Морфофункциональная характеристика лимфоидных органов при стафилококковой инфекции

Материалы X съезда ВНПОЭМП, Москва, 12-13 апреля 2012 г.

Инфекция и иммунитет

Нейтрофилы из периферической крови мигрируют в ткани и в секреты слизистых оболочек, где и осуществляют свои основные функции. На сегодняшний день не разработаны методы определения ловушек, образованных нейтрофилами в мукозаль-ных секретах. Главное препятствие в том, что существующие методы не позволяют дифференцировать нейтрофильную ДНК от слизи, которая находится в мукозальных секретах. Сущность предлагаемого нами способа окраски заключается в одновременном использовании двух красителей: Sytox Green для окрашивания внеклеточных волокон ДНК и ядер погибших клеток, а также синьки Эванса для фонового окрашивания нативного препарата (живые клетки и слизь).

Следующей задачей нашей работы, была клиническая апробация методов обнаружения НВЛ, разработанных на экспериментальных моделях.

Одну из таких клинических групп составили пациенты с сепсисом. С этой целью исследовали мазки из цельной крови. Полученные данные свидетельствуют о том, что при сепсисе, в отличие от здоровых пациентов в крови обнаруживается значительное количество нейтрофильных внеклеточных ловушек. Другую группу составили женщины с церви-цитом и вагинитом. Цервикальный и вагинальный секреты окрашивали сложным красителем. Было установлено, что при воспалении нижнего отдела гениталий увеличивается количество нейтрофиль-ных внеклеточных ловушек. Полученные результаты свидетельствуют о том, что данные методы доступны, просты в исполнении, и могут быть использованы для оценки функционального статуса нейтрофильных гранулоцитов в клинической лабораторной диагностике.

АНАЛИЗ СТРУКТУРЫ БИОМАТЕРИАЛА ИССЛЕДУЕМОГО В УЧРЕЖДЕНИЯХ ЗДРАВООХРАНЕНИЯ

О.Г. Дудникова, Л.М. Дементьева

Департамент здравоохранения Воронежской области, БУЗ ВО «Воронежская областная клиническая больница № 1», г. Воронеж

Проблема профилактики внутрибольничных инфекций является актуальной для учреждений здравоохранения Воронежской области. С целью разработки оперативных противоэпидемических мероприятий в течение ряда лет проводится мониторинг возбудителей, обнаруженных микробиологическими лабораториями больниц при обследовании госпитализированных лиц.

Анализировались результаты лабораторных микробиологических исследований биоматериала от больных — кровь, моча, отделяемое ран, пунктат, мокрота, грудное молоко, мазки со слизистых и кожных покровов.

Итоги: В 2011 г. проведен анализ 375 470 проб материала. Результаты микробиологического мониторинга показали, что наибольший процент высева микроорганизмов обнаружен при исследовании проб грудного молока (48,1%), мазков из зева и носа (42,3%), отделяемого слизистой глаз (37,8%). При анализе установлено, что чаще выделяется кокковая флора: стафилококки, стрептококки, энтерококки (57,8%), на втором месте — семейство энтеробакте-рий (24,3%). При анализе выделенной микрофлоры

за последние 5 лет отмечается тенденция роста выделенных грибковых возбудителей.

Для проведения коррекции противоэпидемических мероприятий руководителям учреждений здравоохранения регулярно направлялась информация с результатами мониторинга. В подразделениях больниц осуществлялась ротация дезинфицирующих средств.

В соответствии с результатами исследований, в микробиологических лабораториях учреждений здравоохранения области стали активнее внедряться методики видовой идентификации грибов рода Candida и контроля определения чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам методом диффузии в агар.

Полученные данные позволяют утверждать, что пейзаж микрофлоры, обнаруженной при обследовании больных, изменяется.

Проведенные исследования показали, что в целях организации своевременных профилактических мероприятий в стационарах учреждений здравоохранения существует необходимость оперативного реагирования противоэпидемических служб на изменение циркулирующей микрофлоры.

МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ЛИМФОИДНЫХ ОРГАНОВ ПРИ СТАФИЛОКОККОВОЙ ИНФЕКЦИИ

А.Н. Евстропов, Ю.А. Пименова, Л.Н. Захарова, Т.А. Агеева

Новосибирский государственный медицинский университет

Золотистый стафилококк, будучи хорошо изученным микроорганизмом, продолжает привлекать внимание, поскольку является инициатором инфекционно-воспалительных процессов любой локализации. Цель исследования — изучение структурных преобразований в мезентериальных лимфатических узлах и селезенке в динамике экспериментальной стафилококковой инфекции. Исследование выполнено на 160 самцах крыс породы Wistar массой 180—200 г. Животным опытной группы (n = 150) внутрибрюшинно под эфирным наркозом вводили 1 х 109 микробных клеток суточной культуры S. aureus. Через 3, 6, 12 часов, 1, 2, 3, 7, 9, 14 суток животных выводили из эксперимента, забирали мезентеральные лимфатические узлы, селезенку, кровь и перитонеальную жидкость для бактериологического и морфометрического исследований.

При бактериологическом исследовании выявлена разная интенсивность элиминации микроба. У животных 1 подгруппы (n = 50) наблюдалось длительное нахождение стафилококка (в лимфатических узлах, крови и перитонеальной жидкости — до 9 суток, в селезенке — до 3 суток). У животных 2 подгруппы (n = 100) отмечено быстрое освобождение от стафилококка (из лимфатических узлов и селезенки микроб не высевался уже через сутки).

При морфометрическом исследовании также установлены различия выраженности изменений и вовлеченности структурно-функциональных зон лимфатических узлов и селезенки животных 1 и 2 подгрупп. Наиболее интенсивно этот процесс происходил у животных 2 подгруппы — значительно увеличивались размеры и число лимфоидных фолликулов, — обеспечивая быструю элиминацию микроба. Освобождение от микроба через сутки

2012, Т. 2, № 1-2

Современное лабораторное обеспечение.

после инфицирования способствовало угасанию структурно-функциональных реакций. Поскольку уже через 3 часа количество микроба в лимфатических узлах животных 1 подгруппы было больше, чем во 2 подгруппе, а структурно-функциональные преобразования зон лимфоузла не были столь выраженным, нежели в узлах животных 2 подгруппы, элиминация агента в 1 подгруппе происходила медленнее и, соответственно, морфологические изменения сохранялись дольше.

Таким образом, выявлена разная интенсивность реакций бласттрансформации лимфоидных органов животных и, соответственно, реализация иммунных реакций, что определило динамику элиминации микроба при экспериментальной стафилококковой инфекции.

УСТОЙЧИВОСТЬ К ХИНОЛОНАМ ШТАММОВ S.TYPHI - ВОЗБУДИТЕЛЕЙ БРЮШНОГО ТИФА, ЗАРЕГИСТРИРОВАННОГО НА ТЕРРИТОРИИ РФ

С.А. Егорова1, Л.А. Кафтырева1, В.К. Козырева2, Е.В. Войтенкова1

ФБУН НИИ эпидемиологии и микробиологии имени Пастера, Санкт-Петербург; 2НИИантимикробной химиотерапии ГБОУ ВПО Смоленская государственная медицинская академия Минздравсоцразвития РФ, Смоленск

Препараты группы хинолонов стали использовать в качестве эмпирической терапии брюшного тифа в 1990-е годы в связи с появлением и широким распространением штаммов S.Typhi, устойчивых к традиционно используемым препаратам: левомицети-ну, ампициллину и ко-тримоксазолу. В настоящее время во всех странах (и эндемичных по брюшному тифу и для которых заболеваемость определяется завозными случаями), возбудитель брюшного тифа характеризуется устойчивостью к хинолонам (нали-диксовой кислоте) и сниженной чувствительностью к фторхинолонам (ципрофлоксацину, норфлокса-цину, офлоксацину). Эта глобальная тенденция затронула и административные территории РФ, в которых в последние годы регистрировались случаи, как правило, завозного брюшного тифа.

