МАТРИЧНЫЕ РИБОНУКЛЕИНОВЫЕ КИСЛОТЫ ДЛЯ УСИЛЕНИЯ ИММУННЫХ ОТВЕТОВ И СПОСОБЫ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ

1. Матричная РНК (мРНК), кодирующая полипептид, который усиливает иммунный ответ на представляющий интерес антиген у субъекта, причем иммунный ответ включает в себя клеточный или гуморальный иммунный ответ, характеризующийся
(i) стимуляцией сигнального пути интерферона типа I;
(ii) стимуляцией сигнального пути NFkB;
(iii) стимуляцией воспалительного ответа;
(iv) стимуляцией продукции цитокинов;
(v) стимуляцией развития, активности или мобилизации дендритных клеток; и
(vi) комбинацией любого из (i) - (v).
2. мРНК по п. 1, причем полипептид функционирует в сигнальном пути ниже по меньшей мере одного Toll-подобного рецептора (TLR), тем самым усиливая иммунный ответ.
3. мРНК по п. 1 или 2, причем полипептид стимулирует ответ интерферона типа I (ИФН) и/или NFκB-опосредованный провоспалительный ответ.
4. мРНК по п. 3, причем полипептид стимулирует ответ ИФН типа I и при этом полипептид выбирают из группы, состоящей из STING, MAVS, IRF1, IRF3, IRF5, IRF7, IRF8, IRF9, TBK1, IKKα, IKKi, MyD88, TRAM, TRAF3, TRAF6, IRAK1, IRAK4, TRIF, IPS-1, RIG-1, DAI и IFI16.
5. мРНК по п. 3, причем полипептид стимулирует NFκB-опосредованный провоспалительный ответ и при этом полипептид выбирают из группы, состоящей из STING, c-FLIP, IKKβ, RIPK1, Btk, TAKl, TAK-TAB1, TBK1, MyD88, IRAK1, IRAK2, IRAK4, TAB2, TAB3, TRAF6, TRAM, MKK3, MKK4, MKK6 и MKK7.
6. мРНК по п. 1 или 2, причем полипептид представляет собой внутриклеточный адаптерный белок.
7. мРНК по п. 6, причем внутриклеточный адаптерный белок выбирают из группы, состоящей из STING, MAVS и MyD88.
8. мРНК по п. 2, причем полипептид представляет собой внутриклеточный сигнальный белок сигнального пути TLR.
9. мРНК по п. 8, причем внутриклеточный сигнальный белок выбирают из группы, состоящей из MyD88, IRAK 1, IRAK2, IRAK4, TRAF3, TRAF6, TAK1, ТАВ2, ТАВ3, TAK-TAB1, MKK3, MKK4, MKK6, MKK7, IKKα, IKKβ, TRAM, TRIF, RIPK1 и TBK1.
10. мРНК по п. 2, причем полипептид представляет собой фактор транскрипции.
11. мРНК по п. 10, причем фактор транскрипции представляет собой IRF3 или IRF7.
12. мРНК по п. 2, причем полипептид участвует в некроптозе или образовании некроптосом.
13. мРНК по п. 12, причем полипептид выбирают из группы, состоящей из MLKL, RIPK1, RIPK3, DIABLO и FADD.
14. мРНК по п. 2, причем полипептид участвует в пироптозе или образовании инфламмасом.
15. мРНК по п. 14, причем полипептид выбирают из группы, состоящей из каспазы 1, каспазы 4, каспазы 5, каспазы 11, GSDMD, NLRP3, пиринового домена и ASC/PYCARD.
16. мРНК по любому из пп. 1-15, которая содержит одно или более модифицированных нуклеотидных оснований.
17. Липидная наночастица, содержащая мРНК по любому из пп. 1-16.
18. Липидная наночастица по п. 17, которая дополнительно содержит мРНК, кодирующую представляющий интерес антиген.
