ПРИМЕНЕНИЕ СЕКОИЗОЛАРИЦИРЕЗИНОЛА В КАЧЕСТВЕ ГЕМОРЕОЛОГИЧЕСКОГО, АНТИТРОМБОЦИТАРНОГО И ЭНДОТЕЛИЙПРОТЕКТОРНОГО СРЕДСТВА
USING SECOISOLARICIRESINOL AS HAEMORHEOLOGICAL, ANTI-PLATELET AND ENDOTHELIUM-PROTECTIVE AGENT

Изобретение относится к медицине, конкретно к фармакологии, и касается средства, обладающего гемореологической и антитромбоцитарной активностью.
Известны средства, обладающие гемореологической активностью - пентоксифиллин, диквертин, танакан [1, 2, 3, 4, 5].
Известны средства, обладающие антитромбоцитарной активностью -  пентоксифиллин, ацетилсалициловая кислота, тиклопидин, дипиридамол [1, 2, 3, 6, 7].
Известны средства, обладающие эндотелийпротекторной активностью: ресвератрол, эдаровон, адипонектин, капсаицин, α-токоферол, аскорбиновая кислота [8-16].
Однако такие средства обладают только ограниченной функциональностью по отношению к упомянутым видам активности.
Задачей изобретения является повышение функциональности по отношению к этим видам активности.
Задачей изобретения является также расширение арсенала средств, обладающих гемореологической, антитромбоцитарной и эндотелийпротекторной активностью.
Поставленная задача решается использованием в качестве средства, обладающего гемореологической, антитромбогенной и эндотелийпротекторной активностью секоизоларицирезинола.
Секоизоларицирезинол - 2,3бис(3-метокси-4-гидроксифенилен)бутан-1,4-диол - проявляет эстрогеноподобную, противоопухолевую и иммуностимулирующую активность [17, 18, 19]. Субстанция секоизоларицирезинола представляет собой мелкокристаллический порошок от белого до светло-кремового цвета, массовая доля секоизоларицирезинола составляет 97,5%.
Использование секоизоларицирезинола, как гемореологического, антитромбоцитарного и эндотелийпротекторного средства, в литературе не описано.
Принципиально новым в предлагаемом изобретении является то, что секоизоларицирезинол применяется в качестве средства, обладающего гемореологической, антитромбоцитарной и эндотелийпротекторной активностью. Данные свойства секоизоларицирезинола явным образом не вытекают для специалиста из уровня техники.
Секоизоларицирезинол можно использовать для лечения больных с сердечно-сосудистыми заболеваниями, в частности, для уменьшения повышенной вязкости крови, снижения агрегационной способности тромбоцитов и снижения эндотелиальной дисфункции. Секоизоларицирезинол может выпускаться в лекарственной форме и в виде биологически активных добавок.
Таким образом, данное техническое решение соответствует критериям изобретения: "новизна", "изобретательский уровень", "промышленно применимо".
Новые свойства препарата были найдены экспериментальным путем. Изобретение будет понятно из следующего описания.
Эксперименты по изучению гемореологических, антитромбоцитарных и эндотелийпротекторных свойств секоизоларицирезинола были проведены на животных с овариоэктомией. Удаление яичников осуществляли в асептических условиях под эфирным наркозом [20]. Крысам проводили лапаротомию - кожу рассекали по средней линии живота, тупым способом раздвигали мышцы, выделяя внутренние половые органы самок. Яичники отвязывали лигатурами от рогов матки и кровеносных сосудов и отсекали. Рану послойно ушивали и проводили обработку операционного поля антисептиками.
Эксперименты по изучению гемореологических и антитромбоцитарных свойств секоизоларицирезинола проводили на 44 аутбредных крысах самках сток Вистар массой 250-280 г. Опыты были проведены в несколько серий. В каждой серии животные были разделены на 3 группы: 12 животных были ложнооперированные, 16 животных получали ежедневно 1 мл крахмальной слизи (контроль) и 16 животных получали ежедневно секоизоларицирезинол в дозе 20 мг/кг. Крысы получали крахмальную слизь и лекарственные средства ежедневно внутрижелудочно в течение 14 суток, начиная с 8-х суток после овариоэктомии.
