Уровень глутатиона в эритроцитах и плазме крови коров, больных эндометритом

ВЕТЕРИНАРНЫЕ НА УКИ

УДК 619:612.12:618.14-002:636.2 В.Е. Высокогорский, Н.А. Погорелова

УРОВЕНЬ ГЛУТАТИОНА В ЭРИТРОЦИТАХ И ПЛАЗМЕ КРОВИ КОРОВ,

БОЛЬНЫХ ЭНДОМЕТРИТОМ

В работе изучали кровь коров 2-3-летнего возраста черно-пестрой породы. Для дальнейших биохимических исследований использовали плазму и гемолизат отмытых эритроцитов. Содержание восстановленного глутатиона (GSH) определяли по образованию комплекса с 5,5-дитио-бис-(2-нитробензойной) кислотой. Все коровы были разделены на 4 группы: 1-я группа (контрольная) - клинически здоровые животные, первой половины стельности; 2-я группа - коровы с диагнозом острого послеродового эндометрита (ОПЭ), 3-я группа - с гнойно-катаральным эндометритом (ГКЭ), 4-я группа - животные без клинических проявлений эндометрита (БКПЭ). Выявлено значительное увеличение содержания глутатиона эритроцитов и плазмы крови коров с диагнозом острого послеродового эндометрита, а у больных животных с более тяжелой формой заболевания -гнойно-катаральным эндометритом - напротив, уровень глутатиона в эритроцитах снижался в сравнении с контрольной группой. Содержание восстановленного глутатиона сохраняется повышенным в плазме крови в послеродовой период больных животных этой группы. У животных, получавших лечение, без клинических проявлений эндометрита (БКПЭ) на 25-30-й день после отела не выявлено значимого изменения содержания глутатиона как в эритроцитах, так и в плазме крови по сравнению с контрольной группой. Изменения содержания глутатиона как важнейшего компонента антиоксидантной защиты обусловлены, вероятно, развитием окислительного стресса и интенсификацией свободно-радикальных процессов. Показатели уровня глутатиона в эритроцитах и плазме крови могут быть дополнительным критерием эффективности лечения послеродового эндометрита крупного рогатого скота.

Ключевые слова: восстановленный глутатион, послеродовой эндометрит, окислительный стресс, антиок-сидантная система.

Введение

Акушерские заболевания крупного рогатого скота, регистрируемые в послеродовой период, протекают на фоне интенсификации свободно-радикального окисления и разнонаправленных изменений ферментативного и неферментативного звеньев антиоксидантной системы организма животных [1-3]. Глутатион (трипептид - у-глутамилцистеинилглицин) является важным неферментативным компонентом антиокислительной системы организма. Анти-оксидантные свойства глутатиона, проявляемые как вне-, так и внутриклеточно, основаны на его взаимодействии с активными формами кислорода непосредственно либо в качестве субстрата ферментов антиокислительной системы [4]. Поэтому уменьшение содержания восстановленного глутатиона крови крупного рогатого скота в послеродовый период может приводить к развитию оксидативного стресса, а его определение может служить в качестве маркера нарушения окислительного статуса животных. Кроме того, уровень глутатиона при

© Высокогорский В.Е., Погорелова Н.А., 2015

44

акушерских патологиях позволит оценить эффективность и целесообразность применения лечебных препаратов, своевременно скорректировать лечение.

Материалы и методы исследования Исследования выполнены в летне-стойловый период, на базе хозяйств лесостепной зоны Омской области. В работе изучали кровь коров 2-3-летнего возраста черно-пестрой породы, полновозрастных (1-2-й лактации), средней упитанности с массой тела 500-700 кг. Животные находились в одинаковых условиях кормления и содержания. В соответствии с анамнестическими данными, результатами вагинальных и ректальных исследований коровы были распределены на группы: 1-я (контрольная) - клинически здоровые животные, первой половины стельности; 2-я - коровы с диагнозом острого послеродового эндометрита (ОПЭ), 10-12-й день после отела, 3-я - гнойно-катаральный эндометрит (ГКЭ), 27-30-й день после отела, 4-я - животные, реконвалесценты, без клинических проявлений эндометрита (БКПЭ), 25-30-й день после отела. Коровы 2-4-й групп получали комплексные ветеринарные препараты антимикробного и противовоспалительного действия по одинаковой схеме лечения. Учитывали общее клиническое состояние, характер течения родов, послеродовых инволюционных процессов в половых органах и сроки их завершения. Эндометрит подтверждался клиническими исследованиями.

