Различия экспрессии белков теплового шока на поверхности живых и апоптозных клеток лимфомы EL-4

комолекулярый меланомо-ассоциированный антиген НМХ^ в 02, ООЗ-ганглиозиды и другие. М ногие из этих антигенов связаны с опухолевой прогрессией, поэтому изучение их экспрессии на малигнизированных клетках имеет значение не только для дифференциальной диагностики меланомы кожи, но и для определения прогноза заболевания. Выявление МАА-антигенов, иммунных комплексов и антител к МАА в крови имеет значение при мониторинге больных меланомой.

Целью работы явилось получение моноклональных антител против меланомо-ассоциированных антигенов.

Материалы и методы: С помощью стандартных методов гибридомной технологии проведено слияние спле-ноцитов иммунизированной опухолевыми клетками метастатической меланомы мыши линии ВАЬВ/с и мие-ломной линии N51. Отбор продуцирующих клонов и определение реактивности полученных гибридом проводили с помощью реакции непрямой иммунофлюоресценции, учитываемой на проточном цитофлуоримет-ре РАСЭсап и флуоресцентном микроскопе Орюп. В качестве контрольных антител использовали МКА 225.28 (Ог. Б.Реггопе) против высокомолекулярного меланомоассоциированного антигена НМ\У.

Результаты: Получена гибридома, стабильно продуцирующая МКА изотипа, названные 1СО-218. МКА 1СО-218 взаимодействуют с 90-100% клеток меланомы перевиваемых клеточных линий Ме1иг, МБ, РМ4593, Со1о38 и с отдельными клетками клеточной линии Вго. МКА не реагировали с клетками перевиваемых клеточных линий гематологической природы — .1игка(, КХЗ1, ЭаисП, Яа] 1, с лимфоцитами и гранулоцита-ми здоровых доноров. Методами иммуногистохимии на криостатных срезах не выявлена специфическая реакция с опухолевыми клетками саркомы Юинга, лим-фомы желудка, рака легкого. МКА 1СО-218 взаимодействовали с опухолевыми клетками 7 криостатных срезов метастазов больных меланомой, а также со 100% клеток первичной культуры меланомы, полученной из метастаза больной Т.

Антигены, узнаваемые МКА 1СО-218 и МКА 225.28, имеют сходное распределение по тканям. Однако изучаемые антитела не конкурируют друг с другом при связывании с клетками-мишенями. Таким образом, МКА 1СО-218 и 225.28 реагируют с разными антигенами или с различными антигенными детерминантами НМ\У.

Заключение: Благодаря стабильности и специфичному связыванию с клетками меланомы кожи человека полученные МКА могут быть рекомендованы для использования при диагностике малигнизированной меланомы методами иммуногистохимии. Предварительные данные позволяют предположить, что МКА 1СО-218 взаимодействуют с дифференцировочным МАА. Ведется работа по выделению антигена, узнаваемого 1СО-218. Изучается возможность использования полученных нами МКА в составе препаратов направленного действия.

Различия экспрессии белков теплового шока на поверхности живых и апоптозных клеток лимфомы EL-4

Пономарёв Е.Д., Тарасенко Т.Н., Сапожников А.М.

Институт биооргинической химии им. М.М.Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН Москва, Россия

В настоящее время накоплено много данных, свидетельствующих о существенной роли белков теплового шока (БТШ) в системе иммунологического надзора. Повышенная экспрессия БТШ сопутствует клеточному стрессу любого происхождения и наблюдается у микроорганизмов, подверженных иммунной атаке, у вируспнфицированных клеток, у многих трансформированных клеток, а также у клеток, испытывающих разнообразные повреждающие воздействия. БТШ являются протектнвными внутриклеточными протеинами, однако в ряде случаев зарегистрирована их локализация и на клеточной поверхности. Функшш поверхностных БТШ практически не изучены, хотя для иммунной сис темы эти протеины могут явля ться маркерами клеток, подлежащих элиминации. Недавно было обнаружено, что БТШ экспрессируются на поверхности ти-моцитов в процессе их программированной клеточной гибели (ПКГ, апоптоза). Это явление дополняет сведения о вовлеченности БТШ в функционирование иммунной системы и инициирует вопрос о роли БТШ. локализующихся на клеточной поверхности, в ПКГ Т-лимфоцитов.

Целью данной работы был анализ взаимосвязи экспрессии поверхностных БТШ с процессом апоптоза у линии трансформированных тимоцитов EL-4. Выбор этой модели обусловлен обнаруженным нами ранее сочетанием у культивируемых in vitro клеток EL-4 спонтанного апоптоза со спонтанной экспрессией БТШ на поверхности их плазматических мембран.

Одновременную регистрацию поверхностных БТШ и апоптоза у культивируемых in vitro клеток EL-4 проводили с помощью метода проточной цитофлуориметрии. В качестве экзогенных индукторов ПКГ использовали тепловой шок и актиномицин D.

Было установлено, что пул апоптозных клеток характеризуется повышенной экспрессией поверхностных БТШ по сравнению с пулом живых клеток EL-4. Кинетика экспрессии БТШ на клеточной поверхности в процессе ПКГ имеет выраженный максимум, соответствующий ранним стадиям апоптоза. Однако и на поздних стадиях ПКГ плотность этих протеинов у апоптозных клеток остается более высокой, чем у живых клеток. Такой характер взаимосвязи экспрессии поверхностных БТШ с процессом ПКГ в культуре клеток EL-4 наблюдался как для спонтанного, так и для индуцированного апоптоза. Существенно, что указанная кинетика экспрессии была специфична для протеинов из семейства БТШ. Плотность других белков клеточной поверхности - в частности, протеинов из семейства главного комплекса гистосовмести-мости, снижалась в течение ПКГ.

