СПИРОИНДОЛИНОВЫЕ СОЕДИНЕНИЯ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ И ПРОФИЛАКТИКИ РЕСПИРАТОРНО-СИНЦИТИАЛЬНОГО ВИРУСА (RSV)
SPIROINDOLIN COMPOUNDS FOR TREATING AND PREVENTING THE RESPIRATORY SYNCYTIAL VIRUS (RSV)

Область техники
Настоящее изобретение относится к соединениям бензимидазола и их применению для лечения или предотвращения инфекции, вызванной респираторно-синцитиальным вирусом (RSV).
Уровень техники
RSV представляет собой РНК-вирус семейства Paramyxoviridae, содержащий отрицательно-полярную однонитевую РНК. RSV легко передается через секреции от инфицированного человека посредством переноса через поверхности или руки. В отличие от гриппа, он не передается через аэрозоли мелких частиц. После успешной инокуляции инкубационный период составляет от четырех до шести дней, в течение которых вирус распространяется из носоглотки в нижние дыхательные пути путем слияния инфицированных и неинфицированных клеток и отделения некротического эпителия. У младенцев в сочетании с повышенной секрецией слизи и отеком это может привести к закупорке слизью, которая вызывает гиперинфляцию и коллапс дистальной легочной ткани, свидетельствующий о бронхиолите. Вследствие респираторного дистресса распространена гипоксия и часто нарушается способность к кормлению. При пневмонии, вызванной RSV, воспалительная инфильтрация дыхательных путей состоит из мононуклеарных клеток и более генерализована с вовлечением бронхиол, бронхов и альвеол. Было обнаружено, что продолжительность и степень выделения вирусов коррелируют с клиническими признаками и тяжестью заболевания.
RSV является главной причиной тяжелых инфекций дыхательных путей у младенцев и детей младшего возраста во всем мире. Самая высокая заболеваемость и смертность наблюдается среди тех детей, кто родился раньше срока, и тех, кто страдает от хронической болезни легких или сердца, хотя многие младенцы, которых госпитализируют по поводу RSV инфекции, не имеют других заболеваний. Тяжелая RSV инфекция в младенческом возрасте может привести к возникновению рецидивирующей бронхиальной обструкции в течение нескольких лет и связана с развитием впоследствии астмы.
RSV также является основной причиной заболеваемости и смертности у пожилых людей и у детей и взрослых с ослабленным иммунитетом, а также тех, кто страдает от хронической обструктивной болезни легких (ХОБЛ) и застойной сердечной недостаточности (ЗСН).
Заболеваемость RSV имеет сезонный характер; ее можно очень точно прогнозировать, и RSV наблюдается зимой в обоих полушариях, с сентября по май в Европе и Северной Америке, при этом пик заболеваемости приходится на декабрь и январь, а в тропических странах RSV может наблюдаться в течение всего года. RSV поражает >90% младенцев и детей младшего возраста до двух лет, и, поскольку естественный иммунитет является нестойким, многие будут повторно инфицироваться каждый год. Как и в случае гриппа, у пожилых людей RSV является причиной примерно 10% госпитализаций зимой, при этом связанная с ним смертность составляет 10%.
Существующее лечение, направленное против RSV, включает применение моноклонального антитела к RSV, называемого паливизумабом. Такое применение паливизумаба является профилактическим, а не терапевтическим лечением RSV. Хотя данное антитело часто является эффективным, его применение ограничивается применением у недоношенных детей и младенцев группы высокого риска. Действительно, его ограниченная применимость означает, что оно недоступно для многих людей, нуждающихся в лечении RSV. Соответственно, существует острая необходимость в разработке эффективных альтернатив существующему лечению RSV.
Кроме того, в качестве ингибиторов RSV были предложены некоторые соединения, включая соединения на основе бензимидазола. Например, в K D Combrink et al., Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, 17 (2007), 4784-4790 описано соединение BMS-433771 и его варианты. Другие соединения на основе бензимидазола описаны в WO-02/062290, WO-03/053344 и WO-10/103306.
В WO 2013/068769 раскрыты спироциклические соединения, обладающие активностью в отношении RSV. Однако существует потребность в идентификации дополнительных соединений и, в частности, соединений, имеющих благоприятные фармакокинетические профили.
Сущность изобретения
В настоящее время обнаружено, что новая серия бензимидазолов активна в качестве ингибиторов RSV с благоприятной фармакокинетикой.
Соответственно, в настоящем изобретении предложено соединение, которое представляет собой бензимидазол формулы (I):
где:
- один из X и Y представляет собой атом N или замещенный атом С, и другой представляет собой CH;
1-3
2-3
2-3
- L представляет собой простую связь, C алкилен, С алкенилен или С алкинилен;
1
1-6
2-6
2-6
- R представляет собой C алкил, С алкенил, С алкинил, 3-10-членный циклоалкил, 5-10-членный гетероциклил или 5-12-членный гетероарил, каждый из которых не замещен или замещен;
1-6
2
2
2
2
2
2
2
- Z представляет собой галоген, С галогеналкил, нитро, -CN, -N(R), -OR, -SR, -S(=O)R или -S(=O)R;
2
1-6
2-6
2-6
- каждый R независимо представляет собой водород, С алкил, С алкенил или С алкинил, где указанные алкильные, алкенильные и алкинильные группы не замещены или замещены; и
- m представляет собой 0 или 1;
или его фармацевтически приемлемая соль.
Подробное описание изобретения
Когда какая-либо группа, кольцо, заместитель или фрагмент, определенные в настоящем описании, содержат заместители, они, как правило, содержат в качестве заместителя Q, как определено ниже.
1-6
1-6
1-4
4-6
1-6
1-6
1-6
С алкильная группа или фрагмент является линейной или разветвленной. С алкильная группа, как правило, представляет собой С алкильную группу или С алкильную группу. Примеры С алкильных групп и фрагментов включают метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, изобутил, трет-бутил, н-пентил, изопентил (т.е. 3-метилбут-1-ил), трет-пентил (т.е. 2-метилбут-2-ил), неопентил (т.е. 2,2-диметилпропан-1-ил), н-гексил, изогексил (т.е. 4-метилпентан-1-ил), трет-гексил (т.е. 3-метилпентан-3-ил) и неопентил (т.е. 3,3-диметилбутан-1-ил). Во избежание неопределенности, в случае когда два алкильных фрагмента присутствуют в группе, данные алкильные фрагменты могут быть одинаковыми или разными. С алкильная группа не содержит заместителей или содержит в качестве заместителей, как правило, одну или более групп Q, определенных ниже. Например, С алкильная группа не содержит заместителей или содержит в качестве заместителей 1, 2 или 3 группы Q, определенные ниже.
1-6
1-6
1-6
1-6
1-4
2
2
2
3
10
1-6
3-10
Q представляет собой галоген, нитро, -CN, ОН, С алкокси, С гидроксиалкил, С алкилтио, С галогеналкил, С галогеналкокси, -COR''', -NR''', -SR''', -S(=O)R''', -S(=O)R''', С-С циклоалкил, 5-10-членный гетероциклил, 5-12-членный арил или 5-12-членный гетероарил, где каждый R''' независимо выбран из Н, С алкила, С циклоалкила, 5-10-членного гетероциклила, 5-12-членного арила и 5-12-членного гетероарила.
1-3
С алкиленовая группа или фрагмент представляет собой не содержащую заместителей или содержащую заместители, линейную или разветвленную насыщенную двухвалентную алифатическую углеводородную группу или фрагмент, содержащий от 1 до 3 атомов углерода. Примеры включают метиленовые, этиленовые, н-пропиленовые и изопропиленовые группы и фрагменты. Когда алкиленовая группа содержит заместители, она, как правило, содержит в качестве заместителей группу Q, определенную выше.
2-6
2-4
4-6
2
2
2
2
С алкенильная группа представляет собой не содержащий заместителей или содержащий заместители, линейный или разветвленный углеводородный радикал из двух-шести атомов углерода с по меньшей мере одним ненасыщенным участком, т.е. двойной связью углерод-углерод sp. Алкенильная группа может иметь «цис»- или «транс»-ориентацию, или в качестве альтернативы «Е»- или «Z»-ориентацию. Как правило, она представляет собой С алкенильную группу или С алкенильную группу. Примеры включают этиленил или винил (-CH=CH) и аллил (-CHCH=CH). Когда алкенильная группа содержит заместители, она, как правило, содержит в качестве заместителей группу Q, определенную выше.
2-3
2
2
2
С алкениленовая группа или фрагмент представляет собой линейную или разветвленную, ненасыщенную двухвалентную алифатическую углеводородную группу или фрагмент, содержащий два или три атома углерода, с по меньшей мере одной двойной связью углерод-углерод sp. Алкениленовая группа может иметь «цис»- или «транс»-ориентацию, или в качестве альтернативы «Е»- или «Z»-ориентацию. Примеры включают группы и фрагменты -CH=CH-, -CH=CHCH- и -CHCH=CH-.
2-6
2-4
4-6
2
С алкинильная группа представляет собой не содержащий заместителей или содержащий заместители, линейный или разветвленный углеводородный радикал из двух-шести атомов углерода с по меньшей мере одним ненасыщенным участком, т.е. тройной связью углерод-углерод sp. Как правило, она представляет собой С алкинильную группу или С алкинильную группу. Алкинильная группа может иметь «цис»- или «транс»-ориентацию, или в качестве альтернативы «Е»- или «Z»-ориентацию. Примеры включают этинил (-С≡CH) или пропинил (пропаргил, -CHC≡CH). Когда алкинильная группа содержит заместители, она, как правило, содержит в качестве заместителей одну или более групп Q, определенных выше.
2-3
2
2
С алкиниленовая группа представляет собой линейную ненасыщенную двухвалентную алифатическую углеводородную группу или фрагмент, содержащий два или три атома углерода, с одной тройной связью углерод-углерод sp. Алкиниленовая группа может иметь «цис»- или «транс»-ориентацию, или в качестве альтернативы «Е»- или «Z»-ориентацию. Примеры включают группы и фрагменты -C≡С-, -С≡CCH- и -CHC≡С-.
1-6
1-4
1-6
С алкоксигруппа является линейной или разветвленной. Как правило, она представляет собой С алкоксигруппу, например, метокси-, этокси-, пропокси-, изопропокси-, н-пропокси-, н-бутокси-, втор-бутокси- или трет-бутоксигруппу. С алкоксигруппа не содержит заместителей или содержит в качестве заместителей, как правило, одну или более групп Q, как определено.
1-6
1-4
1-6
С алкилтиогруппа является линейной или разветвленной. Как правило, она представляет собой С алкилтиогруппу, например, метилтио-, этилтио-, пропилтио-, изопропилтио-, н-пропилтио-, н-бутилтио-, втор-бутилтио- или трет-бутилтиогруппу. С алкилтиогруппа не содержит заместителей или содержит в качестве заместителей, как правило, одну или более групп Q, как определено.
1-6
1-6
1-6
1-6
1-6
1-6
1-6
1-6
3
3
3
3
3
3
Галоген или галогеногруппа представляет собой F, Cl, Br или I. Предпочтительно, она представляет собой F, Cl или Br. С алкильная группа, содержащая в качестве заместителей галоген, может быть обозначена «С галогеналкил», что означает C алкильную группу, определенную выше, в которой один или более атомов водорода замещены на галоген. Подобным образом, С алкоксигруппа, содержащая в качестве заместителей галоген, может быть обозначена «С галогеналкокси», что означает С алкоксигруппу, определенную выше, в которой один или более атомов водорода замещены на галоген. Как правило, C галогеналкил или С галогеналкокси содержит в качестве заместителей 1, 2 или 3 указанных атома галогена. Галогеналкильные и галогеналкоксигруппы включают пергалогеналкильные и пергалогеналкоксигруппы, такие как -СХ и -ОСХ, где X представляет собой галоген, например, -CF -CCl -OCF и -OCCl.
1-6
1-6
С гидроксиалкильная группа представляет собой С алкильную группу, определенную выше, которая содержит в качестве заместителей одну или более ОН-групп. Как правило, она содержит в качестве заместителей одну, две или три ОН-группы. Предпочтительно, она содержит в качестве заместителей одну ОН-группу.
1-4
1-4
5-12-членная арильная группа представляет собой ароматическую карбоциклическую группу, содержащую от 5 до 12 атомов углерода, например, от 6 до 10 атомов углерода, например, 6 или 10 атомов углерода. Она представляет собой моноциклическую или конденсированную бициклическую кольцевую систему, в которой ароматическое кольцо конденсировано с другим ароматическим карбоциклическим кольцом. Примеры 5-12-членной арильной группы включают фенил и нафталенил. Когда арильная группа содержит заместители, она, как правило, содержит в качестве заместителей С алкил или группу Q, определенную выше, например, 1, 2 или 3 группы, выбранные из С алкильной группы и группы определенной выше.
Аралкильная группа представляет собой арильную группу, определенную выше, присоединенную к алкильной группе, определенной выше. Примеры включают бензил.
3-10
3-10
3
7
3
6
3-10
С циклоалкильная группа представляет собой насыщенное углеводородное кольцо, содержащее от 3 до 10 атомов углерода. С циклоалкильная группа может представлять собой, например, С-С циклоалкил, такой как циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил, или циклогептил. Как правило, он представляет собой С-С циклоалкил, например, циклопропил, циклобутил или циклопентил. В одном из вариантов реализации она представляет собой циклопропил. С циклоалкильная группа не содержит заместителей или содержит в качестве заместителей, как правило, одну или более групп Q, определенных выше.
1-4
5-12-членная гетероарильная группа или фрагмент представляет собой 5-12-членную ароматическую гетероциклическую группу, которая содержит 1, 2, 3 или 4 гетероатома, выбранных из О, N и S. Она является моноциклической или бициклической. Как правило, она содержит один атом N и 0, 1, 2 или 3 дополнительных гетероатома, выбранных из О, S и N. Она может представлять собой, например, 5-7-членную гетероарильную группу, например, 5- или 6-членную N-содержащую гетероарильную группу. Примеры включают пиридильную, пиразинильную, пиримидинильную, пиридазинильную, фуранильную, тиенильную, пиразолидинильную, пирролильную, оксадиазолильную, оксазолильную, изоксазолильную, тиазолильную, тиадиазолильную, имидазолильную и пиразолильную группы. Фуранильная, тиенильная, пиридильная и пиримидильная группы являются предпочтительными. Когда гетероарильная группа содержит заместители, она, как правило, содержит в качестве заместителей одну или более, например, 1, 2 или 3 группы, выбранные из С алкила и группы Q, определенной выше.
5-10
2
5-10
2
5
6
5-10-членный гетероциклильный фрагмент представляет собой моноциклическое или бициклическое неароматическое насыщенное или ненасыщенное С карбоциклическое кольцо, в котором по меньшей мере один, например, 1, 2 или 3 атома углерода в кольце замещены на атом или группу, выбранную из О, S, SO, SO, СО и N. Как правило, он представляет собой насыщенное С кольцо, в котором 1, 2 или 3 атома углерода в кольце замещены на атом или группу, выбранную из О, S, SO, СО и NH. Чаще он представляет собой моноциклическое кольцо, предпочтительно моноциклическое С-С кольцо. Примеры включают пиперидильный, пиперидин-2,6-дионильный, пиперидин-2-онильный, пиперазинильный, морфолинильный, тиоморфолинильный, S,S-диоксотиоморфолинильный, 1,3-диоксоланильный, пирролидинильный, имидазол-2-онильный, пирролидин-2-онильный, тетрагидрофуранильный и тетрагидропиранильный фрагменты.
Во избежание неопределенности, хотя приведенные выше определения гетероарильных и гетероциклильных групп относятся к атому «N», который может присутствовать в кольце, как будет понятно специалисту в области химии, указанный атом N будет протонированным (или будет иметь заместитель, определенный выше), если он присоединен к каждому из смежных атомов кольца через простую связь. Такие протонированные формы включены в определения гетероарильных групп и гетероциклильных групп, приведенные в настоящем описании.
1-6
1-6
1-6
1-6
1-4
2
2
2
1-6
Как правило, когда один из X и Y представляет собой замещенный атом С, он представляет собой атом С, замещенный Q, как определено выше. Более типично, когда один из X и Y представляет собой замещенный атом С, он представляет собой атом С, замещенный галогеном, нитро, -CN, ОН, C алкокси, С гидроксиалкилом, С алкилтио, С галогеналкилом, С галогеналкокси, -COR''', -NR''', -SR''', -S(=O)R''' или -S(=O)R''', где каждый R''' независимо выбран из Н и С алкила.
1-4
1-4
1-4
1-4
1-4
2
2
2
1-4
Предпочтительно, когда один из X и Y представляет собой замещенный атом С, он представляет собой атом С, замещенный галогеном, нитрогруппой, -CN, ОН, С алкокси, С гидроксиалкилом, С алкилтио, С галогеналкилом, С галогеналкокси, -COR''', -NR''', -SR''', -S(=O)R''' или -S(=O)R''', где каждый R''' независимо выбран из Н и С алкила. Более предпочтительно, когда один из X и Y представляет собой замещенный атом С, он представляет собой атом С, замещенный галогеном, нитрогруппой, -CN, ОН. Еще более предпочтительно, когда один из X и Y представляет собой замещенный атом С, он представляет собой атом С, замещенный атомом галогена. Наиболее предпочтительно, когда один из X и Y представляет собой замещенный атом С, он представляет собой атом С, замещенный атомом фтора.
Таким образом, согласно некоторым вариантам реализации один из X и Y представляет собой атом N или атом С, замещенный атомом галогена, и другой представляет собой CH. Как правило, согласно таким вариантам реализации один из X и Y представляет собой атом N или С, замещенный атомом фтора, и другой представляет собой CH.
1
1-6
2-6
2-6
Согласно некоторым вариантам реализации R представляет собой С алкил, С алкенил, С алкинил, 5-10-членный гетероциклил или 5-12-членный гетероарил, каждый из которых не замещен или замещен.
1
Как правило, когда R представляет собой гетероциклильную или гетероарильную группу, указанная гетероциклильная или гетероарильня группа содержит один, два или три гетероатома, более типично один или два гетероатома и предпочтительно один гетероатом. Как правило, указанные гетероатомы выбирают из N, О и S. Более типично, гетероатомы выбирают из N и О. Предпочтительно, указанные гетероатомы представляют собой О.
1
1
1-6
1-6
1-6
1-6
1-4
2
2
2
1-6
Как правило, когда R является замещенным, он замещен одной или более группами (например, 1, 2, 3 или 4 группами) Q, как определено выше. Более типично, когда R является замещенным, он замещен одной или более группами (например, 1, 2, 3 или 4 группами), выбранными из галогена, нитро, -CN, ОН, С алкокси, С гидроксиалкила, С алкилтио, С галогеналкила, С галогеналкокси, -COR''', -NR''', -SR''', -S(=O)R''' и -S(=O)R''', где каждый R''' независимо выбран из Н и С алкила.
1
1-4
1-4
1-4
1-4
1-4
2
2
2
1-4
Еще более типично, когда R является замещенным, он замещен одной или более группами (например, 1, 2, 3 или 4 группами), выбранными из галогена, нитро, -CN, ОН, С алкокси, С гидроксиалкила, С алкилтио, С галогеналкила, С галогеналкокси, -COR''', -NR''', -SR''', -S(=O)R''' и -S(=O)R''', где каждый R''' независимо выбран из Н и С алкила.
