МУЛЬТИЭНЗИМНАЯ КОМПОЗИЦИЯ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ БЕЛКОВЫХ ДОБАВОК ИЗ СЕМЯН ЗЕРНОБОБОВЫХ КУЛЬТУР
MULTI-ENZYME COMPOSITION FOR PRODUCTION OF LEGUMINOUS CROPS SEEDS PROTEIN ADDITIVES

Изобретение относится к пищевой промышленности и может быть использовано для получения белковых добавок высокого качества пищевого и кормового назначения из семян зернобобовых культур.
Одной из негативных мировых тенденций в области питания признано снижение потребления наиболее ценных в биологическом отношении пищевых продуктов, содержащих витамины, макро- и микроэлементы, полноценный белок, потребление которого снизилось на 15-22% от рекомендуемых норм [1, 2]. Наблюдается также острейший дефицит белка в кормопроизводстве, потребность в котором удовлетворяется только на 45-50%. В связи с этим приоритетной задачей здорового питания является повышение уровня обеспечения населения России полноценным белком, а также удовлетворение потребности с/х животных и птицы в кормовом белке высокого качества, что непосредственно влияет на здоровье нации.
Одним из основных путей решения этой проблемы в настоящее время является увеличение производства дешевого растительного белка за счет широкого использования семян зернобобовых, так как они являются наиболее ценными продовольственными и кормовыми культурами. По химическому составу и пищевой ценности эти культуры наиболее близки к источникам животного белка - молоку, мясу, рыбе [3]. Семена зернобобовых отличаются высоким содержанием белка - 27,8-61,0% [1, 2], причем по биологической и питательной ценности не уступают сое, и характеризуются хорошей сбалансированностью незаменимых аминокислот и достаточно высокой степенью усвояемости в организме человека и животных, семена также богаты витаминами, макро- и микроэлементами.
Существенный дефицит белка при производстве различных продуктов питания и для кормовых целей покрывается преимущественно за счет переработки сои, но она не является широко возделываемой зернобобовой культурой в России, особенно в центральной ее части, и объем ее производства составляет менее 1% мирового. Среди зернобобовых культур особое внимание в последние годы уделяют люпину.
Люпиновый белок, как и соевый, хорошо переваривается человеком и животными, обладает высокой биологической ценностью и имеет в своем составе все незаменимые аминокислоты, достаточно большое количество лизина, треонина и лейцина. Биологическая ценность (БЦ) люпина составляет, по одним данным, 60% [3], по другим - 67-78% [4], что превосходит чечевицу (БЦ - 48%), нут (51%), горох (43%) и практически мало уступает сое (БЦ - 80%). Все виды люпина имеют наименьшее количество ингибиторов протеаз, если в семенах сои содержится в среднем 29-32 г инактивированного трипсина на 1 кг, то в семенах люпина - 2,0-2,5 г, что характеризует их как более перспективное сырье для производства продуктов питания. По количеству наиболее ценных ненасыщенных жирных кислот (олеиновой, линолевой и линоленовой) и их общей сумме масло люпина превосходит по своему качеству масло гороха, а масло желтого люпина идентично соевому. Люпиновые масла исключительно богаты жирорастворимыми витаминами и провитаминами - токоферолами, стеролами и каратиноидами. Семена люпина богаты водорастворимыми витаминами группы B, особенно отличаются по количеству β - каротина и токоферолов [3].
Большинство исследователей считает, что люпин относится к пищевой культуре, обладающей рядом преимуществ по сравнению с другими бобовыми растениями, в частности с соей, и может быть рекомендован для повышения биологической ценности продуктов во всех отраслях пищевой промышленности [3].
Одним из основных факторов, ограничивающих использование семян зернобобовых культур, особенно люпина, являются токсичные алкалоиды, обуславливающие горький привкус сырья, присутствие неусвояемых олигосахаридов, которые не разрушаются в желудочно-кишечном тракте моногастричных животных из-за отсутствия соответствующих ферментов, вызывая нежелательные явления метеоризма, и не подверженных различным технологическим воздействиям, а также высокий уровень сырой клетчатки.
