НОВЫЕ ИНГИБИТОРЫ CDK8/19
NEW CDK8/19 INHIBITORS

Область техники
Настоящее изобретение относится к новым ингибиторам циклинзависимых протеинкиназ CDK8/19, способам их получения, фармацевтическим композициям, содержащим данные соединения, и к применению таких соединений или таких композиций для лечения заболеваний или нарушений.
Уровень техники
CDK8, наряду с близко связанной с ней по структурным и функциональным характеристикам изоформой CDK19, является онкогенной киназой, регулирующей транскрипцию (Xu, W. & Л, J.Y. (2011) Dysregulation of CDK8 and Cyclin С in tumorigenesis, J. Genet. Genomics 38, 439-452; Galbraith, M.D., et al. (2010) CDK8: a positive regulator of transcription, Transcription. 1, 4-12; Firestein, R. & Hahn, W.C. (2009) Revving the Throttle on an oncogene: CDK8 takes the driver seat, Cancer Res 69, 7899-7901). В противоположность более известным членам семейства CDK (таким как CDK1, CDK2 и CDK4/6), CDK8 не играет роли в регуляции клеточного цикла, однако нокаут по гену CDK8 в эмбриональных стволовых клетках приводит к остановке развития эмбриона (Adler, A.S., et al. (2012) CDK8 maintains tumor de- differentiation and embryonic stem cell pluripotency, Cancer Res. 72, 2129-2139) ввиду своей важной роли в формировании фенотипа плюрипотентных стволовых клеток (Firestein, R., et al. (2008) CDK8 is a colorectal cancer oncogene that regulates beta-catenin activity, Nature 455, 547-551). Следует отметить, что блокирование CDK8 не подавляет рост нормальных клеток (Adler, A.S., et al. (2012) CDK8 maintains tumor de-differentiation and embryonic stem cell pluripotency, Cancer Res. 72, 2129-2139, Kapoor, A., et al. (2010) The histone variant macroH2A suppresses melanoma progression through regulation of CDK8, Nature 468, 1105-1109). Роль CDK8 в канцерогенезе связана с его уникальной функцией в качестве регулятора нескольких транскрипционных факторов (Xu, W. & Л, J.Y. (2011) Dysregulation of CDK8 and Cyclin С in tumorigenesis, J. Genet. Genomics 38, 439-452). Высокая экспрессия CDK8 была выявлена при раке толстой кишки (Firestein, R., et al. (2010) CDK8 expression in 470 colorectal cancers in relation to beta-catenin activation, other molecular alterations and patient survival, Int. J. Cancer 126, 2863-2873), меланоме (Kapoor, A., et al. (2010) The histone variant macroH2A suppresses melanoma progression through regulation of CDK8, Nature 468, 1105-1109), при этом при указанных видах рака повышенная экспрессия CDK8 наблюдается в ~50% случаев; подобная ситуация наблюдается и при раке молочной железы и. раке яичников (Broude Е., et al. (2015) Expression of CDK8 and CDK8-interacting genes as potential biomarkers in breast cancer, Curr. Cancer Drug Targets, 15(8), 739-749). Повышенную экспрессию CDK8 связывают с неблагоприятным прогнозом при раке толстой кишки (Gyorffy, В., et al. (2010) An online survival analysis tool to rapidly assess the effect of 22,277 genes on breast cancer prognosis using microarray data of 1,809 patients, Breast Cancer Res. Treat. 123, 725-731).
Известные механизмы, ассоциированные с CDK8 при раке, включают положительное регулирование Wnt/b-catenin пути (Kapoor, A., et al. (2010) The histone variant macroH2A suppresses melanoma progression through regulation of CDK8, Nature 468, 1105-1109; Alarcon, C, et al. (2009) Nuclear CDKs drive Smad transcriptional activation and turnover in BMP and TGF-beta pathways, Cell 139, 757-769), транскрипцию, индуцированную NF-kappaB (DiDonato, J.A., et al. (2012) NF-kappaB and the link between inflammation and cancer, Immunol. Rev. 246, 379-400) и сигнальный путь TGF-бета (Acharyya, S., et al. (2012) A CXCL1 paracrine network links cancer chemoresistance and metastasis, Cell 150, 165-178). Было также показано, что CDK8 может поддерживать плюрипотентный фенотип эмбриональных стволовых клеток, и что он может ассоциироваться с фенотипом стволовых клеток рака (Firestein, R., et al. (2008) CDK8 is a colorectal cancer oncogene that regulates beta-catenin activity, Nature 455, 547-551). Химиотерапевтические препараты, вызывающие повреждения ДНК, индуцируют ФНО-а, активатор фактора транскрипции NFkB (Fabian et al. (2005) A small molecule-kinase interaction map for clinical kinase inhibitors, Nat. Biotechnol. 23, 329-336), в эндотелиальных клетках и в других стромальных элементах микроокружения опухоли. Стромальный ФНО-а действует на опухолевые клетки, где он индуцирует NFkB-опосредованную выработку цитокинов CXCL1 и CXCL2, способствующих выживанию и росту опухолевых клеток. CXCL 1/2 привлекают миелоидные клетки к опухоли путем связывания с рецептором CXCR2 на поверхности миелоидных клеток. Миелоидные клетки затем секретируют небольшие кальций-связывающие белки S 100А8 и А9, которые связаны с процессами хронического воспаления и опухолевого роста. S 100А8/9 действуют на опухолевые клетки, способствуя как их метастазированию, так и выживаемости на фоне химиотерапии (Huang, et al. (2012) MED 12 Controls the response to multiple cancer drugs through regulation of TGF-β receptor signaling, Cell 151, 937-950).
Также известен механизм, ассоциированный с CDK8 и CDK19 при аутоиммунных, воспалительных и аллергических заболеваниях, в котором химическое ингибирование CDK8 и CDK19 способно индуцировать Foxp3, ключевой фактор транскрипции, контролирующий функцию Treg-клеток, в антиген-стимулированном эффекторе/памяти, а также наивных CD4+ и CD8+ Т-клетках (Akamatsu М. et al. (2019) Conversion of antigen-specific effector/memory T cells into Foxp3-expressing Treg cells by inhibition of CDK8/19. Sei Immunol. 2019 Oct 25; 4(40); Guo Z. et al. (2019) Inhibition of Cdk8/Cdk19 Activity Promotes Treg Cell Differentiation and Suppresses Autoimmune Diseases. Front Immunol. 2019 Aug 20; 10:1988; WO 2018139660; WO 2014194245; WO 2018027082).
В настоящее время представляется актуальным поиск новых соединений, ингибирующих циклинзависимые протеинкиназы CDK8/19.
Описание изобретения
Ниже приведены определения терминов, которые использованы в описании этого изобретения.
«Алкил» означает алифатическую углеводородную линейную или разветвленную группу с 1-12 атомами углерода в цепи, более предпочтительно с 1-6 атомами углерода в цепи. «Разветвленная» означает, что алкильная цепь имеет один или несколько «низших алкильных» заместителей. Примеры алкильных групп включают, но не ограничиваются ими, метил, этил, н-пропил, изо-пропил, н-бутил, изо-бутил, втор-бутил, трет-бутил, н-пентил, 2-пентил, 3-пентил, нео-пентил, н-гексил. Алкил может иметь заместители, которые могут быть одинаковыми или разными.
«Арил» означает ароматическую моноциклическую или полициклическую систему, включающую от 6 до 14 атомов углерода, преимущественно от 6 до 10 атомов углерода. Примеры арильных групп включают, но не ограничиваются ими, фенил, нафтил, антранил и прочие. Арил может иметь заместители циклической системы, которые могут быть одинаковыми или разными. Арил может быть аннелирован с неароматической циклической системой или гетероциклом.
«Алкилокси» или «Алкокси» означает алкил-О- группу, в которой алкил определен в данном разделе. Примеры алкокси групп включают, но не ограничиваются ими, метокси, этокси, н-пропокси, изо-пропокси и н-бутокси.
«Аминогруппа» означает R'R''N- группу, замещенную или незамещенную необязательно одинаковыми заместителями R' и R''.
2
1
6
2
«Алкилсульфонил» (-S(O)-С-Салкил) означает «алкил», определение которого приведено выше, присоединенный к соответствующему фрагменту молекулы через сульфонильную группу -SO-. Примеры алкилсульфонилов, включают, но не ограничиваются ими, метилсульфонил, этилсульфонил и т.д.
«Низший алкил» означает линейный или разветвленный алкил с 1-4 атомами углерода.
«Гало» или «Галоген» (Hal) означает фтор, хлор, бром или йод.
«Гетероцикл», «гетероциклил» или «гетероциклическое кольцо» означает моноциклическую или полициклическую систему, включающую от 3 до 11 атомов углерода, в которой один или несколько атомов углерода заменены на гетероатом, такой как азот, кислород, сера. Гетероцикл может быть конденсирован с арилом или гетероарилом. Гетероцикл может иметь один или несколько заместителей, которые могут быть одинаковыми или разными. Атомы азота и серы, находящиеся в гетероцикле могут быть окислены до N-оксида, S-оксида или S-диоксида. Гетероцикл может быть насыщенным, частично ненасыщенным или ненасыщенным. Примеры гетероциклов включают, но не ограничиваются ими, азетидин, пирролидин, пиперидин, 2,8-диазаспиро[4.5]декан, пиперазин, морфолин и др.
«Гетероарил» означают ароматическую моноциклическую или полициклическую систему, включающую от 5 до 11 атомов углерода, предпочтительно от 5 до 10, в которой один или несколько атомов углерода замещены на гетероатом, такой как азот, сера или кислород. Атом азота, находящийся в гетероариле, может быть окислен до N-оксида. Гетероарил может иметь один или несколько заместителей, которые могут быть одинаковыми или разными. Представителями гетероарилов являются пирролил, фуранил, тиенил, пиридил, пиразинил, пиримидинил, пиридазинил, изооксазолил, изотиазолил, тетразолил, оксазолил, тиазолил, пиразолил, фуразанил, триазолил, 1,2,4-тиадиазолил, хиноксалинил, фталазинил, имидазо[1,2-а]пиридинил, имидазо[2,1-b]тиазолил, бензофуразанил, индолил, азаиндолил, бензимидазолил, бензотиазенил, хинолинил, имидазолил, пиразолил, тиенопиридил, хиназолинил, нафтиридинил, тиенопиримидинил, пирролопиридинил, имидазопиридил, изохинолинил, бензоазаиндолил, 1,2,4-триазинил, тиенопирролил, фуропирролил и др.
«Частично ненасыщенный» означает кольцевую систему, которая включает по меньшей мере одну двойную или тройную связь. Термин «частично ненасыщенный» относится к кольцам, имеющим множество сайтов для насыщения, но не включает арильные и гетероарильные системы, как они определены выше.
Термин «оксо», используемый в настоящем документе, относится к радикалу =O.
«Заместитель» означает химический радикал, который присоединяется к молекулярному остову (скэффолду, фрагменту).
«Сольват» означает молекулярный комплекс соединения по настоящему изобретению, включая его фармацевтически приемлемые соли, с одной или более молекулами растворителя. Такие молекулы растворителя представляют собой молекулы, обычно используемые в фармацевтике, которые известны как безвредные для реципиента, например, воду, этанол, этиленгликоль и подобные. Другие растворители можно использовать как промежуточные сольваты в получении более желательных сольватов, такие как метанол, метил-трет-бутиловый эфир, этилацетат, метилацетат, (S)-пропиленгликоль, (R)-пропиленгликоль, 1,4-бутандиол и подобные.
Термин «гидрат» относится к комплексу, в котором молекула растворителя представляет собой воду.
Сольваты и/или гидраты предпочтительно существуют в кристаллической форме.
Термин «связь», «химическая связь» или «одинарная связь» относится к химической связи между двумя атомами или двумя группировками (группами, фрагментами), если два атома, соединенные связью, рассматриваются как часть более крупной субструктуры.
Термин «защитная группа» относится к группам, которые применяются для блокирования реакционной способности функциональных групп, таких как аминогруппы, карбоксильной группы или гидроксигруппы. Примерами, без ограничения, защитных групп являются трет-бутоксикарбонил (Вос), бензилоксикарбонил (Cbz), 2-(триметилсилил)этокси) метилацеталь (SEM), триалкилсилил, алкил(диарил)силил или алкил.
Термин «эксципиент» используется в данном документе для описания любого ингредиента, отличающегося от соединения(-ий) по данному изобретению.
«Фармацевтическая композиция» обозначает композицию, включающую в себя соединение согласно изобретению и, по крайней мере, один эксципиент. Эксципиент может быть выбран из группы, состоящей из фармацевтически приемлемых и фармакологически совместимых наполнителей, растворителей, разбавителей, носителей, вспомогательных, распределяющих и воспринимающих средств, средств доставки, таких как консерванты, стабилизаторы, наполнители, измельчители, увлажнители, эмульгаторы, суспендирующие агенты, загустители, подсластители, отдушки, ароматизаторы, антибактериальные агенты, фунгициды, лубриканты, регуляторы пролонгированной доставки, выбор и соотношение которых зависит от природы и способа назначения и дозировки. Примерами суспендирующих агентов являются этоксилированный изостеариловый спирт, полиоксиэтилен, сорбитол и сорбитовый эфир, микрокристаллическая целлюлоза, метагидроксид алюминия, бентонит, агар-агар и трагакант, а также смеси этих веществ. Защита от действия микроорганизмов может быть обеспечена с помощью разнообразных антибактериальных и противогрибковых агентов, например, таких как парабены, хдорбутанол, сорбиновая кислота и подобные им соединения. Композиция может включать также изотонические агенты, например, сахара, хлористый натрий и им подобные. Пролонгированное действие композиции может быть обеспечено с помощью агентов, замедляющих абсорбцию активного начала, например, моностеарат алюминия и желатин. Примерами подходящих носителей, растворителей, разбавителей и средств доставки являются вода, этанол, полиспирты, а также их смеси, растительные масла (такие как оливковое масло) и инъекционные органические сложные эфиры (такие как этилолеат). Примерами наполнителей являются лактоза, молочный сахар, цитрат натрия, карбонат кальция, фосфат кальция и им подобные. Примерами измельчителей и распределяющих средств являются крахмал, альгиновая кислота и ее соли, силикаты и им подобные. Примерами лубрикантов являются стеарат магния, лаурилсульфат натрия, тальк, а также полиэтиленгликоль с высоким молекулярным весом. Фармацевтическая композиция для перорального, сублингвального, трансдермального, внутримышечного, внутривенного, подкожного, местного или ректального введения активного начала, одного или в комбинации с другим активным началом, может быть введена животным и людям в стандартной форме введения в виде смеси с традиционными фармацевтическими носителями. Пригодные стандартные формы введения включают пероральные формы, такие как таблетки, желатиновые капсулы, пилюли, порошки, гранулы, жевательные резинки и пероральные растворы или суспензии, сублингвальные и трансбуккальные формы введения, аэрозоли, имплантаты, местные, трансдермальные, подкожные, внутримышечные, внутривенные, интраназальные или внутриглазные формы введения и ректальные формы введения.
«Фармацевтически приемлемая соль» означает относительно нетоксичные соли соединения, заявленного в настоящем изобретении. Соли соединений, предусмотренных настоящим документом, могут быть получены из неорганических или органических кислот и оснований. Примерами полученных таким образом солей являются гидрохлориды, гидробромиды, сульфаты, бисульфаты, фосфаты, нитраты, ацетаты, оксалаты, валериаты, олеаты, пальмитаты, стеараты, лаураты, бораты, бензоаты, лактаты, тозилаты, цитраты, малеаты, фумараты, сукцинаты, тартраты, мезилаты, малонаты, салицилаты, пропионаты, этансульфонаты, бензолсульфонаты, сульфаматы и им подобные; соли натрия, калия, аммония, кальция, магния, железа, цинка, меди, марганца и алюминия, соли первичных, вторичных и третичных аминов, замещенных аминов, в том числе природных замещенных аминов, циклических аминов, таких как изопропиламин, триметиламин, диэтиламин, триэтиламин, трипропиламин, этаноламин, 2-диэтиламиноэтанол, триметамин, дициклогексиламин, лизин, аргинин, гистидин, кофеин, прокаин, гидрабамин, холин, этилендиамин, глюкозамин, метилглюкамин, теобромин, пурины, пиперазин, пиперидин, N-этилпиперидин (Подробное описание свойств таких солей дано в Berge S.M., et al., "Pharmaceutical Salts" J. Pharm. Sci. 1977, 66: 1-19).
«Лекарственное средство (препарат, медикамент)» - вещество (или смесь веществ в виде фармацевтической композиции) в виде таблеток, капсул, инъекций, мазей и др. готовых форм, предназначенное для восстановления, исправления или изменения физиологических функций у человека и животных, а также для лечения и профилактики болезней, диагностики, анестезии, контрацепции, косметологии и прочего.
