ПРИМЕНЕНИЕ ОЛЕОРЕЗИНОВ КОПАИФЕРЫ ПРИ ПАТОЛОГИЯХ ПРОСТАТЫ
USE OF COPAIFERA OLEORESINS IN PROSTATE PATHOLOGIES

Настоящее изобретение относится к применению олеорезина Copaifera для предупреждения и/или лечения заболеваний простаты, в частности доброкачественной гиперплазии простаты и/или рака простаты.
Род Copaifera включает 35 видов, которые все представляют собой деревья из тропической Америки, т.е. Мексики, северной Аргентины и, главным образом, Бразилии. На данной территории имеется более чем 20 видов, причем самыми массовыми являются С. officinalis, С. reticulata, С. multijuga. Copaifera officinalis представляет собой дерево, обнаруживаемое, главным образом, в Бразилии, Колумбии и Венесуэле. Оно имеет красновато-коричневую древесину и вырастает до 25 м. Листья являются сложными, парноперистыми с 2-10 листочками, чередующимися или супротивными, короткоостроконечными и неравно закругленными в основании. Они имеют длину 3-8 см и ширину 2-4 см. Белые цветки, обычно сидячие, группируются в соцветия размером 7-14 см. Плоды представляют собой маленькие стручки, набухающие при созревании, с диаметром 20-25 мм, гладкие, короткоостроконечные, содержащие яйцевидное семя.
Олеорезин представляет собой вещество, получаемое надрезанием коры нескольких видов Copaifera. Располагается в переплетенных секреторных каналах вторичной древесины и мякоти, следовательно, его экстракция требует очень глубоких надрезов ствола, что обеспечивает его естественное вытекание из дерева.
После паровой дистилляции или гидродистилляции становится возможным получение из олеорезина копайского эфирного масла, знаменитого в парфюмерии.
Олеорезин копаибы использовался в медицине коренным населением Бразилии с XVI столетия. Он имеет длительную историю применения в традиционной бразильской медицине для лечения ран и удаления шрамов, в качестве жаропонижающего, антисептика мочевыводящих путей, против лейкореи и гонореи. При рассмотрении в качестве общего тонического средства, его показания были следующими: венерические заболевания, респираторные заболевания, астма, ревматизм, вторичные поражения кожи, язвы. В низких дозах он является стимулятором с прямым действием на желудок. Олеорезин копаибы снижает избыточную секрецию слизи, вызванную воспалением. В настоящее время олеорезин копаибы продается в капсулах в аптеках в Бразилии, где он показан для всех типов внутреннего воспаления и язв желудка. При местном нанесении он является мощным антисептическим и противовоспалительным заживляющим средством, он помогает излечивать самые сложные раны. Указывают на то, что олеорезин копаибы является очень эффективным при суставной боли, доброкачественных растяжениях связок, гематомах, тендините. Олеорезин наносят непосредственно на кожу. Олеорезин также используют в качестве массажного масла в отношении болезненных или воспаленных мышц и суставов.
В предшествующем уровне техники раскрыто то, что белки-шапероны (такие как HSP27 (белок теплового шока 27)) способствуют резистентности к химиотерапии химическими средствами в раковых тканях, и, таким образом, описывается то, что хардвиковая кислота из масла Copaifera ингибирует HSP27. Исследование по данной теме нацелено на идентификацию других ингибиторов шаперонов в масле Copaifera (Phytochemistry Letters, 10 (2014); 65-75). В одном таком документе показано то, что некислотная фракция и только одна кислотная подфракция (без дитерпеновых кислот или сложных эфиров дитерпеновых кислот) данного масла имеет антипролиферативную активность. Другие подфракции (т.е. кислотные) демонстрируют антишаперонную активность. Данный документ, таким образом, нацелен на очень специфический случай, а именно на комбинацию масла Copaifera с химиотерапевтическим лечением химическим агентом для того, чтобы противодействовать резистентности раковых клеток к указанному лечению химическим средством. В данном документе делается заключение о том, что только хардвиковая кислота из масла Copaifera является активной в комбинации с антинеопластическим средством, которое представляет собой антираковое средство, для ингибирования белков-шаперонов, которые представляюет собой агенты, способствующие резистентности к указанному противораковому агенту.
