Диагностическое значение стероидных профилей биологических жидкостей у больных c синдромом Иценко-Кушинга

Диагностическое значение стероидных профилей биологических жидкостей у больных c синдромом Иценко—Кушинга

К.м.н. З.Р. ШАФИГУЛЛИНА1, проф. Л.И. ВЕЛИКАНОВА1*, проф. Н.В. ВОРОХОБИНА1, к.м.н. А.А. ЛИСИЦЫН1, Е.А. КУХИАНИДЗЕ1, к.х.н. Е.Г. СТРЕЛЬНИКОВА1, д.х.н. В.Г. ПОВАРОВ2, Н.Ф. ТЕЙЛОР 3

1ГБОУ ВПО «Северо-Западный государственный медицинский университет им. И.И. Мечникова» Минздрава России, Санкт-Петербург, Россия; 2ФГБОУ ВО «Санкт-Петербургский государственный университет», Санкт-Петербург, Россия; 3Госпиталь Королевского Колледжа, Лондон, Великобритания

Стероидные профили изучены у 49 больных c синдромом Иценко—Кушинга. Установлены дифференциально-диагностические критерии и особенности метаболизма стероидных гормонов при этом синдроме, обусловленном адренокорти-кальной аденомой и адренокортикальным раком (АКР), путем сочетания классических тестов и исследования стероидных профилей методами ВЭЖХ и газовой хромато-масс-спектрометрии. У 22,4% больных c синдромом Иценко—Кушинга установлены признаки АКР, основными критериями которого были увеличение 11-дезоксикортизола в крови (больше 20 нг/мл), экскреции с мочой 18-ОН-кортикостерона, метаболитов глюкокортикоидов и прегненов. У 8,2% пациентов с синдромом Иценко—Кушинга дополнительными критериями АКР было увеличение экскреции с мочой андрогенов и их метаболитов.

Ключевые слова: синдром Иценко—Кушинга, адренокарцинома, высокоэффективная жидкостная хроматография, газовая хромато-масс-спектрометрия.

The diagnostical importance of steroid profiles of biological fluids of patients with Cushing's syndrome

Z.R. SHAFIGULLINA, L.I. VELIKANOVA, N.V. VOROHOBINA, A.A. LISICYN, E.A. KUHIANIDZE, E.G. STRELNIKOVA, V.G. POVAROV, N.F. TALOR

1North-Western State Medical University named after I.I. Mechnikov, St. Petersburg, Russia; 2St. Petersburg State University, St. Petersburg, Russia; 3King's College Hospital, London, Great Britain

Steroid profiles of 49 patients having Cushing's syndrome were investigated. Differential diagnostic criteria of Cushing's syndrome with adrenocortical adenoma and adrenocarcinoma and features of steroid hormones metabolism were established by combination of classical tests and steroid profiles investigation using HPLC and gas chromatography — mass-spectrometry. The adenocarcinoma was diagnosed for 22,4% of patients having Cushing's syndrome and the main biochemical criteria were the increasing of 11-deoxycortisol in blood (>20 ng/ml), the excretion of 18-OH-corticosterone and metabolites of glucocorticoids and pregnenes, 8,2% of patients having Cushing's syndrome had additionally increased androgens metabolites excretion.

Keywords: Cushing's syndrome, adenocarcinoma, high-performance liquid chromatography, gas chromatography — mass-spec-trometry.

doi: 10.14341/probl20156144-8

Несмотря на большие возможности верификации редких и труднодиагностируемых заболеваний надпочечников, остается ряд вопросов в диагностике различных форм синдрома Иценко—Кушинга (СИК), определении ракового потенциала у больных с гиперкортицизмом [1—4]. Определение экскреции свободного кортизола с мочой (СКМ), свободного кортизола в слюне в 23 ч (СКС), уровней кортизола (К) и адренокортикотропного гормона (АКТГ) в плазме в ходе пробы с дексаметазоном являются стандартными тестами, используемыми в диагностике СИК [5—8]. Специфичность и чувствительность перечисленных тестов составляет 85—95%. Кроме того, отмечено повышение СКМ при всех формах эндогенного функционального и органического гиперкортицизма [9]. Ряд авторов

