СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРЕПАРАТА ДЛЯ КОРМЛЕНИЯ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ ЖИВОТНЫХ И ПТИЦЫ И СПОСОБ ПРИГОТОВЛЕНИЯ КОРМА НА ЕГО ОСНОВЕ
METHOD FOR PRODUCTION OF PREPARATION FOR FEEDING FARM ANIMALS AND BIRDS AND METHOD FOR PREPARATION OF FODDER BASED ON IT

Изобретение относится к комбикормовой промышленности, а именно к получению кормовых добавок и кормов для сельскохозяйственных животных и птицы с высокой ферментативной (целлюлозной) активностью, улучшенными пробиотическими свойствами и обладающей одновременно антимикробными свойствами.
Современное состояние отечественного животноводства определяется состоянием кормовой базы и особенно качеством кормов.
Повышение качества кормов, их переваримости, рационального использования является самой насущной задачей практики современного животноводства. Возможности повышения продуктивности различных видов сельскохозяйственных животных и птицы на основе повышения усвоения питательных веществ кормов могут быть реализованы за счет использования новых биологически активных препаратов.
Наиболее эффективными путями использования микробиологических препаратов в животноводстве является создание препаратов-пробиотиков на основе микроорганизмов, чаще всего выделенных из желудочно-кишечного тракта животных.
К настоящему времени установлено, что по эффективности применения пробиотики не уступают антибиотикам кормового и ветеринарного назначения, не оказывая при этом побочного действия на организм животного и микрофлору желудочно-кишечного тракта, являясь экологически чистыми. Ранее пробиотические препараты использовались в основном в ветеринарной медицине для профилактики и лечения у животных заболеваний желудочно-кишечного тракта инфекционной природы, стимуляции неспецифического иммунитета, коррекции дисбактериозов, возникающих вследствие резкого изменения состава комбикормов, нарушения режимов кормления и содержания, применения антибиотиков и некоторых других антибактериальных химиотерапевтических средств. Однако теперь пробиотики все чаще стали использовать в зоотехнической практике - для замены кормовых антибиотиков, повышения переваримости корма, стимуляции роста и продуктивности птицы. Ассортимент пробиотических препаратов расширяется. Более того, выяснилось, что совмещение пробиотической и ферментативной активности в одном продукте усиливает его действие. Таким образом использование пробиотических препаратов в рационах животных и птицы способствует улучшению использования питательных веществ, позволяет повысить их продуктивность, снизить затраты кормов на единицу продукции.
Известно изобретение «Кормовая добавка БИОВИТОС» по патенту №2131677 (заявка №98108740 с приоритетом от 05.05.1998 г.) на имя НПФ «Аквазинэль» (г.Краснодар), публикация 20.06.1999 г.
Кормовая добавка, содержащая биологически активный компонент природного происхождения, дополнительно содержит антибиотик, причем в качестве биологически активного компонента природного происхождения использован биосорбент на основе дрожжей столовых и шампанских вин, причем поверхность частиц добавки имеет электрокинетический потенциал не менее 10 мВ. В частных случаях выполнения содержание антибиотика составляет 5-50 г на 1 кг готовой кормовой добавки; в качестве антибиотика использованы производные тетрациклина; биосорбент смешан с кормовыми дрожжами и/или пшеничными отрубями при их соотношении от 50:50 до 20:80. Добавка хорошо всасывается организмом, высокопитательна, при ее использовании уменьшается падеж животных.
К недостаткам кормов с антибиотиками относится то, что регулярное их использование приводит к развитию дисбактериоза у животных, снижению уровня специфической и неспецифической резистентности, появлению форм микроорганизмов, устойчивых к антибиотикам. Такие корма имеют "срок ожидания", когда кормление ими должно прекращаться за 30-40 дней до начала реализации животным, птицы или рыбы, что весьма неудобно. В развитых странах их применение вообще запрещено.
Перечисленные недостатки частично устраняются в способах приготовления кормов, в которых к компонентам корма добавляют пробиотики - препараты на основе микроорганизмов-симбионтов желудочно-кишечного тракта. По эффективности применения пробиотики не уступают антибиотикам кормового и ветеринарного назначения, но не оказывают побочного действия на организм животного и микрофлору кишечника, т.е. являются экологически безопасными. Их использование позволяет получить продукцию животноводства, не содержащую остатков химиотерапевтических антибиотических препаратов.
Известно изобретение «Способ приготовления кормовой добавки», описанное в заявке №2007120372 от 31.05.2007 г. на имя ГОУ ВПО «Орловский государственный технический университет» (Орел ГТУ), публикация 10.12.2008 г. Указанный способ приготовления кормовой добавки включает измельчение, смешивание компонентов, введение пробиотика на основе бактерий рода Bacillus в сухом (лиофилизированном) виде с последующим гранулированием, причем в кормовую смесь перед гранулированием вносят связующее вещество и гранулирование осуществляют при температуре 55-60°C.
Известно также изобретение «Способ приготовления корма» по патенту №2140165 (заявка №98114053 с приоритетом от 14.07.1998 г.) на имя ВНИИ Пресноводного рыбного хозяйства (Московская обл., Дмитровский р-н, пос. Рыбное), публикация 27.10.1999 г.
В данном способе корм или его компоненты предварительно измельчают, смешивают, вводят пробиотик на основе бактерий рода Bacillus в сухом (лиофилизированном) виде, затем полученную смесь нагревают острым паром до 65-95°C при экспозиции 5-10 с и гранулируют. При этом, в частности, в качестве пробиотика используют культуру Bacillus subtilis ВКПМ-В-4759 в количестве от 0,0002 до 0,002% от массы корма.
Известна группа изобретений «Штамм Escherichia coli - продуцент лизина, способ получения кормовой добавки, содержащей данный штамм, композиция, полученная этим способом, и способ кормления моногастричных животных и птиц» по патенту №2347807 (заявка №2007146038 с приоритетом от 13.12.2007 г.) на имя ООО "БИОРЕАКТОР" (Москва), опубликовано 27.02.2009 г.
