Противовоспалительные глазные капли для домашних и сельскохозяйственных животных
ANTI-INFLAMMATORY EYE DROPS FOR PETS AND FARM ANIMALS

Изобретение относится преимущественно к ветеринарии, а именно к офтальмологии, предназначено для лечения и профилактики инфекционных и воспалительных заболеваний глаз у домашних и сельскохозяйственных животных, а также может быть успешно использовано для профилактики и лечения инфекционных и воспалительных заболеваний глаз у человека.
Часто у животных наблюдаются гнойные выделения из глаз, продолжительное слезотечение, твердые корки в уголках глаз, красные сосуды, травмы глаз и другие клинические проявления воспалительных заболеваний глаз.
При отсутствии правильного и своевременного лечения это может привести к потере зрения животного и, как следствие, к экономическому ущербу в сельском хозяйстве в целом.
Задачей заявленного технического решения является разработка отечественного средства в виде глазных капель для профилактики и лечения воспалительных заболеваний глаз, которые обладают противовоспалительными (антимикробными) свойствами в отношении широкого спектра патогенной микрофлоры.
Из исследованного уровня техники выявлены средства для профилактики и лечения воспалительных заболеваний глаз.
Известны составы и способы гигиены, профилактики и лечения различных воспалительных заболеваний глаз - кератоконъюнктивитов, включающих введение в конъюнктивальную полость глаза лекарственных капель [Морозов В.И., Яковлев А.А. Фармакотерапия глазных болезней. М.: МЕДпресс-информ, 2009, С. 79 - 113].
Недостатками известных составов и способов лечения являются:
- очень высокие концентрации препаратов,
- недостаточное противомикробное действие,
- низкая противовоспалительная активность,
- низкое анальгизирующее действие;
- высокая возможность прогрессирования инфекционного процесса.
Известен антибактериальный офтальмологический препарат сульфацил натрия в виде 30% раствора глазных капель и 30% глазной мази [Червяков Д.К. и др. Лекарственные средства в ветеринарии. - М. Колос, 1977].
Недостатками известного препарата является:
- очень высокие лечебные дозы,
- недостаточное противомикробное действие,
- низкое анальгезирующее действие.
Известно изобретение заявителя по патенту RU 2423131 «Средство для лечения заболеваний в ветеринарии на основе соли фосфония», сущностью которого является средство для лечения глазных заболеваний в ветеринарии, капли и мази, включающее действующее вещество н-гексадецилтрифенилфосфоний бромид (формулы I) в концентрации 0,001 вес.% и фармацевтически приемлемый носитель, вазелин: ланолин безводный (9:1) или бидистиллированную воду.
Недостатками известного технического решения по сравнению с заявленным техническим решением является:
- менее широкий спектр антимикробного действия,
- более высокая концентрация (токсичность),
- недостаточное противовоспалительное действие,
- низкое анальгезирующее действие.
Известен антибиотик ципрофлоксацин в виде раствора глазных капель 0,3% [https://mgkl.ru/patient/aptechka/tsiprofloksatsin]. Содержит: активнодействующее вещество ципрофлоксацина моногидрат - 3,0 мг, и дополнительные элементы: натрия ацетата тригидрат, динатрия эдетата дигидрат, бензалкония хлорид, маннитол, уксусная кислота, вода. Ципрфлоксацин - противомикробное средство, с широким спектром действия. В основе его действия лежит механизм подавления бактериальной ДНК-гиразы и нарушения синтеза ДНК, влияющее на рост и деление бактериальной микрофлоры, что вызывает быструю гибель бактериальных клеток. Применение ципрофлоксацина не вызывает устойчивости к иным актибиотикам: аминогликозидам, пенициллинам, тетрациклинам, цефалоспоринам и пр. К ципрофлоксацину чувствительны большинство грамположительных и грамотрицательных аэробных бактерий. Показания к применению: инфекционные и воспалительные болезни глаз (конъюнктивит в остром и подостром периоде, кератит, кератоконъюнктивит, блефарит, блефароконъюнктивит, бактериальная язва роговицы, мейбомит (ячмень), хронический дакриоцистит, инфекции, вызванные травмой глаз, профилактика возможных инфекционных осложнений в офтальмологической хирургии.
Недостатками известного технического решения по сравнению с заявленным техническим решением является:
- менее широкий спектр антимикробного действия,
- недостаточное противовоспалительное действие.
Glycyrrhiza glabra
Glycyrrhiza uralensis
Известно растение солодка (лат. Glycyrrhíza) - род травянистых растений семейства Бобовые. Солодка китайская/уральская Glycyrrhiza uralensis - многолетнее травянистое корневищное растение 50-70 (иногда 100) см, растет в степях, на солонцеватых лугах, в тугаях, по берегам горных рек на высоте до 3000 м над уровнем моря. Вид характерен для Центральноазиатского региона и встречается в Центральном, Юго-Восточном и Восточном Казахстане (в долинах рек Шу, Или, Каратал, Аксу, Лепсы, Аягуз, Тентек и вокруг озер Алаколь и Сасыкколь) [https://express-k.kz/news/ okruzhayushchaya_sreda/gubyat_na_kornyu_12-104979]. Добыча солодки, торговля и охрана месторождений в Казахстане контролируется государством [https://www.traffic.org/site/assets/files/14086/sweet-dreams-ru-final.pdf]. Также представители рода солодки встречаются в умеренном и субтропическом поясах Евразии и Америки, в Северной Африке и Австралии. В России встречается 7 видов солодки, главным образом в степной, полупустынной и пустынной зонах. Наиболее распространены Солодка голая () на юге Европейской части, Кавказе и Солодка уральская () на юге Урала и Западной Сибири [Толстиков, Г. А. и др. Солодка: биоразнообразие, химия, применение в медицине. - Новосибирск: Гео, 2007. - 311 с. - ISBN 5-9747-0060-0].