19. Композиция, содержащая первую мРНК, кодирующую первый полипептид, который усиливает иммунный ответ на представляющий интерес антиген у субъекта, вторую мРНК, кодирующую второй полипептид, который усиливает иммунный ответ на представляющий интерес антиген у субъекта, и необязательно третью мРНК, кодирующую третий полипептид, который усиливает иммунный ответ на представляющий интерес антиген у субъекта, причем первый, второй и третий полипептиды функционируют в сигнальном пути ниже по меньшей мере одного Toll-подобного рецептора (TLR), тем самым усиливая иммунный ответ, и при этом иммунный ответ включает в себя клеточный или гуморальный иммунный ответ, характеризующийся
(i) стимуляцией сигнального пути интерферона типа I;
(ii) стимуляцией сигнального пути NFkB;
(iii) стимуляцией воспалительного ответа;
(iv) стимуляцией продукции цитокинов;
(v) стимуляцией развития, активности или мобилизации дендритных клеток; и
(vi) комбинацией любого из (i) - (v).
20. Композиция по п. 19, в которой:
(i) первый полипептид стимулирует ответ интерферона типа I (ИФН), а второй полипептид стимулирует NFκB-опосредованный провоспалительный ответ;
(ii) первый полипептид стимулирует ответ интерферона типа I (ИФН), а второй полипептид участвует в некроптозе или образовании некроптосом;
(iii) первый полипептид стимулирует ответ интерферона типа I (ИФН), а второй полипептид участвует в пироптозе или образовании инфламмасом;
(iv) первый полипептид стимулирует NFκB-опосредованный провоспалительный ответ, а второй полипептид участвует в некроптозе или образовании некроптосом;
(v) первый полипептид стимулирует NFκB-опосредованный провоспалительный ответ, а второй полипептид участвует в пироптозе или образовании инфламмасом;
(vii) первый полипептид стимулирует ответ интерферона типа I (ИФН), второй полипептид стимулирует NFκB-опосредованный провоспалительный ответ, а третий полипептид участвует в некроптозе или образовании некроптосом; или
(viii) первый полипептид стимулирует ответ интерферона типа I (ИФН), второй полипептид стимулирует NFκB-опосредованный провоспалительный ответ, а третий полипептид участвует в пироптозе или образовании инфламмасом.
21. Композиция по п. 20, в которой первый полипептид стимулирует ответ интерферона I типа (ИФН) и выбирается из группы, состоящей из STING, MAVS, IRF1, IRF3, IRF5, IRF7, IRF8, IRF9, TBK1, IKKα, IKKi, MyD88, TRAM, TRAF3, TRAF6, IRAK1, IRAK4, TRIF, IPS-1, RIG-1, DAI и IFI16; а второй полипептид стимулирует NFκB-опосредованный провоспалительный ответ и выбирается из группы, состоящей из STING, c-FLIP, IKKβ, RIPK1, Btk, TAK1, TAK-ТАВ1, TBK1, MyD88, IRAK1, IRAK2, IRAK4, TAB2, TAB3, TRAF6, TRAM, MKK3, MKK4, MKK6 и MKK7.
22. Композиция по п. 21, в которой первый полипептид представляет собой конститутивно активный IRF3, а второй полипептид представляет собой конститутивно активный IKKα.
23. Композиция по п. 22, которая дополнительно содержит мРНК, кодирующую конститутивно активный полипептид IRF7.
24. Композиция по п. 20, в которой первый полипептид стимулирует ответ интерферона типа I (ИФН) и выбирается из группы, состоящей из STING, MAVS, IRF1, IRF3, IRF5, IRF7, IRF8, IRF9, TBK1, IKKα, IKKi, MyD88. TRAM, TRAF3, TRAF6, IRAK1, IRAK4, TRIF, IPS-1, RIG-1, DAI и IFI16; а второй полипептид участвует в некроптозе или образовании некроптосом и выбирается из группы, состоящей из MLKL, RIPK1, RIPK3, DIABLO и FADD.
25. Композиция по п. 24, в которой первый полипептид представляет собой конститутивно активный STING, а второй полипептид представляет собой полипептид MLKL.
26. Композиция по п. 20, в которой первый полипептид стимулирует NFκB-опосредованный провоспалительный ответ и выбирается из группы, состоящей из STING, c-FLIP, IKKβ, RIPK1, Btk, TAK1, TAK-TAB1, TBK1, MyD88, IRAK1, IRAK2, IRAK4, TAB2, TAB3, TRAF6, TRAM, MKK3, MKK4, MKK6 и MKK7; а второй полипептид участвует в пироптозе или образовании инфламмасом и выбирается из группы, состоящей из каспазы 1, каспазы 4, каспазы 5, каспазы 11, GSDMD, NLRP3, пиринового домена и ASC/PYCARD.
