Содержание цитокинов в цервикальном секрете при дисплазии шейки матки на фоне генитальных инфекций

© Т.Е. Белокриницкая1,

Ю.Н. Пономарева1,

Н.М. Ладыгина2, Е.Н. Бунина3

'Государственная медицинская академия, Чита;

2Областной центр по профилактике и борьбе со СПИД, Чита;

3Областной диагностический центр, Чита

Проведено сравнительное исследование содержания цитокинов ^-1р, TNFa и ТСїїр цервикального секрета при дисплазиях шейки матки на фоне генитальных инфекций. Полученные результаты демонстрируют выраженные нарушения локальных иммунных реакций, обусловленные дисбалансом продукции цитокинов при ассоциированном инфекционном поражении шейки матки, что может быть использовано для прогноза развития цервикальной пренеоплазии.

Ключевые слова: цитокины; цервикальная дисплазия; генитальные инфекции

СОДЕРЖАНИЕ ЦИТОКИНОВ В ЦЕРВИКАЛЬНОМ СЕКРЕТЕ ПРИ ДИСПЛАЗИИ ШЕЙКИ МАТКИ НА ФОНЕ ГЕНИТАЛЬНЫХ ИНФЕКЦИЙ

В генезе инфекционного поражения цервикального эпителия существенное значение имеют локальные иммунные реакции, механизм регуляции которых связан с продукцией цитокинов [8, 9]. Установлено, что система цитокинов, в которую входят интерлейкины, интерфероны, ростовые факторы, играет важную роль в развитии воспалительных реакций, межклеточных взаимодействиях в цервикальном биотопе, реализации эндокринных эффектов, а также во многом определяет характер, клинические проявления и исход различных патологических процессов [1, 3, 5].

Многочисленные исследования, посвященные участию цитокинов в регуляции механизмов инфекционного поражения шейки матки, характеризуются разноречивостью результатов [8, 9, 11]. Перспективным является изучение особенностей локальной продукции цитокинов при генитальных инфекциях, связанных с неопластическими изменениями цервикального эпителия, что необходимо для оценки иммунного ответа и прогнозирования риска злокачественной трансформации инфицированных клеток.

Целью настоящего исследования явилось сравнительное исследование содержания провоспалительных цитокинов — интер-лейкина-lß (IL-1ß), фактора некроза опухолей-a (TNFa) и трансформирующего фактора роста-ß (TGFß) в цервикальном секрете пациенток с предраковым поражением шейки матки, ассоциированным с папилломавирусами (HPV), хламидийной (CT), герпетической (HSV) и цитомегаловирусной (CMV) инфекциями.

Материалы и методы

Проспективное клинико-иммунологическое исследование включало 80 пациенток с дисплазией шейки матки, которые находились на обследовании и лечении в Областном онкологическом диспансере Читы в 1998-2004 годах.

Диагностика предраковых поражений шейки матки включала в себя клинические, кольпоскопические, цитогистологические и иммуногистохимические методы исследования. Определение патологических процессов цервикального эпителия проводилось в соответствии с общепринятой Международной статистической классификацией болезней (1992). В зависимости от степени поражения шейки матки пациентки распределились следующим образом: слабая дисплазия шейки матки была диагностирована у 24 (30,0 ± 5,1 %) женщин, умеренная — у 27 (33,6 ± 5,3 %) и тяжелая — у 29 (36,3 ± 5,4 %) больных. Средний возраст обследованных пациенток составил 34,7 ± 6,1 года, варьируя от 19 до 46 лет. Контрольную группу составили 20 здоровых женщин, сопоставимых по возрасту и данным анамнеза, и не имеющих в настоящее время генитальных инфекций и изменений на шейке матки.

Материалом для исследования служили цервикальная слизь и соскобы эпителия шейки матки, которые забирались в фолликулиновую фазу овариального цикла до проведения комплексного обследования и лечения заболеваний шейки матки.

Определение IL-1 р, TNFa и TGFP (пкг/мл) в цервикальной слизи проводили с помощью стандартных коммерческих наборов для иммуно-ферментного анализа компании «Протеиновый контур» (Санкт-Петербург) в клинико-диагностической лаборатории Читинского областного центра по профилактике и борьбе со СПИД [2].

