Роль гистамина и гистаминовых рецепторов Н3/4-типа в регуляции синтеза IgE при тяжелой астме у детей

больных с проявлениями атопического дерматита. У всех пациентов была повышенная складчатость кожи ладоней и подошв, у 60% - ониходистрофии.

Перечисленные гистологические, иммуногистохими-ческие и ультраструктурные особенности ВИ могут быть использованы при дифференциальной диагностике с приобретенным ихтиозом, другими формами ихтиоза, что очень важно для назначения адекватной терапии, медико-генетического консультирования. К сожалению, данные исследования не позволяют ответить на все вопросы об этиологии и патогенезе ВИ, механизмах нарушения процессов кератинизации, что требует дальнейшего изучения и генетических исследований.

Поступила 14.11.2006 ЛИТЕРАТУРА

1. Патология кожи / Под. ред. В. Н. Мордовцева, Г. М. Цветковой. М.: Медицина. 1993.

2. Суворова К. Н., Антоньев А. А. Генетически обусловленная патология кожи. Ростов-на-Дону, 1990. С. 270-283.

3. Фицпатрик Т., Джонсон Р., Полано М., Сюрмонд Д. Дерматология, атлас-справочник: Перевод с англ. Мак-Гроу-Хилл: Практика, 1999. С. 96-111.

4. Цветкова Г. М., Мордовцева В. В., Вавилов А. М. Патоморфология болезней кожи. М., 2003. C. 94-100.

5. Anton-Lamprecht I. Ultrastructural identification of basic abnormalities as clues to genetic disorders of the epidermis // J. Invest. Dermatol. 1994. Vol. 103 (5). P. 68-98.

6. Compton J. G., DiGiovanna J. J., Johnston K. A., Fleckman P., Bale S. J. Mapping of the associated phenotype of an absent granular layer in ichthyosis vulgaris to the epidermal differentiation complex on chromosome 1. Exp Dermatol. 2002. Dec. № 11 (6). P. 518-526.

7. Fleckman P., Brumbaugh S. Absence of the granular layer and keratohyalin define a morphologically distinct subset of individuals with ichthyosis vulgaris. Exp Dermatol. 2002 Aug. № 11 (4). P. 27-36.

8. Jason F., Okulicz M. D., Robert A., Schwartz M. D. MPH Hereditary and acquired ichthyosis vulgaris // Internat. J. Dermatol.

2003, № 42. P. 95-98.

9. Manabe M., Sanchez M., Sun T. T., Dale B. A. Interaction of filaggrin with keratin filaments during advanced stages of normal human epidermal differentiation and in ichthyosis vulgaris // Differentiation. 1991 Sep. № 48 (1). P. 43-50.

По эпидемиологическим данным одних авторов, бронхиальная астма - одно из наиболее распространенных заболеваний современного общества. За последние 40 лет распространенность аллергии и астмы в развитых странах возросла в 2-3 раза, а сами заболевания приобрели характер эпидемии. Рост заболеваемости аллергией и астмой совпал с изменением как окружающей среды, так и образа жизни людей [1]. Среди взрослого населения болезнь регистрируется более чем в 5% случаев, у детей еще чаще -до 10% [2]. По данным официальной статистики, в последние годы значительно возросло число детей,

10. Nirunsuksiri W., Presland R. B., Brumbaugh S. G., Dale B. A., Fleckman P. Decreased profilaggrin expression in ichthyosis vulgaris is a result of selectively impaired posttranscriptional control. J Biol Chem. 1995 Jan 13; № 270 (2). P. 871-876.

11. Sandilands A., O’Regan G. M. et alt. Prevalent and rare mutations in the gene encoding filaggrin cause ichthyosis vulgaris and predispose individuals to atopic dermatitis // J. Invest. Dermatol 2006 Aug. № 126 (8). P. 1770-1775.

12. Smith F. J., Irvine A. D. et alt. Loss-of-function mutations in the gene encoding filaggrin cause ichthyosis vulgaris // Nat. Genet. 2006. № Mar. № 38 (3). P. 337-342.

13. Sybert V. P., Dale B. A., Holbrook K. A. Ichthyosis vulgaris:identification of a defect in synthesis of filaggrin correlated withan absence of keratohyaline granules // Journal of Investigative Dermatology. 1985, № 84. P. 191-194.

14. Takahashi K., Folmer S., Colombe P. A. Incresed expression of keratin 16 causes anomalies in cytoarchitecture and keratinization in transgenic mouse skin // J. Cell. Biol. Vol. 127, № 2. P. 505-510.

