НОВЫЕ ПЕПТИДНЫЕ ПРОИЗВОДНЫЕ И ИХ ПРИМЕНЕНИЯ
NOVEL PEPTIDE DERIVATIVES AND USE THEREOF

[0001] Все патенты, заявки на патенты и публикации, цитируемые в настоящем документе, включены сюда в качестве ссылки во всей их полноте. Раскрытие этих публикаций во всей их полноте включено посредством ссылки в настоящее изобретение, чтобы более полно описать уровень техники, как известно специалистам в данной области, на дату изобретения, описанного и заявленного здесь.
Область техники изобретения
[0002] Настоящее изобретение относится к новым соединениям на основе пептидов и композициям их содержащим, а также к применению таких соединений и их композиций для лечения бактериального заболевания.
Уровень техники
[0003] Бактериальные инфекции ответственны как за глобальные пандемии, так и локальные эпидемии, и могут приводить к большой смертности при отсутствии лечения или отсутствии подходящего лечения. Необходимо отметить, что множество антибиотиков все более неэффективны ввиду приобретения устойчивости многими бактериями. В качестве примера мультирезистентные бактериальные патогены включают метициллин-резистентный Staphylococcus aureus (MRSA), ванкомицин-резистентный enterococci (VRE), продуценты β-лактамазы расширенного спектра (ESBL), карбапенем-резистентный Enterobacteriaceae (CRE), мультирезистентные виды Pseudomonas и Acinetobacter. Для этих бактерий терапевтически эффективными являются только несколько видов существующих антибиотиков.
[0004] Существует необходимость в новых антибиотических соединениях. Также существует потребность в новых и эффективных терапиях бактериальных инфекций и спектра болезненных состояний, в которые вовлечены бактериальные инфекции.
[0005] Авторы изобретения сообщали в WO 2013045600 об открытии нового класса антибиотиков, которые первоначально были названы Одиломицины, и затем переименованы в Одилорабдины. 3 первых молекулы одилорабдинов естественным образом продуцируются бактерией Xenorhabdus nematophila. Одилорабдины обладают интересными антибактериальными свойствами против бактериальных патогенов, в том числе против мультилекарственнно-резистентных клинических штаммов. Однако, недостатком оригинальных одилорабдинов является их аффинность к кальциевым каналам (типа N), придающая им существенные побочные эффекты. Эти побочные эффекты препятствуют прямому использованию натуральных одилорабдинов в качестве лекарственных средств. Авторы изобретения преодолели данный недостаток разработкой более безопасных синтетических аналогов одилорабдинов, которые сохранили антибактериальную активность, в соответствии с программой медицинской химии и исследований взаимосвязи структура-активность. Эти безопасные антибактериальные аналоги являются целью настоящего изобретения.
Краткое изложение сущности изобретения
[0006] В одном аспекте, настоящее изобретение относится к классу соединений формулы (I)
Как определено в пункте 1.
b
10
c
[0007] Настоящее изобретение также раскрывает соединения формулы (I) где R представляет собой Xaa-R
10
Хаа представляет собой , , или ;
10
10
Х независимо представляет собой NH, О, предпочтительно Х представляет собой NH
10
10
2
1
3
1
3
1
3
R, R' независимо представляет собой Н, -C(NH)NH, -(C-C)-алкил, -С(O)-(C-C)-алкил, или -С(O)-(С-С)-галоалкил;
100
10
R представляет собой Н, ОН или галоген; и n представляет собой целое число из 1-4;
[0008] Соединения формулы (I) с Rb=Rc показывают низкую аффинность к кальциевым каналам N-типа (см Пример 11), и таким образом улучшенной переносимостью с существенно сниженным риском серьезных нежелательных явлений.
[0009] Объект настоящего изобретения также включает комбинацию по меньшей мере одного соединения в соответствии с настоящим изобретением с по меньшей мере одним другим антибиотиком. Предпочтительно указанная комбинация является комбинацией двух антибиотиков: соединение настоящего изобретения с другим антибиотиком. Комбинация по меньшей мере одного соединения в соответствии с настоящим изобретением с по меньшей мере другим антибиотиком может быть введена субъекту одновременно, раздельно или последовательно во времени.
[0010] В другом аспекте, настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей соединение формулы (I) и фармацевтически приемлемый носитель.
[0011] В еще другом аспекте предложены способы лечения бактериальной инфекции у нуждающегося в этом субъекта, содержащие введение соединения формулы (I), или фармацевтических композиций, содержащих соединение формулы (I). Соединения и/или композиции по настоящему изобретению могут применяться, например, при лечении, подавлении и/или предотвращении бактериальной инфекции и/или заболевания.
[0012] В некоторых воплощениях, настоящее изобретение направлено на способ лечения бактериальной инфекции у нуждающегося в этом субъекта, содержащий введение терапевтически эффективного количества соединения формулы (I), или фармацевтической композиции, содержащей соединение формулы (I).
[0013] В некоторых воплощениях, настоящее изобретение относится к способу уничтожения бактерии, содержащему контактирование указанной бактерии с соединением формулы (I), или фармацевтической композицией, содержащей соединение формулы (I).
[0014] Другие объекты и преимущества настоящего изобретения будут очевидны квалифицированным специалистам из следующего далее описания, которое является лишь иллюстративным и не ограничивает настоящего изобретения. Таким образом, другие воплощения будут распознаны квалифицированным специалистом без отступления от существа и объема настоящего изобретения.
Подробное описание изобретения
[0015] В настоящем изобретении предложены антибактериальные соединения, способы и/или композиции, и способы и композиции, которые полезны для лечения, подавления или предотвращения бактериальных инфекций у субъектов. В некоторых воплощениях способы, содержат введение субъекту терапевтически эффективного количества соединения формулы I, или его фармацевтически приемлемой соли, или композиции, содержащей соединение формулы I, или его фармацевтически приемлемой соли, и фармацевтически приемлемый носитель. Композиция или способ могут возможно содержать один или более антибактериальных агентов.
[0016] В частности, воплощения относятся к способам лечения, подавления и/или предотвращения заболеваний или состояний, связанных с бактериальной инфекцией, содержащим введение соединения формулы I, или его фармацевтически приемлемой соли.
[0017] Сокращения и определения
[0018] Термин "галоген", как используется в настоящем изобретении, относится к фтору, брому, хлору, или атому йода, предпочтительно фтору, хлору или йоду, более предпочтительно фтору.
1
6
[0019] Термин "(С-С)алкил", как используется в настоящем изобретении, относится к прямой или разветвленной моновалентной насыщенной углеводородной цепи, содержащей от 1 до 6 атомов углерода, включая, без ограничения, метил, этил, n-пропил, изо-пропил, n-бутил, изо-бутил, втор-бутил, t-бутил, n-пентил, n-гексил, и т.д..
1
6
1
6
[0020] Термин "(С-С)галоалкил", как используется в настоящем изобретении, относится к (С-С)алкильной группе, как определено выше, замещенной по меньшей мере одним атомом галогена, и предпочтительно по меньшей мере одним атомом фтора. Им может быть, в частности, трифторметильная группа.
2
6
[0021] Термин "(С-С)алкенил", как используется в настоящем изобретении, относится к прямой или разветвленной моновалентной ненасыщенной углеводородной цепи, содержащей от 2 до 6 атомов углерода и содержащей по меньшей мере одну двойную связь, включая, без ограничения, этенил, пропенил, бутенил, пентенил, гексенил и т.д..
2
6
[0022] Термин "(С-С)алкинил", как используется в настоящем изобретении, относится к прямой или разветвленной моновалентной ненасыщенной углеводородной цепи, содержащей от 2 до 6 атомов углерода и содержащей по меньшей мере одну тройную связь, включая, без ограничения, этинил, пропинил, бутинил, пентенил, гексенил и т.д.
1
6
1
6
[0023] Термин "(C-С)алкокси", как используется в настоящем изобретении, относится к (C-C)алкильной группе, как определено выше, соединенной с молекулой через атом кислорода, включая, без ограничения, метокси, этокси, n-пропокси, изо-пропокси, n-бутокси, изо-бутокси, втор-бутокси, t-бутокси, n-пентокси, n-гексокси, и т.д.
3
10
[0024] Термин "(С-С)циклоалкил", как используется в настоящем изобретении, относится к углеводородному кольцу, обладающему 3-10 атомами углерода, включая, без ограничения, циклопропил, циклопентил, циклогексил и т.д..
[0025] Термин "арил", как используется в настоящем изобретении, относится к ароматической углеводородной группе, содержащей предпочтительно 5-10 атомов углерода и содержащей одно или более конденсированных колец, такой как, например, фенильная или нафтильная группа. Предпочтительно, это будет фенильная группа.
1
6
[0026] Термин "(C-C)алкил-арил", как используется в настоящем изобретении, относится к арильной группе, как определено выше, соединенной с молекулой через алкильную группу, как определено выше, в частности, аралкильной группой является бензильная группа.
[0027] Термин "гетероарил" как используется в настоящем изобретении, относится к ароматической группе, предпочтительно 5- до 10-членной ароматической группе, содержащей одно или более конденсированных колец, в которой кольцевой атом(ы) включают один или более, предпочтительно 1-4, и более предпочтительно 1 или 2, гетероатома, таких как азот, кислород или атом серы, оставшиеся являются атомами углерода. Гетероарильной группой может быть в частности тиенил, фуранил, пирролил и т.д.
1
6
[0028] Термин "(С-С)алкил-RADICAL", как используется в настоящем изобретении, относится к RADICAL, как определено его химической формулой или названием в термине, соединенному с молекулой через алкильную группу, как определено выше.
[0029] Термин "соединение по изобретению", как здесь используется означает соединение формулы (I) или любой ее подвид или вид. Термин также предназначен для охвата его фармацевтически приемлемых солей.
[0030] Термин "композиция(-ции) по настоящему изобретению", как здесь используется означает композиции, содержащие соединение по изобретению. Композиции по изобретению могут дополнительно содержать другие агенты, такие как, например, носители, эксципиенты, стабилизаторы, любриканты, растворители и т.д.
[0031] "Фармацевтическая композиция" относится к смеси одного или более соединений по настоящему изобретению с другими химическими компонентами, такими как физиологически приемлемые носители и эксципиенты. Назначение фармацевтической композиции является облегчение введения соединения в организм или субъекту.
[0032] Термин "фармацевтически приемлемая соль" предназначен для охвата солей, полученных из неорганических и органических кислот, включая, например, соляную, бромистоводородную, серную, азотную, перхлорную, фосфорную, муравьиную, уксусную, молочную, малеиновую, фумаровую, янтарную, винную, гликолевую, салициловую, лимонную, метансульфоновую, бензолсульфоновую, бензойную, малоновую, трифторуксусную, трихлоруксусную, нафталин-2-сульфоновую и другие кислоты; и соли, полученные из неорганических или органических оснований, включая, например, натрий, калий, кальций, аммоний или тетрафторборат.В качестве примера фармацевтически приемлемые соли можно найти, например, в Berge, S.M. et al., J. Pharm. Sci. 1977, 66, 2, и Gould, P.L., Int. J. Pharmaceutics 1986, 33, 201-217; каждый включен сюда посредством ссылки во всей полноте.
[0033] Как здесь используется термин "около" используется здесь для обозначения приблизительно, округленно, примерно или в районе значения. Когда термин "около" используется вместе с числовым диапазоном, он изменяет диапазон посредством расширения верхней и нижней границы заданных числовых значений. В основном, термин "около" используется здесь для изменения числового значения выше и ниже заданного значения на 20% вверх или вниз (выше или ниже).
st
[0034] Термин «носитель» относится к разбавителю, адъюванту, эксципиенту или носителю, с которым вводится соединение. Неограничивающие примеры таких фармацевтических носителей включают жидкости, такие как вода и масла, в том числе масла, животные, растительные или синтетические, такие как арахисовое масло, соевое масло, минеральное масло, кунжутное масло и т.д. Носители могут также представлять собой солевой раствор, аравийскую камедь, желатин, крахмальную пасту, тальк, кератин, коллоидный кремнезем, мочевину и т.д. Кроме того, могут использоваться вспомогательные, стабилизирующие, сгущающие, смазывающие и окрашивающие агенты. Другие примеры подходящих фармацевтических носителей описаны в Remington's Pharmaceutical Sciences (Alfonso Gennaro ed., Krieger Publishing Company (1997); Remington's: The Science and Practice of Pharmacy, 21 Ed. (Lippincot, Williams & Wilkins (2005); Modern Pharmaceutics, vol. 121 (Gilbert Banker and Christopher Rhodes, CRC Press (2002); каждый из которых включен сюда посредством ссылки во всей полноте).
[0035] Конфигурация α-атомов углерода в аминокислотных остатках может быть "D" или "L", и может быть независимой от конфигурации других аминокислотных остатков в соединениях формулы (I). Конфигурация по гидроксильным группам в боковой цепи аминокислоты может быть "R" или "S", и может быть независимой от конфигурации других гидроксильных групп в соединениях формулы (I). Так, в некоторых воплощениях, одна или более гидроксильных групп обладает "R" конфигурацией. В некоторых воплощениях, одна или более гидроксильных групп обладает S" конфигурацией. В некоторых воплощениях, каждая из гидроксильных групп обладает "R" конфигурацией. В некоторых воплощениях, каждая из гидроксильных групп обладает "S" конфигурацией.
[0036] Если не указано иного, соединения формулы (I) включают все стереоизомеры, включая, например, энантиомеры и диастереомеры. Типичные изомеры включают также цис- и транс-двойные связи. Соединения формулы (I) дополнительно включают изомерно обогащенные соединения, а также изомерные смеси, рацемические смеси и одиночные энантиомеры.
a
1
3
1
3
1
3
1
3
a
1
3
1
2
1
3
1
3
a
a
a
a
[0037] R представляет собой Н, -(C-C)-алкил, -С(O)-(C-C)-алкил, или -С(O)-(C-C)-галоалкил, предпочтительно Н или -(C-C)-алкил. В некоторых воплощениях, R представляет собой Н, -(C-C)-алкил, -С(O)-(C-C)-алкил, или -С(O)-(С-С)-галоалкил, предпочтительно Н или -(C-C)-алкил. В некоторых воплощениях, R представляет собой Н, метил, ацетил, или тригалоацетил, в частности Н, метил, ацетил или трифторацетил. В некоторых воплощениях, R представляет собой Н, метил, или ацетил, в частности Н или метил. В некоторых воплощениях, R представляет собой Н. В некоторых воплощениях, R представляет собой метил.
[0038]
1
1
11
11
1
3
1
3
1
3
1
1
1
1
11
11
1
2
1
2
1
1
11
11
11
1
1
3
11
1
2
1
2
11
Xaa представляет собой , или ; R, R, R' независимо представляет собой Н, -(C-C)-алкил, -С(O)-(С-С)-алкил, или -С(O)-(С-С)-галоалкил; n представляет собой целое число из 1-4. Предпочтительно, n представляет собой целое число из 1-3, в частности n представляет собой 1, 2 или 3. В некоторых воплощениях, R, R R' независимо представляет собой Н, метил, этил, -С(O)-(C-C)-алкил, или -С(O)-(С-С)-галоалкил; и n представляет собой целое число из 1-3. В некоторых воплощениях, R, R, R' независимо представляет собой Н, метил, ацетил или трифторацетил. В частности, в этих воплощениях, R' представляет собой Н. Предпочтительно, R представляет собой Н, -(C-C)-алкил, в частности Н, метил, этил, R представляет собой Н, метил, этил, -С(O)-(C-C)-алкил, или -С(O)-(C-C)-галоалкил, в частности Н, метил, ацетил или трифторацетил и R' представляет собой Н.
1
2
n1
11
11
[0039] Конфигурация асимметричных атомов углерода, несущих радикалы R или -(CH)-NRR' предпочтительно представляет собой S.
1
1
[0040] В некоторых воплощениях, Xaa представляет собой. В некоторых воплощениях, Хаа представляет собой .
1
[0041] Предпочтительно, Xaa представляет собой , или .
1
[0042] В частности, Xaa представляет собой , или .
1
[0043] В некоторых воплощениях, Xaa представляет собой , , , или .
1
1
1
1
[0044] В некоторых воплощениях, Хаа представляет собой , , или . В некоторых воплощениях, Xaa представляет собой . В некоторых воплощениях, Xaa представляет собой . В некоторых воплощениях, Xaa представляет собой .
2
2
2
2
1
3
1
3
1
3
22
1
3
1
3
1
6
1
6
2
[0045] Хаа представляет собой , ,  или ; Х независимо представляет собой NH, N(Me), О, R, R' независимо представляет собой Н, -(C-C)-алкил, -С(O)-(C-C)-алкил, или -С(O)-(C-C)-галоалкил; R независимо представляет собой ОН, галоген, -(C-C)-алкил, -(C-C)-алкокси, О-С(О)-(C-C)-алкил или -О-С(О)-(C-C)-галоалкил; и n представляет собой целое число из 1-3.
2
2
[0046] Х представляет собой предпочтительно NH, N(Me), более предпочтительно NH. В другом воплощении, Х представляет собой О.
2
1
2
1
2
2
[0047] Предпочтительно, R независимо представляет собой Н, метил, этил, -С(O)-(C-С)-алкил, или -С(O)-(С-С)-галоалкил; более предпочтительно Н, метил, ацетил или трифторацетил. В этом воплощении, R' предпочтительно представляет собой Н, метил, этил, более предпочтительно Н.