Олеорезин копаибы, возможно подвергнутый перегонке, также используется в косметике, в изготовлении мыл, пен для ванны, детергентов и кремов, и в качестве фиксатора в парфюмерии. Олеорезин иногда используется в качестве корригента в пищевой промышленности. Олеорезин копаибы также используется в качестве вещества для художников, в частности, в рецептах масляных красок и в декоративной керамике.
Олеорезин представляет собой бесцветную и легкоподвижную жидкость, которая с течением времени принимает масляную консистенцию и зеленовато-желтый цвет. Его консистенция и цвет слегка варьируют, в зависимости от дерева, из которого он происходит, и от эфирного масла, находящегося там. Его запах является сильным и неприятным, его вкус является горьким и жгучим. Олеорезин является нерастворимым в воде, полностью растворимым в спирте и в простом эфире.
Олеорезин С. officinalis состоит из двух фракций, которые различаются их летучестью; каждая из фракций характеризуется следующими отличными химическими соединениями:
- «летучее» эфирное масло, составляющее 50-90% олеорезина, которое, главным образом, состоит из сесквитерпенов. Среди данных сесквитерпенов могут быть различены, главным образом, гемакрен D, (Е)-β-кариофиллен, β- и δ-элемен, α-иланген, α-гурюнен, α-хумулен. Меньшая часть сесквитерпенов представляет собой α-кубепен, α-копаен, 7-эпи-сесквитуен, цис- и транс-α-бергамотен, сесквисабинен-А и -В, 4αН, 10αН-гуайя-1(5),6-диен, алло-аромаденрен, γ-ууролен, α-аморфен, β-селинен, бициклиосесквифилландрен, α-мууролен, β-бисаболен, γ-кадинен, δ-кадинен, цис-каламен, зонарен, какина-1'4-диен, α-кадинен, α-калакорен, селина-3,7(11)-диен, гермакрен В. Это летучее масло является очень прозрачным, бесцветным, с очень отчетливым запахом и вкусом,
- «нелетучая фракция», составляющая 10-50% олеорезина, которая, главным образом, состоит из следующих дитерпеновых кислот и/или сложных эфиров дитерпеновых кислот: копаловая кислота, копаифероловая кислота, сложный диметиловый эфир агатендиоевой кислоты, агатовая кислота, сложный метиловый эфир 3β-гидроксиантикопаловой кислоты, хардвиковая кислота, 7α-ацетоксихардвиковая кислота. Этот остаток перегонки представляет собой вязкую жидкость с ароматическим запахом и темно-коричневым цветом.
Неожиданно, авторы данного изобретения показали то, что олеорезин Copaifera имеет особенно полезную анти-5α-редуктазную активность.
Роль ингибиторов 5α-редуктазы устанавливается в патофизиологии простаты (Rittmaster, Journal of Andrology, vol. 18, no. 6, 1997), в частности, при доброкачественной гиперплазии простаты и при раке простаты.
Простата представляет собой наибольшую экзокринную железу в мужской мочеполовой системе. Она располагается на пересечении половых и мочевыводящих путей. Наряду с семенными пузырьками, простата играет существенную роль в синтезе и высвобождении семенной жидкости. Она более опосредованно способствует циклу мочеиспускания-воздержания через ее гладкомышечный компонент. Наконец, простата окружена сосудистыми и нервными ножками, участвующими в мужской сексуальной реакции. С возрастом анатомические изменения в предстательной железе иногда могут быть причиной расстройств мочеиспускания и сексуальных дисфункций, которые приводят к снижению качества жизни.
Простата может быть местом трех главных заболеваний: простатита, аденомы простаты или доброкачественной гиперплазии простаты и рака простаты. Однако к настоящему времени известно то, что 5α-редуктаза участвует только в доброкачественной гиперплазии простаты и раке простаты.
Доброкачественная гиперплазия простаты представляет собой обычное состояние, стимулируемое старением и связанное с развитием аденомы простаты, ответственной за хроническую обструкцию в отношении опустошения мочевого пузыря. Доброкачественная гиперплазия простаты отличается увеличением размера предстательной железы. Большая простата сдавливает мочеиспускательный канал при давлении на мочевой пузырь, приводя к частой потребности к мочеиспусканию и разным проблемам с мочеиспусканием, слабой и прерывающейся струе, боли и т.д. Почти все мужчины склонны к доброкачественной гиперплазии простаты по мере их старения. В самом деле, больше, чем 50% мужчин в возрасте 60 лет имеют ее, и 90% мужчин в возрасте старше 80 лет. Однако не все из них страдают от нее, так как один из двух мужчин обеспокоен симптомами, связанными с мочеиспусканием. Причины данного состояния ясно не установлены, возможно, имеется наследственная предрасположенность, но могут играть роль и другие факторы. Однако к данному состоянию не нужно относиться легкомысленно, так как есть несколько возможных осложнений, таких как инфекции мочевыводящих путей, острая задержка мочеиспускания, камни в мочевом пузыре и повреждение почек.