«Лечить», «лечение» и «терапия» относятся к методу смягчения или устранения биологического расстройства и/или по меньшей мере одного из сопутствующих ему симптомов. Термин «облегчить» болезнь, заболевание или состояние, означает уменьшение тяжести и/или частоты возникновения симптомов заболевания, расстройства или состояния. Кроме того, содержащиеся в данном документе ссылки на «лечение» включают ссылки на лечебную, паллиативную и профилактическую терапию.
В одном аспекте субъект лечения или пациент является млекопитающим, предпочтительно человеческим субъектом. Вышеупомянутый субъект может быть мужского или женского пола любого возраста.
Термин «нарушение» означает любое состояние, которое можно улучшить в результате лечения по настоящему изобретению. В определение данного термина входят хронические и острые нарушения или заболевания, включающие в себя патологические состояния, которые вызывают предрасположенность млекопитающего к возникновению данного нарушения. Неограничивающие примеры подлежащих лечению заболеваний включают в себя онкологические заболевания, в частности рак молочной железы, HER2-позитивный рак молочной железы, эстроген-положительный рак молочной железы (ER+), трижды негативный рак молочной железы (ТНРМЖ), рак яичника, метастатический рак яичника, рак желудка, метастатический рак желудка, рак эндометрия, слюнной железы, легкого, почки, ободочной кишки, колоректальный рак, меланому, метастатическую меланому, рак щитовидной железы, поджелудочной железы (РПЖЖ), предстательной железы или мочевого пузыря, кастрационно-рефрактерный рак предстательной железы; онкогематологические заболевания, лейкозы, острый миелоидный лейкоз и лимфоидные злокачественные новообразования; нейронные, глиальные, астроцитальные, гипоталамусные и другие гранулярные, макрофаговые, эпителиальные, стромальные и бластоцельные нарушения; воспалительные, ангиогенные и иммунологические нарушения, аутоиммунные или аллергические нарушения, в частности IgA нефрофатия; IgG4-связанная болезнь; IgG4-связанная склерозирующая болезнь; PANDAS (педиатрические аутоиммунные нейропсихические расстройства, связанные со стрептококком); POEMS синдром; агаммаглобулинемия; аксиальный спондиоартрит; аксональная и нейрональная невропатия; аллергический конъюнктивит; аллергический ринит; амилоидоз; ангиоцентрический эозинофильный фиброз; анкилозирующий спондилит; анти-GMB / анти-ТМВ нефрит; антиспермальные антитела; антифосфолипидный синдром; артериит Такаясу; атопический дерматит; аутоиммунная апластическая анемия; аутоиммунная болезнь внутреннего уха; аутоиммунная гемолитическая анемия; аутоиммунная гемолитическая анемия с тепловыми антителами; аутоиммунная гиперлипидемия; аутоиммунная дизавтономия; аутоиммунная крапивница; аутоиммунная невромиотония (синдром Исаакса); аутоиммунная ретинопатия; аутоиммунная тромбоцитопеническая пурпура; аутоиммунное поражение тестикул / аутоиммунный гипогонадизм; аутоиммунный ангионевротический отек; аутоиммунный гепатит; аутоиммунный диабет; аутоиммунный иммунодефицит; аутоиммунный перикардит; аутоиммунный прогестероновый дерматит; аутоиммунный тиреоидит; болезни несовместимости по группам крови; болезнь Аддисона; болезнь Бехчета; болезнь Грейвса (диффузный токсический зоб); болезнь Девика (нейромиелит оптического нерва); болезнь Кавасаки; болезнь Каслмана; болезнь Крона; болезнь Меньера; болезнь Муха-Габермана; болезнь Ормонда (ретроперитонеальный фиброз); болезнь Рейно; болезнь Чарга-Стросса; болезнь Шагаса; болезнь Шегрена; буллезный пемфигоид; буллезный эпидермолиз; васкулит; васкулит почек; васкулиты, ассоциированные с антинейтрофильными цитоплазматическими антителами; везикулобуллезный дерматоз; височный артериит; височный/гигантоклеточный артериит; витилиго; витилиго и гранулематоз Вегенера; волчаночный нефрит; воспалительная аневризма аорты; врожденная блокада сердца; вульгарный пемфигус; гангренозная пиодермия; гемолитическая анемия; геморрагический васкулит; герпес гестационный или пемфигоид гестационный; герпетиформный дерматит; гестационный пемфигоид; гигантоклеточный артериит (височный артериит); гигантоклеточный миокардит; гипогаммаглобулинемия; гломерулонефрит; гранулематоз с полиангиитом (синдром Вегенера); деревянистый конъюнктивит; дерматомиозит; дилатационная кардиомиопатия; дискоидная волчанка; идиопатическая возвратная макрогематурия; идиопатическая воспалительная миопатия; идиопатическая тромбоцитопеническая пурпура; идиопатический воспалительный псевдотумор; идиопатический гипокомплементемический тубулоинтерстициальный нефрит; идиопатический легочный фиброз; инсулинозависимый сахарный диабет (1 типа); интерстициальный цистит; истинная красноклеточная аплазия; кардиомиопатия; контактный дерматит; концентрический склероз Бало; крапивница; красный плоский лишай / склероатрофический лишай; лейкоцитокластический васкулит; лимбический энцефалит; лимитированная склеродермия (CREST синдром); линейный IgA-зависимый буллезный дерматоз; листовидный пемфигус; макроглобулинемия Вальденстрема; медиастинальный фиброз; миастенический криз; миастенический синдром Ламберта-Итона; миастения; миастения гравис; микроскопический полиангиит; миозит; миокардит Коксаки; мультифокальная моторная невропатия; мультифокальный фибросклероз; нарколепсия; неврит зрительного нерва; недифференцированное заболевание соединительной ткани; нейромиелит оптического нерва (синдром Девика); нейтропения; неспецифический язвенный колит; нефрит, ассоциированный с антителами к базальной мембране канальцев и клубочков; опсоклонус; острая моторная аксональная невропатия; острый геморрагический лейкоэнцефалит; острый диссеминированный энцефаломиелит; очаговая алопеция; палиндромный ревматизм; паранеопластическая дегенерация мозжечка; паранеопластический синдром; парапротеинемическая полиневропатия; пароксизмальная ночная гемоглобинурия; педиатрическое аутоиммунное нейропсихиатрическое расстройство, ассоциированное со стрептококковой инфекцией (PANDAS-синдром); пемфигоид конъюнктивы; пемфигоид слизистых оболочек; первичный билиарный холангит (цирроз); первичный склерозирующий холангит; периаортит; периартериит; перивенозный энцефаломиелит; периферическая невропатия; периферический увеит; пернициозная анемия; подострый бактериальный эндокардит; полигландулярный (полиэндокринный) аутоиммунный синдром 1 (кандидополиэндокринный синдром), 2 (синдром Шмидта), 3 типов; полимиозит; полиневропатия с органомегалией (POEMS синдром); поперечный миелит; постинфарктный синдром; посттравматический перикардит; прогестероновый дерматит; псориаз; псориатический артрит; пузырчатка; пурпура Шенлейна-Геноха; рассеянный склероз; реактивный артрит; реакция «трансплантат против хозяина» (РТПХ); реакция отторжения трансплантата в следствие антител к HLA; ревматизм; ревматическая лихорадка; ревматическая полимиалгия; ревматоидный артрит; рефлекторная симпатическая дистрофия; рефрактерная эпилепсия; рецидивирующий полихондрит; Рубцующий пемфигоид (РП) конъюнктивы; саркоидоз; сахарный диабет 1 типа; симпатическая офтальмия; синдром беспокойных ног; синдром Гийена-Барре; синдром Гудпасчера; синдром Дресслера; синдром Кавасаки; синдром Когана; синдром Ламберта-Итона; синдром Микулича; синдром Миллера Фишера; синдром Пари-Ромберга (прогрессивная лицевая гемиатрофия); синдром Персонейджа-Тернера (невралгическая амиотрофия, идиопатическая плечевая плексопатия); синдром постперикардиотомии; синдром Рейтера; синдром ригидности; синдром Стиффа-Персона; синдром Сусака; синдром Толосы-Ханта. (синдром верхней глазничной щели); синдром холодовой агглютинации (CAD); синдром Шегрена; синдром Шмидта; синдром Эванса; системная красная волчанка; склерит; склеродерма; склеродермия; склерозирующий лишай; смешанная болезнь соединительной ткани; смешанная криоглобулинемия; спорадический миозит с включениями; тиреоидит Риделя; тиреоидит Хашимото; тиреоидная офтальмопатия; тиреоидный криз; тромботическая тромбоцитопеническая пурпура; тромбоцитопеническая пурпура; увеит; узелковый полиартериит; узловатая эритема; универсальная алопеция; фетальная и неонатальная аллоиммунная тромбоцитопения; фиброзирующий альвеолит; фибромиалгия; холодовая гемагглютининовая болезнь; хорея Сиденхема (малая или ревматическая хорея); хроническая болезнь Лайма; хроническая воспалительная демиелинизирующая полинейропатия (CIDP); хронический рецидивирующий мультифокальный остеомиелит; хронический склерозирующий сиалоаденит (воспалительная опухоль Кюттнера); целиакия; чистая / истинная эритроцитарная аплазия; экспериментальный аллергический энцефаломиелит; эндокринная офтальмопатия (тиреоидная офтальмопатия, офтальмопатия Грейвса, аутоиммунная офтальмопатия); эндометриоз; энцефалит Хашимото; энцефалит/энцефалопатия, ассоциированные с аутоантителами; эозинофильный фасциит; эозинофильный эзофагит; эссенциальная смешанная криоглобулинемия; ювенильный артрит; ювенильный диабет (диабет 1 типа); ювенильный миозит; ювенильный ревматоидный артрит; язва Мурена; язвенный колит.
«Терапевтически эффективным количеством» считается количество вводимого в процессе лечения терапевтического агента, которое избавит в определенной степени от одного или нескольких симптомов заболевания, по поводу которого проводится лечение.
В настоящем описании и в последующей формуле изобретения, если контекстом не предусмотрено иное, слова «иметь», «включать» и «содержать» или их вариации, такие как «имеет», «имеющий», «включает», «включающий», «содержит» или «содержащий», следует понимать, как включение указанного целого или группы целых, но не исключение любого другого целого или группы целых.
Подробное описание изобретения
В одном варианте осуществления, настоящее изобретение относится к соединению формулы I:
или его фармацевтически приемлемая соль, или его стереоизомер,
где n, m каждый независимо выбран из 0, 1, 2, 3;
р, q каждый независимо выбран из 0, 1;
9
X выбран из О, NR;
Y выбран из N, С, СН;
10
Z выбран из О, NR;
1
1
6
11
1
6
1
6
11
R представляет собой Н, C-С алкил, незамещенный или замещенный одним или несколькими радикалами R; C-С алкилокси C-С алкил, незамещенный или замещенный одним или несколькими радикалами R;
2
3
1
6
R, R каждый независимо представляет собой Н, C-С алкил;
6
1
6
12
1
6
1
6
12
R представляет собой Н, C-С алкил, незамещенный или замещенный одним или несколькими радикалами R; C-С алкилокси C-С алкил, незамещенный или замещенный одним или несколькими радикалами R;
4
5
7
8
1
6
17
R, R, R, R каждый независимо представляет водород, C-С алкил, незамещенный или замещенный одним или несколькими радикалами R или
4
5
4
5
6
R и R вместе представляют собой оксогруппу, или R и R вместе с R и Y представляют собой 5-6 членный гетероциклил с 1, 2 или 3 гетероатомами в цикле, выбранными из N, S или О, 5-6 членный гетероарил с 1, 2 или 3 гетероатомами в цикле, выбранными из N, S или О
или
7
8
R и R вместе представляют собой оксогруппу;
11
12
3
6
13
14
1
6
1
6
1
6
15
16
R, R каждый независимо представляет собой гидрокси, С-С циклоалкил, -NR, R; C-С алкил-С(O)-С-С алкил; С(О)-C-C алкил, C(O)-NRR;
9
10
13
14
15
16
1
6
R, R, R, R, R, R, каждый независимо представляет собой Н, C-С алкил;
17
1
6
R представляет собой C-С алкил незамещенный или замещенный Hal, гидроксигруппой, аминогруппой, карбокси-группой, карбоксамидной группой;
представляет собой одинарную связь или двойную связь.
4
5
В одном варианте осуществления R и R представляет собой Н или в совокупности - оксогруппу.
В одном варианте осуществления X представляет собой О или NH.
1
1
6
1
6
В одном варианте осуществления R представляет собой N,N-ди C-С алкил ацетамид, С-С алкил.
1
В одном варианте осуществления R представляет собой N,N-диметилацетамид, метил.
6
1
6
1
6
3
6
1
6
1
6
В одном варианте осуществления R представляет собой Н, C-С алкил, C-С алкил С-С циклоалкил, C-С алкилокси C-С алкил.
6
В одном варианте осуществления R представляет собой Н, метил, циклопропилметил, метоксиэтил.
4
5
6
В одном варианте осуществления изобретения R, R, R и Y совместно представляют триазолил, имидазолил, пиразолил, пирролил, пирролидинил, пиперидинил, пиридинил, пиридазинил, пиримидинил, морфолинил, фуранил, тиенил.
7
8
В одном варианте осуществления, где R и R каждый представляют собой Н или в совокупности - оксогруппу.
В еще одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединению формулы II:
или его фармацевтически приемлемая соль, или его стереоизомер,
где n, m каждый независимо выбран из 0, 1, 2, 3;
р, q каждый независимо выбран из 0, 1;
9
X выбран из О, NR;
Y выбран из N, С, СН;
10
Z выбран из О, NR;
1
1
6
11
1
6
1
6
11
R представляет собой Н, C-С алкил, незамещенный или замещенный одним или несколькими радикалами R; C-С алкилокси C-С алкил, незамещенный или замещенный одним или несколькими радикалами R;
6
1
6
12
1
6
1
6
12
R представляет собой Н, C-С алкил, незамещенный или замещенный одним или несколькими радикалами R; C-С алкилокси C-С алкил, незамещенный или замещенный одним или несколькими радикалами R;
4
5
7
8
1
6
17
R, R, R, R каждый независимо представляет водород, C-С алкил, незамещенный или замещенный одним или несколькими радикалами R
или
4
5
4
5
6
R и R вместе представляют собой оксогруппу, или R и R вместе с R и Y представляют собой 5-6 членный гетероциклил с 1, 2 или 3 гетероатомами в цикле, выбранными из N, S или О, 5-6 членный гетероарил с 1, 2 или 3 гетероатомами в цикле, выбранными из N, S или О
или
7
8
R и R вместе представляют собой оксогруппу;
11
12
3
6
13
14
1
6
1
6
1
6
15
16
R, R каждый независимо представляет собой гидрокси, С-С циклоалкил, -NR, R; C-С алкил-С(O)-С-С алкил; С(О)-C-C алкил, C(O)-NRR;
9
10
13
14
15
16
1
6
R, R, R, R, R, R, каждый независимо представляет собой Н, С-С алкил;
17
1
6
R представляет собой C-С алкил незамещенный или замещенный Hal, гидроксигруппой, аминогруппой, карбоксигруппой, карбоксамидной группой;
представляет собой одинарную связь или двойную связь.
4
5
В одном варианте осуществления R и R представляет собой Н или в совокупности - оксогруппу.
В одном варианте осуществления X представляет собой О или NH.
1
1
6
1
6
В одном варианте осуществления R представляет собой N,N-ди C-С алкил ацетамид, C-С алкил.
1
В одном варианте осуществления R представляет собой N,N-диметилацетамид, метил.
6
1
6
1
6
3
6
1
6
1
6
В одном варианте осуществления R представляет собой Н, C-С алкил, C-С алкил С-С циклоалкил, C-С алкилокси C-С алкил.
6
В одном варианте осуществления R представляет собой Н, метил, циклопропилметил, метоксиэтил.
4
5
6
В одном варианте осуществления изобретения R, R, R и Y совместно представляют триазолил, имидазолил, пиразолил, пирролил, пирролидинил, пиперидинил, пиридинил, пиридазинил, пиримидинил, морфолинил, фуранил, тиенил.
7
8
В одном варианте осуществления, где R и R каждый представляют собой Н или в совокупности - оксогруппу.
