Рестрикция гуморального иммунного ответа на антигены тромбоцитов систем НРА и HLA у гематологических больных

Приложение 1

сравнению с нормальными значениями. Клинически манифестный гемолиз с изменением цвета кожи и мочи, билиру-бинемией различной степени выраженности и постоянным превышением нормального уровня ЛДГ сыворотки крови в 5-6 раз и более отмечался при размерах ПНГ-клона, превышающих 80%. Изучение динамики ПНГ-клона у 28 больных показало, что у У больных (п = 7) наблюдалось постепенное увеличение ПНГ-клона. В том числе нарастание размеров клона на 10% и более отмечено у 3 (10,7%) всех обследованных. У 1 больной за 2,5 года наблюдения клон вырос почти в 3 раза по сравнению с исходным уровнем

(с 30,3 до 82,4%) без существенного влияния на клиническое течение заболевания, несмотря на постепенно нарастающие признаки скрытого гемолиза. У 3 больных отмечено снижение содержания клеток с ПНГ-фенотипом, вплоть до исчезновения (у 1 больного с исходным клоном 1,3%). В этой подгруппе тенденция к уменьшению уровня патологических клеток наблюдалась у 1 больной с первично определенным клоном 80,7%. Что касается большей части больных АА/ПНГ - 13 (46,4%) в подгруппе и 5 больных с отсутствием патологического клона, то данные проточной цитометрии у них оставались стабильными.

Определение генетических полиморфизмов CCR5-A32 и CCR2-64I у доноров и ВИЧ-1-инфицированных

больных

Глинщикова О.А., Февралева И.С., Макарик Т.В., Пивник А.В., Судариков А.Б. ФГБУ Гематологический научный центр Минздрава России, Москва; Московский клинический научно-практический центр департамента

здравоохранения Москвы

Введение. Полиморфизмы генов, кодирующих хемо-киновые рецепторы CCR5 и CCR2, которые являются ко-рецепторами для вируса ВИЧ-1, могут влиять на вероятность заражения и течение ВИЧ-инфекции. Гомозиготная мутация CCR5-Д32, при которой на поверхности клеток отсутствует функциональный белок CCR5, полностью препятствует проникновению вируса в клетки хозяина. По сравнению с носителями нормального генотипа у больных с гетерозиготной мутацией CCR5-Д32 медленнее развиваются симптомы СПИДа, меньше вирусная нагрузка, медленнее снижается количество CD4+T-клеток. В отношении других полиморфизмов генов (CCR5-59029, CCR2-64I, SDF1-3'A и др.), связанных с проникновением ВИЧ-1 в клетки, данные литературы не так однозначны. Кроме того, было показано, что распространенность этих мутаций отличается у разных этнических групп. Так, частота мутации CCR5-Д32 у представителей европеоидной расы значительно выше, чем у африканцев и азиатов. Для русских и украинцев частота гетерозиготной мутации CCR5-Д32 составляет в среднем 21%.

Цель работы. Определение частоты генотипов CCR5-Д32 и CCR2-64I у доноров и ВИЧ-1-инфицированных больных (ВИЧ+).

Материалы и методы. Исследовано 59 образцов ДНК ВИЧ+-больных и 77 образцов ДНК доноров. Мультиплексную ПЦР в режиме реального времени для определения полиморфизмов CCR5-A32 и CCR2-64I проводили с праймерами, разработанными с помощью программы Primer 3.0, с наборами реагентов фирмы "Синтол" в соответствии с инструкцией.

Результаты и обсуждение. Гетерозиготная мутация CCR5-A32 выявлена у 20,8% доноров и 13,6% ВИЧ+-больных. Гомозиготная мутация CCR5-A32 - у 2,6% доноров и не обнаружена у ВИЧ+-больных. Гетерозиготная мутация CCR2-64I выявлена у 22,1% доноров и 23,7% ВИЧ+-больных. Гомозиготная мутация CCR2-64I выявлена у 2,6% доноров и не обнаружена у ВИЧ+-больных.

Заключение. Выявленные нами частоты распространения мутаций CCR5-A32 и CCR2-64I совпадают с данными литературы. Получены статистически значимые различия по частоте встречаемости генотипов CCR5-A32 в группах доноров и ВИЧ-инфицированных. По результатам частотного анализа в группе ВИЧ-инфицированных данная мутация встречается в гетерозиготном состоянии в 1,5 раза реже (p < 0,05), чем у доноров, а в гомозиготном не встречается вообще. Полученные результаты говорят в пользу гипотезы о протективных свойствах мутантного аллеля CCR5-A32.