© Коллектив авторов, 2015

Сведения об авторах:

Великанова Людмила Иосифовна — д.биол.н., проф., зав. НИЛ хроматографии ГБОУ ВПО «Северо-Западный государственный медицинский университет им. И.И. Мечникова», Санкт-Петербург, Россия e-mail: velikanovali@hotbox.ru

Шафигуллина Зульфия Рифгатовна — к.м.н., ст.н.с. НИИ эндокринологии, зав. эндокринологическим отделением; Ворохобина Наталья Владимировна — д.м.н., проф., зав. каф. эндокринологии им. акад. В.Г. Баранова; Лисицын Александр Александрович — к.м.н., доц. каф. факультетской хирургии им. И.И. Грекова; Кухианидзе Екатерина Акакиевна — асп. каф. эндокринологии им. акад. В.Г. Баранова;

Стрельникова Елена Геннадьевна — к.хим.н., ст.н.с. НИЛ хроматографии;

Поваров Владимир Глебович — д.хим.н., проф. каф. аналитической химии Санкт-Петербургского государственного университета;

Норман Ф Тейлор — проф., рук. лаб. стероидов отделения клинической биохимии Госпиталя Королевского Колледжа, Лондон, Великобритания

рекомендуют определять экскрецию свободного кортизола (UFF) и кортизона (UFE) с мочой методами хроматографии, чтобы снизить аналитические ошибки и повысить чувствительность и специфичность диагностики СИК [10, 11]. Выяснение особенностей стероидогенеза позволяет проводить дифференциальную диагностику доброкачественных и злокачественных новообразований коры надпочечников. По мнению ряда авторов [10], значительное повышение уровней в крови 11-дезокси-кортизола (S) или 11-дезоксикортикостерона (DOC) является важным критерием риска малигнизации опухолей коры надпочечников [10]. Другие авторы [3, 12, 13] считают, что характер стероидного профиля мочи является наиболее значимым для диагностики рака коркового слоя надпочечников. При исследовании стероидного профиля мочи (СПМ) у больных адренокортикальным раком (АКР) с помощью газовой хромато-масс-спектрометрии (ГХ/ МС) отмечено повышение экскреции с мочой метаболитов андрогенов, глюкокортикоидов и прегне-нов, или тетрагидро-11-дезоксикортикостерона (THDOC) и тетрагидро-11-дезоксикортизола (THS) [3, 14]. Таким образом, исследование СПМ является перспективным направлением в диагностике злокачественного потенциала образований надпочечников. В связи с этим представляется актуальным сочетание классических тестов с исследованием стероидных профилей для улучшения диагностики СИК и поиска критериев злокачественности образований коры надпочечников. Изучение данных вопросов необходимо для усовершенствования диагностики и выработки адекватной терапии пациентов c различными формами гиперкортицизма.

Материал и методы

Обследованы 49 больных с СИК в возрасте от 28 до 58 лет (средний возраст 44,5±6,4 года), среди которых у 11 пациентов при гистологическом исследовании удаленной опухоли был верифицирован злокачественный характер образования коры надпочечников. Контрольную группу составили 25 здоровых лиц в возрасте от 22 до 45 лет (средний возраст 33,2±5,5 года). Определяли уровни АКТГ, К [в 9 ч. утра (Ку) и в 21 ч (Кв)], дегидроэпиандростерона-сульфата (DEAS) в сыворотке крови и СКС. Проводили пробы с 1 мг и 2 мг дексаметазона. Методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) определяли уровни кортизола (F), кортизона (Е), кортикостерона (В), 11-дегидрокортикосте-рона (А), 18-гидроксикортикостерона (18-ОНВ), DOC и S в крови, экскрецию с мочой UFF, UFE, 18-ОНВ, 6ß-OHF. Методом ГХ/МС определяли экскрецию стероидов с мочой [15, 16]. СПМ были получены на газовом хромато-масс-спектрометре SHIMADZU GCMS - QP2010 ULTRA в ресурсном

центре «Методы анализа состава веществ» Санкт-Петербургского государственного университета (дир. — д.техн.н. А.Л. Москвин). С помощью этой методики идентифицировано 65 стероидов у больных с различными новообразованиями коры надпочечников.

