Особенности локального иммунитета больных эндометриоидными кистами яичников

© Коллектив авторов, 2008 УДК 618.11.14-002:612.017.1

ОСОБЕННОСТИ ЛОКАЛЬНОГО ИММУНИТЕТА БОЛЬНЫХ ЭНДОМЕТРИОИДНЫМИ КИСТАМИ ЯИЧНИКОВ

С.А. Гаспарян1, М.А. Лысенко1, И.А. Василенко2 'Ставропольская государственная медицинская академия 2Институт ревматологии РАМН

Поражение яичников - одна из наиболее часто встречающихся локализаций наружного генитального эндометриоза (ЭМ). В течение последнего десятилетия специалисты отмечают значительный рост этого патологического процесса у женщин репродуктивного возраста с ЭМ

- до 59% [1, 2, 3]. Однако, несмотря на большое число исследований, посвященных различным аспектам ЭМ, до сих пор остаются невыясненными многие вопросы его этиологии и патогенеза, особенности клинического течения в зависимости от локализации процесса, эффективность методов лечения и мониторинга.

Среди факторов, обусловливающих развитие и прогрессирование эндометриоидного процесса, до недавнего времени преимущественно выделяли наследственную предрасположенность и гормональный дисбаланс в организме женщины [6, 7]. Настоящий этап развития медицинской науки характеризуется повышенным вниманием к иммунологическим нарушениям, участвующим в возникновении, развитии и рецидивировании эндометриоидной болезни, в том числе и эндометриоидных кист яичников.

Исследование иммунитета, интерпретация полученных результатов в плане изучения реакции организма на то или иное воздействие (экологические факторы, патологические процессы) занимает далеко не последнее место в клинической практике. Является очевидным, что при оценке состояния иммунной системы основное внимание должно уделяться ее клеточным элементам, отличающимся друг от друга по происхождению, поверхностной структуре, функциям и морфологическим характеристикам. Анализ современной научной литературы показывает, что в системе адаптивного переноса клетки иммунной системы могут не только передавать информацию о регенераторных процессах, постстрессорных перестройках иммунного гомеостаза, но и быть посредниками в реакции других систем на любое стрессорное воздействие. Они аккумулируют, хранят и переносят информацию, как об адаптивных, так и о дизадаптив-ных процессах и могут активно воздействовать на организм вплоть до его гибели. Поэтому почти каждое заболевание, влияющее на клеточный состав крови, может быть оценено в виде изменений как количественных, так и морфологических показателей клеток.

В этом плане особое внимание уделяется поиску наиболее точных и информативных методов анализа диагностических параметров, разработке универсальных критериев оценки эффективности лечебных мероприятий. Этим требованиям в полной мере

отвечают новейшие лазерные оптические диагностические системы, которые не требуют расходных лабораторных материалов, являются существенно более доступными и позволяют получать результат практически в режиме реального времени, что дает возможность непосредственно в процессе лечения отслеживать динамику и вносить изменения в протокол лечебных мероприятий.

Целью настоящего исследования явилось изучение особенностей локального иммунитета больных эндометриоидными кистами яичников (ЭКЯ) с использованием показателей морфофункционального статуса и секреторной активности клеток перитонеальной жидкости (ПЖ).

Материал и методы. Проанализированы данные обследования 54 больных эндометриодными кистами яичников (средний возраст 28,7±2,9 лет) и 20 - лейо-миомой матки (ЛММ) (средний возраст 33,4±3,1 лет). Из 54 больных ЭКЯ - 32 (59,2%) были со 2-ой (средний диаметр кист 5,1±1,3 см), 22 (40,8%) - с 3-й стадией заболевания (средний диаметр кист 8,6±1,9 см).

Для определения нормативных значений изучены показатели 20 соматически здоровых женщин репродуктивного возраста: 22 - 49 лет (средний - 31,8±4,6 лет).

Оценку морфофункционального состояния клеток ПЖ осуществляли методом витальной компьютерной фазовой морфометрии (КФМ) на базе отечественного компьютерного лазерного фазово-интерференционного микроскопа “Цитоскан” (МГИРЭА, Москва) [4].

Комплексный алгоритм морфометрии клеток включал автоматическое определение заданных морфометрических показателей отдельных клеток иммунной системы (диаметр - D, периметр - Р, высота

- Н, площадь - А, объем - V), интегральный морфомет-рическай анализ клеточной популяции, построение цитограмм.

