СПОСОБЫ ПОВЫШЕНИЯ ЭФФЕКТИВНОСТИ ВАКЦИНЫ ПУТЕМ ВВЕДЕНИЯ АНТАГОНИСТА IL-4R
METHODS FOR INCREASING VACCINE EFFICIENCY BY INJECTING IL-4R ANTAGONIST

ССЫЛКА НА ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
[001]
Данная заявка включает ссылку на перечень последовательностей, представленный в машиночитаемой форме, как файл 10209WO01-Sequence.txt, созданный 10 февраля 2017 года и содержащий 15276 байт.
ОБЛАСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[002]
Данное изобретение относится к способам повышения эффективности вакцины. Более конкретно, изобретение относится к введению антагониста рецептора интерлейкина-4 (ИЛ-4R) в комбинации с вакциной субъекту, нуждающемуся в этом.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
[003]
Вакцины были одними из самых успешных методов в области общественного здравоохранения в профилактике заболеваний и смерти из-за инфекционных заболеваний. Вакцины обычно содержат возбудитель заболевания, его продукты или его заменители, которые действуют как антиген, не вызывая заболевания (или в некоторых случаях приводят к заболеванию легкой степени). Некоторые современные вакцины против, например, микробных патогенов, состоят из живых ослабленных или невирулентных вариантных штаммов микроорганизмов, или убитых или иным образом инактивированных организмов. Другие вакцины используют более или менее очищенные компоненты лизатов патогенов, такие как поверхностные углеводы, белки, полученные из рекомбинантного патогена, которые иногда сливаются с другими молекулами, или репликативные вирусы, которые продуцируют антиген из патогена. Вакцины действуют путем индуцирования эндогенного иммунного ответа, приводящего к активации антигенспецифических наивных лимфоцитов, которые затем приводят к образованию секретирующих антитела В-клеток или антигенспецифических эффекторных Т-клеток и Т-клеток памяти или того и другого. Такой подход может привести к стойкому защитному иммунитету, который может быть повышен время от времени путем возобновления контакта с тем же антигенным материалом.
[004]

Вакцины обычно содержат адъюванты, которые помогают ускорять, продлевать и/или усиливать антигенспецифические иммунные ответы. Некоторые широко используемые адъюванты включают, но не ограничиваются ими, соли алюминия (например, квасцы, фосфат алюминия и гидроксид алюминия), полный адъювант Фрейнда, неполный адъювант Фрейнда, адъювант Риби, сквален и MF59.
[005]
Остается необходимость в безопасных и эффективных вакцинах и/или улучшенных стратегиях вакцинации для повышения эффективности и обеспечения более долгой защиты от воздействия и заражения патогенами без каких-либо неблагоприятных побочных эффектов (например, аллергической реакции).
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[006]
В соответствии с некоторыми аспектами данного изобретения предлагаются способы повышения эффективности и/или безопасности вакцины у субъекта. Также включены способы повышения иммунного ответа против вакцины или увеличения продолжительности защитного иммунитета вакцины у субъекта. В некоторых вариантах осуществления данное изобретение относится к способам повышения защиты от заболевания у субъекта и/или предотвращения заражения и передачи указанного заболевания неинфицированному субъекту или предотвращения прогрессирования заболевания к другому заболеванию. Способы в соответствии с этими аспектами включают введение субъекту, нуждающемуся в этом, антагониста рецептора интерлейкина-4 (ИЛ-4R) в комбинации с вакциной. В некоторых вариантах осуществления способы включают выбор субъекта, который восприимчив к микробной инфекции, и введение субъекту, нуждающемуся в этом, антагониста рецептора интерлейкина-4 (ИЛ-4R) в комбинации с вакциной против указанной микробной инфекции. В некоторых вариантах осуществления антагонист ИЛ-4R вводят до, после или одновременно с вакциной субъекту, нуждающемуся в этом.
[007]
В соответствии с некоторыми аспектами данное изобретение обеспечивает способы предотвращения, лечения, уменьшения или устранения неблагоприятного побочного эффекта (например, аллергической реакции) вакцины у субъекта, нуждающегося в этом. В некоторых вариантах осуществления данное изобретение обеспечивает способы предотвращения, уменьшения или устранения ответа Т-хелпера 2 (Th2), вызванного вакциной у субъекта, нуждающегося в этом. В некоторых вариантах осуществления данное изобретение обеспечивает способы снижения IgE, индуцированного вакциной у субъекта, нуждающегося в этом. Способы в соответствии с этими аспектами включают введение антагониста ИЛ-4R в комбинации с вакциной субъекту, нуждающемуся в этом.
[008]
В соответствии с некоторыми аспектами данное изобретение обеспечивает способы уменьшения числа доз вакцины, причем способы включают введение антагониста ИЛ-4R в комбинации с указанной вакциной субъекту, нуждающемуся в этом. В некоторых вариантах осуществления число доз вакцины уменьшается на одну или более доз, например, на одну дозу, на две дозы или более по сравнению с субъектом, которому не вводили антагонист ИЛ-4R.
[009]
В соответствии с некоторыми аспектами данное изобретение обеспечивает способы лечения атопического дерматита у пациента без вмешательства в ответ пациента на вакцину. В некоторых вариантах осуществления данное изобретение обеспечивает способы лечения атопического дерматита у пациента без подавления ответа пациента на вакцину. Способы, в соответствии с этими аспектами, включают выбор пациента с диагнозом атопического дерматита, который недавно был или будет привит вакциной; и введение пациенту одной или более доз антагониста ИЛ-4R, причем антагонист ИЛ-4R не уменьшает или не ослабляет ответ пациента на вакцину. В некоторых вариантах осуществления введение антагониста ИЛ-4R приводит к улучшению одного или более параметров, связанных с атопическим дерматитом (AD), выбранных из группы, состоящей из общей оценки исследователя (IGA); площади поверхности тела, вовлеченной в атопический дерматит (BSA); индекса распространенности и тяжести экземы (EASI); шкалы атопического дерматита (SCORAD); 5D-шкалы оценки зуда; и числовой оценочной шкалы зуда (NRS). В некоторых вариантах осуществления пациент с атопическим дерматитом восприимчив к микробной инфекции, например, коклюшу, дифтерии, столбняку, туберкулезу, менингиту и т. д. В некоторых вариантах осуществления пациент с атопическим дерматитом имеет аллергию к определенным компонентам вакцины или развивает аллергическую реакцию (например, кожную реакцию) на вакцину. В некоторых вариантах осуществления пациент является ребенком менее 3 лет, у которого был диагностирован атопический дерматит, и ему нужна вакцина против инфекционного заболевания (например, коклюша).
[010]
Bordetella pertussis
Corynebacterium diptheriae
Clostridium tetani
Mycobacterium tuberculosis
Plasmodium
Bacillus anthracis
Vibrio cholera
Salmonella typhi
Borrelia
Streptococus
pneumoniae
Staphylococcus
aureus
Escherichia coli
Clostridium
Mycobacterium leprae
Yersinia pestis
В некоторых вариантах осуществления вакцина против болезни или инфекции, вызванной микроорганизмом, выбранным из группы, состоящей из , , , ,  spp., , , ,  spp., , , ,  spp., , , вируса гриппа, вируса ветряной оспы, вируса иммунодефицита человека (ВИЧ), респираторно-синцитиального вируса (РСВ), полиовируса, вируса натуральной оспы, вируса бешенства, ротавируса, вируса папилломы человека, вирус Эбола, вируса гепатита А, вируса гепатита В, вируса гепатита С, лиссавируса, вируса кори, вируса эпидемического паротита и вируса краснухи.
[011]
E. coli
В некоторых вариантах осуществления вакцина против заболевания или инфекции, выбранной из группы, состоящей из коклюша, дифтерии, столбняка, туберкулеза, малярии, сибирской язвы, холеры, брюшного тифа, проказы, болезни Лайма, стрептококковой инфекции, инфекции, вызванной бактериями , стафилококковой инфекции, чумы, клостридиальной инфекции, менингококковой инфекции, пневмококковой инфекции, пневмонии, менингита, сепсиса, гриппа, ветряной оспы, ВИЧ-инфекции, инфекции, вызванной РСВ, полиомиелита, оспы, бешенства, ротавирусной инфекции, папилломы, рака шейки матки, лихорадки Эбола, гепатита, желтой лихорадки, кори, эпидемического паротита и краснухи. В одном варианте осуществления вакцина против коклюша (судорожный кашель).
[012]
В соответствии с некоторыми вариантами осуществления способы согласно данному изобретению включают введение одной или более доз антагониста ИЛ-4R в комбинации с одной или более дозами вакцины субъекту, нуждающемуся в этом. В некоторых вариантах осуществления вводят одну или более доз антагониста ИЛ-4R, причем каждую дозу вводят через 1-12 недель после непосредственно предшествующей дозы. В некоторых вариантах осуществления каждая доза антагониста ИЛ-4R составляет 1-50 мг/кг массы тела субъекта. В некоторых вариантах осуществления каждая доза антагониста ИЛ-4R содержит 10-600 мг антагониста ИЛ-4R. В некоторых вариантах осуществления каждая доза содержит от 0,1 до 10 мг/кг массы тела субъекта. В некоторых вариантах осуществления вводят одну или более доз вакцины, причем каждую дозу вводят через 2-24 месяца после непосредственно предшествующей дозы. В некоторых вариантах осуществления одну или более доз вакцины вводят с интервалом в 2-15 лет после непосредственно предшествующей дозы. В некоторых вариантах осуществления последующие дозы вакцины упоминаются как «бустерные» дозы. В некоторых вариантах осуществления способы включают введение одной или более доз антагониста ИЛ-4R перед каждой дозой вакцины с последующим введением дозы антагониста ИЛ-4R одновременно с дозой вакцины. В дополнительном варианте осуществления способы включают необязательное введение одной или более доз антагониста ИЛ-4R после введения дозы вакцины.
[013]
В некоторых вариантах осуществления способы согласно данному изобретению включают введение от около 10 мг до около 600 мг антагониста ИЛ-4R в качестве начальной дозы с последующей одной или более вторичными дозами. В некоторых вариантах осуществления начальная доза и одна или более вторичных доз, каждая из которых содержит от около 10 мг до около 600 мг антагониста ИЛ-4R. В некоторых вариантах осуществления антагонист ИЛ-4R вводят в начальной дозе 600 мг, затем одну или более вторичных доз, причем каждая вторичная доза составляет 300 мг. В одном варианте осуществления антагонист ИЛ-4R вводят в начальной дозе 400 мг, затем следуют одна или более вторичных доз, причем каждая вторичная доза составляет 200 мг. В некоторых вариантах осуществления начальная и одна или более вторичных доз содержат от 0,1 до 10 мг/кг антагониста ИЛ-4R. В некоторых вариантах осуществления начальная и одна или более вторичных доз содержат 1, 2, 3, 5 или 6 мг/кг антагониста ИЛ-4R. Согласно этому аспекту изобретения антагонист ИЛ-4R может вводиться субъекту с частотой введения дозы, например, один раз в неделю, один раз в 2 недели, один раз в 3 недели или один раз в 4 недели. В одном варианте осуществления каждую вторичную дозу вводят через 1 неделю после непосредственно предшествующей дозы. В некоторых вариантах осуществления вакцину вводят в начальной дозе, за которой следуют одна или более последующих (бустерных) доз, причем каждая последующая (бустерная) доза вводится через 1-104 недели после непосредственно предшествующей дозы. В некоторых вариантах осуществления одну или более последующих (бустерных) доз вводят через 2-20 лет после непосредственно предшествующей дозы.
[014]
В некоторых вариантах осуществления антагонист ИЛ-4R вводят до, после или одновременно с вакциной субъекту, нуждающемуся в этом. В некоторых вариантах осуществления одну или более доз антагониста ИЛ-4R вводят до, после или одновременно с каждой дозой вакцины. В некоторых вариантах осуществления одну или более доз антагониста ИЛ-4R вводят перед каждой дозой вакцины. В некоторых вариантах осуществления одну или более доз антагониста ИЛ-4R вводят после каждой дозы вакцины. В некоторых вариантах осуществления одну или более доз антагониста ИЛ-4R вводят перед дозой вакцины с последующей дозой антагониста ИЛ-4R одновременно с дозой вакцины, необязательно с одной или более дозами антагониста ИЛ-4R после введения вакцины.
