ЗАМЕЩЕННЫЕ ТРИАОЗЛЫ И СПОСОБЫ, КАСАЮЩИЕСЯ ИХ
SUBSTITUTED TRIA-AZOLES AND METHODS RELATING THERETO

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
Область техники
Настоящее изобретение относится, главным образом, к замещенным соединениям 1,2,3-триазола, к способам и промежуточным соединениям, используемым для их получения, к композициям, содержащим их, и к способам лечения неврологических нарушений посредством введения таких соединений теплокровному животному, нуждающемуся в этом.
Описание связанной области
Эссенциальный тремор (ET) представляет собой одно из наиболее распространенных обусловленных тремором нарушений и одно из наиболее распространенных неврологических заболеваний. Хотя заболевание часто называют "доброкачественным", этот постуральный и/или кинетический тремор часто вызывает затруднения при выполнении каждодневных задач, таких как письмо, наливание и прием пищи. ET имеет распространенность, сравнимую с распространенностью эпилепсии и превышающую распространенность как болезни Паркинсона, так и болезни Альцгеймера. Встречаемость ET возрастает с увеличением возраста и ET в семейном анамнезе, по-видимому, коррелирует с более ранним возникновением заболевания. Фармакологическое лечение этого нарушения ограничено вследствие переменной эффективности, возникновения побочных эффектов и отсутствия понимания патофизиологии заболевания.
,
ET имеет варьирующие клинические проявления, характеризующиеся постуральным и/или кинетическим тремором с диапазоном частот от 4 до 12 Гц. Частота тремора, как правило, снижается с течением времени в то время как амплитуда возрастает. Приблизительно 90% пациентов имеют тремор верхних конечностей, 30% имеют тремор головы, 20% имеют тремор голоса, 10% имеют тремор лица или челюсти и 10% имеют тремор нижней части тела. Кроме того, последние исследования показывают более высокие частоты мягких когнитивных изменений, депрессии, тревожности, социальных фобий и дефектов обоняния и слуха у пациентов с ET по сравнению со здоровыми контролями (см., например Zesiewicz et al., Neuropsychiatric Disease andTreatment, 2010:6, 401-408).
,
Наиболее старым средством против тремора при управлении течением ET является этанол. Хотя он демонстрирует некоторые благоприятные эффекты, эта терапия является непрактичной вследствие проблем с зависимостью и серьезных недостатков при длительном применении этанола (см., например Iseri et al., Neuropharmacology, 2011, 61:715-723).
Хотя было исследовано множество лекарственных средств, фармакологическое лечение ET является неоптимальным. Два лекарственных средства считаются терапией первой линии: пропранолол, неселективный бета-блокатор, который является единственным одобренным FDA средством против ET; и примидон, противоэпилептическое лекарственное средство. В дополнение к побочным эффектам, которые включают сужение бронхов, брадикардию, гипотензию, депрессию и усталость для пропранолола и седативный эффект, головокружение, усталость, тошноту и депрессию для примидона (см., например, Abboud et al., ClevelandClinic Journal of Medicine, 2011 78:12:821-828), ни одно из лекарственных средств не снижает уровни тремора до бессимптомных уровней, а также не является эффективным у более чем приблизительно половины пациентов с заболеванием.
В дополнение к терапии первой линии против ET, описанной выше, на протяжении последнего десятилетия было исследовано несколько других способов терапии, большинство из которых представляют собой более старые лекарственные средства, приспособленные для лечения ET, такие как противоэпилептические средства, габапентин, топирамат, зонисамид, левитирацетам, фенобарбитал, прегабалин и лакосамид; антагонисты кальция флунаризин и никарпин; бензодиазепины, такие как альпразолам; антидепрессант миртазапин; и такие средства, как оксибат натрия, T-2000 и 1-октанол. Кроме того, инъекции ботулинического токсина были предметом небольших исследований, и они могут быть пригодными против некупируемого тремора головы и голоса (см., например, Shill, Clinical Medicine: Therapeutics (2009) 1: 613-620, Sadeghi et al., Drug 2010; 70(17):2215-2228).
Также хирургические операции могут обеспечить лечение тяжелого и рефрактерного ET. Глубокая стимуляция головного мозга в области вентрального промежуточного ядра таламуса вовлекает хирургическую операцию по имплантации электрода и генератора импульсов. Таламотомия представляет собой стереотаксическую процедуру, которая создает очаг повреждения в вентральном промежуточном ядре таламуса. Побочные эффекты и неблагоприятные явления ограничивают эту хирургическую операцию пациентами, которые не отвечают на фармакотерапию (см., например, Zesiewicz et al., Neuropsychiatric Disease and Treatment, (2010) 6:401-408).
Эпилепсия представляет собой нарушение головного мозга, характеризующееся периодическими и непрогнозируемыми припадками. Поведенческие проявления эпилептических припадков у пациентов-людей варьируются от мягкого подергивания конечности до потери сознания и неконтролируемых судорог. Страдает вплоть до 1% популяции, что делает эпилепсию одной из наиболее распространенных неврологических проблем и значительной экономической нагрузкой на общество. Несмотря на значительный прогресс в понимании патофизиологии и фармакотерапии припадков и эпилепсии, клеточная основа эпилепсии человека остается загадкой. В отсутствие понимания этиологии подходы к фармакотерапии направлены на контроль симптомов; а именно, подавление припадков. Большее беспокойство вызывает то, что настоящие противоэпилептические лекарственные средства не останавливают базисное естественное прогрессирование нарушения.
,
.
.
.
.
,
.
.
.
С течением лет был достигнут значительный успех в разработке новых противоэпилептических лекарственных средств (AED) с новыми улучшенными составами. Они включают более старые лекарственные средства "первого поколения", такие как карбамазепин, фенобарбитал, вальпроевая кислота, и более новые лекарственные средства "второго поколения", такие как ламотригин, вигабатрин, тиагабин, топирамат, габапентин и леветирацетам (см., например Brazil et al., AnnRevMed., 1998, 49:135-162; McCabe P H., Expert OpinionPharmacother, 2000, 1:633-674]. Выбор противоэпилептического лекарственного средства для лечения определяется его эффективностью в отношении конкретного типа припадков, переносимостью и безопасностью (см., например Regesta et al., Epilepsy Res,1999, 34:109-122; Kwan et al.,EnglJMed., 2000, 342:314-319).
Эпилептический статус (SE) представляет собой угрожающее жизни состояние, характеризующееся длительной фазой непрерывных судорог, которая приводит к значительной болезненности и смертности. SE определяют как активность припадков, длящаяся в течение 30 минут или более без возвращения сознания. Лечение должно быть начато быстро, поскольку длительный SE может привести к смерти, прогрессирующему повреждению головного мозга и развитию трудноизлечимого рефрактерного SE. В США ежегодно страдает вплоть до 200000 человек с вплоть до 55000 смертями. Причины SE включают как острые проблемы со здоровьем, такие как инсульт, метаболические нарушения, инфекции, травма головы и взаимодействия лекарственных средств, так и хронические процессы, такие как предшествующая эпилепсия, прекращение медикаментозной терапии и опухоли центральной нервной системы (см., например, Deshpande et al., Front Neurol (2014, 5:11).
.
.
.
.
SE подразделяют на судорожный и несудорожный, оба из которых требуют быстрого лечения для предупреждения смерти и повреждения головного мозга. Патофизиология SE до конца не понятна. После медицинской стабилизации пациента терапия первой линии вовлекает внутривенное или внутримышечное введение бензодиазепина, такого как мидазолам, диазепам или лоразепам. Терапия второй линии вовлекает дополнительное введение фенитоина, фосфенитоина, фенобарбитала или вальпроевой кислоты. Приблизительно 40% случаев SE не разрешается посредством этого лечения и называются рефрактерными. Рефрактерный SE, как правило, лечат анестетиками, такими как пропофол или фенобарбитал (см., например, Reddy et al.,IntJMolSci2013, 14:18284-318).
Нервно-паралитические средства ингибируют ацетилхолинэстеразу, что приводит к повышенным уровням ацетилхолина в нервной системе. Последующее кардиреспираторное угнетение и эпилептический статус могут приводить к смерти или повреждению головного мозга у страдающих индивидуумов (см., например, Apland et al., J Pharmacol Exp Ther 2013, 344:133-40).
В то время как были сделаны значительные достижения в данной области, остается потребность в низкомолекулярных соединениях, эффективных для лечения неврологических нарушений и заболеваний, особенно эссенциального тремора, эпилепсии, эпилептического статуса и/или воздействия нервно-паралитического средства. Низкомолекулярные средства могут уменьшить некоторые из побочных эффектов и ограничения современных медикаментозных способов терапии, такие как лечение рефрактерных пациентов, уменьшение седативного действия, когнитивных и поведенческих эффектов, взаимодействий лекарственное средство/лекарственное средство и проблем тератогенности/генотоксичности. Настоящее изобретение удовлетворяет эти потребности и обеспечивает другие связанные с ними преимущества.
КРАТКОЕ ИЗЛОЖЕНИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ
В кратком изложении, настоящее изобретение, главным образом, относится к аналогам 1,2,3-триазола, а также к способам их получения и применения, и к фармацевтическим композициям, содержащим такие соединения. Более конкретно, аналоги 1,2,3-триазола, описанные в настоящем описании, представляют собой соединения, имеющие следующую структуру (A):
(A)
1
2
3
включая их стереоизомеры, сложные эфиры, сольваты и фармацевтически приемлемые соли, где R, R, R и n являются такими, как определено в настоящем описании.
В другом варианте осуществления предусматривается фармацевтическая композиция, содержащая любое из соединений, описанных выше и здесь, в комбинации с фармацевтически приемлемым носителем и/или разбавителем.
В другом варианте осуществления способы предусматриваются способы лечения состояния у индивидуума, нуждающегося в этом, где состояние представляет собой эссенциальный тремор, эпилепсию, эпилептический статус и/или воздействие нервно-паралитического средства, посредством введения индивидууму соединения, как описано выше и здесь (или фармацевтической композиции, содержащей соединение).
В другом варианте осуществления предусматривается способ лечения неврологического состояния или нарушения у индивидуума, нуждающегося в этом, путем введения индивидууму соединения, как описано выше и здесь (или фармацевтической композиции, содержащей соединение).
Эти и другие аспекты изобретения станут понятными с помощью приведенного ниже подробного описания. В связи с этим, в настоящем описании приведены различные ссылки, в которых более подробно описана определенная справочная информация, методики, соединения и/или композиции, и каждая из них включена в настоящее описание в качестве ссылки в полном объеме.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ
В приведенном ниже описании представлены определенные конкретные детали для обеспечения полного понимания различных вариантов осуществления. Однако специалисту в данной области будет понятно, что соединения по настоящему изобретению можно получать и использовать без этих деталей. В других случаях хорошо известные структуры не показаны или не описаны детально во избежание чрезмерного усложнения описания вариантов осуществления. Если контекстом не требуется обратное, на протяжении описания и формулы изобретения, которые следуют далее, слово "содержать" и его варианты, такие как "содержит" и "содержащий" следует истолковывать в открытом включительном значении, т.е. как "включающий, но не ограничивающийся ими". Кроме того, термин "содержащий" (и сходные термины, такие как "содержать", или "содержит", или "имеющий", или "включающий") не исключает того, что в других определенных вариантах осуществления, например, вариант осуществления любой механической смеси, композиции, способа или процесса или сходных с ними, описанных в настоящем описании, может "состоять из" или "по существу состоять из" описанных признаков. Заголовки, приведенные в настоящем описании, предоставлены только для удобства, и они не интерпретируют объем или значение заявленных вариантов осуществления.
Указание на протяжении настоящего описания на "один вариант осуществления" или "вариант осуществления" означает, что конкретный признак, структура или характеристика, описанные применительно к вариантам осуществления, включены по меньшей мере в один вариант осуществления. Таким образом, выражения "в одном варианте осуществления" или "в варианте осуществления" в различных частях настоящего описания не обязательно все относятся к одному и тому же варианту осуществления. Более того, конкретные признаки, структуры или характеристики могут быть объединены любым подходящим образом в одном или нескольких вариантах осуществления.
,
.
Также, как используют в настоящем описании и прилагаемой формуле изобретения, форма единственного числа включает множественное число объектов, если контекст явно не указывает на иное. Таким образом, например, указание на "не являющееся человеком животное" может относиться к одному или нескольким не являющимся человеком животным или к множеству таких животных, и указание на "клетку" включает указание на одну или несколько клеток или их эквивалентов (например множество клеток), известных специалистам в данной области, и т.д. Когда стадии способа описаны или заявлены, и происходящие стадии описаны в конкретном порядке, описание первой происходящей (или проводимой) стадии "перед" (т.е до) второй стадией имеет то же значение, как если бы это было указано как состояние, когда вторая стадия происходит (или проводится) "после" первой стадии. Термин "приблизительно", когда он относится к числу или числовому диапазону, означает, что упоминаемое число или числовой диапазон являются приближением в пределах вариабельности эксперимента (или в пределах статистической ошибки эксперимента), и, таким образом, число или числовой диапазон могут варьироваться между 1% и 15% указанного числа или числового диапазона. Следует отметить, что термин "или", как правило, используют как включающий "и/или", если контекст явно не указывает на иное. Термин, "по меньшей мере один", например, при указании на по меньшей мере одно соединение или по меньшей мере одну композицию, имеет то же значение и интерпретацию, что и термин "один или несколько".
Терминам, не определенным в настоящем описании конкретно, должно быть дано значение, которое было бы дано им специалистом в данной области с учетом изобретения и контекста. Однако, как используют в описании, если не указано обратное, термины имеют указанное значение.
В настоящем описании описаны соединения, пригодные для лечения неврологических заболеваний и/или нарушений, которые имеют следующую структуру (A):
(A)
или их стереоизомер, сложный эфир, сольват или фармацевтически приемлемая соль,
где:
1
1-4
R представляет собой H или Cалкил;
2
1-4
4
1-6
2
5
5
6
1-6
2
2
2
3
2
2
3
1-4
R представляет собой Cалкил, -C(=O)OR, -C(=O)-Cалкандиил-NH, -C(=O)NRR или -C(=O)R, где указанный Cалкандиил необязательно замещен группой, выбранной из -NH-C(=NH)NH, -COH, -COCH, -SH, -C(=O)NH, -NH, -SCH, фенила, -OH, -OCалкила, 4-гидроксифенила, циклогексила, имидазолила и индолила;
1
2
4
или R и R, взятые вместе с N, к которому они присоединены, образуют 5-6-членный неароматический гетероцикл, где 5-6-членный неароматический гетероцикл может быть замещен 0-3 R;
3
1-4
1-4
R в каждом случае независимо представляет собой Cl, F, Cалкил, -OCалкил или трифторметил;
4
1-4
R в каждом случае независимо представляет собой Cалкил;
5
1-4
R в каждом случае независимо представляет собой H или Cалкил;
6
1-4
1-4
1-4
1-4
1-4
R представляет собой Cалкил, 5-6-членный неароматический гетероцикл, или 5-6-членный гетероциклCалкил, где 5-6-членный гетероциклCалкил необязательно замещен OH, Cl, F, Cалкилом, -OCалкилом или трифторметилом; и
n равен 0-3.
1
1-4
В одном варианте осуществления структуры (A) R представляет собой Cалкил.
1
В одном варианте осуществления структуры (A) R представляет собой метил.
1
В одном варианте осуществления структуры (A) R представляет собой этил.
1
В одном варианте осуществления структуры (A) R представляет собой H.
1
2
1-4
В одном варианте осуществления структуры (A) как R, так и R представляет собой Cалкил.
2
1-4
В одном варианте осуществления структуры (A) R представляет собой Cалкил.
2
4
В одном варианте осуществления структуры (A) R представляет собой -C(=O)OR.
2
1-6
2
1-6
2
2
2
3
2
2
3
1-4
1-6
2
1-6
2
1-6
2
3
1-6
1-6
2
1-6
2
1-6
.
3
1-6
1-6
1-6
1-4
1-6
1-6
1-6
1-6
В одном варианте осуществления структуры (A) R представляет собой -C(=O)-Cалкандиил-NH. В более конкретных вариантах осуществления Cалкандиил необязательно замещен группой, выбранной из -NH-C(=NH)NH, -COH, -COCH, -SH, -C(=O)NH, -NH, -SCH, фенила, -OH, -OCалкила, 4-гидроксифенила, циклогексила, имидазолила и индолила. В определенных вариантах осуществления Cалкандиил замещен -NH-C(=NH)NH. В определенных вариантах осуществления Cалкандиил замещен -COH. В определенных вариантах осуществления Cалкандиил замещен -COCH. В определенных вариантах осуществления Cалкандиил замещен -SH. В определенных вариантах осуществления Cалкандиил замещен -C(=O)NH. В определенных вариантах осуществления Cалкандиил замещен -NH. В определенных вариантах осуществления Cалкандиил замещен-SCH. В определенных вариантах осуществления Cалкандиил замещен фенилом. В определенных вариантах осуществления Cалкандиил замещен -OH. В определенных вариантах осуществления Cалкандиил замещен -OCалкилом. В определенных вариантах осуществления Cалкандиил замещен 4-гидроксифенилом. В определенных вариантах осуществления Cалкандиил замещен циклогексилом. В определенных вариантах осуществления Cалкандиил замещен имидазолилом. В определенных вариантах осуществления Cалкандиил замещен индолилом.
2
5
5
В одном варианте осуществления структуры (A) R представляет собой -C(=O)NRR.
2
6
В одном варианте осуществления структуры (A) R представляет собой -C(=O)R.
3
В одном варианте осуществления структуры (A) R представляет собой Cl.
3
В одном варианте осуществления структуры (A) R представляет собой F.
3
1-4
В одном варианте осуществления структуры (A) R представляет собой Cалкил.
3
1-4
В одном варианте осуществления структуры (A) R представляет собой -OCалкил.
3
В одном варианте осуществления структуры (A) R представляет собой трифторметил
4
В одном варианте осуществления структуры (A) R представляет собой метил.
4
В одном варианте осуществления структуры (A) R представляет собой этил.
5
В одном варианте осуществления структуры (A) R представляет собой H.
5
1-4
В одном варианте осуществления структуры (A) R представляет собой Cалкил.
