БИСПЕЦИФИЧЕСКИЕ ТРЕХВАЛЕНТНЫЕ АНТИТЕЛА, СВЯЗЫВАЮЩИЕСЯ С КЛАУДИНОМ 6 ИЛИ КЛАУДИНОМ 18.2, И CD3, ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ОНКОЛОГИЧЕСКИХ ЗАБОЛЕВАНИЙ С ЭКСПРЕССИЕЙ

1. Связывающий агент, включающий, по меньшей мере, три связывающих домена, где первый связывающий домен связывается с Т-клеточным специфическим антигеном, а второй связывающий домен и третий связывающий домен связываются с клаудином.
2. Связывающий агент по п. 1, отличающийся тем, что каждый из первого, второго и третьего связывающих доменов включает вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина (VH) и вариабельный домен легкой цепи иммуноглобулина (VL).
3. Связывающий агент по п. 1 или 2, отличающийся тем, что первый связывающий домен имеет формат молекулы Fab, и/или второй связывающий домен и третий связывающий домен имеют формат молекулы scFv.
4. Связывающий агент по любому из пп. 1-3, отличающийся тем, что связывающий агент включает
(а) первый полипептид, включающий домен VH со специфичностью к Т-клеточному специфическому антигену (VH(T)), домен VH со специфичностью к клаудину (VH(CLDN)) и домен VL со специфичностью к клаудину (VL(CLDN)); и
(b) второй полипептид, включающий домен VL со специфичностью к Т-клеточному антигену (VL(T)), домен VH со специфичностью к клаудину (VH(CLDN)) и домен VL со специфичностью к клаудину (VL(CLDN)),
где первый полипептид и второй полипептид связаны так, что образуют связывающий агент.
5. Связывающий агент по п. 4, отличающийся тем, что первый полипептид дополнительно включает константный домен 1 тяжелой цепи иммуноглобулина (CH1), а второй полипептид дополнительно включает константный домен легкой цепи иммуноглобулина (CL), где оба домена обладают способностью к ассоциации.
6. Связывающий агент по п. 5, отличающийся тем, что первый полипептид и второй полипептид ковалентно связаны через дисульфидный мостик между доменом CH1 и доменом CL.
7. Связывающий агент по п. 5 или 6, отличающийся тем, что в первом полипептиде и втором полипептиде домен(ы) VH, домен(ы) VL, домен CH1 и домен CL расположены от N-конца до C -конец, в порядке
-VH(T)-CH1-VH(CLDN)-VL(CLDN) и VL(T)-CL-VH(CLDN)-VL(CLDN); или
VH(T)-CH1-VL(CLDN)-VH(CLDN) и VL(T)-CL-VL(CLDN)-VH(CLDN).
2
3
4
2
8. Связывающий агент по п. 7, отличающийся тем, что домены VH-VL или VL-VH связаны с доменом CH1 или доменом CL через пептидный линкер, например, пептидный линкер, содержащий аминокислотную последовательность DVPGS или SGPGRS(GS).
4
x
9. Связывающий агент по п. 7 или 8, отличающийся тем, что домены VH и VL связаны через пептидный линкер с образованием доменов VH-VL или VL-VH, таких как пептидный линкер, содержащий аминокислотную последовательность (GS), где х равен 3, 4, 5 или 6.
10. Связывающий агент по любому из пп. 1-9, отличающийся тем, что связывающий агент представляет собой биспецифический димерный связывающий агент.
11. Связывающий агент по любому из пп. 1-10, отличающийся тем, что Т-клеточный специфический антиген экспрессируется на поверхности Т-клетки.
12. Связывающий агент по любому из пп. 1-11, отличающийся тем, что связывание связывающего агента с Т-клеточным специфическим антигеном на Т-клетках приводит к пролиферации и/или активации Т-клеток.
13. Связывающий агент по любому из пп. 1-12, отличающийся тем, что Т-клеточным специфическим антигеном является CD3.
14. Связывающий агент по п. 13, отличающийся тем, что первый связывающий домен связывается с эпсилон-цепью CD3.
15. Связывающий агент по любому из пп. 1-14, отличающийся тем, что клаудин экспрессируется на поверхности раковой клетки.
16. Связывающий агент по любому из пп. 1-15, отличающийся тем, что клаудин выбран из группы, состоящей из клаудина 6 и клаудина 18.2.
