Экспрессия молекул межклеточной адгезии и эндотелиальная дисфункция у беременных женщин с гипертензивными нарушениями

ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ

Хлипунова Д.А., Панова И.А., Кудряшова А.В., Попова И.Г.

Ивановский научно-исследовательский институт материнства и детства им. В.Н. Городкова,

г. Иваново

ЭКСПРЕССИЯ МОЛЕКУЛ

МЕЖКЛЕТОЧНОЙ АДГЕЗИИ И ЭНДОТЕЛИАЛЬНАЯ ДИСФУНКЦИЯ У БЕРЕМЕННЫХ ЖЕНЩИН С ГИПЕРТЕНЗИВНЫМИ НАРУШЕНИЯМИ

Цель исследования - изучить особенности экспрессии молекул интегринов нейтрофилами периферической крови и проявления дисфункции эндотелия у женщин с гипертензивными нарушениями при беременности.

Материалы и методы. Обследованы 104 беременные женщины в 22-36 недель гестации. Первая группа - 39 женщин с преэклампсией (ПЭ), вторая - 32женщины с хронической артериальной гипертензией (ХАГ). Контрольная группа - 33 женщины без гипертензивных расстройств при беременности. В периферической венозной крови определялось количество десквамированных эндотелиоцитов (ДЭ), С-реактивного белка (С-РБ), гомоцистеина (ГЦ), количество нейтрофилов, экспрессирующих молекулы адгезии - CD49b и CD99.

Результаты. По результатам исследования выявлено, что у женщин первой и второй групп при беременности имелись проявления эндотелиоза - повышение количества ДЭ, СРБ и ГЦ. Наиболее высокое содержание CD49b+ нейтрофилов в крови отмечено у женщин с ПЭ, а CD99+ нейтрофилов - у женщин с ХАГ.

Заключение. Проведенные нами исследования позволили выявить особенности взаимодействия нейтрофилов и эндотелиальных клеток при ПЭ и ХАГ, что может свидетельствовать о разном характере патологического процесса с вовлечением в воспаление эндотелия сосудов или окружающих тканей.

КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: преэклампсия: хроническая артериальная гипертензия; эндотелиальная дисфункция; молекулы адгезии.

Khlipunova D.A., Panova I.A., Kudryashova A.V., Popova I.G.

Ivanovo Scientific Research Institute of Maternity and Childhood V.N. Gorodkova, Ivanovo THE EXPRESSION OF ADHESION MOLECULES AND ENDOTHELIAL DYSFUNCTION OF WOMEN WITH HYPERTENSION DISTURBANCES DURING PREGNANCY Objective - explore the features of expression of molecules, integrins neutrophils in peripheral blood and manifestations of endothelial dysfunction in women with hypertensive disorders in pregnancy.

Materials and methods. Surveyed 104 pregnant women in 22-36 weeks of gestation. The first group - 39 women with preeclampsia, the second - 32 women with chronic arterial hypertension. A control group of 33 women without hypertensive disorders in pregnancy. In peripheral venous blood was determined by the number of endothelial cells, C-reactive protein, homocysteine, number of neutrophils, expressing adhesion molecule - CD49b and CD99.

Results. The results of the study revealed that women first and second groups in pregnancy there were manifestations of endothelial dysfunction: increasing the number of endothelial cells, C-reactive protein, homocysteine. The highest content of CD49b+ neutrophils in the blood noted in women with preeclampsia, and CD99+ neutrophils in women with a chronic arterial hypertension. Conclusion. It speaks about different mechanisms of endothelial dysfunction by arterial hypertension, existed before the pregnancy end preeclampsia.

KEY WORDS:preeclampsia; chronic arterial hypertension: endothelial dysfunction: adhesion molecules.

