Количественный клеточный способ определения биологической активности лиганда антитела против CD26

1. Способ определения in vitro эффективности лиганда антитела против CD26, включающий следующие стадии:
а) инкубацию при 37°С или при комнатной температуре популяции человеческих Т-лимфоцитов, экспрессирующих рецептор CD26, в процентной доле более 75% с лигандом антитела против CD26 в концентрации в диапазоне от 0,001 мкг/мл до 150 мкг/мл;
б) инкубацию с антителом против антитела CD26, меченым флуорохромом, которое распознает эпитоп CD26, отличающийся от эпитопа, распознаваемого лигандом антитела против CD26, используемого на стадии а);
T
NT
в) определение величины MFI (медиана интенсивности флуоресценции) для CD26, измеренной для образца клеток, обработанных лигандом антитела против CD26 (MFI), и величины MFI для необработанных клеток (MFI) путем цитофлуориметрического анализа;
г) оценку процентной доли интернализации рецептора CD26 (%int CD26) или RFI (относительная интенсивность флуоресценции), рассчитываемой в соответствии со следующей формулой:
где, если величина %int CD26:
составляет менее 20%, это указывает на низкую эффективность лиганда антитела против CD26;
находится в диапазоне от 20% до 30%, это указывает на среднюю эффективность лиганда антитела против CD26;
составляет более 30%, это указывает на высокую эффективность лиганда антитела против CD26.
2. Способ по п. 1, где указанная концентрация лиганда антитела против CD26 со стадии а) находится в диапазоне от 0,01 мкг/мл до 100 мкг/мл, более предпочтительно от 0,01 мкг/мл до 2 мкг/мл, еще более предпочтительно от 0,01 мкг/мл до 0,5 мкг/мл.
3. Способ по любому из пп. 1, 2, где лиганд антитела против CD26 со стадии а) представляет собой антитело или его фрагменты.
4. Способ по п. 3, где указанное антитело против CD26 представляет собой моноклональное антитело бегеломаб.
5. Способ по любому из пп. 1-4, где указанный флуорохром со стадии б) выбран из группы, состоящей из FITC (флуоресцеин изотиоцианат), АРС (аллофикоцианин), РЕ (фикоэритрин), РЕ-Су7, АРС-Н7, PerCP (перидинин-хлорофилл протеин) и РЕ-Су5.5, предпочтительно АРС.
6. Способ по любому из пп. 1-5, где популяция человеческих CD26+ Т-лимфоцитов со стадии а) выбрана из популяции первичных Т-лимфоцитов и опухолевой клеточной линии человеческих Т-лимфоцитов.
7. Способ по п. 6, где указанная опухолевая клеточная линия человеческих Т-лимфоцитов представляет собой клеточную линию Karpas 299.
8. Способ по любому из пп. 1-7, где цитофлуориметрический анализ со стадии в) осуществляют путем FACS-анализа (анализа сортировки клеток с активированной флуоресценцией).
9. Способ по любому из пп. 1-8, дополнительно включающий стадию анализа ингибирования продукции воспалительных цитокинов, выбранных из группы, состоящей из IL-8 (интерлейкин-8), IL-1β, IL-6, IL-2, GM-CSF (колониестимулирующий фактор гранулоцитов-макрофагов), IL-6 и TNF-α (фактор некроза опухоли альфа), осуществляемого на популяции человеческих CD26+ Т-лимфоцитов со стадии а).
10. Способ по п. 9, где указанное ингибирование продукции цитокинов оценивают путем анализа MesoScale Discovery.
11. Способ по п. 9 или 10, где указанная популяция человеческих CD26+ Т-лимфоцитов представляют собой клеточную линию Karpas 299.