Носительство тромбогенных ДНК-полиморфизмов в семьях при осложнениях беременности тяжелой преэклампсией

УДК 618.3-008.61:616-005.2 DOI 10.21685/2072-3032-2017-3-8

Н. И. Фадеева, А. А. Белинина, О. В. Ремнева, М. Б. Игитова

НОСИТЕЛЬСТВО ТРОМБОГЕННЫХ ДНК-ПОЛИМОРФИЗМОВ В СЕМЬЯХ ПРИ ОСЛОЖНЕНИЯХ БЕРЕМЕННОСТИ ТЯЖЕЛОЙ ПРЕЭКЛАМПСИЕЙ

Аннотация.

Актуальность и цели. Определены частота выявления и характер полиморфизмов аллелей генов системы гемостаза, ассоциированных с риском развития тромбофилии, в семьях пациенток, которые были родоразрешены до 34 недель беременности в связи с тяжелой преэклампсией.

Материалы и методы. У 32 членов семьи (мать, отец, новорожденный ребенок) исследован аллельный полиморфизм 11 генов: восемь - кодирующих фибринолиз и трех - фолатный цикл: F2 (G20210A), F5 (G1691A), F7 (G10976A), F13 (G > T), FGB (G455A), ITGA2 (C807T), ITGB3 (T1565C), PAI-1 (675 5G > 4G), MTHFR (C677T, A1298C), MTR (A2756G), MTRR (A66G) методом полимеразной цепной реакции.

Результаты. Полиморфизмы аллелей генов, кодирующих фибринолиз и фолатный цикл в семьях женщин, имеющих тяжелую преэклампсию, были выявлены в 100 % случаев у матерей, отцов и детей. Полиморфизмы генов в гомозиготном состоянии с редкими аллелями, в основном в виде комбинаций 2-5 генов, часто обнаруживались в одной семье: 38,2, 24,1 и 34,7 % у матерей, отцов и младенцев соответственно. Комбинации наследственных полиморфизмов тромбофилии чаще выявлялись у матерей (68,8 %) и их младенцев (53,1 %) по сравнению с отцами (12,5 %) случаев.

Выводы. У пациенток с тяжелой преэклампсией, послужившей показанием к досрочному родоразрешению, и их новорожденных генетические мутации высокого риска тромбофилий выявляются соответственно в 87,5 и 86,6 % случаев в виде комбинаций полиморфизмов генов, отвечающих за фолатный цикл и фибринолиз. Полученные результаты свидетельствуют о целесообразности обследования беременных с проблемной репродукцией на наличие генетических форм тромбофилии для более точной идентификации групп акушерского и перинатального риска.

Ключевые слова: преэклампсия, гемостаз, тромбофилия, генетические полиморфизмы.

N. I. Fadeeva, A. A. Belinina, O. V. Remneva, M. B. Igitova

CARRIAGE OF THROMBOGENIC DNA POLYMORPHISMS IN FAMILIES WITH SEVERE PREECLAMPSIA PREGNANCY COMPLICATIONS

Abstract.

Background. The article determines the detection frequency and nature of polymorphisms of the hemostatic system's gene alleles associated with the risk of thrombophilia in families of female patients, whose pregnancy was complicated with severe preeclampsia in the period before 34 weeks of gestation.

Materials and methods. In order to detect allelic polymorphisms of genes encoding fibrinolysis and folate cycle, 32 families (each family - mother, father and

premature infants) were examined. Allelic polymorphism of 11 genes encoding components of various links of the hemostatic system was studied with the PCR method: F2 (G20210A), F5 (G1691A), F7 (G10976A), F13 (G > T), FGB (G455A), ITGA2 (C807T), ITGB3 (T1565C), PAI-1 (675 5G > 4G), MTHFR (C677T, A1298C), MTR (A2756G), MTRR (A66G).

Results. Polymorphisms of alleles of genes coding for fibrinolysis and folate cycle in families of mothers with severe preeclampsia were detected in 100 % of mothers, fathers and babies. Polymorphisms of genes in the homozygous state with rare alleles, mainly in the form of combinations of 2-5 genes were often detected in the same family: 38.2 %, 24.1% and 34.7 % of mothers, fathers and infants, respectively. Combinations of hereditary thrombophilia polymorphisms were detected more frequently in mothers (68.8 %) and their infants (53.1 %) compared with fathers (12.5 %).