ПЦР-диагностику HPV 6, 11, 16, 18, 31, 33 типов, Chlamydia trachomatis, CMV-500, HSV-430 I и II типов, проводили по общепринятой методике с применением соответствующих тест-систем «АмплиСенс-100-R» (Москва) в лаборатории молекулярной диагностики Областного диагностического центра Читы [7].

Данные представлены в виде M ± m, где M — среднее арифметическое, m — ошибка среднего. Для оценки статистически значимых различий полученных данных использовали критерий Стьюдента, критический уровень значимости принимался менее или равным 0,05.

Результаты

В результате проведенного исследования было выявлено, что частота изучаемых нами генитальных инфекций среди обследованных женщин в среднем составила 61,3 ± 5,4 %. Встречаемость инфекций при диспластических поражениях шейки матки представлена в таблице 1.

Из представленной таблицы видно, что наиболее часто предраковые поражения шейки матки были ассоциированы с HPV-инфицированием, которое в 42,9 ± 7,1 % случаев протекало как моноинфекция, однако в большинстве наблюдений папилломавирусы сочетались с другими возбудителями. Превалирующим (75,5 ± 6,1 %) было поражение шейки матки 16, 18, 31 и 33 типами HPV,

которые принято считать канцерогенными [5]. Низкоонкогенные 6 и 11 типы HPV при предраковых изменениях шейки матки составили лишь 24,5 ± 6,1 %.

Как известно, наиболее агрессивными являются ассоциированные инфекции, в результате хронизации процесса с формированием стойких, неспецифических патологических изменений цервикального эпителия и усиливающегося дисбаланса локальных иммунных реакций [5]. При цервикальной дисплазии HPV-инфекция в 57,1 ± 7,1 % случаях имела ассоциированный характер, при этом чаще всего (42,9 ± 9,4 %) она сочеталась с СТ, а также с CmV (32,1 ± 8,8 %) и HSV (25,0 ± 8,2 %).

При исследовании содержания цитокинов в цервикальном секрете пациенток с эпителиальными дисплазиями были выявлены существенные различия в зависимости от характера инфекционного поражения шейки матки (табл. 2).

Содержание IL-1ß и TNFa при инфицировании HPV типами низкого и высокого онкогенного риска не имело достоверных отличий по сравнению с контрольной группой, тогда как концентрации TGFß в цервикальной слизи пациенток с этими вариантами инфекций были более чем в два раза выше по сравнению с показателями здоровых не-инфицированных женщин.

Значительное по отношению к контрольным величинам уменьшение концентраций IL-1 ß и TNFa, на фоне высоких значений TGFß, обнаруживалось при сочетании CT и HPV.

Увеличение концентраций провоспалитель-ных цитокинов IL-1ß, TNFa и отсутствие динамики содержания TGFß, по сравнению с контролем, было отмечено при инфицировании шейки матки HPV в ассоциации с HSV и CMV.

Обсуждение

Таким образом, нами обнаружено, что при диспластических изменениях шейки матки HPV

Таблица 1

Частота выявления генитальных инфекций при дисплазии шейки матки

Группы обследованных n Инфекции, %

HPV, тип смешанная с HPV инфекция

16, 18, 31, 33 6, 11 CT HSV CMV

Цервикальная дисплазия

слабая 24 16,7 ± 7,6 20,8 ± 8,3 16,7 ± 7,6 8,3 ± 5,6 12,5 ± 6,8

умеренная 27 44,4 ± 9,6 p = 0,031 22,2 ± 8,0 р = 0,904 11,1 ± 6,0 p = 0,562 7,4 ± 5,0 p = 0,905 11,1 ± 6,0 р = 0,877

тяжелая 29 72,4 ± 8,3 р < 0,001 р1 = 0,031 3,5 ± 3,4 p = 0,045 Pj = 0,032 17,2 ± 7,0 p = 0,962 р1 = 0,514 10,4 ± 5,7 p = 0,796 p1 = 0,696 10,4 ± 5,7 p = 0,812 р1 = 0,933

p — по сравнению со слабой дисплазией; Pj — по сравнению с умеренной дисплазией

Таблица 2

Содержание ^-1р, TNFa и ТСЕр в цервикальном секрете при генитальных инфекциях, ассоциированных с цервикальными дисплазиями

