ТРЕХМЕРНЫЙ ЭКВИВАЛЕНТ ТКАНИ С ПРИМЕНЕНИЕМ КУЛЬТУРЫ МАКРОМАССЫ

1. Трехмерный несокращающийся эквивалент ткани, содержащий:
a) клеточный слой макромассы высокой плотности, содержащий клетки дермальных фибробластов; и
b) подложку из пористого каркаса или матрикса,
где клеточный слой макромассы полностью прикреплен только к одной стороне пористого каркаса или матрикса,
где пористый каркас или матрикс содержит поры, которые не контактируют с клеточным слоем макромассы,
где поры не содержат в себе клеток или жидкого или твердого вещества, и
где клеточный слой макромассы не сокращается относительно его исходного размера.
2. Эквивалент ткани по п.1, где клетки дермальных фибробластов включают клетки неонатальных дермальных фибробластов человека.
3. Эквивалент ткани по п.1, где пористый каркас или матрикс представляет собой губчатую или пенистую структуру.
4. Эквивалент ткани по п.1, где пористый каркас или матрикс включает вещество, выбранное из хитозана, коллагена, полигликолевой кислоты и полимолочной кислоты.
5. Эквивалент ткани по п.1, где клетки в клеточном слое макромассы экспрессируют VEGF в количестве, способном индуцировать ангиогенез в ране.
6. Эквивалент ткани по п.1, где клетки в клеточном слое макромассы экспрессируют IL-8 в количестве, способном к рекрутированию нейтрофилов в рану.
7. Эквивалент ткани по п.1, где клетки в клеточном слое макромассы экспрессируют, по меньшей мере, один ген, кодирующий белок, выбранный из трансформирующего фактора роста β1 (TGF-β1), фактора роста кератиноцитов (KGF), основного фактора роста фибробластов (bFGF), трансформирующего фактора роста α (TGFα), производного фактора роста тромбоцитов (PDGF), коллагена типа I и коллагена типа III.
8. Эквивалент ткани по п.1, где толщина пористого каркаса или матрикса не препятствует диффузии факторов роста.
9. Эквивалент ткани по п.1, где, по меньшей мере, 98% клеток не экспрессируют поверхностный белок HLA-DR.
10. Эквивалент ткани по п.1, где клетки дермальных фибробластов, по меньшей мере, на 90% жизнеспособны в течение до 72 ч при 2-8°C.
11. Способ лечения раны на коже, включающий нанесение на рану эквивалента ткани по п.1.
12. Способ по п.11, где способ дополнительно включает прямой контакт клеточного слоя макромассы с раной и перенос клеток из клеточного слоя макромассы в рану.
13. Способ по п.11, где рана представляет собой язву.
14. Способ тестирования безопасность противоракового соединения, включающий приведение соединения в контакт с эквивалентом ткани по п.1 и проверку жизнеспособности клеток в клеточном слое макромассы.
15. Способ получения трехмерного несокращающегося эквивалента ткани, содержащего клеточный слой макромассы клеток дермальных фибробластов, присоединенный к пористому каркасу или матриксу, где способ включает:
a) абсорбцию жидкого блокирующего средства в поры пористого каркаса или матрикса,
b) затвердевание блокирующего средства;
c) культивирование клеток дермальных фибробластов на поверхности пористого каркаса или матрикса с формированием многослойного клеточного слоя макромассы высокой плотности; и
d) разжижение и удаление блокирующего средства.
16. Способ по п.15, где этап культивирования включает культивирование клеток дермальных фибробластов макромассы только на одной стороне пористого каркаса или матрикса.
17. Способ по п.15, где клетки дермальных фибробластов включают клетки неонатальных дермальных фибробластов человека.
18. Способ по п.15, где блокирующее средство включает вещество, выбранное из желатина, альгината, пектина, агара и агарозы.
19. Способ по п.15, где пористый каркас или матрикс включает вещество, выбранное из хитозана, коллагена, полигликолевой кислоты и полимолочной кислоты.
20. Способ по п.15, где клетки дермальных фибробластов не теряются посредством вытекания через поры пористого каркаса или матрикса при этапе культивирования.
6
6
2
6
2
21. Способ по п.15, где при этапе культивирования на пористый каркас или матрикс высевают, по меньшей мере, 20·10 клеток дермальных фибробластов, и где клеточный слой макромассы обладает клеточной плотностью от 1·10 клетки на см до 12·10 клеток на см пористого каркаса или матрикса.
22. Способ по п.15, где клетки в клеточном слое макромассы экспрессируют VEGF и/или IL-8 в количестве, большем, чем могли бы экспрессировать эти же клетки в монослое с тем же диаметром, что и клеточный слой макромассы.