Терапевтический эффект корней солодки обусловлен большим содержанием глицирризиновой и глицирретиновой кислот (23%), которая является противовирусным средством и активна в отношении ДНК- и РНК-содержащих вирусов, включая различные штаммы вирусов Herpes simplex, Varicella zoster, вирусов папилломы человека. Противовирусное действие связано, по-видимому, с индукцией образования интерферона. Прерывает репликацию вирусов на ранних стадиях, вызывает выход вириона из капсида, тем самым не допуская его проникновение в клетки. Это обусловлено селективным дозозависимым ингибированием фосфорилирующей киназы Р. Взаимодействует со структурами вируса, изменяя различные фазы вирусного цикла, что сопровождается необратимой инактивацией вирусных частиц (находящихся в свободном состоянии вне клеток), блокированием внедрения активных вирусных частиц через клеточную мембрану внутрь клетки, а также нарушением способности вирусов к синтезу новых структурных компонентов. Ингибирует вирусы в концентрациях, нетоксичных для нормально функционирующих клеток [Sun, Z. G., Zhao, T. T., Lu, N., Yang, Y. A., & Zhu, H. L. (2019). Research Progress of Glycyrrhizic Acid on Antiviral Activity. Mini reviews in medicinal chemistry, 19(10), 826-837. https://doi.org/10.2174/1389557519666190119111125]. Штаммы вирусов, резистентные к ацикловиру и иодоуридину, высокочувствительны к глицирризиновой кислоте.
in vitro
В частности, глицирризин и его аналоги активно подавляли репликацию SARS-ассоциированного коронавируса [Cinatl, J., Morgenstern, B., Bauer, G., Chandra, P., Rabenau, H., & Doerr, H. W. (2003). Glycyrrhizin, an active component of liquorice roots, and replication of SARS-associated coronavirus. The Lancet, 361(9374), 2045-2046. doi:10.1016/s0140-6736(03)13615-x PMID 12814717; Hoever, G., Baltina, L., Michaelis, M., Kondratenko, R., Baltina, L., Tolstikov, G. A., ... & Cinatl, J. (2005). Antiviral Activity of Glycyrrhizic Acid Derivatives against SARS - Coronavirus. Journal of medicinal chemistry, 48(4), 1256-1259. doi:10.1021/jm0493008 PMID 15715493], а также SARS-CoV-2 за счет ингибирования основной вирусной протеазы [Lukas van de Sand, Maren Bormann, Mira Alt, Leonie Schipper, et al., (2020). Glycyrrhizin effectively neutralizes SARS-CoV-2 in vitro by inhibiting the viral main protease. bioRxiv, https://doi.org/10.1101/2020.12.18.423104].
Вытяжки из корней солодки также оказывают противовоспалительное, противовирусное, анальгезирующее, ранозаживляющее, противоаллергическое, антисептическое, смягчающее, спазмолитическое, детоксикационное, противоопухолевое и улучшающее регенерацию тканей действие, как при ранних проявлениях вирусной инфекции, так и при поздних язвенных формах [https://shop.evalar.ru/encyclopedia/item/solodka/].
Наружное применение показано также в виде примочек при снятии боли при невралгии, язвах, ранах, лишае и различных воспалениях глаз.
Спиртовая настойка корня солодки использована в настоящем техническом решении как компонент заявленных глазных капель, в концентрации, подобранной заявителем экспериментальным путем.
Наиболее близким к заявленному техническому решению, выбранному заявителем в качестве прототипа, является изобретение заявителя по патенту № 2736054 «Средство для лечения воспалительных заболеваний глаз в ветеринарии на основе соли фосфония и хлорнитробензофуроксанов», сущностью является средство для лечения глазных заболеваний в ветеринарии, включающее три действующих вещества и фармацевтически приемлемый носитель, отличающееся тем, что действующими веществами являются н-гексадецилтрибутилфосфоний бромид в концентрации 0.0000001 вес.%, 5,7-дихлор-4,6-динитробензофуроксан в концентрации 0,00001 вес.% и 4,6-дихлор-5-нитробензофуроксан в концентрации 0,0001 вес.%. Средство для лечения глазных заболеваний по п.1, отличающееся тем, что фармацевтически приемлемый носитель представляет собой искусственную слезу, которая включает в свой состав: бензалкония хлорид 0,01 вес.%, гипромеллозу 0,3 вес.%, динатрия эдетат 0,1 вес.%, натрия хлорид 0,2 вес.%, натрия фосфат однозамещенный двуводный 0,35 вес.%, натрия фосфат двузамещенный 12-водный 2,4 вес.%, вода остальное.
Недостатками прототипа по сравнению с заявленным техническим решением является:
- недостаточное противомикробное действие вследствие отсутствия в составе ципрофлоксацина и корня солодки;
- недостаточное противовоспалительное действие вследствие отсутствия в составе ципрофлоксацина и корня солодки;
- недостаточное анальгезирующее действие вследствие отсутствия в составе ципрофлоксацина и корня солодки;
- раздражающее действие вследствие наличия в составе н-гексадецилтрибутилфосфоний бромида.