Статистическая обработка данных осуществлялась с использованием программной системы Statis-tica for Windows (версия У). Результаты представлены в виде M±m, где M — арифметическое среднее значение, а m — стандартная ошибка среднего. Сравнение средних значений количественных показателей осуществлялось c использованием непараметрического критерия Манна—Уитни. Статистически значимым считался критерий достоверности р<0,05.

Результаты

У больных с СИК с адренокортикальной аденомой (АКА) выявлдены более высокие уровни Ку, Кв и СКС (>14 нмоль/л), чем у здоровых лиц. Уровни К при проведении проб с 1 мг и 2 мг дексаметазона (К ) превышали 200 нмоль/л (табл. 1). У больных с СИК с АКР уровни К , К и К в крови были выше,

J ^ у' в дмт ^ '

чем у здоровых лиц и у больных с СИК с АКА (см. табл. 1). Уровень в крови дегидроэпиандростерона-сульфата (DEAS) у У пациентов с АКР (0,3±0,2 мкг/ мл; р<0,05) был ниже, а у 4 больных с АКР (9,5±1,5 мкг/мл) — выше, чем у здоровых лиц (1,9± 0,4 мкг/ мл) (р<0,01).

Методом ВЭЖХ установлены дополнительные критерии СИК: увеличение уровней B и S в крови, соотношений F/E, В/А, UFF/UFE, снижение соотношения 6ß-OHF/UFF (табл. 2). Экскреция с мочой UFF и UFE была выше, чем у здоровых лиц, но ниже, чем у больных СИК с АКР. При проведении пробы с дексаметазоном экскреция с мочой UFF (252±109 мкг/сут) и UFE (209±63 мкг/сут) была выше верхних референтных значений, а уровни В (6,1±1,4 нг/мл) и S (19,1±1,9 нг/мл) в крови снижались меньше чем на 50% как при АКА, так и при АКР. У больных с АКР в отличие от пациентов с АКА были повышены уровни DOC и 18-ОНВ в крови, уровень S в крови превышал 20 нг/мл, была увеличена экскреция с мочой 18-ОНВ и 6ß-OHF. Таким образом, по данным ВЭЖХ получены следующие критерии злокачественности новообразования коры надпочечников у больных с СИК: S>20 нг/мл, D0C>5,0 нг/мл, 18-ОНВ>5 нг/мл, (UFF+UFE)>500 мкг/сут, 6ß^HF>500 мкг/сут, 18-ОНВ> 50 мкг/сут.

При исследовании стероидных профилей мочи методом ГХ/МС у больных с АКА и у У пациентов с АКР отмечено повышение экскреции с мочой те-трагидрокортизола (THF), allo-THF, тетрагидро-кортизона (THE), тетрагидрокортикостерона (ТНВ), THS и соотношений THF/THE, (THF+allo-

Таблица 1. Состояние гипофизарно-адреналовой системы у больных с синдромом Иценко—Кушинга (СИК) с адренокортикальной аденомой (АКА) и с адренокортикальным раком (АКР) по данным стандартных тестов

Показатель

Группы

СИК, AEA

СИК, AOT

Здоровые люди

AOT в 9 ч, пг/мл 23,5±3,7 3,2±2,2** 29,5±2,3

Кортизол в 9 ч, нмоль/л 678±48*** 920±217** 384±17

Кортизол в 21 ч, нмоль/л 610±56*** 936±257** 144±6,5

Кортизол иа пробе с 1 мг дексаметазона, нмоль/л 401± 61*** 652±182* 45±5,3

Кортизол иа пробе с 2 мг дексаметазона, нмоль/л 549±58*** 652±104*** 39,6±2,1

Свободный кортизол в слюне, нмоль/л 21,7±3,7*** 25,5±4,2*** 3,7±0,5

Примечание. Здесь и в табл. 2: * — р<0,05, ** — ^<0,01, *** — p<0,0001 при сравнении с группой здоровых лиц.

