СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ РАНЕВОГО ПОКРЫТИЯ ДЛЯ РЫБ, ВЫРАЩИВАЕМЫХ В ИСКУССТВЕННЫХ УСЛОВИЯХ
METHOD OF OBTAINING WOUND COVERING FOR FISH GROWN IN ARTIFICIAL CONDITIONS

Изобретение относится к рыбоводству, а именно для профилактики и лечения кожных заболеваний различной этиологии у рыб.
Известен способ получения пищевого общеукрепляющего профилактического продукта из хрящевой ткани гидробионтов, включающий гомогенизацию хрящевой ткани акул, или скатов, или осетровых и лососевых рыб, или головоногих моллюсков (кальмаров, осьминогов) ткани, экстракцию 0,9-2,0% хлористым натрием, ферментативный гидролиз, инактивацию ферментов с последующим осаждением липидов раствором хитозана в 2-4% уксусной кислоте, затем осадок отделяют, обезжиренный ферментативный гидролизат диализируют против дистиллированной воды, осадок подвергают кислотному гидролизу 2-4 М раствором соляной кислоты, из кислотного гидролизата выделяют гексозамины путем обработки хлоридом кальция, после чего осадок и диализованный ферментативный гидролизат смешивают и сушат с получением пищевого общеукрепляющего профилактического продукта (см. патент РФ №2250047, A23L 1/30, A23L 1/325, 2003 г.).
Известно средство для стимуляции репаративной регенерации, содержащее продукты животного происхождения и фармацевтически адекватный наполнитель, где в качестве активного начала выступает препарат натрия нуклеоспермат, а в качестве фармацевтически адекватного наполнителя - 0,1%-ный раствор натрия хлорида, мазевая, гелевая, эмульсионная или коллагеновая основы (см. заявку на изобретение №95113539, A61K 31/70, A61K 35/60, A61K 9/08, A61K 9/06, 1995 г.).
Недостатком данных способов является невозможность применения конечного продукта для кожного покрова водных биологических ресурсов, ввиду снижения их эффективности в условиях водной среды.
Известен способ лечения и профилактики заболеваний рыб, заключающийся в скармливании рыбам лечебного корма, содержащего пробиотический препарат - субалин (ветосубалин) из расчета не менее 100 доз (700 млрд живых бактерий Bacillus subtilis ВКПМ В-4759 в споровой форме) на тонну корма в течение пяти дней (см. патент на изобретение №2186576, A61K 35/74, A01K 61/00, 1998 г.).
К недостаткам данного способа относится то, что скармливание рыбам лечебного корма не оказывает существенного виляния на патогенные микроорганизмы находящиеся на поверхности кожного поражения тела рыбы, а кроме того может привести к поражению полезной микрофлоры и снизить показатели безопасности конечной пищевой продукции из рыб для человека.
Известно, что для профилактики и лечения кожных заболеваний и механических повреждений у осетровых рыб в аквакультуре обычно используют купание (ванны) в растворах антибиотиков, красителей с антибактериальными свойствами (фиолетовый "K", бриллиантовый зеленый), поваренной соли NaCl (Казарникова А.В., Шестаковская Е.В. Основные заболевания осетровых рыб в аквакультуре, 2005 г.).
Недостатком такой процедуры являются, например, ожоги жабр или нарушение работы биофильтров оборотной системы водоснабжения.
Вспышки заболеваний кожных покровов рыб, выращиваемых в искусственных условиях, в частности осетровых, широко распространены и зачастую связаны с поражением миксобактериями, часто обнаруживаемыми на поврежденных участках кожного покрова тела рыбы. Вызвано это высокой плотностью посадки, слабой проточностью воды, а также механическими травмами рыбы.
На данный момент из уровня техники не известен способ получения раневого покрытия для рыб, в частности выращиваемых в искусственных условиях, и эффективного применения его в агрессивной водной среде.
