Повреждение органов иммунопоэза при химической травме и способ его коррекции

«Дни иммунологии в СПб 2017» Immunology Days in St. Petersburg 2017

Медицинская Иммунология Medical Immunology (Russia)/Meditsinskaya Immunologiya

вызывала у реципиентов в депрессивно-подобном состоянии стимуляцию двигательной и исследовательской активностей в «открытом поле»; существенное увеличение временных периодов мобильности в тесте принудительного плавания и снижение ангедонии, считающейся главным признаком депрессии в экспериментальных моделях, выявляемое по предпочтению потребления раствора сахарозы (в процентном отношении от общего количества потребляемой жидкости) по сравнению с контрольной группой животных (87,8±2,0 и 67,5±4,8 соответственно; р < 0,05). Различия по указанным показателям между контрольной и опытной группами реципиентов регистрировались в течение 8-10 дней после клеточной трансплантации и были ассоциированы со стимуляцией нейрогенеза в гиппокампе. У животных в депрессивно-подобном состоянии после внутривенного введения иммунных клеток, обработанных in vitro кофеином, наблюдалось также изменение содержания ряда ре-гуляторных цитокинов в патогенетически значимых для депрессивно-подобного состояния структурах головного мозга, преимущественно в сторону снижения провоспа-лительных цитокинов: в гиппокампе выявлено снижение IL-6, IFNy и повышение IL-10; в гипоталамусе — снижение IL-ip, IL-6, IFNy; в префронтальной коре — снижение IFNy.

Заключение. Представленные результаты демонстрируют позитивный эффект трансплантации модулированных кофеином иммунных клеток, проявляющийся в купировании поведенческих паттернов депрессивно-подобного состояния у экспериментальных животных путем воздействия на патогенетические механизмы депрессии.

КОНЦЕНТРАЦИЯ ЦИТОКИНОВ В СЫВОРОТКЕ КРОВИ МАКАК-РЕЗУСОВ В СРАНИТЕЛЬНО ВОЗРАСТНОМ АСПЕКТЕ

Матуа А.З., Шевцова З.В., Трапш Х.З., Амаба С.Т.

Научно-исследовательский институт экспериментальной патологии и терапии АНА, Сухум, Абхазия

Введение. Обезьяны, как известно, являются наиболее адекватным экспериментальным объектом для решения задач экспериментальной биологии и медицины, вследствие биологического сходства с человеком (Лапин Б.А. и соавт., 1987, 2004; Фридман Э.П., 2009). Большинство видов приматов уже внесены в международную и национальные Красные книги (Лапин Б.А., 2004). Однако по-прежнему сохраняется необходимость изучения на приматах патогенеза инфекционных заболеваний, а также испытания на них вакцин и терапевтических препаратов при таких инфекциях, для которых нет альтернативных моделей. Учитывая, что цитокины являются одной из наиболее мощных систем регуляции и интеграции врожденных и адаптивных форм иммунного ответа, определение уровня ведущих цитокинов у соматически здоровых обезьян Сухумского питомника имело практическое значение.

Цели и задачи. Исследование уровня цитокинов у макак-резусов, с установлением нормативных значений для обезьян, содержащихся в условиях сухумского питом-

ника. Сравнение полученных концентрации цитокинов у молодых половозрелых обезьян (основная группа сравнения) с особями старшей возрастной группы и человеком.

Материалы и методы. Исследования проведены на базе Сухумского питомника при НИИ экспериментальной патологии и терапии АНА. Специалистами клинического отдела Сухумского питомника, по соответствующим кли-нико-лабораторным критериям соматического здоровья животных, были отобраны 60 здоровых макак-резусов (28$ и 32$). Группа 1 — 40 молодых половозрелых обезьян (с 4 до 11 лет) и группа 2 — 20 животных старшего возраста (с 20 до 30 лет). Забор крови осуществляли из локтевой вены в один и тот же временной промежуток — с 9 до 10 часов утра натощак. Методом иммуноферментного анализа, с применением тест-систем ЗАО «Вектор-Бест», были определены в сыворотке крови уровни следующих цитокинов: IL-1, IL-2, IL-4, IL-6, IFNy.