[015]
В соответствии с некоторыми аспектами данное изобретение обеспечивает схемы вакцинации для субъекта, включающие введение начальной дозы вакцины, необязательно, за которой следует одна или более последующих бустерных доз, причем введение каждой дозы вакцины включает введение одной или более доз антагониста ИЛ-4R, за которым следует доза антагониста ИЛ-4R с указанной вакциной, за которой следуют одна или более доз антагониста ИЛ-4R. В некоторых вариантах осуществления одну или более доз антагониста ИЛ-4R вводят с интервалом один раз в неделю, один раз в 2 недели, один раз в 3 недели или один раз в 4 недели после непосредственно предшествующей дозы.
[016]
Иллюстративные антагонисты ИЛ-4R, которые могут быть использованы в контексте способов согласно данному изобретению, включают, например, низкомолекулярные химические ингибиторы ИЛ-4R или его лигандов (ИЛ-4 и/или ИЛ-13), или биологические агенты, которые нацелены на ИЛ-4R или его лиганды. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления антагонист ИЛ-4R представляет собой антигенсвязывающий белок (например, антитело или его антигенсвязывающий фрагмент), который связывает цепь ИЛ-4Rα и блокирует сигналинг с помощью ИЛ-4, ИЛ-13 или как ИЛ- 4, так и ИЛ-13. В одном варианте осуществления антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, который специфически связывает ИЛ-4R, содержит определяющие комплементарность области (CDR) в паре последовательностей вариабельная область тяжелой цепи (HCVR)/вариабельная область легкой цепи (LCVR) SEQ ID NO: 1/2. В некоторых вариантах осуществления антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит CDR тяжелой цепи (HCDR1), имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 3, HCDR2, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4, HCDR3, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5, CDR легкой цепи (LCDR1), имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6, LCDR2, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7, и LCDR3, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8. Один такой тип антигенсвязывающего белка, который может быть использован в контексте способов согласно данному изобретению, представляет собой анти-ИЛ-4Rα антитело, такое как дупилумаб.
[017]
В некоторых вариантах осуществления антагонист ИЛ-4R вводят подкожно, внутривенно или внутрибрюшинно субъекту.
[018]
В соответствии с некоторыми аспектами данном изобретение относится к композициям вакцины, содержащим адъювант, причем адъювант включает антагонист ИЛ-4R. В некоторых вариантах осуществления композиция вакцины дополнительно содержит компонент вакцины, выбранный из группы, состоящей из столбнячного анатоксина, дифтерийного анатоксина, инактивированного коклюшного токсина, филаментозного гемагглютинина, пертактина, фимбрий 2-ого типа, фимбрий 3-его типа и формалин-инактивированного респираторно-синцитиального вируса. В некоторых вариантах осуществления композиция вакцины содержит второй адъювант (например, квасцы).
[019]
В некоторых вариантах осуществления данное изобретение обеспечивает применение антагониста ИЛ-4R согласно изобретению при изготовлении лекарственного средства для повышения эффективности и/или безопасности вакцины для пациента. В некоторых вариантах осуществления данное изобретение обеспечивает применение антагониста ИЛ-4R в способе повышения эффективности и/или безопасности вакцины, причем антагонист ИЛ-4R вводят в комбинации с указанной вакциной субъекту, нуждающемуся в этом.
[020]
Другие варианты осуществления данного изобретения станут очевидными из обзора следующего подробного описания.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ
[021]
фиг. 1
На изображен дизайн исследования, включая схему применения препарата и забора образцов для исследования в примере 1, 2, 3 или 4.
[022]
фиг. 2А
2В
Наи  изображены общие уровни IgE в сыворотке у мышей, иммунизированных или TDaP (вакцина против дифтерии, столбняка, коклюша), которая содержит бесклеточную (aP) коклюшную вакцину (фиг. 2A), или DTP (вакцина против дифтерии, столбняка, коклюша), которая содержит цельноклеточную (wP) коклюшную вакцину (фиг. 2B) и получавших лечение с использованием изотипического контрольного антитела или антитела против ИЛ-4R мыши (анти-ИЛ-4Rα). Результаты представляют собой значения для 4-12 мышей на группу. Был проведен статистический анализ с использованием однофакторного дисперсионного анализа: *** p <0,001, **** p <0,0001
[023]
фиг. 3А
3В
Bordetella pertussis
На и  изображены (фиг. 3А) титры общего IgG, специфического к филаментозному гемагглютинину (FHA), у иммунизированных aP, и (фиг. 3B) титры общего IgG, специфического к убитому нагреванием  (HKBp), у иммунизированных wP мышей. Результаты представляют собой значения для 4-12 мышей на группу. * p <0,05, **** p<0,0001
[024]
фиг. 4А
4В
На  и изображены (фиг. 4А) титры FHA-специфического IgG1 у иммунизированных aP и (фиг. 4B) титры HKBp-специфических IgG1 у иммунизированных wP мышей. Результаты представляют собой значения для 4-12 мышей на группу. Был проведен статистический анализ с использованием однофакторного дисперсионного анализа. **p<0,01, ***p<0,001, ****p<0,0001
[025]
фиг. 5А
5В
На  и изображены (фиг. 5А) титры FHA-специфического IgG2a у иммунизированных aP и (фиг. 5B) титры HKBp-специфических IgG2a у иммунизированных wP мышей. Результаты представляют собой средние значения для 4-12 мышей на группу. Был проведен статистический анализ с использованием однофакторного дисперсионного анализа. **p<0,01, ***p<0,001, ****p<0,0001
[026]
фиг. 6А
6В
На  и изображены (фиг. 6А) титры FHA-специфического IgG2c у иммунизированных aP и (фиг. 6B) титры HKBp-специфических IgG2c у иммунизированных wP мышей. Результаты представляют собой значения для 4-12 мышей на группу. Был проведен статистический анализ с использованием однофакторного дисперсионного анализа. *p<0,05, ****p<0,0001
[027]
фиг. 7
На  изображено, что при обработке анти-ИЛ-4Rα для повторной стимуляции у мышей, иммунизированных aP, усиливается продукция FHA-специфического интерферона-гамма (ИФН-γ) клетками селезенки. Результаты представляют собой средние значения для 4 мышей на группу. Был выполнен статистический анализ с использованием двухфакторного дисперсионного анализа: *** p <0,001
[028]
фиг. 8А
8В
B.pertussis
B. pertussis
На  и изображено количество колониеобразующих единиц (КОЕ)  на легкое мыши, иммунизированной двумя дозами или aP (фиг. 8A), или wP (фиг. 8B) и зараженной  путем воздействия аэрозолем, как описано в примере 4. Результаты представляют собой средние значения для 4-8 мышей на группу в каждой временной точке [за исключением wP-иммунизированных групп (B) на 14-е сутки, n=3]. *** p <0,001, aP+контрольный IgG против aP+анти-ИЛ-4Rα, с использованием двухфакторного дисперсионного анализа.
[029]
фиг. 9
На изображен дизайн исследования, включая схему применения препарата и забора образцов для исследования в примере 5.
[030]
фиг. 10
B. pertussis
B. pertussis
На  изображено количество колониеобразующих единиц (КОЕ)  на легкое мыши, иммунизированной одной дозой или aP, или wP вакцины и зараженной  путем воздействия аэрозолем, как описано в примере 5. Результаты представляют собой средние значения для 4 мышей на группу в каждой временной точке (за исключением наивной группы на 7-е сутки, n=3). *** p <0,001, aP+контроль IgG против aP+анти-ИЛ-4Ra; ΔΔΔ p <0,001, aP+контрольный IgG против wP+ контрольный IgG, с помощью двухстороннего дисперсионного анализа.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[031]
До того, как будет описано данное изобретение, следует понимать, что это изобретение не ограничивается конкретными способами и описанными экспериментальными условиями, поскольку такие способы и условия могут варьироваться. Следует также понимать, что используемая в данном документе терминология предназначена только для описания конкретных вариантов осуществления изобретения и не предназначена для ограничения, поскольку объем данного изобретения будет ограничен только прилагаемой формулой изобретения.
[032]
Если не указано иное, все технические и научные термины, используемые в данном документе, имеют то же значение, которое обычно понимается специалистом в данной области техники, к которой относится данное изобретение. Используемый в данном документе термин «около» при использовании в отношении конкретного указанного числового значения означает, что значение может отличаться от указанного значения не более чем на 1%. Например, как используется в данном документе, выражение «около 100» включает 99 и 101 и все значения между ними (например, 99,1, 99,2, 99,3, 99,4 и т. д.). Используемые в данном документе термины «лечить», «лечение» и т. д. означают облегчение симптомов, устранение причины симптомов, или на временной или постоянной основе, или предотвращение или замедление появления симптомов определенного заболевания или патологического состояния.
[033]
Хотя любые способы и материалы, аналогичные или эквивалентные описанным в данном документе, могут быть использованы в практике данного изобретения, теперь описаны предпочтительные способы и материалы. Все публикации, упомянутые в данном документе, включены в данный документ посредством ссылки, чтобы описать их полностью.
Общее описание
[034]
Bacillus pertussis
et al
представляет собой грамотрицательную бактерию, которая вызывает коклюш (также называемый судорожным кашлем), очень заразную, тяжелую и иногда летальную респираторную инфекцию у младенцев и детей. Коклюш в значительной степени контролировался после введения цельноклеточных коклюшных (wP) вакцин (DTP или DPT) в 1943 году. Вакцины wP обычно включают инактивированные (убитые нагреванием или химически обработанные, обычно формалином) суспензии целого бактериального организма. Однако было установлено, что wP вакцины связаны с различными неблагоприятными побочными эффектами, включая лихорадку, вызванную вакциной, фебрильные судороги и осложнения центральной нервной системы. Таким образом, wP вакцины были сняты с производства в Соединенных Штатах в связи с такими проблемами безопасности и полностью заменены в 1997 году бесклеточными (aP) коклюшными вакцинами. aP вакцины содержат инактивированный коклюшный токсин (PT) и один или более других бактериальных компонентов (т. е. филаментозный гемагглютинин (FHA), пертактин (Pn) и фимбрий (Fim)], адсорбированные в квасцы, и широко используются в развитых странах с 1990-го года. Однако, поскольку aP вакцины заменили wP вакцинами, коклюш вновь возник как проблема общественного здравоохранения. Зарегистрированные случаи коклюша среди 7-10-летних детей увеличились с 13% до 23% зарегистрированных случаев, когда в 2012 году было зарегистрировано 42 000 случаев коклюша у детей (Mills  2014; Trends Microbiol. 22: 49-52).
[035]
et al
et al
et al
Механизмы, способствующие защитному иммунитету, были изучены для wP и aP вакцин у людей и у мышей. Иммунный ответ, наблюдаемый при использовании wP вакцины, очень похож на иммунный ответ человека, зараженного естественным образом, или зараженной мыши. wP индуцирует ответ Т-хелпера 1 (Th1) (т. е. приток нейтрофилов и продукцию ИЛ-1, ИЛ-12) (Redhead  1993, Infect. Immun. 61: 3190-8; Ross  2013, PLoS Pathog 9(4): e1003264.doi:10.1371/journal.ppat.1003264). Однако wP также приводит к образованию IgE и аллергическим реакциям. С другой стороны, aP вакцина имеет четко определенный ответ Т-хелпера 2 (Th2) как у человека, так и в доклинической мышиной модели, причем ответ Th2 индуцируется продуцированием ИЛ-4 (Mills  1998, Infect. Immun. 66: 596-602). Последующие исследования продемонстрировали, что ответ Th2 не требуется для защитного иммунитета в моделях человека и мыши, и что wP вакцины и предшествующая инфекция лучше, чем современные aP вакцины в обеспечении защитного иммунитета, потому что они индуцируют ответ Th1 (Ross et al 2013, PLoS Pathog 9(4): e1003264.doi:10.1371/journal.ppat.1003264; Brummelman et al 2015, FEMS Pathog. Dis. doi: 10.1093/femspd/ftv067). aP вакцины не способны генерировать эффективную иммунологическую память, что приводит к ослаблению защитного иммунитета. Кроме того, ответ Th2, вызванный aP вакцинами, приводит к нежелательному IgE и редким реакциям гиперчувствительности, наблюдаемым у детей при 4-ой или 5-ой бустерной дозе (Brummelmane et al 2015, FEMS Pathog. Dis. doi: 10.1093/femspd/ftv067). Кроме того, антигенная изменчивость была обнаружена в коклюшном токсине, пертактине и фимбрии, что приводит к потере защиты от некоторых штаммов, распространенных в данное время (Brummelmane et al 2015, FEMS Pathog. Dis. doi: 10.1093/femspd/ftv067).
