Анализ взаимосвязи фактора роста эндотелия сосудов с аденомами гипофиза, осложненными питуитарной апоплексией

КЛИНИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

clinical investigations

© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2017 УДК 616.432-006.55-06:616-005.1]-07

Махкамов К.Э., Азизов М.М., Вервекина Т.А., Нишонов Д.А.

анализ взаимосвязи фактора роста эндотелия сосудов с аденомами гипофиза, осложненными питуитарной

апоплексией

Республиканский научный центр экстренной медицинской помощи Министерства здравоохранения Республики Узбекистан, 100115, г. Ташкент, Узбекистан

Цель. Несмотря на то что гипофизарная аденома - относительно доброкачественная опухоль, иногда течение заболевания осложняется интратуморальным кровоизлиянием. В мировой литературе имеются единичные данные о молекулярном механизме кровоизлияния в аденомах гипофиза. Фактор роста эндотелия сосудов (VEGF) играет важную роль в ангиогенезе и проницаемости эндотелия в различных опухолях головного мозга. Проведен анализ взаимосвязи между питуитарной апоплексией и экспрессией VEGF при аденомах гипофиза.

Материал и методы. Иммуногистохимическое исследование уровня экспрессии молекулярно-биологического маркёра VEGF проведено с использованием моноклональных антител методом полуколичественного анализа у 30 больных с аденомой гипофиза. При клиническом исследовании изучены возрастные данные, пол, гормональная активность и данные рентгенологического исследования. Проведен статистический анализ взаимосвязи между клинико-диагностическими данными и экспрессией VEGF.

Результаты. Гормонально активные опухоли выявлены в 12 (40%) случаях, интратуморальное кровоизлияние в 16 (53,3%), аденомы с кистозным компонентом в 7 (23,3%) и инвазия в кавернозный синус - в 22 (73,3%) случаях. Экспрессия VEGF наблюдалась в 11 случаях (36,6%). На основании проведенного анализа выявлено, что выраженность экспрессии VEGF тесно взаимосвязана с питуитарной апоплексией (ПА) при аденомах гипофиза (p < 0,001). Однако статистической достоверной взаимосвязи между VEGF и возрастом, полом, размером опухоли, гормональной активностью, наличием кистозного компонента, инвазивнымростом опухоли не выявлено (p > 0,05).

Заключение. Выявлено, что иммуногистохимическое исследование уровня экспрессии молекулярно-биологического маркера VEGF может быть использовано в оценке прогноза заболевания или выделении группы риска с высокой степенью вероятности развития питуитарной апоплексии и рецидива опухолевого роста.

Ключевые слова: ангиогенез; питуитарная апоплексия; аденома гипофиза; фактор роста эндотелия сосудов.

Для цитирования: Махкамов К.Э., Азизов М.М., Вервекина Т.А., Нишонов Д.А. Анализ взаимосвязи фактора роста эндотелия сосудов с аденомами гипофиза, осложненными питуитарной апоплексией. Российский онкологический журнал. 2017; 22 (3): 131-135. DOI: http://dx.doi.org/10.18821/1028-9984-2017-22-3-131-135

Для корреспонденции: Азизов Миралим Мирабидович, старший научный сотрудник отдела нейрохирургии. E-mail: alimazizov1979@gmail.com.

Makhkamov K.E., AzizovMM., Vervekina T.A., Nishonov D.A.

ANALYSIS OF THE INTERRELATION OF THE VASCULAR ENDOTHELIAL GROWTH FACTOR WITH

PITUITARY ADENOMAS COMPLICATED BY PITUITARY APOPLEXY

Republican Research Centre of Emergency Medicine, Tashkent, 100115, Republic of Uzbekistan

Aim. Despite the fact that the pituitary adenoma is a relatively benign tumor, sometimes the course of the disease is complicated by intramedullary hemorrhage. In the world literature there are single data on the molecular mechanism of hemorrhage in the adenomas of the pituitary gland. Vascular endothelial growth factor (VEGF) plays an important role in angiogenesis and permeability of the endothelium in various brain tumors. There was made an analysis of the relationship between pituitary apoplexy and VEGF expression in pituitary adenomas.

