ПТЕРИДИНЫ, ПОЛЕЗНЫЕ В КАЧЕСТВЕ ИНГИБИТОРОВ HCV, И СПОСОБЫ ПОЛУЧЕНИЯ ПТЕРИДИНОВ
PTERIDINES EFFECTIVE AS HCV INHIBITORS AND METHODS FOR PRODUCING PTERIDINES

Настоящее изобретение касается использования птеридинов в качестве ингибиторов репликации HCV, а также использования указанных соединений в фармацевтических композициях, предназначенных для лечения или борьбы с HCV-инфекциями. Кроме того, настоящее изобретение касается соединений, как таковых, и применения указанных соединений в виде лекарственных препаратов. Настоящее изобретение также относится к способам получения таких соединений, фармацевтическим композициям, включающим указанные соединения, и комбинациям указанных соединений с другими средствами против HCV.
После открытия в 1989, как агента, вовлеченного в большинство вирусных гепатитов, не относящихся к A и B (Choo et al., Science 244, 359-362, 1989), вирус гепатита C (HCV) оказался в центре внимания разнообразных медицинских исследований (Lauer G.M and Walker B.D., New Eng. J Med. 345, 41-52, 2001). HCV является членом семейства Flaviviridae вирусов рода hepacivirus и близкородственным роду flavivirus, включающему ряд вирусов, вовлеченных в болезни человека, таких как вирус денге и вирус желтой лихорадки, и семейству pestivirus животных, включающему вирус диареи крупного рогатого скота (BVDV). HCV является позитивно-чувствительным вирусом с однонитевой РНК и геномом приблизительно из 9600 оснований. Геном включает как 5', так и 3' нетранслируемые области, которые заимствуют вторичные структуры РНК, и центральную открытую рамку считывания, которая кодирует один полипротеин, приблизительно из 3010-3030 аминокислот. Полипротеин кодирует десять генных продуктов, генерируемых из предшествующего полипротеина путем организованных серий ко- и посттрансляционных эндопротеолитических расщеплений, опосредованных протеазами как хозяина, так и вируса. Вирусные структурные белки включают нуклеокапсидный белок сердцевины и два гликопротеина оболочки, E1 и E2. Неструктурные (NS) белки кодируют некоторые незаменимые вирусные ферментативные функции (геликаза, полимераза, протеаза), также как и белки неустановленной функции. Репликация вирусного генома опосредована РНК-зависимой ДНК-полимеразой, кодируемой неструктурным белком 5b (NS5B). На моделях инфекции у шимпанзе доказано, что в дополнение к полимеразе функции вирусной геликазы и протеазы, которые обе кодированы бифункциональным белком NS3, необходимы для репликации РНК HCV (Kolykhalov A.A., Mihalik K., Feinstone, S.M. and Rice, C.M. J Virol. 74, 2046-2051, 2000). Кроме NS3-серинпротеазы HCV также кодирует металлпротеиназу в области NS2.
HCV реплицируется преимущественно в гепатоцитах, но не является полностью цитопатическим, приводящим к персистентной инфекции. В частности, отсутствие мощного отклика T-лимфоцитов и высокая склонность вируса к мутации способствуют, по-видимому, высокой скорости хронической инфекции. Существует 6 основных генотипов HCV и свыше 50 субтипов, которые различно распределены географически. HCV типа 1 является доминирующим генотипом в США и Европе. Например, HCV типа 1 составляет до 70-75 процентов от всех HCV-инфекций в Соединенных Штатах. Экстенсивная генетическая неоднородность HCV имеет важные диагностические и клинические проявления, возможно, объясняющие трудности в разработке вакцины и отсутствие ответа на лечение. Приблизительно 170 миллионов людей во всем мире заражено вирусом гепатита C (HCV). Следом за первичной острой инфекцией у большинства зараженных больных развивается хронический гепатит, который может прогрессировать до фиброза печени, приводящего к циррозу, конечной стадии заболевания печени и HCC (гепатоцеллюлярной карциноме) (National Institutes of Health Consensus Development Conference Statement: Management of Hepatitis C. Hepatology, 36, 5 Suppl. S3-S20, 2002). Цирроз печени, обусловленный HCV-инфекцией, является причиной порядка 10000 смертей в год только в США и служит поводом для пересадки печени. Передача HCV может осуществляться при контакте с зараженной кровью или продуктами крови, например после переливания крови или внутривенного введения лекарственного препарата. Введение диагностических тестов, используемых в скрининге крови, привело к тенденции снижения посттрансфузионного распространения HCV. Однако если учесть медленное прогрессирование до конечной стадии заболевания печени, уже имеющиеся инфекции будут продолжать вызывать проблемы, связанные с серьезной лекарственной нагрузкой, и представлять собой тяжелое экономическое бремя на протяжении десятков лет (Kim W.R. Hepatology, 36, 5 Suppl. S30-S34, 2002).
Лечение данного хронического заболевания не удовлетворяет клинические потребности, поскольку существующая в настоящее время терапия лишь частично эффективна и ограничивается нежелательными побочными эффектами.
Современная HCV-терапия основана на (пегилированном) альфа-интерфероне (IFN-α) в комбинации с рибавирином. Такая комбинированная терапия вызывает устойчивый вирусологический отклик более чем у 40% пациентов, инфицированных вирусом генотипа 1, и порядка 80% пациентов, инфицированных вирусом генотипов 2 и 3. Помимо ограниченной эффективности в отношении HCV типа 1, комбинированная терапия имеет значительные побочные эффекты и плохо переносится многими пациентами. Например, согласно регистрационным протоколам испытаний пегилированного интерферона и рибавирина значительные побочные эффекты приводят к прекращению лечения приблизительно 10-14 процентов пациентов. Основные побочные эффекты комбинированной терапии включают симптомы, подобные гриппозным, гематологические нарушения и нейропсихиатрические симптомы. Разработка более эффективных, удобных и лучше переносимых лечений является основной задачей здравоохранения.
Итак, существует значительная потребность медицины в низкомолекулярных соединениях, приводящих к ингибированию HCV-репликация.
Неожиданно было обнаружено, что производные птеридинов обладают антивирусной активностью в отношении млекопитающих, зараженных HCV, в частности такие производные ингибируют репликацию HCV. Указанные соединения полезны, таким образом, в лечении или борьбе с HCV-инфекциями.
US 20040038856 описывает способы лечения фибропролиферативных нарушений, связанных с передачей сигнала TGF-β, путем введения непептидных низкомолекулярных ингибиторов TGF-β, специфически связывающих TGF-β-рецептор типа I (TGF-β-R1). Ингибиторы являются преимущественно хиназолиновыми производными.
WO 04/048930 дополнительно описывает способы противодействия потери β-адренергической чувствительности в β-адренергическом пути сигнальной трансдукции посредством введения эффективного количества соединения, способного к ингибированию передачи TGF-β сигнала через TGF-β-рецептор.
WO 04/065392 касается конденсированных пиридинов и пиримидинов и применения указанных соединений в качестве лигандов ALK-5-рецептора. В частности, изобретение описывает терапевтически активные замещенные хинолиновые и хиназолиновые соединения, применение указанных соединений в терапии, в особенности в лечении или профилактике нарушений, характеризующихся сверхпродукцией трансформирующего фактора роста β (TGF-β), и фармацевтические композиции для применения в указанной терапии.
После первоначального воздействия вируса гепатита C РНК HCV может быть обнаружена в крови через 1-3 недели. В среднем за 50 дней практически у всех пациентов развивается нарушение клеток печени. Большинство пациентов является бессимптомным и безжелтушным. Только у 25-35 процентов обнаруживается недомогание, слабость или потеря аппетита, и некоторые становятся желтушными. Антитела к HCV (анти-HCV) почти всегда могут быть обнаружены во время болезни. Анти-HCV могут быть обнаружены у 50-70 процентов пациентов в начале проявления симптомов и приблизительно у 90 процентов пациентов через 3 месяца после возникновения инфекции. HCV-инфекция проходит без лечения только в 15 процентах случаев. Возвращение к норме характеризуется исчезновением РНК HCV в крови и возвращением ферментов печени к норме.
Около 85 процентов HCV-инфицированных больных не может освободиться от вируса в течение 6 месяцев и развивается хронический гепатит с персистентной, хотя иногда интермиттирующей вирусемией. Такая способность продуцировать хронический гепатит является одной из наиболее поразительных особенностей HCV-инфекции. Хронический гепатит C является обычно постепенно развивающимся процессом, прогрессирующим, если это и происходит, с низкой скоростью без симптомов или физических признаков у большинства пациентов в течение первых двух декад после заражения. Симптомы впервые появляются у многих пациентов с хроническим гепатитом C во время развития запущенного заболевания печени.
При хроническом гепатите клетки зоны воспаления инфильтрируют портальные каналы и могут также собираться в небольшие кластеры в паренхиме. Последний случай обычно сопровождается фокальным некрозом клеток печени. Краевая зона паренхимы и портальных каналов может стать воспаленной при наличии некроза клеток печени на этом участке (гепатит каймы). Если и когда болезнь прогрессирует, воспаление и гибель клеток печени могут приводить к фиброзу. Легкая форма фиброза не распространяется за пределы портальных каналов и непосредственно примыкающей паренхимы. Более тяжелая форма фиброза приводит к образованию мостиков между портальными каналами и между портальными каналами и печеночными венами. Такой фиброз может прогрессировать до цирроза, определяемого как состояние диффузного фиброза, при котором фиброзная септа выделяет кластеры клеток печени в узелки. Размер фиброза определяет стадию заболевания и легко может быть определен. Тяжелая форма фиброза и некротические воспалительные изменения предваряют прогрессирование до цирроза. Когда цирроз установлен, могут следовать осложнения, которые являются вторичными по отношению к печеночной недостаточности и/или портальной гипертензии, такие как разлитие желчи, асцит, кровотечение из варикозно расширенных вен и энцефалопатия. Развитие любого из указанных осложнений означает переход от компенсированного до декомпенсированного цирроза.
Инфекция хронического гепатита C приводит к циррозу, по меньшей мере, у 20 процентов пациентов за 2 декады от момента заражения. Цирроз и конечная стадия заболевания печени иногда могут развиваться быстро, в особенности, у пациентов с сопутствующим алкоголизмом. Хроническая инфекция, обусловленная HCV, связана с повышенным риском рака печени. Основополагающий принцип состоит в том, что гепатоцеллюлярная карцинома (HCC) проявляется наряду с фоновым воспалением, и регенерация, связанная с хроническим гепатитом, продолжается приблизительно 3 или более декад. В большинстве случаев HCV-вызванная HCC наблюдается в присутствии цирроза.
Фиброз печени является одним из процессов, который происходит, когда поражается печень. Такое поражение может быть результатом действия вируса (например, хронический гепатит типа B или C) или других печеночных инфекций (например, паразиты, бактерии); химических веществ (например, фармацевтических препаратов, рекреационных наркотиков, чрезмерного количества спирта, воздействия загрязнителей окружающей среды); иммунных процессов (например, аутоиммунный гепатит); нарушений обмена веществ (например, липидные, гликогеновые нарушения или нарушения, вызванные аккумуляцией металлов) или роста карциномы (первичной или вторичной печеночной карциномы). Фиброз является как признаком поражения печени, так и потенциальным фактором, способствующим печеночной недостаточности, через нарастающий цирроз печени.
Установлено, что ингибирование семейства киназ TGFв полезно при лечении фибропролиферативных нарушений, включающих фиброз печени. Однако, как указано выше, фиброз печени может быть вызван различными этиологическими агентами, включая вирус гепатита C. Что наиболее важно, фиброз печени является специфическим состоянием в прогрессировании болезни пациентов, инфицированных HCV.