Эти результаты позволяют предположить, что в нашей модели БТШ, наряду с их защитной ролыо, выполняют определенную функцию и реализации программ!,I апоптоза. В то же время, выявленная корреляция ПКГ и экспрессии поверхностных БТШ у клеток ЕЬ-4 может являться существенным свойством лимфоцитов, необходимым для своевременной элиминации их короткожи-вуших пулов, индуцированных протективными иммунными реакциями.

Иммунокорригирующая терапия опухолей препаратами цитокинов местно-резорбтивного действия

Протасова С.Ф.1, Киселева И.В.2, Щсканова С.М.1, Жунко В.В.'

1Институт гриппа РАМН,' Институт жашримешпсшъной медицины РА МН, Санкт-Петербург

В настоящее время в нашей стране и за рубежом широко проводится изучение и лечение больных с различными нозологическими формами заболевании, включая онкологические, препаратами рекомбинантных цитокинов. Из зарубежной литературы известно, что не все проводимые исследования заканчиваются удачно. Есть сообщения о том, что применение концентрированных цитокиновых коктейлей приводит к осложнениям, связанным с некрозом тканей при подкожном и внутрикожном введениях, а в отдельных случаях приводит к гибели больного.

Нами разработана серия новых уникальных препаратов рекомбинантных цитокинов под условным названием “Интерлин”, обладающих местно-резорбтивным действием, которые не имеют побочных эффектов и легко переносятся больными при очевидном терапевтическом эффекте. Препараты серии “Интерлин” были получены на основе комбинации низких доз некоторых рекомбинантных цитокинов - таких, как а-, Р- и у-интерфероны, интерлейкин-1, интерлейкин-2, фактор некроза опухолей-а, активирующих клеточное звено иммунитета.

В условиях эксперимента было изучено влияние цитокиновых мазей па рост карциномы Эрлиха и лимфомы Ь-1210 у белых мышей. Опухолевые клетки вводили животным внутримышечно в заднюю лапу. Показано, что после трехкратного накожного (па область пальпируемой опухоли) нанесения цитокиновой мази количество животных-опу-холеносителей уменьшалось почти в 5 раз по сравнению с этим же показателем в контрольной (нелеченной) группе животных. Противоопухолевы й эффект был достигнут как в случае терапии чувствительной к интерлейкину-2 опухоли (лнмфома Ь-1210), так и в отношении опухоли, известной своей резистентностью к лечению интерлейкином-2 (карцинома Эрлиха). Даже после однократного нанесения цитокиновой мази наблюдался выраженный лечебный эффект. Так, только у 30% леченых животных определялись опухоли, причем диаметр их не превышал 1 см, в то же время в контрольной группе насчитывалось 80% мышей с опухолями, диаметр которых достигал 3-4 см.

В настоящее время начато изучение противоопухолевого действия препаратов серии “Интерлин", содержащих разрешенные для лечения людей иитокины, на ограниченном количестве добровольцев, больных раком. Установлен выраженный иммуностимулирующий, противоопухолевый и обезболивающий эффекты “Ин-терлина”. Уже на первых этапах лечения происходило чрезвычайно быстрое снятие токсикоза и улучшение общего состояния больного. Весьма важным представляется тот факт, что препараты, не оказывая никакою побочного действия, обладают выраженным аналме-зирующим эффектом, что допускает исключить из курса лечения наркотические средства, которые, как известно, угнетают функционирование иммунной системы организма. Показана высокая эффективность “Интер-лина” при комплексном лечении шести больных И-1У стадиями рака разной локализации (рак яичников, шейки матки, легкого, кожи). Так, при лечении рака яичников Ш-1У стадии отмечено значительное уменьшение опухолей и их кальцификация. После краткого (десятидневного) курса его использования при раке шейки матки наблюдалось выраженное редуцирование опухоли. При лечении плоскоклеточного рака кожи достигнуто выздоровление с отсутствием рубцовых изменений. Предоперационная подготовка онкологических больных с помощью “Интерлина” значительно облегчала их послеоперационное состояние. В послеоперационном периоде его применение позволяло значительно сократить сроки пребывания больного в стационаре и перевести его на амбулаторное лечение. Использование “Интерлина” улучшало показатели иммунного статуса у больных, и они легче переносили послеоперационную химио- и лучевую терапию. Применение “Интерлипа” может быть также рекомендовано больным с неоперабельными формами онкологических заболеваний в качестве иммунокорригнрующего средства, приостанавливающего рост опухоли и продлевающего жизнь этим больным.

Полученные результаты расширяют наши знания о свойствах цитокинов, используемых в терапии рака, и позволяют предположить, что простые в приготовлении и относительно дешевые препараты серии “Интерлин”, обладающие обезболивающим действием и не оказывающие никакого побочного эффекта, являются перспективными противоопухолевыми препаратами.

Идентификация лекарственно-индуцированного апоптоза в лейкозных клетках

Соколовская А.А., Заботима Т.Н., Блохин Д.Ю., Барышников АЛО.

Российский Онкологический научный центр им. Н.Н.Блохина, РАМН, Москва

Существенный прогресс в познании феномена апоптоза или программированной клеточной смерти