В еще одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединению формулы III:
или его фармацевтически приемлемая соль, или его стереоизомер,
где n, m каждый независимо выбран из 0, 1, 2, 3;
p, q каждый независимо выбран из 0, 1;
9
X выбран из О, NR;
Y выбран из N, С, СН;
10
Z выбран из О, NR;
1
1
6
11
1
6
1
6
11
R представляет собой Н, C-С алкил, незамещенный или замещенный одним или несколькими радикалами R; C-С алкилокси C-С алкил, незамещенный или замещенный одним или несколькими радикалами R;
6
1
6
12
1
6
1
6
12
R представляет собой Н, C-С алкил, незамещенный или замещенный одним или несколькими радикалами R; C-С алкилокси C-С алкил, незамещенный или замещенный одним или несколькими радикалами R;
7
8
1
6
17
R, R каждый независимо представляет водород, C-С алкил, незамещенный или замещенный одним или несколькими радикалами R
или
7
8
R и R вместе представляют собой оксогруппу;
11
12
3
6
13
14
1
6
1
6
1
6
15
16
R, R каждый независимо представляет собой гидрокси, С-С циклоалкил, -NR, R; C-C алкил-С(O)-С-С алкил; С(О)-C-C алкил, C(O)-NRR;
9
10
13
14
15
16
1
6
R, R, R, R, R, R, каждый независимо представляет собой Н, C-С алкил;
17
1
6
R представляет собой C-С алкил незамещенный или замещенный Hal, гидроксигруппой, аминогруппой, карбокси-группой, карбоксамидной группой;
представляет собой одинарную связь или двойную связь.
1
1
6
1
6
В одном варианте осуществления R представляет собой N,N-ди C-С алкил ацетамид, C-С алкил.
1
В одном варианте осуществления R представляет собой N,N-диметилацетамид, метил.
6
1
6
1
6
3
6
1
6
1
6
В одном варианте осуществления R представляет собой Н, C-С алкил, C-С алкил С-С циклоалкил, C-С алкилокси C-С алкил.
6
В одном варианте осуществления R представляет собой Н, метил, циклопропилметил, метоксиэтил.
7
8
В одном варианте осуществления, где R и R каждый представляют собой Н или в совокупности - оксогруппу.
В еще одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединению формулы III.1:
или его фармацевтически приемлемая соль, или его стереоизомер,
где n, m каждый независимо выбран из 0, 1, 2, 3;
р, q каждый независимо выбран из 0, 1;
9
X выбран из О, NR;
10
Z выбран из О, NR;
1
1
6
11
1
6
1
6
11
R представляет собой Н, C-С алкил, незамещенный или замещенный одним или несколькими радикалами R; C-С алкилокси C-С алкил, незамещенный или замещенный одним или несколькими радикалами R;
4
5
7
8
1
6
17
R, R, R, R каждый независимо представляет водород, C-С алкил, незамещенный или замещенный одним или несколькими радикалами R
или
4
5
R и R вместе представляют собой оксогруппу
или
7
8
R и R вместе представляют собой оксогруппу;
6
1
6
12
1
6
1
6
12
R представляет собой Н, C-С алкил, незамещенный или замещенный одним или несколькими радикалами R; C-С алкилокси C-С алкил, незамещенный или замещенный одним или несколькими радикалами R;
7
8
1
6
17
R, R каждый независимо представляет водород, C-С алкил, незамещенный или замещенный одним или несколькими радикалами R
или
7
8
R и R вместе представляют собой оксогруппу;
11
12
3
6
13
14
1
6
1
6
1
6
15
16
R, R каждый независимо представляет собой гидрокси, С-С циклоалкил, -NR, R; C-С алкил-С(O)-С-С алкил; С(О)-C-C алкил, C(O)-NRR;
9
10
13
14
15
16
1
6
R, R, R, R, R, R, каждый независимо представляет собой Н, C-С алкил;
17
1
6
R представляет собой C-С алкил незамещенный или замещенный Hal, гидроксигруппой, аминогруппой, карбокси-группой, карбоксамидной группой;
представляет собой одинарную связь или двойную связь.
1
1
6
1
6
В одном варианте осуществления R представляет собой N,N-ди C-С алкил ацетамид, С-С алкил.
1
В одном варианте осуществления R представляет собой N,N-диметилацетамид, метил.
6
1
6
1
6
3
6
1
6
1
6
В одном варианте осуществления R представляет собой Н, C-С алкил, C-С алкил С-С циклоалкил, C-С алкилокси C-С алкил.
6
В одном варианте осуществления R представляет собой Н, метил, циклопропилметил, метоксиэтил.
7
8
В одном варианте осуществления, где R и R каждый представляют собой Н или в совокупности - оксогруппу.
В еще одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединению формулы IV:
или его фармацевтически приемлемая соль, или его стереоизомер,
где n, m каждый независимо выбран из 0, 1, 2, 3;
р, q каждый независимо выбран из 0, 1;
Y выбран из N, С, СН;
10
Z выбран из О, NR;
1
1
6
11
1
6
1
6
11
R представляет собой Н, C-С алкил, незамещенный или замещенный одним или несколькими радикалами R; C-С алкилокси C-С алкил, незамещенный или замещенный одним или несколькими радикалами R;
6
1
6
12
1
6
1
6
12
R представляет собой Н, C-С алкил, незамещенный или замещенный одним или несколькими радикалами R; C-С алкилокси C-С алкил, незамещенный или замещенный одним или несколькими радикалами R;
4
5
7
8
1
6
17
R, R, R, R каждый независимо представляет водород, C-С алкил, незамещенный или замещенный одним или несколькими радикалами R
или
4
5
4
5
6
R и R вместе представляют собой оксогруппу, или R и R вместе с R и Y представляют собой 5-6 членный гетероциклил с 1, 2 или 3 гетероатомами в цикле, выбранными из N, S или О, 5-6 членный гетероарил с 1, 2 или 3 гетероатомами в цикле, выбранными из N, S или О или
7
8
R и R вместе представляют собой оксогруппу;
11
12
3
6
13
14
1
6
1
6
1
6
15
16
R, R каждый независимо представляет собой гидрокси, С-С циклоалкил, -NR, R; C-С алкил-С(O)-С-С алкил; С(О)-C-C алкил, C(O)-NRR;
10
13
14
15
16
1
6
R, R, R, R, R, каждый независимо представляет собой Н, C-С алкил;
17
1
6
R представляет собой C-С алкил незамещенный или замещенный Hal, гидроксигруппой, аминогруппой, карбокси-группой, карбоксамидной группой;
представляет собой одинарную связь или двойную связь.
1
1
6
1
6
В одном варианте осуществления R представляет собой N,N-ди C-С алкил ацетамид, C-С алкил.
1
В одном варианте осуществления R представляет собой N,N-диметилацетамид, метил.
6
1
6
1
6
3
6
1
6
1
6
В одном варианте осуществления R представляет собой Н, C-С алкил, C-С алкил С-С циклоалкил, C-С алкилокси C-С алкил.
6
В одном варианте осуществления R представляет собой Н, метил, циклопропилметил, метоксиэтил.
4
5
6
В одном варианте осуществления изобретения R, R, R и Y совместно представляют триазолил, имидазолил, пиразолил, пирролил, пирролидинил, пиперидинил, пиридинил, пиридазинил, пиримидинил, морфолинил, фуранил, тиенил.
7
8
В одном варианте осуществления, где R и R каждый представляют собой Н или в совокупности - оксогруппу.
В еще одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединению формулы V:
или его фармацевтически приемлемая соль, или его стереоизомер,
где n, m каждый независимо выбран из 0, 1, 2, 3;
р, q каждый независимо выбран из 0, 1;
Y выбран из N, С, СН;
10
Z выбран из О, NR;
1
1
6
11
1
6
1
6
11
R представляет собой Н, C-С алкил, незамещенный или замещенный одним или несколькими радикалами R; C-С алкилокси C-С алкил, незамещенный или замещенный одним или несколькими радикалами R;
6
1
6
12
1
6
1
6
12
R представляет собой Н, C-С алкил, незамещенный или замещенный одним или несколькими радикалами R; C-С алкилокси C-С алкил, незамещенный или замещенный одним или несколькими радикалами R;
7
8
1
6
17
R, R каждый независимо представляет водород, C-С алкил, незамещенный или замещенный одним или несколькими радикалами R
или
7
8
R и R вместе представляют собой оксогруппу;
11
12
3
6
13
14
1
6
1
6
1
6
15
16
R, R каждый независимо представляет собой гидрокси, С-С циклоалкил, -NR, R; C-C алкил-С(O)-С-С алкил; С(О)-C-C алкил, C(O)-NRR;
10
13
14
15
16
1
6
R, R, R, R, R, каждый независимо представляет собой Н, C-С алкил;
17
1
6
R представляет собой C-С алкил незамещенный или замещенный Hal, гидроксигруппой, аминогруппой, карбокси-группой, карбоксамидной группой;
представляет собой одинарную связь или двойную связь.
1
1
6
1
6
В одном варианте осуществления R представляет собой N,N-ди C-С алкил ацетамид, C-С алкил.
1
В одном варианте осуществления R представляет собой N,N-диметилацетамид, метил.
6
1
6
1
6
3
6
1
6
1
6
В одном варианте осуществления R представляет собой Н, C-С алкил, C-С алкил С-С циклоалкил, C-С алкилокси C-С алкил.
6
В одном варианте осуществления R представляет собой Н, метил, циклопропилметил, метоксиэтил.
7
8
В одном варианте осуществления, где R и R каждый представляют собой Н или в совокупности - оксогруппу.
В еще одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединению формулы VI:
или его фармацевтически приемлемая соль, или его стереоизомер,
где n, m каждый независимо выбран из 0, 1, 2, 3;
р, q каждый независимо выбран из 0, 1;
10
Z выбран из О, NR;
1
1
6
11
1
6
1
6
11
R представляет собой Н, C-С алкил, незамещенный или замещенный одним или несколькими радикалами R; C-С алкилокси C-С алкил, незамещенный или замещенный одним или несколькими радикалами R;
6
1
6
12
1
6
1
6
12
R представляет собой Н, C-С алкил, незамещенный или замещенный одним или несколькими радикалами R; C-С алкилокси C-С алкил, незамещенный или замещенный одним или несколькими радикалами R;
7
8
1
6
17
R, R каждый независимо представляет водород, C-С алкил, незамещенный или замещенный одним или несколькими радикалами R
или
7
8
R и R вместе представляют собой оксогруппу;
11
12
3
6
13
14
1
6
1
6
1
6
15
16
R, R каждый независимо представляет собой гидрокси, С-С циклоалкил, -NR, R; C-С алкил-С(O)-С-С алкил; С(О)-C-C алкил, C(O)-NRR;
10
13
14
15
16
1
6
R, R, R, R, R, каждый независимо представляет собой Н, C-С алкил;
17
1
6
R представляет собой C-С алкил незамещенный или замещенный Hal, гидроксигруппой, аминогруппой, карбокси-группой, карбоксамидной группой;
представляет собой одинарную связь или двойную связь.
1
1
6
1
6
В одном варианте осуществления R представляет собой N,N-ди C-С алкил ацетамид, C-С алкил.
1
В одном варианте осуществления R представляет собой N,N-диметилацетамид, метил.
6
1
6
1
6
3
6
1
6
1
6
В одном варианте осуществления R представляет собой Н, C-С алкил, C-С алкил С-С циклоалкил, C-С алкилокси C-С алкил.
6
В одном варианте осуществления R представляет собой Н, метил, циклопропилметил, метоксиэтил.
7
8
В одном варианте осуществления, где R и R каждый представляют собой Н или в совокупности - оксогруппу.
Соединения, описанные в настоящем изобретении, могут быть получены в виде и/или их можно применять в виде фармацевтически приемлемых солей. Типы фармацевтически приемлемых солей включают следующие, но не ограничены ими: соли кислот, образованные при взаимодействии соединения в форме свободного основания с фармацевтически приемлемой неорганической кислотой, такой как соляная, бромистоводородная, серная, азотная, фосфорная, метафосфорная кислоты и т.п.; или с органической кислотой, такой как уксусная, пропионовая, капроновая, циклопентанпропионовая, гликолевая, пировиноградная, молочная, малоновая, янтарная, яблочная, малеиновая, фумаровая, трифторуксусная, винная, лимонная, бензойная, 3-(4-гидроксибензоил)бензойная, коричная, миндальная кислоты, метансульфокислота, этансульфокислота, 1,2-этандисульфокислота, 2-гидроксиэтандисульфокислота, бензолсульфокислота, толуолсульфокислота, 2-нафталинсульфокислота, 4-метилбицикло[2.2.2]окт-2-ен-1-карбоновая, глюкогептоновая, 4,4'-метилен-бис-3-гидрокси-2-ен-1-карбоновая, 3-фенилпропионовая, триметилуксусная, третбутилуксусная, лаурилсерная, глюконовая, глутаминовая, гидроксинафтойная, салициловая, стеариновая, муконовая кислоты и т.п.
Соответствующие противоионы фармацевтически приемлемых солей можно исследовать и идентифицировать с использованием различных методов, включая перечисленные, но не ограничиваясь ими: ионнообменную хроматографию, ионную хроматографию, капиллярный электрофорез, индукционное связывание плазмы, атомно-абсорбционную спектроскопию, масс-спектрометрию или любую их комбинацию.
Соли восстанавливают с применением по меньшей мере одной из следующих методик: фильтрация, осаждение с осадителем с последующей фильтрацией, выпариванием растворителя или в случае водных растворов лиофилизацией. Следует понимать, что упоминание фармацевтически приемлемой соли включает формы аддитивной соли растворителем или их кристаллические формы, в частности сольваты или полиморфы. Сольваты содержат стехиометрическое или нестехиометрическое количество растворителя и могут быть образованы в ходе процесса кристаллизации с фармацевтически приемлемыми растворителями, такими как вода, этанол и т.п. Гидраты образуются в случае, если растворителем является вода, а алкоголяты образуются в случае, когда растворителем является спирт. Сольваты соединений, описанных в настоящем патенте, могут быть легко получены или образованы в способах, описанных в настоящем изобретении. Кроме того, соединения, предусмотренные настоящим изобретением, могут существовать в несольватированной, а также в сольватиррванной формах. В целом, сольватированные формы рассматриваются как эквивалент несольватированных форм при описании соединений и способов, предусмотренных настоящим изобретением.
Соединения, описанные в настоящем изобретении, могут быть представлены в различных формах, включая перечисленные, но не ограничиваясь ими: бесструктурные формы, молотые формы и наночастицы. Кроме того, описанные в настоящем изобретении соединения включают кристаллические формы, также известные как полиморфы. Полиморфы включают кристаллы с различной структурой одинакового элементного состава соединения. Полиморфы, как правило, имеют различный характер рентгеновской дифракции, различные инфракрасные спектры, температуру плавления, различную плотность, твердость, кристаллическую форму, оптические и электрические свойства, стабильность и растворимость. Различные факторы, такие как растворитель для рекристаллизации, степень кристаллизации и температура хранения, могут обусловливать доминирование одной кристаллической формы.
Скрининг и определение характеристик фармацевтически приемлемых солей, полиморфов и/или сольватов можно осуществлять рядом методов, включая перечисленные, но не ограничиваясь ими: термический анализ, рентгено-дифракционный метод, спектроскопию, сорбцию пара и микроскопию. Термические методы анализа направлены на исследование термохимического разложения или термофизических процессов, включая, но не ограничиваясь, полиморфные переходы, и такие методы применяют для анализа связи между полиморфными формами, определения потери в массе, для нахождения температуры стеклования или исследования совместимости с наполнителем. Такие способы включают, без ограничения, дифференциальную сканирующую калориметрию (ДСК), модулирующую дифференциальную сканирующую калориметрию (МДСК), термогравиметрический анализ (ТГА), термогравиметрический и инфракрасный анализ (ТГ/ИК). Кристаллографические методы включают перечисленные, но не ограничиваются ими: монокристаллические и порошковые дифрактометры и синхротронные источники. Различные используемые спектроскопические методы включают перечисленные, но не ограничены ими: определение спектра Рамана (комбинационного рассеяния), FTIR, UVIS и ЯМР (жидкого и твердого состояния). Различные методы микроскопии включают перечисленные, но не ограничены ими: микроскопию в поляризованном свете, сканирующую электронную микроскопию (СЭМ) с рентгеновским анализом методом энергетической дисперсии (EDX), сканирующую электронную микроскопию в режиме естественной среды с EDX (в атмосфере газа или водяного пара), ИК-микроскопию и микроскопию комбинационного рассеяния.
В еще одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединениям, выбранным из группы, включающей:
Настоящее изобретение также относится к способу ингибирования биологической активности циклинзависимых протеинкиназ CDK8/19 у субъекта, заключающемуся в контактировании циклинзависимых протеинкиназ CDK8/19 с соединением по настоящему изобретению.
В одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей терапевтически эффективное количество соединения, описанного в настоящем документе, или его фармацевтически приемлемую соль, сольват, и один или несколько фармацевтически приемлемых эксципиентов. В еще одном варианте изобретения фармацевтическая композиция по данному изобретению предназначена для профилактики или лечения заболевания, или нарушения, опосредованного активацией циклинзависимых протеинкиназ CDK8/19. В еще одном варианте изобретения фармацевтическая композиция по данному изобретению предназначена для профилактики или лечения заболевания, или нарушения, опосредованного активацией циклинзависимой протеинкиназы CDK8/19, где заболевание, или нарушение, опосредованное активацией циклинзависимых протеинкиназ CDK8/19, представляет собой онкологическое, онкогематологическое, аутоиммунное, воспалительное или аллергическое заболевание.