Неожиданно было установлено, что соединения по настоящему изобретению ингибируют репликацию HCV. HCV-репликация означает процесс репродуцирования или создания копий РНК HCV. Применительно к данному изобретению репликация HCV означает как репликацию вируса HCV в целом, так и репликацию генома РНК HCV.
Важно проводить лечение зараженных HCV пациентов на ранних стадиях, чтобы избежать прогрессирования болезни, что позволяет, таким образом, избежать развития хронического гепатита, фиброза печени, цирроза, гепатоцеллюлярной карциномы (HCC) или гибели.
Кроме того, соединения по изобретению ценны тем, что могут снижать HCV-вирусную нагрузку пациента до неопределяемых уровней.
Описание чертежей
Фиг.1 иллюстрирует средние концентрации в плазме и тканях (n=3) соединения №21 после однократного перорального введения при 20 мг основ.-экв./кг самцам мышей Swiss SPF (CD1).
Описание изобретения
Таким образом, настоящее изобретение касается применения соединения формулы (I) для изготовления лекарственного препарата, пригодного для ингибирования HCV-активности в организме млекопитающих, инфицированных HCV. Указанное соединение представляет собой птеридин формулы (I):
N
его -оксид, соль, стереоизомер, рацемическую смесь, пролекарство, сложный эфир или метаболит, где
1
1-6
2-6
R независимо означает водород, амино, моно- или дизамещенный амино, где заместитель (заместители) амино могут быть выбраны из группы, включающей Cалкил, Cалкенил,
2-6
1-4
1-4
1-4
1-4
1-4
1-6
1-4
1-4
Cалкинил, CалкоксиCалкил, диCалкиламиноCалкил, пиперидин-1-илCалкил, арилCалкил, где арильная группа дополнительно может быть замещена Cалкилом или Cалкокси;
8
8
8
8
1-6
1-6
2
1-6
1-6
L означает -NR-, -NR-Cалкандиил-, -NR-CO-Cалкандиил-, -NR-SO-Cалкандиил-, -O-, -O-Cалкандиил-, -O-CO-,
1-6
1-6
-O-CO-Cалкандиил-, -S-, -S-Cалкандиил- или
1
где цикл, обозначенный пунктирной линией, вместе с N и Z образует Het цикл, содержащий 5-8 членов, включая циклические члены N и Z, и где указанный L цикл присоединен к птеридиновому циклу посредством атомом азота;
Z означает N или CH;
2
1
2
1
2
1-6
3-7
3-7
1-4
R означает водород, гидроксиCалкил, Cциклоалкил, арил, Het или Het, где каждый Cциклоалкил, арил, Het и Het независимо необязательно замещен одним или несколькими заместителями, выбранными из группы, включающей Cалкил,
2-4
2-4
1-4
2
2
3
6
7
4a
4b
7
6
4a
4b
4a
4b
4a
6
4a
4a
4b
4a
5
4a
5
5
7
5
7
Cалкенил, Cалкинил, полигалогенCалкил, галоген, циано, нитро, -COR, -COOR, -CONRR, -OR, -OCOR, -OCONRR, -NRR, -NRCOR, -NRCONRR, -NRSOR, -NRSOR, -SR, -SOR, -SOR, -SOR,
2
1-4
4a
4b
7
-SONRR, морфолин-4-ил, фенил, аминофенил и аминофенилкарбонил, и где Cалкил может быть дополнительно замещен -COOR;
3
1
2
2
6
7
1-6
3-7
1-6
1-6
1-4
2-4
2-4
1-4
R означает Cалкил, Cциклоалкил, арил, арилCалкил, Het, Het или Het-Cалкил, каждый из которых независимо необязательно замещен одним или несколькими заместителями, выбранными из группы, включающей Cалкил, Cалкенил, Cалкинил, полигалогенCалкил, галоген, циано, нитро, -COR, -COOR,
4a
4b
7
6
4a
4b
4a
4b
4a
6
4a
7
4a
4a
4b
4a
5
4a
5
5
7
5
7
4a
4b
4a
4b
2
2
3
2
-CONRR, -OR, -OCOR, -OCONRR, -NRR, -NRCOR, -NRCOOR, -NRCONRR, -NRSOR, -NRSOR, -SR, -SOR, -SOR, -SOR, -SONRR; и где R и R могут необязательно образовывать вместе с атомом азота, с которым связаны, 5-8-членный насыщенный, ненасыщенный или частично ненасыщенный цикл, необязательно содержащий один или два дополнительных гетероатома;
4a
4b
1
1-4
1-4
1-4
1-4
каждый из R и R независимо означает водород, Cалкил, гидроксиCалкил, HetCалкил, полигалогенCалкил, циано или нитро;
5
1-4
каждый из R независимо означает водород или Cалкил;
6
1-4
каждый из R независимо означает водород или Cалкил;
7
1-4
каждый из R независимо означает водород или Cалкил и
8
1-10
2-10
2-10
R означает водород, Cалкил, Cалкенил, Cалкинил,
1-10
1-10
Cалкилкарбонил, аминоCалкил, арил, арилкарбонил,
1-10
1-6
1-4
2-4
2-4
1-4
1-4
1
1
арилCалкил, Het, HetCалкил или защитную группу, где арил необязательно замещен 1-3 заместителями, выбранными из группы, включающей Cалкил, Cалкенил, Cалкинил, Cалкилкарбонил, фенил, Cалкилфенил, фенилкарбонил, аминофенил,
1-4
6
4a
4b
аминоCалкилфенил, аминофенилкарбонил, галоген, -OR, -NRR,
5
5
4a
5
4a
5
5
6
4a
6
2
2
-SR, -SOR, -NRSOR, -NRSOR, -SOR, -OCOR, -NRCOR,
4a
4a
4b
4a
6
4a
4b
6
6
4a
4b
3
-NRCONRR, -NRCOOR, -OCONRR, -COOR, -SOR, -CONRR,
2
1-4
4a
4b
-SONRR, циано, полигалогенCалкил и нитро;
1
1-6
Het в качестве группы или части группы означает насыщенный или ненасыщенный моноциклический, бициклический или трициклический гетероцикл, имеющий предпочтительно 3-12 членов в цикле, желательно 5-10 членов в цикле и более предпочтительно 5-8 членов в цикле, который содержит в качестве членов цикла один или несколько гетероатомов, выбранных из группы, включающей азот, кислород или серу, и который необязательно замещен по одному или нескольким атомам углерода заместителями, выбранными из группы, включающей Cалкил,
1-6
1-4
1-6
3-7
1-4
Cалкокси, галоген, гидрокси, оксо, необязательно моно- или дизамещенный амино, нитро, циано, полигалогенCалкил, карбоксил, Cалкоксикарбонил, Cциклоалкил, необязательно моно- или дизамещенный аминокарбонил, метилтио, метилсульфонил, арил и насыщенный или частично ненасыщенный моноциклический, бициклический или трициклический гетероцикл, имеющий 3-12 членов в цикле, который содержит в качестве членов цикла один или несколько гетероатомов, выбранных из группы, включающей азот, кислород или серу, и при этом необязательными заместителями на любой амино- функции являются водород или Cалкил;
2
1
1-6
1-6
1-6
1-6
1-4
1-6
3-7
1-4
Het в качестве группы или части группы означает ароматический моноциклический, бициклический или трициклический гетероцикл, имеющий 3-14 членов в цикле, предпочтительно 5-10 членов в цикле и более предпочтительно 5-6 членов в цикле, который содержит в качестве членов цикла один или несколько гетероатомов, каждый из которых независимо выбирают из группы включающей азот, кислород или серу, и который необязательно замещен по одному или нескольким атомам углерода заместителями, выбранными из группы, включающей Cалкил, необязательно моно- или дизамещенный аминоCалкил, гидроксиCалкил, Cалкокси, галоген, гидрокси, необязательно моно- или дизамещенный амино, нитро, циано, полигалогенCалкил, карбоксил, Cалкоксикарбонил, Cциклоалкил, необязательно моно- или дизамещенный аминокарбонил, метилтио, метилсульфонил, арил, Het и ароматический моноциклический, бициклический или трициклический гетероцикл, имеющий 3-12 членов в цикле, при этом необязательными заместителями на любой аминофункции являются водород или Cалкил; и
арил в качестве группы или части группы, означает фенил.
Настоящее изобретение касается также применения соединения формулы (II) для изготовления лекарственного препарата, пригодного для ингибирования HCV-активности в организме млекопитающего, инфицированного HCV. Указанное соединение представляет собой птеридин формулы (II):
N
1
3
4a
4b
5
6
7
8
1
2
его-оксид, соль, стереоизомер, рацемическую смесь, пролекарство, сложный эфир или метаболит, где R, R, R, R, R, R, R, R, Het и Het имеют вышеуказанные значения; где
9
6
7
4a
4b
7
6
1-4
2-4
2-4
1-4
R означает Cалкил, Cалкенил, Cалкинил, полигалогенCалкил, галоген, циано, нитро, -COR, -COOR, -CONRR, -OR, -OCOR,
4a
4b
4a
4b
4a
6
4a
4a
4b
4a
5
4a
5
5
7
5
7
4a
4b
7
2
2
3
2
1-4
-OCONRR, -NRR, -NRCOR, -NRCONRR, -NRSOR, -NRSOR, -SR, -SOR, -SOR, -SOR, -SONRR, морфолин-4-ил, фенил, аминофенил или аминофенилкарбонил и где Cалкил может быть дополнительно замещен -COOR; и
n равно 0, 1, 2, 3 или 4.
Настоящее изобретение касается также применения соединения формулы (III) для изготовления лекарственного препарата, пригодного для ингибирования HCV-активности в организме млекопитающего, инфицированного HCV. Указанное соединение представляет собой птеридин формулы (III):
N
1
2
4a
4b
5
6
7
8
1
2
его -оксид, соль, стереоизомер, рацемическую смесь, пролекарство, сложный эфир или метаболит, где R, L, R, R, R, R, R, R, R, Het и Het имеют вышеуказанные значения; где
10
1-4
2-4
2-4
R означает Cалкил, Cалкенил, Cалкинил,
1-4
6
7
полигалогенCалкил, галоген, циано, нитро, -COR, -COOR,
4a
4b
7
6
4a
4b
4a
4b
4a
6
4a
7
4a
4a
4b
4a
5
4a
5
5
7
5
7
2
2
3
-CONRR, -OR, -OCOR, -OCONRR, -NRR, -NRCOR, -NRCOOR, -NRCONRR, -NRSOR, -NRSOR, -SR, -SOR, -SOR, -SOR и
2
4a
4b
-SONRR и
m равно 0, 1, 2, 3 или 4.
Настоящее изобретение касается также применения соединения формулы (IV) для изготовления лекарственного препарата, пригодного для ингибирования HCV-активности в организме млекопитающего, инфицированного HCV. Указанное соединение представляет собой птеридин формулы (IV):
N
1
4a
4b
5
6
7
8
1
2
его -оксид, соль, стереоизомер, рацемическую смесь, пролекарство, сложный эфир или метаболит, где R, R, R, R, R, R, R, Het и Het имеют вышеуказанные значения; где
9
1-4
2-4
2-4
R означает Cалкил, Cалкенил, Cалкинил,
1-4
6
7
полигалогенCалкил, галоген, циано, нитро, -COR, -COOR,
4a
4b
7
6
4a
4b
4a
4b
4a
6
-CONRR, -OR, -OCOR, -OCONRR, -NRR, -NRCOR,
4a
4a
4b
4a
5
4a
5
5
7
5
7
2
2
3
-NRCONRR, -NRSOR, -NRSOR, -SR, -SOR, -SOR, -SOR,
2
1-4
4a
4b
7
-SONRR, морфолин-4-ил, фенил, аминофенил или аминофенилкарбонил, и где Cалкил может быть дополнительно замещен -COOR;
10
1-4
2-4
2-4
R означает Cалкил, Cалкенил, Cалкинил,
1-4
6
7
полигалогенCалкил, галоген, циано, нитро, -COR, -COOR,
4a
4b
7
6
4a
4b
4a
4b
4a
6
4a
7
4a
4a
4b
4a
5
4a
5
5
7
5
7
4a
4b
2
2
3
2
-CONRR, -OR, -OCOR, -OCONRR, -NRR, -NRCOR, -NRCOOR, -NRCONRR, -NRSOR, -NRSOR, -SR, -SOR, -SOR, -SOR и -SONRR;
n равно 0, 1, 2, 3 или 4 и
m равно 0, 1, 2, 3 или 4.
