Влияние химиотерапии на кислород-зависимую антимикробную активность нейтрофилов у больных раком молочной железы

З. Н. Никифорова1, Г. В. Варлан2, В. Е. Шевченко3, Н. В. Дмитриева1 ВЛИЯНИЕ ХИМИОТЕРАПИИ НА КИСЛОРОДЗАВИСИМУЮ АНТИМИКРОБНУЮ АКТИВНОСТЬ НЕЙТРОФИЛОВ У БОЛЬНЫХ РАКОМ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ

1 НИИ клинической онкологии ГУ РОНЦ им. Н. Н. Блохина РАМН, Москва 2Городская клиническая больница №33, Москва 3 НИИ канцерогенеза ГУ РОНЦ им. Н. Н. Блохина РАМН, Москва

Изучали кислородзависимую антимикробную активность нейтрофилов у 8 больных раком молочной железы IV стадии до курса химиотерапии (доцетаксел 100 мг/м2 либо по схеме доксорубицин 50 мг/ м2; доцетаксел 75 мг/м2; циклофосфамид 500 мг/м2) и после него по сравнению с показателями, полученными у 100 здоровых доноров. Методом хемилюминесценции регистрировали образование активных форм кислорода нейтрофилами пациентов до полихимиотерапии (0 ч) и через 24, 72, 192 и 312 ч после ее окончания. Отмечено уменьшение миелопероксидаз- и НАДФН-зависимой генерации активных форм кислорода нестимулированными нейтрофилами до начала химиотерапии по сравнению с контролем. Миелотоксическое действие противоопухолевых препаратов проявлялось начиная с 72 ч и приводило к снижению на 3, 8, 13-е сутки НАДФН-зависимого, а на 8 и 13-е сутки — миелопероксидаззависимо-го образования активных форм кислорода. Максимальное снижение абсолютного числа нейтрофилов и кислородзависимой антимикробной активности нейтрофилов больных раком молочной железы отмечалось на 8-е сутки после завершения курса противоопухолевой терапии, а через 13 сут продукция активных форм кислорода нейтрофилами оставалась заметно ниже исходной, что свидетельствуют об опасности возникновения инфекционных осложнений в этот период.

Ключевые слова: рак молочной железы, нейтрофилы, антимикробная активность, хемилюминес-ценция, активированные формы кислорода.

Сокращения

АФК — активные формы кислорода.

КЗАА — кислородзависимая антимикробная активность.

ЛХЛ — люминол-усиленная хемилюминесценция.

ЛЦХЛ — люцегинин-усиленная хемилюминесцен-ция.

МПО — миелопероксидаза.

ОЗ — опсонизированный зимозан.

ПХТ — полихимотерапия.

РМЖ — рак молочной железы.

ФМЛП — №формил-метионил-лейцил-фенилаланин.

А — максимальная амплитуда индуцированной хе-милюминесценции.

Асп — средняя амплитуда спонтанной хемилюминес-ценции.

РМА — форбол-12-миристат-13-ацетат.

— светосумма реактивной хемилюминесценции.

$сп — светосумма спонтанной хемилюминесценции.

© Никифорова З. Н., Варлан Г. В., Шевченко В. Е., Дмитриева Н. В., 2007

УДК 612.112.91:618.19-006.6-02:615.277.3.065

Онкологические больные после курсов противоопухолевой терапии составляют группу риска развития инфекционных осложнений [12; 16; 20]. Одним из факторов, способствующих развитию инфекции, является фебрильная нейтропения и/или нарушение функциональной активности нейтрофилов пациентов [4; 11; 14]. Известно, что у онкологических больных как опухолевый процесс, так и проводимая химиолучевая терапия изменяют генерацию АФК, играющих важную роль в КЗАА нейтрофилов [2; 10; 15]. Ранее во многих опытах in vitro было показано, что противоопухолевые препараты могут как подавлять, так и стимулировать образование АФК нейтрофилами доноров [1; 9; 13]. Воздействию в той или иной степени подвергается весь каскад метаболизма кислорода в нейтрофилах [3; 5; 7]. До настоящего времени нет полной ясности в том, как изменяется антимикробная активность нейтрофилов после ПХТ и предшествующего хирургического лечения. Так, у больных РМЖ, перенесших хирургическое вмешательство, снижается эффективность механизмов регуляции свободнорадикального окисления в гранулоцитах, что может стать причиной повышенной восприимчивости организма к различным инфекциям [2]. В этой связи особенно важной становится быстрая и точная индивидуальная оценка состояния КЗАА нейтрофилов больного.

