НОВАЯ ВОЗМОЖНОСТЬ БОРЬБЫ С ГИАРДИАЗОМ
NEW ALTERNATIVE FOR GIARDIASIS CONTROL

Настоящее изобретение касается борьбы с болезнями, вызванными гиардиями, более конкретно к лекарственному средству для лечения болезней, вызванных гиардиями.
Эффективность нитрогетероциклических соединений в борьбе с заболеваниями, вызванными простейшими, известна ((1) Raether w., Hänel H. (2003): Nitroheterocyclic drugs with broad spectrum activity Parasitol Res. 90:S19-S39).
К простейшим относятся одноядерные организмы, основной структурой которых является эукариотическая клетка. Если точно рассматривать систематику, то имеются, однако, большие различия в образе жизни, морфологии и биохимических путях метаболизма отдельных штаммов, классов, отрядов и видов. Поэтому химические вещества в зависимости от точки своего воздействия и принципа действия обычно эффективны не против всех простейших в равной степени, а лишь против отдельных групп простейших ((2) Harder A, Greif G, Haberkorn A. (2001a): Chemotherapeutic approoaches to protozoa: Haemosporina - current level of knowledge and outlook; (3) Harder A, Greif G., Haberkorn A. (2001 b): Chemotherapeutic approaches to protozoa: Giardia, Trichomonas and Entamoeba - current level of knowledge and outlook; (4) Greif G, Harder A, Haberkorn A (2001): chemotherapeutic approaches to protozoa: Caccidiae - current level of knowledge and outlook).
До настоящего времени была описана только эффективность нифуртимокса против видов простейших рода трипаносом, например Trypanosoma brucei и Trypanosoma cruzi ((5) Harder A, Greif G., Haberkorn A (2001с): Chemotherapeutic approaches to protozoa: Kinetoplastida - current level of knowledge and outlook. Parasitol Res 87:778-780).
У трипаносом имеется жгутик, начинающийся в базальном тельце ("кинетосоме") и вместе с основной частью тела образующий ундулирующую мембрану. В систематике простейших паразитов этого основного морфологического типа относят к классу кинетопластид. Трипаносомы размножаются преимущественно в плазме крови и переносятся кровососущими членистоногими. Эти возбудители вызывают у человека болезнь Шагаса (трипаносомиаз). В настоящее время едва ли не единственным соединением, эффективным в борьбе против этих возбудителей, является нифуртимокс. Предположительно эта эффективность основана на ингибировании трипанотион-редуктазы, специфического фермента трипаносом. У других возбудителей-простейших этого фермента нет.
В заявке на патент, подаваемой параллельно, мы описываем эффективность нифуртимокса в борьбе с трихомонадидами.
Гиардиаз (лямблиоз) - инфекционное заболевание, вызываемое одноклеточными жгутиконосными паразитами рода Giardia. Этот род принадлежит к классу Diplomonadida. Важнейший его представитель - Giardia lamblia (синонимы: Giardia intestinalis, Giardia duodenalis). В мире положительны по этому паразиту до 50%, а в Центральной Европе - 2-7% анализов у собак и кошек. Особенно у очень молодых животных (в первые полгода жизни) инфекция приводит к длительным поносам и отчасти крови в помете, вызываемым воспалением двенадцатиперстной и тонкой кишки. Хронические заболевания могут привести к долгосрочной задержке роста ((6) Adam R.D. (2001): Biology of Giardia lamblia. Clinical Microbiology Reviews, July: 447-475).
В изолированных препаратах гиардий описаны более 7 генотипов (A-G). Для человека заразны генотипы А + В, которые также могут встречаться у кошек, собак, бобров, овец, телят, лошадей, свиней и обезьян. Поэтому болезнь считается "зоонозом": человек может через загрязненную питьевую воду заразиться цистами от собак и кошек. Заражение гиардиями относится к самым распространенным причинам так называемых передаваемых через воду вспышек инфекции (англ. waterborn outbreaks) у человека ((7) Marshall MM, Naumovitz D., Ortega Y., Sterling CR. (1997): Waterborne Protozoan Pathogens. Clinical Microbiology Reviews Jan:67-85).
В основном заражение паразитом в форме цист происходит оральным путем через загрязненную питьевую воду или инфицированные фекалии.
