СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СУХОГО СИНБИОТИЧЕСКОГО ПРЕПАРАТА
METHOD FOR MAKING DRY SYNBIOTIC PREPARATION

Изобретение относится к области биотехнологии, синбиотикам, препаратам для профилактики дисбактериозов и различных заболеваниях, связанных со свободно-радикальным окислением липидов в организме человека.
Известен способ получения сухого бактериального препарата путем сублимационной сушки биопрепарата на основе ацидофильных бактерий и бифидобактерий (Патент РФ №2083666, кл. 6 С12N 1/20, А23С 9/12, С12N 1/20, опубл. 01.07.1997 г.). К недостаткам данного способа относится применение дорогостоящей сублимационной сушки, требующей больших капиталовложений в производство препарата.
Известен способ получения сухого пробиотического препарата, предусматривающий получение маточной культуры штаммов микроорганизмов Rhuminococcus albus Kr, Lactobacillus acidophilus Scav. BKПM В 4625, совместное культивирование маточной культуры на подсолнечном шроте при температуре 30-45°С в течение 4-8 суток, с последующим смешиванием получившийся полувлажной формы с сухим шротом в соотношении 1:10-1:12 до получения влажности в готовом препарате 8-10% (патент РФ №2280464, А61К 35/66, А23К 1/165, опубл. 27.07.2006 г.). К недостаткам данного способа относится отсутствие в препарате компонентов, стимулирующих рост и развитие собственной микрофлоры хозяина.
Техническим результатом изобретения является следующее: полученный препарат обладает выраженным синбиотическим эффектом за счет использования муки из семян амаранта, в качестве источника пребиотиков - пектиновых веществ и биологически активных веществ - сквалена с радиопротекторными свойствами; токоферолов с антиоксидантными, иммуномоделирующими свойствами с одной стороны, и комплекса молочнокислых микроорганизмов, обладающих высокой антагонистической активностью (в отношении патогенной микрофлоры кишечника), высокой выживаемостью в кислой среде желудка и обеспечивающих своими метаболитами улучшение микробиоценоза кишечника с другой стороны. Препарат, полученный по заявляемому способу, оказывает рост-стимулирующее воздействие на нормофлору организма и поэтому показан для профилактики и лечения не только дисбактериоза кишечника, но и при различных заболеваниях, связанных со свободно-радикальным окислением липидов в организме человека (атеросклероз, в том числе ишемическая болезнь сердца, стенокардия, гипертоническая болезнь, лучевое и другие негативные воздействия).
Технический результат достигается предложенным способом. Готовят маточную культуру совместным культивированием молочнокислых микроорганизмов Lactobacillus acidophilus В 3235, Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus В 5788, Bifidobacterium longum AC 1249, Bifidobacterium adolescentis AC 1244, взятых в равной пропорции на питательной среде, состоящей из смеси молока коровьего, глюкозы, сахарозы, агара и воды при следующем соотношении компонентов, мас%:
Молоко коровье
50
Глюкоза
5-15
Лактоза
5-15
Агар
3-4
Вода
остальное
9
8
осуществляют твердофазную ферментацию маточной культуры на стерилизованной муке из семян амаранта, взятых в соотношении 1:1 при 35-40°С в течении 4-6 суток с получением в полувлажном препарате не менее 2·10КОЕ/г, перемешивают последнюю со стерилизованной мукой из семян амаранта до получения влажности в готовом препарате 8-12% и биотитра не менее 2·10 КОЕ/г.
Штамм Lactobacillus acidophilus В 3235 является антагонистом бактерий кишечной группы и используется для получения лечебно-профилактического кормового продукта и как пробиотик в медицине и ветеринарии, продуцент молочной кислоты.
Штамм Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus В 5788 применяется в качестве лечебно-профилактического препарата медицинского и ветеринарного назначения.
Штаммы бактерий Bifidobacterium longum AC 1249, Bifidobacterium adolescentis AC 1244 являются пробиотиками и активными продуцентами витаминов группы В.
Семена амаранта являются высокобелковым продуктом со сбалансированным аминокислотным составом, высоким содержанием кальция, витамина С и пищевых волокон, являющихся стимулириующим фактором роста молочнокислых бактерий в кишечнике.
Таким образом, получен комбинированный синбиотический препарат сообщества доминантных молочнокислых микроорганизмов с семенами амаранта, содержащими компоненты-пребиотики, стимулирующие рост представителей нормальной микрофлоры кишечника.