Генитальные инфекции n Цитокины, пкг/мл

IL-1ß TNFa TGFß

Контрольная группа 20 67,5 і 11,5 48,1 і 15,4 72,8 і 19,1

HPV моноинфекция, тип

6,11 5 70,0 і 19,1 46,2 і 12,6 182,2 і 41,5

р = 0,921 р = 0,953 p = 0,019

16, 18, 31,33 16 71,4 і 11,9 44,9 і 11,5 84,4 і 15,8

р = 0,817 р = 0,874 р = 0,654

Смешанная с HPV инфекция

CT 12 64,4 і 20,0 52,0 і 16,4 349,0 і 65,2

р = 0,886 р = 0,870 p < 0,001

HSV 7 159,2 і 44,2 171,7 і 62,5 108,0 і 36,0

p = 0,008 p = 0,010 р = 0,370

CMV 9 193,5 і 35,1 108,6 і 19,0 94,6 і 26,9

p < 0,001 р = 0,030 р = 0,524

р — статистическая значимость различий по сравнению с контрольной группой

выявляются в 61,3 ± 5,4 % случаев, при этом превалирующими являются канцерогенные типы вирусов и ассоциированные с другими инфекционными возбудителями (хламидии, вирусы герпеса и цитомегалии).

Выявленные изменения содержания цитоки-нов в цервикальном секрете при дисплазии шейки матки на фоне генитальных инфекций, позволяют предположить, что HPV-инфекция является ведущим патогенетическим звеном по отношению к другим вариантам инфицирования, изменяя функциональную активность иммунокомпетент-ных клеток и способствуя формированию иммунодефицита.

Отсутствие клеточных защитных реакций, благодаря которым и развивается воспаление, как адекватная реакция слизистой шейки матки, при HPV может быть связано с иммуносупрес-сивными свойствами персистирующего вируса. В отличие от других вирусов и, тем более бактерий, HPV не реплицируется и не инфицирует эпителиальные антигенпрезентирующие клетки, не разрушает эпителиоциты, в которых происходит репликация вируса, ограничивая выход ви-рус-специфических белков и контакт с ними им-мунокомпетентных клеток [4]. Но, тем не менее, очевидно, что постоянная персистенция вируса приводит к изменению антигенной структуры эпителиоцитов, что закономерно инициирует увеличение продукции TGFß с преобладанием Th-2 иммунного ответа [1]. Высокие уровни TGFß при ассоциированной хламидийно-папилломавирус-ной инфекции могут быть связаны с продукцией белков теплового шока, в частности, Hsp 60, которые продуцируются хламидиями в течение всего периода персистенции и стимулируют секрецию TGFß [10]. Увеличение продукции TGF-ß, инак-

тивирующего цитотоксическую активность макрофагов, сопровождается снижением экспрессии TNFa и IL-1ß [2].

Изве стно, что TNFa и IL-1ß, продукция которых увеличивалась при инфицировании шейки матки HPV в сочетании с HSV и CMV, способствуют дифференцировке ThO-лимфоцитов по Th1-пути иммунного ответа и выработке цитотоксичес-ких лимфоцитов, с которыми связаны локальные защитные реакции против локализованных внутриклеточно вирусов [3]. Однако, несмотря на активацию механизмов противоинфекцион-ной защиты, элиминация вирусов не происходит, продолжается их персистенция с повреждающим действием на клетки покровного эпителия шейки матки. Функциональная неадекватность систем защиты при внедрении и репликации вируса может быть связана с несколькими причинами. Во-первых, показано, что вирусы способны экспрессировать гены, гомологичные клеточным рецепторам цитокинов, что позволяет им связывать продуцируемые цитокины и блокировать их влияние на репликацию вирусов. Во-вторых, вирусными гомологами нарушается представление вирусного антигена белками главного комплекса гистосовместимости HLA [6]. И, в-третьих, ассоциированное с HPV инфицирование HSV и CMV может быть связано с блокированием противовирусной активности системы интерферона [4, 6].