Настоящее изобретение касается также применения соединения формулы (V) для изготовления лекарственного препарата, пригодного для ингибирования HCV-активности в организме млекопитающего, инфицированного HCV. Указанные соединения представляют собой птеридины формулы (V):
его соль, стереоизомер и рацемическую смесь, где
1
R означает водород или амино;
8
1-6
1-4
1-4
1-4
1-6
R означает водород, Cалкил, аминоCалкил, фенилCалкил, пирролидин-1-илCалкил или Cалкоксикарбонил;
9
6
7
4a
4b
1-4
каждый из R означает независимо водород, Cалкил, -COR, -COOR или -CONRR;
n равно 0, 1, 2, 3 или 4;
11
4a
4b
4a
4b
R означает водород, галоген или -NRR, где R и R могут необязательно образовывать вместе с атомом азота, с которым связаны, 5-8-членный насыщенный, ненасыщенный или частично ненасыщенный цикл, необязательно содержащий один или два дополнительных гетероатома;
12
1-4
R означает водород, галоген, Cалкил или
1-4
полигалогенCалкил;
6
1-4
R означает водород или Cалкил;
7
1-4
R означает водород или Cалкил и
4a
4b
1-4
1-4
R и R независимо означают водород, Cалкил, 2-оксопирролидин-1-илCалкил.
Один из вариантов осуществления касается применения соединений вышеуказанных формул (II), (IV) или (V), где n равно 1.
По другому аспекту изобретение касается способа ингибирования HCV-репликации в организме млекопитающего, инфицированного HCV, указанный способ включает введение HCV-ингибирующего эффективного количества соединения формулы (I), (II), (III), (IV) или (V), как указано выше или определено здесь в дальнейшем. В заслуживающем особого внимания варианте осуществления способ ингибирования HCV-репликации в организме млекопитающего, инфицированного HCV, включает введение HCV-ингибирующего эффективного количества соединения формулы (II), (IV) или (V), где n равно 1.
Согласно другому аспекту изобретение касается способа лечения млекопитающего, инфицированного HCV, указанный способ включает введение HCV-ингибирующего эффективного количества соединения формулы (I), (II), (III), (IV) или (V), как указано выше или определено здесь в дальнейшем. В заслуживающем особого внимания варианте осуществления способ лечения млекопитающего, инфицированного HCV, включает введение HCV-ингибирующего эффективного количества соединения формулы (II), (IV) или (V), где n равно 1.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение касается применения соединения формулы (VI) для изготовления лекарственного препарата для ингибирования HCV-репликации в организме млекопитающего, инфицированного HCV. Указанное соединение представляет собой птеридин формулы (VI):
1
8
9
11
12
6
его соль, стереоизомер и рацемическую смесь, где R, R, R, R, R, R имеют вышеуказанные значения.
В еще одном варианте осуществления настоящее изобретение касается способа ингибирования HCV-репликации в организме млекопитающего, инфицированного HCV, указанный способ включает введение HCV-ингибирующего эффективного количества соединения формулы (VI), как указано выше или определено здесь в дальнейшем.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение касается способа лечения млекопитающего, инфицированного HCV, указанный способ включает введение HCV-ингибирующего эффективного количества соединения формулы (VI), как указано выше или определено здесь в дальнейшем.
Дальнейшие дополнительные варианты осуществления изобретения касаются применения соединений формул (V) или (VI) для изготовления лекарственного препарата для ингибирования HCV-репликации в организме млекопитающего, инфицированного HCV. Указанные соединения представляют собой птеридины формулы (V) или (VI), где приемлемое значение n равно 1 и
1
R означает водород или амино;
8
1-6
1-4
R означает водород, Cалкил, фенилCалкил;
9
6
7
4a
4b
1-4
R означает водород, Cалкил, -COR, -COOR или -CONRR;
11
R означает водород, фтор или пирролидин-1-ил;
12
1-4
1-4
R означает галоген, Cалкил или полигалогенCалкил;
6
1-4
R означает водород или Cалкил;
7
1-4
R означает водород или Cалкил и
4a
4b
1-4
1-4
R и R независимо означают водород, Cалкил, 2-оксопирролидин-1-илCалкил.
1
8
9
11
12
Другие варианты осуществления изобретения касаются способа ингибирования HCV-репликации в организме млекопитающего, инфицированного HCV, и способа лечения млекопитающего, инфицированного HCV, указанные способы включают введение HCV-ингибирующего эффективного количества соединения формулы (V) или (VI), где приемлемое значение n равно 1 и R, R, R, R, R принимают значения, указанные в приведенном выше абзаце.
Дальнейшие варианты осуществления изобретения касаются применения соединений формулы (V) или (VI) для изготовления лекарственного препарата для ингибирования HCV-репликации в организме млекопитающего, инфицированного HCV. Указанные соединения представляют собой птеридины формулы (V) или (VI), где приемлемое значение n равно 1 и
1
R означает водород;
8
1-6
1-4
R означает водород, Cалкил, фенилCалкил;
9
7
1-4
R означает водород, Cалкил или -COOR;
11
R означает фтор или пирролидин-1-ил;
12
1-4
R означает галоген или Cалкил и
7
1-4
R означает водород или Cалкил.
1
8
9
11
12
Таким образом, дальнейшие варианты осуществления изобретения касаются способа ингибирования HCV-репликации в организме млекопитающего, инфицированного HCV, и способа лечения млекопитающего, инфицированного HCV, указанные способы включают введение HCV-ингибирующего эффективного количества соединения формулы (V) или (VI), где приемлемое значение n равно 1 и R, R, R, R, R принимают значения, указанные выше.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение касается птеридина формулы (VII):
его соли, стереоизомера и рацемической смеси, где
1
R означает водород или амино;
8
1-6
1-4
R означает водород, Cалкил, фенилCалкил;
9
6
7
4a
4b
1-4
R означает водород, Cалкил, -COR, COOR или -CONRR;
6
1-4
R независимо означает водород или Cалкил;
7
1-4
каждый из R независимо означает водород или Cалкил и
4a
4b
1-4
1-4
каждый из R и R независимо означает водород, Cалкил, 2-оксопирролидин-1-илCалкил;
8
9
при условии, что когда R означает водород, R не является водородом.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение касается птеридина формулы (VII), его соли, стереоизомера и рацемической смеси, где
8
1-6
1-4
R означает Cалкил, фенилCалкил;
1
4a
4b
6
7
9
R, R, R R, R и R принимают значения, перечисленные выше.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение касается птеридина формулы (VII), его соли, стереоизомера и рацемической смеси, где
9
6
7
4a
4b
1-4
R означает Cалкил, -COR, COOR или -CONRR;
1
4a
4b
6
7
8
R, R, R R, R и R принимают значения, перечисленные выше.
В еще одном варианте осуществления настоящее изобретение касается птеридина формулы (VIII):
его соли, стереоизомера и рацемической смеси, где
1
R независимо означает водород или амино;
8
1-6
1-4
R означает водород, Cалкил, фенилCалкил;
9
6
7
4a
4b
1-4
R означает водород, Cалкил, -COR, COOR или -CONRR;
6
1-4
R независимо означает водород или Cалкил;
7
1-4
каждый из R независимо означает водород или Cалкил и
4a
4b
1-4
1-4
каждый из R и R независимо означает водород, Cалкил, 2-оксопирролидин-1-илCалкил;
8
9
при условии, что когда R означает водород, R не является водородом.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение касается птеридина формулы (VIII), его соли, стереоизомера и рацемической смеси, где
9
6
7
4a
4b
1-4
R означает Cалкил, -COR, COOR или -CONRR;
1
4a
4b
6
7
8
R, R, R, R, R и R принимают значения, перечисленные в предшествующем абзаце.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение касается птеридина формулы (VIII), его соли, стереоизомера и рацемической смеси, где
8
1-6
1-4
R означает Cалкил, фенилCалкил;
1
4a
4b
6
7
9
R, R, R, R, R и R принимают значения, перечисленные выше.
В дальнейшем варианте осуществления настоящее изобретение касается птеридина вышеуказанной формулы (VII) или (VIII), где
1
R означает водород;
8
R означает водород;
9
1-4
R означает Cалкил.
В дальнейшем варианте осуществления настоящее изобретение касается птеридина вышеуказанной формулы (VII) или (VIII), где
1
R означает водород;
8
1-6
R означает Cалкил;
9
R означает водород.
1
8
9
11
12
Способ лечения клинических состояний, вызванных HCV-инфекцией у млекопитающего, указанный способ включает введение HCV-ингибирующего эффективного количества соединения формулы (V), где R, R, R, R, R принимают указанные ниже значения.
Способ по предшествующему абзацу, где клинические состояния отличны от фиброза печени.
Соединения формул (I), (II), (III), (IV), (V), (VI), (VII) и (VIII) проявляют активность против вируса HCV и поэтому полезны в качестве лекарственного препарата и для изготовления лекарственного препарата для профилактики, лечения или подавления инфекции, клинических состояний или заболевания, вызванного HCV-инфекцией.
Соединения формул (I), (II), (III), (IV), (V), (VI), (VII) и (VIII) проявляют активность против вируса HCV и поэтому полезны в качестве лекарственного препарата и для изготовления лекарственного препарата для профилактики, лечения или подавления клинических состояний, вызванных HCV-инфекцией, иных, чем фиброз печени.
1-2
Термин "Cалкил", в качестве группы или части группы, означает линейные и разветвленные, насыщенные углеводородные радикалы с 1-2 атомами углерода, такие как, например, метил, этил и тому подобное.
1-4
1-2
Термин "Cалкил", в качестве группы или части группы, означает линейные и разветвленные, насыщенные углеводородные радикалы с 1-4 атомами углерода, такие как, например, группы, указанные для термина Cалкил, и пропил, бутил, 2-метилпропил и тому подобное.
1-6
1-4
Термин "Cалкил", в качестве группы или части группы, означает линейные и разветвленные, насыщенные углеводородные радикалы с 1-6 атомами углерода, такие как, например, группы, указанные для термина Cалкил, и пентил, гексил, 2-метилбутил, 3-метилпентил и тому подобное.
1-10
1-6
Термин "Cалкил", в качестве группы или части группы, означает линейные и разветвленные, насыщенные углеводородные радикалы с 1-10 атомами углерода, такие как, например, группы, указанные для термина Cалкил, и гептил, октил, нонил, децил и тому подобное.
2-4
2-4
Термин "Cалкенил", в качестве группы или части группы, означает линейные и разветвленные, углеводородные радикалы, имеющие насыщенные углерод-углеродные связи и, по меньшей мере, одну двойную связь и содержащие от 2 до 4 атомов углерода, такие как, например, этенил, проп-1-енил, бут-1-енил, бут-2-енил и тому подобное. Предпочтительными являются Cалкенилы с одной двойной связью.
