Костномозговое кроветворение и динамика иммунных лимфоцитов в ходе вакцинации цыплят против инфекционного ларинготрахеита на фоне применения витамина с

Итак, полученные данные свидетельствуют о том, что в группах клинически здоровых телок до 3 месяцев значения ССЭ достоверно повышаются, а затем значения этого показателя остаются практически на постоянном уровне.

При исследовании показателя ССЭ крови телок с 1 -й степенью интоксикации в возрасте б, 9, 12 месяцев получены значения, которые колеблются в диапазонах 40,86^-49,92; 43,28-^50,36 и 42,77-^51,29% соответственно. Обнаружено достоверное повышение этого показателя у телок с нарушенным метаболизмом в возрасте 3 месяцев (р<0,05), 9 месяцев (р<0,01) и 12 месяцев (р<0,05) в сравнении с группами клинически здоровых животных соответствующего возраста.

Таким образом, показатель ССЭ позволяет определять степень метаболических сдвигов у КРС. Метод оценки ССЭ является воспроизводимым и может быть использован в ветеринарной практике для

экспресс- диагностики метаболических нарушений у

крс. :

Литература

1. Тогайбаев А.Я., КургузкинА.А. с соавт. Способ диагностики эндогенной интоксикации // Лаб. дело.

- 1988.-№9.-С. 22-25.

2. Первушин Ю.В. Лабораторная диагностика синдрома эндогенной интоксикации. — Ставрополь,

- 1993.-25 с.

ПЬЯНОВ Владимир Дмитриевич, доктор биологических наук, профессор кафедры физиологии. СТЕПАНОВА Ирина Петровна, кандидат биологических наук, доцент кафедры химии. МУГАК Вера Васильевна, старший преподаватель кафедры химии.

УДК419.612.119:636.5 А. С. СТАРУН

Институт ветеринарной медицины Омского государственного аграрного университета

КОСТНОМОЗГОВОЕ КРОВЕТВОРЕНИЕ И ДИНАМИКА ИММУННЫХ ЛИМФОЦИТОВ В ХОДЕ ВАКЦИНАЦИИ ЦЫПЛЯТ ПРОТИВ ИНФЕКЦИОННОГО ЛАРИНГОТРАХЕИТА НА ФОНЕ ПРИМЕНЕНИЯ ВИТАМИНА С

Изучена динамика иммунокомпетентных клеток периферической крови и костномозгового кроветворения цыплят в ходе вакцинации их против инфекционного ларинготрахеита. Показана роль витамина С в создании резистентности организма, профилактики развития стрессового состояния птицы и создания стойкого иммунитета при вакцинации ее против инфекционного лариготрахеита.

ВитаминС — это синтетический препарат. Содержится аскорбиновая кислота в ягодах шиповника, иглах хвои, капусте, крапиве, листьях березы, липы, томатах, черной смородине, хрене, петрушке и других продуктах растительного происхождения. Многочисленные экспериментальные наблюдения касаются, главным образом, изучения биохимии витамина и его роли в обменных процессах. Но мало исследованы функции аскорбиновой кислоты в физиологии иммунной системы. Целый ряд данных указывает на связь витамина С с иммунной реакцией организма. Показано, что иммуноингибируемый эффект при недостатке витамина С связан с нарушением тимус-зависимых факторов; к тому же тимус имеет высокую концентрацию витамина С, что указывает на важную роль витамина в развитии и поддержании структуры лимфоидной ткани. Витамин С шрает важную роль в фагоцитарной функции клеток. В частности, у животных при недостатке витамина функции фагоцитов имеют значительные нарушения, но эти дефекты исчезают при экзогенном введении аскорбиновой кислоты.

Витамин С играет важную роль в регуляции физиологии лимфоидных тканей в целом. Высокая клеточная концентрация витамина С и ее колебания при инфекционных болезнях указывают на эту взаимосвязь, а эксперименты in vitro подтверждают влияние витамина на подвижность фагоцитарных клеток. Симптомы респираторных инфекций сглаживаются при профилактических добавках в рацион витамина С. Возможно, в этих случаях витамин С оказывает влияние на подвижность фагоцитов за счет прямого воздействия на активность их энзимов и, предполагают, на микротубулярные структуры этих клеток. Витамин С участвует в окислительно-восстановительных процессах, его присутствие также необходимо в тканях для нормального течения их дифференциров-ки. При этом в тканях витамин присутствует в двух формах; окисленной — в виде аскорбиновой кислоты, в виде дегидроаскорбиновой кислоты — восстановленной форме. Последняя легко растворяется в липи-дах, что обеспечивает ее свободный транспорт через клеточные мембраны. Аскорбиновая кислота является неотъемлемым компонентом лейкоцитов, спо-

собствует тканевому дыханию, снижает степень гликолиза.

