Влияние БАД из тканей и органов морских гидробионтов на кроветворение при острой лучевой болезни

Известия ТИНРО

2004 Том 139

ТЕХНОЛОГИЯ ОБРАБОТКИ ГИДРОБИОНТОВ

УДК 664.959

В.В.Потапова, Л.А.Иванушко, Н.Н.Беседнова; И.А.Орловская; Ю.М.Позднякова, В.В.Давидович, Т.Н.Пивненко, Л.М.Эпштейн

ВЛИЯНИЕ БАД ИЗ ТКАНЕЙ И ОРГАНОВ МОРСКИХ ГИДРОБИОНТОВ НА КРОВЕТВОРЕНИЕ ПРИ ОСТРОЙ ЛУЧЕВОЙ БОЛЕЗНИ

В работе приведены сравнительные данные по действию биологически активных добавок к пище (БАД) из органов и тканей гидробионтов: гребешка, лосося, минтая, сельди, кальмара, акулы, осетра — на кроветворение при острой лучевой болезни, а также на выживаемость и среднюю продолжительность жизни облученных мышей. Показано, что на формирование эндогенных колоний в селезенке облученных мышей наибольшее стимулирующее действие оказывает БАД из гонад гребешка и препарат "Моллюскам" из мидии, наименьшее — препарат "Артротин" из хрящей акулы и кальмара. По влиянию на выживаемость и среднюю продолжительность жизни облученных мышей, а также по действию на гуморальное звено иммунитета наилучший результат установлен для БАД из гонад гребешка.

Potapova V.V., Ivanushko L.A., Besednova N.N., Orlovskaya I.A., Pozdnjakova Ju.M., Davidovich V.V., Pivnenko T.N., Epshtein L.M. The

influence of BASF from tissue and organs of marine hydrobionts on blood formation at acute radiation sickness // Izv. TINRO. — 2004. — Vol. 139. — P. 418-425.

The comparative data are presented on action of biologically active supplements to food (BASF) from organs and tissue of marine hydrobionts (scallop, mussel, salmon , pollock , herring , squid , shark , sturgeon) on blood formation at acute radiation sickness (ARS) and on survival and average life expectancy of irradiated mice. The experiments were executed on noninbred puberty mice — males with weight 20-24 and 18-20 g, receiving a standard diet. The greatest stimulating action on endogenic colonies formation in spleen of mice was rendered by the BASF from gonads of scallop and the BASF "Molluskam" produced from mussel. The lowest stimulating action was rendered by the preparation "Artrotin" from cartilages of shark and squid. Besides , the "Molluskam" and the BASF from scallop gonads were tested in 8 days experiment for estimation of their influence on the colonies formation cells. Both of them caused an increase of the colonies formation cells (CFC) in vitro and an activation of the stem blood formations cells (SFC), but the effect was better expressed for the BASF from scallop gonads.

Одной из актуальных проблем современной медицины является поиск новых эффективных малотоксичных радиозащитных средств. В последнее время повышенный интерес вызывают вещества природного происхождения, обладаю-

щие противолучевыми свойствами и способностью стимулировать кроветворение на уровне ранних костномозговых предшественников.

Главным стимулом этих исследований послужило стремление избавиться от ряда существенных недостатков классических синтетических радиопротекторов: побочного действия, ограниченного срока применения, снижения защитной активности при уменьшении дозы облучения. Применение природных препаратов позволяет получить лечебный и профилактический эффект, частично или полностью лишенный перечисленных недостатков (Гончаренко, Кудряшов, 1991). Кроме того, использование этой группы биологически активных веществ (БАВ) позволяет достичь положительных результатов и при длительном воздействии ионизирующего излучения низкой интенсивности.

Механизм противолучевого действия данных препаратов непосредственно связан с адаптивными реакциями на организменном и клеточном уровне с неизбежным вовлечением и мобилизацией возможностей иммуногормональной системы регуляции организма, с перестройкой ее функционирования в новых условиях. Лекарственные соединения, в той или иной мере влияющие на иммунноре-активность организма и состояние его антиоксидантной системы, одновременно влияют на его радиорезистентность (Васин, 2001).