Material and methods. Immunohistochemical investigation of the level of expression of the molecular-biological marker - VEGF was performed with the use of monoclonal antibodies with the method of semiquantitative analysis in 30 pituitary adenoma patients. In the clinical study data about the age, gender, hormonal activity and X-ray study were studied. There was executed a statistical analysis of the relationship between clinical diagnostic data and VEGF expression. Results. Hormonal active tumors were detected in 12 (40%) cases, intratumoral hemorrhage - in 16 (53.3%), adenomas with cystic component - in 7 (23.3%) and invasion of cavernous sinus - in 22 (73.3%) of cases. Expression of VEGF was observed in 11 cases (36.6%). Based on the analysis the expression of VEGF was found to be closely related to pituitary apoplexy (PA) in pituitary adenomas (p < 0.001). However, there was no statistically significant relationship between VEGF and age, sex, tumor size, hormonal activity, cystic component presence, invasive tumor growth (p > 0.05).

Conclusion. It was found that immunohistochemical examination of the level of expression of a molecular biological marker VEGF can be used in the evaluation of the prognosis of the disease or the identification of a risk group with a high probability of the development ofpituitary apoplexy and recurrence of tumor growth.

Keywords: angiogenesis; pituitary apoplexy; adenoma of the pituitary gland; vascular endothelial growth factor.

For citation: Makhkamov K.E., Azizov M.M., Vervekina T.A., Nishonov D.A. Analysis of the interrelation of the vascular endothelial growth factor with pituitary adenomas complicated by pituitary apoplexy. Rossiiskii

российский онкологический журнал. 2017; 22

DOI: http://dx.doi.org/10.18821/1028-9984-2017-22-3-131-135

kfllmhimheckime imccfleflobahimfl

onkologicheskii zhurnal. (Russian Journal of Oncology). 2017; 22 (3): 131-135. (In Russ.). DOI: http://dx.doi. org/10.18821/1028-9984-2017-22-3-131-135

For correspondence: Miralib M. Azizov, MD, Senior Researches of the Department of the Neurosurgery, Tashkent, 100115, Republic of Uzbekistan. E-mail: alimazizov1979@gmail.com. Conflict of interest. The authors declare no conflict of interest. Acknowledgment. The study had no sponsorship.

Received 03 December 2016 Accepted 16 February 2017

Одной из наиболее важных биологических характеристик опухоли в прогнозе болезни считается оценка потенциала ее пролиферативной активности, инвазив-ной способности, ангиогенеза и апоптоза [1-4]. Нео-ангиогенез - сложный и тонко регулируемый процесс образования новых сосудов, связанный с активацией 82 генов, необходим для роста опухоли и развития метастазов [5]. В регуляции ангиогенеза тем или иным образом участвуют многие известные факторы роста и цитокины, однако важнейшим положительным регулятором ангиогенеза, бесспорно, является фактор роста эндотелия сосудов (VEGF - vascular endothelial growth factor) [6, 7]. Уникальность этого фактора заключается в том, что в отличие от всех других факторов роста VEGF является активным митогеном для микро- и ма-кроваскулярных клеток кровеносных и лимфатических сосудов. Фактор роста эндотелия сосудов - сигнальный белок, вырабатываемый клетками для стимулирования васкулогенеза и ангиогенеза. Выработка VEGF может быть вызвана в клетках, которые не получают достаточного количества кислорода. Циркулирующий белок VEGF связывается с VEGF-рецептором на клетках эндотелия и активирует действие тирозинкиназы, запуская ангиогенез; активация данных белков происходит путем их трансфосфорилирования. Опухоли, способные экспрессировать VEGF, могут расти и метастази-ровать [8]. В семейство VEGF входят её 5 изо-форм: VEGF-А, плацентарный фактор роста (PGF) и белки VEGF-B, VEGF-С, VEGF-D, с различным молекулярным размером и биологической активностью [9]. VEGF характеризуется ангиогенетической активностью и является одним из основных потенцирующих факторов, отвечающих за проницаемость сосудов [10, 11]. Недавние исследования установили, что VEGF увеличил венуллярную и капиллярную проходимость, вызывая и поддерживая процесс фенестрации в сосудистом эндотелии [12, 13]. Имеются публикации о VEGF-связанном интратуморальном кровоизлиянии при глио-бластомах [14]. Экспрессия VEGF тесно взаимосвязана с прогрессивным ростом гипофизарной опухоли и выраженностью её васкуляризации. Несмотря на частую встречаемость внутриопухолевого кровоизлияния при аденомах гипофиза (АГ), роль VEGF в данной патологии не изучена [15-18].