-1
-1
Кровь забирали из общей сонной артерии под эфирным наркозом через 2 ч после последнего введения препарата или крахмальной слизи. В качестве стабилизатора использовали 3,8% раствор цитрата натрия в соотношении с кровью 1:9. Вязкость крови измеряли на ротационном вискозиметре АКР-2 в диапазоне скоростей сдвига от 5 c до 300 с [21]. Амплитуду АДФ-индуцированной агрегации тромбоцитов оценивали в стандартизованной плазме на приборе АТ-02, агрегатограммы регистрировали с помощью самописца Recorder 2210 [22]. Эндотелийпротекторный эффект оценивали на основании данных о состоянии эндотелийзависимой и эндотелийнезависимой реакции сосудов у крыс. Для этого наркотизированным животным (тиопентал-натрий 60 мг/кг, внутрибрюшинно) в левую бедренную артерию имплантировали катетер, заполненный смесью физиологического раствора и гепарина, после чего непрерывно регистрировали САД. Эндотелийзависимую вазодилатацию вызывали болюсным внутривенным введением ацетилхолина гидрохлорида (5 мкг/кг), эндотелийнезависимую вазодилатацию - болюсным внутривенным введением натрия нитропруссида (30 мкг/кг). Ацетилхолина гидрохлорид и натрия нитропруссид вводили в правую бедренную вену.
Функциональное состояние эндотелия характеризовали коэффициентом эндотелиальной дисфункции (КЭД), который рассчитывали по формуле [23]
<mrow><mi>К</mi><mi>Е</mi><mi>Д</mi><mo>=</mo><mfrac><mrow><msub><mi>S</mi><mrow><mi>н</mi><mi>п</mi></mrow></msub></mrow><mrow><msub><mi>S</mi><mrow><mi>а</mi><mi>х</mi></mrow></msub></mrow></mfrac></mrow>
,
нп
ax
где S - площадь над кривой снижения артериального давления в ответ на внутривенное введение натрия нитропруссида; S - площадь над кривой снижения артериального давления в ответ на внутривенное введение ацетилхолина гидрохлорида.
Статистическую обработку проводили с помощью ПСП "Statistica for Windows 8.0". Рассчитывали среднее значение, стандартную ошибку, для выявления межгрупповых различий использовали t-критерий Стьюдента.
Результаты исследований представлены в примерах 1-4.
-1
Пример 1. Овариоэктомия приводила к достоверному повышению вязкости крови при всех скоростях сдвига в диапазоне 3-300 с на 11-30% по сравнению с ложнооперированными животными (табл.1, контроль).
-1
Пример 2. У крыс опытной группы происходило достоверное снижение вязкости крови при всех скоростях сдвига 3-300 c на 9-19% (табл.1).
Из полученных результатов можно сделать вывод о том, что секоизоларицирезинол при внутрижелудочном введении в дозе 20 мг/кг обладает выраженным гемореологическим эффектом.
Пример 3. В контрольной группе животных амплитуда АДФ-индуцированной агрегации тромбоцитов в стандартизованной плазме составила 23±1% (табл.2, контроль).
Пример 4. У опытных крыс секоизоларицирезинол при ежедневном внутрижелудочном введении в дозе 20 мг/кг в течение 14 дней снижал амплитуду АДФ-индуцированной агрегации тромбоцитов в стандартизованной плазме до 15±2% (табл.2). Амплитуда агрегации тромбоцитов была на 45% ниже, чем в контроле. Из полученных результатов можно вделать вывод о том, что секоизоларицирезинол при внутрижелудочном введении в дозе 20 мг/кг обладает выраженным антиагрегантным эффектом на тромбоциты.
Пример 5. В контрольной группе животных КЭД составил 2,6±0,2, что превышало значения у ложнооперированных крыс на 66% (р<0,05) (табл.3, контроль). Наблюдаемые изменения свидетельствую о том, что овариоэктомия сопровождается развитием эндотелиальной дисфункции у крыс.