Фармацевтическая композиция по настоящему изобретению может содержать, например, от приблизительно 10% до приблизительно 100% активных ингредиентов, предпочтительно от приблизительно 20% до приблизительно 60% активных ингредиентов. Подразумевается, что содержание активного ингредиента или ингредиентов в индивидуальной дозе каждой лекарственной формы не обязательно составляет эффективное количество, поскольку необходимое эффективное количество может достигаться при введении нескольких стандартных лекарственных форм.
Типичную композицию получают посредством смешивания соединения по настоящему изобретению и одного или нескольких эксципиентов. Примеры эксципиентов включают, но не ограничиваются ими, разбавители, носители, наполнители. Подходящие носители, разбавители, наполнители хорошо известны специалистам в данной области и включают такие вещества, как углеводы, воска, водорастворимые и/или набухающие полимеры, гидрофильные или гидрофобные вещества, желатин, масла, растворители, воду и подобное. Конкретный используемый носитель, разбавитель или наполнитель будет зависеть от средств и цели, для которой применяют соединение по настоящему изобретению. Растворители в общем случае выбирают на основании растворителей, признанных специалистами в данной области техники безопасными для введения млекопитающему. В общем случае безопасные растворители представляют собой водные растворители, такие как вода и другие растворители, которые растворимы в воде или смешиваются с водой. Подходящие водные растворители включают воду, как основной компонент, и этанол, пропиленгликоль, полиэтиленгликоли (например, PEG400, PEG300) и т.д., и их смеси. Композиции также могут включать один или более буферов, стабилизирующих агентов, поверхностно-активных веществ, увлажняющих агентов, смазывающих агентов, эмульгаторов, суспендирующих агентов, консервантов, антиокислителей, матирующих агентов, скользящих веществ, технологических добавок, красителей, подсластителей, отдушек, ароматизаторов и других известных добавок для получения хорошего внешнего вида лекарственного средства (т.е. соединения по настоящему изобретению или его фармацевтической композиции) или чтобы способствовать изготовлению фармацевтического продукта (т.е. лекарственного средства).
Фармацевтические композиции также могут включать соли, сольваты и гидраты соединений по настоящему изобретению, или стабилизированную форму соединения (например, комплекс с производным цикл о декстрина или другим известным агентом комплексообразования).
Фармацевтические композиции по настоящему изобретению, как правило, пригодны для перорального введения. Пероральный прием лекарственных средств - прием лекарства через рот (лат. per os, oris), путем проглатывания лекарства. Соединения по настоящему изобретению могут также вводиться буккально, лингвально или сублингвально, так что соединение поступает в кровоток непосредственно из полости рта.
Лекарственные формы, пригодные для перорального, буккального, лингвального или сублингвального введения, включают твердые, полутвердые и жидкие системы, такие как таблетки; гранулы; мягкие или твердые капсулы, содержащие мульти- или наночастицы, жидкости или порошки; пастилки (включая заполненные жидкостью); жевательные формы; гели; быстро растворимые лекарственные формы; пленки; суппозитории; спреи; и щечные/мукоадгезивные пластыри.
Жидкие лекарственные формы включают суспензии, растворы, сиропы и эликсиры. Такие лекарственные формы могут быть использованы как наполнители в мягких или жестких капсулах (например, из желатина или гидроксипропилметилцеллюлозы) и обычно содержат носитель, например, воду, этанол, полиэтиленгликоль, пропиленгликоль, метилцеллюлозу или подходящее масло и один или более эмульгаторов и/или суспендирующих агентов. Жидкие лекарственные формы могут быть также изготовлены путем восстановления твердого вещества, например, из саше.
Соединения по настоящему изобретению могут также вводиться парентерально. Используемый в данном документе термин «парентеральное введение» фармацевтической композиции включает любой способ введения, для которого характерно физическое нарушение целостности ткани субъекта и введение фармацевтической композиции через нарушение в ткани, что обычно приводит к прямому попаданию в кровоток, в мышцу или во внутренний орган. Таким образом, парентеральное введение включает, помимо прочего, введение фармацевтической композиции путем инъекции композиции, посредством введения композиции через хирургический разрез, путем нанесения композиции с помощью проникающей в ткани нехирургической раны и т.п. В частности, предполагается, что парентеральное введение включает, помимо прочего, подкожную, внутрибрюшинную, внутримышечную, внутривенную, внутриартериальную, интратекальную, внутрижелудочковую, интрауретральную, внутричерепную, внутрисуставную инъекцию или инфузии; и почечные диализные инфузионные методики. Внутриопухолевая доставка, например, внутриопухолевая инъекция, также может оказаться полезной. Также предусмотрена региональная перфузия.
Лекарственные формы фармацевтических композиций, подходящие для парентерального введения, обычно содержат активный ингредиент в сочетании с фармацевтически приемлемым носителем, например, стерильной водой или стерильным изотоническим раствором. Такие лекарственные формы могут быть изготовлены, упакованы в форме, подходящей для болюсного введения или для непрерывного введения. Инъекционные лекарственные формы могут быть изготовлены, упакованы в стандартной лекарственной форме, например, в ампулах, или в многодозовых контейнерах, содержащих консервант. Лекарственные формы для парентерального введения включают, помимо прочего, суспензии, растворы, эмульсии в масляных или водных основах, пасты и тому подобное.
Лекарственные формы могут быть выполнены для немедленного и/или модифицированного высвобождения. Лекарственные формы с модифицированным высвобождением включают отсроченное, замедленное, пульсирующее, контролируемое, нацеленное и программируемое высвобождение.
В одном варианте настоящее изобретение относится к способу лечения заболевания или нарушения, опосредованного активацией циклинзависимых протеинкиназ CDK8/19, который включает в себя введение в терапевтически эффективном количестве соединения по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемой соли, или фармацевтической композиции по данному изобретению субъекту, нуждающемуся в таком лечении.
В еще одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу лечения заболевания или нарушения, опосредованного активацией циклинзависимых протеинкиназ CDK8/19, представляющего собой онкологическое, онкогематологическое, аутоиммунное, воспалительное или аллергическое заболевание заболевание, который включает в себя введение соединения, описанного в настоящем документе, или его фармацевтически приемлемой соли, или фармацевтической композиции по данному изобретению субъекту, нуждающемуся в таком лечении, в терапевтически эффективном количестве.
Подразумевается, что соединения по данному изобретению могут использоваться в способах лечения, как описано выше, могут использоваться в лечении, как описано выше, и/или могут использоваться в производстве лекарственных средств (медикаментов) для лечения, как описано выше.
Соединения, являющиеся ингибиторами CDK8/19, могут использоваться в способах лечения, описанных выше, в виде монотерапии или в сочетании с хирургией, или лучевой терапией, или лекарственной терапией.
Используемые в данном документе термины «совместное назначение», «совместно назначенный», «в комбинации с» или «в сочетании с», относящиеся к данным соединениям с одним или более другими терапевтическими агентами, как предполагается, означают, ссылаются или включают:
• одновременное введение такой комбинации соединения по данному изобретению и терапевтического агента пациенту, который нуждается в лечении, когда такие компоненты сформулированы вместе в одной лекарственной форме, из которой указанные компоненты высвобождаются практически одновременно,
• одновременное введение такой комбинации соединения по данному изобретению и терапевтического агента пациенту, который нуждается в лечении, когда такие компоненты сформулированы отдельно в разных лекарственных формах, введение которых происходит практически в одно и то же время указанному пациенту, после чего указанные компоненты высвобождаются практически одновременно,
• последовательное введение такой комбинации соединения по данному изобретению и терапевтического агента пациенту, который нуждается в лечении, когда такие компоненты сформулированы отдельно друг от друга в отдельных лекарственных формах, которые принимаются последовательно по времени указанным пациентом со значимым временным интервалом между каждым введением, после чего указанные компоненты высвобождаются в разное время; а также
• последовательное введение такой комбинации соединения по данному изобретению и терапевтического агента пациенту, который нуждается в лечении, когда такие компоненты сформулированы вместе в единый лекарственной форме, из которой высвобождение указанных компонентов происходит контролируемым образом, после чего они одновременно, последовательно или совместно высвобождаются в одно и то же время и/или разное время, где каждая часть может быть введена одним или разными путями.
Специалистам в данной области известно, что терапевтически эффективные дозировки могут меняться при применении препаратов в комбинированном лечении. Способы для экспериментального определения терапевтически эффективных дозировок препаратов и других агентов для применения в режимах комбинированного лечения описаны в литературе. Например, применение равномерного дозирования, т.е. введение более частых и меньших доз для минимизации токсичных побочных эффектов, описано в литературе. Комбинированное лечение, кроме того, включает периодическое лечение, которое начинается и останавливается в различное время в соответствии с планом лечения пациента. В комбинированной терапии, описанной в настоящем патенте, дозировки совместно вводимых соединений, несомненно, меняются в зависимости от типа применяемого вспомогательного лекарственного средства, специфики применяемого лекарственного средства, болезни или состояния, подвергаемого лечению, и т.д.
Кроме того, соединения, описанные в настоящем изобретении, также можно применять в комбинации с процедурами, которые могут обеспечить аддитивную или синергичную пользу для пациента. Только в качестве примера ожидается, что пациенты получат терапевтическую и/или профилактическую пользу в способах, описанных в настоящем патенте, при которых фармацевтическую композицию соединения, описанного в настоящем изобретении, и/или комбинации с другими способами терапии объединяют с генетическим исследованием для определения того, является ли объект носителем мутантного гена, для которого известно, что он коррелирует с определенными болезнями или состояниями.
Вышеуказанная лекарственная терапия может включать введение одного или более противораковых агентов. Примеры противораковых агентов включают, без ограничения, любой из следующих агентов: алкилирующие агенты, алкилированные сульфонаты, нитрозомочевины или триазены; антиметаболиты; гормональные средства или антагонисты гормонов; соединения платины; противоопухолевые антибиотики; ингибиторы топоизомеразы.
Примеры антиметаболитов включают, без ограничения, антагонисты фолиевой кислоты (например, метотрексат, триметрексат, пеметрексед, пралатрексат, ралтитрексед, кальция левофолинат) или антагонисты пиримидина (например, цитарабин, тегафур, фторурацил, капецитабин, флоксоуридин, азацитидин, эноцитабин, кармофур, гемцитабин, сапацитабин, элацитарабин, доксифлуридин), или антагонисты пурина (например, меркаптопурин, тиогуанин, пентостатин, флударабин, кладрибин, неларабин, азатиоприн, клофарабин), или аспарагиназу.
Примеры алкилирующих агентов включают, без ограничения, мехлороэтамин, циклофосфамид, хлорамбуцил, менфалан, бендамустин, гексаметилимеламине, тиотепа, бусулфан, кармустин, ломустин, ларомустин, семустин, стрептозоцин, дакарбазин, ифосфамид, импросульфан, митобронитол, митолактол, нимустин, ранимустин, темозоломид, треосульфан, карбохион, апазихион, фотемустин, алтретамин, глюфосфамид, пипоброман, трофосфамид, урамустин, эвофосфамид, VAL-083.
Примеры гормональных средств и антагонистов гормонов включают, без ограничения, преднизон, преднизолон, гидроксипрогестерона капроат, мегестрола ацетат, медроксипрогестерона ацетат, диэтилстильбестрол, эстрадиол, тамоксифен, пропионат тестостерона, флуоксиместерон, флутамид, лейпролид, абареликс, абиратерон, бикалутамид, бусерелин, калустерон, хлоротрианизен, дегареликс, дексаметазон, флуокортолон, фулвестрант, гозерелин, хистрелин, лейпрорелин, митотан, нафарелин, нандролон, нилутамид, октреотид, ралоксифен, тиреотропин-альфа, торемифен, трипторелин, диэтилстильбэстрол, аколбифен, даназол, деслорелин, эпитиостанол, ортеронел, энзалутамид, аминоглутетимид, анастрозол, эксеместан, фадрозол, летрозол, тестолактон, форместан.
Примеры соединений платины включают, без ограничения, цисплатин, карбоплатин, оксалиплатин, эптаплатин, мириплатин гидрат, лобаплатин, недаплатин, пикоплатин, сатраплатин.
Примеры противоопухолевых антибиотиков включают, без ограничения, доксорубицин, даунорубицин, идарубицин, карубицин, валрубицин, зорубицин, акларубицин, пирарубицин, неморубицин, амрубицин, эпирубицин, блеомицин, дактиномицин, пликамицин, пепломицин, митомицин С, зиностатин, стрептозоцин.
Примеры ингибиторов топоизомеразы включают, без ограничения, иринотекан, топотекан, белотекан, тенипозид, этопозид, ворелоксин, амонафид.
Примеры противораковых агентов включают, без ограничения, любой из следующих агентов: препараты, действующие на микротрубочки, такие как таксаны (например, паклитаксел, наб-паклитаксел, доцетаксел, кабазитаксел, тезетаксел), алкалоиды барвинка (например, винорелбин, винбластин, винкристин, виндезин, винфлунин); ингибиторы сигналинга митогенактивируемой протеинкиназы (например, U0126, PD98059, PD184352, PD0325901, ARRY-142886, SB239063, SP600125, BAY 43-9006, вортманин или LY294002); ингибиторы mTOR (например, сиролимус, темсиролимус, эверолимус, ридафоролимус); антитела (например, ритуксимаб, трастузумаб, алемтузумаб, бесилесомаб, цетуксимаб, деносумаб, ипилимумаб, бевацизумаб, пертузумаб, ниволумаб, офатумумаб, панитумумаб, тозитумомаб, катумаксомаб, элотузумаб, эпратузумаб, фарлетузумаб, могамулизумаб, нецитумумаб, нимотузумаб, обинутузумаб, окаратузумаб, ореговомаб, рамуцирумаб, рилотумумаб, силтуксимаб, тоцилизумаб, залутумумаб, занолимумаб, матузумаб, далотузумаб, онартузумаб, ракотумомаб, табалумаб, abituzumab); ингибиторы киназ (фосматаниб, энтосплетениб, эрлотиниб, иматиниб, лапатиниб, нилотиниб, пазопаниб, вемурафениб, гефитиниб, кризотиниб, дазатиниб, регорафениб, руксолитиниб, сорафениб, сунитиниб, вандетаниб, бозутиниб, акситиниб, афатиниб, алисертиб, дабрафениб, дакомитиниб, динациклиб, довитиниб, нинтеданиб, ленватиниб, линифаниб, линситиниб, маситиниб, мотесаниб, нератиниб, орантиниб, понатиниб, радотиниб, типифарниб, тивантиниб, тивозаниб, траметиниб, апатиниб, ибрутиниб, акалабрутиниб, кобиметиниб, федратиниб, бриваниб аланинат, цедираниб, кабозантиниб, икотиниб, ципатиниб, ригосертиб, пимасертиб, бупарлисиб, иделалисиб, мидостаурин, перифозин, tesevatinib); фотосенсибилизаторы (например, талапорфин, темопорфин, порфимер натрия); цитокины (например, алдеслейкин, интерферон альфа, интерферон альфа-2а, интерферон альфа-2b, целмолейкин, тасонермин, рекомбинантный интерлейкин-2, опрелвекин, рекомбинантный интерферон бета-1а); вакцины (например, пицибанил, сипулеуцел-Т, витеспен, эмепепимут-S, онкоВАКС, риндопепимут, троВАКС, MGN-1601, MGN-1703); бисантрен, децитабин, митоксантрон, прокарбазин, трабектедин, амсакрин, бросталлицин, милтефозин, ромидепсин, плитидепсин, эрибулин, иксабепилон, фосбретабулин, денилейкин дифтитокс, ибритумомаб тиуксетан, преднимустин, трастузумаб эмтанзин, эстрамустин, гемтузумаб-озогамицин, афлиберцепт, опортузумаб монатокс, цинтредекин бесудокс, эдотреотид, инотузумаб-озогамицин, наптумомаб эстафенатокс, винтафолид, брентуксимаб ведотин, бортезомиб, иксазомиб, карфилзомиб, леналидомид, талидомид, помалидомид, золедроновая кислота, ибандроновая кислота, памидроновая кислота, алитретиноин, третиноин, перетиноин, бексаротен, тамибаротен, имихимод, лентинан, мифамуртид, ромуртид, пэгаспаргаза, пентостатин, эндостатин, сизофиран, висмодегиб, вориностат, энтиностат, панобиностат, целекоксиб, циленгитид, этанидазол, ганетеспиб, идроноксил, инипариб, лонидамин, ниморазол, прокодазол, тасхинимод, телотристат, белиностат, тимальфазин, тирапазамин, тоседостат, трабедерсен, убенимекс, валсподар, гендицин, реолизин, ретаспимицин, требананиб, вирулизин.
В одном варианте настоящее изобретение относится к применению соединения, описанного в настоящем документе, или его фармацевтически приемлемой соли, или фармацевтической композиции по данному изобретению для лечения заболевания или нарушения, опосредованного активацией циклинзависимых протеинкиназ CDK8/19, у субъекта, нуждающегося в таком лечении.