17. Связывающий агент по любому из пп. 1-16, отличающийся тем, что связывающий агент связывается с внеклеточным доменом клаудина.
18. Связывающий агент по любому из пп. 1-17, отличающийся тем, что связывание с Т-клеточным специфическим антигеном и/или связывание с клаудином является специфическим связыванием.
19. Связывающий агент по любому из пп. 1-18, отличающийся тем, что связывающий агент индуцирует опосредованную Т-клетками цитотоксичность в отношении раковых клеток, экспрессирующих клаудин.
20. Связывающий агент по п. 19, отличающийся тем, что связывающий агент индуцирует опосредованную Т-клетками цитотоксичность против раковых клеток, экспрессирующих клаудин, с ЕС50 < 10 нМ или < 1 нМ или < 500 пМ, или < 250 пМ, или < 100 пМ, или < 50 пМ.
21. Связывающий агент по любому из пп. 15-20, отличающийся тем, что клаудин представляет собой клаудин 6, а раковая(ые) клетка(и) являются клетками или получены из клеток рака, выбранного из группы, состоящей из: рака мочевого пузыря, рака яичника, в частности аденокарциномы яичника и тератокарциномы яичника, рака легкого, включая мелкоклеточный рак легкого (SCLC) и немелкоклеточный рак легкого (NSCLC), в частности плоскоклеточный рак легкого и аденокарцинома, рака желудка, рака молочной железы, рака печени, рака поджелудочной железы, рака кожи, в частности базальноклеточной карциномы и плоскоклеточной карциномы, злокачественной меланомы, рака головы и шеи, в частности злокачественной плеоморфной аденомы, саркомы, в частности синовиальной саркомы и карциносаркомы, рака желчных протоков, рака мочевого пузыря, в частности переходно-клеточной карциномы и папиллярной кациномы, рака почки, в частности почечно-клеточной карциномы, включая светлоклеточную почечно-клеточную карциному и папиллярную почечно-клеточную карциному, рака толстой кишки, рака тонкой кишки, включая рак подвздошной кишки, в частности аденокарциномы тонкой кишки и аденокарциномы подвздошной кишки, эмбриональной карциномы яичка, плацентарной хориокарциномы, рака шейки матки, рака яичка, в частности семиномы яичка, тератомы яичка и эмбрионального рака яичка, рака матки, опухолей половых клеток, таких как тератокарцинома или эмбриональная карцинома, в частности герминомы яичка, и их метастатических форм.
22. Связывающий агент по любому из пп. 15-20, отличающийся тем, что клаудин представляет собой клаудин 18.2, а раковая(ые) клетка(и) являются клетками или получены из клеток рака, выбранного из группы, состоящей из рака желудка, рака пищевода, рака поджелудочной железы, рака легкого, такого как немелкоклеточный рак легкого (NSCLC), рака молочной железы, рака яичника, рака толстой кишки, рака печени, рака головы и шеи, рака желчного пузыря и их метастатических форм, опухоли Крукенберга, метастазов в брюшную полость и/или метастазов в лимфатические узлы.
23. Связывающий агент по любому из пп. 4-22, отличающийся тем, что Т-клеточный специфический антиген представляет собой CD3, и VH(T) включает или состоит из аминокислотной последовательности, представленной SEQ ID NO: 5, или ее фрагмента, или варианта аминокислотной последовательности или фрагмента и/или VL(T) включает или состоит из аминокислотной последовательности, представленной SEQ ID NO: 6, или ее фрагмента, или варианта аминокислотной последовательности или фрагмента.
24. Связывающий агент по любому из пп. 4-21 и 23, в котором клаудин представляет собой клаудин 6, а VH (CLDN) включает или состоит из аминокислотной последовательности, представленной SEQ ID NO: 8, или ее фрагмента, или варианта аминокислотной последовательности или фрагмента, и/или VL (CLDN) включает или состоит из аминокислотной последовательности, представленной SEQ ID NO: 10, или ее фрагмента, или варианта аминокислотной последовательности или фрагмента.