В целях устранения "антипитательных" факторов существуют различные способы обработки семян зернобобовых культур, к которым относятся: замачивание, запаривание, экструдирование, автоклавирование, тостирование, экстракция органическими растворителями, воздействие постоянным электрическим током, использование приемов ультрафильтрации, экстрагирование сатурированной водой при давлении выше атмосферного [5-11].
Проведя анализ результатов исследований, было установлено, что, используя разные виды обработки, можно улучшить показатели питательности бобовых культур. Так, после термохимического воздействия содержание переваримой энергии в зерне бобовых культур увеличивается до 15%, доступность аминокислот повышается с 79 до 89%. Воздействие, например, на кормовой горох электромагнитным полем (СВЧ, 20°C) повышает в нем переваримость протеина и доступность аминокислот на 2 -3%. Обработка зерна люпина на экструдере ПЭК-125-8 является эффективным способом повышения его питательной ценности, не уступающей соевому шроту. Сдерживающим фактором использования сырых соевых бобов в кормопроизводстве является высокое содержание ингибиторов трипсина и химотрипсина, которые практически блокируют пищеварительные процессы в организме. Для снижения в них ингибиторов протеаз используют тостирование, экструдирование, СВЧ и др. [12]. В последние годы увеличение потребления белка из семян зернобобовых культур решается двумя путями: проводится селекционная работа специалистов по выведению сортов люпина с пониженным содержанием алкалоидов, но достигнутые результаты пока не соответствуют требованиям по наличию в них хинолизидов. В ряде литературных источников и Рекомендациях приводятся различные значения допустимых суммарных количеств алкалоидов для использования в пищевых продуктах: не более 0,1% [13], не более 0,02% [14], 0,017-0,038% [15], не более 0,04 [16], менее 0,025% [17], и кормах: 0,008% [18], 0,1-0,3% [17], не более 0,025% [19], не более 0,028% [20], 0,05-0,5% [21], не более 0,05% [22], 0,03-0,07% [23]. Ряд авторов обращает особое внимание на необходимость конкретизации требований к допустимому содержанию алкалоидов в семенах люпина, предназначенных для использования в продовольственных и кормовых целях [24, 25]. Представляется более рациональным и перспективным другое направление, связанное с удалением алкалоидов, неусвояемых олигосахаридов, а также снижением уровня клетчатки в семенах зернобобовых культур за счет использования ферментных препаратов целенаправленного действия, что будет способствовать повышению их питательности и биологической ценности и более широкому использованию семян зернобобовых культур для получения белковых добавок пищевого и кормового назначения.
Показана возможность снижения концентрации "антипитательных" веществ в зерне гороха, люпина и чечевицы в процессе проведения ферментативной обработки сырья с использованием мультиэнзимной добавки МЭД-4 в дозе 0,1% (св. семян) [26]. Размолотое зерно увлажняли (гидромодуль 2:1) и помещали в термостат при температуре 60°C при тщательном перемешивании, добавляли препарат МЭД-4 и проводили ферментативную обработку в течение 3-х часов, смесь перемешивали через каждые 15 минут. После окончания ферментации отбирали средние пробы для определения содержания ингибиторов трипсина (АТФ), химотрипсина (АХТФ) и алкалоидов. Установлено, что ферментативная обработка сырья снижает уровень АТФ в горохе на 42,2%, АХТФ - на 17,75%; в люпине - на 20,17 и на 16,87%, в чечевице уровень АТФ составил 43,14% и 17,48% соответственно. Содержание алкалоидов в люпине до ферментативной обработки составило 0,084 г/кг, после ферментативной обработки - 0,080, то есть содержание алкалоидов оказалось практически на одном уровне. Вероятно, отсутствие соответствующих ферментов в препарате МЭД-4 не позволило более эффективно воздействовать на удаление токсичных алкалоидов.
