МЫШИ, ЭКСПРЕССИРУЮЩИЕ ОГРАНИЧЕННЫЙ РЕПЕРТУАР ЛЕГКИХ ЦЕПЕЙ ИММУНОГЛОБУЛИНА

1. Способ получения последовательности вариабельного домена тяжелой или легкой цепи иммуноглобулина человека, предусматривающий следующие стадии:
(а) иммунизация генетически модифицированной мыши представляющим интерес антигеном, причем генетически модифицированная мышь содержит в своем геноме зародышевой линии:
(i) ровно два нереаранжированных генных сегмента Vκ иммуноглобулина человека и пять нереаранжированных генных сегментов Jκ иммуноглобулина человека, функционально связанных с последовательностью константной области легкой цепи иммуноглобулина мыши в эндогенных локусах легкой цепи каппа мыши, причем два нереаранжированных генных сегмента Vκ иммуноглобулина человека представляют собой генный сегмент Vκ1-39 человека и генный сегмент Vκ3-20 человека; а также
H
H
H
(ii) один или несколько нереаранжированных генных сегментов V иммуноглобулина человека, один или несколько нереаранжированных генных сегментов D иммуноглобулина человека и один или несколько нереаранжированных генных сегментов J иммуноглобулина человека, функционально связанных с последовательностью константной области тяжелой цепи иммуноглобулина мыши в эндогенных локусах тяжелой цепи мыши;
причем нереаранжированные человеческие генные сегменты тяжелой цепи и легкой цепи каппа иммуноглобулина генетически модифицированной мыши способны к реаранжированию и кодированию человеческих иммуноглобулиновых вариабельных доменов антитела, причем генетически модифицированная мышь не содержит эндогенных генных сегментов Vκ или Jκ иммуноглобулина, которые способны к реаранжированию с образованием последовательности вариабельной области легкой цепи иммуноглобулина; а также
(b) определение человеческой иммуноглобулиновой последовательности вариабельного домена тяжелой или легкой цепи антитела, которое специфически связывается с антигеном и которое было произведено генетически модифицированной мышью.
2. Способ по п. 1, при котором определение последовательности вариабельного домена тяжелой или легкой цепи иммуноглобулина человека предусматривает определение нуклеотидной последовательности, которая кодирует последовательность вариабельного домена тяжелой или легкой цепи иммуноглобулина человека.
3. Способ по п. 1, при котором пять нереаранжированных генных сегментов Jκ иммуноглобулина человека представляют собой генный сегмент Jκ1 человека, генный сегмент Jκ2 человека, генный сегмент Jκ3 человека, генный сегмент Jκ4 человека и генный сегмент Jκ5 человека.
4. Способ по п. 1, при котором генный сегмент Vκ1-39 человека в геноме зародышевой линии генетически модифицированной мыши представляет собой генный сегмент Vκ1-39 зародышевой линии человека, а генный сегмент Vκ3-20 человека в геноме зародышевой линии генетически модифицированной мыши представляет собой генный сегмент Vκ3-20 зародышевой линии человека.
5. Способ по п. 1, при котором геном зародышевой линии генетически модифицированной мыши содержит по порядку: генный сегмент Vκ1-39 человека, генный сегмент Vκ3-20 человека, генный сегмент Jκ1 человека, генный сегмент Jκ2 человека, генный сегмент Jκ3 человека, генный сегмент Jκ4 человека и генный сегмент Jκ5 человека.
6. Способ по п. 1, при котором генетически модифицированная мышь содержит нефункциональный локус легкой цепи λ.
7. Способ по п. 1, при котором генетически модифицированная мышь содержит функциональный локус легкой цепи λ.
8. Способ производства полностью человеческой тяжелой цепи иммуноглобулина или полностью человеческой легкой цепи иммуноглобулина, предусматривающий следующие стадии:
(а) иммунизация генетически модифицированной мыши представляющим интерес антигеном, причем генетически модифицированная мышь содержит в своем геноме зародышевой линии:
(i) ровно два нереаранжированных генных сегмента Vκ иммуноглобулина человека и пять нереаранжированных генных сегментов Jκ иммуноглобулина человека, функционально связанных с последовательностью константной области легкой цепи иммуноглобулина мыши в эндогенных локусах легкой цепи каппа мыши, причем два нереаранжированных генных сегмента Vκ иммуноглобулина человека представляют собой генный сегмент Vκ1-39 человека и генный сегмент Vκ3-20 человека; а также
H
H
H
(ii) один или несколько нереаранжированных генных сегментов V иммуноглобулина человека, один или несколько нереаранжированных генных сегментов D иммуноглобулина человека и один или несколько нереаранжированных генных сегментов J иммуноглобулина человека, функционально связанных с последовательностью константной области тяжелой цепи иммуноглобулина мыши в эндогенных локусах тяжелой цепи мыши;
причем нереаранжированные человеческие генные сегменты тяжелой цепи и легкой цепи каппа иммуноглобулина генетически модифицированной мыши способны к реаранжированию и кодированию человеческих иммуноглобулиновых вариабельных доменов антитела, причем генетически модифицированная мышь не содержит эндогенных генных сегментов Vκ или Jκ иммуноглобулина, которые способны к реаранжированию с образованием последовательности вариабельной области легкой цепи иммуноглобулина;
(b) определение человеческой иммуноглобулиновой последовательности вариабельного домена тяжелой или легкой цепи антитела, которое специфически связывается с антигеном и которое было произведено генетически модифицированной мышью; а также
(c) функциональное связывание последовательности вариабельного домена тяжелой или легкой цепи иммуноглобулина человека с последовательностью константного домена тяжелой или легкой цепи иммуноглобулина человека, соответственно, с образованием полностью человеческой тяжелой цепи иммуноглобулина или полностью человеческой легкой цепи иммуноглобулина.
