УСТОЙЧИВЫЕ К ПРОТЕАЗЕ ПЕПТИДЫ

1. Синтетический пептид, включающий по меньшей мере одно замещение альфа-метил-функционализированной аминокислотой естественного аминокислотного остатка, где синтетический пептид сохраняет по существу такую же рецепторную эффективность и селективность, что и соответствующий синтетический пептид, который не включает замещений.
2. Синтетический пептид по п. 1, где по меньшей мере одна альфа-метил-функционализированная аминокислота соответствует замещенному естественному аминокислотному остатку.
3. Синтетический пептид по п. 1, где по меньшей мере одна альфа-метил-функционализированная аминокислота выбрана из группы, состоящей из альфа-метил-гистидина, альфа-метил-аланина, альфа-метил-изолейцина, альфа-метил-аргинина, альфа-метил-лейцина, альфа-метил-аспарагина, альфа-метил-лизина, альфа-метил-аспарагиновой кислоты, альфа-метил-метионина, альфа-метил-цистеина, альфа-метил-фенилаланина, альфа-метил-глутаминовой кислоты, альфа-метил-треонина, альфа-метил-глутамина, альфа-метил-триптофана, альфа-метил-глицина, альфа-метил-валина, альфа-метил-орнитина, альфа-метил-пролина, альфа-метил-селеноцистеина, альфа-метил-серина и альфа-метил-тирозина.
4. Синтетический пептид по любому из пп. 1-3, где синтетический пептид является по существу устойчивым к протеолитическому расщеплению.
5. Синтетический пептид по п. 4, где синтетический пептид является по существу устойчивым к расщеплению DPP-IV, неприлизином, химотрипсином, плазмином, тромбином, калликреином, трипсином, эластазой и/или пепcином.
6. Синтетический пептид по любому из пп. 1-5, где естественный аминокислотный остаток представляет собой сайт, восприимчивый к протеолитическому расщеплению.
7. Синтетический пептид по любому из пп. 1-6, где пептид представляет собой пептид из класса инкретинов.
8. Синтетический пептид по п. 7, где пептид выбран из группы, состоящей из глюкагоноподобного пептида 1 (GLP-1), глюкозозависимого инсулинотропного пептида (GIP), пептида эксенатид плюс глюкагон, секретинов, теномодулина, оксинтомодулина и вазоактивного пептида кишечника (VIP).
9. Синтетический пептид по п. 1, где пептид представляет собой инсулин.
10. Синтетический пептид GLP-1, включающий по меньшей мере три замещения альфа-метил-функционализированными аминокислотами естественных аминокислотных остатков, где синтетический пептид GLP-1 сохраняет по существу такую же рецепторную эффективность, что и соответствующий синтетический пептид GLP-1, который не включает замещений.
11. Синтетический пептид GLP-1 по п. 10, где по меньшей мере три альфа-метил-функционализированные аминокислоты представляют собой альфа-метил-фенилаланин.
12. Синтетический пептид GLP-1 по п. 10, содержащий четыре альфа-метил-функционализированные аминокислоты.
13. Синтетический пептид GLP-1 по п. 12, где четыре альфа-метил-функционализированные аминокислоты представляют собой альфа-метил-фенилаланин замещающий в положениях Phe6, Try13, Phe22 и Trp25.
14. Синтетический пептид GLP-1 по любому из пп. 10-13, дополнительно включающий замещение аминоизомасляной кислоты в положении 2 (Aib2).
15. Синтетический пептид GLP-1 по любому из пп. 10-14, дополнительно включающий модификацию по серину в положении 5 (Ser5).
16. Синтетический пептид GLP-1 по любому из пп. 10-15, дополнительно включающий альфа-метил-лизин замещающий в положениях Lys20 и Lys28.
17. Синтетический пептид GLP-1 по любому из пп. 10-16, дополнительно включающий замещение лейцина 26 на валин.
C
18. Синтетический пептид GLP-1 по любому из пп. 10-17, дополнительно включающий -концевую липидизацию.
19. Синтетический пептид GLP-1 по любому из пп. 10-18, где синтетический пептид GLP-1 является по существу устойчивым к протеолитическому расщеплению.
20. Синтетический пептид GLP-1 по п. 19, где синтетический пептид GLP-1 является по существу устойчивым к расщеплению DPP-IV, неприлизином, химотрипсином, плазмином, тромбином, калликреином, трипсином, эластазой и/или пепcином.
21. Способ получения синтетического пептида, включающий:
a. выявление по меньшей мере одного естественного аминокислотного остатка в пептиде с целью замещения; и
b. замещение альфа-метил-функционализированной аминокислотой выявленного естественного аминокислотного остатка,
где синтетический пептид сохраняет по существу такую же рецепторную эффективность и селективность, что и соответствующий синтетический пептид, который не включает замещение, и
где синтетический пептид является по существу устойчивым к протеолитическому расщеплению.
22. Способ по п. 21, где замещающая альфа-метил-функционализированная аминокислота соответствует замещенному естественному аминокислотному остатку.
23. Способ по п. 21, где замещающая альфа-метил-функционализированная аминокислота представляет собой альфа-метил-фенилаланин.
24. Способ по любому из пп. 21-23, где синтетический пептид является по существу устойчивым к расщеплению DPP-IV, неприлизином, химотрипсином, плазмином, тромбином, калликреином, трипсином, эластазой и/или пепcином.
25. Способ по п. 21, где указанное выявление включает выявление аминокислот в сайтах, восприимчивых к ферментативному расщеплению.