1
1
1
Предпочтительно, когда R является замещенным, он замещен одной или более группами (например, 1, 2, 3 или 4 группами), выбранными из галогена, нитро, -CN, ОН. Более предпочтительно, когда R является замещенным, он замещен одним или более (например, 1, 2, 3 или 4, как правило 3) атомами галогена. Еще более предпочтительно, когда R является замещенным, он замещен одним или более (например, 1, 2, 3 или 4, как правило 3) атомами фтора.
1
1
1
Предпочтительно, согласно некоторым вариантам реализации, когда R является замещенным, он замещен одной или более группами (например, 1, 2, 3 или 4 группами), выбранными из галогена, нитро, -СN, ОН. Более предпочтительно, когда R является замещенным, он замещен одним или более (например, 1, 2, 3 или 4, как правило 3) атомами галогена или одной или более (например, 1, 2, 3 или 4, как правило 1) группами -ОН. Еще более предпочтительно, когда R является замещенным, он замещен одним или более (например, 1, 2, 3 или 4, как правило 3) атомами фтора или одной или более (например, 1, 2, 3 или 4, как правило 1) группами -ОН.
1
1
3-6
3-6
3-6
3-6
Как правило, R представляет собой С алкил, С алкенил, 5- или 6-членный гетероциклил или 5- или 6-членный гетероарил, каждый из которых не замещен или замещен. Более типично, R представляет собой С алкил, С алкенил или 5-или 6-членный гетероциклил, каждый из которых не замещен или замещен (например, замещен 1 или более атомами галогена).
1
1
3-6
3-6
3-6
3-6
Как правило, согласно некоторым вариантам реализации R представляет собой С алкил, С алкенил, 5- или 6-членный циклоалкил, 5- или 6-членный гетероциклил или 5- или 6-членный гетероарил, каждый из которых не замещен или замещен. Более типично, R представляет собой С алкил, С алкенил, 5- или 6-членный циклоалкил или 5- или 6-членный гетероциклил, каждый из которых не замещен или замещен (например, замещен 1 или более группами, каждая из которых независимо выбрана из атома галогена и группы -ОН).
1
1
1
1
1
1
3-6
5-6
Предпочтительно, R представляет собой С алкил или 5- или 6-членный гетероциклил, каждый из которых не замещен или замещен (например, замещен 1 или более атомами галогена). Более предпочтительно R представляет собой С алкил, который не замещен или замещен (например, замещен 1, 2, 3 или 4 атомами галогена), или незамещенный 6-членный гетероциклил. Еще более предпочтительно R представляет собой изопентил или н-бутил, который не замещен или замещен 3 атомами фтора, или R представляет собой незамещенный тетрагидропиранил. Более предпочтительно, R представляет собой незамещенный изопентил, н-бутил, который замещен 3 атомами фтора, или R представляет собой незамещенный тетрагидропиранил.
1
1
1
1
3-6
5-6
Предпочтительно, согласно некоторым вариантам реализации R представляет собой С алкил, 5- или 6-членный циклоалкил или 5- или 6-членный гетероциклил, каждый из которых не замещен или замещен (например, замещен 1 или более группами, каждая из которых независимо выбрана из атома галогена и группы -ОН). Более предпочтительно R представляет собой С алкил, который не замещен или замещен (например, замещен 1, 2, 3 или 4 атомами галогена), незамещенный 6-членный гетероциклил или замещенный 6-членный циклоалкил (например, замещен 1, 2, 3 или 4 группами -ОН). Еще более предпочтительно, R представляет собой незамещенный тетрагидропиранил, гидроксициклогексил или изопентил или н-бутил, где изопентильная или н-бутильная группа не замещена или замещена 3 атомами фтора. Более предпочтительно R представляет собой незамещенный тетрагидропиранил, гидроксициклогексил, незамещенный изопентил или н-бутил, который замещен 3 атомами фтора.
1-3
1
Как правило, L представляет собой простую связь или С алкилен. Предпочтительно, L представляет собой простую связь или С алкилен.
1-6
2
1-6
1-4
1-2
1
2
2
1-6
2
2
3
3
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
Как правило, Z представляет собой галоген, С галогеналкил, нитро, -CN, -N(R), -OR, или -SR. Более типично, Z представляет собой галоген, С галогеналкил (например, С галогеналкил, С галогеналкил или С галогеналкил), -N(R) или -OR. Еще более типично, Z представляет собой -N(R), -OR, атом галогена или С галогеналкил. Предпочтительно, Z представляет собой галоген или -N(R). Более предпочтительно, Z представляет собой фтор, хлор, NH, NHCH или N(CH). Еще более предпочтительно, Z представляет собой хлор или NH.
2
2
1-4
1-4
1-4
1-4
1-4
2
2
2
1-4
Как правило, когда R представляет собой замещенную алкильную, алкенильную или алкинильную группу, где указанная алкильная, алкенильная или алкинильная группа замещена одной или более группами (например, 1, 2, 3 или 4 группами), выбранными из галогена, нитро, -CN, ОН, С алкокси, С гидроксиалкила, С алкилтио, С галогеналкила, С галогеналкокси, -COR''', -NR''', -SR''', -S(=O)R''' и -S(=O)R''', где каждый R''' независимо выбран из Н и С алкила. Более типично, когда R представляет собой замещенную замещенную алкильную, алкенильную или алкинильную группу, где указанная алкильная, алкенильная или алкинильная группа замещена одной или более группами (например, 1, 2, 3 или 4 группами), выбранными из галогена, нитро, -CN, ОН.
2
2
2
2
2
1-4
2-4
2-4
1-4
1-4
Как правило, каждый R независимо представляет собой водород, С алкил, С алкенил или С алкинил, где указанные алкильные, алкенильные и алкинильные группы не замещены или замещены. Предпочтительно, каждый R независимо представляет собой водород или С алкил, где указанная алкильная группа не замещена или замещена. Более предпочтительно, каждый R независимо представляет собой водород или незамещенный С алкил. Еще более предпочтительно, каждый R независимо представляет собой водород или незамещенный метил. Более предпочтительно, каждый R представляет собой водород.
Как правило, m представляет собой 1.
1
2
2
2
Согласно некоторым предпочтительным вариантам реализации L представляет собой прямую связь и Z представляет собой атом галогена (например, Z представляет собой атом хлора). Согласно другим предпочтительным вариантам реализации L представляет собой С алкиленовую группу и Z представляет собой -N(R) (например, Z представляет собой -NH).
Согласно одному из предпочтительных вариантов реализации соединений согласно изобретению, в формуле (I):
- один из X и Y представляет собой атом N или С, замещенный атомом фтора, и другой представляет собой CH;
1
5-6
- R представляет собой С алкил, который не замещен или замещен одним, двумя, тремя или четырьмя атомами фтора, или незамещенный тетрагидропиран
- m представляет собой 1
1
- L представляет собой простую связь или C алкилен; и
2
- Z представляет собой NH или атом хлора.
Согласно другому предпочтительному варианту реализации соединений согласно изобретению, в формуле (I):
- один из X и Y представляет собой атом N или С, замещенный атомом фтора, и другой представляет собой CH;
1
1
1
5-6
- R представляет собой С алкил, который не замещен или замещен одним, двумя, тремя или четырьмя атомами фтора, R представляет собой циклогексил, который не замещен или замещен одной или двумя группами -ОН, или R представляет собой незамещенный тетрагидропиран;
- m представляет собой 1
1
- L представляет собой простую связь или С алкилен; и
2
- Z представляет собой NH или атом хлора.
Конкретные соединения согласно изобретению включают:
- 1'-{[5-(аминометил)-1-(4,4,4-трифторбутил)-1Н-1,3-бензодиазол-2-ил]метил}-6'-фтор-1',2'-дигидроспиро[циклопропан-1,3'-индол]-2'-он;
- 1'-((5-(аминометил)-1-(4,4,4-трифторбутил)-1Н-бензо[d]имидазол-2-ил)метил)спиро[циклопропан-1,3'-пирроло[2,3-b]пиридин]-2'(1'Н)-он;
- 1'-((5-хлор-1-(тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)-1Н-бензо[d]имидазол-2-ил)метил)спиро[циклопропан-1,3'-пирроло[2,3-с]пиридин]-2'(1'Н)-он;
- 1'-((5-(аминометил)-1-изопентил-1Н-бензо[d]имидазол-2-ил)метил)спиро[циклопропан-1,3'-пирроло[2,3-b]пиридин]-2'(1'Н)-он;
- 1'-((5-(аминометил)-1-изопентил-1Н-бензо[d]имидазол-2-ил)метил)спиро[циклопропан-1,3'-пирроло[2,3-с]пиридин]-2'(1'Н)-он; и
- 1'-((5-(аминометил)-1-(тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)-1Н-бензо[d]имидазол-2-ил)метил)-6'-фторспиро[циклопропан-1,3'-индолин]-2'-он;
или их фармацевтически приемлемую соль.
Согласно некоторым вариантам реализации конкретные соединения согласно изобретению включают:
- 1'-{[5-(аминометил)-1-(4,4,4-трифторбутил)-1Н-1,3-бензодиазол-2-ил]метил}-6'-фтор-1',2'-дигидроспиро[циклопропан-1,3'-индол]-2'-он;
- 1'-((5-(аминометил)-1-(4,4,4-трифторбутил)-1Н-бензо[d]имидазол-2-ил)метил)спиро[циклопропан-1,3'-пирроло[2,3-b]пиридин]-2'(1'Н)-он;
- 1'-((5-хлор-1-(тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)-1Н-бензо[d]имидазол-2-ил)метил)спиро[циклопропан-1,3'-пирроло[2,3-с]пиридин]-2'(1'Н)-он;
- 1'-((5-(аминометил)-1-изопентил-1Н-бензо[d]имидазол-2-ил)метил)спиро[циклопропан-1,3'-пирроло[2,3-b]пиридин]-2'(1'Н)-он;
- 1'-((5-(аминометил)-1-изопентил-1Н-бензо[d]имидазол-2-ил)метил)спиро[циклопропан-1,3'-пирроло[2,3-с]пиридин]-2'(1'Н)-он; и
- 1'-((5-(аминометил)-1-(тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)-1Н-бензо[d]имидазол-2-ил)метил)-6'-фторспиро[циклопропан-1,3'-индолин]-2'-он;
- 1'-((5-(Аминометил)-1-((1R,4R)-4-гидроксициклогексил)-1Н-бензо[d]имидазол-2-ил)метил)-6'-фторспиро[циклопропан-1,3'-индолин]-2'-он
или их фармацевтически приемлемую соль.
Предпочтительные соединения согласно изобретению включают 1'-{[5-(аминометил)-1-(4,4,4-трифторбутил)-1Н-1,3-бензодиазол-2-ил]метил}-6'фтор-1',2'-дигидроспиро[циклопропан-1,3'-индол]-2'-он.
1-6
1-6
1
100
Согласно некоторым вариантам реализации, когда -L-Z представляет собой С алкокси, галоген, трифторметил или циано, R не представляет собой С алкил, замещенный R,
100
108
1-6
1-6
1-6
2
где R выбран из С алкилсульфонилфенил, тиетан-3-ил, диоксотиетан-3-ил, оксетан-3-ил, аминооксетан-3-ил, гидрокси, С алкилсульфинил, трифторметил-С алкилен-аминокарбонилокси,  SOR;
108
109
109
110
111
1-6
1-6
1-6
1-6
1-6
1-6
1-6
1-6
1-6
2-6
где R представляет собой С алкил, циклоалкил, С алкилкарбониламино, С алкиламино ди-С алкиламино, амино, морфолинил, пирролидинил, пиперазинил,  или C алкилен-COR; где R представляет собой С алкокси, амино, гидрокси, циклоалкилсульфониламино, циклоалкилсульфониламино(С алкил) С алкилсульфониламино(С алкил) или С алкил-NRR;
110
111
110
111
1-6
1-6
1-6
1-6
1-6
1-6
где R представляет собой водород, R представляет собой водород, С алкоксикарбонил, С алкилкарбонил, С алкилсульфонил или гидрокси-C алкил, или R и R, вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют  или , которые не замещены или замещены гидрокси, С алкилкарбонилом или С алкилсульфонилом.
1-6
2-6
2-6
1-6
1-6
1-6
1-6
1-4
2
2
3
10
1-6
3-10
1-6
1-6
2-6
2-6
1-6
1-6
1-6
1-4
2
2
3
10
1-6
3-10
1
1
1
1
Согласно некоторым вариантам реализации, когда -L-Z представляет собой C алкокси, галоген, трифторметил или циано, R представляет собой С алкенил, С алкинил, 5-10-членный гетероциклил или 5-12-членный гетероарил, каждый из которых не замещен или замещен (например, замещен одной или более группами Q, как определено выше), или R представляет собой С алкил, который не замещен или замещен одной или более группами (например, 1, 2, 3 или 4 группами), выбранными из галогена, нитро, -CN, С алкокси, С алкилтио, С галогеналкила, С галогеналкокси, -COR''', -NR''', -SR''', С-C циклоалкил, 5-10-членного гетероциклила или 5-12-членного гетероарила, где каждый R''' независимо выбран из Н, С алкила, С циклоалкила, 5-10-членного гетероциклила, 5-12-членного арила и 5-12-членного гетероарила. Как правило, согласно таким вариантам реализации, когда -L-Z представляет собой С алкокси, галоген, трифторметил или циано, R представляет собой 5-10-членный гетероциклил или 5-12-членный гетероарил, каждый из которых не замещен или замещен (например, замещен одной или более группами Q, как определено выше), или R представляет собой С алкильную, С алкенильную или С алкинильную группу, где указанная алкильная, алкенильная или алкинильная группа не замещена или замещена одной или более группами (например, 1, 2, 3 или 4 группами), выбранными из галогена, нитро, -CN, С алкокси, С алкилтио, С галогеналкила, С галогеналкокси, -COR''', -NR''', -SR''', С-С циклоалкила, 5-10-членного гетероциклила или 5-12-членного гетероарила, где каждый R''' независимо выбран из Н, С алкила, С циклоалкила, 5-10-членного гетероциклила, 5-12-членного арила и 5-12-членного гетероарила.
1-6
2
2
2
2
2
2
Согласно некоторым вариантам реализации -L-Z не представляет собой С алкокси, галоген, трифторметил или циано. Например, согласно некоторым вариантам реализации Z представляет собой нитро, -N(R), -SR, -S(=O)R или -S(=O)R, и L является таким, как определено выше.
1
100
100
1
1
1-6
2-6
2-6
1-6
1-6
1-6
1-6
1-4
2
2
3
10
1-6
3-10
Согласно некоторым вариантам реализации R не представляет собой C алкил, замещенный R, где R является таким, как определено выше. Например, согласно некоторым вариантам реализации R представляет собой С алкенил, С алкинил, 5-10-членный гетероциклил или 5-12-членный гетероарил, каждый из которых не замещен или замещен (например, замещен одной или более группами Q, как определено выше), или R представляет собой С алкил, который не замещен или замещен одной или более группами (например, 1, 2, 3 или 4 группами), выбранными из галогена, нитро, -CN, С алкокси, С алкилтио, С галогеналкила, С галогеналкокси, -COR''', -NR''', -SR''', С-С циклоалкил, 5-10-членного гетероциклила или 5-12-членного гетероарила, где каждый R''' независимо выбран из Н, С алкила, С циклоалкила, 5-10-членного гетероциклила, 5-12-членного арила и 5-12-членного гетероарила.
1
1-6
2
1-4
Согласно некоторым вариантам реализации, когда -L-Z представляет собой хлор, R не представляет собой С алкил, замещенный -S(=O)R''', где R''' представляет собой Н или С алкил.
1
1
2-6
2-6
1-6
1-6
1-6
1-6
1-6
1-4
2
2
3
10
1-6
3-10
Согласно некоторым вариантам реализации, когда -L-Z представляет собой хлор, R представляет собой С алкенил, С алкинил, 5-10-членный гетероциклил или 5-12-членный гетероарил, каждый из которых не замещен или замещен (например, замещен одной или более группами Q, как определено выше), или R представляет собой С алкил, который не замещен или замещен одной или более группами (например, 1, 2, 3 или 4 группами), выбранными из галогена, нитро, -CN, ОН, С алкокси, С гидроксиалкила, С алкилтио, С галогеналкила, С галогеналкокси, -COR''', -NR''', -SR''', -S(=O)R''', С-С циклоалкила, 5-10-членного гетероциклила, 5-12-членного арила или 5-12-членного гетероарила, где каждый R''' независимо выбран из Н, С алкила, С циклоалкила, 5-10-членного гетероциклила, 5-12-членного арила и 5-12-членного гетероарила.
1-6
2
2
1-6
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
Согласно некоторым вариантам реализации -L-Z не представляет собой хлор. Например, согласно некоторым вариантам реализации Z представляет собой F, Br, I, С галогеналкил, нитро, -CN, -N(R), -OR, -SR, -S(=O)R или -S(=O)R, и L является таким, как определено выше. Как правило, согласно таким вариантам реализации, Z представляет собой С галогеналкил, нитро, -CN, -N(R), -OR, -SR, -S(=O)R или -S(=O)R, и L является таким, как определено выше.
1
1
1
1
1
1-6
2
1-4
2-6
2-6
1-6
1-6
1-6
1-6
1-6
1-4
2
2
3
10
1-6
3-10
1-6
2-6
2-6
1-6
1-6
1-6
1-6
1-4
2
2
3
10
1-6
3-10
Согласно некоторым вариантам реализации R не представляет собой C алкил, замещенный -S(=O)R''', где R''' представляет собой Н или С алкил. Например, согласно некоторым вариантам реализации R представляет собой С алкенил, С алкинил, 5-10-членный гетероциклил или 5-12-членный гетероарил, каждый из которых не замещен или замещен (например, замещен одной или более группами Q, как определено выше), или R представляет собой С алкил, который не замещен или замещен одной или более группами (например, 1, 2, 3 или 4 группами), выбранными из галогена, нитро, -CN, ОН, C алкокси, C гидроксиалкила, C алкилтио, C галогеналкила, С галогеналкокси, -COR''', -NR''', -SR''', -S(=O)R''', С-C циклоалкила, 5-10-членного гетероциклила, 5-12-членного арила или 5-12-членного гетероарила, где каждый R''' независимо выбран из Н, C алкила, С циклоалкила, 5-10-членного гетероциклила, 5-12-членного арила и 5-12-членного гетероарила. Как правило, согласно таким вариантам реализации, R представляет собой 5-10-членный гетероциклил или 5-12-членный гетероарил, каждый из которых не замещен или замещен (например, замещен одной или более группами Q, как определено выше), или R представляет собой C алкил, С алкенил, или С алкинил, где алкильная, алкенильная или алкинильная группа не замещена или замещена одной или более группами (например, 1, 2, 3 или 4 группами), выбранными из галогена, нитро, -CN, ОН, C алкокси, C гидроксиалкила, С алкилтио, C галогеналкила, С галогеналкокси, -COR''', -NR''', -SR''', -S(=O)R''', С-C циклоалкила, 5-10-членного гетероциклила, 5-12-членного арила или 5-12-членного гетероарила, где каждый R''' независимо выбран из Н, C алкила, С циклоалкила, 5-10-членного гетероциклила, 5-12-членного арила и 5-12-членного гетероарила.
