КОМПОЗИЦИИ И СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ ИНФЕКЦИОННЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА И СВИНЕЙ
COMPOSITIONS AND METHOD OF TREATING CATTLE AND PIGS' INFECTIOUS DISEASES

Настоящее изобретение относится к композициям и способам лечения инфекционных заболеваний животных. Точнее, настоящее изобретение относится к композициям, содержащим и антибиотик, и нестероидный лекарственный препарат, предназначенный для лечения инфекционных заболеваний животных, таких как крупный рогатый скот и свиньи.
Все цитированные в настоящем изобретении ссылки включены в него во всей полноте путем ссылки.
Респираторное заболевание крупного рогатого скота (РЗК) возникает и у молочного, и у мясного крупного рогатого скота и является одной из основных причин экономического ущерба в промышленном скотоводстве в мире. Этот экономический ущерб обусловлен повышенным падежом, снижением привеса, а также затратами на лечение и предупреждение заболевания. Вследствие многофакторной этиологии РЗК часто называют "комплексом респираторных заболеваний крупного рогатого скота".
TH
Размер ущерба от падежа вследствие респираторных заболеваний различен в разных странах. По оценкам ежегодный ущерб от падежа в США достигает 1 млрд долларов США. Ущерб в разных европейских странах составляет от 75 до 120 млн долларов США. У крупного рогатого скота с клиническим или субклиническим РЗК не наблюдается такого привеса и удоев, как у здоровых животных. У мясного крупного рогатого скота, страдающего РЗК, меньше привес, снижена эффективность использования корма и после убоя часто получаются туши худшего качества. Perino L.J., Apley M., Bowine Respiratory Disease, in CURRENT VETERINARY THERAPY 4 (FOODANIMAL PRACTICE), 4 ED. 446-455 (Howard J.L, Smith R.A., eds., 1999). Для крупного рогатого скота с субклиническими инфекционными заболеваниями обнаружена положительная корреляция между легочными заболеваниями, выявленными после убоя, и снижением привеса. Whittem Т.Е. et al., J. Am. Vet. Med. Assoc., 209:814-818 (1996).
В дополнение к потерям продукции, вызванным падежом и заболеваемостью, значительные затраты связаны с лечением РЗК, что обусловлено стоимостью различных терапевтических агентов и трудозатрат, необходимых для введения этих агентов, а также дополнительных трудозатрат для изоляции этих животных и наблюдения за ними.
Предполагается, что патогенез РЗК обусловлен взаимодействием стрессов, связанных с окружающей средой, и физиологических стрессов, вызванных возбудителями инфекций. Mannheimia (Pasteurella,) haemolytica, Pasteurella multocida и Haemophilus somnus считаются частью нормальной флоры верхних дыхательных путей крупного рогатого скота. Когда стрессовые факторы, связанные с окружающей средой, и физиологические стрессовые факторы уменьшают естественную сопротивляемость и подавляют механизмы защиты в легких, эти микроорганизмы размножаются и заселяют нижние дыхательные пути. Кроме того, известно, что различные вирусы крупного рогатого скота, такие как вирус инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота (IBRV), вирус инфекционной диареи крупного рогатого скота (BVDV), респираторно-синцитиальный вирус крупного рогатого скота (BRSV) и вирус пара-гриппа 3 (РI-3), оказывают иммуносупрессивное воздействие на легкие.
Аналогичным образом, респираторное заболевание свиней (РЗС) также обладает многофакторной этиологией. Бактериальные инфекции, вызванные Р. multocida, H. parasuis, Bordetella bronchiseptica, Actinobacillus pleuropneumoniae, Snreptococcus suis, Salmonella cholerasuis и Mycoplasma sp., могут вызвать респираторное заболевание у свиней, что приведет к значительному экономическому ущербу. Стрессы, такие как вызванные скученностью, смешиванием и перемещением свиней и кратковременными вирусными инфекциями, могут способствовать усилению этого заболевания. Эти микроорганизмы могут стимулировать усиление воспалительного процесса в легких посредством выработки различных токсинов, которые стимулируют продуцирование разных цитокинов, которые активируют воспалительный процесс. М.hаеmоlуtiса, считающийся самым вирулентным из этих микроорганизмов, также продуцирует лейкотоксин, который подавляет лейкоцитарный фагоцитоз, что дополнительно усиливает его способность заселять нижние дыхательные пути. Этот процесс часто приводит к бактериальной бронхопневмонии.
Поражение легких, которое приводит к падежу или заболеванию, обусловлено чрезмерной воспалительной реакцией на внедрившиеся патогены. Поражение тканей животного-хозяина происходит, когда нейтрофилы, макрофаги альвеол легких и природные клетки-киллеры разрушают инфицированные клетки. При повреждении клеточных мембран выделяется арахидоновая кислота. Арахидоновая кислота является субстратом для образования различных простагландинов и других эйкозаноидов. Высвобождение этих биологически активных веществ критически важно для развития воспалительной реакции, которая приводит к легочным заболеваниям. Mosier D.A., Vet. Clin. North Am. Food Animal Prac., 13:483-493 (1997).
Обычно лечение РЗК должно быть направлено на решение следующих задач:
1. Борьба с инфекцией - для животных, у которых инфекционный процесс остановлен на ранней стадии, потребность в повторном лечении значительно снижается (см. Apley M.D. & Fajt V.R., Vet. Clin. North Am. Food Anim. Prac., 14:291-313 (1998). Выбор подходящего противомикробного соединения следует основывать на восприимчивости инфицированного организма к воздействию противомикробного агента, содержании противомикробного агента в дыхательных путях, легкости введения, возможности поражения ткани на участке введения и дозировочном режиме, который сводит к минимуму боль и стресс, связанные с лечением.
2. Сведение к минимуму поражения легких - по мере усиления воспаления и последующего поражения легких увеличивается вероятность повторения лечения и снижается скорость прироста массы. Lekeux P., Воvine Рractitioner, 29:71-75 (1995); Scott P.R., J. Dairy Sci., 76(2):414-420 (1993).
3. Уменьшение пирексии - борьба с инфекцией и ослабление воспаления уменьшают пирексию (жар), что увеличивает вероятность выздоровления. Ощущение хорошего самочувствия, которым сопровождается уменьшение пирексии, также может улучшить потребление питательных веществ за счет подавления отсутствия аппетита, вызванного заболеванием и пирексией.
