СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ПОСЛЕРОДОВЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ У КОРОВ
METHOD FOR PREDICTION OF POSTPARTUM DISEASES IN COWS

Изобретение относится к ветеринарии, в частности к способам прогнозирования послеродовой патологии у коров.
Известен способ прогнозирования патологии послеродового периода у коров, заключающийся в том, что у телят в первые 1-1,5 часа после рождения кутиметром или штангенциркулем замеряют диаметр пупка и при диаметре пупка более 18 мм у коров-матерей прогнозируется патология послеродового периода (Патент РФ №2296507, МПК А61В 5/07, публ. 10.04.2007 Бюл. №10).
Недостатком данного метода является невысокая прогностическая точность и чувствительность, а также то, что способ можно использовать только после родов, что не позволяет применять в транзитный период протоколы профилактики послеродовых патологий.
Известен способ прогнозирования послеродовых заболеваний у коров, включающий отбор проб слизи со слизистой оболочки верхнего свода влагалища и цитологическую оценку мазков. Отбор проб осуществляется за 10-15 дней до отела, а послеродовые заболевания прогнозируют при наличии в мазке более 80-85% поверхностных эпителиальных клеток, а также если ядра более 50-60% эпителиальных клеток находятся в стадии лизиса (Патент РФ №2314763, МПК А61В 17/42, G01N 33/483, публ. 20.01.2008 Бюл. №2).
Недостатком данного способа является невысокая прогностическая информативность и необходимость проведения микроскопических исследований непосредственно в хозяйстве.
Известен способ прогнозирования послеродовых осложнений у коров черно-пестрой породы, включающий взятие крови за месяц до родов и ее исследование на морфологические, биохимические и иммунологические показатели при дальнейшем сравнении полученных результатов с комплексом показателей и если полученные результаты ниже или равны указанным показателям, то у этих животных после родов повышается риск возникновения послеродовых осложнений (Патент РФ №2651036, МПК, G01N 33/48, публ. 18.04.2018 Бюл. №11 - прототип).
Недостатком этого способа является невысокая прогностическая информативность (75%) и необходимость определения в крови большого количества показателей, которые к тому же не все являются предикторами развития послеродовых осложнений, что и предопределило невысокую прогностическую точность способа.
Задачей на решение которой направлено заявленное изобретение является повышение прогностической точности послеродовых заболеваний при использовании минимального количества предикторов (прогностические параметры).
Указанный технический результат достигается тем что, в способе прогнозирования послеродовых заболеваний у коров включающем взятие крови у коров в сухостойный период, согласно заявленному изобретению, кровь берут за 15 дней до отела и определяют содержание положительных нейтрофилов в стимулированном НСТ - тесте и концентрацию плацентарной щелочной фосфатазы с последующим расчетом коэффициента, определяемого соотношением содержание положительных нейтрофилов: концентрация плацентарной щелочной фосфатазы, и при его величине, равной 2 и выше, прогнозируют задержание плодных оболочек, а при величине меньше 1 прогнозируют развитие эндометрита.
Сущность заявленного способа заключается в том, что между показателями концентрации плацентарной щелочной фосфатазы (ПЩФ) и содержанием положительных нейтрофилов в стимулированном НСТ - тесте в крови коров за 15 дней до родов и заболеваемостью животных после родов (эндометрит, задержание плодных оболочек) выявлена определенная зависимость. НСТ - тест широко применяется в медицине для оценки функциональной активности фагоцитов крови. Тест с НСТ (нитросиний тетразолий) основан на восстановлении поглощенного нейтрофилами растворимого красителя НСТ в нерастворимый диформазан, образующегося в НАДФ-Н-оксидазной реакции. Спонтанный НСТ-тест позволяет оценить степень активации кислород-зависимых механизмов киллинга неактивированных нейтрофилов. Значения стимулированного НСТ - теста характеризуют активность нейтрофилов в присутствии антигенного раздражителя и рассматриваются как критерий их готовности к завершенному фагоцитозу. При уменьшении функциональной активности нейтрофилов по кислород-зависимому пути происходит нарушение переваривания поглощенных нейтрофилами бактерий, так задержание плодных оболочек происходит в основном вследствие неспособности клеток иммунной системы, то есть нейтрофилов, успешно разрушить связь между карункулами и плацентой в конце стельности. Основным этиологическим фактором развития эндометрита в после родовой период являются бактерии, проникающие в матку после отела. Нейтрофилы являются первыми и наиболее важными клетками иммунной системы, которые выводятся из системы кровотока и направляются в матку для борьбы с болезнетворными бактериями, поэтому при дисфункции нейтрофилов происходит нарушение иммунного ответа и бактерии размножаются в эндометрии и вызывают его воспаление. Плацентарная щелочная фосфатаза (ПЩФ) продуцируется микроворсинками плаценты и эндотелием ее новообразующихся сосудов, является органоспецифическим антигеном плаценты, в связи с чем, логично ее непосредственное участие в патологических процессах в плаценте. Таким образом, оба эти показателя являются предикторами будущей патологии.