1
1-6
1-6
1-6
1-6
1-6
1-6
1-6
Согласно некоторым вариантам реализации, когда -L-Z представляет собой галоген, R не представляет собой азетидинил, который не замещен или замещен С алкилсульфонилом; C алкоксикарбонилпирролидинил; C алкилкарбонилпирролидинил; циклоалкил, который не замещен или замещен С алкилом, С алкилсульфонилом, карбокси, галогеном или гидрокси; диоксо-тетрагидротиофенил, который не замещен или замещен C алкилои; диоксо-тетрагидротиопиранил; диоксо-тиетанил; оксо-тиетанил; оксо-пирролидинил, который не замещен или замещен C алкилои; оксетанил; оксопиперидинил; пиперидинил; тетрагидрофуранил; тетрагидропиранил;  или
1
1
1
1
1
1
1
2-6
2-6
1-6
1-6
1-6
1-6
1-4
2
2
2
3
10
1-6
3-10
1-6
2-6
2-6
1-6
1-6
1-6
1-4
2
2
2
3
10
1-6
3-10
Согласно некоторым вариантам реализации, когда -L-Z представляет собой галоген, R не представляет собой алкил, замещенный одной или более гидроксильными группами, R не представляет собой циклоалкил, и R не представляет собой гетероциклил. Например, согласно некоторым вариантам реализации, когда -L-Z представляет собой галоген, R представляет собой С алкенил, C алкинил или 5-12-членный гетероарил, каждый из которых не замещен или замещен (например, замещен одной или более группами Q, как определено выше); или R представляет собой C алкил, который не замещен или замещен одной или более (например, 1, 2, 3 или 4) группами, выбранными из галогена, нитро, -CN, C алкокси, C алкилтио, C галогеналкила, С галогеналкокси, -COR''', -NR''', -SR''', -S(=O)R''', -S(=O)R''', С-С циклоалкила, 5-10-членного гетероциклила, 5-12-членного арила или 5-12-членного гетероарила, где каждый R''' независимо выбран из Н, C алкила, С циклоалкила, 5-10-членного гетероциклила, 5-12-членного арила и 5-12-членного гетероарила. Как правило согласно указанным вариантам реализации, когда -L-Z представляет собой галоген, R представляет собой 5-12-членный гетероарил, который не замещен или замещен (например, замещен одной или более группами Q, как определено выше); или R представляет собой C алкил С алкенил или С алкинил, где алкильные, алкенильные или алкинильнные группы не замещены или замещены одной или более (например, 1, 2, 3 или 4) группами, выбранными из галогена, нитро, -CN, C алкокси, C алкилтио, C галогеналкила, C галогеналкокси, -COR''', -NR''', -SR''', -S(=O)R''', -S(=O)R''', С-C циклоалкила, 5-10-членного гетероциклила, 5-12-членного арила или 5-12-членного гетероарила, где каждый R''' независимо выбран из Н, C алкила, С циклоалкила, 5-10-членного гетероциклила, 5-12-членного арила и 5-12-членного гетероарила.
1-6
2
2
2
2
2
2
2
Согласно некоторым вариантам реализации -L-Z не представляет собой галоген. Например, согласно некоторым вариантам реализации Z представляет собой C галогеналкил, нитро, -CN, -N(R), -OR, -SR, -S(=O)R или -S(=O)R, и L является таким, как определено выше.
1
1
1
1
1
1
1
2-6
2-6
1-6
1-6
1-6
1-6
1-4
2
2
2
3
10
1-6
3-10
1-6
2-6
2-6
1-6
1-6
1-6
1-4
2
2
2
3
10
1-6
3-10
Согласно некоторым вариантам реализации R не представляет собой алкил, замещенный одной или более гидроксильными группами, R не представляет собой циклоалкил и R не представляет собой гетероциклил. Например, согласно некоторым вариантам реализации R представляет собой С алкенил, С алкинил или 5-12-членный гетероарил, каждый из которых не замещен или замещен (например, замещен одной или более группами Q, как определено выше); или R представляет собой C алкил, который не замещен или замещен одной или более (например, 1, 2, 3 или 4) группами, выбранными из галогена, нитро, -CN, C алкокси, C алкилтио, C галогеналкила, С галогеналкокси, -COR''', -NR''', -SR''', -S(=O)R''', -S(=O)R''', С-C циклоалкила, 5-10-членного гетероциклила, 5-12-членного арила или 5-12-членного гетероарила, где каждый R''' независимо выбран из Н, C алкила, С циклоалкила, 5-10-членного гетероциклила, 5-12-членного арила и 5-12-членного гетероарила. Как правило согласно указанным вариантам реализации, R представляет собой 5-12-членный гетероарил, который не замещен или замещен (например, замещен одной или более группами Q, как определено выше); или R представляет собой C алкил С алкенил или С алкинил, где алкильные, алкенильные или алкинильнные группы не замещены или замещены одной или более (например, 1, 2, 3 или 4) группами, выбранными из галогена, нитро, -CN, С алкокси, С алкилтио, С галогеналкила, С галогеналкокси, -COR''', -NR''', -SR''', -S(=O)R''', -S(=O)R''', С-С циклоалкила, 5-10-членного гетероциклила, 5-12-членного арила или 5-12-членного гетероарила, где каждый R''' независимо выбран из Н, C алкила, С циклоалкила, 5-10-членного гетероциклила, 5-12-членного арила и 5-12-членного гетероарила.
1
1
1
1
1
1
1-6
2-6
2-6
1-6
1-6
1-6
1-4
2
2
2
3
10
1-6
3-10
Согласно некоторым вариантам реализации, когда -L-Z представляет собой хлор, R не представляет собой диоксидотетрагидротиопиранил, тетрагидропиранил, оксопирролидинил, оксопиперидинил, тетрагидрофуранил, трет-бутоксикарбонилпирролидинил, дигидроксипропанил, диоксидотетрагидротиофенил, метилоксопирролидинил, этилоксопирролидинил, пиперидинил, 2-метилпропаноилпирролидинил, пропаноилпирролидинил, диметилдиоксидотетрагидротиофенил, диоксидотиазолидинил, оксаазаспиро[3.4]октил, циклопентил, дифторциклобутил, гидроксициклогексил, гидроксициклопентил, дифторциклопентил, циклогексанкарбоновую кислоту, (гидроксил)(метил)циклобутил или гидроксициклобутил. В примерах указанных вариантов реализации, когда -L-Z представляет собой хлор, R не представляет собой гетероциклил, R не представляет собой циклоалкил и R не представляет собой алкил, замещенный одной или более гидроксильными группами. Как правило, согласно указанным вариантам реализации, когда -L-Z представляет собой хлор, R представляет собой 5-12-членный гетероарил, который не замещен или замещен (например, замещен одной или более группами Q, как определено выше); или R представляет собой C алкил, С алкенил, или С алкинил, где алкильные, алкенильные или алкинильнные группы не замещены или замещены одной или более (например, 1, 2, 3 или 4) группами, выбранными из галогена, нитро, -CN, C алкокси, C алкилтио, C галогеналкила, С галогеналкокси, -COR''', -NR''', -SR''', -S(=O)R''', -S(=O)R''', С-С циклоалкила, 5-10-членного гетероциклила, 5-12-членного арила или 5-12-членного гетероарила, где каждый R''' независимо выбран из Н, C алкила, С циклоалкила, 5-10-членного гетероциклила, 5-12-членного арила и 5-12-членного гетероарила.
1
Согласно некоторым вариантам реализации R не представляет собой диоксидотетрагидротиопиранил, тетрагидропиранил, оксопирролидинил, оксопиперидинил, тетрагидрофуранил, трет-бутоксикарбонилпирролидинил, дигидроксипропанил, диоксидотетрагидротиофенил, метилоксопирролидинил, этилоксопирролидинил, пиперидинил, 2-метилпропаноилпирролидинил, пропаноилпирролидинил, диметилдиоксидотетрагидротиофенил, диоксидотиазолидинил, оксаазаспиро[3.4]октил, циклопентил, дифторциклобутил, гидроксициклогексил, гидроксициклопентил, дифторциклопентил, циклогексанкарбоновую кислоту, (гидроксил)(метил)циклобутил или гидроксициклобутил.
1
1-6
1-6
Согласно некоторым вариантам реализации, когда -L-Z представляет собой галоген, R не представляет собой пиридин, замещенный одной группой, где группа выбрана из С алкилсульфонила, C алкокси, -CN и гидроксила.
1
1-6
2-6
2-6
1-6
1-6
1-6
1-4
2
2
3
10
1-6
3-10
Согласно некоторым вариантам реализации, когда -L-Z представляет собой галоген, R представляет собой C алкил, С алкенил, С алкинил или 3-10-членный циклоалкил или 5-10-членный гетероциклил, каждый из которых не замещен или замещен (например, замещен одной или более группами Q, как определено выше); или 5-12-членный гетероарил, который не замещен или замещен одной или более группами (например, 1, 2, 3 или 4 группами), выбранными из галогена, нитро, C гидроксиалкила, C алкилтио, C галогеналкила, С галогеналкокси, -COR''', -NR''', -SR''', -S(=O)R''', С-C циклоалкила, 5-10-членного гетероциклила, 5-12-членного арила или 5-12-членного гетероарила, где каждый R''' независимо выбран из Н, C алкила, С циклоалкила, 5-10-членного гетероциклила, 5-12-членного арила и 5-12-членного гетероарила.
1
1-6
2-6
2-6
1-6
1-6
1-6
1-4
2
2
3
10
1-6
3-10
Согласно некоторым вариантам реализации R представляет собой C алкил, С алкенил, С алкинил, 3-10-членный циклоалкил или 5-10-членный гетероциклил, каждый из которых не замещен или замещен (например, замещен одной или более группами Q, как определено выше); или 5-12-членный гетероарил, который не замещен или замещен одной или более группами (например, 1, 2, 3 или 4 группами), выбранными из галогена, нитро, C гидроксиалкила, C алкилтио, С галогеналкила, С галогеналкокси, -COR''', -NR''', -SR''', -S(=O)R''', С-С циклоалкила, 5-10-членного гетероциклила, 5-12-членного арила или 5-12-членного гетероарила, где каждый R''' независимо выбран из Н, C алкила, С циклоалкила, 5-10-членного гетероциклила, 5-12-членного арила и 5-12-членного гетероарила.
1
1
1-6
2-6
2-6
1-6
1-6
1-6
1-4
2
2
3
10
1-6
3-10
Согласно некоторым вариантам реализации, когда -L-Z представляет собой хлор, R не представляет собой пиридин, замещенный-CN, метилсульфонилом, этилсульфонилом, метокси или гидрокси группой. Например, согласно некоторым вариантам реализации, когда -L-Z представляет собой хлор, R представляет собой C алкил, C алкенил, C алкинил, 3-10-членный циклоалкил или 5-10-членный гетероциклил, каждый из которых не замещен или замещен (например, замещен одной или более группами Q, как определено выше); или 5-12-членный гетероарил, который не замещен или замещен одной или более группами (например, 1, 2, 3 или 4 группами), выбранными из галогена, нитро, C гидроксиалкила, C алкилтио, C галогеналкила, С галогеналкокси, -COR''', -NR''', -SR''', -S(=O)R''', С-С циклоалкила, 5-10-членного гетероциклила, 5-12-членного арила или 5-12-членного гетероарила, где каждый R''' независимо выбран из Н, C алкила, С циклоалкила, 5-10-членного гетероциклила, 5-12-членного арила и 5-12-членного гетероарила.
1-6
1-6
2-6
2-6
1-6
1-6
1-6
1-4
2
2
3
10
1-6
1-6
1-6
1-4
2
2
3
10
1-6
3-10
1
1
Согласно некоторым вариантам реализации, когда -L-Z представляет собой C алкокси, галоген, трифторметил или циано, R представляет собой C алкильную, C алкенильную или С алкинильную группу, где алкильная, алкенильная или алкинильная группа не замещена или замещена одной или более группами (например, 1, 2, 3 или 4 группами), выбранными из галогена, нитро, -CN, C алкокси, C алкилтио, C галогеналкила, С галогеналкокси, -COR''', -NR''', -SR''', С-С циклоалкила, 5-10-членного гетероциклила или 5-12-членного гетероарила; или R представляет собой 5-12-членный гетероарил, который не замещен или замещен одной или более группами (например, 1, 2, 3 или 4 группами), выбранными из галогена, нитро, C гидроксиалкила, C алкилтио, C галогеналкила, С галогеналкокси, -COR''', -NR''', -SR''', -S(=O)R''', С-Сциклоалкила, 5-10-членного гетероциклила, 5-12-членного арила или 5-12-членного гетероарила; где каждый R''' независимо выбран из Н, C алкила, С циклоалкила, 5-10-членного гетероциклила, 5-12-членного арила и 5-12-членного гетероарила.
1
1
1-6
2-6
2-6
1-6
1-6
1-6
1-4
2
2
3
10
1-6
1-6
1-6
1-4
2
2
3
10
1-6
3-10
Согласно некоторым вариантам реализации R представляет собой C алкильную, С алкенильную или С алкинильную группу, где алкильная, алкенильная или алкинильная группа не замещена или замещена одной или более группами (например, 1, 2, 3 или 4 группами), выбранными из галогена, нитро, -CN, C алкокси, C алкилтио, C галогеналкила, С галогеналкокси, -COR''', -NR''', -SR''', С-C циклоалкила, 5-10-членного гетероциклила или 5-12-членного гетероарила; или R представляет собой 5-12-членный гетероарил, который не замещен или замещен одной или более группами (например, 1, 2, 3 или 4 группами), выбранными из галогена, нитро, C гидроксиалкилп, C алкилтио, C галогеналкилп, С галогеналкокси, -COR''', -NR''', -SR''', -S(=O)R''', С-C циклоалкилп, 5-10-членного гетероциклилп, 5-12-членного арила или 5-12-членного гетероарила; где каждый R''' независимо выбран из Н, C алкила, С циклоалкила, 5-10-членного гетероциклила, 5-12-членного арила и 5-12-членного гетероарила.
1
1
1-6
2-6
2-6
1-6
1-6
1-6
1-4
2
2
3
10
1-6
1-6
1-6
1-4
2
2
3
10
1-6
3-10
Согласно некоторым вариантам реализации, когда Z представляет собой Cl, R представляет собой C алкил, С алкенил или С алкинил, где алкильная, алкенильная или алкинильная группа не замещена или замещена одной или более группами (например, 1, 2, 3 или 4 группами), выбранными из галогена, нитро, -CN, C алкокси, C алкилтио, C галогеналкила, С галогеналкокси, -COR''', -NR''', -SR''', -S(=O)R''', С-C циклоалкила, 5-10-членного гетероциклила, 5-12-членный арил или 5-12-членного гетероарила; или R представляет собой 5-12-членный гетероарил, который не замещен или замещен одной или более группами (например, 1, 2, 3 или 4 группами), выбранными из галогена, нитро, C гидроксиалкила, C алкилтио, C галогеналкила, С галогеналкокси, -COR''', -NR''', -SR''', -S(=O)R''', С-C циклоалкила, 5-10-членного гетероциклила, 5-12-членного арила или 5-12-членного гетероарила; где каждый R''' независимо выбран из Н, C алкила, С циклоалкила, 5-10-членного гетероциклила, 5-12-членного арила и 5-12-членного гетероарила.
1
1
1-6
2-6
2-6
1-6
1-6
1-6
1-4
2
2
3
10
1-6
1-6
1-6
1-4
2
2
3
10
1-6
3-10
Согласно некоторым вариантам реализации R представляет собой C алкил, C алкенил или C алкинил, где алкильная, алкенильная или алкинильная группа не замещена или замещена одной или более группами (например, 1, 2, 3 или 4 группами), выбранными из галогена, нитро, -CN, C алкокси, C алкилтио, C галогеналкила, С галогеналкокси, -COR''', -NR''', -SR''', -S(=O)R''', С-С циклоалкила, 5-10-членного гетероциклила, 5-12-членного арила или 5-12-членного гетероарила; или R представляет собой 5-12-членный гетероарил, который не замещен или замещен одной или более группами (например, 1, 2, 3 или 4 группами), выбранными из галогена, нитро, C гидроксиалкила, C алкилтио, C галогеналкила, С галогеналкокси, -COR''', -NR''', -SR''', -S(=O)R''', С-С циклоалкила, 5-10-членного гетероциклила, 5-12-членного арила или 5-12-членного гетероарила; где каждый R''' независимо выбран из Н, C алкила, С циклоалкила, 5-10-членного гетероциклила, 5-12-членного арила и 5-12-членного гетероарила.
Соединения согласно настоящему изобретению могут содержать асимметрические или хиральные центры и, следовательно, существовать в разных стереоизомерных формах. Предполагается, что все стереоизомерные формы соединений согласно настоящему изобретению, включая, но не ограничиваясь ими, диастереомеры, энантиомеры и атропоизомеры, а также их смеси, такие как рацемические смеси, составляют часть настоящего изобретения. Соединения формулы (I), содержащие один или более хиральных центров, можно использовать в энантиомерно или диастереоизомерно чистой форме, или в виде смеси изомеров.
Настоящее изобретение включает все геометрические и позиционные изомеры соединений согласно настоящему изобретению, определенных выше. Например, если соединение согласно настоящему изобретению содержит двойную связь или конденсированное кольцо, цис- и транс-формы, а также их смеси включены в объем настоящего изобретения. В объем настоящего изобретения также включены как отдельные позиционные изомеры, так и смеси позиционных изомеров.
Соединения согласно настоящему изобретению могут существовать в несольватированных, а также в сольватированных формах с фармацевтически приемлемыми растворителями, такими как вода, этиловый спирт и т.п., и предполагается, что настоящее изобретение включает как сольватированные, так и несольватированные формы.
Соединения согласно настоящему изобретению могут существовать в разных таутомерных формах, и все такие формы включены в объем настоящего изобретения. Термин «таутомер» или «таутомерная форма» относится к структурным изомерам с разной энергией, которые подвергаются взаимным превращениям через низкий энергетический барьер. Например, протонные таутомеры (также известные как прототропные таутомеры) включают взаимопревращения за счет миграции протона, такие как кето-енольная таутомеризация. Валентные таутомеры включают взаимопревращения путем перестройки некоторых связывающих электронов.
Соединения согласно изобретению могут быть получены в соответствии со схемами реакций, описанными в WO 2013/068769, или по аналогии с ними. Соединения согласно изобретению также могут быть получены способами синтеза, описанными в следующих далее примерах, или по аналогии с такими способами.
Бензимидазол формулы (I) может быть превращен в его фармацевтически приемлемую соль, и соль может быть превращена в свободное соединение традиционными способами. Например, бензимидазол формулы (I) можно приводить в контакт с фармацевтически приемлемой кислотой с образованием фармацевтически приемлемой соли. Фармацевтически приемлемая соль представляет собой соль с фармацевтически приемлемой кислотой или основанием.