Известен способ устранения горького вкуса и аромата, свойственных муке семян зернобобовых культур (горох, кормовые бобы, люпин), а также снижения содержания олигосахаридов, заключающийся в замачивании муки семян зернобобовых в воде при температуре 20-50°C (гидромодуль от 1:2 до 1:5) в течение 10-50 минут, подкислении суспензии до pH 3,2-5,0 пищевой кислотой и введении в нее пепсина или пектофоетидина. Продолжительность обработки - 40-90 минут при 20-50°C. После доведения величины pH до нейтрального значения (6-8) суспензию выдерживали в течение 3-8 часов при комнатной температуре, после чего ее подвергали распылительной сушке или непосредственно вводили в рецептуру пищевого продукта с последующей термической обработкой [27].
Основным недостатком данного способа является узкая направленность действия используемых ферментов (пепсин или пектофоетидин). На наш взгляд, для того чтобы обеспечить разрушение α-галактоолигосахаридов и клетчатки в получаемой белковой добавке, необходимо при обработке муки из семян зернобобовых культур использование соответствующих ферментов - α-галактозидазы и комплекса целлюлаз. Кроме того, данный способ обработки приемлем только для муки и не пригоден для семян зернобобовых культур.
Известен способ получения пищевого продукта из семян зернобобового сырья, характеризующийся тем, что в качестве сырья используют семена люпина, или гороха, или чечевицы, или фасоли, который заключается в замачивании и проращивании семян в течение 24 -26 часов, последующей обработке их раствором смеси ферментов, содержащих эндо- и экзо-β-глюканазы, ксиланазу, целлюлазу, гемицеллюлазу, протеазу, целлобиазу; смесь используют в количестве 0,18-0,20% от массы сырья при массовом соотношении семян и раствора от 1:1,5 до 1:8,0. После ферментации семена промывают проточной водой с величиной pH 7,2 при температуре 20-30°C с последующей сушкой (конвективной или инфракрасной). Далее проводят экструдирование полученной массы при 90°C в течение 3 секунд, или при температуре 140°C и давлении 10 мПа в течение 3 секунд, или при 130°C и 11 мПа в течение 5 секунд [28].
Основным недостатком указанного способа, на наш взгляд, является отсутствие в материалах патента сведений о соотношении единиц активности перечисленных ферментов, входящих в смесь, которую используют при обработке сырья. Кроме того, в смеси ферментов отсутствует α-галактозидаза, ответственная за разрушение неусвояемых олигосахаридов, что не позволяет согласиться с утверждением авторов о ферментативном их разрушении. Необходимо также отметить, что при условии обоснованно сбалансированного соотношения ферментов в смеси ее доза при обработке сырья может быть снижена практически в два раза.
Известен способ получения кормового продукта из люпиновых семян, характеризующийся двукратным замачиванием в воде: процессы первого и второго замачивания проводят при температуре 40-80°C в течение 3-5 часов (1), второго - в течение 2-5 часов. Кроме воды, для замачивания может быть использован буферный раствор с величиной pH 3-7 для поддержания оптимальной ферментативной активности и для улучшения растворимости алкалоидов в водной среде. Для подкисления среды может быть использован разбавленный раствор слабой уксусной кислоты. Последующий процесс ферментативной обработки сырья может быть повторен два раза, что определяют по содержанию удаляемых алкалоидов в жидкой среде предыдущей обработки. В некоторых случаях замачивание семян люпина проводят с одновременным использованием ферментов. Для ферментативной обработки применяют или индивидуальные ферментные препараты, или смеси ферментных препаратов, обладающих целлюлазной, гемицеллюлазной, ксиланазной, пектолитической, α-галактозидазной активностями в дозе 0,1-0,5% от массы сухих семян. Установлено, что при двухстадийном замачивании и двойной ферментативной обработке количество алкалоидов в сырье в среднем уменьшается на 90% от исходного, белка - на 8-9% от исходного количества, α-галактоолигосахаридов (рафиноза, стахиоза, вербаскоза) уменьшается на 90-99% [29].