Пример 6. В группе животных, получавших секоизоларицирезинол в дозе 20 мг/кг внутрижелудочно в течение 2 недель, КЭД составил 1,7±0,1 и при этом был ниже значений в контроле на 65% (р<0,05) и достоверно не отличался от показателя у ложнооперированных животных (табл.3).
Таким образом, секоизоларицирезинол обладает выраженными гемореологическими, антитромбоцитарными и эндотелийпротекторными свойствами.
Предлагаемое изобретение расширяет арсенал средств, обладающих гемореологической, антитромбоцитарной и эндотелийпротекторной активностью.
Таблица 1
Влияние внутрижелудочного введения секоизоларицирезинола (20 мг/кг ежедневно однократно в течение 14 дней) на вязкость крови (мПа·с) при различных скоростях сдвига у крыс после овариоэктомии
Группы животных
3 с<sup>-1</sup>
5 с<sup>-1</sup>
7 с<sup>-1</sup>
10 с<sup>-1</sup>
50 с<sup>-1</sup>
100 с<sup>-1</sup>
300 с<sup>-1</sup>
Ложнооперированные (n=6)
5,9±0,1
5,7±0,1
5,6±0,1
5,4±0,1
4,3±0,1
4,2±0,1
4,0±0,1
Контроль (n=8)
7,7±0,4*
6,9±0,3*
6,5±0,3*
6,2±0,3*
4,9±0,2*
4,7±0,2*
4,5±0,1*
Секоизоларицирезинол (n=8)
6,3±0,1<sup>+</sup>
5,8±0,2<sup>+</sup>
5,6±0,2<sup>+</sup>
5,4±0,1<sup>+</sup>
4,4±0,1<sup>+</sup>
4,2±0,1<sup>+</sup>
4,1±0,1<sup>+</sup>
Примечание: * - р<0,05 по сравнению со значениями у ложнооперированных животных; <sup>+</sup> - р<0,05 по сравнению со значениями у животных контрольной группы.
Таблица 2
Влияние секоизоларицирезинола (20 мг/кг ежедневно однократно в течение 14 дней) на АДФ-индуцированную агрегации тромбоцитов (АДФ в конечной концентрации 4·10<sup>-6</sup> М) у крыс после овариоэктомии
Серия опытов
Амплитуда агрегации тромбоцитов, %
Ложноперированные животные (n=6)
20±2
Контроль (n=8)
23±1*
Секоизоларицирезинол (n=8)
15±2<sup>+</sup>
Примечание: * - р<0,05 по сравнению с значениями у ложнооперированных животных; <sup>+</sup> - р<0,05 по сравнению со значениями в группе контроля.
Таблица 3
Влияние секоизоларицирезинола (20 мг/кг ежедневно однократно в течение 14 дней) на коэффициент эндотелиальной дисфункции (КЭД,от. ед.).
Серия опытов
КЭД
Ложнооперированные
1,8±0,1
Контроль
2,6±0,2*
Секоизоларицирезинол
1,7±0,1<sup>+</sup>
Примечание: * - р<0,05 по сравнению с значениями у ложнооперированных животных; <sup>+</sup> - p<0,05 по сравнению со значениями в группе контроля.
Источники литературы
1. Дроздов С.А. Пентоксифиллин в лечении нарушений мозгового кровообращения // Журн. неврол. и психиатрии им.С.С. Корсакова. - 1997. - №9. - С.62-67.
2. Габриэлян Э.С., Акопов С.Э. Клетки крови и кровообращение. - Ереван: Айастан, 1985. - 399 с.
3. Машковский М.Д. Лекарственные средства: Пособие для врачей. - М.: Новая волна, 2000. - Т.1 и 2.
4. Плотников М.Б., Алиев О.И., Маслов М.Ю., Васильев А.С., Тюкавкина Н.А. Коррекция синдрома повышенной вязкости крови в условиях ишемии мозга у крыс комплексом диквертина и аскорбиновой кислоты // Эксперим. и клинич. фармакология. - 1999. - №6. - С.45-47.
5. Koltringer P., Eber O., Lind P. et al. Microzirkulationund Viscoelastizitat des Vullblutes unter Gingko biloba extrakt. Eine placebocontrollierte randomisierte Doppelblind-Studie // Perfusion. - 1989. - Bd.1. - S.28-30.