Рак простаты является обычным заболеванием, которое является вторым самым обычным мужским раковым заболеванием в промышленно развитых странах. Вероятно имеется генетическая предрасположенность. Большинство раковых заболеваний простаты прогрессирует очень медленно. Часто опухоль остается локализованной в предстательной железе и имеет ограниченное влияние на здоровье, иногда вызывая мочеиспускательную или эректильную дисфункцию. Однако некоторые раковые заболевания простаты могут прогрессировать и распространяться быстрее. Аденокарцинома является самой обычной формой рака простаты. Она представляет примерно 95% случаев. Тяжесть рака зависит от степени развития опухоли и от типа раковых клеток.
Тестостерон стимулирует рост простаты посредством одного из его метаболитов - дигидротестостерона. Тестостерон превращается в дигидротестостерон действием 5α-редуктазы. Дигидротестостерон имеет высокую аффинность связывания в отношении рецептора андрогена. По сравнению с тестостероном дигидротестостерон стимулирует транскрипционную активность клеток простаты в 2-10 раз. Дигидротестостерон имеет значительно более мощный стимулирующий эффект на рост опухоли простаты ex vivo, чем тестостерон. У мужчин с симптоматической доброкачественной гиперплазией простаты ингибирование 5α-редуктазы уменьшает объем простаты, улучшает симптомы и диурез, и снижает риск острой задержки мочеиспускания.
50
50
50
Имеются две изоформы 5α-редуктазы - 5αR1 и 5αR2, которые кодируются, соответственно, двумя отличными генами - SRD5A1 и SRD5A2, расположенными на отдельных хромосомах. Изозим 5αR2 встречается, главным образом, в мужских репродуктивных тканях, семенных пузырьках, эпидимисе и простате, тогда как изозим 5αR1 выявляется, главным образом, в печени и коже. 5αR2 присутствует в ткани простаты в высоких концентрациях и имеет высокую аффинность в отношении тестостерона. Финастерид является мощным ингибитором 5αR2 с полумаксимальной ингибирующей концентрацией (ИК) 69 нМ, но который значительно менее эффективен в ингибировании 5αR1 - ИК 360 нМ. В отличие от этого, дутастерид аналогично ингибирует и 5αR1, и 5αR2 - ИК 6 нМ и 7 нМ соответственно. Дутастерид, по-видимому, является более эффективным, чем финастерид, соответственно, 94,7% относительно 70,8%, в снижении средних сывороточных уровней дигидротестостерона. Внутри простаты наблюдали большее снижение уровня дигидротестостерона при использовании дутастерида, свидетельствующее о том, что 5αR1, по-видимому, способствует синтезу дигидротестостерона внутри простаты. Роль 5α-редуктазы в ингибировании рака простаты была описана в животных моделях.
Согласно первому воплощению данное изобретение касается олеорезина Copaifera для применения в качестве медицинского продукта, предназначенного для лечения и/или предупреждения доброкачественной гиперплазии простаты и/или рака простаты.
Во втором воплощении данное изобретение относится к олеорезину Copaifera для применения согласно первому воплощению, отличающемуся тем, что данный олеорезин происходит из видов Copaifera, выбранных из группы, состоящей из С. officinalis, С. multijuga, С. reticulata.
В третьем воплощении данное изобретение относится к фракции дитерпеновых кислот и/или сложных эфиров дитерпеновых кислот олеорезина для применения согласно одному из воплощений 1 или 2, отличающейся тем, что она содержит по меньшей мере 90% масс. дитерпеновых кислот и/или сложных эфиров дитерпеновых кислот.
Четвертое воплощении данного изобретения относится к фармацевтической композиции, отличающейся тем, что она содержит в качестве активного агента олеорезин Copaifera согласно одному из воплощений 1 или 2, или фракцию согласно третьему воплощению и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый эксципиент для применения в качестве медицинского продукта, предназначенного для лечения и/или предупреждения доброкачественной гиперплазии простаты и/или рака простаты. Преимущественно олеорезин или данная фракция является единственным активным агентом в указанной композиции.
