УСОВЕРШЕНСТВОВАННЫЙ СПОСОБ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ КЛЕТОК

1. Способ получения рекомбинантного полипептида, включающий культивирование клеток СНО в среде при условиях, включающих в себя, по крайней мере, один температурный сдвиг и, по крайней мере, один сдвиг pH, и экспрессирование рекомбинантного полипептида, где
- выращивание клеток осуществляют при первой температуре в течение, по крайней мере, 3 дней, с последующим изменением температуры до второй температуры, которая на около 1 - около 8°C ниже первой температуры, причем клетки поддерживают при указанной второй температуре в течение, по крайней мере, еще 2 дней;
- выращивание клеток осуществляют при первом значении рН, по крайней мере, 2 дня, и рН с последующим изменением до второго значения рН, которое на около 0,05 - около 1 единицы рН ниже первого рН, причем клетки выращивают при указанном втором pH, по крайней мере, 1 день.
2. Способ по п.1, где pH активно изменяют между указанным первым и указанным вторым pH.
3. Способ по любому из предшествующих пунктов, где pH пассивно изменяют между указанным первым и указанным вторым значением рН.
4. Способ по п.1, где первая температура находится в диапазоне от около 33°C до примерно 38°C.
5. Способ по п.1, где вторая температура находится в диапазоне от около 30°C до примерно 37°C.
6. Способ по п.1, где первое значение рН находится в диапазоне от около pH 6,8 до примерно pH 7,5.
7. Способ по п.1, где второе значение рН находится в диапазоне от около pH 6,0 до примерно pH 7,1.
8. Способ по п.1, где указанное второе значение pH активно поддерживают до окончания культивирования.
9. Способ по п.1, где за первым сдвигом pH следует второй сдвиг pH через, по крайней мере, 1 день с третьим значением pH, превышающим второе значение pH на около 0,05 единицы рН - около 1 единицы pH.
10. Способ по п.9, где pH активно изменяют от указанного второго к указанному третьему значению pH.
11. Способ по п.9, где pH пассивно изменяют от указанного второго к указанному третьему значению pH.
12. Способ по п.1, где среда не содержит белков и сыворотки и характеризуется общим содержанием аминокислот от около 40 до примерно 100 мМ.
13. Способ по п.1, где культивирование осуществляют способом с подпиткой, включающим питание, по крайней мере, двумя питательными растворами, которые добавляются к культуре.
14. Способ по п.13, где один из питательных растворов, добавленных к культуральной среде, представляет собой питательный материал, содержащий дипептид цистин и аминокислоту тирозин.
15. Способ по п.14, где питательный материал содержит дипептид цистин и аминокислоту тирозин в соответствующих концентрациях в диапазоне от около 6,5 г/л до примерно 8,0 г/л и в диапазоне от около 9 г/л до примерно 11 г/л в водном растворе с щелочным рН выше 10.
16. Способ по любому из пп.14 и 15, где количество питательного раствора, содержащего цистин и тирозин, добавляют в культуральную среду в диапазоне от около 0,2 до примерно 0,8% мас. первоначальной массы культуральной среды в день.
17. Способ по п.1, где продуцируемый полипептид является гликозилированным.
18. Способ по п.1, где полипептид представляет собой антитело или фрагмент антитела.