В течение ряда лет противомикробная терапия являлась основой лечения РЗК. В настоящее время для лечения РЗК имеется много эффективных противомикробных агентов. НУФЛОР, предназначенная для инъекций композиция антибиотика широкого спектра действия, флорфеникола, стал одним из основных антибиотиков, применяющихся во всем мире. Он показан для лечения и контроля РЗК, вызванных М. hаеmоlуtiса, Р. multocida и Н. somnus, a также для предупреждения респираторного заболевания крупного рогатого скота, у которого существует высокий риск возникновения РЗК, вызываемого этими бактериями. НУФЛОР также показан для лечения межпальцевой флегмоны (копытной гнили, острого межпальцевого некробациллеза, инфекционного пододерматита), вызванной Fusobacterium necrophorum и Вacteroides melaninogenicus. НУФЛОР можно вводить подкожно, а также внутримышечно.
Патогенез РЗК включает развитие значительного воспалительного процесса в легких и последующее развитие заболеваний легких, часто приводящих к уплотнению легких. Степень развития этого воспалительного процесса может определить, приведет ли заболевание к гибели, хроническому отставанию в росте или развитии или произойдет выздоровление животного с гладким течением. Исследована способность различных противовоспалительных агентов уменьшать пирексию, уплотнение легких и снижение массы, сопутствующие РЗК.
Применение кортикостероидов в качестве вспомогательных средств лечения РЗК обычно противопоказано вследствие их способности приводить к сильной иммунодепрессии. Однако показано, что применение нестероидных противовоспалительных лекарственных препаратов (НСПРП) совместно с антибиотиками полезно при лечении респираторного заболевания крупного рогатого скота. Показано, что нестероидный противовоспалительный агент флуниксин меглумин эффективно приводит к быстрому уменьшению пирексии, сопутствующей РЗК. Также показано, что флуниксин уменьшает уплотнение легких и необходимость в повторном лечении антибиотиками.
Флуниксин меглумин является активным компонентом ФИНАДИНА и БАНАМИНА (оба выпускаются компанией Schering-Plough Animal Health Corporation, Union, NJ). Он стал одним из главных НСПРП для дополнительной терапии РЗК.
Проведено обширное исследование применения флуниксин меглумина совместно с антибиотиками для лечения РЗК. Хотя его широко применяли при этом показании, его не использовали в единой комбинации с флорфениколом, поскольку основным способом введения флуниксина является внутривенный, а флорфеникол вводят внутримышечно или подкожно. Кроме того, композиции, содержащие флорфеникол, предназначены для того, чтобы определенные концентрации антибиотика сохранялись в крови в течение длительного периода, и не ожидается, что в таких композициях флуниксин будет обладать достаточной биологической доступностью. Наряду с этим, имеются сомнения в том, что флорфеникол и флуниксин будут совместимы в таких композициях.
Флуниксин меглумин применяют совместно с окситетрациклином, и в Европе имеются в продаже препараты, содержащие и флуниксин меглумин, и окситетрациклин. Однако такие комбинированные препараты необходимо вводить один раз в день в течение 3-5 дней. Кроме того, для бактериальных патогенов, включая те, которые обычно связывают с РЗК, резистентность по отношению к антибиотику окситетрациклину стала обычной.
В связи с этим существует потребность в удобных для введения, стабильных композициях, которые могут устранять инфекцию и предупреждать ее и сводить к минимуму воспаление, сопутствующее респираторному заболеванию крупного рогатого скота и другим инфекционным заболеваниям, и одновременно сводить у животного к минимуму боль и стресс, связанные с лечением, а также возможность поражения ткани на участке инъекции.
Краткое содержание изобретения
Настоящее изобретение удовлетворяет эту потребность путем предоставления улучшенных композиций и способов лечения респираторного заболевания крупного рогатого скота и других инфекций крупного рогатого скота и свиней.
Настоящее изобретение относится к композиции для лечения микробной инфекции у животного, включающей флуниксин или одну из его фармацевтически приемлемых солей и соединение формулы I:
в которой R означает фрагмент, выбранный из группы, включающей метил или этил или его галогенированное производное, дигалогендейтерометил, 1-галоген-1-дейтероэтил, 1,2-дигалоген-1-дейтероэтил, азидометил и метил-сульфонилметил;
2
2
1
1
1
2
2
2
1
2
1
1
1
1
1
2
1
2
1
1
1
1
2
1
2
1
1
1
2
каждый из Х и X' означает фрагмент, независимо выбранный из группы, включающей NO, SOR, SOR, SR, SONH, SONH. SONHR, SONHR, COR, OR, R, CN галоген, водород, фенил и фенил, содержащий галоген в качестве заместителя, NO, R, POR, CONHR, NHR, NRR, CONRR, OCOR и OR, где каждый из R и R означает фрагмент, независимо выбранный из группы, включающей метил, этил, н-пропил, изопропил, бутил, трет-бутил, изобутил и фенил;
и Z означает водород или ацильную группу карбоновой кислоты с углеводородной цепью, содержащую до 16 атомов углерода, или ацильную группу аминокарбоновой кислоты с углеводородной цепью, содержащую до 12 атомов углерода; и фармацевтически приемлемые соли указанных ацильных групп.
В предпочтительном варианте осуществления композиция для лечения микробной инфекции у животного включает (а) флорфеникол; (b) флуниксин или одну из его фармацевтически приемлемых солей; и (с) от около 5% до около 80% апротонного полярного растворителя.
Настоящее изобретение также относится к способу лечения микробной инфекции у животного, включающему стадию подкожного введения животному, нуждающемуся в таком лечении, терапевтически эффективного количества композиции, включающей флуниксин или одну из его фармацевтически приемлемых солей и соединение формулы I.
В предпочтительном варианте осуществления микробная инфекция выбрана из группы, включающей респираторное заболевание крупного рогатого скота, респираторное заболевание свиней, копытную гниль, острый мастит, острый эпидемический конъюнктивит, метрит и энтерит.
Настоящее изобретение также относится к способу предупреждения микробной инфекции у животного, подверженного такой инфекции, включающему стадию подкожного введения животному, подверженному такой инфекции, профилактического количества композиции, включающей флуниксин или одну из его фармацевтически приемлемых солей и соединение формулы I.
В предпочтительном варианте осуществления микробной инфекцией является респираторное заболевание крупного рогатого скота.
