Изучение иммунотоксичности сухого экстракта лапчатки белой

Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

Прозрачность исследования. Исследование не имело спонсорской поддержки. Исследователи несут полную ответственность за предоставление окончательной версии рукописи в печать.

Декларация о финансовых и иных взаимодействиях. Все авторы принимали участие в разработке концепции и дизайна исследования и в написании рукописи. Окончательная версия рукописи была одобрена всеми авторами. Авторы не получали гонорар за исследование.

Работа поступила в редакцию: 30.01.2015 г.

ЛИТЕРАТУРА

1. Леви М.И., Горожанкина И.А., Сагатовская Л.А. Быстрый метод определения чувствительности бактериальных культур к различным антибиотикам в жидкой среде // Антибиотики. — 1967. — № 1. — С. 57-65.

2. Махлаюк В. П. Лекарственные растения в народной медицине. — М.: Нива России, 1992. — 478 с.

3. Растительные ресурсы СССР: Цветковые растения. Семейства Caprifoliaceae —Plantaginaceae. — Л., 1990. — 328 с.

4. Сечин В.А., Куракулев В.В., Громов А.А. и др. Лекарственные растения и их применение в животноводстве. — Оренбург, 2006. — 313 с.

5. Ткачев А.В. Исследование летучих веществ растений. — Новосибирск: Наука, 2008. — 969 с.

6. McLafferty F. W. The Wiley. NBS Registry of Mass Spectral Data; Wiley. — London: Interscience, 1989. — 563 p.

REFERENCES

1. Levi M.I., Gorozhankina I.A., Sagatovskaya L.A. A fast method of determination of sensitivity of bacterial cultures to various antibiotics in the liquid environment // Antibiotiki. — 1967. — № 1. — P. 57-65.

2. Makhlayuk V.P. Herbs in traditional medicine. — Moscow: Field of Russia, 1992. — 478 p.

3. Vegetable resources of the USSR: Floral plants. Caprifoliaceae families — Plantaginaceae. — Leningrad,

1990. — 328 p.

4. Sechin V. A., Kurakulev V. V., Thunders A. A., et al. Herbs and their application in animal husbandry. Orenburg, 2006. — 313 p.

5. Tkachev A. V. Study plant volatiles. — Novosibirsk: Nauka, 2008. — 969 p.

6. McLafferty F.W. The Wiley. NBS Registry of Mass Spectral Data; Wiley. — London: Interscience, 1989. — 563 p.

Информация об авторах: Зыкова Ирина Дементьевна — к.т.н., доцент, доцент кафедры, 660074, г. Красноярск, ул. Киренского, д. 26, ИФП СФУ, кафедра химии, тел. (391) 2497559, е-mail: izykova@sfu-kras.ru; Наймушина Лилия Викторовна, к.х.н., доцент, доцент кафедры технологии и организации общественного питания.

About the Authors: Zykova Irina Dementyevna — PhD, assistant professor, associate professor, 660074, Krasnoyarsk, Kirenskogo st., 26, Department of Chemistry, tel. (391) 2497559, e-mail: izykova@sfu-kras.ru; Naimushina Lilia Viktorovna, PhD, assistant professor, associate professor of department of technology and catering.

© АРХИПОВА Э.В., ХОБРАКОВА В.Б., НИКОЛАЕВ С.М. — 2015 УДК 615.322

ИЗУЧЕНИЕ ИММУНОТОКСИЧНОСТИ СУХОГО ЭКСТРАКТА ЛАПЧАТКИ БЕЛОЙ

Эржена Владимировна Архипова1,3, Валентина Бимбаевна Хобракова1,3, Сергей Матвеевич Николаев 1,2,3 ('Институт общей и экспериментальной биологии СО РАН, Улан-Удэ, директор — д.б.н., проф. Л.Л. Убугунов; 2Иркутская государственная медицинская академия последипломного образования, ректор — д.м.н., проф.

В.В. Шпрах, кафедра клинической фармакологии, зав. — д.м.н., проф. Н.В. Верлан; 3Бурятский государственный университет, Улан-Удэ, и.о. ректора — д.т.н., проф. Н.И. Мошкин, медицинский институт, директор — д.м.н.,

проф. В.Е. Хитрихеев)

Резюме. В опытах на мышах линий СВА и Fj (CBAxC57Bl/6) изучены иммунотоксические свойства сухого экстракта лапчатки белой. Показано, что испытуемое средство в экспериментально-терапевтической дозе 50 мг/кг не оказывало негативного влияния на состояние клеточного, гуморального и макрофагального звеньев иммунного ответа интактных животных. Введение экстракта не изменяло показатели иммунитета, определяемые в реакциях антителообразования, гиперчувствительности замедленного типа и фагоцитоза макрофагов.

