ПРОИЗВОДНЫЕ ИНДОЛА И БЕНЗОКСАЗИНА В КАЧЕСТВЕ МОДУЛЯТОРОВ МЕТАБОТРОПНЫХ ГЛУТАМАТНЫХ РЕЦЕПТОРОВ
INDOLE AND BENZOXAZINE DERIVATIVES AS MODULATORS OF METABOTROPIC GLUTAMATE RECEPTORS

Область техники
Настоящее изобретение относится к новым производным индола и бензоксазина, которые представляют собой положительные аллостерические модуляторы метаботропных глутаматных рецепторов подтипа 2 ("mGIuR2") и которые являются полезными для лечения или предупреждения неврологических и психиатрических расстройств, ассоциированных с глутаматной дисфункцией, и заболеваний, в которые вовлечен подтип mGIuR2 метаботропных рецепторов. Изобретение также направлено на фармацевтические композиции, содержащие такие соединения, на способы получения таких соединений и композиций и на применение таких соединений для предупреждения или лечения неврологических и психиатрических расстройств и заболеваний, в которые вовлечен mGIuR2.
Предшествующий уровень техники
Глутамат является важным аминокислотным нейромедиатором в центральной нервной системе млекопитающих. Глутамат играет важную роль в многочисленных физиологических функциях, таких как обучение и память, а также сенсорное восприятие, развитие синаптической пластичности, регуляция моторики, дыхание и регуляция сердечно-сосудистой функции. Кроме того, глутамат находится в центре нескольких различных неврологических и психиатрических заболеваний, в которых имеется нарушение баланса глутаматергической нейротрансмиссии.
Глутамат опосредует синаптическую нейротрансмиссию через активацию каналов ионотропных глутаматных рецепторов (iGluRs) и рецепторов NMDA (N-метил-О-аспартат), АМРА (2-альфа-амино-3-гидрокси-5-метил-4-изоксазольпропионовая кислота) и каинатных рецепторов, которые являются ответственными за быструю возбудительную трансмиссию.
Кроме того, глутамат активирует метаботропные глутаматные рецепторы(mGluR), играющие дополнительную модуляторную роль, способствующую тонкой корректировке синаптической эффективности.
Глутамат активирует mGluR посредством связывания с большим внеклеточным амино-концевым доменом рецептора, называемым в данном описании изобретения ортостерическим центром связывания. Это связывание вызывает конформационное изменение в рецепторе, что приводит к активации G-белка и внутриклеточных сигнальных путей.
Подтип mGluR2 негативно связан с аденилатциклазой через активацию Gai-белка, и его активация приводит к ингибированию высвобождения глутамата в синапсе. В центральной нервной системе (CNS) рецепторы mGluR2 распространены главным образом в коре головного мозга, таламических участках, придаточной обонятельной луковице, гиппокампе, миндалевидном теле, хвостатом ядре-путамене и прилежащем ядре.
Активирование mGluR2, как показали клинические исследования, является эффективным в лечении тревожных расстройств. Кроме того, активирование mGluR2 в различных животных моделях показало их эффективность, таким образом предоставляя возможный новый терапевтический подход к лечению шизофрении, эпилепсии, аддикции/наркотической зависимости, болезни Паркинсона, боли, расстройств сна и болезни Гентингтона.
В настоящее время большинство доступных фармакологических средств, нацеленных на mGluR, представляют собой ортостерические лиганды, которые активируют некоторые члены семейства, так как они являются структурными аналогами глутамата.
Новым направлением для развития селективных соединений, действующих на mGluR, является идентификация соединений, которые действуют посредством аллостерических механизмов, модулируя рецептор путем связывания с сайтом, отличным от высококонсервативного ортостерического центра связывания.
Недавно положительные аллостерические модуляторы mGluR выступили в качестве новых фармакологических объектов, предлагающих эту привлекательную альтернативу. В качестве положительных аллостерических модуляторов mGluR2 были описаны различные соединения. В WO 2004/092135 (NPS & Astra Zeneca), WO 2004/018386, WO 2006/014918 и WO 2006/015158 (Merck), WO 2001/56990 (Eli Lilly) и WO 2006/030032 и WO 2007/104783 (Addex & Janssen Phamnaceutica) описаны, соответственно, фенилсульфонамид, ацетофенон, инданон, пиридилметилсульфонамид и производные пиридинона в качестве положительных аллостерических модуляторов mGluR2. Ни одно из конкретно раскрытых в них соединений не является структурно родственным соединениям по настоящему изобретению.
Показано, что такие соединения не активируют рецептор сами по себе. Скорее они обеспечивают возможность для рецептора продуцировать максимальный ответ на концентрацию глутамата, которая самостоятельно индуцирует минимальный ответ. Мутационный анализ однозначно продемонстрировал, что связывание положительных аллостерических модуляторов mGluR2 происходит не в ортостерическом центре, но вместо этого на аллостерическом сайте, расположенном внутри семитрансмембранного участка рецептора.
Данные на животных позволяют предположить, что положительные аллостерические модуляторы mGluR2 оказывают эффекты в моделях тревоги и психоза, аналогичные полученным с ортостерическими агонистами. Аллостерические модуляторы mGluR2, как было показано, активны при страхе, усиленном испугом и в стресс-индуцированных гипертермических моделях тревоги. Кроме того, такие соединения, как показано, активны в реверсировании кетамин- или амфетамин-индуцированной гиперлокомоции и в реверсировании амфетамин-индуцированного нарушения преимпульсного ингибирования акустической реакции испуга в модели шизофрении (J. Pharmacol. Exp. Тhеr. 2006, 318, 173-185; Psychopharmacology 2005, 179, 271-283).
Современные исследования на животных также выявили, что селективный положительный аллостерический модулятор метаботропных глутаматных рецепторов подтипа 2, бифенилинданон (BINA), блокирует модель психоза на основе галлюциногенных лекарственных средств, поддерживая стратегию нацеливания рецепторов mGluR2 на лечение глутаматергической дисфункции при шизофрении (Mol. Pharmacol. 2007, 72, 477-484).
Положительные аллостерические модуляторы обеспечивают возможность усиления глутаматного ответа, но, кроме того, было доказано, что они потенциируют ответ на ортостерические агонисты mGluR2, такие как LY379268 или DCG-IV. Такие данные обеспечивают доказательство в отношении еще одного нового терапевтического подхода к лечению указанных выше неврологических и психиатрических заболеваний, в которые вовлечен mGluR2, с использованием комбинации положительного аллостерического модулятора mGluR2 вместе с ортостерическим агонистом mGluR2.
Подробное описание изобретения
Настоящее изобретение относится к соединениям, имеющим активность модулятора метаботропных глутаматных рецепторов 2, где указанные соединения имеют Формулу (I)
или их стереохимически изомерной форме, где
1
1-6
3-7
1-3
3-7
R представляет собой Салкил; С циклоалкил; трифторметил; Cзалкил, замещенный трифторметилом, 2,2,2-трифторэтокси, Сциклоалкил, фенил, или фенил, замещенный галогеном, трифторметилом или трифторметокси; фенил; фенил, замещенный 1 или 2 заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогено, трифторметила и трифторметокси; или 4-тетрагидропиранил;
2
1-3
R представляет собой циано, галогено, трифторметил, Cалкил или циклопропил;
3
1-3
1-3
3-7
1-3
1-3
1-3
2-4
1-3
2-4
1-3
3-7
1-3
1-3
1-3
R представляет собой водород; Cалкил; Cалкил, замещенный Сциклоалкилом, фенилом, фенилом, замещенным 1 или 2 заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогено, циано, Cзалкил, Cзалкокси и трифторметила; пиридинил или пиридинил, замещенный 1 или 2 Cалкильными группами; гидрокси Салкил; Сзалкилалкилокси Салкил; 4-тетрагидропиранил; 1-окса-спиро[3,5]нон-7-ил; 2-окса-спиро[3,5]нон-7-ил; 1-окса-спиро[4,5]дец-8-ил; 2-окса-спиро[4,5]дец-8-ил; 4-(гидрокси)-циклогексанил; 4-(гидрокси)-4-(Салкил)циклогексанил; 4-(гидрокси)-4-(Сциклоалкил)-циклогексанил; 4-(Салкилокси)циклогексанил; фенил; пиридинил; пиридинилметил; или фенил, пиридинил или пиридинилметил, замещенный одним или двумя заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогено, Cалкила, Cалкокси и трифторметила;
4
R представляет собой водород или галогено;
А представляет собой радикал формулы
-СН=СН- (а) или
2
2
-СН-СН-O- (б);
1-3
1-3
где одни или два атома водорода могут быть заменены Cалкилом или полигалогено Салкилом;
или их фармацевтически приемлемой соли или сольвату.
В одном воплощении настоящее изобретение относится к соединению формулы (I) или его стереохимически изомерной форме, где
1
1-6
1-3
3-7
R представляет собой Cалкил; Cалкил, замещенный трифторметилом или Сциклоалкилом;
2
R представляет собой циано или галогено;
3
1-3
1-3
3-7
2-4
1-3
2-4
1-3
R представляет собой водород; Cалкил; Cалкил, замещенный Сциклоалкилом; гидрокси Салкил; Сзалкилокси Салкил; 4-тетрагидропиранил; 4-(гидрокси)-циклогексанил; или 4-(гидрокси)-4-(Сзалкил)циклогексанил;
4
R представляет собой водород, хлоро или фторо;
А представляет собой радикал формулы
-СН=СН- (а), или
2
2
-СН-СН-O- (б);
или его фармацевтически приемлемой соли или сольвату.
В одном воплощении настоящее изобретение относится к соединению формулы (I) или его стереохимически изомерной форме, где
1
1-3
R представляет собой Cалкил, замещенный трифторметилом;
2
R представляет собой циано или хлор;
3
R представляет собой водород; метил; метилил, замещенный циклопропилом; 2-гидрокси-2,2-диметилэтил; 1-метил-этилоксиэтил; 4-тетрагидропиранил; 4-(гидрокси)-циклогексанил; или 4-(гидрокси)-4-(метил)циклогексанил;
4
R представляет собой водород или хлоро;
А представляет собой радикал формулы
-СН=СН- (а), или
2
2
-СН-СН-O- (б);
или его фармацевтически приемлемой соли или сольвату. В одном воплощении настоящее изобретение относится к соединению формулы (I) или стереохимически изомерной его форме, где
1
R представляет собой 2,2,2-трифторэтил;
2
R представляет собой циано или хлоро;
А представляет собой радикал формулы -СН=СН- (а);
или его фармацевтически приемлемой соли или сольвату.
В одном воплощении настоящее изобретение относится к соединению формулы (I) или его стереохимически изомерной форме, где
1
R представляет собой 2,2,2-трифторэтил;
2
R представляет собой циано или хлоро;
2
2
А представляет собой радикал формулы -СН-СН-O- (б);
или его фармацевтически приемлемой соли или сольвату.
Типичные соединения по настоящему изобретению представляют собой:
8-хлор-7-(7-хлор-1H-индол-5-ил)-3-(2,2,2-трифторэтил)имидазо[1,2-а]пиридин;
транс-4-[5-[8-хлор-3-(2,2,2-трифторэтил)имидазо[1,2-а]пиридин-7-ил]-1H-индол-1-ил] циклогексанол;
транс-7-[1-(4-гидрокси-4-метилциклогексил)-1H-индол-5-ил]-3-(2,2,2-трифторэтил)-имидазо[1,2-а]пиридин-8-карбонитрил;
4-[7-[8-хлор-3-(2,2,2-трифторэтил)имидазо[1,2-а]пиридин-7-ил]-2,3-дигидро-4H-1,4-бензоксазин-4-ил]циклогексанол;
транс-4-[5-[8-хлор-3-(2,2,2-трифторэтил)имидазо[1,2-а]пиридин-7-ил]-1H-индол-1 -ил]-1 -метилциклогексанол.
1-3
Обозначение "Cалкил" в качестве группы или части группы означает насыщенный, прямой или разветвленный, углеводородный радикал, содержащий от 1 до 3 атомов углерода, такой как метил, этил, 1-пропил и 1-метилэтил.
1-6
Обозначение "Cалкил" в качестве группы или части группы означает насыщенный, неразветвленный или разветвленный, углеводородный радикал, содержащий от 1 до 6 атомов углерода, такой как метил, этил, 1-пропил, 1-метилэтил, 1-бутил, 2-метил-1-пропил, 3-метил-1-бутил, 1-пентил, 1-гексил и тому подобное.
3-7
Обозначение "циклоСалкил" в виде группы или части группы означает насыщенный, циклической углеводородный радикал, содержащий от 3 до 7 атомов углерода, такой как циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил и циклогептил.
Галогено может представлять собой фторо, хлоро, бромо или йодо, предпочтительно фторо или хлоро.
Для терапевтического применения соли соединений формулы (I) представляют собой те соли, где противоион является фармацевтически приемлемым. Однако, соли кислот и оснований, которые не являются фармацевтически приемлемыми, также могут находить применение, например, в получении или очистке фармацевтически приемлемого соединения. Все соли, как фармацевтически приемлемые, так и нет, включены в объем настоящего изобретения.
Определено, что фармацевтически приемлемые соли включают терапевтически активные нетоксичные формы соли присоединения кислоты, которые способны образовывать соединения Формулы (I). Указанные соли могут быть получены путем обработки основной формы соединений Формулы (I) подходящими кислотами, например неорганическими кислотами, например галогеноводородными кислотами, в частности соляной кислотой, бромистоводородной кислотой, серной кислотой, азотной кислотой и фосфорной кислотой; органическими кислотами, например уксусной кислотой, гидроксиуксусной кислотой, пропионовой кислотой, молочной кислотой, пировиноградной кислотой, щавелевой кислотой, малоновой кислотой, янтарной кислотой, малеиновой кислотой, фумаровой кислотой, яблочной кислотой, винной кислотой, лимонной кислотой, метансульфоновой кислотой, этансульфоновой кислотой, бензолсульфоновой кислотой, пара-толуолсульфоновой кислотой, цикламовой кислотой, салициловой кислотой, пара-аминосалициловой кислотой и памовой кислотой.
Наоборот, указанные солевые формы можно превращать в форму свободного основания путем обработки подходящим основанием.
Соединения Формулы (I), содержащие кислотообразующие протоны, можно также превращать в их терапевтически активные нетоксичные формы основной соли обработкой подходящими органическими и неорганическими основаниями. Подходящие формы основной соли включают, например, соли аммония, соли щелочного и щелочноземельного металла, в частности соли лития, натрия, калия, магния и кальция, соли органических оснований, например соли бензатина, N-метил-D-глюкамина, гидрабамина и соли аминокислот, например аргинина и лизина.
Наоборот, указанные солевые формы могут быть превращены в формы свободной кислоты обработкой подходящей кислотой.
Термин "сольват" включает формы присоединения растворителя, а также их соли, которые способны образовывать соединения формулы (I). Примерами таких форм присоединения растворителя являются, например, гидраты, алкоголяты и тому подобное.
Термин "стереохимически изомерные формы", при использовании выше в данном описании изобретения, означает все возможные изомерные формы, которые могут иметь соединения Формулы (I). Если не упомянуто или не указано иное, химическое наименование соединений означает смеси всех возможных стереохимически изомерных форм, где указанные смеси содержат все диастереомеры и энантиомеры основной молекулярной структуры. Изобретение также включает в себя каждую из отдельных изомерных форм соединений Формулы (I) и их соли и сольваты, по существу не содержащую, то есть ассоциированную менее чем с 10%, предпочтительно менее 5%, в частности менее 2% и наиболее предпочтительно менее 1% других изомеров. Таким образом, если соединение формулы (I), например, определено как (R), это означает, что соединение по существу не содержит (S)-изомер. Стереогенные центры могут иметь R- или S-конфигурацию; заместители на бивалентных циклических (частично) насыщенных радикалах могут иметь либо цис-, либо транс-конфигурацию.
Следуя соглашениям о CAS-наименовании, если в соединении присутствуют два стереогенных центра известной беспримесной конфигурации, то дескриптор R или S присваивают (на основании правила последовательности Кана-Ингольда-Прелога) хиральному центру с самым низким порядковым номером, центру отсчета. Конфигурацию второго стереогенного центра обозначают, используя относительные дескрипторы [R*, R*] или [R*, S*], где R* всегда указывают в качестве центра отсчета и [R*, R*] указывает центры с одинаковой хиральностью, и [R*, S*] указывает центры с разной хиральностью. Например, если хиральный центр с самым низким порядковым номером в соединении имеет S-конфигурацию и второй центр имеет S-конфигурацию, стереодескриптор следует указать как S-[R*, S*]. Если используют «а» и «Р»: положение заместителя с высшим приоритетом на асимметрическом атоме углерода в кольцевой системе, имеющей самый низкий номер кольца, всегда произвольно является положением «а» средней плоскости, определяемой кольцевой системой. Положение заместителя с высшим приоритетом на другом асимметрическом атоме углерода в кольцевой системе (атом водорода в соединениях Формулы (I)) относительно положения заместителя с высшим приоритетом на атоме отсчета обозначают «α», если он находится на той же стороне средней плоскости, определяемой кольцевой системой, или «β», если он находится на другой стороне средней плоскости, определяемой кольцевой системой.
3
11
18
122
123
125
131
75
76
77
82
3
11
18
В рамках данной заявки, элемент, в частности при упоминании в отношении соединения Формулы (I), содержит все изотопы и изотопные смеси данного элемента, или имеющиеся в природе, или полученные синтетически, или с распространённостью элементов в природе или в изотопно обогащенной форме. Меченные радиоактивным изотопом соединения Формулы (I) могут содержать радиоактивный изотоп, выбранный из группы H С, F, I, I, I, I, Br, Br, Br и Br. Предпочтительно радиоактивный изотоп выбран из группы H, С и F.
Получение
Соединения по изобретению, как правило, могут быть получены посредством последовательности стадий, каждая из которых известна специалисту. В частности, соединения могут быть получены согласно следующим способам синтеза.