Conclusions. Patients with severe preeclampsia being an indication for early delivery and their newborns have genetic high-risk thrombophilia mutations identified respectively in 87.5 and 86.6 % of cases, mainly in the form of combinations of polymorphisms in genes involved in folate cycle and fibrinolysis. The results indicate expedience of examining pregnant women with problematic reproduction for genetic forms of thrombophilia for more accurate identification of groups of obstetric and perinatal risk.

Key words: preeclampsia, hemostasis, thrombophilia, genetic polymorphism.

Частота осложнений беременности преэклампсией не снижается, но успехи медицины позволяют полностью избежать материнской смертности и значительно снизить перинатальные потери за счет досрочного родоразреше-ния [1, 2]. При этом младенческая заболеваемость остается высокой, поскольку при досрочном родоразрешении по поводу тяжелой эклампсии тяжесть состояния новорожденного определяется не только тяжелой пренатальной гипоксией, но и всеми проблемами глубоко недоношенных детей [3]. Вышеизложенное позволяет считать, что выявление факторов риска именно ранних пре-эклампсий и разработка методов подавления их негативного влияния являются реальным путем снижения частоты и тяжести заболеваемости младенцев.

Большое количество исследований свидетельствует о роли наследственной предрасположенности к тромбозам в развитии таких тяжелых осложнений беременности, как невынашивание, преждевременная отслойка нормально расположенной плаценты и предлежание плаценты [4-6]. Поскольку преэклампсия является также клиническим проявлением несостоятельности плаценты, можно предположить, что наследственные тромбофилии будут способствовать ее тяжелому течению. К настоящему времени выявлены ассоциации около 100 различных генетических полиморфизмов с преэк-лампсией [7, 8]. Важная роль в этиологии и патогенезе преэклампсии принадлежит генам-кандидатам фолатного обмена [7-9]. Мутации в генах фолатного обмена, обусловливающие снижение активности ферментов метилтетрагид-рофолатредуктазы и метионин-синтазы редуктазы, приводят к избыточному накоплению гомоцистеина в крови и, как следствие, нарушению процессов метилирования в клетках [9, 10]. Дефицит фолиевой кислоты обусловливает формирование артериальной гипертензии у беременных, развитие тотальной ангиопатии, микротромбозов [2, 4, 10].

Цель данного исследования - определение частоты выявления и характера полиморфизмов аллелей генов системы гемостаза, ассоциированных

с риском развития тромбофилии, в семьях пациенток, беременность которых осложнилась тяжелой преэклампсией.

Материалы и методы

У 32 женщин, родоразрешенных по поводу тяжелой преэклампсии в сроках до 34 недель включительно, а также их мужей и новорожденных исследован аллельный полиморфизм 11 генов: восемь - кодирующих фибрино-лиз и трех - фолатный цикл: F2 (G20210A), F5 (G1691A), F7 (G10976A), F13 (G > T), FGB (G455A), ITGA2 (C807T), ITGB3 (T1565C), PAI-1 (675 5G > 4G), MTHFR (C677T, A1298C), MTR (A2756G), MTRR (A66G). Средний срок родоразрешения составил 33,1 недели. В 75 % случаев дополнительным показанием к досрочному родоразрешению явился прогрессирующий дистресс плода. Критериями исключения из исследования были многоплодная беременность и пороки развития плода.

Оценку полиморфизмов генов белков, ассоциированных с нарушением системы фибринолиза и обмена фолатов, проводили методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) в лаборатории иммунологии Алтайского краевого диагностического центра. Информированное согласие на использование биологического материала было получено у всех матерей и отцов.

Математический анализ результатов проводился по общепринятым методам вариационной статистики с использованием программы Statistica. Значения качественных признаков представлены в виде наблюдаемых частот и в процентах.

Результаты исследования

Результаты молекулярно-генетического исследования показали, что полиморфизмы (ПМ) аллелей генов, кодирующих фибринолиз и фолатный цикл, в семьях матерей с тяжелой преэклампсией выявлялись в 100 % случаев у матерей, отцов и новорожденных. Абсолютное количество выявленных полиморфизмов аллелей генов в гетерозиготном и гомозиготном вариантах у матерей, отцов и новорожденных представлено на рис. 1.

