACAAGGTTTCCGTAGGTGAACCTGCGGAAGGATCATTA(SEQ ID NO: 26)
<i>Symbiotaphrina kochii</i>, контрольный штамм CBS 589.63
Жуки–точильщики <i>Lasioderma serricorne</i>
Мицетома
TACCTGGTTGATTCTGCCAGTAGTCATATGCTTGTCTCAAAGATTAAGCCATGCAAGTCTAAGTATAAGCAATCTATACGGTGAAACTGCGAATGGCTCATTAAATCAGTTATCGTTTATTTGATAGTACCTTACTACATGGATAACCGTGGTAATTCTAGAGCTAATACATGCTAAAAACCTCGACTTCGGAAGGGGTGTATTTATTAGATAAAAAACCAATGCCCTTCGGGGCTCCTTGGTGATTCATGATAACTTAACGAATCGCATGGCCTTGCGCCGGCGATGGTTCATTCAAATTTCTGCCCTATCAACTTTCGATGGTAGGATAGTGGCCTACCATGGTTTCAACGGGTAACGGGGAATTAGGGTTCGATTCCGGAGAGGGAGCCTGAGAAACGGCTACCACATCCAAGGAAGGCAGCAGGCGCGCAAATTACCCAATCCCGACACGGGGAGGTAGTGACAATAAATACTGATACAGGGCTCTTTTGGGTCTTGTAATTGGAATGAGTACAATTTAAATCCCTTAACGAGGAACAATTGGAGGGCAAGTCTGGTGCCAGCAGCCGCGGTAATTCCAGCTCCAATAGCGTATATTAAAGTTGTTGCAGTTAAAAAGCTCGTAGTTGAACCTTGGGCCTGGCTGGCCGGTCCGCCTAACCGCGTGTACTGGTCCGGCCGGGCCTTTCCTTCTGGGGAGCCGCATGCCCTTCACTGGGTGTGTCGGGGAACCAGGACTTTTACTTTGAAAAAATTAGAGTGTTCAAAGCAGGCCTATGCTCGAATACATTAGCATGGAATAATAGAATAGGACGTGTGGTTCTATTTTGTTGGTTTCTAGGACCGCCGTAATGATTAATAGGGATAGTCGGGGGCATCAGTATTCAATTGTCAGAGGTGAAATTCTTGGATTTATTGAAGACTAACTACTGCGAAAGCATTTGCCAAGGATGTTTTCATTAATCAGTGAACGAAAGTTAGGGGATCGAAGACGATCAGATACCGTCGTAGTCTTAACCATAAACTATGCCGACTAGGGATCGGGCGATGTTATTATTTTGACTCGCTCGGCACCTTACGAGAAATCAAAGTCTTTGGGTTCTGGGGGGAGTATGGTCGCAAGGCTGAAACTTAAAGAAATTGACGGAAGGGCACCACCAGGAGTGGAGCCTGCGGCTTAATTTGACTCAACACGGGGAAACTCACCAGGTCCAGACACATTAAGGATTGACAGATTGAGAGCTCTTTCTTGATTATGTGGGTGGTGGTGCATGGCCGTTCTTAGTTGGTGGAGTGATTTGTCTGCTTAATTGCGATAACGAACGAGACCTTAACCTGCTAAATAGCCCGGTCCGCTTTGGCGGGCCGCTGGCTTCTTAGAGGGACTATCGGCTCAAGCCGATGGAAGTTTGAGGCAATAACAGGTCTGTGATGCCCTTAGATGTTCTGGGCCGCACGCGCGCTACACTGACAGAGCCAACGAGTACATCACCTTGGCCGGAAGGTCTGGGTAATCTTGTTAAACTCTGTCGTGCTGGGGATAGAGCATTGCAATTATTGCTCTTCAACGAGGAATTCCTAGTAAGCGCAAGTCATCAGCTTGCGCTGATTACGTCCCTGCCCTTTGTACACACCGCCCGTCGCTACTACCGATTGAATGGCTCAGTGAGGCCTTCGGACTGGCACAGGGACGTTGGCAACGACGACCCAGTGCCGGAAAGTTCGTCAAACTTGGTCATTTAGAGGAAGNNNAAGTCGTAACAAGGTTTCCGTAGGTGAACCTGCGGAAGGATCATTA(SEQ ID NO: 27)
<b>Первичный внеклеточный симбионт</b>
<b>Хозяин</b>
<b>Местоположение</b>
<b>16S рРНК </b>
Бактерии, расщепляющие фенитротион
<i>Burkholderia sp. SFA1</i>
<i>Riptortus pedestris</i>
Кишка
AGTTTGATCCTGGCTCAGATTGAACGCTGGCGGCATGCCTTACACATGCAAGTCGAACGGCAGCACGGGGGCAACCCTGGTGGCGAGTGGCGAACGGGTGAGTAATACATCGGAACGTGTCCTGTAGTGGGGGATAGCCCGGCGAAAGCCGGATTAATACCGCATACGACCTAAGGGAGAAAGCGGGGGATCTTCGGACCTCGCGCTATAGGGGCGGCCGATGGCAGATTAGCTAGTTGGTGGGGTAAAGGCCTACCAAGGCGACGATCTGTAGCTGGTCTGAGAGGACGACCAGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATTTTGGACAATGGGGGCAACCCTGATCCAGCAATGCCGCGTGTGTGAAGAAGGCTTCGGGTTGTAAAGCACTTTTGTCCGGAAAGAAAACTTCGTCCCTAATATGGATGGAGGATGACGGTACCGGAAGAATAAGCACCGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGGTGCGAGCGTTAATCGGAATTACTGGGCGTAAAGCGTGCGCAGGCGGTCTGTTAAGACCGATGTGAAATCCCCGGGCTTAACCTGGGAACTGCATTGGTGACTGGCAGGCTTTGAGTGTGGCAGAGGGGGGTAGAATTCCACGTGTAGCAGTGAAATGCGTAGAGATGTGGAGGAATACCGATGGCGAAGGCAGCCCCCTGGGCCAACTACTGACGCTCATGCACGAAAGCGTGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCCTAAACGATGTCAACTAGTTGTTGGGGATTCATTTCCTTAGTAACGTAGCTAACGCGTGAAGTTGACCGCCTGGGGAGTACGGTCGCAAGATTAAAACTCAAAGGAATTGACGGGGACCCGCACAAGCGGTGGATGATGTGGATTAATTCGATGCAACGCGAAAAACCTTACCTACCCTTGACATGGTCGGAACCCTGCTGAAAGGTGGGGGTGCTCGAAAGAGAACCGGCGCACAGGTGCTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTGTCCTTAGTTGCTACGCAAGAGCACTCTAAGGAGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAGTCCTCATGGCCCTTATGGGTAGGGCTTCACACGTCATACAATGGTCGGAACAGAGGGTTGCCAAGCCGCGAGGTGGAGCCAATCCCAGAAAACCGATCGTAGTCCGGATCGCAGTCTGCAACTCGACTGCGTGAAGCTGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCATGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGTCTTGTACACACCGCCCGTCACACCATGGGAGTGGGTTTCACCAGAAGTAGGTAGCCTAACCGCAAGGAGGGCGCTTACCACGGTGGGATTCATGACTGGGGTGAAGTCGTAACAAGGTAGC(SEQ ID NO: 28)
<i>Burkholderia sp. KM–A</i>
<i>Riptortus pedestris</i>
Кишка
GCAACCCTGGTGGCGAGTGGCGAACGGGTGAGTAATACATCGGAACGTGTCCTGTAGTGGGGGATAGCCCGGCGAAAGCCGGATTAATACCGCATACGATCTACGGAAGAAAGCGGGGGATCCTTCGGGACCTCGCGCTATAGGGGCGGCCGATGGCAGATTAGCTAGTTGGTGGGGTAAAGGCCTACCAAGGCGACGATCTGTAGCTGGTCTGAGAGGACGACCAGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATTTTGGACAATGGGGGCAACCCTGATCCAGCAATGCCGCGTGTGTGAAGAAGGCCTTCGGGTTGTAAAGCACTTTTGTCCGGAAAGAAAACGTCTTGGTTAATACCTGAGGCGGATGACGGTACCGGAAGAATAAGCACCGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGGTGCGAGCGTTAATCGGAATTACTGGGCGTAAAGCGTGCGCAGGCGGTCTGTTAAGACCGATGTGAAATCCCCGGGCTTAACCTGGGAACTGCATTGGTGACTGGCAGGCTTTGAGTGTGGCAGAGGGGGGTAGAATTCCACGTGTAGCAGTGAAATGCGTAGAGATGTGGAGGAATACCGATGGCGAAGGCAGCCCCCTGGGCCAACACTGACGCTCATGCACGAAAGCGTGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCCTAAACGATGTCAACTAGTTGTTGGGGATTCATTTCCTTAGTAACGTAGCTAACGCGTGAAGTTGACCGCCTGGGGAGTACGGTCGCAAGATTAAAACTCAAAGGAATTGACGGGGACCCGCACAAGCGGTGGATGATGTGGATTAATTCGATGCAACGCGAAAAACCTTACCTACCCTTGACATGGTCGGAAGTCTGCTGAGAGGTGGACGTGCTCGAAAGAGAACCGGCGCACAGGTGCTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTGTCCTTAGTTGCTACGCAAGAGCACTCTAAGGAGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAGTCCTCATGGCCCTTATGGGTAGGGCTTCACACGTCATACAATGGTCGGAACAGAGGGTTGCCAAGCCGCGAGGTGGAGCCAATCCCAGAAAACCGATCGTAGTCCGGATCGCAGTCTGCAACTCGACTGCGTGAAGCTGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCATGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGTCTTGTACACACCGCCCGTCACACCATGGGAGTGGGTTTCACCAGAAGTAGGTAGCCTAACCGCAAGGAGGGCGCTTACCACGGTGGGATTCATGACTGGGGTGAAGT(SEQ ID NO: 29)
Burkholderia sp. KM–G
Riptortus pedestris
Кишка
GCAACCCTGGTGGCGAGTGGCGAACGGGTGAGTAATACATCGGAACGTGTCCTGTAGTGGGGGATAGCCCGGCGAAAGCCGGATTAATACCGCATACGACCTAAGGGAGAAAGCGGGGGATCTTCGGACCTCGCGCTATAGGGGCGGCCGATGGCAGATTAGCTAGTTGGTGGGGTAAAGGCCTACCAAGGCGACGATCTGTAGCTGGTCTGAGAGGACGACCAGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATTTTGGACAATGGGGGCAACCCTGATCCAGCAATGCCGCGTGTGTGAAGAAGGCCTTCGGGTTGTAAAGCACTTTTGTCCGGAAAGAAAACTTCGAGGTTAATACCCTTGGAGGATGACGGTACCGGAAGAATAAGCACCGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGGTGCGAGCGTTAATCGGAATTACTGGGCGTAAAGCGTGCGCAGGCGGTCTGTTAAGACCGATGTGAAATCCCCGGGCTTAACCTGGGAACTGCATTGGTGACTGGCAGGCTTTGAGTGTGGCAGAGGGGGGTAGAATTCCACGTGTAGCAGTGAAATGCGTAGAGATGTGGAGGAATACCGATGGCGAAGGCAGCCCCCTGGGCCAACACTGACGCTCATGCACGAAAGCGTGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCCTAAACGATGTCAACTAGTTGTTGGGGATTCATTTCCTTAGTAACGTAGCTAACGCGTGAAGTTGACCGCCTGGGGAGTACGGTCGCAAGATTAAAACTCAAAGGAATTGACGGGGACCCGCACAAGCGGTGGATGATGTGGATTAATTCGATGCAACGCGAAAAACCTTACCTACCCTTGACATGGTCGGAAGTCTGCTGAGAGGTGGACGTGCTCGAAAGAGAACCGGCGCACAGGTGCTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTGTCCTTAGTTGCTACGCAAGAGCACTCTAAGGAGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAGTCCTCATGGCCCTTATGGGTAGGGCTTCACACGTCATACAATGGTCGGAACAGAGGGTTGCCAAGCCGCGAGGTGGAGCCAATCCCAGAAAACCGATCGTAGTCCGGATCGCAGTCTGCAACTCGACTGCGTGAAGCTGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCATGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGTCTTGTACACACCGCCCGTCACACCATGGGAGTGGGTTTCACCAGAAGTAGGTAGCCTAACCTGCAAAGGAGGGCGCTTACCACG(SEQ ID NO: 30)
<i>Snodgrassella alvi</i>
Пчела медоносная (<i>Apis mellifera</i>) и <i>Bombus</i> spp.
Подвздошная кишка
GAGAGTTTGATCCTGGCTCAGATTGAACGCTGGCGGCATGCCTTACACATGCAAGTCGAACGGCAGCACGGAGAGCTTGCTCTCTGGTGGCGAGTGGCGAACGGGTGAGTAATGCATCGGAACGTACCGAGTAATGGGGGATAACTGTCCGAAAGGATGGCTAATACCGCATACGCCCTGAGGGGGAAAGCGGGGGATCGAAAGACCTCGCGTTATTTGAGCGGCCGATGTTGGATTAGCTAGTTGGTGGGGTAAAGGCCTACCAAGGCGACGATCCATAGCGGGTCTGAGAGGATGATCCGCCACATTGGGACTGAGACACGGCCCAAACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATTTTGGACAATGGGGGGAACCCTGATCCAGCCATGCCGCGTGTCTGAAGAAGGCCTTCGGGTTGTAAAGGACTTTTGTTAGGGAAGAAAAGCCGGGTGTTAATACCATCTGGTGCTGACGGTACCTAAAGAATAAGCACCGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGGTGCGAGCGTTAATCGGAATTACTGGGCGTAAAGCGAGCGCAGACGGTTAATTAAGTCAGATGTGAAATCCCCGAGCTCAACTTGGGACGTGCATTTGAAACTGGTTAACTAGAGTGTGTCAGAGGGAGGTAGAATTCCACGTGTAGCAGTGAAATGCGTAGAGATGTGGAGGAATACCGATGGCGAAGGCAGCCTCCTGGGATAACACTGACGTTCATGCTCGAAAGCGTGGGTAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCCTAAACGATGACAATTAGCTGTTGGGACACTAGATGTCTTAGTAGCGAAGCTAACGCGTGAAATTGTCCGCCTGGGGAGTACGGTCGCAAGATTAAAACTCAAAGGAATTGACGGGGACCCGCACAAGCGGTGGATGATGTGGATTAATTCGATGCAACGCGAAGAACCTTACCTGGTCTTGACATGTACGGAATCTCTTAGAGATAGGAGAGTGCCTTCGGGAACCGTAACACAGGTGCTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTGTCATTAGTTGCCATCATTAAGTTGGGCACTCTAATGAGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAGTCCTCATGGCCCTTATGACCAGGGCTTCACACGTCATACAATGGTCGGTACAGAGGGTAGCGAAGCCGCGAGGTGAAGCCAATCTCAGAAAGCCGATCGTAGTCCGGATTGCACTCTGCAACTCGAGTGCATGAAGTCGGAATCGCTAGTAATCGCAGGTCAGCATACTGCGGTGAATACGTTCCCGGGTCTTGTACACACCGCCCGTCACACCATGGGAGTGGGGGATACCAGAATTGGGTAGACTAACCGCAAGGAGGTCGCTTAACACGGTATGCTTCATGACTGGGGTGAAGTCGTAACAAGGTAGCCGTAG(SEQ ID NO: 33)
<i>Gilliamella apicola </i>
Пчела медоносная (<i>Apis mellifera</i>) и <i>Bombus</i> spp.
Подвздошная кишка
TTAAATTGAAGAGTTTGATCATGGCTCAGATTGAACGCTGGCGGCAGGCTTAACACATGCAAGTCGAACGGTAACATGAGTGCTTGCACTTGATGACGAGTGGCGGACGGGTGAGTAAAGTATGGGGATCTGCCGAATGGAGGGGGACAACAGTTGGAAACGACTGCTAATACCGCATAAAGTTGAGAGACCAAAGCATGGGACCTTCGGGCCATGCGCCATTTGATGAACCCATATGGGATTAGCTAGTTGGTAGGGTAATGGCTTACCAAGGCGACGATCTCTAGCTGGTCTGAGAGGATGACCAGCCACACTGGAACTGAGACACGGTCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTGCACAATGGGGGAAACCCTGATGCAGCCATGCCGCGTGTATGAAGAAGGCCTTCGGGTTGTAAAGTACTTTCGGTGATGAGGAAGGTGGTGTATCTAATAGGTGCATCAATTGACGTTAATTACAGAAGAAGCACCGGCTAACTCCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGGAGGGTGCGAGCGTTAATCGGAATGACTGGGCGTAAAGGGCATGTAGGCGGATAATTAAGTTAGGTGTGAAAGCCCTGGGCTCAACCTAGGAATTGCACTTAAAACTGGTTAACTAGAGTATTGTAGAGGAAGGTAGAATTCCACGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGAGATGTGGAGGAATACCGGTGGCGAAGGCGGCCTTCTGGACAGATACTGACGCTGAGATGCGAAAGCGTGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCTGTAAACGATGTCGATTTGGAGTTTGTTGCCTAGAGTGATGGGCTCCGAAGCTAACGCGATAAATCGACCGCCTGGGGAGTACGGCCGCAAGGTTAAAACTCAAATGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGATGCAACGCGAAGAACCTTACCTGGTCTTGACATCCACAGAATCTTGCAGAGATGCGGGAGTGCCTTCGGGAACTGTGAGACAGGTGCTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTTGTGAAATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTATCCTTTGTTGCCATCGGTTAGGCCGGGAACTCAAAGGAGACTGCCGTTGATAAAGCGGAGGAAGGTGGGGACGACGTCAAGTCATCATGGCCCTTACGACCAGGGCTACACACGTGCTACAATGGCGTATACAAAGGGAGGCGACCTCGCGAGAGCAAGCGGACCTCATAAAGTACGTCTAAGTCCGGATTGGAGTCTGCAACTCGACTCCATGAAGTCGGAATCGCTAGTAATCGTGAATCAGAATGTCACGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCATGGGAGTGGGTTGCACCAGAAGTAGATAGCTTAACCTTCGGGAGGGCGTTTACCACGGTGTGGTCCATGACTGGGGTGAAGTCGTAACAAGGTAACCGTAGGGGAACCTGCGGTTGGATCACCTCCTTAC(SEQ ID NO: 34)
<i>Bartonella apis </i>
Пчела медоносная (<i>Apis mellifera</i>)
Кишка
AAGCCAAAATCAAATTTTCAACTTGAGAGTTTGATCCTGGCTCAGAACGAACGCTGGCGGCAGGCTTAACACATGCAAGTCGAACGCACTTTTCGGAGTGAGTGGCAGACGGGTGAGTAACGCGTGGGAATCTACCTATTTCTACGGAATAACGCAGAGAAATTTGTGCTAATACCGTATACGTCCTTCGGGAGAAAGATTTATCGGAGATAGATGAGCCCGCGTTGGATTAGCTAGTTGGTGAGGTAATGGCCCACCAAGGCGACGATCCATAGCTGGTCTGAGAGGATGACCAGCCACATTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTGGACAATGGGCGCAAGCCTGATCCAGCCATGCCGCGTGAGTGATGAAGGCCCTAGGGTTGTAAAGCTCTTTCACCGGTGAAGATAATGACGGTAACCGGAGAAGAAGCCCCGGCTAACTTCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGAAGGGGGCTAGCGTTGTTCGGATTTACTGGGCGTAAAGCGCACGTAGGCGGATATTTAAGTCAGGGGTGAAATCCCGGGGCTCAACCCCGGAACTGCCTTTGATACTGGATATCTTGAGTATGGAAGAGGTAAGTGGAATTCCGAGTGTAGAGGTGAAATTCGTAGATATTCGGAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGGCTTACTGGTCCATTACTGACGCTGAGGTGCGAAAGCGTGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCTGTAAACGATGAATGTTAGCCGTTGGACAGTTTACTGTTCGGTGGCGCAGCTAACGCATTAAACATTCCGCCTGGGGAGTACGGTCGCAAGATTAAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGCAGAACCTTACCAGCCCTTGACATCCCGATCGCGGATGGTGGAGACACCGTCTTTCAGTTCGGCTGGATCGGTGACAGGTGCTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTCGCCCTTAGTTGCCATCATTTAGTTGGGCACTCTAAGGGGACTGCCGGTGATAAGCCGAGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAGTCCTCATGGCCCTTACGGGCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGTGGTGACAGTGGGCAGCGAGACCGCGAGGTCGAGCTAATCTCCAAAAGCCATCTCAGTTCGGATTGCACTCTGCAACTCGAGTGCATGAAGTTGGAATCGCTAGTAATCGTGGATCAGCATGCCACGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCATGGGAGTTGGTTTTACCCGAAGGTGCTGTGCTAACCGCAAGGAGGCAGGCAACCACGGTAGGGTCAGCGACTGGGGTGAAGTCGTAACAAGGTAGCCGTAGGGGAACCTGCGGCTGGATCACCTCCTTTCTAAGGAAGATGAAGAATTGGAA(SEQ ID NO: 35)
<i>Parasaccharibacter apium</i>
Пчела медоносная (<i>Apis mellifera</i>)
Кишка
CTACCATGCAAGTCGCACGAAACCTTTCGGGGTTAGTGGCGGACGGGTGAGTAACGCGTTAGGAACCTATCTGGAGGTGGGGGATAACATCGGGAAACTGGTGCTAATACCGCATGATGCCTGAGGGCCAAAGGAGAGATCCGCCATTGGAGGGGCCTGCGTTCGATTAGCTAGTTGGTTGGGTAAAGGCTGACCAAGGCGATGATCGATAGCTGGTTTGAGAGGATGATCAGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTGGACAATGGGGGCAACCCTGATCCAGCAATGCCGCGTGTGTGAAGAAGGTCTTCGGATTGTAAAGCACTTTCACTAGGGAAGATGATGACGGTACCTAGAGAAGAAGCCCCGGCTAACTTCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGAAGGGGGCTAGCGTTGCTCGGAATGACTGGGCGTAAAGGGCGCGTAGGCTGTTTGTACAGTCAGATGTGAAATCCCCGGGCTTAACCTGGGAACTGCATTTGATACGTGCAGACTAGAGTCCGAGAGAGGGTTGTGGAATTCCCAGTGTAGAGGTGAAATTCGTAGATATTGGGAAGAACACCGGTTGCGAAGGCGGCAACCTGGCTNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNGAGCTAACGCGTTAAGCACACCGCCTGGGGAGTACGGCCGCAAGGTTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGCAGAACCTTACCAGGGCTTGCATGGGGAGGCTGTATTCAGAGATGGATATTTCTTCGGACCTCCCGCACAGGTGCTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTGTCTTTAGTTGCCATCACGTCTGGGTGGGCACTCTAGAGAGACTGCCGGTGACAAGCCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAGTCCTCATGGCCCTTATGTCCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGCGGTGACAGAGGGATGCTACATGGTGACATGGTGCTGATCTCAAAAAACCGTCTCAGTTCGGATTGTACTCTGCAACTCGAGTGCATGAAGGTGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCATGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCATGGGAGTTGGTTTGACCTTAAGCCGGTGAGCGAACCGCAAGGAACGCAGCCGACCACCGGTTCGGGTTCAGCGACTGGGGGA(SEQ ID NO: 36)
<i>Lactobacillus kunkeei</i>
Пчела медоносная (<i>Apis mellifera</i>)
Кишка
TTCCTTAGAAAGGAGGTGATCCAGCCGCAGGTTCTCCTACGGCTACCTTGTTACGACTTCACCCTAATCATCTGTCCCACCTTAGACGACTAGCTCCTAAAAGGTTACCCCATCGTCTTTGGGTGTTACAAACTCTCATGGTGTGACGGGCGGTGTGTACAAGGCCCGGGAACGTATTCACCGTGGCATGCTGATCCACGATTACTAGTGATTCCAACTTCATGCAGGCGAGTTGCAGCCTGCAATCCGAACTGAGAATGGCTTTAAGAGATTAGCTTGACCTCGCGGTTTCGCGACTCGTTGTACCATCCATTGTAGCACGTGTGTAGCCCAGCTCATAAGGGGCATGATGATTTGACGTCGTCCCCACCTTCCTCCGGTTTATCACCGGCAGTCTCACTAGAGTGCCCAACTAAATGCTGGCAACTAATAATAAGGGTTGCGCTCGTTGCGGGACTTAACCCAACATCTCACGACACGAGCTGACGACAACCATGCACCACCTGTCATTCTGTCCCCGAAGGGAACGCCCAATCTCTTGGGTTGGCAGAAGATGTCAAGAGCTGGTAAGGTTCTTCGCGTAGCATCGAATTAAACCACATGCTCCACCACTTGTGCGGGCCCCCGTCAATTCCTTTGAGTTTCAACCTTGCGGTCGTACTCCCCAGGCGGAATACTTAATGCGTTAGCTGCGGCACTGAAGGGCGGAAACCCTCCAACACCTAGTATTCATCGTTTACGGCATGGACTACCAGGGTATCTAATCCTGTTCGCTACCCATGCTTTCGAGCCTCAGCGTCAGTAACAGACCAGAAAGCCGCCTTCGCCACTGGTGTTCTTCCATATATCTACGCATTTCACCGCTACACATGGAGTTCCACTTTCCTCTTCTGTACTCAAGTTTTGTAGTTTCCACTGCACTTCCTCAGTTGAGCTGAGGGCTTTCACAGCAGACTTACAAAACCGCCTGCGCTCGCTTTACGCCCAATAAATCCGGACAACGCTTGCCACCTACGTATTACCGCGGCTGCTGGCACGTAGTTAGCCGTGGCTTTCTGGTTAAATACCGTCAAAGTGTTAACAGTTACTCTAACACTTGTTCTTCTTTAACAACAGAGTTTTACGATCCGAAAACCTTCATCACTCACGCGGCGTTGCTCCATCAGACTTTCGTCCATTGTGGAAGATTCCCTACTGCTGCCTCCCGTAGGAGTCTGGGCCGTGTCTCAGTCCCAATGTGGCCGATTACCCTCTCAGGTCGGCTACGTATCATCGTCTTGGTGGGCTTTTATCTCACCAACTAACTAATACGGCGCGGGTCCATCCCAAAGTGATAGCAAAGCCATCTTTCAAGTTGGAACCATGCGGTTCCAACTAATTATGCGGTATTAGCACTTGTTTCCAAATGTTATCCCCCGCTTCGGGGCAGGTTACCCACGTGTTACTCACCAGTTCGCCACTCGCTCCGAATCCAAAAATCATTTATGCAAGCATAAAATCAATTTGGGAGAACTCGTTCGACTTGCATGTATTAGGCACGCCGCCAGCGTTCGTCCTGAGCCAGGATCAAACTCTCATCTTAA(SEQ ID NO: 37)
<i>Lactobacillus</i><i>Firm–4</i>
Пчела медоносная (<i>Apis mellifera</i>)
Кишка
ACGAACGCTGGCGGCGTGCCTAATACATGCAAGTCGAGCGCGGGAAGTCAGGGAAGCCTTCGGGTGGAACTGGTGGAACGAGCGGCGGATGGGTGAGTAACACGTAGGTAACCTGCCCTAAAGCGGGGGATACCATCTGGAAACAGGTGCTAATACCGCATAAACCCAGCAGTCACATGAGTGCTGGTTGAAAGACGGCTTCGGCTGTCACTTTAGGATGGACCTGCGGCGTATTAGCTAGTTGGTGGAGTAACGGTTCACCAAGGCAATGATACGTAGCCGACCTGAGAGGGTAATCGGCCACATTGGGACTGAGACACGGCCCAAACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCACAATGGACGCAAGTCTGATGGAGCAACGCCGCGTGGATGAAGAAGGTCTTCGGATCGTAAAATCCTGTTGTTGAAGAAGAACGGTTGTGAGAGTAACTGCTCATAACGTGACGGTAATCAACCAGAAAGTCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTGGCAAGCGTTGTCCGGATTTATTGGGCGTAAAGGGAGCGCAGGCGGTCTTTTAAGTCTGAATGTGAAAGCCCTCAGCTTAACTGAGGAAGAGCATCGGAAACTGAGAGACTTGAGTGCAGAAGAGGAGAGTGGAACTCCATGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGATATATGGAAGAACACCAGTGGCGAAGGCGGCTCTCTGGTCTGTTACTGACGCTGAGGCTCGAAAGCATGGGTAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCATGCCGTAAACGATGAGTGCTAAGTGTTGGGAGGTTTCCGCCTCTCAGTGCTGCAGCTAACGCATTAAGCACTCCGCCTGGGGAGTACGACCGCAAGGTTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACCTTACCAGGTCTTGACATCTCCTGCAAGCCTAAGAGATTAGGGGTTCCCTTCGGGGACAGGAAGACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTGTTACTAGTTGCCAGCATTAAGTTGGGCACTCTAGTGAGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGGTGGGGACGACGTCAAATCATCATGCCCCTTATGACCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGATGGTACAATGAGAAGCGAACTCGCGAGGGGAAGCTGATCTCTGAAAACCATTCTCAGTTCGGATTGCAGGCTGCAACTCGCCTGCATGAAGCTGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCATGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCC(SEQ ID NO: 38)
Шелкопряд
Энтерококк
<i>Bombyx mori </i>
Кишка
AGGTGATCCAGCCGCACCTTCCGATACGGCTACCTTGTTACGACTTCACCCCAATCATCTATCCCACCTTAGGCGGCTGGCTCCAAAAAGGTTACCTCACCGACTTCGGGTGTTACAAACTCTCGTGGTGTGACGGGCGGTGTGTACAAGGCCCGGGAACGTATTCACCGCGGCGTGCTGATCCGCGATTACTAGCGATTCCGGCTTCATGCAGGCGAGTTGCAGCCTGCAATCCGAACTGAGAGAAGCTTTAAGAGATTTGCATGACCTCGCGGTCTAGCGACTCGTTGTACTTCCCATTGTAGCACGTGTGTAGCCCAGGTCATAAGGGGCATGATGATTTGACGTCATCCCCACCTTCCTCCGGTTTGTCACCGGCAGTCTCGCTAGAGTGCCCAACTAAATGATGGCAACTAACAATAAGGGTTGCGCTCGTTGCGGGACTTAACCCAACATCTCACGACACGAGCTGACGACAACCATGCACCACCTGTCACTTTGTCCCCGAAGGGAAAGCTCTATCTCTAGAGTGGTCAAAGGATGTCAAGACCTGGTAAGGTTCTTCGCGTTGCTTCGAATTAAACCACATGCTCCACCGCTTGTGCGGGCCCCCGTCAATTCCTTTGAGTTTCAACCTTGCGGTCGTACTCCCCAGGCGGAGTGCTTAATGCGTTTGCTGCAGCACTGAAGGGCGGAAACCCTCCAACACTTAGCACTCATCGTTTACGGCGTGGACTACCAGGGTATCTAATCCTGTTTGCTCCCCACGCTTTCGAGCCTCAGCGTCAGTTACAGACCAGAGAGCCGCCTTCGCCACTGGTGTTCCTCCATATATCTACGCATTTCACCGCTACACATGGAATTCCACTCTCCTCTTCTGCACTCAAGTCTCCCAGTTTCCAATGACCCTCCCCGGTTGAGCCGGGGGCTTTCACATCAGACTTAAGAAACCGCCTGCGCTCGCTTTACGCCCAATAAATCCGGACAACGCTTGCCACCTACGTATTACCGCGGCTGCTGGCACGTAGTTAGCCGTGGCTTTCTGGTTAGATACCGTCAGGGGACGTTCAGTTACTAACGTCCTTGTTCTTCTCTAACAACAGAGTTTTACGATCCGAAAACCTTCTTCACTCACGCGGCGTTGCTCGGTCAGACTTTCGTCCATTGCCGAAGATTCCCTACTGCTGCCTCCCGTAGGAGTCTGGGCCGTGTCTCAGTCCCAGTGTGGCCGATCACCCTCTCAGGTCGGCTATGCATCGTGGCCTTGGTGAGCCGTTACCTCACCAACTAGCTAATGCACCGCGGGTCCATCCATCAGCGACACCCGAAAGCGCCTTTCACTCTTATGCCATGCGGCATAAACTGTTATGCGGTATTAGCACCTGTTTCCAAGTGTTATCCCCCTCTGATGGGTAGGTTACCCACGTGTTACTCACCCGTCCGCCACTCCTCTTTCCAATTGAGTGCAAGCACTCGGGAGGAAAGAAGCGTTCGACTTGCATGTATTAGGCACGCCGCCAGCGTTCGTCCTGAGCCAGGATCAAACTCT(SEQ ID NO: 39)
<i>Delftia</i>
<i>Bombyx mori </i>
Кишка
CAGAAAGGAGGTGATCCAGCCGCACCTTCCGATACGGCTACCTTGTTACGACTTCACCCCAGTCACGAACCCCGCCGTGGTAAGCGCCCTCCTTGCGGTTAGGCTACCTACTTCTGGCGAGACCCGCTCCCATGGTGTGACGGGCGGTGTGTACAAGACCCGGGAACGTATTCACCGCGGCATGCTGATCCGCGATTACTAGCGATTCCGACTTCACGCAGTCGAGTTGCAGACTGCGATCCGGACTACGACTGGTTTTATGGGATTAGCTCCCCCTCGCGGGTTGGCAACCCTCTGTACCAGCCATTGTATGACGTGTGTAGCCCCACCTATAAGGGCCATGAGGACTTGACGTCATCCCCACCTTCCTCCGGTTTGTCACCGGCAGTCTCATTAGAGTGCTCAACTGAATGTAGCAACTAATGACAAGGGTTGCGCTCGTTGCGGGACTTAACCCAACATCTCACGACACGAGCTGACGACAGCCATGCAGCACCTGTGTGCAGGTTCTCTTTCGAGCACGAATCCATCTCTGGAAACTTCCTGCCATGTCAAAGGTGGGTAAGGTTTTTCGCGTTGCATCGAATTAAACCACATCATCCACCGCTTGTGCGGGTCCCCGTCAATTCCTTTGAGTTTCAACCTTGCGGCCGTACTCCCCAGGCGGTCAACTTCACGCGTTAGCTTCGTTACTGAGAAAACTAATTCCCAACAACCAGTTGACATCGTTTAGGGCGTGGACTACCAGGGTATCTAATCCTGTTTGCTCCCCACGCTTTCGTGCATGAGCGTCAGTACAGGTCCAGGGGATTGCCTTCGCCATCGGTGTTCCTCCGCATATCTACGCATTTCACTGCTACACGCGGAATTCCATCCCCCTCTACCGTACTCTAGCCATGCAGTCACAAATGCAGTTCCCAGGTTGAGCCCGGGGATTTCACATCTGTCTTACATAACCGCCTGCGCACGCTTTACGCCCAGTAATTCCGATTAACGCTCGCACCCTACGTATTACCGCGGCTGCTGGCACGTAGTTAGCCGGTGCTTATTCTTACGGTACCGTCATGGGCCCCCTGTATTAGAAGGAGCTTTTTCGTTCCGTACAAAAGCAGTTTACAACCCGAAGGCCTTCATCCTGCACGCGGCATTGCTGGATCAGGCTTTCGCCCATTGTCCAAAATTCCCCACTGCTGCCTCCCGTAGGAGTCTGGGCCGTGTCTCAGTCCCAGTGTGGCTGGTCGTCCTCTCAGACCAGCTACAGATCGTCGGCTTGGTAAGCTTTTATCCCACCAACTACCTAATCTGCCATCGGCCGCTCCAATCGCGCGAGGCCCGAAGGGCCCCCGCTTTCATCCTCAGATCGTATGCGGTATTAGCTACTCTTTCGAGTAGTTATCCCCCACGACTGGGCACGTTCCGATGTATTACTCACCCGTTCGCCACTCGTCAGCGTCCGAAGACCTGTTACCGTTCGACTTGCATGTGTAAGGCATGCCGCCAGCGTTCAATCTGAGCCAGGATCAAACTCTACAGTTCGATCT(SEQ ID NO: 40)
<i>Pelomonas</i>
<i>Bombyx mori </i>
Кишка
ATCCTGGCTCAGATTGAACGCTGGCGGCATGCCTTACACATGCAAGTCGAACGGTAACAGGTTAAGCTGACGAGTGGCGAACGGGTGAGTAATATATCGGAACGTGCCCAGTCGTGGGGGATAACTGCTCGAAAGAGCAGCTAATACCGCATACGACCTGAGGGTGAAAGCGGGGGATCGCAAGACCTCGCNNGATTGGAGCGGCCGATATCAGATTAGGTAGTTGGTGGGGTAAAGGCCCACCAAGCCAACGATCTGTAGCTGGTCTGAGAGGACGACCAGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATTTTGGACAATGGGCGCAAGCCTGATCCAGCCATGCCGCGTGCGGGAAGAAGGCCTTCGGGTTGTAAACCGCTTTTGTCAGGGAAGAAAAGGTTCTGGTTAATACCTGGGACTCATGACGGTACCTGAAGAATAAGCACCGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGGTGCAAGCGTTAATCGGAATTACTGGGCGTAAAGCGTGCGCAGGCGGTTATGCAAGACAGAGGTGAAATCCCCGGGCTCAACCTGGGAACTGCCTTTGTGACTGCATAGCTAGAGTACGGTAGAGGGGGATGGAATTCCGCGTGTAGCAGTGAAATGCGTAGATATGCGGAGGAACACCGATGGCGAAGGCAATCCCCTGGACCTGTACTGACGCTCATGCACGAAAGCGTGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCCTAAACGATGTCAACTGGTTGTTGGGAGGGTTTCTTCTCAGTAACGTANNTAACGCGTGAAGTTGACCGCCTGGGGAGTACGGCCGCAAGGTTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGACCCGCACAAGCGGTGGATGATGTGGTTTAATTCGATGCAACGCGAAAAACCTTACCTACCCTTGACATGCCAGGAATCCTGAAGAGATTTGGGAGTGCTCGAAAGAGAACCTGGACACAGGTGCTGCATGGCCGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTGTCATTAGTTGCTACGAAAGGGCACTCTAATGAGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAGGTCATCATGGCCCTTATGGGTAGGGCTACACACGTCATACAATGGCCGGGACAGAGGGCTGCCAACCCGCGAGGGGGAGCTAATCCCAGAAACCCGGTCGTAGTCCGGATCGTAGTCTGCAACTCGACTGCGTGAAGTCGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCTTGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGTCTTGTACACACCGCCCGTCACACCATGGGAGCGGGTTCTGCCAGAAGTAGTTAGCCTAACCGCAAGGAGGGCGATTACCACGGCAGGGTTCGTGACTGGGGTGAAGTCGTAACAAGGTAGCCGTATCGGAAGGTGCGGCTGGATCAC(SEQ ID NO: 41)
На любое количество видов бактерий можно целенаправленно воздействовать с помощью композиций или способов, описанных в данном документе. Например, в некоторых случаях модулирующее средство может целенаправленно воздействовать на один вид бактерий. В некоторых случаях модулирующее средство может целенаправленно воздействовать на по меньшей мере приблизительно любой из 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150, 200, 250, 500 или больше различных видов бактерий. В некоторых случаях модулирующее средство может целенаправленно воздействовать на любой из от приблизительно 1 до приблизительно 5, от приблизительно 5 до приблизительно 10, от приблизительно 10 до приблизительно 20, от приблизительно 20 до приблизительно 50, от приблизительно 50 до приблизительно 100, от приблизительно 100 до приблизительно 200, от приблизительно 200 до приблизительно 500, от приблизительно 10 до приблизительно 50, от приблизительно 5 до приблизительно 20 или от приблизительно 10 до приблизительно 100 различных видов бактерий. В некоторых случаях модулирующее средство может целенаправленно воздействовать на по меньшей мере приблизительно любые из 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100 или больше типов, классов, порядков, семейств или родов бактерий.
В некоторых случаях модулирующее средство может увеличивать популяцию одной или нескольких бактерий (например, патогенных бактерий, бактерий, продуцирующих токсин) на по меньшей мере приблизительно любое значение из 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% или больше в организме хозяина по сравнению с организмом–хозяином, которому модулирующее средство не было введено. В некоторых случаях модулирующее средство может уменьшать популяцию одной или нескольких бактерий (например, симбиотических бактерий, бактерий, расщепляющих пестициды, например, бактерии, которая расщепляет пестицид, приведенный в таблице 12) на по меньшей мере приблизительно любое значение из 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% или больше в организме хозяина по сравнению с организмом–хозяином, которому модулирующее средство не было введено. В некоторых случаях модулирующее средство может уничтожать популяцию бактерии (например, симбиотической бактерии, бактерии, расщепляющей пестициды) в организме хозяина. В некоторых случаях модулирующее средство может повышать уровень одной или нескольких патогенных бактерий на по меньшей мере приблизительно любое значение из 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% или больше в организме хозяина и/или может снижать уровень одной или нескольких симбиотических бактерий на по меньшей мере приблизительно любое значение из 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% или больше в организме хозяина по сравнению с организмом–хозяином, которому модулирующее средство не было введено.
В некоторых случаях модулирующее средство может изменять разнообразие бактерий и/или состав бактерий хозяина. В некоторых случаях модулирующее средство может увеличивать разнообразие бактерий в организме хозяина относительно исходного разнообразия на по меньшей мере приблизительно любое значение из 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% или больше по сравнению с организмом–хозяином, которому модулирующее средство не было введено. В некоторых случаях модулирующее средство может уменьшать разнообразие бактерий в организме хозяина относительно исходного разнообразия на по меньшей мере приблизительно любое значение из 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% или больше по сравнению с организмом–хозяином, которому модулирующее средство не было введено.
В некоторых случаях модулирующее средство может изменять функцию, активность, рост и/или деление одной или нескольких бактериальных клеток. Например, модулирующее средство может изменять экспрессию одного или нескольких генов в бактерии. В некоторых случаях модулирующее средство может изменять функцию одного или нескольких белков в бактерии. В некоторых случаях модулирующее средство может изменять функцию одной или нескольких клеточных структур (например, клеточной стенки, внешней или внутренней мембраны) в бактерии. В некоторых случаях модулирующее средство может уничтожать (например, лизировать) бактерию.
Бактерия–мишень может обитать в одной или нескольких частях организма насекомого. Кроме того, бактерия–мишень может быть внутриклеточной или внеклеточной. В некоторых случаях бактерии обитают в одной или нескольких частях кишки хозяина, в том числе, например, в передней кишке, средней кишке и/или задней кишке. В некоторых случаях бактерии обитают в виде внутриклеточных бактерий в клетке насекомого–хозяина. В некоторых случаях бактерии обитают в бактериоците насекомого–хозяина.
in situ
Изменения в отношении популяций бактерий в организме хозяина могут быть определены с помощью любых способов, известных в данной области техники, таких как микроматричный анализ, полимеразная цепная реакция (ПЦР), ПЦР в реальном времени, проточная цитометрия, флуоресцентная микроскопия, трансмиссионная электронная микроскопия, флуоресцентная гибридизация (например, FISH), спектрофотометрия, масс–спектрометрия с матрично–активированной лазерной десорбцией/ионизацией (MALDI–MS) и секвенирование ДНК. В некоторых случаях образец от хозяина, обработанного модулирующим средством, секвенируют (например, с помощью метагеномного секвенирования 16S рРНК или рДНК) для определения микробиоты хозяина после доставки или введения модулирующего средства. В некоторых случаях образец от хозяина, который не получал модулирующее средство, также секвенируют для получения эталона.
Грибы
Amylostereum areolatum, Epichloe spp, Pichia pinus, Hansenula capsulate, Daldinia decipien, Ceratocytis spp, Ophiostoma spp и Attamyces bromatificus.
Candida, Metschnikowia, Debaryomyces, Scheffersomyces shehatae и Scheffersomyces stipites, Starmerella, Pichia, Trichosporon, Cryptococcus, Pseudozyma,
Pezizomycotina
Symbiotaphrina bucneri
Symbiotaphrina kochii
Иллюстративные грибы, на которые можно целенаправленно воздействовать в соответствии со способами и композициями, предусмотренными в данном документе, включают в себя без ограничения Неограничивающие примеры дрожжевых и дрожжеподобных симбионтов, обнаруживаемых в организмах насекомых, включают в себя а также дрожжеподобные симбионты из подтипа  (например,  и ). Неограничивающие примеры дрожжевых грибов, на которые можно целенаправленно воздействовать с помощью способов и композиций согласно данному документу, приведены в таблице 2.
Таблица 2. Примеры дрожжевых грибов в организмах насекомых
<b>Вид насекомого</b>
<b>Отряд: семейство</b>
<b>Местоположение дрожжевых грибов (вид) </b>
<i>Stegobium paniceum</i>
Coleoptera: Anobiidae
Мицетомы
<i>(= Sitodrepa panicea)</i>
(<i>Saccharomyces</i>)
Слепая кишка (<i>Torulopsis buchnerii</i>)
Мицетома между передней и средней кишкой
Мицетомы (<i>Symbiotaphrina buchnerii</i>)
Мицетомы и пищеварительная трубка (<i>Torulopsis buchnerii</i>)
Слепая кишка (<i>Symbiotaphrina buchnerii</i>)
<i>Lasioderma serricorne</i>
Coleoptera: Anobiidae
Мицетома между передней и средней кишкой
(<i>Symbiotaphrina kochii</i>)
<i>Ernobius abietis</i>
Coleoptera: Anobiidae
Мицетомы (<i>Torulopsis karawaiewii</i>)
(<i>Candida karawaiewii</i>)
<i>Ernobius mollis</i>
Coleoptera: Anobiidae
Мицетомы (<i>Torulopsis ernobii</i>)
(<i>Candida ernobii</i>)
<i>Hemicoelus gibbicollis</i>
Coleoptera: Anobiidae
Мицетомы личинок
<i>Xestobium plumbeum</i>
Coleoptera: Anobiidae
Мицетомы (<i>Torulopsis xestobii</i>)
(<i>Candida xestobii</i>)
<i>Criocephalus rusticus</i>
Coleoptera: Cerambycidae
Мицетомы
<i>Phoracantha semipunctata</i>
Coleoptera: Cerambycidae
Пищеварительный канал (<i>Candida</i><i>guilliermondii</i>, <i>C</i>. <i>tenuis</i>)
Слепая кишка около средней кишки (<i>Candida guilliermondii</i>)
<i>Harpium inquisitor</i>
Coleoptera: Cerambycidae
Мицетомы (<i>Candida rhagii</i>)
<i>Harpium mordax </i><i>H. sycophanta</i>
Coleoptera: Cerambycidae
Слепая кишка около средней кишки (<i>Candida tenuis</i>)
<i>Gaurotes virginea</i>
Coleoptera: Cerambycidae
Слепая кишка около средней кишки (<i>Candida rhagii</i>)
<i>Leptura rubra</i>
Coleoptera: Cerambycidae
Слепая кишка около средней кишки (<i>Candida tenuis</i>)
Слепая кишка около средней кишки (<i>Candida parapsilosis</i>)
<i>Leptura maculicornis</i>
Coleoptera: Cerambycidae
Слепая кишка около средней кишки (<i>Candida parapsilosis</i>)
<i>L. cerambyciformis</i>
<i>Leptura sanguinolenta</i>
Coleoptera: Cerambycidae
Слепая кишка около средней кишки (<i>Candida</i><i>sp.</i>)
<i>Rhagium bifasciatum</i>
Coleoptera: Cerambycidae
Слепая кишка около средней кишки (<i>Candida tenuis</i>)
<i>Rhagium inquisitor</i>
Coleoptera: Cerambycidae
Слепая кишка около средней кишки (<i>Candida guilliermondii</i>)
<i>Rhagium mordax</i>
Coleoptera: Cerambycidae
Слепая кишка около средней кишки (<i>Candida</i>)
<i>Carpophilus hemipterus</i>
Coleoptera: Nitidulidae
Кишечный тракт (10 видов дрожжевых грибов)
<i>Odontotaenius disjunctus</i>
Coleoptera: Passalidae
Задняя кишка (<i>Enteroramus dimorphus</i>)
<i>Odontotaenius disjunctus</i>
Coleoptera: Passalidae
Кишка (<i>Pichia stipitis</i>, <i>P. segobiensis</i>, <i>Candida shehatae</i>)
<i>Verres sternbergianus</i>
(<i>C. ergatensis</i>)
<i>Scarabaeus semipunctatus</i>
Coleoptera: Scarabaeidae
Пищеварительный тракт (10 видов дрожжевых грибов)
<i>Chironitis furcifer</i>
<i>Неизвестный вид</i>
Coleoptera: Scarabaeidae
Кишка (<i>Trichosporon cutaneum</i>)
<i>Dendroctonus и Ips spp.</i>
Coleoptera: Scolytidae
Пищеварительный канал (13 видов дрожжевых грибов)
<i>Dendroctonus frontalis</i>
Coleoptera: Scolytidae
Средняя кишка (<i>Candida sp.</i>)
<i>Ips sexdentatus</i>
Coleoptera: Scolytidae
Пищеварительный тракт (<i>Pichia bovis</i>, <i>P. rhodanensis</i>)
Hansenula holstii (<i>Candida rhagii</i>)
Пищеварительный тракт
(<i>Candida pulcherina</i>)
<i>Ips typographus</i>
Coleoptera: Scolytidae
Пищеварительный канал
Пищеварительный тракт (<i>Hansenula capsulata</i>, <i>Candida parapsilosis</i>)
Кишка и гомогенаты жуков (<i>Hansenula holstii</i>, <i>H. capsulata</i>, <i>Candida diddensii</i>, <i>C. mohschtana</i>, <i>C. nitratophila</i>, <i>Cryptococcus albidus</i>, <i>C. laurentii</i>)
<i>Trypodendron lineatum</i>
Coleoptera: Scolytidae
Не определено
<i>Xyloterinus politus</i>
Coleoptera: Scolytidae
Голова, грудь, брюшко (<i>Candida</i>, <i>Pichia</i>, <i>Saccharomycopsis</i>)
<i>Periplaneta americana</i>
Dictyoptera: Blattidae
Гемоцель (<i>Candida sp. nov.</i>)
<i>Blatta orientalis</i>
Dictyoptera: Blattidae
Кишечный тракт (<i>Kluyveromyces blattae</i>)
<i>Blatella germanica</i>
Dictyoptera: Blattellidae
Гемоцель
<i>Cryptocercus punctulatus</i>
Dictyoptera: Cryptocercidae
Задняя кишка (1 вид дрожжевых грибов)
<i>Philophylla heraclei</i>
Diptera: Tephritidae
Гемоцель
<i>Aedes (4 вида)</i>
Diptera: Culicidae
Внутренняя микрофлора (9 родов дрожжевых грибов)
<i>Drosophila pseudoobscura</i>
Diptera: Drosophilidae
Пищеварительный канал (24 вида дрожжевых грибов)
<i>Drosophila (5 видов)</i>
Diptera: Drosophilidae
Зоб (42 вида дрожжевых грибов)
<i>Drosophila melanogaster</i>
Diptera: Drosophilidae
Зоб (8 видов дрожжевых грибов)
<i>Drosophila (4 вида)</i>
Diptera: Drosophilidae
Зоб (7 видов дрожжевых грибов)
<i>Drosophila (6 видов)</i>
Diptera: Drosophilidae
Кишка личинок (17 видов дрожжевых грибов)
<i>Drosophila (20 видов)</i>
Diptera: Drosophilidae
Зоб (20 видов дрожжевых грибов)
<i>Drosophila (8 групп видов)</i>
Diptera: Drosophilidae
Зоб (<i>Kloeckera, Candida, Kluyveromyces</i>)
<i>Drosophila serido</i>
Diptera: Drosophilidae
Зоб (18 видов дрожжевых грибов)
<i>Drosophila (6 видов)</i>
Diptera: Drosophilidae
Эпителий кишечника (<i>Coccidiascus legeri</i>)
<i>Protaxymia melanoptera</i>
Diptera
Неизвестно (<i>Candida</i>, <i>Cryptococcus</i>, <i>Sporoblomyces</i>)
<i>Astegopteryx styraci</i>
Homoptera: Aphididae
Гемоцель и жировое тело
<i>Tuberaphis sp.</i>
Homoptera: Aphididae
Срезы тканей
<i>Hamiltonaphis styraci</i>
<i>Glyphinaphis bambusae</i>
<i>Cerataphis sp.</i>
<i>Hamiltonaphis styraci</i>
Homoptera: Aphididae
Гемоцель брюшка
<i>Cofana unimaculata</i>
Homoptera: Cicadellidae
Жировое тело
<i>Leofa unicolor</i>
Homoptera: Cicadellidae
Жировое тело
<i>Lecaniines и т.д.</i>
Homoptera: Coccoidea
Гемолимфа, жировая ткань и т.д.
<i>Lecanium sp.</i>
Homoptera: Coccidae
Гемолимфа, жировая ткань
<i>Ceroplastes (4 вида)</i>
Homoptera: Coccidae
Мазки крови
<i>Laodelphax striatellus</i>
Homoptera: Delphacidae
Жировое тело
Яйца
Яйца (<i>Candida</i>)
<i>Nilaparvata lugens</i>
Homoptera: Delphacidae
Жировое тело
Яйца (2 неидентифицированных вида дрожжевых грибов)
Яйца, нимфы (<i>Candida</i>)
Яйца (7 неидентифицированных видов дрожжевых грибов)
Яйца (<i>Candida</i>)
<i>Nisia nervosa</i>
Homoptera: Delphacidae
Жировое тело
<i>Nisia grandiceps</i>
<i>Perkinsiella spp.</i>
<i>Sardia rostrata</i>
<i>Sogatella furcifera</i>
<i>Sogatodes orizicola</i>
Homoptera: Delphacidae
Жировое тело
<i>Amrasca devastans</i>
Homoptera: Jassidae
Яйца, мицетомы, гемолимфа
<i>Tachardina lobata</i>
Homoptera: Kerriidae
Мазки крови (<i>Torulopsis</i>)
<i>Laccifer (=Lakshadia) sp.</i>
Homoptera: Kerriidae
Мазки крови (<i>Torula</i><i>variabilis</i>)
<i>Comperia merceti</i>
Hymenoptera: Encyrtidae
Гемолимфа, кишка, ядовитая железа
<i>Solenopsis invicta</i>
Hymenoptera: Formicidae
Гемолимфа (<i>Myrmecomyces annellisae</i>)
<i>S. quinquecuspis</i>
<i>Solenopsis invicta</i>
Hymenoptera: Formicidae
Личинки на стадии четвертого возраста (<i>Candida parapsilosis</i>, <i>Yarrowia lipolytica</i>)
Кишка и гемолимфа (<i>Candida parapsilosis</i>, <i>C. lipolytica</i>, <i>C. guillermondii</i>, <i>C. rugosa</i>, <i>Debaryomyces hansenii</i>)
<i>Apis mellifera</i>
Hymenoptera: Apidae
Пищеварительный тракт (<i>Torulopsis sp.</i>)
Кишечный тракт (<i>Torulopsis apicola</i>)
Пищеварительный тракт (8 видов дрожжевых грибов)
Содержимое кишечника (12 видов дрожжевых грибов)
Содержимое кишечника (7 видов дрожжевых грибов)
Кишечник (14 видов дрожжевых грибов)
Кишечный тракт (<i>Pichia melissophila</i>)
Кишечный тракт (7 видов дрожжевых грибов)
Пищеварительный канал (<i>Hansenula silvicola</i>)
Зоб и кишка (13 видов дрожжевых грибов)
<i>Apis mellifera</i>
Hymenoptera: Apidae
Средняя кишка (9 родов дрожжевых грибов)
<i>Anthophora occidentalis</i>
Hymenoptera: Anthophoridae
<i>Nomia melanderi</i>
Hymenoptera: Halictidae
<i>Halictus rubicundus</i>
Hymenoptera: Halictidae
<i>Megachile rotundata</i>
Hymenoptera: Megachilidae
На любое количество видов грибов можно целенаправленно воздействовать с помощью композиций или способов, описанных в данном документе. Например, в некоторых случаях модулирующее средство может целенаправленно воздействовать на один вид грибов. В некоторых случаях модулирующее средство может целенаправленно воздействовать на по меньшей мере приблизительно любой из 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150, 200, 250, 500 или больше различных видов грибов. В некоторых случаях модулирующее средство может целенаправленно воздействовать на любой из от приблизительно 1 до приблизительно 5, от приблизительно 5 до приблизительно 10, от приблизительно 10 до приблизительно 20, от приблизительно 20 до приблизительно 50, от приблизительно 50 до приблизительно 100, от приблизительно 100 до приблизительно 200, от приблизительно 200 до приблизительно 500, от приблизительно 10 до приблизительно 50, от приблизительно 5 до приблизительно 20 или от приблизительно 10 до приблизительно 100 различных видов грибов. В некоторых случаях модулирующее средство может целенаправленно воздействовать на по меньшей мере приблизительно любые из 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100 или больше типов, классов, порядков, семейств или родов грибов.
В некоторых случаях модулирующее средство может увеличивать популяцию одного или нескольких грибов (например, патогенных или паразитических грибов) на по меньшей мере приблизительно любое значение из 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% или больше в организме хозяина по сравнению с организмом–хозяином, которому модулирующее средство не было введено. В некоторых случаях модулирующее средство может уменьшать популяцию одного или нескольких грибов (например, симбиотических грибов) на по меньшей мере приблизительно любое значение из 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% или больше в организме хозяина по сравнению с организмом–хозяином, которому модулирующее средство не было введено. В некоторых случаях модулирующее средство может уничтожать популяцию грибов (например, симбиотических грибов) в организме хозяина. В некоторых случаях модулирующее средство может повышать уровень одного или нескольких симбиотических грибов на по меньшей мере приблизительно любое значение из 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% или больше в организме хозяина и/или может снижать уровень одного или нескольких симбиотических грибов на по меньшей мере приблизительно любое значение из 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% или больше в организме хозяина по сравнению с организмом–хозяином, которому модулирующее средство не было введено.
В некоторых случаях модулирующее средство может изменять разнообразие грибов и/или состав грибов хозяина. В некоторых случаях модулирующее средство может повышать разнообразие грибов в организме хозяина относительно исходного разнообразия на по меньшей мере приблизительно любое значение из 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% или больше по сравнению с организмом–хозяином, которому модулирующее средство не было введено. В некоторых случаях модулирующее средство может снижать разнообразие грибов в организме хозяина относительно исходного разнообразия на по меньшей мере приблизительно любое значение из 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% или больше по сравнению с организмом–хозяином, которому модулирующее средство не было введено.
В некоторых случаях модулирующее средство может изменять функцию, активность, рост и/или деление одного или нескольких грибов. Например, модулирующее средство может изменять экспрессию одного или нескольких генов в грибе. В некоторых случаях модулирующее средство может изменять функцию одного или нескольких белков в грибе. В некоторых случаях модулирующее средство может изменять функцию одного или нескольких клеточных компонентов в грибе. В некоторых случаях модулирующее средство может уничтожать гриб.
Кроме того, гриб–мишень может обитать в одной или нескольких частях организма насекомого. В некоторых случаях гриб обитает в одной или нескольких частях кишки хозяина, в том числе, например, в передней кишке, средней кишке и/или задней кишке. В некоторых случаях гриб живет внеклеточно в гемолимфе, жировых телах или в специализированных структурах в организме хозяина.
in situ
Изменения в отношении популяции грибов в организме хозяина могут быть определены с помощью любых способов, известных в данной области техники, таких как микроматричный анализ, полимеразная цепная реакция (ПЦР), ПЦР в реальном времени, проточная цитометрия, флуоресцентная микроскопия, трансмиссионная электронная микроскопия, флуоресцентная гибридизация (например, FISH), спектрофотометрия, масс–спектрометрия с матрично–активированной лазерной десорбцией/ионизацией (MALDI–MS) и секвенирование ДНК. В некоторых случаях образец от хозяина, обработанного модулирующим средством, секвенируют (например, с помощью метагеномного секвенирования) для определения микробиоты хозяина после доставки или введения модулирующего средства. В некоторых случаях образец от хозяина, который не получал модулирующее средство, также секвенируют для получения эталона.
Модулирующие средства
Модулирующее средство из способов и композиций, предусмотренных в данном документе, может включать в себя фаг, полипептид, малую молекулу, антибиотик, вторичный метаболит, бактерию, гриб или любую их комбинацию.
Фаг
Buchnera
Tectiviridae, Myoviridae, Siphoviridae, Podoviridae, Caudovirales, Lipothrixviridae, Rudiviridae
Ligamenvirales
Myoviridae, Siphoviridae, Podoviridae, Lipothrixviridae, Rudiviridae, Ampullaviridae, Bicaudaviridae, Clavaviridae, Corticoviridae, Cystoviridae, Fuselloviridae, Gluboloviridae, Guttaviridae, Inoviridae, Leviviridae, Microviridae, Plasmaviridae
Tectiviridae.
Модулирующее средство, описанное в данном документе, может включать в себя фаг (например, литический фаг или нелитический фаг). В некоторых случаях эффективная концентрация любого фага, описанного в данном документе, может изменять уровень, активность или метаболизм одного или нескольких микроорганизмов (описанных в данном документе, например, spp.), обитающих в организме хозяина, описанного в данном документе (например, тли), при этом модулирование приводит к снижению приспособленности хозяина (например, как изложено в данном документе). В некоторых случаях модулирующее средство включает в себя по меньшей мере один фаг, выбранный из порядков или . В некоторых случаях композиция содержит по меньшей мере один фаг, выбранный из семейства и Дополнительные неограничивающие примеры фагов, пригодных в способах и композициях, приведены в таблице 3.
Таблица 3. Примеры фагов и бактерий–мишеней
<b>Фаг и № доступа</b>
<b>Бактерия–мишень</b>
<b>Хозяин–мишень</b>
SA1 (NC_027991), phiP68 (NC_004679)
<i>Staphylococcus sp.</i>
Семейство <i>Apidae</i>
WO (AB036666.1)
<i>Wolbachia sp. </i>
<i>Aedes aegypti</i>; <i>Drosophila melanogaster</i>; <i>Plasmodium sp</i>; <i>Teleogryllus taiwanemma</i>; <i>Bombyx mori </i>
KL1 (NC_018278), BcepNazgul (NC_005091) PhiE125 (NC_003309)
<i>Burkholderia sp. </i>
<i>Riptortus sp.</i>; <i>Pyrrhocoris apterus.</i>
Fern (NC_028851), Xenia (NC_028837), HB10c2 (NC_028758)
<i>Paenibacillus larvae</i>
Шмели:<i> Bombus sp.</i>; медоносные пчелы:<i> A. mellifera</i>
CP2 (NC_020205), XP10 (NC_004902), XP15 (NC_007024), phiL7 (NC_012742)
<i>Xanthomonas sp.</i>
<i>Plebeina denoiti</i>; семейство <i>Apidae</i>; <i>Apis mellifera</i>; семейство<i> Drosophilidae</i> и семейство <i>Chloropidae</i>
PP1 (NC_019542), PM1 (NC_023865)
<i>Pectobacterium</i><i>carotovorum </i>subsp<i>.</i><i>carotovorum</i>
Семейство <i>Apidae</i>
ΦRSA1 (NC_009382),ΦRSB1 (NC_011201), ΦRSL1 (NC_010811), RSM1 (NC_008574)
<i>Ralstonia solanacearum</i>
<i>Bombyx mori </i>
SF1 (NC_028807)
<i>Streptomyces scabies</i>
<i>Philantus sp.</i>;<i> Trachypus sp</i>
ECML–4 (NC_025446), ECML–117 (NC_025441), ECML–134 (NC_025449)
<i>Escherichia coli </i>
Семейство <i>Apidae</i>;
<i>Varroa destructor </i>
SSP5 (JX274646.1), SSP6 (NC_004831), SFP10 (NC_016073), F18SE (NC_028698)
<i>Salmonella </i>sp.
Семейство <i>Drosophilidae</i>
(NC_001416), Bcp1 (NC_024137)
<i>Bacillus sp. </i>
Непарный шелкопряд; <i>Lymantria dispar</i>; <i>Varroa destructor </i>
Phi1 (NC_009821)
<i>Enterococcus sp. </i>
<i>Schistocerca gragaria</i>
ΦKMV (NC_005045), ΦEL(AJ697969.1), ΦKZ (NC_004629)
<i>Pseudomonas sp.</i>
<i>Lymantria dispar</i>; семейство <i>Apidae</i>
A2 (NC_004112), phig1e (NC_004305)
<i>Lactobacillus sp.</i>
Семейство <i>Apidae</i>; семейство <i>Drosophila</i>; <i>Varroa destructor</i>
KLPN1 (NC_028760)
<i>Klebsiella sp.</i>
<i>C. capitata </i>
vB_AbaM_Acibel004 (NC_025462), vB_AbaP_Acibel007 (NC_025457)
<i>Acinetobacter sp. </i>
<i>Schistocerca gragaria</i>
В некоторых случаях модулирующее средство включает в себя литический фаг. Таким образом, после доставки литического фага в бактериальную клетку, обитающую в организме хозяина, фаг вызывает лизис в бактериальной клетке–мишени. В некоторых случаях литический фаг целенаправленно воздействует на бактерию, обитающую в организме насекомого–хозяина, и уничтожает ее со снижением приспособленности хозяина. В качестве альтернативы или дополнительно, фаг модулирующего средства может представлять собой нелитический фаг (также называемый лизогенным или умеренным фагом). Таким образом, после доставки нелитического фага в бактериальную клетку, обитающую в организме хозяина, бактериальная клетка может оставаться жизнеспособной и способной стабильно поддерживать экспрессию генов, кодируемых в геноме фага. В некоторых случаях нелитический фаг применяют для изменения экспрессии генов в бактерии, обитающей в организме насекомого–хозяина, со снижением приспособленности хозяина. В некоторых случаях модулирующее средство включает в себя смесь литического и нелитического фага.
Buchnera
В определенных случаях фаг представляет собой встречающийся в природе фаг. Например, встречающийся в природе фаг может быть выделен из образца окружающей среды со смесью различных фагов. Встречающийся в природе фаг может быть выделен с помощью способов, известных в данной области техники для выделения, очистки и идентификации фага, который целенаправленно воздействует на определенный микроорганизм (например, бактериальный эндосимбионт в организме насекомого–хозяина, например,  spp. у тлей). В качестве альтернативы, в определенных случаях фаг может быть сконструирован на основе встречающегося в природе фага.
Модулирующее средство, описанное в данном документе, может включать в себя фаг с узким или широким спектром бактерий–мишеней. В некоторых случаях фаг имеет узкий спектр бактерий–мишеней. В некоторых случаях фаг представляет собой промискуитетный фаг с широким спектром бактерий–мишеней. Например, промискуитетный фаг может целенаправленно воздействовать на по меньшей мере приблизительно любую из 5, 10, 20, 30, 40, 50 или больше бактерий, обитающих в организме хозяина. Фаг с узким спектром бактерий–мишеней может целенаправленно воздействовать на конкретный штамм бактерий в организме хозяина без отрицательного влияния на другую, например, не являющуюся мишенью, бактерию в организме хозяина. Например, фаг может целенаправленно воздействовать на не более чем приблизительно любую из 50, 40, 30, 20, 10, 8, 6, 4, 2 или 1 бактерии, обитающей в организме хозяина.
Композиции, описанные в данном документе, могут содержать любое количество фагов, как, например, по меньшей мере приблизительно любое количество из 1, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20, 30, 40, 50, 100 или больше фагов. В некоторых случаях композиция содержит фаг из одного или нескольких семейств (например, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или больше фагов), одного или нескольких порядков (например, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или больше фагов) или одного или нескольких видов (например, 1, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20, 30, 40, 50, 100 или больше фагов). Композиции, содержащие один или несколько фагов, также называются в данном документе "коктейлями фагов". Коктейли фагов являются пригодными, поскольку они обеспечивают целенаправленное воздействие на более широкий спектр хозяев бактерий. Кроме того, они обеспечивают целенаправленное воздействие на каждый штамм (т. е. подвид) бактерий многочисленных ортогональных фагов, тем самым предупреждая или значительно задерживая появление устойчивости. В некоторых случаях коктейль содержит несколько фагов, целенаправленно воздействующих на один вид бактерий. В некоторых случаях коктейль содержит несколько фагов, целенаправленно воздействующих на несколько видов бактерий. В некоторых случаях в однофаговом "коктейле" содержится один промискуитетный фаг (т. е. фаг с широким спектром хозяев), целенаправленно воздействующий на многие штаммы в пределах вида.
2
3
4
5
6
7
8
9
10
2
3
4
5
6
7
8
9
2
3
3
4
4
5
5
6
7
8
8
9
2
4
4
6
6
9
3
8
8
6
Подходящие концентрации фага в модулирующем средстве, описанном в данном документе, зависят от таких факторов, как эффективность, показатель выживаемости, переносимость фага, количество различных фагов и/или типы лизина в композициях, состав и способы применения композиции. В некоторых случаях фаг находится в жидком или твердом составе. В некоторых случаях концентрация каждого фага в любой из композиций, описанных в данном документе, имеет по меньшей мере приблизительно любое значение из 10, 10, 10, 10, 10, 10, 10, 10, 10или больше БОЕ/мл. В некоторых случаях концентрация каждого фага в любой из композиций, описанных в данном документе, имеет не более чем приблизительно любое значение из 10, 10, 10, 10, 10, 10, 10, 10 БОЕ/мл. В некоторых случаях концентрация каждого фага в композиции имеет любое значение из от приблизительно 10 до приблизительно 10, от приблизительно 10 до приблизительно 10, от приблизительно 10 до приблизительно 10, от приблизительно 10 до приблизительно 10, от приблизительно 10 до приблизительно 10, от приблизительно 10 до приблизительно 10, от приблизительно 10 до приблизительно 10, от приблизительно 10 до приблизительно 10, от приблизительно 10 до приблизительно 10 или от приблизительно 10 до приблизительно 10БОЕ/мл. В некоторых случаях, если композиция содержит по меньшей мере два типа фагов, то концентрация каждого типа фагов может быть одной и той же или разной. Например, в некоторых случаях концентрация одного фага в коктейле составляет приблизительно 10БОЕ/мл, и концентрация второго фага в коктейле составляет приблизительно 10 БОЕ/мл.
Модулирующее средство, включающее в себя фаг, описанный в данном документе, может быть приведено в контакт с хозяином–мишенью в количестве и в течение времени, достаточных для: (a) достижения целевого уровня (например, предварительно определенного или порогового уровня) концентрации фага внутри хозяина–мишени; (b) достижения целевого уровня (например, предварительно определенного или порогового уровня) концентрации фага внутри кишки хозяина–мишени; (c) достижения целевого уровня (например, предварительно определенного или порогового уровня) концентрации фага внутри бактериоцита хозяина–мишени; (d) модулирования уровня или активности одного или нескольких микроорганизмов (например, эндосимбионтов) в организме хозяина–мишени или/и (e) модулирования приспособленности хозяина–мишени.
Buchnera
Как проиллюстрировано в примерах 1–3 и 25, фаги (например, один или несколько встречающихся в природе фагов) можно применять в качестве модулирующих средств, которые целенаправленно воздействуют на эндосимбиотическую бактерию, такую как spp., в организме насекомого–хозяина, как, например, тлей, для снижения приспособленности хозяина (например, как изложено в данном документе).
Полипептиды
Buchnera
Многочисленные полипептиды (например, бактериоцин, бактериоцин R–типа, C–богатый пептид клубеньков, противомикробный пептид, лизин или регуляторный пептид бактериоцитов) можно применять в композициях и способах, описанных в данном документе. В некоторых случаях эффективная концентрация любого пептида или полипептида, описанного в данном документе, может изменять уровень, активность или метаболизм одного или нескольких микроорганизмов (описанных в данном документе, например, spp.), обитающих в организме хозяина (например, тли), при этом изменение приводит к снижению приспособленности хозяина (например, как изложено в данном документе). Полипептиды, включенные в данный документ, могут включать в себя встречающиеся в природе полипептиды или рекомбинантно получаемые варианты. Например, полипептид может представлять собой функционально активный вариант любого из полипептидов, описанных в данном документе, на по меньшей мере 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичный, например, в определенной области или во всей последовательности, последовательности полипептида, описанного в данном документе, или встречающегося в природе полипептида.
Модулирующее средство, включающее в себя полипептид, описанный в данном документе, может быть приведено в контакт с хозяином–мишенью в количестве и в течение времени, достаточных для: (a) достижения целевого уровня (например, предварительно определенного или порогового уровня) концентрации внутри хозяина–мишени; (b) достижения целевого уровня (например, предварительно определенного или порогового уровня) концентрации внутри кишки хозяина–мишени; (c) достижения целевого уровня (например, предварительно определенного или порогового уровня) концентрации внутри бактериоцита хозяина–мишени; (d) модулирования уровня или активности одного или нескольких микроорганизмов (например, эндосимбионтов) в организме хозяина–мишени или/и (e) модулирования приспособленности хозяина–мишени.
Buchnera
Полипептидные модулирующие средства, обсуждаемые далее в данном документе, а именно бактериоцины, лизины, противомикробные пептиды, C–богатые пептиды клубеньков и регуляторные пептиды бактериоцитов, можно применять для изменения уровня, активности или метаболизма микроорганизмов–мишеней (например, ),как указано в разделе касательно снижения приспособленности насекомых (например, тлей).
Бактериоцины
Pseudomonas, Streptomyces, Bacillus, Staphylococcus
Lactococcus lactis
Hafnia alvei
Citrobacter freundii
Klebsiella oxytoca, Klebsiella pneumonia, Enterobacter cloacae
Serratia plymithicum, Xanthomonas campestris, Erwinia carotovora, Ralstonia solanacearum
Escherichia coli
Модулирующее средство, описанное в данном документе, может включать в себя бактериоцин. В некоторых случаях бактериоцин продуцируется естественным образом грамположительными бактериями, такими как  или молочнокислые бактерии (LAB, такие как ). В некоторых случаях бактериоцин продуцируется естественным образом грамотрицательными бактериями, такими как , , , или . Иллюстративные бактериоцины включают в себя без ограничения антибиотики LAB I–IV класса (такие как лантибиотики), колицины, микроцины и пиоцины. Неограничивающие примеры бактериоцинов приведены в таблице 4.
Таблица 4. Примеры бактериоцинов
<b>Класс</b>
<b>Название</b>
<b>Продуцент</b>
<b>Мишени</b>
<b>Последовательность</b>
<b>Класс I</b>
Низин
<i>Lactococcus lactis</i>
Активный в отношении грамположительных бактерий:
<i>Enterococcus,</i><i>Lactobacillus, </i><i>Lactococcus,</i><i>Leuconostoc, </i><i>Listeria,</i><i>Clostridium</i>
ITSISLCTPGCKTGALMGCNMKTATCHCSIHVSK(SEQ ID NO: 42)
Эпидермин
<i>Staphylococcus epidermis</i>
Грамположительные бактерии
IASKFICTPGCAKTGSFNSYCC(SEQ ID NO: 43)
<b>Класс II</b>
<b>Класс II a</b>
Педиоцин PA–1
<i>Pediococcus acidilactici</i>
<i>Pediococci,</i><i>Lactobacilli,</i><i>Leuconostoc,</i><i>Brochothrix thermosphacta,</i><i>Propionibacteria,</i><i>Bacilli,</i><i>Enterococci,</i><i>Staphylococci,</i><i>Listeria clostridia,</i><i>Listeria monocytogenes, Listeria innocua</i>
KYYGNGVTCG KHSCSVDWGK ATTCIINNGAMAWATGGHQGNHKC(SEQ ID NO: 44)
<b>Класс II b</b>
Энтероцин P
<i>Enterococcus faecium</i>
<i>Lactobacillus sakei, Enterococcus faecium</i>
ATRSYGNGVYCNNSKCWVNWGEAKENIAGIVISGWASGLAGMGH(SEQ ID NO: 45)
<b>Класс II c</b>
Лактококцин G
<i>Streptococcus lactis</i>
Грамположительные бактерии
GTWDDIGQGIGRVAYWVGKAMGNMSDVNQASRINRKKKH(SEQ ID NO: 46)
<b>Класс II d</b>
Лактацин–F
<i>Lactobacillus johnsonii</i>
<i>Lactobacilli,</i><i>Enterococcus faecalis</i>
NRWGDTVLSAASGAGTGIKACKSFGPWGMAICGVGGAAIGGYFGYTHN(SEQ ID NO: 47)
<b>Класс III</b>
<b>Класс III a</b>
Энтероцин AS–48
<i>Enterococcus faecalis</i>
Широкий спектр: грамположительные и грамотрицательные бактерии
MAKEFGIPAAVAGTVLNVVEAGGWVTTIVSILTAVGSGGLSLLAAAGRESIKAYLKKEIKKKGKRAVIAW(SEQ ID NO: 48)
<b>Класс III b</b>
Ауреоцин A70
<i>Staphylococcus aureus</i>
Широкий спектр: грамположительные и грамотрицательные бактерии
MSWLNFLKYIAKYGKKAVSAAWKYKGKVLEWLNVGPTLEWVWQKLKKIAGL(SEQ ID NO: 49)
<b>Класс IV</b>
Гарвицин A
<i>Lactococcus garvieae</i>
Широкий спектр: грамположительные и грамотрицательные бактерии
IGGALGNALNGLGTWANMMNGGGFVNQWQVYANKGKINQYRPY(SEQ ID NO: 50)
<b>Неклассифицированные</b>
Колицин V
<i>Escherichia coli</i>
Активный в отношении <i>Escherichia coli</i> (а также близкородственных бактерий), Enterobacteriaceae
MRTLTLNELDSVSGGASGRDIAMAIGTLSGQFVAGGIGAAAGGVAGGAIYDYASTHKPNPAMSPSGLGGTIKQKPEGIPSEAWNYAAGRLCNWSPNNLSDVCL(SEQ ID NO: 51)
В некоторых случаях бактериоцин представляет собой колицин, пиоцин или микроцин, продуцируемые грамотрицательными бактериями. В некоторых случаях бактериоцин представляет собой колицин. Колицин может представлять собой колицин группы A (например, использует систему Tol для проникновения через внешнюю мембрану бактерии–мишени) или колицин группы B (например, использует систему Ton для проникновения через внешнюю мембрану бактерии–мишени). В некоторых случаях бактериоцин представляет собой микроцин. Микроцин может представлять собой микроцин класса I (например, < 5 кДа, имеет посттрансляционные модификации) или микроцин класса II (например, 5–10 кДа, с посттрансляционными модификациями или без них). В некоторых случаях микроцин класса II представляет собой микроцин класса IIa (например, требует более одного гена для синтеза и сборки функциональных пептидов) или микроцин класса IIb (например, линейные пептиды с посттрансляционными модификациями на С–конце или без них). В некоторых случаях бактериоцин представляет собой пиоцин. В некоторых случаях пиоцин представляет собой R–пиоцин, F–пиоцин или S–пиоцин.
В некоторых случаях бактериоцин представляет собой бактериоцин класса I, класса II, класса III или класса IV, продуцируемый грамположительными бактериями. В некоторых случаях модулирующее средство включает в себя бактериоцин класса I (например, антибиотики, содержащие лантионин (лантибиотики), продуцируемые грамположительными бактериями). Бактериоцины класса I или лантибиотики могут представлять собой пептид с низкой молекулярной массой (например, менее чем приблизительно 5 кДа) и могут иметь аминокислотные остатки с посттрансляционными модификациями (например, лантионин, β–метиллантионин или дегидрированные аминокислоты).
В некоторых случаях бактериоцин представляет собой бактериоцин класса II (например, соединения, не являющиеся лантибиотиками, продуцируемые грамположительными бактериями). Многие из них являются положительно заряженными не содержащими лантионина пептидами, которые, в отличие от лантибиотиков, не подвергаются обширной посттрансляционной модификации. Бактериоцин класса II может принадлежать к одному из следующих подклассов: "педиоциноподобные" бактериоцины (например, педиоцин PA–1 и карнобактериоцин X (класс IIa)); двухпептидные бактериоцины (например, лактацин F и ABP–118 (класс IIb)); круговые бактериоцины (например, карноциклин А и энтероцин AS–48 (класс IIc)) или немодифицированные линейные непедиоциноподобные бактериоцины (например, эпидермицин NI01 и лактококцин A (класс IId)).
В некоторых случаях бактериоцин представляет собой бактериоцин класса III (например, продуцируемый грамположительными бактериями). Бактериоцины класса III могут иметь молекулярную массу более 10 кДа и могут представлять собой термонестабильные белки. Бактериоцины класса III могут быть дополнительно подразделены на бактериоцины группы IIIA и группы IIIB. Бактериоцины группы IIIA включают в себя бактериолитические ферменты, которые уничтожают восприимчивые штаммы посредством лизиса клеточной стенки, такие как энтеролизин А. Бактериоцины группы IIIB включают в себя нелитические белки, такие как казеицин 80, гельветицин J и лактацин B.
В некоторых случаях бактериоцин представляет собой бактериоцин класса IV (например, продуцируемый грамположительными бактериями). Бактериоцины класса IV представляют собой группу сложных белков, ассоциированных с другими липидными или углеводными фрагментами, которые, по–видимому, требуются для активности. Они являются относительно гидрофобными и термостабильными. Примерами бактериоцинов класса IV являются лейконоцин S, лактоцин 27 и лактоцин S.
C. difficile
P. aeruginosa
В некоторых случаях бактериоцин представляет собой бактериоцин R–типа. Бактериоцины R–типа представляют собой сократительные бактериоцидные белковые комплексы. Некоторые бактериоцины R–типа имеют сократительную структуру, подобную отростку фага. C–концевая область белка нити отростка фага определяет специфичность связывания с мишенью. Они могут прикрепляться к клеткам–мишеням посредством белка, связывающегося с рецептором, например, нити отростка. За прикреплением следует сокращение наружного чехла и введение сердцевины через оболочку бактерии–мишени. Проникновение сердцевины приводит к быстрой деполяризации потенциала клеточной мембраны и мгновенной гибели клетки. Контакт с одной частицей бактериоцина R–типа может приводить к гибели клетки. Бактериоцин R–типа, например, может быть термолабильным, умеренно кислотостойким, устойчивым к трипсину, способным осаждаться в результате центрифугирования, быть различимым при использовании электронной микроскопии или обладать комбинацией этих свойств. Другие бактериоцины R–типа могут представлять собой сложные молекулы, включающие в себя многочисленные белки, полипептиды или субъединицы, и могут напоминать структуру отростка бактериофагов семейства Myoviridae. У встречающихся в природе бактериоцинов R–типа структуры субъединиц могут кодироваться бактериальным геномом, таким как геном  или , и образовывать бактериоцины R–типа, которые выступают в качестве природной защиты против других бактерий. В некоторых случаях бактериоцин R–типа представляет собой пиоцин. В некоторых случаях пиоцин представляет собой R–пиоцин, F–пиоцин или S–пиоцин.
В некоторых случаях бактериоцин представляет собой функционально активный вариант бактериоцинов, описанных в данном документе. В некоторых случаях вариант бактериоцина является на по меньшей мере 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичным, например, в определенной области или во всей последовательности, последовательности бактериоцина, описанного в данном документе, или встречающегося в природе бактериоцина.
В некоторых случаях бактериоцин можно создавать с помощью биоинженерии в соответствии со стандартными способами для модулирования его биологической активности, например, повышения, или снижения, или регулирования, или для определения его микроорганизмов–мишеней. В других случаях бактериоцин продуцируется трансляционным аппаратом (например, рибосомой и т. д.) микробной клетки. В некоторых случаях бактериоцин синтезируют химическим путем. Некоторые бактериоцины могут образовываться из полипептидного предшественника. Полипептидный предшественник может подвергаться расщеплению (например, процессингу под действием протеазы) с образованием самого полипептида бактериоцина. Таким образом, в некоторых случаях бактериоцин продуцируется из полипептида–предшественника. В некоторых других случаях бактериоцин включает в себя полипептид, который подвергся посттрансляционным модификациям, например, расщеплению или добавлению одной или нескольких функциональных групп.
Бактериоцины, описанные в данном документе, могут быть составлены в виде композиции для любого из путей применения, описанных в данном документе. Композиции, раскрытые в данном документе, могут содержать любые количество или тип (например, классы) бактериоцинов, как, например, по меньшей мере приблизительно любое количество из 1 бактериоцина, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20, 30, 40, 50, 100 или больше бактериоцинов. Подходящие концентрации каждого бактериоцина в композициях, описанных в данном документе, зависят от таких факторов, как эффективность, стабильность бактериоцина, количество различных типов бактериоцина в композициях, состав и способы применения композиции. В некоторых случаях концентрация каждого бактериоцина в жидкой композиции составляет от приблизительно 0,01 нг/мл до приблизительно 100 мг/мл. В некоторых случаях концентрация каждого бактериоцина в твердой композиции составляет от приблизительно 0,01 нг/г до приблизительно 100 мг/г. В некоторых случаях, если композиция содержит по меньшей мере два типа бактериоцинов, то концентрация каждого типа бактериоцинов может быть одной и той же или разной. В некоторых случаях бактериоцин предусмотрен в композиции, содержащей бактериальную клетку, которая секретирует бактериоцин. В некоторых случаях бактериоцин предусмотрен в композиции, содержащей полипептид (например, полипептид, выделенный из бактериальной клетки).
Бактериоцины могут нейтрализовать (например, уничтожать) по меньшей мере один микроорганизм, отличный от отдельной бактериальной клетки, в которой полипептид образуется, в том числе клетки, клонально родственные бактериальной клетке, и другие микробные клетки. Таким образом, бактериальная клетка может проявлять цитотоксические или ингибирующие рост эффекты в отношении множества микроорганизмов посредством секреции бактериоцинов. В некоторых случаях бактериоцин целенаправленно воздействует на один или несколько видов бактерий, обитающих в организме хозяина, и уничтожает их посредством образования пор в цитоплазматической мембране, разрушения клеточной стенки (например, активности пептидогликаназы) или активности нуклеазы (например, активности ДНКазы, активности 16S рРНКазы или активности тРНКазы).
В некоторых случаях бактериоцин характеризуется нейтрализующей активностью. Нейтрализующая активность бактериоцинов может включать в себя без ограничения остановку размножения микроорганизмов или цитотоксичность. Некоторые бактериоцины характеризуются цитотоксической активностью, и, таким образом, могут уничтожать микроорганизмы, например, бактерии, дрожжевые грибы, водоросли и т. п. Некоторые бактериоцины могут ингибировать размножение микроорганизмов, например, бактерий, дрожжевых грибов, водорослей и т. п., например, посредством остановки клеточного цикла.
В некоторых случаях бактериоцин характеризуется уничтожающей активностью. Механизм уничтожения у бактериоцинов является специфичным для каждой группы бактериоцинов. В некоторых случаях бактериоцин характеризуется биологической активностью узкого спектра. Бактериоцины известны своей очень высокой активностью в отношении своих штаммов–мишеней. Активность некоторых бактериоцинов ограничена штаммами, которые являются близкородственными по отношению к штамму–продуценту бактериоцина (биологическая активность узкого спектра). В некоторых случаях бактериоцин характеризуется биологической активностью широкого спектра в отношении широкого круга родов.
В некоторых случаях бактериоцины взаимодействуют с рецепторной молекулой или стыковочной молекулой на клеточной мембране бактерии–мишени. Например, низин является крайне активным в отношении своих штаммов бактерий–мишеней, демонстрируя противомикробную активность даже в одноразрядной наномолярной концентрации. Было показано, что молекула низина связывается с липидом II, который является основным переносчиком субъединиц пептидогликанов из цитоплазмы в клеточную стенку.
Bacillus
Malaysian Journal of Microbiology
Enterococcus faecalis
Candida
BMC
Microbiology
Pseudomonas
Curvularia lunata
Fusarium
Helminthosporium
Biopolaris
The Internet Journal of Microbiology
B. subtilis
В некоторых случаях бактериоцин характеризуется противогрибковой активностью. Был идентифицирован ряд бактериоцинов с противодрожжевой или противогрибковой активностью. Например, было показано, что бактериоцины из  характеризуются нейтрализующей активностью в отношении некоторых штаммов дрожжевых грибов (см., например, Adetunji and Olaoye,  9:130–13, 2013). В другом примере было показано, что пептид  характеризуется нейтрализующей активностью в отношении видов  (см., например, Shekh and Roy,  12:132, 2012). В другом примере было показано, что бактериоцины из  характеризуются нейтрализующей активностью в отношении грибов, таких как , виды , виды  и виды  (см., например, Shalani and Srivastava,  Volume 5 Number 2, 2008). В другом примере было показано, что ботрицидин AJ1316 и алирин B1 из  характеризуются противогрибковой активностью.
Модулирующее средство, включающее в себя бактериоцин, описанный в данном документе, может быть приведено в контакт с хозяином–мишенью в количестве и в течение времени, достаточных для: (a) достижения целевого уровня (например, предварительно определенного или порогового уровня) концентрации бактериоцина внутри хозяина–мишени; (b) достижения целевого уровня (например, предварительно определенного или порогового уровня) концентрации бактериоцина внутри кишки хозяина–мишени; (c) достижения целевого уровня (например, предварительно определенного или порогового уровня) концентрации бактериоцина внутри бактериоцита хозяина–мишени; (d) модулирования уровня или активности одного или нескольких микроорганизмов (например, эндосимбионтов) в организме хозяина–мишени или/и (e) модулирования приспособленности хозяина–мишени.
Buchnera
Как проиллюстрировано в примерах 4, 5 и 13, бактериоцины (например, colA или низин) можно применять в качестве модулирующих средств, которые целенаправленно воздействуют на эндосимбиотическую бактерию, такую как spp., в организме насекомого–хозяина, как, например, тлей, для снижения приспособленности хозяина (например, как изложено в данном документе).
Лизины
Модулирующее средство, описанное в данном документе, может включать в себя лизин (например, также известный как муреингидролаза или аутолизин пептидогликанов). Можно применять любой лизин, подходящий для ингибирования бактерии, обитающей в организме хозяина. В некоторых случаях лизин представляет собой лизин, который может продуцироваться естественным путем бактериальной клеткой. В некоторых случаях лизин представляет собой лизин, который может продуцироваться естественным путем бактериофагом. В некоторых случаях лизин получают из фага, который ингибирует бактерию, обитающую в организме хозяина. В некоторых случаях лизин конструируют на основе встречающегося в природе лизина. В некоторых случаях лизин конструируют для секреции бактерией–хозяином, например, посредством введения сигнального пептида в лизин. В некоторых случаях лизин применяют в комбинации с холином фага. В некоторых случаях лизин экспрессируется рекомбинантным бактериальным хозяином, который не является восприимчивым к лизину. В некоторых случаях лизин применяют для ингибирования грамположительной или грамотрицательной бактерии, обитающей в организме хозяина.
N
N
N
Лизин может представлять собой лизин любого класса и может иметь один или несколько видов субстратной специфичности. Например, лизин может представлять собой гликозидазу, эндопептидазу, карбопептидазу или их комбинацию. В некоторых случаях лизин расщепляет β–1–4–гликозидную связь в сахарном фрагменте клеточной стенки, амидную связь, соединяющую сахарные и пептидные фрагменты бактериальной клеточной стенки, и/или пептидные связи между пептидными фрагментами клеточной стенки. Лизин может принадлежать к одной или нескольким специфическим группам лизина в зависимости от участка расщепления в пептидогликане. В некоторых случаях лизин представляет собой –ацетил–β–D–мурамидазу (например, лизоцим), литическую трансгликозилазу, –ацетил–β–D–глюкозаминидазу, –ацетилмурамил–L–аланинамидазу, L,D–эндопептидазу, D,D–эндопептидазу, D,D–карбоксипептидазу, L,D–карбоксипептидазу или L,D–транспептидазу. Неограничивающие примеры лизинов и форм их активности приведены в таблице 5.
Таблица 5. Примеры лизинов
<b>Бактерия–мишень</b>
<b>Продуцент</b>
<b>Лизины</b>
<b>Активность</b>
<b>Последовательность</b>
<i>S. pneumoniae </i>
Cp1
Cpl–1
Мурамидаза
MVKKNDLFVDVSSHNGYDITGILEQMGTTNTIIKISESTTYLNPCLSAQVEQSNPIGFYHFARFGGDVAEAEREAQFFLDNVPMQVKYLVLDYEDDPSGDAQANTNACLRFMQMIADAGYKPIYYSYKPFTHDNVDYQQILAQFPNSLWIAGYGLNDGTANFEYFPSMDGIRWWQYSSNPFDKNIVLLDDEEDDKPKTAGTWKQDSKGWWFRRNNGSFPYNKWEKIGGVWYYFDSKGYCLTSEWLKDNEKWYYLKDNGAMATGWVLVGSEWYYMDDSGAMVTGWVKYKNNWYYMTNERGNMVSNEFIKSGKGWYFMNTNGELADNPSFTKEPDGLITVA(SEQ ID NO: 52)
<i>S. pneumoniae</i>
Dp–1
Pal
Амидаза
MGVDIEKGVAWMQARKGRVSYSMDFRDGPDSYDCSSSMYYALRSAGASSAGWAVNTEYMHAWLIENGYELISENAPWDAKRGDIFIWGRKGASAGAGGHTGMFIDSDNIIHCNYAYDGISVNDHDERWYYAGQPYYYVYRLTNANAQPAEKKLGWQKDATGFWYARANGTYPKDEFEYIEENKSWFYFDDQGYMLAEKWLKHTDGNWYWFDRDGYMATSWKRIGESWYYFNRDGSMVTGWIKYYDNWYYCDATNGDMKSNAFIRYNDGWYLLLPDGRLADKPQFTVEPDGLITAKV(SEQ ID NO: 53)
<i>S. pyogenes</i>
C1
C1
Амидаза
Н. о.
<i>B. anthracis</i>
PlyG
Амидаза
MEIQKKLVDPSKYGTKCPYTMKPKYITVHNTYNDAPAENEVSYMISNNNEVSFHIAVDDKKAIQGIPLERNAWACGDGNGSGNRQSISVEICYSKSGGDRYYKAEDNAVDVVRQLMSMYNIPIENVRTHQSWSGKYCPHRMLAEGRWGAFIQKVKNGNVATTSPTKQNIIQSGAFSPYETPDVMGALTSLKMTADFILQSDGLTYFISKPTSDAQLKAMKEYLDRKGWWYEVK(SEQ ID NO: 54)
<i>B. anthracis </i>
Профаг Эймса
PlyPH
Амидаза
Н. о.
<i>E. faecalis и E. faecium </i>
Phi1
PlyV12
Амидаза
Н. о.
<i>S. aureus</i>
ΦMR11
MV–L
Эндопептидаза и амидаза
MQAKLTKKEFIEWLKTSEGKQFNVDLWYGFQCFDYANAGWKVLFGLLLKGLGAKDIPFANNFDGLATVYQNTPDFLAQPGDMVVFGSNYGAGYGHVAWVIEATLDYIIVYEQNWLGGGWTDRIEQPGWGWEKVTRRQHAYDFPMWFIRPNFKSETAPRSIQSPTQASKKETAKPQPKAVELKIIKDVVKGYDLPKRGGNPKGIVIHNDAGSKGATAEAYRNGLVNAPLSRLEAGIAHSYVSGNTVWQALDESQVGWHTANQLGNKYYYGIEVCQSMGADNATFLKNEQATFQECARLLKKWGLPANRNTIRLHNEFTSTSCPHRSSVLHTGFDPVTRGLLPEDKQLQLKDYFIKQIRVYMDGKIPVATVSNESSASSNTVKPVASAWKRNKYGTYYMEENARFTNGNQPITVRKIGPFLSCPVAYQFQPGGYCDYTEVMLQDGHVWVGYTWEGQRYYLPIRTWNGSAPPNQILGDLWGEIS(SEQ ID NO: 55)
<i>S. pyogenes</i>
C1
PlyC
Амидаза
Н. о.
<i>S. agalactiae </i>
B30
Лизин GBS
Мурамидаза и эндопептидаза
MVINIEQAIAWMASRKGKVTYSMDYRNGPSSYDCSSSVYFALRSAGASDNGWAVNTEYEHDWLIKNGYVLIAENTNWNAQRGDIFIWGKRGASAGAFGHTGMFVDPDNIIHCNYGYNSITVNNHDEIWGYNGQPYVYAYRYSGKQSNAKVDNKSVVSKFEKELDVNTPLSNSNMPYYEATISEDYYVESKPDVNSTDKELLVAGTRVRVYEKVKGWARIGAPQSNQWVEDAYLIDATDM(SEQ ID NO: 56)
<i>S. aureus</i>
P68
Lys16
Эндопептидаза
Н. о.
