СТАБИЛЬНЫЕ ПОЛИПЕПТИДЫ, СВЯЗЫВАЮЩИЕСЯ С С5 КОМПЛЕМЕНТА ЧЕЛОВЕКА
STABLE POLYPEPTIDES BINDING WITH HUMAN C5 COMPLEMENT

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ
Настоящее изобретение относится к полипептидам, которые связываются с компонентом 5 комплемента человека (C5) и к применению таких полипептидов в терапии.
ПРЕДШЕСТВУЮЩИЙ УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
et al
et al
Белок С5 комплемента является центральным компонентом системы комплемента; основной части врожденной иммунной системы. Система комплемента представляет собой сложную систему иммунного надзора с многочисленными задачами в жестко контролируемых, разнородных процессах. Она функционирует в качестве первой линии иммунной защиты организма против инфекции другими организмами, а также при различении здоровых тканей организма от продуктов клеточного распада и апоптотических и некротических клеток. Более того, она вовлечена в выведение иммунных комплексов, регуляцию адаптивного иммунного ответа, инициацию регенерации тканей, ангиогенез, мобилизацию стволовых клеток и развитие центральной нервной системы (Woodruff . Mol Immunol 2011, 48 (14):1631-1642); Ricklin . Nat Immunol 2010, 11(9):785-795). Любое запускающее событие, например, ошибочная или неограниченная активация или недостаточная регуляция, которое нарушает точное равновесие активации и регуляции комплемента, может приводить к патологическим состояниям, включающим атаку собственных иммунных клеток организма, приводящую к обширному повреждению тканей.
Система комплемента состоит из приблизительно 30 белков. Существуют три пути для инициации комплемента; классический путь, в котором используется C1q для распознавания иммунных комплексов на поверхности клеток; лектиновый путь, который инициируется, когда маннозосвязывающий лектин (MBL) распознает некоторые сахара; и альтернативный путь, который самопроизвольно инициируется посредством гидролиза фактора 3 комплемента (C3), процесса, подавляемого некоторыми молекулами поверхности клеток млекопитающих, не присутствующих на инвазивных патогенах. Альтернативный путь также действует в качестве амплификационного шунта для системы комплемента. Все три пути сходятся на уровне C3. Расщепление C3 на C3a и C3b приводит к образованию конвертазы, которая, в свою очередь, расщепляет фактор 5 комплемента (C5) на C5a и C5b. C5a представляет собой очень мощный аттрактант различных иммунных клеток, в то время как C5b олигомеризуется с C6-9 с образованием поры, известной как мембраноатакующий комплекс (MAC), или, иногда, терминальный каскад комплемента (TCC). Активация системы комплемента приводит к ряду механизмов с целью нейтрализации патогена; образование MAC на поверхности клеток, таких как инвазивные бактерии, приводит к лизису, осаждение продуктов расщепления C3 и C4, C3b и C4b, способствует опсонизации, приводящей к фагоцитозу патогена макрофагами, и анафилатоксины, такие как C3a и C5a привлекают моноциты и нейтрофилы к участку активации, повышающе регулируют поверхностные маркеры, приводя к увеличенной иммунологической восприимчивости и к высвобождению цитокинов.
et al
et al.
C5 представляет собой 190-кДа гликопротеин, состоящий из 2 дисульфид-связанных полипептидных цепей, альфа и бета, с молекулярной массой, равной 115 и 75 кДа, соответственно (Tack . Biochem 1979, 18:1490-1497). Haviland  (J Immun 1991, 146: 362-368) построили полную последовательность кДНК про-С5 комплемента человека, которая предположительно кодирует 1676-аминокислотную про-молекулу, которая содержит 18-аминокислотный лидерный пептид и 4-аминокислотный линкер, разделяющий бета- и альфа- цепи (SEQ ID NO: 251). Поскольку C5 является общим для всех путей активации комплемента, блокирование C5 останавливает прогрессирование каскада независимо от стимулов и, таким образом, предотвращает повреждающие свойства терминальной активации комплемента, в то же время, оставляя иммунопротективные и иммунорегуляторные функции проксимального каскада комплемента незатронутыми.
et al
et al
et al
et al
et al.
et al.
et al
Ключевое значение системы комплемента в защите против патогенов, в целом, делает ее интересной мишенью для фармацевтического вмешательства. Это усиливается тем фактом, что многие мутации или ухудшенная регуляция комплемента вовлечены в различные заболевания и состояния. Последние включают увеличенную подверженность аутоиммунным заболеваниям, таким как системная красная волчанка (СКВ), где отложение иммунных комплексов приводит в действие классический путь (Manderson. Annu Rev Immunol 2004, 22:431-456). Дополнительно, мутации белков C1-C5 комплемента часто приводят в результате к СКВ или СКВ-подобным симптомам. Другие аутоиммунные заболевания с сильным включением системы комплемента представляют собой ревматоидный артрит (РА), где иммунные комплексы могут активировать комплемент в пораженном РА суставе, синдром Сегрена, дерматомиозит и другие управляемые аутоиммунными антителами заболевания, такие как синдром Гийена-Барре (GBS), синдром Фишера (Kaida . J. Neuroimmun 2010, 223:5-12), различные типы васкулита, системный склероз, легочный гемосидероз с гломерулонефритом (анти-БМК-нефрит) и антифосфолипидный синдром (APS) (Chen . J Autoimmun 2010, 34:J276-J286). Кроме того, ингибирование комплемента оказалось эффективным на животных моделях таких различных состояний, как периодонтит (Abe . J Immunol 2012, 189:5442-5448), заживление ран (Cazender  Clin Dev Immunol 2012, публикация в Интернете), опухолевый рост (Markiewski  Nat Immunol 2008, 9:1225-1235) и глазные болезни, такие как увеит и возрастная дегенерация желтого пятна (AMD) (Copland . Clin Exp Immunol 2009, 159:303-314).
E. coli
et al
et al
et al
et al
Антитела, нацеленные на С5 комплемента человека, известны из, например, WO 95/29697; WO 02/30985; и WO 2004/007553. Экулизумаб (Soliris™) представляет собой гуманизированное моноклональное антитело, направленное против белка C5, и предотвращает расщепление C5 на C5a и C5b. Было показано, что Экулизумаб является эффективным при лечении пароксизмальной ночной гемоглобинурии (ПНГ), редкого и иногда опасного для жизни заболевания крови, характеризуемого внутрисосудистой гемолитической анемией, тромбофилией и недостаточностью костного мозга, и разрешенным для данного показания. Экулизумаб был также недавно разрешен FDA для лечения атипичного гемолитического синдрома (АГС), редкого, но опасного для жизни заболевания, вызываемого потерей управления альтернативным путем комплемента, приводящей к сверхактивации, проявляющейся как тромботическая микроангиопатия (TMA), приводящая к постоянному риску повреждения жизненно важных органов, таких как почка, сердце и мозг. При АГС, трансплантация поврежденного органа только временно помогает пациенту, так как печень продолжает вырабатывать мутировавшую форму управляющего белка (наиболее часто, фактора комплемента H или других белков альтернативного пути). Родственным заболеванием с преходящей острой патофизиологией является HUS, вызываемое инфекцией положительной по токсину Шига  (STEC-HUS), и существуют обнадеживающие клинические данные, предполагающие эффективность действия также для этого состояния (Lapeyraque , N Engl J Med 2011, 364:2561-2563). Окончательно, C5-блокирующее антитело Экулизумаб оказалось эффективным при профилактике антитело-опосредованного отторжения (AMR) у реципиентов с почками, имеющими высокую степень несовпадения (Stegall, M. D. . Am J Transplant 2011, 11:2405-2413), и при лечении аутоиммунных нейропатий, таких как нейромиелит зрительного нерва и тяжелая миастения (Pittock . Lancet Neurol 2013, 12:554-562; Howard . Muscle Nerve 2013, 48:76-84).
Ornithodoros moubata
et al
Ornithodoros moubata
et al
et al
Помимо непроцессированных антител, одноцепочечные вариабельные фрагменты (scFV), миниантитела и аптамеры, нацеленные на C5, описаны в литературе. Эти ингибиторы С5 могут связываться с различными участками (эпитопами) на молекуле C5 и могут иметь различные механизмы действия. Например, в то время как Экулизумаб взаимодействует с C5 на некотором расстоянии от участка расщепления конвертазы, миниантитело Mubodina взаимодействует с участком расщепления C5. Ингибирующий белок C5 Ингибитора Комплемента  (OmCI, Nunn, M. A. . J Immunol 2005, 174:2084-2091) из мягкого клеща  предположительно связывается с дистальным концом супердомена CUB-C5d-MG8, который находится близко от участка расщепления конвертазы (Fredslund . Nat Immunol 2008, 9 (7):753-760). В отличие от трех белков, указанных выше, ингибирующих расщепление C5, моноклональное антитело TNX-558 связывается с эпитопом C5a, присутствующим как на интактном C5, так и высвобождаемом C5a без ингибирования расщепления C5. (Fung . Clin Exp Immunol 2003, 133 (2):160-169).
BM
C5-связывающие полипептиды, содержащие C5-связывающий мотив, раскрыты в Международной патентной заявке № PCT/SE2013/050139, опубликованной как WO 2013/126006. В частности, WO 2013/126006 раскрывает C5-связывающ мотив, , состоящий из аминокислотной последовательности
2
3
4
6
7
11
16
17
18
21
25
26
28
EXXXA XXEID XLPNL XXXQW XAFIX XLXD,
где, независимо друг от друга,
2
X выбирают из H, Q, S, T и V;
3
X выбирают из I, L, M и V;
4
X выбирают из A, D, E, H, K, L, N, Q, R, S, T и Y;
6
X выбирают из N и W;
7
X выбирают из A, D, E, H, N, Q, R, S и T;
11
X выбирают из A, E, G, H, K, L, Q, R, S, T и Y;
16
X выбирают из N и T;
17
X выбирают из I, L и V;
18
X выбирают из A, D, E, H, K, N, Q, R, S и T;
21
X выбирают из I, L и V;
25
X выбирают из D, E, G, H, N, S и T;
26
X выбирают из K и S; и
28
X выбирают из A, D, E, H, N, Q, S, T и Y.
Примеры конкретных C5-связывающих мотивов, как раскрыто ранее в WO 2013/126006, показаны как SEQ ID NO: 1-248 в настоящей патентной заявке.
in vivo
Из WO 2013/126006 известно, что такие дополнительные пептиды или полипептиды могут улучшать стабилизацию C5-связывающих полипептидов. Одним примером такого полипептида является альбумин-связывающий домен (ABD), показанный как SEQ ID NO: 250 в настоящем описании. Другие примеры подходящих альбумин-связывающих доменов раскрыты в WO 2009/016043 и WO 2012/004384. ABD-расширенный полипептид связывается с альбумином сыворотки , и выигрывает от его более длительного периода полужизни, который увеличивает суммарный период полужизни самого полипептида (см. например, WO 91/01743).
Дальнейшее обеспечение средствами со сравнимой C5-блокирующей активностью остается предметом значительного интереса в данной области. В частности, существует продолжающаяся потребность в молекулах, которые предотвращают концевой каскад комплемента, а также образование провоспалительной молекулы C5a. Большой интерес также представляет обеспечение областей применения таких молекул при лечении заболеваний.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ
Фиг. 1 иллюстрирует гель ДСН-ПААГ, где полосы представляют C5-связывающее соединение PSI0242 (SEQ ID NO: 249) (0) перед тестом на стабильность; и (2w) после 2-х недельного теста на стабильность.
Фиг. 2 представляет собой хроматограмму обращенно-фазовой ВЭЖХ PSI0242 (SEQ ID NO: 249) перед тестом на стабильность (сплошная линия) и после 2-х недельного теста на стабильность (пунктирная линия).
Фиг. 3 иллюстрирует гель ДСН-ПААГ, где первая дорожка содержит маркер размера SeeBlue 2P, и полосы представляют (0) первоначальные образцы; и (2w) образцы после 2-х недельного теста на стабильность. Фиг. 3A: SEQ ID NO: 249; Фиг. 3B: SEQ ID NO: 261; Фиг. 3C: SEQ ID NO: 262; Фиг. 3D: SEQ ID NO: 264.
Фиг. 4 представляет собой хроматограмму обращенно-фазовой ВЭЖХ C5-связывающего соединения (SEQ ID NO: 253) перед тестом на стабильность (сплошная линия) и после 2-х недельного теста на стабильность (пунктирная линия).
Фиг. 5 представляет собой хроматограмму обращенно-фазовой ВЭЖХ C5-связывающего соединения (SEQ ID NO: 264) перед тестом на стабильность (сплошная линия) и после 2-х недельного теста на стабильность (пунктирная линия).

Фиг. 6A-D показывает изображения гелей ДСН-ПААГ для сравнения исходных и модифицированных полипептидных вариантов (0) до и (2w) после 2-х недельного теста на стабильность. Маркер размера молекулы (Mw) представлял собой Novex предварительно окрашенный Sharp стандартный белок (216, 160, 110, 80, 60, 50, 40, 30, 20, 15, 10, 3,5 кДа). Фиг. 6A показывает гель с HER2-связывающими полипептидами, где дорожки показывают дорожку 1: Mw, дорожку 2: (0) Z02891 (SEQ ID NO: 272), дорожку 3: (2w) Z02891 (SEQ ID NO: 272), дорожку 4: Mw, дорожку 5: (0) Z17341 (SEQ ID NO: 273), дорожку 6: (2w) Z17341 (SEQ ID NO: 273), дорожку 7: (0) Z17342 (SEQ ID NO: 274), дорожку 8: (2w) Z17342 (SEQ ID NO: 274). Фиг. 6B представляет собой гель с PDGF-Rβ-связывающими полипептидами, где дорожки показывают: дорожку 1: Mw, дорожку 2: (0) Z15805 (SEQ ID NO: 275), дорожку 3: (2w) Z15805 (SEQ ID NO: 275), дорожку 4: Mw, дорожку 5: (0) Z17343 (SEQ ID NO: 276), дорожку 6: (2w) Z17343 (SEQ ID NO: 276), дорожку 7: (0) Z17344 (SEQ ID NO: 277), дорожку 8: (2w) Z17344 (SEQ ID NO: 277). Фиг. 6C показывает гель с FcRn-связывающими полипептидами, где дорожки показывают: дорожку 1: (0) Z10103 (SEQ ID NO: 278), дорожку 2: (2w) Z10103 (SEQ ID NO: 278), дорожку 3: Mw, дорожку 4: (0) Z17347 (SEQ ID NO: 279), дорожку 5: (2w) Z17347 (SEQ ID NO: 279), дорожку 6: (0) Z17348 (SEQ ID NO: 280), дорожку 7: (2w) Z17348 (SEQ ID NO: 280). Диагональные полосы, видимые на Фиг. 6C, представляют собой артефакт, являющийся результатом отпечатка от второго геля, окрашенного в том же контейнере. Фиг. 6D представляет собой гель с CAIX-связывающими полипептидами, где дорожки показывают дорожку 1:Mw, дорожку 2: (0) Z09782 (SEQ ID NO: 281), дорожку 3: (2w) Z09782 (SEQ ID NO: 281), дорожку 4: Mw, дорожку 5: (0) Z17351 (SEQ ID NO: 282), дорожку 6: (2w) Z17351 (SEQ ID NO: 282), дорожку 7: (0) Z17352 (SEQ ID NO:283), дорожку 8: (2w) Z17352 (SEQ ID NO:283); дорожку 9: (0) Z17355 (SEQ ID NO: 284), дорожку 10: (2w) Z17355 (SEQ ID NO: 284), дорожку 11: (0) Z17357 (SEQ ID NO: 285), дорожку 12: (2w) Z17357 (SEQ ID NO: 285), дорожку 13: (0) Z17359 (SEQ ID NO: 286), дорожку 14: (2w) Z17359 (SEQ ID NO: 286), дорожку 15: (0) Z17360 (SEQ ID NO: 287), дорожку 16: (2w) Z17360 (SEQ ID NO: 287).
Фиг. 7 представляет собой таблицу, показывающую аминокислотные последовательности:
- примеров C5-связывающих мотивов (SEQ ID NO: 1-248);
- C5-связывающего соединения, обозначенного PSI0242 (SEQ NO: 249);
- альбумин-связывающего домена (SEQ ID NO: 250);
- входа Свисса-Прота P01031 человеческого С5 (SEQ ID NO:251), где α-цепь соответствует аминокислотным остаткам 678-1676, и α-цепь соответствует аминокислотным остаткам 19-673;
- примеров модифицированных C5-связывающих полипептидов (SEQ ID NO: 260, 265-267).
