Тканеспецифический матрикс для тканевой инженерии паренхиматозного органа и способ его получения

1. Способ получения тканеспецифического матрикса для тканевой инженерии паренхиматозного органа млекопитающего, включающий последовательное проведение следующих этапов:
а) получение донорского материала в виде донорского органа или его части;
б) фрагментацию донорского материала;
в) замораживание фрагментов и их последующее оттаивание;
г) первоначальное измельчение фрагментов;
д) децеллюляризацию измельченных частиц;
е) лиофилизацию измельченных частиц;
ж) замораживание измельченных частиц;
з) последующее измельчение замороженных частиц до размера в диапазоне от 50 до 300 мкм с получением образцов искомого матрикса;
при этом сначала выполняют фрагментацию донорского материала, затем последовательно замораживают и оттаивают полученные фрагменты, далее проводят их первоначальное измельчение, после чего осуществляют децеллюляризацию измельченных частиц, затем выполняют их лиофилизацию и последующее измельчение в замороженном состоянии.
2. Способ по п. 1, в котором указанным млекопитающим является человек.
3. Способ по п. 2, в котором донорский орган представляет собой орган человека.
4. Способ по п. 1, в котором донорский орган является органом человека с диагностированной смертью мозга или биологической смертью.
5. Способ по п. 1, в котором при получении донорского материала сохраняют кровенаполнение его сосудов.
6. Способ по п. 1, в котором донорский орган представляет собой печень, почку, легкое, поджелудочную железу, селезенку.
7. Способ по п. 1, в котором донорский материал представляет собой печень или ее часть и, по меньшей мере, 35% объема донорского материала поражено жировым гепатозом.
8. Способ по п. 7, в котором поражение жировым гепатозом составляет от 35% до 75% объема донорского материала.
9. Способ по п. 1, в котором при фрагментации донорского материала формируют фрагменты размером от 10 мм до 15 мм.
10. Способ по п. 1, в котором замораживание фрагментов донорского материала проводят при температуре от -30°С до -80°С.
11. Способ по п. 1, в котором для сохранения после замораживания перед оттаиванием фрагменты выдерживают предпочтительно от 1 до 40 суток.
12. Способ по п. 1, в котором хранение фрагментов проводят при температуре от -30°С до -80°С.
13. Способ по п. 1, в котором оттаивание фрагментов проводят при температуре от 35°С до 40°С.
14. Способ по п. 1, в котором этап в) замораживание фрагментов и их последующее оттаивание повторяют, по меньшей мере, однократно.
15. Способ по п. 1, в котором при первоначальном измельчении фрагментов получают частицы с размером от 0,5 мм до 5 мм.
16. Способ по п. 1, в котором децеллюляризацию измельченных частиц проводят путем последовательной инкубации в растворах детергентов с повышающейся концентрацией при перемешивании со скоростью от 2 до 500 оборотов в минуту.
17. Способ по п. 16, в котором в качестве растворов детергентов последовательно используют:
а) 400-500 мл раствора PBS, содержащего 1% Triton X 100 и 0,1% натриевой соли додецилсульфата (SDS);
б) 400-500 мл раствора PBS, содержащего 2% Triton X 100 и 0,1% SDS;
в) 400-500 мл раствора PBS, содержащего 3% Triton X 100 и 0,1% SDS.
18. Способ по п. 1, в характеризующийся тем, что после децеллюляризации проводят отмывку децеллюляризированных фрагментов от детергентов путем инкубации с 400-500 мл раствора PBS при их перемешивании с трехкратной заменой раствора на свежий раствор того же состава с периодичностью один раз в сутки, сохраняя скорость перемешивания, которая применялась в процессе децеллюляризации.
19. Способ по п. 1, характеризующийся тем, что при лиофилизации фрагментов их сначала замораживают в течение 4-8 часов при температуре от -40°С до -50°С, затем выдерживают при давлении от 2 Па до 100 Па с повышением температуры до 30-35°С в течение 18-48 часов.
20. Способ по п. 1, в котором замораживание частиц перед их последующим измельчением до размера в диапазоне от 50 до 300 мкм проводят до температуры жидкого азота.
21. Способ по п. 1, в котором измельченный продукт до частиц размером в диапазоне от 50 до 300 мкм стерилизуют γ-облучением в дозе 15 кГр.
22. Способ по п. 20, в котором после стерилизации продукт хранят при температуре от 4°С до 6°С.
23. Тканеспецифический матрикс для тканевой инженерии паренхиматозного органа, полученный по любому из пп. 1-22.