В еще одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к применению соединения, описанного в настоящем документе, или его фармацевтически приемлемой соли, или фармацевтической композиции по данному изобретению у субъекта, нуждающегося в таком лечении, для лечения заболевания или нарушения, опосредованного активацией циклинзависимых протеинкиназ CDK8/19, представляющего собой онкологическое, онкогематологическое, аутоиммунное, воспалительное или аллергическое заболевание.
В еще одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей терапевтически эффективное количество соединения по настоящему изобретению, или его фармацевтически приемлемую соль, к способу лечения заболевания или нарушения, опосредованного активацией циклинзависимых протеинкиназ CDK8/19, соединением по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемой соли, или фармацевтической композицией, содержащей такое соединение, к применению соединения по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемой соли, или фармацевтической композицией, содержащей такое соединение, для лечения заболевания или нарушения, опосредованного активацией циклинзависимых протеинкиназ CDK8/19, у субъекта, нуждающегося в таком лечении, где заболевание или нарушение, опосредованное активацией циклинзависимых протеинкиназ CDK8/19, представляет собой онкологическое, онкогематологическое, аутоиммунное, воспалительное или аллергическое заболевание, при этом онкологическое или онкогематологическое заболевание выбирают из группы, включающей колоректальный рак, меланому, метастатическую меланому, рак молочной железы, HER2-позитивный рак молочной железы, гормон-зависимый рак молочной железы, трижды негативный рак молочной железы (ТНРМЖ), рак предстательной железы, кастрационно-рефрактерный рак предстательной железы, метастатический рак яичника, метастатический рак желудка, лейкоз, острый миелоидный лейкоз, рак поджелудочной железы (РПЖЖ); аутоиммунное, воспалительное или аллергическое заболевание представляет собой IgA нефрофатию; IgC4-связанная болезнь; несвязанная склерозирующая болезнь; PANDAS (педиатрические аутоиммунные нейропсихические расстройства, связанные со стрептококком); POEMS синдром; агаммаглобулинемия; аксиальный спондиоартрит; аксональная и нейрональная невропатия; аллергический конъюнктивит; аллергический ринит; амилоидоз; ангиоцентрический эозинофильный фиброз; анкилозирующий спондилит; анти-GMB/анти-ТМВ нефрит; антиспермальные антитела; антифосфолипидный синдром; артериит Такаясу; атопический дерматит; аутоиммунная апластическая анемия; аутоиммунная болезнь внутреннего уха; аутоиммунная гемолитическая анемия; аутоиммунная гемолитическая анемия с тепловыми антителами; аутоиммунная гиперлипидемия; аутоиммунная дизавтономия; аутоиммунная крапивница; аутоиммунная невромиотония (синдром Исаакса); аутоиммунная ретинопатия; аутоиммунная тромбоцитопеническая пурпура; аутоиммунное поражение тестикул/аутоиммунный гипогонадизм; аутоиммунный ангионевротический отек; аутоиммунный гепатит; аутоиммунный диабет; аутоиммунный иммунодефицит; аутоиммунный перикардит; аутоиммунный прогестероновый дерматит; аутоиммунный тиреоидит; болезни несовместимости по группам крови; болезнь Аддисона; болезнь Бехчета; болезнь Грейвса (диффузный токсический зоб); болезнь Девика (нейромиелит оптического нерва); болезнь Кавасаки; болезнь Каслмана; болезнь Крона; болезнь Меньера; болезнь Муха-Габермана; болезнь Ормонда (ретроперитонеальный фиброз); болезнь Рейно; болезнь Чарга-Стросса; болезнь Шагаса; болезнь Шегрена; буллезный пемфигоид; буллезный эпидермолиз; васкулит; васкулит почек; васкулиты, ассоциированные с антинейтрофильными цитоплазматическими антителами; везикулобуллезный дерматоз; височный артериит; височный/гигантоклеточный артериит; витилиго; витилиго и гранулематоз Вегенера; волчаночный нефрит; воспалительная аневризма аорты; врожденная блокада сердца; вульгарный пемфигус; гангренозная пиодермия; гемолитическая анемия; геморрагический васкулит; герпес гестационный или пемфигоид гестационный; герпетиформный дерматит; гестационный пемфигоид; гигантоклеточный артериит (височный артериит); гигантоклеточный миокардит; гипогаммаглобулинемия; гломерулонефрит; гранулематоз с полиангиитом (синдром Вегенера); деревянистый конъюнктивит; дерматомиозит; дилатационная кардиомиопатия; дискоидная волчанка; идиопатическая возвратная макрогематурия; идиопатическая воспалительная миопатия; идиопатическая тромбоцитопеническая пурпура; идиопатический воспалительный псевдотумор; идиопатический гипокомплементемический тубулоинтерстициальный нефрит; идиопатический легочный фиброз; инсулинозависимый сахарный диабет (1 типа); интерстициальный цистит; истинная красноклеточная аплазия; кардиомиопатия; контактный дерматит; концентрический склероз Бало; крапивница; красный плоский лишай/склероатрофический лишай; лейкоцитокластический васкулит; лимбический энцефалит; лимитированная склеродермия (CREST синдром); линейный IgA-зависимый буллезный дерматоз; листовидный пемфигус; макроглобулинемия Вальденстрема; медиастинальный фиброз; миастенический криз; миастенический синдром Ламберта-Итона; миастения; миастения гравис; микроскопический полиангиит; миозит; миокардит Коксаки; мультифокальная моторная невропатия; мультифокальный фибросклероз; нарколепсия; неврит зрительного нерва; недифференцированное заболевание соединительной ткани; нейромиелит оптического нерва (синдром Девика); нейтропения; неспецифический язвенный колит; нефрит, ассоциированный с антителами к базальной мембране канальцев и клубочков; опсоклонус; острая моторная аксональная невропатия; острый геморрагический лейкоэнцефалит; острый диссеминированный энцефаломиелит; очаговая алопеция; палиндромный ревматизм; паранеопластическая дегенерация мозжечка; паранеопластический синдром; парапротеинемическая полиневропатия; пароксизмальная ночная гемоглобинурия; педиатрическое аутоиммунное нейропсихиатрическое расстройство, ассоциированное со стрептококковой инфекцией (PANDAS-синдром); пемфигоид конъюнктивы; пемфигоид слизистых оболочек; первичный билиарный холангит (цирроз); первичный склерозирующий холангит; периаортит; периартериит; перивенозный энцефаломиелит; периферическая невропатия; периферический увеит; пернициозная анемия; подострый бактериальный эндокардит; полигландулярный (полиэндокринный) аутоиммунный синдром 1 (кандидополиэндокринный синдром), 2 (синдром Шмидта), 3 типов; полимиозит; полиневропатия с органомегалией (POEMS синдром); поперечный миелит; постинфарктный синдром; посттравматический перикардит; прогестероновый дерматит; псориаз; псориатический артрит; пузырчатка; пурпура Шенлейна-Геноха; рассеянный склероз; реактивный артрит; реакция «трансплантат против хозяина» (РТПХ); реакция отторжения трансплантата в следствие антител к HLA; ревматизм; ревматическая лихорадка; ревматическая полимиалгия; ревматоидный артрит; рефлекторная симпатическая дистрофия; рефрактерная эпилепсия; рецидивирующий полихондрит; Рубцующий пемфигоид (РП) конъюнктивы; саркоидоз; сахарный диабет 1 типа; симпатическая офтальмия; синдром беспокойных ног; синдром Гийена-Барре; синдром Гудпасчера; синдром Дресслера; синдром Кавасаки; синдром Когана; синдром Ламберта-Итона; синдром Микулича; синдром Миллера Фишера; синдром Пари-Ромберга (прогрессивная лицевая гемиатрофия); синдром Персонейджа-Тернера (невралгическая амиотрофия, идиопатическая плечевая плексопатия); синдром постперикардиотомии; синдром Рейтера; синдром ригидности; синдром Стиффа-Персона; синдром Сусака; синдром Толосы-Ханта (синдром верхней глазничной щели); синдром холодовой агглютинации (CAD); синдром Шегрена; синдром Шмидта; синдром Эванса; системная красная волчанка; склерит; склеродерма; склеродермия; склерозирующий лишай; смешанная болезнь соединительной ткани; смешанная криоглобулинемия; спорадический миозит с включениями; тиреоидит Риделя; тиреоидит Хашимото; тиреоидная офтальмопатия; тиреоидный криз; тромботическая тромбоцитопеническая пурпура; тромбоцитопеническая пурпура; увеит; узелковый полиартериит; узловатая эритема; универсальная алопеция; фетальная и неонатальная аллоиммунная тромбоцитопения; фиброзирующий альвеолит; фибромиалгия; холодовая гемагглютининовая болезнь; хорея Сиденхема (малая или ревматическая хорея); хроническая болезнь Лайма; хроническая воспалительная демиелинизирующая полинейропатия (CIDP); хронический рецидивирующий мультифокальный остеомиелит; хронический склерозирующий сиалоаденит (воспалительная опухоль Кюттнера); целиакия; чистая/истинная эритроцитарная аплазия; экспериментальный аллергический энцефаломиелит; эндокринная офтальмопатия (тиреоидная офтальмопатия, офтальмопатия Грейвса, аутоиммунная офтальмопатия); эндометриоз; энцефалит Хашимото; энцефалит/энцефалопатия, ассоциированные с аутоантителами; эозинофильный фасциит; эозинофильный эзофагит; эссенциальная смешанная криоглобулинемия; ювенильный артрит; ювенильный диабет (диабет 1 типа); ювенильный миозит; ювенильный ревматоидный артрит; язва Мурена; язвенный колит.
Соединения по настоящему изобретению будут вводиться в количестве, эффективном для лечения состояния, о котором идет речь, т.е. в дозах и в течение периодов времени, необходимых для достижения желаемого результата. Терапевтически эффективное количество может изменяться в зависимости от таких факторов, как конкретное состояние, по поводу которого проводится лечение, возраста, пола и веса пациента, а также является ли введение данных соединений самостоятельным лечением или оно проводится в комбинации с одним или более дополнительных методов лечения.
Схемы приема лекарственных средств можно регулировать, чтобы обеспечить оптимальный желаемый ответ. Например, может быть введена одна доза, несколько разделенных доз могут быть введены в течение некоторого времени, или доза может быть пропорционально уменьшена или увеличена в зависимости от остроты терапевтической ситуации. Особенно полезным является изготовление пероральных композиций в стандартной лекарственной форме для простоты введения и однородности дозирования. Стандартная лекарственная форма при использовании в данном документе, относится к физически дискретным единицам, пригодным в качестве единичных доз для пациентов/субъектов, подлежащих лечению; каждая единица содержит заданное количество активного соединения, рассчитанное для получения желаемого терапевтического эффекта в сочетании с требуемым фармацевтическим носителем.
Кроме того, необходимо понимать, что для любого конкретного пациента, конкретные схемы введения должны быть скорректированы через некоторое время согласно индивидуальной потребности и на усмотрение медицинского работника, который осуществляет введение или контролирует введение композиций, и что диапазоны концентрации, приведенные в данном описании, приведены только в качестве примера и не предназначены для ограничения объема или практики заявленных композиций. Кроме того, режим дозирования с композициями по данному изобретению может быть основан на различных факторах, включая тип заболевания, возраст, вес, пол, состояния здоровья пациента, тяжесть состояния, путь введения и конкретное используемое соединение по настоящему изобретению. Таким образом, режим дозирования может широко варьироваться, но может определяться регулярно с помощью стандартных методов. Например, дозы могут быть скорректированы на основе фармакокинетических и фармакодинамических параметров, которые могут включать клинические эффекты, такие как токсические эффекты или лабораторные значения. Таким образом, настоящее изобретение охватывает индивидуальное повышение дозы, которое определяется квалифицированным специалистом. Определение необходимой дозы и режимы хорошо известны в соответствующей области техники и будут понятны специалисту в данной области после ознакомления с идеями, раскрытыми в данном документе.
Как правило, дозы, применяемые для лечения взрослого человека, обычно находятся в диапазоне 0,02-5000 мг в день или приблизительно от 1-1500 мг в день.
При улучшении состояния пациента вводится поддерживающая доза, если это необходимо. Впоследствии, дозировка или частота введения, или то и другое могут быть уменьшены, в зависимости от симптомов, до уровня, при котором поддерживается облегченное состояние болезни, нарушения или состояния. Пациентам может, однако, потребоваться периодическое лечение в течение долгого времени при любом рецидиве симптомов.
Вышеизложенный спектр является только предположительным, поскольку количество переменных в отношении индивидуального режима лечения велико, и значительные отклонения от этих рекомендованных значений являются весьма обычными. Эти дозировки могут быть изменены в зависимости от множества переменных, не ограниченных активностью применяемого соединения, болезни или состояния, подвергаемого лечению, способа введения, потребности индивидуального субъекта, тяжести болезни или состояния, подвергаемого лечению, и мнения лечащего врача.
Все публикации, патенты и патентные заявки, указанные в этой спецификации включены в данный документ путем отсылки. Хотя вышеупомянутое изобретение было довольно подробно описано, специалистам в данной области на основе идей, раскрытых в данном изобретении, будет вполне понятно, что могут быть внесены определенные изменения и модификации без отклонения от сущности и объема прилагаемых вариантов осуществления изобретения.
Для наилучшего понимания изобретения приводятся следующие примеры. Эти примеры приведены только в иллюстративных целях и не должны толковаться как ограничивающие сферу применения изобретения в любой форме.
Соединения и процессы по настоящему изобретению будут лучше поняты в совокупности со следующими схемами синтеза, которые демонстрируют способы, с помощью которых могут быть получены соединения по настоящему изобретению. Исходные продукты могут быть получены из коммерческих источников или получены с помощью общепринятых способов из уровня техники, известных среднему специалисту. Среднему специалисту будет также очевидно, что стадии выборочного введения защиты и снятия защиты, так же как порядок проведения указанных стадий, могут быть осуществлены в различной очередности, в зависимости от природы заместителей, для успешного завершения синтеза, представленного ниже.
Сокращения, используемые в настоящем описании, включая приведенные в иллюстративных схемах и последующих примерах хорошо известны среднему специалисту. Некоторые из сокращений используют как следующие:
ДМФА - N,N-диметилформамид;
ТГФ - тетрагидрофуран;
3
4
Pd(PPh) - тетракис(трифенилфосфин)палладий(0);
BINAP - (±)-2,2'-бис(дифенилфосфино)-1,1'-динафталин;
МТБЭ - метил-трет-бутиловый эфир;
ТМЭДА - N,N,N',N'-тетраметилэтан-1,2-диамин;
2
Pd(dppf)Cl*DCM - бис(дифенилфосфино)ферроцен]дихлорпалладий(II), комплекс с дихлорметаном;
HATU - 1-[бис(диметиламино)метилен]-1Н-1,2,3-триазоло[4,5-b]пиридиний 3-оксид гексафторфосфата.
Примеры
Пример 1. Синтез блока А
Схема 1. Синтез фрагмента A3
Пример 1.1. Синтез соединения А1
2
4
NaH в виде 60% суспензии в минеральном масле (1.45 г, 36.2 ммоль) прибавили к 60 мл ДМФА, перемешивали 15 мин, прибавили 4-метоксибензиловый спирт (5.10 г, 36.2 ммоль), нагрели до 90°С атмосфере азота, перемешивали 30 мин, охладили до 20°С, прибавили 4-бром-2-фтор-1-иодбензол (10.0 г, 32.9 ммоль). Реакционную массу перемешивали при 90°С 5 ч, охладили, вылили в 300 мл воды, экстрагировали этилацетатом (4×80 мл), промывали экстракт водой (4×30 мл), насыщенным раствором NaCl (30 мл), сушили над NaSO, отогнали растворитель в вакууме, остаток перекристаллизовывали из изопропанола. Получили 10.4 г (75.8%) продукта А1.
Пример 1.2. Синтез соединения А2
2
3
2
1-Метил-4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборон-2-ил)-1H-пиразол (6.26 г, 29.5 ммоль), А1 (10.00 г, 22.7 ммоль), CsCO (14.92 г, 45.3 ммоль), Pd(dppf)Cl*DCM, (0.56 г, 0.68 ммоль), диоксан (100 мл) и воду (40 мл) поместили в сосуд с завинчивающейся крышкой. Через реакционную массу барботировали азот в течение 15 мин, закрыли сосуд и нагревали при перемешивании в атмосфере азота в течение 6 ч при 100°С. После окончания реакции реакционную массу охладили до комнатной температуры, нанесли на силикагель, продукт выделяли колоночной хроматографией на силикагеле, элюент гексан-этилацетат (8:2), затем (7:3). Полученное желтоватое масло обработали смесью 40 мл МТБЭ и 120 мл гексана, осадок отфильтровали, промыли гексаном (30 мл), сушили на воздухе. Получили 5.77 г (69.0%) А2.
