Исследование ассоциации полиморфных вариантов гена р2-адренергического рецептора с бронхиальной астмой у русских

УДК 616.248

Исследование ассоциации полиморфных вариантов гена р2-адренергического рецептора с бронхиальной астмой у русских

Ю.Ю. ФЕДОРОВА, А.С. КАРУНАС, P.P. МУРЗИНА, Л.А. МУХТАРОВА, Н.Н. РАМАЗАНОВА, Г.Ф. ГИМАЛОВА, Р.Ф. ГАТИЯТУЛЛИН, Ш.З. ЗАГИДУЛЛИН, Э.И. ЭТКИНА, Э.К. ХУСНУТДИНОВА

Институт биохимии и генетики Уфимского научного центра РАН Башкирский государственный университет, г. Уфа Башкирский государственный медицинский университет, г. Уфа

Проведен анализ полиморфных вариантов rs1042713 (Arg16Gly) и rs1042714 (Gln27Glu) гена @2-адренорецептора ADRB2 у больных бронхиальной астмой и здоровых индивидов русской этнической принадлежности, проживающих на территории Республики Башкортостан. Обнаружена ассоциация аллеля ADRB2*16Arg полиморфного варианта Arg16Gly с умеренным снижением ОФВ1 (объем форсированного выдоха за 1 сек). Не установлено ассоциации полиморфного варианта Gln27Glu гена ADRB2 с развитием бронхиальной астмы.

Ключевые слова: бронхиальная астма, ассоциация, ген /32-адренорецептора.

Association study of the p2-adrenergic receptor gene polymorphisms with bronchial asthma in russians

YU.YU. FEDOROVA, A.S. KARUNAS, R.R. MURZINA, L.A. MUKHTAROVA, N.N. RAMAZANOVA, G.PH. GIMALOVA, R.PH. GATIYATULLIN, SH.Z. ZAGIDULLIN, E.I. ETKINA, E.K. KHUSNUTDINOVA

Institute of Biochemistry and Genetics, Ufa Scientific Center, Russian Academy of Sciences Bashkir State University, Ufa Bashkir State Medical University, Ufa

The analysis of ADRB2 gene polymorphisms rs1042713 (Arg16Gly) and rs1042714 (Gln27Glu) in patients with asthma and healthy individuals of Russian ethnicity from the Republic of Bashkortostan was conducted. The association of ADRB2*16Arg allele of Arg16Gly polymorphism with mildly decreased FEV1 (forced expiratory volume for 1 second) was revealed. There is no association between Gln27Glu polymorphisms in ADRB2 gene and asthma in Russians.

Key words: bronchial asthma, association, fi2-adrenergic receptor gene.

Федорова Юлия Юрьевна

кандидат биологических наук, научный сотрудник лаборатории молекулярной генетики человека Института биохимии и генетики 450054, г. Уфа, пр. Октября, д. 71 тел. (347) 235-60-88, e-mail: fedorova-y@yandex.ru

Бронхиальная астма (БА) — распространенное хроническое воспалительное заболевание дыхательных путей. Эпидемиологические исследования демонстрируют широкий диапазон распространенности бронхиальной астмы в разных странах мира (от 1 до 18%). В целом, более чем 5% населения мира страдает от бронхиальной астмы. Данной па-

тологии подвержены все возраста: заболевание распространено как у детей, подростков, так и у взрослых [1].

Бронхиальная астма — многофакторное заболевание, характеризующееся различными клиническими фенотипами, обусловленными взаимодействием различных генов и факторов внешней среды,

провоцирующих появление симптомов. Суммированные результаты ассоциативных исследований генов-кандидатов БА свидетельствуют, что более чем для 30 генов в литературе опубликованы воспроизводимые данные [1, 2].

