НОВЫЕ ФЛУОРЕСЦЕНТНЫЕ БЕЛКИ И СПОСОБЫ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ

1. Выделенная нуклеиновая кислота, кодирующая функциональный флуоресцентный белок и выбранная из группы, состоящей из:
(а) нуклеиновой кислоты, кодирующей белок, характеризующейся аминокислотной последовательностью, по существу, соответствующей аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14 и 16;
(b) нуклеиновой кислоты, представленной в SEQ ID NO: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13 и 15;
(с) нуклеиновой кислоты, кодирующей белок, имеющий последовательность, которая, по крайней мере, на 90% идентична аминокислотной последовательности (а), описанной выше;
(d) нуклеиновой кислоты, кодирующей белок, имеющий последовательность, которая, по крайней мере, на 85% идентична аминокислотной последовательности (а), описанной выше.
2. Выделенная нуклеиновая кислота по п.1 (с, d), где функциональный флуоресцентный белок содержит одну или более замен, выбранных из группы, состоящей из K6T, E36G, R32G, K42R, F53V, K67R, T68A, L79F, I93V, F110L, N112D, I115L, N122R, S131P, R138L, N143S, N143H, N143F, N143Y, G152S, R155E, H157R, S158G, Q159D, Y169H, H171I, C172A, S173N, F174L, K188R, F192V, H193Y, F194Y, H197R, M216V, K220R, R231S и R231K.
3. Вектор, включающий молекулу нуклеиновой кислоты по п.1 и элементы репликации вектора в клетке-хозяине, необходимые для амплификации вектора, содержащего нуклеиновую кислоту по п.1, в клетке-хозяине.
4. Кассета экспрессии содержащая (а) область инициации транскрипции, функциональную в клетке-хозяине; (b) нуклеиновую кислоту по п.1; и (с) область терминации транскрипции, функциональную в клетке-хозяине, которая будучи интегрированной в геном клетки или при введении в клетку в виде внехромосомного элемента способна обеспечить экспрессию флуоресцирующего белка, кодируемого нуклеиновой кислотой по п.1.
5. Клетка или ее потомство, продуцирующие флуоресцентный белок, кодируемый нуклеиновой кислотой по п.1, содержащая экспрессионный кластер по п.4 в виде внехромосомного элемента или элемента, интегрированного в геном этой клетки.
6. Трансгенная клетка или ее потомство, продуцирующие флуоресцентный белок, кодируемый нуклеиновой кислотой по п.1, содержащая экспрессионный кластер по п.4 в виде внехромосомного элемента или элемента, интегрированного в геном этой клетки.
7. Выделенный функциональный флуоресцентный белок, который кодируется нуклеиновой кислотой по п.1, где указанный белок выбран из группы, состоящей из:
(а) белка, характеризующегося аминокислотной последовательностью, по существу, соответствующей аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14 и 16;
(b) белка, имеющего последовательность, которая, по крайней мере, на 90% идентична аминокислотной последовательности (а), описанной выше;
(с) белка, имеющего последовательность, которая, по крайней мере, на 85% идентична аминокислотной последовательности (а), описанной выше.
8. Выделенный функциональный флуоресцентный белок, который кодируется нуклеиновой кислотой по п.2 и включает, по крайней мере, одну аминокислотную замену, выбранную из группы, состоящей из K6T, E36G, R32G, K42R, F53V, K67R, T68A, L79F, I93V, F110L, N112D, I115L, N122R, S131P, R138L, N143S, N143H, N143F, N143Y, G152S, R155E, H157R, S158G, Q159D, Y169H, H171I, C172A, S173N, F174L, K188R, F192V, H193Y, F194Y, H197R, M216V, K220R, R231S и R231K.
9. Способ получения флуоресцентного белка, кодируемого нуклеиновой кислотой по п.1, включающий (а) обеспечение молекулы нуклеиновой кислоты по п.1, функционально связанной с подходящими регулирующими экспрессию элементами, (b) экспрессию флуоресцентного белка с указанной молекулой нуклеиновой кислоты, и (с) выделение белка, по существу, не содержащего другие белки.