2-6
2-4
2-6
Термин "Cалкенил", в качестве группы или части группы, означает линейные и разветвленные, углеводородные радикалы, имеющие насыщенные углерод-углеродные связи и, по меньшей мере, одну двойную связь и содержащие от 2 до 6 атомов углерода, такие как, например, группы, указанные для термина Cалкенил, и пент-1-енил, пент-2-енил, гекс-1-енил, гекс-2-енил, гекс-3-енил, 1-метилпент-2-енил и тому подобное. Предпочтительными являются Cалкенилы с одной двойной связью.
2-10
2-6
2-10
Термин "Cалкенил", в качестве группы или части группы, означает линейные и разветвленные, углеводородные радикалы, имеющие насыщенные углерод-углеродные связи и, по меньшей мере, одну двойную связь и содержащие от 2 до 10 атомов углерода, такие как, например, группы, указанные для термина Cалкенил, и гепт-1-енил, гепт-2-енил, 2-метилгепт-1-енил, окт-3-енил, нон-4-енил, 1-метилнон-2-енил и тому подобное. Предпочтительными являются Cалкенилы с одной двойной связью.
2-4
2-4
Термин "Cалкинил", в качестве группы или части группы, означает линейные и разветвленные, углеводородные радикалы, имеющие насыщенные углерод-углеродные связи и, по меньшей мере, одну тройную связь и содержащие от 2 до 4 атомов углерода, такие как, например, этинил, проп-1-инил, бут-1-инил, бут-2-инил и тому подобное. Предпочтительными являются Cалкинилы с одной тройной связью.
2-6
2-4
2-6
Термин "Cалкинил", в качестве группы или части группы, означает линейные и разветвленные, углеводородные радикалы, имеющие насыщенные углерод-углеродные связи и, по меньшей мере, одну тройную связь и содержащие от 2 до 6 атомов углерода, такие как, например, группы, указанные для термина Cалкинил, и пент-1-инил, пент-2-инил, гекс-1-инил, гекс-2-инил, гекс-3-инил, 1-метилпент-2-инил, пент-2-ен-4-инил и тому подобное. Предпочтительными являются Cалкинилы с одной тройной связью.
2-10
2-6
2-10
Термин "Cалкинил", в качестве группы или части группы, означает линейные и разветвленные, углеводородные радикалы, имеющие насыщенные углерод-углеродные связи и, по меньшей мере, одну тройную связь и содержащие от 2 до 10 атомов углерода, такие как, например, группы, указанные для термина Cалкинил, и гепт-1-инил, гепт-2-инил, 2-метилгепт-1-инил, окт-3-инил, нон-4-инил, 1-метилнон-2-инил и тому подобное. Предпочтительными являются Cалкинилы с одной тройной связью.
1-6
Термин "Cалкандиил", в качестве группы или части группы, означает двухвалентные линейные и разветвленные углеводороды, содержащие от 1 до 6 атомов углерода, такие как, например, метандиил, 1,2-этандиил или 1,1-этандиил, 1,3-пропандиил, 1,3-бутандиил, 1,4-бутандиил, 1,3-пентандиил, 1,5-пентандиил, 1,4-гександиил, 1,6-гександиил и тому подобное.
3-7
Термин "Cциклоалкил" характеризует группу, включающую циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил и циклогептил.
Подразумевается, что термин "арил", в качестве группы или части группы, включает фенил или нафтил. В предпочтительном варианте осуществления термин "арил", в качестве группы или части группы, означает фенил.
Термин "галоген" характеризует группу, включающую фтор, хлор, бром или йод.
1-4
1-4
1-4
1-4
Как использовано здесь выше и далее, "полигалогенCалкил", в качестве группы или части группы, означает моно- или полигалогензамещенный Cалкил, например, 1,1,1-трифторэтил, 1,1-дифторэтил, упомянутые ниже полигалогенметильные группы и тому подобное. Предпочтительной подгруппой полигалогенCалкила является полигалогенметил, где последний, в качестве группы или части группы, определяется как моно- или полигалоген- замещенный метил, в частности метил с одним или несколькими атомами фтора, например дифторметил или трифторметил. В случае, когда более одного атома галогена присоединено к алкильной группе, подпадающей под определение алкильной группы в составе полигалогенметила или полигалогенCалкила, указанные алкильные группы могут быть одинаковыми или различными.
1-10
1-10
Термин "защитная группа" означает аминозащитную группу, такую как такую как Cалкоксикарбонил, арилCалкоксикарбонил, как, например, бензоил, анизоил-, изобутироил-, ацетил- или третбутилбензоил (Breipohl et al. (1997) Tetrahedron 53, 14671-14686). Защитная группа может быть также неустойчивой к кислотам защитной группой, такой как диметокситритил.
Следует также отметить, что положения радикалов на молекулярной составляющей, используемой в определениях, если не оговорено особо, могут быть любыми в такой составляющей до тех пор, пока указанная составляющая является химически устойчивой. Например, пиридил включает 2-пиридил, 3-пиридил и 4-пиридил; пентил включает 1-пентил, 2-пентил и 3-пентил.
1-4
Когда любой из переменных параметров (например, галоген или Cалкил) встречается более одного раза в любой из указанных составляющих, каждое значение является независимым.
Подразумевается, что N-оксидные формы рассматриваемых соединений включают любое одно из соединений по настоящему изобретению, где один или несколько атомов азота окислены до так называемого N-оксида.
Предназначенные для терапевтического применения по настоящему изобретению соли соединений по настоящему изобретению являются такими солями, где противоион является фармацевтически и физиологически приемлемым. Однако соли, содержащие фармацевтически неприемлемый противоион, могут также находить применение, например, в получении или очистке фармацевтически приемлемого соединения по настоящему изобретению. Все соли, будь то фармацевтически приемлемые либо нет, входят в рамки объема настоящего изобретения.
Фармацевтически приемлемые или физиологически переносимые формы аддитивных солей, которые способны образовывать соединения по настоящему изобретению, обычно получают, используя подходящие кислоты, такие как, например, неорганические кислоты, такие как гидрогалогеновые кислоты, например хлористоводородная или бромистоводородная кислота, серная, гемисерная, азотная, фосфорная и тому подобные кислоты; или органические кислоты, такие как, например, уксусная, аспарагиновая, додецилсерная, гептановая, гексановая, бензойная, никотиновая, пропановая, гидроксиуксусная, молочная, пировиноградная, щавелевая, малоновая, янтарная, малеиновая, фумаровая, яблочная, винная, лимонная, метансульфоновая, этансульфоновая, бензолсульфоновая, п-толуолсульфоновая, цикламовая, салициловая, п-аминосалициловая, памовая и тому подобные кислоты.
И наоборот, указанные формы кислотно-аддитивных солей могут быть превращены путем обработки с помощью основания в форму свободного основания.
Соединения по настоящему изобретению, содержащие кислотный протон, могут также быть превращены в соответствующий нетоксичный металл или амино-аддитивную основную солевую форму путем обработки подходящими органическими или неорганическими основаниями. Подходящие основные солевые формы включают, например соли аммония, соли щелочных и щелочно-земельных металлов, например, соли лития, натрия, калия, магния, кальция и тому подобные, соли с органическими основаниями, например, такие как соли бензатина, N-метил-D-глюкамина, гидрабамина, и соли с аминокислотами, такими как, например, аргинин, лизин и тому подобные. Альтернативно, когда карбоксильная составляющая присутствует на соединении по настоящему изобретению, соединение может также быть получено в виде соли с фармацевтически приемлемым катионом.
И наоборот, формы основно-аддитивных солей могут быть превращены путем обработки с помощью подходящей кислоты в форму свободной кислоты.
Термин "соли" также включает гидраты и аддитивные формы с растворителем, которые соединения по настоящему изобретению способны образовывать. Примерами таких форм являются, например, гидраты, алкоголяты и тому подобное.
В случае если любой из заместителей по настоящему изобретению содержит хиральные центры, как иногда действительно бывает, соединения по настоящему изобретению включают все стереоизомеры как в виде выделенных стереоизомеров, так и в виде смесей таких стереоизомеров.
Термин стереохимически изомерные формы соединений по настоящему изобретению, как использован выше, означает все возможные соединения, состоящие из одних и тех же атомов, связанных той же самой последовательностью связей, но имеющие различные трехмерные структуры, не являющиеся взаимозаменяемыми, которые могут образовывать соединения по настоящему изобретению. Если не оговорено или не указано иное, химическое название охватывает смесь всех возможных стереохимически изомерных форм, которыми может обладать указанное соединение. Указанная смесь может содержать все диастереомеры и/или энантиомеры основной молекулярной структуры указанного соединения. Подразумевается, что все стереохимически изомерные формы соединений по настоящему изобретению как в чистом виде, так и в смеси друг с другом входят в рамки объема настоящего изобретения.
Чистые стереоизомерные формы соединений и промежуточных соединений, как упомянуто здесь, определяются как изомеры, по существу свободные от других энантиомерных или диастереомерных форм той же самой основной молекулярной структуры указанных соединений и промежуточных соединений. В частности, термин 'стереоизомерно чистый' означает соединения или промежуточные соединения, имеющие стереоизомерный избыток, равный, по меньшей мере, от 80% (т.е. минимум 90% одного изомера и максимум 10% других возможных изомеров) вплоть до стереоизомерного избытка в 100% (т.е. 100% одного изомера и никакого другого), более предпочтительно соединения или промежуточные соединения, имеющие стереоизомерный избыток от 90% до 100%, еще более предпочтительно имеющие стереоизомерный избыток от 94% до 100%, и наиболее предпочтительно имеющие стереоизомерный избыток от 97% до 100%. Термины 'энантиомерно чистый' и 'диастереомерно чистый' следует понимать аналогичным образом, но, соответственно, применительно к рассматриваемому энантиомерному избытку, диастереомерному избытку смеси.
Чистые стереоизомерные формы соединений и промежуточных соединений по настоящему изобретению могут быть получены с применением известных из уровня техники способов. Например, энантиомеры могут быть отделены друг от друга селективной кристаллизацией соответствующих диастереомерных солей с оптически активными кислотами и основаниями. Примерами таких оптически активных соединений являются винная кислота, дибензоилвинная кислота, дитолуоилвинная кислота и камфорсульфоновая кислота. Альтернативно энантиомеры могут быть разделены хроматографическими способами с использованием хиральных неподвижных фаз. Указанные чистые стереохимически изомерные формы могут также быть получены из соответствующих чистых стереохимически изомерных форм подходящих исходных соединений при условии, что взаимодействие протекает стереоспецифически. Преимущественно, если специфический стереоизомер требуется, указанное соединение синтезируют стереоспецифическими способами получения. При таких способах преимущественно используют энантиомерно чистые исходные материалы.
2
Диастереомерные рацематы соединений по настоящему изобретению могут быть получены раздельно общепринятыми способами. Подходящими физическими способами разделения, которые могут быть использованы, являются, например, селективная кристаллизация и хроматография, например, колоночная хроматография. Настоящие соединения могут также существовать в таутомерных формах. Такие формы, хотя явно не указаны в приведенной выше формуле, считаются включенными в рамки объема настоящего изобретения. Например, в определении Het, к примеру, 1,2,4-оксадиазол может быть замещен гидрокси- или меркаптогруппой в 5-положении, находясь, таким образом, в равновесии с соответствующей таутомерной формой, как показано ниже.
th
Подразумевается, что термин "пролекарство", как использован в данном тексте, означает фармакологически приемлемые производные, такие как сложные эфиры, амиды и фосфаты, так что образующийся in vivo продукт биотрансформации производного является активным лекарственным средством, отвечающим определению соединений по настоящему изобретению. Ссылочный материал, представленный в Goodman and Gilman (The Pharmacological Basis of Therapeutics, 8 ed, McGraw-Hill, Int. Ed. 1992, "Biotransformation of Drugs", p. 13-15), описывающий пролекарства, включен здесь, как обычно. Пролекарства соединения по настоящему изобретению получают модификацией функциональных групп, присутствующих в соединении, таким образом, чтобы модификации расщеплялись либо путем стандартной обработки, либо in vivo до исходного соединения. Например, заместитель, содержащий сульфгидрил, должен быть связан с носителем, который делает соединение биологически неактивным до момента извлечения под действием эндогенных ферментов или, например, ферментов, направленных на конкретный рецептор, или локализации в организме.
