СИСТЕМЫ И СПОСОБЫ РЕДАКТИРОВАНИЯ ГЕНОМА РАСТЕНИЙ РОДА BRASSICA

1. Способ редактирования генома клетки растения рода Brassica, при этом способ включает:
a. культивирование выделенной микроспоры из растения рода Brassica с получением выделенной предварительно инкубированной микроспоры;
b. культивирование выделенной предварительно инкубированной микроспоры в условиях плазмолиза;
c. введение посредством бомбардировки в условиях плазмолиза микрочастицы, содержащей систему редактирования генома CRISPR-Cas, в выделенную предварительно инкубированную микроспору;
d. культивирование в условиях плазмолиза предварительно инкубированной микроспоры, содержащей генетическую модификацию, введенную с помощью системы редактирования генома, с получением трансформированной микроспоры;
e. культивирование трансформированной предварительно инкубированной микроспоры в жидкой селективной среде или на ней с получением зародыша или ткани и
f. регенерацию растения рода Brassica из зародыша или ткани, где растение рода Brassica содержит генетическую модификацию, введенную с помощью системы редактирования генома.
2. Способ по п. 1, где система редактирования генома содержит эндонуклеазу CRISPR/Cas, выбранную из группы, состоящей из Cas9, Cpf1 или Csm1.
3. Способ по п. 2, где система редактирования генома содержит направляющую РНК, эндонуклеазу Cas и их комбинацию.
4. Способ по п. 2, где система редактирования генома содержит ДНК-конструкцию, которая кодирует эндонуклеазу Cas, направляющую РНК или их комбинацию.
5. Способ по п. 2, где ДНК-конструкция содержит как кассету экспрессии направляющей РНК, так и кассету экспрессии эндонуклеазы Cas.
6. Способ по п. 1, где система редактирования генов содержит рибонуклеопротеин в комплексе с направляющей РНК на микрочастице.
7. Способ по п. 1, где система редактирования генома содержит направляющую РНК и донорную ДНК-матрицу.
8. Способ по п. 1, где зародыш обрабатывают с помощью средства для удвоения числа хромосом.
9. Способ увеличения частоты редактирования генома представителя рода Brassica, при этом способ включает:
a. культивирование выделенной микроспоры, полученной из растения рода Brassica, с получением выделенной предварительно инкубированной микроспоры, которая была подвергнута кондиционированию с приданием ей эмбриогенности;
b. введение в условиях плазмолиза микрочастицы-носителя, содержащей систему направленного редактирования генома, в выделенную предварительно инкубированную микроспору посредством бомбардировки, где микроспора не подвергается разрыву или не повреждается иным образом при проникновении в нее микрочастицы;
c. получение зародыша из подвергнутой бомбардировке микроспоры в подходящих условиях культивирования и
d. получение растения рода Brassica из зародыша, содержащего генетическую модификацию, введенную с помощью системы редактирования генома.
10. Способ по п. 9, где система редактирования генома представляет собой систему редактирования генов CRISPR/Cas.
11. Способ по п. 10, где ДНК-конструкция содержит кассету экспрессии направляющей РНК или кассету экспрессии эндонуклеазы Cas.
12. Способ по п. 10, где система редактирования генома содержит рибонуклеопротеиновый (RNP) комплекс, который способен к сайт-направленному редактированию эндогенной геномной ДНК.
13. Способ по п. 11, где генетическая модификация представляет собой введение гетерологичной ДНК посредством гомологичной рекомбинации или опосредованной гомологией репарации.
14. Способ по п. 10, где система редактирования генов нацеливается на FAD2, FAD3 представителя рода Brassica или их комбинацию.
15. Способ по п. 13, где кассета экспрессии дополнительно содержит ген, кодирующий селектируемый маркер.
16. Способ по п. 15, где селектируемый маркер представляет собой глифосатацетилтрансферазу.
17. Эмбриогенная клетка микроспоры представителя рода Brassica, содержащая микрочастицу, где микрочастица обеспечивает доставку комплекса для редактирования генома, содержащего эндонуклеазу CRISPR-Cas, направляющую РНК и необязательно донорную матрицу, при этом эндонуклеаза Cas и направляющая РНК образуют комплекс с целевой геномной ДНК в клетке микроспоры, при этом клетка микроспоры является эмбриогенной и способна к развитию в зародыш.
18. Клетка микроспоры по п. 17, где геном содержит целевое изменение, введенное с помощью комплекса эндонуклеазы Cas и gRNA.
19. Клетка микроспоры по п. 17, где эндонуклеаза CRISPR-Cas является одной из Cas9, Cpf1 или Csm1.
20. Клетка микроспоры по п. 17, где микроспора находится в осмолитической культуральной среде.
21. Клетка микроспоры по п. 17, где микроспора получена из донорного растения рода Brassica, которое представляет собой канолу.
22. Клетка микроспоры по п. 17, где микроспора характеризуется выносливостью по отношению к селектируемому маркеру.
23. Клетка микроспоры по п. 17, где микроспора содержит мутацию в FAD2, FAD3 представителя рода Brassica или комбинацию их мутаций.