26. Способ по п. 21, где пептид представляет собой пептид из класса инкретинов.
27. Способ по п. 26, где пептид выбирают из группы, состоящей из глюкагоноподобного пептида 1 (GLP-1), глюкагона, глюкозозависимого инсулинотропного пептида (GIP) и пептида эксенатид.
28. Способ по п. 21, где пептид представляет собой инсулин.
29. Способ получения протеолитически стабильного пептида, включающий:
a. воздействие на пептид одной или несколькими протеазами;
b. выявление по меньшей мере одного естественного аминокислотного остатка, восприимчивого к сайт-специфическому протеолитическому расщеплению; и
с. замещение альфа-метил-функционализированной аминокислотой выявленного аминокислотного остатка,
где синтетический пептид сохраняет по существу такую же рецепторную эффективность и селективность, что и соответствующий синтетический пептид, который не включает замещение, и
где синтетический пептид является по существу устойчивым к протеолитическому расщеплению.
30. Способ по п. 29, где замещающая альфа-метил-функционализированная аминокислота соответствует замещенному естественному аминокислотному остатку.
31. Способ по п. 29, где замещающая альфа-метил-функционализированная аминокислота представляет собой альфа-метил-фенилаланин.
32. Способ по любому из пп. 29-31, где синтетический пептид является по существу устойчивым к расщеплению DPP-IV, неприлизином, химотрипсином, плазмином, тромбином, калликреином, трипсином, эластазой и/или пепcином.
33. Способ по п. 32, где пептид представляет собой пептид из класса инкретинов.
34. Способ по п. 33, где пептид выбирают из группы, состоящей из глюкагоноподобного пептида 1 (GLP-1), глюкозозависимого инсулинотропного пептида (GIP) и пептида эксенатид.
35. Способ по п. 29, где пептид представляет собой инсулин.
36. Способ лечения пациента, включающий введение пациенту фармацевтически эффективного количества синтетического пептида по п. 1.
37. Способ лечения пациента с диагностированным диабетом, включающий введение пациенту терапевтически эффективного количества синтетического пептида GLP-1 по п. 10.
38. Способ лечения пациента с диагностированным диабетом, включающий введение пациенту терапевтически эффективного количества синтетического инсулина по п. 9.
39. Способы по любому из пп. 36-38, где введение является пероральным.
40. Синтетический пептид GLP-1, содержащий следующую аминокислотную последовательность:
1
2
R-His-X1-Glu-Gly-X2-X3-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-X4-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-X5-Glu-X6-Ile-Ala-X7-X8-X9-X10-X11-X12-R (SEQ ID NO:2), где
1
p
R представляет собой Hy, Ac или Glu;
2
2
R представляет собой -NH или -OH;
X1 представляет собой Ala, Aib, Pro или Gly;
X2 представляет собой Thr, Pro или Ser;
N
X3 представляет собой Aib, Bip, β,β-Dip, F5-Phe, Phe, PhG, Nle, гомоPhe, гомоTyr, -MePhe, α-MePhe, α-Me-2F-Phe, Tyr, Trp, Tyr-OMe, 4I-Phe, 2F-Phe, 3F-Phe, 4F-Phe, 1-NaI, 2-NaI, Pro или ди-β,β-Me-Phe;
X4 представляет собой Aib, Ala, Asp, Arg, Bip, Cha, β,β-Dip, Gln, F5-Phe, PhG, Nle, гомоPhe, гомоTyr, α-MePhe, α-Me-2F-Phe, Phe, Thr, Trp, Tyr-OMe, 4I-Phe, 2F-Phe, 3F-Phe, 4F-Phe, Tyr, 1-NaI, 2-NaI, Pro или ди-β,β-Me-Phe;
X5 представляет собой Aib, Lys, D-pro, Pro или α-MeLys;
3
3
3
X6 представляет собой Aib, Asp, Arg, Bip, Cha, Leu, Lys, 2Cl-Phe, 3Cl-Phe, 4Cl-Phe, PhG, гомоPhe, 2Me-Phe, 3Me-Phe, 4Me-Phe, 2CF-Phe, 3CF-Phe, 4CF-Phe, β-Phe, β-MePhe, D-phe, 4I-Phe, 3I-Phe, 2F-Phe, β,β-Dip, β-Ala, Nle, Leu, F5-Phe, гомоTyr, α-MePhe, α-Me-2F-Phe, Ser, Tyr, Trp, Tyr-OMe, 3F-Phe, 4F-Phe, Pro, 1-NaI, 2-NaI или ди-β,β-Me-Phe;
N
X7 представляет собой Aib, Arg, Bip, Cha, β,β-Dip, F5-Phe, PhG, Phe, Tyr, гомоPhe, гомоTyr, α-MePhe, α-Me-2F-Phe, 2Me-Phe, 3Me-Phe, 4Me-Phe, Nle, Tyr-OMe, 4I-Phe, 1-NaI, 2-NaI, 2F-Phe, 3F-Phe, 4F-Phe, Pro, -MeTrp, α-MeTrp или ди-β,β-Me-Phe;
N
X8 представляет собой Aib, Ala, Arg, Asp, Glu, Nle, Pro, Ser, -MeLeu, α-MeLeu или Val;
X9 представляет собой Aib, Glu, Lys, α-MeVal или Pro;
X10 представляет собой Aib, Glu, α-MeLys или Pro;
X11 представляет собой Aib, Glu, Pro или Ser; и
X12 представляет собой Aib, Gly, Glu, Pro или α-MeArg.