Техническим результатом заявленного технического решения
является расширение арсенала известных средств заявленного назначения путем создания лекарства для профилактики и лечения глазных заболеваний в ветеринарии в виде противовоспалительных глазных капель, при этом по сравнению с прототипом:
- обладающих повышенным противомикробным действием вследствие введения в состав ципрофлоксацина и корня солодки;
- обладающих повышенным противовоспалительным действием вследствие введения в состав ципрофлоксацина и корня солодки;
- обладающих повышенным анальгезирующим действием вследствие введения в состав ципрофлоксацина и корня солодки;
- не обладающих раздражающим действием вследствие отсутствия в составе н-гексадецилтрибутилфосфоний бромида.
При этом заявленные глазные капли активны против SARS-ассоциированного коронавируса вследствие наличия в составе корня солодки.
Заявленные глазные капли имеют очень низкие лечебные дозы, сравнимые с лечебными дозами прототипа.
Могут быть использованы для профилактики и лечения глазных заболеваний человека.
Сущностью заявленного технического решения
характеризующийся тем, что
отличающиеся тем, что
являются противовоспалительные глазные капли для ветеринарии, включающие 5,7-дихлор-4,6-динитробензофуроксан, 4,6-дихлор-5-нитробензофуроксан, фармацевтически приемлемый носитель,  дополнительно содержит ципрофлоксацин, спиртовую настойку корня солодки и полиэтиленгликоль 400 при следующем соотношении компонентов, вес. %: 5,7-дихлор-4,6-динитробензофуроксан - 0,00001; 4,6-дихлор-5-нитробензофуроксан - 0,0001; ципрофлоксацин - 0,45; спиртовая настойка корня солодки - 0,50; полиэтиленгликоль 400 - 0,02; фармацевтически приемлемый носитель - остальное. Противовоспалительные глазные капли по п.1,  фармацевтически приемлемый носитель представляет собой искусственную слезу, которая включает в свой состав: гипромеллозу 0,3 вес.%, бензалкония хлорид 0,01 вес.%, динатрия эдетат 0,1 вес.%, натрия хлорид 0,2 вес%, натрия фосфат однозамещенный двуводный 0,35 вес.%, натрия фосфат двузамещенный 12-водный 2,4 вес.%, остальное вода.
Далее заявителем приведено более подробное описание действующих веществ
.
5,7-дихлор-4,6-динитробензофуроксан формулы I
обладает антибактериальным и антимикотическим действием [https://dspace.kpfu.ru/xmlui/bitstream/handle/net/107274/0-784376.pdf?sequence=-1&isAllowed=y].
4,6-дихлор-5-нитробензофуроксан формулы II:
обладает антибактериальным и антимикотическим действием [https://dspace.kpfu.ru/xmlui/bitstream/handle/net/107274/0-784376.pdf?sequence=-1&isAllowed=y].
Ципрофлоксацин
- противомикробное средство широкого спектра действия, подавляет бактериальную ДНК-гиразу, нарушает синтез ДНК, рост и деление бактерий, вызывает выраженные морфологические изменения и быструю гибель бактериальной клетки. Действует бактерицидно на грамотрицательные организмы в период покоя и деления, на грамположительные микроорганизмы - только в период деления. Низкая токсичность для клеток макроорганизма объясняется отсутствием в них ДНК-гиразы. На фоне приема ципрофлоксацина не происходит параллельной выработки устойчивости к другим антибиотикам, не принадлежащим к группе ингибиторов гиразы, что делает его высокоэффективным по отношению к бактериям, которые устойчивы, например, к аминогликозидам, пенициллинам, цефалоспоринам, тетрациклинам и многим другим антибиотикам. К ципрофлоксацину чувствительны грамотрицательные аэробные бактерии, грамположительные аэробные бактерии [https://ru.wikipedia.org/wiki/ Ципрофлоксацин].
Солодка
используется с древних времен в китайской медицине, как средство для поддержания вечной молодости. Солодка в Китае приравнивается по лечебной значимости к женьшеню. В солодке содержатся вещества близкие как по своему строению, так и по действию со стероидными гормонами, которые вырабатываются корковым слоем надпочечников и обладают сильными противовоспалительными свойствами. https://shop.evalar.ru/encyclopedia/item/solodka/#:~:text=%D0%92%20%D0%BA%D0%BE%D1%80%D0%BD%D1%8F%D1%85%20%D1%81%D0%BE%D0%BB%D0%BE%D0%B4%D0%BA%D0%B8,%D0%9F%D1%80%D0%B8%D0%BC%D0%B5%D0%BD%D0%B5%D0%BD%D0%B8%D0%B5.
Настойки из корня солодки оказывают противовоспалительное, противоаллергическое, противовирусное, антисептическое, ранозаживляющее, анальгезирующее, смягчающее, спазмолитическое, детоксикационное, противоопухолевое и улучшающее регенерацию тканей действие, как при ранних проявлениях вирусной инфекции, так и при поздних язвенных формах [https://shop.evalar.ru/encyclopedia/item/solodka/].
