Новые комплексные соединения янтарной кислоты с производными пиримидина перспективные средства метаболической коррекции

Выводы 2. Выявлено позитивное влияние ВЛОК на

1. Применение ВЛОК у крыс с алкогольной сосуды микроциркуляторного русла головного

комой вызывало резкое снижение летальности, мозга и сетчатки глаза, а также на реологические

неврологического дефицита, активизировало сим- свойства крови.

патический отдел вегетативной нервной системы и способствовало в последующем нормотонии.

ЛИТЕРАТУРА

1. Баевский Р.М., Кириллов О.И., Клецкин С.З. Математический анализ изменений сердечного ритма при стрессе. - М.: Наука, 1984.

2. Григораш Г.А., Костылев М.В., Коновалов Е.П. и др. Влияние интракорпорального лазерного облучения крови на функции сердечно-сосудистой системы у больных с гнойно-воспалительными заболеваниями //Клиническая хирургия. - 1990. - № 1. - С. 12-14.

3. Идрисова Л.Т., Еникеев Д.А., Байбурина Г.А. Балльная оценка неврологического статуса крыс при алкогольной коме и влияние на нее лазерной физиогемотерапии //Клиническая медицина и патофизиология. - 1999. - № 2. - С. 75-79.

4. Идрисова Л.Т., Еникеев Д.А., Байбурина Г.А., Байрамгулов Ф.М. Алкогольная кома и лазеротерапия в эксперименте. - Уфа, 2003.

5. Кутко И.И., Фролов В.М., Пустовой Ю.Г. и др. Влияние эндоваскулярной лазеротерапии и антиоксидантов на иммунный статус и энергетический обмен у больных с резистентными к лечению формами шизофрении // Лечение нервных и психических заболеваний. - 1996. - № 2. - С. 34-38.

6. Лысенков С.П., Корпачев В.Г., Тель Л.З. Балльная оценка общего состояния крыс, перенесших клиническую смерть // Клиника, патогенез и лечение неотложных состояний. -Новосибирс, 1982. - С. 8-13.

7. Мхеидзе Ч.Г., Хитаришвили М.Б. Ультраструктура нейронов и межнейрональных контактов гипоталамуса при острой этаноловой интоксикации // Журн. неврологии и психиатрии. - 1996. - Т. 96. - №3. -С. 105-106.

8. Савицкая Е.В., Ромаданова Н.Б., Абрашитов А.Х. Потребление глюкозы головным мозгом крысы при интоксикации этанолом и синдроме отмены //Патологическая физиол. и экспер. Терапия. - 1992. - № 1. - С. 9-12.

9. Таланцев К.В., Кожура В.Л., Новодержкина И.С. и др. Внутрисосудистое лазерное облучение крови в комплексе реанимационных мероприятий у собак, перенесших длительную клиническую смерть: мат. междун. симп. «Реаниматология на рубеже XXI века».- М., 1996. - С.62-64.

10. Barbour R.L. Optical spectroscopy and cerebral vascular effects of alcohol in the intact brain effects on tissue oxyhemoglobin, blood content, and reduced cytochrome oxidase / R.L. Barbour, A. Gebrewold, B.M. Altura // Alcohol. ain. Exp. Res. - 1993. - Vol. 17.- №6. - P. 1319-1324.

УДК 615.015.11.42.27:[547.853.3:547.461.4]-092.9

© В.А. Мышкин, Д.В. Срубилин, Д. А. Еникеев, М. А. Исакова Л.Т.Идрисова, Д.М.Галимов, И.Д.Исаков, 2009

В.А. Мышкин1, Д.В. Срубилин2, Д. А. Еникеев2,

М. А. Исакова Л.Т.Идрисова, Д.М.Галимов, И.Д.Исаков НОВЫЕ КОМПЛЕКСНЫЕ СОЕДИНЕНИЯ ЯНТАРНОЙ КИСЛОТЫ С ПРОИЗВОДНЫМИ