В настоящей работе представлены данные ретроспективного анализа уровня экспрессии молекуляр-но-биологического маркёра VEGF в АГ. Изучена взаимосвязь экспрессии VEGF с питуитарной апоплексией (ПА).

Материал и методы

В период с 2005 по 2016 г. в отделении нейрохирургии Республиканского научного центра экстренной медицинской помощи (РНЦЭМП) пролечены пациенты (n = 251) с различными клиническими формами гипофизарных опухолей. Хирургическое лечение осуществляли транссфеноидальным доступом. В данное исследование включены 30 пациентов с АГ, которым проведено иммуногистохимическое исследование с определением уровня экспрессии VEGF. Анализиро-

ваны возрастные данные, пол, гормональную активность опухоли и данные МРТ-исследований. На МРТ определены размеры опухоли, признаки инвазии АГ в кавернозный синус, ПА и наличие кистозного компонента. Дооперационное МРТ-исследование селляр-ной области проведено во всех случаях. Интратумо-ральному кровоизлиянию был характерен гиперинтенсивный сигнал в Т1-взвешенном режиме (T1WI) и гипоинтенсивный сигнал в Т2-взвешенном режиме (T2WI), в то же время кистозный компонент визуализировался как гипоинтенсивный сигнал на T1WI и гиперинтенсивный сигнал на T2WI (рис. 1, см. 1-ю полосу вклейки; рис. 2, см. 2-ю полосу вклейки).

Диагноз у всех подтвержден интраоперационно и данными гистологического исследования удаленной опухоли. С целью определения степени инвазивного роста опухоли в кавернозный синус мы использовали классификацию Knosp-Steiner [19]. Латероселлярный рост АГ с прорастанием в кавернозный синус на МРТ выявляли при прорастании опухолевой ткани через медиальную стенку кавернозного синуса, в некоторых случаях охватывающий интракавернозную часть внутренней сонной артерии (ВСА) с тотальным прорастанием в кавернозный синус (степень 3, 4). (табл. 1).

Выявление антигенов в клетках с помощью имму-ногистохимического анализа проводили в несколько этапов. В качестве фиксатора использован 10% раствор забуферного формальдегида. Исследуемые образцы заключали в парафиновые блоки. Перед проведением иммуногистохимической реакции на парафиновых срезах осуществляли их регидратацию; после резки на микротоме помещали на предметные стекла и высушивали. Затем срезы освобождали от парафина, на них проводили демаскирование антигенов, блокировали неспецифическое связывание белков и эндогенную пероксидазную активность и после этого - инкубацию с первичными антителами. Исследование экспрессии молекулярно-биологического маркёра VEGF проведено с использованием моноклональных антител (Dako Denmark A/S. Daniya Productionvej 42. Dako, DK-2600). При анализе иммуногистохимического окрашивания антителами VEGF цитоплазмы опухолевых клеток АГ использовали полуколичественный метод и оценивали по балльной системе: 0 баллов - отсутствие окрашивания; + (1 балл) - более 20% клеток со слабой интенсивностью окрашивания цитоплазмы; ++ (2 балла) - умеренное окрашивание цитоплазмы опухолевых клеток; +++ (3 балла) - интенсивное окрашивание; ++++ (4 балла) - интенсивное окрашивание цитоплазмы более чем 80% клеток (рис. 3, см. 2-ю полосу вклейки).

