СПОСОБ СОЗДАНИЯ НАНОРАЗМЕРНОЙ ДИАГНОСТИЧЕСКОЙ МЕТКИ НА ОСНОВЕ КОНЪЮГАТОВ НАНОЧАСТИЦ И ОДНОДОМЕННЫХ АНТИТЕЛ

1. Способ создания наноразмерной диагностической метки на основе конъюгатов наночастиц и однодоменных антител, включающий подготовку поверхности наночастиц при помощи производных полиэтиленгликоля, отличающийся тем, что наночастицы конъюгируют с рекомбинантными однодоменными антителами с распознающими центрами таким образом, что распознающие центры однодоменных антител всегда ориентированы в сторону расположения анализируемых молекул.
2. Способ создания наноразмерной диагностической метки на основе конъюгатов наночастиц и однодоменных антител по п.1, отличающийся тем, что в качестве наночастиц используют полупроводниковые нанокристаллы с разной длиной волны максимума флуоресценции.
3. Способ создания наноразмерной диагностической метки на основе конъюгатов наночастиц и однодоменных антител по п.1, отличающийся тем, что в качестве наночастиц используют магнитные наночастицы.
4. Способ создания наноразмерной диагностической метки на основе конъюгатов наночастиц и однодоменных антител по п.1, отличающийся тем, что в качестве наночастиц используют плазменные наночастицы.
5. Способ создания наноразмерной диагностической метки на основе конъюгатов наночастиц и однодоменных антител по п.1, отличающийся тем, что в качестве наночастиц используют одностенные нанотрубки.
6. Способ создания наноразмерной диагностической метки на основе конъюгатов наночастиц и однодоменных антител по пп.2 - 5, отличающийся тем, что в качестве наночастиц используют гибридные материалы, представляющие собой комбинации перечисленных наносистем.
7. Способ создания наноразмерной диагностической метки на основе конъюгатов наночастиц и однодоменных антител по п.1, отличающийся тем, что поверхность наночастицы модифицируют низкомолекулярными соединениями, содержащими тиольные группы.
8. Способ создания наноразмерной диагностической метки на основе конъюгатов наночастиц и однодоменных антител по п.7, отличающийся тем, что поверхность наночастиц модифицируют путем замещения низкомолекулярных соединений, содержащих тиольные группы, производными полиэтиленгликоля.
9. Способ создания наноразмерной диагностической метки на основе конъюгатов наночастиц и однодоменных антител по п.1, отличающийся тем, что в качестве первичного источника однодоменных антител используют особи семейства камелоидов или над отряда акул.
10. Способ создания наноразмерной диагностической метки на основе конъюгатов наночастиц и однодоменных антител по п.1, отличающийся тем, что селекцию однодоменных антител проводят методом фагового дисплея.
11. Способ создания наноразмерной диагностической метки на основе конъюгатов наночастиц и однодоменных антител по п.10, отличающийся тем, что селекцию однодоменных антител проводят методом фагового дисплея при помощи хелперного фага КМ 13.
12. Способ создания наноразмерной диагностической метки на основе конъюгатов наночастиц и однодоменных антител по п.9, отличающийся тем, что в C-концевую часть молекул рекомбинантных однодоменных антител вводят гексагистидиновую последовательность аминокислот.
13. Способ создания наноразмерной диагностической метки на основе конъюгатов наночастиц и однодоменных антител по п.12, отличающийся тем, что в C-концевую часть молекулы рекомбинантных однодоменных антител вводят терминальный остаток цистеина.
14. Способ создания наноразмерной диагностической метки на основе конъюгатов наночастиц и однодоменных антител по п.13, отличающийся тем, что очистку однодоменных антител проводят методом металл-аффинной хроматографии.
15. Способ создания наноразмерной диагностической метки на основе конъюгатов наночастиц и однодоменных антител по п.14, отличающийся тем, что после очистки однодоменных антител проводят реакцию восстановления межмолекулярных дисульфидных связей при помощи трис-(2-карбоксиэтил)фосфина для получения мономерной фракции антител со свободными сульфгидрильными группами.