р2-адренергический рецептор играет важную роль в контрактильности дыхательных путей и является мишенью для р2-агонистов, широко применяемых для бронходилатации при астме. Тем не менее, длительное использование р2-агонистов ведет к потере контроля над астмой, снижению пиковой скорости выдоха утром, продолжительным обострениям БА, развитию жизнеугрожающих состояний у пациентов [3, 4, 5]. Наиболее вероятным объяснением побочных эффектов от регулярного употребления р2-агонистов является десенсити-зация адренорецепторов — особенность многих мембран-ассоциированных рецепторов [4, 5]. Ген р2-адренергического рецептора ADRB2 не содержит интронов и расположен в 5q31-32 хромосомной области. Секвенирование области гена ADRB2 у 669 афроамериканцев и европеоидов выявило 49 полиморфных вариантов, 21 из которых был идентифицирован впервые [б]. К настоящему моменту в гене ADRB2 обнаружено более 200 полиморфных вариантов (http://snpper.chip.org/bio/show-gene/622). Наиболее изученными полиморфными вариантами гена ADRB2 являются несинонимичные нуклеотидные замены Arg16Gly, Gln27Glu и Thr164Ile, которые, как отмечено во многих исследованиях, играют важную роль в функционировании рецептора [3]. В исследованиях in vitro с использованием клеточных линий было обнаружено, что экспрессия р2-адренорецептора с заменой ADRB2*16Gly понижена при обработке изопротеренолом [7]. При регулярном использовании бронходилататоров рецептор с заменой ADRB2*16Gly существенно быстрее деградирует как у взрослых, так и у детей, поэтому пациенты, гомозиготные по этому варианту гена, быстрее теряют чувствительность к этим препаратам [3, 4, 5]. Наличие замены ADRB2*16Glu в р2-адренорецепторе, напротив, препятствует снижению активности рецептора при обработке р2-агонистами [7]. Результаты ассоциативных исследований противоречивы: в ряде исследований установлена значимость полиморфных локусов Ar-g16Gly, Gln27Glu в патогенезе бА, в формировании ответа пациентов на терапию р2-агонистами, в других продемонстрировано, что полиморфные варианты гена ADRB2 не ассоциированы с БА [3, 4, 5]. Вариабельность фармакологического ответа на р2-адреномиметики и противоречивые литературные данные, полученные при оценке эффективности терапии, показателей функции внешнего дыхания у больных БА с различными генотипами изучаемых полиморфных вариантов гена ADRB2, определяют актуальность дальнейших фармакогенетических исследований.

Целью настоящей работы явился анализ ассоциаций полиморфных локусов rs1042713 (Arg16Gly) и rs1042714 (Gln27Glu) гена р2-адренорецептора ADRB2 с бронхиальной астмой различной степени тяжести, а также показателями функции внешнего дыхания у индивидов русской этнической принадлежности, проживающих в Республике Башкортостан (РБ).

Материалы и методы

В работе использованы образцы ДНК 358 неродственных индивидов, проживающих на территории РБ, в возрасте от 2 до 60 лет. Группу пациентов со-

ставили 208 больных бронхиальной астмой русской этнической принадлежности (102 женщины, 106 мужчин). Из них число больных с детской формой заболевания, развивающейся до 18 лет, составило 142 человека. Среди пациентов с БА у 42 индивидов наблюдалось легкое течение заболевания, 106 индивидов — среднетяжелое и 56 человек — тяжелое течение БА. Диагноз БА устанавливался в соответствии с критериями GINA [2012] и критериями отечественных программных документов по диагностике, лечению и профилактике БА [8, 9]. Оценка функции внешнего дыхания проводилась на компьютерном спирографе («Erich Jaeger», Германия) с анализом кривой «поток-объем». Оценивались следующие показатели (в процентах от должных величин, заложенных в компьютерную базу спирометра): жизненная емкость легких (ЖЕЛ), форсированная жизненная емкость легких (ФжЕл), объем форсированного выдоха за 1 сек. (ОФВ1), максимальные объемные скорости потока кривой в точках, соответствующих объему легких 75, 50, 25% ФЖЕЛ (МОС75, M0C50, МОС25, соответственно). В качестве контроля исследована группа здоровых лиц без каких-либо признаков аллергических заболеваний с очень низким или низким уровнем IgE, состоящая из 150 человек русской этнической принадлежности.