15. Weidinger S., Irvine A. D. et alt. Loss-of-function variations within the filaggrin gene predispose for atopic dermatitis with allergic sensitizations // J Allergy Clin Immunol 2006 Jul. № 118 (1). P. 214-219.

16. Zhong W., Cui B., Zhang Y., Jiang H., Wei S., Bu L., Zhao G., Hu L., Kong X. Linkage analysis suggests a locus of ichthyosis vulgaris on 1q22 // J Hum Genet. 2003. № 48 (7). P. 390-392. Epub 2003 Jun 28.

A. K. ALEKSANDROVA

KLINICAL AND MORPHOLOGIC BASIS OF ICHTHYOSIS VULGARIS

Literature review as well as the data of the authors, concerning ichthyosis vulgaris (IV) are presented. We have demonstrated that the structural protein filaggrin is reduced or absent in patients with IV and this biochemical abnormality correlates with the morphologic reduction in the amount of keratohyalin, and with the clinical severity of the disorder. Atopic manifestations are associated with IV. Nearly 75% of the patients in our stady had atopic symptoms.

Key words: ichthyosis vulgaris, filaggrin, kera-tohyalin granules.

страдающих бронхиальной астмой, и показатели ее распространенности достигают 10-30%. Отмечается также тенденция к более раннему началу заболевания, и сейчас его нередко диагностируют у детей первых месяцев жизни [3]. Таким образом, бронхиальная астма (БА) является одной из самых актуальных проблем медицины. Согласно современным международным руководствам выделяют 4 степени тяжести БА у детей. Наиболее сложной и проблематичной во всех аспектах является тяжелая астма (ТБА). Это связано с высоким риском развития угрожающих жизни состояний, значительным влиянием на качество жизни

А. Н. АНДРЕЯНОВА, Д. В. ЛЁСИК, Р. А. ХАНФЕРЯН

РОЛЬ ГИСТАМИНА И ГИСТАМИН0ВЫХ РЕЦЕПТОРОВ Н3/4-ТИПА В РЕГУЛЯЦИИ СИНТЕЗА 1ЭЕ ПРИ ТЯЖЕЛОЙ АСТМЕ У ДЕТЕЙ

Кафедра клинической иммунологии, аллергологии и лабораторной диагностики

ГОУ ВПО КГМУ Росздрава

УДК 616.248-053.4/.5-08-039.32

ребенка, необходимостью назначения высоких доз противовоспалительных препаратов, в связи с чем возрастает риск развития побочных эффектов. Вместе с тем в настоящее время нет четких представлений о механизмах формирования тяжелой астмы у детей. До настоящего времени дискутабельны причины, не позволяющие достичь адекватного контроля над симптомами астмы при условии назначения адекватной противовоспалительной терапии. Считается, что одним из основных факторов, предопределяющих тяжелое течение БА, является высокий индекс атопии [5]. Важную роль в патогенезе БА играет гиперпродукция IgE. Многие механизмы причин подобного синтеза до настоящего времени не изучены. Неясна роль гистамина и новых типов гистаминовых рецепторов в синтезе IgE. Предыдущими работами были получены данные, свидетельствующие о важной роли Н3/4 рецепторов в регуляции синтеза IgE [7]. Была доказана их роль в супрессии синтеза IgE гистамином и, таким образом, в отрицательной регуляции синтеза IgE [4, 6].

Целью настоящей работы стало изучение закономерностей влияния гистамина и блокады гистаминовых рецепторов Н3/Н4-типа на синтез IgE при ТБА, в том числе при гормонозависимой астме у детей.

Материалы и методы

Под наблюдением находилось 18 детей с атопической БА тяжелой степени (3-я группа) и 12 детей с тяжелой гормонозависимой астмой (ТГБА) (2-я группа), находившихся на стационарном лечении в краевой детской клинической больнице г. Краснодара по поводу обострения астмы. Возраст детей составил от 6 до 15 лет. Группу контроля составили 12 здоровых детей (1-я группа). Диагноз ТБА устанавливался в соответствии с критериями Global Initiativ for Asthma, пересмотр 2002 года (GINA): постоянное наличие типичных дневных симптомов, ночные симптомы более 3 раз в неделю, значительное ограничение физических нагрузок, показатель ОФВ1 менее 60% от возрас-