16. Способ создания наноразмерной диагностической метки на основе конъюгатов наночастиц и однодоменных антител по п.15, отличающийся тем, что восстановление межмолекулярных дисульфидных связей при помощи трис-(2-карбоксиэтил)фосфина проводят в течение 25-35 мин при температуре 20-25°C.
17. Способ создания наноразмерной диагностической метки на основе конъюгатов наночастиц и однодоменных антител по п.8, отличающийся тем, что поверхность наночастицы модифицируют производными полиэтиленгликоля, имеющими в своем составе гидроксильную и тиольную группы.
18. Способ создания наноразмерной диагностической метки на основе конъюгатов наночастиц и однодоменных антител по п.17, отличающийся тем, что после модификации поверхности наночастиц производными полиэтиленгликоля, имеющими в своем составе гидроксильную и тиольную группы, конъюгирование наночастиц и однодоменных антител проводят через стадию активации поверхности наночастиц при помощи N-(п-малеимидофенил)-изоцианата.
19. Способ создания наноразмерной диагностической метки на основе конъюгатов наночастиц и однодоменных антител по п.18, отличающийся тем, что стадию активации поверхности наночастиц при помощи N-(п-малеимидофенил)-изоцианата проводят в диапазоне значений pH 8,4-8,6 в течение 30-60 мин в темноте при комнатной температуре и постоянном мягком перемешивании.
20. Способ создания наноразмерной диагностической метки на основе конъюгатов наночастиц и однодоменных антител по п.8, отличающийся тем, что наночастицы модифицируют смесью двух производных полиэтиленгликоля, имеющих в своем составе гидроксильную и тиольную группы или амино и тиольную группы.
21. Способ создания наноразмерной диагностической метки на основе конъюгатов наночастиц и однодоменных антител по п.20, отличающийся тем, что после модификации поверхности наночастиц смесью двух производных полиэтиленгликоля, имеющих в своем составе гидроксильную и тиольную группы или амино и тиольную группы, конъюгирование наночастиц и однодоменных антител проводят через стадию активации поверхности наночастиц при помощи сульфосукцинимидил-4-(N-малеимидометил)-циклогексан-1-карбоксилата.
22. Способ создания наноразмерной диагностической метки на основе конъюгатов наночастиц и однодоменных антител по п.21, отличающийся тем, что стадию активации поверхности наночастиц при помощи сульфосукцинимидил-4-(N-малеимидометил)-циклогексан-1-карбоксилата проводят в диапазоне значений pH 7.1-7.3 в течение 55-65 мин в темноте, при комнатной температуре и постоянном мягком перемешивании.
23. Способ создания наноразмерной диагностической метки на основе конъюгатов наночастиц и однодоменных антител по пп.19,22, отличающийся тем, что после стадии активации поверхности наночастиц фракции активированных наночастиц подвергают очистке от избытка N-(п-малеимидофенил)-изоцианата и сульфосукцинимидил-4-(N-малеимидометил)-циклогексан-1-карбоксилата с помощью гель-фильтрационной хроматографии.
24. Способ создания наноразмерной диагностической метки на основе конъюгатов наночастиц и однодоменных антител по п.23, отличающийся тем, что полученные очищенные активированные наночастицы смешивают с мономерными однодоменными антителами, содержащими свободную сульфгидрильную группу C-концевого остатка цистеина по п.17.
25. Способ создания наноразмерной диагностической метки на основе конъюгатов наночастиц и однодоменных антител по п.24, отличающийся тем, что реакцию конъюгирования очищенных активированных наночастиц и однодоменных антител, содержащих свободную сульфгидрильную группу C-концевого остатка цистеина, проводят путем инкубирования реакционной смеси в диапазоне значений pH 7,1-7,3 в течение 110-130 мин в темноте, при комнатной температуре и постоянном мягком перемешивании.
26. Способ создания наноразмерной диагностической метки на основе конъюгатов наночастиц и однодоменных антител по п.25, отличающийся тем, что после инкубации конъюгат наночастиц и однодоменных антител подвергают очистке с помощью гель-фильтрационной хроматографии.