Для статистической обработки данных применяли программу Statistica 6.0; i-критерий Стьюдента и критерий согласия Пирсона (х2) вычисляли по соответствующей формуле с использованием программы Microsoft Office Excel. Проведен сравнительный анализ экспрессии VEGF, размеров опухоли, наличия кистозных компонентов и инвазивного характера роста опухоли в кавернозный синус. Различия между группами считали статистически значимыми при p < 0,05.

Таблица 1

Классификация Knosp-Steiner, определяющая степень инвазив-ного роста АГ в кавернозный синус

шК

Степень 0 \

tsmk

Степень 1 *

Степень 2 '

Степень 0. Опухоль прилегает к медиальной стенке кавернозного синуса, при этом не переходит за линию соединяющую медиальные стенки интра- и супракли-ноидной части ВСА

Степень 1. На коронарных срезах опухоль прорастает в медиальную стенку кавернозного синуса и доходит до линии, соединяющей середины диаметров интракавернозного и супраклиноидного сегментов ВСА

Степень 2. Характеризуется распространением опухоли за линией, соединяющей середины диаметров интра-кавернозного и супракли-ноидного сегментов ВСА. При этом не переходит за линию, соединяющую латеральные стенки интра-кавернозной и супраклино-идной части ВСА

Степень 3. Опухоль распространяется за линией, соединяющей латеральные стенки интракавернозной и супраклиноидной части ВСА. Опухоль прорастает полость кавернозного синуса, но не прорастает в ВСА

Степень 4. Тотальное прорастание опухоли в кавернозный синус и ВСА. Контуры кавернозного синуса деформированы и увеличены

Результаты

В настоящем исследовании приняли участие 17

clinical investigations

случаях экспрессия VEGF в иммуногистохимической реакции была положительной, в 19 (63,4 %) случаях -отрицательной (табл. 2).

Средний размер опухоли составил 22,2 ± 13,1 мм. В 25 (83,4%) случаях выявлены макроаденомы (>10 мм), в 5 случаях (16,6%) - микроаденомы (< 10 мм). Кистозный компонент отмечен в 7 (23,4%) случаях, внутриопухолевое кровоизлияние - в 16 (53,4%) случаях. Степень инвазии АГ в кавернозный синус определяли согласно классификации Knosp-Steiner: степень 0 в 12 случаях, степень 1 в 6 случаях, степень 2 в 7 случаях, степень 3 в 2 случаях и степень 4 в 3 случаях (табл. 3).

Средний возраст больных с VEGF позитивной реакцией составил 42,4 года, с VEGF-отрицательной реакцией - 38,2 года. В 58% у мужчин и 42% у женщин имела место положительная экспрессия VEGF. В 49 и 51% соответственно экспрессия VEGF была отрицательной. Таким образом, статистически достоверной корреляции между экспрессией VEGF и возрастно-половыми данными не выявлено (p = 0,073) (рис. 4 а, б, см. 2-ю полосу вклейки).

Такие же результаты отмечены у больных с позитивной реакцией VEGF, где средний размер опухоли составил 22,4 ± 16,8 мм, и в группе больных с отрицательной VEGF реакцией, где возрастной показатель составил 21,7 ± 10,2. Статистически достоверной корреляции между экспрессией VEGF и размерами опухоли не выявлено (p = 0,095) (рис. 5).

У 12 (40%) пациентов отмечены различные гормонально активные АГ, в 18 (60%) случаях диагностирована гормонально неактивная форма. Положительная реакция VEGF выявлена у 42% пациентов с гормонально активными АГ и у 58% -с гормонально неактивными АГ. Экспрессия VEGF была отрицательной в 35% гормонально активных и 65% гормонально неактивных АГ. При этом статистически значимой взаимосвязи между экспрессией VEGF и гормональной активностью не выявлено (p = 0,052) (рис. 6, а, см. 3-ю полосу вклейки).