Рис. 1. Количество полиморфизмов аллелей генов, кодирующих фибринолиз и фолатный цикл, в семьях матерей с тяжелой преэклампсией

Поскольку в 32 обследованных семьях все члены были носителями патологических аллелей (полиморфизмов) генов, ассоциированных с нарушением системы фибринолиза и обмена фолатов, нами проведено сравнение между матерями, отцами и их новорожденными как общего количества выявленных полиморфизмов, так и относительного носительства значимого гомозиготного варианта, а также их комбинаций у членов семьи.

Следует отметить, что матери были носительницами наибольшего количества полиморфизмов аллелей генов. Гомозиготные варианты полиморфизмов, составляющие 38,2 % от всех выявленных, присутствовали у матерей в 87,5 % случаев. У отцов общее количество полиморфизмов аллелей генов было почти в два раза меньше (88), из них только в 24,1 % случаев выявлялись редкие аллели в гомозиготном состоянии. У новорожденных полиморфизмов генов выявлено на 26,6 % меньше, чем у матерей, и на 28,9 % больше, чем у отцов, причем доля их гомозиготных вариантов была идентична материнской (34,7 %).

Спектр выявленных полиморфизмов аллелей генов в гомозиготном состоянии с редкими аллелями («риска») был представлен F13 (G > T), FGB (G455A), ITGA2 (C807T), PAI-1 (675 5G > 4G), MTHFR (C677T, A1298C), MTR (A2756G), MTRR (A66G). Наиболее часто встречались среди прочих три генетические аномалии: PAI-1 (675 5G > 4G), отвечающая за фибринолиз и выявленная в 65,6 % случаев у матерей, в 21,9 % - у отцов и в 40,6 % -у новорожденных; и две, отвечающие за фолатный цикл, MTRR (A66G), выявленная в 46,9 % случаев у матерей, в 9,3 % - у отцов и в 28,1 % - у новорожденных; и MTHFR (C677T, A1298C), выявленная в 34,4, 12,5 и 34,4 % случаев в семьях соответственно.

При анализе носительства межгенных аллельных комбинаций в гомозиготном состоянии установлено, что они присутствовали у матерей в 68,8 %, отцов - в 12,5 % и у новорожденных - в 53,1 % случаев.

Комбинации гомозиготных аллелей у членов обследованных семей представлены в табл. 1. Сочетание двух полиморфизмов выявлялось у 16 матерей, 3 отцов и 15 новорожденных (50,0; 9,4 и 46,9 % соответственно). Комбинации из трех межгенных дефектов выявлялись в 9,4 % случаев у матерей, в 3,3 % - у отцов и в 6,3 % - у новорожденных. Сочетание четырех и пяти межгенных аллельных комбинаций выявлялось только у одной матери.

Таблица 1

Частота встречаемости комбинаций полиморфных вариантов генов в гомозиготном состоянии с редкими аллелями системы гемостаза и фолатного цикла в семьях матерей с тяжелой преэклампсией

