Состояние антиоксидантной зашиты у больных хроническими вирусными микст гепатитами

Состояние антиоксидантной зашиты у вольных хроническими вирусными микст гепатитами

Ф. И. ИНОЯТОВА, Г. З. ИНОГАМОВА, Н. К. ВАЛИЕВА, С. А. АШУРОВА

нии педиатрии мз республики узбекистан, ташкент

Целью исследования явилось изучение активности перекисного окисления липидов (ПОЛ) и эффективности антиоксидантной системы (АОС) у больных хроническими микст гепатитами (ХМГ) с персистенцией НВ-, НС- и HD-вирусов. Всего обследовано 66 детей с ХМГ в возрасте от 3-х до 14 лет. Из них детей с ХМГ В + С — 46; с ХМГ B + C + D — 20. Контрольную группу составили 20 детей с хроническим гепатитом В. В постановке диагноза ХМГ использована классификация, принятая на Всемирном Конгрессе экспертов-гепатологов (Лос-Анджелес, 1994).

Установлено, что микст инфекции гепатотропными вирусами усугубляют мембранодеструктивные процессы в клетках, способствуя развитию тяжелых форм заболевания. Характерными биохимическими признаками ХМГ у детей являются длительная ги-перферментемия и нарушение взаимосвязи показателей процессов ПОЛ/АОС с развитием стойкой интенсификации реакций ПОЛ, особенно при тройном (B + C + D) инфицировании. В результате дестабилизация липидной структуры мембран выражалась в повышении содержания холестерина, триглицеридов и снижении уровня фосфолипидов. Ключевые слова: дети, хронические вирусные микст гепатиты, маркеры HBV, HCV, HDV

Antioxidant protection condition in chronic virus mixed hepatitis patients

F. I. iNOYATOVA, G. Z. iNOGAMOVA, N. K. VALIEVA, S. A. ASHUROVA

Scientific Research Pediatrics Institute of Uzbekistan Republic, Tashkent

Research objective was studying activity of peroxide oxidation of lipids (POL) and efficiency of antioxidant system (AOS) in chronic virus mixed hepatitis (CMH) patients with persistence of НВ-, НС- and HD-viruses. 66 children with CMH aged 3—14 were examined in total. They included 46 children with CMH В + С and 20 with CMH B + C + D. Control group included 20 children with chronic hepatitis B. CMH was diagnosed using classification approved by the Experts-Hepatologists World Congress (Los Angeles, 1994).

It was found that mixed hepatotropic viruses infections contribute to membrane destructive processes in cells facilitating development of grave forms of disease. Characteristic biochemical CMH properties in children are long-term hyperfermentemia and irregular correlation of POL/AOS processes values with development of stable intensification of POL reactions, especially in the event of triple (B + C + D) viral infection. As a result a destabilization of lipid membranes structures was expressed in increased vales of cholesterol, triglycerides and low vales of phospholipids. Key words: children, chronic virus mixed hepatitis, HBV, HCV, HDV markers

Хронические вирусные гепатиты являются одной из актуальных проблем здравоохранения в XXI веке. Увеличение числа вирусных агентов, вызывающих гепатит, появление в последние годы новых возможностей их диагностики и рост случаев поливирусных заболеваний с тяжелыми последствиями заставляют более пристально взглянуть на проблему смешанной инфекции [1, 2]. Среди различных сочетаний возбудителей, вызывающих вирусный гепатит, на первое место выходит смешанная НБУ/НСУ-инфекция. Примерно у 10—20% лиц, инфицированных НВУ выявляется НСУ-инфекция. У пациентов с наличием анти-НСУ в 2—10% случаев обнаруживаются маркеры НВУ [3]. Анализ структуры заболеваемости хроническими вирусными гепатитами (ХВГ) в отделе гепатологии нашего института показал, что хроническая микст инфекция выявляется в 25,6% случаев. При этом наибольший удельный вес приходится на инфицирование вирусами В и С (71,7%) и относительно низкий — на В, С и D (28,3%).

