СПОСОБ ДЕТЕКЦИИ ПАРТНЕРА ПО СВЯЗЫВАНИЮ МУЛЬТИСПЕЦИФИЧЕСКОГО СВЯЗЫВАЮЩЕГО АГЕНТА

1. Способ определения наличия и/или концентрации антигена биспецифического антитела в образце, в котором антиген, подлежащий определению, может быть специфически связан с первой связывающей детерминантой биспецифического антитела, и в котором антиген находится в комплексе с биспецифическим антителом (комплекс антиген-биспецифическое антитело), включающий этап:
- инкубации образца, содержащего антиген и биспецифическое антитело, с антиидиотипическим антителом, которое специфически связывается со второй связывающей детерминантой биспецифического антитела, отличной от первой связывающей детерминанты, при этом антиидиотипическое антитело связано с твердой фазой.
2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что способ включает этапы:
- инкубации образца, содержащего антиген и биспецифическое антитело, с антиидиотипическим антителом, которое специфически связывается со второй связывающей детерминантой биспецифического антитела, отличной от первой связывающей детерминанты, при этом антиидиотипическое антитело связано с твердой фазой, и
- детекции комплекса антиген-биспецифическое антитело-антиидиотипическое антитело и таким образом определения наличия и/или концентрации антигена биспецифического антитела.
3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что способ включает этапы:
- инкубации образца, содержащего антиген и биспецифическое антитело, с антиидиотипическим антителом, которое специфически связывается со второй связывающей детерминантой биспецифического антитела, отличной от первой связывающей детерминанты, при этом антиидиотипическое антитело связано с твердой фазой, и
- инкубации комплекса, образованного на первом этапе, с антителом, которое специфически связывается с эпитопом антигена, отличным от эпитопа, связанного с биспецифическим антителом, и таким образом определения наличия и/или концентрации антигена биспецифического антитела в образце.
4. Способ по п. 1, отличающийся тем, что способ предназначен для определения наличия и/или концентрации антигена биспецифического антитела, который находится в комплексе с биспецифическим антителом.
5. Способ по п. 1, отличающийся тем, что способ включает следующие этапы:
- получение образца, содержащего антиген и биспецифическое антитело, в котором по меньшей мере 90% антигена находится в комплексе с биспецифическим антителом,
- инкубацию образца, содержащего антиген и биспецифическое антитело, с антиидиотипическим антителом, которое специфически связывается со второй связывающей детерминантой биспецифического антитела, отличной от первой связывающей детерминанты, при этом антиидиотипическое антитело связано с твердой фазой, и
- инкубацию комплекса, образованного на первом этапе, с антителом, которое специфически связывается с эпитопом антигена, отличным от эпитопа, связанного с биспецифическим антителом, и таким образом определения наличия и/или концентрации антигена биспецифического антитела в образце.
6. Способ по п. 1, отличающийся тем, что способ включает следующие этапы:
- инкубацию образца, содержащего антиген и биспецифическое антитело, с биспецифическим антителом в таком количестве, чтобы в образце по меньшей мере 90% антигена находилось в составе комплекса с биспецифическим антителом,
- инкубацию образца, содержащего антиген, находящийся в комплексе с биспецифическим антителом, с антиидиотипическим антителом, которое специфически связывается со второй связывающей детерминантой биспецифического антитела, отличной от первой связывающей детерминанты, при этом антиидиотипическое антитело связано с твердой фазой, и
- инкубацию комплекса, образованного на предыдущем этапе, с антителом, которое специфически связывается с эпитопом антигена, отличным от эпитопа, связанного с биспецифическим антителом, и таким образом определения наличия и/или концентрации антигена биспецифического антитела в образце.
7. Способ по п. 6, отличающийся тем, что концентрация биспецифического антитела в образце составляет от 1 мкг/мл до 10 мкг/мл.
8. Способ по любому из пп. 6-7, отличающийся тем, что по меньшей мере 95% антигена находится в составе комплекса с биспецифическим антителом.
9. Способ по п. 8, отличающийся тем, что по меньшей мере 98% антигена находится в составе комплекса с биспецифическим антителом.