Для обосновании взаимосвязи прогнозирования патологии послеродового периода с содержанием положительных нейтрофилов в стимулированном НСТ - тесте и концентрацией плацентарной щелочной фосфатазой (ПЩФ) были проведены научно-производственные исследования. В первом опыте у 94 коров за 45 и 15 дней до отела брали кровь из подхвостовой вены в утренние часы, перед кормлением. Для оценки уровня функциональной активности нейтрофилов крови коров, проводили постановку НСТ - теста. НСТ - тест основан на поглощении красителя нитросинего тетразолия лейкоцитами крови с дальнейшим восстановлением его под влиянием активных форм кислорода внутри клетки и на ее мембране в виде нерастворимого диформазана темно-синего цвета. НСТ - тест ставили в двух вариантах, а именно спонтанном и стимулированном (с пирогеналом). Количество выпавшего диформазана служило критерием интенсивности реакции. Для оценки использовали световую микроскопию, подсчитывали процент нейтрофилов, содержащих диформазан. Для определения уровня плацентарной щелочной фосфатазы предварительно в сыворотке крови термически инактивировали другие изоферменты, при температуре 65°С в течении 10 минут, затем исследовали уровень плацентарной щелочной фосфатазы кинетическим УФ-методом на фотометрическом автоматическом анализаторе Chem Well Combi 2910. Задержание плодных оболочек у коров диагностировали, если они самопроизвольно не отделялись в течении 6-8 часов после отела. Диагностику эндометрита проводили на 10 и 21 дни после отела, при помощи портативного УЗИ сканера iScan с встроенным электронным линейным ректальным датчиком 7,5 MHz. Полученные результаты исследования крови коров в сухостойный период сравнивали с характером течения послеродового периода и в зависимости от вида послеродовых заболеваний, распределяли животных на три группы: с нормальным течением родов и послеродового периода - 61 голова (контрольная группа); с задержанием плодных оболочек - 13 голов; с эндометритом после самопроизвольного отделения плодных оболочек - 20 голов.
Результаты проведенного опыта представлены в таблице 1. Как показали исследования содержания положительных нейтрофилов как в спонтанном так и в стимулированном вариантах НСТ - теста при взятии крови за 45 дней до отела, достоверно не отличались у здоровых и больных животных, то есть столь отдаленное от сроков отела исследование вышеназванных показателей не обеспечивает возможность постановки прогноза, поэтому в таблице 1 представлены только результаты при взятии крови за 15 дней до отела. Аналогичная картина наблюдалась и с концентрацией плацентарной щелочной фосфатазой.
Согласно данным таблицы 1, при исследовании зависимости показателей НСТ- теста и развития после отела заболеваний было установлено, что у животных с послеродовыми осложнениями в сравнении с коровами с физиологическим течением послеотельного периода в спонтанном НСТ-тесте не выявлено достоверных отличий в функциональной активности нейтрофилов по кислород-зависимому пути. В стимулированном НСТ-тесте, после инкубации нейтрофилов с нитросиним тетразолием, в группах животных предрасположенных к задержанию плодных оболочек и развитию эндометрита произошло достоверное снижение активности нейтрофилов в сравнении с животными контрольной группы на 18,1% и 13,5% соответственно.
Снижение функциональной активности нейтрофилов в стимулированном НСТ-тесте, при сохранении уровня активности в спонтанном НСТ-тесте у животных в поздний период гестации, указывает на неполноценную реакцию нейтрофилов, что проявляется нарушением уничтожения и переваривания, поглощенных лейкоцитами бактерий и предрасполагает после отела животных к послеродовым заболеваниям.