Пятое воплощение данного изобретения касается фармацевтической композиции для применения согласно четвертому воплощению, отличающейся тем, что олеорезин происходит из видов Copaifera, выбранных из группы, состоящей из С. officinalis, С. multijuga, С. reticulata.
Шестое воплощение данного изобретения касается фармацевтической композиции для применения согласно одному из воплощений 4 или 5, отличающейся тем, что она содержит в качестве активного агента фракцию согласно третьему воплощению.
Седьмое воплощение данного изобретения также касается фармацевтической композиции для применения согласно одному из воплощений 4-6, отличающейся тем, что она находится в подходящей для перорального или внутривенного введения форме.
Преимущественно олеорезин или фракция согласно настоящему изобретению представляет собой единственное активное начало, предназначенное для лечения и/или предупреждения доброкачественной гиперплазии простаты и/или рака простаты, в фармацевтических композициях для применения согласно данному изобретению.
Другое воплощение данного изобретения относится к применению олеорезина Copaifera или фракции, как определено согласно одному из предшествующих воплощений, для изготовления медицинского продукта, предназначенного для лечения и/или предупреждения доброкачественной гиперплазии простаты и/или рака простаты.
Настоящее изобретение также относится к способу лечения и/или предупреждения доброкачественной гиперплазии простаты и/или рака простаты, включающему введение индивиду, нуждающемуся в этом, фармацевтической композиции, содержащей или состоящей из олеорезина Copaifera или фракции согласно одному из предшествующих воплощений в качестве активного агента и по меньшей мере одного фармацевтически приемлемого эксципиента.
Преимущественно согласно способу по изобретению олеорезин или данная фракция является единственным противораковым активным началом в композиции.
Для целей настоящего изобретения термин «олеорезин Copaifera» означает экссудат вида(дов) дерева(вьев) Copaifera, содержащий летучую фракцию, состоящую, главным образом, из сесквитерпеновых соединений, и нелетучую фракцию, состоящую, главным образом, из дитерпеновых кислот и/или сложных эфиров дитерпеновых кислот.
Для целей настоящего изобретения термин «фракция дитерпеновых кислот и/или сложных эфиров дитерпеновых кислот олеорезина Copaifera» означает «нелетучую фракцию» олеорезина, полученную после полного или частичного удаления, предпочтительно полного удаления, эфирного масла, в частности, посредством гидродистилляции. Эта нелетучая фракция содержит по меньшей мере 80% по массе и предпочтительно 80-90% по массе дитерпеновых кислот и/или сложных эфиров дитерпеновых кислот.
Данную смесь дитерпеновых кислот и/или сложных эфиров дитерпеновых кислот также можно получать из олеорезина Copaifera или из «нелетучей» фракции олеорезина Copaifera, в частности, посредством экстракции жидкость-жидкость, пока не получается смесь, имеющая концентрацию дитерпеновых кислот и/или сложных эфиров дитерпеновых кислот от 50 до 100% по массе, в частности, от 60 до 100% по массе, более конкретно от 80 до 100% по массе дитерпеновых кислот и/или сложных эфиров дитерпеновых кислот на основе общей массы жидкой фракции, полученной после экстракции и удаления экстракционного растворителя. Эта жидкая фракция, полученная после экстракции и удаления данного растворителя, представляет собой указанную смесь.
Данная смесь дитерпеновых кислот и/или сложных эфиров дитерпеновых кислот содержит по меньшей мере 2 или по меньшей мере 3, или по меньшей мере 4, или по меньшей мере 5, или по меньшей мере 6, или по меньшей мере 7 дитерпеновых кислот и/или сложных эфиров дитерпеновых кислот, выбранных из группы, состоящей из следующих: копаловая кислота, копаифероловая кислота, сложный диметиловый эфир агатендиоевой кислоты, агатовая кислота, сложный метиловый эфир 3β-гидроксиантикопаловой кислоты, хардвиковая кислота, 7α-ацетоксихардвиковая кислота.
Предпочтительно смесь дитерпеновых кислот и/или сложных эфиров дитерпеновых кислот включает все из следующих дитерпеновых кислот и/или сложных эфиров дитерпеновых кислот: копаловая кислота, копаифероловая кислота, сложный диметиловый эфир агатендиоевой кислоты, агатовая кислота, сложный метиловый эфир 3β-гидроксиантикопаловой кислоты, хардвиковая кислота, 7-альфа-ацетоксихардвиковая кислота.
