УСТРОЙСТВО И СПОСОБ ДЛЯ КОЛИЧЕСТВЕННОЙ ОЦЕНКИ ПОЛИПЕПТИДА, СОДЕРЖАЩЕГОСЯ В ПРОБЕ ЖИДКОСТИ ОРГАНИЗМА, А ТАКЖЕ МАРКЕР ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ ПАТОЛОГИЧЕСКИХ СОСТОЯНИЙ
DEVICE AND METHOD FOR QUANTITATIVE ANALYSIS OF POLYPEPTIDE CONTAINED IN BODY FLUID SAMPLE, AND ALSO MARKER FOR DETECTING PATHOLOGICAL STATES

Настоящее изобретение относится к устройству и способу для количественной оценки полипептидов, содержащихся в пробе жидкости организма, и сравнения с контрольными значениями, сохраненными в базе данных, а также к маркеру для выявления патологических состояний.
Из DE 10021737 С2 известны способ и устройство для количественного и/или качественного определения образца белка и/или полипептида в пробе жидкости организма. Белки и/или полипептиды пробы жидкости организма разделяют при помощи капиллярного электрофореза, затем подвергают прямой ионизации и передают online через интерфейс в подсоединенный масс-спектрометр для выполнения детекции.
Для контроля состояния организма человека или животного в течение длительного промежутка времени в базе данных автоматически сохраняют описывающие состояния контрольные значения и значения, относящиеся к пробам, а также связанные с ними отличия и соответствия, и автоматически производят поиск наилучших соответствий с новым целевым образцом белка или полипептида.
Было обнаружено, что при помощи собранных до настоящего времени образцов полипептидов могут быть получены весьма достоверные показатели, характеризующие состояния организма человека или животного. Это может дополнить или заменить обычно используемые способы исследования и диагностики, применяемые в настоящее время. В частности, к настоящему времени для диабета и диабетической нефропатии было получено большое количество контрольных значений и значений, относящихся к пробам, для определения образцов полипептидов.
Часто диабет представляет собой начальный этап диабетической нефропатии, которая может проявиться через годы или десятилетия. К тому же при диабете нефропатия проходит несколько стадий. Доступные в настоящее время способы диагностики диабетической нефропатии на ранней стадии являются неудовлетворительными вследствие их дороговизны и поскольку установление диагноза возможно на относительно поздней стадии.
Современная диагностика и последовательная терапия явной нефропатии не могут предупредить обязательный диализ или отодвинуть срок его начала, а также не могут снизить риск сердечно-сосудистых осложнений у диабетических пациентов.
Показана возможность установления диагноза при помощи образца полипептидов из пробы жидкости, например мочи, полученной на ранней стадии заболевания. Дальнейшие исследования позволили установить, что при использовании образца полипептидов также возможно диагностирование дальнейшего развития заболеваний, таких как вышеупомянутый диабет и диабетическая нефропатия.
В основе настоящего изобретения лежит задача разработки устройства и способа для количественной оценки полипептидов, содержащихся в пробе жидкости организма, и сравнения с контрольными значениями, сохраненными в базе данных, для соответствующего определения полипептидов при помощи компьютерной регистрации и обработки.
Эта задача решается при помощи устройства для количественной оценки полипептидов, содержащихся в пробе жидкости организма, и сравнения с контрольными значениями, сохраненными в базе данных, отличающегося тем, что контрольные значения хранятся в виде записей данных для полипептидов, релевантных состоянию, причем каждая из которых содержит по меньшей мере информацию о вероятности появления и/или концентрации полипептидов для патологического состояния в пробах здоровых и больных испытуемых, и при помощи способа количественной оценки полипептидов, содержащихся в пробе жидкости организма, и сравнения с контрольными значениями, сохраненными в базе данных, отличающегося тем, что для сравнения используются контрольные значения в виде записей данных для полипептидов, релевантных состоянию, причем информацию о вероятности появления и/или концентрации полипептидов в пробе жидкости организма можно сравнить с информацией для каждого по меньшей мере одного контрольного значения, относящегося к вероятности появления и/или концентрации полипептидов для патологического состояния в пробах здоровых и больных испытуемых.