В кишечнике из цисты вылупляются так называемые трофозоиты. Размер трофозоита составляет 11-17×7-11 мкм, у него два ядра и 8 флагелл (жгутиков). В отличие от других групп жгутиконосных паразитов, трофозоиты гиардий не проникают внутрь эпителиальных клеток. У трофозоитов есть присоска, с помощью которой они могут закрепиться с наружной стороны просвета кишки у людей, обезьян, свиней, собак и кошек. Там они размножаются простым делением. Широкомасштабное поражение блокирует и изменяет всасывающую поверхность кишки и вызывает поносы, отчасти кровавые. В слепой кишке вновь образуются цисты, которые вновь выделяются с калом, причем продолжительность цикла с момента первой инфекции составляет 5-16 суток. Выделение цист может продолжаться 4-5 недель, а их инфекционность сохраняется несколько недель ((8) Roxstrom-Lindquist, К. Palm D., Reiner D., Ringqvist E., Svard SG. (2006): Giardia immunity - an update. Trends in Parasitology Vo. 22(1):26-31; (9) Beckmann L. (2003): Mucosal defences against Giardia. Parasite Immunology 25:259-270).
С морфологической и биохимической точек зрения имеются большие отличия от отряда кинетопластид: у дипломонадид 8 жгутиков и два ядра, однако нет митохондрий и комплекса Гольджи, а в цикле развития отсутствуют внутриклеточные стадии. В отличие от трипаносом у поверхностных белков гиардий отсутствует ГФИ-якорь ((10) HulsmeierA.J., Kohler Р.(2005): Giardia duodenalis: direct experimental evidence fort he absence of a glycosylphosphatidylinositol anchor in a variant surface protein. Experimental Parasitology 109:49-52).

Для кошек и собак в настоящее время рекомендована терапия метронидазолом (Clont, Flagyl, Elyzol) в дозировке 12,5-22 мг/кг массы тела 2 раза в сутки на протяжении 5 дней. ((11) Kirkpatrick, СЕ, Farrell JP (1984): Feline giardiasis: observations on natural and induced infections. Amer. J. Vet. Res. 45:2182-2188). Метронидазол и другие 5-нитроимидазолы активируются ферментом пируват-ферредоксин-оксидоредуктазой с образованием свободных нитро-радикалов, которые затем воздействуют на метаболизм ДНК паразита. Поэтому для лечения гиардиаза у собак можно также применять ипронидазол (Ipropan, 126 мг/л питьевой воды) и тинидазол (Fasigyn, 44 мг/кг массы тела на протяжении 3 дней) ((12) Zimmer JF, Burrington DB (1986): Comparison of four protocols fort the treatment of canine giardiasis. J. Amer. Anim. Hosp. Ass. 22:168-172; (13) Abbitt В, Huey RL, EugsterAK, SylerJ. (1986): Treatment of giardiasis in adult greyhounds, using ipronidazole-medicated water. J. Amer. Vet. Med. Ass. 188:67-69).
Из группы бензимидазолов рекомендованы мебендазол, албендазол или фенбендазол (перорально на протяжении 3 дней). Бензимидазолы препятствуют полимеризации микротрубочек, связываясь с субъединицей й-тубулина. Микротрубочки - важные элементы цитоскелета паразитов, особым образом стабилизирующие диск присоски трофозоитов.
В лечении людей также применяют антибиотики (например, парамомицин, 25-35 мг/кг/сут в трех дозировках на протяжении 7-10 суток), хинакрин и фуразолидон (100 мг трижды в сутки на протяжении 7 суток) или нитазоксанид (500 мг дважды в сутки на протяжении 3 суток) ((14) Wright J M., Dunn L A., Upcroft P., Upcroft J.A. (2003): Efficacy of antigiardial drugs. Expert Opin. Drug Saf. 2(6):529-541).
Многие из этих классов действующих веществ применяют для лечения вызванных гиардиями заболеваний уже давно, было показано развитие резистентности к большинству из них, приводящей к зарегистрированным случаям безуспешного лечения. Поэтому крайне необходима разработка новых действующих веществ и концепций лечения ((15) Escobedo A.A & Cimerman S. (2007): Giardiasis: a pharmacotherapy review. Expert Opin. Pharmacother. 8(12):1885-1902).
Неожиданным образом мы обнаружили эффективность нифуртимокса в борьбе с гиардиями. Эта эффективность до сих пор описана не была. Действие направлено против стадии возбудителя, обитающего в кишечнике, оно препятствует формированию цист.
Поэтому объектом изобретения является лекарственное средство для борьбы с болезнями, вызванными гиардиями, содержащее в качестве активного вещества нифуртимокс.
Нифуртимокс представляет собой соединение формулы (I):
Данное соединение может иметься в форме обычных приемлемых с точки зрения фармации солей, гидратов или других сольватов и их солей.
Возможно применение лекарственного средства как в профилактических, так и в терапевтических целях. Действие направлено на различные стадии жизненного цикла возбудителей, в частности нифуртимокс действует на возбудителя, обитающего в кишке, и препятствует формированию цисты.
Среди гиардий особое значение имеют Giardia lamblia (синонимы: Giardia intestinalis, Giardia duodenalis), Giardia bovis и Giardia caprae. Названия приведенных здесь видов часто используют как синонимы, их специфичность по хозяевам выражена слабо.