Полученные нами результаты демонстрируют выраженные нарушения локальных иммунных реакций, обусловленные дисбалансом продукции цитокинов при инфекционном поражении шейки матки различными возбудителями, что впоследствии может инициировать прогрессию предраковых поражений в более тяжелые состояния. Обнаруженные закономерности локальной

продукции цитокинов при цервикальных дисплазиях, на наш взгляд, могут быть использованы в прогнозировании их развития.

Литература

1. Зубова С.Г. Молекулярные механизмы действия фактора некроза опухолей-а и трансформирующего фактора роста-р в процессе ответа макрофага на активацию / Зубова С.Г., Окулов В.Б. // Иммунология. — 2001. — № 5. — С. 18-21.

2. Иммуноферментный анализ / Под ред. Т.Т. Нго, Г.М. Лен-хофф. — М.: Мир, 1988. — 444 с.

3. Кадагидзе З.Г. Цитокины / Кадагидзе З.Г. // Практическая онкология. — 2003. — Т. 4, № 3. — С. 131-139.

4. КиселевВ.И. Этиологическая роль вируса папилломы человека в развитии рака шейки матки: генетические и патогенетические механизмы / Киселев В.И., Киселев О.И. // Цитокины и воспаление. — 2003. — Т. 2, № 4. — С. 31-38.

5. МинкинаГ.Н. Предрак шейки матки / Минкина Г.Н., Ману-хин И.Б., Франк Г.А. — М.: Аэрограф-медиа, 2001. — 112 с.

6. Носик Н.Н. Цитокины при вирусных инфекциях / Носик Н. Н. // Вопросы вирусологии. — 2000. — Т. 45, № 1. — С. 4-10.

7. Хейди М. Бауэр. Применение ПЦР для диагностики папил-ломавирусных инфекций гениталий / Хейди М. Бауэр, Грир Е., Мишель Мано М. // Молекулярная клиническая диагностика. Методы: пер. с англ. / Под ред. С. Херрингтон, Дж. Макги. — М.: Мир, 1999. — С. 258-331.

8. Cytokine expression in squamous intraepithelial lesions of the uterine cervix: implications for the generation of local immunosupression / S.L. Giannini, W. Al-Saleh, H. Piron, N. Jacobs [et al.] // Clin. Exp. Immunol. — 1998. — Vol. 113, N 2. — P. 183-189.

9. Cytokines in cervicovaginal washing fluid from patients with cervical neoplasia / M.Y. Tjiong, N. van der Vange,

J.S. ter Schegget, M.P. Burger [et al.] // Cytokine. — 2001. -Vol. 21. — P. 357-360.

10. Is chlamydial heat shock protein 60 a risk factor for oncogenesis / V. Di Felice, S. David, F. Capello [et al.] // Cell Mol. Life Sci. — 2005. — Vol. 62, N 1. — P. 4-9.

11. TyringS.K. Human papillomavirus infections:epidemiology, pathogenesis, and host immune response / Tyring S.K. // J. Amer. Acad. Dermatol. — 2000. — Vol. 43. — P. 218-226.

Статья представлена С.А. Сельковым

НИИ акушерства и гинекологии им. Д.О. Отта РАМН,

Санкт-Петербург

CYTOKINES IN CERVICAL SLIME FROM CERVICAL INTRAEPITHELIAL NEOPLASIA WITH GENITAL INFECTIONS

Belokrinitskaya T.E., Ponomaryova Y.N., Ladygina N.M., Bunina E.N.

Summary: There was a comparative investigation of cytokines IL-1ß, TNFa and TGFß in cervical slime under cervical intraepithelial neoplasia (CIN), associated with sexual transmission infections.

These results show significant changes of local immune reactions, which were caused by disbalance of cytokine secretion in combination with infections of uterine cervix. These data can be used for prognosticating the development of cervical preneoplasia.

Key words: cytokines; cervical intraepithelial neoplasia; genital infections