Особенностью течения хронических микст гепатитов (ХМГ) является способность к длительному персистирова-нию возбудителей гепатита в макрорганизме. Существуют различные механизмы ускользания НВУ, НСУ, HDV от иммунологического контроля макроорганизма. Основ-

Иноятова Флора Ильясовна — д. м. н., профессор, зав. отделением гепатологии НИИ педиатрии республики Узбекистан, т. (8-10-998-712) 229-38-75

ным механизмом выживания НВУ является его интеграция в геном гепатоцита. При НСУ- и HDV-инфекциях такая интеграция не возможна, поскольку в жизненном цикле этих вирусов нет ни матричной, ни промежуточной ДНК [4]. По мнению Ф. Х. Мансуровой, сочетанная инфицирован-ность больного вирусами различного типа определяет тяжесть клинического течения заболевания и глубину функциональных и структурных повреждений. В основе патогенеза всех патологических состояний лежат первичные нарушения на уровне межмолекулярных взаимодействий, в частности, в настоящее время известны 4 основных механизма, ведущих к апоптозу клеток: 1) повреждение плазматической мембраны и нарушения цитоскелета; 2) дисфункция митохондрий; 3) утрата внутриклеточного ионного гомеостаза; 4) активация ферментов деградации веществ [4, 5].

С учетом вышеизложенного, целью исследования явилось изучение активности перекисного окисления липи-дов (ПОЛ) и эффективности антиоксидантной системы (АОС) у детей, больных ХМГ.

Материалы и методы исследования

Всего обследовано 66 детей с ХМГ в возрасте от 3 до 14 лет. Диагноз ХМГ устанавливали на основании анамнеза, клинического обследования, результатов биохимических и инструментальных исследований с использованием классификации, принятой на Всемирном конгрессе экспертов-гепатологов (Лос-Анджелес, 1994).

Таблица 1. Показатели ПОЛ и АОС в эритроцитах больных ХМГ умеренной активности

Показатель Контроль ХГВ ХМГВ+С ХМГВ+С+D

СОД (ед/мл) 211,5 ± 18,7 218,7 ± 9,2 222,6 ± 2,1 217,7 ± 2,4

Каталаза (ед/мл X мин) 192,6 ± 13,7 149 ± 1,9а 104,6 ± 2,9а. ь 66,7 ± 2,3а. ь. с

МДА (мкмоль/л) 1,88 ± 0,09 3,17 ± 0,20а 4,72 ± 0,33а. ь 6,02 ± 0,37а. ь. с

ДК (мкмоль/л) 6,04 ± 0,5 7,87 ± 0,9 а 10,33 ± 0,81а. ь 12,41 ± 0,88а. ь

ХЛ (моль/л) 2,12 ± 0,16 3,49 ± 0,23 а 4,51 ± 0,29а. ь 5,99 ± 0,41а. ь. с

ТГ (моль/л) 0,78 ± 0,06 2,00 ± 0,11а 2,47 ± 0,19а. ь 3,01 ± 0,17а. ь. с

ОЛ (г/л) 3,65 ± 0,22 4,05 ± 0,36а 5,79 ± 0,34а. ь 6,88 ± 0,39а. ь. с

ФЛ (моль/л) 7,43 ± 0,59 5,33 ± 0,4а 3,94 ± 0,38а. ь 2,94 ± 0,34а. ь. с

а — достоверно к контролю; Ь — к группе детей с ХГВ; с — между группами детей с ХМГ

