СВЯЗЫВАЮЩИЕ ADAMTS ИММУНОГЛОБУЛИНЫ

1. Полипептид, содержащий по меньшей мере 1 одиночный вариабельный домен иммуноглобулина (ISVD), связывающий дезинтегрин и металлопротеиназу с тромбоспондиновыми мотивами (ADAMTS).
2. Полипептид по п.1, где указанный ADAMTS выбран из группы, состоящей из ADAMTS1 – ADAMTS19, предпочтительно, ADAMTS5, ADAMTS4, ADAMTS1, ADAMTS8, ADAMTS9 и ADAMTS15, и ADAMTS20, наиболее предпочтительно, ADAMTS5.
3. Полипептид по п.2, где указанный ISVD, связывающий ADAMTS, предпочтительно, ADAMTS5, не связывает ADAMTS4, MMP1 или MMP14.
4. Полипептид по п.3, где указанный ISVD, связывающий ADAMTS5, содержит 3 определяющих комплементарность области (CDR1 – CDR3, соответственно), в которых
(i) CDR1 выбрана из группы, состоящей из SEQ ID NO: 21, 35, 20, 22, 25, 33, 28, 24, 23, 26, 27, 29, 30, 31, 32 и 34; и
аминокислотных последовательностей, имеющих 1, 2 или 3 отличие(отличий) аминокислот от SEQ ID NO: 21, 35, 20, 22, 25, 33, 33, 28, 24, 23, 26, 27, 29, 30, 31, 32 и 34;
(ii) CDR2 выбрана из группы, состоящей из SEQ ID NO: 37, 53, 36, 40, 50, 51, 44, 45, 43, 39, 38, 41, 119, 42, 46, 47, 48, 49 и 52; и
аминокислотных последовательностей, имеющих 1, 2 или 3 отличие(отличий) аминокислот от SEQ ID NO: 37, 53, 36, 40, 50, 51, 44, 45, 43, 39, 38, 41, 119, 42, 46, 47, 48, 49 и 52; и
(iii) CDR3 выбрана из группы, состоящей из SEQ ID NO: SEQ ID NO: 55, 118, 71, 54, 58, 68, 69, 62, 63, 61, 57, 56, 59, 60, 64, 65, 66, 67 и 70; и
аминокислотных последовательностей, имеющих 1, 2, 3 или 4 отличие(отличий) аминокислот от SEQ ID NO: 55, 118, 71, 54, 58, 68, 69, 62, 63, 61, 57, 56, 59, 60, 64, 65, 66, 67 и 70.
5. Полипептид по п.3, где указанный ISVD, специфически связывающий ADAMTS5, содержит 3 определяющих комплементарность области (CDR1 – CDR3, соответственно), в которых
(i) CDR1 выбрана из группы, состоящей из
(a) SEQ ID NO: 22; и
(b) аминокислотной последовательности, имеющей 1, 2, 3, 4, 5 или 6 отличие (отличий) аминокислот от SEQ ID NO: 22, где отличие(отличия) аминокислот определены следующим образом:
– в положении 2 S заменен на R; и/или
– в положении 3 A заменен на T; и/или
– в положении 4 V заменен на F; и/или
– в положении 6 V заменен на S; и/или
– в положении 7 N заменен на Y; и/или
– в положении 10 A заменен на G;
(ii) CDR2 представляет собой SEQ ID NO: 36; и
(iii) CDR3 представляет собой SEQ ID NO: 54.
6. Полипептид по п.3, где указанный ISVD, специфически связывающий ADAMTS5, содержит 3 определяющих комплементарность области (CDR1 – CDR3, соответственно), в которых
(i) CDR1 представляет собой SEQ ID NO: 33;
(ii) CDR2 выбрана из группы, состоящей из
(c) SEQ ID NO: 50; и
(d) аминокислотной последовательности, имеющей 1, 2, или 3 отличие (отличий) аминокислот от SEQ ID NO: 50, где отличие (отличия) аминокислот определены следующим образом:
– в положении 8 M заменен на I; и/или
– в положении 9 P заменен на T; и/или
– в положении 10 Y заменен на F; и
(iii) CDR3 выбрана из группы, состоящей из
(e) SEQ ID NO: 68; и
(f) аминокислотной последовательности, имеющей 1 или 2 отличие (отличий) аминокислот от SEQ ID NO: 68, где отличие (отличия) аминокислот определены следующим образом:
– в положении 5 F заменен на L; и/или
– в положении 11 D заменен на E.
