СРЕДСТВО ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ ГЕПАТОЗА У КУР
AGENT FOR CHICKEN HEPATOSIS PREVENTION

Изобретение относится к ветеринарии и может быть использовано для профилактики гепатоза у кур.
Известно средство профилактики гепатоза у кур дипромоний, который им скармливают. Скармливание молодняку мясных птиц дипромония с трехдневного возраста на протяжении 45 дней в дозах 7,5-10 мг/кг живой массы обеспечивало 98,5%-ную сохранность птицы; увеличение на 5% прироста живой массы и отсутствие случаев гепатоза. Наряду с гепатотропным действием дипромоний обладает заметно выраженным детоксицирующим свойством и витаминсберегающим эффектом. При скармливании дипромония у птицы повышается содержание витаминов А, Е, К, С в печени и сыворотке крови на 10-30% (1).
Использование этого средства профилактики гепатоза кур требует ежедневного добавления в комбикорм, кроме того, для быстро растущего молодняка трудно определить необходимую дозу препарата.
Известно средство профилактики гепатоза селенит натрия, который добавляют в рацион в дозе 0,15 мг на килограмм массы птицы (6).
Однако селенит натрия является достаточно токсическим препаратом и малейшее нарушение его дозировки может повлечь гибель птицы.
Известны средства профилактики гепатоза метионин и цистин, которые добавляют в рацион из расчета на 1 тонну: 300 г метионина или 600 г метионина и цистина (3).
Недостатком данных средств является высокая стоимость аминокислот, что существенно снижает рентабельность получения продукции птицеводства.
Известно средство профилактики гепатоза - добавка Мидивет в рацион кормлени, которая повышает белково-синтетическую функцию печени. Добавка вводится, начиная с 1-го по 10-й день жизни птицы, в дозе 0,3 г/кг массы тела. Для взрослых кур - 0,1-0,2 г/кг в течение 10 дней с кормом или водой (5).
Недостатком данного средства является то, что оно производится из мяса мидий и, следовательно, может служит источником биологической опасности для птицы, так как является хорошей питательной средой для роста микроорганизмов.
Известно средство профилактики гепатоза - пробиотик Биоспорин. Данный пробиотик содержит бациллы B.subtilis и B.lichenintormis. Данные микроорганизмы, заселяя кишечник, не дают патогенным микроорганизмам, грибкам и токсинам проникать в кровь и вызывать гепатоз. Пробиотик задается с кормом в течение первых пяти дней жизни молодняка кур (4).
Недостатком данного средства может служить быстрое исчезновение эффекта действия пробиотика.
Известно средство для профилактики гепатоза у кур - антигепатотоксическая сыворотка. Применение малых доз сыворотки (0,2 ед.) однократно подкожно или внутримышечно позволяет нормализовать нарушение функции печени в результате патологического процесса (2).
Достоинством данного средства является однократное применение и низкая стоимость.
Данное средство, наиболее близкое по технической сущности и выбранное за прототип, обладает следующим недостатком: для полноценной работы антигепатотоксической сыворотки необходимо определить иммунный статус поголовья и в зависимости от него корректировать дозу антигепатотоксической сыворотки.
Целью изобретения является средство профилактики гепатоза у кур, позволяющее предупреждать заболевания печени и стимулировать органы иммунной системы. Поставленная цель достигается тем, что дополнительно к антигепатотоксической сыворотке добавляется антиспленотоксическая сыворотка, которая усиливает действие антигепатотоксической сыворотки и повышает естественную резистентность организма, что очень важно при гепатозе. Полученный препарат именуется в дальнейшем «геприм» (гепатопротекториммуномодулятор) для кур.
«Геприм» для кур представляет собой прозрачную жидкость с незначительным осадком, легко разбивающимся при встряхивании. В 1 мл препарата содержится от 0,9-1,15 титровочных единиц антигепатотоксической и антиспленотоксической сывороток по реакции связывания комплемента. Препарат должен быть стерильным, нетоксичным и апирогенным.
Срок годности препарата при хранении в температуре 5-7°С - 2 года.