Вирусологическую верификацию возбудителя проводили на основании обнаружения в сыворотке крови HBsAg, HBsAb, НВеАд, НВеАЬ, НВсогАЬ, НСУ-АЬ, HDV-Ab методом И ФА; HBV-ДНК, Н^-РНК, HDV-PHK- методом ПЦР в сыворотке крови. С учетом маркерного профиля были сформированы группы больных: 1-ю составили 34 ребенка с ХМГ В + С умеренной активности; 2-ю — 12 детей с ХМГ В + С выраженной активности; в 3-ю группу вошли 8 детей с ХМГ В + С + D умеренной активности; в 4-ю — 1 2 детей с ХМГ В + С + D выраженной активности; в 5-ю — 1 1 детей с ХГВ умеренной активности; в 6-ю группу — 9 детей с ХГВ выраженной активности (5 и 6 группы использовали в качестве сравнения). Дополнительно обследованы 20 практически здоровых детей для получения нормативных показателей.

Исследование состояния прооксидантной и антиокси-дантной систем (АОС) включало: определение перекис-ного окисления липидов (ПОЛ) по содержанию малонового диальдегида (МДА) и диеновых конъюгатов (ДК);

системы АОС по активности супероксидисмутазы (СОД) и каталазы (КТ) [6, 7]. Липидная структура эритроцитар-ных мембран оценивалась по содержанию фосфолипи-дов (ФЛ), холестерина (ХЛ), триглицеридов (ТГ) и общих липидов (ОЛ). При статистической обработке результатов применяли критерии Стьюдента-Фишера.

Результаты и их обсуждение

Анализ ПОЛ и АОС в клинических группах выявил различия в динамике интенсивности этих процессов у больных с умеренной и выраженной активностью ХГВ и ХМГ.

Хронический микст гепатит умеренной активности.

Предварительные результаты исследований состояния АОС и ПОЛ приведены в таблице 1, из которой следует, что во всех группах из показателей АОС активность СОД в эритроцитах достоверно не отличалась от контроля (р > 0,05). Вместе с тем, активность второго энзима антирадикальной защиты — каталазы — достоверно снижалась во всех группах с большей выраженностью при

Таблица 2. Показатели ПОЛ и АОС в эритроцитах детей, больных ХМГ выраженной активности

Показатель Контроль ХГВ ХМГВ+С ХМГ В + С + D

СОД (ед/мл) 211,5 ± 18,7 200,1 ± 2,4а 188,2 ± 2,4а. ь 176,9 ± 3,2а. ь. с

Каталаза (ед/мл X мин) 192,6 ± 13,7 120,0 ± 1,9а 75,4 ± 2,7а. ь 56,1 ± 3,2а. ь. с

МДА (мкмоль/л) 1,88 ± 0,11 4,60 ± 0,31а 4,53 ± 0,34а. ь 7,27 ± 0,44а. ь. с

ДК(мкмоль/л) 6,04 ± 0,5 8,1 ± 0,7а 10,40 ± 0,84а. ь 13,50 ± 0,91а. ь. с

ХЛ (моль/л) 2,12 ± 0,16 4,56 ± 0,30а 5,70 ± 0,37а. ь 7,44 ± 0,41а. ь. с

ТГ (моль/л) 0,78 ± 0,06 2,51 ± 0,17а 3,15 ± 0,22а. ь 5,18 ± 0,30а. ь. с

ОЛ (г/л) 3,65 ± 0,22 4,51 ± 0,31а 5,50 ± 0,38а. ь 7,71 ± 0,49а. ь. с

ФЛ (моль/л) 7,43 ± 0,59 5,47 ± 0,3а 3,45 ± 0,24а. ь 2,94 ± 0,22а. ь. с

а — достоверно относительно показателей группы контроля; Ь — относительно показателей ХГВ; с — между группами с ХМГ (р < <0,05 — р < 0,001.