7. Полипептид по п.3, где указанный ISVD, специфически связывающий ADAMTS5, содержит 3 определяющих комплементарность области (CDR1 – CDR3, соответственно), в которых
(i) CDR1 представляет собой SEQ ID NO: 28;
(ii) CDR2 выбрана из группы, состоящей из
(c) SEQ ID NO: 44; и
(d) аминокислотной последовательности, имеющей 1, 2, или 3 отличие (отличий) аминокислот от SEQ ID NO: 44, где отличие (отличия) аминокислот определены следующим образом:
– в положении 3 S заменен на T; и/или
– в положении 4 R заменен на W; и/или
– в положении 8 T заменен на I; и/или
– в положении 9 T заменен на L; и
(iii) CDR3 выбрана из группы, состоящей из
(e) SEQ ID NO: 62; и
(f) аминокислотной последовательности, имеющей 1 или 2 отличие (отличий) аминокислот от SEQ ID NO: 62, где отличие (отличия) аминокислот определены следующим образом:
– в положении 1 G заменен на S; и/или
– в положении 14 D заменен на E.
8. Полипептид по любому из пп. 1–7, где:
– CDR1 выбрана из группы, состоящей из SEQ ID NO: 21, 35, 20, 22, 25, 33, 28, 24, 23, 26, 27, 29, 30, 31, 32 и 34;
– CDR2 выбрана из группы, состоящей из SEQ ID NO: 37, 53, 36, 40, 50, 51, 44, 45, 43, 39, 38, 41, 119, 42, 46, 47, 48, 49 и 52; и
– CDR3 выбрана из группы, состоящей из SEQ ID NO: 55, 118, 71, 54, 58, 68, 69, 62, 63, 61, 57, 56, 59, 60, 64, 65, 66, 67 и 70.
9. Полипептид по любому из пп. 1–7, где указанный ISVD содержит комбинацию CDR1, CDR2 и CDR3, выбранную из группы, состоящей из:
CDR1 представляет собой SEQ ID NO: 21, CDR2 представляет собой SEQ ID NO: 37, и CDR3 представляет собой SEQ ID NO: 55;
CDR1 представляет собой SEQ ID NO: 35, CDR2 представляет собой SEQ ID NO: 53, и CDR3 представляет собой SEQ ID NO: 118;
CDR1 представляет собой SEQ ID NO: 35, CDR2 представляет собой SEQ ID NO: 53, и CDR3 представляет собой SEQ ID NO: 71;
CDR1 представляет собой SEQ ID NO: 20, CDR2 представляет собой SEQ ID NO: 36, и CDR3 представляет собой SEQ ID NO: 54;
CDR1 представляет собой SEQ ID NO: 22, CDR2 представляет собой SEQ ID NO: 36, и CDR3 представляет собой SEQ ID NO: 54;
CDR1 представляет собой SEQ ID NO: 25, CDR2 представляет собой SEQ ID NO: 40, и CDR3 представляет собой SEQ ID NO: 58;
CDR1 представляет собой SEQ ID NO: 33, CDR2 представляет собой SEQ ID NO: 50, и CDR3 представляет собой SEQ ID NO: 68;
CDR1 представляет собой SEQ ID NO: 33, CDR2 представляет собой SEQ ID NO: 51, и CDR3 представляет собой SEQ ID NO: 69;
CDR1 представляет собой SEQ ID NO: 28, CDR2 представляет собой SEQ ID NO: 44, и CDR3 представляет собой SEQ ID NO: 62;
CDR1 представляет собой SEQ ID NO: 28, CDR2 представляет собой SEQ ID NO: 45, и CDR3 представляет собой SEQ ID NO: 63;
CDR1 представляет собой SEQ ID NO: 28, CDR2 представляет собой SEQ ID NO: 43, и CDR3 представляет собой SEQ ID NO: 61;
CDR1 представляет собой SEQ ID NO: 24, CDR2 представляет собой SEQ ID NO: 39, и CDR3 представляет собой SEQ ID NO: 57;