Геномную ДНК выделяли из лимфоцитов периферической крови методом фенольно-хлороформной экстракции [10]. Анализ полиморфных вариантов rs1042713 (Arg16Gly) и rs1042714 (Gln27Glu) гена ß2-адренорецептора ADRB2 проводили методом полимеразной цепной реакции синтеза ДНК на ампли-фикаторе «Bio-Rad T100 Thermal Cycler». Для амплификации использовали реакционную смесь объемом 25 мкл, которая содержала 2,5 мкл 10хTaq-буфера (67 мМ трис-HCl (pH 8,8), 16,6 мМ (NH4)2 SO4, 2,5мМ MgCl2, 0,01% Tween-20), 0,1 мкг геномной ДНК, смесь dNTP (dATP, dGTP, dCTP, dTTP по 200 мкМ каждого), 1 ед. ДНК-полимеразы Termus aquaticus (производства фирмы «Силекс», г. Москва) и 5-10 пМ локусспецифичных олигонуклеотидных праймеров. Для определения нуклеотидных замен методом полиморфизма длин рестрикционных фрагментов (ПДРФ-анализ) проводили гидролиз амплифицированных фрагментов соответствующей рестриктазой. Последовательности праймеров, размеры амплифицируе-мых фрагментов, названия рестриктаз описаны ранее [11]. Результаты ПДРФ-анализа оценивали путем проведения вертикального электрофореза в 7%-ом полиакриламидном геле с последующим окрашиванием бромистым этидием и визуализацией в проходящем ультрафиолетовом свете.

Для проверки соответствия наблюдаемого распределения частот генотипов теоретически ожидаемому равновесному распределению по закону Харди-Вайнберга использовался критерий х2 . При попарном сравнении частот аллелей и генотипов в группах больных и контроля применялся критерий х2 для таблиц сопряженности 2x2 с поправкой Йейтса на непрерывность. В случае наличия достоверных отличий в исследуемых выборках проводилась оценка показателя отношения шансов (odds ratio, OR), а также границ его 95% доверительного интервала (CI 95%). Неравновесие по сцеплению (linkage disequilibrium) между парами полиморфных локусов оценивалось с помощью коэффициента D', предложенного Левонтином, и коэффициента корреляции r2 Пирсона. Определение частот гапло-типов и тестирование различий в распределении

частот гаплотипов в исследуемых выборках прово- равновесию Харди-Вайнберга (рП0,05). Частота дилось согласно ЕМ-алгоритму, реализованному в аллеля ADRB2*27Gly гена ADRB2 в контрольной

программе Haploview 4.2 [12]. Результаты и обсуждение

группе составила 62,33% и соответствовала частоте встречаемости данного аллеля у индивидов европейского происхождения (61,7-65,7%) [13, 14],

Проведено исследование распределения ча- тогда как у мексиканцев была ниже (57%) [15]. стот аллелей и генотипов полиморфных вариантов По данным проекта НарМар, аллель ADRB2*27Gly ^1042713 (Arg16Gly) и ^1042714 (Gln27Glu) гена встречается у европеоидов с частотой 64,2%, у на-в2-адренорецептора ADRB2 у больных бронхиаль- селения Северной Америки — 62%. Реже этот аллель ной астмой и здоровых индивидов русской этниче- встречается у индивидов африканского (50,0%), ской принадлежности, проживающих в РБ (табл. 1). китайского (45,3%), японского (55,8%), мексикан-Распределение частот генотипов указанных поли- ского (55,0%) происхождения [http://www.ncbi. морфных вариантов гена ADRB2 соответствовало nlm.nih.gov/projects/SNP/snp_ref.cgi?rs=1042713].