Кровь для биохимических исследований брали из яремной вены в утреннее время до кормления в вакуумные пробирки с гепарином фирмы Bodywin. Эритроциты и плазму разделяли центрифугированием при 2000 об./мин в течение 15 мин. Эритроциты промывали 0,9%-ным NaCl и лизировали холодной дистиллированной водой. Плазму и гемолизат использовали для дальнейших биохимических исследований. Содержание восстановленного глутатиона (GSH) определяли по образованию комплекса с 5,5-дитио-бис-(2-нитробензой-ной) кислотой с максимумом поглощения 412 нм. Исследования проведены на биохимическом анализаторе «Screen Master» производства фирмы «Hospitex» (Швейцария, Италия) с использованием реактивов фирмы «RANDOX» (Великобритания). Статистическая обработка проводилась с помощью пакета программ Statistica 6.0 for Windows [5]. Выборки не подчинялись нормальному закону распределения на уровне значимости p < 0,001, поэтому полученные результаты представлены в таблицах в виде медианы (Ме), верхнего и нижнего квартилей (Q1—Q3). Достоверность различий выборок оценивали непараметрическим критерием Манна - Уитни при уровне значимости р < 0,05.

Результаты исследований Полученные данные свидетельствуют: в эритроцитах коров, больных послеродовым эндометритом (ОПЭ), содержание глутатиона возрастало в 1,5 раза на 10-12 сут. после отела (таблица). Однако в 3-й группе животных больных гнойно-катаральным эндометритом (ГКЭ) на 27-30-й день после отела содержание восстановленного глутатиона эритроцитов крови значительно снижалось (на 50%) как по сравнению с показателями 2-й группы больных коров ОПЭ, так и со значениями клинически здоровых животных (на 34%).

Содержание глутатиона в эритроцитах и плазме крови коров, больных эндометритом

Компонент 1-я группа 2-я группа 3-я группа 4-я группа

крови

Эритроциты 3,3 4 9*х 2,2* х 3,6

мкмоль/гНЬ

Плазма 247,8 391,2* х 313,5* х 284,2

нмоль/г

Примечание. Данные представлены как медиана и квартили - Ме ^1^3). Статистически значимые различия «*» - с контрольной группой, «х» - 2-й и 3-й групп (р < 0,05).

В противоположность этому в плазме крови уровень глутатиона сохранялся повышенным как во 2-й, так и в 3-й группе животных. Наибольшие изменения глутатиона в плазме

крови выявлены во 2-й группе животных: увеличение на 58% в сравнении с контрольной группой. Возрастание глутатиона установлено и в 3-й группе на 27%, однако его содержание в плазме значительно ниже по сравнению со 2-й группой.

У животных, получавших лечение, без клинических проявлений эндометрита (БКПЭ) на 25-30-й день после отела не выявлено значимого изменения содержания глутатиона как в эритроцитах, так и в плазме крови по сравнению с контрольной группой.

Заключение

Адаптация организма при развитии окислительного стресса проявляется в повышении активности ферментов антиокислительной защиты, в том числе и глутатионредуктазы, что приводит к возрастанию уровня восстановленного глутатиона в эритроцитах. Резкое снижение содержания глутатиона в эритроцитах может быть вызвано тем, что при более тяжелой форме заболевания ферменты глутатионового звена АОС расходуют GSH на обезвреживание АФК и ксенобиотиков в большей степени, чем он восстанавливается ГР из окисленной формы GSSG.

В предыдущих исследованиях нами отмечена [6] интенсификация свободно-радикальных процессов, возрастание оксидативной модификации липидов и карбонильных производных белков крови коров при послеродовых эндометритах. Повышение проницаемости клеточных мембран эритроцитов в этих условиях может способствовать выходу восстановленного глутатиона из эритроцитов и повышению его уровня в плазме крови больных животных.

Список литературы

1. Свободно-радикальное окисление и антиоксидантная терапия / В.К. Казимирко [и др.]. - К. : Морион, 2004. - 160 с.

2. Пасько, Н.В. Пероксидное окисление липидов, антиоксидантная система и оксид азота при послеродовых нарушениях сократительной функции матки у коров : дис. ... канд. биол. наук : 03.00.04 / Пасько Надежда Валериевна. - Воронеж, 2009. - 144 с.

3. Попов, Ю.Г. Показатели естественной резистентности, про- и антиоксидантной активности сыворотки крови коров при лечении острого послеродового эндометрита / Ю.Г. Попов, Н.Н. Горб // Науч. тр. Уральской гос. академии ветеринарной медицины. Том XVI. - Троицк : Уральская государственная академия ветеринарной медицины. - 2011. - С. 37-43.

4. Кулинский, В.И. Система глутатиона / В.И. Кулинский, Л.С. Колесниченко // Биомед. химия. - 2009. -Т. 55. - Вып. 3. - С. 255-277.

5. Реброва, О.Ю. Статистический анализ медицинских данных. Применение пакета прикладных программ STATISTICA / О.Ю. Реброва. - М. : МедиаСфера, 2006. - 312 с.

6. Высокогорский, В.Е. Пероксидация липидов и окислительная модификация белков молока и крови коров, больных послеродовым эндометритом / В.Е. Высокогорский, Т.Д. Воронова, Н.А. Погорелова // Фундаментальные исследования. - 2014. - № 3 (1) - С. 81-85.

Высокогорский Валерий Евгеньевич, доктор мед. наук, профессор, ОмГАУ им. П.А. Столыпина, тел. (3812) 65-16-66, e-mail: vve-bio@mail.ru; Погорелова Наталья Анатольевна, старший преподаватель, ОмГАУ им. П.А. Столыпина, e-mail: ntali839@list.ru.

