Аппарат и способ считывания биологического индикатора

1. Способ обнаружения биологической активности в биологическом индикаторе, включающий:
(a) обеспечение известного количества спор, содержащих фиксированное число копий фермента;
(b) обеспечение жидкой культуральной среды, содержащей субстраты фермента, причем субстраты имеют первый спектр испускания, и причем субстраты способны к переходу под действием фермента в производные субстрата, имеющие второй спектр испускания;
(c) воздействие на споры жидкой культуральной средой;
(d) измерение второго спектра испускания жидкой культуральной среды; и
(e) обнаружение в зависимости от времени или:
(i) отсутствия изменения второго спектра испускания; или
(ii) линейного увеличения во втором спектре испускания.
2. Способ по п. 1, в котором обнаруживают линейное увеличение во втором спектре испускания, причем способ дополнительно включает контроль второго спектра испускания на предмет изменения от линейного увеличения во втором спектре испускания до экспоненциального увеличения во втором спектре испускания.
Geobacillus stearothermophilus, спор Bacillus subtilis, спор Bacillus atrophaeus, спор Bacillus megaterium, спор Bacillus coagulans, спор Clostridium sporogenes, спор Bacillus pumilus
3. Способ по п. 1, в котором споры выбирают из спор  и их комбинаций.
4. Способ по п. 3, в котором ферменты выбирают из бета-D-глюкозидазы, альфа-D-глюкозидазы, щелочной фосфатазы, кислой фосфатазы, бутиратэстеразы, каприлат-эстеразы-липазы, миристат-липазы, лейцинаминопептидазы, валинаминопептидазы, химотрипсина, фосфогидролазы, альфа-D-галактозидазы, бета-D-галактозидазы, тирозин-аминопептидазы, фенилаланин-аминопептидазы, бета-D-глюкуронидазы, альфа-L-арабинофуранозидазы, N-ацетил-бета-глюкозаминидазы, бета-D-целлобиозидазы, аланинаминопептидазы, пролинаминопептидазы, эстераз жирных кислот и их комбинаций.
5. Способ по п. 1, в котором жидкая культуральная среда по существу не содержит индикаторный краситель.
6. Способ по п. 2, в котором изменение от линейного увеличения во втором спектре испускания до экспоненциального увеличения во втором спектре испускания занимает менее чем приблизительно 2 часа.
7. Способ по п. 2, в котором изменение от линейного увеличения во втором спектре испускания до экспоненциального увеличения во втором спектре испускания занимает менее чем приблизительно 1 час.
8. Способ по п. 2, в котором изменение от линейного увеличения во втором спектре испускания до экспоненциального увеличения во втором спектре испускания занимает менее чем приблизительно 30 минут.
9. Способ применения биологического индикатора, содержащего:
(i) хрупкую ампулу, содержащую первую жидкость, причем первая жидкость содержит жидкую культуральную среду и флуорогенный ферментный субстрат, имеющий первый спектр испускания, причем флуорогенный ферментный субстрат способен к переходу под действием фермента во флуоресцентное производное со вторым спектром испускания, и
(ii) носитель, на котором размещено известно количество бактериальных спор, содержащих фиксированное число копий фермента,
при этом способ включает:
(a) слом хрупкой ампулы;
(b) воздействие на жидкую культуральную среду бактериальными спорами с образованием второй жидкости;
(c) инкубирование второй жидкости; и
(d) контроль второй жидкости и обнаружение в зависимости от времени или:
(i) отсутствия изменения второго спектра испускания, или
(ii) линейного увеличения во втором спектре испускания.
10. Способ по п. 9, в котором обнаруживают линейное увеличение во втором спектре испускания, причем способ дополнительно включает контроль второго спектра испускания на предмет изменения от линейного увеличения во втором спектре испускания до экспоненциального увеличения во втором спектре испускания.
11. Способ по п. 9, в котором первая жидкость и вторая жидкость по существу не содержат индикаторный краситель.
12. Способ по п. 9, в котором первая жидкость и вторая жидкость являются бесцветными.
13. Способ по п. 10, в котором изменение от линейного увеличения во втором спектре испускания до экспоненциального увеличения во втором спектре испускания занимает менее чем приблизительно 2 часа.
14. Способ по п. 10, в котором изменение от линейного увеличения во втором спектре испускания до экспоненциального увеличения во втором спектре испускания занимает менее чем приблизительно 1 час.
15. Способ по п. 10, в котором изменение от линейного увеличения во втором спектре испускания до экспоненциального увеличения во втором спектре испускания занимает менее чем приблизительно 30 минут.
16. Способ по п. 10, в котором изменение от линейного увеличения во втором спектре испускания до экспоненциального увеличения во втором спектре испускания занимает менее чем приблизительно 5 минут.
17. Способ по п. 9, в котором биологический индикатор не содержит субстрат, который способен к поглощению и/или избирательному концентрированию индикаторного реагента.
Geobacillus stearothermophilus, спор Bacillus subtilis, спор Bacillus atrophaeus, спор Bacillus megaterium, спор Bacillus coagulans, спор Clostridium sporogenes, спор Bacillus pumilus
18. Способ по п. 9, в котором споры выбирают из спор  и их комбинаций.
19. Способ по п. 9, в котором ферменты выбирают из бета-D-глюкозидазы, альфа-D-глюкозидазы, щелочной фосфатазы, кислой фосфатазы, бутиратэстеразы, каприлат-эстеразы-липазы, миристат-липазы, лейцинаминопептидазы, валинаминопептидазы, химотрипсина, фосфогидролазы, альфа-D-галактозидазы, бета-D-галактозидазы, тирозин-аминопептидазы, фенилаланин-аминопептидазы, бета-D-глюкуронидазы, альфа-L-арабинофуранозидазы, N-ацетил-бета-глюкозаминидазы, бета-D-целлобиозидазы, аланинаминопептидазы, пролинаминопептидазы, эстераз жирных кислот и их комбинаций.
20. Способ подтверждения эффективности стерилизации спор, включающий:
Geobacillus stearothermophilus
(a) обеспечение биологического индикатора, содержащего споры , имеющие оболочки спор, причем оболочки спор содержат альфаглюкозидазу;
(b) обеспечение жидкой культуральной среды, которая по существу не содержит индикаторный краситель, причем жидкая культуральная среда содержит 4-метилумбеллиферил-α-D-глюкозид, причем 4-метилумбеллиферил-α-D-глюкозид имеет первый спектр испускания, и причем 4-метилумбеллиферил-α-D-глюкозид переходит посредством альфаглюкозидазы во флуоресцентное производное со вторым спектром испускания;
Geobacillus stearothermophilus
(c) воздействие на жидкую культуральную среду спорами ; и
(d) обнаружение в зависимости от времени изменения от линейного увеличения во втором спектре испускания до экспоненциального увеличения во втором спектре испускания.