ПОНИЖАЮЩАЯ РЕГУЛЯЦИЯ ЭКСПРЕССИИ ГЕНА С ПОМОЩЬЮ ИСКУССТВЕННЫХ микроРНК

1. Выделенный фрагмент нуклеиновой кислоты, включающий предшественник миРНК, причем указанный предшественник миРНК, по существу, соответствует дезоксирибонуклеотидной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 11, (i) где нуклеотиды 430-450 в SEQ ID NO: 11 замещены первой вариабельной нуклеотидной субпоследовательностью, размер которой варьирует от примерно 19 до примерно 30 нуклеотидов в зависимости от последовательности-мишени, экспрессия которой подлежит понижению, и (ii) кроме того, где нуклеотиды 244-264 в SEQ ID NO: 11 замещены второй вариабельной нуклеотидной субпоследовательностью, размер которой варьирует от примерно 19 до примерно 30 нуклеотидов, причем указанная вторая вариабельная нуклеотидная субпоследовательность способна гибридизоваться с первой вариабельной субпоследовательностью предшественника миРНК.
2. Рекомбинантная конструкция, включающая выделенный фрагмент нуклеиновой кислоты по п.1, функционально связанный, по меньшей мере, с одной регуляторной последовательностью.
3. Растительная клетка, включающая рекомбинантную конструкцию по п.2.
4. Растительная клетка по п.3, где растительная клетка является растительной клеткой однодольного растения.
5. Способ понижения экспрессии последовательности-мишени в растительной клетке, включающий:
(а) трансформацию, по меньшей мере, одной растительной клетки конструкцией нуклеиновой кислоты, включающей предшественник миРНК, причем указанный предшественник миРНК, по существу, соответствует дезоксирибонуклеотидной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 11, (i) где нуклеотиды 430-450 в SEQ ID NO: 11 замещены первой вариабельной нуклеотидной субпоследовательностью, размер которой варьирует от примерно 19 до примерно 30 нуклеотидов в зависимости от последовательности-мишени, экспрессия которой подлежит понижению, и (ii) кроме того, где нуклеотиды 244-264 в SEQ ID NO: 11 замещены второй вариабельной нуклеотидной субпоследовательностью, размер которой варьирует от примерно 19 до примерно 30 нуклеотидов, причем указанная вторая вариабельная нуклеотидная субпоследовательность способна гибридизоваться с первой вариабельной субпоследовательностью предшественника миРНК; и
(b) отбор той трансформированной растительной клетки (клеток), у которых уровень экспрессии той последовательности-мишени понижен по сравнению с уровнем экспрессии гена-мишени в растительной клетке дикого типа.
6. Способ по п.5, где растительная клетка является растительной клеткой однодольного растения.
7. Выделенный фрагмент нуклеиновой кислоты, включающий предшественник миРНК, причем указанный предшественник миРНК, по существу, соответствует дезоксирибонуклеотидной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 12, (i) где нуклеотиды 94-114 в SEQ ID NO: 12 замещены первой вариабельной нуклеотидной субпоследовательностью, размер которой варьирует от примерно 19 до примерно 30 нуклеотидов в зависимости от последовательности-мишени, экспрессия которой подлежит понижению, и (ii) кроме того, где нуклеотиды 163-183 в SEQ ID NO: 12 замещены второй вариабельной нуклеотидной субпоследовательностью, размер которой варьирует от примерно 19 до примерно 30 нуклеотидов, причем указанная вторая вариабельная нуклеотидная субпоследовательность способна гибридизоваться с первой вариабельной субпоследовательностью предшественника миРНК.
8. Рекомбинантная конструкция, включающая выделенный фрагмент нуклеиновой кислоты по п.7, функционально связанный, по меньшей мере, с одной регуляторной последовательностью.
9. Растительная клетка, включающая рекомбинантную конструкцию по п.8.
10. Растительная клетка по п.9, где растительная клетка является растительной клеткой однодольного растения.
