МУЛЬТИПЛЕКСНЫЙ АНАЛИЗ СТОПОЧНОГО ТРАНСГЕННОГО БЕЛКА

1. Высокопроизводительный способ выявления присутствия двух или более представляющих интерес белков с известными аминокислотными последовательностями в образце растительного происхождения, где указанный способ включает:
(i) обеспечение пептидов, полученных посредством расщепления белков в образце растительного происхождения;
(ii) разделение пептидов;
(iii) ионизацию пептидов; и
(iv) получение одновременных масс-спектральных данных для пептидов и определение присутствия или отсутствия двух или более представляющих интерес белков.
2. Способ по п.1, в котором пептиды, разделяемые на стадии (ii), разделяют посредством колоночной хроматографии.
3. Способ по п.1, в котором колоночная хроматография представляет собой жидкостную колоночную хроматографию.
4. Способ по п.1, в котором белки, расщепляемые на стадии (i), расщепляют в один прием перед впрыскиванием.
5. Способ по п.1, в котором пептиды, разделяемые на стадии (ii), разделяют в один прием.
6. Способ по п.1, в котором пептиды, ионизируемые на стадии (iii), ионизируют в один прием.
7. Способ по п.1, в котором одновременные данные по соотношению между массой и зарядом пептидов, соответствующих двум или более представляющим интерес белкам, получают в один прием.
8. Способ по п.1, в котором два или более представляющих интерес белков представляют собой два представляющих интерес белка.
9. Способ по п.1, в котором два или более представляющих интерес белков представляют собой четыре представляющих интерес белка.
10. Способ по п.1, в котором образец растительного происхождения представляет собой образец из трансгенного растения.
11. Способ по п.1, в котором образец растительного происхождения представляет собой образец из трансгенного растения, а два или более представляющих интерес белков являются ожидаемыми продуктами экспрессии трансгена в трансгенном растении.
12. Высокопроизводительный способ выявления присутствия двух или более представляющих интерес белков с известными аминокислотными последовательностями в образце растительного происхождения, где указанный способ включает:
(i) получение масс-спектральных данных для двух или более представляющих интерес белков;
(ii) проведение первого впрыскивания сложного образца растительного происхождения, содержащего белки;
(iii) расщепление белков в сложном образце растительного происхождения на пептиды;
(iv) разделение пептидов;
(v) ионизацию пептидов;
(vi) получение одновременных масс-спектральных данных для пептидов; и
(vii) сравнение одновременных масс-спектральных данных с масс-спектральными данными, полученными для двух или более представляющих интерес белков, чем определяется присутствие или отсутствие двух или более представляющих интерес белков.
13. Способ по п.12, в котором пептиды, расщепляемые на стадии (iii), расщепляют в один прием.
14. Способ по п.12, в котором пептиды, разделяемые на стадии (iv), разделяют в один прием.
15. Способ по п.12, в котором пептиды, ионизируемые на стадии (v), ионизируют в один прием.
16. Способ по п.12, в котором образец растительного происхождения представляет собой образец из трансгенного растения.
17. Способ сохранения генотипа сорта трансгенного растения, где указанный способ включает:
(i) получение масс-спектральных данных для одного или более ожидаемых продуктов экспрессии трансгена в сорте трансгенного растения;
(ii) проведение первого впрыскивания сложного образца, содержащего белки, из первого поколения сорта трансгенного растения;
(iii) расщепление белков в сложном образце растительного происхождения на пептиды;
(iv) разделение пептидов;
(v) ионизацию пептидов;
(vi) получение одновременных масс-спектральных данных для пептидов и сравнение одновременных масс-спектральных данных с масс-спектральными данными, полученными для ожидаемых продуктов экспрессии трансгена, чем определяется присутствие или отсутствие ожидаемых продуктов экспрессии трансгена в первом поколении сорта трансгенного растения;
(vii) проведение первого впрыскивания сложного образца, содержащего белки, из второго поколения сорта трансгенного растения;
(viii) повторение стадий (iii)-(vi) со сложным образцом, содержащим белки, из второго поколения сорта трансгенного растения; и
(ix) отказ от размножения второго поколения сорта трансгенного растения, если присутствие ожидаемого продукта (продуктов) экспрессии трансгена не может быть подтверждено масс-спектральными данными для пептидов из сложного белкового образца из второго поколения сорта трансгенного растения, чем поддерживается генотип сорта трансгенного растения.
18. Способ по п.17, в котором пептиды, расщепляемые на стадии (iii), расщепляют в один прием.
19. Способ по п.17, в котором пептиды, разделяемые на стадии (iv), разделяют в один прием.
20. Способ по п.17, в котором пептиды, ионизируемые на стадии (v), ионизируют в один прием.