КОМПОЗИЦИИ И СПОСОБЫ, ВКЛЮЧАЮЩИЕ ВАРИАНТЫ АЛЬФА-АМИЛАЗЫ С ИЗМЕНЕННЫМИ СВОЙСТВАМИ

1. Выделенный вариант альфа-амилазы, где указанный вариант представляет собой зрелую форму альфа-амилазы, обладающую амилазной активностью и содержащую замену в одном или нескольких положениях, выбранных из группы, состоящей из 1, 2, 3, 4, 5, 7, 15, 16, 17, 18, 19, 22, 25, 26, 28, 29, 30, 32, 35, 36, 37, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 59, 60, 70, 71, 72, 73, 75, 78, 83, 87, 90, 91, 93, 94, 95, 104, 105, 107, 108, 110, 112, 113, 116, 118, 125, 126, 128, 129, 130, 131, 134, 136, 138, 142, 144, 147, 149, 150, 152, 154, 156, 158, 160, 161, 162, 165, 166, 168, 169, 170, 172, 174, 177, 178, 182, 183, 185, 189, 192, 195, 197, 201, 202, 203, 207, 210, 214, 217, 221, 228, 234, 236, 237, 246, 250, 254, 255, 257, 264, 267, 269, 270, 272, 275, 279, 283, 284, 298, 301, 303, 305, 306, 310, 311, 314, 318, 319, 320, 322, 323, 336, 337, 338, 339, 340, 344, 359, 374, 375, 376, 377, 379, 381, 382, 393, 394, 399, 401, 407, 408, 419, 433, 436, 438, 444, 447, 448, 451, 453, 459, 465, 470, 475, 476, 483 и 484;
где положения соответствуют аминокислотным остаткам в аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 2; и
где замена природного аминокислотного остатка в одном или нескольких положениях на другой аминокислотный остаток приводит к варианту альфа-амилазы с коэффициентом эффективности >1,0 для показателя стабильности и коэффициентом эффективности >1,0 для показателя активности.
2. Выделенный вариант альфа-амилазы по п.1, содержащий замену в одном или нескольких положениях, выбранных из группы, состоящей из 7, 29, 35, 53, 60, 72, 87, 108, 116, 126, 128, 129, 130, 131, 134, 136, 138, 142, 156, 161, 165, 178, 182, 185, 189, 192, 195, 197, 202, 210, 214, 217, 221, 234, 246, 269, 303, 310, 337, 340, 374, 401 и 438, и где замена природного аминокислотного остатка на другой аминокислотный остаток приводит к варианту альфа-амилазы с коэффициентом эффективности >1,5 для показателя активности и коэффициентом эффективности >1,0 для показателя стабильности.
3. Выделенный вариант альфа-амилазы по п.1, содержащий замену в одном или нескольких положениях, выбранных из группы, состоящей из 2, 7, 22, 25, 28, 30, 37, 70, 75, 83, 87, 91, 93, 108, 128, 160, 165, 178, 182, 183, 217, 269, 270, 279, 283, 298, 305, 306, 310, 320, 374, 375, 376, 407, 419, 475 и 476, где замена природного аминокислотного остатка на другой аминокислотный остаток приводит к варианту альфа-амилазы с коэффициентом эффективности >1,5 для показателя стабильности и коэффициентом эффективности >1,0 для показателя активности.
4. Выделенный вариант альфа-амилазы по п.1, содержащий замену в одном или нескольких положениях, выбранных из группы, состоящей из 83, 125, 128, 131, 160, 178, 182, 183, 185, 189, 279, 305, 319, 320, 379, 407, 433, 453, 475, 476 и 483.
5. Выделенный вариант альфа-амилазы, содержащий замену в одном или нескольких положениях, выбранных из группы, состоящей из 83, 125, 128, 131, 160, 178, 182, 183, 185, 189, 279, 305, 319, 320, 379, 407, 433, 453, 475, 476 и 483, где положения соответствуют аминокислотным остаткам в аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 2, и где замена обеспечивает по меньшей мере один положительный эффект, выбранный из группы, состоящей из улучшенной эффективности очистки, улучшенной стабильности в моющих средствах, улучшенной термостабильности и улучшенной экспрессии белка.
