ИММУНОФЛУОРЕСЦЕНТНЫЙ АНАЛИЗ И ФЛУОРЕСЦЕНТНЫЙ АНАЛИЗ НУКЛЕИНОВЫХ КИСЛОТ В ОДНОМ И ТОМ ЖЕ ОБРАЗЦЕ

1. Способ получения составного изображения одного и того же биологического образца, включающий стадии:
(1) формирования первого изображения биологического образца, включающего стадии:
a. приведения образца на твердой подложке в контакт с первым связывающим агентом для белка-мишени;
b. окрашивания образца флуоресцентным маркером, обеспечивающим морфологическую информацию;
c. выявления, посредством флуоресценции, сигналов от первого связывающего агента и флуоресцентного маркера;
d. формирования первого изображения по меньшей мере части образца по выявленным флуоресцентным сигналам; и затем
(2) формирования второго изображения биологического образца, включающего стадии:
a. приведения того же образца, что и на стадии (1), в контакт с зондом для каждой из по меньшей мере одной нуклеиновокислотной последовательности-мишени, тем самым осуществляя гибридизацию зондов с нуклеиновокислотной последовательностью-мишенью;
b. возможно, окрашивания образца флуоресцентным маркером;
c. выявления, посредством флуоресценции, сигналов от зондов для каждой нуклеиновокислотной последовательности-мишени и флуоресцентного маркера; и
d. формирования второго изображения по меньшей мере части образца по выявленному флуоресцентному сигналу; и
(3) формирования составного изображения, обеспечивающего определение относительного расположения белка-мишени и нуклеиновой кислоты-мишени.
2. Способ по п. 1, где формирование составного изображения включает использование информации о сигналах, полученной при формировании первого изображения и формировании второго изображения, для формирования составного изображения.
3. Способ по п. 1, где формирование составного изображения включает соотнесение расположения сигналов от флуоресцентного маркера, полученных на стадии 1, с расположением сигналов от флуоресцентного маркера, полученных на стадии 2.
4. Способ по п. 1, где стадия (1)(d) включает:
(i) формирование начального изображения по меньшей мере части образца по выявленным флуоресцентным сигналам; и
(ii) выбор представляющей интерес области начального изображения и выявление, посредством флуоресценции, сигналов по меньшей мере от первого связывающего агента и флуоресцентного маркера с получением первого изображения с более высоким, чем у начального изображения, разрешением.
5. Способ по п. 4, где составное изображение формируют, комбинируя информацию о сигналах на изображении с более высоким разрешением и на втором изображении.
6. Способ по п. 4, включающий соотнесение расположения сигналов от флуоресцентного маркера на изображении с более высоким разрешением с расположением сигналов от флуоресцентного маркера на втором изображении.
7. Способ по п. 1, где формирование первого изображения и/или формирование второго изображения включает формирование изображения светлопольного типа, сходного со светлопольным окрашиванием, где указанные изображения светлопольного типа сходны с имитированным Н&Е(гематоксилин и эозин)-изображением или имитированным DAB(3,3′-диаминобензидин)-изображением.
8. Способ по п. 7, где представляющие интерес области выбраны, по меньшей мере частично, на основании морфологической информации из изображения светлопольного типа первого изображения.
9. Способ по п. 1, где указанный связывающий агент представляет собой антитело, специфическое в отношении белка-мишени.
10. Способ по п. 9, где указанное антитело мечено флуорофором.
11. Способ по п. 1, где на стадии (1)(а) образец также приводят в контакт с по меньшей мере одним дополнительным связывающим агентом, обеспечивающим дополнительную морфологическую информацию, и на стадии
(1)(с) также проводят выявление, посредством флуоресценции, сигналов от по меньшей мере одного дополнительного связывающего агента.
12. Способ по п. 1, дополнительно включающий расщепление образца протеиназой перед стадией (2)(а).
13. Способ по п. 1, где на стадии (2)(а) указанная реакция гибридизации выбрана из группы, состоящей из FISH (флуоресцентная гибридизация in situ), IQ-FISH (интерфазная количественная FISH), PCR (полимеразная цепная реакция) in situ, амплификации по типу катящегося кольца и примированного мечения in situ.
14. Способ по п. 1, где после стадии (1)(d) флуоресцентный сигнал от первого связывающего агента модифицируют.
15. Способ по п. 14, где стадии (1)(a)-(1)(d) повторяют с другим связывающим агентом для другого белка.
16. Способ по любому из пп. 1-15, где после стадии (2)(d) флуоресцентный сигнал от зондов модифицируют посредством окисления, фрагментирования, фотообесцвечивания или их сочетания, и стадии (2)(а)-(2)(d) повторяют с зондами для дополнительных представляющих интерес нуклеиновокислотных последовательностей.
17. Способ анализа биологического образца, включающий получение составного изображения биологического образца по п. 1 и анализ экспрессии представляющих интерес белковых последовательностей и нуклеиновокислотных последовательностей по составному изображению.
18. Способ по п. 17, где на стадии (1)(а) образец также приводят в контакт с по меньшей мере одним дополнительным связывающим агентом, обеспечивающим дополнительную морфологическую информацию, и на стадии (1)(с) также проводят выявление, посредством флуоресценции, сигналов от по меньшей мере одного дополнительного связывающего агента, дополнительно включающий создание смешанного цветного составного изображения для первого изображения, включающего изображение белка-мишени, морфологическую информацию, представленную по меньшей мере одним дополнительным связывающим агентом и флуоресцентным маркером.
19. Набор, содержащий компоненты для флуоресцентного выявления белка, а также флуоресцентного выявления нуклеиновокислотной последовательности-мишени в одном и том же биологическом образце.
20. Система, содержащая средства для проведения флуоресцентного выявления белка, а также нуклеиновокислотной последовательности-мишени в одном и том же биологическом образце.
21. Способ формирования первого и второго изображения одного и того же биологического образца, включающий стадии:
(1) формирования первого изображения биологического образца, включающего стадии:
a. приведения образца на твердой подложке в контакт с первым связывающим агентом для белка-мишени;
b. окрашивания образца флуоресцентным маркером, обеспечивающим морфологическую информацию;
c. выявления, посредством флуоресценции, сигналов от первого связывающего агента и флуоресцентного маркера;
d. формирования первого изображения по меньшей мере части образца по выявленным флуоресцентным сигналам; и затем
(2) формирования второго изображения биологического образца, включающего стадии:
a. приведения того же образца, что и на стадии (1), в контакт с зондом для каждой из по меньшей мере одной нуклеиновокислотной последовательности-мишени, тем самым осуществляя гибридизацию зондов с нуклеиновокислотной последовательностью-мишенью;
b. возможно, окрашивания образца флуоресцентным маркером;
c. выявления, посредством флуоресценции, сигналов от зондов для каждой нуклеиновокислотной последовательности-мишени и флуоресцентного маркера; и
d. формирования второго изображения по меньшей мере части образца по выявленному флуоресцентному сигналу.