Ген/генотип Мать Отец Ребенок

Абс. % Абс. % Абс. %

1 2 3 4 5 6 7

Всего: 22 68,8 4 12,5 17 53,1

2 межгенных дефекта, из них: 16 50,0 3 9,4 15 46,9

PAI-I 675 4G/4G/ F13 G > TT/T 2 6,3 1 3,3 1 3,3

PAI-I 675 4G/4G/ITGA2 C807TT/T 1 3,3 1 3,3

PAI-I 675 4G/4G /MTHFRC677T7/r 6 18,8 5 15,6

PAI-I 675 4G/4G / MTRRA66GG/G 4 12,5 3 9,4

Окончание табл. 1

1 2 3 4 5 6 7

F13 G > TT/T/ MTRRA66GG/G 1 3,3 1 3,3

FGB G455AA/A/ MTHFRC677T7/T 1 3,3 1 3,3 1 3,3

MTHFRC677T7/T/ MTRRA66GG/G 1 3,3 1 3,3

MTRRA66GG/G/ MTR A2756GG/G 1 3,3 2 6,4

3 межгенных дефекта, из них: 3 9,4 1 3,3 2 6,3

PAI-I 675 4G/4G/ FGB G455AA/A/ MTRRA66GG/G / 1 3,3

F13 G > TT/T/ FGB G455AA/A/ MTRRA66GG/G / 1 3,3

PAI-I 675 4G/4G /MTHFRC677TT/TMTRRA66GG/G 1 3,3 1 3,3

F13 G > TT/T/ PAI-I 675 4G/4G/ MTRRA66GG/G / 1 3,3

F13 G > TT/T/MTHFRC677TT/ TMTRRA66GG/G 1 3,3

4 межгенных дефекта, из них: 2 6,3

ITGA2 C807TT/T/PAI-I 675 4G/4G /MTHFRC677TT/TMTRRA66GG/G 1 3,3

FGBG455AA/A/PAI-I 675 4G/4G /MTHFRC677TT/TMTRRA66GG/G 1 3,3

5 межгенных дефектов, из них: 1 3,3

F13 G > TT/T/ ITGA2 C807TT/T/PAI-I 675 4G/4G /MTHFRC677TT/TMTRRA66GG/G 1 3,3

Заключение

Таким образом, у пациенток с тяжелой преэклампсией, послужившей показанием к досрочному родоразрешению, и их новорожденных, генетические мутации высокого риска тромбофилий выявляются соответственно в 87,5 и 86,6 % случаев, преимущественно (68,8 % и 53,1 %) в виде комбинаций полиморфизмов генов, отвечающих за фолатный цикл и фибринолиз. Полученные результаты свидетельствуют о целесообразности обследования беременных с проблемной репродукцией на наличие генетических форм тромбофилии для более точной идентификации групп акушерского и перинатального риска.

Библиографический список

1. Айламазян, Э. К. Гестоз: теория и практика / Э. К. Айламазян, Е. В. Мозговая. -М. : МЕДпресс-информ, 2008. - 272 с.

2. Преэклампсия. Руководство / под ред. Г. Т. Сухих, Л. Е. Мурашко. - М. : ГЭОТАР-Медиа, 2010. - 576 с.

3. Ремнева, О. В. Структура и частота младенческой смертности и заболеваемости в Алтайском крае в 2002-2006 гг. / О. В. Ремнева, Т. М. Черкасова, И. Г. Бру-сенцов // Вестник перинатологии, акушерства и гинекологии. - 2009. - Вып. 16. -С. 39-45.

4. Тромбофилия как важнейшее звено патогенеза осложнений беременности / В. О. Бицадзе, А. Д. Макацария, Д. Х. Хизроева, Н. А. Макацария, Е. В. Яшенина, Л. А. Казакова // Практическая медицина. - 2012. - № 5 (60). - С. 22-30.

5. Красноружских, Е. А. Генетическая предрасположенность к нарушениям гемостаза как фактор риска гестационных и перинатальных осложнений / Е. А. Красноружских, М. Б. Игитова // Современные проблемы науки и образования. - 2012. - № 5. - С. 1-5.

6. Фадеева, Н. И. Факторы риска формирования предлежания плаценты / Н. И. Фадеева, О. А. Бельницкая, И. А. Мяделец, Г. В. Сердюк // Журнал акушерства и женских болезней. - 2016. - Т. 65, № 3. - С. 31-38.

7. Генетические аспекты преэклампсии / И. Н. Фетисова, И. А. Панова, А. И. Ма-лышкина, Е. А. Рокотянская, С. Ю. Ратникова, Е. В. Смирнова, Н. С. Фетисов, А. О. Назарова // Современные проблемы науки и образования. - 2014. - № 6. -С. 1-9.

8. Susceptibility to pre-eclampsia is associated with multiple genetic polymorphisms in maternal biotransformation enzymes / P. L. Zusterzeel, W. H. Peters, G. J. Burton, W. Visser, H. M. Roelofs, E. A. Steegers // Gynecol. Obstet. Invest. - 2007. - № 63 (4). - P. 209-213.

9. Methylenetetrahydrofolate reductase C677T and glutathione S-transferase P1 A313G are associated with a reduced risk of preeclampsia in Maya-Mestizo women / P. Canto, T. Canto-Cetina, R. Juarez-Velazquez et al. // Hypertens. Res. - 2008. - Vol. 31 (5). -P. 1015-1019.

