КОМПОЗИЦИЯ ДЛЯ ПОДДЕРЖАНИЯ ДОМИНИРОВАНИЯ ЛАКТОБАКТЕРИЙ
COMPOSITION FOR MAINTENANCE OF LACTOBACTERIA DOMINATION

ПРЕДПОСЫЛКИ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Люди в желудочно-кишечном тракте, на коже и в других эпителиальных и тканевых углублениях, таких как ротовая полость, поверхность глаза и влагалище, колонизированы микробами. У здоровых людей в одной локализации или типе ткани могут обитать сотни различных видов бактерий. Взаимодействия между разными видами бактерий в этих популяциях, а также между бактериями и человеком-хозяином, образуют структуру сообществ с наличием ресурсов и конкуренцией за них, влияющими на распространение разных видов бактерий. Такими ресурсами могут являться пища, местоположение и доступность пространства для роста или физическая структура, к которой бактерии могут прикрепляться.
4
Здоровая микрофлора предоставляет хозяину множество преимуществ, в том числе устойчивость к колонизации широкого спектра патогенов, биосинтез и абсорбцию важных питательных веществ и иммунная стимуляция. Например, в норме во влагалище, как правило, содержится более чем приблизительно 10 лактобактерий в миллилитре вагинальной жидкости. В нормальных условиях флора влагалища обеспечивает умеренно кислую среду, что способствует защите против заражения патогенными микробами. К сожалению, этот баланс во влагалище может легко быть нарушен различными внешними факторами, что в конечном итоге приводит к вагинальной инфекции. Вагинальная инфекция представляет собой клинический синдром и существует в трех основных формах, т. е. бактериальный вагиноз, кандидозный вагинит («дрожжевые грибы») и трихомонадный вагинит («трихомониаз»).
Современные схемы лечения бактериальной инфекции влагалища включают применение различных антибиотиков широкого спектра действия, таких как метронидазол. Тем не менее, антибиотики часто являются нежелательными, так как они могут уничтожать широкий спектр нормальной бактериальной флоры во влагалище, в том числе полезные лактобактерии. Это может вызывать вторичные осложнения, потому что лактобактерии держат под контролем различные оппортунистические патогены во влагалище. Затем лечение может повлечь необходимость в дальнейшей схеме лечения, такой как употребление молочных продуктов, полученных с помощью культур, для восполнения лактобактерий в организме, а также лечение противогрибковыми средствами. Кроме того, повышение уровня анаэробов вследствие недостатка лактобактерий может дополнительно осложнять инфекцию. Помимо этого, антибиотики при частом применении во влагалище могут вызывать системное токсическое воздействие посредством абсорбции из влагалища.
В настоящее время существует, как таковая, потребность в улучшенных композициях для поддержания и сохранения здорового баланса микрофлоры в урогенитальной области и, более конкретно, – в улучшенных композициях.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Неожиданно было обнаружено, что рост определенных штаммов лактобактерий можно повысить посредством введения фармацевтической композиции, содержащей одно терапевтическое средство, выбранное из группы, состоящей из изомальтулозы, мальтита, пуллулана, мальтотриозы, 2-дезокси-D-рибозы, 1-кестозы и эрлозы. В определенных вариантах осуществления увеличивая рост полезных лактобактерий, можно эффективно подавлять рост патогенов, связанных с урогенитальными инфекциями, и способствовать поддержанию здорового баланса микрофлоры в урогенитальной области. Как таковые, композиции, содержащие одно терапевтическое средство, хорошо подходят для местного введения в урогенитальную область женщины с целью поддержания и сохранения здорового баланса микрофлоры в урогенитальной области. Например, обеспечение композиции, содержащей одно терапевтическое средство, выбранное из группы, состоящей из изомальтулозы, мальтита, пуллулана, мальтотриозы, 2-дезокси-D-рибозы, 1-кестозы и эрлозы, способствует росту лактобактерий без способствования росту патогенных бактерий, таких как Escherichia coli или Gardnerella vaginalis.
Соответственно, в определенных вариантах осуществления настоящее изобретение предусматривает композицию, содержащую одно терапевтическое средство, выбранное из группы, состоящей из изомальтулозы, мальтита, пуллулана, мальтотриозы, 2-дезокси-D-рибозы, 1-кестозы и эрлозы, где средство способствует росту лактобактерий. В особенно предпочтительном варианте осуществления введение фармацевтической композиции не только способствует росту лактобактерий, но также и приводит в результате к подавлению энтеропатогенных бактерий, таких как Gardnerella vaginalis.
В других вариантах осуществления настоящее изобретение предусматривает фармацевтическую композицию, содержащую одно терапевтическое средство, выбранное из группы, состоящей из изомальтулозы, мальтита, пуллулана, мальтотриозы, 2-дезокси-D-рибозы, 1-кестозы и эрлозы, где содержание одного терапевтического средства составляет от приблизительно 0,05 до приблизительно 1,0 вес/об. %, где введение фармацевтической композиции пользователю, нуждающемуся в этом, способствует росту лактобактерий.