В одном воплощении данного изобретения олеорезин содержит, в процентах по массе, от 7,5 до 40% по массе семи дитерпеновых кислот и/или сложных эфиров дитерпеновых кислот, упомянутых выше, или предпочтительно от 10 до 30% по массе.
В одном воплощении настоящего изобретения олеорезин может представлять собой олеорезин, обогащенный дитерпеновыми кислотами и/или сложными эфирами дитерпеновых кислот, и содержание данных семи дитерпеновых кислот и/или сложных эфиров дитерпеновых кислот такого обогащенного олеорезина будет составлять от 48 до 90% по массе, предпочтительно от 60 до 90% по массе, все же предпочтительно - от 60 до 85% по массе.
Для целей настоящего изобретения термин «обогащенная смола» означает то, что олеорезин обрабатывали посредством способа, разработанного для концентрирования содержания данных семи дитерпеновых кислот и/или сложных эфиров дитерпеновых кислот относительно других соединений и молекул данного олеорезина. Таким образом, соотношения между дитерпеновыми кислотами и/или сложными эфирами дитерпеновых кислот и другими молекулами модифицируются в направлении увеличения и представляют собой отличные соотношения относительно природных продуктов или продуктов, экстрагированных из дерева.
Настоящее изобретение касается олеорезина Copaifera для применения в качестве медицинского продукта, предназначенного для лечения и/или предупреждения доброкачественной гиперплазии простаты и/или рака простаты.
Согласно конкретному воплощению олеорезин происходит из видов Copaifera, выбранных из группы, состоящей из Copaifera officinalis, Copaifera multijuga или Copaifera reticulata, для применения в качестве медицинского продукта, предназначенного для лечения и/или предупреждения доброкачественной гиперплазии простаты и/или рака простаты. Предпочтительно олеорезин происходит из вида Copaifera officinalis.
Согласно одинаково преимущественному воплощению изобретения лишь фракция дитерпеновых кислот и/или сложных эфиров дитерпеновых кислот олеорезина используется в качестве медицинского продукта, предназначенного для лечения и/или предупреждения доброкачественной гиперплазии простаты и/или рака простаты. Используемая фракция олеорезина состоит из по меньшей мере 90% по массе дитерпеновых кислот и/или сложных эфиров дитерпеновых кислот, преимущественно по меньшей мере 92% по массе дитерпеновых кислот и/или сложных эфиров дитерпеновых кислот или даже более преимущественно по меньшей мере 95% по массе дитерпеновых кислот и/или сложных эфиров дитерпеновых кислот.
Один объект изобретения касается применения олеорезина Copaifera для изготовления медицинского продукта, предназначенного для предупреждения и/или лечения доброкачественной гиперплазии простаты и/или рака простаты.
Согласно предпочтительному воплощению данное изобретение касается применения олеорезина из Copaifera officinalis, С. multijuga или С. reticulate для изготовления медицинского продукта, предназначенного для предупреждения и/или лечения доброкачественной гиперплазии простаты и/или рака простаты.
Согласно особенно предпочтительному воплощению данное изобретение касается применения олеорезина Copaifera officinalis для изготовления медицинского продукта, предназначенного для предупреждения и/или лечения доброкачественной гиперплазии простаты и/или рака простаты.
Согласно конкретному воплощению данное изобретение касается применения фракции дитерпеновых кислот и/или сложных эфиров дитерпеновых кислот олеорезина Copaifera, состоящей из по меньшей мере 90% по массе дитерпеновых кислот и/или сложных эфиров дитерпеновых кислот, предпочтительно по меньшей мере 92% по массе дитерпеновых кислот и/или сложных эфиров дитерпеновых кислот и более предпочтительно по меньшей мере 95% по массе дитерпеновых кислот и/или сложных эфиров дитерпеновых кислот, для изготовления медицинского продукта, предназначенного для предупреждения и/или лечения доброкачественной гиперплазии простаты и/или рака простаты.
Согласно настоящему изобретению термин «лечение» означает ингибирование прогрессирования, более конкретно регрессию, предпочтительно исчезновение гиперплазии простаты или опухоли простаты.
Согласно настоящему изобретению «предупреждение» означает предупреждение или задержку развития гиперплазии или опухоли простаты.
Лечение или предупреждение согласно данному изобретению означает лечение или предупреждение у человека или животных.
