НАБОР ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВЕРОЯТНОСТИ ТЕРАПЕВТИЧЕСКОГО ОТВЕТА НА ПРОТИВОРАКОВУЮ ХИМИОТЕРАПИЮ СЕРДЕЧНЫМ ГЛИКОЗИДОМ

1. Набор для применения в in vitro прогностическом" способе для определения или предсказания in vivo терапевтического ответа заболевания или расстройства, имеющего этиологию, связанную с избыточной пролиферацией клеток, на лечение сердечным гликозидом или композицией, содержащей сердечный гликозид, где набор включает:
a) первое "первичное" антитело, обладающее аффинностью связывания с изоформой α3 субъединицы Na,К-АТФазы; и
b) второе "первичное" антитело, обладающее аффинностью связывания с изоформой α1 субъединицы Na,К-АТФазы,
c) инструкции по применению набора и осуществлению прогностического анализа для предсказания in vivo терапевтического ответа заболевания или расстройства, имеющего этиологию, связанную с избыточной пролиферацией клеток, на лечение сердечным гликозидом или композицией, содержащей сердечный гликозид; и
d) подробную информацию относительно того, как интерпретировать прогностические данные, полученные при проведении указанного прогностического способа.
2. Набор по п. 1, где набор дополнительно включает: а) композицию для лизиса; b) образец, используемый в качестве позитивного контроля и содержащий изоформу α3 субъединицы Na,K-АТФазы; с) образец, используемый в качестве позитивного контроля и содержащий изоформу α3  субъединицы Na,К-АТФазы и изоформу α1  субъединицы Na,К-АТФазы; d) образец, используемый в качестве негативного контроля и содержащий изоформу α1  субъединицы Na,K-АТФазы и исключающий изоформу α3  субъединицы Na,К-АТФазы; е) "второе" антитело, то есть, ПХ-конъюгированное козье антитело против мышиных IgG (которое может быть использовано, например, для визуализации представляющих интерес белков); f) гель-образующий материал, подходящий для проведения анализа методом гель-электрофореза; g) радиоактивно меченный маркер; h) инструкции по применению набора и осуществлению прогностического анализа; i) денситометр или радиометр; j) водную жидкую среду; k) набор для приготовления геля/мембраны; 1) блокирующий раствор; m) промывочный буфер; n) материалы, содержащиеся в наборе для вестерн-блот-анализа или о) их комбинации.
3. Набор по п. 2, где "вторым" антителом является конъюгированное с пероксидазой хрена козье антитело против α-цепи мышиного IgG, либо содержит другие, но не мышиные "вторые" антитела против мышиного IgG, связанные с соответствующим маркером, таким как пероксидаза хрена.
4. Набор по п. 2, где образец позитивного контроля выбран из группы, состоящей из ткани, клеточной массы, клеточного лизата и приготовленных из них мембранных препаратов, которые могут быть получены посредством биопсии или другими хирургическими способами.
5. Набор по п. 2, где образец негативного контроля выбран из группы, состоящей из ткани, клеточной массы, клеточного лизата и приготовленных из них мембранных препаратов, которые не содержат α3-изоформы α-субъединицы Na,К-АТФазы.