- примеров модифицированных C5-связывающих соединений (SEQ ID NO: 252-259, 261-264, 268-270).
- примеров полипептидных вариантов с аффинностью связывания для других целевых молекул (SEQ ID NO: 272, 275, 278, 281)
- примеров полипептидных вариантов с улучшенной стабильностью с аффинностью связывания для других мишеней с (SEQ ID NO: 273-274, 276-277, 279-280, 282-287).
РАСКРЫТИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Неожиданно было обнаружено, что C5-связывающие полипептиды и соединения, в которых аминокислотные последовательности были модифицированы в конкретных положениях, имеет улучшенную стабильность по сравнению с ранее известными C5-связывающими полипептидами и соединениями.
Следовательно, данное изобретение предоставляет полипептид, способный к связыванию компонента 5 комплемента человека (C5), где указанный полипептид выбирают из:
(а) полипептида, содержащего аминокислотную последовательность
BM
42
43
46
52
53
54
[]-[L2]-QSXXLLXEAKKLXXXQ
где, независимо друг от друга,
BM
[] представляет собой С5-связывающий мотив;
[L2] выбирают из DDPS и RQPE;
42
X выбирают из A и S;
43
X выбирают из N и E;
46
X выбирают из A, S и C;
52
X выбирают из E, N и S;
53
53
X выбирают из D, E и S, при условии, что X не является
52
D, когда X представляет собой N; и
54
X выбирают из A и S; и
53
52
(b) полипептида, который имеет по меньшей мере 89% идентичности аминокислотной последовательности с полипептидом из (a), при условии, что X не является D, когда X представляет собой N.
52
53
Авторы изобретения неожиданно обнаружили, что модификация или замена аминокислотных остатка(остатков) в некоторых положении(положениях) аминокислотной последовательности C5-связывающих полипептидов, как описано в WO 2013/126006, улучшает стабильность C5-связывающих полипептидов, в то время, как биологическая активность, такая как аффинность связывания для компонента 5 комплемента человека (C5) и ингибирование функции пути комплемента, сохраняется по существу такой же. Таким образом, биологическая активность модифицированных C5-связывающих полипептидов является сравнимой с биологической активностью известных C5-связывающих полипептидов. Тестирование стабильности C5-связывающих полипептидов настоящего изобретения демонстрирует, что замена либо в X, от N до E или S, или X, от D до E, или S, улучшает стабильность. Кроме того, было обнаружено, что замена конкретной аминокислоты в [L2] независимо может стимулировать стабильность.
D
D
D
Термины “C5-связывание” и ”аффинность связывания для C5”, как используют в данном описании, относится к свойству полипептида, которое можно протестировать, например, посредством применения технологии поверхностного плазмонного резонанса, такой как в приборе Biacore (GE Healthcare). Аффинность С5-связывания, можно, например, тестировать в эксперименте, в котором C5 иммобилизуют на сенсорном чипе прибора Biacore, и образец, содержащий полипептид, подлежащий тестированию, пропускают над чипом. Альтернативно, полипептид, подлежащий тестированию, иммобилизуют на сенсорном чипе прибора, и образец, содержащий C5, или его фрагмент, пропускают над чипом. Квалифицированный специалист может затем интерпретировать результаты, полученные в таких экспериментах, чтобы установить по меньшей мере качественный показатель связывания полипептида с C5. Если желательным является количественный показатель, например, чтобы определить константу диссоциации кажущегося равновесия K для взаимодействия, также могут применяться методы поверхностного плазмонного резонанса. Значения связывания могут, например, определяться на приборе Biacore 2000 (GE Healthcare). C5 иммобилизуют на сенсорном чипе для измерения, и образцы полипептида, аффинность которого подлежит определению, готовят посредством серийного разведения и инъекционно вводят над чипом. Значения K могут затем быть рассчитаны на основании результатов с использованием, например, 1:1 модели связывания Лэнгмюра из программного обеспечения BIAevaluation, предоставляемого производителем прибора. C5 или его фрагмент, используемые при определении K, могут, например, содержать аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 251. Примеры того, как можно тестировать аффинность С5-связывания, приведены в настоящем описании, см. Примеры 3 и 5.
В предпочтительной форме изобретения, указанный полипептид выбирают из
(a) полипептида, содержащего аминокислотную последовательность
BM
42
43
46
52
53
54
AEAKYAK-[]-[L2]-QSXXLLXEAKKLXXXQAP
где, независимо друг от друга,
BM
42
43
46
52
53
54
[], [L2], X, X, X, X, X и X являются такими, как определено выше;
53
52
и (b) полипептида, который имеет по меньшей мере 90% идентичности аминокислотной последовательности с полипептидом из (a), при условии, что X не является D, когда X представляет собой N.
BM
Как раскрыто ранее в WO 2013/126006, C5-связывающий полипептид согласно изобретению может образовывать часть трехспирального пучка белкового домена. Указанный C5-связывающий мотив [] по существу может образовывать часть двух альфа спиралей, с взаимосвязывающей петлей, внутри указанного трехспирального пучка. Вторая взаимосвязывающая петля, именуемая в данном описании [L2], соединяет C5-связывающий мотив с третьей альфа-спиралью, именуемой “Остов”.
BM
В одном варианте осуществления, C5-связывающий мотив [] является по существу таким, как раскрыто в WO 2013/126006. Однако, согласно настоящему изобретению, C5-связывающий мотив предпочтительно состоит из 28, а не 29 аминокислот, и может дополнительно нести дополнительные замены аминокислот.
BM
BM
BM
Таким образом, в одном варианте осуществления, указанный [] несет по меньшей мере одну дополнительную замену аминокислоты, например в положении 17, по сравнению с [], как раскрыто в WO 2013/126006. Таким образом, указанный [] представляет собой полипептид, выбранный из:
(a) полипептида, содержащего аминокислотную последовательность
9
10
11
13
14
17
18
23
24
25
28
32
33
35
EXXXA XXEIDXXLPNLXXXQWXAFIXXLX;
где, независимо друг от друга,
9
X выбирают из H, Q, S, T и V;
10
X выбирают из I, L, M и V;
11
X выбирают из A, D, E, H, K, L, N, Q, R, S, T и Y;
13
X выбирают из N и W;
14
X выбирают из A, D, E, H, N, Q, R, S и T;
17
X выбирают из D и E;
18
X выбирают из A, E, G, H, K, L, Q, R, S, T и Y;
23
X выбирают из N и T;
24
X выбирают из I, L и V;
25
X выбирают из A, D, E, H, K, N, Q, R, S и T;
28
X выбирают из I, L и V;
32
X выбирают из A, D, E, G, H, N, S и T;
33
X выбирают из K и S;
35
X выбирают из A, D, E, H, N, Q, S, T и Y; и
(b) полипептида, который имеет по меньшей мере 85% идентичности аминокислотной последовательности с полипептидом из (a).
BM
BM
В предпочтительном варианте осуществления, C5-связывающий мотив [] является по существу таким, как раскрыто в WO 2013/126006. Указанный [] представляет собой, соответственно полипептид, выбранный из:
(a) полипептида, содержащего аминокислотную последовательность
9
10
11
13
14
18
23
24
25
28
32
33
35
EXXXA XXEIDXLPNLXXXQWXAFIXXLX;
где, независимо друг от друга,
9
X выбирают из H, Q, S, T и V;
10
X выбирают из I, L, M и V;
11
X выбирают из A, D, E, H, K, L, N, Q, R, S, T и Y;
13
X выбирают из N и W;
14
X выбирают из A, D, E, H, N, Q, R, S и T;
18
X выбирают из A, E, G, H, K, L, Q, R, S, T и Y;
23
X выбирают из N и T;
24
X выбирают из I, L и V;
25
X выбирают из A, D, E, H, K, N, Q, R, S и T;
28
X выбирают из I, L и V;
32
X выбирают из D, E, G, H, N, S и T;
33
X выбирают из K и S;
35
X выбирают из A, D, E, H, N, Q, S, T и Y; и
(b) полипептида, который имеет по меньшей мере 85% идентичности аминокислотной последовательности с полипептидом из (а).
BM
BM
В дополнительном предпочтительном аспекте, [] состоит из аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из положений 1-28 в SEQ ID NOS: 1-248 или содержащей ее. Более предпочтительно, [] состоит из аминокислотной последовательности, показанной в виде положений 1-28 в SEQ ID NO: 1, или содержит ее.
В дополнительном аспекте, C5-связывающий полипептид согласно изобретению выбирают из:
(a) полипептида, содержащего аминокислотную последовательность
9
10
11
13
14
17
18
23
24
25
28
32
AEAKYAKEXXXAXXEIXXLPNLXXXQWXAFIX
33
35
42
43
46
52
53
54
XLX-[L2]-QSXXLLXEAKKLXXXQAP;
где, независимо друг от друга,
9
X выбирают из H, Q, S, T и V;
10
X выбирают из I, L, M и V;
11
X выбирают из A, D, E, H, K, L, N, Q, R, S, T и Y;
13
X выбирают из N и W;
14
X выбирают из A, D, E, H, N, Q, R, S и T;
17
X выбирают из D и E;
18
X выбирают из A, E, G, H, K, L, Q, R, S, T и Y;
23
X выбирают из N и T;
24
X выбирают из I, L и V;
25
X выбирают из A, D, E, H, K, N, Q, R, S и T;
28
X выбирают из I, L и V;
32
X выбирают из A, D, E, G, H, N, S и T;
33
X выбирают из K и S;
35
X выбирают из A, D, E, H, N, Q, S, T и Y;
[L2] выбирают из DDPS и RQPE;
42
X выбирают из A и S;
43
X выбирают из N и E;
46
X выбирают из A, S и C;
52
X выбирают из E, N и S;
53
53
X выбирают из D, E и S, при условии, что X не является
52
D, когда X представляет собой N; и
54
X выбирают из A и S; и
53
52
(b) полипептида, который имеет по меньшей мере 90% идентичности аминокислотной последовательности с полипептидом из (а), при условии, что X не является D, когда X представляет собой N.
В предпочтительном варианте осуществления, C5-связывающий полипептид согласно изобретению выбирают из:
(a) полипептида, содержащего аминокислотную последовательность
9
10
11
13
14
18
23
24
25
28
32
33
35
42
43
46
52
53
54
AEAKYAKEXXXAXXEIDXLPNLXXXQWXAFIXXLX-[L2]-QSXXLLXEAKKLXXXQAP;
где, независимо друг от друга,
9
X выбирают из H, Q, S, T и V;
10
X выбирают из I, L, M и V;
11
X выбирают из A, D, E, H, K, L, N, Q, R, S, T и Y;
13
X выбирают из N и W;
14
X выбирают из A, D, E, H, N, Q, R, S и T;
18
X выбирают из A, E, G, H, K, L, Q, R, S, T и Y;
23
X выбирают из N и T;
24
X выбирают из I, L и V;
25
X выбирают из A, D, E, H, K, N, Q, R, S и T;
28
X выбирают из I, L и V;
32
X выбирают из D, E, G, H, N, S и T;
33
X выбирают из K и S;
35
X выбирают из A, D, E, H, N, Q, S, T и Y;
[L2] выбирают из DDPS и RQPE;
42
X выбирают из A и S;
43
X выбирают из N и E;
46
X выбирают из A, S и C;
52
X выбирают из E, N и S;
53
53
X выбирают из D, E и S, при условии, что X не является
52
D, когда X представляет собой N; и
54
X выбирают из A и S; и
53
52
(b) полипептида, который имеет по меньшей мере 90% идентичности аминокислотной последовательности с полипептидом из (а), при условии, что X не является D, когда X представляет собой N.
В предпочтительных формах изобретения, выполняется по меньшей мере одно из следующих восемнадцати, необязательно девятнадцати условий:
9
X представляет собой V,
10
X представляет собой L,
11
X представляет собой E,
13
X представляет собой W,
14
X представляет собой D,
17
необязательно X представляет собой D,
18
X представляет собой R,
23
X представляет собой T,
24
X представляет собой I,
25
X представляет собой E,
28
X представляет собой L,
32
Xпредставляет собой N,
33
X представляет собой K,
35
X представляет собой D,
[L2] представляет собой DDPS,
42
X представляет собой S,
43
X представляет собой E,
46
X представляет собой S,
54
X представляет собой S.
Более предпочтительно, выполняются по меньшей мере два, три, четыре, пять, шесть, семь, восемь, девять, десять, одиннадцать, двенадцать, тринадцать, четырнадцать, пятнадцать, шестнадцать, семнадцать, восемнадцать или девятнадцать из приведенных выше условий.
52
53
52
53
52
53
В варианте осуществления, X и X независимо выбирают из E и S. Предпочтительно, (a) X представляет собой S, и X представляет собой E, или (b) X представляет собой E, и X представляет собой S.
52
53
В варианте осуществления, X представляет собой S, и X представляет собой D.
52
53
В еще одном варианте осуществления, X представляет собой N, и X представляет собой E.
В дополнительном аспекте, полипептид согласно изобретению содержит аминокислотную последовательность, показанную как SEQ ID NO: 260, SEQ ID NO: 265, SEQ ID NO: 266 или SEQ ID NO: 267.
В дополнительном аспекте, предоставлено соединение, способное к связыванию C5, причем указанное соединение содержит:
(a) по меньшей мере один C5-связывающий полипептид, как определено выше;
(b) по меньшей мере один альбумин-связывающий домен стрептококкового белка G, или его производного; и
(с) необязательно, по меньшей мере один связывающий фрагмент для связывания указанного по меньшей мере одного альбумин-связывающего домена или его производного с C или N концом указанного по меньшей мере одного C5-связывающего полипептида.
Предпочтительно, указанный альбумин-связывающий домен содержит аминокислотную последовательность, показанную в виде SEQ ID NO: 250.
60
60
60
60
60
Предпочтительно, указанный связывающий фрагмент представляет собой пептид, содержащий аминокислотную последовательность KVXGS, где X выбирают из D, E и A. Когда X представляет собой D, предпочтительное соединение содержит аминокислотную последовательность, показанную как SEQ ID NO: 253 или состоит из нее. Когда X представляет собой E, предпочтительные соединения содержат аминокислотную последовательность, показанную как SEQ ID NO: 261, SEQ ID NO: 263, SEQ ID NO: 264, SEQ ID NO: 269 или SEQ ID NO: 270 или состоят из нее. Когда X представляет собой А, предпочтительное соединение содержит аминокислотную последовательность, показанную как SEQ ID NO: 262 или состоит из нее. В перечисленных выше аминокислотных последовательностях из C5-связывающих соединений, аминокислотные остатки 1-57 представляют аминокислотную последовательность C5-связывающего полипептида, остатки 58-62 представляют аминокислотную последовательность линкера, и остатки 63-108 представляют аминокислотную последовательность альбумин-связывающего домена.
В варианте осуществления, связывающий фрагмент отсутствует.
