СПОСОБ ОЦЕНКИ ДЕЙСТВИЯ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ НА АНТИГЕН-АНТИТЕЛЬНОЕ ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ
METHOD FOR ASSESSING ACTION OF BIOLOGICALLY ACTIVE SUBSTANCES ON ANTIGEN-ANTIBODY INTERACTION

Изобретение относится к области медицины, в частности к биохимии, фармакологии, биологии, и может быть использовано для тестирования биологически активных веществ с учетом групповой принадлежности крови.
Наиболее близким по технической сущности и достигаемому результату является способ изучения агглютинации эритроцитов, который включает в себя взятие цельной крови, стабилизацию ее антикоагулянтом, добавление антител (антигликофориновые антитела, синтетический ВИЧ-пептид, химерные антитела к гликофорину/Д-димеру, дигоксин-гликофориновые антитела), перемешивание и спустя 3 минуты оценку агглютинации визуально или с помощью ИФА (Hillyard et al. Erythrocyte agglutination assay. Patent Number 5.086.002).
Недостатком известного способа, принятого за прототип, является проведение суммарной оценки агглютинации всех антигенов, расположенных на мембране эритроцита, не учитывая групповую принадлежность крови и индивидуальную группоспецифическую чувствительность.
Техническим результатом, на достижение которого направлено создание данного изобретения, является повышение качества оценки действия биологически активных веществ на антиген-антительное взаимодействие.
Поставленный технический результат достигается тем, что в способе оценки действия биологически активных веществ на антиген-антительное взаимодействие, основанном на взятии цельной крови, стабилизации ее антикоагулянтом, добавлении в нее антител, перемешивании и спустя 3 минуты проведении оценки агглютинации визуально, в способе к образцам цельной крови О(I)-AB(IV) групп добавляют биологически активное вещество, инкубируют в течение 3-5 минут, затем вносят стандартные моноклональные анти-А и анти-В антитела и спустя 3-5 минут по бальной шкале определяют интенсивность агглютинации, соответствующую группе крови.
Биологически активными веществами, используемыми в «Способе оценки действия биологически активных веществ на антиген-антительное взаимодействие», могут быть гормоны, метаболиты, высшие жирные кислоты, витамины, флаволигнаны, лекарственные препараты.
В качестве биологически активного вещества используют пировиноградную кислоту.
В таблице 1 приведены данные оценки степени агглютинации в образцах цельной крови О(I)-AB(IV) групп, такие как значение агглютинации, числовое значение агглютинации и описание агглютинации.
Таблица 1
Данные оценки степени агглютинации в образцах групп крови О(I)-AB(IV)
Значение агглютинации
Числовое значение агглютинации
Описание
4+
12 pt
Клеточный осадок образует один комок, осадок виден макроскопически
3+
10 pt
Клеточный осадок представлен несколькими крупными комками, виден макроскопически
2+
8 pt
Клеточный осадок представлен множеством мелких комочков, виден макроскопически
1+
5 pt
Клеточный осадок представлен мельчайшими зернистыми комочками, макроскопически слабо заметен
(+) или w (слабая)
3 pt
Клеточный осадок представлен мельчайшими гранулами, видимыми только под микроскопом
-
0 pt
Отрицательный результат - все клетки свободно и равномерно распределены
В таблице 2 приведены данные о влиянии биологически активного вещества, в качестве которого использовалась пировиноградная кислота, на антиген-антительное взаимодействие эритроцитов А(II) и B(III) групп крови.
Таблица 2
Влияние пировиноградной кислоты на антиген-антительное взаимодействие эритроцитов А(II) и В(III) групп крови
Контрольные образцы
Антиген А А (II)
Антиген В В (III)
Время, (с)
Агглютинация
Время, (с)
Агглютинация
Время, (с)
Агглютинация
М
6
4+
7
4+
6,4
4+
Me
6
4+
7
4+
6
4+
Δ%
+16
+6
SE
0
0
0,81
0
0,51
0
В условиях in vitro у эритроцитов А(II) группы крови при добавлении пировиноградной кислоты, время начала агглютинации увеличилось на 16% по сравнению с контролем (7±0,81), а у В(III) группы крови увеличилось на 6%, то есть пировиноградная кислота слабее влияет на антиген-антительное взаимодействие эритроцитов B(III) группы крови с анти-В антителами (6,4±0,51). Степень агглютинации как в контрольных образцах, так и в опытных образцах - максимальная 4+.
В таблице 3 приведены данные о влиянии биологически активного вещества, в качестве которого использовалась пировиноградная кислота, на антиген-антительное взаимодействие эритроцитов AB(IV) группы крови.
Таблица 3
Влияние пировиноградной кислоты на антиген-антительное взаимодействие эритроцитов AB(IV) группы крови
Контрольные образцы
Антиген АAB(IV)
Антиген ВAB(IV)
Время (сек.)
Агглютинация
Время (сек.)
Агглютинация
Время (сек.)
Агглютинация
М
6
4+
7,4
3,6+
7,4
3,6+
Me
6
4+
7
4+
7
4+
Δ%
+23
+23
SE
0
0
0,51
0,51
0,51
0,51
При оценке агглютинации антигенов А и В эритроцитов AB(IV) группы крови время агглютинации в среднем возросло на 23% (7,4±0,51), а степень агглютинации слабее, чем в контрольных образцах и составляет 3,6+. Таким образом, пировиноградная кислота влияет на антиген-антительное взаимодействие, увеличивая время связывания антигенов и антител и образования их комплексов.
Проведенный заявителем анализ уровня техники, включающий поиск по патентным и научно-техническим источникам информации, и выявление источников, содержащих сведения об аналогах заявляемого изобретения, позволили установить, что заявителем не обнаружен аналог, характеризующийся признаками, тождественными (идентичными) всем существенным признакам заявляемого изобретения.
Определение из перечня выявленных аналогов прототипа позволило выявить совокупность существенных по отношению к усматриваемому техническому результату отличительных признаков в заявляемом «Способе оценки действия биологически активных веществ на антиген-антительное взаимодействие», изложенных в формуле изобретения. Следовательно, заявляемое изобретение соответствует критерию «новизна».
Для проверки соответствия заявляемого изобретения условию «изобретательсткий уровень» заявитель провел дополнительный поиск известных решений, чтобы выявить признаки, совпадающие с отличительными от прототипа признаками заявляемого изобретения.
Результаты поиска показали, что заявляемое техническое решение не вытекает для специалиста явным образом из известного уровня техники, определенного заявителем, и не выявлено влияние предусматриваемых существенными признаками заявляемого «Способа оценки действия биологически активных веществ на антиген-антительное взаимодействие» на достижение технического результата.
Следовательно, заявляемое изобретение соответствует критерию «изобретательский уровень».
Критерий изобретения «промышленная применимость» подтверждается тем, что предлагаемый «Способ оценки действия биологически активных веществ на антиген-антительное взаимодействие» может быть использован в биохимии, фармакологии, биологии, для тестирования биологически активных веществ с учетом принадлежности к различным группам крови.