В исследуемой группе выявлены 16 (53,3%) больных с АГ, осложненной интратуморальным кровоизлиянием. Отрицательные результаты экспрессии VEGF в

Таблица 2

Клинические данные больных исследуемой группы

Характеристика пациентов

Общее количество пациентов Возраст, лет

Пол

Гормонально активные АГ

ПРЛ

СТГ

АКТГ

Гормонально неактивные АГ Экспрессия VEGF Положительная Отрицательная

30

36,5 ± 16,4 17 : 13 (56,6 : 43,3%) 12 (40%) 6 4 2

18

11

Примечание. СТГ - соматотропный гормон; ПРЛ - пролак-тин; АКТГ - адренокортикотропный гормон; VEGF - фактор роста эндотелия сосудов.

n

российский онкологический журнал. 201 DOI: http://dx.doi.org/10.18821/1028-9984-2017-22-3-131

7; 22 (3) -135

клинические исследования

Данные МРТ исследуемой группы больных

Таблица 3

Характеристика пациентов

Средний размер опухоли, мм 22,2 ± 13,1

Макроаденома

Микроаденома (< 10 мм) 5 (16,6%) Кистозный компонент

Выявлен 7

Не выявлен 23 (76,6%) Интратуморальное кровоизлияние

Выявлено 16

Не выявлено 14 (46,6%) Инвазия в кавернозный синус

Степень 0 12

Степень 1 6

Степень 2 7

основном отмечены в АГ без ПА (87%). В то же время положительная экспрессия VEGF выявлена в группе больных с ПА (57%) и в группе без ПА (43%). Таким образом, выявлена тесная корреляция между экспрессией VEGF и интратуморальным кровоизлиянием при АГ (p < 0,001) (рис. 6, б, см. 3-ю полосу вклейки).

В 7 (23,4%) случаях выявлены кистозные АГ. Положительная экспрессия VEGF отмечена у 28% больных с кистозными АГ и в 72% в АГ без кистозного компонента. Экспрессия VEGF не выявлена у 12% пациентов с кистозной АГ и у 88% - без кистозного компонента. Статистически достоверной взаимосвязи между кистозными АГ и VEGF не выявлено (p = 0,193) (рис. 6, в, см. 3-ю полосу вклейки).

60 50 40 30 20 10 0

VEGF

VEGF

Рис. 5. Экспрессия VEGF и размеры опухоли.

Средний размер опухоли в группе больных с положительной и отрицательной VEGF-реакцией составил 22,4 ± 16,8 и 21,7 ± 10,2 мм соответственно (а = 0,096).

Степень инвазии аденом гипофиза в полость кавернозного синуса в исследуемой группе определялась согласно классификации Knosp-Stemer: степень 0 в 12 случаях, инвазия в полость синуса степень 1 в 6 случаях, степень 2 в 7 случаях, степень 3 в 2 случаях, и степень 4 в 3 случаях (см. табл. 1). В 18 (60%) случаях выявлены признаки инвазивного роста в кавернозный синус. Положительная экспрессия VEGF отмечена у 52% больных с инвазивным ростом и у 48% в группе больных с неинвазивным ростом. Экспрессия VEGF была отрицательной в группах пациентов с инвазив-ным и неинвазивным ростом в 31 и 69% соответственно. Статистически достоверной взаимосвязи между VEGF и инвазивным ростом не выявлено ф = 0,903) (рис. 6, г, см. 3-ю полосу вклейки).

Обсуждение

Как известно, VEGF - один из членов семейства структурно близких между собой белков, которые являются лигандами для семейства рецепторов VEGF. VEGF влияет на развитие новых кровеносных сосудов (ангиогенез) и выживание незрелых кровеносных сосудов (сосудистая поддержка), связываясь с двумя близкими по строению мембранными тирозинкиназ-ными рецепторами и активируя их. Связывание VEGF с этими рецепторами запускает сигнальный каскад, который в конечном итоге стимулирует рост эндоте-лиальных клеток сосуда, их выживание и пролиферацию [1, 15, 20, 21].