CDR1 представляет собой SEQ ID NO: 23, CDR2 представляет собой SEQ ID NO: 38, и CDR3 представляет собой SEQ ID NO: 56;
CDR1 представляет собой SEQ ID NO: 26, CDR2 представляет собой SEQ ID NO: 41, и CDR3 представляет собой SEQ ID NO: 59;
CDR1 представляет собой SEQ ID NO: 27, CDR2 представляет собой SEQ ID NO: 119, и CDR3 представляет собой SEQ ID NO: 60;
CDR1 представляет собой SEQ ID NO: 27, CDR2 представляет собой SEQ ID NO: 42, и CDR3 представляет собой SEQ ID NO: 60;
CDR1 представляет собой SEQ ID NO: 29, CDR2 представляет собой SEQ ID NO: 46, и CDR3 представляет собой SEQ ID NO: 64;
CDR1 представляет собой SEQ ID NO: 30, CDR2 представляет собой SEQ ID NO: 47, и CDR3 представляет собой SEQ ID NO: 65;
CDR1 представляет собой SEQ ID NO: 31, CDR2 представляет собой SEQ ID NO: 48, и CDR3 представляет собой SEQ ID NO: 66;
CDR1 представляет собой SEQ ID NO: 32, CDR2 представляет собой SEQ ID NO: 49, и CDR3 представляет собой SEQ ID NO: 67; и
CDR1 представляет собой SEQ ID NO: 34, CDR2 представляет собой SEQ ID NO: 52, и CDR3 представляет собой SEQ ID NO: 70.
10. Полипептид по любому из предшествующих пунктов, где указанный ISVD состоит из или в основном состоит из 4 каркасных областей (FR1 – FR4, соответственно) и указанных 3 определяющих комплементарность областей CDR1, CDR2 и CDR3.
11. Полипептид по любому из предшествующих пунктов, где указанный полипептид представляет собой SEQ ID NO: 129 или 130, или полипептид, имеющий по меньшей мере 95% идентичность последовательности с SEQ ID NO: 129 или 130.
12. Полипептид по любому из пп. 4, 8 и 9, в котором CDR1 представляет собой SEQ ID NO: 21, CDR2 представляет собой SEQ ID NO: 37, и CDR3 представляет собой SEQ ID NO: 55.
13. Полипептид по любому из пп. 4–12, в котором указанный ISVD выбран из группы, состоящей из SEQ ID NO: 2, 116, 19, 1, 3, 6, 16, 17, 10, 11, 9, 5, 4, 7, 8, 117, 12, 13, 14, 15 и 18.
D
–07
–13
–08
–12
–07
–08
–09
10
–11
–11
11
–11
–11
11
–12
–12
12
–12
14. Полипептид по любому из пп. 1–13, где указанный полипептид связывается с ADAMTS5 с K между 1EM и 1E M, например, между 1EM и 1E M, предпочтительно, не более 1E M, предпочтительно, ниже, чем 1E M или 1EM, или даже ниже, чем 1E M, например, 5E M, 4E M, 3E M, 2E M, 1,7E M, 1E M, или даже 5E M, 4E M, 3E M, 1E M, например, как определено посредством KinExA, или альтернативно, посредством Gyrolab.
50
–07
–12
–08
–11
15. Полипептид по любому из пп. 1–14, где указанный полипептид ингибирует активность ADAMTS5 с IC между 1E M и 1E M, например, между 1E M и 1E M, например, как определено посредством анализа FRET для человека или AlphaLISA для человека.
50
–07
–08
–09
–9
–9
–9
–9
16. Полипептид по п.15, где указанный полипептид ингибирует (ферментную) активность ADAMTS5 с IC не более 1E M, предпочтительно 1E M, 5E M, или 4E M, 3E M, 2E M, например, 1E M.