[036]
et al
Новая модель экспериментального коклюша у бабуинов выявила значительный дефицит защитного иммунитета, вызванный вакцинацией aP (Warfel  2014, PNAS 111: 787). Исследование показало, что животные с предшествующей инфекцией не были колонизированы после аэрозольного заражения, тогда как wP вакцина предотвращала заболевание и улучшала бактериальный клиренс по сравнению с наивными животными. Напротив, aP вакцина продуцировала недостаточный иммунный ответ, который предотвращал заболевание у вакцинированных бабуинов, но не смог предотвратить заражение или передачу наивным бабуинам.
[037]
et al
B. pertussis
Различные молекулы изучались в качестве возможных кандидатов-адъювантов для повышения иммуногенности и продолжительности иммунитета, обеспечиваемых aP вакцинами, например, цитокинами, такими как ИЛ-1, ИЛ-12 и ГМКСФ, и агонистами Toll-подобных рецепторов (Dunne  2015), Mucosal Immunol. 8: 607-17; Allen & Mills 2014, Expert Rev. Vaccines 13: 1253-64). Все еще остается неудовлетворенная потребность в улучшенных композициях вакцины и стратегиях вакцинации, которые предотвращают заражение и передачу . Авторы данного изобретения продемонстрировали, что введение антагониста ИЛ-4R (например, анти-ИЛ-4R антитела) с aP вакциной приводит к получению большего количества антигенспецифических антител изотипа IgG типа Th1 (например, IgG2a и b/c у мышей или IgG1 у людей) и снижению IgE и антигенспецифических антител изотипа IgG типа (Th2) (например, IgG1 у мышей или IgG4 у людей), тем самым обеспечивая лучшую защиту в ответ на заражение патогеном. В более общем плане, как показано в данном документе, введение антагониста ИЛ-4R (например, анти-ИЛ-4R антитело) в качестве адъюванта в комбинации с вакциной вызывает ответ Th1 вместо ответа Th2, что обеспечивает лучшую эффективность вакцины и/или предотвращение неблагоприятных побочных эффектов вакцины (например, аллергической реакции).
Способы повышения эффективности и/или безопасности вакцин
[038]
Данное изобретение включает способы, которые включают введение субъекту, нуждающемуся в этом, вакцины в комбинации с фармацевтической композицией, содержащей антагонист ИЛ-4R. Фармацевтическая композиция, содержащая антагонист ИЛ-4R, содержит фармацевтически приемлемый носитель или вспомогательное вещество. В некоторых вариантах осуществления антагонист ИЛ-4R вводят до, после и/или одновременно с вакциной.
[039]
E. coli
Используемый в данном документе термин «субъект, нуждающийся в этом» означает человека или отличное от человека животное, которое подвержено и/или нуждается в профилактической защите от микробной (например, бактериальной или вирусной) инфекции. В контексте данного изобретения термин «субъект» включает субъекта, который восприимчив к инфекции, выбранной из группы, состоящей из коклюша, дифтерии, столбняка, туберкулеза, малярии, сибирской язвы, холеры, брюшного тифа, проказы, болезни Лайма, стрептококковой инфекции, инфекции, вызванной бактериями , стафилококковой инфекции, чумы, клостридиальной инфекции, менингококковой инфекции, пневмококковой инфекции, пневмонии, менингита, сепсиса, гриппа, ветряной оспы, ВИЧ-инфекции, инфекции, вызванной РСВ, полиомиелита, оспы, бешенства, ротавирусной инфекции, папилломы, рака шейки матки, лихорадки Эбола, гепатита, желтой лихорадки, кори, эпидемического паротита и краснухи.
[040]
В некоторых вариантах осуществления термин «субъект» включает ребенка, которому не исполнилось 3 года. Например, данные способы могут применяться для детей младше 1 месяца, около 1 месяца, около 2 месяцев, около 3 месяцев, около 4 месяцев, около 5 месяцев, около 6 месяцев, около 7 месяцев, около 8 месяцев, около 9 месяцев, около 10 месяцев, около 11 месяцев или около 12 месяцев. В других вариантах осуществления способы согласно данному изобретению могут применяться для лечения детей в возрасте около 1 года, менее 1 года, менее 2 лет, менее 3 лет, менее 4 лет, менее 5 лет, менее 6 лет, менее 7 лет, менее 8 лет, менее 9 лет, менее 10 лет, менее 11 лет, менее 12 лет, менее 13 лет, менее 14 лет или менее 15 лет. В некоторых вариантах осуществления способы согласно данному изобретению могут быть применены для лечения подростков в возрасте до 15 лет, около 16 лет, около 17 лет, около 18 лет, около 19 лет, около 20 лет или менее 20 лет.
[041]
В некоторых вариантах осуществления термин «субъект» включает взрослого в возрасте более 50 лет, более 55 лет, более 60 лет, более 65 лет, более 70 лет или старше 75 лет.
[042]
В некоторых вариантах осуществления термин «субъект» включает взрослого в возрасте более 20 лет, более 25 лет, более 30 лет, более 35 лет, более 40 лет, старше 45 лет или более 50 лет. В некоторых вариантах осуществления взрослый предварительно не иммунизирован вакциной, такой как столбнячная вакцина, дифтерийная вакцина или коклюшная вакцина.
[043]
В некоторых вариантах осуществления термин «субъект» включает взрослого или подростка в возрасте старше 10 лет, который был иммунизирован вакциной, но ему необходимо получить бустерную дозу вакцины. В некоторых вариантах осуществления данный термин включает взрослого человека, который может быть предварительно иммунизирован, но у которого развился ослабленный иммунитет к инфекции и который должен получить дополнительную дозу вакцины (например, бустерную дозу). В некоторых вариантах осуществления термин «субъект» включает субъекты, у которых есть аллергия к одному или более компонентам вакцины. В следующем варианте осуществления данный термин включает субъекты, которые могут подвергаться повышенному риску развития аллергической реакции на вакцину.
[044]
В некоторых вариантах осуществления данное изобретение обеспечивает способы повышения эффективности и/или безопасности вакцины, причем способы включают введение одной или более доз указанной вакцины в комбинации с одной или более дозами антагониста ИЛ-4R субъекту, нуждающемуся в этом.
[045]
В некоторых вариантах осуществления данное изобретение относится к способам повышения или усиления иммунного ответа к вакцине, причем способы включают введение одной или более доз указанной вакцины в комбинации с одной или более дозами антагониста ИЛ-4R субъекту, нуждающемуся в этом.
[046]
Используемый в данном документе термин «повысить эффективность и/или безопасность вакцины» относится к повышенной защите и/или увеличению продолжительности защиты, обеспечиваемой введением вакцины в комбинации с антагонистом ИЛ-4R с последующем заражением патогена по сравнению с введением только одной вакцины. В некоторых вариантах осуществления данный термин включает одно или более из следующего: (а) предотвращение заболевания, вызванного патогенной бактерией или вирусом; (b) снижение бактериальных или вирусных титров в инфицированном хозяине или снижение нагрузки на патогенные инфекции у инфицированного хозяина; (c) более высокий клиренс патогена от инфицированного хозяина; (d) увеличение продуцирования титров изотипа IgG патогенспецифического типа Th1; (d) снижение или приостановка аллергической реакции из-за введения вакцины; (f) снижение или приостановка продуцирования сывороточного IgE у хозяина из-за введения вакцины; (g) уменьшение Th2-ответа; (h) снижение продуцирования титров изотипа IgG патогенспецифического типа Th2; (i) уменьшение количества доз вакцины, необходимого для защиты; (j) предотвращение заражения и передачи возбудителя и/или инфекционного заболевания; и/или (k) долговременная (продолжительная) резистентность к последующей патогенной инфекции по сравнению с субъектом, которому вводили только одну вакцину. В некоторых вариантах осуществления данный термин включает повышение безопасности вакцины. В некоторых вариантах осуществления данный термин включает предотвращение или снижение, или приостановку одного или более IgE-опосредованных ответов на вакцину, включая, но не ограничиваясь ими, крапивницу, ангионевротический отек, анафилаксию, желудочно-кишечные расстройства и прекращение введения бустерной дозы вакцины, что приводит к недостаточному иммунному ответу на эту вакцину. В одном аспекте данное изобретение обеспечивает способы получения оптимального иммунного ответа на вакцину у субъекта, причем способы включают введение антагониста ИЛ-4R в комбинации с вакциной субъекту, нуждающемуся в этом.
[047]
В соответствии с одним аспектом данное изобретение обеспечивает способы профилактики инфекции и/или передачи инфекционного заболевания субъекту. В некоторых вариантах осуществления данное изобретение обеспечивает способы повышения популяционного иммунитета в популяции, которая подвержена инфекционному заболеванию. Способы в соответствии с этим аспектом включают введение антагониста ИЛ-4R в комбинации с вакциной субъекту, нуждающемуся в этом.
[048]
В некоторых вариантах осуществления данное изобретение обеспечивает способы предотвращения, лечения или уменьшения, или устранения тяжелого неблагоприятного побочного эффекта, вызванного введением вакцины, у субъекта, нуждающегося в этом. Неблагоприятные побочные эффекты, вызванные вакциной, включают, но не ограничиваются ими, реакции в месте инъекции, аллергические реакции, локализованный отек, припухлость лимфатических узлов и гиперчувствительность. В некоторых конкретных вариантах осуществления данное изобретение относится к способам предотвращения, лечения или снижения, или уменьшения тяжести аллергического ответа, вызванного введением вакцины, у субъекта, нуждающегося в этом. Как используется в данном документе, фразы «аллергический ответ», «аллергическая реакция», «аллергический симптом» и тому подобное включают один или более признаков или симптомов, выбранных из группы, состоящей из крапивницы (например, аллергическая сыпь), ангионевротического отека, ринита, астмы, рвоты, чихания, ринореи, воспаление придаточных пазух носа, слезотечения, стерторозного дыхания, бронхоспазма, снижения максимальной скорости выдоха (PEF), желудочно-кишечный расстройства, приливов крови к лицу и верхней половине тела, отека губ, отека языка, снижения артериального давления, анафилаксия и дисфункции/функциональной недостаточности органа. «Аллергический ответ», «аллергическая реакция», «аллергический симптом» и т. д. также включает иммунологические ответы и реакции, такие как, например, повышенный ответ Th2, увеличение продукции IgE и/или увеличение продукции аллерген-специфического иммуноглобулина. Используемый в данном документе термин «уменьшить аллергическую реакцию» относится к отсутствию или снижению тяжести аллергического ответа.
[049]
В некоторых вариантах осуществления данное изобретение включает способы снижения общего уровня IgE в сыворотке, индуцированного введением вакцины, причем способы включают введение одной или более доз вакцины в комбинации с одной или более дозами антагониста ИЛ-4R. Как используется в данном документе, снижение уровня IgE в сыворотке означает, что количество IgE, измеренное в сыворотке субъекта, которому была введена вакцина и который получил лечение с использованием антагониста ИЛ-4R, составляет на по меньшей мере 5%, 10%, 20%, 50%, 80% или 90% ниже уровня IgE в сыворотке, измеренного в том же или эквивалентном субъекте, который не получал лечение с использованием антагониста ИЛ-4R. В некоторых вариантах осуществления снижение уровня IgE в сыворотке означает, что в сыворотке субъекта не обнаружено или обнаружено незначительное количество IgE. Как используется в данном документе, сывороточный IgE может включать общий сывороточный IgE и/или антигенспецифический IgE (например, аллергенспецифический IgE).
[050]
В некоторых вариантах осуществления данное изобретение обеспечивает способы снижения Th2-ответа, вызванного приемом вакцины у нуждающегося в этом субъекта, причем способы включают введение одной или более доз вакцины в комбинации с одной или более дозами антагониста ИЛ-4R. В некоторых вариантах осуществления снижение Th2-ответа включает, но не ограничивается этим, снижение уровня IgE в сыворотке, которое вызвано вакциной, и/или снижение продуцирования титров изотипа IgG патогенспецифического типа Th2 (например, IgG1 у мышей или IgG4 у людей).