<i>S. aureus </i>
K
LysK
Амидаза и эндопептидаза
MAKTQAEINKRLDAYAKGTVDSPYRVKKATSYDPSFGVMEAGAIDADGYYHAQCQDLITDYVLWLTDNKVRTWGNAKDQIKQSYGTGFKIHENKPSTVPKKGWIAVFTSGSYEQWGHIGIVYDGGNTSTFTILEQNWNGYANKKPTKRVDNYYGLTHFIEIPVKAGTTVKKETAKKSASKTPAPKKKATLKVSKNHINYTMDKRGKKPEGMVIHNDAGRSSGQQYENSLANAGYARYANGIAHYYGSEGYVWEAIDAKNQIAWHTGDGTGANSGNFRFAGIEVCQSMSASDAQFLKNEQAVFQFTAEKFKEWGLTPNRKTVRLHMEFVPTACPHRSMVLHTGFNPVTQGRPSQAIMNKLKDYFIKQIKNYMDKGTSSSTVVKDGKTSSASTPATRPVTGSWKKNQYGTWYKPENATFVNGNQPIVTRIGSPFLNAPVGGNLPAGATIVYDEVCIQAGHIWIGYNAYNGNRVYCPVRTCQGVPPNQIPGVAWGVFK(SEQ ID NO: 57)
<i>L. monocytogenes</i>
A118
Ply118
Амидаза
MTSYYYSRSLANVNKLADNTKAAARKLLDWSESNGIEVLIYETIRTKEQQAANVNSGASQTMRSYHLVGQALDFVMAKGKTVDWGAYRSDKGKKFVAKAKSLGFEWGGDWSGFVDNPHLQFNYKGYGTDTFGKGASTSNSSKPSADTNTNSLGLVDYMNLNKLDSSFANRKKLATSYGIKNYSGTATQNTTLLAKLKAGKPHTPASKNTYYTENPRKVKTLVQCDLYKSVDFTTKNQTGGTFPPGTVFTISGMGKTKGGTPRLKTKSGYYLTANTKFVKKI(SEQ ID NO: 58)
<i> L. monocytogenes </i>
A511
Ply511
Амидаза
MVKYTVENKIIAGLPKGKLKGANFVIAHETANSKSTIDNEVSYMTRNWKNAFVTHFVGGGGRVVQVANVNYVSWGAGQYANSYSYAQVELCRTSNATTFKKDYEVYCQLLVDLAKKAGIPITLDSGSKTSDKGIKSHKWVADKLGGTTHQDPYAYLSSWGISKAQFASDLAKVSGGGNTGTAPAKPSTPAPKPSTPSTNLDKLGLVDYMNAKKMDSSYSNRDKLAKQYGIANYSGTASQNTTLLSKIKGGAPKPSTPAPKPSTSTAKKIYFPPNKGNWSVYPTNKAPVKANAIGAINPTKFGGLTYTIQKDRGNGVYEIQTDQFGRVQVYGAPSTGAVIKK(SEQ ID NO: 59)
<i>L. monocytogenes</i>
A500
Ply500
Эндопептидаза
MALTEAWLIEKANRKLNAGGMYKITSDKTRNVIKKMAKEGIYLCVAQGYRSTAEQNALYAQGRTKPGAIVTNAKGGQSNHNYGVAVDLCLYTNDGKDVIWESTTSRWKKVVAAMKAEGFKWGGDWKSFKDYPHFELCDAVSGEKIPAATQNTNTNSNRYEGKVIDSAPLLPKMDFKSSPFRMYKVGTEFLVYDHNQYWYKTYIDDKLYYMYKSFCDVVAKKDAKGRIKVRIKSAKDLRIPVWNNIKLNSGKIKWYAPNVKLAWYNYRRGYLELWYPNDGWYYTAEYFLK(SEQ ID NO: 60)
<i> S. pneumoniae </i>
ΦDp–1
Pal, S
Эндопептидаза и амидаза
Н. о.
<i>S. agalactiae </i>
Профаг LambdaSa1
LambdaSa1
Гликозидаза
MVINIEQAIAWMASRKGKVTYSMDYRNGPSSYDCSSSVYFALRSAGASDNGWAVNTEYEHDWLIKNGYVLIAENTNWNAQRGDIFIWGKRGASAGAFGHTGMFVDPDNIIHCNYGYNSITVNNHDEIWGYNGQPYVYAYRYARKQSNAKVDNQSVVSKFEKELDVNTPLSNSNMPYYEATISEDYYVESKPDVNSTDKELLVAGTRVRVYEKVKGWARIGAPQSNQWVEDAYLIDATDM(SEQ ID NO: 61)
<i>S. agalactiae </i>
Профаг LambdaSa2
LambdaSa2
Гликозидаза и эндопептидаза
MEINTEIAIAWMSARQGKVSYSMDYRDGPNSYDCSSSVYYALRSAGASSAGWAVNTEYMHDWLIKNGYELIAENVDWNAVRGDIAIWGMRGHSSGAGGHVVMFIDPENIIHCNWANNGITVNNYNQTAAASGWMYCYVYRLKSGASTQGKSLDTLVKETLAGNYGNGEARKAVLGNQYEAVMSVINGKTTTNQKTVDQLVQEVIAGKHGNGEARKKSLGSQYDAVQKRVTELLKKQPSEPFKAQEVNKPTETKTSQTELTGQATATKEEGDLSFNGTILKKAVLDKILGNCKKHDILPSYALTILHYEGLWGTSAVGKADNNWGGMTWTGQGNRPSGVTVTQGSARPSNEGGHYMHYASVDDFLTDWFYLLRAGGSYKVSGAKTFSEAIKGMFKVGGAVYDYAASGFDSYIVGASSRLKAIEAENGSLDKFDKATDIGDGSKDKIDITIEGIEVTINGITYELTKKPV(SEQ ID NO: 62)
<i>S. uberis </i>
Профаг (ATCC700407)
Ply700
Амидаза
MTDSIQEMRKLQSIPVRYDMGDRYGNDADRDGRIEMDCSSAVSKALGISMTNNTETLQQALPAIGYGKIHDAVDGTFDMQAYDVIIWAPRDGSSSLGAFGHVLIATSPTTAIHCNYGSDGITENDYNYIWEINGRPREIVFRKGVTQTQATVTSQFERELDVNARLTVSDKPYYEATLSEDYYVEAGPRIDSQDKELIKAGTRVRVYEKLNGWSRINHPESAQWVEDSYLVDATEM(SEQ ID NO: 63)
<i>S. suis</i>
SMP
LySMP
Гликозидаза и эндопептидаза
Н. о.
<i>B. anthracis</i>
Bcp1
PlyB
Мурамидаза
Н. о.
<i>S. aureus</i>
Phi11 и Phi12
Лизин Phi11
Амидаза и эндопептидаза
MQAKLTKNEFIEWLKTSEGKQFNVDLWYGFQCFDYANAGWKVLFGLLLKGLGAKDIPFANNFDGLATVYQNTPDFLAQPGDMVVFGSNYGAGYGHVAWVIEATLDYIIVYEQNWLGGGWTDGIEQPGWGWEKVTRRQHAYDFPMWFIRPNFKSETAPRSVQSPTQAPKKETAKPQPKAVELKIIKDVVKGYDLPKRGSNPKGIVIHNDAGSKGATAEAYRNGLVNAPLSRLEAGIAHSYVSGNTVWQALDESQVGWHTANQIGNKYYYGIEVCQSMGADNATFLKNEQATFQECARLLKKWGLPANRNTIRLHNEFTSTSCPHRSSVLHTGFDPVTRGLLPEDKRLQLKDYFIKQIRAYMDGKIPVATVSNESSASSNTVKPVASAWKRNKYGTYYMEESARFTNGNQPITVRKVGPFLSCPVGYQFQPGGYCDYTEVMLQDGHVWVGYTWEGQRYYLPIRTWNGSAPPNQILGDLWGEIS(SEQ ID NO: 64)
<i>S. aureus</i>
ΦH5
LysH5
Амидаза и эндопептидаза
MQAKLTKKEFIEWLKTSEGKQYNADGWYGFQCFDYANAGWKALFGLLLKGVGAKDIPFANNFDGLATVYQNTPDFLAQPGDMVVFGSNYGAGYGHVAWVIEATLDYIIVYEQNWLGGGWTDGVQQPGSGWEKVTRRQHAYDFPMWFIRPNFKSETAPRSVQSPTQASKKETAKPQPKAVELKIIKDVVKGYDLPKRGSNPNFIVIHNDAGSKGATAEAYRNGLVNAPLSRLEAGIAHSYVSGNTVWQALDESQVGWHTANQIGNKYGYGIEVCQSMGADNATFLKNEQATFQECARLLKKWGLPANRNTIRLHNEFTSTSCPHRSSVLHTGFDPVTRGLLPEDKRLQLKDYFIKQIRAYMDGKIPVATVSNDSSASSNTVKPVASAWKRNKYGTYYMEESARFTNGNQPITVRKVGPFLSCPVGYQFQPGGYCDYTEVMLQDGHVWVGYTWEGQRYYLPIRTWNGSAPPNQILGDLWGEIS(SEQ ID NO: 65)
<i>S. warneri </i>
ΦWMY
LysWMY
Амидаза и эндопептидаза
MKTKAQAKSWINSKIGKGIDWDGMYGYQCMDEAVDYIHHVTDGKVTMWGNAIDAPKNNFQGLCTVYTNTPEFRPAYGDVIVWSYGTFATYGHIAIVVNPDPYGDLQYITVLEQNWNGNGIYKTEFATIRTHDYTGVSHFIRPKFADEVKETAKTVNKLSVQKKIVTPKNSVERIKNYVKTSGYINGEHYELYNRGHKPKGVVIHNTAGTASATQEGQRLTNMTFQQLANGVAHVYIDKNTIYETLPEDRIAWHVAQQYGNTEFYGIEVCGSRNTDKEQFLANEQVAFQEAARRLKSWGMRANRNTVRLHHTFSSTECPDMSMLLHTGYSMKNGKPTQDITNKCADYFMKQINAYIDGKQPTSTVVGSSSSNKLKAKNKDKSTGWNTNEYGTLWKKEHATFTCGVRQGIVTRTTGPFTSCPQAGVLYYGQSVNYDTVCKQDGYVWISWTTSDGYDVWMPIRTWDRSTDKVSEIWGTIS(SEQ ID NO: 66)
<i>Streptococci (GBS) </i>
ΦNCTC 11261
PlyGBS
Мурамидаза и эндопептидаза
MATYQEYKSRSNGNAYDIDGSFGAQCWDGYADYCKYLGLPYANCTNTGYARDIWEQRHENGILNYFDEVEVMQAGDVAIFMVVDGVTPYSHVAIFDSDAGGGYGWFLGQNQGGANGAYNIVKIPYSATYPTAFRPKVFKNAVTVTGNIGLNKGDYFIDVSAYQQADLTTTCQQAGTTKTIIKVSESIAWLSDRHQQQANTSDPIGYYHFGRFGGDSALAQREADLFLSNLPSKKVSYLVIDYEDSASADKQANTNAVIAFMDKIASAGYKPIYYSYKPFTLNNIDYQKIIAKYPNSIWIAGYPDYEVRTEPLWEFFPSMDGVRWWQFTSVGVAGGLDKNIVLLADDSSKMDIPKVDKPQELTFYQKLATNTKLDNSNVPYYEATLSTDYYVESKPNASSADKEFIKAGTRVRVYEKVNGWSRINHPESAQWVEDSYLVNATDM(SEQ ID NO: 67)
<i>C. perfringens</i>
Φ3626
Ply3626
Амидаза
Н. о.
<i>C. difficile</i>
ΦCD27
Лизин CD27
Амидаза
Н. о.
<i>E. faecalis </i>
Φ1
PlyV12
Амидаза
Н. о.
<i>A. naeslundii </i>
ΦAv–1–
Лизин Av–1
Предполагаемая амидаза/ мурамидаза
Н. о.
<i>L. gasseri</i>
ΦgaY
LysgaY
Мурамидаза
Н. о.
<i>S. aureus</i>
ΦSA4
LysSA4
Амидаза и эндопептидаза
Н. о.
<i>S. haemolyticus</i>
ΦSH2
SH2
Амидаза и эндопептидаза
Н. о.
<i> B. thuringiensis </i>
ΦBtCS33
PlyBt33
Амидаза
Н. о.
<i>L. monocytogenes </i>
ΦP40
PlyP40
Амидаза
Н. о.
<i>L. monocytogenes </i>
ΦFWLLm3
LysZ5
Амидаза
MVKYTVENKIIAGLPKGKLKGANFVIAHETANSKSTIDNEVSYMTRNWQNAFVTHFVGGGGRVVQVANVNYVSWGAGQYANSYSYAQVELCRTSNATTFKKDYEVYCQLLVDLAKKAGIPITLDSGSKTSDKGIKSHKWVADKLGGTTHQDPYAYLSSWGISKAQFASDLAKVSGGGNTGTAPAKPSTPSTNLDKLGLVDYMNAKKMDSSYSNRAKLAKQYGIANYSGTASQNTTLLSKIKGGAPKPSTPAPKPSTSTAKKIYFPPNKGNWSVYPTNKAPVKANAIGAINPTKFGGLTYTIQKDRGNGVYEIQTDQFGRVQVYGAPSTGAVIKK(SEQ ID NO: 68)
<i>B. cereus</i>
ΦBPS13
LysBPS13
Амидаза
MAKREKYIFDVEAEVGKAAKSIKSLEAELSKLQKLNKEIDATGGDRTEKEMLATLKAAKEVNAEYQKMQRILKDLSKYSGKVSRKEFNDSKVINNAKTSVQGGKVTDSFGQMLKNMERQINSVNKQFDNHRKAMVDRGQQYTPHLKTNRKDSQGNSNPSMMGRNKSTTQDMEKAVDKFLNGQNEATTGLNQALYQLKEISKLNRRSESLSRRASASGYMSFQQYSNFTGDRRTVQQTYGGLKTANRERVLELSGQATGISKELDRLNSKKGLTAREGEERKKLMRQLEGIDAELTARKKLNSSLDETTSNMEKFNQSLVDAQVSVKPERGTMRGMMYERAPAIALAIGGAITATIGKLYSEGGNHSKAMRPDEMYVGQQTGAVGANWRPNRTATMRSGLGNHLGFTGQEMMEFQSNYLSANGYHGAEDMKAATTGQATFARATGLGSDEVKDFFNTAYRSGGIDGNQTKQFQNAFLGAMKQSGAVGREKDQLKALNGILSSMSQNRTVSNQDMMRTVGLQSAISSSGVASLQGTKGGALMEQLDNGIREGFNDPQMRVLFGQGTKYQGMGGRAALRKQMEKGISDPDNLNTLIDASKASAGQDPAEQAEVLATLASKMGVNMSSDQARGLIDLQPSGKLTKENIDKVMKEGLKEGSIESAKRDKAYSESKASIDNSSEAATAKQATELNDMGSKLRQANAALGGLPAPLYTAIAAVVAFTAAVAGSALMFKGASWLKGGMASKYGGKGGKGGKGGGTGGGGGAGGAAATGAGAAAGAGGVGAAAAGEVGAGVAAGGAAAGAAAGGSKLAGVGKGFMKGAGKLMLPLGILMGASEIMQAPEEAKGSAIGSAVGGIGGGIAGGAATGAIAGSFLGPIGTAVGGIAGGIAGGFAGSSLGETIGGWFDSGPKEDASAADKAKADASAAALAAAAGTSGAVGSSALQSQMAQGITGAPNMSQVGSMASALGISSGAMASALGISSGQENQIQTMTDKENTNTKKANEAKKGDNLSYERENISMYERVLTRAEQILAQARAQNGIMGVGGGGTAGAGGGINGFTGGGKLQFLAAGQKWSSSNLQQHDLGFTDQNLTAEDLDKWIDSKAPQGSMMRGMGATFLKAGQEYGLDPRYLIAHAAEESGWGTSKIARDKGNFFGIGAFDDSPYSSAYEFKDGTGSAAERGIMGGAKWISEKYYGKGNTTLDKMKAAGYATNASWAPNIASIMAGAPTGSGSGNVTATINVNVKGDEKVSDKLKNSSDMKKAGKDIGSLLGFYSREMTIA(SEQ ID NO: 69)
<i>S. aureus</i>
ΦGH15
LysGH15
Амидаза и эндопептидаза
MAKTQAEINKRLDAYAKGTVDSPYRIKKATSYDPSFGVMEAGAIDADGYYHAQCQDLITDYVLWLTDNKVRTWGNAKDQIKQSYGTGFKIHENKPSTVPKKGWIAVFTSGSYQQWGHIGIVYDGGNTSTFTILEQNWNGYANKKPTKRVDNYYGLTHFIEIPVKAGTTVKKETAKKSASKTPAPKKKATLKVSKNHINYTMDKRGKKPEGMVIHNDAGRSSGQQYENSLANAGYARYANGIAHYYGSEGYVWEAIDAKNQIAWHTGDGTGANSGNFRFAGIEVCQSMSASDAQFLKNEQAVFQFTAEKFKEWGLTPNRKTVRLHMEFVPTACPHRSMVLHTGFNPVTQGRPSQAIMNKLKDYFIKQIKNYMDKGTSSSTVVKDGKTSSASTPATRPVTGSWKKNQYGTWYKPENATFVNGNQPIVTRIGSPFLNAPVGGNLPAGATIVYDEVCIQAGHIWIGYNAYNGDRVYCPVRTCQGVPPNHIPGVAWGVFK(SEQ ID NO: 70)
<i>S. aureus</i>
ΦvB SauS–PLA88
HydH5
Эндопептидаза и гликозидаза
Н. о.
<i>E. faecalis</i>
ΦF168/08
Lys168
Эндопептидаза
Н. о.
<i>E. faecalis </i>
ΦF170/08
Lys170
Амидаза
Н. о.
<i>S. aureus</i>
ΦP–27/HP
P–27/HP
Неопределенные
Н. о.
<i>C. perfringens</i>
ΦSM101
Psm
Мурамидаза
Н. о.
<i>C. sporogenes</i>
Φ8074–B1
CS74L
Амидаза
MKIGIDMGHTLSGADYGVVGLRPESVLTREVGTKVIYKLQKLGHVVVNCTVDKASSVSESLYTRYYRANQANVDLFISIHFNATPGGTGTEVYTYAGRQLGEATRIRQEFKSLGLRDRGTKDGSGLAVIRNTKAKAMLVECCFCDNPNDMKLYNSESFSNAIVKGITGKLPNGESGNNNQGGNKVKAVVIYNEGADRRGAEYLADYLNCPTISNSRTFDYSCVEHVYAVGGKKEQYTKYLKTLLSGANRYDTMQQILNFINGGK(SEQ ID NO: 71)
<i>S. typhimurium </i>
ΦSPN1S
SPN1S
Гликозидаза
MDINQFRRASGINEQLAARWFPHITTAMNEFGITKPDDQAMFIAQVGHESGGFTRLQENFNYSVNGLSGFIRAGRITPDQANALGRKTYEKSLPLERQRAIANLVYSKRMGNNGPGDGWNYRGRGLIQITGLNNYRDCGNGLKVDLVAQPELLAQDEYAARSAAWFFSSKGCMKYTGDLVRVTQIINGGQNGIDDRRTRYAAARKVLAL(SEQ ID NO: 72)
<i>C. michiganensis </i>
ΦCMP1
CMP1
Пептидаза
Н. о.
<i>C. michiganensis </i>
ΦCN77
CN77
Пептидаза
MGYWGYPNGQIPNDKMALYRGCLLRADAAAQAYALQDAYTRATGKPLVILEGYRDLTRQKYLRNLYLSGRGNIAAVPGLSNHGWGLACDFAAPLNSSGSEEHRWMRQNAPLFGFDWARGKADNEPWHWEYGNVPVSRWASLDVTPIDRNDMADITEGQMQRIAVILLDTEIQTPLGPRLVKHALGDALLLGQANANSIAEVPDKTWDVLVDHPLAKNEDGTPLKVRLGDVAKYEPLEHQNTRDAIAKLGTLQFTDKQLATIGAGVKPIDEASLVKKIVDGVRALFGRAAA(SEQ ID NO: 73)
<i>A. baumannii</i>
ΦAB2
LysAB2
Гликозидаза
MILTKDGFSIIRNELFGGKLDQTQVDAINFIVAKATESGLTYPEAAYLLATIYHETGLPSGYRTMQPIKEAGSDSYLRSKKYYPYIGYGYVQLTWKENYERIGKLIGVDLIKNPEKALEPLIAIQIAIKGMLNGWFTGVGFRRKRPVSKYNKQQYVAARNIINGKDKAELIAKYAIIFERALRSL(SEQ ID NO: 74)
<i>B. cereus</i>
ΦB4
LysB4
Эндопептидаза
MAMALQTLIDKANRKLNVSGMRKDVADRTRAVITQMHAQGIYICVAQGFRSFAEQNALYAQGRTKPGSIVTNARGGQSNHNYGVAVDLCLYTQDGSDVIWTVEGNFRKVIAAMKAQGFKWGGDWVSFKDYPHFELYDVVGGQKPPADNGGAVDNGGGSGSTGGSGGGSTGGGSTGGGYDSSWFTKETGTFVTNTSIKLRTAPFTSADVIATLPAGSPVNYNGFGIEYDGYVWIRQPRSNGYGYLATGESKGGKRQNYWGTFK(SEQ ID NO: 75)
<i>P. aeruginosa</i>
ΦKMV
KMV45
Неопределенные
Н. о.
<i>C. tyrobutyricum </i>
ΦCTP1
Ctp1l
Гликозидаза
MKKIADISNLNGNVDVKLLFNLGYIGIIAKASEGGTFVDKYYKQNYTNTKAQGKITGAYHFANFSTIAKAQQEANFFLNCIAGTTPDFVVLDLEQQCTGDITDACLAFLNIVAKKFKCVVYCNSSFIKEHLNSKICAYPLWIANYGVATPAFTLWTKYAMWQFTEKGQVSGISGYIDFSYITDEFIKYIKGEDEVENLVVYNDGADQRAAEYLADRLACPTINNARKFDYSNVKNVYAVGGNKEQYTSYLTTLIAGSTRYTTMQAVLDYIKNLK(SEQ ID NO: 76)
<i>P. aeruginosa</i>
ΦEL
EL188
Трансгликозилаза
Н. о.
<i>P. aeruginosa</i>
ΦKZ
KZ144
Трансгликозилаза
Н. о.
<i>S. aureus</i>
Вирус стафилококков 187
Ply187
Гидролаза клеточной стенки
MALPKTGKPTAKQVVDWAINLIGSGVDVDGYYGRQCWDLPNYIFNRYWNFKTPGNARDMAWYRYPEGFKVFRNTSDFVPKPGDIAVWTGGNYNWNTWGHTGIVVGPSTKSYFYSVDQNWNNSNSYVGSPAAKIKHSYFGVTHFVRPAYKAEPKPTPPAQNNPAPKDPEPSKKPESNKPIYKVVTKILFTTAHIEHVKANRFVHYITKSDNHNNKPNKIVIKNTNTALSTIDVYRYRDELDKDEIPHFFVDRLNVWACRPIEDSINGYHDSVVLSITETRTALSDNFKMNEIECLSLAESILKANNKKMSASNIIVDNKAWRTFKLHTGKDSLKSSSFTSKDYQKAVNELIKLFNDKDKLLNNKPKDVVERIRIRTIVKENTKFVPSELKPRNNIRDKQDSKIDRVINNYTLKQALNIQYKLNPKPQTSNGVSWYNASVNQIKSAMDTTKIFNNNVQVYQFLKLNQYQGIPVDKLNKLLVGKGTLANQGHAFADGCKKYNINEIYLIAHRFLESANGTSFFASGKTGVYNYFGIGAFDNNPNNAMAFARSHGWTSPTKAIIGGAEFVGKGYFNVGQNTLYRMRWNPQKPGTHQYATDISWAKVQAQMISAMYKEIGLTGDYFIYDQYKK(SEQ ID NO: 77)
<i>P. fluorescens</i>
ΦOBP
OBPgp279
Гликозидаза
Н. о.
<i>L. monocytogenes </i>
ΦP35
PlyP35
Амидаза
MARKFTKAELVAKAEKKVGGLKPDVKKAVLSAVKEAYDRYGIGIIVSQGYRSIAEQNGLYAQGRTKPGNIVTNAKGGQSNHNFGVAVDFAIDLIDDGKIDSWQPSATIVNMMKRRGFKWGGDWKSFTDLPHFEACDWYRGERKYKVDTSEWKKKENINIVIKDVGYFQDKPQFLNSKSVRQWKHGTKVKLTKHNSHWYTGVVKDGNKSVRGYIYHSMAKVTSKNSDGSVNATINAHAFCWDNKKLNGGDFINLKRGFKGITHPASDGFYPLYFASRKKTFYIPRYMFDIKK(SEQ ID NO: 78)
<i>L. fermentum</i>
ΦPYB5
Lyb5
Мурамидаза
Н. о.
<i>S. pneumoniae</i>
ΦCP–7
Cpl–7
Мурамидаза
MVKKNDLFVDVASHQGYDISGILEEAGTTNTIIKVSESTSYLNPCLSAQVSQSNPIGFYHFAWFGGNEEEAEAEARYFLDNVPTQVKYLVLDYEDHASASVQRNTTACLRFMQIIAEAGYTPIYYSYKPFTLDNVDYQQILAQFPNSLWIAGYGLNDGTANFEYFPSMDGIRWWQYSSNPFDKNIVLLDDEKEDNINNENTLKSLTTVANEVIQGLWGNGQERYDSLANAGYDPQAVQDKVNEILNAREIADLTTVANEVIQGLWGNGQERYDSLANAGYDPQAVQDKVNEILNAREIADLTTVANEVIQGLWGNGQERYDSLANAGYDPQAVQDKVNELLS(SEQ ID NO: 79)
<i>P. chlororaphis 201 </i>
Φ2–1
2012–1gp229
Гликозидаза
Н. о.
<i>S. enterica </i>
ΦPVP–SE1
PVP–SE1gp146
Гликозидаза
Н. о.
Corynebacterium
ΦBFK20
BKF20
Амидаза
Н. о.
<i>E. faecalis </i>
ΦEFAP–1
EFAL–1
Амидаза
MKLKGILLSVVTTFGLLFGATNVQAYEVNNEFNLQPWEGSQQLAYPNKIILHETANPRATGRNEATYMKNNWFNAHTTAIVGDGGIVYKVAPEGNVSWGAGNANPYAPVQIELQHTNDPELFKANYKAYVDYTRDMGKKFGIPMTLDQGGSLWEKGVVSHQWVTDFVWGDHTDPYGYLAKMGISKAQLAHDLANGVSGNTATPTPKPDKPKPTQPSKPSNKKRFNYRVDGLEYVNGMWQIYNEHLGKIDFNWTENGIPVEVVDKVNPATGQPTKDQVLKVGDYFNFQENSTGVVQEQTPYMGYTLSHVQLPNEFIWLFTDSKQALMYQ(SEQ ID NO: 80)
<i>Lactobacilli </i>
lambdaSA2
LysA, LysA2 и Lysga Y
Неопределенные
Н. о.
<i>S. aureus </i>
SAL–1
Неопределенные
Н. о.
В некоторых случаях лизин представляет собой функционально активный вариант лизинов, описанных в данном документе. В некоторых случаях вариант лизина является на по меньшей мере 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичным, например, в определенной области или во всей последовательности, последовательности лизина, описанного в данном документе, или встречающегося в природе лизина.
В некоторых случаях лизин можно создавать с помощью биоинженерии для модулирования его биологической активности, например, повышения, или снижения, или регулирования, или для определения его микроорганизма–мишени. В некоторых случаях лизин продуцируется трансляционным аппаратом (например, рибосомой и т. д.) микробной клетки. В некоторых случаях лизин синтезируют химическим путем. В некоторых случаях лизин образуется из полипептидного предшественника. Полипептидный предшественник может подвергаться расщеплению (например, процессингу под действием протеазы) с образованием самого полипептида лизина. Таким образом, в некоторых случаях лизин продуцируется из полипептида–предшественника. В некоторых случаях лизин включает в себя полипептид, который подвергся посттрансляционным модификациям, например, расщеплению или добавлению одной или нескольких функциональных групп.
Лизины, описанные в данном документе, могут быть составлены в виде композиции для любого из путей применения, описанных в данном документе. Композиции, раскрытые в данном документе, могут содержать любые количество или тип (например, классы) лизинов, как, например, по меньшей мере приблизительно любое количество из 1 лизина, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20 или больше лизинов. Подходящая концентрация каждого лизина в композиции зависит от таких факторов, как эффективность, стабильность лизина, количество различных лизинов, состав и способы применения композиции. В некоторых случаях концентрация каждого лизина в жидкой композиции составляет от приблизительно 0,1 нг/мл до приблизительно 100 мг/мл. В некоторых случаях концентрация каждого лизина в твердой композиции составляет от приблизительно 0,1 нг/г до приблизительно 100 мг/г. В некоторых случаях, если композиция содержит по меньшей мере два типа лизинов, то концентрация каждого типа лизинов может быть одной и той же или разной.
Модулирующее средство, включающее в себя лизин, описанный в данном документе, может быть приведено в контакт с хозяином–мишенью в количестве и в течение времени, достаточных для: (a) достижения целевого уровня (например, предварительно определенного или порогового уровня) концентрации лизина внутри хозяина–мишени; (b) достижения целевого уровня (например, предварительно определенного или порогового уровня) концентрации лизина внутри кишки хозяина–мишени; (c) достижения целевого уровня (например, предварительно определенного или порогового уровня) концентрации лизина внутри бактериоцита хозяина–мишени; (d) модулирования уровня или активности одного или нескольких микроорганизмов (например, эндосимбионтов) в организме хозяина–мишени или/и (e) модулирования приспособленности хозяина–мишени.
Противомикробные пептиды
Модулирующее средство, описанное в данном документе, может включать в себя противомикробный пептид (AMP). Можно применять любой AMP, подходящий для ингибирования микроорганизма, обитающего в организме хозяина. AMP представляют собой разнообразную группу молекул, которые разделяются на подгруппы на основании их аминокислотного состава и структуры. AMP могут быть получены из любого организма или продуцироваться в любом организме, который естественным образом продуцирует AMP, в том числе AMP, получаемые из растений (например, копсин), насекомых (например, дрозоцин, пептид скорпиона (например, Uy192, UyCT3, D3, D10, Uy17, Uy192), мастопаран, понератоксин, цекропин, морицин, меллитин), лягушек (например, магаинин, дермасептин, ауреин) и млекопитающих (например, кателицидины, дефензины и протегрины). В некоторых случаях AMP может представлять собой пептид скорпиона, такой как Uy192 (5’–FLSTIWNGIKGLL–3’; SEQ ID NO: 232), UyCT3 (5’–LSAIWSGIKSLF–3’; SEQ ID NO: 233), D3 (5’–LWGKLWEGVKSLI–3’; SEQ ID NO: 234) и D10 (5’–FPFLKLSLKIPKSAIKSAIKRL–3’; SEQ ID NO: 235), Uy17 (5’–ILSAIWSGIKGLL–3’; SEQ ID NO: 236) или их комбинацию. В некоторых случаях противомикробный пептид может представлять собой пептид, характеризующийся по меньшей мере 90% идентичностью последовательности (например, по меньшей мере 90%, 92%, 94%, 96%, 98% или 100% идентичностью последовательности) с одним или несколькими из следующих: цекропина (SEQ ID NO: 82), мелиттина, копсина, дрозомицина (SEQ ID NO: 93), дермсидина (SEQ ID NO: 81), андропина (SEQ ID NO: 83), морицина (SEQ ID NO: 84), цератотоксина (SEQ ID NO: 85), абецина (SEQ ID NO: 86), апидецина (SEQ ID NO: 87), профенина (SEQ ID NO: 88), индолицидина (SEQ ID NO: 89), протегрина (SEQ ID NO: 90), тахиплезина (SEQ ID NO: 91) или дефензина (SEQ ID NO: 92), насекомому, являющемуся сельскохозяйственным вредителем. Неограничивающие примеры AMP приведены в таблице 6.
Таблица 6. Примеры противомикробных пептидов
<b>Тип</b>
<b>Характеристика</b>
<b>Иллюстративный AMP</b>
<b>Последовательность</b>
Анионные пептиды
Богатые глутаминовой и аспарагиновой кислотой
Дермсидин
SSLLEKGLDGAKKAVGGLGKLGKDAVEDLESVGKGAVHDVKDVLDSVL(SEQ ID NO: 81)
Линейные катионные α–спиральные пептиды
Не имеют цистеина
Цекропин A
KWKLFKKIEKVGQNIRDGIIKAGPAVAVVGQATQIAK(SEQ ID NO: 82)
Андропин
MKYFSVLVVLTLILAIVDQSDAFINLLDKVEDALHTGAQAGFKLIRPVERGATPKKSEKPEK(SEQ ID NO: 83)
Морицин
MNILKFFFVFIVAMSLVSCSTAAPAKIPIKAIKTVGKAVGKGLRAINIASTANDVFNFLKPKKRKH(SEQ ID NO: 84)
Цератотоксин
MANLKAVFLICIVAFIALQCVVAEPAAEDSVVVKRSIGSALKKALPVAKKIGKIALPIAKAALPVAAGLVG(SEQ ID NO: 85)
Катионные пептиды, обогащенные конкретными аминокислотами
Богатые пролином, аргинином, фенилаланином, глицином, триптофаном
Абецин
MKVVIFIFALLATICAAFAYVPLPNVPQPGRRPFPTFPGQGPFNPKIKWPQGY(SEQ ID NO: 86)
Апидецины
KNFALAILVVTFVVAVFGNTNLDPPTRPTRLRREAKPEAEPGNNRPVYIPQPRPPHPRLRREAEPEAEPGNNRPVYIPQPRPPHPRLRREAELEAEPGNNRPVYISQPRPPHPRLRREAEPEAEPGNNRPVYIPQPRPPHPRLRREAELEAEPGNNRPVYISQPRPPHPRLRREAEPEAEPGNNRPVYIPQPRPPHPRLRREAEPEAEPGNNRPVYIPQPRPPHPRLRREAEPEAEPGNNRPVYIPQPRPPHPRLRREAKPEAKPGNNRPVYIPQPRPPHPRI(SEQ ID NO: 87)
Профенин
METQRASLCLGRWSLWLLLLALVVPSASAQALSYREAVLRAVDRLNEQSSEANLYRLLELDQPPKADEDPGTPKPVSFTVKETVCPRPTRRPPELCDFKENGRVKQCVGTVTLDQIKDPLDITCNEGVRRFPWWWPFLRRPRLRRQAFPPPNVPGPRFPPPNVPGPRFPPPNFPGPRFPPPNFPGPRFPPPNFPGPPFPPPIFPGPWFPPPPPFRPPPFGPPRFPGRR(SEQ ID NO: 88)
Индолицидин
MQTQRASLSLGRWSLWLLLLGLVVPSASAQALSYREAVLRAVDQLNELSSEANLYRLLELDPPPKDNEDLGTRKPVSFTVKETVCPRTIQQPAEQCDFKEKGRVKQCVGTVTLDPSNDQFDLNCNELQSVILPWKWPWWPWRRG(SEQ ID NO: 89)
Анионные и катионные пептиды, которые содержат цистеин и образуют дисульфидные связи
Содержат 1–3 дисульфидные связи
Протегрин
METQRASLCLGRWSLWLLLLALVVPSASAQALSYREAVLRAVDRLNEQSSEANLYRLLELDQPPKADEDPGTPKPVSFTVKETVCPRPTRQPPELCDFKENGRVKQCVGTVTLDQIKDPLDITCNEVQGVRGGRLCYCRRRFCVCVGRG(SEQ ID NO: 90)
Тахиплезины
KWCFRVCYRGICYRRCR(SEQ ID NO: 91)
Дефензины
MKCATIVCTIAVVLAATLLNGSVQAAPQEEAALSGGANLNTLLDELPEETHHAALENYRAKRATCDLASGFGVGSSLCAAHCIARRYRGGYCNSKAVCVCRN(SEQ ID NO: 92)
Дрозомицин
MMQIKYLFALFAVLMLVVLGANEADADCLSGRYKGPCAVWDNETCRRVCKEEGRSSGHCSPSLKCWCEGC(SEQ ID NO: 93)
AMP может быть активным в отношении любого количества микроорганизмов–мишеней. В некоторых случаях AMP может характеризоваться формами антибактериальной и/или противогрибковой активности. В некоторых случаях AMP может характеризоваться биологической активностью узкого спектра или биологической активностью широкого спектра. Например, некоторые AMP целенаправленно воздействуют только на несколько видов бактерий или грибов и уничтожают их, тогда как другие являются активными в отношении как грамотрицательных, так и грамположительных бактерий, а также грибов.
Кроме того, AMP может функционировать посредством ряда известных механизмов действия. Например, цитоплазматическая мембрана представляет собой частую мишень для AMP, однако AMP могут также нарушать синтез ДНК и белка, сворачивание белка и синтез клеточной стенки. В некоторых случаях AMP с суммарным катионным зарядом и амфипатической природой разрушают мембраны бактерий, приводя к лизису клеток. В некоторых случаях AMP могут проникать в клетки и взаимодействовать с внутриклеточной мишенью с нарушением синтеза ДНК, РНК, белка или клеточной стенки. Помимо уничтожения микроорганизмов, AMP продемонстрировали ряд иммуномодулирующих функций, которые вовлечены в устранение инфекции, в том числе способность изменять экспрессию генов хозяев, выступать в роли хемокинов и/или индуцировать продуцирование хемокинов, ингибировать продуцирование провоспалительных цитокинов, индуцированное липополисахаридами, способствовать заживлению ран и модулировать ответы дендритных клеток и клеток, участвующих в адаптивном иммунном ответе.
В некоторых случаях AMP представляет собой функционально активный вариант AMP, описанных в данном документе. В некоторых случаях вариант AMP является на по меньшей мере 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичным, например, в определенной области или во всей последовательности, последовательности AMP, описанного в данном документе, или AMP природного происхождения.
В некоторых случаях AMP можно создавать с помощью биоинженерии для модулирования его биологической активности, например, повышения, или снижения, или регулирования, или для определения его микроорганизма–мишени. В некоторых случаях AMP продуцируется трансляционным аппаратом (например, рибосомой и т. д.) клетки. В некоторых случаях AMP синтезируют химическим путем. В некоторых случаях AMP образуется из полипептидного предшественника. Полипептидный предшественник может подвергаться расщеплению (например, процессингу под действием протеазы) с образованием самого полипептида AMP. Таким образом, в некоторых случаях AMP продуцируется из полипептида–предшественника. В некоторых случаях AMP включает в себя полипептид, который подвергся посттрансляционным модификациям, например, расщеплению или добавлению одной или нескольких функциональных групп.
AMP, описанные в данном документе, могут быть составлены в виде композиции для любого из путей применения, описанных в данном документе. Композиции, раскрытые в данном документе, могут содержать любые количество или тип (например, классы) AMP, как, например, по меньшей мере приблизительно любое количество из 1 AMP, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20 или больше AMP. Например, композиции могут содержать коктейль AMP (например, коктейль пептидов скорпиона, например, UyCT3, D3, D10 и Uy17). Подходящая концентрация каждого AMP в композиции зависит от таких факторов, как эффективность, стабильность AMP, количество различных AMP в композиции, состав и способы применения композиции. В некоторых случаях концентрация каждого AMP в жидкой композиции составляет от приблизительно 0,1 нг/мл до приблизительно 100 мг/мл (от приблизительно 0,1 нг/мл до приблизительно 1 нг/мл, от приблизительно 1 нг/мл до приблизительно 10 нг/мл, от приблизительно 10 нг/мл до приблизительно 100 нг/мл, от приблизительно 100 нг/мл до приблизительно 1000 нг/мл, от приблизительно 1 мг/мл до приблизительно 10 мг/мл, от приблизительно 10 мг/мл до приблизительно 100 мг/мл). В некоторых случаях концентрация каждого AMP в твердой композиции составляет от приблизительно 0,1 нг/г до приблизительно 100 мг/г (от приблизительно 0,1 нг/г до приблизительно 1 нг/г, от приблизительно 1 нг/г до приблизительно 10 нг/г, от приблизительно 10 нг/г до приблизительно 100 нг/г, от приблизительно 100 нг/г до приблизительно 1000 нг/г, от приблизительно 1 мг/г до приблизительно 10 мг/г, от приблизительно 10 мг/г до приблизительно 100 мг/г). В некоторых случаях, если композиция содержит по меньшей мере два типа AMP, то концентрация каждого типа AMP может быть одной и той же или разной.
Модулирующее средство, включающее в себя AMP, описанный в данном документе, может быть приведено в контакт с хозяином–мишенью в количестве и в течение времени, достаточных для: (a) достижения целевого уровня (например, предварительно определенного или порогового уровня) концентрации AMP внутри хозяина–мишени; (b) достижения целевого уровня (например, предварительно определенного или порогового уровня) концентрации AMP внутри кишки хозяина–мишени; (c) достижения целевого уровня (например, предварительно определенного или порогового уровня) концентрации AMP внутри бактериоцита хозяина–мишени; (d) модулирования уровня или активности одного или нескольких микроорганизмов (например, эндосимбионтов) в организме хозяина–мишени или/и (e) модулирования приспособленности хозяина–мишени.
Buchnera
Как проиллюстрировано в примерах 17–19, AMP, такие как пептиды скорпиона, можно применять в качестве модулирующих средств, которые целенаправленно воздействуют на эндосимбиотическую бактерию, такую как spp., в организме насекомого–хозяина, как, например, тлей, для снижения приспособленности хозяина (например, как изложено в данном документе).
C–богатые пептиды клубеньков
Rhizobiaceae
Medicago truncatula
Sinorhizobium meliloti
Модулирующее средство, описанное в данном документе, может включать в себя C–богатый пептид клубеньков (пептид NCR). Пептиды NCR продуцируются в определенных видах бобовых растений и играют важную роль в мутуалистическом азотфиксирующем симбиозе растений с бактериями из семейства  (клубеньковыми бактериями), который приводит к образованию корневых клубеньков, в которых растительные клетки содержат тысячи внутриклеточных эндосимбионтов. Пептиды NCR обладают противомикробными свойствами, управляя необратимым процессом терминальной дифференцировки бактерий, например, с пермеабилизацией мембраны бактерий, нарушением клеточного деления или ингибированием синтеза белка. Например, в клетках клубеньков , инфицированных , продуцируются сотни пептидов NCR, которые управляют необратимым процессом дифференцировки бактерий в крупные полиплоидные азотфиксирующие бактероиды. Неограничивающие примеры NCR приведены в таблице 7.
Таблица 7. Примеры пептидов NCR
<b>Название</b>
<b>Пептидная последовательность</b>
<b>Продуцент</b>
>gi|152218086|gb|ABS31477.1| NCR 340
MTKIVVFIYVVILLLTIFHVSAKKKRYIECETHEDCSQVFMPPFVMRCVIHECKIFNGEHLRY(SEQ ID NO: 94)
<i>Medicago truncatula </i>
>gi|152218084|gb|ABS31476.1| NCR 339
MAKIMKFVYNMIPFLSIFIITLQVNVVVCEIDADCPQICMPPYEVRCVNHRCGWVNTDDSLFLTQEFTRSKQYIIS(SEQ ID NO: 95)
<i>Medicago truncatula </i>
>gi|152218082|gb|ABS31475.1| NCR 338
MYKVVESIFIRYMHRKPNMTKFFKFVYTMFILISLFLVVTNANAHNCTDISDCSSNHCSYEGVSLCMNGQCICIYE(SEQ ID NO: 96)
<i>Medicago truncatula </i>
>gi|152218080|gb|ABS31474.1| NCR 337
MVETLRLFYIMILFVSLCLVVVDGESKLEQTCSEDFECYIKNPHVPFGHLRCFEGFCQQLNGPA(SEQ ID NO: 97)
<i>Medicago truncatula </i>
>gi|152218078|gb|ABS31473.1| NCR 336
MAKIVNFVYSMIVFLFLFLVATKAARGYLCVTDSHCPPHMCPPGMEPRCVRRMCKCLPIGWRKYFVP(SEQ ID NO: 98)
<i>Medicago truncatula </i>
>gi|152218076|gb|ABS31472.1| NCR 335
MQIGKNMVETPKLDYVIIFFFLYFFFRQMIILRLNTTFRPLNFKMLRFWGQNRNIMKHRGQKVHFSLILSDCKTNKDCPKLRRANVRCRKSYCVPI(SEQ ID NO: 99)
<i>Medicago truncatula </i>
>gi|152218074|gb|ABS31471.1| NCR 334
MLRLYLVSYFLLKRTLLVSYFSYFSTYIIECKTDNDCPISQLKIYAWKCVKNGCHLFDVIPMMYE(SEQ ID NO: 100)
<i>Medicago truncatula </i>
>gi|152218072|gb|ABS31470.1| NCR 333
MAEILKFVYIVILFVSLLLIVVASERECVTDDDCEKLYPTNEYRMMCDSGYCMNLLNGKIIYLLCLKKKKFLIIISVLL(SEQ ID NO: 101)
<i>Medicago truncatula </i>
>gi|152218070|gb|ABS31469.1| NCR 332
MAEIIKFVYIMILCVSLLLIEVAGEECVTDADCDKLYPDIRKPLMCSIGECYSLYKGKFSLSIISKTSFSLMVYNVVTLVICLRLAYISLLLKFL(SEQ ID NO: 102)
<i>Medicago truncatula </i>
>gi|152218068|gb|ABS31468.1| NCR 331
MAEILKDFYAMNLFIFLIILPAKIRGETLSLTHPKCHHIMLPSLFITEVFQRVTDDGCPKPVNHLRVVKCIEHICEYGYNYRPDFASQIPESTKMPRKRE(SEQ ID NO: 103)
<i>Medicago truncatula </i>
>gi|152218066|gb|ABS31467.1| NCR 330
MVEILKNFYAMNLFIFLIILAVKIRGAHFPCVTDDDCPKPVNKLRVIKCIDHICQYARNLPDFASEISESTKMPCKGE(SEQ ID NO: 104)
<i>Medicago truncatula </i>
>gi|152218064|gb|ABS31466.1| NCR 329
MFHAQAENMAKVSNFVCIMILFLALFFITMNDAARFECREDSHCVTRIKCVLPRKPECRNYACGCYDSNKYR(SEQ ID NO: 105)
<i>Medicago truncatula </i>
>gi|152218062|gb|ABS31465.1| NCR 328
MQMRQNMATILNFVFVIILFISLLLVVTKGYREPFSSFTEGPTCKEDIDCPSISCVNPQVPKCIMFECHCKYIPTTLK(SEQ ID NO: 106)
<i>Medicago truncatula </i>
>gi|152218060|gb|ABS31464.1| NCR 327
MATILMYVYITILFISILTVLTEGLYEPLYNFRRDPDCRRNIDCPSYLCVAPKVPRCIMFECHCKDIPSDH(SEQ ID NO: 107)
<i>Medicago truncatula </i>
>gi|152218058|gb|ABS31463.1| NCR 326
MTTSLKFVYVAILFLSLLLVVMGGIRRFECRQDSDCPSYFCEKLTVPKCFWSKCYCK(SEQ ID NO: 108)
<i>Medicago truncatula </i>
>gi|152218056|gb|ABS31462.1| NCR 325
MTTSLKFVYVAILFLSLLLVVMGGIRKKECRQDSDCPSYFCEKLTIAKCIHSTCLCK(SEQ ID NO: 109)
<i>Medicago truncatula </i>
>gi|152218054|gb|ABS31461.1| NCR 324
MQIGKNMVETPKLVYFIILFLSIFLCITVSNSSFSQIFNSACKTDKDCPKFGRVNVRCRKGNCVPI(SEQ ID NO: 110)
<i>Medicago truncatula </i>
>gi|152218046|gb|ABS31457.1| NCR 320
MTAILKKFINAVFLFIVLFLATTNVEDFVGGSNDECVYPDVFQCINNICKCVSHHRT(SEQ ID NO: 111)
<i>Medicago truncatula </i>
>gi|152218044|gb|ABS31456.1| NCR 319
MQKRKNMAQIIFYVYALIILFSPFLAARLVFVNPEKPCVTDADCDRYRHESAIYSDMFCKDGYCFIDYHHDPYP(SEQ ID NO: 112)
<i>Medicago truncatula </i>
>gi|152218042|gb|ABS31455.1| NCR 318
MQMRKNMAQILFYVYALLILFTPFLVARIMVVNPNNPCVTDADCQRYRHKLATRMICNQGFCLMDFTHDPYAPSLP(SEQ ID NO: 113)
<i>Medicago truncatula </i>
>gi|152218040|gb|ABS31454.1| NCR 317
MNHISKFVYALIIFLSIYLVVLDGLPISCKDHFECRRKINILRCIYRQEKPMCINSICTCVKLL(SEQ ID NO: 114)
<i>Medicago truncatula </i>
>gi|152218038|gb|ABS31453.1| NCR 316
MQREKNMAKIFEFVYAMIIFILLFLVEKNVVAYLKFECKTDDDCQKSLLKTYVWKCVKNECYFFAKK(SEQ ID NO: 115)
<i>Medicago truncatula </i>
>gi|152218036|gb|ABS31452.1| NCR 315
MAGIIKFVHVLIIFLSLFHVVKNDDGSFCFKDSDCPDEMCPSPLKEMCYFLQCKCGVDTIA(SEQ ID NO: 116)
<i>Medicago truncatula </i>
>gi|152218034|gb|ABS31451.1| NCR 314
MANTHKLVSMILFIFLFLASNNVEGYVNCETDADCPPSTRVKRFKCVKGECRWTRMSYA(SEQ ID NO: 117)
<i>Medicago truncatula </i>
>gi|152218032|gb|ABS31450.1| NCR 313
MQRRKKKAQVVMFVHDLIICIYLFIVITTRKTDIRCRFYYDCPRLEYHFCECIEDFCAYIRLN(SEQ ID NO: 118)
<i>Medicago truncatula </i>
>gi|152218030|gb|ABS31449.1| NCR 312
MAKVYMFVYALIIFVSPFLLATFRTRLPCEKDDDCPEAFLPPVMKCVNRFCQYEILE(SEQ ID NO: 119)
<i>Medicago truncatula </i>
>gi|152218028|gb|ABS31448.1| NCR 310
MIKQFSVCYIQMRRNMTTILKFPYIMVICLLLLHVAAYEDFEKEIFDCKKDGDCDHMCVTPGIPKCTGYVCFCFENL(SEQ ID NO: 120)
<i>Medicago truncatula </i>
>gi|152218026|gb|ABS31447.1| NCR 309
MQRSRNMTTIFKFAYIMIICVFLLNIAAQEIENGIHPCKKNEDCNHMCVMPGLPWCHENNLCFCYENAYGNTR(SEQ ID NO: 121)
<i>Medicago truncatula </i>
>gi|152218024|gb|ABS31446.1| NCR 304
MTIIIKFVNVLIIFLSLFHVAKNDDNKLLLSFIEEGFLCFKDSDCPYNMCPSPLKEMCYFIKCVCGVYGPIRERRLYQSHNPMIQ(SEQ ID NO: 122)
<i>Medicago truncatula </i>
>gi|152218022|gb|ABS31445.1| NCR 303
MRKNMTKILMIGYALMIFIFLSIAVSITGNLARASRKKPVDVIPCIYDHDCPRKLYFLERCVGRVCKYL(SEQ ID NO: 123)
<i>Medicago truncatula </i>
>gi|152218020|gb|ABS31444.1| NCR 301
MAHKLVYAITLFIFLFLIANNIEDDIFCITDNDCPPNTLVQRYRCINGKCNLSFVSYG(SEQ ID NO: 124)
<i>Medicago truncatula </i>
>gi|152218018|gb|ABS31443.1| NCR 300
MDETLKFVYILILFVSLCLVVADGVKNINRECTQTSDCYKKYPFIPWGKVRCVKGRCRLDM(SEQ ID NO: 125)
<i>Medicago truncatula </i>
>gi|152218016|gb|ABS31442.1| NCR 290
MAKIIKFVYVLAIFFSLFLVAKNVNGWTCVEDSDCPANICQPPMQRMCFYGECACVRSKFCT(SEQ ID NO: 126)
<i>Medicago truncatula </i>
>gi|152218014|gb|ABS31441.1| NCR 289
MVKIIKFVYFMTLFLSMLLVTTKEDGSVECIANIDCPQIFMLPFVMRCINFRCQIVNSEDT(SEQ ID NO: 127)
<i>Medicago truncatula </i>
>gi|152218012|gb|ABS31440.1| NCR 286
MDEILKFVYTLIIFFSLFFAANNVDANIMNCQSTFDCPRDMCSHIRDVICIFKKCKCAGGRYMPQVP(SEQ ID NO: 128)
<i>Medicago truncatula </i>
>gi|152218008|gb|ABS31438.1| NCR 278
MQRRKNMANNHMLIYAMIICLFPYLVVTFKTAITCDCNEDCLNFFTPLDNLKCIDNVCEVFM(SEQ ID NO: 129)
<i>Medicago truncatula </i>
>gi|152218006|gb|ABS31437.1| NCR 266
MVNILKFIYVIIFFILMFFVLIDVDGHVLVECIENRDCEKGMCKFPFIVRCLMDQCKCVRIHNLI(SEQ ID NO: 130)
<i>Medicago truncatula </i>
>gi|152218004|gb|ABS31436.1| NCR 265
MIIQFSIYYMQRRKLNMVEILKFSHALIIFLFLSALVTNANIFFCSTDEDCTWNLCRQPWVQKCRLHMCSCEKN(SEQ ID NO: 131)
<i>Medicago truncatula </i>
>gi|152218002|gb|ABS31435.1| NCR 263
MDEVFKFVYVMIIFPFLILDVATNAEKIRRCFNDAHCPPDMCTLGVIPKCSRFTICIC(SEQ ID NO: 132)
<i>Medicago truncatula </i>
>gi|152218000|gb|ABS31434.1| NCR 244
MHRKPNMTKFFKFVYTMFILISLFLVVTNANANNCTDTSDCSSNHCSYEGVSLCMNGQCICIYE(SEQ ID NO: 133)
<i>Medicago truncatula </i>
>gi|152217998|gb|ABS31433.1| NCR 239
MQMKKMATILKFVYLIILLIYPLLVVTEESHYMKFSICKDDTDCPTLFCVLPNVPKCIGSKCHCKLMVN(SEQ ID NO: 134)
<i>Medicago truncatula </i>
>gi|152217996|gb|ABS31432.1| NCR 237
MVETLRLFYIMILFVSLYLVVVDGVSKLAQSCSEDFECYIKNPHAPFGQLRCFEGYCQRLDKPT(SEQ ID NO: 135)
<i>Medicago truncatula </i>
>gi|152217994|gb|ABS31431.1| NCR 228
MTTFLKVAYIMIICVFVLHLAAQVDSQKRLHGCKEDRDCDNICSVHAVTKCIGNMCRCLANVK(SEQ ID NO: 136)
<i>Medicago truncatula </i>
>gi|152217992|gb|ABS31430.1| NCR 224
MRINRTPAIFKFVYTIIIYLFLLRVVAKDLPFNICEKDEDCLEFCAHDKVAKCMLNICFCF(SEQ ID NO: 137)
<i>Medicago truncatula </i>
>gi|152217990|gb|ABS31429.1| NCR 221
MAEILKILYVFIIFLSLILAVISQHPFTPCETNADCKCRNHKRPDCLWHKCYCY(SEQ ID NO: 138)
<i>Medicago truncatula </i>
>gi|152217988|gb|ABS31428.1| NCR 217
MRKSMATILKFVYVIMLFIYSLFVIESFGHRFLIYNNCKNDTECPNDCGPHEQAKCILYACYCVE(SEQ ID NO: 139)
<i>Medicago truncatula </i>
>gi|152217986|gb|ABS31427.1| NCR 209
MNTILKFIFVVFLFLSIFLSAGNSKSYGPCTTLQDCETHNWFEVCSCIDFECKCWSLL(SEQ ID NO: 140)
<i>Medicago truncatula </i>
>gi|152217984|gb|ABS31426.1| NCR 206
MAEIIKFVYIMILCVSLLLIAEASGKECVTDADCENLYPGNKKPMFCNNTGYCMSLYKEPSRYM(SEQ ID NO: 141)
<i>Medicago truncatula </i>
>gi|152217982|gb|ABS31425.1| NCR 201
MAKIIKFVYIMILCVSLLLIVEAGGKECVTDVDCEKIYPGNKKPLICSTGYCYSLYEEPPRYHK(SEQ ID NO: 142)
<i>Medicago truncatula </i>
>gi|152217980|gb|ABS31424.1| NCR 200
MAKVTKFGYIIIHFLSLFFLAMNVAGGRECHANSHCVGKITCVLPQKPECWNYACVCYDSNKYR(SEQ ID NO: 143)
<i>Medicago truncatula </i>
>gi|152217978|gb|ABS31423.1| NCR 192
MAKIFNYVYALIMFLSLFLMGTSGMKNGCKHTGHCPRKMCGAKTTKCRNNKCQCV(SEQ ID NO: 144)
<i>Medicago truncatula </i>
>gi|152217976|gb|ABS31422.1| NCR 189
MTEILKFVCVMIIFISSFIVSKSLNGGGKDKCFRDSDCPKHMCPSSLVAKCINRLCRCRRPELQVQLNP(SEQ ID NO: 145)
<i>Medicago truncatula </i>
>gi|152217974|gb|ABS31421.1| NCR 187
MAHIIMFVYALIYALIIFSSLFVRDGIPCLSDDECPEMSHYSFKCNNKICEYDLGEMSDDDYYLEMSRE(SEQ ID NO: 146)
<i>Medicago truncatula </i>
>gi|152217972|gb|ABS31420.1| NCR 181
MYREKNMAKTLKFVYVIVLFLSLFLAAKNIDGRVSYNSFIALPVCQTAADCPEGTRGRTYKCINNKCRYPKLLKPIQ(SEQ ID NO: 147)
<i>Medicago truncatula </i>
>gi|152217970|gb|ABS31419.1| NCR 176
MAHIFNYVYALLVFLSLFLMVTNGIHIGCDKDRDCPKQMCHLNQTPKCLKNICKCV(SEQ ID NO: 148)
<i>Medicago truncatula </i>
>gi|152217968|gb|ABS31418.1| NCR 175
MAEILKCFYTMNLFIFLIILPAKIREHIQCVIDDDCPKSLNKLLIIKCINHVCQYVGNLPDFASQIPKSTKMPYKGE(SEQ ID NO: 149)
<i>Medicago truncatula </i>
>gi|152217966|gb|ABS31417.1| NCR 173
MAYISRIFYVLIIFLSLFFVVINGVKSLLLIKVRSFIPCQRSDDCPRNLCVDQIIPTCVWAKCKCKNYND(SEQ ID NO: 150)
<i>Medicago truncatula </i>
>gi|152217964|gb|ABS31416.1| NCR 172
MANVTKFVYIAIYFLSLFFIAKNDATATFCHDDSHCVTKIKCVLPRTPQCRNEACGCYHSNKFR(SEQ ID NO: 151)
<i>Medicago truncatula </i>
>gi|152217962|gb|ABS31415.1| NCR 171
MGEIMKFVYVMIIYLFMFNVATGSEFIFTKKLTSCDSSKDCRSFLCYSPKFPVCKRGICECI(SEQ ID NO: 152)
<i>Medicago truncatula </i>
>gi|152217960|gb|ABS31414.1| NCR 169
MGEMFKFIYTFILFVHLFLVVIFEDIGHIKYCGIVDDCYKSKKPLFKIWKCVENVCVLWYK(SEQ ID NO: 153)
<i>Medicago truncatula </i>
>gi|152217958|gb|ABS31413.1| NCR 165
MARTLKFVYSMILFLSLFLVANGLKIFCIDVADCPKDLYPLLYKCIYNKCIVFTRIPFPFDWI(SEQ ID NO: 154)
<i>Medicago truncatula </i>
>gi|152217956|gb|ABS31412.1| NCR 159
MANITKFVYIAILFLSLFFIGMNDAAILECREDSHCVTKIKCVLPRKPECRNNACTCYKGGFSFHH(SEQ ID NO: 155)
<i>Medicago truncatula </i>
>gi|152217954|gb|ABS31411.1| NCR 147
MQRVKKMSETLKFVYVLILFISIFHVVIVCDSIYFPVSRPCITDKDCPNMKHYKAKCRKGFCISSRVR(SEQ ID NO: 156)
<i>Medicago truncatula </i>
>gi|152217952|gb|ABS31410.1| NCR 146
MQIRKIMSGVLKFVYAIILFLFLFLVAREVGGLETIECETDGDCPRSMIKMWNKNYRHKCIDGKCEWIKKLP(SEQ ID NO: 157)
<i>Medicago truncatula </i>
>gi|152217950|gb|ABS31409.1| NCR 145
MFVYDLILFISLILVVTGINAEADTSCHSFDDCPWVAHHYRECIEGLCAYRILY(SEQ ID NO: 158)
<i>Medicago truncatula </i>
>gi|152217948|gb|ABS31408.1| NCR 144
MQRRKKSMAKMLKFFFAIILLLSLFLVATEVGGAYIECEVDDDCPKPMKNSHPDTYYKCVKHRCQWAWK(SEQ ID NO: 159)
<i>Medicago truncatula </i>
>gi|152217946|gb|ABS31407.1| NCR 140
MFVYTLIIFLFPSHVITNKIAIYCVSDDDCLKTFTPLDLKCVDNVCEFNLRCKGKCGERDEKFVFLKALKKMDQKLVLEEQGNAREVKIPKKLLFDRIQVPTPATKDQVEEDDYDDDDEEEEEEEDDVDMWFHLPDVVCH(SEQ ID NO: 160)
<i>Medicago truncatula </i>
>gi|152217944|gb|ABS31406.1| NCR 138
MAKFSMFVYALINFLSLFLVETAITNIRCVSDDDCPKVIKPLVMKCIGNYCYFFMIYEGP(SEQ ID NO: 161)
<i>Medicago truncatula </i>
>gi|152217942|gb|ABS31405.1| NCR 136
MAHKFVYAIILFIFLFLVAKNVKGYVVCRTVDDCPPDTRDLRYRCLNGKCKSYRLSYG(SEQ ID NO: 162)
<i>Medicago truncatula </i>
>gi|152217940|gb|ABS31404.1| NCR 129
MQRKKNMGQILIFVFALINFLSPILVEMTTTTIPCTFIDDCPKMPLVVKCIDNFCNYFEIK(SEQ ID NO: 163)
<i>Medicago truncatula </i>
>gi|152217938|gb|ABS31403.1| NCR 128
MAQTLMLVYALIIFTSLFLVVISRQTDIPCKSDDACPRVSSHHIECVKGFCTYWKLD(SEQ ID NO: 164)
<i>Medicago truncatula </i>
>gi|152217936|gb|ABS31402.1| NCR 127
MLRRKNTVQILMFVSALLIYIFLFLVITSSANIPCNSDSDCPWKIYYTYRCNDGFCVYKSIDPSTIPQYMTDLIFPR(SEQ ID NO: 165)
<i>Medicago truncatula </i>
>gi|152217934|gb|ABS31401.1| NCR 122
MAVILKFVYIMIIFLFLLYVVNGTRCNRDEDCPFICTGPQIPKCVSHICFCLSSGKEAY(SEQ ID NO: 166)
<i>Medicago truncatula </i>
>gi|152217932|gb|ABS31400.1| NCR 121
MDAILKFIYAMFLFLFLFVTTRNVEALFECNRDFVCGNDDECVYPYAVQCIHRYCKCLKSRN(SEQ ID NO: 167)
<i>Medicago truncatula </i>
>gi|152217930|gb|ABS31399.1| NCR 119
MQIGRKKMGETPKLVYVIILFLSIFLCTNSSFSQMINFRGCKRDKDCPQFRGVNIRCRSGFCTPIDS(SEQ ID NO: 168)
<i>Medicago truncatula </i>
>gi|152217928|gb|ABS31398.1| NCR 118
MQMRKNMAQILFYVYALLILFSPFLVARIMVVNPNNPCVTDADCQRYRHKLATRMVCNIGFCLMDFTHDPYAPSLP(SEQ ID NO: 169)
<i>Medicago truncatula </i>
>gi|152217926|gb|ABS31397.1| NCR 111
MYVYYIQMGKNMAQRFMFIYALIIFLSQFFVVINTSDIPNNSNRNSPKEDVFCNSNDDCPTILYYVSKCVYNFCEYW(SEQ ID NO: 170)
<i>Medicago truncatula </i>
>gi|152217924|gb|ABS31396.1| NCR 103
MAKIVNFVYSMIIFVSLFLVATKGGSKPFLTRPYPCNTGSDCPQNMCPPGYKPGCEDGYCNHCYKRW(SEQ ID NO: 171)
<i>Medicago truncatula </i>
>gi|152217922|gb|ABS31395.1| NCR 101
MVRTLKFVYVIILILSLFLVAKGGGKKIYCENAASCPRLMYPLVYKCLDNKCVKFMMKSRFV(SEQ ID NO: 172)
<i>Medicago truncatula </i>
>gi|152217920|gb|ABS31394.1| NCR 96
MARTLKFVYAVILFLSLFLVAKGDDVKIKCVVAANCPDLMYPLVYKCLNGICVQFTLTFPFV(SEQ ID NO: 173)
<i>Medicago truncatula </i>
>gi|152217918|gb|ABS31393.1| NCR 94
MSNTLMFVITFIVLVTLFLGPKNVYAFQPCVTTADCMKTLKTDENIWYECINDFCIPFPIPKGRK(SEQ ID NO: 174)
<i>Medicago truncatula </i>
>gi|152217916|gb|ABS31392.1| NCR 93
MKRVVNMAKIVKYVYVIIIFLSLFLVATKIEGYYYKCFKDSDCVKLLCRIPLRPKCMYRHICKCKVVLTQNNYVLT(SEQ ID NO: 175)
<i>Medicago truncatula </i>
>gi|152217914|gb|ABS31391.1| NCR 90
MKRGKNMSKILKFIYATLVLYLFLVVTKASDDECKIDGDCPISWQKFHTYKCINQKCKWVLRFHEY(SEQ ID NO: 176)
<i>Medicago truncatula </i>
>gi|152217912|gb|ABS31390.1| NCR 88
MAKTLNFMFALILFISLFLVSKNVAIDIFVCQTDADCPKSELSMYTWKCIDNECNLFKVMQQMV(SEQ ID NO: 177)
<i>Medicago truncatula </i>
>gi|152217910|gb|ABS31389.1| NCR 86
MANTHKLVSMILFIFLFLVANNVEGYVNCETDADCPPSTRVKRFKCVKGECRWTRMSYA(SEQ ID NO: 178)
<i>Medicago truncatula </i>
>gi|152217908|gb|ABS31388.1| NCR 77
MAHFLMFVYALITCLSLFLVEMGHLSIHCVSVDDCPKVEKPITMKCINNYCKYFVDHKL(SEQ ID NO: 179)
<i>Medicago truncatula </i>
>gi|152217906|gb|ABS31387.1| NCR 76
MNQIPMFGYTLIIFFSLFPVITNGDRIPCVTNGDCPVMRLPLYMRCITYSCELFFDGPNLCAVERI(SEQ ID NO: 180)
<i>Medicago truncatula </i>
>gi|152217904|gb|ABS31386.1| NCR 74
MRKDMARISLFVYALIIFFSLFFVLTNGELEIRCVSDADCPLFPLPLHNRCIDDVCHLFTS(SEQ ID NO: 181)
<i>Medicago truncatula </i>
>gi|152217902|gb|ABS31385.1| NCR 68
MAQILMFVYFLIIFLSLFLVESIKIFTEHRCRTDADCPARELPEYLKCQGGMCRLLIKKD(SEQ ID NO: 182)
<i>Medicago truncatula </i>
>gi|152217900|gb|ABS31384.1| NCR 65
MARVISLFYALIIFLFLFLVATNGDLSPCLRSGDCSKDECPSHLVPKCIGLTCYCI(SEQ ID NO: 183)
<i>Medicago truncatula </i>
>gi|152217898|gb|ABS31383.1| NCR 62
MQRRKNMAQILLFAYVFIISISLFLVVTNGVKIPCVKDTDCPTLPCPLYSKCVDGFCKMLSI(SEQ ID NO: 184)
<i>Medicago truncatula </i>
>gi|152217896|gb|ABS31382.1| NCR 57
MNHISKFVYALIIFLSVYLVVLDGRPVSCKDHYDCRRKVKIVGCIFPQEKPMCINSMCTCIREIVP(SEQ ID NO: 185)
<i>Medicago truncatula </i>
>gi|152217894|gb|ABS31381.1| NCR 56
MKSQNHAKFISFYKNDLFKIFQNNDSHFKVFFALIIFLYTYLHVTNGVFVSCNSHIHCRVNNHKIGCNIPEQYLLCVNLFCLWLDY(SEQ ID NO: 186)
<i>Medicago truncatula </i>
>gi|152217892|gb|ABS31380.1| NCR 54
MTYISKVVYALIIFLSIYVGVNDCMLVTCEDHFDCRQNVQQVGCSFREIPQCINSICKCMKG(SEQ ID NO: 187)
<i>Medicago truncatula </i>
>gi|152217890|gb|ABS31379.1| NCR 53
MTHISKFVFALIIFLSIYVGVNDCKRIPCKDNNDCNNNWQLLACRFEREVPRCINSICKCMPM(SEQ ID NO: 188)
<i>Medicago truncatula </i>
>gi|152217888|gb|ABS31378.1| NCR 43
MVQTPKLVYVIVLLLSIFLGMTICNSSFSHFFEGACKSDKDCPKLHRSNVRCRKGQCVQI(SEQ ID NO: 189)
<i>Medicago truncatula </i>
>gi|152217886|gb|ABS31377.1| NCR 28
MTKILMLFYAMIVFHSIFLVASYTDECSTDADCEYILCLFPIIKRCIHNHCKCVPMGSIEPMSTIPNGVHKFHIINN(SEQ ID NO: 190)
<i>Medicago truncatula </i>
>gi|152217884|gb|ABS31376.1| NCR 26
MAKTLNFVCAMILFISLFLVSKNVALYIIECKTDADCPISKLNMYNWRCIKSSCHLYKVIQFMV(SEQ ID NO: 191)
<i>Medicago truncatula </i>
>gi|152217882|gb|ABS31375.1| NCR 24
MQKEKNMAKTFEFVYAMIIFILLFLVENNFAAYIIECQTDDDCPKSQLEMFAWKCVKNGCHLFGMYEDDDDP(SEQ ID NO: 192)
<i>Medicago truncatula </i>
>gi|152217880|gb|ABS31374.1| NCR 21
MAATRKFIYVLSHFLFLFLVTKITDARVCKSDKDCKDIIIYRYILKCRNGECVKIKI(SEQ ID NO: 193)
<i>Medicago truncatula </i>
>gi|152217878|gb|ABS31373.1| NCR 20
MQRLDNMAKNVKFIYVIILLLFIFLVIIVCDSAFVPNSGPCTTDKDCKQVKGYIARCRKGYCMQSVKRTWSSYSR(SEQ ID NO: 194)
<i>Medicago truncatula </i>
>gi|152217876|gb|ABS31372.1| NCR 19
MKFIYIMILFLSLFLVQFLTCKGLTVPCENPTTCPEDFCTPPMITRCINFICLCDGPEYAEPEYDGPEPEYDHKGDFLSVKPKIINENMMMRERHMMKEIEV(SEQ ID NO: 195)
<i>Medicago truncatula </i>
>gi|152217874|gb|ABS31371.1| NCR 12
MAQFLMFIYVLIIFLYLFYVEAAMFELTKSTIRCVTDADCPNVVKPLKPKCVDGFCEYT(SEQ ID NO: 196)
<i>Medicago truncatula </i>
>gi|152217872|gb|ABS31370.1| NCR 10
MKMRIHMAQIIMFFYALIIFLSPFLVDRRSFPSSFVSPKSYTSEIPCKATRDCPYELYYETKCVDSLCTY(SEQ ID NO: 197)
<i>Medicago truncatula </i>
Pisum sativum
Astragalus sinicus
Phaseolus vulgaris
Vigna unguiculata
Medicago truncatula
Lotus japonicus
M. truncatula
Любой пептид NCR, известный в данной области техники, является подходящим для применения в способах или композициях, описанных в данном документе. Растения, продуцирующие пептиды NCR, включают в себя без ограничения  (горох),  (бобовые IRLC), (фасоль),  (коровий горох), (люцерну усеченную)и . Например, на основании геномной последовательности  прогнозируют свыше 600 потенциальных пептидов NCR, и почти 150 различных пептидов NCR были выявлены в клетках, выделенных из корневых клубеньков, с помощью масс–спектрометрии.
Пептиды NCR, описанные в данном документе, могут быть зрелыми или незрелыми пептидами NCR. Незрелые пептиды NCR имеют C–концевой сигнальный пептид, который требуется для транслокации в эндоплазматический ретикулум и отщепляется после транслокации. N–конец пептида NCR содержит сигнальный пептид, который может быть отщепляемым, для нацеливания на секреторный путь. Пептиды NCR, как правило, представляют собой малые пептиды с дисульфидными мостиками, которые стабилизируют их структуры. Зрелые пептиды NCR имеют длину в диапазоне от приблизительно 20 до приблизительно 60 аминокислот, от приблизительно 25 до приблизительно 55 аминокислот, от приблизительно 30 до приблизительно 50 аминокислот, от приблизительно 35 до приблизительно 45 аминокислот или в любом диапазоне в промежутке между этими значениями. Пептиды NCR могут содержать консервативную последовательность из цистеиновых остатков, при этом остальная часть пептидной последовательности является высоковариабельной. Пептиды NCR, как правило, имеют от четырех до восьми молекул цистеина.
Пептиды NCR могут быть анионными, нейтральными или катионными. В некоторых случаях синтетические катионные пептиды NCR, имеющие pI, превышающую приблизительно восемь, обладают формами противомикробной активности. Например, как NCR247 (pI=10,15) (RNGCIVDPRCPYQQCRRPLYCRRR; SEQ ID NO: 198), так и NCR335 (pI=11,22) являются эффективными в отношении грамотрицательных и грамположительных бактерий, а также грибов. В некоторых случаях нейтральные и/или анионные пептиды NCR, такие как NCR001 (MAQFLLFVYSLIIFLSLFFGEAAFERTETRMLTIPCTSDDNCPKVISPCHTKCFDGFCGWYIEGSYEGP; SEQ ID NO: 199), не обладают формами противомикробной активности при pI, превышающей приблизительно 8.
S. meliloti,
Xenorhabdus spp, Photorhabdus spp, Candidatus spp, Buchnera spp, Blattabacterium spp, Baumania spp, Wigglesworthia spp, Wolbachia spp, Rickettsia spp, Orientia spp, Sodalis spp, Burkholderia spp, Cupriavidus spp, Frankia spp, Snirhizobium spp, Streptococcus spp, Wolinella spp, Xylella spp, Erwinia spp, Agrobacterium spp, Bacillus spp, Paenibacillus spp, Streptomyces spp, Micrococcus spp, Corynebacterium spp, Acetobacter spp, Cyanobacteria spp, Salmonella spp, Rhodococcus spp, Pseudomonas spp, Lactobacillus spp, Enterococcus spp, Alcaligenes spp, Klebsiella spp, Paenibacillus spp, Arthrobacter spp, Corynebacterium spp, Brevibacterium spp, Thermus spp, Pseudomonas spp, Clostridium spp
Escherichia spp
В некоторых случаях пептид NCR является эффективным в уничтожении бактерий. В некоторых случаях пептид NCR является эффективным в уничтожении или .
В некоторых случаях пептид NCR представляет собой функционально активный вариант пептида NCR, описанного в данном документе. В некоторых случаях вариант пептида NCR является на по меньшей мере 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичным, например, в определенной области или во всей последовательности, последовательности пептида NCR, описанного в данном документе, или пептида NCR природного происхождения.
В некоторых случаях пептид NCR можно создавать с помощью биоинженерии для модулирования его биологической активности, например, повышения, или снижения, или регулирования, или для определения его микроорганизма–мишени. В некоторых случаях пептид NCR продуцируется трансляционным аппаратом (например, рибосомой и т. д.) клетки. В некоторых случаях пептид NCR синтезируют химическим путем. В некоторых случаях пептид NCR образуется из полипептидного предшественника. Полипептидный предшественник может подвергаться расщеплению (например, процессингу под действием протеазы) с образованием самого пептида NCR. Таким образом, в некоторых случаях пептид NCR продуцируется из полипептида–предшественника. В некоторых случаях пептид NCR включает в себя полипептид, который подвергся посттрансляционным модификациям, например, расщеплению или добавлению одной или нескольких функциональных групп.
Пептид NCR, описанный в данном документе, может быть составлен в виде композиции для любого из путей применения, описанных в данном документе. Композиции, раскрытые в данном документе, могут содержать любые количество или тип пептидов NCR, как, например, по меньшей мере приблизительно любое количество из 1 пептида NCR, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20, 30, 40, 50, 100 или больше пептидов NCR. Подходящая концентрация каждого пептида NCR в композиции зависит от таких факторов, как эффективность, стабильность пептида NCR, количество различных пептидов NCR, состав и способы применения композиции. В некоторых случаях концентрация каждого пептида NCR в жидкой композиции составляет от приблизительно 0,1 нг/мл до приблизительно 100 мг/мл. В некоторых случаях концентрация каждого пептида NCR в твердой композиции составляет от приблизительно 0,1 нг/г до приблизительно 100 мг/г. В некоторых случаях, если композиция содержит по меньшей мере два типа пептидов NCR, то концентрация каждого типа пептида NCR может быть одной и той же или разной.
Модулирующее средство, включающее в себя пептид NCR, описанный в данном документе, может быть приведено в контакт с хозяином–мишенью в количестве и в течение времени, достаточных для: (a) достижения целевого уровня (например, предварительно определенного или порогового уровня) концентрации пептида NCR внутри хозяина–мишени; (b) достижения целевого уровня (например, предварительно определенного или порогового уровня) концентрации пептида NCR внутри кишки хозяина–мишени; (c) достижения целевого уровня (например, предварительно определенного или порогового уровня) концентрации пептида NCR внутри бактериоцита хозяина–мишени; (d) модулирования уровня или активности одного или нескольких микроорганизмов (например, эндосимбионтов) в организме хозяина–мишени или/и (e) модулирования приспособленности хозяина–мишени.
Регуляторные пептиды бактериоцитов
Модулирующее средство, описанное в данном документе, может включать в себя регуляторный пептид бактериоцитов (BRP). BRP представляют собой пептиды, экспрессируемые в бактериоцитах насекомых. Эти гены впервые экспрессируются в момент времени развития, совпадающий с включением симбионтов, а их специфичная для бактериоцитов экспрессия поддерживается в течение всей жизни насекомого. В некоторых случаях BRP имеет гидрофобный аминоконцевой домен, который, как предполагается, представляет собой сигнальный пептид. Помимо этого, некоторые BRP имеют домен, богатый цистеином. В некоторых случаях регуляторный пептид бактериоцитов представляет собой специфичный для бактериоцитов белок, богатый цистеином (BCR). Регуляторные пептиды бактериоцитов имеют длину от приблизительно 40 до 150 аминокислот. В некоторых случаях регуляторный пептид бактериоцитов имеет длину в диапазоне от приблизительно 45 до приблизительно 145, от приблизительно 50 до приблизительно 140, от приблизительно 55 до приблизительно 135, от приблизительно 60 до приблизительно 130, от приблизительно 65 до приблизительно 125, от приблизительно 70 до приблизительно 120, от приблизительно 75 до приблизительно 115, от приблизительно 80 до приблизительно 110, от приблизительно 85 до приблизительно 105 или в любом диапазоне в промежутке между этими значениями. Неограничивающие примеры BRP и форм их активности приведены в таблице 8.
Таблица 8. Примеры регуляторных пептидов бактериоцитов
<b>Название </b>
<b>Пептидная последовательность</b>
Семейство специфичных для бактериоцитов белков BCR, богатых цистеином, пептид BCR1
MKLLHGFLIIMLTMHLSIQYAYGGPFLTKYLCDRVCHKLCGDEFVCSCIQYKSLKGLWFPHCPTGKASVVLHNFLTSP(SEQ ID NO: 200)
Семейство специфичных для бактериоцитов белков BCR, богатых цистеином, пептид BCR2
MKLLYGFLIIMLTIHLSVQYFESPFETKYNCDTHCNKLCGKIDHCSCIQYHSMEGLWFPHCRTGSAAQMLHDFLSNP(SEQ ID NO: 201)
Семейство специфичных для бактериоцитов белков BCR, богатых цистеином, пептид BCR3
MSVRKNVLPTMFVVLLIMSPVTPTSVFISAVCYSGCGSLALVCFVSNGITNGLDYFKSSAPLSTSETSCGEAFDTCTDHCLANFKF(SEQ ID NO: 202)
Семейство специфичных для бактериоцитов белков BCR, богатых цистеином, пептид BCR4
MRLLYGFLIIMLTIYLSVQDFDPTEFKGPFPTIEICSKYCAVVCNYTSRPCYCVEAAKERDQWFPYCYD(SEQ ID NO: 203)
Семейство специфичных для бактериоцитов белков BCR, богатых цистеином, пептид BCR5
MRLLYGFLIIMLTIHLSVQDIDPNTLRGPYPTKEICSKYCEYNVVCGASLPCICVQDARQLDHWFACCYDGGPEMLM(SEQ ID NO: 204)
Семейство секретируемых белков SP, пептид SP1
MKLFVVVVLVAVGIMFVFASDTAAAPTDYEDTNDMISLSSLVGDNSPYVRVSSADSGGSSKTSSKNPILGLLKSVIKLLTKIFGTYSDAAPAMPPIPPALRKNRGMLA(SEQ ID NO: 205)
Семейство секретируемых белков SP, пептид SP2
MVACKVILAVAVVFVAAVQGRPGGEPEWAAPIFAELKSVSDNITNLVGLDNAGEYATAAKNNLNAFAESLKTEAAVFSKSFEGKASASDVFKESTKNFQAVVDTYIKNLPKDLTLKDFTEKSEQALKYMVEHGTEITKKAQGNTETEKEIKEFFKKQIENLIGQGKALQAKIAEAKKA(SEQ ID NO: 206)
Семейство секретируемых белков SP, пептид SP3
MKTSSSKVFASCVAIVCLASVANALPVQKSVAATTENPIVEKHGCRAHKNLVRQNVVDLKTYDSMLITNEVVQKQSNEVQSSEQSNEGQNSEQSNEGQNSEQSNEVQSSEHSNEGQNSKQSNEGQNSEQSNEVQSSEHSNEGQNSEQSNEVQSSEHSNEGQNSKQSNEGQNSKQSNEVQSSEHWNEGQNSKQSNEDQNSEQSNEGQNSKQSNEGQNSKQSNEDQNSEQSNEGQNSKQSNEVQSSEQSNEGQNSKQSNEGQSSEQSNEGQNSKQSNEVQSPEEHYDLPDPESSYESEETKGSHESGDDSEHR(SEQ ID NO: 207)
Семейство секретируемых белков SP, пептид SP4
MKTIILGLCLFGALFWSTQSMPVGEVAPAVPAVPSEAVPQKQVEAKPETNAASPVSDAKPESDSKPVDAEVKPTVSEVKAESEQKPSGEPKPESDAKPVVASESKPESDPKPAAVVESKPENDAVAPETNNDAKPENAAAPVSENKPATDAKAETELIAQAKPESKPASDLKAEPEAAKPNSEVPVALPLNPTETKATQQSVETNQVEQAAPAAAQADPAAAPAADPAPAPAAAPVAAEEAKLSESAPSTENKAAEEPSKPAEQQSAKPVEDAVPAASEISETKVSPAVPAVPEVPASPSAPAVADPVSAPEAEKNAEPAKAANSAEPAVQSEAKPAEDIQKSGAVVSAENPKPVEEQKPAEVAKPAEQSKSEAPAEAPKPTEQSAAEEPKKPESANDEKKEQHSVNKRDATKEKKPTDSIMKKQKQKKAN(SEQ ID NO: 208)
Семейство секретируемых белков SP, пептид SP5a
MNGKIVLCFAVVFIGQAMSAATGTTPEVEDIKKVAEQMSQTFMSVANHLVGITPNSADAQKSIEKIRTIMNKGFTDMETEANKMKDIVRKNADPKLVEKYDELEKELKKHLSTAKDMFEDKVVKPIGEKVELKKITENVIKTTKDMEATMNKAIDGFKKQ(SEQ ID NO: 209)
Семейство секретируемых белков SP, пептид SP6
MHLFLALGLFIVCGMVDATFYNPRSQTFNQLMERRQRSIPIPYSYGYHYNPIEPSINVLDSLSEGLDSRINTFKPIYQNVKMSTQDVNSVPRTQYQPKNSLYDSEYISAKDIPSLFPEEDSYDYKYLGSPLNKYLTRPSTQESGIAINLVAIKETSVFDYGFPTYKSPYSSDSVWNFGSKIPNTVFEDPQSVESDPNTFKVSSPTIKIVKLLPETPEQESIITTTKNYELNYKTTQETPTEAELYPITSEEFQTEDEWHPMVPKENTTKDESSFITTEEPLTEDKSNSITIEKTQTEDESNSIEFNSIRTEEKSNSITTEENQKEDDESMSTTSQETTTAFNLNDTFDTNRYSSSHESLMLRIRELMKNIADQQNKSQFRTVDNIPAKSQSNLSSDESTNQQFEPQLVNGADTYK(SEQ ID NO: 210)
Колеоптерицин A, пептид ColA
MTRTMLFLACVAALYVCISATAGKPEEFAKLSDEAPSNDQAMYESIQRYRRFVDGNRYNGGQQQQQQPKQWEVRPDLSRDQRGNTKAQVEINKKGDNHDINAGWGKNINGPDSHKDTWHVGGSVRW(SEQ ID NO: 211)
RlpA I типа
MKETTVVWAKLFLILIILAKPLGLKAVNECKRLGNNSCRSHGECCSGFCFIEPGWALGVCKRLGTPKKSDDSNNGKNIEKNNGVHERIDDVFERGVCSYYKGPSITANGDVFDENEMTAAHRTLPFNTMVKVEGMGTSVVVKINDRKTAADGKVMLLSRAAAESLNIDENTGPVQCQLKFVLDGSGCTPDYGDTCVLHHECCSQNCFREMFSDKGFCLPK (SEQ ID NO: 212)
В некоторых случаях BRP изменяет рост и/или активность одной или нескольких бактерий, обитающих в бактериоците хозяина. В некоторых случаях BRP можно создавать с помощью биоинженерии для модулирования его биологической активности (например, повышения, снижения или регулирования) или для определения его микроорганизма–мишени. В некоторых случаях BRP продуцируется трансляционным аппаратом (например, рибосомой и т. д.) клетки. В некоторых случаях BRP синтезируют химическим путем. В некоторых случаях BRP образуется из полипептидного предшественника. Полипептидный предшественник может подвергаться расщеплению (например, процессингу под действием протеазы) с образованием самого полипептида BRP. Таким образом, в некоторых случаях BRP продуцируется из полипептида–предшественника. В некоторых случаях BRP включает в себя полипептид, который подвергся посттрансляционным модификациям, например, расщеплению или добавлению одной или нескольких функциональных групп.
Функционально активные варианты BRP, описанные в данном документе, также пригодны в композициях и способах, описанных в данном документе. В некоторых случаях вариант BRP является на по меньшей мере 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичным, например, в определенной области или во всей последовательности, последовательности BRP, описанного в данном документе, или BRP природного происхождения.
BRP, описанный в данном документе, может быть составлен в виде композиции для любого из путей применения, описанных в данном документе. Композиции, раскрытые в данном документе, могут содержать любые количество или тип (например, классы) BRP, как, например, по меньшей мере приблизительно любое количество из 1 BRP, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20 или больше BRP. Подходящая концентрация каждого BRP в композиции зависит от таких факторов, как эффективность, стабильность BRP, количество различных BRP, состав и способы применения композиции. В некоторых случаях концентрация каждого BRP в жидкой композиции составляет от приблизительно 0,1 нг/мл до приблизительно 100 мг/мл. В некоторых случаях концентрация каждого BRP в твердой композиции составляет от приблизительно 0,1 нг/г до приблизительно 100 мг/г. В некоторых случаях, если композиция содержит по меньшей мере два типа BRP, то концентрация каждого типа BRP может быть одной и той же или разной.
Модулирующее средство, включающее в себя BRP, описанный в данном документе, может быть приведено в контакт с хозяином–мишенью в количестве и в течение времени, достаточных для: (a) достижения целевого уровня (например, предварительно определенного или порогового уровня) концентрации BRP внутри хозяина–мишени; (b) достижения целевого уровня (например, предварительно определенного или порогового уровня) концентрации BRP внутри кишки хозяина–мишени; (c) достижения целевого уровня (например, предварительно определенного или порогового уровня) концентрации BRP внутри бактериоцита хозяина–мишени; (d) модулирования уровня или активности одного или нескольких микроорганизмов (например, эндосимбионтов) в организме хозяина–мишени или/и (e) модулирования приспособленности хозяина–мишени.
Малые молекулы
Многочисленные малые молекулы (например, антибиотик или метаболит) можно применять в композициях и способах, описанных в данном документе. В некоторых случаях эффективная концентрация любой малой молекулы, описанной в данном документе, может изменять уровень, активность или метаболизм одного или нескольких микроорганизмов (описанных выше), обитающих в организме хозяина, при этом изменение приводит к снижению приспособленности хозяина.
Модулирующее средство, включающее в себя малую молекулу, описанную в данном документе, может быть приведено в контакт с хозяином–мишенью в количестве и в течение времени, достаточных для: (a) достижения целевого уровня (например, предварительно определенного или порогового уровня) концентрации малой молекулы внутри хозяина–мишени; (b) достижения целевого уровня (например, предварительно определенного или порогового уровня) концентрации малой молекулы внутри кишки хозяина–мишени; (c) достижения целевого уровня (например, предварительно определенного или порогового уровня) концентрации малой молекулы внутри бактериоцита хозяина–мишени; (d) модулирования уровня или активности одного или нескольких микроорганизмов (например, эндосимбионтов) в организме хозяина–мишени или/и (e) модулирования приспособленности хозяина–мишени.
Малые молекулы, обсуждаемые далее в данном документе, а именно антибиотики и вторичные метаболиты, можно применять для изменения уровня, активности или метаболизма микроорганизмов–мишеней, как указано в разделах касательно снижения приспособленности насекомых, таких как тли.
Антибиотики
Модулирующее средство, описанное в данном документе, может включать в себя антибиотик. Можно применять любой антибиотик, известный в данной области техники. Антибиотики обычно классифицируются на основании их механизма действия, химической структуры или спектра активности.
Антибиотик, описанный в данном документе, может целенаправленно воздействовать на любую функцию или процессы роста бактерий и может быть как бактериостатическим (например, замедлять или предупреждать рост бактерий), так и бактерицидным (например, уничтожать бактерии). В некоторых случаях антибиотик представляет собой бактерицидный антибиотик. В некоторых случаях бактерицидный антибиотик представляет собой антибиотик, который целенаправленно воздействует на клеточную стенку бактерий (например, пенициллины и цефалоспорины); антибиотик, который целенаправленно воздействует на клеточную мембрану (например, полимиксины); или антибиотик, который ингибирует важнейшие ферменты бактерий (например, рифамицины, липиармицины, хинолоны и сульфонамиды). В некоторых случаях бактерицидный антибиотик представляет собой аминогликозид. В некоторых случаях антибиотик представляет собой бактериостатический антибиотик. В некоторых случаях бактериостатический антибиотик целенаправленно воздействует на синтез белка (например, макролиды, линкозамиды и тетрациклины). Дополнительные классы антибиотиков, которые можно применять в данном документе, включают в себя циклические липопептиды (такие как даптомицин), глицилциклины (такие как тигециклин), оксазолидиноны (такие как линезолид) или липиармицины (такие как фидаксомицин). Примеры антибиотиков включают в себя рифампицин, ципрофлоксацин, доксициклин, ампициллин и полимиксин B. Другие неограничивающие примеры антибиотиков находятся в таблице 9.
Таблица 9. Примеры антибиотиков
<b>Антибиотики</b>
<b>Действие</b>
Пенициллины, цефалоспорины, ванкомицин
Синтез клеточной стенки
Полимиксин, грамицидин
Мембраноактивное средство, разрушает клеточную мембрану
Тетрациклины, макролиды, хлорамфеникол, клиндамицин, спектиномицин
Ингибируют синтез белка
Сульфонамиды
Ингибируют фолат–зависимые пути
Ципрофлоксацин
Ингибируют ДНК–гиразу
Изониазид, рифампицин, пиразинамид, этамбутол, (миамбутол), стрептомицин
Антимикобактериальные средства
Антибиотик, описанный в данном документе, может характеризоваться любым уровнем специфичности к мишеням (например, узким или широким спектром действия). В некоторых случаях антибиотик представляет собой антибиотик узкого спектра действия и, таким образом, целенаправленно воздействует на конкретные типы бактерий, такие как грамотрицательные или грамположительные бактерии. В качестве альтернативы, антибиотик может представлять собой антибиотик широкого спектра действия, который целенаправленно воздействует на широкий круг бактерий.
Антибиотики, описанные в данном документе, могут быть составлены в виде композиции для любого из путей применения, описанных в данном документе. Композиции, раскрытые в данном документе, могут содержать любые количество или тип (например, классы) антибиотиков, как, например, по меньшей мере приблизительно любое количество из 1 антибиотика, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20 или больше антибиотиков (например, комбинацию рифампицина и доксициклина или комбинацию ампициллина и рифампицина). Подходящая концентрация каждого антибиотика в композиции зависит от таких факторов, как эффективность, стабильность антибиотика, количество различных антибиотиков, состав и способы применения композиции. В некоторых случаях, если композиция содержит по меньшей мере два типа антибиотиков, то концентрация каждого типа антибиотика может быть одной и той же или разной.
Модулирующее средство, включающее в себя антибиотик, описанный в данном документе, может быть приведено в контакт с хозяином–мишенью в количестве и в течение времени, достаточных для: (a) достижения целевого уровня (например, предварительно определенного или порогового уровня) концентрации антибиотика внутри хозяина–мишени; (b) достижения целевого уровня (например, предварительно определенного или порогового уровня) концентрации антибиотика внутри кишки хозяина–мишени; (c) достижения целевого уровня (например, предварительно определенного или порогового уровня) концентрации антибиотика внутри бактериоцита хозяина–мишени; (d) модулирования уровня или активности одного или нескольких микроорганизмов (например, эндосимбионтов) в организме хозяина–мишени или/и (e) модулирования приспособленности хозяина–мишени.
Buchnera
Bacillus
Sitophilus
Как проиллюстрировано в примерах 6 и 11, антибиотики (например, рифампицин) можно применять в качестве модулирующих средств, которые целенаправленно воздействуют на эндосимбиотическую бактерию, такую как spp., в организме насекомого–хозяина, как, например, тлей, для снижения приспособленности хозяина (например, как изложено в данном документе). Как дополнительно проиллюстрировано в примере 7, антибиотики, такие как окситетрациклин, можно применять в качестве модулирующих средств, которые целенаправленно воздействуют на эндосимбиотическую бактерию, такую как spp., в организме насекомого–хозяина, как, например, микроскопических клещейVarroa, для снижения приспособленности хозяина (например, как изложено в данном документе). Кроме того, как дополнительно проиллюстрировано в примере 23, антибиотики (например, ципрофлоксацин) можно применять в качестве модулирующих средств, которые целенаправленно воздействуют на эндосимбиотическую бактерию, такую как spp., в организме насекомого–хозяина, как, например, долгоносиков, для снижения приспособленности хозяина (например, как изложено в данном документе). Как также проиллюстрировано в примере 24, антибиотики (например, рифампицин или доксициклин) можно применять в качестве модулирующих средств, которые целенаправленно воздействуют на эндосимбиотическую бактерию в организме насекомого–хозяина, как, например, микроскопических клещей, для снижения приспособленности хозяина (например, как изложено в данном документе).
Вторичные метаболиты
В некоторых случаях модулирующее средство в композициях и способах, описанных в данном документе, включает в себя вторичный метаболит. Вторичные метаболиты образуются из органических молекул, продуцируемых организмом. Вторичные метаболиты могут выступать (i) в качестве конкурентных средств, применяемых в отношении бактерий, грибов, амеб, растений, насекомых и крупных животных; (ii) в качестве средств, транспортирующих металлы; (iii) в качестве средств симбиоза между микроорганизмами и растениями, насекомыми и более крупными животными; (iv) в качестве половых гормонов и (v) в качестве эффекторов дифференцировки. Неограничивающие примеры вторичных метаболитов находятся в таблице 10.
Таблица 10. Примеры вторичных метаболитов
<b>Фенилпропаноиды</b>
<b>Алкалоиды</b>
<b>Терпеноиды</b>
<b>Хиноны</b>
<b>Стероиды</b>
<b>Поликетиды</b>
Антоцианы
Акридины
Каротины
Антрохиноны
Сердечные
Эритромицин
Кумарины
Беталаины
Монотерпены
Бензохиноны
гликозиды
Ловастатин и другие статины
Флавоноиды
Хинолизидины
Сесквитерпены
Нафтохиноны
Производные
Дискодермолид
Производные
Фуронохиноны
Дитерпены
прегненолона
Афлатоксин B1
гидроксициннамоила
Харрингтонины
Тритерпены
Авермектины
Изофлавоноиды
Изохинолины
Нистатин
Лигнаны
Индолы
Рифамицин
Феноленоны
Пурины
Проантоцианидины
Пиридины
Стильбены
Тропановые
Таннины
алкалоиды
Annu. Rev. Microbiol.
Вторичный метаболит, применяемый в данном документе, может включать в себя метаболит из любой известной группы вторичных метаболитов. Например, вторичные метаболиты можно классифицировать на следующие группы: алкалоиды, терпеноиды, флавоноиды, гликозиды, природные фенолы (например, госсиполуксусная кислота), енали (например, транс–коричный альдегид), феназины, бифенолы и дибензофураны, поликетиды, пептиды синтазы жирных кислот, нерибосомальные пептиды, пептиды, синтезируемые в рибосомах и подвергающиеся посттрансляционным модификациям, полифенолы, полисахариды (например, хитозан) и биополимеры. Углубленный обзор вторичных метаболитов см., например, в Vining,  44:395–427, 1990.
Вторичные метаболиты, пригодные для композиций и способов, описанных в данном документе, включают в себя метаболиты, которые изменяют природную функцию эндосимбионта (например, первичного или вторичного эндосимбионта), бактериоцита или внеклеточного симбионта. В некоторых случаях один или несколько вторичных метаболитов, описанных в данном документе, выделяют в результате высокопроизводительного скрининга (HTS) противомикробных соединений. Например, скрининг HTS выявил 49 антибактериальных экстрактов, которые характеризуются специфичностью в отношении грамположительных и грамотрицательных бактерий, из свыше 39000 неочищенных экстрактов из организмов, растущих в различных экосистемах одного конкретного региона. В некоторых случаях вторичный метаболит транспортируется внутрь бактериоцита.