50
–07
–12
–08
–11
17. Полипептид по любому из пп. 1–16, где указанный полипептид модулирует ADAMTS5 с EC между 1E M и 1E M, например, между 1E M и 1E M, например, как определено посредством ELISA связывания.
–04
–1
18. Полипептид по любому из пп.1–14, где указанный полипептид связывается с ADAMTS5 со скоростью диссоциации менее, чем 1E с, например, как определено посредством SPR.
19. Полипептид по любому из пп. 1–18, где указанный ADAMTS5 представляет собой ADAMTS5 человека (SEQ ID NO: 149), ADAMTS5 быка (SEQ ID NO: 150), ADAMTS5 крысы (SEQ ID NO: 151), ADAMTS5 морской свинки (SEQ ID NO: 152), ADAMTS5 мыши (SEQ ID NO: 153) или ADAMTS5 яванского макака (SEQ ID NO: 154), предпочтительно, ADAMTS5 человека, наиболее предпочтительно, SEQ ID NO: 149.
20. Полипептид по любому из пп. 1–19, где указанный полипептид является антагонистом активности ADAMTS5, такой как протеазная активность, например, расщепление аггрекана, версикана, бревикана, нейрокана, декорина и/или бигликана, предпочтительно, расщепление аггрекана; предпочтительно, является антагонистом аггреканазной активности ADAMTS5.
21. Полипептид по любому из пп. 1–19, где указанный полипептид блокирует связывание ADAMTS5 с аггреканом по меньшей мере на 20%, например, по меньшей мере на 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% или даже больше, например, как определено посредством FRET, AlphaLISA или ELISA.
22. Полипептид по любому из пп. 1–20, где указанный полипептид ингибирует протеазную активность ADAMTS5, например, ингибирует протеолиз субстрата, такого как аггрекан, версикан, бревикан, нейрокан, декорин, и/или бигликан, предпочтительно, аггрекан.
23. Полипептид по любому из пп. 1–22, содержащий по меньшей мере 2 ISVD, где по меньшей мере 1 ISVD специфически связывается с ADAMTS, предпочтительно, ADAMTS5, предпочтительно, выбранным из группы, состоящей из SEQ ID NO: 2, 116, 19, 1, 3, 6, 16, 17, 10, 11, 9, 5, 4, 7, 117, 8, 12, 13, 14, 15 и 18.
24. Полипептид по п.23, где указанные по меньшей мере 2 ISVD специфически связываются с ADAMTS, предпочтительно, ADAMTS5.
25. Полипептид, содержащий два или более ISVD, каждый из которых специфически связывается с ADAMTS5, где
a) по меньшей мере «первый» ISVD специфически связывается с первой антигенной детерминантой, эпитопом, частью, доменом, субъединицей или конформацией ADAMTS5; и где,
b) по меньшей мере «второй» ISVD специфически связывается с второй антигенной детерминантой, эпитопом, частью, доменом, субъединицей или конформацией ADAMTS5, отличной от первой антигенной детерминанты, эпитопа, части, домена, субъединицы или конформации, соответственно.
26. Полипептид по п.25, где указанный «первый» ISVD, специфически связывающий ADAMTS5, выбран из группы, состоящей из SEQ ID NO: 2, 1, 3, 6, 16, 17, 10, 11, 9, 5, 4, 7, 8, 117, 12, 13, 14, 15 и 18.
27. Полипептид по п.25 или 26, где указанный «второй» ISVD, специфически связывающий ADAMTS5, представляет собой SEQ ID NO: 118 или 19.
28. Полипептид по любому из пп.25–27, где полипептид содержит полипептид, выбранный из группы, состоящей из SEQ ID NO: 126 (клон 129 2F3–093–Alb), SEQ ID NO: 127 (клон 130 049–093–Alb) и SEQ ID NO: 128 (клон 131 9D3–093–Alb), или полипептид, имеющий идентичность аминокислотной последовательности по меньшей мере 95% с SEQ ID NO: 126, 127, 128, 130 или 131.