В других вариантах осуществления фармацевтические композиции по настоящему изобретению можно составлять в составы для введения пользователю, нуждающемуся в этом. Подходящие составы могут включать, например, жидкости, растворы, пасты или гели. Соответственно, в одном предпочтительном варианте осуществления настоящее изобретение предусматривает состав для местного введения пользователю, содержащий одно терапевтическое средство, выбранное из группы, состоящей из изомальтулозы, мальтита, пуллулана, мальтотриозы, 2-дезокси-D-рибозы, 1-кестозы и эрлозы, и от приблизительно 0,05 до приблизительно 5,0 вес/об. % по меньшей мере одного гелеобразующего средства, которое включает геллановую камедь. В особенно предпочтительном варианте осуществления содержание одного терапевтического средства составляет от приблизительно 0,1 до приблизительно 2,0 вес/об. %, и pH состава составляет от приблизительно 3,5 до приблизительно 5,5.
В еще одних других вариантах осуществления композиции по настоящему изобретению можно наносить на аппликатор. Подходящие аппликаторы включают полотно, такое как тканевое полотно, полученное влажным формованием, или полотно, полученное суховоздушным формованием, марлю, ватный тампон, трансдермальный пластырь, емкость или держатель. Таким образом, в определенных вариантах осуществления композицию можно наносить на нетканое полотно, такое как полотно, полученное по технологии мелтблаун, коформ, спанбонд, полотно, полученное суховоздушным формованием, нетканые материалы, полученные водоструйным скреплением, полотна, полученный по технологии спанлейс, скрепленные кардочесанные полотна и слоистые материалы из них, а также волокнистые полотна, полученные влажным формованием, такие как тканевые полотна.
В других аспектах композиции по настоящему изобретению можно вводить пользователю с обеспечением терапевтического эффекта. Соответственно, в одном варианте осуществления настоящее изобретение предусматривает способ усиления роста или активности лактобактерий in vivo, предусматривающий введение композиции, содержащей одно терапевтическое средство, выбранное из группы, состоящей из изомальтулозы, мальтита, пуллулана, мальтотриозы, 2-дезокси-D-рибозы, 1-кестозы и эрлозы.
ОПРЕДЕЛЕНИЯ
При использовании в данном документе термин «подавлять», как правило, означает сокращать на измеримое количество или полностью предотвращать.
При использовании в данном документе термин «урогенитальный» относится к вульве, влагалищу, мочевыводящему тракту, мочевому пузырю и окружающим областям.
При использовании в данном документе термины «эффективное количество» и «терапевтическое количество» представляют собой количество, достаточное для инактивации, но не обязательно уничтожения, патогенных микроорганизмов, ответственных за вагинальную инфекцию. В действительности, хотя это не является обязательным, может быть желательным применение концентрации, которая не оказывает значительного влияния или подавления показателей роста нормальной флоры влагалища или, в другом случае, не вызывает значительного раздражения ткани влагалища при применении ингибиторных, нетоксичных или клинических концентраций. Например, одно терапевтическое средство желательно применять при концентрации, составляющей от приблизительно 0,01 до приблизительно 5,0 вес/об. %, в некоторых вариантах осуществления от приблизительно 0,1 до приблизительно 2,0 вес/об. %, в некоторых вариантах осуществления от приблизительно 0,2 до приблизительно 1,5 вес/об. % и в некоторых вариантах осуществления от приблизительно 0,5 до приблизительно 1,0 вес/об. %. Следует понимать, что дозировка может варьировать от возраста, состояния и типа инфекции, от которой страдает пациент, и может быть легко определена специалистом в данной области техники.
При использовании в данном документе термин «терапевтический эффект» относится к способности композиций и составов по настоящему изобретению стимулировать рост L. crispatus относительно E. coli, измеренный в соответствии с нижеописанным протоколом оценки терапевтического эффекта. Как правило, терапевтический эффект выражается как соотношение L. crispatus и E. coli, и желательно составляет более чем приблизительно 30, более предпочтительно более чем приблизительно 50 и более предпочтительно более чем приблизительно 100.
При использовании в данном документе обозначения «вес/об. %» или «вес/об.» относятся к значению, полученному с помощью деления веса вещества (в граммах) на объем раствора (в миллилитрах), а затем умноженному на 100.
При использовании в данном документе термин «растворимый», при наличии упоминания пентозы, дисахарида, органической кислоты, циклодекстрина, пектинового вещества или неусваиваемого полисахарида, означает, что вещество является по меньшей мере растворимым в соответствии со способом, описанным L. Prosky et al, J. Assoc. Off. Anal. Chem. 71, 1017—1023 (1988).
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Композиции и составы по настоящему изобретению предназначены для стимулирования роста грамположительных палочковидных бактерий, относящихся к виду Lactobacilli spp. Предполагается, что стимуляция роста и доминирования лактобактерий восстанавливает здоровую флору посредством уменьшения или исключения популяции патогенных бактерий. Композиции по настоящему изобретение, как правило, содержат только одно терапевтическое средство, способное способствовать росту грамположительных палочковидных бактерий, относящихся к виду Lactobacilli spp. Предпочтительно, одно терапевтическое средство выбрано из группы, состоящей из изомальтулозы, мальтита, пуллулана, мальтотриозы, 2-дезокси-D-рибозы, 1-кестозы и эрлозы.
