МОДУЛЯЦИЯ УРОВНЕЙ sAPP, sAPPα И BDNF У ИНДИВИДУУМОВ С ДИАГНОЗОМ FXS И ASD
MODULATION sAPP, sAPPα AND BDNF LEVELS IN INDIVIDUALS DIAGNOSED WITH FXS AND ASD

ПРЕДВАРИТЕЛЬНОЕ ЗАЯВЛЕНИЕ
Эта заявка утверждает преимущество предварительных заявок на патенты Соединенных Штатов с номерами: 61/674367, поданной 22 июля 2012 г.; 61/675116, поданной 24 июля 2012 г. и 61/748652, поданной 3 января 2013 г., каждая из которых включена посредством ссылки в ее полном виде.
УТВЕРЖДЕНИЕ ПРАВ ГОСУДАРСТВА
[0001] Это изобретение было выполнено с поддержкой правительства при AG01839 и RR025761 по решению Национальных Институтов Здравоохранения. Правительство имеет определенные права в этом изобретении.
ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ
[0002] Аспекты этого раскрытия относятся к модуляции уровней белков сыворотки, выбранных из группы, состоящей из: секретируемого белка-предшественника амилоида (sAPP); (sAPPα); полученного из головного мозга нейротрофического фактора (BDNF) с использованием соединений, таких как акампросат, для лечения пациентов, диагностируемых со специфическими нарушениями развития, выбранными из группы, состоящей из синдрома хрупкой Х-хромосомы (FXS), и FXS-связанного нарушения аутистического спектра и нарушения идиопатического аутистического спектра (ASD, аутизма).
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
[0003] Нейро-эволюционные расcтройства аутистического спектра (ASD: аутизма) и синдрома хрупкой Х-хромосомы (FXS) являются детскими пожизненными нарушениями, которые могут приводить к заметному ухудшению в общественном поведении, социальных навыках общения и когнитивной функции. Тяжесть этих симптомов, проявляемую индивидуумом, идентифицируемым с этими нейро-эволюционными нарушениями, широко варьируется. К сожалению, многие индивидуумы, пораженные этими нарушениями, проявляют глубокие симптомы, некоторые из которых проходят сами, тогда как другие проявляют значительно уменьшенную способность функционировать в обществе. Хотя причина FXS является известной, различные нейронные пути, которые поражены этим состоянием, являются неизвестными, так же как и уровни специфических нейроактивных соединений в головном мозге этих индивидуумов. Что касается идиопатического аутистического нарушения, даже основная причина этого нарушения остается неизвестной. Вследствие воздействия, которое эти нарушения оказывают на индивидуумов, диагностируемых с этим нарушением, проводится большое количество преклинических или клинических исследований, посвященных развитию терапий для этих состояний. Несмотря на исследование, посвященное диагностике и лечению, остается неотложная потребность в новых терапиях для помощи индивидуумам, пораженным этими расстройствами, для ведения более комфортабельной и независимой жизни. Материалы, способы и системы, описанные здесь, предназначены для направления на эти жизненные необходимости.
[0004] Нарушения спектра аутизма являются детскими пожизненными появляющимися в детстве нейро-эволюционными нарушениями, вызывающими заметное ухудшение в общественном поведении и коммуникации (общении). Согласно Департаменту Здравоохранения и Обслуживания (DHHS), увеличенное распространение ASD, в настоящее время оцениваемое как 1 у 110 детей, оправдывает то, что ASD, рассматриваются как национальная чрезвычайная ситуация. Лица с ASD также часто проявляют дополнительные симптомы интерференции, такие агрессия, самоповреждение, компульсивные побуждения, невнимательность, гиперактивность и тревожность, среди прочего. Расходы на ASD (определяемые как $95 миллиардов ежегодно в Соединенных Штатах) для общества являются большими и все более увеличивающимися. Проявление аутизма является гетерогенным. Например, лица с аутизмом могут иметь или могут не иметь интеллектуальную неспособность, припадки или функциональную речь. Эта гетерогенность проявлялась как в исследовании причины, так и в эффективном лечении ASD. Понимание причины аутизма остается ненадежным, только с приблизительно 10% случаев, ассоциированных с известными генетическими аномалиями. Что касается лечения, до сих пор не обнаруживали лекарственных средств, эффективных в крупномасштабных исследованиях для лечения существенных социальных и коммуникационных ухудшений ASD. Гетерогенность аутизма приводила ко многим многообещающим терапиям с лекарственными средствами, которые не имели успеха вследствие трудности идентификации подходящих подгрупп для тестирования. При такой вариабельной презентации, развитие рационального лекарственного средства в аутизме будет требовать фокусирования на определении подходящих подгрупп, где польза лекарственного средства является максимизированной. Развитие биомаркера в аутизме представляет уникальную возможность для обращения к этим стимулам терапевтического развития. Стратегический План 2011 Департамента Здравоохранения и Службы человека (Interagency Autism Coordinating Committee) в сильной степени подчеркнул необходимость для развития биомаркера, при условии, что этот потенциал биомаркеров обеспечивает раннее детектирование заболевания, оценивание тяжести болезни, индикаторов фармакологической реакции и способность утилизации биомаркеров для идентификации подгрупп в аутизме для развития нацеленного лечения.
[0005] При условии гетерогенности аутизма, известные причины аутизма обеспечивают наилучшее обоснование для фармакотерапии и развития биомаркеров. Среди этих известных причин, недавние открытия исследований в синдроме хрупкой Х-хромосомы (FXS), объединенные со статусом FXS, как наиболее общей причиной единственного гена аутизма, делает это нарушение первичным кандидатом, на котором развивают стратегию развития терапевтических веществ аутизма. FXS является наиболее общей неотъемлемой формой задержки развития, охватывающей 1 из 4000 лиц. Два из трех лиц с FXS также страдают от аутизма, и в целом число FXS составляет 5-7% всех случаев аутизма.
[0006] До настоящего времени Департаментом по контролю за качеством пищевых продуктов, медикаментов и косметических средств (FDA) Соединенных Штатов не было сообщено лекарственное средство для уменьшения центрального социального ухудшения аутистического нарушения. Многие фармакотерапевтические исследования в нацеленном на аутизм социальном ухудшении давали однородно отрицательные результаты. Таким образом, существует потребность в материалах и способах для лечения этих состояний. Некоторые аспекты данного раскрытия обеспечивают материалы и способы для этого исследования, диагностики и лечения идиопатического и связанного с синдромом хрупкой Х-хромосомы (FXS) Нарушения Спектра Аутизма (ASD).
СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[0007] Первый вариант осуществления включает в себя способы для лечения пациента, предусматривающие стадии: контактирования первого образца плазмы от пациента, диагностируемого, как имеющего ASD или FXS, с первым реагентом, который селективно связывается с BDNF, вторым реагентом, который селективно связывается с sAPP, и реагентом, который связывается с sAPPα, определения уровней BDNF, sAPP и sAPPα в этом образце плазмы; введения по меньшей мере одного соединения этому пациенту; связывания второго образца плазмы от этого пациента с первым реагентом, который селективно связывается с BDNF, вторым реагентом, который селективно связывается с sAPP, и реaгентом, который связывается с sAPPα; определения, имеется ли изменение в уровнях BDNF, sAPP и sAPPα в плазме пациента; и коррекции количества соединения, введенного этому пациенту, в ответ на изменение в уровнях BDNF, sAPP и sAPPα, определенных в образцах плазмы пациента.
[0008] Второй вариант осуществления включает в себя способы по первому варианту, где этот первый реагент является антителом, которое селективно связывается с BDNF. Третий вариант осуществления включает в себя способы по первому варианту осуществления, где этот второй вариант является антителом, которое селективно связывается с sAPP. Четвертый вариант осуществления включает в себя способы по первому варианту осуществления, где этот реагент является антителом, который специфически связывается с sAPPα.
[0009] Пятый вариант осуществления включает в себя способы по первому варианту осуществления, включающие в себя стадии: повышения уровня BDNF в ответ на стадию введения и понижения уровней sAPP и sAPPα в ответ на эту стадию введения.
[0010] Шестой вариант осуществления включает в себя способы по первому - пятому вариантам осуществления, где это соединение является акампросатом или фармацевтически приемлемой солью акампросата. Седьмой вариант осуществления включает в себя способы по шестому варианту осуществления, где акампросат вводят пациенту в дозе в диапазоне приблизительно 500 мг/день - приблизительно 1500 мг/день.
[0011] Восьмой вариант осуществления включает в себя системы для мониторинга пациента, предусматривающие: по меньшей мере одно первое антитело, которое селективно связывается с BDNF; по меньшей мере одно второе антитело, которое селективно связывается с sAPP; и по меньшей мере одно антитело, которое селективно связывается с sAPPα.
[0012] Девятый вариант осуществления включает в себя системы по восьмого варианту осуществления, дополнительно включающие в себя: по меньшей мере один реагент, выбранный из группы, состоящей из: буфера, хелатора, бактерицида, фунгицида и блокирующего агента.
[0013] Десятый вариант осуществления включает в себя способы для скрининга на соединение, применимое в лечении идиопатического или FXS-связанного ASD; предусматривающие стадии: контактирования первого образца плазмы от пациента, диагностируемого с ASD или FXS, с первым реагентом, который селективно связывается с BDNF, вторым реагентом, который селективно связывается с sAPP, и реагентом, который связывается с sAPPα; определения уровней BDNF, sAPP и sAPPα в этом образце плазмы; введения по меньшей мере одного соединения пациенту; связывания второго образца плазмы от этого пациента с первым реагентом; связывания второго образца плазмы от этого пациента с первым реагентом, который селективно связывается с BDNF, вторым реагентом, который селективно связывается с sAPP, и реагентом, который связывается с sAPPα; определения, имеется ли изменение в уровнях BDNF, sAPP и sAPPα в плазме этого пациента; и отбора соединения, которое вызывает изменение в уровнях BDNF, sAPP и sAPPα в плазме этого пациента.
[0014] Одиннадцатый вариант осуществления включает в себя способы по десятому варианту, где первый реагент является антителом, которое селективно связывается с BDNF. Двенадцатый вариант осуществления включает в себя способ по десятому варианту осуществления, где этот второй реагент является антителом, которое селективно связывается с sAPP. Тринадцатый вариант осуществления включает в себя способ по десятому варианту, где этот реагент является антителом, которое селективно связывается с sAPPα.
[0015] Двенадцатый вариант осуществления включает в себя способы по десятому варианту, включающему в себя стадии: оценивания, вызвало ли изменение, вызванное этим соединением увеличение в уровне BDNF, уменьшение в уровнях sAPP и sAPPα. Тринадцатый вариант включает в себя способы по десятому варианту осуществления, дополнительно включающие в себя стадию: изменения количества соединения, вводимого этому пациенту.
[0016] Четырнадцатый вариант осуществления включает в себя способы лечения пациента, включающие в себя стадии: введения терапевтически эффективного количества акампросата или его фармацевтически приемлемой соли; мониторинга периферической крови пациента на изменение уровней BDNF, sAPP и sAPPα в периферической крови пациента; и корректировки терапевтически эффективного количества акампросата или его фармацевтически приемлемой соли таким образом, что уровень BDNF и sAPP и sAPPα в периферической крови этого пациента изменяется. Пятнадцатый вариант включает в себя способы по десятому варианту осуществления, включающие в себя стадию изменения количества соединения.
[0017] Шестнадцатый вариант осуществления включает в себя способы лечения пациента, предусматривающий стадии: введения терапевтически эффективного количества акампросата или его фармацевтически приемлемой соли пациенту; мониторинга периферической крови пациента на изменение уровней BDNF, sAPP и sAPPα в периферической крови пациента; и корректировки терапевтически эффективного количества акампросата или его фармацевтически приемлемой соли таким образом, что уровень BDNF и sAPP и sAPPα в периферической крови пациента изменяется.