Определение содержания интерлейкина-6 (ИЛ-6), интерлейкина-8 (ИЛ-8), фактора некроза опухоли альфа (ФНО-а) и интерферона гамма (ИФН-у) в перитонеальной жидкости больных проводили твердофазным иммуноферментным методом с использованием диагностических тест-систем ООО “Цитокин” (г. Санкт-Петербург). В качестве стандарта для сравнения в каждой реакции служили рекомбинантные интерлейкины, входящие в состав набора.

При статистическом анализе данных использовали алгоритмы среды Ма^аЬ и математического пакета ‘^а^^са 6”. Стандартная обработка выборок включала подсчет значений средних арифметических величин, ошибок средних, а также величины диспер-

МЕДИЦИНСКИЙ ВЕСТНИК СЕВЕРНОГО КАВКАЗА, № 1, 2008

Таблица

Средние размерные параметры популяции клеток перитонеальной жидкости больных эндометриоидными кистами яичника

Клинические Диаметр Периметр Высота Площадь (S), Объем

группы (D), мкм (P), мкм (H), мкм мкм2 (V), мкм3

ЭКЯ (N = 54) 10,3±2,2 30,1±7,0 2,4±0,7 63,7±29,5 74,5±50,1

ЛММ (N = 20) 9,2±2,1* 29,5±7,3 2,1±0,4* 58,2±21,7* 58,3±21,7*

Примечание. Достоверность различий по отношению к контролю р<0,05.

сии, среднего квадратичного отклонения. Различия между сравниваемыми группами рассчитывали по критериям Вилкоксона-Манна-Уитни, Колмагорова-Смирнова или Стъюдента. Уровень значимости устанавливался равным 0,05.

Результаты и обсуждение. Для проведения объективной количественной оценки особенностей морфофункционального состояния клеточных факторов Пж больных ЭКЯ анализировали изменение их морфометрических параметров по сравнению с составом клеток ПЖ при ЛММ (табл.).

Установлено достоверное (р<0,05) увеличение средних значений диаметра, площади, высоты и объема фазовых изображений цитообъектов ПЖ больных ЭКЯ по сравнению с группой ЛММ на 11,9, 14,3, 9,4 и 27,8%, соответственно.

Необходимо отметить, что при компьютерной фазовой морфометрии исследователь имеет дело не с реальными размерами цитообъектов, а с величинами, характеризующими геометрию их фазовых образов. При этом размерные признаки фазового портрета содержат информацию не только о пространственнообъемных характеристиках клетки, но и ее оптических свойствах, в частности о внутриклеточной анизотропии. Величина показателя преломления, измеряемая в каждой точке цитообъекта, непосредственно зависит от концентрации, химического состава, агрегатного состояния внутриклеточного вещества, наличия или отсутствия органелл и включений. Изменение любого из указанных условий находит отражение в характерных локальных трансформациях фазового изображения клетки.

Известно, что ПЖ представляет собой циклически изменяющуюся динамическую систему. Поэтому даже незначительные изменения ее клеточных и гуморальных компонентов играют существенную роль в нарушениях механизмов репродуктивного процесса. Использование КФМ при исследовании локального иммунитета позволяет провести объективную количественную оценку состояния клеточной фракции ПЖ.

Полученные результаты продемонстрировали изменение клеточного состава ПЖ при ЭКЯ, связанные, по-видимому, с увеличением числа макрофагов, нейтрофилов и активированных лимфоцитов, обладающих большими размерами по сравнению с интак-тными неактивными лейкоцитарными клетками, присутствующими в данной биологической среде.

Наши данные согласуются с мнением других исследователей, указывающих на важность анализа клеточного состава перитонеальной жидкости, характеризующего степень участия локального иммунитета в патогенезе наружного генитального эндометриоза [5, 10].

Параллельно в образцах ПЖ обследованных больных определяли уровень провоспалительных цитоки-нов : ФНО-а, ИЛ-6, ИЛ-8, ИФН-у.

Рисунок иллюстрирует уровень цитокинов в ПЖ больных ЭКЯ и ЛММ.

Отмечено достоверное повышение содержания провоспалительных цитокинов в перитонеальной

жидкости больных ЭКЯ по сравнению с ЛММ. Так, уровень ИЛ-6 был увеличен практически в 5 раз, ИЛ-8

- в 2,5 раза, ФНО-а - в 2, а ИФН-у.- в 1,5 раза.

Цитокины являются посредниками межклеточных взаимодействий, регулируют кроветворение, иммунный ответ, клеточный цикл в различных тканях, участвуя во многих физиологических и патологических процессах [8].