SARS
SARS-CoV-2
in vitro
Особенно важно отметить, что корень солодки используется как сильное противовирусное средство для наружного и местного применения [Sun, Z. G., Zhao, T. T., Lu, N., Yang, Y. A., & Zhu, H. L. (2019). Research Progress of Glycyrrhizic Acid on Antiviral Activity. Mini reviews in medicinal chemistry, 19(10), 826-837. https://doi.org/10.2174/1389557519666190119111125]. Глицирризиновая кислота, которая содержится (до 23%) в корнях солодки активна в отношении ДНК- и РНК-содержащих вирусов, включая различные штаммы вирусов Herpes simplex, Varicella zoster, вирусов папилломы человека и цитомегаловирусов. Самое важное, что при сегодняшней ситуации с коронавирусами, глицирризин и его аналоги активно подавляют репликацию -ассоциированного коронавируса [Cinatl, J., Morgenstern, B., Bauer, G., Chandra, P., Rabenau, H., & Doerr, H. W. (2003). Glycyrrhizin, an active component of liquorice roots, and replication of SARS-associated coronavirus. The Lancet, 361(9374), 2045-2046. doi:10.1016/s0140-6736(03)13615-x PMID 12814717; Hoever, G., Baltina, L., Michaelis, M., Kondratenko, R., Baltina, L., Tolstikov, G. A., ... & Cinatl, J. (2005). Antiviral Activity of Glycyrrhizic Acid Derivatives against SARS - Coronavirus. Journal of medicinal chemistry, 48(4), 1256-1259. doi:10.1021/jm0493008 PMID 15715493], а также  за счет ингибирования основной вирусной протеазы [Lukas van de Sand, Maren Bormann, Mira Alt, Leonie Schipper, et al., (2020). Glycyrrhizin effectively neutralizes SARS-CoV-2 in vitro by inhibiting the viral main protease. bioRxiv, https://doi.org/10.1101/2020.12.18.423104]. Противовирусное действие связано с индукцией образования интерферона. Также важно, что штаммы вирусов, резистентные к ацикловиру и иодоуридину, высокочувствительны к глицирризиновой кислоте, которая ингибирует вирусы в концентрациях, нетоксичных для нормально функционирующих клеток.
В заявленном техническом решении важно, что вытяжки из корня солодки оказывают сильное противовоспалительное, анальгезирующее и улучшающее регенерацию тканей действие, как при ранних проявлениях инфекции, так и при язвенных формах. При лечении офтальмологических заболеваний высокой эффективностью обладают примочки и компрессы настоев и отваров корней солодки.
В заявленных противовоспалительных глазных каплях спиртовая настойка корня солодки используется в концентрации 0,50 вес.%, что позволяет достигнуть заявленный технический результат, а именно - повысить биологическую активность заявленных противовоспалительных глазных капель без раздражения глаз, при этом спирт дополнительно играет роль консерванта.
Полиэтиленгликоль 400 (ПЭГ-400)
является эффективным растворителем, эмульгатором, оказывает поверхностно-активное действие, усиливает действие антисептиков и антибиотиков. Имеет высокую водорастворимость. Используется в каплях для глаз [http://apifitopharm.ua/kremovaja-osnova-peg-400]. В заявленном техническом решении используется в качестве растворителя соединений формулы I и формулы II.
Фармацевтически приемлемый носитель.
В качестве фармацевтически приемлемого носителя может быть использована, например, искусственная слеза Дефислез, которая в своем составе имеет шесть вспомогательных веществ (протекторного свойства) [Справочник Видаль, искусственная слеза Дефислез, vidal.ru/defislez_8947].
Дефислез - недорогой коммерческий препарат, который является хорошим протектором эпителия роговицы. Оказывает увлажняющее и защитное действие по отношению к роговице при пониженной секреции слезной жидкости. Обладая высокой вязкостью, увеличивает продолжительность контакта раствора с роговицей. Показатель преломления раствора аналогичен естественным слезам. Восстанавливает, стабилизирует и воспроизводит оптические характеристики слезной пленки. Поэтому его использование в качестве основы для противовоспалительных капель является оправданным.
Дефислез включает в свой состав: гипромеллозу 3 мг/мл, бензалкония хлорид 100 мкг/мл, динатрия эдетат 1 мг/мл, натрия хлорид 2 мг/мл, натрия фосфат однозамещенный двуводный 3,5 мг/мл, натрия фосфат двузамещенный 12-водный 24 мг/мл и воду для инъекций в заявленных количествах.
Далее заявителем приведено получение компонентов заявленных противовоспалительных глазных капель.
5,7-дихлор-4,6-динитробензофуроксан формулы I
получают по способу, описанному, например, в работе [К.х.н. Спатлова Л.В., Хузиахметова А.Н., д.х.н. Юсупова Л.М., Бикмухаметова З.Н. / Оптимизация стадий получения 5,7-дихлоро-4,6-динитробензофуроксана. Химия и химическая технология / Казанский национальный исследовательский технологический университет, Россия /6. Органическая химия] [http://www.rusnauka.com/9_NND_2014/Chimia/6_162545.doc.htm].
4,6-дихлор-5-нитробензофуроксан формулы II
получают по способу, описанному, например, в работе [Бузыкин Б.И., Губайдуллин А.Т., Литвинов И.А. и Юсупова Л.М., Молекулярная и кристаллическая структура 4,6-дихлор-5-нитробенз-2,1,3-оксадиазол-1-оксида. / Бутлеровские сообщения. 2005, Т. 6, № 2, с. 29-31].