52
53
Как обсуждается выше, предпочтительные C5-связывающие полипептиды согласно изобретению включают такие полипептиды, где X и X независимо выбирают из E и S. Конкретно, соединения согласно изобретению могут являться производными PSI0242 (SEQ ID NO: 249), но имеют модификации по меньшей мере в одном из положений 52, 53 и 60. Например, как показано на Фиг. 7 и в списке последовательностей, предпочтительное соединение, обозначенное PSI0378 (SEQ ID NO: 261), несет замены аминокислот N52S, D53E и D60E; предпочтительное соединение, обозначенное PSI0379 (SEQ ID NO: 262), несет замены аминокислот N52S, D53E и D60A; предпочтительное соединение, обозначенное PSI0381 (SEQ ID NO: 263), несет замены аминокислот N52E, D53S и D60E; и предпочтительное соединение, обозначенное PSI0383 (SEQ ID NO: 264) несет замены аминокислот N52S, D53E и D60E. Дополнительно, SEQ ID NO: 264 также несет замены в петле [L2], а именно, D36R, D37Q и S39E. Кроме того, предпочтительное соединение, обозначенное PSI0403 (SEQ ID NO: 269), несет замены аминокислот D53E и D60E, и предпочтительное соединение, обозначенное PSI0404 (SEQ ID NO: 270), несет замены аминокислот N52S и D60E.
in vitro
52
53
60
С учетом вышеуказанного, авторы изобретения неожиданно обнаружили, что замены аминокислот в некоторых положениях аминокислотной последовательности C5-связывающих полипептидов, как описано в WO 2013/126006, могут улучшать стабильность. Такие замены улучшают стабильность C5-связывающих соединений, в то время как биологическая активность, такая, как способность к связыванию С5 и ингибирование гемолиза , сохраняется. Тестирование стабильности C5-связывающих соединений настоящего изобретения демонстрирует, что, например каждая из N52S (X) и D53E (X) (SEQ ID NO: 253) индивидуально, а также удаление D60 (X) (SEQ ID NO: 259 без связывающего фрагмента) улучшает стабильность. Комбинация замен N52S, D53E и D60E или D60A дополнительно улучшает стабильность (SEQ ID NO: 261 и SEQ ID NO: 262). Аналогично, было обнаружено, что каждая из комбинированных замен N52S и D60E (SEQ ID NO: 270) и D53E и D60E (SEQ ID NO: 269), улучшает стабильность. Это указывает на то, что каждая из перечисленных замен аминокислот включена в улучшение стабильности полипептида, и таким образом, что каждая из этих замен будет обеспечивать дополнительно стабилизированные C5-связывающие полипептиды и соединения в сравнении с ранее известными C5-связывающими полипептидами и соединениями.
in vivo
in vitro
Однако квалифицированный специалист сможет идентифицировать полипептиды и/или соединения, которые имеют модификации по меньшей мере в одном из положений 52, 53 и 60 и/или в петле [L2], но которые также несут дополнительные модификации, такие как замены, небольшие делеции, вставки или инверсии, и, тем не менее, имеют по существу раскрытые биологические активности и улучшенную стабильность. Дополнительно, C5-связывающий полипептид и/или соединение согласно изобретению могут содержать дополнительные C-концевые и/или N-концевые аминокислоты, которые улучшают получение, очистку, стабилизацию или, сочетание или обнаружение полипептида.
В дополнительном аспекте изобретения, предоставлено соединение, способное к связыванию C5, причем указанное соединение содержит:
a. по меньшей мере один C5-связывающий полипептид, где указанный полипептид выбирают из:
a-1. полипептида, содержащего аминокислотную последовательность
BM
42
43
46
52
53
54
[]-[L2]-QSXXLLXEAKKLXXXQ
где, независимо друг от друга,
BM
[] представляет собой С5-связывающий мотив;
[L2] выбирают из DDPS и RQPE;
42
X выбирают из A и S;
43
X выбирают из N и E;
46
X выбирают из A, S и C;
52
X выбирают из E, N и S;
53
X выбирают из D, E и S;
54
X выбирают из A и S; и
a-2. полипептида, который имеет по меньшей мере 89% идентичности аминокислотной последовательности с полипептидом из a-1.;
b. по меньшей мере один альбумин-связывающий домен стрептококкового белка G, или его производного; и
c. по меньшей мере один связывающий фрагмент для связывания указанного по меньшей мере одного альбумин-связывающего домена или его производного с C- или N-концом указанного по меньшей мере одного C5-связывающего полипептида; где связывающий фрагмент содержит KVEGS или KVAGS или состоит из них; или, где указанный связывающий фрагмент отсутствует.
60
52
53
Было обнаружено, что удаление D60 или замена аминокислоты в положении 60 SEQ ID NO: 249 по отдельности улучшает стабильность C5-связывающих соединений изобретения в сравнении с ранее известными C5-связывающими соединениями. Предпочтительно, связывающий фрагмент представляет собой KVEGS (X=E), в то время как XX может являться ND, и примером предпочтительного соединения, несущего такой связывающий фрагмент, является PSI0410 (SEQ ID NO: 268). В еще одном предпочтительном варианте осуществления, D60 и полный связывающий фрагмент отсутствуют, и примером такого соединения является предпочтительное соединение, обозначенное PSI0369 (SEQ ID NO: 259).
BM
В вариантах осуществления вышеуказанного аспекта, [] и альбумин-связывающий домен являются такими, как определено выше в соответствующих аспектах. Предпочтительно, [L2] представляет собой DDPS.
В дополнительном аспекте, предоставлено соединение, способное к связыванию C5, причем указанное соединение содержит:
a. по меньшей мере один C5-связывающий полипептид, где указанный полипептид выбирают из:
a-1. полипептида, содержащего аминокислотную последовательность
BM
42
43
46
52
53
54
[]-[L2]-QSXXLLXEAKKLXXXQ
где, независимо друг от друга,
BM
[] представляет собой С5-связывающий мотив;
[L2] представляет собой RQPE;
42
X выбирают из A и S;
43
X выбирают из N и E;
46
X выбирают из A, S и C;
52
X выбирают из E, N и S;
53
X выбирают из D, E и S;
54
X выбирают из A и S; и
a-2. полипептида, который имеет по меньшей мере 89% идентичности аминокислотной последовательности с полипептидом из a-1.;
b. по меньшей мере одного альбумин-связывающего домена стрептококкового белка G или его производного; и
c. необязательно, по меньшей мере одного связывающего фрагмента для связывания указанного по меньшей мере одного альбумин-связывающего домена или его производного с C- или N- концом указанного по меньшей мере одного C5-связывающего полипептида.
BM
60
60
Было обнаружено, что замена конкретных аминокислот в петле [L2] улучшает стабильность C5-связывающих соединений (например SEQ ID NO: 252) изобретения в сравнении с ранее известными C5-связывающими соединениями. В вариантах осуществления вышеуказанного аспекта, указанные [] и альбумин-связывающий домен представлены индивидуально, как определено выше в соответствующих аспектах. Предпочтительно, указанный связывающий фрагмент представляет собой пептид, содержащий аминокислотную последовательность KVXGS, где X выбирают из D, E и A.
Изобретение включает полинуклеотиды, которые кодируют полипептиды согласно изобретению. Дополнительно включенными в изобретение являются векторы, такие как векторы экспрессии, содержащие полинуклеотиды, которые кодируют полипептиды согласно изобретению. Включены также клетки-хозяева, которые содержат такие векторы.
Включенными в изобретение являются C5-связывающие полипептиды и соединения, описанные выше, для применения в терапии. В частности, C5-связывающие полипептиды и соединения согласно изобретению являются применимыми в способах лечения и/или профилактики состояний, ассоциированных с С-5, таких как воспалительные заболевания; аутоиммунные заболевания; инфекционные заболевания; сердечно-сосудистые заболевания; нейродегенеративные заболевания; повреждение трансплантата; болезни глаз; болезни почек; заболевания легких; гематологические заболевания, такие как пароксизмальная ночная гемоглобинурия (ПНГ); аллергические заболевания и дерматологические заболевания.
В способах лечения и/или профилактики, указанные C5-связывающий полипептид или соединение предпочтительно могут вводиться внутривенно, подкожно, путем ингаляции, назально, перорально, интравитреально или местно.
ПРИМЕРЫ
ПРИМЕР 1
Тест на стабильность известного ингибитора C5
:
C5-связывающее соединение, обозначенное PSI0242 (SEQ ID NO: 249) составляли в 25 мМ NaP/125 мМ NaCl pH 7,0 и подвергали ускоренному исследованию на стабильность в течение 2 недель при 37°C. Стабильность измеряли при появлении новых вариантов после тестирования стабильности посредством ДСН-ПААГ и обращенно-фазовой ВЭЖХ (ОФХ). При обоих анализах первоначальный образец и образец, подвергаемый исследованию на стабильность, анализировали параллельно. Для ДСН-ПААГ, 7,5 мкг белка загружали в каждую лунку. ОФХ проводили на ВЭЖХ Agilent 1100, используя подвижную фазу A, состоящую из 0,1% трифторуксусной кислоты (ТФУ) в воде, и используя подвижную фазу B, состоящую из 0,1% ТФУ/45% MeOH/45% изопропиламина (ИПА)/10% воды.
Результаты показывают, что новые формы белка образуются во время инкубации, причем эти новые формы визуализируются в виде полос на ДСН-ПААГ (Фиг. 1) и в виде новых пиков на хроматограммах обращенно-фазовой ВЭЖХ (ОФХ) (Фиг. 2). На Фиг. 2, основной пик после 2 недель инкубации соответствует 57% образца исходного белка.
Положения 1-60 в SEQ ID NO: 249 соответствуют полипептиду Z06175a, ранее раскрытому в WO 2013/126006 в виде SEQ ID NO: 753. PSI0242 (SEQ ID NO: 249) был получен по существу, как раскрыто в WO 2013/126006.
ПРИМЕР 2: Стабильность модифицированных C5-связывающих полипептидов и соединений
Модифицированные C5-связывающие полипептиды и соединения синтезировали и очищали по существу так, как описано в WO 2013/126006.
E. coli
E. coli
Вкратце, ДНК, кодирующая C5-связывающие Z варианты, представляла собой кодон, оптимизированный и синтезированный в GeneArt, GmbH. Синтетические гены, представляющие C5-связывающие Z варианты, субклонировали и экспрессировали в.
Экспрессированные внутриклеточно Z варианты очищали, используя общепринятые хроматографические методы. Гомогенизацию и осветление выполняли посредством обработки ультразвуком с последующими центрифугированием и фильтрацией. Анионо-обменную хроматографию применяли как стадию захвата. Дополнительную очистку проводили посредством хроматографии с гидрофобным взаимодействием. Очистку выполняли в кислой среде (pH 5,5). Обессоливание и буферный обмен выполняли посредством эксклюзионной хроматографии.
Очищенные белки составляли в 25 мМ NaP/125 мМ NaCl pH 7,0 и подвергали ускоренному исследованию на стабильность в течение 2 недель при 37°C. Стабильность измеряли по появлению новых вариантов после тестирования стабильности посредством ДСН-ПААГ и обращенно-фазовой ВЭЖХ (ОФХ). При обоих анализах первоначальный образец и образец, подвергаемый исследованию на стабильность, анализировали параллельно. Для ДСН-ПААГ, 7,5 мкг белка загружали в каждую лунку. Пример полученного в результате геля показан на Фиг. 3.
ОФХ проводили на ВЭЖХ Agilent 1100, используя подвижную фазу A, состоящую из 0,1% трифторуксусной кислоты (ТФУ) в воде, и подвижную фазу B, состоящую из 0,1% ТФУ/45% MeOH/45% изопропиламина (ИПА)/10% воды. Пример полученной в результате хроматограммы показан на Фиг. 4 для SEQ ID NO: 253.
Результаты тестирования стабильности обобщены в Таблице I, ниже.
<b>Таблица I</b>
SEQ ID NO:
Название
ДСН-ПААГ полосы
ОФХ пред-пики
Основной пик (% общего белка)
ОФХ после-пики
249
PSI0242
2
2
57
1
252
PSI0332
2
1
57
1
253
PSI0334
1
1
73
0
254
PSI0335
2
2
57
1
255
PSI0336
2
2
57
1
256
PSI0337
2
2
57
1
257
PSI0339
2
2
57
1
258
PSI0340
2
2
67
1
259
PSI0369
2
1
90
1
260
PSI0377
1
0
77
0
261
PSI0378
1
0
89
0
262
PSI0379
1
0
88
0
263
PSI0381
1
0
87
0
264
PSI0383
1
0
91
0
267
PSI0400
1
0
91
0
268
PSI0410
1
1
72
1
269
PSI0403
1
1
77
1
270
PSI0404
1
1
88
0
На основании данных Таблицы I можно сделать вывод, что некоторые модифицированные C5-связывающие полипептиды или соединения имеют улучшенные свойства, такие как увеличенная стабильность, при сравнении с PSI0242. Такие улучшенные C5-связывающие полипептиды или соединения включают PSI0334 (SEQ ID NO: 253), PSI0340 (SEQ ID NO: 258), PSI0369 (SEQ ID NO: 259), PSI0377 (SEQ ID NO: 260), PSI0378 (SEQ ID NO: 261), PSI0379 (SEQ ID NO: 262), PSI0381 (SEQ ID NO: 263), PSI0383 (SEQ ID NO: 264), PSI0400 (SEQ ID NO: 267), PSI0410 (SEQ ID NO: 268), PSI0403 (SEQ ID NO: 269) и PSI0404 (SEQ ID NO: 270). В шести из указанных вариантов (SEQ ID NO: 253, 260, 261, 262, 264 и 267), аминокислотные остатки в положениях 52-53 были заменены с ND (см. PSI0242) на SE. В SEQ ID NO: 263, соответствующей заменой является с ND на ES. В SEQ ID NO: 269 только аминокислотный остаток в положении 53 был заменен с D на E, в то время как в SEQ ID NO: 270 аминокислотный остаток в положении 52 был заменен с N на S.
Дополнительно, PSI0378 (SEQ ID NO: 261), PSI0381 (SEQ ID NO: 263), PSI0383 (SEQ ID NO: 264), PSI0410 (SEQ ID NO: 268), PSI0403 (SEQ ID NO: 269) и PSI0404 (SEQ ID NO: 270), имеют, в общем, замену аминокислотного остатка D на E в положении 60.
Комбинированный благоприятный эффект от увеличивающих стабильность замен в положении 52 или 53 и положении 60 можно видеть на Фиг. 5, показыващей хроматограмму PSI0383 (SEQ ID NO: 264). В PSI0379 (SEQ ID NO: 262) заменой в положении 60 является замена D на A.
В PSI0369 (SEQ ID NO: 259) линкерный фрагмент (включающий D60) удаляют полностью, получая более стабильное C5-связывающее соединение, что указывает на влияние положения 60 на стабильность C5-связывающих соединений.
ПРИМЕР 3: Связывание модифицированных соединений с человеческим C5
го
Человеческий сывороточный альбумин иммобилизовали на аминореакционноспособных биосенсорах 2 поколения типа Dip и Read (AR2G) (Pall Life sciences (ForteBio) Кат # 18-5092) посредством сочетания амина. PSI0242 (SEQ ID NO: 249; 1 мкМ) и C5-связывающие соединения (1 мкМ) в буфере считывания (HBS-EP Буфер готовый к применению 200 мл, GE Healthcare #BR100188) загружали, каждый на поверхность отдельного сенсора, с использованием HSA, в течение 120 секунд с последующей регистрацией базовой линии в течение 60 секунд в буфере считывания перед подверганием воздействию человеческого C5 (Quidel Кат. # 403) в концентрациях в интервале от 0,79 нМ до 25 нМ в буфере считывания с циклом регенерации и регистрацией базовой линии между каждой концентрацией. Условия регенерации для сенсоров представляли собой 10 мМ Глицин, pH 2 (три импульса по 30 секунд и подвижный буфер в течение 60 секунд). Проводили вычитание эталонной спектрограммы, полученной для аналогичной конструкции, содержащей альбумин-связывающий домен (SEQ ID NO: 250), но не имеющей C5-связывающей способности. Данные анализировали в соответствии с моделью Лэнгмюра 1:1, используя ForteBio Analysis 7.1 (программное обеспечение для кинетики от Pall Life sciences (ForteBio)).
D
D
K взаимодействия с C5 относительно PSI0242 (SEQ ID NO: 249) показана в Таблице II. K PSI0242 варьировала от 1-3 нМ в различных сериях.
Результаты в Таблице II указывают на то, что C5-связывающие соединения согласно изобретению имеют способность к связыванию с человеческим С5, которая является аналогичной такой способности полипептида PSI0242 (SEQ ID NO: 249), раскрытого в WO 2013/126006.
<b>Таблица II</b>
SEQ ID NO:
Название
Отн. K<sub>D</sub>
249
PSI0242
1,0
253
PSI0334
1,1
261
PSI0378
1,3
263
PSI0381
23
264
PSI0383
2,1
ПРИМЕР 4: Стабильность химически синтезированного C5-связывающего полипептида
Химически синтезированный PSI0400 (SEQ ID NO: 267) был получен по заказу от BACHEM AG. Стабильность полипептида тестировали в соответствии с такой же методологией, как в Примере 2. Результаты тестирования стабильности показаны в Таблице III.
<b>Таблица III</b>
SEQ ID NO:
Название
ДСН-ПААГ полосы
ОФХ пред-пики
Основной пик(% от общего белка)
ОФХ после-пики
267
PSI0400
1
0
91
0
E.coli
Стабильность PSI0400 была сравнимой со стабильностью полипептидов, которые продуцировались в  в Примере 2.