9. Способ по п. 8, при котором определение последовательности вариабельного домена тяжелой или легкой цепи иммуноглобулина человека предусматривает определение нуклеотидной последовательности, которая кодирует последовательность вариабельного домена тяжелой или легкой цепи иммуноглобулина человека.
10. Способ по п. 8, при котором функциональное связывание последовательности вариабельного домена тяжелой или легкой цепи иммуноглобулина человека с последовательностью константного домена тяжелой или легкой цепи иммуноглобулина человека, соответственно, предусматривает функциональное связывание нуклеотидной последовательности, кодирующей последовательность вариабельного домена тяжелой или легкой цепи иммуноглобулина человека, с нуклеотидной последовательностью, кодирующей последовательность константного домена тяжелой или легкой цепи иммуноглобулина человека.
11. Способ по п. 8, при котором пять нереаранжированных генных сегментов Jκ иммуноглобулина человека представляют собой генный сегмент Jκ1 человека, генный сегмент Jκ2 человека, генный сегмент Jκ3 человека, генный сегмент Jκ4 человека и генный сегмент Jκ5 человека.
12. Способ по п. 8, при котором генный сегмент Vκ1-39 человека в геноме зародышевой линии генетически модифицированной мыши представляет собой генный сегмент Vκ1-39 зародышевой линии человека, а генный сегмент Vκ3-20 человека в геноме зародышевой линии генетически модифицированной мыши представляет собой генный сегмент Vκ3-20 зародышевой линии человека.
13. Способ по п. 8, при котором геном зародышевой линии генетически модифицированной мыши содержит по порядку: генный сегмент Vκ1-39 человека, генный сегмент Vκ3-20 человека, генный сегмент Jκ1 человека, генный сегмент Jκ2 человека, генный сегмент Jκ3 человека, генный сегмент Jκ4 человека и генный сегмент Jκ5 человека.
14. Способ по п. 8, при котором генетически модифицированная мышь содержит нефункциональный локус легкой цепи λ.
15. Способ по п. 8, при котором генетически модифицированная мышь содержит функциональный локус легкой цепи λ.
16. Способ получения антитела, предусматривающий:
экспрессию в одной клетке:
(а) первой последовательности нуклеиновой кислоты, которая кодирует первую тяжелую цепь иммуноглобулина, причем первая последовательность нуклеиновой кислоты содержит первую последовательность вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина человека, функционально связанную с последовательностью константной области тяжелой цепи иммуноглобулина человека, причем первая последовательность вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина человека идентифицирована из В-клетки первой мыши, и, причем первая мышь была иммунизирована первым представляющим интерес антигеном, включающим в себя первый эпитоп, и первая мышь содержит в своем геноме зародышевой линии:
(i) ровно два нереаранжированных генных сегмента Vκ иммуноглобулина человека и пять нереаранжированных генных сегментов Jκ иммуноглобулина человека, функционально связанных с последовательностью константной области легкой цепи иммуноглобулина мыши в эндогенных локусах легкой цепи каппа мыши, причем два нереаранжированных генных сегмента Vκ иммуноглобулина человека представляют собой генный сегмент Vκ1-39 человека и генный сегмент Vκ3-20 человека; а также
H
H
H
(ii) один или несколько нереаранжированных генных сегментов V иммуноглобулина человека, один или несколько нереаранжированных генных сегментов D иммуноглобулина человека и один или несколько нереаранжированных генных сегментов J иммуноглобулина человека, функционально связанных с последовательностью константной области тяжелой цепи иммуноглобулина мыши в эндогенных локусах тяжелой цепи мыши;
причем нереаранжированные человеческие генные сегменты тяжелой цепи и легкой цепи каппа иммуноглобулина первой мыши способны к реаранжированию и кодированию человеческих иммуноглобулиновых вариабельных доменов антитела, причем первая мышь не содержит эндогенного генного сегмента Vκ иммуноглобулина, который способен к реаранжированию для образования последовательности вариабельной области легкой цепи иммуноглобулина, причем первая последовательность вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина человека кодирует первый вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина человека, который распознает первый эпитоп; а также
(b) второй последовательности нуклеиновой кислоты, которая кодирует легкую цепь иммуноглобулина, причем вторая последовательность нуклеиновой кислоты содержит последовательность вариабельной области легкой цепи каппа иммуноглобулина человека, слитую с последовательностью константной области легкой цепи иммуноглобулина человека, причем последовательность вариабельной области легкой цепи каппа иммуноглобулина человека содержит генный сегмент Vκ1-39 человека, генный сегмент Vκ3-20 человека или его соматически гипермутированную версию;
поддержание клетки в условиях, достаточных для экспрессии полностью человеческого антитела; а также
выделение антитела.