Ципрофлоксацин
является товарным лекарственным продуктом [https://health.sarbc.ru/apteka/?InfoDrug=3396].
Спиртовую настойку корня солодки
получают по способу, описанному, например, в патенте RU № 2331428. Для целей заявленного изобретения берут 0,50 вес.% приготовленного раствора.
Полиэтиленгликоль 400 (ПЭГ-400)
является товарным лекарственным продуктом [https://ldhim.ru/polyetilenglycol?yclid=15744106175070470143].
Искусственная слеза Дефислез
является товарным лекарственным продуктом [https://yandex.ru/health/apteki/product/35082?utm_campaign=yandex-searchster&utm_content=wizard-drugs&utm_medium=search&utm_source=yandex].
примерами конкретного осуществления
Заявленное изобретение иллюстрируется следующими , которые, однако, не ограничивают объем патентных притязаний заявителя.
В Примерах использованы следующие условные обозначения:
- солодка - спиртовая настойка корня солодки,
- ИС - искусственная слеза Дефислез.
Пример 1. Приготовление заявленных противовоспалительных глазных капель.
Для приготовления заявленных противовоспалительных глазных капель сначала готовят раствор действующих веществ формулы I и формулы II в соотношении 1 : 10 в ПЭГ-400, для чего взвешивают, например, 1,0 мг действующего вещества формулы I (5,7-дихлор-4,6-динитробензофуроксан и 10,0 мг действующего вещества формулы II (4,6-дихлор-5-нитробензофуроксан), растирают, например, в ступке, до однородности состава, например, 10 минут. Полученную смесь растворяют, например, в 2 г ПЭГ-400 и тщательно перемешивают при комнатной температуре, например, 22°С, до полного растворения, например, в течение 30 минут.
Отмеряют расчетное количество свежеперегнанной воды для инъекций в стеклянный лабораторный стакан, включают автоматическую мешалку, добавляют расчетное количество полученного раствора действующих веществ формулы I и формулы II в ПЭГ-400 для получения заявленных концентраций: 0,00001 вес.% 5,7-дихлор-4,6-динитробензофуроксана, 0,0001 вес.% 4,6-дихлор-5-нитробензофуроксана, 0,02 вес.% ПЭГ-400.
Затем в полученный раствор добавляют при перемешивании при комнатной температуре концентрат ципрофлоксацина 0,45 вес.% в пересчете на основное вещество, спиртовую настойку корня солодки 0,50 вес.%, затем добавляют фармацевтически приемлемый носитель, например, искусственную слезу Дефислез - остальное до 100 вес.%.
Смесь тщательно перемешивают. Отбирают пробу для анализа.
После получения положительного результата анализа раствор фильтруют через фильтр, например, с диаметром пор 0,2 мкм.
В асептических условиях разливают фильтрованный раствор во флаконы, например, по 10 и 100 мл и укупоривают пипеткой-капельницей и крышкой.
Получают заявленные противовоспалительные глазные капли, которые представляет собой прозрачную слегка желтоватую жидкость без цвета и запаха.
Концентрации действующих веществ, приведенные в Примере 1, включены в формулу изобретения.
При этом заявителем были изучены и другие концентрации действующих веществ для приведения доказательства оптимального состава действующих веществ по Примеру 1 (см. Примеры 2, 3, 4, 5). Приготовление составов с другими концентрациями проводили аналогично Примеру 1, изменяя концентрации действующих веществ.
Пример 2. Изучение кожно-раздражающего и кожно-резорбтивного действия составов в различных концентрациях.
Эксперименты проведены на кроликах (6 особей обоего пола породы «советская шиншилла») на кафедре эпизоологии и паразитологии Казанской государственной академии ветеринарной медицины.
Участки кожи 5х5 см за день до опыта тщательно обрабатывали антисептиками (0,1% раствор хозяйственного мыла, в качестве ополаскивателя использовали 4% настой ромашки аптечной) и выстригали на спине слева и справа от позвоночника. В день эксперимента очищенные участки кожи обезжиривали 70% этиловым спиртом и многократно обрабатывали испытуемыми растворами составов в различных концентрациях.
Были испытаны три варианта составов, приведенных в Таблице 1.
Таблица 1. Составы с различной концентрацией компонентовдля изучения кожно-раздражающего и кожно-резорбтивного действия, вес.%.
Составы
Соединение I
Соединение II
Ципрофлоксацин
Солодка
ПЭГ-400
ИС
Первый состав
0,001
0,01
1,80
2,0
2,0
остальное
Второй состав
0,0001
0,001
0,90
1,0
0,2
остальное
Третий состав
0,00001
0,0001
0,45
0,50
0,02
остальное
Контролем (для сравнения) служила искусственная слеза.
Реакцию кожи регистрировали через определенные промежутки времени в течение каждого дня, в среднем 5 раз в день и оценивали с симметричным участком кожи того же животного, где была нанесена дистиллированная вода в качестве контроля сравнения. Наблюдение вели в течение 7 дней [ГОСТ 12.1.007. Вредные вещества, Классификация и общие требования безопасности; Заугольников С.Д., Кочанов М.М., Лойт А.О., Ставчанский И.И. Экспрессные методы определения токсичности и опасности химических веществ. М.: Медицина, 1978, 184 С.].
В результате проведенного эксперимента получены следующие результаты.
