КОНСТРУКЦИЯ И СПОСОБ КОНСТРУИРОВАНИЯ СИНТЕТИЧЕСКОГО ДВУНАПРАВЛЕННОГО РАСТИТЕЛЬНОГО ПРОМОТОРА UBI1

1. Синтетический полинуклеотид, содержащий минимальный коровый промоторный элемент из гена убиквитина-1 Zea mays или Zea luxurians.
2. Синтетический полинуклеотид по п. 1, в котором минимальный коровый промоторный элемент содержит полинуклеотидную последовательность, которая по меньшей мере на 75% идентична последовательности SEQ ID NO: 1 или ее комплементу.
3. Синтетический полинуклеотид по п. 1, в котором минимальный коровый промоторный элемент содержит полинуклеотидную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1 и 15-39.
4. Синтетический полинуклеотид по п. 1, в котором минимальный коровый промоторный элемент содержит последовательность SEQ ID NO: 1 или ее комплемент.
5. Синтетический полинуклеотид по п. 1, дополнительно содержащий экзон из гена убиквитина-1 и интрон из гена убиквитина-1.
6. Синтетический полинуклеотид по п. 1, дополнительно содержащий вышележащую регуляторную последовательность из гена убиквитина-1.
7. Синтетический полинуклеотид по п. 6, в котором вышележащая регуляторная последовательность содержит последовательность SEQ ID NO: 4 или ее комплемент.
8. Синтетический полинуклеотид по п. 1, дополнительно содержащий элемент, выбранный из группы, состоящей из вышележащей регуляторной последовательности (URS), энхансерного
элемента, экзона, интрона, участка старта транскрипции, TATA-бокса, консенсусного элемента теплового шока и их комбинаций.
9. Синтетический полинуклеотид по п. 1, дополнительно содержащий представляющую интерес нуклеотидную последовательность, оперативно связанную с минимальным коровым промоторным элементом.
10. Синтетический полинуклеотид по п. 1, дополнительно содержащий второй минимальный коровый промоторный элемент из гена убиквитина-1 Zea mays или Zea luxurians, при этом два минимальных коровых промоторных элемента находятся в полинуклеотиде в обратной комплементарной ориентации по отношению друг к другу.
11. Синтетический полинуклеотид по п. 10, дополнительно содержащий экзон из гена убиквитина-1 и интрон из гена убиквитина-1.
12. Синтетический полинуклеотид по п. 11, содержащий последовательность SEQ ID NO: 3 или ее комплемент.
13. Синтетический полинуклеотид по п. 10, дополнительно содержащий вышележащую регуляторную последовательность из гена убиквитина-1.
14. Синтетический полинуклеотид по п. 13, в котором вышележащая регуляторная последовательность содержит последовательность SEQ ID NO: 4 или ее комплемент.
15. Синтетический полинуклеотид по п. 10, дополнительно содержащий элемент, выбранный из группы, состоящей из вышележащей регуляторной последовательности (URS), экзона, интрона, участка старта транскрипции, TATA-бокса, консенсусного
элемента теплового шока, нуклеотидной последовательности старта и/или остановки трансляции и их комбинаций.
16. Синтетический полинуклеотид по п. 15, содержащий последовательность SEQ ID NO: 5 или ее комплемент.
17. Синтетический полинуклеотид по п. 10, содержащий первую представляющую интерес нуклеотидную последовательность, оперативно связанную с одним из минимальных коровых промоторных элементов.
18. Синтетический полинуклеотид по п. 17, содержащий вторую представляющую интерес нуклеотидную последовательность, оперативно связанную с минимальным коровым промоторным элементом, который оперативно не связан с первой представляющей интерес нуклеотидной последовательностью.
19. Способ получения трансгенной клетки, включающий трансформацию клетки полинуклеотидом по п. 1.
20. Способ получения трансгенной клетки, включающий трансформацию клетки полинуклеотидом по п. 10.
21. Способ по п. 20, в котором клетка представляет собой растительную клетку.
22. Способ по п. 19, в котором клетка представляет собой растительную клетку.
23. Растительная клетка, содержащая полинуклеотид по п. 1.
24. Растительная клетка, содержащая полинуклеотид по п. 10.
