КОМПОЗИЦИИ И СПОСОБЫ УСИЛЕНИЯ ЭКСПРЕССИИ ГЕНА PKLR

1. Кассета экспрессии, содержащая полинуклеотидную последовательность, содержащую следующее в 5’-3’-направлении:
a) промоторную последовательность;
b) последовательность, кодирующую продукт гена; и
c) сигнал экспорта рибонуклеиновой кислоты (РНК),
где промоторная последовательность функционально связана с последовательностью, кодирующей полипептид пируваткиназы.
2. Кассета экспрессии по п. 1, где промотор представляет собой промотор фосфоглицераткиназы (PGK).
3. Кассета экспрессии по п. 1 или 2, где продукт гена представляет собой терапевтический продукт гена.
4. Кассета экспрессии по п. 3, где терапевтический продукт гена представляет собой полипептид пируваткиназы (PK), необязательно полипептид пируваткиназы печени и эритроцитов (PKLR).
5. Кассета экспрессии по любому из пп. 1-4, где последовательность, кодирующая продукт гена, является кодон-оптимизированной.
6. Кассета экспрессии по любому из пп. 1-5, где сигнал экспорта РНК представляет собой мутантный посттранскрипционный регуляторный элемент вируса гепатита сурков (Wpre).
7. Кассета экспрессии по п. 6, где мутантный Wpre представляет собой химерный Wpre, содержащий последовательность, характеризующуюся по меньшей мере 80% идентичностью с SEQ ID NО: 1.
8. Кассета экспрессии по любому из пп. 1-7, дополнительно содержащая одну или более энхансерных последовательностей.
9. Кассета экспрессии по любому из пп. 1-8, дополнительно содержащая последовательность полипуринового тракта (PPT) или последовательность сигнала полиаденилирования (polyA).
10. Кассета экспрессии по любому из пп. 1-9, дополнительно содержащая одну или более из следующих последовательностей:
i) последовательность сигнала упаковки;
ii) усеченную последовательность Gag;
iii) Rev-чувствительный элемент (RRE);
iv) центральный полипуриновый тракт (cPPT);
v) центральную терминальную последовательность (CTS) и
vi) элемент последовательности (USE), расположенный против хода транскрипции, необязательно из вируса обезьян 40 (SV40-USE).
11. Кассета экспрессии по любому из пп. 1-10, дополнительно содержащая последовательности длинного концевого повтора 5’- и 3’-конца.
12. Рекомбинантный вектор доставки гена, содержащий кассету экспрессии по любому из пп. 1-11.
13. Рекомбинантный вектор доставки гена по п. 12, где рекомбинантный вектор доставки гена представляет собой вирус или вирусный вектор.
14. Рекомбинантный вектор доставки гена по п. 13, где вирус или вирусный вектор представляет собой лентивирус (LV).
15. Клетка, содержащая кассету экспрессии по любому из пп. 1-11 или вектор доставки гена по любому из пп. 12-14.
16. Клетка по п. 15, где клетка представляет собой гемопоэтическую стволовую клетку.
17. Клетка по п. 15, где клетка представляет собой коммитированную гемопоэтическую эритроидную клетку-предшественник.
18. Фармацевтическая композиция, содержащая фармацевтически приемлемый наполнитель и рекомбинантный вектор доставки гена по любому из пп. 12-14 или клетку по любому из пп. 15-17.
19. Способ лечения или предупреждения заболевания или нарушения у субъекта, нуждающегося в этом, предусматривающий введение субъекту фармацевтической композиции по п. 18.
20. Способ по п. 19, где заболевание или нарушение представляет собой недостаточность пируваткиназы (PKD), а продукт гена представляет собой полипептид пируваткиназы (PK), необязательно полипептид пируваткиназы печени и эритроцитов (PKLR).
21. Способ по п. 19 или 20, где фармацевтическая композиция содержит рекомбинантный вектор доставки гена.
22. Способ по п. 19 или 20, где фармацевтическая композиция содержит клетку.
23. Способ по п. 22, где клетка является аутологической по отношению к субъекту.
24. Способ по п. 22, где клетка является аллогенной по отношению к субъекту.
25. Способ экспрессии трансгена в эритроидных клетках, предусматривающий приведение одной или более эритроидных клеток в контакт с эффективным количеством рекомбинантного вирусного вектора, где вектор содержит промотор гена фосфоглицераткиназы человека, кодон-оптимизированный вариант трансгена на основе кДНК пируваткиназы печени и эритроцитов (PKLR) человека и мутантный посттранскрипционный регуляторный элемент вируса гепатита сурков, где после указанного приведения в контакт PKLR экспрессируется на выявляемых уровнях в одной или более эритроидных клетках.