Фармацевтически приемлемые кислоты включают как неорганические кислоты, такие как хлороводородная, серная, фосфорная, дифосфорная, бромистоводородная или азотная кислота, так и органические кислоты, такие как лимонная, фумаровая, малеиновая, яблочная, аскорбиновая, янтарная, винная, бензойная, уксусная, метансульфоновая, этансульфоновая, бензолсульфоновая или n-толуолсульфоновая кислота. Фармацевтически приемлемые основания включают гидроксиды щелочных металлов (например, натрия или калия) и щелочноземельных металлов (например, кальция или магния), и органические основания, такие как алкиламины, аралкиламины и гетероциклические амины.
В биологических тестах было обнаружено, что соединения согласно настоящему изобретению являются ингибиторами респираторно-синцитиального вируса (RSV). Следовательно, данные соединения являются терапевтически полезными. Соответственно, согласно настоящему изобретению также предложено соединение, которое представляет собой бензимидазол формулы (I), определенной выше, или его фармацевтически приемлемую соль, для применения в способе лечения организма человека или животного посредством терапии. В соответствии с настоящим изобретением также предложено соединение согласно настоящему изобретению, определенное выше, для применения в способе лечения или предотвращения RSV инфекции. В соответствии с настоящим изобретением также предложено применение соединения согласно настоящему изобретению, определенного выше, для изготовления лекарственного средства для применения для лечения или предотвращения RSV инфекции. Таким образом, субъекта, страдающего от или подверженного RSV инфекции, можно лечить с помощью способа, включающего введение указанному субъекту соединения согласно настоящему изобретению, определенного выше. Тем самым можно улучшать или облегчать состояние субъекта.
RSV инфекция, как правило, представляет собой инфекцию дыхательных путей. RSV инфекция может представлять собой инфекцию у ребенка, например ребенка в возрасте до десяти лет или младенца в возрасте до двух лет. В одном из вариантов реализации настоящего изобретения предложено соединение, определенное выше, для применения для лечения или предотвращения RSV инфекции у пациентов детского возраста. В качестве альтернативы указанная инфекция может представлять собой инфекцию у взрослого зрелого возраста или пожилого взрослого, например, взрослого старше 60 лет, взрослого старше 70 лет или взрослого старше 80 лет. Согласно настоящему изобретению также предложено соединение для применения для лечения или предотвращения RSV инфекции у пожилых пациентов.
RSV инфекция может представлять собой инфекцию у индивидуума с ослабленным иммунитетом или индивидуума, страдающего от ХОБЛ или ЗСН. В другом варианте реализации RSV инфекция представляет собой инфекцию у индивидуума без нарушений функций организма, например, индивидуума, который не имеет других заболеваний.
Соединение согласно настоящему изобретению можно вводить в различных лекарственных формах, например, перорально, как например, в форме таблеток, капсул, таблеток с сахарным или пленочным покрытием, жидких растворов или суспензий, или парентерально, например, внутримышечно, внутривенно или подкожно. Следовательно, соединение может быть введено путем инъекции, инфузии или путем ингаляции или распыления. Соединение предпочтительно вводят пероральным путем.
Доза зависит от различных факторов, включая возраст, массу тела и состояние пациента, и путь введения. Суточные дозы могут варьироваться в широких пределах и будут корректироваться в соответствии с потребностями индивидуума в каждом конкретном случае. Однако, как правило, доза, принятая для каждого пути введения, когда соединение вводят отдельно взрослым людям, составляет от 0,0001 до 650 мг/кг, чаще всего находится в диапазоне от 0,001 до 10 мг/кг массы тела, например, от 0,01 до 1 мг/кг. Такая доза может быть введена, например, от 1 до 5 раз в сутки. Для внутривенной инъекции подходящая суточная доза составляет от 0,0001 до 1 мг/кг массы тела, предпочтительно от 0,0001 до 0,1 мг/кг массы тела. Суточная доза может быть введена в виде однократной дозы или в соответствии с режимом введения разделенной дозы.
Единичная лекарственная форма, такая как таблетка или капсула, обычно будет содержать 1-250 мг активного ингредиента. Например, соединение формулы (I) может быть введено пациенту, представляющему собой человека, в дозе, составляющей 100-250 мг, либо один раз в сутки, два раза, либо три раза в сутки. Например, соединение формулы (I) может быть введено пациенту, представляющему собой человека, в дозе, составляющей 100-250 мг, либо один раз в сутки, два раза, либо три раза в сутки.
Соединения формулы (I) и их фармацевтически приемлемые соли могут быть использованы сами по себе. В качестве альтернативы, они могут быть введены в форме фармацевтической композиции. Следовательно, согласно настоящему изобретению также предложена фармацевтическая композиция, содержащая соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль, определенную выше, совместно с фармацевтически приемлемым адъювантом, разбавителем или носителем. Традиционные процедуры выбора и получения подходящих фармацевтических составов описаны, например, в "Pharmaceuticals - The Science of Dosage Form Designs", M.E. Aulton, Churchill Livingstone, 1988.
В зависимости от способа введения фармацевтическая композиция будет предпочтительно содержать от 0,05 до 99 масс. % (массовых процентов), более предпочтительно от 0,05 до 80 масс. %, более предпочтительно от 0,10 до 70 масс. % и еще более предпочтительно от 0,10 до 50 масс. % активного ингредиента; все массовые проценты приведены из расчета на общую массу композиции.
В соответствии с настоящим изобретением также предложен способ получения фармацевтической композиции согласно настоящему изобретению, включающий смешивание соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, определенной выше, с фармацевтически приемлемым адъювантом, разбавителем или носителем.
Соединения согласно настоящему изобретению могут быть введены в различных лекарственных формах. Таким образом, они могут быть введены перорально, например, в виде таблеток, таблеток для рассасывания, пастилок, водных или масляных суспензий, растворов, диспергируемых порошков или гранул. Соединения согласно настоящему изобретению также могут быть введены парентерально либо подкожно, внутривенно, внутримышечно, внутригрудинно, трансдермально, способами инфузии, либо путем ингаляции или распыления. Соединения также могут быть введены в виде суппозиториев.
Твердые пероральные формы фармацевтической композиции согласно настоящему изобретению могут содержать наряду с активным соединением разбавители, например, лактозу, декстрозу, сахарозу, целлюлозу, кукурузный крахмал или картофельный крахмал; смазывающие вещества, например, диоксид кремния, тальк, стеариновую кислоту, стеарат магния или кальция, и/или полиэтиленгликоли; связующие вещества, например, крахмалы, аравийскую камедь, желатин, метилцеллюлозу, карбоксиметилцеллюлозу или поливинилпирролидон; дезагрегирующие агенты, например, крахмал, альгиновую кислоту, альгинаты или крахмалгликолят натрия; вспенивающиеся смеси; красители; подсластители; смачивающие агенты, такие как лецитин, полисорбаты, лаурилсульфаты; и, в целом, нетоксичные и фармакологически неактивные вещества, используемые в фармацевтических составах. Такие фармацевтические препараты могут быть изготовлены известным способом, например, способами смешивания, гранулирования, таблетирования, нанесения сахарного покрытия или нанесения пленочного покрытия.
Жидкие дисперсии для перорального введения могут представлять собой сиропы, эмульсии и суспензии. Сиропы могут содержать в качестве носителей, например, сахарозу или сахарозу с глицерином и/или маннит и/или сорбит.
Суспензии и эмульсии могут содержать в качестве носителя, например, природную камедь, агар, альгинат натрия, пектин, метилцеллюлозу, карбоксиметилцеллюлозу или поливиниловый спирт. Суспензии или растворы для внутримышечных инъекций могут содержать наряду с активным соединением фармацевтически приемлемый носитель, например, стерильную воду, оливковое масло, этилолеат, гликоли, например, пропиленгликоль и при необходимости подходящее количество гидрохлорида лидокаина. Другие подходящие носители для суспензий включают стерильную воду, гидроксипропилметилцеллюлозу (ГПМЦ), полисорбат 80, поливинилпирролидон (ПВП), аэрозоль АОТ (т.е. натрия 1,2-бис(2-этилгексоксикарбонил)этансульфонат), плюроник F127 и/или каптизол (т.е. простой сульфобутиловый эфир-бета-циклодекстрин).
Соединения согласно настоящему изобретению могут, например, быть приготовлены в виде водных суспензий в носителе, выбранном из:
(I) 0,5% масс/об. гидроксипропилметилцеллюлозы (ГПМЦ)/0,1% масс/об. полисорбата 80;
(ii) 0,67% масс/об. поливинилпирролидона (ПВП)/0,33% масс/об. аэрозоля АОТ (натрия 1,2-бис(2-этилгексоксикарбонил)этансульфоната);
(iii) 1% масс/об. плюроника F 127; и
(iv) 0,5% мас./об. полисорбата 80.
Носители могут быть получены с использованием стандартных процедур, известных специалисту в данной области техники. Например, каждый из носителей (i)-(iv) может быть получен путем взвешивания необходимого количества вспомогательного вещества в подходящий сосуд, добавления приблизительно 80% от конечного объема воды и перемешивания с помощью магнитной мешалки до образования раствора. Затем носитель доводят до объема водой. Водные суспензии соединений формулы I могут быть получены путем взвешивания необходимого количества соединения формулы I в подходящий сосуд, добавления 100% от необходимого объема носителя и перемешивания с помощью магнитной мешалки.
Растворы для инъекции или инфузии могут содержать в качестве носителя, например, стерильную воду или предпочтительно они могут находиться в форме стерильных водных изотонических солевых растворов.
Соединения согласно настоящему изобретению также могут быть введены в сочетании с другими соединениями, применяемыми для лечения вирусных инфекций. Таким образом, настоящее изобретение также относится к комбинированной терапии, при которой соединение согласно настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемую соль, или фармацевтическую композицию или состав, содержащий соединение согласно настоящему изобретению, вводят одновременно или последовательно, или в виде комбинированного препарата с другим терапевтическим агентом или агентами для лечения или предотвращения вирусной инфекции, в частности, инфекции, вызываемой RSV.
В настоящем описании, когда употребляется термин «комбинация», следует понимать, что он относится к одновременному, раздельному или последовательному введению. В соответствии с одним из аспектов настоящего изобретения термин «комбинация» относится к одновременному введению. В соответствии с другим аспектом настоящего изобретения термин «комбинация» относится к раздельному введению. В соответствии с другим аспектом настоящего изобретения термин «комбинация» относится к последовательному введению. В случае, когда введение является последовательным или раздельным, отсрочка введения второго компонента не должна приводить к снижению полезного эффекта комбинации.
Подходящие терапевтические агенты для применения в комбинированной терапии включают
(i) ингибитор нуклеокапсидного (N)-белка RSV;
(ii) другой ингибитор белка, такой как ингибитор белка фосфопротеина Р и/или большого белка (L);
(iii) моноклональное антитело к RSV, такое как антитело к F-белку;
(iv) иммуномодулирующее соединение, представляющее собой toll-подобные рецепторы;
(v) другое противовирусное средство против респираторных вирусов, такое как соединение против гриппа и/или соединение против риновируса; и/или
(vi) противовоспалительные соединения.
Нуклеокапсидный (N)-белок RSV играет ключевую роль в транскрипции и репликации вируса, опосредуя взаимодействие между геномной РНК и кодируемой вирусом РНК-зависимой РНК-полимеразой. Р- и L-белки RSV являются компонентами кодируемой вирусом РНК-зависимой РНК-полимеразы RSV.
В соответствии с другим аспектом настоящего изобретения предложено соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль, определенная выше, в комбинации с одним или более терапевтическими агентами, перечисленными в пп. (i)-(vi) выше, для применения для лечения RSV.
Следующие примеры иллюстрируют изобретение. Однако они не ограничивают изобретение каким-либо образом.
Примеры
Пример получения 1
1,3-Диэтил-2-(4-фтор-2-нитрофенил)пропандиоат
К раствору 1,4-дифтор-2-нитробензола (10,06 г, 63,23 ммоль) и диэтилпропандиоата (13,58 мл, 88,99 ммоль) в 50 мл диметилформамида медленно добавляли 36,4 г карбоната цезия при комнатной температуре в атмосфере азота Суспензию перемешивали в течение 48 ч до добавления большего количества диметилформамида (20 мл) и диэтилпропандиоат (2 мл) и смесь перемешивали в течение дополнительных 24 ч при комнатной температуре. Реакционную смесь затем концентрировали в вакууме и азеотропировали с н-гептаном. Добавляли воду (250 мл) и экстрагировали этилацетатом (4×75 мл). Органическую фазу промывали водой (1×300 мл), отделяли, сушили над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали в вакууме с получением 18,9 г (99%) требуемого продукта в виде желтого масла.
ЖХМС:М/Z [М+Н]+: 299,96 1Н-ЯМР: 1Н ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ 7,79 (dd, J=8,2, 2,7 Гц, 1H), 7,63-7,51 (m, 1H), 7,44-7,33 (m, 1Н), 5,27 (s, 1H), 4,27 (qd, J=7,1, 2,2 Гц, 5Н), 4,21 (d, J=7,1 Гц, 1Н), 3,36 (d, J=1,1 Гц, 0Н), 1,34-1,25 (m, 9Н). 13С-ЯМР: 13С ЯМР (126 МГц, cdcl3) δ 167,00, 166,56, 162,68, 160,67, 133,14, 133,07, 124,24, 124,20, 120,77, 120,60, 112,91, 112,70, 77,26, 77,21, 77,01, 76,75, 62,36, 61,44, 53,74, 41,66, 14,02, 13,94.
Пример получения 2
Этил-2-(4-фтор-2-нитрофенил)ацетат.
Смесь диэтил-2-(4-фтор-2-нитрофенил)пропандиоата (18 г, 60,15 ммоль), хлорида лития (5,1 г, 120,3 ммоль) в диметилсульфоксиде (150 мл) и воды (1,08 мл, 60,15 ммоль) нагревали при перемешивании при 100°C в течение 16 часов. Реакционную смесь оставляли охлаждаться до комнатной температуры, добавляли воду (100 мл), затем смесь экстрагировали этилацетатом (150 мл). Водный слой дополнительно экстрагировали этилацетатом (2×75 мл) и объединенные органические слои промывали солевым раствором (100 мл), сушили над сульфатом магния, фильтровали и выпаривали в вакууме с получением требуемого продукта в виде желтого масла (16 г, 94%). Неочищенный продукт был загрязнен 20% исходного вещества и его непосредственно использовали на следующей стадии.
1Н ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ 7,86 (dd, J=8,4, 2,6 Гц, 1H), 7,39-7,30 (m, 2Н), 4,18 (q, J=7,1 Гц, 2Н), 4,00 (s, 3Н), 1,27 (t, J=7,2 Гц, 5Н).
Пример получения 3
6-Фтор-2,3-дигидро-1Н-индол-2-он.
В атмосфере азота железные опилки (10,22 г, 183,11 ммоль) добавляли порциями к раствору этил-2-(4-фтор-2-нитро-фенил)ацетата с примера получения 2 (13 г, 45,78 ммоль) в уксусной кислоте (200 мл). Реакционную смесь перемешивали при 80°C в течение 48 часов. Реакционную смесь оставляли охлаждаться до комнатной температуры, фильтровали через целит, промывали этилацетатом (100 мл) и концентрировали в вакууме с получением коричневого твердого вещества. Его растворяли в этилацетате (150 мл) и промывали насыщенным водным бикарбонатом натрия (2×75 мл). Органический слой сушили над сульфатом магния и концентрировали при пониженном давлении. Указанное твердое вещество растирали с эфиром и фильтровали с получением твердого вещества (4,0 г) (58%).
Фильтрат выпаривали и остаток очищали с помощью колоночной хроматографии (силикагель, 25 г, этилацетат: петролейный эфир 15:85 градиент до 80:20) с получением светло-желтого твердого вещества второй обработки (1,5 г, 22%).
1Н-ЯМР: 1Н ЯМР (500 МГц, ДМСО-d6) δ 10,46 (s, 1Н), 7,19 (dd, J=8,1, 5,7 Гц, 1Н), 6,71 (ddd, J=10,3, 8,1, 2,5 Гц, 1Н), 6,61 (dd, J=9,3, 2,4 Гц, 1Н), 3,43 (s, 2Н). 1H-ЯМР: 1Н ЯМР (500 МГц, ДМСО-d6) δ 10,46 (s, 1H), 7,25-7,11 (m, 1H), 6,71 (ddd, J=10,4, 8,2, 2,5 Гц, 1H), 6,61 (dd, J=9,3, 2,4 Гц, 1Н), 3,43 (t, J=1,5 Гц, 2Н).
Пример получения 4
6'Фтор-1',2'-дигидроспиро[циклопропан-1,3'-индол]-2'-он
К перемешиваемой суспензии 6-фтор-2,3-дигидро-1Н-индол-2-она с примера получения 3 (3 г, 19,85 ммоль) и диизопропиламина (5,84 мл, 41,68 ммоль) в тетрагидрофуране (30 мл) а атмосфере азота при -40°C добавляли н-бутиллитий по каплям в течение 30 минут (2,5М раствор в н-гексане, 31,76 мл, 79,4 ммоль). Смесь нагревали до 0°C на ледяной бане. К указанной смеси добавляли по каплям раствор 1,2-дибромэтана (5,13 мл, 59,55 ммоль) в THF (10 мл). Реакционную смесь затем оставляли перемешиваться при комнатной температуре в течение 48 часов в виде светло-коричневой суспензии. К смеси осторожно добавляли насыщенный водный раствор хлорида аммония (5 мл затем 200 мл). Смесь экстрагировали уксусной кислотой (4×75 мл). Органические вещества объединяли и промывали солевым раствором (1×150 мл), сушили с использованием сульфата магния, фильтровали, затем концентрировали в вакууме с получением 4 г оранжево-светлокоричневого твердого вещества.
Указанное вещество объединяли с продуктом с второй реакции, затем очищали с использованием флэш-хроматографии (100 г силикагеля, элюируя смесью петролейный эфир: этилацетат, градиент 100:0 - 40:60) с получением требуемого продукта 6,31 г (89%).
ЖХМС M/Z [М+Н]+: 178,2
1Н-ЯМР: 1Н ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ 9,18 (s, 1Н), 6,88-6,59 (m, 3Н), 1,76 (m, J=4,4, 4,0 Гц, 2Н), 1,53 (m, J=4,3 Гц, 2Н).
Пример получения 5
N-[[2-(хлорметил)-1-(4,4,4-трифторбутил)-1Н-1,3-бензодиазол-5-ил]метил]карбамат
2
2
К суспензии трет-бутил-N-[[2-(гидроксиметил)-1-(4,4,4-трифторбутил)-1Н-1,3-бензодиазол-5-ил]метил]карбамата (полученного в соответствии с процедурой, изложенной в WO 2010/103306; 960 мг, 2,48 ммоль) в тетрагидрофуране (20 мл) добавляли ди-изопропилэтиламин (1,29 мл, 7,43 ммоль) и указанную суспензию перемешивали в атмосфере N в течение 5 минут. Указанную суспензию охлаждали до 0°C с использованием ледяной бани и метансульфонилхлорид (0,25 мл, 3,22 ммоль) добавляли по каплям в течение 5 минут. Реакционную смесь оставляли нагреваться до комнатной температуры путем удаления ледяной бани и перемешивали в атмосфере N в течение ночи. Воду (8 мл) по каплям добавляли к смеси и растворитель удаляли в вакууме. Добавляли дополнительное количество воды (60 мл) и остаток экстрагировали этилацетатом (1×75 мл), затем (3×25 мл). Органические фазы объединяли и промывали раствором лимонной кислоты (1×35 мл), насыщенным водным бикарбонатом натрия (1×60 мл), сушили над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали в вакууме с получением 1,015 г темного смолистого неочищенного вещества.