[051]
Данное изобретение включает способы снижения восприимчивости к аллергической реакции на вакцину у субъекта. Используемый в данном документе термин «субъект» относится к субъектам с повышенной восприимчивостью или повышенному риску развития аллергического ответа, например, к субъектам с атопическим дерматитом. В этом аспекте термин «субъект» включает субъектов с атопическим дерматитом, повышенной сенсибилизацией к аллергенам и субъектов с аллергическим ринитом, астмой или пищевой аллергией. В некоторых вариантах осуществления данное изобретение включает способы снижения токсичности, связанные с введением вакцины у пациента с атопическим дерматитом, причем способы включают введение одной или более доз антагониста ИЛ-4R в комбинации с указанной вакциной. Термин «субъект» также включает субъектов с повышенными уровнями сывороточного общего и аллерген-специфического IgE или сывороточных хемокинов (например, CCL17 или CCL27).
[052]
В соответствии с некоторыми аспектами данное изобретение обеспечивает способы повышения продолжительности иммунитета, вызванного вакциной, у субъекта, нуждающегося в этом. В данной области техники известно, что некоторые вакцины, например, бесклеточная коклюшная вакцина, демонстрируют более короткую продолжительность защиты, что требует регулярные бустерные дозы для таких субъектов, как дети старшего возраста, подростки, взрослые или пожилые люди. Эти бустерные дозы приводят к нежелательным реакциям гиперчувствительности у субъектов. Соответственно, в некоторых вариантах осуществления данное изобретение обеспечивает способы уменьшения количества бустерных доз, необходимых для обеспечения защиты от заражения патогенами субъекта. Способы в соответствии с этим аспектом включают введение вакцины в комбинации с фармацевтической композицией, содержащей антагонист ИЛ-4R. Способы, описанные в данном документе, приводят к аналогичной или лучшей иммунной защите от заражения патогенами даже с использованием сниженных доз вакцины. В некоторых вариантах осуществления данное изобретение обеспечивает способы уменьшения количества доз вакцины на одну или более доз, например, на одну дозу, на две дозы, на три дозы или более по сравнению с субъектом, которому не вводили антагонист ИЛ-4R. В конкретных вариантах осуществления введение одной дозы вакцины в комбинации с одной или более дозами антагониста ИЛ-4R является по меньшей мере столь же эффективным, как введение 2 доз вакцины без антагониста ИЛ-4R. В другом варианте осуществления введение одной или двух доз вакцины в комбинации с одной или более дозами антагониста ИЛ-4R является по меньшей мере столь же эффективным, как введение трех доз вакцины без антагониста ИЛ-4R.
[053]
Способы согласно данному изобретению в соответствии с некоторыми вариантами осуществления включают введение субъекту вакцины в комбинации с антагонистом ИЛ-4R. Используемый в данном документе термин «в комбинации с» означает, что вакцину вводят до, после или одновременно с фармацевтической композицией, содержащей антагонист ИЛ-4R. Термин «в комбинации с» также включает последовательное или совместное введение антагониста ИЛ-4R и вакцины.
[054]
Например, при введении «до» введения вакцины, антагонист ИЛ-4R можно вводить за около 10 недель, около 9 недель, около 8 недель, около 7 недель, около 6 недель, около 5 недель, около 4 недели, около 3 недели, около 2 недели или за около 1 неделю до введения вакцины. В некоторых вариантах осуществления антагонист ИЛ-4R можно вводить за около 72 часа, около 60 часов, около 48 часов, около 36 часов, около 24 часов, около 12 часов, около 10 часов, около 8 часов, около 6 часов, около 4 час, около 2 часов, около 1 часа, около 30 минут, около 15 минут или за около 10 минут до введения вакцины. При введении «после» вакцины фармацевтическая композиция, содержащая антагонист ИЛ-4R, может вводиться через около 1 неделю, около 2 недели, около 3 недели, около 4 недели, около 5 недель, около 6 недель, около 7 недель, около 8 недель, около 9 недель или через около 10 недель после введения вакцины. В некоторых вариантах осуществления антагонист ИЛ-4R можно вводить через около 10 минут, около 15 минут, около 30 минут, около 1 час, около 2 часа, около 4 часа, около 6 часов, около 8 часов, около 10 часов, около 12 часов, около 24 часов, около 36 часов, около 48 часов, около 60 часов или через около 72 часа после введения вакцины. «Одновременное» или «совместное» введение с вакциной означает, что антагонист ИЛ-4R вводят субъекту в разделенной на дозы лекарственной форме в течение менее чем 10 минут (до, после или в то же время) введения вакцины, или вводят субъекту в виде разовой лекарственной формы комбинированной дозы, содержащей как вакцину, так и антагонист ИЛ-4R.
[055]
Данное изобретение включает способы повышения эффективности и/или безопасности вакцины, включающие введение указанной вакцины в комбинации с эффективным количеством фармацевтической композиции, содержащей антагонист ИЛ-4R, субъекту, нуждающемуся в этом, причем фармацевтическую композицию вводят субъекту в нескольких дозах, например, как часть схемы конкретной вакцинации. Например, схема вакцинации может включать введение в организм нескольких доз фармацевтической композиции субъекту с частотой примерно один раз в сутки, один раз в двое суток, один раз в трое суток, один раз в четверо суток, один раз в пять суток, один раз в шесть суток, один раз в неделю, один раз в две недели, один раз в три недели, один раз в четыре недели, один раз в месяц, один раз в два месяца, один раз в три месяца, один раз в четыре месяца или реже, за которыми следует одна или более доз вакцины.
[056]
В некоторых вариантах осуществления каждая доза антагониста ИЛ-4R составляет 1-50 мг/кг массы тела субъекта. В некоторых вариантах осуществления каждая доза антагониста ИЛ-4R содержит 10-600 мг антагониста ИЛ-4R.
[057]
В связанных аспектах данное изобретение обеспечивает схемы вакцинации субъекта, включающие введение одной или более доз антагониста ИЛ-4R, за которыми следует доза антагониста ИЛ-4R, одновременно с вакциной, необязательно сопровождаемая одной или более дозами антагониста ИЛ-4R. В некоторых вариантах осуществления схема вакцинации включает введение 1-10 еженедельных доз антагониста ИЛ-4R с последующей дозой антагониста ИЛ-4R одновременно с вакциной, за которой следуют 1-3 еженедельные дозы антагониста ИЛ-4R. В некоторых вариантах осуществления схема вакцинации включает одну или более бустерных доз вакцины. В других вариантах осуществления каждую бустерную дозу вакцины вводят после одной или более доз антагониста ИЛ-4R.
Способы лечения атопического дерматита
[058]
В соответствии с некоторыми аспектами данное изобретение обеспечивает способы лечения атопического дерматита (AD) у пациента без вмешательства в ответ пациента на вакцину. В некоторых вариантах осуществления данное изобретение обеспечивает способы лечения AD у пациента без подавления ответа пациента на вакцину. В некоторых вариантах осуществления данное изобретение обеспечивает способы лечения AD у пациента, причем пациент восприимчив к микробной инфекции и/или пациент нуждается в вакцине против инфекционного заболевания. Способы в соответствии с этими аспектами включают введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтической композиции, содержащей антагонист ИЛ-4R. В некоторых вариантах осуществления способы включают выбор пациента с диагнозом атопического дерматита, который недавно был или будет привит вакциной; и введение пациенту одной или более доз антагониста ИЛ-4R, причем антагонист ИЛ-4R не уменьшает или не ослабляет ответ пациента на вакцину. Используемый в данном документе термин «реакция пациента на вакцину» относится к защитному иммунному ответу на вакцину у пациента. В контексте данного изобретения термин относится к уровню антител, продуцируемых у пациентов с AD, которые получали или не получали лечение с дупилумабом. Используемый в данный документе термин «пациент, нуждающийся в этом» означает человека, который проявляет один или более симптомов или признаков атопического дерматита и/или у кого был диагностирован атопический дерматит. В некоторых вариантах осуществления способы согласно данному изобретению могут применяться для лечения пациентов, которые проявляют повышенные уровни одного или более AD-ассоциированных биомаркеров (например, IgE). AD-ассоциированные биомаркеры описаны в публикации патента США № US20140072583, полностью включенной в данный документ. Например, способы согласно данному изобретению включают введение антагониста ИЛ-4R пациентам с повышенным уровнем IgE или TARC (хемокин, регулируемый тимусом и активацией) или периостином. В контексте данного изобретения «пациент, нуждающийся в этом» может включать, например, пациентов, которые перед лечением демонстрируют (или проявляют) один или более AD-ассоциированных параметров, таких как, например, повышенные IGA, BSA, EASI, SCORAD, 5D-шкала оценки зуда и/или шкала NRS, и/или повышенные уровни одного или более AD-ассоциированного биомаркера, такого как, например, IgE и/или TARC. В некоторых вариантах осуществления «субъект, нуждающийся в этом» может включать подмножество популяции, которое более восприимчиво к AD, или может проявлять повышенный уровень AD-ассоциированного биомаркера. Например, «субъект, нуждающийся в этом», может включать подмножество популяции, определенное как раса или этническая принадлежность, присутствующей в популяции.
[059]
В некоторых вариантах осуществления способы в данном документе могут быть применены для лечения AD у детей, которым менее 1 года. Например, данные способы могут применяться для лечения детей в возрасте младше 1 месяца, 1 месяца, 2 месяцев, 3 месяцев, 4 месяцев, 5 месяцев, 6 месяцев, 7 месяцев, 8 месяцев, 9 месяцев, 10 месяцев, 11 месяцев или менее 12 месяцев. В других вариантах осуществления данные способы могут применяться для лечения детей и/или подростков, которым не исполнилось 18 лет. Например, данные способы могут применяться для лечения детей или подростков в возрасте менее 17 лет, 16 лет, 15 лет, 14 лет, 13 лет, 12 лет, 11 лет, 10 лет, 9 лет, 8 лет, 7 лет, 6 лет, 5 лет, 4 года, 3 года или менее 2 лет. В конкретных вариантах осуществления данные способы могут быть применены для лечения AD у детей, которые нуждаются в вакцине против инфекционного заболевания (например, коклюша, дифтерии, туберкулеза, РСВ, кори, паротита и краснухи).
[060]
В некоторых вариантах осуществления пациент, нуждающийся в этом, является взрослым с AD и в возрасте более 20 лет, которому может потребоваться бустерная доза вакцины.
[061]
Термин «атопический дерматит» (AD), используемый в данном документе, означает воспалительное заболевание кожи, характеризующееся интенсивным пруритом (например, сильным зудом) и шелушащимися и сухими экзематозными поражениями. Термин «атопический дерматит» включает, но не ограничивается, AD, вызванный или связанные с дисфункцией эпидермального барьера, аллергию (например, аллергию на определенные продукты, пыльцу, плесень, пылевого клеща, животных и т. д.), радиационным облучением и/или астмой. Данное изобретение охватывает способы лечения пациентов с легкой, умеренной или тяжелой AD. Используемый в данном документе термин «умеренная или тяжелая форма AD» характеризуется интенсивно зудящими, широко распространенными поражениями кожи, которые часто осложняются стойкими бактериальными, вирусными или грибковыми инфекциями. Умеренная или тяжелая форма AD также включает хронический AD у пациентов. Во многих случаях хронические поражения включают утолщенные бляшки на коже, лихенификацию и фиброзные папулы. Пациенты, страдающие умеренной или тяжелой формой AD, также, как правило, имеют более 20% пораженной кожи тела или 10% площади кожи в дополнение к вовлечению глаз, рук и складок тела. Считается, что умеренная или тяжелая форма AD присутствует у пациентов, которым требуется частое лечение местными кортикостероидами. Можно также сказать, что пациент имеет умеренную или тяжелую форму AD, если пациент устойчив или невосприимчив к лечению или местным кортикостероидом, или ингибитором кальциневрина или любым другим широко используемым терапевтическим агентом, известным в данной области техники. Пациент с умеренной или тяжелой формой, или тяжелой формой AD также может проявлять больше рецидивов или обострений заболевания.