Помимо этого, в основе настоящего изобретение также лежит задача получения маркера для выявления патологических состояний путем подходящего определения содержащихся в пробе полипептидов при помощи компьютерной регистрации и обработки.
Эта задача решается при помощи маркера для выявления патологических состояний, характеризующегося множеством полипептидов, релевантных состоянию, каждый из которых связан с информацией о вероятности появления и/или концентрации полипептида для патологического состояния в пробах здоровых или больных испытуемых.
Улучшенные и полезные варианты осуществления описаны в соответствующих зависимых пунктах формулы изобретения.
В настоящем изобретении оцениваются данные, относящиеся к полипептидам, концентрация которых в жидкости организма в патологическом состоянии явно меняется по сравнению с нормальным состоянием. Эти полипептиды могут быть определены при помощи предварительного исследования большого количества испытуемых.
Каждый полипептид связан с информацией, включающей в себя информацию о вероятности его появления или концентрации у здоровых и у больных испытуемых для патологического состояния.
При сравнении полипептидов из проб жидкости с контрольными значениями получают связи для каждого сравниваемого полипептида из пробы жидкости, благодаря тому, что появление и/или концентрация является репрезентативной для здорового или больного состояния. Путем сравнения множества полипептидов и концентраций можно сократить или исключить систематические ошибки в окончательном результате по каждому отдельному отличию от стандартной вероятности появления и концентрации.
Дополнительное улучшение позволяет определять полипептиды при помощи информации о соответствующих им массах и соответствующих им временах задержек в капиллярном электрофорезе.
При этом непосредственно используют данные капиллярного электрофореза и масс-спектрометрии. Эта информация отличается, но однозначна для всех полипептидов, так что эта информация является достаточной для определения. Время задержки в капиллярном электрофорезе может быть установлено, например, при помощи капиллярного электрофореза с использованием стеклянного капилляра длиной 90 см, внутренним диаметром (ID) 75 мкм и внешним диаметром (OD) 360 мкм при напряжении 30 кВ, причем в качестве растворителя для пробы используется водный раствор, содержащий 30% метанола и 0,5% муравьиной кислоты.
Для диагноза “диабет” и “поражение почек” в базе данных объединяли определенные записи данных для полипептидов, релевантных состоянию, которые выявляли и верифицировали на основании проб мочи для множества пациентов. При этом можно сравнивать отдельные полипептиды, либо комбинацию полипептидов или все полипептиды.
Поскольку представление большого количества полипептидов для здоровых и патологических состояний является избыточным, в простом случае может оказаться достаточным сравнение только некоторых из этих полипептидов. Тем не менее, ошибка, связанная со статистической погрешностью или индивидуальными отличиями, может быть исключена при сравнении комбинации полипептидов, релевантных состоянию. Оптимальный результат достигается при сравнении всех допустимых полипептидов.
Такие служащие в качестве маркеров полипептиды также могут представлять собой терапевтические мишени. Следовательно, возможно развитие способов терапии, в которых указанные полипептиды могут использоваться либо в качестве основной, либо в качестве целевой структуры. При этом наличие и/или концентрация каждого полипептида в организме изменяется путем добавления и/или при помощи антител таким образом, что его концентрация в исследуемой жидкости организма считается нормальной.
Далее изобретение описывается со ссылками на чертежи, на которых:
на фиг.1 (a-e) схематически показаны отдельные этапы сбора данных путем определения образцов полипептидов,
на фиг.2 (a-f) схематически показаны образцы полипептидов и их взаимосвязь.
В варианте осуществления настоящего изобретения анализируют наличие, а также концентрацию большого количества полипептидов в моче. В настоящее время это выполняют при помощи капиллярного электрофореза в сочетании с масс-спектрометром (СЕ-MS), но для этой цели можно использовать и другие способы.
Результаты исследований с помощью CE-MS, условно показанные в виде графика на фиг.1а, приведены в трехмерном виде через представление времени задержки по оси х, массы по оси у и амплитуды сигнала по оси z для образца обычных полипептидов с массой 500-1500. Фиг.1b представляет собой изображение “исходных данных”, из них получены отфильтрованные релевантные сигналы, показанные на фиг.1с как “распознанные сигналы”, при помощи обработки с применением программных средств для фильтрации и анализа, и затем вычислен образец полипептида, показанный на фиг.1d как “паттерн полипептида”. При этом полипептиды аннотировали/идентифицировали при помощи определения их масс и времен задержек в СЕ. Концентрацию вычисляли по амплитуде сигналов.