ХМГ В + С и В + С + D — на 45,7 и 55% соответственно, при моногепатите В — на 22,7% (р < 0,01). Известно, что в условиях отсутствия активации СОД и КТ, усиленная продукция активных форм кислорода приводит к чрезмерному образованию гидроперекисей липидов [5]. Свидетельством этого, по нашим наблюдениям, являлось повышенное содержание МДА и ДК — продуктов расщепления гидроперекисей липидов. Так, содержание МДА в эритроцитах крови детей с ХМГ В + С и В + С + D было увеличено в 2,5 и 3,2 раза соответственно по отношению к контролю (р < 0,01). В группе сравнения содержание МДА было увеличено только в 1,7 раза. Аналогичные изменения отмечены в содержании ДК: при ХГВ их уровень повышался на 23,3%, при ХМГ В + С и В + С + D — на 41,6 и 51,4% соответственно.

Следовательно, ХМГ умеренной активности у детей, по сравнению с ХГВ, характеризуется более выраженными нарушениями в системе ПОЛ/АОС, особенно при В + + С + D-инфекции. Характер патологических изменений представлен отсутствием активации СОД и снижением активности КТ на фоне параллельного повышения продуктов расщепления ПОЛ — МДА и ДК. По-видимому, отсутствие активации СОД в условиях одновременной персистенции вирусов гепатита свидетельствует о состоянии напряженности адаптационных механизмов организма на клеточном уровне.

Липидный спектр при ХГВ и ХМГ у детей характеризовался повышением уровня холестерина, триглицеридов и общих липидов (р < 0,01 — р < 0,001 к контролю) с большей выраженностью при микст инфекции. Так, наиболее высокие отклонения выявлены при ХМГ В + С + D, где уровень ХЛ в 2,8 раза, ТГ — в 3,8 раза и ОЛ в 1,8 раза превышал контрольные значения при ХМГ в 2,1; 3,1 и

1.5 раза соответственно. Относительно менее выражено изучаемые параметры повышались при ХГВ: ХЛ — в

1.6 раза, ТГ — в 2,5 раза и ОЛ — в 1,2 раза. Содержание суммарных ФЛ было снижено у больных всех обследуемых групп, однако определенные различия отмечены в зависимости от сочетания вирусов. При этом наиболее глубокие изменения выявлены при микст инфекциях, в частности, уровень суммарных ФЛ при ХМГ В + С + D и В + + С снижался до 2,94 ± 0,34 и 3,94 ± 0,38 моль/л соответственно (при контроле 7,43 ± 0,59моль/л, р < <0,001). В группе детей с ХГВ суммарные ФЛ находились на уровне 5,33 ± 0,4моль/л.

Таким образом, при ХМГ потенцируется ослабление антирадикальной защиты и усиливаются процессы липе-роксидации биомембран клеток (гепатоцитов), что еще более усугубляет метаболические нарушения и сопутствующий цитолиз гепатоцитов.

Хронический микст гепатит выраженной активности. В отличие от ХМГ умеренной активности, изменения в ан-тиоксидантном звене характеризовались достоверным повышением СОД (р < 0,001) относительно контрольных значений (табл. 2). Наиболее выраженное снижение ее уровня отмечалось у детей, инфицированных несколькими вирусами. Так, при ХМГ В + С + D и В + С уровень СОД

находился в пределах 176,9 ± 3,2 и 1 88,2 ± 2,4 ед/мл соответственно (при контроле 211,5 ± 18,7ед/мл). По всей видимости, в результате уже истощения адаптаци-оно-компенсаторных механизмов происходит инактивация СОД-реакции, которая увеличивает дискоординацию ферментных систем клеток (гепатоцитов), выработку Н2О2 и как следствие, ведет к инициации и поддержанию процессов ПОЛ, что косвенно подтверждалось данными КТ, активность которой резко снижалась при B + C + D — до 56,1 ± 3,3 ед/мл X мин и ХМГ В + С — до 75,4 ± ± 2,7 ед/мл X мин, p < 0,001 к контролю. Следует подчеркнуть, что сопоставление по группам показало, что активность КТ при хронической HBV-инфекции в сочетании с HCV и HDV ниже аналогичного показателя при ХГВ в 2,1 раза (p < 0,001), а в сочетании только с HCV-инфекцией — в 1,6 раза (p < 0,001). Изменения в ферментативном звене АОС не предотвращали нарастания содержания МДА в эритроцитах больных детей. В наибольшей степени поломка системы антиперекисной защиты наблюдалась при выраженной форме ХМГ B + C + + D, при этом содержание МДА превышало контрольные цифры в 3,8 раза, ДК — в 2,2 раза. Чрезмерное накопление продуктов липопероксидации — неблагоприятный фактор, поскольку они могут инактивировать сульфгид-рильные группы белков, в том числе ферменты. Мы полагаем, что усиление процессов ПОЛ, нарушение координации компонентов АОС у больных ХМГ могут приводить к усугублению дисбаланса иммунного гомеостаза и выраженному иммунодефицитному состоянию.