Соединения Формулы (I) можно синтезировать в форме рацемических смесей энантиомеров, которые можно отделять друг от друга, следуя известным в области техники способам разделения. Рацемические соединения Формулы (I) можно превращать в соответствующие диастереомерные солевые формы путем взаимодействия с подходящей хиральной кислотой. Указанные диастереомерные солевые формы затем разделяют, например, посредством селективной или фракционной кристаллизации и энантиомеры выделяют из них щелочами. Альтернативный способ разделения энантиомерных форм соединений Формулы (I) включает жидкостную хроматографию с использованием хиральной неподвижной фазы. Указанные чистые стереохимически изомерные формы также могут быть произведены из соответствующих чистых стереохимически изомерных форм соответствующих исходных веществ, при условии, что взаимодействие происходит стереоспецифически.
А. Получение конечных соединений
Экспериментальная методика 1
3
2
3
3
4
2
2
2
2
3
3
2
3
2
5
6
Конечные соединения Формулы (I) могут быть получены посредством взаимодействия промежуточного соединения Формулы (II) с соединением Формулы (III) согласно схеме взаимодействия (1), где взаимодействие осуществляют в подходящем реакционно-инертном растворителе, таком как, например, 1,4-диоксан, или в смеси реакционно-инертных растворителей, таких как, например, 1,4-диоксан/DМF(диметилформамид), в присутствии подходящего основания, такого как, например водный NаНСО или NaCO, комплексного Pd-катализатора, такого как, например, Рd(РРh), в тепловых условиях, таких как, например, нагревание реакционной смеси при 150°С в микроволновом излучении, например в течение 10 минут. В схеме взаимодействия (1) все переменные определены как в Формуле (I), и W представляет собой группу, подходящую для Pd-опосредованного сочетания с бороновыми кислотами или бороновыми эфирами, такую как, например, галогено или трифлат. R и R могут представлять собой водород или алкил, или могут быть взяты вместе с образованием, например бивалентного радикала формулы -CHCH-, -СНСHСН- или -С(СН)С(СН)-.
Схема взаимодействия 1
В. Получение промежуточных соединений
Экспериментальная методика 2
Промежуточные соединения Формулы (II), где W представляет собой галогено, могут быть получены путем взаимодействия промежуточного соединения Формулы (IV) с подходящим галогенирующим агентом, таким как, например, оксихлорид фосфора (V), где взаимодействие осуществляют в подходящем реакционно-инертном растворителе, таком как, например, DMF, при умеренно повышенной температуре, такой как, например, 110°С, в течение подходящего периода времени, который позволяет завершить взаимодействие, например, 1 ч. В схеме взаимодействия (2) все переменные определены как в Формуле (I) и W представляет собой галогено.
Схема взаимодействия 2
Экспериментальная методика 3
1
2
Промежуточные соединения Формулы (IV) могут быть получены посредством взаимодействия промежуточного соединения Формулы (V) с промежуточным соединением Формулы (VI) согласно схеме взаимодействия (3). Данное взаимодействие осуществляют в подходящем реакционно-инертном растворителе, таком как, например, этанол, в тепловых условиях, таких как, например, нагревание реакционной смеси, например, при 160°С в микроволновом излучении в течение 45 минут. В схеме взаимодействия (3) R и R определены как в Формуле (I), и галогено представляет собой, например, хлоро или бромо.
Схема взаимодействия 3
Экспериментальная методика 4
2
Промежуточные соединения Формулы (VI) могут быть получены посредством взаимодействия промежуточного соединения Формулы (VII) с источником аммония, таким как, например, гидроксид аммония, в тепловых условиях, таких как, например, нагревание реакционной смеси, например, при температуре дефлегмации в течение 3 ч. В схеме взаимодействия (4), Rопределен как в Формуле (I).
Схема взаимодействия 4
Экспериментальная методика 5
2
Промежуточные соединения Формулы (VII) могут быть получены посредством взаимодействия промежуточного соединения Формулы (VIII) с N,N-диметилформамид-диметил-ацеталем согласно схеме взаимодействия (5). Данное взаимодействие осуществляют в подходящем реакционно-инертном растворителе, таком как, например, метанол, в тепловых условиях, таких как, например, нагревание реакционной смеси, например, с обратным холодильником в течение 2 ч. В схеме взаимодействия (5) R определен как в Формуле (I).
Схема взаимодействия 5
2
2
Промежуточные соединения Формулы (VIII) или имеются в продаже (R=CN; C.A.S. 5515-16-2), или могут быть получены, следуя методикам взаимодействия, известным специалисту в данной области техники. Промежуточные соединения Формулы (VIII), где R представляет собой галогено, например, могут быть получены согласно методике, описанной в Chemische Berichte (1976), 109(8), 2908-13.
Экспериментальная методика 6
2
1
Промежуточные соединения Формулы (II), где R представляет собой галогено, обозначенные (II-а), могут быть получены посредством взаимодействия промежуточного соединения Формулы (IX) с промежуточным соединением Формулы (V) согласно схеме взаимодействия (6). Данное взаимодействие осуществляют в подходящем реакционно-инертном растворителе, таком как, например, этанол, в тепловых условиях, таких как, например, нагревание реакционной смеси, например при 150°С в микроволновом излучении в течение 50 минут. В схеме взаимодействия (6) Rопределен как в Формуле (I), галогено может представлять собой хлоро, бромо или йодо, и W определен как в Формуле (II).
Схема взаимодействия 6
Экспериментальная методика 7
Промежуточные соединения Формулы (IX) могут быть получены путем обработки промежуточного соединения Формулы (X) кислотой, такой как, например, трифторуксусная кислота, согласно схеме взаимодействия (7). Данное взаимодействие осуществляют в подходящем реакционно-инертном растворителе, таком как, например, DCM (дихлорметан), при комнатной температуре в течение периода времени, который позволяет завершить взаимодействие, например 2 ч. В схеме взаимодействия (7) галогено может представлять собой хлоро, бромо или йодо, и W определен как в Формуле (II).
Схема взаимодействия 7
Экспериментальная методика 8
Промежуточные соединения Формулы (X) могут быть получены согласно схеме взаимодействия (8) посредством взаимодействия промежуточного соединения Формулы (XI) с сильным основанием, таким как, например н-бутиллитий, и дальнейшей обработки галогенирующим агентом, таким как, например, М-хлорсукцинимид. Данное взаимодействие осуществляют в подходящем реакционно-инертном растворителе, таком как, например, THF, при низкой температуре, такой как, например -78°С, в течение периода времени, который позволяет завершить взаимодействие, например 2 ч. В схеме взаимодействия (8) галогено может представлять собой хлоро, бромо или йодо, и W определен как в Формуле (II).
Схема взаимодействия (8)
Экспериментальная методика 9
Промежуточные соединения Формулы (IX), где W представляет собой йод, обозначенные (IХ-а), могут быть получены посредством взаимодействия промежуточного соединения Формулы (XII) с гидроксидом аммония согласно схеме взаимодействия (9). Данное взаимодействие осуществляют в тепловых условиях, таких как, например, нагревание реакционной смеси, например при 130°С в течение 12 ч.
Кроме того, промежуточные соединения Формулы (IХ-а) могут быть получены посредством взаимодействия промежуточного соединения Формулы (XII) с дифенилметанимином, с последующим расщеплением иминной двойной связи согласно схеме взаимодействия (9), где взаимодействие осуществляют в подходящем реакционно-инертном растворителе, таком как, например, толуол, в присутствии подходящего основания, такого как, например, натрия трет-бутилат, катализатора на основе металла, более конкретно палладиевого катализатора, такого как ацетат палладия(Н), и подходящего лиганда, такого как, например, 1,1'-[1,1-бинафталин]-2,2'-диилбис[1,1-дифенил-фосфин] (BINAP), нагревания в течение подходящего периода времени, которое позволяет завершить взаимодействие, например при 100°С в течение 16 ч в герметично закрытой пробирке, с последующим расщеплением промежуточной иминной двойной связи подходящей кислотой, такой как, например, водная соляная кислота. В схеме взаимодействия (9) галогено может представлять собой хлоро, бромо или йодо.
Схема взаимодействия 9
Экспериментальная методика 10
Промежуточные соединения Формулы (III) могут быть получены согласно известным в данной области техники методикам посредством взаимодействия промежуточного соединения Формулы (XIII) с подходящим источником бора, таким как, например, бис(пинаколато)дибор, в присутствии палладиевого катализатора, такого как, например, 1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроценпалладий(II)дихлорид, в реакционно-инертном растворителе, таком как, например, DCM, как показано в схеме взаимодействия (10). Взаимодействие можно осуществлять в присутствии подходящей соли, такой как, например, ацетат калия, при умеренно высокой температуре, такой как, например, 110°С, в течение, например, 16 ч.
Кроме того, промежуточные соединения Формулы (III) могут быть получены посредством известных в области техники способов обмена галоген-металл и последующего взаимодействия с подходящим источником бора из промежуточных соединений Формулы (XIII). Данный тип взаимодействия можно осуществить, используя, например, промежуточное соединение Формулы (XIII) и литийорганическое соединение, такое как, например, н-бутиллитий. Взаимодействие можно осуществлять при умеренно низкой температуре, такой как, например, -40°С, в инертном растворителе, таком как, например, THF. За данным взаимодействием следует последующее взаимодействие с подходящим источником бора, таким как, например, триметоксиборан.
5
6
2
2
2
2
2
3
2
3
2
В схеме взаимодействия (10) все переменные определены как в Формуле (I), R и R могут представлять собой водород или алкил, или могут быть взяты вместе с образованием, например, бивалентного радикала формулы -СНСН-, -СНСНСН- или -С(СН)С(СН)-, галогено представляет собой подходящий галоген, такой как, например, бром, и все другие переменные определены как в Формуле (I).
Схема взаимодействия 10
Экспериментальная методика 11
3
3
2
3
Промежуточные соединения Формулы (XIII), где R такой как определено в Формуле (I), но не является водородом, обозначенные (ХIII-а), могут быть получены, следуя известным в области техники методикам путем взаимодействия промежуточного соединения Формулы (XIII), где Rпредставляет собой водород, обозначенного (XIII-b), с промежуточным соединением Формулы (XIV) в условиях алкилирования, например, в присутствии основания, такого как, например, КСО или NaH, в подходящем реакционно-инертном растворителе, таком как, например, DMF. Взаимодействие можно осуществлять в микроволновом излучении, при подходящей температуре, обычно 150°С, в течение подходящего периода времени, который позволяет завершить взаимодействие. В схеме взаимодействия (11) все переменные определены как в Формуле (I), X представляет собой подходящую уходящую группу для реакций алкилирования, такую как, например, галогено, тозил, мезил и галогено может представлять собой хлоро, бромо или йодо.
Схема взаимодействия 11
Экспериментальная методика 12
3
Промежуточные соединения Формулы (XIII), где галогено представляет собой бромо или йодо, могут быть получены, следуя известным в области техники методикам путем взаимодействия промежуточного соединения Формулы (XV) с подходящим галогенирующим агентом. Данное взаимодействие показано в схеме взаимодействия (12). Взаимодействие можно осуществлять с помощью галогенирующих агентов, таких как N-бромсукцинимид, N-йодсукцинимид, при температурах в диапазоне от комнатной температуры до температуры дефлегмации, в реакционно-инертном растворителе, таком как DMF, DCM, СНСl или уксусная кислота. Обычно реакционные смеси можно перемешивать в течение от 15 минут до 48 ч при температуре от 0 до 100°С. В схеме взаимодействия (12) все переменные определены как в Формуле (I), и галогено может представлять собой хлоро, бромо или йодо.
Схема взаимодействия 12
Экспериментальная методика 13
3
3
Промежуточные соединения Формулы (XV), где R такой, как определено в Формуле (I), но не является водородом, обозначенные (XV-a), могут быть получены известными в области техники способами путем взаимодействия промежуточного соединения Формулы (XV), где R представляет собой водород, обозначенного (XV-b), с промежуточным соединением Формулы (XIV) в условиях алкилирования, как проиллюстрировано в схеме взаимодействия (13). В схеме взаимодействия (13) все переменные определены как в Формуле (I), X представляет собой подходящую уходящую группу для алкилирования, такую как, например, галогено, тозил, мезил, и галогено может представлять собой хлоро, бромо или йодо.
Схема взаимодействия 13
Экспериментальная методика 14
3
7-
7
1-3
3-7
Промежуточные соединения Формулы (XIII), где R представляет собой 4-гидрокси-4-метилциклогексан-1-ил, обозначенные (ХIII-с), могут быть получены известными в области техники способами посредством взаимодействия промежуточного соединения Формулы (XVI) с подходящим металлорганическим источником алкила, таким как, например RM, где М представляет собой галогенид магния или литий. Данное взаимодействие показано в схеме взаимодействия (14). Взаимодействие можно осуществлять в инертном растворителе, таком как, например, THF, диэтиловый эфир или 1,4-диоксан. Обычно смеси можно перемешивать от 1 до 48 ч при температуре от 0 до 100°С. В схеме взаимодействия (14) все переменные определены как в Формуле (I), галогено может представлять собой хлоро или бромо, и Rпредставляет собой Cалкил или Сциклоалкил.
Схема взаимодействия 14
Экспериментальная методика 15
3
Промежуточные соединения Формулы (XIII), где R представляет собой 4-гидрокси-циклогексан-1-ил, обозначенные (XIII-d), могут быть получены посредством взаимодействия промежуточного соединения Формулы (XVI) в восстановительных условиях, которые известны специалисту в данной области техники. Взаимодействие проиллюстрирована в схеме взаимодействия (15). Взаимодействие можно осуществлять в присутствии восстанавливающего агента, такого как, например, боргидрид натрия, в подходящим растворителе, таком как, например, метанол. Взаимодействие можно осуществлять при подходящей температуре, обычно комнатной температуре, в течение подходящего периода времени, который позволяет завершить взаимодействие. В схеме взаимодействия (15) все переменные определены как в Формуле (I), и галогено может представлять собой хлоро, бромо или йодо.
Схема взаимодействия 15
Экспериментальная методика 16
Промежуточные соединения Формулы (XVI) могут быть получены путем подвергания ацетального промежуточного соединения Формулы (XVII) подходящим условиям снятия защиты для карбонильной функциональной группы, которые известны специалисту в данной области техники. Данное взаимодействие проиллюстрировано в схеме взаимодействия (16). Взаимодействие можно осуществлять в присутствии кислоты, такой как, например, пара-толуолсульфоновая кислота, в подходящем реакционном растворителе, таком как, например, ацетон. Взаимодействие может быть легко осуществлено в микроволновом излучении при подходящей температуре, обычно при 100°С, в течение подходящего периода времени, который позволяет завершить взаимодействие. В схеме взаимодействия (16) все переменные определены как в Формуле (I) и галогено может представлять собой хлоро, бромо или йодо.
Схема взаимодействия 16
Экспериментальная методика 17
3
3
3
3
Промежуточные соединения формулы (XVII) и промежуточные соединения Формулы (XIII), где А представляет собой радикал формулы -СН=СН- и R представляет собой , где Q представляет собой -O-, , ,  и каждый n равен 1 или 2, обозначенные (Xlll-f), могут быть получены посредством взаимодействия промежуточного соединения Формулы (XIII), где А представляет собой радикал формулы -СН=СН-, и R представляет собой Н, обозначенные (ХIII-е), с промежуточным соединением Формулы R-Х (Формула XIV), где R такой, как определено выше, обозначенным (XIV-a), согласно схеме взаимодействия (17). Взаимодействие можно осуществлять в условиях алкилирования, которые известны специалистам в данной области техники, например в присутствии основания, такого как, например, гидроксид калия, в подходящем реакционном растворителе, таком как, например, диметилсульфоксид. Взаимодействие можно осуществлять при подходящей температуре, обычно при 60°С, в течение подходящего периода времени, который позволяет завершить взаимодействие. В схеме взаимодействия (17) все переменные определены как в Формуле (I), X представляет собой подходящую уходящую группу для алкилирования, такую как, например, галогено, тозил, мезил, и галогено может представлять собой хлоро, бромо или йодо.
Схема взаимодействия 17
Экспериментальная методика 18
2
2
2
3
Промежуточные соединения Формулы (XIII), где А представляет собой радикал формулы -СН-СН-O-, обозначенные (ХIII-g), могут быть получены посредством взаимодействия орто-аминофенольного производного Формулы (XVIII) с имеющимся в продаже 1,2-дибромэтаном в условиях алкилирования, таких как, например, осуществление взаимодействия в присутствии основания, такого как, например, КСО, в подходящем реакционно-инертном растворителе, таком как, например, DMF. Взаимодействие можно осуществлять в микроволновом излучении при подходящей температуре, обычно 180°С, в течение подходящего периода времени, которое позволяет завершить взаимодействие. В схеме взаимодействия (18) все переменные определены как в Формуле (I) и галогено может представлять собой хлоро, бромо или йодо.
Схема взаимодействия 19
Экспериментальная методика 20
Промежуточные соединения Формулы (XVIII) могут быть получены посредством взаимодействия промежуточного соединения Формулы (XIX) с N-галогеносукцинимидом, таким как N-xлop-(NCS), N-бром-(NВS) или N-йодосукцинимид (NIS), согласно схеме взаимодействия (20). Данное взаимодействие можно осуществлять в подходящем реакционно-инертном растворителе, таком как, например, DMF, DCM или уксусная кислота. Взаимодействие обычно можно осуществлять при комнатной температуре в течение от 1 до 24 ч. В схеме взаимодействия (20) все переменные определены как в Формуле (I) и галогено может представлять собой хлоро, бромо или йодо.
Схема взаимодействия 20
Экспериментальная методика 21
3
3
Промежуточные соединения Формулы (XIX), где R представляет собой , обозначенные (XIX-a), могут быть получены посредством взаимодействия промежуточного соединения Формулы (XIX), где Rпредставляет собой Н, обозначенного (XIX-b), с циклическим кетонным производным Формулы (XX) в условиях восстановительного аминирования, которые известны специалисту в данной области техники. Это проиллюстрировано в схеме взаимодействия (21). Взаимодействие можно осуществлять, например, в присутствии триацетоксиборгидрида натрия в подходящем реакционно-инертном растворителе, таком как, например, DCE (1,2-дихлорэтан), при подходящей температуре взаимодействия, обычно при комнатной температуре, в течение подходящего периода времени, который позволяет завершить взаимодействие. В схеме взаимодействия (21) все переменные определены как в Формуле (I), и Q такой, как определен.
