СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КУЛЬТУРАЛЬНОЙ РОСТОВОЙ ДОБАВКИ И БИОСОВМЕСТИМОГО ГИДРОГЕЛЯ НА ОСНОВЕ ЛИЗАТА ТРОМБОЦИТОВ ЧЕЛОВЕКА

1. Способ получения культуральной ростовой добавки и биосовместимого гидрогеля на основе лизата тромбоцитов человека, включающий его приготовление из тромбоцитарной массы (ТМ) доноров для получения на его основе добавки к среде культивирования для наращивания клеточной массы стволовых, прогениторных, дифференцированных и опухолевых клеток человека, нормирование образца ТМ по содержанию тромбоцитов путем центрифугирования ТМ при 3130 g в течение 40 минут при 20°C и ресуспендирование осадка в супернатанте заданного объема до концентрации тромбоцитов 1,75×109 клеток/мл, 3-кратный температурный лизис тромбоцитов путем замораживания на сутки до -80°C и размораживания при +37°C, осаждение клеточного дебриса путем центрифугирования при 3130 g, 40 минут, 20°C, сбор супернатанта, микроскопический контроль (×200) на наличие в поле зрения не более 3-х фрагментов тромбоцитов, и далее его стандартизацию путем пулирования равных по объему образцов, полученных из ТМ не менее 12 доноров обеих тендерных групп, далее центрифугирования пулированного ЛТ при 3130 g, 40 минут, 20°C и осуществление фильтрации образца на фильтрах 0,45 мкм и 0,22 мкм, наконец, разливание по аликвотам требуемого объема, отличающийся тем, что полученный пулированный ЛТ лиофилизируют.
2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что для получения среды с ростовой добавкой, содержащей фибриноген, лиофилизированный ЛТ доводят стерильной водой для инъекций до исходного (до лиофилизации) объема и при дальнейшей работе in vitro добавляют к среде для культивирования с гепарином (1-2 ЕД/мл среды) в количестве 5-10% от ее общего объема.
2+
3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что для получения среды с ростовой добавкой, очищенной от фибриногена, добавляют лиофилизированный ЛТ к среде культивирования, содержащей ионы Са, без гепарина в количестве 5-10% от ее объема, помещают в термостат (при 37°C в течение 4 часов), сформированный фибриновый сгусток стабилизируют в холодильнике (при 4°C в течение 16 часов), затем отделяют сгусток от стенок пробирки и центрифугируют (280 g в течение 10 минут при комнатной температуре), супернатант фильтруют через сито с диаметром отверстий 40 мкм и фильтрат используют для культивирования клеток.
4. Способ по п. 1, отличающийся тем, что для получения ЛТ, очищенного от фибриногена, к разведенному (до исходного объема) в воде для инъекций лиофилизированному ЛТ добавляют CaCl2 до конечной концентрации 16-20 ммоль/л для формирования сгустка, далее помещают в термостат (при 37°C на 4 часа), сформированный в ЛТ фибриновый сгусток стабилизируют в холодильнике (при 4°C в течение 16 ч), далее сгусток отделяют от плазмы и центрифугируют (280 g, 10 минут при комнатной температуре) и полученный супернатант, свободный от фибриногена, используют в качестве ростовой добавки к средам для культивирования клеток.
5. Способ по п. 4, отличающийся тем, что полученный супернатант используют для получения мягких лекарственных форм накожного применения в целях регенеративной медицины и для создания косметических средств.
6. Способ по п. 1, отличающийся тем, что для получения гидрогеля в целях использования при 3D культивировании лиофилизированный ЛТ разводят в воде для инъекции до исходного объема, добавляют в количестве 10-15% в ростовую среду, содержащую Са2+ в концентрации 10-30 ммоль/л и сформированный гидрогель используют для культивирования клеток, клеточных ассоциатов, микроорганов, а также в качестве «чернил» для 3D биопечати.