Целостность складки PSI0400 (SEQ ID NO: 267) сравнивали с целостностью C5-связывающего полипептида (PSI0257, SEQ ID NO: 271), полученного в соответствии с методами Примера 2, используя спектры кругового дихроизма в дальней УФ-области (КД).
4
Спектры CD регистрировали на КД-спектрополяриметре J-720 (Jasco, Japan). Образцы разбавляли до концентрации белка 0,17 мг/мл, используя Pi буфер (5 мМ Na-K-PO, pH 7.0). Сначала записывали спектр КД Pi-буфера, затем спектры записывали для каждого из образцов и окончательно снова для Pi-буфера. Так как два спектра буфера совпадали, первоначально записанный спектр применяли в качестве спектра буфера. Спектр буфера сглаживали, применяя методику Савицкого-Голэя с шириной свертки, равной 25. Другие спектры сглаживали в соответствии с такой же методикой с шириной свертки, равной 15. Сглаженный спектр буфера затем вычитали из каждого другого сглаженного спектра. Программу CDNN применяли для оценки вторичного содержимого белков, и полученные в результате оценки представлены в Таблице IV. Результаты показали, что ни две замены аминокислот в положении 52 и 53, ни получение полипептида посредством химического синтеза не влияют на содержимое вторичной структуры химически синтезированного полипептида. Целостность содержания вторичной структуры сравнивали с рекомбинантно полученным PSI0257 (SEQ ID NO: 271).
<b>Таблица IV</b>
SEQ ID NO: 271
SEQ ID NO: 267
Спираль
63%
69%
Антипараллельная
3%
2%
Параллельная
3%
3%
Бета-изгиб
13%
12%
Беспорядочная Спираль
13%
11%
ПРИМЕР 5: Связывание модифицированных соединений и полипептидов с человеческим C5
D
Аффинность связывания C5-связывающих соединений PSI0242 (SEQ ID NO: 249), PSI0340 (SEQ ID NO: 258), PSI0378 (SEQ ID NO: 261), и PSI0410 (SEQ ID NO: 268) и C5-связывающего полипептида PSI0400 (SEQ ID NO: 267) для человеческого C5 анализировали, используя прибор Biacore T200 (GE Healthcare). Человеческий C5 (A403, Quidel Corporation) сочетали с сенсорным чипом CM5 (900 RU), используя химическую реакцию сочетания с аминной группой, в соответствии с протоколом изготовителя. Сочетание выполняли посредством инъекционного ввода hC5 при концентрации, равной 7,5 мкг/мл в 10 мМ Na-ацетатного буфера с pH=5 (GE Healthcare). Элемент сравнения обрабатывали таким же реагентом, но без инъекции человеческого C5. Связывание связующих для C5 с иммобилизованным hC5 исследовали с помощью метода кинетики с одним циклом, в котором пять концентраций образца, обычно, 25, 12,5, 6,25, 3,12 и 1,56 нМ в HBS-EP буфере (10 мМ HEPES pH 7,4, 150 мМ NaCl, 3 мМ ЭДТА, 0,005% ПАВ P20, GE Healthcare) инъекционно вводили один за другим при скорости потока, равной 30 мкл/мин при 25°C в том же самом цикле без регенерации между инъекциями. Данные, полученные от элемента сравнения, вычитали, чтобы скомпенсировать объемные изменения показателя преломления. В большинстве случаев, инъекцию HBS-EP также включали в качестве контроля, таким образом, чтобы сенсограммы были скомпенсированы дважды. Поверхности регенерировали в HBS-EP буфере. Кинетические константы рассчитывали по сенсограммам, используя аналит-модель Лэнгмюра 1:1 из программного обеспечения оценки для Biacore T200, версия 1.0. Полученные в результате значения K взаимодействий представлены в Таблице V.
<b>Таблица V</b>
SEQ ID NO:
Название
K<sub>D</sub> (нМ)
249
PSI0242
1,3
258
PSI0340
2,5
261
PSI0378
2,1
267
PSI0400
0,53
268
PSI0410
1,3
Увеличивающие стабильность замены аминокислот не являются неблагоприятными для способности молекул связываться с C5, и, таким образом, не влияют на их биологические активности.
ПРИМЕР 6: Ингибирование гемолиза
Для исследований функции классического пути комплемента и его ингибирования посредством C5-связывающих соединений PSI0378 (SEQ ID NO: 261) и PSI0410 (SEQ ID NO: 268), и C5-связывающего полипептида PSI0400 (SEQ ID NO: 267), бараньи эритроциты получали из свежей цельной крови баранов в растворе Олсвера (Национальный Ветеринарный Институт Швеции) и затем обрабатывали кроличьей антисывороткой против бараньих эритроцитов (Sigma), чтобы получить сенсибилизированные антителами бараньи эритроциты (EA). Весь процесс проводили в асептических условиях. Все другие реагенты получали из коммерческих источников.
in vitro
2
2
3
Аналитический тест проводили в 96-луночном U-образном микротитрационном планшете посредством последовательных добавлений тестируемого белка, сыворотки комплемента и суспензии EA. Конечные концентрации всех реагентов, в полном реакционном объеме, равном 50 мкл на лунку и при pH 7,3-7,4, составляли: 0,15 мМ CaCl; 0,5 мМ MgCl; 3 мМ NaN; 138 мМ NaCl; 0,1% желатина; 1,8 мМ натрия барбитала; 3,1 мМ барбитуровой кислоты; 5 миллионов EA; белок С5 сыворотки комплемента при подходящем разведении и C5-связывающее соединение или полипептид при желательных концентрациях.
C5-связывающие соединения и полипептид предварительно инкубировали с описанной выше сывороткой комплемента в течение 20 мин на льду перед началом реакции посредством добавления суспензии EA. Гемолитическую реакцию проводили при 37°C при встряхивании в течение 45 мин и затем необязательно заканчивали добавлением 100 мкл ледяного физраствора, содержащего 0,02% Твина 20. Клетки центрифугировали до полного осаждения, и верхнюю часть, соответствующую 100 мкл супернатанта, переносили в прозрачный микропланшет, имеющий плоскодонные лунки с половинным объемом. Результаты реакции анализировали по оптической плотности, используя считывающее устройство для микротитрационных планшетов при длине волны, равной 415 нм.
Во всех случаях тестирования, контрольный образец (PSI0242,SEQ ID NO: 249) и несущую среду включали в каждый планшет для определения значений для неингибированных и полностью ингибированных реакций, соответственно. Эти значения применяли для расчета% ингибирования гемолиза комплемента при любой данной концентрации образца. Ингибиторные активности (IC50-значения) тестируемых C5-связывающих соединений и полипептида определяли, применяя такой же аналитический тест в присутствии контролируемой концентрации человеческого С5, добавленного к сыворотке, лишенной C5. Для высокоактивных ингибиторов (от низких наномолярных до субнаномолярных), конечную концентрацию C5 в реакционной смеси контролировали при 0,1 нМ, которую необязательно устанавливали, используя сыворотку, лишенную C5, или с недостатком С5. Результаты представлены ниже в Таблице VI.
<b>Таблица VI</b>
SEQ ID NO:
Название
Активность (%)
IC<sub>50</sub> (нМ)
249
PSI0242
100
0,47
261
PSI0378
83
0,58
267
PSI0400
-
4
268
PSI0410
107
0,49
Результаты аналитического теста на гемолиз показывают, что улучшенные C5-связывающие соединения SEQ ID NO: 261 и 268 являются сравнимыми с эталонным соединением. C5-связывающий полипептид SEQ ID NO: 267 был функциональным в аналитическом тесте, но поскольку он не содержит альбумин-связывающий домен, результаты не могут напрямую сравниваться с эталонным соединением.
ПРИМЕР 7: Связывание с человеческим альбумином
Для оценки аффинности связывания C5-связывающих соединений для альбумина, применяли ELISA с человеческим альбумином с использованием рекомбинантного человеческого альбумина (покрытие) и доступных для приобретения антител (первичных и обнаруживающих), приобретенных от Novozymes, Affibody AB и DakoCytomation, соответственно. Стандарт для метода, полученный из PSI0242 (SEQ ID NO:249), содержащий C5-связывающий полипептид и альбумин-связывающий домен стрептококкового белка G, применяли для количественных измерений образцов. 96-луночный микропланшет покрывали рекомбинантным человеческим альбумином. Планшет затем промывали забуференным фосфатом физраствором, содержащим 0,05% Твин 20 (PBST) и блокировали в течение 1-2 часов 1% казеином в PBS. После промывки планшета, в него добавляли стандарт, контроли метода, контрольный образец и тестируемые образцы. После инкубации в течение 2 часов, несвязанное вещество удаляли промывкой. Козьи против-Affibody IgG (Affibody AB, кат. №. 20.1000.01.0005) добавляли в лунки, и планшет инкубировали в течение 1,5 часов для обеспечения связывания со связанными C5-связывающими соединениями. После промывки, обеспечивали связывание кроличьих против-козьих IgG HRP с козьими антителами в течение 1 ч. После конечной промывки, количество связанной HRP обнаруживали посредством добавления TMB-субстрата, который превращался в синий продукт под действием фермента. Добавление 1 M хлористоводородной кислоты через 30 минут останавливало реакцию, и цвет содержимого лунки изменялся с синего на желтый. Поглощение при 450 нм измеряли фотометрически, используя поглощение при 650 нм в качестве эталонной длины волны. Интенсивность окраски была пропорциональной количеству PSI0242 (SEQ ID NO:249), и концентрации образцов определяли по стандартной кривой.
C5-связывающие соединения, содержащие альбумин-связывающий домен стрептококкового белка G, оказались способными к связыванию с человеческим альбумином, и данные представлены в Таблице VII ниже.
<b>Таблица VII</b>
SEQ ID NO:
Название
% от общего содержания белка
249
PSI0242
103
261
PSI0378
85
268
PSI0410
150
Результаты аналитического теста показали, что оба исследованных C5-связывающих соединения с улучшенной стабильностью поддерживают их способность связываться с человеческим альбумином.
ПРИМЕР 8: Тест C5-связывающих полипептидов/соединений на стабильность в течение 3 месяцев
C5-связывающие полипептиды/соединения, которые показали улучшенную стабильность в сравнении с PSI0242 в тесте на стабильность в течение 2 недель при 37°C (Пример 2), подвергали более длительному тесту на стабильность в течение 3 месяцев при 37°C. Набор установок теста на стабильность был таким же, как описано в Примере 2, и оценку стабильности проводили посредством измерения процентной доли основного пика хроматограммы от содержания общего белка посредством обращенно-фазовой ВЭЖХ (ОФХ), причем метод ОФХ осуществляли, как описано в примере 2. Данные 2-х-недельного исследования из примера 2 включены в Таблицу VIII ниже, чтобы упростить интерпретацию.
<b>Таблица VIII</b>
SEQ ID NO:
Название
2 недели, 37°CОсновной пик(% от общего белка)
3 месяца, 37°CОсновной пик(% от общего белка)
253
PSI0334
73
16
261
PSI0378
89
59
262
PSI0379
88
58
263
PSI0381
87
46
264
PSI0383
91
59
268
PSI0410
72
16
269
PSI0403
77
35
270
PSI0404
88
46
C5-связывающие соединения с заменами аминокислот в положении 52, 53 с ND на SE и заменой в положении 60 с D на E или A (SEQ ID NO: 261, 264, и 262) в сравнении с PSI0242 имеют более высокую долю белка в исходной форме через 3 месяца при 37°C, чем PSI0242 (SEQ ID NO: 249) имеет через 2 недели при таких же условиях. Другие соединения также проявляли увеличенную стабильность.
ПРИМЕР 9: Стабильность аналогично модифицированных полипептидов
et al
BM
Ранее известные полипептидные варианты, являющиеся производными белка Z (Grönwall . J Biotechnol 2007, 128:162-183) с аффинностью связывания для целевых молекул, отличных от C5, были аналогичным образом модифицированы в конкретных положениях аминокислотной последовательности, чтобы улучшить стабильность. Отбор и получение исходных полипептидных вариантов с аффинностью связывания для человеческого рецептора 2 эпидермального фактора роста (HER2), рецептора бета фактора роста тромбоцитов (PDGF-Rβ), неонатального Fc рецептора (FcRn) и карбоангидразы IX (CAIX) раскрыты, например, в WO 2009/080810, WO 2009/077175, PCT/EP2014/055299 и WO 2014/096163. Полипептидные варианты с улучшенной стабильностью получали посредством сайт-направленного мутагенеза в выбранных положениях аминокислотной последовательности. Улучшающие стабильность замены аминокислот в полипептидных вариантах Z02891 (SEQ ID NO: 272), нацеленные на HER2; Z15805 (SEQ ID NO: 275), нацеленные на PDGF-Rβ; Z10103 (SEQ ID NO: 278), нацеленные на FcRn; и Z09782 (SEQ ID NO: 281), нацеленные на CAIX, приведены ниже в Таблице IX. Эти полипептидные варианты с улучшенной стабильностью отличаются от C5-связывающих полипептидов настоящего изобретения, например, в том, что они имеют связывающий мотив [] с аффинностью связывания для HER2, PDGF-Rβ, FcRn и CAIX.
Все варианты клонировали с N-концевой 6 × Гистидиновой-меткой (His6) и имели достигнутые конструкции кодируемых полипептидов в формате MGSSHHHHHHLQ-[Z#####]. Мутации вводили в плазмиды полипептидных вариантов, используя перекрывающиеся пары олигонуклеотидных праймеров, кодирующие желательные замены аминокислот, и применяя установленные технологии молекулярной биологии. Корректные плазмидные последовательности верифицировали посредством секвенирования ДНК.
E coli
2
4
2
4
Клетки (штамма T7E2) (GeneBridge) трансформировали плазмидами, содержащими генные фрагменты, кодирующие исходные и модифицированные полипептиды. Клетки культивировали при 37°C в среде TSB-YE, дополненой 50 мкг/мл канамицина и экспрессию белка последовательно индуцировали добавлением IPTG. Осажденные центрифугированием клетки разрушали, используя гомогенизатор FastPrep-24 (Nordic Biolabs), и клеточный дебрис удаляли центрифугированием. Каждый супернатант, содержащий полипептидный вариант в виде His6-меченого белка, очищали посредством аффинной хроматографии с иммобилизованными ионами металлов (IMAC), используя колонки His GraviTrapTM (GE Healthcare) в соответствии с инструкциями производителя. Очищенные полипептидные варианты подвергали замене буфера на забуференный фосфатом физраствор (PBS; 1,47 мМ KHPO, 8,1 мМ NaHPO, 137 мМ NaCl, 2,68 мМ KCl, pH 7,4) используя колонки для обессоливания PD-10 (GE Healthcare). Корректную идентичность каждого полипептида верифицировали посредством ДСН-ПААГ и ВЭЖХ-МС.
<b>Таблица IX</b>
SEQ ID NO:
Название
Мишень
Аминокислотные замены
Исходные в сравнении с модифицированными
272
Z02891
HER2
-
Исходный
273
Z17341
HER2
N52S, D53E
Модифицированный
274
Z17342
HER2
D36R, D37Q, S39E, N52S, D53E
Модифицированный
275
Z15805
PDGF-Rβ
-
Исходный
276
Z17343
PDGF-Rβ
N52S, D53E
Модифицированный
277
Z17344
PDGF-Rβ
D36R, D37Q, S39E, N52S, D53E
Модифицированный
278
Z10103
FcRn
-
Исходный
279
Z17347
FcRn
N52S, D53E
Модифицированный
280
Z17348
FcRn
D36R, D37Q, S39E, N52S, D53E
Модифицированный
281
Z09782
CAIX
-
Исходный
282
Z17351
CAIX
N52S, D53E
Модифицированный
283
Z17352
CAIX
D36R, D37Q, S39E, N52S, D53E
Модифицированный
284
Z17355
CAIX
D53E
Модифицированный
285
Z17357
CAIX
D36R, D37Q, S39E, D53E
Модифицированный
286
Z17359
CAIX
N52S
Модифицированный
287
Z17360
CAIX
D36R, D37Q, S39E, N52S
Модифицированный
Помимо замен одной из (SEQ ID NO: 284-287) или обеих из (SEQ ID NO: 273-274, 276-277, 279-280, 282-283) N52 и D53, замены также проводили в положениях, соответствующих петле [L2]. Таким образом, в полипептидных вариантах SEQ ID NO: 274, 277, 280, 283, 285, и 287, [L2] представляет собой RQPE.
