Способы очистки антител

1. Способ очистки белка из раствора, содержащего по меньшей мере одну загрязняющую примесь, посредством хроматографии с суперантигеном, включающий: а) адсорбирование белка на суперантигене, иммобилизованном на твердом носителе; б) удаление по меньшей мере одной загрязняющей примеси посредством приведения в контакт иммобилизованного суперантигена, содержащего адсорбированный белок, с первым промывочным буфером, содержащим алифатический карбоксилат, где указанный алифатический карбоксилат содержит остов из 6-12 атомов углерода; и в) элюирование белка из суперантигена, иммобилизованного на твердом носителе.
2. Способ по п. 1, где суперантиген выбран из группы, состоящей из белка А, белка G и белка L.
3. Способ по п. 1, где алифатический карбоксилат выбран из группы, состоящей из капроата, гептаноата, каприлата, деканоата и додеканоата, и где источник алифатического карбоксилата выбран из группы, состоящей из алифатической карбоновой кислоты, натриевой соли алифатической карбоновой кислоты и калиевой соли алифатической карбоновой кислоты.
4. Способ по п. 1, где промывочный буфер содержит от 10 мМ до 125 мМ каприлата натрия, от 1 мМ до 30 мМ деканоата натрия или от 1 мМ до 30 мМ додеканоата натрия.
5. Способ по п. 1, где промывочный буфер дополнительно содержит от 100 мМ до 400 мМ ацетата натрия, например 300 мМ ацетата натрия.
6. Способ по п. 1, где по меньшей мере одна загрязняющая примесь представляет собой белок клетки-хозяина или ДНК клетки-хозяина.
7. Способ по п. 6, где клетка-хозяин выбрана из группы, состоящей из клеток СНО (яичника китайского хомяка), клеток NS0, клеток Sp2/0, клеток COS, клеток K562, клеток BHK, клеток PER.C6, клеток HEK (почки эмбриона человека), клеток E.coli, клеток грибов или дрожжевых клеток.
8. Способ по любому из пп. 1-7, где белок выбран из группы, состоящей из растворимого рецептора, антитела, фрагмента антитела, одиночного вариабельного домена иммуноглобулина, Fab, F(ab')2, Fv, связанных через дисульфид Fv, scFv, мультиспецифического антитела с закрытой конформацией, связанных через дисульфид scFv или диатела.
9. Способ по п. 1, где промывочный буфер дополнительно содержит органическую кислоту, соль щелочного металла или аммониевую соль сопряженного основания органической кислоты и органическое основание, и где промывочный буфер приготовлен без добавления NaCl.
10. Способ по п. 9, где органическая кислота выбрана из группы, состоящей из муравьиной кислоты, уксусной кислоты, молочной кислоты, лимонной кислоты, яблочной кислоты, малеиновой кислоты, глицина, глицил-глицина, янтарной кислоты, TES (2-{[трис(гидроксиметил)-метил]амино}этансульфоновая кислота), MOPS (3-(N-морфолино)-пропансульфоновая кислота), PIPES (пиперазин-N,N'-бис(2-этансульфоновая кислота)) и MES (2-(N-морфолино)этансульфоновая кислота), и где органическое основание выбрано из группы, состоящей из трис-основания, бис-триса, бис-трис-пропана, бицина (N,N-бис(2-гидроксиэтил)глицин), HEPES (4-2-гидроксиэтил-1-пиперазинэтансульфоновая кислота), TAPS (3-{[трис(гидроксиметил)метил]амино}пропансульфоновая кислота) и трицина (N-трис(гидроксиметил)метилглицин).
11. Способ по п. 9 или 10, где сопряженное основание органической кислоты представляет собой натриевую, калиевую или аммониевую соль сопряженного основания органической кислоты.
12. Способ очистки белка из его содержащего загрязняющие примеси раствора посредством хроматографии с белком А или белком L, включающий:
а) уравновешивание белка А, иммобилизованного на твердой фазе, уравновешивающим буфером для белка А или белка L, иммобилизованного на твердой фазе, уравновешивающим буфером для белка L;
б) адсорбирование белка из содержащего загрязняющие примеси раствора на белке А или белке L, иммобилизованном на твердой фазе;
в) удаление по меньшей мере одной загрязняющей примеси путем промывания твердой фазы первым промывочным буфером для белка А или для белка L, содержащим от 50 мМ до 55 мМ трис-основания, от 45 мМ до 50 мМ уксусной кислоты, по меньшей мере один алифатический карбоксилат, при рН 7,2, где алифатический карбоксилат выбран из группы, состоящей из 100 мМ каприлата натрия, 20 мМ деканоата натрия и 20 мМ додеканоата натрия; и
(г) извлечение белка из твердой фазы элюирующим буфером для белка А или белка L, где все буферы приготовлены без добавления NaCl.
13. Способ по п. 12, дополнительно включающий следующую стадию после стадии (в) и перед стадией (г): удаление загрязняющих примесей путем промывания твердой фазы вторым промывочным буфером для белка А, содержащим 55 мМ трис-основания, 45 мМ уксусной кислоты, при рН 7,2, где второй промывочный буфер для белка А приготовлен без добавления NaCl.
14. Способ по п. 12 или 13, дополнительно включающий следующие стадии после стадии (г): (д) титрование раствора, содержащего извлеченный белок, до рН 3,0 с помощью 30 мМ уксусной кислоты, 100 мМ HCl; (е) выдерживание раствора со стадии (д) при рН 3,0 в течение от 30 до 60 мин; и (ж) доведение раствора со стадии (е) до рН 7,5 посредством 1 M трис и возможно фильтрование раствора, полученного на стадии (ж).
15. Способ по п. 12, где промывочный буфер для белка А или белка L дополнительно содержит от 1 мМ до 500 мМ ацетата натрия, например 300 мМ ацетата натрия.