2
2
[0048] n представляет собой целое число из 1-3, в частности 1, 2 или 3, предпочтительно n представляет собой 1.
22
3
3
3
3
2
2
2
2
[0049] Предпочтительно, R независимо представляет собой ОН, фтор, метил, или метокси, -O-С(O)-СН, -O-С(O)-CF, в частности ОН, -O-С(O)-СН, -О-С(O)-CF,. В этом воплощении, R, R' являются такими, как определено выше, в частности R независимо представляет собой Н, метил, ацетил или трифторацетил, предпочтительно Н, R' представляет собой Н.
2
2
2
2
[0050] В некоторых воплощениях, Хаа представляет собой  или . В частности, Хаа представляет собой  или . В некоторых воплощениях, Хаа представляет собой . В некоторых воплощениях, Хаа представляет собой .
3
3
33
3
2
1
6
1
6
3
8
1
6
1
6
1
6
33
1
6
33
1
6
33
33
1
6
33
33
1
6
33
1
6
1
6
1
6
1
3
1
6
1
3
1
3
33
33
33
2
1
3
1
3
1
3
333
333
333
333
1
3
1
3
1
3
1
3
3
[0051] Хаа представляет собой  или ; Х независимо представляет собой N(R), О; R независимо представляет собой Н, галоген, NH, -(C-C)-алкил, -(C-C)-галоалкил, -(С-С)-циклоалкил, -(C-C)-алкенил, -(C-C)-алкинил, -(С-C)-алкил-OR, (C-C)-алкил-SP, (C-C)-алкил-NRR', (C-C)-алкил-С(O)NRR', (C-C)-алкил-С(O)OR, (C-C)-алкил-гетероарил, где указанный алкил возможно замещен -ОН или -O-С(O)-(С-С)-алкилом или -О-С(О)-(C-C)-галоалкилом, где указанный гетероарил возможно замещен -(C-C)-алкилом, или (C-C)-алкил-арилом где указанный арил возможно замещен -ОН, -(C-C)-алкилом, -(C-C)-алкокси или галогеном; R, R', R'' независимо представляет собой Н, -C(NH)NH, -(C-C)-алкил, -C(O)-(C-C)-алкил, или -С(O)(C-C)-галоалкил; R, R', R'', R''' независимо представляет собой Н, ОН, галоген, -(C-C)-алкил, -(C-C)-алкокси, -O-СО-(C-C)-алкил или -O-СО-(C-C)-галоалкил; и n представляет собой целое число из 1-3.
3
33
3
3
[0052] В одном из воплощений Х представляет собой N(R), в частности (NH) или (NCH). В другом воплощении Х представляет собой О.
3
3
[0053] Конфигурация асимметричного атома углерода между -Х и -С(О) предпочтительно представляет собой S. Соответственно, Хаа предпочтительно представляет собой  или .
3
33
3
33
2
3
2
5
3
33
3
33
33
2
1
3
1
3
1
3
33
1
3
[0054] Х предпочтительно представляет собой N(R), в частности (NH) или (NCH). R предпочтительно независимо представляет собой Н, -C(NH)NH, метил, этил, -С(O)-СН, -С(O)-СН или -С(O)-CF, предпочтительно Н, метил. Когда R присоединен к Х, он является более предпочтительно Н. R', R'' предпочтительно независимо представляет собой Н, -C(NH)NH, -(C-C)-алкил, -С(O)-(C-C)-алкил, или -С(O)-(С-С)-галоалкил. R'' предпочтительно независимо представляет собой Н, -(C-C)-алкил, более предпочтительно Н.
333
1
3
1
3
1
3
1
3
333
1
3
1
3
3
333
1
3
1
3
3
333
1
3
1
3
[0055] R предпочтительно независимо представляет собой ОН, галоген, -(C-C)-алкил, -(C-C)-алкокси, -O-СО-(C-C)-алкил или -O-СО-(С-С)-галоалкил. R' предпочтительно независимо представляет собой Н, ОН, галоген, -(C-C)-алкил, или -(C-C)-алкокси, предпочтительно Н, метил, этил, -ОСН, более предпочтительно Н. R'' предпочтительно независимо представляет собой Н, ОН, галоген, -(C-С)-алкил, или -(C-С)-алкокси, предпочтительно Н, метил, этил, -ОСН, более предпочтительно. Н. R''' предпочтительно независимо представляет собой Н, ОН, галоген, -(C-C)-алкил, или -(C-C)-алкокси, предпочтительно Н.
3
2
1
6
1
6
3
8
1
6
1
6
1
6
33
1
6
33
1
6
33
33
1
6
33
33
1
6
33
1
6
1
6
1
6
1
3
1
6
1
3
1
3
3
2
1
6
1
6
3
8
1
6
1
6
1
6
33
1
6
33
1
6
33
33
1
6
33
33
1
6
33
1
6
1
3
1
6
1
3
1
3
3
1
4
1
4
1
4
1
4
1
4
1
4
1
4
33
1
4
33
1
4
1
4
1
4
[0056] R предпочтительно независимо представляет собой Н, галоген, NH, -(C-C)-алкил, -(C-C)-галоалкил, -(С-С)-циклоалкил, -(C-C)-алкенил, -(С-C)-алкинил, -(С-C)-алкил-OR, (C-C)-алкил-SR, (C-C)-алкил-N RR', (C-C)-алкил-С(O)N RR', (C-C)-алкил-С(O)OR, (C-C)-алкил-гетероарил, где указанный алкил возможно замещен -ОН или -О-С(О)-(C-C)-алкилом или -О-С(О)-(C-C)-галоалкилом, где указанный гетероарил возможно замещен -(C-C)-алкилом, или (C-C)-алкил-арилом, где указанный арил возможно замещен -ОН, -(C-C)-алкилом, -(C-C)-алкокси или галогеном. Предпочтительно, R независимо представляет собой Н, галоген, NH, -(С-С)-алкил, -(C-C)-галоалкил, -(С-С)-циклоалкил, -(C-C)-алкенил, -(C-C)-алкинил, -(C-C)-алкил-OR, (C-C)-алкил-SR, (C-C)-алкил-NRR', (С-С)-алкил-С(O)NRR', (C-C)-алкил-С(O)OR, (C-C)-алкил-гетероарил, где указанный гетероарил возможно замещен -(C-C)-алкилом, или (C-C)-алкил-арилом, где указанный арил возможно замещен -ОН, -(C-C)-алкилом, -(C-C)-алкокси или галогеном. Более предпочтительно, R независимо представляет собой Н, галоген, -(С-С)-алкил, -(С-С)-галоалкил, -(C-С)-алкенил, -(С-С)-алкинил, -(C-С)-алкил-ОН, (C-C)-алкил-SH, (C-С)-алкил-NHR, (C-C)-алкил-С(O)NHR, (С-С)-алкил-С(O)ОН, (C-C)-алкил-гетероарил, где указанный гетероарил выбран из имидазола, пиразола, оксазола, изоксазола, тиазола, пиррола, фурана, тиофена, пиразина, пиридазина, пиридина или пиримидина, более конкретно из имидазола, пиррола, тиазола, фурана или тиофена, более конкретно из имидазола, оксазола, тиазола, более конкретно имидазола, или (C-C)-алкил-арил, где указанный арил представляет собой бензол.
3
3
33
33
2
3
2
5
3
3
2
1
6
1
6
3
8
1
6
1
6
1
6
33
1
6
33
1
6
33
33
1
6
33
33
1
6
33
1
6
1
6
1
6
1
3
1
6
1
3
1
3
3
2
1
6
1
6
3
8
1
6
1
6
1
6
33
1
6
33
1
6
33
33
1
6
33
33
1
6
33
1
6
1
3
1
6
1
3
1
3
3
1
4
1
4
1
4
1
4
1
4
1
4
1
4
33
1
4
33
1
4
1
4
1
4
[0057] В одном из воплощений, Хаа представляет собой . X предпочтительно представляет собой N(R). R предпочтительно независимо представляет собой Н, -C(NH)NH, метил, этил, -С(O)-СН, -С(О)-CH или -С(О)-CF, предпочтительно Н, метил, более предпочтительно Н. R предпочтительно независимо представляет собой Н, галоген, NH, -(C-C)-алкил, -(C-С)-галоалкил, -(С-С)-циклоалкил, -(C-C)-алкенил, -(C-C)-алкинил, -(C-C)-алкил-OR, (C-C)-алкил-SR, (C-C)-алкил-N RR', (C-C)-алкил-С(O)N RR', (C-C)-алкил-С(O)OR, (C-C)-алкил-гетероарил, где указанный алкил возможно замещен -ОН или -O-С(O)-(С-С)-алкилом или -O-С(O)-(C-C)-галоалкилом, где указанный гетероарил возможно замещен -(С-С)-алкилом, или (C-C)-алкил-арил, где указанный арил возможно замещен -ОН, -(C-С)-алкилом, -(С-С)-алкокси или галогеном. Предпочтительно, R независимо представляет собой Н, галоген, NH, -(C-C)-алкил, -(C-С)-галоалкил, -(С-С)-циклоалкил, -(С-С)-алкенил, -(C-C)-алкинил, -(C-C)-алкил-OR, (C-C)-алкил-SR, (C-C)-алкил-NRR', (C-C)-алкил-С(O)NRR', (С-С)-алкил-С(O)OR, (C-C)-алкил-гетероарил, где указанный гетероарил возможно замещен -(C-C)-алкилом, или (C-C)-алкил-арил, где указанный арил возможно замещен -ОН, -(C-C)-алкилом, -(C-C)-алкокси или галогеном. Более предпочтительно, R независимо представляет собой Н, галоген, -(C-С)-алкил, -(С-С)-галоалкил, -(С-С)-алкенил, -(C-С)-алкинил, -(C-C)-алкил-ОН, (C-C)-алкил-SH, (C-C)-алкил-NHR, (C-C)-алкил-С(O)NHR, (C-С)-алкил-С(O)ОН, (C-С)-алкил-гетероарил, где указанный гетероарил выбран из имидазола, пиразола, оксазола, изоксазола, тиазола, пиррола, фурана, тиофена, пиразина, пиридазина, пиридина или пиримидина, более конкретно из имидазола, пиррола, тиазола, фурана или тиофена, более конкретно из имидазола, оксазола, тиазола, более конкретно имидазола, или (C-С)-алкил-арил, где указанный арил представляет собой бензол.
3
3
33
33
2
3
2
5
3
3
3
[0058] В другом воплощении, Хаа представляет собой . Х предпочтительно представляет собой N(R). R предпочтительно независимо представляет собой Н, -C(NH)NH, метил, этил, -С(O)-СН, -С(O)-СН или -С(О)-CF, предпочтительно Н, метил, более предпочтительно Н. n представляет собой целое число из 1-3, в частности, n представляет собой 1, 2 или 3.
3
3
33
33
33
33
2
1
3
1
3
1
3
333
1
3
1
3
1
3
1
3
33
33
33
2
1
3
1
3
1
3
33
2
1
3
1
3
1
3
33
1
3
333
1
3
1
3
1
3
1
3
3
3
3
333
[0059] В другом воплощении, Хаа представляет собой . Х предпочтительно представляет собой N(R). R, R', R'' независимо представляет собой Н, -C(NH)NH, -(C-C)-алкил, -С(O)-(C-C)-алкил, или -С(О)-(C-C)-галоалкил; R независимо представляет собой Н, ОН, галоген, -(С-C)-алкил, -(C-C)-алкокси, -О-СО-(C-C)-алкил или -O-СО-(C-C)-галоалкил. R предпочтительно независимо представляет собой Н, метил, этил, предпочтительно Н, метил, более предпочтительно Н. R', R'' предпочтительно независимо представляет собой Н, -C(NH)NH, -(C-C)-алкил, -C(O)-(C-C)-алкил, или -С(О)-(C-C)-галоалкил. R' предпочтительно независимо представляет собой Н, -C(NH)NH, -(C-C)-алкил, -С(O)-(С-С)-алкил, или -С(O)-(C-C)-галоалкил. R'' предпочтительно независимо представляет собой Н, -(C-C)-алкил, более предпочтительно Н. R предпочтительно независимо представляет собой ОН, галоген, -(C-C)-алкил, -(C-C)-алкокси, -О-СО-(C-C)-алкил или -O-СО-(С-С)-галоалкил, более предпочтительно ОН, галоген, ОСН, -O-СО-СН, -O-CO-CF. Конфигурация асимметричного атома углерода, несущего R, предпочтительно представляет собой S.
3
3
3
33
33
33
333
333
333
333
3
[0060] В одном из воплощений, Хаа выбран из ,  или . Х; R; R, R', R''; R, R', R'', R'''; и n являются такими, как определено выше.
[0061]
4
4
4
4
1
3
1
3
4
1
3
1
3
4
4
[0062] Хаа представляет собой  Х независимо представляет собой NH, N(Me), О и R, R', независимо представляет собой Н, -(C-C)-алкил, или -(C-C)-галоалкил. В одном из воплощений, R представляет собой -(С-С)-алкил, или -(C-C)-галоалкил и R'4 представляет собой Н или оба R и R' представляют собой Н.
4
4
4
4
4
[0063] В некоторых воплощениях, Хаа представляет собой , , или . В некоторых воплощениях, Хаа представляет собой  или . В некоторых воплощениях, Хаа представляет собой  или . В некоторых воплощениях, Хаа представляет собой . Х независимо представляет собой NH, N(Me), О, предпочтительно NH, N(Me), более предпочтительно NH.
5
5
5
5
1
3
1
3
1
3
555
555
555
555
1
3
1
3
5
5
5
5
5
5
5
5
5
[0064] Хаа представляет собой  или ; Х независимо представляет собой NH, N(Me), О, R, R' независимо представляет собой Н, -(C-C)-алкил, -С(О)-(C-C)-алкил, или -С(O)-(C-C)-галоалкил; R, R', R'', R''' независимо представляет собой Н, ОН, галоген, -(C-C)-алкил, или -(C-C)-алкокси; и n представляет собой целое число из 1-3. В некоторых воплощениях, R, R' независимо представляет собой представляет собой Н, метил, ацетил или трифторацетил. В некоторых воплощениях, R R' независимо представляет собой Н или метил. В некоторых воплощениях, R, R' независимо представляет собой Н. В некоторых воплощениях n представляет собой 2. В этих воплощениях Х независимо представляет собой NH, N(Me), О, предпочтительно NH, N(Me), более предпочтительно NH.
5
5
5
5
5
5
5
[0065] В некоторых воплощениях, Хаа представляет собой  и R представляет собой Н, метил, ацетил или трифторацетил. В некоторых воплощениях, Хаа представляет собой  и R представляет собой Н, метил, ацетил или трифторацетил. В некоторых воплощениях, Хаа представляет собой . В некоторых воплощениях, Хаа представляет собой . Во всех этих воплощениях, Х независимо представляет собой NH, N(Me), О, предпочтительно NH, N(Me), более предпочтительно NH.
6
6
66
6
2
1
6
1
6
3
8
1
6
1
6
1
6
66
1
6
66
1
6
66
66
1
6
66
66
1
6
66
1
6
1
6
1
6
1
3
1
6
1
3
1
3
66
66
2
1
3
1
3
1
3
1
3
2
1
3
1
3
1
3
6
[0066] Хаа представляет собой  или ; Х независимо представляет собой N(R), О; R независимо представляет собой Н, галоген, NH, -(C-C)-алкил, -(C-C)-галоалкил, -(С-С)-циклоалкил, -(C-C)-алкенил, -(C-C)-алкинил, -(C-C)-алкил-OR, (C-C)-алкил-SR, (С-С)-алкил-NRR', (C-C)-алкил-С(O)NRR', (C-C)-алкил-С(O)OR, (C-C)-алкил-гетероарил, где указанный алкил возможно замещен -ОН или -О-С(О)-(C-C)-алкилом или -О-С(О)-(C-C)-галоалкилом, где указанный гетероарил возможно замещен -(C-C)-алкилом, или (C-C)-алкил-арил, где указанный арил возможно замещен-ОН, -(C-C)-алкилом, -(C-С)-алкокси или галогеном; R, R' независимо представляет собой Н, ОН, галоген, -C(NH)NH, -(C-C)-алкил, -(C-C)-галоалкил, -С(O)-(C-C)-алкил, -С(O)-(C-C)-галоалкил, -NH, NH(C-C)-алкил, или N[(C-C)-алкил][(С-С)-алкил]; и n представляет собой целое число из 0-3.
66
3
66
2
1
3
1
3
1
3
1
3
2
1
3
1
3
1
3
6
3
[0067] R предпочтительно независимо представляет собой Н или СН или галоген. R' предпочтительно независимо представляет собой Н, ОН, галоген, -C(NH)NH, -(C-C)-алкил, -(C-C)-галоалкил, -С(O)-(C-C)-алкил, -С(O)-(C-C)-галоалкил, -NH, NH(C-C)-алкил, или N[(C-C)-алкил][(C-C)-алкил]. R предпочтительно независимо представляет собой Н или СН.
6
66
3
6
[0068] В одном из воплощений Х представляет собой N(R), предпочтительно (NH) или (NCH). В другом воплощении Х представляет собой О.