27. Композиция по п. 26, в которой первый полипептид представляет собой конститутивно активный IKKβ, а второй полипептид представляет собой полипептид каспазы-1.
28. Композиция по п. 27, которая дополнительно содержит мРНК, кодирующую полипептид каспазы-4.
29. Композиция по любому из пп. 19-28, в которой первая, вторая и/или третья мРНК содержат одно или более модифицированных нуклеотидных оснований.
30. Липидная наночастица, содержащая композицию по любому из пп. 19-29.
31. Липидная наночастица по п. 30, которая дополнительно содержит мРНК, кодирующую представляющий интерес антиген.
32. Липидная наночастица по любому из пп. 17, 18, 30 или 31 и необязательный фармацевтически приемлемый носитель или композиция по п. 29 и необязательный фармацевтически приемлемый носитель для применения в усилении иммунного ответа у индивидуума, причем лечение включает введение липидной наночастицы или композиции, необязательно в комбинации со второй композицией, необязательно при этом вторая композиция содержит полипептид-ингибитор контрольной точки и необязательный фармацевтически приемлемый носитель.
33. Применение липидной наночастицы по любому из пп. 17, 18, 30 или 31 и необязательного фармацевтически приемлемого носителя при изготовлении лекарственного средства для усиления иммунного ответа у индивидуума, причем лекарственное средство содержит липидную наночастицу и необязательно фармацевтически приемлемый носитель, и при этом лечение включает введение лекарственного средства, необязательно в комбинации с композицией, содержащей полипептид-ингибитор контрольной точки и необязательный фармацевтически приемлемый носитель.
34. Набор, содержащий контейнер, содержащий липидную наночастицу по любому из пп. 17, 18, 30 или 31 и необязательный фармацевтически приемлемый носитель или композицию по п. 29 и необязательный фармацевтически приемлемый носитель, и листок-вкладыш, содержащий инструкции по введению липидной наночастицы или композиции для усиления иммунного ответа у индивидуума.
35. Набор по п. 34, причем листок-вкладыш дополнительно содержит инструкции по введению липидной наночастицы или композиции в комбинации с композицией, содержащей полипептид-ингибитор контрольной точки и необязательный фармацевтически приемлемый носитель, для усиления иммунного ответа у индивидуума.
36. Набор, содержащий лекарственное средство, содержащее липидную наночастицу по любому из пп. 17, 18, 30 и 31 и необязательный фармацевтически приемлемый носитель или композицию по п. 29 и необязательный фармацевтически приемлемый носитель, и листок-вкладыш, содержащий инструкции по введению лекарственного средства отдельно или в комбинации с композицией, содержащей полипептид-ингибитор контрольной точки и необязательный фармацевтически приемлемый носитель, для усиления иммунного ответа у индивидуума.
37. Набор по п. 36, причем набор дополнительно содержит листок-вкладыш, содержащий инструкции по введению первого лекарственного средства до, одновременно или после введения второго лекарственного средства для усиления иммунного ответа у индивидуума.
38. Липидная наночастица по любому из пп. 17, 18, 30 или 31, композиция по п. 29, применение по п. 33 или набор по любому из пп. 36-37, причем полипептид-ингибитор контрольных точек ингибирует PD1, PD-L1, CTLA4 или их комбинации.
39. Липидная наночастица по любому из пп. 17, 18, 30 или 31, композиция по п. 29, применение по п. 33 или набор по любому из пп. 36-37, причем полипептид-ингибитор контрольной точки представляет собой антитело.
40. Липидная наночастица по любому из пп. 17, 18, 30 или 31, композиция по п. 29, применение по п. 33 или набор по любому из пп. 36-37, причем полипептид-ингибитор контрольной точки представляет собой антитело, выбранное из анти-CTLA4 антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, которое специфически связывает CTLA4, анти-PD1 антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, которое специфически связывает PD1, анти-PD-L1 антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, которое специфически связывает PD-L1, и их комбинации.
41. Липидная наночастица по любому из пп. 17, 18, 30 или 31, композиция по п. 29, применение по п. 33 или набор по любому из пп. 36-37, причем полипептид-ингибитор контрольной точки представляет собой анти-PD-Ll антитело, выбранное из атезолизумаба, авелумаба или дурвалумаба.
