Способ ингибирования экспрессии атерогенных микроРНК-24, микроРНК - 125 и индуцирования экспрессии антиатерогенных микроРНК-126, микроРНК -222, микроРНК -let7b в плазме крови человека
METHOD FOR INHIBITING EXPRESSION OF ATHEROGENIC MICRORNA-24, MICRORNA-125, AND INDUCING EXPRESSION OF ANTIATHEROGENIC MICRORNA-126, MICRORNA-222, MICRORNA-LET7B IN HUMAN BLOOD PLASMA

Изобретение относится к области клинической медицины, а именно к возможности влияния на профиль экспрессии определенных микроРНК в плазме крови человека посредством приема экстракта дудника, что позволит использовать в дальнейшем экстракт дудника в качестве защитного средства от действия определенных эпигенетических атерогенных факторов в плазме крови человека.
Из уровня техники известен следующий метод применения экстракта дудника «Средство для предотвращения старения кожи или улучшения состояния ее состояния на фоне старения» [US 20040223942 A1,6.03.2003, Япония]. Данный метод подразумевает использование экстракта дудника в составе композиции компонентов, влияющих на функциональное состояние фибробластов кожи за счет повышения экспрессии Rho киназы или киназы легкой цепи миозина. Основным отличием данного метода является отсутствие эффекта от применения дудника на эпигенетические атерогенные и антиатерогенные факторы, в частности, на уровень экспрессиив плазме крови атерогенных микроРНК-24, -125 и антиатерогенных микроРНК-126, -222, -let7b.
Техническим результатом заявленного способа является возможность влияния на профиль экспрессии определенных микроРНК (микроРНК-24, -125, -126, -222, -let7b) в плазме крови за счет ингибирования экспрессии атерогенных микроРНК (микроРНК-24, -125) и индуцирования экспрессии антиатерогенных микроРНК (микроРНК-126, -222, -let7b)посредством приема экстракта дудника.
Вышеприведенный технический результат достигается благодаря тому, что способ включает последовательное выполнение следующих стадий: 1) получение экстракта дудника; 2) прием полученного экстр акта дудника по 5 капель на 10 кг веса ежедневно в течение 4 недель.
Получают экстракт дудника путем сушки корней растения дудник в течение недели при температуре 24±1°С, затем измельчают высушенные корни до порошкообразного состояния, далее к 100 г измельченного дудника добавляют 100 мл дистилированной воды, перемешивают, затем полученную смесь кипятят на водной бане в течение 1-3 часа, до уменьшения объема жидкости в 10 раз, проводят его центрифугирование при 15000 оборотах/минуту в течение 30 минут при температуре 24±1°С, затем полученный супернатант фильтруют на фильтр е Whatman №1, далее раствор концентрируют с помощью роторного испарителя Concentrator plus (Eppendorf) и насоса WP6122050 (Millipore) при следующих условиях: 1400 оборотов/мин., температура 30°С, в течении 16 часов, уровень вакуума 10 мбар.
Отбирают 5 мл из полученного водного экстр акта дудника и разводят 1:5 в физиологическом растворе (0,9% водном растворе хлорида натрия) и рекомендуют к приему per os в объеме 5 капель на каждые 10 кг веса пациента.
Пример «Ингибирование экспрессии атерогенных микроРНК-24, -125 и индуцирование экспрессии антиатерогенных микроРНК-126, -222, -let7b по данным исследования микроРНК плазмы крови человека на фоне приема экстракта дудника ежедневно в течение 4 недель в дозировке 5 капель на 10 кг веса».
Мужчина 55 лет 82 кг и женщина 43 лет 75 кг принимали водный экстракт дудника, приготовленный вышеприведенным способом, ежедневно в течение 4 недель в дозировке 5 капель на 10 кг веса. Уровень экспрессии атерогенных и антиатерогенных микроРНК в плазме крови определяли на 1-ый и на 28-ой день приема водного экстр акта дудника.
Для оценки уровня экспрессии атерогенных и антиатерогенных микроРНК проводили выделение микроРНК из периферической венозной крови (5 мл, собрана в вакуумную пробирку с антикоагулянтом) на наборах RNeasy Mini Kit (Qiagen, Германия), затем проводили реакцию обратной транскрипции на наборах miScript II RT kit (Qiagen, Германия) и постановку ПЦР в реальном времени с праймерами к микроРНК-24, 125, 126, 222, let-7b, 16. Уровень экспрессии приведен относительно уровня экспрессии микроРНК16 (miRNeasy Mini Kit, miScript II RT Kit, Qiagen, Германия). Значения микроРНК представлены в виде отношения уровня экспрессии исследуемой микроРНК, представленного в виде число копий исследуемой микроРНК/мкл к уровню экспрессии микроРНК 16, также представленному в виде число копий микроРНК 16/мкл. Данный подход является общепринятым для отражения динамики уровней экспрессии микроРНК, т.к. уровень экспрессии микроРНК 16 является стабильным относительно уровней экспрессии остальных микроРНК и может выступать в качестве референсного, относительного которого оцениваются уровни экспрессии остальных микроРНК и может происходить оценка уровней экспрессии микроРНК между разными объектами (клеточными линиями, культурами, живыми организмами).
Полученные значения уровней экспрессии атерогенных и антиатерогенных микроРНК на фоне приема водного экстракта дудника отражены в таблице.
Уровень экспрессии атерогенных микроРНК в плазме крови на фоне 4 недель приема экстракта дудника в дозировке 5 капель на 10 кг веса снизился: микроРНК-24 снизилась с 12,1 до 5,4 у мужчины и с 10,4 до 7,2 у женщины; микроРНК-125 с 7,5 до 5,8 у мужчины и с 7,6 до 6,0 у женщины. Уровень экспрессии антиатерогенных микроРНК в плазме крови на фоне 4 недель приема экстракта дудника повысился: микроРНК-126 с 4,5 до 5,1 у мужчины и с 5,1 до 6,6 у женщины; микро РНК-222 с 3,8 до 6,7 у мужчины и с 5,8 до 7,1 у женщины и let-7b с 2,2 до 4,9 у мужчины и с 7,9 до 10,3 у женщины.