Гипертензивные расстройства при беременности, по данным мировой статистики [1, 2], уже долгое время являются ведущей причиной материнской заболеваемости, смертности и неблагоприятных перинатальных исходов. Несмотря на то, что многочисленные исследования последних лет открывают новые аспекты патогенеза данного состояния, причины и механизмы развития артериальной гипертензии у беременных остаются недостаточно ясны. Гипертензивные расстройства во время беременности представлены двумя группами патологических состояний — артериальной гипертензией, существовавшей до беременности, и гипертензией,

Корреспонденцию адресовать:

ХЛИПУНОВА Дарья Александровна,

153045, г. Иваново, ул. Свободы, д. 45а, кв. 22. Тел.: +7-910-688-66-84.

E-mail: da shutka xa@mail.ru

развившейся непосредственно в связи с гестационным процессом.

Данные отечественной и зарубежной литературы [3, 4] позволяют выделить ряд этиологических факторов, способствующих развитию гестационной артериальной гипертензии и преэклампсии (ПЭ): плацентарная ишемия вследствие неполноценной инвазии трофобласта и трансформации спиральных артерий, оксидантный стресс, иммунологическая дезадаптация и генетическая предрасположенность. Последнее время в развитии гипертензивных нарушений большое внимание уделяется теории эндотелиальной дисфункции, как части системной воспалительной реакции [5, 6]. Ряд исследований [7-9] доказывают, что развитие как хронической, так и гестационной артериальной гипертензии сопровождается повышением функциональной активности гранулоцитов, моноцитов, лимфоцитов, активацией системы комплемента и повышенным выбросом в кровоток провоспалительных

сУ$(ръ и^ггя в^^узбассе

№2(57) 2014

ЭКСПРЕССИЯ МОЛЕКУЛ МЕЖКЛЕТОЧНОЙ АДГЕЗИИ И ЭНДОТЕЛИАЛЬНАЯ ДИСФУНКЦИЯ У БЕРЕМЕННЫХ ЖЕНЩИН С ГИПЕРТЕНЗИВНЫМИ НАРУШЕНИЯМИ

цитокинов. Эти изменения иммунологических процессов могут приводить к повреждению белков клеточных мембран и являться потенциальными посредниками эндотелиальной дисфункции.

Существуют несколько факторов нарушения микроциркуляции при развитии дисфункции эндотелия — спазм сосудов, активация системы свертывания и усиление тромбообразования, а также изменения адгезии лейкоцитов к эндотелию и повышение проницаемости стенки сосудов [8]. Адгезия лейкоцитов представляет собой динамический многоступенчатый процесс. Взаимодействие лейкоцитов и эндотелиоцитов опосредовано различными видами молекул клеточной адгезии — селектинами, интегринами и кадгеринами, каждые из которых участвуют в определенном этапе транссосудистой миграции клеток. В процессе адгезии и последующей экстравазации лейкоциты активизируются и высвобождают свободные радикалы и протеазы, приводящие к деструктивным изменениям коллагенового каркаса сосудистой стенки. В субэндотелиальном слое и периваскулярном пространстве развивается асептическое воспаление, которое носит хронический характер [10, 11].

Цель исследования — изучить особенности экспрессии адгезионных молекул нейтрофилами периферической крови и уровень маркеров дисфункции эндотелия у женщин с гипертензивными нарушениями при беременности.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Были обследованы 104 беременные женщины в 22-36 недель гестации. В первую группу вошли 39 женщин с ПЭ, во вторую — 32 женщины с хронической артериальной гипертензией (ХАГ). Контрольную группу составили 33 женщины без гипертензивных расстройств при беременности.

Материалом для исследования являлась периферическая венозная кровь. Количество десквамирован-ных эндотелиоцитов (ДЭ) определялось по методу Hladovec J., (1978) с использованием фазово-контрастной микроскопии. В сыворотке периферической крови определяли содержание С-реактивного белка (СРБ) методом иммуноферментного анализа (ИФА) на микропланшетном ридере Multiscan и уровень гомоцистеина (ГЦ) методом иммуно-хемилюминисцен-тного анализа (ИХЛА) на анализаторе Immulite. Выделение общей фракции лейкоцитов осуществлялось традиционным методом скоростного центрифугирования в градиенте плотности фиколл-урографина (d-1,114). Методом проточной цитофлюориметрии оп-

ределялось количество нейтрофилов, экспрессирующих молекулы CD49b и CD99 на проточном цитоф-люориметре FACSCantoII в программе FACSDiva.