42. Липидная наночастица по любому из пп. 17, 18, 30 или 31, композиция по п. 29, применение по п. 33 или набор по любому из пп. 36-37, причем полипептид-ингибитор контрольной точки представляет собой анти-CTLA-4 антитело, выбранное из тремелимумаба или ипилимумаба.
43. Липидная наночастица по любому из пп. 17, 18, 30 или 31, композиция по п. 29, применение по п. 33 или набор по любому из пп. 36-37, причем полипептид-ингибитор контрольной точки представляет собой анти-PD1 антитело, выбранное из ниволумаба или пембролизумаба.
44. Способ усиления иммунного ответа на представляющий интерес антиген у субъекта, включающий введение липидной наночастицы по п. 18 или п. 31 субъекту таким образом, чтобы усилить иммунный ответ на представляющий интерес антиген.
45. Композиция, содержащая по меньшей мере одну иммуностимуляторную мРНК и по меньшей мере одну мРНК, кодирующую представляющий интерес антиген, причем иммуностимулятор функционирует в сигнальном пути ниже по меньшей мере одного Toll-подобного рецептора (TLR), тем самым усиливая иммунный ответ, и при этом иммунный ответ включает в себя клеточный или гуморальный иммунный ответ, характеризующийся
(i) стимуляцией сигнального пути интерферона типа I;
(ii) стимуляцией сигнального пути NFkB;
(iii) стимуляцией воспалительного ответа;
(iv) стимуляцией продукции цитокинов;
(v) стимуляцией развития, активности или мобилизации дендритных клеток; и
(vi) комбинацией любого из (i) - (v).
46. Композиция по п. 45, в которой иммуностимулятор стимулировал ответ интерферона типа I (ИФН).
47. Композиция по п. 45 или 46, в которой иммуностимулятор стимулирует NFκB-опосредованный провоспалительный ответ.
48. Композиция по п. 47, в которой иммуностимулятор стимулирует ответ ИФН типа I и выбирается из группы, состоящей из STING, MAVS, IRF1, IRF3, IRF5, IRF7, IRF8, IRF9, TBK1, IKKα, IKKi, MyD88, TRAM, TRAF3, TRAF6, IRAK1, IRAK4, TRIF, IPS-1, RIG-1, DAI, IFI16 и их комбинации.
49. Композиция по п. 47, в которой иммуностимулятор стимулирует NFκB-опосредованный провоспалительный ответ и выбирается из группы, состоящей из STING, c-FLIP, IKKβ, RIPK1, Btk, TAK1, TAK-TAB1, TBK1, MyD88, IRAK1, IRAK2, IRAK4, TAB2, ТАВ3, TRAF6, TRAM, MKK3, MKK4, MKK6, MKK7 и их комбинации.
50. Композиция по п. 45 или 46, в которой иммуностимулятор представляет собой внутриклеточный адаптерный белок.
51. Композиция по п. 50, в которой иммуностимуляторный белок выбирают из группы, состоящей из STING, MAVS, MyD88 и их комбинации.
52. Композиция по п. 46, в которой иммуностимулятор представляет собой внутриклеточный сигнальный белок сигнального пути TLR.
53. Композиция по п. 52, в которой внутриклеточный сигнальный белок выбирают из группы, состоящей из MyD88, IRAK 1, IRAK2, IRAK4, TRAF3, TRAF6, TAK1, ТАВ2, ТАВ3, TAK-ТАВ1, MKK3, MKK4, MKK6, MKK7, IKKα, IKKβ, TRAM, TRIF, RIPK1, TBK1 и их комбинации.
54. Композиция по п. 46, в которой иммуностимулятор представляет собой фактор транскрипции.
55. Композиция по п. 54, в которой фактор транскрипции представляет собой IRF3, IRF7 или их комбинацию.
56. Композиция по п. 46, в которой иммуностимулятор участвует в некроптозе или образовании некроптосом.
57. Композиция по п. 56, в которой иммуностимулятор выбирают из группы, состоящей из MLKL, RIPK1, RIPK3, DIABLO, FADD и их комбинации.
58. Композиция по п. 46, в которой иммуностимулятор участвует в пироптозе или образовании инфламмасомы.
59. Композиция по п. 58, в которой иммуностимулятор выбирают из группы, состоящей из каспазы 1, каспазы 4, каспазы 5, каспазы 11, GSDMD, NLRP3, пиринового домена, ASC/PYCARD и их комбинации.