[062]
Данное изобретение включает способы лечения AD у пациентов, устойчивых, нереагирующих или неадекватно реагирующих на лечение кортикостероидом для местного применения (TCS) или ингибитором кальциневрина. Термин «резистентный, нереагирующий или неадекватно реагирующий на TCS или ингибитор кальциневрина», как используется в данном документе, относится к субъектам или пациентам с AD, которые получали лечение TCS или ингибитором кальциневрина, и TCS/ингибитор кальциневрина не имеют терапевтического эффекта. В некоторых вариантах осуществления данный термин относится к снижению комплаентности пациента и/или токсичности и побочным эффектам, и/или неэффективности вводимого TCS/ингибитора кальциневрина для снижения, облегчения или уменьшения симптомов AD. В некоторых вариантах осуществления данный термин относится к пациентам, страдающим средней или тяжелой формой AD, которые не поддаются лечению с помощью TCS/ингибитора кальциневрина. В некоторых вариантах осуществления данный термин относится к пациентам с AD, которые не поддаются контролю, несмотря на лечение с помощью ингибитора TCS и/или кальциневрина. В некоторых вариантах осуществления пациенты, которые являются «устойчивыми, нереагирующими или неадекватно реагирующими на TCS или ингибитор кальциневрина», могут не улучшать один или более AD-ассоциированных параметров. Примеры AD-ассоциированных параметров описаны в данном документе в другом месте. Например, лечение с помощью TCS/ингибитора кальциневрина может не приводить к уменьшению зуда или показателя EASI или показателя BSA. В некоторых вариантах осуществления данное изобретение включает способы лечения АD умеренной или тяжелой степени у пациентов, которые ранее лечились с помощью TCS /ингибитора кальциневрина в течение 1 месяца и не показывали уменьшение одного или более AD-ассоциированных параметров. Например, данные способы могут применяться для лечения пациента с хроническим AD, который находится на неизменяемой схеме приема TCS/ингибитора кальциневрина и имеет показатель BSA ≥ 10% или балл IGA ≥ 3.
[063]
В некоторых вариантах осуществления данное изобретение обеспечивает способы, в которых введение антагониста ИЛ-4R приводит к улучшению одного или более AD-ассоциированных параметров. Примеры «AD-ассоциированных параметров» включают: (a) общую оценку исследователя (IGA); (b) площадь поверхности тела, вовлеченную в атопический дерматит (BSA); (c) индекс распространенности и тяжести экземы (EASI); (d) шкалу атопического дерматита (SCORAD); (e) 5D-шкалу оценки зуда; и числовую оценочную шкалу зуда (NRS). AD-ассоциированные параметры описаны в публикации патента США № US20140072583, полностью включенной в данный документ. «Улучшение AD-ассоциированного параметра» означает снижение по сравнению с исходным уровнем одного или более показателей IGA, BSA, EASI, SCORAD, 5D-шкалы оценки зуда или NRS. Используемый в данном документе термин «исходный уровень» в отношении AD-ассоциированного параметра означает численное значение AD-ассоциированного параметра для субъекта до или во время введения фармацевтической композиции согласно данному изобретению.
[064]
Для определения «улучшился ли» AD-ассоциированный параметр, параметр количественно определяется в начале и в одну или более временных точек после введения фармацевтической композиции согласно данному изобретению. Например, AD-ассоциированный параметр может быть измерен на 1 сутки, 2 сутки, 3 сутки, 4 сутки, 5 сутки, 6 сутки, 7 сутки, 8 сутки, 9 сутки, 10 сутки, 11 сутки, 12 сутки, 14 сутки, 15 сутки, 22 сутки, 25 сутки, 29 сутки, 36 сутки, 43 сутки, 50 сутки, 57 сутки, 64 сутки, 71 сутки, 85 сутки; или в конце 1 недели, 2 недели, 3 недели, 4 недели, 5 недели, 6 недели, 7 недели, 8 недели, 9 недели, 10 недели, 11 недели, 12 недели, 13 недели, 14 недели, 15 недели, 16 недели, 17 недели, 18 недели, 19 недели, 20 недели, 21 недели, 22 недели, 23 недели, 24 недели или позже после начальной стадии лечения с использованием фармацевтической композиции согласно данному изобретению. Разница между значением параметра в конкретный момент времени после начала лечения и значением параметра на исходном уровне применяется для определения того, было ли «улучшение» (например, уменьшение) AD-ассоциированного параметра.
Антагонисты рецептора интерлейкина-4
[065]
Способы согласно данному изобретению включают введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтической композиции, содержащей антагонист рецептора интерлейкина-4 (ИЛ-4R). Используемый в данном документе термин «антагонист ИЛ-4R» (также называемый в данном документе «ингибитором ИЛ-4R», «антагонистом ИЛ-4Rα», «блокатором ИЛ-4R», «блокатором ИЛ-4Rα» и т. д.) представляет собой любой агент, который связывается с ИЛ-4Rα или лигандом ИЛ-4R, или взаимодействует с ним, и ингибирует или ослабляет нормальную биологическую сигнальную функцию рецептора ИЛ-4 1-ого типа и/или 2-ого типа. Человеческий ИЛ-4Rα имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 13. Рецептор ИЛ-4 1-ого типа представляет собой димерный рецептор, содержащий цепь ИЛ-4Rα и γc-цепь. Рецептор ИЛ-4 2-ого типа представляет собой димерный рецептор, содержащий цепь ИЛ-4Rα и цепь ИЛ-13Rα1. Рецепторы ИЛ-4 1-ого типа взаимодействуют и стимулируются ИЛ-4, тогда как рецепторы ИЛ-4 2-ого типа взаимодействуют и стимулируются как ИЛ-4, так и ИЛ-13. Таким образом, антагонисты ИЛ-4R, которые могут быть использованы в способах согласно данному изобретению, могут функционировать путем блокирования ИЛ-4-опосредованного сигналинга, ИЛ-13-опосредованного сигналинга или как ИЛ-4-, так и ИЛ-13-опосредованного сигналинга. Антагонисты ИЛ-4R согласно данному изобретению могут таким образом предотвращать взаимодействие ИЛ-4 и/или ИЛ-13 с рецептором 1-го типа или 2-ого типа.
[066]
Неограничивающие примеры классов антагонистов ИЛ-4R включают низкомолекулярные ингибиторы ИЛ-4R, анти-ИЛ-4R аптамеры, ингибиторы ИЛ-4R на основе пептидов (например, молекулы пептитела), «рецепторы-тела» (например, сконструированные молекулы, содержащие лигандсвязывающий домен компонента ИЛ-4R) и антитела или антигенсвязывающие фрагменты антител, которые специфически связывают ИЛ-4Rα человека. Как используется в данном документе, антагонисты ИЛ-4R также включают антигенсвязывающие белки, которые специфически связывают ИЛ-4 и/или ИЛ-13.
Анти-ИЛ-4Rα антитела и их антигенсвязывающие фрагменты
[067]
H
H
H
L
Согласно некоторым иллюстративным вариантам осуществления данного изобретения антагонист ИЛ-4R представляет собой анти-ИЛ-4Rα антитело или его антигенсвязывающий фрагмент. Используемый в данном документе термин «антитело» включает молекулы иммуноглобулина, содержащие четыре полипептидные цепи, две тяжелые (H) цепи и две легкие цепи (L), связанные между собой дисульфидными связями, а также их мультимеры (например, IgM). В типичном антителе каждая тяжелая цепь содержит вариабельную область тяжелой цепи (сокращенно обозначаемой в данном документе как HCVR или VH) и константную область тяжелой цепи. Константная область тяжелой цепи состоит из трех доменов: C1, C2 и C3. Каждая легкая цепь содержит вариабельную область легкой цепи (сокращенно обозначенной как LCVR или VL) и константную область легкой цепи. Константная область легкой цепи содержит один домен (C1). Области VH и VL можно далее подразделить на области гипервариабельности, которые называются определяющими комплементарность областями (CDR), которые чередуются с более консервативными областями, называемыми каркасными областями (FR). Каждая VH и VL состоит из трех CDR и четырех FR, расположенных от N-конца до С-конца в следующем порядке: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. В различных вариантах осуществления изобретения FR анти-ИЛ-4R антитела (или его антигенсвязывающей части) могут быть идентичны последовательностям зародышевой линии человека или могут быть естественными или модифицированы искусственно. Аминокислотная консенсусная последовательность может быть определена при помощи параллельного анализа двух или более CDR.
[068]
Используемый в данном документе термин «антитело» также включает антигенсвязывающие фрагменты молекул полноразмерного антитела. Термины «антигенсвязывающая часть» антитела, «антигенсвязывающий фрагмент» антитела и т.п., как используется в данном документе, включают любой природный, ферментативно доступный, синтетический или генетически модифицированный полипептид или гликопротеин, который специфически связывает антиген, чтобы образовать комплекс. Антигенсвязывающие фрагменты антитела могут быть получены, например, из молекул полноразмерного антитела с использованием любых подходящих стандартных методов, таких как протеолитическое расщепление или рекомбинантные методы генной инженерии, включающие манипуляцию и экспрессию ДНК, кодирующей вариабельные и необязательно константные домены антитела. Такая ДНК известна и/или легко доступна, например, из коммерческих источников, библиотек ДНК (включая, например, библиотеки фаговых антител), или может быть синтезирована. ДНК может быть секвенирована и обработана химически или с использованием методов молекулярной биологии, например, для организации одного или более вариабельных и/или константных доменов в подходящую конфигурацию, или для введения кодонов, создания остатков цистеина, модификации, добавления или удаления аминокислот, и т.д.
[069]
Неограничивающие примеры антигенсвязывающих фрагментов включают: (i) фрагменты Fab; (ii) фрагменты F (ab') 2; (iii) фрагменты Fd; (iv) фрагменты Fv; (v) одноцепочечные молекулы Fv (scFv); (vi) фрагменты dAb; и (vii) минимальные единицы распознавания, состоящие из аминокислотных остатков, которые имитируют гипервариабельную область антитела (например, выделенную определяющую комплементарность область (CDR), такую как пептид CDR3) или пептид FR3-CDR3-FR4 c ограниченной конформационной свободой. Другие сконструированные молекулы, такие как домен-специфические антитела, однодоменные антитела, антитела с удаленным доменом, химерные антитела, CDR-привитые антитела, диатела, триатела, тетратела, мини-антитела, наноантитела (например, моновалентные наноантитела, двухвалентные наноантитела и т. д.), иммунофармацевтические средства на основе модульного белка малого размера (SMIP) и вариабельные домены IgNAR (иммуноглобулиновый антигенный рецептор) акулы, также включены в выражение «антигенсвязывающий фрагмент», как используется в данном документе.
[070]
H
L
H
L
H
H
H
L
L
L
H
L
Антигенсвязывающий фрагмент антитела обычно содержит по меньшей мере один вариабельный домен. Вариабельный домен может быть любого размера или аминокислотная композиция и, как правило, содержать по меньшей мере одну CDR, которая примыкает или находится в пределах одной или более каркасных последовательностей. В антигенсвязывающих фрагментах, имеющих домен V, связанный с доменом V, домены V и V могут быть расположены относительно друг друга в любом подходящем порядке. Например, вариабельная область может быть димерной и содержать димеры V-V, V-V или V-V. Альтернативно, антигенсвязывающий фрагмент антитела может содержать мономерный домен V или V.
[071]
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
L
L
H
L
H
L
H
L
H
H
L
H
H
H
L
H
H
L
L
H
L
В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий фрагмент антитела может содержать по меньшей мере один вариабельный домен, ковалентно связанный по меньшей мере с одним константным доменом. Неограничивающие иллюстративные конфигурации вариабельных и константных доменов, которые могут быть найдены в антигенсвязывающем фрагменте антитела согласно данному изобретению, включают: (i) V-C1; (ii) V-C2; (iii) V-C3; (iv) V-C1-C2; (v) V-C1-C2-C3; (vi) V-C2-C3; (vii) V-C; (viii) V-C1; (ix) V-C2; (x) V-C3; (xi) V-C1-C2; (xii) V-C1-C2-C3; (xiii) V-C2-C3; и (xiv) V-C. В любой конфигурации вариабельных и константных доменов, включая любую из приведенных выше иллюстративных конфигураций, вариабельные и константные домены могут быть или напрямую связаны друг с другом, или могут быть связаны полной или частичной шарнирной, или линкерной областью. Шарнирная область может состоять из по меньшей мере 2 (например, 5, 10, 15, 20, 40, 60 или более) аминокислот, которые приводят к гибкой или полугибкой связи между соседними вариабельными и/или константными доменами в одной полипептидной молекуле. Кроме того, антигенсвязывающий фрагмент антитела согласно данному изобретению может содержать гомодимер или гетеродимер (или другой мультимер) любой из конфигураций вариабельных и константных доменов, перечисленных выше, в нековалентной связи друг с другом и/или с одним или более мономерными доменами V или V (например, при помощи дисульфидной связи(ей)).