Полученные данные для указанного образца полипептида сохраняли в базе данных. При этом для каждого релевантного полипептида сохраняли необходимую информацию для однозначной идентификации. На фиг.1е показано отображение информации на экране дисплея для некоторых записей данных в алфавитно-цифровом виде.
Для выявления значимых полипептидов при помощи СЕ-MS исследовали мочу пациентов с диагностированной диабетической нефропатией и без нее или с диагностированным диабетом и без него.
При сопоставлении базы данных из 50 результатов исследований можно получить типичный образец полипептидов для испытуемого со здоровыми почками. С использованием такой же методики исследовали пробы мочи 200 пациентов с диабетом типа I и типа II. Используя этих пациентов, установили группы испытуемых с различными стадиями заболевания почек, с количеством белка в моче от совершенно незаметного до 3 г белка в сутки.
В результате анализа данных пациентов разбивали на четыре группы, как представлено в нижеследующей таблице.
Группа
Количество испытуемых
Тип
Классификация по диабету
Классификация по нефропатии
К0
60
Здоровые испытуемые, диабет не диагностируется, отсутствует протеинурия
“здоровый”
“здоровый”
Р0
120
Установлен диагноз диабет, протеинурия отсутствует
“больной”
Р1
61
Установлен диагноз диабет, повышенное содержание белка в моче
“больной”
Р2
23
Установлен диагноз диабет, сильно увеличено содержание белка в моче (симптом нефропатии)
Из обобщенного образца(ов) полипептидов исследованной группы выделили группоспецифичный образец полипептидов. Полученный таким образом образец полипептидов обнаруживает типичные отличия по сравнению с нормальным образцом, т.е. изменения в отдельных полипептидах. На фиг.2 показано графическое представление группоспецифичного образца полипептидов согласно таблице.
Образец полипептидов для каждой из групп К0, Р0, Р1, Р2 показан на фиг.2а, 2b, 2с, 2d. Из образцов полипептидов указанных групп К0, Р0, Р1, Р2 составлена общая картина и использована в качестве профиля маркера для разработки образца полипептидов, представленного на фиг.2е.
Для поиска релевантного маркера были использованы только такие полипептиды, которые были обнаружены в релевантном количестве, в данном случае больше 40% по меньшей мере в одной группе. Затем эти полипептиды проанализировали на возможность их использования для распознавания классов “здоровый” и “больной”. При этом учитывали согласующееся разбиение по группам.
Частично изменения в образце полипептидов обусловлены заболеванием диабетом и, следовательно, соразмерно обнаруживаются у всех больных диабетом, а также частично обусловлены развивающейся/прогрессирующей нефропатией. Таким образом, эти полипептиды можно использовать в качестве маркеров для установления диагноза “диабет” или “диабетическая нефропатия”.
Затем исследуемые пробы пациентов оценивают на наличие указанных полипептидов, после чего для установления диагноза используют указанное наличие либо отсутствие, как показано на фиг.2f.
В приведенной ниже таблице сведены полипептиды-маркеры, являющиеся особо релевантными при выявлении диабетической нефропатии. Вышеуказанные полипептиды служат для выявления больного на ранней стадии и при этом они могут быть использованы по отдельности, в виде сокращенного набора, или в виде полного набора.
Список содержит 380 полипептидов, определенных через их массы и времена задержки в капиллярном электрофорезе. Номера 1-157 относятся к пептидам-маркерам, используемым при установлении диагноза “диабет”. Номера 158-380 охватывают пептиды-маркеры, которые используют при установлении диагноза “поражение почек”. Внутри обеих групп полипептиды сначала сортируют, интерпретируя их как “положительные”, если в случаях заболевания вероятность появления таких полипептидов увеличивается, или как “отрицательные”. Затем полипептиды сортируют по порядку увеличения их масс.