Пример получения 6
трет-бутил-N-[(2-[(6'-фтор-2'-оксо-1',2'-дигидроспиро[циклопропан-1,3'-индол]-1'-илметил]-1-(4,4,4-трифторбутил)-1Н-1,3-бензодиазил)метил]карбамат
К раствору 6'-фтор-1,2-спиро[циклопропан-1,3'-индол]-2'-она с примера получения 4 (487,44 мг, 2,75 ммоль) в N,N-диметилформамиде (10 мл) при 0°C а атмосфере азота добавляли гидрид натрия (0,11 мл, 2,75 ммоль) одной порцией. После добавления, ледяную баню удаляли и мутный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. К указанной смеси добавляли по каплям в течение 5 минут при комнатной температуре раствор неочищенного N-[[2-(хлорметил)-1-(4,4,4-трифторбутил)-1Н-1,3-бензодиазол-5-ил]метил]карбамата полученного в примере получения 5 (1015 мг, 2,5 ммоль; используемого без дополнительной очистки) в ДМФА (4 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 часов. Реакционную смесь гасили водой (100 мл) и экстрагировали этилацетатом (3×75 мл). Объединенные органические вещества промывали водой (1×100 мл), солевым раствором (120 мл), затем сушили над сульфатом магния и выпаривали при пониженном давлении. Неочищенное масло очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии (25 г силикагель), элюируя смесью петролейный эфир: этилацетат (градиент 100:0 до 0:100). Содержащие продукт фракции выпаривали в вакууме и дополнительно растирали количество со смесью петролейный эфир/этилацетат (4:1) (10 мл), фильтровали и сушили в вакууме с получением 1030 мг (75%) требуемого продукта в виде бежевого твердого вещества.
Примеры получения 5 и 6 совместно дали выход 75%.
ЖХМС: М/Z [М+Н]+: 547,0
1
6
1H-ЯМР: Н ЯМР (500 МГц, ДМСО-d) δ 7,55 (d, J=8,3 Гц, 1H), 7,45 (s, 1Н), 7,34 (t, J=6,3 Гц, 1H), 7,22-7,12 (m, 2Н), 7,06 (dd, J=8,2, 5,4 Гц, 1H), 6,81 (ddd, J=10,3, 8,3, 2,4 Гц, 1Н), 5,29 (s, 2Н), 4,35 (t, J=7,7 Гц, 2Н), 4,19 (d, J=5,9 Гц, 2Н), 2,33 (ddd, J=16,6, 7,8, 4,2 Гц, 2Н), 1,84 (dd, J=10,2, 5,9 Гц, 2Н), 1,68 (q, J=3,9, 3,4 Гц, 2Н), 1,58 (q, J=4,2, 3,8 Гц, 2Н), 1,38 (s, 9Н).
3
13С-ЯМР: 13С ЯМР (126 МГц, CDCl) δ 177,08, 163,27, 161,32, 148,40, 143,05, 142,96, 142,59, 134,48, 133,84, 127,54, 125,29, 125,27, 123,52, 119,10, 119,03, 118,96, 109,63, 109,22, 109,04, 99,69, 99,46, 77,24, 77,19, 76,99, 76,73, 44,85, 42,73, 38,22, 31,23, 30,99, 28,42, 26,68, 22,65, 22,62, 22,60, 19,56.
Пример получения 7
Триметил-[2-(пирроло[2,3-b]пиридин-1-илметокси)этил]силан
Гидрид натрия, 60% дисперсию в минеральном масле (1,34 г, 33,52 ммоль), добавляли порциями к раствору 1Н-пирроло[2,3-b]пиридина (3,3 г, 27,93 ммоль) в N,N-диметилформамиде (25 мл) при 0 С и реакционную смесь перемешивали при 0°C в течение 1 часа. После чего 2-(хлорметокси)этил-триметилсилан (5,93 мл, 33,52 ммоль) добавляли по каплям, поддерживая внутреннюю температуру реакционной смеси ниже 10°C. Реакционную смесь оставляли медленно нагреваться до комнатной температуры. ЖХМС через 1 час показала, что реакция завершилась и ожидаемый продукт присутствовал при Rt=5,18 мин (способ 100-500 MW, 7 мин) m/z 249 [М+Н]+. Реакционную смесь гасили водой (200 мл) и экстрагировали в EtOAc (200 мл). Органический слой промывали солевым раствором (3×100 мл), сушили над MgSO4, фильтровали и выпаривали в вакууме с получением неочищенного продукта в виде зеленовато-желтого масла (8,31 г), очищенного с помощью флэш-хроматографии (Biotage, 50 г), элюируя DCM:МеОН (100:0 - 97:3), с получением требуемого продукта в двух партиях в виде светлого масла (4,13 г) и в виде прозрачного масла (3,35 г).
1H ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ 8,35 (dd, J=4,8, 1,6 Гц, 1H), 7,94 (d, J=7,7 Гц, 1H), 7,36 (d, J=3,6 Гц, 1Н), 7,11 (dd, J=7,9, 4,7 Гц, 1H), 6,54 (d, J=3,6 Гц, 1H), 5,72 (s, 2Н), 3,61-3,50 (m, 2Н), 0,96-0,86 (m, 2Н), -0,06 (s, 9Н).
Пример получения 8
1-(2-триметилсилилэтоксиметил)-3Н-пирроло[2,3-b]пиридин-2-он
Раствор триметил-[2-(пирроло[2,3-b]пиридин-1-илметокси)этил]силана (3,36 г, 13,51 ммоль) в 1,4-диоксане (30 мл) добавляли по каплям к перемешиваемой суспензии пербромида бромида пиридиния (10,5 г, 32,83 ммоль) в 1,4-диоксане (30 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 часов. Реакционную смесь гасили водой (100 мл) и экстрагировали в EtOAc (2×100 мл). Органический слой промывали солевым раствором (2×100 мл), сушили (MgSO4), фильтровали и выпаривали в вакууме с получением ожидаемого продукта 3,3-дибром-1-(2-триметилсилилэтоксиметил)пирроло[2,3-b]пиридин-2-она (4,92 г) в виде золотистого масла:
1H ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ 8,30 (dd, J=5,2, 1,6 Гц, 1H), 7,87 (dd, J=7,4, 1,6 Гц, 1Н), 7,15 (dd, J=7,4, 5,1 Гц, 1Н), 5,32 (d, J=0,9 Гц, 2Н), 3,77; 3,68 (m, 2Н), 0,98 (dd, J=9,0, 7,6 Гц, 2Н), 0,01-0,03 (m, 9Н).
Цинковую пыль (5,85 г, 89,53 ммоль) добавляли к раствору 3,3-дибром-1-(2-триметилсилилэтоксиметил)пирроло[2,3-b]пиридин-2-она (3,78 г, 8,95 ммоль) в тетрагидрофуране (50 мл) и нас. растворе хлорида аммония (15. мл, 8,95 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при 20°C в течение 4 часов. Анализ ЖХМС и ТСХ (Пет. эфир: EtOAc, 3:1) показали завершение реакции.
Реакционную смесь фильтровали и концентрировали в вакууме, и остаток разделяли между EtOAc (100 мл) и водой (100 мл), что привело к образованию белого осадка. Оба слоя фильтровали через целит и отделяли. Водный слой экстрагировали EtOAc (2×100 мл), объединенный органический слой промывали солевым раствором (100 мл), сушили (MgSO4), фильтровали и выпаривали в вакууме с получением неочищенного продукта, который очищали с помощью флэш-хроматографии (Biotage, 50 г), элюируя смесью пет. эфир: EtOAc (75:25 - 50:50), с получением продукта (1,7 г) в виде прозрачного масла, которое затвердевало при выдерживании до бежевого твердого вещества.
1Н ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ 8,23 (d, J=5,4 Гц, 1H), 7,52 (ddd, J=7,6, 2,3, 1,1 Гц, 1Н), 6,99 (dd, J=7,3, 5,3 Гц, 1H), 5,27 (s, 2Н), 3,70 (dd, J=9,0, 7,5 Гц, 2Н), 3,60 (s, 2Н), 1,04-0,92 (m, 2Н), -0,01 (s, 9Н).
ЖХМС чистого продукта при Rt=3,99 мин (7 мин способ) m/z 264,9 [МН]+
Пример получения 9
1'-(2-триметилсилилэтоксиметил)-спиро[циклопропан-1,3'-пирроло [2,3-b]пиридин]-2'-он
4
К раствору 1-(2-триметилсилилэтоксиметил)-3Н-пирроло[2,3-b]пиридин-2-она (1,22 г, 4,61 ммоль) в N,N-диметилформамиде (15 мл) при 0°C добавляли гидрид натрия, 60% дисперсию в минеральном масле (461,42 мг, 11,54 ммоль), и реакционную смесь перемешивали при 0°C в течение 30 мин. Затем добавляли 1,2-дибромэтан (0,42 мл, 4,84 ммоль) и реакционную смесь оставляли медленно нагреваться до комнатной температуры в течение ночи. ЖХМС показала, что реакция не завершена - SM: отношение продукта ~1:2, с ожидаемым продуктом, присутствующим при Rt=4,62 мин (7 мин способ) m/z 290,9 [МН]+. Реакционную смесь гасили водой (50 мл), экстрагировали в EtOAc (100 мл), органический слой промывали солевым раствором (3×50 мл), сушили (MgSO), фильтровали и выпаривали в вакууме с получением неочищенного продукта в виде оранжевого масла, которое очищали с помощью флэш-хроматографии (50 г), элюируя смесью пет. эфир: EtOAC (75:25 - 50:50), с получением продукта (679 мг) в виде прозрачного масла и восстановленного исходного вещества (231 мг).
1Н ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ 8,21 (d, J=5,3 Гц, 1Н), 7,11 (d, J=7,2 Гц, 1Н), 6,96 (dd, J=7,3, 5,2 Гц, 1Н), 5,34 (s, 2Н), 3,72 (dd, J=9,0, 7,5 Гц, 2Н), 1,85 (q, J=4,2 Гц, 2Н), 1,58 (q, J=4,2 Гц, 2Н), 1,06-0,94 (m, 2Н), -0,01 (s, 9Н).
ЖХМС - продукт при Rt=4,72 мин m/z 290,9 [МН]+
Пример получения 10
Спиро(1Н-пирроло[2,3-b]пиридин-3,1'-циклопропан)-2-он
2
К раствору 1'-(2-триметилсилилэтоксиметил)спиро(циклопропан-1,3'-пирроло[2,3-b]пиридин)-2'-она (210 мг, 0,72 ммоль) в дихлорметане (2 мл) добавляли 2,2,2-трифторуксусную кислоту (1,9 мл, 24,81 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 часов. ЖХМС показала промежуточное соединение, присутствующее там, где группа SEM была расщеплена до RCHOH при Rt=0,67 мин (7 мин способ) m/z 190,9 [МН]+. Летучие вещества удаляли в вакууме, остаток растворяли в дихлорметане (2 мл) и обрабатывали этилендиамином (0,19 мл, 2,89 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. ЖХМС показала завершение реакции с ожидаемым продуктом, присутствующим при Rt=0,88 мин (100-500MW, 7 мин способ) m/z 161 [МН]+.
3
4
Реакционную смесь разбавляли нас. водным NaHCO и экстрагировали в дихлорметан (5×50 мл), органические вещества сушили (MgSO), фильтровали и концентрировали досуха при пониженном давлении с получением неочищенного продукта в виде белого твердого вещества, которое очищали с помощью флэш-хроматографии (Biotage, 10 г), элюируя DCM: МеОН (100:0 - 95:5), с получением конечного продукта в виде белого твердого вещества (102 мг).
1Н ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ 8,15 (dd, J=5,1, 1,6 Гц, 1Н), 7,13 (dd, J=7,1, 1,6 Гц, 1Н), 6,96 (dd, J=7,3, 5,2 Гц, 1H), 1,85 (q, J=4,3 Гц, 2Н), 1,59 (q, J=4,3 Гц, 2Н).
Пример получения 11
трет-бутил-N-[[2-[(2'-оксо-спиро[циклопропан-1,3'-пирроло[2,3-b]пиридин]-1'-ил)метил]-1-(4,4,4-трифторбутил)бензимидазол-5-ил]метил]карбамат
К раствору спиро[1Н-пирроло[2,3-b]пиридин-3,1'-циклопропан]-2-она (Пример получения 10, 98 мг, 0,6100 ммоль) в N,N-диметилформамиде (2,5 мл) при 0°C добавляли гидрид натрия (60% дисперсию в минеральном масле) (36,71 мг, 0,92 ммоль) и реакционную смесь перемешивали в течение 30 мин. Затем добавляли трет-бутил-N-[[2-(хлорметил)-1-(4,4,4-трифторбутил)бензимидазол-5-ил]метил]карбамат (Пример получения 5,248,31 мг, 0,6100 ммоль) и реакционную смесь оставляли нагреваться до комнатной температуры в течение недели (для удобства). ЖХМС показала по существу завершение реакции с ожидаемым промежуточным соединением, присутствующим при Rt=3,20 мин (7 мин способ) m/z 530 [МН]+.
4
Реакционную смесь гасили водой, разбавляли EtOAc (50 мл) и органические вещества промывали солевым раствором (3×50 мл), сушили MgSO, фильтровали и выпаривали в вакууме. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии (Biotage, 10 г), элюируя DCM: МеОН (100:0 - 95:5), с получением продукт (187 мг) в виде желтого масла.
1Н ЯМР (500 МГц, ДМСО-d6) δ 8,02 (dd, J=5,1, 1,6 Гц, 1H), 7,53 (d, J=8,4 Гц, 1Н), 7,47 (dd, J=7,3, 1,6 Гц, 1H), 7,32 (d, J=9,9 Гц, 2Н), 7,12 (d, J=8,3 Гц, 1Н), 7,01 (dd, J=7,3, 5,3 Гц, 1Н), 5,26 (s, 2Н), 4,43 (t, J=7,4 Гц, 2Н), 4,16 (d, J=6,1 Гц, 2Н), 2,42-2,35 (m, 3Н), 2,01 (q, J=7,8 Гц, 2H), 1,78 (q, J=4,0, 3,5 Гц, 2H), 1,66 (q, J=3,8 Гц, 2H), 1,36 (s, 9H).
ЖХМС продукт при Rt=3,38 мин (7 мин способ) m/z 530 [МН]+
Пример получения 12
трет-бутил-N-[[1-изопентил-2-[(2'-оксо-спиро[циклопропан-1,3'-пирроло[2,3-b]пиридин]-1'-ил)метил]бензимидазол-5-ил]метил]карбамат
К спиро[1Н-пирроло[2,3-b]пиридин-3,1'-циклопропан]-2-ону (Пример получения 10,90 мг, 0,5600 ммоль) в N,N-диметилформамиде (2 мл) при 0°C добавляли гидрид натрия (60% дисперсию в минеральном масле) (29,22 мг, 0,7300 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при этой температуре в течение 1 часа. Добавляли трет-бутил-N-[[2-(хлорметил)-1-изопентил-бензимидазол-5-ил]метил]карбамат (полученный в соответствии с процедурой, изложенной в WO 2010/103306, 205,6 мг, 0,5600 ммоль) и реакционную смесь оставляли медленно нагреваться до комнатной температуры в течение ночи.
ЖХМС показала ожидаемый продукт, присутствующий при (Rt=3,24 мин m/z 490), плюс непрореагировавший RHS (Rt=0,88 мин m/z 161) и примесь (Rt=2,37 мин m/z 508).
4
Реакционную смесь гасили водой (1 мл), разбавляли EtOAc (100 мл) и промывали солевым раствором (3×50 мл), органический слой сушили (MgSO), фильтровали и выпаривали в вакууме. Неочищенное вещество очищали путем колоночной очистки (Biotage, 10 г), элюируя MeOH:DCM (градиент 0:100 - 5:95), с получением светло-желтого масла, которое азеотропировали с петролейным эфиром, получая конечный продукт в виде пены кремового цвета, высушивали до постоянной массы в вакууме (115 мг).
1Н ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ 8,15 (d, J=5,4 Гц, 1H), 7,85 (s, 1Н), 7,36 (s, 2Н), 7,12 (dd, J=7,4, 1,5 Гц, 1Н), 6,95 (dd, J=7,4, 5,3 Гц, 1H), 5,53 (s, 2Н), 4,93 (s, 1Н), 4,43 (d, J=5,8 Гц, 2Н), 4,33 (t, J=8,1 Гц, 2Н), 1,90 (q, J=4,3 Гц, 2Н), 1,63 (dq, J=10,1, 5,9, 4,9 Гц, 5Н), 1,46 (s, 9Н)
ЖХМС - чистый продукт при Rt=3,15 мин m/z 490 [МН]+.
Пример получения 13
Спиро[1Н-пирроло[2,3-c]пиридин-3,1'-циклопропан]-2-он
2
4
4
3
Красную суспензию гидрохлорида 1,3-дигидропирроло[2,3-с]пиридин-2-она (767 мг, 4,49 ммоль) и диизопропиламина (2,52 мл, 17,98 ммоль) в тетрагидрофуране (40 мл) в атмосфере N охлаждали при -40°C с использованием бани сухой лед/ацетонитрил. Раствор н-бутиллития (9,5 мл, 23,75 ммоль) добавляли по каплям в течение 60 мин через шприц. После завершения добавления баню сухой лед/ацетонитрил меняли на ледяную баню, и когда температура реакционной смеси достигла 0°C, раствор 1,2-дибромэтана (0,77 мл, 9,0 ммоль) в THF (5 мл) добавляли по каплям в течение 90 мин, и дополнительное добавление THF (15 мл) привело к красной суспензии. Реакционную смесь оставляли медленно нагреваться до кт (без удаления ледяной бани) и оставляли перемешиваться при комнатной температуре с 18:30 в течение ночи. Осторожное добавление насыщенный водный раствор NHCl (60 мл) и фазы разделяли. Темно-красную вязкую водную фазу экстрагировали EtOAc (5×60 мл). Органические вещества объединяли, промывали солевым раствором (1×50 мл), сушили с использованием MgSO, фильтровали через спеченный фильтр и концентрировали в вакууме. Полученное неочищенное бежевое твердое вещество (250 мг) адсорбировали в силикагель и хроматографировали с использованием 10 г предварительно упакованный картридж Biotage, проводя градиентное элюирование смесью DCM 90% и DCM/МеОН/NH (9:1:0,2) 10% с дополнительными градиентами указанной смеси до 100%. Фракции, содержащие продукт, собирали, объединяли и концентрировали в вакууме с получением 77 мг продукта в виде желто-коричневого твердого вещества.
ЖХМС-LCQ: M/Z [М+Н]+: 161,27 RT: 0,45 мин 1Н-ЯМР: 1Н ЯМР (500 МГц, ДМСО-d6) δ 10,70 (s, 1Н), 8,33-8,02 (m, 2Н), 7,06 (d, J=4,7 Гц, 1Н), 1,70 (q, J=3,8, 3,4 Гц, 2Н), 1,57 (q, J=3,8 Гц, 2Н).