Схема взаимодействия 21
Экспериментальная методика 22
Промежуточные соединения Формулы (V) могут быть получены посредством взаимодействия промежуточного соединения Формулы (XXI) с галогенирующим агентом, таким как, например, бром, при умеренно низкой температуре, такой как, например, 0°С, в инертном растворителе, таком как, например, 1,4-диоксан. В схеме взаимодействия (22) все переменные определены как в Формуле (I).
Схема взаимодействия 22
Промежуточные соединения Формул (VIII), (XI), (XII), (ХIII-е), (XIV), (XIX-b), (XX) и (XXI) имеются в продаже или могут быть получены специалистами в данной области техники.
Промежуточное соединение Формулы (XIV-a), где Q=-О-(CAS[97986-34-0]) может быть получено согласно методикам синтеза, описанным в WO 2007148648 А1;
промежуточные соединения, где Q представляет собой  [23511-05-9]) могут быть получены согласно методике синтеза, описанной в J. Chem. Soc, Perkin Trans. 1, 2002, 2251-2255.
Фармакология
Соединения, предложенные в данном изобретении, представляют собой положительные аллостерические модуляторы метаботропных глутаматных рецепторов, в частности они представляют собой положительные аллостерические модуляторы mGluR2. По всей видимости, соединения по настоящему изобретению связываются не с сайтом распознавания глутамата, ортостерическим сайтом лиганда, но вместо него с аллостерическим сайтом в пределах семитрансмембранного участка рецептора. В присутствии глутамата или агониста mGluR2 соединения по данному изобретению усиливают ответ mGluR2. Ожидается, что соединения, предложенные в данном изобретении, оказывают воздействие на mGluR2 посредством своей способности усиливать ответ таких рецепторов на глутамат или агонисты mGluR2, усиливая ответ рецептора. Следовательно, настоящее изобретение относится к соединению по настоящему изобретению для применения в качестве лекарственного средства. Настоящее изобретение также относится к соединению по изобретению или фармацевтической композиции по изобретению для применения в лечении или предупреждении, в частности лечении, заболевания или состояния у млекопитающего, включая человека, лечение или предупреждение которого находится под влиянием или облегчается нейромодуляторным эффектом аллостерических модуляторов mGluR2, в частности его положительных аллостерических модуляторов. Настоящее изобретение также относится к применению соединения по изобретению или фармацевтической композиции по изобретению для изготовления лекарственного средства для лечения или предупреждения, в частности лечения, состояния у млекопитающего, включая человека, лечение или предупреждение которого находится под воздействием или облегчается нейромодуляторным эффектом аллостерических модуляторов mGluR2, в частности его положительных аллостерических модуляторов. Настоящее изобретение также относится к соединению по настоящему изобретению или фармацевтической композиции по изобретению для применения в изготовлении лекарственного средства для лечения или предупреждения, в частности лечения, состояния у млекопитающего, включая человека, лечение или предупреждение которого находится под воздействием или облегчается нейромодуляторным эффектом аллостерических модуляторов mGluR2, в частности его положительных аллостерических модуляторов. Настоящее изобретение также относится к соединению по настоящему изобретению или фармацевтической композиции по изобретению для лечения или предупреждения, в частности лечения, состояния млекопитающего, включая человека, лечение или предупреждение которого находится под воздействием или облегчается нейромодуляторным эффектом аллостерических модуляторов mGluR2, в частности его положительных аллостерических модуляторов.
Также настоящее изобретение относится к применению соединения по изобретению или фармацевтической композиции по изобретению для изготовления лекарственного средства для лечения, предупреждения, ослабления, контроля или снижения риска различных неврологических и психиатрических расстройств, ассоциированных с глутаматной дисфункцией у млекопитающего, включая человека, лечение или предупреждение которого находится под воздействием или облегчается нейромодуляторным эффектом положительных аллостерических модуляторов mGluR2.
Когда указывается, что изобретение относится к применению соединения или композиции по изобретению для изготовления лекарственного средства, например для лечения млекопитающего, следует понимать, что такое применение следует интерпретировать в некоторых случаях как способ, например, лечения млекопитающего, включающий введение млекопитающему, нуждающемуся в таком, например, лечении, эффективного количества соединения или композиции по изобретению.
В частности, неврологические и психиатрические расстройства, ассоциированные с глутаматной дисфункцией, включают одно или более из следующих состояний или заболеваний: острые неврологические и психиатрические расстройства, такие как, например, церебральные недостаточности после операции шунтирования на сердце и имплантации, инсульт, церебральная ишемия, травма спинного мозга, травма головы, перинатальная гипоксия, остановка сердца, гипогликемическое повреждение нейронов, деменция (включая деменцию, индуцированную СПИД), болезнь Альцгеймера, хорея Хантингтона, боковой амиотрофический склероз, поражение зрения, ретинопатия, когнитивные расстройства, идиопатическая и индуцированная лекарственным средством болезнь Паркинсона, мышечные спазмы и расстройства, ассоциированные с мышечной спастичностью, включая треморы, эпилепсию, судороги, мигрень (включая мигреневую головную боль), недержание мочи, толерантность к веществу, синдром отмены вещества (включая такие вещества, как, например, опиаты, никотин, табачные продукты, алкоголь, бензодиазепины, кокаин, седативные средства, снотворные средства и так далее.), психоз, шизофрения, тревога (включая генерализованное тревожное расстройство, паническое расстройство и обсессивно-компульсивное расстройство), расстройства настроения (включая депрессию, манию, биполярное расстройство), тригеминальная невралгия, потеря слуха, шум в ушах, макулярная дегенерация глаза, тошнота, отек головного мозга, боль (включая острые и хронические состояния, сильную боль, некупируемая боль, невропатическая боль и посттравматическая боль), поздняя дискинезия, расстройства сна (включая нарколепсию), синдром дефицита внимания/гиперактивности и расстройство поведения.
В частности, состояние или заболевание представляет собой расстройство центральной нервной системы, выбранное из группы тревожных расстройств, психотических расстройств, расстройств личности, расстройств, связанных с веществом, расстройств питания, расстройств настроения, мигрени, эпилепсии или судорожных расстройств, детских расстройств, когнитивных расстройств, нейродегенерации, нейротоксичности и ишемии.
Предпочтительно расстройство центральной нервной системы представляет собой тревожное расстройство, выбранное из группы:
агорафобия, генерализованное тревожное расстройство (GAD), обсессивно-компульсивное расстройство (OCD), паническое расстройство, посттравматическое стрессовое расстройство (PTSD), социальная фобия и другие фобии.
Предпочтительно расстройство центральной нервной системы представляет собой психотическое расстройство, выбранное из группы:
шизофрения, бредовое расстройство, шизоаффективное расстройство, шизоморфное расстройство и психотическое расстройство, индуцированное веществом.
Предпочтительно расстройство центральной нервной системы представляет собой расстройство личности, выбранное из группы: обсессивно-компульсивное расстройство личности и шизоидное, шизотипическое расстройство.
Предпочтительно расстройство центральной нервной системы представляет собой связанное с веществом расстройство, выбранное из группы: злоупотребление алкоголем, алкогольная зависимость, синдром отмены алкоголя, делирий при алкогольной абстиненции, индуцированное алкоголем психотическое расстройство, амфетаминовая зависимость, синдром отмены амфетамина, кокаиновая зависимость, синдром отмены кокаина, никотиновая зависимость, синдром отмены никотина, опиоидная зависимость и синдром отмены опиоида.
Предпочтительно расстройство центральной нервной системы представляет собой расстройство питания, выбранное из группы: нервная анорексия и нейрогенная булимия.
Предпочтительно расстройство центральной нервной системы представляет собой расстройство настроения, выбранное из группы: биполярные расстройства (I и II), циклотимическое расстройство, депрессия, дистимическое расстройство, большое депрессивное расстройство и расстройство настроения, индуцированное веществом.
Предпочтительно расстройство центральной нервной системы представляет собой мигрень.
Предпочтительно расстройство центральной нервной системы представляет собой эпилепсию или судорожное расстройство, выбранное из группы: генерализованная бессудорожная эпилепсия, генерализованная судорожная эпилепсия, малый эпилептический припадок, большой эпилептический припадок, парциальная эпилепсия с нарушением или без нарушения сознания, младенческие судороги, непрерывная парциальная эпилепсия и другие формы эпилепсии.
Предпочтительно, расстройство центральной нервной системы представляет собой синдром дефицита внимания/гиперактивности.
Предпочтительно расстройство центральной нервной системы представляет собой когнитивное расстройство, выбранное из группы: делирий, персистирующий делирий, индуцированный веществом, деменция, деменция вследствие ВИЧ-заболевания, деменция вследствие болезни Хантингтона, деменции вследствие болезни Паркинсона, деменция альцгеймеровского типа, персистирующая деменция, индуцированная веществом и умеренное когнитивное нарушение.
Из расстройств, упомянутых выше, особую важность представляет собой лечение тревоги, шизофрении, мигрени, депрессии и эпилепсии.
В настоящее время в четвертом издании Diagnostic & Statistical Manual of Mental Disirders (DSM-IV) Американской Психиатрической Ассоциации предложено диагностическое руководство для идентификации расстройств, описанных в данном описании изобретения. Специалисты в данной области техники признают, что существуют альтернативные номенклатуры, нозологии и системы классификации неврологических и психиатрических расстройств, описанных в данном описании изобретения, и что они развиваются вместе с прогрессом медицины и науки.
Так как такие положительные аллостерические модуляторы mGluR2, включающие соединения Формулы (I), усиливают ответ mGluR2 на глутамат, преимуществом является то, что в данных способах используется эндогенный глутамат.
Так как положительные аллостерические модуляторы mGluR2, включающие соединения Формулы (I), усиливают ответ mGluR2 на агонисты, понятно, что настоящее изобретение распространяется на лечение неврологических и психиатрических расстройств, ассоциированных с глутаматной дисфункцией, путем введения эффективного количества положительного аллостерического модулятора mGluR2, включая соединения Формулы (I), в комбинации с агонистом mGluR2.
Соединения по настоящему изобретению можно применять в комбинации с одним или более другими лекарственными средствами в лечении, предупреждении, регулировании, ослаблении или снижении риска заболеваний или состояний, для которых соединения Формулы (I) или другие лекарственных средства могут быть полезными, где комбинация лекарственных средств, взятых вместе, является более безопасной или более эффективной, чем любое одно из этих лекарственных средств.
Фармацевтические композиции
Изобретение также относится к фармацевтической композиции, содержащей фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель и, в качестве активного ингредиента, терапевтически эффективное количество соединения по изобретению, в частности соединения Формулы (I), его фармацевтически приемлемой соли, сольвата или его стереохимически изомерной формы.
Эффективное суточное количество может меняться от примерно 0,01 мг/кг до примерно 10 мг/кг массы тела, предпочтительно от примерно 0,05 мг/кг до примерно 1 мг/кг массы тела.
Соединения по изобретению, в частности соединения Формулы (I), их фармацевтически приемлемые соли, сольваты и стереохимически изомерные формы, или любая их подгруппа или комбинация могут быть приготовлены в виде препарата в различных фармацевтических формах с целью введения. В качестве подходящих композиций можно указать все композиции, обычно применяемые для системного введения лекарственных средств.
Для изготовления фармацевтических композиций по данному изобретению эффективное количество конкретного соединения, возможно в солевой форме, в качестве активного ингредиента объединяют в тщательно перемешанную смесь с фармацевтически приемлемым носителем или разбавителем, где носитель или разбавитель могут принимать широкий ряд форм в зависимости от формы препарата, желательной для введения. Такие фармацевтические композиции являются желательными в однократной лекарственной форме, подходящей, в частности, для введения перорально, ректально, чрескожно, посредством парентеральной инъекции или ингаляции. Например, при приготовлении композиции в пероральной лекарственной форме можно использовать любую из обычных фармацевтических сред, такую как, например, вода, гликоли, масла, спирты и тому подобное, в случае пероральных жидких препаратов, таких как, например, суспензии, сиропы, эликсиры, эмульсии и растворы; или твердых носителей, таких как, например, крахмалы, сахара, каолин, разбавители, смазывающие вещества, связующие вещества, разрыхлители и тому подобное, в случае порошков, пилюль, капсул и таблеток. Из-за легкости введения предпочтительным является пероральное введение, и таблетки и капсулы представляют собой наиболее полезные пероральные стандартные лекарственные формы, очевидно, что в таком случае используют твердые фармацевтические носители. Для парентеральных композиций носитель обычно содержит стерильную воду, по меньшей мере большую часть, однако могут быть включены другие ингредиенты, например, для поддержания растворимости. Могут быть приготовлены, например, инъецируемые растворы, в которых носитель содержит солевой раствор, раствор глюкозы или смесь солевого и глюкозного раствора. Также могут быть приготовлены инъецируемые суспензии, в таком случае могут использоваться подходящие жидкие носители, суспендирующие агенты и тому подобное. Также включены препараты в твердой форме, которые предназначены для превращения, незадолго до применения, в препараты в жидкой форме. В композициях, подходящих для чрескожного введения, носитель возможно содержит усиливающий проникновение агент и/или подходящий увлажняющий агент, возможно объединенный с подходящими добавками любой природы в незначительных количествах, данные добавки не оказывают значительного вредного воздействия на кожу. Указанные добавки могут облегчать введение в кожу и/или могут быть полезными для приготовления желательных композиций. Такие композиции могут быть введены различными путями, например в виде трансдермального пластыря, в виде капли, в виде мази.
Особенно полезно изготавливать вышеуказанные фармацевтические композиции в стандартной лекарственной форме для облегчения введения и равномерности дозирования. Стандартная лекарственная форма, при использовании в данном описании изобретения, относится к физически дискретным единицам, подходящим в качестве однократных дозировок, где каждая единица содержит предварительно определенное количество активного ингредиента, рассчитанное для получения желаемого терапевтического эффекта вместе с желательным фармацевтическим носителем. Примерами таких стандартных дозированных форм являются таблетки (включая таблетки с насечками или покрытые оболочкой таблетки), капсулы, пилюли, пакеты с порошком, облатки, суппозитории, инъецируемые растворы или суспензии и тому подобное и их отдельные составные части.
Точная дозировка и частота введения зависит от конкретного используемого соединения формулы (I), конкретного состояния, подлежащего лечению, тяжести состояния, подлежащего лечению, возраста, массы, пола, степени расстройства и общего физического состояния конкретного пациента, а также другого лечения, которое может получать субъект, как хорошо известно специалисту в данной области техники. Кроме того, очевидно, что указанное эффективное суточное количество можно уменьшать или увеличивать в зависимости от ответа получающего лечение субъекта и/или в зависимости от оценки лечащего врача, прописывающего соединения по настоящему изобретению.
В зависимости от способа введения фармацевтическая композиция содержит от 0,05 до 99% масс., предпочтительно от 0,1 до 70% масс., более предпочтительно от 0,1 до 50% масс. активного ингредиента, от 1 до 99,95% масс., предпочтительно от 30 до 99,9% масс., более предпочтительно от 50 до 99,9% масс. фармацевтически приемлемого носителя, где все процентные содержания даны в пересчете на общую массу композиции.
Как уже указано выше, изобретение также относится к фармацевтической композиции, содержащей соединения по изобретению и одно или более из других лекарственных средств, в лечении, предупреждении, регулировании, облегчении или снижении риска заболеваний или состояний, для которых соединения Формулы (I) или другие лекарственных средств могут быть полезны, а также к применению такой композиции для изготовления лекарственного средства. Настоящее изобретение также относится к комбинации соединения по настоящему изобретению и ортостерического агониста mGluR2. Настоящее изобретение также относится к такой комбинации для применения в качестве лекарственного средства. Настоящее изобретение также относится к продукту, содержащему (а) соединение по настоящему изобретению, его фармацевтически приемлемую соль или сольват; и (б) ортостерический агонист mGluR2, в виде комбинированного препарата для одновременного, раздельного или последовательного применения в лечении или предупреждении состояния у млекопитающего, включая человека, лечение или предупреждение которого находится под воздействием или облегчается нейромодуляторным эффектом аллостерических модуляторов mGluR2, в частности положительных аллостерических модуляторов mGluR2. Настоящее изобретение также относится к соединению по изобретению в комбинации с ортостерическим агонистом mGluR2 для применения в лечении или предупреждении вышеуказанных заболеваний или состояний. Различные лекарственные средства такой комбинации или продукта могут быть объединены в один препарат вместе с фармацевтически приемлемыми носителями или разбавителями, или каждый из них может присутствовать в отдельном препарате вместе с фармацевтически приемлемыми носителями или разбавителями.
Следующие примеры предназначают для иллюстрации, а не ограничения объема настоящего изобретения.
Химия
Некоторые способы получения соединений по данному изобретению проиллюстрированы в следующих Примерах. Если не указано иное, все исходные вещества получали от торговых поставщиков и использовали без дополнительной очистки.
2
2
2
Ниже "THF" означает тетрагидрофуран; "DMF" означает N,N-диметилформамид; "ЕtOАс" означает этилацетат; "DCM" означает дихлорметан; "DME" означает 1,2-диметоксиэтан; "DCE" означает 1,2-дихлорэтан; "DIPE" означает диизопропиловый эфир; "DMSO" означает диметилсульфоксид; "DBU" означает 1,8-диаза-7-бицикло[5,4.0]ундецен, "МеОН" означает метанол, "h" означает час(ы), "s" означает секунду(ы), "мин" означает минуту(ы), "к.т." означает комнатную температуру, "Т.пл." означает точку плавления, DAPCy означает транс-(CyNH)Pd(OAc).
Взаимодействия, осуществляемые при помощи микроволнового излучения, выполняли в одномодовом реакторе: микроволновой реактор Initiator™ Sixty EXP (Biotage AB), или в многомодовом реакторе: MicroSYNTH Labstation (Milestone, Inc.).
1
3
6
6
H ЯМР спектры регистрировали на спектрометре Bruker DPX-400 и на Bruker AV-500 с последовательностями стандартных импульсов, оперируя при 400 МГц и 500 МГц, соответственно, используя CDCl и CD в качестве растворителей. Химические сдвиги (δ) представлены в частях на миллион (м.д.) в направлении уменьшения напряженности поля от тетраметилсилана (TMS), который использовали в качестве внутреннего стандарта.
