ТЕРАПЕВТИЧЕСКОЕ СРЕДСТВО ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ДЕМЕНЦИИ, ПРЕДСТАВЛЯЮЩЕЕ СОБОЙ КОМБИНАЦИЮ ПРОИЗВОДНОГО ПИРАЗОЛОХИНОЛИНА И МЕМАНТИНА
THERAPEUTIC AGENT FOR TREATMENT OF DEMENTIA, WHICH IS COMBINATION OF PYRAZOLOQUINOLINE DERIVATIVE AND MEMANTINE

Область техники
[0001] Настоящее изобретение относится к терапевтическому средству для лечения деменции, представляющему собой комбинацию производного пиразолохинолина, обладающего ингибирующей активностью в отношении фосфодиэстеразы 9 (PDE9), или его фармацевтически приемлемой соли и мемантина или его фармацевтически приемлемой соли.
Уровень техники
[0002]
[0003] Производные пиразолохинолина, представленные формулой (I) (далее в данном документе называемые "соединением (I)"), обладают ингибирующей активностью в отношении фосфодиэстеразы 9 (PDE9), и считается, что они обладают перспективными благоприятными эффектами в отношении когнитивной функции при болезни Альцгеймера (PTL 1).
[0004] Мемантин, представленный формулой (II) (в данном документе называемый "соединением (II)"), обладает антагонистическим эффектом в отношении глутаматных рецепторов типа NMDA и, как сообщалось, обеспечивает улучшение когнитивной функции при болезни Альцгеймера со степенью тяжести от умеренной до тяжелой, при этом также проявляет эффективность в отношении второстепенных симптомов, таких как тревожное возбуждение, раздражительность, агрессия и расстройство поведения (BPSD: поведенческие и психологические симптомы деменции) (см. NPL 1 и 2).
[0005] Другие терапевтических средств для лечения болезни Альцгеймера, которые были одобрены для применения, включают ингибиторы ацетилхолинэстеразы: донепезил, галантамин и ривастигмин. Донепезил показан для лечения болезни Альцгеймера со степенью тяжести от легкой до тяжелой, и сообщалось, что в дополнение к благоприятному эффекту в отношении когнитивной функции он также обладает эффектом против BPSD, включая тревожное возбуждение, тревожность, апатию, бред, депрессию, расторможенность, галлюцинацию, раздражительность, нарушенное моторное поведение и апатию (см. NPL 3, 4, 5, 6 и 7). Галантамин и ривастигмин показаны для лечения болезни Альцгеймера со степенью тяжести от легкой до умеренной (см. NPL 8 и 9). Комбинированное применение разных ингибиторов ацетилхолинэстеразы противопоказано, но любой ингибитор ацетилхолинэстеразы можно использовать в комбинации с мемантином. В соответствии с Руководством по лечению деменции, 2010 года, ингибиторы ацетилхолинэстеразы рекомендованы для облегчения главных симптомов болезни Альцгеймера с использованием одного из донепезила, галантамина или ривастигмина, выбранного исходно, и с последующей заменой на другой ингибитор ацетилхолинэстеразы, если возникает проблема в плане эффективности или переносимости. Если эффект ингибитора ацетилхолинэстеразы является недостаточным или возникает проблема в отношении переносимости, то можно рассматривать комбинацию с мемантином или с заменой на мемантин.
[0006] Однако, ингибиторы ацетилхолинэстеразы обладают побочными эффектами в отношении пищеварительной системы. В тех случаях, где их применение исключено из-за побочных эффектов или особенностей переносимости, можно выбрать мемантин для пациентов с болезнью Альцгеймера со степенью тяжести от умеренной до тяжелой, но для пациентов с болезнью Альцгеймера легкой степени на данный момент не существует эффективного способа лечения. Комбинированное применение ингибиторов ацетилхолинэстеразы с мемантином возможно у пациентов, у которых наблюдались неудовлетворительные эффекты, но мнения разделяются, поскольку в некоторых сообщениях отмечен эффект от их комбинированного применения (см. NPL 10) в то время, как в других сообщениях отмечается отсутствие эффекта (см. NPL 11).