Результаты. В сыворотке крови молодых половозрелых особей концентрация IL-1ß и IL-6 была ниже в 3,6 (IL-1ß) и в 1,5 (IL-6) раза по сравнению с животными старшей группы (р < 0,0001 и р < 0,03 соответственно). При этом содержание IL-2 и IFNy у особей группы 1 было, наоборот, в 4,5 (IL-2) и 2,3 (IFNy) раза выше по сравнению с группой 2 (р < 0,0001). Разницы в уровне IL-4 выявлено не было. При сравнении полученных данных с человеком, было определено, что концентрации цитокинов в сыворотке соматически здоровых макак-резусов молодого половозрелого возраста входит в диапазон нормативных значений цитокинов здоровых людей соответствующего возраста (Симбирцев А.С., 2009).

Заключение. Определение уровня ряда ведущих цитокинов и установление их норм явилось дополнительным иммунологическим критерием для полной оценки соматического здоровья макак-резусов Сухумского питомника. Кроме того то, что исследуемые цитокины укладываются в те же пределы нормативных колебаний, что и человеческие, является очередным подтверждением порой безальтернативного использования низших обезьян старого света при моделировании ряда иммунопатологических состояний.

ПОВРЕЖДЕНИЕ ОРГАНОВ ИММУНОПОЭЗА ПРИ ХИМИЧЕСКОЙ ТРАВМЕ И СПОСОБ ЕГО КОРРЕКЦИИ

Медведева С. Ю.1, 2, Пьянкова З.А.2, Белоусова А.В.1, 2

1ФГБУН«Институт иммунологии и физиологии» УрО РАН, Екатеринбург, Россия

2 ФГАОУ ВПО «Уральский федеральный университет им. первого Президента России Б.Н. Ельцина, Екатеринбург, Россия

Введение. Основной мишенью токсического действия тетрахлорметана (СС14) является печень. В последнее время много работ посвящено изучению структурных изменений печени, ее клеточных элементов, принимающих участие в регенерации при токсическом повреждении. Однако исследование иммунотоксикологического воздействия промышленных ядов на иммунные органы остается не до конца изученным и является актуальным, поскольку нарушение иммунологической реактивности может приводить к развитию инфекционных и онколо-

2017, Т. 19, Специальный выпуск 2017, Vol. 19, Special Issue

Экспериментальные модели Experimental models

гических процессов, формированию аутоиммунных и аллергических реакций.

Цель. Выявить закономерности структурных изменений в органах иммуногенеза крыс при токсическом воздействии и фармакологической коррекции.

Задачи. Оценить структурные изменения в тимусе и селезенке крыс при токсическом воздействии и фармакологической коррекции; определить вклад Ти В-лимфоцитов в процессы регенерации в органах им-мунопоэза.

Материалы и методы. Эксперимент проведен на 25-ти крысах — самцах линии Wistar массой 180±10 г в соответствии с принципами международных этических комитетов (Директива Совета ЕС 2010/63/EU) и одобрен этическим комитетом Института иммунологии и физиологии УрО РАН (протокол ( No-D-nM-2015-28) . Все животные были разделены на экспериментальные группы: 1 группа — интактные животные, 2, 3 группа — внутрибрюшин-ное введение тетрахлорметана, 4 и 5 группы — на фоне моделирования токсического гепатита вводился иммуно-модулятор макрофагов 3-аминофталгидразид (АФГ) по схеме. Выведение животных из эксперимента осуществлялось на 3 и 7 сутки.

Проводилось морфометрическое исследование препаратов тимуса и селезенки. Для иммуногистохимиче-ского (ИГХ) исследование тимуса и селезенки применяли моноклональные антитела mouse antirat CD3 clone G 4.18, CD45 RA clone OX-33 Количественную оценку Т- и В-лимфоцитов производили в единице площади в 20 полях зрения при увеличении микроскопа х1000.

Результаты. Введение СС14 на 3 и 7 сутки приводит к резкому угнетению иммуногенеза в селезенке, о чем свидетельствует достоверное сокращение площади белой пульпы и увеличение площади красной пульпы по сравнению с показателями у интактных животных. У экспериментальных животных наблюдается увеличение количества фолликулов на 3 и 7 сутки эксперимента по сравнению с интактными, однако средняя площадь фолликула снижается.