Описание 1
2-(1 -Этокси-этилиден)-малононитрил (D1)
Смесь малононитрила (17 г, 257,57 ммоль) и триэтилортооацетата (45,95 г, 283,25 ммоль) нагревали при 95°С в течение 1,5 ч. Затем смесь упаривали в вакууме с получением соединения D1 (34 г, 99%) в виде желтого твердого вещества. Данное соединение использовали на следующей стадии взаимодействия без дополнительной очистки.
Соединение D1 также имеется в продаже - CAS: 5417-82-3.
Описание 2
2-(3-Диметиламино-1 -метокси-аллилиден)-малононитрил (D2)
+
К смеси D1 (34 г, 250 ммоль) в МеОН (300 мл) добавляли NN-диметилформамид-диметил-ацеталь (44,68 г, 375 ммоль). Реакционную смесь нагревали при температуре дефлегмации в течение 2 ч. Смесь затем охлаждали до комнатной температуры, и при охлаждении осаждалось темно-красное твердое вещество. Твердое вещество отфильтровывали, промывали холодным метанолом и сушили в вакууме с получением соединения D2 (16,2 г, 38%) в виде красного твердого вещества. LCMS: ММ (молекулярная масса) (теоретическая): 177; [МН]: 178; RT (время удерживания) (мин): 2,25, Соединение D2 также имеется в продаже - CAS: 95689-38-6.
Описание 3
2-Амино-4-метокси-никотинонитрил (D3)
4
Смесь D2 (16 г, 90,39 ммоль) в NHOH (100 мл, 30% в воде) нагревали с обратным холодильником в течение 3 ч. После охлаждения в ледяной бане осаждалось желтое твердое вещество. Твердое вещество отфильтровывали, промывали холодным изопропанолом и сушили в вакууме с получением соединения D3 (10 г, 76%) в виде белого твердого вещества.
+
LCMS: ММ (теоретическая): 149; [MH]: 150; RT (мин): 0,41.
Соединение D3 также имеется в продаже - САЗ: 98651-70-8.
Описание 4
2-Бром-4,4,4-трифтор-бутиральдегид (D4)
3
4
К смеси 4,4,4-трифторбутиральдегида (5 г, 39,68 ммоль) в 1,4-диоксане (5 мл), охлажденном до 0°С, добавляли по каплям бром (2,24 мл, 43,65 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 0°С в течение 2 ч. Полученную реакционную смесь фильтровали через подушку диатомитовой земли и фильтрат промывали NаНСО (насыщенный водный раствор). Органический слой отделяли, сушили (MgSO) и упаривали в вакууме с получением соединения D4 (6,2 г, 76%), которое использовали на следующей стадии взаимодействия без дополнительной очистки.
1
3
H-ЯМР (CDCl): 9,46 (s, 1H); 4.48 (t, J=6,5 Гц, 1Н); 3.26-3.13 (m, 1H); 2.74-2.60 (m, 1H).
Описание 5
7-Гидрокси-3-(2,2,2-трифтор-этил)-имидазол[1,2-а]-пиридин-8-карбонитрил (D5)
2
Смесь соединения D3 (3,31 г, 22,19 ммоль) и D4 (6,2 г, 21,86 ммоль) в ЕtOН (10 мл) подвергали микроволновому нагреванию при 150°С в течение 40 мин. После охлаждения до комнатной температуры растворитель выпаривали в вакууме. Полученный таким образом остаток обрабатывали EtО, осаждалось твердое вещество. Твердое вещество отфильтровывали, промывали ЕtOАс и сушили в вакууме с получением соединения D5 (1 г, 18%).
+
LCMS: MM (теоретическая): 241; [MH]: 242; RT (мин): 1,06.
Описание 6
7-Хлор-3-(2,2,2-трифтор-этил)-имидазо[1,2-а]пиридин-8-карбонитрил (D6)
3
4
2
Смесь соединения D5 (1 г, 4,148 ммоль) и оксихлорида фocфopa(V) (2 мл) подвергали микроволновому нагреванию при 130°С в течение 15 мин. После охлаждения до комнатной температуры растворитель выпаривали в вакууме. Затем остаток обрабатывали NаНСО (насыщенный водный раствор) и экстрагировали DCM. Органический слой отделяли, сушили (MgSO) и упаривали в вакууме. Неочищенный продукт очищали посредством колоночной хроматографии (силикагель; EtO в качестве элюента). Нужные фракции собирали и упаривали в вакууме с получением соединения D6 (0,6 г, 56%) в виде желтого твердого вещества.
+
LCMS: ММ (теоретическая): 259; [МН]: 260; RT (мин): 2,66. (Способ 11)
Описание 7
2,4-дибром-никотинонитрил (D7)
3
4
+
К раствору имеющегося в продаже 4-метокси-2-оксо-1,2-дигидро-3-пиридинкарбонитрила (95,47 г, 333 ммоль) [C.A.S. 21642-98-8] в ацетонитриле (670 мл), добавляли порциями оксибромид фосфора(V) (250 г, 166 ммоль). Полученную суспензию нагревали при 60°С в течение 16 ч. После охлаждения до комнатной температуры реакционную смесь разбавляли ЕtOАс и промывали водой. Органический слой отделяли и промывали NаНСО (насыщенный водный раствор), сушили (MgSO) и упаривали в вакууме. Неочищенный продукт растирали с DIPE с получением соединения D7 (34,5 г, 79%) в виде белого твердого вещества. GCMS (сочетание газовой хроматографии и масс-спектроскопии) (EI (ионизация электрораспылением)): ММ (теоретическая): 262; [М-2H]: 260; RT (мин): 9,67,
Описание 8
2-Амино-4-бром-никотинонитрил (D8)
4
2
4
Смесь соединения D7 (32 г, 122,2 ммоль) в NHOH (200 мл, 30% в воде) и THF (200 мл) нагревали при 100°С в течение 12 ч в сосуде PARR для работы под давлением. После охлаждения добавляли ЕtOАс. Органический слой отделяли, промывали рассолом, сушили (NaSO) и упаривали в вакууме. Полученный таким образом твердый остаток растирали с DCM и затем отфильтровывали. Фильтрат упаривали в вакууме с получением соединения D8 (6,5 г, 26,8%) в виде белого твердого вещества.
+
LCMS: ММ (теоретическая): 197; [МН: 198; RT (мин): 1,14 (Способ 2)
Описание 9
7-Бром-3-(2,2,2-трифтор-этил)-имидазо[1,2-а]пиридин-8-карбонитрил (D9)
4
Смесь соединений D8 (2 г, 10,1 ммоль) и D4 (2,898 г, 14,14 ммоль) в ЕtOН (10 мл) подвергали микроволновому нагреванию при 150°С в течение 40 мин. После охлаждения до комнатной температуры растворитель выпаривали в вакууме. Полученный таким образом остаток разбавляли ЕtOАс и промывали водой. Органический слой отделяли и промывали водой, затем 1 М HCl (водный раствор), сушили (МgSO) и упаривали в вакууме. Полученный таким образом неочищенный продукт растирали с диэтиловым эфиром с получением соединения D9 (1,5 г, 48,8%).
+
LCMS: MM (теоретическая): 303; [МН]: 304; RT (мин): 2,48. Способ 14.
Описание 10
2,3-дихлор-4-йод-пиридин (D10)
2
К раствору н-бутиллития (27,6 мл, 69 ммоль, 2,5 М в гексанах) в безводном EtO (150 мл), охлажденному до -78°С в атмосфере азота, добавляли по каплям 2,2,6,6-тетраметилпиперидин (11,64 мл, 69 ммоль).
2
2
3
3
2
4
Полученную реакционную смесь перемешивали при -78°С в течение 10 мин и добавляли по каплям раствор 2,3-дихлорпиридина (10 г, 67,57 ммоль) в безводном THF (75 мл). Смесь перемешивали при -78°С в течение 30 мин и добавляли раствор йода (25,38 г, 100 ммоль) в безводном THF (75 мл). Смесь оставляли медленно нагреваться до комнатной температуры в течение ночи, затем гасили NaSO (насыщенный водный раствор) и дважды экстрагировали ЕtOАс. Объединенные органические экстракты промывали NаНСО (насыщенный водный раствор), сушили (NaSO) и упаривали в вакууме. Неочищенный остаток осаждали гептаном и полученный осадок отфильтровывали и сушили в сушильном шкафу с получением соединения D10 (8,21 г, 44%) в виде светло-кремового твердого вещества.
+
LCMS: ММ (теоретическая): 273; [МН]: не ионизируют; RT (мин): 2,73. (Способ 12)
Описание 11
3-Хлор-4-йод-пиридин-2-иламин (D11)
4
2
4
3
+
Смесь соединения D10 (6 г, 21,9 ммоль) в водном NHOH (12 мл, 11 н.) нагревали при 129°С в течение 12 ч. После охлаждения до комнатной температуры добавляли DCM. Органический слой отделяли, промывали рассолом, сушили (NaSO) и упаривали в вакууме. Полученный таким образом остаток очищали посредством колоночной хроматографии (силикагель; DСМ/МеОН(NН) до 2% в качестве элюента). Нужные фракции собирали и упаривали в вакууме с получением соединения D11 (2,88 г, 52%) в виде белого твердого вещества. LCMS: ММ (теоретическая): 254; [МН]: 255; RT (мин): 2,22. (Способ 13).
Описание 12
8-Хлор-7-йод-3-(2,2,2-трифтор-этил)-имидазол[1,2-а]пиридин (D12)
3
2
4
К смеси соединения D11 (0,507 г, 1,992 ммоль) в ЕtOН (7 мл) добавляли соединение D4 (0,817 г, 3,985 ммоль). Реакционную смесь подвергали микроволновому нагреванию при 150°С в течение 30 мин. Смесь охлаждали до комнатной температуры и летучие вещества выпаривали в вакууме. Остаток переносили в DCM и промывали NаНСО (насыщенный водный раствор). Органический слой отделяли, сушили (NaSO) и растворитель выпаривали в вакууме. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии (силикагель; DCM/EtOAc до 6% в качестве элюента). Нужные фракции собирали и упаривали в вакууме с получением соединения D12 (0,5 г, 69,6%) в виде желтого твердого вещества.
+
LCMS: ММ (теоретическая): 360; [MН]: 361; RT (мин): 2,31 (Способ 8)
Описание 13
(4-Бром-2-хлорфенил)-(тетрагидропиран-4-ил)-амин (D13)
3
2
4
+
Смесь 4-бром-2-хлор-фениламина (0,5 г, 2,422 ммоль), тетрагидропиран-4-она (1,308 мл, 10,898 ммоль) и триацетоксиборгидрида натрия (2,31 г, 10,898 ммоль) в DCE (20 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. Реакционную смесь промывали NаНСО (насыщенный водный раствор), сушили (NaSO) и растворитель упаривали в вакууме. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии (силикагель; гептан/DCM до 40% в качестве элюента). Нужные фракции собирали и упаривали в вакууме с получением соединения D13 (0,383 г, 52%) в виде белого твердого вещества. LCMS: ММ (теоретическая): 289; [MН]: 290; RT (мин): 4,39 (Способ 1).
Описание 14
(4-Бром-2-хлор-6-йод-фенил)-(тетрагидропиран-4-ил)-амин (D14)
3
2
2
3
3
2
4
К раствору D13 (0,380 г, 1,308 ммоль) в смеси СНСl(20 мл) и уксусной кислоты (10 мл) добавляли N-йодсукцинимид (0,324 мг, 1,438 ммоль). Полученную суспензию перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч. Реакционную смесь разбавляли DCM и последовательно промывали NaSO (насыщенный водный раствор), NаНСО (насыщенный водный раствор) и рассолом. Промытый органический слой сушили (NаSО) и растворитель упаривали в вакууме. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии (силикагель; гептан/DCM до 50% в качестве элюента). Нужные фракции собирали и упаривали в вакууме с получением соединения D14 (0,145 г, 26,6%) в виде бесцветного масла.
Описание 15
(4-Бром-2-хлор-6-триметилсиланилэтинил-фенил)-(тетрагидропиран-4-ил)-амин (D15)
3
2
2
3
2
4
+
D14 (0,145 г, 0,348 ммоль), Pd(PPh)Cl (12,219 мг, 0,0174 ммоль) и Cul (3,315 мг, 0,0174 ммоль) помещали в высушенном в сушильном шкафу флаконе в атмосферу азота. Добавляли безводный ЕtN (10 мл) и полученную суспензию охлаждали до 0°С и перемешивали. После добавления по каплям триметилсилилацетилена (0,0541 мл, 0,383 ммоль) смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи в атмосфере азота. Реакционную смесь разбавляли DCM, промывали рассолом и сушили (NaSO). Растворитель выпаривали в вакууме. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии (силикагель; гептан/DCM до 60% в качестве элюента). Нужные фракции собирали и упаривали в вакууме с получением соединения D15 (0,11 г, 81,6%) в виде бесцветного масла. LCMS: ММ (теоретическая): 285; [МН]: 286; RT (мин): 4,26 (Способ 11).
Описание 16
5-Бром-7-хлор-1 -(тетрагидро-пиран-4-ил)-1H-индол (D16)
+
Смесь D15 (0,11 г, 0,284 ммоль) и Cul (0,108 мг, 0,569 ммоль) в DMF (10 мл) подвергали микроволновому нагреванию при 180°С в течение 15 мин. После охлаждения до комнатной температуры реакционную смесь разбавляли DCM и фильтровали через слой диатомитовой земли. Фильтрат упаривали в вакууме. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии (силикагель; гептан в качестве элюента). Нужные фракции собирали и упаривали в вакууме с получением соединения D16 (0,071 г, 79%). GCMS: MM (теоретическая): 313; [М]: 313; RT (мин): 13,6 (Способ 21).
Описание 17
7-Хлор-1-(тетрагидро-пиран-4-ил)-5-(4,4,5,5-тетраметил-[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)-1H-индол (D17)
Бис(пинаколато)дибор (0,275 г, 1,083 ммоль) и ацетат калия (0,199 г, 2,031 ммоль) добавляли к раствору промежуточного соединения D16 (0,071 г, 0,226 ммоль) в 1,4-диоксане (10 мл) и DMF (4 мл). Поток азота барботировали через смесь и затем добавляли комплекс [1,1'-бис(дифенилфосфино)-ферроцен]-дихлорпалладий(II) с DCM (1:1) (14,9 мг, 0,0203 ммоль). Реакционную смесь подвергали микроволновому нагреванию при 150°С в течение 40 мин. Посредством LCMS наблюдали только незначительное превращение в целевой продукт. Требовалось два дополнительных микроволновых облучения для завершения превращения в целевой продукт, первое при 170°С в течение 50 мин и второе при 175°С в течение 1 ч, с соответствующими дополнительными количествами бис(пинаколато)дибора (1,6 экв.), ацетата калия (3 экв.), комплекса [1,1'-бис(дифенилфосфино)-ферроцен]-дихлорпалладий(II) с DCM (1:1) (0,03 экв.) и DMF (2 мл) для каждого из дополнительных облучений. После охлаждения до комнатной температуры реакционную смесь фильтровали через слой диатомитовой земли. Фильтрат упаривали в вакууме. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии (силикагель; элюент: гептан/DCM до 50% в качестве элюента). Нужные фракции собирали, и растворитель выпаривали в вакууме с получением D17 (0,072 г, 88%) в виде бесцветного масла.
Описание 18
7-Хлор-5-(4,4,5,5-тетраметил-[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)-1Н-индол (D 18)
Бис(пинаколато)дибор (1,058 г, 4,165 ммоль) и ацетат калия (0,383 г, 3,905 ммоль) добавляли к раствору 5-бром-7-хлор-1H-индола (0,3 г, 1,302 ммоль) [C.A.S. 180623-89-6] в диоксане (10 мл) и DMF (2 мл). Поток азота барботировали через смесь и затем добавляли комплекс [1,1'-бис(дифенилфосфино)-ферроцен]-дихлорпалладий(II) с DCM (1:1) (47,75 мг, 0,0651 ммоль). Реакционную смесь подвергали микроволновому нагреванию при 150°С в течение 30 мин. Посредством LCMS наблюдали только незначительное превращение в целевой продукт. Затем в реакционную смесь загружали дополнительное количество комплекса [1,1'-бис(дифенилфосфино)-ферроцен]-дихлорпалладия(II) с DCM (1:1) (48 мг) и снова подвергали микроволновому облучению при 150°С в течение 30 мин. После охлаждения до комнатной температуры реакционную смесь фильтровали через диатомитовую землю. Фильтрат упаривали в вакууме. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии (силикагель: гептан/ЕtOАс до 10% в качестве элюента). Нужные фракции собирали и растворитель выпаривали в вакууме с получением D18 (0,08 г, 22%) в виде белого твердого вещества.
+
LCMS: ММ (теоретическая): 277; [МН]: 276; RT (мин): 4,66 (Способ 9).
Описание 19
2-(1,4-Диокса-спиро[4.5]дец-8-иламино)-фенол (D19)
3
2
4
+
Смесь 2-аминофенола (2 г, 18,327 ммоль), 1,4-диокса-спиро[4.5]декан-8-она (3,721 г, 23,825 ммоль) и триацетоксиборгидрида натрия (5,826 г, 27,491 ммоль) в DCE (20 мл) и уксусную кислоту (0,2 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч. Реакционную смесь разбавляли DCM и промывали NaHCO (насыщенный водный раствор), сушили (NaSO) и растворитель выпаривали в вакууме. Твердый остаток растирали с диизопропиловым эфиром с получением D19 (3,78 г) в виде белого твердого вещества. LCMS: ММ (теоретическая): 327; [MH]: 328; RT (мин): 3,92 (Способ 9).
Описание 20
2-(Тетрагидропиран-4-иламино)-фенол (D20)
Смесь 2-аминофенола (1 г, 9,164 ммоль), тетрагидропиран-4-она (1,099 мл, 11,913 ммоль) и триацетоксиборгидрида натрия (0,71 г, 3,42 ммоль) в DCE (50 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. Неочищенную смесь фильтровали через диатомитовую землю, промывали DCM и фильтрат упаривали в вакууме с получением D20 (0,69 г), которое использовали как таковое на следующей стадии взаимодействия без дополнительной очистки.
+
LCMS: ММ (теоретическая): 193; [MН]: 194; RT (мин): 2,19 (Способ 9).