Статистический анализ полученных результатов осуществлялся в пакете прикладных лицензионных программ Microsoft Office 2010, Statistica for Windows 6.0. Проверка рядов данных на нормальность распределения осуществлялась с помощью критериев Колмогорова и Шапиро-Уилка. Достоверность различий между показателями независимых выборок оценивалась по t-критерию Стьюдента. Критический уровень значимости при проверке статистических гипотез принимался равным 0,05.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ОБСУЖДЕНИЕ

Проведенные нами исследования показали, что обследованные женщины были сопоставимы по возрасту и паритету. Средний возраст обследованных женщин первой группы составил 28,9 ± 6,0 лет, второй группы — 30,33 ± 5,8 лет, контрольной группы —

27,4 ± 5,1 лет, достоверных различий между группами не выявлено. Однако в группе беременных с ПЭ достоверно чаще встречались женщины моложе 25 лет, по сравнению со второй группой (р = 0,04). Отягощенную наследственность по артериальной гипертензии чаще имели женщины с ХАГ (68,6 %), в отличие от беременных с ПЭ (51,5 %; р = 0,03) и контрольной группы (13,4 %; р = 0,02).

У женщин с гипертензивными нарушениями из сопутствующей соматической патологии была выявлена высокая частота встречаемости заболеваний мочевыводящих путей: 36,4 % в группе с ХАГ, 28,3 % в группе с ПЭ, 16,5 % в контрольной группе (р = 0,03, р = 0,04). Ожирение встречалось у 26,5 % женщин первой группы и у 33,4 % женщин второй группы, а в контрольной группе лишь у 5,7 % обследованных

(р = 0,001, р = 0,001).

Из осложнений беременности у большинства женщин с ПЭ встречалась фетоплацентарная недостаточность — у 92,2 %, что достоверно выше, чем в группе беременных с ХАГ, у которых данное осложнение встречалось в 57,8 % (р = 0,03), и в группе контроля, где данный показатель составил 13,7 % (р = 0,002). Задержка развития плода также чаще выявлялась у женщин первой группы (56,3 %), по сравнению со второй (29,4 %) (р = 0,01), в контрольной группе данного осложнения беременности не встречалось. Доля преждевременных родов была наибольшей у беременных с ПЭ — 93,8 %, в группе женщин с ХАГ

Сведения об авторах:

ХЛИПУНОВА Дарья Александровна, аспирант, ФГБУ «Ив НИИ МиД им. В.Н. Городкова» Минздрава России, г. Иваново, Россия. E-mail: da_shut-ka_xa@mail.ru

ПАНОВА Ирина Александровна, доктор мед. наук, зав. отделом акушерства и гинекологии, ФГБУ «Ив НИИ МиД им. В.Н. Городкова» Минздрава России, г. Иваново, Россия. E-mail: ia_panova@mail.ru

КУДРЯШОВА Анна Владимировна, доктор биол. наук, ст. науч. сотрудник, лаборатория клинической иммунологии, ФГБУ «Ив НИИ МиД им. В.Н. Городкова» Минздрава России, г. Иваново, Россия. E-mail: niimid.immune@mail.ru

ПОПОВА Ирина Геннадьевна, канд. мед. наук, науч. сотрудник, лаборатория клинической биохимии, ФГБУ «Ив НИИ МиД им. В.Н. Городкова» Минздрава России, г. Иваново, Россия. E-mail: i_g_popova@mail.ru

№2(57) 2014 с/^ть и^пя вс7|узбассе

ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ

беременность завершилась преждевременными родами у 28,4 % (р = 0,0002). У всех женщин контрольной группы роды произошли своевременно.

Средний гестационный срок родоразрешения у женщин с ПЭ составил 31,5 ± 3,4 недель, при ХАГ —

35,6 ± 3,7 недель (р = 0,005). Кроме того, в 3,5 % случаев у женщин с ПЭ беременность осложнилась антенатальной гибелью плода.