Целью данного исследования явилось сравнительное изучение K3AA нейтрофилов у больных РМЖ до курса ПХТ и после него и у здоровых доноров.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Изучали генерацию AФК нейтрофилами периферической крови, взятой у 100 здоровых доноров, средний возраст которых составлял З8,5 года.

Исследуемая группа включала больных с диагнозом РМЖ IV стадии (8 женщин, средний возраст 5З года), которым ранее проводились курсы ПХТ (от 1 до 10). Исследовали образование AФК нейтрофилами пациентов по сравнению с нормой без стимуляции различными активаторами и при стимуляции. Измерения выполняли до и после ПХТ, проводимой по схеме: доцетаксел в монорежиме (одно введение препарата в дозе 100 мг/м2) — у З больных и TAС (доксорубицин 50 мг/м2; доцетаксел 75 мг/ м2; циклофосфамид 500 мг/м2) — у 5. Продолжительность ПХТ составляла 1 сут. Методом хемилюминесценции регистрировали образование AФК нейтрофилами пациентов до ПХТ (0 ч) и через 24, 72, 192 и З12 ч после ее окончания.

Изучение образования АФК нейтрофилами хемилюминесцентным методом

K3AA нейтрофилов оценивали по их способности образовывать AФК при инкубации с O3, РMA и ФМЛП.

Продукцию AФК нейтрофилами изучали с использованием хемилюминометра «LKB 1251» (Финляндия). С помощью ЛХЛ регистрировали весь пул AФК и получали суммарную активность MПO и НAДФН-оксидaзы, а с помощью ЛЦХЛ измеряли образование супероксид-радикала (02_) и оценивали активность НAДФН-оксидазы. Нейтрофилы активировали с применением O3, РМД ФМЛП; хемилюминесценцию оценивали по следующим параметрам: Agi (измеренная за 15 мин), Aini (измеренная за 140 мин), Sgi (измеренная за 15 мин), Smi (измеренная за 140 мин).

Для выполнения исследований использовали декстран Т-500 («Pharmacia», Швеция); фиколл-400 («Pharmacia», Швеция); урографин 76% («Shering», Германия); люминол («Sigma», СШA); зимозан («Sigma», СШA); люцегинин («Sigma», СШ^; ФМЛП («Sigma», СШ^; PMA («Sigma», СШ^.

Статистическая обработка данных

Статистическую обработку полученных данных проводили с помощью программ «Excel» (Microsoft, СШA), «Statistica 6,0» (Statsoft, Inc., СШA). Достоверность различий сравниваемых величин оценивали с помощью параметрического t-критерия Стьюдента; непараметрического Т- и W-критерия Вилкоксона. Различия считали достоверными при р < 0,05. Данные обрабатывали на компьютере IBM PC с использованием программы «Luminograf», разработанной в Томском НИИ онкологии

Е. В. Борунтовым, И. A. Шепеткиным, Е. С. Чердынцевым и Н. В. Чердынцевой.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ Образование АФК нестимулированными нейтрофилами

Полученные данные свидетельствуют об уменьшении MПO- и НAДФН-зaвисимой генерации AФК нестимули-рованными нейтрофилами до начала ПХТ по сравнению с контролем (рис. 1). Так, Agi ЛЦХЛ, Sgi ЛХЛ и ЛЦХЛ нейтрофилов были ниже нормы на 25, 45 и 68% соответственно (р < 0,05). В то же время Agii ЛХЛ достоверно не отличалась от таковой у доноров. Через 24 и 72 ч после окончания курса терапии Agii и Sgii ЛХЛ нейтрофилов больных превышали как исходные, так и аналогичные показатели у доноров, тогда как для НAДФН-зaвисимой генерации AФК через 24 ч после окончания ПХТ наблюдалась только тенденция к увеличению Sgii (см. рис. 1). Необходимо подчеркнуть, что на З-и сутки после окончания курса ПХТ Agii и Sgii ЛЦХЛ были достоверно ниже исходных в 2,9 и 2 раза соответственно.