6
1-4
В одном варианте осуществления структуры (A) R представляет собой Cалкил.
6
В одном варианте осуществления структуры (A) R представляет собой 5-6-членный неароматический гетероцикл.
6
1-4
1-4
1-4
1-4
1-4
1-4
1-4
1-4
1-4
В одном варианте осуществления структуры (A) R представляет собой 5-6-членный гетероциклCалкил, где 5-6-членный гетероциклCалкил необязательно замещен OH, Cl, F, Cалкилом, -OCалкилом или трифторметилом. В одном конкретном варианте осуществления 5-6-членный гетероциклCалкил замещен OH. В конкретном варианте осуществления 5-6-членный гетероциклCалкил замещен Cl, F или трифторметилом. В конкретном варианте осуществления 5-6-членный гетероциклCалкил замещен Cалкилом или -OCалкилом.
В одном варианте осуществления структуры (A) n=1.
В одном варианте осуществления структуры (A) n= 2.
В одном варианте осуществления структуры (A) n=3.
1
2
4
В одном варианте осуществления структуры (A) Rи R, взятые вместе с N, к которому они присоединены, образуют 5-6-членный неароматический гетероцикл, где 5-6-членный неароматический гетероцикл может быть замещен 0-3 R, как показано на структуре (B):
(B)
3
4
или структуре его стереоизомера, сложного эфира, сольвата и фармацевтически приемлемой соли; где R, и R, и n являются такими, как определено выше для структуры (A).
В одном варианте осуществления структуры (B) 5-6-членный неароматический гетероцикл дополнительно содержит по меньшей мере один другой гетероатом, выбранный из N, S и O, или дополнительно содержит по меньшей мере один другой гетероатом, выбранный из N и O.
В одном варианте осуществления структуры (B) n равен 1.
3
В одном варианте осуществления структуры (B) n равен 1 и R представляет собой F или Cl.
3
В одном варианте осуществления структуры (B) n равен 1 и R представляет собой F.
3
В одном варианте осуществления структуры (B) n равен 1 и R представляет собой Cl.
3
1-4
В одном варианте осуществления структуры (B) n равен 1 и R представляет собой Cалкил.
3
1-4
В одном варианте осуществления структуры (B) n равен 1 и R представляет собой -OCалкил.
3
В одном варианте осуществления структуры (B) n равен 1 и R представляет собой трифторметил.
В одном варианте осуществления структуры (B) n равен 2.
3
В одном варианте осуществления структуры (B) n равен 2 и R в каждом случае представляет собой F.
4
В одном варианте осуществления структуры (B) n равен 1 и R представляет собой метил.
4
В одном варианте осуществления структуры (B) n равен 1 и R представляет собой этил.
1
2
В одном варианте осуществления структуры (B) 5-6-членный неароматический гетероцикл (т.е.Rи R, взятые вместе) представляет собой пиперазин.
1
2
В одном варианте осуществления структуры (B) 5-6-членный неароматический гетероцикл (т.е.Rи R, взятые вместе) представляет собой морфолин.
1
2
В одном варианте осуществления структуры (B) 5-6-членный неароматический гетероцикл (т.е.Rи R, взятые вместе) представляет собой пиперизин.
1
2
В одном варианте осуществления структуры (B) 5-6-членный неароматический гетероцикл (т.е.Rи R, взятые вместе) представляет собой оксазолидин.
1
2
В одном варианте осуществления структуры (B) 5-6-членный неароматический гетероцикл (т.е.Rи R, взятые вместе) представляет собой пирролидин.
В определенных конкретных вариантах осуществления соединение выбрано из одного из следующих соединений, включая их фармацевтически приемлемые соли:
(2S)-2-амино-N-{1-[(2,6-дифторфенил)метил]-1H-1,2,3-триазол-4-ил}-3-фенилпропанамид;
(2R)-2-амино-N-{1-[(2,6-дифторфенил)метил]-1H-1,2,3-триазол-4-ил}-3-фенилпропанамид;
(3S)-N-{1-[(2,6-дифторфенил)метил]-1H-1,2,3-триазол-4-ил}морфолин-3-карбоксамид;
(3R)-N-{1-[(2,6-дифторфенил)метил]-1H-1,2,3-триазол-4-ил}морфолин-3-карбоксамид;
(2R)-2-амино-N-{1-[(2,6-дифторфенил)метил]-1H-1,2,3-триазол-4-ил}-3-метоксипропанамид;
(2R)-2-амино-N-{1-[(2,6-дифторфенил)метил]-1H-1,2,3-триазол-4-ил}-3-гидроксипропанамид;
N-[1-(2,6-дифторбензил)-1H-[1,2,3]триазол-4-ил]-3-пиридин-3-илпропионамид;
3-(3-хлорфенил)-N-{1-[(4-фторфенил)метил]-1H-1,2,3-триазол-4-ил}пропанамид;
(2S)-N-{1-[(2,6-дифторфенил)метил]-1H-1,2,3-триазол-4-ил}-2-(2-оксопирролидин-1-ил)бутанамид;
[1-(2,6-дифторбензил)-1H-[1,2,3]триазол-4-ил]диметиламин;
[1-бензил-1H-[1,2,3]триазол-4-ил]-диметиламин;
4-{1-[(2,6-дифторфенил)метил]-1H-1,2,3-триазол-4-ил}морфолин;
1-[(2,6-дифторфенил)метил]-4-(пирролидин-1-ил)-1H-1,2,3-триазол;
1-[(2,6-дифторфенил)метил]-N-метил-1H-1,2,3-триазол-4-амин;
1-[(2,6-дифторфенил)метил]-N-этил-1H-1,2,3-триазол-4-амин;
2-({1-[(2,6-дифторфенил)метил]-1H-1,2,3-триазол-4-ил}амино)этан-1-ол;
1-{1-[(2,6-дифторфенил)метил]-1H-1,2,3-триазол-4-ил}пирролидин-2-он;
3-{1-[(2,6-дифторфенил)метил]-1H-1,2,3-триазол-4-ил}-1,3-оксазолидин-2-он; или
1-{1-[(2,6-дифторфенил)метил]-1H-1,2,3-триазол-4-ил}имидазолидин-2-он.
2
В определенных химических структурах, приведенных в настоящем описании, в частности, в контексте раздела "Примеры", могут не быть изображены все атомы водорода. Например, "-NH" (т.е.аминогруппа) может быть изображена как "-N" (т.е. два атома водорода отсутствуют), двухвалентный амин ("-NH"-) может быть изображен как -"N"- (т.е. один атом водорода отсутствует) и спирт ("-OH") может быть изображен как "-O" (т.е. один атом водорода отсутствует). Эти и другие короткие обозначения будут понятны специалисту в данной области.
1
4
4
12
Кроме того, определенным химическим группам, указанным в настоящем описании, предшествует сокращенное обозначение, указывающее на общее количество атомов углерода, которые находятся в указанной химической группе. Например, C-Cалкил относится к алкильной группе, как определено ниже, имеющей всего 1-4 атомов углерода, и C-Cциклоалкилалкил относится к циклоалкилалкильной группе, как определено ниже, имеющей всего 4-12 атомов углерода. Общее количество атомов углерода в сокращенном обозначении не включает атомы углерода, которые могут находиться в заместителях описанной группы.
Как используют в описании и прилагаемой формуле изобретения, если не указано обратное, следующие термины имеют указанные значения.
1
6
1
6
1
4
1
4
2
2
2
2
"C-Cалкил" относится к алкильному радикалу, как определено ниже, содержащему от одного до шести атомов углерода. C-Cалкильный радикал необязательно может быть замещенным, как определено ниже для алкильной группы. "C-Cалкил" относится к алкильному радикалу, как определено ниже, содержащему от одного до четырех атомов углерода. C-Cалкильный радикал необязательно может быть замещенным, как определено ниже для алкильной группы. "Алкил" относится к прямому или разветвленному углеводородному радикалу, состоящему только из атомов углерода и водорода, не имеющему ненасыщенности, имеющему от одного до двенадцати атомов углерода, от одного до восьми атомов углерода или от одного до шести атомов углерода, или от одного до четырех атомов углерода, и связанного с остальной частью молекулы одинарной связью,как например, метил, этил, н-пропил, 1-метилэтил (изопропил), н-бутил, н-пентил, н-гексил и т.п. Насыщенные разветвленные алкилы включают изопропил, втор-бутил, изобутил, трет-бутил, изопентил, 3-метилгексил, 2-метилгексил и т.п. Репрезентативные насыщенные циклические алкилы включают циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил, -CH-циклопропил, -CH-циклобутил, -CH-циклопентил, -CH-циклогексил и т.п.
"Алкенил" относится к группе прямого или разветвленного углеводородного радикала, состоящей только из атомов углерода и водорода, содержащей по меньшей мере одну двойную связь, имеющей от двух до двенадцати атомов углерода, предпочтительно от двух до восьми атомов углерода, и связанной с остальной частью молекулы одинарной связью. Репрезентативные неразветвленные и разветвленные алкенилы включают этиленил, пропиленил, 1-бутенил, 2-бутенил, изобутиленил, 1-пентенил, 2-пентенил, 3-метил-1-бутенил, 2-метил-2-бутенил, 2,3-диметил-2-бутенил и т.п.; в то время как репрезентативные неразветвленные и разветвленные алкинилы включают ацетиленил, пропинил, 1-бутинил, 2-бутинил, 1-пентинил, 2-пентинил, 3-метил-1 бутинил и т.п.
Ненасыщенные циклические алкилы включают циклопентенил и циклогексенил, и т.п. Циклические алкилы, также обозначаемые как "гомоциклические кольца", включают ди- и поли-гомоциклические кольца, такие как декалин и адамантил. Ненасыщенные алкилы содержат по меньшей мере одну двойную или тройную связь между соседними атомами углерода (обозначаются как "алкенил" или "алкинил", соответственно).
1-6
1-6
2
2
2
3
2
2
2
3
2
2
3
2
2
3
2
2
"Cалкандиил" означает двухвалентный Cалкил, у которого два атома водорода удалены от одного и того же атома углерода или от различных атомов углерода, такой как -CH-, -CHCH-, -CH(CH)-, -CHCHCH-, -CH(CH)CHCH-, -CHCH(CH)-, -CHC(CH)CH- и т.п.
"Гетероарил" означает ароматическое гетероциклическое кольцо из 5- 10-членов, имеющее по меньшей мере один гетероатом, выбранный из азота, кислорода и серы, и где гетероатомы азота и серы необязательно могут быть окисленными, и содержащее по меньшей мере 1 атом углерода, включая как моно-, так и бициклические кольцевые системы. Репрезентативные гетероарилы включают (но не ограничиваются ими) фурил, бензофуранил, тиофенил, бензотиофенил, пирролил, индолил, изоиндолил, азаиндолил, пиридил, хинолинил, изохинолинил, оксазолил, изооксазолил, оксадиазолил, тиадиазолил, бензоксазолил, пиразолил, имидазолил, бензимидазолил, тиазолил, бензотиазолил, изотиазолил, пиридазинил, пиримидинил, пиразинил, триазинил, циннолинил, фталазинил и хиназолинил.
"Гетероцикл" (также называемый в настоящем описании "гетероциклическим кольцом") означает 5-7-членное моноциклическое или 7-14-членное полициклическое гетероциклическое кольцо, которое является либо насыщенным (неароматическим), либо ненасыщенным, либо ароматическим, и которое содержит от 1 до 4 гетероатомов, независимо выбранных из азота, кислорода и серы, и где гетероатомы азота и серы необязательно могут быть окисленными, и гетероатом азота необязательно может быть кватернизированным, включая бициклические кольца, в которых любой из описанных выше гетероциклов слит с бензольным кольцом или трициклическим (и более высокого порядка) гетероциклическим кольцом. Гетероцикл может быть присоединен через любой гетероатом или атом углерода. Гетероциклы включают гетероарилы, как определено выше. Таким образом, в дополнение к ароматическим гетероарилам, приведенным выше, гетероциклы также включают (но не ограничиваются ими) морфолинил, пирролидинонил, пирролидинил, пиперизинил, пиперидинил, гидантоинил, валеролактамил, оксиранил, оксетанил, тетрагидрофуранил, тетрагидропиранил, тетрагидропиридинил, тетрагидропиримидинил, тетрагидротиофенил, тетрагидротиопиранил, тетрагидропиримидинил, тетрагидротиофенил, тетрагидротиопиранил, оксопирролидинил, имидазолидинон и т.п.
1-6
2
2
t
t
p
t
2
40
40
40
40
40
40
40
42
40
42
40
42
42
42
40
40
42
Если в описании нет иных конкретных указаний, каждый из алкильной группы, алкенильной группы, циклического алкила, Cалкандиила и гетероцикла может быть необязательно замещен одной из следующих групп: алкил, алкенил, галоген, галоалкенил, циано, нитро, арил, циклоалкил, гетероциклил, гетероарил, оксо, триметилсиланил, -OR, -OC(O)-R, -N(R), -C(O)R, -C(O)OR, -C(O)N(R), -N(R)C(O)OR, -N(R)C(O)R, -N(R)S(O)R (где t равен 1-2), -S(O)OR (где t равен 1-2), -S(O)R (где p равен 0-2), и -S(O)N(R) (где t равен 1-2), где каждый R независимо представляет собой водород, алкил, галоалкил, циклоалкил, циклоалкилалкил, арил, аралкил, гетероциклил, гетероциклилалкил, гетероарил или гетероарилалкил; и каждый R представляет собой алкил, галоалкил, циклоалкил, циклоалкилалкил, арил, аралкил, гетероциклил, гетероциклилалкил, гетероарил или гетероарилалкил.
"Галогеналкил" означает алкильную группу, имеющую по меньшей мере один атом водорода, замещенный галогеном, такую как трифторметил и т.п.
"Галоген" означает фтор, хлор, бром или йод, как правило, фтор или хлор.
"Гидрокси" означает -OH.
"Алкокси" означает алкильную часть, присоединенную через кислородный мостик (т.е. -O-алкил), и включает такие группы, как метокси и этокси.
Соединения, описанные в настоящем описании, как правило, можно использовать в качестве свободной кислоты или свободного основания. Альтернативно соединения можно использовать в форме кислотно-аддитивных или основно-аддитивных солей. Кислотно-аддитивные соли свободных аминосоединений, описанных в настоящем описании, можно получать способами, хорошо известными в данной области, и они могут быть образованы из органических и неорганических кислот, которые образуют нетоксичные соли. Подходящие органические кислоты включают малеиновую, фумаровую, бензойную, аскорбиновую, янтарную, метансульфоновую, уксусную, трифторуксусную, щавелевую, пропионовую, виннокаменной, салициловую, лимонную, глюконовую, молочную, миндальную, коричную, аспарагиновую, стеариновую, пальмитиновую, гликолевую, глутаминовую и бензолсульфоновую кислоты. Подходящие неорганические кислоты включают хлористоводородную, бромистоводородную, серную, фосфорную и азотную кислоты. Основно-аддитивные соли включают соли, которые образуют карбоксилатный анион, и включают соли, образованные с органическими и неорганическими катионами, такими как катионы, выбранные из щелочных и щелочноземельных металлов (например, литий, натрий, калий, магний, барий и кальций), а также ион аммония и его замещенные производные (например, дибензиламмоний, бензиламмоний, 2-гидроксиэтиламмоний и т.п.). Таким образом, термин "фармацевтически приемлемая соль" формулы (I) охватывает любые и все приемлемые солевые формы.
R
S
цис
транс
Что касается стереоизомеров, соединения, описанные в настоящем описании, могут иметь один или несколько хиральных (или асимметричных) центров и, таким образом, могут давать начало энантиомерам, диастереомерам и другим стереоизомерным формам, которые могут быть определены, в терминах абсолютной стереохимии, как ()- или ()-. Когда соединения, описанные в настоящем описании, содержат олефиновые двойные связи или другие центры геометрической асимметрии, и, если нет иных указаний, подразумевается, что соединения включают геометрические как E-, так и Z-изомеры (например,  или ). Аналогично, если нет иных указаний, подразумевается, что включены все возможные изомеры, а также их рацемические и оптически чистые формы и все таутомерные формы. Таким образом, предусматривается, что различные стереоизомеры и их смеси включают "энантиомеры", которые относятся к двум стереоизомерам, молекулы которых не являются совпадающими при наложении зеркальными изображениями друг друга. Таким образом, соединения могут находиться в любой изомерной форме, включая рацематы, рацемические смеси и индивидуальные энантиомеры или диастереомеры.
in vivo
in vivo
,
"Пролекарство" означает соединение, которое может конвертироваться в физиологических условиях или посредством сольволиза в биологически активное соединение, описанное в настоящем описании. Таким образом, термин "пролекарство" относится к метаболическому предшественнику соединения, описанного в настоящем описании, который является фармацевтически приемлемым. Пролекарство может быть неактивным при введении индивидууму, нуждающемуся в этом, однако конвертируется  в активное соединение, как описано в настоящем описании. Пролекарства, как правило, быстро трансформируются  в исходное соединение, описанное в настоящем описании, например, посредством гидролиза в крови. Пролекарственное соединение часто имеет преимущества, состоящие в растворимости, тканевой совместимости или замедленном высвобождении в организме млекопитающего (см., например Bundgard, H., Design of Prodrugs (1985), pp. 7-9, 21-24 (Elsevier, Amsterdam). Обсуждение пролекарств приведено в Higuchi, T., et al., "Pro-drugs as Novel Delivery Systems," A.C.S. Symposium Series, Vol. 14, и в Bioreversible Carriers in Drug Design, ed. Edward B. Roche, American Pharmaceutical Association and Pergamon Press, 1987, обе из которых включены в настоящее описание в качестве ссылок в полном объеме.
in vivo,
in vivo
Термин "пролекарство" также включает любые ковалентно связанные носители, которые высвобождают активное соединение, как описано в настоящем описании,  когда такое пролекарство вводят млекопитающему. Пролекарства соединения, описанного в настоящем описании, можно получать путем модификации функциональных групп, присутствующих в соединении, описанном в настоящем описании, таким образом, чтобы происходило отщепление модификаций, либо посредством стандартного манипулирования, либо , до исходного соединения, описанного в настоящем описании. Пролекарства включают соединения, описанные в настоящем описании, где гидрокси, амино или меркаптогруппа связана с любой группой, которая, когда пролекарственную форму соединения вводят млекопитающему, отщепляется с образованием свободной гидрокси, свободной амино или свободной меркаптогруппы, соответственно. Примеры пролекарств включают, но не ограничиваются ими, сложноэфирные и амидные производные функциональных групп гидрокси, карбокси, меркапто или амино в соединениях, описанных в настоящем описании, и т.п.