6
6
1
3
1
3
66
3
66
1
3
1
3
666
666
666
666
1
3
1
3
6
6
66
66
3
[0069] В некоторых воплощениях, Хаа представляет собой , , , или ; R независимо представляет собой Н, -(C-C)-алкил, или -(C-C)-галоалкил; R предпочтительно представляет собой Н или СН или галоген, R' независимо представляет собой Н, галоген, метил, ОН, O-(C-C)-алкил, -(C-C)-галоалкил NR R', R, R' независимо представляет собой Н, -(C-C)-алкил, или -(C-C)-галоалкил; и n представляет собой целое число из 0-3. Х независимо представляет собой N(R), О, предпочтительно N(R), более предпочтительно NH или N(CH).
6
66
3
66
1
3
1
3
666
666
666
666
1
3
1
3
6
6
66
66
3
3
666
666
1
3
1
3
66
3
2
66
66
66
66
66
66
[0070] В некоторых воплощениях, Хаа представляет собой , R предпочтительно представляет собой Н или СН или галоген, R' независимо представляет собой Н, галоген, метил, ОН, О-(C-C)-алкил, -(C-C)-галоалкил, NRR', R, R' независимо представляет собой Н, -(С-C)-алкил, или -(C-C)-галоалкил; и n представляет собой целое число из 0-3. Предпочтительно, n представляет собой 0, 1 или 2. R предпочтительно представляет собой Н или F. R' предпочтительно представляет собой Н, галоген, метил, CF, ОН, ОСН, NHR, R представляет собой Н, -(C-C)-алкил, или -(C-C)-галоалкил. R'более предпочтительно представляет собой Н, F, метил, CF, NH, ОН. R, R' могут быть присоединены к одному и тому же атому углерода. Конфигурация атома углерода, несущего R, R' или R и R' может быть S или R, предпочтительно S.
6
[0071] Во всех этих воплощениях, конфигурация атома углерода, связанного с -Х и с -С(О)- предпочтительно представляет собой S.
6
[0072] В некоторых воплощениях, Хаа представляет собой  или .
6
[0073] В некоторых воплощениях, Хаа представляет собой  или .
7
7
77
7
1
6
1
6
1
6
1
6
1
6
77
1
6
77
1
6
77
1
6
2
77
1
6
77
77
1
6
77
1
6
77
77
1
6
1
6
2
2
3
1
6
1
3
77
77
1
3
1
3
2
2
1
3
1
3
2
1
3
1
3
1
3
7
[0074] Хаа представляет собой ,  или ; Х независимо представляет собой N(R), О; R представляет собой Н, -(C-C)-алкил, -(C-C)-галоалкил, -(C-C)-алкенил, -(C-C)-алкинил, -(C-C)-алкил-OR, (C-C)-алкил-SR, (C-C)-алкил-S(O)R, (C-C)-алкил-S(O)-R, -(C-C)-алкил-NRR', -(C-C)-алкил-С(O)OR, -(C-C)-алкил-С(O)NRR', -(C-C)-алкил-гетероарил или -(C-C)-алкил-ари, где арил или гетероарил возможно моно- или полизамещены -ОН, -NH, -СООН, -CONH, -CN, -CF, -(C-C)-алкилом, -(C-C)-алкокси или галогеном; R, R' независимо представляет собой Н, ОН, галоген, -(C-C)-алкил, -(C-C)-галоалкил, -С(O)-NH, -C(NH)-NH, -С(О)-(C-C)-алкил, -С(O)-(С-C)-галоалкил, -NH, NH(C-C)-алкил, или N[(C-C)-алкил][(С-С)-алкил]; и n представляет собой целое число из 0-3.
7
77
3
7
[0075] В одном из воплощений Х представляет собой N(R), предпочтительно (NH) или (NCH). В другом воплощении Х представляет собой О.
7
7
77
7
1
6
1
6
1
6
1
6
1
6
77
1
6
77
1
6
77
1
6
2
77
1
6
77
77
1
6
77
1
6
77
77
1
6
1
6
2
2
3
1
6
1
3
77
77
1
3
1
3
1
3
2
2
7
77
3
7
[0076] В некоторых воплощениях, Хаа представляет собой  или ; Х независимо представляет собой N(R), О, R представляет собой Н, -(C-C)-алкил, -(C-C)-галоалкил, -(C-C)-алкенил, -(C-C)-алкинил, -(C-C)-алкил-OR, (С-C)-алкил-SR, (C-C)-алкл-S(O)-R, (C-C)-алкил-S(O)-R, -(C-C)-алкил-NRR',, -(C-C)-алкил-С(O)OR, -(C-C)-алкил-С(О)NRR', -(C-C)-алкил-гетероарил или -(C-C)-алкил-арил, где гетероарил или арил возможно моно- или полизамещен -ОН, NH, -СООН, -CONH, -CN, -CF, -(C-C)-алкилом, -(C-C)-алкокси или галогеном; и R, R' независимо представляет собой Н, -(C-C)-алкил, -С(O)-(С-С)-алкил, -С(O)-(С-С)-галоалкил, -С(O)-NH, или -C(NH)-NH. Х предпочтительно представляет собой N(R), более предпочтительно (NH) или (NCH). Альтернативно Х представляет собой О.
[0077]
7
1
6
1
6
1
6
1
6
1
6
77
1
6
77
1
6
77
1
6
2
77
1
6
77
77
1
6
77
1
6
77
77
1
6
1
6
2
2
3
1
3
1
3
2
2
3
1
3
1
3
2
2
3
3
3
R предпочтительно представляет собой Н, -(C-C)-алкил, -(C-C)-галоалкил, -(C-C)-алкенил, -(C-C)-алкинил, -(C-C)-алкил-OR, (C-C)-алкил-SR, (C-C)-алкил-S(O)R, (C-C)-алкил-S(O)R, -(C-C)-алкил-NRR', -(С-С)-алкил-С(O)OR, -(C-C)-алкил-С(O)NRR', -(C-C)-алкил-гетероарил или -(C-C)-алкил-арил, где арил или гетероарил возможно моно- или полизамещен -ОН, NH, -СООН, -CONH, -CN, -CF, -(C-C)-алкил, -(C-C)-алкокси или галогеном и где гетероарил выбран из пиридина, пиримидина, пиразина, пиридазина, хинолина, изохинолина, хиноксалина, хиноксолина, имидазола, оксазола, тиазола, фурана, пиррола, тиофена, бензимидазола, бензоксазола, бензотиазола, бензотиофена, индола, изоиндола, бензофурана или триазола и арил представляет собой бензол или нафталин. Гетероарил предпочтительно представляет собой пиридин, индол, изоиндол, бензотиофен, бензофуран, имидазол, оксазол, тиазол, фуран, пиррол, тиофен или триазол, более предпочтительно пиридин, изоиндол, имидазол, тиофен. Арил или гетероарил предпочтительно является моно-, ди- или тризамещенным ОН, NH, -СООН, -CONH, -CN, -CF, -(C-C)-алкилом, -(C-C)-алкокси или галогеном, в частности ОН, NH, СООН, -CONH, -CN, -CF, -СН, -ОСН, F, Cl, или I.
7
1
3
1
3
1
3
1
3
1
6
77
1
6
77
1
3
77
1
3
77
1
3
77
1
3
77
1
3
1
3
77
1
3
[0078] В некоторых воплощениях, R представляет собой -(C-C)-алкил, -(C-C)-галоалкил, -(C-C)-алкенил, -(C-C)-алкинил, -(С-C)-алкил-OR, -(С-C)-алкил-SR, -(C-C)-алкил-S(O)R, -(С-C)-алкил-S(O)2R, -(C-C)-алкил-С(O)OR, -(C-C)-алкил-C(O)NHR, , -(C-C)-алкил-гетероарил, или -(C-C)-алкил-арил, где арил или гетероарил являются моно- или полизамещенными, как описано выше; и R независимо представляет собой Н или -(C-C)-алкил.
7
[0079] Х предпочтительно представляет собой N
7
2
3
3
2
2
3
3
2
2
3
3
2
2
3
3
2
2
3
3
2
2
3
3
2
7
[0080] В некоторых воплощениях, Хаа представляет собой  где R представляет собой -С(O)NH, F, Cl, I, CH, CF, CN, OH, OMe, tBu, NH, COOH,  где R представляет собой -С(O)NH, F, Cl, I, CH, CF, CN, OH, OMe, tBu, NH, СООН,  где R представляет собой -С(O)NH, F, Cl, I, CH, CF, CN, OH, OMe, tBu, NH, СООН,  где R, R' независимо представляет собой -С(O)NH, F, Cl, I, CH, CF, CN, OH, OMe, tBu, NH, COOH,  где R, R' независимо представляет собой -С(O)NH, F, Cl, I, CH, CF, CN, OH, OMe, tBu, NH, COOH,  где R, R', R'' независимо представляет собой -С(O)NH, F, Cl, I, CH, CF, CN, OH, OMe, tBu, NH, COOH,  или . Во всех этих воплощениях, Х независимо представляет собой NH, N(Me), О, предпочтительно NH, N(Me), более предпочтительно NH.
7
[0081] Во всех этих воплощениях, конфигурация атома углерода, соединенного с -Х и с -(СО)- предпочтительно представляет собой S.
7
2
3
3
2
2
3
3
2
2
3
3
2
2
3
3
2
2
3
3
2
2
3
3
2
7
[0082] В некоторых воплощениях, Хаа представляет собой  где R представляет собой -С(O)NH, F, Cl, I, СН, CF, CN, OH, OMe, tBu, NH, COOH,  где R представляет собой -С(O)NH, F, Cl, I, CH, CF, CN, OH, OMe, tBu, NH, COOH,  где R представляет собой-С(О)NH, F, Cl, I, СН, CF, CN, OH, OMe, tBu, NH, COOH,  где R представляет собой -С(O)NH, F, Cl, I, CH, CF, CN, OH, OMe, tBu, NH, COOH,  где R представляет собой -С(O)NH, F, Cl, I, CH, CF, CN, OH, OMe, tBu, NH, COOH,  где R представляет собой -С(O)NH, F, Cl, I, CH, CF, CN, OH, OMe, tBu, NH, COOH,  или . Во всех этих воплощениях, X независимо представляет собой NH, N(Me), О, предпочтительно NH, N(Me), более предпочтительно NH.
8
8
8
8
1
3
1
3
1
3
88
88
88
88
1
3
1
3
8
[0083] Хаа представляет собой , , или ; Х независимо представляет собой NH, N(Me), О, предпочтительно NH, N(Me), более предпочтительно NH; R, R' независимо представляет собой Н, -(C-C)-алкил, -С(O)-(С-С)-алкил, или -С(О)-(C-C)-галоалкил; R, R', R'', R''' независимо представляет собой Н, ОН -(С-С)-алкил, -(C-C)-алкокси, или галоген, в частности Н, ОН или галоген; и n представляет собой целое число из 1-4.
8
8
8
8
8
[0084] В некоторых воплощениях, Хаа представляет собой ,  или . В некоторых воплощениях, Хаа представляет собой . В некоторых воплощениях, Хаа представляет собой . В некоторых воплощениях, Хаа представляет собой . Во всех этих воплощениях, Х независимо представляет собой NH, N(Me), О, предпочтительно NH, N(Me), более предпочтительно NH.
8
1
2
1
2
8
8
8
[0085] В некоторых воплощениях, R независимо представляет собой Н, метил, этил, -С(O)-(С-С)-алкил, или -С(O)-(С-С)-галоалкил; и n представляет собой целое число из 1-3. В некоторых воплощениях, R независимо представляет собой Н, метил, ацетил или трифторацетил, в частности Н. n представляет собой 1, 2 или 3, в частности 3.
8
8
[0086] В некоторых воплощениях, Хаа представляет собой ,  или . Во всех этих воплощениях, Х независимо представляет собой NH, N(Me), О, предпочтительно NH, N(Me), более предпочтительно NH.
8
[0087] Во всех этих воплощениях, конфигурация атома углерода, связанного с -Х и с -С(О)- предпочтительно представляет собой S.
8
8
[0088] В некоторых воплощениях, Хаа представляет собой ,  или . Во всех этих воплощениях, Х независимо представляет собой NH, N(Me), О, предпочтительно NH, N(Me), более предпочтительно NH.
8
8
8
8
[0089] В некоторых воплощениях, Хаа представляет собой  или . В некоторых воплощениях, Хаа представляет собой . В некоторых воплощениях, Хаа представляет собой . Во всех этих воплощениях, Х независимо представляет собой NH, N(Me), О, предпочтительно NH, N(Me), более предпочтительно NH.
9
9
9
9
2
2
1
6
1
6
1
3
1
3
99
1
3
9
[0090] Хаа представляет собой , или ; Х независимо представляет собой NH, N(Me), О, в частности NH или N(Me), более конкретно NH; R, R' независимо представляет собой Н, -C(NH)NH, -С(O)NH, -(C-C)-алкил, -(С-С)-галоалкил, -C(O)-(C-C)-алкил, или -С(O)-(C-C)-галоалкил; R представляет собой Н, или -(C-C)-алкил; и n независимо представляет собой целое число из 1-3.
9
9
2
2
1
3
1
3
1
3
1
3
99
1
3
9
[0091] В некоторых воплощениях, Хаа представляет собой  или ; R независимо представляет собой Н, -C(NH)NH, -С(O)NH, -(C-C)-алкил, -(C-C)-галоалкил, -С(O)-(C-C)-алкил, или -С(O)-(C-C)-галоалкил; R представляет собой Н, или -(C-C)-алкил; и n независимо представляет собой целое число из 1-3.
9
9
9
2
2
1
3
99
1
3
9
[0092] В некоторых воплощениях, Хаа представляет собой  или ; Х независимо представляет собой NH, N(Me), О, в частности NH или N(Me), более конкретно NH; R независимо представляет собой Н, -C(NH)NH, -С(O)NH, или -(C-C)-алкил; R представляет собой Н, или -(C-C)-алкил; и n независимо представляет собой целое число из 1-2.
9
9
[0093] В некоторых воплощениях, Хаа представляет собой , или . Во всех этих воплощениях, Х независимо представляет собой NH, N(Me), О, в частности NH или N(Me), более конкретно NH.
9
9
[0094] В некоторых воплощениях, Хаа представляет собой  или . Во всех этих воплощениях, Хнезависимо представляет собой NH, N(Me), О, в частности NH или N(Me), более конкретно NH.
9
9
[0095] В некоторых воплощениях, Хаа представляет собой  или . Во всех этих воплощениях, Х независимо представляет собой NH, N(Me), О, в частности NH или N(Me), более конкретно NH.
9
9
9
9
9
[0096] В некоторых воплощениях, Хаа представляет собой , , или . В некоторых воплощениях, Хаа представляет собой  или . В некоторых воплощениях, Хаа представляет собой . В некоторых воплощениях, Хаа представляет собой . Во всех этих воплощениях, Х независимо представляет собой NH, N(Me), О, в частности NH или N(Me), более конкретно NH.
10
10
2
1
3
1
3
1
3
100
10
[0097] Хаа представляет собой , ,  или ; R независимо представляет собой Н, -C(NH)NH, -(C-C)-алкил, -С(O)-(C-C)-алкил, или -С(O)-(C-C)-галоалкил; R представляет собой Н, ОН или галоген; и n представляет собой целое число из 1-4.
10
10
2
1
3
1
3
1
3
100
10
[0098] В некоторых воплощениях, Хаа представляет собой ,  или ; R независимо представляет собой Н, -C(NH)NH, -(C-C)-алкил, -С(O)-(C-C)-алкил, или -С(О)-(C-C)-галоалкил; R представляет собой Н, ОН или галоген; и n представляет собой целое число из 1-3.
10
10
2
1
2
100
[0099] В некоторых воплощениях, Хаа представляет собой , , или  или ; R независимо представляет собой Н, -C(NH)NH, -(C-C)-алкил, ацетил, трифторметил; и R представляет собой Н, ОН или галоген.
10
[00100] В некоторых воплощениях, Хаа представляет собой  или .
10
[00101] В некоторых воплощениях, Хаа представляет собой или.
10
10
10
[00102] В некоторых воплощениях, Хаа представляет собой  или . В некоторых воплощениях, Хаа представляет собой . В некоторых воплощениях, Хаа представляет собой .
