ВЕКТОР ЭКСПРЕССИИ МЛЕКОПИТАЮЩИХ

1. Нуклеиновая кислота вектора, применимая для экспрессии по меньшей мере одного целевого полипептида в клетках млекопитающего, включающая:
(а) по меньшей мере одну кассету экспрессии (POI), пригодную для экспрессии целевого полипептида;
(б) кассету экспрессии (MSM), включающую ген селективного маркера млекопитающих;
(в) кассету экспрессии (MASM), включающую амплифицируемый ген селективного маркера млекопитающих;
в которой кассета экспрессии (POI) фланкирована в направлении 5' кассетой экспрессии (MASM), кассета экспрессии (MSM) локализована в направлении 3' от кассеты экспрессии (POI), и в которой кассеты экспрессии (MASM), (POI) и (MSM) расположены в той же ориентации от 5' к 3'.
2. Нуклеиновая кислота вектора по п.1, в которой кассета экспрессии (POI) включает полинуклеотид, кодирующий целевой полипептид.
3. Нуклеиновая кислота вектора по п.1 или 2, которая является кольцевой, и в которой кассета экспрессии (MSM) расположена в направлении 3' кассеты экспрессии (РОГ), и в которой кассета экспрессии (MASM) расположена в направлении 3' кассеты экспрессии (MSM).
4. Нуклеиновая кислота вектора по п.3, в которой вектор включает уникальный сайт линеаризации рестрикции для линеаризации вектора, причем указанный сайт рестрикции для линеаризации локализован между кассетами экспрессии (MSM) и (MASM).
5. Нуклеиновая кислота вектора по п.1, в которой указанная кассета экспрессии (MSM) включает ген, кодирующий ферментативно функциональную неомицинфосфотрансферазу, и в которой указанная кассета экспрессии (MASM) включает ген, кодирующий ферментативно функциональную дигидрофолатрезуктазу (DHFR).
6. Нуклеиновая кислота вектора по п.1, в которой вектор включает по меньшей мере одну дополнительную кассету экспрессии (POI') для экспрессии дополнительного целевого полипептида и в которой дополнительная кассета экспрессии (POI') локализована между кассетой экспрессии (POI) и кассетой экспрессии (MSM), причем кассета экспрессии (POI') расположена в той же ориентации от 5' к 3', что и кассеты экспрессии (POI) и (MSM).
7. Нуклеиновая кислота вектора по п.6 для экспрессии молекулы иммуноглобулина, включающая в каждой кассете экспрессии (POI) и (POI') полинуклеотид, кодирующий или легкую, или тяжелую цепь молекулы иммуноглобулина, или ее функциональных фрагментов, причем каждая кассета экспрессии (POI) и (POI') включает один из указанных полинуклеотидов.
8. Нуклеиновая кислота вектора по п.1, причем указанные кассеты экспрессии включают промотор и/или сайт терминации транскрипции.
9. Нуклеиновая кислота вектора по п.1, причем указанные кассеты экспрессии включают энхансер и/или интрон.
10. Нуклеиновая кислота вектора по п.8 или 9, в которой при наличии кассеты экспрессии (POI) и/или кассеты экспрессии (POI') включает промотор/энхансер ЦМВ и/или в которой кассеты экспрессии (MSM) и (MASM) включают промотор/энхансер SV40 или промотор SV40.
11. Нуклеиновая кислота вектора по п.9, в которой по меньшей мере кассета экспрессии (POI) включает интрон, который расположен между промотором и стартовым кодоном полинуклеотида для экспрессии целевого полипептида.
12. Нуклеиновая кислота вектора по п.9, в которой кассета экспрессии (MASM) включает интрон, который локализован в направлении 3' амплифицируемого гена селективного маркерного млекопитающих.
13. Нуклеиновая кислота вектора по п.1, включающая по меньшей мере одну дополнительную кассету экспрессии (PSM), содержащую прокариотический ген селективного маркера, в которой кассета экспрессии (PSM) локализована между кассетами экспрессии (MSM) и (MASM).
14. Нуклеиновая кислота вектора по п.13, в которой прокариотический ген селективного маркера обеспечивает устойчивость к антибиотику, причем указанный антибиотик выбран из группы, состоящей из ампициллина, канамицина, тетрациклина и хлорамфеникола.
15. Нуклеиновая кислота вектора по п.5, в которой ген DHFR выбран из группы, состоящей из DHFR дикого типа, варианта DHFR, имеющего пониженную чувствительность к МТ по сравнению с DHFR дикого типа, и вариант DHFR, имеющий повышенную чувствительность к МТ по сравнению с DHFR дикого типа.