В связи с ростом, развитием и инволюцией первичных лимфоидных органов птиц в относительно короткий промежуток времени метаболизм витамина С в них также должен происходить весьма интенсивно, а концентрация его в тканях определяться как состоянием общего обмена веществ, так и гормональным статусом, особенносодержанием кортикостероидов. Кортикостерон способствует мобилизации резервов углеводов, жиров, белков на физиологический ответ к стрессору, что создает определенный дефицит энергетического материала для роста, замедляет иммунные реакции организма птицы. Указанная ситуация делает ее более чувствительной к болезням и в ряде случаев даже вакцинация может быть недостаточно эффективной. Кортикостерон оказывает и прямой эффект на иммунный процесс. Под влиянием стрессора снижается число лимфоцитов, повышается чувствительность птицы к инфекционным агентам: Витамин С угнетает продукцию кортикостерона надпочечниками и тем самым оказывает положительное влияние на показатели роста, течение иммунных реакций. Аскорбиновая кислота снижает иммуносу-прессивный эффект от стрессоров.

Эксперименты по выяснению влияния различных доз аскорбиновой кислоты, вводимой в рацион цыплят, на их рост и развитие, сохранность и накопление витамина С в органах подтвердили его активное участие в обмене веществ и в том числе в окислительно-восстановительных реакциях. Наибольшую устойчивость имела птица, получавшая 50-75мг аскорбиновой кислоты на 1 кг корма. У этих цыплят мясо отличалось от контрольных птиц повышенным содержанием белка и умеренным содержанием жира. Уровень витамина С в организме птицы может служить показателем естественной резистентности организма к инфекции. Снижение аскорбиновой кислоты и ее уровня при воздействии на организм экстремальных факторов среды было предложено в качестве теста для оценки стрессового состояния животного или птицы, определением гистохимическим путем уровня витамина С в надпочечниках. При развитии длительной стресс-реакции витамин С почти полностью исчезает из тканей надпочечников. Воздействие на организм стресс-факторов приводит не только к изменению содержания в крови кортикостероидов, угнетении иммунологической реактивности, но и к повышенному метаболизму витамина С. В этой связи с целью профилактики развития стрессового развития рекомендуется вводить в рацион птиц в течение нескольких дней витамин С наряду с комплексом других витаминов и микроэлементов. Выступая в качестве анти-оксиданта, витамин С нормализует обменные процессы в клетках и пролиферативную активность плазматических клеток, тем самым положительно влияет на синтез антител.

С целью профилактики развития стрессового состояния, вызванного проведением вакцинации, рекомендуется вводить в рацион птиц в течение нескольких дней витамин С в количестве 40-100мг/кг корма.

Задачей наших исследований было проследить динамику иммунокомпетентных клеток периферической крови и изменений, происходящих в костном мозге у цыплят в период иммунизации их против инфекционного ларинготрахеита. Эксперимент проводился в условиях птицефабрики предприятия «Оша», в цехе выращивания молодняка кур. Наблюдения осуществляли за 160 цыплятами породы белый леггорн 45-дневного возраста, размещенными в 10 клетках.

Иммунизацию проводили живой вирус-вакциной из штамма ВНИИБП против инфекционного ларинготрахеита путем инстилляции на конъюнктиву. В опыте было 2 группы цыплят: 1 группа — иммунизированные цыплята, 2 группа — иммунизация цыплят проводилась на фоне дачи им аскорбиновой кислоты в дозе 100 мг на кг корма. Витамин С давали за 3 дня до вакцинации и в течение 1 недели после нее. Выборочно брали пробы периферической крови и костного мозга шестикратно: до вакцинации, через сутки после нее, на 5, 7, 14 и 21 день после иммунизации. Выделение лимфоцитов проводили методом И.А. Болотникова, определение количества Т-лимфоцитов — методом спонтанного розеткообразования, В-лимфоцитов — методом комплементарных розеткообразований, вирус-специфические клетки — по И.А. Болотникову. Пробы костного мозга получали из проксимального конца большеберцовой кости по методике В.П. Косых. Готовили мазки-отпечатки, окрашивали их по Пап-пенгейму в нашей модификации и выводили миело-грамму.