Согласно изобретению лечат животных (хищных и диких), предпочтительно млекопитающих, как, например, лошадей, свиней, кроликов, а в особенности - собак и кошек.
В соответствии с одним из вариантов выполнения изобретения среди млекопитающих предпочтительно лечение диких животных, а в особенности - хищников (собака, кошка).
Также возможно лечение людей, поскольку они могут заражаться видами гиардий, патогенными для животных, через загрязненную питьевую воду.
Гиардиаз проявляется прежде всего у молодых животных, чаще в возрасте 3-10 недель, и вызывает тяжелые поносы и снижение прибавки в массе тела.
Действующие вещества применяют непосредственно (в чистом виде) или в виде подходящих лекарственных форм: энтерально, парентерально, дермально.
По энтеральному пути действующие вещества применяют, например, вводя внутрь в форме порошков, свеч, таблеток, капсул, паст, (микстуры)пойла, гранулятов, вливания, болюсов, добавления медикамента в пищу или питьевую воду. Дермальное нанесение осуществляют, например, посредством погружения (дип), опрыскивания (спрей), ванны, мытья, обливания и опыления. Формы парентерального применения - это, например, инъекция (внутримышечная, подкожная, внутривенная, внутрибрюшинная) или с помощью имплантатов.
Надлежащие рецептуры - это:
Растворы: для инъекций, для приема внутрь, концентраты для дачи внутрь после разбавления, растворы для нанесения на кожу или в полости тела, рецептуры настоев, гели, эмульсии и суспензии для дачи внутрь, нанесения на кожу, а также для инъекций.
Полутвердые (пастообразные) рецептуры, в которых действующее вещество введено в мазевую основу или в эмульсионную основу типа «масло в воде» или «вода в масле»;
Твердые лекарственные формы, такие как: порошки, премиксы или концентраты, грануляты, крупинки, таблетки, болюсы, капсулы, аэрозоли и ингаляты, формованные изделия, содержащие действующее вещество.
Растворы для инъекций вводят, например, внутривенно, внутримышечно и подкожно.
Растворы для внутреннего применения используют в готовом виде. Концентраты дают внутрь после предварительного разбавления до концентрации применения.
Растворы для нанесения на кожу наносят каплями, намазывают, втирают, ими опрыскивают, их распыляют или применяют методом погружения, ванн или мойки.
Гели наносят или намазывают на кожу или в полости тела.
Настои наливают или разбрызгивают на ограниченные участки кожи, причем действующее вещество либо проникает через кожу и действует системно, либо распределяется по поверхности тела.
Эмульсии принадлежат либо к типу «вода в масле», либо к типу «масло в воде», их можно применять перорально, наносить на кожу или вводить в виде инъекций.
Суспензии можно применять перорально, наносить на кожу или вводить в виде инъекций.
Полутвердые рецептуры можно давать внутрь или наносить на кожу. От вышеописанных суспензий и эмульсий они отличаются только более высокой вязкостью.
Для изготовления твердых рецептур действующие вещества смешивают с носителем, при необходимости - с добавлением вспомогательных веществ, и придают им нужную форму.
Согласно изобретению особо предпочтительно введение внутрь (перорально), из обычных лекарственных форм перорального применения особо предпочтительны таблетки.
Все вышеупомянутые лекарственные формы, подлежащие применению добавки и вспомогательные вещества, а также изготовление этих лекарственных форм, в принципе, известны специалисту.
Возможна комбинация нифуртимокса с синергистами или с другими действующими веществами. В качестве других действующих веществ следует упомянуть:
Средства от кокцидиоза, такие как: робенидин или ампролиум, частично в комбинации с антагонистами фолиевой кислоты (например, приметамином, эпиропримом, триметопримом); антибиотики, как то, например, клиндамицин, парамомицин или спирамицин; сульфонамиды, как, например, сульфадиметоксин, сульфадимидин, сульфадиазин; противоглистные препараты, например, циклические депсипептиды (например, эмодепсид, PF1022A); производные амидина (трибендимидин, амидантел, Bay d 9216), празиквантел или бензилбензоат.
Для эффективности лечения в долгосрочной перспективе рекомендуется параллельно регулярно дезинфицировать место содержания животных.
Для борьбы с нематодами у человека и животных годятся противоглистные агенты, в частности циклические октадепсипептиды, как то: PF1022A или эмодепсид ((16) Harder A. et al. (2003) Cyclooctadepsipeptides - an anthelmintically active class of compounds exhibiting a novel mode of action. Int. J. Antimicrobial Agents. 22:318-331).
