Патогенетические особенности бактериального вагиноза

Секция «Акушерство и гинекология»

patients in the area of transformation found a combination of different degrees of epithelial neoplasia - polymorphic lesions. Results. The diagnosis was made at the maximum extent of the damage. Colposcopic picture in the 1st group of patients was more different. Almost 2 times more common atsetobely thick epithelium (ABE) was found as a coarse mosaic, as well as a large area with multiple swellings in the mouths of glands resembling "yeast pancake". As prolong postpartum period in two patients worsening ectopia, identified during pregnancy, accompanied by the detection of areas specific to Cin-1, previously hidden inside the cervical canal. Colposcopic picture in these patients was characterized by deeper lesions of the cervix: a combination of active proliferation of stromal edema, detsiduozom, increased vascularization, bleeding. When comparing the results of histological examination of biopsy material with full preliminary study of the transformation zone in the main group level of damage coincided with colposcopic pattern in 42.8% of cases. It should be noted that patients in the control group during the inspection also revealed the phenomenon of ectopic expressed without damage cervical epithelium during colposcopy. Colposcopic and cytological control was performed every 2-3 months, followed by surgery in 2 patients and final morphological confirmation. The other patients with ectopia were made cauterization with the drug solkovalin once. Follow-up examination was performed 6-8 weeks after completion of treatment. Conclusion. In order to prevent the development of deep lesions of the cervix it is necessary to conduct inspection of the cervix in the mirror for the first two months after birth. The presence of cervical ectopic pregnancy is a risk factor for developing cervical disease background.

ПАТОГЕНЕТИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ БАКТЕРИАЛЬНОГО ВАГИНОЗА

А.М. Рамазанова, В.О. Шпирко

Научные руководители - к.м.н. К.Р. Бондаренко, д.м.н., проф. Л.А. Озолиня

Российский национальный исследовательский медицинский университет им. Н.И. Пирогова, Москва, Россия

Введение. Актуальность вопроса бактериального вагиноза (БВ) связана с широкой распространенностью заболевания, достигающей 40% среди женщин репродуктивного возраста [Parma M et al., 2014], и его связью с воспалительными заболеваниями органов малого таза [Doerflinger S.Y. et al., 2014], невынашиванием беременности [Zhang D. et al., 2014], повышением риска инфекций, передаваемых половым путем [Jane R. et al., 2014]. При развитии БВ лактобактерии замещаются условно-патогенными микроорганизмами [Ravel J. et al., 2013]. Происходит повышение проницаемости вагинального эпителия и транслокация структурных компонентов клеточной стенки грамотрицательных бактерий - липополисахаридов (ЛПС) [Yeganegi M. et al., 2010] - в венозные сосуды с последующим проникновением в центральный кровоток и развитием системных реакций. Цель исследования. Оценка сывороточного уровня ЛПС при бактериальном вагинозе для расширения представлений о патогенезе указанного синдрома для разработки патогенетически обоснованных методов лечения. Материалы и методы. Объектом исследования послужили 374 женщины репродуктивного возраста, из которых 180 -с БВ (основная группа) и 194 - с нормофлорой вагинального биотопа (группа контроля). Проводилась световая микроскопия препаратов, окрашенных по Граму, определялась степень дисбиоза влагалища; оценка степени эндотоксинемии проводилась по концентрации ЛПС с помощью хромогенного ЛАЛ-теста, состояния антиэндотоксинового иммунитета - по уровню ЛПС-связывающего белка (LBP) и IgG к core-региону ЛПС в плазме («HyCult biotechnology», Голландия). Статистический анализ проводился с помощью современных прикладных программ. Для нейтрализации патогенетически значимых ЛПС грамотрицательных бактерий в вагинальном биоценозе при дисбиозе мы включили в стандартную схему лечения БВ лекарственный препарат «Энтеросгель» (ФС 42-3603-98) в качестве сорбента ЛПС. В зависимости от характера лечения женщины были разделены на две группы: первая (30 женщин) получала стандартное двухэтапное лечение, вторая (31 женщина), которой дополнительно энтеросорбент «Энтеросгель» вводили 1 раз в сутки интравагинально в течение 4 дней после завершения антибактериальной терапии. Контрольное исследование осуществляли через 3 сут, 1,5 и 3 мес после окончания лечения, учитывали характер жалоб, результаты гинекологического обследования, pH-метрии влагалищной среды, световой микроскопии влагалищных мазков и культурального исследования. Результаты. Было выявлено значительное повышение