Таблица 2. Содержание кортикостероидов в сыворотке крови и моче у больных с синдромом Иценко—Кушинга (СИК) с адренокор-тикальной аденомой (АКА) и адренокортикальным раком (АКР) по данным высокоэффективной жидкостной хроматографии

Группа

Показатель здоровые люди

18-гидроксикортикостерон, нг/мл 0,7±0,1 2,6±1,5 9,7± ,6

Кортизол, нг/мл 82,7±4,3 164±26*** 184±45**

Кортизон, нг/мл 19,9±0,9 24,9±3,1* 22,7±1,6

11-дегидрокортикостерон, нг/мл 1,8±0,2 3,5±1,1 4,5±1,7

Кортикостерон, нг/мл 2,5±0,1 11,8±2,9*** 5,3±1,1 *

11-дезоксикортикостерон, нг/мл 1,7±0,1 5,8±3,1 6,1±2,3*

11-дезоксикортизол, нг/мл 1,3±0,1 12,0±2,3** 30,6±8,1*

Кортизол/кортизон 4,3±0,2 7,5±0,9** 8,4±1,9**

Кортикостерон/11-дегидрокортикостерон 1,6± 0,1 5,5±1,8** 1,1±0,1

бр-гидроксикортизол мочи (6ßOHF), мкг/сут 141±16 147±53 1081±256*

18-гидроксикортико-стерон мочи, мкг/сут 14,9±1,1 51±13 78±18**

Свободный кортизол мочи (UFF), мкг/сут 19,9±1,3 185±44*** 313±64**

Свободный кортизон мочи (UFE), мкг/сут 53,0±2,7 183±26*** 327±127**

UFF/UFE 0,4±0,1 1,3±0,3*** 0,8±0,2**

6ßOHF/UFF 6,8±0,6 2,2±0,6*** 4,5±1,9

THF)/THE, снижение уровня дегидроэпиандросте-рона (DEA) и соотношения allo-THF/THF по сравнению с группой здоровых лиц (табл. 3). У больных с АКР в отличие от больных с АКА установлено повышение экскреции с мочой прегнантриола (Р3), 11 -оксопрегнантриола (11-ONP3), прегнендиола (DP2), прегнентриола (dP3), 3a,16-OHDP2 (см. табл. 3). Кроме этих стероидов, у больных с АКР определялись прегнены, отсутствующие у здоровых лиц и больных с АКА - 3P,16-OHDP2 (1419±812 мкг/сут), 3PDP3 (343± 166 мкг/сут), 16-ОН-прегненолон (555±239 мкг/сут), 21-ОН-прегненолон (414± 115 мкг/сут). У больных с АКР соотношение 3a,16-OHDP2/3P,16-OHDP2 было меньше 6,0, а соотношение 3aDP3/3pDP3 меньше 10, что является признаком злокачественности опухоли коры надпочечника. У 4 больных СИК с АКР установлены дополнительные признаки злокачественности с повышением экскреции с мочой ан-дрогенов и их метаболитов: DEA (31625±12089 мкг/ сут; р<0,008), 17р-андростендиола (4250±1627 мкг/ сут; р<0,008), 16-OHDEA (12245±4406 мкг/сут; р<0,008), этиохоланолона (6237± 1965 мкг/сут; р<0,04), андростентриола (8764±3445 мкг/сут;

р<0,008), 16-оксоандростендиола (1546+799 мкг/ сут; р<0,001).