Рестрикция гуморального иммунного ответа на антигены тромбоцитов систем НРА и ИЬД

у гематологических больных

Головкина Л.Л., Атрощенко Г.В., Пушкина Т.Д., Васильева М.Н., Михайлова Е.А. ФГБУ Гематологический научный центр Минздрава России, Москва

Введение. Аллоиммунизация гематологических больных к антигенам систем НРА (Human Platelet Antigens) и HLA (Human Leukocyte Antigens) класса I является одним из основных иммунологических осложнений трансфузионной терапии тромбоцитами. В инициации гуморального иммунного ответа важную роль играют молекулы HLA класса II: аминокислотный состав пептидсвязывающих сайтов имму-нокомпетентных клеток влияет на презентацию чужеродных белков рецепторам Т-лимфоцитов. Полиморфизм антигенов систем НРА и HLA, определяемый заменами аминокислот, влияет на презентацию иммуногенных олигопептидов вследствие изменения их пространственной конфигурации. HLA-рестриктированные механизмы аллоиммунизации на антигены систем HLA и НРА в трансфузиологии изучены недостаточно.

Цель работы. Изучение влияния НРА- и HLA-генотипа больного на антителообразование при трансфузиях тромбоцитов.

Материалы и методы. Обследованы 29 больных апла-стической анемией (АА), 18 - острым лимфобластным лейкозом (ОЛЛ), 20 - острым миелобластным лейкозом (ОМЛ), 300 доноров. Тканевое типирование локусов НЬА-ЭКВ1, -DQB1 (низкое и высокое разрешение) выполняли методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с секвенс-специфи-ческими праймерами, генотипирование локусов НРА-1, -2, -3, -4, -5, -6, -15 - методом ПЦР с аллель-специфическими праймерами. Сопоставление результатов иммуноферментно-го анализа с нативными и лишенными НЬА тромбоцитами, микролимфоцитотоксического теста применяли для выявления и определения направленности антител, тромбоциты доноров с известным НРА-генотипом применяли для изучения специфичности анти-НРА-антител.

Результаты и обсуждение. Способность к антитело-образованию у больных зависела от нозологической формы заболеваний, которые по частоте аллоиммунизации можно представить в следующем порядке: АА - ОМЛ - ОЛЛ. Опре-

Гематол. и трансфузиол., 2014, т. 59, № 1

делены маркеры предрасположенности к образованию: антител анти-НРА-1Ь у больных ОЛЛ - ген HLA-DRB1*07:01 и генотип HLA-DRB1*07:01,-DQB1*02,*03:01; антител анти-НРА-5Ь у больных ОМЛ - ген HLA-DQB1*02, полиспецифических антител анти-НЬА у больных АА -НМ-ЩВ1*03:01. У больных ОМЛ с анти-^А- и анти-НРА-антителами с большей частотой выявляли гены НМ^В1*07:01 и -DQB1*02. Частота аллоиммунизации не зависела от количества трансфузий, а определялась исключительно НЬА-генами больного.

Заключение. Аллоиммунизация к антигенам систем НРА и НЬА зависит от нозологической формы заболевания. Генетические маркеры предрасположенности к инициации гуморального иммунного ответа на аллоантигены систем НРА и НЬА являются определяющими. Практическая значимость результатов: больным с маркерами предрасположенности к образованию анти-НЬА-антител предпочтительно переливать аппаратные тромбоконцентраты, больным с маркерами предрасположенности к образованию анти-НРА-антител -тромбоциты от НРА-совместимых доноров.

Недостаточность трансплантата при трансплантации аллогенного костного мозга

у больных апластической анемией

Голубовская И.К., Рудакова Т.А., Боровкова А.С., Успенская О.С., Бабенко Е.В., Бархатов И.М., Алянский А.Л., Кулагин А.Д., Афанасьев Б.В. НИИ детской онкологии, гематологии и трансплантологии им.Р.М. Горбачевой, Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский

университет им. акад. И.П.Павлова

Введение. Трансплантация аллогенного костного мозга (алло-ТКМ) является единственным радикальным методом лечения апластической анемии (АА). Среди актуальных проблем ТКМ при АА, особенно у тяжело предлеченных больных, остается недостаточность трансплантата (НТ), включающая первичное неприживление, вторичное отторжение и тяжелую гипофункцию.

Цель работы. Оценить частоту первичного неприживления, вторичного отторжения и тяжелой гипофункции трансплантата и факторы, влияющие на качество приживления трансплантата.