Композиции и составы по настоящему изобретения особенно хорошо пригодны для введения в урогенитальный тракт для поддержания и сохранения здоровой микрофлоры. В других вариантах осуществления композиции и составы по настоящему изобретению могут быть пригодными для поддержания и сохранения баланса здоровой микрофлоры на коже, в мочевом пузыре или желудочно-кишечном тракте. Например, сохранение и поддержание здоровой микрофлоры может достигаться с помощью местного введения композиции в урогенитальный тракт или другую область тела. В других вариантах осуществления композиции по настоящему изобретению могут быть составлены для перорального введения и перорально вводиться пациенту для поддержания и сохранения здоровой микрофлоры в желудочно-кишечном тракте.
Как правило, терапевтическая композиция содержит только одно терапевтическое средство, выбранное из группы, состоящей из изомальтулозы, мальтита, пуллулана, мальтотриозы, 2-дезокси-D-рибозы, 1-кестозы и эрлозы. Композиция может содержать другие компоненты, такие как, например, стабилизатор, поверхностно-активное вещество, солюбилизатор, буфер, суспендирующее вещество, краситель, регулятор pH, загуститель, диспергирующее вещество, консервант или растворитель, но, как правило, содержит только одно терапевтическое средство, способное обеспечивать терапевтический эффект.
Композиции по настоящему изобретению для лечения урогенитального тракта, как правило, стимулируют рост здоровых, нативных бактерий, таких как Lactobacillus spp., и могут вводиться пользователю в нескольких формах. Например, композиции для применения в урогенитальном тракте можно получать в виде составов для введения пользователю или можно наносить на подложку, такую как подложка для обтирания, для введения пользователю. Предпочтительно, сахариды, пригодные в настоящем изобретении, являются растворимыми для облегчения их составления для введения пользователю.
Неожиданно, композиции, содержащие одно терапевтическое средство, выбранное из группы, состоящей из изомальтулозы, мальтита, пуллулана, мальтотриозы, 2-дезокси-D-рибозы, 1-кестозы и эрлозы, способствуют росту здоровых бактерий, таких как Lactobacillus spp. и, более конкретно, Lactobacillus acidophilus, без способствования росту энтеропатогенных бактерий, таких как Gardnerella (например, Gardnerella vaginalis), Candida (например, Candida albicans) и/или Trichomonas (например, Trichomonas vaginalis). Соответственно, композиции по настоящему изобретению можно вводить пользователю для селективной стимуляции роста лактобактерий без стимуляции роста конкурирующих энтеропатогенных бактерий. Таким образом, при применении, введение состава, содержащего одно терапевтическое средство, выбранное из группы, состоящей из изомальтулозы, мальтита, пуллулана, мальтотриозы, 2-дезокси-D-рибозы, 1-кестозы и эрлозы, может усиливать рост и колонизацию здоровых бактерий, таких как Lactobacillus spp. у пользователя, что способствует, таким образом, снижению вероятности возникновения заболевания.
Соответственно, в предпочтительном варианте осуществления композиция, содержащая одно терапевтическое средство, выбранное из группы, состоящей из изомальтулозы, мальтита, пуллулана, мальтотриозы, 2-дезокси-D-рибозы, 1-кестозы и эрлозы, влияет на рост L. crispatus, преобладающий над ростом E. coli, что измерено с помощью нижеописанного протокола оценки терапевтического эффекта. Предпочтительно, применение композиции приводит к соотношению L. crispatus и E. coli, составляющему более чем приблизительно 30, еще более предпочтительно более чем приблизительно 50 и еще более предпочтительно более чем 100, и даже более предпочтительно более чем приблизительно 300.
12
24
11
6
12
5
n
Как правило, композиции, пригодные в настоящем изобретении, содержат только одно терапевтическое средство. Терапевтическое средство, как правило, содержит сахарид. Например, в одном варианте осуществления композиция может содержать пентозу и более предпочтительно 2-дезокси-D-рибозу. В других вариантах осуществления одно терапевтическое средство может представлять собой сахарный спирт и более предпочтительно мальтит, который характеризуется формулой CHO. В еще одних других вариантах осуществления одно терапевтическое средство может представлять собой дисахарид и более предпочтительно изомальтулозу, которая состоит из глюкозы и фруктозы, соединенных альфа-1,6-гликозидной связью. В еще одних других вариантах осуществления одно терапевтическое средство может представлять собой полисахарид и более предпочтительно пуллулан, который состоит из мальтотриозных единиц и характеризуется, таким образом, общей формулой (CHO). В еще одних других вариантах осуществления одно терапевтическое средство может представлять собой трисахарид, такой как, например, мальтотриоза, 1-кестоза и эрлоза.