Настоящее изобретение, кроме того, относится к фармацевтической композиции, содержащей олеорезин Copaifera и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый эксципиент.
В настоящем изобретении термин «фармацевтически приемлемый» означает тот, который является полезным при приготовлении фармацевтической композиции, который, в общем, является безопасным, не токсичным и ни биологически, ни иным образом нежелательным, и который является приемлемым для фармацевтического применения у человека.
Термин «фармацевтически приемлемый эксципиент», при использовании в данном документе, включает любой адъювант или эксципиент, такой как растворители, солюбилизаторы, консерванты, эмульгаторы, агенты, придающие консистенцию, распределяющие агенты, водоудерживающие агенты, красители, корригенты, подсластители, причем применение данных эксципиентов хорошо известно специалисту.
Настоящее изобретение, кроме того, относится к фармацевтической композиции для применения в качестве медицинского продукта.
Настоящее изобретение, кроме того, относится к фармацевтической композиции, отличающейся тем, что она содержит, в качестве активного агента, олеорезин Copaifera согласно данному изобретению или фракцию дитерпеновых кислот и/или сложных эфиров дитерпеновых кислот олеорезина Copaifera согласно данному изобретению и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый эксципиент для применения в качестве медицинского продукта, предназначенного для лечения и/или предупреждения доброкачественной гиперплазии простаты и/или рака простаты.
Согласно конкретному воплощению данного изобретения композиция содержит в качестве активного агента олеорезин из видов Copaifera, выбранных из группы, состоящей из С. officinalis, С. multijuga, С. reticulata, и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый эксципиент для применения в качестве медицинского продукта, предназначенного для лечения и/или предупреждения доброкачественной гиперплазии простаты и/или рака простаты.
Согласно другому воплощению данного изобретения композиция содержит в качестве активного агента фракцию дитерпеновых кислот и/или сложных эфиров дитерпеновых кислот олеорезина, которая содержит по меньшей мере 90% по массе дитерпеновых кислот и/или сложных эфиров дитерпеновых кислот, предпочтительно по меньшей мере 92% по массе дитерпеновых кислот и/или сложных эфиров дитерпеновых кислот и более предпочтительно по меньшей мере 95% по массе дитерпеновых кислот и/или сложных эфиров дитерпеновых кислот, и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый эксципиент для применения в качестве медицинского продукта, предназначенного для лечения и/или предупреждения доброкачественной гиперплазии простаты и/или рака простаты.
Фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению могут быть приготовлены в подходящей форме для введения млекопитающим, включая человека. Дозировка варьирует согласно лечению и участвующему состоянию. Данные композиции разрабатываются для введения перорально, подъязычно, подкожно, внутримышечно, внутривенно, чрескожно, местно или ректально. В данном случае активный ингредиент может вводиться животным или человеку в стандартных лекарственных формах в смеси с традиционными фармацевтическими носителями. Подходящие стандартные лекарственные формы включают пероральные формы, такие как таблетки, капсулы, порошки, гранулы и пероральные растворы или суспензии, подъязычные и щечные лекарственные формы, подкожные, местные, внутримышечные, внутривенные, интраназальные или внутриглазные лекарственные формы и ректальные лекарственные формы.
При приготовлении твердой композиции в форме таблетки главный активный ингредиент смешивается с фармацевтическим носителем, таким как желатин, крахмал, лактоза, стеарат магния, тальк, аравийская камедь, диоксид кремния или аналогичные носители. Таблетки могут быть покрыты сахарозой или другими подходящими веществами, или обработаны таким образом, что они имеют длительную или отложенную активность и непрерывное высвобождение заданного количества активного начала.
Препарат капсулы получают смешиванием активного ингредиента с разбавителем и выливанием образующейся смеси в мягкие или твердые капсулы.
Препарат в виде сиропа или эликсира может содержать активный ингредиент в комбинации с подсластителем, антисептиком, корригентом и подходящим красителем.
Диспергируемые в воде порошки или гранулы могут содержать активный ингредиент, смешанный с диспергентами или увлажнителями, или суспендирующими агентами, а также с агентами, корректирующими вкус или подсластителями.
Для ректального введения используются суппозитории, которые получают со связующими веществами, которые плавятся при ректальной температуре, такими как масло какао или полиэтиленгликоли.