Таким образом, исследование стероидных профилей методами ВЭЖХ и ГХ/МС дает возможность установить признаки злокачественности новообразований коры надпочечников у больных СИК до проведения хирургического лечения.

Выводы

1. Установлены гормональные критерии синдрома Иценко—Кушинга с учетом данных ВЭЖХ и газовой хромато-масс-спектрометрии: увеличение свободного кортизола в слюне (>14 нмоль/л), уровней кортизола, кортикостерона и 11-дезоксикорти-зола в крови, экскреции с мочой свободного корти-зола и кортизона, метаболитов глюкокортикоидных гормонов и соотношений UFF/UFE, THF/THE, (THF+alloTHF)/THE, снижение соотношений alloTHF/THF и 6ß-OHF/UFF.

2. При проведении пробы с 2 мг дексаметазона у больных с синдромом Иценко—Кушинга получены значения уровня кортизола в крови >200 нмоль/л, экскреции свободного кортизола и кортизона с мо-

Таблица 3. Экскреция стероидов с мочой у больных с синдромом Иценко-Кушинга (СИК) с адренокортикальной аденомой (АКА) и с адренокортикальным раком (АКР) по данным газовой хромато-масс-спектрометрии

Наименование стероидов Группа (М±т), мкг/с

здоровые люди

Андростерон 1010+198 210+61* 448+76

Этиохоланолон 854+218 533+185 716+163

Андростендиол-1713 72+16 126+25 25+15

Дегидроэпиандростерон (DEA) 186+49 47+35* 19+8**

16-гидрокси^ЕА 179+52 286+124 330+121

Прегнандиол 610+175 1093+422 3309+1060*

Прегнантриол 492+58 745+202 2101+520*

Анростентриол 292+75 1159+521* 1209+913

11-оксо-прегнантриол 16,6+3,1 141+ 97 376+ 54**

Тетрагидро-11-дезоксикортизол 29+17 329+151* 1513+537**

Прегнендиол 230+65 374+ 133 2007+748**

5-Прегнен, 3а,16а,20а-триол 140+41 392+154 1869+818**

Прегнентриол 248+44 261+29 1039+430*

Тетрагидрокортизон (THE) 1620+342 5933+1825* 5275+788**

Тетрагидрокортикостерон 48+21 481+85* 629+136**

а11о-тетрагидрокортикостерон 75+24 252+130 306+87

Тетрагидрокортизол (THF) 560+110 5672+1768* 5334+1179**

a11o-THF 630+134 2138+813* 1642+386**

11-дегидрокортикостерон 109+ 23 207+93 81+38

(ТОТ+а11оЛОТ)/ТНЕ 0,7+0,1 1,2+0,1* 1,4+0,3*

ТОТ/ТНЕ 0,36+0,03 0,9+0,1** 1,1+0,2**

a11o-THF/THF 1,4+0,2 0,43+0,07* 0,42+0,12*

Примечание. * — р<0,05, ** — ^<0,01 по сравнению с группой здоровых лиц.

чой выше верхних референтных значений, снижение уровней кортикостерона и 11-дезоксикортизола в крови менее чем на 50%.

3. У больных с синдромом Иценко—Кушинга с адренокортикальным раком в отличие от пациентов с доброкачественной кортикостеромой установлено повышение уровней 11-дезоксикортикостерона и 18-ОН-кортикостерона в крови, экскреции с мочой 18-ОН-кортикостерона, 6р-ОН-кортизола, пре-гнандиола, прегнантриола, прегнендиола, 3а,17,20-прегнентриола и 3а,16,20-прегнентриола, уровень 11-дезоксикортизола в крови > 20 нг/мл и экскреция с мочой ТЖ >1000 мкг/сут. Увеличение экскреции с мочой дегидроэпиандростерона и его метаболитов установлено у 4 больных с адренокорти-кальным раком.