Предпочтительно композиция содержит только одно терапевтическое средство. Это означает, что композиция, как правило, содержит только одно терапевтическое средство, выбранное из группы изомальтулозы, мальтита, пуллулана, мальтотриозы, 2-дезокси-D-рибозы, 1-кестозы и эрлозы. Другие средства, которые, как известно, являются источниками углерода для грамположительных бактерий и имеют терапевтический эффект, такие как глюкоза, фруктоза, галактоза, манноза, лактоза, лактулоза, микоза, целлобиоза, мелибиоза, мелитоза, декстрин, крахмал и гликоген, не являются компонентами композиции по настоящему изобретению. Неожиданно было показано, что композиции, содержащие только одно терапевтическое средство, стимулируют рост лактобактерий и поддерживают здоровую флору без добавления второго источника углерода. Как таковые, композиции по настоящему изобретению, как правило, содержат только один источник углерода, который может быть использован грамотрицательными бактериями, и предпочтительно, чтобы один источник углерода был выбран из группы изомальтулозы, мальтита, пуллулана, мальтотриозы, 2-дезокси-D-рибозы, 1-кестозы и эрлозы.
Как правило, композиции по настоящему изобретению содержат менее чем приблизительно 10,0 вес/об. % терапевтического средства. В особенно предпочтительных вариантах осуществления общее количество терапевтического средства составляет менее чем приблизительно 5,0 вес/об. % и еще более предпочтительно менее чем приблизительно 2,5 вес/об. %, например, от приблизительно 0,01 до приблизительно 2,0 вес/об. % и более предпочтительно от приблизительно 0,1 до приблизительно 1,5 вес/об. %. Например, в одном варианте осуществления композиция содержит от приблизительно 0,1 до приблизительно 2,0 вес/об. % одного терапевтического средства, выбранного из группы, состоящей из изомальтулозы, мальтита, пуллулана, мальтотриозы, 2-дезокси-D-рибозы, 1-кестозы и эрлозы.
Кроме того, первое и второе терапевтические средства должны быть предоставлены в количестве, достаточном для обеспечения терапевтического эффекта при введении пользователю. Например, в случае если композиция содержит одно терапевтическое средство, выбранное из группы, состоящей из изомальтулозы, мальтита, пуллулана, мальтотриозы, 2-дезокси-D-рибозы, 1-кестозы и эрлозы, одно терапевтическое средство присутствует в количестве, достаточном для стимулирования роста определенных здоровых бактерий, таких как Lactobacillus bulgaricus, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus gasseri, Lactobacillus crispatus, Lactobacillus casei, Lactobacillus plantarum. Предпочтительно композиция обеспечивает терапевтический эффект, измеряемый в виде соотношения L. crispatus и E. coli, как описано ниже в разделе способов тестирования, составляющего более чем приблизительно 30, более предпочтительно более чем приблизительно 100 и более предпочтительно более чем приблизительно 200, и еще более предпочтительно более чем приблизительно 300.
Композиции по настоящему изобретению могут быть составлены для введения пользователю. Например, в тех вариантах осуществления, где композицию составляют в виде состава для вагинального лечения, ее можно составлять в виде спрея, увлажняющего средства, лосьона, крема, желеобразного вещества, линимента, мази, бальзама, масла, пены, геля, пленки, средства для промывания, суппозитория, полимера с медленным высвобождением, покрытия, жидкости, вагинальной капсулы, вагинальной таблетки, вагинальной пленки, вагинальной губки, вагинального суппозитория и т. д. Композицию также можно наносить на вагинальную вставку, тампон, салфетку или диск, а затем вводить во влагалище. Составы могут содержать одно терапевтическое средство, выбранное из группы, состоящей из изомальтулозы, мальтита, пуллулана, мальтотриозы, 2-дезокси-D-рибозы, 1-кестозы и эрлозы, растворитель и необязательно дерматологически приемлемый носитель. При использовании в данном документе термин «дерматологически приемлемый носитель», как правило, относится к носителю, который является подходящим для местного введения в ороговевшую ткань и совместимым с пребиотиком. Дерматологически приемлемый носитель может находиться в широком разнообразии форм, таких как, например, простые растворы (на водной основе или на масляной основе), твердые формы (например, гели или палочки) и эмульсии.
Растворители могут быть как водными, так и неводными. Вода представляет собой особенно предпочтительный водный растворитель. Неводные растворители могут включать, например, гликоли, такие как пропиленгликоль, бутиленгликоль, триэтиленгликоль, гексиленгликоль, полиэтиленгликоли, этоксидигликоль и дипропиленгликоль; спирты, такие как этанол, н-пропанол и изопропанол; триглицериды; этилацетат; ацетон; триацетин и их комбинации. Обычно содержание растворителя составляет более чем приблизительно 75 вес/об. %, более предпочтительно более чем приблизительно 85 вес/об. % и еще более предпочтительно более чем приблизительно 90 вес/об. %.
Как правило, композиции по настоящему изобретению являются кислотными, т. е. характеризуются значением pH, составляющим менее чем приблизительно 7,0 и более предпочтительно менее чем приблизительно 6,0, например, от приблизительно 3,0 до приблизительно 6,0 и еще более предпочтительно от приблизительно 4,0 до приблизительно 5,0. В особенно предпочтительном варианте осуществления значение pH может поддерживаться на умеренно кислотном уровне в соответствии с нормальными условиями влагалища. Например, значение pH может находиться в диапазоне от приблизительно 3,0 до приблизительно 6,0, в некоторых вариантах осуществления от приблизительно 3,5 до приблизительно 5,0 и в некоторых вариантах осуществления от приблизительно 4,0 до приблизительно 4,5. Вышеупомянутый кислый уровень pH может обеспечивать другие преимущества. Например, в случае если композиция составлена с возможностью образовывать гель, как описано ниже, то низкий уровень pH также может повышать скорость образования геля и прочность геля для уменьшения вероятности протекания непосредственно после введения композиции во влагалище.