По данным мировой литературы, встречаемость ПА варьирует от 9,6 до 46% [8, 11]. В исследуемой группе больных признаки ПА по типу интратумораль-ного кровоизлияния выявлены в 16 (60%) случаях. Несмотря на то что ПА встречается в большинстве случаев АГ, потенциальная роль VEGF в её развитии изучена недостаточно. Впервые К. Агйа и соавт. провели научное исследование, в котором выявлена тесная взаимосвязь между VEGF и интратуморальным кровоизлиянием при АГ [8]. В противоположность заключениям данного исследования некоторые авторы отрицают это предположение [6, 11]. Проведённая нами работа дала положительные результаты: выявлена взаимосвязь между экспрессией VEGF и развитием интратуморального кровоизлияния при АГ. Но сопоставление с возрастно-половыми данными, кистозны-ми и инвазивными формами АГ показало отсутствие их корреляции с VEGF.

В некоторых исследованиях отмечено, что экспрессия VEGF не коррелирует с гормональной активностью и объемом опухоли, но имеется взаимосвязь VEGF с пролиферативной активностью опухоли [2]. Кроме этого, авторы отметили, что пролиферативная активность и объем опухоли служат факторами, предопределяющими инвазивный рост АГ в кавернозный синус. Несмотря на то что экспрессия VEGF напрямую не влияет на инвазивность АГ, он может играть роль в активации агрессивного роста. Указанные предположения авторов основываются только на результатах исследования СТГ-секретирующих АГ.

Несмотря на то что в многочисленных публикациях авторы неоднократно ссылаются на классификацию Knosp-Steiner, по нашему мнению, она не может исключить микроинвазию АГ в окружающие структуры, в частности в кавернозный синус, хотя и является неотъемлемым условием планирования хирургического вмешательства и предопределения возможных интра- и послеоперационных осложнений.

n

Заключение

Проведенное нами исследование направлено на изучение экспрессии VEGF методом иммуногистохи-мического анализа с полуколичественным анализом окрашенных материалов. Результаты показали, что выраженность экспрессии VEGF влияет на развитие ин-тратуморального кровоизлияния. VEGF является новой мишенью для дальнейшего изучения, цель которого -профилактика развития осложнений и предопределение возможности активизации и рецидивного роста опухоли при АГ. Проведенное исследование показывает необходимость изучения молекулярных механизмов интратуморального кровоизлияния с учётом роли VEGF в развитии данного осложнения.

Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

Финансирование. Исследование не имело спонсорской поддержки.

ЛИТЕРАТУРА

1. Бабиченко И.И., Ковязин В.А. Новые методы иммуногистохимиче-ской диагностики опухолевого роста: Учебное пособие. М.: РУДН, 2008.

2. Ferrara N. The role of vascular endothelial growth factor in pathological angiogenesis. Breast Cancer Res. Treat. 1995; 36(2): 127-37.

3. Kurihara N., Takahashi S., Higano S., Ikeda H., Mugikura S., Singh L.N. et al. Hemorrhage in pituitary adenoma: correlation of MR imaging with operative findings. Eur. Radiol. 1998; 8: 971-6.

4. Connolly D.T. Vascular permeability factor a unique regulator of blood vessel function. J. CellBiochem. 1991; 47: 219-23.

5. Yamada S., Takada K. Angiogenesis in pituitary adenomas. Microsc. Res. Tech. 2003; 60: 236-43.

6. Ke L.D., Shi Y.X., Yung W.K. VEGF, VEGF over expression enhances tumorigenicity in U251 MG but not in NG-1 glioma cells. Cancer Res. 2002; 62: 1854-61.

7. Холова Д.Ш., Халимова З.Ю., Урманова Ю.М., Алиева Д.А., Али-мухамедова Г.О. Состояние показателей процессов апоптоза и ан-гиогенеза у больных с неактивными аденомами гипофиза. Международный эндокринологический журнал. 2015; [6(70)]: 28-9.

8. Mendiola M., Barriuso J., Redondo A. et al. Angiogenesis-related gene expression profile with independent prognostic value in advanced ovarian carcinoma. PLoS One. 2008; 3: 4051.