10
b
c
[00103] Хаа отсутствует и тогда R представляет собой R.
c
d
d
3
8
1
6
c
d
3
8
1
6
c
d
5
6
1
4
c
d
5
6
1
4
c
d
c
c
d
[00104] R представляет собой ОН, -N(R)(R'), -(С-С)-аминоциклоалкил, или -(C-C)-алкокси. В некоторых воплощениях, R представляет собой ОН, -NH(R), -(С-С)-аминоциклоалкил, или -(C-C)-алкокси. В некоторых воплощениях, R представляет собой ОН, -NH(R), -(С-С)-аминоциклоалкил, или -(С-С)-алкокси. В некоторых воплощениях, R представляет собой ОН, -NH(R), -(С-С)-аминоциклоалкил, или -(C-С)-алкокси. В некоторых воплощениях, R представляет собой ОН или -NH(R). В некоторых воплощениях, R представляет собой ОН. В некоторых воплощениях, R представляет собой -NH(R).
d
d
1
6
1
3
1
6
e
e
1
3
d
1
6
1
3
1
6
e
2
1
3
d
d
1
4
1
3
1
4
e
1
3
d
1
2
2
4
1
4
e
d
1
4
e
d
d
1
4
e
[00105] R, R' независимо представляет собой Н, ОН, -(C-C)-алкил, -(C-C)-гидроксиалкил, -(C-C)-алкил-N(R)(R'), -С(O)-(C-C)-галоалкил, арил или гетероарил. В некоторых воплощениях, R независимо представляет собой Н, ОН, -(C-C)-алкил, -(C-C)-гидроксиалкил, -(C-C)-алкил-N(R), -С(O)-(С-С)-галоалкил, арил или гетероарил и R' представляет собой Н. В некоторых воплощениях, R независимо представляет собой Н, ОН, -(С-С)-алкил, -(C-C)-гидроксиалкил, -(С-С)-алкил-NH(R), или -С(O)-(C-C)-галоалкил. В некоторых воплощениях, R независимо представляет собой Н, ОН, -(C-C)-алкил, -(С-С)-гидроксиалкил, или -(C-С)-алкил-NH(R). В некоторых воплощениях, R независимо представляет собой Н, ОН, или -(C-С)-алкил-NH(R). В некоторых воплощениях, R независимо представляет собой Н или ОН. В некоторых воплощениях, R представляет собой -(C-C)-алкил-NH(R).
e
e
1
6
1
3
e
1
3
1
2
e
e
e
e
e
[00106] В некоторых воплощениях, R, R' независимо представляет собой Н, -(С-С)-алкил, или -С(O)-(С-С)-галоалкил. В некоторых воплощениях, R независимо представляет собой Н, -(C-C)-алкил, или -С(О)-(C-C)-галоалкил. В некоторых воплощениях, R независимо представляет собой Н, метил, этил, или трифторметил. В некоторых воплощениях, R независимо представляет собой Н или метил. В некоторых воплощениях, R представляет собой Н. В некоторых воплощениях, R представляет собой метил. В этих воплощениях R' предпочтительно представляет собой Н.
2
3
4
5
6
7
8
9
[00107] В одном из воплощений, Х независимо представляет собой NH, N(Me), Х представляет собой N, Х независимо представляет собой NH, N(Me), Х независимо представляет собой NH, N(Me), Х представляет собой N, Х представляет собой N, Х независимо представляет собой NH, N(Me), и Х независимо представляет собой NH, N(Me).
[00108] Предпочтительно:
c
d
2
3
8
1
3
d
2
1
3
R представляет собой ОН, -N(R), -(С-С)-аминоциклоалкил, или -(C-C)-алкокси; в частности ОН, -N(R), или -(C-C)-алкокси
d
1
3
1
3
1
6
e
е
1
3
d
1
6
e
е
d
R независимо представляет собой Н, ОН, -(C-C)-алкил, -(С-С)-гидроксиалкил, -(C-C)-алкил-N(R)(R'), -С(O)-(С-С)-галоалкил или фенил; в частности R представляет собой Н, -(С-С)-алкил-N(R)(R'), более конкретно R представляет собой Н
1
Xaa представляет собой , , или
2
22
2
2
Хаа представляет собой , в частности R представляет собой ОН, R, R' оба представляют собой Н
Хаа3 является таким, как определено выше, в частности Хаа3 представляет собой  или ,
4
Хаа представляет собой  или ;
5
5
1
3
1
3
5
5
Хаа5 является таким, как определено выше, где R, R' независимо представляет собой Н, -С(О)-(C-C)-алкил, или -С(O)-(C-C)-галоалкил, в частности R, R' представляют собой Н;
Хаа6 является таким, как определено выше, в частности Хаа6 представляет собой  или ,
Хаа7 представляет собой
88
88
88
Хаа8 является таким, как определено выше, где R, R', R'' независимо представляет собой Н или ОН, в частности Хаа8 представляет собой
9
9
2
2
1
6
1
3
1
3
Хаа9 является таким, как определено выше, где R, R' независимо представляет собой Н, -C(NH)NH, -С(O)NH, -(C-C)-алкил, -С(O)-(C-C)-алкил, или -С(O)-(C-C)-галоалкил, в частности Хаа9 представляет собой ,
2
2
1
6
1
3
1
3
R'9 представляет собой Н и R9 представляет собой, -C(NH)NH, -С(O)NH, -(C-C)-алкил, -С(O)-(С-С)-алкил, или -С(O)-(C-C)-галоалкил
Другие радикалы являются такими, как определено выше
333
333
333
1
3
[00109] В частности, R, R', R'' представляет собой ОН, галоген или -(C-C)-алкокси.
[00110] В частности:
5
5
1
3
1
3
1
3
5
5
Хаа представляет собой  и R представляет собой Н, -(C-C)-алкил, -С(O)-(C-C)-алкил, или -С(O)-(С-С)-галоалкил, предпочтительно R представляет собой Н. в частности Х представляет собой NH.
[00111] В одном из воплощений,
4
4
Хаа представляет собой  или ; в частности Х представляет собой NH
5
5
1
3
1
3
1
3
5
Хаа представляет собой ; и R представляет собой Н, -(C-C)-алкил, -С(O)-(С-С)-алкил, или -С(O)-(С-С)-галоалкил, в частности Н; в частности Х представляет собой NH
Другие радикалы являются такими, как определено выше, в частности:
1
Xaa предпочтительно представляет собой ,
22
2
2
2
Хаа2 предпочтительно представляет собой , где R=ОН, R=R'=H и X=NH
8
8
8
Хаа8 предпочтительно представляет собой  где X=NH, R=R'=H
9
Хаа9 предпочтительно представляет собой  где X=NH,
[00112] В одном из воплощений,
a
1
2
R представляет собой Н, метил, -С(O)-(С-С)-алкил, или трифторацетил, предпочтительно Н, метил;
b
c
R представляет собой R;
c
2
2
6
e
1
3
2
4
1
3
2
1
3
R представляет собой ОН, NH, NHOH, -(С-С)-алкил-NH(R), -NH(C-C)-алкил, -NH(С-С)-алкил-ОН, -NH-фенил, N-пиперидинил, или -(C-C)-алкокси, предпочтительно ОН, NH, или -(C-C)-алкокси;
e
R представляет собой Н или трифторацетил;
1
Xaa представляет собой , или ,
1
1
2
1
2
R представляет собой Н, -(C-С)-алкил, ацетил, или трифторацетил, предпочтительно Н, -(С-С)-алкил;
1
n представляет собой целое число из 1-3;
2
Хаа представляет собой , ,  или , предпочтительно  или ;
2
1
2
R представляет собой Н, -(C-C)-алкил, ацетил или трифторацетил, предпочтительно Н;
22
R представляет собой ОН, фтор, метил, или метокси, предпочтительно ОН;
3
Хаа представляет собой  или , предпочтительно  или ;
3
2
1
6
1
6
1
6
1
2
3
5
1
2
2
2
2
3
1
4
33
1
6
2
1
6
1
6
1
6
1
6
1
2
1
4
33
1
6
2
R представляет собой Н, фторо, NH, -(C-C)-алкил, -(C-C)-алкенил, -(С-C)-алкинил, -(C-С)-галоалкил, -(C-С)-циклоалкил, -(C-C)-гидроксиалкил, -CHSH, -CHCHSCH, (С-С)-алкил-NH(R), (C-C)-алкил-С(O)NH, или (C-C)-алкил-С(O)ОН, предпочтительно Н, -(C-C)-алкил, -(C-C)-алкенил, -(C-C)-алкинил, -(C-C)-гидроксиалкил, (С-C)-алкил-NH(R), (С-С)-алкил-С(O)NH;
33
1
3
2
1
3
2
R представляет собой Н, -(С-С)-алкил, ацетил, трифторацетил, или -C(NH)NH, предпочтительно Н, -(C-C)-алкил, ацетил, или -C(NH)NH;
4
Хаа представляет собой  или ;
5
Хаа представляет собой ;
5
R представляет собой Н, ацетил или трифторацетил, предпочтительно Н;
6
Хаа представляет собой  или ;
7
2
3
3
2
2
3
3
2
2
3
3
2
2
3
3
2
2
3
3
2
2
3
3
2
Хаа представляет собой  где R представляет собой -С(O)NH, F, Cl, I, СН, CF, CN, OH, OMe, tBu, NH, COOH,  где R представляет собой -С(O)NH, F, Cl, I, CH, CF, CN, OH, OMe, tBu, NH, COOH,  где R представляет собой -С(O)NH, F, Cl, I, CH, CF, CN, OH, OMe, tBu, NH, COOH,  где R представляет собой -С(O)NH, F, Cl, I, CH, CF, CN, OH, OMe, tBu, NH, COOH,  где R представляет собой -С(O)NH, F, Cl, I, CH, CF, CN, OH, OMe, tBu, NH, COOH,  где R представляет собой -С(O)NH, F, Cl, I, CH, CF, CN, OH, OMe, tBu, NH, COOH, ,  или ;
8
Xaa представляет собой ,  или , предпочтительно ;
8
R представляет собой Н, ацетил или трифторацетил, предпочтительно Н;
8
n независимо представляет собой целое число из 2-4, предпочтительно n=3;
9
Хаа представляет собой  или , предпочтительно  или ;
9
2
R представляет собой Н или -C(NH)NH;
9
n представляет собой целое число из 2-4, предпочтительно n=2.
[00113] В некоторых воплощениях, соединение выбрано из группы, состоящей из
[00114] В некоторых воплощениях, в настоящем изобретении предложен способ лечения субъекта, страдающего от бактериальной инфекции содержащий введение указанному субъекту соединения формулы (I) или композиции, содержащей соединение формулы (I).
[00115] В некоторых воплощениях, в настоящем изобретении предложен способ подавления бактериальной инфекции у субъекта, содержащий введение субъекту соединения формулы (I) или композиции, содержащей соединение формулы (I).
[00116] В некоторых воплощениях, в настоящем изобретении предложен способ предотвращения бактериальной инфекции у субъекта, содержащий введение субъекту соединения формулы (I) или композиции, содержащей соединение формулы (I).
[00117] В некоторых воплощениях, в настоящем изобретении предложен способ лечения субъекта, страдающего от бактериальной инфекции с множественной лекарственной устойчивостью содержащий введение указанному субъекту эффективного количества соединения формулы (I) или композиции, содержащей эффективное количество соединения формулы (I).
[00118] В некоторых воплощениях, в настоящем изобретении предложен способ подавления бактериальной инфекции с множественной лекарственной устойчивостью, содержащий введение субъекту эффективного количества соединения формулы (I) или композиции, содержащей эффективное количество соединения формулы (I).
[00119] В некоторых воплощениях, в настоящем изобретении предложен способ предотвращения бактериальной инфекции с множественной лекарственной устойчивостью, содержащий введение субъекту эффективного количества соединения формулы (I) или композиции, содержащей эффективное количество соединения формулы (I).
[00120] В некоторых воплощениях, способы настоящего изобретения предложены для ингибирования бактерии, или связанной с ней инфекцией, которые являются резистентными для других лекарственных средств или антибиотиков. В некоторых воплощениях, способы предложены для лечения, подавления и/или предотвращения инфекции из бактерий с множественной лекарственной устойчивостью.
[00121] В некоторых воплощениях способы дополнительно содержат введение второго соединения антибиотика.
[00122] В некоторых воплощениях бактериальная инфекция обладает множественной лекарственной устойчивостью. В некоторых воплощениях, бактериальный штамм является внутрибольничным. В некоторых воплощениях, бактериальный штамм является нозокомиальным.
[00123] В некоторых воплощениях бактериальная инфекция включает инфекцию из грамотрицательных бактерий. В некоторых воплощениях бактериальная инфекция включает инфекцию из грамположительных бактерий. В некоторых воплощениях бактериальная инфекция содержит инфекцию из более чем одного бактериального штамма.
[00124] В другом аспекте, настоящее изобретение относится к фармацевтическим композициям, содержащим соединение формулы (I) и фармацевтически приемлемый носитель. В некоторых воплощениях, композиции дополнительно содержат второе соединение антибиотик.
[00125] В некоторых воплощениях вводится соединение формулы (I). В некоторых воплощениях вводится композиция, содержащая соединение формулы (I).
[00126] В некоторых воплощениях соединение формулы (I) или композиция, содержащая соединение формулы (I) является эффективным против бактерий с множественной лекарственной устойчивостью.
[00127] Соединения формулы (I) могут быть включены в фармацевтические композиции, подходящие для введения. Такие композиции могут содержать соединение формулы (I) и фармацевтически приемлемый носитель. Так, в некоторых воплощениях, соединения по настоящему изобретению представлены в фармацевтической композиции.
[00128] В одном аспекте, настоящее изобретение также относится к соединениям формулы (I) для применения при производстве лекарственного средства для лечения бактериальной инфекции или бактериального заболевания.
[00129] В другом аспекте, настоящее изобретение также относится к соединениям формулы (I) для применения при производстве лекарственного средства, в частности антибиотика, например для подавления бактериальной инфекции или бактериального заболевания.
[00130] В другом аспекте, настоящее изобретение также относится к соединениям формулы (I) для применения при производстве лекарственного средства? В частности в качестве антибиотика, например для подавления бактериальной инфекции или бактериального заболевания.
[00131] В рамках настоящего изобретения, антибиотик следует понимать как средство, которое либо убивает, либо ингибирует рост микроорганизма. Микроорганизм представляет собой микроскопический организм и который может состоять из одной клетки или нескольких клеток. Термин антибиотик, таким образом, относится к агентам, которые либо убивают, либо ингибируют рост эукариотических или прокариотических микроорганизмов. Такими примерами антибиотиков в контексте настоящего изобретения являются антибактериальные средства, противогрибковые средства, противоаллергические средства и так далее. Предпочтительно в контексте настоящего изобретения антибиотик является антибактериальным агентом.
[00132] В другом аспекте, настоящее изобретение также относится к соединениям формулы (I) для применения при производстве лекарственного средства для лечения бактериальной инфекции или бактериального заболевания с множественной лекарственной устойчивостью.
[00133] В другом аспекте, настоящее изобретение также относится к соединениям формулы (I) для применения при производстве лекарственного средства для подавления бактериальной инфекции или бактериального заболевания с множественной лекарственной устойчивостью.
[00134] В другом аспекте, настоящее изобретение также относится к соединениям формулы (I) для применения при производстве лекарственного средства для предотвращения бактериальной инфекции или бактериального заболевания с множественной лекарственной устойчивостью.
[00135] В другом аспекте, настоящее изобретение также относится к соединениям формулы (I) для применения при производстве антибиотической композиции.
[00136] В одном аспекте, настоящее изобретение также относится к соединениям формулы (I) для применения при производстве антибиотической композиции для лечения бактериальной инфекции или бактериального заболевания.
[00137] В одном аспекте, настоящее изобретение также относится к соединениям формулы (I) для применения при производстве антибиотической композиции для подавления бактериальной инфекции или бактериального заболевания.
[00138] В одном аспекте, настоящее изобретение также относится к соединениям формулы (I) для применения при производстве антибиотической композиции для предотвращения бактериальной инфекции или бактериального заболевания.
[00139] В другом аспекте, настоящее изобретение также относится к соединениям формулы (I) для применения при производстве антибиотической композиции для лечения бактериальной инфекции или бактериального заболевания с множественной лекарственной устойчивостью.
[00140] В другом аспекте, настоящее изобретение также относится к соединениям формулы (I) для применения при производстве антибиотической композиции для подавления бактериальной инфекции или бактериального заболевания с множественной лекарственной устойчивостью.
[00141] В другом аспекте, настоящее изобретение также относится к соединениям формулы (I) для применения при производстве антибиотической композиции для предотвращения бактериальной инфекции или бактериального заболевания с множественной лекарственной устойчивостью.
[00142] В одном аспекте, настоящее изобретение также относится к соединениям формулы (I) для применения при производстве лекарственного средства для предотвращения бактериальной инфекции или бактериального заболевания. В соответствии с изобретением фармацевтически приемлемый носитель может содержать любые и все растворители, дисперсионные среды, покрытия, антибактериальные и противогрибковые агенты, изотонические и абсорбирующие агенты задержки и т.д., совместимые с фармацевтическим введением. Использование таких сред и агентов для фармацевтически активных веществ хорошо известно в данной области. Могут быть использованы любые обычные среды или агенты, которые совместимы с активным соединением. Дополнительные активные соединения также могут быть включены в композиции.
[00143] В другом аспекте, настоящее изобретение также относится к применению соединений формулы (I) для производства лекарственного средства для одного или более показаний, указанных выше.
[00144] Любое из терапевтических применений, описанных здесь, может быть применено к любому субъекту, нуждающемуся в такой терапии, включая, например, млекопитающее, такое как мышь, крыса, собака, кошка, корова, лошадь, кролик, обезьяна, свинья, овца, коза или человек. В некоторых воплощениях субъектом является млекопитающее. В некоторых воплощениях субъектом является птица, свиньи, крупный рогатый скот или человек. В некоторых воплощениях субъектом является мышь, крыса или человек. В некоторых воплощениях субъектом является мышь. В некоторых воплощениях субъектом является крыса. В некоторых воплощениях субъектом является человек
[00145] В некоторых воплощениях, соединение или композиция вводятся перорально. В некоторых воплощениях, соединение или композиция вводятся парентерально. В некоторых воплощениях, соединение или композиция вводятся внутривенно. В некоторых воплощениях, соединение или композиция вводятся местно.