Соединения, описанные в настоящем описании, могут существовать в множестве твердых состояний в диапазоне от полностью аморфного до кристаллического. Более того, некоторые из кристаллических форм соединений структур (A) или (B) могут существовать в качестве полиморфов. Кроме того, некоторые из соединений структуры (A) или (B) также могут образовывать сольваты с водой или другими органическими растворителями. Термин "сольват" используют в настоящем описании для описания молекулярного комплекса, содержащего соединение, описанное в настоящем описании, и одну или несколько фармацевтически приемлемых молекул растворителя. Такие сольваты аналогично входят в объем настоящего изобретения.
2
3
11
13
14
36
18
123
125
13
15
35
В определенных вариантах осуществления соединения, описанные в настоящем описании, включают все фармацевтически приемлемые изотопно меченные соединения структур (A) или (B), где один или несколько атомов заменены атомами, имеющими то же атомное число, но отличающуюся атомную массу. Примеры включают H (дейтерий) и H (тритий) для водорода, C, C и C для углерода, Cl для хлора, F для фтора, I и I для йода, N и N для азота и S для серы.
2
3
13
14
15
18
17
31
32
35
18
36
3
14
3
14
2
in vivo
Как будет понятно специалисту в данной области, любое из вышеупомянутых соединений может включать радиоактивные изотопы. Таким образом, также предусматривается применение изотопно меченных соединений, идентичных соединениям, описанным в настоящем описании, где один или несколько атомов заменены атомом, имеющим атомную массу или массовое число, отличные от атомной массы или массового числа, обычно встречающихся в природе. Примеры изотопов, которые можно включать в эти соединения, включают изотопы водорода, углерода, азота, кислорода, фосфора, фтора и хлора, такие как, но не ограничиваясь ими, H, H, C, C, N, O, O, P, P, S, F и Cl, соответственно. Определенные изотопно меченные соединения, например, соединения, в которые включены радиоактивные изотопы, такие как H и C, также являются пригодными в анализах распределения в тканях лекарственного средства или субстрата. Тритированный изотоп водорода (H) и изотопы углерода-14 (C) являются особенно предпочтительными вследствие их простоты получения и возможности определения. Замена более тяжелыми изотопами, такими как дейтерий(H), может обеспечить определенные терапевтические преимущества вследствие более высокой метаболической стабильности, например, увеличенное время полужизни  или снижение требуемых доз и, таким образом, они могут быть предпочтительными в некоторых случаях. Изотопно меченные соединения, как правило, можно получать посредством методик, повседневно применяемых на практике в данной области.
СИНТЕЗ СОЕДИНЕНИЙ
Соединения, описанные в настоящем описании, можно получать с помощью известных способов органического синтеза, включая способы, более подробно описанные в разделе "Примеры". Как правило, соединения структур (A) и (B), выше, можно получать по следующим схемам реакции, где все заместители являются такими, как определено выше, если нет иных указаний.
Схема 1
Бензилгалогениды формулы (I), где X представляет собой галогенид, можно подвергать реакции с азидом натрия в растворителе, таком как ацетонитрил, этанол или DMF, необязательно в присутствии йодида натрия, йодида калия или йодида н-тетрабутиламмония, при температуре от комнатной температуры до температуры кипения растворителя с образованием азида формулы (II). Азиды формулы (II) можно подвергать реакции с этилпропиолатом в растворителе, таком как этанол, при температуре от комнатной температуры до 90°C с образованием триазолов формулы (III).
2
2
Альтернативно триазолы формулы (III) можно обрабатывать основанием, таким как гидроксид лития или гидроксид калия, в смеси растворителей, такой как метанол и HO или диоксан и HO, при температуре от комнатной температуры до температуры кипения смеси растворителей, с образованием кислот формулы (V).
Схема 2
Триазолы формулы (III) можно подвергать реакции с гидратом гидразина в этаноле при температуре от комнатной температуры до 80°C с образованием гидразидов формулы (VII).
2
2
Альтернативно триазолы формулы (III) можно обрабатывать основанием, таким как гидроксид лития или гидроксид калия, в смеси растворителей, такой как метанол и HO, или диоксан и HO, при температуре от комнатной температуры до температуры кипения смеси растворителей с получением кислот формулы (V).
Гидразиды формулы (VII) можно подвергать реакции с нитритом натрия в водном растворе хлористоводородной кислоты при температуре от 0°C до комнатной температуры с получением азидов формулы (VIII). Полученные азиды формулы (VIII) можно подергать реакции в этаноле при 85°C с получением соединений формулы (IX).
4
Альтернативно азиды формулы (VIII) можно подвергать реакции со спиртами формулы HO-Rв присутствии растворителя, такого как тетрагидрофуран, диоксан или DMF, при температуре от комнатной температуры до температуры кипения растворителя с получением карбаматов формулы (XIV).
Аминотриазолы формулы (X) получают путем обработки соединений формулы (IX) основанием, таким как гидроксид натрия, гидроксид лития или гидроксид калия, в этаноле и воде при температуре от комнатной температуры до 85°C.
5
5
N,N
N,N
N,N
Аминотриазолы формулы (X) можно подвергать реакции с кислотами формулы HOOC-Rс использованием стандартных условий реакции сочетания с использованием агента реакции сочетания, такого как HATU, в присутствии основания, такого как -диизопропилэтиламин или триэтиламин, в растворителе, таком как дихлорметан или DMF, при комнатной температуре с получением соединений формулы (XI). Другие подходящие условия реакции сочетания включают '-дициклогексилкарбодиимид или 1-этил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимид в присутствии 4-диметиламинопиридина и растворителя, такого как дихлорметан, при комнатной температуре. Альтернативно, аминотриазолы формулы (X) можно обрабатывать хлорангидридами формулы ClOC-R в присутствии основания, такого как триэтиламин, пиридин или -диизопропилэтиламин, в растворителе, таком как дихлорметан, тетрагидрофуран или диоксан, при температуре от комнатной температуры до температуры кипения растворителя с получением соединений формулы (XI).
N,N
2
5
Соединения мочевины формулы (XII) можно получать, сначала подвергая реакции аминотриазолы формулы (X) с основанием, таким как пиридин, триэтиламин или -диизопропилэтиламин и трифосген или фосген, в растворителе, таком как дихлорметан, при температуре от 0°C до комнатной температуры. Затем добавляют амины формулы HN-R при комнатной температуре.
N,N
Также кислоты формулы (V) можно подвергать реакции с дифенилфосфорилазидом в присутствии оснований, таких как триэтиламин или -диизопропилэтиламин, в растворителе, таком как трет-бутанол, при температуре от комнатной температуры до 90°C с получением изоцианатов формулы (XIII), которые могут дать соединение (IX) при обработке этанолом или соединение (XII) при обработке соответствующим амином.
1
2
1
2
1
2
Соединения формулы (XVI), где R и R, взятые вместе, образуют гетероцикл, можно получать из аминов формулы (X) алкилированием соответствующим бис-электрофилом (таким как дигалогенид, димезилат, дитозилат и т.п.) и соответствующим основанием, таким как DIEA или карбонат калия. Соединение формулы (X) и альдегид можно подвергать восстановительному аминированию с получением (XV), где R=R. Альтернативно соединение (XV), где R может быть таким же, как и R, или может отличаться от него, можно синтезировать посредством восстановительного аминирования соединения формулы (XVII) и соответствующего альдегида. Соединение формулы (XVII) можно синтезировать посредством восстановление гидридом бора соединения (XI). Как правило, соединения, используемые в реакциях, описанных в настоящем описании, можно получать способами органического синтеза, известными специалистам в данной области, начиная с коммерчески доступных химических веществ и/или с соединений, описанных в химической литературе. "Коммерчески доступные химические реагенты" можно получать из стандартных коммерческих источников, включающих Acros Organics (Pittsburgh PA), Aldrich Chemical (Milwaukee WI, including Sigma Chemical and Fluka), Apin Chemicals Ltd. (Milton Park UK), Avocado Research (Lancashire U.K.), BDH Inc. (Toronto, Canada), Bionet (Cornwall, U.K.), Chemservice Inc. (West Chester PA), Crescent Chemical Co. (Hauppauge NY), Eastman Organic Chemicals, Eastman Kodak Company (Rochester NY), Fisher Scientific Co. (Pittsburgh PA), Fisons Chemicals (Leicestershire UK), Frontier Scientific (Logan UT), ICN Biomedicals, Inc. (Costa Mesa CA), Key Organics (Cornwall U.K.), Lancaster Synthesis (Windham NH), Maybridge Chemical Co. Ltd. (Cornwall U.K.), Parish Chemical Co. (Orem UT), Pfaltz & Bauer, Inc. (Waterbury CN), Polyorganix (Houston TX), Pierce Chemical Co. (Rockford IL), Riedel de Haen AG (Hanover, Germany), Spectrum Quality Product, Inc. (New Brunswick, NJ), TCI America (Portland OR), Trans World Chemicals, Inc. (Rockville MD) и Wako Chemicals USA, Inc. (Richmond VA).
Способы, известные специалисту в данной области, можно идентифицировать с помощью различных справочников и баз данных. Подходящие справочники и монографии, в которых подробно описан синтез реагентов, пригодных для получения соединений по настоящему изобретению, или приведены ссылки на статьи в которых описано получение, включают, например, "Synthetic Organic Chemistry," John Wiley & Sons, Inc., New York; S. R. Sandler et al., "Organic Functional Group Preparations," 2nd Ed., Academic Press, New York, 1983; H. O. House, "Modern Synthetic Reactions", 2nd Ed., W. A. Benjamin, Inc. Menlo Park, Calif. 1972; T. L. Gilchrist, "Heterocyclic Chemistry", 2nd Ed., John Wiley & Sons, New York, 1992; J. March, "Advanced Organic Chemistry: Reactions, Mechanisms and Structure," 4th Ed., Wiley Interscience, New York, 1992. Дополнительные пригодные справочники и монографии, в которых подробно описаны реагенты, пригодные для получения соединений по настоящему изобретению, или предоставлены ссылки на статьи, в которых описано получение, включают, например, Fuhrhop, J. and Penzlin G. "Organic Synthesis: Concepts, Methods, Starting Materials", Second, Revised and Enlarged Edition (1994) John Wiley & Sons ISBN: 3 527-29074-5; Hoffman, R.V. "Organic Chemistry, An Intermediate Text" (1996) Oxford University Press, ISBN 0-19-509618-5; Larock, R. C. "Comprehensive Organic Transformations: A Guide to Functional Group Preparations" 2nd Edition (1999) Wiley-VCH, ISBN: 0-471-19031-4; March, J. "Advanced Organic Chemistry: Reactions, Mechanisms, and Structure" 4th Edition (1992) John Wiley & Sons, ISBN: 0-471-60180-2; Otera, J. (editor) "Modern Carbonyl Chemistry" (2000) Wiley-VCH, ISBN: 3-527-29871-1; Patai, S. "Patai's 1992 Guide to the Chemistry of Functional Groups" (1992) Interscience ISBN: 0-471-93022-9; Quin, L.D. et al. "A Guide to Organophosphorus Chemistry" (2000) Wiley-Interscience, ISBN: 0-471-31824-8; Solomons, T. W. G. "Organic Chemistry" 7th Edition (2000) John Wiley & Sons, ISBN: 0-471-19095-0; Stowell, J.C., "Intermediate Organic Chemistry" 2nd Edition (1993) Wiley-Interscience, ISBN: 0-471-57456-2; "Industrial Organic Chemicals: Starting Materials and Intermediates: An Ullmann's Encyclopedia" (1999) John Wiley & Sons, ISBN: 3-527-29645-X, в 8 томах; "Organic Reactions" (1942-2000) John Wiley & Sons, в более чем 55 томах; и "Chemistry of Functional Groups" John Wiley & Sons, в 73 томах.
Verlag Helvetica Chimica Acta
Конкретные и аналогичные реагенты также можно идентифицировать по индексам известных химических реагентов, полученных Chemical Abstract Service of the American Chemical Society, которые являются доступными в большинстве общественных и университетских библиотек, а также через базы данных, доступные через Интернет (для более подробной информации можно связаться с American Chemical Society, Washington, D.C.). Химические вещества, которые известны, но не являются коммерчески доступными в каталогах, можно получать с помощью специализирующихся на химическом синтезе учреждений, где многие из стандартных поставщиков химических реагентов (например, поставщики, приведенные выше) предоставляют услуги специализированного синтеза. Ссылка для получения и отбора фармацевтических солей по настоящему изобретению представляет собой P. H. Stahl & C. G. Wermuth "Handbook of Pharmaceutical Salts", , Zurich, 2002.
СПОСОБЫ ОХАРАКТЕРИЗАЦИИ И ИДЕНТИФИКАЦИИ СОЕДИНЕНИЙ
Эффективность соединения для лечения неврологических нарушений можно определять различными способами анализа. Программа скрининга противосудорожных препаратов (ASP) National Institute of Neurological Diseases and Stroke продвигает разработку новых противосудорожных лекарственных средств посредством обеспечения скрининга и других услуг для оценки новых кандидатов в высокой степени прогнозирующих и стандартизированных анализах. Многие из соединений, описанных в настоящем описании, исследовали в одном или нескольких анализах ASP.
in vitro
Стандартные модели, включенные в скрининг противосудорожных препаратов, включают тест максимального электрошока (MES), тест с подкожным метразолом (scMET) и оценку токсичности (минимальное двигательное ухудшение, MMI). Дополнительные модели включают следующие: припадки, индуцированные другими химическими веществами, вызывающими судороги; минимальные клонические судороги у мышей (тест при 6 Гц); крысы с гиппокампальным киндлингом; модель фармакорезистентности на основе самопроизвольной импульсации  у крыс, которым вводили каинаты; крысы с резистентным к ламотригину киндлингом миндалевидного тела; локальные припадки у мышей с корнеальным киндлингом; индуцируемый пилокарпином эпилептический статус у крыс и мыши, чувствительные к аудиогенному припадку Фрингса.
Тест максимального электрошока (MES)
MES представляет собой модель для генерализованных тонико-клонических судорог, и он указывает на способность соединения препятствовать распространению судорог, когда все нейронные цепи в головном мозге максимально активны. Эти припадки являются в высокой степени воспроизводимыми и электрофизиологически соответствуют припадкам у человека.
Тест судорожного порога при подкожном введении метразола (scMET)
Возбуждающая и ингибиторная нейротрансмиссия играет ключевую роль в опосредовании нормальной нейрональной передачи сигнала, и дисбаланс между этими двумя каскадами может приводить к возникновению припадков и, в конечном итоге, к эпилептогенезу. Химическое нарушение этого тонко регулируемого равновесия может искусственно индуцировать припадок. Подкожная инъекция метразола - средства, вызывающего судороги, вызывает клонические судороги у лабораторных животных. Тест scMET обнаруживать способность исследуемого соединения вызывать судорожный порог у животного и, таким образом, защищать его от клонических судорог.
Острая токсичность - минимальное двигательное ухудшение (MMI)
Для оценки нежелательных побочных эффектов (токсичности) проводили мониторинг животных в отношении явных признаков нарушенной неврологической или мышечной функции. У мышей для описания минимального мышечного или неврологического ухудшения используют тест вращающегося стержня. Когда мышь помещают на стержень, который вращается со скоростью 6 об/мин, животное может сохранять равновесие в течение длительного периода времени. Животное считают демонстрирующим двигательное нарушение, если оно падает с этого вращающегося стержня три раза за 1 мин. У крыс на минимальный двигательный дефицит указывает атаксия, которая проявляется аномальной некоординированной походкой. Крыс, используемых для оценки токсичности, исследуют до введения исследуемого лекарственного средства, поскольку отдельные животные могут иметь особенности походки, равновесия, реакции опоры и т.д., которые могут быть ошибочно приписаны исследуемому веществу. В дополнение к MMI, животные могут демонстрировать ходьбу по кругу или в форме зигзага, аномальную позу тела и расстановку лап, тремор, гиперактивность, отсутствие исследовательского поведения, сонливость, ступор, каталепсию, потерю реакции опоры и изменение мышечного тонуса.
Тесты с другими химическими средствами, вызывающими судороги
A
A
A
В дополнение к внутривенному тесту scMET, можно использовать другие химические средства, вызывающие судороги, для исследования активности противосудорожных препаратов. Как антагонист GABA бикукуллин, так и блокатор хлоридных каналов GABA пикротоксин, индуцируют припадки посредством нарушения нормальной ингибиторной нейротрансмиссии (т.е. ослабления синаптического ингибирования) посредством блокирования функции рецептора GABA. Оба этих лекарственных средства используют в качестве модели острого припадка для быстрой оценки потенциальных противосудорожных препаратов.
Тест минимальных клонических судорог
in vivo
Некоторые клинически полезные AED являются неэффективными в стандартных тестах MES и scMET, но, тем не менее, обладают активностью противосудорожных препаратов . Для идентификации потенциальных AED с этим профилем соединения можно исследовать в тесте минимальных клонических судорог (6 Гц или "психомоторный" тест). Подобно тесту максимального электрошока (MES), тест минимальных клонических судорог используют для оценки эффективности соединения против электрически индуцируемых судорог, однако в нем используется более низкая частота (6 Гц) и более длительная стимуляция (3 с). Мыши демонстрируют припадки, характеризующиеся минимальной клонической фазой, за которой следует стереотипное автоматическое поведение, описываемое как сходное с аурой пациентов-людей с парциальными припадками. Животные, не демонстрирующие это поведение, считаются защищенными. Этот тест также можно проводить при 22 и 44 мА, причем в случае 44 мА мыши являются более рефрактерными к лечению.