Таблица 1.

Распределение частот аллелей и генотипов полиморфных вариантов Arg16Gly и 01п2701и гена ADRB2 у больных БА и в контрольной группе

Arg16Gly

< ^ с Аллели Генотипы N

Gly АгдАгд ArgGly GlyGly

п

Контрольная группа 113 (37,67) 187 (62,33) 19 (12,67) 75 (50,00) 56 (37,33) 150

Группа больных БА легкая форма БА 24 (28,57) 60 (71,43) 1 (2,38) 22 (52,38) 19 (45,24) 42

средне-тяжелая форма БА 82 (38,68) 130 (61,32) 15 (14,15) 52 (49,06) 39 (36,79) 106

тяжелая форма БА 52 (46,43) 60 (53,57) 12 (21,43) 28 (50,00) 16 (28,57) 56

детская форма БА 103 (36,52) 179 (63,48) 16 (11,35) 71 (50,35) 54 (38,30) 141

В целом 163 (39,37) 251 (60,63) 30 (14,49) 103 (49,76) 74 (35,75) 207

Gln27Glu

.Е? с Аллели Генотипы N

Glu Gln/Gln Gln/Glu Glu/Glu

п

Контрольная группа 176 (58,67) 124 (41,33) 50 (33,33) 76 (50,67) 24 (16,00) 150

Группа больных БА легкая форма БА 46 (54,76) 38 (45,24) 9 (21,43) 28 (66,67) 5 (11,9) 42

средне-тяжелая форма БА 118 (55,66) 94 (44,34) 30 (28,30) 58 (54,72) 18 (16,98) 43

тяжелая форма БА 69 (61,61) 43 (38,39) 19 (33,93) 31 (55,36) 6 (10,71) 56

детская форма БА 154 (54,61) 128 (45,39) 35 (24,82) 84 (59,57) 22 (15,60) 141

В целом 238 (57,49) 176 (42,51) 60 (28,99) 118 (57,00) 29 (14,01) 207

Анализ частот аллелей и генотипов полиморфного варианта rs1042713 (Arg16Gly) гена ADRB2 в выборках больных бронхиальной астмой и здоровых индивидов контрольной группы не выявил статистически значимых различий (p>0,05). В группе больных БА аллель ADRB2*16Arg встречался с частотой 39,37%, в контрольной группе - со сходной частотой 37,67%. Частота аллеля ADRB2*16Arg в группах больных с различной тяжестью БА варьировала от 28,57% у больных легкой формой бА до 46,43% у больных тяжелой формой БА. В выборке больных с детской формой БА аллель ADRB2*16Arg определялся с частотой 36,52%.

В результате сравнительного анализа распределения частот аллелей и генотипов полиморфного варианта Arg16Gly с данными спирографии в группе пациентов и контроля, установлена ассоциация ДНК-локуса с умеренным снижением ОФВ1 (объем форсированного выдоха за 1 сек). У пациентов со значениями ОФВ1 60-80% чаще, чем в контрольной группе (37,67%), выявлялся аллель ADRB2*16Arg (49,04%; х2=4,14; p=0,04; OR=1,59; CI95% 1,022,50). Частота аллеля ADRB2*16Gly в выборке больных была ниже и составила 50,96%, по сравнению с контролем (62,33%; 0R=0,63; CI95% 0,40-0,98). Гомозиготный генотип ADRB2*16Gly/Gly у больных (23,08%) определялся реже, чем в контрольной группе индивидов (37,33%), но отличия не достигли уровня статистической значимости (х2=3,51; p=0,06).