В приведенной ниже таблице столбцы имеют следующие значения:
- №
Порядковый номер
- ИД
Внутренний идентификационный номер
- время
СЕ-время в минутах и стандартное отклонение
- масса
Масса полипептида в дальтонах и стандартное отклонение
- % здоровых
Процент появления в классе “здоровый”
- % больных
Процент появления в классе “больной”
- тип
Характеристика маркера в патологическом состоянии:Положительная: маркер появляется в состоянии “больной” с б<i>о</i>льшей вероятностью, чем в состоянии “здоровый”Отрицательная: маркер появляется в состоянии “больной” с меньшей вероятностью, чем в состоянии “здоровый”
В предпочтительном варианте настоящего изобретения устройство согласно настоящему изобретению или способ согласно настоящему изобретению дополнительно отличаются тем, что полипептиды определяют путем определения соответствующих им масс и соответствующих им времен задержек в капиллярном электрофорезе, например, при помощи капиллярного электрофореза в сочетании с масс-спектрометром. В другом предпочтительном варианте осуществления база данных для диагноза “диабет” содержит по меньшей мере одну запись, подгруппу записей или все записи данных 1-157 для полипептидов из вышеуказанной таблицы. В другом предпочтительном варианте осуществления база данных для диагноза “поражение почек” содержит по меньшей мере одну запись, подгруппу записей или все записи данных 158-380 для полипептидов из вышеуказанной таблицы.
В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения маркер согласно настоящему изобретению дополнительно отличается тем, что полипептиды определяют путем определения соответствующих им масс и соответствующих им времен задержек в капиллярном электрофорезе, например, при помощи капиллярного электрофореза в сочетании с масс-спектрометром. В частности, маркер отличается тем, что для диагноза “диабет” содержит по меньшей мере один полипептид, одну из комбинаций полипептидов или все полипептиды 1-157 из вышеуказанной таблицы, или для диагноза “поражение почек” содержит по меньшей мере один полипептид, одну из комбинаций полипептидов или все полипептиды 158-380 из вышеуказанной таблицы.
В особо предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения для устройства, способа или маркера можно использовать особо предпочтительные комбинации полипептидов.
В качестве "положительных" полипептидов для диабета предпочтительными являются полипептиды №32(А), 1(В), 48(С), 2(D), 44(Е), 22(F), 9(G), 23(Н) и 20(I) и их комбинации, в частности, как показано ниже.
В качестве "отрицательных" полипептидов для диабета предпочтительными являются полипептиды № 123(А), 153(В), 155(С), 105(D), 150(Е), 121(F), 157(G), 92(Н) и 69(I) и их комбинации, в частности, как показано ниже.
В качестве "положительных" полипептидов для нефропатии предпочтительными являются полипептиды №225(А), 208(В), 164(С), 166(D), 171(Е), 204(F), 206(G), 182(Н) и 210(I) и их комбинации, в частности, как показано ниже.
В качестве "отрицательных" полипептидов для нефропатии предпочтительными являются полипептиды №262(А), 260(В), 306(С), 358(D), 279(Е), 318(F), 305(G), 261(Н) и 278(I) и их комбинации, в частности, как показано ниже.
В одном из предпочтительных вариантов осуществления настоящего изобретения используются любые два из вышеуказанных предпочтительных полипептидов А, В, С, D, Е, F, G, Н и I в качестве "отрицательных" для диабета, "положительных" для диабета, "отрицательных" для нефропатии или "положительных" для нефропатии. В частности, указанные комбинации полипептидов представляют собой:
- А и В, А и С, А и D, А и Е, А и F, A и G, A и Н, А и I,
- В и С, В и D, В и Е, В и F, В и G, В и Н, В и I,
- С и D, С и Е, С и F, С и G, С и Н, С и I,
- D и Е, D и F, D и G, D и Н, D и I,
- Е и F, E и G, E и Н, E и I,
- F и G, F и Н, F и I,
- G и Н, G и I,
- Н и I.