Краткое описание чертежей
Фиг.1 представляет собой график зависимости средней концентрации (±СО) (СО - среднеквадратичное отклонение) флорфеникола в плазме от времени после однократной подкожной инъекции НУФЛОРА (флорфеникола) или композиции, соответствующей настоящему изобретению, содержащей и флорфеникол, и флуниксин меглумин.
Фиг.2 представляет собой график зависимости средней концентрации флуниксина в плазме от времени после парентерального введения БАНАМИН/ФИНАДИНА (флуниксин меглумина) или комбинированной композиции флорфеникол-флуниксин меглумин, соответствующей настоящему изобретению.
Фиг.3 представляет собой график, демонстрирующий влияние флуниксина, содержащегося в комбинированной композиции флорфеникол-флуниксин меглумин, соответствующей настоящему изобретению.
Фиг.4 представляет собой график, демонстрирующий влияние лечения с помощью комбинированной композиции флорфеникол-флуниксин меглумин, соответствующей настоящему изобретению, на антипиретический ответ у крупного рогатого скота, страдающего РЗК.
Фиг.5 представляет собой график, демонстрирующий влияние лечения с помощью комбинированной композиции флорфеникол-флуниксин меглумин, соответствующей настоящему изобретению, на показатель уплотнения легких.
Фиг.6 представляет собой график, демонстрирующий влияние лечения с помощью комбинированной композиции флорфеникол-флуниксин меглумин, соответствующей настоящему изобретению, на клиническую степень успешности лечения.
Подробное описание изобретения
Когда флуниксин вводят подкожно в комбинированной композиции с антибиотиком, его биологическая доступность значительно снижается. Следует ожидать, что введение таким способом приведет к меньшей клинической эффективности, чем при аналогичном внутривенном введении.
Однако неожиданно было обнаружено, что несмотря на сниженную биологическую доступность флуниксин меглумина при подкожном введении такая же доза флуниксин меглумина при введении в составе некоторых композиций, содержащих фторированный аналог/производное антибиотика хлорамфеникола или тиамфеникола, оказывается клинически столь же эффективной, как и такое же количество флуниксин меглумина, введенное внутривенно совместно с отдельной подкожной инъекцией антибиотика.
Если не указано иного, то следует полагать, что приведенные ниже термины обладают следующими значениями:
"Ацил" означает H-C(O)-, алкил-С(О)-, алкенил-С(O)-, алкинил-С(O)-, циклоалкил-С(О)-, циклоалкенил-С(О)- или циклоалкинил-С(O)-группу, в которой разные группы являются такими, как описано ранее. Связь с основным фрагментом осуществляется через карбонильную группу. Предпочтительные ацилы содержат низший алкил. Неограничивающие примеры подходящих ацильных групп включают формил, ацетил, пропаноил, 2-метилпропаноил, бутаноил и циклогексаноил.
"Алкил" означает алифатическую углеводородную группу, которая может быть линейной или разветвленной и содержать от 1 до около 20 атомов углерода в цепи. Предпочтительные алкильные группы содержат от 1 до около 12 атомов углерода в цепи. Более предпочтительные алкильные группы содержат от 1 до около 6 атомов углерода в цепи. "Разветвленная" означает, что к линейной алкильной цепи присоединена одна или большее количество алкильных групп, таких как метил, этил или пропил. "Низший алкил" означает группу, содержащую от 1 до около 6 атомов углерода в цепи, которая может быть линейной или разветвленной. Термин "замещенный алкил" означает, что алкильная группа может содержать один или большее количество заместителей, которые могут быть одинаковыми или разными.
"Арил" означает ароматическую моноциклическую или полициклическую кольцевую систему, включающую от около 6 до около 14 атомов углерода, предпочтительно - от около 6 до около 10 атомов углерода. Арильная группа необязательно может в качестве заместителей содержать один или большее количество "заместителей кольцевой системы", которые могут быть одинаковыми или разными и являются такими, как определено в настоящем изобретении.
"Алкоксил" означает группу алкил-O-, в которой алкильная группа является такой, как описано выше. Неограничивающие примеры подходящих алкоксильных групп включают метоксил, этоксил, изопропоксил и н-бутоксил. Связь с основным фрагментом осуществляется через эфирный атом кислорода.
3
"Азидо" означает группу -N.
"Галоидная группа" означает фторидную, хлоридную, бромидную или йодидную группы. Предпочтительными являются фторидная, хлоридная или бромидная, а более предпочтительными являются фторидная и хлоридная.
"Галоген" означает фтор, хлор, бром или йод. Предпочтительными являются фтор, хлор или бром, а более предпочтительными являются фтор и хлор.
"Галогеналкил" означает алкильную группу, определенную выше, в которой один или большее количество атомов водорода алкила заменены на галоидную группу, определенную выше.
"Заместитель кольцевой системы" означает заместитель, присоединенный к ароматической или неароматической кольцевой системе, который, например, замещает имеющийся в кольцевой системе водород. Заместители кольцевой системы могут быть одинаковыми или разными.
Термин "необязательно замещенный" означает необязательное замещение указанными группами, радикалами или фрагментами.
При использовании в настоящем изобретении подразумевается, что термин "композиция" охватывает продукт, включающий заданные компоненты в заданных количествах, а также любой продукт, который получается, прямо или косвенно, путем комбинирования заданных компонентов в заданных количествах.
"Эффективное количество" означает дозу, необходимую для смягчения конкретного симптома инфекции или заболевания или для защиты животного от инфекций или заболевания.
При использовании в настоящем изобретении термин "крупный рогатый скот" относится к животным рода Bos (настоящие быки), таким как крупный рогатый скот. Термин "полорогие" (относящийся к полорогим жвачным животным) относится к животным семейства Воvidае (полорогие), которое включает копытных полорогих жвачных животных, таких как крупный рогатый скот, овцы, козы, буйволы, быки и т.п. При использовании в настоящем изобретении термин "свиньи" относится к животным семейства Suidae, которое включает свиней, кабанов, бородавочников и т.п.
Флуниксин меглумин в настоящее время во всем мире утвержден к применению при лечении РЗК. В ветеринарной практике он стал основным средством лечения воспалительных состояний. Поскольку ветеринары проводят лечение с помощью НСПРП совместно с антибиотиком, желательна разработка предназначенного для инъекций комбинированного препарата флуниксин-антибиотик. Флуниксин меглумин продает, например, компания ISP (Wayne, NJ), или его можно получить способами, известными в данной области техники, например способами, описанными в патентах США №№3337570, 3478040 и 3839344.