Представлен штамм Escherichia coli "BioR.Prolyzer-4L" (B-9843), являющийся продуцентом лизина и предназначенный для кормления моногастричных животных и птиц с целью повышения их продуктивности. Изобретение также относится к добавке «Пролизэр-Биор», содержащей указанный штамм, нанесенный на носитель (выбран из ряда цеолитов, таких как глауконит, кормовой зернопродукт, пшеничные отруби, отходы кукурузной муки).
9
Там же описан способ кормления моногастричных животных и птиц, предусматривающий введение в корм добавки, которая представляет собой культуру указанного штамма, выращенного на среде с использованием перевара Хоттингера в температурном диапазоне 25-37°C в течение 6-12 часов до содержания живых микробных клеток (5-32)·10 на 1 мл.
Изобретения позволяют повысить полноценность аминокислотного питания моногастричных животных и птиц (в частности, поросят и цыплят-бройлеров), снизить себестоимость их мяса, а также снизить себестоимость корма для них.
Известна также группа изобретений «Бактериальный штамм, растительные экстракты для обработки, композиции, содержащие их, способы их получения и их терапевтическое и промышленное применение» по заявке в РФ №2003119151 от 30.06.2003 г. с конвенционным приоритетом от 30.11.2000 г. US 09/725846) на имя ДЗЕ БАЙО БЭЛЭНС КОРП. (IL), публикация в РФ 10.12.2004 г. В указанной группе изобретений описана пробиотическая композиция, содержащая жизнеспособные микроорганизмы штамма Escherichia coli BU-230-98 АТСС депозит № 202226 (DSM 12799) и препарат для сохранения жизнеспособности указанного штамма Escherichia coli.
Пробиотическая композиция, предназначенная для профилактики или лечения желудочно-кишечных инфекций или расстройств, для нормализации физиологической активности желудочно-кишечного тракта, для сохранения желудочно-кишечной микрофлоры или восстановления ее до нормы, для профилактики или лечения диареи.
В частном случае выполнения данной композиции указанный препарат включает в себя, по крайней мере, одну летучую фракцию (VF) из растительного экстракта, в частности полученную путем перегонки с водяным паром указанного растительного экстракта при пониженном давлении и температуре бани, не превышающей 38°C, причем, в частности, указанный растительный экстракт получают из части растения, выбранной из группы, состоящей из листьев, стеблей, корней и плода, в частности указанный растительный экстракт получают из растения, выбранного из группы, состоящей из овощного и травянистого растения, причем указанное овощное растение выбрано из группы, состоящей из культурной сои, люцерны, чеснока, свеклы и капусты, а травянистое растение выбрано из группы, состоящей из петрушки огородной, мяты и укропа огородного.
Описан также способ промышленного производства пробиотической композиции, где способ включает стадию суспендирования жизнеспособного микроорганизма Escherichia coli штамма BU-230-98 АТСС депозит № 202226 (DSM 12799) в препарате для сохранения жизнеспособности указанного штамма Escherichia coli.
Известно изобретение «Штамм бактерий Bacillus pantothenticus 1-85 для использования в гранулированных кормах» по патенту №2235772 (заявка 2003103720 с приоритетом от 29.01.2003 г.) на имя ООО «Биотроф», опубликовано 10.09.2004 г.
В данном изобретении в качестве бактериальной добавки в гранулированных кормах используют штамм Bacillus pantothenticus 1-85, обладающий высокой целлюлазной активностью и способный выдерживать кратковременное повышение температуры до 80°C. Штамм бактерий Bacillus pantothenticus 1-85 выделен из рубца лося Alces alces. Штамм депонирован в коллекции Всероссийского государственного научно-исследовательского института контроля, страндартизации и сертификации ветпрепаратов (ВГНКИ) 05.08.2002 под регистрационным номером Bacillus pantothenticus 1-85 ВГНКИ 02.08.05-ДЕП. Изобретение обеспечивает получение бактериального штамма для использования в гранулированных кормах для животных и птиц, обладающего высокой ферментативной (целлюлазной) активностью и способного выдерживать кратковременное повышение температуры до 80°C при сохранении титра. На основе указанного штамма разработан препарат Целлобактерин-Т, который отличается от других ферментативных и пробиотических препаратов уникальной термостабильностью.
Известен ферментативный препарат-пробиотик Целлобактерин на основе консорциума бактерий ВНИИСХМ №1-33, включающего Ruminococcus albus и Lactobacillus acidophilus, который используется в группе изобретений «Способ кормления цыплят и способ получения препарата для кормления цыплят» по патенту РФ №2171037 (заявка №2000110410 с приоритетом от 14.04.2000 г.), опубликовано 27.07.2001 г.
Штаммы указанных микроорганизмов депонированы в коллекции Всероссийского государственного научно-исследовательского института контроля, страндартизации и сертификации ветпрепаратов (ВГНКИ) 18.10.1999 г. под регистрационными номерами Ruminococcus albus 1-33 ДЕП и Lactobacillus acidophilus 1-33 ДЕП.
Способ кормления цыплят включает добавление в комбикорм ассоциации Ruminococcus albus 1-33 и Lactobacillus acidophilus 1-33 в соотношении 1:1 с допускаемым отклонением 20% с концентрацией микроорганизмов от 50 до 500 млн клеток на 1 мл раствора, а добавление препарата в корм производят из расчета по 0,1 г в сутки на 1 голову цыпленка.
Способ получения препарата для кормления цыплят заключается в том, что маточную культуру, содержащую консорциум бактерий 1-33, засевают в количестве 1-5% в питательную среду, состоящую из 5% подсолнечникового или соевого шрота и 95% водопроводной воды, которую предварительно стерилизуют в течение 20 мин при давлении 1 атм и pH 6,8-7,0, после чего охлаждают до температуры 35-40°C, а затем проводят культивирование в бутылях или ферментерах емкостью до 1000 л в течение 1 суток. Полученную бактериальную производственную культуру, содержащую консорциум бактерий 1-33, смешивают с подсолнечниковым или соевым шротом в соотношении от 1:1 до 1:2, затем, пропуская сухой воздух, высушивают при температуре 40-60°C до остаточной влажности 7-7,2% и далее высушенный препарат измельчают до размера частиц не более 2 мм. Указанный консорциум используется для улучшения переваримости корма цыплятами. Данный способ обеспечивает высокие привесы и сохранность сельскохозяйственных животных и птицы.