Однако, при выраженной активности ХМГ В + С и монохроническом гепатите В в процессах липопероксидации биомембран гепатоцитов были выявлены менее выраженные нарушения. Это проявлялось отсутствием достоверной разницы в показателях МДА у больных ХМГ В + С и ХГВ, который находился практически в одних пределах — 4,53 ± 0,34 и 4,60 ± 0,31 мкмоль/л соответственно. Возможно, что вялое, монотонное течение процессов ли-пероксидации ненасыщенных жирных кислот мембран клеток (гепатоцитов) способствовало развитию вялотекущего хронического процесса в печени, столь характерного для хронической HCV-инфекции. С другой стороны, такая динамика содержания МДА в эритроцитах могла свидетельствовать о гетерогенности обследуемой группы, уже имевшей на этапе первичной диагностики в своем составе лиц с риском развития цирроза печени.

Дальнейший анализ липидного спектра показал, что изучаемые параметры у детей с хроническими вирусными гепатитами достоверно отличались от контрольных (p < <0,001). Межгрупповые сопоставления выявили закономерные изменения, характеризующиеся выраженным дисбалансом липидных компонентов мембран, особенно в случае микст инфекции. Из приведенных данных таблицы 2 видно, что при ХМГ B + C + D на фоне снижения общего количества фосфолипидов характерно повышение других показателей липидного обмена, таких как ХЛ — в 1,6 раза, ТГ — в 2,0 раза и ОЛ — в 1,7 раза относительно таковых у детей с ХГВ (p < 0,001). Аналогичную

картину, но с меньшей выраженностью наблюдали у детей, инфицированных В + С, у них повышены ХЛ, ТГ и ОЛ — в 1,2 раза соответственно (р < 0,01). При этом значения суммарных ФЛ снижались при ХМГ В + С + D до 2,94 ± 0,22 моль/л и при ХМГ В + С — до 3,45 ± ± 0,24 моль/л, что достоверно ниже такового показателя при ХГВ, равного 5,47 ± 0,3 моль/л (при норме 7,43 ± ± 0,59 моль/л, р < 0,001).

Таким образом, при выраженной активности ХМГ, особенно при одновременном персистировании НВ-, НС-и HD-вирусов, наблюдалось более интенсивное взаимодействие, по сравнению с моноинфекцией, отдельных компонентов системы ПОЛ/АОС, что могло бы быть, с одной стороны, показателем истощения адаптационно-приспособительных возможностей организма в ответ на сочетанное повреждающее воздействие двух/трех инфекционных агентов. С другой стороны — отражением особенностей патогенеза заболевания, где имеет место наличие вирусов (Н^ и HDV), оказывающих, возможно, цитопатическое действие на гепатоциты.

Выводы

1. При ХМГ у детей в основе развития патологического процесса лежит структурная дестабилизация клеточных мембран, обусловленная усилением ПОЛ и несостоятельностью АОС организма, выраженность которых зависит от вида инфекции и активности заболевания. В наибольшей степени дискоординация системы ПОЛ/АОС наблюдается при хронической В + С + D-инфекции с выраженной активностью.