По данным морфометрии, в центральном органе им-мунопоэза — тимусе, введение иммуномодулятора после токсического повреждения приводит к усилению лим-фопоэза, что подтверждается достоверным увеличением площади коркового и мозгового вещества на 7 сутки эксперимента.

При ИГХ исследовании Т- и В-лимфоцитов установлено, что на 3 сутки токсического воздействия уменьшается количество Т-лимфоцитов в тимусе и В-лимфоцитов в селезенке. Уменьшение количества лимфоцитов в органах иммуногенеза при действии СС14 может быть связано с деструкцией лимфоцитов и подавлением метаболических процессов в клетках, резким и длительным подавлением пролиферации. Наряду с этим разрушение лимфоидной ткани при токсическом воздействии можно считать главной причиной уменьшения их количества. Применение АФГ приводило к увеличению количества иммуноцитов белой и красной пульпы селезенки, в тимусе зафиксировано увеличение численности преимущественно В-лимфоцитов, а количество Т-лимфоцитов на фоне введения иммуномодулятора на 7 сутки достигает значения близкого к интактным.

Заключение и выводы. Действие гепатотропного яда вызывает лимфопению, выражающуюся уменьшением Ти В-лимфоцитов в органах иммунопоэза. Введение иммуномодулятора при токсическом повреждении усиливает лимфопоэз в тимусе и селезенке, что подтверждается увеличением числа Т- и В-лимфоцитов. Полученные результаты дают основание для применения иммуномодулятора АФГ в качестве перспективной стратегии в стимуляции репаративных процессов в органах иммунной системы после токсического воздействия.

Исследование проведено в рамках бюджетной программы «Изучение механизмов регенераторных процессов в органах и тканях с использованием экспериментальных моделей экстремальных факторов и токсического воздействия на организм», № гос. регистрации - 01201352042.

СПОНТАННАЯ И ИНДУЦИРОВАННАЯ ПРОДУКЦИЯ ЦИТОКИНОВ, СЕКРЕТИРУЕМЫХ КЛЕТКАМИ КРОВИ ОБЕЗЬЯН ВИДА МАКАК-РЕЗУС, ИММУНИЗИРОВАННЫХ КАНДИДАТНОЙ ЖИВОЙ РЕКОМБИНАНТНОЙ КОКЛЮШНОЙ ВАКЦИНОЙ

Медкова А.Ю.1, Амичба А.А.2, Матуа А.З.2, Синяшина Л.Н.1, Шевцова З.В.2, Семин Е.Г.1, Лядова И.А.1, Цыганов Е.Н.1, Конджария И.Г.2, Баркая В.С.2, Миквабиа З.Я.2, Каратаев Г.И.1

1ФГБУ «Федеральный научно-исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии» им. Н.Ф. Гамалеи Министерства здравоохранения России, Москва, Россия 2 Научно-исследовательский институт экспериментальной патологии и терапии АНА, Сухум, Абхазия

В последние десятилетия коклюш снова привлек к себе внимание в связи со вспышками заболевания даже в странах с подавляющей долей привитого населения. Это тяжелое инфекционное респираторное заболевание до сих пор остается одной из главных причин смертности младенцев в возрасте до 1 года. Из-за ослабления коллективного иммунитета, связанного с краткосрочной эффективностью применяемых вакцин, наблюдается адаптация возбудителя вследствие геномных изменений бактерий B. pertussis. Более того, поствакцинальный амнестический иммунный ответ (бустер-эффект) ослабевает и не поддерживается циркулирующими в настоящее время штаммами коклюшных бактерий. Такое развитие событий ставит вопрос о создании новых, более эффективных вакцин, способных обеспечивать поствакцинальную защиту от коклюша, сравнимую с постинфекционной.

Новая стратегия в достижении необходимого защитного иммунитета против коклюша заключается в создании препарата, максимально имитирующего природную инфекцию, но не проявляющую патогенных свойств вирулентных бактерий B. pertussis. В НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи нами сконструированы рекомбинантные бактерии B. pertussis4МКS, продуцирующие нетоксичную имму-ногенную форму коклюшного токсина — рКТ и не проявляющие активности непротективного антигена — дер-монекротического токсина. На основе этих генетически аттенуированных бактерий — B. pertussis4МКS — разра-