Пролекарства характеризуются превосходной водорастворимостью, повышенной биодоступностью и легко превращаются в процессе обмена в активные ингибиторы in vivo.
Подразумевается также, что настоящее изобретение включает все изотопы атомов, входящих в состав рассматриваемых соединений. Изотопы включают атомы, имеющие тот же самый атомный номер, но отличающиеся массовыми числами. В качестве общего примера, а не в порядке ограничения, изотопы водорода включают тритий и дейтерий. Изотопы углерода включают C-13 и C-14.
Всякий раз, когда в дальнейшем используется термин "соединения формулы (I)", "соединения формулы (II)", "соединения формулы (III)", "соединения формулы (IV)", "соединения формулы (V)", "соединения формулы (VI)", "соединения формулы (VII)", "соединения формулы (VIII)", "соединения формул (V)-(VIII)" или "соединения по настоящему изобретению" или подобный термин подразумевается, что указанный термин включает соединения общих формул (I), (II), (III), (IV), (V), (VI), (VII), (VIII), N-оксиды, соли, стереоизомерные формы, рацемические смеси, пролекарства, сложные эфиры и метаболиты указанных соединений, а также четвертичные азотные аналоги. Заслуживающей внимание подгруппой соединений формулы (V) или какой-либо подгруппы таких соединений являются N-оксиды, соли и все стереоизомерные формы соединений формулы (V).
Вариантами осуществления настоящего изобретения являются те соединения по настоящему изобретению или любые подгруппы таких соединений, где 4-пиридил образует N-оксид, например, N-оксид соединения №24.
N-оксид соединения №24
Другими вариантами осуществления настоящего изобретения являются те соединения по настоящему изобретению или любая подгруппа таких соединений, где соединение существует в виде кислотно-аддитивной соли, где соль предпочтительно выбирают из группы, включающей гидрохлорид, гидробромид, трифторацетат, фумарат, хлорацетат, метансульфонат, оксалат, ацетат и цитрат.
1
1-6
1-4
1-4
1-4
1-4
1-4
1-6
1-4
1-4
Дальнейшими вариантами осуществления настоящего изобретения являются те соединения по настоящему изобретению или любая подгруппа таких соединений, где R независимо означает водород, амино, моно- или дизамещенный амино, где заместитель (заместители) амино могут быть выбраны из группы, включающей Cалкил, CалкоксиCалкил, диCалкиламиноCалкил, пиперидин-1-илCалкил, арилCалкил, где арильная группа дополнительно может быть замещена Cалкилом или Cалкокси.
1
1-4
1-4
1-4
1-4
1-4
1-4
1-6
1-4
Другими вариантами осуществления настоящего изобретения являются те соединения по настоящему изобретению или любая подгруппа таких соединений, где R независимо означает водород, амино, моно- или дизамещенный амино, где заместитель (заместители) амино могут быть выбраны из группы, включающей Cалкил, CалкоксиCалкил, диCалкиламиноCалкил, пиперидин-1-илCалкил, арилCалкил, где арильная группа дополнительно может быть замещена Cалкокси.
1
1-2
1-2
1-2
1-2
1-2
1-2
1-2
1-2
Другими вариантами осуществления настоящего изобретения являются те соединения по настоящему изобретению или любая подгруппа таких соединений, где R независимо означает водород, амино, моно- или дизамещенный амино, где заместитель (заместители) амино могут быть выбраны из группы, включающей Cалкил, CалкоксиCалкил, диCалкиламиноCалкил, пиперидин-1-илCалкил, арилCалкил, где арильная группа дополнительно может быть замещена Cалкокси.
1
Другими вариантами осуществления настоящего изобретения являются те соединения по настоящему изобретению или любая подгруппа таких соединений, где R независимо означает водород, амино, моно- или дизамещенный амино, где заместитель (заместители) амино могут быть выбраны из группы, включающей метил, метоксиэтил, диметиламиноэтил, пиперидин-1-илэтил, бензил, где фенильная группа дополнительно может быть замещена метокси.
1
Другими вариантами осуществления настоящего изобретения являются те соединения по настоящему изобретению или любая подгруппа таких соединений, где R независимо означает водород, амино или монозамещенный амино, где заместитель амино может быть выбран из группы, включающей метоксиэтил, диметиламиноэтил, пиперидин-1-илэтил, бензил, где фенильная группа дополнительно может быть замещена метокси.
1
Другими вариантами осуществления настоящего изобретения являются те соединения по настоящему изобретению или любая подгруппа таких соединений, где R независимо означает водород или амино.
8
1
6
1-10
1-10
1-10
1-6
1-4
1-4
Дальнейшими вариантами осуществления настоящего изобретения являются те соединения по настоящему изобретению или любая подгруппа таких соединений, где R означает водород, Cалкил, аминоCалкил, арилCалкил, HetCалкил или защитную группу, где арил необязательно замещен 1-3 заместителями, выбранными из группы, включающей Cалкил, Cалкилкарбонил, галоген, -OR,
4a
4b
5
1-4
-NRR, -SR и полигалогенCалкил.
8
1
1-6
1-6
1-6
1-6
1-6
Другими вариантами осуществления настоящего изобретения являются те соединения по настоящему изобретению или любая подгруппа таких соединений, где R означает водород, Cалкил, аминоCалкил, арилCалкил, HetCалкил или Cалкоксикарбонил.
8
1-6
1-4
1-4
1-4
1-6
Другими вариантами осуществления настоящего изобретения являются те соединения по настоящему изобретению или любая подгруппа таких соединений, где R означает водород, Cалкил, аминоCалкил, фенилCалкил, пирролидин-1-илCалкил или Cалкоксикарбонил.
9
6
7
1-4
1-4
Другими вариантами осуществления настоящего изобретения являются те соединения по настоящему изобретению или любая подгруппа таких соединений, где каждый из R независимо означает водород, Cалкил, полигалогенCалкил, галоген, -COR, -COOR,
4a
4b
7
4a
4b
4a
6
4a
5
5
7
2
1-4
-CONRR, -OR, -NRR, -NRCOR, -NRSOR, -SR или морфолин-4-ил, и где Cалкил может быть дополнительно замещен -COOR.
9
6
7
4a
4b
7
1-4
1-4
Другими вариантами осуществления настоящего изобретения являются те соединения по настоящему изобретению или любая подгруппа таких соединений, где каждый из R независимо означает водород, Cалкил, -COR, -COOR или -CONRR и где Cалкил может быть дополнительно замещен -COOR.
9
6
7
4a
4b
1-4
Дальнейшими вариантами осуществления настоящего изобретения являются те соединения по настоящему изобретению или любая подгруппа таких соединений, где каждый из R независимо означает водород, Cалкил, -COR, -COOR или -CONRR.
11
Дальнейшими вариантами осуществления настоящего изобретения являются те соединения формул (V), (VI) или любая из подгрупп таких соединений, где R означает водород, фтор или пирролидин-1-ил.
11
Другими вариантами осуществления настоящего изобретения являются те соединения формул (V), (VI) или любая из подгрупп таких соединений, где R означает водород или фтор.
12
1-4
1-4
Другими вариантами осуществления настоящего изобретения являются те соединения формул (V), (VI) или любая из подгрупп таких соединений, где R означает галоген, Cалкил или полигалогенCалкил.
12
1-4
Дополнительными вариантами осуществления настоящего изобретения являются те соединения формул (V), (VI) или любая из подгрупп таких соединений, где R означает галоген или полигалогенCалкил.
12
Другими вариантами осуществления настоящего изобретения являются те соединения формул (V), (VI) или любая из подгрупп таких соединений, где R означает хлор, бром, фтор или трифторметил.
11
12
Другими вариантами осуществления настоящего изобретения являются те соединения формул (V), (VI) или любая из подгрупп таких соединений, где R означает фтор и R означает хлор или бром.
11
12
Другими вариантами осуществления настоящего изобретения являются те соединения формул (V), (VI) или любая из подгрупп таких соединений, где R означает водород и R означает хлор, бром, фтор или трифторметил.
Соединениями, представляющими особый интерес, являются соединения формулы (V), перечисленные в таблице 1 ниже, в особенности соединения номер 1, номер 7, номер 21, номер 23, номер 24 и номер 25 и соответствующие N-оксиды, соли и стереоизомеры.
Ряд синтетических способов может быть использован для получения соединений по настоящему изобретению. Обычно указанные соединения могут быть синтезированы с использованием взаимодействий, известных из уровня техники. Может быть использован любой известный из уровня техники способ синтеза. Однако для получения соединений по изобретению удобны следующие способы синтеза.
Соединения формулы (V) могут быть синтезированы по следующей адаптированной методике Wamhoff, H.; Kroth, E. Synthesis, 1994, 405-410, представленной схемой 1.
Схема 1
По существу, метил-3-амино-2-пиразинкарбоксилат (1a) подвергают взаимодействию с ацилхлоридом в присутствии подходящего растворителя, такого как хлороформ или пиридин, получая 3-ациламинопиразин-2-карбоксилаты (1b). Указанные 3-ациламинопиразин-2-карбоксилаты (1b) превращают, например, с помощью гидроксида аммония в 3-ациламинопиразин-2-амиды (1d). Необязательно 3-ациламинопиразин-2-карбоксамиды (1d) могут уже быть получены путем ацилирования 3-амино-2-пиразинкарбоксамида (1c).
2
3-Ациламинопиразин-2-амиды (1d) затем циклизуют путем добавления основания с целью получения производных птеридин-4-ола формулы (1e). Затем спирт может быть замещен галогеном с помощью галогенирующего агента, такого как тионилхлорид, в подходящем растворителе, таком как хлороформ, дихлорэтан или тетрагидрофуран (ТГФ) в присутствии каталитического количества диметилформамида (ДМФА). После чего нуклеофильное замещение осуществляют на соединении (1f) с помощью амина или спирта формулы HLR, вместе с подходящим основанием, таким как TEA или DIPEA, в органическом растворителе, таком как DCM, ТГФ или ДМФА, получая птеридиновые соединения формулы (1g).
2
2
2
Альтернативно птеридин-4-ол может быть превращен по однореакторной методике в птеридины формулы (V) путем осуществления взаимодействия соединений формулы (1e) с амином или спиртом формулы HLR, вместе с подходящим основанием, таким как TEA или DIPEA, в присутствии бензотриазол-1-илокситриспирролидинофосфонийгексафторфосфата (PyBOP). В формуле HLR H означает водород и L и R имеют значения, указанные выше в определении заместителей соединения формулы (V).
Схема 2
Альтернативно соединения формулы (V) могут быть получены из соответствующих птеридинонов, в качестве исходных материалов, с последующей конверсией полученных соединений до иминохлоридов и последовательным замещением атома хлора с помощью подходящего амина, такого как 4-аминопиридин, как показано ниже на схеме 2.
4a
4b
(i) тионилхлорид, ДМФА; (ii) метиловый эфир 4-аминоникотиновой кислоты, TEA; (iii) NaOH; (iv) PyBOP, TEA, HNRR.