По литературным данным установлена ассоциация аллеля ADRB2*16Gly с ночной астмой у мексиканцев, у тайваньцев и индивидов европейского происхождения, проживающих в США, с тяжелой формой Ба у европеоидов из Новой Зеландии [11, 15-19]. Martinez с соавт. было выявлено, что у больных БА европейского происхождения, гомозиготных по аллелю ADRB2*16Gly, наблюдался сниженный ответ на терапию альбутеролом, что было подтверждено и рядом других исследований [13, 20, 21]. Обнаружено, что больные БА с аллелем ADRB2*16Gly имели повышенную чувствительность дыхательных путей к метахолину [22]. В работе российских коллег была установлена ассоциация генотипа ADRB2*16Gly/Gly с недостаточным эффектом терапии Ь2-адреномиметиками короткого действия [23]. Ряд других литературных данных противоречит результатам вышеописанных исследований. Например, у гаттеритов была выявлена ассоциация аллеля ADRB2*16Arg с пониженными показателями легочных функций [24]. В работе Национального института сердца, легких и крови (ACRN) пациенты с БА, гомозиготные по ADRB2*16Arg, находящиеся на терапии краткодействующими р2-агонистами, демонстрировали значительное снижение пиковой скорости выдоха по сравнению с индивидами, гомозиготными по аллелю ADRB2*16Gly [25]. Подобная ситуация была описана и в исследовании Taylor с соавт., где у пациентов, гомозиготных по аллелю ADRB2*l6Arg, наблюдалось усиление обострений при регулярной терапии альбутеролом [14]. Увеличение риска возникновения обострений астмы наблюдалось у носителей аллеля ADRB2*16Arg, находящихся на ежедневной терапии р2-агонистами на фоне регулярного применения ИГКС [26]. Исследование на двух многоцентровых рандомизированных выборках также подтвердило, что индивиды с генотипом ADRB2*16Arg/Arg демонстрируют пониженный ответ на терапию сальметеролом [27]. В японской популяции у пациентов с генотипом

ADRB2*16Arg/Arg регулярное употребление агонистов не демонстрировало улучшений в показателях ОФВ1 по сравнению с пациентами, принимавшими р2-агонисты по необходимости [28]. Отсутствие ассоциации полиморфного варианта Arg16Gly с обострениями и показателями спирографии было выявлено у европеоидов из США [29].

Проведен анализ полиморфного варианта rs1042714 (Gln27Glu) гена ADRB2 у больных БА и в контрольной группе индивидов русской этнической принадлежности. В контрольной группе чаще встречался аллель ADRB2*27Gln — 58,67%. В европейских популяциях также более распространенным является аллель ADRB2*27Gln (53,3%, HapMap). Чаще этот аллель встречается у африканцев — 82,5%, китайцев — 87,8%, японцев — 92,0% [http://www.ncbi. nlm.nih.gov/projects/SNP/snp_ref.cgi?rs=1042714].

В выборке пациентов с БА и в контрольной группе распределение частот аллелей и генотипов полиморфного варианта rs1042714 (Gln27Glu) гена ADRB2 оказалось схожим (p>0,05). Частота аллеля ADRB2*27Glu в контрольной группе составила 41,33%, у больных БА — 42,51%. При анализе групп больных с различной тяжестью БА, разными показателями спирографии не было выявлено статистически значимых различий в распределении частот аллелей и генотипов данного локуса между группой контроля и больными (p>0,05). Анализ распределения частот аллелей и генотипов полиморфного варианта Gln27Glu у больных с детской формой БА и у индивидов контрольной группы также показал отсутствие статистически значимых различий. В выборках больных с тяжелой формой БА, детской формой БА частота аллеля ADRB2*27Glu составила 38,39 и 45,39%, соответственно.