6. Набор по п. 2, где способ включает:
определение отношения α3-изоформы к α1-изоформе α-субъединиц Na,К-АТФазы в образце, выделенном из пораженной клеточной ткани in vivo у индивидуума с заболеванием или расстройством, имеющим этиологию, связанную с избыточной пролиферацией клеток, где указанный образец содержит одну или несколько изоформ α-субъединицы Na,К-АТФазы; где стадия определения отношения включает количественную оценку уровня экспрессии каждой изоформы α3 субъединицы Na,К-АТФазы и изоформы α1 субъединицы Na,К-АТФазы в образце in vitro или в биоптате, и вычисление их отношения; или где стадия определения отношения включает определение количества каждой изоформы α3 субъединицы Na,К-АТФазы по отношению к количеству изоформы α1 субъединицы Na,К-АТФазы в образце in vitro и вычисление их отношения; и
определение вероятности терапевтического ответа на основе отношения α3-изоформы к α1-изоформе Na,К-АТФазы у индивидуума, подвергнутого лечению терапевтически релевантной дозой сердечного гликозида в соответствии с назначенной схемой введения доз, где вероятность терапевтического ответа выражается согласно с нижеследующей таблицей, которая включена в указанную подробную информацию относительно того, как интерпретировать прогностические данные:
Отношение
Вероятность терапевтического ответа у индивидуума
0,3-0,45+0,05
от 20 до <30%
0,5-0,95±0,05
от 30 до 50%
>1±0,05
>50%
>10
>75%
7. Набор по п. 6, где способ дополнительно включает:
a) предсказание продуцирования в пораженных тканях, имеющих отношение изоформ α-субъединиц от 1 до 100, более высокого терапевтического ответа, чем в тканях, имеющих отношение изоформ α-субъединиц менее, чем 1; или
b) предсказание того, что ткани, в которых детектируется лишь изоформа α3, но не изоформа α1, являются наиболее терапевтически восприимчивыми к сердечным гликозидам; или
c) предсказание продуцирования в клеточных тканях по меньшей мере частичного терапевтического ответа на лечение сердечным гликозидом, если указанное отношение составляет ≥25; или дополнительно включает предсказание продуцирования в клеточных тканях по меньшей мере частичного терапевтического ответа на лечение сердечным гликозидом, если отношение составляет ≥75.
8. Набор по п. 6, где указанным образцом является клеточная ткань, клеточная масса, клеточный лизат, мембранные препараты, приготовленные из этих компонентов, или их гистопатологические срезы, фиксированные на предметных стеклах.
9. Набор по п. 6, где образцом, полученным от указанного субъекта, является образец in vitro.
10. Набор по п. 6, где образец, полученный от указанного субъекта, содержит по меньшей мере две изоформы α-субъединицы Na,К-АТФазы.
11. Набор по п. 6, где образец, полученный от указанного субъекта, содержит по меньшей мере α1- и α3-изоформы α-субъединицы Na,К-АТФазы.
12. Набор по п. 1, где пораженная клеточная ткань получена от индивидуума, такого как млекопитающее.
13. Набор по п. 12, где млекопитающее представляет собой человека, корову, собаку, кошку, лошадь, свинью или других домашних животных, независимо от того, представляют ли они промышленную ценность или нет.
14. Набор по п. 1, где указанным заболеванием или расстройством, имеющим этиологию, связанную с избыточной пролиферацией клеток, является раковое или опухолевое заболевание или другие пролиферативные заболевания, оказывающие негативное влияние на качество жизни человека или животного.
15. Набор по п. 14, где указанное раковое или опухолевое заболевание выбрано из группы, состоящей из рака прямой и ободочной кишки, рака головы и шеи, рака коры надпочечника, рака заднего прохода, рака желчных протоков, рака мочевого пузыря, рака кости, метастазов в кости, саркомы кости, рака головного мозга, рака молочной железы, рака шейки матки, неходжкинской лимфомы, рака прямой кишки, рака пищевода, рака глаз, рака желчного пузыря, карциноидного рака желудочно-кишечного тракта, трофобластоза беременных, болезни Ходжкина, саркомы Капоши, рака почек, рака гортани и гортанной части глотки, рака печени, рака почек (немелкоклеточных и мелкоклеточных карцином), карциноидных опухолей легких, злокачественной мезотелиомы, рака, дающего метастазы, множественной миеломы, миелодиспластического синдрома, рака носовой полости и параназального рака, рака носоглотки, нейробластомы, новообразований в области центральной нервной системы, рака ротовой полости и ротоглотки, остеосаркомы, рака яичника, рака поджелудочной железы, рака пениса, рака гипофиза, рака предстательной железы, ретинобластомы, рака слюнных желез, саркомы, рака кожи, рака желудка, рака яичек, рака тимуса, рака щитовидной железы, рака мочеточника, саркомы матки, рака влагалища, рака вульвы или опухоли Вильмса.
16. Набор по п. 1, где сердечный гликозид присутствует в чистой форме независимо от того, был ли он получен путем экстракции из источника растительного или животного происхождения или синтезирован или получен путем химической модификации коммерчески доступного сердечного гликозида.
17. Набор по п. 1, где сердечный гликозид присутствует в экстракте.