Для выполнения тестирования на стабильность, полипептидные варианты, составленные в PBS с pH 7,4, разбавляли до 1 мг/мл, и аликвоты по 200 мкл инкубировали при 37°C в течение 2 недель. Образцы, собранные до и после теста на стабильность, анализировали посредством ДСН-ПААГ, используя 10% гели Bis-Tris NuPAGE (Invitrogen) и загружая 5 мкг белка в каждую лунку. Полученные в результате окрашенные Кумасси голубым гели показаны на Фиг. 6. Стабильность оценивали по появлению новых вариантов после инкубации при повышенной температуре, и подвергшиеся мутации варианты сравнивали с соответствующим исходным полипептидом.
Все полипептидные варианты с модификациями, как выделено в Таблице IX, показали улучшенную стабильность в сравнении с соответствующим исходным полипептидом в том смысле, что вторая полоса непосредственно выше основной полосы, наблюдаемой для образцов исходного полипептида, не являлась видимой в образцах модифицированных полипептидов с заменой D53E и/или N52S, см. Фиг. 6. Полипептиды с заменами D53E и/или N52S в комбинации с заменами D36R, D37Q и S39E показали аналогичные профили на геле ДСН-ПААГ. Замена D53E по отдельности или в комбинации с заменами D36R, D37Q и S39E, по-видимому, снижает количество вида с альтернативной конформацией, наблюдаемого в виде второй полосы на геле ДСН-ПААГ, но не может полностью предотвратить образованием данного вида.
Дополнительно, тестировали способность к связыванию модифицированных полипептидных вариантов. Все полипептидные варианты сохраняли их аффинность связывания для их мишени после модификации (результаты не показаны).
BM
Результаты, представленные выше для полипептидных вариантов, имеющих аффинность связывания для других целевых молекул, отличных от C5, хорошо соответствует результатам, представленным для C5-связывающих полипептидов и соединений настоящего изобретения (см., например, Примеры 2 и 4). Таким образом, конкретные аминокислотные модификации, как описано в данном документе, очевидно, обладают стабилизирующим эффектом независимо от аминокислотной последовательности []. Аминокислотные модификации или замены, описанные в данном документе, таким образом, рассматривают, как улучшающие стабильность всех C5-связывающих полипептидов и соединений, описанных в данном документе, и в WO 2013/126006.
--->
СПИСОК ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
<110>  Swedish Orphan Biovitrum AB
<120>  СТАБИЛЬНЫЕ ПОЛИПЕПТИДЫ, СВЯЗЫВАЮЩИЕСЯ С C5 КОМПЛЕМЕНТА ЧЕЛОВЕКА
<130>  21070713
<160>  287
<170>  PatentIn version 3.5
<210>  1
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  1
Glu Val Leu Glu Ala Trp Asp Glu Ile Asp Arg Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  2
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  2
Glu Val Leu Glu Ala Trp Asn Glu Ile Asp Arg Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  3
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  3
Glu Val Ile Glu Ala Trp Asn Glu Ile Asp Arg Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  4
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  4
Glu Val Leu Glu Ala Trp Asp Glu Ile Asp Arg Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Leu Asp Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  5
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  5
Glu Val Leu Asp Ala Trp Asp Glu Ile Asp Ala Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Leu Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  6
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  6
Glu Val Ile Asp Ala Trp Asp Glu Ile Asp Arg Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Leu Asp Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  7
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  7
Glu Thr Leu Glu Ala Trp Asp Glu Ile Asp Arg Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  8
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  8
Glu Val Ile Asp Ala Trp Asn Glu Ile Asp Ala Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Leu Asp Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  9
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  9
Glu Val Leu Asp Ala Trp Asp Glu Ile Asp Lys Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Asp Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  10
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  10
Glu Val Leu Glu Ala Trp Asp Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Leu Asp Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  11
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  11
Glu Val Leu Glu Ala Trp Asp Glu Ile Asp Ala Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  12
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  12
Glu Val Leu Asp Ala Trp Asp Glu Ile Asp Lys Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Leu Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  13
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  13
Glu Thr Ile Thr Ala Trp Asp Glu Ile Asp Lys Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Gly Lys Leu Glu Asp
20                  25
<210>  14
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  14
Glu Ser Met Lys Ala Trp Asp Glu Ile Asp Arg Leu Pro Asn Leu Asn
1               5                   10                  15
Ile Asn Gln Trp Val Ala Phe Ile Asp Ser Leu Tyr Asp
20                  25
<210>  15
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  15
Glu Ser Ile Glu Ala Trp Thr Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Thr Asp
20                  25
<210>  16
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  16
Glu Val Leu Asp Ala Trp His Glu Ile Asp Thr Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Val Arg Gln Trp Leu Ala Phe Ile Ser Lys Leu Glu Asp
20                  25
<210>  17
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  17
Glu His Ile Gln Ala Asn Glu Glu Ile Asp Arg Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Lys Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu His Asp
20                  25
<210>  18
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  18
Glu Val Leu His Ala Trp Ala Glu Ile Asp Ala Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  19
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  19
Glu Val Leu Ala Ala Trp Asp Glu Ile Asp Ser Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Leu Gln Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  20
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  20
Glu Val Ile Asp Ala Trp Asn Glu Ile Asp Ala Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Leu Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  21
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  21
Glu Val Leu Asp Ala Trp Asn Glu Ile Asp Ala Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Asp Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Ser Asp
20                  25
<210>  22
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  22
Glu Val Ile Glu Ala Trp Asp Glu Ile Asp Gly Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  23
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  23
Glu Val Leu Glu Ala Trp Asp Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Leu Gln Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  24
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  24
Glu Val Ile Glu Ala Trp Asn Glu Ile Asp Ala Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  25
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  25
Glu Val Ile Ala Ala Trp Asn Glu Ile Asp Arg Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Leu Thr Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  26
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  26
Glu Val Ile Glu Ala Trp Asp Glu Ile Asp Ala Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Leu Gln Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  27
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  27
Glu Val Ile Ala Ala Trp Asp Glu Ile Asp Lys Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  28
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  28
Glu Val Ile Ala Ala Trp Asp Glu Ile Asp Lys Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Leu Gln Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  29
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  29
Glu Thr Ile Ala Ala Trp Asp Glu Ile Asp Lys Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  30
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  30
Glu Thr Ile Glu Ala Trp Asn Glu Ile Asp Arg Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  31
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  31
Glu Val Leu Glu Ala Trp Arg Glu Ile Asp Ala Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Gln Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  32
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  32
Glu Val Ile Glu Ala Trp Asp Glu Ile Asp Gln Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  33
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  33
Glu Val Leu Arg Ala Trp Asp Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Leu Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  34
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  34
Glu Val Leu Glu Ala Trp Asp Glu Ile Asp Arg Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Leu Asn Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  35
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  35
Glu Val Leu Asp Ala Trp Asn Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  36
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  36
Glu Val Ile Asp Ala Trp Asn Glu Ile Asp Lys Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  37
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  37
Glu Thr Leu Glu Ala Trp Asp Glu Ile Asp Gln Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Leu Gln Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  38
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  38
Glu Val Ile Glu Ala Trp Asn Glu Ile Asp Ala Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Leu Asp Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  39
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  39
Glu Val Ile Asp Ala Trp Asn Glu Ile Asp Arg Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Leu Gln Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  40
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  40
Glu Val Ile Asp Ala Trp Asn Glu Ile Asp Gln Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Leu Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  41
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  41
Glu Thr Ile Ala Ala Trp Asp Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Leu Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  42
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  42
Glu Val Leu Gln Ala Trp Asp Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Gln Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Ser Asp
20                  25
<210>  43
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  43
Glu Thr Leu His Ala Trp Ala Glu Ile Asp Arg Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  44
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  44
Glu Val Leu Glu Ala Trp Asn Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Leu Ala Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  45
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  45
Glu Val Ile Glu Ala Trp Asp Glu Ile Asp Lys Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Ala Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  46
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  46
Glu Val Leu Asp Ala Trp Asp Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Leu Gln Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  47
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  47
Glu Thr Ile Glu Ala Trp Asn Glu Ile Asp Lys Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Leu Thr Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  48
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  48
Glu Val Leu Glu Ala Trp Asn Glu Ile Asp Leu Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  49
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  49
Glu Val Ile Glu Ala Trp Asp Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Asp Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  50
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  50
Glu Val Ile Ser Ala Trp Asn Glu Ile Asp Ala Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Leu Gln Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  51
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  51
Glu Val Ile Ala Ala Trp Asn Glu Ile Asp Lys Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Leu Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  52
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  52
Glu Thr Ile Glu Ala Trp Asn Glu Ile Asp Ser Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Leu Asp Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  53
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  53
Glu Val Leu Asp Ala Trp Asn Glu Ile Asp Gln Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Leu Gln Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  54
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  54
Glu Val Leu Ala Ala Trp Asn Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  55
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  55
Glu Val Leu Glu Ala Trp Asp Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Thr Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  56
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  56
Glu Thr Ile Asp Ala Trp Asn Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  57
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  57
Glu Val Ile Glu Ala Trp Asn Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Gln Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  58
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  58
Glu Val Ile Gln Ala Trp Asn Glu Ile Asp Ala Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Ser Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  59
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  59
Glu Val Ile Ala Ala Trp Asp Glu Ile Asp Ser Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  60
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  60
Glu His Ile Glu Ala Trp Asn Glu Ile Asp Ala Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Gln Asp
20                  25
<210>  61
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  61
Glu Val Leu Glu Ala Trp Asn Glu Ile Asp Lys Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Leu Asp Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  62
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  62
Glu Val Ile Asp Ala Trp Asn Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Ala Asp
20                  25
<210>  63
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  63
Glu Thr Ile Asp Ala Trp Asp Glu Ile Asp Lys Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  64
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  64
Glu Val Ile Ala Ala Trp Asp Glu Ile Asp Leu Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Leu Gln Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Ala Asp
20                  25
<210>  65
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  65
Glu Val Ile His Ala Trp Asp Glu Ile Asp Lys Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  66
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  66
Glu Val Ile Ala Ala Trp Asn Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Leu Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  67
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  67
Glu Thr Leu Asp Ala Trp Asn Glu Ile Asp Lys Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Leu Ser Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  68
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  68
Glu Val Leu Glu Ala Trp Asn Glu Ile Asp Ala Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Leu Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  69
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  69
Glu Val Ile Gln Ala Trp Asp Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Ser Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  70
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  70
Glu Val Leu Gln Ala Trp Asp Glu Ile Asp Ser Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  71
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  71
Glu Thr Leu Glu Ala Trp Asp Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Ala Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  72
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  72
Glu Thr Ile Asp Ala Trp Asn Glu Ile Asp Arg Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Ser Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  73
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  73
Glu Val Leu Asp Ala Trp His Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Gln Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  74
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  74
Glu Gln Ile Arg Ala Trp Asp Glu Ile Asp Lys Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Ala Asp
20                  25
<210>  75
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  75
Glu Thr Leu Tyr Ala Trp Asn Glu Ile Asp Lys Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Glu Lys Leu Gln Asp
20                  25
<210>  76
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  76
Glu Val Ile Glu Ala Trp Asn Glu Ile Asp Ala Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Asp Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  77
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  77
Glu Val Leu Glu Ala Trp Asn Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Gln Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  78
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  78
Glu Thr Ile Glu Ala Trp Asp Glu Ile Asp Ala Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  79
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  79
Glu Val Ile Glu Ala Trp Asn Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Leu Gln Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  80
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  80
Glu Val Ile Glu Ala Trp Asn Glu Ile Asp Lys Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Gln Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  81
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  81
Glu Thr Leu Asp Ala Trp Ala Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Leu Asp Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  82
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  82
Glu His Ile Asp Ala Trp Asn Glu Ile Asp Ala Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Leu Ser Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  83
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  83
Glu Val Leu Asp Ala Trp Asn Glu Ile Asp Lys Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Ala Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  84
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  84
Glu Val Ile Glu Ala Trp Thr Glu Ile Asp Tyr Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Leu Gln Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  85
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  85
Glu Thr Ile Glu Ala Trp Asn Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Ala Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  86
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  86
Glu Val Ile Gln Ala Trp Asn Glu Ile Asp Lys Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Leu Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  87
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  87
Glu Val Ile Glu Ala Trp Asp Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  88
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  88
Glu Thr Ile Asp Ala Trp Asn Glu Ile Asp Leu Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  89
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  89
Glu His Ile Asp Ala Trp Asn Glu Ile Asp Lys Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Leu Asp Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  90
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  90
Glu Val Val Ala Ala Trp Asn Glu Ile Asp Ala Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asn Asp
20                  25
<210>  91
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  91
Glu Val Ile Glu Ala Trp Asn Glu Ile Asp Ala Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Leu Ala Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  92
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  92
Glu Val Leu Gln Ala Trp Asp Glu Ile Asp Arg Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Leu Asp Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  93
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  93
Glu Val Ile Asp Ala Trp Asp Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Ser Asp
20                  25
<210>  94
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  94
Glu Val Val Glu Ala Trp Asn Glu Ile Asp Gln Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  95
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  95
Glu Val Ile Gln Ala Trp Asn Glu Ile Asp Ala Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  96
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  96
Glu Val Ile Gln Ala Trp Asp Glu Ile Asp Lys Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Asp Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Ala Asp
20                  25
<210>  97
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  97
Glu Val Val Ala Ala Trp Asp Glu Ile Asp Ala Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Leu Thr Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  98
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  98
Glu Val Ile Gln Ala Trp Asn Glu Ile Asp Gly Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Leu Ser Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  99
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  99
Glu Thr Ile Glu Ala Trp Asp Glu Ile Asp Ala Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Thr Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  100
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  100
Glu Val Ile Asp Ala Trp Asn Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Gln Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Ala Asp
20                  25
<210>  101
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  101
Glu Thr Ile Glu Ala Trp Asn Glu Ile Asp Ala Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Leu Asp Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Glu Asp