Buchnera
В некоторых случаях малая молекула представляет собой ингибитор синтеза витаминов. В некоторых случаях ингибитор синтеза витаминов представляет собой аналог предшественника витамина. В определенных случаях аналог предшественника витамина представляет собой пантотенол. Например, пантотенол можно применять для ингибирования синтеза витамина B5 у  в организмах тлей.
В некоторых случаях малая молекула представляет собой аналог аминокислоты. В определенных случаях аналог аминокислоты представляет собой L–канаванин, D–аргинин, D–валин, D–метионин, D–фенилаланин, D–гистидин, D–триптофан, D–треонин, D–лейцин, L–NG–нитроаргинин или их комбинацию.
В некоторых случаях малая молекула представляет собой природное противомикробное соединение, такое как пропионовая кислота, левулиновая кислота, транс–коричный альдегид или низкомолекулярный хитозан. Вторичный метаболит, описанный в данном документе, может быть составлен в виде композиции для любого из путей применения, описанных в данном документе. Композиции, раскрытые в данном документе, могут содержать любые количество или тип (например, классы) вторичных метаболитов, как, например, по меньшей мере приблизительно любое количество из 1 вторичного метаболита, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20 или больше вторичных метаболитов. Подходящая концентрация каждого вторичного метаболита в композиции зависит от таких факторов, как эффективность, стабильность вторичного метаболита, количество различных вторичных метаболитов, состав и способы применения композиции. В некоторых случаях, если композиция содержит по меньшей мере два типа вторичных метаболитов, то концентрация каждого типа вторичного метаболита может быть одной и той же или разной.
Модулирующее средство, включающее в себя вторичный метаболит, описанный в данном документе, может быть приведено в контакт с хозяином–мишенью в количестве и в течение времени, достаточных для: (a) достижения целевого уровня (например, предварительно определенного или порогового уровня) концентрации вторичного метаболита внутри хозяина–мишени; (b) достижения целевого уровня (например, предварительно определенного или порогового уровня) концентрации вторичного метаболита внутри кишки хозяина–мишени; (c) достижения целевого уровня (например, предварительно определенного или порогового уровня) концентрации вторичного метаболита внутри бактериоцита хозяина–мишени; (d) модулирования уровня или активности одного или нескольких микроорганизмов (например, эндосимбионтов) в организме хозяина–мишени или/и (e) модулирования приспособленности хозяина–мишени.
Buchnera
Buchnera
Как проиллюстрировано в примере 15, вторичные метаболиты (например, госсипол) можно применять в качестве модулирующих средств, которые целенаправленно воздействуют на эндосимбиотическую бактерию, такую как spp., в организме насекомого–хозяина, как, например, тлей, для снижения приспособленности хозяина (например, как изложено в данном документе). Как дополнительно проиллюстрировано в примерах 8–10, 12–14, 16, 20 и 21, малые молекулы, такие как транс–коричный альдегид, левулиновая кислота, хитозан, аналоги витаминов или ингибиторы транспорта аминокислот, можно применять в качестве модулирующих средств, которые целенаправленно воздействуют на эндосимбиотическую бактерию, такую как spp., в организме насекомого–хозяина, как, например, тлей, для снижения приспособленности хозяина (например, как изложено в данном документе).
Бактерии в качестве модулирующих средств
Gammaproteobacteria, Alphaproteobacteria, Betaproteobacteria, Bacteroidetes, Firmicutes
Lactobacillus
Bacillus
Clostridia, Actinomycetes, Spirochetes, Verrucomicrobia
Actinobacteria
В некоторых случаях модулирующее средство, описанное в данном документе, включает в себя одну или несколько бактерий. Многочисленные бактерии являются пригодными в композициях и способах, описанных в данном документе. В некоторых случаях средство представляет собой вид бактерий, обнаруживаемый эндогенно в организме хозяина. В некоторых случаях бактериальное модулирующее средство представляет собой вид эндосимбиотических бактерий. В некоторых случаях бактериальное модулирующее средство представляет собой патоген в организме хозяина. Неограничивающие примеры бактерий, которые можно применять в качестве модулирующих средств, включают в себя все виды бактерий, описанные в данном документе в разделе II подробного описания, и виды бактерий, приведенные в таблице 1. Например, модулирующее средство может представлять собой вид бактерий из любого типа бактерий, присутствующего в кишках насекомых, в том числе  (например,  и  spp.), и .
В некоторых случаях модулирующее средство представляет собой бактерию, которая нарушает разнообразие микроорганизмов или иным образом изменяет микробиоту хозяина таким образом, что это является пагубным для хозяина. В одном случае бактерии могут быть предусмотрены для нарушения микробиоты насекомых. Например, бактериальное модулирующее средство может конкурировать с популяцией симбиотических бактерий в организме насекомого, вытеснять и/или уменьшать ее. Например, бактерия может снижать приспособленность хозяина путем конкуренции с симбиотическими бактериями в организме хозяина, которые придают устойчивость к пестициду (например, пестициду, приведенному в таблице 12). В других случаях бактерия может представлять собой патоген, который снижает приспособленность хозяина, вызывая заболевание у хозяина.
Бактериальные модулирующие средства, обсуждаемые в данном документе, можно применять для изменения уровня, активности или метаболизма микроорганизмов–мишеней, как указано в разделах касательно снижения приспособленности насекомых, таких как тли.
Модификации в отношении модулирующих средств
Продукты слияния
Любое из модулирующих средств, описанных в данном документе, может быть слито или связано с дополнительным фрагментом. В некоторых случаях модулирующее средство включает в себя продукт слияния одного или нескольких дополнительных фрагментов (например, 1 дополнительного фрагмента, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или больше дополнительных фрагментов). В некоторых случаях дополнительное средство представляет собой любое из модулирующих средств, описанных в данном документе (например, пептид, полипептид, малую молекулу или антибиотик). В качестве альтернативы, дополнительный фрагмент может сам по себе не выступать в качестве модулирующего средства, однако вместо этого может выполнять вторичную функцию. Например, дополнительный фрагмент может облегчать доступ, связывание или активирование модулирующего средства в участке–мишени в организме хозяина (например, в кишке хозяина или бактериоците хозяина) или в микроорганизме–мишени, обитающем в организме хозяина (например, тли).
В некоторых случаях дополнительный фрагмент может облегчать проникновение модулирующего средства в клетку хозяина–мишени или микроорганизм–мишень, обитающий в организме хозяина. Например, дополнительный фрагмент может включать в себя пептид, проникающий в клетку. Пептиды, проникающие в клетку (CPP), могут представлять собой природные последовательности, полученные из белков; химерные пептиды, которые образуются в результате слияния двух природных последовательностей; или синтетические CPP, которые представляют собой последовательности, сконструированные синтетическим путем на основании исследований взаимосвязи структуры и активности. В некоторых случаях CPP характеризуются способностью повсеместно проникать через клеточные мембраны (например, клеточные мембраны прокариот и эукариот) с ограниченной токсичностью. Кроме того, CPP могут характеризоваться способностью проникать через клеточные мембраны посредством энергозависимых и/или энергонезависимых механизмов без необходимости хирального распознавания специфическими рецепторами. CPP могут связываться с любыми из модулирующих средств, описанных в данном документе. Например, CPP может связываться с противомикробным пептидом (AMP), например, пептидом скорпиона, например, UY192, слитым с пептидом, проникающим в клетку (например, YGRKKRRQRRRFLSTIWNGIKGLLFAM; SEQ ID NO: 237). Неограничивающие примеры CPP приведены в таблице 11.
Таблица 11. Примеры пептидов, проникающих в клетку (CPP)
<b>Пептид</b>
<b>Происхождение</b>
<b>Последовательность</b>
<i></i><i><u>Полученные из белков</u></i><i></i>
Пенетратин
Antennapedia
RQIKIWFQNRRMKWKK(SEQ ID NO: 213)
Пептид Tat
Tat
GRKKRRQRRRPPQ(SEQ ID NO: 214)
pVEC
Кадгерин
LLIILRRRIRKQAHAHSK(SEQ ID NO: 215)
<i></i><i><u>Химерные</u></i><i></i>
Транспортан
Галанин/Мастопаран
GWTLNSAGYLLGKINLKALAALAKKIL(SEQ ID NO: 216)
MPG
HIV–gp41/T–антиген SV40
GALFLGFLGAAGSTMGAWSQPKKKRKV(SEQ ID NO: 217)
Pep–1
Обратная транскриптаза HIV/T–антиген SV40
KETWWETWWTEWSQPKKKRKV(SEQ ID NO: 218)
<i></i><i><u>Синтетические</u></i><i></i>
Полиаргинины
На основе пептида Tat
(R)<sub><i>n</i></sub><i></i><sub>;</sub> 6 < <i>n</i> < 12
MAP
de novo
KLALKLALKALKAALKLA(SEQ ID NO: 219)
R<sub>6</sub>W<sub>3</sub>
На основе пенетратина
RRWWRRWRR(SEQ ID NO: 220)
Galanthus nivalis
В других случаях дополнительный фрагмент облегчает связывание модулирующего средства с микроорганизмом–мишенью (например, грибом или бактерией), обитающим в организме хозяина. Дополнительный фрагмент может включать в себя один или несколько нацеливающих доменов. В некоторых случаях нацеливающий домен может нацеливать модулирующее средство на один или несколько микроорганизмов (например, бактерию или гриб), обитающих в кишке хозяина. В некоторых случаях нацеливающий домен может нацеливать модулирующее средство на конкретную область в организме хозяина (например, кишку или бактериоцит хозяина) для доступа к микроорганизмам, которые обычно присутствуют в указанной области организма хозяина. Например, нацеливающий домен может нацеливать модулирующее средство на переднюю кишку, среднюю кишку или заднюю кишку хозяина. В других случаях нацеливающий домен может нацеливать модулирующее средство на бактериоцит в организме хозяина и/или одну или несколько конкретных бактерий, обитающих в бактериоците хозяина. Например, нацеливающий домен может представлять собой лектин или агглютинин  (GNA), связанный с модулирующим средством, описанным в данном документе, например, AMP, например, пептидом скорпиона, например, Uy192.
Пре– или продомены
В некоторых случаях модулирующее средство может включать в себя аминокислотную пре– или пропоследовательность. Например, модулирующее средство может представлять собой неактивный белок или пептид, которые могут быть активированы посредством расщепления или посттрансляционной модификации пре– или пропоследовательности. В некоторых случаях модулирующее средство конструируют с инактивирующей пре– или пропоследовательностью. Например, пре– или пропоследовательность может закрывать сайт активации на модулирующем средстве, например, сайт связывания с рецептором, или может индуцировать конформационное изменение в модулирующем средстве. Таким образом, при отщеплении пре– или пропоследовательности модулирующее средство активируется.
В качестве альтернативы, модулирующее средство может включать в себя малую пре– или промолекулу, например, антибиотик. Модулирующее средство может представлять собой неактивную малую молекулу, описанную в данном документе, которая может быть активирована в среде–мишени внутри хозяина. Например, малая молекула может быть активирована при достижении определенного значения pH в кишке хозяина.
Линкеры
В случаях, если модулирующее средство связано с дополнительным фрагментом, модулирующее средство может дополнительно содержать линкер. Например, линкер может представлять собой химическую связь, например, одну или несколько ковалентных связей или нековалентных связей. В некоторых случаях линкер может представлять собой пептидный линкер (например, длиной 2, 3, 4, 5, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 20, 25, 30, 35, 40 или больше аминокислот). Линкер может включать в себя любые гибкие, жесткие или расщепляемые линкеры, описанные в данном документе.
Гибкий пептидный линкер может включать в себя любой из линкеров, широко применяемых в данной области техники, в том числе линкеры, имеющие последовательности, содержащие главным образом остатки Gly и Ser (линкер "GS"). Гибкие линкеры могут быть пригодны для соединения доменов, которые требуют определенной степени подвижности или взаимодействия, и могут содержать небольшие, неполярные (например, Gly) или полярные (например, Ser или Thr) аминокислоты.
n
В качестве альтернативы, пептидный линкер может представлять собой жесткий линкер. Жесткие линкеры пригодны для сохранения фиксированного расстояния между фрагментами и поддержания их независимых функций. Жесткие линкеры также могут быть пригодны, если пространственное разделение доменов является важным для сохранения стабильности или биологической активности одного или нескольких компонентов в продукте слияния. Жесткие линкеры, например, могут иметь альфа–спиральную структуру или Pro–богатую последовательность, (XP), при этом X обозначает любую аминокислоту, предпочтительно Ala, Lys или Glu.
in vivo
.
in vitro
Adv. Drug Deliv. Rev.
in vivo
В еще нескольких случаях пептидный линкер может представлять собой расщепляемый линкер. В некоторых случаях линкеры могут расщепляться в специфических условиях, таких как присутствие восстанавливающих реагентов или протеаз. Расщепляемые  линкеры могут использовать обратимую природу дисульфидной связи. Один пример включает в себя чувствительную к тромбину последовательность (например, PRS) между двумя остатками CysОбработка тромбином CPRSC  приводит к расщеплению чувствительной к тромбину последовательности, тогда как обратимая дисульфидная связь остается интактной. Такие линкеры известны и описаны, например, в Chen et al.,  65(10):1357–1369, 2013. Расщепление линкеров в продуктах слияния также может осуществляться протеазами, которые экспрессируются в условиях  в конкретных клетках или тканях хозяина или микроорганизмах, обитающих в организме хозяина. В некоторых случаях при достижении участка– или клетки–мишени в результате расщепления линкера может высвобождаться свободное функциональное модулирующее средство.
Продукты слияния, описанные в данном документе, в качестве альтернативы могут быть связаны со связывающей молекулой, в том числе гидрофобным линкером, таким как отрицательно заряженная сульфонатная группа; липидами, такими как поли(––CH2––)углеводородные цепи, такие как полиэтиленгликолевая (PEG) группа, их ненасыщенными вариантами, их гидроксилированными вариантами, их амидированными или в других отношениях N–содержащими вариантами, неуглеродными линкерами; углеводными линкерами; фосфодиэфирными линкерами или другими молекулами, способными ковалентно связывать две или более молекул, например, два модулирующих средства. Можно применять нековалентные линкеры, такие как гидрофобные липидные глобулы, с которыми связывается модулирующее средство, например, посредством гидрофобной области модулирующего средства или гидрофобного удлинения модулирующего средства, такого как ряд остатков, богатый лейцином, изолейцином, валином или, возможно, также аланином, фенилаланином или даже тирозином, метионином, глицином или другим гидрофобным остатком. Модулирующее средство может быть связано с помощью химического взаимодействия зарядов таким образом, что положительно заряженный фрагмент модулирующего средства связывается с отрицательно заряженным другим модулирующим средством или дополнительным фрагментом.
Составы и композиции
Композиции, описанные в данном документе, могут быть составлены в чистой форме (например, композиция содержит только модулирующее средство) либо совместно с одним или несколькими дополнительными средствами (такими как наполнитель, средство доставки, носитель, разбавитель, стабилизатор и т. д.) для облегчения применения или доставки композиций. Примеры подходящих наполнителей и разбавителей включают в себя без ограничения лактозу, декстрозу, сахарозу, сорбит, маннит, крахмалы, аравийскую камедь, фосфат кальция, альгинаты, трагакант, желатин, силикат кальция, микрокристаллическую целлюлозу, поливинилпирролидон, целлюлозу, воду, солевой раствор, сироп, метилцеллюлозу, метил– и пропилгидроксибензоаты, тальк, стеарат магния и минеральное масло.
В некоторых случаях композиция содержит средство доставки или носитель. В некоторых случаях средство доставки включает в себя наполнитель. Иллюстративные наполнители включают в себя без ограничения твердые или жидкие материалы–носители, растворители, стабилизаторы, наполнители для составов с замедленным высвобождением, красители и поверхностно–активные вещества (поверхностно–активные средства). В некоторых случаях средство доставки представляет собой стабилизирующее средство доставки. В некоторых случаях стабилизирующее средство доставки включает в себя стабилизирующий наполнитель. Иллюстративные стабилизирующие наполнители включают в себя без ограничения эпоксидированные растительные масла, противовспенивающие средства, например, силиконовое масло, консерванты, регуляторы вязкости, связующие средства и средства, придающие липкость. В некоторых случаях стабилизирующее средство доставки представляет собой буфер, подходящий для модулирующего средства. В некоторых случаях композиция является микроинкапсулированной в средство доставки на основе полимерных гранул. В некоторых случаях стабилизирующее средство доставки защищает модулирующее средство от УФ и/или кислых условий. В некоторых случаях средство доставки содержит pH–буфер. В некоторых случаях композиция составлена таким образом, что она имеет pH в диапазоне от приблизительно 4,5 до приблизительно 9,0, включая, например, любой из диапазонов pH от приблизительно 5,0 до приблизительно 8,0, от приблизительно 6,5 до приблизительно 7,5 или от приблизительно 6,5 до приблизительно 7,0.
В зависимости от предполагаемых целей и преобладающих обстоятельств композиция может быть составлена в виде концентратов эмульсий, концентратов суспензий, непосредственно распыляемых или разбавляемых растворов, паст, наносимых в виде покрытия, разбавленных эмульсий, распыляемых порошков, растворимых порошков, диспергируемых порошков, смачиваемых порошков, пылевидных препаратов, гранул, форм, инкапсулированных в полимерные вещества, микрокапсул, пен, аэрозолей, препаратов на основе газообразного диоксида углерода, таблеток, препаратов на основе смол, препаратов на основе бумаги, препаратов на основе нетканого полотна или препаратов на основе трикотажного или тканого полотна. В некоторых случаях композиция представляет собой жидкость. В некоторых случаях композиция представляет собой твердое вещество. В некоторых случаях композиция представляет собой аэрозоль, как, например, в находящемся под давлением аэрозольном баллончике. В некоторых случаях композиция присутствует в отходах (таких как экскременты) вредителя. В некоторых случаях композиция присутствует внутри или на поверхности тела живого вредителя.
В некоторых случаях средство доставки представляет собой пищу или воду для хозяина. В других случаях средство доставки представляет собой источник пищи для хозяина. В некоторых случаях средство доставки представляет собой пищевую приманку для хозяина. В некоторых случаях композиция представляет собой съедобное средство, поглощаемое хозяином. В некоторых случаях композиция доставляется хозяином второму хозяину и поглощается вторым хозяином. В некоторых случаях композиция поглощается хозяином или вторым хозяином, и композиция высвобождается в окружение хозяина или второго хозяина с отходами (такими как экскременты) хозяина или второго хозяина. В некоторых случаях модулирующее средство включено в пищевую приманку, предназначенную для поглощения хозяином или переноса назад в его колонию.
В некоторых случаях модулирующее средство может составлять от приблизительно 0,1% до приблизительно 100% композиции, как, например, любое количество из от приблизительно 0,01% до приблизительно 100%, от приблизительно 1% до приблизительно 99,9%, от приблизительно 0,1% до приблизительно 10%, от приблизительно 1% до приблизительно 25%, от приблизительно 10% до приблизительно 50%, от приблизительно 50% до приблизительно 99% или от приблизительно 0,1% до приблизительно 90% активных ингредиентов (таких как фаг, лизин или бактериоцин). В некоторых случаях композиция содержит по меньшей мере любое количество из 0,1%, 0,5%, 1%, 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% или больше активных ингредиентов (таких как фаг, лизин и бактериоцин). В некоторых случаях концентрированные средства являются предпочтительными в качестве коммерческих продуктов, а конечный потребитель, как правило, использует разведенные средства, которые имеют значительно более низкую концентрацию активного ингредиента.
Любой из составов, описанных в данном документе, можно применять в форме приманки, спирали, электрического коврика, дымящегося препарата, фумиганта или листа.
Жидкие составы
Композиции, предусмотренные в данном документе, могут находиться в форме жидкого состава. Жидкие составы, как правило, смешивают с водой, однако в некоторых случаях их можно применять с растительным маслом, дизельным топливом, керосином или другим легким маслом в качестве носителя. Количество активного ингредиента часто находится в диапазоне от приблизительно 0,5 до приблизительно 80 процентов по весу.
Состав в виде концентрата эмульсии может содержать жидкий активный ингредиент, один или несколько растворителей на нефтяной основе и средство, которое способствует смешиванию состава с водой с образованием эмульсии. Такие концентраты можно применять в составах для сельского хозяйства, декоративных и газонных растений, лесного хозяйства, обработки зданий, обработки пищевых продуктов, сельскохозяйственных животных и вредителей, значимых для общественного здравоохранения. Их можно адаптировать для эксплуатационного оборудования от небольших переносных опрыскивателей до гидравлических опрыскивателей, малообъемных наземных опрыскивателей, вентиляторных туманообразователей и малообъемных авиационных опрыскивателей. Некоторые активные ингредиенты легко растворяются в жидком носителе. При смешивании с носителем они образуют раствор, в котором не происходит осаждение или разделение, например, гомогенный раствор. Составы этого типа могут содержать активный ингредиент, носитель и один или несколько других ингредиентов. Растворы можно применять в любом типе распылителя, в закрытом помещении и на свежем воздухе.
В некоторых случаях композиция может быть составлена в виде обратной эмульсии. Обратная эмульсия представляет собой водорастворимый активный ингредиент, диспергированный в масляном носителе. Обратные эмульсии требуют эмульгатора, который способствует смешиванию активного ингредиента с большим объемом носителя на нефтяной основе, обычно топливного масла. Обратные эмульсии способствуют снижению сноса. В случае других составов некоторый снос при распылении происходит, когда капли воды начинают испаряться до достижения целевых поверхностей; в результате этого капли могут стать очень маленькими и легковесными. Поскольку масло испаряется более медленно, чем вода, капли обратной эмульсии сжимаются меньше, и большее количество активного ингредиента достигает цели. Масло дополнительно способствует снижению поверхностного стока и повышает устойчивость к дождю. Оно дополнительно выступает в качестве адгезивного средства, улучшая степень покрытия поверхности и всасывание. Поскольку капли являются сравнительно большими и тяжелыми, то им сложно пройти насквозь покрытие нижней стороны листьев. Обратные эмульсии наиболее широко применяются в полосах отчуждения, где снос на восприимчивые нецелевые площади может быть проблемой.
Текучий или жидкий состав объединяет многие из характеристик концентратов эмульсий и смачиваемых порошков. Изготовители используют эти составы, если активный ингредиент представляет собой твердое вещество, которое не растворяется ни в воде, ни в масле. Активный ингредиент, пропитанный веществом, таким как глина, измельчают до очень мелкого порошка. Затем порошок суспендируют в небольшом количестве жидкости. Образующийся в результате жидкий продукт является достаточно плотным. Текучие и жидкие составы имеют многие из характеристик концентратов эмульсий, а также они имеют аналогичные недостатки. Они требуют умеренного взбалтывания для поддержания их в виде суспензии и оставляют видимые остатки, аналогичные таковым у смачиваемых порошков.
Текучие/жидкие составы являются легкими в обращении и применении. Поскольку они представляют собой жидкости, то они подлежат разбрызгиванию и расплескиванию. Они содержат твердые частицы, поэтому они способствуют абразивному износу насадок и насосов. Текучие и жидкие суспензии осаждаются в своих контейнерах. Поскольку текучие и жидкие составы склонны к осаждению, упаковка в контейнеры по пять галлонов или меньше облегчает повторное смешивание.
Аэрозольные составы содержат один или несколько активных ингредиентов и растворитель. Большинство аэрозолей имеют низкое процентное содержание активных ингредиентов. Существует два типа аэрозольных составов – готовый к применению тип, широко доступный в находящихся под давлением запечатанных контейнерах, и продукты, используемые в электрических или работающих на бензине аэрозольных генераторах, которые высвобождают состав в виде дыма или тумана.
Готовые к применению аэрозольные составы обычно представляют собой небольшие автономные блоки, которые высвобождают состав, когда клапан насадки приводится в движение. Состав пропускается через тонкое отверстие с помощью инертного газа под давлением с образованием мелкодисперсных капель. Эти продукты используются в теплицах, на небольших площадях внутри зданий или на ограниченных площадях на открытом воздухе. Коммерческие модели, которые удерживают до 5 фунтов активного ингредиента, обычно являются многоразовыми.
Дымообразующие или туманообразующие аэрозольные составы не находятся под давлением. Они используются в машинах, которые разбивают жидкий состав на мелкодисперсный туман или густой туман (аэрозоль) с помощью быстро вращающегося диска или нагреваемой поверхности.
Сухие или твердые составы
Сухие составы могут быть разделены на два типа: готовые к применению и концентраты, которые должны быть смешаны с водой для применения в качестве спрея. Большинство пылевидных составов являются готовыми к применению и имеют низкое процентное содержание активных ингредиентов (меньше чем приблизительно 10 процентов по весу) наряду с очень тонкодисперсным сухим инертным носителем, изготовленным из талька, мела, глины, ореховой скорлупы или вулканического пепла. Размер отдельных пылевидных частиц варьируется. Некоторые пылевидные составы представляют собой концентраты и имеют высокое процентное содержание активных ингредиентов. Перед применением их смешивают с сухими инертными носителями. Порошки всегда используются сухими и могут легко сноситься на нецелевые участки.
Гранулированные или пеллетированные составы
В некоторых случаях композиция составлена в виде гранул. Гранулированные составы аналогичны пылевидным составам, за исключением того, что гранулированные частицы являются более крупными и тяжелыми. Крупнодисперсные частицы могут быть получены из таких материалов, как глина, кукурузные початки или скорлупа грецких орехов. Активный ингредиент покрывает наружную поверхность гранул или всасывается в них. Количество активного ингредиента может быть относительно малым, обычно находясь в диапазоне от приблизительно 0,5 до приблизительно 15 процентов по весу. Гранулированные составы наиболее часто используются для применения в отношении почвы, насекомых, живущих в почве, или всасывания растениями через корни. Гранулированные составы иногда применяют с использованием самолета или вертолета с целью сведения к минимуму сноса или проникновения в густые заросли. После применения гранулы могут медленно высвобождать активный ингредиент. Некоторые гранулы требуют почвенной влаги для высвобождения активного ингредиента. Гранулированные составы также используются для контроля личинок комаров и других водных вредителей. Гранулы используются в операциях контроля вредителей в сельском хозяйстве, при обработке зданий, на декоративных и газонных растениях, в водной среде, в полосах отчуждения, а также в общественном здравоохранении (в отношении жалящих насекомых).
В некоторых случаях композиция составлена в виде пеллет. Большинство пеллетированных составов являются весьма сходными с гранулированными составами; эти термины используются взаимозаменяемо. Однако в пеллетированном составе все частицы имеют одну и ту же массу и форму. Однородность частиц облегчает применение с использованием точного эксплуатационного оборудования.
Порошки
В некоторых случаях композиция составлена в виде порошка. В некоторых случаях композиция составлена в виде смачиваемого порошка. Смачиваемые порошки представляют собой сухие тонкоизмельченные составы, которые выглядят как пылевидные препараты. Обычно они должны смешиваться с водой для применения в качестве спрея. Однако, немного продуктов можно применять в качестве пылевидного препарата или в качестве смачиваемого порошка – выбор остается за потребителем. Смачиваемые порошки имеют от приблизительно 1 до приблизительно 95 процентов по весу активного ингредиента; в некоторых случаях более чем приблизительно 50 процентов. Частицы не растворяются в воде. Они быстро осаждаются, если их постоянно не взбалтывать для поддержания в суспендированном состоянии. Их можно применять для решения большинства проблем, связанных с вредителями, и в большинстве типов распылительного оборудования, в которых возможно взбалтывание. Смачиваемые порошки обладают превосходной остаточной активностью. В связи с их физическими свойствами большинство состава остается на поверхности обработанных пористых материалов, таких как бетон, штукатурка и необработанная древесина. В таких случаях только вода проникает в материал.
В некоторых случаях композиция составлена в виде растворимого порошка. Растворимые порошковые составы выглядят как смачиваемые порошки. В то же время при смешивании с водой растворимые порошки легко растворяются и образуют истинный раствор. После их тщательного смешивания дополнительное взбалтывание не требуется. Количество активного ингредиента в растворимых порошках находится в диапазоне от приблизительно 15 до приблизительно 95 процентов по весу; в некоторых случаях более чем приблизительно 50 процентов. Растворимые порошки имеют все преимущества смачиваемых порошков и ни одного из недостатков, за исключением опасности вдыхания во время смешивания.
В некоторых случаях композиция составлена в виде гранул, диспергируемых в воде. Гранулы, диспергируемые в воде, также известные как сухие текучие составы, подобны смачиваемым порошкам за исключением того, что являются пылевидными, и их составляют в виде небольших легко определяемых гранул. Гранулы, диспергируемые в воде, должны быть смешаны с водой перед применением. Оказавшись в воде, гранулы распадаются на мелкодисперсные частицы, аналогичные смачиваемым порошкам. Состав требует непрерывного взбалтывания для поддержания его в суспендированном состоянии в воде. Процентное содержание активного ингредиента является высоким, часто не менее 90 процентов по весу. Гранулы, диспергируемые в воде, имеют многие из тех же самых преимуществ и недостатков смачиваемых порошков, за исключением того, что они являются более легко определяемыми и смешиваемыми. В связи с низким содержанием пылевидных частиц они обуславливают меньшую опасность вдыхания для потребителя во время использования.
Приманка
В некоторых случаях композиция включает в себя приманку. Приманка может находиться в любой подходящей форме, такой как твердое вещество, паста, пеллетированная или порошкообразная форма. Приманка также может переноситься хозяином назад в популяцию указанного хозяина (например, колонию или улей). Приманка может затем выступать в качестве источника пищи для других членов колонии, тем самым предоставляя эффективное модулирующее средство большому числу хозяев и потенциально всей колонии хозяина.
Приманки могут быть предоставлены в подходящем "домике" или "ловушке". Такие домики и ловушки являются коммерчески доступными, и существующие ловушки могут быть адаптированы для включения композиций, описанных в данном документе. Домик или ловушка могут быть предусмотрены, например, в форме коробки, и могут быть предусмотрены в готовом виде или могут быть изготовлены, например, из складывающегося картона. Подходящие материалы для домика или ловушки включают в себя пластмассу и картон, в частности, гофрированный картон. Внутренние поверхности ловушек могут быть выстланы липким веществом с целью ограничения движения хозяина при попадании в ловушку. Домик или ловушка могут содержать подходящую бороздку внутри, которая может удерживать приманку на месте. Ловушка отличается от домика, поскольку хозяин не может легко покинуть ловушку после попадания, тогда как домик выступает в качестве "кормушки", которая обеспечивает хозяина предпочтительной средой, в которой они могут кормиться и чувствовать себя в безопасности от хищников.
Аттрактанты
В некоторых случаях композиция содержит аттрактант (например, хемоаттрактант). Аттрактант может привлекать взрослого хозяина или неполовозрелого хозяина (например, личинку) к месту поблизости композиции. Аттрактанты включают в себя феромоны – химические вещества, которые секретируются животным, в частности насекомым, которые влияют на поведение или развитие других особей этого же вида. Другие аттрактанты включают в себя сахарные сиропы и сиропы на основе гидролизатов белков, дрожжевые грибы и гниющее мясо. Аттрактанты также можно объединять с активным ингредиентом и распылять на листья или другие предметы в обрабатываемой области.
Известны различные аттрактанты, которые влияют на поведение хозяина, например, поиск хозяином пищи, мест для откладывания яиц или спаривания или партнеров для спаривания. Аттрактанты, пригодные в способах и композициях, описанных в данном документе, включают в себя, например, эвгенол, фенэтилпропионат, этилдиметилизобутилциклопропанкарбоксилат, пропилбензодиоксанкарбоксилат, цис–7,8–эпокси–2–метилоктадекан, транс–8,транс–0–додекадиенол, цис–9–тетрадеценаль (и цис–11–гексадеценаль), транс–11–тетрадеценаль, цис–11–гексадеценаль, (Z)–11,12–гексадекадиеналь, цис–7–додеценилацетат, цис–8–додеценилацетат, цис–9–додеценилацетат, цис–9–тетрадеценилацетат, цис–11–тетрадеценилацетат, транс–11–тетрадеценилацетат (и цис–11), цис–9,транс–11–тетрадекадиенилацетат (и цис–9,транс–12), цис–9,транс–12–тетрадекадиенилацетат, цис–7,цис–11–гексадекадиенилацетат (и цис–7,транс–11), цис–3,цис–13–октадекадиенилацетат, транс–3,цис–13–октадекадиенилацетат, анетол и изоамилсалицилат.
Для привлечения насекомых также можно применять средства, отличные от хемоаттрактантов, в том числе осветительные устройства с различными длинами волн или цветами излучения.
Нанокапсулы/микроинкапсулирование/липосомы
В некоторых случаях композиция предусмотрена в виде микроинкапсулированного состава. Микроинкапсулированные составы смешивают с водой и распыляют таким же образом, как и другие распыляемые составы. После распыления пластмассовые покрытия разрушаются и медленно высвобождают активный ингредиент.
Носители
Любая из композиций, описанных в данном документе, может быть составлена с включением модулирующего средства, описанного в данном документе, и инертного носителя. Такой носитель может представлять собой твердый носитель, жидкий носитель, гелеобразный носитель и/или газообразный носитель. В определенных вариантах осуществления носитель может представлять собой покрытие для семян. Покрытие для семян представляет собой любой не встречающийся в природе состав, который прилипает, целиком или частично, к поверхности семени. Состав может дополнительно содержать вспомогательное вещество или поверхностно–активное вещество. Состав может также содержать одно или несколько модулирующих средств для расширения спектра действия.
Твердый носитель, используемый для состава, включает в себя мелкодисперсный порошок или гранулы глины (например, каолиновой глины, диатомовой земли, бентонитовой глины, глины Фубасами, кислой глины и т. д.), синтетический гидратированный диоксид кремния, тальк, керамические материалы, другие неорганические материалы (например, серицит, кварц, серу, активированный уголь, карбонат кальция, гидратированный диоксид кремния и т. д.), вещество, которое может быть сублимировано и находится в твердой форме при комнатной температуре (например, 2,4,6–триизопропил–1,3,5–триоксан, нафталин, п–дихлорбензол, камфору, адамантан и т. д.); шерсть; шелк; хлопок; пеньку; жом; синтетические смолы (например, полиэтиленовые смолы, такие как полиэтилен низкой плотности, немодифицированный полиэтилен низкой плотности и полиэтилен высокой плотности; сополимеры этилена и винилового сложного эфира, такие как сополимеры этилена и винилацетата; сополимеры этилена и сложного эфира метакриловой кислоты, такие как сополимеры этилена и метилметакрилата и сополимеры этилена и этилметакрилата; сополимеры этилена и сложного эфира акриловой кислоты, такие как сополимеры этилена и метилакрилата и сополимеры этилена и этилакрилата; сополимеры этилена и винилкарбоновой кислоты, такие как сополимеры этилена и акриловой кислоты; сополимеры этилена и тетрациклододецена; полипропиленовые смолы, такие как гомополимеры пропилена и сополимеры пропилена и этилена; поли–4–метилпентен–1, полибутен–1, полибутадиен, полистирол; смолы на основе сополимера акрилонитрила и стирола; стирольные эластомеры, такие как смолы на основе сополимера акрилонитрила, бутадиена и стирола, блок–сополимеры диенов с сопряженными двойными связями и стирола и гидриды блок–сополимеров диенов с сопряженными двойными связями и стирола; фторкаучуки; акриловые смолы, такие как поли(метилметакрилат); полиамидные смолы, такие как нейлон 6 и нейлон 66; полиэфирные смолы, такие как полиэтилентерефталат, полиэтиленнафталат, полибутилентерефталат и полициклогексилендиметилентерефталат, поликарбонаты, полиацетали, полиакрилсульфоны, полиарилаты, полиэфиры гидроксибензойной кислоты, полиэфиримиды, полиэфиркарбонаты, полифениленэфирные смолы, поливинилхлорид, поливинилиденхлорид, полиуретан и пористые смолы, такие как пенополиуретан, пенополипропилен или пеноэтилен и т. д.), стекла, металлы, керамические материалы, волокнистые материалы, ткани, трикотажные полотна, листы, бумагу, пряжу, пену, пористые вещества и мультифиламенты.
Жидкий носитель может включать в себя, например, ароматические или алифатические углеводороды (например, ксилол, толуол, алкилнафталин, фенилксилилэтан, керосин, газойль, гексан, циклогексан и т. д.), галогензамещенные углеводороды (например, хлорбензол, дихлорметан, дихлорэтан, трихлорэтан и т. д.), спирты (например, метанол, этанол, изопропиловый спирт, бутанол, гексанол, бензиловый спирт, этиленгликоль и т. д.), эфиры (например, диэтиловый эфир, диметиловый эфир этиленгликоля, монометиловый эфир диэтиленгликоля, моноэтиловый эфир диэтиленгликоля, монометиловый эфир пропиленгликоля, тетрагидрофуран, диоксан и т. д.), сложные эфиры (например, этилацетат, бутилацетат и т. д.), кетоны (например, ацетон, метилэтилкетон, метилизобутилкетон, циклогексанон и т. д.), нитрилы (например, ацетонитрил, изобутиронитрил и т. д.), сульфоксиды (например, диметилсульфоксид и т. д.), амиды (например, N,N–диметилформамид, N,N–диметилацетамид, циклические имиды (например, N–метилпирролидон), алкилиденкарбонаты (например, пропиленкарбонат и т. д.), растительное масло (например, соевое масло, хлопковое масло и т. д.), растительные эфирные масла (например, апельсиновое масло, масло иссопа, лимонное масло и т. д.) или воду.
Газообразный носитель может включать в себя, например, газообразный бутан, газообразный политетрафторэтилен, сжиженный нефтяной газ (LPG), диметиловый эфир и газообразный диоксид углерода.
Вспомогательные вещества
В некоторых случаях композиция, предусмотренная в данном документе, может содержать вспомогательное вещество. Вспомогательные вещества представляют собой химические вещества, которые не обладают активностью. Вспомогательные вещества предварительно смешивают в составе или добавляют в распылительный резервуар для улучшения смешивания или применения или для усиления функциональных характеристик. Они широко используются в продуктах, предназначенных для применения в отношении листьев. Вспомогательные вещества можно использовать для придания индивидуальных свойств составу в соответствии с конкретными нуждами и введения поправки на местные условия. Вспомогательные вещества могут быть предназначены для осуществления конкретных функций, в том числе смачивания, распределения, прилипания, снижения испарения, снижения улетучивания, буферизации, эмульгирования, диспергирования, снижения сноса при распылении и снижения пенообразования. Ни одно вспомогательное вещество не может осуществлять все эти функции само по себе, однако совместимые вспомогательные вещества часто можно объединять для осуществления нескольких функций одновременно.
Среди неограничивающих примеров вспомогательных веществ, включенных в состав, присутствуют связующие вещества, диспергирующие вещества и стабилизаторы, в частности, например, казеин, желатин, полисахариды (например, крахмал, аравийская камедь, производные целлюлозы, альгиновая кислота и т. д.), производные лигнина, бентонит, сахара, синтетические водорастворимые полимеры (например, поливиниловый спирт, поливинилпирролидон, полиакриловая кислота и т. д.), PAP (кислый изопропилфосфат), BHT (2,6–ди–трет–бутил–4–метилфенол), BHA (смесь 2–трет–бутил–4–метоксифенола и 3–трет–бутил–4–метоксифенола), растительные масла, минеральные масла, жирные кислоты и сложные эфиры жирных кислот.
Поверхностно–активные вещества
В некоторых случаях композиция, предусмотренная в данном документе, содержит поверхностно–активное вещество. Поверхностно–активные вещества, также называемые смачивающими средствами и распределителями, физически изменяют поверхностное натяжение капли спрея. Для того, чтобы состав надлежащим образом выполнял свою функцию, капля спрея должна быть способной смачивать листья и распределяться равномерно по листу. Поверхностно–активные вещества увеличивают площадь, покрываемую составом, тем самым усиливая воздействие химического вещества на вредителя. Поверхностно–активные вещества особенно важны при применении состава в отношении листьев, покрытых воском, или волосистых листьев. Без надлежащего смачивания и распределения капли спрея часто стекают или не могут покрыть поверхности листьев надлежащим образом. В то же время слишком большое количество поверхностно–активного вещества может вызвать избыточный поверхностный сток и снизить эффективность.
Поверхностно–активные вещества классифицируются на основе способа их ионизации или расщепления на электрически заряженные атомы или молекулы, называемые ионами. Поверхностно–активное вещество с отрицательным зарядом является анионным. Поверхностно–активное вещество с положительным зарядом является катионным, и поверхностно–активное вещество без электрического заряда является неионогенным. Активность состава в присутствии неионогенного поверхностно–активного вещества может значительно отличаться от активности в присутствии катионного или анионного поверхностно–активного вещества. Выбор неправильного поверхностно–активного вещества может снижать эффективность пестицидного продукта и наносить вред растению–мишени. Анионные поверхностно–активные вещества являются наиболее эффективными при использовании с контактными пестицидами (пестициды, которые контролируют вредителя путем непосредственного контакта, а не системного всасывания). Катионные поверхностно–активные вещества никогда не должны применяться в качестве самостоятельных поверхностно–активных веществ, поскольку они обычно являются фитотоксичными.
Неионогенные поверхностно–активные вещества, часто применяемые с системными пестицидами, облегчают проникновение пестицидных спреев через кутикулы растений. Неионогенные поверхностно–активные вещества совместимы с большинством пестицидов, и для большинства пестицидов, зарегистрированных EPA, которым необходимо поверхностно–активное вещество, рекомендуется неионогенный тип. Вспомогательные вещества включают в себя без ограничения клеящие вещества, сухие разбавители, вещества, обеспечивающие проникновение в растения, факторы совместимости, буферы или модификаторы pH, дополнительные компоненты для контроля сноса, противовспенивающие средства и загустители.
Среди неограничивающих примеров поверхностно–активных веществ, включенных в композиции, описанные в данном документе, присутствуют соли алкилсульфатных сложных эфиров, алкилсульфонаты, аклиларилсульфонаты, алкилариловые эфиры и их полиоксиэтиленированные продукты, простые эфиры полиэтиленгликоля, сложные эфиры многоатомных спиртов и производные сахарных спиртов.
Комбинации
В составах и в применяемых формах, полученных из этих составов, модулирующее средство может находиться в смеси с другими активными соединениями, такими как пестицидные средства (например, инсектициды, стерилизаторы, акарициды, нематоциды, моллюскоциды или фунгициды; см., например, пестициды, приведенные в таблице 12), аттрактанты, вещества, регулирующие рост, или гербициды. Используемый в данном документе термин "пестицидное средство" относится к любому веществу или смеси веществ, предусмотренных для предупреждения воздействия, нарушения воздействия, отпугивания или ослабления воздействия любого вредителя. Пестицид может представлять собой химическое вещество или биологическое средство, применяемое против вредителей, в том числе насекомых, патогенов, сорняков и микроорганизмов, которые конкурируют с человеком за пищу, разрушают имущество, распространяют заболевания или представляют собой негативный раздражитель. Термин "пестицидное средство" может дополнительно охватывать другие биологически активные молекулы, такие как антибиотики, противовирусные пестициды, противогрибковые средства, антигельминтные средства, питательные вещества, пыльцу, сахарозу и/или средства, которые останавливают или замедляют движение насекомых.
В случаях, когда модулирующее средство применяют в отношении растений, смесь с другими известными соединениями, такими как гербициды, удобрения, регуляторы роста, антидоты, химические сигнальные вещества или другие средства для улучшения свойств растения, также является возможной.
Доставка
Хозяин, описанный в данном документе, может подвергаться воздействию любой из композиций, описанных в данном документе, любым подходящим образом, который обеспечивает доставку или введение композиции насекомому. Модулирующее средство может быть доставлено в отдельности или в комбинации с другими активными или неактивными веществами и может применяться, например, посредством распыления, микроинъекции, через растения, посредством полива, погружения, в форме концентрированных жидкостей, гелей, растворов, суспензий, спреев, порошков, пеллет, брикетов, плиток и т. п., составленных для доставки эффективной концентрации модулирующего средства. Количества и места для применения композиций, описанных в данном документе, как правило, определяются условиями обитания хозяина, стадией жизненного цикла, на которой на микроорганизмы хозяина можно целенаправленно воздействовать с помощью модулирующего средства, участком, в котором применение должно выполняться, а также физическими и функциональными характеристиками модулирующего средства. Модулирующие средства, описанные в данном документе, можно вводить насекомому путем перорального заглатывания, однако также можно вводить с помощью средств, которые обеспечивают проникновение через кутикулу или проникновение в дыхательную систему насекомого.
В некоторых случаях насекомое может быть просто "намочено" или "опрыскано" раствором, содержащим модулирующее средство. В качестве альтернативы, модулирующее средство может быть связано с пищевым компонентом (например, съедобным) для насекомого для облегчения доставки и/или в целях повышения поглощения модулирующего средства насекомым. Способы перорального введения включают в себя, например, непосредственное смешивание модулирующего средства с пищей для насекомого, распыление модулирующего средства в среде обитания насекомого или поле, а также подходы на основе конструирования, в которых вид, который применяется в качестве пищи, конструируется с целью экспрессии модулирующего средства, после чего скармливается насекомому, подлежащему отрицательному влиянию. В некоторых случаях, например, композиция на основе модулирующего средства может быть включена в состав рациона насекомого или покрывать его сверху. Например, композицию на основе модулирующего средства можно распылять на поле с сельскохозяйственными культурами, на которых насекомое обитает.
В некоторых случаях композицию распыляют непосредственно на растение, например, сельскохозяйственные культуры, например, путем распыления из рюкзака, распыления с воздуха, опрыскивания/опыления растительных культур и т. д. В случаях, когда модулирующее средство доставляют в растение, растение, получающее модулирующее средство, может находиться на любой стадии роста растения. Например, составленные модулирующие средства можно применять в виде покрытия для семян или средства для обработки корней на ранних стадиях роста растения или в виде средства для полной обработки растения на более поздних стадиях цикла урожая. В некоторых случаях модулирующее средство можно применять в отношении растения в качестве местного средства, так чтобы насекомое–хозяин заглатывало или иным образом приходило в контакт с растением при взаимодействии с растением.
Кроме того, модулирующее средство можно применять (например, в отношении почвы, в которой растение растет, или в отношении воды, которую используют для полива растения) в качестве системного средства, которое поглощается и распределяется по тканям (например, стеблям или листьям) растения–хозяина или животного–хозяина таким образом, что насекомое, питающееся на нем, будет получать эффективную дозу модулирующего средства. В некоторых случаях растения или организмы, используемые в качестве пищи, могут быть генетически трансформированы для экспрессии модулирующего средства, так чтобы хозяин, питающийся на растении или организме, используемом в качестве пищи, заглатывал модулирующее средство.
Замедленное или непрерывное высвобождение также может достигаться посредством покрытия модулирующего средства или композиции с модулирующим(модулирующими) средством(средствами) растворимым или биоразрушаемым слоем покрытия, таким так желатин, при этом данное покрытие растворяется или разрушается в среде применения, что таким образом делает модулирующее средство доступным, или посредством диспергирования средства в растворимой или разрушаемой матрице. Такое непрерывное высвобождение и/или распределение означает, что устройства могут быть предпочтительно использованы для устойчивого поддержания эффективной концентрации одного или нескольких модулирующих средств, описанных в данном документе, в конкретной среде обитания хозяина.
Модулирующее средство также может быть включено в среду, в которой насекомое растет, живет, размножается, питается или осуществляет заражение. Например, модулирующее средство может быть включено в контейнер для пищи, кормушку, защитную обертку или улей. В некоторых путях применения модулирующее средство может быть связано с твердой подложкой для применения в порошкообразной форме или в "ловушке" или "кормушке". В качестве примера, в путях применения, в которых композиция подлежит применению в ловушке или в виде приманки для определенного насекомого–хозяина, композиции также могут быть связаны с твердой подложкой или инкапсулированы в материал с медленным высвобождением. Например, композиции, описанные в данном документе, можно вводить посредством доставки композиции в по меньшей мере одну среду обитания, в которой сельскохозяйственный вредитель (например, тля) растет, живет, размножается или питается.
Скрининг
В данный документ включены способы скрининга модулирующих средств, которые являются эффективными для изменения микробиоты хозяина (например, насекомого) и тем самым снижают приспособленность хозяина. Скрининговые анализы, предусмотренные в данном документе, могут быть эффективными для идентификации одного или нескольких модулирующих средств (например, фага), которые целенаправленно воздействуют на симбиотические микроорганизмы, обитающие в организме хозяина, и тем самым снижают приспособленность хозяина. Например, идентифицированное модулирующее средство (например, фаг) может быть эффективным для снижения жизнеспособности микроорганизмов, которые расщепляют пестициды или аллелохимикаты (например, бактерий, например, бактерии, которая расщепляет пестицид, приведенный в таблице 12), с повышением тем самым восприимчивости хозяев к пестициду (например, восприимчивости к пестициду, приведенному в таблице 12) или аллелохимическому средству.
Например, библиотека фагов может быть подвергнута скринингу для идентификации фага, который целенаправленно воздействует на конкретный эндосимбиотический микроорганизм, обитающий в организме хозяина. В некоторых случаях библиотека фагов может быть предусмотрена в форме одного или нескольких образцов окружающей среды (например, почвы, прудовых донных отложений или сточной воды). В качестве альтернативы, библиотека фагов может быть создана из лабораторных изолятов. Библиотеку фагов можно совместно культивировать со штаммом бактерий–мишеней. После инкубирования со штаммом бактерий популяцию фага, который успешно инфицирует и лизирует бактерии–мишени, обогащают в культуральной среде. Культуру, обогащенную фагами, можно субкультивировать с дополнительными бактериями любое число раз для дальнейшего обогащения популяции фага, представляющего интерес. Фаг может быть выделен для применения в качестве модулирующего средства в любых из способов или композиций, описанных в данном документе, при этом фаг изменяет микробиоту хозяина таким образом, что снижается приспособленность хозяина.
<b>Таблица 12. Пестициды</b>
Аклонифен
Фенхлоразол–этил
Пендиметалин
Ацетамиприд
Фенотиокарб
Пенфлуфен
Аланикарб
Фенитротион
Пенфлуфен
Амидосульфурон
Фенпропидин
Пентахлорбензол
Аминоциклопирахлор
Флуазолат
Пентиопирад
Амиcулбром
Флуфеноксурон
Пентиопирад
Антрахинон
Флуметралин
Пиримифос–метил
Асулам, натриевая соль
Флуксапироксад
Праллетрин
Бенфуракарб
Фуберидазол
Профенофос
Бенсулид
Глюфосинат аммония
Проквиназид
Бета–HCH; бета–BCH
Глифосат
Протиофос
Биоресметрин
Группа: Бура, боратные соли (см.
Пираклофос
Бластицидин–S
Группа: Парафиновые масла, минеральные
Пиразахлор
Бура; тетраборат динатрия
Галфенпрокс
Пиразофос
Борная кислота
Имипротрин
Пиридабен
Гептаноат бромоксинила
Имидаклоприд
Пиридалил
Октаноат бромоксинила
Ипконазол
Пиридифентион
Карбосульфан
Изопиразам
Пирифенокс
Хлорантранилипрол
Изопиразам
Квинмерак
Хлордимеформ
Ленацил
Ротенон
Хлорфлуазурон
Фосфид магния
Седаксан
Хлорпрофам
Метафлумизон
Седаксан
Климбазол
Метазахлор
Силафлуофен
Клопиралид
Метазахлор
Синтофен
Гидроксид меди (II)
Метобромурон
Спинеторам
Цифлуфенамид
Метоксурон
Сульфоксафлор
Цигалотрин
Метсульфурон–метил
Темефос
Цигалотрин, гамма
Милбемектин
Тиаклоприд
Декагидрат
Налед
Тиаметоксам
Диафентиурон
Напропамид
Толфенпирад
Димефурон
Никосульфурон
Тралометрин
Димоксистробин
Нитенпирам
Соединения трибутилолова
Динотефуран
Нитробензол
Тридифан
Дикват–дихлорид
o–фенилфенол
Трифлумизол
Дитианон
Масла
Валидамицин
E–фосфамидон
Оксадиаргил
Фосфид цинка
EPTC
Оксикарбоксин
Этабоксам
Парафиновое масло
Этиримол
Пенконазол
ПРИМЕРЫ
Далее представлен пример способов по настоящему изобретению. Следует понимать, что на практике могут осуществляться различные другие варианты осуществления c учетом общего описания, приведенного выше.
Пример 1. Получение библиотеки фагов
Данный пример демонстрирует получение коллекции фагов из образцов окружающей среды.
Схема терапии.
Myoviridae, Siphoviridae, Podoviridae, Lipothrixviridae, Rudiviridae, Ampullaviridae, Bicaudaviridae, Clavaviridae, Corticoviridae, Cystoviridae, Fuselloviridae, Gluboloviridae, Guttaviridae, Inoviridae, Leviviridae, Microviridae, Plasmaviridae, Tectiviridae.
Сбор библиотеки фагов, имеющей следующие семейства фагов:
Схема эксперимента
Несколько образцов окружающей среды (почва, прудовые донные отложения, сточная вода) собирали в стерильные колбы на 1 л в течение периода 2 недель и незамедлительно обрабатывали, как описано ниже, после сбора и затем хранили при 4°C. Твердые образцы гомогенизировали в стерильном бульоне Лурия (LB) или триптическом соевом бульоне (TSB) двойной концентрации от Difco с добавлением 2 мM CaCl2 до конечного объема 100 мл. Значения pH и уровни фосфата измеряли с помощью индикаторных полос для фосфата. Для очистки все образцы центрифугировали при 3000–6000 g в Megafuge 1.0R Heraeus или центрифуге Eppendorf 5702 R в течение 10–15 минут при +4°C и фильтровали через фильтры с размером пор 0,2 мкм с низким связыванием белка для удаления всех оставшихся бактериальных клеток. Надосадочную жидкость хранили при 4°C в присутствии хлороформа в стеклянном флаконе.
Пример 2. Идентификацияфагов, специфичных в отношении мишени
Данный пример демонстрирует выделение, очистку и идентификацию отдельных фагов, специфичных в отношении мишени, из неоднородной библиотеки фагов.
Схема эксперимента
Buchnera
20–30 мл библиотеки фагов, описанной в примере 1, разбавляли до объема 30–40 мл бульоном LB. Штамм бактерий–мишеней,например, , добавляли (50–200 мкл культуры, выращенной в течение ночи в бульоне LB) для обогащения популяции фагов, которые целенаправленно воздействуют на этот конкретный штамм бактерий в культуре. Эту культуру инкубировали в течение ночи при +37°C, встряхивая при 230 об./мин. Бактерии из этой обогатительной культуры удаляли центрифугированием (3000–6000 g в Megafuge 1.0R Heraeus или центрифуге Eppendorf 5702 R, 15–20 минут, +4°C) и фильтровали (фильтр с размером пор 0,2 или 0,45 мкм). 2,5 мл культуры, не содержащей бактерий, добавляли к 2,5 мл бульона LB и 50–100 мкл бактерий–мишеней для обогащения фагами. Обогатительную культуру выращивали в течение ночи, как описано выше. Образец из этой обогатительной культуры центрифугировали при 13000 g в течение 15 мин. при комнатной температуре, и 10 мкл надосадочной жидкости помещали на чашку Петри, содержащую агар LB, совместно с 100–300 мкл бактерий–мишеней и 3 мл расплавленного 0,7% мягкого агара. Планшеты инкубировали в течение ночи при +37°C. Каждую из бляшек, наблюдаемых на бактериальном газоне, собирали и переносили в 500 мкл бульона LB. Образец из этой исходной культуры бляшек дополнительно высевали на бактерии–мишени. Очистку бляшек выполняли три раза для всех обнаруженных фагов с целью выделения одного однородного фага из неоднородной смеси фагов.
J
Bacteriol
Лизаты из чашек с фагами с высокими титрами (> 1x 10^10 БОЕ/мл) получали путем сбора верхних слоев с планшетов, содержащих штамм бактерий–хозяев, демонстрирующий сливной лизис. После добавления 5 мл буфера верхний мягкий слой агара мацерировали, очищали центрифугированием и стерилизовали фильтрацией. Полученные лизаты хранили при 4°C. Фаговые лизаты с высоким титром дополнительно очищали с помощью изопикнического центрифугирования с использованием CsCl, как описано в (Summer et al., . . 192:179–190, 2010).
Methods Mol. Biol.
Methods Mol. Biol.
Nucleic Acids Res.
Bioinformatics
BMC Bioinformatics
Nucleic Acids Res
ДНК выделяли из очищенных с помощью CsCl фаговых суспензий, как описано в (Summer,  502:27–46, 2009). Отдельный выделенный фаг секвенировали в виде части двух пулов геномов фагов с помощью способа пиросеквенирования 454. Геномную ДНК фагов смешивали в эквимолярных количествах до конечной концентрации приблизительно 100 нг/л. Объединенную ДНК фрагментировали, лигировали с помощью мультиплексной идентификационной метки (MID), специфичной для каждого из пулов, и секвенировали с помощью пиросеквенирования с использованием полнопланшетной реакции на секвенаторе FLX Titanium Roche в соответствии с протоколами производителя. Объединенная ДНК фагов присутствовала в двух реакциях секвенирования. Урезанные выходные данные потоковых диаграмм FLX Titanium, соответствующие каждому из пулов, собирали отдельно с использованием сборщика Newbler версии 2.5.3 (454 Life Sciences), регулируя настройки таким образом, чтобы были включены только риды, содержащие одну MID на сборку. Идентичность отдельных контигов определяли с помощью ПЦР с использованием праймеров, образованных для последовательностей контигов и отдельных препаратов геномной ДНК фагов, в качестве матрицы. Sequencher 4.8 (Gene Codes Corporation) использовали для сборки и редактирования последовательностей. Хромосомные концевые структуры фагов определяли экспериментально. Липкие концы (cos) для фагов определяли посредством секвенирования концов фагового генома и секвенирования продуктов ПЦР, полученных путем амплификации посредством лигирующего соединения циркуляризованной геномной ДНК, как описано в Summer,  502:27–46, 2009). Области, кодирующие белки, изначально прогнозировали с использованием GeneMark.hmm (Lukashin et al.  26:1107–1115, 1998), очищали посредством ручного анализа в Artemis (Rutherford et al.,  16:944–945, 2000) и анализировали путем применения BLAST (пороговое E–значение 0,005) (Camacho et al.,  10:421, 2009). Белки, представляющие особый интерес, дополнительно анализировали с помощью InterProScan (Hunter et al., . 40:D306–D312, 2012).
Buchnera
Электронную микроскопию очищенного с помощью CsCl фага (>1 x10^11 БОЕ/мл), который лизировал эндосимбиотические бактерии ,выполняли путем разведения исходного раствора буфером на основе триптического соевого бульона. Фаги наносили на тонкие сетки Formvar на 400 меш с углеродным покрытием, окрашивали 2% (вес./об.) уранилацетатом и сушили на воздухе. Образцы наблюдали в трансмиссионном электронном микроскопе JEOL 1200EX, функционирующем при ускоряющем напряжении 100 кВ. Пять вирионов каждого фага измеряли для расчета средних значений и стандартных отклонений размеров капсида и отростка при необходимости.
Пример 3. Обработка тлей раствором очищенных фагов
Buchnera
Данный пример демонстрирует способность уничтожать или снижать приспособленность тлей посредством их обработки раствором фагов. Данный пример демонстрирует, что влияние фага на тлей опосредовано модулированием популяций бактерий, эндогенных по отношению к тлям, которые являются восприимчивыми к фагам. Один штамм бактерий–мишеней представляет собой , при этом фаг был идентифицирован в примере 2.
Тли представляют собой одних из наиболее важных насекомых, являющихся сельскохозяйственными вредителями. Они причиняют непосредственный вред растению в результате кормления и выступают в качестве переносчиков вирусов растений. Помимо этого, медвяная падь тлей способствует росту плесневых налетов грибов и привлекает вредоносных муравьев. Применение средств химической обработки, к сожалению, по–прежнему остается широко распространенным, что приводит к отбору устойчивых особей, уничтожение которых становится все более сложным.
Схема терапии.
2
5
8
Растворы фагов составляли при 0 (отрицательный контроль), 10, 10 или 10 бляшкообразующих единиц (БОЕ)/мл фага из примера 2 в 10 мл стерильной воды с 0,5% сахарозой и незаменимыми аминокислотами.
Схема эксперимента
Для подготовки к обработке тлей выращивали в лабораторных условиях и среде. В комнате с контролируемым климатом (фотопериод с 16 ч. света; 60±5% RH; 20±2°C) растения конских бобов выращивали в смеси вермикулита и перлита при 24°C при 16 ч. света и 8 ч. темноты. Для ограничения материнских эффектов или различий в состоянии здоровья между растениями 5–10 взрослых особей из разных растений распределяли среди 10 растений в возрасте двух недель и оставляли размножаться до высокой плотности в течение 5–7 дней. Для экспериментов тлей на стадии личинок второго и третьего возраста собирали из здоровых растений и разделяли по видам обработки таким образом, что для каждого вида обработки получали примерно одно и то же число особей с каждого из растений коллекции.
Canadian Journal of Zoology
2
8
Растворы фагов получали, как описано в данном документе. Лунки 96–луночного планшета заполняли 200 мкл искусственного рациона для тлей (Febvay et al.,  66(11):2449–2453, 1988), и планшет закрывали парафильмом для получения съедобного саше. Искусственный рацион смешивали со стерильной водой и 0,5% сахарозой и незаменимыми аминокислотами в качестве отрицательного контроля либо растворами фагов с различными концентрациями фагов. Растворы фагов смешивали с искусственным рационом с получением конечных концентраций фагов от 10 до 10 (БОЕ)/мл.
Для каждой повторности обработки 30–50 тлей на стадии личинок второго и третьего возраста помещали отдельно в лунки 96–луночного планшета, и планшет со съедобным саше переворачивали над ними, что позволяло насекомым питаться через парафильм и оставаться ограниченными отдельными лунками. Экспериментальных тлей содержали при тех же самых условиях окружающей среды, что и колонии тлей. После того, как тлей вскармливали в течение 24 часов, съедобное саше заменяли новым, содержащим стерильный искусственный рацион, и новое стерильное саше предоставляли каждые 24 часа в течение 4 дней. Когда саше заменяли, тлей также проверяли в отношении смертности. Тлю считали мертвой, если она становилась коричневой или располагалась на дне лунки и не двигалась во время наблюдения. Если тля находилась на парафильме съедобного саше, но не двигалась, она считалась кормящейся и живой.
Buchnera
Buchnera
23S–5S рРНК
Buchnera
Nature
Buchnera
Статус в образцах от тлей оценивали с помощью ПЦР. Взрослых тлей из группы отрицательного контроля (не обработанных фагом) и группы, обработанной фагом, вначале подвергали поверхностной стерилизации 70% этанолом в течение 1 минуты, 10% отбеливателем в течение 1 минуты и тремя промывками сверхчистой водой в течение 1 минуты. Общую ДНК экстрагировали из каждой особи (всего тела) с помощью набора для выделения ДНК насекомых (OMEGA, Bio–tek) в соответствии с протоколом производителя. Праймеры для , прямой праймер 5′–GTCGGCTCATCACATCC–3′ (SEQ ID NO: 221) и обратный праймер 5′–TTCCGTCTGTATTATCTCCT–3′ (SEQ ID NO: 222), разрабатывали на основе последовательностей , полученных из генома (номер доступа: GCA_000009605.1) (Shigenobu et al., 407:81–86, 2000) с использованием программного обеспечения Primer 5.0 (Primer–E Ltd., Плимут, Великобритания). Циклы ПЦР–амплификации включали в себя начальный этап денатурации при 95°C в течение 5 минут, 35 циклов при 95°C в течение 30 секунд, при 55°C в течение 30 секунд и при 72°C в течение 60 секунд и конечный этап элонгации в течение 10 минут при 72°C. Продукты амплификации из обработанных рифампицином и контрольных образцов анализировали на 1% агарозных гелях, окрашивали с помощью SYBR Safe и визуализировали с использованием системы визуализации. Тли, обработанные фагами, демонстрировали снижение экспрессии специфичных для генов.
Buchnera
Buchnera
Показатели выживаемости тлей, обработанных специфичными в отношении фагами, сравнивали с тлями, обработанными отрицательным контролем. Показатели выживаемости тлей, обработанных специфичными в отношении фагами, снижались по сравнению с тлями, обработанными контролем.
Пример 4. Получение раствора бактериоцина
colA
colA
Данный пример демонстрирует получение и очистку бактериоцина .
Последовательность конструкции
catatgatgacccgcaccatgctgtttctggcgtgcgtggcggcgctgtatgtgtgcattagcgcgaccgcgggcaaaccggaagaatttgcgaaactgagcgatgaagcgccgagcaacgatcaggcgatgtatgaaagcattcagcgctatcgccgctttgtggatggcaaccgctataacggcggccagcagcagcagcagcagccgaaacagtgggaagtgcgcccggatctgagccgcgatcagcgcggcaacaccaaagcgcaggtggaaattaacaaaaaaggcgataaccatgatattaacgcgggctggggcaaaaacattaacggcccggatagccataaagatacctggcatgtgggcggcagcgtgcgctggctcgag (SEQ ID NO: 223)
Схема эксперимента
ДНК получали с помощью ПЦР с использованием специфических праймеров с вышерасположенными (NdeI) и нижерасположенными (XhoI) сайтами рестрикции. Прямой праймер GTATCTATTCCCGTCTACGAACATATGGAATTCC (SEQ ID NO: 224)
colA
BMC Biol.
и обратный праймер CCGCTCGAGCCATCTGACACTTCCTCCAA (SEQ ID NO: 225). Очищенные ПЦР–фрагменты (NucleoSpin Extract II – Macherey Nagel) расщепляли с помощью NdeI или XhoI, и затем фрагменты лигировали. В случае клонирования лигируемый фрагмент ДНК клонировали в вектор pcr2.1(номер доступа в базе данных GenBank EY122872) (Anselme et al., 6:43, 2008). Нуклеотидную последовательность систематически проверяли (Cogenics).
colA
Плазмиду с последовательностью экспрессировали в BL21 (DE3)/pLys. Бактерии выращивали в бульоне LB при 30°C. При OD600 0,9 добавляли изопропил–β–D–1–тиогалактопиранозид (IPTG) до конечной концентрации 1 мM, и клетки выращивали в течение 6 часов. Бактерии лизировали путем ультразвуковой обработки в 100 мM NaCl, 1% Triton X–100, 100 мM Tris–основания с pH 9,5, и белки загружали в колонку HisTrap HP (GE Healthcare). Колонку последовательно промывали с помощью 100 мM NaCl, 100 мM Tris–HCl с pH 6,8 и PBS. Элюирование проводили 0,3M имидазолом в PBS. Обессоливающие колонки PD–10 (GE Healthcare) применяли для удаления имидазола, и солюбилизированные в PBS пептиды концентрировали на центрифужных фильтрующих элементах (Millipore).
Последовательность белка ColA:
MTRTMLFLAC VAALYVCISA TAGKPEEFAK LSDEAPSNDQ AMYESIQRYR RFVDGNRYNG GQQQQQQPKQ WEVRPDLSRD QRGNTKAQVE INKKGDNHDI NAGWGKNING PDSHKDTWHV GGSVRW (SEQ ID NO: 211)
Пример 5. Обработка тлей раствором бактериоцина
colA
Buchnera
Данный пример демонстрирует способность уничтожать или снижать приспособленность тлей посредством их обработки раствором бактериоцина. Данный пример демонстрирует, что влияние бактериоцинов на тлей опосредовано модулированием популяций бактерий, эндогенных по отношению к тлям, которые являются восприимчивыми к бактериоцину ColA. Один штамм бактерий–мишеней представляет собой , при этом бактериоцин был получен в примере 1.
Тли представляют собой одних из наиболее важных насекомых, являющихся сельскохозяйственными вредителями. Они причиняют непосредственный вред растению в результате кормления и выступают в качестве переносчиков вирусов растений. Помимо этого, медвяная падь тлей способствует росту плесневых налетов грибов и привлекает вредоносных муравьев. Применение средств химической обработки, к сожалению, по–прежнему остается широко распространенным, что приводит к отбору устойчивых особей, уничтожение которых становится все более сложным.
Схема терапии.
Растворы ColA составляли при 0 (отрицательный контроль), 0,6, 1, 50 или 100 мг/мл ColA из примера 4 в 10 мл стерильной воды с 0,5% сахарозой и незаменимыми аминокислотами.
Схема эксперимента
E. balteatus
Для подготовки к обработке тлей выращивали в лабораторных условиях и среде. В комнате с контролируемым климатом (фотопериод с 16 ч. света; 60±5% RH; 20±2°C) растения выращивали в смеси вермикулита и перлита и заражали тлями. В тех же самых климатических условиях личинки  получали в результате массового производства; журчалок выкармливали с использованием сахара, пыльцы и воды; и откладку яиц индуцировали путем помещения зараженных растений–хозяев в садок для насекомых на 3 ч. Полный жизненный цикл происходил на растениях–хозяевах, которые ежедневно повторно заражали тлями.
Canadian Journal of Zoology
Лунки 96–луночного планшета заполняли 200 мкл искусственного рациона для тлей (Febvay et al.,  66(11):2449–2453, 1988), и планшет закрывали парафильмом для получения съедобного саше. Искусственный рацион смешивали с раствором стерильной воды с 0,5% сахарозой и незаменимыми аминокислотами в качестве отрицательного контроля или растворами ColA с различными концентрациями ColA. Растворы ColA смешивали с искусственным рационом с получением конечных концентраций от 0,6 до 100 мг/мл.
Для каждой повторности обработки 30–50 тлей на стадии личинок второго и третьего возраста помещали отдельно в лунки 96–луночного планшета, и планшет со съедобным саше переворачивали над ними, что позволяло насекомым питаться через парафильм и оставаться ограниченными отдельными лунками. Экспериментальных тлей содержали при тех же самых условиях окружающей среды, что и колонии тлей. После того, как тлей вскармливали в течение 24 часов, съедобное саше заменяли новым, содержащим стерильный искусственный рацион, и новое стерильное саше предоставляли каждые 24 часа в течение 4 дней. Когда саше заменяли, тлей также проверяли в отношении смертности. Тлю считали мертвой, если она становилась коричневой или располагалась на дне лунки и не двигалась во время наблюдения. Если тля находилась на парафильме съедобного саше, но не двигалась, она считалась кормящейся и живой.
Buchnera
Buchnera
23S–5S рРНК
Buchnera
Nature
Buchnera
Статус в образцах от тлей оценивали с помощью ПЦР. Взрослых тлей из групп отрицательного контроля и обработки фагом вначале подвергали поверхностной стерилизации 70% этанолом в течение 1 минуты, 10% отбеливателем в течение 1 минуты и тремя промывками сверхчистой водой в течение 1 минуты. Общую ДНК экстрагировали из каждой особи (всего тела) с помощью набора для выделения ДНК насекомых (OMEGA, Bio–tek) в соответствии с протоколом производителя. Праймеры для , прямой праймер 5′–GTCGGCTCATCACATCC–3′ (SEQ ID NO: 221) и обратный праймер 5′–TTCCGTCTGTATTATCTCCT–3′ (SEQ ID NO: 222), разрабатывали на основе последовательностей , полученных из генома (номер доступа: GCA_000009605.1) (Shigenobu et al., 200:407, 81–86) с использованием программного обеспечения Primer 5.0 (Primer–E Ltd., Плимут, Великобритания). Циклы ПЦР–амплификации включали в себя начальный этап денатурации при 95°C в течение 5 минут, 35 циклов при 95°C в течение 30 секунд, при 55°C в течение 30 секунд и при 72°C в течение 60 секунд и конечный этап элонгации в течение 10 минут при 72°C. Продукты амплификации из обработанных рифампицином и контрольных образцов анализировали на 1% агарозных гелях, окрашивали с помощью SYBR Safe и визуализировали с использованием системы визуализации. Тли, обработанные ColA, демонстрировали снижение экспрессии специфичных для генов.
Buchnera
Buchnera
Показатели выживаемости тлей, обработанных специфичным в отношении бактериоцином ColA, сравнивали с тлями, обработанными отрицательным контролем. Показатели выживаемости тлей, обработанных специфичным в отношении бактериоцином ColA, снижались по сравнению с тлями, обработанными контролем.
Пример 6. Обработка тлей растворами рифампицина
Buchnera
Данный пример демонстрирует способность уничтожать или снижать приспособленность тлей посредством их обработки рифампицином, антибиотиком узкого спектра действия, который ингибирует ДНК–зависимый синтез РНК путем ингибирования бактериальной РНК–полимеразы. Данный пример демонстрирует, что влияние рифампицина на тлей опосредовано модулированием популяций бактерий, эндогенных по отношению к тлям, которые являются восприимчивыми к рифампицину. Одним штаммом бактерий–мишеней является.
Тли представляют собой одних из наиболее важных насекомых, являющихся сельскохозяйственными вредителями. Они причиняют непосредственный вред растению в результате кормления и выступают в качестве переносчиков вирусов растений. Помимо этого, медвяная падь тлей способствует росту плесневых налетов грибов и привлекает вредоносных муравьев. Применение средств химической обработки, к сожалению, по–прежнему остается широко распространенным, что приводит к отбору устойчивых особей, уничтожение которых становится все более сложным.
Схема терапии.
Растворы антибиотика составляли при 0 (отрицательный контроль), 1, 10 или 50 мкг/мл рифампицина в 10 мл стерильной воды с 0,5% сахарозой и незаменимыми аминокислотами.
Схема эксперимента
Для подготовки к обработке тлей выращивали в лабораторных условиях и среде. В комнате с контролируемым климатом (фотопериод с 16 ч. света; 60±5% RH; 20±2°C) растения конских бобов выращивали в смеси вермикулита и перлита при 24°C при 16 ч. света и 8 ч. темноты. Для ограничения материнских эффектов или различий в состоянии здоровья между растениями 5–10 взрослых особей из разных растений распределяли среди 10 растений в возрасте двух недель и оставляли размножаться до высокой плотности в течение 5–7 дней. Для экспериментов тлей на стадии личинок второго и третьего возраста собирали из здоровых растений и разделяли по видам обработки таким образом, что для каждого вида обработки получали примерно одно и то же число особей с каждого из растений коллекции.
Canadian Journal of Zoology
Растворы рифампицина получали путем растворения рифампицина (SIGMA–ALDRICH, 557303) в стерильной воде с 0,5% сахарозой и незаменимыми аминокислотами. Лунки 96–луночного планшета заполняли 200 мкл искусственного рациона для тлей (Febvay et al.,  66(11):2449–2453, 1988), и планшет закрывали парафильмом для получения съедобного саше. Искусственный рацион смешивали со стерильной водой и 0,5% сахарозой и незаменимыми аминокислотами в качестве отрицательного контроля или раствором рифампицина с одной из концентраций рифампицина. Растворы рифампицина смешивали с искусственным рационом с получением конечных концентраций антибиотика от 1 до 50 мкг/мл.
Для каждой повторности обработки 30–50 тлей на стадии личинок второго и третьего возраста помещали отдельно в лунки 96–луночного планшета, и планшет со съедобным саше переворачивали над ними, что позволяло насекомым питаться через парафильм и оставаться ограниченными отдельными лунками. Экспериментальных тлей содержали при тех же самых условиях окружающей среды, что и колонии тлей. После того, как тлей вскармливали в течение 24 часов, съедобное саше заменяли новым, содержащим стерильный искусственный рацион, и новое стерильное саше предоставляли каждые 24 часа в течение четырех дней. Когда саше заменяли, тлей также проверяли в отношении смертности. Тлю считали мертвой, если она становилась коричневой или располагалась на дне лунки и не двигалась во время наблюдения. Если тля находилась на парафильме съедобного саше, но не двигалась, она считалась кормящейся и живой.
Buchnera
Buchnera
23S–5S рРНК
Buchnera
Nature
Buchnera
Статус в образцах от тлей оценивали с помощью ПЦР. Общую ДНК выделяли из контрольных (не обработанных рифампицином) и обработанных рифампицином особей с помощью набора для выделения ДНК насекомых (OMEGA, Bio–tek) в соответствии с протоколом производителя. Праймеры для , прямой праймер 5′–GTCGGCTCATCACATCC–3′ (SEQ ID NO: 221) и обратный праймер 5′–TTCCGTCTGTATTATCTCCT–3′ (SEQ ID NO: 222), разрабатывали на основе последовательностей , полученных из генома (номер доступа: GCA_000009605.1) (Shigenobu et al., 407:81–86, 2000) с использованием программного обеспечения Primer 5.0 (Primer–E Ltd., Плимут, Великобритания). Циклы ПЦР–амплификации включали в себя начальный этап денатурации при 95°C в течение 5 минут, 35 циклов при 95°C в течение 30 секунд, при 55°C в течение 30 секунд и при 72°C в течение 60 секунд и конечный этап элонгации в течение 10 минут при 72°C. Продукты амплификации из обработанных рифампицином и контрольных образцов анализировали на 1% агарозных гелях, окрашивали с помощью SYBR Safe и визуализировали с использованием системы визуализации. Тли, обработанные рифампицином, демонстрировали снижение экспрессии специфичных для генов.
Показатели выживаемости тлей, обработанных раствором рифампицина, сравнивали с тлями, обработанными отрицательным контролем. Показатели выживаемости тлей, обработанных раствором рифампицина, снижались по сравнению с контролем.
Пример 7. Обработка микроскопических клещей из рода Varroa, которые инфицируют пчел, растворами рифампицина
Bacillus
Данный пример демонстрирует способность уничтожать или снижать приспособленность микроскопических клещей из рода Varroa посредством их обработки раствором антибиотика. Данный пример демонстрирует, что влияние окситетрациклина на микроскопических клещей из рода Varroa опосредовано модулированием популяций бактерий, таких как , эндогенных по отношению к микроскопическим клещам из рода Varroa, которые являются восприимчивыми к окситетрациклину.
Apis mellifera
Микроскопические клещи из рода Varroa считаются основной причиной широко распространенного синдрома разрушения колоний (CCD), который приводит к массовому снижению численности колоний домашних медоносных пчел  во всем мире. Они прикрепляются к брюшку пчел и высасывают их кровь, лишая их питательных веществ и в конечном счете уничтожая их. Хотя микроскопических клещей из рода Varroa можно уничтожить с помощью химически синтезируемых майтицидов, эти типы химических веществ следует держать в отдалении от съедобного меда.
Схема терапии.
Раствор окситетрациклина составляли при 0 (отрицательный контроль), 1, 10 или 50 мкг/мл в 10 мл стерильной воды с 0,5% сахарозой и незаменимыми аминокислотами.
Схема эксперимента
Apis mellifera
Для определения того, имеют ли взрослые микроскопические клещи из рода Varroa на стадии размножения другую восприимчивость по сравнению с форетическими микроскопическими клещами или их потомством, поскольку их кутикула не является завтердевшей, собирали микроскопических клещей из рода Varroa, живущих на взрослых пчелах, и микроскопических клещей, ассоциированных с личинками и куколками. В этом анализе исследовали влияние растворов антибиотика на различные типы микроскопических клещей и определяли, как их приспособленность изменяется в результате целенаправленного воздействия на эндогенные микроорганизмы, такие как Bacillus.
Микроскопических клещей, поражающих расплод, собирали из сот (или кусочков сот) в колониях пчел, зараженных микроскопическими клещами из рода Varroa. Микроскопических клещей собирали из ячеек, в которых развиваются личинки пчел.
Микроскопических клещей из рода Varroa разделяли на группы по возрасту их хозяев в расплоде и анализировали по отдельности. Возраст расплода определяли на основании морфологических характеристик и пигментации личинок или куколок следующим образом: микроскопических клещей из рода Varroa, собранных из закрученных личинок, которые были достаточно маленькими для того, чтобы передвигаться по своей ячейке, помещали в группу 1; микроскопических клещей из рода Varroa, собранных из выпрямленных личинок, которые были слишком большими, чтобы лежать в ячейке, и начинали вытягиваться прямо с помощью своего ротового аппарата в направлении отверстия ячейки, помещали в группу 2; и микроскопических клещей из рода Varroa, собранных из куколок, помещали в группу 3. Микроскопических клещей хранили на личинках или куколках их хозяев в стеклянных чашках Петри до тех пор, пока не собирали 50 единиц. Это обеспечивало сохранение неизменным их стандартных условий питания и физиологического состояния. Чтобы предупредить отделение микроскопических клещей от личинок или куколок их хозяев или заползание друг на друга, в одной и той же чашке содержали только хозяев на одной и той же стадии развития.
2
Устройство – кольцо из нержавеющей стали (внутренний диаметр 56 мм, высота 2–3 мм) и 2 стеклянных круга (диаметр 62 мм) – очищали ацетоном и гексаном или пентаном с образованием испытательной арены. Растворы окситетрациклина и контрольный раствор наносили на устройство путем однородного распыления на стеклянные диски и кольцо арены. Для этого в резервуар загружали 1 мл растворов; устанавливали расстояние от опрыскиваемой поверхности до дна пробирки на 11 мм, и использовали форсунку на 0,0275 дюйма. Давление регулировали (обычно в диапазоне 350–500 гПа) до тех пор, пока количество отложенного раствора не составляло 1 ± 0,05 мг/см. Растворы антибиотика выливали в соответствующие чашки, покрывая все дно чашек, а остаточную жидкость выпаривали под вытяжным устройством. Кольцо помещали между стеклянными кругами, образуя камеру. Камеры использовали в течение 60 часов после приготовления не более чем для трех анализов в целях контроля воздействия растворов антибиотика на микроскопических клещей. В эту камеру вводили от 10 до 15 микроскопических клещей из рода Varroa, и части устройства соединяли вместе каплями расплавленного воска. Использовали микроскопических клещей, собранных из закрученных личинок, выпрямленных личинок, белоглазых куколок и темноглазых куколок с белыми и бледными тельцами.
Через 4 часа микроскопических клещей переносили на чистую стеклянную чашку Петри (диаметр 60 мм) с двумя или тремя белоглазыми куколками (через 45 дней после покрытия оболочкой) для вскармливания. Микроскопических клещей наблюдали под препаровальной лупой через 4 часа, 24 часа и 48 часов после обработки антибиотиком или контрольными растворами и классифицировали в соответствии со следующими категориями:
Подвижные: они передвигались на своих конечностях, вне зависимости от того, тыкали ли в них иглой.
Парализованные: они двигали одним или несколькими придатками, без стимуляции или после стимуляции, однако они не могли передвигаться.
Мертвые: неподвижные и не реагировали на 3 последовательные стимуляции.
Стерильную зубочистку или иглу использовали для стимуляции микроскопических клещей путем прикасания к их конечностям. Новые зубочистки или стерильные иглы использовали для стимуляции каждой группы для избежания контаминации между группами микроскопических клещей.
Анализы проводили при 32,5°C и относительной влажности 6070%. Если смертность контрольных особей превышала 30%, то повторность исключали. Каждый эксперимент повторяли с использованием четырех серий камер.
Bacillus
Bacillus
23S–5S рРНК
Bacillus
J. Bacteriol.
Статус в группах микроскопических клещей из рода Varroa оценивали с помощью ПЦР. Общую ДНК выделяли из контрольных (не обработанных окситетрациклином) и обработанных окситетрациклином особей (целого тела) с помощью набора для выделения ДНК (OMEGA, Bio–tek) в соответствии с протоколом производителя. Праймеры для , прямой праймер 5′–GAGGTAGACGAAGCGACCTG–3′ (SEQ ID NO: 226) и обратный праймер 5′–TTCCCTCACGGTACTGGTTC–3′ (SEQ ID NO: 227), разрабатывали на основе последовательностей , полученных из генома (номер доступа: AP007209.1) (Takeno et al., 194(17):4767–4768, 2012) с использованием программного обеспечения Primer 5.0 (Primer–E Ltd., Плимут, Великобритания). Циклы ПЦР–амплификации включали в себя начальный этап денатурации при 95°C в течение 5 минут, 35 циклов при 95°C в течение 1 минуты, при 59°C в течение 1 минуты и при 72°C в течение 2 минут и конечный этап элонгации в течение 5 минут при 72°C. Продукты амплификации из обработанных окситетрациклином и контрольных образцов анализировали на 1% агарозных гелях, окрашивали с помощью SYBR Safe и визуализировали с использованием системы визуализации.
Показатели выживаемости микроскопических клещей из рода Varroa, обработанных раствором окситетрациклина, сравнивали с микроскопическими клещами из рода Varroa, обработанными отрицательным контролем.
Предполагается, что показатели выживаемости и подвижность микроскопических клещей из рода Varroa, обработанных раствором окситетрациклина, снижаются по сравнению с контролем.
Пример 8. Высокопроизводительный скрининг (HTS) в отношении молекул, целенаправленно воздействующих на
Buchnera
Buchnera
Данный пример демонстрирует идентификацию молекул, которые целенаправленно воздействуют на .
Схема эксперимента.
Buchnera
PLoS ONE
Buchnera
Для HTS в целях идентификации ингибиторов штаммов бактерий–мишеней использовали сбраживание сахарозы в среде pH–MMSuc (Ymele–Leki et al.,  7(2):e31307, 2012) для снижения pH среды. Индикаторы pH в среде обеспечивали спектрофотометрический контроль подкисления среды по изменению поглощения при 615 нм (A615). Штамм бактерий–мишеней, полученный из исходной культуры в глицерине, высевали на чашку с агаром LB и инкубировали в течение ночи при 37°C. Петлю для посева с клетками собирали, промывали три раза с помощью PBS и затем ресуспендировали в PBS при оптической плотности 0,015.
PLoS ONE
Для HTS 10 мкл суспензий этих бактериальных клеток разделяли на аликвоты в лунки 384–луночного планшета, содержащего 30 мкг среды pH–MMSuc и 100 нл фракции исследуемого соединения из библиотеки природных продуктов, содержащей предварительно фракционированные экстракты (39314 экстрактов, размещенных в 384–луночных планшетах) из источников–микроорганизмов, таких как эндофиты грибов, эндофиты бактерий, почвенные бактерии и морские бактерии, описанные в (Ymele–Leki et al.,  7(2):e31307, 2012). Для каждого анализа A615 измеряли после инкубирования при комнатной температуре через 6 часов и 20 часов. Этот этап является автоматизированным и валидированным в формате 384–луночного планшета с использованием спектрофотометра для многолуночных планшетов EnVisionTM для исследования всех фракций из библиотеки. Фракции, которые демонстрировали замедленное подкисление среды при сбраживании сахарозы и ингибируемый клеточный рост, выбирали для дальнейшей очистки и идентификации.
Пример 9. Выделение и идентификация молекул, специфичных в отношении
Buchnera
Buchnera
Данный пример демонстрирует выделение и идентификацию изолята из фракции, описанной в примере 8, который блокирует сбраживание сахарозы и ингибирует клеточный рост .
Схема эксперимента.
Фракцию, описанную в примере 8, ресуспендировали в 90% смеси вода/метанол и пропускали через колонку C18 SPE с получением фракции I. Затем колонку промывали метанолом с получением фракции II. Фракцию II отделяли с помощью системы для HPLC серии Agilent 1100 на колонке для препаративной хроматографии с фенилгексилом (Phenomenex, Luna, 25 см, 610 мм, размер частиц 5 мм) с использованием буфера для элюирования со смесью 20% ацетонитрил/вода с 0,1% муравьиной кислотой при скорости потока 2 мл/мин. в течение 50 минут. Это приводило к образованию многочисленных соединений с различными значениями времени элюирования. Спектры для каждого соединения получали на масс–спектрометре Alpha FT–IR (Bruker), спектрофотометре для УФ/видимой области спектра UltrospecTM 5300 pro (Amersham Biosciences) и ядерно–магнитном резонансном спектрометре INOVA на 600 МГц (Varian).
Пример 10. Обработка тлей раствором молекулы, специфичной в отношении
Buchnera
Buchnera
Данный пример демонстрирует способность уничтожать или снижать приспособленность тлей посредством обработки их одним из соединений, идентифицированных в примере 9, благодаря модулированию популяций бактерий, эндогенных по отношению к тлям, которые являются восприимчивыми к этому соединению. Одним штаммом бактерий–мишеней является.
Схема терапии.
Каждое из соединений из примера 9 составляли при 0 (отрицательный контроль), 0,6, 1, 20 или 80 мкг/мл в 10 мл стерильной воды с 0,5% сахарозой и незаменимыми аминокислотами.
Схема эксперимента
Для подготовки к обработке тлей выращивали в лабораторных условиях и среде. В комнате с контролируемым климатом (фотопериод с 16 ч. света; 60±5% RH; 20±2°C) растения конских бобов выращивали в смеси вермикулита и перлита при 24°C при 16 ч. света и 8 ч. темноты. Для ограничения материнских эффектов или различий в состоянии здоровья между растениями 5–10 взрослых особей из разных растений распределяли среди 10 растений в возрасте двух недель и оставляли размножаться до высокой плотности в течение 5–7 дней. Для экспериментов тлей на стадии личинок второго и третьего возраста собирали из здоровых растений и разделяли по видам обработки таким образом, что для каждого вида обработки получали примерно одно и то же число особей с каждого из растений коллекции.
Canadian Journal of Zoology
Лунки 96–луночного планшета заполняли 200 мкл искусственного рациона для тлей (Febvay et al.,  66(11):2449–2453, 1988), и планшет закрывали парафильмом для получения съедобного саше. Искусственный рацион смешивали со стерильной водой с 0,5% сахарозой и незаменимыми аминокислотами в качестве отрицательного контроля или растворами с различными концентрациями соединения.
Для каждой повторности обработки 30–50 тлей на стадии личинок второго и третьего возраста помещали отдельно в лунки 96–луночного планшета, и планшет со съедобным саше переворачивали над ними, что позволяло насекомым питаться через парафильм и оставаться ограниченными отдельными лунками. Экспериментальных тлей содержали при тех же самых условиях окружающей среды, что и колонии тлей. После того, как тлей вскармливали в течение 24 часов, съедобное саше заменяли новым, содержащим стерильный искусственный рацион, и новое стерильное саше предоставляли каждые 24 часа в течение 4 дней. Когда саше заменяли, тлей также проверяли в отношении смертности. Тлю считали мертвой, если она становилась коричневой или располагалась на дне лунки и не двигалась во время наблюдения. Если тля находилась на парафильме съедобного саше, но не двигалась, она считалась кормящейся и живой.
Buchnera
Buchnera
23S–5S рРНК
Buchnera
Nature
Buchnera
Статус в образцах от тлей оценивали с помощью ПЦР. Тлей из групп отрицательного контроля и обработки соединением 1 вначале подвергали поверхностной стерилизации 70% этанолом в течение 1 минуты, 10% отбеливателем в течение 1 минуты и тремя промывками сверхчистой водой в течение 1 минуты. Общую ДНК экстрагировали из каждой особи (всего тела) с помощью набора для выделения ДНК насекомых (OMEGA, Bio–tek) в соответствии с протоколом производителя. Праймеры для , прямой праймер 5′–GTCGGCTCATCACATCC–3′ (SEQ ID NO: 221) и обратный праймер 5′–TTCCGTCTGTATTATCTCCT–3′ (SEQ ID NO: 222), разрабатывали на основе последовательностей , полученных из генома (номер доступа: GCA_000009605.1) (Shigenobu et al., 407:81–86, 2000) с использованием программного обеспечения Primer 5.0 (Primer–E Ltd., Плимут, Великобритания). Циклы ПЦР–амплификации включали в себя начальный этап денатурации при 95°C в течение 5 минут, 35 циклов при 95°C в течение 30 секунд, при 55°C в течение 30 секунд и при 72°C в течение 60 секунд и конечный этап элонгации в течение 10 минут при 72°C. Продукты амплификации из обработанных соединением 1 и контрольных образцов анализировали на 1% агарозных гелях, окрашивали с помощью SYBR Safe и визуализировали с использованием системы визуализации. Снижение экспрессии генов, специфичных для , указывало на противомикробную активность соединения 1.
Показатель выживаемости тлей, обработанных соединением, сравнивали с тлями, обработанными отрицательным контролем. Предполагается, что снижение показателя выживаемости тлей, обработанных соединением, указывало на противомикробную активность соединения.
Пример 11. Тли, обработанные раствором антибиотика
Buchnera
Данный пример демонстрирует обработку тлей рифампицином, антибиотиком узкого спектра действия, который ингибирует ДНК–зависимый синтез РНК путем ингибирования бактериальной РНК–полимеразы. Данный пример демонстрирует, что влияние рифампицина на тлей опосредовано модулированием популяций бактерий, эндогенных по отношению к тлям, которые являются восприимчивыми к рифампицину. Одним штаммом бактерий–мишеней является.
Тли представляют собой насекомых, являющихся сельскохозяйственными вредителями, причиняющими вред растению в результате кормления и выступающими в качестве переносчиков вирусов растений. Помимо этого, медвяная падь тлей способствует росту плесневых налетов грибов и привлекает вредоносных муравьев. Применение средств химической обработки, к сожалению, по–прежнему остается широко распространенным, что приводит к отбору устойчивых особей, уничтожение которых становится все более сложным.
Схема терапии
Раствор антибиотика составляли в соответствии со способом доставки следующим образом (фиг. 1A–1G).
Схема эксперимента
1) Через растения: с 0 (отрицательный контроль) или 100 мкг/мл рифампицина, составленного в искусственном рационе (согласно Akey and Beck, 1971; см. раздел ) с незаменимыми аминокислотами и без них (2 мг/мл гистидина, 2 мг/мл изолейцина, 2 мг/мл лейцина, 2 мг/мл лизина, 1 мг/мл метионина, 1,62 мг/мл фенилаланина, 2 мг/мл треонина, 1 мг/мл триптофана и 2 мг/мл валина).
2) Покрытие листьев: 100 мкл 0,025% неионогенного кремнийорганического поверхностно–активного растворителя Silwet L–77 в воде (отрицательный контроль) или 100 мкл 50 мкг/мл рифампицина, составленного в растворе растворителя, применяли непосредственно в отношении поверхности листьев и оставляли высыхать.
3) Микроинъекция: растворы для инъекций представляли собой 0,025% неионогенный кремнийорганический поверхностно–активный растворитель Silwet L–77 в воде (отрицательный контроль) или 50 мкг/мл рифампицина, составленного в растворе растворителя.
4) Местная доставка: 100 мкл 0,025% неионогенного кремнийорганического поверхностно–активного растворителя Silwet L–77 (отрицательный контроль) или 50 мкг/мл рифампицина, составленного в растворе растворителя, распыляли с помощью аэрозольного флакончика на 30 мл.
5) Способ А инъекции в листья – заливание в листья и разрезание листьев: в листья инъецировали примерно 1 мл 50 мкг/мл рифампицина в воде с пищевым красителем или примерно 1 мл отрицательного контроля с водой и пищевым красителем. Листья нарезали на квадратные кусочки размером 2×2 см, и тлей помещали на кусочки листьев.
6) Заливание в листья и доставка через растение: в листья инъецировали примерно 1 мл 100 мкг/мл рифампицина в воде с пищевым красителем или примерно 1 мл отрицательного контроля с водой и пищевым красителем. Черешок листа, в который была произведена инъекция, затем помещали в пробирку Eppendorf с 1 мл 100 мкг/мл рифампицина с водой и пищевым красителем или 1 мл отрицательного контроля, содержащего только воду и пищевой краситель.
7) Комбинированный способ доставки: a) местная доставка тлям и растениям: путем распыления как на тлей, так и на растения 0,025% неионогенного кремнийорганического поверхностно–активного растворителя Silwet L–77 в воде (отрицательный контроль) или 100 мкг/мл рифампицина, составленного в растворе растворителя, с помощью аэрозольного флакончика на 30 мл, b) доставка через растение: только вода (отрицательный контроль) или 100 мкг/мл рифампицина, составленного в воде.
Доставка через растения – схема эксперимента
Acyrthosiphon pisum
Vroma vicia
Тлей (линии LSR–1, ) выращивали на растениях конских бобов (бобы  от Johnny's Selected Seeds) в инкубаторе с контролируемым климатом (фотопериод с 16 ч. света/8 ч. темноты; 60±5% RH; 25±2°C). Перед использованием для выкармливания тлей растения конских бобов выращивали в почвенной смеси для горшечных культур при 24°C при 16 ч. света и 8 ч. темноты. Для ограничения материнских эффектов или различий в состоянии здоровья между растениями 5–10 взрослых особей из разных растений распределяли среди 10 растений в возрасте двух недель и оставляли размножаться до высокой плотности в течение 5–7 дней. Для экспериментов тлей на стадии личинок первого возраста собирали со здоровых растений и разделяли на 3 различные группы обработки: 1) только искусственный рацион без незаменимых аминокислот, 2) только искусственный рацион без незаменимых аминокислот и 100 мкг/мл рифампицина и 3) искусственный рацион с незаменимыми аминокислотами и 100 мкг/мл рифампицина. Для каждой группы обработки получали примерно одно и то же число особей с каждого из растений коллекции.
Acyrthosiphon pisum
Используемый искусственный рацион готовили, как описано ранее (Akey and Beck, 1971 Continuous Rearing of the Pea Aphid, , on a Holidic Diet), с незаменимыми аминокислотами и без них (2 мг/мл гистидина, 2 мг/мл изолейцина, 2 мг/мл лейцина, 2 мг/мл лизина, 1 мг/мл метионина, 1,62 мг/мл фенилаланина, 2 мг/мл треонина, 1 мг/мл триптофана и 2 мг/мл валина), за исключением того, что ни в одном случае рацион не включал гомосерин или бета–аланилтирозин. Значение pH рационов доводили до 7,5 с помощью KOH, и рационы стерилизовали фильтрацией с помощью фильтра с размером пор 0,22 мкм и хранили при 4°C в течение короткого срока (<7 дней) или при –80°C в течение длительного срока.