4. У больных с синдромом Иценко—Кушинга с адренокортикальным раком методом газовой хромато-масс-спектрометрии обнаружены стероиды, не выявляемые у здоровых и больных с доброкачественной кортикостеромой: 3р,16,20-прегнен-триол, 3р,17,20-прегнентриол, 16-ОН-прегненолон, 21-ОН-прегненолон; установлены соотношения 3а,16,20-прегнентриол/3р,16,20-прегнентриол <6,0

и 3а,17,20-прегнентриол/3р,17,20-прегнентриол <15.

Авторы статьи выражают благодарность ресурсному центру «Методы анализа состава вещества» СПбГУ за возможность проведения газохроматогра-фических исследований на хромато-масс-спектрометре SHIMADZU GCMS - QP2010 ULTRA.

Информация о финансировании и конфликте

интересов

Участие авторов: Концепция и дизайн исследования — Ворохобина Н.В., Великанова Л.И.

Сбор и обработка материала — Шафигуллина З.Р., Лисицын А.А., Кухианидзе Е.А., Стрельникова Е.Г., Поваров В.Г., Тейлор Н.Ф.

Статистическая обработка данных — Великанова Л.И.

Написание текста — Великанова Л.И., Шафи-гуллина З.Р., Лисицын А.А.

Редактирование — Ворохобина Н.В.

Авторы декларируют отсутствие явных и потенциальных конфликтов интересов, связанных с публикацией настоящей статьи.

ЛИТЕРАТУРА

1. Мельниченко Г.А., Стилиди И.С, Алексеев Б.Я., и др. Федеральные клинические рекомендации по диагностике и лечению адренокортикального рака. // проблемы эндокринологии. - 2014. - т. 60. - №2 - с. 51-65. [Me1nichenko GA, Sti1idi IS, A1ekseev BY, et a1. Federa1 c1inica1 practice guide1ines on the diagnostics and treatment of adrenocortica1 cancer. Probl E«dokri«ol(Mosk). 2014;60(2):51. (In Russ.)]

doi: 10.14341/prob1201460251-67.

2. Великанова Л.И., Ворохобина Н.В., Шаффигулина З.Р., Крихели И.О. Особенности лабораторной диагностики субклинического синдрома Иценко—Кушинга. Клинико-лабо-раторный консилиум. - 2006. - №9-10 - с. 91-96. [Ve1ikanova LI, Vorokhobina NV, Shaffigu1ina ZR, Krikhe1i IO Osobennosti 1aboratornoy diagnostiki subk1inicheskogo sindroma Itsenko— Kushinga. Kli«iko-laborator«yy ko«silium. 2006;(10-11):91—96. (In Russ.)].

3. Ar1t W, Bieh1 M, Tay1or AE, et a1. Urine steroid metabo1omics as a biomarker too1 for detecting malignancy in adrena1 tumors. J Cli« E«docri«olMetab. 2011;96(12):3775-3784.

doi: 10.1210/jc.2011-1565.

4. Honour JW. Urinary steroid profi1e ana1ysis. Cli« Chim Acta. 2001;313(1-2):45-50.

5. Белая Ж.Е., Ильин А.В., Мельниченко Г.А., и др. Определение уровня кортизола в слюне на автоматическом иммуно-химическом анализаторе COBAS E601 («ROCHE») для диагностики эндогенного гиперкортицизма среди пациентов с ожирением. // Клиническая лабораторная диагностика. - 2011. - №12 - С. 7-12. [Be1aya JY, I1iyn AV, Me1nitchenko GA, et a1. The sa1iva cortiso1 1eve1 test using the automatic immu-nochemica1 ana1yzer Cobas e601 (ROCHE) to diagnose endogenous hypercortica1ism in patients with obesity. Kli« Lab Diag«. 2011;(12):7-12. (in Russ.)]