Результаты исследований, обработанные методами вариационной статистики, показывают, что в ходе вакцинации происходят характерные изменения в популяционном составе иммунокомпетентных клеток периферической кроии цыплят. Так, количество Т-лимфоцитов у цыплят первой группы к 7 дню наблюдений достоверно увеличивается с 17,6 4- 0,34%в2,6ра-эа, к 14 дню их уровень снижается, но все еще выше довакцинального на 3%. У цыплят второй группы, получавших с кормом аскорбиновую кислоту, сохраняется та же тенденция. Считают, что регулятором клеточного иммунитета являются субпопуляции Т-лимфоци-тов: хелперы и супрессоры, и цепь иммунных реакций активизируется после контакта гиперсенситивных лимфоцитов со специфическим антигеном. Эти иммунные лимфоциты вырабатывают биологически активные вещества — лимфокины, которые приводят в состояние напряжения и другие компоненты системы, обеспечивающей резистентность организма. Так, если до вакцинации количество Т-супрессоров было 11,2 4^0,22%, а Т-хелперов - 6,4 _+ 0,12% в первой группе цыплят, то к 4 дню их стало соответственно в 1,1 раза меньше и 2,3 раза больше. У цыплят второй группы данные субпопуляций Т-лимфоцитов представлены следующим образом: супрессоров до вакцинации было 12,4 13%, хелперов- 6,8 .±.0,11%,ток4 дню исследований стало соответственно в 1,8 раза и 2,1 раза больше исходных значений. Следует отметить, что в течение периода исследований преобладание в сыворотке крови у цыплят супрессоров, инги-бирующих иммунный ответ, под влиянием вакцины сменяется преобладанием хелперов, усиливающих и клеточные и гуморальные (опосредованно) механизмы защиты. К 7 дню исследований были определены максимальные величины: количество супрессоров у цыплят первой группы стало в 1,8 раза больше исходного, хелперов — в 4 раза больше довакцинальных значений. Во второй группе: супрессоров — в 1,8 раза, хелперов — в 3,1 раза больше исходных данных.

К 14 дню исследований периферической крови цыплят 1 группы происходит уменьшение количества клеток, принадлежащих к субпопуляции супрессоров в 2,5 раза, а хелперов - в 2,1 раза, что на 5,6% выше довакцинальных значений. Аскорбиновая кислота после скармливания цыплятам первой группы способствовала изменению субпопуляционного состава лимфоцитов: так уровень супрессоров снизился в 3,1 раза, а хелперов только на 6,2% (в 1,4 раза), что на7,8% больше довакцинальных показателей.

Изменения отмечались и в количестве В-лимфо-цитов — основных эффекторов гуморального иммунитета, продуцентов специфических антител. В первой группе цыплят их количество с 13,6 + 0,17% до вакцинации снижается через 24 часа после введения вакцины в 2,6 раза, затем к 4 дню возрастает в 2,2 раза. Максимальное количество В-лимфоцитов отмечали на 7 день исследований. Затем постепенно уровень этих клеток снижаетсядо 17 + 0,37% к 14дню исследований. Во второй группе, где цыплята получали корм с витамином С, первоначальное количество В-лимфоци-тов ниже, чем у цыплят первой группы. Через сутки снижение количества этих клеток менее выраженное — всего на 1,7%, но уже к 4 дню количество будущих плазматических клеток увеличивается в 2,9 раза, а к 7 дню снижается на 8,2 %.Тенденция к снижению В-лим-фоцитов в периферической крови у цыплят 2 -й группы прослеживалась до конца периода исследований, хотя показатели данного параметра выше на 1-3%, чем у цыплят 1 группы.

В нашем эксперименте мы определяли изменение количества антигенспецифических клеток в периферической крови цыплят. Эти клетки уже активированы антигеном, содержащимся в вакцине против инфекционного ларинготрахеита. Такими гиперсенситивными клетками могут быть Т-лимфоциты, В-лимфоциты, и так называемые Д- клетки, которые на своей мембране имеют маркеры и Т- и В- клеток, которые могут активироваться под влиянием антигена вакцины. Их динамика в периферической крови у цыплят первой группы коррелирует с динамикой других клеток крови в период вакцинации: после введения вакцины через сутки незначительное (на 4,5%) уменьшение количества, затем постепенное увеличение — в 2,23 раза к седьмому дню эксперимента. Затем к 14 дню этот показатель эффективности иммунной системы цыплят в период вакцинации, снижаясь в 2,4 раза, приближается к изначальному уровню антиген-специфических лимфоцитов. Во второй группе цыплят под влиянием аскорбиновой кислоты изменился ход иммунного ответа: довакцинальные величины ви-русспецифических лимфоцитов были в периферической крови цыплят этой группы несколько ниже, но затем ответ на антиген был значительно ярче: уже через сутки после вакцинации увеличился на 4,58%, к 4-му дню после вакцинации стал уже 21,8 _+. 0,52%, что в 1,8 раза выше исходного. А к 7 дню этот показатель стал уже выше в 4,37 раза, чем до вакцинации и выше, чем у цыплят первой группы на 16,8%. Затемдо конца исследований происходит снижение этого уровня, но остается выше довакцинальных значений на 3,2-5%.