Пример получения 14
трет-бутил-N-[[1-изопентил-2-[(2'-оксоспиро[циклопропан-1,3'-пирроло[2,3-с]пиридин]-1'-ил)метил]бензимидазол-5-ил]метил]карбамат
2
2
4
3
К раствору спиро[1Н-пирроло[2,3-с]пиридин-3,1'-циклопропан]-2-она (Пример получения 13, 77,04 мг, 0,4800 ммоль) в N,N-диметилформамиде (2 мл), охлажденного до 0°C с использованием ледяной бани, гидрид натрия (60% дисперсия в минеральном масле) (22,74 мг, 0,5700 ммоль) добавляли одной порцией и реакционную смесь перемешивали при 0°C в течение 1 часа. Раствор трет-бутил-N-[[2-(хлорметил)-1-изопентил-бензимидазол-5-ил]метил]карбамата (160 мг, 0,4400 ммоль) трет-бутил-N-[[2-(хлорметил)-1-изопентил-бензимидазол-5-ил]метил]карбамата (160 мг, 0,4400 ммоль) в ДМФА (1 мл) медленно добавляли по каплям в течение 1 ч и реакционную смесь оставляли перемешиваться при комнатной температуре в течение ночи. Добавляли HO (3 мл) и неочищенное вещество концентрировали в вакууме с использованием н-гептана (4×12 мл) с удалением как можно большего количества DMF. Добавляли HO (60 мл) и неочищенное вещество экстрагировали с использованием EtOAc (5×20 мл). Органические вещества отделяли, объединяли, промывали солевым раствором (1×50 мл), сушили с использованием MgSO, фильтровали через спеченный фильтр и концентрировали в вакууме с получением неочищенного вещества, которое растирали с эфиром (2×7 мл). Полученное твердое вещество адсорбировали на силикагеле и очищали с помощью флэш-хроматографии, с использованием 10 г предварительно упакованной колонки Biotage и градиента элюирования от DCM 100% до смеси DCM/МеОН/NH (9:1:0,2) от 0% до 60%. Полученное твердое вещество после концентрирования фракций очищали с использованием 5 г колонки Grace, с градиентом элюирования, начиная с 100% EtOAc и увеличивая градиент смеси EtOAc/МеОН (95:5) с 0% до 100%. Это привело к получению указанного в заголовке соединения в виде белого твердого вещества (62 мг).
ЖХМС-LCQ: M/Z [М+Н]+: 490,08 RT: 2,57 мин
1Н ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ 8,73 (s, 1Н), 8,31 (d, J=19,9 Гц, 1Н), 7,68 (s, 1Н), 6,80 (s, 1Н), 5,34 (s, 2Н), 4,89 (s, 1Н), 4,44 (s, 2Н), 4,23 (dd, J=20,0,12,8 Гц, 2Н), 2,24-1,85 (m, 3Н), 1,69 (s, 4Н), 1,48 (s, 12Н), 1,38-1,13 (m, 12Н), 0,97 (d, J=6,2 Гц, 7H).
Пример получения 15
2-(Хлорметил)-1-тетрагидропиран-4-ил-бензимидазол-5-карбонитрил
2
Смесь 2-хлор-1,1,1-триэтоксиэтана (2,17 мл, 12,66 ммоль) и 3-амино-4-(тетрагидропиран-4-иламино)бензонитрила (275 мг, 1,27 ммоль) нагревали до 80°C в течение 1 ч. ЖХМС показала продукт и промежуточное соединение. Избыточный реагент удаляли в вакууме и неочищенное вещество очищали с помощью колоночной хроматографии (SiO 10 г, элюент: 20% EtOAc в петролейном эфире до 100% EtOAc. Вторая собранная фракция представляла собой требуемый продукт в виде бежевого твердого вещества (100 мг)
ЖХМС-LCQ Rt: 2,08 m/z: 276 [М+Н]
1
Н ЯМР (500 МГц, ДМСО-d6) δ 7,37-7,31 (m, 1Н), 6,95 (s, 1H), 6,79 (d, J=8,3 Гц, 1Н), 5,04 (d, J=8,2 Гц, 1Н), 4,36-4,29 (m, 2Н), 4,08 (s, 2Н), 3,89-3,82 (m, 2Н), 3,61 (d, J=11,2 Гц, 1H), 3,42 (t, J=11,7 Гц, 2Н), 1,83 (d, J=12,0 Гц, 2Н), 1,57-1,44 (m, 2Н), 1,36- 1,27 (m, 3Н).
2
Первая собранная фракция представляла собой промежуточное соединение в виде белого твердого вещества (230 мг), которое суспендировали в EtOH (3 мл) и нагревали в течение 4 ч. Растворитель затем выпаривали с получением коричневого твердого вещества, которое растирали с EtO и твердое вещество фильтровали с получением дополнительного количества требуемого продукта (87 мг)
1
Н ЯМР (500 МГц, ДМСО-d6) δ 8,22 (d, J=1,6 Гц, 1Н), 7,96 (d, J=8,5 Гц, 1H), 7,65 (dd, J=8,5, 1,6 Гц, 1Н), 5,19 (s, 3Н), 4,79 (tt, J=12,5, 4,6 Гц, 2Н), 4,05 (dd, J=11,6, 4,5 Гц, 3Н), 3,55 (td, J=11,7, 2,1 Гц, 3Н), 2,46-2,31 (m, 4Н), 1,94-1,82 (m, 3Н).
ЖХМС-LCQ Rt: 1,94 m/z: 276 [М+Н]
Пример получения 16
2-[(6'-фтор-2'-оксо-спиро[циклопропан-1,3'-индолин]-1'-ил)метил]-1-тетрагидропиран-4-ил-бензимидазол-5-карбонитрил
2
Смесь 6'-фтор[спироциклопропан-1,3'-индолин]-2'-она (Пример получения 3, 128,5 мг, 0,7300 ммоль) и 2-(хлорметил)-1-тетрагидропиран-4-ил-бензимидазол-5-карбонитрила (Пример получения 15, 200 мг, 0,7300 ммоль) и карбоната цезия (354,5 мг, 1,09 ммоль) в ацетонитриле (10 мл) перемешивали при кт в течение ночи. Летучие вещества удаляли в вакууме, остаток перемешивали в воде (20 мл) и суспензию фильтровали с получением серого твердого вещества, которое затем растирали с EtO и твердое вещество фильтровали (228 мг)
ЖХМС-MDAP Rt: 19,0 m/z: 417 [М+Н]
1
Н ЯМР (500 МГц, ДМСО-d6) δ 8,18 (s, 1Н), 7,90 (d, J=8,5 Гц, 1H), 7,59 (d, J=8,5 Гц, 1H), 7,12-7,02 (m, 2Н), 6,80 (t, J=8,7 Гц, 1Н), 5,43 (s, 2Н), 4,84 (t, J=12,6 Гц, 1H), 4,03 (dd, J=12,3, 4,3 Гц, 2Н), 3,51-3,44 (m, 2Н), 2,43-2,33 (m, 2Н), 1,82-1,73 (m, 2Н), 1,69 (d, J=4,3 Гц, 2Н), 1,57 (q, J=4,3, 3,7 Гц, 2Н).
Пример получения 17
N-(4-хлор-2-нитро-фенил)тетрагидропиран-4-амин
Смесь 5-хлор-2-фторнитробензола (3,5 г, 19,94 ммоль), тетрагидропиран-4-амина (2,29 мл, 21,93 ммоль) и карбоната калия (5,51 г, 39,88 ммоль) в MeCN (100 мл) перемешивали при 25°C в течение недели, затем нагревали до 50°C пока ЖХМС не показала завершение реакции. Реакционную смесь фильтровали и промывали EtOAc и концентрировали досуха с получением оранжевого твердого вещества (5,1 г)
1Н ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ 8,20 (d, J=2,6 Гц, 1Н), 8,06 (d, J=7,3 Гц, 1Н), 7,38 (dd, J=9,2, 2,6 Гц, 1Н), 6,85 (d, J=9,2 Гц, 1H), 4,03 (d, J=12,1, 3,8 Гц, 2Н), 3,77-3,67 (m, 1Н), 3,63-3,53 (m, 2Н), 2,12-2,03 (m, 2Н), 1,68 (dtd, J=14,1, 10,2, 4,1 Гц, 2Н).
ЖХМС Rt: 4,31 m/z: 257 [М+Н]
Пример получения 18
4-хлор-N1-тетрагидропиран-4-ил-бензол-1,2-диамин
Раствор карбоната калия (16,48 г, 119,21 ммоль) и дитионита натрия (27,67 г, 158,95 ммоль) в воде (30 мл) добавляли по каплям к раствору N-(4-хлор-2-нитро-фенил)тетрагидропиран-4-амина (5,1 г, 19,87 ммоль) в ацетонитриле (70 мл) и воде (30 мл) и реакционную смесь перемешивали при кт в течение примерно 48 ч.
ЖХМСRt: 1,97 m/z: 227 [М+Н]
4
EtOAc (100 мл) добавляли к реакционной смеси, слои разделяли и водный слой дополнительно экстрагировали EtOAc (2×50 мл). Объединенный органический слой промывали насыщенным солевым раствором (1×60 мл). Органические вещества сушили (MgSO) и концентрировали досуха при пониженном давлении с остатком коричневого твердого вещества (4 г) и неочищенное вещество очищали с помощью колоночной хроматографии (SiO2 25 г, элюент 50% EtOAc в РЕ до 100% EtOAc) с получением указанного в заголовке соединения (2,0 г).
1Н ЯМР (500 МГц, ДМСО-d6) δ 6,54 (d, J=2,2 Гц, 1Н), 6,49-6,38 (m, 2Н), 4,83 (s, 2Н), 4,29 (d, J=7,6 Гц, 1Н), 3,86 (dt, J=11,6, 3,3 Гц, 2Н), 3,39 (td, J=11,3, 2,2 Гц, 3Н), 1,92-1,83 (m, 2Н), 1,37 (qd, J=11,3, 4,2 Гц, 2Н). ЖХМС-LCQ Rt: 1,79 m/z: 227 [М+Н]
Пример получения 19
5-хлор-2-(хлорметил)-1-тетрагидропиран-4-ил-бензимидазол
2
3
4
Смесь 4-хлор-N1-тетрагидропиран-4-ил-бензол-1,2-диамина (1 г, 4,41 ммоль) и 2-хлоруксусной кислоты (0,63 г, 6,62 ммоль) в 4М HCl (50 мл) нагревали до 60°C пока ЖХМС не показала завершение (72 ч). Реакционную смесь оставляли охлаждаться до кт и образовавшийся осадок собирали фильтрованием и промывали НО (2×50 мл). Белый остаток обрабатывали нас. раствором NaHCO и продукт экстрагировали EtOAc (3×100 мл) (немного нерастворимый), сушили (MgSO) и растворитель выпаривали с получением светло-коричневого твердого вещества (658 мг, N2006-173-1)
1Н ЯМР (500 МГц, ДМСО-d6) δ 7,78 (d, J=8,8 Гц, 1H), 7,71 (d, J=2,1 Гц, 1Н), 7,29 (dd, J=8,8, 2,1 Гц, 1Н), 5,15 (s, 2Н), 4,74 (tt, J=12,2, 4,4 Гц, 1Н), 4,05 (dd, J=11,5, 4,5 Гц, 2Н), 3,54 (td, J=11,9, 2,0 Гц, 2Н), 2,45-2,34 (m, 2Н), 1,88-1,80 (m, 2Н).
ЖХМС-LCQ Rt: 3,24 m/z: 285 [М+]
Пример получения 20
4-(((1R,4R)-4-Гидроксициклогексил)амино)-3-нитробензонитрил
В колбе, снабженной обратным холодильником, гидрохлорид транс-4-аминоциклогексанола (2,70 г, 17,80 ммоль) суспендировали в изопропаноле (15 мл). К указанной перемешиваемой суспензии медленно добавляли триэтиламин (4,40 мл, 31,49 ммоль), затем 4-хлор-3-нитробензонитрил (2,50 г, 13,69 ммоль). Полученную желтую суспензию нагревали при 65°C в течение 36 ч, оставляли охлаждаться до комнатной температуры, после чего к реакционной смеси добавляли воду (10 мл). Образовавшийся осадок собирали фильтрованием и последовательно промывали водой и изопропанолом с получением 4-(((1R,4R)-4-гидроксициклогексил)амино)-3-нитробензонитрила в виде желтого кристаллического твердого вещества (3,28 г, 12,55 ммоль, 92%). Полученное твердое вещество далее очищали перекристаллизацией из горячего этанола.
m/z 262,2 [МН]+
1
6
Н ЯМР (500 МГц, ДМСО-d) δ 8,49 (s, 1Н), 8,18 (d, J=7,8 Гц, 1H), 7,79 (d, J=9,0 Гц, 1H), 7,26 (d, J=9,1 Гц, 1H), 4,63 (s, 1H), 3,67 (dtd, J=14,9, 10,4, 4,0 Гц, 1H), 3,57-3,41 (m, 1H), 2,05-1,88 (m, 2H), 1,89-1,75 (m, 2H), 1,53-1,19 (m, 4H).
Пример получения 21
3-Амино-4-(((1R,4R)-4-гидроксициклогексил)амино)бензонитрил
В колбу, продутую азотом, последовательно загружали 4-(((1R,4R)-4-гидроксициклогексил)амино)-3-нитробензонитрил из примера получения 20 (1,31 г, 5,01 ммоль), 10% палладий на угле (0,131 г) и метанол (40 мл). Затем колбу продували водородом и реакционную смесь оставляли перемешиваться в атмосфере водорода (водородный баллон). Через 3 ч 10% Pd/C удаляли фильтрованием и фильтрат концентрировали в вакууме. В результате хроматографии на диоксиде кремния (дихлорметан/этанол/аммиак, 200/8/1) получали 3-амино-4-(((1R,4R)-4-гидроксициклогексил)амино)бензонитрил в виде беловатого кристаллического твердого вещества (0,253 г, 1,09 ммоль, 22%).
m/z 232,2 [МН]+
1
6
Н ЯМР (500 МГц, ДМСО-d) δ 6,89 (dd, J=8,2,2,0 Гц, 1H), 6,75 (d, J=2,0 Гц, 1Н), 6,49 (d, J=8,2 Гц, 1Н), 5,02 (d, J=7,4 Гц, 1H), 4,94 (s, 2Н), 4,57 (d, J=4,3 Гц, 1Н), 3,44 (d, J=11,8 Гц, 2Н), 3,24 (ddd, J=10,6, 7,2, 3,7 Гц, 1Н), 1,94 (dd, J=11,8, 4,1 Гц, 3Н), 1,89-1,79 (m, 3Н), 1,35-1,19 (m, 5Н).
Пример получения 22
2-(Хлорметил)-1-((1R,4R)-4-гидроксициклогексин)-1H-бензо[d]имидазол-5-карбонитрил
В колбу, снабженную обратным холодильником, 2-хлор-1,1,1-триэтоксиэтан (544 мкл, 2,85 ммоль) добавляли за один раз к раствору 3-амино-4-(((1R,4R)-4-гидроксициклогексил)амино)бензонитрила из примера получения 21 (0,220 г, 0,95 ммоль) в этаноле (10 мл). Полученный раствор нагревали при 70°C в течение 24 ч, затем добавляли еще 2-хлор-1,1,1-триэтоксиэтан (544 мкл, 2,85 ммоль) и продолжали нагревание в течение дополнительных 24 ч. Полученной раствор оставляли охлаждаться до комнатной температуры и растворитель удаляли в вакууме. В результате хроматографии на диоксиде кремния на диоксиде кремния (дихлорметан/этанол/аммиак, 200/8/1) получали 2-(хлорметил)-1-((1R,4R)-4-гидроксициклогексил)-1H-бензо[d]имидазол-5-карбонитрил в виде белого кристаллического твердого вещества (0,251 г, 0,86 ммоль, 91%).
m/z 289,9 [МН]+
1
Н ЯМР (500 МГц, ДМСО-d6) δ 8,20-8,14 (m, 1Н), 8,01 (dd, J=8,6, 2,0 Гц, 1Н), 7,65-7,57 (m, 1H), 5,16 (d, J=1,9 Гц, 2Н), 4,74 (s, 1H), 4,47 (tt, J=12,5, 4,1 Гц, 1H), 3,71 (tt, J=10,4, 4,3 Гц, 1Н), 2,26 (ddt, J=16,3, 12,4, 6,2 Гц, 2Н), 2,05-1,93 (m, 2Н), 1,92-1,82 (m, 2Н), 1,51-1,38 (m, 2Н).
Пример получения 23
2-((6'-Фтор-2'-оксоспиро[циклопропан-1,3'-индолин]-1'-ил)метил)-1-((1R,4R)-4-гидроксициклогексил)-1Н-бензо[d]имидазол-5-карбонитрил
К раствору 6'-фторспиро[циклопропан-1,3'-индолин]-2'-она с примера получения 4 (0,084 г, 0,475 ммоль) в ацетонитриле (5 мл) последовательно добавляли 1,8-диазабицикло[5,4.0]ундец-7-ен (142 мкл, 0,95 ммоль) и 2-(хлорметил)-1-((1'R,4'R)-4'-гидроксициклогексил)-1H-бензо[d]имидазол-5-карбонитрил с примера получения 22 (0,165 г, 0,57 ммоль). Полученную суспензию нагревали при 90°C в течение 2h. Полученный темно-фиолетовый раствор оставляли охлаждаться до комнатной температуры до добавления воды (20 мл). Полученный осадок собирали фильтрованием, промывали водой и очищали с помощью хроматографии на силикагеле (100% этилацетат), с получением 2-((6'-фтор-2'-оксоспиро[циклопропан-1,3'-индолин]-1'-ил)метил)-1-((1R,4R)-4-гидроксициклогексил)-1H-бензо[d]имидазол-5-карбонитрила в виде белого кристаллического твердого вещества (0,165 г, 0,38 ммоль, 67%).
m/z 431,0 [МН]+
1
6
Н ЯМР (500 МГц, ДМСО-d) δ 8,17 (d, J=1,7 Гц, 1H), 7,95 (d, J=8,6 Гц, 1H), 7,56 (dd, J=8,6, 1,6 Гц, 1Н), 7,09-7,01 (m, 2Н), 6,79 (ddd, J=10,3, 8,3, 2,4 Гц, 1H), 5,38 (s, 2Н), 4,72 (d, J=4,4 Гц, 1Н), 4,51 (s, 1H), 3,72-3,60 (m, 1H), 2,27-2,16 (m, 2Н), 1,92 (d, J=12,2 Гц, 2H), 1,70 (dt, J=6,9,4,2 Гц, 4H), 1,58 (q, J=3,8 Гц, 2H), 1,42-1,29 (m, 2H).
