СПОСОБ ПРОФИЛАКТИКИ БРУЦЕЛЛЕЗА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА
METHOD FOR PREVENTION OF CATTLE BRUCELLOSIS

Изобретение относится к ветеринарии, в частности к биотехнологии, к способам изготовления и применения химических вакцин для профилактики бруцеллеза - заболевания общего для человека и животных.
Известны способы профилактики бруцеллеза у крупного рогатого скота при помощи живых вакцин из штаммов 19 и 82 [1]. Санитарные и ветеринарные правила «Профилактика и борьба с заразными болезнями, общими для человека и животных». - М.: Информационно-издательский центр Госкомэпиднадзора России, 1996. - 256 с., Наставление по применению сухой живой вакцины из слабоагглютиногенного штамма 82 Бруцелла абортус против бруцеллеза крупного рогатого скота // Ветеринарное законодательство - т.3. - М.: Колос, 1981. - С.166-169; ГОСТ 18589-73 «Сухая живая вакцина против бруцеллеза сельскохозяйственных животных из штамма 19».
Однако использование живых вакцин опасно из-за длительного бактерионосительства, возможности проявления остаточной вирулентности у иммунодефицитных и ослабленных животных и возможности перехода вакцинного штамма в вирулентную форму [3]. Вследствие длительных гуморальных реакций после введения вакцин (от 6 месяцев и выше) снижается эффективность диагностических мероприятий. Неоднократное применение живых вакцин способствует накоплению патоморфологических изменений. Из-за клинических проявлений запрещено введение живых вакцин до получения двух отрицательных результатов исследования на бруцеллез и иммунизация взрослых животных неиммунизированных ранее. Отсутствует тестирование иммунной системы и выявление латентно больных животных [2, 4].
Наиболее близким к предлагаемому способу, является способ профилактики бруцеллеза [патент RU №2037319, A61K 39/10, 19.06.1995], включающий однократное внутримышечное введение белково-полисахаридного комплекса телятам 3-5 месячного возраста в дозе 5-35 мг в 5 мл 0,9% раствора хлористого натрия. Однако высокая агглютиногенность (способность стимулировать выработку бруцеллезных антител), снижающая результативность дифференциально-диагностических мероприятий (выявление среди вакцинированных больных животных), обуславливают его недостаточную эффективность. Защитные свойства препарата установлены лишь в один срок - 30 суток, что технологически недостаточно для животноводства. Не определена возможность выявления иммунодефицитных (с низким иммунитетом) особей.
Техническим результатом изобретения является повышение результативности дифференциально-диагностических мероприятий, выявление иммунодефицитных, ареактивных и латентно больных животных, вследствие одновременного взятия крови для исследования и иммунизации, сокращение периода неиммунного состояния организма, уменьшение воздействия стресс-факторов, снижение сроков диагностических исследований.
Технический результат достигается тем, что способ профилактики бруцеллеза крупного рогатого скота включает введение антигенного комплекса бруцелл в объеме 5 мл 0,9% раствора хлорида натрия, в качестве антигенного комплекса бруцелл подкожно вводят протективный антигенный комплекс бруцелл в дозе от 5 до 10 мг с последующей реиммунизацией через 10 месяцев, выявляют на 15 и 180 сутки латентно больных, а также на 15 сутки при помощи реакции агглютинации в титре 5 ME взрослых ареактивных и иммунодефицитных животных, одновременно с иммунизацией берется кровь от животных для исследования на бруцеллез.
Способ профилактики бруцеллеза крупного рогатого скота осуществляют следующим образом: животным подкожно вводится протективный комплекс бруцелл [патент RU №2398597, A61K 39/10, 10.09.2010], например, в дозе 10 мг, растворенный в 5 мл 0,9% раствора хлорида натрия. Одновременно берется кровь у животных для исследования на бруцеллез по общепринятым реакциям. Через 15 и 180 суток после введения протективного антигенного комплекса проводят дифференциально-диагностические исследования, выявляя латентно больных животных, у которых вследствие применения протективного антигенного комплекса бруцелл, провоцируются специфические бруцеллезные серологические реакции. А также в первое исследование - через 15 суток животных исследуют при помощи реакции агглютинации в титре 5 ME для выявления ареактивных и иммунодефицитных животных, у которых не вырабатывается специфический противобруцеллезный иммунитет.
