СТРУКТУРНЫЕ ПЕПТИДНЫЕ ИНГИБИТОРЫ АГРЕГАЦИИ АЛЬФА-СИНУКЛЕИНА

1. Полинуклеотид, кодирующий ингибитор агрегации α–синуклеина (SEQ ID NO: 1),
где указанный ингибитор агрегации α–синуклеина состоит из ингибиторного пептида до 30 аминокислот в длину и содержащего последовательность:
GAVVWGVTAVKK (SEQ ID NO: 3); или
RAVVTGVTAVAE (SEQ ID NO: 4); где
по меньшей мере одна из аминокислот в ингибиторном пептиде представляет собой не встречающуюся в природе аминокислоту, где указанная не встречающаяся в природе аминокислота содержит по меньшей мере одну из D–аминокислоты; или аминокислоты, содержащей фрагмент N–метильной группы; и
гетерологичный пептидный тэг, связанный с указанным ингибиторным пептидом, где указанный гетерологичный пептидный тэг содержит:
аминокислотную последовательность, которая повышает растворимость пептида;
аминокислотную последовательность, которая облегчает мониторинг пептида; и/или
аминокислотную последовательность, которая облегчает вхождение пептида в клетку млекопитающего.
2. Полинуклеотид по п.1, где ингибиторный пептид содержит последовательность:
GAVVWGVTAVKKKKK (SEQ ID NO: 5);
GAVVWGVTAVKKGRKKRRQRRRPQ (SEQ ID NO: 6); или
YGRKKRRQRRRAVVTGVTAVAE (SEQ ID NO: 7).
3. Полинуклеотид по п.1, где указанный гетерологичный пептидный тэг содержит:
множество аргининовых остатков;
множество лизиновых аминокислотных остатков; и/или
аминокислотную последовательность TAT.
4. Вектор экспрессии, содержащий полинуклеотид по любому из пп.1-3.
5. Клетка для получения ингибитора агрегации α–синуклеина, трансфицированная вектором по п.4.
6. Способ получения ингибитора агрегации α–синуклеина, включающий
(i) экспрессию ингибитора агрегации α–синуклеина в клетке по п.5,
(ii) культивирование указанной клетки; и
(iii) сбор полученного таким образом ингибитора агрегации α–синуклеина.
7. Способ снижения или ингибирования агрегации α–синуклеина (SEQ ID NO: 1), включающий приведение амилоидных фибрилл α–синуклеина в контакт с ингибитором агрегации α–синуклеина в количестве, достаточном для снижения или ингибирования агрегации α–синуклеина,
где указанный ингибитор агрегации α–синуклеина состоит из ингибиторного пептида до 30 аминокислот в длину и содержащего последовательность:
GAVVWGVTAVKK (SEQ ID NO: 3); или
RAVVTGVTAVAE (SEQ ID NO: 4); где
по меньшей мере одна из аминокислот в ингибиторном пептиде представляет собой не встречающуюся в природе аминокислоту, где указанная не встречающаяся в природе аминокислота содержит по меньшей мере одну из D–аминокислоты; или аминокислоты, содержащей фрагмент N–метильной группы; и
гетерологичный пептидный тэг, связанный с указанным ингибиторным пептидом, где указанный гетерологичный пептидный тэг содержит:
аминокислотную последовательность, которая повышает растворимость пептида;
аминокислотную последовательность, которая облегчает мониторинг пептида; и/или
аминокислотную последовательность, которая облегчает вхождение пептида в клетку млекопитающего.
in vivo
8. Способ по п.7, где амилоидные фибриллы α–синуклеина находятся в среде .
9. Способ модуляции размера или скорости роста амилоидных фибрилл α–синуклеина, или скорости распространения амилоидных фибрилл α–синуклеина, включающий приведение фибриллы в контакт с некоторым количеством ингибитора агрегации α–синуклеина, где указанный ингибитор агрегации α–синуклеина контактирует с остатками 68–78 α–синуклеина или остатками 47–56;
таким образом, что амилоидная фибрилла α–синуклеина, с которой осуществляется контакт, демонстрирует измененный размер или скорость роста,
где указанный ингибитор агрегации α–синуклеина состоит из ингибиторного пептида до 30 аминокислот в длину и содержащего последовательность:
GAVVWGVTAVKK (SEQ ID NO: 3); или
RAVVTGVTAVAE (SEQ ID NO: 4); где
по меньшей мере одна из аминокислот в ингибиторном пептиде представляет собой не встречающуюся в природе аминокислоту, где указанная не встречающаяся в природе аминокислота содержит по меньшей мере одну из D–аминокислоты; или аминокислоты, содержащей фрагмент N–метильной группы; и
гетерологичный пептидный тэг, связанный с указанным ингибиторным пептидом, где указанный гетерологичный пептидный тэг содержит:
аминокислотную последовательность, которая повышает растворимость пептида;
аминокислотную последовательность, которая облегчает мониторинг пептида; и/или
аминокислотную последовательность, которая облегчает вхождение пептида в клетку млекопитающего.