В период наблюдения за накожными эффектами после обработки составами по всем трем составам функциональных и морфологических нарушений кожи (покраснений, эритем, отеков, трещин, изъязвлений, изменения местной температуры) отмечено не было. Кожно-резорбтивных (системных) эффектов также не отмечено.
На кожных участках, обработанных дистиллированной водой (контроль сравнения), функциональных и морфологических нарушений кожи и кожно-резорбтивных (системных) эффектов также не было отмечено.
Пример 3. Изучение раздражающего действия на слизистую оболочку глаз составов в различных концентрациях.
Эксперименты проведены на кроликах (6 особей обоего пола породы «советская шиншилла») на кафедре эпизоологии и паразитологии Казанской государственной академии ветеринарной медицины.
Были испытаны три варианта составов, приведенных в Таблице 2.
Таблица 2. Составы с различной концентрацией компонентовдля изучения раздражающего действия на слизистую оболочку глаз, вес.%.
Составы
Соединение I
Соединение II
Ципрофлоксацин
Солодка
ПЭГ-400
ИС
Первый состав
0,001
0,01
1,80
2,0
2,0
остальное
Второй состав
0,0001
0,001
0,90
1,0
0,2
остальное
Третий состав
0,00001
0,0001
0,45
0,50
0,02
остальное
Контролем (для сравнения) служила искусственная слеза.
В конъюнктивальный мешок правого глаза кролика стерильной пипеткой закапывали однократно испытуемые составы в количестве 2 капель.
В качестве контроля (для сравнения) служила дистиллированная вода, которую закапывали стерильной пипеткой в левый глаз кролика в количестве 2 капель.
Во всех случаях после внесения испытуемых соединений слезно-носовой канал прижимали у внутреннего угла глаза на 1 минуту. Наблюдение за состоянием слизистой оболочки и прозрачностью роговицы проводили в течение 1 недели [ГОСТ 12.1.007. Вредные вещества, Классификация и общие требования безопасности; Заугольников С.Д., Кочанов М.М., Лойт А.О., Ставчанский И.И. Экспрессные методы определения токсичности и опасности химических веществ. М.: Медицина, 1978, 184 С.].
В результате проведенного эксперимента получены следующие результаты.
При испытании первого состава (с самыми высокими концентрациями) была выражена видимая реакция со стороны слизистой оболочки глаза. Через 1 минуту после внесения раствора отмечалась гиперемия конъюнктивы глаза, а через 5 минут - гиперемия спадала. На 5-е сутки клинические признаки воспаления слизистой оболочки глаза полностью исчезли.
При испытании второго состава (со средними концентрациями) через 1 минуту появилась незначительная гиперемия поверхностных сосудов конъюнктивы, а через 5 минут - конъюнктивы приходили почти в норму. На 4-е сутки клинические признаки воспаления слизистой оболочки глаза полностью исчезли.
При испытании третьего состава (с самыми низкими концентрациями) местных раздражающих эффектов на слизистую оболочку глаз и резорбтивных (системных) эффектов не отмечено.
У контроля сравнения (введение дистиллированной воды) местных раздражающих эффектов на слизистую оболочку глаз и резорбтивных (системных) эффектов также не отмечено.
Пример 4. Изучение антимикробной активности составов в различных концентрациях.
Для оценки антимикробной активности действующих веществ заявленных глазных капель непосредственно перед исследованием готовили составы с различными концентрациями.
Были испытаны пять варианта составов, приведенных в Таблице 3.
Таблица 3. Составы с различной концентрацией компонентовдля изучения антимикробной активности, вес.%
Составы
Соединение I
Соединение II
Ципрофлок-сацин
Солодка
ПЭГ-400
ИС
Первый состав
0,001
0,01
1,80
2,0
2,0
остальное
Второй состав
0,0001
0,001
0,90
1,0
0,2
остальное
Третий состав
0,00001
0,0001
0,45
0,50
0,02
остальное
Четвер-тый состав
0,00001
0,0001
0
0,50
0,02
остальное
Пятый состав
0,00001
0,0001
0,45
0
0,02
остальное
E. Coli, B. cereus, S. aureus, Candida albicans
Готовили культуры микроорганизмов - бактерий и грибов .
Суточные культуры микроорганизмов смывали физиологическим раствором со скошенных мясопептонных агаров, отстандартизовывали по стандарту мутности до 0,5 по МакФарланду (1,5х108 КОЕ/мл). Затем, в 10 мл расплавленного и остуженного до 45°С питательного агара вносили 0,4 мл отстандартизованной тест культуры, перемешивали и тут же выливали в стерильные чашки Петри.
Candida
После застывания в зараженном питательном агаре просекали лунки и вносили в них растворы исследуемых составов. В качестве питательных сред использовали среду Сабуро для дрожжеподобных грибов рода  и среду Мюллера-Хинтона для условно-патогенной микрофлоры.
Чашки инкубировали при 35°С в течение 24-48 часов (экспозиция данного времени необходима для диффузии испытуемых веществ в толщу питательного агара, содержащего различные виды микроорганизмов), затем оценивали величину зоны задержки роста микроорганизмов, измеряя ее с точностью до 0,1 мм.
Результаты представлены в Таблице 4.