В другом предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения используются три из вышеуказанных предпочтительных полипептидов A, B, C, D, E, F, G, H и I в качестве “отрицательных” для диабета, “положительных” для диабета, “отрицательных” для нефропатии или “положительных” для нефропатии. В частности, указанные комбинации полипептидов представляют собой:
- А и B в комбинации с одним из полипептидов C, D, E, F, G, H или I,
- А и С в комбинации с одним из полипептидов D, E, F, G, H или I,
- А и D в комбинации с одним из полипептидов E, F, G, H или I,
- А и E в комбинации с одним из полипептидов F, G, H или I,
- А и F в комбинации с одним из полипептидов G, H или I,
- А и G в комбинации с одним из полипептидов H или I,
- А и H в комбинации с полипептидом I,
- B и С в комбинации с одним из полипептидов D, E, F, G, H или I,
- B и D в комбинации с одним из полипептидов E, F, G, H или I,
- B и E в комбинации с одним из полипептидов F, G, H или I,
- B и F в комбинации с одним из полипептидов G, H или I,
- B и G в комбинации с одним из полипептидов H или I,
- B и H в комбинации с I,
- C и D в комбинации с одним из полипептидов E, F, G, H или I,
- C и E в комбинации с одним из полипептидов F, G, H или I,
- C и F в комбинации с одним из полипептидов G, H или I,
- C и G в комбинации с одним из полипептидов H или I,
- C и H в комбинации с I,
- D и E в комбинации с одним из полипептидов F, G, H или I,
- D и F в комбинации с одним из полипептидов G, H или I,
- D и G в комбинации с одним из полипептидов H или I,
- D и H в комбинации с I,
- E и F в комбинации с одним из полипептидов G, H или I,
- E и G в комбинации с одним из полипептидов H или I,
- E и H в комбинации с I,
- F и G в комбинации с H или I,
- F и H в комбинации с I, или
- G и H в комбинации с I.
В другом предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения используются четыре из вышеназванных предпочтительных полипептидов A, B, C, D, E, F, G, H и I в качестве “отрицательных” для диабета, “положительных” для диабета, “отрицательных” для нефропатии или “положительных” для нефропатии. В частности, указанные комбинации полипептидов представляют собой:
- А, В и С в комбинации с одним из полипептидов D, E, F, G, H или I,
- А, В и D в комбинации с одним из полипептидов E, F, G, H или I,
- А, B и E в комбинации с одним из полипептидов F, G, H или I,
- А, B и F в комбинации с одним из полипептидов G, H или I,
- А, B и G в комбинации с одним из полипептидов H или I,
- А, B и H в комбинации с I,
- А, C и D в комбинации с одним из полипептидов E, F, G, H или I,
- А, C и Е в комбинации с одним из полипептидов F, G, H или I,
- А, C и F в комбинации с одним из полипептидов G, H или I,
- А, C и G в комбинации с одним из полипептидов H или I,
- А, C и H в комбинации с I,
- А, D и E в комбинации с одним из полипептидов F, G, H или I,
- А, D и F в комбинации с одним из полипептидов G, H или I,
- А, D и G в комбинации с одним из полипептидов H или I,
- А, D и H в комбинации с I,
- А, E и F в комбинации с одним из полипептидов G, H или I,
- А, E и G в комбинации с одним из полипептидов H или I,
- А, E и H в комбинации с I,
- А, F и G в комбинации с одним из полипептидов H или I,
- А, F и H в комбинации с I,
- А, G и H в комбинации с I,
- В, C и D в комбинации с одним из полипептидов E, F, G, H или I,
- В, C и E в комбинации с одним из полипептидов F, G, H или I,
- В, C и F в комбинации с одним из полипептидов G, H или I,
- В, C и G в комбинации с одним из полипептидов H или I,
- В, C и H в комбинации с I,
- В, D и E в комбинации с одним из полипептидов F, G, H или I,
- В, D и F в комбинации с одним из полипептидов G, H или I,
- В, D и G в комбинации с одним из полипептидов H или I,
- В, D и H в комбинации с I,
- В, E и F в комбинации с одним из полипептидов G, H или I,
- В, E и G в комбинации с одним из полипептидов H или I,
- В, E и H в комбинации с I,
- В, F и G в комбинации с одним из полипептидов H или I,
- В, F и H в комбинации с I,
- В, G и H в комбинации с I,
- C, D и E в комбинации с одним из полипептидов F, G, H или I,
- C, D и F в комбинации с одним из полипептидов G, H или I,
- C, D и G в комбинации с одним из полипептидов H или I,
- C, D и H в комбинации с I,
- C, E и F в комбинации с одним из полипептидов G, H или I,
- C, E и G в комбинации с одним из полипептидов H или I,
- C, E и H в комбинации с I,
- C, F и G в комбинации с одним из полипептидов H или I,
- C, F и H в комбинации с I,
- C, G и H в комбинации с I,
- D, E и F в комбинации с одним из полипептидов G, H или I,
- D, E и G в комбинации с одним из полипептидов H или I,
- D, E и H в комбинации с I,
- D, F и G в комбинации с одним из полипептидов H или I,
- D, F и H в комбинации с I,
- D, G и H в комбинации с I,
- E, F и G в комбинации с одним из полипептидов H или I,
- E, F и H в комбинации с I,
- E, G и H в комбинации с I, или
- F, G и H в комбинации с I.