[072]
2
et al
et al
J. Am. Chem. Soc
Epub
Dec. 4, 2012
Используемый в данном документе термин «антитело» также включает мультиспецифические (например, биспецифические) антитела. Мультиспецифическое антитело или антигенсвязывающий фрагмент антитела обычно содержат по меньшей мере два разных вариабельных домена, причем каждый вариабельный домен способен специфически связываться с отдельным антигеном или с другим эпитопом на том же антигене. Любой формат мультиспецифических антител может быть адаптирован для использования в контексте антитела или антигенсвязывающего фрагмента антитела согласно данному изобретению с использованием обычных методов, доступных в данной области техники. Например, данное изобретение включает способы, включающие использование биспецифических антител, в которых одно плечо иммуноглобулина специфично для ИЛ-4Rα или его фрагмента, а другое плечо иммуноглобулина специфично для второй терапевтической мишени или конъюгировано с терапевтическим фрагментом. Иллюстративные биспецифические форматы, которые могут быть использованы в контексте данного изобретения, включают без ограничения, например, биспецифические форматы на основе scFv или диатела, гибриды IgG-scFv, двойной вариабельный домен (DVD)-Ig, квадрому, выступы-во-впадины, обычную легкую цепь (например, обычную легкую цепь с выступами-во-впадину и т. д.), CrossMab, CrossFab, (SEED), лейциновую молнию, Duobody, IgG1/IgG2, Fab двойного действия (DAF) -IgG, и Mab биспецифические форматы (см., например, Klein . 2012, mAbs 4:6, 1-11, и ссылки, приведенные в нем, для обзора вышеперечисленных форматов). Биспецифические антитела также могут быть сконструированы с использованием конъюгации пептид/нуклеиновая кислота, например, где неприродные аминокислоты с ортогональной химической реактивностью используются для создания сайт-специфических антитело-олигонуклеотидных конъюгатов, которые затем самостоятельно собираются в мультимерные комплексы с определенным составом, валентностью и геометрией. (См., например, Kazane ., . [:]).
[073]
in vitro
in vivo
Антитела, используемые в способах согласно данному изобретению, могут быть антителами человека. Используемый в данном документе термин «человеческое антитело» предназначен для включения антител, имеющих вариабельные и константные области, полученные из последовательностей иммуноглобулина зародышевой линии человека. Человеческие антитела согласно изобретению могут, тем не менее, содержать аминокислотные остатки, не кодируемые последовательностями иммуноглобулина зародышевой линии человека (например, мутации, вводимые случайным или сайт-специфическим мутагенезомили при помощи соматической мутации ), например, в CDR и, в частности, CDR3. Однако термин «человеческое антитело», как используется в данном документе, не предназначен для включения антител, в которых последовательности CDR, полученные из зародышевой линии другого вида млекопитающих, такие как мышь, были привиты в каркасную последовательность человека.
[074]
et al
in vitro
in vivo
in vivo
H
L
H
L
Антитела, используемые в способах согласно данному изобретению, могут быть рекомбинантными антителами человека. Используемый в данном документе термин «рекомбинантное человеческое антитело» предназначен для включения всех человеческих антител, которые были получены, экспрессированы, созданы или выделены рекомбинантными средствами, такими как антитела, экспрессируемые с использованием рекомбинантного вектора экспрессии, трансфицированного в клетку-хозяина (описанного ниже), антитела, выделенного из рекомбинантной комбинаторной библиотеки человеческих антител (описанных далее ниже), антитела, выделенные из животного (например, мыши), которое является трансгенным для генов иммуноглобулина человека (см., например, Taylor . (1992) Nucl. Acids Res. 20: 6287-6295) или антитела, полученные, экспрессированные, созданные или выделенные любым другим способом, который включает сплайсинг последовательностей генов иммуноглобулина человека в другие последовательности ДНК. Такие рекомбинантные человеческие антитела имеют вариабельные и константные области, полученные из последовательностей иммуноглобулинов зародышевой линии человека. Однако в некоторых вариантах осуществления такие рекомбинантные человеческие антитела подвергаются мутагенезу  (или, когда используется трансгенное животное для последовательностей Ig человека, соматический мутагенез ) и, следовательно, аминокислотные последовательности областей V и V рекомбинантного антитела представляют собой последовательности, которые, будучи производными и связанными с последовательностями V и V зародышевой линии человека, не могут в естественных условиях существовать в зародышевом наборе антител человека i .
[075]
D
В соответствии с некоторыми вариантами осуществления антитела, используемые в способах согласно данному изобретению, специфически связывают ИЛ-4Rα. Термин «специфически связывается» или тому подобное означает, что антитело или его антигенсвязывающий фрагмент образуют комплекс с антигеном, который относительно устойчив в физиологических условиях. Способы определения того, специфично ли антитело связывается с антигеном, хорошо известны в данной области техники и включают, например, равновесный диализ, поверхностный плазмонный резонанс и тому подобное. Например, антитело, которое «специфически связывает» ИЛ-4Rα, как используется в контексте данного изобретения, включает антитела, которые связывают ИЛ-4Rα или его часть с K менее чем около 1000 нМ, менее чем около 500 нМ, менее чем около 300 нМ, менее чем около 200 нМ, менее чем около 100 нМ, менее чем около 90 нМ, менее чем около 80 нМ, менее чем около 70 нМ, менее чем около 60 нМ, менее чем около 50 нМ, менее чем около 40 нМ, менее чем около 30 нМ, менее чем около 20 нМ, менее чем около 10 нМ, менее чем около 5 нМ, менее чем около 1 нМ, менее чем около 0,5 нМ, менее чем около 0,25 нМ, менее чем около 0,1 нМ или менее чем около 0,05 нМ, как измерено в анализе поверхностного плазмонного резонанса. Выделенное антитело, которое специфически связывает человеческий ИЛ-4Rα, может, однако, обладать перекрестной реактивностью по отношению к другим антигенам, таким как молекулы ИЛ-4Rα от других (не относящихся к человеку) видов.
[076]
Согласно некоторым иллюстративным вариантам осуществления данного изобретения антагонист ИЛ-4R представляет собой анти-ИЛ-4Rα антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, содержащий вариабельную область тяжелой цепи (HCVR), вариабельную область легкой цепи (LCVR) и/или определяющие комплементарность области (CDR), содержащие любую из аминокислотных последовательностей анти-ИЛ-4R антител, как указано в патенте США № 7608693. В некоторых иллюстративных вариантах осуществления анти-ИЛ-4Rα антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, который может быть использован в контексте способов согласно данному изобретению, содержит определяющие комплементарность области тяжелой цепи (HCDR) вариабельной области тяжелой цепи (HCVR), содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1, и определяющие комплементарность области легкой цепи (LCDR) вариабельной области легкой цепи (LCVR), содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления анти-ИЛ-4Rα антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит три HCDR (HCDR1, HCDR2 и HCDR3) и три LCDR (LCDR1, LCDR2 и LCDR3), причем HCDR1 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 3; HCDR2 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4; HCDR3 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5; LCDR1 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6; LCDR2 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7, и LCDR3 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8. В некоторых вариантах осуществления анти-ИЛ-4R антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит HCVR, содержащий SEQ ID NO: 1, и LCVR, содержащий SEQ ID NO: 2. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления способы согласно данному изобретению включают применение анти-ИЛ-4R антитела, содержащего аминокислотные последовательности HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3 SEQ ID NO: 3-4-5-6-7-8 (упоминается и известно в данной области техники как «дупилумаб») или его биоэквивалент. В некоторых вариантах осуществления способы согласно данному изобретению включают применение анти-ИЛ-4R антитела, причем антитело содержит тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9. В некоторых вариантах осуществления анти-ИЛ-4R антитело содержит легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10. Иллюстративное антитело, содержащее тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9, и легкую цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10, представляет собой полностью человеческое анти-ИЛ-4R антитело, известное как дупилумаб. В соответствии с некоторыми иллюстративными вариантами осуществления способы согласно данному изобретению включают применение дупилумаба или его биоэквивалента. Используемый в данном документе термин «биоэквивалент» относится к анти-ИЛ-4R антителам или ИЛ-4R-связывающим белкам или их фрагментам, которые представляют собой фармацевтические эквиваленты или фармацевтические альтернативы, чья скорость и/или степень поглощения не демонстрируют существенной разницы с дупилумабом, при введении которого в той же молярной дозе в аналогичных экспериментальных условиях, или однократной или многократной дозе. В контексте изобретения данный термин относится к антигенсвязывающим белкам, которые связываются с ИЛ-4R, которые не имеют клинически значимых различий с дупилумабом в их безопасности, чистоте и/или активности.
[077]
Bordetella pertussis
В некоторых конкретных вариантах осуществления способы согласно данному изобретению включают применение антимышиного анти-ИЛ-4R антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, содержащего последовательность HCVR SEQ ID NO: 11 и последовательность LCVR SEQ ID NO: 12. В иллюстративном варианте осуществления способы по согласно данному изобретению включают применение антимышиного ант-ИЛ-4R антитела для повышения эффективности и/или безопасности коклюшной вакцины в мышиной модели аэрозольного заражения .
[078]
В некоторых конкретных вариантах осуществления способы согласно данному изобретению включают применение антиобезьяньего анти-ИЛ-4R антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, содержащего последовательность HCVR SEQ ID NO: 14 и последовательность LCVR SEQ ID NO: 15. В примерном варианте осуществления способы согласно данному изобретению включают применение антиобезьяньего анти-ИЛ-4R антитела в повышении эффективности и/или безопасности коклюшной вакцины в клинически значимой модели младенца павиана.
[079]
et al
Am J Respir Crit Care Med., 181
Другие анти-ИЛ-4Rα антитела, которые могут быть применены в контексте способов согласно данному изобретению, включают, например, антитело, упомянутое и известное в данной области техники как AMG317 (Corren ., 2010, (8):788-796), или любое из анти-ИЛ-4Rα антител, как указано в патенте США № 7186809, патенте США 7605237, патенте США № 7608693 или патенте США № 8092804.
[080]
Анти-ИЛ-4Rα антитела, используемые в контексте способов согласно данному изобретению, могут иметь рН-зависимые характеристики связывания. Например, анти-ИЛ-4Rα антитело для применения в способах согласно данному изобретению может проявлять сниженное связывание с ИЛ-4Rα при кислом рН по сравнению с нейтральным pH. Альтернативно, анти-ИЛ-4Rα антитело согласно изобретению может проявлять усиленное связывание с его антигеном при кислом рН по сравнению с нейтральным рН. Выражение «кислый рН» включает значения рН менее чем около 6,2, например, около 6,0, 5,95, 5,9, 5,85, 5,8, 5,75, 5,7, 5,65, 5,6, 5,55, 5,5, 5,45, 5,4, 5,35, 5,3, 5,25, 5,2, 5,15, 5,1, 5,05, 5,0 или менее. Используемый в данном документе термин «нейтральный рН» означает рН от около 7,0 до около 7,4. Выражение «нейтральный рН» включает значения рН около 7,0, 7,05, 7,1, 7,15, 7,2, 7,25, 7,3, 7,35 и 7,4.
[081]
D
D
D
D
В некоторых случаях «сниженное связывание с ИЛ-4Rα при кислом рН по сравнению с нейтральным рН» выражается в терминах отношения значения K связывания антитела с ИЛ-4Rα при кислом рН к значению K связывания антитела с ИЛ-4Rα при нейтральном рН (или наоборот). Например, антитело или его антигенсвязывающий фрагмент можно рассматривать как проявляющие «сниженное связывание с ИЛ-4Rα при кислом рН по сравнению с нейтральным pH» для целей данного изобретения, если антитело или его антигенсвязывающий фрагмент проявляет отношение Kкислое/нейтральное около 3,0 или выше. В некоторых иллюстративных вариантах отношение Kкислое/нейтральное для антитела или антигенсвязывающего фрагмента согласно данному изобретению может составлять около 3,0, 3,5, 4,0, 4,5, 5,0, 5,5, 6,0, 6,5, 7,0, 7,5, 8,0, 8,5, 9,0, 9,5, 10,0, 10,5, 11,0, 11,5, 12,0, 12,5, 13,0, 13,5, 14,0, 14,5, 15,0, 20,0, 25,0, 30,0, 40,0, 50,0, 60,0, 70,0, 100,0 или выше.