6. Выделенный вариант альфа-амилазы, где указанный вариант представляет собой зрелую форму альфа-амилазы, обладающую амилазной активностью и содержащую замену в одном или нескольких положениях, выбранных из группы, состоящей из 5, 32, 83, 95, 154, 214, 221, 228, 322, 401, 407, 419, 444, 447, 459, 470, 483 и 484;
где положения соответствуют аминокислотным остаткам в аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 2; и
где замена природного аминокислотного остатка на другой аминокислотный остаток приводит к варианту альфа-амилазы со значением коэффициента эффективности 0,5 или лучше для активности при pH 8, активности при pH 10, активности при 16°C и активности при 32°C, и со значением коэффициента эффективности 0,5 или лучше для стабильности в моющем средстве и для термостабильности.
7. Выделенный вариант альфа-амилазы по любому из предшествующих пунктов, где другой аминокислотный остаток выбран из группы, состоящей из A, C, D, E, F, G, H, I, K, L, M, N, P, Q, R, S, T, V, W и Y, при условии, что другой аминокислотный остаток отличается от природного аминокислотного остатка.
8. Выделенный вариант альфа-амилазы по любому из пп.1-4, дополнительно содержащий замену в положении 243, соответствующем аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 2.
9. Выделенный вариант альфа-амилазы по любому из пп.1-4, дополнительно содержащий делецию в положении 180 и/или в положении 181, соответствующих аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 2.
10. Вариант альфа-амилазы по любому из пп.1-4, где вариант альфа-амилазы получают из исходной альфа-амилазы с аминокислотной последовательностью, которая по меньшей мере на 75% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13 и SEQ ID NO: 14.
11. Выделенный вариант альфа-амилазы по любому из пп.1-4, где вариант альфа-амилазы обладает по меньшей мере 75% идентичностью по последовательности с аминокислотной последовательностью, приведенной в SEQ ID NO: 2
12. Выделенный вариант альфа-амилазы по любому из пп.1-4, где вариант альфа-амилазы обладает по меньшей мере 80% идентичностью по последовательности с аминокислотной последовательностью, приведенной в SEQ ID NO: 2.
13. Выделенный вариант альфа-амилазы по любому из пп.1-4, где вариант альфа-амилазы обладает по меньшей мере 90% идентичностью по последовательности с аминокислотной последовательностью, приведенной в SEQ ID NO: 2.
14. Вариант альфа-амилазы по любому из пп.1-4, где вариант содержит замену в одном или нескольких положениях, выбранных из группы, состоящей из 128, 178, 182, 185 и 189, соответствующих аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 2, где замена обеспечивает улучшенную эффективность очистки или улучшенную стабильность в моющих средствах.
15. Вариант альфа-амилазы по п.1, где вариант альфа-амилазы содержит:
(a) аланин в положении 125,
цистеин в положении 128,
изолейцин в положении 131,
изолейцин в положении 165,
лейцин в положении 178,
глицин в положении 182,
тирозин в положении 202,
аргинин в положении 305,
треонин в положении 319 или
аргинин в положении 475;
(b) замены N128C+K178L+T182G+Y305R+G475K, и
по меньшей мере одну дополнительную замену, выбранную из группы, состоящей из S125A, T131I, T165I, F202Y и D319T; или
(c) замены
N128C+K178L+T182G+F202Y+Y305R+D319T+G475K,
S125A+N128C+K178L+T182G+Y305R+G475K или
S125A+N128C+T131I+T165I+K178L+T182G+Y305R+G475K;
где вариант необязательно дополнительно содержит замену в положении 243 и/или делецию в положении 180 и/или в положении 181; и
где положения соответствуют аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 2.
16. Вариант альфа-амилазы по п.1, где указанный вариант альфа-амилазы содержит замену в положении 475.
17. Вариант альфа-амилазы по п.16, где указанный вариант альфа-амилазы содержит аргинин в положении 475.
18. Вариант альфа-амилазы по п.16 или 17, дополнительно содержащий замену в положении 243 и/или делецию в положении 180 и/или в положении 181.