При этом уничтожаются все имеющие экономическое значение нематоды в желудочно-кишечном тракте, в т.ч. и у собак. Также известно, что при отсутствии лечения животных против глистов направлен иммунный ответ GALT (лимфоретикулярная ткань кишечника, gut-associated-lymphoid-tissue) ((17) Mehlhorn (ed) (2001) Giardiasis, Man; Encyclopedic Reference of Parasitology, Diseases, treatment, Therappy, Second Edition, Springer-Verlag, pp.234-235). В этом случае говорят о Th2-ответе иммунной системы. При отсутствии инфекции иммунный ответ сбалансирован, т.е. антагонист Th2-ответа, а именно направленный против простейших, вирусов и бактерий Th1-ответ столь же интенсивен, как и Th2-ответ.
Если у животного, например у собаки, имеется заражение нематодами, например анкилостомами, аскаридами или власоглавом, то баланс нарушается, и вдобавок в кишке возникает протозойная инфекция, вызванная, например, гиардиями. Если заражение нематодами излечивают надлежащими противоглистными агентами, то получается косвенное усиление защиты от гиардий, поскольку в этом случае начинает действовать Th1-ответ против этих простейших. Получается, что в сочетании нифуртимокса с противоглистными агентами нифуртимокс лучше воздействует на инфекцию гиардиями, поскольку они уже отчасти сдерживаются Th1-ответом, косвенно усиленным благодаря борьбе с нематодами, т.е. число паразитов в кишечнике уже уменьшено.
В предпочтительной форме исполнения нифуртимокс применяют в сочетании с противоглистными агентами.
Предпочтительно применяемые противоглистные агенты - это 24-членные циклодепсипептиды (циклооктадепсипептиды). Из таковых следует упомянуть:
Соединения с формулой (IIa)
в которой
2
Z означает водород, N-морфолинил, NH, монометиламиногруппу или диметиламиногруппу.
Кроме того, необходимо назвать соединения с формулой (IIb):
3
Rв которой
1
2
3
4
R, R, R, R независимо друг от друга означают водород, алкил с 1-10 атомами углерода или арил, особенно фенил, которые при необходимости замещены гидроксильной группой, алкоксигруппой с 1-10 атомами углерода или галогеном.
Соединения общей формулы (IIb) известны, их можно получать способами, описанными в европейской заявке ЕР-А-382173, немецких заявках DE-A 4317432, DE-A 4317457, DE-A 4317458, европейских заявках ЕР-А-634408, ЕР-А-718293, ЕР-А-872481, ЕР-А-685469, ЕР-А-626375, ЕР-А-664297, ЕР-А-669343, ЕР-А-787141, ЕР-А-865498, ЕР-А-903347.
К циклическим депсипептидам с 24 атомами кольца относятся также соединения общей формулы (IIc)
,
в которой
1a
2a
11a
12a
R, R, R и R независимо друг от друга означают алкил 1-8 атомами углерода, галогеналкил с 1-8 атомами углерода, циклоалкил с 3-6 атомами углерода, аралкил, арил,
3a
5a
7a
9a
R, R, R, R независимо друг от друга означают водород или неразветвленный или разветвленный алкил с 1-8 атомами углерода, который при необходимости может быть замещен гидроксильной группой, алкоксигруппой, карбоксильной группой, , карбоксамидом, , имидазолилом, индолилом, гуанидиновой группой, группой -SH или алкилтиогруппой с 1-4 атомами углерода, а также они означают арил или аралкил, которые могут быть замещены галогеном, гидроксигруппой, алкилом с 1-4 атомами углерода, алкоксигруппой с 1-4 атомами углерода,
4a
6a
8a
10a
R, R, R, R независимо друг от друга означают водород, неразветвленный алкил с 1-5 атомами углерода, алкенил с 2-6 атомами углерода, циклоалкил с 3-7 атомами углерода, которые при необходимости могут быть замещены гидроксильной группой, алкоксигруппой с 1-4 атомами углерода, карбоксильной группой, карбоксамидом, имидазолилом, индолилом, гуанидиновой группой, группой -SH или алкилтиогруппой с 1-4 атомами углерода, а также они означают арил или аралкил, которые могут быть замещены галогеном, гидроксигруппой, алкилом с 1-4 атомами углерода, алкоксигруппой с 1-4 атомами углерода, а также их оптические изомеры и рацематы.
1a
2a
11a
12a
Предпочтительными являются те соединения формулы (IIc), у которых R, R, R и R независимо друг от друга означают метил, этил, пропил, изопропил или н-бутил, втор-бутил, трет-бутил или фенил, который при необходимости замещен галогеном, алкилом с 1-4 атомами углерода, гидроксильной группой, алкоксигруппой с 1-4 атомами углерода, а также это бензил или фенилэтил, которые при необходимости могут быть замещены остатками, указанными в случае фенила;
3a
10a
R - R имеют вышеприведенное значение.
