СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ВОСПАЛЕНИЯ ПРИ ГИПЕРПЛАЗИИ ЭНДОМЕТРИЯ

Полезная модель относится к медицине, а именно к акушерству и гинекологии и может быть использована для диагностики наличия и степени выраженности воспаления при гиперплазии эндометрия.
Несмотря на отсутствие единой классификации гиперплазии эндометрия, считается, что ведущая роль в ее развитии принадлежит абсолютной или относительной гиперестрогенемии, а также комплексу нейроэндокринных, метаболических и иммунных нарушений. Этиопатогенетическая многофакторность гиперпластических процессов женской репродуктивной системы обуславливает необходимость определения превалирующего механизма развития в каждом клиническом случае. Современный взгляд на этиопатогенез гиперплазии эндометрия определяет, что более чем в 20% случаев развитие гиперпластического процесса не связано с повышением эстрогенной стимуляции пролиферативной активности эндометрия. Однако в анамнезе проявляется связь с травматическими повреждениями при многоразовых абортах и диагностическом выскабливании, а также воспалительными процессами, которые наблюдаются в 46-59% больных с гиперплазией эндометрия. При этом, кроме повышения уровня эстрогенов, ведущая роль в стимуляции гиперпластических процессов может принадлежать возрастанию экспрессии факторов роста, которые имеют митогенный и ангиогенный эффекты, цитокинов и простагландинов. Следствием нарушений гуморальной регуляции, а также изменений рецепторного фенотипа эндометрия является развитие дисбаланса процессов пролиферации и апоптоза, в котором наибольшее значения имеет торможение запрограммированной гибели клеток. Следует отметить, что именно хронический воспалительный процесс является главным источником повышения уровней цитокинов и простагландинов. Очевидно, успешное лечение гиперплазии эндометрия невозможно без уточнения ведущего этиопатогенетического фактора.
В качестве прототипа выбран способ диагностики воспаления при гиперплазии эндометрия (Хмельницкий O.K. Патоморфологическая диагностика гинекологических заболеваний. - СПб: Сотис, 1994. - С. 136-144; Кузнецова А.В. Хронический эндометрит // Архив патологии. - 2000. - № 3. - С. 48-52), заключающийся в получении биоптата эндометрия для исследования и оценки общих морфологических признаков хронического воспаления путем проведения гистологического исследования.
Признаками, совпадающими с существенными признаками заявляемого способа, являются: получение биологического материала для исследования и оценка критериев воспалительного процесса.
Техническим результатом полезной модели является: повышение эффективности, информативности и точности диагностики воспаления при гиперплазии эндометрия.
Причинами, препятствующими достижению ожидаемого технического результата, являются: низкая информативность и точность оценки морфологических изменений при гиперплазии эндометрия, ассоциированной с воспалительным процессом, высокий риск возникновения осложнений при получении биологического материала для гистологического исследования, планирование исследования с учетом фазы менструального цикла, невозможность оценки интенсивности воспаления и мониторинга течения воспалительного процесса в динамике.
В основу полезной модели поставлена завдання усовершенствования способа-прототипа путем использования вместо гистологического исследования биоптата эндометрия иммуноферментного исследования маточного смыва, и определения в нем в качестве диагностических критериев воспалительного процесса при гиперплазии эндометрия показателей количества провоспалительных цитокинов, которые являются маркерами биохимической альтерации и классическими факторами междуклеточной кооперации в процессе воспаления.
Поставленная задача решается тем, что в способе диагностики воспаления при гиперплазии эндометрия, включающем получение биологического материала для исследования и дальнейшую оценку критериев воспалительного процесса, согласно полезной модели, осуществляют забор маточного смыва и определяют в нем наличие и степень повышения уровней провоспалительных цитокинов - интерлейкина-1β (ИЛ-1β), интерлейкина-6 (ИЛ-6) и фактора некроза опухолей-α (ФНО-а) относительно нормы, и при повышении ИЛ-1β до 35,6 пг/мг, ИЛ-6 - до 30,5 пг/мг, a ФНО-а - до 10,8 пг/мг диагностируют умеренную интенсивность воспалительного процесса, а при значении ИЛ-1β более 35,6 пг/мг, ИЛ-6 - более 30,5 пг/мг, ФНО-α - выше 10,8 пг/мг определяют высокую интенсивность воспалительного процесса гиперплазии эндометрия.
