ГЕНЕТИЧЕСКАЯ КОНСТРУКЦИЯ

1. Рекомбинантный вектор, содержащий генетическую конструкцию, которая содержит промотор, функционально присоединённый к первой кодирующей последовательности, которая кодирует рецептор тирозинкиназы B (TrkB), и ко второй кодирующей последовательности, которая кодирует агонист рецептора TrkB, при этом агонистом является зрелый НФГМ или зрелый NT-4, при этом вторая кодирующая последовательность содержит нуклеотидную последовательность, кодирующую сигнальный пептид, который повышает секрецию агониста рецептора TrkB и при этом генетическая конструкция содержит спейсерную последовательность, расположенную между первой и второй кодирующими последовательностями, причем эта спейсерная последовательность кодирует пептидный спейсер, который сконфигурирован для расщепления, чтобы таким образом продуцировать рецептор и агонист TrkB в виде отдельных молекул.
2. Рекомбинантный вектор по п. 1, отличающийся тем, что указанная генетическая конструкция содержит нуклеотидную последовательность, кодирующую пост-транскрипционный регуляторный элемент вируса гепатита сурков (WHPE), при этом, необязательно, WHPE содержит последовательность нуклеиновой кислоты, по существу, как указано в SEQ ID No: 57 или 58, или фрагмент или вариант, по меньшей мере с 65% идентичностью последовательности с SEQ ID No: 57 или 58.
3. Рекомбинантный вектор по любому из пп. 1 или 2, отличающийся тем, что указанная конструкция содержит нуклеотидную последовательность, кодирующую хвост полиA, при этом, необязательно, хвост полиA содержит последовательность нуклеиновой кислоты, по существу, как указано в SEQ ID No: 59, или фрагмент или вариант, по меньшей мере с 65% идентичностью последовательности с SEQ ID No: 59.
4. Рекомбинантный вектор по любому из предшествующих пунктов, отличающийся тем, что промотор представляет собой промотор синапсина I (SYN I) человека, при этом, необязательно, указанный промотор содержит последовательность нуклеиновой кислоты, по существу, как указано в SEQ ID No: 1, или фрагмент или вариант, по меньшей мере с 65% идентичностью последовательности с SEQ ID No: 1.
5. Рекомбинантный вектор по любому из пп.1-3, отличающийся тем, что промотор представляет собой промотор CAG, при этом, необязательно, указанный промотор содержит последовательность нуклеиновой кислоты, по существу, как указано в SEQ ID No: 2, 3 или 48, или фрагмент или вариант, по меньшей мере с 65% идентичностью последовательности с SEQ ID No: 2, 3 или 48.
6. Рекомбинантный вектор по любому из предшествующих пунктов, отличающийся тем, что спейсерная последовательность содержит и кодирует вирусную пептидную спейсерную последовательность, более предпочтительно, вирусную 2А-пептидную спейсерную последовательность.
7. Рекомбинантный вектор по любому из предшествующих пунктов, отличающийся тем, что пептидная спейсерная последовательность содержит нуклеотидную последовательность, по существу, как указано в SEQ ID NO. 4, или фрагмент или вариант, с по меньшей мере 65% идентичностью последовательности с SEQ ID No: 4.
8. Рекомбинантный вектор по любому из пп. 1-6, отличающийся тем, что спейсерная последовательность содержит нуклеотидную последовательность, по существу, как указано в SEQ ID NO. 5, или фрагмент или вариант, по меньшей мере с 65% идентичностью последовательности с SEQ ID No: 5.
9. Рекомбинантный вектор по любому из пп. 1-7, отличающийся тем, что пептидная спейсерная последовательность содержит аминокислотную последовательность, по существу, как указано в SEQ ID NO. 6, или фрагмент или вариант, по меньшей мере с 65% идентичностью последовательности с SEQ ID No: 6.
10. Рекомбинантный вектор по любому из пп. 1-6, отличающийся тем, что спейсерная последовательность содержит нуклеотидную последовательность, по существу, как указано в SEQ ID NO. 7, или фрагмент или вариант, по меньшей мере с 65% идентичностью последовательности с SEQ ID No: 7.
11. Рекомбинантный вектор по любому из пп. 1-7, отличающийся тем, что пептидная спейсерная последовательность содержит аминокислотную последовательность, по существу, как указано в SEQ ID NO. 8, или фрагмент или вариант, по меньшей мере с 65% идентичностью последовательности с SEQ ID No: 8.