Предлагаемая схема получения препарата «геприм» для кур состоит из следующих этапов:
1. Получение антигена из печени. Для приготовления антигена из печени используют печень здоровых кур. Кусочки печени 4-6 раз отмывают от крови 10-кратным объемом изотонического раствора натрия хлорида. Кусочки измельчают, растирают в ступке со стеклом и разводят 0,85% раствором натрия хлорида до 10%-ной концентрации. Полученную суспензию центрифугируют 9-10 минут при 2500-3000 об./мин и в качестве антигена используют надосадочную жидкость. Антиген осветляют пятикратным замораживанием и оттаиванием с последующим центрифугированием при 7000-8000 об./мин в течение 10 минут. Хранят антиген в замороженном состоянии.
2. Получение антигена из селезенки. Для приготовления антигена из селезенки используют селезенку здоровых кур. Кусочки селезенки 4-6 раз отмывают от крови 10-кратным объемом изотонического раствора натрия хлорида. Кусочки измельчают, растирают в ступке со стеклом и разводят 0,85% раствором натрия хлорида до 10%-ной концентрации. Полученную суспензию центрифугируют 9-10 минут при 2500-3000 об./мин и в качестве антигена используют надосадочную жидкость. Антиген осветляют пятикратным замораживанием и оттаиванием с последующим центрифугированием при 7000-8000 об./мин в течение 10 минут. Хранят антиген в замороженном состоянии.
3. Выбор животных-доноров. Для приготовления «геприм» в качестве доноров пригодны следующие виды: лошади, кролики, крупный и мелкий рогатый скот. Доноры должны быть свободны от инфекционных заболеваний и пройти карантинирование.
4. Получение антигепатотоксической сыворотки. Антигепатотоксическую сыворотку получают путем гипериммунизации доноров по схеме: первое введение антигена проводят подкожно в области левой лопатки и правой подколенной ямки; второе введение - через 6-8 дней - подкожно в области правой лопатки и левой подколенной ямки; третье введение проводят через такой же срок, как и второе, внутривенно и подкожно в вышеперечисленные точки. Через 6-8 дней после третьего введения антигена делают пробный забор крови и определяют титр полученной антигепатотоксической сыворотки в реакции связывания комплемента. При наличии титра не менее 1:160-1:200 проводят забор крови. Полученную кровь помещают в термостат на 29-30 минут при 37-38°С, затем в стерильных условиях отделяют сгусток от стенок и оставляют пробирку в холодильнике для лучшей ретракции сгустка до следующего дня. Образовавшуюся сыворотку отсасывают и консервируют фенолом до 0,5%-ной концентрации вещества в сыворотке.
5. Получение антиспленотоксической сыворотки. Антиспленотоксическую сыворотку получают путем гипериммунизации доноров по схеме: первое введение антигена проводят подкожно в области левой лопатки и правой подколенной ямки; второе введение - через 6-8 дней - подкожно в области правой лопатки и левой подколенной ямки; третье введение проводят через такой же срок, как и второе, внутривенно и подкожно в перечисленные выше точки. Через 6-8 дней после третьего введения антигена делают пробный забор крови и определяют титр полученной антиспленотоксической сыворотки в реакции связывания комплемента. При наличии титра не менее 1:160-1:200 проводят забор крови. Полученную кровь помещают в термостат на 29-30 минут при 37-38°С, затем в стерильных условиях отделяют сгусток от стенок и оставляют пробирку в холодильнике для лучшей ретракции сгустка до следующего дня. Образовавшуюся сыворотку отсасывают и консервируют фенолом до 0,5%-ной концентрации вещества в сыворотке.
6. Получение препарата «геприм» для кур. Для получения препарата «геприм» антигепатотоксическую и антиспленотоксическую сыворотки смешивают со стерильным физиологическим раствором, консервированным фенолом до 0,5%-ной концентрации с таким расчетом, чтобы в 1,0 мл его содержалось по 0,9-1,15 титровочных единиц антигепатотоксической и антиспленотоксической сывороток по реакции связывания комплемента.
Сравнительный анализ заявленного препарата со средством, выбранным за прототип, показал, что «геприм» для кур обладает следующим отличительным признаком:
- дополнительно включает антиспленотоксическую сывотротку в количестве 0,9-1,15 титровочных единиц по реакции связывания комплемента, а антигепатотоксическая сыворотка используется с активностью 0,9-1,15 титровочных единиц по реакции связывания комплемента.