Пример 1
1'-{[5-(Аминометил)-1-(4,4,4-трифторбутил)-1Н-1,3-бензодиазол-2-ил]метил}-6'-фтор-1',2'-дигидроспиро[циклопропан-1,3'-индол]-2'-он
2
К раствору трет-бутил-N-[(2-[(6'-фтор-2'-оксо-1',2'-дигидро[спироциклопропан-1,3'-индол]-1'-илметил]-1-(4,4,4-трифторбутил)-1H-1,3-бензодиазил)метил]карбамата с примера получения 6 (1030 мг, 1,88 ммоль) в дихлорметане (3,5 мл) в атмосфере азота добавляли раствор хлороводорода (2М в EtO) (12,54 мл, 25,08 ммоль). Почти сразу образовался розовый/белый твердый осадок, и гетерогенную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 6 часов. Реакционную смесь затем концентрировали в вакууме при комнатной температуре и дополнительно азеотропировали количество с 3×20 мл DCM. Неочищенный продукт обрабатывали ультразвуком и растирали с диэтиловым эфиром (2×15 мл затем 3×10 мл). Растворитель удаляли декантированием и дополнительно растирали с 10 мл эфира. Смесь фильтровали и сушили с получением 865 мг требуемого продукта в виде беловатого твердого вещества в виде неочищенной HCl соли (95% выход неочищенного вещества).
HCl соль неочищенного вещества разделяли между этилацетатом (80 мл) и насыщенным водным бикарбонатом натрия (80 мл). Органические вещества отделяли и водные экстрагировали дополнительном количеством этилацетата (3×30 мл). Органические вещества объединяли, сушили над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали в вакууме. Остаток очищали с использованием флэш-хроматографии, (25 г предварительно упакованный картридж Biotage, силикагель адсорбировал вещество и элюировали смесью дихлорметан/этанол/аммиак (градиент от 100:0:0 до 95:5:1) с получением 539 мг (65% выход) свободного основания требуемого продукта в виде белого твердого вещества.
ЖХМС:
М/Z [М+Н]+: 447,10 1H-ЯМР: 1H ЯМР (500 МГц, ДМСОd6) δ 7,56 (s, 1Н), 7,51 (d, J=8,3 Гц, 1Н), 7,23 (d, J=8,3 Гц, 1H), 7,19-7,12 (m, 1Н), 7,06 (dd, J=8,3, 5,3 Гц, 1H), 6,85-6,76 (m, 1Н), 5,28 (s, 2Н), 4,35 (t, J=7,5 Гц, 2Н), 3,77 (s, 2Н), 2,32 (dt, J=21,6, 8,1 Гц, 2Н), 1,83 (р, J=8,1 Гц, 2Н), 1,67 (q, J=3,9, 3,4 Гц, 2Н), 1,57 (q, J=4,2, 3,7 Гц, 2Н).
Пример 2
1'-{[5-(Аминометил)-1-(4,4,4-трифторбутил)-1Н-1,3-бензодиазол-2-ил]метил}-6'фтор-1',2'-дигидроспиро[циклопропан-1,3'-индол]-2'-он, гидрохлорид
К раствору 1'-{[5-(аминометил)-1-(4,4,4-трифторбутил)-1Н-1,3-бензодиазол-2-ил]метил}-6'фтор-1',2'-дигидроспиро[циклопропан-1,3'-индол]-2'-она с примера 1 (539 мг, 1,21 ммоль) в дихлорметане (10 мл) добавляли по каплям раствор хлороводорода 2,0 М в диэтиловом эфире (0,6 мл, 1,21 ммоль) и реакционную смесь перемешивали в течение 30 мин. Растворитель затем выпаривали в вакууме. Остаток растворяли в 20 мл МеОН и концентрировали в вакууме при комнатной температуре и дополнительно сушили количество при 40°C с получением продукта в виде НС1 соли.
ЖХМС: М/Z [М+Н]+: 447,05 1H-ЯМР: 1Н ЯМР (500 МГц, ДМСО-d6) δ 8,36 (s, 3Н), 7,77 (s, 1Н), 7,71 (d, J=8,3 Гц, 1Н), 7,42 (d, J=8,2 Гц, 1Н), 7,15 (dd, J=9,6, 2,4 Гц, 1H), 7,08 (dd, J=8,3, 5,4 Гц, 1Н), 6,82 (ddd, J=10,5, 8,3, 2,4 Гц, 1Н), 5,35 (s, 2Н), 4,41 (t, J=7,7 Гц, 2Н), 4,09 (q, J=5,8 Гц, 2Н), 2,43-2,26 (m, 2Н), 1,87 (р, J=8,0 Гц, 2Н), 1,63 (dq, J=54,6, 4,2 Гц, 4Н).
Пример 3
1'-((5-(аминометил)-1-(4,4,4-трифторбутил)-1Н-бензо[d]имидазол-2-ил)метил)спиро[циклопропан-1,3'-пирроло[2,3-b]пиридин]-2'(1'Н)-он
3
3
Суспензию трет-бутил-N-[[2-[(2'-оксо[спироциклопропан-1,3'-пирроло[2,3-b]пиридин]-1'-ил)метил]-1-(4,4,4-трифторбутил)бензимидазол-5-ил]метил]карбамата (Пример получения 11, 184 мг, 0,35 ммоль) в дихлорметане (4 мл) обрабатывали трифторуксусной кислотой (1,86 мл, 24,32 ммоль) и полученный раствор оставляли перемешиваться в течение 1 ч при комнатной температуре. Летучие вещества удаляли при пониженном давлении, остаток очищали с помощью картриджа SCX-2, элюируя сначала МеОН и затем 2М раствором NH в МеОН. Фракции, содержащие продукт, объединяли, выпаривали в вакууме и дополнительно очищали с помощью колоночной хроматографии (Biotage, 10 г), элюируя DCM:МеОН:NH (от 98:2:0,2 до 90:10:1). Фракции, содержащие продукт, объединяли и растворитель выпаривали с получением белого твердого вещества, которое дополнительно сушили в вакууме при 40С в вакуумном пистолете с получением продукта (113 мг).
1Н ЯМР (500 МГц, ДМСО-d6) δ 8,06-7,98 (m, 1Н), 7,51 (d, J=8,3 Гц, 1Н), 7,47 (d, J=7,2 Гц, 1Н), 7,43 (s, 1Н), 7,19 (d, J=8,3 Гц, 1Н), 7,00 (dd, J=7,3, 5,3 Гц, 1Н), 5,26 (s, 2Н), 4,43 (t, J=7,4 Гц, 2Н), 3,74 (s, 2Н), 2,44-2,33 (m, 2Н), 2,00 (dd, J=15,1, 7,5 Гц, 2Н), 1,78 (q, J=4,0, 3,5 Гц, 2Н), 1,65 (q, J=4,2, 3,8 Гц, 2Н).
ЖХМС Rt: 0,51-0,69 мин m/z: 430 [М+Н]+
Пример 4
1'-((5-хлор-1-(тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)-1Н-бензо[d]имидазол-2-ил)метил)спиро[циклопропан-1,3'-пирроло[2,3-c] пиридин]-2'(1'Н)-он
К раствору спиро[1Н-пирроло[2,3-с]пиридин-3,1'-циклопропан]-2-она (30 мг, 0,1900 ммоль, Пример получения 13) в диметилформамиде (3 мл) при 0°C добавляли 60% гидрид натрия (8,99 мг, 0,2200 ммоль), перемешивали в течение 5 мин при 0°C и еще 10 при кт до добавления раствора 5-хлор-2-(хлорметил)-1-тетрагидропиран-4-ил-бензимидазола (53,41 мг, 0,1900 ммоль, Пример получения 19) в N,N-диметилформамиде (3 мл).
2
4
2
Через 30 мин ЖХМС показала отсутствие оставшегося RHS, поэтому реакционную смесь гасили HO (5 мл) и продукт экстрагировали в EtOAc (3×30 мл). Объединенные органические слои промывали солевым раствором, сушили (MgSO) и растворитель выпаривали с получением оранжевого масла. (82 мг), которое очищали с помощью колоночной хроматографии (SiO2 10 г, элюент: 100% EtOAc до 5% МеОН в EtOAc) и продукт повторно хроматографировали с помощью колоночной хроматографии (6 г SiO; 100% EtOAc). Фракции, содержащие продукт, объединяли и растворитель выпаривали и сушили в течение ночи в вакуумном пистолете при 40°C.Получали светло-желтое твердое вещество (16 мг, N2006-192-2)
1H ЯМР (500 МГц, ДМСО-d6) δ 8,40 (s, 1H), 8,24 (d, J=4,8 Гц, 1H), 7,72 (d, J=9,9 Гц, 2Н), 7,23 (d, J=8,8 Гц, 1Н), 7,15 (d, J=4,6 Гц, 1Н), 5,44 (s, 2Н), 4,80 (dq, J=12,5, 6,8, 5,0 Гц, 1H), 4,02 (dd, J=11,1, 4,7 Гц, 3Н), 3,45 (t, J=11,6 Гц, 2Н), 2,35 (qd, J=12,3, 4,4 Гц, 3Н), 1,84 (q, J=4,1, 3,7 Гц, 2Н), 1,71 (dq, J=8,2, 4,2 Гц, 5Н).
ЖХМС-MDAP Rt: 11,84 mz:409 [М+Н]
Пример 5
1'-((5-(аминометил)-1-изопентил-1Н-бензо[d]имидазол-2-ил)метил)[спироциклопропан-1,3'-пирроло[2,3-b]пиридин]-2'(1'Н)-он
3
3
Суспензию трет-бутил-N-[[1-изопентил-2-[(2'-оксо [спироциклопропан-1,3'-пирроло[2,3-b]пиридин]-1'-ил)метил]бензимидазол-5-ил]метил]карбамата (Пример получения 12, 115 мг, 0,2300 ммоль) в дихлорметане (3 мл) обрабатывали трифторуксусной кислотой (1,26 мл, 16,44 ммоль) и полученный раствор оставляли перемешиваться в течение 1 ч при комнатной температуре. ЖХМС показала продукт, присутствующий при Rt: 1,24 мин m/z: 390 [МН]+. Летучие вещества удаляли при пониженном давлении, остаток очищали с помощью картриджа SCX-2, элюируя сначала МеОН и затем 2М раствором NH в МеОН. Фракции, содержащие продукт, объединяли, выпаривали в вакууме и дополнительно очищали с помощью колоночной хроматографии (Biotage, 10 г), элюируя DCM:МеОН:NH (от 98:2:0,2 до 90:10:1). Фракции, содержащие продукт, объединяли и растворитель выпаривали с получением белого твердого вещества, которое дополнительно сушили в вакууме при 40С в вакуумном пистолете с получением продукта (60 мг).
1Н ЯМР (500 МГц, ДМСО-d6) δ 8,06 (d, J=5,3 Гц, 1H), 7,53-7,36 (m, 3Н), 7,18 (d, J=8,1 Гц, 1H), 7,02 (t, J=6,5 Гц, 1H), 5,25 (s, 2H), 4,31 (t, J=7,6 Гц, 2H), 3,74 (s, 2H), 1,84-1,73 (m, 2H), 1,71-1,53 (m, 5H), 0,94 (d, J=5,8 Гц, 6H).
ЖХМС Rt: 0,51-0,69 мин m/z: 390 [М+Н]+ЖХМС-MDAP: Rt=10,77 мин m/z 390 [MH]+
Пример 6
1'-((5-(аминометил)-1-изопентил-1Н-бензо[d]имидазол-2-ил)метил)спиро[циклопропан-1,3'-пирроло[2,3-c]пиридин]-2'(1'Н)-он
3
3
Суспензию трет-бутил-N-[[1-изопентил-2-[(2'-оксоспиро[циклопропан-1,3'-пирроло[2,3-с]пиридин]-1'-ил)метил]бензимидазол-5-ил]метил]карбамата (Пример получения 14, 62 мг, 0,1300 ммоль) в дихлорметане (2 мл) обрабатывали трифторуксусной кислотой (0,68 мл, 8,86 ммоль) и полученный раствор оставляли перемешиваться в течение 1 ч при комнатной температуре. Летучие вещества удаляли при пониженном давлении, остаток очищали с помощью картриджа SCX-2, элюируя сначала МеОН и затем 2М раствором NH в МеОН. Фракции, содержащие продукт, объединяли, выпаривали в вакууме и дополнительно очищали с помощью колоночной хроматографии (Biotage, 5 г), элюируя DCM:МеОН:NH (98:2:0,2) с 0% до 100% указанной смеси. Фракции, содержащие продукт, объединяли и растворитель выпаривали с получением белого твердого вещества. Дополнительное растирание с эфиром (3×6 мл) проводили для удаления дополнительных примесей с получением немного загрязненного указанного в заголовке соединения (60 мг).
ЖХМС-LCQ: M/Z [М+Н]+: 390,4 RT: 0,47 мин
1Н ЯМР (500 МГц, ДМСО-d6) δ 8,42 (s, 1Н), 8,24 (d, J=4,9 Гц, 1Н), 7,57 (s, 1Н), 7,42 (d, J=8,4 Гц, 1Н), 7,22 (d, J=8,4 Гц, 1Н), 7,16 (d, J=4,8 Гц, 1Н), 5,32 (s, 2Н), 4,26 (t, J=8,2 Гц, 2Н), 3,79 (s, 2Н), 1,85 (q, J=4,0 Гц, 2Н), 1,71 (q, J=4,3, 3,9 Гц, 2Н), 1,68-1,58 (m, 1Н), 1,46 (q, J=7,5 Гц, 2Н), 0,92 (d, J=6,5 Гц, 7Н).
Пример 7
1'-((5-(аминометил)-1-(тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)-1Н-бензо[d]имидазол-2-ил)метил)-6'-фторспиро[циклопропан-1,3'-индолин]-2'-он
3
2-[(6'-фтор-2'-оксо-спиро[циклопропан-1,3'-индолин]-1'-ил)метил]-1-тетрагидропиран-4-ил-бензимидазол-5-карбонитрил (Пример получения 16, 100 мг, 0,2400 ммоль) растворяли в смеси THF/NH (6/0,5 мл) и гидрировали путем пропускания раствора через маленький картридж Ni-Ra в Н-Cube при 1 мл/мин при 20 бар и 45°C в течение примерно 45 мин. Растворитель выпаривали с получением указанного в заголовке соединения в виде белого твердого вещества (105 мг)
1Н ЯМР (600 МГц, ДМСО-d6) δ 7,59-7,54 (m, 2Н), 7,16 (dd, J=8,5, 1,7 Гц, 1Н), 7,10 (dd, J=9,7, 2,4 Гц, 1H), 7,03 (dd, J=8,2, 5,3 Гц, 1H), 6,78 (ddd J=10,4, 8,3, 2,4 Гц, 1H), 5,34 (s, 2Н), 4,73 (tt, J=12,2, 4,3 Гц, 1H), 4,00 (dd, J=11,5, 4,4 Гц, 2Н), 3,74 (s, 2Н), 3,41 (td, J=11,9, 1,9 Гц, 2Н), 2,36 (qd, J=12,4, 4,6 Гц, 2Н), 1,67 (q, J=3,9 Гц, 2Н), 1,62 (dd, J=13,0, 3,9 Гц, 2Н), 1,55 (q, J=3,8 Гц, 2Н).
ЖХМС-MDAP Rt: 10,68 m/z: 421 [М+Н]
Пример 8
1'-((5-(Аминометил)-1-((1R,4R)-4-гидроксициклогексил)-1Н-бензо[d]имидазол-2-ил)метил)-6'-фторспиро[циклопропан-1,3'-индолин]-2'-он
В колбу, продутую азотом, последовательно загружали 2-((6'-фтор-2'-оксоспиро[циклопропан-1,3'-индолин]-1'-ил)метил)-1-((1R,4R)-4-гидроксициклогексил)-1H-бензо[d]имидазол-5-карбонитрил (0,139 г, 0,32 ммоль), 10% палладия на угле (0,014 г), метанол (4 мл) и 37% соляную кислоту (159 мкл, 1,615 ммоль). Колбу продували водородом и перемешивали в атмосфере водорода в течение 3 ч. К реакционной смеси добавляли воду (10 мл), катализатор удаляли фильтрованием и фильтрат концентрировали в вакууме. После разделения остатка между водой (20 мл) и этилацетатом (10 мл) проводили экстракцию водной фазы этилацетатом (2×10 мл). Водный слой доводили до pH=10 с использованием 30% водного раствора аммиака и полученную суспензию экстрагировали этилацетатом (4×20 мл). Объединенные органические экстракты промывали солевым раствором (50 мл), сушили над сульфатом натрия и концентрировали в вакууме с получением 1'-((5-(аминометил)-1-((1R,4R)-4-гидроксициклогексил)-1H-бензо[d]имидазол-2-ил)метил)-6'-фторспиро[циклопропан-1,3'-индолин]-2'-она в виде белого твердого вещества (0,117 г, 0,27 ммоль, 84%). Полученное твердое вещество дополнительно очищали путем перекристаллизации из горячего этанола.
m/z 435,2 [МН]+
1
6
Н ЯМР (600 МГц, ДМСО-d) δ 7,59 (d, J=8,3 Гц, 1Н), 7,56 (s, 1H), 7,12 (dd, J=8,5, 1,6 Гц, 1H), 7,07 (dd, J=9,6, 2,4 Гц, 1H), 7,03 (dd, J=8,2, 5,3 Гц, 1H), 6,77 (ddd, J=10,4, 8,2, 2,4 Гц, 1H), 5,29 (s, 2H), 4,65 (d, J=4,5 Гц, 1H), 4,41 (tt, J=12,3, 4,0 Гц, 1H), 3,74 (s, 2H), 3,61 (dp, J=15,6, 5,3, 4,6 Гц, 1H), 2,19 (qd, J=12,6, 3,3 Гц, 2H), 1,92-1,84 (m, 2H), 1,68 (q, J=3,8 Гц, 2H), 1,56 (dt, J=8,4, 3,8 Гц, 4H), 1,36-1,26 (m, 2H).
Пример 9: Эффективность in vitro
Соединения были подвергнуты анализу слияния RSV и анализам уменьшения бляшек в соответствии со следующими протоколами.
Анализ слияния RSV
6
Клетки НЕК 293Т/17 культивировали в культуральных колбах Т75 в среде Дульбекко, содержащей 10% FBS и 1× пенициллин-стрептомицин, и нагревали до 37°C перед использованием. Клетки пассировали посредством сначала быстрого промывания 3 мл PBS, а затем 4 мин инкубации с 3 TrypLE при 37°C. Затем в колбу добавляли 7 мл среды и клетки распределяли пипетированием (×3) на дне колбы. Две другие колбы Т75 засевали 2×10 клетками в 15 мл свежей среды.
5
-1
Клетки высевали на планшеты Т75 при той же плотности, что и на 6-луночных планшетах, соответствующих площади колбы Т75 и сравнивали одну лунку радиусом 1,75 см из 6-луночного планшета. 7,79×2 мл 3×10 клеток мл использовали для засевания одной колбы Т75.
5
Клетки НЭК удаляли из колбы Т75, как описано выше. Клетки подсчитывали и разбавляли до 3×10 клеток/мл в свежей среде. В две колбы Т75 засевали 15,88 мл разбавленных клеток.
Плазмидную ДНК (для pFR-Luc и pcDNA3,1_Gal4/NFkB), подлежащую трансфекции в клетки НЕК, сначала получали в бессывороточной среде (DMEM+Pen/Strep), содержащей реагент для трансфекции Fugene 6 (Promega). Трансфекции были выполнены следующим образом (Luc=pFR_Luc, Gal4=pcDNA3,1+_Gal4/NFkB, A2_F=pcDNA3,1+_A2_F)
Трансфекции
Бессывороточную среду помещали в 1,5 мл пробирку Эппендорфа, после чего в среду добавляли fugene 6. Пробирку встряхивали в течение 1 перед инкубацией при КТ в течение 5 мин. Затем в пробирку добавляли плазмидную ДНК, встряхивали в течение 1 с, затем инкубировали при КТ в течение 15 мин.