1a
2a
11a
12a
Особо предпочтительные соединения формулы (IIc) - это те, в которых R, R, R и R независимо друг от друга означают метил, этил, пропил, изопропил или н-бутил, втор-бутил и трет-бутил,
3a
5a
7a
9a
R, R, R, R означают неразветвленный или разветвленный алкил с 1-8 атомами углерода, в особенности метил, этил, пропил, изопропил, н-бутил, втор-бутил, трет-бутил, которые при необходимости могут быть замещены алкоксигруппой с 1-4 атомами углерода, особенно метоксигруппой, этоксигруппой, имидазолилом, индолилом или алкилтиогруппой с 1-4 атомами углерода, особенно метилтиогруппой, этилтиогруппой, а также они означают финил, бензил или фенетил, которые могут быть при необходимости замещены галогеном, особенно хлором.
4a
6a
8a
10a
R, R, R, R независимо друг от друга означают водород, метил, этил, н-пропил, н-бутил, винил, циклогексил, которые при необходимости могут быть замещены метоксигруппой, этоксигруппой, имидазолилом, индолилом, метилтиогруппой, этилтиогруппой, а также они означают изопропил, втор-бутил и при необходимости галогензамещенные фенил, бензил или фенэтил.
Соединения общей формулы (IIc) также можно получать способами, описанными в европейской заявке ЕР-А-382173, немецких заявках DE-A 4317432, DE-A 4317457, DE-A 4317458, европейских заявках ЕР-А-634408, ЕР-А-718293, ЕР-А-872481, ЕР-А-685469, ЕР-А-626375, ЕР-А-664 297, ЕР-А-669343, ЕР-А-787141, ЕР-А-865498, ЕР-А-903347.
В качестве крайне предпочтительного депсипептида следует назвать известное из публикации европейского патента ЕР-(выложенная заявка) 382173 вещество PF 1022, представляющее собой соединение формулы (IIа), где оба заместителя Z означают водород. Следовательно, формула PF 1022 - это формула (IId):
Другие предпочтительные депсипептиды - это соединения, известные из заявки PCTWO 93/19053, в частности соединения формулы (IIа),
в которой
2
Z означает N-морфолинил, NH, монометиламиногруппу или диметиламинофуппу.
Крайне предпочтительно среди этих соединений депсипептидное соединение эмодепсид (PF 1022-221). Оно представляет собой соединение формулы (IIа), где оба остатка Z означают морфолиновый остаток. Международное непатентованное название (INN) эмодепсид означает соединение с систематическим наименованием: цикло[(R)-лактоил-N-метил-1-лейцил-(R)-3-(р-морфолинофенил)лактоил-N-метил-L-лейцил-(R)-лактоил-N-метил-L-лейцил-(R)-3-(р-морфолинофенил)лактоил-N-метил-L-лейцил. Эмодепсид описан в международной заявке WO 93/19053 и имеет следующую формулу:
Названные выше действующие вещества, пригодные к применению в комбинациях, могут в зависимости от структуры находиться в виде стереоизомеров или в виде смесей стереоизомеров, например энантиомеров или рацематов. Применять согласно изобретению можно как чистые стереоизомеры, так и смеси стереоизомеров.
Кроме того, при необходимости можно применять: соли действующих веществ с приемлемыми с точки зрения фармации кислотами или основаниями, а также сольваты, в частности гидраты действующих веществ или их соли.
Применение в комбинации означает, что нифуртимокс и второе действующее вещество, в частности циклодепсипептид, можно применять либо по отдельности, либо со сдвигом по времени. В этом случае нифуртимокс и второе действующее вещество в каждом случае представлены в виде отдельных лекарственных средств.
Возможно также одновременное применение. В соответствии с одной из форм исполнения, подходящей для этого случая, действующие вещества комбинации объединены в одно лекарственное средство. Обычно готовые к применению рецептуры содержат конкретное действующее вещество в концентрациях от 10 частей на млн. до 20 вес.%, предпочтительно 0,1-10 вес.%.
Рецептуры, которые разбавляют до применения, содержат конкретное действующее вещество в концентрациях от 0,5 до 90 вес.%, предпочтительно 5-50 вес.%. В концентрированных растворах для добавления к питьевой воде концентрация конкретного действующего вещества составляет, например, 0,5-20 вес.%, предпочтительно 1-15 вес.%, особо предпочтительно 2-10 вес.%.
Для достижения действенного результата оказалось в общем случае целесообразным вводить количества от 0,05 до 400 мг, преимущественно от 0,1 до 200 мг действующего вещества на кг массы тела в сутки.
В смесях с другими средствами борьбы с кокцидиозом, антибиотиками или противоглистными препаратами массовое соотношение действующих веществ согласно изобретению, как правило, составляет от 1:0,01-50 до 1:1-50.
Действующие вещества можно также давать животным с кормом или питьевой водой.
Корма и пища содержат 0,005-1000 частей на млн, предпочтительно 0,05-500 частей на млн действующего вещества в сочетании с подходящим съедобным материалом.
Такие корма можно применять как в целях лечения, так и в целях профилактики.