2. Патохимические показатели мембранодеструктив-ных процессов у детей с ХМГ, имеющие следующие значения: содержание МДА выше 6,27 мкмоль/л; активность СОД ниже 176,9 ед/мл и каталазы ниже 56,1 ед/мл X

X мин в эритроцитах, являются критериями выделения этих детей в группу риска развития неблагоприятных исходов (цирроза печени).

3. Интенсификация ПОЛ в эритроцитарных мембранах детей с ХМГ сопровождается нарушением липидного состава, характеризующегося повышением уровня холестерина, триглицеридов и снижением суммарных фос-фолипидов, выраженность которого зависит от вида микст инфекции и активности процесса.

4. Полученные результаты свидетельствуют о необходимости разработки методов лечения, направленных на коррекцию мембранодеструктивных процессов при хроническом микст гепатите у детей.

Литература:

1. Иванова В. В. 75 лет научно-исследовательскому институту детских инфекции: достижения и перспективы / В. В. Иванова, Н. В. Скрипченко, Г. Г. Тарасова // Детские инфекции. — 2002. — № 1. — С. 2—13.

2. Иноятова Ф. И. Хронические вирусные гепатиты у детей. — Ташкент: Изд. «Абу ибн Сино», 1998. — 109 с.

3. Частота обнаружения HBV-DNA в сыворотке крови НВ$Ад-но-сителей и больных с одновременным выявлением анти-Н^ и НВзАд/ В. В. Горбаков и др.// РЖГГК. — 2002.— №1.— (Прилож. 12). — С. 9—12.

4. Интенсивность свободнорадикальных процессов и антиокси-дантной защиты у больных с хроническим поражением печени HBV и HDV-вирусной этиологии/ Ф.Х.Мансурова и др.// Проблемы ГАЭЛ. — 2003. — № 3—4. — С. 72—78.

5. Буеверов А. О. Оксидантный стресс и его роль в повреждении печени // ЖГГК. — 2002. — № 4. — С. 21 —25.

6. Гаврилов В. Б. Анализ методов определения продуктов пере-кисного окисления липидов в сыворотке крови по тесту с ти-обарбитуровой кислотой / В. Б. Гаврилов, А. Р. Гаврилова, Л. М. Мажуль // Вопр. мед. химии. —1988. — № 1. — С. 118— 122.

7. Метод определения аткивности каталазы / М.А. Королюк и др.// Лабор. дело. — 1988. — № 1. — С. 16—19.

Диетическая коррекция метаболических

нарушений микрофлоры кишечника

при вирусных диареях у детей раннего возраста

Л. Н. МАЗАНКОВА, Л. В. БЕГИАШВИЛИ, Н. О. ИЛЬИНА, О. А. КОНДРАКОВА, А. М. ЗАТЕВАЛОВ

ГОУ ДПО Российская медицинская академия последипломного образования Росздрава, кафедра детских инфекционных болезней,

НИФ «Ультрасан» ГУ МНИИ эпидемиологии им. Г. Н. Габричевского, Москва

В работе представлены результаты клинико-лабораторной оценки влияния лечебно-питательной смеси «Хумана ЛП + СЦТ» на динамику клинических симптомов и состояние метаболической активности микрофлоры кишечника при вирусных диареях у детей раннего возраста. Под наблюдением находилось 18 детей в возрасте от 1 мес. до 1 года, получавших в качестве основного питания детскую смесь «Хумана ЛП + СЦТ». Установлено, что на фоне диетической коррекции при биохимическом исследовании кала по спектрам и уровням летучих жирных кислот имеет место положительный эффект стимуляции функциональной активности нормальной, в первую очередь сахаролитической микрофлоры, а также регулирующее влияние на процессы метаболизма углеводов и жиров. Клинический эффект заключался в быстром и стойком купировании основных проявлений заболевания.

Ключевые слова: вирусные диареи, летучие жирные кислоты, дисбактериоз, лечебно-питательная смесь «Хумана ЛП + СЦТ»