ПИРИМИДИНА - ПЕРСПЕКТИВНЫЕ СРЕДСТВА МЕТАБОЛИЧЕСКОЙ КОРРЕКЦИИ

ФГУН Уфимский НИИ медицины труда и экологии человека федеральной службы по надзору в среде защиты прав и благополучия человека, г. Уфа 2 ГОУ ВПО Башкирский государственный медицинский университет Росздрава, г. Уфа

В модельных системах изучена антирадикальная, антиокислительная и противогипоксическая активность комплексных соединений производных пиримидина с янтарной кислотой. Установлено, что исследуемые препараты различаются по ан-тирадикальной активности и по способности влиять на перекисное окисление липидов. Отсутствует четкое соответствие антиокислительных свойств пиримидиновых соединений их антирадикальной активности. Выявлено соединение, обладающее противогипоксической активностью.

Ключевые слова: производные пиримидина, янтарная кислота, антирадикальная и антиокислительная активность.

V.A. Myshkin, D.V. Srubilin, D.A. Enikeyev, M.A. Isakova, L.T. Idrisova, D.M. Galimov, I.D. Isakov NEW COMPLEX COMPOUNDS OF SUCCINIC ACID WITH PYRIMIDINE DERIVATIVES -A PERSPECTIVE MEANS OF METABOLIC CORRECTION

Antiradical, antioxidizing and antihypoxic activities of complex compounds of pyrimidine derivatives with succinic acid have been studied in modeling systems. It has been shown that the agents studied differ by their antiradical activity and capacity to exert influence on lipid peroxidation. There is no precise conformity of antioxidizing properties of pyrimidine compounds to their antiradical activity. The compound having antihypoxic activity has been detected.

Key words: pyrimidine derivatives, succinic acid, antiradical and antioxidizing activity.

Клиническая медицина постоянно сталкивается с необходимостью защиты организма от недостатка кислорода, с одной стороны, и его повреждающим действием - с другой. В этих случаях целесообразно использовать соединения с общеклеточным действием, обладающими ан-тигипоксической, антиоксидантной и мембранопротекторной активностью. Коррекция развивающихся нарушений при избыточной активации процессов свободнорадикального окисления и недостаточности антиоксидантной защиты с помощью препаратов, обладающих антиокси-дантной и антигипоксической активностью, является наиболее универсальной. Целью настоящей работы явилось исследование антиради-кальной, антиокислительной, антигипоксической активности новых комплексных соединений янтарной кислоты (ЯК) с производными пиримидина.

Материалы и методы

Исследовали сукцинатпиримидиновые комплексы, синтезированные в Институте органической химии УНЦ РАН д.х.н. В.П. Кривоно-говым: 3-оксиэтил-6-метилурацил с ЯК (I); 1,3-бис(2-гидроксиэтил)-6-метилурацил с ЯК (II); 1,3-бис(2-гидроксиэтил)-5-гидрокси-6-метилурацил с ЯК (III); 1,3-бис(2-гидроксиэтил)-5гидроксиэтокси-6-метилурацил с ЯК (IV); 1,6-диметил-5-гидроксиурацил с ЯК (V). Антиради-кальную активность соединений оценивали по степени ингибирования реакции образования супероксидного анион-радикала в системе, состоящей из 66 ммоль фосфатного буфера (pH=7,8); 1 ммоль этилендиаминтетраацетата; 0,407 ммоль нитросинего тетразолия (НТС);

0,0018 ммоль феназинметасульфата; 1 ммоль никотинамид-аденин-динуклеотида восстанов-

ленного (НАДН+); 1 мг желатина. Инкубацию проводили 10 мин. в аэробных условиях при комнатной температуре. Об активности соединений судили по скорости изменения оптической плотности в ходе восстановления НТС при длине волны 540 нм. Результаты выражали в процентах торможения восстановления НТС по отношению к контролю [5].