В отличие от полученных нами результатов, в исследованиях Hopes с соавт. на детской выборке из Шотландии было выявлено, что носители аллеля ADRB2*27Glu имеют пониженный риск развития детской формы БА [30]. Установлена ассоциация аллеля ADRB2*27Glu с пониженным риском БА, с высокими показателями ОФВ1 и пониженным количеством госпитализаций в тайландской популяции [31]. Данные мета-анализа также выявили ассоциацию генотипа ADRB2*27Glu/Glu с пониженным риском развития БА у детей и генотипа ADRB2*27Gln/Glu с пониженным риском БА у взрослых [32]. В работах коллег из Великобритании обнаружена ассоциация аллеля ADRB2*27Gln с повышенным уровнем IgE в семьях с БА [33]. Ассоциация аллеля ADRB2*27Gln с астмой выявлена в тайваньской популяции [34]. Полученные нами данные согласуются с результатами других исследований. В работе на британской выборке, в которую вошли рожденные в марте 1958, было установлено, что полиморфные варианты гена ADRB2 слабо ассоциированы с детской БА, в результате чего был сделан вывод, что ген ADRB2 не является главным геном предрасположенности к данному заболеванию [35]. Отсутствие ассоциации полиморфного варианта Gln27Glu гена ADRB2 с атопической формой БА выявлено в группе славян, проживающих в г. Томске [36]. В работе Martinez с соавт. также было показано, что полиморфный вариант Gln27Glu не ассоциирован с ответом на терапию р2-агонистами у больных БА [13].

Анализ неравновесия по сцеплению полиморфных локусов гена ADRB2 в изученных нами выборках выявил, что полиморфные варианты rs1042713 (Ar-g16Gly) и rs1042714 (Gln27Glu) находятся в тесном неравновесии по сцеплению (D'=0,862).

Проведен гаплотипический анализ полиморфных вариантов гена ADRB2 в выборках больных БА и контрольной группе. В исследованных группах из четырех возможных гаплотипов три определялись с частотой более 5 %. Статистически значимых различий частот гаплотипов не было установлено между контрольной группой и больными БА. Наиболее распространенным у русских был гаплотип GG ^^1и), определенный у пациентов в 40,0% случаев. В контрольной группе этот гаплотип выявлялся в 39,5% случаев. В выборке с детской формой БА гаплотип GG встречался с частотой 42,6%, в выборке с тяжелой БА — 35,1%.

В литературе придается большое значение роли полиморфных вариантов ^1042713 (Arg16Gly) и ^1042714 (Gln27Glu) гена р2-адренорецептора ADRB2 в патогенезе астмы [3, 4, 5]. Тем не менее, полученные результаты противоречивы: одни клинические исследования подтверждают ассоциацию указанных полиморфных локусов с БА, другие опровергают наличие этой взаимосвязи. При исследовании полиморфного варианта Arg16Gly гена р2-адренорецептора ADRB2 у русских, проживающих в Республике Башкортостан, установлена ассоциация аллеля ADRB2*16Arg с умеренным снижением ОФВ1 (объем форсированного выдоха за 1 сек). Не выявлено ассоциации полиморфного варианта ^1042714 (Gln27Glu) гена ADRB2 с бронхиальной астмой различной степени тяжести. Отличий в распределении частот аллелей и генотипов полиморфного варианта ^1042714 (Gln27Glu) при сравнении групп пациентов с различными показателями спирографии и контроля также обнаружено не было.

Данная работа частично финансирована грантами РФФИ № 11-04-97063, № 13-04-01397.

ЛИТЕРАТУРА

1. Global atlas of asthma / Ed. C.A. Akdis, I. Agache. — European Academy of Allergy and Clinical Immunology, 2013. — 182 p.

2. Ober C., Hoffjan S. Asthma genetics 2006: the long and winding road to gene discovery // Genes Immun. — 2006. — Vol. 7, № 2. — P. 95-100.

3. Portelly M. and Sayers I. Genetic basis for personalized medicine in asthma // Expert Rev. Respir. Med. — 2012. — Vol. 6, № 2. — P. 223-236.

4. Hizawa N. Beta-2 adrenergic receptor genetic polymorphisms and asthma // J Clin. Pharm. Ther. — 2009. — Vol. 34, № 6. — P. 631-643.