Пример. Профилактическую эффективность протективного антигенного комплекса бруцелл изучали на 30 телятах (табл.1) в возрасте 3-4 месяцев, сформировав 6 групп по 5 голов в каждой. Протективный антигенный комплекс бруцелл растворяли в 0,9%-ом растворе хлорида натрия из расчета: 30, 10, 5, 1 мг в объеме 5 мл (1 доза). Растворы, содержащие разные дозы протективного антигенного комплекса бруцелл вводили подкожно: 1-я группа - 30 мг, 2-я группа - 10 мг, 3-я группа - 5 мг, 4-я группа - 1 мг. Для выявления уровня иммуногенности 5-я группа телят была вакцинирована противобруцеллезной живой вакциной из штамма 19 в дозе 80 млрд. микробных клеток в 5 мл 0,9%-ого раствора хлорида натрия, а 6-я группа была контрольной, животным вместо вакцины вводили по 5 мл 0,9%-ого раствора хлорида натрия.
Через 30 суток после вакцинации всех телят заразили вирулентной двухсуточной культурой штамма B.abortus 54 в дозе 25 млн. микробных клеток. Через 28-30 суток после заражения иммунизированных и контрольных телят забили и после вскрытия провели бактериологические исследования путем высева из органов и тканей на питательные среды. Через 5-7 суток выдерживания посевов при температуре 37°C провели учет роста бруцелл. Считали заразившимся животное, если выделяли вирулентные бруцеллы хотя бы из одного из исследованных органов.
Таблица 1
Профилактическая эффективность протективного антигенного комплекса бруцелл.
№ п/п
Голов
Вводимый препарат
Доза
Уровень защиты
голов
%
1
5
Протективный антигенный комплекс бруцелл
30 мг
2
40
2
5
Протективный антигенный комплекс бруцелл
10 мг
3
60
3
5
Протективный антигенный комплекс бруцелл
5 мг
3
60
4
5
Протективный антигенный комплекс бруцелл
1 мг
2
40
4
5
Вакцина против бруцеллеза штамм 19
80 млрд м.к.
3
60
5
5
0,9% раствор хлорида натрия
5 мл
0
0
Установлено, что протективный антигенный комплекс бруцелл не вызывает у телят местных и общих реакций на иммунизацию, а также поствакцинальных осложнений. Результаты проверки иммуногенности протективного антигенного комплекса бруцелл в разных дозах показывают, что в группе телят, получавших пониженную дозу - 1 мг, не заразилось 2 головы из 5-ти (40%). В группах телят, иммунизированных дозой 5-10 мг протективного антигенного комплекса бруцелл, количество иммунных составляет 60%. Увеличение дозы до 30 мг протективного антигенного комплекса не повышает защитного эффекта, а вызывает специфическую иммунодепрессию, 40% устойчивых к заражению. Живая вакцина против бруцеллеза из штамма 19 профилактирует заражение 60% животных, что показало равный результат с оптимальной дозировкой. В контрольной группе у всех не вакцинированных и зараженных вирулентной культурой B.abortus животных выделены вирулентные бруцеллы.
Таким образом, введение протективного антигенного комплекса бруцелл в дозе от 5 до 10 мг создает после однократного применения иммунитет достаточной напряженности против заражения вирулентными бруцеллами.
Оптимальной определена доза протективного антигенного комплекса бруцелл от 5 до 10 мг, создающая защиту у животных сопоставимую с живой вакциной.
По принятой в животноводстве технологии [4, 5] взрослые животные иммунизируются живой противобруцеллезной вакциной из штамма 82 в дозе 100 млрд. микробных клеток в 5 мл 0,9%-ого раствора хлорида натрия.
В эксперименте по определению длительности иммунитета из 15-ти коров сформировали 3 группы по 5 голов в каждой (табл.2) Подкожно вводили 1-й группе - протективный антигенный комплекс бруцелл, например, в дозе 10 мг растворенный в 5 мл 0,9%-ого раствора хлорида натрия. Для выявления уровня иммуногенности 2-я группа коров была вакцинирована противобруцеллезной живой вакциной из штамма 82 в дозе 100 млрд. микробных клеток в 5 мл 0,9%-ого раствора хлорида натрия, а 3-я группа была контрольной, животным вместо вакцины вводили по 5 мл 0,9%-ого раствора хлорида натрия.
Через 10 месяцев после вакцинации всех коров заразили вирулентной двухсуточной культурой штамма B.abortus 54 в дозе 200 млн.м.т. Через 28-30 суток после заражения иммунизированных и контрольных коров забили и после вскрытия провели бактериологические исследования путем высева из органов и тканей на питательные среды. Через 5-7 суток выдерживания посевов при температуре 37°C провели учет роста бруцелл. Считали заразившимся животное, если выделяли вирулентные бруцеллы хотя бы из одного из исследованных органов.
Установлено, что протективный антигенный комплекс бруцелл не вызывает у коров местных и общих реакций на иммунизацию, а также поствакцинальных осложнений. Результаты проверки иммуногенности протективного антигенного комплекса бруцелл показывают, что в группе коров иммунизированных дозой 10 мг протективного антигенного комплекса бруцелл количество иммунных составляет 60%. Живая вакцина из штамма 82 профилактирует заражение 60% животных, что показало равный результат с протективным антигенным комплексом бруцелл. В контрольной группе у всех не вакцинированных и зараженных вирулентной культурой B.abortus животных выделены вирулентные бруцеллы.