Модель на крысах с гиппокампальным киндлингом
Крысы с гиппокампальным киндлингом обеспечивают экспериментальную модель локальных припадков, которые становятся вторично генерализованными. Эта модель на крысах является пригодной не только для идентификации соединений, эффективных против парциальных припадков, но также позволяет исследование сетей головного мозга, которые могут вносить вклад в распространение и генерализацию припадка из очага. Более того, эта модель обеспечивает временные рамки для оценки эффективности лекарственного средства в модели локального припадка. В частности, рефрактерный период отдельных животных является достаточно коротким, чтобы позволить повторяющуюся стимуляцию на протяжении короткого периода времени. Во-вторых, эту модель с киндлингом у крыс можно использовать для оценки способности исследуемого соединения блокировать припадки после полного киндлинга, спровоцированные электрическим стимулом. Наконец, модель на крысах с гиппокампальным киндлингом также можно использовать для оценки способности исследуемого соединения повышать порог до локального возбуждения.
Модель фармакорезистентности на основе самопроизвольной импульсации
in vitro
in vitro
2+
Срез медиальной энторинальной области коры-гиппокампа (mEC-HC), полученный от животных, которым вводили каиновую кислоту (KA), представляет собой скрининг , предназначенный для идентификации соединений, которые могут быть эффективными при фармакорезистентной эпилепсии. Введение KA представляет собой признанную модель на животных для эпилепсии лобной доли (TLE), причем первоначальное повреждение приводит к эпилептическому статусу, за которым следует длительный латентный период, который затем переходит в развитие самопроизвольных припадков. Срезы mEC-HC, полученные от крыс, которым вводили KA, демонстрировали самопроизвольные электрографические "подобные межприпадочным" события, которые являются фармакорезистентными к традиционным AED. Более того, срезы mEC-HC, полученные от крыс, которым вводили KA, являются сверхвозбудимыми в нормальном искусственном растворе цереброспинальной жидкости (ACSF) уже через одну неделю после SE, индуцированного посредством KA. Эта сверхвозбудимость срезов от крыс, которым вводили KA, значительно снижает время, требуемое для индукции самопроизвольных разрядных импульсов (SB) по сравнению со срезами с mEC-HC с низким уровнем Mg, полученными от контрольных крыс.
Модель крыс с резистентным к ламотригину (LTG) киндлингом миндалевидного тела
Добавление LTG в ходе развития припадков в конечном итоге снижает эффективность LTG против припадка с полным киндлингом. Таким образом, добавление низких доз LTG в ходе фазы достижения киндлинга (посредством стимуляции электрода, имплантированного в миндалевидное тело крысы) обеспечивает модель, способную различать традиционные противосудорожные препараты и исследуемые лекарственные средства, которые являются эффективными в отношении блокирования полностью выраженного припадка с киндлингом, и, таким образом, могут быть эффективными у пациентов с не поддающейся лечению эпилепсией.
Локальные припадки у мышей с корнеальным киндлингом
В этой модели оптический нерв используют для обеспечения транскорнеальной электрической стимуляции головного мозга неинвазивным путем. Мышь с корнеальным киндлингом демонстрирует фармакологический профиль, согласующийся с моделью на крысах с гиппокампальным киндлингом и с парциальной эпилепсией человека. Нехирургическая природа методики позволяет быструю оценку исследуемых лекарственных средств в отношении этого состояния,
Индуцируемый пилокарпином эпилептический статус
Модель с пилокарпином является хорошо охарактеризованной моделью эпилептического статуса (SE). Эта модель обладает множеством общих характеристик с нервно-паралитическим средством, которое индуцирует припадки, поскольку припадки, которые возникают в обеих моделях, опосредуются холинэргическим рецепторами. Клинические проявления после кратковременной дозы пилокарпина включают атаксию, акинезию и лицевые автоматизмы. Эти симптомы быстро прогрессируют в полный SE, который может длиться вплоть до двенадцати часов. Эту активность можно сопоставлять с электрографической активностью припадка. Крысы, которые выживают после острого повреждения, позднее демонстрируют самопроизвольные рецидивирующие припадки и спраутинг мшистых волокон.
Модель на мышах, чувствительных к аудиогенным судорогам Фрингса (AGS)
Чувствительные к AGS Фрингса мыши являются генетически чувствительными к индуцируемым звуком рефлекторным судорогам. Они имеют хорошо подтвержденный фенотип эпилепсии и, в частности, являются пригодными в качестве скрининговой модели. Начиная с возраста приблизительно 21 суток, чувствительные к AGS Фрингса мыши демонстрируют выраженную судорожную активность в ответ на высокоинтенсивный звуковой стимул. Затем они остаются чувствительными к звуку на протяжении их жизни. Их фенотип припадков характеризуется безудержным бегом, утратой рефлекса выпрямления, тоническим сгибанием и тоническим разгибанием в ответ на высокоинтенсивную звуковую стимуляцию. В противоположность другим моделям припадков, чувствительные к AGS Фрингса мыши являются неселективными в отношении клинических категорий противосудорожных лекарственных средств. По этой причине эту модель используют для скрининга новых исследуемых соединений, и также она может облегчать идентификацию и охарактеризацию соединений, эффективных против унаследованных форм эпилепсии.
Другие тесты эффективности новых соединений для неврологических нарушений включают модель индуцируемых зоманом судорог у крыс и модель индуцируемого гармалином тремора у мышей.
Индуцируемые зоманом судороги
Фосфаторганическое нервно-паралитическое средство зоман индуцирует судороги посредством необратимой инактивации фермента ацетилхолинэстеразы, что приводит к значительному увеличению холинэргического тонуса в головном мозге и периферических тканях. Крыс, подвергнутых воздействию газообразного зомана, можно использовать в качестве модели отравления фосфаторганическим соединением. Крысы, подвергнутые воздействию зомана, быстро достигают судорожного состояния, где посредством ЭЭГ может быть зарегистрирована выраженная иктальная активность. Исследуемые соединения инъецируют внутримышечно или подкожно в различные моменты времени после начала судорог. Поскольку маловероятно, что пострадавшие люди в чрезвычайной ситуации применения оружия массового поражения быстро получат доступ к лечению после первоначального воздействия, соединения, способные блокировать судорожную активность при введении в более поздние моменты времени после индукции судорог, вероятно, будут наиболее эффективными и практичными для применения.
Индуцируемый гармалином тремор
Эссенциальный тремор (ET) является наиболее распространенным двигательным нарушением у человека. В то время как для ET было предложено несколько механизмов и генетических моделей на животных, введение производного β-карболина гармалина мышам считается стандартной моделью для этого нарушения. Гармалин вызывает генерализованный тремор с частотой 11-14 Гц, той же частотой тремора, что и при ET. Предварительное введение современных лекарственных средств против ET, таких как пропранолол (β-блокатор) и примидон (противоэпилептическое средство), снижает индуцированный гармалином тремор у мышей.
in vitro
in vivo
Соединения, описанные в настоящем описании, как показано в разделе "Примеры" ниже (включая некоторые химические промежуточные соединения), в основном исследовали в одном или нескольких показанных способах анализа. Специалисту в данной области будет хорошо понятно, что анализы и способы  и модели на животных  выполняют с использованием соответствующих контролей.
Соединения, описанные в настоящем описании, являются пригодными в широком диапазоне терапевтических применений, и их можно использовать для лечения различных неврологических нарушений у человека, как у мужчин, так и у женщин, а также у млекопитающих в целом (также называемых в настоящем описании "индивидуумами"). Например, соединения структур (A) и (B) (а также конкретные соединения, описанные в настоящем описании), можно использовать для лечения или предупреждения неврологических нарушений и заболеваний, особенно эссенциального тремора, эпилепсии, эпилептического статуса и воздействия нервно-паралитического средства. Такие соединения можно использовать в комбинации с другими противосудорожными средствами и/или в комбинации с глубокой стимуляцией головного мозга (DBS).
,
Как понятно специалисту в области медицины, термины "лечить" и "лечение" относятся к медицинскому управлению течением заболевания, нарушения или состояния у субъекта (т.е. пациента, индивидуума) (см., например Stedman's Medical Dictionary). Как правило, подходящая доза (т.е. эффективное количество, терапевтическое количество) и режим лечения предоставляют соединение в количестве, достаточном для обеспечения терапевтической и/или профилактической пользы. Терапевтическая польза для индивидуумов, которым вводят соединение(я), описанное в настоящем описании, включает, например, улучшенный клинический исход, где задачей является предупреждение, или замедление, или торможение (уменьшение) нежелательного физиологического изменения, ассоциированного с заболеванием, или предупреждение, или замедление, или торможение (уменьшение) распространения или тяжести такого заболевания. Как рассмотрено в настоящем описании, эффективность одного или нескольких соединений может включать полезные или желательные клинические результаты, которые включают, но не ограничиваются ими, ослабление, уменьшение или смягчение симптомов, которые являются результатом или ассоциированы с заболеванием, подвергаемым лечению; снижение встречаемости симптомов; улучшение качества жизни; более длительный статус отсутствия заболевания (т.е. снижение вероятности или предрасположенности индивидуума к тому, что у индивидуума будут присутствовать симптомы, на основе которых ставится диагноз заболевания); уменьшение степени заболевания; стабилизированное (т.е. без ухудшения) состояние заболевания; отсрочивание или замедление прогрессирования заболевания; смягчение или ослабление болезненного состояния; и ремиссию (как частичную, так и полную), как поддающуюся обнаружению, так и не поддающуюся обнаружению; и/или общую выживаемость.
"Лечение" также может означать продление выживаемости по сравнению с ожидаемой выживаемостью, если бы индивидуум не получал лечения. Индивидуумы, нуждающиеся в лечении, включают индивидуумов, которые уже имеют заболевание или нарушение, а также индивидуумов, которые предрасположены или имеют риск развития заболевания или нарушения, и индивидуумов, у которых намереваются предупреждать заболевание, состояние или нарушение (т.е. снижение вероятности возникновения или рецидива заболевания или нарушения).
Субъект (т.е. пациент, индивидуум), нуждающийся в лечении соединением, как описано в настоящем описании, может представлять собой человека или может быть не являющимся человеком приматом или другим животным (т.е. ветеринарное применение), у которого развились симптомы нейрональной дисфункции и контроля, включая тремор и судороги, или который имеет риск развития неврологического заболевания или нарушения, и, более конкретно, симптомов нейрональной дисфункции и контроля, включая тремор и судороги. Не являющиеся человеком животные, которых можно лечить, включают млекопитающих, например, не являющихся человеком приматов (например, обезьяна, шимпанзе, горилла и т.п.), грызунов (например, крысы, мыши, песчанки, хомячки), зайцеобразных, свиней (например, свинья, карликовая свинья), животных семейства лошадиных, животные семейства собачьих, животных семейства кошачьих, животных семейства бычьих, слонов, медведей и других домашних животных, сельскохозяйственных животных и животных зоопарков.
ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЕ КОМПОЗИЦИИ
Кроме того, настоящее изобретение относится к фармацевтическим композициям, содержащим любые из соединений, описанных в настоящем описании (соединение структур (A) и (B), включая конкретные соединения, описанные в настоящем описании) и фармацевтически приемлемый эксципиент для применения в способе лечения неврологических нарушений и заболеваний, особенно эссенциального тремора, эпилепсии, эпилептического статуса и воздействия нервно-паралитического средства. Фармацевтически приемлемый эксципиент представляет собой физиологически и фармацевтически пригодный нетоксичный и неактивный материал или ингредиент, который не препятствует активности активного ингредиента; эксципиент также может называться носителем.
Для целей введения индивидууму, соединения, описанные в настоящем описании, можно составлять в качестве фармацевтических композиций, которые содержат соединение и фармацевтически приемлемый эксципиент (носитель и/или разбавитель). Соединение присутствует в композиции в количестве, которое является эффективным для лечения конкретного нарушения и предпочтительно обладает приемлемой для пациента токсичностью. Подходящие концентрации и дозировки может без труда определить специалист в данной области.
et al
Remington: The Science and Practice of Pharmacy
th
st
Фармацевтически приемлемые эксципиенты, носители и разбавители известны специалистам в данной области. Для композиций, составляемых в качестве жидких растворов, приемлемые носители и/или разбавители включают физиологический раствор и стерильную воду, и они необязательно могут включать антиоксиданты, буферы, бактериостатические средства и другие стандартные добавки. Композиции также можно составлять в качестве пилюль, капсул, гранул или таблеток, которые в дополнение к соединению содержат разбавители, диспергирующие и поверхностно-активные вещества, связующие вещества и смазывающие вещества. Кроме того, специалист в данной области может далее составить соединение соответствующим образом и в соответствии с общепринятой практикой. Фармацевтически приемлемые эксципиенты хорошо известны в области фармацевтики и описаны, например, в Rowe ., Handbook of Pharmaceutical Excipients: A Comprehensive Guide to Uses, Properties, and Safety, 5 Ed., 2006, и (Gennaro, 21 Ed. Mack Pub. Co., Easton, PA (2005)). Примеры фармацевтически приемлемых эксципиентов включают стерильный физиологический раствор и фосфатно-солевой буфер при физиологических значениях pH. В фармацевтической композиции могут быть предоставлены консерванты, стабилизаторы, красители, буферы и т.п. Кроме того, также можно использовать антиоксиданты и суспендирующие вещества.
Соединения и фармацевтические композиции, содержащие соединения, могут быть доставлены индивидуумам любым из нескольких способов введения, обычно используемых в данной области, включая системное введение. Как используют в рамках изобретения, системное введение включает пероральные и парентеральные способы введения.
Для перорального введения подходящие фармацевтические композиции включают порошки, гранулы, пилюли, таблетки, пастилки, жвачки, гели и капсулы, а также жидкости, сиропы, суспензии, эликсиры и эмульсии. Соединения, описанные в настоящем описании, также можно использовать в быстрорастворимых быстрораспадающихся дозированных формах. Эти композиции также могут включать антиоксиданты, вкусовые добавки, консерванты, суспендирующие вещества, загустители и эмульгаторы, красители, вкусовые добавки и другие фармацевтически приемлемые добавки. Составы для перорального введения можно составлять для немедленного высвобождения или модифицированного высвобождения, где модифицированное высвобождение включает замедленное, непрерывное, импульсное, контролируемое, направленное и запрограммированное высвобождение.
Для парентерального введения соединения, описанные в настоящем описании, вводят непосредственно в кровоток, в мышцу или во внутренний орган посредством внутривенной, внутриартериальной, внутрибрюшинной, внутримышечной, подкожной или другой инъекции или инфузии. Парентеральные составы можно получать в водных инъекционных растворах, которые могут содержать, в дополнение к соединению, буферы, антиоксиданты, бактериостатические средства, соли, углеводы и другие добавки, обычно используемые в таких растворах. Парентеральное введение может включать немедленное высвобождение или модифицированное высвобождение (такое как инъецируемое или имплантируемое депо).
Соединения и их фармацевтические композиции, описанные в настоящем описании, также можно вводить местным путем, (внутри)кожным путем или трансдермально на кожу или слизистую оболочку. Типичные составы включают гели, гидрогели, лосьоны, растворы, кремы, мази, повязки, пены, кожные пластыри, капсулы-имплантаты, имплантаты и микроэмульсии. Соединения также можно вводить посредством ингаляции или интраназального введения, например, в качестве сухого порошка, аэрозольного спрея или капель. Дополнительные пути введения соединений, описанных в настоящем описании, включают интравагинальный и ректальный (посредством суппозитория, пессария или клизмы) и глазной и ушной.
Следующие примеры предоставлены для целей иллюстрации, а не ограничения. В целом, соединения можно анализировать общими способами, описанными в примерах 17-29. В следующих примерах 1-16 описан синтез репрезентативных соединений структур (A) и (B).
ПРИМЕРЫ
Способы ВЭЖХ для анализа образцов (время удержания, t
, в минутах)
R
Способ 1
:Платформа: Agilent 1100 series, оборудованная автодозатором, УФ-детектором (220 нм и 254 нм), MS-детектором (APCI); колонка ВЭЖХ: Phenomenex Synergi-Max-RP 2,0×50 мм; градиент ВЭЖХ: 1,0 мл/мин, от 5% ацетонитрила в воде 95% ацетонитрила в воде в течение 13,5 мин, поддержание 95% в течение 2 мин. Как ацетонитрил, так и вода содержат 0,025% TFA.
Способ 2
4
: Платформа: Dionex, оборудованная автодозатором, УФ-детектором (220 нм и 254 нм), MS-детектором (APCI); колона ВЭЖХ: Waters XBridge C18, 3,0×100 мм; градиент ВЭЖХ: 1,4 мл/мин, от 5% ацетонитрила в воде до 99% ацетонитрила в воде в течение 7,8 мин, поддержание 99% в течение 1,6 мин. Как ацетонитрил, так и вода содержат 0,04% NHOH.
Способ
3
: Платформа: Agilent, оборудованная автодозатором, УФ-детектором (220 нм и 254 нм), MS-детектором (APCI); колонка ВЭЖХ: Waters XTerraMS C18, 3,0×250 мм; градиент ВЭЖХ: 1,0 мл/мин, от 10% ацетонитрила в воде до 90% ацетонитрила в воде в течение 46 мин, поддержание 90% в течение 7,0 мин. Как ацетонитрил, так и вода содержат 0,025% TFA.
Способ 4
: Платформа: Agilent 1100 series, оборудованная автодозатором, УФ-детектором (220 нМ и 254 нМ), MS-детектором (APCI); колонка ВЭЖХ: Phenomenex Synergi: MAX-RP, 2,0×50 мм; градиент ВЭЖХ: 1,0 мл/минута, от 10% ацетонитрила в воде до 90% ацетонитрила в воде в течение 2,5 минуты, поддержание 90% в течение 1 минуты. Как ацетонитрил, так и вода содержат 0,025% TFA.
ПРИМЕР 1
1-[(2,6-дифторфенил)метил]-1H-1,2,3-триазол-4-амин
Стадия 1A: 2,6-дифторбензилазид
2
4
Смесь 2,6-дифторбензилбромида (4,0 г, 19,3 ммоль), йодида натрия (2,9 г, 19,3 ммоль) и азида натрия (3,8 г, 57,9 ммоль) в ацетонитриле (20 мл) перемешивали при 70°C в течение 12 часов. Раствор разбавляли насыщенным раствором бикарбоната натрия и смесь экстрагировали этилацетатом (3×100 мл). Объединенные органические экстракты сушили (NaSO) и растворитель удаляли при пониженном давлении с получением 2,6-дифторбензилазида 1a в качестве светло-коричневого масла (65%).