Ключевые слова: сухой экстракт лапчатки белой, иммунитет, иммунотоксичность, антителообразование, гиперчувствительность замедленного типа, фагоцитоз.

THE STUDY OF IMMUNOTOXICITY OF THE DRY EXTRACT FROM POTENTILLA ALBA L.

E.V. Arkhipova u, V.B.Khobrakova1,3, S.M.Nikolaev1,2,3 ('Institute of General and Experimental Biology of SD RAS, Ulan-Ude; 2Irkutsk State Medical Academy of Continuing

Education; 3 Buryat State University, Ulan-Ude, Russia)

Summary. The immunotoxic properties of the dry extract from Potentilla alba L. have been studied in experiments on the СВА and Fj (CВАxC57Bl/6) mice. The dry extract from Potentilla alba L. in the experimental-therapeutic dose 50 mg/ kg has no negative effect on the cellular, humoral and maa'ophagal immunity of intact animals. The introduction of the extract has not changed the immune indices determined in the reactions of antibody genesis, hypersensitivity of slow type and phagocytosis of maa'ophages.

Key words: the dry extract from Potentilla alba L., immunity, immunotoxicity, antibody genesis, hypersensitivity of slow type, phagocytosis.

Профилактика и лечение заболеваний щитовидной социальными проблемами медицинской науки и прак-железы в настоящее время являются важными медико- тического здравоохранения. Частота различных форм

дисфункций щитовидной железы вне зон зобной эндемии составляет 20% от общей заболеваемости населения, в эндемичных по зобу регионах, где проживают 1/3 населения, эта цифра превышает иногда 50%. Йоддефицитные заболевания представляют собой наиболее распространенную неинфекционную патологию человека [1].

Сегодня фармакологическая коррекция гипотиреоидного состояния организма основана преимущественно на восполнении дефицита йода и тиреоидных гормонов. Несмотря на используемый арсенал современных лекарственных средств с тирео-тропным действием, применяемых для профилактики и лечения заболеваний щитовидной железы, необходимость в эффективных и безопасных средствах сохраняется. Используемые в настоящее время препараты и биологически активные добавки к пище не всегда отличаются достаточной клинической эффективностью и при длительном применении могут вызывать побочные эффекты. В связи с этим оправдан значительный интерес к поиску новых средств, способных предупреждать и корригировать гипофункцию щитовидной железы. Задачи в этом плане являются актуальными для фармакологии и клинической практики. При этом лекарственные растения являются наиболее перспективным источником биологически активных веществ тирео-тропного действия. Одним из растений, применяемых в народной и традиционной медицине для лечения и профилактики дисфункций щитовидной железы, является лапчатка белая (Potentilla alba L., семейство розоцветные — Rosaceae). Извлечения из Potentilla alba L. рекомендуют для коррекции гипофункции и гиперфункции щитовидной железы [2, 3, 8].

Определенно, что фармакологические эффекты извлечений лапчатки белой обусловлены ее химическим составом. Корневища с корнями лапчатки белой содержат углеводы (крахмал), иридоиды, сапонины, фенол-карбоновые кислоты, флавоноиды (кверцетин), дубильные вещества — галлотанин до 17,0%. Трава лапчатки белой содержит иридоиды, сапонины, фенолкарбоно-вые кислоты, флавоноиды (рутин), дубильные вещества до 6,0%. В листьях обнаружены фенолкарбоновые кислоты и их производные (n-кумаровая и эллаговая кислоты), флавоноиды (кверцетин, кемпферол, цианидин). Установлено, что лапчатка белая накапливает Mn, Zn, Cu, Se, Co, Fe, Si, Al, а также содержит элементарный йод и анион йодистой кислоты [3]. Также, по данным литературы, известно, что настои и отвары лапчатки белой используют в народной медицине для лечения дисфункции яичников и других расстройств женской половой сферы, применяют для регуляции артериального давления, нормализации массы тела, а также используют в качестве адаптогена, антидепрессанта, средства, улучшающего состояние волос, ногтей, кожи, омолаживающего средства. Кроме того, установлено, что готовые формы лапчатки белой оказывают антибактериальное действие [4].