Между совокупностью существенных признаков заявляемого способа и ожидаемым техническим результатом проявляется следующая причинно-следственная связь: использование маточных смывов в качестве биологического материала с дальнейшим определением в них показателей количества цитокинов ИЛ-1β, ИЛ-6 и ФНО-α позволяет определить наличие и степень интенсивности воспалительного процесса при гиперплазии эндометрия без использования инвазивного диагностического вмешательства и независимо от фазы менструального цикла, что позволяет достичь ожидаемый технический результат.
Способ состоит в следующем.
Вводят в полость матки подогретый физиологический раствор в количестве 3-4 мл через педиатрический одноразовый катетер Фолея, к противоположному концу которого присоединяют 10-ти мл шприц. Катетер вводят без предварительного расширения цервикального канала. Введенную жидкость аспирируют через 20-30 секунд и получают 2-3 мл маточного смыва. Далее маточный смыв замораживают и сохраняют при температуре -15°С - -18°С до осуществления исследования показателей количества провоспалительных цитокинов.
Для определения концентрации цитокинов ИЛ-IB, ИЛ-6 и ФНО-α в маточных смывах твердофазным иммуноферментным (ИФА) методом используют наборы реагентов "Вектор-Бест" (Россия).
Методы определения уровней провоспалительных цитокинов основаны на связывании исследуемого цитокина с моноклональными антителами против ИЛ-Ιβ, ИЛ-6 и ФНО-α, иммобилизированными на внутренней поверхости полистироловых планшетов.
После отмывания несвязанных цитокинов проводят связывание цитокинов с поликлональними антителами до цитокинов, конъюгированнными с биотином. В качестве индикаторов реакции используют пероксидазу хрена и хромоген тетраметилбензидина.
Полученные результаты фиксируют с помощью микропланшетного сканера с диной волны 450 нм. По данным производителя, чувствительность и диапазон измерений при использовании наборов составляет: для ИЛ-1β и ФНО-α - от 0 до 250 пг/мл, для ИЛ-6 - от 0 до 300 пг/мл.
Анализируют полученные показатели количества цитокинов ИЛ -1В, ИЛ -6 и ФНО-α и определяют наличие и степень интенсивности воспалительного процесса.
При повышении ИЛ-IB в маточных смывах до 10 раз по отношению к норме, то есть до 35,6 пг/мг, ИЛ-6 - до 7 раз, то есть до 30,5 пг/мг, а уровня ФНО-α выше 10,8 пг/мг устанавливают умеренную интенсивность воспалительного компонента при гиперплазии эндометрия. При увеличении ИЛ -1β более 35,6 пг/мг, ИЛ-6 - 30,5 пг/мг, а ФНО-α до уровня большего, чем 10,8 пг/мг устанавливают высокую интенсивность воспалительного компонента при гиперплазии эндометрия.
Заявленный способ был апробирован у 89 больных женщин с разными гистологическими формами гиперплазии эндометрия.
Для подтверждения результатов, полученных при определении уровней провоспалительных цитокинов в качестве диагностических критериев воспалительного процесса при гиперплазии эндометрия, была проведена
серия клинических исследований с определением показателей количества провоспалительных цитокинов в маточных смывах 89 женщин с данной патологией. В качестве контроля применяли измерения аналогичных показателей у 18 клинически здоровых женщин.
В таблице 1 приведены данные об уровне провоспалительных цитокинов ИЛ -1β, ИЛ -6 и ФНО-α в маточных смывах у женщин с разными формами гиперплазии эндометрия.
Выраженное повышение ИЛ -1β в маточных смывах более, чем в 40 раз, ИЛ -6 - в 15 раз, а ФНО-α в 3 раза выше контроля зафиксировано при клиническом обследовании женщин, больных разными формами гиперплазии эндометрия, что подтверждает возможность использования показателей уровней провоспалительных цитокинов в качестве диагностических критериев воспалительного процесса при гиперплазии эндометрия.
В результате проведенных исследований было установлено, что при повышении уровня ИЛ -1В в маточных смывах до 10 раз по отношению к норме, то есть до 35,6 пг/мг, уровня ИЛ -6 - до 7 раз, то есть до 30,5 пг/мг, а уровня ФНО-α выше за 10,8 пг/мг устанавливают умеренную интенсивность воспалительного компонента при гиперплазии эндометрия.
При увеличении уровня ИЛ -1β болем 35,6 пг/мг, уровня ИЛ-6 -30,5 пг/мг, а ФНО-α до уровня выше 10,8 пг/мг устанавливают высокую интенсивность воспалительного компонента при гиперплазии эндометрия.