Стадия 1B: этиловый эфир 1-(2,6-дифторбензил)-1H-[1,2,3]триазол-4-карбоновой кислоты
m/z
J=
J=
+
1
6
К раствору 1a (2,2 г, 13,0 ммоль) в этаноле (10,0 мл) добавляли этилпропиолат (1,40 г, 14,3 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 80°C в течение 5 часов. При охлаждении продукт выкристаллизовался. Кристаллы продукта фильтровали и промывали этанолом. Перекристаллизация из горячего метанола дала этиловый эфир 1-(2,6-дифторбензил)-1H-[1,2,3]триазол-4-карбоновой кислоты 1b в виде не совсем белых кристаллов (45%). LCMS (APCI)  268,0 (MH). H-ЯМР (300 МГц, DMSO-d): δ 8,85 (с, 1H), 7,47-7,57 (м, 1H), 7,14-7,22 (м, 2H), 5,74 (ушир. с, 2H), 4,29 (кв, 7,5 Гц, 2H), 1,28 (т, 7,5 Гц, 3H).
Стадия 1C: 1-(2,6-дифторбензил)-1H-[1,2,3]триазол-4-карбоновая кислота
2
2
R
+
К 1b (2,0 г, 7,5 ммоль), перемешиваемому в растворе 1:1 метанола (5,0 мл) и HO (5,0 мл) добавляли гидроксид лития (0,888 г, 37 ммоль). Реакционную смесь нагревали при 50°C в течение 2 часов. При охлаждении раствор подкисляли 1 Н водным раствором HCl до pH ~3,0. Осадок отфильтровывали, и промывали HO (30 мл), и сушили в вакуумной печи с получением 1-(2,6-дифторбензил)-1H-[1,2,3]триазол-4-карбоновой кислоты 1c в виде не совсем белого твердого вещества (85%). LCMS (способ 4) m/z 239,7 [MH], t=1,99 мин.
Стадия 1D: 1-[(2,6-дифторфенил)метил]-1H-1,2,3-триазол-4-карбонилхлорид
К 1c (20 г) добавляли тионилхлорид (60 мл) и смесь кипятили с обратным холодильником в течение 1 ч. Раствор концентрировали и сушили в вакууме с получением хлорангидрида 1d в виде белого твердого вещества.
Стадия 1E: 1-[(2,6-дифторфенил)метил]-1H-1,2,3-триазол-4-карбонилазид
Хлорангидрид 1d растворяли в ацетоне (120 мл) и медленно добавляли смесь азида натрия (8,2 г) в воде (100 мл), поддерживая внутреннюю температуру ниже 10°C. Смесь оставляли нагреваться до к.т. в течение ночи. Продукт отфильтровывали в виде твердого вещества, промывали водой и сушили в вакуумной сушке над гранулами NaOH с получением азида 1e в виде белого твердого вещества (21,6 г).
Стадия 1F: 1-[(2,6-дифторфенил)метил]-1H-1,2,3-триазол-4-амин
+
R
Азид 1e кипятили с обратным холодильником в сухом этаноле (100 мл) в течение ночи. Осторожно добавляли NaOH (4 M, водный, 20 мл) и кипячение с обратным холодильником продолжали в течение ночи. Смесь охлаждали до к.т. и медленно добавляли HCl (12 Н) для подкисления до pH 1. Этанол удаляли в вакууме и добавляли воду и DCM. Продукт экстрагировался в водный слой, который промывали DCM и органические экстракты удаляли. Водную фазу доводили до pH 10 медленным добавлением NaOH (12 M, водный) и продукт выпадал в осадок при перемешивании. После перемешивания в течение 30 минут продукт отфильтровывали, промывая водой несколько раз с получением аминсодержащего продукта 1f в виде не совсем белого твердого вещества (12,3 г). Хроматография на силикагеле с элюированием этилацетатом/гексаном дала более чистый образец для тестирования. LCMS (способ 4) m/z 211,1 [MH], t=1,46 мин.
ПРИМЕР 2
1-[(2,6-дифторфенил)метил]-1H-1,2,3-триазол-4-амин
Стадия 2A: гидразид 1-(2,6-дифторбензил)-1H-[1,2,3]триазол-4-карбоновой кислоты
2
2
R
+
К 1b (1,6 г, 6,0 ммоль) добавляли гидрат гидразина (0,9 г, 18,0 ммоль) и этанол (5 мл). Реакционную смесь нагревали в закрытой емкости при 80°C в течение 1 часа. Смесь разбавляли HO (20 мл) и фильтровали с использованием HO для ополаскивания остатка на фильтре с получением 1-(2,6-дифторбензил)-1H-[1,2,3]триазол-4-карбоновой кислоты 2a в виде не совсем твердого вещества, которое использовали без дополнительной очистки на следующей стадии. LCMS (способ 4) m/z 254,1 [MH], t=1,81 мин.
Стадия 2B: 1-(2,6-дифторбензил)-1H-[1,2,3]триазол-4-карбонилазид
2
2
R
+
Смесь 2a (1,0 г, 3,9 ммоль) и нитрита натрия (0,54 г, 7,8 ммоль) перемешивали в 2 Н водном растворе HCl (5,0 мл) на ледяной бане при 0°C. Смеси позволяли нагреться до комнатной температуры и перемешивали в течение 5 часов. Смесь разбавляли HO (50 мл) и фильтровали с использованием холодной HO для ополаскивания остатка на фильтре с получением 1-(2,6-дифторбензил)-1H-[1,2,3]триазол-4-карбонилазида 1e в виде белого твердого вещества (80% на двух стадиях). LCMS (способ 4) m/z 265,1 [MH], t=2,45 мин.
Стадия 2C: этиловый эфир [1-(2,6-дифторбензил)-1H-[1,2,3]триазол-4-ил]карбаминовой кислоты
+
R
Этанол (5,0 мл) добавляли к 1e (1,37 г, 5,2 ммоль) и смесь перемешивали при 85°C в течение 12 ч. Смесь концентрировали в вакууме с получением этилового эфира [1-(2,6-дифторбензил)-1H-[1,2,3]триазол-4-ил]карбаминовой кислоты 2c (выход 95%). LCMS (способ 4) m/z 283,0 [MH], t=2,08 мин.
Стадия 2D: 1-(2,6-дифторбензил)-1H-[1,2,3]триазол-4-иламин
2
4
R
3
+
1
К 2c (1,39 г, 4,9 ммоль) добавляли раствор 1:1 2 Н водный раствор NaOH/EtOH (5 мл 2 Н NaOH, 5 мл EtOH). Реакционную смесь перемешивали в закрытой емкости при 85°C в течение 1 часа. После охлаждения реакционную реакционная смесь нейтрализовали до pH 7,5 с использованием 1 Н водного раствора HCl. Раствор разбавляли рассолом и промывали 5% MeOH/DCM (3×50 мл). Объединенные органические экстракты сушили (NaSO) и растворитель удаляли при пониженном давлении с получением 1-(2,6-дифторбензил)-1H-[1,2,3]триазол-4-иламина 1f в виде не совсем белого твердого вещества (90%). LCMS (способ 1) m/z 211,0 [MH], t=2,03 мин. H-ЯМР (300 МГц, CDCl): δ 7,33 (м, 1H), 6,40 (м, 3H), 5,48 (с, 2H), 3,56 (с, 2H).
Другие соединения, которые получали по этой методике, включают:
+
R
1-(4-фторбензил)-1H-[1,2,3]триазол-4-иламин, 2e, LCMS (способ 1) m/z 192,8 [MH], t=1,89 мин;
+
R
1-(4-трифторметилбензил)-1H-[1,2,3]триазол-4-иламин, 2f, LCMS (способ 4) m/z 243,1 [MH], t=1,79 мин;
+
R
1-(3-фторбензил)-1H-[1,2,3]триазол-4-иламин, 2g, LCMS (способ 4) m/z 193,1 [MH], t=1,48 мин; и
+
R
1-бензил-1H-1,2,3-триазол-4-амин, 2h, LCMS (способ 4) m/z 175,1 [MH], t=1,40 мин.
ПРИМЕР 3
(2S)-2-амино-N-{1-[(2,6-дифторфенил)метил]-1H-1,2,3-триазол-4-ил}-3-фенилпропанамид
Стадия 3A: (2S)-2-амино-N-{1-[(2,6-дифторфенил)метил]-1H-1,2,3-триазол-4-ил}-3-фенилпропанамид
4
2
2
R
6
+
1
J=
Аминотриазол 1f (1,4 г), Boc-L-Phe-OH (1,8 г) и DIEA (1,75 мл) объединяли в DCM (10 мл) и DMF (10 мл). Медленно добавляли HATU (3,6 г) в течение 10 минут при перемешивании, а затем перемешивали при к.т. в течение ночи. Добавляли EtOAc и DCM и органический слой промывали 0,5 M NaOH, 1 M уксусной кислотой и рассолом, сушили над MgSO и концентрировали с получением твердого вещества. Твердое вещество перерастворяли в горячем DCM и добавляли простой эфир для кристаллизации продукта. Полученное твердое вещество отфильтровывали, промывали простым эфиром и сушили откачкой с получением продукта Boc-амин в виде не совсем белого твердого вещества (2,26 г). Твердое вещество растворяли в DCM (20 мл) и добавляли HCl (4 М, в диоксане, 20 мл) и перемешивали при к.т. в течение 2 ч. Приблизительно 80% растворителя удаляли в вакууме, и добавляли простой эфир, и энергично перемешивали для медленного осаждения продукта - амина в качестве соли HCl. Твердое вещество отфильтровывали в потоке N, промывали простым эфиром, сушили откачиванием в потоке N, а затем в вакуумной сушке над гранулами NaOH в течение ночи. Продукт - амин 3a - получали в виде белого порошка (1,9 г). LCMS (способ 3) m/z 358,2 [MH], t=19,65 мин H-ЯМР (300 МГц, DMSO-d): δ 8,58 (ушир. с, 2H), 8,20 (с, 1H), 7,43 (м, 1H), 7,16-7,29 (м, 7H), 5,67 (с, 2H), 4,23 (ушир. м, 1H), 3,14 (д, 6,9 Гц, 2H).
Стадия 3B: (2R)-2-амино-N-{1-[(2,6-дифторфенил)метил]-1H-1,2,3-триазол-4-ил}-3-фенилпропанамид
N
N,N
2
4
R
+
К 1f (0,700 г, 3,3 ммоль) в растворе 1:1 DCM (2,0 мл) и DMF (2,0 мл) добавляли-boc-D-фенилаланин (1,3 г, 5,0 ммоль) и -диизопропилэтиламин (0,645 г, 5,0 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 5 минут, затем добавляли HATU (1,60 г, 4,3 ммоль) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 5 часов. Смесь разбавляли насыщенным раствором бикарбоната натрия (100 мл) и промывали DCM (3×100 мл). Объединенные органические слои промывали насыщенным раствором хлорида аммония (100 мл), затем сушили (NaSO) и растворитель удаляли при пониженном давлении. Очистка колоночной хроматографией на силикагеле с элюированием 2% MeOH/DCM дала продукт Boc-амин, который затем разбавляли DCM (3,0 мл) и перемешивали с 2 Н HCl в простом эфире (4,95 мл, 9,9 ммоль) при комнатной температуре в течение 1 часа. Полученный осадок отфильтровывали, растирали с DCM и вновь отфильтровывали. Высушивание остатка на фильтре при пониженном давлении дало амин 3b в виде белого твердого вещества (63%) (соль HCl). LCMS (способ 3) m/z 358,2 [MH], t=19,61 мин.
Другие соединения, полученные с использованием этой методики, включают:
+
R
(3S)-N-{1-[(2,6-дифторфенил)метил]-1H-1,2,3-триазол-4-ил}морфолин-3-карбоксамид, 3c, LCMS (способ 3) m/z 324,2 [MH], t=12,52 мин;
+
R
(3R)-N-{1-[(2,6-дифторфенил)метил]-1H-1,2,3-триазол-4-ил}морфолин-3-карбоксамид, 3d, LCMS (способ 3) m/z 324,2 [MH], t=12,52 мин;
+
1
R
6
(2R)-2-амино-N-{1-[(2,6-дифторфенил)метил]-1H-1,2,3-триазол-4-ил}-3-метоксипропанамид, 3e, LCMS (способ 3) m/z 312,2 [MH], t=9,90 мин H-ЯМР (300 МГц, DMSO-d): δ 8,50 (ушир. с, 1H), 8,21 (с, 1H), 7,52 (м, 1H), 7,16-7,22 (м, 2H), 5,68 (с, 2H), 4,18-4,20 (м, 1H), 3,75-3,79 (м, 2H), 3,28 (с, 3H);
+
R
(2S)-2-амино-N-(1-бензил-1H-1,2,3-триазол-4-ил)-3-метоксипропанамид, 3f, LCMS (способ 4) m/z 276,1 [MH], t=1,40 мин;
+
R
(2S)-2-амино-N-{1-[(3-фторфенил)метил]-1H-1,2,3-триазол-4-ил}-3-метоксипропанамид, 3g, LCMS (способ 4) m/z 294,1 [MH], t=1,43 мин;
+
R
(2S)-2-амино-N-{1-[(4-фторфенил)метил]-1H-1,2,3-триазол-4-ил}-3-метоксипропанамид, 3h, LCMS (способ 4) m/z 294,1 [MH], t=1,43 мин;
+
R
(2S)-2-амино-3-метокси-N-(1-{[4-(трифторметил)фенил]метил}-1H-1,2,3-триазол-4-ил)пропанамид, 3i, LCMS (способ 4) m/z 344,1 [MH], t=1,62 мин;
+
R
(2R)-2-амино-N-{1-[(2,6-дифторфенил)метил]-1H-1,2,3-триазол-4-ил}-3-гидроксипропанамид, 3j, LCMS (способ 1) m/z 298,1 [MH], t=1,66 мин;
+
R
(2R)-2-амино-N-{1-[(3-фторфенил)метил]-1H-1,2,3-триазол-4-ил}-3-гидроксипропанамид, 3k, LCMS (способ 4) m/z 280,1 [MH], t=1,32 мин;
+
R
(2R)-2-амино-N-{1-[(4-фторфенил)метил]-1H-1,2,3-триазол-4-ил}-3-гидроксипропанамид, 3l, LCMS (способ 4) m/z 280,2 [MH], t=1,34 мин;
+
R
(2R)-2-амино-N-(1-бензил-1H-1,2,3-триазол-4-ил)-3-гидроксипропанамид, 3m, LCMS (способ 4) m/z 262,1 [MH], t=1,24 мин;
+
R
(2S)-2-амино-N-{1-[(2,6-дифторфенил)метил]-1H-1,2,3-триазол-4-ил}-3-гидроксипропанамид, 3n, LCMS (способ 1) m/z 298,1 [MH], t=1,72 мин;
+
R
(2S)-2-амино-N-{1-[(4-фторфенил)метил]-1H-1,2,3-триазол-4-ил}-3-гидроксипропанамид, 3o, LCMS (способ 4) m/z 280,1 [MH], t=1,33 мин;
+
R
(2S)-2-амино-N-(1-бензил-1H-1,2,3-триазол-4-ил)-3-гидроксипропанамид, 3p, LCMS (способ 4) m/z 262,1 [MH], t=1,25 мин; и
+
R
(2S)-2-амино-3-гидрокси-N-(1-{[4-(трифторметил)фенил]метил}-1H-1,2,3-триазол-4-ил)пропанамид, 3q, LCMS (способ 4) m/z 330,1 [MH], t=1,57 мин.
ПРИМЕР 4
2-(1-аминометилциклогексил)-N-[1-(2,6-дифторбензил)-1H-[1,2,3]триазол-4-ил]ацетамид
Стадия 4A: [1-(трет-бутоксикарбониламинометил)циклогексил]уксусная кислота
2
2
4
К раствору габапентина (2,0 г, 12 ммоль), перемешиваемому в THF (10,0 мл) и HO (10,0 мл), добавляли триэтиламин (4,9 мл, 36 ммоль) и boc-ангидрид (5,2 г, 24 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. Смесь подщелачивали до pH ~8 с использованием 2 Н водного раствора NaOH и промывали этилацетатом (3×100 мл). Водный слой подкисляли до pH ~5 с использованием 1 Н водного раствора HCL, а затем промывали этилацетатом (3×100 мл). Объединенные органические слои после промывания кислотой сушили (NaSO) и растворитель удаляли при пониженном давлении с получением [1-(трет-бутоксикарбониламинометил)циклогексил]уксусной кислоты 4a в виде бесцветного масла (90%).
Стадия 4B: 2-(1-аминометилциклогексил)-N-[1-(2,6-дифторбензил)-1H-[1,2,3]триазол-4-ил]ацетамид
N
+
R
Соединение 4b получали по методике стадии 3B с использованием промежуточного соединения 4a вместо -boc-D-фенилаланина. Неочищенный boc-защищенный продукт очищали колоночной хроматографией на силикагеле, элюируя 2% MeOH/DCM. Затем boc-защищенный продукт разбавляли DCM (3,0 мл) и перемешивали с 2 Н раствором HCl в простом эфире (4,95 мл, 9,9 ммоль) при комнатной температуре в течение 1 часа. Полученный осадок отфильтровывали, растирали с DCM и вновь фильтровали. Высушивание остатка на фильтре при пониженном давлении дало 2-(1-аминометилциклогексил)-N-[1-(2,6-дифторбензил)-1H-[1,2,3]триазол-4-ил]ацетамид 4b в виде белого твердого вещества (83%) (соль HCl). LCMS (способ 3) m/z 364,3 [MH], t=14,41 мин.