Одним из этапов доклинических исследований новых лекарственных средств является изучение их влияния на функциональную активность иммунной систе-

Влияние экстракта лапчатки белой на антителообразование

Таблица 1

Группы животных Абсолютное число АОК на селезенку Число АОК на 106 спленоцитов

Интактная, n=10 87524±4114 606±34

Опытная (экстракт лапчатки белой), n=10 79856±5752 575±49

Примечание: здесь и далее n — количество животных в группе.

животных осуществляли методом мгновенной декапи-тации под легким эфирным наркозом.

Сухой экстракт лапчатки белой вводили опытной группе мышей в экспериментально-терапевтической дозе 50 мг/кг перорально 1 раз в сутки в течение 14 дней. Интактная группа животных получала воду очищенную по аналогичной схеме.

Состояние гуморального иммунитета оценивали по количеству антителообразующих клеток (АОК), определяемых методом локального гемолиза по A.J. Cunningham (1965) [9]. Мышей иммунизировали вну-трибрюшинно эритроцитами барана (ЭБ) в дозе 2х108 клеток/мышь. Величину иммунного ответа оценивали по числу АОК на селезенку и на 106 клеток с ядрами на 5-е сутки после иммунизации.

Состояние клеточного звена иммунного ответа оценивали в реакции гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) согласно стандартной методике локальной ГЗТ [7]. Мышей сенсибилизировали внутрибрюшин-ным введением 0,1 %-ой взвеси ЭБ в физиологическом растворе. На 4-е сутки под подошвенный апоневроз задней лапки вводили разрешающую дозу антигена — 50 мкл 50%-ой взвеси ЭБ. В контралатеральную лапку инъецировали физиологический раствор в том же объеме. Оценку реакции ГЗТ проводили спустя 24 часа по разнице массы опытной и контрольной лапок.

Состояние макрофагального звена иммунного ответа оценивали в реакции фагоцитоза перитонеальных макрофагов в отношении частиц коллоидной туши. Оптическую плотность лизата клеток перитонеального экссудата, отражающую количество туши, поглощенной перитонеальными макрофагами, определяли при длине волны 620 нм [7].

Значимость различий между указанными параметрами среди опытной и контрольной групп животных оценивали с помощью непараметрического критерия U Манна-Уитни. Критический уровень значимости при проверке статистических гипотез р=0,05 [5, 6].

Результаты и обсуждение

При исследовании влияния экстракта лапчатки белой на процессы антителообразования установлено, что данное средство значимо не изменяет как абсолютное число АОК, так и число АОК на 106 спленоцитов по сравнению с теми же показателями в интактной группе (табл. 1).

При исследовании влияния экстракта лапчатки белой на клеточно-опосредованную реакцию ГЗТ установлено, что испытуемое средство не оказывает существенного влияния на индекс реакции ГЗТ по сравнению с таковым в интактной группе (табл. 2).

Таблица 2

Влияние экстракта лапчатки белой на выраженность реакции гиперчувствительности замедленного типа

Группы животных ИР ГЗТ, %

Интактная, n=10 32,50±2,58

Опытная (экстракт лапчатки белой), n=10 28,93±2,14

Материалы и методы

Эксперименты проведены на мышах самцах линии СВА и F1 (СВАхС57В1/6) массой 18-20 г. Эксперименты проводили в соответствии с «Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных» (Приложение к приказу Минздрава СССР № 755 от 12.08.1977 г.) и «Правилами Европейской конвенции по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и иных научных целей». Эвтаназию

При исследовании влияния сухого экстракта лапчатки белой на фагоцитарную активность перитонеаль-ных макрофагов в отношении частиц коллоидной туши не наблюдали достоверного значимого изменения фагоцитарного индекса по сравнению с данными в интакт-ной группе (табл. 3).

Таблица 3

Влияние экстракта лапчатки белой на фагоцитарную активность перитонеальных макрофагов

Группы животных Фагоцитарный индекс, Оптическая плотность, усл.ед.

Интактная, n=10 0,234±0,011

Опытная (экстракт лапчатки белой), n=10 0,216±0,010

Таким образом, сухой экстракт лапчатки белой не оказывает иммунотоксического действия, определяемого в реакциях клеточного, гуморального и макрофа-

гального звеньев иммунного ответа.

Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

Прозрачность исследования. Исследование не имело спонсорской поддержки. Исследователи несут полную ответственность за предоставление окончательной версии рукописи в печать.

Декларация о финансовых и иных взаимодействиях. Все авторы принимали участие в разработке концепции и дизайна исследования и в написаниируко-писи. Окончательная версия рукописи была одобрена всеми авторами. Авторы не получали гонорар за исследование.

Работа поступила в редакцию: 04.06.2015 г.

ЛИТЕРАТУРА

1. Алефиров А.Н. Фитотерапия заболеваний щитовидной железы. — СПб., 2008. — 312 с.

2. Башилов А.В. Potentilla alba L. — эффективное средство при тиреотоксикозе // Вестник ВГМУ —

2009. — Т. 8, №3. — С. 1-9.

3. Башилов А.В. Использование Potentilla alba L. в качестве лекарственного растительного сырья в условиях Республики Беларусь // Экологический вестник. —

2010. — №3. — С. 85-88.

4. Будневский А.В., Дмитриев В.Н., Провоторов В.М., Бурлачук В.Т. Тиреоидные гормоны и нетире-оидная патология (обзор литературы) // Научно-медицинский вестник Центрального Черноземья. — 2009. - №36. — С. 113-122.

5. Лакин Г.Ф. Биометрия. — М., 1990. — 352 с.

6. Майборода А.А., Калягин А.Н., Зобнин Ю.В., Щербатых А.В. Современные подходы к подготовке оригинальной статьи в журнал медико-биологической направленности в свете концепции «доказательной медицины» // Сибирский медицинский журнал (Иркутск). — 2008. — Т. 76, № 1. — С. 5-8.

7. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / Под ред. Р.У Хабриева. — М., 2005. — С. 80.

8. Шимко О.М., Хишова О.М., Кухарева Л.В. Поиск новых видов сырья лапчатки // Вестник фармации ВГМУ — 2008. - №4. — Т. 42. — С. 1-3.

9. Cunningham A.J. A method of increased sensitivity for detecting single antibodyforming cells // Nature. — 1965. — Vol.207. — № 5001. — P.1106-1107.

REFERENCES

1. Alephirov A.N. Phytotherapy of thyroid gland diseases. — Saint-Petersburg, 2008. — 312 p.

2. Bashilov A.V. Potentilla alba L. is an effective remedy in thyrotoxicosis // Vestnik VGMU. — 2009. — V. 8, №3. — P. 1-9.

3. Bashilov A. V. The use of Potentilla alba L. as medicinal plant in the Republic of Belarus // Ecologicheskij vestnik. — 2010. — №3

4. Budnevskij A.V., Dmitriev V.N., Provotorov V.M., Burlachuk V.T. Thyroid hormones and nonthyroid pathology

5. Lakin G.Ph. Biometrics. — Moscow, 1990. — 352 p.

6. Majboroda A.A., Kalyagin A.N., Zobnin Yu.V., Scherbatikh A.V. Modern approaches to preparation of original article for scientific journal of the medical and biologic orientation in a view of the concept «Evidence-Based Medicine» // Sibirskij medicinskij zurnal

7. Instructions to experimental

8. Shimko O.M., Khishova O.M., Kukhareva L.V. Search for new raw materials of Potentilla // Vestnik farmacii VGMU. — 2008. - №4. — V. 42. — P. 1-3.

9. Cunningham A.J. A method of increased sensitivity for detecting single antibodyforming cells // Nature. — 1965. — Vol.207. — № 5001. — P.1106-1107.

Информация об авторах: Архипова Эржена Владимировна — к.м.н.; Хобракова Валентина Бимбаевна —д.б.н., доцент, 670047, г. Улан-Удэ, ул. Сахьяновой, 6, ИОЭБ СО РАН, ОБАВ, тел. (3012) 433463, e-mail: val0808@mail.ru;

Николаев Сергей Матвеевич — д.м.н., профессор.

Information about the authors: Arkhipova Erzhena Vladimirovna — MD, PhD; Khobrakova Valentina Bimbaevna — PhD. DSc, associate professor, 670047, Russia, Ulan-Ude, Sakhiyanova str. 6, tel. (3012) 433463, fax (3012) 433034, е-mail: val0808@mail.ru; Nikolaev Sergei Matveevich — MD, PhD, DSc, professor.