Описание 21
5-Бром-2-(тетрагидропиран-4-иламино)-фенол (D21)
3
2
4
Раствор промежуточного соединения D20 (0,66 г, 3,415 ммоль) и N-бромсукцинимида (0,669 г, 3,757 ммоль) в DMF (10 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Затем реакционную смесь промывали NаНСО (насыщенный водный раствор). Органический слой отделяли, сушили (NaSO) и растворитель выпаривали в вакууме. Неочищенный продукт очищали посредством колоночной хроматографии (силикагель; DCM/EtOAc 8:2 в качестве элюента). Нужные фракции собирали и упаривали в вакууме с получением D21 (0,433 г, 46,6%) в виде красноватого твердого вещества.
+
LCMS: ММ (теоретическая): 271; [MН]: 272; RT (мин): 3,33 (Способ 9).
Описание 22
5-Бром-2-(1,4-диокса-спиро[4.5]дец-8-иламино)-фенол (D22)
3
2
4
Раствор промежуточного соединения D19 (1 г, 4,011 ммоль) и N-бромсукцинимида (0,785 г, 4,412 ммоль) в DMF (15 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Затем реакционную смесь промывали NаНСО (насыщенный водный раствор). Органический слой отделяли, сушили (NaSO) и растворитель выпаривали в вакууме. Неочищенный продукт очищали посредством колоночной хроматографии (силикагель; DCM/EtOAc 8:2 в качестве элюента): Нужные фракции собирали и упаривали в вакууме с получением D22 (0,433 г, 32,89%) в виде красноватого твердого вещества.
+
LCMS: ММ (теоретическая): 327; [МН]: 328; RT (мин): 2,82 (Способ 15)
Описание 23
7-Бром-4-(тетрагидропиран-4-ил)-3,4-дигидро-2Н-бензо[1,4]оксазин (D23)
2
3
Смеси промежуточного соединения D21 (0,433 г, 1,591 ммоль), 1,2-дибромэтана (0,411 мл, 4,773 ммоль и KCO (1,099 г, 7,955 ммоль) в DMF (10 мл) подвергали микроволновому нагреванию при 180°С в течение 15 мин. После охлаждения до комнатной температуры реакционную смесь фильтровали через диатомитовую землю. Фильтрат упаривали в вакууме. Неочищенный остаток очищали посредством колоночной хроматографии (силикагель; DCM в качестве элюента). Нужные фракции собирали и упаривали в вакууме с получением бесцветного масла, которое кристаллизовалось с получением D23 (0,267 г, 56%) в виде белого твердого вещества. Т.пл.: 66,2°С.
+
LCMS: ММ (теоретическая): 297; [МН]: 298; RT (мин): 4,24 (Способ 9).
Описание 24
7-Бром-4-(1,4-диокса-спиро[4.5]дец-8-ил)-3,4-дигидро-2Н-бензо[1,4]оксазин (D24)
Смесь промежуточного соединения D22 (0,433 г, 1,319 ммоль), 1,2-дибромэтана (0,341 мл, 3,958 ммоль) и карбоната калия (0,912 г, 6,596 ммоль) в DMF (10 мл) подвергали микроволновому нагреванию при 180°С в течение 15 мин. После охлаждения до комнатной температуры реакционную смесь фильтровали через диатомитовую землю. Фильтрат упаривали в вакууме. Неочищенный остаток очищали посредством колоночной хроматографии (силикагель; DCM в качестве элюента). Нужные фракции собирали и упаривали в вакууме с получением бесцветного масла, которое кристаллизовалось с получением D24 (0,271 г, 58%).
+
LCMS: MM (теоретическая): 353; [МН]: 354; RT (мин): 4,71 (Способ 9)
Описание 25
4-(7-Бром-2,3-дигидро-бензо[1,4]оксазин-4-ил)-циклогексанон (D25)
2
3
2
4
+
Смесь промежуточного соединения D24 (0,250 г, 0,706 ммоль), пара-толуолсульфоновой кислоты (13,424 мг, 0,0706 ммоль) в НО (5 мл) и ацетона (2,5 мл) подвергали микроволновому нагреванию при 100°С в течение 15 мин. После охлаждения до комнатной температуры реакционную смесь разбавляли DCM и промывали NaHCO (насыщенный водный раствор), сушили (NaSO) и упаривали в вакууме. Реакционную смесь очищали посредством колоночной хроматографии (силикагель; DCM в качестве элюента). Нужные фракции собирали и упаривали в вакууме с получением D25 (0,172 г, 78%) в виде белого твердого вещества. Т.пл.: 101,8°С. LCMS: ММ (теоретическая): 309; [МН]: 310;
RT (мин): 3,77 (Способ 16).
Описание 26
4-(7-Бром-2,3-дигидро-бензо[1,4]оксазин-4-ил)-циклогексанол (D26)
4
2
4
Смесь промежуточного соединения D25 (1,3 г, 4,191 ммоль) и боргидрида натрия (0,476 г, 12,573 ммоль) в МеОН (15 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч. Затем полученную смесь осторожно гасили NHCl (насыщенный водный раствор) и экстрагировали DCM. Органический слой отделяли, сушили (NаSО) и упаривали в вакууме. Остаток растирали со смесью диизопропиловый эфир/диэтиловый эфир с получением D26 (1,045 г, 63%) в виде смеси цис/транс изомеров (34% и 66% соответственно)
+
LCMS: ММ (теоретическая): 311 ; [МH]: 312; RT(мин): 2,83. (Способ 15)
Описание 27
4-[7-(4,4,5,5-Тетраметил-[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)-2,3-дигидро-бензо[1,4] оксазин-4-ил]-циклогексанол (D27)
Бис(пинаколато)дибор (0,552 г, 2,174 ммоль) и ацетат калия (0,492 г, 5,016 ммоль) добавляли к раствору промежуточного соединения D26 (цис/транс смесь) (0,522 г, 1,672 ммоль) в 1,4-диоксане (5 мл). Поток азота барботировали через смесь и затем добавляли комплекс [1,1'-бис(дифенилфосфино)-ферроцен]-дихлорпалладий(II) с DCM (1:1) (0,0736 г, 0,1 ммоль). Реакционную смесь нагревали в течение ночи при 95°С в герметично закрытой пробирке. После охлаждения до комнатной температуры реакционную смесь фильтровали через подушку диатомитовой земли и эту подушку дополнительно промывали 1,4-диоксаном. Объединенные фильтраты упаривали в вакууме. Неочищенный остаток очищали посредством колоночной хроматографии (силикагель; градиент DCM/EtOAc до 5% в качестве элюента). Нужные фракции собирали и упаривали в вакууме с получением бесцветного масляного остатка, который кристаллизовался при стоянии с получением D27 (0,6 г, 99%) в виде смеси цис/транс-изомеров. Согласно LCMS (67% транс и 33% цис).
+
LCMS: ММ (теоретическая): 359; [МН]: 360; RT (мин): 2,74. (Способ 17)
Описание 28
4-(Тетрагидро-пиран-4-ил)-7-(4,4,5,5-тетраметил-[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)-3,4-дигидро-2Н-бензо[1,4]оксазин (D28)
+
Бис(пинаколато)дибор (315,956 мг, 1,244 ммоль) и ацетат калия (261,659 мг, 2,666 ммоль) добавляли к раствору промежуточного соединения D23 (265 мг, 0,889 ммоль) в 1,4-диоксане (12 мл). Поток азота барботировали через смесь и затем добавляли комплекс [1,1'-бис(дифенилфосфино)-ферроцен]-дихлорпалладий(II) с DCM (1:1) (39,125 мг, 0,0533 ммоль). Реакционную смесь нагревали в течение ночи при 95°С в герметично закрытой пробирке. После охлаждения до комнатной температуры реакционную смесь фильтровали через диатомитовую землю. Фильтрат упаривали в вакууме. Неочищенный остаток очищали посредством колоночной хроматографии (силикагель; DCM в качестве элюента). Собирали нужные фракции и растворитель выпаривали в вакууме с получением бесцветного маслянистого остатка, который кристаллизовался при стоянии с получением D28 (0,61 г, 19,88%) в виде белого твердого вещества. LCMS: ММ (теоретическая): 345; [МН]: 346; RT (мин): 4,52 (Способ 9).
Описание 29
5-Бром-1 -(1,4-диокса-спиро[4.5дец-8-ил)-1H-индол (D29)
2
2
4
Смесь 5-броминдола (8,472 г, 43,216 ммоль), 1,4-диокса-спиро[4.5]дец-8-илового эфира толуол-4-сульфоновой кислоты (13,5 г, 43,216 ммоль) (полученного согласно способу, описанному в Journal of the Chemical Society, Perkin Transactions 1 (2002), (20), 2251-2255) и порошкообразного гидроксида калия (13,239 г, 235,958 ммоль) в DMSO (300 мл) перемешивали при 80°С в течение 6 ч. Затем смесь охлаждали до комнатной температуры и вливали в ледяную воду. Полученную водную смесь экстрагировали EtO, сушили (NaSO) и летучие вещества выпаривали в вакууме. Неочищенный остаток очищали посредством колоночной хроматографии (силикагель; DCM/гептан 1:1 в качестве элюента). Нужные фракции собирали и упаривали в вакууме с получением D29 (2,897 г, 19,93%) в виде белого твердого вещества.
+
LCMS: ММ (теоретическая): 335; [МН]: 336; RT (мин): 4,38 (Способ 18)
Описание 30
4-(5-Бром-1H-индол-1 -ил)-циклогексанон (D30)
3
2
4
2
Смесь промежуточного соединения D29 (24 г, 71,38 ммоль) и пара-толуолсульфоновой кислоты (0,679 мг, 3,569 ммоль) в воде (72 мл) и ацетоне (168 мл) подвергали микроволновому нагреванию при 100°С в течение 15 мин. После охлаждения до комнатной температуры реакционную смесь разбавляли DCM и промывали NaHCO (насыщенный водный раствор), сушили (NaSO) и растворитель выпаривали в вакууме. Остаток растирали со смесью EtO (100 мл)/ацетон (30 мл). Отфильтровывали твердое вещество и фильтрат упаривали в вакууме с получением D30 (18,13 г, 73%) в виде желтого масла.
+
GCMS: ММ (теоретическая): 291; [М]: 291; RT (мин): 14,5,
Описание 31
4-(5-Бром-1H-индол-1-ил)-циклогексанол (D31)
4
2
4
Боргидрид натрия (62,198 мг, 1,644 ммоль) добавляли к смеси промежуточного соединения D30 (2,074 г, 7,098 ммоль) в МеОН (50 мл), перемешиваемой при 0°С. Полученную реакционную смесь нагревали до комнатной температуры и дополнительно перемешивали в течение 1 ч. Затем смесь концентрировали в вакууме и остаток растворяли в DCM. Этот раствор промывали NHCl (насыщенный водный раствор). Органический слой отделяли, сушили (NaSO) и растворитель выпаривали в вакууме. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии (силикагель; ЕtOАс/гептан градиент от 0:100 до 30:70 в качестве элюента). Нужные фракции собирали, и растворитель выпаривали в вакууме с получением транс-D31 (1,809 г, 86,6%) и цис-D31 (0,110 г, 5,27%).
транс-D31
+
LCMS: ММ (теоретическая): 293; [MH]: 294; RT (мин): 3,88 (Способ 19)
цис-D31
+
LCMS: MM (теоретическая): 293; [МН]: 294; RT (мин): 3,88 (Способ 19)
Описание транс-32
транс-4-[5-(4,4,5,5-Тетраметил-[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)-1H-индол-1-ил]-циклогексанол {транс-032)
Бис(пинаколато)дибор (0,829 г, 3,263 ммоль) и ацетат калия (0,300 г, 3,059 ммоль) добавляли к раствору промежуточного соединения транс-D31 (0,300 г, 1,02 ммоль) в 1,4-диоксане (12 мл) и DMF (2 мл). Поток азота барботировали через смесь и затем добавляли комплекс [1,1'-бис(дифенилфосфино)-ферроцен]-дихлорпалладий(II) с DCM (1:1) (0,0374 г, 0,051 ммоль). Реакционную смесь подвергали микроволновому нагреванию при 160°С в течение 1 ч. После охлаждения до комнатной температуры реакционную смесь фильтровали через диатомитовую землю. Фильтрат упаривали в вакууме. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии (силикагель; элюент: DCM/EtOAc градиент от 100:0 до 60:40). Нужные фракции собирали и растворитель выпаривали в вакууме с получением транс-032 (0,260 г, 74,6%).
+
LCMS: MM (теоретическая): 341; [MH]: 342; RT (мин): 4,74 (Способ 10).
Описание цис-32
цис-4-[5-(4,4,5,5-Тетраметил-[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)-1Н-индол-1-ил]-циклогексанол (цис-D32)
Бис(пинаколато)дибор (0,265 г, 1,042 ммоль) и ацетат калия (0,219 г, 2,233 ммоль) добавляли к раствору промежуточного соединения цис-D31 (0,219 г, 0,744 ммоль) в 1,4-диоксане (4 мл). Поток азота барботировали через смесь и затем добавляли комплекс [1,1'-бис(дифенилфосфино)-ферроцен]-дихлорпалладий(II) с DCM (1:1) (0,033 г, 0,045 ммоль). Реакционную смесь нагревали в течение 2 ч. при 95°С. После охлаждения до комнатной температуры реакционную смесь фильтровали через диатомитовую землю. Фильтрат упаривали в вакууме. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии (силикагель; градиент гептан/ЕtOАс от 100:0 до 80:20 в качестве элюента). Нужные фракции собирали и растворитель выпаривали в вакууме с получением промежуточного соединения цис-032 (0,213 г, 83,8%). Т.пл.: 187,7°С.
+
LCMS: ММ (теоретическая): 341; [MH]: 342; RT (мин): 4,74 (Способ 3)
Описание 33
4-(5-Бром-1Н-мндол-1-ил)-1-метил-циклогексанол (D33)
2
4
2
4
Метилмагния бромид (1,4 М раствор в смеси толуол/THF) (3,667 мл, 5,134 ммоль) добавляли по каплям к охлажденному раствору (при 0°С) промежуточного соединения D30 (0,5 г, 1,711 ммоль) в THF (20 мл) в атмосфере N. Полученную реакционную смесь нагревали до комнатной температуры и дополнительно перемешивали в течение 4 ч. После охлаждения в ледяной бане смесь осторожно гасили NHCl (насыщенный водный раствор) и затем экстрагировали DCM. Органический слой отделяли, сушили (NaSO) и растворитель выпаривали в вакууме. Неочищенный остаток очищали посредством колоночной хроматографии (силикагель; 0-30% ЕtOАс/гептан в качестве элюента). Нужные фракции собирали и растворитель выпаривали в вакууме с получением цис-D33 (0,096 г, 18,2%) и транс-D33 (0,12 г, 22,7%).
Т.пл. цис-D33: 111°С
+
LCMS: ММ (теоретическая): 307; [МН]: 308; RT (мин): 4,06 (Способ 20)
Т.пл. транс-D33: 95,9°С.
+
LCMS: ММ (теоретическая): 307; [МН]: 308; RT (мин): 4,30 (Способ 18)
Описание цис-34
цис-1-Метил-4-[5-(4,4,5,5-тетраметил-[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)-1H-индол-1-ил]-циклогексанол (цис-D34)
Бис(пинаколато)дибор (0,111 г, 0,436 ммоль) и ацетат калия (0,0917 г, 0,934 ммоль) добавляли к раствору промежуточного соединения цис-033 (0,096 г, 0,311 ммоль) в 1,4-диоксане (4 мл). Поток азота барботировали через смесь и затем добавляли комплекс [1,1'-бис(дифенилфосфино)-ферроцен]-дихлорпалладий(II) с DCM (1:1) (0,0137 г, 0,0187 ммоль). Реакционную смесь нагревали при 100°С в течение 1,5 ч. После охлаждения до комнатной температуры реакционную смесь фильтровали через диатомитовую землю. Фильтрат упаривали в вакууме. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии (силикагель; градиент гептан/ЕtOАс от 100:0 до 80:20 в качестве элюента). Нужные фракции собирали и растворитель выпаривали в вакууме с получением цис-034 (0,074 г, 66,87%).
+
LCMS: MM (теоретическая): 355; [MH]: 356; RT (мин): 3,86 (Способ 6)
Описание транс-34
транс-1-Метил-4-[5-(4,4,5,5-тетраметил-[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)-1Н-индол-1-ил]- циклогексанол (транс-D34)
Бис(пинаколато)дибора (0,130 г, 0,513 ммоль) и ацетат калия (0,108 г, 1,1 ммоль) добавляли к раствору промежуточного соединения транс-033 (0,113 г, 0,367 ммоль) в 1,4-диоксане (5 мл). Поток азота барботировали через смесь и затем добавляли комплекс [1,1'-бис(дифенилфосфино)-ферроцен]-дихлорпалладий(II) с DCM (1:1) (0,0161 г, 0,022 ммоль). Реакционную смесь нагревали при 100°С в течение 2,5 ч. После охлаждения до комнатной температуры реакционную смесь фильтровали через диатомитовую землю. Фильтрат упаривали в вакууме. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии (силикагель; градиент гептан/ЕtOАс от 100:0 до 80:20 в качестве элюента). Нужные фракции собирали и упаривали в вакууме с получением транс-D34 (0,096 г, 74%).
+
LCMS: MM (теоретическая): 355; [MH]: 356; RT (мин): 3,97 (Способ 6)
Описание 35
5-Бром-1 -пиримидин-2-ил-1Н-индол (D35)
2
3
Поток азота барботировали через смесь 5-броминдола (2 г, 10,201 ммоль) в DMSO (10 мл). Затем добавляли КСО (4,23 г, 30,604 ммоль), йодную медь(I) (0,097 г, 0,51 ммоль), L-пролин.трифторуксусную кислоту (0,234 г, 1,02 ммоль) и 2-бромпиримидин (1,622 г, 10,201 ммоль). Полученную реакционную смесь перемешивали в герметично закрытой пробирке при 90°С в течение 48 ч. После охлаждения до комнатной температуры реакционную смесь разбавляли ЕtOАс и водой и фильтровали через диатомитовую землю. Фильтрат упаривали в вакууме. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии (силикагель; DCM в качестве элюента). Нужные фракции собирали и упаривали в вакууме с получением D35 (2,6 г, 92%).