[00146] В некоторых воплощениях, соединения формулы (I) применяются для лечения бактериальных инфекций у субъекта. Бактериальные патогены с множественной лекарственной устойчивостью, которые вызывают инфекцию включают метициллин-резистентный Staphylococcus aureus (MRSA), ванкомицин-резистентный enterococci (VRE), продуценты β-лактамазы расширенного спектра (ESBL), карбапенем-резистентный Enterobacteriaceae, мультирезистентные виды Pseudomonas и Acinetobacter. В некоторых воплощениях, бактериальная или микрбная инфекция является инфекцией, вызванной целой или частью бактерии Achromobacter, Actinobacillus, Actinomyces, Acinetobacter, Aeromonas, Anaplasma, Bacillus, Bacteroides, Bartonella, Bdellovibrio, Bifidobacterium, Bordetella, Borrelia, Brucella, Burkholderia, Campylobacter, Capnocytophaga, Cardiobacterium, Chlamydia, Chlamydophila, Chromobacterium, Citrobacter, Clostridium, Corynebacterium, Coxiella, Ehrlichia, Enterobacter, Enterococcus, Erysipelothrix, Escherichia, Francisella, Fusobacterium, Haemophilus, Helicobacter, Hemobartonella, Klebsiella, Lactobacillus, Legionella, Leptospira, Listeria, Mannheimia, Moraxella, Morganella, Mycobacterium, Mycoplasma, Neisseria, Neorickettsia, Nocardia, Pasteurella, Peptostreptococcus, Photorhabdus, Porphyromonas, Prevotella, Propionibacterium, Proteus, Pseudomonas, Rickettsia, Salmonella, Serratia, Shigella, Sphaerophorus, Spirillum, Staphylococcus, Stenotrophomonas, Streptobacillus, Streptococcus, Treponema, Tropheryma, Ureaplasma, Vibrio, или Yersinia семейств.
[00147] В некоторых воплощениях, бактериальная или микробная инфекция является инфекцией, вызванной целой или частью бактерии Acinetobacter sp., Bacillus sp., Burkholderia sp., Enterobacter sp., Enterococcus sp., Escherichia sp., Klebsiella sp., Staphylococcus sp., Stenotrophomonas sp., Serratia sp. и Pseudomonas sp.. В некоторых воплощениях, бактерия выбрана из группы, состоящей из Staphylococus sp., Escherichia sp., Klebsiella sp., Pseudomonas sp., или Acinetobacter sp.
[00148] В некоторых воплощениях, бактериальная или микробная инфекция является инфекцией, вызванной целой или частью Acinetobacter baumannii, Bacillus subtilis, Burkholderia cepacia, Enterobacter clocae, Enterococcus faecalis, Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, Stenotrophomonas maltophilia, Serratia marescens или Pseudomonas aeruginosa. В некоторых воплощениях, бактериальная или микробная инфекция является инфекцией, вызванной целой или частью Acinetobacter baumannii, Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Staphylococcus aureus, или Pseudomonas aeruginosa.
[00149] Фармацевтическая композиция по изобретению составлена так, чтобы быть совместимой с ее предполагаемым способом введения. Примеры путей введения включают парентеральное, например внутривенное, внутрикожное, подкожное, пероральное (например, ингаляционное), трансдермальное (местное), трансмукозальное и ректальное введение. Растворы или суспензии, используемые для парентерального, внутрикожного или подкожного применения, могут включать следующие компоненты: стерильный разбавитель, такой как вода для инъекций, физиологический раствор, фиксированные масла, полиэтиленгликоли, глицерин, пропиленгликоль или другие синтетические растворители; антибактериальные агенты, такие как бензиловый спирт или парабены; антиоксиданты, такие как аскорбиновая кислота или бисульфит натрия; хелатирующие агенты, такие как этилендиаминтетрауксусная кислота; буферы, такие как ацетаты, цитраты или фосфаты, и агенты для регулирования тоничности, такие как хлорид натрия или декстроза. рН можно регулировать кислотами или основаниями, такими как соляная кислота или гидроксид натрия. Парентеральный препарат может быть заключен в ампулы, одноразовые шприцы или многоразовые флаконы из стекла или пластика
[00150] Фармацевтические композиции, подходящие для инъекционного применения, включают стерильные водные растворы (если растворимы в воде) или дисперсии и стерильные порошки для немедленного получения стерильных растворов или дисперсий для инъекций. Для внутривенного введения подходящие носители включают физиологический раствор, бактериостатическую воду, Cremophor ЕМ™ (BASF, Parsippany, N.J.) или фосфатно-солевой буфер (PBS). Во всех случаях композиция должна быть стерильной и должна быть жидкой до такой степени, чтобы наполнить шприц. Она должна быть стабильной в условиях производства и хранения и должна быть ограждена от загрязняющего действия микроорганизмов, таких как бактерии и грибы. Носитель может быть растворителем или дисперсионной средой, содержащей, например, воду, этанол, фармацевтически приемлемый полиол, такой как глицерин, пропиленгликоль, жидкий полиэтиленгликоль и подходящие их смеси. Подходящую текучесть можно поддерживать, например, с помощью покрытия, такого как лецитин, путем поддержания требуемого размера частиц в случае дисперсии и с использованием поверхностно-активных веществ. Предотвращение воздействия микроорганизмов может быть достигнуто с помощью различных антибактериальных и противогрибковых агентов, например, парабенов, хлорбутанола, фенола, аскорбиновой кислоты и тимеросала. Во многих случаях может быть полезно включать изотонические агенты, например, сахара, полиспирты, такие как маннит, сорбит, хлорид натрия, в композиции. Длительное поглощение инъекционных композиций может быть достигнуто путем включения в композицию агента, который задерживает поглощение, например, моностеарат алюминия и желатин.
[00151] Стерильные растворы для инъекций могут быть получены путем включения соединения в требуемом количестве в подходящий растворитель с использованием одного или комбинации ингредиентов, перечисленных здесь, при необходимости с последующей фильтрованной стерилизацией. Как правило, дисперсии получают путем включения активного соединения в стерильный носитель, который содержит основную дисперсионную среду и необходимые другие ингредиенты из перечисленных в настоящем изобретении. В случае стерильных порошков для получения стерильных растворов для инъекций примерами полезных способов получения являются вакуумная сушка и сушка замораживанием, которая дает порошок активного ингредиента плюс любой дополнительный желаемый ингредиент из ранее стерильно отфильтрованного раствора
[00152] Пероральные композиции обычно включают инертный разбавитель или съедобный носитель. Они могут быть заключены в желатиновые капсулы или спрессованы в таблетки. С целью перорального терапевтического введения активное соединение можно вводить с эксципиентами и применять в форме таблеток, пастилок или капсул. Пероральные композиции могут быть также получены с использованием жидкого носителя для применения в качестве полоскания для рта, когда соединение в жидком носителе применяют перорально и растворяют, сплевывают или проглатывают
[00153] Фармацевтически совместимые связывающие агенты и/или адъювантные материалы могут быть включены в состав композиции. Таблетки, пилюли, капсулы, палочки и т.д. могут содержать любой из следующих ингредиентов или соединений аналогичного характера: связующее, такое как микрокристаллическая целлюлоза, трагакантовая камедь или желатин; эксципиент, такой как крахмал или лактоза, дезинтегрирующий агент, такой как альгиновая кислота, Примогель или кукурузный крахмал; любрикант, такой как стеарат магния или стероиды; глидант, такой как коллоидный диоксид кремния; подслащивающий агент, такой как сахароза или сахарин; или ароматизатор, такой как перечная мята, метилсалицилат или апельсиновый ароматизатор.
[00154] Системное введение может также осуществляться с помощью трансмукозального или трансдермального средств. Для трансмукозального или чрескожного введения в препарате используют пенетранты, соответствующие барьеру, который должен быть преодолен. Такие пенетранты обычно известны в данной области и включают, например, для трансмукозального введения, детергенты, желчные соли и производные фузидовой кислоты. Трансмукозальное введение может быть выполнено с использованием носовых спреев или суппозиториев. Для трансдермального введения активные соединения вводят в мази, бальзамы, гели или кремы, как общеизвестно в данной области.
[00155] Соединения формулы (I) синтезируются с использованием способов, относящихся к компетенции обычного квалифицированного специалиста. Типичные способы синтеза таких соединений включают в себя, без ограничения, органический синтез в жидкой фазе и твердофазный органический синтез. В некоторых воплощениях твердофазный органический синтез включает синтез с помощью пептидного синтезатора. Такие варианты осуществления и их выполнение находятся в пределах объема обычно квалифицированного специалиста. Примеры синтетических методов описаны в Bodanzky, et al. "The Practice of Peptide Synthesis," Springer-Verlag (1994); включено сюда посредством ссылки во всей полноте. Дополнительные иллюстративные способы показаны в Примерах.
[00156] Необходимо понимать, что один или несколько признаков любых вариантов осуществления, раскрытых здесь, могут быть объединены и/или перегруппированы в рамках объема изобретения для получения дополнительных вариантов осуществления, которые также входят в объем изобретения. Специалисты в данной области техники узнают или смогут установить, используя не более, чем обычные эксперименты, многие эквиваленты конкретных вариантов осуществления изобретения, описанных здесь. Предполагается, что такие эквиваленты находятся в пределах объема изобретения.
[00157] Настоящее изобретение далее описано следующими не ограничивающими Примерами.
ПРИМЕРЫ
[00158] Ниже приводятся примеры, чтобы облегчить более полное понимание настоящего изобретения. Следующие примеры иллюстрируют примерные способы создания и осуществления изобретения. Однако объем изобретения не ограничивается конкретными вариантами осуществления, раскрытыми в этих примерах, которые являются только иллюстративными, поскольку могут быть использованы альтернативные способы для получения аналогичных результатов.
[00159] Аббревиатуры:
Boc: трет-бутоксикарбонил
ДХМ: Дихлорметан
DIAD: Диизопропилазодикарбоксилат
DIPEA: N,N',N''-диизопропилэтиламин
ДМФ: N,N'-диметилформамид
Fmoc: 9-флуоренилметилоксикарбонил
ТВМЕ: трет-бутил метиловый эфир
ТФУ: Трифторуксусная кислота
Trt: Тритил
[00160] Химические аналоги были получены твердофазным пептидным синтезом (SPPS; Merrifield R.В. J. Am. Chem. Soc. 1963, 85, 2149; включено сюда посредством ссылки во всей полноте) с применением ортогональной стратегии Fmoc/tBu. Классические пептидные связывания проводили с использованием урониевых реагентов HATU или HBTU. Для каждого связывания использовали 3.0 эквивалента аминокислоты и 2.9 эквивалента HATU или HBTU. Каждое связывание повторяли один, два или три раза. В конце связывающих стадий проводили депротекцию Fmoc с использованием раствора ДМФ/пиперидин, и следующую аминокислоту добавляли с использованием такой же стратегии. Когда требовалось в качестве дипептидного структурного элемента вводили дегидроаргинин, дегидроаргинин был в С-концевом положении (Схема 1).
[00161] Схема 1. Дегидроаргинин дипептидный структурный элемент.
[00162] В конце синтеза, защиту боковых цепей, чувствительных к кислоте, и отщепление пептида от смолы проводили за одну стадию с использованием раствора ТФУ, воды и триизопропилсилана в качестве акцептора. Конечный пептидный продукт впоследствии очищали с помощью препаративной ВЭЖХ. Чистоту конечного соединения проверяли с помощью ЖХ-МС анализа.
[00163] ВЭЖХ-МС аналитический метод для проверки конечной чистоты:
Поток: 0.7 мл/мин
2
Подвижная фаза А: HO milliQ, ТФУ 0.1%
Подвижная фаза В: ацетонитрил
Градиент: 0% - 30% В в течение 15 минут
[00164] Способ очистки препаративной ВЭЖХ:
Поток: 2.5 мл/мин
2
Подвижная фаза А: HO milliQ, ТФУ 0.1%
Подвижная фаза В: ацетонитрил
Градиент: 0% - 12% В в течение 12 минут
Время прохождения: 19 минут
[00165] Пример 1: Синтез некоммерческих аминокислотных структурных элементов: аминотреонин
[00166] Аминотреониновый структурный элемент получили в соответствии с методикой, описанной в заявке на патент FR 1451623 (включено сюда посредством ссылки во всей полноте).
+
1
13
2
2
[00167] Стадия 1: Гидроксиэктоин (50.0 г, 316.4 ммоль) растворили в воде (260 мл). NaOH (2.0 экв., 632.9 ммоль, 25.3 г) добавили по порциям и смесь перемешивали при комнатной температуре до растворения всего NaOH. Полученный раствор нагревали при 50°С в течение 6 часов, затем охладили до комнатной температуры, затем до 5°С с помощью ледяной бани. Водную HCl (6 н) добавили осторожно (~100 мл) до рН=4. Полученный раствор заморозили до -80°С, затем лиофилизировали. Полученный белый осадок растворили в водной HCl (6 н, 300 мл) и смесь нагревали при 110°С в течение 3 часов. Полученный раствор разбавили водой (300 мл), заморозили до -80°С, затем лиофилизировали с получением (2S,3S)-2,4-диамино-3-гидрокси-бутановой кислоты (1-1) в виде бледно-желтого осадка (107 г, содержала 2.0 экв. NaCI, чистота >90%). ЖХ-МС (0.7 мл/мин; 100:0 до 90:10 воды (0.1% ТФУ)/AcCN в течение 10 мин): Rt=2.30 мин, [М+Н]=135. Н NMR (DO, 600 MHz, смесь 2 диастереоизомеров 70:30): δ (ppm) 3.22 (dd, J=10.2 and 13.2 Hz, 0.3 H), 3.34-3.47 (m, 1.7H), 4.08 (d, J=4.8 Hz, 0.3H), 4.24 (d, J=3.0 Hz, 0.7H), 4.46 (td, J=3.0 и 10.2 Hz, 0.7H), 4.48-4.52 (m, 0.3H). C NMR (DO, 150 MHz, смесь 2 диастереоизомеров): δ (ppm) 42.65, 43.38, 57.70, 66.92, 67.45, 170.45. Анализ Мэрфи: 2S,3S/2R,3S=73:27 (2S.3S: Rt=96.01 мин, 73%; 2R,3S: Rt=97.84 мин, 27%).
4
2
2
2
2
2
[00168] Стадия 2: (2S,3S)-2,4-диамино-3-гидрокси-бутановую кислоту (1-1) (53 г, ~160 ммоль) поместили в 2 л круглодонную колбу и растворили в воде (250 мл). NaOH (3.0 экв., 480 ммоль, 19.0 г) добавили по порциям (немного эксзотермично). Смесь перемешивали до растворения осадков, затем раствор CuSO.5HO (0.5 экв., 80 ммоль, 20.0 г) в воде (125 мл) медленно добавили. Полученный темно-голубой раствор поместили на масляную баню при комнатной температуре. Систему нагревали при 110°С в течение 30 минут, затем медленно охладили до комнатной температуры в течение 4 часов. Раствор BocO (2.0 экв., 320 ммоль, 52.0 г) в диоксане (275 мл) добавили и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 70 часов. Раствор BocO (0.5 экв., 80 ммоль, 13.0 г) в диоксане (60 мл) медленно добавили и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 24 часов. Полученную суспензию отфильтровали. Полученный бледно-голубой осадок промыли водой (~700 мл), EtO (~300 мл), затем высушили с получением ((2S,3S)-2-амино-4-(трет-бутоксикарбониламино)-3-гидрокси-бутановой кислоты)Cu (1-2) в виде бледно-голубого осадка (17.1 г, 40% выход за 2 стадии). Продукт использовали в неочищенном виде на следующей стадии без дополнительной очистки.
2
2
2
3
2
4
6
6
+
1
13
+
[00169] Стадия 3: ((2S,3S)-2-амино-4-(трет-бутоксикарбониламино)-3-гидрокси-бутановая кислота)Cu (1-2) (17.1 г, 32.0 ммоль) суспендировали в воде (300 мл). Раствор NaEDTA (1.5 экв., 48.0 ммоль, 15.9 г) и NaOH (3.0 экв., 96.0 ммоль, 3.84 г) в воде (300 мл) добавили. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 4 часов до полного растворения суспензии. Полученный раствор охладили в ванне со льдом затем медленно добавили раствор FmocOSu (2.5 экв., 80.0 ммоль, 35.7 г) в диоксане (500 мл). В конце добавления NaCO (2.5 экв., 80.0 ммоль, 8.5 г) добавили и смесь нагрели до комнатной температуры, затем перемешивали при комнатной температуре в течение 18 часов. Полученный прозрачный голубой раствор промыли EtO (4*200 мл), затем охладили в ванне со льдом. Водную 1 н HCl медленно добавили до рН=3-4 (-250 мл). Эту водную фазу экстрагировали AcOEt (5*200 мл). Органические фазы объединили, промыли солевым раствором (2*150 мл), высушили над MgSO, отфильтровали и сконцентрировали с получением бледно-желтого масла. Ацетонитрил (200 мл) добавили и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 70 часов. Суспензию отфильтровали, осадок промыли с помощью AcCN (100 мл), затем высушили с получением (2S,3S)-4-(трет-бутоксикарбониламино)-2-(9Н-флуорен-9-илметоксикарбониламино)-3-гидрокси-масляной кислоты (1-3) в виде белого порошка (29.1 г, колич. выход, 95% чистота по данным ЖХ-МС (5% DBF, диастереоизомера не наблюдалось)). ЖХ-МС (0.7 мл/мин; 100:0 до 70:30 воды (0.1% ТФУ)/AcCN за 15 мин): Rt=13.96 мин, 95% (254 нм), [М+Н-Вос]=357. H NMR (DMSO-d, 600 MHz, 343 K): δ (ppm) 1.39 (s, 9H), 3.00-3.04 (m, 1H), 3.12-3.20 (m, 1H), 3.85-3.88 (m, 1H), 4.00-4.13 (m, 1H), 4.22-4.25 (m, 1H), 4.28-4.31 (m, 2H), 6.61 (br s, 0.8H), 7.33 (t, J=7.2 Hz, 2H), 7.42 (t, J=7.2 Hz, 2H), 7.71 (d, J=7.2 Hz, 2H), 7.87 (d, J=7.2 Hz, 2H). C NMR (DMSO-d, 150 MHz, 343 K): δ (ppm) 27.93, 42.88, 46.48, 57.26, 65.69, 69.96, 77.56, 119.65, 124.87, 126.70, 127.24, 140.40, 143.50, 143.54, 151.30, 155.41, 155.65, 171.06. Анализ Марфи: Rt=95.60 мин (2S, 3S), 100% (340 нм), [М+Н]=695.