Среди разнообразия противолучевых природных средств особое внимание привлекают препараты из морских гидробионтов, относящиеся к группе многокомпонентных зооадаптогенов (Кудряшов, Гончаренко, 1999). По многочисленным литературным данным, морские беспозвоночные (двустворчатые моллюски, голотурии, морские ежи и др.) и различные виды рыб (акула, лосось, осетр и т.д.) являются источниками уникальных биологически активных веществ различной природы (Слуцкая, 1972; Лебедев, 1974; Эпштейн и др., 1997; Новикова и др., 1998; Касьяненко и др., 1999; Касьяненко, Пивненко, 1999; Левин-гтон и др., 1999; Давидович, Пивненко, 2001).

Было проведено испытание БАВ из гидробионтов: моллюсков, морских звезд, голотурий, офиур, креветок, рыб, — используемых в китайской народной медицине. У некоторых из них обнаружено лечебно-профилактическое противолучевое действие (Гончаренко, Кудряшов, 1991).

Наиболее известный представитель класса зооадаптогенов — препарат МИГИ-К. Его получают из мяса мидий МуШи galloprovincialis с помощью кислотного гидролиза. Одной из областей применения препарата является лечение острой лучевой болезни (Гончаренко и др., 1997). Предлагаемый способ получения препарата позволяет иметь высокий выход конечного продукта, но жесткие условия обработки приводят к полной или частичной потере некоторых аминокислот, а также к возникновению иных, не содержащихся в исходном сырье компонентов (Пат. № 2043728). В лаборатории прикладной биохимии ТИНРО-центра разработаны методы получения БАД из различных органов и тканей морских гидробионтов с использованием метода ферментативного гидролиза (Пат. № 2171066). В настоящее время получены 3 серии БАД на основе ферментативных гидролизатов: "Моллюскам" из двустворчатых моллюсков, обогащенный свободными аминокислотами; "Нуклеатин" из молок рыб и БАД из гонад гребешка, наряду с аминокислотами содержащие олигонуклео-тиды; "Артротин" из хрящевой ткани гидробионтов, содержащий аминосахара различной структуры.

Задачей настоящего исследования было установление способности БАД из органов и тканей различных гидробионтов оказывать влияние на кроветворение при острой лучевой болезни (ОЛБ), а также на выживаемость и среднюю продолжительность жизни облученных мышей.

В работе использовали БАД, разработанные в лаборатории прикладной биохимии ТИНРО-центра: "Моллюскам" (из мидии, мантии гребешка); "Нуклеа-

тин" (из молок лосося, минтая, сельди) (Пат. № 2161002) и БАД из гонад гребешка; "Артротин" (из хрящей осетра, кальмара, лосося, акулы) (Пат. № 2171066).

Эксперименты выполнены на неинбредных половозрелых мышах-самцах массой 20-24 г, а также мышах-самцах (СВАхС57 BL/6) F1, полученных из питомника РАМН "Столбовая" массой 18-20 г, находившихся на стандартной диете в боксированных помещениях с соблюдением всех правил и международных рекомендаций Европейской конвенции по защите позвоночных животных, используемых в экспериментальных работах.

Метод эндоколоний (Till, McCulloch, 1961). Путем общего однократного облучения мышей в дозе 6,5-7,0 Гр на аппарате РОКУС-М источником 60Со (мощность дозы — 0,9 Гр/ мин) создавали костномозговую модель ОЛБ. Испытуемые физиологические растворы (0,9 % NaCl в воде) БАД вводили подкожно в левую паховую область в курсовой дозе 10 мг/кг в 0,1 мл объема. На первом этапе исследования животные опытной группы получали препараты в течение 6 дней до облучения (профилактическая схема), на втором — 6 дней после облучения (лечебная схема). Контрольным мышам вводили аналогичное количество физиологического раствора. Количество эндогенных макроколоний на селезенке определяли на 9-е сутки после облучения (Till, McCulloch, 1961). Параллельно проводился подсчет лейкоцитов по стандартной методике (Ройт-берг, С трутынский, 1999).