Значение pH композиции можно регулировать с применением органической кислоты. Органические кислоты, пригодные в настоящем изобретении, как правило, состоят из моно- или поликарбоновых кислот, содержащих одну или более гидроксильных функциональных групп, по меньшей мере одна из которых введена в α-положении (т. е. около атома углерода, прилегающего к карбоксильной функциональной группе). Примеры особенно пригодных органических кислот включают лимонную кислоту, молочную кислоту, метилмолочную кислоту, фенилмолочную кислоту, яблочную кислоту, миндальную кислоту, гликолевую кислоту, тартроновую кислоту, винную кислоту и глюконовую кислоту. В особенно предпочтительных вариантах осуществления органическая кислота выбрана из группы, состоящей из лимонной кислоты, молочной кислоты, яблочной кислоты, гликолевой кислоты и винной кислоты. В определенных вариантах осуществления органическая кислота может быть обеспечена соответствующим противоионом, таким как кальций, натрий или магний. В особенно предпочтительных вариантах осуществления композиция может содержать одно терапевтическое средство, выбранное из группы, состоящей из изомальтулозы, мальтита, пуллулана, мальтотриозы, 2-дезокси-D-рибозы, 1-кестозы и эрлозы, и органическую кислоту. В других вариантах осуществления композиция может содержать одно терапевтическое средство, выбранное из группы, состоящей из изомальтулозы, мальтита, пуллулана, мальтотриозы, 2-дезокси-D-рибозы, 1-кестозы и эрлозы, и органическую кислоту, выбранную из группы, состоящей из лимонной кислоты, молочной кислоты, яблочной кислоты, гликолевой кислоты и винной кислоты.
С учетом изложенного выше в определенных вариантах осуществления композиции и составы по настоящему изобретению могут характеризоваться значением pH от приблизительно 3,0 до приблизительно 6,0, более предпочтительно от приблизительно 3,5 до приблизительно 5,0, и содержат одно терапевтическое средство, выбранное из группы, состоящей из изомальтулозы, мальтита, пуллулана, мальтотриозы, 2-дезокси-D-рибозы, 1-кестозы и эрлозы, где общее количество терапевтического средства составляет от приблизительно 0,1 до приблизительно 2,0 вес/об. %.
В одном конкретном варианте осуществления настоящего изобретения, например, композиция составлена с возможностью быстрого образования геля при применении во влагалище. «Гель» представляет собой коллоид, в котором дисперсная фаза комбинируется с диспергирующей средой с получением желеобразного, твердого или полутвердого материала. Гель может образовываться в течение менее чем приблизительно одного часа, в некоторых вариантах осуществления в течение менее чем приблизительно одной минуты и в некоторых вариантах осуществления в течение менее чем приблизительно 30 секунд. Кроме того, такое быстрое образование геля снижает вероятность протекания во время применения. Помимо этого, поскольку гель может образовываться интравагинально, более вероятно, что он сохранит свою структуру и форму на протяжении длительного периода времени. Таким образом, гель может обеспечивать продолжительное высвобождение терапевтического средства, которое подавляет и/или лечит вагинальную инфекцию. Например, гель может оставаться во влагалище в течение периода, составляющего от приблизительно 2 до приблизительно 48 часов для обеспечения требуемого эффекта.
Хотя можно применять множество соединений, для оптимизации биосовместимости обычно используют воду в качестве диспергирующей среды для геля. Другие возможные диспергирующие среды включают неводные растворители, в том числе гликоли, такие как пропиленгликоль, бутиленгликоль, триэтиленгликоль, гексиленгликоль, полиэтиленгликоли, этоксидигликоль и дипропиленгликоль; спирты, такие как этанол, н-пропанол и изопропанол; триглицериды; этилацетат; ацетон; триацетин и их комбинации. Обычно содержание диспергирующей среды (например, воды) составляет более чем приблизительно 75 вес/об. %, в некоторых вариантах осуществления более чем приблизительно 90 вес/об. % и в некоторых вариантах осуществления от приблизительно 95 до приблизительно 99 вес/об. % композиции.