12. Рекомбинантный вектор по любому из предшествующих пунктов, отличающийся тем, что первая кодирующая последовательность содержит нуклеотидную последовательность, кодирующую каноническую изоформу TrkB человека, при этом каноническая изоформа TrkB содержит аминокислотную последовательность, как указано в SEQ ID NO. 9, или фрагмент или вариант, по меньшей мере с 65% идентичностью последовательности с SEQ ID No: 9
13. Рекомбинантный вектор по любому из предшествующих пунктов, отличающийся тем, что первая кодирующая последовательность содержит нуклеотидную последовательность, по существу, как указано в SEQ ID NO. 10, или фрагмент или вариант, по меньшей мере с 65% идентичностью последовательности с SEQ ID No: 10.
14. Рекомбинантный вектор по любому из предшествующих пунктов, отличающийся тем, что первая кодирующая последовательность содержит нуклеотидную последовательность, которая кодирует изоформу 4 TrkB.
15. Рекомбинантный вектор по п. 14, отличающийся тем, что изоформа 4 TrkB содержит аминокислотоную последовательность, по существу, как указано в SEQ ID NO. 11, или фрагмент или вариант, по меньшей мере с 65% идентичностью последовательности с SEQ ID No: 11.
16. Рекомбинантный вектор по любому из пп. 14 или 15, отличающийся тем, что первая кодирующая последовательность содержит нуклеотидную последовательность, по существу, как указано в SEQ ID NO. 12, или фрагмент или вариант, по меньшей мере с 65% идентичностью последовательности с SEQ ID No: 12.
17. Рекомбинантный вектор по любому из предшествующих пунктов, отличающийся тем, что первая кодирующая последовательность содержит нуклеотидную последовательность согласно SEQ ID NO: 9, при этом один или большее количество остатков тирозина в положениях 516, 701, 705, 706 и/или 816 последовательности SEQ ID No: 9 являются модифицированными до других аминокислотных остатков.
18. Рекомбинантный вектор по п. 17, отличающийся тем, что по меньшей мере два, три или четыре остатка тирозина в положениях 516, 701, 705, 706 и/или 816 последовательности SEQ ID No: 9 являются модифицированными до других аминокислотных остатков.
19. Рекомбинантный вектор по п. 18, отличающийся тем, что по меньшей мере пять остатков тирозина в положениях 516, 701, 705, 706 и/или 816 последовательности SEQ ID No: 9 являются модифицированными до других аминокислотных остатков.
20. Рекомбинантный вектор по любому из пп. 17-19, отличающийся тем, что или каждый остаток тирозина модифицируют до глутаминовой кислоты.
21. Рекомбинантный вектор по любому из пп.17-20, отличающийся тем, что модифицированная форма рецептора TrkB содержит аминокислотную последовательность, по существу, как указано в SEQ ID NO. 13, или фрагмент или вариант, по меньшей мере с 65% идентичностью последовательности с SEQ ID No: 13.
22. Рекомбинантный вектор по п. 21, отличающийся тем, что первая кодирующая последовательность содержит нуклеотидную последовательность, по существу, как указано в SEQ ID NO. 14, или фрагмент или вариант, по меньшей мере с 65% идентичностью последовательности с SEQ ID No: 14.
23. Рекомбинантный вектор по любому из предшествующих пунктов, отличающийся тем, что вторая кодирующая последовательность кодирует нейротрофин-4 (NT-4), который содержит аминокислотную последовательность, по существу, как указано в SEQ ID NO: 49 или 55, или фрагмент или вариант, по меньшей мере с 65% идентичностью последовательности с SEQ ID No: 49 или 55, и/или вторая кодирующая последовательность содержит нуклеотидную последовательность, по существу, как указано в SEQ ID No: 50 или 56, или фрагмент или вариант, по меньшей мере с 65% идентичностью последовательности SEQ ID No: от 50 до 56.
24. Рекомбинантный вектор по любому из предшествующих пунктов, отличающийся тем, что вторая кодирующая последовательность содержит нуклеотидную последовательность, которая кодирует зрелый НФГМ.
25. Рекомбинантный вектор по п. 24, отличающийся тем, что зрелый НФГМ содержит аминокислотоную последовательность, по существу, как указано в SEQ ID NO. 18, или фрагмент или вариант, по меньшей мере с 65% идентичностью последовательности с SEQ ID No: 18.
26. Рекомбинантный вектор по п. 25, отличающийся тем, что вторая кодирующая последовательность содержит нуклеотидную последовательность, по существу, как указано в SEQ ID NO. 19, или фрагмент или вариант, по меньшей мере с 65% идентичностью последовательности с SEQ ID No: 19.