6. Применение антитромбоцитарных средств. По материалам рекомендаций Рабочей группы по применению антитромбоцитарных средств у больных с атеросклерозом Европейского общества кардиологов // Клин. фармакол. и терапия. - 2004. - №3. - С.32-38.
7. Посаль Р. Современное состояние и перспективы антитромбоцитарной терапии // Словакофарма ревю. - 2000. - №1-2. - С.14-19.
8. d'Uscio L.V., Milstien S., Richardson P. Long-term vitamin С treatment increases vascular tetrahydrobiopterin levels and nitric oxide synthase activing // Circulation research. - 2003. - №92. - P.88-95.
9. Sudano I., Spieker L.E., Hemann F. et al. Protection of endothelial function: targets for nutritional and pharmacological intervention // J. Cardiovascular Pharmacolodgy. - 2006. - Suppl. 47. - P.136-150.
10. Ueno Y., Zhang N., Miyamoto N. et al. Edaravone attenuates white matter lesions through endothelial protection in a rat chronic hypoperfusion model // Neuroscience. - 2009. - Vol.162, №2. P.317-327.
11. Ungvari Z.I., Bagi Z., Feher A. Resveratrol confers endothelial protection via activation of the antioxidant transcription factor Nrf2 // Am. J. Physiol. Heart. Circ. Physiol. - 2010. №299. - P.18-24.
12. Visioli F. Effect of vitamin E on the endothelium: equivocal? α-tocopherol and endothelial dysfunction // Cardiovascular Research. - 2001. - Vol.51, №2. - P.198-201.
13. Taddei S., Virdis A., Ghiadoni L. et al. Vitamin С improves endothelium-dependent vasodilatation by restarting nitric oxide activity in essential hypertension // Circulation. - 1998. - Vol.97, №22. - P.2222-2229.
14. Laml K.S.L., Xul A. Adiponectin: Protection of the endothelium // Current Diabetes Reports. - 2005. - Vol.5, №4. - P.254-259.
15. Carr A., Frei B. The role of antioxidants in preserving the biological activity of endothelium-derived nitric oxide // Free Rad. Biol. Med. - 2000. - №286. - P.1806-1814.
16. Tangl Y.H., Lul R., Lil Y.J. et al. Protection by capsaicin against attenuated endothelium-dependent vasorelaxation due to lysophosphatidylcholine // Naunyn-Schmiedeberg's Archives of Pharmacology. - 1997. - Vol.356, №3. - P.364-367.
17. Tominaga S., Sugahara Т., Nishimoto S., Yamawaki M., Nakashima Y., Kishida Т., Akiyama K., Maruyama M., Yamauchi S. The effect of secoisolariciresinol on 3T3-L1 adipocytes and the relationship between molecular structure and activity // Biosci Biotechnol Biochem. - 2009. - Vol.73, №1. - P.35-39.
18. Thomson L.U. Experimental studies on lignans and cancer // Baillieres. Clin. Endocrinol. Metab. - 1998. - №12. - P.691-705.
19. Sugahara Т., Yamauchi S., Kondo A., Ohno F., Tominaga S., Nakashima Y., Kishida Т., Akiyama K., Maruyama M. First stereoselective synthesis of mesosecoisolariciresinol and comparison of its biological activity with (+) and (-) - secoisolariciresinol // Biosci. Biotechnol. Biochem. - 2007. - №71. - P.2962-2968.
20. Киршенблат Я.Д. Практикум по эндокринологии. - М., 1969. - С.55-57.
21. Левтов В.А., Регирер С.А., Шадрина И.Х. Реология крови. - М.: Наука, 1982. - 268 с.
22. Баркаган З.С., Момот А.П. Основные методы лабораторной диагностики нарушений системы гемостаза. - Барнаул, 1998. - С.10-11.
23. Тюренков И.Ю., Воронов А.В. Методический подход к оценке эндотелиальной дисфункции в эксперименте // Клин. и эксперим. фармакол. - 2008. - Т.71, №1. - С.49-51.