Наличие отличительного от прототипа признака обеспечивает соответствие заявляемого технического решения критерию «новизна»: из уровня техники неизвестны такие биологически активные препараты, содержащие одновременно в 1,0 мл по 0,9-1,15 титровочных единиц антигепатотоксической и антиспленотоксической сывороток по реакции связывания комплемента.
Проведенные испытания «геприм» для кур подтверждают его преимущества перед препаратом-прототипом.
Пример выполнения: схема получения «геприм» для кур.
1. Получение антигена из печени. Для приготовления антигена из печени использовали печень здоровых кур. Кусочки печени 5 раз отмывали от крови 10-кратным объемом изотонического раствора натрия хлорида. Кусочки измельчали, растирали в ступке со стеклом и разводили 0,85% раствором натрия хлорида до 10%-ной концентрации. Полученную суспензию центрифугировали 10 минут при 3000 об./мин и в качестве антигена использовали надосадочную жидкость. Антиген осветляли пятикратным замораживанием и оттаиванием с последующим центрифугированием при 8000 об./мин в течение 10 минут. Хранили антиген в замороженном состоянии.
2. Получение антигена из селезенки. Для приготовления антигена из селезенки использовали селезенку здоровых кур. Кусочки селезенки 5 раз отмывали от крови 10-кратным объемом изотонического раствора натрия хлорида. Кусочки измельчали, растирали в ступке со стеклом и разводили 0,85% раствором натрия хлорида до 10%-ной концентрации. Полученную суспензию центрифугировали 10 минут при 3000 об./мин и в качестве антигена использовали надосадочную жидкость. Антиген осветляли пятикратным замораживанием и оттаиванием с последующим центрифугированием при 8000 об./мин в течение 10 минут. Хранили антиген в замороженном состоянии.
3. В качестве донора использовали здоровых кроликов, прошедших карантинирование.
4. Получение антигепатотоксической сыворотки. Антигепатотоксическую сыворотку получали путем гипериммунизации кроликов по схеме: первое введение антигена проводили подкожно в области левой лопатки и правой подколенной ямки в дозе 40 мг белка в 1 мл; второе введение - через 7 дней подкожно в области правой лопатки и левой подколенной ямки в дозе 60 мг белка в 1 мл; третье введение проводили через такой же срок, как и второе, внутривенно в дозе 80 мг белка в 1 мл и подкожно в дозе 50 мг в 1 мл в перечисленные выше точки. Через 7 дней после третьего введения антигена делали пробный забор крови и определяли титр полученной антигепатотоксической сыворотки в реакции связывания комплемента. При наличии титра не менее 1:160-1:200 проводили забор крови у кролика в количестве 50 мл. Полученную кровь помещали в термостат на 30 минут при 37°С, затем в стерильных условиях отделяли сгусток от стенок и оставляли пробирку в холодильнике для лучшей ретракции сгустка до следующего дня. Образовавшуюся сыворотку отсасывали и консервировали фенолом до 0,5%-ной концентрации вещества в сыворотке.
5. Получение антиспленотоксической сыворотки. Антиспленотоксическую сыворотку получали путем гипериммунизации кроликов по схеме: первое введение антигена проводили подкожно в области левой лопатки и правой подколенной ямки в дозе 40 мг белка в 1 мл; второе введение - через 7 дней подкожно в области правой лопатки и левой подколенной ямки в дозе 60 мг белка в 1 мл; третье введение проводили через такой же срок, как и второе, внутривенно в дозе 80 мг белка в 1 мл и подкожно в дозе 50 мг в 1 мл в перечисленные выше точки. Через 7 дней после третьего введения антигена делали пробный забор крови и определяли титр полученной антиспленотоксической сыворотки в реакции связывания комплемента. При наличии титра не менее 1:160-1:200 проводили забор крови у кролика в количестве 50 мл. Полученную кровь помещали в термостат на 30 минут при 37°С, затем в стерильных условиях отделяли сгусток от стенок и оставляли пробирку в холодильнике для лучшей ретракции сгустка до следующего дня. Образовавшуюся сыворотку отсасывали и консервировали фенолом до 0,5%-ной концентрации вещества в сыворотке.