Для парентерального (внутривенного, внутримышечного и т.д.), интраназального или внутриглазного введения используются водные суспензии, изотоничные физиологические растворы или стерильные инъецируемые растворы, содержащие фармакологически совместимые диспергирующие агенты и/или увлажнители.
Активное начало также может быть приготовлено в виде микрокапсул, возможно с одним или более чем одним дополнительным носителем.
Преимущественно фармацевтическая композиция согласно настоящему изобретению находится в подходящей форме для перорального или внутривенного введения.
Композиция согласно настоящему изобретению может вводиться в комбинации, одновременно, раздельно или последовательно, с простатэктомией, лучевой терапией и/или гормональной терапией для лечения или предупреждения рака простаты.
Следующие примеры иллюстрируют данное изобретение без ограничения его объема.
Пример 1. Влияния разных соединений на активность 5α-редуктазы фибробластов, полученных из фолликулов человеческих кожных сосочков
Целью данного исследования была оценка потенциальной ингибирующей активности разных соединений на 5α-редуктазу.
Материалы и методы
2
14
Данное исследование проводится на человеческих клетках, полученных из фолликулов кожных сосочков донора. Эта модель является привлекательной, так как кожные сосочки имеют такую же изоформу 5αR2, что и ткань простаты. Клетки высевают в 24-луночные планшеты и культивируют в течение 24 часов в культуральной среде DMEM (среда Игла, модифицированная по Дульбекко), дополненной L-глутамином (2 мМ), пенициллином (50 U/мл), стрептомицином (50 мкг/мл) и фетальной телячьей сывороткой (10%), при стандартных условиях культуры (37°С и 5% CO). Данную культуральную среду затем заменяют на аналитическую среду DMEM, дополненную L-глутамином (2 мМ), пенициллином (50 U/мл), стрептомицином (50 мкг/мл) и фетальной телячьей сывороткой (1%). Данная аналитическая среда может содержать или может не содержать (контрольные условия) продукты, подлежащие тестированию, и соединение, используемое в качестве контроля - финастерид (10 мкМ) - в течение 24 ч предынкубации. Данные клетки затем обрабатывали аналитической средой, содержащей [С]-тестостерон и содержащей или не содержащей (контрольные условия) тестируемые или контрольные продукты, и клетки инкубировали в течение 24 ч при данных условиях. После инкубации супернатанты отбирали для анализа метаболизма тестостерона. Все эксперименты проводили три раза. Молекулы стероидов экстрагировали из супернатантов с использованием смеси хлороформ/метанол. Отбирали органическую фазу, и разные молекулярные виды (метаболиты тестостерона) разделяли тонкослойной хроматографией с использованием системы растворителей, содержащей дихлорметан, этилацетат и метанол. Проводили ауторадиографию на хроматографии, и превращенный тестостерон оценивали денситометрическим анализом.
Таким образом, метаболизм тестостерона до дигидротестостерона отражает 5α-редуктазную активность и оценивается по отношению дигидротестостерон/тестостерон.
Результаты
Первая группа экспериментов подчеркивает эффекты олеорезина Copaifera officinalis (Таблица 3 ниже). Неожиданно авторы изобретения продемонстрировали значимую и воспроизводимую активность ингибирования 5α-редуктазы посредством олеорезина Copaifera officinalis, причем данное ингибирование даже оказывается зависимым от концентрации. Сильное ингибирование данного фермента финастеридом, в самом деле, подтверждает все эти эксперименты.
Статистическое исследование проводится относительно контрольной группы (критерий Даннета).
Протестированный олеорезин получали согласно способу, описанному в Примере 2.
В качестве сравнения в одном из данных экспериментов также тестировали экстракт Serenoa repens. Экстракт Serenoa repens, полученный из плодов сереноа ползучей, представляет собой самую исследованную растительную добавку и чаще всего прописываемую - одну или в комбинации - в частности, при лечении доброкачественной гиперплазии простаты (Gordon АЕ, Am. Fam. Physician, 67(06), 1281-1283, 2003). В концентрации 10 мкг/мл экстракт Serenoa repens не индуцирует значимого ингибирования 5α-редуктазы, однако, при 20 мкг/мл данный экстракт индуцирует 23%-ное ингибирование, достигающее статистической значимости (р меньше 0,05 относительно контроля).