Схема терапии
Исходные растворы рифампицина (Tokyo Chemical Industry, LTD) готовили в концентрации 25 мг/мл в метаноле, стерилизовали путем пропускания через шприцевой фильтр с размером пор 0,22 мкм и хранили при –20°C. Для обработок (см. раздел ) подходящее количество исходного раствора добавляли к искусственному рациону с незаменимыми аминокислотами или без них с получением конечной концентрации 100 мкг/мл рифампицина. Рацион затем помещали в пробирку Eppendorf на 1,5 мл с черешком и листом конских бобов, и отверстие пробирки закрывали парафильмом. Эту систему вскармливания искусственным рационом затем помещали в глубокую чашку Петри (Fisher Scientific, № по кат. FB0875711), и тлей наносили на листья растения.
Для каждой обработки на каждый лист помещали 33 тли. Системы вскармливания искусственным рационом заменяли каждые 2–3 дня на протяжении всего эксперимента. У тлей ежедневно отслеживали выживаемость, и мертвых тлей удаляли из глубокой чашки Петри, в которой содержалась система вскармливания искусственным рационом, в случае их обнаружения.
–го
–го
–го
–го
–го
–го
Помимо этого, стадию развития (личинки 1, 2, 3, 4, 5 возраста) определяли ежедневно на протяжении всего эксперимента. При достижении тлями стадии личинок 4 возраста им предоставляли их собственные искусственные системы вскармливания в глубокой чашке Петри для того, чтобы можно было контролировать плодовитость, как только они достигали зрелого возраста.
В случае взрослых тлей новых нимф считали ежедневно и затем исключали. В конце экспериментов плодовитость определяли в виде среднего числа потомков, образуемых ежедневно после достижения тлей зрелого возраста. Снимки тлей получали на протяжении всего эксперимента для оценивания различий в размерах между группами обработки.
Buchnera
Buchnera
Через 7 дней после обработки ДНК экстрагировали из нескольких тлей из каждой группы обработки. Вкратце, поверхность тела тлей стерилизовали путем погружения тли в 6% раствор отбеливателя примерно на 5 секунд. Затем тлей промывали в стерильной воде, и ДНК экстрагировали из каждой отдельной тли с помощью набора для экстракции ДНК (Qiagen, набор DNeasy) в соответствии с инструкциями производителя. Концентрацию ДНК измеряли посредством количественной оценки нуклеиновой кислоты с использованием NanoDrop, и число копий ДНК  и тлей измеряли с помощью qPCR. Праймерами, используемыми для , были Buch_groES_18F (CATGATCGTGTGCTTGTTAAG; SEQ ID NO: 228) и Buch_groES_98R (CTGTTCCTCGAGTCGATTTCC; SEQ ID NO: 229) (Chong and Moran, 2016 PNAS). Праймерами, используемыми для тлей, были ApEF1a 107F (CTGATTGTGCCGTGCTTATTG; SEQ ID NO: 230) и ApEF1a 246R (TATGGTGGTTCAGTAGAGTCC; SEQ ID NO: 231) (Chong and Moran, 2016 PNAS). qPCR проводили с использованием скорости линейного изменения для qPCR–амплификации 1,6 градуса C/с и следующих условий: 1) 95°C в течение 10 минут, 2) 95°C в течение 15 секунд, 3) 55°C в течение 30 секунд, 4) повторение этапов 2–3 40x, 5) 95°C в течение 15 секунд, 6) 55°C в течение 1 минуты, 7) изменение скорости линейного изменения до 0,15 градуса C/с, 8) 95°C в течение 1 секунды. Данные qPCR анализировали с помощью аналитического программного обеспечения (Thermo Fisher Scientific, QuantStudio Design and Analysis).
Обработка антибиотиками задерживает и останавливает прогрессирование развития тлей
–го
–го
–го
Схема эксперимента
Тлей LSR–1 на стадии личинок 1 возраста разделяли на три отдельные группы обработки, как определено в разделе (выше). Тлей отслеживали ежедневно, и определяли число тлей на каждой стадии развития. Тли, обработанные только искусственным рационом без незаменимых аминокислот, начинали достигать зрелого возраста (стадии личинок 5 возраста) примерно через 6 дней (фиг. 2A). Развитие задерживалось у тлей, обработанных рифампицином, и через 6 дней после обработки большинство тлей не дозревали дальше чем до стадии личинок 3 возраста, и даже через 12 дней их размер подвергался существенному отрицательному влиянию (фиг. 2A–2C).
В отличие от этого, тли, обработанные искусственным рационом с рифампицином с добавлением незаменимых аминокислот, развивались быстрее и достигали стадий личинок более позднего возраста по сравнению с тлями, обработанными только рифампицином, однако не так быстро, как тли, обработанные искусственным рационом без незаменимых аминокислот (фиг. 2A–2C). Эти данные указывают на то, что обработка рифампицином ухудшала развитие тлей. Добавление незаменимых аминокислот обратно частично устраняло этот дефект развития.
Обработка антибиотиками повышала смертность тлей
Показатель выживаемости тлей также измеряли в ходе обработок. Большинство тлей, обработанных только искусственным рационом без незаменимых аминокислот, были живыми через 5 дней после обработки (фиг. 3). Через 5 дней тли начинали постепенно погибать, а некоторые выживали по истечении 13 дней после обработки.
В отличие от этого, тли, обработанные рифампицином без незаменимых аминокислот, имели более низкие показатели выживаемости, чем тли, обработанные только искусственным рационом (p<0,00001). Тли, обработанные рифампицином, начинали погибать через 1 день после обработки, и все тли погибали вследствие обработки через 9 дней. Тли, обработанные как рифампицином, так и незаменимыми аминокислотами, выживали дольше, чем тли, обработанные только рифампицином (p=0,017). Эти данные указывают на то, что обработка рифампицином отрицательно влияла на выживаемость тлей.
Обработка антибиотиками снижала интенсивность размножения тлей
В ходе обработок также отслеживали плодовитость тлей. Через 7 и 8 дней после обработки большинство взрослых тлей, обработанных искусственным рационом без незаменимых аминокислот, начинали размножаться. Среднее число потомков, образуемых ежедневно после достижения зрелого возраста тлями, обработанными искусственным рационом без добавления незаменимых аминокислот, составляло примерно 4 (фиг. 4). В отличие от этого, тли, обработанные рифампицином с незаменимыми аминокислотами или без них, были неспособны достигать зрелого возраста и образовывать потомство. Эти данные указывают на то, что обработка рифампицином приводила к утрате способности к размножению у тлей.
Обработка антибиотиками снижала количество Buchnera у тлей
Buchnera
Buchnera
Buchnera
Buchnera
Buchnera
В частности, для исследования того, приводил ли рифампицин к потере  у тлей и влияла ли эта потеря на приспособленность тлей, ДНК экстрагировали из тлей в каждой группе обработки через 7 дней после обработки, и проводили qPCR для определения числа копий /тлей. Тли, обработанные только искусственным рационом без незаменимых аминокислот, имели высокие соотношения числа копий ДНК /тлей. В отличие от этого, тли, обработанные рифампицином, имели в ~4 раза меньше копий ДНК /тлей (фиг. 5), что указывало на то, что обработка рифампицином снижала уровни .
Доставка путем покрытия листьев – схема эксперимента
Acyrthosiphon pisum
Исходный раствор рифампицина добавляли к 0,025% неионогенного кремнийорганического поверхностно–активного растворителя Silwet L–77 с получением конечной концентрации 50 мкг/мл рифампицина. Тлей (линии eNASCO, ) выращивали на растениях конских бобов, как описано в предыдущем примере. Для экспериментов тлей на стадии личинок первого возраста собирали со здоровых растений и разделяли на 2 различные группы обработки: листья опрыскивали 1) отрицательным контролем (только раствором растворителя), 2) 50 мкг/мл рифампицина в растворителе. Растворы поглощались кусочком листа конских бобов размером 2×2 см.
–го
–го
–го
–го
–го
–го
Для каждой группы обработки получали примерно одно и то же число особей с каждого из растений коллекции. Для каждой обработки на каждый лист помещали 20 тлей. У тлей ежедневно отслеживали выживаемость, и мертвых тлей удаляли в случае их обнаружения. Помимо этого, стадию развития (личинки 1, 2, 3, 4, 5 возраста и 5R, что обозначает размножающуюся личинку 5 возраста) определяли ежедневно на протяжении всего эксперимента. Снимки тлей получали на протяжении всего эксперимента для оценивания различий в размерах между группами обработки.
Buchnera
Через 6 дней после обработки ДНК экстрагировали из нескольких тлей из каждой группы обработки, и qPCR для количественной оценки уровней проводили, как описано в предыдущем примере.
Обработка антибиотиками, доставляемыми посредством покрытия листьев, задерживает и останавливает прогрессирование развития тлей
–го
–го
–го
Схема эксперимента
Тлей LSR–1 на стадии личинок 1 возраста разделяли на две отдельные группы обработки, как определено в разделе , что описано в данном документе. Тлей отслеживали ежедневно, и определяли число тлей на каждой стадии развития. Тли, помещенные на покрытые листья, обработанные контролем, начинали достигать зрелого возраста (стадии размножающихся личинок 5 возраста; 5R) примерно через 6 дней (фиг. 6A). Развитие задерживалось у тлей, помещенных на листья, покрытые рифампицином, и через 6 дней после обработки большинство тлей не дозревали дальше чем до стадии личинок 3 возраста, и даже через 12 дней их размер подвергался существенному отрицательному влиянию (фиг. 6A и 6B).
Эти данные указывают на то, что покрытие листьев рифампицином ухудшало развитие тлей.
Обработка антибиотиками, доставляемыми посредством покрытия листьев, повышала смертность тлей
Показатель выживаемости тлей также измеряли в ходе обработок путем покрытия листьев. Тли, помещенные на листья, покрытые рифампицином, имели более низкие показатели выживаемости, чем тли, помещенные на листья, покрытые контролем (фиг. 7). Эти данные указывают на то, что обработка рифампицином, доставляемым посредством покрытия листьев, отрицательно влияла на выживаемость тлей.
Обработка антибиотиками, доставляемыми посредством покрытия листьев, снижала количество Buchnera у тлей
Buchnera
Buchnera
В частности, для исследования того, приводил ли рифампицин, доставляемый посредством покрытия листьев, к потере  у тлей и влияла ли эта потеря на приспособленность тлей, ДНК экстрагировали из тлей в каждой группе обработки через 6 дней после обработки, и проводили qPCR для определения числа копий /тлей.
Buchnera
Buchnera
Buchnera
Тли, помещенные на листья, обработанные контролем, имели высокие соотношения числа копий ДНК /тлей. В отличие от этого, тли, помещенные на листья, обработанные рифампицином, характеризовались существенным снижением числа копий ДНК /тлей (фиг. 8), что указывало на то, что обработка путем покрытия листьев рифампицином устраняла эндосимбиотические .
Доставка путем микроинъекции – схема эксперимента
Acyrthosiphon pisum
Микроинъекцию осуществляли с помощью автоматического нанолитрового инъектора NanoJet III с выдвижной иглой из боросиликатного стекла собственного изготовления (Drummond Scientific; № по кат. 3–000–203–G/XL). Тлей (линии eNASCO, ) выращивали на растениях конских бобов, как описано в предыдущем примере. Тлей переносили с помощью малярной кисти в трубную систему, подсоединенную к вакууму (фиг. 1C). Место инъекции находилось в вентральной части груди тли. Растворы для инъекций представляли собой 0,025% неионогенный кремнийорганический поверхностно–активный растворитель Silwet L–77 (Lehle Seeds, № по кат. VIS–01) в воде (отрицательный контроль) или 50 мкг/мл рифампицина, составленного в растворе растворителя. Объем инъекции составлял 10 нл для нимфы и 20 нл для взрослой особи (в обоих случаях при скорости 2 нл/с). В каждой группе обработки было примерно одно и то же число получивших инъекцию особей с каждого из растений коллекции. После инъекции тлей выпускали в чашку Петри с листьями конских бобов, черешки которых находились в 2% агаре.
Обработка антибиотиками путем микроинъекции снижала количество Buchnera у тлей
Buchnera
Buchnera
Для исследования того, приводил ли рифампицин, доставляемый посредством микроинъекции, к потере  у тлей и влияла ли эта потеря на приспособленность тлей, как было продемонстрировано в предыдущих примерах, ДНК экстрагировали из тлей в каждой группе обработки через 4 дня после обработки, и проводили qPCR, как описано в предыдущем примере, для определения числа копий /тлей.
Buchnera
Buchnera
Buchnera
Тли, получившие микроинъекцию отрицательного контроля, имели высокие соотношения числа копий ДНК /тлей. В отличие от этого, нимфы и взрослые особи тлей, получившие микроинъекцию рифампицина, характеризовались существенным снижением числа копий ДНК /тлей (фиг. 9), что указывало на то, что обработка путем микроинъекции рифампицина уменьшала присутствие эндосимбиотических .
Местная доставка – схема эксперимента
Acyrthosiphon pisum
Тлей (линии LSR–1, ) выращивали на растениях конских бобов, как описано в предыдущем примере. Аэрозольные флакончики наполняли 2 мл контроля (0,025% Silwet L–77) или растворами рифампицина (50 мкг/мл в растворе растворителя). Тлей (число=10) переносили на дно чистой чашки Петри и собирали на краю чашки Петри с помощью малярной кисти. Затем тлей разделяли на две когорты и опрыскивали ~100 мкл контрольного раствора или раствора рифампицина. Непосредственно после распыления чашку Петри закрывали крышкой. Через пять минут после распыления тлей выпускали в чашку Петри с листьями конских бобов, при этом черешки находились в 2% агаре.
Обработка антибиотиками путем местной доставки снижала количество Buchnera у тлей
Buchnera
Buchnera
Для исследования того, приводил ли рифампицин, доставляемый посредством местной доставки, к потере  у тлей и влияла ли эта потеря на приспособленность тлей, как было продемонстрировано в предыдущих примерах, ДНК экстрагировали из тлей в каждой группе обработки через 3 дня после обработки, и проводили qPCR, как описано в предыдущем примере, для определения числа копий /тлей.
Buchnera
Buchnera
Buchnera
Тли, опрысканные контрольным раствором, имели высокие соотношения числа копий ДНК /тлей. В отличие от этого, тли, опрысканные рифампицином, характеризовались существенным снижением числа копий ДНК /тлей (фиг. 10), что указывало на то, что обработка рифампицином, доставляемым посредством местной обработки, снижала присутствие эндосимбиотических .
Способ А инъекции в листья – заливание в листья и разрезание листьев
Схема эксперимента
Buchnera
Acyrthosiphon pisum
Vroma vicia
–го
–го
–го
–го
–го
–го
Тлей LSR–1 (в которых содержатся только )  выращивали на растениях конских бобов (бобы  от Johnny's Selected Seeds) в инкубаторе с контролируемым климатом (фотопериод с 16 ч. света/8 ч. темноты; 60±5% RH; 25±2°C). Перед использованием для выкармливания тлей растения конских бобов выращивали в почвенной смеси для горшечных культур при 24°C при 16 ч. света и 8 ч. темноты. Для ограничения материнских эффектов или различий в состоянии здоровья между растениями 5–10 взрослых особей из разных растений распределяли среди 10 растений в возрасте двух недель и оставляли размножаться до высокой плотности в течение 5–7 дней. Для экспериментов тлей на стадии личинок первого и второго возраста собирали со здоровых растений и разделяли на 2 различные группы обработки: 1) отрицательный контроль (лист, в который была произведена инъекция воды с синим пищевым красителем) и 2) лист, в который была произведена инъекция 50 мкг/мл рифампицина в воде с синим пищевым красителем. Для каждой группы обработки получали примерно одно и то же число особей с каждого из растений коллекции. Для обработки исходный раствор рифампицина (25 мг/мл в 100% метаноле) разбавляли до 50 мкг/мл в воде с синим пищевым красителем. Раствор затем помещали в пробирку Eppendorf на 1,5 мл с черешком конских бобов, залитым растворами, и отверстие пробирки закрывали парафильмом. Эту систему вскармливания затем помещали в глубокую чашку Петри (Fisher Scientific, № по кат. FB0875711), и тлей наносили на листья растения. Для каждой обработки на каждый лист помещали 74–81 тлю. Системы вскармливания заменяли каждые 2–3 дня на протяжении всего эксперимента. У тлей ежедневно отслеживали выживаемость, и мертвых тлей удаляли из глубокой чашки Петри в случае их обнаружения. Помимо этого, стадию развития (личинки 1, 2, 3, 4, 5 возраста и 5R (размножающиеся личинки 5 возраста)) определяли ежедневно на протяжении всего эксперимента.
Обработка антибиотиками, доставляемыми посредством способа А инъекции в листья, задерживает и останавливает прогрессирование развития тлей
Тлей LSR–1 на стадии личинок 1–го и 2–го возраста разделяли на две отдельные группы обработки, как определено в разделе Способ А инъекции в листья – Заливание в листья и разрезание листьев: схема эксперимента (что описано в данном документе). Тлей отслеживали ежедневно, и определяли число тлей на каждой стадии развития. Тли, обработанные водой с пищевым красителем, начинали достигать зрелого возраста (стадии личинок 5–го возраста) примерно через 6 дней (фиг. 11). Развитие задерживалось у тлей, вскармливаемых на листьях, в которые была произведена инъекция рифампицина, а через 6 дней после обработки большинство тлей не дозревали дальше чем до стадии личинок 4–го возраста. Даже через 8 дней развитие тлей, вскармливаемых на листьях, в которые была произведена инъекция рифампицина, существенно задерживалось (фиг. 11). Эти данные указывают на то, что обработка рифампицином путем заливания в листья ухудшала развитие тлей.
Обработка антибиотиками, доставляемыми посредством способа А инъекции в листья, повышала смертность тлей
Показатель выживаемости тлей также измеряли в ходе экспериментов по заливанию в листья. Тли, помещенные на листья, в которые была произведена инъекция рифампицина, имели более низкие показатели выживаемости, чем тли, помещенные на листья, в которые была произведена инъекция контрольного раствора (фиг. 12). Эти данные указывают на то, что обработка рифампицином, доставляемым посредством инъекции в листья, отрицательно влияла на выживаемость тлей.
Обработка антибиотиками, доставляемыми посредством способа А инъекции в листья, приводит к сниженным уровням Buchnera
Buchnera
Buchnera
Для исследования того, приводил ли рифампицин, доставляемый посредством заливания в листья, к потере  у тлей и влияла ли эта потеря на приспособленность тлей, как было продемонстрировано в предыдущих примерах, ДНК экстрагировали из тлей в каждой группе обработки через 8 дней после обработки, и проводили qPCR, как описано в предыдущем примере, для определения числа копий /тлей.
Buchnera
Buchnera
Buchnera
Тли, вскармливаемые на листьях, в которые была произведена инъекция контрольного раствора, имели высокие соотношения числа копий ДНК /тлей. В отличие от этого, тли, вскармливаемые на листьях, в которые была произведена инъекция рифампицина, характеризовались снижением числа копий /тлей (фиг. 13), что указывало на то, что обработка рифампицином, доставляемым посредством инъекции в листья, уменьшала присутствие эндосимбиотических , как показано в предыдущих примерах, и приводила к снижению приспособленности.
Заливание в листья и доставка через растение
Схема эксперимента
Buchnera
Acyrthosiphon pisum
Vroma vicia
Тлей LSR–1 (в которых содержатся только )  выращивали на растениях конских бобов (бобы  от Johnny's Selected Seeds) в инкубаторе с контролируемым климатом (фотопериод с 16 ч. света/8 ч. темноты; 60±5% RH; 20±2°C). Перед использованием для выкармливания тлей растения конских бобов выращивали в почвенной смеси для горшечных культур при 24°C при 16 ч. света и 8 ч. темноты.
Для ограничения материнских эффектов или различий в состоянии здоровья между растениями 5–10 взрослых особей из разных растений распределяли среди 10 растений в возрасте двух недель и оставляли размножаться до высокой плотности в течение 5–7 дней. Для экспериментов тлей на стадии личинок первого и второго возраста собирали со здоровых растений и разделяли на 2 различные группы обработки: 1) тли, помещенные на листья, в которые была произведена инъекция раствора отрицательного контроля (вода и пищевой краситель), и помещенные в пробирку Eppendorf с раствором отрицательного контроля, или 2) тли, помещенные на листья, в которые была произведена инъекция 100 мкг/мл рифампицина в воде с пищевым красителем, и помещенные в пробирку Eppendorf со 100 мкг/мл рифампицина в воде. Для каждой группы обработки получали примерно одно и то же число особей с каждого из растений коллекции.
Для обработки исходный раствор рифампицина (25 мг/мл в 100% метаноле) разбавляли до 100 мкг/мл в воде с синим пищевым красителем. Раствор затем помещали в пробирку Eppendorf на 1,5 мл с черешком конских бобов, лист на котором также был залит растворами, и отверстие пробирки закрывали парафильмом. Эту систему вскармливания затем помещали в глубокую чашку Петри (Fisher Scientific, № по кат. FB0875711), и тлей наносили на листья растения.
Для каждой обработки на каждый лист помещали 49–50 тлей. Системы вскармливания заменяли каждые 2–3 дня на протяжении всего эксперимента. У тлей ежедневно отслеживали выживаемость, и мертвых тлей удаляли из глубокой чашки Петри в случае их обнаружения.
–го
–го
–го
–го
–го
–го
Помимо этого, стадию развития (личинки 1, 2, 3, 4, 5 возраста и 5R (размножающиеся личинки 5 возраста)) определяли ежедневно на протяжении всего эксперимента.
Обработка антибиотиками, доставляемыми посредством инъекции в листья и доставки через растение, задерживает и останавливает прогрессирование развития тлей
–го
–го
–го
Заливание в листья и доставка через растение – схема эксперимента
Тлей LSR–1 на стадии личинок 1 и 2 возраста разделяли на две отдельные группы обработки, как определено в разделе  (что описано в данном документе). Тлей отслеживали ежедневно, и определяли число тлей на каждой стадии развития. Тли, обработанные контрольным раствором (только водой с пищевым красителем), начинали достигать зрелого возраста (стадии личинок 5 возраста) примерно через 6 дней (фиг. 14).
Развитие задерживалось у тлей, обработанных рифампицином, а через 6 дней после обработки большинство тлей не дозревали дальше чем до стадии личинок 3–го возраста. Даже через 8 дней их развитие существенно задерживалось (фиг. 14). Эти данные указывают на то, что обработка рифампицином путем заливания в листья ухудшала развитие тлей.
Обработка антибиотиками, доставляемыми посредством инъекции в листья и доставки через растение, повышала смертность тлей
Показатели выживаемости тлей также измеряли в ходе экспериментов, в которых тлей обрабатывали контрольным раствором или рифампицином, доставляемым посредством заливания в листья и через растение. Тли, вскармливаемые на листьях, залитых и обработанных рифампицином, имели более низкие показатели выживаемости, чем тли, вскармливаемые на листьях, залитых и обработанных контрольным раствором (фиг. 15). Эти данные указывают на то, что обработка рифампицином, доставляемым посредством заливания в листья и через растение, отрицательно влияла на выживаемость тлей.
Обработка антибиотиками, доставляемыми посредством инъекции в листья и через растение, приводит к сниженным уровням Buchnera
Buchnera
Buchnera
Для исследования того, приводил ли рифампицин, доставляемый посредством заливания в листья и через растение, к потере  у тлей и влияла ли эта потеря на приспособленность тлей, как было продемонстрировано в предыдущих примерах, ДНК экстрагировали из тлей в каждой группе обработки через 6 и 8 дней после обработки, и проводили qPCR для определения числа копий /тлей, как описано в предыдущих примерах.
Buchnera
Buchnera
Buchnera
Тли, вскармливаемые на листьях, в которые была произведена инъекция контрольного раствора и которые были им обработаны, имели высокие соотношения числа копий ДНК /тлей. В отличие от этого, тли, вскармливаемые на листьях, залитых и обработанных рифампицином, характеризовались статистически значимым снижением числа копий ДНК /тлей в оба момента времени (p=0,0037 и p=0,0025, в дни 6 и 8 соответственно) (фиг. 16A и 16B), что указывало на то, что обработка рифампицином, доставляемым посредством заливания в листья и через растение, уменьшала присутствие эндосимбиотических  и, как показано в предыдущих примерах, приводила к снижению приспособленности.
Комбинированный способ доставки
Схема эксперимента
Buchnera
Acyrthosiphon pisum
Vroma vicia
Тлей LSR–1 (в которых содержатся только )  выращивали на растениях конских бобов (бобы  от Johnny's Selected Seeds) в инкубаторе с контролируемым климатом (фотопериод с 16 ч. света/8 ч. темноты; 60±5% RH; 20±2°C). Перед использованием для выкармливания тлей растения конских бобов выращивали в почвенной смеси для горшечных культур при 24°C при 16 ч. света и 8 ч. темноты. Для ограничения материнских эффектов или различий в состоянии здоровья между растениями 5–10 взрослых особей из разных растений распределяли среди 10 растений в возрасте двух недель и оставляли размножаться до высокой плотности в течение 5–7 дней.
Для экспериментов тлей на стадии личинок первого и второго возраста собирали со здоровых растений и разделяли на 2 различные группы обработки: 1) обработка раствором Silwet–L77 или контрольным раствором воды или 2) обработка рифампицином, разбавленным в Silwet L–77 или воде. Для каждой группы обработки получали примерно одно и то же число особей с каждого из растений коллекции. Комбинация способов доставки была следующей: a) местная доставка тлям и растениям путем распыления 0,025% неионогенного кремнийорганического поверхностно–активного растворителя Silwet L–77 (отрицательный контроль) или 100 мкг/мл рифампицина, составленного в растворе растворителя, с помощью аэрозольного флакончика на 30 мл и b) доставка через растение воды (отрицательного контроля) или 100 мкг/мл рифампицина, составленного в воде. Для обработки исходный раствор рифампицина (25 мг/мл в 100% метаноле) разбавляли до 100 мкг/мл в Silwet L–77 (для местной обработки тлей и покрытия листа) или воде (для доставки через растение). Раствор затем помещали в пробирку Eppendorf на 1,5 мл с черешком конских бобов, лист на котором также был залит растворами, и отверстие пробирки закрывали парафильмом. Эту систему вскармливания затем помещали в глубокую чашку Петри (Fisher Scientific, № по кат. FB0875711), и тлей наносили на листья растения.
Для каждой обработки на каждый лист помещали 76–80 тлей. Системы вскармливания заменяли каждые 2–3 дня на протяжении всего эксперимента. У тлей ежедневно отслеживали выживаемость, и мертвых тлей удаляли из глубокой чашки Петри в случае их обнаружения.
–го
–го
–го
–го
–го
–го
Помимо этого, стадию развития (личинки 1, 2, 3, 4, 5 возраста и 5R (размножающиеся личинки 5 возраста)) определяли ежедневно на протяжении всего эксперимента.
Комбинированная обработка антибиотиками задерживает развитие тлей
–го
–го
–го
–го
Комбинированный способ доставки – схема эксперимента
Тлей LSR–1 на стадии личинок 1 и 2 возраста разделяли на две отдельные группы обработки, как определено в разделе  (что описано в данном документе). Тлей отслеживали ежедневно, и определяли число тлей на каждой стадии развития. Тли, обработанные контролем, начинали достигать зрелого возраста (стадии личинок 5 возраста) примерно через 6 дней (фиг. 17). Развитие задерживалось у тлей, обработанных рифампицином, и через 6 дней после обработки большинство тлей не дозревали дальше чем до стадии личинок 3 возраста, и даже через 7 дней их развитие существенно задерживалось (фиг. 17). Эти данные указывают на то, что комбинация обработок рифампицином ухудшала развитие тлей.
Комбинированная обработка антибиотиками приводит к повышенной смертности тлей
Показатели выживаемости тлей также измеряли во время экспериментов, когда тлей обрабатывали с помощью комбинации обработок рифампицином. Тли, обработанные рифампицином, характеризовались немного более низкими показателями выживаемости, чем тли, обработанные контрольными растворами (фиг. 18). Эти данные указывают на то, что обработка рифампицином, доставляемым посредством комбинации обработок, отрицательно влияла на выживаемость тлей.
Комбинированная обработка антибиотиками снижала уровни Buchnera
Buchnera
Buchnera
Для исследования того, приводил ли рифампицин, доставляемый посредством комбинации способов, к потере  у тлей и влияла ли эта потеря на приспособленность тлей, как было продемонстрировано в предыдущих примерах, ДНК экстрагировали из тлей в каждой группе обработки через 7 дней после обработки, и проводили qPCR, как описано в предыдущем примере, для определения числа копий /тлей.
Buchnera
Buchnera
Buchnera
Тли, обработанные контрольными растворами, имели высокие соотношения числа копий ДНК /тлей. В отличие от этого, тли, обработанные рифампицином, характеризовались статистически значимым и существенным снижением числа копий /тлей (p=0,227; фиг. 19), что указывало на то, что обработка рифампицином, доставляемым посредством комбинации способов, уменьшала присутствие эндосимбиотических , и, как показано в предыдущих примерах, это приводило к снижению приспособленности.
В совокупности эти данные, описанные в предыдущих примерах, демонстрируют способность уничтожать тлей и уменьшать их интенсивность развития, способность к размножению, продолжительность жизни и эндогенные популяции бактерий, например, приспособленность, посредством их обработки антибиотиком с помощью нескольких способов доставки.
Пример 12. Тли, обработанные природным противомикробным полисахаридом
Buchnera aphidicola
Данный пример демонстрирует обработку тлей хитозаном, природным катионным линейным полисахаридом, состоящим из звеньев деацетилированного бета–1,4–D–глюкозамина, который является производным хитина. Хитин представляет собой структурный элемент экзоскелета насекомых, ракообразных (главным образом креветок и крабов) и клеточных стенок грибов, а также вторым наиболее распространенным полисахаридом после целлюлозы. Данный пример демонстрирует, что влияние хитозана на тлей опосредовано модулированием популяций бактерий, эндогенных по отношению к тлям, которые являются восприимчивыми к хитозану. Одним штаммом бактерий–мишеней является.
Тли представляют собой насекомых, являющихся сельскохозяйственными вредителями, причиняющими непосредственный вред растению в результате кормления и выступающими в качестве переносчиков вирусов растений. Помимо этого, медвяная падь тлей способствует росту плесневых налетов грибов и привлекает вредоносных муравьев. Применение средств химической обработки, к сожалению, по–прежнему остается широко распространенным, что приводит к отбору устойчивых особей, уничтожение которых становится все более сложным.
Схема терапии
Раствор хитозана составляли для использования в комбинации заливания в листья и доставки через растения (фиг. 20). Контрольный раствор инъецировали в листья с использованием воды+синего пищевого красителя и воды в пробирке. Раствор для обработки с 300 мкг/мл хитозана в воде (низкомолекулярного) вводили путем инъекции в листья (с синим пищевым красителем) и через растение (в пробирке Eppendorf).
Заливание в листья и доставка через растения – схема эксперимента
Buchnera
Acyrthosiphon pisum
Vroma vicia
Тлей LSR–1 (в которых содержатся только )  выращивали на растениях конских бобов (бобы  от Johnny's Selected Seeds) в инкубаторе с контролируемым климатом (фотопериод с 16 ч. света/8 ч. темноты; 60±5% RH; 25±2°C). Перед использованием для выкармливания тлей растения конских бобов выращивали в почвенной смеси для горшечных культур при 24°C при 16 ч. света и 8 ч. темноты. Для ограничения материнских эффектов или различий в состоянии здоровья между растениями 5–10 взрослых особей из разных растений распределяли среди 10 растений в возрасте двух недель и оставляли размножаться до высокой плотности в течение 5–7 дней. Для экспериментов тлей на стадии личинок первого и второго возраста собирали со здоровых растений и разделяли на 2 различные группы обработки: 1) отрицательный контроль (обработка водой), 2) раствор для обработки, содержащий 300 мкг/мл хитозана в воде (низкомолекулярного). Для каждой группы обработки получали примерно одно и то же число особей с каждого из растений коллекции.
Схема терапии
Исходный раствор хитозана (Sigma, № по каталогу 448869–50G)готовили в концентрации 1% в уксусной кислоте, стерилизовали автоклавированием и хранили при 4°C. Для обработки (см. раздел ) подходящее количество исходного раствора разбавляли водой с получением конечной концентрации хитозана для обработки. Раствор затем помещали в пробирку Eppendorf на 1,5 мл с черешком конских бобов, лист на котором также был залит растворами, и отверстие пробирки закрывали парафильмом. Эту систему вскармливания затем помещали в глубокую чашку Петри (Fisher Scientific, № по кат. FB0875711), и тлей наносили на листья растения.
Для каждой обработки на каждый лист помещали 50–51 тлю. Системы вскармливания заменяли каждые 2–3 дня на протяжении всего эксперимента. У тлей ежедневно отслеживали выживаемость, и мертвых тлей удаляли из глубокой чашки Петри в случае их обнаружения.
–го
–го
–го
–го
–го
–го
Помимо этого, стадию развития (личинки 1, 2, 3, 4, 5 возраста и 5R (размножающиеся личинки 5 возраста)) определяли ежедневно на протяжении всего эксперимента.
Buchnera
Buchnera
Через 8 дней после обработки ДНК экстрагировали из нескольких тлей из каждой группы обработки. Вкратце, поверхность тела тлей стерилизовали путем погружения тли в 6% раствор отбеливателя примерно на 5 секунд. Затем тлей промывали в стерильной воде, и ДНК экстрагировали из каждой отдельной тли с помощью набора для экстракции ДНК (Qiagen, набор DNeasy) в соответствии с инструкциями производителя. Концентрацию ДНК измеряли посредством количественной оценки нуклеиновой кислоты с использованием NanoDrop, и число копий ДНК  и тлей измеряли с помощью qPCR. Праймерами, используемыми для , были Buch_groES_18F (CATGATCGTGTGCTTGTTAAG; SEQ ID NO: 228) и Buch_groES_98R (CTGTTCCTCGAGTCGATTTCC; SEQ ID NO: 229) (Chong and Moran, 2016 PNAS). Праймерами, используемыми для тлей, были ApEF1a 107F (CTGATTGTGCCGTGCTTATTG; SEQ ID NO: 230) и ApEF1a 246R (TATGGTGGTTCAGTAGAGTCC; SEQ ID NO: 231) (Chong and Moran, 2016 PNAS). qPCR проводили с использованием скорости линейного изменения для qPCR–амплификации 1,6 градуса C/с и следующих условий: 1) 95°C в течение 10 минут, 2) 95°C в течение 15 секунд, 3) 55°C в течение 30 секунд, 4) повторение этапов 2–3 40x, 5) 95°C в течение 15 секунд, 6) 55°C в течение 1 минуты, 7) изменение скорости линейного изменения до 0,15 градуса C/с, 8) 95°C в течение 1 секунды. Данные qPCR анализировали с помощью аналитического программного обеспечения (Thermo Fisher Scientific, QuantStudio Design and Analysis).
Имела место отрицательная реакция в отношении приспособленности насекомых при обработке природным противомикробным полисахаридом
A. pisum
Схема эксперимента
–го
–го
–го
–го
Тлей  LSR–1 на стадии личинок 1 и 2 возраста разделяли на две отдельные группы обработки, как определено в разделе (выше). Тлей отслеживали ежедневно, и определяли число тлей на каждой стадии развития. Тли, обработанные только отрицательным контролем, начинали достигать зрелого возраста (стадии личинок 5 возраста) примерно через 6 дней (фиг. 21). Развитие задерживалось у тлей, обработанных раствором хитозана, а через 6 дней после обработки хитозаном большинство тлей не дозревали дальше чем до стадии личинок 4 возраста. Эти данные указывают на то, что обработка хитозаном задерживала и останавливала прогрессирование развития тлей.
Обработка хитозаном повышала смертность тлей
Показатель выживаемости тлей также измеряли в ходе обработок. Большинство тлей, обработанных только контролем, были живыми через 3 дня после обработки (фиг. 22). Через 4 дня тли начинали постепенно погибать, а некоторые выживали по истечении 7 дней после обработки.
В отличие от этого, тли, обработанные раствором хитозана, имели более низкие показатели выживаемости, чем тли, обработанные контролем. Эти данные указывают на то, что имело место снижение выживаемости при обработке природным противомикробным полисахаридом.
Обработка хитозаном снижала количество Buchnera у тлей
Buchnera
Buchnera
Buchnera
Buchnera
Buchnera
В частности, для исследования того, приводила ли обработка раствором хитозана к потере  у тлей и влияла ли эта потеря на приспособленность тлей, ДНК экстрагировали из тлей в каждой группе обработки через 8 дней после обработки, и проводили qPCR для определения числа копий /тлей. Тли, обработанные только контролем, имели высокие соотношения числа копий ДНК /тлей. В отличие от этого, тли, обработанные 300 мкг/мл хитозана в воде, имели в ~5 раз меньше копий ДНК /тлей (фиг. 23), что указывало на то, что обработка хитозаном снижала уровни .
В совокупности эти данные, описанные ранее, демонстрировали способность уничтожать тлей и уменьшать их интенсивность развития, продолжительность жизни и эндогенные популяции бактерий, например, приспособленность, посредством их обработки природным противомикробным полисахаридом.
Пример 13. Тли, обработанные низином, природным противомикробным пептидом
Buchnera aphidicola
Данный пример демонстрирует обработку тлей природным полициклическим антибактериальным пептидом "широкого спектра действия", продуцируемым бактерией Lactococcus lactis, который широко используется в качестве пищевого консерванта. Антибактериальная активность низина опосредована его способностью создавать поры в клеточной мембране бактерий и прерывать биосинтез бактериальной клеточной стенки путем специфического взаимодействия с липидом II. Данный пример демонстрирует, что отрицательное влияние низина на приспособленность тлей опосредовано модулированием популяций бактерий, эндогенных по отношению к тлям, которые являются восприимчивыми к низину. Одним штаммом бактерий–мишеней является.
Тли представляют собой насекомых, являющихся сельскохозяйственными вредителями, причиняющими непосредственный вред растению в результате кормления и выступающими в качестве переносчиков вирусов растений. Помимо этого, медвяная падь тлей способствует росту плесневых налетов грибов и привлекает вредоносных муравьев. Применение средств химической обработки, к сожалению, по–прежнему остается широко распространенным, что приводит к отбору устойчивых особей, уничтожение которых становится все более сложным.
Схема терапии
Низин составляли для использования в комбинации заливания в листья и доставки через растения. Контрольный раствор (воду) или раствор для обработки (низин) инъецировали в лист и помещали в пробирку Eppendorf. Растворы для обработки состояли из 1,6 или 7 мг/мл низина в воде.
Заливание в листья и доставка через растения – схема эксперимента
Тлей Acyrthosiphon pisum LSR–1 выращивали на растениях конских бобов (бобы Vroma vicia от Johnny's Selected Seeds) в инкубаторе с контролируемым климатом (фотопериод с 16 ч. света/8 ч. темноты; 60±5% RH; 25±2°C). Перед использованием для выкармливания тлей растения конских бобов выращивали в почвенной смеси для горшечных культур при 24°C при 16 ч. света и 8 ч. темноты. Для ограничения материнских эффектов или различий в состоянии здоровья между растениями 5–10 взрослых особей из разных растений распределяли среди 10 растений в возрасте двух недель и оставляли размножаться до высокой плотности в течение 5–7 дней. Для экспериментов тлей на стадии личинок первого и второго возраста собирали со здоровых растений и разделяли на 2 различные группы обработки: 1) отрицательный контроль (обработка водой), 2) обработка низином в концентрации 1,6 или 7 мг/мл низина в воде. Для каждой группы обработки получали примерно одно и то же число особей с каждого из растений коллекции.
Для обработки (см. раздел Схема терапии) раствор низина (Sigma, № продукта: N5764) готовили в концентрации 1,6 или 7 мг/мл (вес./об.) в воде и стерилизовали фильтрацией с помощью шприцевого фильтра с размером пор 0,22 мкм. Затем раствор инъецировали в лист растения, и черешок растения помещали в пробирку Eppendorf на 1,5 мл. Отверстие пробирки закрывали парафильмом. Эту систему вскармливания затем помещали в глубокую чашку Петри (Fisher Scientific, № по кат. FB0875711), и тлей наносили на листья растения.
Для каждой обработки на каждый лист помещали 56–59 тлей. Системы вскармливания заменяли каждые 2–3 дня на протяжении всего эксперимента. У тлей ежедневно отслеживали выживаемость, и мертвых тлей удаляли из глубокой чашки Петри в случае их обнаружения.
Помимо этого, стадию развития (личинки 1–го, 2–го, 3–го, 4–го, 5–го возраста и 5R (размножающиеся личинки тлей 5–го возраста)) определяли ежедневно на протяжении всего эксперимента.
Buchnera
Buchnera
Через 8 дней после обработки ДНК экстрагировали из оставшихся тлей в каждой группе обработки. Вкратце, поверхность тела тлей стерилизовали путем погружения тли в 6% раствор отбеливателя примерно на 5 секунд. Затем тлей промывали в стерильной воде, и ДНК экстрагировали из каждой отдельной тли с помощью набора для экстракции ДНК (Qiagen, набор DNeasy) в соответствии с инструкциями производителя. Концентрацию ДНК измеряли посредством количественной оценки нуклеиновой кислоты с использованием NanoDrop, и число копий ДНК  и тлей измеряли с помощью qPCR. Праймерами, используемыми для , были Buch_groES_18F (CATGATCGTGTGCTTGTTAAG; SEQ ID NO: 228) и Buch_groES_98R (CTGTTCCTCGAGTCGATTTCC; SEQ ID NO: 229) (Chong and Moran, 2016 PNAS). Праймерами, используемыми для тлей, были ApEF1a 107F (CTGATTGTGCCGTGCTTATTG; SEQ ID NO: 230) и ApEF1a 246R (TATGGTGGTTCAGTAGAGTCC; SEQ ID NO: 231) (Chong and Moran, 2016 PNAS). qPCR проводили с использованием скорости линейного изменения для qPCR–амплификации 1,6 градуса C/с и следующих условий: 1) 95°C в течение 10 минут, 2) 95°C в течение 15 секунд, 3) 55°C в течение 30 секунд, 4) повторение этапов 2–3 40x, 5) 95°C в течение 15 секунд, 6) 55°C в течение 1 минуты, 7) изменение скорости линейного изменения до 0,15 градуса C/с, 8) 95°C в течение 1 секунды. Данные qPCR анализировали с помощью аналитического программного обеспечения (Thermo Fisher Scientific, QuantStudio Design and Analysis).
Имела место дозозависимая отрицательная реакция в отношении приспособленности насекомых при обработке низином
A. pisum
Тлей  LSR–1 на стадии личинок 1–го и 2–го возраста разделяли на три отдельные группы обработки, как определено в разделе Схема эксперимента (выше). Тлей отслеживали ежедневно, и определяли число тлей на каждой стадии развития. Тли, обработанные раствором отрицательного контроля (водой), начинали достигать зрелости (стадии личинок 5–го возраста) примерно через 6 дней и способности к размножению (стадии 5R) через 7 дней (фиг. 24). Развитие значительно задерживалось у тлей, обработанных 7 мг/мл низина. Тли, обработанные 7 мг/мл низина, развивались только до стадии личинок 2–го возраста через 3 дня, а через 6 дней все тли в группе погибали (фиг. 24). Развитие немного задерживалось у тлей, обработанных более низкой концентрацией низина (1,6 мг/мл), и в каждый оцениваемый момент времени было больше менее развитых тлей по сравнению с контрольными особями, обработанными водой (фиг. 24). Эти данные указывают на то, что обработка низином задерживала и останавливала прогрессирование развития тлей, и эта задержка в развитии зависела от дозы вводимого низина.
В то же время важно отметить, что обработка с помощью 7 мг/мл низина также оказывала отрицательное влияние на состояние листьев, используемых в анализе. Вскоре после заливания в лист 7 мг/мл низина он начинал буреть. Через два дня листья, залитые 7 мг/мл, чернели. Значимого различия в состоянии у листьев, обработанных 1,6 мг/мл низина, не наблюдалось.
Обработка низином приводила к повышенной смертности тлей
Показатель выживаемости тлей также измеряли в ходе обработок. Примерно 50% тлей, обработанных только контролем, выживали после 8–дневного эксперимента (фиг. 25). В отличие от этого, выживаемость была значимо меньшей для тлей, обработанных 7 мг/мл низина (p<0,0001, согласно логарифмическому ранговому критерию Кокса–Мантеля), и все тли в этой группе погибали вследствие обработки через 6 дней (фиг. 25). Тли, обработанные более низкой дозой низина (1,6 мг/мл), имели более высокую смертность по сравнению с тлями, обработанными контролем, несмотря на то, что различие не достигало статистической значимости (p=0,0501, согласно логарифмическому ранговому критерию Кокса–Мантеля). Эти данные указывают на то, что имело место дозозависимое снижение выживаемости при обработке низином.
Обработка низином приводила к снижению количества Buchnera у тлей
Buchnera
Buchnera
Buchnera
Buchnera
Buchnera
Buchnera
В частности, для исследования того, приводила ли обработка низином к потере  у тлей и влияла ли эта потеря на приспособленность тлей, ДНК экстрагировали из тлей в каждой группе обработки через 8 дней после обработки, и проводили qPCR для определения числа копий /тлей. Тли, обработанные только контролем, имели высокие соотношения числа копий ДНК /тлей. В отличие от этого, тли, обработанные 1,6 мг/мл низина, имели в ~1,4 раза меньше копий ДНК /тлей через 8 дней после обработки (фиг. 26). В группе, обработанной 7 мг/мл низина, не оставалось живых тлей, и, таким образом, в этой группе не оценивали число копий ДНК /тлей. Эти данные указывают на то, что обработка низином снижала уровни .
В совокупности эти данные, описанные ранее, демонстрируют способность уничтожать тлей и уменьшать их интенсивность развития, продолжительность жизни и эндогенные популяции бактерий, например, приспособленность, посредством их обработки противомикробным пептидом низином.
Пример 14. У тлей, обработанных левулиновой кислотой, снижается приспособленность насекомых
Escherichia coli
Salmonella
Buchnera aphidicola
Данный пример демонстрирует, что обработка тлей левулиновой кислотой, кетокислотой, продуцируемой в результате нагревания углевода, содержащего гексозу (например, древесины, крахмала, пшеницы, соломы или тростникового сахара), с добавлением разбавленной минеральной кислоты, снижает приспособленность насекомых. Левулиновую кислоту ранее исследовали в качестве противомикробного средства против  и  при производстве мяса (Carpenter et al., 2010, Meat Science; Savannah G. Hawkins, 2014, University of Tennessee Honors Thesis). Данный пример демонстрирует, что влияние левулиновой кислоты на тлей опосредовано модулированием популяций бактерий, эндогенных по отношению к тлям, которые являются восприимчивыми к левулиновой кислоте. Одним штаммом бактерий–мишеней является.
Тли представляют собой насекомых, являющихся сельскохозяйственными вредителями, причиняющими непосредственный вред растению в результате кормления и выступающими в качестве переносчиков вирусов растений. Помимо этого, медвяная падь тлей способствует росту плесневых налетов грибов и привлекает вредоносных муравьев. Применение средств химической обработки, к сожалению, по–прежнему остается широко распространенным, что приводит к отбору устойчивых особей, уничтожение которых становится все более сложным.
Схема терапии
Левулиновую кислоту составляли для использования в комбинации заливания в листья и доставки через растения. Контрольный раствор инъецировали в листья с использованием воды, и воду помещали в пробирку Eppendorf. Растворы для обработки, содержащие 0,03 или 0,3% левулиновой кислоты в воде, вводили посредством инъекции в листья и через растение (в пробирке Eppendorf).
Заливание в листья и доставка через растения – схема эксперимента
Acyrthosiphon pisum
Vroma vicia
Тлей  eNASCO выращивали на растениях конских бобов (бобы  от Johnny's Selected Seeds) в инкубаторе с контролируемым климатом (фотопериод с 16 ч. света/8 ч. темноты; 60±5% RH; 25±2°C). Перед использованием для выкармливания тлей растения конских бобов выращивали в почвенной смеси для горшечных культур при 24°C при 16 ч. света и 8 ч. темноты. Для ограничения материнских эффектов или различий в состоянии здоровья между растениями 5–10 взрослых особей из разных растений распределяли среди 10 растений в возрасте двух недель и оставляли размножаться до высокой плотности в течение 5–7 дней. Для экспериментов тлей на стадии личинок первого и второго возраста собирали со здоровых растений и разделяли на 2 различные группы обработки: 1) отрицательный контроль (обработка водой), 2) раствор для обработки, содержащий 0,03 или 0,3% левулиновую кислоту в воде. Для каждой группы обработки получали примерно одно и то же число особей с каждого из растений коллекции.
Схема терапии
Для обработки (см. раздел ) левулиновую кислоту (Sigma, № продукта: W262706) разбавляли до 0,03 или 0,3% в воде. Раствор затем помещали в пробирку Eppendorf на 1,5 мл с черешком конских бобов, лист на котором также был залит растворами, и отверстие пробирки закрывали парафильмом. Эту систему вскармливания затем помещали в глубокую чашку Петри (Fisher Scientific, № по кат. FB0875711), и тлей наносили на листья растения.
Для каждой обработки на каждый лист помещали 57–59 тлей. Системы вскармливания заменяли каждые 2–3 дня на протяжении всего эксперимента. У тлей ежедневно отслеживали выживаемость, и мертвых тлей удаляли из глубокой чашки Петри в случае их обнаружения.
–го
–го
–го
–го
–го
Помимо этого, стадию развития (личинки 1, 2, 3, 4 и 5 возраста) определяли ежедневно на протяжении всего эксперимента.
Buchnera
Buchnera
Через 7 дней после обработки ДНК экстрагировали из оставшихся тлей в каждой группе обработки. Вкратце, поверхность тела тлей стерилизовали путем погружения тли в 6% раствор отбеливателя примерно на 5 секунд. Затем тлей промывали в стерильной воде, и ДНК экстрагировали из каждой отдельной тли с помощью набора для экстракции ДНК (Qiagen, набор DNeasy) в соответствии с инструкциями производителя. Концентрацию ДНК измеряли посредством количественной оценки нуклеиновой кислоты с использованием NanoDrop, и число копий ДНК  и тлей измеряли с помощью qPCR. Праймерами, используемыми для , были Buch_groES_18F (CATGATCGTGTGCTTGTTAAG; SEQ ID NO: 228) и Buch_groES_98R (CTGTTCCTCGAGTCGATTTCC; SEQ ID NO: 229) (Chong and Moran, 2016 PNAS). Праймерами, используемыми для тлей, были ApEF1a 107F (CTGATTGTGCCGTGCTTATTG; SEQ ID NO: 230) и ApEF1a 246R (TATGGTGGTTCAGTAGAGTCC; SEQ ID NO: 231) (Chong and Moran, 2016 PNAS). qPCR проводили с использованием скорости линейного изменения для qPCR–амплификации 1,6 градуса C/с и следующих условий: 1) 95°C в течение 10 минут, 2) 95°C в течение 15 секунд, 3) 55°C в течение 30 секунд, 4) повторение этапов 2–3 40x, 5) 95°C в течение 15 секунд, 6) 55°C в течение 1 минуты, 7) изменение скорости линейного изменения до 0,15 градуса C/с, 8) 95°C в течение 1 секунды. Данные qPCR анализировали с помощью аналитического программного обеспечения (Thermo Fisher Scientific, QuantStudio Design and Analysis).
Имела место дозозависимая отрицательная реакция в отношении приспособленности насекомых при обработке левулиновой кислотой
A. pisum
Схема эксперимента
–го
–го
–го
–го
Тлей  eNASCO на стадии личинок 1 и 2 возраста разделяли на три отдельные группы обработки, как определено в разделе (выше). Тлей отслеживали ежедневно, и определяли число тлей на каждой стадии развития. Тли, обработанные только отрицательным контролем, начинали достигать зрелого возраста (стадии личинок 5 возраста) примерно через 7 дней (фиг. 27). Развитие задерживалось у тлей, обработанных левулиновой кислотой, а через 11 дней после обработки практически все тли, обработанные контролем, достигали зрелого возраста, тогда как ~23 и 63% тлей, обработанных 0,03 и 0,3% левулиновой кислотой соответственно, не дозревали дальше чем до стадии личинок 4 возраста. Эти данные указывают на то, что обработка левулиновой кислотой задерживала и останавливала прогрессирование развития тлей, и эта задержка в развитии зависела от дозы вводимой левулиновой кислоты.
Обработка левулиновой кислотой приводит к повышенной смертности тлей
Показатель выживаемости тлей также измеряли в ходе обработок. Примерно 50% тлей, обработанных только контролем, выживали после 11–дневного эксперимента (фиг. 28). В отличие от этого, выживаемость была значимо меньшей у тлей, обработанных 0,3% левулиновой кислотой (p<0,01). Тли, обработанные низкой дозой левулиновой кислоты (0,03%), имели более высокую смертность по сравнению с тлями, обработанными контролем, несмотря на то, что различие не достигало статистической значимости. Эти данные указывают на то, что имело место дозозависимое снижение выживаемости при обработке левулиновой кислотой.
Обработка левулиновой кислотой приводит к снижению количества Buchnera у тлей
Buchnera
Buchnera
Buchnera
Buchnera
Buchnera
В частности, для исследования того, приводила ли обработка левулиновой кислотой к потере  у тлей и влияла ли эта потеря на приспособленность тлей, ДНК экстрагировали из тлей в каждой группе обработки через 7 дней после обработки, и проводили qPCR для определения числа копий /тлей. Тли, обработанные только контролем, имели высокие соотношения числа копий ДНК /тлей. В отличие от этого, тли, обработанные 0,03 или 0,3% левулиновой кислотой в воде, имели в ~6 раз меньше копий ДНК /тлей через 7 дней после обработки (фиг. 29, левая панель). Эти данные указывают на то, что обработка левулиновой кислотой снижала уровни .
В совокупности эти данные, описанные ранее, демонстрировали способность уничтожать тлей и уменьшать их интенсивность развития, продолжительность жизни и эндогенные популяции бактерий, например, приспособленность, посредством их обработки левулиновой кислотой.
Пример 15. Тли, обработанные раствором вторичного метаболита растительного происхождения
Gossypium
Buchnera aphidicola
Данный пример демонстрирует обработку тлей госсиполуксусной кислотой, природным фенолом, получаемым из хлопчатника (род ), который проникает в клетку и выступает в качестве ингибитора для нескольких ферментов дегидрогеназ. Данный пример демонстрирует, что влияние госсипола на тлей опосредовано модулированием популяций бактерий, эндогенных по отношению к тлям, которые являются восприимчивыми к госсиполу. Одним штаммом бактерий–мишеней является.
Тли представляют собой насекомых, являющихся сельскохозяйственными вредителями, причиняющими непосредственный вред растению в результате кормления и выступающими в качестве переносчиков вирусов растений. Помимо этого, медвяная падь тлей способствует росту плесневых налетов грибов и привлекает вредоносных муравьев. Применение средств химической обработки, к сожалению, по–прежнему остается широко распространенным, что приводит к отбору устойчивых особей, уничтожение которых становится все более сложным.
Схема терапии
. Раствор госсипола составляли в зависимости от способа доставки.
1) Через растения: с 0 (отрицательный контроль) или 0,5%, 0,25% и 0,05% госсиполом, составленным в искусственном рационе (согласно Akey and Beck, 1971; см. раздел Схема эксперимента) без незаменимых аминокислот (гистидина, изолейцина, лейцина, лизина, метионина, фенилаланина, треонина, триптофана и валина).
2) Микроинъекция: растворы для инъекций представляли собой 0,5% госсипол или только искусственный рацион (отрицательный контроль).
Доставка через растения – схема эксперимента
Buchnera
Serratia
Buchnera
Acyrthosiphon pisum
Vroma vicia
Тлей (линии eNASCO (в которых содержатся как первичные, так и вторичные симбионты  и  соответственно) или LSR–1 (в которых содержатся только ), ) выращивали на растениях конских бобов (бобы  от Johnny's Selected Seeds) в инкубаторе с контролируемым климатом (фотопериод с 16 ч. света/8 ч. темноты; 60±5% RH; 25±2°C). Перед использованием для выкармливания тлей растения конских бобов выращивали в почвенной смеси для горшечных культур при 24°C при 16 ч. света и 8 ч. темноты. Для ограничения материнских эффектов или различий в состоянии здоровья между растениями 5–10 взрослых особей из разных растений распределяли среди 10 растений в возрасте двух недель и оставляли размножаться до высокой плотности в течение 5–7 дней. Для экспериментов тлей на стадии личинок первого и второго возраста собирали со здоровых растений и разделяли на 4 различные группы обработки: 1) только искусственный рацион без незаменимых аминокислот, 2) только искусственный рацион без незаменимых аминокислот и 0,05% госсипол, 3) только искусственный рацион без незаменимых аминокислот и 0,25% госсипол и 4) только искусственный рацион без незаменимых аминокислот и 0,5% госсипол. Для каждой группы обработки получали примерно одно и то же число особей с каждого из растений коллекции.
Acyrthosiphon pisum
Используемый искусственный рацион готовили, как описано ранее (Akey and Beck, 1971 Continuous Rearing of the Pea Aphid, , on a Holidic Diet), с незаменимыми аминокислотами и без них (2 мг/мл гистидина, 2 мг/мл изолейцина, 2 мг/мл лейцина, 2 мг/мл лизина, 1 мг/мл метионина, 1,62 мг/мл фенилаланина, 2 мг/мл треонина, 1 мг/мл триптофана и 2 мг/мл валина), за исключением того, что ни в одном случае рацион не включал гомосерин или бета–аланилтирозин. Значение pH рационов доводили до 7,5 с помощью KOH, и рационы стерилизовали фильтрацией с помощью фильтра с размером пор 0,22 мкм и хранили при 4°C в течение короткого срока (<7 дней) или при –80°C в течение длительного срока.
Схема терапии
Исходный раствор госсиполуксусной кислоты (Sigma, № по кат. G4382–250MG)готовили в концентрации 5% в метаноле и стерилизовали путем пропускания через шприцевой фильтр с размером пор 0,22 мкм и хранили при 4°C. Для обработок (см. раздел ) подходящее количество исходного раствора добавляли к искусственному рациону с получением различных конечных концентраций госсипола. Рацион затем помещали в пробирку Eppendorf на 1,5 мл с черешком и листом конских бобов, и отверстие пробирки закрывали парафильмом. Эту систему вскармливания затем помещали в глубокую чашку Петри (Fisher Scientific, № по кат. FB0875711), и тлей наносили на листья растения.
Для каждой обработки на каждый лист помещали 15–87 тлей. Системы вскармливания искусственным рационом заменяли каждые 2–3 дня на протяжении всего эксперимента. У тлей ежедневно отслеживали выживаемость, и мертвых тлей удаляли из глубокой чашки Петри, в которой содержалась система вскармливания искусственным рационом, в случае их обнаружения.
–го
–го
–го
–го
–го
–го
–го
Помимо этого, стадию развития (личинки 1, 2, 3, 4, 5 возраста и 5R (размножающиеся личинки 5 возраста)) определяли ежедневно на протяжении всего эксперимента. При достижении тлями стадии личинок 4 возраста им предоставляли их собственные искусственные системы вскармливания в глубокой чашке Петри для того, чтобы можно было контролировать плодовитость, как только они достигали зрелого возраста.
В случае взрослых тлей новых нимф считали ежедневно и затем исключали. В конце экспериментов плодовитость измеряли двумя способами: 1) средний день, в который был определен первый потомок в группе обработки, и 2) среднее число потомков, образуемых ежедневно после достижения тлей зрелого возраста. Снимки тлей получали на протяжении всего эксперимента для оценивания различий в размерах между группами обработки.
Buchnera
Buchnera
Через 5 или 13 дней после обработки ДНК экстрагировали из нескольких тлей из каждой группы обработки. Вкратце, поверхность тела тлей стерилизовали путем погружения тли в 6% раствор отбеливателя примерно на 5 секунд. Затем тлей промывали в стерильной воде, и ДНК экстрагировали из каждой отдельной тли с помощью набора для экстракции ДНК (Qiagen, набор DNeasy) в соответствии с инструкциями производителя. Концентрацию ДНК измеряли посредством количественной оценки нуклеиновой кислоты с использованием NanoDrop, и число копий ДНК  и тлей измеряли с помощью qPCR. Праймерами, используемыми для , были Buch_groES_18F (CATGATCGTGTGCTTGTTAAG; SEQ ID NO: 228) и Buch_groES_98R (CTGTTCCTCGAGTCGATTTCC; SEQ ID NO: 229) (Chong and Moran, 2016 PNAS). Праймерами, используемыми для тлей, были ApEF1a 107F (CTGATTGTGCCGTGCTTATTG; SEQ ID NO: 230) и ApEF1a 246R (TATGGTGGTTCAGTAGAGTCC; SEQ ID NO: 231) (Chong and Moran, 2016 PNAS). qPCR проводили с использованием скорости линейного изменения для qPCR–амплификации 1,6 градуса C/с и следующих условий: 1) 95°C в течение 10 минут, 2) 95°C в течение 15 секунд, 3) 55°C в течение 30 секунд, 4) повторение этапов 2–3 40x, 5) 95°C в течение 15 секунд, 6) 55°C в течение 1 минуты, 7) изменение скорости линейного изменения до 0,15 градуса C/с, 8) 95°C в течение 1 секунды. Данные qPCR анализировали с помощью аналитического программного обеспечения (Thermo Fisher Scientific, QuantStudio Design and Analysis).
Имела место дозозависимая отрицательная реакция в отношении приспособленности насекомых при обработке аллелохимикатом госсиполом
A. pisum
Схема эксперимента
–го
–го
–го
–го
Тлей  eNASCO и LSR–1 на стадии личинок 1 и 2 возраста разделяли на четыре отдельные группы обработки, как определено в разделе (что описано в данном документе). Тлей отслеживали ежедневно, и определяли число тлей на каждой стадии развития. Тли, обработанные только искусственным рационом, начинали достигать зрелого возраста (стадии личинок 5 возраста) примерно через 3 дня (фиг. 30A). Развитие задерживалось у тлей, обработанных госсиполом, и через 5 дней после обработки с помощью 0,5% госсипола большинство тлей не дозревали дальше чем до стадии личинок 3 возраста, и их размер также подвергался отрицательному влиянию (фиг. 30A и 30B). Эти данные указывают на то, что обработка госсиполом задерживала и останавливала прогрессирование развития тлей, и эта реакция была дозозависимой.
Обработка госсиполом повышала смертность тлей
Показатель выживаемости тлей также измеряли в ходе обработок. Большинство тлей, обработанных только искусственным рационом без незаменимых аминокислот, были живыми через 2 дня после обработки (фиг. 31). Через 4 дня тли начинали постепенно погибать, а некоторые выживали по истечении 7 дней после обработки.
В отличие от этого, тли, обработанные 0,25 (отсутствие значимых различий по сравнению с контролем, p=0,2794) и 0,5% госсиполом, имели более низкие показатели выживаемости, чем тли, обработанные только искусственным рационом, при этом при обработке 0,5% госсиполом наблюдались значимые различия по сравнению с контролем AD без EAA (p=0,002). Тли, обработанные 0,5% госсиполом, начинали погибать через 2 дня после обработки, и все тли погибали вследствие обработки через 4 дня. Тли, обработанные 0,25%, выживали немного дольше, чем тли, обработанные 0,5%, однако также подвергались существенному отрицательному влиянию. Эти данные указывают на то, что имело место дозозависимое снижение выживаемости при обработке аллелохимикатом госсиполом.
Обработка госсиполом снижала интенсивность размножения тлей
В ходе обработок также отслеживали плодовитость тлей. Через 7 и 8 дней после обработки большинство взрослых тлей, обработанных искусственным рационом без незаменимых аминокислот, начинали размножаться. Среднее число потомков, образуемых ежедневно после достижения зрелого возраста тлями, обработанными искусственным рационом без добавления незаменимых аминокислот, составляло примерно 5 (фиг. 32A и 32B).
В отличие от этого, тли, обработанные 0,25% госсиполом, демонстрировали снижение темпов достижения зрелого возраста и образования потомков. Эти данные указывают на то, что обработка госсиполом приводила к уменьшению интенсивности размножения тлей.
Обработка госсиполом снижала количество Buchnera у тлей
Buchnera
Buchnera
Buchnera
Buchnera
Buchnera
В частности, для исследования того, приводили ли различные концентрации госсипола к потере  у тлей и влияла ли эта потеря на приспособленность тлей, ДНК экстрагировали из тлей в каждой группе обработки через 5 или 13 дней после обработки, и проводили qPCR для определения числа копий /тлей. Тли, обработанные только искусственным рационом без незаменимых аминокислот (контролем), имели высокие соотношения числа копий ДНК /тлей. В отличие от этого, тли, обработанные 0,25 и 0,5% госсиполом, имели в ~4 раза меньше копий ДНК /тлей (фиг. 33), что указывало на то, что обработка госсиполом снижала уровни , и что это снижение было зависимым от концентрации.
Доставка путем микроинъекции – схема эксперимента
A. pisum
–го
Микроинъекцию осуществляли с помощью автоматического нанолитрового инъектора NanoJet III с выдвижной иглой из боросиликатного стекла собственного изготовления (Drummond Scientific; № по кат. 3–000–203–G/XL). Тлей (линии LSR–1, ) выращивали на растениях конских бобов, как описано в предыдущем примере. В каждой группе обработки было примерно одно и то же число получивших инъекцию особей с каждого из растений коллекции. Нимфы тлей (на стадии личинок < 3 возраста) переносили с помощью малярной кисти в трубную систему, подсоединенную к вакууму, и им в брюшную часть груди вводили микроинъекцию 20 нл искусственного рациона без незаменимых аминокислот (отрицательный контроль) или 0,05% раствора госсипола в искусственном рационе без незаменимых аминокислот. После инъекции тлей помещали в глубокую чашку Петри с листом конских бобов, черешок которого находился в 2% агаре.
Обработка антибиотиками путем микроинъекции снижала количество Buchnera у тлей
Buchnera
Buchnera
Для исследования того, приводил ли госсипол, доставляемый посредством микроинъекции, к потере  у тлей и влияла ли эта потеря на приспособленность тлей, как было продемонстрировано в предыдущих примерах, ДНК экстрагировали из тлей в каждой группе обработки через 4 дня после обработки, и проводили qPCR, как описано в предыдущем примере, для определения числа копий /тлей.
Buchnera
Buchnera
Buchnera
Тли, получившие микроинъекцию отрицательного контроля, имели высокие соотношения числа копий ДНК /тлей. В отличие от этого, нимфы и взрослые особи тлей, получившие микроинъекцию госсипола, характеризовались существенным снижением числа копий /тлей (фиг. 34), что указывало на то, что обработка путем микроинъекции госсипола уменьшала присутствие эндосимбиотических , и, как показано в предыдущих примерах, это приводило к снижению приспособленности.
В совокупности эти данные, описанные в предыдущих примерах, демонстрировали способность уничтожать тлей и уменьшать их интенсивность развития, способность к размножению, продолжительность жизни и эндогенные популяции бактерий, например, приспособленность, посредством их обработки раствором вторичного метаболита растений с помощью нескольких способов доставки.
Пример 16. Тли, обработанные природным противомикробным соединением растительного происхождения транс–коричным альдегидом
Cinnamomum zeylanicum
Buchnera aphidicola
Этот пример демонстрирует, что обработка тлей транс–коричным альдегидом, природным ароматическим альдегидом, который представляет собой основной компонент экстракта коры коричного дерева (), приводит к снижению приспособленности. Было показано, что транс–коричный альдегид характеризуется противомикробной активностью в отношении как грамотрицательных, так и грамположительных организмов, несмотря на то, что точный механизм осуществления его противомикробной активности остается неясным. Транс–коричный альдегид может разрушать клеточные мембраны бактерий и ингибировать специфические клеточные процессы или ферменты (Gill and Holley, 2004 Applied Environmental Microbiology). Данный пример демонстрирует, что влияние транс–коричного альдегида на тлей было опосредовано модулированием популяций бактерий, эндогенных по отношению к тлям, которые являются восприимчивыми к транс–коричному альдегиду. Одним штаммом бактерий–мишеней является.
Тли представляют собой насекомых, являющихся сельскохозяйственными вредителями, причиняющими непосредственный вред растению в результате кормления и выступающими в качестве переносчиков вирусов растений. Помимо этого, медвяная падь тлей способствует росту плесневых налетов грибов и привлекает вредоносных муравьев. Применение средств химической обработки, к сожалению, по–прежнему остается широко распространенным, что приводит к отбору устойчивых особей, уничтожение которых становится все более сложным.
Схема терапии
Транс–коричный альдегид разбавляли до 0,05%, 0,5% или 5% в воде и доставляли посредством заливания в листья (~1 мл инъецировали в листья) и через растения.
Схема эксперимента
Buchnera
Acyrthosiphon pisum
Тлей (линии LSR–1 (в которых содержатся только ), ) выращивали на растениях конских бобов (бобы Vroma vicia от Johnny's Selected Seeds) в инкубаторе с контролируемым климатом (фотопериод с 16 ч. света/8 ч. темноты; 60±5% RH; 25±2°C). Перед использованием для выкармливания тлей растения конских бобов выращивали в почвенной смеси для горшечных культур при 24°C при 16 ч. света и 8 ч. темноты. Для ограничения материнских эффектов или различий в состоянии здоровья между растениями 5–10 взрослых особей из разных растений распределяли среди 10 растений в возрасте двух недель и оставляли размножаться до высокой плотности в течение 5–7 дней. Для экспериментов тлей на стадии личинок первого и второго возраста собирали со здоровых растений и разделяли на четыре различные группы обработки: 1) контроли, обработанные водой, 2) 0,05% транс–коричный альдегид в воде, 3) 0,5% транс–коричный альдегид в воде и 4) 5% транс–коричный альдегид в воде. Для каждой группы обработки получали примерно одно и то же число особей с каждого из растений коллекции.
Транс–коричный альдегид (Sigma, № по кат. C80687)разбавляли до соответствующей концентрации в воде (см. раздел Схема терапии), стерилизовали путем пропускания через шприцевой фильтр с размером пор 0,22 мкм и хранили при 4°C. В листья конских бобов инъецировали примерно 1 мл средства для обработки, и затем лист помещали в пробирку Eppendorf на 1,5 мл, содержащую тот же самый раствор для обработки. Отверстие пробирки, в которую помещали черешок конских бобов, закрывали парафильмом. Эту систему вскармливания для обработки затем помещали в глубокую чашку Петри (Fisher Scientific, № по кат. FB0875711), и тлей наносили на листья растения.
Для каждой обработки на каждый лист помещали 40–49 тлей. Системы вскармливания для обработки заменяли каждые 2–3 дня на протяжении всего эксперимента. У тлей ежедневно отслеживали выживаемость, и мертвых тлей удаляли из глубокой чашки Петри, в которой содержалась система вскармливания для обработки, в случае их обнаружения.
–го
–го
–го
–го
–го
–го
Помимо этого, стадию развития (личинки 1, 2, 3, 4, 5 возраста и 5R (размножающиеся личинки 5 возраста)) определяли ежедневно на протяжении всего эксперимента.
Buchnera
Buchnera
Через 3 дней после обработки ДНК экстрагировали из оставшихся живых тлей в каждой группе обработки. Вкратце, поверхность тела тлей стерилизовали путем погружения тли в 6% раствор отбеливателя примерно на 5 секунд. Затем тлей промывали в стерильной воде, и ДНК экстрагировали из каждой отдельной тли с помощью набора для экстракции ДНК (Qiagen, набор DNeasy) в соответствии с инструкциями производителя. Концентрацию ДНК измеряли посредством количественной оценки нуклеиновой кислоты с использованием NanoDrop, и число копий ДНК  и тлей измеряли с помощью qPCR. Праймерами, используемыми для , были Buch_groES_18F (CATGATCGTGTGCTTGTTAAG; SEQ ID NO: 228) и Buch_groES_98R (CTGTTCCTCGAGTCGATTTCC; SEQ ID NO: 229) (Chong and Moran, 2016 PNAS). Праймерами, используемыми для тлей, были ApEF1a 107F (CTGATTGTGCCGTGCTTATTG; SEQ ID NO: 230) и ApEF1a 246R (TATGGTGGTTCAGTAGAGTCC; SEQ ID NO: 231) (Chong and Moran, 2016 PNAS). qPCR проводили с использованием скорости линейного изменения для qPCR–амплификации 1,6 градуса C/с и следующих условий: 1) 95°C в течение 10 минут, 2) 95°C в течение 15 секунд, 3) 55°C в течение 30 секунд, 4) повторение этапов 2–3 40x, 5) 95°C в течение 15 секунд, 6) 55°C в течение 1 минуты, 7) изменение скорости линейного изменения до 0,15 градуса C/с, 8) 95°C в течение 1 секунды. Данные qPCR анализировали с помощью аналитического программного обеспечения (Thermo Fisher Scientific, QuantStudio Design and Analysis).
Имела место дозозависимая отрицательная реакция в отношении приспособленности насекомых при обработке природным противомикробным транс–коричным альдегидом
A. pisum
–го
–го
–го
–го
Тлей  LSR–1 на стадии личинок 1 и 2 возраста разделяли на четыре отдельные группы обработки, как определено в разделе Схема эксперимента (что описано в данном документе). Тлей отслеживали ежедневно, и определяли число тлей на каждой стадии развития. Тли, обработанные только водой, начинали достигать стадии личинок 3 возраста через 3 дня после обработки (фиг. 35). Развитие задерживалось у тлей, обработанных транс–коричным альдегидом, и через 3 дня после обработки каждой из трех концентраций транс–коричного альдегида ни одна из тлей не дозревала до стадии личинок более чем второго возраста (фиг. 35). Кроме того, все тли, обработанные наиболее высокой концентрацией транс–коричного альдегида (5%), оставались на стадии личинок 1 возраста на протяжении всего эксперимента. Эти данные указывают на то, что обработка транс–коричным альдегидом задерживала и останавливала прогрессирование развития тлей, и эта реакция была дозозависимой.
Обработка транс–коричным альдегидом повышала смертность тлей
Показатель выживаемости тлей также измеряли в ходе обработок. Примерно 75 процентов тлей, обработанных только водой, были живыми через 3 дня после обработки (фиг. 36). В отличие от этого, тли, обработанные 0,05%, 0,5% и 5% транс–коричным альдегидом, имели значимо более низкие (p<0,0001 в каждой группе обработки по сравнению с контролем, обработанным водой) показатели выживаемости, чем тли, обработанные только водой. Эти данные указывают на то, что имело место дозозависимое снижение выживаемости при обработке природным противомикробным транс–коричным альдегидом.
Обработка транс–коричным альдегидом снижала количество Buchnera у тлей
Buchnera
Buchnera
Buchnera
Buchnera
В частности, для исследования того, приводили ли различные концентрации транс–коричного альдегида к потере  у тлей и влияла ли эта потеря на приспособленность тлей, ДНК экстрагировали из тлей в каждой группе обработки через 3 дня после обработки, и проводили qPCR для определения числа копий /тлей. Тли, обработанные только водой (контролем), имели высокие соотношения числа копий ДНК /тлей. Аналогичным образом, тли, обработанные наиболее низкой концентрацией транс–коричного альдегида (0,5%), имели высокие соотношения числа копий ДНК /тлей.
Buchnera
Buchnera
В отличие от этого, тли, обработанные 0,5 и 5% транс–коричным альдегидом, имели в ~870 раз меньше копий ДНК /тлей (фиг. 37), что указывало на то, что обработка транс–коричным альдегидом снижала уровни , и что это снижение было зависимым от концентрации.
В совокупности эти данные, описанные в предыдущих примерах, демонстрируют способность уничтожать тлей и уменьшать их интенсивность развития, способность к размножению, продолжительность жизни и эндогенные популяции бактерий, например, приспособленность, посредством их обработки раствором вторичного метаболита растений с помощью нескольких способов доставки.
Пример 17. Тли, обработанные противомикробными пептидами скорпиона
Buchnera aphidicola
Этот пример демонстрирует обработку тлей несколькими противомикробными пептидами скорпиона (AMP), из которых несколько AMP были идентифицированы в транскриптоме ядовитой железы скорпиона Urodacus yaschenkoi (Luna–Ramirez et al., 2017, Toxins). AMP в типичном случае имеют суммарный положительный заряд и, таким образом, высокое сродство к мембранам бактерий. Данный пример демонстрирует, что влияние AMP на тлей было опосредовано модулированием популяций бактерий, эндогенных по отношению к тлям, которые были восприимчивыми к пептидам AMP. Одним штаммом бактерий–мишеней является , облигатный симбионт тлей.
Тли представляют собой насекомых, являющихся сельскохозяйственными вредителями, причиняющими непосредственный вред растению в результате кормления и выступающими в качестве переносчиков вирусов растений. Помимо этого, медвяная падь тлей способствует росту плесневых налетов грибов и привлекает вредоносных муравьев. Применение средств химической обработки, к сожалению, по–прежнему остается широко распространенным, что приводит к отбору устойчивых особей, уничтожение которых становится все более сложным.
Схема терапии
Раствор Uy192 составляли для использования в комбинации заливания в листья и доставки через растения. Контрольный раствор инъецировали в листья с использованием воды+синего пищевого красителя и воды в пробирке. Раствор для обработки состоял из 100 мкг/мл Uy192 в воде для инъекции в листья (с синим пищевым красителем) и доставки через растение (в пробирке Eppendorf).
Заливание в листья и доставка через растения – схема эксперимента
Buchnera
Acyrthosiphon pisum
Vroma vicia
Тлей LSR–1 (в которых содержатся только )  выращивали на растениях конских бобов (бобы  от Johnny's Selected Seeds) в инкубаторе с контролируемым климатом (фотопериод с 16 ч. света/8 ч. темноты; 60±5% RH; 20±2°C). Перед использованием для выкармливания тлей растения конских бобов выращивали в почвенной смеси для горшечных культур при 24°C при 16 ч. света и 8 ч. темноты. Для ограничения материнских эффектов или различий в состоянии здоровья между растениями 5–10 взрослых особей из разных растений распределяли среди 10 растений в возрасте двух недель и оставляли размножаться до высокой плотности в течение 5–7 дней. Для экспериментов тлей на стадии личинок первого и второго возраста собирали со здоровых растений и разделяли на 2 различные группы обработки: 1) отрицательный контроль (обработка водой), 2) раствор для обработки, содержащий 100 мкг/мл AMP в воде. Для каждой группы обработки получали примерно одно и то же число особей с каждого из растений коллекции.
Схема терапии
Uy192 синтезировали в Bio–Synthesis с чистотой >75%. 1 мг лиофилизированного пептида разводили в 500 мкл 80% ацетонитрила, 20% воды и 0,1% TFA, 100 мкл (100 мкг) разделяли на аликвоты в 10 отдельных пробирок Eppendorf и оставляли высыхать. Для обработки (см. раздел ) 1 мл воды добавляли к 100 мкг аликвоты пептида с получением конечной концентрации Uy192 (100 мкг/мл). Раствор затем помещали в пробирку Eppendorf на 1,5 мл с черешком конских бобов, лист на котором также был залит растворами, и отверстие пробирки закрывали парафильмом. Эту систему вскармливания затем помещали в глубокую чашку Петри (Fisher Scientific, № по кат. FB0875711), и тлей наносили на листья растения.
Для каждой обработки на каждый лист помещали 50 тлей. Системы вскармливания заменяли каждые 2–3 дня на протяжении всего эксперимента. У тлей ежедневно отслеживали выживаемость, и мертвых тлей удаляли из глубокой чашки Петри в случае их обнаружения.
–го
–го
–го
–го
–го
–го
Помимо этого, стадию развития (личинки 1, 2, 3, 4, 5 возраста и 5R (размножающиеся личинки 5 возраста)) определяли ежедневно на протяжении всего эксперимента.
Buchnera
Buchnera
Через 8 дней после обработки ДНК экстрагировали из оставшихся тлей в каждой группе обработки. Вкратце, поверхность тела тлей стерилизовали путем погружения тли в 6% раствор отбеливателя примерно на 5 секунд. Затем тлей промывали в стерильной воде, и ДНК экстрагировали из каждой отдельной тли с помощью набора для экстракции ДНК (Qiagen, набор DNeasy) в соответствии с инструкциями производителя. Концентрацию ДНК измеряли посредством количественной оценки нуклеиновой кислоты с использованием NanoDrop, и число копий ДНК  и тлей измеряли с помощью qPCR. Праймерами, используемыми для , были Buch_groES_18F (CATGATCGTGTGCTTGTTAAG; SEQ ID NO: 228) и Buch_groES_98R (CTGTTCCTCGAGTCGATTTCC; SEQ ID NO: 229) (Chong and Moran, 2016 PNAS). Праймерами, используемыми для тлей, были ApEF1a 107F (CTGATTGTGCCGTGCTTATTG; SEQ ID NO: 230) и ApEF1a 246R (TATGGTGGTTCAGTAGAGTCC; SEQ ID NO: 231) (Chong and Moran, 2016 PNAS). qPCR проводили с использованием скорости линейного изменения для qPCR–амплификации 1,6 градуса C/с и следующих условий: 1) 95°C в течение 10 минут, 2) 95°C в течение 15 секунд, 3) 55°C в течение 30 секунд, 4) повторение этапов 2–3 40x, 5) 95°C в течение 15 секунд, 6) 55°C в течение 1 минуты, 7) изменение скорости линейного изменения до 0,15 градуса C/с, 8) 95°C в течение 1 секунды. Данные qPCR анализировали с помощью аналитического программного обеспечения (Thermo Fisher Scientific, QuantStudio Design and Analysis).
Имела место отрицательная реакция в отношении приспособленности насекомых при обработке с помощью AMP скорпиона
A. pisum
Схема эксперимента
–го
–го
–го
–го
Тлей  LSR–1 на стадии личинок 1 и 2 возраста разделяли на две отдельные группы обработки, как определено в разделе (выше). Тлей отслеживали ежедневно, и определяли число тлей на каждой стадии развития. Тли, обработанные только отрицательным контролем, начинали достигать зрелого возраста (стадии личинок 5 возраста) примерно через 6 дней (фиг. 38). Развитие задерживалось у тлей, обработанных с помощью Uy192, а через 8 дней после обработки тли не дозревали дальше чем до стадии личинок 4 возраста. Эти данные указывают на то, что обработка с помощью Uy192 задерживала и останавливала прогрессирование развития тлей.
Обработка с помощью AMP скорпиона приводит к повышенной смертности тлей
Показатель выживаемости тлей также измеряли в ходе обработок. Большинство тлей, обработанных только контролем, были живыми через 3 дня после обработки (фиг. 39). Через 4 дня тли начинали постепенно погибать, а некоторые выживали по истечении 7 дней после обработки.
В отличие от этого, тли, обработанные с помощью Uy192, имели более низкие показатели выживаемости, чем тли, обработанные контролем. Эти данные указывают на то, что имело место снижение выживаемости при обработке с помощью АМР скорпиона Uy192.
Обработка с помощью АМР скорпиона Uy192 приводит к снижению количества Buchnera у тлей
Buchnera
Buchnera
Buchnera
Buchnera
Buchnera
В частности, для исследования того, приводила ли обработка с помощью Uy192 к потере  у тлей и влияла ли эта потеря на приспособленность тлей, ДНК экстрагировали из тлей в каждой группе обработки через 8 дней после обработки, и проводили qPCR для определения числа копий /тлей. Тли, обработанные только контролем, имели высокие соотношения числа копий ДНК /тлей. В отличие от этого, тли, обработанные с помощью 100 мкг/мл Uy192 в воде, имели в ~7 раз меньше копий ДНК /тлей (фиг. 40), что указывало на то, что обработка с помощью Uy192 снижала уровни .
В совокупности эти данные, описанные ранее, демонстрировали способность уничтожать тлей и уменьшать их интенсивность развития, продолжительность жизни и эндогенные популяции бактерий, например, приспособленность, посредством их обработки природным противомикробным пептидом скорпиона.
Пример 18. Тли, обработанные противомикробными пептидами скорпиона
Buchnera aphidicola
Этот пример демонстрирует обработку тлей несколькими противомикробными пептидами скорпиона (AMP) D10, D3, Uyct3 и Uy17 – AMP, которые недавно были идентифицированы в транскриптоме ядовитой железы скорпиона Urodacus yaschenkoi (Luna–Ramirez et al., 2017, Toxins). AMP в типичном случае имеют суммарный положительный заряд и, таким образом, высокое сродство к мембранам бактерий. Данный пример демонстрирует, что влияние AMP на тлей опосредовано модулированием популяций бактерий, эндогенных по отношению к тлям, которые являются восприимчивыми к пептидам AMP. Одним штаммом бактерий–мишеней является , облигатный симбионт тлей.
Тли представляют собой насекомых, являющихся сельскохозяйственными вредителями, причиняющими непосредственный вред растению в результате кормления и выступающими в качестве переносчиков вирусов растений. Помимо этого, медвяная падь тлей способствует росту плесневых налетов грибов и привлекает вредоносных муравьев. Применение средств химической обработки, к сожалению, по–прежнему остается широко распространенным, что приводит к отбору устойчивых особей, уничтожение которых становится все более сложным.
Схема терапии
Указанный пептид или коктейль пептидов (более подробно см. нижеприведенные разделы Микроинъекция тлям – схема эксперимента и Заливание в листья и доставка через растения – схема эксперимента) вводили путем прямой микроинъекции тлям или доставляли посредством комбинации заливания в листья и доставки через растения. В качестве отрицательного контроля тлям вводили путем микроинъекции воду (в экспериментах по микроинъекции), или их помещали на листья, в которые была произведена инъекция воды, и в воду в пробирке (для экспериментов по заливанию в листья и доставке через растение). Растворы для обработки состояли из 20 нл 5 мкг/мл D3 или D10, растворенных в воде (для микроинъекций тлям), или 40 мкг/мл коктейля из D10, Uy17, D3 и UyCt3 в воде для инъекции в листья и доставки через растение (в пробирке Eppendorf).
Микроинъекция тлям – схема эксперимента
Микроинъекцию осуществляли с помощью автоматического нанолитрового инъектора NanoJet III с выдвижной иглой из боросиликатного стекла собственного изготовления (Drummond Scientific; № по кат. 3–000–203–G/XL). Тлей (линии LSR–1, Acyrthosiphon pisum) выращивали на растениях конских бобов (бобы Vroma vicia от Johnny's Selected Seeds) в инкубаторе с контролируемым климатом (фотопериод с 16 ч. света/8 ч. темноты; 60±5% RH; 25±2°C). Перед использованием для выкармливания тлей растения конских бобов выращивали в почвенной смеси для горшечных культур при 24°C при 16 ч. света и 8 ч. темноты. Для ограничения материнских эффектов или различий в состоянии здоровья между растениями 5–10 взрослых особей из разных растений распределяли среди 10 растений в возрасте двух недель и оставляли размножаться до высокой плотности в течение 5–7 дней. В каждой группе обработки было примерно одно и то же число получивших инъекцию особей с каждого из растений коллекции. Взрослым тлям вводили микроинъекцию 20 нл воды или 100 нг (20 мкл 5 мкг/мл раствора) пептида D3 или D10 в брюшную часть груди. Скорость микроинъекции составляла 5 нл/сек. После инъекции тлей помещали в глубокую чашку Петри, содержащую лист конских бобов, черешок которого находился в 2% агаре.
Пептиды синтезировали в Bio–Synthesis с чистотой >75%. 1 мг лиофилизированного пептида разводили в 500 мкл 80% ацетонитрила, 20% воды и 0,1% TFA, 100 мкл (100 мкг) разделяли на аликвоты в 10 отдельных пробирок Eppendorf и оставляли высыхать.
Buchnera
Buchnera
Через 5 дней после обработки ДНК экстрагировали из оставшихся тлей в каждой группе обработки. Вкратце, поверхность тела тлей стерилизовали путем погружения тли в 6% раствор отбеливателя примерно на 5 секунд. Затем тлей промывали в стерильной воде, и ДНК экстрагировали из каждой отдельной тли с помощью набора для экстракции ДНК (Qiagen, набор DNeasy) в соответствии с инструкциями производителя. Концентрацию ДНК измеряли посредством количественной оценки нуклеиновой кислоты с использованием NanoDrop, и число копий ДНК  и тлей измеряли с помощью qPCR. Праймерами, используемыми для , были Buch_groES_18F (CATGATCGTGTGCTTGTTAAG; SEQ ID NO: 228) и Buch_groES_98R (CTGTTCCTCGAGTCGATTTCC; SEQ ID NO: 229) (Chong and Moran, 2016 PNAS). Праймерами, используемыми для тлей, были ApEF1a 107F (CTGATTGTGCCGTGCTTATTG; SEQ ID NO: 230) и ApEF1a 246R (TATGGTGGTTCAGTAGAGTCC; SEQ ID NO: 231) (Chong and Moran, 2016 PNAS). qPCR проводили с использованием скорости линейного изменения для qPCR–амплификации 1,6 градуса C/с и следующих условий: 1) 95°C в течение 10 минут, 2) 95°C в течение 15 секунд, 3) 55°C в течение 30 секунд, 4) повторение этапов 2–3 40x, 5) 95°C в течение 15 секунд, 6) 55°C в течение 1 минуты, 7) изменение скорости линейного изменения до 0,15 градуса C/с, 8) 95°C в течение 1 секунды. Данные qPCR анализировали с помощью аналитического программного обеспечения (Thermo Fisher Scientific, QuantStudio Design and Analysis).
Микроинъекция тлям пептидов скорпиона D3 и D10 приводит к снижению выживаемости насекомых
A. pisum
Схема эксперимента
–го
–го
Тлей  LSR–1 на стадии личинок 1 и 2 возраста разделяли на три отдельные группы обработки, как определено в разделе  (что описано в данном документе). Тлей отслеживали ежедневно, и определяли показатель выживаемости. Через 5 дней после обработки тли, которым инъецировали пептиды скорпиона, имели более низкие показатели выживаемости по сравнению с контрольными особями, которым инъецировали воду (9, 35 и 45% выживаемость в случае инъекции D3, D10 и воды соответственно) (фиг. 41). Эти данные указывают на то, что имело место снижение выживаемости при обработке с помощью АМР скорпиона D3 и D10.
Микроинъекция тлям пептидов скорпиона D3 и D10 приводит к снижению количества эндосимбионтов Buchnera
Buchnera
Buchnera
Buchnera
Buchnera
Buchnera
В частности, для исследования того, приводила ли инъекция AMP скорпиона D3 и D10 к потере  у тлей и влияла ли эта потеря на приспособленность тлей, ДНК экстрагировали из тлей в каждой группе обработки через 5 дней после инъекции, и проводили qPCR для определения числа копий /тлей. Тли, которым инъецировали только воду, имели высокие соотношения количества ДНК /тлей (47,4), тогда как тли, которым инъецировали D3 и D10, имели более низкие соотношения количества ДНК /тлей (25,3 и 30,9 соответственно) (фиг. 42). Эти данные указывают на то, что обработка пептидами скорпиона D3 и D10 приводила к снижению уровней бактерий–симбионтов .
Заливание в листья и доставка через растения – схема эксперимента
Buchnera
Тлей Acyrthosiphon pisum eNASCO (в которых содержатся  и Serratia) выращивали на растениях конских бобов (бобы Vroma vicia от Johnny's Selected Seeds), как описано выше. Для экспериментов тлей на стадии личинок первого и второго возраста собирали со здоровых растений и разделяли на 2 различные группы обработки: 1) отрицательный контроль (обработка водой), 2) раствор для обработки, состоящий из 40 мкг/мл каждого из D10, Uy17, D3 и UyCt3 в воде. Для каждой группы обработки получали примерно одно и то же число особей с каждого из растений коллекции.
Пептиды синтезировали, растворяли и разделяли на аликвоты, как описано выше. Для обработки (см. раздел Схема терапии) воду добавляли к 100 мкг аликвоты пептида с получением необходимой конечной концентрации (40 мкг/мл). Четыре пептида объединяли с получением раствора коктейля пептидов. Этот раствор применяли для заливания в листья путем инъекции. После инъекции черешки листьев, в которые была произведена инъекция, помещали в пробирку Eppendorf на 1,5 мл, которую затем запечатывали парафильмом. Эту систему вскармливания затем помещали в глубокую чашку Петри (Fisher Scientific, № по кат. FB0875711), и тлей наносили на листья растения.
Для каждой обработки на каждый лист помещали 41–49 тлей. Системы вскармливания заменяли каждые 2–3 дня на протяжении всего эксперимента. У тлей ежедневно отслеживали выживаемость, и мертвых тлей удаляли из глубокой чашки Петри в случае их обнаружения.
Обработка коктейлем пептидов скорпиона приводит к повышенной смертности тлей
Показатель выживаемости тлей также измеряли в ходе обработок. Через 6 дней после обработки тли, обработанные коктейлем пептидов, имели более низкие показатели выживаемости по сравнению с тлями, обработанными водой, а через 9 дней эффект был более очевидным (16 и 29% выживаемость в случае обработки коктейлем пептидов и водой соответственно) (фиг. 43). Эти данные указывают на то, что имело место снижение выживаемости при обработке коктейлем AMP скорпиона, и, как показано в предыдущих примерах, эти AMP снижали уровни эндосимбионтов у тлей.
В совокупности эти данные, описанные ранее, демонстрировали способность уничтожать тлей и уменьшать их продолжительность жизни и эндогенные популяции бактерий, например, приспособленность, посредством их обработки отдельным природным противомикробным пептидом скорпиона или коктейлем пептидов.
Пример 19. Тли, обработанные противомикробным пептидом, слитым с пептидом, проникающим в клетку
Buchnera
Данный пример демонстрирует обработку тлей противомикробным пептидом скорпиона (AMP) (Uy192), слитым с пептидом, проникающим в клетку, полученным из вируса. AMP Uy192 представляет собой один из нескольких недавно идентифицированных AMP в транскриптоме ядовитой железы скорпиона Urodacus yaschenkoi (Luna–Ramirez et al., 2017, Toxins). AMP в типичном случае имеют суммарный положительный заряд и, таким образом, высокое сродство к мембранам бактерий. Для усиления доставки пептида скорпиона Uy192 в клетки тлей пептид синтезировали слитым с частью белка–трансактиватора транскрипции (TAT) вируса иммунодефицита человека I (HIV–1). Предыдущие исследования показали, что конъюгирование этого белка, проникающего в клетку (CPP), с другими молекулами увеличивало их поглощение клетками путем трансдукции (Zhou et al., 2015 Journal of Insect Science and Cermenati et al., 2011 Journal of Insect Physiology). Данный пример демонстрирует, что влияние слитого пептида на тлей было опосредовано модулированием популяций бактерий, эндогенных по отношению к тлям, которые были восприимчивыми к противомикробному пептиду. Одним штаммом бактерий–мишеней является.
Тли представляют собой насекомых, являющихся сельскохозяйственными вредителями, причиняющими непосредственный вред растению в результате кормления и выступающими в качестве переносчиков вирусов растений. Помимо этого, медвяная падь тлей способствует росту плесневых налетов грибов и привлекает вредоносных муравьев. Применение средств химической обработки, к сожалению, по–прежнему остается широко распространенным, что приводит к отбору устойчивых особей, уничтожение которых становится все более сложным.
Схема терапии
Пептид скорпиона, конъюгированный с пептидом, проникающим в клетку, и флуоресцентно меченный с помощью 6FAM (Uy192+CPP+FAM), составляли для использования в комбинации заливания в листья и доставки через растения. Контрольный раствор (воду) или раствор для обработки (Uy192+CPP+FAM) инъецировали в лист и помещали в пробирку Eppendorf. Раствор для обработки содержал 100 мкг/мл Uy192+CPP+FAM в воде.
Заливание в листья и доставка через растения – схема эксперимента
Тлей Acyrthosiphon pisum LSR–1 выращивали на растениях конских бобов (бобы Vroma vicia от Johnny's Selected Seeds) в инкубаторе с контролируемым климатом (фотопериод с 16 ч. света/8 ч. темноты; 60±5% RH; 25±2°C). Перед использованием для выкармливания тлей растения конских бобов выращивали в почвенной смеси для горшечных культур при 24°C при 16 ч. света и 8 ч. темноты. Для ограничения материнских эффектов или различий в состоянии здоровья между растениями 5–10 взрослых особей из разных растений распределяли среди 10 растений в возрасте двух недель и оставляли размножаться до высокой плотности в течение 5–7 дней. Для экспериментов тлей на стадии личинок первого возраста собирали со здоровых растений и разделяли на 2 различные группы обработки: 1) отрицательный контроль (обработка водой), 2) обработка с помощью Uy192+CPP+FAM со 100 мкг/мл Uy192+CPP+FAM в воде. Для каждой группы обработки получали примерно одно и то же число особей с каждого из растений коллекции.
Для обработки (см. раздел Схема терапии) Uy192+CPP+FAM (аминокислотная последовательность: YGRKKRRQRRRFLSTIWNGIKGLL–FAM) синтезировали в Bio–Synthesis с чистотой >75%. 5 мг лиофилизированного пептида разводили в 1 мл 80% ацетонитрила, 20% воды и 0,1% TFA, 50 мкл (100 мкг) разделяли на аликвоты в отдельные пробирки Eppendorf и оставляли высыхать. Для обработки (см. раздел Схема терапии) 1 мл стерильной воды добавляли к 100 мкг аликвоты пептида с получением конечной концентрации Uy192+CPP+FAM (100 мкг/мл). Затем раствор инъецировали в лист растения, и черешок растения помещали в пробирку Eppendorf на 1,5 мл. Отверстие пробирки закрывали парафильмом. Эту систему вскармливания затем помещали в глубокую чашку Петри (Fisher Scientific, № по кат. FB0875711), и тлей наносили на листья растения. Эпифлуоресцентная визуализация листа подтверждала, что листья содержали пептид с зеленой флуоресцентной меткой в своей сосудистой системе.