Метод экзоколоний (Till, McCulloch, 1961). При исследованиях in vitro клетки костного мозга (ККМ) мышей (СВАхС57 BL/6) F1, полученные путем промывания бедренных костей мышей, отмывали средой RPMI-1640, доводили до концентрации 1 • 106 мл и инкубировали в течение 2,5 ч с физиологическими растворами БАД в конечной концентрации 100 мкг/мл. После дальнейшей инкубации в присутствии митостатического агента цитозина-арабинозида — ara C ("Sigma") (30 мкг/мл), — действующего в течение 1 ч при 37 "С на клетки, находящиеся в фазе синтеза ДНК, последние отмывали средой и вводили внутривенно в количестве 0,5 • 105 сингенным летально облученным (9,5 Гр) реципиентам. Контрольную суспензию тех же клеток инкубировали в таких же условиях, но без ara C. Облучение животных проводили на аппарате РУМ-25 при мощности дозы 0,5 Гр/мин, напряжении 130 кВ, силе тока 10 мА. На 8-е сут подсчитывали число колониеобразующих клеток (КОЕс-8). Процентное содержание стволовых кроветворных клеток (СКК), находящихся в S-фазе клеточного цикла, определяли по формуле: (а - в)/а • 100, где а — число колоний, образуемых клетками без ara C, в — число колоний, образуемых клетками, преинкубиро-ванными с ara C.

При исследовании действия БАД на пролиферативную активность КОЕс в системе in vivo препараты вводили подкожно мышам в дозе 10 мг/ кг в течение 6 дней. ККМ контрольных (инъекции среды) и обработанных препаратами мышей переносили сингенным летально облученным мышам-реципиентам.

При исследовании влияния БАД на колониеобразующую способность ККМ использовали стандартный препарат метилцеллюлозы М3434 (Stem Cell Technology, Canada), содержащий чистые рекомбинантные цитокины и эмбриональную сыворотку теленка. Суспензию клеток (104 ККМ/ мл) помещали в пробирки с метилцеллюлозой и энергично высаживали в 24-луночные планшеты. Каждая лунка содержала 250 мкл метилцеллюлозы. Чашки помещали в CO2-инкуба-тор при температуре 37 "С, 5 % СО2. Подсчет колоний проводили под инвертированным микроскопом, согласно рекомендациям Stem Cell Technology (Canada). Различали коммитированные гранулоцитарно-макрофагальные колониеобразую-щие клетки (КОЕ-ГМ), эритроидные бурстообразующие клетки (БОЕ-Э), а также полипотентные предшественники, дающие начало колониям, состоящим из мак-рофагальных, эритроидных, мегакариоцитарных, гранулоцитарных и Т-клеточных элементов (КОЕ-ГЭММ).

30-дневная выживаемость и средняя продолжительность жизни.

Облучение животных проводилось так же, как и при исследовании эндогенных селезеночных колоний. Дозы препаратов и схемы их введения также аналогичны.

Иммуногенные свойства препарата из гонад гребешка оценивали по его влиянию на гуморальный иммунный ответ, путем подсчета антителобразующих клеток (АОК) в селезенках мышей (Yerne, Nordin, 1963), и клеточные факторы неспецифической резистентности (Lagrange et al., 1974).

Результаты исследований обработаны статистически с использованием общепринятых параметрических методов определения стандартного отклонения (5), средней квадратической ошибки (m); степень достоверности различий (р) между сравниваемыми показателями определяли по t-критерию Стьюдента.

В первой серии экспериментов путем определения количества эндоколо-ний на селезенках облученных неинбредных мышей-самцов было исследовано действие БАД, которые вводили в течение 6 дней до облучения (профилактическая схема), на постлучевую регенерацию СКК (табл. 1).