Анализ результатов обследования, характеризующего функцию эндотелия, показал, что у беременных женщин с гипертензивными расстройствами первой и второй групп уровень маркеров дисфункции эндотелия в периферической крови был выше, чем в группе контроля. Наибольшее количество ДЭ, как маркера проявления эндотелиоза, имели беременные с ПЭ — 14,5 ± 1,5 кл/мкл по сравнению со второй и контрольной группами (р = 0,04, р = 0,001). У женщин с ХАГ данный показатель составил 9,4 ±

1,2 кл/мкл, что было достоверно выше, чем в контрольной группе (4,1 ± 0,5 кл/мкл; р = 0,001). Уровень СРБ оказался высоким и в первой (14,3 ± 3,5 мг/л), и во второй (10,1 ± 1,9 мг/л) группе, по сравнению с контрольной группой (3,3 ± 0,6 мг/л; р = 0,02, р = 0,001). Содержание ГЦ было достоверно выше в группах женщин с ПЭ (13,1 ± 1,5 мкмоль/л) и с ХАГ (10,6 ± 0,9 мкмоль/л), по сравнению с показателями женщин без гипертензивных расстройств, где данный показатель составил 6,7 ± 0,7 мкмоль/л (р = 0,002, р = 0,01). Достоверных различий по содержанию СРБ и ГЦ у женщин с ПЭ и ХАГ между собой не выявлено.

Экспрессия молекул межклеточной адгезии нейтрофилами у беременных с гипертензивными нарушениями имела свои особенности. Так, наиболее высокое содержание CD49b+ нейтрофилов в периферической крови отмечено у женщин с ПЭ (69,9 ± 9,5 %), что достоверно выше, чем у женщин с ХАГ (57,8 ± 4,5 %; р = 0,03) и в группе контроля (56,6 ± 3,6 %; р = 0,01). Уровень CD49b+ нейтрофилов в группе ХАГ и группе контроля достоверно не отличался друг от друга. Количество нейтрофилов, экспрессирующих молекулы CD99, напротив, было наибольшим у женщин с ХАГ — 51,1 ± 10,1 %, что достоверно выше показателей женщин первой группы (34,4 ± 4,2 %; р = 0,01) и группы контроля (39,3 ± 5,3 %; р = 0,02).

Таким образом, по результатам исследования выявлено, что у беременных женщин с ХАГ и с ПЭ имелись проявления эндотелиоза — повышение количества ДЭ, гомоцистеина и С-РБ. Наряду с этим, в периферической крови женщин с ПЭ отмечалось повы-

шение содержания CD49b+ нейтрофилов, а у женщин с ХАГ — повышение уровня CD99+ нейтрофилов. Известно, что данные молекулы участвуют на разных этапах экстравазации клеток. Полиморфноядерные лейкоциты мигрируют через эндотелий путем первоначального прикрепления к апикальной поверхности и последующего продвижения между клетками эндотелия. По данным литературы [12], экспрессия молекул CD49b чаще является индуцированной, а не конституциональной, и появляется на поздней стадии активации клеток. Взаимодействие CD49b молекул плазматической мембраны нейтрофилов с компонентами внеклеточного матрикса особенно усиливается при воспалительном процессе [13]. Вероятно, рост уровня CD49b+ нейтрофилов при ПЭ определялся характерной для данного патологического состояния системной воспалительной реакцией [7, 8]. Следует отметить, что при ПЭ уровень CD49b+ нейтрофилов в два раза превышал содержание CD99+ клеток. Показано, что молекулы CD99 играют важную роль в процессе последующего диапедеза клеток. Показано, что блокирование CD99 молекул соответствующими антителами приводит к ограничению миграции моноцитов в пределах боковых стенок эндотелиальных клеток [14]. Возможно, при ПЭ создаются условия для аккумуляции нейтрофилов непосредственно между клетками эндотелия сосудов и развития выраженной местной воспалительной реакции, что стимулирует более мощный процесс десквама-ции эндотелиоцитов у женщин с ПЭ.