[082]
Антитела с рН-зависимыми характеристиками связывания могут быть получены, например, путем скрининга популяции антител на сниженное (или повышенное) связывание с определенным антигеном при кислом рН по сравнению с нейтральным рН. Кроме того, модификации антигенсвязывающего домена на аминокислотном уровне могут давать антитела с рН-зависимыми характеристиками. Например, путем замены одной или более аминокислот антигенсвязывающего домена (например, внутри CDR) на остаток гистидина может быть получено антитело с уменьшенным связыванием антигена при кислом рН относительно нейтрального рН. Используемый в данном документе термин «кислый рН» означает рН 6,0 или менее.
Фармацевтические композиции
[083]
et al.
Данное изобретение включает способы, которые включают введение антагониста ИЛ-4R пациенту, причем антагонист ИЛ-4R содержится в фармацевтической композиции. Фармацевтические композиции согласно изобретению составлены с подходящими носителями, вспомогательными веществами и другими агентами, которые обеспечивают подходящий перенос, доставку, переносимость и тому подобное. Множество подходящих лекарственных форм можно найти в формуляре, известном всем химикам-фармацевтам: Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, PA. К таким лекарственным формам относятся, например, порошки, пасты, мази, желе, воски, масла, липиды, липид-содержащие (катионные или анионные) везикулы (например, LIPOFECTIN™), конъюгаты ДНК, безводные абсорбционные пасты, эмульсии масла в воде и воды в масле, эмульсии Carbowax (полиэтиленгликоли различного молекулярного веса), полутвердые гели и полутвердые смеси, содержащие Carbowax. См. также Powell "Compendium of excipients for parenteral formulations" PDA (1998) J Pharm Sci Technol 52:238-311.
[084]
et al.
Pharmaceut. Res. 8
Доза антитела, вводимого пациенту в соответствии со способами согласно данному изобретению, может варьироваться в зависимости от возраста и размера пациента, симптомов, патологических состояний, пути введения и тому подобного. Доза обычно рассчитывается в соответствии с массой тела или площадью поверхности тела. В зависимости от тяжести патологического состояния можно корректировать частоту и продолжительность лечения. Эффективные дозы и схемы для введения фармацевтических композиций, содержащих анти-ИЛ-4R антитела, могут быть определены эмпирически; например, прогресс пациента может контролироваться путем периодической оценки, и доза корректируется соответствующим образом. Кроме того, межвидовое приведение доз может быть выполнено с использованием хорошо известных методов в данной области техники (например, Mordenti , 1991, :1351). Конкретные иллюстративные дозы анти-ИЛ-4R антител и схемы введения, включающие то же, что может быть использовано в контексте данного изобретения, раскрыты в данном документе в другом месте.
[085]
et al
Различные системы доставки известны и могут быть использованы для введения фармацевтической композиции, содержащей антагонист ИЛ-4R, например, инкапсулирование в липосомы, микрочастицы, микрокапсулы, рекомбинантные клетки, способные экспрессировать мутантные вирусы, опосредованный рецепторами эндоцитоз (см., например, Wu ., 1987, J. Biol. Chem. 262:4429-4432). Способы введения включают, но не ограничиваются ими, внутрикожный, внутримышечный, интраперитонеальный, внутривенный, подкожный, интраназальный, эпидуральный и пероральный пути введения. Композиция может вводиться любым подходящим способом, например, при помощи инфузии или болюсной инъекции, абсорбции через эпителиальные или кожно-слизистые оболочки (например, слизистую оболочку ротовой полости, слизистую оболочку прямой кишки и кишечника и пр.) и может применяться совместно с другими биологически активными агентами.
[086]
Фармацевтическая композиция согласно данному изобретению может быть доставлена подкожно или внутривенно с использованием стандартной иглы и шприца. Кроме того, в отношении подкожной доставки шприц-ручка для доставки легко может применяться для доставки фармацевтической композиции согласно данному изобретению. Такая шприц-ручка может быть многоразовой или одноразовой. В многоразовой шприце-ручке используется сменный картридж, который содержит фармацевтическую композицию. Как только вся фармацевтическая композиция внутри картриджа будет введена, а картридж пуст, пустой картридж можно легко извлечь и заменить новым картриджем, который содержит фармацевтическую композицию. Затем шприц-ручка для доставки может быть повторно использована. В одноразовой шприце-ручке для доставки нет сменного картриджа. Скорее, одноразовую шприц-ручку для доставки заполняют фармацевтической композицией, удерживаемой в резервуаре внутри устройства. После того как резервуар становится пустым от фармацевтической композиции, все устройство выбрасывается.
[087]
TM
TM
Многочисленные повторно используемые шприцы-ручки и автоинъекторы применялись для подкожной доставки фармацевтической композиции согласно данному изобретению. Примеры включают, но не ограничиваются ими, AUTOPEN™ (Owen Mumford, Inc., Вудсток, Великобритания), шприц-ручку DISETRONIC™ (Disetronic Medical Systems, Бергдорф, Швейцария), шприц-ручку HUMALOG MIX 75/25™, шприц-ручку HUMALOG™, шприц-ручку HUMALIN 70/30™ (Eli Lilly and Co., Индианаполис, Индиана), NOVOPEN™ I, II и III (Novo Nordisk, Копенгаген, Дания), NOVOPEN JUNIOR™ (Novo Nordisk, Копенгаген, Дания), шприц-ручку BD™ (Becton Dickinson, Франклин Лейкс, Нью-Джерси), OPTIPEN™, OPTIPEN PRO™, OPTIPEN STARLET™, и OPTICLIK™ (sanofi-aventis, Франкфурт, Германия), и это лишь некоторые из них. Примеры одноразовых шприцев-ручек для доставки, которые применяются для подкожной доставки фармацевтической композиции согласно данному изобретению, включают, но не ограничиваются ими, шприц-ручку SOLOSTAR™ (санофи-авентис), FLEXPEN™ (Novo Nordisk) и KWIKPEN™ (Eli Lilly), автоинъектор SURECLICK (Amgen, Таузанд-Окс, Калифорния), PENLET (Haselmeier, Штутгарт, Германия), EPIPEN (Dey, L.P.) и шприц-ручку HUMIRATM (Abbott Labs, Абботт Парк, Иллинойс), и это лишь некоторые из них.
[088]
В определенных ситуациях фармацевтическая композиция может поставляться в системе с контролируемым высвобождением. В одном варианте осуществления может использоваться насос (см. Langer, supra; Sefton, 1987, CRC Crit. Ref. Biomed. Eng. 14:201). В другом варианте могут быть использованы полимерные материалы; см., Medical Applications of Controlled Release, Langer and Wise (eds.), 1974, CRC Pres., Boca Raton, Florida. В еще одном варианте осуществления изобретения, система с контролируемым высвобождением может быть размещена вблизи цели композиции, что требует лишь доли системной дозы (см., например, Goodson, 1984, in Medical Applications of Controlled Release, supra, vol. 2, pp. 115-138). Другие системы с контролируемым высвобождением обсуждаются в обзоре Langer, 1990, Science 249:1527-1533.
[089]
Инъекционные формы могут включать лекарственные формы для внутривенных, подкожных, внутрикожных и внутримышечных инъекций, капельных инфузий и т. д. Эти инъекционные формы могут быть получены известными способами. Например, инъекционные формы могут быть получены, например, путем растворения, суспендирования или эмульгирования антитела или его соли, описанных выше, в стерильной водной среде или масляной среде, обычно используемой для инъекций. В качестве водной среды для инъекций выделяют, например, физиологический раствор, изотонический раствор, содержащий глюкозу и другие вспомогательные агенты и т. д., которые могут быть использованы в комбинации с подходящим солюбилизирующим агентом, таким как спирт (например, этанол) (например, пропиленгликоль, полиэтиленгликоль), неионное поверхностно-активное вещество (например, полисорбат 80, HCO-50 (полиоксиэтилен (50 моль) аддукт из гидрогенизированного касторового масла)] и т. д. В качестве масляной среды используют, например, кунжутное масло, соевое масло и т. д., которые могут использоваться в комбинации с солюбилизирующим агентом, таким как бензилбензоат, бензиловый спирт и т. д. Приготовленный таким образом препарат для инъекций предпочтительно фасовать в соответствующие ампулы.
[090]
Преимущественно фармацевтические композиции для перорального или парентерального применения, описанные выше, готовят в лекарственные формы в однократной дозе, подбираемой так, чтобы в нее вмещалась доза активных ингредиентов. Такие лекарственные формы в однократной дозе включают, например, таблетки, пилюли, капсулы, инъекции (ампулы), суппозитории и т. д.
[091]
Иллюстративные фармацевтические композиции, содержащие анти-ИЛ-4R антитело, которое можно использовать в контексте данного изобретения, раскрыты, например, в патенте США № 8945559.
Композиции вакцины
[092]
В некоторых вариантах осуществления данное изобретение относится к композиции вакцины, содержащей адъювант вакцины, причем адъювант вакцины включает антагонист ИЛ-4R. Используемый в данном документе термин «адъювант» относится к любому веществу, которое действует для ускорения, удлинения или усиления антигенспецифических иммунных реакций при использовании в комбинации с конкретными вакцинными антигенами. В контексте изобретения адъювант (например, антагонист ИЛ-4R) обладает свойством повышать эффективность вакцины у субъекта по сравнению с субъектом, которому вводят вакцину без антагониста ИЛ-4R. В некоторых вариантах осуществления применение антагониста ИЛ-4R повышает безопасность вводимой вакцины, например, путем снижения риска аллергической реакции на компонент вакцины. В некоторых вариантах осуществления применение антагониста ИЛ-4R в качестве адъюванта позволяет уменьшить количество вводимых доз вакцины. Например, введение одной дозы композиции вакцины с адъювантом (то есть антагонистом ИЛ-4R) согласно изобретению так же эффективно, как введение двух доз вакцины без адъюванта в соответствии с изобретением. Аналогично, введение одной или двух доз вакцины согласно изобретению с адъювантом в соответствии с изобретением так же эффективно, как введение трех доз вакцины без адъюванта в соответствии с изобретением. В некоторых вариантах осуществления композиция вакцины содержит второй адъювант (например, квасцы).
[093]
В некоторых вариантах осуществления антагонист ИЛ-4R представляет собой анти-ИЛ-4R антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, как описано в данном документе. В некоторых иллюстративных вариантах осуществления анти-ИЛ-4R антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит определяющие комплементарность области тяжелой цепи (HCDR) вариабельной области тяжелой цепи (HCVR), содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1, и определяющие комплементарность области легкой цепи (LCDR) вариабельной области легкой цепи (LCVR), содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах осуществления анти-ИЛ-4R антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит три HCDR (HCDR1, HCDR2 и HCDR3) и три LCDR (LCDR1, LCDR2 и LCDR3), причем HCDR1 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 3; HCDR2 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4; HCDR3 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5; LCDR1 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6; LCDR2 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7, и LCDR3 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8.
[094]
Bordetella pertussis
Corynebacterium diptheriae
Clostridium tetani
Mycobacterium tuberculosis
Plasmodium
Bacillus anthracis
Vibrio cholera
Salmonella typhi
Borrelia
Streptococus
pneumoniae
Staphylococcus
aureus
Escherichia coli
Clostridium
Mycobacterium leprae
Yersinia pestis
Иммуноген или антиген, пригодный для использования в композициях вакцины согласно данному изобретению, могут быть выбраны из группы, состоящей из инактивированных патогенов, аттенуированных патогенов, иммуногенных субъединиц (например, белков, полипептидов, пептидов, эпитопов, гаптенов) или рекомбинантных векторов экспрессии, включая плазмиды, имеющие иммуногенные вставки. В одном варианте осуществления данного изобретения иммуноген представляет собой инактивированный или убитый микроорганизм. В некоторых вариантах осуществления композиция вакцины содержит компонент из микробного организма, выбранный из группы, состоящей из , , , ,  spp., , , ,  spp., , , ,  spp., , , вируса гриппа, вируса ветряной оспы, вируса иммунодефицита человека (ВИЧ), респираторно-синцитиального вируса (РСВ), полиовируса, вируса натуральной оспы, вируса бешенства, ротавируса, вируса папилломы человека, вирус Эбола, вируса гепатита А, вируса гепатита В, вируса гепатита С, лиссавируса, вируса кори, вируса эпидемического паротита и вируса краснухи. В некоторых вариантах осуществления композиция вакцины содержит компонент вакцины, выбранный из группы, состоящей из столбнячного анатоксина, дифтерийного анатоксина, инактивированного коклюшного токсина, филаментозного гемагглютинина, пертактина, фимбрий 2-ого типа, фимбрий 3-его типа и формалин-инактивированного респираторно-синцитиального вируса.