ПРИМЕР 5
N-[1-(2,6-дифторбензил)-1H-[1,2,3]триазол-4-ил]-3-пиридин-4-илпропионамид
Стадия 5A: N-[1-(2,6-дифторбензил)-1H-[1,2,3]триазол-4-ил]-3-пиридин-4-илпропионамид
N,N
J=
J=
J=
2
4
R
6
+
1
К 1f (0,700 г, 3,3 ммоль) в растворе 1:1 DCM (2,0 мл) и DMF (2,0 мл) добавляли 3-(4-пиридинил)пропионовую кислоту (0,755 г, 5,0 ммоль) и -диизопропилэтиламин (0,645 г, 5,0 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 5 минут, а затем добавляли HATU (1,60 г, 4,3 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 5 часов, разбавляли насыщенным раствором бикарбоната натрия (100 мл) и промывали DCM (3×100 мл). Объединенные органические слои промывали насыщенным раствором хлорида аммония (100 мл), затем сушили (NaSO) и растворитель удаляли при пониженном давлении с получением не совсем белого твердого вещества. Твердое вещество растирали с метанолом и фильтровали с получением N-[1-(2,6-дифторбензил)-1H-[1,2,3]триазол-4-ил]-3-пиридин-4-илпропионамида 5a в виде белого твердого вещества (44%). LCMS (способ 3) m/z 344,2 [MH], t=11,31 мин H-ЯМР (300 МГц, DMSO-d): δ 10,97 (с, 1H), 8,46 (d, 6,0 Гц, 2H), 8,11 (с, 1H), 7,52 (м, 1H), 7,16-7,28 (м, 4H), 5,64 (с, 2H), 2,91.(т, 7,5 Гц, 2H), 2,68 (т, 7,5 Гц, 2H).
Другие соединения, полученные по этой методике, включают:
+
R
N-[1-(2,6-дифторбензил)-1H-[1,2,3]триазол-4-ил]-3-пиридин-3-ил-пропионамид, 5b, LCMS (способ 3) m/z 344,2 [MH], t=11,14 мин;
+
1
R
6
J=
J=
3-(3-хлорфенил)-N-[1-(4-фторбензил)-1H-[1,2,3]триазол-4-ил]-пропионамид, 5c, LCMS (способ 3) m/z 359,2 [MH], t=27,39 мин H-ЯМР (300 МГц, DMSO-d): δ 10,90 (с, 1H), 8,18 (с, 1H), 7,18-7,43 (м, 8H), 5,54 (с, 2H), 2,88 (т, 7,5 Гц, 2H), 2,64 (т, 7,5 Гц, 2H);
+
R
N-{1-[(4-фторфенил)метил]-1H-1,2,3-триазол-4-ил}-3-фенилпропанамид, 5d, LCMS (способ 4) m/z 343,1 [MH], t=2,15 мин;
+
R
3-(3-хлорфенил)-N-{1-[(4-фторфенил)метил]-1H-1,2,3-триазол-4-ил}пропанамид, 5e, LCMS (способ 4) m/z 359,1 [MH], t=2,27 мин;
+
R
N-{1-[(4-фторфенил)метил]-1H-1,2,3-триазол-4-ил}-3-фенилпропанамид, 5f, LCMS (способ 4) m/z 325,1 [MH], t=2,16 мин;
+
R
N-{1-[(4-фторфенил)метил]-1H-1,2,3-триазол-4-ил}-3-(пиридин-3-ил)пропанамид, 5g, LCMS (способ 4) m/z 326,1 [MH], t=1,49 мин; и
+
1
R
6
J=
(2S)-N-{1-[(2,6-дифторфенил)метил]-1H-1,2,3-триазол-4-ил}-2-(2-оксопирролидин-1-ил)бутанамид, 5h, LCMS (способ 3) m/z 364,2 [MH], t=18,07 мин H-ЯМР (300 МГц, DMSO-d): δ 8,10 (с, 1H), 7,52 (м, 1H), 7,16-7,23 (м, 7H), 5,63 (с, 2H), 4,59 (м, 1H), 3,58 (м, 1H), 3,2 (м, 1H), 2,23-2,28 (м, 2H), 1,61-1,98 (м, 4H), 0,82 (т, 7,5 Гц, 3H).
ПРИМЕР 6
3-{1-[(2,6-дифторфенил)метил]-1H-1,2,3-триазол-4-ил}-1-(пиридин-3-илметил)мочевина
Стадия 6A: 3-{1-[(2,6-дифторфенил)метил]-1H-1,2,3-триазол-4-ил}-1-(пиридин-3-илметил)мочевина
+
R
К 1f (0,030 г, 0,14 ммоль), перемешиваемому в DCM (0,5 мл), добавляли пиридин (0,055 г, 0,70 ммоль) и трифосген (0,038 г, 0,13 ммоль). Реакционную смесь перемешивали на ледяной бане при 0°C в течение 30 минут, а затем добавляли 3-(аминометил)пиридин (0,075 г, 0,7 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Очистка посредством препаративной ВЭЖХ-MS дала 1-[1-(2,6-дифторбензил)-1H-[1,2,3]триазол-4-ил]-3-пиридин-3-илметилмочевину 6a в качестве соли TFA (35%). LCMS (способ 5) m/z 345,1 [MH], t=3,54 мин.
Другие соединения, полученные согласно методике, описанной выше, включают:
+
R
3-{1-[(2,6-дифторфенил)метил]-1H-1,2,3-триазол-4-ил}-1-(пиридин-2-илметил)мочевину, 6b, LCMS (способ 2) m/z 345,4 [MH], t=2,72 мин; и
+
R
3-{1-[(2,6-дифторфенил)метил]-1H-1,2,3-триазол-4-ил}-1-(пиридин-4-илметил)мочевину, 6c, LCMS (способ 5) m/z 345,1 [MH], t=2,65 мин.
ПРИМЕР 7
Бензиловый эфир [1-(2,6-дифторбензил)-1H-[1,2,3]триазол-4-ил]карбаминовой кислоты
Стадия 7A: бензиловый эфир [1-(2,6-дифторбензил)-1H-[1,2,3]триазол-4-ил]карбаминовой кислоты
2
4
R
3
+
1
К азиду 1e (0,40 г, 1,5 ммоль) в DMF (3,0 мл) добавляли бензиловый спирт (0,486 г, 4,5 ммоль). Реакционную смесь нагревали при 80°C в течение 24 часов. При охлаждении смесь разбавляли рассолом и промывали DCM (3×100 мл). Объединенные органические слои сушили (NaSO) и растворитель удаляли при пониженном давлении. Очистка колоночной хроматографией на силикагеле с элюированием 2% MeOH/DCM дала бензиловый эфир [1-(2,6-дифторбензил)-1H-[1,2,3]триазол-4-ил]-карбаминовой кислоты 7a (87%). LCMS (способ 2) m/z 345,2 [MH], t=5,36 мин. H-ЯМР (300 МГц, CDCl): δ 7,92 (с, 1H), 7,15-7,57 (м, 8H), 5,63 (с, 2H), 5,14 (с, 2H).
ПРИМЕР 8
[1-(2,6-дифторбензил)-1H-[1,2,3]триазол-4-ил]диметиламин
Стадия 8A: [1-(2,6-дифторбензил)-1H-[1,2,3]триазол-4-ил]диметиламин
2
4
R
3
+
1
К 1f (1,5 г, 7,1 ммоль) добавляли уксусную кислоту (20 мл), параформальдегид (2,1 г, 71 ммоль) и цианоборгидрид натрия (1,4 г, 21,3 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 12 часов. Реакционную смесь подщелачивали 1 Н водным NaOH при перемешивании на льду и промывали DCM (3×200 мл). Объединенные органические слои сушили (NaSO) и растворитель удаляли при пониженном давлении. Очистка колоночной хроматографией на силикагеле с элюированием 5% MeOH/DCM+0,5% TEA дала [1-(2,6-дифторбензил)-1H-[1,2,3]триазол-4-ил]диметиламин 8a (35%). LCMS (способ 3) m/z 239,2 [MH], t=15,82 мин. H-ЯМР (300 МГц, CDCl): δ 8,03 (с, 1H), 7,42 (м, 1H), 6,96-7,04 (м, 2H), 5,64 (с, 2H), 3,21 (с, 6H).
Другие соединения, полученные с использованием описанной выше методики, включают:
+
R
[1-(4-фторбензил)-1H-[1,2,3]триазол-4-ил]диметиламин, 8b, LCMS (способ 4) m/z 221,1 [MH], t=1,82 мин;
+
R
[1-(3-фторбензил)-1H-[1,2,3]триазол-4-ил]диметиламин, 8c, LCMS (способ 4) m/z 221,1 [MH], t=1,84 мин;
+
R
[1-(4-трифторметилбензил)-1H-[1,2,3]триазол-4-ил]диметиламин, 8d, LCMS (способ 4) m/z 271,1 [MH], t=2,06 мин;
+
R
[1-бензил-1H-[1,2,3]триазол-4-ил]диметиламин, 8e, LCMS (способ 4) m/z 203,1 [MH], t=1,77 мин; и
+
1
R
3
1-[(2,6-дифторфенил)метил]-N,N-диэтил-1H-1,2,3-триазол-4-амин, 8f, LCMS (способ 1) m/z 267,0 [MH], t=5,27 мин H-ЯМР (соль HCl; 300 МГц, CDCl): δ 8,29 (ушир. с, 1H), 7,41 (м, 1H), 7,00 (т, 2H), 5,68 (с, 2H), 3,60 (м, 4H), 1,28 (м, 6H).
ПРИМЕР 9
1-[1-(2,6-дифторбензил)-1H-[1,2,3]триазол-4-ил]-4-метил-пиперазин
Стадия 9A: 1-[1-(2,6-дифторбензил)-1H-[1,2,3]триазол-4-ил]-4-метилпиперазин
N,N
+
R
К 1f (0,030 г, 0,14 ммоль) в растворе 2:1 толуола (0,400 мл) и DMF (0,200 мл) добавляли гидрохлорид мехлорэтамина (0,025 г, 0,13 ммоль) и -диизопропилэтиламин (0,072 мг, 0,56 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 100°C в течение 12 часов. Очистка посредством препаративной ВЭЖХ-MS дала 1-[1-(2,6-дифторбензил)-1H-[1,2,3]триазол-4-ил]-4-метилпиперазин 9a в качестве соли TFA (30%). LCMS (способ 2) m/z 294,3 [MH], t=2,65 мин.
ПРИМЕР 10
4-{1-[(2,6-дифторфенил)метил]-1H-1,2,3-триазол-4-ил}морфолин
Стадия 10A: 4-{1-[(2,6-дифторфенил)метил]-1H-1,2,3-триазол-4-ил}морфолин
+
1
R
3
К раствору амина 1f (1,0 г) в ацетонитриле (20 мл) добавляли карбонат калия (2 г, порошковый) и 1-бром-2-(2-бромэтокси)этан (1,3 г) и реакционную смесь нагревали при микроволновом излучении при 120°C в течение 1,5 ч. Добавляли дополнительный 1-бром-2-(2-бромэтокси)этан (1,3 г) и нагревали при 120°C в течение дополнительного 1,5 ч. Смесь фильтровали, промывали DCM и фильтрат концентрировали и очищали хроматографией на силикагеле, элюируя смесью этилацетат/гексан, а затем далее очищали хроматографией на силикагеле, элюируя смесью ацетон/гексан, с получением 4-{1-[(2,6-дифторфенил)метил]-1H-1,2,3-триазол-4-ил}морфолина 10a (495 мг) в виде не совсем белого твердого вещества. LCMS (способ 1) m/z 280,9 [MH], t=4,14 мин H-ЯМР (300 МГц, CDCl): δ 7,36 (м, 1H), 6,96 (т, 2H), 6,79 (с, 1H), 5,53 (с, 2H), 3,82(м, 4H), 3,16 (м, 4H).
Другие соединения, полученные с использованием описанной выше методики, включают:
+
R
4-{1-[(4-фторфенил)метил]-1H-1,2,3-триазол-4-ил}морфолин, 10b, LCMS (способ 2) m/z 263,1 [MH], t=1,79 мин;
+
R
4-{1-[(3-фторфенил)метил]-1H-1,2,3-триазол-4-ил}морфолин, 10c, LCMS (способ 2) m/z 263,1 [MH], t=1,80 мин;
+
R
4-{1-[(4-трифторметилфенил)метил]-1H-1,2,3-триазол-4-ил}морфолин, 10d, LCMS (способ 2) m/z 313,1 [MH], t=2,02 мин;
+
R
4-(1-бензил-1H-1,2,3-триазол-4-ил)морфолин, 10e, LCMS (способ 2) m/z 245,2 [MH], t=1,74 мин; и
+
1
R
3
1-[(2,6-дифторфенил)метил]-4-(пирролидин-1-ил)-1H-1,2,3-триазол, 10f, LCMS (способ 1) m/z 265,0 [MH], t=5,11 мин H-ЯМР (300 МГц, CDCl): δ 7,35 (м, 1H), 6,96 (т, 2H), 6,71 (с, 1H), 5,51 (с, 2H), 3,27 (м, 4H), 1,92 (м, 4H).
Пример 11
1-[(2,6-дифторфенил)метил]-N-метил-1H-1,2,3-триазол-4-амин
Стадия 11A: N-{1-[(2,6-дифторфенил)метил]-1H-1,2,3-триазол-4-ил}формамид
+
R
К раствору амина 1f (1,3 г) в ацетонитриле (12 мл) добавляли формиат аммония (5 г) и реакционную смесь нагревали в закрытой емкости при 130°C в течение ночи. Добавляли дополнительный формиат аммония (2 г) и нагревание продолжали при 130°C в течение 3 ч. После охлаждения до к.т. и концентрирования добавляли воду и твердое вещество отфильтровывали и промывали водой с получением формамида 11a (1,22 г) в виде белого твердого вещества. LCMS (способ 4) m/z 310,9 [MH], t=2,24 мин.
Стадия 11B: 1-[(2,6-дифторфенил)метил]-N-метил-1H-1,2,3-триазол-4-амин
+
R
К раствору формамида 11a (1,22 г) в THF (40 мл) добавляли раствор борана (18,5 мл, 1 M в THF) и смесь перемешивали при к.т. в течение ночи. Осторожно добавляли метанол (20 мл), а затем HCl (10 мл, 1 Н, водный раствор) и перемешивали при к.т. в течение ночи. Реакционную смесь концентрировали, разбавляли DCM и промывали NaOH (50 мл, 2 Н, водный) и водой. Органическую фазу сушили над сульфатом натрия, концентрировали и очищали хроматографией на силикагеле, элюируя смесью этилацетат/гексан с получением 1-[(2,6-дифторфенил)метил]-N-метил-1H-1,2,3-триазол-4-амина 11b (0,67 г) в виде белого твердого вещества. LCMS (способ 4) m/z 225,0 [MH], t=2,03 мин.
ПРИМЕР 12
N-{1-[(2,6-дифторфенил)метил]-1H-1,2,3-триазол-4-ил}ацетамид
Стадия 12A: N-{1-[(2,6-дифторфенил)метил]-1H-1,2,3-триазол-4-ил}ацетамид
+
R
К взвеси амина 1f (1,0 г) в DCM (40 мл) медленно добавляли триэтиламин (0,86 мл), а затем ацетилхлорид (0,37 мл) при охлаждении на ледяной бане. Нагревание до к.т. и концентрирование дали неочищенный амид 12a. LCMS (способ 4) m/z 252,9 [MH], t=1,95 мин.
Другие соединения, полученные с использованием описанной выше методики, включают:
+
R
N-{1-[(3-фторфенил)метил]-1H-1,2,3-триазол-4-ил}ацетамид, 12b, LCMS (способ 4) m/z 235,1 [MH], t=1,70 мин;
+
R
N-{1-[(4-фторфенил)метил]-1H-1,2,3-триазол-4-ил}ацетамид, 12c, LCMS (способ 4) m/z 235,1 [MH], t=1,70 мин;
+
R
N-(1-{[4-(трифторметил)фенил]метил}-1H-1,2,3-триазол-4-ил)ацетамид, 12d, LCMS (способ 4) m/z 285,1 [MH], t=1,92 мин;
+
R
N-(1-бензил-1H-1,2,3-триазол-4-ил)пропанамид, 12e, LCMS (способ 4) m/z 231,1 [MH], t=1,76 мин;
+
R
N-{1-[(3-фторфенил)метил]-1H-1,2,3-триазол-4-ил}пропанамид, 12f, LCMS (способ 4) m/z 249,1 [MH], t=1,81 мин; и
+
R
N-{1-[(4-фторфенил)метил]-1H-1,2,3-триазол-4-ил}пропанамид, 12g, LCMS (способ 4) m/z 249,1 [MH], t=1,81 мин.
Стадия 12B: 1-[(2,6-дифторфенил)метил]-N-этил-1H-1,2,3-триазол-4-амин
+
R
К взвеси неочищенного амида 12a в THF (20 мл) добавляли алюмогидрид лития (1 M в THF, 8,3 мл) и смесь перемешивали при к.т. в течение 3 суток. Реакционную смесь гасили добавлением соли Рошеля (насыщенный водный раствор) и экстрагировали этилацетатом (2×100 мл). Органическую фазу экстрагировали HCl (1 Н, водный) и органический слой удаляли. Водную фазу подщелачивали NaOH (2 Н, водный) до pH 8 и продукт экстрагировали в этилацетат (2×30 мл). Органический слой промывали рассолом, сушили над сульфатом магния и концентрировали с получением 1-[(2,6-дифторфенил)метил]-N-этил-1H-1,2,3-триазол-4-амина 12h в виде белого твердого вещества. LCMS (способ 4) m/z 211,0 [MH], t=2,11 мин.
ПРИМЕР 13
2-({1-[(2,6-дифторфенил)метил]-1H-1,2,3-триазол-4-ил}амино)этан-1-ол
Стадия 13A: ({1-[(2,6-дифторфенил)метил]-1H-1,2,3-триазол-4-ил}карбамоил)метилацетат
+
R
К взвеси амина 1f (1,3 г) в DCM (40 мл) медленно добавляли триэтиламин (1,1 мл), а затем ацетоксиацетилхлорид (0,73 мл) при к.т. и перемешивали в течение 1 ч. После промывания насыщенным бикарбонатом натрия и водой органический слой сушили над сульфатом натрия и концентрировали с получением ({1-[(2,6-дифторфенил)метил]-1H-1,2,3-триазол-4-ил}карбамоил)метилацетата 13a (1,9 г) в виде белого твердого вещества. LCMS (способ 4) m/z 310,9 [MH], t=2,24 мин
Стадия 13B: 2-({1-[(2,6-дифторфенил)метил]-1H-1,2,3-триазол-4-ил}амино)этан-1-ол
+
R
К взвеси амида 13a (1,9 г) в THF (40 мл) добавляли раствор борана (18,5 мл, 1 M в THF) и кипятили с обратным холодильником в течение 8 ч. Осторожно добавляли метанол (20 мл), а затем HCl (6 Н, водный раствор) и смесь перемешивали при 60°C в течение ночи. После охлаждения смесь концентрировали, разбавляли DCM и промывали NaOH (50 мл, 2 Н, водный) и водой. Органическую фазу сушили над сульфатом натрия, концентрировали и очищали хроматографией на силикагеле, элюируя смесью этилацетат/гексан, с получением 2-({1-[(2,6-дифторфенил)метил]-1H-1,2,3-триазол-4-ил}амино)этан-1-ола 13b (0,91 г) в виде белого твердого вещества. LCMS (способ 4) m/z 254,9 [MH], t=1,92 мин.