25. Растение, содержащее растительную клетку по п. 23.
26. Растение, содержащее растительную клетку по п. 24.
27. Способ экспрессии представляющей интерес нуклеотидной последовательности в растительной клетке, включающий введение в
растительную клетку представляющей интерес нуклеотидной последовательности, оперативно связанной со средствами для инициации транскрипции независимым от направления образом.
28. Способ экспрессии представляющей интерес нуклеотидной последовательности в растительной клетке, включающий введение в растительную клетку представляющей интерес нуклеотидной последовательности, оперативно связанной со средствами для инициации транскрипции двух оперативно связанных представляющих интерес нуклеотидных последовательностей.
29. Способ по п. 28, включающий введение в растительную клетку нуклеиновой кислоты, содержащей:
(a) представляющую интерес нуклеотидную последовательность, оперативно связанную со средствами для инициации транскрипции двух оперативно связанных представляющих интерес нуклеотидных последовательностей; и
(b) вторую представляющую интерес нуклеотидную последовательность, оперативно связанную со средствами для инициации транскрипции двух оперативно связанных представляющих интерес нуклеотидных последовательностей.
30. Синтетический полинуклеотид по п. 5, в котором экзон получен из гена убиквитина-1 Zea mays или Zea luxurians.
31. Способ по п. 29, в котором средства для инициации транскрипции двух оперативно связанных представляющих интерес нуклеотидных последовательностей содержат последовательность SEQ ID NO: 5 или ее комплемент.
32. Способ по п. 29, в котором нуклеиновую кислоту вводят в растительную клетку так, чтобы точно направить в предварительно
определяемый участок в ДНК растительной клетки представляющую интерес нуклеотидную последовательность, оперативно связанную со средствами для инициации транскрипции двух оперативно связанных представляющих интерес нуклеотидных последовательностей.
33. Способ по п. 32, в котором представляющую интерес нуклеотидную последовательность, оперативно связанную со средствами для инициации транскрипции двух оперативно связанных представляющих интерес нуклеотидных последовательностей, направляют точно в предварительно определяемый участок, используя рекомбинацию, опосредованную нуклеазами типа цинковых пальцев.
34. Конструкция нуклеиновой кислоты для экспрессии множества генов в растительных клетках и/или тканях, содержащая:
(a) двунаправленный промотор; и
(b) две кассеты экспрессии генов на противоположных концах двунаправленного промотора;
при этом по меньшей мере одна из кассет экспрессии генов содержит два или больше генов, связанных через переключатель трансляции.
35. Конструкция нуклеиновой кислоты по п. 34, в котором двунаправленный промотор не содержит вирусной последовательности.
36. Конструкция нуклеиновой кислоты по п. 34, в котором двунаправленный промотор содержит по меньшей мере один энхансер.
37. Конструкция нуклеиновой кислоты по п. 34, в котором конструкция нуклеиновой кислоты содержит бинарный вектор для трансформации, опосредованной Agrobacterium.
38. Конструкция нуклеиновой кислоты по п. 34, в котором двунаправленный промотор содержит элемент, выбранный из группы, состоящей из вышележащей регуляторной последовательности (URS), энхансерного элемента, экзона, интрона, участка старта транскрипции, TATA-бокса, консенсусного элемента теплового шока и их комбинаций.
39. Конструкция нуклеиновой кислоты по п. 34, в котором двунаправленный промотор содержит минимальный коровый промоторный элемент из гена убиквитина-1 Zea mays или Zea luxurians.
40. Конструкция нуклеиновой кислоты по п. 39, в котором двунаправленный промотор дополнительно содержит второй минимальный коровый промотор из Zea mays или Zea luxurians, при этом два минимальных коровых промоторных элемента находятся в обратной комплементарной ориентации по отношению друг к другу.
41. Конструкция нуклеиновой кислоты по п. 39, в котором минимальный коровый промоторный элемент содержит полинуклеотидную последовательность по меньшей мере на 70% идентичную последовательности SEQ ID NO: 1 или ее комплементу.
42. Конструкция нуклеиновой кислоты по п. 39, в котором двунаправленный промотор содержит экзон из гена убиквитина-1 и/или интрон из гена убиквитина.