Дисперсная фаза геля может быть образована из любого из множества различных гелеобразующих средств, в том числе чувствительных к температуре («термогелевых») соединений, чувствительных к ионам соединений и так далее. Например, термогелевые системы реагируют на изменение температуры (например, повышение температуры) с помощью превращения из жидкости в гель. В общем, представляющий интерес температурный диапазон составляет от приблизительно 25°C до приблизительно 40°C, в некоторых вариантах осуществления от приблизительно 35°C до приблизительно 39°C и в одном конкретном варианте осуществления при температуре тела человека (приблизительно 37°C). Композиции, которые изменяют состояние при приблизительно данной температуре, являются пригодными, так как они остаются в полости тела, например после того, как они были доставлены. В настоящем изобретении можно применять любое из термогелевых соединений, которое способно к превращению в гель при применении во влагалище. В некоторых случаях можно применять термогелевые блокcoполимеры, привитые coполимеры и/или гомополимеры. Например, в некоторых вариантах осуществления по настоящему изобретению можно применять блокcoполимеры полиоксиалкилена с образованием термогелевой композиции. Подходящие термогелевые композиции могут включать, например, гомополимеры, такие как поли(N-метил-N-н-пропилакриламид), поли(N-н-пропилакриламид), поли(N-метил-N-изопропилакриламид), поли(N-н-пропилметакриламид), поли(N-изопропилакриламид), поли(N,н-диэтилакриламид); поли(N-изопропилметакриламид), поли(N-циклопропилакриламид), поли(N-этилметилакриламид), поли(N-метил-N-этилакриламид), поли(N-циклопропилметакриламид) и поли(N-этилакриламид). Еще одни другие примеры подходящих термогелевых полимеров могут включать производные эфира целлюлозы, такие как гидроксипропилцеллюлоза, метилцеллюлоза, гидроксипропилметилцеллюлоза и этилгидроксиэтилцеллюлоза. Кроме того, термогелевые полимеры можно получать с помощью образования coполимеров среди (из) мономеров или с помощью объединения таких гомополимеров с другими водорастворимыми полимерами, такими как акриловые мономеры (например, акриловая или метакриловая кислота, акрилат или метакрилат, акриламид или метакриламид и их производные).
Композиции по настоящему изобретению также могут включать в себя чувствительное к ионам соединение. Как правило, такие соединения хорошо известны из уровня техники и имеют склонность к образованию геля в присутствии определенных ионов или при определенном значении pH. Например, один подходящий класс чувствительных к ионам соединений, которые можно применять в настоящем изобретении, представляет собой анионные полисахариды. Анионные полисахариды могут образовывать трехмерную сеть полимеров, которая действует как дисперсная фаза геля. В общем, анионные полисахариды включают в себя полисахариды, имеющие общий анионный заряд, а также нейтральные полисахариды, которые содержат анионные функциональные группы.
В настоящем изобретении можно применять любой из множества анионных полисахаридов, способный к образованию геля при вступлении в контакт со слизистой влагалища. Такие гелеобразующие анионные полисахариды обычно устойчивы при нормальных значениях кислого pH, обнаруживаемых во влагалище (например, от приблизительно 2,5 до приблизительно 5,5). Например, некоторые подходящие примеры гелеобразующих анионных полисахаридов включают природные камеди, такие как геллановая камедь и альгинатные камеди (например, соли альгиновой кислоты и аммония и соли альгиновой кислоты со щелочными металлами); хитозан; карбоксиметилцеллюлоза, пектины, каррагенан, ксантановая камедь и их производные или соли. Конкретный тип выбранного анионного полисахарида будет зависеть, отчасти, от природы композиции и других компонентов, используемых в ней. Например, каррагенан чувствителен к конкретным типам катионов, например он обычно образует гель в присутствии калия, но не натрия. Гликуронаты подобным образом обычно образуют гель в присутствии катионов двухвалентных металлов (например, Ca2+), но не одновалентных катионов (например, Na+). Ксантановая камедь может образовывать гель в присутствии двухвалентных катионов, но только при относительно высоком значении pH.
Хотя в настоящем изобретении можно применять любой из вышеописанных анионных полисахаридов, геллановая камедь является особенно желательной для применения в настоящем изобретении, либо отдельно, либо в комбинации с другими гелеобразующими средствами, так как она способна образовывать гель в присутствии широкого ряда различных катионов, в том числе как одновалентных, так и двухвалентных катионов. Предполагается, что геллановая камедь охватывает любую форму геллана, в том числе нативный геллан, очищенный геллан, деацилированный геллан, неацилированный геллан (например, полученный из генетически модифицированных бактерий), очищенный геллан (полисахарид полностью или частично удален из продуктов распада бактерий), химически модифицированный геллан и т. д. Различные типы геллановых камедей и способы образования таких камедей описаны в пат. США №№ 4326052; 4326053, 4377636; 4385123 и 4563366. Подходящие геллановые камеди коммерчески доступны из множества различных источников. Например, геллановая камедь GELRITE™ доступна от Sigma-Aldrich Chemical Co., Сент-Луис, штат Миссури, и ее получают из встречающегося в природе полисахарида после деацилирования и очистки. Деацилированный геллан также доступен от CP Kelco U.S., Inc., Чикаго, штат Иллинойс, под названием KELCOGEL.
Геллановая камедь может представлять собой как высоко-, так и низкоацильный геллан. В высокоацильной (или «нативной») форме присутствуют два ацильных заместителя – ацетат и глицерат. Оба заместителя расположены на одном и том же остатке глюкозы, и в среднем присутствуют один глицерат на повторяющееся звено и один ацетат на каждые два повторяющихся звена. В низкоацильной форме ацильные группы могут быть полностью или частично удалены с помощью деацилирования. Степень деацилирования деацилированных геллановых камедей может составлять по меньшей мере приблизительно 20%, в некоторых вариантах осуществления по меньшей мере приблизительно 50% и в некоторых вариантах осуществления по меньшей мере приблизительно 75%. В качестве альтернативы, низкоацильная геллановая камедь может являться просто «неацилированной» по той причине, что образуется без ацильных групп генетически модифицированными бактериями. Независимо от способа, с помощью которого они образуются, низкоацильные геллановые камеди, как правило, характеризуются температурой образования геля в диапазоне от 30 до 50°C, при этом они могут быть особенно хорошо подходящими для применения в настоящем изобретении, так как могут образовывать гель при значениях температуры тела, составляющих приблизительно 37°C, однако оставаться стабильными при температурах обычного хранения и транспортировки, составляющих приблизительно 25°C. Помимо этого, низкоацильные геллановые камеди также являются прочными и эластичными и, таким образом, могут сохранять свою форму после доставки в полость влагалища.
