ПРОЦЕССЫ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ В СИСТЕМЕ ПОСЕВНЫХ ФЕРМЕНТЕРОВ И СПОСОБЫ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ

1. Способ получения рекомбинантного белка, где способ состоит из:
7
7
помещение от 4,5×10 до 450×10 рекомбинантных клеток млекопитающих в первую культуральную среду, содержащуюся в сосуде, с получением первой культуры клеток;
6
6
периодическое культивирование первой культуры клеток до плотности клеток в диапазоне от 1,0×10 клеток/мл до 5,0×10 клеток/мл;
6
6
помещение объема первой культуры клеток со стадии (b) во вторую культуральную среду, содержащуюся в перфузионном биореакторе, с получением второй культуры клеток при исходной плотности клеток в диапазоне от 0,25×10 клеток/мл до 0,5×10 клеток/мл;
6
6
перфузионное культивирование второй культуры клеток до плотности клеток в диапазоне от 5×10клеток/мл до 120×10клеток/мл;
6
6
помещение объема второй культуры клеток со стадии (d) в третью культуральную среду, содержащуюся в производственном биореакторе, с получением культуры клеток-продуцентов при исходной плотности клеток в диапазоне от 0,25×10 клеток/мл до 8×10 клеток/мл; и
перфузионное культивирование культуры клеток-продуцентов в условиях, позволяющих рекомбинантным клеткам млекопитающих секретировать рекомбинантный белок; и
сбор рекомбинантного белка из культуры клеток-продуцентов,
где помещение рекомбинантных клеток млекопитающих на стадии (a) для получения первой культуры клеток включает:
размораживание банка замороженных клеток;
помещение объема банка размороженных клеток в первую культуральную среду, и
7
7
где банк замороженных клеток имеет плотность клеток в диапазоне от 10×10 клеток/мл до 50×10 клеток/мл.
2. Способ по п. 1, где процентная доля жизнеспособных клеток в размороженном банке клеток составляет по меньшей мере 60%.
3. Способ по п.2, где процентная доля жизнеспособных клеток в размороженном банке клеток составляет по меньшей мере 90%.
4. Способ по п.1, где сосуд на стадии (а) представляет собой биореактор одноразового использования.
5. Способ по п.4, где биореактор одноразового использования содержит стерильный пластиковый пакет.
6. Способ по п.1, где первая культура клеток на стадии (а) имеет объем в диапазоне от 5,0 л до 10,0 л.
7. Способ по п.1, где вторая культура клеток на стадии (с) имеет объем в диапазоне от 10 л до 300 л.
8. Способ по п.1, где культура клеток-продуцентов на стадии (е) имеет объем в диапазоне от 100 л до 10000 л.
9. Способ по п.1, где сосуд на стадии (а) имеет внутренний объем в диапазоне от 1,5 л до 50 л.
10. Способ по п.1, где перфузионный биореактор на стадии (с) имеет внутренний объем от 50 л до 1000 л.
11. Способ по п.1, где производственный биореактор на стадии (е) имеет внутренний объем от 150 л до 10000 л.
12. Способ по п.1, где перфузионное культивирование на стадии (с) осуществляют с использованием перфузионного биореактора, снабженного устройством фильтрации с переменным тангенциальным потоком.
13. Способ получения рекомбинантного белка, где способ состоит из:
а) помещение объема замороженного банка клеток, содержащего рекомбинантные клетки млекопитающих, в четвертую культуральную среду, содержащуюся в сосуде, с получением третьей культуры клеток;
6
6
(b) периодическое культивирование третьей культуры клеток со стадии (a) до плотности клеток в диапазоне от 1,0×10 клеток/мл до 5,0×10 клеток/мл,
7
7
(c) помещение объема третьей культуры клеток со стадии (b), содержащей от 4,5×10 до 450×10 рекомбинантных клеток млекопитающих, в первую культуральную среду, содержащуюся в сосуде, с получением первой культуры клеток;
6
6
(d) периодическое культивирование первой культуры клеток до плотности клеток в диапазоне от 1,0×10 клеток/мл до 5,0×10клеток/мл;
6
6
(e) помещение объема первой культуры клеток со стадии (d) во вторую культуральную среду, содержащую в перфузионном биореакторе, с получением второй культуры клеток при исходной плотности клеток в диапазоне от 0,25×10 клеток/мл до 0,5×10 клеток/мл;
6
6
(f) перфузионное культивирование второй культуры клеток до плотности клеток в диапазоне от 5×10 клеток/мл до 120×10 клеток/мл; и
6
6
(g) помещение объема второй культуры клеток со стадии (f) в третью культуральную среду, содержащуюся в производственном биореакторе, с получением культуры клеток-продуцентов при исходной плотности клеток в диапазоне от 0,25×10 клеток/мл до 8×10 клеток/мл; и
(h) перфузионное культивирование культуры клеток-продуцентов в условиях, позволяющих рекомбинантным клеткам млекопитающих секретировать рекомбинантный белок; и
сбор рекомбинантного белка из культуры клеток-продуцентов,
7
7
где банк замороженных клеток имеет плотность клеток в диапазоне от 10×10 клеток/мл до 50×10 клеток/мл.
14. Способ по п.13, где процентная доля жизнеспособных клеток в размороженном банке клеток составляет по меньшей мере 60%.