Список использованной литературы
Патентная литература
[0007] [PTL 1] Патент США № 8563565
Непатентные литературные источники
[0008] [NPL 1] Mecocci et al., Int J Geriatr Psychiatry, vol. 24, p. 532
[NPL 2] Grossberg et al., Dement Geriatr Cogn Disord, 2009, vol. 27, p. 164
[NPL 3] Homma et al., Dement. Geriatr. Cogn. Disord., 2000, vol. 11, p. 299
[NPL 4] Homma et al., Dement. Geriatr. Cogn. Disord., 2008, vol. 25, p. 399
[NPL 5] Mori et al., Ann. Neurol, vol. 72, p. 41 2012
[NPL 6] Holmes at al., Neurology, 2004, vol. 63, p. 214
[NPL 7] Gauthier et al., Int Psychogeriatr, 2002, vol. 14, p. 389
[NPL 8] Raskind et al., Neurology, 2000, vol. 54, p. 226
[NPL 9] Winblad et al., Neurology, 2007, vol. 69, p. S14
[NPL 10] Lopez et al., J Neurol Neurosurg Psychiatry, 2009, vol. 80, p. 600
[NPL 11] Howard et al., New Eng J. Med., 2012, vol. 366, p. 893
Краткое описание изобретения
Техническая задача
[0009] Дело обстоит так, что в настоящее время не существует удовлетворительного способа лечения болезни Альцгеймера, вместе с тем эффективное средство против деменции также еще не было разработано.
Решение задачи
[0010] С целью решения данной задачи авторы настоящего изобретения провели очень тщательное исследование с применением модели индуцированного скополамином когнитивного нарушения на крысах, в результате которого авторы настоящего изобретения завершили настоящее изобретение с выявлением, что комбинированное применение соединения (I) или его фармацевтически приемлемой соли с соединением (II) или его фармацевтически приемлемой солью неожиданно проявляет эффект ингибирования в отношении индуцированного скополамином когнитивного нарушения в дозах, каждая из которых по отдельности является неэффективной.
[0011] В частности, настоящее изобретение относится к следующим пунктам <1>-<19.3>.
<1> Терапевтическое средство для лечения болезни Альцгеймера, предназначенное для комбинированного применения (S)-7-(2-метокси-3,5-диметилпиридин-4-ил)-1-(тетрагидрофуран-3-ил)-1H-пиразолo[4,3-c]хинолин-4(5H)-она, представленного формулой (I):
или его фармацевтически приемлемой соли с мемантином, представленным формулой (II):
, или его фармацевтически приемлемой солью.
<2> Терапевтическое средство в соответствии с <1>, где болезнь Альцгеймера представляет собой болезнь Альцгеймера умеренной или тяжелой степени.
<3> Терапевтическое средство в соответствии с <1> или <2>, где мемантин или его фармацевтически приемлемая соль представляет собой мемантина гидрохлорид.
<4> Терапевтическое средство в соответствии с любым из <1>-<3>, где (S)-7-(2-метокси-3,5-диметилпиридин-4-ил)-1-(тетрагидрофуран-3-ил)-1H-пиразолo[4,3-c]хинолин-4(5H)-он или его фармацевтически приемлемая соль представляет собой (S)-7-(2-метокси-3,5-диметилпиридин-4-ил)-1-(тетрагидрофуран-3-ил)-1H-пиразолo[4,3-c]хинолин-4(5H)-она малеат.
<5> Терапевтическое средство для лечения болезни Альцгеймера, предназначенное для одновременного или раздельного введения (S)-7-(2-метокси-3,5-диметилпиридин-4-ил)-1-(тетрагидрофуран-3-ил)-1H-пиразолo[4,3-c]хинолин-4(5H)-она, представленного формулой (I):
, или его фармацевтически приемлемой соли и мемантина, представленного формулой (II):
, или его фармацевтически приемлемой соли.
<6> Терапевтическое средство в соответствии с <5>, где болезнь Альцгеймера представляет собой болезнь Альцгеймера умеренной или тяжелой степени.
<7> Терапевтическое средство в соответствии с <5> или <6>, где мемантин или его фармацевтически приемлемая соль представляет собой мемантина гидрохлорид.
<8> Терапевтическое средство в соответствии с любым из <5>-<7>, где (S)-7-(2-метокси-3,5-диметилпиридин-4-ил)-1-(тетрагидрофуран-3-ил)-1H-пиразолo[4,3-c]хинолин-4(5H)-он или его фармацевтически приемлемая соль представляет собой (S)-7-(2-метокси-3,5-диметилпиридин-4-ил)-1-(тетрагидрофуран-3-ил)-1H-пиразолo[4,3-c]хинолин-4(5H)-она малеат.