11. Способ понижения экспрессии последовательности-мишени в растительной клетке, включающий:
(а) трансформацию, по меньшей мере, одной растительной клетки конструкцией нуклеиновой кислоты, включающей предшественник миРНК, причем указанный предшественник миРНК, по существу, соответствует дезоксирибонуклеотидной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 12, (i) где нуклеотиды 94-114 в SEQ ID NO: 12 замещены первой вариабельной нуклеотидной субпоследовательностью, размер которой варьирует от примерно 19 до примерно 30 нуклеотидов в зависимости от последовательности-мишени, экспрессия которой подлежит понижению, и (ii) кроме того, где нуклеотиды 163-183 в SEQ ID NO: 12 замещены второй вариабельной нуклеотидной субпоследовательностью, размер которой варьирует от примерно 19 до примерно 30 нуклеотидов, причем указанная вторая вариабельная нуклеотидная субпоследовательность способна гибридизоваться с первой вариабельной субпоследовательностью предшественника миРНК; и
(b) отбор той трансформированной растительной клетки (клеток), у которых уровень экспрессии последовательности-мишени понижен по сравнению с уровнем экспрессии гена-мишени в растительной клетке дикого типа.
12. Способ по п.11, где растительная клетка является растительной клеткой однодольного растения.
13. Выделенный фрагмент нуклеиновой кислоты, включающий предшественник миРНК, причем указанный предшественник миРНК, по существу, соответствует дезоксирибонуклеотидной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 13, (i) где нуклеотиды 53-73 в SEQ ID NO: 13 замещены первой вариабельной нуклеотидной субпоследовательностью, размер которой варьирует от примерно 19 до примерно 30 нуклеотидов в зависимости от последовательности-мишени, экспрессия которой подлежит понижению, и (ii) кроме того, где нуклеотиды 97-117 в SEQ ID NO: 13 замещены второй вариабельной нуклеотидной субпоследовательностью, размер которой варьирует от примерно 19 до примерно 30 нуклеотидов, причем указанная вторая вариабельная нуклеотидная субпоследовательность способна гибридизоваться с первой вариабельной субпоследовательностью предшественника миРНК.
14. Рекомбинантная конструкция, включающая выделенный фрагмент нуклеиновой кислоты по п.13, функционально связанный, по меньшей мере, с одной регуляторной последовательностью.
15. Растительная клетка, включающая рекомбинантную конструкцию по п.14.
16. Растительная клетка по п.15, где растительная клетка является растительной клеткой однодольного растения.
17. Способ понижения экспрессии последовательности-мишени в растительной клетке, включающий:
(a) трансформацию, по меньшей мере, одной растительной клетки конструкцией нуклеиновой кислоты, включающей предшественник миРНК, причем указанный предшественник миРНК, по существу, соответствует дезоксирибонуклеотидной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 13, (i) где нуклеотиды 53-73 в SEQ ID NO: 13 замещены первой вариабельной нуклеотидной субпоследовательностью, размер которой варьирует от примерно 19 до примерно 30 нуклеотидов в зависимости от последовательности-мишени, экспрессия которой подлежит понижению, и (ii) кроме того, где нуклеотиды 97-117 в SEQ ID NO: 13 замещены второй вариабельной нуклеотидной субпоследовательностью, размер которой варьирует от примерно 19 до примерно 30 нуклеотидов, причем указанная вторая вариабельная нуклеотидная субпоследовательность способна гибридизоваться с первой вариабельной субпоследовательностью предшественника миРНК; и
(b) отбор той трансформированной растительной клетки (клеток), чей уровень экспрессии последовательности-мишени понижен по сравнению с уровнем экспрессии гена-мишени в растительной клетке дикого типа.
18. Способ по п.17, где растительная клетка является растительной клеткой однодольного растения.
19. Выделенный фрагмент нуклеиновой кислоты, включающий предшественник миРНК, причем указанный предшественник миРНК, по существу, соответствует дезоксирибонуклеотидной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 14, (i) где нуклеотиды 110-130 в SEQ ID NO: 14 замещены первой вариабельной нуклеотидной субпоследовательностью, размер которой варьирует от примерно 19 до примерно 30 нуклеотидов в зависимости от последовательности-мишени, экспрессия которой подлежит понижению, и (ii) кроме того, где нуклеотиды 184-203 в SEQ ID NO: 14 замещены второй вариабельной нуклеотидной субпоследовательностью, размер которой варьирует от примерно 19 до примерно 30 нуклеотидов, причем указанная вторая вариабельная нуклеотидная субпоследовательность способна гибридизоваться с первой вариабельной субпоследовательностью предшественника миРНК.
