АНАЛИЗ СТАТУСА МЕТИЛИРОВАНИЯ ГЕНА ОПУХОЛЕВОЙ СУПРЕССИИ ГЕНА RARβ2 В ЦИРКУЛИРУЮЩИХ ДНК КРОВИ ПРИ РАКЕ ЛЕГКОГО

бронха методом локальной флуоресцентной в показателях АФ при раке, остром воспалении

спектроскопии выявило достоверные отличия и нормальной слизистой оболочке.

АНАЛИЗ СТАТУСА МЕТИЛИРОВАНИЯ ГЕНА ОПУХОЛЕВОЙ СУПРЕССИИ ГЕНА RARp2 В ЦИРКУЛИРУЮЩИХ ДНК КРОВИ ПРИ РАКЕ ЛЕГКОГО

А.А. ПОНОМАРЕВА1, Т.Э. СКВОРЦОВА2, А.Ю. ДОБРОДЕЕВ1

НИИ онкологии СО РАМН, г. Томск1 Институт химической биологии и фундаментальной медицины СО РАН, г. Новосибирск

Актуальность. Рак легких (РЛ) занимает одно из ведущих мест в структуре общей летальности от онкологических заболеваний. Важнейшим условием успешного лечения РЛ является обнаружение опухолевого процесса на ранних стадиях. Известно, что инактивация ряда генов опухолевой супрессии в результате аберрантного гиперметилирования их промоторных областей является одним из наиболее распространенных и ранних событий, приводящих к опухолевому перерождению клеток. С высокой частотой в опухолевой ткани при раке легкого выявлено аберрантное метилирование гена RARP2 (в 80% случаев). Обнаружение эпигенетических изменений в циркулирующих ДНК (цирДНК) плазмы/сыворотки, идентичных изменениям ДНК в клетках опухоли (Fleischhacker M. et al.. 2007), открывает большие возможности для разработки чувствительных методов ранней малоинвазивной диагностики рака легких. Недавние исследования показали, что использование цирДНК, связанных с поверхностью форменных элементов клеток крови в ПЦР, специфичной к метилированию (метПЦР), повышает чувствительность метода выявления ДНК-онкомаркеров по сравнению с использованием цирДНК плазмы (Skvortsova T. et al., 2006; Kolesnikova E. et al., 2008).

Цель исследования - сравнительный анализ в норме и при раке легкого уровня метилирования гена RARP2 во внеклеточных ДНК в различных фракциях крови методом количественной метил-специфичной ПЦР в реальном времени.

Материал и методы. В работе использованы образцы крови здоровых индивидуумов и боль-

2

ных раком легкого. Кровь разделяли на плазму и клетки крови, фракцию внДНК, связанных с клеточной поверхностью, получали последовательной обработкой клеток фосфатным буфером, содержащим ЭДТА, и раствором трипсина. Уровень метилирования гена опухолевой супрессии RARP2 оценивали методом ПЦР.

Результаты. Показано, что метилированные формы промоторов генов RARP2 могут быть детектированы в 75-84% случаев в опухолевой ткани и плазме крови у больных раком легкого и в 23% случаев в ткани и плазме крови у индивидуумов, не обнаруживающих симптомов развития онкозаболеваний (Hsu H.S. et al., 2007; Brait M. et al., 2009). В силу этого необходимым условием создания методов анализа, позволяющих диагностировать рак, является не только качественная, но и количественная оценка уровня метилирования промоторных областей генов в норме и при развитии злокачественных опухолей. Методом количественной ПЦР нами показано, что уровень метилирования гена RARP2 в цирДНК крови достоверно выше при раке легкого, чем в норме. При этом количество метилированных форм гена RARP2 в цирДНК в плазме и цирДНК, связанных с клеточной поверхностью, представлено в соотношении 1:1.

Выводы. Полученные данные свидетельствуют о том, что определение уровня метилирования последовательностей генов опухолевой супрессии в циркулирующих ДНК крови может быть использовано для поиска и верификации новых диагностических ДНК-маркеров, ассоциированных с развитием РЛ.

СИБИРСКИЙ ОНКОЛОГИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ. 2010. Приложение № 1