При ХАГ мы не отметили значительных изменений в содержании CD49b+ нейтрофилов, но выявили достоверное повышение уровня CD99+ клеток. При этом соотношение CD49b+ и CD99+ нейтрофилов в периферической крови было приблизительно одинаковым, что может способствовать отмеченному рядом авторов накоплению лейкоцитов в периваску-лярной ткани больших и малых сосудов [10] и развитию воспалительного процесса.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Проведенные нами исследования позволили выявить особенности взаимодействия нейтрофилов и эндотелиальных клеток при ПЭ и при ХАГ, что может свидетельствовать о разном характере патологического процесса с вовлечением в воспаление эндотелия сосудов или окружающих тканей. Уровень экспрессии молекул адгезии может зависеть от воспалительных стимулов, характер которых при ПЭ и ХАГ требует дальнейшего изучения.

Information about authors:

KHLIPUNOVA Daria Aleksandrovna, postgraduate, Ivanovo Scientific Research Institute of Maternity and Childhood V.N. Gorodkova, Ivanovo, Russia. E-mail: da_shutka_xa@mail.ru

PANOVA Irina Aleksandrovna, doctor of medical sciences, head of obstetrics and gynecology department, Ivanovo Scientific Research Institute of Maternity and Childhood V.N. Gorodkova, Ivanovo, Russia. Е-mail: ia_panova@mail.ru

KUDRYASHOVA Anna Vladimirovna, doctor of biological sciences, senior researcher, department of clinical immunology, Ivanovo Scientific Research Institute of Maternity and Childhood V.N. Gorodkova, Ivanovo, Russia. Е-mail: niimid.immune@mail.ru

POPOVA Irina Gennadievna, candidate of medical sciences, researcher, laboratory clinical biochemistry, Ivanovo scientific research institute of maternity and childhood V.N. Gorodkova, Ivanovo, Russia. E-mail: i_g_popova@mail.ru

с/$(ръ и^ггя в^^узбассе

№2(57) 2014

ЭКСПРЕССИЯ МОЛЕКУЛ МЕЖКЛЕТОЧНОЙ АДГЕЗИИ И ЭНДОТЕЛИАЛЬНАЯ ДИСФУНКЦИЯ У БЕРЕМЕННЫХ ЖЕНЩИН С ГИПЕРТЕНЗИВНЫМИ НАРУШЕНИЯМИ

ЛИТЕРАТУРА:

1. Основные показатели деятельности службы охраны здоровья матери и ребенка в Российской Федерации. Статистическая форма 32 за 2012 год. Российское общество акушеров-гинекологов. ФГБУ «НЦАГИП им. В.И. Кулакова» Минздрава России. ФГБУ «ЦНИИОИЗ» Минздрава России /Э.Е. Запорожец и др. - М., 2013. - С . 48-50, 59-61.

2. WHO analysis of causes of maternal death: a systematic review /K.S. Khan, D. Wojdyla, L. Say, A.M. Gulmezoglu //Van Look PFA. Lancet. -

2006. - V. 367. - P. 1066-1074.

3. Айламазян, Э.К. Гестоз: теория и практика /Э.К. Айламазян, Е.В. Мозговая. - М., 2008. - 272 с.

4. Марков, Х.М. Молекулярные механизмы дисфункции сосудистого эндотелия /Х.М. Марков //Кардиология. - 2005. - № 12. - С. 62-72.

5. Сидорова, И.С. Эндотелиальная дисфункция в развитии гестоза /И.С. Сидорова, И.Л. Галинова //Вопр. гинек., акуш. и перинат. -2006. - № 1(5). - С. 75-81.

6. Салов, И.А. Дисфункция эндотелия как один из патогенетических факторов расстройств микроциркуляции при гестозе /И.А. Салов, Т.Н. Глухова, Н.П. Чеснокова //Рос. вест. акуш.-гинек. - 2006. - № 6. - С. 4-9.

7. Systemic inflammatory indices in preeclampsia and eclampsia /R.S. Bowen, J. Moodley, M.F. Dutton, H. Fickl //Obstet. Gynaec. - 2001. -V. 21(6). - P. 563-569.

8. Иммунные механизмы развития гестоза /Л.В. Посисеева и др. - Иваново, 2008. - 240 с.