20                  25
<210>  102
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  102
Glu His Ile His Ala Trp Asn Glu Ile Asp Glu Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Ala Asp
20                  25
<210>  103
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  103
Glu Val Ile Asp Ala Trp Asp Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Asp Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Ser Asp
20                  25
<210>  104
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  104
Glu Val Ile Asp Ala Asn Asp Glu Ile Asp Ala Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Ala Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu His Asp
20                  25
<210>  105
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  105
Glu Thr Ile Glu Ala Trp Asp Glu Ile Asp Lys Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  106
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  106
Glu Val Leu Leu Ala Trp Asp Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Leu Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  107
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  107
Glu His Ile Asp Ala Trp Asn Glu Ile Asp Gly Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Leu Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  108
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  108
Glu Val Ile Glu Ala Trp Ser Glu Ile Asp Ala Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Asp Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Ala Asp
20                  25
<210>  109
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  109
Glu Gln Leu Asn Ala Trp Ala Glu Ile Asp Ala Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  110
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  110
Glu Val Ile Asp Ala Trp Asn Glu Ile Asp Ala Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Ala Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  111
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  111
Glu Thr Ile Asp Ala Trp Asn Glu Ile Asp Gln Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  112
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  112
Glu Val Ile Glu Ala Trp Asp Glu Ile Asp Lys Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Leu Ala Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  113
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  113
Glu Val Leu Tyr Ala Trp Ala Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  114
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  114
Glu Gln Ile Asp Ala Trp Asn Glu Ile Asp Arg Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Gln Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  115
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  115
Glu Val Leu Ala Ala Trp Asp Glu Ile Asp Arg Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  116
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  116
Glu Val Ile Glu Ala Trp Asp Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Leu His Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  117
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  117
Glu Val Ile Glu Ala Trp Asn Glu Ile Asp Lys Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Leu Gln Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  118
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  118
Glu Val Ile Asp Ala Asn Asp Glu Ile Asp Ala Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu His Asp
20                  25
<210>  119
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  119
Glu Val Ile Ala Ala Trp Asp Glu Ile Asp Ala Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  120
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  120
Glu Val Ile Glu Ala Trp Thr Glu Ile Asp Gln Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Leu Asp Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  121
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  121
Glu Val Ile Asn Ala Trp Asn Glu Ile Asp Ala Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Leu Gln Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  122
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  122
Glu His Ile Glu Ala Trp Asp Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Asp Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Ala Asp
20                  25
<210>  123
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  123
Glu His Leu Glu Ala Trp Arg Glu Ile Asp Ala Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  124
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  124
Glu Val Leu Asp Ala Trp Asn Glu Ile Asp Lys Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Leu Gln Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  125
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  125
Glu Val Ile Ala Ala Trp Asp Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Gln Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  126
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  126
Glu Val Ile Gln Ala Trp Asn Glu Ile Asp Ala Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Leu Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  127
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  127
Glu Val Ile Asp Ala Trp Asn Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Ala Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  128
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  128
Glu Gln Leu Asp Ala Trp Asp Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Asp Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Ser Asp
20                  25
<210>  129
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  129
Glu Val Leu Asn Ala Trp Asp Glu Ile Asp Lys Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  130
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  130
Glu Val Leu Glu Ala Trp Asn Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Asp Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  131
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  131
Glu Val Leu Leu Ala Trp Asp Glu Ile Asp Arg Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Asp Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Ala Asp
20                  25
<210>  132
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  132
Glu Val Ile Ala Ala Trp Asn Glu Ile Asp Gln Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Leu Asp Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  133
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  133
Glu Thr Leu Leu Ala Trp Asp Glu Ile Asp Ala Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  134
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  134
Glu Val Ile Asp Ala Trp Asn Glu Ile Asp Thr Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Leu Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  135
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  135
Glu Val Leu His Ala Trp Asn Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Leu Asn Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Gln Asp
20                  25
<210>  136
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  136
Glu Val Ile Gln Ala Trp Asn Glu Ile Asp Ala Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Ala Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  137
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  137
Glu Thr Val Asp Ala Trp Asn Glu Ile Asp Ala Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  138
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  138
Glu Val Ile Gln Ala Trp Asp Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Asp Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  139
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  139
Glu Val Leu Asp Ala Trp Asn Glu Ile Asp Gln Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Gln Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  140
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  140
Glu Thr Ile Glu Ala Trp Asn Glu Ile Asp Ala Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Leu Asp Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  141
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  141
Glu Val Ile Glu Ala Trp Asp Glu Ile Asp Ala Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Asp Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  142
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  142
Glu Val Ile Glu Ala Trp Asn Glu Ile Asp Gln Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Gln Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  143
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  143
Glu Val Ile Glu Ala Trp Thr Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  144
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  144
Glu Val Ile Gln Ala Trp Asn Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Leu Gln Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Glu Asp
20                  25
<210>  145
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  145
Glu Val Ile Gln Ala Asn Asn Glu Ile Asp Gln Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu His Asp
20                  25
<210>  146
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  146
Glu Val Leu His Ala Trp Ser Glu Ile Asp Lys Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  147
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  147
Glu Thr Ile Gln Ala Trp Asp Glu Ile Asp Lys Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Leu Asp Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Ser Asp
20                  25
<210>  148
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  148
Glu Thr Leu Arg Ala Trp Asp Glu Ile Asp Lys Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Gln Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Ala Asp
20                  25
<210>  149
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  149
Glu Val Ile Asp Ala Trp Asn Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Glu Asp
20                  25
<210>  150
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  150
Glu Val Ile Asp Ala Trp Asn Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Leu Gln Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Ala Asp
20                  25
<210>  151
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  151
Glu Thr Ile Asp Ala Trp Asn Glu Ile Asp Ala Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Leu Asp Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  152
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  152
Glu Val Ile Glu Ala Trp Asn Glu Ile Asp Gln Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  153
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  153
Glu Val Ile Arg Ala Trp Asp Glu Ile Asp Gln Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Leu Ser Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  154
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  154
Glu Val Ile Glu Ala Trp Asn Glu Ile Asp Arg Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile His Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  155
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  155
Glu Thr Ile Glu Ala Trp Asn Glu Ile Asp Gln Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  156
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  156
Glu Val Leu Thr Ala Trp Ala Glu Ile Asp Ala Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Leu Ser Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  157
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  157
Glu Val Ile Glu Ala Trp Asp Glu Ile Asp Lys Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Val Asp Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  158
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  158
Glu Val Ile Asp Ala Trp Asn Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Leu Thr Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  159
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  159
Glu Val Ile Glu Ala Trp Asn Glu Ile Asp Gln Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Leu Asp Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  160
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  160
Glu Thr Leu Gln Ala Trp Asp Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Leu Asn Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  161
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  161
Glu Val Ile Asp Ala Trp Asn Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  162
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  162
Glu Val Ile Glu Ala Trp Asn Glu Ile Asp Leu Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Leu Ser Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  163
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  163
Glu Val Ile Asp Ala Trp Asp Glu Ile Asp Arg Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Leu Lys Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  164
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  164
Glu Thr Leu His Ala Trp Asp Glu Ile Asp Lys Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  165
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  165
Glu Val Ile Lys Ala Trp Asp Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Leu Asn Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  166
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  166
Glu Val Ile Glu Ala Trp Asn Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Leu Ala Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  167
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  167
Glu Val Ile Gln Ala Trp Asn Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Asp Gln Trp Leu Ala Phe Ile Thr Lys Leu Glu Asp
20                  25
<210>  168
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  168
Glu Val Ile Glu Ala Trp Asn Glu Ile Asp Arg Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Lys Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  169
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  169
Glu Val Ile Glu Ala Trp Asn Glu Ile Asp Ser Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Leu Gln Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  170
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  170
Glu Thr Ile Asp Ala Trp Asn Glu Ile Asp Lys Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  171
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  171
Glu Val Leu Glu Ala Trp Ala Glu Ile Asp Ala Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Ala Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  172
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  172
Glu Thr Ile Asp Ala Trp Asn Glu Ile Asp Arg Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  173
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  173
Glu Thr Leu Lys Ala Trp Asp Glu Ile Asp Arg Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Leu Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  174
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  174
Glu Thr Ile Ala Ala Trp Asn Glu Ile Asp Ala Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Leu Gln Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  175
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  175
Glu Val Leu Gln Ala Trp Asn Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Gln Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  176
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  176
Glu Val Ile Glu Ala Trp Ser Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Leu Gln Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  177
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  177
Glu Val Ile Asp Ala Trp Asn Glu Ile Asp Gly Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  178
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  178
Glu Val Ile His Ala Trp Asn Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Leu Asn Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Glu Asp
20                  25
<210>  179
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  179
Glu Val Leu Asp Ala Trp Asn Glu Ile Asp Ser Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Leu Asp Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  180
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  180
Glu Gln Ile Glu Ala Trp Asn Glu Ile Asp Arg Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Leu Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  181
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  181
Glu Val Val Asp Ala Trp Asn Glu Ile Asp Ala Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Leu Gln Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  182
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  182
Glu Val Ile Glu Ala Trp Asn Glu Ile Asp Lys Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  183
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  183
Glu Val Ile Glu Ala Asn Asp Glu Ile Asp Arg Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu His Asp
20                  25
<210>  184
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  184
Glu Thr Leu Gln Ala Trp Asp Glu Ile Asp Lys Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  185
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  185
Glu Val Ile Glu Ala Trp Asp Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Asp Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Ala Asp
20                  25
<210>  186
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  186
Glu Thr Ile Asp Ala Trp Asn Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Leu Gln Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Ala Asp
20                  25
<210>  187
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  187
Glu Val Ile Asp Ala Trp Asp Glu Ile Asp Lys Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  188
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  188
Glu Val Ile Glu Ala Trp Asn Glu Ile Asp Lys Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Leu Ala Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  189
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  189
Glu Val Leu Gln Ala Trp Asp Glu Ile Asp Lys Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Gln Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  190
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  190
Glu Val Ile Ala Ala Trp Asn Glu Ile Asp Gly Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Leu Gln Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  191
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  191
Glu Thr Leu Asn Ala Trp Asn Glu Ile Asp Ala Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Leu Gln Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  192
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  192
Glu Val Leu Ser Ala Trp Asn Glu Ile Asp Gln Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Leu Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  193
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  193
Glu Thr Leu Glu Ala Trp Asp Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Leu His Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  194
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  194
Glu Gln Ile Glu Ala Trp Asn Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Leu Gln Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Ala Asp
20                  25
<210>  195
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  195
Glu Val Val Glu Ala Trp Asp Glu Ile Asp Lys Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  196
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  196
Glu Val Leu Glu Ala Trp Asn Glu Ile Asp Glu Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  197
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  197
Glu Val Ile Asp Ala Trp Asn Glu Ile Asp Gln Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Leu Gln Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  198
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  198
Glu Thr Ile Asp Ala Trp Asp Glu Ile Asp Lys Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Leu Ser Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  199
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  199
Glu Thr Ile Asp Ala Trp Asn Glu Ile Asp Gln Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Leu Gln Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  200
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  200
Glu Val Ile Gln Ala Trp Asp Glu Ile Asp Ala Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Leu Asn Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  201
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  201
Glu Val Leu Asp Ala Trp Ala Glu Ile Asp Gln Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Leu Gln Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  202
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  202
Glu His Ile Ala Ala Trp Asp Glu Ile Asp Ala Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  203
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  203
Glu Val Ile Arg Ala Trp Asp Glu Ile Asp Ala Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  204
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  204
Glu Val Ile Asp Ala Trp Asp Glu Ile Asp Ala Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Asp Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Ala Asp
20                  25
<210>  205
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  205
Glu Val Ile Asp Ala Trp Asn Glu Ile Asp Arg Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Gln Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  206
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  206
Glu Val Ile Thr Ala Trp Asn Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Leu Ser Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  207
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  207
Glu Val Ile Asp Ala Trp Asn Glu Ile Asp Ala Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile His Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  208
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  208
Glu Gln Leu Lys Ala Trp Asp Glu Ile Asp Lys Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Glu Lys Leu Gln Asp
20                  25
<210>  209
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  209
Glu His Ile Asp Ala Trp Thr Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  210
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  210
Glu Gln Leu Arg Ala Trp Asp Glu Ile Asp Lys Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Gln Asp
20                  25
<210>  211
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  211
Glu Val Leu Glu Ala Trp Arg Glu Ile Asp Ser Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Ala Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  212
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  212