В таблице 2 приведены уровни провоспалительных цитокинов ИЛ -1β, ИЛ -6 и ФНО-α в маточных смывах у женщин с разными формами гиперплазии эндометрия в 1 и 2 фазы менструального цикла.
Было установлено, что концентрация провоспалительных цитокинов в маточных смывах женщин, больных гиперплазией эндометрия, не зависит от фазы менструального цикла, что значительно повышает диагностические возможности предложенного метода.
В сравнении со способом-прототипом заявляемый способ позволяет, используя иммуноферментные методы исследования провоспалительных цитокинов, определять наличие у больной воспалительного компонента, ассоциированного с гиперплазией эндометрия, оценить его интенсивность, повысить точность диагностики, обосновать необходимость проведения противоспалительной терапии без применения инвазивного и опасного метода диагностического выскабливания, а также ожидания надлежащей фазы менструального цикла, что может быть использовано при установлении наличия воспалительного компонента гиперпластических заболеваний эндометрия.
Способ подтверждается следующими примерами его использования. Пример 1.
Больная С, возраст 41 год, обратилась з жалобами на ановуляторные маточные кровотечения, периодическую боль внизу живота. После проведения первичного обследования, в которое входило и стандартне морфологического исследование биоптата, было установлено диагноз комплексной гиперплазии эндометрия с атипией, назначено комбинированную гормональную терапию, после курса которой клиническая картина частично сохранялась (боль внизу живота).
Предложенным способом была проведена диагностика.
Было назначено иммуноферментное исследование уровней провоспалительных цитокинов маточного смыва, в результате которого было выявлено повышение уровней ИЛ-Ιβ до 147,6 пг/мг, ИЛ-6 - до 54,5 пг/мг, а ФНО-α до 13,8 пг/мг.
Таким образом, была установлена высокая интенсивность воспалительного компонента.
Благодаря применению данного способа терапевтическая схема была своевременно дополнена использованием антибактериальных, иммуномодулирующих средств физиотерапевтическими методами лечения.
Пример 2.
Больная Б., возраст 43 года, обратилась с жалобами на маточные кровотечения, возникающие после задержки менструаций, междуменструальные кровянистые выделения. После проведения первичного обследования, в которое входило стандартное морфологическое исследование биоптата, УЗИ. Было также проведено иммуноферментное исследование уровней провоспалительных цитокинов в маточном смыве предложенным способом.
В результате было выявлено повышение уровней ИЛ-1β до 18,6 пг/мг, ИЛ-6 - до 44,5 пг/мг, а ФНО-α до 7,8 пг/мг. Установлен диагноз простой гиперплазии эндометрия с умеренной интенсивностю воспалительного компонента и назначена комбинированная гормональная терапия.
Сравнение данного способа со способом-прототипом показывает, что использование предложенного способа позволяет на основании объективных параметрических критериев определить наличие и интенсивность воспалительного процесса без ожидания надлежащей фазы менструального цикла, сокращает время для назначения адекватной противоспалительной терапии, позволяет определять необходимую продолжительность курса терапии и осуществлять прогноз.
Таблица 1
Примечание. Звездочками позначено достоверность сравнений (р<0,05); * -относительно контроля; ** - относительно группы с простой ГЭ
Примечание. Звездочками позначено достоверность сравнений относительно контроля: * -ρ < 0,05; ** - ρ < 0,01; *** - ρ < 0,001.
Способ диагностики воспаления при гиперплазии эндометрия, включающий получение биологического материала для исследования и дальнейшую оценку критериев воспалительного процесса, отличающийся тем, что осуществляют забор маточного смыва и определяют в нем наличие и степень повышения уровней провоспалительных цитокинов -интерлейкина-1β (ИЛ-1β), интерлейкина-6 (ИЛ-6) и фактора некроза опухолей-α (ФНО-α) относительно нормы, и при повышении ИЛ-IB до 35,6 пг/мг, ИЛ-6 - до 30,5 пг/мг, a ФНО-а - до 10,8 пг/мг диагностируют умеренную интенсивность воспалительного процесса, а при значении ИЛ-1В более 35,6 пг/мг, ИЛ-6 - более 30,5 пг/мг, ФНО-α - выше 10,8 пг/мг определяют высокую интенсивность воспалительного процесса гиперплазии эндометрия.