10. Способ наблюдения наличия или отсутствия амилоидых фибрилл α–синуклеина в биологическом образце, включающий:
(a) комбинирование биологического образца с ингибитором агрегации α–синуклеина;
(b) обеспечение связывания ингибитора агрегации α–синуклеина с амилоидными фибриллами α–синуклеина, которые могут присутствовать в биологическом образце; и
(c) мониторинг комбинации (b) в отношении наличия комплексов, образованных между амилоидными фибриллами α–синуклеина и указанным ингибитором агрегации α–синуклеина; где наличие указанных комплексов указывает на наличие амилоидных фибрилл α–синуклеина в биологическом образце с помощью МРТ (MRI) или ПЭТ (PET) или другого метода визуализации,
где указанный ингибитор агрегации α–синуклеина состоит из ингибиторного пептида до 30 аминокислот в длину и содержащего последовательность:
GAVVWGVTAVKK (SEQ ID NO: 3); или
RAVVTGVTAVAE (SEQ ID NO: 4); где
по меньшей мере одна из аминокислот в ингибиторном пептиде представляет собой не встречающуюся в природе аминокислоту, где указанная не встречающаяся в природе аминокислота содержит по меньшей мере одну из D–аминокислоты; или аминокислоты, содержащей фрагмент N–метильной группы; и
гетерологичный пептидный тэг, связанный с указанным ингибиторным пептидом, где указанный гетерологичный пептидный тэг содержит:
аминокислотную последовательность, которая повышает растворимость пептида;
аминокислотную последовательность, которая облегчает мониторинг пептида; и/или
аминокислотную последовательность, которая облегчает вхождение пептида в клетку млекопитающего.
11. Способ по п.10, где наличие комплексов, образованных между амилоидными фибриллами α–синуклеина и ингибитором агрегации α–синуклеина, мониторят с помощью детектируемой метки, которая связана с ингибитором агрегации α–синуклеина.
12. Способ по п.11, где детектируемая метка содержит гетерологичный пептидный тэг.
13. Способ по п.10, где способ осуществляют с использованием биологического образца, полученного от индивидуума с подозрением на то, что он страдает болезнью Паркинсона.
14. Способ ингибирования затравки α–синуклеина, включающий введение ингибитора агрегации α–синуклеина, где указанный ингибитор агрегации α–синуклеина состоит из ингибиторного пептида до 30 аминокислот в длину и содержащего последовательность:
GAVVWGVTAVKK (SEQ ID NO: 3); или
RAVVTGVTAVAE (SEQ ID NO: 4); где
по меньшей мере одна из аминокислот в ингибиторном пептиде представляет собой не встречающуюся в природе аминокислоту, где указанная не встречающаяся в природе аминокислота содержит по меньшей мере одну из D–аминокислоты; или аминокислоты, содержащей фрагмент N–метильной группы; и
гетерологичный пептидный тэг, связанный с указанным ингибиторным пептидом, где указанный гетерологичный пептидный тэг содержит:
аминокислотную последовательность, которая повышает растворимость пептида;
аминокислотную последовательность, которая облегчает мониторинг пептида; и/или
аминокислотную последовательность, которая облегчает вхождение пептида в клетку млекопитающего.
15. Способ снижения или ингибирования агрегации мутантного α–синуклеина, включающий приведение мутантного α–синуклеина в контакт с ингибитором агрегации α–синуклеина в количестве, достаточном для снижения или ингибирования агрегации мутантного α–синуклеина, где указанный ингибитор агрегации α–синуклеина состоит из ингибиторного пептида до 30 аминокислот в длину и содержащего последовательность:
GAVVWGVTAVKK (SEQ ID NO: 3); или
RAVVTGVTAVAE (SEQ ID NO: 4); где
по меньшей мере одна из аминокислот в ингибиторном пептиде представляет собой не встречающуюся в природе аминокислоту, где указанная не встречающаяся в природе аминокислота содержит по меньшей мере одну из D–аминокислоты; или аминокислоты, содержащей фрагмент N–метильной группы; и
гетерологичный пептидный тэг, связанный с указанным ингибиторным пептидом, где указанный гетерологичный пептидный тэг содержит:
аминокислотную последовательность, которая повышает растворимость пептида;
аминокислотную последовательность, которая облегчает мониторинг пептида; и/или
аминокислотную последовательность, которая облегчает вхождение пептида в клетку млекопитающего.
16. Способ по любому из пп.7-15, где указанный ингибиторный пептид содержит последовательность:
GAVVWGVTAVKKKKK (SEQ ID NO: 5);
GAVVWGVTAVKKGRKKRRQRRRPQ (SEQ ID NO: 6); или
YGRKKRRQRRRAVVTGVTAVAE (SEQ ID NO: 7).
17. Способ по любому из пп.7-15, где указанный гетерологичный пептидный тэг содержит:
множество аргининовых остатков;
множество лизиновых аминокислотных остатков; и/или
аминокислотную последовательность TAT.