Технической задачей заявленного изобретения является получение раневого покрытия в виде тонкой пленки, обладающей ранозаживляющим действием, устойчивой к водной среде, с возможностью применения ее на любых участках поверхности тела рыбы при нарушениях ее кожного покрова различной этиологии.
Поставленная задача решается в способе получения раневого покрытия для рыб, выращиваемых в искусственных условиях, включающем подбор компонентов, их перемешивание, фильтрацию и разлив полученной смеси на подложку слоем 10 мм с последующей сушкой. В качестве компонентов берут хондроитинсульфат-белковый комплекс, выделенный из хрящевого сырья путем щелочного или ферментативного гидролиза, 1-4%-ный раствор высокомолекулярного хитозана в растворе аскорбиновой, молочной, янтарной или лимонной кислот, взятых в соотношении 1:1:1, сухой низкомолекулярный хитозан и водный раствор поливинилового спирта, причем смешивание компонентов ведут последовательно, при этом сухого низкомолекулярного хитозана вносят 0,1-1% к общей массе смеси, а водный раствор поливинилового спирта берут 1,5-2,5% к общей массе смеси, сушку проводят при температуре 45-55°C в течение 600-720 мин или лиофильным способом.
Способ осуществляют следующим образом.
В качестве одного из компонентов получаемого раневого покрытия для рыб, выращиваемых в искусственных условиях, выбирают хондроитинсульфат-белковый комплекс, выделенный из хрящевого сырья и представляющий собой ковалентно связанные между собой аминополисахарид хондроитинсульфат и белки группы коллагенов, усиливающих эффект устранения воспалительных заболеваний кожи рыб и являющихся естественным компонентом, способствующим восстановлению поврежденных и утраченных тканей. В настоящее время хрящевые ткани от разделки водного биологического сырья либо направляются в отходы, либо не используются, тогда как доля их в теле, например, хрящевых рыб (акулы, скаты) и хрящевых ганоидов (осетровые рыбы) доходит до 10%, а по содержанию выделенного хондроитинсульфата этот вид сырья значительно превосходит костную и хрящевую ткани сельскохозяйственных животных. Поэтому с целью выделения хондроитинсульфат-белкового комплекса берут свежую, замороженную, соленую, сушеную или законсервированную другим способом хрящевую ткань от разделки водных биологических ресурсов и подвергают ее гидролизу щелочью или ферментным препаратом с коллагенолитической активностью, например коллагеназой из гепатопанкреаса крабов или протосубтилином Г20Х. После чего выделенный хондроитинсульфат-белковый комплекс сушат до остаточного содержания воды 8-10%, вследствие чего он в конечном продукте проявит свое регенерирующее действие на кожный покров тела рыбы. Далее 1-10 г высушенного хондроитинсульфат-белкового комплекса растворяют в 100 мл дистиллированной воды. В связи с использованием конечного продукта (раневого покрытия) в агрессивных условиях водной среды, оно должно обладать прочностью, что обеспечивается за счет добавления к раствору хондроитинсульфат-белкового комплекса 1-4%-ного раствора высокомолекулярного хитозана в растворе аскорбиновой, молочной, янтарной или лимонной кислот, взятых в соотношении 1:1:1. При этом высокомолекулярный хитозан выступает в качестве связующего агента, обладающего адгезионным действием, а кроме того оказывает антидотное и антибактериальное воздействие на поврежденный участок тела рыбы при использовании полученного раневого покрытия. Используемые в смеси органические кислоты обеспечивают поддержание низкого pH на пораженной поверхности кожного покрова тела рыбы, в частности янтарная и аскорбиновая кислоты препятствуют развитию грибковых заражений на поверхности раны рыбы, что в сумме способствует ранезаживлению. Затем в качестве еще одного компонента вносят 0,1-1% к общей массе смеси сухого низкомолекулярного хитозана, позволяющего повысить иммунный статус и сопротивляемость организма рыбы различного рода внешним и внутренним факторам за счет его