Описанный способ получения препарата и корма на его основе наиболее близок к заявляемым изобретениям по технической сущности и выбран в качестве прототипа.
Кроме того, в материалах диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук Лаптева Г.Ю. на тему «Разработка биологических препаратов для повышения питательности и эффективности использования кормов» содержатся сведения, подтверждающие положительные свойства Целлобактерина при его использовании в рационе крупного рогатого скота (телят), бройлеров, несушек и свиней (с диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский институт животноводства Российской академии сельскохозяйственных наук» по адресу: 142132, Московская обл. Подольский район, п.Дубровицы, ВНИИЖ, т/факс (4967)65-11-01.
В диссертации приведены сведения о том, что разработан ферментативный препарат-пробиотик Целлобактерин. Скармливание Целлобактерина в рационах бройлеров увеличивает среднесуточные привесы на 3-10% и снижает затраты корма на единицу привеса на 9-15% у бройлеров, у яичных молодок улучшает выравненность стада к началу продуктивного периода, что обеспечивает повышение яйценоскости на 8-12% и уменьшение затрат корма на продукцию на 5-7%. Включение Целлобактерина удешевляет рацион для несушек за счет более широкого использования подсолнечного шрота (до 20-30%) и отрубей, а также повышает устойчивость птицы к стрессам.
Однако известные способы получения кормовых добавок, в том числе таких как Целлобактерин и Целлобактерин-Т, а также кормов на их основе не позволяют получать препараты, обладающие не только высокой ферментативной (целлюлазной) активностью и хорошими пробиотическими свойствами, но одновременно и антимикробными свойствами.
Задачей заявляемой группы изобретений является улучшение зоотехнических показателей сельскохозяйственных животных и птицы путем разработки способа приготовления препарата-кормовой добавки, обладающего улучшенными комплексными функциональными свойствами: ферментными, пробиотическими и антимикробными, т.е. препарата-фитобиотика, а также способа приготовления корма на его основе.
Поставленная задача решается следующим образом.
5
6
Сначала выбирают бактерии, обладающие высокой, не менее 20% выше контроля, целлюлозолитической активностью и высокой пробиотической активностью, способные понижать концентрацию патогенных микроорганизмов в желудочно-кишечном тракте (ЖКТ) животных и птицы до титра не более 10 КОЕ/мг и проводят их селекцию на устойчивость к смеси эфирных масел растений: чеснока, эвкалипта, розмарина, тимьяна - путем их высева на агаризованные среды, содержащие в своем составе смесь эфирных масел указанных растений при их соотношении 1:1:1:1 с возможным отклонением ±5% и общей концентрацией эфирных масел от 0,2 до 20,0% к общей массе смеси, и осуществляют отбор для маточной культуры отселектированных бактерий с титром не менее 1·10 10 КОЕ/г.
Затем маточную культуру отселектированных бактерий, устойчивых к смеси эфирных масел растений, засевают в количестве 1-5% в питательную среду, состоящую из 2-7% подсолнечникового или соевого шрота и 98-93% водопроводной воды соответственно, которую предварительно стерилизуют в течение 15-25 мин при давлении 1-2 атм и pH 6,8-7,0, после чего охлаждают до температуры 35-40°C, а затем проводят культивирование в бутылях или ферментерах емкостью до 5000 л включительно в течение 1 суток.
После этого полученную культивированную бактериальную производственную культуру, содержащую отселектированные бактерии, устойчивые к смеси эфирных масел чеснока, эвкалипта, розмарина, тимьяна, смешивают с подсолнечниковым, соевым шротом или пшеничными отрубями в соотношении от 1:1 до 1:2.
После чего на полученную смесь из бактериальной производственной культуры со шротом подсолнечниковым, соевым или пшеничными отрубями наносят смесь эфирных масел чеснока, эвкалипта, розмарина и тимьяна при их соотношении 1:1:1:1 с возможным отклонением ±5% и общей концентрацией смеси эфирных масел в субстанции в пределах от 0,2 до 20%. Затем, пропуская сухой воздух, полученную смесь высушивают при температуре 40-60°C до остаточной влажности 7-7,2% и далее высушенный препарат - фитобиотик измельчают до размера частиц не более 2 мм.
Кормовая добавка в виде препарата-фитобиотика, полученного описанным способом, названа авторами Провитол.
Поставленная задача решается также за счет того, что способ приготовления корма для сельскохозяйственных животных и птицы, включающий введение в корм препарата - кормовой добавки в виде бактериального препарата, согласно изобретению предусматривает использование в качестве кормовой добавки препарата-фитобиотика Провитол, полученного описанным выше способом, в количестве от 150 г до 1 кг на 1 т исходного корма.
Полученный с помощью заявляемого способа препарат Провитол не обладает токсичностью и патогенными свойствами для животных и птицы.
Экспериментально было установлено, что в комплексе ферментными, пробиотическими и хорошими антимикробными свойствами обладает бактериальный препарат, который содержит смесь эфирных масел чеснока, эвкалипта, розмарина и тимьяна в равных между собой соотношениях с возможным отклонением ±5%.
5
В заявляемом способе в качестве бактерий, синтезирующих целлюлазы, улучшающие переваримость корма и продуцирующие вещества, обладающие пробиотической активностью, используют бактерии, способные повышать целлюлозолитическую активность рубцовой жидкости не менее чем на 20% и одновременно способные понижать концентрацию патогенных микроорганизмов в желудочно-кишечном тракте (ЖКТ) животных и птицы до титра не более 10 КОЕ/мг.
Все указанные выше параметры и режимы определены экспериментально.