Описание 36
1-Пиримидин-2-ил-5-(4,4,5,5-тетраметил-[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)-1H-индол (D36)
Бис(пинаколато)дибор (2 г, 7,88 ммоль) и ацетат калия (1,933 г, 19,699 ммоль) добавляли к раствору промежуточного соединения D35 (1,8 г, 6,566 ммоль) в DMSO (13 мл). Поток азота барботировали через смесь и затем добавляли комплекс [1,1'-бис(дифенилфосфино)-ферроцен]-дихлорпалладий(II) с DCM (1:1) (0,145 г, 0,197 ммоль). Реакционную смесь нагревали при 100°С в течение 16 ч. С помощью LCMS наблюдали только частичное превращение в целевой продукт. Затем реакционный сосуд наполняли дополнительным количеством тетракис(трифенилфосфин)палладия(0) (0,145 г) и вновь нагревали при 110°С в течение 4,5 ч. После охлаждения до комнатной температуры реакционную смесь разбавляли ЕtOАс и фильтровали через диатомитовую землю. Фильтрат упаривали в вакууме. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии (силикагель; градиент гептан/ЕtOАс от 100:0 до 90:10 в качестве элюента). Нужные фракции собирали и упаривали в вакууме с получением D36 (2,19 г, 73%).
Пример 1
7-[7-Хлор-1-(тетрагидропиран-4-ил)-1Н-индол-5-ил]-3-(2,2,2-трифторэтил)имидазо[1,2-а]пиридин-8-карбонитрил (Е1)
3
2
4
Смесь промежуточного соединения D17 (0,07 г, 0,194 ммоль), промежуточного соединения D9 (0,107 г, 0,194 ммоль), тетракис(трифенилфосфин)палладия(0) (0,011 г, 0,00968 ммоль) и насыщенный водный раствор NаНСО (5 мл) в 1,4-диоксане (5 мл) подвергали микроволновому нагреванию при 150°С в течение 10 мин. После охлаждения до комнатной температуры реакционную смесь фильтровали через диатомитовую землю, фильтрат разбавляли DCM и органический слой промывали сначала водой и затем рассолом. Органическую фракцию сушили (NaSO), фильтровали и растворитель выпаривали в вакууме. Неочищенный остаток очищали посредством колоночной хроматографии (силикагель;
DCM/ЕtOАст до 30% в качестве элюента). Нужные фракции собирали и упаривали в вакууме с получением Е1 (9,1 мг, 9,6%) в виде желтого сиропа.
1
3
H ЯМР (500 МГц, CDCl) δ м.д. 2.03-2,13 (m, 2H), 2,14-2.20 (m, 2H), 3.64 (td, J=11,8, 1,6 Гц, 2H), 3.80 (q, J=9,9 Гц, 2H), 4.17 (dd, J=11,7, 4,2 Гц, 2H), 5,55 (tt, J=11,6, 4,0 Гц, 1Н), 6.69 (d, J=3,5 Гц, 1Н), 7,15 (d, J=7,2 Гц, 1Н), 7,39 (d, J=3,2 Гц, 1Н), 7,47 (d, J=1,4 Гц, 1Н), 7,79 (s, 1Н), 7,91 (d, J=1,7 Гц, 1Н), 8.22 (d, J=7,2Гц, 1Н).
Пример 2
8-Хлор-7-(7-хлор-1H-индол-5-ил)-3-(2,2,2-трифторэтил)-имидазо[1,2-а]-пиридин (Е2)
3
4
Смесь промежуточного соединения D18 (0,09 г, 0,324 ммоль), промежуточного соединения D12 (0,106 г, 0,295 ммоль), КРO (0,187 г, 0,884 ммоль) и DAPCy (8,624 мг, 0,0147 ммоль) в ЕtOН (2 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь фильтровали через диатомитовую землю и фильтрат упаривали в вакууме. Неочищенный остаток очищали посредством колоночной хроматографии (силикагель;
DCM/EtOAc до 5% в качестве элюента). Нужные фракции собирали и упаривали в вакууме. Остаток растирали с гептаном с получением твердого вещества, которое отфильтровывали и сушили в сушильном шкафу с получением Е2 (0,07 г, 61,8%) в виде белого твердого вещества.
Т.пл. - разложилось
1
3
H ЯМР (400 МГц, CDCl) δ м.д. 3.78 (q, J=9,9 Гц, 1Н), 6.68 (dd, J=3,2, 2,3 Гц, 1Н), 7,01 (d, J=7,2 Гц, 1Н), 7,35 (dd, J=2,8, 2,8 Гц, 1Н), 7,39 (d, J=1,4 Гц, 1Н), 7,70-7,73 (m, 1Н), 7,74 (s, 1Н), 8.00 (d, J=6,9 Гц, 1Н), 8.57 (br. s., 1Н).
Пример 3
транс-4-[5-[8-Хлор-3-(2,2,2-трифторэтил)-имидазо[1,2-а]пиридин-7-ил]-1Н-индол-1-ил]-циклогексанол (Е3)
3
2
4
3
Смесь промежуточного соединения транс-032 (0,255 г, 0,748 ммоль), промежуточного соединения D12 (0,35 г, 0,68 ммоль), тетракис(трифенилфосфин)палладия(0) (0,039 г, 0,034 ммоль) и насыщенный водный раствор NаНСО (1,5 мл) в 1,4-диоксане (3 мл) подвергали микроволновому нагреванию при 150°С в течение 10 мин. После охлаждения до комнатной температуры реакционную смесь фильтровали через диатомитовую землю, диатомитовую землю дополнительно промывали ЕtOАс и объединенные фильтраты промывали водой и рассолом. Органический слой отделяли, сушили (NaSO) и растворитель выпаривали в вакууме. Неочищенный остаток очищали посредством колоночной хроматографии (силикагель; DСМ/МеОН(NН) до 10%, затем гептан/ЕtOАс в качестве элюента). Нужные фракции собирали и упаривали в вакууме. Остаток растирали с диэтиловым эфиром. Белый осадок отфильтровывали и сушили в вакууме с получением Е3 (0,14 г, 46%) в виде белого твердого вещества.
Т.пл. 129,4°С
1
3
H ЯМР (400 МГц, CDCl) 5 м.д. 1,53-1,68 (m, 3Н), 1,80-1,95 (m, 2 H), 2.21 (br. d, J=10,9 Гц, 4H), 3.78 (q, J=9,9 Гц, 2Н), 3.79-3.89 (m, 1Н), 4.25-4.37 (m, 1Н), 6.60 (d, J=3,2 Гц, 1Н), 7,04 (d, J=7,2 Гц, 1Н), 7,27 (d, 1Н), 7,40 (dd, J=8,6, 1,6 Гц, 1Н), 7,48 (d, J=8,6 Гц, 1Н), 7,72 (s, 1Н), 7,80 (d, J=1,4 Гц, 1Н), 7,99 (d, J=6,9 Гц, 1Н).
Пример 4
транс-4-[5-[8-Хлор-3-(2,2.2-трифторэтил)-имидазо[1,2-а]пиридин-7-ил]-1Н-индол-1 -ил]-1 -метил-циклогексанол (Е4)
3
2
4
2
Смесь промежуточного транс-D34 (0,221 г, 0,373 ммоль), D12 (0,112 г, 0,311 ммоль), тетракис(трифенилфосфин)палладия(0) (0,018 г, 0,0155 ммоль) и насыщенного водного раствора NаНСО (2 мл) в 1,4-диоксане (8 мл) подвергали микроволновому нагреванию при 150°С в течение 10 мин. После охлаждения до комнатной температуры реакционную смесь фильтровали через диатомитовую землю, диатомитовую землю дополнительно промывали ЕtOАс и объединенные фильтраты промывали водой и рассолом. Органическую фракцию сушили (NaSO), фильтровали и растворитель выпаривали в вакууме. Неочищенный остаток очищали посредством колоночной хроматографии (силикагель; DCM/EtOAc до 15% в качестве элюента). Нужные фракции собирали и растворитель выпаривали в вакууме. Остаток растирали с EtO. Белый осадок отфильтровывали и сушили в вакууме с получением остатка, который растирали с DIPE, отфильтровывали и сушили в сушильном шкафу с получением Е4 (0,75 г, 52%) в виде белого твердого вещества.
Т.пл.162,2°С
1
3
H ЯМР (400 МГц, CDCl) δ м.д. 1,11 (br. s, 1H), 1,36 (s, 3H), 1,69 (td, J=1 3.9, 3,9 Гц, 2Н), 1,83-1,93 (m, 2Н), 1,94-2.04 (m, 2H), 2.25 (qd, J=13,2, 3,7 Гц, 2Н), 3.77 (q, J=9,9 Гц, 2Н), 4.26 (tt, J=12,3, 3,9 Гц, 1H), 6.59 (d, J=3,2 Гц, 1Н), 7,04 (d, J=6,9 Гц, 1H), 7,35 (d, J=3,2 Гц, 1H), 7,39 (dd, J=8,8, 1,6 Гц, 1H), 7,48 (d, J=8,6 Гц, 1H), 7,71 (s, 1H), 7,80 (d, J=1,4 Гц, 1H), 7,98 (d, J=6,9 Гц, 1H).
Пример 5
4-[7-[8-Хлор-3-(2,2,2-трифтор-этил)-имидазо[1,2-а]пиридин-7-ил]-2,3-дигидро-4Н-1,4-бензоксазин-4-ил]-циклогексанол (Е5)
3
3
1
Смесь промежуточных соединений D27 (0,3 г, 0,835 ммоль), D12 (0,301 г, 0,835 ммоль), тетракис(трифенилфосфин)палладия(0) (0,0482 г, 0,0418 ммоль) и NаНСО (насыщенный водный раствор) (1,5 мл) в 1,4-диоксане (5 мл) нагревали при 150°С в течение 10 мин в микроволновом излучении. После охлаждения до комнатной температуры реакционную смесь доолнительно подвергали микроволновому нагреванию при 150°С в течение еще 10 мин. С помощью LCMS наблюдали только частичное превращение в целевой продукт. Затем в реакционный сосуд загружали дополнительное количество тетракис(трифенилфосфин)палладия(0) (0,0482 г) и насыщенного водного раствора NaHCO (0,5 мл) и вновь нагревали при 150°С в течение 10 мин в микроволновом излучении. После охлаждения до комнатной температуры реакционную смесь фильтровали через диатомитовую землю и диатомитовую землю дополнительно промывали 1,4-диоксаном. Объединенные фильтраты упаривали в вакууме. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии (силикагель: DCM/EtOAc до 50% в качестве элюента). Нужные фракции собирали и растворитель выпаривали в вакууме с получением Е5 в виде смеси диастереоизомеров, которые определяли с помощью H ЯМР. транс/цис =88:12 (0,097 г, 10%)
1
3
5
(транс-ES)H ЯМР (400 МГц, CDCl) δ м.д. 1,11 (уширенный s, 1H) 1,38-1,73 (m, 4H), 1,90 (уширенный d, J=12,3 Гц, 2Н), 2,13 (br. d, J=12,5 Гц, 2Н), 3.29-3.36 (m, 2Н), 3.60-3.73 (m, 2Н), 3.74 (q, J=9,9 Гц, 2Н), 4.20-4.29 (m, 2Н), 6.80 (d, J=8,6 Гц, 1Н), 6.95 (d, J=7,2 Гц, 1Н), 7,04 (d, J=1,4 Гц, 1Н), 7,10 (уширенный d, J=8,6 Гц, 1Н), 7,68 (s, 1Н), 7,94 (d, J=7,2 Гц, 1Н).
Пример 25
8-Хлор-7-(1-пиримидин-2-ил-1Н-индол-5-ил)-3-(2,2,2-трифтор-этил)-имидазо[1,2-а]пиридин
3
2
4
Смесь промежуточного D36 (0,267 г, 0,832 ммоль), D12 (0,25 г, 0,693 ммоль), тетракис(трифенилфосфин)палладия(0) (0,0401 г, 0,0347 ммоль) и NаНСО (насыщенный водный раствор) (1,7 мл) в 1,4-диоксане (6,8 мл) нагревали при 150°С в течение 5 мин в микроволновом излучении. После охлаждения до комнатной температуры реакционную смесь разбавляли EtOAc и водой и фильтровали через диатомитовую землю. Фильтрат экстрагировали EtOAc, сушили (NaSO) и упаривали в вакууме. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии (силикагель: DCM/EtOAc до 15% в качестве элюента). Нужные фракции собирали и растворитель выпаривали в вакууме с получением остатка, который растирали с DIPE, отфильтровывали и сушили в сушильном шкафу с получением Е25 (0,135 г, 46%).
1
3
H ЯМР (400 МГц, CDCl) δ м.д. 3.78 (q, J=9,9 Гц, 2 Н), 6.78 (d, J=3,5 Гц, 1H), 7,06 (d, J=6,9 Гц, 1Н), 7,10 (t, J=4,7 Гц, 1Н), 7,51 (dd, J=8,6, 1,8 Гц, 1Н), 7,73 (s, 1Н), 7,80 (d, J=1,8 Гц, 1Н), 8.01 (d, J=6,9 Гц, 1Н), 8.36 (d, J=3,5 Гц, 1Н), 8.74 (d, J=4,6 Гц, 2 Н), 8.93 (d, J=8,6 Гц, 1Н).
Т.пл. - Разложилось
В Таблице 1 перечислены соединения Формулы (I), которые получали согласно одному из вышеуказанных Примеров (№ Примера).
Таблица 1:
№ соединения
№ примера
R<sup>1</sup>
R<sup>2</sup>
R<sup>3</sup>
R<sup>4</sup>
А
1
E1
-СН<sub>2</sub>-СF<sub>3</sub>
-CN
<img file="00000073.tif" he="14" wi="10" img-content="undefined" img-format="tif" />
2-Cl
-CH=CH-
2
E2
-СН<sub>2</sub>-СF<sub>3</sub>
-Cl
Н
2С1
-CH=CH-
3
ЕЗ
-СН<sub>2</sub>-СF<sub>3</sub>
-Cl
<img file="00000074.tif" he="23" wi="11" img-content="undefined" img-format="tif" />
Н
-CH=CH-
4
Е4
-СН<sub>2</sub>-СF<sub>3</sub>
-Cl
<img file="00000075.tif" he="17" wi="11" img-content="undefined" img-format="tif" />
Н
-CH=CH-
5
Е5
-СН<sub>2</sub>-СF<sub>3</sub>
-Cl
<img file="00000076.tif" he="22" wi="10" img-content="undefined" img-format="tif" />
Н
-СН<sub>2</sub>-СН<sub>2</sub>-О-
6
E1
-СН<sub>2</sub>-СF<sub>3</sub>
-CN
<img file="00000073.tif" he="14" wi="10" img-content="undefined" img-format="tif" />
Н
-СН=СН-
7
E1
-СН<sub>2</sub>-СF<sub>3</sub>
-CN
Me
Н
-CH=CH-
8
E1
-СН<sub>2</sub>-СF<sub>3</sub>
-CN
Н
2-Cl
-CH=CH-
9
E1
-СН<sub>2</sub>-СF<sub>3</sub>
-CN
<img file="00000077.tif" he="19" wi="16" img-content="undefined" img-format="tif" />
Н
-CH=CH-
10
E1
-СН<sub>2</sub>-СF<sub>3</sub>
-CN
Me
2-Cl
-CH=CH-
11
E1
-СН<sub>2</sub>-СF<sub>3</sub>
-CN
<img file="00000078.tif" he="19" wi="16" img-content="undefined" img-format="tif" />
2-Cl
-CH=CH-
12
E1
-СН<sub>2</sub>-СF<sub>3</sub>
-CN
<img file="00000078.tif" he="19" wi="16" img-content="undefined" img-format="tif" />
Н
-СН<sub>2</sub>-СН<sub>2</sub>-O-
13
E1
-СН<sub>2</sub>-СF<sub>3</sub>
-CN
<img file="00000078.tif" he="19" wi="16" img-content="undefined" img-format="tif" />
Н
-CH=CH-
14
E1
-СН<sub>2</sub>-СF<sub>3</sub>
-CN
<img file="00000079.tif" he="12" wi="16" img-content="undefined" img-format="tif" />
Н
-CH=CH-
15
E1
-СН<sub>2</sub>-СF<sub>3</sub>
-CN
Me
Н
-СН<sub>2</sub>-СН<sub>2</sub>-O-
№ соединения
№ примера
R<sup>1</sup>
R<sup>2</sup>
R<sup>3</sup>
R<sup>4</sup>
А
16
El
-СН<sub>2</sub>-СF<sub>3</sub>
-CN
<img file="00000080.tif" he="23" wi="11" img-content="undefined" img-format="tif" />
Н
-CH=CH-
17
El
-СН<sub>2</sub>-СF<sub>3</sub>
-CN
<img file="00000073.tif" he="14" wi="10" img-content="undefined" img-format="tif" />
Н
-СН<sub>2</sub>-СН<sub>2</sub>-О-
18
El
-СН<sub>2</sub>-СF<sub>3</sub>
-C1
<img file="00000078.tif" he="19" wi="16" img-content="undefined" img-format="tif" />
2-Cl
-СН=СН-
19
El
-СН<sub>2</sub>-СF<sub>3</sub>
-CN
<img file="00000080.tif" he="23" wi="11" img-content="undefined" img-format="tif" />
Н
-СН<sub>2</sub>-СН<sub>2</sub>-О-
20
El
-СН<sub>2</sub>-СF<sub>3</sub>
-CN
Н
Н
-СН<sub>2</sub>-СН<sub>2</sub>-О-
21
El
-СН<sub>2</sub>-СF<sub>3</sub>
-CN
<img file="00000075.tif" he="17" wi="11" img-content="undefined" img-format="tif" />
Н
-СН=СН-
22
El
-СН<sub>2</sub>-СF<sub>3</sub>
-CN
<img file="00000081.tif" he="17" wi="11" img-content="undefined" img-format="tif" />
Н
-СН=СН-
23
El
-СН<sub>2</sub>-СF<sub>3</sub>
-C1
<img file="00000081.tif" he="17" wi="11" img-content="undefined" img-format="tif" />
Н
-СН=СН-
24
E2
-СН<sub>2</sub>-СF<sub>3</sub>
-C1
<img file="00000082.tif" he="19" wi="12" img-content="undefined" img-format="tif" />
Н
-СН=СН-
25
E2
-СН<sub>2</sub>-СF<sub>3</sub>
-C1
<img file="00000083.tif" he="19" wi="12" img-content="undefined" img-format="tif" />
Н
-CH=CH-
26
El
-СН<sub>2</sub>-СF<sub>3</sub>
-CN
Н
Н
-СН=СHе-
№ Соединения
№ Примера
R<sup>1</sup>
R<sup>2</sup>
R<sup>3</sup>
R<sup>4</sup>
A
27
E1
-СН<sub>2</sub>-СF<sub>3</sub>
-CN
<img file="00000084.tif" he="22" wi="11" img-content="undefined" img-format="tif" />
H
-CH=CH-
28
E1
-СН<sub>2</sub>-СF<sub>3</sub>
-CN
<img file="00000085.tif" he="18" wi="12" img-content="undefined" img-format="tif" />
H
-CH=CH-
29
E1
-СН<sub>2</sub>-СF<sub>3</sub>
-CN
<img file="00000086.tif" he="23" wi="11" img-content="undefined" img-format="tif" />
H
-CH=CH-
30
E1
-СН<sub>2</sub>-СF<sub>3</sub>
-CN
<img file="00000087.tif" he="24" wi="16" img-content="undefined" img-format="tif" />
H
-CH=CH-
Общий способ для приборов Waters MS (TOP, ZQ, SQD, Platform)
Измерение с помощью HPLC выполняют, используя HP 1100 от Agilent Technologies, содержащий насос (для четырехкомпонентных или двухкомпонентных смесей) с дегазатором, автоматический пробоотборник, термостат колонки, детектор на диодной матрице (DAD) и колонку, как указано в соответствующих способах ниже. Поток из колонки разделяли для MS-спектрометра. Детектор MS укомплектовывали либо источником ионизации электрораспылением, либо источником двойной ионизации ESCI (электрораспыление в комбинации с химической ионизацией при атмосферном давлении). Азот использовали в качестве распыляющего газа. Температуру источника поддерживали при 140°С. Сбор данных выполняли с помощью программного обеспечения MassLynx-Openlynx.