18. Набор по п. 17, где экстракт сердечного гликозида был получен путем экстракции в надкритической жидкости (SCF), необязательно, в присутствии модификатора.
19. Набор по п. 18, где указанный SCF-экстракт также включает, помимо сердечного гликозида, по меньшей мере одно другое фармацевтически активное вещество.
20. Набор по п. 19, где другое активное вещество может сообщать терапевтическую эффективность сердечному гликозиду при введении указанного экстракта индивидууму.
21. Набор по п. 20, где указанное другое активное вещество усиливает терапевтический эффект сердечного гликозида благодаря аддитивному или синергическому действию вместе с указанным сердечным гликозидом.
22. Набор по п. 17, где указанный сердечный гликозид присутствует в фармацевтическом препарате или в фармацевтической композиции.
23. Набор по п. 17, где указанный сердечный гликозид получен из растительной массы олеандра.
24. Набор по п. 23, где растительная масса олеандра получена из растения вида Nerium, такого как Nerium oleander, или вида Thevetia, такого как Thevetia nerifolia.
25. Набор по п. 17, где указанный экстракт получен из кожи жабы или выделенного из нее секрета.
26. Набор по п. 1, включающий альтернативные средства оценки относительного состава изоформ α-субъединицы Na,К-АТФазы и их отношений, где указанные альтернативные средства включают: использование антител в ELISA (твердофазном иммуноферментном анализе) или массивов белок-содержащих тканей или клеточных лизатов; осуществление Нозерн-блот-анализов для определения мРНК, ассоциированной с различными изоформами α-субъединицы Na,К-АТФазы, или применение анализа на иммуногистохимическое окрашивание.
27. Набор по п. 1, где прогностический способ включает:
определение отношения α3-изоформы к α1-изоформе Na,К-АТФазы в образце in vitro, выделенном из пораженной клеточной ткани индивидуума, где указанный образец содержит одну или несколько изоформ α-субъединицы Na,К-АТФазы, где стадия определения отношения включает количественную оценку уровня экспрессии каждой изоформы α3 субъединицы Na,К-АТФазы и изоформы α1 субъединицы Na,К-АТФазы в образце in vitro или в биоптате, и вычисление их отношения; или где стадия определения отношения включает определение количества каждой изоформы α3 субъединицы Na,К-АТФазы по отношению к количеству изоформы α1  субъединицы Na,К-АТФазы в образце in vitro и вычисление их отношения; и
определение вероятности терапевтического ответа у индивидуума на основе отношения α3-изоформы к α1-изоформе Na,K-АТФазы, подвергнутого лечению терапевтически релевантной дозой сердечного гликозида, где указанная вероятность по меньшей мере частичного терапевтического ответа выражается как отношение α3-изоформы к α1-изоформе Na,К-АТФазы, представленное в нижеследующей таблице:
Отношение
Вероятность по меньшей мере частичного терапевтического ответа у индивидуума
0,3-0,45+0,05
от 20 до <30%
0,5-0,95±0,05
от 30 до 50%
>1±0,05
>50%
>10
>75%
28. Набор по п. 27, где указанная стадия определения отношения включает количественную оценку уровня экспрессии каждой изоформы α3 субъединицы Na,К-АТФазы и изоформы α1 субъединицы Na,К-АТФазы в образце in vitro или в биоптате и вычисление их отношения.
29. Набор по п. 28, где способ дополнительно включает: проведение статистического анализа на основе данных, по которым было определено отношение.
30. Набор по п. 28, где способ дополнительно включает: лизис или разрушение клеток, тканей или биоптатов; или фиксацию срезов ткани для гистопатологической оценки пораженной клеточной ткани in vivo с последующим получением образца.
31. Набор по п. 30, где способ дополнительно включает: проведение вестерн-блот-анализа или анализа методом иммуногистохимического окрашивания образца для определения количества и относительного уровня экспрессии изоформы α3 субъединицы Na,К-АТФазы и изоформы α1 субъединицы Na,К-АТФазы в данном образце; и вычисление их отношения.