Целлюлозолитическая активность бактерий определяется по методу Хендерсона, Хорвата и Блока в модификации Чюрлиса. Этот метод основан на определении разницы в весе целлюлозы (фильтровальной бумаги, целлофана, беззольных фильтров или других источников) до и после инкубации ее с содержимым рубца в условиях in vitro (Тараканов Б.В. Методы исследования микрофлоры пищеварительного тракта сельскохозяйственных животных и птицы. - М.: Научный мир, 2006, стр.84-87). Было установлено, что бактериями, которые после их инкубации обеспечивают повышение целлюлозолитической активности рубцовой жидкости коровы на 25-30% по сравнению с целлюлозолитической активностью до их инкубации, являются, например, консорциум бактерий ВНИИСХМ №1-33, включающий Ruminococcus albus и Lactobacillus acidophilus (Патент №2171037, справка о депонировании), штамм бактерий Bacillus pantothenticus 1-85 (Патент №2235772, справка о депонировании), штамм бактерий Enterococcus faecium №1-35 (справка о депонировании).
Как известно, пробиотики - это бактериальные препараты из живых микробных культур, которые при попадании в достаточном количестве в желудочно-кишечный тракт хозяина проявляют антагонистическую активность в отношении патогенных бактерий (колиформ) и одновременно проявляют способность восстанавливать нормофлору кишечника, ключевым показателем которой является численность молочнокислых бактерий. Совокупность указанных признаков была названа пробиотической активностью. Пробиотическая активность препарата устанавливается опытно путем определения численности молочнокислых бактерий и колиформ в желудочно-кишечном тракте (ЖКТ) животного или птицы до (контроль) и после применения препарата методом высева проб выделенного кала на агаризованные селективные питательные среды для определения численности молочнокислых бактерий и на селективную среду на мясопептонном бульоне - для определения численности колиформ (Практикум по микробиологии. Под. Ред. Нетрусова А.И. М.: Академия, 2005 г.).
Установлено, что высокой пробиотической активностью, в частности, обладают, например, консорциум бактерий ВНИИСХМ №1-33 (Патент №2171037, справка о депонировании), штамм бактерий Bacillus pantothenticus 1-85 (Патент №2235772, справка о депонировании), штамм бактерий Enterococcus faecium №1-35 (справка о депонировании).
В качестве основы метода селекции бактерий по устойчивости к смеси эфирных масел была использована методика определения антибактериальной активности (Фитонциды в медицине / Макарчук Н.М., Лещинская Я.С., Акимов Ю.А. и др. Киев, 1990. - 216 с.). Согласно этой методике определение антибактериальной активности проводят методом серийных разведений в агаризованной среде МПБ. В качестве тест-объектов выбирают условно-патогенные микроорганизмы семейства Enterobacteriacea. Для посева используют суспензии суточной агаровой культуры бактерий. Стандартный раствор содержит 2 млрд микробных тел, после его дополнительных разведений микробная нагрузка составляет 250 тыс. микробных тел в 1 мл среды. Посев инкубируют при 37°C, учет растущих культур проводят через 24 ч. Затем определяют предельную концентрацию препаратов в среде при отсутствии видимого роста культур, который оценивают в мкг на 1 мл питательной среды.
6
Указанная методика была модифицирована следующим образом. На питательные агаризованные среды, содержащие смесь эфирных масел из растений, обладающих бактериостатическим эффектом, в концентрации, в которой в дальнейшем предполагается смешивать эти масла с бактериями, высевали штаммы микроорганизмов. В данном способе общая концентрация смеси эфирных масел чеснока, эвкалипта, розмарина, тимьяна составляет от 0,2 до 20,0% к общей массе смеси, причем соотношение указанных эфирных масел в смеси составляет 1:1:1:1 с возможным отклонением ±5%. После инкубирования посева отбирали штаммы бактерий, сохранивших высокий титр - не менее 10 КОЕ/г. Такой титр бактерий, определенный экспериментально, обеспечивает получение данным способом бактериального препарата с хорошими ферментными и пробиотическими свойствами.
В ходе исследований было установлено, что устойчивостью к смеси эфирных масел чеснока, эвкалипта, розмарина, тимьяна, в частности, обладают, например, консорциум бактерий ВНИИСХМ №1-33 (Патент №2171037, справка о депонировании), штамм бактерий Bacillus pantothenticus 1-85 (Патент №2235772, справка о депонировании), штамм бактерий Enterococcus faecium №1-35 (справка о депонировании).
5
В частных случаях выполнения способа приготовления препарата-фитобиотика, а также способа приготовления корма на его основе в качестве бактерий, обладающих высокой ферментативной активностью, способных повышать целлюлозолитическую активность рубцовой жидкости не менее чем на 20%, и высокой пробиотической активностью, способных понижать концентрацию патогенных микроорганизмов в ЖКТ животных и птицы до титра не более 10 КОЕ/мг, и устойчивых к смеси эфирных масел чеснока, эвкалипта, розмарина, тимьяна, используют консорциум бактерий ВНИИСХМ №1-33, включающий Ruminococcus albus и Lactobacillus acidophilus. Штаммы указанных микроорганизмов депонированы в коллекции Всероссийского государственного научно-исследовательского института контроля, стандартизации и сертификации ветпрепаратов (ВГНКИ) 18.10.1999 г. под регистрационными номерами Ruminococcus albus 1-33 ДЕП и Lactobacillus acidophilus 1-33 ДЕП, что подтверждается прилагаемой копией справки о депонировании. Местом хранения штамма определена коллекция ВГНКИ ветпрепаратов (Москва).
5
В частных случаях выполнения способа приготовления препарата-фитобиотика, а также способа приготовления корма на его основе в качестве бактерий, обладающих высокой ферментативной активностью, способных повышать целлюлозолитическую активность рубцовой жидкости не менее чем на 20%, и высокой пробиотической активностью, способных понижать концентрацию патогенных микроорганизмов в ЖКТ животных и птицы до титра не более 10 КОЕ/мг, и устойчивых к смеси эфирных масел чеснока, эвкалипта, розмарина, тимьяна, используют штамм бактерий Bacillus pantothenticus 1-85. Штамм депонирован в коллекции Всероссийского государственного научно-исследовательского института контроля, стандартизации и сертификации ветпрепаратов (ВГНКИ) 05.08.2002 под регистрационным номером Bacillus pantothenticus 1-85 ВГНКИ 02.08.05-ДЕП, что подтверждается прилагаемой копией справки о депонировании. Место хранения штамма - коллекция ООО «БИОТРОФ».