<9> Терапевтическое средство для лечения болезни Альцгеймера, содержащее (S)-7-(2-метокси-3,5-диметилпиридин-4-ил)-1-(тетрагидрофуран-3-ил)-1H-пиразолo[4,3-c]хинолин-4(5H)-он, представленный формулой (I):
, или его фармацевтически приемлемую соль и мемантин, представленный формулой (II):
, или его фармацевтически приемлемую соль.
<10> Терапевтическое средство в соответствии с <9>, где болезнь Альцгеймера представляет собой болезнь Альцгеймера умеренной или тяжелой степени.
<11> Терапевтическое средство в соответствии с <9> или <10>, где мемантин или его фармацевтически приемлемая соль представляет собой мемантина гидрохлорид.
<12> Терапевтическое средство в соответствии с любым из <9>-<11>, где (S)-7-(2-метокси-3,5-диметилпиридин-4-ил)-1-(тетрагидрофуран-3-ил)-1H-пиразолo[4,3-c]хинолин-4(5H)-он или его фармацевтически приемлемая соль представляет собой (S)-7-(2-метокси-3,5-диметилпиридин-4-ил)-1-(тетрагидрофуран-3-ил)-1H-пиразолo[4,3-c]хинолин-4(5H)-она малеат.
<13> Мемантин, представленный формулой (II):
, или его фармацевтически приемлемая соль для лечения болезни Альцгеймера путем применения в комбинации с (S)-7-(2-метокси-3,5-диметилпиридин-4-ил)-1-(тетрагидрофуран-3-ил)-1H-пиразолo[4,3-c]хинолин-4(5H)-оном, представленным формулой (I):
, или его фармацевтически приемлемой солью.
<13.1> Мемантин или его фармацевтически приемлемая соль в соответствии с <13>, где болезнь Альцгеймера представляет собой болезнь Альцгеймера умеренной или тяжелой степени.
<13.2> Мемантин или его фармацевтически приемлемая соль в соответствии с <13> или <13.1>, где мемантин или его фармацевтически приемлемая соль представляет собой мемантина гидрохлорид.
<13.3> Мемантин или его фармацевтически приемлемая соль в соответствии с любым из <13>-<13.2>, где (S)-7-(2-метокси-3,5-диметилпиридин-4-ил)-1-(тетрагидрофуран-3-ил)-1H-пиразолo[4,3-c]хинолин-4(5H)-он или его фармацевтически приемлемая соль представляет собой (S)-7-(2-метокси-3,5-диметилпиридин-4-ил)-1-(тетрагидрофуран-3-ил)-1H-пиразолo[4,3-c]хинолин-4(5H)-она малеат.
<14> (S)-7-(2-Метокси-3,5-диметилпиридин-4-ил)-1-(тетрагидрофуран-3-ил)-1H-пиразолo[4,3-c]хинолин-4(5H)-он, представленный формулой (I):
, или его фармацевтически приемлемая соль для лечения болезни Альцгеймера путем применения в комбинации с мемантином, представленным формулой (II):
, или его фармацевтически приемлемой солью.
<14.1> Соединение, представленное формулой (I), или его фармацевтически приемлемая соль в соответствии с <14>, где болезнь Альцгеймера представляет собой болезнь Альцгеймера умеренной или тяжелой степени.
<14.2> Соединение, представленное формулой (I), или его фармацевтически приемлемая соль в соответствии с <14> или <14.1>, где мемантин или его фармацевтически приемлемая соль представляет собой мемантина гидрохлорид.
<14.3> Соединение, представленное формулой (I), или его фармацевтически приемлемая соль в соответствии с любым из <14>-<14.2>, где (S)-7-(2-метокси-3,5-диметилпиридин-4-ил)-1-(тетрагидрофуран-3-ил)-1H-пиразолo[4,3-c]хинолин-4(5H)-он или его фармацевтически приемлемая соль представляет собой (S)-7-(2-метокси-3,5-диметилпиридин-4-ил)-1-(тетрагидрофуран-3-ил)-1H-пиразолo[4,3-c]хинолин-4(5H)-она малеат.