3
2
3
4
2
2
3
2
6
6
+
1
13
+
[00170] Стадия 4: (2S,3S)-4-(трет-бутоксикарбониламино)-2-(9Н-флуорен-9-илметоксикарбониламино)-3-гидрокси-масляную кислоту (1-3) (29.1 г, 63.6 ммоль) суспендировали в смеси ацетона и 2,2-диметоксипропана (1:1, 480 мл). Суспензию охладили с помощью ледяной бани, затем BF.OEt (каталитический, 900 мкл) добавили по каплям. Реакционную смесь перемешивали в плавящейся ванне со льдом до получения прозрачного оранжевого/коричневого раствора (около 2.5 часов, завершение реакции подтвердили с помощью ЖХ-МС). Водный насыщенный раствор NaHCO (200 мл), AcOEt (400 мл), затем воду (300 мл) добавили и фазы разделили. Водную фазу экстрагировали с помощью AcOEt (2*200 мл). Органические фазы объединили, промыли водным 0.1 н HCl (200 мл), солевым раствором (200 мл), высушили над MgSO, отфильтровали и сконцентрировали. Полученное бледно-желтое масло растворили в EtO (100 мл), раствор охладили в ванне со льдом, затем добавили гексан (400 мл). Наблюдали образование суспензии несмотря на добавление гексана. В конце добавления на дне колбы наблюдался вязкий осадок. EtO добавили при комнатной температуре и смесь тритурировали с получением белого осадка, который тритурировали в течение 18 часов. Полученную суспензию отфильтровали с получением (2S)-2-[(5S)-3-трет-бутоксикарбонил-2,2-диметил-оксазолидин-5-ил]-2-(9Н-флуорен-9-илметоксикарбониламино)уксусной кислоты (1-4) в виде белого порошка (22.9 г, 73% выход, 96% чистота по данным ЖХ-МС (наблюдалось 2% DBF и 1.5% исходного материала, диастереоизомера не наблюдалось)). ЖХ-МС (0.7 мл/мин; 100:0 до 70:30 воды (0.1% ТФУ)/AcCN за 15 мин): Rt=19.66 мин, 96% (254 нм), [М+Н-Вос-СН(СН)]=357. H NMR (DMSO-d, 600 MHz, 343 K): δ (ppm) 1.43 (s, 12H), 1.47 (s, 3Н), 3.36-3.41 (m, 1H), 3.54-3.59 (m, 1H), 4.22-4.25 (m, 2H), 4.30-4.33 (m, 2H), 4.38 (br s, 1H), 7.30-7.34 (m, 2H), 7.39-7.44 (m, 2H), 7.58 (br s, 1H), 7.69-7.72 (m, 2H), 7.87 (d, J=7.8, 2H). C NMR (DMSO-d, 150 MHz, 343 K): δ (ppm) 27.78, 46.48, 46.84, 65.72, 72.81, 78.86, 92.94, 119.65, 124.83, 126.66, 127.25, 140.41, 143.48, 151.04, 155.51, 170.37. Региоселективность защиты определялась с использованием анализов НМВС и HSQC. Ясный сигнал наблюдался в НМВС между СНα (4.25 ppm) и СО в составе Fmoc защиты амина в альфа положении (155.5 ppm), обеспечивая региоселективность защиты. Анализ Марфи: Rt=96.19 мин (2S, 3S), 100% (340 нм), [М+Н]=695.
[00171] Пример 2: Синтез некоммерческих структурных аминокислотных элементов: дипептид лизин-дигидроаргинин.
[00172] Структурный элемент дипептид лизин-дигидроаргинин получили в соответствии с методиками, описанными в Schmidt, U. and Wild, J. Ang. Chem. Int. Ed. 1984, 23, 991 (включено сюда посредством ссылки во всей полноте) и примененными в Berwe, M. et al., Org. Process Res. Dev. 2011, 15, 1348; and Freeman, N. S. et al., J. Org. Chem. 2011, 76, 3078 (каждый включен сюда посредством ссылки во всей полноте).
[00173] Схема 2. Синтез структурного элемента дипептид лизин-дигидроаргинин
1
1
6
[00174] Стадия 1: Раствор бензилкарбамата (90.0 г, 0.59 моль, 1.0 экв.) и моногидрата дигидроксиуксусной кислоты 1 (60.3 г, 1.1 моль, 1.1 экв.) в толуоле (840 мл) поместили в 2 л колбу и раствор нагревали при 40°С в течение 1.5 часов. Половину растворителя сконцентрировали при пониженном давлении. Толуол (540 мл) добавили и половину растворителя сконцентрировали при пониженном давлении. Толуол (540 мл) добавили и реакционную смесь перемешивали при 40°С в течение 2 часов и затем охладили до 20°С. Белый осадок отфильтровали, промыли с помощью толуола и высушили под вакуумом. Ожидаемое соединение 2 (133.0 г, колич. выход, 95% чистота (Н NMR)) получили в виде белого осадка. H NMR (400 MHz, DMSO-d): δ (ppm): 5.05 (s, 2H), 5.21 (d, J=8.8 Hz, 1H), 6.62-6.80 (br s, 1H), 7.26-7.44 (m, 5H), 8.14 (d, J=8.8 Hz, 1H), 12.10-13.60 (br s, 1H).
[00175] Стадия 2:
2
6
1
Стадия I: 2-(((бензилокси)карбонил)амино)-2-гидроксиуксусную кислоту 2 (133.0 г, 0.59 моль, 1.0 экв.) разбавили в метаноле (480 мл). Триметилортоформиат (TMOF, 130.2 мл, 1.11 моль, 2.0 экв.) и соляную кислоту в метаноле (1.25 М, 24 мл, 0.03 моль, 0.05 экв.) добавили последовательно. Смесь перемешивали при 56°С в течение 40 мин. Растворитель сконцентрировали при пониженном давлении и добавили 600 мл EtO. При необходимости исходное соединение отфильтровали. Фильтрат сконцентрировали и высушили при пониженном давлении. Ожидаемое промежуточное соединение (149.6 г) получили в виде белого осадка. Чистоту оценили с помощью ЯМР и она составила >95%. H NMR (400 MHz, DMSO-d) δ (ppm): 3.26 (s, 3Н), 3.66 (s, 3Н), 5.08 (s, 2H), 5.16 (d, J=9,2 Hz, 1H), 7.28-7.44 (m, 5H), 8.49 (d, J=8.8 Hz, 1H).
2
3
4
2
3
3
1
1
31
[00176] Стадия ii: 2 л трехгорловую круглодонную колбу, оснащенную капельной воронкой и обратным холодильником высушили тремя циклами нагревание + вакуум/аргон. Предшествующее промежуточное соединение (149.5 г, 0.59 моль, 1.0 экв.) поместили в атмосфере аргона с последующим безводным толуолом (720 мл). Три капли концентрированной серной кислоты добавили. Треххлористый фосфор (80 мл, 0.69 моль, 1.2 экв.) ввели в капельную воронку. Смесь нагревали при 75°С и PCl3 добавляли в течение 1 ч при этой температуре. В конце добавления, смесь перемешивали при 75°С в течение 13 ч. После охлаждения до комнатной температуры осадок отфильтровали и фильтрат сконцентрировали под вакуумом для удаления избытка PCl3. Неочищенную смесь разбавили в 720 мл безводного толуола в атмосфере аргона. Триэтилфосфит (100 мл, 0.65 моль, 1.1 экв.) затем добавили и смесь перемешивали при 75°С в течение 2 ч и затем при 90°С в течение 30 мин. Реакционную смесь охладили до комнатной температуры; растворитель и избыток триэтилфосфита удалили под вакуумом. Неочищенную смесь растворили в EtOAc. Органическую фазу промыли дважды с помощью насыщенного NaCO, высушили над MgSO, отфильтровали и сконцентрировали под вакуумом. Неочищенную смесь преципитировали в EtO (1 ч при 5°С). Суспензию отфильтровали и осадок высушили под вакуумом с получением соединения 3 в виде белого осадка (165.1 г, 70% выход за 2 стадии, 90% чистота (Н NMR)). H NMR (400 MHz, CDCl): δ (ppm) 3.74-3.87 (m, 9H), 4.93 (dd, J=22.4 and 9.6 Hz, 1H), 5.13-5.14 (m, 2H), 5.60 (d, J=8.4 Hz, 1H), 7.28-7.43 (m, 5H). P NMR (400 MHz, CDCl): δ (ppm) 18.45.
2
31
[00177] Стадия 3: Метил 2-(((бензилокси)карбонил)амино)-2-(диэтоксифосфорил)ацетат 3 (20.1 г, 55.7 ммоль, 1.0 экв.) растворили в 600 мл EtOH. 10% палладий на угле (2.0 г, катал.) добавили и реакционную смесь перемешивали в атмосфере Н в течение от 8 до 14 ч. Депротекцию контролировали с помощью P NMR. После завершения смесь отфильтровали через целит. Фильтрат сконцентрировали под вакуумом. Неочищенный продукт растворили в ДХМ и сконцентрировали при пониженном давлении. Операцию повторили три раза с целью удаления следов EtOH. Свободный амин использовали сразу на следующей стадии.
4
3
4
3
6
6
3
1
1
13
31
[00178] Неочищенный продукт растворили в 60 мл ДХМ. Fmoc-Lys(Boc)-OH (26.0 г, 55.7 ммоль, 1.0 экв.) добавили с последующим PyBOP (29.0 г, 55.7 ммоль, 1.0 экв.). Реакционную смесь охладили до 0°С перед добавлением диизопропилэтиламина по каплям (28.0 мл, 160.7 ммоль, 3.0 экв.). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. После завершения реакционную смесь разбавили EtOAc. Органическая фаза была промыта дважды с помощью 5% водного раствора KHSO, дважды с помощью насыщенного водного раствора NaHCO и один раз солевым раствором. Органические фазы высушили над MgSO, отфильтровали и сконцентрировали под вакуумом. Неочищенный продукт очистили посредством колоночной хроматографии через силикагель (40-63 мкм, поры 60 , 1.4 кг, 100% EtOAc). Для удаления следов EtOAc, неочищенную смесь растворили в CHCl и сконцентрировали при пониженном давлении с получением соединения 4 в виде белой пены (33.4 г, 83% выход, 95% чистота (Н NMR)). H NMR (400 MHz, DMSO-d): δ (ppm) 1.15-1.62 (m, 21H), 2.87-2.90 (m, 2H), 3.70 (d, J=4.8 Hz, 3Н), 4.03-4.25 (m, 8H), 4.90-5.15 (m, 1H), 6.75 (br s, 1H), 7.32 (t, J=7.2 Hz, 2H), 7.42 (t, J=7.6 Hz, 2H), 7.50-7.58 (m, 1H), 7.72 (d, J=7.2 Hz, 2H), 7.89 (d, J=7.6 Hz, 2H), 8.77-8.85 (m, 1H). C NMR (100 MHz, DMSO-d): δ (ppm) 16.08, 22.76, 28.24, 29.18, 31.54, 31.73, 46.60, 49.43, 50.88, 52.67, 52.71, 54.16, 63.06, 63.11, 63.28, 63.35, 65.63, 77.32, 120.07, 125.26, 127.03, 127.60, 140.66, 143.74, 143.83, 155.52, 155.89, 167.11, 172.71. P NMR (400 MHz, CDCl): δ (ppm) 18.25.
2
3
2
4
3
1
1
[00179] Стадия 4: 1.3-бис(трет-бутоксикарбонил)-2-метил-2-тиопсевдомочевину (50.0 г, 172.1 ммоль, 1.0 экв.) растворили в 400 мл ДМФ. Аминопропан-3-ол (52.5 мл, 688.0 ммоль, 4.0 экв.) добавили по каплям с последующим диметиламинопиридином (2.1 г, 17.2 ммоль, 0.1 экв.). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 4 ч. Реакционную смесь растворили в 4 л EtO. Органическую фазу промыли с помощью 800 мл водного 0.1 М АсОН, 800 мл насыщенного водного NaHCO, 800 мл HO и 800 мл солевого раствора. Органическую фазу высушили над MgSO, отфильтровали и сконцентрировали под вакуумом. Соединение 5 получили в виде белого осадка (51.1 г, колич. выход, 95% чистота (Н NMR)). H NMR (250 MHz, CDCl): δ (ppm) 1.47 (s, 9H), 1.50 (s, 9H), 1.64-1.76 (m, 2H), 3.52-3.63 (m, 4H), 8.42-8.61 (br s, 1H), 11.44 (s, 1H).
[00180] Стадия 5 и 5': 1.2 экв. альдегида получили реакцией Хорнера-Водсворта-Эммонса (1.0 экв. соединения 4).
2
3
2
2
4
3
1
[00181] Стадия 5: В 2 л колбе соединение 5 (20.5 г, 64.6 ммоль, 1.2 экв.) растворили в ДХМ (стабилизированный через амилен, 410 мл). Пиридин (30.9 мл, 465.1 ммоль, 7.2 экв.) добавили с последующим Периодинаном Десса-Мартина (29.7 г, 70 ммоль, 1.3 экв.). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч. Насыщенный водный раствор NaCO (600 мл) и 300 мл EtO добавили. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 10 мин. Полученную суспензию отфильтровали через целит. Добавили 1.1 л EtO и органическую фазу промыли водой (3×1 л).Органическую фазу высушили над MgSO, отфильтровали и сконцентрировали под вакуумом. Альдегид 6 получили в виде желтого масла (22.1 г, колич.) и использовали сразу на следующей стадии без очистки. H NMR (400 MHz, CDCl): δ (ppm) 1.48 (s, 9H), 1.50 (s, 9H), 2.79 (t, J=6.0 Hz, 2H), 3.74 (q, J=6.4 Hz, 2H), 8.56-8.64 (m, 1H), 9.83 (s, 1H), 11.44 (s, 1 Н).
3
3
2
4
6
6
2
31
1
1
13
[00182] Стадия 5': В 500 мл колбе в атмосфере аргона соединение 4 (36.1 г, 53.4 ммоль, 1.0 экв.) растворили в 300 мл безводного CHCN. Безводный хлорид лития (2.73 г, 64.1 ммоль, 1.2 экв.) добавили и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин. Альдегид 6 (22.1 г) растворили в 40 мл безводного CHCN. Раствор добавили в реакционную смесь, затем диизопропилэтиламин (10.83 мл, 64.1 ммоль, 1.2 экв.) добавили по каплям. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3-4 дней. Реакцию контролировали P NMR. После завершения добавили 1 л EtOAc и органическую фазу промыли с помощью 100 мл HO. Органическую фазу высушили над MgSO, отфильтровали и сконцентрировали под вакуумом. После ВЭЖХ анализа, установили соотношение Z/E как 86/14. Неочищенный продукт очистили посредством колоночной хроматографии на силикагеле (40-63 мкм, поры 60 , 1.5 кг, 3/2 петролейный эфир/EtOAc ≈ 2L, затем 1/1 петролейный эфир/EtOAc ≈ 3 л, затем 2/3 петролейный эфир/EtOAc). Получили 3 фракции, первая из них содержала алкен Е, вторая - смесь алкенов Z и Е, и третья - алкен Z с хорошей чистотой (>95% по данным ВЭЖХ). Вторую фракцию очистили снова посредством колоночной хроматографии. После объединения различных фракций, (Z)-7 получили в виде белой пены (30.0 г, 71% выход, 90% чистота (Н NMR)). (Z)-7: H NMR (400 MHz, DMSO-d): δ (ppm) 1.23-1.46 (m, 31 H), 1.53-1.68 (m, 2H), 2.31-2.36 (m, 2H), 2.90 (br s, 2H), 3.37 (br s, 2H), 3.64 (s, 3H), 4.08-4.26 (m, 4H), 6.41-6.43 (m, 1H), 6.77-6.79 (m, 1H), 7.31-7.34 (m, 2H), 7.39-7.42 (m, 2H), 7.52-7.54 (m, 1H), 7.70-7.73 (m, 2H), 7.87-7.90 (m, 2H), 8.37-8.41 (m, 1H), 9.32 (br s, 1H), 11.47 (br s, 1H). C NMR (100 MHz, DMSO-d): δ (ppm) 22.74, 27.34, 27.55, 27.95, 28.25, 29.23, 31.51, 46.63, 51.87, 54.42, 65.61, 77.30, 78.12, 82.80, 120.06, 125.28, 127.01, 127.59, 128.04, 132.93, 140.67, 143.73, 143.84, 151.85, 155.27, 155.51, 155.93, 163.04, 164.39, 171.31. NOESY эксперимент (2D NMR) показал ясное взаимодействие между CH, соседним к винильному СН и NH амидной связи, дающее Z стереохимию двойной связи. Для подтверждения этому провели эксперимент NOESY на другом изомере и он показал ясное взаимодействие между винильным СН и NH амидной связи, давая Е стереохимию двойной связи.