Таблица 4. Антимикробная активность составов с различными концентрациями действующих веществ
Составы
Величина зоны задержки роста микроорганизмов, d (мм)
<i>E. coli</i>
<i>B. cereus</i>
<i>S. aureus</i>
<i>Candida albicans</i>
Первый состав
24±0,3
31±0,4
30±,3
37±0,5
Второй состав
21±0,5
21±0,4
28±0,3
27±0,4
Третий состав
17±0,4
20±0,3
19±0,4
24±0,3
Четвертый состав
15±0,3
11±0,35
12±0,3
11±0,1
Пятый состав
13±0,2
15±0,3
15±0,4
19±0,3
E. coli, B. cereus, S. aureus и Candida albicans
Как видно из Таблицы 4, первые три варианта составов проявили высокую антимикробную активность на патогенных и условно патогенных культурах  - величина зоны задержки роста микроорганизмов составила величину более 17 мм.
В четвертом варианте - без ципрофлоксацина, произошло заметное снижение антимикробной активности, что является подтверждением заявленного технического результата.
В пятом варианте - без солодки, также произошло снижение антимикробной активности, что является подтверждением заявленного технического результата.
Пример 5. Изучение анальгезирующего действия составов в различных концентрациях.
Эксперименты проведены на кроликах (12 особей обоего пола породы «советская шиншилла») на кафедре эпизоологии и паразитологии Казанской государственной академии ветеринарной медицины, имеющим раневую инфекцию глаза с болевым синдромом.
Были испытаны пять варианта составов, приведенных в Таблице 5, с различными концентрациями ципрофлоксацина и спиртовых настоев солодки.
Таблица 5. Составы с различной концентрацией компонентовдля изучения анальгезирующего действия, вес.%
Составы
Соединение I
Соединение II
Ципрофлоксацин
Солодка
ПЭГ-400
ИС
Первый состав
0,00001
0,0001
1,80
1,25
0,02
остальное
Второй состав
0,00001
0,0001
0,90
0,75
0,02
остальное
Третий состав
0,00001
0,0001
0,45
0,50
0,02
остальное
Четвер-тый состав
0,00001
0,0001
0,45
0
0,02
остальное
Пятый состав
0,00001
0,0001
0
0,50
0,02
остальное
В конъюнктивальный мешок правого глаза кролика стерильной пипеткой закапывали однократно смесь испытуемых растворов в количестве 2 капель.
В качестве контроля (для сравнения) служила дистиллированная вода, которую закапывали стерильной пипеткой в левый глаз кролика в количестве 2 капель.
Во всех случаях после внесения испытуемых соединений слезно-носовой канал прижимали у внутреннего угла глаза на 1 минуту. Наблюдение за состоянием слизистой оболочки и прозрачностью роговицы проводили в течение 1 недели [ГОСТ 12.1.007. Вредные вещества, Классификация и общие требования безопасности; Заугольников С.Д., Кочанов М.М., Лойт А.О., Ставчанский И.И. Экспрессные методы определения токсичности и опасности химических веществ. М.: Медицина, 1978, 184 С.].
В результате проведенного эксперимента получены следующие результаты.
При испытании первого, второго и третьего состава животные в течение всего времени эксперимента оставались спокойными, раздражение и покраснение роговицы прошло в течение одного дня.
При испытании четвертого состава (без ципрофлоксацина) было отмечено небольшое беспокойство в поведении кроликов, проявлялось волнение, при этом наблюдали в течение нескольких дней легкое раздражение и покраснение роговицы.
При испытании пятого состава (без солодки) было отмечено беспокойство в поведении кроликов, проявлялось волнение, при этом наблюдали в течение нескольких дней раздражение и покраснение роговицы.
Таким образом, из результатов по Примеру 5 можно сделать вывод, что составы без ципрофлоксацина и без солодки не обладают анальгезирующим действием.
При этом первый, второй и третий составы обладают равным анальгезирующим действием, поэтому возможно использовать третий состав с наименьшими концентрациями действующих веществ, как экономически более выгодный.
Таким образом, после изучения местного раздражающего действия составов на кожу (Пример 2), слизистую оболочку глаза (Пример 3), изучения их антимикробной активности (Пример 4) и анальгезирующего действия (Пример 5) можно сделать общий вывод, что оптимальными концентрациями действующих веществ, подобранными заявителем опытным путем, являются, вес.%:
5,7-дихлор-4,6-динитробензофуроксан - 0,00001;
4,6-дихлор-5-нитробензофуроксан - 0,0001;
ципрофлоксацин - 0,45;
спиртовая настойка корня солодки - 0,50;
полиэтиленгликоль 400 - 0,02;
фармацевтически приемлимый носитель - остальное.
Пример 6. Изучение терапевтического действия заявленных противовоспалительных глазных капель на примере экспериментального кератоконъюнктивита у кроликов.
Исходя из полученных по Примерам 2, 3, 4, 5 результатов, были проведены исследования по изучению терапевтического действия заявленных противовоспалительных глазных капель. Заявителем выбран третий вариант концентраций действующих веществ: 5,7-дихлор-4,6-динитробензофуроксан - 0,00001; 4,6-дихлор-5-нитробензофуроксан - 0,0001; ципрофлоксацин - 0,45; спиртовая настойка корня солодки - 0,50; полиэтиленгликоль 400 - 0,02; фармацевтически приемлимый носитель - остальное, так как у данного состава отсутствует раздражающее действие, сохраняется высокая антимикробная активность и противовоспалительное действие.
Эксперименты проведены на кроликах (6 особей обоего пола породы «советская шиншилла») на кафедре эпизоологии и паразитологии Казанской государственной академии ветеринарной медицины.