<15> Способ лечения болезни Альцгеймера, предусматривающий комбинированное применение (S)-7-(2-метокси-3,5-диметилпиридин-4-ил)-1-(тетрагидрофуран-3-ил)-1H-пиразолo[4,3-c]хинолин-4(5H)-она, представленного формулой (I):
, или его фармацевтически приемлемой соли с мемантином, представленным формулой (II):
, или его фармацевтически приемлемой солью.
<15.1> Способ в соответствии с <15>, где болезнь Альцгеймера представляет собой болезнь Альцгеймера умеренной или тяжелой степени.
<15.2> Способ в соответствии с <15> или <15.1>, где мемантин или его фармацевтически приемлемая соль представляет собой мемантина гидрохлорид.
<15.3> Способ в соответствии с любым из <15>-<15.2>, где (S)-7-(2-метокси-3,5-диметилпиридин-4-ил)-1-(тетрагидрофуран-3-ил)-1H-пиразолo[4,3-c]хинолин-4(5H)-он или его фармацевтически приемлемая соль представляет собой (S)-7-(2-метокси-3,5-диметилпиридин-4-ил)-1-(тетрагидрофуран-3-ил)-1H-пиразолo[4,3-c]хинолин-4(5H)-она малеат.
<16> Фармацевтическая композиция, содержащая (S)-7-(2-метокси-3,5-диметилпиридин-4-ил)-1-(тетрагидрофуран-3-ил)-1H-пиразолo[4,3-c]хинолин-4(5H)-он, представленный формулой (I):
, или его фармацевтически приемлемую соль, мемантин, представленный формулой (II):
, или его фармацевтически приемлемую соль и вспомогательное вещество.
<16.1> Фармацевтическая композиция в соответствии с <16>, где мемантин или его фармацевтически приемлемая соль представляет собой мемантина гидрохлорид.
<16.2> Фармацевтическая композиция в соответствии с <16> или <16.1>, где (S)-7-(2-метокси-3,5-диметилпиридин-4-ил)-1-(тетрагидрофуран-3-ил)-1H-пиразолo[4,3-c]хинолин-4(5H)-он или его фармацевтически приемлемая соль представляет собой (S)-7-(2-метокси-3,5-диметилпиридин-4-ил)-1-(тетрагидрофуран-3-ил)-1H-пиразолo[4,3-c]хинолин-4(5H)-она малеат.
<17> Набор, содержащий
фармацевтическую композицию, содержащую (S)-7-(2-метокси-3,5-диметилпиридин-4-ил)-1-(тетрагидрофуран-3-ил)-1H-пиразолo[4,3-c]хинолин-4(5H)-он, представленный формулой (I):
, или его фармацевтически приемлемую соль и вспомогательное вещество, и
фармацевтическую композицию, содержащую мемантин, представленный формулой (II):
, или его фармацевтически приемлемую соль и вспомогательное вещество.
<17.1> Набор в соответствии с <17>, где мемантин или его фармацевтически приемлемая соль представляет собой мемантина гидрохлорид.
<17.2> Набор в соответствии с любым из <17>-<17.1>, где (S)-7-(2-метокси-3,5-диметилпиридин-4-ил)-1-(тетрагидрофуран-3-ил)-1H-пиразолo[4,3-c]хинолин-4(5H)-он или его фармацевтически приемлемая соль представляет собой малеат.
<18> Применение мемантина, представленного формулой (II):
, или его фармацевтически приемлемой соли для получения терапевтического средства для лечения болезни Альцгеймера путем применения в комбинации с (S)-7-(2-метокси-3,5-диметилпиридин-4-ил)-1-(тетрагидрофуран-3-ил)-1H-пиразолo[4,3-c]хинолин-4(5H)-оном, представленным формулой (I):
, или его фармацевтически приемлемой солью.
<18.1> Применение мемантина или его фармацевтически приемлемой соли в соответствии с <18>, где болезнь Альцгеймера представляет собой болезнь Альцгеймера умеренной или тяжелой степени.
<18.2> Применение мемантина или его фармацевтически приемлемой соли в соответствии с <18> или <18.1>, где мемантин или его фармацевтически приемлемая соль представляет собой мемантина гидрохлорид.
<18.3> Применение мемантина или его фармацевтически приемлемой соли в соответствии с любым из <18>-<18.2>, где (S)-7-(2-метокси-3,5-диметилпиридин-4-ил)-1-(тетрагидрофуран-3-ил)-1H-пиразолo[4,3-c]хинолин-4(5H)-он или его фармацевтически приемлемая соль представляет собой (S)-7-(2-метокси-3,5-диметилпиридин-4-ил)-1-(тетрагидрофуран-3-ил)-1H-пиразолo[4,3-c]хинолин-4(5H)-она малеат.