Результаты показали, что в группах мышей, получавших препараты из молок минтая, лосося, из мидии и гонад гребешка количество эндогенных селезеночных колоний превышало контрольные показатели. В других опытных группах достоверных различий по сравнению с контролем выявлено не было ("Артротин" из хрящей кальмара, акулы, "Моллюскам" из мантии гребешка, "Нуклеатин" из молок сельди), либо имелась слабо выраженная тенденция к повышению эндогенных селезеночных колоний ("Ар-тротин" из хрящей осетра и лосося). Как наиболее эффективные, "Моллюскам" из мидии и БАД из гонад гребешка были отобраны для дальнейшего исследования.

На следующем этапе исследовали влияние на формирование эндогенных селезеночных колоний лечебной схемы введения "Моллюс-кама" из мидии и БАД из гонад гребешка. Было установлено, что количество эндоколоний на селезенке у мышей опытных групп, получавших препараты, в 2,7 раза превышало показатели контрольной группы (12,6 ± 2,7 р < 0,05; 12,4 ± 1,8 р < 0,01 и 4,6 ± 1,27 соответственно).

Как известно (Дыгай, Клименко, 1992), костный мозг млекопитающих представляет собой равновесную систему с низкой пролиферативной активностью: в стабильных условиях основная масса СКК находится в стадии покоя, вне клеточного цикла, т.е. в G0 периоде. Как видно из данных табл. 2, только число КОЕс-8 (in vivo) и КОЕс-8 в S-фазе (in vitro и in vivo) в селезенке летально облученных сингенных реципиентов достоверно превышало таковое у контрольных животных. Это свидетельствует о способности гидролизатов выводить при кратковременном контакте СКК из фазы G0 в S-фазу клеточного цикла с последующей клеточной репликацией.

Таблица 1 Влияние гидролизатов морских гидробионтов на количество эндогенных селезеночных колоний у облученных мышей

Table 1

The influence of hydrolisates from marine hydrobionts on quantity endogenic colonies in spleens of irradiated mice

тт Количество

Название препарата

эндоколоний

БАД серии "Моллюскам"

Из мантии гребешка 11,4 ± 1,9

Из мидии 20,5 ± 3,1*

БАД серии "Нуклеатин"

Из молок лосося 13,7 ± 2,4

Из молок минтая 16,7 ± 2,8*

Из молок сельди 12,0 ± 1,7

БАД из гонад гребешка 21,9 ± 3,3*

БАД серии "Артротин"

Из хрящей осетра 14,3 ± 2,5

Из хрящей лосося 12,7± 2,0

Из хрящей акулы 10,2 ± 1,9

Из хрящей кальмара 9,4 ± 1,7

Контроль 8,9 ± 1,7

p < 0,05.

Таблица 2

Влияние БАД из мидии и гонад гребешка на число КОЕс-8 и КОЕс в S-фазе

Table 2

The influence BASF from mytillus and patinopecten gonads on quantity КОЕс-8

and КОЕс in S-fase

Инкубирование KKM Введение гидролизатов мышам

а г с гидролизатами in vitro in vivo

№ Г руппа 0 KOEc-8 KOEc-8 в 0 KOEc-8 KOEc-8 в KOEc-8 , n c , о/ KOEc-8 . n 0 , 0/ ara C S-фазе, %_+ ara C S-фазе, %

1 ^нтроль 20,5 ± 1,5 18,7 ± 1,5 9 16,3 ± 0,8 17,1 ± 1,3 0

2 "Mоллюcкам"

из мидии 20,8 ± 1,9 13,5 ± 1,6 35 23,4 ± 1,4* 22,0 ± 2,3 5

3 БАД из гонад

гребешка 21,4 ± 1,8 16,2 ± 0,9 24 19,9 ± 1,5* 15,1 ± 1,2 24

* p < 0,05.

CKK полипотентна и гао^бна к дифференцировке по вcем направлениям миело- и лимфопоэза. Тонкая регуляция гемопоэза, позволяющая быcтро реагировать на изменяющиеcя потребноcти макроорганизма в зрелых клетках крови, проиcxодит в первую очередь на уровне так называемых коммитированных предшественников, дающих начало отдельным росткам кроветворения. Для изучения пролиферации отдельных коммитированных кроветворных предшественников игаользуют вязкую cреду (метилцеллюлозу), в которой миграция клеток затруднена, в результате чего каждый пролиферирующий предшественник проявляет cебя по образованию макроcкопичеcкого клона — колонии клеток той или иной линии дифференцировки. В бедующей cерии экгаериментов было проведено и^ледование влияния гидролизатов из моржих гидробионтов на гао^бность KKM формировать KOE-ГМ, BOE-Э и KOE-ГЭММ.