60. Композиция по п. 45, в которой иммуностимулятор включает в себя конститутивно активный полипептид STING человека.
61. Композиция по п. 60, в которой конститутивно активный полипептид STING человека содержит одну или более мутаций, выбранных из группы, состоящей из V147L, N154S, V155M, R284M, R284K, R284T, E315Q, R375A и их комбинации.
62. Композиция по п. 61, в которой конститутивно активный полипептид STING человека содержит мутацию V155M.
63. Композиция по п. 61, в которой конститутивно активный полипептид STING человека содержит мутации R284M/V147L/N154S/V155M.
64. Композиция по любому из пп. 60-63, дополнительно содержащая вторую иммуностимуляторную мРНК, причем вторая иммуностимуляторная мРНК кодирует полипептид MLKL.
65. Композиция по п. 45, в которой иммуностимулятор представляет собой полипептид MAVS.
66. Композиция по п. 45, в которой иммуностимулятор представляет собой конститутивно активный полипептид IRF3.
67. Композиция по п. 66, в которой конститутивно активный полипептид IRF3 содержит мутацию S396D.
68. Композиция по любому из пп. 66-67, дополнительно содержащая вторую иммуностимуляторную мРНК, причем вторая иммуностимуляторная мРНК кодирует конститутивно активный полипептид IRF7 человека.
69. Композиция по п. 68, в которой конститутивно активный полипептид IRF7 человека содержит одну или более мутаций, выбранных из группы, состоящей из S475D, S476D, S477D, S479D, L480D, S483D, S487D, делеции аминокислот 247-467 и их комбинаций.
70. Композиция по любому из пп. 68-69, дополнительно содержащая третью иммуностимуляторную мРНК, причем третья иммуностимуляторная мРНК кодирует полипептид IKKβ.
71. Композиция по любому из пп. 45-70, причем представляющий интерес антиген представляет собой один или более опухолевых антигенов.
72. Композиция по любому из пп. 45-70, причем представляющий собой антиген является одним или более антигенами патогена, и при этом патоген представляет собой вирус, бактерию, простейшее или паразита.
73. Композиция по любому из пп. 45-72, причем усиленный иммунный ответ представляет собой клеточный иммунный ответ, гуморальный иммунный ответ или и тот и другой.
74. Композиция по п. 73, причем усиленный иммунный ответ представляет собой ответ Т-клеток, при этом ответ Т-клеток представляет собой антигенспецифический ответ CD8+ Т-клеток, ответ CD4+ Т-клеток или и тот и другой.
75. Композиция по п. 73, причем усиленный иммунный ответ представляет собой ответ В-клеток, при этом ответ В-клеток представляет собой образование антигенспецифических антител.
76. Композиция по любому из пп. 45-72, причем усиленный иммунный ответ стимулирует продукцию цитокинов, стимулирует антигенспецифические ответы CD8+ Т-клеток, стимулирует антигенспецифические ответы CD4+ клеток-хелперов, увеличивает популяцию эффекторных CD62Llo Т-клеток памяти, стимулирует активность В-клеток или стимулирует продукцию антигенспецифических антител, или любую комбинацию вышеуказанных ответов.
77. Композиция по п. 76, причем усиленный иммунный ответ включает в себя стимуляцию продукции цитокинов, при этом цитокин представляет собой ИФН-γ или ФНО-α, или и тот и другой.
78. Композиция по п. 76, причем усиленный иммунный ответ включает в себя стимуляцию антигенспецифических ответов CD8+ Т-клеток, при этом антигенспецифический ответ CD8+ Т-клеток включает в себя пролиферацию CD8+ Т-клеток или продукцию цитокинов CD8+ Т-клетками, или и то и другое.
79. Композиция по п. 78, причем продукция цитокинов CD8+ Т-клетками увеличивается на по меньшей мере 5%, или по меньшей мере 10%, или по меньшей мере 15%, или по меньшей мере 20%, или по меньшей мере 25%, или по меньшей мере 30%, или по меньшей мере 35%, или по меньшей мере 40%, или по меньшей мере 45%, или по меньшей мере 50%.