Максимальное снижение ЛХЛ и ЛЦХЛ нестимули-рованных нейтрофилов отмечалось на 8-е сутки после окончания ПХТ (см. рис. 1): Agii ЛХЛ и ЛЦХЛ снизились относительно исходных в З и З,З раза (р < 0,05), a Sgii ЛХЛ и ЛЦХЛ — в 2,8 и 1,З раза соответственно (р < 0,05). Через З12 ч после окончания ПХТ наблюдалась тенденция к увеличению параметров спонтанной ЛХЛ, тогда как максимальная амплитуда ЛЦХЛ оставалась достоверно ниже исходной в 2,2 раза. Таким образом, максимальное подавление генерации AФК в нестимулированных нейтрофи-лах происходило на 8-е сутки после окончания ПХТ.

Увеличение образования AФК, в частности, можно объяснить активацией MПO нестимулированных ней-трофилов в первые сутки после ее окончания. Ранее показано, что доцетаксел может усиливать НAДФН- и цитохром-С-зависимое образование AФК [5; 17]. Влияние доксорубицина и его главного метаболита доксорубици-нола на так называемый кислородный взрыв зависел от концентрации препаратов. При 0,З мкг/мл наблюдалось подавление, а при 0,0З мкг/мл — стимуляция образования AФК нейтрофилами [17].

Миелотоксическое действие противоопухолевых препаратов проявлялось начиная с 72 ч и приводило к снижению на З, 8 и 1З-е сутки НAДФН-зaвисимого образования AФК, а на 8-Е и 1З-е сутки — MПO-зaвисимого, что подтверждает данные предыдущих исследований [19].

Образование АФК после стимуляции нейтрофилов ФМЛП

Для изучения антимикробной активности нейтро-филов, связанной с рецепторами к формилпептидам, нейтрофилы активировали ФМЛП — продуктом метаболизма бактерий. До начала ПХТ при стимуляции нейтрофилов больных ФМЛП выявлялось уменьшение параме-

A Время, ч

Б Время, ч

Рисунок 1. Спонтанная ЛХЛ и ЛЦХЛ в нейтрофилах больных РМЖ до и после ПХТ по сравнению с аналогичными показателями доноров. 1 — ЛХЛ; 2 — ЛЦХЛ; 3 — доноры. * p < 0,05 по сравнению с соответствующими параметрами в исходной точке; ** p < 0,05 по сравнению с аналогичными показателями доноров.

А. ИзменениеA . Б. ИзменениеS .

сп сп

тров ЛХЛ и ЛЦХЛ относительно нормы (р < 0,05) (рис. 2): Аинд ЛХЛ и ЛЦХЛ — на 64 и 48%, S^ ЛХЛ и ЛЦХЛ — на 65 и 60% соответственно.

Через 24 ч после завершения курса ПХТ наблюдалось достоверное увеличение индуцированной ЛХЛ относительно исходной (см. рис. 2): А в 2,25 раза, S — в

' 1 ' инд — ' 1 ' инд

1,7 раза. В то же время Аш ЛЦХЛ достоверно уменьшалась в 2 раза по сравнению с исходной, а для Smi ЛЦХЛ отмечалась тенденция к уменьшению. Через 72 ч Аинд и

А Время, ч

Б Время, ч

Рисунок 2. ЛХЛ и ЛЦХЛ при стимуляции ФМЛП нейтрофилов больных РМЖ до и после ПХТ по сравнению с аналогичными показателями доноров. 1 — ЛХЛ; 2 — ЛЦХЛ; 3 — доноры. * p < 0,05 по сравнению с соответствующими параметрами в исходной точке; ** p < 0,05 по сравнению с аналогичными показателями доноров.

А. Изменение A . Б. ИзменениеS .