При рассмотрении материалов данного патента следует отметить, что ему также присущи те же недостатки, что и предыдущему, касающиеся отсутствия данных по соотношению единиц активности ферментов в используемой смеси, что затрудняет оценку целесообразности введения каждого из ферментов в ее комплекс, для обработки сырья. Кроме того, основываясь на биохимическом составе обрабатывемого сырья и присущих ему "антипитательных" факторов, необходимо отметить, что использование в технологическом процессе получения белковой кормовой добавки индивидусшьных ферментных препаратов, которые авторы называют "мультиферментными", по определению, не корректно и мало эффективно, так как индивидуальные препараты, как правило, стандартизуют по основному ферменту, а наличие сопутствующих в одном и том препарате, в зависимости от условий культивирования, имеет значительные колебания величин активности. В связи с этим использование индивидуальных ферментов в процессах ферментативной обработки сырья не позволяет получить стабильные результаты по эффективности вследствие несбалансированности таких ферментных систем, что и определило завышенные дозы препаратов. Причем доза введения ферментных препаратов в одном случае составляет 0,1-0,5% от массы сухих семян, в другом - 0,5% от веса люпина при условии дозировки препарата по содержанию в нем белка. И в том, и в другом случаях высокие дозы ферментных препаратов при обработке сырья, на наш взгляд, не являются оправданными, тем более что перед ферментативной обработкой с семян люпина удаляют оболочку.
Известен способ получения белкового концентрата из семян люпина. Зерна люпина размалывают и просеивают через сито с диаметром отверстий не более 100 мкм и проводят ферментативный гидролиз сырья. Для этого готовят водную суспензию муки в соотношении 1:7 и вносят α-амилазу (амилосубтилин) и глюкоамилазу (глюкаваморин) при дозе 2,4 ед. АС/г и 2,8 ед. ГлА/г крахмала муки. Общая продолжительность гидролиза при температуре 37°C составляет 3 часа. После окончания процесса гидролиза смесь центрифугируют, декантируют и осаждают белок в изоэлектрической точке (pH  3,0-3,2) раствором уксусной кислоты с массовой долей 35%. После осаждения белков смесь повторно центрифугируют. Белковую пасту трижды промывают водой для полного удаления уксусной кислоты, далее центрифугируют и сушат. По информации авторов, полученный концентрат из семян люпина имеет высокую биологическую ценность, улучшенные функционально-технические свойства и может быть использован в различных отраслях пищевой промышленности, в т.ч. мясной, с целью обогащения получаемых продуктов полноценным белком [30].
При рассмотрении данной публикации следует отметить, что предложенный способ обработки возможен только для муки и не пригоден для семян зернобобовых культур. Кроме того, на наш взгляд, использование α-амилазы и глюкоамилазы в данном процессе мало эффективно, так как люпин не относится к крахмалосодержащим культурам и удаление крахмала не является первоочередной задачей в аспекте переработки семян зернобобовых культур.
Анализируя представленные материалы, следует отметить, что предлагаемые способы ферментативной обработки семян зернобобовых культур с целью получения пищевых и кормовых белковых добавок заслуживают внимания, но практической реализации, по ряду причин, не имеют. В патентах приводятся сведения о возможности использования многих ферментов, для большей части которых до настоящего времени в РФ не разработаны технологические процессы их получения, в том числе целевых мультиэнзимных препаратов, в которых должны быть установлены соотношения единиц активности ферментов, необходимых для оптимального разрушения компонентов сырья, в первую очередь "антипитательных" факторов. Кроме того, вследствие несбалансированности ферментного состава предлагаемых в патентных материалах препаратов необоснованно завышены их дозы для обработки сырья. Все это затрудняет достижение поставленной цели - увеличение производства белковых добавок пищевого и кормового назначения высокого качества, при одновременной рентабельности их производства.