5
В частных случаях выполнения способа приготовления препарата-фитобиотика, а также способа приготовления корма на его основе в качестве бактерий, обладающих высокой ферментативной активностью, способных повышать целлюлозолитическую активность рубцовой жидкости не менее чем на 20%, и высокой пробиотической активностью, способных понижать концентрацию патогенных микроорганизмов в ЖКТ животных и птицы до титра не более 10 КОЕ/мг, и устойчивых к смеси эфирных масел чеснока, эвкалипта, розмарина, тимьяна, используют штамм бактерий Enterococcus faecium 1-35. Штамм депонирован в коллекции Всероссийского государственного научно-исследовательского института контроля, стандартизации и сертификации ветпрепаратов (ВГНКИ) 20.03.2008 под регистрационным номером Enterococcus faecium №1-35 ВГНКИ 08.03.53-ДЕП, что подтверждается прилагаемой копией справки о депонировании. Место хранения штамма - коллекция ООО «БИОТРОФ».
Экспериментально доказано, что препарат, полученный заявляемым способом, увеличивает переваримость клетчатки в корме. Для проведения опыта были взяты три группы цыплят по 40 штук, которых кормили 38 дней (до убоя), причем 1-ю контрольную группу цыплят кормили обычным комбикормом (ОР), 2-ю группу цыплят кормили, как в прототипе, комбикормом с добавлением биопрепарата на основе консорциума бактерий ВНИИСХМ №1-33 из расчета 1 кг Целлобактерина на 1 т комбикорма, а 3-ю группу цыплят кормили комбикормом с добавлением фитобиотика на основе консорциума бактерий ВНИИСХМ №1-33 из расчета 1 кг Провитола на 1 т комбикорма. Переваримость корма определялась опытным путем на основе учета количества съеденного корма, выделенного кала и содержания в них основных веществ. Вещества, которые задержались в организме, считаются переваренной частью (Нормы и рационы кормления сельскохозяйственных животных. Под ред. Калашникова А.П., М.: 2003 г., 456 с.). Результаты этого опыта приведены в Таблице 1.
Таблица 1
Переваримость корма у цыплят-бройлеров
Показатель
Группа цыплят
1-я группа - (контроль) ОР
2-я группа - (прототип) ОР + Целлобактерин
3-я группа - (изобретение) ОР + Провитол
Переваримость, %
Органического вещества комбикорма
73,2
74,2
75,1
Клетчатки
0
16,3
17,8
Из данных, приведенных в Таблице 1, видно, что при вводе в рацион цыплят-бройлеров препарата Провитол, полученного заявляемым способом, переваримость органического вещества комбикорма увеличилась незначительно по сравнению с контролем и с прототипом, а переваримость клетчатки по сравнению с контролем резко возросла и увеличилась по сравнению с прототипом. Полученный результат определяется действием целлюлаз, продуцируемых микробным компонентом препарата-фитобиотика Провитол.
Экспериментально доказано также, что препарат, полученный заявляемым способом, увеличивает также пробиотический эффект. Для проведения опыта были отобраны две группы лошадей по методу аналогов по 3 лошади в каждой, с помощью которых исследовали влияние кормовых добавок: биопрепарата и фитобиотика на численность микроорганизмов в их желудочно-кишечном тракте (ЖКТ), для чего в корм одной группы в течение 25 дней добавляли биопрепарат на основе штамма бактерий Bacillus pantothenticus 1-85 из расчета 1 кг Целлобактерина-Т на 1 т корма, а в корм другой группы в течение тех же 25 дней добавляли фитобиотик на основе штамма бактерий Bacillus pantothenticus 1-85 из расчета 1 кг Провитола на 1 т корма. Численность микроорганизмов в ЖКТ лошади определялась методом высева проб из выделенного кала: для молочнокислых бактерий на агаризованные селективные питательные среды, а для колиформ - на селективную среду на мясопептонном бульоне (Практикум по микробиологии. Под. ред. Нетрусова А.И. М.: Академия, 2005 г., 608 с.). Результаты данного опыта приведены в таблице 2.
Таблица 2
Влияние препарата на численность микроорганизмов в ЖКТ лошади
Численность микроорганизмов, КОЕ/мг
молочнокислые
колиформы
Время
1-я группа
2-я группа
1-я группа
2-я группа
До начала применения препарата
1·10<sup>5</sup>
1·10<sup>5</sup>
8·10<sup>7</sup>
8·10<sup>7</sup>
Применение препарата
Целлобактерин-Т
Провитол
Целлобактерин-Т
Провитол
15-е сутки после начала применения препарата
5·10<sup>5</sup>
1,1·10<sup>6</sup>
4,8·10<sup>7</sup>
1,2·10<sup>6</sup>
25-е сутки после начала применения препарата
6,2·10<sup>6</sup>
1·10<sup>7</sup>
1,1·10<sup>7</sup>
0,8·10<sup>6</sup>
Из Таблицы 2 видно, что во время применения препарата-фитобиотика Провитол по сравнению с контролем (т.е. до начала применения препарата) в ЖКТ лошади резко (на 25-е сутки - на два порядка) возросла численность полезных молочнокислых бактерий и снизилась численность условно-патогенных микроорганизмов - колиформ. Из данных, приведенных в Таблице 2, видно также, что препарат-фитобиотик Провитол обладает более высоким пробиотическим эффектом по сравнению с биопрепаратом Целлобактерин-Т.
Полученные результаты показывают, что высокая пробиотическая активность применяемого препарата Провитол, полученного заявляемым способом, определяется его антимикробными свойствами. Таким образом, результаты опытов, приведенные в Таблицах 1 и 2, показывают, что полученный заявляемым способом препарат Провитол, являющийся кормовой добавкой - фитобиотиком, а также корм для сельскохозяйственных животных и птицы на его основе обладает улучшенными функциональными комплексными свойствами: ферментными, пробиотическими и антимикробными.
Изобретения иллюстрируются следующими примерами.
Пример 1.