16. Нуклеиновая кислота вектора по п.1, в которой экспрессирующий вектор выбран из группы, состоящей из:
(а) кольцевой или линейной нуклеиновой кислоты вектора, включающей следующие генетические элементы в определенном порядке, причем направление от 5' к 3' выражено стрелкой →:
I. Промотор кассеты экспрессии (MASM) (→)
II. Ген, кодирующий амплифицируемый селективный маркер для клеток млекопитающих, кассеты экспрессии (MASM) (→)
III. Интрон кассеты экспрессии (MASM) (→)
IV. ПолиА сайт кассеты экспрессии (MASM) (→)
V. Промотор кассеты экспрессии (POI) (→)
VI. Интрон кассеты экспрессии (POI) (→)
VII. Полинуклеотид, кодирующий целевой полипептид, инсертированный в кассету экспрессии (POI) (→)
VIII. ПолиА сайт кассеты экспрессии (POI) (→)
IX. Промотор кассеты экспрессии (POI') (→)
X. Интрон кассеты экспрессии (POI') (→)
XI. Полинуклеотид, кодирующий дополнительный целевой полипептид, который инсертирован в кассету экспрессии (POI') (→)
XII. ПолиА сайт кассеты экспрессии (POI') (→)
XIII. Промотор кассеты экспрессии (MSM) (→)
XIV. Ген, кодирующий селективный маркер для клеток млекопитающих, кассеты экспрессии (MSM) (→)
XV. ПолиА сайт кассеты экспрессии (MSM) (→)
XVI. Кассета экспрессии PSM (→) или (←)
XVII. Сайт рестрикции для линеаризации, если нуклеиновая кислота вектора кольцевая;
(б) нуклеиновая кислота вектора, показанная в виде Seq. ID No.1, или Seq. ID No.16, или их производного, включающая то же расположение генетических элементов.
17. Способ получения нуклеиновой кислоты вектора по меньшей мере по одному из пп.1-16, причем указанный способ включает сборку по меньшей мере следующих генетических элементов:
(а) по меньшей мере одной кассеты экспрессии (POI) для экспрессии целевого полипептида;
(б) кассеты экспрессии (MSM), включающей ген селективного маркера млекопитающих;
(в) кассеты экспрессии (MASM), включающей амплифицированный ген селективного маркера млекопитающих;
таким образом, что кассета экспрессии (POI) фланкирована в направлении 5' кассетой экспрессии (MASM), кассета экспрессии (MSM) локализована в направлении 3' от кассеты экспрессии (POI), и в которой кассеты экспрессии (MASM), (POI) и (MSM) расположены в той же ориентации от 5' к 3'.
18. Способ по п.17 для получения кольцевой нуклеиновой кислоты вектора, включающей сборку генетических элементов таким образом, что кассета экспрессии (MSM) расположена в направлении 3' от кассеты экспрессии (POI), и в которой кассета экспрессии (MASM) расположена в направлении 3' от кассеты экспрессии (MSM).
19. Клетки млекопитающих-хозяева, включающие нуклеиновую кислоту вектора по меньшей мере по одному из пп.1-16.
20. Клетки млекопитающих-хозяева по п.19, выбранные из группы, состоящей из СОР, L, С127, Sp2/0, NS-0, NS-1, NIH3T3, РС12, PC12h, BHK и СНО, COS1, COS3, COS7, CV1, Vero, HeLa, НЕК-293, производных от сетчатки клеток PER-C6, производных от диплоидных фибробластов клеток, клеток миеломы и HepG2.
21. Способ получения клеток-хозяев по п.19 или 20, в котором клетки-хозяева трансфецированы нуклеиновой кислотой вектора по меньшей мере по одному из пп.1-16.
22. Способ получения целевого полипептида, включающий культивирование по меньшей мере одной клетки-хозяина по п.19 в культуральной среде для клеток в условиях, допускающих экспрессию указанного целевого полипептида.
23. Способ по п.22, причем указанный целевой полипептид секретируется в культуральную среду клеток и выделяется из культуральной среды клеток.
24. Способ по п.22 или 23, причем целевой полипептид является молекулой иммуноглобулина или ее функциональным фрагментом.
25. Полипептид, полученный способом по меньшей мере по одному из пп.22-24.
26. Полипептид по п.25, причем указанный полипептид является молекулой иммуноглобулина или ее функциональным фрагментом.