Общий способ для прибора Agilent MS (MSD)
Измерение с помощью HPLC выполняли, используя HP 1100 от Agilent Technologies, содержащий насос для двухкомпонентной смеси с дегазатором, автоматический пробоотборник, термостат колонки, детектор на диодной матрице (DAD) и колонку, как указано в соответствующих способах ниже. Поток из колонки разделяли для MS-спектрометра. MS-детектор укомплектовывали источником двойной ионизации ESCI (электрораспыление в комбинации с химической ионизацией при атмосферном давлении). Азот использовали в качестве распыляющего газа. Температуру источника поддерживали при 100°С. Сбор данных выполняли с помощью программного обеспечения Chemsation-Agilent Data Browser.
Общий способ для приборов Waters MS (Acquity-SQD)
Измерение с помощью UPLC (Ultra Performance Liquid Chromatography -ультраэффективная жидкостная хроматография) выполняли, используя систему Acquity от Waters, содержащую органайзер для отбора проб, насос для двухкомпонентной смеси с дегазатором, термостат для четырех колонок, детектор на диодной матрице (DAD) и колонку, как указано в соответствующих способах ниже. Поток из колонки используют без разделения до MS-детектора. MS-детектор укомплектовывают источником двойной ионизации ESCI (электрораспыление в комбинации с химической ионизацией при атмосферном давлении). Азот использовали в качестве распыляющего газа. Температуру источника поддерживали при 140°С. Сбор данных выполняли с помощью программного обеспечения MassLynx-Openlynx.
Общий способ для прибора Agilent GC/MSD
Измерение с помощью GC (газовой хроматографии) выполняли, используя систему 6890 Series Gas Chromatograph (Agilent Technologies), содержащую инжектор 7683 Series и автоматический пробоотборник, термостат колонки и колонку, как указано в соответствующих способах ниже, соединенную с масс-селективным детектором 5973N MSD (одинарный квадрупольный, Agilent Technologies). MS-детектор укомплектовывали источником ионизации электронным ударом источника/источником химической ионизации (EI/CI). Масс-спектры EI с низким разрешением получали путем сканирования от 50 до 550 при скорости 14,29 сканов/с. Температуру источника поддерживали при 230°С. В качестве распыляющего газа использовали гелий. Сбор данных выполняли с помощью программного обеспечения Chemstation-Open Action.
Способ 1
В дополнение к общему способу: обращенно-фазовую HPLC выполняли на картридже XDB-C18 (1,8 мкм, 2,1 × 30 мм) от Agilent при 60°С со скоростью потока 1 мл/мин при 60°С. Используемые градиентные условия: от 90% А (0,5 г/л раствора ацетата аммония), 5% В (ацетонитрила), 5% С (метанола) до 50% В и 50% С в 6,5 минут, до 100% В в 7 минут и уравновешанные с начальными условиями от 7,5 минут до 9,0 минут. Объем вводимой пробы 2 мкл. Масс-спектры высокого разрешения (Time of Flight, TOF, времяпролетный) получали путем сканирования от 100 до 750 за 0,5 секунды, используя время задержки 0,3 секунд. Напряжение на капиллярной игле составляло 2,5 кВ для режима положительной ионизации и 2,9 кВ для режима отрицательной ионизации. Напряжение на конусе составляло 20 В как для положительного, так и для отрицательного режимов. Стандартное вещество, используемое для калибровки по lock массе ("запирающей массе)", представляло собой лейцин-энкефалин.
Способ 2
В дополнение к общему способу: обращенно-фазовую HPLC выполняли на картридже XDB-C18 (1,8 мкм, 2,1 × 30 мм) от Agilent при 60°С со скоростью потока 1 мл/мин при 60°С. Используемые градиентные условия: от 90% А (0,5 г/л раствора ацетата аммония), 5% В (ацетонитрила), 5% С (метанола) до 50% В и 50% С в 6,5 минут, до 100% В в 7 минут и уравновешанные с начальными условиями от 7,5 минут до 9,0 минут. Объем вводимой пробы 2 мкл. Масс-спектры (Time of Flight, TOF, времяпролетные) высокого разрешения получали только в режиме положительной ионизации путем сканирования от 100 до 750 за 0,5 секунд, используя время задержки 0,1 секунд. Напряжение на капиллярной игле составляло 2,5 кВ и напряжение на конусе составляло 20 В. Стандартное вещество, используемое для калибровки по "запирающей массе", представляло собой лейцин-энкефалин.
Способ 3
В дополнение к общему способу: обращенно-фазовую HPLC выполняли на колонке Sunfire-C18 (2,5 мкм, 2,1 × 30 мм) от Waters со скоростью потока 1,0 мл/мин при 60°С. Используемые градиентные условия: от 95% А (0,5 г/л раствора ацетата аммония + 5% ацетонитрила), 2,5% В (ацетонитрила), 2,5% С (метанола) до 50% В, 50% С в 6,5 минут, поддерживали до 7,0 минут и уравновешивали с начальными условиями от 7,3 минут до 9,0 минут. Объем вводимой пробы 2 мкл. Масс-спектры высокого разрешения (Time of Flight, TOF, времяпролетные) получали путем сканирования от 100 до 750 за 0,5 секунд, используя время задержки 0,3 секунды. Напряжение на капиллярной игле составляло 2,5 кВ для положительного режима ионизации и 2,9 кВ для режима отрицательной ионизации. Напряжение на конусе составляло 20 В для режимов как положительной, так и отрицательной ионизации. Стандартное вещество, используемое для калибровки по "запирающей массе", представляло собой лейцин-энкефалин.
Способ 4
В дополнение к общему способу: обращенно-фазовую HPLC выполняли на колонке Sunfire-C18 (2,5 мкм, 2,1 × 30 мм) от Waters со скоростью потока 1,0 мл/мин при 60°С без разделения для MS-детектора. Используемые градиентные условия: от 95% А (0,5 г/л раствора ацетата аммония + 5% ацетонитрил), 5% В (смесь ацетонитрил/метанол, 1/1) до 100% В в 6,5 минут, поддерживали до 7,0 минут и уравновешивали с начальными условиями от 7,3 минут до 9,0 минут. Объем вводимой пробы 2 мкл. Масс-спектры низкого разрешения (квадрупольный, SQD) получали путем сканирования от 100 до 1000 за 0,1 секунды, используя задержку между каналами 0,08 секунд. Напряжение на капиллярной игле составляло 3 кВ. Напряжение на конусе составляло 20 В для режима положительной ионизации и 30 В для режима отрицательной ионизации.
Способ 5
В дополнение к общему способу: обращенно-фазовую UPLC выполняли на колонке ВЕН-С18 (1,7 мкм, 2,1 × 50 мм) от Waters со скоростью потока 0,8 мл/мин при 60°С без разделения для MS-детектора. Используемые градиентные условия: от 90% А (0,5 г/л раствора ацетата аммония), 10% В (смесь ацетонитрил/метанол, 1/1) до 20% А, 80% В в 6,3 минут, до 100% В в 6,85 минут, поддерживали до 7,50 минут и уравновешивали с начальными условиями от 7,75 минут до 9,0 минут. Объем вводимой пробы 0,5 мкл. Масс-спектры низкого разрешения (квадрупольный, SQD) получали путем сканирования от 100 до 1000 за 0,1 секунды, используя задержку между каналами 0,08 секунд. Напряжение на капиллярной игле составляло 3 кВ. Напряжение на конусе составляло 20 В для режима положительной ионизации и 30 В для режима отрицательной ионизации.
Способ 6
В дополнение к общему способу: обращенно-фазовую UPLC выполняли на колонке ВЕН-С18 (1,7 мкм, 2,1 × 50 мм) от Waters со скоростью потока 0,8 мл/мин при 60°С без разделения для MS-детектора. Используемые градиентные условия: от 95% А (раствор ацетата аммония 0,5 г/л + 5% ацетонитрил), 5% В (смесь ацетонитрил/метанол, 1/1) до 20% А, 80% В в 4,9 минут, до 100% В 5,3 минут, поддерживали до 5,8 минут и уравновешивали с начальными условиями от 6,0 минут до 7,0 минут. Объем вводимой пробы 0,5 мкл. Масс-спектры низкого разрешения (квадрупольный, SQD) получали путем сканирования от 100 до 1000 за 0,1 секунды, используя задержку между каналами 0,08 секунды. Напряжение на капиллярной игле составляло 3 кВ. Напряжение на конусе составляло 20 В для режима положительной ионизации и 30 В для режима отрицательной ионизации.
Способ 7
В дополнение к общему способу: обращенно-фазовую HPLC выполняли на колонке Sunfire-C18 (2,5 мкм, 2,1 × 30 мм) от Waters со скоростью потока 1,0 мл/мин при 60°С. Используемые градиентные условия: от 90% А (раствор ацетата аммония 0,5 г/л), 10% В (смесь ацетонитрил/метанол, 1/1), поддерживали 0,20 минуты, до 100% В в 3,5 минут, поддерживали до 3,65 минут и уравновешивали до начальных условий от 3,8 минут до 5,0 минут. Объем вводимой пробы 2 мкл. Масс-спектры низкого разрешения (квадрупольный, MSD) получали в режиме электрораспыления путем сканирования от 100 до 1000 в 0,99 секунд, с размером шага 0,30 и шириной пика 0,10 минуты. Напряжение на капиллярной игле составляло 1,0 кВ и напряжение на фрагментаторе составляло 70 В как для режима положительной, так и отрицательной ионизации.
Способ 8
В дополнение к общему способу: обращенно-фазовую UPLC выполняли на колонке ВЕН-С18 (1,7 мкм, 2,1 × 50 мм) от Waters со скоростью потока 0,8 мл/мин при 60°С без разделения для MS-детектора. Используемые градиентные условия: от 90% А (раствор ацетата аммония 0,5 г/л), 10% В (смесь ацетонитрил/метанол, 1/1), поддерживали 0,2 минуты, до 20% А, 80% В в 3,5 минуты, до 100% В в 3,8 минуты, поддерживали до 4,15 минут и уравновешивали с начальными условиями от 4,3 минут до 5,0 минут. Объем вводимой пробы 0,5 мкл. Масс-спектры низкого разрешения (квадрупольный, SQD) получали путем сканирования от 100 до 1000 в 0,1 секунды, используя задержку между каналами 0,08 секунды. Напряжение на капиллярной игле составляло 3 кВ. Напряжение на конусе составляло 20 В для режима положительной ионизации и 30 В для режима отрицательной ионизации.
Способ 9
В дополнение к общему способу: обращенно-фазовую HPLC выполняли на картридже XDB-C18 (1,8 мкм, 2,1 × 30 мм) от Agilent со скоростью потока 0,8 мл/мин при 60°С. Используемые градиентные условия: от 90% А (раствор 0,5 г/л ацетата аммония), 10% В (смесь ацетонитрил/метанол, 1/1) до 100% В в 6,0 минут, поддерживали до 6,5 минут и уравновешивали с начальными условиями от 7,0 минут до 9,0 минут. Объем вводимой пробы 2 мкл. Масс-спектры низкого разрешения (квадрупольный, SQD) получали в режиме положительной ионизации путем сканирования от 100 до 1000 в 0,1 секунды, используя задержку между каналами 0,08 секунды. Напряжение на капиллярной игле составляло 3 кВ. Напряжение на конусе составляло 20 В и 50 В для режима положительной ионизации и 30 В для режима отрицательной ионизации.
Способ 10
В дополнение к общему способу: обращенно-фазовую HPLC выполняли на колонке Sunfire-C18 (2,5 мкм, 2,1 × 30 мм) от Waters со скоростью потока 1,0 мл/мин, при 60°С. Используемые градиентные условия: от 95% А (раствор ацетата аммония 0,5 г/л + 5% ацетонитрила), 2,5% В (ацетонитрил), 2,5% С (метанол) до 50% В, 50% С в 6,5 минут, поддерживали до 7,0 минут и уравновешивали с начальными условиями от 7,3 минут до 9,0 минут. Объем вводимой пробы 2 мкл. Масс-спектры высокого разрешения (Time of Flight, TOF, времяпролетный) получали путем сканирования от 100 до 750 в 0,5 секунды, используя время задержки 0,3 секунды. Напряжение на капиллярной игле составляло 2,5 кВ для режима положительной ионизации и 2,9 кВ для режима отрицательной ионизации. Напряжение на конусе составляло 20 В как для режима положительной, так и отрицательной ионизации. Стандартное вещество, используемое для калибровки по "запирающей массе", представляло собой лейцин-энкефалин.
Способ 11
В дополнение к общему способу: обращенно-фазовую HPLC выполняли на картридже XDB-C18 (1,8 мкм, 2,1 х 30 мм) от Agilent со скоростью потока 0,8 мл/мин при 60°С. Используемые градиентные условия: от 90% А (раствор ацетата аммония 0,5 г/л), 10% В (смесь ацетонитрил/метанол, 1/1), поддерживали 0,2 минуты, до 100% В в 3,0 минуты, поддерживали до 3,15 минут и уравновешивали с начальными условиями от 3,3 минут до 5,0 минут. Объем вводимой пробы 2 мкл. Масс-спектры низкого разрешения (квадрупольный, SQD) получали путем сканирования от 100 до 1000 за 0,1 секунды, используя задержку между каналами 0,08 секунды. Напряжение на капиллярной игле составляло 3 кВ. Напряжение на конусе составляло 20 В и 50 В для режима положительной ионизации и 30 В для режима отрицательной ионизации.
Способ 12
В дополнение к общему способу: обращенно-фазовую HPLC выполняли на картридже XDB-C18 (1,8 мкм, 2,1 × 30 мм) от Agilent со скоростью потока 1,0 мл/мин при 60°С. Используемые градиентные условия: от 90% А (раствор ацетата аммония 0,5 г/л), 10% В (смесь ацетонитрил/метанол, 1/1), поддерживали 0,2 минуты, до 100% В в 3,5 минуты, поддерживали до 3,65 минут и уравновешивали с начальными условиями от 3,8 минут до 5,0 минут. Объем вводимой пробы 2 мкл. Масс-спектры низкого разрешения (одинарный квадрупольный, ZQ детектор) получали путем сканирования от 100 до 1000 за 0,5 секунды, используя время задержки 0,1 секунды. Напряжение на капиллярной игле составляло 3 кВ. Напряжение на конусе составляло 20 В и 50 В для режима положительной ионизации и 20 В для режима отрицательной ионизации.
Способ 13
В дополнение к общему способу: обращенно-фазовую HPLC выполняли на картридже XDB-C18 (1,8 мкм, 2,1 х 30 мм) от Agilent со скоростью потока 1,0 мл/мин при 60°С. Используемые градиентные условия: от 90% А (раствор ацетата аммония 0,5 г/л), 10% В (смесь ацетонитрил/метанол, 1/1), поддерживали 0,20 минуты до 100% В в 3,5 минуты, поддерживали до 3,65 минут и уравновешивали с начальными условиями от 3,8 минут до 5,0 минут. Объем вводимой пробы 2 мкл. Масс-спектры низкого разрешения (одинарный квадрупольный, MSD детектор) получали в режиме электрораспыления путем сканирования от 100 до 1000 за 0,99 секунд, размер шага 0,30 и ширина пика 0,10 минут. Напряжение на капиллярной игле составляло 1,0 кВ и напряжение на фрагментаторе составляло 70В для режимов как положительной, так и отрицательной ионизации.