ПРИМЕР 14
1-{1-[(2,6-дифторфенил)метил]-1H-1,2,3-триазол-4-ил}пирролидин-2-он
Стадия 14A: 1-{1-[(2,6-дифторфенил)метил]-1H-1,2,3-триазол-4-ил}пирролидин-2-он
+
1
R
3
J
J
J
К раствору амина 1f (400 мг) в DCM (8 мл) добавляли DIEA (0,41 мл), а затем 4-хлорбутаноилхлорид (0,23 мл) и смесь перемешивали при к.т. в течение ночи. Реакционную смесь сушили и добавляли DMF (2 мл) и реакционную смесь вновь сушили и перерастворяли в DMF. Добавляли NaH (169 мг, 60%, в масле) при перемешивании и реакционную смесь нагревали при 60°C в течение ночи. Добавляли дополнительный NaH (60 мг, 60%, в масле) и вновь нагревали при 60°C в течение ночи для завершения реакции. Добавляли DCM и хлорид аммония и органический слой отделяли и сушили над сульфатом магния и концентрировали. Хроматография на силикагеле с элюированием смесью этилацетат/гексан дала лактам 1-{1-[(2,6-дифторфенил)метил]-1H-1,2,3-триазол-4-ил}пирролидин-2-он 14a (230 мг) в виде белого твердого вещества. LCMS (способ 1) m/z 279,1 [MH], t=4,50 мин H-ЯМР (300 МГц, CDCl): δ 8,13 (с, 1H), 7,35 (м, 1H), 6,96 (т, =7,0 Гц, 2H), 5,60 (с, 2H), 4,07 (т, =7,8 Гц, 2H), 2,55 (т, 2H), 2,21 (кажущийся кв, =7,4 Гц, 2H).
ПРИМЕР 15
3-{1-[(2,6-Дифторфенил)метил]-1H-1,2,3-триазол-4-ил}-1,3-оксазолидин-2-он
Пример 15A: 3-{1-[(2,6-дифторфенил)метил]-1H-1,2,3-триазол-4-ил}-1,3-оксазолидин-2-он
+
1
R
3
К раствору неочищенного амина 13b (1,3 г, без очистки) в DCM (100 мл) добавляли триэтиламин (1,8 мл), а затем трифосген (0,65 г). Смесь перемешивали при к.т. в течение ночи. Добавляли дополнительный трифосген (0,06 г) и перемешивали в течение ночи. Реакционную смесь промывали водой, насыщенным бикарбонатом натрия, сушили над сульфатом натрия и концентрировали. Хроматография на силикагеле с элюированием смесью этилацетат/гексан дала карбамат 3-{1-[(2,6-дифторфенил)метил]-1H-1,2,3-триазол-4-ил}-1,3-оксазолидин-2-он 15a (0,65 г) в виде белого твердого вещества. LCMS (способ 1) m/z 281,1 [MH], t=4,36 мин H-ЯМР (300 МГц, CDCl): δ 7,91 (с, 1H), 7,38 (м, 1H), 6,97 (т, 1H), 5,62 (с, 2H), 4,56 (т, 2H), 4,23 (т, 2H).
ПРИМЕР 16
1-{1-[(2,6-дифторфенил)метил]-1H-1,2,3-триазол-4-ил}имидазолидин-2-он
Стадия 16A: 1-{1-[(2,6-дифторфенил)метил]-1H-1,2,3-триазол-4-ил}имидазолидин-2-он
+
1
R
3
К раствору амина 1f (5,0 г, 23,8 ммоль) и Boc-глицина (5,0 г, 28,6 ммоль) в DCM (40 мл) и DMF (40 мл) добавляли DIEA (6,2 мл), а затем HATU (12,7 г) и смесь перемешивали при к.т. в течение 3 суток. Реакционную смесь концентрировали для удаления DCM, а затем добавляли избыток воды. Твердое вещество отфильтровывали, промывали водой и сушили в вакууме с получением амида в виде не совсем белого твердого вещества (8,6 г). Амидный продукт растворяли в DCM (40 мл) и добавляли HCl (4 M в диоксане, 40 мл) и перемешивали при к.т. в течение 1 ч. Осторожно добавляли NaOH (4 M, водный) для подщелачивания и добавляли дополнительный DCM. Органический слой сушили над сульфатом магния и концентрировали с получением неочищенного амина Амин растворяли в THF (20 мл) и добавляли боран (1 M, в THF, 72 мл), и раствор нагревали при 60°C в течение 16 ч. При 60°C при быстром перемешивании осторожно добавляли MeOH (20 мл), а затем HCl (4 M в диоксане, 35 мл), а затем кипятили с обратным холодильником в течение 1,5 ч. Реакционную смесь охлаждали, концентрировали (приблизительно 80% растворителя удаляли) и добавляли эфир для осаждения диамина в качестве соли HCl. Продукт фильтровали в потоке азота, промывали простым эфиром и сушили откачиванием в потоке азота с получением белого твердого вещества (6,95 г, предположительно дисоль HCl). Диамин (6,95 г) растворяли в DCM (200 мл), содержавшем избыток DIEA (15 мл) и медленно добавляли трифосген (2,12 г в 50 мл DCM) при к.т. Через 1 ч реакционную смесь промывали HCl (1 M водный, 2×50 мл), NaOH (2 M, водный, 50 мл), водой и рассолом, и сушили над сульфатом магния, и концентрировали с получением белого твердого вещества. Твердое вещество перерастворяли в DCM (минимальное количество для растворения) и осаждали добавлением простого эфира. Твердое вещество отфильтровывали и промывали простым эфиром с получением 1-{1-[(2,6-дифторфенил)метил]-1H-1,2,3-триазол-4-ил}имидазолидин-2-она 16a (3,45 г) в виде белого твердого вещества. LCMS (способ 1) m/z 280,0 [MH], t=3,42 мин H-ЯМР (300 МГц, CDCl): δ 7,95 (с, 1H), 7,50 (м, 1H), 7,18 (т, 2H), 7,07 (с, 1H), 5,62 (с, 2H), 3,87 (т, 2H), 3,43 (т, 2H).
ПРИМЕР 17
ТЕСТ МАКСИМАЛЬНОГО ЭЛЕКТРОШОКА
Все эксперименты с моделями на животных в рамках настоящего изобретения проводили на самцах грызунов (мыши-альбиносы Carworth Farms No. 1 (CF-1) или крысы-альбиносы Sprague-Dawley). Содержание, обращение и кормление соответствовали рекомендациям "Guide for the Care and Use of Laboratory Animals". Многие из следующих экспериментов проводили в рамках программы скрининга противосудорожных препаратов (ASP) National Institute of Neurological Disease and Stroke. The Department of Health and Human Services недавно расширил объем ASP включением контрмер для воздействия нервно-паралитических средств.
in vivo
50
Противосудорожную активность  измеряли посредством теста максимального электрошока (MES). Для этих экспериментов использовали взрослых самцов мышей-альбиносов CF-1 (18-25 г) или крыс Sprague-Dawley (100-150 г). Переменный ток 60 Гц (50 мА для мышей, 150 мА для крыс) доставляли в течение 0,2 секунд посредством корнеальных электродов, первоначально обработанных раствором электролита, содержавшим анестетик 0,5% татракаин HCl. Конечной точкой защиты от индуцируемых MES судорог является устранение компонента судорог, представляющего собой тоническое разгибание задних конечностей. Мышей исследовали в различные временные интервалы после введения доз исследуемого соединения посредством внутрибрюшинного введения с использованием объема 0,01 мл/г у мышей, и скрининг крыс проводили в объеме 0,04 мл/г (как в/б, так и п/о). Было показано, что соединения, приведенные в таблице 1, являются активными при однократной указанной дозе или при ED, если исследовали множество доз (данные приведены для мышей, которым проводили в/б введение, и для крыс, которым проводили п/о введение, mpk=мг/кг).
Таблица 1
Соединение
Мышь (в/б)
Крыса (п/о)
3a
Активно при MES в дозе 100 mpk
ED<sub>50</sub> при MES 25 mpk
3b
ED<sub>50</sub> при MES 56 mpk
ED<sub>50</sub> при MES 24 mpk
3c
ED<sub>50</sub> при MES 20 mpk
Активно при MES в дозе
3d
ED<sub>50</sub> при MES 73 mpk
ED<sub>50</sub> при MES 24 mpk
3e
ED<sub>50</sub> при MES 40 mpk
Активно при MES в дозе
3j
Активно при MES в дозе 100 mpk
ED<sub>50</sub> при MES 29 mpk
5b
Активно при MES в дозе 300 mpk
---
5e
Активно при MES в дозе 100 mpk
---
5h
Активно при MES в дозе 300 mpk
---
8a
ED<sub>50</sub> при MES 27 mpk
ED<sub>50</sub> при MES 9 mpk
8e
Активно при MES в дозе 100 mpk
---
10a
ED<sub>50</sub> при MES 31 mpk
ED<sub>50</sub> при MES 44 mpk
ED<sub>50</sub> при MES 73mpk
Активно при MES в дозе 30 mpk
11b
Активно при MES в дозе 100 mpk
Активно при MES в дозе 30 mpk
12h
Активно при MES в дозе 100 mpk
Активно при MES в дозе 30 mpk
13b
Активно при MES в дозе 30 mpk
Активно при MES в дозе 30 mpk
14a
Активно при MES в дозе 100 mpk
ED<sub>50</sub> при MES 28 mpk
16a
ED<sub>50</sub> при MES 8 mpk
ED<sub>50</sub> при MES 7 mpk
ПРИМЕР 18
ТЕСТ СУДОРОЖНОГО ПОРОГА ПРИ ПОДКОЖНОМ ВВЕДЕНИИ МЕТРАЗОЛА
Животным предварительно вводили различные дозы исследуемого соединения, как и для тестов MES. Дозу метразола, которая индуцировала судороги у 97% контрольных животных (85 мг/кг у мышей), инъецировали в ненатянутую складку кожи на средней линии шеи. Для минимизации стресса животных помещали в изолирующие клетки и наблюдали в течение последующих 30 мин в отношении наличия или отсутствия припадка. Постоянное наблюдение позволяло определить время до максимального эффекта (TPE) для каждого лекарственного средства. Конечным результатом считается эпизод с клоническими спазмами, длящийся приблизительно 3-5 с, передних и/или задних конечностей, челюстей или вибрисс. Животных, которые не удовлетворяли этому критерию, считали защищенными.
ПРИМЕР 19
ОСТРАЯ ТОКСИЧНОСТЬ - МИНИМАЛЬНОЕ ДВИГАТЕЛЬНОЕ УХУДШЕНИЕ
50
Проводят мониторинг животных в отношении явных признаков ухудшенной неврологической или мышечной функции. У мышей используют тест вращающегося стержня. Мышь без введения, когда ее помещают на стержень, который вращается со скоростью 6 об./мин., может сохранять равновесие в течение длительного периода времени. Исследуемое соединение считают токсичным, если мышь падает с этого вращающегося стержня три раза за 1 мин. У крыс на минимальный двигательный дефицит указывает атаксия (которая проявляется аномальной некоординированной походкой). В дополнение к минимальному двигательному ухудшению животных наблюдают в отношении других аномальных признаков, включающих аномальную позу тела, тремор, гиперактивность, отсутствие исследовательского поведения или сонливость. Можно строить кривые доза-эффект для токсичности для определения токсичной дозы у 50% животных (TD).
ПРИМЕР 20
СУДОРОГИ, ИНДУЦИРОВАННЫЕ ХИМИЧЕСКИМИ СРЕДСТВАМИ, ВЫЗЫВАЮЩИМИ СУДОРОГИ
50
Исследуемое соединение вводят в дозе TD или ниже и исследуют в момент времени максимального эффекта п/к метразола (TPE). В этом тесте измеряют способность исследуемого вещества предотвращать клонические судороги, индуцируемые п/к инъекцией либо бикукуллина (2,7 мг/кг), либо пикротоксина (2,5 мг/кг). После введения бикукуллина мышей CF-1 помещают в изолирующие клетки и наблюдают в течение 30 мин в отношении наличия или отсутствия судорог; мышей, которым ввели пикротоксин, наблюдают в течение 45 мин вследствие более медленного всасывания этого средства, вызывающего судороги. Припадки, как правило, состояли из эпизода клонических спазмов передних и задних лап, челюстей и вибрисс. После индуцированных бикукуллином клонических судорог, как правило, следует тоническое разгибание задних конечностей и смерть. Соединение считается защитным, если на протяжении всего периода наблюдения судороги отсутствуют.
ПРИМЕР 21
ТЕСТ МИНИМАЛЬНЫХ КЛОНИЧЕСКИХ СУДОРОГ
Neurology
Двадцати мышам CF-1 предварительно в/б вводят 30, 100 и 300 мг/кг исследуемого соединения. В различные моменты времени (0,25, 0,5, 1, 2 и 4 ч) после введения отдельным мышам (четыре в каждый момент времени) вводят глазные капли 0,5% татракаина гидрохлорида и нагружают достаточным током (32 мА при 6 Гц в течение 3 c), доставляемым через корнеальные электроды, для индукции психомоторных судорог. Как правило, эти судороги характеризуются минимальной клонической фазой, за которой следует стереотипное и автоматическое поведение, первоначально описанное как сходное с аурой пациентов-людей с парциальными припадками (Toman, , 1951. 1:444-460). Животных, не демонстрирующих это поведение, считают защищенными.
ПРИМЕР 22
ТЕСТ НА КРЫСАХ С ГИППОКАМПАЛЬНЫМ КИНДЛИНГОМ (ЛОКАЛЬНЫЕ ПРИПАДКИ)
Brain Res.,
Electroencephalogr Clin Neurophysiol,
Электроды имплантируют в гиппокамп крыс под анестезией, которым затем позволяют восстановиться в течение 1 недели. Следуя протоколу быстрого киндлинга (Lothman et al.,  1994. 649:71-84), крыс стимулируют 200 мА в течение 10 с, 50 Гц, каждые 30 мин в течение 6 ч через день до тех пор, пока они не достигают полного киндлинга (4-5 суток стимуляции). После покоя в течение 1 недели животным дают тот же электрический стимул, который служил в качестве исходного уровня. Животным предварительно вводят исследуемое соединение (посредством в/б инъекции), а затем исследуют через различные промежутки времени. В каждый момент времени регистрируют поведенческую оценку припадка и длительность следового разряда. Поведенческую оценку судорог проводят по следующим критериям (Racine,  1972. 32(3):281-94): стадия 1 - клонус лицевых мышц и рта, стадия 2 - стадия 1 плюс подергивание головы, стадия 3 - стадия 2 плюс клонус передних конечностей, стадия 4 - стадия 3 плюс повизгивание, стадия 5 - стадия 4 плюс повторяющееся повизгивание и падение. Также у крыс с киндлингом можно измерять пороговое значение следового разряда (ADT). ADT определяют как наиболее низкий ток, при котором индуцируется следовой разряд по меньшей мере 4 с. В день теста индивидуальное ADT каждой крысы определяют путем повышения интенсивности тока пошаговым образом до тех пор, пока крысы не продемонстрируют электрографический следовой разряд длительностью по меньшей мере 4 с. Первоначальную стимуляцию проводят при интенсивности 20 мкА с приращением 10 мкА каждые 1-2 мин до индукции следового разряда. Через пятнадцать минут после определения порогового значения до лекарственного средства вводят однократную дозу исследуемого вещества 2 животным в объеме 0,04 мл/10 г массы тела. Таким образом, животные служат в качестве их собственного контроля. Затем определяют ADT индивидуальной крысы в различные моменты времени (т.е. 0,25, 1, 2 и 4 ч) после введения лекарственного средства. Результаты этого анализа представлены в таблице 2.
Таблица 2
Соединение
Крыса
3a
Активно при 200 mpk
3c
Активно при 50 mpk
3d
ED<sub>50</sub> 79 mpk
8a
ED<sub>50</sub> 25 mpk
10a
ED<sub>50</sub> 32 mpk
16a
Активно при 100 mpk
ПРИМЕР 23
IN VITRO
МОДЕЛЬ ФАРМАКОРЕЗИСТЕНТНОСТИ НА ОСНОВЕ САМОПРОИЗВОЛЬНОЙ ИМПУЛЬСАЦИИ
Epilepsy Research
Electroencephalogr Clin Neurophysiol,
J Neurophysiol,
2
2
2
4
4
3
2
Системное введение каинатов (KA): введение KA состоит в многократных системных инъекциях KA в модифицированном протоколе, как описано ранее (Hellier, et al., , 1998. 31:73-84). Крыс Sprague-Dawley извлекали из их клеток, взвешивали и помещали по отдельности в емкости из плексигласа для инъекций и мониторинга. Припадки оценивали в ходе эксперимента на основе шкалы Racine (Racine,  1972. 32(3):281-94). Носитель (0,9% физиологический раствор) или KA (5 мг/кг, в/б) вводили один раз в час до тех пор, пока животные не начинали демонстрировать поведение, соответствующее судорогам ранней стадии (стадия 1-3). После начала у животного судорог дозирование прекращали или снижали до 2,5 мг/кг (в/б) для этого животного до тех пор, пока не наблюдали по меньшей мере один припадок стадии 4/5. Количество и стадию припадков регистрировали до тех пор, пока животное не демонстрировало припадки стадии 4 или стадии 5 в течение 3,5 часов. Животных, не имевших по меньшей мере один припадок стадии 4 или 5 в час, не включали в анализ. После мониторинга в течение 3,5 часов крысам проводили в/б инъекцию 0,9% физиологического раствора (1-2 мл) для гидратации и возвращали в их клетки. Объединенные срезы энторинальной коры/гиппокампа получали от крыс под анестезией пентобарбиталом (35 мг/кг). После быстрой декапитации головной мозг извлекали и помещали на одну минуту на ледяной оксигенированный (95% O/5% CO) раствор Рингера, содержавший (в мМ): сахарозу (125,0), KCl (3,0), NaHPO (1,2), MgSO (2,0), NaHCO (26,0), глюкозу (10,0), и CaCl (2,0) (Scharfman,  1997. 78(2):1082-95). Затем головной мозг блокировали и приклеивали корой вниз к держателю вибратома. Получали горизонтальные срезы (400 мкм), содержавшие энторинальную кору и гиппокамп, и помещали в приемную камеру по меньшей мере на один час до начала регистрации. Оксигенированный раствор Рингера в приемной камере и при регистрации имеет NaCl (126 мМ) вместо сахарозы, pH=7,4, и осмолярность 300-310 мосм.