иммуномодулирующих и сорбционных свойств. Внесение водного раствора поливинилового спирта в количестве 1,5-2,5% к общей массе смеси обусловлено использованием его в качестве пластификатора. После подбора всех компонентов смесь тщательно перемешивают, фильтруют, разливают на стеклянные или полимерные подложки толщиной слоя 10 мм и сушат. Сушку проводят при температуре 45-55°C в течение 600-720 мин или лиофильным способом до состояния ее беспрепятственного отделения от подложки. Полученное раневое покрытие обладает оптимальными для использования в агрессивной водной среде структурно-механическими свойствами: прочностью 19 МПа, разрывным удлинением - 61% и с прозрачной, пластичной, шероховатой поверхностью. Для применения раневого покрытия рыбу извлекают из бассейна, укладывают в специальную подставку с треугольным сечением, причем голову и жабры обворачивают куском смоченной в воде хлопчатобумажной ткани. Далее раневое покрытие в виде пленки смачивают в воде и накладывают на подготовленный пораженный участок тела рыбы, разглаживая по поверхности для удаления образовавшихся пузырьков воздуха. Пленку фиксируют эластичным бинтом, номер применяемого бинта (диаметр) определятся в зависимости от размера рыбы и местонахождения раны. Пленку снимают через 5-36 часов, при необходимости процедуру повторяют с интервалом в 1-2 дня до наступления положительной динамики заживления раны.
Примеры выполнения способа.
Пример 1. Берут 2% раствор хондроитинсульфат-белкового комплекса в количестве 35% к общей массе смеси, выделенный из хрящевой ткани катрана (Squalus acanthias), путем щелочного гидролиза, кроме того 62,5% к общей массе смеси 2%-ного раствора высокомолекулярного хитозана в растворе аскорбиновой, молочной, янтарной или лимонной кислот, взятых в соотношении 1:1:1, добавляют сухой низкомолекулярный хитозан и водный раствор поливинилового спирта, при этом смешивание компонентов ведут последовательно. Сухого низкомолекулярного хитозана вносят в количестве 0,5% к общей массе смеси, а водный раствор поливинилового спирта - 2% к общей массе смеси, далее все компоненты последовательно перемешивают и сушат при температуре 45°C в течение 720 мин. Полученная пленка имеет прочность 18 МПа, разрывное удлинение 41%, матовую шероховатую поверхность, высокую адгезию. При нанесении на пораженную поверхность хорошо удерживается и способствует активному ранезаживлению, препятствуя при этом развитию грибка сапролегнии.
Пример 2. Выполняется аналогично примеру 1, за исключением того, что раствор хондроитинсульфат-белкового комплекса берут в количестве 40% к общей массе смеси и перемешивают с 4%-ным раствором высокомолекулярного хитозана в растворе аскорбиновой, молочной, янтарной или лимонной кислот, взятых в соотношении 1:1:1, взятый в количестве 57,5% к общей массе смеси, при этом сухого низкомолекулярного хитозана вносят 1% к общей массе смеси, а водный раствор поливинилового спирта берут 1,5% к общей массе смеси, сушку проводят при температуре 50°C в течение 675 мин. Полученная пленка имеет прочность 19 МПа, разрывное удлинение 61% и прозрачную поверхность.
Пример 3. Выполняется аналогично примеру 1, за исключением того, что берут 4% раствор хондроитинсульфат-белкового комплекса в количестве 10% к общей массе смеси, выделенный из хрящевого сырья путем щелочного или ферментативного гидролиза, 3%-ный раствор высокомолекулярного хитозана в растворе аскорбиновой, молочной, янтарной или лимонной кислот, взятых в соотношении 1:1:1, взятый в количестве 87% к общей массе смеси, а сухого низкомолекулярного хитозана вносят 1% к общей массе смеси, водный раствор поливинилового спирта берут 2% к общей массе смеси, сушку проводят при температуре 55°C в течение 600 мин. Полученная пленка имеет прочность 38 МПа, разрывное удлинение 27%, прозрачную поверхность, высокую адгезию. При нанесении на пораженную поверхность способствует ускоренному ранезаживлению и препятствует развитию грибка сапролегнии.