Антиокислительные свойства сукцинат-пиримидинового комплекса изучали в условиях спонтанного и индуцированного перекисного окисления липидов (ПОЛ). В качестве модельной системы природного происхождения использовали 20% гомогенат печени крыс. Соединения вводили в инкубационную среду в виде водных растворов в концентрации 100 мкмоль. Интенсивность процессов ПОЛ исследовали по накоплению малонового диальдегида (МДА), количество которого определяли по реакции с 2-тиобарбитуровой кислотой [2]. ПОЛ индуцировали системой железо-аскорбат, содержащей 6 мкмоль соли Мора и 0,5 ммоль аскорбата. Для индукции НАДФН+ - зависимого ПОЛ в инкубационную среду вносили 1 ммоль НАДФН+; 6 мкмоль соли Мора; 0,2 ммоль пирофосфата на-

трия. Антиокислительную активность соединения рассчитывали по формуле [4]:

[МДАк] - [МДАо]

АОА = --------- х 100%

где - [МДАк] - прирост МДА в контрольной пробе за время инкубации,

[МДАо] - прирост МДА в опытной пробе за время инкубации.

Антигипоксическую активность изучали на моделях острой гемической гипоксии (ОГеГ) и острой гипоксии с гиперкапнией (ОГГК) в соответствии с «Методическими рекомендациями по экспериментальному изучению препаратов, предлагаемых для клинического изучения в качестве антигипоксических средств» Фармакологического государственного комитета МЗ СССР (1990).

Эксперименты проведены на 52 белых мышах-самцах массой 19-25г. при температуре воздуха 25°С и нормальных показателях барометрического давления. ОГеГ вызывали подкожным введением 4% раствора нитрита натрия в дозе 400 мг/кг. ОГГК достигалась путем помещения мышей в герметически закрывающуюся емкость, объемом 250 см3. Исследуемые соединения вводили мышам внутрибрюшинно за 1 час до гипоксического воздействия виде 1% водных растворов в дозе 100 мг/кг. Контрольным мышам вводили адекватное количество растворителя. Критерием опыта являлась продолжительность жизни опытных и контрольных мышей в минутах.

Статистическую обработку полученных данных проводили на основе расчета средних арифметических величин и их ошибок. Различия показателей определяли методом вариационной статистики с использованием 1 - критерия Стью-дента. Различия считали достоверными при р<0,05.

Результаты и обсуждения

Результаты проведенных исследований представлены в таблице, из которой видно, что комплексные соединения тормозят генерацию супероксидного анион-радикала. Супероксидный радикал (О°2), взаимодействуя с протоном, образует перекись водорода, которая в свою очередь в реакции Габера-Вейса дает гидроксильный радикал (ОН)°, обладающий высокой реакционной способностью. ПОЛ индуцирующее влияние различных радикалов неравнозначно и находится в обратной зависимости от продолжительности их жизни (ОН°<О°2<Н2О2) и в прямой зависимости от их диффузионной способности. Супер-оксидный радикал способен к миграции по каналам анионной проводимости и к распространению повреждающего и ПОЛ-индуцирующего эффекта[1;3]. Вследствие того, что первичной активной формой кислорода в оксирадикалгене-рирующей системе является супероксидный радикал, а образование более реакционных форм происходит вторично антирадикальная активность исследуемых соединений на О°2 представляет значительный интерес.

Таблица

Антирадикальная и антиокислительная активность

Комплексные соединения Антиради-кальная активность (в % по отношению к контролю' Антиокислительная активность, %

Спонтанное ПОЛ Аскорбат-индуцированное ПОЛ НАДФН+ -индуцированное ПОЛ

3-оксиэтил-6-метилурацил с ЯК (І) 11,5±2,4 44,6±5,2 85,8±7,2 16,8±2,3

1,3-бис(2-гидроксиэтил)-6-метил-урацил с ЯК (ІІ) 13,2±1,9 41,2±3,8 78,7±8,4 8,2±1,2