25. Связывающий агент по любому из пп. 4-21, 23 и 24, отличающийся тем, что Т-клеточный специфический антиген представляет собой CD3, клаудин представляет собой клаудин 6 и
- первый полипептид включает или состоит из аминокислотной последовательности, представленной SEQ ID NO: 14, или ее фрагмента, или варианта аминокислотной последовательности или фрагмента, и второй полипептид включает или состоит из аминокислотной последовательности, представленной SEQ ID NO. 16 или ее фрагмента, или варианта аминокислотной последовательности или фрагмента;
- первый полипептид включает или состоит из аминокислотной последовательности, представленной SEQ ID NO: 15, или ее фрагмента, или варианта аминокислотной последовательности или фрагмента, и второй полипептид включает или состоит из аминокислотной последовательности, представленной SEQ ID NO. 16 или ее фрагмента, или варианта аминокислотной последовательности или фрагмента;
- первый полипептид включает или состоит из аминокислотной последовательности, представленной SEQ ID NO: 17, или ее фрагмента, или варианта аминокислотной последовательности или фрагмента, и второй полипептид включает или состоит из аминокислотной последовательности, представленной SEQ ID NO. 19 или ее фрагмента, или варианта аминокислотной последовательности или фрагмента; или
- первый полипептид включает или состоит из аминокислотной последовательности, представленной SEQ ID NO: 18, или ее фрагмента, или варианта аминокислотной последовательности или фрагмента, и второй полипептид включает или состоит из аминокислотной последовательности, представленной SEQ ID NO. 19 или ее фрагмента, или варианта аминокислотной последовательности или фрагмента.
26. Связывающий агент по любому из пп. 4-20, 22 и 23, отличающийся тем, что клаудин представляет собой клаудин 18.2, и (i) VH (CLDN) включает или состоит из аминокислотной последовательности, представленной SEQ ID NO: 20, или ее фрагмента или варианта аминокислотной последовательности или фрагмента и/или VL (CLDN) включает или состоит из аминокислотной последовательности, представленной SEQ ID NO: 22, или ее фрагмента, или варианта аминокислотной последовательности или фрагмента, или (ii) VH (CLDN) включает или состоит из аминокислотной последовательности, представленной SEQ ID NO: 21, или ее фрагмента, или варианта аминокислотной последовательности или фрагмента, и/или VL (CLDN) включает или состоит из аминокислотной последовательности, представленной SEQ ID NO: 23 или ее фрагмента, или варианта аминокислотной последовательности или фрагмента.
27. Связывающий агент по любому из пп. 4-20, 22, 23 и 26, отличающийся тем, что Т-клеточный специфический антиген представляет собой CD3, клаудин представляет собой клаудин 18.2 и
- первый полипептид включает или состоит из аминокислотной последовательности, представленной SEQ ID NO: 30, или ее фрагмента, или варианта аминокислотной последовательности или фрагмента, и второй полипептид включает или состоит из аминокислотной последовательности, представленной SEQ ID NO: 32 или ее фрагмента, или варианта аминокислотной последовательности или фрагмента;
- первый полипептид включает или состоит из аминокислотной последовательности, представленной SEQ ID NO: 31, или ее фрагмента, или варианта аминокислотной последовательности или фрагмента, и второй полипептид включает или состоит из аминокислотной последовательности, представленной SEQ ID NO: 32 или ее фрагмента, или варианта аминокислотной последовательности или фрагмента;
- первый полипептид включает или состоит из аминокислотной последовательности, представленной SEQ ID NO: 33, или ее фрагмента, или варианта аминокислотной последовательности или фрагмента, и второй полипептид включает или состоит из аминокислотной последовательности, представленной SEQ ID NO. 35 или ее фрагмента, или варианта аминокислотной последовательности или фрагмента;
- первый полипептид включает или состоит из аминокислотной последовательности, представленной SEQ ID NO: 34, или ее фрагмента, или варианта аминокислотной последовательности или фрагмента, и второй полипептид включает или состоит из аминокислотной последовательности, представленной SEQ ID NO. 35 или ее фрагмента, или варианта аминокислотной последовательности или фрагмента;
- первый полипептид включает или состоит из аминокислотной последовательности, представленной SEQ ID NO: 36, или ее фрагмента, или варианта аминокислотной последовательности или фрагмента, и второй полипептид включает или состоит из аминокислотной последовательности, представленной SEQ ID NO. 37 или ее фрагмента, или варианта аминокислотной последовательности или фрагмента;
- первый полипептид включает или состоит из аминокислотной последовательности, представленной SEQ ID NO: 38, или ее фрагмента, или варианта аминокислотной последовательности или фрагмента, и второй полипептид включает или состоит из аминокислотной последовательности, представленной SEQ ID NO. 39 или ее фрагмента, или варианта аминокислотной последовательности или фрагмента;
- первый полипептид включает или состоит из аминокислотной последовательности, представленной SEQ ID NO: 40, или ее фрагмента, или варианта аминокислотной последовательности или фрагмента, и второй полипептид включает или состоит из аминокислотной последовательности, представленной SEQ ID NO: 41 или ее фрагмента, или варианта аминокислотной последовательности или фрагмента;
- первый полипептид включает или состоит из аминокислотной последовательности, представленной SEQ ID NO: 42, или ее фрагмента, или варианта аминокислотной последовательности или фрагмента, и второй полипептид включает или состоит из аминокислотной последовательности, представленной SEQ ID NO: 43 или ее фрагмента, или варианта аминокислотной последовательности или фрагмента.