тной нормы, суточные колебания бронхопроводимости более 30%. Атопическая форма БА была подтверждена уровнем общего IgE и наличием диагностического титра специфических IgE к бытовым, грибковым и эпидермальным, пищевым аллергенам, данными семейного и личного анамнеза. Длительность течения болезни к моменту начала наблюдения составила в среднем 6,5 ±/ -0,6 года. Началом болезни считался возраст возникновения первого эпизода бронхиальной обструкции. У одного ребенка в анамнезе дважды был зарегистрирован астматический статус. Всем больным проводилось исследование ФВД методом спирометрии. Для ежедневного мониторинга применялись индивидуальные пикфлоуметры с регистрацией пиковой скорости выдоха в утренние и вечерние часы. К моменту обследования больные 3-й группы не получали адекватной базисной терапии: 14 из них получали низкие дозы ингаляционных кортикостероидов (ИКС) (</= 400 мкг/сут.), остальные 4 человека получали интал, бронходилятаторы. Больные 2-й группы на момент поступления получали per os 5 мг предни-золона в сутки. Эти же дети были обследованы через 3 месяца после подобранной базисной терапии (клиническая ремиссия). Забор крови производился до начала адекватной терапии. МПК выделялись из гепа-ринизированной крови общепринятым методом на центрифуге РС-6 в градиенте плотности фиколл-пак (плотность - 1,077-78) (фирма «Pharmacia», Швейцария). После двукратной отмывки в среде 199 лейкоциты ресуспендировали в среде RPMI 1640, содержащей: 2мМ L-глютамина, 10 мМ Hepes (фирма «Serva», Германия) с добавлением 10%-ной эмбриональной телячьей сыворотки и 40 мкг/мл гентамицина. Культивирование проводилось в 96 луночных планшетах в концентрации 200 тысяч клеток на лунку и объеме 150 мкл, в СО2 инкубаторе, содержащем 5% СО2, при 96%-ной влажности и 37° С, 6 суток для определения уровня синтеза IgE. Содержание общего IgE в сыворотках и концентрации IgE в супернатантах определяли иммуноферментным методом с использованием

Ш Здоровые  ТГБА Ш ТБАБ Щ ТБАМ

Рис. 1. Уровень синтеза 1дЕ в клеточных культурах МПК здоровых детей и больных тяжелой астмой в стадии обострения

16

14

12

10

ш

I i

1 1 i

1 1 Р

1 1 1р 1 1

1 1

1

гй г1 и гЛ 1 г1 ! г| т

Здоровые

ТГБА

ТБАБ

ТБАМ

К0

Н3/4

Г-5

Г-8

Н3/4+Г-5 Н3/4+Г-8

Рис. 2. Уровень синтеза 1дЕ в клеточных культурах МПК здоровых детей и больных тяжелой астмой в стадии ремиссии

Условные обозначения:

Здоровые - уровень синтеза 1дЕ МПК здоровых лиц;

ТГБА - уровень синтеза 1дЕ МПК детей с тяжелой гормонозависимой бронхиальной астмой;

ТБАБ - уровень синтеза 1дЕ МПК детей с тяжелой бронхиальной астмой с более высоким уровнем спонтанного синтеза;

ТБАМ - уровень синтеза 1дЕ МПК детей с тяжелой бронхиальной астмой с менее высоким уровнем спонтанного синтеза;

Г-5 - уровень синтеза 1дЕ при добавлении в систему МПК гистамина в концентрации 10-5М;

Г-8 - уровень синтеза 1дЕ при добавлении в систему МПК гистамина в концентрации 10'8М;

Н3/4 - уровень синтеза 1дЕ при добавлении в систему МПК блокатора Н3/4 рецепторов РЫБ 181 Иу^одепта!еа1е;

Н3/4 Г (-5;-8) - уровень синтеза 1дЕ при добавлении в систему МПК блокатора Н3/4-рецепторов РУБ 181 Иу^одепта!еа1е одновременно с гистамином в соответствующей концентрации.

стандартных тест-наборов для определения общего IgE человека (IgE-total, FEiA, «Pharmacia»). Были определены уровень спонтанного синтеза IgE, уровень синтеза IgE при добавлении в культуральную систему гистамина в низкой (10-8М) и высокой (10-5М) концентрации, а также при добавлении в систему блокатора Н3/4 рецепторов FUB 181 hydrogenmaleate в концентрации 10-5 (концентрации используемых препаратов были установлены нами ранее на основании предварительно проведенных исследований). Статистическая обработка выполнялась на персональной ЭВМ: программа «Statiatica-6» (Copyright, Stat Soft, Inc. 1984-2001). Данные представлены в виде M±s , где М - среднее арифметическое значение признака, S - среднее квадратичное отклонение. Анализ проводился с помощью критерия Вилкоксона.