Анализ полученных миелограмм показывает, что наиболее яркие изменения происходили в составе клеток костного мозга через сутки и7 дней после вакцинации цыплят. Так, количество клеток эритро-идного ряда через сутки после воздействия уменьшилось в 1, 2 раза, а к 7 дню увеличилось на 10,3% по сравнению с довакцинальным. Костный мозг цыплят, употреблявших витаминизированный корм, реагировал уменьшением клеток красного ростка кроветворения через сутки — аналогично первой группе, а к 7 дню вакцинального периода количество этих клеток только на 1% превышало исходные величины.

Изменения в составе клеток белого ростка кроветворения были следующими. Количество миелоцитов и метамиелоцитов псевдоэозинофильных у цыплят первой группы через сутки после вакцинации уменьшилось в 1,2 раза, а к 7 дню возросло в 1,5 раза. Колебания в количестве мета- и миелоцитов эозинфильных были не настолько яркими, их количество к 24 часам после

воздействия уменьшилось в1,9разаик7 дню не восстановилось до исходных величин. Введение в корм цыплятам аскорбиновой кислоты привело к тому, что при подсчете костномозговых клеток этой категории колебания в их количестве были незначительными.

Более зрелые формы гранулоцитов — палочко-ядерные псевдоэознофилы, их количество менялось так: у цыплят первой группы через сутки после вакцинации уменьшается в 1,8 раза, к 7 дню возрастает до первоначальных показателей. У цыплят второй группы количество клеток этого вида через сутки увеличивается в 1,5 раза, а к 7 дню возвращается к исходному значению. Количество палочкоядерных эозинофилов изменяется только в группе цыплят, употреблявших корма без витамина С. К 7 дню их количество уменьшается в 6,6 раза.

Сегментоядерные псевдоэозинофилы — зрелые гранулоцитарные клетки. Их количество у цыплят первой группы уже к 24 часам после вакцинации уменьшается в 1,8 раза и только к 14 дню незначительно повышается. У цыплят второй группы количество клеток этого вида через сутки после воздействия увеличивается в 2 раза, а к 7 дню снижается в 1,3 раза. Количество зрелых эозинофилов в костном мозге у цыплят первой группы увеличивается уже через сутки после вакцинации в 1,7 раза, а к 7 дню восстанавливается. Во второй группе колебания количества этих клеток проявляются наиболее ярко: увеличение к 24 часам в 2,3 раза, уменьшение — к7днюв2,8раза.

Аскорбиновая кислота при поступлении в организм способствует увеличению в костном мозге цыплят моноцитов: уже через сутки после воздействия стрессором их количество становится в 4 раза больше, постепенно снижаясь к концу периода исследований. В костном мозге у цыплят первой группы количество этих клеток уменьшается в 1,9 раза к 24 часам после вакцинации, не имея в дальнейшем тенденции к возрастанию.

Количество клеток лимфоидного ряда у цыплят первой группы уже через сутки после воздействия вакциной на 10% увеличивается, а к 7 дню уменьшается на 16,6%. Во второй группе цыплят количество костномозговых клеток лимфоидного ряда подвергалось незначительным колебаниям. Уровень плазматических клеток — продуцентов антител в костном мозге у цыплят и первой и второй групп уменьшался в ходе эксперимента. По-видимому, это связано с выходом этих клеток в кровяное русло для функционирования.

Таким образом, степень иммунологической реактивности цыплят значительно изменяется под влиянием антигена в течение вакцинального периода, происходит усиление работы защитных механизмов организма, что приводит к становлению иммунитета против данного инфекционного заболевания. Под влиянием аскорбиновой кислоты динамика некоторых иммунокомпетентных выражена более ярко (особенно В-лимфоцитов и вирусспецифических клеток) по сравнению с группой цыплят, которые не получали с кормом витамин С — антиоксидант, антистрессовый препарат. В костном мозге аскорбиновая кислота значительно нивелирует резкие изменения костномозгового кроветворения, особенно в отношении эозинофилов и моноцитов. Поэтому использование в рационе цыплят витамина С перед вакцинацией их против инфекционного ларинготрахеита активизирует их иммунологическую реактивность, что повышает устойчивость иммунизированных цыплят против инфекции. Использование антистрессовых препаратов в птицеводстве, особенно при проведении профилактических мероприятий, необходимо.