27. Рекомбинантный вектор по любому из предшествующих пунктов, отличающийся тем, что вторая кодирующая последовательность содержит нуклеотидную последовательность, кодирующую сигнальный пептид для агониста рецептора TrkB, наиболее предпочтительно, сигнальный пептид для НФГМ.
28. Рекомбинантный вектор по п.27, отличающийся тем, что нуклеотидная последовательность кодирует канонический сигнальный пептид для НФГМ, при этом вторая кодирующая последовательность содержит нуклеотидную последовательность, которая кодирует сигнальный пептид, содержащий аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID NO. 20, или фрагмент или вариант, по меньшей мере с 65% идентичностью последовательности SEQ ID No: 20.
29. Рекомбинантный вектор по п. 27, отличающийся тем, что вторая кодирующая последовательность содержит нуклеотидную последовательность, по существу, как указано в SEQ ID NO. 21, или фрагмент или вариант, по меньшей мере с 65% идентичностью последовательности с SEQ ID No: 21.
30. Рекомбинантный вектор по любому из предшествующих пунктов, отличающийся тем, что вторая кодирующая последовательность содержит нуклеотидную последовательность, кодирующую последовательность сигнального пептида, по существу, как указано в любой из SEQ ID NO. 23, 25, 27 или 29, или отличающийся тем, что сигнальный пептид содержит аминокислотную последовательность, по существу, как указано в любой из SEQ ID NO. 22, 24, 26 или 28.
31. Рекомбинантный вектор по любому из предшествующих пунктов, отличающийся тем, что вторая кодирующая последовательность содержит нуклеотидную последовательность, кодирующую последовательность сигнального пептида, по существу, как указано в любой из SEQ ID NO. 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 61, 63, 65, 67, 69, 71, 73, 75, 77, 79, 81, 83, 85, 87, 89, 91, 93, 95, 97, 99, 101 или 103; или отличающийся тем, что сигнальный пептид содержит аминокислотную последовательность, по существу, как указано в любой из SEQ ID NO. 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 96, 98, 100 или 102.
32. Рекомбинантный вектор по любому из предшествующих пунктов, отличающийся тем, что указанная конструкция содержит нуклеотидную последовательность, по существу, как указано в SEQ ID No: 107 или 108, или фрагмент или вариант, по меньшей мере с 65% идентичностью последовательности SEQ ID No: 107 или 108.
33. Рекомбинантный вектор по любому из предшествующих пунктов, отличающийся тем, что указанный вектор представляет собой рекомбинантный вектор AAV (rAAV).
34. Рекомбинантный вектор по п. 33, отличающийся тем, что rAAV представляет собой AAV-1, AAV-2, AAV-3A, AAV-3B, AAV-4, AAV-5, AAV-6, AAV-7, AAV-8, AAV-9, AAV-10 или AAV-11.
35. Рекомбинантный вектор по п. 34, отличающийся тем, что rAAV представляет собой серотип-2 rAAV.
36. Рекомбинантный вектор по любому из пп. 1-35, для применения в качестве лекарственного средства или для лечения.
37. Рекомбинантный вектор по любому из пп. 1-35 для применении в лечении, предотвращении или облегчении патологии зрительного нерва или кохлеарной патологии или для стимулирования регенерации и/или выживания нервов.
38. Вектор по п. 37, отличающийся тем, что патология зрительного нерва, которая подлежит лечению, является любым патофизиологическим состоянием, которое приводит к гибели ГКС, таким как травма головы или лица или сосудистые нарушения, например частичное или полное нарушение кровоснабжения глазных структур или областей мозга, которые получают иннервацию от зрительного нерва, или для применения с целью обеспечения замещения ГКС посредством введения нетрансформированной или трансформированной стволовой клетки в глаз или области, ассоциированные с функцией зрения у пациентов.
39. Вектор по п. 38, отличающийся тем, что патология зрительного нерва, которая подлежит лечению, представляет собой глаукому.
40. Вектор по п. 37, отличающийся тем, что кохлеарная патология, которая подлежит лечению, представляет собой потерю слуха или глухоту.
41. Фармацевтическая композиция, содержащая рекомбинантный вектор по любому из пп. 1-35 и фармацевтически приемлемый носитель.
42. Способ получения фармацевтической композиции по п. 41, при этом способ включает приведение в контакт рекомбинантного вектора по любому из пп. 1-35 с фармацевтически приемлемым носителем.