32. Набор по п. 31, где способ дополнительно включает: а) сравнение уровней содержания изоформы α3 субъединицы Na,К-АТФазы и изоформы α1 субъединицы Na,К-АТФазы в образце с уровнем содержания изоформы α3 субъединицы Na,К-АТфазы и/или изоформы α1 субъединицы Na,К-АТФазы в образце, используемом в качестве позитивного контроля и/или в образце, используемом в качестве негативного контроля; или b) проведение сравнения уровня содержания изоформы α3 субъединицы Nа,К-АТФазы и изоформы α1 субъединицы Na,К-АТФазы в образце ткани, где, как известно, в качестве контроля используется экспрессия только одной из изоформ α3- и α1 субъединиц.
33. Набор по п. 32, где способ дополнительно включает: идентификацию индивидуума, страдающего заболеванием или расстройством, имеющим этиологию, связанную с избыточной пролиферацией клеток.
34. Набор по п. 33, где способ дополнительно включает: взятие образца пораженных клеток у индивидуума.
35. Набор по п. 34, где способ дополнительно включает получение точной информации о проведении анализов на присутствие α3- и α1-изоформ α-субъединицы Na,К-АТФазы.
36. Набор по п. 27, где способ дополнительно включает: проведение радиометрического или денситометрического анализа геля для: а) определения содержания изоформы α3 субъединицы Na,К-АТФазы и содержания изоформы α1-субъединицы Na,К-АТФазы в образце; или b) определение присутствия и количественную оценку содержания изоформы α3 субъединицы Na,К-АТФазы и изоформы α1 субъединицы Na,К-АТФазы в образце.
37. Набор по п. 27, где указанный анализ на иммуногистохимическое окрашивание включает: а) раствор для обнаружения антигена; b) буфер; с) материал для гашения эндогенной пероксидной активности; d) антитело против изоформы α3 субъединицы Na,К-АТФазы и антитело против изоформы α1 субъединицы Nа,К-АТФазы; е) неиммунное антитело против мышиного IgGl; f) универсальный реагент-антитело, содержащий смесь реагентов-антител против кроличьих IgG и против мышиных IgG; g) первичный химический краситель; h) общий химический краситель для контрастного окрашивания; i) специфический краситель для клеточных органелл; или j) комбинации двух или более указанных компонентов.
38. Набор по п. 37, где способ включает:
a) получение образца ткани млекопитающего;
b) иммунохимическое окрашивание α3-изоформы и α1-изоформы α-субъединицы Na,К-АТФазы, присутствующих в образце;
c) определение содержания изоформы α3 субъединицы Na,K-АТФазы и содержания изоформы α1 субъединицы Na,К-АТФазы в образце; и
d) определение отношения α3-изоформы к α1-изоформе, присутствующих в образце.
39. Набор по п. 27, где указанное заболевание или расстройство, имеющее этиологию, связанную с избыточной пролиферацией клеток, выбрано из группы, состоящей из: 1) аутоиммунных заболеваний, таких как индуцированный антигеном артрит и аллергический энцефаломиелит; 2) хронических воспалительных пролиферативных заболеваний, таких как ревматоидный артрит, системный хронический ювенильный артрит, остеопороз и псориаз; 3) пролиферативных заболеваний молочной железы, включая фиброкистозное заболевание; 4) пролиферативных заболеваний предстательной железы, включая доброкачественную гиперплазию предстательной железы (ВРН); 5) пролиферативных заболеваний глаз, включая пролиферативную диабетическую ретинопатию; 6) сосудистых пролиферативных заболеваний, включая атеросклероз и стеноз коронарной артерии; 7) рака и/или 8) опухоли.
40. Набор по п. 1, где указанный сердечный гликозид выбран из группы, состоящей из олеандрина, убаина, буфалина, дигитоксина, дигоксина, цинобуфаталина, цинобуфагина и резибуфогенина.