2
2
2
4
6
6
6
1
13
+
1
+
[00183] Стадия 6: Получили 1 л 0.8 М раствора CaCl в смеси iPrOH/HO (7/3). (Z)-соединение 7 (30.0 г, 35.8 ммоль, 1.0 экв.) растворили в 580 мл 0.8 М раствора СаСl. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 20 мин, затем охладили до 0°С и водный NaOH (1 М, 71.6 мл, 71.6 ммоль, 2.0 экв.) добавили по каплям. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч, затем добавили EtOAc и насыщенный водный раствор NHCl. Водную фазу экстрагировали дважды с помощью EtOAc. Объединенные органические фазы промыли солевым раствором. Органическую фазу сконцентрировали под вакуумом. Неочищенную смесь очистили посредством колоночной хроматографии на силикагеле (40-63 мкм, поры 60 , 1 кг, неочищенная смесь абсорбированная на силикагеле, 100% ДХМ, затем МеОН/ДХМ 2/98, 4/96, 6/94, 8/92 10/90). (Z)-соединение 8 получили в виде белой пены (17.0 г, 55% выход, >95% чистота (ЖХ-МС)). H NMR (400 MHz, DMSO-d): δ (ppm) 1.23-1.46 (m, 31H), 1.55-1.71 (m, 2H), 2.22-2.26 (m, 2H), 2.90 (br s, 2H), 3.37 (br s, 2H), 4.08-4.29 (m, 4H), 6.26-6.34 (m, 1H), 6.75-6.78 (m, 1H), 7.29-7.33 (m, 2H), 7.38-7.42 (m, 2H), 7.57-7.60 (m, 1H), 7.70-7.74 (m, 2H), 7.84-7.89 (m, 2H), 8.32-8.34 (m, 1H), 8.94 (br s, 1H), 11.49 (br s, 1H). С NMR (100 MHz, DMSO-d): δ (ppm) 22.91, 27.54, 27.95, 28.23, 29.20, 31.60, 46.64, 54.92, 65.66, 77.26, 78.09, 82.77, 120.03, 121.34, 125.28, 127.01, 127.24, 127.56, 128.87, 140.66, 143.72, 143.84, 151.94, 155.22, 155.50, 155.99, 163.04, 170.19. ЖХ-МС (0.7 мл/мин; 60:40 до 10:90 воды (0.1% ТФУ)/АсСN за 25 мин): Rt=17.30 мин, 90% (254 нм), [М+Н]=823. Аналогичную реакцию провели с использованием в качестве исходного вещества (Е)-соединения 7 с получением соответствующего (Е)-соединения 8: H NMR (400 MHz, DMSO-d): δ (ppm) 1.23-1.46 (m, 31H), 1.55-1.71 (m, 2H), 2.60-2.68 (m, 2H), 2.90 (br s, 2H), 3.37 (br s, 2H), 3.96-4.02 (br s, 1H), 4.08-4.29 (m, 3H), 6.12-6.18 (m, 1H), 6.75-6.78 (m, 1H), 7.29-7.33 (m, 2H), 7.38-7.42 (m, 2H), 7.60-7.68_(m, 1H), 7.70-7.74 (m, 2H), 7.84-7.89 (m, 2H), 8.32-8.34 (m, 1H), 9.20 (br s, 1H), 11.49 (br s, 1H). ЖХ-МС (0.7 мл/мин; 60:40 до 10:90 воды (0.1% ТФУ)/АсСN за 25 мин): Rt=20.97 мин, 96% (254 нм), [M+H]=823.
[00184] Пример 3: Синтез некоммерческих аминокислотных структурных элементов: дипептид аланин-дигидроаргин.
1
6
[00185] Структурный элемент дипептид аланин-дигидроаргин получили в соответствии с методиками, описанными в Schmidt, U. and Wild, J. Ang. Chem. Int. Ed. 1984, 23, 991 (включено сюда посредством ссылки во всей полноте) и примененными в Berwe, M. et al., Org. Process Res. Dev. 2011, 15, 1348; and Freeman, N.S. et al., J. Org. Chem. 2011, 76, 3078 (каждый включен сюда посредством ссылки во всей полноте). Соединение получили, следуя методикам, описанным в примере 2, с использованием Fmoc-Ala-OH вместо Fmoc-Lys(Boc)-OH на Стадии 3. H NMR (400 MHz, DMSO-d): δ (ppm) 1.23-1.46 (m, 21 H), 2.90 (br s, 2H), 3.37 (br s, 2H), 4.08-4.29 (m, 4H), 6.26-6.34 (m, 1H), 6.75-6.78 (m, 1H), 7.29-7.33 (m, 2H), 7.38-7.42 (m, 2H), 7.70-7.74 (m, 2H), 7.84-7.89 (m, 2H), 8.32-8.34 (m, 1H), 8.94 (br s, 1H), 11.49 (br s, 1H).
2
2
5
2
2
4
2
2
3
2
2
2
2
[00186] Пример 4: Синтез пептидов с CONH, CONH(CH) NH, CONH(CH)NH, CONH(CH)NH и CONH(CH)NH в С-концевом положении.
[00187] Аналогичный протокол применяли для синтеза пептидов этого типа с использованием:
2
- Амидная смола Ринка для CONH в С-концевом положении. После первого набухания смолу повергли депротекции (раствор ДМФ/пиперидина (80:20, 4.0 мл) добавили к смоле; смесь встряхивали в течение 20 минут, затем отфильтровали под вакуумом для удаления растворителя. Эту стадию повторили один раз. ДМФ (2.5 мл) добавили; смесь встряхивали в течение 20 секунд, затем отфильтровали. Крышку и края пробирки промыли ДМФ (2.5 мл), встряхивали в течение 20 секунд и отфильтровали под вакуумом. Эту промывку повторили 4 раза. Реакционную пробирку заполнили МеОН (2.5 мл), встряхивали в течение 20 секунд и отфильтровали под вакуумом. Реакционную пробирку заполнили ДХМ (2.5 мл), встряхивали в течение 20 секунд и отфильтровали под вакуумом).
2
5
2
- 1,5-диамино пентан тритиловая смола для CONH(CH)NH в С-концевом положении
2
4
2
- 1,4- диамино бутан тритиловая смола для CONH(CH)NH в С-концевом положении
2
3
2
- 1,3- диамино пропан тритиловая смола для CONH(CH)NH в С-концевом положении
2
2
2
- 1,2- диамино этан тритиловая смола для CONH(CH)NH в С-концевом положении
[00188] Стадия 1: Набухание смоля. Смолу (1.0 экв., 0.08 ммоль) поместили в реакционную пробирку. ДХМ (3.0 мл) добавили для погружения всей смолы, смесь встряхивали в течение 30 мин. ДХМ удалили посредством фильтрации под вакуумом.
[00189] Стадия 2: Обычное связывание с HBTU. ДМФ (2.5 мл) добавили к набухшей смоле, смесь встряхивали в течение 20 секунд и растворитель удалили под вакуумом. Раствор первой аминокислоты или дипептида (3.0 экв., 0.24 ммоль) в ДМФ (1.3 мл) с DIPEA (4.0 экв., 0.32 ммоль, 55 мкл) добавили и встряхивали в течение 20 секунд. HBTU (2.9 экв., 0.23 ммоль, 88 м) добавили, реакционную пробирку закрыли крышкой и систему встряхивали в течение 60 мин. Раствор отфильтровали под вакуумом и связывание повторили дважды, за исключением реакции с дипептидом (одно связывание). Смесь отфильтровали под вакуумом, затем заполнили с помощью ДМФ (2.5 мл), встряхивали в течение 20 секунд и отфильтровали. Эту промывку повторили 4 раза. Реакционную пробирку заполнили МеОН (2.5 мл), встряхивали в течение 20 секунд и отфильтровали под вакуумом. Эту промывку повторили 4 раза. Реакционную пробирку заполнили с помощью ДХМ (2.5 мл), встряхивали в течение 20 секунд и отфильтровали под вакуумом. Эту промывку повторили 5 раз.
[00190] Стадия 3: Удаление Fmoc. К смоле, полученной в конце связывания (Стадия 2) добавили ДМФ (2.5 мл). Смесь встряхивали в течение 20 секунд, затем растворитель удалили посредством фильтрации под вакуумом. Раствор ДМФ/пиперидин (80:20, 4.0 мл) добавили к смоле; смесь встряхивали в течение 20 минут, затем отфильтровали под вакуумом. Эту стадию повторили один раз. ДМФ (2.5 мл) добавили; смесь встряхивали в течение 20 секунд, затем отфильтровали. Крышку и края пробирки промыли с помощью ДМФ (2.5 мл), встряхивали в течение 20 секунд и отфильтровали под вакуумом. Эту промывку повторили 4 раза. Реакционную пробирку заполнили МеОН (2.5 мл), встряхивали в течение 20 секунд и отфильтровали под вакуумом. Эту промывку повторили 4 раза. Реакционную пробирку заполнили с помощью ДХМ (2.5 мл), встряхивали в течение 20 секунд и отфильтровали под вакуумом. Эту промывку повторили 5 раз. Цикл со Стадии 2 до Стадии 3 повторили для каждой аминокислоты или дипептида последовательности. Два связывания проводили без последней аминокислоты (три связывания) при этом были введены защищенный аминотреонин (одно связывание, время увеличили до 120 мин) и дипептидсодержащий дегидроаргинин (одно связывание с последующим кэпированием).
2
[00191] Процедура кэпирования проводилась следующим образом: смола набухала в ДХМ (2.5 мл) и ее встряхивали в течение 20 секунд. Растворитель удалили посредством фильтрации. 0.8 мл 0.5 М раствора ACO/DIPEA в ДМФ добавили в реакционную пробирку, и пробирку встряхивали в течение 3 мин. Раствор удалили посредством фильтрации, затем добавили 1.3 мл такого же раствора, и пробирку встряхивали в течение 7 мин. Раствор удалили посредством фильтрации, и смолу промыли три раза с помощью ДХМ (2.5 мл). Кэпирование контролировали с помощью теста Кайзера. Если появлялся голубой цвет, стадию кэпирования повторяли один раз.
[00192] Стадия 4: Отщепление пептида от смолы и депротекция боковых цепей. После последнего удаления Fmoc, смолу осторожно промыли с помощью ДХМ (5*2.5 мл). 5 мл смеси для расщепления приготовили свежей (ТФУ/H2O/TIS, 85/7.5/7.5: 4.25 мл/0.4 мл/0.4 мл) и 2 мл добавили к смоле. Смесь встряхивали в течение 3 часов. Реакционную пробирку поместили на верх центрифужной пробирки, содержащей 30 мл холодного (0°С) перемешанного ТВМЕ. Раствор из реакционной пробирки добавили по каплям к холодному ТВМЕ. 2 мл смеси для расщепления снова добавили к смоле, смесь встряхивали в течение 20 мин и раствор добавили по каплям к предыдущему холодному раствору. Смесь перемешивали при 0°С в течение 30 мин. Полученный преципитат выделили центрифугированием (2,200 г, 5 мин), промыли холодным (0°С) ТВМЕ (10 мл) и затем центрифугировали снова (2,200 г, 5 мин). Полученный неочищенный продукт высушили на воздухе (3 часа) при комнатной температуре с получением коричневого масла. Неочищенный продукт растворили в воде (4 мл), раствор заморозили и лиофилизировали.
[00193] Стадия 5: Очистка. Неочищенный продукт растворили в воде milliQ (~100 мг/мл) и очистили, применив способ ВЭЖХ очистки, описанный в 2). Пробирки, содержащие чистый продукт объединили и раствор заморозили до -80°С и лиофилизировали с получением конечного продукта. Этот конечный продукт анализировали с помощью ВЭЖХ-МС, применив аналитический способ ВЭЖХ-МС для контроля конечной чистоты, описанный выше.
2
[00194] Пример 5: Синтез пептидов с лизином и СОН в С-концевом положении.
[00195] Хлортритиловую смолу (0.08 ммоль) поместили в реакционную пробирку. ДХМ (3.0 мл) добавили для набухания всей смолы и смесь встряхивали в течение 30 мин. ДХМ удалили посредством фильтрации под вакуумом. Fmoc-Lys-OAll.HCl (3.0 экв.) растворили с минимальным количеством ДХМ (1 мл) для достижения полного растворения. DIPEA (5.0 экв.) добавили и раствор интенсивно перемешали. Раствор незамедлительно добавили к смоле. Реакционную пробирку закрыли крышкой и систему встряхивали в течение 60 мин. Раствор отфильтровали под вакуумом и методику повторили один раз. Смолу промыли с помощью ДМФ (2.5 мл), встряхивали в течение 20 секунд и отфильтровали. Эту промывку повторили дважды. Смесь ДХМ/MeOH/DIPEA (80/15/5) (1 мл) добавили к смоле. Реакционную пробирку закрыли крышкой и систему встряхивали в течение 10 мин. Раствор отфильтровали под вакуумом и процесс повторили один раз. Смесь отфильтровали под вакуумом, затем добавили ДМФ (2.5 мл), встряхивали в течение 20 секунд и отфильтровали. Крышку и края пробирки промыли с помощью ДМФ (2.5 мл), встряхивали в течение 20 секунд и отфильтровали под вакуумом. Эту промывку повторили дважды. Раствор ДМФ/пиперидин (80:20, 4.0 мл) добавили к смоле, смесь встряхивали в течение 20 минут, затем отфильтровали под вакуумом для удаления растворителя. Эту стадию повторили один раз. ДМФ (2.5 мл) добавили, смесь встряхивали в течение 20 секунд, затем отфильтровали. Крышку и края пробирки промыли с помощью ДМФ (2.5 мл), встряхивали в течение 20 секунд и отфильтровали под вакуумом. Эту промывку повторили 4 раза. Реакционную пробирку заполнили изопропанолом (2.5 мл), встряхивали в течение 20 секунд и отфильтровали под вакуумом. Эту промывку повторили дважды. Реакционную пробирку заполнили гексаном (2.5 мл), встряхивали в течение 20 секунд, и отфильтровали и высушили под вакуумом в течение 24 часов.
[00196] Цикл со Стадии 2 до Стадии 3, описанный в примере 4, повторили для каждой аминокислоты или дипептида последовательности.
[00197] После присоединения последней аминокислоты, С-концевое положение подвергли депротекции с использованием следующего протокола:
[00198] Тетракис(трифенилфосфин)палладий(0) (0.1 экв.) растворили в ДХМ (1.3 мл). Фенилсилан (10.0 экв.) добавили к раствору и этот раствор ввели в реакционную пробирку. Смесь встряхивали в течение 45 минут, затем отфильтровали под вакуумом. Раствор N,N-диэтилдитиокарбамата натрия (0.02 М в ДМФ, 4 мл) добавили к смоле, смесь встряхивали в течение 15 минут, затем отфильтровали под вакуумом для удаления растворителя. Эту стадию повторили дважды. ДМФ (2.5 мл) добавили к смоле и смесь встряхивали в течение 20 секунд, затем отфильтровали. Крышку и края пробирки промыли с помощью ДМФ (2.5 мл), встряхивали в течение 20 секунд и отфильтровали под вакуумом. Эту промывку повторили 4 раза.
[00199] N-концевое положение подвергли депротекции в соответствии со Стадией 3, описанной в примере 4. Отщепление пептида от смолы и депротекция боковых цепей проводились в соответствии со Стадией 4, описанной в Примере 4. Заключительная очистка проводилась в соответствии со Стадией 5, описанной в Примере 4.
2
[00200] Пример 6. Синтез пептидов с дигидроаргинином и СОН в С-концевом положении.