SUMMARY

V.Y. Vysokogorskiy, N.A. Pogorelova

Glutathione levels in erythrocytes and blood plasma of cows patients with endometritis

In this paper we studied the blood of cows 2-3 years old black-and-white breed. For further biochemical studies using plasma and hemolysate washed erythrocytes. The content of reduced glutathione (GSH) was determined by forming a complex with 5,5-dithio-bis-(2-nitrobenzoic) acid. All cows were divided into 4 groups: group 1 (control) -klinicheski healthy animals, the first half of pregnancy; group 2 - cows diagnosed with acute postpartum endometritis, group 3 - purulent-catarrhal endometritis, group 4 - animals without clinical signs of endometritis. Vyyavleno significant increase in glutathione content of erythrocytes and plasma of cows diagnosed with acute postpartum endometritis,

and in patients with more severe animal form of the disease - purulent-catarrhal endometritis-naprotiv, glutathione levels in erythrocytes decreased in comparison with the control group. The content of reduced glutathione is retained in blood plasma increased in patients post-partum animals of this group. In treated animals without clinical signs of endometritis 25-30 days after calving revealed no significant changes in the content of glutathione in erythrocytes and plasma in comparison with the control group of animals. Changes in the content of glutathione as an essential component of the antioxidant defense is probably due to the development of oxidative stress and the intensification of free radical processes. Indicators of the level of glutathione in erythrocytes and blood plasma may be an additional criterion for the effectiveness of treatment of postpartum endometritis in cattle.

Keywords: reduced glutathione, postpartum endometritis, oxidative stress, antioxidant system.

Vysokogorskiy Valeriy Evgenevich, Dr. Med. Sci., Prof., OSAU named after P.A. Stolypin, ph. (3812) 65-16-66, e-mail: vve-bio@mail.ru; Pogorelova Natalya Anatolevna, Senior Lecturer, OSAU named after P.A. Stolypin, e-mail: ntali839@list.ru.

УДК 619:616-07-084:615.37:636:592

В.И. Плешакова, В.В. Балашов, А.С. Горбань

ВЛИЯНИЕ ПРЕПАРАТА «ВЕТОСТИМ» НА ОСНОВНЫЕ ПОКАЗАТЕЛИ КРОВИ ИНДЮШАТ И ИХ ИММУННЫЙ СТАТУС

Приведены результаты исследований влияния иммуномодулятора «Ветостим» на основные иммунобиологические показатели крови индюшат при совместном введении с вакциной против Ньюкаслской болезни. Для определения влияния препарата «Ветостим» на основные гематологические, биохимические, иммунобиологические показатели индюшат, а также на специфическую резистентность против Ньюкаслской болезни при иммунизации живой вакциной было сформировано две группы индюшат кросса ВЮ-6 (100 гол. в каждой), подобранных по принципу аналогов. Индюшатам первой группы вводили препарат «Ветостим», вторая группа в том же количестве была контрольной. Препарат применяли дважды методом выпаивания совместно с вакциной «Авивак-НБ» против Ньюкаслской болезни на 14-е и 28-е сут. согласно рекомендациям производителя. При оценке напряженности иммунитета к вирусу Ньюкаслской болезни, после применения живой вакцины в сочетании с препаратом «Ветостим», установлено: на 10-е сут. средний титр антител в опытной группе выше по сравнению с контролем. Индюшата, иммунизированные вакциной «Авивак-НБ» в сочетании с иммуномодуля-тором «Ветостим», имеют более напряженный иммунитет: повышенное содержание в крови Т-, В-лимфоцитов и Т-киллеров, увеличение функциональной активности псевдоэозинофилов, а также более интенсивный синтез антител к вакцинному вирусу Ньюкаслской болезни. Установлено, что содержание Т-, В-лимфоцитов и Т-киллеров, а также титр антител против Ньюкаслской болезни у индюшат, привитых вакциной «Авивак-НБ» в сочетании с иммуномодулятором, выше, чем в группе, где не применяли «Ветостим».

Ключевые слова: Ньюкаслская болезнь, иммуномодулятор, «Ветостим», индюшата, вакцинация.

Введение

Птицеводство - одна из наиболее рентабельных и высокопродуктивных отраслей сельского хозяйства. Однако, несмотря на достигнутые показатели, в промышленном птицеводстве остается много нерешенных проблем [1].

Пусковым механизмом в патогенезе инфекционных, особенно вирусных болезней в условиях промышленной технологии является снижение иммунобиологической реактивности организма птицы, вызванное различными технологическими стресс-факторами, один из которых - многократная вакцинация индюшат в раннем постнатальном онтогенезе [2].

В этой ситуации возрастает роль профилактических и лечебных мероприятий, направленных на повышение естественной резистентности птицы, стимуляцию их иммунной системы [3]. В связи с этим создание и применение иммуномодуляторов с целью воздействия на повышение общей резистентности организма птицы, устойчивости его к технологическим

© Плешакова В.И., Балашов В.В., Горбань А.С., 2015

47