МОСТИКОВЫЙ АНАЛИЗ НА ОСНОВЕ SPR ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ БИОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ МНОГОВАЛЕНТНЫХ МУЛЬТИСПЕЦИФИЧЕСКИХ МОЛЕКУЛ

D
D
1. Применение одновременного связывания двухвалентного биспецифического антитела с его первым и вторым антигеном в методе на основе поверхностного плазмонного резонанса или ELISA, в котором первый антиген иммобилизуют на твердой поверхности в качестве захватывающего реагента, и в котором двухвалентное биспецифическое антитело имеет величину k, характеризующую взаимодействие с первым антигеном, меньшую, чем величина k, характеризующая взаимодействие со вторым антигеном, для снижения воздействия функциональных мультимерных форм двухвалентного биспецифического антитела на результаты анализа методом на основе поверхностного плазмонного резонанса или ELISA.
2. Применение по п. 1, в котором твердая поверхность представляет собой чип для поверхностного плазмонного резонанса.
3. Применение по одному из пп. 1-2, в котором первый антиген представляет собой димер или тример, или тетрамер.
4. Применение по одному из пп. 1-2, в котором функциональный мультимер представляет собой функциональный димер.
D
D
D
D
5. Применение по одному из пп. 1-2, в котором величина k для сайта связывания, который имеет большую величину k, характеризующую взаимодействие с его антигеном, по меньшей мере в 1,1 раза выше величины k для сайта связывания двухвалентного биспецифического антитела, который имеет меньшую величину k.
D
6. Применение по п. 5, в котором величина k выше по меньшей мере в 10 раз.
D
7. Применение по п. 6, в котором величина kвыше по меньшей мере в 100 раз.
8. Способ определения присутствия функциональных мультимеров двухвалентного биспецифического антитела в образце, отличающийся тем, что осуществляют стадию, на которой
- сравнивают сигнал связывания, определенный для двухвалентного биспецифического антитела с помощью анализа, в котором первый антиген иммобилизуют и применяют для захвата двухвалентного биспецифического антитела, с сигналом связывания, определенным для двухвалентного биспецифического антитела с помощью того же самого анализа, в котором второй антиген иммобилизуют и используют для захвата двухвалентного биспецифического антитела,
где считают, что имеет место присутствие функциональных мультимеров двухвалентного биспецифического антитела, если определенные сигналы связывания различаются более чем на одно стандартное отклонение для проведенного анализа.
9. Способ по п. 8, в котором определение сигнала связывания для одновременного связывания двухвалентного биспецифического антитела с его первым и вторым антигенами основано на связывании двухвалентного биспецифического антитела с его вторым антигеном.
10. Способ по одному из пп. 8-9, в котором твердая поверхность представляет собой чип для поверхностного плазмонного резонанса.
11. Способ по одному из пп. 8-9, в котором первый антиген представляет собой димер или тример, или тетрамер.
12. Способ по одному из пп. 8-9, в котором функциональный мультимер представляет собой функциональный димер.