Известна мультиэнзимная композиция [31], предназначенная для использования в технологии получения белковых добавок пищевого и кормового назначения из семян зернобобовых культур, принципиально отличающаяся от рассмотренных выше изобретений, так как представляет собой контролируемую по соотношению единиц активностей систему ферментов, которые необходимы для обеспечения стабильных результатов при достижении поставленной цели, а именно: по целлюлазе, пектин-лиазе, эндо- и экзоксиланазе как 1:(11.7-3,3):(7,3-2,7) и по α-галактозидазе, эндополигалактуроназе и пектинлиазе - 1:(8,3-13,3):(58,0-22,2) соответственно (заявка РФ №2008125308/13, приоритет от 25.06.2008). Данная мультиэнзимная композиция обеспечивает удаление из обрабатываемого сырья алкалоидов на 90-95%, олигосахаридов (рафиноза, стахиоза, вербаскоза) - на 95-99%, а также конверсию белка - на 5-6% и клетчатки - на 25-28%.
Однако, на наш взгляд, упомянутая мультиэнзимная композиция имеет недостатки, прежде всего,  низкий уровень ферментов эндополигалактуроназы и α-галактозидазы, действие которых должно быть направлено на максимально быстрое разрушение негативных факторов обрабатываемого сырья (пектиновые вещества, олигосахариды и др.), так как комплекс этих ферментов способствует повышению доступности субстрата к действию целлюлаз. Кроме того, отсутствие в мультисистеме заявленных соотношений активности целлобиазы к активностям контролируемых ферментов, разрушающей полупродукты гидролиза целлюлозы (целлобиоза) до глюкозы, не позволяет получить максимально возможное количество глюкозы в конечном продукте, так как увеличение ее количества способствует повышению качества люпинового гидролизата.
Следует также отметить, что в доступной научно-технической литературе и патентных материалах выявлен единственный патент на мультисистему, которая выбрана в качестве ближайшего аналога к заявляемой мультиэнзимной композиции [31].
Техническая задача состоит в разработке технологии получения новой мультиэнзимной композиции для производства белковых добавок пищевого и кормового назначения из семян зернобобовых культур, обеспечивающей повышение их питательной и биологической ценности за счет максимально возможного удаления "антипитательных" и негативных факторов из обрабатываемого сырья, что позволяет повысить качество готовой продукции с целью замены соевого белка, используемого в производстве пищевой и комбикормовой продукции, на белковые добавки из зернобобовых культур.
Технический результат заявляемого изобретения заключается в реализации мультиэнзимной композиции, обеспечивающей максимально возможное удаление из обрабатываемого сырья, при одновременном сокращении продолжительности процесса гидролиза, токсичных алкалоидов на 92-98%, олигосахаридов (рафиноза, стахиоза, вербаскоза) - на 97-100%, практически полную сохранность белка и снижение уровня сырой клетчатки - на 27-32%, а также повышение на 3-5% энергетической ценности белковых добавок, что позволит заменить закупаемый, в основном, по импорту более дорогой соевый белок, в производстве пищевых продуктов и обеспечить кормопроизводство растительными белковыми кормами высокого качества при повышении норм ввода их в комбикормовую продукцию с 10 до 20% (моногастричные животные), а также повысить усвояемость протеина и доступность аминокислот на 5-13% и уровень обменной энергии рационов, содержащих люпин, на 8-14%.
Причем данные результаты установлены при использовании мультиэнзимной композиции для получения белковых добавок в технологическом процессе продолжительностью 45-90 минут и дозах внесения 0,035-0,075% (от массы обрабатываемого сырья), что существенно отличается от режимов, указанных в ближайшем аналоге - 60-120 минут и 0,04-0,09% соответственно.
Многокомпонентная система ферментов заявляемой мультиэнзимной композиции позволяет интенсифицировать технологический процесс получения белковых добавок пищевого и кормового назначения и тем самым сократить затраты на их производство и повысить качество конечного продукта.