Вторую серию экспериментов проводили для оценки того, осуществлялась ли данная ингибирующая активность на 5α-редуктазу нелетучей фракцией или скорее летучей фракцией, соответствующей эфирному маслу. Результаты обобщаются в Таблице 4 ниже. Получение летучей и нелетучей фракций проводится согласно способу, описанному в Примере 4, с использованием сложного диэтилового эфира в качестве неполярного растворителя.
Статистический анализ проводится относительно контрольной группы (критерий Даннета).
Оказывается то, что активность олеорезина Copaifera officinalis осуществляется нелетучей фракцией, в самом деле, не была выявлена активность летучей фракции. Ингибирование 5α-редуктазы нелетучей фракцией составляет только 14%, но данное снижение достигает статистической значимости (р меньше 0,05).
Третью серию экспериментов проводили для демонстрации того, что другие виды Copaifera, в частности С. multijuga, также имели полезную активность в отношении ингибирования 5α-редуктазы. Авторы изобретения сосредоточились на нелетучей фракции, которая несет ингибирующую активность. Результаты обобщаются в Таблице 5 ниже.
Статистический анализ проводится относительно контрольной группы (критерий Даннета).
Получение летучей и нелетучей фракций проводится согласно способу, описанному в Примере 4, с использованием сложного диэтилового эфира в качестве неполярного растворителя.
Данные результаты явно показывают то, что несколько видов Copaifera представляют интерес. В самом деле, нелетучая фракция вида С. multijuga достигает 31%-ного ингибирования 5α-редуктазы в концентрации 10 мкг/мл.
Все данные результаты приводят к заключению о том, что олеорезин Copaifera имеет крайне полезную ингибирующую активность в отношении 5α-редуктазы. Данная активность осуществляется нелетучей фракцией олеорезина. Наконец, авторы данного изобретения также показали то, что данная активность обнаруживается у нескольких видов Copaifera.
Пример 2. Получение олеорезина
На коре ствола деревьев Copaifera officinalis и/или Copaifera multijuga, и/или Copaifera reticulata делаются надрезы для выделения олеорезина. Он затем гомогенизируется и стабилизируется под азотом.
Активное вещество представляет собой 100%-ный неочищенный олеорезин из ствола Copaifera officinalis и/или Copaifera multijuga, и/или Copaifera reticulata.
Анализ ЖХ-МС (жидкостная хроматография-масс-спектрометрия) олеорезина Copaifera officinalis
Каждый образец анализировали посредством УВЭЖХ (ультравысокоэффективная жидкостная хроматография)-QTOFMS с использованием традиционного линейного градиента.
Разделение на системе УВЭЖХ Waters Acquity.
- Колонка 100×2,1 мм, 1,7 мкм, Acquity ВЕН С18, оснащенная предколонкой;
- Подвижная фаза:
Подвижная фаза А: вода уровня качества для ЖХ-МС плюс 0,1% муравьиная кислота
Подвижная фаза В: ацетонитрил уровня качества для ЖХ-МС плюс 0,1% муравьиная кислота
- Градиент:
Обнаружение:
УФ (ультрафиолетовая область спектра) 220 нм
Пример 3. Получение нелетучей фракции
Олеорезин, полученный согласно Примеру 2, суспендируют в 10 объемах воды, нагретой до 100°С, в течение 4 ч для осуществления гидродистилляции. Летучее эфирное масло выделяется посредством конденсации. После гидродистилляции выделяют остаток дистилляции. После сушки посредством лиофилизации или других способов сушки остаток составляет нелетучую фракцию.
Пример 4. Альтернативное получение нелетучей фракции
2
4
Объем олеорезина Copaifera, полученный согласно Примеру 2, разводят в 8-10 объемах несмешивающегося с водой липофильного растворителя (такого как диэтиловый эфир, этилацетат). Данный раствор экстрагируется посредством экстракции жидкость/жидкость с использованием 5%-ного раствора гидроксида натрия (NaOH). Данную операцию повторяют 3 раза с использованием 4-5 объемов 5%-ного NaOH. Нижнюю фазу (основная водная фаза) подкисляют добавлением 1 н. соляной кислоты (HCl) и затем экстрагируют посредством экстракции жидкость/жидкость с использованием несмешивающегося с водой неполярного растворителя (такого как диэтиловый эфир, этилацетат). Фазу этилацетата промывают водой и затем сушат над NaSO. После удаления растворителя посредством ротационного испарителя или других способов сушки полученный сухой остаток соответствует смеси дитерпеновых кислот и/или сложных эфиров дитерпеновых кислот согласно данному изобретению.