15. Способ по п.14, где процентная доля жизнеспособных клеток в размороженном банке клеток составляет по меньшей мере 90%.
16. Способ по п.13, где сосуд на стадии (а) представляет собой биореактор одноразового использования.
17. Способ по п.16, где биореактор одноразового использования содержит стерильный пластиковый пакет.
18. Способ по п.13, где первая культура клеток на стадии (c) имеет объем в диапазоне от 5,0 л до 10,0 л.
19. Способ по п.13, где вторая культура клеток на стадии (e) имеет объем в диапазоне от 10 л до 300 л.
20. Способ по п.13, где культура клеток-продуцентов на стадии (g) имеет объем в диапазоне от 100 л до 10000 л.
21. Способ по п.13, где сосуд на стадии (c) имеет внутренний объем в диапазоне от 1,5 л до 50 л.
22. Способ по п.13, где перфузионный биореактор на стадии (e) имеет внутренний объем от 50 л до 1000 л.
23. Способ по п.13, где производственный биореактор на стадии (g) имеет внутренний объем от 150 л до 10000 л.
24. Способ по п.13, где перфузионное культивирование на стадии (e) осуществляют с использованием перфузионного биореактора, снабженного устройством фильтрации с переменным тангенциальным потоком.
25. Способ по п.13, где четвертая культуральная среда на стадии (a) имеет объем в диапазоне от 500 мл до 20 л.
26. Способ по п.13, где четвертая культуральная среда на стадии (a) имеет объем в диапазоне от 500 мл до 10 л.
27. Способ получения и выделения рекомбинантного белка, где способ состоит из:
а) помещение объема замороженного банка клеток, содержащего рекомбинантные клетки млекопитающих, в четвертую культуральную среду, содержащуюся в сосуде, с получением третьей культуры клеток;
6
6
(b) периодическое культивирование третьей культуры клеток со стадии (a) до плотности клеток в диапазоне от 1,0×10 клеток/мл до 5,0×10 клеток/мл;
7
7
(c) помещение от 4,5×10 до 450×10 рекомбинантных клеток млекопитающих в первую культуральную среду, содержащуюся в сосуде, с получением первой культуры клеток;
6
6
(d) периодическое культивирование первой культуры клеток до плотности клеток в диапазоне от 1,0×10 клеток/мл до 5,0×10клеток/мл;
6
6
(e) помещение объема первой культуры клеток со стадии (b) во вторую культуральную среду, содержащую в перфузионном биореакторе, с получением второй культуры клеток при исходной плотности клеток в диапазоне от 0,25×10 клеток/мл до 0,5×10 клеток/мл;
6
6
(f) перфузионное культивирование второй культуры клеток до плотности клеток в диапазоне от 5×10 клеток/мл до 120×10 клеток/мл; и
6
6
(g) помещение объема второй культуры клеток со стадии (d) в третью культуральную среду, содержащуюся в производственном биореакторе, с получением культуры клеток-продуцентов при исходной плотности клеток в диапазоне от 0,25×10 клеток/мл до 8×10 клеток/мл; и
(h) перфузионное культивирование культуры клеток-продуцентов в условиях, позволяющих рекомбинантным клеткам млекопитающих секретировать рекомбинантный белок; и
сбор рекомбинантного белка из культуры клеток-продуцентов, где сбор включает удаление третьей культуральной среды из производственного биореактора; и
(j) выделение рекомбинантного белка из удаленной третьей среды со стадии (i),
7
7
где банк замороженных клеток имеет плотность клеток в диапазоне от 10×10 клеток/мл до 50×10 клеток/мл.
28. Способ по п.27, где процентная доля жизнеспособных клеток в размороженном банке клеток составляет по меньшей мере 60%.
29. Способ по п.28, где процентная доля жизнеспособных клеток в размороженном банке клеток составляет по меньшей мере 90%.
30. Способ по п.27, где сосуд на стадии (а) представляет собой биореактор одноразового использования.
31. Способ по п.30, где биореактор одноразового использования содержит стерильный пластиковый пакет.
32. Способ по п.27, где первая культура клеток на стадии (c) имеет объем в диапазоне от 5,0 л до 10,0 л.
33. Способ по п.27, где вторая культура клеток на стадии (e) имеет объем в диапазоне от 10 л до 300 л.
34. Способ по п.27, где культура клеток-продуцентов на стадии (g) имеет объем в диапазоне от 100 л до 10000 л.
35. Способ по п.27, где сосуд на стадии (c) имеет внутренний объем в диапазоне от 1,5 л до 50 л.
36. Способ по п.27, где перфузионный биореактор на стадии (e) имеет внутренний объем от 50 л до 1000 л.
37. Способ по п.27, где производственный биореактор на стадии (g) имеет внутренний объем от 150 л до 10000 л.
38. Способ по п.27, где перфузионное культивирование на стадии (e) осуществляют с использованием перфузионного биореактора, снабженного устройством фильтрации с переменным тангенциальным потоком.
39. Способ по п.27, где четвертая культуральная среда на стадии (a) имеет объем в диапазоне от 500 мл до 20 л.
40. Способ по п.39, где четвертая культуральная среда на стадии (а) имеет объем в диапазоне от 500 мл до 10 л.