ИЛ-6 является мультифункциональным цитокином: рецепторы для него обнаружены как на лимфоидных, так и нелимфоидных клетках. Он оказывает существенное влияние на многие органы и системы: кровь, печень, иммунную систему, обмен веществ; обладает пирогенными свойствами, участвует в регуляции функций эндокринной системы (стимулирует секрецию соматотропного гормона и подавляет продукцию тиреотропного гормона). Увеличение ИЛ-6, обладающего противовоспалительными и противоопухолевыми свойствами, может свидетельствовать об усилении воспалительной реакции при прогрессировании заболевания, повышении активности пролиферативных процессов, а также способствовать бесплодию, нарушая подвижность спермы. Кроме того, важно, что ИЛ-6 является антагонистом ФНО-а, соотношение уровней этих цитокинов у больных ЭКЯ может способствовать адекватной оценке нарушений их иммунореактивности, поскольку позволяет дифференцировать компенсированное или декомпенсированное состояние иммунной системы при прогрессировании патологического процесса. Некоторые специалисты отводят большое значение данному цитокину в патогенезе ЭКЯ [9, 11]. Учитывая, что у обследованных нами пациенток изменение уровня ИЛ-6 оказалось наиболее выраженным, мы полагаем, что этот показатель может служить критерием тяжести состояния больных эндометриоидными кистами яичника.

Зарегистрированные нами высокие концентрации ИЛ-8 также свидетельствуют об усилении пролиферативных процессов, активации мононуклеарных фагоцитов - продуцентов провоспалительных цито-кинов, которые играют важную роль в иммунопатологических процессах. Кроме того, ИЛ-8 является инду-цибельным белком. Его продукция начинается только после воздействия на клетки митогенов или эндогенных регуляторов: ИЛ-1, ИЛ-3, ФНО-а, ГМ-КСФ и др. Следовательно, увеличение его концентрации в определенной степени отражает характер причинноследственных взаимоотношений тех или иных звеньев цитокинового каскада на различных стадиях патологического процесса.

Значительное повышение ФНО-а характеризует цитотоксический потенциал фагоцитарных моноцитов ПЖ. А высокий уровень ИФН-у, по-видимому, способствует поддержанию неспецифическогого воспаления, и определяет регуляцию реакций адаптивного иммунитета. Среди цитокинов ИФН-у считается одним из основных активаторов макрофагов. Кроме того, важным аспектом его действия на имму-нокомпетентные клетки является поляризация Т-хел-перов в направлении ТМ. Поэтому высокий уровень

Рис. Уровень провоспалительных цитокинов (пк/мл) перитонеальной жидкости больных ЭКЯ и ЛММ.

Примечание. содержание ФНО-а (х10).

ИФН-у ассоциируется с эффективным иммунным ответом на основе реакций гиперчувствительности замедленного типа.

Заключение. Проведенные исследования позволили оценить функциональное состояние локального иммунитета при эндометриоидных кистах яичников как реакцию компенсированного напряжения. Данное состояние характеризуется изменением клеточного состава перитонеальной жидкости в сторону преобладания активированных макрофагов, моноцитов и нейтрофилов, повышением хемотаксической активности нейтрофильных фагоцитов. Регуляцию этих процессов осуществляют цитокины, уровень которых при ЭКЯ возрастает в несколько раз. Продуцируемые цитокины обуславливают активность локальных процессов, связанных с апоптозом, ангиогенезом, воспалительными реакциями, определяя патогенетические механизмы прогрессирования заболевания. Не исключено, что степень нарушения цитокиново-го профиля может находиться в прямой зависимости от степени тяжести ЭКЯ. Уровень ИЛ-6 адекватно отражает степень иммунологических нарушений при прогрессировании ЭКЯ, являясь патогенетическим критерием диагностики данного патологического процесса.

ОСОБЕННОСТИ ЛОКАЛЬНОГО ИММУНИТЕТА БОЛЬНЫХ ЭНДОМЕТРИОИДНЫМИ КИСТАМИ ЯИЧНИКОВ

С.А. ГАСПАРЯН, М.А. ЛЫСЕНКО,

И.А. ВАСИЛЕНКО

Целью настоящей работы явилось изучение особенностей локального иммунитета больных эндометриоидными кистами яичников (ЭКЯ) с использованием показателей морфофункционального статуса и секреторной активности клеток перитонеальной жидкости (ПЖ). Оценку морфофункционального состояния клеток ПЖ осуществляли методом витальной компьютерной фазовой морфометрии, содержание цитокинов (интерлейкина-6, 8, фактора некроза опухоли альфа и интерферона гамма) определяли твердофазным иммуно-ферментным методом. Установлено изменение клеточного состава ПЖ в сторону преобладания активированных макрофагов, моноцитов и нейтрофилов, повышение хемотаксической активности нейтрофильных фагоцитов, высокий уровень провоспалительных цитокинов, особенно интерлейкина 6.