TH
TH
Показано, что фторсодержащие аналоги антибиотиков хлорамфеникола или тиамфеникола обладают антибиотической активностью по отношению к микроорганизмам, которые и чувствительны по отношению кхлорамфениколу и тиамфениколу, и резистентны по отношению к ним. См. работу Schafer, T.W. et al., "Novel Fluorine-Containing Analogs of Chloramphenicol and Thiamphenicol; Antibacterial and Biobgical Properties," в CURRENT CHEMOTHERAPY AND INFECTIOUS DISEASE PROCEEDINGS OF THE 11ICC AND THE 19ICAAC AMERICAN SOCIETY OF MICROBIOLOGY 1980, 444-446. Примеры таких соединений и способы их получения описаны в патенте США №4235892 и включены в его формулу изобретения. Медики все больше озабочены передачей резистентности бактерий к людям, наблюдающейся, когда домашнему скоту вводят антибиотики, применяющиеся при лечении людей. Поскольку антибиотики группы хлорамфеникола редко применяют для лечения людей, его производные являются особенно подходящими для применения в ветеринарии. Особый интерес представляют 3-фтор, 3-дезоксипроизводные.
Настоящее изобретение относится к новым композициям, предназначенным для лечения инфекционных заболеваний домашнего скота, таких как респираторное заболевание крупного рогатого скота. Эти композиции представляют собой композиции, содержащие флуниксин совместно с некоторыми производными хлорамфеникола. Предварительные исследования этих композиций показали, что после введения разовой дозы содержание флуниксина в сыворотке крупного рогатого скота является относительно низким. В последующих клинических исследованиях композиции, соответствующие настоящему изобретению, обнаружили неожиданно высокую степень эффективности по сравнению с отрицательной контрольной группой, а также с группой, получавшей флорфеникол и флуниксин одновременно, но в разных композициях. Композиция, соответствующая настоящему изобретению, включает флуниксин меглумин и, по меньшей мере, один антибиотик формулы I:
в которой R означает фрагмент, выбранный из группы, включающей метил или этил или его галогенированное производное, дигалогендейтерометил, 1-галоген-1-дейтероэтил, 1,2-дигалоген-1-дейтероэтил, азидометил и метил-сульфонилметил;
2
2
1
1
1
2
2
2
1
2
1
1
1
1
2
1
1
2
1
1
1
1
2
1
2
1
1
2
каждый из Х и X' означает фрагмент, независимо выбранный из группы, включающей NO, SOR, SOR, SR, SONH, SONH, SONHR, SONHR, COR, OR, R, CN, галоген, водород, фенил и фенил, содержащий галоген в качестве заместителя, NO, R, OR, POR, CONHR, NHR, NRR, CONRRи OCOR, где каждый из R и R означает фрагмент, независимо выбранный из группы, включающей метил, этил, н-пропил, изопропил, бутил, трет-бутил, изобутил и фенил;
и Z означает водород или ацильную группу карбоновой кислоты с углеводородной цепью (предпочтительно - дикарбоновой кислоты с углеводородной цепью), содержащую до 16 атомов углерода, или ацильную группу аминокарбоновой кислоты с углеводородной цепью, содержащую до 12 атомов углерода; и фармацевтически приемлемые соли указанных ацильных групп.
В число галогенированных групп, содержащихся во фрагменте R в формуле I, входят моно-, ди- и трифтор-, моно-, ди- и трихлор-, моно- и дибром- и йодметильные группы, а также моно- и дифтор-, моно- и дихлор-, моно- и дибром- и йодэтильные группы, в которых галоидные заместители предпочтительно присоединены к атому углерода, находящемуся в альфа-положении по отношению к карбонильной группе. В их число также входят смешанные дигалогеналкильные группы, в которых оба атома галогена предпочтительно присоединены к атомам углерода, находящимся в альфа-положении по отношению к карбонильным группам, например, такие группы, как фторхлор-, фторбром- и хлорбромметильная и -этильная, а также тригалогенметильные группы, такие как дихлорфтор- и дифторхлорметильная.
2
1
1
2
1
1
1
2
В число соединений формулы I также включены сложноэфирные производные, например, 1-карбоксилаты углеводородов формулы I, в которой Z означает ацильную группу карбоновой кислоты с углеводородной цепью, содержащей до 16 атомов углерода, которая может быть насыщенной, ненасыщенной, обладать линейной цепью или разветвленной цепью, алифатической циклической, циклоалифатической, ароматической, арилалифатической или алкилароматической и может содержать в качестве заместителей гидроксил, алкоксил, содержащий от 1 до 5 атомов углерода, карбоксил, NO, NHR, NRR, SR, SOR или галоген, где R и R являются такими, как определено выше.
Другими обладающими антибактериальной активностью сложноэфирными производными формулы I являются такие, в которых Z означает ацильную группу аминокислоты, содержащей до 12 атомов углерода, которая может быть насыщенной, ненасыщенной, обладать линейной целью, разветвленной цепью или быть циклической, которая может содержать ароматические группы и которая может содержать в качестве заместителей гидроксильные группы.
Предпочтительные сложноэфирные производные включают производные, полученные из двухосновных карбоксилатов углеводородов, например, 1-сукцинатные и 1-пальмитатные сложные эфиры, которые образуют растворимые в воде фармацевтически приемлемые катионсодержащие соли, например натриевые или калиевые соли, а также соли с амином, например с триметиламином. Также предпочтительными являются сложноэфирные производные аминокислот, которые образуют растворимые в воде фармацевтически приемлемые кислые молекулярные соли с неорганическими или органическими кислотами, например, молекулярные соли с хлористо-водородной или серной кислотой или с янтарной кислотой.
Таким образом, при использовании в настоящем изобретении выражение "фармацевтически приемлемые соли" включает соли, в которых кислотный атом водорода в двухосновных карбоксилатных сложных эфирах углеводородов, соответствующих настоящему изобретению, замещен на катион (например, D-(трео)-1-п-нитрофенил-2-дихлорацетамидо-3-фтор-1-пропилгемисукцинат натрия), а также соли, в которых кислотный атом водорода образует кислую молекулярную соль с амином (например, N-триметиламиновая соль D-(трео)-1-п-нитрофенил-2-дихлорацетамидо-3-фтор-1-пропилгемисукцината). Также включены кислые молекулярные соли неорганических или органических кислот с аминогруппой сложных эфиров аминокислот соединений формулы I (например, D-(трео)-1-п-нитрофенил-2-дихлорацетамидо-3-фтор-1-пропилглицинатгидрохлорид).