В дополнение к лечению нифуртимоксом можно применять дезинфицирующее средство. С его помощью во время лечения дезинфицируют места пребывания животных (или человека). Дезинфекционное средство, в основном разрушая выделенные цисты, устраняет паразитов на продолжительных стадиях и таким образом препятствует повторной инфекции по окончании лечения. Поэтому дезинфицирующее средство можно применять уже до начала лечения нифуртимоксом, но лучше, как правило, применять его одновременно с лечением нифуртимоксом или по крайней мере до конца лечения.
Дезинфекционные средства - это, например, такие средства на основе биоцидных фенолов и/или производных фенолов. Под биоцидрыми фенолами подразумевают такие фенольные соединения, у которые имеется свободна гидроксильная группа, и которые обладают биоцидным действием. У таких фенолов возможно наличие прочих кольцевых заместителей, как, например, галогенов, в частности хлора, алкила с 1-6 атомами углерода, циклоалкила с 3-6 атомами углерода, фенила, хлорфенила, бензила и/или хлорбензила.
Не хлорированные биоцидные фенолы - это, например, 2-метилфенол, 3-метилфенол, 4-метилфенол, 4-этилфенол, 2,4-диметилфенол, 2,5-диметилфенол, 3,4-диметилфенол, 2,6-диметилфенол, 4-н-пропилфенол, 4-н-бутилфенол, 4-н-амилфенол, 4-н-гексилфенол, тимол (6-метил-2-изопропилфенол), 2-фенилфенол, 4-фенилфенол, 2-бензилфенол. В качестве предпочтительного не хлорированного биоцидного фенола применяют 2-фенилфенол.
Хлорированные биоцидные фенолы - это, например, 4-хлор-3-метилфенол (РСМС, пара-хлор-мета-крезол), 4-хлор-3-этилфенол, 2-н-амил-4-хлорфенол, 2-н-гексил-4-хлорфенол, 2-циклогексил-4-хлорфенол, 4-хлор-3,5-ксиленол (РСМХ, пара-хлор-мета-ксиленол), 2,4-дихлор-3,5-ксиленол (DCMX, дихлор-пара-ксиленол), 4-хлор-2-фенилфенол, 2-бензил-4-хлорфенол, бензил-4-хлор-мета-крезол, 4-хлорбензил-дихлор-мета-крезол. Предпочтительные хлорированные биоцидные фенолы - это 2-бензил-4-хлорфенол, 4-хлор-3,5-ксиленол, 2,4-дихлор-3,5-ксиленол, а также, в частности, 4-хлор-3-метилфенол.
Под производными фенолов в настоящем тексте подразумевают такие получающиеся из фенола соединения, гидроксильная группа которых подверглась преобразованию, так что свободная гидроксильная группа отсутствует. Это предпочтительно простые эфиры фенола, в особенности с алифатическими спиртами с 1-6 атомами углерода. В качестве предпочтительного примера следует назвать феноксиэтанол.
Предпочтительно применяют дезинфицирующие средства, описанные в международной заявке WO 2007/009606, которые содержат биоциды и кератолитик. Надлежащие биоциды или сочетания биоцидов и надлежащие кератолитики подробно описаны в международной заявке WO 2007/009606, на который дается ссылка.
Примеры
Примеры композиций
Пример 1 (жидкая композиция):
Суспензии в 100 мл смеси глицеринформаля/глицерин-полиэтиленгликоль-рицинолеата (кремофор EL) и воды в соотношении 1:10 со следующими компонентами:
- 500 мг нифуртимокса
- 1000 мг нифуртимокса.
Пример 2(жидкая композиция):
Суспензии в 100 мл смеси кремофора EL и воды в соотношении 1:5 со следующими компонентами:
- 500 мг нифуртимокса
- 1000 мг нифуртимокса.
Пример 3 (твердая композиция)
Действующие вещества в приведенных ниже количествах помещают в
желатиновую капсулу:
- 250 мг нифуртимокса.
Пример 4 (таблетка)
Таблетки нифуртимокса известны и представлены в торговле в виде лекарственного средства, например, под торговым наименованием Lampit.