Пример 1. Для культивирования пробиотических штаммов молочнокислых микроорганизмов Lactobacillus acidophilus В 3235, Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus В 5788, Bifidobacterium longum AC 1249, Bifidobacterium adolescentis AC 1244 используют питательную среду следующего состава, мас%:
Молоко коровье
50
Глюкоза
6
Лактоза
14
Агар
3
Вода
остальное
9
8
Культивирование проводят при 35°С в течение 72 часов, активная кислотность к концу культивирования рН 4,5. Тверд офазную ферментацию полученной маточной культуры проводят на цельно смолотой муке из семян амаранта, стерилизованной при 121°С в течение 40 мин, при температуре 35°С в течение 4 суток с получением в полувлажном препарате 1·10 КОЕ/г и рН 4,0. Полувлажную форму препарата перемешивают со стерилизованной мукой из семян амаранта с получением сухой формы препарата с биотитром 1·10 КОЕ/г и влажности в готовом препарате 12%.
Пример 2. Для культивирования пробиотических штаммов молочнокислых микроорганизмов Lactobacillus acidophilus В 3235, Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus В 5788, Bifidobacterium longum AC 1249, Bifidobacterium adolescentis AC 1244 используют питательную среду следующего состава, мас%:
Молоко коровье
50
Глюкоза
10
Лактоза
10
Агар
3,5
Вода
остальное
9
8
Культивирование проводят при 37°С в течение 72 часов, активная кислотность к концу культивирования рН 3,5. Твердофазную ферментацию полученной маточной культуры проводят на стерилизованной цельно смолотой муке из семян амаранта, при температуре 37°С в течение 4 суток с получением в полувлажном препарате 2·10 КОЕ/г и рН 3,6. Полувлажную форму препарата перемешивают со стерилизованной мукой из семян амаранта с получением сухой формы препарата с биотитром 2·10 КОЕ/г и влажности в готовом препарате 9%.
Пример 3. Для культивирования пробиотических штаммов молочнокислых микроорганизмов Lactobacillus acidophilus В 3235, Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus В 5788, Bifidobacterium longum AC 1249, Bifidobacterium adolescentis AC 1244 используют питательную среду следующего состава, мас%:
Молоко коровье
50
Глюкоза
14
Лактоза
6
Агар
4
Вода
остальное
9
8
Культивирование проводят при 40°С в течение 72 часов, активная кислотность к концу культивирования рН 4. Твердофазную ферментацию полученной маточной культуры проводят на стерилизованной цельно смолотой муке из семян амаранта, при температуре 40°С в течение 5 суток с получением в полувлажном препарате 1,5·10 КОЕ/г и рН 4,3. Полувлажную форму препарата перемешивают со стерилизованной мукой из семян амаранта с получением сухой формы препарата с биотитром 1·10 КОЕ/г и влажности в готовом препарате 10%.
Цельно смолотая мука амаранта содержит в своем составе не менее 5,5 г/100 г пищевых волокон, которые не перевариваются эндогенными секретами желудочно-кишечного тракта, стимулируют рост и метаболизм микроорганизмов, обитающих в толстом кишечнике, обеспечивая нормальный состав кишечной микрофлоры. Защитные компоненты, входящие в состав питательной среды для маточной культуры, обеспечивают лучшую выживаемость и сохранность микроорганизмов в сухом препарате.
В лабораторном опыте на белых мышах было сформировано 3 группы по 25 голов в каждой. Мыши контрольной 1-й группы получали стандартный рацион согласно нормам, изложенным в Приказе по Министерству здравоохранения СССР за №163 от 10 марта 1966 г. О нормах кормления лабораторных животных и продуцентов. Мышам 2-й и 3-й групп добавляли 0,05 и 0,1 г синбиотического препарата соответственно. Продолжительность опыта 56 суток.
Контролируемый показатель
Группы
1
2
3
Количество мышей на начало опыта
25
25
25
На конец опыта
20
24
25
Сохранность, %
80
96
100
Живая масса одной мыши на начало опыта, г
9,90
9,91
9,86
На конец опыта
22,9
26,3
31,9
Прирост живой массы тела, г
13
16,39
22,04
Исследования показали, что применение препарата повысило сохранность мышей и увеличило прирост живой массы тела во 2-й и 3-й группах на 26 и 69,5% соответственно. Препарат не оказывает неблагоприятных воздействий на организм, каких-либо патологических изменений в ходе приема препарата не обнаружено.