СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПОЛА ПТИЦ

1. Способ определения пола эмбриона в птичьем яйце перед вылупливанием, включающий стадии
a. введения в яйцо антитела, предназначенного для соответствия специфическому для пола антигену на эмбрионе, причем антитело является меченым,
b. предоставления возможности меченому антителу мигрировать к специфическому для пола антигену на эмбрионе и связаться с ним,
c. выявления связывания меченых антител на эмбрионе с использованием средств выявления, расположенных снаружи яйца.
2. Способ по п.1, где меченое антитело инъецируется в яйцо предпочтительно микроинъекцией с использованием иглы или микроинъекцией жидкости с использованием струи жидкости под высоким давлением или путем осмоса.
3. Способ по п.1, где меченое антитело инъецируется в белок зародыша.
4. Способ по п.1, где меченое антитело инъецируется в воздушную камеру и диффундирует через внутреннюю оболочку скорлупы.
5. Способ по п.1, где меченое антитело инъецируется перед началом инкубации.
6. Способ по п.1, где меченое антитело инъецируется и ему предоставляется достаточное время для диффузии и миграции к специфическому для пола антигену и связывания с ним на эмбрионе.
,
7. Способ по п.1, где специфический для пола антиген на эмбрионе представляет собой белковый антиген, специфический для W-хромосомы, или белковый антиген, специфический для ZZ-хромосомыили другие косвенно эксперессированные специфические для пола белки.
8. Способ по п.1, где выявление происходит от 2 до 10 дней, предпочтительно от 2 до 7 дней, более предпочтительно от 2 до 5 дней от начала инкубации.
9. Способ по п.1, где специфический для пола антиген на эмбрионе выбран из группы W-специфических генных/белковых экспрессий, в частности CHD1W, ATP5A1W, Spin-W, ASW, и наиболее предпочтительно FET-1 (женский экспрессированный транскрипт; трансмембранный домен) или из ZZ-специфической генной/белковой экспрессии; в частности DMRT1, SF1 и Dax1, или из косвенно экспрессированных специфических для пола белков, в частности AMH (анти-Мюллеровского гормона).
10. Способ по п.1, где антитело представляет собой поликлональное антитело, моноклональное антитело или тяжелую цепь антитела или их фрагмент.
11. Способ по п.1, где присутствие или отсутствие связывания меченых антител с эмбрионом выявляется измерением концентрации меченого антитела близко к бластодиску и сравнением измеренных концентраций с заданным стандартным критерием, предпочтительно полученным из неоплодотворенных или неневылупившихся яиц.
12. Способ по п.1, где присутствие или отсутствие связывания меченых антител с эмбрионом выявляется выявлением неоднородности распределения меченых антител.
13. Способ по п.12, где неоднородность определяется измерением локальных концентраций меченого антитела в области, близкой к бластодиску, и в области, отдаленной от бластодиска, и определением присутствия или отсутствия связывания сравнением различия соотношения указанных измеренных концентраций с заданным критерием, предпочтительно полученным из неоплодотворенных или невылупившихся яиц.
14. Способ по п.13, где область, отдаленная от бластодиска, находится на стороне яичного желтка, противоположной стороне, где расположен бластодиск.
15. Способ по п.1, где антитело мечено маркером, выявляемым светом, предпочтительно флуоресцентной группой.
16. Способ по п.1, где средства выявления включают источник света, детектор и, необязательно, фильтры для улучшения отношения сигнала к шуму поглощенного или испускаемого света, предпочтительно спектрометр.
17. Способ по п.16, включающий первое и второе средства выявления, где первый детектор измеряет концентрацию меченого антитела около бластодиска и где второй детектор измеряет концентрацию меченого антитела в области, удаленной от бластодиска, предпочтительно на другой стороне яичного желтка.
18. Способ по п.16, где длина волн средств выявления выбирается так, чтобы свет от источника света и/или свет, испускаемый метящей группой на антителе, поглощался яичным желтком для отделения измерения первым детектором около бластодиска от измерения вторым детектором на другой стороне яичного желтка.
19. Способ по п.16, где источник света и/или детектор вводятся в яйцо через небольшое отверстие в яичной скорлупе предпочтительно в воздушную камеру, но предпочтительно не через внутреннюю мембрану скорлупы.
20. Способ по п.16, где источник света и/или детектор располагаются снаружи от яйца и где длина волн света возбуждения и/или испускаемого света, по существу, не поглощается или не рассеивается яичной скорлупой.
21. Способ по п.20, где длина волн света возбуждения и/или испускаемого света выбрана от 700 до 2000 нм, предпочтительно от 700 до 1500 нм, более предпочтительно от 700 до 1000 или от 610 до 630 нм.
22. Способ измерения in-ovo меченых антител, включающий
a. предоставление яйца, содержащего меченые молекулы, предпочтительно специфические для пола молекулы, предпочтительнее специфические для пола антитела, причем указанные молекулы имеют функциональную группу, выявляемую средствами выявления in-ovo, предпочтительно флуоресцентную группу,
b. измерение in-ovo концентрации меченых молекул предпочтительно с использованием спектрометра флуоресценции,
c. оценку измеренных количеств меченых молекул предпочтительно для определения пола эмбриона в яйце.
23. Способ по п.22 для измерения меченых молекул около эмбриона или бластодиска, где яйцо предпочтительно располагается широким концом, обращенным кверху, и концентрация меченой молекулы измеряется вблизи бластодиска или эмбриона через воздушную камеру.
24. Способ по п.23, где на стадии c) измеренная концентрация оценивается 1) сравнением измеренной концентрации с заданным критерием, предпочтительно полученным из эталонного яйца, или 2) сравнением измеренной концентрации со второй измеренной концентрацией в области, удаленной от бластодиска, предпочтительно на стороне яичного желтка, противоположной стороне, где локализуется бластодиск.
25. Способ по п.22, где источник света и/или детектор вводятся в яйцо через небольшое отверстие в яичной скорлупе предпочтительно в воздушную камеру, но предпочтительно не через внутреннюю мембрану скорлупы.
26. Устройство для определения пола эмбриона в яйце перед вылупливанием, включающее:
a. средства для введения в яйцо меченой молекулы, предпочтительно меченого антитела, предпочтительно средства для микроинъекции с использованием иглы или средства микроинъекции жидкости с использованием струи жидкости под высоким давлением,
b. средства для измерения in-ovo концентрации меченой молекулы, предпочтительно источник света и детектор, более предпочтительно спектрометр флуоресценции,
c. средства для оценки по измеренным количествам меченой молекулы присутствия или отсутствия связывания меченой молекулы на эмбрионе.
27. Устройство по п.26, включающее первый и второй детекторы, где первый детектор измеряет концентрацию меченого антитела около бластодиска и где второй детектор измеряет концентрацию меченого антитела в области, удаленной от бластодиска, предпочтительно на другой стороне яичного желтка.