Биологические примеры
Пример 1

10-11 недельных щенков породы бигль, которым до инфекции дали возможность акклиматизации в ветеринарном центре на протяжении 11 дней, перорально инфицировали 50000 цистами Giardia duodenalis. До инфицирования цисты получали из кала собак, выделяющих цисты гиардий, с помощью градиента сахарозы и хранили в бакто-казитоновой среде при 4 градусах Цельсия не более 2 недель. Начиная с 10 дня после инфицирования щенков держали в отдельных клетках и собирали весь их помет за сутки. Подсчет выделяемых цист проводили на протяжении 4 суток до лечения (дни с -3 по 0), а на основании количества выделяемых цист щенков рандомизировали в две группы. В 0 день 7 щенков группы лечения однократно получили 50 мг/кг нифуртимокса (Lampit), перорально, а 7 собак контрольной группы остались без лечения. С дня 1 по день 8 после лечения определяли количество выделяемых цист. Результаты: Эффективность рассчитывали по следующей формуле:
<mrow><mi>Э</mi><mi>ф</mi><mi>ф</mi><mi>е</mi><mi>к</mi><mi>т</mi><mi>%</mi><mo>=</mo><mfrac><mrow><mi>Ц</mi><mi>и</mi><mi>с</mi><mi>т</mi><mtext> </mtext><mi>в</mi><mtext> </mtext><mi>к</mi><mi>о</mi><mi>н</mi><mi>т</mi><mi>р</mi><mi>о</mi><mi>л</mi><mi>ь</mi><mi>н</mi><mi>о</mi><mi>й</mi><mtext> </mtext><mi>г</mi><mi>р</mi><mi>у</mi><mi>п</mi><mi>п</mi><mi>е</mi><mo>−</mo><mi>ц</mi><mi>и</mi><mi>с</mi><mi>т</mi><mtext> </mtext><mi>в</mi><mtext> </mtext><mi>г</mi><mi>р</mi><mi>у</mi><mi>п</mi><mi>п</mi><mi>е</mi><mtext> </mtext><mi>л</mi><mi>е</mi><mi>ч</mi><mi>е</mi><mi>н</mi><mi>и</mi><mi>я</mi></mrow><mrow><mi>ц</mi><mi>и</mi><mi>с</mi><mi>т</mi><mtext> </mtext><mi>в</mi><mtext> </mtext><mi>к</mi><mi>о</mi><mi>н</mi><mi>т</mi><mi>р</mi><mi>о</mi><mi>л</mi><mi>ь</mi><mi>н</mi><mi>о</mi><mi>й</mi><mtext> </mtext><mi>г</mi><mi>р</mi><mi>у</mi><mi>п</mi><mi>п</mi><mi>е</mi></mrow></mfrac><mo>×</mo><mn>100</mn></mrow>
Рассчитанная эффективность при однократной даче нифуртимокса составила 90,4%. (см. таблицу 1).
Методика: Количественное определение выделяемых цист проводили по модифицированному методу Hewlett ((18) Hewlett, E.L, Andrews, J.S.Jr., Ruffier, J., Schaefer III, F.W. (1982): experimental Infection of Mongroel Dogs with Giardia lamblia Cysts and Cultured Trophozoites In: The Journal of infectious diseases, Vol.145, No.1, pp. 89-93) 4 г помета растворяли в 100 мл воды, просеивали и осаждали. Осадок наслаивали на сахарозный градиент 1 М (удельный вес 1,13) и пипеткой собирали цисты, которые после центрифугирования собирались в слое разделения сахарозы и воды. После промывки с последующим центрифугированием подсчитывали цисты в окатыше. Для этого аликвоту окатыша подсчитывали под микроскопом и вычисляли число цист на г помета.
Таблица 1
Выделение цист гиардий до и после лечения нифуртимоксом
50 мг/кг нифуртимокса в день Т0
собака
Т-3
Т-2
Т-1
Т0
Т1
Т2
Т3
Т4
Т5
Т6
Т7
Т8
9048
22402
186750
189275
19681
0
0
0
424
0
0
191
1621
9028
5259
45672
45725
16419
2636
180
224
1451
1318
4102
4615
1768
8343
5339
28322
26163
13644
2391
0
0
193
153
6315
223
508
8329
29625
907
1306
4397
504
0
0
590
1700
3693
8881
3294
9040
1063
923
14238
8456
4928
0
0
0
1094
2000
431
517
9038
1385
5897
2264
0
152
0
0
0
0
1201
1873
14181
9020
3263
905
788
375
0
0
0
652
137
353
608
0
Σ
9762
38482
39966
8996
1516
26
32
473
629
2523
2403
3127
Инфицированный контроль без лечения
собака
Т-3
Т-2
Т-1
Т0
Т1
Т2
Т3
Т4
Т5
Т6
Т7
Т8
9008
65325
41925
368
0
450
179
1183
3288
4747
14232
22237
3684
8341
21150
44988
35525
3138
1332
806
23399
17739
27253
9321
2660
12901
8309
7144
34613
33688
4531
25050
13238
5547
26106
52000
5125
47365
47999
8327
21250
21485
1350
3991
5383
4520
3529
17355
6145
14298
25331
110846
8313
2975
3185
8168
1209
609
6133
8438
6739
18113
4027
7103
2645