Схемы 3 и 4, приведенные ниже, представляют альтернативные пути к ядрам пиридила и дальнейшим замещениям указанных ядер.
Схема 3
Схема 4
Соединения, являющиеся вариантами воплощения настоящего изобретения, приведены ниже в таблице 1:
Таблица 1
Способ введения и формулирования соединений, полезных для изобретения, и родственных соединений зависит от природы состояния конкретного излечиваемого пациента и личной оценки практикующего врача; формулирование определяется способом введения. Поскольку соединения по изобретению являются низкомолекулярными, указанные соединения обычно вводят перорально, составляя смеси с подходящими фармацевтическими наполнителями для получения таблеток, капсул, сиропов и тому подобного. Подходящие составы для перорального введения могут также включать компоненты в следовых количествах, такие как буферы, корригенты и тому подобное. Как правило, количество активного ингредиента в составах изменяется в пределах 5%-95% от общего состава, но допускаемый диапазон отклонения зависит от носителя. Подходящие носители включают такие вещества, как сахароза, пектин, стеарат магния, лактоза, арахисовое масло, оливковое масло, вода и тому подобное.
Соединения, пригодные по изобретению, могут также быть введены посредством суппозиториев или других трансмукозальных носителей. Обычно такие составы включают наполнители, способствующие прохождению соединения через мукозу, такие как фармацевтически приемлемые детергенты.
Соединения могут также применяться местно или в составе, предназначенном для проникновения через кожу. Такие составы включают лосьоны, кремы, мази и тому подобное, формулированные известными способами.
Соединения могут быть также введены путем инъекции, включая внутривенную, внутримышечную, подкожную или интраперитонеальную инъекцию. Типичные составы для указанного применения представляют собой жидкие составы в изотонических растворителях, таких как раствор Ханка и раствор Рингера.
Альтернативные составы включают назальные аэрозоли, липосомальные составы, составы замедленного высвобождения и тому подобное, известные из уровня техники.
Могут быть использованы любые подходящие составы. Смотри руководство по известным из уровня техники способам формулирования Remington's Pharmaceutical Sciences, latest edition, Mack Publishing Company, Easton, PA. Ссылка на указанное руководство является стандартной для данной области техники.
Дозировки соединений по изобретению зависят от ряда факторов, которые варьируются от пациента к пациенту. Однако обычно считается, что следует применять суточную пероральную дозу 0,001-100 мг/кг общей массы тела, предпочтительно 0,01-50 мг/кг и более предпочтительно 0,01 мг/кг-10 мг/кг. Режим дозирования изменяется, опять таки, в зависимости от состояний, подвергаемых лечению и по усмотрению практикующего врача.
Следует отметить, что соединения по изобретению могут быть введены как в виде индивидуальных активных ингредиентов, так и в виде смесей из нескольких возможных вариантов воплощения указанной формулы. Кроме того, соединения по изобретению могут быть использованы в качестве отдельных терапевтических средств или в комбинации с другими терапевтическими средствами.
По причине благоприятных противовирусных свойств, как следует из примеров, соединения по настоящему изобретению применимы для лечения пациентов, инфицированных HCV, и в целях профилактики указанных пациентов. В целом, соединения по настоящему изобретению могут быть полезны для лечения теплокровных животных, инфицированных флавивирусами. Состояния, которые могут быть предупреждены или излечены соединениями по настоящему изобретению, включают, в частности, состояния, вызванные HCV и другими патогенными флавивирусами, такими как вирус желтой лихорадки, лихорадки Денге (типы 1-4), энцефалита Сент-Луис, японского энцефалита, энцефалита долины Муррея, вирус Западного Нила и вирус Kunjin. Состояния, вызванные HCV, включают прогрессирующий фиброз печени, воспаление и некроз, ведущие к циррозу, конечную стадию заболевания печени и HCC; и в случае других патогенных флавивирусов состояния включают желтую лихорадку, лихорадку Денге, геморрагическую лихорадку и энцефалит.
Соединения по настоящему изобретению или любая подгруппа указанных соединений могут быть полезны в качестве лекарства против вышеуказанных состояний. Указанное применение в качестве лекарственного средства или способ лечения включает системное введение HCV-инфицированным пациентам в количестве, эффективном для подавления состояний, вызванных HCV и другими патогенными флавивирусами. Следовательно, соединения по настоящему изобретению могут быть использованы для изготовления лекарственного препарата, пригодного для лечения состояний, вызванных HCV и другими патогенными флавивирусами.
Согласно варианту осуществления изобретение касается применения соединения формулы (V) или любой подгруппы указанных соединений, как определено выше, для изготовления лекарственного препарата для лечения или борьбы с инфекцией или состоянием, вызванным HCV-инфекцией у млекопитающего. Изобретение также касается способа лечения флавивирусной инфекции или заболевания, вызванного флавивирусной инфекцией, включающего введение нуждающемуся в таком лечении млекопитающему эффективного количества соединения формулы (V) или любой подгруппы указанных соединений, как определено выше.
По другому варианту осуществления настоящее изобретение касается применения соединения формулы (V) или любой подгруппы указанных соединений, как определено выше, для изготовления лекарственного препарата, пригодного для ингибирования HCV-активности в организме млекопитающего, инфицированного флавивирусами, в частности HCV. По еще одному варианту осуществления настоящее изобретение касается применения соединения формулы (V) или любой подгруппы указанных соединений, как определено выше, для изготовления лекарственного препарата, пригодного для ингибирования HCV-активности в организме млекопитающего, инфицированного флавивирусами, где указанный HCV ингибируют на стадии репликации.
Также комбинация ранее известного анти-HCV-соединения, такого как, например, интерферон-α (IFN-α), пегилированный интерферон-α и/или рибавирин, и соединения по настоящему изобретению может быть использована в качестве лекарственного препарата в комбинированной терапии. Термин "комбинированная терапия" касается продукта, содержащего обязательно (a) соединение по настоящему изобретению и (b) необязательно другое анти-HCV-соединение, в качестве комбинированного препарата для одновременного, раздельного или последовательного применения для лечения HCV-инфекций, в частности лечения заражений HCV типа 1. Таким образом, для борьбы с HCV-инфекциями или для соответствующего лечения соединения по данному изобретению могут быть введены совместно, в комбинации, например, с такими веществами, как интерферон-α (IFN-α), пегилированный интерферон-α и/или рибавирин, а также терапевтические средства на основе антител, направленных против эпитопов HCV, малая интерферирующая РНК (Si RNA), рибозимы, ДНК-энзимы, антисмысловая РНК, антагонисты, например, NS3 протеаза, NS3 геликаза и NS5B полимераза.
Следовательно, настоящее изобретение касается применения соединения формулы (V) или любой подгруппы указанных соединений, как определено выше, для изготовления лекарственного препарата, пригодного для ингибирования HCV-активности в организме млекопитающего, инфицированного HCV-вирусами, где указанный лекарственный препарат используют в комбинированной терапии, указанная комбинированная терапия предпочтительно включает соединение формулы (V) и (пегилированный) IFN-α и/или рибавирин.
Специалисту в данной области ясно, что соединения формулы (V) могут быть исследованы в клеточной системе HCV-репликации на основании Lohmann et al. (1999) Science 285: 110-113, с дополнительными модификациями, описанными в Krieger et al. (2001) Journal of Virology 75: 4614-4624 (включено здесь в качестве ссылки), далее иллюстрируемыми в разделе, включающем примеры. Такая модель, хотя не является полной инфекционной моделью HCV, широко распространена в качестве наиболее разумной и эффективной модели независимой репликации РНК HCV, существующей в настоящее время. Соединения, проявляющие анти-HCV- активность в указанной клеточной модели, считаются подходящими для дальнейшей разработки в целях применения для лечения HCV-инфекций у млекопитающих. Следует понимать, что важно отличать соединения, специфически препятствующие функциям HCV, от соединений, которые проявляют цитотоксическое или цитостатическое действие в модели HCV-репликации и, как следствие, вызывают снижение в концентрации РНК HCV или концентрации связанный репортер-фермент. Исследования, известные в области оценки клеточной цитотоксичности, основаны, например, на активности митохондриальных ферментов с использованием флуорогенных редокс-красителей, таких как ресазурин. Кроме того, существуют тесты на подсчет клеток для оценки неселективного ингибирования активности связанный репортер-фермент, такой как желто-красная люцифераза. Соответствующие типы клеток могут быть наделены устойчивой трансфекцией с помощью гена репортера люциферазы, экспрессия которого зависит от конститутивно активного промотора гена, и такие клетки могут быть использованы для подсчета при скрининге в целях оценки неселективных ингибиторов.
Все патенты, патентные заявки и статьи, упомянутые ранее или ниже, включены в данное описание в качестве ссылки.
Примеры
Следующие примеры рассматриваются как иллюстративные, но не ограничивающие изобретение.
Пример 1
Синтез 2-(5-бром-2-фторфенил)-4-(4-пиридиламино)птеридина, соединения №1
Метиловый эфир 3-(5-бром-2-фторбензоиламино)пиразин-2-карбоновой кислоты 102
2
2
2
2
2
3
2
4
Пиридин (7,75 г, 98,0 ммоль) добавляют при 0°C в атмосфере N к раствору метилового эфира 3-аминопиразин-2-карбоновой кислоты 101 (1,5 г, 9,80 ммоль) и 5-бром-2-фторбензоилхлорида (9,45 г, 49,0 ммоль) в CHCl. Реакционную смесь нагревают до 40°C в течение 4 ч, затем охлаждают до комнатной температуры. Реакционную смесь гасят 20 мл этанола, упаривают, распределяют между CHCl и 1н NaHCO, сушат (NaSO) и упаривают. Сырой продукт измельчают в порошок с EtOH, фильтруют, промывают EtOH и диэтиловым эфиром, получая 2,6 г метилового эфира 3-(5-бром-2-фторбензоиламино)пиразин-2-карбоновой кислоты 102 в виде белого порошка (ЖХ-МС-анализ).
3-(5-Бром-2-фторбензоиламино)пиразин-2-карбоксамид 103
4
Смесь метилового эфира 3-(5-бром-2-фторбензоиламино)пиразин-2-карбоновой кислоты 102 (2,6 г, 7,34 ммоль) и NHOH (15 мл) в этаноле (50 мл) нагревают до температуры кипения с обратным холодильником в течение 10 мин. Затем реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры и осадок отделяют фильтрованием, промывают этанолом и диэтиловым эфиром, получая 2,1 г указанного в заголовке продукта 103 в виде белого порошка (ЖХ-МС-анализ).
2-(5-Бром-2-фторфенил)птеридин-4-он 104
2
2
Смесь 3-(5-бром-2-фторбензоиламино)пиразин-2-карбоксамида 103 (2,3 г, 6,78 ммоль) и KOH (3,81 г, 67,8 ммоль) в HO (60 мл) и ДМСО (20 мл) перемешивают при комнатной температуре в течение 45 мин. Подкисление до pH 5 (контроль с помощью индикаторной бумаги для определения pH) с помощью AcOH с последующим добавлением 50 мл охлажденной льдом воды дает осадок, который отделяют фильтрованием, промывают HO, ацетонитрилом и диэтиловым эфиром, получая 1,83 г указанного в заголовке продукта 104 в виде белого порошка (ЖХ-МС-анализ).