инд инд

S ЛХЛ превышали исходные в 1,6 и 1,8 раза соответственно (р < 0,05). На 8-е сутки после окончания лечения A и S ЛХЛ достоверно снизились в 2 и 1,З раза соот-

инд инд

ветственно, а ЛЦХЛ — в 1,5 и 5,8 раза по сравнению с исходными. На 1З-е сутки A и S ЛХЛ и ЛЦХЛ остава-

инд инд

лись ниже исходных. Полученные нами данные частично согласуются с результатами исследования [8], в котором показано, что при проведении курса ПХТ по схеме CHOP (циклофосфамид, доксорубицин, винкристин, предни-

золон) для лечения В-клеточных лимфом образование АФК нейтрофилами достоверно снижалось на 2-е сутки после окончания терапии при стимуляции гранулоцитов ФМЛП, тогда как при лечении по схеме DexaBEAM (дек-саметазон, кармустин, этопозид, цитарабин, мелфалан) генерация АФК не изменялась [18].

Таким образом, доказаны 2 эффекта ПХТ: один наблюдался в первые 3 дня после окончания ПХТ и проявлялся увеличением МПО-зависимого и уменьшением НАДФН-зависимого образования АФК. Другой эффект наблюдался на 8 и 13-е сутки после окончания ПХТ и проявлялся токсическим действием химиопрепаратов на генерацию АФК нейтрофилами больных. Уменьшение МПО- и НАДФН-зависимого образования АФК в ответ на ФМЛП на 8 и 13-е сутки после окончания ПХТ можно объяснить, в частности, уменьшением экспрессии рецепторов к ФМЛП на цитоплазматической мембране нейтрофилов, вследствие чего в них не генерируется адекватный ответ на стимуляцию ФМЛП. Таким образом, уменьшение экспрессии рецепторов к ФМЛП после окончания ПХТ может приводить к значительному снижению МПО- и НАДФН-зависимой микробицидности нейтрофилов больных.

Образование АФК нейтрофилами после стимуляции РМА

Для оценки состояния сигнальных путей нейтрофилов, связанных с участием протеинкиназы С в регуляции активности НАДФН-оксидазы, нейтрофилы при-мировали прямым активатором протеинкиназы С РМА. Анализ полученных данных показал, что до начала ПХТ Аш и Sи ЛХЛ были достоверно ниже, чем у доноров, на 40 и 67% соответственно (рис. 3); Аи и Sи ЛЦХЛ также были снижены по сравнению с нормой на 64 и 63% (р < 0,05) соответственно. Таким образом, до начала терапии МПО- и НАДФН-зависимое образование АФК в нейтрофилах, стимулированных РМА, было снижено в основном за счет уменьшения генерации супероксид-радикала.

Через 24 и 72 ч после ПХТ выявлялась тенденция к увеличению А и S ЛХЛ (см. рис. 3). Суммарная гене-

инд инд 'А ’ *

рация Ю2- достоверно увеличилась на первые сутки по сравнению с исходной в 1,6 раза, а для одномоментного образования Ю2- отмечалась тенденция к уменьшению (см. рис. 3 а). На 3-и сутки Аш и Sи ЛЦХЛ достоверно снижались в 1,8 и 4 раза, а на 8-е сутки — в 2,5 (р < 0,05) и 1,5 (р > 0,05) раза соответственно. Полученные нами данные частично согласуются с результатами исследования [18], в котором показано, что после окончания ПХТ в режиме DexaBEAM уменьшается генерация АФК нейтрофилами больных, стимулированными РМА.

Через 192 ч после завершения курса терапии Аинд и S ЛХЛ достоверно уменьшились по сравнению с исходными в 6,6 и 2,2 раза соответственно (см. рис. 3). Следует отметить, что на 13-е сутки показатели индуцированной

А Время, ч

Б Время, ч

Рисунок 3. ЛХЛ и ЛЦХЛ при стимуляции РМА нейтрофилов больных РМЖ до и после ПХТ по сравнению с аналогичными показателями доноров. 1 — ЛХЛ; 2 — ЛЦХЛ; 3 — доноры. * p < 0,05 по сравнению с соответствующими параметрами в исходной точке; ** p < 0,05 по сравнению с аналогичными показателями доноров.

