СПОСОБ ПРЕДВАРИТЕЛЬНОЙ ОБРАБОТКИ ЖЕЛЧИ ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ ОПИСТОРХОЗНОЙ ИНВАЗИИ
METHOD FOR BILE PREPARATION FOR DIAGNOSIS OF OPISTHORCHIASIS INVASION

Изобретение относится к области медицины, а именно к способам диагностики описторхозного поражения печени и желудочно-кишечного тракта.
Широко известны способы ультразвуковой диагностики описторхозного поражения печени (RU, патент №2136216, МПК А61В 8/00, опубл. 09.10.1999 г., Ярошина Т.Н. «Ультразвуковая диагностика» в книге «Хирургия печени и желчных путей» под ред. Б.И. Альперовича, Томск, СГМУ, 1997, с. 151-189). Недостатком данной методики является низкая точность диагностики.
Известен также способ диагностики описторхоза с применением микроскопии, включающий диагностику натощак с первоначальной анестезией ротоглотки, затем эзофагогастродуоденоскопию, во время которой оценивают степень поражения слизистой оболочки пилорического отдела желудка, а также наличие и степень доуденогастрального рефлюкса. При наличии последнего, под визуальным контролем, проводят аспирацию содержимого луковицы двенадцатиперсной кишки и дальнейшую прямую микроскопию содержимого луковицы двенадцатиперсной кишки с целью обнаружения яиц гельминтов (RU, патент №2257152, МПК А61В 10/00, G01N 33/48, опубл. 27.07.2005). Данный способ достаточно трудоемок и может вызывать повреждение желудочно-кишечного тракта.
Наиболее близким решением к заявляемому является исследование желчи с центрифугированием для выявления яиц трематод (в т.ч. описторхид), включающий взбалтывание желчи с равным количеством диэтилового эфира, центрифугирование в центрифужных пробирках всех порций дуоденального содержимого не менее 20 мин при 1500-2000 об/мин, слив надосадочной части желчи в отдельную емкость. Осадок переносят пипеткой или прямо из пробирки на предметное стекло. Микроскопию осуществляют без покровного стекла при увеличении: объектив х8 или х10, окуляр х10 (Паразитологичесие методы лабораторной диагностики гельминтозов и протозоозов: Методические указания. - М.: Федеральный центр госсанэпиднадзора Минздрава России, 1999. - 72 с.) [МУК 4.2735-99, с. 31].
Данный способ исследования желчи с центрифугированием позволяет выявлять яйца описторхид, однако он недостаточно эффективен при их малом содержании в исследуемой желчи.
Задачей данного изобретения является усовершенствование методики предварительной обработки желчи для диагностики описторхозной инвазии.
Технический результат, который будет достигнут от использования изобретения, заключается в повышении точности диагностики.
Технический результат достигается тем, что в способе предварительной обработки желчи для диагностики описторхозной инвазии, включающем забор желчи, центрифугирование при 1500-2000 об/мин не менее 20 мин, удаление надосадочной части желчи, экстрагирование желчи с диэтиловым эфиром, нанесение полученного осадка на предметное стекло и последующую микроскопию, центрифугированию подвергают исходную желчь, затем полученный концентрированный осадок желчи экстрагируют с 2 мл диэтилового эфира в присутствии 3%-ной уксусной кислоты до 8 мл, центрифугируя в течение 2 мин, затем удаляют надосадочную жидкость, а полученные 200 мкл очищенного концентрированного осадка наносят на предметное стекло и микроскопируют.
Сущность изобретения заключается в увеличении концентрации яиц описторхид в исследуемом материале.
Первоначальное центрифугирование всех порций исходной желчи, затем экстрагирование полученного концентрированного осадка желчи с 2 мл диэтилового эфира в присутствии 3%-ной уксусной кислоты до 8 мл, центрифугируя в течение 2 мин, затем удаление надосадочной жидкости, и микроскопия нанесенного на предметное стекло, полученного очищенного концентрированного осадка в количестве 200 мкл позволяет с высокой точностью за 1 раз выявить яйца описторхид и с высокой точностью выставить диагноз.
Из анализа научно-технической и патентной литературы дополнительного центрифугирования предварительно центрифугированной желчи с получением высоко концентрированного очищенного осадка и его микроскопии, приводящих к существенному повышению точности и качества диагностики описторхозной инвазии, нами не выявлено, что позволяет сделать выводы о соответствии заявляемого решения критериям «новизна» и «изобретательский уровень».
Изобретение осуществляется следующим образом.
Желчь от пациента при зондировании наливают в центрифужные пробирки объемом 10 мл. Для исследования на яйца трематод, паразитирующих в протоках печени и поджелудочной железы, берут порции пузырной желчи «В» и печеночной «С». Порции «В» в норме может быть 30-50 мл, порции «С» - 10-30 мл. От одного пациента может быть забрано для анализа на наличие яиц трематод от 10 до 80 мл желчи. Яйца трематод распределены в желчи неравномерно, поэтому очень важно весь биологический материал, полученный от пациента, без потерь, использовать для анализа.
Всю доставленную в лабораторию желчь от пациента центрифугируют в центрифужных пробирках 20 минут при 1500-2000 об/мин. После чего надосадочную часть желчи сливают в отдельную емкость.
Оставшиеся осадки первичной желчи (до 500 мкл в каждой пробирке) сливают в одну пробирку. К полученному осадку добавляют до 8 мл 3% уксусной кислоты и 2 мл диэтилового эфира. Встряхивают при закрытой крышке и ставят в штатив на 2 минуты, затем центрифугируют в течение 2-х минут при 2000 об/мин.
После центрифугирования надосадочную часть сливают в отдельную емкость. Излишки влаги снимают со стенок пробирки ватным тампоном, а полученный осадок (200 мкл) переносят на предметное стекло и микроскопируют под покровным стеклом на предмет яиц описторхид.
При параллельном независимом исследовании образцов желчи от 33 пациентов в трех лабораториях (в двух из которых исследования проводились традиционным методом (по прототипу), в третьей - заявляемым способом), показано, что заявляемый способ предварительной обработки желчи позволяет повысить чувствительность диагностики описторхоза из желчи за счет выявления инвазии при низком содержании яиц в образце в 3 раза по сравнению со способом обработки и микроскопии желчи по прототипу.
Результаты исследования представлены в таблице 1.
Сравнительные данные показателей по заявляемому способу и способу по прототипу приведены в таблице 2.
Как видно из таблицы, заявляемый способ по сравнению со способом по прототипу является менее ресурсо- и трудозатратным, т.к. позволяет сократить расходы экстрагента (диэтилового эфира) в 2,5 раза, время микроскопирования в 3 раза, минимизировать потери образцов желчи, идущих на анализ, при этом увеличивая качество выявления яиц трематод в 3 раза, особенно при низком их содержании в образце.
Заявляемый способ позволяет получить более прозрачный осадок, концентрированный до малых объемов, без потерь яиц трематод, что повышает качество диагностики описторхид из желчи. Вероятность ложноотрицательного ответа при наличии яиц в пробе практически отсутствует.
Таким образом, двойное центрифугирование всех порций желчи позволяет без потерь сконцентрировать яйца трематод в малом объеме жидкости, а применение 3% уксусной кислоты растворяет слизистую структуру желчи, переводя ее в прозрачный раствор, что способствует лучшим условиям для микроскопирования осадка и в 3 раза повышает результативность диагностики описторхоза, особенно при низком содержании яиц в желчи, по сравнению с методом, указанным в МУК.