2-(5-Бром-2-фторфенил)-4-(4-пиридиламино)птеридин, соединение №1
2
2
2
2
2
4
2
2
2
2
Триэтиламин (1,04 мл, 7,17 ммоль) добавляют к раствору 2-(5-бром-2-фторфенил)птеридин-4-она 104 (800 мг, 2,49 ммоль), 4-аминопиридина (469 мг, 4,98 ммоль) и PyBOP (2,59 г, 4,98 ммоль) в CHCl. Спустя 12 ч, реакционную смесь распределяют между CHCl/петролейный эфир (2:1, 300 мл) и охлажденной льдом 1н HCl (300 мл). pH водной фазы доводят до 12 с помощью конц. NaOH и экстрагируют AcOEt, сушат (NaSO) и упаривают. Остаток измельчают в порошок в смеси CHCl/петролейный эфир (2:1, 15 мл), отделяют фильтрованием и промывают диэтиловым эфиром. Продукт очищают колоночной хроматографией (смесь AcOEt/CHCl/MeOH, 5:4:1), получая 325 мг указанного в заголовке продукта 1 в виде желтого порошка (ЖХ-МС-анализ).
Пример 2
Синтез 4-[[2-(5-бром-2-фторфенил)птеридин-4-ил]амино]никотиновой кислоты, соединения №16, и 4-[[2-(5-бром-2-фторфенил)птеридин-4-ил]амино]-N-[3-(2-оксопирролидин-1-ил)пропил]никотинамида, соединения №21
2-(5-Бром-2-фторфенил)4-хлорптеридин 106
2
Тионилхлорид (371 мг, 3,11 ммоль) добавляют к перемешиваемой суспензии 2-(5-бром-2-фторфенил)птеридин-4-она 104 (200 мг, 0,623 ммоль) в хлороформе (5 мл) и сухом ДМФА (100 мкл). Реакционную смесь нагревают до температуры кипения с обратным холодильником, в атмосфере азота, в течение 1 ч (исходный материал проходит ВЭЖХ). Растворитель удаляют в вакууме. Затем остаток измельчают в порошок в EtO и отделяют фильтрованием, получая 210 мг указанного в заголовке продукта 106 в виде желтого твердого вещества (ЖХ-МС-анализ).
Метиловый эфир 4-[[2-(5-бром-2-фторфенил)птеридин-4-ил]амино]никотиновой кислоты 107
2
2
2
К раствору 2-(5-бром-2-фторфенил)-4-хлорптеридина 106 (200 мг, 0,589 ммоль), метилового эфира 4-аминоникотиновой кислоты (224 мг, 1,47 ммоль) в дихлорэтане (5 мл) добавляют по каплям триэтиламин (300 мкл, 2,07 ммоль). Полученную смесь нагревают до 70°C в течение 15 мин, затем гасят диоксидом кремния и очищают колоночной хроматографией (смесь AcOEt/CHCl/триэтиламин, 70/19/1). Кристаллизация из смеси AcOEt/EtO дает 200 мг указанного в заголовке продукта 107 в виде желтых призматических кристаллов (ЖХ-МС-анализ).
4-[[2-(5-Бром-2-фторфенил)птеридин-4-ил]амино]никотиновая кислота 16
2
2
2
Раствор метилового эфира 4-[[2-(5-бром-2-фторфенил)птеридин-4-ил]амино]никотиновой кислоты 107 (200 мг, 0,439 ммоль) и NaOH (44 мг, 1,10 ммоль) в смеси ТГФ/MeOH/HO (3:2:1, 5 мл), перемешивают при комнатной температуре в течение 3 ч. Растворитель выпаривают и остаток растворяют в HO, нейтрализуют AcOH, отделяют фильтрованием и последовательно промывают HO, MeOH и диэтиловым эфиром, получая 160 мг указанного в заголовке продукта 16 в виде желтого порошка (ЖХ-МС-анализ).
4-[[2-(5-бром-2-фторфенил)птеридин-4-ил]амино]-N-[3-(2-оксопирролидин-1-ил)пропил]никотинамид 21
2
2
2
2
2
2
Триэтиламин (140 мкл, 1,00 ммоль) медленно добавляют к раствору 4-[[2-(5-бром-2-фторфенил)птеридин-4-ил]амино]никотиновой кислоты 16 (150 мг, 0,340 ммоль), PyBOP (0,350 мг, 0,68 ммоль) и 1-(3-аминопропил)пирролидинона (97 мг, 0,68 ммоль) в CHCl (10 мл). После выдерживания в течение 15 мин при комнатной температуре реакционную смесь упаривают и остаток очищают колоночной хроматографией (от смеси AcOEt/CHCl, 2:1 + 1% триэтиламин до смеси AcOEt/CHCl/MeOH, 7:2:1 + 1% триэтиламин). Желтый порошок перекристаллизовывают из EtOH, получая 58 мг указанного в заголовке продукта 21 в виде желтых призматических кристаллов (ЖХ-МС-анализ).
Пример 3
Синтез 2-(5-Бром-2-пирролидин-1-илфенил)-4-(3-метил-4-пиридиламино)птеридина, соединения №6
2-(5-Бром-2-пирролидин-1-илфенил)птеридин-4-он 110
3
2
2
2
4
2
Раствор 2-(5-бром-2-фторфенил)птеридин-4-она 104 в пирролидине нагревают в микроволновом резонаторе (Мощность = 270 W, Темп. = 110°C) в течение 12 мин. Пирролидин выпаривают, затем остаток распределяют между 0,5 н NaHCO и CHCl, сушат (NaSO) и упаривают. Порошкование в EtO дает указанный в заголовке продукт 110 в виде желтого порошка (ЖХ-МС-анализ).
2-(5-Бром-2-пирролидин-1-илфенил)-4-(3-метил-4-пиридиламино)птеридин 6
Указанный в заголовке продукт синтезируют при взаимодействии 2-(5-бром-2-пирролидин-1-илфенил)птеридин-4-она 110 и 4-амино-3-метилпиридина, следуя методике, описанной для 4-(4-пиридиламино)-2-(5-бром-2-фторфенил)птеридина 1 (ЖХ-МС-анализ).
Пример 4
Синтез 4-[(бутил)(4-пиридил)амино]-2-(5-бром-2-фторфенил)птеридина, соединения №3
4-Бутиламинопиридин 113
2
2
2
4
Раствор 4-хлорпиридина (2,0 г, 17,6 ммоль), 50% бутиламина в воде (30 мл) нагревают до 150°C в запаянной ампуле в течение 24 ч. Реакционную смесь упаривают, распределяют между 0,1 н NaOH и CHCl, сушат (NaSO) и упаривают. Кристаллизация в смеси диэтиловый эфир/петролейный эфир 4:1 дает 2,4 г указанного в заголовке продукта 113 в виде белого порошка (ЖХ-МС-анализ).
4-[(Бутил)(4-пиридил)амино]-2-(5-бром-2-фторфенил)птеридин 3
,
Указанный в заголовке продукт синтезируют при взаимодействии 2-(5-бром-2-фторфенил)птеридин-4-она 104 с 4-бутиламинопиридином 113 следуя методике, описанной для 4-(4-пиридиламино)-2-(5-бром-2-фторфенил)птеридина 1 (ЖХ-МС-анализ).
Пример 5
Синтез 2-(3-фторфенил)-4-(4-пиридиламино)птеридина, соединения №27
3
Указанный в заголовке продукт синтезируют при взаимодействии 2-(3-фторфенил)птеридин-4-она с 4-аминопиридином, следуя методике, описанной для 4-[(бутил)(4-пиридил)амино]-2-(5-бром-2-фторфенил)птеридина .
Пример 6
Синтез 2-(5-бром-2-фторфенил)-4-[(метил)(4-пиридил)амино]птеридина, соединения №2
Указанный в заголовке продукт синтезируют при взаимодействии 2-(5-бром-2-фторфенил)птеридин-4-она 104 с 4-(метиламино)пиридином, следуя методике, описанной для 4-[(бутил)(4-пиридил)амино]-2-(5-бром-2-фторфенил)птеридина 3.
Пример 7
Синтез 2-(5-бром-2-фторфенил)-4-[(3,3-диметилбутил)(4-пиридил)амино]птеридина, соединения №4
Указанный в заголовке продукт синтезируют при взаимодействии 2-(5-бром-2-фторфенил)птеридин-4-она 104 с 4-(3,3-диметилбутиламино)пиридином, следуя методике, описанной для 4-[(бутил)(4-пиридил)амино]-2-(5-бром-2-фторфенил)птеридина 3.
Пример 8
Синтез 4-[(бензил)(4-пиридил)амино]-2-(5-бром-2-фторфенил)птеридина, соединения №5
Указанный в заголовке продукт синтезируют при взаимодействии 2-(5-бром-2-фторфенил)птеридин-4-она 104 с 4-(бензиламино)пиридином, следуя методике, описанной для 4-[(бутил)(4-пиридил)амино]-2-(5-бром-2-фторфенил)птеридина 3.
Пример 9
Синтез 2-(5-бром-2-фторфенил)-4-(3-метил-4-пиридиламино)птеридина, соединения №7
Указанный в заголовке продукт синтезируют при взаимодействии 2-(5-бром-2-фторфенил)птеридин-4-она 104 с 4-амино-3-метилпиридином, следуя методике, описанной для 4-[(бутил)(4-пиридил)амино]-2-(5-бром-2-фторфенил)птеридина 3.
Пример 10
Синтез 2-(5-бром-2-фторфенил)-4-(фениламино)птеридина, соединения №8
Указанный в заголовке продукт синтезируют при взаимодействии 2-(5-бром-2-фторфенил)птеридин-4-она 104 с анилином, следуя методике, описанной для 4-[(бутил)(4-пиридил)амино]-2-(5-бром-2-фторфенил)птеридина 3.
Пример 11
Синтез 2-(5-бром-2-фторфенил)-4-(2-толиламино)птеридина, соединения №9
Указанный в заголовке продукт синтезируют при взаимодействии 2-(5-бром-2-фторфенил)птеридин-4-она 104 с 2-метиланилином, следуя методике, описанной для 4-[(бутил)(4-пиридил)амино]-2-(5-бром-2-фторфенил)птеридина 3.
Пример 12
Синтез 2-(5-бром-2-фторфенил)-4-[4-(2-пиридил)пиперазин-1-ил]птеридина, соединения №12
Указанный в заголовке продукт синтезируют при взаимодействии 2-(5-бром-2-фторфенил)птеридин-4-она 104 с 1-(2-пиридил)пиперазином, следуя методике, описанной для 4-[(бутил)(4-пиридил)амино]-2-(5-бром-2-фторфенил)птеридина 3.
Пример 13
Синтез 2-(5-бром-2-фторфенил)-4-[(метил)(фенил)амино]птеридина, соединения №10
Указанный в заголовке продукт синтезируют при взаимодействии 2-(5-бром-2-фторфенил)птеридин-4-она 104 с N-метиланилином, следуя методике, описанной для 4-[(бутил)(4-пиридил)амино]-2-(5-бром-2-фторфенил)птеридина 3.
Пример 14
Синтез 2-(5-бром-2-фторфенил)-4-(2-гидроксиэтиламино)птеридина, соединения №11
Указанный в заголовке продукт синтезируют при взаимодействии 2-(5-бром-2-фторфенил)птеридин-4-она 104 с 2-гидроксиэтиламином, следуя методике, описанной для 4-[(бутил)(4-пиридил)амино]-2-(5-бром-2-фторфенил)птеридина 3.
Пример 15
Синтез 2-(5-бром-2-фторфенил)-4-(4-морфолинофениламино)птеридина, соединения №14
Указанный в заголовке продукт синтезируют при взаимодействии 2-(5-бром-2-фторфенил)птеридин-4-она 104 с 4-(4-морфолино)анилином, следуя методике, описанной для 4-[(бутил)(4-пиридил)амино]-2-(5-бром-2-фторфенил)птеридина 3.