Для каждой обработки на каждый лист помещали 30 тлей в трех повторностях. Системы вскармливания заменяли каждые 2–3 дня на протяжении всего эксперимента. У тлей ежедневно отслеживали выживаемость, и мертвых тлей удаляли из глубокой чашки Петри в случае их обнаружения. Помимо этого, стадию развития (личинки 1–го, 2–го, 3–го, 4–го, 5–го возраста и 5R (размножающиеся личинки тлей 5–го возраста)) определяли ежедневно на протяжении всего эксперимента.
Buchnera
Buchnera
Через 5 дней после обработки ДНК экстрагировали из нескольких тлей в каждой группе обработки. Вкратце, поверхность тела тлей стерилизовали путем погружения тли в 6% раствор отбеливателя примерно на 5 секунд. Затем тлей промывали в стерильной воде, и ДНК экстрагировали из каждой отдельной тли с помощью набора для экстракции ДНК (Qiagen, набор DNeasy) в соответствии с инструкциями производителя. Концентрацию ДНК измеряли посредством количественной оценки нуклеиновой кислоты с использованием NanoDrop, и число копий ДНК  и тлей измеряли с помощью qPCR. Праймерами, используемыми для , были Buch_groES_18F (CATGATCGTGTGCTTGTTAAG; SEQ ID NO: 228) и Buch_groES_98R (CTGTTCCTCGAGTCGATTTCC; SEQ ID NO: 229) (Chong and Moran, 2016 PNAS). Праймерами, используемыми для тлей, были ApEF1a 107F (CTGATTGTGCCGTGCTTATTG; SEQ ID NO: 230) и ApEF1a 246R (TATGGTGGTTCAGTAGAGTCC; SEQ ID NO: 231) (Chong and Moran, 2016 PNAS). qPCR проводили с использованием скорости линейного изменения для qPCR–амплификации 1,6 градуса C/с и следующих условий: 1) 95°C в течение 10 минут, 2) 95°C в течение 15 секунд, 3) 55°C в течение 30 секунд, 4) повторение этапов 2–3 40x, 5) 95°C в течение 15 секунд, 6) 55°C в течение 1 минуты, 7) изменение скорости линейного изменения до 0,15 градуса C/с, 8) 95°C в течение 1 секунды. Данные qPCR анализировали с помощью аналитического программного обеспечения (Thermo Fisher Scientific, QuantStudio Design and Analysis).
Обработка пептидом скорпиона Uy192, слитым с пептидом, проникающим в клетку, задерживала и останавливала прогрессирование развития тлей
A. pisum
Тлей  LSR–1 на стадии личинок 1–го возраста разделяли на три отдельные группы обработки, как определено в разделе Схема эксперимента (выше). Тлей отслеживали ежедневно, и определяли число тлей на каждой стадии развития. Развитие как тлей, обработанных водой, так и тлей, обработанных пептидом скорпиона, слитым с пептидом, проникающим в клетку, было аналогичным в дни 0 и 1 (фиг. 44). Однако в день 2 тли, обработанные контролем, развивались до стадии личинок второго или третьего возраста, в то время как некоторые тли, обработанные пептидом скорпиона, слитым с пептидом, проникающим в клетку, оставались на стадии личинок первого возраста (фиг. 44). Даже через 3 дня после обработки некоторые тли, обработанные пептидом скорпиона, слитым с пептидом, проникающим в клетку, оставались на стадии личинок первого возраста (фиг. 44). Через 7 дней после обработки большинство тлей, обработанных водой, развивались до стадии личинок 5–го возраста или стадии размножающихся личинок 5–го возраста. В отличие от этого, только 50 процентов тлей, обработанных пептидом скорпиона, слитым с пептидом, проникающим в клетку, развивались до стадии личинок 5–го возраста, тогда как ~42 и ~8 процентов тлей оставались на стадии личинок 3–го или 4–го возраста соответственно (фиг. 44). Эти данные указывают на то, что обработка пептидом скорпиона Uy192, слитым с пептидом, проникающим в клетку, задерживала и останавливала прогрессирование развития тлей.
Обработка пептидом скорпиона Uy192, слитым с пептидом, проникающим в клетку, приводила к повышенной смертности тлей
Показатель выживаемости тлей также измеряли в ходе обработок. Примерно 40% тлей, обработанных только контролем, выживали после 7–дневного эксперимента (фиг. 45). В отличие от этого, выживаемость была значимо меньшей у тлей, обработанных с помощью 100 мг/мл Uy192+CPP+FAM (p=0,0036, согласно логарифмическому ранговому критерию Кокса–Мантеля), при этом только 16% тлей доживали до дня 7 (фиг. 45). Эти данные указывают на то, что имело место снижение выживаемости при обработке пептидом скорпиона Uy192, слитым с пептидом, проникающим в клетку.
Обработка пептидом скорпиона, слитым с пептидом, проникающим в клетку, приводила к снижению соотношений количества ДНК Buchnera/тлей
Buchnera
Buchnera
Buchnera
Buchnera
В частности, для исследования того, приводила ли обработка с помощью Uy192+CPP+FAM к потере  у тлей и влияла ли эта потеря на приспособленность тлей, ДНК экстрагировали из тлей в каждой группе через 5 дней после обработки, и проводили qPCR для определения числа копий /тлей. Тли, обработанные только водой, имели высокие соотношения числа копий ДНК /тлей (~134). В отличие от этого, тли, обработанные пептидом скорпиона, слитым с пептидом, проникающим в клетку, имели в ~1,8 раза меньше копий ДНК /тлей через 5 дней после обработки (фиг. 46). Эти данные указывают на то, что обработка пептидом скорпиона, слитым с пептидом, проникающим в клетку, снижала уровни эндосимбионтов.
Пептид скорпиона, слитый с пептидом, проникающим в клетку, свободно проникал в бактериоциты с оказанием противодействия Buchnera
Buchnera
Для исследования того, способствовал ли непосредственно пептид, проникающий в клетку, доставке пептида скорпиона в бактериоциты, выделенные бактериоциты подвергали прямому воздействию слитого белка и визуализировали. Бактериоциты извлекали из тлей в среде Шнайдера с добавлением 1% вес./об. BSA (среде Шнайдера с BSA) и помещали в лунку для визуализации, содержащую 20 мкл среды Шнайдера. 100 мкг аликвоты лиофилизированного пептида скорпиона ресуспендировали в 100 мкл среды Шнайдера с получением 1 мг/мл раствора, и 5 мкл этого раствора примешивали в лунку, содержащую бактериоциты. Спустя 30 минут инкубирования при комнатной температуре бактериоциты тщательно промывали для удаления любого избытка свободного пептида в растворе. Изображения бактериоцитов получали до и после инкубирования (фиг. 47). Слитый пептид проникал через мембраны бактериоцита и был непосредственно доступен для .
В совокупности эти данные демонстрируют способность уничтожать тлей и уменьшать их интенсивность развития, продолжительность жизни и эндогенные популяции бактерий, например, приспособленность, посредством их обработки противомикробным пептидом скорпиона Uy192, слитым с пептидом, проникающим в клетку.
Пример 20. Тли, обработанные аналогами витаминов
Buchnera
Plasmodium falciparum
Данный пример демонстрирует обработку тлей провитамином пантотенолом, который представляет собой спиртовой аналог пантотеновой кислоты (витамин B5). Тли имеют облигатных бактерий–эндосимбионтов , которые способствуют образованию ими незаменимых аминокислот и витаминов, в том числе витамина B5. Предыдущее исследование показало, что пантотенол ингибирует рост  путем ингибирования специфических киназ паразита (Saliba et al., 2005). Была выдвинута гипотеза, что обработка тлей пантотенолом была бы пагубной для симбиоза бактерия–насекомое, отрицательно влияя таким образом на приспособленность тлей. Данный пример демонстрирует, что обработка пантотенолом снижает приспособленность тлей.
Тли представляют собой насекомых, являющихся сельскохозяйственными вредителями, причиняющими непосредственный вред растению в результате кормления и выступающими в качестве переносчиков вирусов растений. Помимо этого, медвяная падь тлей способствует росту плесневых налетов грибов и привлекает вредоносных муравьев. Применение средств химической обработки, к сожалению, по–прежнему остается широко распространенным, что приводит к отбору устойчивых особей, уничтожение которых становится все более сложным.
Схема терапии
Растворы пантотенола составляли в зависимости от способа доставки.
1) В искусственном рационе через растения: с 0 (отрицательный контроль) или 10 или 100 мкМ пантотенола, составленного в искусственном рационе (согласно Akey and Beck, 1971; см. раздел Схема эксперимента) без незаменимых аминокислот (2 мг/мл гистидина, 2 мг/мл изолейцина, 2 мг/мл лейцина, 2 мг/мл лизина, 1 мг/мл метионина, 1,62 мг/мл фенилаланина, 2 мг/мл треонина, 1 мг/мл триптофана и 2 мг/мл валина).
2) Покрытие листьев: 100 мкл 0,025% неионогенного кремнийорганического поверхностно–активного растворителя Silwet L–77 в воде (отрицательный контроль) или 100 мкл 50 мкг/мл рифампицина, составленного в растворе растворителя, применяли непосредственно в отношении поверхности листьев и оставляли высыхать.
Доставка через растения – схема эксперимента
Тлей (eNASCO, Acyrthosiphon pisum) выращивали на растениях конских бобов (бобы Vroma vicia от Johnny's Selected Seeds) в инкубаторе с контролируемым климатом (фотопериод с 16 ч. света/8 ч. темноты; 60±5% RH; 25±2°C). Перед использованием для выкармливания тлей растения конских бобов выращивали в почвенной смеси для горшечных культур при 24°C при 16 ч. света и 8 ч. темноты. Для ограничения материнских эффектов или различий в состоянии здоровья между растениями 5–10 взрослых особей из разных растений распределяли среди 10 растений в возрасте двух недель и оставляли размножаться до высокой плотности в течение 5–7 дней. Для экспериментов тлей на стадии личинок первого и второго возраста собирали со здоровых растений и разделяли на 3 различные группы обработки: 1) только искусственный рацион без незаменимых аминокислот, 2) только искусственный рацион без незаменимых аминокислот и 10 мкМ пантотенола и 3) только искусственный рацион без незаменимых аминокислот и 100 мкМ пантотенола. Для каждой группы обработки получали примерно одно и то же число особей с каждого из растений коллекции.
Используемый искусственный рацион готовили, как описано ранее (Akey and Beck, 1971 Continuous Rearing of the Pea Aphid, Acyrthosiphon pisum, on a Holidic Diet), с незаменимыми аминокислотами и без них (2 мг/мл гистидина, 2 мг/мл изолейцина, 2 мг/мл лейцина, 2 мг/мл лизина, 1 мг/мл метионина, 1,62 мг/мл фенилаланина, 2 мг/мл треонина, 1 мг/мл триптофана и 2 мг/мл валина), за исключением того, что ни в одном случае рацион не включал гомосерин или бета–аланилтирозин. Значение pH рационов доводили до 7,5 с помощью KOH, и рационы стерилизовали фильтрацией с помощью фильтра с размером пор 0,22 мкм и хранили при 4°C в течение короткого срока (<7 дней) или при –80°C в течение длительного срока.
Растворы пантотенола (Sigma, № по кат. 295787) готовили в концентрации 10 мкМ и 100 мкМ в искусственном рационе без незаменимых аминокислот, стерилизовали путем пропускания через шприцевой фильтр с размером пор 0,22 мкм и хранили при –20°C. Для обработок (см. раздел Схема терапии) подходящее количество исходного раствора добавляли к искусственному рациону без незаменимых аминокислот с получением конечной концентрации 10 или 100 мкМ пантотенола. Рацион затем помещали в пробирку Eppendorf на 1,5 мл с черешком и листом конских бобов, и отверстие пробирки закрывали парафильмом. Эту систему вскармливания искусственным рационом затем помещали в глубокую чашку Петри (Fisher Scientific, № по кат. FB0875711), и тлей наносили на листья растения.
Для каждой обработки на каждый лист помещали 16–20 тлей. Системы вскармливания искусственным рационом заменяли каждые 2–3 дня на протяжении всего эксперимента. У тлей ежедневно отслеживали выживаемость, и мертвых тлей удаляли из глубокой чашки Петри, в которой содержалась система вскармливания искусственным рационом, в случае их обнаружения.
Помимо этого, стадию развития (личинки 1–го, 2–го, 3–го, 4–го, 5–го возраста) определяли ежедневно на протяжении всего эксперимента. При достижении тлями стадии личинок 4–го возраста им предоставляли их собственные искусственные системы вскармливания в глубокой чашке Петри для того, чтобы можно было контролировать плодовитость, как только они достигали зрелого возраста.
В случае взрослых тлей новых нимф считали ежедневно и затем исключали. В конце экспериментов плодовитость определяли в виде среднего числа потомков, образуемых ежедневно после достижения тлей зрелого возраста. Снимки тлей получали на протяжении всего эксперимента для оценивания различий в размерах между группами обработки.
Buchnera
Buchnera
Через 8 дней после обработки ДНК экстрагировали из нескольких тлей из каждой группы обработки. Вкратце, поверхность тела тлей стерилизовали путем погружения тли в 6% раствор отбеливателя примерно на 5 секунд. Затем тлей промывали в стерильной воде, и ДНК экстрагировали из каждой отдельной тли с помощью набора для экстракции ДНК (Qiagen, набор DNeasy) в соответствии с инструкциями производителя. Концентрацию ДНК измеряли посредством количественной оценки нуклеиновой кислоты с использованием NanoDrop, и число копий ДНК  и тлей измеряли с помощью qPCR. Праймерами, используемыми для , были Buch_groES_18F (CATGATCGTGTGCTTGTTAAG; SEQ ID NO: 228) и Buch_groES_98R (CTGTTCCTCGAGTCGATTTCC; SEQ ID NO: 229) (Chong and Moran, 2016 PNAS). Праймерами, используемыми для тлей, были ApEF1a 107F (CTGATTGTGCCGTGCTTATTG; SEQ ID NO: 230) и ApEF1a 246R (TATGGTGGTTCAGTAGAGTCC; SEQ ID NO: 231) (Chong and Moran, 2016 PNAS). qPCR проводили с использованием скорости линейного изменения для qPCR–амплификации 1,6 градуса C/с и следующих условий: 1) 95°C в течение 10 минут, 2) 95°C в течение 15 секунд, 3) 55°C в течение 30 секунд, 4) повторение этапов 2–3 40x, 5) 95°C в течение 15 секунд, 6) 55°C в течение 1 минуты, 7) изменение скорости линейного изменения до 0,15 градуса C/с, 8) 95°C в течение 1 секунды. Данные qPCR анализировали с помощью аналитического программного обеспечения (Thermo Fisher Scientific, QuantStudio Design and Analysis).
Обработка аналогами витаминов задерживает развитие тлей
Тлей eNASCO на стадии личинок 1–го и 2–го возраста разделяли на три отдельные группы обработки, как определено в разделе Доставка через растения – схема эксперимента (что описано в данном документе). Тлей отслеживали ежедневно, и определяли число тлей на каждой стадии развития. Тли, обработанные только искусственным рационом без незаменимых аминокислот, начинали достигать зрелого возраста (стадии личинок 5–го возраста) примерно через 5 дней (фиг. 48A). Развитие задерживалось у тлей, обработанных пантотенолом, особенно во второй и третий дни после обработки (фиг. 48A), что указывало на то, что обработка пантотенолом ухудшает развитие тлей. В конечном счете большинство тлей из каждой группы обработки достигали зрелого возраста и начинали размножаться. Помимо отслеживания динамики стадий развития тлей, тлей также визуализировали, и определяли площадь тела тлей. Все тли имели одинаковый размер через 1 день после обработки, однако через 3 дня после обработки тли, обработанные пантотенолом, имели меньшую площадь тела, чем необработанные контрольные особи. Кроме того, тли, обработанные пантотенолом, имели намного меньший прирост размера тела (определенный, исходя из площади тела) в течение эксперимента по сравнению с тлями, обработанными только искусственным рационом без незаменимых аминокислот (фиг. 48B).
Обработка аналогами витаминов повышала смертность тлей
Показатель выживаемости тлей также измеряли в ходе обработок. Тли, выкармливаемые только искусственным рационом без незаменимых аминокислот, имели более высокие показатели выживаемости по сравнению с тлями, обработанными 10 или 100 мкM пантотенола (фиг. 49), что указывало на то, что обработка пантотенолом отрицательно влияла на приспособленность тлей.
Обработка пантотенолом снижает плодовитость тлей
В ходе обработок также отслеживали плодовитость тлей. Определяли долю тлей, доживших до зрелого возраста и появления способности к размножению. Примерно одна четверть тлей, обработанных искусственным рационом без незаменимых аминокислот, доживала до достижения зрелого возраста через 8 дней после обработки (фиг. 50A). В отличие от этого, только немного более 1/10 тлей, обработанных 10 или 100 мкМ пантотенола, доживали до достижения зрелого возраста и размножались через 8 дней после обработки. Также измеряли средний день, на который тли в каждой группе обработки начинали размножаться, и для всех групп обработки средним днем, на который тли начинали размножаться, был 7–й день (фиг. 50B). Кроме того, также отслеживали среднее число потомков, образуемых за день зрелыми размножающимися тлями. Тли, обработанные только искусственным рационом без незаменимых аминокислот, образовывали примерно 7 потомков/день. В отличие от этого, тли, обработанные 10 и 100 мкМ пантотенола, образовывали только соответственно примерно 4 и 5 потомков/день, как показано на фиг. 50C. В совокупности эти данные указывают на то, что обработка пантотенолом приводила к утрате способности к размножению у тлей.
Обработка пантотенолом не влияет отрицательно на количество Buchnera у тлей
Buchnera
Buchnera
Buchnera
Buchnera
В частности, для исследования того, приводила ли обработка пантотенолом к потере  у тлей и влияла ли эта потеря на приспособленность тлей, ДНК экстрагировали из тлей в каждой группе обработки через 8 дней после обработки, и проводили qPCR для определения числа копий /тлей. Тли, обработанные только искусственным рационом без незаменимых аминокислот, имели высокие соотношения числа копий ДНК /тлей, как и тли, обработанные каждой из двух концентраций пантотенола (фиг. 51). Эти данные указывают на то, что обработка пантотенолом непосредственно не влияла отрицательно на число копий ДНК /тлей.
Доставка путем покрытия листьев – схема эксперимента
Порошок пантотенола добавляли к 0,025% неионогенного кремнийорганического поверхностно–активного растворителя Silwet L–77 с получением конечной концентрации 10 мкМ пантотенола. Средство обработки стерилизовали фильтрацией с помощью фильтра с размером пор 0,22 мкм и хранили при 4 градусах C. Тлей (линии eNASCO, Acyrthosiphon pisum) выращивали на растениях конских бобов, как описано в предыдущем примере. Для экспериментов тлей на стадии личинок первого возраста собирали со здоровых растений и разделяли на 2 различные группы обработки: 1) отрицательный контроль (только раствор растворителя) и 2) 10 мкM пантотенола в растворителе. 100 мкл раствора поглощалось кусочком листа конских бобов размером 2×2 см.
Для каждой группы обработки получали примерно одно и то же число особей с каждого из растений коллекции. Для каждой обработки на каждый лист помещали 20 тлей. У тлей ежедневно отслеживали выживаемость, и мертвых тлей удаляли в случае их обнаружения. Помимо этого, стадию развития (личинки 1–го, 2–го, 3–го, 4–го, 5–го возраста и 5R, что обозначает размножающуюся личинку 5–го возраста) определяли ежедневно на протяжении всего эксперимента.
Обработка пантотенолом, доставляемым посредством покрытия листьев, не влияет отрицательно на развитие тлей
Тлей eNASCO на стадии личинок 1–го возраста разделяли на две отдельные группы обработки, как определено в разделе Схема эксперимента, что описано в данном документе. Тлей отслеживали ежедневно, и определяли число тлей на каждой стадии развития. Тли, помещенные на покрытые листья, обработанные контрольным раствором или раствором пантотенола, созревали при аналогичных скоростях в течение двух дней после обработки (фиг. 52). Эти данные указывают на то, что покрытие листьев пантотенолом не влияло отрицательно на развитие тлей.
Обработка пантотенолом, доставляемым посредством покрытия листьев, повышала смертность тлей
Buchnera
Показатель выживаемости тлей также измеряли в ходе обработок путем покрытия листьев. Тли, помещенные на листья, покрытые пантотенолом, имели более низкие показатели выживаемости, чем тли, помещенные на листья, покрытые контрольным раствором (фиг. 53). Эти данные указывают на то, что обработка пантотенолом, доставляемым посредством покрытия листьев, значимо (p=0,0019) отрицательно влияла на выживаемость тлей. Все тли погибали в данном эксперименте, и никаких оставшихся тлей не оставалось для экстрагирования из них ДНК и определения соотношения количества ДНК /тлей.
В совокупности эти данные, описанные в предыдущих примерах, демонстрируют способность уничтожать тлей и уменьшать их интенсивность развития, способность к размножению, продолжительность жизни и эндогенные популяции бактерий, например, приспособленность, посредством их обработки пантотенолом с помощью нескольких путей доставки.
Пример 21. Тли, обработанные коктейлем ингибиторов переносчиков аминокислот
Buchnera
Данный пример демонстрирует обработку тлей коктейлем аналогов аминокислот. Целью данной обработки было ингибирование захвата глутамина бактериоцитами с помощью переносчика глутамина ApGLNT1. Ранее было показано, что аргинин ингибирует захват глутамина с помощью переносчика глутамина (Price et al., 2014 PNAS), и была выдвинута гипотеза, что обработка аналогами аргинина или другими аналогами аминокислот также будет ингибировать захват незаменимых аминокислот бактериоцитами тлей. Данный пример демонстрирует, что снижение приспособленности при обработке было опосредовано модулированием популяций бактерий, эндогенных по отношению к тлям, которые были восприимчивыми к аналогам аминокислот. Одним штаммом бактерий–мишеней является.
Тли представляют собой насекомых, являющихся сельскохозяйственными вредителями, причиняющими непосредственный вред растению в результате кормления и выступающими в качестве переносчиков вирусов растений. Помимо этого, медвяная падь тлей способствует росту плесневых налетов грибов и привлекает вредоносных муравьев. Применение средств химической обработки, к сожалению, по–прежнему остается широко распространенным, что приводит к отбору устойчивых особей, уничтожение которых становится все более сложным.
Схема терапии
Коктейль аминокислот составляли для доставки посредством заливания в листья и через растение. Этот способ доставки заключался в инъекции в листья примерно 1 мл коктейля аминокислот в воде (см. ниже перечень компонентов коктейля) или 1 мл раствора отрицательного контроля, содержащего только воду.
Заливание в листья и доставка через растения – схема эксперимента
Buchnera
Тлей LSR–1 (в которых содержатся только ) Acyrthosiphon pisum выращивали на растениях конских бобов (бобы Vroma vicia от Johnny's Selected Seeds) в инкубаторе с контролируемым климатом (фотопериод с 16 ч. света/8 ч. темноты; 60±5% RH; 25±2°C). Перед использованием для выкармливания тлей растения конских бобов выращивали в почвенной смеси для горшечных культур при 24°C при 16 ч. света и 8 ч. темноты. Для ограничения материнских эффектов или различий в состоянии здоровья между растениями 5–10 взрослых особей из разных растений распределяли среди 10 растений в возрасте двух недель и оставляли размножаться до высокой плотности в течение 5–7 дней. Для экспериментов тлей на стадии личинок первого возраста собирали со здоровых растений и разделяли на 2 различные группы обработки: 1) отрицательный контроль (обработка водой) и 2) обработка коктейлем аминокислот. Коктейль аминокислот содержал каждое из следующих средств в указанных конечных концентрациях: 330 мкM L–NNA (N–нитро–L–аргинина; Sigma), 0,1 мг/мл L–канаванина (Sigma), 0,5 мг/мл D–аргинина (Sigma), 0,5 мг/мл D–фенилаланина (Sigma), 0,5 мг/мл D–гистидина (Sigma), 0,5 мг/мл D–триптофана (Sigma), 0,5 мг/мл D–треонина (Sigma), 0,5 мг/мл D–валина (Sigma), 0,5 мг/мл D–метионина (Sigma), 0,5 мг/мл D–лейцина и 6 мкM L–NMMA (цитрата) (Cayman Chemical). В лист конских бобов заливали ~1 мл раствора для обработки путем инъекции, и черешок растения помещали в пробирку Eppendorf на 1,5 мл, содержащую раствор для обработки. Отверстие пробирки закрывали парафильмом. Эту систему вскармливания затем помещали в глубокую чашку Петри (Fisher Scientific, № по кат. FB0875711), и тлей наносили на листья растения. Для каждой обработки в общей сложности 56–58 тлей помещали на каждый лист (каждая обработка состояла из двух повторностей по 28–31 тле). Для каждой группы обработки получали примерно одно и то же число особей с каждого из растений коллекции. Системы вскармливания заменяли каждые 2–3 дня на протяжении всего эксперимента. У тлей ежедневно отслеживали выживаемость, и мертвых тлей удаляли из глубокой чашки Петри в случае их обнаружения. Стадию развития тлей (стадию личинок 1–го, 2–го, 3–го, 4–го и 5–го возраста) определяли ежедневно на протяжении всего эксперимента, и микроскопические изображения тлей получали в день 5 с целью выполнения измерений площади тела тлей.
Исходные растворы L–NNA готовили в концентрации 5 мM в воде, стерилизовали путем пропускания через шприцевой фильтр с размером пор 0,22 мкм и хранили при –20°C. Исходные растворы L–канаванина готовили в концентрации 100 мг/мл в воде, стерилизовали путем пропускания через шприцевой фильтр с размером пор 0,22 мкм и хранили при 4°C. Исходные растворы D–аргинина и D–треонина готовили в концентрации 50 мг/мл в воде, стерилизовали путем пропускания через шприцевой фильтр с размером пор 0,22 мкм и хранили при 4°C. Исходные растворы D–валина и D–метионина готовили в концентрации 25 мг/мл в воде, стерилизовали путем пропускания через шприцевой фильтр с размером пор 0,22 мкм и хранили при 4°C. Исходные растворы D–лейцина готовили в концентрации 12 мг/мл в воде, стерилизовали путем пропускания через шприцевой фильтр с размером пор 0,22 мкм и хранили при 4°C. Исходные растворы D–фенилаланина и D–гистидина готовили в концентрации 50 мг/мл в 1M HCl, стерилизовали путем пропускания через шприцевой фильтр с размером пор 0,22 мкм и хранили при 4°C. Исходные растворы D–триптофана готовили в концентрации 50 мг/мл в 0,5M HCl, стерилизовали путем пропускания через шприцевой фильтр с размером пор 0,22 мкм и хранили при 4°C. Исходные растворы L–NMMA готовили в концентрации 6 мг/мл в стерильном PBS, стерилизовали путем пропускания через шприцевой фильтр с размером пор 0,22 мкм и хранили при –20°C. Для обработок (см. раздел Схема терапии) соответствующее количество исходного раствора добавляли к воде с получением конечной концентрации средства в коктейле, как указано выше.
Buchnera
Buchnera
Через 6 дней после обработки ДНК экстрагировали из нескольких тлей из каждой группы обработки. Вкратце, поверхность тела тлей стерилизовали путем погружения тли в 6% раствор отбеливателя примерно на 5 секунд. Затем тлей промывали в стерильной воде, и ДНК экстрагировали из каждой отдельной тли с помощью набора для экстракции ДНК (Qiagen, набор DNeasy) в соответствии с инструкциями производителя. Концентрацию ДНК измеряли посредством количественной оценки нуклеиновой кислоты с использованием NanoDrop, и число копий ДНК  и тлей измеряли с помощью qPCR. Праймерами, используемыми для , были Buch_groES_18F (CATGATCGTGTGCTTGTTAAG; SEQ ID NO: 228) и Buch_groES_98R (CTGTTCCTCGAGTCGATTTCC; SEQ ID NO: 229) (Chong and Moran, 2016 PNAS). Праймерами, используемыми для тлей, были ApEF1a 107F (CTGATTGTGCCGTGCTTATTG; SEQ ID NO: 230) и ApEF1a 246R (TATGGTGGTTCAGTAGAGTCC; SEQ ID NO: 231) (Chong and Moran, 2016 PNAS). qPCR проводили с использованием скорости линейного изменения для qPCR–амплификации 1,6 градуса C/с и следующих условий: 1) 95°C в течение 10 минут, 2) 95°C в течение 15 секунд, 3) 55°C в течение 30 секунд, 4) повторение этапов 2–3 40x, 5) 95°C в течение 15 секунд, 6) 55°C в течение 1 минуты, 7) изменение скорости линейного изменения до 0,15 градуса C/с, 8) 95°C в течение 1 секунды. Данные qPCR анализировали с помощью аналитического программного обеспечения (Thermo Fisher Scientific, QuantStudio Design and Analysis).
Обработка коктейлем аналогов аминокислот задерживала и останавливала прогрессирование развития тлей
Тлей LSR–1 на стадии личинок 1–го возраста разделяли на две отдельные группы обработки, как определено в разделе Заливание в листья и доставка через растения – схема эксперимента (что описано в данном документе). Тлей отслеживали ежедневно, и определяли число тлей на каждой стадии развития. Тли, обработанные водой, начинали достигать зрелого возраста (стадии личинок 5–го возраста) в день 5 после обработки (фиг. 54A). Через 6 дней после обработки ~20 процентов тлей, обработанных водой, достигали стадии личинок 5–го возраста. В отличие от этого, менее чем 3 процента тлей, обработанных коктейлем аминокислот, достигали стадии личинок 5–го возраста даже через 6 дней (фиг. 54A). Эта задержка в развитии при обработке коктейлем аминокислот была дополнительно представлена на примере путем измерений размера тлей, выполненных через 5 дней после обработки. Тли, обработанные только водой, имели площадь тела примерно 0,45 мм2, тогда как тли, обработанные коктейлем аминокислот, имели площадь тела примерно 0,33 мм2 (фиг. 54B). Эти данные указывают на то, что обработка коктейлем аминокислот задерживала развитие тлей, отрицательно влияя на приспособленность тлей.
Обработка коктейлем аналогов аминокислот приводила к снижению количества Buchnera у тлей
Buchnera
Buchnera
Buchnera
Buchnera
Buchnera
В частности, для исследования того, приводила ли обработка коктейлем аналогов аминокислот к потере  у тлей и влияла ли эта потеря на приспособленность тлей, ДНК экстрагировали из тлей в каждой группе обработки через 6 дней после обработки, и проводили qPCR для определения числа копий /тлей. Тли, помещенные на контрольный раствор, имели высокие соотношения числа копий ДНК /тлей. В отличие от этого, тли, помещенные на коктейль AA для обработки, характеризовались существенным снижением числа копий ДНК /тлей (фиг. 55), что указывало на то, что обработка коктейлем аналогов AA устраняла эндосимбиотические .
В совокупности эти данные демонстрируют способность уменьшать интенсивность развития и эндогенные популяции бактерий, например, приспособленность, у тлей посредством их обработки коктейлем аналогов аминокислот.
Пример 22. Тли, обработанные комбинацией средств (антибиотиком, пептидом и природным противомикробным средством)
Данный пример демонстрирует обработку тлей комбинацией из трех противомикробных средств – антибиотика (рифампицина), пептида (пептида скорпиона Uy192) и природного противомикробного средства (низкомолекулярного хитозана). В других примерах каждое из этих средств, введенное отдельно, приводило к уменьшению приспособленности тлей и снижению уровней эндосимбионтов. Данный пример демонстрирует, что посредством доставки комбинации средств обработки приспособленность тлей и уровни эндосимбионтов снижались так же, как и при обработке каждым отдельным средством в отдельности, или в лучшей степени.
Тли представляют собой насекомых, являющихся сельскохозяйственными вредителями, причиняющими непосредственный вред растению в результате кормления и выступающими в качестве переносчиков вирусов растений. Помимо этого, медвяная падь тлей способствует росту плесневых налетов грибов и привлекает вредоносных муравьев. Применение средств химической обработки, к сожалению, по–прежнему остается широко распространенным, что приводит к отбору устойчивых особей, уничтожение которых становится все более сложным.
Схема терапии
Комбинацию средств обработки составляли для доставки посредством заливания в листья и через растение. Этот способ доставки заключался в инъекции в листья примерно 1 мл комбинации средств обработки в воде (с конечными концентрациями 100 мкг/мл рифампицина, 100 мкг/мл Uy192 и 300 мкг/мл хитозана) или 1 мл раствора отрицательного контроля, содержащего только воду.
Заливание в листья и доставка через растения – схема эксперимента
Buchnera
Acyrthosiphon pisum
Vroma vicia
–го
–го
–го
–го
–го
Тлей LSR–1 (в которых содержатся только )  выращивали на растениях конских бобов (бобы  от Johnny's Selected Seeds) в инкубаторе с контролируемым климатом (фотопериод с 16 ч. света/8 ч. темноты; 60±5% RH; 25±2°C). Перед использованием для выкармливания тлей растения конских бобов выращивали в почвенной смеси для горшечных культур при 24°C при 16 ч. света и 8 ч. темноты. Для ограничения материнских эффектов или различий в состоянии здоровья между растениями 5–10 взрослых особей из разных растений распределяли среди 10 растений в возрасте двух недель и оставляли размножаться до высокой плотности в течение 5–7 дней. Для экспериментов тлей на стадии личинок первого возраста собирали со здоровых растений и разделяли на 2 различные группы обработки: 1) отрицательный контроль (обработка водой) и 2) обработка комбинацией из 100 мкг/мл рифампицина, 100 мкг/мл Uy192 и 300 мкг/мл хитозана. В лист конских бобов заливали ~1 мл раствора для обработки путем инъекции, и черешок растения помещали в пробирку Eppendorf на 1,5 мл, содержащую раствор для обработки.Отверстие пробирки закрывали парафильмом. Эту систему для обработки затем помещали в глубокую чашку Петри (Fisher Scientific, № по кат. FB0875711), и тлей наносили на листья растения. Для каждой обработки в общей сложности 56 тлей помещали на каждый лист (каждая обработка состояла из двух повторностей по 28 тлей). Для каждой группы обработки получали примерно одно и то же число особей с каждого из растений коллекции. Системы вскармливания заменяли каждые 2–3 дня на протяжении всего эксперимента. У тлей ежедневно отслеживали выживаемость, и мертвых тлей удаляли из глубокой чашки Петри в случае их обнаружения. Стадию развития тлей (стадию личинок 1, 2, 3, 4 и 5 возраста) определяли ежедневно на протяжении всего эксперимента, и микроскопические изображения тлей получали в день 5 с целью выполнения измерений площади тела тлей.
Исходный раствор рифампицина (Tokyo Chemical Industry, LTD) готовили в концентрации 25 мг/мл в метаноле, стерилизовали путем пропускания через шприцевой фильтр с размером пор 0,22 мкм и хранили при –20°C. Для обработки подходящее количество исходного раствора добавляли к воде с получением конечной концентрации 100 мкг/мл рифампицина. Uy192 синтезировали в Bio–Synthesis с чистотой >75%. 1 мг лиофилизированного пептида разбавляли в 500 мкл 80% ацетонитрила, 20% воды и 0,1% TFA. 100 мкл (100 мкг) разделяли на аликвоты в 10 отдельных пробирок Eppendorf и оставляли высыхать. Для обработки 1 мл воды добавляли к 100 мкг аликвоты пептида с получением конечной концентрации 100 мкг/мл Uy192. Исходный раствор хитозана (Sigma, № по кат. 448869–50G)готовили в концентрации 1% в уксусной кислоте, стерилизовали автоклавированием и хранили при 4°C. Для обработок подходящее количество исходного раствора добавляли к воде с получением конечной концентрации хитозана 300 мкг/мл.
Buchnera
Buchnera
Через 6 дней после обработки ДНК экстрагировали из нескольких тлей из каждой группы обработки. Вкратце, поверхность тела тлей стерилизовали путем погружения тли в 6% раствор отбеливателя примерно на 5 секунд. Затем тлей промывали в стерильной воде, и ДНК экстрагировали из каждой отдельной тли с помощью набора для экстракции ДНК (Qiagen, набор DNeasy) в соответствии с инструкциями производителя. Концентрацию ДНК измеряли посредством количественной оценки нуклеиновой кислоты с использованием NanoDrop, и число копий ДНК  и тлей измеряли с помощью qPCR. Праймерами, используемыми для , были Buch_groES_18F (CATGATCGTGTGCTTGTTAAG; SEQ ID NO: 228) и Buch_groES_98R (CTGTTCCTCGAGTCGATTTCC; SEQ ID NO: 229) (Chong and Moran, 2016 PNAS). Праймерами, используемыми для тлей, были ApEF1a 107F (CTGATTGTGCCGTGCTTATTG; SEQ ID NO: 230) и ApEF1a 246R (TATGGTGGTTCAGTAGAGTCC; SEQ ID NO: 231) (Chong and Moran, 2016 PNAS). qPCR проводили с использованием скорости линейного изменения для qPCR–амплификации 1,6 градуса C/с и следующих условий: 1) 95°C в течение 10 минут, 2) 95°C в течение 15 секунд, 3) 55°C в течение 30 секунд, 4) повторение этапов 2–3 40x, 5) 95°C в течение 15 секунд, 6) 55°C в течение 1 минуты, 7) изменение скорости линейного изменения до 0,15 градуса C/с, 8) 95°C в течение 1 секунды. Данные qPCR анализировали с помощью аналитического программного обеспечения (Thermo Fisher Scientific, QuantStudio Design and Analysis).
Обработка комбинацией из трех противомикробных средств задерживала и останавливала прогрессирование развития тлей
–го
–го
–го
–го
2
2
Заливание в листья и доставка через растения
схема эксперимента
Тлей LSR–1 на стадии личинок 1 возраста разделяли на две отдельные группы обработки, как определено в разделе  –  (что описано в данном документе). Тлей отслеживали ежедневно, и определяли число тлей на каждой стадии развития. Тли, обработанные водой, начинали достигать зрелого возраста (стадии личинок 5 возраста) в день 5 после обработки (фиг. 56A). Через 6 дней после обработки ~20 процентов тлей, обработанных водой, достигали стадии личинок 5 возраста. В отличие от этого, тли, обработанные комбинацией из трех средств, не достигали стадии личинок 5 возраста даже через 6 дней (фиг. 56A). Эта задержка в развитии при комбинированной обработке была дополнительно представлена на примере путем измерений размера тлей, выполненных через 5 дней после обработки. Тли, обработанные только водой, имели площадь тела примерно 0,45 мм, тогда как тли, обработанные комбинацией из 3 средств, имели площадь тела примерно 0,26 мм (фиг. 56B). Эти данные указывают на то, что обработка комбинацией средств задерживала развитие тлей, отрицательно влияя на приспособленность тлей.
Обработка комбинацией из трех противомикробных средств повышала смертность тлей
Выживаемость также отслеживали ежедневно после обработки. Через 2 дня после обработки примерно 75 процентов тлей, обработанных водой, были живыми, тогда как только 62 процента тлей, обработанных комбинацией средств, были живыми. Эта тенденция к большему количеству тлей, переживших обработку, в контрольной группе (обработанных водой) сохранялась в течение всего эксперимента. Через 6 дней после обработки выживали 64 процента контрольных (обработанных водой) тлей, тогда как среди тлей, обработанных комбинацией рифампицина, Uy192 и хитозана, выживали 58 процентов (фиг. 57). Эти данные указывают на то, что комбинация средств обработки отрицательно влияла на выживаемость тлей.
Обработка комбинацией из трех средств приводила к снижению количества Buchnera у тлей
Buchnera
Buchnera
Buchnera/
Buchnera/
В частности, для исследования того, приводила ли обработка комбинацией пептида, антибиотика и природного противомикробного средства к потере  у тлей и влияла ли эта потеря на приспособленность тлей, ДНК экстрагировали из тлей в каждой группе обработки через 6 дней после обработки, и проводили qPCR для определения числа копий /тлей. Тли, обработанные только водой, имели соотношения количества ДНК тлей, составляющие примерно 2,3 (фиг. 58). В отличие от этого, тли, обработанные комбинацией пептида, антибиотика и природного противомикробного средства, имели примерно в 2 раза более низкие соотношения количества ДНК тлей (фиг. 58). Эти данные указывают на то, что комбинированная обработка снижала уровни эндосимбионтов, что приводило к снижению приспособленности тлей.
В совокупности эти данные демонстрируют способность уменьшать интенсивность развития и эндогенные популяции бактерий, например, приспособленность, у тлей посредством их обработки комбинацией пептида, антибиотика и природного противомикробного средства.
Пример 23. Долгоносики, обработанные раствором антибиотика
Sitophilus
Candidatus
Sodalis pierantonius
Данный пример демонстрирует влияние обработки долгоносиков ципрофлоксацином, бактерицидным антибиотиком, который ингибирует активность ДНК–гиразы и топоизомеразы, двух ферментов, необходимых для репликации ДНК. Данный пример демонстрирует, что фенотипическое влияние ципрофлоксацина на долгоносиков опосредовано модулированием популяций бактерий, эндогенных по отношению к долгоносикам, которые являются восприимчивыми к ципрофлоксацину. Одним штаммом бактерий–мишеней является первичный эндосимбионт (SPE, ).
Sitophilus
Sitophilus zemais
Sitophilus oryzae
Sitophilus granarius
Род включает три вида долгоносиков, известных как амбарные вредители (, кукурузный долгоносик; , рисовый долгоносик; и , зерновой слоник). Во всех трех этих видах долгоносиков содержится внутриклеточный симбионт SPE, который обеспечивает долгоносика питательными веществами, такими как витамины и аминокислоты, и улучшает его митохондриальный энергетический метаболизм. Амбарных вредителей контролируют главным образом с помощью синтетических инсектицидов, что приводит к отбору устойчивых особей, уничтожение которых становится все более сложным.
Схема эксперимента
Sitophilus zeamais
Кукурузных долгоносиков Sitophilus () выкармливали на органической кукурузе при 27,5°C и 70% относительной влажности. Перед использованием для выкармливания долгоносиков кукурузу замораживали в течение 7 дней и затем доводили до 10% влажности стерильной водой. Спаривающиеся пары взрослых самцов и самок разделяли на 3 различные группы обработки для экспериментов, которые выполняли в трех повторностях: 1) контроль c водой, 2) 250 мкг/мл ципрофлоксацина и 3) 2,5 мг/мл ципрофлоксацина. Исходные растворы ципрофлоксацина (Sigma) готовили в концентрации 25 мг/мл в 0,1 н. HCl, стерилизовали путем пропускания через шприцевой фильтр с размером пор 0,22 мкм и хранили при –20°C. Для обработок подходящее количество исходного раствора разбавляли в стерильной воде.
Долгоносиков подвергали трем последовательным обработкам.
1. Первая обработка включала в себя замачивание 25 г кукурузы с каждым из средств для трех групп обработки, приведенных выше: 1) контроль c водой, 2) 250 мкг/мл ципрофлоксацина и 3) 2,5 мг/мл ципрофлоксацина. Вкратце, 25 г кукурузы помещали в коническую пробирку на 50 мл, и каждое из средств обработки добавляли до полного заполнения пробирки. Пробирку помещали на шейкер на 1,5 часа, после чего кукурузу удаляли и помещали в глубокую чашку Петри и сушили на воздухе. Спаривающиеся пары самцов и самок затем добавляли в каждую группу обработки и оставляли вскармливаться в течение 4 дней.
Оценка потомства
2. Через 4 дня спаривающиеся пары удаляли и подвергали второй обработке, помещая их на 25 г новой кукурузы, обработанной 1) контролем c водой, 2) 250 мкг/мл ципрофлоксацина и 3) 2,5 мг/мл ципрофлоксацина. Спаривающиеся пары вскармливались и откладывали яйца на этой кукурузе в течение 7 дней. Кукурузу после второй обработки оценивали в отношении появления потомства (см. раздел ниже)
3. Спаривающиеся пары подвергали заключительной обработке, которая включала комбинацию из погружения их в средство обработки (1) контроль c водой, 2) 250 мкг/мл ципрофлоксацина и 3) 2,5 мг/мл ципрофлоксацина на 5 секунд и затем помещения их в пузырек с 10 зернами кукурузы, которые были покрыты 1 мл 1) контроля c водой, 2) 250 мкг/мл ципрофлоксацина и 3) 2,5 мг/мл ципрофлоксацина.
SPE
SPE
Выживаемость долгоносиков отслеживали ежедневно в течение 18 дней, после чего ДНК экстрагировали из оставшихся долгоносиков в каждой группе. Вкратце, тело долгоносиков подвергали поверхностной стерилизации путем погружения долгоносика в 6% раствор отбеливателя примерно на 5 секунд. Затем долгоносиков промывали в стерильной воде, и ДНК экстрагировали из каждого отдельного долгоносика с помощью набора для экстракции ДНК (Qiagen, набор DNeasy) в соответствии с инструкциями производителя. Концентрацию ДНК измеряли посредством количественной оценки нуклеиновой кислоты с использованием NanoDrop, и число копий ДНК  и долгоносиков измеряли с помощью qPCR. Праймерами, используемыми для , были qPCR_Sod_F (ATAGCTGTCCAGACGCTTCG; SEQ ID NO: 238) и qPCR_Sod_R (ATGTCGTCGAGGCGATTACC; SEQ ID NO: 239). Праймерами, используемыми для долгоносиков (β–актин), были SACT144_FOR (GGTGTTGGCGTACAAGTCCT; SEQ ID NO: 240) и SACT314_REV (GAATTGCCTGATGGACAGGT; SEQ ID NO: 241) (Login et al., 2011). qPCR проводили с использованием скорости линейного изменения для qPCR–амплификации 1,6 градуса C/с и следующих условий: 1) 95°C в течение 10 минут, 2) 95°C в течение 15 секунд, 3) 57°C в течение 30 секунд, 4) повторение этапов 2–3 40x, 5) 95°C в течение 15 секунд, 6) 55°C в течение 1 минуты, 7) изменение скорости линейного изменения до 0,15 градуса C/с, 8) 95°C в течение 1 секунды. Данные qPCR анализировали с помощью аналитического программного обеспечения (Thermo Fisher Scientific, QuantStudio Design and Analysis).
Оценка потомства
Схема эксперимента
Через 25 дней одну повторность зерен кукурузы после второй обработки взрослых спаривающихся пар вскрывали (см. раздел , выше) для проверки наличия любых из развивающихся личинок, куколок или взрослых долгоносиков. Большая часть развития долгоносиков Sitophilus происходит в зерновых культурах/рисе/кукурузе, и взрослые особи появляются из зерен после того, как их развитие завершается. Зерна кукурузы осторожно вскрывали скальпелем, и любых развивающихся долгоносиков собирали и определяли процент взрослых особей, куколок и личинок. Долгоносиков, полученных в результате вскрытия, затем подвергали поверхностной стерилизации, и уровни SPE определяли с помощью qPCR. Зерна кукурузы из оставшихся двух повторностей каждой из групп после второй обработки не вскрывали, но проверяли ежедневно в отношении появления взрослых долгоносиков.
Оценка проникновения антибиотика в кукурузу
Escherichia coli
25 мг зерен кукурузы помещали в коническую пробирку на 50 мл, и воду или 2,5 мг/мл или 0,25 мг/мл ципрофлоксацина в воде добавляли до заполнения пробирки. Зерна замачивали в течение 1,5 часов, как описано выше. После замачивания зерна высушивали на воздухе и анализировали для определения того, был ли способен антибиотик покрывать зерно и проникать в него. Для исследования этого концентрированный образец DH5α  в воде распределяли по 5 чашкам с бульоном Лурия (LB). В отношении каждой чашки было выполнено следующее: 1) добавляли зерно кукурузы, замоченное в воде, 2) добавляли целое зерно кукурузы, которое было замочено в 2,5 или 0,25 мг/мл ципрофлоксацина, и 3) добавляли половинку зерна кукурузы, которое было замочено в 2,5 или 0,25 мг/мл ципрофлоксацина, и помещали вглубь чашки. Чашки инкубировали в течение ночи при 37 градусах C, и на следующий день оценивали рост бактерий и/или зону(зоны) ингибирования.
Замачивание зерен кукурузы в антибиотиках позволяло антибиотикам покрывать поверхность и проникать в зерна кукурузы
E. coli
Для исследования того, мог ли ципрофлоксацин покрывать поверхность зерна кукурузы, зерна кукурузы замачивали в воде без антибиотиков или в воде с 2,5 или 0,25 мг/мл ципрофлоксацина (как описано выше). Затем концентрированную культуру  распределяли по чашкам с LB, и одно из покрытых зерен затем помещали в центр чашки. Чашки инкубировали в течение ночи, а на следующий день оценивали рост бактерий.
Газон из бактерий рос на всей чашке с зерном кукурузы, которое было покрыто водой без каких–либо антибиотиков (фиг. 59A). В отличие от этого, бактерии не росли на чашках с целыми зернами кукурузы, которые были замочены в ципрофлоксацине в любой из двух концентраций (фиг. 59B, левые панели). Эти данные показывают, что способ покрытия, используемый в этих экспериментах, способствовал успешному покрытию ципрофлоксацином поверхности зерен кукурузы и ингибированию роста бактерий.
E. coli
Для исследования того, мог ли ципрофлоксацин проникать в зерно кукурузы, зерна кукурузы, замоченные в 2,5 или 0,25 мг/мл ципрофлоксацина, разрезали пополам и помещали разрезанной стороной вниз на чашку с LB с концентрированной культурой . Чашки инкубировали в течение ночи, и на следующий день оценивали рост бактерий. Рост бактерий отсутствовал в чашках с зернами, замоченными антибиотиком в любой концентрации, что указывало на то, что ципрофлоксацин проникал в зерно кукурузы (фиг. 59B, правые панели). В совокупности эти данные указывают на то, что способ замачивания зерен кукурузы, применяемый в этих экспериментах, приводил к успешному покрытию зерен кукурузы антибиотиком и его проникновению в них.
Обработка антибиотиками снижает уровни SPE в поколении F0
S. zeamais
Схема эксперимента
Спаривающиеся пары  разделяли на три отдельные группы обработки, как определено в разделе (выше). Долгоносиков отслеживали ежедневно, и все долгоносики оставались живыми в течение эксперимента. Через 18 дней после обработки долгоносиков подвергали поверхностной стерилизации, геномную ДНК экстрагировали, и уровни SPE измеряли с помощью qPCR. Долгоносики, обработанные только водой, имели примерно в 4 и 8 раз большие количества SPE по сравнению с долгоносиками, обработанными соответственно 250 мкг/мл и 2,5 мг/мл ципрофлоксацина (фиг. 60). Эти данные указывают на то, что обработка долгоносиков ципрофлоксацином приводила к снижению уровней SPE.
Обработка антибиотиками задерживает развитие и снижает уровни SPE у долгоносиков поколения F1
Развитие долгоносиков поколения F1 оценивали при вскрытии зерен кукурузы, в которые спаривающиеся пары F0 откладывали яйца в течение 7 дней и которых затем удаляли. Через 25 дней 12 потомков обнаруживали в кукурузе, обработанной водой/контролем, при этом большинство (~67%) потомства находилось в форме куколок (фиг. 61A). 13 и 20 потомков обнаружили у долгоносиков, обработанных соответственно 250 мкг/мл и 2,5 мг/мл ципрофлоксацина. Интересно отметить, что долгоносики, обработанные антибиотиком, демонстрировали задержку развития по сравнению с долгоносиками, обработанными контролем, при этом большинство (38 и 65% в случае 250 мкг/мл и 2,5 мг/мл ципрофлоксацина соответственно) потомков находилось в форме личинок (фиг. 61A).
Геномную ДНК экстрагировали из долгоносиков, извлеченных из зерен кукурузы, и qPCR проводили для измерения уровней SPE. Долгоносики F1, обработанные водой, имели примерно в 4 раза более высокие уровни SPE по сравнению с долгоносиками, обработанными 2,5 мг/мл ципрофлоксацина (фиг. 61B). Эти данные указывают на то, что обработка ципрофлоксацином снижала уровни SPE у долгоносиков, что приводило к задержке развития.
Обработка антибиотиками снижала интенсивность размножения долгоносиков
Число долгоносиков, которые появлялись в течение 43 дней после того, как исходные спаривающиеся пары удаляли после второй обработки, использовали в качестве показателя плодовитости (фиг. 62A и 62B). Появление первых долгоносиков происходило в день 29, и подсчитывали общее количество долгоносиков, которые появлялись до дня 43. Несмотря на то, что долгоносики, обработанные водой и 250 мкг/мл, имели аналогичное число потомков F1, в группе обработки 2,5 мг/мл появлялось намного меньшее число потомков, что указывало на то, что обработка антибиотиками снижала уровни SPE, отрицательно влияя на плодовитость долгоносиков.
Вместе с предыдущими примерами эти данные демонстрируют способность уничтожать долгоносиков и уменьшать их интенсивность развития, способность к размножению, продолжительность жизни и эндогенные популяции бактерий, например, приспособленность, посредством их обработки антибиотиком с помощью нескольких путей доставки.
Пример 24. Микроскопические клещи, обработанные раствором антибиотика
Данный пример демонстрирует способность уничтожать, снижать приспособленность двупятнистых паутинных клещиков посредством их обработки рифампицином, антибиотиком узкого спектра действия, который ингибирует ДНК–зависимый синтез РНК путем ингибирования бактериальной РНК–полимеразы, и доксициклином, антибиотиком широкого спектра действия, который предупреждает размножение бактерий путем ингибирования синтеза белка. Влияние рифампицина и доксициклина на микроскопических клещей было опосредовано модулированием популяций бактерий, эндогенных по отношению к микроскопическим клещам, которые были восприимчивыми к антибиотикам.
Насекомые, такие как комары, и паукообразные, такие как иксодовые клещи, могут выступать в роли переносчиков патогенов, вызывающих серьезные заболевания у человека и животных, такие как болезнь Лайма, лихорадка денге, трипаносомоз и малярия. Заболевания, передаваемые переносчиками, вызывают миллионы человеческих смертей ежегодно. Кроме того, заболевания, передаваемые переносчиками, которые инфицируют животных, таких как домашний скот, представляют большую нагрузку для системы здравоохранения во всем мире. Таким образом, имеется потребность в способах и композициях для контроля насекомых и паукообразных, которые переносят заболевания, передаваемые переносчиками. Двупятнистые паутинные клещики являются паукообразными из того же подкласса, что и иксодовые клещи. Таким образом, способы и композиции, применяемые для снижения приспособленности двупятнистых паутинных клещиков, могут давать углубленное понимание снижения приспособленности иксодовых клещей.
Схема терапии
Для этих экспериментов использовали две обработки: 1) 0,025% Silwet L–77 (отрицательный контроль) или 2) коктейль антибиотиков, содержащий 250 мкг/мл рифампицина и 500 мкг/мл доксициклина. Исходные растворы рифампицина (Tokyo Chemical Industry, LTD) готовили в концентрации 25 мг/мл в метаноле, стерилизовали путем пропускания через шприцевой фильтр с размером пор 0,22 мкм и хранили при –20°C. Исходные растворы доксициклина (от производителя) готовили в концентрации 50 мг/мл в воде, стерилизовали путем пропускания через шприцевой фильтр с размером пор 0,22 мкм и хранили при –20°C.
Схема эксперимента
В этом анализе исследовали влияние раствора антибиотика на двупятнистых паутинных клещиков и определяли, как их приспособленность изменялась в результате целенаправленного воздействия на эндогенные микроорганизмы.
Растения фасоли Кидни выращивали в почвенной смеси для горшечных культур при 24°C при 16 ч. света и 8 ч. темноты. Микроскопических клещей выкармливали на растениях фасоли Кидни при 26°C и относительной влажности 15–20%. Для обработок листовые диски диаметром один дюйм нарезали из листьев конских бобов и опрыскивали 0,025% Silwet L–77 (отрицательный контроль) или коктейлем антибиотиков (250 мкг/мл рифампицина и 500 мкг/мл доксициклина в 0,025% Silwet L–77) с использованием распылительного воздушного компрессора Master Airbrush Brand Compressor модели C–16–B Black Mini. Компрессор очищали этанолом до обработок, после них и между ними. Жидкость подавали в компрессор с помощью трубки диаметром четверть дюйма. Для каждой обработки использовали новую трубку.
После того, как листовые диски высыхали, четыре из каждой группы обработки помещали в чашку сверху влажного ватного шарика, покрытого кусочком салфетки Kimwipe. Каждое условие обработки выполняли в двух повторностях. Затем 25 взрослых самок микроскопических клещей помещали в чашку. В день 4 самок удаляли из чашки, а яйца и личинки оставляли на листовых дисках.
В день 11 микроскопических клещей на стадии протонимфы и дейтонимфы извлекали из чашек и помещали в их собственную пробирку для того, чтобы можно было измерять выживаемость. Каждая пробирка содержала влажный ватный шарик, покрытый кусочком салфетки Kimwipe, с листовым диском диаметром полдюйма, обработанным отрицательным контролем или коктейлем.
Микроскопических клещей наблюдали под препаровальной лупой ежедневно после вскармливания на листе, обработанном растворами антибиотиков или контрольными растворами, и классифицировали в соответствии со следующими категориями:
Живые: они передвигались на своих конечностях или двигались после того, как в них тыкали малярной кистью.
Мертвые: неподвижные и не реагировали на стимуляцию малярной кистью.
Стерильную малярную кисть использовали для стимуляции микроскопических клещей путем прикасания к их конечностям. Микроскопических клещей, классифицированных как мертвых, сохраняли на протяжении всего анализа и повторно проверяли на подвижность ежедневно. Анализы проводили при 26°C и относительной влажности 1520%.
Обработка антибиотиками повышала смертность микроскопических клещей
Показатели выживаемости двупятнистых паутинных клещиков, обработанных коктейлем антибиотиков, сравнивали с микроскопическими клещами, обработанными отрицательным контролем. Показатели выживаемости микроскопических клещей, обработанных коктейлем, снижались по сравнению с контролем (фиг. 60).
Эти данные демонстрируют способность снижать приспособленность микроскопических клещей посредством их обработки раствором антибиотиков.
Пример 25. Насекомые, обработанные раствором очищенных фагов
Данный пример демонстрирует выделение и очистку из образцов окружающей среды фагов, которые целенаправленно воздействовали на специфические бактерии насекомых. Данный пример также демонстрирует эффективность выделенных фагов в отношении бактерий–мишеней в анализах бляшкообразования in vitro, измеренную по их скорости потребления кислорода и скорости закисления внеклеточной среды. Наконец, данный пример демонстрирует эффективность фагов in vivo, измеренную по способности фага целенаправленно воздействовать на бактерии мух посредством их обработки выделенным фагом, противодействующим бактериям. Данный пример демонстрирует, что патогенная бактерия, которая снижала приспособленность насекомого, могла быть устранена с помощью фага, целенаправленно воздействующего на бактерию. В частности, Serratia marcescens, которая представляет собой патогенную бактерию мух, может быть устранена с помощью фага, который был выделен из садового компоста.
Схема эксперимента
Выделение специфических бактериофагов из природных источников
Бактериофаги, противодействующие бактериям–мишеням, выделяли из исходного материала среды. Вкратце, насыщенную культуру Serratia marcescens разбавляли в свежем триптическом соевом бульоне двойной концентрации (TSB) и выращивали в течение ~120 минут до ранней лог–фазы при 24–26°C или в бульоне Лурия–Бертани двойной концентрации (LB) и выращивали в течение ~90 минут при 37°C. Садовый компост готовили путем гомогенизации в PBS и стерилизовали путем фильтрации через фильтр с размером пор 0,2 мкм. Неочищенные сточные воды стерилизовали путем фильтрации через фильтр с размером пор 0,2 мкм. Один объем фильтрованного исходного материала добавляли к культурам бактерий в лог–фазе, и инкубирование продолжали в течение 24 ч. Обогащенный исходный материал готовили путем осаждения культур центрифугированием и фильтрования надосадочной жидкости через мембраны с размером пор 0,45 мкм.
Фаги выделяли путем высевания образцов на бактериальные газоны в двойном слое агара. Стационарные культуры бактерий объединяли с LB или TSB c расплавленным 0,6% агаром и наливали в чашки c LB или TSB с 1,5% агаром. После затвердения 2,5 мкл разведенных образцов фагов наносили на чашки с двойным слоем агара и оставляли для поглощения. Затем чашки заворачивали в обертку и инкубировали в течение ночи при 25°C (TSA) или 37°C (LB), после этого оценивали в отношении образования видимых бляшек. Свежевыделенные бляшки очищали посредством последовательного пассирования отдельных бляшек на штамме–мишени путем отбора бляшек в буфере SM (50 мM Tris–HCl [pH 7,4], 10 мM MgSO4, 100 мM NaCl) и инкубирования в течение 15 минут при 55°C, затем повторения способа нанесения на двойной слой агара, как указано выше, с использованием суспензии бляшек.
S. marcescens
Бактериофаги успешно выделяли как из сточных вод, так и из компоста, как подробно описано выше. Образование бляшек было отчетливо заметно после нанесения образцов на газоны из бактерий , используемые для обогащений.
Пассирование, количественная оценка и размножение бактериофагов
Размножение и образование фаговых лизатов для применения в последующих экспериментах осуществляли с помощью бактериофагов, выделенных и очищенных, как описано выше. Вкратце, насыщенные культуры бактерий разбавляли в 100 раз в свежей среде и выращивали в течение 60–120 минут для достижения состояния ранней логарифмической фазы роста с целью эффективного инфицирования фагами. Суспензии фагов или фаговые лизаты добавляли к культурам в ранней логарифмической фазе роста, и инкубирование продолжали до тех пор, пока не наблюдали очищение бульона, что указывало на размножение фагов и лизис бактерий, или до прохождения 24 ч. после инфицирования. Лизаты собирали путем осаждения клеток центрифугированием при 7197 x g в течение 20 мин. с последующим фильтрованием надосадочной жидкости через мембраны с размером пор 0,45 или 0,2 мкм. Отфильтрованные лизаты хранили при 4°C.
Подсчет инфекционных фаговых частиц осуществляли с помощью способа нанесения на двойной слой агара. Вкратце, в PBS выполняли серийное разведение образцов 1:10, и разведения наносили на чашки с затвердевшим двойным слоем агара, полученными с бактериями хозяина, как описано выше. Бляшкообразующие единицы (БОЕ) подсчитывали после инкубирования в течение ночи с определением примерного титра образцов.
Анализ выделенных фагов in vitro путем измерения дыхания бактерий
S. marcescens
Анализатор Seahorse XFe96 (Agilent) использовали для измерения влияния фагов на бактерии путем отслеживания скорости потребления кислорода (OCR) и скорости закисления внеклеточной среды (ECAR) в ходе инфицирования. Планшеты XFe96 покрывали за день до экспериментов с помощью 15 мкл 1 мг/мл исходного раствора поли–L–лизина на лунку и высушивали в течение ночи при 28°C, и зонды XFe96 уравновешивали путем помещения в лунки, содержащие 200 мкл калибрующего вещества XF, и инкубирования в темноте при комнатной температуре. На следующий день планшеты, покрытые поли–L–лизином, промывали дважды с помощью ddH2O. Насыщенные ночные культуры E. coli BL21 (LB, 37°C) или  (TSB, 25°C) субкультивировали при 1:100 в той же самой среде и выращивали при вентиляции в течение ~2,5 ч. при 30°C. Затем культуры разбавляли до O.D. 600 нм ~ 0,02 с помощью той же самой среды. Средства обработки получали путем разведения исходных растворов в буфере SM при 10x конечной концентрации и загрузки 20 мкл 10x растворов в подходящие отверстия для ввода проб планшета с зондами. Хотя зонды уравновешивали в анализаторе XFe96 Flux, планшеты с бактериями готовили путем добавления 90 мкл бактериальных суспензий или контролей со средой и центрифугировали при 3000 об./мин. в течение 10 минут. После центрифугирования дополнительные 90 мкл соответствующей среды осторожно добавляли в лунки так, чтобы не нарушить прилипание бактерий, доводя общий объем до 180 мкл на лунку.
Анализатор XFe96 прогоняли при ~30°C в соответствии с циклами смешивания, ожидания, считывания продолжительностью 1:00, 0:30, 3:00. Выполняли четыре цикла, чтобы обеспечить уравновешивание/нормализацию бактерий, затем вводили 20 мкл средств обработки, и циклы продолжали, как описано выше, в течение общего времени примерно 6 ч. Данные анализировали с помощью пакета компьютерных программ Seahorse XFe96 Wave.
E. coli
S. marcescens
Влияние выделенных бактериофагов анализировали путем измерения скорости потребления кислорода (OCR) и скорости закисления внеклеточной среды (ECAR) у бактерий в анализаторе Seahorse XFe96. Когда  инфицировали фагом T7, а  инфицировали свежевыделенным фагом ΦSmVL–C1, наблюдались существенные снижения OCR после кратковременных пиков этой скорости (фиг. 64). Для обоих фагов с обоими организмами–хозяевами анализ Seahorse способствовал выявлению успешного инфицирования фагами без необходимости в анализах бляшкообразования. Таким образом, данный способ применим для выявления инфицирования фагами организма–хозяина, не поддающегося традиционным способам выявления фагов.
Анализ трансдукции с использованием SYBR Gold для идентификации инфекции
Препараты бактериофагов готовили для окрашивания путем предварительной обработки нуклеазами для удаления вневирусных нуклеиновых кислот, которые могли нарушать интерпретацию флуоресцентного сигнала. Вкратце, MgCl2 добавляли к 10 мл фагового лизата при конечной концентрации 10 мM, и как РНКазу A (Qiagen), так и ДНКазу I (Sigma) добавляли до конечных концентраций 10 мкг/мл. Образцы инкубировали в течение 1 ч. при комнатной температуре. После обработки нуклеазами 5 мл лизатов объединяли с 1 мкл SYBR Gold (Thermo, 10000x) и инкубировали при комнатной температуре в течение ~1,5 ч. Избыточный краситель затем удаляли из образцов с помощью ультрафильтрационных колонок Amicon. Вкратце, колонки Amicon (15 мл, MWCO 10 кДа) промывали путем добавления 10 мл буфера SM и центрифугировали при 5000 x g, 4°C в течение 5 минут. Меченые образцы фагов затем центрифугировали в колонках при 5000 x g, 4°C до тех пор, пока объем не снижался примерно в 10 раз (15–30 мин.). Для промывания образцов 5 мл буфера SM добавляли в каждый резервуар, и центрифугирование повторяли с последующими двумя дополнительными промывками. После третьей промывки оставшиеся образцы отбирали пипеткой из резервуаров Amicon и доводили до примерно 1 мл с помощью буфера SM. Для удаления более крупных контаминантов промытые и меченые образцы фагов центрифугировали при 10000 x g в течение 2 минут, и образцы надосадочной жидкости затем фильтровали через мембраны с размером пор 0,2 мкм в черные микропробирки и хранили при 4°C.
E. coli
S. marcescens
S. symbiotica
Насыщенные культуры бактерий ( MG1655, выращенная в LB при 37°C,  и , выращенные в TSB при 26°C) получали путем центрифугирования 1 мл аликвот и однократного промывания с помощью 1 мл PBS перед заключительным ресуспендированием с помощью 1 мл PBS. Меченые положительным контролем бактерии окрашивали путем объединения 500 мкл промытых бактерий и 1 мкл SYBR Gold и инкубирования в течение 1 ч. в темноте при комнатной температуре. Бактерии осаждали путем центрифугирования при 8000 x g в течение 5 мин. и промывали дважды равным объемом PBS с последующим ресуспендированием в конечном объеме 500 мкл PBS. Объем 25 мкл окрашенных бактерий объединяли с 25 мкл буфера SM в черной микропробирке, к которой добавляли 50 мкл 10% формалина (5% конечный объем, ~2% формальдегид) и смешивали путем пощелкивания. Образцы фиксировали при комнатной температуре в течение ~3 ч. и затем промывали с помощью ультрафильтрационных колонок Amicon. Вкратце, 500 мкл воды РicoРure добавляли в колонки Amicon (0,5 мл, MWCO 100 кДа) и центрифугировали при 14000 x g в течение 5 мин. для промывания мембран. Фиксированные образцы разбавляли путем добавления 400 мкл PBS и затем переносили в предварительно промытые микроцентрифужные колонки и центрифугировали при 14000 x g в течение 10 мин. Колонки переносили в свежие пробирки для сбора образцов, и 500 мкл PBS добавляли для разбавления фиксатора, остающегося в ретентате. Затем проводили два дополнительных разбавления с помощью PBS, в общей сложности в количестве трех промывок. Конечные ретентаты разбавляли до около 100 мкл, затем колонки помещали вверх дном в свежие пробирки для сбора образцов и центрифугировали при 1000 x g в течение 2 мин. для сбора образцов. Промытые образцы переносили в черные микропробирки и хранили при 4°C.
Для экспериментов по трансдукции и контролей 25 мкл бактерий (или PBS) и 25 мкл меченого SYBR Gold фага (или буфера SM) объединяли в черных микропробирках и инкубировали в неподвижном состоянии в течение 15–20 мин. при комнатной температуре для обеспечения адсорбции фагов и впрыскивания в получающие их бактерии. Сразу после инкубирования 50 мкл 10% формалина добавляли к образцам, и фиксацию осуществляли при комнатной температуре в течение ~4 ч. Образцы промывали с помощью PBS с использованием колонок Amicon, как указано выше.
S. marcescens
Buchnera
Для успешного инфицирования фагом бактериальной клетки–хозяина требовалось впрыскивание нуклеиновой кислоты бактериофагов. Колифаг P1kc, меченный SYBR Gold и инкубированный совместно с , выявил присутствие флуоресцирующих бактерий с помощью микроскопии, подтверждая применение данного анализа в процессе выделения фагов. Как и в случае анализа Seahorse, данный подход предусматривал альтернативу традиционным способам анализа фагов для обеспечения распространения на организмы, не поддающиеся анализу бляшкообразования. Кроме того, анализ трансдукции с использованием SYBR Gold не требовал роста бактерий, поэтому был применим для анализа фагов, целенаправленно воздействующих на сложные в культивировании или даже не поддающиеся культивированию организмы, в том числе эндосимбионты, такие как .
Исследование эффективности фагов in vivo в отношении S. marcescens у мух Drosophila melanogaster
S. marcescens
Культуры  выращивали в триптическом соевом бульоне (TSB) при 30°C при постоянном встряхивании при 200 об./мин.
Среда, используемая для выкармливания исходных популяций мух, представляла собой среду, содержащую кукурузную муку, мелассу и дрожжи (11 г/л дрожжей, 54 г/л желтой кукурузной муки, 5 г/л агара, 66 мл/л мелассы и 4,8 мл/л пропионовой кислоты). Все компоненты этого рациона, за исключением пропионовой кислоты, нагревали совместно до 80°C в деионизированной воде при постоянном перемешивании в течение 30 минут, и им давали охладиться до 60°C. Затем примешивали пропионовую кислоту, и 50 мл рациона разделяли на аликвоты в отдельные флаконы и оставляли охлаждаться и затвердевать. Мух выращивали при 26°C, цикле свет:темнота 16:8 часов, при влажности около 60%.
S. marcescens
S. marcescens
S. marcescens
Для инфицирования мух  тонкую иглу (с кончиком шириной приблизительно 10 мкм) погружали в плотную ночную культуру в стационарной фазе, и грудь мух прокалывали. Для этого эксперимента четыре повторности по 10 самцов и 10 самок в каждой инфицировали  с помощью способа прокалывания иглой в качестве положительного контроля в отношении смертности мух. В группах обработки четырем повторностям по 10 самцов и 10 самок в каждой вводили путем прокалывания  и раствор фага, содержащий приблизительно 108 фаговых частиц/мл. Наконец, две повторности по 10 самцов и 10 самок в каждой, которых не прокалывали и не обрабатывали каким–либо другим образом, использовали в качестве отрицательного контроля в отношении смертности.
S. marcescens
Мух во всех состояниях помещали во флаконы с кормовой средой и инкубировали при 26°C, цикле свет:темнота 16:8 часов, при влажности 60%. Число живых и мертвых мух подсчитывали ежедневно в течение четырех дней после прокалывания. Все мухи, которым вводили путем прокалывания только , были мертвыми через 24 часа после обработки. Для сравнения, более чем 60% мух в группе обработки фагами и все мухи в группе контроля без обработки были живыми в этот момент времени (фиг. 65). Кроме того, большинство мух в группе обработки фагами и группе отрицательного контроля продолжали выживать в течение еще четырех дней после того, как эксперимент завершали.
S. marcescens
S. marcescens
S. marcescens
S. marcescens
S. marcescens
S. marcescens
S. marcescens
Для определения причины гибели мух мертвых мух из мух, которым вводили путем прокалывания как , так и +фаги, гомогенизировали и высевали. Четыре мертвые мухи из каждой из четырех повторностей обработки как с помощью , так и с помощью +фагов гомогенизировали в 100 мкл TSB. Разведение 1:100 также получали путем разведения гомогената в TSB. 10 мкл концентрированного гомогената, а также разведение 1:100 высевали на чашки с TSA и инкубировали в течение ночи при 30°C. При исследовании чашек в отношении роста бактерий во всех чашках с мертвыми мухами, которым вводили путем прокалывания , был газон из бактерий, растущих на них, тогда как в чашках с мертвыми мухами, которым вводили путем прокалывания +фаги, не было бактерий. Это указывало на то, что в отсутствие фага , вероятно, индуцировала септический шок у мух, приводя к их смерти. В то же время в присутствии фага смертность могла быть обусловлена повреждением, вызванным прокалыванием иглой.
ДРУГИЕ ВАРИАНТЫ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ
Несмотря на то, что вышеизложенное изобретение было достаточно подробно описано с помощью иллюстраций и примеров в целях ясности понимания, описания и примеры не следует истолковывать как ограничивающие объем настоящего изобретения. Раскрытия всех источников патентной и научной литературы, цитируемых в данном документе, явным образом включено в их полном объеме посредством ссылки.
--->
ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
<110>  Flagship Pioneering, Inc.