41. Набор по п. 1, где способ включает:
взятие образца пораженной ткани у индивидуума, страдающего заболеванием, имеющим этиологию, связанную с избыточной пролиферацией клеток, и получение образца, содержащего одну или несколько изоформ α-субъединицы Na,К-АТФазы, при этом стадия определения отношения включает количественную оценку уровня экспрессии каждой изоформы α3 субъединицы Na,К-АТФазы и изоформы α1 субъединицы Na,К-АТФазы в образце in vitro или в биоптате, и вычисление их отношения; или стадия определения отношения включает определение количества каждой изоформы α3 субъединицы Na,К-АТФазы по отношению к количеству изоформы α1 субъединицы Na,К-АТФазы в образце in vitro и вычисление их отношения;
определение отношения α3-изоформы к α1-изоформе α-субъединиц Na,К-АТФазы в образце; и
если данное отношение составляет ≥0,3, индивидуума следует лечить сердечным гликозидом, посредством введения композиции, содержащей сердечный гликозид, в соответствии с назначенной схемой введения доз, или
если данное отношение составляет <0,3, индивидуума не следует лечить сердечным гликозидом, при лечении заболевания или расстройства, имеющее этиологию, связанную с избыточной пролиферацией клеток.
42. Набор по п. 41, где если данное отношение составляет ≥0,5, ≥1, или ≥10, указанного индивидуума следует лечить сердечным гликозидом посредством введения композиции, содержащей сердечный гликозид, индивидууму, в соответствии с назначенной схемой введения доз.
43. Набор по п. 6, где способ дополнительно включает: проведение статистического анализа на основе данных, по которым было определено отношение.
44. Набор по п. 6, где способ дополнительно включает: лизис или разрушение клеток, тканей или биоптатов; или фиксацию срезов ткани для гистопатологическои оценки пораженной клеточной ткани in vivo с последующим получением образца.
45. Набор по п. 6, где способ дополнительно включает: проведение вестерн-блот-анализа или анализа методом иммуногистохимического окрашивания образца для определения количества и относительного уровня экспрессии изоформы α3 субъединицы Na,K-АТФазы и изоформы α1 субъединицы Na,К-АТФазы в данном образце; и вычисление их отношения.
46. Набор по п. 6, где способ дополнительно включает: а) сравнение уровней содержания изоформы α3 субъединицы Na,К-АТФазы и изоформы α1 субъединицы Na,К-АТФазы в образце с уровнем содержания изоформы α3 субъединицы Na,К-АТфазы и/или изоформы α1 субъединицы Na,К-АТФазы в образце, используемом в качестве позитивного контроля и/или в образце, используемом в качестве негативного контроля; или b) проведение сравнения уровня содержания изоформы α3 субъединицы Na,К-АТФазы и изоформы α1 субъединицы Na,К-АТФазы в образце ткани, где, как известно, в качестве контроля используется экспрессия только одной из изоформ α3- и α1 субъединиц.
47. Набор по п. 6, где способ дополнительно включает: идентификацию индивидуума, страдающего заболеванием или расстройством, имеющим этиологию, связанную с избыточной пролиферацией клеток.
48. Набор по п. 6, где способ дополнительно включает: проведение радиометрического или денситометрического анализа геля для: а) определения содержания изоформы α3 субъединицы Na,К-АТФазы и содержания изоформы α1-субъединицы Na,К-АТФазы в образце; или b) определение присутствия и количественную оценку содержания изоформы α3 субъединицы Na,К-АТФазы и изоформы α1 субъединицы Na,К-АТФазы в образце.
49. Набор по п. 1, где указанное заболевание или расстройство, имеющее этиологию, связанную с избыточной пролиферацией клеток, выбрано из группы, состоящей из: 1) аутоиммунных заболеваний, таких как индуцированный антигеном артрит и аллергический энцефаломиелит; 2) хронических воспалительных пролиферативных заболеваний, таких как ревматоидный артрит, системный хронический ювенильный артрит, остеопороз и псориаз; 3) пролиферативных заболеваний молочной железы, включая фиброкистозное заболевание; 4) пролиферативных заболеваний предстательной железы, включая доброкачественную гиперплазию предстательной железы (ВРН); 5) пролиферативных заболеваний глаз, включая пролиферативную диабетическую ретинопатию; 6) сосудистых пролиферативных заболеваний, включая атеросклероз и стеноз коронарной артерии; 7) рака и/или 8) опухоли.
50. Набор по п. 1, где указанный сердечный гликозид выбран из группы, состоящей из олеандрина, убаина, буфалина, дигитоксина, дигоксина, цинобуфаталина, цинобуфагина и резибуфогенина.