В число фармацевтически приемлемых катионсодержащих солей двухосновных карбоксилатных сложных эфиров углеводородов, включенных в формулу I, входят соли щелочных и щелочноземельных металлов (например, натрия, калия, кальция, алюминия) и соли с аминами, такими как триалкиламины, прокаин, дибензиламин, N-бензил-бета-фенетиламин, N,N'-дибензилэтилендиамин, N-(низший)алкилпиперидины (например, N-этилпиперидин) и N-метилглюкамин.
1
2
1
1
2
2
Предпочтительно, если R означает галогенированное производное метила или этила, Z означает водород, Х означает фенил, COR или SOR, R означает метил и X' означает водород. Наиболее предпочтительно, если R означает СНСl или CHF.
Предпочтительным соединением-антибиотиком является флорфеникол (D-(трео)-1-п-метилсульфонилфенил-2-дихлорацетамидо-3-фтор-1-пропанол). Другим предпочтительным соединением-антибиотиком является D-(трео)-1-п-метилсульфонилфенил-2-дифторацетамидо-3-фтор-1-пропанол. Способы получения этих предпочтительных соединений-антибиотиков и промежуточных продуктов, применяющихся в таких способах, описаны в патентах США №№4311857; 4582918; 4973750; 4876352; 5227494; 4743700; 5567844; 5105009; 5382673; 5352832; и 5663361.
Усилия по составлению комбинированного препарата были направлены на поддержание требуемого фармакокинетического профиля флорфеникола, что обеспечивает одноразовое введение крупному рогатому скоту, страдающему РЗК. Композиция, содержащая 300 мг/мл флорфеникола и 16,5 мг/мл флуниксина, разработана и введена в дозе, равной 40 мг/кг флорфеникола, и в дозе, равной 2,2 мг/кг флуниксин меглумина. Представленные данные показывают, что биологическая доступность флорфеникола не изменилась (см. Фиг.1). Кроме того, компонент-флуниксин оказывает воздействие, клинически эквивалентное воздействию ФИНАДИНА. В клиническом исследовании, при котором эта композиция сопоставлена с такой же композицией, содержащей в два раза больше флуниксина, и с чистым НУФЛОРОМ, преимущество лечения флуниксином было весьма очевидным. Однако при использовании более высокой дозы флуниксина дополнительное преимущество не обнаружено (см. фиг.3).
Клинические исследования повторно подтвердили надежно установленные преимущества флуниксина при лечении респираторного заболевания крупного рогатого скота, проявляющиеся в последовательном улучшении клинического ответа, антипиретического ответа и уменьшении уплотнения легких. Преимущество по сравнению с использованием только антибиотика было очевидным, особенно в течение критических первых 24 часов после постановки диагноза и начала лечения (см. Фиг.4, 5 и 6).
Предполагается, что, в дополнение к удобству и легкости применения, подкожное введение комбинированного препарата, соответствующего настоящему изобретению, проводимое один раз в день, будет содействовать гуманному лечению животных, поскольку уменьшается количество инъекций, необходимых для лечения животных, и быстрее ослабляются симптомы заболевания. Вследствие уменьшения количества инъекций также можно значительно снизить затраты на рабочую силу.
В композициях, соответствующих настоящему изобретению, концентрация флуниксина обычно составляет от около 1 до около 10 мас.%, а предпочтительная концентрация составляет от около 1,5 до около 3,5%, а еще более предпочтительная концентрация составляет, по меньшей мере, около 1,65 мас.%. Концентрация флорфеникола или другого антибиотика обычно составляет от около 10 до около 50% мас./об., а предпочтительная концентрация составляет от около 20 до около 40% мас./об., а еще более предпочтительная концентрация составляет, по меньшей мере, около 30% мас./об.
Оставшейся частью композиций, соответствующих настоящему изобретению, является фармацевтически приемлемый носитель, включающий, по меньшей мере, один растворитель. Фармацевтически приемлемый носитель обычно составляет от около 40 до около 80% композиции.
Флорфеникол обычно растворим в апротонных полярных растворителях, таких как пирролидоновый растворитель или N,N-диметилацетамид, N,N-диметилформамид, ДМСО (диметилсульфоксид), ацетон или формаль глицерина. Предпочтительными пирролидоновыми растворителями являются N-метил-2-пирролидон и 2-пирролидон. В соответствии с этим такой апротонный полярный растворитель (или комбинация таких растворителей) предпочтителен для применения в композициях, соответствующих настоящему изобретению, которые содержат флорфеникол или аналогичные антибиотики. Предпочтительно, если такой растворитель составляет от около 5 до около 80 мас.% композиции. Более предпочтительно, если такой растворитель составляет от около 10 до около 35% композиции.
В композициях, соответствующих настоящему изобретению, могут содержаться другие фармацевтически приемлемые растворители. Подходящие растворители включают воду, этанол, изопропанол, 1,2-пропандиол, глицерин, бензиловый спирт, диметилизосорбид, триацетин, простые эфиры гликоля, пропиленгликоль и полиэтиленгликоль (ПЭГ). Особенно предпочтительные растворители включают ПЭГ, обладающий средней молекулярной массой, равной от около 200 до около 400, триацетин, диметилизосорбид, этанол и воду и их комбинации. Эти растворители могут составлять от 0 до около 75% композиции. Предпочтительно, если они составляют от около 15 до около 60%. Более предпочтительно, если они составляют от около 40 до около 55% композиции.
Прибавление одного или большего количества таких дополнительных растворителей может быть желательным для снижения вязкости композиции, необходимого для получения препарата, легко вводимого шприцем. Примеры растворителей, особенно подходящих для регулирования вязкости композиций, соответствующих настоящему изобретению, включают воду, этанол, изопропанол, пропиленгликоль, диметилизосорбид и триацетин и их комбинации.
При необходимости в композицию, соответствующую настоящему изобретению, можно включить другие инертные компоненты. Такие компоненты включают консерванты, хелатирующие агенты, антиоксиданты и стабилизаторы. Типичные консерванты включают метил-п-гидроксибензоат (метилпарабен) и пропил-п-гидроксибензоат (пропилпарабен). Типичные хелатирующие агенты включают натриевую соль этилендиаминтетрауксусной кислоты. Типичные антиоксиданты включают бутилированный гидроксианизол и натриевую соль монотиоглицерина.