29. Полипептид по любому из пп. 1–28, дополнительно содержащий ISVD, связывающий сывороточный альбумин.
30. Полипептид по п.29, где указанный ISVD, связывающий сывороточный альбумин, в основном состоит из 4 каркасных областей (FR1 – FR4, соответственно) и 3 определяющих комплементарность областей (CDR1 – CDR3, соответственно), в которых CDR1 представляет собой SEQ ID NO: 146, CDR2 представляет собой SEQ ID NO: 147, и CDR3 представляет собой SEQ ID NO: 148.
31. Полипептид по п.30, где указанный ISVD, связывающий сывороточный альбумин, выбран из группы, состоящей из ALB8 (SEQ ID NO: 131), ALB23 (SEQ ID NO: 132), ALB129 (SEQ ID NO: 133), ALB132 (SEQ ID NO: 134), ALB11 (SEQ ID NO: 135), ALB11 (S112K)–A (SEQ ID NO: 136), ALB82 (SEQ ID NO: 137), ALB82–A (SEQ ID NO: 138), ALB82–AA (SEQ ID NO: 139), ALB82–AAA (SEQ ID NO: 140), ALB82–G (SEQ ID NO: 141), ALB82–GG (SEQ ID NO: 142), ALB82–GGG (SEQ ID NO: 143), ALB92 (SEQ ID NO: 144) и ALB223 (SEQ ID NO: 145).
32. Полипептид по п.31, выбранный из группы, состоящей из
SO
SEQ ID NO: 129 (клон 577 2F3–Alb),
SO
SEQ ID NO: 130 (клон 579 2F3–093–Alb),
SEQ ID NO: 120 (клон 4 2A12–Alb),
SEQ ID NO: 121 (клон 5 2D7–Alb),
SEQ ID NO: 122 (клон 6 2F3–Alb),
SEQ ID NO: 123 (клон 69 049–Alb),
SEQ ID NO: 124 (клон 70 9D3–Alb),
SEQ ID NO: 125 (клон 71 3B2–Alb),
SEQ ID NO: 126 (клон 129 2F3–093–Alb),
SEQ ID NO: 127 (клон 130 049–093–Alb), и
SEQ ID NO: 128 (клон 131 9D3–093–Alb).
33. Полипептид по любому из пп. 1–32 дополнительно содержащий по меньшей мере один ISVD, специфически связывающий аггрекан, предпочтительно, выбранный из группы, состоящей из SEQ ID NO: 156 (нанотело 00745 PEA114F08) и SEQ ID NO: 157 (нанотело 00747 PEA604F02).
34. Полипептид по любому из пп. 1–32, содержащий по меньшей мере 2 ISVD, специфически связывающих аггрекан.
35. Полипептид по п.34, где указанные по меньшей мере 2 ISVD, специфически связывающие аггрекан, могут являться одинаковыми или различными.
36. Полипептид по п.34 или 35, где указанные по меньшей мере 2 ISVD, специфически связывающие аггрекан, независимо выбраны из группы, состоящей из SEQ ID NO: 156 и 157.
37. Полипептид по любому из пп. 33–36, где указанный ISVD, специфически связывающий аггрекан, специфически связывает аггрекан человека [SEQ ID NO: 155].
38. Полипептид по любому из пп. 33–37, где указанный ISVD, специфически связывающий аггрекан, специфически связывает аггрекан собаки, аггрекан быка, аггрекан крысы; аггрекан свиньи; аггрекан мыши, аггрекан кролика; аггрекан яванского макака и/или аггрекан макака–резуса.
39. Полипептид по любому из пп. 33–38, где указанный ISVD, специфически связывающий аггрекан, предпочтительно связывается с хрящевой тканью, такой как хрящ и/или мениск.
40. Полипептид по любому из пп. 1–39, где указанный полипептид имеет стабильность в течение по меньшей мере 7 суток, например, 14 суток, 21 суток, 1 месяца, 2 месяцев или даже 3 месяцев в синовиальной жидкости (SF) при 37°C.
41. Полипептид по любому из пп. 23–40, где указанные по меньшей мере два ISVD напрямую связаны друг с другом или связаны посредством линкера.
