СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ МУКОВИСЦИДОЗА
DIAGNOSTIC TECHNIQUE FOR CYSTIC FIBROSIS

Изобретение относится к медицине, в частности педиатрии, и может быть использовано при диагностике муковисцидоза.
Муковисцидоз (MB) или кистофиброз поджелудочной железы - наиболее распространенное тяжелое моногенное заболевание человека, обусловленное мутацией гена трансмембранного регулятора белка муковисцидоза, характеризующееся поражением экзокринных желез жизненно важных органов и систем, имеющее обычно тяжелое течение и прогноз (Капранов Н.И., Каширская Н.Ю. Муковисцидоз (Современные достижения и актуальные проблемы) // Методические рекомендации. М. 2008. - С. 43-100).
Ген, ответственный за развитие заболевания, был картирован в 1989 г., а продукт его (белок) назван «муковисцидозный трансмембранный регулятор проводимости муковисцидоза» (Cystic Fibrosis transmembrane conductance regulator - CFTR) (Rinrdan J.R., Rnmmens J.M., Kc.rc.t B.Sh. fit al. Identification of the cystic fibrosis gene: Cloning and characterization of complementary DNA. Science 1989; 245: 1066-1073).
К настоящему времени обнаружены около 1500 мутаций в гене CFTR, приводящих к развитию заболевания. По данным Международного консорциума менее 10 мутаций в гене CFTR можно считать часто встречающимися в мире.
После выделения MB в отдельную нозологическую категорию его относили к разряду «фатальных» заболеваний, так как средняя продолжительность жизни больных не превышала 5 лет.
В 70,0% случаев MB выявляется в течение первых двух лет жизни ребенка. В наши дни благодаря расширению знаний о MB и разработке новых эффективных методов лечения средняя продолжительность жизни увеличилась.
Несмотря на огромные достижения в области MB, остаются не решенными многие жизненно важные вопросы: недостаточная диагностика, неполное лекарственное обеспечение, отсутствие комплексной программы наблюдения за больным (Намазова Л.С., Симонова О.И. Научно-практическая конференция «Муковисцидоз вчера, сегодня, завтра» // Педиатрическая фармакология. - 2009. - т. 6, №1. - С. 93-95).
Исследования последних лет свидетельствуют о нарастании неблагоприятных тенденций в состоянии здоровья как взрослого, так и детского населения Российской Федерации, одной из причин которого является нарушение минерального обмена в организме человека вследствие изменения концентрации и соотношения микроэлементов в окружающей среде, питьевой воде и пищевых продуктах (Оберлис Д., Харланд Б., Скальный А. Биологическая роль макро- и микроэлементов у человека и животных. - СПб.: Наука, 2008. - 544 с.).
Важным вопросом остается ранняя диагностика заболевания, так как только в случае своевременного адекватного лечения можно рассчитывать на качественную и продолжительную жизнь данного контингента больных.
Для диагностики MB используют ряд методов, различающихся по информативности и трудоемкости. К ним относят определение концентрации Na и Cl в поте, копрологическое исследование, ДНК-диагностику, измерение разности назальных потенциалов, определение активности эластазы-1 в кале.
Основанием для постановки диагноза MB, как правило, становятся типичные клинические проявления заболевания в сочетании с высоким содержанием хлорида натрия в секрете потовых желез, что до сих пор считается основным «золотым стандартом» диагностики MB (Пат. РФ №2141670, опубл. 20.11.1999).
Недостатком данного способа можно считать то, что сбор пота у детей раннего возраста представляет достаточно сложную задачу, так как существуют технические погрешности непосредственно при сборе пота (сниженное потоотделение в данной возрастной группе), неаккуратность при транспортировке пота, очистки кожных покровов, взвешивании и определении концентрации электролитов, необходимость многократности исследования (2-3 раза).
Все это усложняет раннюю диагностику заболевания и, соответственно, приводит к позднему диагностированию и назначению лечения.
Известен также способ диагностики MB с помощью лабораторных исследований слюны больного до и после воздействия на нее мукосальвином (Пат. РФ №2009491, опубл. 15.07.1994 г.)
Недостатком данного способа является необходимость проведения анализа в лабораторных условиях, его продолжительность (до 30-40 мин).
Наиболее близким к заявляемому изобретению являются разработки по исследованию элементного статуса человека, в которых выбор волос в качестве объекта анализа обусловлен многими фактами, подтверждающими пригодность этого биосубстрата как наиболее информативного объекта (Скальный А.В. Микроэлементы: бодрость, здоровье, долголетие. М.: Эксмо, 2010. 288 с.).
Недостатком данного метода является дороговизна, так как определяются от 25 до 40 элементов.