А. Изменение A . Б. ИзменениеS .

инд инд

ЛХЛ достоверно не отличались от исходных, тогда как амплитуда ЛЦХЛ была ниже в З раза (p < 0,05).

Таким образом, полученные данные свидетельствуют о том, что после окончания цитостатической терапии вначале начинает уменьшаться НAДФН-зaвиcимое образование AФК, в то время как MПO-зaвиcимое образование AФК достоверно уменьшается только на 8-е сутки после окончания ПХТ. Вероятно, в первые сутки после окончания ПХТ происходит компенсаторное увеличение

генерации AФК, отличных от супероксид-радикала, но на 8-е сутки компенсаторные возможности нейтрофилов больных истощаются, и наблюдается уменьшение образования всех активных форм кислорода.

Образование АФК нейтрофилами, стимулированными ОЗ

Для изучения K3AA нейтрофилов, связанной с фагоцитозом, клетки активировали O3, полученным из стенок дрожжей Saccharomyces cerevisiae. Aнaлиз экспериментальных данных позволил выявить, что до начала ПХТ при стимуляции нейтрофилов O3 Aini и Sh ЛХЛ были достоверно снижены по сравнению с таковыми у доноров на З4 и 55% соответственно (рис. 4). Полученные данные согласуются с результатами исследования [6], в котором показано, что у больных РМЖ IV стадии при стимуляции нейтрофилов O3 A и S ЛХЛ были ниже нормы.

инд инд

Показатели хемилюминесценции для одномоментного и суммарного образования 02_ были ниже нормы на 58 и 54% (p < 0,05) соответственно, что свидетельствовало о снижении MПO- и НAДФН-зaвиcимой антимикробной активности нейтрофилов пациентов до начала очередного курса ПХТ.

Через 24 и 72 ч после окончания ПХТ значимые изменения A ЛХЛ отсутствовали, а для S ЛХЛ (см. рис.

инд инд

4) отмечалась тенденция к их уменьшению. В то же время одномоментное и суммарное образование 02_ через 24 ч снижалось по сравнению с исходными в 2,5 и 1,8 раза (p < 0,05) соответственно. На З-и сутки эти показатели были также достоверно ниже исходных (см. рис. 4).

Достоверное уменьшение всех показателей ЛХЛ и ЛЦХЛ наблюдалось на 8-е сутки после окончания ПХТ (см. рис. 4). Максимальная амплитуда ЛХЛ и ЛЦХЛ снижалась по сравнению с исходной в З и 7 раз, а светосум-ма — в 11 и 2,4 раза (p < 0,05) соответственно. Таким образом, через 192 ч после окончания курса терапии MПO- и НAДФН-зaвиcимaя антимикробная активность нейтро-филов больных уменьшалась. Полученные нами данные согласуются с результатами исследования [17], в котором отмечалось, что на 2-е сутки после окончания ПХТ по схемам CHOP и DexaBEAM у больных B-клеточными лимфомами уменьшалось образование AФК нейтрофилами, стимулированными Escherichia coli, по сравнению с нормой.

На 1З-е сутки отмечалась тенденция к восстановлению способности нейтрофилами пациентов образовывать AФК, но одномоментная генерация AФК по данным ЛХЛ и ЛЦХЛ оставались достоверно ниже аналогичных показателей до ПХТ в 2,З и З,2 раза соответственно (см. рис. 4 а).

Следует отметить, что у всех пациентов до ПХТ абсолютное число лейкоцитов и нейтрофилов в периферической крови не отличалось от нормы. Через 24 и 72 ч после окончания ПХТ абсолютное число нейтрофилов в крови также заметно не отличалось от нормы, тогда как MПO- и

А Время, ч

Б Время, ч

Рисунок 4. ЛХЛ и ЛЦХЛ при стимуляции ОЗ нейтрофилов больных РМЖ до и после ПХТ по сравнению с аналогичными показателями доноров. 1 — ЛХЛ; 2 — ЛЦХЛ; 3 — доноры. * p < 0,05 по сравнению с соответствующими параметрами в исходной точке; ** p < 0,05 по сравнению с аналогичными показателями доноров.