<120>  КОМПОЗИЦИИ И СООТВЕТСТВУЮЩИЕ СПОСОБЫ ДЛЯ СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА
<130>  51215-003WO3
<150>  US 62/583763
<151>  2017-11-09
<150>  US 62/450,045
<151>  2017-01-24
<160>  241
<170>  PatentIn версия 3.5
<210>  1
<211>  1526
<212>  ДНК
<213>  Carsonella ruddii
<400>  1
tatccagcca caggttcccc tacagctacc ttgttacgac ttcaccccag ttacaaatca       60
taccgttgta atagtaaaat tacttatgat acaatttact tccatggtgt gacgggcggt      120
gtgtacaagg ctcgagaacg tattcaccgt aacattctga tttacgatta ctagcgattc      180
caacttcatg aaatcgagtt acagatttca atccgaacta agaatatttt ttaagattag      240
cattatgttg ccatatagca tataactttt tgtaatactc attgtagcac gtgtgtagcc      300
ctacttataa gggccatgat gacttgacgt cgtcctcacc ttcctccaat ttatcattgg      360
cagtttctta ttagttctaa tatattttta gtaaaataag ataagggttg cgctcgttat      420
aggacttaac ccaacatttc acaacacgag ctgacgacag ccatgcagca cctgtctcaa      480
agctaaaaaa gctttattat ttctaataaa ttctttggat gtcaaaagta ggtaagattt      540
ttcgtgttgt atcgaattaa accacatgct ccaccgcttg tgcgagcccc cgtcaattca      600
tttgagtttt aaccttgcgg tcgtaatccc caggcggtca acttaacgcg ttagcttttt      660
cactaaaaat atataacttt ttttcataaa acaaaattac aattataata tttaataaat      720
agttgacatc gtttactgca tggactacca gggtatctaa tcctgtttgc tccccatgct      780
ttcgtgtatt agtgtcagta ttaaaataga aatacgcctt cgccactagt attctttcag      840
atatctaagc atttcactgc tactcctgaa attctaattt cttcttttat actcaagttt      900
ataagtatta atttcaatat taaattactt taataaattt aaaaattaat ttttaaaaac      960
aacctgcaca ccctttacgc ccaataattc cgattaacgc ttgcacccct cgtattaccg     1020
cggctgctgg cacgaagtta gccggtgctt cttttacaaa taacgtcaaa gataatattt     1080
ttttattata aaatctcttc ttactttgtt gaaagtgttt tacaacccta aggccttctt     1140
cacacacgcg atatagctgg atcaagcttt cgctcattgt ccaatatccc ccactgctgc     1200
cttccgtaaa agtttgggcc gtgtctcagt cccaatgtgg ttgttcatcc tctaagatca     1260
actacgaatc atagtcttgt taagctttta ctttaacaac taactaattc gatataagct     1320
cttctattag cgaacgacat tctcgttctt tatccattag gatacatatt gaattactat     1380
acatttctat atacttttct aatactaata ggtagattct tatatattac tcacccgttc     1440
gctgctaatt atttttttaa taattcgcac aacttgcatg tgttaagctt atcgctagcg     1500
ttcaatctga gctatgatca aactca                                          1526
<210>  2
<211>  1536
<212>  ДНК
<213>  aleyrodidarum BT-B
<400>  2
aagagtttga tcatggctca gattgaacgc tagcggcaga cataacacat gcaagtcgag       60
cggcatcata caggttggca agcggcgcac gggtgagtaa tacatgtaaa tatacctaaa      120
agtggggaat aacgtacgga aacgtacgct aataccgcat aattattacg agataaagca      180
ggggcttgat aaaaaaaatc aaccttgcgc ttttagaaaa ttacatgccg gattagctag      240
ttggtagagt aaaagcctac caaggtaacg atccgtagct ggtctgagag gatgatcagc      300
cacactggga ctgagaaaag gcccagactc ctacgggagg cagcagtggg gaatattgga      360
caatgggggg aaccctgatc cagtcatgcc gcgtgtgtga agaaggcctt tgggttgtaa      420
agcactttca gcgaagaaga aaagttagaa aataaaaagt tataactatg acggtactcg      480
cagaagaagc accggctaac tccgtgccag cagccgcggt aagacggagg gtgcaagcgt      540
taatcagaat tactgggcgt aaagggcatg taggtggttt gttaagcttt atgtgaaagc      600
cctatgctta acataggaac ggaataaaga actgacaaac tagagtgcag aagaggaagg      660
tagaattccc ggtgtagcgg tgaaatgcgt agatatctgg aggaatacca gttgcgaagg      720
cgaccttctg ggctgacact gacactgaga tgcgaaagcg tggggagcaa acaggattag      780
ataccctggt agtccacgct gtaaacgata tcaactagcc gttggattct taaagaattt      840
tgtggcgtag ctaacgcgat aagttgatcg cctggggagt acggtcgcaa ggctaaaact      900
caaatgaatt gacgggggcc cgcacaagcg gtggagcatg tggtttaatt cgatgcaacg      960
cgcaaaacct tacctactct tgacatccaa agtactttcc agagatggaa gggtgcctta     1020
gggaactttg agacaggtgc tgcatggctg tcgtcagctc gtgttgtgaa atgttgggtt     1080
aagtcccgta acgagcgcaa cccttgtcct tagttgccaa cgcataaggc gggaacttta     1140
aggagactgc tggtgataaa ccggaggaag gtggggacga cgtcaagtca tcatggccct     1200
taagagtagg gcaacacacg tgctacaatg gcaaaaacaa agggtcgcaa aatggtaaca     1260
tgaagctaat cccaaaaaaa ttgtcttagt tcggattgga gtctgaaact cgactccata     1320
aagtcggaat cgctagtaat cgtgaatcag aatgtcacgg tgaatacgtt ctcgggcctt     1380
gtacacaccg cccgtcacac catggaagtg aaatgcacca gaagtggcaa gtttaaccaa     1440
aaaacaggag aacagtcact acggtgtggt tcatgactgg ggtgaagtcg taacaaggta     1500
gctgtagggg aacctgtggc tggatcacct ccttaa                               1536
<210>  3
<211>  1540
<212>  ДНК
<213>  Buchnera aphidicola, штамм APS (Acyrthosiphon pisum)
<400>  3
agagtttgat catggctcag attgaacgct ggcggcaagc ctaacacatg caagtcgagc       60
ggcagcgaga agagagcttg ctctctttgt cggcaagcgg caaacgggtg agtaatatct      120
ggggatctac ccaaaagagg gggataacta ctagaaatgg tagctaatac cgcataatgt      180
tgaaaaacca aagtggggga ccttttggcc tcatgctttt ggatgaaccc agacgagatt      240
agcttgttgg tagagtaata gcctaccaag gcaacgatct ctagctggtc tgagaggata      300
accagccaca ctggaactga gacacggtcc agactcctac gggaggcagc agtggggaat      360
attgcacaat gggcgaaagc ctgatgcagc tatgccgcgt gtatgaagaa ggccttaggg      420
ttgtaaagta ctttcagcgg ggaggaaaaa aataaaacta ataattttat ttcgtgacgt      480
tacccgcaga agaagcaccg gctaactccg tgccagcagc cgcggtaata cggagggtgc      540
aagcgttaat cagaattact gggcgtaaag agcgcgtagg tggtttttta agtcaggtgt      600
gaaatcccta ggctcaacct aggaactgca tttgaaactg gaaaactaga gtttcgtaga      660
gggaggtaga attctaggtg tagcggtgaa atgcgtagat atctggagga atacccgtgg      720
cgaaagcggc ctcctaaacg aaaactgaca ctgaggcgcg aaagcgtggg gagcaaacag      780
gattagatac cctggtagtc catgccgtaa acgatgtcga cttggaggtt gtttccaaga      840
gaagtgactt ccgaagctaa cgcattaagt cgaccgcctg gggagtacgg ccgcaaggct      900
aaaactcaaa tgaattgacg ggggcccgca caagcggtgg agcatgtggt ttaattcgat      960
gcaacgcgaa aaaccttacc tggtcttgac atccacagaa ttctttagaa ataaagaagt     1020
gccttcggga gctgtgagac aggtgctgca tggctgtcgt cagctcgtgt tgtgaaatgt     1080
tgggttaagt cccgcaacga gcgcaaccct tatcccctgt tgccagcggt tcggccggga     1140
actcagagga gactgccggt tataaaccgg aggaaggtgg ggacgacgtc aagtcatcat     1200
ggcccttacg accagggcta cacacgtgct acaatggttt atacaaagag aagcaaatct     1260
gcaaagacaa gcaaacctca taaagtaaat cgtagtccgg actggagtct gcaactcgac     1320
tccacgaagt cggaatcgct agtaatcgtg gatcagaatg ccacggtgaa tacgttcccg     1380
ggccttgtac acaccgcccg tcacaccatg ggagtgggtt gcaaaagaag caggtatcct     1440
aaccctttaa aaggaaggcg cttaccactt tgtgattcat gactggggtg aagtcgtaac     1500
aaggtaaccg taggggaacc tgcggttgga tcacctcctt                           1540
<210>  4
<211>  1552
<212>  ДНК
<213>  Buchnera aphidicola, штамм Sg (Schizaphis graminum)
<400>  4
aaactgaaga gtttgatcat ggctcagatt gaacgctggc ggcaagccta acacatgcaa       60
gtcgagcggc agcgaaaaga aagcttgctt tcttgtcggc gagcggcaaa cgggtgagta      120
atatctgggg atctgcccaa aagaggggga taactactag aaatggtagc taataccgca      180
taaagttgaa aaaccaaagt gggggacctt ttttaaaggc ctcatgcttt tggatgaacc      240
cagacgagat tagcttgttg gtaaggtaaa agcttaccaa ggcaacgatc tctagctggt      300
ctgagaggat aaccagccac actggaactg agacacggtc cagactccta cgggaggcag      360
cagtggggaa tattgcacaa tgggcgaaag cctgatgcag ctatgccgcg tgtatgaaga      420
aggccttagg gttgtaaagt actttcagcg gggaggaaaa aattaaaact aataatttta      480
ttttgtgacg ttacccgcag aagaagcacc ggctaactcc gtgccagcag ccgcggtaat      540
acggagggtg cgagcgttaa tcagaattac tgggcgtaaa gagcacgtag gtggtttttt      600
aagtcagatg tgaaatccct aggcttaacc taggaactgc atttgaaact gaaatgctag      660
agtatcgtag agggaggtag aattctaggt gtagcggtga aatgcgtaga tatctggagg      720
aatacccgtg gcgaaagcgg cctcctaaac gaatactgac actgaggtgc gaaagcgtgg      780
ggagcaaaca ggattagata ccctggtagt ccatgccgta aacgatgtcg acttggaggt      840
tgtttccaag agaagtgact tccgaagcta acgcgttaag tcgaccgcct ggggagtacg      900
gccgcaaggc taaaactcaa atgaattgac gggggcccgc acaagcggtg gagcatgtgg      960
tttaattcga tgcaacgcga aaaaccttac ctggtcttga catccacaga attttttaga     1020
aataaaaaag tgccttcggg aactgtgaga caggtgctgc atggctgtcg tcagctcgtg     1080
ttgtgaaatg ttgggttaag tcccgcaacg agcgcaaccc ttatcccctg ttgccagcgg     1140
ttcggccggg aactcagagg agactgccgg ttataaaccg gaggaaggtg gggacgacgt     1200
caagtcatca tggcccttac gaccagggct acacacgtgc tacaatggtt tatacaaaga     1260
gaagcaaatc tgtaaagaca agcaaacctc ataaagtaaa tcgtagtccg gactggagtc     1320
tgcaactcga ctccacgaag tcggaatcgc tagtaatcgt ggatcagaat gccacggtga     1380
atacgttccc gggccttgta cacaccgccc gtcacaccat gggagtgggt tgcaaaagaa     1440
gcagatttcc taaccacgaa agtggaaggc gtctaccact ttgtgattca tgactggggt     1500
gaagtcgtaa caaggtaacc gtaggggaac ctgcggttgg atcacctcct ta             1552
<210>  5
<211>  1566
<212>  ДНК
<213>  Buchnera aphidicola, штамм Bp (Baizongia pistaciae)
<400>  5
acttaaaatt gaagagtttg atcatggctc agattgaacg ctggcggcaa gcttaacaca       60
tgcaagtcga gcggcatcga agaaaagttt acttttctgg cggcgagcgg caaacgggtg      120
agtaacatct ggggatctac ctaaaagagg gggacaacca ttggaaacga tggctaatac      180
cgcataatgt ttttaaataa accaaagtag gggactaaaa tttttagcct tatgctttta      240
gatgaaccca gacgagatta gcttgatggt aaggtaatgg cttaccaagg cgacgatctc      300
tagctggtct gagaggataa ccagccacac tggaactgag atacggtcca gactcctacg      360
ggaggcagca gtggggaata ttgcacaatg ggctaaagcc tgatgcagct atgccgcgtg      420
tatgaagaag gccttagggt tgtaaagtac tttcagcggg gaggaaagaa ttatgtctaa      480
tatacatatt ttgtgacgtt acccgaagaa gaagcaccgg ctaactccgt gccagcagcc      540
gcggtaatac ggagggtgcg agcgttaatc agaattactg ggcgtaaaga gcacgtaggc      600
ggtttattaa gtcagatgtg aaatccctag gcttaactta ggaactgcat ttgaaactaa      660
tagactagag tctcatagag ggaggtagaa ttctaggtgt agcggtgaaa tgcgtagata      720
tctagaggaa tacccgtggc gaaagcgacc tcctaaatga aaactgacgc tgaggtgcga      780
aagcgtgggg agcaaacagg attagatacc ctggtagtcc atgctgtaaa cgatgtcgac      840
ttggaggttg tttcctagag aagtggcttc cgaagctaac gcattaagtc gaccgcctgg      900
ggagtacggt cgcaaggcta aaactcaaat gaattgacgg gggcccgcac aagcggtgga      960
gcatgtggtt taattcgatg caacgcgaag aaccttacct ggtcttgaca tccatagaat     1020
tttttagaga taaaagagtg ccttagggaa ctatgagaca ggtgctgcat ggctgtcgtc     1080
agctcgtgtt gtgaaatgtt gggttaagtc ccgcaacgag cgcaacccct atcctttgtt     1140
gccatcaggt tatgctggga actcagagga gactgccggt tataaaccgg aggaaggtgg     1200
ggatgacgtc aagtcatcat ggcccttacg accagggcta cacacgtgct acaatggcat     1260
atacaaagag atgcaactct gcgaagataa gcaaacctca taaagtatgt cgtagtccgg     1320
actggagtct gcaactcgac tccacgaagt aggaatcgct agtaatcgtg gatcagaatg     1380
ccacggtgaa tacgttcccg ggccttgtac acaccgcccg tcacaccatg ggagtgggtt     1440
gcaaaagaag caggtagctt aaccagatta ttttattgga gggcgcttac cactttgtga     1500
ttcatgactg gggtgaagtc gtaacaaggt aaccgtaggg gaacctgcgg ttggatcacc     1560
tcctta                                                                1566
<210>  6
<211>  828
<212>  ДНК
<213>  Buchnera aphidicola BCc
<400>  6
atgagatcat taatatataa aaatcatgtt ccaattaaaa aattaggaca aaatttttta       60
cagaataaag aaattattaa tcagataatt aatttaataa atattaataa aaatgataat      120
attattgaaa taggatcagg attaggagcg ttaacttttc ctatttgtag aatcattaaa      180
aaaatgatag tattagaaat tgatgaagat cttgtgtttt ttttaactca aagtttattt      240
attaaaaaat tacaaattat aattgctgat attataaaat ttgatttttg ttgttttttt      300
tctttacaga aatataaaaa atataggttt attggtaatt taccatataa tattgctact      360
atattttttt taaaaacaat taaatttctt tataatataa ttgatatgca ttttatgttt      420
caaaaagaag tagcaaagag attattagct actcctggta ctaaagaata tggtagatta      480
agtattattg cacaatattt ttataagata gaaactgtta ttaatgttaa taaatttaat      540
ttttttccta ctcctaaagt agattctact tttttacgat ttactcctaa atattttaat      600
agtaaatata aaatagataa acatttttct gttttagaat taattactag attttctttt      660
caacatagaa gaaaattttt aaataataat ttaatatctt tattttctac aaaagaatta      720
atttctttag atattgatcc atattcaaga gcagaaaatg tttctttaat tcaatattgt      780
aaattaatga aatattattt gaaaagaaaa attttatgtt tagattaa                   828
<210>  7
<211>  921
<212>  ДНК
<213>  Buchnera aphidicola (Cinara tujafilina)
<400>  7
ttatcttatt tcacatatac gtaatattgc gctgcgtgca cgaggatttt tttgaatttc       60
agatatattt ggtttaatac gtttaataaa acgtattttt ttttttattt ttcttatttg      120
caattcagta ataggaagtt ttttaggtat atttggataa ttactgtaat tcttaataaa      180
gttttttaca atcctatctt caatagaatg aaaactaata atagcaattt ttgatccgga      240
atgtaatatg ttaataataa tttttaatat tttatgtaat tcatttattt cttggttaat      300
atatattcga aaagcttgaa atgttctcgt agctggatgt ttaaatttgt catattttgg      360
gattgatttt tttatgattt gaactaactc taacgtgctt gttatggttt ttttttttat      420
ttgtaatatg atggctcggg atattttttt tgcgtatttt tcttcgccaa aattttttat      480
tacctgttct attgtttttt ggtttgtttt ttttaaccat tgactaactg atattccaga      540
tttagggttc atacgcatat ctaaaggtcc atcattcata aatgaaaatc ctcggatact      600
agaatttaac tgtattgaag aaatacctaa atctaataat attccatcta ttttatctct      660
atttttttct ttttttaata ttttttcaat attagaaaat ttacctaaaa atattttaaa      720
tcgcgaatct tttatttttt ttccgatttt tatagattgt gggtcttgat caatactata      780
taactttcca ttaaccccta attcttgaag aattgctttt gaatgaccac cacctccaaa      840
tgtacaatca acatatgtac cgtctttttt tatttttaag tattgtatga tttcttttgt      900
taaaacaggt ttatgaatca t                                                921
<210>  8
<211>  822
<212>  ДНК
<213>  Buchnera aphidicola, штамм G002 (Myzus persicae)
<400>  8
atgaaaagta taaaaacttt taaaaaacac tttcctgtga aaaaatatgg acaaaatttt       60
cttattaata aagagatcat aaaaaatatt gttaaaaaaa ttaatccaaa tatagaacaa      120
acattagtag aaatcggacc aggattagct gcattaactg agcccatatc tcagttatta      180
aaagagttaa tagttattga aatagactgt aatctattat attttttaaa aaaacaacca      240
ttttattcaa aattaatagt tttttgtcaa gatgctttaa actttaatta tacaaattta      300
ttttataaaa aaaataaatt aattcgtatt tttggtaatt taccatataa tatctctaca      360
tctttaatta tttttttatt tcaacacatt agagtaattc aagatatgaa ttttatgctt      420
caaaaagaag ttgctgcaag attaattgca ttacctggaa ataaatatta cggtcgtttg      480
agcattatat ctcaatatta ttgtgatatc aaaattttat taaatgttgc tcctgaagat      540
ttttggccta ttccgagagt tcattctata tttgtaaatt taacacctca tcataattct      600
ccttattttg tttatgatat taatatttta agccttatta caaataaggc tttccaaaat      660
agaagaaaaa tattacgtca tagtttaaaa aatttatttt ctgaaacaac tttattaaat      720
ttagatatta atcccagatt aagagctgaa aatatttctg tttttcagta ttgtcaatta      780
gctaattatt tgtataaaaa aaattatact aaaaaaaatt aa                         822
<210>  9
<211>  822
<212>  ДНК
<213>  Buchnera aphidicola, штамм Ak (Acyrthosiphon kondoi)
<400>  9
attataaaaa attttaaaaa acattttcct ttaaaaaggt atggacaaaa ttttcttgtc       60
aatacaaaaa ctattcaaaa gataattaat ataattaatc caaacaccaa acaaacatta      120
gtggaaattg gacctggatt agctgcatta acaaaaccaa tttgtcaatt attagaagaa      180
ttaattgtta ttgaaataga tcctaattta ttgtttttat taaaaaaacg ttcattttat      240
tcaaaattaa cagtttttta tcaagacgct ttaaatttca attatacaga tttgttttat      300
aagaaaaatc aattaattcg tgtttttgga aacttgccat ataatatttc tacatcttta      360
attatttctt tattcaatca tattaaagtt attcaagata tgaattttat gttacagaaa      420
gaggttgctg aaagattaat ttctattcct ggaaataaat cttatggccg tttaagcatt      480
atttctcagt attattgtaa aattaaaata ttattaaatg ttgtacctga agattttcga      540
cctataccga aagtgcattc tgtttttatc aatttaactc ctcataccaa ttctccatat      600
tttgtttatg atacaaatat cctcagttct atcacaagaa atgcttttca aaatagaagg      660
aaaattttgc gtcatagttt aaaaaattta ttttctgaaa aagaactaat tcaattagaa      720
attaatccaa atttacgagc tgaaaatatt tctatctttc agtattgtca attagctgat      780
tatttatata aaaaattaaa taatcttgta aaaatcaatt aa                         822
<210>  10
<211>  822
<212>  ДНК
<213>  Buchnera aphidicola, штамм Ua (Uroleucon ambrosiae)
<400>  10
atgatactaa ataaatataa aaaatttatt cctttaaaaa gatacggaca aaattttctt       60
gtaaatagag aaataatcaa aaatattatc aaaataatta atcctaaaaa aacgcaaaca      120
ttattagaaa ttggaccggg tttaggtgcg ttaacaaaac ctatttgtga atttttaaat      180
gaacttatcg tcattgaaat agatcctaat atattatctt ttttaaagaa atgtatattt      240
tttgataaat taaaaatata ttgtcataat gctttagatt ttaattataa aaatatattc      300
tataaaaaaa gtcaattaat tcgtattttt ggaaatttac catataatat ttctacatct      360
ttaataatat atttatttcg gaatattgat attattcaag atatgaattt tatgttacaa      420
caagaagtgg ctaaaagatt agttgctatt cctggtgaaa aactttatgg tcgtttaagt      480
attatatctc aatattattg taatattaaa atattattac atattcgacc tgaaaatttt      540
caacctattc ctaaagttaa ttcaatgttt gtaaatttaa ctccgcatat tcattctcct      600
tattttgttt atgatattaa tttattaact agtattacaa aacatgcttt tcaacataga      660
agaaaaatat tgcgtcatag tttaagaaat tttttttctg agcaagattt aattcattta      720
gaaattaatc caaatttaag agctgaaaat gtttctatta ttcaatattg tcaattggct      780
aataatttat ataaaaaaca taaacagttt attaataatt aa                         822
<210>  11
<211>  816
<212>  ДНК
<213>  Buchnera aphidicola (Aphis glycines)
<400>  11
atgaaaaagc atattcctat aaaaaaattt agtcaaaatt ttcttgtaga tttgagtgtg       60
attaaaaaaa taattaaatt tattaatccg cagttaaatg aaatattggt tgaaattgga      120
ccgggattag ctgctatcac tcgacctatt tgtgatttga tagatcattt aattgtgatt      180
gaaattgata aaattttatt agatagatta aaacagttct cattttattc aaaattaaca      240
gtatatcatc aagatgcttt agcatttgat tacataaagt tatttaataa aaaaaataaa      300
ttagttcgaa tttttggtaa tttaccatat catgtttcta cgtctttaat attgcattta      360
tttaaaagaa ttaatattat taaagatatg aattttatgc tacaaaaaga agttgctgaa      420
cgtttaattg caactccagg tagtaaatta tatggtcgtt taagtattat ttctcaatat      480
tattgtaata taaaagtttt attgcatgtg tcttcaaaat gttttaaacc agttcctaaa      540
gtagaatcaa tttttcttaa tttgacacct tatactgatt atttccctta ttttacttat      600
aatgtaaacg ttcttagtta tattacaaat ttagcttttc aaaaaagaag aaaaatatta      660
cgtcatagtt taggtaaaat attttctgaa aaagttttta taaaattaaa tattaatccc      720
aaattaagac ctgagaatat ttctatatta caatattgtc agttatctaa ttatatgata      780
gaaaataata ttcatcagga acatgtttgt atttaa                                816
<210>  12
<211>  1463
<212>  ДНК
<213>  Annandia pinicola
<400>  12
agattgaacg ctggcggcat gccttacaca tgcaagtcga acggtaacag gtcttcggac       60
gctgacgagt ggcgaacggg tgagtaatac atcggaacgt gcccagtcgt gggggataac      120
tactcgaaag agtagctaat accgcatacg atctgaggat gaaagcgggg gaccttcggg      180
cctcgcgcga ttggagcggc cgatggcaga ttaggtagtt ggtgggataa aagcttacca      240
agccgacgat ctgtagctgg tctgagagga cgaccagcca cactggaact gagatacggt      300
ccagactctt acgggaggca gcagtgggga atattgcaca atgggcgcaa gcctgatgca      360
gctatgtcgc gtgtatgaag aagaccttag ggttgtaaag tactttcgat agcataagaa      420
gataatgaga ctaataattt tattgtctga cgttagctat agaagaagca ccggctaact      480
ccgtgccagc agccgcggta atacgggggg tgctagcgtt aatcggaatt actgggcgta      540
aagagcatgt aggtggttta ttaagtcaga tgtgaaatcc ctggacttaa tctaggaact      600
gcatttgaaa ctaataggct agagtttcgt agagggaggt agaattctag gtgtagcggt      660
gaaatgcata gatatctaga ggaatatcag tggcgaaggc gaccttctgg acgataactg      720
acgctaaaat gcgaaagcat gggtagcaaa caggattaga taccctggta gtccatgctg      780
taaacgatgt cgactaagag gttggaggta taacttttaa tctctgtagc taacgcgtta      840
agtcgaccgc ctggggagta cggtcgcaag gctaaaactc aaatgaattg acgggggcct      900
gcacaagcgg tggagcatgt ggtttaattc gatgcaacgc gtaaaacctt acctggtctt      960
gacatccaca gaattttaca gaaatgtaga agtgcaattt gaactgtgag acaggtgctg     1020
catggctgtc gtcagctcgt gttgtgaaat gttgggttaa gtcccgcaac gagcgcaacc     1080
cttgtccttt gttaccataa gatttaagga actcaaagga gactgccggt gataaactgg     1140
aggaaggcgg ggacgacgtc aagtcatcat ggcccttatg accagggcta cacacgtgct     1200
acaatggcat atacaaagag atgcaatatt gcgaaataaa gccaatctta taaaatatgt     1260
cctagttcgg actggagtct gcaactcgac tccacgaagt cggaatcgct agtaatcgtg     1320
gatcagcatg ccacggtgaa tatgtttcca ggccttgtac acaccgcccg tcacaccatg     1380
gaagtggatt gcaaaagaag taagaaaatt aaccttctta acaaggaaat aacttaccac     1440
tttgtgactc ataactgggg tga                                             1463
<210>  13
<211>  1554
<212>  ДНК
<213>  Moranella endobia
<400>  13
tctttttggt aaggaggtga tccaaccgca ggttccccta cggttacctt gttacgactt       60
caccccagtc atgaatcaca aagtggtaag cgccctccta aaaggttagg ctacctactt      120
cttttgcaac ccacttccat ggtgtgacgg gcggtgtgta caaggcccgg gaacgtattc      180
accgtggcat tctgatccac gattactagc gattcctact tcatggagtc gagttgcaga      240
ctccaatccg gactacgacg cactttatga ggtccgctaa ctctcgcgag cttgcttctc      300
tttgtatgcg ccattgtagc acgtgtgtag ccctactcgt aagggccatg atgacttgac      360
gtcatcccca ccttcctccg gtttatcacc ggcagtctcc tttgagttcc cgaccgaatc      420
gctggcaaaa aaggataagg gttgcgctcg ttgcgggact taacccaaca tttcacaaca      480
cgagctgacg acagccatgc agcacctgtc tcagagttcc cgaaggtacc aaaacatctc      540
tgctaagttc tctggatgtc aagagtaggt aaggttcttc gcgttgcatc gaattaaacc      600
acatgctcca ccgcttgtgc gggcccccgt caattcattt gagttttaac cttgcggccg      660
tactccccag gcggtcgatt taacgcgtta actacgaaag ccacagttca agaccacagc      720
tttcaaatcg acatagttta cggcgtggac taccagggta tctaatcctg tttgctcccc      780
acgctttcgt acctgagcgt cagtattcgt ccagggggcc gccttcgcca ctggtattcc      840
tccagatatc tacacatttc accgctacac ctggaattct acccccctct acgagactct      900
agcctatcag tttcaaatgc agttcctagg ttaagcccag ggatttcaca tctgacttaa      960
taaaccgcct acgtactctt tacgcccagt aattccgatt aacgcttgca ccctccgtat     1020
taccgcggct gctggcacgg agttagccgg tgcttcttct gtaggtaacg tcaatcaata     1080
accgtattaa ggatattgcc ttcctcccta ctgaaagtgc tttacaaccc gaaggccttc     1140
ttcacacacg cggcatggct gcatcagggt ttcccccatt gtgcaatatt ccccactgct     1200
gcctcccgta ggagtctgga ccgtgtctca gttccagtgt ggctggtcat cctctcagac     1260
cagctaggga tcgtcgccta ggtaagctat tacctcacct actagctaat cccatctggg     1320
ttcatctgaa ggtgtgaggc caaaaggtcc cccactttgg tcttacgaca ttatgcggta     1380
ttagctaccg tttccagcag ttatccccct ccatcaggca gatccccaga ctttactcac     1440
ccgttcgctg ctcgccggca aaaaagtaaa cttttttccg ttgccgctca acttgcatgt     1500
gttaggcctg ccgccagcgt tcaatctgag ccatgatcaa actcttcaat taaa           1554
<210>  14
<211>  1539
<212>  ДНК
<213>  Ishikawaella capsulata Mpkobe
<400>  14
aaattgaaga gtttgatcat ggctcagatt gaacgctagc ggcaagctta acacatgcaa       60
gtcgaacggt aacagaaaaa agcttgcttt tttgctgacg agtggcggac gggtgagtaa      120
tgtctgggga tctacctaat ggcgggggat aactactgga aacggtagct aataccgcat      180
aatgttgtaa aaccaaagtg ggggacctta tggcctcaca ccattagatg aacctagatg      240
ggattagctt gtaggtgggg taaaggctca cctaggcaac gatccctagc tggtctgaga      300
ggatgaccag ccacactgga actgagatac ggtccagact cctacgggag gcagcagtgg      360
ggaatcttgc acaatgggcg caagcctgat gcagctatgt cgcgtgtatg aagaaggcct      420
tagggttgta aagtactttc atcggggaag aaggatatga gcctaatatt ctcatatatt      480
gacgttacct gcagaagaag caccggctaa ctccgtgcca gcagccgcgg taacacggag      540
ggtgcgagcg ttaatcggaa ttactgggcg taaagagcac gtaggtggtt tattaagtca      600
tatgtgaaat ccctgggctt aacctaggaa ctgcatgtga aactgataaa ctagagtttc      660
gtagagggag gtggaattcc aggtgtagcg gtgaaatgcg tagatatctg gaggaatatc      720
agaggcgaag gcgaccttct ggacgaaaac tgacactcag gtgcgaaagc gtggggagca      780
aacaggatta gataccctgg tagtccacgc tgtaaacaat gtcgactaaa aaactgtgag      840
cttgacttgt ggtttttgta gctaacgcat taagtcgacc gcctggggag tacggccgca      900
aggttaaaac tcaaatgaat tgacgggggt ccgcacaagc ggtggagcat gtggtttaat      960
tcgatgcaac gcgaaaaacc ttacctggtc ttgacatcca gcgaattata tagaaatata     1020
taagtgcctt tcggggaact ctgagacgct gcatggctgt cgtcagctcg tgttgtgaaa     1080
tgttgggtta agtcccgcaa cgagcgccct tatcctctgt tgccagcggc atggccggga     1140
actcagagga gactgccagt attaaactgg aggaaggtgg ggatgacgtc aagtcatcat     1200
ggcccttatg accagggcta cacacgtgct acaatggtgt atacaaagag aagcaatctc     1260
gcaagagtaa gcaaaactca aaaagtacat cgtagttcgg attagagtct gcaactcgac     1320
tctatgaagt aggaatcgct agtaatcgtg gatcagaatg ccacggtgaa tacgttctct     1380
ggccttgtac acaccgcccg tcacaccatg ggagtaagtt gcaaaagaag taggtagctt     1440
aacctttata ggagggcgct taccactttg tgatttatga ctggggtgaa gtcgtaacaa     1500
ggtaactgta ggggaacctg tggttggatt acctcctta                            1539
<210>  15
<211>  1561
<212>  ДНК
<213>  Baumannia cicadellinicola
<400>  15
ttcaattgaa gagtttgatc atggctcaga ttgaacgctg gcggtaagct taacacatgc       60
aagtcgagcg gcatcggaaa gtaaattaat tactttgccg gcaagcggcg aacgggtgag      120
taatatctgg ggatctacct tatggagagg gataactatt ggaaacgata gctaacaccg      180
cataatgtcg tcagaccaaa atgggggacc taatttaggc ctcatgccat aagatgaacc      240
cagatgagat tagctagtag gtgagataat agctcaccta ggcaacgatc tctagttggt      300
ctgagaggat gaccagccac actggaactg agacacggtc cagactccta cgggaggcag      360
cagtggggaa tcttgcacaa tgggggaaac cctgatgcag ctataccgcg tgtgtgaaga      420
aggccttcgg gttgtaaagc actttcagcg gggaagaaaa tgaagttact aataataatt      480
gtcaattgac gttacccgca aaagaagcac cggctaactc cgtgccagca gccgcggtaa      540
gacggagggt gcaagcgtta atcggaatta ctgggcgtaa agcgtatgta ggcggtttat      600
ttagtcaggt gtgaaagccc taggcttaac ctaggaattg catttgaaac tggtaagcta      660
gagtctcgta gaggggggga gaattccagg tgtagcggtg aaatgcgtag agatctggaa      720
gaataccagt ggcgaaggcg cccccctgga cgaaaactga cgctcaagta cgaaagcgtg      780
gggagcaaac aggattagat accctggtag tccacgctgt aaacgatgtc gatttgaagg      840
ttgtagcctt gagctatagc tttcgaagct aacgcattaa atcgaccgcc tggggagtac      900
gaccgcaagg ttaaaactca aatgaattga cgggggcccg cacaagcggt ggagcatgtg      960
gtttaattcg atacaacgcg aaaaacctta cctactcttg acatccagag tataaagcag     1020
aaaagcttta gtgccttcgg gaactctgag acaggtgctg catggctgtc gtcagctcgt     1080
gttgtgaaat gttgggttaa gtcccgcaac gagcgcaacc cttatccttt gttgccaacg     1140
attaagtcgg gaactcaaag gagactgccg gtgataaacc ggaggaaggt gaggataacg     1200
tcaagtcatc atggccctta cgagtagggc tacacacgtg ctacaatggt gcatacaaag     1260
agaagcaatc tcgtaagagt tagcaaacct cataaagtgc atcgtagtcc ggattagagt     1320
ctgcaactcg actctatgaa gtcggaatcg ctagtaatcg tggatcagaa tgccacggtg     1380
aatacgttcc cgggccttgt acacaccgcc cgtcacacca tgggagtgta ttgcaaaaga     1440
agttagtagc ttaactcata atacgagagg gcgcttacca ctttgtgatt cataactggg     1500
gtgaagtcgt aacaaggtaa ccgtagggga acctgcggtt ggatcacctc cttacactaa     1560
a                                                                     1561
<210>  16
<211>  1464
<212>  ДНК
<213>  Sodalis-подобные
<400>  16
attgaacgct ggcggcaggc ctaacacatg caagtcgagc ggcagcggga agaagcttgc       60
ttctttgccg gcgagcggcg gacgggtgag taatgtctgg ggatctgccc gatggagggg      120
gataactact ggaaacggta gctaataccg cataacgtcg caagaccaaa gtgggggacc      180
ttcgggcctc acaccatcgg atgaacccag gtgggattag ctagtaggtg gggtaatggc      240
tcacctaggc gacgatccct agctggtctg agaggatgac cagtcacact ggaactgaga      300
cacggtccag actcctacgg gaggcagcag tggggaatat tgcacaatgg gggaaaccct      360
gatgcagcca tgccgcgtgt gtgaagaagg ccttcgggtt gtaaagcact ttcagcgggg      420
aggaaggcga tggcgttaat agcgctatcg attgacgtta cccgcagaag aagcaccggc      480
taactccgtg ccagcagccg cggtaatacg gagggtgcga gcgttaatcg gaattactgg      540
gcgtaaagcg tacgcaggcg gtctgttaag tcagatgtga aatccccggg ctcaacctgg      600
gaactgcatt tgaaactggc aggctagagt ctcgtagagg ggggtagaat tccaggtgta      660
gcggtgaaat gcgtagagat ctggaggaat accggtggcg aaggcggccc cctggacgaa      720
gactgacgct caggtacgaa agcgtgggga gcaaacagga ttagataccc tggtagtcca      780
cgctgtaaac gatgtcgatt tgaaggttgt ggccttgagc cgtggctttc ggagctaacg      840
tgttaaatcg accgcctggg gagtacggcc gcaaggttaa aactcaaatg aattgacggg      900
ggcccgcaca agcggtggag catgtggttt aattcgatgc aacgcgaaga accttaccta      960
ctcttgacat ccagagaact tggcagagat gctttggtgc cttcgggaac tctgagacag     1020
gtgctgcatg gctgtcgtca gctcgtgttg tgaaatgttg ggttaagtcc cgcaacgagc     1080
gcaaccctta tcctttattg ccagcgattc ggtcgggaac tcaaaggaga ctgccggtga     1140
taaaccggag gaaggtgggg atgacgtcaa gtcatcatgg cccttacgag tagggctaca     1200
cacgtgctac aatggcgcat acaaagagaa gcgatctcgc gagagtcagc ggacctcata     1260
aagtgcgtcg tagtccggat tggagtctgc aactcgactc catgaagtcg gaatcgctag     1320
taatcgtgga tcagaatgcc acggtgaata cgttcccggg ccttgtacac accgcccgtc     1380
acaccatggg agtgggttgc aaaagaagta ggtagcttaa ccttcgggag ggcgcttacc     1440
actttgtgat tcatgactgg ggtg                                            1464
<210>  17
<211>  1465
<212>  ДНК
<213>  Hartigia pinicola
<400>  17
agatttaacg ctggcggcag gcctaacaca tgcaagtcga gcggtaccag aagaagcttg       60
cttcttgctg acgagcggcg gacgggtgag taatgtatgg ggatctgccc gacagagggg      120
gataactatt ggaaacggta gctaataccg cataatctct gaggagcaaa gcaggggaac      180
ttcggtcctt gcgctatcgg atgaacccat atgggattag ctagtaggtg aggtaatggc      240
tcccctaggc aacgatccct agctggtctg agaggatgat cagccacact gggactgaga      300
cacggcccag actcctacgg gaggcagcag tggggaatat tgcacaatgg gcgaaagcct      360
gatgcagcca tgccgcgtgt atgaagaagg ctttagggtt gtaaagtact ttcagtcgag      420
aggaaaacat tgatgctaat atcatcaatt attgacgttt ccgacagaag aagcaccggc      480
taactccgtg ccagcagccg cggtaatacg gagggtgcaa gcgttaatcg gaattactgg      540
gcgtaaagcg cacgcaggcg gttaattaag ttagatgtga aagccccggg cttaacccag      600
gaatagcata taaaactggt caactagagt attgtagagg ggggtagaat tccatgtgta      660
gcggtgaaat gcgtagagat gtggaggaat accagtggcg aaggcggccc cctggacaaa      720
aactgacgct caaatgcgaa agcgtgggga gcaaacagga ttagataccc tggtagtcca      780
tgctgtaaac gatgtcgatt tggaggttgt tcccttgagg agtagcttcc gtagctaacg      840
cgttaaatcg accgcctggg ggagtacgac tgcaaggtta aaactcaaat gaattgacgg      900
gggcccgcac aagcggtgga gcatgtggtt taattcgatg caacgcgaaa aaccttacct      960
actcttgaca tccagataat ttagcagaaa tgctttagta ccttcgggaa atctgagaca     1020
ggtgctgcat ggctgtcgtc agctcgtgtt gtgaaatgtt gggttaagtc ccgcaacgag     1080
cgcaaccctt atcctttgtt gccagcgatt aggtcgggaa ctcaaaggag actgccggtg     1140
ataaaccgga ggaaggtggg gatgacgtca agtcatcatg gcccttacga gtagggctac     1200
acacgtgcta caatggcata tacaaaggga agcaacctcg cgagagcaag cgaaactcat     1260
aaattatgtc gtagttcaga ttggagtctg caactcgact ccatgaagtc ggaatcgcta     1320
gtaatcgtag atcagaatgc tacggtgaat acgttcccgg gccttgtaca caccgcccgt     1380
cacaccatgg gagtgggttg caaaagaagt aggtaactta accttatgga aagcgcttac     1440
cactttgtga ttcataactg gggtg                                           1465
<210>  18
<211>  1571
<212>  ДНК
<213>  Tremblaya phenacola
<400>  18
aggtaatcca gccacacctt ccagtacggc taccttgtta cgacttcacc ccagtcacaa       60
cccttacctt cggaactgcc ctcctcacaa ctcaaaccac caaacacttt taaatcaggt      120
tgagagaggt taggcctgtt acttctggca agaattattt ccatggtgtg acgggcggtg      180
tgtacaagac ccgagaacat attcaccgtg gcatgctgat ccacgattac tagcaattcc      240
aacttcatgc actcgagttt cagagtacaa tccgaactga ggccggcttt gtgagattag      300
ctcccttttg caagttggca actctttggt ccggccattg tatgatgtgt gaagccccac      360
ccataaaggc catgaggact tgacgtcatc cccaccttcc tccaacttat cgctggcagt      420
ctctttaagg taactgacta atccagtagc aattaaagac aggggttgcg ctcgttacag      480
gacttaaccc aacatctcac gacacgagct gacgacagcc atgcagcacc tgtgcactaa      540
ttctctttca agcactcccg cttctcaaca ggatcttagc catatcaaag gtaggtaagg      600
tttttcgcgt tgcatcgaat taatccacat catccactgc ttgtgcgggt ccccgtcaat      660
tcctttgagt tttaaccttg cggccgtact ccccaggcgg tcgacttgtg cgttagctgc      720
accactgaaa aggaaaactg cccaatggtt agtcaacatc gtttagggca tggactacca      780
gggtatctaa tcctgtttgc tccccatgct ttagtgtctg agcgtcagta acgaaccagg      840
aggctgccta cgctttcggt attcctccac atctctacac atttcactgc tacatgcgga      900
attctacctc cccctctcgt actccagcct gccagtaact gccgcattct gaggttaagc      960
ctcagccttt cacagcaatc ttaacaggca gcctgcacac cctttacgcc caataaatct     1020
gattaacgct cgcaccctac gtattaccgc ggctgctggc acgtagtttg ccggtgctta     1080
ttctttcggt acagtcacac caccaaattg ttagttgggt ggctttcttt ccgaacaaaa     1140
gtgctttaca acccaaaggc cttcttcaca cacgcggcat tgctggatca ggcttccgcc     1200
cattgtccaa gattcctcac tgctgccttc ctcagaagtc tgggccgtgt ctcagtccca     1260
gtgtggctgg ccgtcctctc agaccagcta ccgatcattg ccttgggaag ccattacctt     1320
tccaacaagc taatcagaca tcagccaatc tcagagcgca aggcaattgg tcccctgctt     1380
tcattctgct tggtagagaa ctttatgcgg tattaattag gctttcacct agctgtcccc     1440
cactctgagg catgttctga tgcattactc acccgtttgc cacttgccac caagcctaag     1500
cccgtgttgc cgttcgactt gcatgtgtaa ggcatgccgc tagcgttcaa tctgagccag     1560
gatcaaactc t                                                          1571
<210>  19
<211>  1535
<212>  ДНК
<213>  Tremblaya princeps
<400>  19
agagtttgat cctggctcag attgaacgct agcggcatgc attacacatg caagtcgtac       60
ggcagcacgg gcttaggcct ggtggcgagt ggcgaacggg tgagtaacgc ctcggaacgt      120
gccttgtagt gggggatagc ctggcgaaag ccagattaat accgcatgaa gccgcacagc      180
atgcgcggtg aaagtggggg attctagcct cacgctactg gatcggccgg ggtctgatta      240
gctagttggc ggggtaatgg cccaccaagg cttagatcag tagctggtct gagaggacga      300
tcagccacac tgggactgag acacggccca gactcctacg ggaggcagca gtggggaatc      360
ttggacaatg ggcgcaagcc tgatccagca atgccgcgtg tgtgaagaag gccttcgggt      420
cgtaaagcac ttttgttcgg gatgaagggg ggcgtgcaaa caccatgccc tcttgacgat      480
accgaaagaa taagcaccgg ctaactacgt gccagcagcc gcggtaatac gtagggtgcg      540
agcgttaatc ggaatcactg ggcgtaaagg gtgcgcgggt ggtttgccaa gacccctgta      600
aaatcctacg gcccaaccgt agtgctgcgg aggttactgg taagcttgag tatggcagag      660
gggggtagaa ttccaggtgt agcggtgaaa tgcgtagata tctggaggaa taccgaaggc      720
gaaggcaacc ccctgggcca tcactgacac tgaggcacga aagcgtgggg agcaaacagg      780
attagatacc ctggtagtcc acgccctaaa ccatgtcgac tagttgtcgg ggggagccct      840
ttttcctcgg tgacgaagct aacgcatgaa gtcgaccgcc tggggagtac gaccgcaagg      900
ttaaaactca aaggaattga cggggacccg cacaagcggt ggatgatgtg gattaattcg      960
atgcaacgcg aaaaacctta cctacccttg acatggcgga gattctgccg agaggcggaa     1020
gtgctcgaaa gagaatccgt gcacaggtgc tgcatggctg tcgtcagctc gtgtcgtgag     1080
atgttgggtt aagtcccata acgagcgcaa cccccgtctt tagttgctac cactggggca     1140
ctctatagag actgccggtg ataaaccgga ggaaggtggg gacgacgtca agtcatcatg     1200
gcctttatgg gtagggcttc acacgtcata caatggctgg agcaaagggt cgccaactcg     1260
agagagggag ctaatcccac aaacccagcc ccagttcgga ttgcactctg caactcgagt     1320
gcatgaagtc ggaatcgcta gtaatcgtgg atcagcatgc cacggtgaat acgttctcgg     1380
gtcttgtaca caccgcccgt cacaccatgg gagtaagccg catcagaagc agcctcccta     1440
accctatgct gggaaggagg ctgcgaaggt ggggtctatg actggggtga agtcgtaaca     1500
aggtagccgt accggaaggt gcggctggat tacct                                1535
<210>  20
<211>  1450
<212>  ДНК
<213>  Nasuia deltocephalinicola
<400>  20
agtttaatcc tggctcagat ttaacgcttg cgacatgcct aacacatgca agttgaacgt       60
tgaaaatatt tcaaagtagc gtataggtga gtataacatt taaacatacc ttaaagttcg      120
gaataccccg atgaaaatcg gtataatacc gtataaaagt atttaagaat taaagcgggg      180
aaaacctcgt gctataagat tgttaaatgc ctgattagtt tgttggtttt taaggtaaaa      240
gcttaccaag actttgatca gtagctattc tgtgaggatg tatagccaca ttgggattga      300
aataatgccc aaacctctac ggagggcagc agtggggaat attggacaat gagcgaaagc      360
ttgatccagc aatgtcgcgt gtgcgattaa gggaaactgt aaagcacttt tttttaagaa      420
taagaaattt taattaataa ttaaaatttt tgaatgtatt aaaagaataa gtaccgacta      480
atcacgtgcc agcagtcgcg gtaatacgtg gggtgcgagc gttaatcgga tttattgggc      540
gtaaagtgta ttcaggctgc ttaaaaagat ttatattaaa tatttaaatt aaatttaaaa      600
aatgtataaa ttactattaa gctagagttt agtataagaa aaaagaattt tatgtgtagc      660
agtgaaatgc gttgatatat aaaggaacgc cgaaagcgaa agcatttttc tgtaatagaa      720
ctgacgctta tatacgaaag cgtgggtagc aaacaggatt agataccctg gtagtccacg      780
ccctaaacta tgtcaattaa ctattagaat tttttttagt ggtgtagcta acgcgttaaa      840
ttgaccgcct gggtattacg atcgcaagat taaaactcaa aggaattgac ggggaccagc      900
acaagcggtg gatgatgtgg attaattcga tgatacgcga aaaaccttac ctgcccttga      960
catggttaga attttattga aaaataaaag tgcttggaaa agagctaaca cacaggtgct     1020
gcatggctgt cgtcagctcg tgtcgtgaga tgttgggtta agtcccgcaa cgagcgcaac     1080
ccctactctt agttgctaat taaagaactt taagagaaca gctaacaata agtttagagg     1140
aaggagggga tgacttcaag tcctcatggc ccttatgggc agggcttcac acgtcataca     1200
atggttaata caaaaagttg caatatcgta agattgagct aatctttaaa attaatctta     1260
gttcggattg tactctgcaa ctcgagtaca tgaagttgga atcgctagta atcgcggatc     1320
agcatgccgc ggtgaatagt ttaactggtc ttgtacacac cgcccgtcac accatggaaa     1380
taaatcttgt tttaaatgaa gtaatatatt ttatcaaaac aggttttgta accggggtga     1440
agtcgtaaca                                                            1450
<210>  21
<211>  1536
<212>  ДНК
<213>  Zinderia insecticola CARI
<400>  21
atataaataa gagtttgatc ctggctcaga ttgaacgcta gcggtatgct ttacacatgc       60
aagtcgaacg acaatattaa agcttgcttt aatataaagt ggcgaacggg tgagtaatat      120
atcaaaacgt accttaaagt gggggataac taattgaaaa attagataat accgcatatt      180
aatcttagga tgaaaatagg aataatatct tatgctttta gatcggttga tatctgatta      240
gctagttggt agggtaaatg cttaccaagg caatgatcag tagctggttt tagcgaatga      300
tcagccacac tggaactgag acacggtcca gacttctacg gaaggcagca gtggggaata      360
ttggacaatg ggagaaatcc tgatccagca ataccgcgtg agtgatgaag gccttagggt      420
cgtaaaactc ttttgttagg aaagaaataa ttttaaataa tatttaaaat tgatgacggt      480
acctaaagaa taagcaccgg ctaactacgt gccagcagcc gcggtaatac gtagggtgca      540
agcgttaatc ggaattattg ggcgtaaaga gtgcgtaggc tgttatataa gatagatgtg      600
aaatacttaa gcttaactta agaactgcat ttattactgt ttaactagag tttattagag      660
agaagtggaa ttttatgtgt agcagtgaaa tgcgtagata tataaaggaa tatcgatggc      720
gaaggcagct tcttggaata atactgacgc tgaggcacga aagcgtgggg agcaaacagg      780
attagatacc ctggtagtcc acgccctaaa ctatgtctac tagttattaa attaaaaata      840
aaatttagta acgtagctaa cgcattaagt agaccgcctg gggagtacga tcgcaagatt      900
aaaactcaaa ggaattgacg gggacccgca caagcggtgg atgatgtgga ttaattcgat      960
gcaacacgaa aaaccttacc tactcttgac atgtttggaa ttttaaagaa atttaaaagt     1020
gcttgaaaaa gaaccaaaac acaggtgctg catggctgtc gtcagctcgt gtcgtgagat     1080
gttgggttaa gtcccgcaac gagcgcaacc cttgttatta tttgctaata aaaagaactt     1140
taataagact gccaatgaca aattggagga aggtggggat gacgtcaagt cctcatggcc     1200
cttatgagta gggcttcaca cgtcatacaa tgatatatac aatgggtagc aaatttgtga     1260
aaatgagcca atccttaaag tatatcttag ttcggattgt agtctgcaac tcgactacat     1320
gaagttggaa tcgctagtaa tcgcggatca gcatgccgcg gtgaatacgt tctcgggtct     1380
tgtacacacc gcccgtcaca ccatggaagt gatttttacc agaaattatt tgtttaacct     1440
ttattggaaa aaaataatta aggtagaatt catgactggg gtgaagtcgt aacaaggtag     1500
cagtatcgga aggtgcggct ggattacatt ttaaat                               1536
<210>  22
<211>  1423
<212>  ДНК
<213>  Hodgkinia
<400>  22
aatgctggcg gcaggcctaa cacatgcaag tcgagcggac aacgttcaaa cgttgttagc       60
ggcgaacggg tgagtaatac gtgagaatct acccatccca acgtgataac atagtcaaca      120
ccatgtcaat aacgtatgat tcctgcaaca ggtaaagatt ttatcgggga tggatgagct      180
cacgctagat tagctagttg gtgagataaa agcccaccaa ggccaagatc tatagctggt      240
ctggaaggat ggacagccac attgggactg agacaaggcc caaccctcta aggagggcag      300
cagtgaggaa tattggacaa tgggcgtaag cctgatccag ccatgccgca tgagtgattg      360
aaggtccaac ggactgtaaa actcttttct ccagagatca taaatgatag tatctggtga      420
tataagctcc ggccaacttc gtgccagcag ccgcggtaat acgaggggag cgagtattgt      480
tcggttttat tgggcgtaaa gggtgtccag gttgctaagt aagttaacaa caaaatcttg      540
agattcaacc tcataacgtt cggttaatac tactaagctc gagcttggat agagacaaac      600
ggaattccga gtgtagaggt gaaattcgtt gatacttgga ggaacaccag aggcgaaggc      660
ggtttgtcat accaagctga cactgaagac acgaaagcat ggggagcaaa caggattaga      720
taccctggta gtccatgccc taaacgttga gtgctaacag ttcgatcaag ccacatgcta      780
tgatccagga ttgtacagct aacgcgttaa gcactccgcc tgggtattac gaccgcaagg      840
ttaaaactca aaggaattga cggagacccg cacaagcggt ggagcatgtg gtttaattcg      900
aagctacacg aagaacctta ccagcccttg acataccatg gccaaccatc ctggaaacag      960
gatgttgttc aagttaaacc cttgaaatgc caggaacagg tgctgcatgg ctgttgtcag     1020
ttcgtgtcgt gagatgtatg gttaagtccc aaaacgaaca caaccctcac ccatagttgc     1080
cataaacaca attgggttct ctatgggtac tgctaacgta agttagagga aggtgaggac     1140
cacaacaagt catcatggcc cttatgggct gggccacaca catgctacaa tggtggttac     1200
aaagagccgc aacgttgtga gaccgagcaa atctccaaag accatctcag tccggattgt     1260
actctgcaac ccgagtacat gaagtaggaa tcgctagtaa tcgtggatca gcatgccacg     1320
gtgaatacgt tctcgggtct tgtacacgcc gcccgtcaca ccatgggagc ttcgctccga     1380
tcgaagtcaa gttacccttg accacatctt ggcaagtgac cga                       1423
<210>  23
<211>  1504
<212>  ДНК
<213>  Wolbachia sp. wPip
<400>  23
aaatttgaga gtttgatcct ggctcagaat gaacgctggc ggcaggccta acacatgcaa       60
gtcgaacgga gttatattgt agcttgctat ggtataactt agtggcagac gggtgagtaa      120
tgtataggaa tctacctagt agtacggaat aattgttgga aacgacaact aataccgtat      180
acgccctacg ggggaaaaat ttattgctat tagatgagcc tatattagat tagctagttg      240
gtggggtaat agcctaccaa ggtaatgatc tatagctgat ctgagaggat gatcagccac      300
actggaactg agatacggtc cagactccta cgggaggcag cagtggggaa tattggacaa      360
tgggcgaaag cctgatccag ccatgccgca tgagtgaaga aggcctttgg gttgtaaagc      420
tcttttagtg aggaagataa tgacggtact cacagaagaa gtcctggcta actccgtgcc      480
agcagccgcg gtaatacgga gagggctagc gttattcgga attattgggc gtaaagggcg      540
cgtaggctgg ttaataagtt aaaagtgaaa tcccgaggct taaccttgga attgctttta      600
aaactattaa tctagagatt gaaagaggat agaggaattc ctgatgtaga ggtaaaattc      660
gtaaatatta ggaggaacac cagtggcgaa ggcgtctatc tggttcaaat ctgacgctga      720
agcgcgaagg cgtggggagc aaacaggatt agataccctg gtagtccacg ctgtaaacga      780
tgaatgttaa atatggggag tttactttct gtattacagc taacgcgtta aacattccgc      840
ctggggacta cggtcgcaag attaaaactc aaaggaattg acggggaccc gcacaagcgg      900
tggagcatgt ggtttaattc gatgcaacgc gaaaaacctt accacttctt gacatgaaaa      960
tcatacctat tcgaagggat agggtcggtt cggccggatt ttacacaagt gttgcatggc     1020
tgtcgtcagc tcgtgtcgtg agatgttggg ttaagtcccg caacgagcgc aaccctcatc     1080
cttagttgcc atcaggtaat gctgagtact ttaaggaaac tgccagtgat aagctggagg     1140
aaggtgggga tgatgtcaag tcatcatggc ctttatggag tgggctacac acgtgctaca     1200
atggtgtcta caatgggctg caaggtgcgc aagcctaagc taatccctaa aagacatctc     1260
agttcggatt gtactctgca actcgagtac atgaagttgg aatcgctagt aatcgtggat     1320
cagcatgcca cggtgaatac gttctcgggt cttgtacaca ctgcccgtca cgccatggga     1380
attggtttca ctcgaagcta atggcctaac cgcaaggaag gagttattta aagtgggatc     1440
agtgactggg gtgaagtcgt aacaaggtag cagtagggga atctgcagct ggattacctc     1500
ctta                                                                  1504
<210>  24
<211>  1532
<212>  ДНК
<213>  Uzinura diaspidicola
<400>  24
aaaggagata ttccaaccac accttccggt acggttacct tgttacgact tagccctagt       60
catcaagttt accttaggca gaccactgaa ggattactga cttcaggtac ccccgactcc      120
catggcttga cgggcggtgt gtacaaggtt cgagaacata ttcaccgcgc cattgctgat      180
gcgcgattac tagcgattcc tgcttcatag agtcgaattg cagactccaa tccgaactga      240
gactggtttt agagattagc tcctgatcac ccagtggctg ccctttgtaa ccagccattg      300
tagcacgtgt gtagcccaag gcatagaggc catgatgatt tgacatcatc cccaccttcc      360
tcacagttta caccggcagt tttgttagag tccccggctt tacccgatgg caactaacaa      420
taggggttgc gctcgttata ggacttaacc aaacacttca cagcacgaac tgaagacaac      480
catgcagcac cttgtaatac gtcgtataga ctaagctgtt tccagcttat tcgtaataca      540
tttaagcctt ggtaaggttc ctcgcgtatc atcgaattaa accacatgct ccaccgcttg      600
tgcgaacccc cgtcaattcc tttgagtttc aatcttgcga ctgtacttcc caggtggatc      660
acttatcgct ttcgctaagc cactgaatat cgtttttcca atagctagtg atcatcgttt      720
agggcgtgga ctaccagggt atctaatcct gtttgctccc cacgctttcg tgcactgagc      780
gtcagtaaag atttagcaac ctgccttcgc tatcggtgtt ctgtatgata tctatgcatt      840
tcaccgctac accatacatt ccagatgctc caatcttact caagtttacc agtatcaata      900
gcaattttac agttaagctg taagctttca ctactgactt aataaacagc ctacacaccc      960
tttaaaccca ataaatccga ataacgcttg tgtcatccgt attgccgcgg ctgctggcac     1020
ggaattagcc gacacttatt cgtatagtac cttcaatctc ctatcacgta agatatttta     1080
tttctataca aaagcagttt acaacctaaa agaccttcat cctgcacgcg acgtagctgg     1140
ttcagagttt cctccattga ccaatattcc tcactgctgc ctcccgtagg agtctggtcc     1200
gtgtctcagt accagtgtgg aggtacaccc tcttaggccc cctactgatc atagtcttgg     1260
tagagccatt acctcaccaa ctaactaatc aaacgcaggc tcatcttttg ccacctaagt     1320
tttaataaag gctccatgca gaaactttat attatggggg attaatcaga atttcttctg     1380
gctatacccc agcaaaaggt agattgcata cgtgttactc acccattcgc cggtcgccga     1440
caaattaaaa atttttcgat gcccctcgac ttgcatgtgt taagctcgcc gctagcgtta     1500
attctgagcc aggatcaaac tcttcgttgt ag                                   1532
<210>  25
<211>  1470
<212>  ДНК
<213>  Carsonella ruddii
<400>  25
ctcaggataa acgctagcgg agggcttaac acatgcaagt cgaggggcag caaaaataat       60
tatttttggc gaccggcaaa cgggtgagta atacatacgt aactttcctt atgctgagga      120
atagcctgag gaaacttgga ttaatacctc ataatacaat tttttagaaa gaaaaattgt      180
taaagtttta ttatggcata agataggcgt atgtccaatt agttagttgg taaggtaatg      240
gcttaccaag acgatgattg gtagggggcc tgagaggggc gttcccccac attggtactg      300
agacacggac caaacttcta cggaaggctg cagtgaggaa tattggtcaa tggaggaaac      360
tctgaaccag ccactccgcg tgcaggatga aagaaagcct tattggttgt aaactgcttt      420
tgtatatgaa taaaaaattc taattataga aataattgaa ggtaatatac gaataagtat      480
cgactaactc tgtgccagca gtcgcggtaa gacagaggat acaagcgtta tccggattta      540
ttgggtttaa agggtgcgta ggcggttttt aaagtcagta gtgaaatctt aaagcttaac      600
tttaaaagtg ctattgatac tgaaaaacta gagtaaggtt ggagtaactg gaatgtgtgg      660
tgtagcggtg aaatgcatag atatcacaca gaacaccgat agcgaaagca agttactaac      720
cctatactga cgctgagtca cgaaagcatg gggagcaaac aggattagat accctggtag      780
tccatgccgt aaacgatgat cactaactat tgggttttat acgttgtaat tcagtggtga      840
agcgaaagtg ttaagtgatc cacctgagga gtacgaccgc aaggttgaaa ctcaaaggaa      900
ttgacggggg cccgcacaat cggtggagca tgtggtttaa ttcgatgata cacgaggaac      960
cttaccaaga cttaaatgta ctacgaataa attggaaaca atttagtcaa gcgacggagt     1020
acaaggtgct gcatggttgt cgtcagctcg tgccgtgagg tgtaaggtta agtcctttaa     1080
acgagcgcaa cccttattat tagttgccat cgagtaatgt caggggactc taataagact     1140
gccggcgcaa gccgagagga aggtggggat gacgtcaaat catcacggcc cttacgtctt     1200
gggccacaca cgtgctacaa tgatcggtac aaaagggagc gactgggtga ccaggagcaa     1260
atccagaaag ccgatctaag ttcggattgg agtctgaaac tcgactccat gaagctggaa     1320
tcgctagtaa tcgtgcatca gccatggcac ggtgaatatg ttcccgggcc ttgtacacac     1380
cgcccgtcaa gccatggaag ttggaagtac ctaaagttgg ttcgctacct aaggtaagtc     1440
taataactgg ggctaagtcg taacaaggta                                      1470
<210>  26
<211>  1761
<212>  ДНК
<213>  Symbiotaphrina buchneri, контрольный штамм JCM9740
<220>
<221>  другой_признак
<222>  (30)..(30)
<223>  n представляет собой a, g, c или t
<220>
<221>  другой_признак
<222>  (40)..(40)
<223>  n представляет собой a, g, c или t
<400>  26
agattaagcc atgcaagtct aagtataagn aatctatacn gtgaaactgc gaatggctca       60
ttaaatcagt tatcgtttat ttgatagtac cttactacat ggataaccgt ggtaattcta      120
gagctaatac atgctaaaaa ccccgacttc ggaaggggtg tatttattag ataaaaaacc      180
aatgcccttc ggggctcctt ggtgattcat gataacttaa cgaatcgcat ggccttgcgc      240
cggcgatggt tcattcaaat ttctgcccta tcaactttcg atggtaggat agtggcctac      300
catggtttta acgggtaacg gggaattagg gttcgattcc ggagagggag cctgagaaac      360
ggctaccaca tccaaggaag gcagcaggcg cgcaaattac ccaatcccga cacggggagg      420
tagtgacaat aaatactgat acagggctct tttgggtctt gtaattggaa tgagtacaat      480
ttaaatccct taacgaggaa caattggagg gcaagtctgg tgccagcagc cgcggtaatt      540
ccagctccaa tagcgtatat taaagttgtt gcagttaaaa agctcgtagt tgaaccttgg      600
gcctggctgg ccggtccgcc taaccgcgtg tactggtccg gccgggcctt tccttctggg      660
gagccgcatg cccttcactg ggtgtgtcgg ggaaccagga cttttacttt gaaaaaatta      720
gagtgttcaa agcaggccta tgctcgaata cattagcatg gaataataga ataggacgtg      780
cggttctatt ttgttggttt ctaggaccgc cgtaatgatt aatagggata gtcgggggca      840
tcagtattca attgtcagag gtgaaattct tggatttatt gaagactaac tactgcgaaa      900
gcatttgcca aggatgtttt cattaatcag tgaacgaaag ttaggggatc gaagacgatc      960
agataccgtc gtagtcttaa ccataaacta tgccgactag ggatcgggcg atgttattat     1020
tttgactcgc tcggcacctt acgagaaatc aaagtctttg ggttctgggg ggagtatggt     1080
cgcaaggctg aaacttaaag aaattgacgg aagggcacca ccaggagtgg agcctgcggc     1140
ttaatttgac tcaacacggg gaaactcacc aggtccagac acattaagga ttgacagatt     1200
gagagctctt tcttgattat gtgggtggtg gtgcatggcc gttcttagtt ggtggagtga     1260
tttgtctgct taattgcgat aacgaacgag accttaacct gctaaatagc ccggtccgct     1320
ttggcgggcc gctggcttct tagagggact atcggctcaa gccgatggaa gtttgaggca     1380
ataacaggtc tgtgatgccc ttagatgttc tgggccgcac gcgcgctaca ctgacagagc     1440
caacgagtaa atcaccttgg ccggaaggtc tgggtaatct tgttaaactc tgtcgtgctg     1500
gggatagagc attgcaatta ttgctcttca acgaggaatt cctagtaagc gcaagtcatc     1560
agcttgcgct gattacgtcc ctgccctttg tacacaccgc ccgtcgctac taccgattga     1620
atggctcagt gaggccttcg gactggcaca gggacgttgg caacgacgac ccagtgccgg     1680
aaagttggtc aaacttggtc atttagagga agtaaaagtc gtaacaaggt ttccgtaggt     1740
gaacctgcgg aaggatcatt a                                               1761
<210>  27
<211>  1801
<212>  ДНК
<213>  Symbiotaphrina kochii, контрольный штамм CBS 589.63
<220>
<221>  другой_признак
<222>  (1753)..(1755)
<223>  n представляет собой a, g, c или t
<400>  27
tacctggttg attctgccag tagtcatatg cttgtctcaa agattaagcc atgcaagtct       60
aagtataagc aatctatacg gtgaaactgc gaatggctca ttaaatcagt tatcgtttat      120
ttgatagtac cttactacat ggataaccgt ggtaattcta gagctaatac atgctaaaaa      180
cctcgacttc ggaaggggtg tatttattag ataaaaaacc aatgcccttc ggggctcctt      240
ggtgattcat gataacttaa cgaatcgcat ggccttgcgc cggcgatggt tcattcaaat      300
ttctgcccta tcaactttcg atggtaggat agtggcctac catggtttca acgggtaacg      360
gggaattagg gttcgattcc ggagagggag cctgagaaac ggctaccaca tccaaggaag      420
gcagcaggcg cgcaaattac ccaatcccga cacggggagg tagtgacaat aaatactgat      480
acagggctct tttgggtctt gtaattggaa tgagtacaat ttaaatccct taacgaggaa      540
caattggagg gcaagtctgg tgccagcagc cgcggtaatt ccagctccaa tagcgtatat      600
taaagttgtt gcagttaaaa agctcgtagt tgaaccttgg gcctggctgg ccggtccgcc      660
taaccgcgtg tactggtccg gccgggcctt tccttctggg gagccgcatg cccttcactg      720
ggtgtgtcgg ggaaccagga cttttacttt gaaaaaatta gagtgttcaa agcaggccta      780
tgctcgaata cattagcatg gaataataga ataggacgtg tggttctatt ttgttggttt      840
ctaggaccgc cgtaatgatt aatagggata gtcgggggca tcagtattca attgtcagag      900
gtgaaattct tggatttatt gaagactaac tactgcgaaa gcatttgcca aggatgtttt      960
cattaatcag tgaacgaaag ttaggggatc gaagacgatc agataccgtc gtagtcttaa     1020
ccataaacta tgccgactag ggatcgggcg atgttattat tttgactcgc tcggcacctt     1080
acgagaaatc aaagtctttg ggttctgggg ggagtatggt cgcaaggctg aaacttaaag     1140
aaattgacgg aagggcacca ccaggagtgg agcctgcggc ttaatttgac tcaacacggg     1200
gaaactcacc aggtccagac acattaagga ttgacagatt gagagctctt tcttgattat     1260
gtgggtggtg gtgcatggcc gttcttagtt ggtggagtga tttgtctgct taattgcgat     1320
aacgaacgag accttaacct gctaaatagc ccggtccgct ttggcgggcc gctggcttct     1380
tagagggact atcggctcaa gccgatggaa gtttgaggca ataacaggtc tgtgatgccc     1440
ttagatgttc tgggccgcac gcgcgctaca ctgacagagc caacgagtac atcaccttgg     1500
ccggaaggtc tgggtaatct tgttaaactc tgtcgtgctg gggatagagc attgcaatta     1560
ttgctcttca acgaggaatt cctagtaagc gcaagtcatc agcttgcgct gattacgtcc     1620
ctgccctttg tacacaccgc ccgtcgctac taccgattga atggctcagt gaggccttcg     1680
gactggcaca gggacgttgg caacgacgac ccagtgccgg aaagttcgtc aaacttggtc     1740
atttagagga agnnnaagtc gtaacaaggt ttccgtaggt gaacctgcgg aaggatcatt     1800
a                                                                     1801
<210>  28
<211>  1490
<212>  ДНК
<213>  Burkholderia sp. SFA1
<400>  28
agtttgatcc tggctcagat tgaacgctgg cggcatgcct tacacatgca agtcgaacgg       60
cagcacgggg gcaaccctgg tggcgagtgg cgaacgggtg agtaatacat cggaacgtgt      120
cctgtagtgg gggatagccc ggcgaaagcc ggattaatac cgcatacgac ctaagggaga      180
aagcggggga tcttcggacc tcgcgctata ggggcggccg atggcagatt agctagttgg      240
tggggtaaag gcctaccaag gcgacgatct gtagctggtc tgagaggacg accagccaca      300
ctgggactga gacacggccc agactcctac gggaggcagc agtggggaat tttggacaat      360
gggggcaacc ctgatccagc aatgccgcgt gtgtgaagaa ggcttcgggt tgtaaagcac      420
ttttgtccgg aaagaaaact tcgtccctaa tatggatgga ggatgacggt accggaagaa      480
taagcaccgg ctaactacgt gccagcagcc gcggtaatac gtagggtgcg agcgttaatc      540
ggaattactg ggcgtaaagc gtgcgcaggc ggtctgttaa gaccgatgtg aaatccccgg      600
gcttaacctg ggaactgcat tggtgactgg caggctttga gtgtggcaga ggggggtaga      660
attccacgtg tagcagtgaa atgcgtagag atgtggagga ataccgatgg cgaaggcagc      720
cccctgggcc aactactgac gctcatgcac gaaagcgtgg ggagcaaaca ggattagata      780
ccctggtagt ccacgcccta aacgatgtca actagttgtt ggggattcat ttccttagta      840
acgtagctaa cgcgtgaagt tgaccgcctg gggagtacgg tcgcaagatt aaaactcaaa      900
ggaattgacg gggacccgca caagcggtgg atgatgtgga ttaattcgat gcaacgcgaa      960
aaaccttacc tacccttgac atggtcggaa ccctgctgaa aggtgggggt gctcgaaaga     1020
gaaccggcgc acaggtgctg catggctgtc gtcagctcgt gtcgtgagat gttgggttaa     1080
gtcccgcaac gagcgcaacc cttgtcctta gttgctacgc aagagcactc taaggagact     1140
gccggtgaca aaccggagga aggtggggat gacgtcaagt cctcatggcc cttatgggta     1200
gggcttcaca cgtcatacaa tggtcggaac agagggttgc caagccgcga ggtggagcca     1260
atcccagaaa accgatcgta gtccggatcg cagtctgcaa ctcgactgcg tgaagctgga     1320
atcgctagta atcgcggatc agcatgccgc ggtgaatacg ttcccgggtc ttgtacacac     1380
cgcccgtcac accatgggag tgggtttcac cagaagtagg tagcctaacc gcaaggaggg     1440
cgcttaccac ggtgggattc atgactgggg tgaagtcgta acaaggtagc                1490
<210>  29
<211>  1408
<212>  ДНК
<213>  Burkholderia sp. KM-A
<400>  29
gcaaccctgg tggcgagtgg cgaacgggtg agtaatacat cggaacgtgt cctgtagtgg       60
gggatagccc ggcgaaagcc ggattaatac cgcatacgat ctacggaaga aagcggggga      120
tccttcggga cctcgcgcta taggggcggc cgatggcaga ttagctagtt ggtggggtaa      180
aggcctacca aggcgacgat ctgtagctgg tctgagagga cgaccagcca cactgggact      240
gagacacggc ccagactcct acgggaggca gcagtgggga attttggaca atgggggcaa      300
ccctgatcca gcaatgccgc gtgtgtgaag aaggccttcg ggttgtaaag cacttttgtc      360
cggaaagaaa acgtcttggt taatacctga ggcggatgac ggtaccggaa gaataagcac      420
cggctaacta cgtgccagca gccgcggtaa tacgtagggt gcgagcgtta atcggaatta      480
ctgggcgtaa agcgtgcgca ggcggtctgt taagaccgat gtgaaatccc cgggcttaac      540
ctgggaactg cattggtgac tggcaggctt tgagtgtggc agaggggggt agaattccac      600
gtgtagcagt gaaatgcgta gagatgtgga ggaataccga tggcgaaggc agccccctgg      660
gccaacactg acgctcatgc acgaaagcgt ggggagcaaa caggattaga taccctggta      720
gtccacgccc taaacgatgt caactagttg ttggggattc atttccttag taacgtagct      780
aacgcgtgaa gttgaccgcc tggggagtac ggtcgcaaga ttaaaactca aaggaattga      840
cggggacccg cacaagcggt ggatgatgtg gattaattcg atgcaacgcg aaaaacctta      900
cctacccttg acatggtcgg aagtctgctg agaggtggac gtgctcgaaa gagaaccggc      960
gcacaggtgc tgcatggctg tcgtcagctc gtgtcgtgag atgttgggtt aagtcccgca     1020
acgagcgcaa cccttgtcct tagttgctac gcaagagcac tctaaggaga ctgccggtga     1080
caaaccggag gaaggtgggg atgacgtcaa gtcctcatgg cccttatggg tagggcttca     1140
cacgtcatac aatggtcgga acagagggtt gccaagccgc gaggtggagc caatcccaga     1200
aaaccgatcg tagtccggat cgcagtctgc aactcgactg cgtgaagctg gaatcgctag     1260
taatcgcgga tcagcatgcc gcggtgaata cgttcccggg tcttgtacac accgcccgtc     1320
acaccatggg agtgggtttc accagaagta ggtagcctaa ccgcaaggag ggcgcttacc     1380
acggtgggat tcatgactgg ggtgaagt                                        1408
<210>  30
<211>  1383
<212>  ДНК
<213>  Burkholderia sp. KM-G
<400>  30
gcaaccctgg tggcgagtgg cgaacgggtg agtaatacat cggaacgtgt cctgtagtgg       60
gggatagccc ggcgaaagcc ggattaatac cgcatacgac ctaagggaga aagcggggga      120
tcttcggacc tcgcgctata ggggcggccg atggcagatt agctagttgg tggggtaaag      180
gcctaccaag gcgacgatct gtagctggtc tgagaggacg accagccaca ctgggactga      240
gacacggccc agactcctac gggaggcagc agtggggaat tttggacaat gggggcaacc      300
ctgatccagc aatgccgcgt gtgtgaagaa ggccttcggg ttgtaaagca cttttgtccg      360
gaaagaaaac ttcgaggtta atacccttgg aggatgacgg taccggaaga ataagcaccg      420
gctaactacg tgccagcagc cgcggtaata cgtagggtgc gagcgttaat cggaattact      480
gggcgtaaag cgtgcgcagg cggtctgtta agaccgatgt gaaatccccg ggcttaacct      540
gggaactgca ttggtgactg gcaggctttg agtgtggcag aggggggtag aattccacgt      600
gtagcagtga aatgcgtaga gatgtggagg aataccgatg gcgaaggcag ccccctgggc      660
caacactgac gctcatgcac gaaagcgtgg ggagcaaaca ggattagata ccctggtagt      720
ccacgcccta aacgatgtca actagttgtt ggggattcat ttccttagta acgtagctaa      780
cgcgtgaagt tgaccgcctg gggagtacgg tcgcaagatt aaaactcaaa ggaattgacg      840
gggacccgca caagcggtgg atgatgtgga ttaattcgat gcaacgcgaa aaaccttacc      900
tacccttgac atggtcggaa gtctgctgag aggtggacgt gctcgaaaga gaaccggcgc      960
acaggtgctg catggctgtc gtcagctcgt gtcgtgagat gttgggttaa gtcccgcaac     1020
gagcgcaacc cttgtcctta gttgctacgc aagagcactc taaggagact gccggtgaca     1080
aaccggagga aggtggggat gacgtcaagt cctcatggcc cttatgggta gggcttcaca     1140
cgtcatacaa tggtcggaac agagggttgc caagccgcga ggtggagcca atcccagaaa     1200
accgatcgta gtccggatcg cagtctgcaa ctcgactgcg tgaagctgga atcgctagta     1260
atcgcggatc agcatgccgc ggtgaatacg ttcccgggtc ttgtacacac cgcccgtcac     1320
accatgggag tgggtttcac cagaagtagg tagcctaacc tgcaaaggag ggcgcttacc     1380
acg                                                                   1383
<210>  31
<400>  31
000
<210>  32
<400>  32
000
<210>  33
<211>  1505
<212>  ДНК
<213>  Snodgrassella alvi
<400>  33
gagagtttga tcctggctca gattgaacgc tggcggcatg ccttacacat gcaagtcgaa       60
cggcagcacg gagagcttgc tctctggtgg cgagtggcga acgggtgagt aatgcatcgg      120
aacgtaccga gtaatggggg ataactgtcc gaaaggatgg ctaataccgc atacgccctg      180
agggggaaag cgggggatcg aaagacctcg cgttatttga gcggccgatg ttggattagc      240
tagttggtgg ggtaaaggcc taccaaggcg acgatccata gcgggtctga gaggatgatc      300
cgccacattg ggactgagac acggcccaaa ctcctacggg aggcagcagt ggggaatttt      360
ggacaatggg gggaaccctg atccagccat gccgcgtgtc tgaagaaggc cttcgggttg      420
taaaggactt ttgttaggga agaaaagccg ggtgttaata ccatctggtg ctgacggtac      480
ctaaagaata agcaccggct aactacgtgc cagcagccgc ggtaatacgt agggtgcgag      540
cgttaatcgg aattactggg cgtaaagcga gcgcagacgg ttaattaagt cagatgtgaa      600
atccccgagc tcaacttggg acgtgcattt gaaactggtt aactagagtg tgtcagaggg      660
aggtagaatt ccacgtgtag cagtgaaatg cgtagagatg tggaggaata ccgatggcga      720
aggcagcctc ctgggataac actgacgttc atgctcgaaa gcgtgggtag caaacaggat      780
tagataccct ggtagtccac gccctaaacg atgacaatta gctgttggga cactagatgt      840
cttagtagcg aagctaacgc gtgaaattgt ccgcctgggg agtacggtcg caagattaaa      900
actcaaagga attgacgggg acccgcacaa gcggtggatg atgtggatta attcgatgca      960
acgcgaagaa ccttacctgg tcttgacatg tacggaatct cttagagata ggagagtgcc     1020
ttcgggaacc gtaacacagg tgctgcatgg ctgtcgtcag ctcgtgtcgt gagatgttgg     1080
gttaagtccc gcaacgagcg caacccttgt cattagttgc catcattaag ttgggcactc     1140
taatgagact gccggtgaca aaccggagga aggtggggat gacgtcaagt cctcatggcc     1200
cttatgacca gggcttcaca cgtcatacaa tggtcggtac agagggtagc gaagccgcga     1260
ggtgaagcca atctcagaaa gccgatcgta gtccggattg cactctgcaa ctcgagtgca     1320
tgaagtcgga atcgctagta atcgcaggtc agcatactgc ggtgaatacg ttcccgggtc     1380
ttgtacacac cgcccgtcac accatgggag tgggggatac cagaattggg tagactaacc     1440
gcaaggaggt cgcttaacac ggtatgcttc atgactgggg tgaagtcgta acaaggtagc     1500
cgtag                                                                 1505
<210>  34
<211>  1541
<212>  ДНК
<213>  Gilliamella apicola
<400>  34
ttaaattgaa gagtttgatc atggctcaga ttgaacgctg gcggcaggct taacacatgc       60
aagtcgaacg gtaacatgag tgcttgcact tgatgacgag tggcggacgg gtgagtaaag      120
tatggggatc tgccgaatgg agggggacaa cagttggaaa cgactgctaa taccgcataa      180
agttgagaga ccaaagcatg ggaccttcgg gccatgcgcc atttgatgaa cccatatggg      240
attagctagt tggtagggta atggcttacc aaggcgacga tctctagctg gtctgagagg      300
atgaccagcc acactggaac tgagacacgg tccagactcc tacgggaggc agcagtgggg      360
aatattgcac aatgggggaa accctgatgc agccatgccg cgtgtatgaa gaaggccttc      420
gggttgtaaa gtactttcgg tgatgaggaa ggtggtgtat ctaataggtg catcaattga      480
cgttaattac agaagaagca ccggctaact ccgtgccagc agccgcggta atacggaggg      540
tgcgagcgtt aatcggaatg actgggcgta aagggcatgt aggcggataa ttaagttagg      600
tgtgaaagcc ctgggctcaa cctaggaatt gcacttaaaa ctggttaact agagtattgt      660
agaggaaggt agaattccac gtgtagcggt gaaatgcgta gagatgtgga ggaataccgg      720
tggcgaaggc ggccttctgg acagatactg acgctgagat gcgaaagcgt ggggagcaaa      780
caggattaga taccctggta gtccacgctg taaacgatgt cgatttggag tttgttgcct      840
agagtgatgg gctccgaagc taacgcgata aatcgaccgc ctggggagta cggccgcaag      900
gttaaaactc aaatgaattg acgggggccc gcacaagcgg tggagcatgt ggtttaattc      960
gatgcaacgc gaagaacctt acctggtctt gacatccaca gaatcttgca gagatgcggg     1020
agtgccttcg ggaactgtga gacaggtgct gcatggctgt cgtcagctcg tgttgtgaaa     1080
tgttgggtta agtcccgcaa cgagcgcaac ccttatcctt tgttgccatc ggttaggccg     1140
ggaactcaaa ggagactgcc gttgataaag cggaggaagg tggggacgac gtcaagtcat     1200
catggccctt acgaccaggg ctacacacgt gctacaatgg cgtatacaaa gggaggcgac     1260
ctcgcgagag caagcggacc tcataaagta cgtctaagtc cggattggag tctgcaactc     1320
gactccatga agtcggaatc gctagtaatc gtgaatcaga atgtcacggt gaatacgttc     1380
ccgggccttg tacacaccgc ccgtcacacc atgggagtgg gttgcaccag aagtagatag     1440
cttaaccttc gggagggcgt ttaccacggt gtggtccatg actggggtga agtcgtaaca     1500
aggtaaccgt aggggaacct gcggttggat cacctcctta c                         1541
<210>  35
<211>  1528
<212>  ДНК
<213>  Bartonella apis
<400>  35
aagccaaaat caaattttca acttgagagt ttgatcctgg ctcagaacga acgctggcgg       60
caggcttaac acatgcaagt cgaacgcact tttcggagtg agtggcagac gggtgagtaa      120
cgcgtgggaa tctacctatt tctacggaat aacgcagaga aatttgtgct aataccgtat      180
acgtccttcg ggagaaagat ttatcggaga tagatgagcc cgcgttggat tagctagttg      240
gtgaggtaat ggcccaccaa ggcgacgatc catagctggt ctgagaggat gaccagccac      300
attgggactg agacacggcc cagactccta cgggaggcag cagtggggaa tattggacaa      360
tgggcgcaag cctgatccag ccatgccgcg tgagtgatga aggccctagg gttgtaaagc      420
tctttcaccg gtgaagataa tgacggtaac cggagaagaa gccccggcta acttcgtgcc      480
agcagccgcg gtaatacgaa gggggctagc gttgttcgga tttactgggc gtaaagcgca      540
cgtaggcgga tatttaagtc aggggtgaaa tcccggggct caaccccgga actgcctttg      600
atactggata tcttgagtat ggaagaggta agtggaattc cgagtgtaga ggtgaaattc      660
gtagatattc ggaggaacac cagtggcgaa ggcggcttac tggtccatta ctgacgctga      720
ggtgcgaaag cgtggggagc aaacaggatt agataccctg gtagtccacg ctgtaaacga      780
tgaatgttag ccgttggaca gtttactgtt cggtggcgca gctaacgcat taaacattcc      840
gcctggggag tacggtcgca agattaaaac tcaaaggaat tgacgggggc ccgcacaagc      900
ggtggagcat gtggtttaat tcgaagcaac gcgcagaacc ttaccagccc ttgacatccc      960
gatcgcggat ggtggagaca ccgtctttca gttcggctgg atcggtgaca ggtgctgcat     1020
ggctgtcgtc agctcgtgtc gtgagatgtt gggttaagtc ccgcaacgag cgcaaccctc     1080
gcccttagtt gccatcattt agttgggcac tctaagggga ctgccggtga taagccgaga     1140
ggaaggtggg gatgacgtca agtcctcatg gcccttacgg gctgggctac acacgtgcta     1200
caatggtggt gacagtgggc agcgagaccg cgaggtcgag ctaatctcca aaagccatct     1260
cagttcggat tgcactctgc aactcgagtg catgaagttg gaatcgctag taatcgtgga     1320
tcagcatgcc acggtgaata cgttcccggg ccttgtacac accgcccgtc acaccatggg     1380
agttggtttt acccgaaggt gctgtgctaa ccgcaaggag gcaggcaacc acggtagggt     1440
cagcgactgg ggtgaagtcg taacaaggta gccgtagggg aacctgcggc tggatcacct     1500
cctttctaag gaagatgaag aattggaa                                        1528
<210>  36
<211>  1390
<212>  ДНК
<213>  Parasaccharibacter apium
<220>
<221>  другой_признак
<222>  (643)..(756)
<223>  n представляет собой a, g, c или t
<400>  36
ctaccatgca agtcgcacga aacctttcgg ggttagtggc ggacgggtga gtaacgcgtt       60
aggaacctat ctggaggtgg gggataacat cgggaaactg gtgctaatac cgcatgatgc      120
ctgagggcca aaggagagat ccgccattgg aggggcctgc gttcgattag ctagttggtt      180
gggtaaaggc tgaccaaggc gatgatcgat agctggtttg agaggatgat cagccacact      240
gggactgaga cacggcccag actcctacgg gaggcagcag tggggaatat tggacaatgg      300
gggcaaccct gatccagcaa tgccgcgtgt gtgaagaagg tcttcggatt gtaaagcact      360
ttcactaggg aagatgatga cggtacctag agaagaagcc ccggctaact tcgtgccagc      420
agccgcggta atacgaaggg ggctagcgtt gctcggaatg actgggcgta aagggcgcgt      480
aggctgtttg tacagtcaga tgtgaaatcc ccgggcttaa cctgggaact gcatttgata      540
cgtgcagact agagtccgag agagggttgt ggaattccca gtgtagaggt gaaattcgta      600
gatattggga agaacaccgg ttgcgaaggc ggcaacctgg ctnnnnnnnn nnnnnnnnnn      660
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn      720
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnngagc taacgcgtta agcacaccgc      780
ctggggagta cggccgcaag gttgaaactc aaaggaattg acgggggccc gcacaagcgg      840
tggagcatgt ggtttaattc gaagcaacgc gcagaacctt accagggctt gcatggggag      900
gctgtattca gagatggata tttcttcgga cctcccgcac aggtgctgca tggctgtcgt      960
cagctcgtgt cgtgagatgt tgggttaagt cccgcaacga gcgcaaccct tgtctttagt     1020
tgccatcacg tctgggtggg cactctagag agactgccgg tgacaagccg gaggaaggtg     1080
gggatgacgt caagtcctca tggcccttat gtcctgggct acacacgtgc tacaatggcg     1140
gtgacagagg gatgctacat ggtgacatgg tgctgatctc aaaaaaccgt ctcagttcgg     1200
attgtactct gcaactcgag tgcatgaagg tggaatcgct agtaatcgcg gatcagcatg     1260
ccgcggtgaa tacgttcccg ggccttgtac acaccgcccg tcacaccatg ggagttggtt     1320
tgaccttaag ccggtgagcg aaccgcaagg aacgcagccg accaccggtt cgggttcagc     1380
gactggggga                                                            1390
<210>  37
<211>  1583
<212>  ДНК
<213>  Lactobacillus kunkeei
<400>  37
ttccttagaa aggaggtgat ccagccgcag gttctcctac ggctaccttg ttacgacttc       60
accctaatca tctgtcccac cttagacgac tagctcctaa aaggttaccc catcgtcttt      120
gggtgttaca aactctcatg gtgtgacggg cggtgtgtac aaggcccggg aacgtattca      180
ccgtggcatg ctgatccacg attactagtg attccaactt catgcaggcg agttgcagcc      240
tgcaatccga actgagaatg gctttaagag attagcttga cctcgcggtt tcgcgactcg      300
ttgtaccatc cattgtagca cgtgtgtagc ccagctcata aggggcatga tgatttgacg      360
tcgtccccac cttcctccgg tttatcaccg gcagtctcac tagagtgccc aactaaatgc      420
tggcaactaa taataagggt tgcgctcgtt gcgggactta acccaacatc tcacgacacg      480
agctgacgac aaccatgcac cacctgtcat tctgtccccg aagggaacgc ccaatctctt      540
gggttggcag aagatgtcaa gagctggtaa ggttcttcgc gtagcatcga attaaaccac      600
atgctccacc acttgtgcgg gcccccgtca attcctttga gtttcaacct tgcggtcgta      660
ctccccaggc ggaatactta atgcgttagc tgcggcactg aagggcggaa accctccaac      720
acctagtatt catcgtttac ggcatggact accagggtat ctaatcctgt tcgctaccca      780
tgctttcgag cctcagcgtc agtaacagac cagaaagccg ccttcgccac tggtgttctt      840
ccatatatct acgcatttca ccgctacaca tggagttcca ctttcctctt ctgtactcaa      900
gttttgtagt ttccactgca cttcctcagt tgagctgagg gctttcacag cagacttaca      960
aaaccgcctg cgctcgcttt acgcccaata aatccggaca acgcttgcca cctacgtatt     1020
accgcggctg ctggcacgta gttagccgtg gctttctggt taaataccgt caaagtgtta     1080
acagttactc taacacttgt tcttctttaa caacagagtt ttacgatccg aaaaccttca     1140
tcactcacgc ggcgttgctc catcagactt tcgtccattg tggaagattc cctactgctg     1200
cctcccgtag gagtctgggc cgtgtctcag tcccaatgtg gccgattacc ctctcaggtc     1260
ggctacgtat catcgtcttg gtgggctttt atctcaccaa ctaactaata cggcgcgggt     1320
ccatcccaaa gtgatagcaa agccatcttt caagttggaa ccatgcggtt ccaactaatt     1380
atgcggtatt agcacttgtt tccaaatgtt atcccccgct tcggggcagg ttacccacgt     1440
gttactcacc agttcgccac tcgctccgaa tccaaaaatc atttatgcaa gcataaaatc     1500
aatttgggag aactcgttcg acttgcatgt attaggcacg ccgccagcgt tcgtcctgag     1560
ccaggatcaa actctcatct taa                                             1583
<210>  38
<211>  1395
<212>  ДНК
<213>  Lactobacillus Firm-4
<400>  38
acgaacgctg gcggcgtgcc taatacatgc aagtcgagcg cgggaagtca gggaagcctt       60
cgggtggaac tggtggaacg agcggcggat gggtgagtaa cacgtaggta acctgcccta      120
aagcggggga taccatctgg aaacaggtgc taataccgca taaacccagc agtcacatga      180
gtgctggttg aaagacggct tcggctgtca ctttaggatg gacctgcggc gtattagcta      240
gttggtggag taacggttca ccaaggcaat gatacgtagc cgacctgaga gggtaatcgg      300
ccacattggg actgagacac ggcccaaact cctacgggag gcagcagtag ggaatcttcc      360
acaatggacg caagtctgat ggagcaacgc cgcgtggatg aagaaggtct tcggatcgta      420
aaatcctgtt gttgaagaag aacggttgtg agagtaactg ctcataacgt gacggtaatc      480
aaccagaaag tcacggctaa ctacgtgcca gcagccgcgg taatacgtag gtggcaagcg      540
ttgtccggat ttattgggcg taaagggagc gcaggcggtc ttttaagtct gaatgtgaaa      600
gccctcagct taactgagga agagcatcgg aaactgagag acttgagtgc agaagaggag      660
agtggaactc catgtgtagc ggtgaaatgc gtagatatat ggaagaacac cagtggcgaa      720
ggcggctctc tggtctgtta ctgacgctga ggctcgaaag catgggtagc gaacaggatt      780
agataccctg gtagtccatg ccgtaaacga tgagtgctaa gtgttgggag gtttccgcct      840
ctcagtgctg cagctaacgc attaagcact ccgcctgggg agtacgaccg caaggttgaa      900
actcaaagga attgacgggg gcccgcacaa gcggtggagc atgtggttta attcgaagca      960
acgcgaagaa ccttaccagg tcttgacatc tcctgcaagc ctaagagatt aggggttccc     1020
ttcggggaca ggaagacagg tggtgcatgg ttgtcgtcag ctcgtgtcgt gagatgttgg     1080
gttaagtccc gcaacgagcg caacccttgt tactagttgc cagcattaag ttgggcactc     1140
tagtgagact gccggtgaca aaccggagga aggtggggac gacgtcaaat catcatgccc     1200
cttatgacct gggctacaca cgtgctacaa tggatggtac aatgagaagc gaactcgcga     1260
ggggaagctg atctctgaaa accattctca gttcggattg caggctgcaa ctcgcctgca     1320
tgaagctgga atcgctagta atcgcggatc agcatgccgc ggtgaatacg ttcccgggcc     1380
ttgtacacac cgccc                                                      1395
<210>  39
<211>  1549
<212>  ДНК
<213>  Enterococcus
<400>  39
aggtgatcca gccgcacctt ccgatacggc taccttgtta cgacttcacc ccaatcatct       60
atcccacctt aggcggctgg ctccaaaaag gttacctcac cgacttcggg tgttacaaac      120
tctcgtggtg tgacgggcgg tgtgtacaag gcccgggaac gtattcaccg cggcgtgctg      180
atccgcgatt actagcgatt ccggcttcat gcaggcgagt tgcagcctgc aatccgaact      240
gagagaagct ttaagagatt tgcatgacct cgcggtctag cgactcgttg tacttcccat      300
tgtagcacgt gtgtagccca ggtcataagg ggcatgatga tttgacgtca tccccacctt      360
cctccggttt gtcaccggca gtctcgctag agtgcccaac taaatgatgg caactaacaa      420
taagggttgc gctcgttgcg ggacttaacc caacatctca cgacacgagc tgacgacaac      480
catgcaccac ctgtcacttt gtccccgaag ggaaagctct atctctagag tggtcaaagg      540
atgtcaagac ctggtaaggt tcttcgcgtt gcttcgaatt aaaccacatg ctccaccgct      600
tgtgcgggcc cccgtcaatt cctttgagtt tcaaccttgc ggtcgtactc cccaggcgga      660
gtgcttaatg cgtttgctgc agcactgaag ggcggaaacc ctccaacact tagcactcat      720
cgtttacggc gtggactacc agggtatcta atcctgtttg ctccccacgc tttcgagcct      780
cagcgtcagt tacagaccag agagccgcct tcgccactgg tgttcctcca tatatctacg      840
catttcaccg ctacacatgg aattccactc tcctcttctg cactcaagtc tcccagtttc      900
caatgaccct ccccggttga gccgggggct ttcacatcag acttaagaaa ccgcctgcgc      960
tcgctttacg cccaataaat ccggacaacg cttgccacct acgtattacc gcggctgctg     1020
gcacgtagtt agccgtggct ttctggttag ataccgtcag gggacgttca gttactaacg     1080
tccttgttct tctctaacaa cagagtttta cgatccgaaa accttcttca ctcacgcggc     1140
gttgctcggt cagactttcg tccattgccg aagattccct actgctgcct cccgtaggag     1200
tctgggccgt gtctcagtcc cagtgtggcc gatcaccctc tcaggtcggc tatgcatcgt     1260
ggccttggtg agccgttacc tcaccaacta gctaatgcac cgcgggtcca tccatcagcg     1320
acacccgaaa gcgcctttca ctcttatgcc atgcggcata aactgttatg cggtattagc     1380
acctgtttcc aagtgttatc cccctctgat gggtaggtta cccacgtgtt actcacccgt     1440
ccgccactcc tctttccaat tgagtgcaag cactcgggag gaaagaagcg ttcgacttgc     1500
atgtattagg cacgccgcca gcgttcgtcc tgagccagga tcaaactct                 1549
<210>  40
<211>  1541
<212>  ДНК
<213>  Delftia
<400>  40
cagaaaggag gtgatccagc cgcaccttcc gatacggcta ccttgttacg acttcacccc       60
agtcacgaac cccgccgtgg taagcgccct ccttgcggtt aggctaccta cttctggcga      120
gacccgctcc catggtgtga cgggcggtgt gtacaagacc cgggaacgta ttcaccgcgg      180
catgctgatc cgcgattact agcgattccg acttcacgca gtcgagttgc agactgcgat      240
ccggactacg actggtttta tgggattagc tccccctcgc gggttggcaa ccctctgtac      300
cagccattgt atgacgtgtg tagccccacc tataagggcc atgaggactt gacgtcatcc      360
ccaccttcct ccggtttgtc accggcagtc tcattagagt gctcaactga atgtagcaac      420
taatgacaag ggttgcgctc gttgcgggac ttaacccaac atctcacgac acgagctgac      480
gacagccatg cagcacctgt gtgcaggttc tctttcgagc acgaatccat ctctggaaac      540
ttcctgccat gtcaaaggtg ggtaaggttt ttcgcgttgc atcgaattaa accacatcat      600
ccaccgcttg tgcgggtccc cgtcaattcc tttgagtttc aaccttgcgg ccgtactccc      660
caggcggtca acttcacgcg ttagcttcgt tactgagaaa actaattccc aacaaccagt      720
tgacatcgtt tagggcgtgg actaccaggg tatctaatcc tgtttgctcc ccacgctttc      780
gtgcatgagc gtcagtacag gtccagggga ttgccttcgc catcggtgtt cctccgcata      840
tctacgcatt tcactgctac acgcggaatt ccatccccct ctaccgtact ctagccatgc      900
agtcacaaat gcagttccca ggttgagccc ggggatttca catctgtctt acataaccgc      960
ctgcgcacgc tttacgccca gtaattccga ttaacgctcg caccctacgt attaccgcgg     1020
ctgctggcac gtagttagcc ggtgcttatt cttacggtac cgtcatgggc cccctgtatt     1080
agaaggagct ttttcgttcc gtacaaaagc agtttacaac ccgaaggcct tcatcctgca     1140
cgcggcattg ctggatcagg ctttcgccca ttgtccaaaa ttccccactg ctgcctcccg     1200
taggagtctg ggccgtgtct cagtcccagt gtggctggtc gtcctctcag accagctaca     1260
gatcgtcggc ttggtaagct tttatcccac caactaccta atctgccatc ggccgctcca     1320
atcgcgcgag gcccgaaggg cccccgcttt catcctcaga tcgtatgcgg tattagctac     1380
tctttcgagt agttatcccc cacgactggg cacgttccga tgtattactc acccgttcgc     1440
cactcgtcag cgtccgaaga cctgttaccg ttcgacttgc atgtgtaagg catgccgcca     1500
gcgttcaatc tgagccagga tcaaactcta cagttcgatc t                         1541
<210>  41
<211>  1502
<212>  ДНК
<213>  Pelomonas
<220>
<221>  другой_признак
<222>  (192)..(193)
<223>  n представляет собой a, g, c или t
<220>
<221>  другой_признак
<222>  (832)..(833)
<223>  n представляет собой a, g, c или t
<400>  41
atcctggctc agattgaacg ctggcggcat gccttacaca tgcaagtcga acggtaacag       60
gttaagctga cgagtggcga acgggtgagt aatatatcgg aacgtgccca gtcgtggggg      120
ataactgctc gaaagagcag ctaataccgc atacgacctg agggtgaaag cgggggatcg      180
caagacctcg cnngattgga gcggccgata tcagattagg tagttggtgg ggtaaaggcc      240
caccaagcca acgatctgta gctggtctga gaggacgacc agccacactg ggactgagac      300
acggcccaga ctcctacggg aggcagcagt ggggaatttt ggacaatggg cgcaagcctg      360
atccagccat gccgcgtgcg ggaagaaggc cttcgggttg taaaccgctt ttgtcaggga      420
agaaaaggtt ctggttaata cctgggactc atgacggtac ctgaagaata agcaccggct      480
aactacgtgc cagcagccgc ggtaatacgt agggtgcaag cgttaatcgg aattactggg      540
cgtaaagcgt gcgcaggcgg ttatgcaaga cagaggtgaa atccccgggc tcaacctggg      600
aactgccttt gtgactgcat agctagagta cggtagaggg ggatggaatt ccgcgtgtag      660
cagtgaaatg cgtagatatg cggaggaaca ccgatggcga aggcaatccc ctggacctgt      720
actgacgctc atgcacgaaa gcgtggggag caaacaggat tagataccct ggtagtccac      780
gccctaaacg atgtcaactg gttgttggga gggtttcttc tcagtaacgt anntaacgcg      840
tgaagttgac cgcctgggga gtacggccgc aaggttgaaa ctcaaaggaa ttgacgggga      900
cccgcacaag cggtggatga tgtggtttaa ttcgatgcaa cgcgaaaaac cttacctacc      960
cttgacatgc caggaatcct gaagagattt gggagtgctc gaaagagaac ctggacacag     1020
gtgctgcatg gccgtcgtca gctcgtgtcg tgagatgttg ggttaagtcc cgcaacgagc     1080
gcaacccttg tcattagttg ctacgaaagg gcactctaat gagactgccg gtgacaaacc     1140
ggaggaaggt ggggatgacg tcaggtcatc atggccctta tgggtagggc tacacacgtc     1200
atacaatggc cgggacagag ggctgccaac ccgcgagggg gagctaatcc cagaaacccg     1260
gtcgtagtcc ggatcgtagt ctgcaactcg actgcgtgaa gtcggaatcg ctagtaatcg     1320
cggatcagct tgccgcggtg aatacgttcc cgggtcttgt acacaccgcc cgtcacacca     1380
tgggagcggg ttctgccaga agtagttagc ctaaccgcaa ggagggcgat taccacggca     1440
gggttcgtga ctggggtgaa gtcgtaacaa ggtagccgta tcggaaggtg cggctggatc     1500
ac                                                                    1502
<210>  42
<211>  34
<212>  БЕЛОК
<213>  Lactococcus lactis
<400>  42
Ile Thr Ser Ile Ser Leu Cys Thr Pro Gly Cys Lys Thr Gly Ala Leu
1               5                   10                  15
Met Gly Cys Asn Met Lys Thr Ala Thr Cys His Cys Ser Ile His Val
20                  25                  30
Ser Lys
<210>  43
<211>  22
<212>  БЕЛОК
<213>  Staphylococcus epidermis
<400>  43
Ile Ala Ser Lys Phe Ile Cys Thr Pro Gly Cys Ala Lys Thr Gly Ser
1               5                   10                  15
Phe Asn Ser Tyr Cys Cys
20
<210>  44
<211>  44
<212>  БЕЛОК
<213>  Pediococcus acidilactici
<400>  44
Lys Tyr Tyr Gly Asn Gly Val Thr Cys Gly Lys His Ser Cys Ser Val
1               5                   10                  15
Asp Trp Gly Lys Ala Thr Thr Cys Ile Ile Asn Asn Gly Ala Met Ala
20                  25                  30
Trp Ala Thr Gly Gly His Gln Gly Asn His Lys Cys
35                  40
<210>  45
<211>  44
<212>  БЕЛОК
<213>  Enterococcus faecium
<400>  45
Ala Thr Arg Ser Tyr Gly Asn Gly Val Tyr Cys Asn Asn Ser Lys Cys
1               5                   10                  15
Trp Val Asn Trp Gly Glu Ala Lys Glu Asn Ile Ala Gly Ile Val Ile
20                  25                  30
Ser Gly Trp Ala Ser Gly Leu Ala Gly Met Gly His
35                  40
<210>  46
<211>  39
<212>  БЕЛОК
<213>  Streptococcus lactis
<400>  46
Gly Thr Trp Asp Asp Ile Gly Gln Gly Ile Gly Arg Val Ala Tyr Trp
1               5                   10                  15
Val Gly Lys Ala Met Gly Asn Met Ser Asp Val Asn Gln Ala Ser Arg
20                  25                  30
Ile Asn Arg Lys Lys Lys His
35
<210>  47
<211>  48
<212>  БЕЛОК
<213>  Lactobacillus johnsonii
<400>  47
Asn Arg Trp Gly Asp Thr Val Leu Ser Ala Ala Ser Gly Ala Gly Thr
1               5                   10                  15
Gly Ile Lys Ala Cys Lys Ser Phe Gly Pro Trp Gly Met Ala Ile Cys
20                  25                  30
Gly Val Gly Gly Ala Ala Ile Gly Gly Tyr Phe Gly Tyr Thr His Asn
35                  40                  45
<210>  48
<211>  70
<212>  БЕЛОК
<213>  Enterococcus faecalis
<400>  48
Met Ala Lys Glu Phe Gly Ile Pro Ala Ala Val Ala Gly Thr Val Leu
1               5                   10                  15
Asn Val Val Glu Ala Gly Gly Trp Val Thr Thr Ile Val Ser Ile Leu
20                  25                  30
Thr Ala Val Gly Ser Gly Gly Leu Ser Leu Leu Ala Ala Ala Gly Arg
35                  40                  45
Glu Ser Ile Lys Ala Tyr Leu Lys Lys Glu Ile Lys Lys Lys Gly Lys
50                  55                  60
Arg Ala Val Ile Ala Trp
65                  70
<210>  49
<211>  51
<212>  БЕЛОК
<213>  Staphylococcus aureus
<400>  49
Met Ser Trp Leu Asn Phe Leu Lys Tyr Ile Ala Lys Tyr Gly Lys Lys
1               5                   10                  15
Ala Val Ser Ala Ala Trp Lys Tyr Lys Gly Lys Val Leu Glu Trp Leu
20                  25                  30
Asn Val Gly Pro Thr Leu Glu Trp Val Trp Gln Lys Leu Lys Lys Ile
35                  40                  45
Ala Gly Leu
50
<210>  50
<211>  43
<212>  БЕЛОК
<213>  Lactococcus garvieae
<400>  50
Ile Gly Gly Ala Leu Gly Asn Ala Leu Asn Gly Leu Gly Thr Trp Ala
1               5                   10                  15
Asn Met Met Asn Gly Gly Gly Phe Val Asn Gln Trp Gln Val Tyr Ala
20                  25                  30
Asn Lys Gly Lys Ile Asn Gln Tyr Arg Pro Tyr
35                  40
<210>  51
<211>  103
<212>  БЕЛОК
<213>  Escherichia coli
<400>  51
Met Arg Thr Leu Thr Leu Asn Glu Leu Asp Ser Val Ser Gly Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Gly Arg Asp Ile Ala Met Ala Ile Gly Thr Leu Ser Gly Gln Phe
20                  25                  30
Val Ala Gly Gly Ile Gly Ala Ala Ala Gly Gly Val Ala Gly Gly Ala
35                  40                  45
Ile Tyr Asp Tyr Ala Ser Thr His Lys Pro Asn Pro Ala Met Ser Pro
50                  55                  60
Ser Gly Leu Gly Gly Thr Ile Lys Gln Lys Pro Glu Gly Ile Pro Ser
65                  70                  75                  80
Glu Ala Trp Asn Tyr Ala Ala Gly Arg Leu Cys Asn Trp Ser Pro Asn
85                  90                  95
Asn Leu Ser Asp Val Cys Leu
100
<210>  52
<211>  339
<212>  БЕЛОК
<213>  Cp1
<400>  52
Met Val Lys Lys Asn Asp Leu Phe Val Asp Val Ser Ser His Asn Gly
1               5                   10                  15
Tyr Asp Ile Thr Gly Ile Leu Glu Gln Met Gly Thr Thr Asn Thr Ile
20                  25                  30
Ile Lys Ile Ser Glu Ser Thr Thr Tyr Leu Asn Pro Cys Leu Ser Ala
35                  40                  45
Gln Val Glu Gln Ser Asn Pro Ile Gly Phe Tyr His Phe Ala Arg Phe
50                  55                  60
Gly Gly Asp Val Ala Glu Ala Glu Arg Glu Ala Gln Phe Phe Leu Asp
65                  70                  75                  80
Asn Val Pro Met Gln Val Lys Tyr Leu Val Leu Asp Tyr Glu Asp Asp
85                  90                  95
Pro Ser Gly Asp Ala Gln Ala Asn Thr Asn Ala Cys Leu Arg Phe Met
100                 105                 110
Gln Met Ile Ala Asp Ala Gly Tyr Lys Pro Ile Tyr Tyr Ser Tyr Lys
115                 120                 125
Pro Phe Thr His Asp Asn Val Asp Tyr Gln Gln Ile Leu Ala Gln Phe
130                 135                 140
Pro Asn Ser Leu Trp Ile Ala Gly Tyr Gly Leu Asn Asp Gly Thr Ala
145                 150                 155                 160
Asn Phe Glu Tyr Phe Pro Ser Met Asp Gly Ile Arg Trp Trp Gln Tyr
165                 170                 175
Ser Ser Asn Pro Phe Asp Lys Asn Ile Val Leu Leu Asp Asp Glu Glu
180                 185                 190
Asp Asp Lys Pro Lys Thr Ala Gly Thr Trp Lys Gln Asp Ser Lys Gly
195                 200                 205
Trp Trp Phe Arg Arg Asn Asn Gly Ser Phe Pro Tyr Asn Lys Trp Glu
210                 215                 220
Lys Ile Gly Gly Val Trp Tyr Tyr Phe Asp Ser Lys Gly Tyr Cys Leu
225                 230                 235                 240
Thr Ser Glu Trp Leu Lys Asp Asn Glu Lys Trp Tyr Tyr Leu Lys Asp
245                 250                 255
Asn Gly Ala Met Ala Thr Gly Trp Val Leu Val Gly Ser Glu Trp Tyr
260                 265                 270
Tyr Met Asp Asp Ser Gly Ala Met Val Thr Gly Trp Val Lys Tyr Lys
275                 280                 285
Asn Asn Trp Tyr Tyr Met Thr Asn Glu Arg Gly Asn Met Val Ser Asn
290                 295                 300
Glu Phe Ile Lys Ser Gly Lys Gly Trp Tyr Phe Met Asn Thr Asn Gly
305                 310                 315                 320
Glu Leu Ala Asp Asn Pro Ser Phe Thr Lys Glu Pro Asp Gly Leu Ile
325                 330                 335
Thr Val Ala
<210>  53
<211>  296
<212>  БЕЛОК
<213>  Dp-1
<400>  53
Met Gly Val Asp Ile Glu Lys Gly Val Ala Trp Met Gln Ala Arg Lys
1               5                   10                  15
Gly Arg Val Ser Tyr Ser Met Asp Phe Arg Asp Gly Pro Asp Ser Tyr
20                  25                  30
Asp Cys Ser Ser Ser Met Tyr Tyr Ala Leu Arg Ser Ala Gly Ala Ser
35                  40                  45
Ser Ala Gly Trp Ala Val Asn Thr Glu Tyr Met His Ala Trp Leu Ile
50                  55                  60
Glu Asn Gly Tyr Glu Leu Ile Ser Glu Asn Ala Pro Trp Asp Ala Lys
65                  70                  75                  80
Arg Gly Asp Ile Phe Ile Trp Gly Arg Lys Gly Ala Ser Ala Gly Ala
85                  90                  95
Gly Gly His Thr Gly Met Phe Ile Asp Ser Asp Asn Ile Ile His Cys
100                 105                 110
Asn Tyr Ala Tyr Asp Gly Ile Ser Val Asn Asp His Asp Glu Arg Trp
115                 120                 125
Tyr Tyr Ala Gly Gln Pro Tyr Tyr Tyr Val Tyr Arg Leu Thr Asn Ala
130                 135                 140
Asn Ala Gln Pro Ala Glu Lys Lys Leu Gly Trp Gln Lys Asp Ala Thr
145                 150                 155                 160
Gly Phe Trp Tyr Ala Arg Ala Asn Gly Thr Tyr Pro Lys Asp Glu Phe
165                 170                 175
Glu Tyr Ile Glu Glu Asn Lys Ser Trp Phe Tyr Phe Asp Asp Gln Gly
180                 185                 190
Tyr Met Leu Ala Glu Lys Trp Leu Lys His Thr Asp Gly Asn Trp Tyr
195                 200                 205
Trp Phe Asp Arg Asp Gly Tyr Met Ala Thr Ser Trp Lys Arg Ile Gly
210                 215                 220
Glu Ser Trp Tyr Tyr Phe Asn Arg Asp Gly Ser Met Val Thr Gly Trp
225                 230                 235                 240
Ile Lys Tyr Tyr Asp Asn Trp Tyr Tyr Cys Asp Ala Thr Asn Gly Asp
