СПОСОБ АДРЕСНОГО ВОЗДЕЙСТВИЯ НА ЭКЗОСОМЫ

1. Способ адресного воздействия на внеклеточные везикулы с фосфатидилсерином, экспонированным на поверхности, причем указанный способ включает этап введения молекулы, содержащей:
компонент гамма-карбоксиглутаминовой кислоты (GLA-компонент), причем указанный компонент GLA содержит домен GLA или его активный фрагмент и не содержит активного каталитического домена белка GLA,
в жидкость, которая может содержать внеклеточную везикулу.
2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что внеклеточная везикула является экзосомой.
3. Способ по п. 2, отличающийся тем, что диаметр экзосомы составляет от 30 до 100 нм.
4. Способ по любому из пп. 1-3, отличающийся тем, что плотность везикулы составляет от 1 до 1,5 г/мл, например от 1 до 1,2 г/мл, в частности, от 1,13 до 1,19 г/мл.
5. Способ по любому из пп. 1-4, отличающийся тем, что везикула содержит один или более из трансмембранных белков, независимо выбранных из Lamp-1, Lamp-2, CD 13, CD86, флотиллина, синтаксина-3, CD2, CD36, CD40, CD40L, CD41a, CD44, CD45, ICAM-1, интегрина альфа 4, LiCAM, LFA-1, Mac-1 альфа и бета, Vti-IA и B, CD3 эпсилон и дзета, CD9, CD18, CD37, CD53, CD63, CD81, CD82, CXCR4, FcR, GluR2/3, HLA-DM (MHC II), иммуноглобулинов, компонентов MHC-I или MHC-II, TCR-бета, тетраспанинов и комбинации двух или более из этих белков.
6. Способ по любому из пп. 1-5, отличающийся тем, что указанная везикула высвобождена из нездоровой клетки, например, апоптозной клетки, некротической клетки, раковой клетки, клетки, инфицированной патогеном (например, клетки, инфицированной вирусом, клетки, инфицированной бактериями, или клетки, инфицированной паразитом).
7. Способ по п. 6, отличающийся тем, что клетка представляет собой раковую клетку.
8. Способ по п. 7, отличающийся тем, что клетка представляет собой раковую стволовую клетку.
ex vivo
9. Способ по любому из пп. 1-8, отличающийся тем, что указанная жидкость включает образец, полученный от пациента, , например, образец крови, жидкость, взятую из кисты или опухоли, гомогенизированный биоптат или т.п.
10. Способ по любому из пп. 1-9, отличающийся тем, что домен GLA или его активный фрагмент независимо выбраны из тромбина, фактора VII, фактора IX, фактора X, белка C, белка S, белка Z, остеокальцина, белка GLA матрикса, GAS6, транстиретина, периостина, GLA 1, богатого пролином, GLA 2, богатого пролином, GLA 3, богатого пролином, и GLA 4, богатого пролином.
11. Способ по любому из пп. 1-10, отличающийся тем, что домен GLA или его активный фрагмент происходит из белка S, например, содержит последовательность, показанную в SEQ ID NO: 1.
12. Способ по любому из пп. 1-11, отличающийся тем, что компонент домена GLA дополнительно содержит домен EGF, например, кальций-связывающий домен EGF.
13. Способ по п. 12, отличающийся тем, что конструкт содержит домен EGF, выбранный из тромбина, фактора VII, фактора IX, фактора X, белка C, белка S, белка Z, остеокальцина, белка GLA матрикса, GAS6, транстиретина, периостина, GLA 1, богатого пролином, GLA 2, богатого пролином, GLA 3, богатого пролином, и GLA 4, богатого пролином.
14. Способ по п. 13, отличающийся тем, что конструкт содержит домен EGF, выбранный из белка S.
15. Способ по любому из пп. 1-14, отличающийся тем, что GLA-компонент содержит последовательность, показанную в SEQ ID NO: 6, или ее производное без His-метки, в частности, SEQ ID NO: 6.
16. Способ по любому из пп. 1-15, отличающийся тем, что компонент домена GLA дополнительно содержит домен Kringle.