5. Hizawa N. Pharmacogenetics of p2-agonists // Allergol Int. — 2011. — Vol. 60, № 3. — P. 239-246.

6. Hawkins G.A., Tantisira K., Meyers D.A. et al. Sequence, haplo-type, and association analysis of ADRbeta2 in multiethnic asthma case-control study // Am J of Respir. Crit. Care Med. — 2006. — Vol. 174, № 10. — P. 1101-1109.

7. Green S.A., Turki J., Innis M., Liggett S.B. Amino-terminal polymorphisms of the human beta 2-adren-ergic receptor impart distinct agonist-promoted regulatory properties // Biochemistry. — 1994. — № 33. — P. 9414-9419.

8. Global strategy for asthma management and prevention / Updated 2012. — 128 p.

9. Руководство по диагностике, лечению и профилактике бронхиальной астмы / Под ред. Чучалина А.Г. — М.: НТЦ-КВАН, 2005. — 51 с.

10. Mathew C.C. The isolation of high molecular weight eucariotic DNA // Methods in molecular biology / Ed. Walker J.M. — N.Y.: Human press, 1984. — Vol. 2 — P. 31-34.

11. Holloway J.W., Dunbar P.R., Riley G.A. et al. Association of be-ta2-adrenergic receptor polymorphisms with severe asthma // Clin. Exp. Allergy. — 2000. — Vol. 30, № 8. — P. 1097-1103.

12. Barrett J.C., Fry B., Maller J. et al. Haploview: analysis and visualization of LD and haplotype maps // Bioinformatics. — 2005. — Vol. 21, № 2. — P. 263-265.

13. Martinez F.D., Graves P.E., Baldini M. et al. Association between genetic polymorphisms of the beta2-adrenoceptor and response to albuterol in children with and without a history of wheezing // J Clin. Invest. — 1997. — Vol. 100, № 12. — P. 3184-3188.

14. Taylor D.R., Drazen J.M., Herbison G.P. et al. Asthma exacerbations during long term beta agonist use: influence of beta(2) adrenoceptor polymorphism // Thorax. — 2000. — № 55. — P. 762-767.

15. Santillan A.A., Camargo C.A. Jr., Ramirez-Rivera A., et al. Association between b2-adrenoceptor polymorphisms and asthma diagnosis among Mexican adults // Journal of Allergy and Clinical Immunology. — 2003. — № 112. — P. 1095-1100.

16. Reihsaus E., Innis M., MacIntyre N., Liggett S.B. Mutations in the gene encoding for the b2 adrenergic receptor in normal and asthmatic subjects // American Journal of Respiratory Cell and Molecular Biology. — 1993. — № 8. — P. 334-339.

17. Turki J., Pak J., Green S.A. et al. Genetic polymorphisms of the b2-adrenergic receptor in nocturnal and nonnocturnal asthma: evidence that Gly16 correlates with the nocturnal phenotype // Journal of Clinical Investigation. — 1995. — № 95. — P. 1635-1641.

18. Turner S.W., Khoo S.K., Laing I.A. et al. b2 adrenoceptor Arg-16Gly polymorphism, airway responsiveness, lung function and asthma in infants and children // Clinical and Experimental Allergy. — 2004. — № 34. — P. 1043-1048.

19. Lee M.Y., Cheng S.N., Chen S.J. et al. Polymorphisms of the P2-adrenergic receptor correlated to nocturnal asthma and the response of terbutaline nebulizer // Pediatr Neonatol. — 2011 — Vol. 52, № 1. — P. 18-23.

20. Tan K.S., Grove A., McLean A. et al. Systemic corticosteriod rapidly reverses bronchodilator subsensitivity induced by formoterol in asthmatic patients // American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. — 1997. — № 156. — P. 28-35.

21. Choudhry S., Ung N., Avila P.C. et al. Pharmacogenetic differences in response to albuterol between Puerto Ricans and Mexicans with asthma // American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. — 2005. — № 171. — P. 563-570.