При иccледовании действия БАД из гонад гребешка на колониеобразую-щую активность KKM обнаружено увеличение количества KOE-ГЭММ in vivo (контроль — 0,8 ± 0,5; опыт — 2,3 ± 0,3, р < 0,05) и in vitro (контроль — 0, опыт — 1,3 ± 0,5). Подобного действия у "Mоллюcкама" из мидии обнаружено не было.

Таким образом, взаимодействие гидролизатов c KKM in vitro вызывает активацию CKK, обегаечивающую угаление проце^ов пролиферации и дифференцировки гемопоэтичеcкиx клеток-предшественников, в наибольшей степени выраженные при игаользовании БАД из гонад гребешка.

^к известно, OЛБ часто ^провождается инфекционными оможнениями. Гранулоциты являются одним из огаовных факторов, контролирующих инвазию макроорганизма возбудителями инфекционных проце^ов. В cвязи c этим грану-лоцитоз и повышенная метаболиче^ая активноcть этих клеток, индуцируемая иммуномодуляторами, оказывают cущеcтвенное влияние на течение и иcxод инфекционного проце^а.

Kак показали наши иccледования, введение БАД из моржих гидробионтов животным ^провождается быcтрым выходом в циркуляцию большого количества нейтрофилов, по-видимому, за cчет мобилизации костномозговых нейтрофи-лов. Угаление процеccов пролиферации может быть опоcредованно также действием колониеcтимулирующиx факторов, которые cекретируютcя макрофагами, активированными иммуномодуляторами. Вcе изученные препараты увеличивали количество лейкоцитов в крови мышей при игаользовании лечебной cxемы введения препаратов ^м. риcунок).

Положительное влияние БАД на кроветворение позволило надеятьcя на уcпешные результаты применения их при экгаериментальной OЛБ. Тридцатидневная выживаемоcть и cредняя продолжительноcть жизни при этом являются важными критериями для оценки радиозащитного действия препаратов. Из ре-

зультатов, представленных в табл. 3, следует, что наибольшая выживаемость и средняя продолжительность жизни регистрировались в группе животных, получавших БАД из гонад гребешка после облучения, тогда как при профилактической схеме и у животных 2-й опытной группы не было зарегистрировано статистически достоверного увеличения выживаемости и средней продолжительности жизни. Исходя из этих данных "Моллюскам" из мидии был исключен из дальнейшего исследования.

16

и 12 о

s 10 J

§ 8 >5

О

? 4

° о 2

0

Влияние БАД на количество лейкоцитов в периферической крови облученных мышей (в процентах по отношению к интактному контролю, принятому за 100 %) — лечебная схема

The influence BASF on quantity leukocytes in peripheric blood of irradiated mice (in percentage in relation to intact the control accepted for 100 percents) — the medical circuit

Таблица 3

Влияние БАД из мидии и гонад гребешка на выживаемость и среднюю продолжительность жизни (СПЖ) облученных мышей

Table 3

The influence BASF from mytellisand patinopecten gonads on survival and average life of the irradiated mice

Выживаемость — Выживаемость — СПЖ — профилак- СПЖ — лечебная № Группа профилактическая лечебная схема, тическая схема, схема, _схема, %_%_дни_дни_

1 "Моллюскам"

из мидии 21,6 ± 10,6

2 БАД из гонад

гребешка 32,0 ± 6,4

3 Контроль_10,0 ± 9,5

* p < 0,01.

