СПОСОБ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ ПОПУЛЯЦИИ КЛЕТОК И ЕГО ПРИМЕНЕНИЕ

1. Способ культивирования популяции клеток, содержащей стволовые клетки и/или клетки-предшественники, положительные по экспрессии Tie2 (тирозинкиназы с доменами, гомологичными Ig и EGF 2) (далее обозначенные как «положительные по Tie2 стволовые клетки/-предшественники»), включающий:
культивирование популяции клеток, содержащей положительные по Tie2 стволовые клетки/-предшественники во время присутствия в нерасщепленной ткани (далее способ обозначен как «первый способ культивирования»).
2. Первый способ культивирования по п.1, где положительные по Tie2 стволовые клетки/-предшественники представляют собой положительные по Tie2 стволовые клетки/-предшественники, происходящие из ткани пульпозного ядра межпозвоночного диска.
3. Первый способ культивирования по п.1 или 2, где нерасщепленная ткань представляет собой ткань пульпозного ядра межпозвоночного диска.
4. Первый способ культивирования по любому из пп. 1-3, где нерасщепленная ткань представляет собой ткань, полученную посредством размораживания криоконсервированной ткани.
5. Первый способ культивирования по любому из пп. 1-4, который осуществляют с размножением в то же время положительных по Tie2 стволовых клеток/-предшественников в популяции клеток.
6. Способ культивирования популяции клеток, содержащей положительные по Tie2 стволовые клетки/-предшественники, включающий культивирование популяции клеток, содержащей положительные по Tie2 стволовые клетки/-предшественники, в культуральной среде, содержащей по меньшей мере один вид усилителя экспрессии Tie2, отличного от факторов роста (далее способ обозначен как «второй способ культивирования»).
7. Второй способ культивирования по п.6, где усилитель экспрессии Tie2, отличный от факторов роста, представляет собой животный/растительный экстракт.
Cinnamomum
8. Второй способ культивирования по п.7, где растение представляет собой растение рода .
9. Второй способ культивирования по любому из пп. 6-8, который осуществляют с размножением в то же время положительных по Tie2 стволовых клеток/-предшественников в популяции клеток.
10. Способ культивирования популяции клеток, содержащей положительные по Tie2 стволовые клетки/-предшественники, включающий культивирование популяции клеток, содержащей положительные по Tie2 стволовые клетки/-предшественники, с использованием культурального оборудования с культуральной поверхностью, подвергнутой обработке для увеличения прикрепления клеток (далее способ обозначен как «третий способ культивирования»).
11. Третий способ культивирования по п.10, где положительные по Tie2 стволовые клетки/-предшественники подвергнуты обработке для увеличения экспрессии Tie2.
12. Третий способ культивирования по п.10 или 11, где обработка для увеличения прикрепления клеток представляет собой обработку нанесения покрывающего средства, содержащего внеклеточный матрикс и/или полиаминокислоту.
13. Третий способ культивирования по любому из пп. 10-12, который осуществляют с подверганием в то же время положительных по Tie2 стволовых клеток/-предшественников в популяции клеток дифференцировке в целевые клетки.
14. Третий способ культивирования по п.12 или 13, где внеклеточный матрикс и/или полиаминокислота представляет собой по меньшей мере один или несколько видов, выбранных из группы, состоящей из коллагена типа IV, фибронектина и полилизина.
15. Третий способ культивирования по любому из пп. 10-14, который осуществляют с размножением в то же время положительных по Tie2 стволовых клеток/-предшественников в популяции клеток.
16. Третий способ культивирования по любому из пп. 12-15, где внеклеточный матрикс представляет собой желатин.
17. Способ культивирования популяции клеток, содержащей положительные по Tie2 стволовые клетки/-предшественники, включающий культивирование популяции клеток, содержащей положительные по Tie2 стволовые клетки/-предшественники, с супрессией в то же время формирования сферических колоний, в культуральной среде, содержащей средство, осуществляющее деградацию внеклеточного матрикса (далее способ обозначен как «четвертый способ культивирования»).
18. Четвертый способ культивирования по п.17, где положительные по Tie2 стволовые клетки/-предшественники подвергнуты обработке для увеличения экспрессии Tie2.
19. Четвертый способ культивирования по п.17 или 18, где средство, осуществляющее деградацию внеклеточного матрикса, содержит по меньшей мере протеазу, имеющую активность для деградации коллагена типа II.