6. Kageyama K, Oki Y, Sakihara S, et a1. Eva1uation of the diagnostic criteria for cushing's disease in Japan [Review]. E«docr J. 2013:127-135.

doi: 10.1507/endocrj.EJ12-0299

7. Nieman LK, Bi11er BM, Find1ing JW, et a1. The diagnosis of Cushing's syndrome: an Endocrine Society C1inica1 Practice Guide1ine. J Cli« E«docri«olMetab. 2008;93(5):1526-1540.

doi: 10.1210/jc.2008-0125

8. Viardot A, Huber P, Puder JJ, et a1. Reproducibi1ity of nighttime sa1ivary cortiso1 and its use in the diagnosis of hypercortiso1ism compared with urinary free cortiso1 and overnight dexamethasone suppression test. J Cli« E«docri«olMetab. 2005;90(10):5730-5736. doi: 10.1210/jc.2004-2264

9. Кубачева К.К., Великанова Л.И., Ворохобина Н.В. и др. Функциональный и органический гиперкортицизм у юно-

шей с различным индексом массы тела. Вестник Северо-Западного государственного медицинского университета им. И.И. Мечникова. - 2010. - Т. 2. - №1 - С. 22-27. [Kubacheva KK, Ve1icanova LI, Vorokhobina NV, et a1. The functiona1 and organic hypercorticism in overweight young patients. Vest«ik Severo-Zapad«ogo gosudarstve««ogo meditsi«skogo u«iversiteta im. I.I. Mech«ikova. 2010;2(1):22-27. (in Russ.)]

10. Великанова Л.И., Шафигуллина З.Р., Ворохобина Н.В., и др. Диагностическое значение высокоэффективной жидкостной хроматографии кортикостероидов при заболеваниях гипофизарно-надпочечниковой системы. // Проблемы эндокринологии. - 2005. - Т. 51. - №6 - С. 9-11. [Ve1ikano-va LI, Shafigu11ina ZR, Vorokhobina NV, et a1. Diagnostic va1ue of high performance 1iquid chromatography of corticosteroids in diseases of the pituitary-system. Problems of E«docri«ology. 2005; 51(6):9-11. (in Russ.)].

11. Tay1or RL, Machacek D, Singh RJ. Va1idation of a high-throughput 1iquid chromatography-tandem mass spectrometry method for urinary cortiso1 and cortisone. Cli« Chem. 2002;48(9):1511-1519.

12. Krone N, Hughes BA, Lavery GG, et a1. Gas chromatography/ mass spectrometry (GS/MS) remains a pre-eminent discovery too1 in c1inica1 steroid investigations even in the era of fast 1iquid chromatography tandem mass spectrometry (LC/MS/MS). The Journal of Steroid Biochemistry a«d Molecular Biology. 2010;121 (3-5):496-504.

doi: 10.1016/j.jsbmb.2010.04.010.

13. Tiu SC, Chan AO, Tay1or NF, et a1. Use of urinary steroid profi1-ing for diagnosing and monitoring adrenocortica1 tumours. Ho«g Ko«g Med J. 2009;15(6):463-470.

14. Mcdona1d JG, Matthew S, Auchus RJ. Steroid profi1ing by gas chromatography-mass spectrometry and high performance 1iquid chromatography-mass spectrometry for adrena1 diseases. Horm Ca«cer. 2011;2(6):324-332.

doi: 10.1007/s12672-011-0099-x

15. Кривохижина Н.С., Стрельникова Е.Г., Великанова Л.И., Поваров В.Г. Определение стероидных профилей мочи методом газовой хромато-масс-спектрометрии. / Сборник материалов 2-й научно-практической конференции молодых ученых и специалистов «Трансляционная медицина: от теории к практике», 2014. C. 225-226. [Krivokhizhina NS, Stre1'nikova EG, Ve1ikanova LI, Povarov VG. Oprede1enie ste-roidnykh profi1ey mochi metodom gazovoy khromato-mass-spe-ktrometrii. Proceedings of the 2nd conference «trans1yatsionnaya meditsina: ot teorii k praktike», 2014. P. 225-226.]

16. Tay1or NF. Urinary steroid profi1ing. Methods Mol Biol. 2013;1065:259-276. doi: 10.1007/978-1-62703-616-0_17