17. Способ по п. 16, отличающийся тем, что домен Kringle происходит от белка, выбранного из группы, содержащей фактор активации транскрипции 2 (ATF); фактор XII (F12); тромбин (F2); гиалуронан-связывающий белок 2 (HABP2); фактор роста гепатоцитов (HGF); активатор фактора роста гепатоцитов (HGFAC); белок Kremen 1 (KREMEN1); KREMEN2; липопротеин (а) (LPA); LPAL2; белок, стимулирующий макрофаги (MSP или MST1); белок 1, взаимодействующий с фосфоинозитид-3-киназой (PIK3IP1); активатор тканевого плазминогена (PLAT); урокиназу (https://en.wikipedia.org/wiki/PLAUPLAU); плазмин (PLG); PRSS12; трансмембранный рецептор тирозин-протеинкиназы ROR1 (ROR1); и трансмембранный рецептор тирозин-протеинкиназы ROR2 (ROR2).
18. Способ по любому из пп. 1-17, отличающийся тем, что GLA-компонент связан с полезной нагрузкой.
19. Способ по п. 18, отличающийся тем, что GLA-компонент конъюгирован с полезной нагрузкой.
20. Способ по любому из пп. 1-19, отличающийся тем, что GLA-компонент является частью гибридного белка.
21. Способ по п. 19, отличающийся тем, что полезная нагрузка содержит обнаружимую метку.
99m
22. Способ по п. 21, отличающийся тем, что указанная метка выбрана из флуоресцентной молекулы (включая флуоресцентный зонд (например, родаминовый краситель, FITC, FAM, CY5), биотина, фермента, метки (например, HIS-метки, FLAG-метки, myc-метки), радионуклида (в частности, радиоактивного иода, радиоизотопов, например, Tc), люминесцентных меток или соединений, которые можно обнаружить с помощью ЯМР- или ЭПР-спектроскопии, включая случаи, когда обнаружимая метка находится в молекулярном маяке.
23. Способ по любому из пп. 1-22, отличающийся тем, что полезная нагрузка представляет собой гранулу, планшет или метку, например выделяемую гранулу, например, магнитную гранулу.
24. Способ по пп. 18-23, отличающийся тем, что полезная нагрузка связана с GLA-компонентом через линкер.
25. Способ по п. 24, отличающийся тем, что линкер является расщепляемым.
26. Способ по любому из пп. 1-25, отличающийся тем, что способ включает дополнительный этап получения обогащенной популяции везикул.
27. Способ по любому из пп. 1-26, отличающийся тем, что способ включает этап выделения везикул.
28. Способ по любому из пп. 1-21, отличающийся тем, что молекула, содержащая GLA-компонент, является терапевтической.
29. Способ по любому из пп. 17-21 и 29, отличающийся тем, что полезная нагрузка включает лекарственное средство, химиотерапевтическое средство, пептид (включая сшитые пептиды) или биологическое терапевтическое средство, например, противовирусное лекарственное средство, антибактериальное лекарственное средство, антипаразитарный агент, противораковое лекарственное средство, противораковое терапевтическое средство или онколитический вирус или вирусный вектор.
30. Способ по любому из пп. 1-21, 29 и 30, отличающийся тем, что полезная нагрузка содержит токсин, полимер (например, синтетические или встречающиеся в природе полимеры), биологически активные белки (например, ферменты, другие антитела или фрагменты антител), лекарственное средство (низкомолекулярное соединение (химическую структуру), нуклеиновые кислоты и их фрагменты (например, ДНК, РНК и их фрагменты), агент, образующий хелаты с металлами, наночастицы или комбинацию двух или более из указанного.
31. Способ по любому из пп. 1-22 и 24-30, включающий введение молекулы, содержащей GLA-компонент и полезную нагрузку, пациенту, страдающему от рака.
32. Способ по п. 31, отличающийся тем, что рак представляет собой эпителиальный рак, например, рак ободочной и прямой кишки, рак яичка, рак печени, рак желчных путей, рак предстательной железы, рак поджелудочной железы, рак молочной железы, рак яичников, рак шейки матки, рак матки, рак желудка. рак пищевода, рак щитовидной железы, рак почки, рак мочевого пузыря, рак головного мозга, рак головы и шеи или рак легких или, в качестве альтернативы, рак может представлять собой гемобластоз, например, лейкоз, лимфому, миелому и хронические миелопролиферативные заболевания, например, ОМЛ, ХМЛ, ОЛЛ и ХЛЛ.
33. Везикула или популяция везикул, получаемых способом по любому из пп. 1-32.