10. Polymorphisms in the GSTT1 and GSTM1 genes are associated with increased risk of preeclampsia in the Mexican mestizo population / A. Sandoval-Carrillo, M. Aguilar-Duran, F. Vázquez-Alaniz et al. // Genet. Mol. Res. - 2014. - Vol. 13 (1). - P. 21602165.

References

1. Aylamazyan E. K., Mozgovaya E. V. Gestoz: teoriya i praktika [Gestosis]. Moscow: MEDpress-inform, 2008, 272 p.

2. Preeklampsiya. Rukovodstvo [Preeclampsia. Guide]. Eds. G. T. Sukhikh, L. E. Murash-ko. Moscow: GEOTAR-Media, 2010, 576 p.

3. Remneva O. V., Cherkasova T. M., Brusentsov I. G. Vestnikperinatologii, akusherstva i ginekologii [Bulletin of perinatology, obstetrics and gynecology]. 2009, iss. 16, pp. 39-45.

4. Bitsadze V. O., Makatsariya A. D., Khizroeva D. Kh., Makatsariya N. A., Yashenina E. V., Kazakova L. A. Prakticheskaya meditsina [Practical medicine]. 2012, no. 5 (60), pp. 22-30.

5. Krasnoruzhskikh E. A., Igitova M. B. Sovremennye problemy nauki i obrazovaniya [Modern problems of science and education]. 2012, no. 5, pp. 1-5.

6. Fadeeva N. I., Bel'nitskaya O. A., Myadelets I. A., Serdyuk G. V. Zhurnal akusherstva i zhenskikh bolezney [Journal of obstetrics and women's diseases]. 2016, vol. 65, no. 3, pp. 31-38.

7. Fetisova I. N., Panova I. A., Malyshkina A. I., Rokotyanskaya E. A., Ratnikova S. Yu., Smirnova E. V., Fetisov N. S., Nazarova A. O. Sovremennye problemy nauki i obrazovaniya [Modern problems of sciences and education]. 2014, no. 6, pp. 1-9.

8. Zusterzeel P. L., Peters W. H., Burton G. J., Visser W., Roelofs H. M., Steegers E. A. Gynecol. Obstet. Invest. 2007, no. 63 (4), pp. 209-213.

9. Canto P., Canto-Cetina T., Juarez-Velazquez R. et al. Hypertens. Res. 2008, vol. 31 (5), pp. 1015-1019.

10. Sandoval-Carrillo A., Aguilar-Duran M., Vázquez-Alaniz F. et al. Genet. Mol. Res. 2014, vol. 13 (1), pp. 2160-2165.

Фадеева Наталья Ильинична

доктор медицинских наук, профессор, кафедра акушерства и гинекологии с курсом ДПО, Алтайский государственный медицинский университет

E-mail: nat2fad@hotmail.com

Белинина Антонина Анатольевна

аспирант, Алтайский государственный медицинский университет

E-mail: antonina_belinina@mail.ru

Ремнева Ольга Васильевна доктор медицинских наук, доцент, заведующий кафедрой акушерства и гинекологии с курсом ДПО, Алтайский государственный медицинский университет

E-mail: rolmed@mail.ru

Игитова Марина Борисовна

доктор медицинских наук, профессор, кафедра акушерства и гинекологии с курсом ДПО, Алтайский государственный медицинский университет

E-mail: igitova-2011@mail.ru

Fadeeva Natal'ya Il'inichna Doctor of medical sciences, professor, sub-department of obstetrics and gynecology with a course of additional vocational training, Altai State Medical University

Belinina Antonina Anatol'evna Postgraduate student, Altai State Medical University

Remneva Ol'ga Vasil'evna Doctor of medical sciences, associate professor, head of sub-department of obstetrics and gynecology with a course of additional vocational training, Altai State Medical University

Igitova Marina Borisovna Doctor of medical sciences, professor, sub-department of obstetrics and gynecology with a course of additional vocational training, Altai State Medical University

УДК 618.3-008.61:616-005.2 Фадеева, Н. И.

Носительство тромбогенных ДНК-полиморфизмов в семьях при осложнениях беременности тяжелой преэклампсией / Н. И. Фадеева, А. А. Белинина, О. В. Ремнева, М. Б. Игитова // Известия высших учебных заведений. Поволжский регион. Медицинские науки. - 2017. - № 3 (43). -С. 66-72. БОТ 10.21685/2072-3032-2017-3-8