80. Композиция по п. 78, причем антигенспецифический ответ CD8+ Т-клеток включает в себя пролиферацию CD8+ Т-клеток, при этом процент CD8+ Т-клеток в общей популяции Т-клеток увеличивается на по меньшей мере 5%, или по меньшей мере 10%, или по меньшей мере 15%, или по меньшей мере 20%, или по меньшей мере 25%, или по меньшей мере 30%, или по меньшей мере 35%, или по меньшей мере 40%, или по меньшей мере 45%, или по меньшей мере 50%.
81. Композиция по п. 78, причем антигенспецифический ответ CD8+ Т-клеток включает в себя увеличение процента эффекторных CD62Llo Т-клеток памяти среди CD8+ Т-клеток.
82. Композиция по любому из пп. 45-72, причем иммунный ответ на представляющий интерес антиген увеличивается в несколько раз по сравнению с иммунным ответом на антиген в отсутствии иммуностимулятора.
83. Композиция по п. 82, причем иммунный ответ увеличивается в 0,3-1000 раз, в 1-750 раз, в 5-500 раз, в 7-250 раз или в 10-100 раз.
84. Композиция по п. 82, причем иммунный ответ увеличивается в 2 раза, 3 раза, 4 раза, 5 раз, 7,5 раз, 10 раз, 20 раз, 30 раз, 40 раз, 50 раз, 75 раз или более.
85. Композиция по любому из пп. 45-84, в которой мРНК, кодирующая представляющий интерес антиген (Аг), и иммуностимуляторная мРНК (ИС) составляют в массовом соотношении Аг:ИС 1:1, 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 6:1, 7:1, 8:1, 9:1, 10:1 или 20:1.
86. Композиция по п. 85, в которой массовое соотношение Аг:ИС составляет 1:1, 3:1 или 5:1.
87. Композиция по любому из пп. 45-86, в которой каждая мРНК является полностью модифицированной.
88. Композиция по п. 87, в которой мРНК содержит псевдоуридин (ψ), псевдоуридин (ψ) и 5-метилцитидин (m5C), 1-метилпсевдоуридин (m1ψ), 1-метилпсевдоуридин (m1ψ) и 5-метилцитидин (m5C), 2-тиоуридин (s2U), 2-тиоуридин и 5-метилцитидин (m5C), 5-метоксиуридин (mo5U), 5-метоксиуридин (mo5U) и 5-метилцитидин (m5C), 2'-О-метилуридин, 2'-О-метилуридин и 5-метилцитидин (m5C), N6-метиладенозин (m6A) или N6-метиладенозин (m6A) и 5-метилцитидин (m5C).
89. Композиция по п. 87, в которой мРНК содержит псевдоуридин (ψ), N1-метилпсевдоуридин (m1ψ), 2-тиоуридин, 4'-тиоуридин, 5-метилцитозин, 2-тио-1-метил-1-дезазапсевдоуридин, 2-тио-1-метилпсевдоуридин, 2-тио-5-азауридин, 2-тиодигидропсевдоуридин, 2-тиодигидроуридин, 2-тиопсевдоуридин, 4-метокси-2-тиопсевдоуридин, 4-метоксипсевдоуридин, 4-тио-1-метилпсевдоуридин, 4-тиопсевдоуридин, 5-азауридин, дигидропсевдоуридин, 5-метоксиуридин или 2'-О-метилуридин, или их комбинации.
90. Композиция по п. 87, в которой мРНК содержит 1-метилпсевдоуридин (m1ψ), 5-метоксиуридин (mo5U), 5-метилцитидин (m5C), псевдоуридин (ψ), α-тиогуанозин или α-тиоаденозин или их комбинацию.
91. Липидная наночастица, содержащая композицию по любому из пп. 45-90.
92. Липидная наночастица по п. 91, причем липидная наночастица имеет мольное соотношение около 20-60% ионизируемого аминолипида: 5-25% фосфолипида: 25-55% стерола; и содержит 0,5-15% ПЭГ-модифицированного липида.
93. Липидная наночастица по п. 92, в которой ионизируемый аминолипид выбирают из группы, состоящей, например, из 2,2-дилинолеил-4-диметиламиноэтил-[1,3]-диоксолана (DLin-KC2-DMA), дилинолеилметил-4-диметиламинобутирата (DLin-MC3-DMA) и ди((Z)-нон-2-ен-1-ил)9-((4-(диметиламино)бутаноил)окси)гептадекандиоата (L319).