Обнаружено, что для предотвращения разложения всех активных компонентов, содержащихся в композициях, соответствующих настоящему изобретению, полезно прибавлять, по меньшей мере, один стабилизатор. Предпочтительным стабилизатором является лимонная кислота.
Для получения композиции, соответствующей настоящему изобретению, в сосуд для перемешивания помещают растворитель (растворители) или порцию растворителя (растворителей), а затем остальные наполнители и активные вещества. Смесь перемешивают до растворения всех твердых веществ. При необходимости для доведения композиции до конечного объема можно прибавить дополнительное количество растворителя. В сосуд также можно внести добавки, такие как перечисленные выше, и перемешать их с композицией (порядок прибавления не является существенным).
Композиции, соответствующие настоящему изобретению, обычно вводят крупному рогатому скоту в дозе, равной от около 1 до около 100 мг антибактериального препарата на 1 кг массы тела в день и от около 0,5 до около 5 мг флуниксин меглумина на 1 кг массы тела в день. Предпочтительно вводить крупному рогатому скоту композиции, соответствующие настоящему изобретению, в дозе, равной от около 20 до около 50 мг антибактериального препарата на 1 кг массы тела в день. Более предпочтительная доза антибактериального препарата равна около 40 мг/кг. Предпочтительно вводить композиции, соответствующие настоящему изобретению, в дозе, равной от около 1 до около 3 мг флуниксин меглумина на 1 кг массы тела.
Композиции, соответствующие настоящему изобретению, обычно вводят свиньям в дозе, равной от 15 до около 100 мг антибактериального препарата на 1 кг массы тела в день и от около 0,5 до около 5 мг флуниксин меглумина на 1 кг массы тела в день. Предпочтительно вводить свиньям композиции, соответствующие настоящему изобретению, в дозе, равной от около 20 до около 50 мг антибактериального препарата на 1 кг массы тела и от около 1 до около 2 мг флуниксин меглумина на 1 кг массы тела.
Композиции можно вводить один раз в день или разделять на несколько доз. Для лечения инфекции часто бывает достаточной лишь одной дозы. При некоторых обстоятельствах для лечения животного требуется введение одной дозы с последующим введением второй дозы через 48 ч. Как должно быть понятно специалисту с общей подготовкой в данной области техники, точное значение дозы будет зависеть от стадии и тяжести инфекции, восприимчивости инфицированного организма к действию композиции и индивидуальных характеристик вида животного, подвергающегося лечению.
Композиции, соответствующие настоящему изобретению, являются особенно подходящими для крупного рогатого скота и других полорогих, свиней и других крупных млекопитающих. В дополнение к лечению респираторного заболевания крупного рогатого скота композиции, соответствующие настоящему изобретению, также пригодны для лечения инфекционных заболеваний, сопровождающихся воспалением, таких как респираторное заболевание свиней, копытная гниль, острый мастит, острый эпидемический конъюнктивит (инфекционный кератоконъюнктивит), острая пневмония, метрит и энтерит. Дозировочный режим при лечении таких заболеваний должен быть таким, как описано выше.
Мастит является комплексным заболеванием, которое возникает у лактирующих самок, и он приводит к важным экономическим последствиям при возникновении у молочных коров и коз. Он может быть связан с несколькими патогенными микроорганизмами, включая, Staphylococcus aureus, E. соli и Streptococcus. Острая форма мастита начинается внезапно, вымя обычно увеличено, горячее на ощупь и болезненное; обычно у пораженного животного наблюдается жар. Если его быстро не вылечить, то поражение может стать необратимым, и выработка молока уменьшится или прекратится.
В настоящее время острый мастит лечат антибиотиками, противовоспалительными препаратами и окситоцином. Применение композиций, соответствующих настоящему изобретению, будет лучшим, чем применение известных в настоящее время способов лечения мастита, поскольку в нем одна из наиболее эффективных комбинаций, использующаяся при стандартном лечении, комбинируется в одной удобной для введения композиции.
Острый эпидемический конъюнктивит является острым инфекционным заболеванием крупного рогатого скота, овец и других животных, которое характеризуется воспалением тканей глаз, сопровождающимся выделениями из носа, слезотечением и обильными выделениями из глаз. Пораженное животное может испытывать чрезвычайно сильный дискомфорт, приводящий к снижению выработки молока; в тяжелых случаях наступает полная слепота. Это заболевание, которое у крупного рогатого скота вызывает Moraxella bovis, широко распространено, в особенности среди степного и содержащегося на кормовых площадках крупного рогатого скота, и приводит к значительным экономическим последствиям для промышленного скотоводства.
В настоящее время острый эпидемический конъюнктивит лечат путем введения различных антибиотиков. Применение композиций, соответствующих настоящему изобретению, будет лучшим, чем применение известных в настоящее время способов лечения острого эпидемического конъюнктивита, поскольку для ослабления воспаления глаз в нем применяется эффективное лечение антибиотиками совместно с НСПРП.
Копытная гниль (межпальцевая флегмона) является острой инфекцией межпальцевого пространства, которая во всем мире наблюдается у мясного и молочного крупного рогатого скота. Основной причиной копытной гнили является Fusobacterium necrophorum, хотя могут воздействовать другие микроорганизмы, включая Bacteroides melaninogenicus. Главные симптомы включают боль, сильную хромоту, жар, потерю аппетита и снижение выработки молока.
В настоящее время копытную гниль лечат антибиотиками; рекомендованная терапия может включать лечение продолжительностью до 5 дней. Применение композиций, соответствующих настоящему изобретению, для лечения копытной гнили будет лучшим, чем применение известных в настоящее время способов лечения, поскольку для ослабления воспаления, вызванного копытной гнилью, и улучшения самочувствия животного в нем используется обладающий подтвержденной эффективностью флорфеникол (при меньшем количестве введений) совместно с НСПРП.
Композиции, соответствующие настоящему изобретению, также пригодны для предупреждения этих заболеваний у животных, характеризующихся высоким риском возникновения этих заболеваний. Например, описанные в формуле изобретения композиции можно вводить крупному рогатому скоту, характеризующемуся высоким риском возникновения респираторного заболевания крупного рогатого скота, при таких же дозировках, которые рекомендованы для лечения респираторного заболевания крупного рогатого скота.
Настоящее изобретение более подробно описано в приведенных ниже примерах, которые считаются только иллюстративными, поскольку для специалиста в данной области техники должны быть очевидны многочисленные модификации и изменения.