Способ 14
В дополнение к общему способу: обращенно-фазовую HPLC выполняли на колонке Sunfire-C18 (2,5 мкм, 2,1 × 30 мм) от Waters со скоростью потока 1,0 мл/мин при 60°С. Используемые градиентные условия: от 90% А (раствор ацетата аммония 0,5 г/л), 10% В (смесь ацетонитрил/метанол, 1/1), поддерживали 0,20 минуты, до 100% В в 3,5 минуты, поддерживали до 3,65 минуты и уравновешивали с начальными условиями за 3,8 минуты до 5,0 минут. Объем вводимой пробы 2 мкл. Масс-спектры низкого разрешения (квадрупольный, MSD) получали в режиме электрораспыления путем сканирования от 100 до 1000 за 0,99 секунды, размер шага 0,30 и ширина пика 0,10 минут. Напряжение на капиллярной игле составляло 1,0 кВ и напряжение на фрагментаторе составляло 70 В для режимов как положительной, так и отрицательной ионизации
Способ 15
В дополнение к общему способу: обращенно-фазовую HPLC выполняли на колонке Sunfire-C18 (2,5 мкм, 2,1 × 30 мм) от Waters со скоростью потока 1,0 мл/мин при 60°С без разделения для MS-детектора. Используемые градиентные условия: от 95% А (раствор ацетата аммония 0,5 г/л + 5% ацетонитрил), 5% В (смесь ацетонитрил/метанол, 1/1), поддерживали 0,2 минуты, до 100% В в 3,0 минуты, поддерживали до 3,15 минут и уравновешивали с начальными условиями от 3,30 минут до 5,0 минут. Объем вводимой пробы 2 мкл. Масс-спектры низкого разрешения (одинарный квадрупольный, SQD детектор) получали путем сканирования от 100 до 1000 за 0,1 секунды, используя задержку между каналами 0,08 секунды. Напряжение на капиллярной игле составляло 3 кВ. Напряжение на конусе составляло 20 В и 50 В для режима положительной ионизации и 30 В для режима отрицательной ионизации.
Способ 16
В дополнение к общему способу: обращенно-фазовую HPLC выполняли на картридже XDB-C18 (1,8 мкм, 2,1 × 30 мм) от Agilent со скоростью потока 1 мл/мин при 60°С. Используемые градиентные условия: от 90% А (раствор ацетата аммония 0,5 г/л), 10% В (смесь ацетонитрил/метанол, 1/1) до 100% В в 5,2 минуты, поддерживали до 5,6 минут и уравновешивали с начальными условиями от 5,8 минут до 7,0 минут. Объем вводимой пробы 2 мкл. Масс-спектры низкого разрешения (одинарный квадрупольный, MSD детектор) получали в режиме электрораспыления путем сканирования от 100 до 1000 за 0,99 секунд, размер шага 0,30 и ширина пика 0,10 минут. Напряжение на капиллярной игле составляло 1,0 кВ и напряжение на фрагментаторе составляло 70 В для режимов как положительной, так и отрицательной ионизации.
Способ 17
В дополнение к общему способу: обращенно-фазовую UPLC выполняли на колонке ВЕН-С18 (1,7 мкм, 2,1 × 50 мм) от Waters со скоростью потока 0,8 мл/мин при 60°С без разделения для MS-детектора. Используемые градиентные условия: от 95% А (раствор ацетата аммония 0,5 г/л + 5% ацетонитрил), 5% В (смесь ацетонитрил/метанол, 1/1), поддерживали 0,2 минут, до 20% А, 80% В в 3,5 минуты, до 100% В в 3,8 минуты, поддерживали до 4,15 минут и уравновешивали с начальными условиями от 4,3 минуты до 5,0 минут. Объем вводимой пробы 0,5 мкл. Масс-спектры низкого разрешения (одинарный квадрупольный, SQD детектор) получали путем сканирования от 100 до 1000 за 0,1 секунды, используя задержку между каналами 0,08 секунды. Напряжение на капиллярной игле составляло 3 кВ. Напряжение на конусе составляло 20 В для режима положительной ионизации и 30 В для режима отрицательной ионизации.
Способ 18
В дополнение к общему способу: обращенно-фазовую HPLC выполняли на картридже XDB-C18 (1,8 мкм 2,1 × 30 мм) от Agilent со скоростью потока 0,8 мл/мин при 60°С. Используемые градиентные условия: от 95% А (раствор ацетата аммония 0,5 г/л + 5% ацетонитрил), 5% В (смесь ацетонитрил/метанол, 1/1) до 100% В в 5,0 минут, поддерживали до 5,15 минут и уравновешивали с начальными условиями от 5,3 минут до 7,0 минут. Объем вводимой пробы 2 мкл. Масс-спектры низкого разрешения (одинарный квадрупольный, MSD детектор) получали в режиме электрораспыления путем сканирования от 100 до 1000 за 0,99 секунды, размер шага 0,30 и ширина пика 0,10 минут. Напряжение на капиллярной игле составляло 1,0 кВ и напряжение на фрагментаторе составляло 70 В для режимов как положительной, так и отрицательной ионизации.
Способ 19
В дополнение к общему способу: обращенно-фазовую HPLC выполняли на картридже XDB-C18 (1,8 мкм, 2,1 х 30 мм) от Agilent со скоростью потока 0,8 мл/мин при 60°С. Используемые градиентные условия: от 90% А (раствор ацетата аммония 0,5 г/л), 10% В (смесь ацетонитрил/метанол, 1/1) до 100% В в 5,0 минут, поддерживали до 5,4 минут и уравновешивали с начальными условиями от 5,6 минут до 7,0 минут. Объем вводимой пробы 2 мкл. Масс-спектры низкого разрешения (одинарный квадрупольный, MSD детектор) получали в режиме электрораспыления путем сканирования от 100 до 1000 за 0,99 секунд, размер шага 0,30 и ширина пика 0,10 минут. Напряжение на капиллярной игле составляло 1,0 кВ и напряжение на фрагментаторе составляло 70 В для режимов как положительной так и отрицательной ионизации.
Способ 20
В дополнение к общему способу: обращенно-фазовую HPLC выполняли на колонке Sunfire-C18 (2,5 мкм, 2,1 × 30 мм) от Waters со скоростью потока 1,0 мл/мин при 60°С. Используемые градиентные условия: от 95% А (раствор ацетата аммония 0,5 г/л + 5% ацетонитрила), 5% В (смесь ацетонитрил/метанол, 1/1) до 100% В в 5,0 минут, поддерживали до 5,15 минут и уравновешивали с начальными условиями от 5,3 минут до 7,0 минут. Объем вводимой пробы 2 мкл. Масс-спектры низкого разрешения (одинарный квадрупольный, MSD детектор) получали в режиме электрораспыления путем сканирования от 100 до 1000 за 0,99 секунд, размер шага 0,30 и ширина пика 0,10 минут. Напряжение на капиллярной игле составляло 1,0 кВ и напряжение на фрагментаторе составляло 70 В для режимов как положительной, так и отрицательной ионизации.
Способ 21
В дополнение к общему способу: GC выполняли на колонке J&W HP-5MS (0,25 мкм, 0,25 мм × 30 м) от Agilent Technologies с постоянной скоростью потока 1,2 мл/мин. Применяемый температурный градиент: начальную температуру 50°С поддерживали в течение 3 мин, затем использовали быстрое линейное изменение 20°С/мин в течение 10 мин до 250°С, поддерживали в течение 2 мин в 15-минутном прогоне. Температура на фронтальном входе составляла 250°С. Использовали режим ввода через щелевую форсунку, объем вводимой пробы 1 мкл, с отношением 50/1 в системе GC-MS.
Точки плавления
Для ряда соединений точки плавления определяли в открытых капиллярных трубках на приборе Mettler FP62. Точки плавления измеряли с градиентом температуры 3 или 10°С/мин. Максимальная температура составляла 300°С. Т.пл. считывали с цифрового дисплея и получали с экспериментальными погрешностями, которые обычно связаны с данным аналитическим способом.
Ядерный магнитный резонанс (ЯМР)
1
3
6
6
Спектры H ЯМР регистрировали на спектрометре Bruker DPX-400 и Bruker AV-500 с последовательностями стандартных импульсов, оперируя при 400 МГц и 500 МГц соответственно, используя CDCl и СD в качестве растворителей. Химические сдвиги (δ) регистрировали в миллионных долях (м.д.) в направлении уменьшения напряженности поля от тетраметилсилана (TMS), который использовали в качестве внутреннего стандарта.
Таблица 2 : Физико-химические данные для некоторых соединений (nd = не определено).
№ соединения
Точка плавления (°С)
MM (теор.)
[МН<sup>+</sup>]
RT (мин)
Способ LCMS
1
n.d.
458
459
4,53
2
2
182,8
383
384
4,2
3
3
131,6
447
448
4,0
5
4
262,2
461
462
3,64
6
5
n.d.
465
466
4,15/4,28
4
6
232,9
424
425
4,08
2
7
n.d.
354
355
3,93
2
8
n.d.
374
375
3,77
2
9
n.d.
412
413
3,85
1
10
172
388
389
4,38
2
11
175,3
428
429
4,98
2
12
n.d.
412
413
4,57
2
13
117,9
394
395
4,57
2
14
n.d.
426
427
4,47
2
15
n.d.
372
373
3,83
2
16
n.d.
438
439
4,07
3
17
n.d.
442
443
4,01
2
18
151,3
437
438
5,35
2
19
n.d.
456
457
3,83
2
20
разложилось
358
359
2,52
6
21
138,6
452
453
4,39
4
22
171,1
452
453
4,28
4
23
261,9
461
462
3,53
6
24
разложилось
426
427
4,55
6
25
разложилось
427
428
3,85
6
26
разложилось
354
355
3,76
2
27
разложилось
431
432
3,85
2
28
разложилось
416
417
4,88
2
29
197,3
434
435
4,93
2
30
разложилось
445
446
4,06
2
n.d.: не определено
Фармакологические примеры
35
Соединения, предложенные в настоящем изобретении, представляют собой положительные аллостерические модуляторы mGluR2. Эти соединения, по-видимому, усиливают глутаматные ответы посредством связывания с аллостерическим участком, отличным от участка связывания глутамата. Ответ mGluR2 на концентрацию глутамата увеличивается в присутствии соединений Формулы (I). Ожидается, что соединения Формулы (I) будут оказывать свой эффект главным образом на mGluR2 в силу своей способности усиливать функцию этого рецептора. Поведение положительных аллостерических модуляторов, тестируемых на mGluR2, используя аналитический метод связывания [S]GTPyS, описанный ниже, который является подходящим для идентификации таких соединений и более конкретно соединения Формулы (I) представлены в Таблице 4.
35
Анализ связыванияй [S]GTPyS
35
35
35
35
35
35
Анализ связывания [S]GTPyS представляет собой функциональный анализ на основе мембран, используемый для исследования функции рецептора, сопряженного с белком G (GPCR), посредством которого измеряют присоединение негидролизуемой формы GTP, [S]GTPyS (гуанозин-5'-тритрифосфат, меченый гамма-излучающим S). Субъединица а белка G катализирует замену гуанозин-5'-дифосфата (GDP) на гуанозин-трифосфат (GTP) и при активировании GPCR агонистом, [S]GTPyS, присоединяется и не может быть расщеплен для продолжения обменного цикла (Harper (1998) Current Protocols in Pharmacology 2.6.1-10, John Wiley & Sons, Inc.). Количество присоединенного радиоактивного [S]GTPyS является непосредственным измерением активности белка G и, следовательно, может быть определена активность агониста. Показано, что рецепторы mGluR2 предпочтительно соединяются с белком Gai, предпочтительное связывание для этого метода, и, следовательно, это широко используется для исследования рецепторного активирования рецепторов mGluR2 как в рекомбинантных клеточных линиях, так и в тканях (Schaffhauser et al 2003, Pinkerton et al, 2004, Mutel et al (1998) Journal of Neurochemistry. 71:2558-64; Schaffhauser et al (1998) Molecular Pharmacology 53:228-33). Авторы изобретения описывают применение анализа связывания [S]GTPyS с использованием мембран из клеток, трансфицированных человеческим рецептором mGluR2, и адаптированного из Schaffhauser et al ((2003) Molecular Pharmacology 4:798-810) для обнаружения свойств положительного аллостерического модулирования (РАМ) у соединений по данному изобретению.
Получение мембран
СНО-клетки культивировали до предслияния и стимулировали 5 мМ бутирата в течение 24 ч перед промыванием в PBS (фосфатно-солевой буферный раствор) и затем собирали соскабливанием в буфере для гомогенизации (50 мМ буфера Трис-HCI, рН 7,4, 4°С). Клеточные лизаты быстро гомогенизировали (15 с), используя гомогенизитор ultra-turrax. Гомогенат центрифугировали при 23500хд в течение 10 мин и надосадочную жидкость выбрасывали. Осадок ресуспендировали в 5 мМ Трис-HCl, рН 7,4 и снова центрифугировали (30000хд 20 мин, 4°С). Последний осадок ресуспендировали в 50 мМ HEPES, рН 7,4 и хранили при -80°С подходящими аликвотами до применения. Концентрацию белка определяли методом Брэфорда (Bio-Rad, USA) с бычьим сывороточным альбумином в качестве стандарта.
35
Анализ связывания [S]GTPyS
25
2
4.
2
2
4
2
35
35
35
35
Измерение положительной аллостерической модулирующей активности испытываемых соединений в отношении mGluR2 в мембранах, содержащих mGluR2 человека, выполняли, используя замороженные мембраны, которые размораживали и быстро гомогенизировали перед предварительным инкубированием в 96-луночных микропланшетах (15 мкг/лунка для анализа, 30 минут, 30°С) в буфере для анализа (50 мМ HEPES рН 7,4, 100 мМ NaCl, 3 мМ MgCl2, 50 мкМ GDP, 10 мг/мл сапонина) с возрастающими концентрациями положительного аллостерического модулятора (от 0,3 нМ до 50 мкМ) и либо минимальной, заранее определенной концентрацией глутамата (анализ РАМ), или без добавления глутамата. Для анализа РАМ мембраны предварительно инкубировали с глутаматом в концентрации EC, то есть в концентрации, которая обеспечивает 25% максимального ответа глутамата и находится в соответствии с опубликованными данными (Pin et al. (1999) Eur. J. Pharmacol. 375:277-294). После добавления [S]GTPyS (0,1 нМ, f.c.(конечная концентрация)) для достижения общего объема взаимодействия 200 мкл, микропланшеты встряхивали в течение короткого времени и дополнительно инкубировали, чтобы обеспечить возможность включения [S]GTPyS при активировании (30 минут, 30°С). Взаимодействие останавливали быстрой вакуум-фильтрацией микропланшета на пластине стекловолоконного фильтра (Unifilter 96-луночные фильтровальные пластины GF/B, Perkin-Elmer, Downers Grove, USA), используя сборщик клеток для 96-луночного планшета (Filtermate, Perkin-Elmer, USA), и затем промывая три раза 300 мл ледяного буфера для промывания (NaPO2HO 10 мМ, NaHPO.HO 10 мМ, рН =7,4). Затем фильтры сушили на воздухе, в каждую лунку добавляли 40 мкл жидкой сцинтилляционной смеси (Microscint-0) и измеряли связанный с мембраной [S]GTP/S в 96-луночном планшет-ридере сцинтилляции (Top-Count, Perkin-Elmer, USA). Неспецифическое [S]GTP/S связывание определяли в присутствии холодного 10 мкМ GTP. Каждую кривую выполняли по меньшей мере один раз, используя двойную пробу на каждую точку данных и при 11 концентрациях.
Анализ данных
25
50
50
50
50
Кривые концентрация-ответ типичных соединений по настоящему изобретению в присутствии добавленного агониста mGluR2 глутамата в количестве EC для определения положительного аллостерического модлирования (РАМ) генерировали, используя программное обеспечение Prism GraphPad (Graph Pad Inc, San Diego, USA). К кривым подбирали четырехпараметрическое логистическое уравнение (Y=нижниее + (верхнее-нижнее(/(1+10^((LogЕС-Х)*наклон), что позволяло определить величины ЕС. ЕС представляет собой концентрацию соединения, которая вызывает полумаксимальное усиление глутаматного ответа. Ее рассчитывали путем вычитания максимальных ответов глутамат в присутствии полностью насыщающей концентрации положительного аллостерического модулятора из ответа глутамата в отсутствие положительного аллостерического модулятора. Концентрацию, генерирующую полумаксимальный эффект, затем рассчитывали в виде EC.
Таблица 3: Фармакологические данные для соединений по изобретению.
25
50
50
50
Все соединения испытывали в присутствии агониста mGluR2, глутамата в заранее определенной концентрации ЕС, для определения положительного аллостерического модулирования (GTPyS-PAM). Данные величины представляют собой среднее из двух значений для 11 концентраций на кривых ответа, по меньшей мере, из одного эксперимента. Все тестируемые соединения демонстрировали величину рЕС(-logEC) более 5,0, от 5,78 (слабая активность) до 7,07 (очень высокая активность). Ошибку определения значения pEC для одного эксперимента оценивают как равную примерно 0,3 log-единиц.
№ соединения
GTPyS-hR2 РАМ pEC<sub>50</sub>
1
6,42
2
7,07
3
6,78
4
6,89
5
6,95
6
6,30
7
6,64
8
6,50
9
5,97
10
6,93
11
6,96
12
6,93
13
6,73
14
6,09
15
6,24
16
6,61
17
6,24
18
6,60
19
6,72
20
5,78
21
6,51
22
6,30
23
6,39
24
6,33
25
6,48
26
6,27
27
6,93
28
6,66
29
6,70
30
7,47
Примеры композиций
"Активный ингредиент" при использовании в данных примерах относится к конечному соединению формулы (I), его фармацевтически приемлемым солям, его сольватам и стереохимически изомерным формам.
Типичными примерами прописей композиции по изобретению являются следующие:
1. Таблетки
Активный ингредиент
от 5 до 50 мг
Дикальцийфосфат
20 мг
Лактоза
30 мг
Тальк
10мг
Магния стеарат
5 мг
Картофельный крахмал
до 200 мг
В данном Примере активный ингредиент может быть заменен таким же количеством любого соединения по настоящему изобретению, в частности таким же количеством любого из приведенных в примерах соединений.
2. Суспензия
Водную суспензию получают для перорального введения так, что каждый 1 мл содержит от 1 до 5 мг активного соединения, 50 мг натрий карбоксиметилцеллюлозы, 1 мг бензоата натрия, 500 мг сорбитола и воду до 1 мл.
3. Инъецируемые
Парентеральную композицию получают смешиванием 1,5% масс. активного ингредиента по изобретению в 10% об. пропиленгликоля в воде.
4. Мазь
Активный ингредиент
от 5 до 1000 мг
Стеариловый спирт
3 г
Ланолин
5 г
Белый вазелин
15 г
Вода
до 100 г
В данном Примере активный ингредиент может быть заменен таким же количеством любого соединения по настоящему изобретению, в частности таким же количеством любого из приведенных в примерах соединений.
Разумные варианты не следует рассматривать как отклонение от объема изобретения. Очевидно, что таким образом описанное изобретение может быть изменено во многих отношениях специалистами в данной области техники.