Кератоконъюнктивит воспроизводили путем наложения на роговицу кролика фильтровальной бумаги, смоченной 25%-ным водным раствором аммиака.
Эксперимент начинали на 3 сутки после воспроизведения клинической картины кератоконъюнктивита.
Заявленные противовоспалительные глазные капли закапывали стерильной пипеткой по 1-2 капли в конъюнктивальный мешок однократно. Затем делали перерыв на 2 недели.
При необходимости курс может быть повторен.
В результате проведенного эксперимента получены следующие результаты.
В течение первых дней после начала эксперимента наблюдалась легкая гиперемия сосудов конъюнктивы век, блефароспазм, васкуляризация поверхностных конъюнктивальных сосудов. Слезотечение, наблюдавшееся в первые сутки, сменилось в дальнейшем слизисто-гнойным отделяемым.
Через неделю уменьшилась гиперемия конъюнктивы, исчез отек. Истечения из глаз прекратились. Наблюдалось рассасывание инфильтрата. Сосуды роговицы постепенно облитерировались и рассасывались.
Через две недели произошло полное излечение глаза.
Пример 7. Изучение терапевтического действия заявленных противовоспалительных глазных капель на примере хламидийного кератоконьюктивита у кроликов.
Исходя из полученных по Примерам 2, 3, 4, 5 результатов, были проведены исследования по изучению терапевтического действия заявленных противовоспалительных глазных капель на примере хламидийного кератоконьюктивита у кроликов. Заявителем выбран третий вариант концентраций действующих веществ: 5,7-дихлор-4,6-динитробензофуроксан - 0,00001; 4,6-дихлор-5-нитробензофуроксан - 0,0001; ципрофлоксацин - 0,45; спиртовая настойка корня солодки - 0,50; полиэтиленгликоль 400 - 0,02; фармацевтически приемлимый носитель - остальное, так как у данного состава отсутствует раздражающее действие, сохраняется высокая антимикробная активность и противовоспалительное действие.
Эксперименты проведены на кроликах (6 особей обоего пола породы «советская шиншилла») на кафедре эпизоологии и паразитологии Казанской государственной академии ветеринарной медицины.
Хламидийный кератоконъюнктивит приобретен новорожденными крольчатами при окроле, то есть при спонтанном заражении от матерей.
Эксперимент начали после установления диагноза хламидийного кератоконъюнктивита.
Заявленные противовоспалительные глазные капли закапывали стерильной пипеткой по 1-2 капли в конъюнктивальный мешок однократно. Затем делали перерыв на 2 недели.
При необходимости курс может быть повторен.
В результате проведенного эксперимента получены следующие результаты.
В течение первых дней после начала эксперимента наблюдалась легкая гиперемия сосудов конъюнктивы век, блефароспазм, васкуляризация поверхностных конъюнктивальных сосудов. Слезотечение, наблюдавшееся в первые сутки, сменилось в дальнейшем слизисто-гнойным отделяемым.
Через неделю уменьшилась гиперемия конъюнктивы, исчез отек. Истечения из глаз прекратились. Наблюдалось рассасывание инфильтрата. Сосуды роговицы постепенно облитерировались и рассасывались.
Через две недели произошло полное излечение глаз.
достигнут заявленный технический результат
Таким образом, заявителем , а именно - расширен арсенал известных средств заявленного назначения путем разработки эффективных противовоспалительных глазных капель для профилактики и лечения инфекционных воспалительных заболеваний глаз у сельскохозяйственных и домашних животных:
- обладающих повышенным противомикробным действием вследствие введения в состав ципрофлоксацина и корня солодки;
- обладающих повышенным противовоспалительным действием вследствие введения в состав ципрофлоксацина и корня солодки;
- обладающих повышенным анальгезирующим действием вследствие введения в состав ципрофлоксацина и корня солодки;
- не обладающих раздражающим действием вследствие отсутствия в составе н-гексадецилтрибутилфосфоний бромида.
При этом заявленные глазные капли активны против SARS-ассоциированного коронавируса вследствие наличия в составе корня солодки.
Заявленные глазные капли имеют очень низкие лечебные дозы, сравнимые с лечебными дозами прототипа. При этом заявленные противовоспалительные глазные капли имеет очень низкие лечебные дозы, сравнимые с лечебными дозами прототипа.
Может быть использован для гигиены, профилактики и лечения инфекционных воспалительных глазных заболеваний человека.
Заявленное техническое решение соответствует условию патентоспособности «новизна», предъявляемому к изобретениям, так как на дату предоставления заявочных материалов заявителем из исследованного уровня техники не выявлены источники, обладающие совокупность признаков, идентичными совокупности признаков заявленного технического решения.
Заявленное техническое решение соответствует условию патентоспособности «изобретательский уровень», предъявляемому к изобретениям, т. к. совокупность заявленных признаков обеспечивает получение неочевидных для специалиста технических результатов, превышающих технический результат прототипа. Заявителем из исследованного уровня техники не выявлены составы, в которых одновременно использовались бы заявленные компоненты в заявленном соотношении и в заявленном назначении, а именно - в составе противовоспалительных глазных капель. При этом соотношение компонентов было подобрано заявителем опытным путем.
Заявленное техническое решение соответствует условию патентоспособности «промышленная применимость» предъявляемому к изобретениям, т.к. заявленные капли могут быть получены посредством использования известных компонентов с применением стандартного оборудования и известных приемов.