ПРИМЕРЫ
ПРИМЕР 1
Комбинированные композиции флорфеникол/флуниксин
Компонент
Содержание в % (мас./об.)
Содержание в % (мас./об.)
Композиция 1АФлорфеникол 300 мг/млФлуниксин 16,5 мг/мл
Композиция 1ВФлорфеникол 300 мг/млФлуниксин 33 мг/мл
Флорфеникол
30,0
30,0
Флуниксин меглумин
2,737
5,474
N-Метил-2-пирролидон
25,0
25,0
Пропиленгликоль
15,0
15,0
Полиэтиленгликоль 300
сколько требуется
сколько требуется
Плотность
1,161 г/мл
1,167 г/мл
N-Метил-2-пирролидон, пропиленгликоль и около 90% необходимого количества ПЭГ 300 помещают в сосуд для перемешивания и тщательно перемешивают. Флорфеникол и флуниксин меглумин прибавляют при перемешивании, продолжающемся до растворения всех твердых веществ. До конечного объема доводят, прибавляя оставшийся ПЭГ 300.
ПРИМЕР 2
Фармакокинетика флорфеникола, содержащегося в комбинированном препарате
Композицию 1А Примера 1 (SCH 529752) оценивают с помощью предварительного фармакокинетического исследования, включающего 12 особей крупного рогатого скота, при котором 6 особям подкожно вводят флорфеникол (НУФЛОР) и 6 особям подкожно вводят Композицию 1А. Используют дозу флорфеникола, равную 40 мг/кг, и дозу флуниксина, равную 2,2 мг/кг. Результаты приведены на фиг.1. Это предварительное исследование предоставляет убедительные данные о том, что фармакокинетика флорфеникола, композиции, соответствующей настоящему изобретению, очень сходна с обеспечиваемой уже имеющимся в продаже препаратом, НУФЛОРОМ.
ПРИМЕР 3
Фармакокинетика флуниксина, содержащегося в комбинированном препарате
Во втором исследовании изучают фармакокинетический профиль второго активного компонента Композиции 1А, флуниксина. Фармакокинетический профиль флуниксина оценивают после введения крупному рогатому скоту утвержденного к применению однокомпонентного препарата флуниксин меглумина, ФИНАДИНА, и комбинированного препарата, Композиции 1А. Это исследования проводят в 4 стадии с использованием 6 особей крупного рогатого скота (3 самца, 3 самки). На первой стадии всем животным внутривенно (ВВ) вводят ФИНАДИН. Затем после выдерживания в течение периода, необходимого для выведения препарата, 3 животным вводят внутримышечно (ВМ) ФИНАДИН и 3 животным вводят подкожно (ПК) ФИНАДИН. На следующей стадии животным, которым вводили ФИНАДИН внутримышечно, теперь вводят подкожно, а животным, которым вводили ФИНАДИН подкожно, теперь вводят внутримышечно. На последней стадии всем 6 особям крупного рогатого скота вводят комбинированный препарат флуниксин/флорфеникол (Композиция 1А). Независимо от композиции и способа введения все животные получают флуникеин в дозе, равной 2,2 мг/кг.
Через 0, 0,17, 0,5, 0,75, 1, 2, 3, 4, 6, 8, 12 и 24 часа после введения берут пробы крови для определения концентрации флуниксина. Результаты представлены в приведенной ниже таблице 1 и на Фиг.2.
Таблица 1
Введение
C<sub>max</sub>(нг/мл)
T<sub>max</sub>(ч)
ППК* (0-∞)(ч*мкг/мл)
F(%)
Флуниксин ВВ
-
-
13,6
Флуниксин ВМ
3235
0,51
10,5
78
Флуниксин ПК
2858
0,54
10,9
81
Композиция 1А ПК
1480
1.21
6,47
48
*Площадь под кривой
На последней стадии 6 особям крупного рогатого скота ПК вводят Композицию 1А в дозе, равной 10 мл на 75 кг (что эквивалентно 40 мг/кг флорфеникола и 2,2 мг/кг флуниксина). Кинетика флуниксина при введении в виде Композиции 1А отличается от кинетики флуниксина при введении в виде ФИНАДИНА. Клинический ответ на дозу Композиции 1А определен в последующем исследовании (описано ниже).
ПРИМЕР 4
Клинический ответ крупного рогатого скота на флуниксин в комбинированном препарате
Поскольку исследование, описанное в Примере 3, показало, что биологическая доступность флуниксина, содержащегося в комбинированной композиции (Композиция 1А), ниже, чем в случае утвержденного к применению однокомпонентного препарата, ФИНАДИНА, предпринято клиническое исследование для сопоставления клинического ответа крупного рогатого скота на флуниксин при его введении в двух разных концентрациях флуниксина в комбинированных композициях (Композиция 1А и Композиция 1В).
Девяносто шесть (96) голов крупного рогатого скота, у которых проявлялись классические симптомы респираторного заболевания крупного рогатого скота, случайным образом включают в одну из следующих 3 групп с режимом лечения при дозе, равной 20 мл/150 кг массы тела (МТ):
Таблица 2
Режим лечения
Доза
Способ введения
Количество подопытных животных в группе
Композиция 1А
40 мг/кг флорфеникола и 2,2 мг/кг флуниксина, ОРД**×1
ПК
32
Композиция 1В*
40 мг/кг флорфеникола и 4,4 мг/кг флуниксина, ОРД ×1
ПК
32
НУФЛОР
40 мг/кг флорфеникола, ОРД×1
ПК
32
*Концентрация флуниксина удвоена по сравнению с указанной выше для Композиции 1А.
**ОРД - один раз в день
Во всех трех режимах препарат вводят подкожно один раз в дозе, равной 40 мг/кг МТ флорфеникола (20 мл/150 кг МТ). Композиция 1А одновременно выделяет флуниксин в дозе, равной 2,2 мг/кг МТ. Композиция 1В одновременно выделяет флуниксин в дозе, равной 4,4 мг/кг МТ. В различные моменты времени при исследовании определяют ректальную температуру. Результаты приведены на Фиг.3. В обеих группах, получавших комбинированную композицию, антипиретический ответ во все моменты времени был сходным и лучшим, чем при применении НУФЛОРА. Сделан вывод о том, что увеличение концентрации флуниксина в комбинированной композиции не приводит к последовательному улучшению результата.