9026
945
2813
1723
2038
3544
3366
20163
11291
6719
4621
5867
5621
Σ
19798
24835
13470
2485
6061
4707
10377
13753
19163
8604
184427
30616
Т-3-Т-1: Дни до лечения
Т0: День лечения
Т1 - Т8: Дни после лечения
Лечение
Суммарное выделение цист гиардий
Эффективность
Дни -3-0
Дни 1-8
50 мг/кг нифуртимокса
24302
1341
90.4%
Инфицированный контроль без лечения
15147
13963
-
Пример 2

11-15-недельных щенков породы бигль, которым до инфекции дали возможность акклиматизации в ветеринарном центре на протяжении по меньшей мере 2 недель до начала исследования, перорально инфицировали 50000 цистами Giardia duodenalis. До инфицирования цисты получали из кала собак, выделяющих цисты гиардий, с помощью градиента сахарозы и хранили в бакто-казитоновой среде при 4 градусах Цельсия не более 2 недель. 18 щенков, выделявших цисты гиардий, ввели в исследование, их держали в отдельных клетках и собирали весь их помет за сутки. Количественное определение выделяемых цист проводили так же, как и в опыте 145.717, с тем изменением, что аликвоту в окатыше подсчитывали с помощью камеры Фукса-Розенталя под микроскопом. Подсчет выделяемых цист проводили на протяжении 4 суток до лечения (дни с -3 по 0), а на основании количества выделяемых цист щенков рандомизировали в три группы. На протяжении трех дней подряд (дни 0, 1 и 2) щенки из группы лечения 1 получали по утрам одну дозу нифуртимокса (Lampit) в 50 мг/кг перорально, а шести собакам из группы лечения 2 в эти три дня по утрам вводили перорально 50 мг/кг фенбендазола (таблетки фенбендазола). 6 собакам контрольной группы лечение не проводили. С дня 1 по день 8 после лечения определяли количество выделяемых цист.
Результаты: Рассчитанная эффективность нифуртимокса составила 98,6%, а эффективность фенбендазола - 48,3% (см. таблицу 2).
Таблица 2
Выделение цист гиардий до и после лечения нифуртимоксом в сравнении с лечением фенбендазолом.
50 мг/кг нифуртимокса в дни Т0, Т1 и Т2
собака
T-3
Т-2
Т-1
Т0
Т1
Т2
Т3
Т4
Т5
Т6
Т7
Т8
9300
63463
79689
91293
103442
1261
527
0
0
0
0
0
903
0136
102900
68914
59273
112084
2000
0
0
622
1299
93
0
0
0116
57571
10685
25515
60420
809
741
0
0
229
0
0
517
8553
40909
8278
3472
675
187
0
0
185
0
98
0
0
8531
4891
1618
37203
89880
974
0
0
0
0
0
87
975
0134
28773
133
8528
86
0
0
0
0
2299
1842
237
0
Σ
49751
28220
37547
61098
872
211
0
135
638
339
54
399
50 мг/кг фенбендазола в дни Т0, Т1 и Т2
собака
Т-3
Т-2
Т-1
Т0
Т1
Т2
Т3
Т4
Т5
Т6
Т7
Т8
0117
1878 1
47754
24314 3
4940 0
67200
0
67109
49423
3116
4635
17474
0
9320
6019 3
23808
56014
2855 9
14596
5980
7043
652
18725
7546
20780
5555
8555
44218
26526
2349
639
872
0
961
439
4432
5594
260
5968
8543
34119
18113
16328
2719
12488
3386
3075
12038
0
3691
18056
10875
0135
20463
7230
14744
17037
6178
490
0
0
0
0
251
0
9328
2003
10109
21360
23290
723
552
5388
14133
19057
11495
20657
6370
Σ
29963
22257
58990
20274
17010
1735
13929
12781
7555
5494
12913
4795
Инфицированный контроль без лечения
собака
Т-3
Т-2
Т-1
Т0
Т1
Т2
Т3
Т4
Т5
Т6
Т7
Т8
0121
112757
27324
121092
108868
153336
64620
6127
190
6879
85408
73978
50256
0138
22125
65547
60200
26964
22234
855
17893
8138
13204
3681
439
1470
9332
22346
34475
42076
24466
24360
19145
12575
1455
5712
16122
21440
12563
8529
8884
49213
12881
32105
71378
1139
6409
4739
5297
23725
11626
2835
9330
18829
4711
22120
2476
1987
0
246
2492
4472
602
2052
813
0137
4623
12238
14406
14328
2134
10156
16756
0
8170
104020
79097
55935
Σ
31594
32251
45463
34868
45905
15986
10001
2836
7289
38926
31439
20645
Т-3 - Т-1: Дни до лечения
Т0, Т1, Т2: Дни лечения
Т3-Т8: Дни после лечения
Лечение
Суммарное выделение цист гиардий
Эффективность
Дни -3-0
Дни 3-8
50 мг/кг нифуртимокса
44154
261
98.6%
50 мг/кг фенбендазола
32871
9578
48.3%
Инфицированный контроль без лечения
36044
18523
-