Пример 16
Синтез 2-(5-бром-2-фторфенил)-4-(2-метил-4-пиридиламино)птеридина, соединения №15
Указанный в заголовке продукт синтезируют при взаимодействии 2-(5-бром-2-фторфенил)птеридин-4-она 104 с 4-амино-2-метилпиридином, следуя методике, описанной для 4-[(бутил)(4-пиридил)амино]-2-(5-бром-2-фторфенил)птеридина 3.
Пример 17
Синтез 2-(5-бром-2-фторфенил)-4-[[2-(пирролидин-1-ил)этил]-(4-пиридил)амино]птеридина, соединения №17
Указанный в заголовке продукт синтезируют при взаимодействии 2-(5-бром-2-фторфенил)птеридин-4-она 104 с 4-[2-(пирролидин-1-ил)этиламино]пиридином, следуя методике, описанной для 4-[(бутил)(4-пиридил)амино]-2-(5-бром-2-фторфенил)птеридина 3.
Пример 18
Синтез 2-(5-бром-2-фторфенил)-4-[(фенетил)(4-пиридил)амино]- птеридина, соединения №22
Указанный в заголовке продукт синтезируют при взаимодействии 2-(5-бром-2-фторфенил)птеридин-4-она 104 с 4-(фенетиламино)пиридином, следуя методике, описанной для 4-[(бутил)(4-пиридил)амино]-2-(5-бром-2-фторфенил)птеридина 3.
Пример 19
Синтез 2-(2-метил-6-пиридил)-4-[(3-метил-4-пиридил)амино]птеридина, соединения №19
Указанный в заголовке продукт синтезируют при взаимодействии 2-(2-метил-6-пиридил)птеридин-4-она с 4-амино-3-метилпиридином, следуя методике, описанной для 4-[(бутил)(4-пиридил)амино]-2-(5-бром-2-фторфенил)птеридина 3.
Пример 20
Синтез 2-(3-хлорфенил)-4-(4-пиридиламино)птеридина, соединения №18
Указанный в заголовке продукт синтезируют при взаимодействии 2-(3-хлорфенил)птеридин-4-она с 4-аминопиридином, следуя методике, описанной для 4-[(бутил)(4-пиридил)амино]-2-(5-бром-2-фторфенил)птеридина 3.
Пример 21
Синтез 2-(5-хлор-2-фторфенил)-4-(3-этил-4-пиридиламино)птеридина, соединения №23
Указанный в заголовке продукт синтезируют при взаимодействии 2-(5-хлор-2-фторфенил)птеридин-4-она с 4-амино-3-этилпиридином, следуя методике, описанной для 4-[(бутил)(4-пиридил)амино]-2-(5-бром-2-фторфенил)птеридина 3.
Пример 22
Синтез 2-(5-хлор-2-фторфенил)-4-(3-метил-4-пиридиламино)птеридина, соединения №25
Указанный в заголовке продукт синтезируют при взаимодействии 2-(5-хлор-2-фторфенил)птеридин-4-она с 4-амино-3-метилпиридином, следуя методике, описанной для 4-[(бутил)(4-пиридил)амино]-2-(5-бром-2-фторфенил)птеридина 3.
Пример 23
Синтез 2-(5-хлор-2-фторфенил)-4-(4-пиридиламино)птеридина, соединения №24
Указанный в заголовке продукт синтезируют при взаимодействии 2-(5-хлор-2-фторфенил)птеридин-4-она с 4-аминопиридином, следуя методике, описанной для 4-[(бутил)(4-пиридил)амино]-2-(5-бром-2-фторфенил)птеридина 3.
Пример 24
Синтез 2-(3-трифторметилфенил)-4-(4-пиридиламино)птеридина, соединения №26
Указанный в заголовке продукт синтезируют при взаимодействии 2-(3-трифторметилфенил)птеридин-4-она с 4-аминопиридином, следуя методике, описанной для 4-[(бутил)(4-пиридил)амино]-2-(5-бром-2-фторфенил)птеридина 3.
таблице 2
В приведенной ниже  представлены данные ЖХ-МС для синтезированных соединений:
m/z означает соотношение массы к заряду,
RT означает время удерживания
Пример 25
Активность соединений формулы (V) в испытаниях на HCV-репликацию
Испытание на стабильный репликационный клеточный репортер:
Соединения по настоящему изобретению исследуют на активность в ингибировании репликации РНК HCV путем испытания на клетках. Испытание показывает, что рассматриваемые соединения обладают активностью против HCV-репликонов, функциональных в клеточной культуре. Испытание на клетках основано на бицистроновой экспрессирующей конструкции, как описано в Lohmann et al. (1999) Science vol. 285 pp.110-113, с модификациями, описанными в Krieger et al. (2001) Journal of Virology 75: 4614-4624, с использованием многомишеневой стратегии скрининга. По сути способ состоит в следующем.
R
R
В испытании используют устойчиво трансфицированную линию клеток Huh-7 luc/neo (здесь далее обозначенную Huh-Luc). Указанная клеточная линия имеет кодируемую РНК бицистроновую экспрессирующую конструкцию, включающую немутантные NS3-NS5B-области HCV типа 1b, транслированные из исходного сайта внутренней рибосомы (IRES) вируса энцефаломиокардита (EMCV), с предшествующей частью репортера (FfL-люцифераза) и частью селектируемого маркера (neo, неомицинфосфотрансфераза). Конструкция окружена 5'- и 3'- NTRами (нетранслированными областями) HCV типа 1b. Непрерывное культивирование репликационных клеток в присутствии G418 (neo) зависит от репликации РНК HCV. Устойчиво трансфицированные репликационные клетки, экспрессирующие РНК HCV, которая реплицирует, независимо и на высоких уровнях, в частности, кодирующую люциферазу, используют для скрининга противовирусных соединений.
Экспериментальная методика испытания на клетках:
Tm
Репликационные клетки высевают на 384-луночные планшеты в присутствии испытуемого и контрольного соединений, добавленных в различных концентрациях. После инкубации в течение трех дней HCV-репликацию оценивают, производя анализ на активность люциферазы (используя стандартные субстраты для анализа на люциферазу и реагенты и устройство для визуализации микропластин Perkin Elmer ViewLux ultraHTS). Репликационные клетки в контрольных культурах характеризуются высокой экспрессией люциферазы в отсутствии какого-либо ингибитора. Осуществляют мониторинг ингибирующей активности соединения в отношении Huh-Luc клеток по активности люциферазы, получая кривую доза-эффект для каждого испытуемого соединения. Затем рассчитывают значения EC50, указанное значение соответствует количеству соединения, требуемому для снижения на 50% уровня измеряемой активности люциферазы, или точнее означает способность генетически связанной репликационной РНК HCV воспроизводиться путем клеточного деления.
Установлено, что исследуемые соединения обладают следующей активностью:
<b><u>Таблица 3</u></b>
Номер соединения
Репликационная активность HCV (мкМ)
1
0,352
13
4,9
21
0,058
6
18
3
2,2
27
3,0
2
3,65
4
0,48
5
0,99
7
0,95
8
>32
9
11
12
>32
10
11
11
>32
14
8,7
15
3,56
22
1,96
19
12
18
1,5
23
0,52
25
0,48
24
0,78
26
2,0
Пример 26
Фармакокинетический профиль соединения №21 в организме самцов Swiss SPF (CD1)-мышей
Соединение №21 растворяют в 10% растворе гидроксипропил-в-циклодекстрина (HP-в-CD) до конечной концентрации 1 мг основ.-экв./мл, pH 4,36.
Трем животным вводят перорально раствор соединения №21, давая дозу 20 мг основ.-экв./кг. Пробы крови забирают на момент 30 мин, 1, 2, 4, 8 и 24 ч после перорального введения дозы лекарственного препарата. Плазму получают после центрифугирования при 4°C в течение 10 минут, приблизительно при 1900 × g.
Препарируют сердце и печень каждого получившего пероральную дозу животного, получая индивидуальные пробы, и взвешивают. Образцы ткани гомогенизируют в деминерализованной воде.
Плазму и образцы ткани анализируют на соединение №21, используя подходящую методику исследования ЖХ-МС/МС.
Ограниченный фармакокинетический анализ осуществляют, используя WinNonlin(TM) Professional (Version 4.0.1). Для всех данных используют анализ без компартментализации, применяя lin/log правило трапеций с lin/log интерполяцией. Вариабильность результатов между животными указана через среднеквадратичное отклонение (st dev).
Информация по средним концентрациям в плазме и тканях и некоторые основные фармакокинетические параметры приведены в таблице 4 и на фиг.1.
Заключение: исследуемая концентрация перорального состава, равная 1,0 мг основ.-экв./мл, приводит к требуемой дозе 20 мг основ.-экв./кг при пероральном введении. Не наблюдается проблем стабильности на день введения.
Плазма
max
max
1/2 (2-8ч)
0-inf
После однократного перорального введения соединения №21 при 20 мг основ.-экв./кг уровни поддаются количественному определению в течение периода, достигающего 8 ч после введения дозы (таблица 4 и фигура 1). Средняя максимальная концентрация в плазме (C), равная 220 нг/мл, достигается на период 0,5 ч после введения дозы (T), что свидетельствует о быстром всасывании соединения. Среднее время полужизни (t) равно 2,9 ч. Воздействие, найденное из AUC, составляет 332 нг.ч/мл.
Ткань
max
1/2 (2-8ч)
Как видно из фиг.1, исследуемые ткани вместе с плазмой имеют совершенно одинаковые концентрационно-временные профили, что свидетельствует о равновесном распределении между плазмой и тестируемыми тканями. Средние максимальные концентрации в тканях (C) достигаются в тот же момент времени, что и в плазме, на период 0,5 ч после введения дозы, что свидетельствует о быстром установлении равновесия. Наибольшая концентрация наблюдается в печени (4057 нг/г), затем в сердце (678 нг/г), при соотношениях концентраций ткани к плазме, равных 24 и 3,8, соответственно (таблица 4 и фиг.1). Среднее время полужизни (t), установленное для печени, составляет 3,5 и 3,4 ч для сердца, что сопоставимо с соответствующим параметром для плазмы (2,9 ч). Уровни в тканях снижаются, указанное снижение имеет характер, аналогичный уровням в плазме, и на период, равный 8 ч после введения дозы, лишь низкие уровни соединения все еще определяются, что является доказательством отсутствия существенного удерживания.
<u>Таблица 4</u>Средние уровни в плазме и тканях (n=3) вместе с некоторыми основными фармакокинетическими параметрами соединения №21 после однократного перорального введения при 20 мг основ.-экв./кг самцам мышей Swiss SPF (CD1)
Соединение №21 (нг/мл или г/мл)
Время
Плазма
stdev
Сердце
stdev
Печень
stdev
0,5124824
22016621,720,35,52BQL<sup>1)</sup>
± 100± 160± 6,7± 5,1± 1,20
67855792,983,629,1BQL<sup>1)</sup>
± 258± 403± 49,9± 35,9± 6,0
40572937611627201BQL<sup>1)</sup>
± 1730± 1852± 131± 189± 59
C<sub>max </sub>(нг/мл)T<sub>max </sub>(ч)t<sub>1/2(2-8 ч) </sub>(ч)AUC<sub>(0-8ч) </sub>(нг.ч/мл)AUC<sub>0-inf </sub>(нг.ч/мл)Соотношение ткань/плазма
2200,52,9309332-
6780,53,4111912623,8<sup>2)</sup>
40570,53,56965797324<sup>2)</sup>
<sup>1)</sup>BQL = ниже предела количественного определения. LLOQ равен 0,500 нг/мл для плазмы и изменяется в пределах от 5,00 до 13,16 нг/г для ткани.
<sup>2)</sup>значение основано на AUC<sub>inf</sub>