Результаты исследования эффективности БАД из гонад гребешка в качестве лечебного средства при ОЛБ, индуцированной у-лучами 60Со в дозах, вызывающих развитие костномозговой формы лучевой болезни, позволяют положительно оценить этот препарат. Его способность стимулировать восстановление кроветворения при применении после облучения может осуществляться благодаря высвобождению ряда гуморальных факторов (типа колониестимулирующего фактора макрофагов и лимфоцитов, a-2-макроглобулина, гемопоэтина и др.), обладающих регуляторной активностью в отношении гемопоэза, связыванию радиотоксинов и снижению их ингибирующего влияния на полипотентную стволовую клетку.

Известно, что облучение приводит к выраженной задержке пролиферации в результате не только гибели клеток и аномалии митозов, но и угнетения ми-

15

13,3

7

IZ

lL

из мидии

из мантии гребешка

из гонад гребешка

контроль

22.4 ± 13,9

40,6 ± 9,1*

12.5 ± 5,2

14,3 ± 2,36

17,6 ± 1,46 13,1 ± 2,1

17.6 ± 1,17

19.7 ± 1,7* 11,2 ± 1,5

тотической активности. Действие БАД из гонад гребешка, возможно, связано с сокращением продолжительности митотического блока, а также с повышением митотической активности клеток, способных к делению.

Биологическая активность БАД из гонад гребешка может определяться суммарным действием содержащихся в нем компонентов, включающих наряду со свободными аминокислотами низкомолекулярную ДНК, известную своими радиозащитными свойствами (Пашук и др., 1995), а также высоким антиоксидант-ным потенциалом (Позднякова, 2003).

Нами установлен эффект БАД из гонад гребешка на образование антите-лобразующих клеток в селезенках мышей к эритроцитам барана (в контроле — 6027,2 ± 1182,5, в опыте — 8705,7 ± 959,8 p < 0,01), также повышается и титр антител к этому антигену (ЭБ). Близкие результаты получены по БАД "Моллюскам" из мидии.

В результате проведенных исследований установлено, что на формирование эндогенных колоний в селезенках облученных мышей наибольшее стимулирующее действие оказывают БАД из гонад гребешка и "Моллюскам" из мидии, наименьшее — "Артротин" из хрящей акулы и кальмара. В экспериментах по изучению влияния БАД на формирование КОЕс-8 выявлено, что "Моллюскам" из мидии и БАД из гонад гребешка вызывают повышение колониеобразующих клеток in vitro и активацию СКК, в большей степени данный эффект выражен у последнего препарата. Положительное влияние БАД на количество лейкоцитов у облученных мышей при лечебной схеме их введения показано для "Моллюска-ма" из мидии, мантии гребешка и БАД из гонад гребешка. По влиянию на выживаемость и среднюю продолжительность жизни облученных мышей, а также по действию на гуморальное звено иммунитета наилучший результат установлен для БАД из гонад гребешка.

Таким образом, полученные нами результаты позволяют утверждать, что способность БАД из гонад гребешка воздействовать на стволовые клетки, их пролиферацию и миграцию определяет эффективность его преимущественно при лечебном применении, когда восстановление происходит за счет оставшихся неповрежденными или полностью репопулировавших клеток. В определенной степени лечебный эффект может быть обусловлен стимуляцией этим веществом гуморального звена иммунитета.

Положительно характеризует БАД из гонад гребешка отсутствие токсичности, хорошая растворимость, переносимость, отсутствие видимой клинической реакции на введение эффективной дозы. Анализ результатов исследований позволяет заключить, что БАД из гонад гребешка может использоваться в комплексе раннего лечения ОЛБ.

Литература

Васин М.В. С редства профилактики и лечения лучевых поражений. — М., 2001. — 314 с.

Гончаренко E.H., Кудряшов Ю.Б. Противолучевые средства природного происхождения // Успехи соврем. биологии. — 1991. — Т. 3, № 2. — С. 302-315.

Гончаренко E.H., Деев Л.И. Кудряшов Ю.Б., Пархоменко И.М. Использование препарата природного происхождения для ослабления биологических эффектов в условиях радиоактивного загрязнения и в радиобиологическом эксперименте // Радиацион. биология. Радиоэкология. — 1997. — Т. 37, вып. 4. — С. 676-682.