28. Нуклеиновая кислота, кодирующая связывающий агент по любому из пп. 1-27.
29. Нуклеиновая кислота, кодирующая первый полипептид и/или второй полипептид, по любому из пп. 4-27.
30. Нуклеиновая кислота по п. 28 или 29, которая находится в форме вектора или в форме РНК.
31. Клетка-хозяин, содержащая нуклеиновую кислоту по любому из пп. 28-30.
32. Связывающий агент по любому из пп. 1-27, нуклеиновая кислота по любому из пп. 28-30 или клетка-хозяин по п. 31 для применения в качестве лекарственного средства.
33. Связывающий агент по любому из пп. 1-27, нуклеиновая кислота по любому из пп. 28-30 или клетка-хозяин по п. 31 для применения в лечении или профилактике онкологических заболеваний.
34. Фармацевтическая композиция, включающая связывающий агент по любому из пп. 1-27, нуклеиновую кислоту по любому из пп. 28-30 или клетку-хозяина по п. 31.
35. Способ лечения или профилактики онкологических заболеваний, включающий введение нуждающегося в этом субъекту связывающегося агента по п. 1 по 27, нуклеиновой кислоты по любому из пп. 28-30, клетки-хозяина по п. 31 или фармацевтической композиции по п. 34.
36. Связывающий агент, нуклеиновая кислота или клетка-хозяин по п.33 или способ по п.35, отличающиеся тем, что клетки рака экспрессируют клаудин, с которым связывающий агент способен связываться.
37. Связывающий агент, нуклеиновая кислота, клетка-хозяин или способ по п. 36, отличающиеся тем, что клаудин представляет собой клаудин 6, и рак выбран из группы, состоящей из рака мочевого пузыря, рака яичника, в частности аденокарциномы яичника и тератокарциномы яичника, рака легкого, включая мелкоклеточный рак легкого (SCLC) и немелкоклеточный рак легкого (NSCLC), в частности плоскоклеточный рак легкого и аденокарцинома, рака желудка, рака молочной железы, рака печени, рака поджелудочной железы, рака кожи, в частности базальноклеточной карциномы и плоскоклеточной карциномы, злокачественной меланомы, рака головы и шеи, в частности злокачественной плеоморфной аденомы, саркомы, в частности синовиальной саркомы и карциносаркомы, рака желчных протоков, рака мочевого пузыря, в частности переходно-клеточной карциномы и папиллярной кациномы, рака почки, в частности почечно-клеточной карциномы, включая светлоклеточную почечно-клеточную карциному и папиллярную почечно-клеточную карциному, рака толстой кишки, рака тонкой кишки, включая рак подвздошной кишки, в частности аденокарциномы тонкой кишки и аденокарциномы подвздошной кишки, эмбриональной карциномы яичка, плацентарной хориокарциномы, рака шейки матки, рака яичка, в частности семиномы яичка, тератомы яичка и эмбрионального рака яичка, рака матки, опухолей половых клеток, таких как тератокарцинома или эмбриональная карцинома, в частности герминомы яичка, и их метастатических форм.
38. Связывающий агент, нуклеиновая кислота, клетка-хозяин или способ по п. 36, отличающиеся тем, что клаудин представляет собой клаудин 18.2, и рак выбран из группы, состоящей из рака желудка, рака пищевода, рака поджелудочной железы, рака легкого, такого как немелкоклеточный рак легкого (NSCLC), рака молочной железы, рака яичника, рака толстой кишки, рак печени, рака головы и шеи, рака желчного пузыря и их метастатических форм, опухоли Крукенберга, метастазов в брюшную полость и/или метастазов в лимфатические узлы.