СПОСОБ РЕКОМБИНАНТНОГО ПОЛУЧЕНИЯ СТИМУЛИРУЮЩЕГО ЭРИТРОПОЭЗ БЕЛКА

1. Способ получения обладающего биологической активностью in vivo стимулирующего эритропоэз белка, заключающийся в том, что
(а) выращивают в приемлемых условиях в питательной среде клетки-хозяина, трансформированные или трансфектированные выделенной последовательностью ДНК, которую выбирают из группы, включающей (I) последовательности ДНК, которые представлены в SEQ ID No.1 и SEQ ID No.2, (II) кодирующую белок последовательность, которая представлена в SEQ ID No.3, и (III) последовательности ДНК, которые гибридизуются в строгих условиях с последовательностями ДНК, указанными в (I) и (II), или их комплементарными цепями; и
(б) выделяют из них продукт, представляющий собой эритропоэтин.
2. Способ получения обладающего биологической активностью in vivo продукта, представляющего собой эритропоэтин, заключающийся в том, что трансформируют клетку-хозяина синтезированной последовательностью ДНК, которая кодирует аминокислотную последовательность эритропоэтина, представленную в SEQ ID No.3, и выделяют продукт, представляющий собой эритропоэтин, из клетки-хозяина или ее питательной среды.
3. Способ по п.1 или 2, в котором клетки-хозяева представляют собой клетки млекопитающих.
4. Способ по п.1 или 2, в котором клетки-хозяева предпочтительно представляют собой клетки СНО К1.
5. Способ получения гликозилированного полипептида эритропоэтина, который обладает биологической активностью in vivo, приводящей к повышению производства клетками костного мозга ретикулоцитов и эритроцитов, заключающийся в том, что
а) выращивают в приемлемых условиях в питательной среде клетки млекопитающих, которые содержат промоторную ДНК, отличную от промоторной ДНК человеческого эритропоэтина, которая функционально связана с ДНК, кодирующей аминокислотную последовательность зрелого человеческого эритропоэтина, которая представлена в SEQ ID No.3; и
б) выделяют гликозилированный полипептид эритропоэтина, экспрессируемый указанными клетками.
6. Способ по п.5, в котором промоторная ДНК представляет собой вирусную промоторную ДНК.
7. Способ получения обладающего биологической активность in vivo представляющего собой эритропоэтин продукта, заключающийся в том, что трансформируют клетку-хозяина векторной конструкцией, показанной на фиг.10 или 11, и выделяют представляющий собой эритропоэтин продукт из клетки-хозяина или ее питательной среды.
8. Способ по п.7, в котором вектор представляет собой специфический для клеток млекопитающих экспрессионный вектор и наиболее предпочтительно вектор, показанный на фиг.10 и 11.
9. Фармацевтическая композиция, содержащая в терапевтически эффективном количестве человеческий эритропоэтин и фармацевтически приемлемый разбавитель, адъювант или носитель, где эритропоэтин очищают из клеток млекопитающих, выращенных в культуре.
10. Способ увеличения и поддержания гематокритного числа у млекопитающего, заключающийся в том, что вводят в терапевтически эффективном количестве гипергликозилированный аналог эритропоэтина в составе фармацевтической композиции по п.9, причем для получения сопоставимого воздействия на гематокритное число аналог вводят реже, чем взятый в эквивалентном молярном количестве рекомбинантный человеческий эритропоэтин.