[0018] Седьмой вариант осуществления включает в себя способы по шестнадцатому варианту осуществления, где стадия мониторинга включает в себя: контактирование образца периферической крови пациента с антителом, которое селективно связывается с BDNF. Восемнадцатый вариант осуществления включает в себя способы по шестнадцатому варианту осуществления, где стадия мониторинга включает в себя: инкубирование образца периферической крови пациента с антителом, которое селективно связывается с sAPP. Девятнадцатый вариант осуществления включает в себя способы по шестнадцатому варианту осуществления, где эта стадия мониторинга включает в себя: зондирование образца периферической крови пациента антителом, которое селективно связывается с sAPPα.
[0019] Двадцатый вариант осуществления включает в себя способы по шестнадцатому - семнадцатому вариантам, где стадия корректировки включает в себя: увеличение количества акампросата таким образом, что уровень BDNF в периферической крови пациента увеличивается, и уровни sAPP и sAPPα в периферической крови пациента уменьшаются. Двадцать первый вариант осуществления включает в себя способы по двадцатому варианту осуществления, где акампросат вводят пациенту в дозе в диапазоне приблизительно 500 мг/день - приблизительно 1500 мг/день.
[0020] Некоторые варианты осуществления включают в себя способы лечения пациента, содержащие стадии: повышения уровня BDNF у пациента, где указанный пациент был диагностирован как имеющий FXS. В некоторых вариантах осуществления, стадия повышения включает в себя дозирование пациента терапевтически эффективным уровнем акампросата или фармацевтически приемлемой солью акампросата.
[0021] Некоторые варианты осуществления включают в себя способы лечения пациента, предусматривающие стадии: контактирования образца плазмы с реагентом, который селективно связывается с BDNF, где указанный образец плазмы собирают от пациента; определения уровня BDNF в этом образце плазмы; и введения по меньшей мере одного соединения указанного пациента таким образом, что это соединение повышает уровень BDNF в плазме этого пациента, где указанный пациент был диагностирован как имеющий FXS. В некоторых вариантах осуществления, реагент является антителом, которое селективно или по меньшей мере предпочтительно связывается с BDNF. В некоторых вариантах осуществления, соединение, которое повышает уровень BDNF в сыворотке пациента, является акампросатом или фармацевтически приемлемой солью акампросата.
[0022] Некоторые варианты осуществления включают в себя способы мониторинга пациента, предусматривающие стадии контактирования образца плазмы от пациента по меньшей мере с одним реагентом, который селективно связывается с BDNF. В некоторых вариантах осуществления эти способы дополнительно включают в себя стадии: введения по меньшей мере одной терапевтически эффективной дозы соединения этому пациенту; и тестирования плазмы от этого пациента после этой стадии введения контактированием сыворотки, собранной от этого пациента, с реагентом, который селективно связывается с BDNF. Дополнительные другие варианты осуществления могут включать в себя стадию корректировки дозы этого соединения для изменения уровня BDNF, который присутствует в плазме пациента. В некоторых из этих вариантов осуществления, где реагент, который связывается с BDNF, является антителом, которое специфически или по меньшей мере предпочтительно связывается с BDNF. В некоторых вариантах осуществления соединение, которое изменяет уровень BDNF, является акампросатом или его фармацевтически приемлемой солью.
[0023] Некоторые варианты осуществления включают в себя способы для диагностики аутистических расстройств, предусматривающие стадию измерения уровней секретируемого белка-предшественника бета-амилоида (sAPP) в периферических жидкостях тела, в том числе крови. Повышенные уровни sAPP, измеренные у молодых субъектов, являются показателями аутистических нарушений, величины в диапазоне, большем, чем 19 нг/мл, являются диагностическими в отношении увеличения в бихевиоральных симптомах, таких как симптомы, используемые в шкале (CGI-I) (Clinical Global Impression Improvement).
[0024] Некоторые варианты включают в себя способы лечения пациентов, имеющих диагноз аутистического нарушения, предусматривающие стадии измерения уровней общего sAPP и/или sAPPα до, во время и, если необходимо, после лечения терапевтической дозой или схемой дозирования соединения, которое, как предполагается, уменьшает симптомы нарушения спектра аутизма. В некоторых вариантах осуществления этим соединением является акампросат, и терапевтическая доза, используемая для лечения молодых субъектов, является пропорциональной массе тела этого пациента и может находиться в диапазоне 600-1998 мг/день. Во время лечения дозы могут начинаться с более низких уровней и постепенно увеличиваются до указанных диапазонов. Уровни sAPP и/или sAPPα, измеренные в периферической крови пациента, запускаются и увеличиваются или уменьшаются в уровне терапевтического соединения, вводимого этому пациенту.
[0025] Некоторые варианты осуществления включают в себя способ прогнозирования опций лечения для пациента с идиопатической или FXS-связанным ASD, где эти способы включают в себя стадии измерения уровней в плазме BDNF, sAPP и sAPPα у конкретных пациентов и лечения пациента, который имеет более низкие, чем нормальные BDNF и более высокие, чем нормальные уровни sAPP и/или sAPPα, соединениями, такими как акампросат, которые повышают уровни BDNF и понижают уровни sAРР у некоторых пациентов, диагностированных, как имеющие ASD.
[0026] Некоторые варианты включают в себя анализ фракционного изменения от базовой линии до конечной точки, средние общие уровни sAPP уменьшались от 34,7 (нг/мл) при базовой линии до 19,3 при конечной точке (p=0,02) и средние уровни sAPPα уменьшались от 7,8 (нг/мл) при базовой линии до 4,2 при конечной точке (p=0,03).
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ФИГУР
[0027] ФИГ. 1. График, иллюстрирующий соотношение между фракционным изменением в уровнях sAPPα-CP, измеренных в крови пациентов, диагностированных как имеющие ASD, и лечившихся в течение 10 недель акампросатом.
[0028] ФИГ. 2. График, иллюстрирующий соотошение между фракционным изменением в уровнях sAPPα(общий)-CP, измеренных в крови пациентов, диагностированных как имеющие ASD, и лечившихся в течение 10 недель акампросатом.
ОПИСАНИЕ
[0029] Для целей способствования пониманию принципов этой новой технологии, теперь будет сделана ссылка на предпочтительные варианты этой новой технологии, и будет использоваться специфический язык для их описания. Однако будет понятно, что тем самым не предполагается ограничение объема этой новой технологии, такое как изменения, модификации, и дополнительные применения принципов обсуждаемой новой технологии, как это было бы нормальным для специалиста с квалификацией в области, к которой относится эта новая технология, находятся в объеме этого раскрытия и этой формулы изобретения.
[0030] Акампросат был одобрен FDA для лечения алкогольной зависимости у взрослых. Акампросат является новой молекулой, потенциально действующей на нейротрансмиссию как глутамата, так и гамма-аминомасляной кислоты (GABA). Акампросат гипотетически действует в качестве антагониста при NMDA и рецепторах глутамата метаботропного типа 5 (mGluR5) и в качестве агониста при рецепторах GABA типа A (GABA(A)). Предполагается, что избыточная глутаматергическая и недостаточная GABA(A)-нейротрансмиссия участвовали в патофизиологии аутистического расстройства. Эти потенциальные фармакодинамические механизмы акампросата хорошо совпадают с патофизиологией аутизма. Дополнительная информация об этом соединении может быть найдена в Заявке на Патент Соединенных Штатов с регистрационным номером 13/201014, поданной 11 августа 2011 г., эта заявка на патент включена здесь посредством ссылки в ее полном виде.
[0031] Акампросат является уникальным лекарственным средством, которое, по-видимому, прямо или опосредованно действует на ряд нейрорецепторов. Оценивание действия акампросата на биомаркерах потенциальной значимости в FXS обещает демонстрировать связь акампросата с патофизиологией этого расстройства, несмотря на неполное понимание проксимальных фармакодинамических механизмов такого действия. Кроме того, улучшение навыков общения, отмеченное в этом сообщении, согласуется с открытиями, описанными в первоначальном использовании акампросата у молодых пациентов с идиопатическим ASD (Erickson, Early et al. 2011). При условии перекрывания между FXS и ASD, в будущем будет важным оценивание эффективности нацеливания акампросата на ухудшение навыков общения, ассоциированное с идиопатическим ASD.
[0032] В данном контексте, пока точно не утверждается иное или ясно не имеется в виду другое, термин (“около”) относится к диапазону величин плюс или минус 10%, например, около 1,0 включает в себя величины от 0,9 до 1,1.
[0033] В данном контексте, пока точно не утверждается иное или ясно не имеется в виду другое, термины “терапевтически эффективная доза”, “терапевтически эффективные количества”, и т.п. относятся к части соединения, которая имеет эффективное положительное действие на здоровье и самочувствие человека или другого животного. Терапевтические эффекты могут включать в себя улучшение в продолжительности, качестве жизни и т.п. Эти эффекты могут также включать в себя уменьшенную восприимчивость к развитию заболевания или ухудшению здоровья или самочувствия. Эти эффекты могут быть немедленно реализуемыми после единственной дозы и/или обработки или они могут быть кумулятивно реализованы после ряда доз и/или обработок.
[0034] Фармацевтически приемлемые соли включают в себя соли соединений этого изобретения, которые являются безопасными и эффективными для применения у млекопитающих и которые обладают желаемой терапевтической активностью. Фармацевтически приемлемые соли включают в себя соли кислотных или основных групп, присутствующих в соединениях этого изобретения. Фармацевтически приемлемые кислотно-аддитивные соли включают в себя, но не ограничиваются ими, соли гидрохлорид, гидробромид, гидроиодид, нитрат, сульфат, бисульфат, фосфат, кислый фосфат, изоникотинат, ацетат, лактат, салицилат, цитрат, тартрат, пантотенат, битартрат, аскорбат, сукцинат, малеат, гентизинат, фумарат, глюконат, глюкуронат, сахарат, формиат, бензоат, глутамат, метансульфонат, этансульфонат, бензолсульфонат, п-толуолсульфонат и памоат (т.е. 1,1'-метилен-бис-(2-гидрокси-3-нафтоат)). Некоторые соединения этого изобретения могут образовывать фармацевтически приемлемые соли с различными аминокислотами. Подходящие основные соли этого изобретения включают в себя, но не ограничиваются ими, соли алюминия, кальция, лития, магния, калия, натрия, цинка и диэтаноламина. В отношении информации по некоторым фармацевтически приемлемым солям, которые могут быть использованы для практического применения этого изобретения, см. обзоры, такие как Berge, et al., 66 J. PHARM. SCI. 1-19 (1977), Haynes, et al., Pharma. Sci., Vol. 94, No. 10, Oct. 2005, pgs. 2111-2120 и т.п.
[0035] Синдром хрупкой Х-хромосомы (FXS) является наиболее обычной наследуемой формы эволюционной нетрудоспособности (инвалидности). Генетическая мутация, ответственная за FXS, является нестабильной цистеин-гуанин-гуанин(CGG) тринуклеотидным повторяемым расширением (большим, чем 200 повторов) в гене 1 Х-хрупкой умственной отсталости (FMR1). FXS наследуется через триплетное расширение из носителя (55-200 повторов CGG) родителя, наиболее обычно матери. В качестве X-связанного синдрома, FXS является более обычным у мужчин, и симптомы, ассоциированные с этим нарушением, более заметны у мужчин. FXS является также обычной одногенной причиной нарушений спектра аутизма (ASD). Определено, что 2 из 3 мужчин с FXS имеют одновременно встречающийся диагноз ASD. Существует очень мало терапий, доступных для этого разрушающего состояния, и, таким образом, существует потребность в дополнительных терапиях для лечения этого заболевания. Аспекты этого изобретения стремятся к обеспечению таких терапий и инструментов для мониторинга и применения их.