2
Реагенты для трансфекции затем добавляли в соответствующую колбу Т75, переворачивая колбу на торец и добавляя реагенты непосредственно в среду, уже находящуюся в колбе. Затем колбу переворачивали на стенку для тщательного перемешивания среды, не нарушая работу клеток, прежде чем правильно установить колбу и инкубировать в течение ночи при 37°С и 5% СО.
5
5
Соединения разводили (в полипропиленовом круглодонном 96-луночном планшете 1:3 согласно кривой разведения с двенадцатью точками с получением верхней [конечной] концентрации либо 3,3 мкМ, 1 мкМ, 500 нМ 200 нМ, либо 100 нМ. Контрольное соединение всегда использовали при концентрации 100 нМ. Затем клетки подсчитывали и разбавляли до 4×10 клеток/мл в свежих средах. 50 мкл популяции трансфекции добавляли во все лунки планшетов для анализа. В соответствующие лунки добавляли 100 мкл разведенного соединения (2 ряда на соединение), стандартную кривую (один ряд) и контрольные образцы (100 нМ RV (100% ингибирование, четыре лунки), ДМСО (0% ингибирование, восемь лунок)). 50 мкл разведенной (4×10 клеток/мл) популяции 2 клеток, затем добавляли во все лунки.
2
Планшеты затем инкубировали в течение 24 ч при 37°C и 5% СО
2
Для анализа люциферазы готовили буферы (20 мМ трицин, 10 мМ MgSO4, 1 мМ EDTA, 10 мМ DTT) и лизис и хранили при -20°C. (25 мМ трис-фосфат, 8 мМ MgCl, 1 мМ DTT, 1% Triton Х-100, 15% глицерин). Субстрат люциферина получали и хранили при -80°C (100 мМ трис-HCl, 15,76 г/л, кофермент А, 10,36 г/л, 23,5 мМ люциферина, 7,48 г/л, 26,6 мМ АТФ, 14,66 г/л.
Люминесценцию измеряли в соответствующие моменты времени следующим образом:
(а) Люцифераза
Среду отбрасывали в Virkon и планшеты промывали 100 мкл PBS на лунку. В каждую лунку добавляли 20 мкл/лунку лизирующего буфера и инкубировали встряхиванием в течение 5 мин при КТ. Люциферин добавляли к LAAB при разведении 1:50 с получением рабочего люциферинового буфер. В каждую лунку добавляли 100 мкл рабочего люциферинового буфера и немедленно измеряли люминесценцию.
(b) Резазурин
2
Среду отбрасывали в Virkon и в каждую лунку добавляли 100 мкл SFM + 20 мкл раствора CellTitre-Blue. Планшеты инкубировали при 37°C, 5% СО в течение 2 часов. Резоруфиновую флуоресценцию измеряли при 590 нм.
Анализ уменьшения бляшек:
4
2
2
2
Клетки Vero высевали в 96-луночные планшеты в объеме 100 мкл Optimem, дополненного 3% FCS в концентрации 4×10 клеток на лунку. После инкубации в течение ночи при 37°C в увлажненной атмосфере с 5% СО монослой клеток должен быть приблизительно на 90% конфлюентным. Противовирусные соединения титровали в предварительно нагретом сывороточном (SF) Optimem в 96-луночном планшете с U-образным дном. Для соединений в растворе ДМСО сначала проводили титрование в 100% ДМСО и каждую концентрацию добавляли индивидуально до конечной концентрации 2× при 4% ДМСО в среде SF перед смешиванием с вирусом (2% конечного ДМСО с вирусом). Среду затем удаляли из клеток и заменяли PBS (100 мкл/лунку). Содержимое RSV оттаивали и разбавляли средой SF Optimem до 4000 PFU/мл. К соединениям на планшете для титрования добавляли равный объем вируса. PBS удаляли из клеток, которые затем инокулировали раствором вируса/соединения (50 мкл/лунку). Клетки инкубировали в течение 2 ч в увлажненном инкубаторе с температурой 37°C + 5% СО, чтобы обеспечить инфекцию. Инокулят удаляли и добавляли среду (Optimem + 1% FCS) к клеткам (100 мкл/лунку). Клетки затем инкубировали в течение 48 ч при 37°C и 5% СО в увлажненном инкубаторе.
Процедура иммуноокрашивания:
Среду удаляли с клеток и монослой промывали PBS. Клетки фиксировали ледяным 80% ацетоном в PBS (100 мкл/лунку) в течение 20 минут при -20°C. Фиксатор удаляли и клетки сушили в течение 30 мин в перевернутых планшетах. К клеткам добавляли блокирующий раствор (5% обезжиренного сухого молока в PBS-T) (150 мкл/лунка) и планшеты инкубировали в течение 30 минут при комнатной температуре. Блокирующий раствор удаляли и планшеты промывали один раз PBS-Т. В планшеты добавляли первичное антитело в блокирующем растворе (50 мкл/лунка) и инкубировали в течение 1 часа при 37°C. Затем планшеты 3 раза промывали PBS-T. В планшеты добавляли вторичное антитело в блокирующем растворе (50 мкл/лунка) и инкубировали в течение 1 часа при 37°C в темноте. Планшеты промывали, как описано выше, а затем сушили в течение 10 минут. Планшеты сканировали на Odyssey Imager (Li-Cor Biosciences) с разрешением 42 мкМ, средним качеством и интенсивностью 5 уровня в канале 800 нМ.
Анализ данных:
50
Полученные изображения сохраняли, и количество бляшек подсчитывали с помощью компьютерного программного обеспечения для обработки изображений. значения ЕС для соединений получали из кривых зависимости «доза-ответ» [график зависимости ответа от логарифма концентрации ингибитора (log(ингибитор)) для трех разных значений концентрации], полученных с использованием программного обеспечения Graphpad Prism.
Результаты
Пример 10: Фармакокинетика in vitro
Соединения подвергали следующим анализам для исследования микросомальной стабильности печени, проницаемости, связывания с белками плазмы и расчета коэффициентов распределения/распределения.
Микросомальное ингибирование: процедура эксперимента
Объединенные микросомы печени человека (объединенные мужские и женские), объединенная микросомы печени крыс (самцы крыс Sprague Dawley) и объединенные микросомы печени собак (самцы породы бигль) приобретали у надежного коммерческого поставщика и хранили при температуре -80°C перед использованием.
Микросомы (конечная концентрация белка 0,5 мг/мл), 0,1 М фосфатный буфер с рН 7,4 и тестируемое соединение (конечная концентрация на субстрате 3 мкМ, конечная концентрация в ДМСО 0,25%) предварительно инкубировали при 37°C перед добавлением NADPH (конечная концентрация 1 мМ) для инициирования реакции. Конечный инкубационный объем составлял 50 мкл. Контрольная инкубация включена для каждого тестируемого соединения, где вместо MAD NADPH (минус NADPH) добавляли 0,1 М фосфатный буфер с рН 7,4. Два контрольных соединения были включены для каждого представителя. Все инкубации выполняли отдельно для каждого тестируемого соединения.
Соединения инкубировали в течение 0, 5, 15, 30 и 45 мин. Контроль (минус NADPH) инкубировали только в течение 45 мин. Реакции останавливали, перенося 25 мкл инкубата в 50 мкл метанола в соответствующие моменты времени. Концевые планшеты центрифугировали при 2500 об/мин в течение 20 мин при 4°C для осаждения белка. После осаждения белка супернатанты образца объединяли в кассеты до 4 соединений, добавляли внутренний стандарт и образцы анализировали с помощью ЖХ-МС/МС. Из графика отношения ln площади пика (площадь пика соединения/площадь пика внутреннего стандарта) по времени определяли градиент линии. Затем рассчитывали период полураспада и внутренний клиренс.
Проницаемость MDR1-MDCK: процедура эксперимента
5
2
Клетки MDR1-MDCK, полученные от NIH (Rockville, MD, USA), использовали с количеством пассажей от 6 до 30. Клетки высевали на планшеты Millipore Multiscreen Transwell при 3,4×10 клеток/см. Клетки культивировали в DMEM и среду меняли на третий день. На 4-й день проводили исследование проницаемости. Культуру клеток и инкубации для исследования проводили при 37°C в атмосфере 5% CO2 при относительной влажности 95%. В день анализа монослои получали путем промывки обеих базолатеральных и апикальных поверхностей дважды с помощью сбалансированного солевого раствора Хэнкса (HBSS) при желаемом рН, нагретом до 37°C. Клетки затем инкубировали с HBSS при требуемом значении рН в апикальном и базолатеральном компартментах в течение 40 мин для стабилизации физиологических параметров.
Дозирующие растворы готовили путем разбавления тестируемого соединения буфером для анализа с получением конечной концентрации тестируемого соединения 10 мкМ (конечная концентрация в ДМСО 1% об./об.). Флуоресцентный маркер целостности люцифер желтый также включали в дозирующий раствор. Аналитические стандарты получали из разведений тестируемого соединения ДМСО и переносили в буфер, поддерживая концентрацию 1% об./об. в ДМСО.
Для оценки проницаемости А-В HBSS удаляли из апикального компартмента и заменяли дозирующим раствором тестируемого соединения. Вставку апикального компартмента затем помещали в сопутствующий планшет, содержащий свежий буфер (содержащий 1% об./об. ДМСО). Для оценки проницаемости В-А HBSS удаляли из сопутствующего планшета и заменяли дозирующим раствором тестируемого соединения. Свежий буфер (содержащий 1% об./об. ДМСО) добавляли к вставке апикального компартмента, который затем помещали в сопутствующий планшет.
Через 60 мин вставки апикального компартмента и сопутствующие планшеты разделяли и апикальные и базолатеральные образцы разбавляли для анализа.
Проницаемость тестируемого соединения оценивали в двух повторностях. Соединения с известными характеристиками проницаемости использовали как контрольные образцы на каждом аналитическом планшете.
Тестируемые и контрольные соединения количественно анализировали с помощью кассетного анализа ЖХ-МС/МС с использованием 8-точечной калибровки с соответствующим разбавлением образцов. Исходную концентрацию (С0) определяли из дозирующего раствора и экспериментального восстановления, рассчитанного из С0, и обеих концентраций апикального и базолатерального компартментов.
Целостность монослоя на протяжении всего эксперимента проверялась путем контроля проницаемости Люцифера желтого с использованием флуориметрического анализа. Проницаемость Люцифера желтого была высокой, если монослои были повреждены.
Определение связывания белка: процедура эксперимента
Растворы тестируемого соединения (5 мкМ, конечная концентрация в ДМСО 0,5%) готовили в буфере (рН 7,4) и 100% видоспецифической плазме. Эксперимент проводили с использованием равновесного диализа с двумя компартментами, разделенными полупроницаемой мембраной. Буферный раствор добавляли к одной стороне мембраны, а раствор плазмы - к другой стороне. После уравновешивания образцы брали с обеих сторон мембраны. Стандарты готовили в плазме и буфере и инкубировали при 37°C. Инкубации тестируемых соединений проводили в двух повторностях. Контрольное соединение включали в каждый эксперимент.
Растворы для каждой партии соединений объединяли в две группы (не содержащие белок и содержащие белок), затем кассету анализировали с помощью ЖХ-МС/МС с использованием двух наборов калибровочных стандартов для не содержащих белок (7 точек) и содержащих белок растворов (6 точек).
Определение LogD: процедура эксперимента
0,1 М фосфатный буфер рН 7,4 (насыщенный октанолом) добавляли во флакон, содержащий 1 мг твердого тестируемого соединения, и раствор смешивали и обрабатывали ультразвуком в течение приблизительно 15 мин. Раствор переносили в пробирки, центрифугировали и супернатант отводили сверху, оставляя любое твердое вещество на дне. Указанный супернатант затем фильтровали через фильтр 0,2 мкм с получением исходного раствора.
Приготавливали три флакона, содержащих различные соотношения октанола и соединения в фосфатном буфере, чтобы покрыть диапазон значений logD. Флаконы перемешивали до уравновешивания, затем центрифугировали для полного разделения фаз до удаления октанола и буферные образцы анализировали.
Водные растворы из соответствующих флаконов затем объединяли в кассеты по четыре и анализировали с использованием общих условий ЖХ-МС/МС. Количество соединения в каждом флаконе количественно определяли по 6 точечной стандартной кривой, которую получали путем последовательного разбавления исходного раствора. Затем вычисляли logD из указанных концентраций.
Определение LogP
Величины LogP рассчитывали с помощью программного обеспечения, доступного от ChemAxon, используя метод, описанный в Viswanadhan et al.; J. Chem. Inf. Comput. Sci. 1989; 29: 163-172.
Результаты
Пример 11: Фармакокинетика in vivo
Фармакокинетику соединений изучали in vivo у самцов крыс линии Sprague Dawley при дозах 1 мг/кг (вв) и 10 мг/кг (по).
Способы
Крыс линии Sprague Dawley обрабатывали экспериментальными соединениями путем внутривенного и перорального введения. Три животных для каждого способа введения использовали с последовательным отбором проб крови в десяти временных точках после дозирования соединения.
Внутривенный болюс вводили в дозировке 1 мг/кг и при концентрации 1 мг/мл в 40:60 диметилацетамиде/физиологическом растворе (0,9% мас./об. физиологического раствора). Животных взвешивали и использовали, если их масса составляла 200-250 г. Серийные образцы крови собирали через 0,02, 0,08, 0,25, 0,50, 1, 2, 4, 6, 8 и 24 ч после дозировки. Животные наблюдались на предмет любых явных клинических признаков или симптомов. Образцы крови доставляли в антикоагулянт (гепарин натрия) и центрифугировали при 4°C. Образцы плазмы впоследствии хранили замороженными при температуре ниже -20 4°C перед анализом.
После осаждения белка ацетонитрилом образцы анализировали с помощью тандемной жидкостной хроматографии/масс-спектрометрии с использованием электрораспылительной ионизации. Использовали полную матричную кривую с внутренними стандартами и рассчитывали параметры РК.
Аналогичным образом пероральное введение осуществляли через желудочный зонд в дозировках 5 или 10 мг/кг при концентрации 5 мг/мл в 1% метилцеллюлозе (Sigma М7140), 0,1% Твин 80 в воде. Серийные образцы были взяты, как описано выше.
Результаты
Сравнительный Пример 1: Эффективность in vitro
Протоколы примера 9 повторяли для RV039 (1'-((5-(аминометил)-1-изопентил-1H-бензо[d]имидазол-2-ил)метил)спиро[циклопропан-1,3'-индолин]-2'-он; идентифицируемого в WO 2013/068769 как соединение примера 2).
Результаты
Сравнительный Пример 2: Фармакокинетика in vitro
Протоколы примера 10 повторяли для RV039, которое представляет собой 1'-((5-(аминометил)-1-изопентил-1H-бензо[d]имидазол-2-ил)метил)спиро[циклопропан-1,3'-индолин]-2'-он (идентифицируемое в WO 2013/068769 как соединение примера 2).
Результаты
Сравнительный Пример 3: Фармакокинетика in vivo
Протоколы примера 11 повторяли для RV039 (1'-((5-(аминометил)-1-изопентил-1H-бензо[d]имидазол-2-ил)метил)спиро[циклопропан-1,3'-индолин]-2'-он; идентифицируемое в WO 2013/068769 как соединение примера 2). RV039 вводили в дозировке 1 мг/кг (вв) и 5 мг/кг (по).
Результаты
Пример 11: Водный состав
Готовили состав соединения из Примера 1 в виде раствора в 30% масс/об. каптизоле (т.е. простом сульфобутиловом эфире-бета-циклодекстрине) при pH 4 в соответствии со следующей процедурой.
Носитель, представляющий собой 30% масс/об. каптизол (т.е. простой сульфобутиловый эфир-бета-циклодекстрин) получали путем взвешивания необходимого количества каптизола в подходящий сосуд, добавления приблизительно 80% от конечного объема воды и перемешивания с помощью магнитной мешалки до образования раствора. Затем носитель доводили до объема водой.
Водный раствор соединения из Примера 1 получали путем взвешивания 175 мг указанного соединения в подходящий сосуд и добавления приблизительно 80% от необходимого объема носителя. С использованием водного раствора хлороводородной кислоты рН доводили до рН 2 и полученную смесь перемешивали с помощью магнитной мешалки до образования раствора. Затем состав доводили носителем до объема и рН доводили до рН 4 с использованием водного раствора гидроксида натрия.
Пример 12: Композиция таблетки
Таблетки, каждую массой 0,15 г и содержащую 25 мг соединения согласно настоящему изобретению, изготавливали следующим образом:
Композиция для 10000 таблеток
Соединение согласно настоящему изобретению (250 г)
Лактоза (800 г)
Кукурузный крахмал (415 г)
Тальк, порошок (30 г)
Стеарат магния (5 г)
Смешивали соединение согласно настоящему изобретению, лактозу и половину кукурузного крахмала. Затем смесь продавливали через сито с размером отверстий 0,5 мм. Суспендировали кукурузный крахмал (10 г) в теплой воде (90 мл). Полученную пасту использовали для гранулирования порошка. Гранулят сушили и разбивали на мелкие фрагменты на сите с размером отверстий 1,4 мм. Добавляли оставшееся количество крахмала, тальк и магний, тщательно смешивали и перерабатывали в таблетки.
Пример 13: Состав для инъекций
Соединение согласно настоящему изобретению
200 мг
0,1 М раствор соляной кислоты или
0,1 М раствор гидроксида натрия в количестве, достаточном для достижения pH
от 4,0 до 7,0
Стерильная вода в количестве, достаточном для достижения
10 мл
Соединение согласно настоящему изобретению растворяли в большей части воды (35°C-40°C) и при необходимости рН доводили до 4,0-7,0 соляной кислотой или гидроксидом натрия. Затем партию доводили до объема водой и фильтровали через стерильный микропористый фильтр в стерильный 10 мл флакон из янтарного стекла (1 тип) и герметизировали стерильными укупорочными средствами и дополнительными укупорочными средствами.
Пример 14 Внутримышечная инъекция
Соединение согласно настоящему изобретению
200 мг
Бензиловый спирт
0,10 г
Гликофурол 75
1,45 г
Вода для инъекций в количестве, достаточном для достижения
3,00 мл
Соединение согласно настоящему изобретению растворяли в гликофуроле. Затем добавляли и растворяли бензиловый спирт, и добавляли воду до 3 мл. Затем смесь фильтровали через стерильный микропористый фильтр и герметизировали в стерильных 3 мл стеклянных флаконах (1 типа).
Пример 15 Состав в форме сиропа
Соединение согласно настоящему изобретению
250 мг
Раствор сорбита
1,50 г
Глицерин
2,00 г
Бензоат натрия
0,005 г
Ароматизатор
0,0125 мл
Очищенная вода в количестве, достаточном для достижения
5,00 мл
Соединение согласно настоящему изобретению растворяли в смеси глицерина и большей части очищенной воды. Затем к раствору добавляли водный раствор бензоата натрия с последующим добавлением раствора сорбита и, наконец, ароматизатора. Очищенной водой доводили до объема и хорошо перемешивали.