17. Способ по п. 16, при котором пять нереаранжированных человеческих иммуноглобулиновых генных сегментов Jκ первой мыши представляют собой генный сегмент Jκ1 человека, генный сегмент Jκ2 человека, генный сегмент Jκ3 человека, генный сегмент Jκ4 человека и генный сегмент Jκ5 человека.
18. Способ по п. 16, при котором геном зародышевой линии первой мыши содержит по порядку: генный сегмент Vκ1-39 человека, генный сегмент Vκ3-20 человека, генный сегмент Jκ1 человека, генный сегмент Jκ2 человека, генный сегмент Jκ3 человека, генный сегмент Jκ4 человека и генный сегмент Jκ5 человека.
19. Способ по п. 16, при котором первая мышь содержит функциональный локус легкой цепи λ.
20. Способ по п. 16, при котором первая мышь содержит нефункциональный локус легкой цепи λ.
21. Способ по п. 16, при котором клетка содержит третью последовательность нуклеиновой кислоты, которая кодирует вторую тяжелую цепь иммуноглобулина, причем третья последовательность нуклеиновой кислоты содержит вторую последовательность вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина человека, функционально связанную с последовательностью константной области тяжелой цепи иммуноглобулина человека, причем вторая последовательность вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина человека идентифицирована из В-клетки второй мыши, и, причем вторая мышь была иммунизирована вторым представляющим интерес антигеном, включающим в себя второй эпитоп, и вторая мышь содержит в своем геноме зародышевой линии:
(i) ровно два нереаранжированных генных сегмента Vκ иммуноглобулина человека и пять нереаранжированных генных сегментов Jκ иммуноглобулина человека, функционально связанных с последовательностью константной области легкой цепи иммуноглобулина мыши в эндогенных локусах легкой цепи каппа мыши, причем два нереаранжированных генных сегмента Vκ иммуноглобулина человека представляют собой генный сегмент Vκ1-39 человека и генный сегмент Vκ3-20 человека; а также
H
H
H
(ii) один или несколько нереаранжированных генных сегментов V иммуноглобулина человека, один или несколько нереаранжированных генных сегментов D иммуноглобулина человека и один или несколько нереаранжированных генных сегментов J иммуноглобулина человека, функционально связанных с последовательностью константной области тяжелой цепи иммуноглобулина мыши в эндогенных локусах тяжелой цепи мыши;
причем нереаранжированные человеческие генные сегменты тяжелой цепи и легкой цепи каппа иммуноглобулина второй мыши способны к реаранжированию и кодированию человеческих иммуноглобулиновых вариабельных доменов антитела, и
причем вторая последовательность вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина человека кодирует второй вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина человека, который распознает второй эпитоп, причем первый эпитоп и второй эпитоп не идентичны, и, причем первая и вторая тяжелые цепи иммуноглобулина человека образуют пару с легкой цепью иммуноглобулина человека, кодируемой второй последовательностью нуклеиновой кислоты.
22. Способ по п. 21, при котором пять нереаранжированных человеческих генных сегментов Jκ иммуноглобулина второй мыши представляют собой генный сегмент Jκ1 человека, генный сегмент Jκ2 человека, генный сегмент Jκ3 человека, генный сегмент Jκ4 человека и генный сегмент Jκ5 человека.
23. Способ по п. 21, при котором геном зародышевой линии второй мыши содержит по порядку: генный сегмент Vκ1-39 человека, генный сегмент Vκ3-20 человека, генный сегмент Jκ1 человека, генный сегмент Jκ2 человека, генный сегмент Jκ3 человека, генный сегмент Jκ4 человека и генный сегмент Jκ5 человека.
24. Способ по п. 21, при котором первый представляющий интерес антиген и второй представляющий интерес антиген представляют собой один и тот же представляющий интерес антиген, а первый и второй эпитоп представляют собой разные эпитопы на одном и том же антигене.
25. Способ по п. 21, при котором первая мышь и вторая мышь представляют собой одну и ту же мышь.
26. Способ по п. 21, при котором генный сегмент Vκ1-39 человека в геноме зародышевой линии первой и/или второй мыши представляет собой генный сегмент Vκ1-39 зародышевой линии человека, а генный сегмент Vκ3-20 человека в зародышевом геноме первой и/или второй мыши представляет собой генный сегмент Vκ3-20 зародышевой линии человека.