20. Четвертый способ культивирования по любому из пп. 17-19, который осуществляют с подверганием в то же время положительных по Tie2 стволовых клеток/-предшественников в популяции клеток дифференцировке в целевые клетки.
21. Способ получения популяции клеток, содержащей положительные по Tie2 стволовые клетки/-предшественники, включающий стадию культивирования (далее обозначенную как «стадия культивирования для размножения»), включающую ступень осуществления первого способа культивирования по п.5 и/или второго способа культивирования по п.9 для увеличения экспрессии Tie2 в положительных по Tie2 стволовых/клетках-предшественниках и размножения положительных по Tie2 стволовых клеток/-предшественников в популяции клеток.
22. Способ получения по п.21, где ступень, осуществляемая на стадии культивирования для размножения, представляет собой ступень одновременного осуществления первого способа культивирования и второго способа культивирования.
23. Способ получения по п.21 или 22, где стадия культивирования для размножения дополнительно включает ступень культивирования популяции клеток, содержащей положительные по Tie2 стволовые клетки/-предшественники, в культуральной среде, содержащей, в качестве усилителя экспрессии Tie2, только фактор роста, имеющий эффект увеличения экспрессии Tie2.
24. Способ получения из популяции клеток, содержащей положительные по Tie2 стволовые клетки/-предшественники, популяции клеток, содержащей целевые клетки, полученные в результате дифференцировки из положительных по Tie2 стволовых клеток/-предшественников, включающий стадию культивирования (далее обозначенную как «стадия культивирования для дифференцировки»), включающую ступень осуществления третьего способа культивирования по п.13 или 14 и/или четвертого способа культивирования по п.20 для индукции дифференцировки из положительных по Tie2 стволовых клеток/-предшественников в целевые клетки.
25. Способ получения по п.24, где ступень, осуществляемая на стадии культивирования для дифференцировки, представляет собой ступень одновременного осуществления третьего способа культивирования и четвертого способа культивирования.
26. Способ получения по п.24 или 25, где целевые клетки представляют собой клетки, экспрессирующие по меньшей мере коллаген типа II.
27. Способ получения по п.26, где клетки, экспрессирующие по меньшей мере коллаген типа II, представляют собой клетки пульпозного ядра.
28. Способ получения по любому из пп. 24-27, где популяцию клеток, в которой остаются положительные по Tie2 стволовые клетки/-предшественники, получают посредством стадии культивирования для дифференцировки.
29. Способ получения из популяции клеток, содержащей положительные по Tie2 стволовые клетки/-предшественники, популяции клеток, содержащей целевые клетки, полученные в результате дифференцировки из положительных по Tie2 стволовых клеток/-предшественников, включающий:
стадию культивирования для размножения по любому из пп. 21-23; и
стадию культивирования для дифференцировки по любому из пп. 24-28.
30. Популяция клеток, полученная способом культивирования по любому из пп. 1-20.
31. Культура, содержащая культуральную среду в способе культивирования по любому из пп. 1-20, и популяцию клеток, предназначенную для подвергания способу культивирования, культивируемая или получаемая.
32. Популяция клеток, полученная посредством стадии культивирования для размножения и/или стадии культивирования для дифференцировки в способе получения по любому из пп. 21-29.
33. Культура, содержащая культуральную среду для стадии культивирования для размножения или культуральную среду для стадии культивирования для дифференцировки и популяцию клеток, предназначенную для подвергания стадии культивирования для размножения или стадии культивирования для дифференцировки, соответственно, культивируемая или получаемая в способе получения по любому из пп. 21-29.
34. Композиция для клеточной терапии, содержащая популяцию клеток по п.30 или 32.
35. Композиция для клеточной терапии по п.34 для применения в лечении или предотвращении заболевания, имеющего нарушение, дегенерацию или грыжу межпозвоночного диска в качестве симптома проявления.
36. Способ консервирования популяции клеток, содержащей положительные по Tie2 стволовые клетки/-предшественники, включающий криоконсервирование популяции клеток, содержащей положительные по Tie2 стволовые клетки/-предшественники во время присутствия в нерасщепленной ткани, для поддержания состояния, в котором Tie2 является активированным и/или экспрессированным, или для супрессии уменьшения количества положительных по Tie2 стволовых клеток/-предшественников в популяции клеток.