СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ЗЛОКАЧЕСТВЕННОЙ ОПУХОЛИ И НАБОР ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ ПУТЕМ ИЗМЕРЕНИЯ АКТИВНОСТИ NK-КЛЕТОК

1. Способ измерения активности NK-клеток, включающий:
стимулирование NK-клеток в образце крови, таким образом искусственно активируя NK-клетки к выработке секретируемых NK-клетками цитокинов; и
измерение количества секретируемых NK-клетками цитокинов в образце крови.
2. Способ по п. 1, где образец крови включает цельную кровь, мононуклеарные клетки периферической крови (МКПК) или NK-клетки.
3. Способ по п. 1, где стимуляцию NK-клеток осуществляют посредством инкубирования образца крови по меньшей мере с одним стимулирующим цитокином, выбранным из группы, состоящей из интерлейкина 2, интерлейкина 12, интерлейкина 15 и интерлейкина 18, или посредством инкубирования образца крови с липополисахаридами (ЛПС) или полиинозиновой:полицитидиловой кислотой (поли И:Ц).
4. Способ по п. 1, где стимуляцию NK-клеток осуществляют посредством инкубирования образца крови с интерлейкином 2.
5. Способ по п. 1, где стимуляцию NK-клеток осуществляют посредством инкубирования образца крови с интерлейкином 2 и интерлейкином 12.
6. Способ по п. 1, где стимуляцию NK-клеток осуществляют посредством инкубирования образца крови с интерлейкином 12 и интерлейкином 15.
7. Способ по п. 1, где стимуляцию NK-клеток осуществляют посредством инкубирования образца крови с интерлейкином 12 и интерлейкином 18.
8. Способ по п. 1, где секретируемые NK-клетками цитокины выбирают из группы, состоящей из интерферона-гамма (IFN-γ), фактора некроза опухоли альфа (TNF-α) и макрофагального белка воспаления 1β (MIP-lβ).
9. Способ по п. 1, где секретируемым NK-клетками цитокином является интерферон-гамма (IFN-γ).
10. Способ по п. 1, где секретируемым NK-клетками цитокином является фактор некроза опухоли альфа (TNF-α).
11. Способ по п. 1, где макрофагальный белок воспаления-1β (MIP-1β) применяют в качестве контрольной группы для сравнения активации NK-клеток с активацией у здорового человека.
12. Способ по п. 1, где измерение количества секретируемых NK-клетками цитокинов осуществляют посредством твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА).
13. Способ по п. 3, где по меньшей мере один стимулирующий цитокин находится в форме химерного белка со стабилизирующим пептидом.
14. Способ по п. 13, где стабилизирующий пептид представляет собой пептид с С-концевым кислым хвостовым доменом из семейства синуклеинов.
15. Способ по п. 14, где стабилизирующий пептид содержит аминокислотные остатки 103-115 (SEQ ID NO: 22), аминокислотные остатки 114-126 (SEQ ID NO: 23), аминокислотные остатки 119-140 (SEQ ID NO: 24) и аминокислотные остатки 130-140 (SEQ ID NO: 25) С-концевого кислого хвостового домена α-синуклеина, аминокислотные остатки 85-134 С-концевого кислого хвостового домена β-синуклеина (SEQ ID NO: 27), аминокислотные остатки 96-127 С-концевого кислого хвостового домена γ-синуклеина (SEQ ID NO: 29) и аминокислотные остатки 96-127 С-концевого кислого хвостового домена синоретина (SEQ ID NO: 29).
16. Способ по п. 1, где этап стимулирования NK-клеток в образце крови, таким образом искусственно активируя NK-клетки к выработке секретируемых NK-клетками цитокинов, осуществляют в содержащей белок-носитель среде.
17. Способ по любому из пп. 1-16, где указанный способ предназначен для определения вероятности возникновения или рецидива злокачественной опухоли.
18. Способ по п. 17, где понижение количества секретируемых NK-клетками цитокинов у субъекта по сравнению с уровнями у здоровых людей является показателем вероятности возникновения или рецидива злокачественной опухоли.
19. Набор для измерения активности NK-клеток, содержащий:
средство для стимуляции NK-клеток в образце крови, таким образом искусственно активируя NK-клетки к выработке секретируемых NK-клетками цитокинов.
20. Набор по п. 19, при этом секретируемым NK-клетками цитокином является интерферон-гамма (IFN-γ).
21. Набор по п. 19, при этом секретируемым NK-клетками цитокином является фактор некроза опухоли альфа (TNF-α).
22. Набор по п. 19, при этом средством для стимуляции NK-клеток в образце крови и искусственной активации NK-клеток к выработке секретируемых NK-клетками цитокинов является по меньшей мере один стимулирующий цитокин, ЛПС или поли
И:Ц, при этом по меньшей мере один стимулирующий цитокин выбран из группы, состоящей из интерлейкина 2, интерлейкина 12, интерлейкина 15 и интерлейкина 18.
23. Набор по п. 19, дополнительно содержащий по меньшей мере одно антитело, выбранное из группы из антитела к IFN-γ, антитела к TNF-α и антитела к MIP-1β.
24. Набор по любому из пп. 19-23, при этом указанный набор предназначен для определения вероятности возникновения или рецидива злокачественной опухоли.
25. Набор по п. 24, дополнительно содержащий инструкции для сравнения количества секретируемых NK-клетками цитокинов у субъекта с уровнями у здоровых людей, при этом понижение уровня секретируемых NK-клетками цитокинов у субъекта является показателем вероятности возникновения или рецидива злокачественной опухоли.
26. Химерный белок, содержащий цитокин, связанный с пептидом с С-концевым кислым хвостовым доменом из семейства синуклеинов, при этом цитокин выбран из группы, состоящей из интерлейкина 2, интерлейкина 12, интерлейкина 15 и интерлейкина 18.