1,3-бис(2-гидроксиэтил)-5-гидрокси-6-метил-урацил с ЯК (ІІІ) 20,2±3,7 34,1±6,1 84,2±9,1 7,3±1,9

1,3-бис(2-гидрокси- этил)-5- гидроксиэтокси-6-метилурацил с ЯК (IV) 7,7±3,5 0 6,9±2,4 0

1,6-диметил-5-гидрокси-урацил с ЯК (V) 30,8±3,5 0 0 12,0±2,1

Важным представляется вопрос о характере и механизме действия в более сложных биохимических системах. В качестве такой системы был использован гомогенат печени, и в моделях спонтанного, НАДФН+ зависимого и аскорба-тиндуцированного ПОЛ изучены антиокисли-тельные эффекты производных пиримидина. Система спонтанного окисления липидов характеризует базальные процессы окисления, протекающие в гомогенате печени без активации ферментативной и неферментативной системы. В модельной системе спонтанного ПОЛ соединения І,ІІ,Ш ингибируют накопление МДА (таблица). Данные соединения также проявляют высо-

кую активность в модельной системе аскорбат-зависимого (неферментативного) ПОЛ, уменьшая накопление МДА на 78,7—85,8%. В то же время в системе НАДФН+ зависимого ПОЛ, где предполагается активация ферментативного окисления, у сукцинатпиримидиновых комплексов выявлена незначительная антиокислительная активность. Высокая антиокислительная активность в системе ферментативного ПОЛ обычно характерна для липофильных соединений, которые имеют коэффициент распределения веществ в полярной и неполярной фазах больше единицы [6]. Следует отметить отсутствие четкого соответствия антиокислительных свойств пиримидиновых соединений их антирадикальной активности.

Исследуя влияние сукцинатпиримидино-вых комплексов на время жизни мышей в условиях ОГеГ и ОГГК, было выявлено соединение (I), обладающее противогипоксической активностью. Комплекс 3-оксиэтил-6-метилурацил с ЯК статистически достоверно удлинял время жизни мышей при ОГеГ с 16,5 до 20,5 минут (р<0,05); при ОГГК с 17,2 до 22,7 минут (р<0,05).

Таким образом, в результате проведенных исследований установлено, что исследуемые комплексные соединения янтарной кислоты с производными пиримидина обладают антиради-кальной и антиокислительной активностью. В связи с чем целесообразны дальнейшие изучения протекторной эффективности и механизма действия данных соединений при патологических состояниях, сопровождающихся активацией свободнорадикального окисления.

ЛИТЕРАТУРА

1. Биленко М.В. Ишемические и реперфузионные повреждения органов.- М.: Медицина, 1989.- 367с

2. Гаврилов В.Б., Гаврилова А.Р., Мажуль Л.М. Анализ методов определения продуктов перекисного окисления липидов в сыворотке крови по тесту с тиобарбитуровой кислотой//Вопросы медицинской химии.- 1987.- №1.-с. 118-122.

3. Гуськова Р.А., Иванов И.И., Кольтовер В.И. Проницаемость бислойных фосфолипидных мембран для супероксидных радикалов кислорода// Биохимия.- 1984,- Т.49, №5.-с. 758-766.

4. Зражевская Е.В. Изыскание эффективных антиоксидантов в ряду производных малоновой кислоты: Дис. ...канд. мед. наук.- Благовещенск, 1991.

5. Милютина К.Г., Аманян К.А., Шугалей С.С. Антирадикальный и антиоксидантный эффект аргинина и его влияние на активность ПОЛ при гипоксии//Бюлл. экспер. биологии и медицины.- 1990.-№ 9.-с. 263265.

6. Мышкин В.А. Хайбуллина З.Г., Башкатов С.А. Влияние метилурацила и оксиметилурацила на свободнорадикальное окисление в модельных системах//Бюлл. экспер. биологии и медицины.- 1995.-№ 8.-с. 142-14