9. Jung S., Moon K.S., Jung T.Y., Kim I.Y., Lee Y.H., Rhu H.H. et al. Possible pathophysiological role of vascular endothelial growth factor(VEGF) and matrix metalloproteinase (MMPs) in metastatic brain tumor associated intracerebral hemorrhage. J. Neurooncol. 2006; 76: 257-63.

10. Arita K., Kurisu K., Tominaga A., Sugiyama K., Eguchi K., Hama S. et al. Relationship between intratumoral hemorrhage and over expression of vascular endothelial growth factor(VEGF) in pituitary adenoma. Hiroshima J. MedSci. 2004; 53: 23-7.

11. Fukui S., Otani N., Nawashiro H., Yano A., Nomura N., Tokumaru A.M. et al. The association of the expression of vascular endothelial growth factor with the cystic component and haemorrhage in pituitary adenoma. J. Clin. Neurosci. 2003; 10: 320-4.

12. Neufeld G., Cohen T., Gengrinovitch S., Poltorak Z. Vascular endothelial growth factor (VEGF) and its receptors. FASEB J. 1999; 13: 9-22.

13. Карамышева А.Ф. Механизмы ангиогенеза. Биохимия. 2008; 73(7): 935-48.

14. Niveiro M., Aranda F.I., Peiro G., Alenda C., Pico A. Immunohisto-chemical analysis of tumor angiogenic factors in human pituitary adenomas. Hum. Pathol. 2005; 36: 1090-5.

15. Adams J., Carder P.J., Downey S. et al. Vascular endothelial growth factor (VEGF) in breast cancer: comparison of plasma, serum, and tissue VEGF and microvessel density and effects of tamoxifen. Cancer Res. 2000; 60(11): 2898-905.

16. Kim J.H., Chung Y.G., Lee H.K., Lee K.C., Suh J.K.: Evaluation of cerebrospinal fluid vascular endothelial growth factor for the brain tumor. J. KoreanNeurosurg. Soc. 2003; 33: 121-5.

17. Cheng S.Y., Nagane M., Huang H.S., Cavenee W.K. Intracerebral tumor-associated hemorrhage caused by over expression of the vascular endothelial growth factor isoforms VEGF. Proc Natl. Acad. Sci. USA. 1997; 94: 12081-7.

18. George L. Kumar, Lars Rudbeck. Иммуногистохимические методы: руководство. DAKO / Пер. с англ. под ред. Г.А. Франка, П.Г. Малькова. М., 2011.

clinical investigations

19. Knosp E., Steiner E., Kitz K., Matula C.: Pituitary adenomas with invasion of the cavernous sinus space: a magnetic resonance imaging classification compared with surgical findings. Neurosurgery. 1993; 33: 610-8.

20. Biroccio A., Candiloro A., Mottolese M. et al. Bcl-2 overexpression and hypoxia synergistically act to modulate vascular endothelial growth factor expression and in vivo angiogenesis in a breast carcinoma line. FASEB J. 2000; 14(5): 652-60.

21. Esser S., Wolburg K., Wolberg H., Breier G., Kurzchalia T., Risau W. Vascular endothelial growth factor induces endothelial fenestrations in vitro. J. Cell Biol. 1998: 140(6): 947-59.

REFERENCES

1. Babichenko I.I., Kovyazin V.A. New methods of Immunohistochemi-cal Diagnostics of Tumor Growth: a Tutorial Guide. Moscow: RUDN; 2008.

2. Ferrara N. The role of vascular endothelial growth factor in pathological angiogenesis. Breast Cancer Res. Treat. 1995; 36(2): 127-37.

3. Kurihara N., Takahashi S., Higano S., Ikeda H., Mugikura S., Singh L.N. et al. Hemorrhage in pituitary adenoma: correlation of MR imaging with operative findings. Eur. Radiol. 1998; 8: 971-6.

4. Connolly D.T. Vascular permeability factor a unique regulator of blood vessel function. J. Cell Biochem. 1991; 47: 219-23.