[0036] Триплетное повторяющееся расширение, ассоциированное с FXS, приводит к транскрипционному сайленсингу на гене FMR1, приводя к отсутствию белка задержки умственного развития (fragile X mental retardation protein) (FMRP). FMRP является мРНК-связывающим белком, важным для созревания дендритов и синаптической пластичности. Было показано, что в головном мозге мыши FMRP связывается с сотнями мРНК-транскриптов, важных для пре- и пост-синаптической функции.
[0037] В некоторых исследованиях на животных, отсутствие FMRP было ассоциировано с нарушенной нейротрансмиссией, заметной по избыточной передаче сигнала глутамат-эргической и недостаточной передаче сигнала гамма-аминомасляной кислоты (GABA). Конкретно, избыточная активность рецептора 5 метаботропного глутамата (mGluR5) является наилучшим охарактеризованным элементом нарушенной нейротрансмиссии в FXS. На модели мыши с нокаутом fmr1, избыток долгосрочной депрессии гиппокампа и мозжечка (LTD), избыток интернализации рецептора AMPA, аномальная морфология дендритов и уменьшенный порог судорожной готовности, все являются согласованными с избыточной группой 1, конкретно mGLuR5, активацией метаботропного рецептора глутамата. Причастности обработки избыточной активации mGluR в FXS тщательно тестировали на моделях животных FXS и первоначально исследовали в исследовании на человеке. На мышиной модели было показано, что понижающая регуляция mGluR5 обработкой MPEP (2-метил-6-(фенилэтинил)пиридином) и другими антагонистами mGluR5 обращает фенотипические характеристики, в том числе эпилептические припадки, изменяет пре-пульсовое ингибирование (PPI), и открывает поле гиперактивности. Дополнительно, понижающая регуляция mGluR5, выполняемая скрещиванием мыши с нокаутом FMR1 с гетерозиготным нокаутом mGluR5, приводила к обращению нескольких характеристик нокаута FMRl1, в том числе изменениям дендритных синаптических структур и избытку синтеза белка.
[0038] Два исследования на людях сообщали об использовании селективных антагонистов mGluR5 в FXS. В однодозовом пилотном исследовании, включающем в себя 12 взрослых с FXS (6 мужчин, 6 женщин; средний возраст = 23,9 лет), антагонист mGluR5 фенобам обнаруживал вариабельные фармакокинетики и хорошую толерантность, отмечаемую 3 субъектами (25%), испытывающими умеренное успокоение. Клинически, 9 субъектов (75%) испытывали, как сообщалось, клиническую эффективность от однодозового фенобама, включающую в себя уменьшения в гиперактивности и тревожности.
[0039] Интересно, что использование селективного антагониста mGluR5 AFQ056 не ассоциировалось со значимым эффектом группы обработки в двойном слепом, плацебо-контролируемом, перекрестном исследовании с двумя периодами у 30 мужчин с FXS в возрасте 18-35 лет. В подгруппе из 7 субъектов, отмеченной полным метилированием гена FMR1, значимая реакция на AFQ056 в сравнении с плацебо была отмечена на нескольких измерениях, включающих в себя субшкалы Aberrant Behavior Checklist (ABC) Stereotypy, субшкалы Hyperactivity и Inappropriate Speech и общий балл ABC, шкалу Clinical Global Impressions Improvement (CGI-I), шкалу Visual Analogue и Repetitive Behavior Scale-Revised. Авторы выдвинули гипотезу, что AFQ056 может быть перспективным для лечения приносящих вред поведений в подгруппе лиц с полным метилированием гена FMR1. В настоящее время AFQ056 является предметом крупномасштабных исследований Фазы III в FXS.
[0040] Передача сигнала рецептора глутамата ионотропной N-метил-D-аспарагиновой кислоты (NMDA) была причастна в FXS. Сообщалась повышающая регуляция рецепторов NMDA при 2 неделях жизни с устранением различия посредством 6-7 недель возраста у мышей с нокаутом в fmr1. Применение неконкурентного антагониста NMDA мемантина ассоциировалось с корректировкой развития дендритных шишек позвоночника и образованием синапса в культивируемых гранулярных клетках мозжечка у мышей с нокаутом FMR1. Сообщался умеренный эффект применения мемантина у 6 субъектов (средний возраст = 18,3±3,8 лет; диапазон 13-22 года) с FXS и коморбидным ASD. В этом исследовании четыре субъекта (67%) обнаруживали клиническую реакцию, как определено баллом CGI-I "очень сильно улучшенная" или "сильно улучшенная". Два субъекта развивали ограничивающую лечение раздражительность во время лечения мемантином.
[0041] Недостаточность нейротрансмиссии как GABA типа A (GABA(A)), так и GABA типа B (GABA(B)) была замечена в исследованиях на FXS-животных. Было показано, что FMRP транскрипционно регулирует экспрессию РНК субъединицы рецептора с уменьшениями в мРНК рецептора GABA(A), замеченными у мышей FXS KO, лишенных FMRP. Было показано, что экспрессия рецептора GABA(A) является значимо пониженной в ряде районов головного мозга у мышей fmr1 KO. В моделях животных FXS, GABA(A) агонизм был значимо перспективным в качестве мишени фармакотерапии. Агонист GABA(A) альфаксалон был ассоциирован с уменьшениями в тревожности и избавлении от аудиогенных припадков у мышей fmr1KO. Также, у мышей FXS KO агонист GABA(A) габоксадол восстанавливал дефициты возбудимости нейронов в миндалине, уменьшал гиперактивность и уменьшал дефициты PPI. Улучшения в приобретении и сохранении памяти были замечены у мышей FXS KO, получающих таурин, агонист GABA(A). Авторам ничего неизвестно о каких-либо исследованиях селективных агонистов GABA(A), которые были опубликованы, с участием субъектов с FXS.
[0042] Применение селективного агониста GABA(B) STX209 (арбаклофен, R-баклофен; отдельный энантиомер баклофена) исследовали как на людях с FXS, так и на мышах с нокаутом FMR1. У мышей с нокаутом STX209 ассоциировался с коррекцией синтеза аберрантного белка и аномалиями дендритных шариков (синтетических структур, образующих аксоно-дендритные связи). STX209 был субъектом наибольшего опубликованного двойного слепого, плацебо-контролируемого исследования в FXS. В одном перекрестном исследовании добавление STX209 для стабильного дозирования сопутствующих психотропных лекарственных средств у 63 субъектов в возрасте 6-40 лет с FXS, применение STX209 не ассоциировалось с улучшением на первичном результирующем показателе, на субшкале Раздражительности ABS (ABC-I). Групповые эффекты также не отмечались на глобальных (общих) измерениях, включающих в себя шкалы CGI-I и строгости CGI (CGI-S), другие традиционные субшкалы ABC (Social Withdrawal, Stereotypy, Hyperactivity, Inappropriate Speech), или шкалы Visual Analog (VAS). Суммарно, STX209 был хорошо переносимым, только с 8%-ным числом субъектов, сообщающих успокоение. В последующем анализе, значимое групповое улучшение с использованием STX209 было зарегистрировано на шкале Social Avoidance (ABC-SA), недавно разработанной шкале FBS с 4-пунктами, специально разработанной для потенциального использования у субъектов с FXS. Также в последующем анализе, популяция 27 субъектов с FXS и оценкой базовой линии ≥8 на субшкале ABC Social Withdrawal (ABC-SW) показывает значимое STX209-ассоциированное улучшение на шкалах ABC-SW и Vineland Adaptive Behavior (VABS) показателя Социализации адаптивной функции. Это исследование сделало вывод, что данное лекарственное средство является перспективным для нацеливания на социальные дефициты у лиц с FXS. Исследование широкомасштабной Фазы III STX209 в FXS продолжается.
[0043] Акампросат, (ацетилгомотаурин кальция) является лекарственным средством, одобренным Департаментом по контролю пищевых продуктов, медикаментов и лекарственных средств (FDA), для поддержания абстиненции от алкоголя. Он предписывается для использования у взрослых людей с алкогольной зависимостью. Одобренное FDA дозирование у взрослых людей равно 666 мг три раза в день (две пилюли три раза в день). У людей с алкогольной зависимостью: более низкие уровни нескольких гормонов: лептина, бета-эндорфина, кортизола.
[0044] Научная литература включает в себя отчеты, что эта молекула может быть потенциальным антагонистом рецепторов mGluR. Что она может действовать в качестве агониста при рецепторах GABA(A) в моделях животных Антиоксидантное действие в хронически принимающих алкоголь крысах. У крыс это лекарственное средство повышает внеклеточные уровни допамина в ядерных скоплениях (в зависимости от активации рецептора глицина). Потенциальные эффекты акампросата включают в себя спермидин-чувствительные рецепторы NMDA, повышенную активацию при низких концентрациях глутамата и ингибирование при высоких концентрациях глутамата.
[0045] Некоторые предлагают гипотезу, что акампросат блокирует нейротоксические эффекты агониста mGluR trans-ACPD. Согласно сообщениям, как 3-((2-метил-4-тиазолил)этинил)пиридин (MTEP), так и акампросат, оба уменьшали поглощение алкоголя в мышиной модели распитие-в-темноте. Сообщалось, что MTEP и акампросат, оба уменьшают ассоциированные с тревожностью эффекты выведения алкоголя у животных. Также сообщались сходные эффекты 3-((2-метил-4-тиазолил)этинил)пиридина (MTEP) с увеличенными седативными эфектами выведения алкоголя у мышей. Сообщалось также, что акампросат и MPEP блокировались в mGluR5 у мышей с нокаутом.
[0046] Акампросат, одобренное FDA лекарственное средство, используемое для поддержания абстиненции (воздержания от применения алкоголя) у взрослых субъектов, является биоактивным агентом с потенциальными плейотропными эффектами, задерживающими по меньшей мере нейротрансмиссию глутамата и GABA. В исследованиях на животных было продемонстрировано, что акампросат связывается и действует в качестве антагониста при рецепторе глутамата NMDA. Потенциальный антагонистический эффект на mGluR5 акампроcата был продемонстрирован в обеих моделях алкоголизма и депрессии. Кроме того, акампросат проявляет агонизм в отношении GABA(A) в исследованиях на животных. Однако точный механизм действия акампросата у людей остается неизвестным, в частности, при наличии открытий в модели ооцитов Xenopus, показывающей, что нет прямого связывания между акампросатом и глутаматом или подтипами рецепторов GABA при клинически релевантных концентрациях.
[0047] Исследование с акампросатом и патофизиологией FXS сообщало первоначальное клиническое наблюдение (Erickson, Mullett et al. 2010). В этом исследовании, 3 взрослых мужчин (средний возраст = 20,9 лет), диагностированные, как имеющие FXS, лечили акампросатом (средняя доза = 1,2212 мг/день; средняя продолжительность = 21,3 недели). В этом исследовании, все 3 субъекта обнаруживали значимую положительную клиническую реакцию, как измерено посредством CGI-I, с улучшением, отмеченным сначала в социальном ухудшении и нарушениях коммуникации. Два субъекта испытывали не ограничивающее лечение желудочно-кишечное расстройство (рвоту и/или тошноту). Затем проводили первое системное проспективное исследование акампросата у юных субъектов с FXS.