245                 250                 255
Met Lys Ser Asn Ala Phe Ile Arg Tyr Asn Asp Gly Trp Tyr Leu Leu
260                 265                 270
Leu Pro Asp Gly Arg Leu Ala Asp Lys Pro Gln Phe Thr Val Glu Pro
275                 280                 285
Asp Gly Leu Ile Thr Ala Lys Val
290                 295
<210>  54
<211>  233
<212>  БЕЛОК
<213>  гамма
<400>  54
Met Glu Ile Gln Lys Lys Leu Val Asp Pro Ser Lys Tyr Gly Thr Lys
1               5                   10                  15
Cys Pro Tyr Thr Met Lys Pro Lys Tyr Ile Thr Val His Asn Thr Tyr
20                  25                  30
Asn Asp Ala Pro Ala Glu Asn Glu Val Ser Tyr Met Ile Ser Asn Asn
35                  40                  45
Asn Glu Val Ser Phe His Ile Ala Val Asp Asp Lys Lys Ala Ile Gln
50                  55                  60
Gly Ile Pro Leu Glu Arg Asn Ala Trp Ala Cys Gly Asp Gly Asn Gly
65                  70                  75                  80
Ser Gly Asn Arg Gln Ser Ile Ser Val Glu Ile Cys Tyr Ser Lys Ser
85                  90                  95
Gly Gly Asp Arg Tyr Tyr Lys Ala Glu Asp Asn Ala Val Asp Val Val
100                 105                 110
Arg Gln Leu Met Ser Met Tyr Asn Ile Pro Ile Glu Asn Val Arg Thr
115                 120                 125
His Gln Ser Trp Ser Gly Lys Tyr Cys Pro His Arg Met Leu Ala Glu
130                 135                 140
Gly Arg Trp Gly Ala Phe Ile Gln Lys Val Lys Asn Gly Asn Val Ala
145                 150                 155                 160
Thr Thr Ser Pro Thr Lys Gln Asn Ile Ile Gln Ser Gly Ala Phe Ser
165                 170                 175
Pro Tyr Glu Thr Pro Asp Val Met Gly Ala Leu Thr Ser Leu Lys Met
180                 185                 190
Thr Ala Asp Phe Ile Leu Gln Ser Asp Gly Leu Thr Tyr Phe Ile Ser
195                 200                 205
Lys Pro Thr Ser Asp Ala Gln Leu Lys Ala Met Lys Glu Tyr Leu Asp
210                 215                 220
Arg Lys Gly Trp Trp Tyr Glu Val Lys
225                 230
<210>  55
<211>  481
<212>  БЕЛОК
<213>  MR11
<400>  55
Met Gln Ala Lys Leu Thr Lys Lys Glu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Thr
1               5                   10                  15
Ser Glu Gly Lys Gln Phe Asn Val Asp Leu Trp Tyr Gly Phe Gln Cys
20                  25                  30
Phe Asp Tyr Ala Asn Ala Gly Trp Lys Val Leu Phe Gly Leu Leu Leu
35                  40                  45
Lys Gly Leu Gly Ala Lys Asp Ile Pro Phe Ala Asn Asn Phe Asp Gly
50                  55                  60
Leu Ala Thr Val Tyr Gln Asn Thr Pro Asp Phe Leu Ala Gln Pro Gly
65                  70                  75                  80
Asp Met Val Val Phe Gly Ser Asn Tyr Gly Ala Gly Tyr Gly His Val
85                  90                  95
Ala Trp Val Ile Glu Ala Thr Leu Asp Tyr Ile Ile Val Tyr Glu Gln
100                 105                 110
Asn Trp Leu Gly Gly Gly Trp Thr Asp Arg Ile Glu Gln Pro Gly Trp
115                 120                 125
Gly Trp Glu Lys Val Thr Arg Arg Gln His Ala Tyr Asp Phe Pro Met
130                 135                 140
Trp Phe Ile Arg Pro Asn Phe Lys Ser Glu Thr Ala Pro Arg Ser Ile
145                 150                 155                 160
Gln Ser Pro Thr Gln Ala Ser Lys Lys Glu Thr Ala Lys Pro Gln Pro
165                 170                 175
Lys Ala Val Glu Leu Lys Ile Ile Lys Asp Val Val Lys Gly Tyr Asp
180                 185                 190
Leu Pro Lys Arg Gly Gly Asn Pro Lys Gly Ile Val Ile His Asn Asp
195                 200                 205
Ala Gly Ser Lys Gly Ala Thr Ala Glu Ala Tyr Arg Asn Gly Leu Val
210                 215                 220
Asn Ala Pro Leu Ser Arg Leu Glu Ala Gly Ile Ala His Ser Tyr Val
225                 230                 235                 240
Ser Gly Asn Thr Val Trp Gln Ala Leu Asp Glu Ser Gln Val Gly Trp
245                 250                 255
His Thr Ala Asn Gln Leu Gly Asn Lys Tyr Tyr Tyr Gly Ile Glu Val
260                 265                 270
Cys Gln Ser Met Gly Ala Asp Asn Ala Thr Phe Leu Lys Asn Glu Gln
275                 280                 285
Ala Thr Phe Gln Glu Cys Ala Arg Leu Leu Lys Lys Trp Gly Leu Pro
290                 295                 300
Ala Asn Arg Asn Thr Ile Arg Leu His Asn Glu Phe Thr Ser Thr Ser
305                 310                 315                 320
Cys Pro His Arg Ser Ser Val Leu His Thr Gly Phe Asp Pro Val Thr
325                 330                 335
Arg Gly Leu Leu Pro Glu Asp Lys Gln Leu Gln Leu Lys Asp Tyr Phe
340                 345                 350
Ile Lys Gln Ile Arg Val Tyr Met Asp Gly Lys Ile Pro Val Ala Thr
355                 360                 365
Val Ser Asn Glu Ser Ser Ala Ser Ser Asn Thr Val Lys Pro Val Ala
370                 375                 380
Ser Ala Trp Lys Arg Asn Lys Tyr Gly Thr Tyr Tyr Met Glu Glu Asn
385                 390                 395                 400
Ala Arg Phe Thr Asn Gly Asn Gln Pro Ile Thr Val Arg Lys Ile Gly
405                 410                 415
Pro Phe Leu Ser Cys Pro Val Ala Tyr Gln Phe Gln Pro Gly Gly Tyr
420                 425                 430
Cys Asp Tyr Thr Glu Val Met Leu Gln Asp Gly His Val Trp Val Gly
435                 440                 445
Tyr Thr Trp Glu Gly Gln Arg Tyr Tyr Leu Pro Ile Arg Thr Trp Asn
450                 455                 460
Gly Ser Ala Pro Pro Asn Gln Ile Leu Gly Asp Leu Trp Gly Glu Ile
465                 470                 475                 480
Ser
<210>  56
<211>  239
<212>  БЕЛОК
<213>  B30
<400>  56
Met Val Ile Asn Ile Glu Gln Ala Ile Ala Trp Met Ala Ser Arg Lys
1               5                   10                  15
Gly Lys Val Thr Tyr Ser Met Asp Tyr Arg Asn Gly Pro Ser Ser Tyr
20                  25                  30
Asp Cys Ser Ser Ser Val Tyr Phe Ala Leu Arg Ser Ala Gly Ala Ser
35                  40                  45
Asp Asn Gly Trp Ala Val Asn Thr Glu Tyr Glu His Asp Trp Leu Ile
50                  55                  60
Lys Asn Gly Tyr Val Leu Ile Ala Glu Asn Thr Asn Trp Asn Ala Gln
65                  70                  75                  80
Arg Gly Asp Ile Phe Ile Trp Gly Lys Arg Gly Ala Ser Ala Gly Ala
85                  90                  95
Phe Gly His Thr Gly Met Phe Val Asp Pro Asp Asn Ile Ile His Cys
100                 105                 110
Asn Tyr Gly Tyr Asn Ser Ile Thr Val Asn Asn His Asp Glu Ile Trp
115                 120                 125
Gly Tyr Asn Gly Gln Pro Tyr Val Tyr Ala Tyr Arg Tyr Ser Gly Lys
130                 135                 140
Gln Ser Asn Ala Lys Val Asp Asn Lys Ser Val Val Ser Lys Phe Glu
145                 150                 155                 160
Lys Glu Leu Asp Val Asn Thr Pro Leu Ser Asn Ser Asn Met Pro Tyr
165                 170                 175
Tyr Glu Ala Thr Ile Ser Glu Asp Tyr Tyr Val Glu Ser Lys Pro Asp
180                 185                 190
Val Asn Ser Thr Asp Lys Glu Leu Leu Val Ala Gly Thr Arg Val Arg
195                 200                 205
Val Tyr Glu Lys Val Lys Gly Trp Ala Arg Ile Gly Ala Pro Gln Ser
210                 215                 220
Asn Gln Trp Val Glu Asp Ala Tyr Leu Ile Asp Ala Thr Asp Met
225                 230                 235
<210>  57
<211>  495
<212>  БЕЛОК
<213>  K
<400>  57
Met Ala Lys Thr Gln Ala Glu Ile Asn Lys Arg Leu Asp Ala Tyr Ala
1               5                   10                  15
Lys Gly Thr Val Asp Ser Pro Tyr Arg Val Lys Lys Ala Thr Ser Tyr
20                  25                  30
Asp Pro Ser Phe Gly Val Met Glu Ala Gly Ala Ile Asp Ala Asp Gly
35                  40                  45
Tyr Tyr His Ala Gln Cys Gln Asp Leu Ile Thr Asp Tyr Val Leu Trp
50                  55                  60
Leu Thr Asp Asn Lys Val Arg Thr Trp Gly Asn Ala Lys Asp Gln Ile
65                  70                  75                  80
Lys Gln Ser Tyr Gly Thr Gly Phe Lys Ile His Glu Asn Lys Pro Ser
85                  90                  95
Thr Val Pro Lys Lys Gly Trp Ile Ala Val Phe Thr Ser Gly Ser Tyr
100                 105                 110
Glu Gln Trp Gly His Ile Gly Ile Val Tyr Asp Gly Gly Asn Thr Ser
115                 120                 125
Thr Phe Thr Ile Leu Glu Gln Asn Trp Asn Gly Tyr Ala Asn Lys Lys
130                 135                 140
Pro Thr Lys Arg Val Asp Asn Tyr Tyr Gly Leu Thr His Phe Ile Glu
145                 150                 155                 160
Ile Pro Val Lys Ala Gly Thr Thr Val Lys Lys Glu Thr Ala Lys Lys
165                 170                 175
Ser Ala Ser Lys Thr Pro Ala Pro Lys Lys Lys Ala Thr Leu Lys Val
180                 185                 190
Ser Lys Asn His Ile Asn Tyr Thr Met Asp Lys Arg Gly Lys Lys Pro
195                 200                 205
Glu Gly Met Val Ile His Asn Asp Ala Gly Arg Ser Ser Gly Gln Gln
210                 215                 220
Tyr Glu Asn Ser Leu Ala Asn Ala Gly Tyr Ala Arg Tyr Ala Asn Gly
225                 230                 235                 240
Ile Ala His Tyr Tyr Gly Ser Glu Gly Tyr Val Trp Glu Ala Ile Asp
245                 250                 255
Ala Lys Asn Gln Ile Ala Trp His Thr Gly Asp Gly Thr Gly Ala Asn
260                 265                 270
Ser Gly Asn Phe Arg Phe Ala Gly Ile Glu Val Cys Gln Ser Met Ser
275                 280                 285
Ala Ser Asp Ala Gln Phe Leu Lys Asn Glu Gln Ala Val Phe Gln Phe
290                 295                 300
Thr Ala Glu Lys Phe Lys Glu Trp Gly Leu Thr Pro Asn Arg Lys Thr
305                 310                 315                 320
Val Arg Leu His Met Glu Phe Val Pro Thr Ala Cys Pro His Arg Ser
325                 330                 335
Met Val Leu His Thr Gly Phe Asn Pro Val Thr Gln Gly Arg Pro Ser
340                 345                 350
Gln Ala Ile Met Asn Lys Leu Lys Asp Tyr Phe Ile Lys Gln Ile Lys
355                 360                 365
Asn Tyr Met Asp Lys Gly Thr Ser Ser Ser Thr Val Val Lys Asp Gly
370                 375                 380
Lys Thr Ser Ser Ala Ser Thr Pro Ala Thr Arg Pro Val Thr Gly Ser
385                 390                 395                 400
Trp Lys Lys Asn Gln Tyr Gly Thr Trp Tyr Lys Pro Glu Asn Ala Thr
405                 410                 415
Phe Val Asn Gly Asn Gln Pro Ile Val Thr Arg Ile Gly Ser Pro Phe
420                 425                 430
Leu Asn Ala Pro Val Gly Gly Asn Leu Pro Ala Gly Ala Thr Ile Val
435                 440                 445
Tyr Asp Glu Val Cys Ile Gln Ala Gly His Ile Trp Ile Gly Tyr Asn
450                 455                 460
Ala Tyr Asn Gly Asn Arg Val Tyr Cys Pro Val Arg Thr Cys Gln Gly
465                 470                 475                 480
Val Pro Pro Asn Gln Ile Pro Gly Val Ala Trp Gly Val Phe Lys
485                 490                 495
<210>  58
<211>  281
<212>  БЕЛОК
<213>  A118
<400>  58
Met Thr Ser Tyr Tyr Tyr Ser Arg Ser Leu Ala Asn Val Asn Lys Leu
1               5                   10                  15
Ala Asp Asn Thr Lys Ala Ala Ala Arg Lys Leu Leu Asp Trp Ser Glu
20                  25                  30
Ser Asn Gly Ile Glu Val Leu Ile Tyr Glu Thr Ile Arg Thr Lys Glu
35                  40                  45
Gln Gln Ala Ala Asn Val Asn Ser Gly Ala Ser Gln Thr Met Arg Ser
50                  55                  60
Tyr His Leu Val Gly Gln Ala Leu Asp Phe Val Met Ala Lys Gly Lys
65                  70                  75                  80
Thr Val Asp Trp Gly Ala Tyr Arg Ser Asp Lys Gly Lys Lys Phe Val
85                  90                  95
Ala Lys Ala Lys Ser Leu Gly Phe Glu Trp Gly Gly Asp Trp Ser Gly
100                 105                 110
Phe Val Asp Asn Pro His Leu Gln Phe Asn Tyr Lys Gly Tyr Gly Thr
115                 120                 125
Asp Thr Phe Gly Lys Gly Ala Ser Thr Ser Asn Ser Ser Lys Pro Ser
130                 135                 140
Ala Asp Thr Asn Thr Asn Ser Leu Gly Leu Val Asp Tyr Met Asn Leu
145                 150                 155                 160
Asn Lys Leu Asp Ser Ser Phe Ala Asn Arg Lys Lys Leu Ala Thr Ser
165                 170                 175
Tyr Gly Ile Lys Asn Tyr Ser Gly Thr Ala Thr Gln Asn Thr Thr Leu
180                 185                 190
Leu Ala Lys Leu Lys Ala Gly Lys Pro His Thr Pro Ala Ser Lys Asn
195                 200                 205
Thr Tyr Tyr Thr Glu Asn Pro Arg Lys Val Lys Thr Leu Val Gln Cys
210                 215                 220
Asp Leu Tyr Lys Ser Val Asp Phe Thr Thr Lys Asn Gln Thr Gly Gly
225                 230                 235                 240
Thr Phe Pro Pro Gly Thr Val Phe Thr Ile Ser Gly Met Gly Lys Thr
245                 250                 255
Lys Gly Gly Thr Pro Arg Leu Lys Thr Lys Ser Gly Tyr Tyr Leu Thr
260                 265                 270
Ala Asn Thr Lys Phe Val Lys Lys Ile
275                 280
<210>  59
<211>  341
<212>  БЕЛОК
<213>  A511
<400>  59
Met Val Lys Tyr Thr Val Glu Asn Lys Ile Ile Ala Gly Leu Pro Lys
1               5                   10                  15
Gly Lys Leu Lys Gly Ala Asn Phe Val Ile Ala His Glu Thr Ala Asn
20                  25                  30
Ser Lys Ser Thr Ile Asp Asn Glu Val Ser Tyr Met Thr Arg Asn Trp
35                  40                  45
Lys Asn Ala Phe Val Thr His Phe Val Gly Gly Gly Gly Arg Val Val
50                  55                  60
Gln Val Ala Asn Val Asn Tyr Val Ser Trp Gly Ala Gly Gln Tyr Ala
65                  70                  75                  80
Asn Ser Tyr Ser Tyr Ala Gln Val Glu Leu Cys Arg Thr Ser Asn Ala
85                  90                  95
Thr Thr Phe Lys Lys Asp Tyr Glu Val Tyr Cys Gln Leu Leu Val Asp
100                 105                 110
Leu Ala Lys Lys Ala Gly Ile Pro Ile Thr Leu Asp Ser Gly Ser Lys
115                 120                 125
Thr Ser Asp Lys Gly Ile Lys Ser His Lys Trp Val Ala Asp Lys Leu
130                 135                 140
Gly Gly Thr Thr His Gln Asp Pro Tyr Ala Tyr Leu Ser Ser Trp Gly
145                 150                 155                 160
Ile Ser Lys Ala Gln Phe Ala Ser Asp Leu Ala Lys Val Ser Gly Gly
165                 170                 175
Gly Asn Thr Gly Thr Ala Pro Ala Lys Pro Ser Thr Pro Ala Pro Lys
180                 185                 190
Pro Ser Thr Pro Ser Thr Asn Leu Asp Lys Leu Gly Leu Val Asp Tyr
195                 200                 205
Met Asn Ala Lys Lys Met Asp Ser Ser Tyr Ser Asn Arg Asp Lys Leu
210                 215                 220
Ala Lys Gln Tyr Gly Ile Ala Asn Tyr Ser Gly Thr Ala Ser Gln Asn
225                 230                 235                 240
Thr Thr Leu Leu Ser Lys Ile Lys Gly Gly Ala Pro Lys Pro Ser Thr
245                 250                 255
Pro Ala Pro Lys Pro Ser Thr Ser Thr Ala Lys Lys Ile Tyr Phe Pro
260                 265                 270
Pro Asn Lys Gly Asn Trp Ser Val Tyr Pro Thr Asn Lys Ala Pro Val
275                 280                 285
Lys Ala Asn Ala Ile Gly Ala Ile Asn Pro Thr Lys Phe Gly Gly Leu
290                 295                 300
Thr Tyr Thr Ile Gln Lys Asp Arg Gly Asn Gly Val Tyr Glu Ile Gln
305                 310                 315                 320
Thr Asp Gln Phe Gly Arg Val Gln Val Tyr Gly Ala Pro Ser Thr Gly
325                 330                 335
Ala Val Ile Lys Lys
340
<210>  60
<211>  289
<212>  БЕЛОК
<213>  A500
<400>  60
Met Ala Leu Thr Glu Ala Trp Leu Ile Glu Lys Ala Asn Arg Lys Leu
1               5                   10                  15
Asn Ala Gly Gly Met Tyr Lys Ile Thr Ser Asp Lys Thr Arg Asn Val
20                  25                  30
Ile Lys Lys Met Ala Lys Glu Gly Ile Tyr Leu Cys Val Ala Gln Gly
35                  40                  45
Tyr Arg Ser Thr Ala Glu Gln Asn Ala Leu Tyr Ala Gln Gly Arg Thr
50                  55                  60
Lys Pro Gly Ala Ile Val Thr Asn Ala Lys Gly Gly Gln Ser Asn His
65                  70                  75                  80
Asn Tyr Gly Val Ala Val Asp Leu Cys Leu Tyr Thr Asn Asp Gly Lys
85                  90                  95
Asp Val Ile Trp Glu Ser Thr Thr Ser Arg Trp Lys Lys Val Val Ala
100                 105                 110
Ala Met Lys Ala Glu Gly Phe Lys Trp Gly Gly Asp Trp Lys Ser Phe
115                 120                 125
Lys Asp Tyr Pro His Phe Glu Leu Cys Asp Ala Val Ser Gly Glu Lys
130                 135                 140
Ile Pro Ala Ala Thr Gln Asn Thr Asn Thr Asn Ser Asn Arg Tyr Glu
145                 150                 155                 160
Gly Lys Val Ile Asp Ser Ala Pro Leu Leu Pro Lys Met Asp Phe Lys
165                 170                 175
Ser Ser Pro Phe Arg Met Tyr Lys Val Gly Thr Glu Phe Leu Val Tyr
180                 185                 190
Asp His Asn Gln Tyr Trp Tyr Lys Thr Tyr Ile Asp Asp Lys Leu Tyr
195                 200                 205
Tyr Met Tyr Lys Ser Phe Cys Asp Val Val Ala Lys Lys Asp Ala Lys
210                 215                 220
Gly Arg Ile Lys Val Arg Ile Lys Ser Ala Lys Asp Leu Arg Ile Pro
225                 230                 235                 240
Val Trp Asn Asn Ile Lys Leu Asn Ser Gly Lys Ile Lys Trp Tyr Ala
245                 250                 255
Pro Asn Val Lys Leu Ala Trp Tyr Asn Tyr Arg Arg Gly Tyr Leu Glu
260                 265                 270
Leu Trp Tyr Pro Asn Asp Gly Trp Tyr Tyr Thr Ala Glu Tyr Phe Leu
275                 280                 285
Lys
<210>  61
<211>  239
<212>  БЕЛОК
<213>  Профаг LambdaSa1
<400>  61
Met Val Ile Asn Ile Glu Gln Ala Ile Ala Trp Met Ala Ser Arg Lys
1               5                   10                  15
Gly Lys Val Thr Tyr Ser Met Asp Tyr Arg Asn Gly Pro Ser Ser Tyr
20                  25                  30
Asp Cys Ser Ser Ser Val Tyr Phe Ala Leu Arg Ser Ala Gly Ala Ser
35                  40                  45
Asp Asn Gly Trp Ala Val Asn Thr Glu Tyr Glu His Asp Trp Leu Ile
50                  55                  60
Lys Asn Gly Tyr Val Leu Ile Ala Glu Asn Thr Asn Trp Asn Ala Gln
65                  70                  75                  80
Arg Gly Asp Ile Phe Ile Trp Gly Lys Arg Gly Ala Ser Ala Gly Ala
85                  90                  95
Phe Gly His Thr Gly Met Phe Val Asp Pro Asp Asn Ile Ile His Cys
100                 105                 110
Asn Tyr Gly Tyr Asn Ser Ile Thr Val Asn Asn His Asp Glu Ile Trp
115                 120                 125
Gly Tyr Asn Gly Gln Pro Tyr Val Tyr Ala Tyr Arg Tyr Ala Arg Lys
130                 135                 140
Gln Ser Asn Ala Lys Val Asp Asn Gln Ser Val Val Ser Lys Phe Glu
145                 150                 155                 160
Lys Glu Leu Asp Val Asn Thr Pro Leu Ser Asn Ser Asn Met Pro Tyr
165                 170                 175
Tyr Glu Ala Thr Ile Ser Glu Asp Tyr Tyr Val Glu Ser Lys Pro Asp
180                 185                 190
Val Asn Ser Thr Asp Lys Glu Leu Leu Val Ala Gly Thr Arg Val Arg
195                 200                 205
Val Tyr Glu Lys Val Lys Gly Trp Ala Arg Ile Gly Ala Pro Gln Ser
210                 215                 220
Asn Gln Trp Val Glu Asp Ala Tyr Leu Ile Asp Ala Thr Asp Met
225                 230                 235
<210>  62
<211>  468
<212>  БЕЛОК
<213>  Профаг LambdaSa2
<400>  62
Met Glu Ile Asn Thr Glu Ile Ala Ile Ala Trp Met Ser Ala Arg Gln
1               5                   10                  15
Gly Lys Val Ser Tyr Ser Met Asp Tyr Arg Asp Gly Pro Asn Ser Tyr
20                  25                  30
Asp Cys Ser Ser Ser Val Tyr Tyr Ala Leu Arg Ser Ala Gly Ala Ser
35                  40                  45
Ser Ala Gly Trp Ala Val Asn Thr Glu Tyr Met His Asp Trp Leu Ile
50                  55                  60
Lys Asn Gly Tyr Glu Leu Ile Ala Glu Asn Val Asp Trp Asn Ala Val
65                  70                  75                  80
Arg Gly Asp Ile Ala Ile Trp Gly Met Arg Gly His Ser Ser Gly Ala
85                  90                  95
Gly Gly His Val Val Met Phe Ile Asp Pro Glu Asn Ile Ile His Cys
100                 105                 110
Asn Trp Ala Asn Asn Gly Ile Thr Val Asn Asn Tyr Asn Gln Thr Ala
115                 120                 125
Ala Ala Ser Gly Trp Met Tyr Cys Tyr Val Tyr Arg Leu Lys Ser Gly
130                 135                 140
Ala Ser Thr Gln Gly Lys Ser Leu Asp Thr Leu Val Lys Glu Thr Leu
145                 150                 155                 160
Ala Gly Asn Tyr Gly Asn Gly Glu Ala Arg Lys Ala Val Leu Gly Asn
165                 170                 175
Gln Tyr Glu Ala Val Met Ser Val Ile Asn Gly Lys Thr Thr Thr Asn
180                 185                 190
Gln Lys Thr Val Asp Gln Leu Val Gln Glu Val Ile Ala Gly Lys His
195                 200                 205
Gly Asn Gly Glu Ala Arg Lys Lys Ser Leu Gly Ser Gln Tyr Asp Ala
210                 215                 220
Val Gln Lys Arg Val Thr Glu Leu Leu Lys Lys Gln Pro Ser Glu Pro
225                 230                 235                 240
Phe Lys Ala Gln Glu Val Asn Lys Pro Thr Glu Thr Lys Thr Ser Gln
245                 250                 255
Thr Glu Leu Thr Gly Gln Ala Thr Ala Thr Lys Glu Glu Gly Asp Leu
260                 265                 270
Ser Phe Asn Gly Thr Ile Leu Lys Lys Ala Val Leu Asp Lys Ile Leu
275                 280                 285
Gly Asn Cys Lys Lys His Asp Ile Leu Pro Ser Tyr Ala Leu Thr Ile
290                 295                 300
Leu His Tyr Glu Gly Leu Trp Gly Thr Ser Ala Val Gly Lys Ala Asp
305                 310                 315                 320
Asn Asn Trp Gly Gly Met Thr Trp Thr Gly Gln Gly Asn Arg Pro Ser
325                 330                 335
Gly Val Thr Val Thr Gln Gly Ser Ala Arg Pro Ser Asn Glu Gly Gly
340                 345                 350
His Tyr Met His Tyr Ala Ser Val Asp Asp Phe Leu Thr Asp Trp Phe
355                 360                 365
Tyr Leu Leu Arg Ala Gly Gly Ser Tyr Lys Val Ser Gly Ala Lys Thr
370                 375                 380
Phe Ser Glu Ala Ile Lys Gly Met Phe Lys Val Gly Gly Ala Val Tyr
385                 390                 395                 400
Asp Tyr Ala Ala Ser Gly Phe Asp Ser Tyr Ile Val Gly Ala Ser Ser
405                 410                 415
Arg Leu Lys Ala Ile Glu Ala Glu Asn Gly Ser Leu Asp Lys Phe Asp
420                 425                 430
Lys Ala Thr Asp Ile Gly Asp Gly Ser Lys Asp Lys Ile Asp Ile Thr
435                 440                 445
Ile Glu Gly Ile Glu Val Thr Ile Asn Gly Ile Thr Tyr Glu Leu Thr
450                 455                 460
Lys Lys Pro Val
465
<210>  63
<211>  236
<212>  БЕЛОК
<213>  Профаг (ATCC700407)
<400>  63
Met Thr Asp Ser Ile Gln Glu Met Arg Lys Leu Gln Ser Ile Pro Val
1               5                   10                  15
Arg Tyr Asp Met Gly Asp Arg Tyr Gly Asn Asp Ala Asp Arg Asp Gly
20                  25                  30
Arg Ile Glu Met Asp Cys Ser Ser Ala Val Ser Lys Ala Leu Gly Ile
35                  40                  45
Ser Met Thr Asn Asn Thr Glu Thr Leu Gln Gln Ala Leu Pro Ala Ile
50                  55                  60
Gly Tyr Gly Lys Ile His Asp Ala Val Asp Gly Thr Phe Asp Met Gln
65                  70                  75                  80
Ala Tyr Asp Val Ile Ile Trp Ala Pro Arg Asp Gly Ser Ser Ser Leu
85                  90                  95
Gly Ala Phe Gly His Val Leu Ile Ala Thr Ser Pro Thr Thr Ala Ile
100                 105                 110
His Cys Asn Tyr Gly Ser Asp Gly Ile Thr Glu Asn Asp Tyr Asn Tyr
115                 120                 125
Ile Trp Glu Ile Asn Gly Arg Pro Arg Glu Ile Val Phe Arg Lys Gly
130                 135                 140
Val Thr Gln Thr Gln Ala Thr Val Thr Ser Gln Phe Glu Arg Glu Leu
145                 150                 155                 160
Asp Val Asn Ala Arg Leu Thr Val Ser Asp Lys Pro Tyr Tyr Glu Ala
165                 170                 175
Thr Leu Ser Glu Asp Tyr Tyr Val Glu Ala Gly Pro Arg Ile Asp Ser
180                 185                 190
Gln Asp Lys Glu Leu Ile Lys Ala Gly Thr Arg Val Arg Val Tyr Glu
195                 200                 205
Lys Leu Asn Gly Trp Ser Arg Ile Asn His Pro Glu Ser Ala Gln Trp
210                 215                 220
Val Glu Asp Ser Tyr Leu Val Asp Ala Thr Glu Met
225                 230                 235
<210>  64
<211>  481
<212>  БЕЛОК
<213>  Phi11 и Phi12
<400>  64
Met Gln Ala Lys Leu Thr Lys Asn Glu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Thr
1               5                   10                  15
Ser Glu Gly Lys Gln Phe Asn Val Asp Leu Trp Tyr Gly Phe Gln Cys
20                  25                  30
Phe Asp Tyr Ala Asn Ala Gly Trp Lys Val Leu Phe Gly Leu Leu Leu
35                  40                  45
Lys Gly Leu Gly Ala Lys Asp Ile Pro Phe Ala Asn Asn Phe Asp Gly
50                  55                  60
Leu Ala Thr Val Tyr Gln Asn Thr Pro Asp Phe Leu Ala Gln Pro Gly
65                  70                  75                  80
Asp Met Val Val Phe Gly Ser Asn Tyr Gly Ala Gly Tyr Gly His Val
85                  90                  95
Ala Trp Val Ile Glu Ala Thr Leu Asp Tyr Ile Ile Val Tyr Glu Gln
100                 105                 110
Asn Trp Leu Gly Gly Gly Trp Thr Asp Gly Ile Glu Gln Pro Gly Trp
115                 120                 125
Gly Trp Glu Lys Val Thr Arg Arg Gln His Ala Tyr Asp Phe Pro Met
130                 135                 140
Trp Phe Ile Arg Pro Asn Phe Lys Ser Glu Thr Ala Pro Arg Ser Val
145                 150                 155                 160
Gln Ser Pro Thr Gln Ala Pro Lys Lys Glu Thr Ala Lys Pro Gln Pro
165                 170                 175
Lys Ala Val Glu Leu Lys Ile Ile Lys Asp Val Val Lys Gly Tyr Asp
180                 185                 190
Leu Pro Lys Arg Gly Ser Asn Pro Lys Gly Ile Val Ile His Asn Asp
195                 200                 205
Ala Gly Ser Lys Gly Ala Thr Ala Glu Ala Tyr Arg Asn Gly Leu Val
210                 215                 220
Asn Ala Pro Leu Ser Arg Leu Glu Ala Gly Ile Ala His Ser Tyr Val
225                 230                 235                 240
Ser Gly Asn Thr Val Trp Gln Ala Leu Asp Glu Ser Gln Val Gly Trp
245                 250                 255
His Thr Ala Asn Gln Ile Gly Asn Lys Tyr Tyr Tyr Gly Ile Glu Val
260                 265                 270
Cys Gln Ser Met Gly Ala Asp Asn Ala Thr Phe Leu Lys Asn Glu Gln
275                 280                 285
Ala Thr Phe Gln Glu Cys Ala Arg Leu Leu Lys Lys Trp Gly Leu Pro
290                 295                 300
Ala Asn Arg Asn Thr Ile Arg Leu His Asn Glu Phe Thr Ser Thr Ser
305                 310                 315                 320
Cys Pro His Arg Ser Ser Val Leu His Thr Gly Phe Asp Pro Val Thr
325                 330                 335
Arg Gly Leu Leu Pro Glu Asp Lys Arg Leu Gln Leu Lys Asp Tyr Phe
340                 345                 350
Ile Lys Gln Ile Arg Ala Tyr Met Asp Gly Lys Ile Pro Val Ala Thr
355                 360                 365
Val Ser Asn Glu Ser Ser Ala Ser Ser Asn Thr Val Lys Pro Val Ala
370                 375                 380
Ser Ala Trp Lys Arg Asn Lys Tyr Gly Thr Tyr Tyr Met Glu Glu Ser
385                 390                 395                 400
Ala Arg Phe Thr Asn Gly Asn Gln Pro Ile Thr Val Arg Lys Val Gly
405                 410                 415
Pro Phe Leu Ser Cys Pro Val Gly Tyr Gln Phe Gln Pro Gly Gly Tyr
420                 425                 430
Cys Asp Tyr Thr Glu Val Met Leu Gln Asp Gly His Val Trp Val Gly
435                 440                 445
Tyr Thr Trp Glu Gly Gln Arg Tyr Tyr Leu Pro Ile Arg Thr Trp Asn
450                 455                 460
Gly Ser Ala Pro Pro Asn Gln Ile Leu Gly Asp Leu Trp Gly Glu Ile
465                 470                 475                 480
Ser
<210>  65
<211>  481
<212>  БЕЛОК
<213>  (Phi)H5
<400>  65
Met Gln Ala Lys Leu Thr Lys Lys Glu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Thr
1               5                   10                  15
Ser Glu Gly Lys Gln Tyr Asn Ala Asp Gly Trp Tyr Gly Phe Gln Cys
20                  25                  30
Phe Asp Tyr Ala Asn Ala Gly Trp Lys Ala Leu Phe Gly Leu Leu Leu
35                  40                  45
Lys Gly Val Gly Ala Lys Asp Ile Pro Phe Ala Asn Asn Phe Asp Gly
50                  55                  60
Leu Ala Thr Val Tyr Gln Asn Thr Pro Asp Phe Leu Ala Gln Pro Gly
65                  70                  75                  80
Asp Met Val Val Phe Gly Ser Asn Tyr Gly Ala Gly Tyr Gly His Val
85                  90                  95
Ala Trp Val Ile Glu Ala Thr Leu Asp Tyr Ile Ile Val Tyr Glu Gln
100                 105                 110
Asn Trp Leu Gly Gly Gly Trp Thr Asp Gly Val Gln Gln Pro Gly Ser
115                 120                 125
Gly Trp Glu Lys Val Thr Arg Arg Gln His Ala Tyr Asp Phe Pro Met
130                 135                 140
Trp Phe Ile Arg Pro Asn Phe Lys Ser Glu Thr Ala Pro Arg Ser Val
145                 150                 155                 160
Gln Ser Pro Thr Gln Ala Ser Lys Lys Glu Thr Ala Lys Pro Gln Pro
165                 170                 175
Lys Ala Val Glu Leu Lys Ile Ile Lys Asp Val Val Lys Gly Tyr Asp
180                 185                 190
Leu Pro Lys Arg Gly Ser Asn Pro Asn Phe Ile Val Ile His Asn Asp
195                 200                 205
Ala Gly Ser Lys Gly Ala Thr Ala Glu Ala Tyr Arg Asn Gly Leu Val
210                 215                 220
Asn Ala Pro Leu Ser Arg Leu Glu Ala Gly Ile Ala His Ser Tyr Val
225                 230                 235                 240
Ser Gly Asn Thr Val Trp Gln Ala Leu Asp Glu Ser Gln Val Gly Trp
245                 250                 255
His Thr Ala Asn Gln Ile Gly Asn Lys Tyr Gly Tyr Gly Ile Glu Val
260                 265                 270
Cys Gln Ser Met Gly Ala Asp Asn Ala Thr Phe Leu Lys Asn Glu Gln
275                 280                 285
Ala Thr Phe Gln Glu Cys Ala Arg Leu Leu Lys Lys Trp Gly Leu Pro
290                 295                 300
Ala Asn Arg Asn Thr Ile Arg Leu His Asn Glu Phe Thr Ser Thr Ser
305                 310                 315                 320
Cys Pro His Arg Ser Ser Val Leu His Thr Gly Phe Asp Pro Val Thr
325                 330                 335
Arg Gly Leu Leu Pro Glu Asp Lys Arg Leu Gln Leu Lys Asp Tyr Phe
340                 345                 350
Ile Lys Gln Ile Arg Ala Tyr Met Asp Gly Lys Ile Pro Val Ala Thr
355                 360                 365
Val Ser Asn Asp Ser Ser Ala Ser Ser Asn Thr Val Lys Pro Val Ala
370                 375                 380
Ser Ala Trp Lys Arg Asn Lys Tyr Gly Thr Tyr Tyr Met Glu Glu Ser
385                 390                 395                 400
Ala Arg Phe Thr Asn Gly Asn Gln Pro Ile Thr Val Arg Lys Val Gly
405                 410                 415
Pro Phe Leu Ser Cys Pro Val Gly Tyr Gln Phe Gln Pro Gly Gly Tyr
420                 425                 430
Cys Asp Tyr Thr Glu Val Met Leu Gln Asp Gly His Val Trp Val Gly
435                 440                 445
Tyr Thr Trp Glu Gly Gln Arg Tyr Tyr Leu Pro Ile Arg Thr Trp Asn
450                 455                 460
Gly Ser Ala Pro Pro Asn Gln Ile Leu Gly Asp Leu Trp Gly Glu Ile
465                 470                 475                 480
Ser
<210>  66
<211>  477
<212>  БЕЛОК
<213>  (Phi)WMY
<400>  66
Met Lys Thr Lys Ala Gln Ala Lys Ser Trp Ile Asn Ser Lys Ile Gly
1               5                   10                  15
Lys Gly Ile Asp Trp Asp Gly Met Tyr Gly Tyr Gln Cys Met Asp Glu
20                  25                  30
Ala Val Asp Tyr Ile His His Val Thr Asp Gly Lys Val Thr Met Trp
35                  40                  45
Gly Asn Ala Ile Asp Ala Pro Lys Asn Asn Phe Gln Gly Leu Cys Thr
50                  55                  60
Val Tyr Thr Asn Thr Pro Glu Phe Arg Pro Ala Tyr Gly Asp Val Ile
65                  70                  75                  80
Val Trp Ser Tyr Gly Thr Phe Ala Thr Tyr Gly His Ile Ala Ile Val
85                  90                  95
Val Asn Pro Asp Pro Tyr Gly Asp Leu Gln Tyr Ile Thr Val Leu Glu
100                 105                 110
Gln Asn Trp Asn Gly Asn Gly Ile Tyr Lys Thr Glu Phe Ala Thr Ile
115                 120                 125
Arg Thr His Asp Tyr Thr Gly Val Ser His Phe Ile Arg Pro Lys Phe
130                 135                 140
Ala Asp Glu Val Lys Glu Thr Ala Lys Thr Val Asn Lys Leu Ser Val
145                 150                 155                 160
Gln Lys Lys Ile Val Thr Pro Lys Asn Ser Val Glu Arg Ile Lys Asn
165                 170                 175
Tyr Val Lys Thr Ser Gly Tyr Ile Asn Gly Glu His Tyr Glu Leu Tyr
180                 185                 190
Asn Arg Gly His Lys Pro Lys Gly Val Val Ile His Asn Thr Ala Gly
195                 200                 205
Thr Ala Ser Ala Thr Gln Glu Gly Gln Arg Leu Thr Asn Met Thr Phe
210                 215                 220
Gln Gln Leu Ala Asn Gly Val Ala His Val Tyr Ile Asp Lys Asn Thr
225                 230                 235                 240
Ile Tyr Glu Thr Leu Pro Glu Asp Arg Ile Ala Trp His Val Ala Gln
245                 250                 255
Gln Tyr Gly Asn Thr Glu Phe Tyr Gly Ile Glu Val Cys Gly Ser Arg
260                 265                 270
Asn Thr Asp Lys Glu Gln Phe Leu Ala Asn Glu Gln Val Ala Phe Gln
275                 280                 285
Glu Ala Ala Arg Arg Leu Lys Ser Trp Gly Met Arg Ala Asn Arg Asn
290                 295                 300
Thr Val Arg Leu His His Thr Phe Ser Ser Thr Glu Cys Pro Asp Met
305                 310                 315                 320
Ser Met Leu Leu His Thr Gly Tyr Ser Met Lys Asn Gly Lys Pro Thr
325                 330                 335
Gln Asp Ile Thr Asn Lys Cys Ala Asp Tyr Phe Met Lys Gln Ile Asn
340                 345                 350
Ala Tyr Ile Asp Gly Lys Gln Pro Thr Ser Thr Val Val Gly Ser Ser
355                 360                 365
Ser Ser Asn Lys Leu Lys Ala Lys Asn Lys Asp Lys Ser Thr Gly Trp
370                 375                 380
Asn Thr Asn Glu Tyr Gly Thr Leu Trp Lys Lys Glu His Ala Thr Phe
385                 390                 395                 400
Thr Cys Gly Val Arg Gln Gly Ile Val Thr Arg Thr Thr Gly Pro Phe
405                 410                 415
Thr Ser Cys Pro Gln Ala Gly Val Leu Tyr Tyr Gly Gln Ser Val Asn
420                 425                 430
Tyr Asp Thr Val Cys Lys Gln Asp Gly Tyr Val Trp Ile Ser Trp Thr
435                 440                 445
Thr Ser Asp Gly Tyr Asp Val Trp Met Pro Ile Arg Thr Trp Asp Arg
450                 455                 460
Ser Thr Asp Lys Val Ser Glu Ile Trp Gly Thr Ile Ser
465                 470                 475
<210>  67
<211>  443
<212>  БЕЛОК
<213>  (Phi)NCTC 11261
<400>  67
Met Ala Thr Tyr Gln Glu Tyr Lys Ser Arg Ser Asn Gly Asn Ala Tyr
1               5                   10                  15
Asp Ile Asp Gly Ser Phe Gly Ala Gln Cys Trp Asp Gly Tyr Ala Asp
20                  25                  30
Tyr Cys Lys Tyr Leu Gly Leu Pro Tyr Ala Asn Cys Thr Asn Thr Gly
35                  40                  45
Tyr Ala Arg Asp Ile Trp Glu Gln Arg His Glu Asn Gly Ile Leu Asn
50                  55                  60
Tyr Phe Asp Glu Val Glu Val Met Gln Ala Gly Asp Val Ala Ile Phe
65                  70                  75                  80
Met Val Val Asp Gly Val Thr Pro Tyr Ser His Val Ala Ile Phe Asp
85                  90                  95
Ser Asp Ala Gly Gly Gly Tyr Gly Trp Phe Leu Gly Gln Asn Gln Gly
100                 105                 110
Gly Ala Asn Gly Ala Tyr Asn Ile Val Lys Ile Pro Tyr Ser Ala Thr
115                 120                 125
Tyr Pro Thr Ala Phe Arg Pro Lys Val Phe Lys Asn Ala Val Thr Val
130                 135                 140
Thr Gly Asn Ile Gly Leu Asn Lys Gly Asp Tyr Phe Ile Asp Val Ser
145                 150                 155                 160
Ala Tyr Gln Gln Ala Asp Leu Thr Thr Thr Cys Gln Gln Ala Gly Thr
165                 170                 175
Thr Lys Thr Ile Ile Lys Val Ser Glu Ser Ile Ala Trp Leu Ser Asp
180                 185                 190
Arg His Gln Gln Gln Ala Asn Thr Ser Asp Pro Ile Gly Tyr Tyr His
195                 200                 205
Phe Gly Arg Phe Gly Gly Asp Ser Ala Leu Ala Gln Arg Glu Ala Asp
210                 215                 220
Leu Phe Leu Ser Asn Leu Pro Ser Lys Lys Val Ser Tyr Leu Val Ile
225                 230                 235                 240
Asp Tyr Glu Asp Ser Ala Ser Ala Asp Lys Gln Ala Asn Thr Asn Ala
245                 250                 255
Val Ile Ala Phe Met Asp Lys Ile Ala Ser Ala Gly Tyr Lys Pro Ile
260                 265                 270
Tyr Tyr Ser Tyr Lys Pro Phe Thr Leu Asn Asn Ile Asp Tyr Gln Lys
275                 280                 285
Ile Ile Ala Lys Tyr Pro Asn Ser Ile Trp Ile Ala Gly Tyr Pro Asp
290                 295                 300
Tyr Glu Val Arg Thr Glu Pro Leu Trp Glu Phe Phe Pro Ser Met Asp
305                 310                 315                 320
Gly Val Arg Trp Trp Gln Phe Thr Ser Val Gly Val Ala Gly Gly Leu
325                 330                 335
Asp Lys Asn Ile Val Leu Leu Ala Asp Asp Ser Ser Lys Met Asp Ile
340                 345                 350
Pro Lys Val Asp Lys Pro Gln Glu Leu Thr Phe Tyr Gln Lys Leu Ala
355                 360                 365
Thr Asn Thr Lys Leu Asp Asn Ser Asn Val Pro Tyr Tyr Glu Ala Thr
370                 375                 380
Leu Ser Thr Asp Tyr Tyr Val Glu Ser Lys Pro Asn Ala Ser Ser Ala
385                 390                 395                 400
Asp Lys Glu Phe Ile Lys Ala Gly Thr Arg Val Arg Val Tyr Glu Lys
405                 410                 415
Val Asn Gly Trp Ser Arg Ile Asn His Pro Glu Ser Ala Gln Trp Val
420                 425                 430
Glu Asp Ser Tyr Leu Val Asn Ala Thr Asp Met
435                 440
<210>  68
<211>  334
<212>  БЕЛОК
<213>  (Phi)FWLLm3
<400>  68
Met Val Lys Tyr Thr Val Glu Asn Lys Ile Ile Ala Gly Leu Pro Lys
1               5                   10                  15
Gly Lys Leu Lys Gly Ala Asn Phe Val Ile Ala His Glu Thr Ala Asn
20                  25                  30
Ser Lys Ser Thr Ile Asp Asn Glu Val Ser Tyr Met Thr Arg Asn Trp
35                  40                  45
Gln Asn Ala Phe Val Thr His Phe Val Gly Gly Gly Gly Arg Val Val
50                  55                  60
Gln Val Ala Asn Val Asn Tyr Val Ser Trp Gly Ala Gly Gln Tyr Ala
65                  70                  75                  80
Asn Ser Tyr Ser Tyr Ala Gln Val Glu Leu Cys Arg Thr Ser Asn Ala
85                  90                  95
Thr Thr Phe Lys Lys Asp Tyr Glu Val Tyr Cys Gln Leu Leu Val Asp
100                 105                 110
Leu Ala Lys Lys Ala Gly Ile Pro Ile Thr Leu Asp Ser Gly Ser Lys
115                 120                 125
Thr Ser Asp Lys Gly Ile Lys Ser His Lys Trp Val Ala Asp Lys Leu
130                 135                 140
Gly Gly Thr Thr His Gln Asp Pro Tyr Ala Tyr Leu Ser Ser Trp Gly
145                 150                 155                 160
Ile Ser Lys Ala Gln Phe Ala Ser Asp Leu Ala Lys Val Ser Gly Gly
165                 170                 175
Gly Asn Thr Gly Thr Ala Pro Ala Lys Pro Ser Thr Pro Ser Thr Asn
180                 185                 190
Leu Asp Lys Leu Gly Leu Val Asp Tyr Met Asn Ala Lys Lys Met Asp
195                 200                 205
Ser Ser Tyr Ser Asn Arg Ala Lys Leu Ala Lys Gln Tyr Gly Ile Ala
210                 215                 220
Asn Tyr Ser Gly Thr Ala Ser Gln Asn Thr Thr Leu Leu Ser Lys Ile
225                 230                 235                 240
Lys Gly Gly Ala Pro Lys Pro Ser Thr Pro Ala Pro Lys Pro Ser Thr
245                 250                 255
Ser Thr Ala Lys Lys Ile Tyr Phe Pro Pro Asn Lys Gly Asn Trp Ser
260                 265                 270
Val Tyr Pro Thr Asn Lys Ala Pro Val Lys Ala Asn Ala Ile Gly Ala
275                 280                 285
Ile Asn Pro Thr Lys Phe Gly Gly Leu Thr Tyr Thr Ile Gln Lys Asp
290                 295                 300
Arg Gly Asn Gly Val Tyr Glu Ile Gln Thr Asp Gln Phe Gly Arg Val
305                 310                 315                 320
Gln Val Tyr Gly Ala Pro Ser Thr Gly Ala Val Ile Lys Lys
325                 330
<210>  69
<211>  1278
<212>  БЕЛОК
<213>  (Phi)BPS13
<400>  69
Met Ala Lys Arg Glu Lys Tyr Ile Phe Asp Val Glu Ala Glu Val Gly
1               5                   10                  15
Lys Ala Ala Lys Ser Ile Lys Ser Leu Glu Ala Glu Leu Ser Lys Leu
20                  25                  30
Gln Lys Leu Asn Lys Glu Ile Asp Ala Thr Gly Gly Asp Arg Thr Glu
35                  40                  45
Lys Glu Met Leu Ala Thr Leu Lys Ala Ala Lys Glu Val Asn Ala Glu
50                  55                  60
Tyr Gln Lys Met Gln Arg Ile Leu Lys Asp Leu Ser Lys Tyr Ser Gly
65                  70                  75                  80
Lys Val Ser Arg Lys Glu Phe Asn Asp Ser Lys Val Ile Asn Asn Ala
85                  90                  95
Lys Thr Ser Val Gln Gly Gly Lys Val Thr Asp Ser Phe Gly Gln Met
100                 105                 110
Leu Lys Asn Met Glu Arg Gln Ile Asn Ser Val Asn Lys Gln Phe Asp
115                 120                 125
Asn His Arg Lys Ala Met Val Asp Arg Gly Gln Gln Tyr Thr Pro His
130                 135                 140
Leu Lys Thr Asn Arg Lys Asp Ser Gln Gly Asn Ser Asn Pro Ser Met
145                 150                 155                 160
Met Gly Arg Asn Lys Ser Thr Thr Gln Asp Met Glu Lys Ala Val Asp
165                 170                 175
Lys Phe Leu Asn Gly Gln Asn Glu Ala Thr Thr Gly Leu Asn Gln Ala
180                 185                 190
Leu Tyr Gln Leu Lys Glu Ile Ser Lys Leu Asn Arg Arg Ser Glu Ser
195                 200                 205
Leu Ser Arg Arg Ala Ser Ala Ser Gly Tyr Met Ser Phe Gln Gln Tyr
210                 215                 220
Ser Asn Phe Thr Gly Asp Arg Arg Thr Val Gln Gln Thr Tyr Gly Gly
225                 230                 235                 240
Leu Lys Thr Ala Asn Arg Glu Arg Val Leu Glu Leu Ser Gly Gln Ala
245                 250                 255
Thr Gly Ile Ser Lys Glu Leu Asp Arg Leu Asn Ser Lys Lys Gly Leu
260                 265                 270
Thr Ala Arg Glu Gly Glu Glu Arg Lys Lys Leu Met Arg Gln Leu Glu
275                 280                 285
Gly Ile Asp Ala Glu Leu Thr Ala Arg Lys Lys Leu Asn Ser Ser Leu
290                 295                 300
Asp Glu Thr Thr Ser Asn Met Glu Lys Phe Asn Gln Ser Leu Val Asp
305                 310                 315                 320
Ala Gln Val Ser Val Lys Pro Glu Arg Gly Thr Met Arg Gly Met Met
325                 330                 335
Tyr Glu Arg Ala Pro Ala Ile Ala Leu Ala Ile Gly Gly Ala Ile Thr
340                 345                 350
Ala Thr Ile Gly Lys Leu Tyr Ser Glu Gly Gly Asn His Ser Lys Ala
355                 360                 365
Met Arg Pro Asp Glu Met Tyr Val Gly Gln Gln Thr Gly Ala Val Gly
370                 375                 380
Ala Asn Trp Arg Pro Asn Arg Thr Ala Thr Met Arg Ser Gly Leu Gly
385                 390                 395                 400
Asn His Leu Gly Phe Thr Gly Gln Glu Met Met Glu Phe Gln Ser Asn
405                 410                 415
Tyr Leu Ser Ala Asn Gly Tyr His Gly Ala Glu Asp Met Lys Ala Ala
420                 425                 430
Thr Thr Gly Gln Ala Thr Phe Ala Arg Ala Thr Gly Leu Gly Ser Asp
435                 440                 445
Glu Val Lys Asp Phe Phe Asn Thr Ala Tyr Arg Ser Gly Gly Ile Asp
450                 455                 460
Gly Asn Gln Thr Lys Gln Phe Gln Asn Ala Phe Leu Gly Ala Met Lys
465                 470                 475                 480
Gln Ser Gly Ala Val Gly Arg Glu Lys Asp Gln Leu Lys Ala Leu Asn
485                 490                 495
Gly Ile Leu Ser Ser Met Ser Gln Asn Arg Thr Val Ser Asn Gln Asp
500                 505                 510
Met Met Arg Thr Val Gly Leu Gln Ser Ala Ile Ser Ser Ser Gly Val
515                 520                 525
Ala Ser Leu Gln Gly Thr Lys Gly Gly Ala Leu Met Glu Gln Leu Asp
530                 535                 540
Asn Gly Ile Arg Glu Gly Phe Asn Asp Pro Gln Met Arg Val Leu Phe
545                 550                 555                 560
Gly Gln Gly Thr Lys Tyr Gln Gly Met Gly Gly Arg Ala Ala Leu Arg
565                 570                 575
Lys Gln Met Glu Lys Gly Ile Ser Asp Pro Asp Asn Leu Asn Thr Leu
580                 585                 590
Ile Asp Ala Ser Lys Ala Ser Ala Gly Gln Asp Pro Ala Glu Gln Ala
595                 600                 605
Glu Val Leu Ala Thr Leu Ala Ser Lys Met Gly Val Asn Met Ser Ser
610                 615                 620
Asp Gln Ala Arg Gly Leu Ile Asp Leu Gln Pro Ser Gly Lys Leu Thr
625                 630                 635                 640
Lys Glu Asn Ile Asp Lys Val Met Lys Glu Gly Leu Lys Glu Gly Ser
645                 650                 655
Ile Glu Ser Ala Lys Arg Asp Lys Ala Tyr Ser Glu Ser Lys Ala Ser
660                 665                 670
Ile Asp Asn Ser Ser Glu Ala Ala Thr Ala Lys Gln Ala Thr Glu Leu
675                 680                 685
Asn Asp Met Gly Ser Lys Leu Arg Gln Ala Asn Ala Ala Leu Gly Gly
690                 695                 700
Leu Pro Ala Pro Leu Tyr Thr Ala Ile Ala Ala Val Val Ala Phe Thr
705                 710                 715                 720
Ala Ala Val Ala Gly Ser Ala Leu Met Phe Lys Gly Ala Ser Trp Leu
725                 730                 735
Lys Gly Gly Met Ala Ser Lys Tyr Gly Gly Lys Gly Gly Lys Gly Gly
740                 745                 750
Lys Gly Gly Gly Thr Gly Gly Gly Gly Gly Ala Gly Gly Ala Ala Ala
755                 760                 765
Thr Gly Ala Gly Ala Ala Ala Gly Ala Gly Gly Val Gly Ala Ala Ala
770                 775                 780
Ala Gly Glu Val Gly Ala Gly Val Ala Ala Gly Gly Ala Ala Ala Gly
785                 790                 795                 800
Ala Ala Ala Gly Gly Ser Lys Leu Ala Gly Val Gly Lys Gly Phe Met
805                 810                 815
Lys Gly Ala Gly Lys Leu Met Leu Pro Leu Gly Ile Leu Met Gly Ala
820                 825                 830
Ser Glu Ile Met Gln Ala Pro Glu Glu Ala Lys Gly Ser Ala Ile Gly
835                 840                 845
Ser Ala Val Gly Gly Ile Gly Gly Gly Ile Ala Gly Gly Ala Ala Thr
850                 855                 860
Gly Ala Ile Ala Gly Ser Phe Leu Gly Pro Ile Gly Thr Ala Val Gly
865                 870                 875                 880
Gly Ile Ala Gly Gly Ile Ala Gly Gly Phe Ala Gly Ser Ser Leu Gly
885                 890                 895
Glu Thr Ile Gly Gly Trp Phe Asp Ser Gly Pro Lys Glu Asp Ala Ser
900                 905                 910
Ala Ala Asp Lys Ala Lys Ala Asp Ala Ser Ala Ala Ala Leu Ala Ala
915                 920                 925
Ala Ala Gly Thr Ser Gly Ala Val Gly Ser Ser Ala Leu Gln Ser Gln
930                 935                 940
Met Ala Gln Gly Ile Thr Gly Ala Pro Asn Met Ser Gln Val Gly Ser
945                 950                 955                 960
Met Ala Ser Ala Leu Gly Ile Ser Ser Gly Ala Met Ala Ser Ala Leu
965                 970                 975
Gly Ile Ser Ser Gly Gln Glu Asn Gln Ile Gln Thr Met Thr Asp Lys
980                 985                 990
Glu Asn Thr Asn Thr Lys Lys Ala  Asn Glu Ala Lys Lys  Gly Asp Asn
995                 1000                 1005
Leu Ser  Tyr Glu Arg Glu Asn  Ile Ser Met Tyr Glu  Arg Val Leu
1010                 1015                 1020
Thr Arg  Ala Glu Gln Ile Leu  Ala Gln Ala Arg Ala  Gln Asn Gly
1025                 1030                 1035
Ile Met  Gly Val Gly Gly Gly  Gly Thr Ala Gly Ala  Gly Gly Gly
1040                 1045                 1050
Ile Asn  Gly Phe Thr Gly Gly  Gly Lys Leu Gln Phe  Leu Ala Ala
1055                 1060                 1065
Gly Gln  Lys Trp Ser Ser Ser  Asn Leu Gln Gln His  Asp Leu Gly
1070                 1075                 1080
Phe Thr  Asp Gln Asn Leu Thr  Ala Glu Asp Leu Asp  Lys Trp Ile
1085                 1090                 1095
Asp Ser  Lys Ala Pro Gln Gly  Ser Met Met Arg Gly  Met Gly Ala
1100                 1105                 1110
Thr Phe  Leu Lys Ala Gly Gln  Glu Tyr Gly Leu Asp  Pro Arg Tyr
1115                 1120                 1125
Leu Ile  Ala His Ala Ala Glu  Glu Ser Gly Trp Gly  Thr Ser Lys
1130                 1135                 1140
Ile Ala  Arg Asp Lys Gly Asn  Phe Phe Gly Ile Gly  Ala Phe Asp
1145                 1150                 1155
Asp Ser  Pro Tyr Ser Ser Ala  Tyr Glu Phe Lys Asp  Gly Thr Gly
1160                 1165                 1170
Ser Ala  Ala Glu Arg Gly Ile  Met Gly Gly Ala Lys  Trp Ile Ser
1175                 1180                 1185
Glu Lys  Tyr Tyr Gly Lys Gly  Asn Thr Thr Leu Asp  Lys Met Lys
1190                 1195                 1200
Ala Ala  Gly Tyr Ala Thr Asn  Ala Ser Trp Ala Pro  Asn Ile Ala
1205                 1210                 1215
Ser Ile  Met Ala Gly Ala Pro  Thr Gly Ser Gly Ser  Gly Asn Val
1220                 1225                 1230
Thr Ala  Thr Ile Asn Val Asn  Val Lys Gly Asp Glu  Lys Val Ser
1235                 1240                 1245
Asp Lys  Leu Lys Asn Ser Ser  Asp Met Lys Lys Ala  Gly Lys Asp
1250                 1255                 1260
Ile Gly  Ser Leu Leu Gly Phe  Tyr Ser Arg Glu Met  Thr Ile Ala
1265                 1270                 1275
<210>  70
<211>  495
<212>  БЕЛОК
<213>  (Phi)GH15
<400>  70
Met Ala Lys Thr Gln Ala Glu Ile Asn Lys Arg Leu Asp Ala Tyr Ala
1               5                   10                  15
Lys Gly Thr Val Asp Ser Pro Tyr Arg Ile Lys Lys Ala Thr Ser Tyr
20                  25                  30
Asp Pro Ser Phe Gly Val Met Glu Ala Gly Ala Ile Asp Ala Asp Gly
35                  40                  45
Tyr Tyr His Ala Gln Cys Gln Asp Leu Ile Thr Asp Tyr Val Leu Trp
50                  55                  60
Leu Thr Asp Asn Lys Val Arg Thr Trp Gly Asn Ala Lys Asp Gln Ile
65                  70                  75                  80
Lys Gln Ser Tyr Gly Thr Gly Phe Lys Ile His Glu Asn Lys Pro Ser
85                  90                  95
Thr Val Pro Lys Lys Gly Trp Ile Ala Val Phe Thr Ser Gly Ser Tyr
100                 105                 110
Gln Gln Trp Gly His Ile Gly Ile Val Tyr Asp Gly Gly Asn Thr Ser
115                 120                 125
Thr Phe Thr Ile Leu Glu Gln Asn Trp Asn Gly Tyr Ala Asn Lys Lys
130                 135                 140
Pro Thr Lys Arg Val Asp Asn Tyr Tyr Gly Leu Thr His Phe Ile Glu
145                 150                 155                 160
Ile Pro Val Lys Ala Gly Thr Thr Val Lys Lys Glu Thr Ala Lys Lys
165                 170                 175
Ser Ala Ser Lys Thr Pro Ala Pro Lys Lys Lys Ala Thr Leu Lys Val
180                 185                 190
Ser Lys Asn His Ile Asn Tyr Thr Met Asp Lys Arg Gly Lys Lys Pro
195                 200                 205
Glu Gly Met Val Ile His Asn Asp Ala Gly Arg Ser Ser Gly Gln Gln
210                 215                 220
Tyr Glu Asn Ser Leu Ala Asn Ala Gly Tyr Ala Arg Tyr Ala Asn Gly
225                 230                 235                 240
Ile Ala His Tyr Tyr Gly Ser Glu Gly Tyr Val Trp Glu Ala Ile Asp
245                 250                 255
Ala Lys Asn Gln Ile Ala Trp His Thr Gly Asp Gly Thr Gly Ala Asn
260                 265                 270
Ser Gly Asn Phe Arg Phe Ala Gly Ile Glu Val Cys Gln Ser Met Ser
275                 280                 285
Ala Ser Asp Ala Gln Phe Leu Lys Asn Glu Gln Ala Val Phe Gln Phe
290                 295                 300
Thr Ala Glu Lys Phe Lys Glu Trp Gly Leu Thr Pro Asn Arg Lys Thr
305                 310                 315                 320
Val Arg Leu His Met Glu Phe Val Pro Thr Ala Cys Pro His Arg Ser
325                 330                 335
Met Val Leu His Thr Gly Phe Asn Pro Val Thr Gln Gly Arg Pro Ser
340                 345                 350
Gln Ala Ile Met Asn Lys Leu Lys Asp Tyr Phe Ile Lys Gln Ile Lys
355                 360                 365
Asn Tyr Met Asp Lys Gly Thr Ser Ser Ser Thr Val Val Lys Asp Gly
370                 375                 380
Lys Thr Ser Ser Ala Ser Thr Pro Ala Thr Arg Pro Val Thr Gly Ser
385                 390                 395                 400
Trp Lys Lys Asn Gln Tyr Gly Thr Trp Tyr Lys Pro Glu Asn Ala Thr
405                 410                 415
Phe Val Asn Gly Asn Gln Pro Ile Val Thr Arg Ile Gly Ser Pro Phe
420                 425                 430
Leu Asn Ala Pro Val Gly Gly Asn Leu Pro Ala Gly Ala Thr Ile Val
435                 440                 445
Tyr Asp Glu Val Cys Ile Gln Ala Gly His Ile Trp Ile Gly Tyr Asn
450                 455                 460
Ala Tyr Asn Gly Asp Arg Val Tyr Cys Pro Val Arg Thr Cys Gln Gly
465                 470                 475                 480
Val Pro Pro Asn His Ile Pro Gly Val Ala Trp Gly Val Phe Lys
485                 490                 495
<210>  71
<211>  264
<212>  БЕЛОК
<213>  (Phi)8074-B1
<400>  71
Met Lys Ile Gly Ile Asp Met Gly His Thr Leu Ser Gly Ala Asp Tyr
1               5                   10                  15
Gly Val Val Gly Leu Arg Pro Glu Ser Val Leu Thr Arg Glu Val Gly
20                  25                  30
Thr Lys Val Ile Tyr Lys Leu Gln Lys Leu Gly His Val Val Val Asn
35                  40                  45
Cys Thr Val Asp Lys Ala Ser Ser Val Ser Glu Ser Leu Tyr Thr Arg
50                  55                  60
Tyr Tyr Arg Ala Asn Gln Ala Asn Val Asp Leu Phe Ile Ser Ile His
65                  70                  75                  80
Phe Asn Ala Thr Pro Gly Gly Thr Gly Thr Glu Val Tyr Thr Tyr Ala
85                  90                  95
Gly Arg Gln Leu Gly Glu Ala Thr Arg Ile Arg Gln Glu Phe Lys Ser
100                 105                 110
Leu Gly Leu Arg Asp Arg Gly Thr Lys Asp Gly Ser Gly Leu Ala Val
115                 120                 125
Ile Arg Asn Thr Lys Ala Lys Ala Met Leu Val Glu Cys Cys Phe Cys
130                 135                 140
Asp Asn Pro Asn Asp Met Lys Leu Tyr Asn Ser Glu Ser Phe Ser Asn
145                 150                 155                 160
Ala Ile Val Lys Gly Ile Thr Gly Lys Leu Pro Asn Gly Glu Ser Gly
165                 170                 175
Asn Asn Asn Gln Gly Gly Asn Lys Val Lys Ala Val Val Ile Tyr Asn
180                 185                 190
Glu Gly Ala Asp Arg Arg Gly Ala Glu Tyr Leu Ala Asp Tyr Leu Asn
195                 200                 205
Cys Pro Thr Ile Ser Asn Ser Arg Thr Phe Asp Tyr Ser Cys Val Glu
210                 215                 220
His Val Tyr Ala Val Gly Gly Lys Lys Glu Gln Tyr Thr Lys Tyr Leu
225                 230                 235                 240
Lys Thr Leu Leu Ser Gly Ala Asn Arg Tyr Asp Thr Met Gln Gln Ile
245                 250                 255
Leu Asn Phe Ile Asn Gly Gly Lys
260
<210>  72
<211>  209
<212>  БЕЛОК
<213>  (Phi)SPN1S
<400>  72
Met Asp Ile Asn Gln Phe Arg Arg Ala Ser Gly Ile Asn Glu Gln Leu
1               5                   10                  15
Ala Ala Arg Trp Phe Pro His Ile Thr Thr Ala Met Asn Glu Phe Gly
20                  25                  30
Ile Thr Lys Pro Asp Asp Gln Ala Met Phe Ile Ala Gln Val Gly His
35                  40                  45
Glu Ser Gly Gly Phe Thr Arg Leu Gln Glu Asn Phe Asn Tyr Ser Val
50                  55                  60
Asn Gly Leu Ser Gly Phe Ile Arg Ala Gly Arg Ile Thr Pro Asp Gln
65                  70                  75                  80
Ala Asn Ala Leu Gly Arg Lys Thr Tyr Glu Lys Ser Leu Pro Leu Glu
85                  90                  95
Arg Gln Arg Ala Ile Ala Asn Leu Val Tyr Ser Lys Arg Met Gly Asn
100                 105                 110
Asn Gly Pro Gly Asp Gly Trp Asn Tyr Arg Gly Arg Gly Leu Ile Gln
115                 120                 125
Ile Thr Gly Leu Asn Asn Tyr Arg Asp Cys Gly Asn Gly Leu Lys Val
130                 135                 140
Asp Leu Val Ala Gln Pro Glu Leu Leu Ala Gln Asp Glu Tyr Ala Ala
145                 150                 155                 160
Arg Ser Ala Ala Trp Phe Phe Ser Ser Lys Gly Cys Met Lys Tyr Thr
165                 170                 175
Gly Asp Leu Val Arg Val Thr Gln Ile Ile Asn Gly Gly Gln Asn Gly
180                 185                 190
Ile Asp Asp Arg Arg Thr Arg Tyr Ala Ala Ala Arg Lys Val Leu Ala
195                 200                 205
Leu
<210>  73
<211>  290
<212>  БЕЛОК
<213>  (Phi)CN77
<400>  73
Met Gly Tyr Trp Gly Tyr Pro Asn Gly Gln Ile Pro Asn Asp Lys Met
1               5                   10                  15
Ala Leu Tyr Arg Gly Cys Leu Leu Arg Ala Asp Ala Ala Ala Gln Ala
20                  25                  30
Tyr Ala Leu Gln Asp Ala Tyr Thr Arg Ala Thr Gly Lys Pro Leu Val
35                  40                  45
Ile Leu Glu Gly Tyr Arg Asp Leu Thr Arg Gln Lys Tyr Leu Arg Asn
50                  55                  60
Leu Tyr Leu Ser Gly Arg Gly Asn Ile Ala Ala Val Pro Gly Leu Ser
65                  70                  75                  80
Asn His Gly Trp Gly Leu Ala Cys Asp Phe Ala Ala Pro Leu Asn Ser
85                  90                  95
Ser Gly Ser Glu Glu His Arg Trp Met Arg Gln Asn Ala Pro Leu Phe
100                 105                 110
Gly Phe Asp Trp Ala Arg Gly Lys Ala Asp Asn Glu Pro Trp His Trp
115                 120                 125
Glu Tyr Gly Asn Val Pro Val Ser Arg Trp Ala Ser Leu Asp Val Thr
130                 135                 140
Pro Ile Asp Arg Asn Asp Met Ala Asp Ile Thr Glu Gly Gln Met Gln
145                 150                 155                 160
Arg Ile Ala Val Ile Leu Leu Asp Thr Glu Ile Gln Thr Pro Leu Gly
165                 170                 175
Pro Arg Leu Val Lys His Ala Leu Gly Asp Ala Leu Leu Leu Gly Gln
180                 185                 190
Ala Asn Ala Asn Ser Ile Ala Glu Val Pro Asp Lys Thr Trp Asp Val
195                 200                 205
Leu Val Asp His Pro Leu Ala Lys Asn Glu Asp Gly Thr Pro Leu Lys
210                 215                 220
Val Arg Leu Gly Asp Val Ala Lys Tyr Glu Pro Leu Glu His Gln Asn
225                 230                 235                 240
Thr Arg Asp Ala Ile Ala Lys Leu Gly Thr Leu Gln Phe Thr Asp Lys
245                 250                 255
Gln Leu Ala Thr Ile Gly Ala Gly Val Lys Pro Ile Asp Glu Ala Ser
260                 265                 270
Leu Val Lys Lys Ile Val Asp Gly Val Arg Ala Leu Phe Gly Arg Ala
275                 280                 285
Ala Ala
290
<210>  74
<211>  185
<212>  БЕЛОК
<213>  (Phi)AB2
<400>  74
Met Ile Leu Thr Lys Asp Gly Phe Ser Ile Ile Arg Asn Glu Leu Phe
1               5                   10                  15
Gly Gly Lys Leu Asp Gln Thr Gln Val Asp Ala Ile Asn Phe Ile Val
20                  25                  30
Ala Lys Ala Thr Glu Ser Gly Leu Thr Tyr Pro Glu Ala Ala Tyr Leu
35                  40                  45
Leu Ala Thr Ile Tyr His Glu Thr Gly Leu Pro Ser Gly Tyr Arg Thr
50                  55                  60
Met Gln Pro Ile Lys Glu Ala Gly Ser Asp Ser Tyr Leu Arg Ser Lys
65                  70                  75                  80
Lys Tyr Tyr Pro Tyr Ile Gly Tyr Gly Tyr Val Gln Leu Thr Trp Lys
85                  90                  95
Glu Asn Tyr Glu Arg Ile Gly Lys Leu Ile Gly Val Asp Leu Ile Lys
100                 105                 110
Asn Pro Glu Lys Ala Leu Glu Pro Leu Ile Ala Ile Gln Ile Ala Ile
115                 120                 125
Lys Gly Met Leu Asn Gly Trp Phe Thr Gly Val Gly Phe Arg Arg Lys
130                 135                 140
Arg Pro Val Ser Lys Tyr Asn Lys Gln Gln Tyr Val Ala Ala Arg Asn
145                 150                 155                 160
Ile Ile Asn Gly Lys Asp Lys Ala Glu Leu Ile Ala Lys Tyr Ala Ile
165                 170                 175
Ile Phe Glu Arg Ala Leu Arg Ser Leu
180                 185
<210>  75
<211>  262
<212>  БЕЛОК
<213>  (Phi)B4
<400>  75
Met Ala Met Ala Leu Gln Thr Leu Ile Asp Lys Ala Asn Arg Lys Leu
1               5                   10                  15
Asn Val Ser Gly Met Arg Lys Asp Val Ala Asp Arg Thr Arg Ala Val
20                  25                  30
Ile Thr Gln Met His Ala Gln Gly Ile Tyr Ile Cys Val Ala Gln Gly
35                  40                  45
Phe Arg Ser Phe Ala Glu Gln Asn Ala Leu Tyr Ala Gln Gly Arg Thr
50                  55                  60
Lys Pro Gly Ser Ile Val Thr Asn Ala Arg Gly Gly Gln Ser Asn His
65                  70                  75                  80
Asn Tyr Gly Val Ala Val Asp Leu Cys Leu Tyr Thr Gln Asp Gly Ser
85                  90                  95
Asp Val Ile Trp Thr Val Glu Gly Asn Phe Arg Lys Val Ile Ala Ala
100                 105                 110
Met Lys Ala Gln Gly Phe Lys Trp Gly Gly Asp Trp Val Ser Phe Lys
115                 120                 125
Asp Tyr Pro His Phe Glu Leu Tyr Asp Val Val Gly Gly Gln Lys Pro
130                 135                 140
Pro Ala Asp Asn Gly Gly Ala Val Asp Asn Gly Gly Gly Ser Gly Ser
145                 150                 155                 160
Thr Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Thr Gly Gly Gly Ser Thr Gly Gly
165                 170                 175
Gly Tyr Asp Ser Ser Trp Phe Thr Lys Glu Thr Gly Thr Phe Val Thr
180                 185                 190
Asn Thr Ser Ile Lys Leu Arg Thr Ala Pro Phe Thr Ser Ala Asp Val
195                 200                 205
Ile Ala Thr Leu Pro Ala Gly Ser Pro Val Asn Tyr Asn Gly Phe Gly
210                 215                 220
Ile Glu Tyr Asp Gly Tyr Val Trp Ile Arg Gln Pro Arg Ser Asn Gly
225                 230                 235                 240
Tyr Gly Tyr Leu Ala Thr Gly Glu Ser Lys Gly Gly Lys Arg Gln Asn
245                 250                 255
Tyr Trp Gly Thr Phe Lys
260
<210>  76
<211>  274
<212>  БЕЛОК
<213>  (Phi)CTP1
<400>  76
Met Lys Lys Ile Ala Asp Ile Ser Asn Leu Asn Gly Asn Val Asp Val
1               5                   10                  15
Lys Leu Leu Phe Asn Leu Gly Tyr Ile Gly Ile Ile Ala Lys Ala Ser
20                  25                  30
Glu Gly Gly Thr Phe Val Asp Lys Tyr Tyr Lys Gln Asn Tyr Thr Asn
35                  40                  45
Thr Lys Ala Gln Gly Lys Ile Thr Gly Ala Tyr His Phe Ala Asn Phe
50                  55                  60
Ser Thr Ile Ala Lys Ala Gln Gln Glu Ala Asn Phe Phe Leu Asn Cys
65                  70                  75                  80
Ile Ala Gly Thr Thr Pro Asp Phe Val Val Leu Asp Leu Glu Gln Gln
85                  90                  95
Cys Thr Gly Asp Ile Thr Asp Ala Cys Leu Ala Phe Leu Asn Ile Val
100                 105                 110
Ala Lys Lys Phe Lys Cys Val Val Tyr Cys Asn Ser Ser Phe Ile Lys
115                 120                 125
Glu His Leu Asn Ser Lys Ile Cys Ala Tyr Pro Leu Trp Ile Ala Asn
130                 135                 140
Tyr Gly Val Ala Thr Pro Ala Phe Thr Leu Trp Thr Lys Tyr Ala Met
145                 150                 155                 160
Trp Gln Phe Thr Glu Lys Gly Gln Val Ser Gly Ile Ser Gly Tyr Ile
165                 170                 175
Asp Phe Ser Tyr Ile Thr Asp Glu Phe Ile Lys Tyr Ile Lys Gly Glu
180                 185                 190
Asp Glu Val Glu Asn Leu Val Val Tyr Asn Asp Gly Ala Asp Gln Arg
195                 200                 205
Ala Ala Glu Tyr Leu Ala Asp Arg Leu Ala Cys Pro Thr Ile Asn Asn
210                 215                 220
Ala Arg Lys Phe Asp Tyr Ser Asn Val Lys Asn Val Tyr Ala Val Gly
225                 230                 235                 240
Gly Asn Lys Glu Gln Tyr Thr Ser Tyr Leu Thr Thr Leu Ile Ala Gly
245                 250                 255
Ser Thr Arg Tyr Thr Thr Met Gln Ala Val Leu Asp Tyr Ile Lys Asn
260                 265                 270
Leu Lys
<210>  77
<211>  628
<212>  БЕЛОК
<213>  Вирус стафилококков 187
<400>  77
Met Ala Leu Pro Lys Thr Gly Lys Pro Thr Ala Lys Gln Val Val Asp
1               5                   10                  15
Trp Ala Ile Asn Leu Ile Gly Ser Gly Val Asp Val Asp Gly Tyr Tyr
20                  25                  30
Gly Arg Gln Cys Trp Asp Leu Pro Asn Tyr Ile Phe Asn Arg Tyr Trp
35                  40                  45
Asn Phe Lys Thr Pro Gly Asn Ala Arg Asp Met Ala Trp Tyr Arg Tyr
50                  55                  60
Pro Glu Gly Phe Lys Val Phe Arg Asn Thr Ser Asp Phe Val Pro Lys
65                  70                  75                  80
Pro Gly Asp Ile Ala Val Trp Thr Gly Gly Asn Tyr Asn Trp Asn Thr
85                  90                  95
Trp Gly His Thr Gly Ile Val Val Gly Pro Ser Thr Lys Ser Tyr Phe
100                 105                 110
Tyr Ser Val Asp Gln Asn Trp Asn Asn Ser Asn Ser Tyr Val Gly Ser
115                 120                 125
Pro Ala Ala Lys Ile Lys His Ser Tyr Phe Gly Val Thr His Phe Val
130                 135                 140
Arg Pro Ala Tyr Lys Ala Glu Pro Lys Pro Thr Pro Pro Ala Gln Asn
145                 150                 155                 160
Asn Pro Ala Pro Lys Asp Pro Glu Pro Ser Lys Lys Pro Glu Ser Asn
165                 170                 175
Lys Pro Ile Tyr Lys Val Val Thr Lys Ile Leu Phe Thr Thr Ala His
180                 185                 190
Ile Glu His Val Lys Ala Asn Arg Phe Val His Tyr Ile Thr Lys Ser
195                 200                 205
Asp Asn His Asn Asn Lys Pro Asn Lys Ile Val Ile Lys Asn Thr Asn
210                 215                 220
Thr Ala Leu Ser Thr Ile Asp Val Tyr Arg Tyr Arg Asp Glu Leu Asp
225                 230                 235                 240
Lys Asp Glu Ile Pro His Phe Phe Val Asp Arg Leu Asn Val Trp Ala
245                 250                 255
Cys Arg Pro Ile Glu Asp Ser Ile Asn Gly Tyr His Asp Ser Val Val
260                 265                 270
Leu Ser Ile Thr Glu Thr Arg Thr Ala Leu Ser Asp Asn Phe Lys Met
275                 280                 285
Asn Glu Ile Glu Cys Leu Ser Leu Ala Glu Ser Ile Leu Lys Ala Asn
290                 295                 300
Asn Lys Lys Met Ser Ala Ser Asn Ile Ile Val Asp Asn Lys Ala Trp
305                 310                 315                 320
Arg Thr Phe Lys Leu His Thr Gly Lys Asp Ser Leu Lys Ser Ser Ser
325                 330                 335
Phe Thr Ser Lys Asp Tyr Gln Lys Ala Val Asn Glu Leu Ile Lys Leu
340                 345                 350
Phe Asn Asp Lys Asp Lys Leu Leu Asn Asn Lys Pro Lys Asp Val Val
355                 360                 365
Glu Arg Ile Arg Ile Arg Thr Ile Val Lys Glu Asn Thr Lys Phe Val
370                 375                 380
Pro Ser Glu Leu Lys Pro Arg Asn Asn Ile Arg Asp Lys Gln Asp Ser
385                 390                 395                 400
Lys Ile Asp Arg Val Ile Asn Asn Tyr Thr Leu Lys Gln Ala Leu Asn
405                 410                 415
Ile Gln Tyr Lys Leu Asn Pro Lys Pro Gln Thr Ser Asn Gly Val Ser
420                 425                 430
Trp Tyr Asn Ala Ser Val Asn Gln Ile Lys Ser Ala Met Asp Thr Thr
435                 440                 445
Lys Ile Phe Asn Asn Asn Val Gln Val Tyr Gln Phe Leu Lys Leu Asn
450                 455                 460
Gln Tyr Gln Gly Ile Pro Val Asp Lys Leu Asn Lys Leu Leu Val Gly
465                 470                 475                 480
Lys Gly Thr Leu Ala Asn Gln Gly His Ala Phe Ala Asp Gly Cys Lys
485                 490                 495
Lys Tyr Asn Ile Asn Glu Ile Tyr Leu Ile Ala His Arg Phe Leu Glu
500                 505                 510
Ser Ala Asn Gly Thr Ser Phe Phe Ala Ser Gly Lys Thr Gly Val Tyr
515                 520                 525
Asn Tyr Phe Gly Ile Gly Ala Phe Asp Asn Asn Pro Asn Asn Ala Met
530                 535                 540
Ala Phe Ala Arg Ser His Gly Trp Thr Ser Pro Thr Lys Ala Ile Ile
545                 550                 555                 560
Gly Gly Ala Glu Phe Val Gly Lys Gly Tyr Phe Asn Val Gly Gln Asn
565                 570                 575
Thr Leu Tyr Arg Met Arg Trp Asn Pro Gln Lys Pro Gly Thr His Gln
580                 585                 590
Tyr Ala Thr Asp Ile Ser Trp Ala Lys Val Gln Ala Gln Met Ile Ser
595                 600                 605
Ala Met Tyr Lys Glu Ile Gly Leu Thr Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Asp
610                 615                 620
Gln Tyr Lys Lys
625
<210>  78
<211>  291
<212>  БЕЛОК
<213>  (Phi)P35
<400>  78
Met Ala Arg Lys Phe Thr Lys Ala Glu Leu Val Ala Lys Ala Glu Lys
1               5                   10                  15
Lys Val Gly Gly Leu Lys Pro Asp Val Lys Lys Ala Val Leu Ser Ala
20                  25                  30
Val Lys Glu Ala Tyr Asp Arg Tyr Gly Ile Gly Ile Ile Val Ser Gln
35                  40                  45
Gly Tyr Arg Ser Ile Ala Glu Gln Asn Gly Leu Tyr Ala Gln Gly Arg
50                  55                  60
Thr Lys Pro Gly Asn Ile Val Thr Asn Ala Lys Gly Gly Gln Ser Asn
65                  70                  75                  80
His Asn Phe Gly Val Ala Val Asp Phe Ala Ile Asp Leu Ile Asp Asp
85                  90                  95
Gly Lys Ile Asp Ser Trp Gln Pro Ser Ala Thr Ile Val Asn Met Met
100                 105                 110
Lys Arg Arg Gly Phe Lys Trp Gly Gly Asp Trp Lys Ser Phe Thr Asp
115                 120                 125
Leu Pro His Phe Glu Ala Cys Asp Trp Tyr Arg Gly Glu Arg Lys Tyr
130                 135                 140
Lys Val Asp Thr Ser Glu Trp Lys Lys Lys Glu Asn Ile Asn Ile Val
145                 150                 155                 160
Ile Lys Asp Val Gly Tyr Phe Gln Asp Lys Pro Gln Phe Leu Asn Ser
165                 170                 175
Lys Ser Val Arg Gln Trp Lys His Gly Thr Lys Val Lys Leu Thr Lys
180                 185                 190
His Asn Ser His Trp Tyr Thr Gly Val Val Lys Asp Gly Asn Lys Ser
195                 200                 205
Val Arg Gly Tyr Ile Tyr His Ser Met Ala Lys Val Thr Ser Lys Asn
210                 215                 220
Ser Asp Gly Ser Val Asn Ala Thr Ile Asn Ala His Ala Phe Cys Trp
225                 230                 235                 240
Asp Asn Lys Lys Leu Asn Gly Gly Asp Phe Ile Asn Leu Lys Arg Gly
245                 250                 255
Phe Lys Gly Ile Thr His Pro Ala Ser Asp Gly Phe Tyr Pro Leu Tyr
260                 265                 270
Phe Ala Ser Arg Lys Lys Thr Phe Tyr Ile Pro Arg Tyr Met Phe Asp
275                 280                 285
Ile Lys Lys
290
<210>  79
<211>  342
<212>  БЕЛОК
<213>  (Phi)CP-7
<400>  79
Met Val Lys Lys Asn Asp Leu Phe Val Asp Val Ala Ser His Gln Gly
1               5                   10                  15
Tyr Asp Ile Ser Gly Ile Leu Glu Glu Ala Gly Thr Thr Asn Thr Ile
20                  25                  30
Ile Lys Val Ser Glu Ser Thr Ser Tyr Leu Asn Pro Cys Leu Ser Ala
35                  40                  45
Gln Val Ser Gln Ser Asn Pro Ile Gly Phe Tyr His Phe Ala Trp Phe
50                  55                  60
Gly Gly Asn Glu Glu Glu Ala Glu Ala Glu Ala Arg Tyr Phe Leu Asp
65                  70                  75                  80
Asn Val Pro Thr Gln Val Lys Tyr Leu Val Leu Asp Tyr Glu Asp His
85                  90                  95
Ala Ser Ala Ser Val Gln Arg Asn Thr Thr Ala Cys Leu Arg Phe Met
100                 105                 110
Gln Ile Ile Ala Glu Ala Gly Tyr Thr Pro Ile Tyr Tyr Ser Tyr Lys
115                 120                 125
Pro Phe Thr Leu Asp Asn Val Asp Tyr Gln Gln Ile Leu Ala Gln Phe
130                 135                 140
Pro Asn Ser Leu Trp Ile Ala Gly Tyr Gly Leu Asn Asp Gly Thr Ala
145                 150                 155                 160
Asn Phe Glu Tyr Phe Pro Ser Met Asp Gly Ile Arg Trp Trp Gln Tyr
165                 170                 175
Ser Ser Asn Pro Phe Asp Lys Asn Ile Val Leu Leu Asp Asp Glu Lys
180                 185                 190
Glu Asp Asn Ile Asn Asn Glu Asn Thr Leu Lys Ser Leu Thr Thr Val
195                 200                 205
Ala Asn Glu Val Ile Gln Gly Leu Trp Gly Asn Gly Gln Glu Arg Tyr
210                 215                 220
Asp Ser Leu Ala Asn Ala Gly Tyr Asp Pro Gln Ala Val Gln Asp Lys
225                 230                 235                 240
Val Asn Glu Ile Leu Asn Ala Arg Glu Ile Ala Asp Leu Thr Thr Val
245                 250                 255
Ala Asn Glu Val Ile Gln Gly Leu Trp Gly Asn Gly Gln Glu Arg Tyr
260                 265                 270
Asp Ser Leu Ala Asn Ala Gly Tyr Asp Pro Gln Ala Val Gln Asp Lys
275                 280                 285
Val Asn Glu Ile Leu Asn Ala Arg Glu Ile Ala Asp Leu Thr Thr Val
290                 295                 300
Ala Asn Glu Val Ile Gln Gly Leu Trp Gly Asn Gly Gln Glu Arg Tyr
305                 310                 315                 320
Asp Ser Leu Ala Asn Ala Gly Tyr Asp Pro Gln Ala Val Gln Asp Lys
325                 330                 335
Val Asn Glu Leu Leu Ser
340
<210>  80
<211>  328
<212>  БЕЛОК
<213>  (Phi)EFAP-1
<400>  80
Met Lys Leu Lys Gly Ile Leu Leu Ser Val Val Thr Thr Phe Gly Leu
1               5                   10                  15
Leu Phe Gly Ala Thr Asn Val Gln Ala Tyr Glu Val Asn Asn Glu Phe
20                  25                  30
Asn Leu Gln Pro Trp Glu Gly Ser Gln Gln Leu Ala Tyr Pro Asn Lys
35                  40                  45
Ile Ile Leu His Glu Thr Ala Asn Pro Arg Ala Thr Gly Arg Asn Glu
50                  55                  60
Ala Thr Tyr Met Lys Asn Asn Trp Phe Asn Ala His Thr Thr Ala Ile
65                  70                  75                  80
Val Gly Asp Gly Gly Ile Val Tyr Lys Val Ala Pro Glu Gly Asn Val
85                  90                  95
Ser Trp Gly Ala Gly Asn Ala Asn Pro Tyr Ala Pro Val Gln Ile Glu
100                 105                 110
Leu Gln His Thr Asn Asp Pro Glu Leu Phe Lys Ala Asn Tyr Lys Ala
115                 120                 125
Tyr Val Asp Tyr Thr Arg Asp Met Gly Lys Lys Phe Gly Ile Pro Met
130                 135                 140
Thr Leu Asp Gln Gly Gly Ser Leu Trp Glu Lys Gly Val Val Ser His
145                 150                 155                 160
Gln Trp Val Thr Asp Phe Val Trp Gly Asp His Thr Asp Pro Tyr Gly
165                 170                 175
Tyr Leu Ala Lys Met Gly Ile Ser Lys Ala Gln Leu Ala His Asp Leu
180                 185                 190
Ala Asn Gly Val Ser Gly Asn Thr Ala Thr Pro Thr Pro Lys Pro Asp
195                 200                 205
Lys Pro Lys Pro Thr Gln Pro Ser Lys Pro Ser Asn Lys Lys Arg Phe
210                 215                 220
Asn Tyr Arg Val Asp Gly Leu Glu Tyr Val Asn Gly Met Trp Gln Ile
225                 230                 235                 240
Tyr Asn Glu His Leu Gly Lys Ile Asp Phe Asn Trp Thr Glu Asn Gly
245                 250                 255
Ile Pro Val Glu Val Val Asp Lys Val Asn Pro Ala Thr Gly Gln Pro
260                 265                 270
Thr Lys Asp Gln Val Leu Lys Val Gly Asp Tyr Phe Asn Phe Gln Glu
275                 280                 285
Asn Ser Thr Gly Val Val Gln Glu Gln Thr Pro Tyr Met Gly Tyr Thr
290                 295                 300
Leu Ser His Val Gln Leu Pro Asn Glu Phe Ile Trp Leu Phe Thr Asp
305                 310                 315                 320
Ser Lys Gln Ala Leu Met Tyr Gln
325
<210>  81
<211>  48
<212>  БЕЛОК
<213>  Homo sapiens
<400>  81
Ser Ser Leu Leu Glu Lys Gly Leu Asp Gly Ala Lys Lys Ala Val Gly
1               5                   10                  15
Gly Leu Gly Lys Leu Gly Lys Asp Ala Val Glu Asp Leu Glu Ser Val
20                  25                  30
Gly Lys Gly Ala Val His Asp Val Lys Asp Val Leu Asp Ser Val Leu
35                  40                  45
<210>  82
<211>  37
<212>  БЕЛОК
<213>  Hyalophora cecropia
<400>  82
Lys Trp Lys Leu Phe Lys Lys Ile Glu Lys Val Gly Gln Asn Ile Arg
1               5                   10                  15
Asp Gly Ile Ile Lys Ala Gly Pro Ala Val Ala Val Val Gly Gln Ala
20                  25                  30
Thr Gln Ile Ala Lys
35
<210>  83
<211>  62
<212>  БЕЛОК
<213>  Drosophila teissieri
<400>  83
Met Lys Tyr Phe Ser Val Leu Val Val Leu Thr Leu Ile Leu Ala Ile
1               5                   10                  15
Val Asp Gln Ser Asp Ala Phe Ile Asn Leu Leu Asp Lys Val Glu Asp
20                  25                  30
Ala Leu His Thr Gly Ala Gln Ala Gly Phe Lys Leu Ile Arg Pro Val
35                  40                  45
Glu Arg Gly Ala Thr Pro Lys Lys Ser Glu Lys Pro Glu Lys
50                  55                  60
<210>  84
<211>  66
<212>  БЕЛОК
<213>  Bombyx mori
<400>  84
Met Asn Ile Leu Lys Phe Phe Phe Val Phe Ile Val Ala Met Ser Leu
1               5                   10                  15
Val Ser Cys Ser Thr Ala Ala Pro Ala Lys Ile Pro Ile Lys Ala Ile
20                  25                  30
Lys Thr Val Gly Lys Ala Val Gly Lys Gly Leu Arg Ala Ile Asn Ile
35                  40                  45
Ala Ser Thr Ala Asn Asp Val Phe Asn Phe Leu Lys Pro Lys Lys Arg
50                  55                  60
Lys His
65
<210>  85
<211>  71
<212>  БЕЛОК
<213>  Ceratitis capitata
<400>  85
Met Ala Asn Leu Lys Ala Val Phe Leu Ile Cys Ile Val Ala Phe Ile
1               5                   10                  15
Ala Leu Gln Cys Val Val Ala Glu Pro Ala Ala Glu Asp Ser Val Val
20                  25                  30
Val Lys Arg Ser Ile Gly Ser Ala Leu Lys Lys Ala Leu Pro Val Ala
35                  40                  45
Lys Lys Ile Gly Lys Ile Ala Leu Pro Ile Ala Lys Ala Ala Leu Pro
50                  55                  60
Val Ala Ala Gly Leu Val Gly
65                  70
<210>  86
<211>  53
<212>  БЕЛОК
<213>  Apis mellifera
<400>  86
Met Lys Val Val Ile Phe Ile Phe Ala Leu Leu Ala Thr Ile Cys Ala
1               5                   10                  15
Ala Phe Ala Tyr Val Pro Leu Pro Asn Val Pro Gln Pro Gly Arg Arg
20                  25                  30
Pro Phe Pro Thr Phe Pro Gly Gln Gly Pro Phe Asn Pro Lys Ile Lys
35                  40                  45
Trp Pro Gln Gly Tyr
50
<210>  87
<211>  283
<212>  БЕЛОК
<213>  Apis mellifera
<400>  87
Lys Asn Phe Ala Leu Ala Ile Leu Val Val Thr Phe Val Val Ala Val
1               5                   10                  15
Phe Gly Asn Thr Asn Leu Asp Pro Pro Thr Arg Pro Thr Arg Leu Arg
20                  25                  30
Arg Glu Ala Lys Pro Glu Ala Glu Pro Gly Asn Asn Arg Pro Val Tyr
35                  40                  45
Ile Pro Gln Pro Arg Pro Pro His Pro Arg Leu Arg Arg Glu Ala Glu
50                  55                  60
Pro Glu Ala Glu Pro Gly Asn Asn Arg Pro Val Tyr Ile Pro Gln Pro
65                  70                  75                  80
Arg Pro Pro His Pro Arg Leu Arg Arg Glu Ala Glu Leu Glu Ala Glu
85                  90                  95
Pro Gly Asn Asn Arg Pro Val Tyr Ile Ser Gln Pro Arg Pro Pro His
100                 105                 110
Pro Arg Leu Arg Arg Glu Ala Glu Pro Glu Ala Glu Pro Gly Asn Asn
115                 120                 125
Arg Pro Val Tyr Ile Pro Gln Pro Arg Pro Pro His Pro Arg Leu Arg
130                 135                 140
Arg Glu Ala Glu Leu Glu Ala Glu Pro Gly Asn Asn Arg Pro Val Tyr
145                 150                 155                 160
Ile Ser Gln Pro Arg Pro Pro His Pro Arg Leu Arg Arg Glu Ala Glu
165                 170                 175
Pro Glu Ala Glu Pro Gly Asn Asn Arg Pro Val Tyr Ile Pro Gln Pro
180                 185                 190
Arg Pro Pro His Pro Arg Leu Arg Arg Glu Ala Glu Pro Glu Ala Glu
195                 200                 205
Pro Gly Asn Asn Arg Pro Val Tyr Ile Pro Gln Pro Arg Pro Pro His
210                 215                 220
Pro Arg Leu Arg Arg Glu Ala Glu Pro Glu Ala Glu Pro Gly Asn Asn
225                 230                 235                 240
Arg Pro Val Tyr Ile Pro Gln Pro Arg Pro Pro His Pro Arg Leu Arg
245                 250                 255
Arg Glu Ala Lys Pro Glu Ala Lys Pro Gly Asn Asn Arg Pro Val Tyr
260                 265                 270
Ile Pro Gln Pro Arg Pro Pro His Pro Arg Ile
275                 280
<210>  88
<211>  228
<212>  БЕЛОК
<213>  Sus scrofa
<400>  88
Met Glu Thr Gln Arg Ala Ser Leu Cys Leu Gly Arg Trp Ser Leu Trp
1               5                   10                  15
Leu Leu Leu Leu Ala Leu Val Val Pro Ser Ala Ser Ala Gln Ala Leu
20                  25                  30
Ser Tyr Arg Glu Ala Val Leu Arg Ala Val Asp Arg Leu Asn Glu Gln
35                  40                  45
Ser Ser Glu Ala Asn Leu Tyr Arg Leu Leu Glu Leu Asp Gln Pro Pro
50                  55                  60
Lys Ala Asp Glu Asp Pro Gly Thr Pro Lys Pro Val Ser Phe Thr Val
65                  70                  75                  80
Lys Glu Thr Val Cys Pro Arg Pro Thr Arg Arg Pro Pro Glu Leu Cys
85                  90                  95
Asp Phe Lys Glu Asn Gly Arg Val Lys Gln Cys Val Gly Thr Val Thr
100                 105                 110
Leu Asp Gln Ile Lys Asp Pro Leu Asp Ile Thr Cys Asn Glu Gly Val
115                 120                 125
Arg Arg Phe Pro Trp Trp Trp Pro Phe Leu Arg Arg Pro Arg Leu Arg
130                 135                 140
Arg Gln Ala Phe Pro Pro Pro Asn Val Pro Gly Pro Arg Phe Pro Pro
145                 150                 155                 160
Pro Asn Val Pro Gly Pro Arg Phe Pro Pro Pro Asn Phe Pro Gly Pro
165                 170                 175
Arg Phe Pro Pro Pro Asn Phe Pro Gly Pro Arg Phe Pro Pro Pro Asn
180                 185                 190
Phe Pro Gly Pro Pro Phe Pro Pro Pro Ile Phe Pro Gly Pro Trp Phe
195                 200                 205
Pro Pro Pro Pro Pro Phe Arg Pro Pro Pro Phe Gly Pro Pro Arg Phe
210                 215                 220
Pro Gly Arg Arg
225
<210>  89
<211>  144
<212>  БЕЛОК
<213>  Bos taurus
<400>  89
Met Gln Thr Gln Arg Ala Ser Leu Ser Leu Gly Arg Trp Ser Leu Trp
1               5                   10                  15
Leu Leu Leu Leu Gly Leu Val Val Pro Ser Ala Ser Ala Gln Ala Leu
20                  25                  30
Ser Tyr Arg Glu Ala Val Leu Arg Ala Val Asp Gln Leu Asn Glu Leu
35                  40                  45
Ser Ser Glu Ala Asn Leu Tyr Arg Leu Leu Glu Leu Asp Pro Pro Pro
50                  55                  60
Lys Asp Asn Glu Asp Leu Gly Thr Arg Lys Pro Val Ser Phe Thr Val
65                  70                  75                  80
Lys Glu Thr Val Cys Pro Arg Thr Ile Gln Gln Pro Ala Glu Gln Cys
85                  90                  95
Asp Phe Lys Glu Lys Gly Arg Val Lys Gln Cys Val Gly Thr Val Thr
100                 105                 110
Leu Asp Pro Ser Asn Asp Gln Phe Asp Leu Asn Cys Asn Glu Leu Gln
115                 120                 125
Ser Val Ile Leu Pro Trp Lys Trp Pro Trp Trp Pro Trp Arg Arg Gly
130                 135                 140
<210>  90
<211>  149
<212>  БЕЛОК
<213>  Sus scrofa
<400>  90
Met Glu Thr Gln Arg Ala Ser Leu Cys Leu Gly Arg Trp Ser Leu Trp
1               5                   10                  15
Leu Leu Leu Leu Ala Leu Val Val Pro Ser Ala Ser Ala Gln Ala Leu
20                  25                  30
Ser Tyr Arg Glu Ala Val Leu Arg Ala Val Asp Arg Leu Asn Glu Gln
35                  40                  45
Ser Ser Glu Ala Asn Leu Tyr Arg Leu Leu Glu Leu Asp Gln Pro Pro
50                  55                  60
Lys Ala Asp Glu Asp Pro Gly Thr Pro Lys Pro Val Ser Phe Thr Val
65                  70                  75                  80