<19> Применение (S)-7-(2-метокси-3,5-диметилпиридин-4-ил)-1-(тетрагидрофуран-3-ил)-1H-пиразолo[4,3-c]хинолин-4(5H)-она, представленного формулой (I):
, или его фармацевтически приемлемой соли для получения терапевтического средства для лечения болезни Альцгеймера путем применения в комбинации с мемантином, представленным формулой (II):
, или его фармацевтически приемлемой солью.
<19.1> Применение соединения, представленного формулой (I), или его фармацевтически приемлемой соли в соответствии с <19>, где болезнь Альцгеймера представляет собой болезнь Альцгеймера умеренной или тяжелой степени.
<19.2> Применение соединения, представленного формулой (I), или его фармацевтически приемлемой соли в соответствии с <19> или <19.1>, где мемантин или его фармацевтически приемлемая соль представляет собой мемантина гидрохлорид.
<19.3> Применение соединения, представленного формулой (I), или его фармацевтически приемлемой соли в соответствии с любым из <19>-<19.2>, где (S)-7-(2-метокси-3,5-диметилпиридин-4-ил)-1-(тетрагидрофуран-3-ил)-1H-пиразолo[4,3-c]хинолин-4(5H)-он или его фармацевтически приемлемая соль представляет собой (S)-7-(2-метокси-3,5-диметилпиридин-4-ил)-1-(тетрагидрофуран-3-ил)-1H-пиразолo[4,3-c]хинолин-4(5H)-она малеат.
Полезные эффекты изобретения
[0012] Настоящее изобретение предусматривает терапевтическое средство для лечения болезни Альцгеймера, представляющее собой комбинацию производного пиразолохинолина, представленного формулой (I), или его фармацевтически приемлемой соли, которые обладают ингибирующим действием в отношении PDE9, с мемантином или его фармацевтически приемлемой солью, которые обладают антагонистическим эффектом в отношении глутаматных рецепторов типа NMDA. Терапевтическое средство, в котором задействована данная комбинация, проявляет более ощутимый благоприятный эффект в отношении когнитивной функции в животных моделях по сравнению с их применениями по отдельности, и оно обладает потенциалом для применения в качестве терапевтического средства для лечения болезни Альцгеймера.
Описание вариантов осуществления
[0013] Далее настоящее изобретение будет пояснено подробно.
[0014] "Фармацевтически приемлемая соль", как указано в данном описании, конкретно не ограничена, если она представляет собой соль, образованную соединением по настоящему изобретению, и конкретные примеры включают соли присоединения кислоты, такие как соли неорганических кислот, соли органических кислот или соли кислых аминокислот.
[0015] Если не указано иное, в контексте "фармацевтически приемлемой соли", как используется в данном документе, количество молекул кислоты на одну молекулу соединения в образованной соли конкретно не ограничено, если соль образована при соответствующем соотношении. В одном варианте осуществления количество молекул кислоты на одну молекулу соединения составляет от приблизительно 0,1 до приблизительно 5; в другом варианте осуществления количество молекул кислоты на одну молекулу соединения составляет от приблизительно 0,5 до приблизительно 2; и в еще одном варианте осуществления количество молекул кислоты на одну молекулу соединения составляет приблизительно 0,5, приблизительно 1 или приблизительно 2.
[0016] Конкретные примеры соли неорганической кислоты включают гидрохлорид, гидробромид, сульфат, нитрат и фосфат, а конкретные примеры соли органической кислоты включают ацетат, сукцинат, фумарат, малеат, тартрат, цитрат, лактат, стеарат, бензоат, метансульфонат, пара-толуолсульфонат и бензолсульфонат.
[0017] Конкретные примеры соли кислой аминокислоты включают аспартат и глутамат.
[0018]
[Состав]
Фармацевтическую композицию по настоящему изобретению можно получить путем смешивания фармацевтически приемлемой добавки с соединением (I) или его фармацевтически приемлемой солью и/или с соединением (II) или его фармацевтически приемлемой солью. Фармацевтическую композицию по настоящему изобретению можно получить с помощью известного способа, такого как способ, описанный в "Общие правила получения" в Японской фармакопее, 16-е издание.