[0048] Развитие биомаркеров крови в FXS-исследовании является потенциально многообещающим для предсказания реакции лечения, определения фармакодинамических механизмов лекарственного средства, включающих в себя потенциальную связь механизма лекарственного средства с лежащими в основе патофизиологическими признаками, и служит потенциально в качестве количественных результирующих измерений. Количество этих преимуществ является все время увеличивающимся при условии недавних сообщений клинического исследования FXS, отметившего положительную реакцию в подгруппах субъектов, и неотъемлемой субъективной природы полагаться на исходные сообщенные бихевиористические инвентаризации или подсчитанные лечащим врачом результирующие показатели в клиническом исследовании FXS. Такие маркеры после связывания с эффективными схемами лечения находят особенное использование в популяциях, которые, в противном случае, трудно подвергать мониторингу и оцениванию.
[0049] Полученный из головного мозга нейротрофический фактор (BDNF) является белком, который поддерживает выживание существующих нейронов и рост и дифференцировку новых нейронов и синапсов. В исследованиях на животных было показано, что BDNF регулирует экспрессию FMRP. Применение BDNF к гиппокампальным срезам от мышей с нокаутом FMR1 продемонстрировало избавление от долгосрочных дефектов потенцирования (LTP). Было показано, что экспрессия BDNF уменьшается у мышей с нокаутом FMR1 в сравнении с однопометными детенышами дикого типа. Периферические уровни BDNF не сообщались у людей с FXS и применение действия акампросата на уровни BDNF неизвестно.
[0050] Как сообщалось здесь, каждая зона улучшения, социального поведения или невнимательности/гиперактивности, была захвачена с использованием множественных независимых результирующих, таким образом усиливая каждый результат. Во время этого исследования, семейства часто сообщали об улучшении в навыках общения, результате, потенциально поддерживаемом улучшением, замеченным во время исследовательского использования пре- и пост-лечения VABS. Остается неясным, поражал ли акампросат множественные зоны ухудшения независимо, или если улучшение в одной зоне, например, невнимательности/гиперактивности, приводило к ассоциированному улучшению в других зонах, таких как социальное поведение и коммуникация (общение). Кроме ясно измеряемых улучшений в поведениях пациентов и недавно идентифицированного биомаркера для улучшения, механистические результаты этого исследования осложнялись позволением какому-либо пациенту в этом исследовании использовать психоактивные лекарственные средства. Таким образом, возможно, что у некоторых пациентов взаимодействия лекарственное средство - лекарственное средство между акампросатом и совместно вводимыми лекарственными средствами могут иметь задержанную реакцию их лечения и/или быть толерантными в путях, которые не являются легко очевидными при условии относительно малого количества пациентов, зарегистрированных в этом исследовании.
[0051] Что касается толерантности, было отмечено ограниченное желудочно-кишечное осложнение, несмотря на то, что субъекты время от времени получали покрытые энтеросолюбильной оболочкой таблетки акампросата. Эта низкая степень вредных желудочно-кишечных эффектов была удивительной, при условии, что вредные GI-эффекты являются наиболее обычными вредными эффектами, отмечаемыми с использованием акампросата в исследовании алкоголизма человека и в первом сообщении авторов данного изобретения по использованию акампросата в FXS. При условии новизны этого исследования, авторы не имели никаких анамнестических данных, на которые можно было опереться в дозировании, других, чем данные из литературы по алкоголизму, где это лекарственное средство вводили ниже возраста 16 лет (Niederhofer and Staffen 2003). Оказалось, что легкая раздражительность, отмеченная у 4 субъектов, казавшаяся зависимой от дозы при уменьшении дозы, в каждом случае приводила к быстрому исчезновению этого вредного эффекта. Возможно, что у молодых субъектов, при превышении порогового предоставления лекарственного средства, легкая раздражительность может иметь место у некоторых участников с FXS. В общем и целом, конечная средняя доза была приблизительно равна половине дозы, которая является одобренной FDA для применения лечения алкогольной зависимости у взрослых субъектов.
[0052] Показатели BDNF показывали постоянные увеличения с использованием акампростата. Это общее изменение в показателе BDNF является потенциально важным в FXS при условии сообщений у мышей с нокаутом FMR1 избавления от дефицитов LTP с аппликацией BDNF в срезах гиппокампа головного мозга. Этот показатель BDNF может также потенциально обеспечивать некоторое дополнительное объяснение для недавних антидепрессантных качеств акампросата, отмеченных в исследовании на животных (Louhivuori, Vicario et al. 2011) при условии клеточных и бихевиаристических моделей, связывающих периферический BDNF с продуцированием антидепрессант-подобных эффектов (Uutela, Lindholm et al. 2012). BDNF может быть перспективным в качестве как возможного предсказателя, так и показателя реакции лечения.
[0053] Отсутствие корреляции между изменением в BDNF и реакцией лечения, отмеченное в последующем анализе, может быть обусловлено малым размером образцов и тем фактом, что только один не отвечающий на терапию пациент имел доступные пре- и пост-данные BDNF. Использование сопутствующих лекарственных средств делает интерпретацию BDNF более трудной. Известно, что сопутствующие селективные ингибиторы повторного захвата серотонина (SSRI), используемые в этом исследовании, по-видимому, увеличивали BDNF (Balu, Hoshaw et al. 2008). Дозирование использования сопутствующего лекарственного средства сохраняли стабильно на протяжении этого исследования для попытки и уменьшения вариабельности сопутствующих лекарственных средств.
Действие Акампросата на уровни BDNF у пациентов, диагностированных, как имеющих FXS
Участники
[0054] Institutional Review Board (IRB) при академическом медицинском центре одобрило это исследование. Тринадцать амбулаторных пациентов (мужского и женского пола) в возрасте 5-17 лет с массой тела ≥15 кг включали для этого исследования. Письменное информированное согласие получали от каждого легального опекуна участника (родителя для всех детей в этом отчете), и субъекты обеспечивали согласие, когда были способны. Диагноз FXS подтверждали результатами Блоттинга по Саузерну и ПЦР, согласующимися с большей, чем 200 CGG повторяемой экспансией в гене FMR1 по меньшей мере с частичным метилированием гена. Субъекты должны были быть свободными от других значимых медицинских условий. Сопутствующее использование психотропных лекарственных средств, которые, как считалось, не действовали на нейротрансмиссию глутамата, позволялось, пока эти пациенты подвергались стабильному дозированию по меньшей мере в течение 4 недель перед базовой линией (фоном). Субъекты должны были иметь психический (ментальный) возраст, больший, чем 18 месяцев, как определено Stanford-Binet 5th Edition. Дополнительные критерии включения включали в себя оценку CGI-S (Guy 1976) по меньшей мере 4 ("Умеренно больные"). Субъекты с диагнозом (Diagnostic and Statistical Manual of Mental Disorders, 4th Edition, Text Revision (DSM-IV-TR)) психотического нарушения, биполярного нарушения или нарушения использования вещества исключались из этого исследования. Дополнительно, исключались субъекты с положительным тестом мочи на беременность, клиренсом креатинина <30, нарушением с активными судорогами или другим значимым медицинским состоянием.
Дизайн исследования
[0055] Дизайн 10-недельного, проспективного, открытого исследования выбирали для сбора пилотных данных для потенциальных будущих крупномасштабных, двойных слепых, контролируемых плацебо исследований в этой популяции.
Процедура
[0056] Всех субъектов подвергали визитам скрининга и визиту базовой линии (фона) с последующими визитами наблюдения каждые 2 недели во время 10-недельного периода открытого исследования. В конце недель 1, 3 и 5 исследователи вызывали родителя для оценивания переносимости лекарственного средства и для выполнения корректировок доз, как указано. Все субъекты получали 333 мг/день акампросата во время первой недели этого исследования. Затем исследователи увеличивали дозирование до максимума 1998 мг/день (масса >50 кг) или 1332 мг/день (масса <50 мг) на протяжении первых шести недель этого исследования, если оптимальная клиническая реакция (CGI-I равно 1 "очень сильно улучшенное") не выполнялась и непереносимые вредные эффекты не появлялись. Эта фаза поддержания дозы длится 4 недели при оптимальном дозировании.
Оценивания
[0057] Оценивание CGI-S проводили при отборе (скрининге) и при базовой линии в виде части критериев приемлемости, описанной выше. В этом исследовании, эксперт оценивает CGI-S в отношении тяжести симптомов, обычно замеченных в FXS, включающих в себя, но не ограничивающихся ими, невнимательность/гиперактивность, социальное ухудшение, ухудшение коммуникабельности, повторяющееся поведение, раздражительность и тревожность. CGI-S оценивают по шкале от 1 до 7 (1=нормальные, совсем не больные; 2=погранично больные; 3=слабо больные; 4=умеренно больные; 5=заметно больные; 6=тяжело больные; 7=среди наиболее экстремально больных пациентов с FXS). Autism Diagnostic Observation Schedule (ADOS) (Lord, Rutter et al. 1989) вводили при базовой линии (фоне) для характеристики потенциального сопутствующего диагноза ASD.
[0058] Первичным результирующим показателем была CGI-I. CGI-I является шкалой, построенной для оценивания глобального изменения от базовой линии. Эти оценки CGI-I находятся в диапазоне от 1 до 7 (1=очень сильно улучшены;; 2=сильно улучшены; 3=минимально улучшены; 4=без изменения; 5=минимально худшие, 6=сильно худшие; 7=очень сильно худшие). Реакцию лечения определяли посредством оценки CGI-I "очень сильно улучшены" или 2 "сильно улучшены". В этом исследовании, CGI-I использовали в качестве основного глобального первичного результирующего показателя, при условии неопределенности того, до каких конкретных симптомов/поведений, ассоциированных с FXS, можно ожидать улучшения или ухудшения с использованием акампросата. CGI-I вводили при всех визитах после фона (базовой линии).
[0059] Вторичные результирующие показатели включали в себя все субшкалы ABC (Раздражительность, Уход в себя, Стереотипия, Гиперактивность и Неадекватная Речь) (Irritability, Social Withdrawal, Stereotypy, Hyperactivity, and Inappropriate Speech). Эта ABC является определенным информантом (первичным ухаживающим за пациентом лицом) показателем с подтвержденной надежностью и валидностью в отношении структуры фактора, распределения оценок и чувствительности к изменению у лиц с развивающейся недееспособностью (Aman, Singh et al. 1985). Дополнительно, эта ABC показала хорошую надежность и воспроизводимость в FXS-специфическом клиническом исследовании. Дополнительные вторичные результирующие показатели включали в себя шкалу Социальной Отзывчивости (способности к реакции) Social Responsiveness Scale (SRS) (Constantino, Davis et al. 2003), Компульсионную субшкалу детской шкалы компульсионной навязчивости Yale-Brown, модифицированной для Первазивных Развивающихся Нарушений (PDDs) (CY-BOCS-PDD) (Scahill, McDougle et al. 2006), CGI-S, и ADHD Rating Scale 4th Edition (ADHD-RS) (Zhang, Faries et al. 2005). Эти SRS являются 65-позиционной, завершенной родителем шкалой, которая оценивает несколько аспектов социального поведения. Эта SRS дает общую оценку, которая пропорциональна уровню ухудшения в эквивалентном социальном поведении. CY-BOCS-PDD использует 5 позиций компульсионной строгости (жесткости) из CY-BOCS с использованием слегка модифицированных якорных точек, которые больше подходят для лиц с ASD. Эта ADHD-RS является стандартной оцениваемой врачом шкалой, широко используемой в ADHD-исследованиях лекарственных средств. Все вторичные результирующие показатели вводили при всех визитах исследования.
th
[0060] Дополнительные исследовательские результирующие показатели, вводимые при базовой линии и при неделе 10, включали в себя шкалы Vineland Adaptive Behavior Scales (VABS) (Sparrow and Cicchetti 1985) и Clinical Evaluation of Language Fundamentals, 4Edition (CELF) (Muma 1984). Шкалу VABS использовали для детектирования потенциального изменения в приспособительном (адаптационном) поведении с обработкой. Эти PPVT и CELF включали для захвата потенциального изменения в коммуникации/языке.