В другом предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения используются пять из вышеназванных предпочтительных полипептидов A, B, C, D, E, F, G, H и I в качестве “отрицательных” для диабета, “положительных” для диабета, “отрицательных” для нефропатии или “положительных” для нефропатии. В частности, указанные комбинации полипептидов представляют собой:
- А, В, С и D в комбинации с одним из полипептидов E, F, G, H или I,
- А, В, С и E в комбинации с одним из полипептидов F, G, H или I,
- А, В, С и F в комбинации с одним из полипептидов G, H или I,
- А, В, С и G в комбинации с одним из полипептидов H или I,
- А, В, С и H в комбинации с полипептидом I,
- А, В, D и Е в комбинации с одним из полипептидов F, G, H или I,
- А, В, D и F в комбинации с одним из полипептидов G, H или I,
- А, В, D и G в комбинации с одним из полипептидов H или I,
- А, В, D и Н в комбинации с полипептидом I,
- А, В, Е и F в комбинации с одним из полипептидов G, H или I,
- А, В, Е и G в комбинации с одним из полипептидов H или I,
- А, В, Е и H в комбинации с полипептидом I,
- А, В, F и G в комбинации с одним из полипептидов H или I,
- А, В, F и H в комбинации с полипептидом I,
- А, В, G и H в комбинации с полипептидом I,
- А, С, D и Е в комбинации с одним из полипептидов F, G, H или I,
- А, С, D и F в комбинации с одним из полипептидов G, H или I,
- А, С, D и G в комбинации с одним из полипептидов H или I,
- А, С, D и Н в комбинации с полипептидом I,
- А, С, Е и F в комбинации с одним из полипептидов G, H или I,
- А, С, Е и G в комбинации с одним из полипептидов H или I,
- А, С, Е и H в комбинации с полипептидом I,
- А, С, F и G в комбинации с одним из полипептидов H или I,
- А, С, F и H в комбинации с полипептидом I,
- А, С, G и H в комбинации с полипептидом I,
- А, D, Е и F в комбинации с одним из полипептидов G, H или I,
- А, D, Е и G в комбинации с одним из полипептидов H или I,
- А, D, Е и H в комбинации с полипептидом I,
- А, D, F и G в комбинации с одним из полипептидов H или I,
- А, D, F и H в комбинации с полипептидом I,
- А, D, G и H в комбинации с полипептидом I,
- А, E, F и G в комбинации с одним из полипептидов H или I,
- А, E, F и H в комбинации с полипептидом I,
- А, E, G и H в комбинации с полипептидом I,
- А, F, G и H в комбинации с полипептидом I,
- В, C, D и E в комбинации с одним из полипептидов F, G, H или I,
- В, C, D и F в комбинации с одним из полипептидов G, H или I,
- В, C, D и G в комбинации с одним из полипептидов H или I,
- В, C, D и H в комбинации с полипептидом I,
- В, C, E и F в комбинации с одним из полипептидов G, H или I,
- В, C, E и G в комбинации с одним из полипептидов H или I,
- В, C, E и H в комбинации с полипептидом I,
- В, C, F и G в комбинации с одним из полипептидов H или I,
- В, C, F и H в комбинации с полипептидом I,
- В, C, G и H в комбинации с полипептидом I,
- В, D, E и F в комбинации с одним из полипептидов G, H или I,
- В, D, E и G в комбинации с одним из полипептидов H или I,
- В, D, E и H в комбинации с полипептидом I,
- В, D, F и G в комбинации с одним из полипептидов H или I,
- В, D, F и H в комбинации с полипептидом I,
- В, D, G и H в комбинации с полипептидом I,
- В, E, F и G в комбинации с одним из полипептидов H или I,
- В, E, F и H в комбинации с полипептидом I,
- В, E, G и H в комбинации с полипептидом I,
- В, F, G и H в комбинации с полипептидом I,
- C, D, E и F в комбинации с одним из полипептидов G, H или I,
- C, D, E и G в комбинации с одним из полипептидов H или I,
- C, D, E и H в комбинации с полипептидом I,
- C, D, F и G в комбинации с одним из полипептидов H или I,
- C, D, F и H в комбинации с полипептидом I,
- C, D, G и H в комбинации с полипептидом I,
- C, E, F и G в комбинации с одним из полипептидов H или I,
- C, E, F и H в комбинации с полипептидом I,
- C, E, G и H в комбинации с полипептидом I,
- C, F, G и H в комбинации с полипептидом I,
- D, E, F и G в комбинации с одним из полипептидов H или I,
- D, E, F и H в комбинации с полипептидом I,
- D, E, G и H в комбинации с полипептидом I,
- D, F и G в комбинации с одним из полипептидов H или I, или
- E, F, G и H в комбинации с полипептидом I.