20. Рекомбинантная конструкция, включающая выделенный фрагмент нуклеиновой кислоты по п.19, функционально связанный, по меньшей мере, с одной регуляторной последовательностью.
21. Растительная клетка, включающая рекомбинантную конструкцию по п.20.
22. Растительная клетка по п.21, где растительная клетка является растительной клеткой однодольного растения.
23. Способ понижения экспрессии последовательности-мишени в растительной клетке, включающий:
(a) трансформацию, по меньшей мере, одной растительной клетки конструкцией нуклеиновой кислоты, включающей предшественник миРНК, причем указанный предшественник миРНК, по существу, соответствует дезоксирибонуклеотидной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 14, (i) где нуклеотиды 110-130 в SEQ ID NO: 14 замещены первой вариабельной нуклеотидной субпоследовательностью, размер которой варьирует от примерно 19 до примерно 30 нуклеотидов в зависимости от последовательности-мишени, экспрессия которой подлежит понижению, и (ii) кроме того, где нуклеотиды 184-203 в SEQ ID NO: 14 замещены второй вариабельной нуклеотидной субпоследовательностью, размер которой варьирует от примерно 19 до примерно 30 нуклеотидов, причем указанная вторая вариабельная нуклеотидная субпоследовательность способна гибридизоваться с первой вариабельной субпоследовательностью предшественника миРНК; и
(b) отбор той трансформированной растительной клетки (клеток), у которых уровень экспрессии последовательности-мишени понижен по сравнению с уровнем экспрессии последовательности-мишени в растительной клетке дикого типа.
24. Способ по п.23, где растительная клетка является растительной клеткой однодольного растения.
25. Выделенный фрагмент нуклеиновой кислоты, включающий предшественник миРНК, причем указанный предшественник миРНК, по существу, соответствует дезоксирибонуклеотидной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 15, (i) где нуклеотиды 83-103 в SEQ ID NO: 15 замещены первой вариабельной нуклеотидной субпоследовательностью, размер которой варьирует от примерно 19 до примерно 30 нуклеотидов в зависимости от последовательности-мишени, экспрессия которой подлежит понижению, и (ii) кроме того, где нуклеотиды 172-192 в SEQ ID NO: 15 замещены второй вариабельной нуклеотидной субпоследовательностью, размер которой варьирует от примерно 19 до примерно 30 нуклеотидов, причем указанная вторая вариабельная нуклеотидная субпоследовательность способна гибридизоваться с первой вариабельной субпоследовательностью предшественника миРНК.
26. Рекомбинантная конструкция, включающая выделенный фрагмент нуклеиновой кислоты по п.25, функционально связанный, по меньшей мере, с одной регуляторной последовательностью.
27. Растительная клетка, включающая рекомбинантную конструкцию по п.26.
28. Растительная клетка по п.27, где растительная клетка является растительной клеткой однодольного растения.
29. Способ понижения экспрессии последовательности-мишени в растительной клетке, включающий:
(а) трансформацию, по меньшей мере, одной растительной клетки конструкцией нуклеиновой кислоты, включающей предшественник миРНК, причем указанный предшественник миРНК, по существу, соответствует дезоксирибонуклеотидной последовательности, изложенной в SEQ ID NO: 15, (i) где нуклеотиды 83-103 в SEQ ID NO: 15 замещены первой вариабельной нуклеотидной субпоследовательностью, размер которой варьирует от примерно 19 до примерно 30 нуклеотидов в зависимости от последовательности-мишени, экспрессия которой подлежит понижению, и (ii) кроме того, где нуклеотиды 172-192 в SEQ ID NO: 15 замещены второй вариабельной нуклеотидной субпоследовательностью, размер которой варьирует от примерно 19 до примерно 30 нуклеотидов, причем указанная вторая вариабельная нуклеотидная субпоследовательность способна гибридизоваться с первой вариабельной субпоследовательностью предшественника миРНК; и
(b) отбор той трансформированной растительной клетки (клеток), у которых уровень экспрессии последовательности-мишени понижен по сравнению с уровнем экспрессии последовательности-мишени в растительной клетке дикого типа.
30. Способ по п.29, где растительная клетка является растительной клеткой однодольного растения.