Пример 1.3. Синтез соединения A3
2
Через суспензию А2 (3.00 г, 7.64 ммоль), биспинаколатодиборана (2.97 г, 11.5 ммоль) и KOAc (1.55 г, 15.27 ммоль) в 45 мл диоксана барботировали азот в течение 10 минут, затем добавили Pd(dppf)Cl*DCM(0.40 г, 0.50 ммоль). Реакционную массу перемешивали при 100°С в атмосфере азота в течение 3 часов, профильтровали через слой целита, промыли 10 мл диоксана, из фильтрата удалили растворитель при пониженном давлении. Продукт очищали колоночной хроматографией на силикагеле, элюент этилацетат-гексан (8:2). Полученное после удаления растворителя маслообразное вещество обработали смесью гексана и МТБЭ, отфильтровали осадок. Получили 2.80 г (89%) A3.
Схема 2 Синтез фрагмента А8
Пример 1.4. Синтез соединения А4
2
3
2
4
4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборон-2-ил)-1H-пиразол (2.00 г, 10.1 ммоль), этилхлорацетат (3.75 г, 30.3 ммоль), KCO (4.19 г, 30.3 ммоль) в 30 мл ДМФА перемешивали в атмосфере азота при 50°С в течение 6 ч. Реакционную массу профильтровали, удалили растворитель при пониженном давлении, остаток растворили в дихлорметане, сушили над NaSO, растворитель удалили. Получили 2.70 г (95%) А4 в виде желтого маслообразного вещества.
Пример 1.5. Синтез соединения А5
2
3
3
4
А4 (1.00 г, 3.39 ммоль), А1 (1.42 г, 3.39 ммоль), CsCO (2.23 г, 6.78 ммоль), Pd(PPh), (0.20 г, 0.17 ммоль), в смеси 30 мл диоксана, поместили в сосуд с завинчивающейся крышкой. Через реакционную массу барботировали азот в течение 15 мин, закрыли сосуд и нагревали при перемешивании в атмосфере азота в течение 12 ч при 90°С. После окончания реакции реакционную массу охладили до комнатной температуры, нанесли на силикагель, продукт выделяли колоночной хроматографией на силикагеле, элюент гексан-этилацетат-метанол (4:1:0.01). Получили 0.88 г (58%) А5.
Пример 1.6. Синтез соединения А6
А5 (0.70 г, 1.41 ммоль) растворили в 10 мл ТГФ, к полученному раствору добавили раствор LiOH (0.022 г, 0.51 ммоль) в 20 мл воды. Реакционную массу перемешивали при 20°С в течение 1 ч, удалили ТГФ при пониженном давлении, довели рН оставшегося водного раствора до 3. Выпавший осадок отфильтровали, промыли последовательно небольшим количеством ледяного этанола и эфира, сушили. Получили 0.48 г (89%) А6.
Пример 1.7. Синтез соединения А7
А6 (0.20 г, 0.48 ммоль), диметиламина гидрохлорид (0.12 г, 0.72 ммоль), HATU (0.28 г, 0.72 ммоль), триэтиламин (0.10 г, 0.96 ммоль), 4-диметиламинопиридин (0.015 г, 0.12 ммоль) в 30 мл дихлорметана перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. После окончания реакции реакционную массу нанесли на силикагель, продукт выделяли колоночной хроматографией на силикагеле, элюент дихлорметан-метанол (96:3). Получили 0.18 г (85%) А7.
Пример 1.8. Синтез соединения А8
2
2
4
Через суспензию А7 (0.23 г, 0.49 ммоль), биспинаколатодиборана (0.197 г, 0.74 ммоль) и KOAc (0.10 г, 0.98 ммоль) в 25 мл диоксана барботировали азот в течение 15 минут, затем добавили Pd(dppf)Cl*DCM (0.02 г, 0.025 ммоль). Полученную смесь перемешивали при 90°С в атмосфере азота в течение 12 часов. Реакционную массу сконцентрировали при пониженном давлении, к остатку прибавили 30 мл воды, экстрагировали этилацетатом (3×30 мл), объединенные органические экстракты сушили над NaSO, растворитель удалили при пониженном давлении, продукт выделяли колоночной хроматографией на силикагеле, элюент этилацетат-гексан (1:2). Получили 0.20 г (83%) А8.
Пример 2. Синтез блока В
Схема 3
Пример 2.1. Синтез соединения В1-1
Циклопропилметиламин (3.00 г, 41.3 ммоль) растворили в 15 мл дихлорметана, прибавили при охлаждении в ледяной бане раствор ди-трет-бутилдикарбоната (7.25 г, 33.1 ммоль) в 30 мл дихлорметана, реакционную массу перемешивали в течение 20 ч при комнатной температуре, растворитель и избыток амина удалили при пониженном давлении. Получили 6.40 г (113.0%) В1-1. Продукт был использован в следующей стадии без дополнительной очистки.
Пример 2.2 Синтез соединения В1-2
Получен аналогично В1-1 из 2-метоксиэтиламина (6.00 г, 79.1 ммоль) с выходом 11.0 г (99.3%).
Пример 2.3 Синтез соединения В2-1
NaH в виде 60% суспензии в минеральном масле (0.61 г, 15.2 ммоль) прибавили при охлаждении в ледяной бане в атмосфере азота к раствору В1-1 (2.00 г, 11.7 ммоль) в 30 мл ДМФА. Реакционную массу перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч, добавили 4-бромбутилацетат (2.96 г, 15.2 ммоль) и перемешивали в атмосфере азота при 60°С в течение 6 ч, охладили, прибавили 100 мл воды, экстрагировали этилацетатом (4×70 мл), промывали водой (3×30 мл) и насыщенным раствором NaCl (30 мл). Продукт выделяли колоночной хроматографией на силикагеле, элюент этилацетат-гексан (1:20). Получили 1.34 г (40.2%) В2-1.
Пример 2.4 Синтез соединения В2-2
Получен аналогично В2-1 из В1-2 (1.00 г, 5.52 ммоль) и 3-бромпропилацетата (1.07 г, 6.08 ммоль) с выходом 1.24 г (81.5%).
Пример 2.5 Синтез соединения В2-3
Получен аналогично В2-1 из В1-2 (3.00 г, 17.1 ммоль) и 4-бромбутилацетата (3.34 г, 17.1 ммоль) с выходом 2.02 г (44.4%).
Пример 2.6 Синтез соединения В3-1
3
2
4
К раствору В2-1 (1.33 г, 4.66 ммоль) в 30 мл дихлорметана прибавили при охлаждении ледяной водой 4N раствор HCl в диоксане (5.83 мл, 23.3 ммоль). Реакционную массу перемешивали при комнатной температуре в течение 20 ч, растворители удалили при пониженном давлении, остаток растворили в 15 мл воды, довели рН до 8 с помощью твердого NaHCO, экстрагировали продукт дихлорметаном (5×50 мл), сушили над NaSO, растворитель удалили при пониженном давлении. Получили 0.73 г (85.0%) В3-1.
Пример 2.7 Синтез соединения В3-2
Получен аналогично В3-1 из В2-2 (1.24 г, 4.50 ммоль) с выходом 0.53 г (67.2%).
Пример 2.8 Синтез соединения В3-3
Получен аналогично В3-1 из В3-2 (2.09 г, 7.22 ммоль) с выходом 1.03 г (75.3%).
Пример 3. Синтез блока С
Схема 4
Пример 3.1. Синтез соединения С1
2
4
К раствору 2-хлорпиридинкарбоновой кислоты (30.0 г, 0.19 моль) в 160 мл толуола добавили диизопропилэтиламин (36.9 г, 0.28 моль) и дифенилфосфорилазид (55.6 г, 0.20 моль). Реакционную массу перемешивали при комнатной температуре в течение 2.5 часов, добавили трет-бутиловый спирт (20.1 г, 0.28 моль) и перемешивали еще 1.5 ч при 80°С, охладили, промыли 20 мл воды, сушили над NaSO, растворители удалили при пониженном давлении. Продукт выделяли колоночной хроматографией на силикагеле, элюент этилацетат-гексан (1:9). Получили 35.7 г (84.2%) С1.
Пример 3.2. Синтез соединения С2
2
4
Раствор C1 (35.7 г, 0.14 моль) и ТМЭДА (41.5 г, 0.35 моль) в 500 мл тетрагидрофурана, охладили до -75°С и прибавили по каплям 2.5М раствор BuLi в гексане (142 мл, 0.35 моль) таким образом, чтобы температура реакционной смеси не поднималась выше -64°С. Перемешивали полученную смесь при -70°С в течение 1 ч, после чего нагрели в течение 30 минут до -50°С и снова охладили до -75°С. К реакционной массе прибавили этилформиат (42.4 г, 0.57 моль) из капельной воронки в течение 16 секунд, перемешивали в течение 1 ч при -70°С, нагрели до -40°С, добавили 10 мл метанола и 150 мл 15% раствора NaCl, отделили органический слой и промыли его насыщенным раствором NaCl, сушили над NaSO, растворители удалили при пониженном давлении. Продукт выделяли колоночной хроматографией на силикагеле, элюент этилацетат-гексан (2:8). Получили 29.2 г (81.2%) С2.
Пример 3.3. Синтез соединения С3
К раствору С2 (29.2 г, 0.11 моль) и этил 3,3-диэтоксипропионата (32.5 г, 0.162 моль) в 220 мл хлороформа прибавили по каплям трифторуксусную кислоту (149 г, 1.30 моль) при 0°С. Реакционную массу кипятили в течение 2 часов, растворитель удалили при пониженном давлении. К остатку добавили 200 мл метил-трет-бутилового эфира, образовавшийся осадок отфильтровали, сушили. Получили 22.5 г (98%) С3.
Пример 3.4. Синтез соединения С4
К суспензии С3 (22.5 г, 0.103 моль) в 220 мл тетрагидрофурана прибавили раствор LiOH (6.90 г, 0.162 моль) в 100 мл воды. Реакционную массу перемешивали в течение 1 ч, растворитель удалили при пониженном давлении, к остатку прибавили 1N раствор HCl до рН 2, осадок отфильтровали, сушили. Получили 18.5 г (93.0%) С4.
Пример 3.5 Синтез соединения С5-1
2
2
3
К суспензии С4 (0.753 г, 3.96 ммоль) в SOCl (4.76 г, 39.6 ммоль) прибавили 0.3 мл ДМФА и кипятили реакционную массу в течение 4 ч, SOCl удалили при пониженном давлении, остаток сконцентрировали с МТБЭ, затем растворили в 15 мл дихлорметана, охладили при перемешивании в ледяной бане в атмосфере азота. К реакционной массе прибавили по каплям раствор В3-1 (0.734 г, 3.96 ммоль) и EtN (2.11 г, 19.8 ммоль) в 8 мл дихлорметана, перемешивали при комнатной температуре в течение 20 ч. Продукт выделяли колоночной хроматографией на силикагеле, элюент этилацетат-гексан (1:1). Получили 1.14 г (76.4%) С5-1.
Пример 3.6. Синтез соединения С5-2
Получен аналогично С5-1 из В3-2 (0.53 г, 3.02 ммоль) и С4 (0.58 г, 3.02 ммоль) с выходом 0.89 г (81.0%).
Пример 3.7. Синтез соединения С5-3
Получен аналогично С5-1 из В3-3 (0.70 г, 3.68 ммоль) и С4 (0.69 г, 3.68 ммоль) с выходом 0.96 г (68.7%).
Пример 3.8. Синтез соединения С6-1
2
3
2
Через суспензию С5-1 (1.69 г, 4.49 ммоль), трет-бутилкарбамата (0.797 г, 6.74 ммоль), CsCO (2.96 г, 8.98 ммоль), BINAP (0.577 г, 0.90 ммоль), Pd(OAc) (0.103 г, 0.45 ммоль) в 40 мл диоксана пропускали интенсивный ток азота в течение 10 мин, нагревали при перемешивании в атмосфере азота при 90°С в течение 2.5 ч. Реакционную массу охладили, продукт выделяли колоночной хроматографией на силикагеле, элюент этилацетат. Получили 1.02 г (49.6%) С6-1.
Пример 3.9. Синтез соединения С6-2
Получен аналогично С6-1 из С5-2 (0.85 г, 2.32 ммоль) с выходом 0.66 г (63.8%).
Пример 3.10. Синтез соединения С6-3
Получен аналогично С6-1 из С5-3 (0.92 г, 2.42 ммоль) с выходом 0.51 г (45.8%).
Пример 3.11. Синтез соединения С7-1
3
2
4
К раствору С6-1 (1.02 г, 2.23 ммоль) в 30 мл дихлорметана прибавили при перемешивании 4N раствор HCl в диоксане (5.6 мл, 22.6 ммоль). Реакционную массу перемешивали в течение 20 ч при комнатной температуре, сконцентрировали при пониженном давлении, остаток растворили в смеси 50 мл дихлорметана и 50 мл насыщенного раствора NaHCO, органический слой отделили, водный экстрагировали дихлорметаном (3×30 мл), органические слои объединили, промыли 10 мл воды, сушили над NaSO. Продукт выделяли колоночной хроматографией на силикагеле, элюент этилацетат-метанол (9:1). Получили 0.57 г (71.9%) С7-1.
Пример 3.12. Синтез соединения С7-2
Получен аналогично С7-1 из С6-2 (0.66 г, 1.48 ммоль) с выходом 0.36 г (70.3%).
Пример 3.13. Синтез соединения С7-3
Получен аналогично С7-1 из С6-3 (0.42 г, 0.82 ммоль) с выходом 0.16 г (54.1%).
Пример 3.14. Синтез соединения С8-1
2
4
К раствору С7-1 в (0.57, 1.60 ммоль) в 15 мл дихлорэтана прибавили N-бромсукцинимид (0.316 г, 1.76 ммоль). Реакционную массу перемешивали 20 ч при комнатной температуре, прибавили 50 мл дихлорметана, промыли 20 мл воды, сушили над NaSO. Продукт выделяли колоночной хроматографией на силикагеле, элюент этилацетат. Получили 0.62 г (89.5%) С8-1.
Пример 3.15. Синтез соединения С8-2
Получен аналогично С8-1 из С7-2 (0.34 г, 0.98 ммоль) с выходом 0.29 г (69.5%).
Пример 3.16. Синтез соединения С8-3
Получен аналогично С8-1 из С7-3 (0.31 г, 0.60 ммоль) с выходом 0.27 г (99%).
Схема 5. Синтез блока С для кандидатов CDK8-macro-4 и CDK8- macro-13b
Пример 3.17. Синтез соединения С5-4
3
Синтез 4-аминобутилацетата гидрохлорида. 4-бромбутилацетат (1.50 г, 7.69 ммоль) и NaN (1.52 г, 23.1 ммоль) в 15 мл ДМФА перемешивали при комнатной температуре в течение 20 ч, прибавили 50 мл воды, продукт (4-азидоацетат) экстрагировали МТБЭ (3×50 мл), промыли 20 мл воды, сушили, удалили растворитель при пониженном давлении, остаток растворили в 20 мл ТГФ, прибавили трифенилфосфин (4.05 г, 15.4 ммоль), перемешивали 12 ч, прибавили воду (0.346 г, 19.2 ммоль), перемешивали 8 ч, удалили растворитель при пониженном давлении, прибавили 30 мл 2N HCl, экстрагировали этилацетатом (2×20 мл), водный слой отделили, сконцентрировали, остаток обработали смесью ацетона и изопропанола (5:1), осадок отфильтровали, сушили. Получили 1.10 (85.3%) гидрохлорида 4-аминобутилацетата.
2
2
Синтез соединения С5-4. К суспензии С4 (0.600 г, 3.16 ммоль) в SOCl (3.79 г, 31.6 ммоль) прибавили 0.5 мл ДМФА и кипятили реакционную массу в течение 4 ч, SOCl удалили при пониженном давлении, остаток сконцентрировали с МТБЭ, затем растворили в 10 мл дихлорметана, охладили при перемешивании в ледяной бане в атмосфере азота. К реакционной массе прибавили по каплям раствор гидрохлорида 4-аминобутилацетата (0.620 г, 3.70 ммоль) и триэтиламин (1.60 г, 15.8 ммоль) в 7 мл дихлорметана, перемешивали при комнатной температуре в течение 20 ч. Продукт выделяли колоночной хроматографией на силикагеле, элюент этилацетат-гексан (7:3). Получили 0.35 г (34.5%) С5-4.
Пример 3.18. Синтез соединения С5-13b
С5-13b получено аналогично С5-4, используя 5-амино-3-оксабутилацетат с выходом 65%.
Пример 3.19. Синтез соединения С6-4.
К раствору С5-4 (0.35 г, 1.09 ммоль) в 5 мл ДМФА прибавили NaH (в виде 60% суспензии в минеральном масле) (0.065 г, 1.63 ммоль), перемешивали в течение 1 ч, прибавили йодистый метил (0.325 г, 2.18 ммоль), перемешивали 20 ч при комнатной температуре, прибавили 20 мл воды, экстрагировали этилацетатом (5×20 мл), промывали водой (4×10 мл), сушили. Продукт выделяли колоночной хроматографией на силикагеле, элюент этилацетат-гексан (7:3). Получили 0.27 г (72.8%) С6-4.
