СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ ВЕЩЕСТВ И ИХ КОМПОЗИЦИЙ С ПРОТИВООПУХОЛЕВОЙ АКТИВНОСТЬЮ (ВАРИАНТЫ)

1. Способ выявления веществ и их композиций с противоопухолевой активностью, предусматривающий следующие стадии:
а) рассев клеток;
б) заражение клеток рекомбинантным репликативно-дефектным аденовирусом, кодирующим репортерный белок;
в) инкубацию зараженных клеток для наработки начального уровня репортерного белка;
г) добавление к клеткам испытуемого вещества или их композицией (опыт) или растворителя испытуемого вещества или их композиции (контроль);
д) инкубацию опытных и контрольных клеток;
е) определение уровня продукции репортерного белка в опытных и контрольных клетках;
ж) определение количества опытных и контрольных клеток;
з) нормирование уровней репортерного белка в опыте и контроле на соответствующее количество клеток;
е) сравнение уровней репортерного белка в опыте и контроле, причем увеличение уровня репортерного белка в опыте по сравнению с контролем означает, что испытуемое вещество или их композиция оказала воздействие на одну или несколько мишеней в клетках из числа протеинкиназы mTOR, топоизомераз I и II, гистон деацетилаз и неизвестных мишеней, в частности, ингибируемых соединениями LY294002 и LY303511, и обладает потенциальной противоопухолевой активностью.
2. Способ по п. 1, в котором клетки являются опухолевыми клетками человека или других млекопитающих.
3. Способ по п. 1, в котором клетки рассеиваются и анализ проводится в многолуночном, предпочтительно в 96-луночном, планшете.
4. Способ по п. 1, в котором в качестве репортерного белка, кодируемого рекомбинантным репликативно-дефектным аденовирусом, используется зеленый флуоресцентный белок EGFP.
5. Способ по п. 1, в котором уровень экспрессии репортерного гена может контролироваться внешними воздействиями, обеспечивающими изменение активности промотора, под контролем которого находится репортерный ген.
6. Способ по п. 5, в котором уровень экспрессии репортерного гена контролируется отвечающим на терациклин промотором, а сам аденовирус также кодирует зависимый от тетрациклина транскрипционный фактор.
7. Способ по п. 4, в котором измерение количества репортерного белка EGFP производится с помощью флуориметрии по количеству испускаемой флуоресценции на длине волны, близкой или совпадающей с 509 нм, при облучении клеток светом с длиной волны, близкой или совпадающей с 488 нм.
8. Способ по п. 1, в котором измерение количества клеток проводится путем измерения количества ДНК в клетках.
9. Способ по п. 8, в котором измерение количества ДНК для определения количества клеток проводится с использованием красителя Hoechst33342 и количество связавшегося с клеточной ДНК красителя определяется с помощью флуориметрии на длине волны, близкой или совпадающей с 486 нм, при облучении клеток светом с длиной волны, близкой или совпадающей с 361 нм.
10. Способ по п. 1, в котором в качестве репортерного белка используется один из флуоресцентных белков, и определение количества репортерного белка по интенсивности его флуоресценции проводится с помощью проточной цитофлуориметрии для каждой клетки.