Исследования референс-центра по мониторингу за возбудителем брюшного тифа показали, что 82,8% (167 из 202 изученных штаммов) штаммов S.Typhi, выделенных в 2005—2011 гг. на различных территориях РФ, характеризовались таким фенотипом резистентности (МПК налидиксовой кислоты > 256 мг/л, МПК ципрофлоксацина 0,19—0,5 мг/л). Кроме того, у пяти штаммов (2,2%) МПК ципрофлоксацина превышала 32 мг/л, что свидетельствовало о резистентности. Устойчивость к налидиксовой кислоте обусловлена мутациями в гене gyrA, кодирующем субъединицу А фермента ДНК гиразы, который участвует в репликации ДНК и является мишенью для действия хинолонов. Все устойчивые штаммы имеют хотя бы одну мутацию, как правило, в кодоне 83 (Ser) gyrA. Наиболее широко встречается резистентность, связанная с заменой Ser83Phe. В российских штаммах, устойчивых к хинолонам, встречались два вида мутаций: Asp87Asn и Ser83Tyr, а у штамма устойчивого к ципрофлоксацину — двойная мутация Ser83Phe и Asp87Asn. Выявленные хромосомные мутации могут служить эпидемиологической меткой для выяснения происхождения и подтверждения завоза штаммов.

Многолетнее использование антибиотиков для терапии брюшного тифа сопровождается постоянной адаптацией возбудителя к их селективному давлению посредством различных механизмов: хромосомных точечных мутаций или мобильных генетических элементов, содержащих детерминанты резистентности. В настоящее время особенностью популяции штаммов S.Typhi является устойчивость к современным препаратам (хинолонам) и «восстановление» чувствительности к «старым» препаратам первой линии (хлорамфениколу, ампициллину, ко-тримоксазолу). Такие штаммы имеют глобальное распространение.

ПЕРСПЕКТИВЫ ИННОВАЦИОННЫХ РАЗРАБОТОК ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ЭЛЕКТРИЧЕСКОГО СОПРОТИВЛЕНИЯ БАКТЕРИЙ

В.В. Ефимов

ГБОУ ВПО «Тюменская государственная медицинская академия» Минздравасоцразвития России, г. Тюмень

Теоретическое обоснование электрокинетических свойств бактерий нашло отражение в теориях: Г. Гельмгольца — Ж. Перена и М. Гуа — О. Штерна. На поверхности биологических частиц, находящихся в жидкой среде, возникает двойной электрической слой типа конденсатора. Одна обкладка — заряженная поверхность биологической частицы, а другая — ионы, находящиеся в жидкости и несущие противоположный заряд. Двойной электрический слой биологических частиц образуется под влиянием двух противоположно действующих сил: электрического притяжения и теплового движения ионов. Наличие поверхностного электрического заряда на микробных клетках позволило определять в жидкой среде их электрическое сопротивление, которое зависит от многих факторов, в частности, от вида микроорганизма, его концентрации в жидкой среде и физиологического состояния микробных клеток.

Проведенные исследования показали, что в условиях проведения опытов электрическое сопротивление исследуемых микробных взвесей (возбудителей ИСМП) находилось в пределах 500—2000 кОм. Используяпоказателиэлектрическогосопротивления микробных взвесей предложен метод определения максимальной концентрации Staphylococcus aureus, Proteus mirabilis, Citrobacter freundii и Pseudomonas aeruginosa, способ индикации госпитальных и спорадических штаммов P. aeruginosa, S. aureus, Enterobacter cloacae, способ индикации некультивируемых бактерий стафилококка, разработан экспресс метод определения в жидкой среде P. aeruginosa и Escherichia coli, некультивируемые в лабораторных условиях, сконструировано устройство для выделения некульти-вируемых бактерий. Выше перечисленные научные исследования являются объектом интеллектуальной собственности и защищены заявками на патенты и полезную модель.

Экспресс метод индикации культивируемых и некультивируемых бактерий в лабораторных условиях открывает новые возможности для проведения предэпидемической диагностики инфекционных заболеваний, оценки эпидемического благополучия в лечебно-профилактических учреждениях (ЛПУ), контроля эффективности проведения текущей и заключительной дезинфекции, а также для разработки критериев определения качества применяемых дезинфекционных средств в ЛПУ.