В другом предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения используются шесть из вышеназванных предпочтительных полипептидов A, B, C, D, E, F, G, H и I в качестве “отрицательных” для диабета, “положительных” для диабета, “отрицательных” для нефропатии или “положительных” для нефропатии. В частности, указанные комбинации полипептидов представляют собой:
- А, В, С, D и E в комбинации с одним из полипептидов F, G, H или I,
- А, В, С, D и F в комбинации с одним из полипептидов G, H или I,
- А, В, С, D и G в комбинации с одним из полипептидов H или I,
- А, В, С, D и H в комбинации с полипептидом I,
- А, В, С, E и F в комбинации с одним из полипептидов G, H или I,
- А, В, С, E и G в комбинации с одним из полипептидов H или I,
- А, В, С, E и H в комбинации с полипептидом I,
- А, В, С, F и G в комбинации с одним из полипептидов H или I,
- А, В, С, F и H в комбинации с полипептидом I,
- А, В, С, G и H в комбинации с полипептидом I,
- А, В, D, E и F в комбинации с одним из полипептидов G, H или I,
- А, В, D, E и G в комбинации с одним из полипептидов H или I,
- А, В, D, E и Н в комбинации с полипептидом I,
- А, В, D, F и G в комбинации с одним из полипептидов H или I,
- А, В, D, F и Н в комбинации с полипептидом I,
- А, В, D, G и Н в комбинации с полипептидом I,
- А, В, Е, F и G в комбинации с одним из полипептидов H или I,
- А, В, Е, F и H в комбинации с полипептидом I,
- А, В, Е, G и H в комбинации с полипептидом I,
- А, В, F, G и H в комбинации с полипептидом I,
- А, С, D, E и F в комбинации с одним из полипептидов G, H или I,
- А, С, D, E и G в комбинации с одним из полипептидов H или I,
- А, С, D, E и Н в комбинации с полипептидом I,
- А, С, D, F и G в комбинации с одним из полипептидов H или I,
- А, С, D, F и Н в комбинации с полипептидом I,
- А, С, D, G и Н в комбинации с полипептидом I,
- А, С, Е, F и G в комбинации с одним из полипептидов H или I,
- А, С, Е, F и H в комбинации с полипептидом I,
- А, С, Е, G и H в комбинации с полипептидом I,
- А, С, F, G и H в комбинации с полипептидом I,
- А, D, Е, F и G в комбинации с одним из полипептидов H или I,
- А, D, Е, F и H в комбинации с полипептидом I,
- А, D, E, G и H в комбинации с полипептидом I,
- А, D, F, G и H в комбинации с полипептидом I,
- А, E, F, G и H в комбинации с полипептидом I,
- В, C, D, E и F в комбинации с одним из полипептидов G, H или I,
- В, C, D, E и G в комбинации с одним из полипептидов H или I,
- В, C, D, E и H в комбинации с полипептидом I,
- В, C, D, F и G в комбинации с одним из полипептидов H или I,
- В, C, D, F и H в комбинации с полипептидом I,
- В, C, D, G и H в комбинации с полипептидом I,
- В, C, E, F и G в комбинации с одним из полипептидов H или I,
- В, C, E, F и H в комбинации с полипептидом I,
- В, C, E, G и H в комбинации с полипептидом I,
- В, C, F, G и H в комбинации с полипептидом I,
- В, D, E, F и G в комбинации с одним из полипептидов H или I,
- В, D, E, F и H в комбинации с полипептидом I,
- В, D, E, G и H в комбинации с полипептидом I,
- В, D, F, G и H в комбинации с полипептидом I,
- В, E, F, G и H в комбинации с полипептидом I,
- C, D, E, F и G в комбинации с одним из полипептидов H или I,
- C, D, E, F и H в комбинации с полипептидом I,
- C, D, E, G и H в комбинации с полипептидом I,
- C, D, F, G и H в комбинации с полипептидом I,
- C, E, F, G и H в комбинации с полипептидом I, или
- D, E, F, G и H в комбинации с полипептидом I.