ПРИМЕР 5
Исследование для подтверждения дозы флуниксина
В исследование для подтверждения дозы использована оптимальная доза флуниксина, определенная в исследовании, описанном в Примере 4. Для этого исследования выбраны сто семьдесят пять (175) находящихся на откорме телят мясной породы, у которых проявлялись клинические признаки острого РЗК. В исследование включают только крупный рогатый скот, у которого проявлялись следующие клинические признаки:
- Значение клинического показателя заболевания, равное 2 (заболевание средней тяжести) или 3 (тяжелое заболевание).
- Не менее двух характеристик дыхания оценены как аномальные (полипноэ, одышка, кашель, гнойно-слизистые выделения из носа).
- Пирексия ≥ 104,5°F.
После включения в исследование крупный рогатый скот случайным образом разделяют на 3 подопытные группы:
Таблица 3
Режим лечения
Доза
Способ введения
Количество подопытных животных в группе
Композиция 1А
40 мг/кг флорфеникола и 2,2 мг/кг флуниксина, ОРД×1
ПК
26
НУФЛОР+ФИНАДИН
40 мг/кг флорфеникола и 2,2 мг/кг флуниксина, ОРД×1
ПК (НУФЛОР) и ВВ (ФИНАДИН)
30
НУФЛОР
40 мг/кг флорфеникола, ОРД×1
ПК
30
Задачей настоящего исследования является сопоставление отклика на лечение комбинированной композицией, соответствующей настоящему изобретению, с данными для утвержденного положительного контроля (ФИНАДИН и НУФЛОР, каждый вводят соответствующим утвержденным способом) и отрицательного контроля (только НУФЛОР). Эффективность оценивают с помощью показателей клинических симптомов, ректальной температуры и общего уплотнения легких.
После включения в исследование и лечения в День 0 ректальную температуру у телят измеряют примерно через 2, 6 и 10 часов после лечения. После этого клинические показатели для телят определяют в Дни 1, 2, 3 и 4; ректальную температуру измеряют один раз в день после утреннего осмотра животных.
Успешность лечения оценивают в День 4 исследования. Лечение животного считают успешным, если ректальная температура животного ≤103,5°F, значение клинического показателя заболевания ≤1 (легкое заболевание) и характер дыхания является нормальным (менее двух аномальных показателей для полипноэ, одышки, кашля, гнойно-слизистых выделений из носа).
Th
В заключение, в День 4 телят гуманным образом умерщвляют для проведения вскрытия и оценки поражения легких/уплотнения легких. Уплотнение легких, выраженное в %, рассчитывают на основании визуальных и пальпационных оценок и каждой из 8 долей легких приписывают значение, равное 0, 1, 5, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 или 100%. После этого по стандартной формуле (см. работу Shaw, et al., DISEASES OF SWINE, 8 Ed. 914 (ISU Press, 1999)) рассчитывают общее уплотнение легких.
Результаты этого исследования суммированы на Фиг.4, 5 и 6.
Добавление флуниксина при лечении приводит к более быстрому снижению ректальной температуры (p<0,001 через 2, 6 и 10 ч после лечения) по сравнению с введением только флорфеникола. Ответ является одинаковым, когда флуниксин вводят с помощью отдельного шприца и вводят ВВ или вводят совместно с подкожной инъекцией Композиции 1А (см. фиг.4).
Добавление флуниксина при лечении приводит к меньшему численному значению уплотнения легких (р=0,08 [Композиция 1А по сравнению с НУФЛОРОМ], р=0,1 [НУФЛОР + ФИНАДИН по сравнению с НУФЛОРОМ]). Ответ является одинаковым, когда флуниксин вводят с помощью отдельного шприца и вводят ВВ (ФИНАДИН) или вводят совместно с подкожной инъекцией Композиции 1А (см. Фиг.5).
Как показано на Фиг.6, добавление флуниксина улучшает численное значение степени успешности лечения (р=0,1 [Композиция 1А по сравнению с НУФЛОРОМ]. р=0,3 [НУФЛОР+ФИНАДИН по сравнению с НУФЛОРОМ]).
ПРИМЕР 6
Комбинированные композиции флорфеникол/флуниксин
Компонент
Содержание в % (мас./об.)
Флорфеникол
30,0
30,0
50,0
20,0
Флуниксин меглумин
2,74
2,7
4,6
1,8
N-Метил-2-пирролидон (HMП)
25,0
-
-
-
Лимонная кислота
1,0
-
-
-
Пропиленгликоль
15,0
-
-
-
Диметилацетамид
-
11,9
30,0
-
Формаль глицерина
-
СТ
СТ
СТ
Полиэтиленгликоль (ПЭГ) 300
СТ
-
-
-
*СТ - сколько требуется
HMП или диметилацетамид, лимонную кислоту, пропиленгликоль и около 90% ПЭГ 300 или формаля глицерина, необходимых для каждой композиции, помещают в сосуд для перемешивания и тщательно перемешивают. Флорфеникол и флуниксин меглумин прибавляют при перемешивании, продолжающемся до растворения всех твердых веществ. До конечного объема доводят, прибавляя оставшийся ПЭГ 300 или формаль глицерина.
ПРИМЕР 7
Комбинированные композиции флорфеникол/флуниксин
Компонент
Количество
Флорфеникол
200 мг/мл
Флуниксин меглумин
16,5 мг/мл
Метил-п-гидроксибензоат
1 мг/мл
Пропил-п-гидроксибензоат
0,1 мг/мл
N-Метил-2-пирролидон (НМП)
250 мг/мл
Вода
0,15 мл
Полиэтиленгликоль 200
СТ
НМП и порцию полиэтиленгликоля 200 помещают в сосуд для перемешивания. В сосуд прибавляют флорфеникол, метил-п-гидроксибензоат и пропил-п-гидроксибензоат и перемешивают до растворения. Прибавляют воду, а затем флуниксин меглумин и перемешивают до растворения твердых веществ. При необходимости, до конечного объема доводят, прибавляя требуемое количество полиэтиленгликоля 200.
Хотя в настоящем изобретении описаны некоторые предпочтительные в настоящее время варианты осуществления настоящего изобретения, специалисту в данной области техники, к которому относится настоящее изобретение, должно быть понятно, что без отклонения от сущности и объема настоящего изобретения в описанные варианты осуществления могут быть внесены изменения и модификации. В соответствии с этим подразумевается, что настоящее изобретение ограничивается только в степени, установленной прилагаемой формулой изобретения и действующими правовыми нормами.