[0061] Оценивание и мониторинг при отборе, когда всех субъектов подвергают интервью на медицинскую историю, физическое исследование и полное психиатрическое интервью. Физическое исследование также завершают при конечной точке. Жизненные признаки, включающие в себя высоту и массу, получали при каждом визите исследования. При скрининге, генетическое тестирование на FXS получали, если регистрация молекулярного тестирования с использованием Блоттинга по Саузерну и ПЦР была недоступной. При скрининге, при неделе 6 и конечной точке, получали лабораторные тесты крови и мочи, включающие в себя CBC (полный клинический анализ крови) с дифференциалом и тромбоцитами, панель электролитов, ассоциированные с печенью ферменты и тест мочи на беременность (у женщин). Также получали электрокардиограмму при скрининге и в конечной точке.
Оценивание биомаркеров
[0062] Образцы крови на BDNF брали при скрининге и при Неделе 10 этого исследования. Анализ BDNF выполняли в виде слепого анализа в отношении приписывания пациента (пре- или пост-лечения). Приблизительно 4 мл крови собирали в содержащие ЭДТА пробирки. В пределах 30 минут сбора эту кровь центрифугировали при 1000 г при 2-8°С в течение 15 минут. Плазму собирали и выполняли дополнительное центрифугирование собранной плазмы при 1000 г при 2-8°С в течение 10 минут для полного удаления тромбоцитов из этих образцов. Все образцы плазмы хранили при -80°C. Анализы BDNF выполняли в одно и то же время со всеми образцами в трех повторностях. Для определения BDNF плазмы, чувствительный способ на основе ELISA использовали с применением набора ELISA для BDNF человека из R&D systems (Minneapolis, MN; USA), который является валидным для детектирования BDNF, присутствующего в плазме человека (Grassi-Oliveira et al., 2008). Количество (пг/мл) BDNF, присутствующее в образцах плазмы, определяли из количества pg, полученного в стандартной кривой с использованием известного количества чистого BDNF человека, которое использовалось одновременно с образцами субъекта.
Анализ данных
[0063] Все данные записывали в IBM SPSS Statistics Professional для статистического анализа. Потенциальные различия в средних величинах пре- или пост-лечении всех используемых полученных показателей рассчитывали с использованием t-критериев для парных выборок. В случаях, когда данные не имели допущения нормальности, использовали знаковые критерии рангов Вилкоксана для оценивания потенциального изменения в средних величинах пре- и пост-лечения. Размеры эффекта рассчитывали посредством взятия среднего изменения от базовой линии до конечной точки, деленного на стандартное отклонение при базовой линии.
[0064] Из 13 субъектов, подвергнутых скринингу, 12 (92%) удовлетворяли критериям приемлемости и были зачислены. Рекрутируемый образец состоял из 10 пациентов мужского пола и 2 пациентов женского пола (диапазон возраста, 6-17 лет; среднее 11,9 лет). Десять субъектов (83%) удовлетворяли критериям ADOS для дополнительного диагноза аутистического нарушения и два субъекта (17%)) удовлетворяли критериям для первазивного развивающегося нарушения, не указанного по-другому (PDD-NOS). Полномасштабный коэффициент развития находится в диапазоне 36-61, со средним баллом 45. Субъекты получали среднюю конечную дозу акампросата 1054 мг/день (диапазон, 666-1998 мг/день). Десять субъектов использовали сопутствующие психотропные лекарственные средства), в том числе наиболее обычные атипические антипсихотики (n=7; Таблица 1) и стимуляторы (n=4).
Таблица 1Применение Сопутствующих Психотропных Лекарственных Средств у Участников в Исследовании BDNF
Лекарственное средство
Количество субъектов
Рисперидон
4
Арипипразол
2
Флуоксетин
2
Метилфенидат ER
2
Миртазапин
2
Сертралин
2
Клонидин
2
Декседрин
1
Гуанфацин
1
Лисдексамфетамин
1
Лоразепам
1
Окскарбазепин
1
[0065] Все субъекты завершали полное исследование. Девять (75%) из двенадцати субъектов рассматривали в качестве респондеров терапии на основе CGI-I-оценки 1 "очень сильно улучшенные" (n=5) или 2 "сильно улучшенные" (n=4). Среднее CGI-I в конечной точке было 1,9.
[0066] Среди дополнительных результирующих показателей, значимые улучшения были отмечены в социальном поведении и невнимательности/гиперактивности. Что касается социального поведения, средние оценки на субшкале ABC-SW снижались на 53% от 8,8 при базовой линии до 4,1 при конечной точке (p=0,04; размер эффекта = 0,81). Средние оценки на ABC-SA снижались на 51% от 3,3 при базовой линии до 1,6 при конечной точке (p=0,01; размер эффекта = 0,64).
[0067] Кроме ABC-показателей, состоящих из изменения в социальном поведении, изменения SRS, замеченные с лечением, совпадали с уменьшениями в социальном ухудшении. Средние общие необработанные оценки SRS уменьшались на 16% от 91,3 при базовой линии до 76,4 при конечной точке (p=0,005; размер эффекта 0,54). Среди субшкал терапии SRS, отмечено улучшение в социальном познании (19% уменьшение; p=0,01), Социальной Коммуникации (уменьшение 14%; p=0,01) и Социальной Мотивации (28% уменьшение; p=0,003). Улучшение не было отмечено на субшкалах Социального Осознания SRS и Аутистического Маннеризма.
[0068] Улучшение в гиперактивности отмечалось на субшкале ABC Гиперактивности (ABC-H), где средние оценки уменьшались на 35% при базовой линии до 11,0 при конечной точке (p=0,01; размер эффекта = 0,64). В соответствии с показателем субшкалы ABC-H, средние оценки на ADHD-RS уменьшались на 29% от 23,6 при базовой линии до 16,7 при конечной точке (p=<0,0001; размер эффекта = 0,65).
[0069] Глобальная тяжесть заболевания улучшалась, что проявлялось посредством среднего изменения CGI-S от 4,25 (между умеренной и тяжелой оценкой заболевания) до 3,33 (между слабой и умеренной оценкой заболевания) при конечной точке (p=<0,0001; размер эффекта = 2,0). Другие субшкалы ABC и CY-BOCS-PDD не изменялись значимо во время терапии (Таблица 2).
[0070] Среди исследовательских пилотных показателей, оценки PPVT не изменялись значимо с терапией. CELF оказался трудным для введения, только с 3 субъектами, получающими валидные пре- и пост-оценки терапии. Среди доменов VABS, средние стандартные оценки Домена Коммуникации улучшались на 5% от 63,4 при базовой линии до 66,6 при конечной точке (p=0,03; размер эффекта = 0,3). В субдоменах VABS, средние оценки Экспрессивной Коммуникации улучшались на 13% от 69,7 при базовой линии до 78,9 при конечной точке (p=0,003; размер эффекта = 0,4). Другие изменения с терапией не были отмечены на VABS.
Таблица 2Результирующие показатели у субъекта, лечившегося акампросатом
<b>Показатель</b>
<b>Базовая линия (среднее ± SD)</b>
<b>Конечная точка (среднее ± SD)</b>
<b>Величина Р</b>
<b>Размер эффекта</b><sup><b>а</b></sup>
<b>Величина Т</b>
<b>Степень свободы</b>
Aberrant Behavior Checklist - Irritability (ABC-I)
9,9±7,8
7,0±8,9
0,11
-
1,76
11
Aberrant Behavior Checklist - Social Withdrawal (ABC-SW)
8,8±5,8
4,1±6,5
0,04
0,81
2,35
11
Aberrant Behavior Checklist - Stereotypy (ABC-S)
6,8±6,8
6,0±6,3
0,09
-
1,89
11
Aberrant Behavior Checklist - Hyperactivity (ABC-H)
16,8±9,1
11,0±8,6
0,009
0,64
3,19
11
Aberrant Behavior Checklist - Inappropriate Speech (ABC-IS)
5,2±3,5
4,8±3,4
0,61
-
0,53
11
Aberrant Behavior Checklist - Social Avoidance (ABC-SA)
3,3±2,6
1,6±2,7
0,01
0,64
2,93
11
Clinical Global Impressions - Severity (CGI-S)
4,25±0,45
3,33±0,5
<0,0001
2,0
6,17
11
Children's Yale-Brown Obsessive Compulsive Scale Modified for PDD (CY-BOCS-PDD)
11,1±2,6
9,8±4,1
0,15
-
1,53
11
Social Responsiveness Scale total score (SRS)
91,3±27,4
76,4±26,8
0,005
0,54
3,52
11
ADHD Rating Scale 4th Edition (ADHD-RS)
23,6±10,6
16,7±8,0
<0,0001
0,65
5,14
11
Peabody Picture Vocabulary Test (PPVT)
85,2±32,0
83,3±32,0
0,53
-
0,65
10
Vineland Adaptive Behavior Scale (VABS) Communication Domain
63,4±10,1
66,6±11,2
0,03
0,32
-2,45
11
VABS Expressive Communication Subdomain
69,8±23,0
78,9±21,2
0,003
0,4
-3,72
11
Размер эффекта<sup>а</sup> вычислен только для корректированных величин p≤0,05; Вычислен как среднее изменение от базовой линии до конечной точки, деленное на SD при базовой линии.SD = Стандартное отклонение.
[0071] Десять субъектов (83%) участвовали в сборе плазмы BDNF в скрининге и при Неделе 10. Два субъекта не имели достаточной крови при Неделе 10, собранной для взятия образца биомаркера (приоритет был отдан сохранению лабораторных показателей). Все данные BDNF анализировали с использованием знаковых критериев рангов Вилкоксана. Все субъекты испытывали увеличение в плазме BDNF от скрининга до Недели 10. Среднее BDNF плазмы субъекта увеличивалось лечением от 790,4±1350,4 пг/мл до 1007,6±1493,2 пг/мл (p=0,01). Проводили post-hoc анализ потенциальной корреляции изменения BDNF и оценки CGI-I Недели 10. У 10 субъектов авторов изобретения с доступными данными BDNF, 9 из которых были респондентами (отвечающими на лечение), не было корреляции между изменением в уровне BDNF и реакцией лечения (P=0,2; знаковый критерий).
Показатели безопасности и вредные эффекты
[0072] Не отмечались значимые изменения в массе, пульсе или кровяном давлении. Не отмечались клинически значимые изменения на ЭКГ, в том числе не было изменения в QTc-интервале. Что касается лабораторных показателей, не отмечались клинически значимые или средние изменения в липидах, электролитах, тестах функции печени или гемограмме.
[0073] Акампросат в целом хорошо переносился без тяжелых или серьезных вредных эффектов, замеченных во время этого исследования. Девять субъектов (75%) испытывали слабое вредное проявление во время этого исследования. Наиболее обычные слабые вредные эффекты, сообщаемыми лицами, ухаживающими за пациентами, включали в себя раздражимость (n=4) и увеличенное рецидивирующееся поведение (n=2). Все случаи раздражительности кажутся зависимыми от дозы с раздражительностью, уменьшающейся в каждом случае, с дозой уменьшения 333 мг. Случаи слабой раздражительности не оставались при визите после Недели 10. Желудочно-кишечные вредные эффекты включали в себя слабую диарею (n=1) и слабую констипацию (n=1).