уровня ЛПС у женщин основной группы по сравнению с контрольной Me - 1,4 [0,6-1,5] EU/мл, у здоровых - 0,22 [0-0,6] EU/мл, (р<0,001); уровень LBP на начальных этапах заболевания составлял 29,0±4,4 мкг/мл, что в 3 раза превышало аналогичный показатель при длительности течения БВ более одной недели (10,4±2,4 мкг/мл), (p<0,01); не выявлено зависимости уровня LBP от степени дисбиоза вагинального биотопа, тогда как концентрация IgG к core-региону ЛПС увеличивалась по мере прогрессирования дисбиотического сдвига и составляла при дисбиозе 1 ст. 75,0±1,2 MU/мл, 2 ст. -115,0±10,4 MU/мл, 3 ст. - 141,0±13,4 MU/мл. Выявлено наличие прямой сильной корреляционной зависимости уровня LBP (rs=0,61; p<0,01) и концентрацией IgG к core-региону ЛПС (rs=0,7; p<0,01). При оценке эффективности терапии с использованием сорбента «Энтеросгель» было зарегистрировано полное клинико-лабораторное излечение в 1 группе в 94% случаев, во 2 - в 100% через 3 сут; через 1,5 мес были зарегистрированы рецидивы БВ у 10% женщин 1 группы и лишь в 3,2% случаев - 2. Выводы. При БВ повышение колонизации вагинальной микроэкосистемы грамотрицательными микроорганизмами сопровождается повышением концентрации ЛПС в сыворотке, что доказывается повышением уровня ЛПС-связывающего белка и титров IgG к core-региону ЛПС, относительно здоровых женщин. Содержание IgG к core-региону ЛПС зависит от степени тяжести дисбиоза. По итогам проведенного лечения было отмечено повышение эффективности за счет применения «Энтеросгель» в качестве местного сорбента ЛПС для местной детоксикации.

PATHOGENETIC CHARACTERISTICS OF BACTERIAL VAGINOSIS

A.M. Ramazanova, V.O. Shpirko

Scientific Advisors - CandMedSci, K.R. Bondarenko, DMedSci, Prof. L.A. Ozolinya

Pirogov Russian National Research Medical University, Moscow, Russia

Introduction. Urgency of the issue of bacterial vaginosis (BV) is associated with high prevalence rate of the disease, which is up to 40% among women of reproductive age [Parma M. et al., 2014], as well as its relation to inflammatory diseases of pelvic organs [Doerflinger S.Y. et al., 2014], habitual non-carrying of pregnancy [Zhang D. et al., 2014], and increased risk of sexually-transmitted infections [Jane R. et al., 2014]. In case of BV development, lactobacteria are substituted for opportunistic pathogens [Ravel J. et al., 2013]. As a result of production of a wide spectrum of proteolytic enzymes by the latter [Swidsinski A. et al., 2013], there is an increase in permeability of vaginal epithelium, translocation of lipopolyssacharides (LPS) [Yeganegi M. et al., 2010] -into central blood flow and development of systemic reactions. Aim. Assessment of serum LPS level at bacterial vaginosis to increase our knowledge of pathogenesis of the syndrome indicated in order to develop pathogenetically grounded methods of treatment. Materials and methods. Object of the study: 374 women of reproductive age, 180 of them had BV (main group) and 194 - normoflora of vaginal biotope (control group). We carried out light microscopy of gram-stained preparations, determined the degree of vaginal dysbiosis; assessed the degree of endotoxinemia due to LPS concentration estimated with chromogenic LAL-test, state of antiendotoxic immunity due to the level of LPS-binding protein (LBP) and IgG to core-region of LPS in plasma (HyGjlt biotechnology, Holland). For neutralization of pathogenetically significant LPS gram-negative bacteria in vaginal biocoenosis in case of dysbiosis, we included drug product Enterosgel (FS 42-3603-98) as LPS sorbent into a standard scheme of BV treatment. Due to the character of treatment, women were subdivided into two clinical groups: the first (30 women) received two-stage treatment (antibacterial treatment and probiotics), and the second one (31 women) additionally received intravaginal enterosorbent Enterosgel once a day for 4 days after termination of local antibacterial therapy. Control clinical and laboratory examination was carried out in 3 days, 1.5 and 3 months after treatment termination, taking into consideration the character of complaints, results of physical pelvic examination, pH measurement of vaginal flora, light microscopy of vaginal smears and culture examination. Results. In the results of studies conducted, we have found significant increase of LPS level in women of the main group when compared to controls Me - 1.4 [0.6-1.5] EU/ml, in healthy ones - 0.22 [0-0.6] EU/ ml, (р<0.001); LBP level at initial stages of the disease was 29.0±4.4 ^g/ ml, which is 3 times more than the similar value in case of BV duration course over one week (10.4±2.4 ^g/ml), (p<0.01); no dependency of LBP