Результаты и обсуждение

Полученные данные показали, что в 3-й группе обнаружились определенные различия в ответе МПК на введение гистамина и Н3/4-блокатора, что продиктовало необходимость разделения выборки на подгруппы. Подгруппа 3.1 (10 человек) с менее высоким

уровнем сывороточного 1дЕ - 526+24 МЕ/мл, уровень спонтанного синтеза 1дЕ был достоверно ниже (р < 0, 01 - различия с подгруппой 3.2) и составил 7,0+1,208 МЕ/мл; подгруппа 3.2 (8 человек) - с более высоким уровнем сывороточного 1дЕ - 870+14 МЕ/мл, соответственно, более высокий уровень спонтанного синтеза 1дЕ МПК - М= 13,66+1,414 МЕ/мл.

Было показано, что в культурах МПК детей с ТГБА и ТБА подгруппы 3.2 на момент поступления в стационар блокада Н3/4-рецепторов гистамина не приводила к достоверному изменению синтеза 1дЕ относительно соответствующего исходного уровня (К0), тогда как в культурах МПК здоровых детей и детей с ТБА подгруппы 3.1 в данных условиях уровень синтеза 1дЕ возрастал в 1,44 и 1,35 раза ( р<0,05 и р<0,01 соответственно) (рис.1). В стадии клинической ремиссии астмы уровень синтеза 1дЕ МПК в условиях блокады Н3/4-рецепторов в группе детей с ТБА в обеих подгруппах достоверно возрастал по сравнению с К0 (р<0,01), причем в подгруппе 3.1 кратность увеличения синтеза при Н3/4-блокаде возросла по сравнению с кратностью до лечения (в 2 раза относительно К0) (рис. 2). Тогда как в культурах МПК детей с ТГБА через 3 месяца

после лечения и при наличии клинической ремиссии блокада Н3/4-рецепторов по-прежнему не влияла на уровень синтеза 1дЕ (рис. 2), вместе с тем исходный уровень синтеза 1дЕ (К0) МПК больных ТГБА после лечения оказался достоверно ниже, чем до лечения (Р<0,01).

Гистамин в высоких концентрациях (10-5М) снижал синтез 1дЕ МПК здоровых детей (р<0,05), тогда как во всех изучаемых группах больных в стадии обострения стимулировал 1дЕ-синтез (р<0,01 и р<0,05 достоверность различий с К0 для 2-й и 3-й групп соответственно) (рис. 1). В ремиссию в МПК больных ТГБА степень стимуляции синтеза 1дЕ высокими концентрациями гистамина уменьшалась (рис. 2). В ремиссию в культурах МПК больных ТБА в обеих подгруппах высокие концентрации гистамина супрессировали синтез 1д Е (р<0,01) (рис. 2).

Низкие концентрации гистамина (10-8М) стимулируют синтез 1дЕ как МПК здоровых детей, так и во всех изучаемых подгруппах. Однако в стадии ремиссии (рис. 2) в культурах МПК детей с ТГБА кратность увеличения синтеза 1дЕ под воздействием низких концентраций гистамина ниже, чем до лечения (рис. 1) (в 1,5 и 1,29 раза соответственно). Тогда как в культурах МПК детей с ТБА в обеих подгруппах достижение клинической ремиссии ведет к увеличению стимулирующего влияния гистамина в концентрации 10-8М на синтез 1дЕ (рис. 2).

Блокада Н3/4-рецепторов в культурах МПК здоровых детей отменяет супрессирующее влияние высоких концентраций гистамина на синтез 1дЕ и усиливает стимулирующее влияние низких концентраций гистамина (рис. 1). В культурах МПК детей с ТГБА блокада Н3/4-рецепторов не влияет на соответствующие эффекты гистамина (отсутствуют достоверные отличия от уровня синтеза 1дЕ при изолированном воздействии соответствующих концентраций гистамина) как до лечения (рис. 1), так и по достижении клинической ремиссии (рис. 2). В группе детей с ТБА подгруппе 3.2 до лечения блокада Н3/4-рецепторов также не влияет на соответствующие эффекты гистамина (рис. 1), тогда как в стадии клинической ремиссии блокада рецепторов этого типа отменяет супресси-рующее влияние высоких концентраций гистамина и усиливает стимулирующее влияние низких концентраций (рис. 2). В группе ТБА подгруппе 3.1 как до (рис. 1), так и после лечения (рис. 2) блокада Н3/4-рецепторов в условиях воздействия гистамина как в высоких, так и в низких концентрациях ведет к усилению синтеза 1дЕ МПК относительно исходного. Причем в подгруппе 3.1 в ремиссии в условиях блокады Н3/4-рецепторов МПК происходит отмена супрессии синтеза 1дЕ высокими концентрациями гистамина (рис. 2).