27. Химерный белок по п. 26, в котором цитокином является интерлейкин 2.
28. Химерный белок по п. 26, в котором цитокином является интерлейкин 12.
29. Химерный белок по п. 26, в котором цитокином является интерлейкин 15.
30. Химерный белок по п. 26, в котором цитокином является интерлейкин 18.
31. Химерный белок по любому из пп. 26-30, в котором пептид с С-концевым кислым хвостовым доменом из семейства синуклеинов выбран из аминокислотных остатков 103-115 (SEQ ID NO: 22), аминокислотных остатков 114-126 (SEQ ID NO: 23), аминокислотных остатков 119-140 (SEQ ID NO: 24) и аминокислотных остатков 130-140 (SEQ ID NO: 25) С-концевого кислого хвостового домена α-синуклеина, аминокислотных остатков 85-134 С-концевого кислого хвостового домена β-синуклеина (SEQ ID NO: 27), аминокислотных остатков 96-127 С-концевого кислого хвостового домена γ-синуклеина (SEQ ID NO: 29) и аминокислотных остатков 96-127 С-концевого кислого хвостового домена синоретина (SEQ ID NO: 29).
32. Композиция для активации NK-клеток, содержащая по меньшей мере один химерный белок, выбранный из группы, состоящей из:
интерлейкина 2, связанного с пептидом с С-концевым кислым хвостовым доменом из семейства синуклеинов,
интерлейкина 12, связанного с пептидом с С-концевым кислым хвостовым доменом из семейства синуклеинов,
интерлейкина 15, связанного с пептидом с С-концевым кислым хвостовым доменом из семейства синуклеинов, и
интерлейкина 18, связанного с пептидом с С-концевым кислым хвостовым доменом из семейства синуклеинов.
33. Композиция по п. 32, в которой пептид с С-концевым кислым хвостовым доменом из семейства синуклеинов выбран из аминокислотных остатков 103-115 (SEQ ID NO: 22), аминокислотных остатков 114-126 (SEQ ID NO: 23), аминокислотных остатков 119-140 (SEQ ID NO: 24) и аминокислотных остатков 130-140 (SEQ ID NO: 25) С-концевого кислого хвостового домена α-синуклеина, аминокислотных остатков 85-134 С-концевого кислого хвостового домена β-синуклеина (SEQ ID NO: 27), аминокислотных остатков 96-127 С-концевого кислого хвостового домена γ-синуклеина (SEQ ID NO: 29) и аминокислотных остатков 96-127 С-концевого кислого хвостового домена синоретина (SEQ ID NO: 29).
34. Набор для диагностики злокачественной опухоли, содержащий по меньшей мере один химерный белок, выбранный из группы, состоящей из:
интерлейкина 2, связанного с пептидом с С-концевым кислым хвостовым доменом из семейства синуклеинов,
интерлейкина 12, связанного с пептидом с С-концевым кислым хвостовым доменом из семейства синуклеинов,
интерлейкина 15, связанного с пептидом с С-концевым кислым хвостовым доменом из семейства синуклеинов, и
интерлейкина 18, связанного с пептидом с С-концевым кислым хвостовым доменом из семейства синуклеинов.
35. Набор для диагностики злокачественной опухоли по п. 34, в котором пептид с С-концевым кислым хвостовым доменом из семейства синуклеинов выбран из аминокислотных остатков 103-115 (SEQ ID NO: 22), аминокислотных остатков 114-126 (SEQ ID NO: 23), аминокислотных остатков 119-140 (SEQ ID NO: 24) и аминокислотных остатков 130-140 (SEQ ID NO: 25) С-концевого кислого хвостового домена α-синуклеина, аминокислотных остатков 85-134 С-концевого кислого хвостового домена β-синуклеина (SEQ ID NO: 27), аминокислотных остатков 96-127 С-концевого кислого хвостового домена γ-синуклеина (SEQ ID NO: 29) и аминокислотных остатков 96-127 С-концевого кислого хвостового домена синоретина (SEQ ID NO: 29).
36. Набор для диагностики злокачественной опухоли по п. 34, дополнительно содержащий по меньшей мере одно антитело, выбранное из группы из антитела к IFN-γ, антитела к TNF-α и антитела к М1Р-1β.
37. Полипептид, содержащий аминокислотную последовательность по меньшей мере с 80% идентичностью по отношению к аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8 или SEQ ID NO: 10.
38. Полипептид по п. 37, по меньшей мере с 90% идентичностью по отношению к аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8 или SEQ ID NO: 10.
39. Полипептид по п. 37, по меньшей мере с 95% идентичностью по отношению к аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8 или SEQ ID NO: 10.
40. Полипептид по п. 37, состоящий из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8 или SEQ ID NO: 10.
41. Олигонуклеотид, кодирующий полипептид по любому из пп. 37-40.
42. Олигонуклеотид, содержащий последовательность нуклеиновой кислоты, по меньшей мере с 80% идентичностью по отношению к последовательности нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 7 или SEQ ID NO: 9 или ее комплементарной последовательности.
43. Олигонуклеотид по п. 42, по меньшей мере с 90% идентичностью по отношению к последовательности нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: I, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 7 или SEQ ID NO: 9 или ее комплементарной последовательности.
44. Олигонуклеотид по п. 42, по меньшей мере с 95% идентичностью по отношению к последовательности нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: I, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 7 или SEQ ID NO: 9 или ее комплементарной последовательности.
45. Олигонуклеотид по п. 42, состоящий из последовательности нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 7 или SEQ ID NO: 9 или ее комплементарной последовательности.
46. Вектор, содержащий олигонуклеотид по любому из пп. 41-45.
47. Клетка-хозяин, содержащая вектор по п. 46.