СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ОБЪЕДИНЕННЫХ ФРАГМЕНТОВ ДНК ИЗ СЛОЖНОЙ СМЕСИ ВЫСОКОМОЛЕКУЛЯРНОЙ ДНК ("СПЛАЙСИНГ" И ТРАНСЛОКАЦИИ ДНК IN VITRO)

Способ получения объединенных фрагментов ДНК из сложной смеси высокомолекулярной ДНК ("Сплайсинг" и транслокации ДНК in vitro), позволяющий получать сборные фрагменты ДНК без пропусков и вставок, представляющий собой процесс, состоящий из нескольких стадий, включающий синтез первичных фрагментов, генерирование у сливаемых фрагментов липких концов, слияние фрагментов в один и амплификацию общего фрагмента, отличающийся тем, что все стадии осуществляются в пределах двух раундов мультиплексной ПЦР, с использованием двух групп специфичных праймеров с разной температурой отжига: ниже 57°C для первого раунда, в котором происходит синтез первичных фрагментов ПЦР, и 70°C для второго раунда, в котором объединены все остальные стадии процесса, которые реализуются благодаря комплементарности 5' концов, используемых во втором раунде ПЦР праймеров, концам тех ДНК фрагментов, которые надо присоединить, что позволяет генерировать у ДНК фрагментов взаимно комплементарные концы, общий сборный фрагмент амплифицируется с помощью двух праймеров, также имеющих температуру отжига 70°C, при этом в качестве источника материала для получения начальных фрагментов (первый раунд ПЦР) может быть использована смесь высокомолекулярной ДНК/геномной ДНК (вторая стадия использует в качестве матриц продукта первого раунда ПЦР без очистки);
при отсутствии необходимости получения сборных фрагментов ДНК без пропусков и вставок амплификация и сращивание фрагментов ДНК может осуществляться в течение одного раунда мультиплексной ПЦР с использованием праймеров, которые одновременно с синтезом первичных ПЦР фрагментов формируют у них коплементарные концы, что достигается через взаимную комплементарность 5' концов праймеров сращиваемых фрагментов, при этом последовательность 5' концов данных праймеров в отношении изначальной смеси ДНК, а также остальных праймеров, которые используются в данном процессе, должна быть уникальной.