В большинстве вариантов осуществления гелеобразующее(-ие) средство(-а) присутствует(-ют) в количестве, составляющем от приблизительно 0,01 до приблизительно 10,0 вес/об. %, в некоторых вариантах осуществления от приблизительно 0,05 до приблизительно 5,0 вес/об. % и в некоторых вариантах осуществления от приблизительно 0,1 до приблизительно 1,0 вес/об. % композиции.
Если требуется, гелеобразующая композиция может быть предоставлена в любой требуемой форме (например, жидкость, порошок и т. д.). В сущности, одно конкретное преимущество композиции заключается в том, что ее можно вводить в виде жидкости, что обеспечивает широкое разнообразие методик введения, чем в противном случае было бы возможно для твердого или полутвердого геля. Одна методика, которую можно применять, заключается в распределении композиции в полости влагалища посредством аппликатора для жидкости, такого как шприц или трубка. Введенный объем композиции может составлять одну дозу или две или более доз. Хотя это не является обязательным требованием, композицию можно также стерилизовать перед введением. Стерилизацию можно выполнять с помощью любой методики, известной из уровня техники, такой как использование газа (например, этилeноксида), излучения (например, гамма) или нагревания (автоклавирование). Если требуется, композицию можно подвергать одной или более стадиям фильтрации перед стерилизацией для способствования удалению загрязнений.
Композиции по настоящему изобретению можно наносить на подходящую подложку, которую в свою очередь можно использовать для применения терапевтического средства у пользователя. Подходящие аппликаторы включают полотно, такое как тканевое полотно, полученное влажным формованием, или полотно, полученное суховоздушным формованием, марлю, ватный тампон, трансдермальный пластырь, емкость или держатель. Особенно предпочтительные аппликаторы включают волокнистые полотна, в том числе пригодные и непригодные для смывания в канализацию целлюлозные полотна и нетканые полотна из синтетического волокнистого материала. Пригодные полотна могут представлять собой таковые, полученные влажным формованием, суховоздушным формованием, полученные по технологии мелтблаун или спанбонд. Подходящий синтетический волокнистый материал включает полученный по технологии мелтблаун полиэтилен, полипропилен, coполимеры полиэтилена и полипропилена, двухкомпонентные волокна, в том числе полиэтилен или полипропилен, и т. п. Пригодные нетканые полотна могут представлять собой полотна, полученные по технологии мелтблаун, коформ, спанбонд, полотна, полученные суховоздушным формованием; нетканые материалы, полученные водоструйным скреплением, полотна, полученные по технологии спанлейс, скрепленные кардочесанные полотна.
В определенных вариантах осуществления, особенно в тех, в которых композицию наносят на полотно, может быть желательным, чтобы состав обеспечивал определенные физические свойства, такие как ощущение гладкости, смазываемости, нежирности; способность по меньшей мере частично переноситься с полотна на кожу пользователя; способность сохраняться на полотне при приблизительно комнатной температуре или способность быть совместимым со способом производства полотна. В определенных вариантах осуществления предпочтительно, чтобы по меньшей мере часть композиции переносилась с ткани на кожу пользователя при применении.
Композицию можно наносить на полотно во время формования полотна или после того, как полотно было сформовано и высушено, что часто называется обработкой вне производственной линии или постобработкой. Подходящие способы нанесения композиции на полотно включают способы, известные из уровня техники, такие как глубокая печать, флексографическая печать, распыление, WEKO™, нанесение с использованием щелевой экструзионной головки или электростатическое распыление. Одним особенно предпочтительным способом нанесения вне производственной линии является ротационная глубокая печать.
СПОСОБЫ ТЕСТИРОВАНИЯ
Протокол оценки терапевтического эффекта
Колонии L. crispatus и E. coli получали следующим образом. Колонию L. crispatus переносили в 7 мл бульона MRS и инкубировали анаэробно (с помощью контейнерной системы для создания анаэробных условий BD GasPak EZ с индикатором) при 37°C без встряхивания в течение 18—20 часов. Колонию E. coli переносили в 5 мл бульона TSB и инкубировали аэробно (встряхивание при 100 об./мин.) при 37°C в течение 18—20 часов.