10. Способ определения концентрации связанного с антителом антигена биспецифического антитела в образце, в котором антиген может быть специфически связан с первой связывающей детерминантой биспецифического антитела, включающий этапы:
- инкубации первой аликвоты образца, содержащего антиген, с биспецифическим антителом, и при этом антитело находится в таком количестве, чтобы в образце по меньшей мере 90% антигена находилось в составе комплекса с биспецифическим антителом,
- инкубации образца, содержащего антиген, находящийся в составе комплекса с биспецифическим антителом, с антиидиотипическим антителом, которое специфически связывается со второй связывающей детерминантой биспецифического антитела, отличной от первой связывающей детерминанты, при этом антиидиотипическое антитело связано с твердой фазой, и
- инкубации комплекса, образованного на предыдущем этапе, с антителом, которое специфически связывается с эпитопом антигена, отличным от эпитопа, связанного с биспецифическим антителом, и таким образом определения наличия и/или концентрации антигена биспецифического антитела в образце и таким образом определения общей концентрации антигена, присутствующего в образце,
- инкубации второй аликвоты образца, содержащего антиген и биспецифическое антитело, с антиидиотипическим антителом, которое специфически связывается со второй связывающей детерминантой биспецифического антитела, отличной от первой связывающей детерминанты, при этом антиидиотипическое антитело связано с твердой фазой, и
- инкубации образовавшегося комплекса с антителом, которое специфически связывается с эпитопом антигена, отличным от эпитопа, связанного с биспецифическим антителом, и таким образом определения концентрации свободного антигена биспецифического антитела, присутствующего в образце, и
- определения концентрации связанного с антителом антигена биспецифического антитела по разнице между общей концентрацией антигена, присутствующего в образце, и концентрацией свободного антигена, присутствующего в образце.
11. Способ определения наличия и/или концентрации антигена мультиспецифического антитела в образце, в котором антиген может быть специфически связан с первой связывающей детерминантой мультиспецифического антитела, включающий этапы:
- инкубации образца, содержащего антиген и мультиспецифическое антитело, со вторым антигеном, который может специфически связываться со второй связывающей детерминантой мультиспецифического антитела, отличной от первой связывающей детерминанты, и
- удаления из образца комплекса второй антиген-мультиспецифическое антитело перед определением наличия и/или концентрации антигена.
12. Способ по п. 11, отличающийся тем, что второй антиген конъюгирован с твердой фазой.
13. Способ по п. 11, отличающийся тем, что второй антиген конъюгирован с парамагнитной частицей.
14. Способ по п. 11, отличающийся тем, что он включает следующие этапы:
- инкубацию образца, содержащего антиген и мультиспецифическое антитело, со вторым антигеном, который может специфически связываться со второй связывающей детерминантой мультиспецифического антитела, отличной от первой связывающей детерминанты, для образования комплекса второй антиген-мультиспецифическое антитело,
- удаление из образца комплекса второй антиген-мультиспецифическое антитело, и
- определение антигена в образце, из которого элиминировано мультиспецифическое антитело.
15. Способ по п. 11, отличающийся тем, что определение антигена включает следующие этапы:
- инкубацию образца, из которого элиминировано мультиспецифическое антитело, с захватывающим антителом, которое специфически связывается с антигеном, для образования комплекса захватывающее антитело-антиген, и
- установление зависимости между образованием комплекса захватывающее антитело-антиген и концентрацией в образце антигена.
16. Способ по п. 11, отличающийся тем, что определение антигена включает следующие этапы:
- инкубацию образца, из которого элиминировано мультиспецифическое антитело, с захватывающим антителом, которое специфически связывается с антигеном, для образования комплекса захватывающее антитело-антиген,
- инкубацию комплекса захватывающее антитело-антиген с меченым антителом, где захватывающее антитело и меченое антитело связываются с неперекрывающимися эпитопами антигена, и
- установление зависимости между образованием комплекса захватывающее антитело-антиген-меченое антитело и концентрацией в образце антигена.
17. Способ по п. 11, отличающийся тем, что определение антигена включает следующие этапы:
- инкубацию образца, из которого элиминировано мультиспецифическое антитело, с захватывающим антителом, которое специфически связывается с антигеном, для образования комплекса захватывающее антитело-антиген,
- инкубацию комплекса захватывающее антитело-антиген с меченым антителом, где захватывающее антитело и меченое антитело связываются с неперекрывающимися эпитопами антигена,
- инкубацию комплекса захватывающее антитело-антиген-меченое антитело с детектирующим антителом, содержащим детектируемую метку, где детектирующее антитело специфически связывается с эпитопом меченого антитела, находящимся за пределами вариабельных доменов меченого антитела, и
- установление зависимости между образованием комплекса захватывающее антитело-антиген-меченое антитело и концентрацией в образце антигена.