94. Липидная наночастица по п. 92, причем липидная наночастица содержит Соединение 25, DSPC, холестерин и ПЭГ-DMG.
95. Липидная наночастица по п. 94, причем липидная наночастица имеет мольное соотношение около 20-60% Соединения 25: 5-25% DSPC: 25-55% холестерина; и содержит 0,5-15% ПЭГ-DMG.
96. Липидная наночастица по п. 95, причем липидная наночастица имеет мольное соотношение около 50% Соединения 25: около 10% DSPC: около 38,5% холестерина: около 1,5% ПЭГ-DMG.
97. Фармацевтическая композиция, содержащая липидную наночастицу по любому из пп. 91-96 и фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель или наполнитель.
98. Липидная наночастица по любому из пп. 91-96 и необязательный фармацевтически приемлемый носитель или композиция по п. 97 и необязательный фармацевтически приемлемый носитель, для усиления иммунного ответа у индивидуума, причем лечение включает введение липидной наночастицы или композиции, необязательно в комбинации со второй композицией, необязательно при этом вторая композиция содержит полипептид-ингибитор контрольной точки и необязательный фармацевтически приемлемый носитель.
99. Применение липидной наночастицы по любому из пп. 91-96 и необязательного фармацевтически приемлемого носителя при изготовлении лекарственного средства для усиления иммунного ответа у индивидуума, причем лекарственное средство содержит липидную наночастицу и необязательный фармацевтически приемлемый носитель, и при этом лечение включает введение лекарственного средства, необязательно в комбинации с композицией, содержащей полипептид-ингибитор контрольной точки и необязательный фармацевтически приемлемый носитель.
100. Набор, содержащий контейнер, содержащий липидную наночастицу по любому из пп. 91-96 и необязательный фармацевтически приемлемый носитель или композицию по п. 97 и необязательный фармацевтически приемлемый носитель, и листок-вкладыш, содержащий инструкции по введению липидной наночастицы или композиции для усиления иммунного ответа у индивидуума.
101. Набор по п. 100, в котором листок-вкладыш дополнительно содержит инструкции по введению липидной наночастицы или композиции в комбинации с композицией, содержащей полипептид-ингибитор контрольной точки и необязательный фармацевтически приемлемый носитель, для усиления иммунного ответа у индивидуума.
102. Набор, содержащий лекарственное средство, содержащее липидную наночастицу по любому из пп. 91-96 и необязательный фармацевтически приемлемый носитель или композицию по п. 97 и необязательный фармацевтически приемлемый носитель, и листок-вкладыш, содержащий инструкции по введению лекарственного средства отдельно или в комбинации с композицией, содержащей полипептид-ингибитор контрольной точки и необязательный фармацевтически приемлемый носитель, для усиления иммунного ответа у индивидуума.
103. Набор по п. 102, причем набор дополнительно содержит листок-вкладыш, содержащий инструкции по введению первого лекарственного средства до, одновременно или после введения второго лекарственного средства для усиления иммунного ответа у индивидуума.
104. Липидная наночастица по любому из пп. 91-96, композиция по п. 97, применение по п. 99 или набор по любому из пп. 101-103, причем полипептид-ингибитор контрольных точек ингибирует PD1, PD-L1, CTLA4 или их комбинации.
105. Липидная наночастица по любому из пп. 91-96, композиция по п. 97, применение по п. 99 или набор по любому из пп. 101-103, причем полипептид-ингибитор контрольной точки представляет собой антитело.
106. Липидная наночастица по любому из пп. 91-96, композиция по п. 97, применение по п. 99 или набор по любому из пп. 101-103, причем полипептид-ингибитор контрольной точки представляет собой антитело, выбранное из анти-CTLA4 антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, которое специфически связывает CTLA4, анти-PD1 антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, которое специфически связывает PD1, анти-PD-L1 антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, которое специфически связывает PD-L1, и их комбинации.
107. Липидная наночастица по любому из пп. 91-96, композиция по п. 97, применение по п. 99 или набор по любому из пп. 101-103, причем полипептид-ингибитор контрольной точки представляет собой анти-PD-L1 антитело, выбранное из атезолизумаба, авелумаба или дурвалумаба.
108. Липидная наночастица по любому из пп. 91-96, композиция по п. 97, применение по п. 99 или набор по любому из пп. 101-103, причем полипептид-ингибитор контрольной точки представляет собой анти-CTLA-4 антитело, выбранное из тремелимумаба или ипилимумаба.