6
Для получения препарата Провитол сначала провели селекцию консорциума бактерий ВНИИСХМ №1-33, включающего бактерии Ruminococcus albus и Lactobacillus acidophilus в соотношении 1:1, на устойчивость к смеси эфирных масел чеснока, эвкалипта, розмарина и тимьяна путем их высева на агаризованные среды, содержащие в своем составе смесь эфирных масел указанных растений при их соотношении 1:1:1:1 с возможным отклонением ±5% и общей концентрацией эфирных масел 0,2% к общей массе смеси, затем провели отбор маточной культуры бактерий с титром не менее 1·10 КОЕ/г. Затем маточную культуру отселектированных бактерий засеяли в количестве 1% в питательную среду, состоящую из 2% подсолнечникового шрота и 98% водопроводной воды, которую предварительно простерилизовали в течение 15 мин при давлении 1 атм и pH 6,8, после чего охладили до температуры 35°C, а затем провели культивирование в бутылях емкостью 100 л в течение суток. После этого полученную культивированную бактериальную производственную культуру, содержащую отселектированные бактерии консорциума ВНИИСХМ №1-33, смешали с подсолнечниковым шротом в соотношении 1:1 и на полученную смесь нанесли смесь эфирных масел чеснока, эвкалипта, розмарина и тимьяна при их соотношении 1:1:1:1 с возможным отклонением ±5% и общей концентрацией смеси эфирных масел в субстанции 0,2%. Затем, пропуская сухой воздух, полученную смесь фитобиотика высушили при температуре 40°C до остаточной влажности 7,2% и полученный препарат измельчили до размера частиц не более 2 мм.
Результаты применения кормовой добавки Провитол исследовали на 4-х группах цыплят-бройлеров кросса «Кобб Авиан 48» по 35 голов в каждой. Выращивание цыплят-бройлеров проводили с суточного до 35-дневного возраста в клеточных батареях Big Dutchman. Кормление цыплят осуществляли сухими рассыпными комбикормами вволю. Поение также вволю.
При этом 1-ю контрольную группу цыплят кормили основным рационом, сбалансированным по питательным веществам в соответствии с нормами (ОР).
2-ю группу цыплят кормили, как в прототипе, основным рационом комбикорма с добавлением биопрепарата Целлобактерин (на основе консорциума бактерий ВНИИСХМ №1-33) из расчета 1 кг биопрепарата на 1 т комбикорма.
3-ю группу цыплят кормили основным рационом комбикорма с добавлением смеси эфирных масел чеснока, эвкалипта, розмарина и тимьяна (при их соотношении 1:1:1:1) из расчета 80 г смеси эфирных масел на 1 т комбикорма.
4-ю группу цыплят кормили основным рационом комбикорма с добавлением препарата-фитобиотика Провитол, полученного на основе консорциума бактерий ВНИИСХМ №1-33 описанным выше способом, в количестве 150 г фитобиотика на 1 т комбикорма.
В Таблице 3 представлены основные результаты использования препаратов кормовых добавок при кормлении цыплят-бройлеров для данного опыта.
Таблица 3
Влияние кормовой добавки на зоотехнические показатели цыплят-бройлеров
Зоопоказатели
1 группа - ОР (контроль)
2 группа - ОР + Целлобактерин
3 группа - ОР + смесь эфирных масел
4 группа - ОР + Провитол
Сохранность цыплят, %
97,1
97,1
97,1
100,0
Вес (суточные цыплята), г
48
48
48
48
Вес (35-дн. цыплята-бройлеры), г
1772,3
1832,9
1803,0
1836,2
Среднесуточный прирост веса, г
49,27
51,0
50,14
51,09
Затраты корма на 1 кг прироста веса за период 1-35 дней, кг
1,67
1,65
1,67
1,63
Из Таблицы 3 видно, что применение препарата-фитобиотика Провитол улучшает по сравнению с контролем, добавлением смеси эфирных масел и прототипом зоотехнические показатели: повышает сохранность цыплят, увеличивает среднесуточный прирост их веса, уменьшает затраты корма.
Пример 2.
6
Для изготовления препарата Провитол сначала провели селекцию на устойчивость к смеси эфирных масел чеснока, эвкалипта, розмарина и тимьяна консорциума бактерий ВНИИСХМ №1-33, включающего Ruminococcus albus и Lactobacillus acidophilus в соотношении 1:1, путем их высева на агаризованные среды, содержащие в своем составе смесь эфирных масел указанных растений при их соотношении 1:1:1:1 с возможным отклонением ±5% и общей концентрацией эфирных масел 20% к общей массе смеси, и отбор маточной культуры бактерий с титром не менее 1·10 КОЕ/г. Затем маточную культуру отселектированных бактерий засеяли в количестве 5% в питательную среду, состоящую из 7% подсолнечникового шрота и 93% водопроводной воды, которую предварительно простерилизовали в течение 25 мин при давлении 2 атм и pH 7,0, после чего охладили до температуры 40°C, а затем провели культивирование в ферментерах емкостью 1000 л в течение суток. После этого полученную культивированную бактериальную производственную культуру, содержащую отселектированные бактерии консорциума ВНИИСХМ №1-33, смешали с подсолнечниковым шротом в соотношении 1:2 и на полученную смесь нанесли смесь эфирных масел чеснока, эвкалипта, розмарина и тимьяна при их соотношении 1:1:1:1 с возможным отклонением ±5% и общей концентрацией смеси эфирных масел в субстанции 20%. Затем, пропуская сухой воздух, полученную смесь фитобиотика высушили при температуре 60°C до остаточной влажности 7,0% и полученный препарат измельчили до размера частиц не более 2 мм.
Результаты применения кормовой добавки препарата-фитобиотика Провитол, полученного на основе консорциума бактерий ВНИИСХМ №1-33 описанным выше способом, исследовали на 4-х группах кур-несушек в условиях, которые описаны в Примере 1, причем кур кормили, как описано в Примере 1, за исключением того, что 4-ю группу кур кормили основным рационом комбикорма (ОР) с добавлением препарата Провитол, полученного на основе консорциума бактерий ВНИИСХМ №1-33 описанным выше способом, в количестве 0,5 кг на 1 т комбикорма.
