ВАРИАНТЫ Fc И СПОСОБЫ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ

1. Применение варианта Fc полипептида Fc IgG человека дикого типа, причем вариант Fc включает:
(a) замены в остатках 241 и 243 (согласно схеме нумерации EU относительно антитела IgG1 человека), по меньшей мере на одной тяжелой цепи, выбранные из F241R/F243S и F241S/F243R, и
(b) по меньшей мере одну модификацию «выступ-во-впадину» в одном или нескольких аминокислотных остатках, отличных от 241, и 243; где по меньшей мере одна модификация «выступ-во-впадину» включает:
(i) модификацию выступа T366W (согласно схеме нумерации EU), и
(ii) модификацию впадины, выбранную из группы, состоящей из T366S, L368A и Y407 (согласно схеме нумерации EU);
для получения антитела IgG или гетеромультимерного белка, обладающего сниженным ошибочным спариванием, сниженным образованием «голова-в-хост» и/или увеличенным общим выходом по сравнению с родительским антителом IgG или гетеромультимерным белком без замен в остатках 241 и 243, где полипептид Fc является негликозилированным, и, где гетеромультимерный белок получают способом, включающим:
(a) предоставление первого содержащего Fc полипептида, включающего вариант Fc;
(b) предоставление второго содержащего Fc полипептида;
(c) объединение первого и второго содержащих Fc полипептидов; и
(d) рефолдинг первого содержащего Fc полипептида, включающего вариант Fc, со вторым содержащим Fc полипептидом с образованием антитела IgG или гетеромультимерного белка.
2. Применение по п. 1, в котором тяжелая цепь, содержащая замену F241R/F243S или F241S/F243R, включает модификацию выступа.
3. Применение по п. 1, в котором тяжелая цепь, содержащая замену F241R/F243S или F241S/F243R, включает модификацию впадины.
4. Применение по п. 1, в котором тяжелая цепь, содержащая замену F241R/F243S или F241S/F243R, включает замену T366W (согласно схеме нумерации EU).
5. Применение по п. 1, в котором тяжелая цепь, содержащая замену F241R/F243S или F241S/F243R, включает две или более аминокислотные замены, выбранные из группы, состоящей из T366S, L368A и Y407V (согласно схеме нумерации EU).
6. Применение по п. 1, в котором антитело IgG или гетеромультимерный белок содержит две тяжелые цепи, где каждая тяжелая цепь содержит замену F241R/F243S или F241S/F243R.
7. Применение по п. 1, в котором антитело IgG или гетеромультимерный белок представляет собой антитело IgG.
8. Применение по п. 1, в котором антитело IgG или гетеромультимерный белок представляет собой полиспецифическое антитело.
9. Применение по п. 8, в котором полиспецифическое антитело представляет собой биспецифическое антитело IgG.
10. Применение по п. 1, в котором антитело IgG или гетеромультимерный белок экспрессируется в прокариотической клетке-хозяине.
11. Применение варианта Fc полипептида Fc IgG человека дикого типа, причем вариант Fc включает:
(a) замены в остатках 241 и 243 (согласно схеме нумерации EU относительно антитела IgG1 человека), по меньшей мере на одной тяжелой цепи, выбранные из F241R/F243S и F241S/F243R, и
(b) по меньшей мере одну модификацию «выступ-во-впадину» в одном или нескольких аминокислотных остатках, отличных от 241, и 243; где по меньшей мере одна модификация «выступ-во-впадину» включает:
(i) модификацию выступа T366W (согласно схеме нумерации EU), и
(ii) модификацию впадины, выбранную из группы, состоящей из T366S, L368A и Y407 (согласно схеме нумерации EU);
для получения гетеромультимерного белка, обладающего сниженным ошибочным спариванием, сниженным образованием «голова-в-хост» и/или увеличенным общим выходом по сравнению с родительским гетеромультимерным белком без замен в остатках 241 и 243, где полипептид Fc является негликозилированным, и, где гетеромультимерный белок получают способом, включающим:
(a) предоставление очищенного первого содержащего Fc полипептида, включающего вариант Fc;
(b) предоставление очищенного второго содержащего Fc полипептида;
(c) объединение очищенного первого и очищенного второго содержащих Fc полипептидов; и
(d) рефолдинг очищенного первого содержащего Fc полипептида с очищенным вторым содержащим Fc полипептидом с образованием гетеромультимерного белка.
12. Применение по п. 11, в котором первый содержащий Fc полипептид, включающий вариант Fc, включает модификацию выступа.
13. Применение по п. 11, в котором первый содержащий Fc полипептид, включающий вариант Fc, включает модификацию впадины.
14. Применение по п. 11, первый содержащий Fc полипептид, включающий вариант Fc, включает замену T366W (согласно схеме нумерации EU).
15. Применение по п. 11, в котором первый содержащий Fc полипептид, включающий вариант Fc, включает две или более аминокислотные замены, выбранные из группы, состоящей из T366S, L368A и Y407V (согласно схеме нумерации EU).
16. Применение по п. 11, в котором первый содержащий Fc полипептид и второй содержащий Fc полипептид содержат варианты Fc, включающие замены F241R/F243S или F241S/F243R.
17. Применение по п. 11, в котором гетеромультимерный белок представляет собой полиспецифическое антитело.
18. Применение по п. 17, в котором гетеромультимерный белок представляет собой биспецифическое антитело.
19. Применение по п. 11, в котором гетеромультимерный белок экспрессируется в прокариотической клетке-хозяине.
20. Применение по п. 11, в котором способ дополнительно включает очистку гетеромультимерного белка.