А. Изменение A . Б. ИзменениеS .

инд инд

НAДФН-зaвиcимaя активность покоящихся и активированных нейтрофилов начинала изменяться уже через 24 ч после окончания ПХТ. На 8-е сутки уровень абсолютного числа лейкоцитов максимально снижался по сравнению с исходным до 1,062 x 109/л (р < 0,05), а сегментоядерных нейтрофилов — до 2З% (р < 0,05). Эти данные коррелировали с уменьшением на 8-е сутки после окончания ПХТ активности как покоящихся, так и стимулированных активаторами ^MA, ФМЛП, O3) нейтрофилов больных.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Суммируя результаты проведенного исследования, необходимо подчеркнуть, что максимальное снижение абсолютного числа и КЗАА нейтрофилов больных РМЖ отмечалось на 8-е сутки после завершения курса ПХТ, а через 13 сут продукция АФК нейтрофилами все еще оставалась заметно ниже исходной. Таким образом, наряду с уменьшением абсолютного числа нейтрофилов заметное снижение МПО- и НАДФН-зависимой генерации АФК нейтрофилами и медленное ее восстановление у пациентов после окончания курса ПХТ свидетельствуют об опасности возникновения инфекционных осложнений в указанный период [10; 13; 16]. В этой связи индивидуальный мониторинг реактивности нейтрофилов у больных РМЖ в процессе ПХТ позволит своевременно выявлять нарушения их антимикробной активности и проводить индивидуальную коррекцию МПО- и НАДФН-зависимой активности нейтрофилов с помощью рекомбинантных миелоцитокинов.

ЛИТЕРАТУРА

1. Долгушин И. И., Бухарин О. В. Нейтрофилы и гомеостаз. — Екатеринбург: УрО РАН, 2001. — 278 с.

2. Allen R. C. Phagocytic leukocyte oxygenation activities and chemiluminescence: a kinetic approach to analysis // Meth. Enzym. — 1984. — Vol. 133. — P. 449—493.

3. Babior B. M. NADPH oxidase: an update // Blood. — 1999. — Vol. 93, N 5. — P. 1464—1476.

4. Bohlius J., Reiser M., Schwarzer G. et al. Granulopoiesis-stimulating factors to prevent adverse effects in the treatment of malignant lymphoma // Cochrane Database Syst. Rev. — 2004. — CD003189.

5. Cao D. X., Qiao B., Ge Z. Q. et al. Comparison of burst of reactive oxygen species and activation of caspase-3 in apoptosis of K562 and HL-60 cells induced by docetaxel // Cancer Lett. — 2004. — Vol. 214, N 1. — P. 103—113.

6. Chasseing N. A., Baranao R. I., Fernandez O. et al. Chemilumi-nescene production by neutrophils and immune complex levels in cancer patients // Cancer Investigation. — 1993. — Vol. 11, N 5. — P. 517— 522.

7. Clark R. A. Activation of the neutrophil respiratory burst oxidase // J. Inf. Dis. — 1999. — Vol. 179, Suppl. 2. — P. 309—317.

8. Garelli S., Valbonesi M., Schieppati G. et al. Defective function of granulocytes in patients with cancer // Tumori. — 1981. — Vol. 67, N 5. — P. 415—423.

9. Hara N., Ichinose Y., Motohiro A. et al. Influence of chemotherapeutic agents on superoxide anion production by human polymorphonuclear leukocytes // Cancer. — 1990. — Vol. 66, N 4. — P. 684—688.

10. Kuritzkes D. R. Neutropenia, neutrophil dysfunction, and bacterial infection in patients with human immunodeficiency virus disease: the role of granulocyte colony — stimulating factor // Clin. Inf. Dis. — 2000. — Vol. 30, N 2. — P. 256—260.

11. Lyman G. H., Kuderer N. M. Filgrastim in patients with neutropenia. Potential effects on quality of life // Drugs. — 2002. — Vol. 62. — P. 65—78.