Для устранения недостатков ближайшего аналога по соотношению ферментов в мультисистеме повышены уровни эндополигалактуроназы (в 1,5% раза) и α-галактозидазы (на 16%), которые совместно с целлюлазой способствуют более эффективному разрушению "антипитательных" и негативных факторов обрабатываемого сырья и удалению токсичных алкалоидов. Введение целлобиазы, контролируемой по активности и соотношению с активностями других ферментов, обусловлено необходимостью разрушения целлюлозы до конечного продукта - глюкозы, которая, в основном, образуется в результате действия целлобиазы на промежуточный продукт деструкции целлюлозы целлобиозу. Это позволяет не только повысить качество готовой продукции, но и сократить продолжительность обработки сырья, снизить дозы введения мультиэнзимной композиции и тем самым повысить рентабельность технологического процесса получения белковых добавок пищевого и кормового назначения из семян зернобобовых культур.
Указанный технический результат достигается созданием мультиэнзимной композиции, характеризующейся тем, что содержит комплекс ферментов - целлюлазу, эндо- и экзо-β-глюканазы, эндо- и экзоксиланазы, эндо- и экзополигалактуроиазы, α- и β-галактозидазы, целлобиазу, фитазу, пектин- и пектатлиазы, протеазу, при этом композиция имеет соотношение единиц активности по контролируемым ферментам - целлюлазе, пектин-лиазе, эндо- и экзоксиланазе, эндополигалактуроназе, α-галактозидазе и целлобиазе как 1:(3,3-11,7):(2,7-7,4):(2,5-10,0):(0,12-0,33):(0,08-0,66) соответственно.
Для получения мультиэнзимной композиции могут быть использованы очищенные базовые концентраты гидролитических и лиазных ферментов, продуцируемых грибными и бактериальными микроорганизмами.
Базовые концентраты содержат ведущие и сопутствующие ферменты, причем наличие единиц активности ферментов определяют действующими методами в каждом из базовых концентратов и учитывают при разработке композиции с заявляемыми соотношениями.
Для обеспечения заявляемых соотношений используют базовые концентраты ферментов с минимально допустимыми значениями единиц активности, а именно: целлюлазы - 1800 ед./г, ксиланазы - 6000 ед./г, эндополигалактуроназы - 3000 ед./г, пектинлиазы - 20000 ед./г и α-галактозидазы - 160 ед./г и целлобиазы - 350 ед/г.
В процессе получения мультиэнзимной композиции базовые концентраты вводят с учетом насыпных масс и массовых долей каждого из компонентов для достижения распределяемости ферментов в общей массе мультиэнзимной композиции на уровне 95-105% от расчетных величин единиц активности.
Рабочая зона действия комплекса ферментов находится в пределах pH 4,0-7,5 и диапазоне температуры - 30-50 C°, оптимальная продолжительность гидролиза обрабатываемого сырья составляет 45-90 минут. Норма ввода мультиэнзимной композиции при переработке семян зернобобовых культур составляет 0,035-0,075% от массы сырья. Кроме того, мультиэнзимную композицию используют в составе комбикормовой продукции, с содержанием необработанных семян люпина до 20%, при норме ввода ее до 0,1%.
Предлагаемая мультиэнзимная композиция обеспечивает максимально возможное удаление из обрабатываемого сырья, при одновременном сокращении продолжительности процесса, токсичных алкалоидов на 92-98%, олигосахаридов (рафиноза, стахиоза, вербаскоза) - на 97-100%, практически полную сохранность белка и снижение уровня сырой клетчатки -на 27-32%, а также повышение на 3-5% энергетической ценности белковых добавок, что позволит заменить закупаемый, в основном, по импорту более дорогой соевый белок в производстве пищевых продуктов и обеспечить кормопроизводство растительными белковыми кормами высокого качества при повышении норм ввода их в комбикормовую продукцию с 10 до 20% (моногастричные животные), а также повысить усвояемость протеина и доступность аминокислот на 5-13% и уровень обменной энергии рационов, содержащих люпин, на 8-14%.
Список литературы
1. Браудо Е.Е., Даниленко А.Н., Елисеева Л.Г., Махотина И.А. Повышение питательной ценности белков люпина методом ограниченного ферментативного гидролиза // Известия высших учебных заведений: Пищевая технология. - 2006. - С.69-70.
2. Музалевская Р.С., Батурина Н.А. Химический состав люпина и его возможность использования на пищевые цели // 6-й международный симпозиум "Новые и нетрадиционные растения и перспективы их использования". - М. - Пущино - 2005. - Т.III. - С.380-382.