Таблица 3
Вредные эффекты лечения акампросатом, сообщенные лицом, ухаживающим за пациентом
Вредный результат
Слабый (n)
Раздражительность
4
Увеличенное повторяемое поведение
2
Констипация
1
Диарея
1
Увеличенное беспокойство
1
Бессонница
1
Кошмары
1
Ринит
1
Недержание мочи
1
Действие акампросата на уровни sAPP, sAPPα у пациентов, диагностированных как имеющих нарушение аутистического спектра
Беглый обзор
[0074] Белок-предшественник амилоида (APP) является белком, вероятно, важным для образования синапса. Амилоидогенный путь расщепления APP приводит к продуцированию амилоидного бета пептида (Αβ), основного компонента бляшек, ассоциированных с болезнью Альцгеймера. Этот не-амилоидогенный путь дает секретируемый APPα (sAPPα) нейротрофический продукт. У юных пациентов с аутизмом была замечена потенциальная увеличенная активность не-амилоидогенного пути, отмеченная увеличенными общими sAPP и sAPPα сыворотки. Действительно кажется, как будто sAPP изучался в качестве потенциального маркера и предсказателя реакции терапии в клинических исследованиях, включающих в себя нарушения аутистического спектра.
[0075] Акампросат является новой молекулой, потенциально действующей на нейротрансмиссию как глутамата, так и гамма-аминомасляной кислоты (GABA). APP является важным для образования синапса. Этот амилоидогенный путь расщепления APP приводит к продуцированию амилоидного бета-пептида (Αβ), основного компонента бляшек, ассоциированных с болезнью Альцгеймера. Этот неамилоидогенный путь приводит к секретируемому нейротрофическому продукту APPα (sAPPα). Общий APP плазмы (sAPP общий) и sAPPα плазмы были обнаружены во множественных исследованиях для повышения у молодых пациентов с ASD в сравнении с нейротипическими контрольными субъектами 2,3. Эти показатели, объединенные с данными избыточного вклада головного мозга в патофизиологию идиопатического ASD, привели к гипотезе, что избыточная активность sAPPα может играть роль в патогенезе ASD2. Конкретно в FXS известно, что белок задержки умственного развития (FMRP) (синдрома X-хрупкой хромосомы) регулирует трансляцию APP с результирующим повышением APP, отмеченным в FXS в отсутствии FMRP4. В общем и целом, имеются данные в исследовании идиопатического и FXS-ассоциированного ASD, гарантирующие исследование APP, конкретно sAPPα, модуляции в качестве потенциального фармакодинамического механизма важности.
[0076] В первоначальном клиническом опыте с лечением акампросатом юных субъектов, симптоматических в отношении аутистического нарушения, лечившихся акампросатом, пять из шести детей (средний возраст = 9,5 лет) были оценены в качестве респондеров лечения в отношении акампросата (средняя доза = 1110 мг/день) на протяжении 10-30 недель (средняя продолжительность= 20 недель) лечения. Белок-предшественник бета-амилоида (APP) является белком, вероятно, важным для образования синапса. Этот амилоидогенный путь расщепления APP приводит к продуцированию амилоидного бета-пептида (AB), основного компонента бляшек, ассоциированных с болезнью Альцгеймера. Не-амилоидогенный путь дает секретируемый нейротрофический продукт APPα (sAPPα). У детей с аутизмом, увеличенная потенциальная активность не-амилоидогенного пути была отмечена увеличенными общими sAPP и sAPPα. Действительно кажется, как будто sAPP изучался в качестве потенциального маркера и предсказателя реакции терапии в клинических исследованиях, включающих в себя нарушения аутистического спектра. Действительно кажется, как будто sAPP изучался в качестве потенциального маркера и предсказателя реакции терапии в клинических исследованиях, включающих в себя лиц с нарушением аутистического спектра. Как описано здесь, было обнаружено, что sAPP, обнаруженный в крови, является неожиданно точным биомаркером для нарушения спектра аутизма.
Анализы на sAPP и sAPPα
[0077] Тест-образец плазмы измеряют вскоре после сбора. При необходимости тест-образец плазмы замораживали, но не подвергали повторяемым циклам замораживания/оттаивания. Эти тест-образцы оттаивали непосредственно перед использованием при низкой температуре и смешивали их полностью. Если необходимо, эти образцы плазмы могут быть разведены соответствующим образом буфером EIA, и анализ может выполняться в двойных измерениях для тест-образцов и стандартов. Тест-образцы использовали в диапазоне нейтрального рН, и предпринимались стадии для избежания загрязнения органическими растворителями. Что касается стандарта для количественного определения sAPPα, готовили ряд стандартов sAPPα в буфере EIA с использованием серийных разведений, от 0,78 нг/мл - 50 нг/мл.
3
2
4
[0078] Планшеты ELISA предварительно покрывали аффинно очищенными мышиными IgG-моноклональными антителами против sAPPα человека (IBL). Сначала, лунки с реагентом для слепого опыта определяли и 100 мкл каждого из "EIA буфера” или 10 мМ NaHCО буфера (pH 9,5) помещали в каждую из этих лунок. Подобным образом, лунки распределяли для слепого опыта, тест-образцов и разведенных стандартов. Затем, 100 мкл каждых из тест-образцов слепого опыта, тест-образца и разведений стандартов добавляли в соответствующие лунки. Тест-образец включал в себя образец плазмы от каждого субъекта, которая может варьироваться от 5 до 25 мкл, доведенную до 100 мкл буфером EIA. Этот предварительно покрытый планшет инкубировали в течение ночи при 4°С после покрытия его прочно крышкой планшета. Этот планшет хранили на качалке с острожным встряхиванием. На следующий день, каждую лунку предварительно покрытого планшета сильно промывали промывочным буфером, содержащим 0,05% Твин 20 в фосфатном буфере. Это выполняли наполнением каждой лунки промывочным буфером, оставлением предварительно покрытого планшета лежать в течение 15-30 минут, и удалением промывочного буфера полностью из планшета посредством пощелкивания. Эту процедуру повторяли пять раз. После удаления оставшейся жидкости из всех лунок полностью пощелкиванием этого планшета на бумажное полотенце, добавляют 100 мкл раствора меченого антитела в лунки тест-образцов, разведенного стандарта и тест-образца слепого опыта. Использовали HRP-конъюгированный и меченый мышиный IgG против АРР человека (R101A4) из IBL. Каждый планшет инкубировали в течение 30 минут при 4°С после закрывания его крышкой планшета и затем промывали этот планшет 5 раз таким же образом, который описан выше. Для развития окраски, 100 мкл Хромогена (раствора ТМB) добавляли в эти лунки и планшет инкубировали в течение 30 минут при комнатной температуре в темноте. Когда жидкость начинала становиться синей (посредством добавлением Хромогена), в эти лунки добавляли 100 мкл Стоп-раствора (1 н HSО). Эту жидкость смешивали постукиванием по стороне планшета, и эта жидкость превращалась в желтую добавлением Стоп-раствора. Предпринимали осторожность для исключения любой грязи или капель воды на дне планшета и обеспечивали, чтобы не было пузырьков на поверхности этой жидкости. Использовали планшет-ридер и проводили измерение при 450 нм против реагента-слепого опыта. Это измерение обычно выполняли в пределах 30 минут после добавления Стоп-раствора. Хромоген хранили в надлежащей темноте и сохраняли от присутствия металлов.
ELISA для sAPP:
[0079] Для уровней sAPP, Тест-образцы плазмы должны быть измерены вскоре после сбора. Для хранения тест-образцов авторы изобретения хранили образцы плазмы в замороженном виде и не повторяли циклы размораживание/оттаивание. Непосредственно перед анализом авторы изобретения оттаивали эти тест-образцы при низкой температуре и смешивали их полностью. При необходимости, образцы плазмы должны были разводиться буфером EIA. Рекомендуется измерение в двух повторностях тест-образцов и стандарта. Авторы использовали тест-образцы в нейтральном диапазоне рН и избегали загрязнений органического растворителя, которые могут влиять на это измерение. Что касается стандарта для определения количественных уровней sAPP, авторы готовили ряд стандартов sAPP в буфере EIA серийными разведениями от 0,39 нг/мл до 25 нг/мл.
3
[0080] Планшет ELISA предварительно покрывали мышиным IgG против APP человека (R12A1) (IBL). Сначала, определяли лунки с реагентом для слепого опыта и 100 мкл каждого из "EIA буфера” или 10 мМ NaHCО буфера добавляли в эти лунки. Подобным образом, лунки распределяли для слепого опыта, тест-образца и разведенного стандарта. Затем, 100 мкл каждых из тест-образцов для слепого опыта, тест-образца и разведенного стандарта добавляли в соответствующие лунки. Тест-образец включал в себя образец плазмы от каждого субъекта, который может варьироваться от 5 до 25 мкл, доведенный до 100 мкл буфером EIA. Каждый предварительно покрытый планшет инкубировали в течение ночи при 4°С после закрывания его прочно крышкой планшета. Этот планшет хранили на качалке с острожным встряхиванием. На следующий день, каждую лунку предварительно покрытого планшета сильно промывали промывочным буфером, содержащим 0,05% Твин 20 в фосфатном буфере. Это выполняли наполнением каждой лунки промывочным буфером, оставляя предварительно покрытый планшет лежать в течение 15-30 минут, и удалением промывочного буфера полностью из планшета посредством пощелкивания. Эту процедуру повторяют пять раз. После удаления оставшейся жидкости из всех лунок полностью пощелкиванием этого планшета на бумажное полотенце, авторы добавляли 100 мкл раствора меченого антитела в лунки тест-образцов, разведенного стандарта и тест-образца слепого опыта. Использовали HRP-меченый мышиный IgG против АРР человека (R101A4) из IBL. Этот планшет инкубировали в течение 30 минут при 4°С после закрывания его крышкой планшета и затем промывали этот планшет 5 раз таким же образом, который описан выше. Для развития окраски, 100 мкл Хромогена (раствора ТМB) добавляли в эти лунки и планшет инкубировали в течение 30 минут при комнатной температуре в темноте.
2
4
[0081] Когда жидкость начинала становиться синей (посредством добавлением Хромогена), в эти лунки добавляли 100 мкл Стоп-раствора (1н HSО). Эту жидкость смешивали постукиванием по стороне планшета, и эта жидкость превращалась в желтую добавлением Стоп-раствора. Любую грязь или каплю воды на дне этого планшета удаляли и все планшеты проверяли для гарантии, что нет пузырьков на поверхности этой жидкости. Использовали планшет-ридер и проводили измерение при 450 нм против реагента-слепого опыта. Это измерение обычно выполняли в пределах 30 минут после добавления Стоп-раствора.
Краткое изложение клинических исследований
[0082] Проводили клинические исследования акампросата у юных пациентов. Одно исследование регистрировало 12 юных пациентов с идиопатическим ASD. Еще одно исследование регистрировало 12 юных пациентов с ассоциированным синдромом хрупкой Х-хромосомы (FXS)-ASD. Уровни пре- и после-акампросата общих sAPP и sAPPα были доступны от 15 участников (9 с FXS, 6 с идиопатическим ASD). Средний показатель умственного развития (коэффициент интеллектуальности) IQ был 56 (диапазон 36-96). Конечное дозирование акампросата было равно 1054 мг/день. В целом, общий sAPP уменьшался с использованием акампросата от среднего 32,6±38,3 нг/мл перед обработкой до 21,4±32,3 нг/мл после обработки (p=0,01). sAPPα уменьшался с использованием акампросата от среднего 8,4±7,9 нг/мл перед обработкой до 5,5±7,2 нг/мл после обработки (p=0,003). Уменьшение периферического общего sAPP и sAPPα, индуцированное обработкой, указывает на механизм для нацеливания на патофизиологию ASD.