Давидович В.В., Пивненко Т.Н. Аминокислоты двустворчатых моллюсков: биологическая роль и применение в качестве БАД // Изв. ТИНРО. — 2001. — Т. 129. — С. 146-153.

ДыгаЁ А.М., Клименко H.A. Воспаление и гомеостаз. — Томск: Изд-во Том. унта, 1992. — 274 с.

Касьяненко Ю.И., Пивненко Т.Н. Сравнительные физико-химические характеристики низкомолекулярной дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК) из морских гидробионтов // Изв. ТИНРО. — 1999. — Т. 125. — С. 152-158.

Касьяненко Ю.И., Эпштейн Л.М., Гажа А.К. и др. Биологически активная пищевая добавка — дезоксирибонуклеиновая кислота (ДНК) из молок лососевых // Изв. ТИНРО. — 1999. — Т. 125. — С. 139-146.

Кудряшов Ю.Б., Гончаренко Е.Н. Современные проблемы противолучевой химической защиты организмов // Радиацион. биология. Радиоэкология. — 1999. — Т. 39, № 2-3. — С. 197-211.

Лебедев А.В. Азотистые экстрактивные вещества мышечной ткани беспозвоночных // Журн. эволюц. биохимии и физиологии. — 1974. — Т. 10. — С. 232-242.

Левингтон Ж.Б., Химич Т.Л., Ятченко Е.А. и др. Медико-биологические исследования икры морского ежа // Изв. ТИНРО. — 1999. — Т. 125. — С. 254-259.

Новикова М.В., Рехина Н.И., Беседина Т.В. и др. Пищевая биологически активная добавка из мидий // Вопр. питания. — 1998. — № 1. — С. 10-13.

Пат. № 2043728 РФ. Продукт из мяса мидий / Н.И.Рехина, М.В.Новикова, А.Г.Коноплянников. Заявл. 05.05.93; Опубл. 20.09.95.

Пат. № 2161002 РФ. Пищевой общеукрепляющий лечебно-профилактический продукт из хрящевой ткани акул и способ его получения / Т.Н.Пив-ненко, Л.М.Эпштейн, Ю.М.Позднякова и др. Заявлено 30.07.99; Опубл. 27.12.2000; Бюл. № 36.

Пат. № 2171066 РФ. Продукт, обогащенный свободными аминокислотами и способ его получения / Т.Н.Пивненко, Л.М.Эпштейн, Ю.М.Позднякова и др. Заявлено 22.03.2000; Опубл. 27.07.01.

Пашук Л.К., Агрышко Г.Н., Трещалина Е.М. Препараты ДНК как потенциальные терапевтические средства // Хим.-фарм. журн. — 1995. — Т. 29, № 6. — С. 61-64.

Позднякова Ю.М. Технология биологически активных добавок к пище на основе ферментативного гидролиза гонад гидробионтов: Автореф. дис. ... канд. техн. наук. — Владивосток: ТИНРО-центр, 2003. — 160 с.

Ройтберг Г.Е., Струтынский А.В. Лабораторная и инструментальная диагностика заболеваний внутренних органов: Руководство для врачей и студентов. — М., 1999. — 622 с.

Слуцкая Т.Н. Сравнительная характеристика сушенных трепанга и кукумарии // Исследования по технологии рыбных продуктов. — Владивосток: ТИНРО, 1972. — Вып. 3. — С. 139-146.

Эпштейн Л.Н., Боровская Г.А., Левачев М.М. и др. Эффективность перо-рального применения нового иммунокорректора природного происхождения // Вопр. питания. — 1997. — № 1. — С. 10-13.

Lagrange P.H., Mackaness J.B., Miller T.E. Influence of dose and rout of antigen infection of T-cells // Exp. Med. — 1974. — Vol. 139. — P. 528-542.

Till J.E., McCulloch E.A. A direct measurement of the radiation sensitivity of normal mouse bone marrow cells // Radiate Res. — 1961. — Vol. 14, № 2. — P. 213-222.

Yerne N.K., Nordin F.N. Plaque formation in agar by single antibody producing // Science. — 1963. — Vol. 40(65). — P. 405-407.

Поступила в редакцию 27.07.04 г.