7
8
8
9
Затем колонии инокулировали следующим образом. Бактериальные культуры осторожно встряхивали на вортексе, и 1 мл каждой культуры переносили в соответствующую микроцентрифужную пробирку на 2,0 мл, а затем центрифугировали в течение двух минут при 14500 об./мин. Культуральную надосадочную жидкость удаляли, и клеточный осадок повторно суспендировали в 1 мл 0,95% (вес/об. %) солевого раствора. Затем повторно суспендированную колонию центрифугировали в течение двух минут при 14500 об./мин., и надосадочную жидкость удаляли. В случае L. crispatus осадок повторно суспендировали в 1 мл 0,95% солевого раствора до достижения ~10—10КОЕ/мл. В случае E. coli осадок повторно суспендировали в 1 мл 0,95% солевого раствора до достижения ~10—10КОЕ/мл.
Среду получали следующим образом.
ТАБЛИЦА 1
Все ингредиенты из таблицы 1 объединяли и значение pH регулировали до 6,5. Затем среду автоклавировали в течение 20 минут при 125ºC. Для оценки эффекта различных сахаридов и органических кислот (указанных ниже в качестве источников углерода) получали следующие образцы.
ТАБЛИЦА 2
5
6
Пять миллилитров (5 мл) каждой среды переносили в пробирку для тестирования в двух повторностях для последующего инокулирования. Основную смесь L. crispatus и E. coli, полученную, как описано выше, получали в соотношении 1000:1. Каждую (5 мл) пробирку для тестирования инокулировали основной смесью с получением 10—10 общего значения КОЕ L. crispatus и 100—1000 общего значения КОЕ E. coli на пробирку.
Для получения отрицательного контроля одну пробирку встряхивали на вортексе, и 100 мкл удаляли для определения исходных концентраций клеток с помощью серийных разведений и высевания на чашки (2 чашки на разведение). L. crispatus отбирали на чашках с агаром MRS, инкубированных анаэробно при 37°C в течение двух дней. E. coli отбирали на чашках TSA, инкубированных аэробно при 37°C в течение одного дня. Совместные культуры инкубировали в анаэробном контейнере с BD GasPaks при 37°C в течение 36 часов.
Влияние источника углерода на соотношение L. crispatus и E. coli измеряли через 36 часов после инокулирования. Пробирку с совместными культурами встряхивали на вортексе, и 100 мкл удаляли для определения конечных концентраций клеток с помощью серийных разведений и высевания на чашки (2 чашки на разведение). L. crispatus отбирали на чашках с агаром MRS, инкубированных анаэробно при 37°C в течение двух дней. E. coli отбирали на чашках TSA, инкубированных аэробно при 37°C в течение одного дня.
ПРИМЕРЫ
Образцы по настоящему изобретению получали посредством добавления источника углерода, приведенного ниже в таблице 3. Затем измеряли терапевтический эффект состава с помощью вышеописанного анализа в разделе способов тестирования, представленном выше. Терапевтический эффект обобщен ниже в виде соотношения L. сrispatus и E. coli.
ТАБЛИЦА 3
С учетом изложенного выше описания и примеров настоящее изобретение предусматривает в первом варианте осуществления фармацевтическую композицию, содержащую одно терапевтическое средство, выбранное из группы, состоящей из изомальтулозы, мальтита, пуллулана, мальтотриозы, 2-дезокси-D-рибозы, 1-кестозы и эрлозы, и водный растворитель.
Настоящее изобретение дополнительно предусматривает во втором варианте осуществления композицию согласно первому варианту осуществления, характеризующуюся значением pH менее чем приблизительно 5,0.
Более того, настоящее изобретение предусматривает в третьем варианте осуществления композицию согласно первому или второму варианту осуществления, где терапевтическое средство составляет от приблизительно 0,1 до приблизительно 2,0 вес/об. %.
Настоящее изобретение также предусматривает в четвертом варианте осуществления композицию согласно любому из вариантов осуществления от первого до третьего, где композиция способствует росту L. crispatus относительно E. coli таким образом, что терапевтический эффект составляет более чем приблизительно 30. В еще одних других вариантах осуществления терапевтический эффект может составлять более чем приблизительно 100 и еще более предпочтительно более чем приблизительно 200, например, от приблизительно 200 до приблизительно 600.
Настоящее изобретение дополнительно предусматривает в пятом варианте осуществления композицию согласно любому из вариантов осуществления от первого до четвертого, где единственным источником углерода для способствования росту или активности лактобактерий in vivo является одно терапевтическое средство. В таких вариантах осуществления предпочтительно, чтобы композиция не содержала глюкозу, фруктозу, галактозу, маннозу, лактозу, лактулозу, микозу, целлобиозу, мелибиозу, мелитозу, декстрин, крахмал или гликоген.
Композиция согласно любому из вариантов осуществления от первого до пятого может быть составлена в виде жидкости, пасты или геля, характеризующихся значением pH, составляющим от приблизительно 3,0 до приблизительно 5,0, и содержащих от приблизительно 0,1 до приблизительно 2,0 вес/об. % терапевтического средства.
Настоящее изобретение также предусматривает в шестом варианте осуществления способ лечения бактериального вагиноза, вызванного Gardnerella vaginalis, при этом способ предусматривает местное введение во влагалище женщины, нуждающейся в этом, композиции согласно любому из вариантов осуществления от первого до пятого.
В еще одном варианте осуществления настоящее изобретение предусматривает способ усиления роста или активности лактобактерий in vivo, предусматривающий введение композиции согласно любому из вариантов осуществления от первого до пятого пациенту, нуждающемуся в этом.