[0083] Проводили одно исследование, которое было 12-недельным, простым слепым контролируемым плацебо исследованием акампросата у 12 юных пациентов с аутистическим нарушением. Первичным измеренным показателем была шкала the Clinical Global Impression Improvement (CGI-I) с несколькими дополнительными используемыми бихевиористическими результирующими показателями. В этом исследовании, секретируемый амилоидный белок-предшественник (sAPP) измеряли перед лечением и после лечения акампросатом в качестве анализа биомаркера крови. Результат: двенадцать субъектов (средний возраст = 10,4 лет) вступали в это исследование и 9 субъектов завершали двухнедельное введение плацебо и вступали в активную обработку (средняя конечная доза = 1073 мг/день). Шесть из девяти (67%) субъектов, получающих акампросат, оценивали как респондеры лечения с оценкой CGI-I 1 "очень сильно улучшенные" или 3 "сильно улучшенные". В целом, применение акампросата было хорошо переносимым, без вредных эффектов, ведущих к прекращению введения лекарственного средства, или без замеченных лабораторных/патологий параметров жизненно важных функций. Среди вторичных анализируемых результирующих показателей было замечено значимое акампросат-ассоциированное улучшение на показателях социального поведения и гиперактивности. Применение акампросата ассоциировалось также с уменьшениями в уровнях sAPP. Эти результаты ассоциировались также с уменьшениями в уровнях sAPP. Эти результаты демонстрируют, что акампросат может уменьшать социальные дефициты, ассоциированные с аутизмом у некоторых пациентов, причем sAPP, измеренный в крови, является полезным биомаркером для диагностики заболевания и для мониторинга эффективности фармакологических терапий для этого нарушения.
[0084] В целом, двадцать четыре юных пациента (средний возраст 11,1 лет; диапазон 5-17 лет) участвовали в этих двух пилотных клинических исследованиях. Пятнадцать субъектов имели доступные общие sAPP данные перед лечением и после лечения и доступные данные sAPPα-анализа. Образца крови после обработки не были доступны от 3 субъектов с FXS, 3 субъекта с ASD считались респондерами введенного плацебо и не получали акампросата, и 3 субъекта, получающие акампросат, в исследовании идиопатического ASD были потеряны для дальнейшего наблюдения во время активного лечения акампросатом и не завершали анализ крови после лечения. С использованием предварительно указанных индикаторов клинической реакции, 9 из 12 юных пациентов с FXS из 9 юных пациентов с идеопатическим ASD были оценены как респондеры акампросата. Обычно клиническое улучшение отмечалось в социальном поведении и невнимательности/гиперактивности. Среднее IG объединенных субъектов было равно 56 (диапазон 36-06). Конечное введение доз акампросата объединенным субъектам было равно 1054 мг/день. В целом, общий sAPP уменьшался с использованием акампросата от среднего 32,6±38,3 нг/мл перед лечением до 21,4±32,3 нг/мл после лечения (p=0,01). sAPPα уменьшались с использованием акампросата от среднего 8,4±7,9 нг/мл перед лечением до 5,5±7,2 нг/мл после лечения (p=0,003). Уровни как общего sAPP, так и sAPPα уменьшались с лечением в любом тестируемом образце за исключением случая у одного субъекта с идиопатическими ASD, где sAPPα не изменялся после лечения. Никаких значимых корреляций между процентным измерением в общем sAPP или sAPPα и процентным изменении на ABC-SW не отмечали в объединенном образце 15 субъектов. В популяции 9 субъектов с FXS, отмечали значимую корреляцию между изменением в оценках общего sAPP и оценках ABC-SW, что означает, что большее уменьшение в общем sAPP коррелировало с большим улучшением в оценках ABC-SW (Коэффициент ранговой корреляции Спирмана = 0,853; р=0,003).
[0085] Первый проект регистрировал 12 юных пациентов в возрасте 5-17 лет с синдромом хрупкой Х-хромосомы и коморбидным ASD в 10-недельном открытом исследовании акампросата. Второй проект регистрировал 12 юных пациентов в возрасте 5-17 лет, диагностированных как имеющих идиопатический ASD, в 12-недельном открытом исследовании акампросата с введенным плацебо. В обоих проектах, одновременное дозирование психотропных лекарственных средств оставалось стабильным на протяжении исследования. В каждом проекте, получали уровни в плазме общего sAPP и sAPPα перед лечением и после лечения. Все образцы анализа APP собирали, охлаждали и относили в пределах 2 часов взятия крови в лабораторию для анализа. Общий sAPP и sAPPα плазмы определяли в сыворотке с использованием набора ELISA, полученного из Иммуно-Биологических Лабораторий (IBL, Gumma, Japan). Набор ELISA является валидизированным для измерения уровней sAPPα в образцах человека и способен детектировать такие низкие, как 0,09 нг/мл sAPPα в типичном образце, всего лишь с 0,3% перекрестной реактивностью с sAPPα. Уровни общего sAPP и sAPPα в плазме сообщались в нанограммах на миллилитр (нг/мл). Статистический анализ уровней общего sAPP и sAPPα перед терапией и после терапии проводили с использованием парных T-тестов. Наконец, проводили пробный непланируемый анализ потенциальной корреляции между процентным изменением в sAPP общем или sAPPα и процентным изменением в оценках на субшкале Aberrant Behavior Checklist Social Withdrawal/Lethargy (ABC-SW). Этот ABC-SW измеряет социальное ухудшение, которое является центральным симптомным доменом ASD. Непланируемый анализ выполняли с корреляционными расчетами Спирмана. Все данные анализировали в IBM SPSS Version 20.
[0086] Двенадцать юных пациентов (средний возраст 10,4 лет; диапазон 5-15 лет) участвовали в этом исследовании. Средний IG (средний коэффициент интеллектуальности) субъектов был равен 67 (диапазон 25-96). Девять субъектов вступали в фазу активного лечения (после визита при неделе 2). Один субъект считали респондером плацебо, один субъект развивал значимую раздражительность во время обработки плацебо и покидал это исследование, и один субъект испытывал значительные рвоту и диарею на плацебо и покидал это исследование. Среди девяти пациентов, которые получали акампросат, средняя конечная доза лекарственного средства была 1073 мг/день (диапазон 600-1998 мг/день). В общем и целом, акампросат хорошо переносился без вредных эффектов, приводящих к отмене, и не были замечены лабораторные изменения жизненных признаков или безопасности. Вредные эффекты во время лечения акампросатом включали в себя: умеренную преходящую диарею (n=3), зависимую от дозы преходящую раздражительность, которая ослаблялась с уменьшением дозы (n=2), умеренные преходящие головные боли (n=2), умеренную преходящую усталость (n=2), умеренную преходящую бессонницу (n=2), умеренный транзиторный неумеренный смех (n=1) и умеренную преходящую увеличенную гиперактивность (n=1). Что касается бихевиористических результирующих показателей, на сегодняшний день авторы проанализировали данные из CGI-I, CGI-S, всех субшкал ABC, SRS и ADHD-RS. Все анализы проводят с использованием последнего наблюдения, проводимого ранее, когда три субъекта терялись для последующих наблюдений перед неделей 12 (каждый терялся после недель 6, 8 и 10, соответственно). Шесть из девяти субъектов вступающих в фазу активного лечения, были оценены как респондеры акампросата с оценкой CGI-I 1 или 2 (среднее CGI-I при последнем визите = 2).
[0087] Среди вторичных результирующих показателей, анализированных на сегодняшний день (t-критерии для парных выборок), улучшение с использованием акампросата было замечено на шкале SRS total raw (среднее изменение от 107+/-28 при базовой линии до 91,4+/-30 при конечной точке; p=0,002), субшкале ABC Lethargy/Social Withdrawal (ABC-SW; 14,1+/-8,5-10,0+/-8,4; p=0,019), ADHD-RS (29,5+/-10,4-20,75+/-9,7; p=0,002), субшкале ABC Hyperactivity (25,4+/-12,6-16,6+/-12,4; p=0,005), и CGI-S (4,22+/-0,4-3,7+/-0,5; p=0,013). Что касается данных биомаркера крови sAPP, посредством заключения этого исследования шесть субъектов имели доступные уровни общего sAPP и sAPPα перед акампросатом и после акампросата. В анализе фракционного изменения от базовой линии до конечной точки, средние уровни общего sAPP уменьшались от 34,7 (нг/мл) при базовой линии до 19,3 в конечной точке (p=0,02) и средние уровни sAPPα уменьшались от 7,8 (нг/мл) при базовой линии до 4,2 при конечной точке (p=0,03).
[0088] Это начальное пилотное, контролируемое плацебо исследование акампросата, нацеленного на социальное ухудшение у юных пациентов с аутизмом, продемонстрировало, что это лекарственное средство является хорошо переносимым с потенциальными признаками эффективности, замеченной специфически в отношении уменьшений в социальных дефицитах и гиперактивности. Это исследование демонстрирует, что применение акампросата было ассоциировано со значимыми и однородными уменьшениями в общем sAPP и sAPPα, что указывает на потенциальный маркер фармакодинамики эффекта терапии в аутизме.
[0089] Проводили одно 12-недельное открытое контролируемое плацебо исследование действия акампросата в лечении 12 юных пациентов с аутистическим нарушением в возрасте 5-17 лет. Для применения пилотного теста акампросата у юного пациента с аутизмом проводили нацеливание на центральное социальное ухудшение. Все субъекты и члены их семей не знали статуса терапии. Все субъекты, участвовали в 2-недельной фазе введения плацебо перед 10-недельным лечением акампросатом. Для этого проекта, покрытые энтеросолюбильной оболочкой коммерчески доступные пилюли с 333 мг акампросата инкапсулировали сверху, и идентичные соответствующие плацебо изготовляли для этого проекта. Плацебо-респондеры, определяемые по шкале Clinical Global Impressions Improvement (CGI-I) как 1 "очень сильно улучшенные" или 2 "сильно улучшенные" (рейтинги (оценки) прикрепляемые к центральным социальным дефицитам), при неделе 2 просили выхода из этого исследования. Во время активного лечения акампросатом, дозирование увеличивали в виде 333 мг приращений в неделю на протяжении первых шести недель активного лечения до максимальной дозы 1332 мг/день (масса <60 кг) или 1998 мг/день (масса >60 кг). Во время последних четырех недель активного лечения лекарственным средством, субъектов поддерживали на стабильной наиболее переносимой (оптимальной) дозе. Первичным результирующим показателем был оцениваемый врачом CGI-I, относящийся к симптомам социального ухудшения. Вторичные результирующие показатели включали в себя шкалу CGI-тяжести, Aberrant Behavior Checklist (ABC), шкалу Children's Yale Brown Obsessive-Compulsive, модифицированную в отношении Первазивных нарушений развития (CY-BOCS PDD), 4-ое издание шкалы ADHD Rating (ADHD-RS), шкалу социальной отзывчивости (SRS), субшкалу коммуникации Вайнлада, Словарный тест в картинках Пибоди (PPVT), повторяемую батарею для оценивания нейропсихологического статуса (RBANS) и выборку экспрессивного языка. Каждый субъект завершал IQ-тестирование с использованием 5-го издания шкалы Стэнфорда-Бине при отборе. Дополнительно, образцы sAPP брали при базовой линии и при завершении исследования. Лабораторные исследования безопасности выполняли при отборе, неделе 6 и неделе 12. Физический экзамен выполняли при отборе и при неделе 12, и показатели жизненно важных функций получали при всех визитах исследования. Потенциальные вредные эффекты акампросата выявляли при всех визитах исследования и телефонных звонках врача исследования в интервалах с использованием регистрации вредных эффектов.
Действие акампросата на sAPP, sAPPα у пациентов, диагностированных, как имеющих FXS-связанный ASD
[0090] Двенадцать юных пациентов в возрасте 5-17 лет регистрировали в открытом исследовании. Было подтверждено блоттингом по Саузерну и/или ПЦР-анализом, что все 12 имеют полные мутации FXS. Эти субъекты подвергали дополнительному скринингу на IQ (SB5 или Leiter) ADI-R, ADOS Vineland.