22. Fukui Y., Hizawa N., Takahashi D. et al. Association between nonspecific airway hyper-responsiveness and Arg16Gly beta2-adren-ergic receptor gene polymorphism in asymptomatic healthy Japanese subjects // Chest. — 2006. — № 130. — P. 449-454.

23. Брянцева О.Н., Тихомиров Е.Е., Журкова Н.В. и др. Полиморфизм гена бета 2-адренергического рецептора и эффективность бронхолитической терапии у детей с бронхиальной астмой // Педиатрическая фармакология. — 2007. — Т. 4, № 3. — С. 35-39.

24. Summerhill E., Leavitt S.A., Gidley H. et al. Beta(2)-adrenergic receptor Arg16 /Arg16 genotype is associated with reduced lung function, but not with asthma, in the Hutterites // American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. — 2000. — № 162. — P. 599-602.

25. Israel E, Drazen J.M., Liggett S.B. et al. The effect of polymorphisms of the beta(2) adrenergic receptor on the response to regular use of albuterol in asthma // American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. — 2000. — № 162. — P. 75-80.

26. Basu K., Palmer C.N., Tavendale R. et al. Adrenergic beta(2)-receptor genotype predisposes to exacerbations in steroid-treated asthmatic patients taking frequent albuterol or salmeterol // J Allergy Clin. Immunol. — 2009. — Vol. 124, № 6. — P. 1188-1194.

27. Wechsler M.E., Lehman E., Lazarus S.C. et al. beta-Adrenergic receptor polymorphisms and response to salmeterol // Am J. Respir. Crit. Care Med. — 2006. — Vol. 173, № 5. — P. 519-526.

28. Isada A., Hizawa N., Shimizu K. et al. The Arg16Glybeta2-ad-renergic receptor polymorphism influences long term clinical responses to beta2-agonist // Arerugi. — 2008. — № 57. — P. 713-721.

29. Bleecker E.R., Postma D.S., Lawrence R.M., et al. Effect of ADRB2 polymorphisms on response to long-acting b2-agonist therapy // Lancet. — 2007. — № 370. — P. 2118-2125.

30. Hopes E., McDougall C., Christie G. et al. Association of glutamine 27 polymorphism of P2 adrenoceptor with reported childhood asthma: population based study // BMJ. — 1998. - Vol. 316, № 7132. — P. 664.

31. Limsuwan T., Thakkinstian A., Verasertniyom O., et al. Possible protective effects of the Glu27 allele of beta2-adrenergic receptor polymorphism in Thai asthmatic patients // Asian Pac J Allergy Immunol. — 2010. — Vol. 28, № 2-3. — P. 107-114.

32. Thakkinstian A., McEvoy M., Minelli C. et al. Systematic review and meta-analysis of the association between b2-adrenoceptor polymorphisms and asthma: a HuGE review // American Journal of Epidemiology. — 2005. — Vol. 162. — P. 201-211.

33. Dewar J.C., Wilkinson J., Wheatley A. et al. The glutamine 27 b2-adrenoreceptor polymorphism is associated with elevated IgE levels in asthmatic families // Journal of Allergy and Clinical Immunology. — 1997. — Vol. 100. — P. 261-265.

34. Chiang C.H., Lin M.W., Chung M.Y., Yang U.C. The association between the IL-4, ADRP2 and ADAM 33 gene polymorphisms and asthma in the Taiwanese population // J Chin. Med. Assoc. — 2012. — Vol. 75, № 12. — P. 635-643.

35. Hall I.P., Blakey J.D., Al Balushi K.A. et al. b2-adrenoceptor polymorphisms and asthma from childhood to middle age in the British 1958 birth cohort: a genetic association study // Lancet. — 2006. — Vol. 368. — P. 771-779.

36. Васьковский Н.В., Серебров В.Ю., Фрейдин М.Б. и др. Ассоциация полиморфизма гена р2-адренорецептора с атопической бронхиальной астмой // Медицинская генетика. — 2006. — № 2 (44). — С. 45-48.