6. Получение препарата «геприм» для кур. Для получения препарата «геприм» антигепатотоксическую и антиспленотоксическую сыворотки смешивали со стерильным физиологическим раствором, консервированным фенолом до 0,5%-ной концентрации с таким расчетом, чтобы в 1,0 мл его содержалось по 1,0 титровочных единиц антигепатотоксической и антиспленотоксической сывороток по реакции связывания комплемента.
Для определения оптимальной дозы геприм для профилактики гепатоза у кур был поставлен опыт. С этой целью 400 кур разделили по принципу пар-аналогов на четыре группы по 100 голов в каждой группе. Вся птица находилась в одинаковых условиях кормления и содержания.
Птица первой группы служила контролем, ей геприм не вводили.
Птице второй группы вводили геприм в дозе 0,1 мл/кг живой массы.
Птице третьей группы вводили геприм в дозе 0,2 мл/кг живой массы.
Птице четвертой группы вводили геприм в дозе 0,4 мл/кг живой массы.
Наблюдение за птицей проводили в течение 1 месяца, при этом учитывались количество павших курочек и особенности патологоанатомического вскрытия трупов.
Результаты проведенного опыта отражены в таблицах 1 и 2.
Таблица 1. Результаты определения оптимальной дозы геприм для профилактики гепатоза у кур
Группа
Количество кур
Доза геприм в мл/кг
Пало
Количество павших с диагнозом гепатоз
1 группа
100
-
7
4
2 группа
100
0,1
7
5
3 группа
100
0,2
-
-
4 группа
100
0,4
-
-
Из данных таблицы 1 видно, что за период наблюдения в контрольной и первой опытной группах сохранность составила 93%, при этом причиной падежа в контрольной группе служил гепатоз у 4% птиц, а в первой опытной группе - у 5%.
Определение содержания общего белка и белковых фракций в сыворотке крови является наиболее простым способом оценки действия геприм на печень. Результаты исследования отражены в таблице 2.
Таблица 2. Результаты биохимического исследования сыворотки крови кур при применении различных доз геприм
Показатель
Группа кур
1 группа
2 группа
3 группа
4 группа
Общий белок, г/л
41,7±0,7
42,4±0,2
47,70±0,06*
47,70±0,05*
Альбумины, %
28,90±0,06
31,3±0,1*
33,00±0,08***
32,8±0,2***
Альфа-глобулины, %
22,00±0,06
21,8±0,2
21,7±0,2
21,5±0,3
Бета-глобулины,
13,6±0,1
13,6±0,1
13,8±0,2
13,7±0,2
%
Гамма-глобулины, %
32,9±0,3
33,9±0,1
33,8±0,1
33,3±0,6
Соотношение А/Г
0,4
0,46
0,5
0,49
* - р<0,05, *** - р<0,001
Из данных таблицы 2 видно, что при наблюдении произошло достоверное увеличение содержания общего белка в сыворотке крови у птицы 2-й и 3-й опытных групп по сравнению с контролем на 14,4% (р<0,05). Также произошло увеличение содержания альбуминов во всех опытных группах. В первой опытной оно составило +8,3% (р<0,05), в третьей опытной +13,5% (р<0,001) и максимальным было во второй опытной группе +14,2% (р<0,001). Важный для оценки состояния печени показатель отношения альбуминов к глобулинам также претерпел значительные изменения в опытных группах по сравнению с контролем. В первой опытной группе он был больше, чем в контрольной на 15%, в третьей на 22,5% и во второй на 25%. Указанные изменения говорят об усилении белоксинтезирующей функции печени, повышении ее метаболической активности и снижении риска возникновения гепатоза.
Таким образом, на основании проведенных исследований установлено, что по совокупности положительных клинико-биохимических наблюдений оптимальной дозой геприм для профилактики гепатоза и активизации функции печени является доза 0,2 ед. и 0,4 ед. на 1 килограмм массы тела, доза 0,1 ед. является неэффективной. Следовательно, эффективной и экономически оправданной дозой геприм будет являться 0,2 ед./кг массы тела.
Сравнение эффективности действия «геприм» по отношению к антигепатотоксической сыворотке проводили в опыте на курах возрастом 60 дней.