В Таблице 4 представлены основные результаты использования препарата Провитол при кормлении кур-несушек для данного опыта.
Таблица 4
Влияние кормовой добавки на яйценоскость кур
Возраст кур, недели
25-28
29-32
33-36
37-40
Яйценоскость
%
%
%
%
1-я группа (контроль) - ОР
88,6
86,5
85,3
81,9
2-я группа - ОР + Целлобактерин
89,6
87,1
86,4
84,9
3-я группа - ОР + смесь эфирных масел
89,3
86,8
86,2
83,1
4-я группа - ОР + Провитол
90,4
88,1
87,1
85,4
Из Таблицы 4 видно, что применение кормовой добавки - препарата Провитол, полученной заявляемым способом на основе бактерий консорциума ВНИИСХМ №1-33, улучшает яйценоскость кур-несушек по сравнению с вариантами контроля, добавлением смеси эфирных масел и использования известной биологически активной добавки Целлобактерин, получаемой также на основе бактерий консорциума ВНИИСХМ №1-33.
Пример 3.
Получали препарат Провитол с использованием бактерии штамма Bacillus pantothenticus 1-85 методом, описанным в примере 1, за исключением того, что культивированную бактериальную производственную культуру смешивали с соевым шротом.
Результаты применения кормовых добавок, в т.ч. препарата-фитобиотика Провитол, полученного на основе штамма бактерий Bacillus pantothenticus 1-85 описанным выше способом, исследовали на группах телят, отобранных по методу аналогов, которые содержались в клетках по 5 голов в каждой, начиная с 30-35-дневного возраста.
При этом 1-ю контрольную группу телят кормили основным рационом корма, сбалансированным по питательным веществам в соответствии с нормами (ОР).
2-ю группу телят кормили основным рационом корма с добавлением биопрепарата Целлобактерин -Т (на основе штамма бактерий Bacillus pantothenticus 1-85) из расчета 300 г биопрепарата на 1 т корма.
3-ю группу телят кормили основным рационом корма с добавлением смеси эфирных масел чеснока, эвкалипта, розмарина и тимьяна (при их соотношении 1:1:1:1) из расчета 80 г смеси эфирных масел на 1 т корма.
4-ю группу телят кормили основным рационом корма с добавлением препарата-фитобиотика Провитол, полученного на основе штамма бактерий Bacillus pantothenticus 1-85, в количестве 150 г фитобиотика на 1 т корма.
В Таблице 5 представлены основные результаты использования препарата Провитол при кормлении телят для данного опыта.
Таблица 5
Влияние кормовой добавки на привес телят
Группы телят
Привесы (г)
за 1-2 месяцы
за 2-3 месяцы
за 3-4 месяцы
1-я группа (контроль) - ОР
289
394
623
2-я группа - ОР + Целлобактерин-Т
396
500
780
3-я группа - ОР + смесь эфирных масел
307
426
695
3-я группа - ОР + Провитол
410
519
833
Из Таблицы 5 видно, что применение кормовой добавки - фитобиотика Провитол, полученного описанным способом на основе штамма бактерий Bacillus pantothenticus 1-85, приводит к более высоким привесам у телят по сравнению с вариантами контроля, добавлением смеси эфирных масел и использования известной биологически активной добавки Целлобактерин-Т, получаемой также на основе штамма бактерий Bacillus pantothenticus 1-85. При этом повышение среднесуточных привесов эквивалентно сокращению расхода кормов на 1 кг привеса по сравнению с контролем на 1,32 к.ед. при добавке Целлобактерин-Т и на 1,55 к.ед. при применении фитобиотика Провитол.
Пример 4.
Получали препарат Провитол с использованием бактерии штамма Bacillus pantothenticus 1-85 методом, описанным в примере 2, за исключением того, что культивированную бактериальную производственную культуру смешивали с соевым шротом.
Результаты применения кормовых добавок, в т.ч. препарата-фитобиотика Провитол, полученного на основе штамма бактерий Bacillus pantothenticus 1-85 описанным выше способом, исследовали на группах дойных коров черно-пестрой породы второй и третьей лактации, отобранных по методу аналогов, по 5 голов в каждой. Животные находились на привязном содержании. Продолжительность опыта составила 60 дней.
При этом 1-ю контрольную группу коров кормили основным рационом корма, сбалансированным по питательным веществам в соответствии с нормами (ОР).
2-ю группу коров кормили основным рационом корма с добавлением биопрепарата Целлобактерин-Т (на основе штамма бактерий Bacillus pantothenticus 1-85) из расчета 1 кг биопрепарата на 1 т корма.
3-ю группу коров кормили основным рационом корма с добавлением смеси эфирных масел чеснока, эвкалипта, розмарина и тимьяна (при их соотношении 1:1:1:1) из расчета 80 г смеси эфирных масел на 1 т корма.
4-ю группу коров кормили основным рационом корма с добавлением фитобиотика Провитол, полученного на основе штамма бактерий Bacillus pantothenticus 1-85, в количестве 1 кг фитобиотика на 1 т корма.
В Таблице 6 представлены основные результаты использования препарата Провитол на продуктивность коров дойного стада для данного опыта.
Таблица 6
Влияние кормовой добавки на удой молока у коров
Среднесуточный удой молока натуральной жирности, кг
Содержание жира в молоке, %
Содержание белка в молоке, %
СОМО тыс./см<sup>3</sup>
Среднесуточный удой молока 4% жирности, кг
1-я группа(контроль) - ОР
22,8
3,61
3,11
375
20,5
2-я группа - ОР + Целлобактерин-Т
23,7
3,68
3,17
277
21,9
3-я группа - ОР + смесь эфирных масел
23,2
3,65
3,13
315
21,2
3-я группа - ОР + Провитол
24,2
3,91
3,19
240
23,7
Из Таблицы 6 видно, что применение кормовой добавки - фитобиотика Провитол, полученного описанным способом на основе штамма бактерий Bacillus pantothenticus 1-85, способствует снижению соматических клеток в молоке, что приводит к более высоким надоям молока у коров дойного стада и повышению его качества по сравнению с вариантами контроля, добавлением в корм смеси эфирных масел или использования известной биологически активной добавки Целлобактерин-Т, получаемой также на основе штамма бактерий Bacillus pantothenticus 1-85.