Материалы и методы. В анализ включены 52 больных АА, в их числе 40 -приобретенной АА (ПАА) и 12 -конституциональной АА (КАА), в том числе 9 больных анемией Фанкони (АФ), 3 - анемией Даймонда-Блекфена (ДБА), получившие в период 05.1999 - 12.2013 алло-ТКМ от НЬА-совместимого родственного донора (п = 25), НЬА-совместимого неродственного донора (п = 26), гаплои-дентичного донора (п = 1). Медиана возраста на момент проведения ТКМ составила 17 (2-38) лет (ПАА - 19 лет, КАА - 11 лет). Медиана времени от момента установления диагноза до момента проведения ТКМ составила при ПАА 20 (1-89) мес, при КАА 24 (8-247) мес. Флударабинсодержа-щие режимы были применены у 32 (80%) больных ПАА, у всех (100%) больных КАА. Оценивали факторы, потенциально влияющие на качество приживления трансплантата, такие как возраст, количество трансфузий эритроцитов и тромбоцитов, концентрация ферритина до ТКМ, тип донора, кондиционирование и базовые характеристики трансплантата.

Результаты. НТ зарегистрирована у 21 (40%) больного (у 17 больных ПАА, у 1 - АФ, у 3 - ДБА), в том числе первич-

ное неприживление у 8 (у 5 больных ПАА, у 1 - АФ, у 2 - ДБА), отторжение трансплантата у 7 больных (у 6 больных ПАА, у - ДБА). У 6 больных ПАА имелись признаки гипофункции трансплантата (персистенция панцитопении в течение более 6 мес после ТКМ на фоне полного донорского химеризма). Сравнительная характеристика групп с НТ и устойчивым приживлением трансплантата (ПТ) приведена в таблице.

Статус на момент ТКМ, медиана НТ (n = 21) ПТ (n = 31) Р

Возраст, годы 15 (3-37) 16 (6-37) 0,07

Период "диагноз - ТКМ", мес 20(1-205) 8,2 (1-93) 0,11

Концентрация ферритина, 2150 1382 0,09

мкг/л

Количество трансфузий эри- 58(6-670) 30(7-130) 0,04

троцитов, доз

Количество трансфузий тром- 60(11-340) 20(8-100) 0,01

боцитов, доз

Неродственный донор 13 (62%) 14 (45%) 0,18

Флударабин в режиме конди- 18 (86%) 26 (84%) 0,6

ционирования

Количество КС, • 108/кг 3,3 3,5 0,5

Количество CD34+, • 106/кг 4 3,8 0,5

Заключение. Высокая частота первичного неприживления, отторжения и гипофункции трансплантата у больных АА связана с поздним направлением больных на ТКМ, алло-сенсибилизацией и перегрузкой железом в результате множественных гемотрансфузий.

Гетерогенность острого миелоидного лейкоза с транслокацией ^8;21)^22^22)

Грицаев С.В., Мартынкевич И.С., Зюзгин И.С., Карягина Е.В., Кострома И.И., Мартыненко Л.С., Петрова Е.В., Цыбакова Н.Ю., Иванова М.П., Тиранова С.А., Потихонова Н.А., Абдулкадыров К.М. ФГБУ Российский НИИ гематологии и трансфузиологии ФМБА России; Ленинградская областная клиническая больница; ГБУЗ Городская больница

№15, Санкт-Петербург

Введение. Среди больных острым миелоидным лейкозом (ОМЛ) из группы благоприятного прогноза, которая характеризуется наличием ^15;17), ^8;21) и ту(16), нередки случаи рецидива и/или резистентности к химиотерапии (ХТ). Этим больным, как и больным с неблагоприятными вариантами кариотипа, показана трансплантация аллогенных гемопоэти-ческих стволовых клеток (алло-ТГСК).

Цель работы. Охарактеризовать клинико-гематологиче-скую вариабельность ОМЛ с транслокацией ^8;21) и выделить признаки, сопряженные с агрессивным течением.

Материалы и методы. Осуществлен ретроспективный анализ результатов обследования 44 больных и лечения 36 больных ОМЛ с t(8;21) в возрасте от 11 до 70 лет. Проведено исследование кариотипа методом GTG, а также изучение мутационного статуса генов FLT3, NPM1, NRAS и c-Kit методом ПЦР-диагностики.

Результаты и обсуждение. У 82% больных верифицирован М2-вариант по классификации FAB. Остальные случаи представлены М1- и М4-вариантами. У 1 больного диагностирован вторичный ОМЛ. У 24 больных выявлены дополнитель-