12. Lyman G. H., Kuderer N. M., Djulbegovic B. Prophylactic granulocyte colony-stimulating factor in patients receiving dose-intensive cancer chemotherapy: a meta-analysis // Am. J. Med. — 2002. — Vol. 112. — P. 406—411.

13. Nielson C. P., Brenner D., Olson R. D. Doxorubicin and doxorubici-nol-induced alterations in human polymorphonuclear leukocyte oxygen metabolite generation // J. Pharmacol. Exp. Ther. — 1986. — Vol. 238, N 1. — P. 19—25.

14. Padilla G., Ropka M. Quality of life and chemotherapy-induced neutropenia // Cancer Nurs. — 2005. — Vol. 28. — P. 167—171.

15. Rodriguez-Adrian L. J., Grazziuti M. L., Rex J. H. et al. The potential role of cytokine therapy for fungal infections in patients with cancer: is recovery from neutropenia all that is needed? // Clin. Inf. Dis. — 1998. — Vol. 26. — P. 1270—1278.

16. Timmer-Bonte J., Biesma J., Smit J. et al. Prevention of chemotherapy-induced febrile neutropenia (FN) by antibiotics (AB) versus antibiotics plus granulocyte-colony stimulating factor (G-CSF) in small cell lung cancer (SCLC): a randomized phase III study // J. Clin. Oncol. — 2004. — Vol. 22. — P. 14S.

17. Varbiro G., Veres B., Gallyas F. Jr. et al. Direct effect of Taxol on free radical formation and mitochondrial permeability transition // Free Radic. Biol. Med. — 2001. — Vol. 31, N 4. — P. 548—558.

18. Volk J., Kleine H.-D., Buthmann U. et al. Oxidative burst measurement in patients treated with cytostatics: influuence of G-CSF and role as a prognostic factor // Ann. Hematol. — 2000. — Vol. 79. — P. 187—197.

19. Yoshida M., Yanagisawa R., Ishida Y. et al. Influence of cytotoxic chemotherapy on superoxide production by neutrophils in cancer patients // Kansenshogaku Zasshi. — 1993. — Vol. 67, N 1. — P. 30—35.

20. Wittman B., Horan J. T., Lyman G. H. Prophylactic colony-stimulating factors pediatric patients receiving myelosuppressive chemotherapy: a meta-analysis of randomized controlled trials // Blood. — 2004. — Vol. 104. — P. 11.

Поступила 15.02.2007

Z. N. Nikiforova1, G. V. Varlan2, V. E. Shevchenko3, N. V. Dmitrieva1 CHEMOTHERAPY EFFECT ON NEUTROPHIL OXYGEN-DEPENDENT ANTIMICROBAL ACTIVITY IN BREAST CANCER PATIENTS

1 Clinical Oncology Research Institute, N. N. Blokhin RCRC RAMS, Moscow

2 City Clinical Hospital No.33, Moscow 3 Carcinogenesis Research Institute, N. N. Blokhin RCRC RAMS, Moscow

Neutrophil oxygen-dependent antimicrobal activity was studied in 8 patients with stage IV breast cancer prior to chemotherapy (docetaxel 100 mg/m2 alone or doxorubicin 50 mg/m2, docetaxel 75 mg/m2, cyclophosphamide 500 mg/m2) and after chemotherapy completion and compared with that in 100 healthy donors. Chemiluminescence was used to detect production of oxygen active forms by neutrophils in patients before (h 0) and at 24, 72, 192 and 312 h after polychemotherapy completion. Myeloperoxidase- and NADPN-dependent production of oxygen active forms by nonstimulated neutrophils was decreased before chemotherapy as compared to the control. Anticancer drug myelotoxicity was detected at 72 h and thereafter to result on days 3, 8, 13 in decrease in NADPN-dependent and on days 8 and 13 in myeloperoxidase-dependent production of oxygen active forms. Absolute neutrophil count and neutrophil oxygen-dependent antimicrobal activity in breast cancer patients reached nadir on day 8 after anticancer therapy completion and production of oxygen active forms by neutrophils remained markedly lower than at baseline on day 13 which indicated the risk of infectional complications during this period.

Key words: breast cancer, neutrophils, antimicrobal activity, chemiluminescence, oxygen active forms.