АНАЛИЗ БЕТА-КАЗЕИНА МОЛОКА И МОЛОЧНЫХ ПРОДУКТОВ

1. Способ определения количеств вариантов бета-казеина типа A1 или вариантов бета-казеина типа A2 в композиции с точностью более 80%, где варианты бета-казеина типа A1 представляют собой варианты бета-казеина, содержащие гистидин в положении 67 аминокислотной последовательности бета-казеина, а варианты бета-казеина типа A2 представляют собой варианты бета-казеина, содержащие пролин в положении 67 аминокислотной последовательности бета-казеина, и где композиция представляет собой молоко или продукт, изготовленный из молока, включающий этапы:
(i) приведения в контакт композиции с химотрипсином в условиях, позволяющих расщепление бета-казеинов в композиции химотрипсином;
(ii) получения водного раствора пептидов, образованных при расщеплении бета-казеина;
(iii) определения концентраций:
a) двух или более пептидов, образованных при расщеплении бета-казеина, присутствующих в растворе, причем каждый пептид содержит от 8 до 20 аминокислотных остатков и содержит гистидин в положении, соответствующем положению 67 аминокислотной последовательности бета-казеина; а также
b) двух или более пептидов, образованных при расщеплении бета-казеина, присутствующих в растворе, причем каждый пептид содержит от 8 до 20 аминокислотных остатков и содержит пролин в положении, соответствующем положению 67 аминокислотной последовательности бета-казеина;
путем анализа смеси с применением жидкостной хроматографии-масс-спектрометрии; и
(iv) вычисления концентрации вариантов бета-казеина типа А1 в композиции или концентрации вариантов бета-казеина типа А2 в композиции с использованием концентраций пептидов, образованных при расщеплении бета-казеина, определенных на этапе (iii).
2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что варианты бета-казеина типа А1 содержат любые одно или более из: бета-казеина А1, бета-казеина В, бета-казеина С, бета-казеина F и бета-казеина G.
3. Способ по п. 1 или 2, отличающийся тем, что варианты бета-казеина типа А1 содержат только бета-казеин A1.
4. Способ по любому из пп. 1-3, отличающийся тем, что варианты бета-казеина А2 типа содержат любые одно или более из: бета-казеина типа A2, бета-казеина A3, бета-казеина D, бета-казеина E, бета-казеина H1, бета-казеина H2 и бета-казеина I.
5. Способ по любому из пп. 1-4, отличающийся тем, что варианты бета-казеина типа А1 содержат только бета-казеин A2.
6. Способ по любому из пп. 1-5, отличающийся тем, что варианты бета-казеина типа A1 включают только бета-казеин A1 и варианты бета-казеина типа А2 включают только бета-казеин А2.
7. Способ по любому из пп. 1-6, отличающийся тем, что определяют концентрации трех или четырех пептидов, образованных при расщеплении бета-казеина, содержащих гистидин в положении, соответствующем положению 67 аминокислотной последовательности бета-казеина.
8. Способ по п. 7, отличающийся тем, что молоко представляет собой молоко крупного рогатого скота, а пептиды, образованные при расщеплении бета-казеина, выбирают из группы, содержащей:
(i) VYPFPGPIHN;
(i) SLVYPFPGPIHN;
(iii) VYPFPGPIHNSLPQ; и
(iv) SLVYPFPGPIHNSLPQ.
9. Способ по любому из пп. 1-6, отличающийся тем, что определяют концентрации трех или четырех пептидов, образованных при расщеплении бета-казеина, содержащих пролин в положении, соответствующем положению 67 аминокислотной последовательности бета-казеина.
10. Способ по п. 8, отличающийся тем, что молоко представляет собой молоко крупного рогатого скота, а пептиды, образованные при расщеплении бета-казеина, выбирают из группы, содержащей:
(i) VYPFPGPIPN;
(ii) SLVYPFPGPIPN;
(iii) VYPFPGPIPNSLPQ; и
(iv) SLVYPFPGPIPNSLPQ.
11. Способ по любому из пп. 1-10, отличающийся тем, что смесь, анализируемая с применением жидкостной хроматографии/масс-спектрометрии, содержит изотопно-меченые пептиды, соответствующие каждому из пептидов  из а) и b) этапа (iii).
12. Способ по п. 11, отличающийся тем, что изотопно-меченые пептиды соответствуют следующим пептидам, образованным при расщеплении:
<b>Пептид, образованный при расщеплении</b>
<b>Изотопно-меченый пептид</b>
VYPFPGPIHN
(*V)YPFPGPIHN
SLVYPFPGPIHN
SL(*V)YPFPGPIHN
VYPFPGPIHNSLPQ
VYPFPGPIHNS(*L)PQ
SLVYPFPGPIHNSLPQ
SL(*V)YPFPGPIHNSLPQ
13. Способ по п. 11, отличающийся тем, что изотопно-меченые пептиды соответствуют следующим пептидам, образованным при расщеплении:
<b>Пептид, образованный при расщеплении</b>
<b>Изотопно-меченый пептид</b>
VYPFPGPIPN
(*V)YPFPGPIPN
SLVYPFPGPIPN
SL(*V)YPFPGPIPN
VYPFPGPIPNSLPQ
VYPFPGPIPNS(*L)PQ
SLVYPFPGPIPNSLPQ
SL(*V)YPFPGPIPNSLPQ
14. Способ по п. 1, отличающийся тем, что молоко представляет собой молоко крупного рогатого скота и на этапе (iii) определяют концентрации следующих пептидов:
(i) VYPFPGPIHN;
(ii) SLVYPFPGPIHN;
(iii) VYPFPGPIHNSLPQ;
(iv) SLVYPFPGPIHNSLPQ;
(v) VYPFPGPIPN;
(vi) SLVYPFPGPIPN;
(vii) VYPFPGPIPNSLPQ;
(viii) SLVYPFPGPIPNSLPQ.
15. Способ по любому из пп. 1-14, отличающийся тем, что количества вариантов бета-казеина типа А1 и вариантов бета-казеина типа А2 в композиции определяют с точностью более 90%.
16. Способ по любому из пп. 1-15, отличающийся тем, что количества вариантов бета-казеина типа А1 и вариантов бета-казеина типа А2 в композиции определяют с точностью более 95%.
17. Способ по любому из пп. 1-16, отличающийся тем, что количества вариантов бета-казеина типа А1 и вариантов бета-казеина типа А2 в композиции определяют с точностью более 95%.
18. Способ по любому из пп. 1-17, отличающийся тем, что композиция представляет собой молоко крупного рогатого скота или молочный продукт, изготовленный из молока крупного рогатого скота.
19. Способ по п. 18, отличающийся тем, что молоко представляет собой свежее молоко, сырое молоко, сухое порошковое молоко, жидкое молоко, восстановленное из порошка, обезжиренное молоко, гомогенизированное молоко, сгущенное молоко, концентрированное молоко, молоко с вкусоароматическими добавками, ультрапастеризованное молоко, пастеризованное молоко или непастеризованное молоко.
20. Способ по п. 18, отличающийся тем, что молочный продукт представляет собой детскую смесь, сливки, йогурт, творог, сыр, масло или мороженое.