Вестник РГМУ, 2014, № 2

level on dysbiosis degree of vaginal biocoenosis have been revealed, while IgG concentration to core-region of LPS increased with progression of dysbiotic shift and in case of dysbiosis, degree 1, accounted for 75.0±1.2 MU/ml, degree 2 - 115.0±10.4 MU/ml, and degree 3 - 141.0±13.4 MU/ ml. Presence of a direct strong correlation dependency of LBP level (rs=0.61; p<0.01) and IgG concentration to core-region of LPS (rs=0.7; p<0.01) have been revealed. During assessment of therapy efficiency with the use of sorbent Enterosgel, there was registered complete clinical and laboratory cure in group 1: 94% of cases, and in group 2: in 100% in 3 days; in 1.5 month, cases of BV relapse were registered in 10% of women in group 1 and only in 3.2% in group 2. Conclusion. In case of BV, increase in colonization of vaginal microecosystem with gram-negative microorganisms is accompanied with increased LPS concentration in serum, which is proved by increased level of LPS-binding protein and IgG titers to core-region of LPS, when compared to healthy women. The content of IgG to core-region of LPS depends on degree of dysbiosis severity. According to the results of the treatment conducted, increase in efficiency owing to Enterosgel administration as a local LPS sorbent for local detoxication has been observed.

ГИПЕРАНДРОГЕНИЯ. ПОЛИМОРФИЗМ ГЕНА CYP21. НЕКЛАССИЧЕСКАЯ ФОРМА ВРОЖДЕННОЙ ДИСФУНКЦИИ КОРЫ НАДПОЧЕЧНИКОВ

Ю.Н. Маевская, В.А. Красикова

Научные руководители - д.м.н., проф. Л.А. Озолиня, д.б.н., проф. Л.И. Патрушев

Российский национальный исследовательский медицинский университет им. Н.И. Пирогова, Москва, Россия

Введение. Одной из основных причин гиперандрогении является аутосомно-рецессивное заболевание - врожденная гиперплазия коры надпочечников (ВГКН). Более 90% всех случаев этого заболевания возникает вследствие снижения под действием мутаций активности фермента 21-гидроксилазы, кодируемого геном CYP21A2. Причиной неклассической формы заболевания является частичная недостаточность ферментативной активности 21-гидроксилазы, следствием которой являются недостаточность кортизола и альдостерона и чрезмерный синтез тестостерона в организме пациенток. Из-за стертости и разнообразия фенотипических проявлений диагностика неклассической формы ВГКН вызывает определенные трудности. Ген CYP21 - один из самых полиморфных в геноме человека. Высокая генетическая изменчивость гена CYP21 затрудняет ДНК-диагностику ВГКН и проведение адекватного лечения. Цель исследования. Разработка быстрого и надежного метода обнаружения генетических мутаций в гене CYP21 и его применение для ДНК-диагностики ВГКН. А также обнаружение иных нарушений первичной структуры гена CYP21, которые приводят к появлению характерных симптомов заболевания. Материалы и методы. В исследование были включены 43 женщины с различными симптомами гиперандрогении. При этом у 27 пациенток диагностирована дисфункция яичников в репродуктивном периоде, у 3 - первичное бесплодие, у 2 - привычное невынашивание беременности, у других 3 пациенток в анамнезе была гиперплазия эндометрия, у 1 -андрокортикостерома. В контрольную группу вошли 24 пациентки без гинекологической патологии в анамнезе. В качестве источника ДНК использовали периферическую венозную кровь пациентов, которую брали путем пункции локтевой вены с добавлением к ней в качестве антикоагулянта 3,8% раствора цитрата натрия в соотношении 1:9. При постановке ПЦР использовали термостабильную Taq-ДНК-полимеразу. Продукты ПЦР анализировали стандартным электрофорезом в 1,2 и 0,8% агарозном геле. Секвенирование ДНК осуществляли по методу Сэнгера. Результаты. В результате ДНК-диагностики были обнаружены два мутантных аллеля у двух разных индивидуумов: нонсенс-мутация - C1994T, приводящая к обрыву полипептидной цепи в Q318X и миссенс-мутация - G1683T, сопровождающаяся заменой V281L. Наиболее интересным оказался анализ полученных последовательностей 16 пациенток, у которых обнаружена уникальность генотипов по исследуемому гену. Ни у одной из этих 16 пациенток не повторяется сочетание выявленных полиморфизмов. Анализ расположения выявленных полиморфизмов в гене CYP21A2 у 16 пациенток показал, что они не распределены равномерно вдоль последовательности гена, но кластеризованы относительно экзонов и их функциональных участков. На основании этих данных можно предположить, что найденные полиморфизмы в гене CYP21A2 в совокупности могут оказаться не такими

нейтральными, как утверждается в современной литературе. Выводы. Концентрация значимого количества полиморфизмов относительно функциональных участков экзонов может обуславливать те же клинические проявления, как и известные формы мутаций. Наличие клинических и биохимических проявлений является показанием для более серьезного обследования на известные мутации, однако и отсутствие известных точковых мутаций не исключает генетическую детерминацию надпочечниковой гиперандрогении.