Целью изобретения является разработка способа диагностики MB путем определения содержания Na, В и Pb в волосах пациентов.
Технический результат изобретения достигается путем определения Na, В и Pb в волосах пациентов методами атомной эмиссионной спектрометрии с индукционно связанной аргоновой плазмой (АЭС-ИСП) и масс-спектрометрии с индуктивно связанной аргоновой плазмой (МС-ИСП) на приборах Optima 2000 DV и Elan 9000 по стандартной методике в соответствии с методическими указаниями МУК 4.1.1482-03, 4.1.1483-03.
Аналитические исследования выполнены лабораторией АНО «Центр Биотической Медицины», аккредитованной в Федеральном центре Госсанэпиднадзора при МЗ РФ (аттестат аккредитации ГСЭН.RU.ЦОА.311, регистрационный номер в Государственном реестре РОСС RU.0001.513118 от 29 мая 2003).
Все образцы подвергались пробоподготовке согласно требованиям МАГАТЭ и методическим рекомендациям «Скрининговые методы для выявления групп повышенного риска среди рабочих, контактирующих с токсичными химическими элементами», утв. МЗ СССР (1989 г.), методическим рекомендациям №41 «Выявление и коррекция нарушений обмена макро- и микроэлементов», утв. КЗ г. Москвы 12.09.2000, методическим рекомендациям «Методика определения микроэлементов в диагностируемых биосубстратах методом масс-спектрометрии с индуктивно связанной плазмой (ИСП-МС)», утвержденным ФЦГСЭН 26.03.2003, «Методика определения микроэлементов в диагностирующих биосубстратах атомной спектрометрией с индуктивно связанной аргоновой плазмой», утвержденным ФЦГСЭН 29.01.2003, а также МУК 4.1.1482-03, МУК 4.1.1483-03 «Определение химических элементов в биологических средах и препаратах методами атомно-эмиссионной спектрометрии с индуктивно связанной плазмой и масс-спектрометрии с индуктивно связанной плазмой», утвержденным МЗ РФ в 2003 г.).
Практическое осуществление заявляемого способа заключается в следующем.
Волосы состригают с затылочной части головы на всю длину в количестве не менее 0,1 г. Для снятия поверхностного загрязнения и обезжиривания волос применяется способ подготовки проб волос, рекомендованный МАГАТЭ. Для этого волосы обрабатываются ацетоном в течение 10-15 минут, а затем три раза промываются дистиллированной водой. Сушка волос производится при комнатной температуре в течение 10-15 минут.
В подготовленных образцах проводится определение содержания химических элементов методами атомно-эмиссионной и/или (в зависимости от спектра определяемых элементов) масс-спектрометрии с индуктивно связанной плазмой согласно методическим указаниям МУК 4.1.1482-03, МУК 4.1.1483-03 «Определение химических элементов в биологических средах и препаратах методами атомно-эмиссионной спектрометрии с индуктивно связанной плазмой и масс-спектрометрией», утв. Федеральным Центром госсанэпиднадзора Минздрава России 29.06.2003.
Авторами были обследованы все 47 детей Ставропольского края, которые были зарегистрированы в 2010 году как больные MB, 54 ребенка с атипичной пневмонией (АП) и 68 детей с обструктивным бронхитом с рецидивирующим течением (ОБ).
Контролем служили нормативы содержания Na, В и Pb в волосах у здоровых детей (Скальный А.В. Эколого-физиологическое обоснование эффективности использования макро- и микроэлементов при нарушениях гомеостаза у обследуемых из различных климатогеографических регионов: автореф. дис. … докт. мед. наук / А.В. Скальный. - М., 2000. - 44 с.). (Табл. 1).
Для сравнения всем обследуемым детям были проведены потовая проба и определение концентрации Na, В и Pb в волосах.
При проведении потовой пробы у 34 детей (20,0%) отмечались технические трудности при сборе пота за счет слабого потоотделения, из-за чего результаты их анализов были расценены как сомнительные.
Выявлено, что концентрация Na и B в волосах в десятки раз выше, а Pb - ниже у детей раннего возраста, страдающих MB по сравнению не только со здоровыми сверстниками, но и с ровесниками, больными другими бронхолегочными заболеваниями, сопровождающимися бронхобструкцией инфекционного генеза.
Таким образом, можно сделать вывод о правомерности диагностики MB путем определения концентрации Na, В и Pb в волосах обследуемых детей, так как данный метод исследования высоко достоверен, мало инвазивен и необходимые количества исследуемого материала ничтожно малы и легко доступны.
По отношению к известным способам диагностики MB, заявляемый способ прост, надежен, доступен и позволяет определить отсутствие или наличие болезни даже у новорожденных детей.