3. Пащенко Л.П., Черных И.П., Пащенко В.Л. Семена люпина - перспективный белковый обогатитель продуктов питания // Современные наукоемкие технологии - 2006. - №6. - С.54.
4. Король В.Ф., Лахмоткина Г.Н. // htpp://www.sfera.fm/proizvodstvo Korma\is ispolsouanie-Lyupina-v-kormovyh-celyah.html.
5. Василюк Я.В., Никитюк O.B., Дадашко В.В. Повышение эффективности рационов бройлеров с высоким содержанием кормового люпина //Ученые записки Витебской ордена «Знак почета» государственной академии ветеринарной медицины. - Витебск-1999. - Том 35. - Ч.II. - С.120-122.
6. Мамаева М.В. Питательная ценность зерна узколистного люпина и его использование при выращивании цыплят-бройлеров: Автореф.… дис.… канд. с.-х. наук: 16.05.07. - М., - 2007.- 16 с.
6
7. Патент 2110930 RU, МКИ A23L 1/21. Способ очистки сельскохозяйственной продукции от алкалоидов / Костюченко В.И. (RU). - №96110621/131998. Заявлено 28.05.96. Опубл. 20.05.98.
7
8. Заявка 2000122912 RU, МКИ A23J 1/14, A23L 1/20. Способ производства белкового продукта / Самохин С.Б., Молоков Ю. Г., Сивков О.В. Заявлено 04.09.2000. Опубл. 27.12.2002.
7
9. Заявка 2006130362 RU, МКИ A23J 1/14, A23L 1/20. Способ получения концентрата люпинового пастообразного / Юрченко Н.A. (RU), Мотовилов К.Я. (RU), Мотовилов О.К. (RU). Заявлено 22.08.2006. Опубл. 27.02. 2008.
6
10. Патент 2059388 RU, МКИ A23L 1/20, A23J 1/14. Способ получения полуфабриката из люпина для продуктов питания / Головченко В.И. (UA), Кучеренко В.Г. (UA), Кучеренко Н.И. (UA), Головченко О.В. (UA), Седлецкий М.А. (UA). - №5040757/13. Заявлено 29.04.92. Опубл. 10.05.96.
6
11. Патент 92008943 RU, МКИ А 23 J 1/14. Способ производства белка из семян люпина / Квасенков O.H.(RU), Загибалов А.Ф. (UA), Касьянов Г.И. (RU), Бабков И.И. (UA), Дроздов А.И. (UA). - Заявлено 27.11.92. Опубл. 27.03.95.
12. Егоров И.А., Топорков Н.И. Нетрадиционные корма в птицеводстве // Отраслевой портал WebPticeprom - 17.04.2012.
13. Лисицын А.Н., Андреев Н.В., Григорьева В.Н. Люпин - многоцелевое сырье для пищевой и перерабатывающей промышленности // Состояние и перспективы развития люпиносеяния в XXI веке: Тез. докл. Междун. научно-практич. конф., 17-19 июля 2001 г. - Брянск, 2001. - С.175-177.
14. Король В. Ф. Оценка требований, предъявляемых к продовольственному люпину, и разработка показателей его пищевой безопасности // Проблемы дефицита растительного белка и пути его преодоления: Матер. Междунар. конф., 13-15 июля 2006 г. - Минск: Белорусская наука, 2006. - С.113-117.
15. Красильников В.Н., Панкина И.А. Исследование химического состава и технологических свойств семян люпина узколистного с целью создания комбинированных продуктов питания // Проблемы дефицита растительного белка и пути его преодоления: Матер. Междун. конф., 13-15 июля 2006 г. - Минск: Белорусская наука, 2006. - С.119-123.