С этой целью 200 кур разделили по принципу пар-аналогов на две группы по 100 голов в каждой группе. Вся птица находилась в одинаковых условиях кормления и содержания.
Птица первой группы служила контролем, ей вводили антигепатотоксическую сыворотку в дозе 0,2 мл/кг с содержанием антигепатотоксической сыворотки 1,0 тировочных единиц в 1 мл.
Птице второй группы вводили «геприм» в дозе 0,2 мл на 1 кг живой массы.
Наблюдение за птицей проводили в течение 1 месяца, при этом учитывались количество павших кур и особенности патологоанатомического вскрытия трупов.
Результаты проведенного опыта отражены в таблицах 3 и 4.
Таблица 3. Влияние «геприм» и антигепатотоксической сыворотки на сохранность и профилактику гепатоза у кур
Группа
Количество курочек
Пало
Диагноз при вскрытии
1 группа
100
7
4 головы - гепатоз3 головы - энтерит
2 группа
100
2
2 головы - энтерит
Из данных таблицы 3 видно, что за период наблюдения в контрольной группе сохранность составила 93%, при этом причиной падежа в контрольной группе служил гепатоз у 4% птиц. В опытной группе сохранность составила 98%, причиной падежа послужил энтерит.
Таблица 4. Результаты биохимического исследования сыворотки крови кур при применении «геприм» и антигепатотоксической сыворотки
Показатель
Группа курочек
1 группа
2 группа
Общий белок, г/л
58,8±3,1
62,8±4,4**
Альбумины, %
29,32±0,66
31,33±0,22*
Альфа-глобулины, %
24,04±0,72
23,22±1,03
Бета-глобулины, %
13,74±1,46
13,98±1,75
Гамма-глобулины, %
32,9±1,5
32,41±2,17
Соотношение А/Г
0,41
0,46
* - р<0,05, ** - р<0,01
Из данных таблицы 4 видно, что при наблюдении произошло достоверное увеличение содержания общего белка в сыворотке крови у птицы 2-й группы по сравнению с первой на 6,8% (р<0,01). Также произошло увеличение содержания альбуминов. Во второй группе оно составило +6,8% к контролю (р<0,05). Важный для оценки состояния печени показатель отношения альбуминов к глобулинам также претерпел значительные изменения во второй группе по отношению к контролю - он увеличился на 12,2%. Указанные изменения говорят об усилении белоксинтезирующей функции печени, повышении ее метаболической активности и снижении риска возникновения гепатоза.
«Геприм» для кур вводится курам в дозе 0,2 мл/кг массы тела подкожно или внутримышечно.
«Геприм» для кур представляет собой прозрачную жидкость с незначительным осадком, легко разбивающимся при встряхивании. Срок годности препарата при хранении в температуре 5 -7°С - 2 года.
Экономическая эффективность от применения геприм составила 5,08 рублей, от применения антигепатотоксической сыворотки 1,4 рубля.
Список литературы
1. Войтов Л.И., Федорова Н.М., Бездревный В.П. Применение дипромония при токсической дистрофии печени у мясных птиц. // Актуальные проблемы ветеринарии в борьбе с незаразными болезнями животных. Сб. н. тр. ВНИИНБЖ. Воронеж. 1990. С.34-36.
2. Действие специфических цитотоксических сывороток на половые железы. /Ю.А.Спасокукотский, Н.В.Ильчевич, Л.И.Барченко, О.В.Нищименко, Т.М.Зеленская, А.Г.Гоноровский. - К.: Наукова думка, 1977. - 216 с.
3. Диагностика и терапия внутренних болезней животных. / И.Кондрахин, В.Левченко. - М.: Аквариум-Принт, 2005. - 830 с.
4. Лебедева И. Биоспорин в предстартовый период. // Птицеводство. - 2007. - №11. - С.46.
5. Мухина Н. Мидивет - уникальная кормовая добавка. / Н.Мухина, А.Смирнова, Е.Крюкова, Т.Каблучеева. // Птицеводство. - 2006. - №5. - С.21-22.
6. Уша Б.В. Ветеринарная гепатология. М.: Колос, 1979. - 263 с.