НОВАЯ ФИТАЗА, СПОСОБ ЕЕ ПОЛУЧЕНИЯ И ЕЕ ПРИМЕНЕНИЕ

1. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты
i) содержащая нуклеотидную последовательность, показанную в SEQ ID NO: 1, кодирующую белок с фитазной активностью, или
ii) обладающая идентичностью последовательности по меньшей мере 83% с нуклеотидной последовательностью, показанной в SEQ ID NO: 1, кодирующей белок с фитазной активностью.
2. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по п. 1, отличающаяся тем, что молекула нуклеиновой кислоты не включает нуклеотидную последовательность, кодирующую N-концевой сигнальный пептид.
3. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по п. 1, отличающаяся тем, что дополнительно содержит кодон-оптимизирующие мутации, учитывающие особенности организма клетки-хозяина.
Pichia pastoris
4. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по п. 3, отличающаяся тем, что организм клетки-хозяина представляет собой .
5. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по п. 3, отличающаяся тем, что молекула нуклеиновой кислоты отличается от соответствующей кодирующей нуклеотидной последовательности дикого типа наличием не менее 50 кодон-оптимизирующих мутаций.
6. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по п. 3, отличающаяся тем, что по меньшей мере 50% кодонов соответствующей нуклеотидной последовательности дикого типа заменены на кодоны, наиболее часто используемые организмом клетки-хозяина.
7. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по п. 3, отличающаяся тем, что все кодоны выделенной молекулы нуклеиновой кислоты заменены на кодоны, наиболее часто используемые организмом клетки-хозяина.
8. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по любому из предшествующих пунктов, кодирующая аминокислотную последовательность белка с фитазной активностью в соответствии с SEQ ID NO: 3.
9. Экспрессирующая конструкция, содержащая нуклеотидную последовательность по любому из пп. 1-8, функционально связанную с элементами, регулирующими экспрессию нуклеотидной последовательности.
10. Экспрессирующая конструкция по п. 9, отличающаяся тем, что элементы, регулирующие экспрессию, включают промотер, функционирующий в клетке-хозяине и, необязательно, терминирующую последовательность.
11. Экспрессирующая конструкция по п. 9 или 10, отличающаяся тем, что клетка-хозяин является клеткой гриба.
Pichia pastoris
12. Экспрессирующая конструкция по п. 11, отличающаяся тем, что клетка гриба является клеткой .
13. Вектор, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты по пп. 1-8 или экспрессирующую конструкцию по любому из пп. 9-12.
14. Способ получения белка, имеющего фитазную ферментативную активность, включающий этапы:
a) введение в клетку-хозяина вектора, i) содержащего элементы, регулирующие экспрессию, функционирующие в клетке-хозяине; и ii) функционально связанного с молекулой нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1 или 2;
b) культивирование клеток-хозяев, полученных на этапе a) в условиях, подходящих для экспрессии белка, и, при необходимости,
c) выделение белка, полученного на этапе b), из культуры клеток.
15. Способ по п. 14, отличающийся тем, что элементы, регулирующие экспрессию, включают в себя промотор, функционирующий в клетке-хозяине и, при необходимости, терминирующую последовательность.
16. Способ по п. 14, отличающийся тем, что клетка-хозяин является дрожжевой клеткой.
Pichia pastoris
17. Способ по п. 16, отличающийся тем, что дрожжевая клетка является клеткой .
18. Способ по п. 17, в котором экспрессия белка осуществляется с использованием метанольной системы экспрессии.
19. Способ по п. 14, отличающийся тем, что белок, выделенный на этапе c), обладает фитазной активностью по меньшей мере 1000 единиц/л.
20. Способ по любому из пп. 14-19, отличающийся тем, что этап выделения включает a) отделение секретируемого белка от компонентов среды и/или b) отделение белка от компонентов клетки-хозяина.
21. Белок, полученный способом по любому из пп. 14-20.
22. Применение белка по п. 21 или полученного способом по любому из пп. 14-20 для изготовления добавок в корм для животных.
23. Добавки в корм для животных, содержащие белок по п. 21 или содержащие белок, полученный способом по любому из пп. 14-20.