Фармацевтическую композицию по настоящему изобретению можно соответствующим образом вводить пациенту в соответствии с лекарственной формой.
[0019] Доза соединения (I) или его фармацевтически приемлемой соли и соединения (II) или его фармацевтически приемлемой соли в соответствии с настоящим изобретением будет варьироваться в зависимости от тяжести симптомов, возраста пациента, пола и веса тела, типа введения, и типа соли, и конкретного типа заболевания и т. п.; но обычно взрослым перорально вводят в сутки от приблизительно 30 мкг до 10 г, в одном варианте осуществления от 100 мкг до 5 г, а в другом варианте осуществления от 100 мкг до 1 г в виде однократной дозы или в виде нескольких раздельных доз; или вводят посредством инъекции в сутки от приблизительно 30 мкг до 1 г, в одном варианте осуществления от 100 мкг до 500 мг, а в другом варианте осуществления от 100 мкг до 300 мг в виде однократной дозы или в виде нескольких раздельных доз.
Примеры
[0020] Соединение (I) можно получить, например, с помощью способа, описанного в PTL 1.
[0021]
(Примеры фармакологических тестов)
Авторы настоящего изобретения подтвердили эффекты, полученные при комбинированном применении соединения (I) и мемантина гидрохлорида с использованием следующей животной модели.
[0022]
[Тестовое испытание 1] Тест на распознавание новых объектов с использованием крыс с индуцированным скополамином когнитивным нарушением
Имеются сообщения о расстройстве нервной системы, обусловленном ацетилхолином, при болезни Альцгеймера (Whitehouse et al., Science, 1982, vol.215, p.1237), и при этом животные, которым вводили скополамин, являются пригодными для применения в качестве животной модели болезни Альцгеймера. Скополамин представляет собой ингибитор мускариновых рецепторов, который блокирует передачу ацетилхолина в нервной системе. Ацетилхолин в нервной системе вовлечен в функции памяти и внимания, и здоровые люди или животные, которым вводили скополамин, демонстрировали симптомы амнезии, подобной таковой при деменции, которые ослабляли с помощью лекарственных средств, используемых для лечения когнитивного нарушения при болезни Альцгеймера (Snyder et al., Alzheimer's & Dementia 1(2005)126-135, Sambeth et al., European Journal of Pharmacology, vol.572(2007), pp.151-159).
[0023]
Материалы и методы
Тестирование проводили на самцах крыс Long-Evans 6-недельного возраста (Институт репродукции животных). Процесс привыкания к экспериментальной процедуре проводили один раз в сутки в течение 2 дней перед испытанием. В процессе привыкания среду-носитель вводили крысам, а затем крыс помещали в пустой аппарат для тестирования (40 см × 30 см × высота 45 см) и оставляли их для изучения территории в течение 3 минут, а затем, после помещения в камеру ожидания (13 см × 30 см × высота 45 см) на приблизительно 1 минуту, их снова возвращали в пустой аппарат для тестирования и оставляли на 5 минут.
Испытание с обнаружением (T1) проводили в день проведения теста. Соединение (I) задавали перорально за 2 часа до T1. Мемантина гидрохлорид вводили перорально за 1 час до T1. Скополамин (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) вводили подкожно за 30 минут до T1 в дозе, составляющей 0,7 мг/кг. В ходе T1 крысам предоставляли возможность привыкнуть к пустому аппарату для тестирования в течение 3 минут, а затем помещали их в камеру ожидания. После расположения двух идентичных объектов в аппарате для тестирования, крыс снова возвращали в аппарат для тестирования и предоставляли им возможность свободного изучения двух идентичных объектов в течение 5 минут. Затем крыс обратно возвращали в их клетки для содержания. Через 2 часа проводили испытание на запоминание (T2). Крыс помещали в пустой аппарат для тестирования на 3 минуты для привыкания, а затем переносили в камеру ожидания. После размещения в аппарате для тестирования объекта, использованного в T1 ("знакомого" объекта), и объекта, не использованного в T1 ("нового" объекта), крыс снова возвращали в аппарат для тестирования и предоставляли им возможность свободного изучить такие объекты в течение 3 минут. Объекты протирали влажной салфеткой, пропитанной этанолом, после каждого эксперимента таким образом, чтобы не осталось следов запаха. Поведение крыс в ходе T1 и T2 регистрировали с помощью цифровой видеокамеры, а общее время исследования, затраченное на изучение каждого объекта, измеряли вручную с помощью секундомера. Исследовательское поведение определяли как поведение, при котором крыса подносила свой нос на расстояние в пределах 2 см от объекта и направляла свой нос к объекту.