42. Полипептид по п.41, где указанный линкер выбран из группы, состоящей из SEQ ID NO: 158–174, предпочтительно SEQ ID NO: 169.
43. Полипептид по любому из пп. 1–42, дополнительно содержащий C–концевое удлинение.
44. Полипептид по п.43, где указанное C–концевое удлинение представляет собой C–концевое удлинение (X)n, в котором n представляет собой 1–10, предпочтительно 1–5, например, 1, 2, 3, 4 или 5 (и предпочтительно 1 или 2, например, 1); и каждый X представляет собой (предпочтительно, природный) аминокислотный остаток, который выбран независимо, и предпочтительно, независимо выбран из группы, состоящей из аланина (A), глицина (G), валина (V), лейцина (L) или изолейцина (I).
45. Полипептид по любому из пп. 1–44, где указанный полипептид имеет по меньшей мере 80%, 90%, 95% или 100% идентичность последовательности с любой из SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 116, 117, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129 или 130.
46. Способ лечения и/или предотвращения у индивидуума заболеваний или нарушений, например, в которые вовлечена активность ADAMTS5, включающий введение полипептида по любому из пп. 1–45 указанному индивидууму в количестве, эффективном для лечения или предотвращения симптома указанного заболевания или нарушения.
47. Способ по п.46, где указанные заболевания или нарушения выбраны из группы, состоящей из артропатий и хондродистрофий, артритного заболевания, такого как остеоартрит, ревматоидный артрит, подагрический артрит, псориатический артрит, травматического разрыва или открепления, ахондроплазии, реберного хондрита, спондилоэпиметафизарной дисплазии, межпозвонковой грыжи, заболевания дегенерации поясничного диска, дегенеративного заболевания сустава, и рецидивирующих полихондрита, рассекающего остеохондрита и аггреканопатий.
48. Полипептид по любому из пп. 1–45 для применения в качестве лекарственного средства.
49. Полипептид по любому из пп. 1–45 для применения в лечении или предотвращении симптома ассоциированного с ADAMTS5 заболевания, например, такого как артропатии и хондродистрофии, артритное заболевание, такое как остеоартрит, ревматоидный артрит, подагрический артрит, псориатический артрит, травматический разрыв или открепление, ахондроплазия, реберный хондрит, спондилоэпиметафизарная дисплазия, межпозвонковая грыжа, заболевание дегенерации поясничного диска, дегенеративное заболевание сустава, и рецидивирующий полихондрит, рассекающий остеохондрит и аггреканопатии.
50. Полипептид по любому из пп. 1–45, где указанный полипептид перекрестно блокирует связывание с ADAMTS5 по меньшей мере одного из полипептидов, представленных любой из SEQ ID NO: 2, 116, 19, 1, 3, 6, 16, 17, 10, 11, 9, 5, 4, 7, 117, 8, 12, 13, 14, 15 и 18, и/или его связывание с ADAMTS5 перекрестно блокировано по меньшей мере одним из полипептидов, представленных любой из SEQ ID NO: 2, 116, 19, 1, 3, 6, 16, 17, 10, 11, 9, 5, 4, 7, 117, 8, 12, 13, 14, 15 и 18.
51. Полипептид, который перекрестно блокирует связывание с ADAMTS5 полипептида, представленного любой из SEQ ID NO: 2, 116, 19, 1, 3, 6, 16, 17, 10, 11, 9, 5, 4, 7, 117, 8, 12, 13, 14, 15 и 18, и/или связывание которого с ADAMTS5 перекрестно блокировано по меньшей мере одним из полипептидов, представленных любой из SEQ ID NO: 2, 116, 19, 1, 3, 6, 16, 17, 10, 11, 9, 5, 4, 7, 117, 8, 12, 13, 14, 15 и 18, где указанный полипептид содержит по меньшей мере один VH, VL, dAb, одиночный вариабельный домен иммуноглобулина (ISVD) специфически связывающий ADAMTS5, где связывание с ADAMTS5 модулирует активность ADAMTS5