МУЛЬТИВАЛЕНТНАЯ КОМПОЗИЦИЯ НА ОСНОВЕ КОНЪЮГАТА ПНЕВМОКОККОВЫЙ ПОЛИСАХАРИД-БЕЛОК

1. Способ получения иммуногенного конъюгата, содержащего полисахарид Streptococcus pneumoniae серотипа 19А, ковалентно связанный с белком-носителем, включающий
(a) осуществление реакции очищенного полисахарида серотипа 19А с окисляющим агентом с получением активированного полисахарида серотипа 19А;
(b) смешивание активированного полисахарида серотипа 19А с белком-носителем;
(c) совместную лиофилизацию смешанных полисахарида серотипа 19А и белка-носителя;
(d) ресуспендирование смешанных активированного полисахарида серотипа 19А и белка-носителя в диметилсульфоксиде (ДМСО);
(e) осуществление реакции смешанных активированного полисахарида серотипа 19А и белка-носителя с восстанавливающим агентом с получением конъюгата полисахарид серотипа 19А:белок-носитель; и
(f) кэппирование непрореагировавших альдегидов в конъюгате активированный полисахарид серотипа 19А:белок-носитель с получением иммуногенного конъюгата, содержащего полисахарид Streptococcus pneumoniae серотипа 19А, ковалентно связанный с белком-носителем.
197
2. Способ по п.1, отличающийся тем, что белком-носителем является CRM.
197
3. Способ по п.2, отличающийся тем, что полисахарид серотипа 19А и CRM смешивают в отношении 0.8:1.
4. Способ по п.1, отличающийся тем, что pH активированного полисахарида серотипа 19А доводят до 6.5±0.2 перед смешиванием с белком-носителем.
5. Способ по п.1, отличающийся тем, что активированный полисахарид серотипа 19А смешивают с сахарозой перед смешиванием с белком-носителем.
6. Способ по п.1, дополнительно включающий очистку иммуногенного конъюгата.
7. Способ по п.1, отличающийся тем, что окисляющим агентом является периодат натрия.
8. Способ по п.1, отличающийся тем, что восстанавливающим агентом является цианоборогидрид натрия.
9. Способ по п.1, отличающийся тем, что копирование непрореагировавших альдегидов включает осуществление реакции конъюгата полисахарид серотипа 19А:белок-носитель с борогидридом натрия.
10. Способ получения иммуногенного конъюгата, содержащего полисахарид Streptococcus pneumoniae серотипа 19А, ковалентно связанный с белком-носителем, включающий
(a) осуществление реакции полисахарида серотипа 19А с периодатом натрия с получением активированного полисахарида серотипа 19А;
(b) доведение pH активированного полисахарида серотипа 19А до 6.5+0.2;
(c) смешивание активированного полисахарида серотипа 19А с сахарозой;
(d) смешивание активированного полисахарида серотипа 19А с белком-носителем в отношении 0.8:1;
(e) совместную лиофилизацию смешанных активированного полисахарида серотипа 19А и белка-носителя;
(f) ресуспендирование смешанных активированного полисахарида серотипа 19А и белка-носителя в диметилсульфоксиде (ДМСО);
(g) осуществление реакции смешанных активированного полисахарида серотипа 19А и белка-носителя с цианоборогидридом натрия с получением конъюгата полисахарид серотипа 19А:белок-носитель; и
(h) кэппирование непрореагировавших альдегидов в конъюгате активированный полисахарид серотипа 19А:белок-носитель борогидридом натрия с получением иммуногенного конъюгата, содержащего полисахарид Streptococcus pneumoniae серотипа 19А, ковалентно связанный с белком-носителем.
197
11. Способ по п.1, отличающийся тем, что белком-носителем является CRM.
12. Способ по п.1, дополнительно включающий очистку иммуногенного конъюгата.
13. Способ получения иммуногенного конъюгата, содержащего полисахарид Streptococcus pneumoniae серотипа 19А, ковалентно связанный с белком-носителем, в котором указанный полисахарид содержит фосфодиэфирную связь между повторяющимися блоками, включающий
(a) осуществление реакции указанного полисахарида с окисляющим агентом с получением активированного полисахарида;
(b) смешивание активированного полисахарида с белком-носителем;
(c) совместную лиофилизацию смешанных активированного полисахарида и белка-носителя;
(d) ресуспендирование смешанных активированного полисахарида и белка-носителя в диметилсульфоксиде (ДМСО);
(e) осуществление реакции смешанных активрованного полисахарида и белка-носителя с восстанавливающим агентом с получением конъюгата полисахарид:белок-носитель; и
(f) кэппирование непрореагировавших альдегидов в конъюгате полисахарид: белок-носитель с получением иммуногенного конъюгата, содержащего полисахарид Streptococcus pneumonia, ковалентно связанный с белком-носителем.
14. Способ по п.13, отличающийся тем, что указанный полисахарид, содержащий фосфодиэфирную связь между повторяющимися блоками, представляет собой полисахарид Streptococcus pneumoniae серотипа 19А, 19F, 6А или 6В.
197
15. Способ по п.13, отличающийся тем, что белком-носителем является CRM.