В тесте распознавания нового объекта процентная доля исследования нового объекта в ходе T2 считается показателем для амнезии, отражающим различие знакомых и новых объектов. Процентную долу исследования нового объекта рассчитывали с помощью следующей формулы.
Процентная доля исследования нового объекта (%) = N/(N+F) × 100,
где F: время, затраченное на изучение знакомого объекта;
N: время, затраченное на изучение нового объекта.
Крысы, у которых общее время, затраченное на исследование объектов в ходе T1 или T2, составляло 10 секунд или меньше, или крысы, у которых процентная доля времени, затраченного на исследование одного из объектов в ходе T1, составляла не менее 70% или не более 30% от общего времени исследования, были исключены из анализа данных.
Результаты выражены в виде среднего значения ± стандартная погрешность. Различие между нормальной контрольной группой, не обработанной скополамином, и контрольной группой с заболеванием, обработанной скополамином, анализировали с помощью непарного t-критерия (значимое различие: *). Различие между контрольной группой с заболеванием и группой, обработанной одним лекарственным средством, анализировали с помощью критерия множественных сравнений Даннетта (значимое различие: #). Различие между группой, которую подвергали комбинированной обработке, и группой, обработанной одним лекарственным средством, анализировали с помощью критерия Стьюдента для одной выборки (значимое различие: ). Значение p<0,05 оценивали как статистически значимое различие. Статистический анализ проводили с использованием GraphPad Prism версии 5.04 или 6.02. Результаты показаны в таблицах 1-4.
[0024]
[Таблица 1]
Нормальная контрольная группа
Группа, которой вводили скополамин
Контрольная группа с заболеванием
Соединение (I)0,3 мг/кг
Соединение (I)1 мг/кг
71,3±3,1
54,4±2,8*
58,7±3,2
59,9±3,4
[0025]
[Таблица 2]
Нормальная контрольная группа
Группа, которой вводили скополамин
Контрольная группа с заболеванием
Соединение (I)3,3 мг/кг
Соединение (I)10 мг/кг
73,8±3,0
53,3±2,2*
68,5±2,0#
68,5±1,6#
[0026]
[Таблица 3]
Нормальная контрольная группа
Группа, которой вводили скополамин
Контрольная группа с заболеванием
Мемантин3 мг/кг
Мемантин10 мг/кг
70,2±3,0
55,0±3,9*
68,9±4,0#
59,9±3,8
[0027]
[Таблица 4]
Нормальная контрольная группа
Группа, которой вводили скополамин
Контрольная группа с заболеванием
Мемантин1 мг/кг
Соединение (I) 1 мг/кг и мемантин 1 мг/кг
69,8±2,8
54,3±3,0*
58,1±2,4
69,0 ±2,0<img file="00000006.jpg" he="5" wi="4" img-content="undefined" img-format="jpg" />
[0028]
Результаты
В ходе T2 крысы из контрольной группы с заболеванием демонстрировали в значительной степени более низкую процентную долю исследования нового объекта, чем крысы из нормальной контрольной группы. Это означает, что нарушение памяти у крыс было индуцировано скополамином.
Соединение (I) демонстрировало значительный благоприятный эффект в отношении процентной доли исследования нового объекта при 3,3 мг/кг (таблица 2), но не демонстрировало значительного эффекта при 1 мг/кг (таблица 1). Мемантина гидрохлорид демонстрировал значительный благоприятный эффект в отношении процентной доли исследования нового объекта при 3 мг/кг (таблица 3). Несмотря на то, что значительный благоприятный эффект в отношении процентной доли исследования нового объекта не демонстрировался при применении только мемантина гидрохлорида (1 мг/кг), в группе, которую подвергали комбинированной обработке соединением (I) (1 мг/кг) и мемантина гидрохлоридом (1 мг/кг), демонстрировалась значительно более высокая процентная доля исследования нового объекта, чем в группе, которую подвергали обработке только мемантина гидрохлоридом (1 мг/кг) (таблица 4). Данный результат указывает на усиливающий эффект соединения (I) в отношении когнитивной функции в случае применения в комбинации с мемантина гидрохлоридом.