Литература

1. И.А. Болотников, Ю.В. Конопатов Физиолого-биохимические основы иммунитета сельскохозяйственной птицы. -Л.: Наука, 1987. - 164 с.

2. И.А. Болотников, B.C. Михкиева, Е.К. Олейник Стресс и иммунитет у птиц, - Л.: Наука, 1983. -118 с.

3. И.А. Болотников, Ю.В. Соловьев Гематология птиц. - Л.: Наука, 1980. - 116 с.

4. Б.И. Кузник, Н.В. Васильев, H.H. Цыбиков Иммуногенез, гемостаз и неспецифическая резистентность организма/АМН СССР. — М.: Медицина, 1989. -320с.

5. К.Кестер-Леше Нет — вирусам и бактериям./ Пер.с нем. Г. Гаева. - М.:КРОН-ПРЕСС, 1997. -288 с.

CTAPYH Алла Станиславовна, ассистент кафедры химии.

УДК 619:612.015.1:577.348:636.4-055.26 Д БЕРЕНДЯЕВА

Институт ветеринарной медицины Омского государственного аграрного университета

НЕКОТОРЫЕ БИОХИМИЧЕСКИЕ ПОКАЗАТЕЛИ СЫВОРОТКИ КРОВИ СВИНЕЙ В РАЗЛИЧНЫЕ ФИЗИОЛОГИЧЕСКИЕ ПЕРИОДЫ

Приведены данные р содержании общего белка и белковых фракций, содержании общих липидов и их классов в сыворотке крови супоросных и лактирующих свиноматок. Установлено изменение названных показателей, особенно касающихся содержания как общих липидов, так и их классов. Работа является промежуточным этапом исследования обмена веществ у свиней.

Белковый и липидный состав крови является одним из важнейших физиолого-биохимических показателей, характеризующих состояние здоровья организма животного. Учитывая относительную простоту взятия материала (крови) и достаточно высокую информативность и достоверность получаемых результатов, методы исследования белкового илипидного состава получили широкое распространение и их результаты рассматриваются как критерий продуктивности животных в зависимости от различных условий кормления, содержания, физиологического и возрастного периода.

Белки крови играют исключительно важную фи-зиолого-биохимическую роль в сложных процессах обмена веществ между организмом и внешней средой. Установлено, что общая концентрация белков в сыворотке крови и соотношение различных белковых фракций имеет непосредственную связь с возрастом, физиологическим состоянием, уровнем кормления (4), породными особенностями [2]. Большинство исследователей свидетельствуют о снижении к концу супоросности общего количества белка, в основном за счет фракций, кроме а-глобулиновой [3]. В то же время в условиях промышленного комплекса у большинства свиноматок, как правило, наблюдается увеличение сывороточного белка в течение супоросности [8] и снижение его к 30 дню лактации [6], что, вероятно, обусловлено процессом образования молока, при котором белок крови является одним из источников для синтеза белков молока.

Основными липидами, находящимися в крови млекопитающих, являются жирные кислоты, в том числе свободные или неэстерифицированные, три-ацилглицерины, фосфолипиды, свободный и эстери-

фицированный холеСгерол. В организме липиды выполняют в основном четыре главные функции:

— являются структурным компонентом клеток;

— служат формой, в которой депонируются запасы метаболического топлива;

— служат формой, в которой это топливо транспортируется в организме;

— выполняют защитную роль.

Содержание липидов в организме и соотношение их классов может довольно значительно варьировать в различные периоды физиологичного состояния, а также зависеть от возраста животного. Например, у новорожденных поросят оно составляет около 2%, спустя неделю возрастает до 7%, а к концу второй недели жизни - до 12-15%. В возрасте 6 месяцев содержание липидов в организме свиней достигает 40% [9] и составляет примерно 350-400мг%, хотя верхняя граница может доходить до 1200мг% [ 1 ]. У свиней, как животных, отличающихся интенсивным липогенезом, могут быть достаточно значительные количественные колебания в составе липидов, транспорт которых в животном организме осуществляется белками. Поэтому изучение количественного содержания белка и белковых фракций, а также общих липидов и их классов при различных физиологических состояниях животного имеет определенное значение для выяснения специфики обмена липидов и белков и их регуляции с целью разработки научных программ липидного и белкового питания, способствующего повышению продуктивности животных.

Исходя из вышеизложенного, целью настоящей работы явилось:

1) изучение содержания общего белка и его фракционного состава в зависимости от физиологического