16. Lupin - anutritional update. // Milling Feed and Fertiliser. - 1985. - 168. - N 2. - PP.18, 20, 22.
17. Антипитательные вещества зернобобовых, зерновых, масличных капустных культур и методы их определения (Методические указания) / Фицев. А.И., Коровина Л.М., Леонидова Т.В., Бражникова Т.С. // М.: ГНУ ВНИИкормов им. Р.В.Вильямса РАМН, ФГУ «Российский центр сельскохозяйственного консультирования», 2007. - С.9-11.
18. Рекомендации по кормлению сельскохозяйственной птицы / РАСХН, МНТЦ «Племптица», ВНИТИП. // М. обл., Сергиев Посад: ВНИТИП, 2006. - С.117.
19. Рекомендации по кормлению сельскохозяйственной птицы /РАСХН, МНТЦ «Племптица», ВНИТИП. // М. обл., Сергиев Посад: ВНИТИП, 2006. - С.117.
20. Gladstones J., Fisher Н., Tarr A. Danja narrow-leafed lupin // South Perth. - 1987. - 2 p. / Farmnote-Western Austral, dep. of agriculture.
21. Солодюк H.B., Левченко Т. M., Кучеренко Н.М. Выявление комплементарного эффекта взаимодействия генов по признаку алкалоидности кормовых сортов люпина // Состояние и перспективы развития люпиносеяния в XXI веке: Тез. докл. Междун. научно-практич. конф., 17-19 июля 2001 г. - Брянск, 2001. - С.41-44.
22. Рот-Мейер Дора А., Пауликс Б. Использование люпина в кормлении скота // Сейбит.- 2006. - С.4-8.
23. Перов А. Переработка семян люпина // Комбикорма. - 2008. - №1. - С.50.
24. Potkanski A. Niektore aspekty wykorzystania nasion roslin straczkowyca w zywieniu zwierzat // Roczn. Acad. Roln. w Poznain. - 1986. - 168. - s.51-58.
25. Елисеева Л.Г., Махотина И.А., Рудась П.Г., Браудо Е.Е., Евдокимова О.В. Качество и безопасность белковых препаратов семян люпина // Безопасность питания:: элемент оценки качества жизни семьи: Тез. докл. конф. Коломна, 2008. - С.51-52.
26. Шакиров Ш.К. / Шакиров Ш.К. и др. Влияние ферментативной обработки на антипитательные факторы зерна бобовых культур // Матер. отчетной сессии молодых ученых Тат. НИИ с/х. - Казань, 2003. - С.176-180.
7
27. Патент 2207012 RU, МКИ A23L 1/20, A23J 3/00. Способ устранения горького вкуса и аромата, свойственных муке семян зернобобовых, а также снижения содержания в муке семян зернобобовых олигосахаридов / Браудо Е.Е., Даниленко А.Н., Дианова В.Т., Кроха Н.Г. - №2001103866 (13). Заявлено 13.02.2001. Опубл. 27.06.2003.
28. Патент 2287295 RU, МПК A23L 1/20. Способ получения пищевого продукта из зернобобовых культур / Король В.Ф. (RU), Гаврилин М.В. (RU), Кялов В.P. (RU). - №2004119811/13. Заявл. 28.04.2004. Опубл. 20.11.2006. Бюл. №32.
29. Патент 2288590 RU, МПК A23K 1/14, A23J 1/14, A23J 3/34. Способ получения кормового продукта из люпиновых семян / Гришутин С.Г. (RU), Синицын А.П. (RU), Савинцев И.В. (RU), Попов В.О. (RU). - №2005127969/13. Заявлено 08.09.2005. Опубл. 10.12.2006. Бюл. №34.
30. Кравцова И.С., Руднева И.В., Антипова Л.В., Богатырева Ж.И. Способ получения белкового концентрата из семян люпина // Матер, научн. конфер. "Студенческий научный форум" (pdf) - 15-20.02.2009.
7
31. Заявка 2008125308/13 RU, МКИ A23L 1/20, A23L 1/211. Мультиэнзимная композиция для получения белковых добавок из семян зернобобовых культур. / Удалова Э.В. (RU), Бравова Г.Б. (RU)., Кялов В.Р. (RU)., Король В.Ф. (RU). Заявлено 25.06.2008.