43. Конструкция нуклеиновой кислоты по п. 42, в котором двунаправленный промотор содержит полинуклеотид SEQ ID NO: 3 или его комплемент.
44. Конструкция нуклеиновой кислоты по п. 42, в котором двунаправленный промотор содержит вышележащие регуляторные
последовательности из гена убиквитина.
45. Конструкция нуклеиновой кислоты по п. 44, в котором вышележащие регуляторные последовательности из гена убиквитина содержат полинуклеотид SEQ ID NO: 4 или его комплемент.
46. Конструкция нуклеиновой кислоты по п. 34, в котором двунаправленный промотор содержит полинуклеотид SEQ ID NO: 5 или его комплемент.
47. Конструкция нуклеиновой кислоты по п. 34, в котором двунаправленный промотор содержит вышележащую регуляторную последовательность (URS) из гена убиквитина.
48. Конструкция нуклеиновой кислоты по п. 47, в котором двунаправленный промотор содержит:
(i) промотор, отличный от промотора гена убиквитина, и
(ii) вышележащую регуляторную последовательность (URS) из гена убиквитина.
49. Конструкция нуклеиновой кислоты по п. 34, в котором обе кассеты экспрессии генов содержат два или больше генов, связанных через переключатель трансляции.
50. Конструкция нуклеиновой кислоты по п. 34, в котором переключатель трансляции выбран из группы, состоящей из внутреннего участка связывания рибосомы (IRES), альтернативного сайта сплайсинга, сайта расщепления рибозимом, полинуклеотидной последовательности, кодирующей пептид 2A, полинуклеотидной последовательности, кодирующей 2A-подобный пептид, полинуклеотидной последовательности, кодирующей интеин, полинуклеотидной последовательности, кодирующей сайт расщепления протеазой и их комбинаций.
51. Конструкция нуклеиновой кислоты по п. 34, в котором ген выше переключателя трансляции не содержит стоп-кодона трансляции.
52. Конструкция нуклеиновой кислоты по п. 33, в котором конструкция нуклеиновой кислоты обеспечивает возможность экспрессии по меньшей мере четырех генов.
53. Конструкция нуклеиновой кислоты по п. 34, в котором конструкция нуклеиновой кислоты обеспечивает возможность экспрессии от трех до двадцати генов.
54. Конструкция нуклеиновой кислоты по п. 53, в котором конструкция нуклеиновой кислоты обеспечивает возможность экспрессии от четырех до восьми генов.
55. Конструкция нуклеиновой кислоты по п. 34, в котором экспрессия генов с двунаправленного промотора по меньшей мере в четыре раза выше по сравнению с экспрессией с однонаправленного промотора.
56. Конструкция нуклеиновой кислоты по п. 34, в котором экспрессия генов с двунаправленного промотора в три-десять раз выше по сравнению с экспрессией с однонаправленного промотора.
57. Способ получения трансгенного растения, включающий трансформацию растительной клетки конструкцией нуклеиновой кислоты по п. 34.
58. Способ получения трансгенной клетки, включающий трансформацию клетки конструкцией нуклеиновой кислоты по п. 34.
59. Растительная клетка, содержащая конструкцию нуклеиновой кислоты по п. 34.
60. Растительная клетка по п. 59, в котором растительная
клетка стабильно трансформирована конструкцией нуклеиновой кислоты.
61. Трансгенное растение, содержащее конструкцию нуклеиновой кислоты по п. 34.
62. Трансгенное растение по п. 61, в котором конструкцией нуклеиновой кислоты стабильно трансформируют клетки трансгенного растения.
63. Способ экспрессии множества генов в растительных клетках и/или тканях, включающий введение в растительные клетки и/или ткани конструкции нуклеиновой кислоты по п. 34.
64. Способ по п. 63, в котором растительные клетки и/или ткани стабильно трансформированы конструкцией нуклеиновой кислоты по п. 34.
65. Бинарный вектор для опосредованной Agrobacterium трансформации, содержащий конструкцию нуклеиновой кислоты по п. 34.
66. Бинарный вектор для опосредованной Agrobacterium трансформации, содержащий синтетический полинуклеотид по п. 1.