В другом предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения используются семь из вышеназванных предпочтительных полипептидов A, B, C, D, E, F, G, H и I в качестве “отрицательных” для диабета, “положительных” для диабета, “отрицательных” для нефропатии или “положительных” для нефропатии. В частности, указанные комбинации полипептидов представляют собой:
- А, В, С, D, E и F в комбинации с одним из полипептидов G, H или I,
- А, В, С, D, E и G в комбинации с одним из полипептидов H или I,
- А, В, С, D, E и H в комбинации с полипептидом I,
- А, В, С, D, F и G в комбинации с одним из полипептидов H или I,
- А, В, С, D, F и H в комбинации с полипептидом I,
- А, В, С, D, G и H в комбинации с полипептидом I,
- А, В, С, E, F и G в комбинации с одним из полипептидов H или I,
- А, В, С, E, F и H в комбинации с полипептидом I,
- А, В, С, E, G и H в комбинации с полипептидом I,
- А, В, С, F, G и H в комбинации с полипептидом I,
- А, В, D, E, F и G в комбинации с одним из полипептидов H или I,
- А, В, D, E, F и Н в комбинации с полипептидом I,
- А, В, D, E, G и Н в комбинации с полипептидом I,
- А, В, D, F, G и Н в комбинации с полипептидом I,
- А, В, Е, F, G и H в комбинации с полипептидом I,
- А, С, D, E, F и G в комбинации с одним из полипептидов H или I,
- А, С, D, E, F и Н в комбинации с полипептидом I,
- А, С, D, E, G и Н в комбинации с полипептидом I,
- А, С, D, F, G и Н в комбинации с полипептидом I,
- А, С, Е, F, G и H в комбинации с полипептидом I,
- А, D, Е, F, G и H в комбинации с полипептидом I,
- В, C, D, E, F и G в комбинации с одним из полипептидов H или I,
- В, C, D, E, F и H в комбинации с полипептидом I,
- В, C, D, E, G и H в комбинации с полипептидом I,
- В, C, D, F, G и H в комбинации с полипептидом I,
- В, C, E, F, G и H в комбинации с полипептидом I,
- В, D, E, F, G и H в комбинации с полипептидом I, или
- C, D, E, F, G и H в комбинации с полипептидом I.
В другом предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения используются восемь из вышеназванных предпочтительных полипептидов A, B, C, D, E, F, G, H и I в качестве “отрицательных” для диабета, “положительных” для диабета, “отрицательных” для нефропатии или “положительных” для нефропатии. В частности, указанные комбинации полипептидов представляют собой:
- А, В, С, D, E, F, G и H,
- А, В, С, D, E, F, G и I,
- А, В, С, D, E, F, H и I,
- А, В, С, D, E, G, H и I,
- А, В, С, D, F, G, H и I
- А, В, С, E, F, G, H и I,
- А, В, D, E, F, G, H и I,
- А, С, D, E, F, G, H и I или
- В, C, D, E, F, G, H и I.
В другом предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения используются все девять вышеназванных предпочтительных полипептида A, B, C, D, E, F, G, H и I в качестве “отрицательных” для диабета, “положительных” для диабета, “отрицательных” для нефропатии или “положительных” для нефропатии. В частности, указанная комбинация полипептидов представляет собой:
- А, В, С, D, E, F, G, H и I.