Lys Glu Thr Val Cys Pro Arg Pro Thr Arg Gln Pro Pro Glu Leu Cys
85                  90                  95
Asp Phe Lys Glu Asn Gly Arg Val Lys Gln Cys Val Gly Thr Val Thr
100                 105                 110
Leu Asp Gln Ile Lys Asp Pro Leu Asp Ile Thr Cys Asn Glu Val Gln
115                 120                 125
Gly Val Arg Gly Gly Arg Leu Cys Tyr Cys Arg Arg Arg Phe Cys Val
130                 135                 140
Cys Val Gly Arg Gly
145
<210>  91
<211>  17
<212>  БЕЛОК
<213>  Tachypleus gigas
<400>  91
Lys Trp Cys Phe Arg Val Cys Tyr Arg Gly Ile Cys Tyr Arg Arg Cys
1               5                   10                  15
Arg
<210>  92
<211>  102
<212>  БЕЛОК
<213>  Anopheles gambiae
<400>  92
Met Lys Cys Ala Thr Ile Val Cys Thr Ile Ala Val Val Leu Ala Ala
1               5                   10                  15
Thr Leu Leu Asn Gly Ser Val Gln Ala Ala Pro Gln Glu Glu Ala Ala
20                  25                  30
Leu Ser Gly Gly Ala Asn Leu Asn Thr Leu Leu Asp Glu Leu Pro Glu
35                  40                  45
Glu Thr His His Ala Ala Leu Glu Asn Tyr Arg Ala Lys Arg Ala Thr
50                  55                  60
Cys Asp Leu Ala Ser Gly Phe Gly Val Gly Ser Ser Leu Cys Ala Ala
65                  70                  75                  80
His Cys Ile Ala Arg Arg Tyr Arg Gly Gly Tyr Cys Asn Ser Lys Ala
85                  90                  95
Val Cys Val Cys Arg Asn
100
<210>  93
<211>  70
<212>  БЕЛОК
<213>  Drosophila melanogaster
<400>  93
Met Met Gln Ile Lys Tyr Leu Phe Ala Leu Phe Ala Val Leu Met Leu
1               5                   10                  15
Val Val Leu Gly Ala Asn Glu Ala Asp Ala Asp Cys Leu Ser Gly Arg
20                  25                  30
Tyr Lys Gly Pro Cys Ala Val Trp Asp Asn Glu Thr Cys Arg Arg Val
35                  40                  45
Cys Lys Glu Glu Gly Arg Ser Ser Gly His Cys Ser Pro Ser Leu Lys
50                  55                  60
Cys Trp Cys Glu Gly Cys
65                  70
<210>  94
<211>  63
<212>  БЕЛОК
<213>  Medicago truncatula
<400>  94
Met Thr Lys Ile Val Val Phe Ile Tyr Val Val Ile Leu Leu Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Phe His Val Ser Ala Lys Lys Lys Arg Tyr Ile Glu Cys Glu Thr
20                  25                  30
His Glu Asp Cys Ser Gln Val Phe Met Pro Pro Phe Val Met Arg Cys
35                  40                  45
Val Ile His Glu Cys Lys Ile Phe Asn Gly Glu His Leu Arg Tyr
50                  55                  60
<210>  95
<211>  76
<212>  БЕЛОК
<213>  Medicago truncatula
<400>  95
Met Ala Lys Ile Met Lys Phe Val Tyr Asn Met Ile Pro Phe Leu Ser
1               5                   10                  15
Ile Phe Ile Ile Thr Leu Gln Val Asn Val Val Val Cys Glu Ile Asp
20                  25                  30
Ala Asp Cys Pro Gln Ile Cys Met Pro Pro Tyr Glu Val Arg Cys Val
35                  40                  45
Asn His Arg Cys Gly Trp Val Asn Thr Asp Asp Ser Leu Phe Leu Thr
50                  55                  60
Gln Glu Phe Thr Arg Ser Lys Gln Tyr Ile Ile Ser
65                  70                  75
<210>  96
<211>  76
<212>  БЕЛОК
<213>  Medicago truncatula
<400>  96
Met Tyr Lys Val Val Glu Ser Ile Phe Ile Arg Tyr Met His Arg Lys
1               5                   10                  15
Pro Asn Met Thr Lys Phe Phe Lys Phe Val Tyr Thr Met Phe Ile Leu
20                  25                  30
Ile Ser Leu Phe Leu Val Val Thr Asn Ala Asn Ala His Asn Cys Thr
35                  40                  45
Asp Ile Ser Asp Cys Ser Ser Asn His Cys Ser Tyr Glu Gly Val Ser
50                  55                  60
Leu Cys Met Asn Gly Gln Cys Ile Cys Ile Tyr Glu
65                  70                  75
<210>  97
<211>  64
<212>  БЕЛОК
<213>  Medicago truncatula
<400>  97
Met Val Glu Thr Leu Arg Leu Phe Tyr Ile Met Ile Leu Phe Val Ser
1               5                   10                  15
Leu Cys Leu Val Val Val Asp Gly Glu Ser Lys Leu Glu Gln Thr Cys
20                  25                  30
Ser Glu Asp Phe Glu Cys Tyr Ile Lys Asn Pro His Val Pro Phe Gly
35                  40                  45
His Leu Arg Cys Phe Glu Gly Phe Cys Gln Gln Leu Asn Gly Pro Ala
50                  55                  60
<210>  98
<211>  67
<212>  БЕЛОК
<213>  Medicago truncatula
<400>  98
Met Ala Lys Ile Val Asn Phe Val Tyr Ser Met Ile Val Phe Leu Phe
1               5                   10                  15
Leu Phe Leu Val Ala Thr Lys Ala Ala Arg Gly Tyr Leu Cys Val Thr
20                  25                  30
Asp Ser His Cys Pro Pro His Met Cys Pro Pro Gly Met Glu Pro Arg
35                  40                  45
Cys Val Arg Arg Met Cys Lys Cys Leu Pro Ile Gly Trp Arg Lys Tyr
50                  55                  60
Phe Val Pro
65
<210>  99
<211>  96
<212>  БЕЛОК
<213>  Medicago truncatula
<400>  99
Met Gln Ile Gly Lys Asn Met Val Glu Thr Pro Lys Leu Asp Tyr Val
1               5                   10                  15
Ile Ile Phe Phe Phe Leu Tyr Phe Phe Phe Arg Gln Met Ile Ile Leu
20                  25                  30
Arg Leu Asn Thr Thr Phe Arg Pro Leu Asn Phe Lys Met Leu Arg Phe
35                  40                  45
Trp Gly Gln Asn Arg Asn Ile Met Lys His Arg Gly Gln Lys Val His
50                  55                  60
Phe Ser Leu Ile Leu Ser Asp Cys Lys Thr Asn Lys Asp Cys Pro Lys
65                  70                  75                  80
Leu Arg Arg Ala Asn Val Arg Cys Arg Lys Ser Tyr Cys Val Pro Ile
85                  90                  95
<210>  100
<211>  65
<212>  БЕЛОК
<213>  Medicago truncatula
<400>  100
Met Leu Arg Leu Tyr Leu Val Ser Tyr Phe Leu Leu Lys Arg Thr Leu
1               5                   10                  15
Leu Val Ser Tyr Phe Ser Tyr Phe Ser Thr Tyr Ile Ile Glu Cys Lys
20                  25                  30
Thr Asp Asn Asp Cys Pro Ile Ser Gln Leu Lys Ile Tyr Ala Trp Lys
35                  40                  45
Cys Val Lys Asn Gly Cys His Leu Phe Asp Val Ile Pro Met Met Tyr
50                  55                  60
Glu
65
<210>  101
<211>  79
<212>  БЕЛОК
<213>  Medicago truncatula
<400>  101
Met Ala Glu Ile Leu Lys Phe Val Tyr Ile Val Ile Leu Phe Val Ser
1               5                   10                  15
Leu Leu Leu Ile Val Val Ala Ser Glu Arg Glu Cys Val Thr Asp Asp
20                  25                  30
Asp Cys Glu Lys Leu Tyr Pro Thr Asn Glu Tyr Arg Met Met Cys Asp
35                  40                  45
Ser Gly Tyr Cys Met Asn Leu Leu Asn Gly Lys Ile Ile Tyr Leu Leu
50                  55                  60
Cys Leu Lys Lys Lys Lys Phe Leu Ile Ile Ile Ser Val Leu Leu
65                  70                  75
<210>  102
<211>  95
<212>  БЕЛОК
<213>  Medicago truncatula
<400>  102
Met Ala Glu Ile Ile Lys Phe Val Tyr Ile Met Ile Leu Cys Val Ser
1               5                   10                  15
Leu Leu Leu Ile Glu Val Ala Gly Glu Glu Cys Val Thr Asp Ala Asp
20                  25                  30
Cys Asp Lys Leu Tyr Pro Asp Ile Arg Lys Pro Leu Met Cys Ser Ile
35                  40                  45
Gly Glu Cys Tyr Ser Leu Tyr Lys Gly Lys Phe Ser Leu Ser Ile Ile
50                  55                  60
Ser Lys Thr Ser Phe Ser Leu Met Val Tyr Asn Val Val Thr Leu Val
65                  70                  75                  80
Ile Cys Leu Arg Leu Ala Tyr Ile Ser Leu Leu Leu Lys Phe Leu
85                  90                  95
<210>  103
<211>  100
<212>  БЕЛОК
<213>  Medicago truncatula
<400>  103
Met Ala Glu Ile Leu Lys Asp Phe Tyr Ala Met Asn Leu Phe Ile Phe
1               5                   10                  15
Leu Ile Ile Leu Pro Ala Lys Ile Arg Gly Glu Thr Leu Ser Leu Thr
20                  25                  30
His Pro Lys Cys His His Ile Met Leu Pro Ser Leu Phe Ile Thr Glu
35                  40                  45
Val Phe Gln Arg Val Thr Asp Asp Gly Cys Pro Lys Pro Val Asn His
50                  55                  60
Leu Arg Val Val Lys Cys Ile Glu His Ile Cys Glu Tyr Gly Tyr Asn
65                  70                  75                  80
Tyr Arg Pro Asp Phe Ala Ser Gln Ile Pro Glu Ser Thr Lys Met Pro
85                  90                  95
Arg Lys Arg Glu
100
<210>  104
<211>  78
<212>  БЕЛОК
<213>  Medicago truncatula
<400>  104
Met Val Glu Ile Leu Lys Asn Phe Tyr Ala Met Asn Leu Phe Ile Phe
1               5                   10                  15
Leu Ile Ile Leu Ala Val Lys Ile Arg Gly Ala His Phe Pro Cys Val
20                  25                  30
Thr Asp Asp Asp Cys Pro Lys Pro Val Asn Lys Leu Arg Val Ile Lys
35                  40                  45
Cys Ile Asp His Ile Cys Gln Tyr Ala Arg Asn Leu Pro Asp Phe Ala
50                  55                  60
Ser Glu Ile Ser Glu Ser Thr Lys Met Pro Cys Lys Gly Glu
65                  70                  75
<210>  105
<211>  72
<212>  БЕЛОК
<213>  Medicago truncatula
<400>  105
Met Phe His Ala Gln Ala Glu Asn Met Ala Lys Val Ser Asn Phe Val
1               5                   10                  15
Cys Ile Met Ile Leu Phe Leu Ala Leu Phe Phe Ile Thr Met Asn Asp
20                  25                  30
Ala Ala Arg Phe Glu Cys Arg Glu Asp Ser His Cys Val Thr Arg Ile
35                  40                  45
Lys Cys Val Leu Pro Arg Lys Pro Glu Cys Arg Asn Tyr Ala Cys Gly
50                  55                  60
Cys Tyr Asp Ser Asn Lys Tyr Arg
65                  70
<210>  106
<211>  78
<212>  БЕЛОК
<213>  Medicago truncatula
<400>  106
Met Gln Met Arg Gln Asn Met Ala Thr Ile Leu Asn Phe Val Phe Val
1               5                   10                  15
Ile Ile Leu Phe Ile Ser Leu Leu Leu Val Val Thr Lys Gly Tyr Arg
20                  25                  30
Glu Pro Phe Ser Ser Phe Thr Glu Gly Pro Thr Cys Lys Glu Asp Ile
35                  40                  45
Asp Cys Pro Ser Ile Ser Cys Val Asn Pro Gln Val Pro Lys Cys Ile
50                  55                  60
Met Phe Glu Cys His Cys Lys Tyr Ile Pro Thr Thr Leu Lys
65                  70                  75
<210>  107
<211>  71
<212>  БЕЛОК
<213>  Medicago truncatula
<400>  107
Met Ala Thr Ile Leu Met Tyr Val Tyr Ile Thr Ile Leu Phe Ile Ser
1               5                   10                  15
Ile Leu Thr Val Leu Thr Glu Gly Leu Tyr Glu Pro Leu Tyr Asn Phe
20                  25                  30
Arg Arg Asp Pro Asp Cys Arg Arg Asn Ile Asp Cys Pro Ser Tyr Leu
35                  40                  45
Cys Val Ala Pro Lys Val Pro Arg Cys Ile Met Phe Glu Cys His Cys
50                  55                  60
Lys Asp Ile Pro Ser Asp His
65                  70
<210>  108
<211>  57
<212>  БЕЛОК
<213>  Medicago truncatula
<400>  108
Met Thr Thr Ser Leu Lys Phe Val Tyr Val Ala Ile Leu Phe Leu Ser
1               5                   10                  15
Leu Leu Leu Val Val Met Gly Gly Ile Arg Arg Phe Glu Cys Arg Gln
20                  25                  30
Asp Ser Asp Cys Pro Ser Tyr Phe Cys Glu Lys Leu Thr Val Pro Lys
35                  40                  45
Cys Phe Trp Ser Lys Cys Tyr Cys Lys
50                  55
<210>  109
<211>  57
<212>  БЕЛОК
<213>  Medicago truncatula
<400>  109
Met Thr Thr Ser Leu Lys Phe Val Tyr Val Ala Ile Leu Phe Leu Ser
1               5                   10                  15
Leu Leu Leu Val Val Met Gly Gly Ile Arg Lys Lys Glu Cys Arg Gln
20                  25                  30
Asp Ser Asp Cys Pro Ser Tyr Phe Cys Glu Lys Leu Thr Ile Ala Lys
35                  40                  45
Cys Ile His Ser Thr Cys Leu Cys Lys
50                  55
<210>  110
<211>  66
<212>  БЕЛОК
<213>  Medicago truncatula
<400>  110
Met Gln Ile Gly Lys Asn Met Val Glu Thr Pro Lys Leu Val Tyr Phe
1               5                   10                  15
Ile Ile Leu Phe Leu Ser Ile Phe Leu Cys Ile Thr Val Ser Asn Ser
20                  25                  30
Ser Phe Ser Gln Ile Phe Asn Ser Ala Cys Lys Thr Asp Lys Asp Cys
35                  40                  45
Pro Lys Phe Gly Arg Val Asn Val Arg Cys Arg Lys Gly Asn Cys Val
50                  55                  60
Pro Ile
65
<210>  111
<211>  57
<212>  БЕЛОК
<213>  Medicago truncatula
<400>  111
Met Thr Ala Ile Leu Lys Lys Phe Ile Asn Ala Val Phe Leu Phe Ile
1               5                   10                  15
Val Leu Phe Leu Ala Thr Thr Asn Val Glu Asp Phe Val Gly Gly Ser
20                  25                  30
Asn Asp Glu Cys Val Tyr Pro Asp Val Phe Gln Cys Ile Asn Asn Ile
35                  40                  45
Cys Lys Cys Val Ser His His Arg Thr
50                  55
<210>  112
<211>  74
<212>  БЕЛОК
<213>  Medicago truncatula
<400>  112
Met Gln Lys Arg Lys Asn Met Ala Gln Ile Ile Phe Tyr Val Tyr Ala
1               5                   10                  15
Leu Ile Ile Leu Phe Ser Pro Phe Leu Ala Ala Arg Leu Val Phe Val
20                  25                  30
Asn Pro Glu Lys Pro Cys Val Thr Asp Ala Asp Cys Asp Arg Tyr Arg
35                  40                  45
His Glu Ser Ala Ile Tyr Ser Asp Met Phe Cys Lys Asp Gly Tyr Cys
50                  55                  60
Phe Ile Asp Tyr His His Asp Pro Tyr Pro
65                  70
<210>  113
<211>  76
<212>  БЕЛОК
<213>  Medicago truncatula
<400>  113
Met Gln Met Arg Lys Asn Met Ala Gln Ile Leu Phe Tyr Val Tyr Ala
1               5                   10                  15
Leu Leu Ile Leu Phe Thr Pro Phe Leu Val Ala Arg Ile Met Val Val
20                  25                  30
Asn Pro Asn Asn Pro Cys Val Thr Asp Ala Asp Cys Gln Arg Tyr Arg
35                  40                  45
His Lys Leu Ala Thr Arg Met Ile Cys Asn Gln Gly Phe Cys Leu Met
50                  55                  60
Asp Phe Thr His Asp Pro Tyr Ala Pro Ser Leu Pro
65                  70                  75
<210>  114
<211>  64
<212>  БЕЛОК
<213>  Medicago truncatula
<400>  114
Met Asn His Ile Ser Lys Phe Val Tyr Ala Leu Ile Ile Phe Leu Ser
1               5                   10                  15
Ile Tyr Leu Val Val Leu Asp Gly Leu Pro Ile Ser Cys Lys Asp His
20                  25                  30
Phe Glu Cys Arg Arg Lys Ile Asn Ile Leu Arg Cys Ile Tyr Arg Gln
35                  40                  45
Glu Lys Pro Met Cys Ile Asn Ser Ile Cys Thr Cys Val Lys Leu Leu
50                  55                  60
<210>  115
<211>  67
<212>  БЕЛОК
<213>  Medicago truncatula
<400>  115
Met Gln Arg Glu Lys Asn Met Ala Lys Ile Phe Glu Phe Val Tyr Ala
1               5                   10                  15
Met Ile Ile Phe Ile Leu Leu Phe Leu Val Glu Lys Asn Val Val Ala
20                  25                  30
Tyr Leu Lys Phe Glu Cys Lys Thr Asp Asp Asp Cys Gln Lys Ser Leu
35                  40                  45
Leu Lys Thr Tyr Val Trp Lys Cys Val Lys Asn Glu Cys Tyr Phe Phe
50                  55                  60
Ala Lys Lys
65
<210>  116
<211>  61
<212>  БЕЛОК
<213>  Medicago truncatula
<400>  116
Met Ala Gly Ile Ile Lys Phe Val His Val Leu Ile Ile Phe Leu Ser
1               5                   10                  15
Leu Phe His Val Val Lys Asn Asp Asp Gly Ser Phe Cys Phe Lys Asp
20                  25                  30
Ser Asp Cys Pro Asp Glu Met Cys Pro Ser Pro Leu Lys Glu Met Cys
35                  40                  45
Tyr Phe Leu Gln Cys Lys Cys Gly Val Asp Thr Ile Ala
50                  55                  60
<210>  117
<211>  59
<212>  БЕЛОК
<213>  Medicago truncatula
<400>  117
Met Ala Asn Thr His Lys Leu Val Ser Met Ile Leu Phe Ile Phe Leu
1               5                   10                  15
Phe Leu Ala Ser Asn Asn Val Glu Gly Tyr Val Asn Cys Glu Thr Asp
20                  25                  30
Ala Asp Cys Pro Pro Ser Thr Arg Val Lys Arg Phe Lys Cys Val Lys
35                  40                  45
Gly Glu Cys Arg Trp Thr Arg Met Ser Tyr Ala
50                  55
<210>  118
<211>  63
<212>  БЕЛОК
<213>  Medicago truncatula
<400>  118
Met Gln Arg Arg Lys Lys Lys Ala Gln Val Val Met Phe Val His Asp
1               5                   10                  15
Leu Ile Ile Cys Ile Tyr Leu Phe Ile Val Ile Thr Thr Arg Lys Thr
20                  25                  30
Asp Ile Arg Cys Arg Phe Tyr Tyr Asp Cys Pro Arg Leu Glu Tyr His
35                  40                  45
Phe Cys Glu Cys Ile Glu Asp Phe Cys Ala Tyr Ile Arg Leu Asn
50                  55                  60
<210>  119
<211>  57
<212>  БЕЛОК
<213>  Medicago truncatula
<400>  119
Met Ala Lys Val Tyr Met Phe Val Tyr Ala Leu Ile Ile Phe Val Ser
1               5                   10                  15
Pro Phe Leu Leu Ala Thr Phe Arg Thr Arg Leu Pro Cys Glu Lys Asp
20                  25                  30
Asp Asp Cys Pro Glu Ala Phe Leu Pro Pro Val Met Lys Cys Val Asn
35                  40                  45
Arg Phe Cys Gln Tyr Glu Ile Leu Glu
50                  55
<210>  120
<211>  77
<212>  БЕЛОК
<213>  Medicago truncatula
<400>  120
Met Ile Lys Gln Phe Ser Val Cys Tyr Ile Gln Met Arg Arg Asn Met
1               5                   10                  15
Thr Thr Ile Leu Lys Phe Pro Tyr Ile Met Val Ile Cys Leu Leu Leu
20                  25                  30
Leu His Val Ala Ala Tyr Glu Asp Phe Glu Lys Glu Ile Phe Asp Cys
35                  40                  45
Lys Lys Asp Gly Asp Cys Asp His Met Cys Val Thr Pro Gly Ile Pro
50                  55                  60
Lys Cys Thr Gly Tyr Val Cys Phe Cys Phe Glu Asn Leu
65                  70                  75
<210>  121
<211>  73
<212>  БЕЛОК
<213>  Medicago truncatula
<400>  121
Met Gln Arg Ser Arg Asn Met Thr Thr Ile Phe Lys Phe Ala Tyr Ile
1               5                   10                  15
Met Ile Ile Cys Val Phe Leu Leu Asn Ile Ala Ala Gln Glu Ile Glu
20                  25                  30
Asn Gly Ile His Pro Cys Lys Lys Asn Glu Asp Cys Asn His Met Cys
35                  40                  45
Val Met Pro Gly Leu Pro Trp Cys His Glu Asn Asn Leu Cys Phe Cys
50                  55                  60
Tyr Glu Asn Ala Tyr Gly Asn Thr Arg
65                  70
<210>  122
<211>  85
<212>  БЕЛОК
<213>  Medicago truncatula
<400>  122
Met Thr Ile Ile Ile Lys Phe Val Asn Val Leu Ile Ile Phe Leu Ser
1               5                   10                  15
Leu Phe His Val Ala Lys Asn Asp Asp Asn Lys Leu Leu Leu Ser Phe
20                  25                  30
Ile Glu Glu Gly Phe Leu Cys Phe Lys Asp Ser Asp Cys Pro Tyr Asn
35                  40                  45
Met Cys Pro Ser Pro Leu Lys Glu Met Cys Tyr Phe Ile Lys Cys Val
50                  55                  60
Cys Gly Val Tyr Gly Pro Ile Arg Glu Arg Arg Leu Tyr Gln Ser His
65                  70                  75                  80
Asn Pro Met Ile Gln
85
<210>  123
<211>  69
<212>  БЕЛОК
<213>  Medicago truncatula
<400>  123
Met Arg Lys Asn Met Thr Lys Ile Leu Met Ile Gly Tyr Ala Leu Met
1               5                   10                  15
Ile Phe Ile Phe Leu Ser Ile Ala Val Ser Ile Thr Gly Asn Leu Ala
20                  25                  30
Arg Ala Ser Arg Lys Lys Pro Val Asp Val Ile Pro Cys Ile Tyr Asp
35                  40                  45
His Asp Cys Pro Arg Lys Leu Tyr Phe Leu Glu Arg Cys Val Gly Arg
50                  55                  60
Val Cys Lys Tyr Leu
65
<210>  124
<211>  58
<212>  БЕЛОК
<213>  Medicago truncatula
<400>  124
Met Ala His Lys Leu Val Tyr Ala Ile Thr Leu Phe Ile Phe Leu Phe
1               5                   10                  15
Leu Ile Ala Asn Asn Ile Glu Asp Asp Ile Phe Cys Ile Thr Asp Asn
20                  25                  30
Asp Cys Pro Pro Asn Thr Leu Val Gln Arg Tyr Arg Cys Ile Asn Gly
35                  40                  45
Lys Cys Asn Leu Ser Phe Val Ser Tyr Gly
50                  55
<210>  125
<211>  61
<212>  БЕЛОК
<213>  Medicago truncatula
<400>  125
Met Asp Glu Thr Leu Lys Phe Val Tyr Ile Leu Ile Leu Phe Val Ser
1               5                   10                  15
Leu Cys Leu Val Val Ala Asp Gly Val Lys Asn Ile Asn Arg Glu Cys
20                  25                  30
Thr Gln Thr Ser Asp Cys Tyr Lys Lys Tyr Pro Phe Ile Pro Trp Gly
35                  40                  45
Lys Val Arg Cys Val Lys Gly Arg Cys Arg Leu Asp Met
50                  55                  60
<210>  126
<211>  62
<212>  БЕЛОК
<213>  Medicago truncatula
<400>  126
Met Ala Lys Ile Ile Lys Phe Val Tyr Val Leu Ala Ile Phe Phe Ser
1               5                   10                  15
Leu Phe Leu Val Ala Lys Asn Val Asn Gly Trp Thr Cys Val Glu Asp
20                  25                  30
Ser Asp Cys Pro Ala Asn Ile Cys Gln Pro Pro Met Gln Arg Met Cys
35                  40                  45
Phe Tyr Gly Glu Cys Ala Cys Val Arg Ser Lys Phe Cys Thr
50                  55                  60
<210>  127
<211>  61
<212>  БЕЛОК
<213>  Medicago truncatula
<400>  127
Met Val Lys Ile Ile Lys Phe Val Tyr Phe Met Thr Leu Phe Leu Ser
1               5                   10                  15
Met Leu Leu Val Thr Thr Lys Glu Asp Gly Ser Val Glu Cys Ile Ala
20                  25                  30
Asn Ile Asp Cys Pro Gln Ile Phe Met Leu Pro Phe Val Met Arg Cys
35                  40                  45
Ile Asn Phe Arg Cys Gln Ile Val Asn Ser Glu Asp Thr
50                  55                  60
<210>  128
<211>  67
<212>  БЕЛОК
<213>  Medicago truncatula
<400>  128
Met Asp Glu Ile Leu Lys Phe Val Tyr Thr Leu Ile Ile Phe Phe Ser
1               5                   10                  15
Leu Phe Phe Ala Ala Asn Asn Val Asp Ala Asn Ile Met Asn Cys Gln
20                  25                  30
Ser Thr Phe Asp Cys Pro Arg Asp Met Cys Ser His Ile Arg Asp Val
35                  40                  45
Ile Cys Ile Phe Lys Lys Cys Lys Cys Ala Gly Gly Arg Tyr Met Pro
50                  55                  60
Gln Val Pro
65
<210>  129
<211>  62
<212>  БЕЛОК
<213>  Medicago truncatula
<400>  129
Met Gln Arg Arg Lys Asn Met Ala Asn Asn His Met Leu Ile Tyr Ala
1               5                   10                  15
Met Ile Ile Cys Leu Phe Pro Tyr Leu Val Val Thr Phe Lys Thr Ala
20                  25                  30
Ile Thr Cys Asp Cys Asn Glu Asp Cys Leu Asn Phe Phe Thr Pro Leu
35                  40                  45
Asp Asn Leu Lys Cys Ile Asp Asn Val Cys Glu Val Phe Met
50                  55                  60
<210>  130
<211>  65
<212>  БЕЛОК
<213>  Medicago truncatula
<400>  130
Met Val Asn Ile Leu Lys Phe Ile Tyr Val Ile Ile Phe Phe Ile Leu
1               5                   10                  15
Met Phe Phe Val Leu Ile Asp Val Asp Gly His Val Leu Val Glu Cys
20                  25                  30
Ile Glu Asn Arg Asp Cys Glu Lys Gly Met Cys Lys Phe Pro Phe Ile
35                  40                  45
Val Arg Cys Leu Met Asp Gln Cys Lys Cys Val Arg Ile His Asn Leu
50                  55                  60
Ile
65
<210>  131
<211>  74
<212>  БЕЛОК
<213>  Medicago truncatula
<400>  131
Met Ile Ile Gln Phe Ser Ile Tyr Tyr Met Gln Arg Arg Lys Leu Asn
1               5                   10                  15
Met Val Glu Ile Leu Lys Phe Ser His Ala Leu Ile Ile Phe Leu Phe
20                  25                  30
Leu Ser Ala Leu Val Thr Asn Ala Asn Ile Phe Phe Cys Ser Thr Asp
35                  40                  45
Glu Asp Cys Thr Trp Asn Leu Cys Arg Gln Pro Trp Val Gln Lys Cys
50                  55                  60
Arg Leu His Met Cys Ser Cys Glu Lys Asn
65                  70
<210>  132
<211>  58
<212>  БЕЛОК
<213>  Medicago truncatula
<400>  132
Met Asp Glu Val Phe Lys Phe Val Tyr Val Met Ile Ile Phe Pro Phe
1               5                   10                  15
Leu Ile Leu Asp Val Ala Thr Asn Ala Glu Lys Ile Arg Arg Cys Phe
20                  25                  30
Asn Asp Ala His Cys Pro Pro Asp Met Cys Thr Leu Gly Val Ile Pro
35                  40                  45
Lys Cys Ser Arg Phe Thr Ile Cys Ile Cys
50                  55
<210>  133
<211>  64
<212>  БЕЛОК
<213>  Medicago truncatula
<400>  133
Met His Arg Lys Pro Asn Met Thr Lys Phe Phe Lys Phe Val Tyr Thr
1               5                   10                  15
Met Phe Ile Leu Ile Ser Leu Phe Leu Val Val Thr Asn Ala Asn Ala
20                  25                  30
Asn Asn Cys Thr Asp Thr Ser Asp Cys Ser Ser Asn His Cys Ser Tyr
35                  40                  45
Glu Gly Val Ser Leu Cys Met Asn Gly Gln Cys Ile Cys Ile Tyr Glu
50                  55                  60
<210>  134
<211>  69
<212>  БЕЛОК
<213>  Medicago truncatula
<400>  134
Met Gln Met Lys Lys Met Ala Thr Ile Leu Lys Phe Val Tyr Leu Ile
1               5                   10                  15
Ile Leu Leu Ile Tyr Pro Leu Leu Val Val Thr Glu Glu Ser His Tyr
20                  25                  30
Met Lys Phe Ser Ile Cys Lys Asp Asp Thr Asp Cys Pro Thr Leu Phe
35                  40                  45
Cys Val Leu Pro Asn Val Pro Lys Cys Ile Gly Ser Lys Cys His Cys
50                  55                  60
Lys Leu Met Val Asn
65
<210>  135
<211>  64
<212>  БЕЛОК
<213>  Medicago truncatula
<400>  135
Met Val Glu Thr Leu Arg Leu Phe Tyr Ile Met Ile Leu Phe Val Ser
1               5                   10                  15
Leu Tyr Leu Val Val Val Asp Gly Val Ser Lys Leu Ala Gln Ser Cys
20                  25                  30
Ser Glu Asp Phe Glu Cys Tyr Ile Lys Asn Pro His Ala Pro Phe Gly
35                  40                  45
Gln Leu Arg Cys Phe Glu Gly Tyr Cys Gln Arg Leu Asp Lys Pro Thr
50                  55                  60
<210>  136
<211>  63
<212>  БЕЛОК
<213>  Medicago truncatula
<400>  136
Met Thr Thr Phe Leu Lys Val Ala Tyr Ile Met Ile Ile Cys Val Phe
1               5                   10                  15
Val Leu His Leu Ala Ala Gln Val Asp Ser Gln Lys Arg Leu His Gly
20                  25                  30
Cys Lys Glu Asp Arg Asp Cys Asp Asn Ile Cys Ser Val His Ala Val
35                  40                  45
Thr Lys Cys Ile Gly Asn Met Cys Arg Cys Leu Ala Asn Val Lys
50                  55                  60
<210>  137
<211>  61
<212>  БЕЛОК
<213>  Medicago truncatula
<400>  137
Met Arg Ile Asn Arg Thr Pro Ala Ile Phe Lys Phe Val Tyr Thr Ile
1               5                   10                  15
Ile Ile Tyr Leu Phe Leu Leu Arg Val Val Ala Lys Asp Leu Pro Phe
20                  25                  30
Asn Ile Cys Glu Lys Asp Glu Asp Cys Leu Glu Phe Cys Ala His Asp
35                  40                  45
Lys Val Ala Lys Cys Met Leu Asn Ile Cys Phe Cys Phe
50                  55                  60
<210>  138
<211>  54
<212>  БЕЛОК
<213>  Medicago truncatula
<400>  138
Met Ala Glu Ile Leu Lys Ile Leu Tyr Val Phe Ile Ile Phe Leu Ser
1               5                   10                  15
Leu Ile Leu Ala Val Ile Ser Gln His Pro Phe Thr Pro Cys Glu Thr
20                  25                  30
Asn Ala Asp Cys Lys Cys Arg Asn His Lys Arg Pro Asp Cys Leu Trp
35                  40                  45
His Lys Cys Tyr Cys Tyr
50
<210>  139
<211>  65
<212>  БЕЛОК
<213>  Medicago truncatula
<400>  139
Met Arg Lys Ser Met Ala Thr Ile Leu Lys Phe Val Tyr Val Ile Met
1               5                   10                  15
Leu Phe Ile Tyr Ser Leu Phe Val Ile Glu Ser Phe Gly His Arg Phe
20                  25                  30
Leu Ile Tyr Asn Asn Cys Lys Asn Asp Thr Glu Cys Pro Asn Asp Cys
35                  40                  45
Gly Pro His Glu Gln Ala Lys Cys Ile Leu Tyr Ala Cys Tyr Cys Val
50                  55                  60
Glu
65
<210>  140
<211>  58
<212>  БЕЛОК
<213>  Medicago truncatula
<400>  140
Met Asn Thr Ile Leu Lys Phe Ile Phe Val Val Phe Leu Phe Leu Ser
1               5                   10                  15
Ile Phe Leu Ser Ala Gly Asn Ser Lys Ser Tyr Gly Pro Cys Thr Thr
20                  25                  30
Leu Gln Asp Cys Glu Thr His Asn Trp Phe Glu Val Cys Ser Cys Ile
35                  40                  45
Asp Phe Glu Cys Lys Cys Trp Ser Leu Leu
50                  55
<210>  141
<211>  64
<212>  БЕЛОК
<213>  Medicago truncatula
<400>  141
Met Ala Glu Ile Ile Lys Phe Val Tyr Ile Met Ile Leu Cys Val Ser
1               5                   10                  15
Leu Leu Leu Ile Ala Glu Ala Ser Gly Lys Glu Cys Val Thr Asp Ala
20                  25                  30
Asp Cys Glu Asn Leu Tyr Pro Gly Asn Lys Lys Pro Met Phe Cys Asn
35                  40                  45
Asn Thr Gly Tyr Cys Met Ser Leu Tyr Lys Glu Pro Ser Arg Tyr Met
50                  55                  60
<210>  142
<211>  64
<212>  БЕЛОК
<213>  Medicago truncatula
<400>  142
Met Ala Lys Ile Ile Lys Phe Val Tyr Ile Met Ile Leu Cys Val Ser
1               5                   10                  15
Leu Leu Leu Ile Val Glu Ala Gly Gly Lys Glu Cys Val Thr Asp Val
20                  25                  30
Asp Cys Glu Lys Ile Tyr Pro Gly Asn Lys Lys Pro Leu Ile Cys Ser
35                  40                  45
Thr Gly Tyr Cys Tyr Ser Leu Tyr Glu Glu Pro Pro Arg Tyr His Lys
50                  55                  60
<210>  143
<211>  64
<212>  БЕЛОК
<213>  Medicago truncatula
<400>  143
Met Ala Lys Val Thr Lys Phe Gly Tyr Ile Ile Ile His Phe Leu Ser
1               5                   10                  15
Leu Phe Phe Leu Ala Met Asn Val Ala Gly Gly Arg Glu Cys His Ala
20                  25                  30
Asn Ser His Cys Val Gly Lys Ile Thr Cys Val Leu Pro Gln Lys Pro
35                  40                  45
Glu Cys Trp Asn Tyr Ala Cys Val Cys Tyr Asp Ser Asn Lys Tyr Arg
50                  55                  60
<210>  144
<211>  55
<212>  БЕЛОК
<213>  Medicago truncatula
<400>  144
Met Ala Lys Ile Phe Asn Tyr Val Tyr Ala Leu Ile Met Phe Leu Ser
1               5                   10                  15
Leu Phe Leu Met Gly Thr Ser Gly Met Lys Asn Gly Cys Lys His Thr
20                  25                  30
Gly His Cys Pro Arg Lys Met Cys Gly Ala Lys Thr Thr Lys Cys Arg
35                  40                  45
Asn Asn Lys Cys Gln Cys Val
50                  55
<210>  145
<211>  69
<212>  БЕЛОК
<213>  Medicago truncatula
<400>  145
Met Thr Glu Ile Leu Lys Phe Val Cys Val Met Ile Ile Phe Ile Ser
1               5                   10                  15
Ser Phe Ile Val Ser Lys Ser Leu Asn Gly Gly Gly Lys Asp Lys Cys
20                  25                  30
Phe Arg Asp Ser Asp Cys Pro Lys His Met Cys Pro Ser Ser Leu Val
35                  40                  45
Ala Lys Cys Ile Asn Arg Leu Cys Arg Cys Arg Arg Pro Glu Leu Gln
50                  55                  60
Val Gln Leu Asn Pro
65
<210>  146
<211>  69
<212>  БЕЛОК
<213>  Medicago truncatula
<400>  146
Met Ala His Ile Ile Met Phe Val Tyr Ala Leu Ile Tyr Ala Leu Ile
1               5                   10                  15
Ile Phe Ser Ser Leu Phe Val Arg Asp Gly Ile Pro Cys Leu Ser Asp
20                  25                  30
Asp Glu Cys Pro Glu Met Ser His Tyr Ser Phe Lys Cys Asn Asn Lys
35                  40                  45
Ile Cys Glu Tyr Asp Leu Gly Glu Met Ser Asp Asp Asp Tyr Tyr Leu
50                  55                  60
Glu Met Ser Arg Glu
65
<210>  147
<211>  77
<212>  БЕЛОК
<213>  Medicago truncatula
<400>  147
Met Tyr Arg Glu Lys Asn Met Ala Lys Thr Leu Lys Phe Val Tyr Val
1               5                   10                  15
Ile Val Leu Phe Leu Ser Leu Phe Leu Ala Ala Lys Asn Ile Asp Gly
20                  25                  30
Arg Val Ser Tyr Asn Ser Phe Ile Ala Leu Pro Val Cys Gln Thr Ala
35                  40                  45
Ala Asp Cys Pro Glu Gly Thr Arg Gly Arg Thr Tyr Lys Cys Ile Asn
50                  55                  60
Asn Lys Cys Arg Tyr Pro Lys Leu Leu Lys Pro Ile Gln
65                  70                  75
<210>  148
<211>  56
<212>  БЕЛОК
<213>  Medicago truncatula
<400>  148
Met Ala His Ile Phe Asn Tyr Val Tyr Ala Leu Leu Val Phe Leu Ser
1               5                   10                  15
Leu Phe Leu Met Val Thr Asn Gly Ile His Ile Gly Cys Asp Lys Asp
20                  25                  30
Arg Asp Cys Pro Lys Gln Met Cys His Leu Asn Gln Thr Pro Lys Cys
35                  40                  45
Leu Lys Asn Ile Cys Lys Cys Val
50                  55
<210>  149
<211>  77
<212>  БЕЛОК
<213>  Medicago truncatula
<400>  149
Met Ala Glu Ile Leu Lys Cys Phe Tyr Thr Met Asn Leu Phe Ile Phe
1               5                   10                  15
Leu Ile Ile Leu Pro Ala Lys Ile Arg Glu His Ile Gln Cys Val Ile
20                  25                  30
Asp Asp Asp Cys Pro Lys Ser Leu Asn Lys Leu Leu Ile Ile Lys Cys
35                  40                  45
Ile Asn His Val Cys Gln Tyr Val Gly Asn Leu Pro Asp Phe Ala Ser
50                  55                  60
Gln Ile Pro Lys Ser Thr Lys Met Pro Tyr Lys Gly Glu
65                  70                  75
<210>  150
<211>  70
<212>  БЕЛОК
<213>  Medicago truncatula
<400>  150
Met Ala Tyr Ile Ser Arg Ile Phe Tyr Val Leu Ile Ile Phe Leu Ser
1               5                   10                  15
Leu Phe Phe Val Val Ile Asn Gly Val Lys Ser Leu Leu Leu Ile Lys
20                  25                  30
Val Arg Ser Phe Ile Pro Cys Gln Arg Ser Asp Asp Cys Pro Arg Asn
35                  40                  45
Leu Cys Val Asp Gln Ile Ile Pro Thr Cys Val Trp Ala Lys Cys Lys
50                  55                  60
Cys Lys Asn Tyr Asn Asp
65                  70
<210>  151
<211>  64
<212>  БЕЛОК
<213>  Medicago truncatula
<400>  151
Met Ala Asn Val Thr Lys Phe Val Tyr Ile Ala Ile Tyr Phe Leu Ser
1               5                   10                  15
Leu Phe Phe Ile Ala Lys Asn Asp Ala Thr Ala Thr Phe Cys His Asp
20                  25                  30
Asp Ser His Cys Val Thr Lys Ile Lys Cys Val Leu Pro Arg Thr Pro
35                  40                  45
Gln Cys Arg Asn Glu Ala Cys Gly Cys Tyr His Ser Asn Lys Phe Arg
50                  55                  60
<210>  152
<211>  62
<212>  БЕЛОК
<213>  Medicago truncatula
<400>  152
Met Gly Glu Ile Met Lys Phe Val Tyr Val Met Ile Ile Tyr Leu Phe
1               5                   10                  15
Met Phe Asn Val Ala Thr Gly Ser Glu Phe Ile Phe Thr Lys Lys Leu
20                  25                  30
Thr Ser Cys Asp Ser Ser Lys Asp Cys Arg Ser Phe Leu Cys Tyr Ser
35                  40                  45
Pro Lys Phe Pro Val Cys Lys Arg Gly Ile Cys Glu Cys Ile
50                  55                  60
<210>  153
<211>  61
<212>  БЕЛОК
<213>  Medicago truncatula
<400>  153
Met Gly Glu Met Phe Lys Phe Ile Tyr Thr Phe Ile Leu Phe Val His
1               5                   10                  15
Leu Phe Leu Val Val Ile Phe Glu Asp Ile Gly His Ile Lys Tyr Cys
20                  25                  30
Gly Ile Val Asp Asp Cys Tyr Lys Ser Lys Lys Pro Leu Phe Lys Ile
35                  40                  45
Trp Lys Cys Val Glu Asn Val Cys Val Leu Trp Tyr Lys
50                  55                  60
<210>  154
<211>  63
<212>  БЕЛОК
<213>  Medicago truncatula
<400>  154
Met Ala Arg Thr Leu Lys Phe Val Tyr Ser Met Ile Leu Phe Leu Ser
1               5                   10                  15
Leu Phe Leu Val Ala Asn Gly Leu Lys Ile Phe Cys Ile Asp Val Ala
20                  25                  30
Asp Cys Pro Lys Asp Leu Tyr Pro Leu Leu Tyr Lys Cys Ile Tyr Asn
35                  40                  45
Lys Cys Ile Val Phe Thr Arg Ile Pro Phe Pro Phe Asp Trp Ile
50                  55                  60
<210>  155
<211>  66
<212>  БЕЛОК
<213>  Medicago truncatula
<400>  155
Met Ala Asn Ile Thr Lys Phe Val Tyr Ile Ala Ile Leu Phe Leu Ser
1               5                   10                  15
Leu Phe Phe Ile Gly Met Asn Asp Ala Ala Ile Leu Glu Cys Arg Glu
20                  25                  30
Asp Ser His Cys Val Thr Lys Ile Lys Cys Val Leu Pro Arg Lys Pro
35                  40                  45
Glu Cys Arg Asn Asn Ala Cys Thr Cys Tyr Lys Gly Gly Phe Ser Phe
50                  55                  60
His His
65
<210>  156
<211>  68
<212>  БЕЛОК
<213>  Medicago truncatula
<400>  156
Met Gln Arg Val Lys Lys Met Ser Glu Thr Leu Lys Phe Val Tyr Val
1               5                   10                  15
Leu Ile Leu Phe Ile Ser Ile Phe His Val Val Ile Val Cys Asp Ser
20                  25                  30
Ile Tyr Phe Pro Val Ser Arg Pro Cys Ile Thr Asp Lys Asp Cys Pro
35                  40                  45
Asn Met Lys His Tyr Lys Ala Lys Cys Arg Lys Gly Phe Cys Ile Ser
50                  55                  60
Ser Arg Val Arg
65
<210>  157
<211>  72
<212>  БЕЛОК
<213>  Medicago truncatula
<400>  157
Met Gln Ile Arg Lys Ile Met Ser Gly Val Leu Lys Phe Val Tyr Ala
1               5                   10                  15
Ile Ile Leu Phe Leu Phe Leu Phe Leu Val Ala Arg Glu Val Gly Gly
20                  25                  30
Leu Glu Thr Ile Glu Cys Glu Thr Asp Gly Asp Cys Pro Arg Ser Met
35                  40                  45
Ile Lys Met Trp Asn Lys Asn Tyr Arg His Lys Cys Ile Asp Gly Lys
50                  55                  60
Cys Glu Trp Ile Lys Lys Leu Pro
65                  70
<210>  158
<211>  54
<212>  БЕЛОК
<213>  Medicago truncatula
<400>  158
Met Phe Val Tyr Asp Leu Ile Leu Phe Ile Ser Leu Ile Leu Val Val
1               5                   10                  15
Thr Gly Ile Asn Ala Glu Ala Asp Thr Ser Cys His Ser Phe Asp Asp
20                  25                  30
Cys Pro Trp Val Ala His His Tyr Arg Glu Cys Ile Glu Gly Leu Cys
35                  40                  45
Ala Tyr Arg Ile Leu Tyr
50
<210>  159
<211>  69
<212>  БЕЛОК
<213>  Medicago truncatula
<400>  159
Met Gln Arg Arg Lys Lys Ser Met Ala Lys Met Leu Lys Phe Phe Phe
1               5                   10                  15
Ala Ile Ile Leu Leu Leu Ser Leu Phe Leu Val Ala Thr Glu Val Gly
20                  25                  30
Gly Ala Tyr Ile Glu Cys Glu Val Asp Asp Asp Cys Pro Lys Pro Met
35                  40                  45
Lys Asn Ser His Pro Asp Thr Tyr Tyr Lys Cys Val Lys His Arg Cys
50                  55                  60
Gln Trp Ala Trp Lys
65
<210>  160
<211>  140
<212>  БЕЛОК
<213>  Medicago truncatula
<400>  160
Met Phe Val Tyr Thr Leu Ile Ile Phe Leu Phe Pro Ser His Val Ile
1               5                   10                  15
Thr Asn Lys Ile Ala Ile Tyr Cys Val Ser Asp Asp Asp Cys Leu Lys
20                  25                  30
Thr Phe Thr Pro Leu Asp Leu Lys Cys Val Asp Asn Val Cys Glu Phe
35                  40                  45
Asn Leu Arg Cys Lys Gly Lys Cys Gly Glu Arg Asp Glu Lys Phe Val
50                  55                  60
Phe Leu Lys Ala Leu Lys Lys Met Asp Gln Lys Leu Val Leu Glu Glu
65                  70                  75                  80
Gln Gly Asn Ala Arg Glu Val Lys Ile Pro Lys Lys Leu Leu Phe Asp
85                  90                  95
Arg Ile Gln Val Pro Thr Pro Ala Thr Lys Asp Gln Val Glu Glu Asp
100                 105                 110
Asp Tyr Asp Asp Asp Asp Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Asp Asp Val
115                 120                 125
Asp Met Trp Phe His Leu Pro Asp Val Val Cys His
130                 135                 140
<210>  161
<211>  60
<212>  БЕЛОК
<213>  Medicago truncatula
<400>  161
Met Ala Lys Phe Ser Met Phe Val Tyr Ala Leu Ile Asn Phe Leu Ser
1               5                   10                  15
Leu Phe Leu Val Glu Thr Ala Ile Thr Asn Ile Arg Cys Val Ser Asp
20                  25                  30
Asp Asp Cys Pro Lys Val Ile Lys Pro Leu Val Met Lys Cys Ile Gly
35                  40                  45
Asn Tyr Cys Tyr Phe Phe Met Ile Tyr Glu Gly Pro
50                  55                  60
<210>  162
<211>  58
<212>  БЕЛОК
<213>  Medicago truncatula
<400>  162
Met Ala His Lys Phe Val Tyr Ala Ile Ile Leu Phe Ile Phe Leu Phe
1               5                   10                  15
Leu Val Ala Lys Asn Val Lys Gly Tyr Val Val Cys Arg Thr Val Asp
20                  25                  30
Asp Cys Pro Pro Asp Thr Arg Asp Leu Arg Tyr Arg Cys Leu Asn Gly
35                  40                  45
Lys Cys Lys Ser Tyr Arg Leu Ser Tyr Gly
50                  55
<210>  163
<211>  61
<212>  БЕЛОК
<213>  Medicago truncatula
<400>  163
Met Gln Arg Lys Lys Asn Met Gly Gln Ile Leu Ile Phe Val Phe Ala
1               5                   10                  15
Leu Ile Asn Phe Leu Ser Pro Ile Leu Val Glu Met Thr Thr Thr Thr
20                  25                  30
Ile Pro Cys Thr Phe Ile Asp Asp Cys Pro Lys Met Pro Leu Val Val
35                  40                  45
Lys Cys Ile Asp Asn Phe Cys Asn Tyr Phe Glu Ile Lys
50                  55                  60
<210>  164
<211>  57
<212>  БЕЛОК
<213>  Medicago truncatula
<400>  164
Met Ala Gln Thr Leu Met Leu Val Tyr Ala Leu Ile Ile Phe Thr Ser
1               5                   10                  15
Leu Phe Leu Val Val Ile Ser Arg Gln Thr Asp Ile Pro Cys Lys Ser
20                  25                  30
Asp Asp Ala Cys Pro Arg Val Ser Ser His His Ile Glu Cys Val Lys
35                  40                  45
Gly Phe Cys Thr Tyr Trp Lys Leu Asp
50                  55
<210>  165
<211>  77
<212>  БЕЛОК
<213>  Medicago truncatula
<400>  165
Met Leu Arg Arg Lys Asn Thr Val Gln Ile Leu Met Phe Val Ser Ala
1               5                   10                  15
Leu Leu Ile Tyr Ile Phe Leu Phe Leu Val Ile Thr Ser Ser Ala Asn
20                  25                  30
Ile Pro Cys Asn Ser Asp Ser Asp Cys Pro Trp Lys Ile Tyr Tyr Thr
35                  40                  45
Tyr Arg Cys Asn Asp Gly Phe Cys Val Tyr Lys Ser Ile Asp Pro Ser
50                  55                  60
Thr Ile Pro Gln Tyr Met Thr Asp Leu Ile Phe Pro Arg
65                  70                  75
<210>  166
<211>  59
<212>  БЕЛОК
<213>  Medicago truncatula
<400>  166
Met Ala Val Ile Leu Lys Phe Val Tyr Ile Met Ile Ile Phe Leu Phe
1               5                   10                  15
Leu Leu Tyr Val Val Asn Gly Thr Arg Cys Asn Arg Asp Glu Asp Cys
20                  25                  30
Pro Phe Ile Cys Thr Gly Pro Gln Ile Pro Lys Cys Val Ser His Ile
35                  40                  45
Cys Phe Cys Leu Ser Ser Gly Lys Glu Ala Tyr
50                  55
<210>  167
<211>  62
<212>  БЕЛОК
<213>  Medicago truncatula
<400>  167
Met Asp Ala Ile Leu Lys Phe Ile Tyr Ala Met Phe Leu Phe Leu Phe
1               5                   10                  15
Leu Phe Val Thr Thr Arg Asn Val Glu Ala Leu Phe Glu Cys Asn Arg
20                  25                  30
Asp Phe Val Cys Gly Asn Asp Asp Glu Cys Val Tyr Pro Tyr Ala Val
35                  40                  45
Gln Cys Ile His Arg Tyr Cys Lys Cys Leu Lys Ser Arg Asn
50                  55                  60
<210>  168
<211>  67
<212>  БЕЛОК
<213>  Medicago truncatula
<400>  168
Met Gln Ile Gly Arg Lys Lys Met Gly Glu Thr Pro Lys Leu Val Tyr
1               5                   10                  15
Val Ile Ile Leu Phe Leu Ser Ile Phe Leu Cys Thr Asn Ser Ser Phe
20                  25                  30
Ser Gln Met Ile Asn Phe Arg Gly Cys Lys Arg Asp Lys Asp Cys Pro
35                  40                  45
Gln Phe Arg Gly Val Asn Ile Arg Cys Arg Ser Gly Phe Cys Thr Pro
50                  55                  60
Ile Asp Ser
65
<210>  169
<211>  76
<212>  БЕЛОК
<213>  Medicago truncatula
<400>  169
Met Gln Met Arg Lys Asn Met Ala Gln Ile Leu Phe Tyr Val Tyr Ala
1               5                   10                  15
Leu Leu Ile Leu Phe Ser Pro Phe Leu Val Ala Arg Ile Met Val Val
20                  25                  30
Asn Pro Asn Asn Pro Cys Val Thr Asp Ala Asp Cys Gln Arg Tyr Arg
35                  40                  45
His Lys Leu Ala Thr Arg Met Val Cys Asn Ile Gly Phe Cys Leu Met
50                  55                  60
Asp Phe Thr His Asp Pro Tyr Ala Pro Ser Leu Pro
65                  70                  75
<210>  170
<211>  77
<212>  БЕЛОК
<213>  Medicago truncatula
<400>  170
Met Tyr Val Tyr Tyr Ile Gln Met Gly Lys Asn Met Ala Gln Arg Phe
1               5                   10                  15
Met Phe Ile Tyr Ala Leu Ile Ile Phe Leu Ser Gln Phe Phe Val Val
20                  25                  30
Ile Asn Thr Ser Asp Ile Pro Asn Asn Ser Asn Arg Asn Ser Pro Lys
35                  40                  45
Glu Asp Val Phe Cys Asn Ser Asn Asp Asp Cys Pro Thr Ile Leu Tyr
50                  55                  60
Tyr Val Ser Lys Cys Val Tyr Asn Phe Cys Glu Tyr Trp
65                  70                  75
<210>  171
<211>  67
<212>  БЕЛОК
<213>  Medicago truncatula
<400>  171
Met Ala Lys Ile Val Asn Phe Val Tyr Ser Met Ile Ile Phe Val Ser
1               5                   10                  15
Leu Phe Leu Val Ala Thr Lys Gly Gly Ser Lys Pro Phe Leu Thr Arg
20                  25                  30
Pro Tyr Pro Cys Asn Thr Gly Ser Asp Cys Pro Gln Asn Met Cys Pro
35                  40                  45
Pro Gly Tyr Lys Pro Gly Cys Glu Asp Gly Tyr Cys Asn His Cys Tyr
50                  55                  60
Lys Arg Trp
65
<210>  172
<211>  62
<212>  БЕЛОК
<213>  Medicago truncatula
<400>  172
Met Val Arg Thr Leu Lys Phe Val Tyr Val Ile Ile Leu Ile Leu Ser
1               5                   10                  15
Leu Phe Leu Val Ala Lys Gly Gly Gly Lys Lys Ile Tyr Cys Glu Asn
20                  25                  30
Ala Ala Ser Cys Pro Arg Leu Met Tyr Pro Leu Val Tyr Lys Cys Leu
35                  40                  45
Asp Asn Lys Cys Val Lys Phe Met Met Lys Ser Arg Phe Val
50                  55                  60
<210>  173
<211>  62
<212>  БЕЛОК
<213>  Medicago truncatula
<400>  173
Met Ala Arg Thr Leu Lys Phe Val Tyr Ala Val Ile Leu Phe Leu Ser
1               5                   10                  15
Leu Phe Leu Val Ala Lys Gly Asp Asp Val Lys Ile Lys Cys Val Val
20                  25                  30
Ala Ala Asn Cys Pro Asp Leu Met Tyr Pro Leu Val Tyr Lys Cys Leu
35                  40                  45
Asn Gly Ile Cys Val Gln Phe Thr Leu Thr Phe Pro Phe Val
50                  55                  60
<210>  174
<211>  65
<212>  БЕЛОК
<213>  Medicago truncatula
<400>  174
Met Ser Asn Thr Leu Met Phe Val Ile Thr Phe Ile Val Leu Val Thr
1               5                   10                  15
Leu Phe Leu Gly Pro Lys Asn Val Tyr Ala Phe Gln Pro Cys Val Thr
20                  25                  30
Thr Ala Asp Cys Met Lys Thr Leu Lys Thr Asp Glu Asn Ile Trp Tyr
35                  40                  45
Glu Cys Ile Asn Asp Phe Cys Ile Pro Phe Pro Ile Pro Lys Gly Arg
50                  55                  60
Lys
65
<210>  175
<211>  76
<212>  БЕЛОК
<213>  Medicago truncatula
<400>  175
Met Lys Arg Val Val Asn Met Ala Lys Ile Val Lys Tyr Val Tyr Val
1               5                   10                  15
Ile Ile Ile Phe Leu Ser Leu Phe Leu Val Ala Thr Lys Ile Glu Gly
20                  25                  30
Tyr Tyr Tyr Lys Cys Phe Lys Asp Ser Asp Cys Val Lys Leu Leu Cys
35                  40                  45
Arg Ile Pro Leu Arg Pro Lys Cys Met Tyr Arg His Ile Cys Lys Cys
50                  55                  60
Lys Val Val Leu Thr Gln Asn Asn Tyr Val Leu Thr
65                  70                  75
<210>  176
<211>  66
<212>  БЕЛОК
<213>  Medicago truncatula
<400>  176
Met Lys Arg Gly Lys Asn Met Ser Lys Ile Leu Lys Phe Ile Tyr Ala
1               5                   10                  15
Thr Leu Val Leu Tyr Leu Phe Leu Val Val Thr Lys Ala Ser Asp Asp
20                  25                  30
Glu Cys Lys Ile Asp Gly Asp Cys Pro Ile Ser Trp Gln Lys Phe His
35                  40                  45
Thr Tyr Lys Cys Ile Asn Gln Lys Cys Lys Trp Val Leu Arg Phe His
50                  55                  60
Glu Tyr
65
<210>  177
<211>  64
<212>  БЕЛОК
<213>  Medicago truncatula
<400>  177
Met Ala Lys Thr Leu Asn Phe Met Phe Ala Leu Ile Leu Phe Ile Ser
1               5                   10                  15
Leu Phe Leu Val Ser Lys Asn Val Ala Ile Asp Ile Phe Val Cys Gln
20                  25                  30
Thr Asp Ala Asp Cys Pro Lys Ser Glu Leu Ser Met Tyr Thr Trp Lys
35                  40                  45
Cys Ile Asp Asn Glu Cys Asn Leu Phe Lys Val Met Gln Gln Met Val
50                  55                  60
<210>  178
<211>  59
<212>  БЕЛОК
<213>  Medicago truncatula
<400>  178
Met Ala Asn Thr His Lys Leu Val Ser Met Ile Leu Phe Ile Phe Leu
1               5                   10                  15
Phe Leu Val Ala Asn Asn Val Glu Gly Tyr Val Asn Cys Glu Thr Asp
20                  25                  30
Ala Asp Cys Pro Pro Ser Thr Arg Val Lys Arg Phe Lys Cys Val Lys
35                  40                  45
Gly Glu Cys Arg Trp Thr Arg Met Ser Tyr Ala
50                  55
<210>  179
<211>  59
<212>  БЕЛОК
<213>  Medicago truncatula
<400>  179
Met Ala His Phe Leu Met Phe Val Tyr Ala Leu Ile Thr Cys Leu Ser
1               5                   10                  15
Leu Phe Leu Val Glu Met Gly His Leu Ser Ile His Cys Val Ser Val
20                  25                  30
Asp Asp Cys Pro Lys Val Glu Lys Pro Ile Thr Met Lys Cys Ile Asn
35                  40                  45
Asn Tyr Cys Lys Tyr Phe Val Asp His Lys Leu
50                  55
<210>  180
<211>  66
<212>  БЕЛОК
<213>  Medicago truncatula
<400>  180
Met Asn Gln Ile Pro Met Phe Gly Tyr Thr Leu Ile Ile Phe Phe Ser
1               5                   10                  15
Leu Phe Pro Val Ile Thr Asn Gly Asp Arg Ile Pro Cys Val Thr Asn
20                  25                  30
Gly Asp Cys Pro Val Met Arg Leu Pro Leu Tyr Met Arg Cys Ile Thr
35                  40                  45
Tyr Ser Cys Glu Leu Phe Phe Asp Gly Pro Asn Leu Cys Ala Val Glu
50                  55                  60
Arg Ile
65
<210>  181
<211>  61
<212>  БЕЛОК
<213>  Medicago truncatula
<400>  181
Met Arg Lys Asp Met Ala Arg Ile Ser Leu Phe Val Tyr Ala Leu Ile
1               5                   10                  15
Ile Phe Phe Ser Leu Phe Phe Val Leu Thr Asn Gly Glu Leu Glu Ile
20                  25                  30
Arg Cys Val Ser Asp Ala Asp Cys Pro Leu Phe Pro Leu Pro Leu His
35                  40                  45
Asn Arg Cys Ile Asp Asp Val Cys His Leu Phe Thr Ser
50                  55                  60
<210>  182
<211>  60
<212>  БЕЛОК
<213>  Medicago truncatula
<400>  182
Met Ala Gln Ile Leu Met Phe Val Tyr Phe Leu Ile Ile Phe Leu Ser
1               5                   10                  15
Leu Phe Leu Val Glu Ser Ile Lys Ile Phe Thr Glu His Arg Cys Arg
20                  25                  30
Thr Asp Ala Asp Cys Pro Ala Arg Glu Leu Pro Glu Tyr Leu Lys Cys
35                  40                  45
Gln Gly Gly Met Cys Arg Leu Leu Ile Lys Lys Asp
50                  55                  60
<210>  183
<211>  56
<212>  БЕЛОК
<213>  Medicago truncatula
<400>  183
Met Ala Arg Val Ile Ser Leu Phe Tyr Ala Leu Ile Ile Phe Leu Phe
1               5                   10                  15
Leu Phe Leu Val Ala Thr Asn Gly Asp Leu Ser Pro Cys Leu Arg Ser
20                  25                  30
Gly Asp Cys Ser Lys Asp Glu Cys Pro Ser His Leu Val Pro Lys Cys
35                  40                  45
Ile Gly Leu Thr Cys Tyr Cys Ile
50                  55
<210>  184
<211>  62
<212>  БЕЛОК
<213>  Medicago truncatula
<400>  184
Met Gln Arg Arg Lys Asn Met Ala Gln Ile Leu Leu Phe Ala Tyr Val
1               5                   10                  15
Phe Ile Ile Ser Ile Ser Leu Phe Leu Val Val Thr Asn Gly Val Lys
20                  25                  30
Ile Pro Cys Val Lys Asp Thr Asp Cys Pro Thr Leu Pro Cys Pro Leu
35                  40                  45
Tyr Ser Lys Cys Val Asp Gly Phe Cys Lys Met Leu Ser Ile
50                  55                  60
<210>  185
<211>  66
<212>  БЕЛОК
<213>  Medicago truncatula
<400>  185
Met Asn His Ile Ser Lys Phe Val Tyr Ala Leu Ile Ile Phe Leu Ser
1               5                   10                  15
Val Tyr Leu Val Val Leu Asp Gly Arg Pro Val Ser Cys Lys Asp His
20                  25                  30
Tyr Asp Cys Arg Arg Lys Val Lys Ile Val Gly Cys Ile Phe Pro Gln
35                  40                  45
Glu Lys Pro Met Cys Ile Asn Ser Met Cys Thr Cys Ile Arg Glu Ile
50                  55                  60
Val Pro
65
<210>  186
<211>  86
<212>  БЕЛОК
<213>  Medicago truncatula
<400>  186
Met Lys Ser Gln Asn His Ala Lys Phe Ile Ser Phe Tyr Lys Asn Asp
1               5                   10                  15
Leu Phe Lys Ile Phe Gln Asn Asn Asp Ser His Phe Lys Val Phe Phe
20                  25                  30
Ala Leu Ile Ile Phe Leu Tyr Thr Tyr Leu His Val Thr Asn Gly Val
35                  40                  45
Phe Val Ser Cys Asn Ser His Ile His Cys Arg Val Asn Asn His Lys
50                  55                  60
Ile Gly Cys Asn Ile Pro Glu Gln Tyr Leu Leu Cys Val Asn Leu Phe
65                  70                  75                  80
Cys Leu Trp Leu Asp Tyr
85
<210>  187
<211>  62
<212>  БЕЛОК
<213>  Medicago truncatula
<400>  187
Met Thr Tyr Ile Ser Lys Val Val Tyr Ala Leu Ile Ile Phe Leu Ser
1               5                   10                  15
Ile Tyr Val Gly Val Asn Asp Cys Met Leu Val Thr Cys Glu Asp His
20                  25                  30
Phe Asp Cys Arg Gln Asn Val Gln Gln Val Gly Cys Ser Phe Arg Glu
35                  40                  45
Ile Pro Gln Cys Ile Asn Ser Ile Cys Lys Cys Met Lys Gly
50                  55                  60
<210>  188
<211>  63
<212>  БЕЛОК
<213>  Medicago truncatula
<400>  188
Met Thr His Ile Ser Lys Phe Val Phe Ala Leu Ile Ile Phe Leu Ser
1               5                   10                  15
Ile Tyr Val Gly Val Asn Asp Cys Lys Arg Ile Pro Cys Lys Asp Asn
20                  25                  30
Asn Asp Cys Asn Asn Asn Trp Gln Leu Leu Ala Cys Arg Phe Glu Arg
35                  40                  45
Glu Val Pro Arg Cys Ile Asn Ser Ile Cys Lys Cys Met Pro Met
50                  55                  60
<210>  189
<211>  60
<212>  БЕЛОК
<213>  Medicago truncatula
<400>  189
Met Val Gln Thr Pro Lys Leu Val Tyr Val Ile Val Leu Leu Leu Ser
1               5                   10                  15
Ile Phe Leu Gly Met Thr Ile Cys Asn Ser Ser Phe Ser His Phe Phe
20                  25                  30
Glu Gly Ala Cys Lys Ser Asp Lys Asp Cys Pro Lys Leu His Arg Ser
35                  40                  45
Asn Val Arg Cys Arg Lys Gly Gln Cys Val Gln Ile
50                  55                  60
<210>  190
<211>  77
<212>  БЕЛОК
<213>  Medicago truncatula
<400>  190
Met Thr Lys Ile Leu Met Leu Phe Tyr Ala Met Ile Val Phe His Ser
1               5                   10                  15
Ile Phe Leu Val Ala Ser Tyr Thr Asp Glu Cys Ser Thr Asp Ala Asp
20                  25                  30
Cys Glu Tyr Ile Leu Cys Leu Phe Pro Ile Ile Lys Arg Cys Ile His
35                  40                  45
Asn His Cys Lys Cys Val Pro Met Gly Ser Ile Glu Pro Met Ser Thr
50                  55                  60
Ile Pro Asn Gly Val His Lys Phe His Ile Ile Asn Asn
65                  70                  75
<210>  191
<211>  64
<212>  БЕЛОК
<213>  Medicago truncatula
<400>  191
Met Ala Lys Thr Leu Asn Phe Val Cys Ala Met Ile Leu Phe Ile Ser
1               5                   10                  15
Leu Phe Leu Val Ser Lys Asn Val Ala Leu Tyr Ile Ile Glu Cys Lys
20                  25                  30
Thr Asp Ala Asp Cys Pro Ile Ser Lys Leu Asn Met Tyr Asn Trp Arg
35                  40                  45
Cys Ile Lys Ser Ser Cys His Leu Tyr Lys Val Ile Gln Phe Met Val
50                  55                  60
<210>  192
<211>  72
<212>  БЕЛОК
<213>  Medicago truncatula
<400>  192
Met Gln Lys Glu Lys Asn Met Ala Lys Thr Phe Glu Phe Val Tyr Ala
1               5                   10                  15
Met Ile Ile Phe Ile Leu Leu Phe Leu Val Glu Asn Asn Phe Ala Ala
20                  25                  30
Tyr Ile Ile Glu Cys Gln Thr Asp Asp Asp Cys Pro Lys Ser Gln Leu
35                  40                  45
Glu Met Phe Ala Trp Lys Cys Val Lys Asn Gly Cys His Leu Phe Gly
50                  55                  60
Met Tyr Glu Asp Asp Asp Asp Pro
65                  70
<210>  193
<211>  57
<212>  БЕЛОК
<213>  Medicago truncatula
<400>  193
Met Ala Ala Thr Arg Lys Phe Ile Tyr Val Leu Ser His Phe Leu Phe
1               5                   10                  15
Leu Phe Leu Val Thr Lys Ile Thr Asp Ala Arg Val Cys Lys Ser Asp
20                  25                  30
Lys Asp Cys Lys Asp Ile Ile Ile Tyr Arg Tyr Ile Leu Lys Cys Arg
35                  40                  45
Asn Gly Glu Cys Val Lys Ile Lys Ile
50                  55
<210>  194
<211>  75
<212>  БЕЛОК
<213>  Medicago truncatula
<400>  194
Met Gln Arg Leu Asp Asn Met Ala Lys Asn Val Lys Phe Ile Tyr Val
1               5                   10                  15
Ile Ile Leu Leu Leu Phe Ile Phe Leu Val Ile Ile Val Cys Asp Ser
20                  25                  30
Ala Phe Val Pro Asn Ser Gly Pro Cys Thr Thr Asp Lys Asp Cys Lys
35                  40                  45
Gln Val Lys Gly Tyr Ile Ala Arg Cys Arg Lys Gly Tyr Cys Met Gln
50                  55                  60
Ser Val Lys Arg Thr Trp Ser Ser Tyr Ser Arg
65                  70                  75
<210>  195
<211>  102
<212>  БЕЛОК
<213>  Medicago truncatula
<400>  195
Met Lys Phe Ile Tyr Ile Met Ile Leu Phe Leu Ser Leu Phe Leu Val
1               5                   10                  15
Gln Phe Leu Thr Cys Lys Gly Leu Thr Val Pro Cys Glu Asn Pro Thr
20                  25                  30
Thr Cys Pro Glu Asp Phe Cys Thr Pro Pro Met Ile Thr Arg Cys Ile
35                  40                  45
Asn Phe Ile Cys Leu Cys Asp Gly Pro Glu Tyr Ala Glu Pro Glu Tyr
50                  55                  60
Asp Gly Pro Glu Pro Glu Tyr Asp His Lys Gly Asp Phe Leu Ser Val
65                  70                  75                  80
Lys Pro Lys Ile Ile Asn Glu Asn Met Met Met Arg Glu Arg His Met
85                  90                  95
Met Lys Glu Ile Glu Val
100
<210>  196
<211>  59
<212>  БЕЛОК
<213>  Medicago truncatula
<400>  196
Met Ala Gln Phe Leu Met Phe Ile Tyr Val Leu Ile Ile Phe Leu Tyr
1               5                   10                  15
Leu Phe Tyr Val Glu Ala Ala Met Phe Glu Leu Thr Lys Ser Thr Ile
20                  25                  30
Arg Cys Val Thr Asp Ala Asp Cys Pro Asn Val Val Lys Pro Leu Lys
35                  40                  45
Pro Lys Cys Val Asp Gly Phe Cys Glu Tyr Thr
50                  55
<210>  197
<211>  70
<212>  БЕЛОК
<213>  Medicago truncatula
<400>  197
Met Lys Met Arg Ile His Met Ala Gln Ile Ile Met Phe Phe Tyr Ala
1               5                   10                  15
Leu Ile Ile Phe Leu Ser Pro Phe Leu Val Asp Arg Arg Ser Phe Pro
20                  25                  30
Ser Ser Phe Val Ser Pro Lys Ser Tyr Thr Ser Glu Ile Pro Cys Lys
35                  40                  45
Ala Thr Arg Asp Cys Pro Tyr Glu Leu Tyr Tyr Glu Thr Lys Cys Val
50                  55                  60
Asp Ser Leu Cys Thr Tyr
65                  70
<210>  198
<211>  41
<212>  БЕЛОК
<213>  Medicago truncatula
<400>  198
Thr Arg Met Leu Thr Ile Pro Cys Thr Ser Asp Asp Asn Cys Pro Lys
1               5                   10                  15
Val Ile Ser Pro Cys His Thr Lys Cys Phe Asp Gly Phe Cys Gly Trp
20                  25                  30
Tyr Ile Glu Gly Ser Tyr Glu Gly Pro
35                  40
<210>  199
<211>  69
<212>  БЕЛОК
<213>  Medicago truncatula
<400>  199
Met Ala Gln Phe Leu Leu Phe Val Tyr Ser Leu Ile Ile Phe Leu Ser
1               5                   10                  15
Leu Phe Phe Gly Glu Ala Ala Phe Glu Arg Thr Glu Thr Arg Met Leu
20                  25                  30
Thr Ile Pro Cys Thr Ser Asp Asp Asn Cys Pro Lys Val Ile Ser Pro
35                  40                  45
Cys His Thr Lys Cys Phe Asp Gly Phe Cys Gly Trp Tyr Ile Glu Gly
50                  55                  60
Ser Tyr Glu Gly Pro
65
<210>  200
<211>  78
<212>  БЕЛОК
<213>  Buchnera aphidicola
<400>  200
Met Lys Leu Leu His Gly Phe Leu Ile Ile Met Leu Thr Met His Leu
1               5                   10                  15
Ser Ile Gln Tyr Ala Tyr Gly Gly Pro Phe Leu Thr Lys Tyr Leu Cys
20                  25                  30
Asp Arg Val Cys His Lys Leu Cys Gly Asp Glu Phe Val Cys Ser Cys
35                  40                  45
Ile Gln Tyr Lys Ser Leu Lys Gly Leu Trp Phe Pro His Cys Pro Thr
50                  55                  60
Gly Lys Ala Ser Val Val Leu His Asn Phe Leu Thr Ser Pro
65                  70                  75
<210>  201
<211>  77
<212>  БЕЛОК
<213>  Buchnera aphidicola
<400>  201
Met Lys Leu Leu Tyr Gly Phe Leu Ile Ile Met Leu Thr Ile His Leu
1               5                   10                  15
Ser Val Gln Tyr Phe Glu Ser Pro Phe Glu Thr Lys Tyr Asn Cys Asp
20                  25                  30
Thr His Cys Asn Lys Leu Cys Gly Lys Ile Asp His Cys Ser Cys Ile
35                  40                  45
Gln Tyr His Ser Met Glu Gly Leu Trp Phe Pro His Cys Arg Thr Gly
50                  55                  60
Ser Ala Ala Gln Met Leu His Asp Phe Leu Ser Asn Pro
65                  70                  75
<210>  202
<211>  86
<212>  БЕЛОК
<213>  Buchnera aphidicola
<400>  202
Met Ser Val Arg Lys Asn Val Leu Pro Thr Met Phe Val Val Leu Leu
1               5                   10                  15
Ile Met Ser Pro Val Thr Pro Thr Ser Val Phe Ile Ser Ala Val Cys
20                  25                  30
Tyr Ser Gly Cys Gly Ser Leu Ala Leu Val Cys Phe Val Ser Asn Gly
35                  40                  45
Ile Thr Asn Gly Leu Asp Tyr Phe Lys Ser Ser Ala Pro Leu Ser Thr
50                  55                  60
Ser Glu Thr Ser Cys Gly Glu Ala Phe Asp Thr Cys Thr Asp His Cys
65                  70                  75                  80
Leu Ala Asn Phe Lys Phe
85
<210>  203
<211>  69
<212>  БЕЛОК
<213>  Buchnera aphidicola
<400>  203
Met Arg Leu Leu Tyr Gly Phe Leu Ile Ile Met Leu Thr Ile Tyr Leu
1               5                   10                  15
Ser Val Gln Asp Phe Asp Pro Thr Glu Phe Lys Gly Pro Phe Pro Thr
20                  25                  30
Ile Glu Ile Cys Ser Lys Tyr Cys Ala Val Val Cys Asn Tyr Thr Ser
35                  40                  45
Arg Pro Cys Tyr Cys Val Glu Ala Ala Lys Glu Arg Asp Gln Trp Phe
50                  55                  60
Pro Tyr Cys Tyr Asp
65
<210>  204
<211>  77
<212>  БЕЛОК
<213>  Buchnera aphidicola
<400>  204
Met Arg Leu Leu Tyr Gly Phe Leu Ile Ile Met Leu Thr Ile His Leu
1               5                   10                  15
Ser Val Gln Asp Ile Asp Pro Asn Thr Leu Arg Gly Pro Tyr Pro Thr
20                  25                  30
Lys Glu Ile Cys Ser Lys Tyr Cys Glu Tyr Asn Val Val Cys Gly Ala
35                  40                  45
Ser Leu Pro Cys Ile Cys Val Gln Asp Ala Arg Gln Leu Asp His Trp
50                  55                  60
Phe Ala Cys Cys Tyr Asp Gly Gly Pro Glu Met Leu Met
65                  70                  75
<210>  205
<211>  108
<212>  БЕЛОК
<213>  Buchnera aphidicola
<400>  205
Met Lys Leu Phe Val Val Val Val Leu Val Ala Val Gly Ile Met Phe
1               5                   10                  15
Val Phe Ala Ser Asp Thr Ala Ala Ala Pro Thr Asp Tyr Glu Asp Thr
20                  25                  30
Asn Asp Met Ile Ser Leu Ser Ser Leu Val Gly Asp Asn Ser Pro Tyr
35                  40                  45
Val Arg Val Ser Ser Ala Asp Ser Gly Gly Ser Ser Lys Thr Ser Ser
50                  55                  60
Lys Asn Pro Ile Leu Gly Leu Leu Lys Ser Val Ile Lys Leu Leu Thr
65                  70                  75                  80
Lys Ile Phe Gly Thr Tyr Ser Asp Ala Ala Pro Ala Met Pro Pro Ile
85                  90                  95
Pro Pro Ala Leu Arg Lys Asn Arg Gly Met Leu Ala
100                 105
<210>  206
<211>  178
<212>  БЕЛОК
<213>  Buchnera aphidicola
<400>  206
Met Val Ala Cys Lys Val Ile Leu Ala Val Ala Val Val Phe Val Ala
1               5                   10                  15
Ala Val Gln Gly Arg Pro Gly Gly Glu Pro Glu Trp Ala Ala Pro Ile
20                  25                  30
Phe Ala Glu Leu Lys Ser Val Ser Asp Asn Ile Thr Asn Leu Val Gly
35                  40                  45
Leu Asp Asn Ala Gly Glu Tyr Ala Thr Ala Ala Lys Asn Asn Leu Asn
50                  55                  60
Ala Phe Ala Glu Ser Leu Lys Thr Glu Ala Ala Val Phe Ser Lys Ser
65                  70                  75                  80
Phe Glu Gly Lys Ala Ser Ala Ser Asp Val Phe Lys Glu Ser Thr Lys
85                  90                  95
Asn Phe Gln Ala Val Val Asp Thr Tyr Ile Lys Asn Leu Pro Lys Asp
100                 105                 110
Leu Thr Leu Lys Asp Phe Thr Glu Lys Ser Glu Gln Ala Leu Lys Tyr
115                 120                 125
Met Val Glu His Gly Thr Glu Ile Thr Lys Lys Ala Gln Gly Asn Thr
130                 135                 140
Glu Thr Glu Lys Glu Ile Lys Glu Phe Phe Lys Lys Gln Ile Glu Asn
145                 150                 155                 160
Leu Ile Gly Gln Gly Lys Ala Leu Gln Ala Lys Ile Ala Glu Ala Lys
165                 170                 175
Lys Ala
<210>  207
<211>  311
<212>  БЕЛОК
<213>  Buchnera aphidicola
<400>  207
Met Lys Thr Ser Ser Ser Lys Val Phe Ala Ser Cys Val Ala Ile Val
1               5                   10                  15
Cys Leu Ala Ser Val Ala Asn Ala Leu Pro Val Gln Lys Ser Val Ala
20                  25                  30
Ala Thr Thr Glu Asn Pro Ile Val Glu Lys His Gly Cys Arg Ala His
35                  40                  45
Lys Asn Leu Val Arg Gln Asn Val Val Asp Leu Lys Thr Tyr Asp Ser
50                  55                  60
Met Leu Ile Thr Asn Glu Val Val Gln Lys Gln Ser Asn Glu Val Gln
65                  70                  75                  80
Ser Ser Glu Gln Ser Asn Glu Gly Gln Asn Ser Glu Gln Ser Asn Glu
85                  90                  95
Gly Gln Asn Ser Glu Gln Ser Asn Glu Val Gln Ser Ser Glu His Ser
100                 105                 110
Asn Glu Gly Gln Asn Ser Lys Gln Ser Asn Glu Gly Gln Asn Ser Glu
115                 120                 125
Gln Ser Asn Glu Val Gln Ser Ser Glu His Ser Asn Glu Gly Gln Asn
130                 135                 140
Ser Glu Gln Ser Asn Glu Val Gln Ser Ser Glu His Ser Asn Glu Gly
145                 150                 155                 160
Gln Asn Ser Lys Gln Ser Asn Glu Gly Gln Asn Ser Lys Gln Ser Asn
165                 170                 175
Glu Val Gln Ser Ser Glu His Trp Asn Glu Gly Gln Asn Ser Lys Gln
180                 185                 190
Ser Asn Glu Asp Gln Asn Ser Glu Gln Ser Asn Glu Gly Gln Asn Ser
195                 200                 205
Lys Gln Ser Asn Glu Gly Gln Asn Ser Lys Gln Ser Asn Glu Asp Gln
210                 215                 220
Asn Ser Glu Gln Ser Asn Glu Gly Gln Asn Ser Lys Gln Ser Asn Glu
225                 230                 235                 240
Val Gln Ser Ser Glu Gln Ser Asn Glu Gly Gln Asn Ser Lys Gln Ser
245                 250                 255
Asn Glu Gly Gln Ser Ser Glu Gln Ser Asn Glu Gly Gln Asn Ser Lys
260                 265                 270
Gln Ser Asn Glu Val Gln Ser Pro Glu Glu His Tyr Asp Leu Pro Asp
275                 280                 285
Pro Glu Ser Ser Tyr Glu Ser Glu Glu Thr Lys Gly Ser His Glu Ser
290                 295                 300
Gly Asp Asp Ser Glu His Arg
305                 310
<210>  208
<211>  431
<212>  БЕЛОК
<213>  Buchnera aphidicola
<400>  208
Met Lys Thr Ile Ile Leu Gly Leu Cys Leu Phe Gly Ala Leu Phe Trp
1               5                   10                  15
Ser Thr Gln Ser Met Pro Val Gly Glu Val Ala Pro Ala Val Pro Ala
20                  25                  30
Val Pro Ser Glu Ala Val Pro Gln Lys Gln Val Glu Ala Lys Pro Glu
35                  40                  45
Thr Asn Ala Ala Ser Pro Val Ser Asp Ala Lys Pro Glu Ser Asp Ser
50                  55                  60
Lys Pro Val Asp Ala Glu Val Lys Pro Thr Val Ser Glu Val Lys Ala
65                  70                  75                  80
Glu Ser Glu Gln Lys Pro Ser Gly Glu Pro Lys Pro Glu Ser Asp Ala
85                  90                  95
Lys Pro Val Val Ala Ser Glu Ser Lys Pro Glu Ser Asp Pro Lys Pro
100                 105                 110
Ala Ala Val Val Glu Ser Lys Pro Glu Asn Asp Ala Val Ala Pro Glu
115                 120                 125
Thr Asn Asn Asp Ala Lys Pro Glu Asn Ala Ala Ala Pro Val Ser Glu
130                 135                 140
Asn Lys Pro Ala Thr Asp Ala Lys Ala Glu Thr Glu Leu Ile Ala Gln
145                 150                 155                 160
Ala Lys Pro Glu Ser Lys Pro Ala Ser Asp Leu Lys Ala Glu Pro Glu
165                 170                 175
Ala Ala Lys Pro Asn Ser Glu Val Pro Val Ala Leu Pro Leu Asn Pro
180                 185                 190
Thr Glu Thr Lys Ala Thr Gln Gln Ser Val Glu Thr Asn Gln Val Glu
195                 200                 205
Gln Ala Ala Pro Ala Ala Ala Gln Ala Asp Pro Ala Ala Ala Pro Ala
210                 215                 220
Ala Asp Pro Ala Pro Ala Pro Ala Ala Ala Pro Val Ala Ala Glu Glu
225                 230                 235                 240
Ala Lys Leu Ser Glu Ser Ala Pro Ser Thr Glu Asn Lys Ala Ala Glu
245                 250                 255
Glu Pro Ser Lys Pro Ala Glu Gln Gln Ser Ala Lys Pro Val Glu Asp
260                 265                 270
Ala Val Pro Ala Ala Ser Glu Ile Ser Glu Thr Lys Val Ser Pro Ala
275                 280                 285
Val Pro Ala Val Pro Glu Val Pro Ala Ser Pro Ser Ala Pro Ala Val
290                 295                 300
Ala Asp Pro Val Ser Ala Pro Glu Ala Glu Lys Asn Ala Glu Pro Ala
305                 310                 315                 320
Lys Ala Ala Asn Ser Ala Glu Pro Ala Val Gln Ser Glu Ala Lys Pro
325                 330                 335
Ala Glu Asp Ile Gln Lys Ser Gly Ala Val Val Ser Ala Glu Asn Pro
340                 345                 350
Lys Pro Val Glu Glu Gln Lys Pro Ala Glu Val Ala Lys Pro Ala Glu
355                 360                 365
Gln Ser Lys Ser Glu Ala Pro Ala Glu Ala Pro Lys Pro Thr Glu Gln
370                 375                 380
Ser Ala Ala Glu Glu Pro Lys Lys Pro Glu Ser Ala Asn Asp Glu Lys
385                 390                 395                 400
Lys Glu Gln His Ser Val Asn Lys Arg Asp Ala Thr Lys Glu Lys Lys
405                 410                 415
Pro Thr Asp Ser Ile Met Lys Lys Gln Lys Gln Lys Lys Ala Asn
420                 425                 430
<210>  209
<211>  160
<212>  БЕЛОК
<213>  Buchnera aphidicola
<400>  209
Met Asn Gly Lys Ile Val Leu Cys Phe Ala Val Val Phe Ile Gly Gln
1               5                   10                  15
Ala Met Ser Ala Ala Thr Gly Thr Thr Pro Glu Val Glu Asp Ile Lys
20                  25                  30
Lys Val Ala Glu Gln Met Ser Gln Thr Phe Met Ser Val Ala Asn His
35                  40                  45
Leu Val Gly Ile Thr Pro Asn Ser Ala Asp Ala Gln Lys Ser Ile Glu
50                  55                  60
Lys Ile Arg Thr Ile Met Asn Lys Gly Phe Thr Asp Met Glu Thr Glu
65                  70                  75                  80
Ala Asn Lys Met Lys Asp Ile Val Arg Lys Asn Ala Asp Pro Lys Leu
85                  90                  95
Val Glu Lys Tyr Asp Glu Leu Glu Lys Glu Leu Lys Lys His Leu Ser
100                 105                 110
Thr Ala Lys Asp Met Phe Glu Asp Lys Val Val Lys Pro Ile Gly Glu
115                 120                 125
Lys Val Glu Leu Lys Lys Ile Thr Glu Asn Val Ile Lys Thr Thr Lys
130                 135                 140
Asp Met Glu Ala Thr Met Asn Lys Ala Ile Asp Gly Phe Lys Lys Gln
145                 150                 155                 160
<210>  210
<211>  415
<212>  БЕЛОК
<213>  Buchnera aphidicola
<400>  210
Met His Leu Phe Leu Ala Leu Gly Leu Phe Ile Val Cys Gly Met Val
1               5                   10                  15
Asp Ala Thr Phe Tyr Asn Pro Arg Ser Gln Thr Phe Asn Gln Leu Met
20                  25                  30
Glu Arg Arg Gln Arg Ser Ile Pro Ile Pro Tyr Ser Tyr Gly Tyr His
35                  40                  45
Tyr Asn Pro Ile Glu Pro Ser Ile Asn Val Leu Asp Ser Leu Ser Glu
50                  55                  60
Gly Leu Asp Ser Arg Ile Asn Thr Phe Lys Pro Ile Tyr Gln Asn Val
65                  70                  75                  80
Lys Met Ser Thr Gln Asp Val Asn Ser Val Pro Arg Thr Gln Tyr Gln
85                  90                  95
Pro Lys Asn Ser Leu Tyr Asp Ser Glu Tyr Ile Ser Ala Lys Asp Ile
100                 105                 110
Pro Ser Leu Phe Pro Glu Glu Asp Ser Tyr Asp Tyr Lys Tyr Leu Gly
115                 120                 125
Ser Pro Leu Asn Lys Tyr Leu Thr Arg Pro Ser Thr Gln Glu Ser Gly
130                 135                 140
Ile Ala Ile Asn Leu Val Ala Ile Lys Glu Thr Ser Val Phe Asp Tyr
145                 150                 155                 160
Gly Phe Pro Thr Tyr Lys Ser Pro Tyr Ser Ser Asp Ser Val Trp Asn
165                 170                 175
Phe Gly Ser Lys Ile Pro Asn Thr Val Phe Glu Asp Pro Gln Ser Val
180                 185                 190
Glu Ser Asp Pro Asn Thr Phe Lys Val Ser Ser Pro Thr Ile Lys Ile
195                 200                 205
Val Lys Leu Leu Pro Glu Thr Pro Glu Gln Glu Ser Ile Ile Thr Thr
210                 215                 220
Thr Lys Asn Tyr Glu Leu Asn Tyr Lys Thr Thr Gln Glu Thr Pro Thr
225                 230                 235                 240
Glu Ala Glu Leu Tyr Pro Ile Thr Ser Glu Glu Phe Gln Thr Glu Asp
245                 250                 255
Glu Trp His Pro Met Val Pro Lys Glu Asn Thr Thr Lys Asp Glu Ser
260                 265                 270
Ser Phe Ile Thr Thr Glu Glu Pro Leu Thr Glu Asp Lys Ser Asn Ser
275                 280                 285
Ile Thr Ile Glu Lys Thr Gln Thr Glu Asp Glu Ser Asn Ser Ile Glu
290                 295                 300
Phe Asn Ser Ile Arg Thr Glu Glu Lys Ser Asn Ser Ile Thr Thr Glu
305                 310                 315                 320
Glu Asn Gln Lys Glu Asp Asp Glu Ser Met Ser Thr Thr Ser Gln Glu
325                 330                 335
Thr Thr Thr Ala Phe Asn Leu Asn Asp Thr Phe Asp Thr Asn Arg Tyr
340                 345                 350
Ser Ser Ser His Glu Ser Leu Met Leu Arg Ile Arg Glu Leu Met Lys
355                 360                 365
Asn Ile Ala Asp Gln Gln Asn Lys Ser Gln Phe Arg Thr Val Asp Asn
370                 375                 380
Ile Pro Ala Lys Ser Gln Ser Asn Leu Ser Ser Asp Glu Ser Thr Asn
385                 390                 395                 400
Gln Gln Phe Glu Pro Gln Leu Val Asn Gly Ala Asp Thr Tyr Lys
405                 410                 415
<210>  211
<211>  126
<212>  БЕЛОК
<213>  Sitophilus zeamais
<400>  211
Met Thr Arg Thr Met Leu Phe Leu Ala Cys Val Ala Ala Leu Tyr Val
1               5                   10                  15
Cys Ile Ser Ala Thr Ala Gly Lys Pro Glu Glu Phe Ala Lys Leu Ser
20                  25                  30
Asp Glu Ala Pro Ser Asn Asp Gln Ala Met Tyr Glu Ser Ile Gln Arg
35                  40                  45
Tyr Arg Arg Phe Val Asp Gly Asn Arg Tyr Asn Gly Gly Gln Gln Gln
50                  55                  60
Gln Gln Gln Pro Lys Gln Trp Glu Val Arg Pro Asp Leu Ser Arg Asp
65                  70                  75                  80
Gln Arg Gly Asn Thr Lys Ala Gln Val Glu Ile Asn Lys Lys Gly Asp
85                  90                  95
Asn His Asp Ile Asn Ala Gly Trp Gly Lys Asn Ile Asn Gly Pro Asp
100                 105                 110
Ser His Lys Asp Thr Trp His Val Gly Gly Ser Val Arg Trp
115                 120                 125
<210>  212
<211>  220
<212>  БЕЛОК
<213>  Acyrthosiphon pisum
<400>  212
Met Lys Glu Thr Thr Val Val Trp Ala Lys Leu Phe Leu Ile Leu Ile
1               5                   10                  15
Ile Leu Ala Lys Pro Leu Gly Leu Lys Ala Val Asn Glu Cys Lys Arg
20                  25                  30
Leu Gly Asn Asn Ser Cys Arg Ser His Gly Glu Cys Cys Ser Gly Phe
35                  40                  45
Cys Phe Ile Glu Pro Gly Trp Ala Leu Gly Val Cys Lys Arg Leu Gly
50                  55                  60
Thr Pro Lys Lys Ser Asp Asp Ser Asn Asn Gly Lys Asn Ile Glu Lys
65                  70                  75                  80
Asn Asn Gly Val His Glu Arg Ile Asp Asp Val Phe Glu Arg Gly Val
85                  90                  95
Cys Ser Tyr Tyr Lys Gly Pro Ser Ile Thr Ala Asn Gly Asp Val Phe
100                 105                 110
Asp Glu Asn Glu Met Thr Ala Ala His Arg Thr Leu Pro Phe Asn Thr
115                 120                 125
Met Val Lys Val Glu Gly Met Gly Thr Ser Val Val Val Lys Ile Asn
130                 135                 140
Asp Arg Lys Thr Ala Ala Asp Gly Lys Val Met Leu Leu Ser Arg Ala
145                 150                 155                 160
Ala Ala Glu Ser Leu Asn Ile Asp Glu Asn Thr Gly Pro Val Gln Cys
165                 170                 175
Gln Leu Lys Phe Val Leu Asp Gly Ser Gly Cys Thr Pro Asp Tyr Gly
180                 185                 190
Asp Thr Cys Val Leu His His Glu Cys Cys Ser Gln Asn Cys Phe Arg
195                 200                 205
Glu Met Phe Ser Asp Lys Gly Phe Cys Leu Pro Lys
210                 215                 220
<210>  213
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Пенетратин
<400>  213
Arg Gln Ile Lys Ile Trp Phe Gln Asn Arg Arg Met Lys Trp Lys Lys
1               5                   10                  15
<210>  214
<211>  13
<212>  БЕЛОК
<213>  Вирус иммунодефицита человека 1
<400>  214
Gly Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg Arg Arg Pro Pro Gln
1               5                   10
<210>  215
<211>  18
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  pVEC
<400>  215
Leu Leu Ile Ile Leu Arg Arg Arg Ile Arg Lys Gln Ala His Ala His
1               5                   10                  15
Ser Lys
<210>  216
<211>  27
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Транспортан
<400>  216
Gly Trp Thr Leu Asn Ser Ala Gly Tyr Leu Leu Gly Lys Ile Asn Leu
1               5                   10                  15
Lys Ala Leu Ala Ala Leu Ala Lys Lys Ile Leu
20                  25
<210>  217
<211>  27
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  MPG
<400>  217
Gly Ala Leu Phe Leu Gly Phe Leu Gly Ala Ala Gly Ser Thr Met Gly
1               5                   10                  15
Ala Trp Ser Gln Pro Lys Lys Lys Arg Lys Val
20                  25
<210>  218
<211>  21
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Pep-1
<400>  218
Lys Glu Thr Trp Trp Glu Thr Trp Trp Thr Glu Trp Ser Gln Pro Lys
1               5                   10                  15
Lys Lys Arg Lys Val
20
<210>  219
<211>  18
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  MAP
<400>  219
Lys Leu Ala Leu Lys Leu Ala Leu Lys Ala Leu Lys Ala Ala Leu Lys
1               5                   10                  15
Leu Ala
<210>  220
<211>  9
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  R6W3
<400>  220
Arg Arg Trp Trp Arg Arg Trp Arg Arg
1               5
<210>  221
<211>  17
<212>  ДНК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Прямой праймер для Buchnera
<400>  221
gtcggctcat cacatcc                                                      17
<210>  222
<211>  20
<212>  ДНК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Обратный праймер для Buchnera
<400>  222
ttccgtctgt attatctcct                                                   20
<210>  223
<211>  390
<212>  ДНК
<213>  Sitophilus zeamais
<400>  223
catatgatga cccgcaccat gctgtttctg gcgtgcgtgg cggcgctgta tgtgtgcatt       60
agcgcgaccg cgggcaaacc ggaagaattt gcgaaactga gcgatgaagc gccgagcaac      120
gatcaggcga tgtatgaaag cattcagcgc tatcgccgct ttgtggatgg caaccgctat      180
aacggcggcc agcagcagca gcagcagccg aaacagtggg aagtgcgccc ggatctgagc      240
cgcgatcagc gcggcaacac caaagcgcag gtggaaatta acaaaaaagg cgataaccat      300
gatattaacg cgggctgggg caaaaacatt aacggcccgg atagccataa agatacctgg      360
catgtgggcg gcagcgtgcg ctggctcgag                                       390
<210>  224
<211>  34
<212>  ДНК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Прямой праймер для ColA
<400>  224
gtatctattc ccgtctacga acatatggaa ttcc                                   34
<210>  225
<211>  29
<212>  ДНК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Обратный праймер для ColA
<400>  225
ccgctcgagc catctgacac ttcctccaa                                         29
<210>  226
<211>  20
<212>  ДНК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Прямой праймер для Bacillus
<400>  226
gaggtagacg aagcgacctg                                                   20
<210>  227
<211>  20
<212>  ДНК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Обратный праймер для Bacillus
<400>  227
ttccctcacg gtactggttc                                                   20
<210>  228
<211>  21
<212>  ДНК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Buch_groES_18F
<400>  228
catgatcgtg tgcttgttaa g                                                 21
<210>  229
<211>  21
<212>  ДНК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Buch_groES_98R
<400>  229
ctgttcctcg agtcgatttc c                                                 21
<210>  230
<211>  21
<212>  ДНК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  ApEF1a 107F
<400>  230
ctgattgtgc cgtgcttatt g                                                 21
<210>  231
<211>  21
<212>  ДНК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  ApEF1a 246R
<400>  231
tatggtggtt cagtagagtc c                                                 21
<210>  232
<211>  13
<212>  БЕЛОК
<213>  Pandinus imperator
<400>  232
Phe Leu Ser Thr Ile Trp Asn Gly Ile Lys Gly Leu Leu
1               5                   10
<210>  233
<211>  13
<212>  БЕЛОК
<213>  Urodacus yaschenkoi
<400>  233
Ile Leu Ser Ala Ile Trp Ser Gly Ile Lys Ser Leu Phe
1               5                   10
<210>  234
<211>  13
<212>  БЕЛОК
<213>  Scorpiops tibetanus
<400>  234
Leu Trp Gly Lys Leu Trp Glu Gly Val Lys Ser Leu Ile
1               5                   10
<210>  235
<211>  22
<212>  БЕЛОК
<213>  Apostichopus japonicus
<400>  235
Phe Pro Phe Leu Lys Leu Ser Leu Lys Ile Pro Lys Ser Ala Ile Lys
1               5                   10                  15
Ser Ala Ile Lys Arg Leu
20
<210>  236
<211>  13
<212>  БЕЛОК
<213>  Urodacus yaschenkoi
<400>  236
Ile Leu Ser Ala Ile Trp Ser Gly Ile Lys Gly Leu Leu
1               5                   10
<210>  237
<211>  27
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Uy192 + пептид, проникающий в клетку
<400>  237
Tyr Gly Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg Arg Arg Phe Leu Ser Thr Ile
1               5                   10                  15
Trp Asn Gly Ile Lys Gly Leu Leu
20
<210>  238
<211>  20
<212>  ДНК
<213>  Прямой праймер для Sod
<400>  238
atagctgtcc agacgcttcg                                                   20
<210>  239
<211>  20
<212>  ДНК
<213>  Обратный праймер для Sod
<400>  239
atgtcgtcga ggcgattacc                                                   20
<210>  240
<211>  20
<212>  ДНК
<213>  Прямой праймер для SACT144
<400>  240
ggtgttggcg tacaagtcct                                                   20
<210>  241
<211>  20
<212>  ДНК
<213>  Обратный праймер для SACT314
<400>  241
gaattgcctg atggacaggt                                                   20
<---