Пример 5.
Препарат Провитол получали с использованием бактерий штамма Enterococcus faecium 1-35 методом, описанным в примере 1, за исключением того, что культивированную бактериальную производственную культуру смешивали с пшеничными отрубями.
Результаты применения кормовой добавки - препарата-фитобиотика Провитол, полученного на основе штамма бактерий Enterococcus faecium 1-35 описанным выше способом, исследовали на свиноматках и на группах поросят-сосунов по 10 голов в каждой.
Свиноматки получали препарат за 7-10 дней до опороса и продолжали получать в течение 30 суток (до отъема сосунов). Сосуны получали препарат с 5-суточного возраста (приучали со дня опороса) и до 60-дневного возраста.
При этом 1-ю контрольную группу поросят-сосунов кормили основным рационом корма, сбалансированным по питательным веществам в соответствии с нормами (ОР).
2-ю группу поросят-сосунов кормили основным рационом корма с добавлением биопрепарата Целлобактерин-Т (на основе штамма бактерий Bacillus pantothenticus 1-85) из расчета 200 г биопрепарата на 1 т корма.
3-ю группу поросят-сосунов кормили основным рационом корма с добавлением смеси эфирных масел чеснока, эвкалипта, розмарина и тимьяна (при соотношении 1:1:1:1) из расчета 80 г на 1 т корма.
4-ю группу поросят-сосунов кормили основным рационом корма с добавлением препарата-фитобиотика Провитол, полученного на основе штамма бактерий Enterococcus faecium 1-35 описанным выше способом, в количестве 150 г на 1 т корма.
В Таблице 7 представлены основные/результаты использования препарата Провитол на привесы поросят-сосунов для данного опыта.
Таблица 7
Влияние кормовой добавки на привесы поросят-сосунов
Группы поросят
Привесы поросят-сосунов, (г)
средний за 2 месяца
средние за 30 дней
средние за 60 дней
1-я группа-(ОР) (контроль)
254
236
325
2-я группа - ОР + Целлобактерин-Т
296
245
348
3-я группа - ОР + смесь эфирных масел
293
250
340
4-я группа - ОР + Провитол
304
255
355
Из Таблицы 7 видно, что применение кормовой добавки - фитобиотика Провитол, полученной описанным способом на основе штамма бактерий Enterococcus faecium 1-35, приводит к повышению привесов у поросят-сосунов по сравнению с вариантами контроля, добавления в корм смеси эфирных масел или использования известной биологически активной добавки Целлобактерин-Т.
Пример 6.
Препарат Провитол получали с использованием бактерий штамма Enterococcus faecium 1-35 методом, описанным в примере 2, за исключением того, что культивированную бактериальную производственную культуру смешивали с пшеничными отрубями.
Результаты применения кормовой добавки - препарата-фитобиотика Провитол, полученного на основе штамма бактерий Enterococcus faecium 1-35 описанным выше способом, исследовали на группах поросят-отъемышей по 10 голов в каждой в течение 4-х месяцев.
При этом 1-ю контрольную группу поросят кормили основным рационом корма, сбалансированным по питательным веществам в соответствии с нормами (ОР).
2-ю группу поросят кормили основным рационом корма с добавлением биопрепарата Целлобактерин-Т (на основе штамма бактерий Bacillus pantothenticus 1-85) из расчета 1 кг биопрепарата на 1 т корма.
3-ю группу поросят кормили основным рационом корма с добавлением смеси эфирных масел чеснока, эвкалипта, розмарина и тимьяна (при их соотношении 1:1:1:1) из расчета 80 г смеси эфирных масел на 1 т корма.
4-ю группу поросят кормили основным рационом корма с добавлением фитобиотика Провитол, полученного на основе штамма бактерий Enterococcus faecium №1-35, в количестве 1 кг фитобиотика на 1 т корма.
В Таблице 8 представлены основные результаты использования препарата Провитол на привесы поросят-отъемышей для данного опыта.
Таблица 8
Влияние кормовой добавки на привесы поросят-отъемышей
Группы поросят
Привесы поросят-отъемышей, (г)
Средний за 2 месяца
Средний на 3 месяца
Средний на 4 месяца
1-я группа - (ОР) (контроль)
489
481
489
2-я группа - ОР + Целлобактерин-Т
520
518
522
3-я группа - ОР + смесь эфирных масел
512
502
520
4-я группа - ОР + Провитол
542
548
536
Из Таблицы 8 видно, что применение кормовой добавки - фитобиотика Провитол, полученной описанным способом на основе штамма бактерий Enterococcus faecium №1-35, приводит к повышению привесов у поросят-отъемышей по сравнению с вариантами контроля, добавления в корм смеси эфирных масел или использования известной биологически активной добавки Целлобактерин-Т.
Таким образом, с помощью заявляемого способа получают варианты кормовой добавки Провитол, которая сбалансирована и оказывает сильный зоотехнический эффект, выполняя при ее добавлении указанным способом в корм несколько функций: натурального заменителя кормовых антибиотиков, кормовых ферментов и пробиотика.
Скармливание кормовой добавки сельскохозяйственной птице приводит к повышению продуктивности мяса цыплят-бройлеров и к улучшению яйценоскости у яичных кур-несушек.
В кормлении крупного рогатого скота кормовая добавка за счет нормализации рубцового пищеварения у телят способствует повышению привесов, а у коров дойного стада способствует увеличению их продуктивности, т.е. увеличению надоев молока и улучшению его качества.
В свиноводстве кормовая добавка в период откорма свиней, увеличивая скорость привесов поросят, позволяет существенно уменьшить затраты на привес мяса, а также снизить стоимость рациона за счет включения шрота и отрубей.
Причем, как показывают эксперименты, эффект от применения корма для сельскохозяйственных животных и птицы с использованием полученной заявляемым способом кормовой добавки - фитобиотика Провитол, превышает эффект от применения в кормах чисто бактериальных препаратов или только смеси эфирных масел с антимикробными свойствам