ЛИНИЯ КЛЕТОК, СОДЕРЖАЩАЯ НОВЫЙ МАРКЕР ОТБОРА, И ЕЕ ПРИМЕНЕНИЕ ДЛЯ ПРОДУЦИРОВАНИЯ БЕЛКОВ

1. Линия клеток, содержащая эндогенный ген дегидрооротатдегидрогеназы (DHODH), который частично или полностью инактивирован.
2. Линия клеток по п. 1, которая представляет собой линию клеток яичника китайского хомячка (СНО).
3. Линия клеток по п. 1 или 2, которая получена путем
a) инактивации эндогенного гена DHODH в клетке и
b) культивирования клетки в культуральной среде, содержащей уридин, в условиях, подходящих для создания линии клеток, в которой эндогенный ген DHODH частично или полностью инактивирован.
4. Линия клеток по п. 3, в которой эндогенный ген DHODH инактивирован с помощью метода редактирования генов.
5. Линия клеток по п. 4, в которой эндогенный ген DHODH инактивирован с помощью метода с использованием системы CRISPR-Cas9.
6. Линия клеток по любому из пп. 1-5, в которой одна или более или все аллели эндогенного гена DHODH частично или полностью инактивированы.
7. Линия клеток по любому из пп. 1-6, которая содержит, кроме того, экспрессионный вектор, содержащий нуклеотидную последовательность, кодирующую экзогенную DHODH млекопитающего, и по крайней мере одну экспрессионную кассету для экспрессии рекомбинантного белка, причем указанная экзогенная DHODH включает последовательность, идентичную на по крайней мере 60% последовательности SEQ ID NO:2 или последовательности SEQ ID NO:4.
8. Экспрессионная система, включающая:
(i) линию клеток по любому из пп. 1-6 и
(ii) экспрессионный вектор, содержащий нуклеотидную последовательность, кодирующую DHODH млекопитающего, и по крайней мере одну экспрессионную кассету для экспрессии рекомбинантного белка, причем указанная DHODH включает последовательность, идентичную на по крайней мере 60% последовательности SEQ ID NO:2 или последовательности SEQ ID NO:4.
9. Линия клеток по п. 7 или экспрессионная система по п. 8, в которой указанная нуклеотидная последовательность включает последовательность SEQ ID NO:1 или последовательность SEQ ID NO:3.
10. Линия клеток по п. 7 или 9 или экспрессионная система по п. 8 или 9, в которой указанный рекомбинантный белок представляет собой моноклональное антитело.
11. Линия клеток по любому из пп. 7, 9 и 10 или экспрессионная система по любому из пп. 8-10, в которой указанный вектор содержит первую экспрессионную кассету, подходящую для клонирования легкой цепи антитела, и вторую экспрессионную кассету, подходящую для клонирования тяжелой цепи антитела.
12. Набор, включающий (i) линию клеток по любому из пп. 7 и 9-11, или экспрессионную систему по любому из пп. 8-11, и (ii) культуральную среду, лишенную уридина, в частности, лишенную, кроме того, ингибитора DHODH.
13. Способ продуцирования рекомбинантного белка in vitro, включающий стадии:
А a1) предоставления линии клеток по любому из пп. 7 и 9-11;
или
а2) предоставления линии клеток по любому из пп. 1-6, и
а2') введения экспрессионного вектора, определенного в любом из пп. 9-11, в линию клеток, предоставленную на стадии а2);
или
a3) предоставления линии клеток, содержащей эндогенный ген DHODH,
a3') частичной или полной инактивации эндогенного гена DHODH в линии клеток, предоставленной на стадии a3), и
a3”) введения экспрессионного вектора, определенного в любом из пп. 9-11, в линию клеток, содержащую частично или полностью инактивированный эндогенный ген DHODH, полученный на стадии а3');
B) культивирования указанной линии клеток в условиях, подходящих для продукции рекомбинантного белка; и
C) выделения и/или очистки указанного рекомбинантного белка.
14. Способ по п. 13, в котором стадию B) проводят в культуральной среде, лишенной уридина, в частности, лишенной, кроме того, ингибитора DHODH.
15. Способ по п. 13 или 14, включающий, кроме того, стадию D) составления указанного рекомбинантного белка в фармацевтическую композицию.
16. Применение линии клеток по любому из пп. 7 и 9-11, экспрессионной системы по любому из пп. 9-11 или набора по п. 12 для продуцирования рекомбинантного белка.
17. Применение по п. 16, в случае которого линию клеток, экспрессионную систему или набор используют в сочетании с культуральной средой, лишенной уридина, в частности, в отсутствие ингибитора DHODH.