Ключевые слова: эндометриоидные кисты яичников, перитонеальная жидкость, клетки иммунной системы, провос-палительные цитокины

Литература

1. Адамян, Л.В. Генитальный эндометриоз. Современный взгляд на проблему / Л.В. Адамян, С.А. Гаспарян. - Ставрополь, 20О4. - 228 с.

2. Гормональные и иммунологические нарушения в формировании патологии эндометрия у женщин с наружным генитальным эндометриозом / Е.А. Михнина, Н.И. Давыдова, Н.М.Калинина, В.Н.Эллиниди // Акушерство и женские болезни. - 2006. - Т. IV,- №4. - С. 87-100.

3. Грищенко, В.И. Гормонально-иммунологический гомеостаз у больных эндометриозом / В.И. Грищенко, Н.А. Щербина, Л.В. Потапова // Международный медицинский журнал. - 2001. - №4. - С. 29-32.

4. Новая технология прижизненной компьютерной фазовой микроскопии: диагностические возможности и перспективы / И.А. Василенко, В.Н. Шабалин, В.П. Ты-чинский [и др.] // Радиоэлектроника в медицинской диагностике (оценка функций и состояния организма).

- 1995. - С. 164-169.

5. Параметры функционального состояния лимфоцитов перитонеальной жидкости у женщин с наружным генитальным эндометриозом / Н.Ю. Сотникова, Ю.С. Анци-фирова, Л.В. Посисеева [и др.] // Иммунология. - 2000.

- №3. - С. 53-56.

6. Пашкова, А.В. Принципы терапии эндометриоза яичников / А.В. Пашкова, А.А. Соломатина // Российский вестник акушера-гинеколога. - 2004. - Т 4. - №3. - С. 17-22.

7. Поморцев, А.В. Гормональный профиль больных наружным генитальным эндометриозом в различные фазы менструального цикла / А.В. Поморцев, Г.В. Гудков, А.М. Дегтярев // Акушерство и гинекология. - 2002. - №1. - С. 35-40.

8. Солодовникова, Н.Г Роль цитокинов в развитии наружного генитального эндометриоза / Н.Г. Солодовникова, Д.А. Ниаури // Вестник СПбГУ. 2006. - Вып. 2. - C. 115122.

9. Cytokine profiles in serum and peritoneal fluid from infertile women with and without endometriosis / E. Kalu, N. Sumar. T. Giannopoulos, P Patel [ et al.] // J. Obstet. Gynaecol. Res.

- 2007. - Vol. 33. - №.4. - P. 490-495.

10. Endometriosis markers: immunologic alterations as diagnostic indicators for endometriosis / Н.С. Bohler, C. Ger-cel-Taylor, D.D. Taylor, B.A. Lessey // Reprod. Sci. - 2007.

- Vol. 14. - №.6. - P. 6595-6604.

11. Riley, C.F. Inflammatory markers in endometriosis: reduced peritoneal neutrophil response in minimal endometriosis / C.F. Riley, M.N. Moen, V.Videm // Acta Obstet. Gynecol. Scand. - 2007. - Vol. 86. - №7. - P 877-881.

FEATURES OF LOCAL IMMUNITY OF PATIENTS WITH ENDOMETRIOID CYST OF OVARIES

GASPARYAN S.A., LYSENKO M.A., VASILENKO I.A.

The purpose of the present work was studying features of local immunity of patients with endometrioid cysts of ovaries with use of parameters of the morphofunctional status and secretory activity of peritoneal liquid (PL) cells. An estimation of the morphofunctional condition of PL cells was carried out by a method of vital computer phase morphometry; the contents of cytokines (interleukin-6, 8, the factor of alpha-tumour necrosis and gam-ma-interferon) were determined by solid-phase immunoferment method. Change of PL cellular structure to the prevalence of the activated macrophages, monocytus and neurophiles, increase of haemotoxic activity of neutrophilic phagocytes, a high level of proinflammatory cytokines, especially interleukin-6 were established.

Key words: endometrioid cysts of ovaries, peritoneal liquid, cells of immune system, proinflammatory cytokines