2+
Регистрацию потенциала внеклеточного поля (при 31±1°C) проводили в слое II медиальной энторинальной коры (mEC) с использованием борсиликатных стеклянных электродов (3-6 МОм), заполненных нормальным раствором Рингера или 3 M NaCl. Концентрический биполярный стимулирующий электрод, помещенный в угловой пучок, использовали для индукции ответов потенциала поля. Сигналы фильтровали на уровне 3 кГц, проводили взятие образцов при 10 кГц и получали для хранения на компьютере с использованием Digidata 1440A AD Converter (Axon Instruments). Кривые входа/выхода (I/O) стимулов строили для установления стабильных ответов исходного уровня и для определения пороговых и максимальных ответов. Импульсы напряжения 1-20 В генерировали с использованием элемента для изоляции стимула. Принимали только срезы, которые генерировали стабильные ответы I/O на протяжении периода регистрации исходного уровня. Затем внеклеточный раствор заменяли на раствор, содержавший 6 мМ KCl и 0,1 мМ Mg для индукции самопроизвольной электрографической импульсной активности (SB).
,
Результаты, полученные для исследуемого вещества, сравнивали с результатами, полученными для "традиционных" (например, фенитоин, карбамазепин) и "нетрадиционных" (например ретигабин) противосудорожных препаратов. Зависимые переменные, которые измеряли, включали частоту и длительность импульсов в присутствии и в отсутствие AED. Соединения (100 мкМ), для которых обнаружено, что они по существу блокировали самопроизвольную импульсацию при этой концентрации, считались эффективными. Результаты сравнивали с помощью t-критерия Стьюдента, причем статистическая значимость определялась как p<0,05.
ПРИМЕР 24
МОДЕЛЬ НА КРЫСАХ С РЕЗИСТЕНТНЫМ К ЛАМОТРИГИНУ (LTG) КИНДЛИНГОМ МИНДАЛЕВИДНОГО ТЕЛА
Epilepsia
Двум группам (введение LTG и носителя, n=8-10 крыс/группа) самцов крыс Sprague-Dawley (250-300 г) стереотактически имплантируют электрод в левое миндалевидное тело (AP +5,7 мм, ML +4,5, DV +2,0 от внутриушного нуля) под анестезией кетамином-ксилазином. Затем животным позволяют восстановиться в течение одной недели перед началом киндлинга (Postma et al., , 2000. 41:1514-21). За один час до начала стимуляции киндлинга крысам вводят однократную в/б дозу либо носителя (0,5% метилцеллюлоза (MC)), либо LTG (5 мг/кг в 0,5% MC). Методика киндлинга состоит в доставке стимула 200 мкА (надпороговый) каждые сутки всем животным в обеих группах введения, которые демонстрируют устойчивые припадки стадии 4 или 5 согласно оценке с помощью оценочной шкалы Racine. Через одну неделю после киндлинга всем животных животным вводят нагрузочную дозу LTG (15 мг/кг, в/б), а затем стимулируют для подтверждения чувствительности к LTG контрольных животных, которым вводили носитель, а также резистентности к LTG группы, в которой вводили LTG. Затем животным позволяют нейтрализоваться в течение 3 суток. На 3 сутки отдыха животных предварительно стимулируют для того, чтобы убедиться в восстановлении припадка с полным киндлингом. На 4 сутки обе группы введения нагружают однократной дозой исследуемого AED (доза, которая вызывает минимальное двигательное ухудшение (MMI)). Затем крыс в обеих группах введения нагружают посредством стимула киндлинга при заданном TPE исследуемого AED. Когда наблюдают, что введение лекарственного средства значимо снижает показатель припадка и снижает следовой разряд, можно проводить исследование доза-эффект. Для этого исследования количественно определяют способность вещества-кандидата снижать длительность следового разряда (ADD) и тяжесть припадков путем варьирования дозы между 0 и 100% эффектом. Результаты выражают в качестве количества защищенных животных (т.е. не демонстрирующих вторичный генерализованный лимбический припадок) относительно количества исследованных животных. Показатель припадка анализируют посредством U-критерия Манна-Уитни и ADD (±S.E.M.) анализируют с помощью t-критерия Стьюдента, причем значение p<0,05 определяют как статистически значимое. Затем вычисляют срединную эффективную дозу и 95% доверительный интервал посредством пробит-анализа.
ПРИМЕР 25
ЛОКАЛЬНЫЕ ПРИПАДКИ У МЫШЕЙ С КОРНЕАЛЬНЫМ КИНДЛИНГОМ
Epilepsy Res,
Epilepsy Res,
50
Взрослых самцов мышей CF-1 (n=8 на группу, 18-25 г) подвергают киндлингу до критерия 5 последовательных вторично генерализованных припадков (стадия Racine 4 или 5, согласно протоколу корнеального киндлинга, описанному ранее (Rowley et al., 2010. 92(2-3): 163-69; Matagne et al.,  1998. 31(1):59-71). Два раза в сутки в каждый глаз наносят 0,5% раствор татракаина гидрохлорида и оптический нерв стимулируют через корнеальные электроды (3 мА, 60 Гц, 3 секунды). После проведения корнеальных стимуляций два раза в сутки мыши CF-1, как правило, достигают первого припадка стадии 5 между приблизительно 10-14 сутками. Стимуляции два раза в сутки продолжают для каждой мыши до тех пор, пока эта мышь не достигнет критерия 5 последовательных припадков стадии 5, когда она считается достигшей "полного киндлинга". Затем достигших полного киндлинга мышей стимулируют от раз в двое суток до раз в 3 суток до тех пор, пока все другие мыши в группе не достигнут критерия 5 последовательных припадков стадии 5. Тестирование исследуемых соединений начинают по меньшей мере через 5-7 суток после проведения последней стимуляции. Для идентификационных исследований 100 мг/кг исследуемого соединения вводят в/б пяти группам из 4 достигших полного киндлинга мышей на группу. Затем мышей в каждой группе исследуют в различные моменты времени (0,25, 0,5, 1, 2, 4 часа) после дозирования лекарственного средства. Мышей, демонстрирующих показатель припадка <3, считают защищенными. Момент времени, когда большинство животных защищены, считают временем максимального эффекта (TPE) исследуемого соединения. Также можно проводить количественные дифференцировочные исследования при TPE. По меньшей мере 3 дозы, достаточные для обеспечения 0%-100% защиты, как определено выше для описанных ранее идентификационных исследований, оценивают в группах из 8-10 достигших полного киндлинга мышей. После исследования животных с корнеальным киндлингом возвращают в их клетки и позволяют им "нейтрализовать" какое-либо исследуемое соединение в течение по меньшей мере 3-4 суток после тестирования. Способность исследуемого лекарственного средства блокировать поведенческие припадки полного киндлинга указывает на активность против вторично генерализованных парциальных припадков. Для количественного определения защиты в модели корнеального киндлинга вычисляют эффективную дозу, при которой 50% мышей защищены (ED), 95% доверительный интервал (95% C.I.), и наклон+S.E.M. с использованием пробит-анализа.
ПРИМЕР 26
МОДЕЛЬ НА КРЫСАХ С ПИЛОКАРПИНОМ
Соединения оценивают в отношении их способности остановить индуцируемый пилокарпином судорожный эпилептический статус (SE). Для идентификации доз лекарственного средства для применения в исследовании SE оценивают острое двигательное ухудшение после внутрибрюшинного (в/б) введения доз, начинающихся с 100 и 300 мг/кг. Индивидуальных крыс Sprague Dawley оценивают в отношении острой токсичности на протяжении нескольких моментов времени после введения исследуемых соединений. Результаты, полученные для этого первоначального исследования, определяют, требуется ли коррекция дозы. За поведением животных наблюдают внимательно, и его регистрируют в течение четырех часов. Обычно в этом быстром скрининге используют минимальное количество четыре крысы.
50
50
Для определения того, может ли исследуемое вещество останавливать острый индуцируемый пилокарпином статус проводят первоначальный качественный скрининг эффективности. Нагрузочную дозу пилокарпина (50 мг/кг) вводят в/б и животных наблюдают до первого судорожного (например, стадия 3, 4 или 5) припадка (нулевой момент времени). Тяжесть припадка определяют по шкале Racine. В этот момент времени минимально токсичную дозу лекарственного средства-кандидата вводят в группе из 8 самцов крыс-альбиносов Sprague Dawley (150-180 г) посредством в/б введения. Эффективность определяют по способности исследуемого лекарственного средства останавливать дальнейшее проявление индуцируемых пилокарпином судорожных припадков (например, стадия 3, 4 или 5). Соединения, для которых обнаружено, что они обладают значительной защитой в нулевой момент времени (время от первого припадка стадии 3, 4 или 5), можно использовать для дальнейшей оценки модели длительного статуса. В этом тесте исследуемое лекарственное средство вводят через 30 минут после первого наблюдаемого судорожного припадка. Это является более тщательным испытанием способности кандидата останавливать индуцируемый статус. Соединения, для которых обнаружено, что они обладают значительной активностью, можно использовать для количественного определения, где определяют ED и TD, и соответствующие 95% доверительные интервалы. Для количественного исследования используют минимум 4 дозы с по меньшей мере 8 крысами на дозу.
Соединения, приведенные в таблице 3, исследовали в анализе с пилокарпином (первоначальный качественный скрининг эффективности), и они продемонстрировали активность в показанной дозе при введении после возникновения припадка (mpk=мг/кг).
Таблица 3
Соединение
Доза
3a
200 mpk
3d
450 mpk
8a
65 mpk
10a
65 mpk
65 mpk
ПРИМЕР 27
МОДЕЛЬ НА МЫШАХ, ЧУВСТВИТЕЛЬНЫХ К АУДИОГЕННЫМ СУДОРОГАМ ФРИНГСА (AGS)
,
50
50
В этом исследовании используют самцов и самок чувствительных к аудиогенным судорогам Фрингса мышей (18-25 г). Для каждого скринингового теста группам из 8 мышей в каждой в/б вводят различные дозы исследуемого соединения. В момент максимального эффекта, определенного в тесте MES (у мышей CF-1), отдельных мышей помещают в округлые емкости из плексигласа (диаметр 15 см; высота 18 см) и подвергают звуковому стимулу величиной 110 децибел (11 кГц), доставляемому в течение 20 с. Мышей наблюдают в течение 25 с в отношении наличия или отсутствия тонического разгибания задних конечностей. Мышей, не демонстрирующих тонического разгибания задних конечностей, считают защищенными. Тяжесть припадка также можно количественно определять путем присвоения чистового показателя наблюдаемому ответу, например нет ответа - 0; безудержное бегание в течение <10 с - 1; безудержное бегание в течение >10 с - 2; клонические судороги - 3; разгибание передних конечностей/сгибание задних конечностей - 4; тонические судороги - 5. Способность исследуемого вещества блокировать аудиогенные припадки можно количественно определять на основе результатов для различных доз с защитой от 0% до 100%, использованных для вычисления ED. Противосудорожную активность этих исследуемых веществ, которая обеспечивает защиту в этой модели, количественно определяют, и ED и доверительный интервал 95% вычисляют посредством пробит-анализа.
ПРИМЕР 28
МОДЕЛЬ НА КРЫСАХ С ЗОМАНОМ
Хирургически подготавливают крыс с кортикальными электродами для регистрации электроэнцефалографической активности головного мозга (ЭЭГ) за одну неделю до исследования. В день исследования животных подсоединяют к регистрирующему оборудованию и ЭЭГ регистрируют непрерывно. После регистрации базового уровня животных предварительно обрабатывают оксимом HI-6 (125 мг/кг, в/б) для снижения немедленных летальных эффектов нагрузки нервно-паралитическим веществом. Через тридцать мин после HI-6 животных нагружают посредством 180 мкг/кг (п/к) нервно-паралитического средства зомана и через 1 мин вводят 2,0 мг/кг атропина метилнитрата (в/м). Этот режим введения индуцирует непрерывную судорожную активность в пределах 5-8 мин после нагрузки зоманом у 100% исследуемых животных. Как ЭЭГ, так и нейропатологические способы используют для оценки эффективности противосудорожного лечения. При постепенно более длительном времени задержки введения (5 мин, 20 мин или 40 мин) после начала припадка животным проводят стандартные медикаментозные контрмеры (0,45 мг/кг атропина сульфат, вводимый с 25 мг/кг 2-PAM, 2,2 мг/кг диазепама) вместе с дополнительным исследуемым лекарственным средством. Строят кривые доза-эффект для противосудорожной эффективности.
ПРИМЕР 29
АНАЛИЗ ИНДУЦИРОВАННОГО ГАРМАЛИНОМ ТРЕМОРА
Анализ индуцированного гармалином тремора является основной доклинической моделью индуцированного тремора. В этом исследовании использовали самцов мышей ICR (в возрасте 10 недель). Мышей содержали группами в вентилируемых клетках OPTI для мышей. Всех животных содержали группами на протяжении исследования. Всех мышей подвергали акклиматизации к колониальному помещению в течение по меньшей мере одной недели до исследования. В ходе периода акклиматизации мышей обследовали стандартным образом, обрабатывали и взвешивали, чтобы убедиться в надлежащем здоровье и пригодности. Мышей поддерживали на цикле 12/12 свет/темнота. Комнатную температуру поддерживали между 20 и 23°C при относительной влажности между 30% и 70%. Корм и воду предоставляли без ограничений на протяжении исследования. В каждом исследовании животных случайным образом распределяли на группы введения.
Исследовали по десять мышей на группу. Все соединения вводили через пероральный зонд в объеме дозы 10 мл/кг:
гармалин (30 мг/кг) приготавливали в стерильном солевом растворе и вводили подкожно.
Пропранолол HCl (10 мг/кг) растворяли в стерильном солевом растворе и вводили в/б за 20 минут до гармалина.
Исследуемые соединения суспендировали в 0,5% метилцеллюлозе и вводили в/б за 20 минут до гармалина.
Содержавшихся группами мышей приносили в экспериментальное помещение для акклиматизации в течение по меньшей мере 1 ч перед исследованием. Мышам инъецировали либо стерильный носитель, либо пропранолол, либо исследуемое соединение, и их помещали в отдельные клетки для выдерживания на 20 минут, после чего мышам инъецировали гармалин (30 мг/кг), и их помещали внутрь камеры для мониторинга тремора (San Diego Instruments, SDI) на период акклиматизации, составлявший 10 минут. После привыкания активность тремора у мышей измеряли приблизительно в течение 8 мин. Зарегистрированные частоты (1-64 Гц) активности и количество событий тремора фиксировали в электронной форме.
Данные анализировали с помощью программного обеспечения для мониторинга тремора (San Diego Instruments) в процессе из двух частей. С использованием быстрого преобразования Фурье FFT), предоставляли выходные данные, демонстрирующие процент активности (энергию), регистрируемый при каждой частоте. Выбирали центральную частоту активности между 14-15 Гц, а также ширину полосы 10 Гц. С использованием этих параметров события тремора представляли в виде таблицы в качестве коротких, длинных и общих событий. Длинное событие определяли как имеющее длительность, превышающую 0,5 секунды, и короткое событие определяли как имеющее длительность между 0,3 и 0,5 секунды.
Данные анализировали посредством дисперсионного анализа (ANOVA), а затем апостериорным анализом Фишера PLSD. Эффект считали значимым при p<0,05. Статистически выпадающие значения, которые превышают или являются более низкими, чем среднее значение, на 2 стандартных отклонения в любом из трех показателей (короткие, длинные и общие события тремора) удаляли из конечного анализа.
Соединения, приведенные в таблице 4, исследовали в анализе гармалина, и они продемонстрировали значительное снижение общего тремора при указанных пероральных дозах (mpk=мг/кг).
Таблица 4
Соединение
Доза
8a
50, 150 mpk
10a
5, 15, 50, 150 mpk
11b
15, 50 mpk
14a
50 mpk
15a
50 mpk
16a
50, 150 mpk
Содержание временной патентной заявки США с серийным номером № 62/110415, поданной 30 января 2015 года, и временной патентной заявки США с серийным номером № 62/259314, поданной 24 ноября 2015 года, включено в настоящее описание в качестве ссылки в полном объеме.
Различные варианты осуществления, описанные выше, можно комбинировать для предоставления дополнительных вариантов осуществления. Все патенты США, публикации патентных заявок США, патентные заявки США, иностранные патенты, иностранные патентные заявки и непатентные публикации, упоминаемые в настоящем описании и/или приведенные в листе прилагаемых данных, включены в настоящее описание в качестве ссылок в полном объеме. Аспекты вариантов осуществления можно модифицировать, если необходимо, для использования концепций различных патентов, заявок и публикаций для предоставления следующих дополнительных вариантов осуществления.
Эти и другие изменения можно вносить в варианты осуществления ввиду приведенного выше подробного описания. Как правило, в прилагаемой ниже формуле изобретения, используемые термины не следует истолковывать как ограничивающие формулу изобретения конкретными вариантами осуществления, описанными в описании и формуле изобретения, а следует истолковывать как включающие все возможные варианты осуществления, а также полный объем эквивалентов, на которые формула изобретения дает право. Таким образом, формула изобретения не ограничивается описанием.