Glu Val Ile Gln Ala Trp Asn Glu Ile Asp Lys Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  213
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  213
Glu His Val Glu Ala Trp Asn Glu Ile Asp Gln Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Ala Asp
20                  25
<210>  214
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  214
Glu Val Ile Asp Ala Trp Asp Glu Ile Asp Ala Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Asp Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Ser Asp
20                  25
<210>  215
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  215
Glu Val Ile Glu Ala Trp Asn Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  216
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  216
Glu Val Leu Gln Ala Trp Asp Glu Ile Asp Lys Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Ser Asp
20                  25
<210>  217
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  217
Glu Val Ile Lys Ala Trp Asn Glu Ile Asp Ser Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  218
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  218
Glu Val Leu Glu Ala Trp His Glu Ile Asp Leu Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Gln Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  219
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  219
Glu Val Leu Glu Ala Trp Thr Glu Ile Asp Arg Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Leu Asp Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  220
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  220
Glu Gln Leu Tyr Ala Trp Asn Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Glu Lys Leu Gln Asp
20                  25
<210>  221
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  221
Glu Val Leu Asn Ala Trp Asp Glu Ile Asp Lys Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Lys Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  222
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  222
Glu Val Ile Arg Ala Trp Asp Glu Ile Asp Lys Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Val Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  223
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  223
Glu Val Val Gln Ala Trp Asp Glu Ile Asp Gln Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Leu Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  224
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  224
Glu Val Ile Arg Ala Trp Asp Glu Ile Asp Gln Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Leu Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  225
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  225
Glu Thr Ile Asp Ala Trp Asn Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Leu Asp Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  226
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  226
Glu Val Val Ala Ala Trp Thr Glu Ile Asp Leu Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Leu Asp Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Glu Asp
20                  25
<210>  227
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  227
Glu Val Val Ala Ala Trp Asp Glu Ile Asp Ala Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Ser Asp
20                  25
<210>  228
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  228
Glu Thr Leu Glu Ala Trp Arg Glu Ile Asp Ser Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Leu Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  229
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  229
Glu Val Ile Lys Ala Trp Asn Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Leu Asp Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  230
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  230
Glu Val Leu Glu Ala Trp Thr Glu Ile Asp Lys Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Asp Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  231
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  231
Glu Thr Leu Glu Ala Trp Asp Glu Ile Asp Lys Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Asp Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  232
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  232
Glu Val Ile Glu Ala Trp Asn Glu Ile Asp Lys Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Asp Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  233
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  233
Glu Thr Ile Asp Ala Trp Asn Glu Ile Asp Lys Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Leu Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  234
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  234
Glu Thr Leu Asp Ala Trp Asp Glu Ile Asp Ala Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Asp Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Glu Asp
20                  25
<210>  235
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  235
Glu Val Leu Ser Ala Trp Asn Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Gln Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  236
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  236
Glu Val Ile Gln Ala Asn Asp Glu Ile Asp Lys Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile His Lys Leu His Asp
20                  25
<210>  237
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  237
Glu His Leu Asp Ala Trp Asp Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Gln Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Ala Asp
20                  25
<210>  238
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  238
Glu Val Ile Gln Ala Trp Asn Glu Ile Asp Gln Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  239
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  239
Glu Val Ile Glu Ala Trp Asn Glu Ile Asp Tyr Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Ala Gln Trp Ile Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  240
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  240
Glu Thr Ile Gln Ala Trp Asp Glu Ile Asp Arg Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Leu Gln Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  241
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  241
Glu Thr Ile Gln Ala Trp Asp Glu Ile Asp Lys Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  242
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  242
Glu Thr Leu Asp Ala Trp Ala Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  243
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  243
Glu Val Ile Glu Ala Trp Asp Glu Ile Asp Lys Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Leu Asn Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  244
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  244
Glu Val Leu Asp Ala Trp Asn Glu Ile Asp Gln Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  245
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  245
Glu Val Leu His Ala Trp Asn Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Glu Lys Leu Glu Asp
20                  25
<210>  246
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  246
Glu Val Ile Glu Ala Trp Gln Glu Ile Asp Lys Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Asp Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  247
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  247
Glu Val Val Asp Ala Trp Asn Glu Ile Asp Gln Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20                  25
<210>  248
<211>  29
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  248
Glu Gln Ile Glu Ala Trp Asn Glu Ile Asp Ala Leu Pro Asn Leu Thr
1               5                   10                  15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Ala Asp
20                  25
<210>  249
<211>  108
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  249
Ala Glu Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Val Leu Glu Ala Trp Asp Glu Ile
1               5                   10                  15
Asp Arg Leu Pro Asn Leu Thr Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn
20                  25                  30
Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala
35                  40                  45
Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys Val Asp Gly Ser Leu Ala
50                  55                  60
Glu Ala Lys Glu Ala Ala Asn Ala Glu Leu Asp Ser Tyr Gly Val Ser
65                  70                  75                  80
Asp Phe Tyr Lys Arg Leu Ile Asp Lys Ala Lys Thr Val Glu Gly Val
85                  90                  95
Glu Ala Leu Lys Asp Ala Ile Leu Ala Ala Leu Pro
100                 105
<210>  250
<211>  46
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  250
Leu Ala Glu Ala Lys Glu Ala Ala Asn Ala Glu Leu Asp Ser Tyr Gly
1               5                   10                  15
Val Ser Asp Phe Tyr Lys Arg Leu Ile Asp Lys Ala Lys Thr Val Glu
20                  25                  30
Gly Val Glu Ala Leu Lys Asp Ala Ile Leu Ala Ala Leu Pro
35                  40                  45
<210>  251
<211>  1676
<212>  БЕЛОК
<213>  Homo sapiens
<400>  251
Met Gly Leu Leu Gly Ile Leu Cys Phe Leu Ile Phe Leu Gly Lys Thr
1               5                   10                  15
Trp Gly Gln Glu Gln Thr Tyr Val Ile Ser Ala Pro Lys Ile Phe Arg
20                  25                  30
Val Gly Ala Ser Glu Asn Ile Val Ile Gln Val Tyr Gly Tyr Thr Glu
35                  40                  45
Ala Phe Asp Ala Thr Ile Ser Ile Lys Ser Tyr Pro Asp Lys Lys Phe
50                  55                  60
Ser Tyr Ser Ser Gly His Val His Leu Ser Ser Glu Asn Lys Phe Gln
65                  70                  75                  80
Asn Ser Ala Ile Leu Thr Ile Gln Pro Lys Gln Leu Pro Gly Gly Gln
85                  90                  95
Asn Pro Val Ser Tyr Val Tyr Leu Glu Val Val Ser Lys His Phe Ser
100                 105                 110
Lys Ser Lys Arg Met Pro Ile Thr Tyr Asp Asn Gly Phe Leu Phe Ile
115                 120                 125
His Thr Asp Lys Pro Val Tyr Thr Pro Asp Gln Ser Val Lys Val Arg
130                 135                 140
Val Tyr Ser Leu Asn Asp Asp Leu Lys Pro Ala Lys Arg Glu Thr Val
145                 150                 155                 160
Leu Thr Phe Ile Asp Pro Glu Gly Ser Glu Val Asp Met Val Glu Glu
165                 170                 175
Ile Asp His Ile Gly Ile Ile Ser Phe Pro Asp Phe Lys Ile Pro Ser
180                 185                 190
Asn Pro Arg Tyr Gly Met Trp Thr Ile Lys Ala Lys Tyr Lys Glu Asp
195                 200                 205
Phe Ser Thr Thr Gly Thr Ala Tyr Phe Glu Val Lys Glu Tyr Val Leu
210                 215                 220
Pro His Phe Ser Val Ser Ile Glu Pro Glu Tyr Asn Phe Ile Gly Tyr
225                 230                 235                 240
Lys Asn Phe Lys Asn Phe Glu Ile Thr Ile Lys Ala Arg Tyr Phe Tyr
245                 250                 255
Asn Lys Val Val Thr Glu Ala Asp Val Tyr Ile Thr Phe Gly Ile Arg
260                 265                 270
Glu Asp Leu Lys Asp Asp Gln Lys Glu Met Met Gln Thr Ala Met Gln
275                 280                 285
Asn Thr Met Leu Ile Asn Gly Ile Ala Gln Val Thr Phe Asp Ser Glu
290                 295                 300
Thr Ala Val Lys Glu Leu Ser Tyr Tyr Ser Leu Glu Asp Leu Asn Asn
305                 310                 315                 320
Lys Tyr Leu Tyr Ile Ala Val Thr Val Ile Glu Ser Thr Gly Gly Phe
325                 330                 335
Ser Glu Glu Ala Glu Ile Pro Gly Ile Lys Tyr Val Leu Ser Pro Tyr
340                 345                 350
Lys Leu Asn Leu Val Ala Thr Pro Leu Phe Leu Lys Pro Gly Ile Pro
355                 360                 365
Tyr Pro Ile Lys Val Gln Val Lys Asp Ser Leu Asp Gln Leu Val Gly
370                 375                 380
Gly Val Pro Val Thr Leu Asn Ala Gln Thr Ile Asp Val Asn Gln Glu
385                 390                 395                 400
Thr Ser Asp Leu Asp Pro Ser Lys Ser Val Thr Arg Val Asp Asp Gly
405                 410                 415
Val Ala Ser Phe Val Leu Asn Leu Pro Ser Gly Val Thr Val Leu Glu
420                 425                 430
Phe Asn Val Lys Thr Asp Ala Pro Asp Leu Pro Glu Glu Asn Gln Ala
435                 440                 445
Arg Glu Gly Tyr Arg Ala Ile Ala Tyr Ser Ser Leu Ser Gln Ser Tyr
450                 455                 460
Leu Tyr Ile Asp Trp Thr Asp Asn His Lys Ala Leu Leu Val Gly Glu
465                 470                 475                 480
His Leu Asn Ile Ile Val Thr Pro Lys Ser Pro Tyr Ile Asp Lys Ile
485                 490                 495
Thr His Tyr Asn Tyr Leu Ile Leu Ser Lys Gly Lys Ile Ile His Phe
500                 505                 510
Gly Thr Arg Glu Lys Phe Ser Asp Ala Ser Tyr Gln Ser Ile Asn Ile
515                 520                 525
Pro Val Thr Gln Asn Met Val Pro Ser Ser Arg Leu Leu Val Tyr Tyr
530                 535                 540
Ile Val Thr Gly Glu Gln Thr Ala Glu Leu Val Ser Asp Ser Val Trp
545                 550                 555                 560
Leu Asn Ile Glu Glu Lys Cys Gly Asn Gln Leu Gln Val His Leu Ser
565                 570                 575
Pro Asp Ala Asp Ala Tyr Ser Pro Gly Gln Thr Val Ser Leu Asn Met
580                 585                 590
Ala Thr Gly Met Asp Ser Trp Val Ala Leu Ala Ala Val Asp Ser Ala
595                 600                 605
Val Tyr Gly Val Gln Arg Gly Ala Lys Lys Pro Leu Glu Arg Val Phe
610                 615                 620
Gln Phe Leu Glu Lys Ser Asp Leu Gly Cys Gly Ala Gly Gly Gly Leu
625                 630                 635                 640
Asn Asn Ala Asn Val Phe His Leu Ala Gly Leu Thr Phe Leu Thr Asn
645                 650                 655
Ala Asn Ala Asp Asp Ser Gln Glu Asn Asp Glu Pro Cys Lys Glu Ile
660                 665                 670
Leu Arg Pro Arg Arg Thr Leu Gln Lys Lys Ile Glu Glu Ile Ala Ala
675                 680                 685
Lys Tyr Lys His Ser Val Val Lys Lys Cys Cys Tyr Asp Gly Ala Cys
690                 695                 700
Val Asn Asn Asp Glu Thr Cys Glu Gln Arg Ala Ala Arg Ile Ser Leu
705                 710                 715                 720
Gly Pro Arg Cys Ile Lys Ala Phe Thr Glu Cys Cys Val Val Ala Ser
725                 730                 735
Gln Leu Arg Ala Asn Ile Ser His Lys Asp Met Gln Leu Gly Arg Leu
740                 745                 750
His Met Lys Thr Leu Leu Pro Val Ser Lys Pro Glu Ile Arg Ser Tyr
755                 760                 765
Phe Pro Glu Ser Trp Leu Trp Glu Val His Leu Val Pro Arg Arg Lys
770                 775                 780
Gln Leu Gln Phe Ala Leu Pro Asp Ser Leu Thr Thr Trp Glu Ile Gln
785                 790                 795                 800
Gly Val Gly Ile Ser Asn Thr Gly Ile Cys Val Ala Asp Thr Val Lys
805                 810                 815
Ala Lys Val Phe Lys Asp Val Phe Leu Glu Met Asn Ile Pro Tyr Ser
820                 825                 830
Val Val Arg Gly Glu Gln Ile Gln Leu Lys Gly Thr Val Tyr Asn Tyr
835                 840                 845
Arg Thr Ser Gly Met Gln Phe Cys Val Lys Met Ser Ala Val Glu Gly
850                 855                 860
Ile Cys Thr Ser Glu Ser Pro Val Ile Asp His Gln Gly Thr Lys Ser
865                 870                 875                 880
Ser Lys Cys Val Arg Gln Lys Val Glu Gly Ser Ser Ser His Leu Val
885                 890                 895
Thr Phe Thr Val Leu Pro Leu Glu Ile Gly Leu His Asn Ile Asn Phe
900                 905                 910
Ser Leu Glu Thr Trp Phe Gly Lys Glu Ile Leu Val Lys Thr Leu Arg
915                 920                 925
Val Val Pro Glu Gly Val Lys Arg Glu Ser Tyr Ser Gly Val Thr Leu
930                 935                 940
Asp Pro Arg Gly Ile Tyr Gly Thr Ile Ser Arg Arg Lys Glu Phe Pro
945                 950                 955                 960
Tyr Arg Ile Pro Leu Asp Leu Val Pro Lys Thr Glu Ile Lys Arg Ile
965                 970                 975
Leu Ser Val Lys Gly Leu Leu Val Gly Glu Ile Leu Ser Ala Val Leu
980                 985                 990
Ser Gln Glu Gly Ile Asn Ile Leu  Thr His Leu Pro Lys  Gly Ser Ala
995                 1000                 1005
Glu Ala  Glu Leu Met Ser Val  Val Pro Val Phe Tyr  Val Phe His
1010                 1015                 1020
Tyr Leu  Glu Thr Gly Asn His  Trp Asn Ile Phe His  Ser Asp Pro
1025                 1030                 1035
Leu Ile  Glu Lys Gln Lys Leu  Lys Lys Lys Leu Lys  Glu Gly Met
1040                 1045                 1050
Leu Ser  Ile Met Ser Tyr Arg  Asn Ala Asp Tyr Ser  Tyr Ser Val
1055                 1060                 1065
Trp Lys  Gly Gly Ser Ala Ser  Thr Trp Leu Thr Ala  Phe Ala Leu
1070                 1075                 1080
Arg Val  Leu Gly Gln Val Asn  Lys Tyr Val Glu Gln  Asn Gln Asn
1085                 1090                 1095
Ser Ile  Cys Asn Ser Leu Leu  Trp Leu Val Glu Asn  Tyr Gln Leu
1100                 1105                 1110
Asp Asn  Gly Ser Phe Lys Glu  Asn Ser Gln Tyr Gln  Pro Ile Lys
1115                 1120                 1125
Leu Gln  Gly Thr Leu Pro Val  Glu Ala Arg Glu Asn  Ser Leu Tyr
1130                 1135                 1140
Leu Thr  Ala Phe Thr Val Ile  Gly Ile Arg Lys Ala  Phe Asp Ile
1145                 1150                 1155
Cys Pro  Leu Val Lys Ile Asp  Thr Ala Leu Ile Lys  Ala Asp Asn
1160                 1165                 1170
Phe Leu  Leu Glu Asn Thr Leu  Pro Ala Gln Ser Thr  Phe Thr Leu
1175                 1180                 1185
Ala Ile  Ser Ala Tyr Ala Leu  Ser Leu Gly Asp Lys  Thr His Pro
1190                 1195                 1200
Gln Phe  Arg Ser Ile Val Ser  Ala Leu Lys Arg Glu  Ala Leu Val
1205                 1210                 1215
Lys Gly  Asn Pro Pro Ile Tyr  Arg Phe Trp Lys Asp  Asn Leu Gln
1220                 1225                 1230
His Lys  Asp Ser Ser Val Pro  Asn Thr Gly Thr Ala  Arg Met Val
1235                 1240                 1245
Glu Thr  Thr Ala Tyr Ala Leu  Leu Thr Ser Leu Asn  Leu Lys Asp
1250                 1255                 1260
Ile Asn  Tyr Val Asn Pro Val  Ile Lys Trp Leu Ser  Glu Glu Gln
1265                 1270                 1275
Arg Tyr  Gly Gly Gly Phe Tyr  Ser Thr Gln Asp Thr  Ile Asn Ala
1280                 1285                 1290
Ile Glu  Gly Leu Thr Glu Tyr  Ser Leu Leu Val Lys  Gln Leu Arg
1295                 1300                 1305
Leu Ser  Met Asp Ile Asp Val  Ser Tyr Lys His Lys  Gly Ala Leu
1310                 1315                 1320
His Asn  Tyr Lys Met Thr Asp  Lys Asn Phe Leu Gly  Arg Pro Val
1325                 1330                 1335
Glu Val  Leu Leu Asn Asp Asp  Leu Ile Val Ser Thr  Gly Phe Gly
1340                 1345                 1350
Ser Gly  Leu Ala Thr Val His  Val Thr Thr Val Val  His Lys Thr
1355                 1360                 1365
Ser Thr  Ser Glu Glu Val Cys  Ser Phe Tyr Leu Lys  Ile Asp Thr
1370                 1375                 1380
Gln Asp  Ile Glu Ala Ser His  Tyr Arg Gly Tyr Gly  Asn Ser Asp
1385                 1390                 1395
Tyr Lys  Arg Ile Val Ala Cys  Ala Ser Tyr Lys Pro  Ser Arg Glu
1400                 1405                 1410
Glu Ser  Ser Ser Gly Ser Ser  His Ala Val Met Asp  Ile Ser Leu
1415                 1420                 1425
Pro Thr  Gly Ile Ser Ala Asn  Glu Glu Asp Leu Lys  Ala Leu Val
1430                 1435                 1440
Glu Gly  Val Asp Gln Leu Phe  Thr Asp Tyr Gln Ile  Lys Asp Gly
1445                 1450                 1455
His Val  Ile Leu Gln Leu Asn  Ser Ile Pro Ser Ser  Asp Phe Leu
1460                 1465                 1470
Cys Val  Arg Phe Arg Ile Phe  Glu Leu Phe Glu Val  Gly Phe Leu
1475                 1480                 1485
Ser Pro  Ala Thr Phe Thr Val  Tyr Glu Tyr His Arg  Pro Asp Lys
1490                 1495                 1500
Gln Cys  Thr Met Phe Tyr Ser  Thr Ser Asn Ile Lys  Ile Gln Lys
1505                 1510                 1515
Val Cys  Glu Gly Ala Ala Cys  Lys Cys Val Glu Ala  Asp Cys Gly
1520                 1525                 1530
Gln Met  Gln Glu Glu Leu Asp  Leu Thr Ile Ser Ala  Glu Thr Arg
1535                 1540                 1545
Lys Gln  Thr Ala Cys Lys Pro  Glu Ile Ala Tyr Ala  Tyr Lys Val
1550                 1555                 1560
Ser Ile  Thr Ser Ile Thr Val  Glu Asn Val Phe Val  Lys Tyr Lys
1565                 1570                 1575
Ala Thr  Leu Leu Asp Ile Tyr  Lys Thr Gly Glu Ala  Val Ala Glu
1580                 1585                 1590
Lys Asp  Ser Glu Ile Thr Phe  Ile Lys Lys Val Thr  Cys Thr Asn
1595                 1600                 1605
Ala Glu  Leu Val Lys Gly Arg  Gln Tyr Leu Ile Met  Gly Lys Glu
1610                 1615                 1620
Ala Leu  Gln Ile Lys Tyr Asn  Phe Ser Phe Arg Tyr  Ile Tyr Pro
1625                 1630                 1635
Leu Asp  Ser Leu Thr Trp Ile  Glu Tyr Trp Pro Arg  Asp Thr Thr
1640                 1645                 1650
Cys Ser  Ser Cys Gln Ala Phe  Leu Ala Asn Leu Asp  Glu Phe Ala
1655                 1660                 1665
Glu Asp  Ile Phe Leu Asn Gly  Cys
1670                 1675
<210>  252
<211>  108
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  252
Ala Glu Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Val Leu Glu Ala Trp Asp Glu Ile
1               5                   10                  15
Asp Arg Leu Pro Asn Leu Thr Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn
20                  25                  30
Lys Leu Asp Arg Gln Pro Glu Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala
35                  40                  45
Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys Val Asp Gly Ser Leu Ala
50                  55                  60
Glu Ala Lys Glu Ala Ala Asn Ala Glu Leu Asp Ser Tyr Gly Val Ser
65                  70                  75                  80
Asp Phe Tyr Lys Arg Leu Ile Asp Lys Ala Lys Thr Val Glu Gly Val
85                  90                  95
Glu Ala Leu Lys Asp Ala Ile Leu Ala Ala Leu Pro
100                 105
<210>  253
<211>  108
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  253
Ala Glu Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Val Leu Glu Ala Trp Asp Glu Ile
1               5                   10                  15
Asp Arg Leu Pro Asn Leu Thr Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn
20                  25                  30
Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala
35                  40                  45
Lys Lys Leu Ser Glu Ser Gln Ala Pro Lys Val Asp Gly Ser Leu Ala
50                  55                  60
Glu Ala Lys Glu Ala Ala Asn Ala Glu Leu Asp Ser Tyr Gly Val Ser
65                  70                  75                  80
Asp Phe Tyr Lys Arg Leu Ile Asp Lys Ala Lys Thr Val Glu Gly Val