2
[00201] Хлортритиловую смолу (0.08 ммоль) поместили в реакционную пробирку. ДХМ (3.0 мл) добавили для набухания всей смолы и смесь встряхивали в течение 30 мин. ДХМ удалили посредством фильтрации под вакуумом. Дипептид Fmoc-Lys(Вос)-α,β-дегидроArg(Вос)-ОН (3.0 экв.) растворили с минимальным количеством ДХМ (1 мл) для достижения полного растворения. DIPEA (4.0 экв.) добавили и раствор тщательно перемешали. Раствор незамедлительно добавили к смоле. Реакционную пробирку закрыли крышкой и систему встряхивали в течение 60 мин. Раствор отфильтровали под вакуумом и процедуру повторили один раз. Смолу промыли с помощью ДМФ (2.5 мл), встряхивали в течение 20 секунд и отфильтровали. Эту промывку повторили дважды. Смесь ДХМ/MeOH/DIPEA (80/15/5) (1 мл для 0.08 ммоль смолы) добавили к смоле. Реакционную пробирку закрыли крышкой и систему встряхивали в течение 10 мин. Раствор отфильтровали под вакуумом и процедуру повторили один раз. Смесь отфильтровали под вакуумом, затем добавили ДМФ (2.5 мл), встряхивали в течение 20 секунд и отфильтровали. Крышку и края пробирки промыли с помощью ДМФ (2.5 мл), встряхивали в течение 20 секунд и отфильтровали под вакуумом. Эту промывку повторили дважды. Раствор ДМФ/пиперидин (80:20, 4.0 мл) добавили к смоле, смесь встряхивали в течение 20 минут, затем отфильтровали под вакуумом для удаления растворителя. Эту стадию повторили один раз. ДМФ (2.5 мл) добавили, смесь встряхивали в течение 20 секунд, затем отфильтровали. Крышку и края пробирки промыли с помощью ДМФ (2.5 мл), встряхивали в течение 20 секунд и отфильтровали под вакуумом. Эту промывку повторили 4 раза. Реакционную пробирку заполнили изопропанолом (2.5 мл), встряхивали в течение 20 секунд и отфильтровали под вакуумом. Эту промывку повторили дважды. Реакционную пробирку заполнили гексаном (2.5 мл), встряхивали в течение 20 секунд и отфильтровали и высушили под вакуумом.
[00202] Цикл со Стадии 2 до Стадии 3, описанных в Примере 4 повторили для каждой аминокислоты или дипептида последовательности. N-концевое положение подвергли депротекции в соответствии со Стадией 3, описанной в Примере 4. Отщепление пептида от смолы и депротекция боковых цепей проводились в соответствии со Стадией 4, описанной в Примере 4. Заключительная очистка проводилась в соответствии со Стадией 5, описанной в Примере 4.
[00203] Пример 7. Синтез пептидов с эфирной группой в С-концевом положении.
[00204] Хлортритиловую смолу (0.08 ммоль) поместили в реакционную пробирку. ДХМ (3.0 мл) добавили для набухания всей смолы и смесь встряхивали в течение 30 мин. ДХМ удалили посредством фильтрации под вакуумом. Аллиловый эфир соответствующей Fmoc защищенной аминокислоты (без защиты по боковой цепи) (3.0 экв.) растворили с минимальным количеством ДХМ (1 мл) для наблюдения полного растворения. DIPEA (5.0 экв.) добавили и раствор тщательно перемешали. Раствор незамедлительно добавили к смоле. Реакционную пробирку закрыли крышкой и систему встряхивали в течение 60 мин. Раствор отфильтровали под вакуумом и процедуру повторили один раз. Смолу промыли с помощью ДМФ (2.5 мл), встряхивали в течение 20 секунд и отфильтровали. Эту промывку повторили дважды. Смесь ДХМ/MeOH/DIPEA (80/15/5) (1 мл) добавили к смоле. Реакционную пробирку закрыли крышкой и систему встряхивали в течение 10 мин. Раствор отфильтровали под вакуумом и все процессы повторили один раз. Смесь отфильтровали под вакуумом, затем добавили ДМФ (2.5 мл), встряхивали в течение 20 секунд и отфильтровали. Крышку и края пробирки промыли с помощью ДМФ (2.5 мл), встряхивали в течение 20 секунд и отфильтровали под вакуумом. Эту промывку повторили дважды. К смоле добавили ДМФ (2.5 мл). Смесь встряхивали в течение 20 секунд, затем растворитель удалили посредством фильтрации под вакуумом.
[00205] Тетракис(трифенилфосфин)палладий(0) (0.1 экв.) растворили в ДХМ (1.3 мл). Фенилсилан (10.0 экв.) добавили к раствору и этот раствор поместили в шприц. Смесь встряхивали 45 минут, затем отфильтровали под вакуумом. Раствор натрия N,N-диэтилдитиокарбамата (0.02 М в ДМФ, 4 мл) добавили к смоле, смесь встряхивали в течение 15 минут, затем отфильтровали под вакуумом для удаления растворителя. Эту стадию повторили дважды. ДМФ (2.5 мл) добавили к смоле и смесь встряхивали в течение 20 секунд, затем отфильтровали. Крышку и края пробирки промыли с помощью ДМФ (2.5 мл), встряхивали в течение 20 секунд и отфильтровали под вакуумом. Эту промывку повторили 4 раза.
[00206] Реакция Мицунобу: Смолу промыли тремя малыми объемами безводного ТГФ для удаления следовых количеств воды. Трифенилфосфин (5.0 экв.) поместили в маленькую пробирку и растворили в минимальном количестве безводного ТГФ (приблизительно 1.3 мл). Безводный спирт ROH добавили (10.0 экв.) и получившийся раствор перенесли в реакционную пробирку, содержащую смолу. DIAD (5.0 экв.) добавили по каплям. После того как добавление DIAD завершили, реакционную пробирку закрыли и встряхивали в течение 15 минут.Смесь отфильтровали под вакуумом, затем добавили ДМФ (2.5 мл), встряхивали в течение 20 секунд и отфильтровали. Крышку и края пробирки промыли с помощью ДМФ (2.5 мл), встряхивали в течение 20 секунд и отфильтровали под вакуумом. Эту промывку повторили три раза и реакцию Мицунобу повторили один раз.
[00207] Раствор ДМФ/пиперидин (80:20, 4.0 мл для 0.08 ммоль смолы) добавили к смоле, смесь встряхивали в течение 20 минут, затем отфильтровали под вакуумом для удаления растворителя. Эту стадию повторили один раз. ДМФ (2.5 мл) добавили, смесь встряхивали в течение 20 секунд, затем отфильтровали. Крышку и края пробирки промыли с помощью ДМФ (2.5 мл), встряхивали в течение 20 секунд и отфильтровали под вакуумом. Эту промывку повторили 4 раза. Реакционную пробирку заполнили изопропанолом (2.5 мл), встряхивали в течение 20 секунд и отфильтровали под вакуумом. Эту промывку повторили дважды. Реакционную пробирку заполнили гексаном (2.5 мл), встряхивали в течение 20 секунд и отфильтровали и высушили под вакуумом в течение 24 часов.
[00208] Цикл со Стадии 2 до Стадии 3, описанных в Примере 4 повторили для каждой аминокислоты или дипептида последовательности. N-концевое положение подвергли депротекции в соответствии со Стадией 3, описанной в Примере 4. Отщепление пептида от смолы и депротекция боковых цепей проводились в соответствии со Стадией 4, описанной в Примере 4. Заключительная очистка проводилась в соответствии со Стадией 5, описанной в Примере 4.
[00209] Пример 8. Синтез пептидов, содержащих N-Me амино-кислоты или α,β-дегидроаминомасляную кислоту.
[00210] Для введения N-Me амино кислот или α,β-дегидроаминомасляной кислоты в последовательность, особую методику использовали для связывания этих аминокислот и для соединения последующей аминокислоты. Для оставшегося синтеза использовали описанные ранее методики.
[00211] ДМФ (2.5 мл) добавили к набухшей смоле, смесь встряхивали в течение 20 секунд и растворитель удалили под вакуумом. Fmoc-защищенную N-Me аминокислоту или α,β-дегидроаминомасляную кислоту (3.0 экв.) и HATU (2.9 экв.) растворили в минимальном количестве ДМФ (1.3 мл). DIPEA (6.0 экв.) добавили и раствор тщательно перемешали. Раствор незамедлительно добавили к подвергнувшейся N-депротекции пептидиловой смоле. Реакционную пробирку закрыли крышкой и систему встряхивали в течение 60 мин. Раствор отфильтровали под вакуумом, и присоединение повторили один раз. Смесь отфильтровали под вакуумом, затем добавили ДМФ (2.5 мл), встряхивали в течение 20 секунд и отфильтровали. Крышку и края пробирки промыли с помощью ДМФ (2.5 мл), встряхивали в течение 20 секунд и отфильтровали под вакуумом. Эту промывку повторили один раз. Реакционную пробирку заполнили МеОН (2.5 мл), встряхивали в течение 20 секунд и отфильтровали под вакуумом. Реакционную пробирку заполнили с помощью ДХМ (2.5 мл), встряхивали в течение 20 секунд и отфильтровали под вакуумом. Эту промывку повторили 4 раза.
[00212] Пример 9. Соединения, синтезированные в Примерах 1-8 и аналитические данные (Таблица 1).
[00213]
[00214] Пример 10. Антибактериальная активность.
[00215] Методика определения минимальной ингибирующей концентрации (MIC) выполнялась в соответствии с рекомендациями CLSI (Clinical and Laboratory Standards Institute, Methods for Dilution Antimicrobial Susceptibility Tests for Bacteria that Grow Aerobically- Ninth Edition: Approved Standard M07-A9, 2012). Применяемый способ называется Микроразведение в бульоне (Broth Microdilution).
[00216] Для оценки антибактериальной активности использовались следующие референсные штаммы: Pseudomonas aeruginosa АТСС 27853, Escherichia coli ATCC 25922, Staphylococcus aureus ATCC 13709, Klebsiella pneumoniae ATCC 43816 and Acinetobacter baumannii ATCC 19606. Для оценки антибактериальной активности использовались следующие штаммы Е.coli и K. pneumoniae с множественной лекарственной устойчивостью: Ес#1 (NCTC13476), Ес#2 (MIN), Ес#3 (EGB957), Ес#4 (GUE), Ес#5 (DSM22315), Kp#1 (NCTC13439), Kp#2 (DUB), Kp#3 (А33504), Kp#4 (ATCC ВАА1904), Kp#5 (6560). Профили резистентности этих штаммов даны в Таблице 2.
[00217]
[00218]
[00219] Способ микроразведения в бульоне:
- Тестовой средой был бульон Мюллера-Хинтона со стандартизированным содержанием катионов (САМНВ)
- Приготовили посевную культуру взятием непосредственно 3 мл САМНВ суспензии выделенных колоний, отобранных из 18- до 24-часовой чашки с агаровой средой Мюллера-Хинтона с достижением абсорбции при 600 нм (А600) от 0.11 до 0.15.
- Развели суспензию 1:20 в физрастворе.
- Дозировали 100 мкл стерильной воды во все периферические лунки 96 луночного микротитровального планшета
- Дозировали 190 мкл среды САМНВ в лунки столбца 2 и 100 мкл САМНВ во все лунки столбцов 3-11.
- Поместили с помощью пипетки 10 мкл 1.28 мг/мл раствора антибиотиков в лунки столбца 2.
- Смешали антибиотики в лунках в столбце 2 пипетированием 6-8 раз.
- Набрали 100 мкл из столбца 2 и добавили их в столбец 3. Это сделало столбец 3 двойным разведением столбца 2.
- Повторили процедуру вплоть до столбца 10. Протестировали антибиотики в конечных концентрациях (полученных из серийных двукратных разведений) в диапазоне от 0.25 до 64 мкг/мл.
- Убрали 100 мкл из столбца 10.
5
- Дозировали 10 мкл суспензии бактерий в лунки столбцов 2-10. Не добавляли бактерии в колонку 11 (контроль стерильности). Подходящая плотность для посевного материала для стандартной MIC составляет 5×10 КОЕ/мл.
- Засеянные микропланшеты инкубировали при 35°С в течение 16- до 20-часов перед считыванием.
[00220] MIC определяли как наименьшая концентрация антибиотика, которая не давала видимого роста. Результаты активности показаны в Таблице 3 и Таблице 4.
[00221]
Sa: MIC Staphylococcus aureus ATCC 13709
Ec: MIC Escherichia coli ATCC 25922
Kp: MIC Klebsiella pneumoniae ATCC 43816
Pa: MIC Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853
Ab: MIC Acinetobacter baumannii ATCC 19606
++: ≤ 8 мкг/мл
+: ≤32 мкг/мл
-: >32 мкг/мл
[00222]
[00223] Пример 11. Взаимодействие с кальциевыми каналами.
125
Взаимодействие с кальциевыми каналами N-типа оценивалось с помощью конкурентного анализа связывания с радиоактивной меткой, применяя методику, описанную Wagner et al. (J. Neurosci. 8: 3354-3359). Кальциевые каналы N-типа получили из коры головного мозга крыс, и инкубировали с [I]ω-конотоксином GVIA (0.001 нМ). Добавили исследуемые молекулы, и реагенты инкубировали в течение 30 минут при комнатной температуре. Смещение связывания контролировали с помощью сцинтиляционного подсчета.
[00224]
А: ≤ 30 нМ
В: >300 нМ
[00225] Пример 12. Нагрузка в мышиной модели перитонита/сепсиса с аналогом 24.66
8.1
Самки мышей CD-1 (вес, 25 г; Charles River) использовались для исследования. Шесть групп по 8 мышей инокулировали интраперитонеальными (i.p.) инъекциями 0.5 мл суспензии Klebsiella pneumoniae ATCC ВАА2470, содержащей 10 КОЕ/мл в 0.9% стерильном физрастворе и 5% (мас./об.) муцине. Один час спустя после бактериальной нагрузки в день 0, мышей обработали внутривенно (i.v.) с помощью растворов антибиотика, составленного в 0.9% стерильном физрастворе.
50
Четырем группам вводили единственную болюсную дозу аналога 24.66 при 6 мг/кг, 12.5 мг/кг, 25 мг/кг и 50 мг/кг, соответственно. Одной группе вводили единственную болюсную дозу тигециклина при 20 мг/кг. Одна группа не получала лечения. Мышей наблюдали 24 часа после инъекции посевного материала (Таблица 1). ED аналога 24.66 оценивали с использованием GraphPad Prism 6.05, и подсчитали как 20.4 мг/кг.
[00226] Пример 13. Нагрузка в мышиной модели перитонита/сепсиса с Одилорабдином А
7.7
Самки мышей CD-1 (вес, 20 г; Charles River) использовались для исследования. Шесть групп по 6-8 мышей инокулировали интраперитонеальными (i.p.) инъекциями 0.5 мл суспензии Klebsiella pneumoniae ATCC ВАА2470, содержащей 10 КОЕ/мл в 0.9% стерильном физрастворе и 5% (мас./об.) муцине. Один час спустя после бактериальной нагрузки в день 0, мышей обработали внутривенно (i.v.) с помощью растворов антибиотика, составленного в 0.9% стерильном физрастворе.
50
Четырем группам вводили единственную болюсную дозу Одилорабдина А при 5 мг/кг, 10 мг/кг, 15 мг/кг и 20 мг/кг, соответственно. Одной группе вводили единственную болюсную дозу тигециклина при 15 мг/кг. Одна группа не получала лечения. Мышей наблюдали 24 часа после инъекции посевного материала (Таблица 1). ED Одилорабдина А оценивали с использованием GraphPad Prism 6.05, и подсчитали как 13.9 мг/кг (Фиг. 1). Одилорабдин А и аналог 24.66 обладали аналогичной эффективностью в этой мышиной модели перитонита/сепсиса K. pneumoniae NDM-1.
Фиг. 1. Нагрузка Одилорабдина А и аналога 24.66 в мышиной модели перитонита/сепсиса выживание в %=f(доза в мг/кг), пустые треугольники - Одилорабдин А, закрашенные треугольники - аналог 24.66
50
[00227] Пример 14. Переносимость Одилорбина А и аналога 24.66 у мышей Самки мышей CD-1 (вес, 20 г; Charles River) использовались для исследования. Семь рупп по 5 мышей инокулировали внутривенными (i.v.) инъекциями с помощью растворов антибиотика, составленного в 0.9% стерильном физрастворе. Пяти группам вводили единственную болюсную дозу Одилорабдина А при 5 мг/кг, 10 мг/кг, 15 мг/кг и 20 мг/кг и 30 мг/к, соответственно. Шести группам вводили единственную болюсную дозу аналога 24.66 при 100 мг/кг, 200 мг/кг, 300 мг/кг, 400 мг/кг, 500 мг/кг, и 600 мг/кг, соответственно. Мышей наблюдали 24 часа после инъекции антибиотика. LD Одилорабдина А и аналога 24.66 оценивали с использованием GraphPad Prism 6.05, и подсчитали как 18.6 мг/кг и 494.3 мг/кг, соответственно (Фиг.2).
Фиг 2. Переносимость Одилорабдина А и аналога 24.66 в мышиной модели перитонита/сепсиса выживание в %=f(доза в мг/кг), пустые треугольники - Одилорабдин А, закрашенные треугольники - аналог 24.66
[00228] Несмотря на то, что изобретение было описано и проиллюстрировано в приведенных выше иллюстративных вариантах осуществления, понятно, что настоящее раскрытие было сделано только в качестве примеров, и что многочисленные изменения в деталях осуществления изобретения могут быть сделаны без отхода от сущности и объема изобретения, который ограничен только следующей формулой изобретения. Признаки раскрытых вариантов осуществления могут быть комбинированы и/или перегруппированы различными способами в пределах объема и сущности изобретения для получения дополнительных вариантов осуществления, которые также входят в объем изобретения. Специалисты в данной области техники узнают или смогут установить, используя не более чем обычные эксперименты, многочисленные эквиваленты конкретных вариантов осуществления, описанных конкретно в этом раскрытии. Такие эквиваленты также охватываются следующей формулой изобретения.