При анализе данных представленных в таблице 1, следует отметить, что достоверное снижение в крови концентрации ПЩФ в сравнении с животными с физиологическим течением послеродового периода, в среднем за 15 дней до отела отмечены лишь у животных с задержанием плодных оболочек на 52,8%, в то время как у животных, у которых в последствии развился эндометрит уровень концентрации плацентарной щелочной фосфатазы достоверно не отличался от уровня здоровых животных.
Второй опыт был проведен с целью доказательства, прогностической информативности коэффициента определяемого расчетом соотношения содержание положительных нейтрофилов в стимулированном НСТ - тесте: концентрация плацентарной щелочной фосфатазы (далее стимулированный НСТ - тест: ПЩФ).
У 50 коров в сухостойный период за 15 дней до отела, отобрали однократно кровь из подхвостовой вены в утренние часы, перед кормлением. Исследовали в крови концентрацию плацентарной щелочной фосфатазы и провели постановку стимулированного НСТ-теста, с последующим расчетом коэффициента. С целью подтверждения прогностической точности после отела у животных определяли характер течения послеродового периода. Результаты исследования крови коров в сухостойный период сравнивали с характером течения послеродового периода и в зависимости от вида послеродовых заболеваний. Далее распределяли животных на три группы: с нормальным течением родов и послеродового периода - 32 головы; с задержанием плодных оболочек - 7 голов; с эндометритом после самопроизвольного отделения последа - 11 голов.
Прогностическая информативность коэффициента стимулированный НСТ - тест: ПЩФ при прогнозе послеродовых осложнений представлена в таблице 2.
При исследовании данных таблицы 2 отмечается, что у 87,5% животных с физиологическим течением послеродового периода соотношение показателей стимулированный НСТ - тест: ПЩФ оказалось в пределах от одной до двух единиц, а ниже единицы данный показатель опустился только у 12,5% коров. Животные, у которых в послеродовой период развился эндометрит, коэффициент стимулированный НСТ - тест: ПЩФ в 81,8% случаев оказался ниже единицы и лишь у 18,2% коров, данный показатель был больше двух единиц. Группа животных с задержанием плодных оболочек в большинстве случаев, а именно в 85,7% случаев имела коэффициент стимулированный НСТ - тест: ПЩФ больше двух единиц, тогда как у 14,3% коров дынный показатель находился в пределах от одной до двух единиц. Таким образом, прогностическая информативность коэффициента стимулированный НСТ - тест: ПЩФ при прогнозе задержании плодных оболочек составила 87,5%, а при эндометрите 81,8%.
Учитывая результаты исследований можно за 15 дней до родов с высокой точностью проводить прогноз послеродовых заболеваний на основе расчета коэффициент стимулированный НСТ: ПЩФ и раннюю профилактику заболеваний, что кроме всего прочего способствует повышению воспроизводства стада.
Пример 1.
В хозяйстве у 62 коров в сухостойный период, за 15 дней до отела произвели забор крови. Забор крови проводили из подхвостовой вены в утренние часы перед кормлением. В крови каждого животного определяли концентрацию плацентарной щелочной фосфатазы и проводили постановку стимулированного НСТ - теста. Далее проводили расчет коэффициента определяемого соотношением: содержание положительных нейтрофилов в стимулированнном НСТ - тесте: концентрация плацентарной щелочной фосфатазы. При анализе полученных данных у 5 животных коэффициент стимулированный НСТ - тест: ПЩФ составил более 2 единиц, у 11 животных вышеназванный коэффициент был ниже единицы, а у остальных 44 голов коров коэффициент находился в интервале от 1 до 2 единиц. После отела у животных, которые имели до отела коэффициент выше двух единиц задержание плодных оболочек наблюдалось у 4 животных, то есть в 80% случаев. При значении коэффициента за 15 дней до отела менее единицы был диагностирован эндометрит у 9 животных, то есть в 81,3% случаев.
Таким образом, использование заявленного способа позволяет с высокой точностью прогнозировать послеродовые осложнения (эндометрит, задержание плодных оболочек) используя коэффициент рассчитанный соотношением двух прогностических параметров послеродовой патологии у коров.