[0091] Это пилотное исследование проводилось в течение 10 недель. Лабораторные скрининги безопасности проводили при неделях 6 и 10. Физиологические параметры, измеряемые во время скринингов на безопасность, были следующими: показатели жизненно важных функций, LFT, панели электролитов, CBC с diff/plts, панель липидов, глюкоза, анализ мочи и ЭКГ.
[0092] Персональные клинические визиты планировались для каждых двух недель. Телефонные оценивания проводили при неделях 1, 3 и 5. Каждого субъекта оценивали в отношении побочных эффектов при каждом общении с практикующим врачом.
[0093] Использовали гибкую схему приема лекарственного средства. Использовали покрытые энтеросолюбильной оболочкой таблетки с количеством 333 мг. Дозирование увеличивали в виде прибавок 333 мг один раз в неделю для первых 6 недель этого исследования. Для субъектов с массой тела меньшей, чем 50 кг, максимальная доза была 1332 мг [разделенная BID (2 раза в день) или TID (три раза в день)]. Для субъектов с массой тела большей, чем 50 кг, максимальная доза была 1998 мг [разделенная BID (2 раза в день) или TID (три раза в день)]. Средняя конечная доза была 1054+/-422 мг/день.
[0094] Тринадцать субъектов отбирали для этого исследования. Один из этих субъектов не мог проглатывать пилюли, и был исключен из этого исследования. Остальные субъекты включали в себя 10 пациентов мужского пола и 2 пациента женского пола. Их средний возраст был 11,9 лет, в диапазоне от 6,25 до 17,75 лет. Средний коэффициент интеллектуальности этих 12 субъектов был 44,6, в диапазоне от 36 до 61. Десять из этих субъектов были диагностированы, как имеющие аутистическое нарушение, и два были диагностированы, как имеющие первазивное (всеобъемлющее) нарушение развития NOS.
[0095] В конце исследования определили, что 75% этих субъектов (9/12) являются респондерами. Эти 9 субъектов имели оценки CGI-I 1 (очень сильно улучшенные) или 2 (сильно улучшенные). Средние величины CGI-I для этих респондеров при неделе 10 были 1,92.
Таблица 4Параметры, измеренные у пациентов, диагностированных, как имеющих FXS-связанный ASD, и лечившихся акампросатом
<b>Рассмотренные вторичные результирующие показатели</b>
<b>Вторичные результирующие показатели, предназначенные для анализа</b>
Aberrant Behavior Checklist (ABC)
Childrens Yale-Brown Obsessive Compulsive Scale Modified for PDDSs (CYBOCS PDD)
Social Responsiveness Scale (SRS)
Vineland Communication
Clinical Global Impressions-Severity Scale (CGI-S)
Clinical Evaluation of Language Fundamentals (CELF-4)
Peabody Picture Vocabulary Test (PPVT)
Expressive Language Sampling
[0096] Среди измеренных данных вторичных результирующих показателей, анализированных до сих пор (Т-критерии для парных выборок), улучшение с использованием акампросата было замечено на шкале SRS total raw (среднее изменение от 107+/-28 при базовой линии до 91,4+/-30 при конечной точке; p=0,002), субшкале ABC Lethargy/Social Withdrawal (ABC-SW; 14,1+/-8,5 до 10,0+/-8,4; p=0,019), ADHD-RS (29,5+/-10,4 до 20,75+/-9,7; p=0,002), субшкале ABC Hyperactivity (25,4+/-12,6 до 16,6+/-12,4; p=0,005) и CGI-S (4,22+/-0,4 до 3,7+/-0,5; p=0,013). Что касается данных биомаркера крови sAPP, согласно заключению исследования, шесть субъектов имеют перед акампросатом и после акампросата доступные уровни общих sFPP и sAPPα. В анализе фракционного изменения от базовой линии до конечной точки, средние общие уровни sAPP уменьшались от 34,7 (нг/мл) при базовой линии до 19,3 при конечной точке (p=0,02) и средние уровни sAPPα уменьшались от 7,8 (нг/мл) при базовой линии до 4,2 при конечной точке (p=0,03).
Таблица 5
Действия акампросата на юных пациентов, диагностированных как имеющих FXS-связанный ASP
Показатель
Группа базовой линии Среднее ± SD
Группа конечной точкиСреднее ± SD
Величина Р
CGI-S
4,250,45
3,33±0,49
<0,0001
АВС Раздражительность
9,9±7,8
7,0±8,9
0,106
АBC Избегание общения
7,33±5,2
4,1±6,5
0,014
АВС Стереотипия
6,8±6,8
6±6,3
0,085
АВС Гиперактивность
16,8±9,1
11,0±8,6
0,009
АВС Неадекватная речь
5,2±3,5
4,8±3,4
0,605
Шкала социальной реактивности (общая необработанная оценка)
91,3±27,4
76,42±26,8
0,005
Шкала ADHD-рейтинга,4-е издание
23,6±10,6
16,7±8
<0,0001
PPVT
85,2±32
83,3±32
0,53
Таблица 6
Резюме вредных действий, наблюдаемых у юных пациентов, диагностированных, как имеющих FXS-связанный ASD и лечившихся акампросатом
Вредное действие
Количество пациентов
Раздражительность (умеренная)
4
Увеличенное повторяемое поведение (умеренное)
2
Увеличенная тревожность (умеренная)
1
Диарея (умеренная)
1
Констипация (умеренная)
1
Бессонница
1
Сильная потребность в мочеиспускании (умеренная)
1
Ринит
1
Ночные кошмары (умеренные)
1
Увеличенное качание тела (умеренное)
1
[0097] Теперь дается ссылка на ФИГУРЫ 1 и 2. Графики данных в Таблицах 7 и 8, собранные от 6 субъектов с синдромом хрупкой Х-хромосомы (FXS), которые участвовали в открытом исследовании акампросата. Образец периферической крови собирали от 6 отдельных пациентов-людей. Все 6 пациентов были диагностированы как имеющие FXS. Образцы брали и анализировали перед обработкой акампросатом и после обработки акампросатом для измерения уровня как общих sAPP-CP, так и sAPPα-СР в этих образцах. Уровни этих специфических белков определяли при помощи ELISA с использованием подходящего антитела.
[0098] Данные, представленные на этих графиках, иллюстрируют, что лечение пациентов с FXS акампросатом ассоциируется с нормализацией (понижением) уровней АРР. Эти данные показывают, что акампросат может непосредственно вовлекать аберрантную нейронную активность, ассоциированную с FXS (в этом случае повышенного APP). Уровень APP у пациентов с FXS является хорошим клиническим прогностическим фактором (предиктором) реакции лечения. Пациенты с наивысшими уровнями АРР должны быть обработаны акампросатом. Пациенты, которые проявляют уменьшение в APP во время и после лечения акампросатом, должны продолжать лечение этим соединением. Уровни APP могут быть также использованы в качестве скрининга на другие соединения, которые могут быть эффективными для лечения FXS. Соединения, которые снижают уровни APP, могут быть использованы для лечения FXS.
Таблица 7
Уровни sAPP(общего)-CP, измеренные у пациентов, диагностированных, как имеющих FXS, перед лечением и после лечения Акампросатом
Пациент
Лаб. №
Базовая линия
Лаб. № (Нед. 12)
Неделя 12
1
37
12,97575
46
12,84334
-0,0102
2
39
9,003579
49
8,07674
-0,10294
3
45
100,893
50
56,80199
-0,43701
4
47
16,5507
51
7,547117
-0,544
5
48
32,30696
53
5,561034
-0,82787
6
52
36,27913
54
25,15706
-0,30657
Таблица 8
Уровни sAPPα-CP, измеренные у пациентов, диагностированных, как имеющих XS, перед лечением и после лечения Акампросатом
Пациент
Лаб. №
Базовая линия
Лаб. № (Нед. 12)
Неделя 12
1
37
2,763889
46
2,763889
0
2
39
4,916667
49
4,777778
-0,02825
3
45
18,38889
50
7,416667
-0,59668
4
47
4,986111
51
2,694444
-0,45961
5
48
8,597222
53
2,486111
-0,71082
6
52
7,416667
54
5,055556
-0,31835
[0099] Это первоначальное пилотное контролируемое плацебо исследование нацеливания акампросата на социальное ухудшение у пациентов с синдромом FXS, демонстрировало, что это лекарственное средство должно быть хорошо переносимым с потенциальными признаками эффективности, замеченной специфически в отношении уменьшений в социальных дефицитах и гиперактивности. Это исследование демонстрирует, что применение акампросата ассоциировано со значимыми и однородными уменьшениями в общих sAPP и sAPPα, указывая на потенциальный фармакодинамический маркер для лечения FXS.
[00100] В общем, двадцать четыре юных пациента (средний возраст 11,1 лет; диапазон 5-17 лет) участвовали в этих двух клинических исследованиях. Пятнадцать субъектов имели доступные данные анализа общих sAPP и sAPPα перед акампросатом и после акампросата. Образцы крови после обработки не были доступны от 3 субъектов с FXS, 3 субъекта с ASD считали плацебо, введенным в респондеров, и не получали акампросата и 3 субъекта, получавшие акампросат в идиопатическом исследовании ASD терялись для последующего наблюдения во время активного лечения акампросатом и их исследование не завершалось анализом крови после обработки. С использованием предварительно указанных индикаторов клинической реакции, 9 из 12 юных пациентов с FXS и 6 из 9 юных пациентов с идиопатическим ASD оценивали респондеры для акампросата. Обычно, клиническое улучшение не было замечено в социальном поведении и невнимательности/гиперактивности. Среднее IQ объединенных субъектов было равно 56 (диапазон 36-96). Конечное дозирование акампросата объединенных субъектов было равно 1054 мг/день. В общем и целом, общие sAPP уменьшались с использованием акампросата от среднего 32,6±38,3 нг/мл перед лечением до 21,4±32,3 нг/мл после лечения (p=0,01). sAPPα уменьшался с использованием акампросата от среднего 8,4±7,9 нг/мл перед обработкой до 5,5±7,2 нг/мл после обработки (p=0,003). Уровни как общих sAPP, так и sAPPα уменьшались лечением в каждом тестируемом образце, за исключением случая у одного субъекта с идеопатическим ASD, где sAPPα был неизмененным после лечения. Не были замечены значимые корреляции между процентным изменением в общих sAPP или sAPPα, и процентное изменение в оценках на ABC-SW в объединенном образце 15 субъектов. В субпопуляции 9 субъектов с FXS, была замечена значимая корреляция между изменением в общих sAPP и оценках ABC-SW, что означало, что большее уменьшение в общем sAPP коррелировало с более высоким улучшением в оценках ABC-SW (Коэффициент Корреляции Спирмана = 0,853; p=0,003).
[00101] Хотя эта новая технология была иллюстрирована и описана в деталях на этих фигурах и предшествующем описании, она должна рассматриваться как иллюстративная, а не ограничивающая по характеру, так как понятно, что только предпочтительные варианты были показаны и описаны, и желательно, чтобы все изменения и модификации, которые находятся в пределах объема этой новой технологии, были защищены. А также, хотя эта новая технология была иллюстрирована с использованием конкретных примеров, теоретических аргументов, описаний и иллюстраций, эти иллюстрации и сопутствующее обсуждение ни в коем случае не должны интерпретироваться как ограничивающие эту технологию. Все патенты, заявки на патенты и ссылки на тексты, научные трактаты, публикации и т.п., упоминаемые в этой заявке, включены здесь посредством ссылки в их полном объеме.