85                  90                  95
Glu Ala Leu Lys Asp Ala Ile Leu Ala Ala Leu Pro
100                 105
<210>  254
<211>  108
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  254
Ala Glu Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Val Leu Glu Ala Trp Asp Glu Ile
1               5                   10                  15
Asp Arg Leu Pro Asn Leu Thr Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn
20                  25                  30
Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala
35                  40                  45
Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys Val Asp Gly Ser Leu Ala
50                  55                  60
Glu Ala Lys Val Leu Ala Asn Arg Glu Leu Asp Lys Tyr Gly Val Ser
65                  70                  75                  80
Asp Phe Tyr Lys Arg Leu Ile Asn Lys Ala Lys Thr Val Glu Gly Val
85                  90                  95
Glu Ala Leu Lys Leu His Ile Leu Ala Ala Leu Pro
100                 105
<210>  255
<211>  108
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  255
Ala Glu Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Val Leu Glu Ala Trp Ser Glu Ile
1               5                   10                  15
Asp Arg Leu Pro Asn Leu Thr Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn
20                  25                  30
Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala
35                  40                  45
Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys Val Asp Gly Ser Leu Ala
50                  55                  60
Glu Ala Lys Glu Ala Ala Asn Ala Glu Leu Asp Ser Tyr Gly Val Ser
65                  70                  75                  80
Asp Phe Tyr Lys Arg Leu Ile Asp Lys Ala Lys Thr Val Glu Gly Val
85                  90                  95
Glu Ala Leu Lys Asp Ala Ile Leu Ala Ala Leu Pro
100                 105
<210>  256
<211>  108
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  256
Ala Glu Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Val Leu Glu Ala Trp Asp Glu Ile
1               5                   10                  15
Glu Arg Leu Pro Asn Leu Thr Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn
20                  25                  30
Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala
35                  40                  45
Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys Val Asp Gly Ser Leu Ala
50                  55                  60
Glu Ala Lys Glu Ala Ala Asn Ala Glu Leu Asp Ser Tyr Gly Val Ser
65                  70                  75                  80
Asp Phe Tyr Lys Arg Leu Ile Asp Lys Ala Lys Thr Val Glu Gly Val
85                  90                  95
Glu Ala Leu Lys Asp Ala Ile Leu Ala Ala Leu Pro
100                 105
<210>  257
<211>  108
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  257
Ala Glu Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Val Leu Glu Ala Trp Asp Glu Ile
1               5                   10                  15
Asp Arg Leu Pro Asn Leu Thr Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Ala
20                  25                  30
Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala
35                  40                  45
Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys Val Asp Gly Ser Leu Ala
50                  55                  60
Glu Ala Lys Glu Ala Ala Asn Ala Glu Leu Asp Ser Tyr Gly Val Ser
65                  70                  75                  80
Asp Phe Tyr Lys Arg Leu Ile Asp Lys Ala Lys Thr Val Glu Gly Val
85                  90                  95
Glu Ala Leu Lys Asp Ala Ile Leu Ala Ala Leu Pro
100                 105
<210>  258
<211>  108
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  258
Ala Glu Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Val Leu Glu Ala Trp Asp Glu Ile
1               5                   10                  15
Asp Arg Leu Pro Asn Leu Thr Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn
20                  25                  30
Lys Leu Glu Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala
35                  40                  45
Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys Val Asp Gly Ser Leu Ala
50                  55                  60
Glu Ala Lys Glu Ala Ala Asn Ala Glu Leu Asp Ser Tyr Gly Val Ser
65                  70                  75                  80
Asp Phe Tyr Lys Arg Leu Ile Asp Lys Ala Lys Thr Val Glu Gly Val
85                  90                  95
Glu Ala Leu Lys Asp Ala Ile Leu Ala Ala Leu Pro
100                 105
<210>  259
<211>  103
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  259
Ala Glu Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Val Leu Glu Ala Trp Asp Glu Ile
1               5                   10                  15
Asp Arg Leu Pro Asn Leu Thr Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn
20                  25                  30
Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala
35                  40                  45
Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Leu Ala Glu Ala Lys Glu Ala
50                  55                  60
Ala Asn Ala Glu Leu Asp Ser Tyr Gly Val Ser Asp Phe Tyr Lys Arg
65                  70                  75                  80
Leu Ile Asp Lys Ala Lys Thr Val Glu Gly Val Glu Ala Leu Lys Asp
85                  90                  95
Ala Ile Leu Ala Ala Leu Pro
100
<210>  260
<211>  57
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  260
Ala Glu Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Val Leu Glu Ala Trp Asp Glu Ile
1               5                   10                  15
Asp Arg Leu Pro Asn Leu Thr Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn
20                  25                  30
Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala
35                  40                  45
Lys Lys Leu Ser Glu Ser Gln Ala Pro
50                  55
<210>  261
<211>  108
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  261
Ala Glu Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Val Leu Glu Ala Trp Asp Glu Ile
1               5                   10                  15
Asp Arg Leu Pro Asn Leu Thr Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn
20                  25                  30
Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala
35                  40                  45
Lys Lys Leu Ser Glu Ser Gln Ala Pro Lys Val Glu Gly Ser Leu Ala
50                  55                  60
Glu Ala Lys Glu Ala Ala Asn Ala Glu Leu Asp Ser Tyr Gly Val Ser
65                  70                  75                  80
Asp Phe Tyr Lys Arg Leu Ile Asp Lys Ala Lys Thr Val Glu Gly Val
85                  90                  95
Glu Ala Leu Lys Asp Ala Ile Leu Ala Ala Leu Pro
100                 105
<210>  262
<211>  108
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  262
Ala Glu Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Val Leu Glu Ala Trp Asp Glu Ile
1               5                   10                  15
Asp Arg Leu Pro Asn Leu Thr Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn
20                  25                  30
Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala
35                  40                  45
Lys Lys Leu Ser Glu Ser Gln Ala Pro Lys Val Ala Gly Ser Leu Ala
50                  55                  60
Glu Ala Lys Glu Ala Ala Asn Ala Glu Leu Asp Ser Tyr Gly Val Ser
65                  70                  75                  80
Asp Phe Tyr Lys Arg Leu Ile Asp Lys Ala Lys Thr Val Glu Gly Val
85                  90                  95
Glu Ala Leu Lys Asp Ala Ile Leu Ala Ala Leu Pro
100                 105
<210>  263
<211>  108
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  263
Ala Glu Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Val Leu Glu Ala Trp Asp Glu Ile
1               5                   10                  15
Asp Arg Leu Pro Asn Leu Thr Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn
20                  25                  30
Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala
35                  40                  45
Lys Lys Leu Glu Ser Ser Gln Ala Pro Lys Val Glu Gly Ser Leu Ala
50                  55                  60
Glu Ala Lys Glu Ala Ala Asn Ala Glu Leu Asp Ser Tyr Gly Val Ser
65                  70                  75                  80
Asp Phe Tyr Lys Arg Leu Ile Asp Lys Ala Lys Thr Val Glu Gly Val
85                  90                  95
Glu Ala Leu Lys Asp Ala Ile Leu Ala Ala Leu Pro
100                 105
<210>  264
<211>  108
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  264
Ala Glu Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Val Leu Glu Ala Trp Asp Glu Ile
1               5                   10                  15
Asp Arg Leu Pro Asn Leu Thr Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn
20                  25                  30
Lys Leu Asp Arg Gln Pro Glu Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala
35                  40                  45
Lys Lys Leu Ser Glu Ser Gln Ala Pro Lys Val Glu Gly Ser Leu Ala
50                  55                  60
Glu Ala Lys Glu Ala Ala Asn Ala Glu Leu Asp Ser Tyr Gly Val Ser
65                  70                  75                  80
Asp Phe Tyr Lys Arg Leu Ile Asp Lys Ala Lys Thr Val Glu Gly Val
85                  90                  95
Glu Ala Leu Lys Asp Ala Ile Leu Ala Ala Leu Pro
100                 105
<210>  265
<211>  57
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  265
Ala Glu Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Val Leu Glu Ala Trp Asp Glu Ile
1               5                   10                  15
Asp Arg Leu Pro Asn Leu Thr Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn
20                  25                  30
Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala
35                  40                  45
Lys Lys Leu Glu Ser Ser Gln Ala Pro
50                  55
<210>  266
<211>  57
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  266
Ala Glu Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Val Leu Glu Ala Trp Asp Glu Ile
1               5                   10                  15
Asp Arg Leu Pro Asn Leu Thr Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn
20                  25                  30
Lys Leu Asp Arg Gln Pro Glu Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala
35                  40                  45
Lys Lys Leu Ser Glu Ser Gln Ala Pro
50                  55
<210>  267
<211>  58
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  267
Ala Glu Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Val Leu Glu Ala Trp Asp Glu Ile
1               5                   10                  15
Asp Arg Leu Pro Asn Leu Thr Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn
20                  25                  30
Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala
35                  40                  45
Lys Lys Leu Ser Glu Ser Gln Ala Pro Lys
50                  55
<210>  268
<211>  108
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  268
Ala Glu Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Val Leu Glu Ala Trp Asp Glu Ile
1               5                   10                  15
Asp Arg Leu Pro Asn Leu Thr Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn
20                  25                  30
Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala
35                  40                  45
Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys Val Glu Gly Ser Leu Ala
50                  55                  60
Glu Ala Lys Glu Ala Ala Asn Ala Glu Leu Asp Ser Tyr Gly Val Ser
65                  70                  75                  80
Asp Phe Tyr Lys Arg Leu Ile Asp Lys Ala Lys Thr Val Glu Gly Val
85                  90                  95
Glu Ala Leu Lys Asp Ala Ile Leu Ala Ala Leu Pro
100                 105
<210>  269
<211>  108
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  269
Ala Glu Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Val Leu Glu Ala Trp Asp Glu Ile
1               5                   10                  15
Asp Arg Leu Pro Asn Leu Thr Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn
20                  25                  30
Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala
35                  40                  45
Lys Lys Leu Asn Glu Ser Gln Ala Pro Lys Val Glu Gly Ser Leu Ala
50                  55                  60
Glu Ala Lys Glu Ala Ala Asn Ala Glu Leu Asp Ser Tyr Gly Val Ser
65                  70                  75                  80
Asp Phe Tyr Lys Arg Leu Ile Asp Lys Ala Lys Thr Val Glu Gly Val
85                  90                  95
Glu Ala Leu Lys Asp Ala Ile Leu Ala Ala Leu Pro
100                 105
<210>  270
<211>  108
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  270
Ala Glu Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Val Leu Glu Ala Trp Asp Glu Ile
1               5                   10                  15
Asp Arg Leu Pro Asn Leu Thr Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn
20                  25                  30
Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala
35                  40                  45
Lys Lys Leu Ser Asp Ser Gln Ala Pro Lys Val Glu Gly Ser Leu Ala
50                  55                  60
Glu Ala Lys Glu Ala Ala Asn Ala Glu Leu Asp Ser Tyr Gly Val Ser
65                  70                  75                  80
Asp Phe Tyr Lys Arg Leu Ile Asp Lys Ala Lys Thr Val Glu Gly Val
85                  90                  95
Glu Ala Leu Lys Asp Ala Ile Leu Ala Ala Leu Pro
100                 105
<210>  271
<211>  62
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  271
Ala Glu Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Val Leu Glu Ala Trp Asp Glu Ile
1               5                   10                  15
Asp Arg Leu Pro Asn Leu Thr Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn
20                  25                  30
Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala
35                  40                  45
Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys Val Asp Gly Ser
50                  55                  60
<210>  272
<211>  58
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  272
Ala Glu Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Arg Asn Ala Tyr Trp Glu Ile
1               5                   10                  15
Ala Leu Leu Pro Asn Leu Thr Asn Gln Gln Lys Arg Ala Phe Ile Arg
20                  25                  30
Lys Leu Tyr Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala
35                  40                  45
Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys
50                  55
<210>  273
<211>  58
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  273
Ala Glu Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Arg Asn Ala Tyr Trp Glu Ile
1               5                   10                  15
Ala Leu Leu Pro Asn Leu Thr Asn Gln Gln Lys Arg Ala Phe Ile Arg
20                  25                  30
Lys Leu Tyr Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala
35                  40                  45
Lys Lys Leu Ser Glu Ser Gln Ala Pro Lys
50                  55
<210>  274
<211>  58
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  274
Ala Glu Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Arg Asn Ala Tyr Trp Glu Ile
1               5                   10                  15
Ala Leu Leu Pro Asn Leu Thr Asn Gln Gln Lys Arg Ala Phe Ile Arg
20                  25                  30
Lys Leu Tyr Arg Gln Pro Glu Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala
35                  40                  45
Lys Lys Leu Ser Glu Ser Gln Ala Pro Lys
50                  55
<210>  275
<211>  58
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  275
Ala Glu Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Leu Ile Glu Ala Ala Ala Glu Ile
1               5                   10                  15
Asp Ala Leu Pro Asn Leu Thr Arg Arg Gln Trp Asn Ala Phe Ile Lys
20                  25                  30
Lys Leu Val Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala
35                  40                  45
Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys
50                  55
<210>  276
<211>  58
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  276
Ala Glu Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Leu Ile Glu Ala Ala Ala Glu Ile
1               5                   10                  15
Asp Ala Leu Pro Asn Leu Thr Arg Arg Gln Trp Asn Ala Phe Ile Lys
20                  25                  30
Lys Leu Val Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala
35                  40                  45
Lys Lys Leu Ser Glu Ser Gln Ala Pro Lys
50                  55
<210>  277
<211>  58
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  277
Ala Glu Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Leu Ile Glu Ala Ala Ala Glu Ile
1               5                   10                  15
Asp Ala Leu Pro Asn Leu Thr Arg Arg Gln Trp Asn Ala Phe Ile Lys
20                  25                  30
Lys Leu Val Arg Gln Pro Glu Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala
35                  40                  45
Lys Lys Leu Ser Glu Ser Gln Ala Pro Lys
50                  55
<210>  278
<211>  58
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  278
Ala Glu Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Gln Asp Ala Ala Ala His Glu Ile
1               5                   10                  15
Arg Trp Leu Pro Asn Leu Thr Phe Asp Gln Arg Val Ala Phe Ile His
20                  25                  30
Lys Leu Ala Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala
35                  40                  45
Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys
50                  55
<210>  279
<211>  58
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  279
Ala Glu Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Gln Asp Ala Ala Ala His Glu Ile
1               5                   10                  15
Arg Trp Leu Pro Asn Leu Thr Phe Asp Gln Arg Val Ala Phe Ile His
20                  25                  30
Lys Leu Ala Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala
35                  40                  45
Lys Lys Leu Ser Glu Ser Gln Ala Pro Lys
50                  55
<210>  280
<211>  58
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  280
Ala Glu Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Gln Asp Ala Ala Ala His Glu Ile
1               5                   10                  15
Arg Trp Leu Pro Asn Leu Thr Phe Asp Gln Arg Val Ala Phe Ile His
20                  25                  30
Lys Leu Ala Arg Gln Pro Glu Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala
35                  40                  45
Lys Lys Leu Ser Glu Ser Gln Ala Pro Lys
50                  55
<210>  281
<211>  58
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  281
Ala Glu Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Asn Leu Phe Ala Gly Trp Glu Ile
1               5                   10                  15
Ser Asp Leu Pro Asn Leu Thr Asp Tyr Gln Arg Asn Ala Phe Ile Tyr
20                  25                  30
Lys Leu Trp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala
35                  40                  45
Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys
50                  55
<210>  282
<211>  58
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  282
Ala Glu Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Asn Leu Phe Ala Gly Trp Glu Ile
1               5                   10                  15
Ser Asp Leu Pro Asn Leu Thr Asp Tyr Gln Arg Asn Ala Phe Ile Tyr
20                  25                  30
Lys Leu Trp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala
35                  40                  45
Lys Lys Leu Ser Glu Ser Gln Ala Pro Lys
50                  55
<210>  283
<211>  58
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  283
Ala Glu Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Asn Leu Phe Ala Gly Trp Glu Ile
1               5                   10                  15
Ser Asp Leu Pro Asn Leu Thr Asp Tyr Gln Arg Asn Ala Phe Ile Tyr
20                  25                  30
Lys Leu Trp Arg Gln Pro Glu Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala
35                  40                  45
Lys Lys Leu Ser Glu Ser Gln Ala Pro Lys
50                  55
<210>  284
<211>  58
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  284
Ala Glu Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Asn Leu Phe Ala Gly Trp Glu Ile
1               5                   10                  15
Ser Asp Leu Pro Asn Leu Thr Asp Tyr Gln Arg Asn Ala Phe Ile Tyr
20                  25                  30
Lys Leu Trp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala
35                  40                  45
Lys Lys Leu Asn Glu Ser Gln Ala Pro Lys
50                  55
<210>  285
<211>  58
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  285
Ala Glu Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Asn Leu Phe Ala Gly Trp Glu Ile
1               5                   10                  15
Ser Asp Leu Pro Asn Leu Thr Asp Tyr Gln Arg Asn Ala Phe Ile Tyr
20                  25                  30
Lys Leu Trp Arg Gln Pro Glu Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala
35                  40                  45
Lys Lys Leu Asn Glu Ser Gln Ala Pro Lys
50                  55
<210>  286
<211>  58
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  286
Ala Glu Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Asn Leu Phe Ala Gly Trp Glu Ile
1               5                   10                  15
Ser Asp Leu Pro Asn Leu Thr Asp Tyr Gln Arg Asn Ala Phe Ile Tyr
20                  25                  30
Lys Leu Trp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala
35                  40                  45
Lys Lys Leu Ser Asp Ser Gln Ala Pro Lys
50                  55
<210>  287
<211>  58
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Модифицированная бактериальная последовательность
<400>  287
Ala Glu Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Asn Leu Phe Ala Gly Trp Glu Ile
1               5                   10                  15
Ser Asp Leu Pro Asn Leu Thr Asp Tyr Gln Arg Asn Ala Phe Ile Tyr
20                  25                  30
Lys Leu Trp Arg Gln Pro Glu Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala
35                  40                  45
Lys Lys Leu Ser Asp Ser Gln Ala Pro Lys
50                  55
<---