HYPERANDROGENISM. CYP21 GENE'S PLEOMORPHISM. NONCLASSIC FROM OF CONGENITAL ADRENALS CORE HYPERPLASIA J.N. Maevskaya, V.A. Krasikova

Scientific Advisors - DMedSci, Prof. L.A. Ozolinya, DBiolSci, Prof. L.I. Patrushev

Pirogov Russian National Research Medical University, Moscow, Russia Introduction. One of the main factors of Hyperandrogenism is autosomal-recessive disease - congenital adrenal's core hyperplasia (CACH). More than 90% of all these sickness case's arise in consequence of decreasing, under stress of mutation, of the activity ferment's 21-forcehydroxylase, coded by CYP21A2 gene. The case of nonclassical form of sickness is fragmentary impairment of enzymatic activity of 21-forcehydroxylase, which leads to the impairment of cortisol, aldosterone and testicular hormone's hypernormal fusion in the subject bodies. The diacrisis of CACH's nonclassical form causes certain difficulties in consequence of blurring and diversity of associated traits. CYP21 gene is one of them most multiform in the human's genome. CYP21's gene high genetic variation embarrasses CACH's DNA-diacrisis and providing appropriate care delivery. Aim. Research objective - formulation of fast and fail-safe method of genetic mutations detection in CYP 21 gene and the application of method for the purpose of CACH's DNA-diacrisis, as well as findings of other damages of CYP21's gene primary structure, which lead to the arising of a specific symptom of the medical problem. Materials and methods. The research of based on studying of 43 women with various symptoms of hyperandrogenism. Whereby, 27 examinees had ovarian dysfunction in childbearing period diagnozed with, 3 with primary sterility, 2 with refractory pregnancy loss, other 3 had hyperplasia endometrium in anamnesis, 1 - androcorticosteroma. The control group consisted of 24 examinees without diagnosed без gynaecological abnormity in anamnesis. As a DNA source was used peripheral black blood of examinee, extracted by puncturing median cubital vein with addition to it the 3.8% fluid of sodium citrate at one-to-nine rate as anticoagulant. In setting-up polymerase chain reaction was used thermostable Taq-DNA-polymerase. Polymerase chain reaction products were analyzed by standard electrophoresis in 1.2 and 0.8% agarose gel. DNA sequence analysis was performed under the Sanger method. Results. In consequence of DNA-diacrisis two mutant allelic gene were detected in two different individuals: nonsense mutation - C1994T, leading to polypeptide chain interruption at Q318X and missence mutation - G1683T, followed by the substitution of V281L. Of foremost interest is the result of analyzes of 16 examinees sequences, detected with genotype uniqueness on researched. None of these examinees does not have the same combination of detected polymorphisms. The analyses of the distribution of detected polymorphisms in CYP21A2 gene revealed that they are not distributed equally alongside the gene, but clustered towards the exones and their operating zones. According to this data it could be suggested that the detected in gene CYP21A2 polymorphisms, may not be that neutral as it is stated in modern scientific literature. Conclusion. The concentration of significant quantity of polymorphisms operating zones of the exones could conditionate the same clinical implications as the known forms of mutations do. The presence of clinical and biochemical implications is the indication for more serious research on known mutations, however the absence of known point mutation does not exclude the genetic determination of paranephric hyperandrogenism .

ГЕМОДИНАМИЧЕСКИЕ НАРУШЕНИЯ И ПРОФИЛАКТИКА ИХ РАЗВИТИЯ У ЖЕНЩИН ПОСЛЕ ГИСТЕРЭКТОМИИ

Е.И. Скорбач, А.С. Острополец, А.М. Пискарева Научный руководитель - д.м.н., проф. Н.А. Щербина Харьковский национальный медицинский университет, Харьков, Украина

Введение. Последствия гистерэктомии (ГЭ) в последние годы активно обсуждаются в литературе. Особый интерес представляют данные о развитии постгистерэктомического синдрома (ПГС) у женщин в репродуктивном возрасте после ГЭ с сохранением