109. Липидная наночастица по любому из пп. 91-96, композиция по п. 97, применение по п. 99 или набор по любому из пп. 101-103, причем полипептид-ингибитор контрольной точки представляет собой анти-PD1 антитело, выбранное из ниволумаба или пембролизумаба.
110. Способ усиления иммунного ответа на представляющий интерес антиген, включающий введение субъекту липидной наночастицы по любому из пп. 91-96 или фармацевтической композиции по п. 97 таким образом, чтобы усилить иммунный ответ на представляющий интерес антиген у субъекта.
111. Способ по п. 110, в котором усиленный иммунный ответ представляет собой клеточный иммунный ответ, гуморальный иммунный ответ или и тот и другой.
112. Способ по п. 111, в котором усиленный иммунный ответ представляет собой ответ Т-клеток, причем ответ Т-клеток представляет собой антигенспецифический ответ CD8+ Т-клеток, ответ CD4+ Т-клеток или и тот и другой.
113. Способ по п. 111, в котором усиленный иммунный ответ представляет собой ответ В-клеток, причем ответ В-клеток представляет собой образование антигенспецифических антител.
114. Способ по п. 110, в котором усиленный иммунный ответ стимулирует продукцию цитокинов, стимулирует антигенспецифические ответы CD8+ Т-клеток, стимулирует антигенспецифические ответы CD4+ клеток-хелперов, увеличивает популяцию эффекторных CD62Llo Т-клеток памяти, стимулирует активность В-клеток или стимулирует продукцию антигенспецифических антител, или любую комбинацию вышеуказанных ответов.
115. Способ по п. 114, в котором усиленный иммунный ответ включает в себя стимуляцию продукции цитокинов, причем цитокин представляет собой ИФН-γ или ФНО-α, или и тот и другой.
116. Способ по п. 114, в котором усиленный иммунный ответ включает в себя стимуляцию антигенспецифических ответов CD8+ Т-клеток, причем антигенспецифический ответ CD8+ Т-клеток включает в себя пролиферацию CD8+ Т-клеток или продукцию цитокинов CD8+ Т-клетками, или и то и другое.
117. Способ по п. 116, в котором продукция цитокинов CD8+ Т-клетками увеличивается на по меньшей мере 5%, или по меньшей мере 10%, или по меньшей мере 15%, или по меньшей мере 20%, или по меньшей мере 25%, или по меньшей мере 30%, или по меньшей мере 35%, или по меньшей мере 40%, или по меньшей мере 45%, или по меньшей мере 50%.
118. Способ по п. 116, в котором антигенспецифический ответ CD8+ Т-клеток включает в себя пролиферацию CD8+ Т-клеток, и причем процент CD8+ Т-клеток в общей популяции Т-клеток увеличивается на по меньшей мере 5%, или по меньшей мере 10%, или по меньшей мере 15%, или по меньшей мере 20%, или по меньшей мере 25%, или по меньшей мере 30%, или по меньшей мере 35%, или по меньшей мере 40%, или по меньшей мере 45%, или по меньшей мере 50%.
119. Способ по п. 116, в котором антигенспецифический ответ CD8+ Т-клеток включает в себя увеличение процента эффекторных CD62Llo Т-клеток памяти среди CD8+ Т-клеток.
120. Способ по любому из пп. 110-119, в котором иммунный ответ на представляющий интерес антиген увеличивается в несколько раз по сравнению с иммунным ответом на антиген в отсутствии иммуностимулятора.
121. Способ по п. 120, в котором иммунный ответ увеличивается в 0,3-1000 раз, в 1-750 раз, в 5-500 раз, в 7-250 раз или в 10-100 раз.
122. Способ по п. 120, в котором иммунный ответ увеличивается в 2 раза, 3 раза, 4 раза, 5 раз, 7,5 раз, 10 раз, 20 раз, 30 раз, 40 раз, 50 раз, 75 раз или более.
123. Способ по любому из пп. 110-119, в котором иммунный ответ на представляющий интерес антиген поддерживается в течение более 10 суток, более 15 суток, более 20 суток, более 25 суток, более 30 суток, более 40 суток, более 50 суток, более 60 суток, более 70 суток, более 80 суток или более 90 суток.