5. Yamada S., Takada K. Angiogenesis in pituitary adenomas. Microsc. Res. Tech. 2003; 60: 236-43.

6. Ke L.D., Shi Y.X., Yung W.K. VEGF, VEGF over expression enhances tumorigenicity in U251 MG but not in NG-1 glioma cells. Cancer Res. 2002; 62: 1854-61.

7. Kholova D.Sh., Khalimova Z.Yu., Urmanova Yu.M., Alieva D.A., Al-imukhamedova G.O. The status indicators of the processes of apop-tosis and angiogenesis in patients with inactive pituitary adenomas. Mezhdunarodnyy endokrinologicheskiy zhurnal. 2015; [6

8. Mendiola M., Barriuso J., Redondo A. et al. Angiogenesis-related gene expression profile with independent prognostic value in advanced ovarian carcinoma. PLoS One. 2008; 3: 4051.

9. Jung S., Moon K.S., Jung T.Y., Kim I.Y., Lee Y.H., Rhu H.H. et al. Possible pathophysiological role of vascular endothelial growth factor(VEGF) and matrix metalloproteinase (MMPs) in metastatic brain tumor associated intracerebral hemorrhage. J. Neurooncol. 2006; 76: 257-63.

10. Arita K., Kurisu K., Tominaga A., Sugiyama K., Eguchi K., Hama S. et al. Relationship between intratumoral hemorrhage and over expression of vascular endothelial growth factor(VEGF) in pituitary adenoma. Hiroshima J. MedSci. 2004; 53: 23-7.

11. Fukui S., Otani N., Nawashiro H., Yano A., Nomura N., Tokumaru A.M. et al. The association of the expression of vascular endothelial growth factor with the cystic component and haemorrhage in pituitary adenoma. J. Clin. Neurosci. 2003; 10: 320-4.

12. Neufeld G., Cohen T., Gengrinovitch S., Poltorak Z. Vascular endothelial growth factor (VEGF) and its receptors. FASEB J. 1999; 13: 9-22.

13. Karamysheva A.F. Mechanisms of angiogenesis. Biokhimiya. 2008; 73(7): 935-14. Niveiro M., Aranda F.I., Peiro G., Alenda C., Pico A. Immunohistochemical analysis of tumor angiogenic factors in human pituitary adenomas. Hum. Pathol. 2005; 36: 1090-5.

15. Adams J., Carder P.J., Downey S. et al. Vascular endothelial growth factor (VEGF) in breast cancer: comparison of plasma, serum, and tissue VEGF and microvessel density and effects of tamoxifen. Cancer Res. 2000; 60(11): 2898-905.

16. Kim J.H., Chung Y.G., Lee H.K., Lee K.C., Suh J.K.: Evaluation of cerebrospinal fluid vascular endothelial growth factor for the brain tumor. J. Korean Neurosurg. Soc. 2003; 33: 121-5.

17. Cheng S.Y., Nagane M., Huang H.S., Cavenee W.K. Intracerebral tumor-associated hemorrhage caused by over expression of the vascular endothelial growth factor isoforms VEGF. Proc Natl. Acad. Sci. USA. 1997; 94: 12081-7.

18. George L. Kumar, Lars Rudbeck. Иммуногистохимические методы: руководство. DAKO / Пер. с англ. под ред. Г.А. Франка, П.Г. Малькова. М., 2011.

19. Knosp E., Steiner E., Kitz K., Matula C.: Pituitary adenomas with invasion of the cavernous sinus space: a magnetic resonance imaging classification compared with surgical findings. Neurosurgery. 1993; 33: 610-8.

20. Biroccio A., Candiloro A., Mottolese M. et al. Bcl-2 overexpression and hypoxia synergistically act to modulate vascular endothelial growth factor expression and in vivo angiogenesis in a breast carcinoma line. FASEB J. 2000; 14(5): 652-60.

21. Esser S., Wolburg K., Wolberg H., Breier G., Kurzchalia T., Risau W. Vascular endothelial growth factor induces endothelial fenestrations in vitro. J. Cell Biol. 1998: 140(6): 947-59.

Поступила 03.12.16 Принята к печати 16.02.17