9. Кудряшова, А.В. Дифференцировка клеток памяти в популяции Т-хелперов при неосложненной беременности и преэклампсии /А.В. Кудряшова, Н.Ю. Сотникова, И.А. Панова //Журн. акуш. и жен. бол. - 2013. - Т. LXII, № 2. - С. 110-116.

10. Endothelial dysfunction related to oxidative stress and inflammation in perivascular adipose tissue / M. Filip et al. //Postepy Biochem. - 2012. -V. 58(2). - P. 186-194.

11. Immune Mechanisms in Hypertension /C. De Ciuceis et al. //High Blood Press Cardiovasc. Prev. - 2014. - N 21. - Р. 745-754.

12. Белоцкий, С.М. Воспаление. Мобилизация клеток и клинические эффекты /С.М. Белоцкий, P.P. Авталион. - М., 2008. - 240 с.

13. Zutter, M. M. The alpha2beta1 integrin: a novel collectin/C1q receptor /M.M. Zutter, B.T. Edelson //Immunobiol. - 2007. - V. 212(4-5). -P. 343-353.

14. CD99 plays a major role in the migration of monocytes through endothelial functions /A.R. Schenkel et al. //Nat. Immun. - 2002. - V. 3. -P. 143-150.

Самохвалова В.В., Шатилова Ю.А., Шевцова Е.П., Андреева М.В.

Волгоградский государственный медицинский университет,

г. Волгоград

ФАКТОРЫ РИСКА РАЗВИТИЯ АСПИРАЦИОННОГО СИНДРОМА У НОВОРОЖДЕННЫХ ПРИ СВОЕВРЕМЕННЫХ РОДАХ

Проведен анализ историй 92 родов, закончившихся рождением детей с аспирационным синдромом. Изучено функциональное состояние плода с помощью ультразвуковой эхографии, кардиотокографии и нейросонографии, оценено состояние новорожденных по шкале Апгар. На основании проведенного ретроспективного анализа историй родов у беременных с фетоплацентарной недостаточностью различной степени тяжести определены факторы риска развития аспирационного синдрома у их новорожденных. Показаны преимущества комплексной оценки состояния плода в родах. КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: плод: своевременные роды: аспирационный синдром: фетоплацентарная

недостаточность; нарушения реактивности сердечно-сосудистой системы плода.

Samokhvalova V.V., Shatilova Yu.A, Shevtsova E.P., Andreeva M.V.

Volgograd State Medical University, Volgograd

RISK FACTORS FOR ASPIRATION SYNDROME IN NEWBORNS BY TIMELY LABOR

The analysis of 92 labors ended with the birth of children with aspiration syndrome was made. The functional status of the fetus using ultrasonography , CTG and neurosonography was studied, the state of newborn by Apgar was assessed. Risk factors for aspiration syndrome in newborns were identified based on the retrospective analysis of case histories of women with placental insufficiency. We describe the advantages of an integrated assessment of the fetus during labor.

KEY WORDS: fetus; timely delivery: aspiration syndrome; fetoplacental insufficiency; disorders of reactivity of the cardiovascular system of the fetus.

Внутриутробная инфекция является одной из ведущих причин перинатальной заболеваемости и смертности, что связано с устойчивой тенденцией к ухудшению здоровья населения,

Корреспонденцию адресовать:

ШАТИЛОВА Юлия Александровна,

400074, г. Волгоград, ул. Иркутская, д. 7, кв. 25. Тел.: +7-904-775-84-97.

Е-mail: juliashatilova@yandex.ru

ростом числа инфекционных заболеваний [1-4]. Известно, что наличие очагов персистирующей инфекции в организме матери является одним из факторов риска внутриутробного инфицирования плода, но не означает обязательного развития инфекционно-воспалительного процесса в организме плода [58]. В настоящее время одной из наиболее актуальных проблем акушерства и неонатологии являются аспирационные пневмонии. Летальность от этого заболевания остается высокой и, по данным различ-

№2(57) 2014 с/^ть и^пя вс7|узбассе