Пример 3.20. Синтез соединения С6-13b получено аналогично С6-4, используя С5-13b с выходом 51.2%.
Пример 3.21. Синтез соединения С7-4
2
3
2
Через суспензию С5-1 (1.38 г, 3.69 ммоль), 4-метоксибензиламина (0.62 г, 4.43 ммоль), CsCO (2.06 г, 6.27 ммоль), BINAP (0.23 г, 0.37 ммоль), Pd(OAc) (0.042 г, 0.18 ммоль) в 40 мл диоксана пропускали интенсивный ток азота в течение 10 мин, нагревали при перемешивании в атмосфере азота при 100°С в течение 2.5 ч. Реакционную массу охладили, продукт выделяли колоночной хроматографией на силикагеле, элюент этилацетат. Получили 1.48 г (91.9%) С6-1.
Пример 3.22. Синтез соединения С7-13b получено аналогично С7-4, используя С6-13b с выходом 32.3%)
Пример 3.23. Синтез соединения С8-4
3
3
Раствор С7-4 (1.48 г, 3.39 ммоль) в CFCOOH (17.1 г, 150 ммоль) перемешивали при 40°С в течение 20 ч, удалили летучие компоненты реакционной массы досуха при пониженном давлении, к остатку прибавили 20 мл 5% раствора NaHCO, перемешивали в течение 30 мин, осадок отфильтровали, промыли водой, сушили. Получили 0.87 г (80.9%).
Пример 3.24. Синтез соединения С8-13b получено аналогично С8-4, используя С7-13b с выходом 97.3%
Пример 3.25 Синтез соединения С9-4
2
4
К суспензии С8-4 (0.25 г, 0.79 ммоль) в 10 мл дихлорэтана добавили небольшими порциями N-бромсукцинимид (0.17 г, 0.95 ммоль) при 0°С, реакционную массу перемешивали в течение 40 мин при 20°С, добавили 50 мл дихлорметана, промыли 10 мл воды, сушили над NaSO. Продукт выделяли колоночной хроматографией на силикагеле, элюент: дихлорметан-метанол (98:2). Получили 0.20 г (64.0%) С9-4.
Пример 3.26. Синтез соединения С9-13b получено аналогично С8-4, используя С7-13b, выход 34.0%.
Пример 4. Синтез макроциклов
Схема 6. Синтез кандидатов CDK8-macro-2, 4, 6, 7
Пример 4.1. Синтез соединения D1-1.
2
3
2
Через суспензию С8-1 (0.20 г, 0.46 ммоль), A3 (0.232 г, 0.55 ммоль), CsCO (0.302 г, 0.92 ммоль,) в смеси 10 мл диоксана и 4 мл воды барботировали аргон в течение 15 минут, затем добавили Pd(dppf)Cl*DCM (0.02 г, 0.025 ммоль), реакционную массу перемешивали в атмосфере азота при 90°С в течение 4 ч. Продукт выделяли колоночной хроматографией на силикагеле, элюент дихлорметан-метанол (99:1). Получили 0.3 г (>100%) D1-1, продукт использовали на следующей стадии без дополнительной очистки.
Пример 4.2. Синтез соединения D2-1.
2
4
К раствору D1-1 (0.330 г, 0.50 ммоль) в 4 мл ТГФ прибавили LiOH (0.218 г, 5.10 ммоль) в 4 мл воды при 20°С, перемешивали 5 ч, к реакционной массе добавили воду, рН довели до 6 раствором 1М HCl, экстрагировали дихлорметаном, сушили над NaSO. Продукт выделяли колоночной хроматографией на силикагеле, элюент дихлорметан-метанол (95:5). Получили 0.183 г (59%) D2-1.
Пример 4.3. Синтез соединения D4-1.
2
4
К раствору D2-1 (0.183 г, 0.30 ммоль) в 10 мл дихлорметана прибавили трифторуксусную кислоту (0.171 г, 1.5 ммоль), реакционную массу перемешивали 2 ч при 20°С. Растворитель удалили при пониженном давлении, остаток растворили в смеси 4 мл ТГФ и 4 мл воды, прибавили LiOH (0.065 г, 2.70 ммоль) при 20°С, перемешивали 20 ч, к реакционной массе прибавили 20 мл воды, рН довели до 7 раствором 1М HCl, экстрагировали дихлорметаном, сушили над NaSO, растворитель удалили при пониженном давлении. Получили 0.20 г (>100%) D4-1, продукт использовали на следующей стадии без дополнительной очистки.
Пример 4.4. Синтез соединения CDK8-macro-2.
К раствору D4-1 (0.060 мг, 0.11 ммоль) и трифенилфосфина (0.087 мг, 0.33 ммоль) в 6 мл толуола в атмосфере аргона прибавили по каплям раствор диизопропилазодикарбоксилата (0.067 г, 0.33 ммоль) в 1 мл толуола при 20°С и перемешивали в течение 18 ч. Растворитель удалили при пониженном давлении, продукт выделяли с помощью препаративной ВЭЖХ. Получили 0.010 г (20%) CDK8-macro-2 в виде лиофилизата.
Пример 4.5. Синтез соединения D1-2.
2
3
2
Через суспензию С9-4 (0.05 г, 0.12 ммоль), A3 (0.08 г, 0.18 ммоль), CsCO (0.08 г, 0.24 ммоль,) в смеси 1 мл диоксана и 0.3 мл воды барботировали аргон в течение 5 минут, затем добавили Pd(dppf)Cl*DCM (0.005 г, 0.01 ммоль), реакционную массу перемешивали в атмосфере азота при 95°С в течение 5 ч. Продукт выделяли колоночной хроматографией на силикагеле, элюент дихлорметан-метанол (98:2). Получили 0.03 г (42%) D1-2.
Пример 4.6. Синтез соединения D3.
3
2
4
К раствору D1-2 (0.030 г, 0.05 ммоль) в 1.5 мл дихлорметана прибавили трифторуксусную кислоту (0.2 мл, 0.74 ммоль, 5 экв), перемешивали 20 ч при комнатной температуре, растворитель удалили при пониженном давлении, добавили 10 мл насыщенного раствора NaHCO и 20 мл EtOAc. Водный слой экстрагировали 20 мл EtOAc. Органические слои объединили, промыли насыщенным раствором NaCl, сушили над NaSO, растворитель удалили при пониженном давлении. Продукт выделяли колоночной хроматографией на силикагеле, элюент дихлорметан-метанол (96:4). Получили 0.024 г (99%) D3.
Пример 4.7. Синтез соединения D4-2.
К суспензии D3 (0.024 г, 0.05 ммоль) в 1 мл прибавили раствор LiOH (0.006 г, 0.15 ммоль) в 0.5 мл воды, реакционную массу перемешивали в течение 1 ч, удалили летучие компоненты при пониженном давлении, к остатку прибавили 4М раствор HCl в метаноле до рН 6. Растворители удалили при пониженном давлении, остаток сконцентрировали с ацетонитрилом 4 раза. Получили 0.022 г (99.0%) D4-2.
Пример 4.8. Синтез соединения CDK8-macro-4.
К раствору D4-2 (0.022 г, 0.04 ммоль) и трифенилфосфина (0.059 мг, 0.22 ммоль) в 3 мл ТГФ в атмосфере аргона при 0°С прибавили диизопропилазодикарбоксилат (0.045 г, 0.22 ммоль). Реакционную массу перемешивали при 35°С в течение 4 ч. Растворители удалили при пониженном давлении, продукт выделяли с помощью препаративной ВЭЖХ. Получили 0.008 г (42%) CDK8-macro-4 в виде лиофилизата.
Пример 4.9. Синтез соединений D1-3 и D2-3.
2
3
2
Через суспензию С8-2 (0.264 г, 0.62 ммоль), A3 (0.313 г, 0.74 ммоль), CsCO (0.409 г, 1.24 ммоль,) в смеси 10 мл диоксана и 4 мл воды барботировали аргон в течение 15 минут, затем добавили Pd(dppf)Cl*DCM (0.026 г, 0.03 ммоль), реакционную массу перемешивали в атмосфере азота при 90°С в течение 8 ч. Продукт выделяли колоночной хроматографией на силикагеле, элюент дихлорметан-метанол (95:5). Получили 0.22 г (55%) D1-3 и 0.15 г (39%) D2-3.
Пример 4.10. Синтез соединения D4-3.
2
4
К раствору D2-3 (0.140 г, 0.21 ммоль) в 5 мл дихлорметана прибавили трифторуксусную кислоту (0.171 г, 1.5 ммоль), реакционную массу перемешивали в течение 36 ч при 20°С, сконцентрировали при пониженном давлении, остаток растворили в смеси 5 мл воды и 5 мл ТГФ, прибавили LiOH (0.112 г, 4.7 ммоль), реакционную массу перемешивали в течение 20 ч, добавили 5 мл воды, довели до рН 7 с помощью 1М HCl, продукт экстрагировали дихлорметаном, сушили над NaSO. Продукт выделяли при помощи препаративной ВЭЖХ. Получили 0.070 г (69%) D4-3.
Пример 4.11 Синтез соединения CDK8-macro-6.
Получен аналогично CDK8-macro-2 из D4-3 с выходом 0.006 г (10%).
Пример 4.12. Синтез соединения D1-4 и D2-4.
2
3
2
Через суспензию С8-3 (0.377 г, 0.82 ммоль), A3 (0.343 г, 0.82 ммоль), CsCO (0.537 г, 1.63 ммоль,) в смеси 16 мл диоксана и 8 мл воды барботировали аргон в течение 15 минут, затем добавили Pd(dppf)Cl*DCM (0.034 г, 0.04 ммоль), реакционную массу перемешивали в атмосфере азота при 90°С в течение 5 ч. Продукт выделяли колоночной хроматографией на силикагеле, элюент дихлорметан-метанол (95:5). Получили 0.21 г (38%) D1-4 и 0.20 г (39%) и D2-4.
Пример 4.13. Синтез соединения D4-4.
Получен аналогично D4-3 из D2-4 с выходом 0.040 г (45%) (после очистки с помощью препаративной ВЭЖХ).
Пример 4.14. Синтез соединения CDK8-macro-7.
2
4
К раствору D4-4 (0.040 г, 0.08 ммоль) и трифенилфосфина (0.083 г, 0.41 ммоль) в 4 мл толуола в атмосфере аргона прибавили по каплям раствор диизопропилазодикарбоксилата (0.108 г, 0.41 ммоль) в 1 мл толуола при 20°С и перемешивали в течение 2 ч. К реакционной массе прибавили 10 мл воды, экстрагировали этилацетатом (3×50 мл), объединенные органические слои промыли насыщенным раствором NaCl, сушили над NaSO, растворитель удалили при пониженном давлении, продукт выделяли с помощью препаративной ВЭЖХ. Получили 0.013 г (34%) CDK8-macro-7 в виде лиофилизата.
Пример 4.15. Синтез соединения D1-5.
D1-5 получено аналогично D1-1 из С9-13b с выходом 88.9%
Пример 4.16. Синтез соединения D3-5.
D3-5 получено аналогично D3-2 из D1-5
Пример 4.17. Синтез соединения D4-5.
D4-5 получено аналогично D4-2 из D3-5c выходом 45%
Пример 4.18. Синтез соединения CDK8-macro-13b.
CDK8-macro-13b получено аналогично CDK8-macro-4 из D4-5 виде уксуснокислой соли с выходом 46.3%
Схема 7. Синтез CDK8-macro-13a
Пример 4.19. Синтез соединения D4-6.
D4-6 получено аналогично из А8 из С5-13b с суммарным выходом 11.1%
Пример 4.20 Синтез соединения D5.
2
К раствору D4-6 (0.01 г, 0.02 ммоль), имидазола (0.005 г, 0.07 ммоль) и трифенилфосфина (0.015 г, 0.06 ммоль) в 0.3 мл ДМФА прибавили I (0.015 г, 0.06 ммоль). Реакционную массу перемешивали при 20°С в течение 3 ч, прибавили 2 мл воды, экстрагировали дихлорметаном (6×3 мл), продукт выделяли колоночной хроматографией на силикагеле, элюент дихлорметан-метанол (95:5). Получили 0.0036 г (30%) D5.
Пример 4.21. Синтез соединения CDK8-macro-13a.
2
3
Раствор D5 (0.016 г, 0.03 ммоль), KCO (0.007, 0.05 ммоль), 18-краун-6 (0.014 г, 0.05 ммоль) в 3 мл ДМФА перемешивали в атмосфере азота при 20°С в течение 20 ч. Продукт выделяли с помощью препаративной ВЭЖХ. Получили 0.005 г (39.2%) CDK8-macro-13a.
Схема 8. Синтез CDK8-macro-8
Пример 4.22. Синтез соединения D1-5 и D2-5.
2
3
2
Через суспензию С8-1 (0.150 г, 0.34 ммоль), А1-5 (0.186 г, 0.38 ммоль), CsCO (0.227 г, 0.69 ммоль,) в смеси 10 мл диоксана и 4 мл воды барботировали аргон в течение 15 минут, затем добавили Pd(dppf)Cl*DCM (0.014 г, 0.02 ммоль), реакционную массу перемешивали в атмосфере азота при 90°С в течение 6 ч. Продукт выделяли колоночной хроматографией на силикагеле, элюент дихлорметан, дихлорметан-метанол (80:20). Получили 0.085 г (34%) D1-5 и 0.100 г (43%) D2-5.
Пример 4.23. Синтез соединения D3-5.
К раствору D1-5 (0.085 г, 0.12 ммоль) и D2-5 (0.100 г, 0.15 ммоль) в 10 мл дихлорметана прибавили трифторуксусную кислоту (0.59 г, 5.14 ммоль), реакционную массу перемешивали в течение 4 ч при 20°С, сконцентрировали при пониженном давлении, остаток растворили в смеси 2 мл воды и 2 мл ТГФ, прибавили LiOH (0.220 г, 5.14 ммоль), реакционную массу перемешивали в течение 20 ч, добавили 5 мл воды, довели до рН 7 с помощью 1М HCl, продукт экстрагировали дихлорметаном. Водный слой сконцентрировали при пониженном давлении, остаток обработали смесью 5 мл дихлорметана и 5 мл метанола, раствор профильтровали от неорганических солей, растворители из фильтрата удалили при пониженном давлении, продукт очищали с помощью препаративной ВЭЖХ. Получили 0.056 г (41%) D3-5.
Пример 4.24. Синтез соединения D4-5.
К раствору D3-5 (0.056 г, 0.11 ммоль), HATU (0.049 г, 0.13 ммоль), диметиламина гидрохлорида (0.010 г, 0.13 ммоль) в 4 мл ацетонитрила прибавили раствор диизопропилэтиламина (0.042 г, 0.32 ммоль) в 1 мл ацетонитрила и перемешивали в течение 2 ч при 20°С. Растворитель удалили при пониженном давлении, продукт очищали при помощи препаративной ВЭЖХ. Получили 0.010 г (17%) D4-5.
Пример 4.25. Синтез соединения CDK8-macro-8.
К раствору D4-3 (0.010 г, 0.02 ммоль) и трифенилфосфина (0.029 мг, 0.11 ммоль) в 2 мл толуола в атмосфере аргона прибавили по каплям раствор диизопропилазодикарбоксилата (0.022 г, 0.11 ммоль) в 1 мл толуола при 20°С и перемешивали в течение 4 ч, растворитель удалили при пониженном давлении, продукт очищали при помощи препаративной ВЭЖХ. Получили 0.003 г (31%) CDK8-macro-8.
Схема 9. Синтез CDK8-macro-1.
Пример 4.26. Синтез соединения D6-1.
2
3
К суспензии С4 (1.50 г, 7.00 моль) в 15 мл SOCl добавили 0.2 мл диметилформамида, перемешивали при кипении в течение 1 ч, сконцентрировали при пониженном давлении, остаток второй раз сконцентрировали с толуолом, растворили в 10 мл ТГФ и прибавили по каплям при 0°С и интенсивном перемешивании к смеси циклопропилметиламина (0.50 г, 7.00 ммоль), NaHCO (1.72 г, 0.02 моль), 55 мл тетрагидрофурана и 18 мл воды. Реакционную массу перемешивали 0.5 ч при 0°С и 1 ч при 20°С, удалили растворитель при пониженном давлении, к остатку прибавили 20 мл воды, отфильтровали и сушили осадок. Получили 1.56 г (89.0%) D6-1.
Пример 4.27. Синтез соединения D6-2.
D6-2 получен аналогично С6-1 с выходом 0.80 г (46.0%).
Пример 4.28. Синтез соединения D6-3.