Таким образом, введение протективного антигенного комплекса бруцелл создает после однократного применения иммунитет достаточной напряженности в течение 10-ти месяцев против заражения вирулентными бруцеллами.
Таблица 2
Определение длительности иммунитета
№ гр.
Голов
Вводимый препарат
Не заразилось
Выделено культур
Обсемененность органов (%)
голов
%
1
5
Протективный антигенный комплекс бруцелл
3
60
4
4
2
5
Вакцина против бруцеллеза штамм 82
3
60
5
7
3
5
0,9% раствор хлорида натрия
0
0
22
23
Определение специфической иммунореактивности на бруцеллез через 15 дней после вакцинации протективным антигенным комплексом бруцелл взрослого крупного рогатого скота (табл.3). Для выявления больных бруцеллезом животных используются высокие титры агглютининов 200 ME и выше. Мы использовали низкие титры для выявления иммунореактивности животных на иммунизацию.
Таблица 3
Определение специфической иммунореактивности коров
№ пп
Голов
Титр агглютининов
Уровень реагирования
голов
%
1
95
10 ME
79
83
2
95
5 ME
92
92
3
95
2 ME
92
92
Оптимальным для тестирования иммунореактивности взрослого крупного рогатого скота является титр агглютининов 5 ME, разведение в два раза не охватывает реактивности всех животных на протективный антигенный комплекс бруцелл, а уменьшение разведения не выявляет дополнительно животных и менее экономично из-за использования на анализ большего количества сыворотки.
Для выявления провоцирующей способности протективного антигенного комплекса бруцелл иммунизировали отрицательно реагирующих коров в пункте с наличием бруцеллезной инфекции (табл.4).
Через 15 суток после введения протективного антигенного комплекса бруцелл выявлено 27 больных животных, исследование через 6 месяцев добавило еще одну больную бруцеллезом корову. Дальнейшие исследования через 7 и 9 месяцев показали отрицательный результат на бруцеллез.
Таблица 4
Выявление провоцирующей способности
№ гр
Голов
Срок исследования
Реагирующие
всего
положительно
голов
%
голов
%
1
150
15 суток
103
69
27
17,9
2
79
4 месяца
23
29
0
0
3
153
6 месяцев
7
4,5
1
1,3
4
124
7 месяцев
1
0,8
0
0
5
115
9 месяцев
1
0,8
0
0
Проведение одновременно иммунизации и взятия крови для исследования на бруцеллез уменьшает воздействие стресс-факторов на продуктивных животных и повышает экономическую эффективность специфических мероприятий, так как вместо двукратной фиксации и обработки животных проводится одна.
Таким образом, использование в предлагаемом способе протективного антигенного комплекса бруцелл в дозе 5-10 мг способствует созданию защиты от бруцеллеза на уровне коммерческих вакцин, выявляет ареактивных и латентно больных животных, обеспечивает возможность тестирования специфического состояния иммунной системы, повышает эффективность диагностических и ветеринарно-санитарных мероприятий, а также отменяет потенциальную опасность живых вакцин. Одновременная иммунизация и взятие крови для исследования на бруцеллез, сокращает период неимунного состояния организма, уменьшает воздействие стресс-факторов на продуктивных животных и повышает экономическую эффективность специфических мероприятий.
ЛИТЕРАТУРА
1. Фомин A.M. Разработка и совершенствование средств и методов диагностики и специфической профилактики при бруцеллезе крупного рогатого скота. - Автореф. дисс.… докт. вет. наук. - Казань, 2001. - 36 с.
2. Лутфуллин М.Х. Взаимосвязь аллергии и иммунитета, усовершенствование аллергической диагностики и специфической профилактики бруцеллеза крупного рогатого скота: дисс.… д-ра вет. наук. - Казань, 1992. - 426 с.
3. Воробьев А.Л. Способ повышения вирулентности бруцелл. - Предпатент №17648 РК опубл. 15.08.2006. - Бюлл. №8. - 2 с.
4. Санитарные и ветеринарные правила «Профилактика и борьба с заразными болезнями, общими для человека и животных». - М.: Информационно-издательский центр Госкомэпиднадзора России, 1996. - 256 с.
5. Наставление по применению сухой живой вакцины из слабоагглютиногенного штамма 82 Бруцелла абортус против бруцеллеза крупного рогатого скота // Ветеринарное законодательство. - т.3. - М.: Колос, 1981. - С.166-169.
6. ГОСТ 18589-73 «Сухая живая вакцина против бруцеллеза сельскохозяйственных животных из штамма 19».