КЛЕТОЧНЫЙ СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЭФФЕКТИВНОСТИ ДЕФИБРОТИДА

1. Способ определения активности контрольной партии дефибротида, включающий этапы:
выращивания культуры клеток млекопитающих;
инкубирования клеток с раствором, содержащим как минимум один цитотоксический агент и как минимум одну концентрацию дефибротида из контрольной партии;
определения жизнеспособности клеток после этапа инкубирования;
и
оценки эффективности контрольной партии дефибротида на основе измерения жизнеспособности клеток.
2. Способ по п. 1, при котором клетки инкубируют с цитотоксическим агентом и как минимум четырьмя различными концентрациями дефибротида из контрольной партии, а жизнеспособность клеток оценивают по каждой концентрации для определения кривой дозовой зависимости.
3. Способ по п. 1 или 2, дополнительно включающий сравнение жизнеспособности клеток для контрольной партии дефибротида с жизнеспособностью клеток для эталонной партии дефибротида; и расчета активности контрольной партии дефибротида на основе сравнения.
4. Способ по п. 3, при котором жизнеспособность клеток, измеренную для опытной партии дефибротида, сравнивают с калибровочной кривой, полученной на основе данных измерений жизнеспособности клеток при помощи эталонной партии дефибротида.
5. Способ по любому из пп. 1-4, при котором расчет жизнеспособности контрольной партии дефибротида включает определение соотношения данной жизнеспособности к жизнеспособности эталонной партии дефибротида.
6. Способ по любому из пп. 1-5, при котором клетки млекопитающего представляют собой эндотелиальные клетки человека, эпителиальные клетки человека, синусоидные эндотелиальные клетки печени человека, или клетки микроваскулярного эндотелия человека.
4
5
7. Способ по любому из пп. 1-6, при котором плотность клеток млекопитающего составляет от примерно 5×10 клеток/мл до примерно 5×10 клеток/мл.
8. Способ по любому из пп. 1-7, при котором цитотоксический агент представляет собой флударабин, 9-бета-D-арабинофураноза-2-фтораденин (F-Ara-А), или доксорубицин.
9. Способ по п. 8, при котором концентрация флударабина или F-Ara-A в растворе составляет от примерно 10 мкг/мл до примерно 50 мкг/мл или при котором концентрация доксорубицина составляет от примерно 0,1 мкг/мл до примерно 10 мкг/мл.
10. Способ по любому из пп. 1-9, при котором как минимум одна концентрация дефибротида из контрольной партии находится в пределах от примерно 1 мкг/мл до примерно 100 мкг/мл.
11. Способ по любому из пп. 1-10, при котором время инкубации составляет как минимум 24 часа, как минимум 48 часов, или как минимум 72 часа.
12. Способ по любому из пп. 1-11, при котором определение жизнеспособности клеток включает колориметрический анализ на основе восстановления тетразолиевых красителей.
13. Способ по п. 12, в котором тетразолиевый краситель представляет собой 3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-2,5-дифенилтетразол бромид или 2-(2-метокси-4-нитрофенил)-3-(4-нитрофенил)-5-(2,4-дисульфофенил)-2Н-тетразолий.
14. Способ по любому из пп. 1-13, при котором определение жизнеспособности клеток включает измерение абсорбции раствора после инкубирования с клетками.
15. Способ по любому из пп. 1-14, при котором контрольную партию дефибротида экстрагируют из тканей коров или свиней.