3
К раствору D6-2 (0.80 г, 2.30 ммоль) в 15 мл дихлорметана прибавили по каплям 4М раствор HCl в диоксане (7.00 мл, 28.0 ммоль). Реакционную массу перемешивали при 20°С в течение 20 ч, удалили растворитель при пониженном давлении, добавили 10 мл воды, довели до рН 9 с помощью насыщенного раствора NaHCO, отфильтровали осадок, сушили. Получили 0.55 г (98.0%) D6-3.
Пример 4.29. Синтез соединения D6-4.
К суспензии D6-3 (0.55 г, 2.10 ммоль) в 6 мл дихлорэтана прибавили при 0°С небольшими порциями N-бромсукцинимид (0.48 г, 2.70 ммоль). Реакционную массу перемешивали в течение 2 ч, осадок отфильтровали, сушили. Получили 0.54 г (82.0%) D6-4.
Пример 4.30. Синтез соединения D6-5.
D6-5 Получено аналогично D1-1 с выходом 0.34 г (57.0%).
Пример 4.31. Синтез соединения D6-6.
D6-6 Получено аналогично D2-2 с выходом 0.25 г (98.0%).
Пример 4.32. Синтез соединения D6-7.
К суспезнии D6-6 (0.10 г, 0.24 ммоль), (2Z)-4-хлорбут-2-ен-1-ола (0.10 г, 0.97 ммоль) и трифенилфосфина (0.1 3 г, 0.48 ммоль) в 2.5 мл ТГФ по каплям при 0°С в атмосфере аргона прибавили диизопропилазодикарбоксилат (0.10 г, 0.48 ммоль). Реакционную массу перемешивали при 20°С в течение 20 ч, растворитель удалили при пониженном давлении. Продукт выделяли колоночной хроматографией на силикагеле, элюент дихлорметан-этилацетат-ацетон (6:2:2). Получили 0.10 г (82.0%) D6-7.
Пример 4.33. Синтез соединения CDK8-macro-1.
2
3
К суспезнии D6-7 (0.08 г, 0.14 ммоль) в 40 мл ацетонитрила прибавили KI (0.07 г, 0.42 ммоль) и KCO (0.06 г, 0.42 ммоль), реакционную массу перемешивали при кипячении в течение 5 ч, растворитель удалили при пониженном давлении. Продукт выделяли с помощью препаративной ВЭЖХ. Получили 0.01 г (16.0%) CDK8-macro-1 в виде соли с муравьиной кислотой.
Схема 10. Синтез CDK8-macro-10.
Пример 4.34. Синтез соединения CDK8-macro-10.
К раствору CDK8-macro-4 (0.025 г, 0.060 ммоль) в 0.25 мл пиридина прибавили NaBH4 (0.007 г, 0.18 ммоль), реакционную массу перемешивали в течение 3 ч при 100°С в атмосфере азота. Продукт выделяли с помощью препаративной ВЭЖХ. Получили 0.006 г (24.8%) CDK8-macro-10.
Схема 11. Синтез CDK8-macro-17.
Пример 4.35. Синтез соединения А9.
А9 получено аналогично A3 из 5-бромо-2-(1-метил-1H-пиразол-4-ил)анилина. Выход 96.6%
Пример 4.36. Синтез соединения С10.
С10 получено аналогично С9-4 из С4 и метил 4-(метиламино)бутаноата гидрохлорида с суммарным выходом 29.8%
Пример 4.37. Синтез соединения D7.
D7 получено аналогично D1-2 из С10 и А9 с выходом 22.1%
Пример 4.38. Синтез соединения D7-1.
D7 (0.12 г, 0.26 ммоль) и LiOH (0.028 г, 0.65 ммоль) перемешивали в смеси 2.2 мл ТГФ и 1.2 мл воды при 20°С в течение 2 ч, довели рН реакционной массы до 7 с помощью 1N HCl. Продукт выделяли колоночной хроматографией на силикагеле, элюент дихлорметан-метанол (1:1). Получили 0.15 г (124%) D7-1, продукт использовали в следующей стадии без дополнительной очистки.
Пример 4.39. Синтез соединения CDK8-macro-17.
К раствору HATU (0.124 г, 0.32 ммоль) в 1 мл ДМФА прибавили в течение 1 ч при перемешивании при 0°С в атмосфере аргона раствор D7-1 (0.110 г, 0.22 ммоль) и диизопропилэтиламина (0.141 г, 1.08 ммоль) в 2.3 мл ДМФА. После окончания прибавления раствор перемешивали еще 0.5 ч при той же температуре. Продукт выделяли с помощью препаративной ВЭЖХ. Получили 0.05 г (52.6%) CDK8-macro-17.
Пример 5. Анализ полученных соединений.
1
Чистота и строение полученных соединений была подтверждена методом хромато-масс-спектрометрии LC/MS и спектроскопии Н ЯМР (Табл. 1).
Данные на оборудование:
Пример 6. Определение стабильности соединений в плазме крови человека.
Анализ стабильности соединений в плазме крови проводили на пулированной плазме крови человека, взятой у десяти здоровых доноров. Исходный раствор кандидата (10 мМ в ДМСО) разводили пулированной плазмой крови до концентрации 10 мкМ (испытуемый раствор). Испытуемый раствор выдерживали в твердотельном термостате 4 часа при температуре 37°С. Методом ВЭЖХ с использованием хроматографа Agilent 1200 (Agilent, США) определяли площади пиков соединений в испытуемых образцах, соответствующие начальному времени испытания (до выдерживания) и конечному времени испытания (после выдерживании в твердотельном термостате 4 часа при температуре 37°С) с предварительным осаждением белков ацетонитрилом. Хроматографический анализ проводили в градиентном режиме элюирования при скорости потока 1 мл/мин. Определяли количество вещества в образце в % после термостатирования.
Оценивали стабильность соединений. Соединения, описанные в настоящем документе, являются химически стабильными в плазме крови человека (Таблица 4).
Пример 7. Определение ферментативной стабильности.
Анализ ферментативной стабильности соединений, описанных в настоящем изобретении, позволил оценить их устойчивость к действию ферментов I фазы биотрансформации в микросомах печени и S9 фракциях печени человека.
Скорость ферментативного разложения соединения в микросомах печени определяли путем выдерживания в твердотельном термостате при температуре 37°С реакционной смеси, содержащей 0.5 мг/мл пулированных микросом печени человека (XenoTech, США, cat. #Н2620), 10 мкМ соединения, 2 мМ β-никотинамидадениндинуклеотида (Carbosynth, UK, cat. #NN10871) и 4 мМ хлорида магния в 0.1 М натрий-фосфатном буфере (рН 7.4). Скорость ферментативного разложения соединения в S9 фракциях печени человека определяли путем выдерживания в твердотельном термостате при температуре 37°С реакционной смеси, содержащей 0,5 мг/мл пулированных S9 фракций печени человека (XenoTech, США, cat# Н0610), 10 мкМ соединения, 2 мМ β-никотинамидадениндинуклеотида (Carbosynth, UK, cat#NN10871) и 4 мМ хлорида магния в 0,1 М натрий-фосфатном буфере рН=7,4.
1/2
int
Реакцию останавливали ацетонитрилом из расчета 100 мкл ацетонитрила на 100 мкл реакционной смеси. После остановки реакции образцы центрифугировали 10 минут при 10000 об/мин. Надосадочную жидкость анализировали хроматографическим методом с использованием хроматографа Agilent1200 (Agilent, США). Хроматографический анализ проводили в градиентном режиме элюирования при скорости потока 1 мл/мин. Строили график зависимости логарифма площади пика вещества от времени. Зависимый коэффициент этой прямой соответствовал константе элиминирования к, на основе которой рассчитывали период полураспада препарата Т и скорость разложения CL:
int
На основе полученных данных делали вывод о ферментативной стабильности кандидатов в микросомах печени человека и S9 фракциях печени человека. Соединения по настоящему изобретению показали достаточную устойчивость к действию ферментов микросом печени и S9 фракциях печени человека и имели скорость ферментативного разложения CL менее 47 мкл/мин/мг и 24 мкл/мин/мг соответственно. Результаты приведены в Таблице 5.
Пример 8. Определение химической стабильности
Химическую стабильность соединений, описанных в настоящем патенте, определяли в искусственном кишечном соке и искусственном желудочном соке.
В качестве искусственного кишечного сока использовали SIF без ферментов концентрат, рН=6,5 (Sigma Ireland, cat#55331). В качестве искусственного желудочного сока использовали SGF без ферментов концентрат, рН=1,4 (Sigma Ireland, cat#01651). Исходный раствор кандидата (10 мМ в ДМСО) разводили рабочим раствором SIF /SGF до концентрации 10 мкМ (испытуемый раствор). Испытуемый раствор выдерживали в твердотельном термостате 2 часа при температуре 37°С. Методом ВЭЖХ с использованием хроматографа Agilent 1200 (Agilent, США) определяли площади пиков соединений в испытуемых образцах, соответствующие начальному времени испытания (до выдерживания) и конечному времени испытания (после выдерживании в твердотельном термостате 2 часа при температуре 37°С). Хроматографический анализ проводили в градиентном режиме элюирования при скорости потока 1 мл/мин. Определяли количество вещества в образце в % после термостатирования.
Оценивали стабильность соединений. Соединения, описанные в настоящем документе, являются химически стабильными в искусственных биологических средах (Таблица 6).
Пример 9. Аффинность соединений к рекомбинантному белку CDK8 в комплексе с Cyclin С in vitro.
Способность соединений, описанных в настоящем патенте, связываться с белком CDK8 определяли с помощью методики LanthaScreen (ThermoFisher). Детектировали сигнал FRET, пропорциональный количеству связанного с CDK8 флуоресцентно меченного лиганда (Tracer 236), который конкурирует с ингибитором за сайт связывания с АТФ. Измерения проводили в реакционном объеме 15 мкл с использованием 384-луночного планшета (Corning Inc, кат. № CLS4513). Фермент CDK8/Cyclin С (ThermoFisher, кат. №PR7261B) смешивали с антителами Anti-His-tag-Biotin (ThermoFisher, кат. № PV6090), Streptavidin-Eu (ThermoFisher, кат. №PV6025) и добавляли полученную смесь в лунки планшета по 5 мкл. Конечные концентрации веществ составляли: CDK8/Cyclin С - 5 nM, Streptavidin-Eu - 3 nM, Anti-His-tag-Biotin - 3 nM. В качестве контрольного ингибитора использовали стауроспорин, в качестве бланка использовали 0.1% раствор диметилсульфоксида (ДМСО) в реакционном буфере, содержащем 250 мМ HEPES (рН 7.5), 50 мМ MgCl2, 5 мМ EGTA, и 0.05% Brij-35.
50
Исследуемые ингибиторы и контроли добавлялись в соответствующие лунки по 5 мкл. Планшет инкубировали при комнатной температуре в течение 20 минут. По истечении срока инкубации в лунки добавляли по 5 мкл раствора трейсера (Alexa Fluor-647 (Kinase Tracer 236, ThermoFisher, кат. №PV5592)). Конечная концентрация трейсера составляла 10 нМ. В качестве отрицательного контроля вместо раствора трейсера использовали реакционный буфер. Инкубировали планшет в течение 40 минут при 25°С, затем измеряли TR-FRET сигнал, согласно рекомендациям производителя, на планшетном ридере SPARK20 (Tecan, Швейцария) и пересчитывали на количество связанного с киназой трейсера. Величину IC определяли с использованием программы SparkControl Magellan (Tecan, Швейцария), аппроксимируя экспериментальные точки по четырехпараметрической модели с оптимизацией по Левенбергу-Маркарту (Таблица 7).
Пример 10. Антипролиферативная активность в отношении CDK8-чувствительных клеточных линий in vitro.
3
2
2
Антипролиферативную активность ингибиторов CDK8 по настоящему изобретению измеряли в клеточном тесте на перевиваемых культурах клеток MV4-11 (бифенотипический миеломоноцитарный лейкоз, АТСС CRL-9591™), KG-1 (острый миелогенный лейкоз, АТСС CCL-246™) с помощью прижизненного красителя AlamarBlue (ThermoFisher, кат. № DAL1100). Клетки выращивали в среде RPMI-1640 (ПанЭко, кат. № С330п) с добавлением 10% FBS (Gibco, кат. №16140-071). В день постановки клетки откручивали, готовили суспензию клеток в свежей среде с 10% FBS (Gibco, кат. №16140-071) и высевали в 96-луночные культуральные планшеты (Corning, кат. №3599) в количестве 10×10 клеток в 100 мкл среды на лунку. Исследуемые соединения растворяли в ДМСО и разбавляли средой с 10% FBS (Gibco, кат. №16140-071) до конечной концентрации в пределах от 100 до 0 мкМ. Разбавленные соединения в объеме 50 мкл затем добавляли в каждую лунку (конечная концентрация ДМСО составляла не более 1%) и инкубировали при 37°С в инкубаторе с 5% СО в течение 120 ч. По окончании инкубации добавляли в лунки по 15 мкл реагента AlamarBlue (ThermoFisher, кат. № DAL1100), перемешивали содержимое планшетов на орбитальном шейкере (Biosan, Латвия), затем дополнительно инкубировали от 3 до 5 ч при 37°С в инкубаторе с 5% СО. Детектировали количество живых клеток на микропланшетном спектрофотометре Infinite M200Pro (Tecan, Швейцария), измеряя флуоресцентный сигнал при длине волны возбуждения (λЕх) 540 нм и длине волны испускания (λEm) 590 нм.
50
Величину IC определяли с использованием программы Magellan (Tecan, Швейцария), аппроксимируя экспериментальные точки по четырехпараметрической модели с оптимизацией по Левенбергу-Маркарту (Таблица 8).
Пример 11. Общая цитотоксичность по отношению к первичным клеткам печение HepaRG in vitro.
3
Исследования общей цитотоксичности ингибиторов CDK8 по настоящему изобретению проводили на первичных клетках HepaRG (Gibco (Biopredic International), кат. № HPRGC10). За день до постановки клетки выводили из заморозки и высевали по лункам 96-луночных планшетов (Corning, кат. №3599) в концентрации 30×10 клеток в 100 мкл среды на лунку. Среда для анализа состояла из William's Е без глутамина (Gibco, кат. №12551032) с ростовыми добавками GlutaMAX (Gibco, кат. №35050061) и HepaRG Maintenance/Metabolism Medium Supplement (Gibco, кат. № HPRG720). Ростовые добавки вносили в среду, согласно протоколу производителя клеток. На следующий день в лунки планшетов с клетками вносили анализируемые соединения в диапазоне концентраций от 200 до 0.03 мкМ и инкубировали в течение 72 ч. Жизнеспособность клеток оценивали по методу, описанному выше. Результаты приведены в Таблице 8.
Пример 12. Ингибирование цитохромов.
Ингибиторы CDK8 по настоящему изобретению анализировали на предмет их способности снижать флуоресцентный сигнал в реакции между рекомбинантными ферментами CYP450 и специфическими Vivid субстратами. Для анализа использовали наборы Vivid CYP1A2 Blue (ThermoFisher Scientific, кат. № P2863), Vivid CYP2C19 Blue (ThermoFisher Scientific, кат. № P2864) и Vivid CYP3A4 Green (ThermoFisher Scientific, кат. № P2857).
Перед началом анализа растворяли лиофилизированные субстраты ЕОМСС (1А2), ЕОМСС (2С19) и DBOMF (3А4) в необходимом количестве безводного ацетонитрила (Fisher Chemical, кат. № А/0627/17) до концентрации 2 мМ. Навески исследуемых соединений растворяли в ДМСО (Scharlab, кат. № SU01651000) до концентрации 10 мМ, затем титровали в ДМСО от 10 мМ до 3.2 мкМ с шагом 5.
Раститрованные образцы разводили в 200 раз в однократном буферном растворе I (для цитохромов 1А2 и 3А4) или II (для цитохрома 2С19). После чего образцы вносили по 40 мкл в лунки черных планшетов с плоским дном (Corning, кат. № CLS3631).
Подготавливали 1% смесь CYP450 бакулосом и 2% смесь восстанавливающей системы в соответствующем каждому цитохрому буфере (мастер-микс) и вносили по 40 мкл в соответствующие лунки черного планшета. Инкубировали планшет при комнатной температуре в течение 10 минут. Во время инкубации готовили смесь NADP и субстрата в соответствующих для каждого цитохрома буферах и концентрациях, согласно рекомендациям производителя. По окончанию инкубации вносили смесь субстрата и NADP по 10 мкл в соответствующие лунки черного планшета. Планшеты перемешивали и инкубировали в течение 1-2 часов (в зависимости от цитохрома).
По истечении срока инкубации измеряли интенсивность флуоресценции реакционной смеси при рекомендуемых длинах волн возбуждения и испускания для разных субстратов в относительных единицах флуоресценции (RFU). Измерение проводили на микропланшетном, многорежимном ридере Spark 20М (Tecan, Швейцария).
50
Величину IC определяли с использованием программы SparkControl Magellan (Tecan, Швейцария), аппроксимируя экспериментальные точки по четырехпараметрической модели с оптимизацией по Левенбергу-Маркарту (Таблица 9).