18. Способ по п. 11, отличающийся тем, что мультиспецифическое антитело представляет собой биспецифическое антитело, имеющее первую связывающую детерминанту, которая специфически связывается с первым антигеном или первым эпитопом антигена, и которое имеет вторую связывающую детерминанту, которая специфически связывается со вторым антигеном или со вторым эпитопом антигена.
19. Способ по п. 12, отличающийся тем, что второй антиген конъюгирован с парамагнитной частицей.
20. Способ по п. 12, отличающийся тем, что он включает следующие этапы:
- инкубацию образца, содержащего антиген и мультиспецифическое антитело, со вторым антигеном, который может специфически связываться со второй связывающей детерминантой мультиспецифического антитела, отличной от первой связывающей детерминанты, для образования комплекса второй антиген-мультиспецифическое антитело,
- удаление из образца комплекса второй антиген-мультиспецифическое антитело, и
- определение антигена в образце, из которого элиминировано мультиспецифическое антитело.
21. Способ по п. 12, отличающийся тем, что определение антигена включает следующие этапы:
- инкубацию образца, из которого элиминировано мультиспецифическое антитело, с захватывающим антителом, которое специфически связывается с антигеном, для образования комплекса захватывающее антитело-антиген, и
- установление зависимости между образованием комплекса захватывающее антитело-антиген и концентрацией в образце антигена.
22. Способ по п. 12, отличающийся тем, что определение антигена включает следующие этапы:
- инкубацию образца, из которого элиминировано мультиспецифическое антитело, с захватывающим антителом, которое специфически связывается с антигеном, для образования комплекса захватывающее антитело-антиген,
- инкубацию комплекса захватывающее антитело-антиген с меченым антителом, где захватывающее антитело и меченое антитело связываются с неперекрывающимися эпитопами антигена, и
- установление зависимости между образованием комплекса захватывающее антитело-антиген-меченое антитело и концентрацией в образце антигена.
23. Способ по п. 12, отличающийся тем, что определение антигена включает следующие этапы:
- инкубацию образца, из которого элиминировано мультиспецифическое антитело, с захватывающим антителом, которое специфически связывается с антигеном, для образования комплекса захватывающее антитело-антиген,
- инкубацию комплекса захватывающее антитело-антиген с меченым антителом, где захватывающее антитело и меченое антитело связываются с неперекрывающимися эпитопами антигена,
- инкубацию комплекса захватывающее антитело-антиген-меченое антитело с детектирующим антителом, содержащим детектируемую метку, где детектирующее антитело специфически связывается с эпитопом меченого антитела, находящимся за пределами вариабельных доменов меченого антитела, и
- установление зависимости между образованием комплекса захватывающее антитело-антиген-меченое антитело и концентрацией в образце антигена.
24. Способ по п. 12, отличающийся тем, что мультиспецифическое антитело представляет собой биспецифическое антитело, имеющее первую связывающую детерминанту, которая специфически связывается с первым антигеном или первым эпитопом антигена, и которое имеет вторую связывающую детерминанту, которая специфически связывается со вторым антигеном или со вторым эпитопом антигена.
25. Способ по любому из пп. 11-24, отличающийся тем, что определяют свободный антиген мультиспецифического антитела.
26. Способ определения в образце концентрации антигена биспецифического антитела, находящегося в составе комплекса с биспецифическим антителом, включающий этап:
- инкубации образца, содержащего антиген и биспецифическое антитело, с антиидиотипическим антителом, которое специфически связывается со связывающей детерминантой биспецифического антитела, отличной от связывающей детерминанты, с которой связан антиген, при этом антиидиотипическое антитело связано с твердой фазой.
27. Способ по п. 26, отличающийся тем, что способ включает в качестве второго этапа:
- инкубацию комплекса, образованного на первом этапе, с антителом, которое специфически связывается с эпитопом антигена, отличным от эпитопа, связанного с биспецифическим антителом, и таким образом определения в образце концентрации антигена биспецифического антитела, находящегося в комплексе с биспецифическим антителом.