Таким образом, вероятно, что одной из возможных причин тяжелого течения астмы у детей является патология Н3/4-рецепторов МПК, ведущая к нарушению отрицательной регуляции синтеза 1дЕ, опосредованной Н3/4-рецепторами. Причем показано, что у детей, больных гормонозависимой астмой, степень отклонений в работе Н3/4-рецепторов наиболее выражена, причем при достижении клинической ремиссии не происходит восстановления их функциональной полноценности. У детей с тяжелой астмой степень нарушения функции Н3/4-рецепторов более вы-

ражена в подгруппе с более высоким уровнем синтеза IgE, причем при достижении клинической ремиссии в результате адекватно проведенного стационарного лечения и подобранной базисной терапии их функциональная полноценность восстанавливается в обеих подгруппах.

Поступила 02.10.2006 ЛИТЕРАТУРА

1. Johansson S. G. O., Tari Haahtela (под редакцией). Всемирная организация по аллергии: Руководство по профилактике аллергии и аллергической астмы // Аллергология и иммунология. 2005. Т. 6, № 1. С. 81-91.

2. Княжеская Н. П. Тяжелая бронхиальная астма // Consilium Medicum. 2002. Т. 4, № 4. С. 189-195.

3. Новикова Н. Д., Новиков П. Д. Спектр антител к бытовым и эпидермальным аллергенам в слюне и сыворотке крови детей с бронхиальной астмой // Иммунология, аллергология, ин-фектология. 2003. № 4. С. 46-51.

4. Лесик Д. В., Ханферян Р. А., Андреянова А. Н. Роль гистамина и гистаминовых рецепторов Н3/4-типа в регуляции синтеза IgE при атопических заболеваниях // Кубанский научный медицинский вестник. 2006. № 3-4 (84-85). С. 74-78.

5. Огородова Л. М., Петровская Ю. А., Камалтынова Е. М. и соавт. Тяжелая бронхиальная астма у детей: факторы риска, течение // Пульмонология, 2002, № 1. С. 68-71.

6. Khanferyan R., Milchenko N., Lesik D. IgE regulatory role of histamine and histamine receptors in asthma patients // Inflammation and cell regulation in asthma: annual congress. Glasgow, 2004. Р. 62.

7. Khanferyn R., Lesik D., Milchenko N., Schunack W. The influence of histamine H3 receptor antagonists on IgE syntesis. Abstr. XXXIII Мееting ef the ЕНRS, Dusseldorf / Koln, Germani,

2004. P. 62.

A. N. ANDREYANOVA, D. V. LESIK, R. A. KHANFERYAN

THE IMPACT OF HISTAMINE AND 3/4-TYPE HISTAMINE RECEPTORS BLOCKADE ON IGE PRODUCTION BY THE MONONUCLEARS OF PERIPHERAL BLOOD IN CHILDREN WITH SEVERE BRONCHIAL ASTHMA

The present research aimed at the study of the regularities of histamine and H3/H4-type histamine receptors impact on the level of IgE synthesis by the mononuclears of peripheral blood (MPB) in children with severe bronchial asthma (SBA), including asthma resistant to steroids, in vitro.

Materials and methods. 18 patients with SBA in exacerbation and 12 childrens with asthma resistant to steroids were studied. We isolated the mononuclears of peripheral blood in these patients and cultivated them with FUB 181 hydrogenmaleate blocker of H3/H4-type histamine receptors in concentrations 10-5M, as well as with incorporation of histamine low or high concentrations into the system. The blockade and activation of H3/H4-type histamine receptors in this group of patients showed the inadequacy of MPB response that is probably the reason of asthma severity in such children. As this took place, at children with asthma resistant to steroids, the blockade of H3/H4-type receptors in which had not any effect on the IgE synthesis level at all. The data so obtained offered the great opportunities in solving the problem of therapy resistance in SBA children.