19. Выделенный вариант альфа-амилазы, где указанный вариант представляет собой зрелую форму, обладающую амилазной активностью и содержащую замену в одном или нескольких положениях, выбранных из группы, состоящей из: 1, 2, 3, 4, 5, 7, 15, 16, 17, 18, 19, 22, 25, 26, 28, 29, 30, 32, 35, 36, 37, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 59, 60, 70, 71, 72, 73, 75, 78, 82, 83, 87, 90, 91, 93, 94, 95, 103, 104, 105, 107, 108, 110, 112, 113, 114, 115, 116, 118, 121, 123, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 134, 135, 136, 138, 140, 142, 144, 147, 149, 150, 152, 154, 156, 158, 159, 160, 161, 162, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 182, 183, 185, 186, 188, 189, 190, 191, 192, 193, 195, 197, 199, 200, 201, 202, 203, 207, 210, 214, 217, 221, 228, 234, 237, 238, 239, 240, 246, 250, 254, 255, 257, 264, 266, 267, 268, 269, 270, 272, 273, 275, 279, 283, 284, 298, 301, 303, 305, 306, 310, 311, 314, 318, 319, 320, 322, 323, 336, 337, 338, 339, 340, 344, 359, 374, 375, 376, 377, 379, 381, 382, 393, 394, 399, 401, 407, 408, 419, 433, 436, 438, 444, 447, 448, 451, 453, 459, 465, 479, 475, 483 и 484;
где положения пронумерованы в соответствии с аминокислотной последовательностью эталонной альфа-амилазы, приведенной как SEQ ID NO: 2.
20. Вариант альфа-амилазы по п.1 или 19, где указанная замена в одном или нескольких положениях представляет собой замену в 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 положениях.
21. Вариант альфа-амилазы по п.1 или 19, где вариант альфа-амилазы получают из исходной альфа-амилазы, выбранной из группы, состоящей из BASE, ACE, ACE-Q и ACE-QK.
22. Вариант альфа-амилазы по п.19, где вариант альфа-амилазы получают из исходной альфа-амилазы с аминокислотной последовательностью, по меньшей мере на 75% идентичной представителю группы, состоящей из SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13 и SEQ ID NO: 14.
23. Выделенная нуклеиновая кислота, кодирующая вариант альфа-амилазы по любому из предшествующих пунктов.
24. Экспрессирующий вектор, содержащий выделенную нуклеиновую кислоту по п.23, в функциональной связи с промотором.
25. Клетка-хозяин, содержащая экспрессирующий вектор по п.24.
26. Чистящая композиция, содержащая вариант альфа-амилазы по любому из предшествующих пунктов.
27. Чистящая композиция по п.26, дополнительно содержащая по меньшей мере один дополнительный фермент, выбранный из группы, состоящей из протеазы, липазы, кутиназы, карбогидразы, целлюлазы, пектиназы, маннаназы, арабиназы, галактаназы, ксиланазы, оксидазы, пергидролазы, пектатлиазы и пероксидазы.
28. Чистящая композиция по п.27, где по меньшей мере один дополнительный фермент представляет собой протеазу.
29. Чистящая композиция по п.28, где по меньшей мере один дополнительный фермент представляет собой субтилизин.
30. Чистящая композиция по п.29, где по меньшей мере один дополнительный фермент представляет собой субтилизин BPN' или его вариант.
31. Чистящая композиция по п.30, где по меньшей мере один дополнительный фермент представляет собой субтилизин BPN'Y217L или его вариант.
32. Способ чистки тканого материала или твердой поверхности, включающий контактирование тканого материала или твердой поверхности с чистящей композицией по п.26.
33. Способ по п.32, где чистящая композиция дополнительно содержит по меньшей мере одно поверхностно-активное вещество.
34. Способ по п.32 или 33, где чистящая композиция дополнительно содержит по меньшей мере один дополнительный фермент, выбранный из группы, состоящей из протеазы, липазы, кутиназы, карбогидразы, целлюлазы, пектиназы, маннаназы, арабиназы, галактаназы, ксиланазы, оксидазы, пергидролазы, пектатлиазы и пероксидазы.
35. Способ по п.34, где по меньшей мере один дополнительный фермент представляет собой протеазу.
36. Способ по п.35, где по меньшей мере один дополнительный фермент представляет собой субтилизин.
37. Способ по п.36, где по меньшей мере один дополнительный фермент представляет собой субтилизин BPN'Y217L.
38. Способ по п.37, где вариант альфа-амилазы содержит замены:
N128C+K178L+T182G+F202Y+S243Q+Y305R+D319T+G475K;
S125A+N128C+K178L+T182G+S243Q+Y305R+G475K; или
S125A+N128C+T131I+T165I+K178L+T182G+S243Q+Y305R+G475K.