[095]
Композиции вакцины согласно данному изобретению содержат по меньшей мере один фармацевтически приемлемый носитель. Термин «фармацевтически приемлемый носитель» относится к носителю, который может вводиться пациенту вместе с антигеном и не разрушает его фармакологическую активность и нетоксичен при введении в дозах, достаточных для доставки фармацевтически эффективного количества соединения. Фармацевтически приемлемые носители или вспомогательные вещества для применения являются стандартными. Remington's Pharmaceutical Sciences, E. W. Martin, Mack Publishing Co., Easton, Pa., 15th Edition (1975), описывает композиции и составы, подходящие для фармацевтической доставки вакцины. В общем, тип носителя или вспомогательного вещества будет зависеть от конкретного используемого способа введения. Например, лекарственные формы для парентерального применения обычно включают жидкости для инъекций, которые содержат в качестве основы фармацевтически и физиологически приемлемые жидкости, такие как вода, физиологический раствор, сбалансированные солевые растворы, водный раствор декстрозы, глицерин и т.п. Для твердых композиций (например, лиофилизированных пастилок, порошков, драже, таблеток или капсулированных форм) стандартные нетоксичные твердые носители или вспомогательные вещества могут включать, например, фармацевтические степени чистоты маннита, лактозы, крахмала или стеарата магния. В дополнение к биологически нейтральным носителям или вспомогательным веществам иммуногенные композиции, подлежащие введению, могут содержать незначительные количества нетоксичных вспомогательных веществ, таких как смачивающие или эмульгирующие агенты, консерванты и буферные агенты для поддержания рН и тому подобное, например, ацетат натрия или монолаурат сорбитана.
[096]
Как будет понятно специалистам в данной области техники, вакцины соответствующим образом составлены так, чтобы быть совместимой с ее предполагаемым способом введения. Примеры подходящих путей введения включают парентеральное, например, внутривенное, внутрикожное, подкожное, внутримышечное, внутрибрюшинное, пероральное (например, буккальный, ингаляционный, назальный и ингаляционный спрей), внутрикожное, трансдермальное (местное), трансмукозальное и внутриглазное введение.
Схемы применения
[097]
Способы согласно данному изобретению в соответствии с некоторыми вариантами осуществления включают введение субъекту вакцины в комбинации с антагонистом ИЛ-4R (например, анти-ИЛ-4R антителом). Используемый в данном документе термин «в комбинации с» означает, что вакцину вводят до, после или одновременно с антагонистом ИЛ-4R. Термин «в комбинации с» также включает последовательное или совместное введение антагониста ИЛ-4R и вакцины.
[098]
Например, при введении «до» антагониста ИЛ-4R, вакцину можно вводить за более чем 72 часа, за около 72 часа, около 60 часов, около 48 часов, около 36 часов, около 24 часов, около 12 часов, около 10 часов, около 8 часов, около 6 часов, около 4 час, около 2 часов, около 1 часа, около 30 минут, около 15 минут или за около 10 минут до введения антагониста ИЛ-4R. При введении «после» антагониста ИЛ-4R, вакцину можно вводить через около 10 минут, около 15 минут, около 30 минут, около 1 час, около 2 часа, около 4 часа, около 6 часов, около 8 часов, около 10 часов, около 12 часов, около 24 часов, около 36 часов, около 48 часов, около 60 часов, около 72 часа или через более чем 72 часа после введения антагониста ИЛ-4R. «Одновременное» введение с антагонистом ИЛ-4R означает, что вакцину вводят субъекту в разделенной на дозы лекарственной форме в течение менее 5 минут (до, после или в то же время) введения антагониста ИЛ-4R, или вводят субъекту в виде разовой лекарственной формы комбинированной дозы, содержащей как вакцину, так и антагонист ИЛ-4R.
[099]
Данное изобретение включает способы, включающие введение субъекту антагониста ИЛ-4R с частотой введения дозы около четырех раз в неделю, два раза в неделю, один раз в неделю, раз в две недели, раз в три недели, раз в четыре недели, один раз в пять недель, один раз в шесть недель, один раз в восемь недель, один раз в двенадцать недель или менее часто до тех пор, пока не достигается терапевтический ответ. В некоторых вариантах осуществления, включающих введение анти-ИЛ-4R антител, можно применять однократную дозу в количестве около 25 мг, 50 мг, 150 мг или 300 мг.
[0100]
Согласно некоторым вариантам осуществления данного изобретения в течение определенного времени субъекту несколько доз антагониста ИЛ-4R. Способы в соответствии с этим аспектом изобретения включают последовательное введение субъекту нескольких доз антагониста ИЛ-4R. Используемый в данном документе термин «последовательное введение» означает, что каждая доза антагониста ИЛ-4R вводится субъекту в разные моменты времени, например, в разные дни, разделенные заданным интервалом (например, часами, днями, неделями или месяцами). Данное изобретение включает способы, которые включают последовательное введение пациенту одноразовой начальной дозы антагониста ИЛ-4R с последующей одной или более вторичными дозами антагониста ИЛ-4R и необязательно с последующей одной или более третичными дозами антагониста ИЛ-4R.
[0101]
Термины «начальная доза», «вторичные дозы» и «третичные дозы» относятся к временной последовательности введения антагониста ИЛ-4R. Таким образом, «начальная доза» представляет собой дозу, которая вводится в начале курса лечения (также называемая «исходной дозой»); «вторичные дозы» представляют собой дозы, вводимые после начальной дозы; а «третичные дозы» представляет собой дозы, вводимые после вторичных доз. Начальные, вторичные и третичные дозы могут содержать одинаковое количество антагониста ИЛ-4R, но обычно могут отличаться друг от друга в терминах частоты введения. Однако в некоторых вариантах осуществления количество антагониста ИЛ-4R, содержащегося в исходных, вторичных и/или третичных дозах, варьируется относительно друг друга (например, скорректировано вверх или вниз по мере необходимости) в ходе лечения. В некоторых вариантах осуществления начальная доза включает первое количество антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, и одна или более вторичных доз включают второе количество антитела или его антигенсвязывающего фрагмента. В некоторых вариантах осуществления первое количество антитела или его фрагмента представляет собой 1,5x, 2x, 2,5x, 3x, 3,5x, 4x или 5x второго количества антитела или его антигенсвязывающего фрагмента. В некоторых вариантах осуществления одну или более (например, 1, 2, 3, 4 или 5) доз вводят в начале схемы лечения в виде «нагрузочной дозы», а затем последующие дозы, которые вводят менее часто (например, "поддерживающие дозы"). Например, антагонист ИЛ-4R можно вводить пациенту, нуждающемуся в этом, в нагрузочной дозе от около 300 мг до около 600 мг, за которой следует одна или более поддерживающих доз от около 25 мг до около 300 мг. В одном варианте осуществления начальная доза и одна или более вторичных доз включают от 10 мг до 600 мг антагониста ИЛ-4R, например, от 100 мг до 400 мг антагониста ИЛ-4R, например, 10 мг, 25 мг, 50 мг, 100 мг, 150 мг, 200 мг, 250 мг, 300 мг, 400 мг или 500 мг антагониста ИЛ-4R.
[0102]
В одном примерном варианте осуществления данного изобретения каждую вторичную и/или третичную дозу вводят от 1 до 14 (например, 1, 1½, 2, 2½, 3, 3½, 4, 4½, 5, 5½, 6, 6½, 7, 7½, 8, 8½, 9, 9½, 10, 10½, 11, 11½, 12, 12½, 13, 13½, 14, 14½ или более) недель после непосредственно предшествующей дозы. Фраза «непосредственно предшествующая доза», как используется в данном документе, означает в последовательности множественных введений дозу антагониста ИЛ-4R, которая вводится пациенту до введения крайней следующей дозы в последовательности без промежуточных доз.
[0103]
Способы в соответствии с этим аспектом изобретения могут включать введение пациенту любого количества вторичных и/или третичных доз антагониста ИЛ-4R. Например, в некоторых вариантах осуществления пациенту вводят только одну вторичную дозу. В других вариантах осуществления пациенту вводят две или более (например, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 или более) вторичных доз. Аналогичным образом, в некоторых вариантах осуществления пациенту вводят только одну третичную дозу. В других вариантах осуществления пациенту вводят две или более (например, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 или более) третичных доз.
[0104]
В вариантах осуществления, включающих множественные вторичные дозы, каждую вторичную дозу можно вводить с той же частотой, что и другие вторичные дозы. Например, каждую вторичную дозу можно вводить пациенту через 1-6 недель после непосредственно предшествующей дозы. Аналогично, в вариантах осуществления, включающих множественные третичные дозы, каждую третичную дозу можно вводить с той же частотой, что и другие третичные дозы. Например, каждую третичную дозу можно вводить пациенту через 2-4 недели после непосредственно предшествующей дозы. Альтернативно, частота, с которой вторичные и/или третичные дозы вводят пациенту, может изменяться в течение курса.
Дозировка
[0105]
Количество антагониста ИЛ-4R (например, анти-ИЛ-4R антитела), вводимого в комбинации с вакциной субъекту в соответствии со способами согласно данному изобретению, как правило, является иммунологически эффективным количеством. Используемый в данном документе термин «иммунологически эффективное количество» означает количество антагониста ИЛ-4R, которое приводит к повышению эффективности вакцины или усиленному, или повышенному иммунному ответу на вакцину. В контексте изобретения фраза «иммунологически эффективное количество» означает количество антагониста ИЛ-4R, которое приводит к одному или более из: (а) более высокого клиренса микробного патогена из инфицированного хозяина; (b) снижения уровня IgE, вызванного вакциной; (c) увеличения антиген-специфического IgG типа Th1; (d) снижения уровня антиген-специфического IgG типа Th2; (e) снижения количества доз вакцины; и/или (f) лучшей защиты против и задержки инфекции при заражении патогеном. В некоторых вариантах осуществления термин «иммунологически эффективное количество» включает профилактически эффективное количество или терапевтически эффективное количество антагониста ИЛ-4R, которое означает количество, необходимое для эффективного иммунного ответа для предотвращения или лечения, или облегчения симптома, или признака инфекционного заболевания. В некоторых вариантах осуществления фраза «иммунологически эффективное количество» означает количество антагониста ИЛ-4R, которое приводит к обнаруживаемому улучшению одного или более симптомов, или признаков у пациента с атопическим дерматитом, астмой, назальным полипозом, хроническим риносинуситом, эозинофильным эзофагитом, или аллергией.
[0106]
В случае анти-ИЛ-4R антитела иммунологически эффективное количество может составлять от около 0,05 мг до около 600 мг, например, около 0,05 мг, около 0,1 мг, около 1,0 мг, около 1,5 мг, около 2,0 мг, около 10 мг, около 20 мг, около 30 мг, около 40 мг, около 50 мг, около 60 мг, около 70 мг, около 80 мг, около 90 мг, около 100 мг, около 110 мг, около 120 мг, около 130 мг, около 140 мг, около 150 мг, около 160 мг, около 170 мг, около 180 мг, около 190 мг, около 200 мг, около 210 мг, около 220 мг, около 230 мг, около 240 мг, около 250 мг, около 260 мг, около 270 мг, около 280 мг, около 290 мг, около 300 мг, около 310 мг, около 320 мг, около 330 мг, около 340 мг, около 350 мг, около 360 мг, около 370 мг, около 380 мг, около 390 мг, около 400 мг, около 410 мг, около 420 мг, около 430 мг, около 440 мг, около 450 мг, около 460 мг, около 470 мг, около 480 мг, около 490 мг, около 500 мг, около 510 мг, около 520 мг, около 530 мг, около 540 мг, около 550 мг, около 560 мг, около 570 мг, около 580 мг, около 590 мг или около 600 мг анти-ИЛ-4R антитела. В некоторых вариантах осуществления субъекту вводят 10 мг, 25 мг, 50 мг, 75 мг, 150 мг или 300 мг анти-ИЛ-4R антитела.
[0107]
Количество антагониста ИЛ-4R, содержащегося в отдельных дозах, может быть выражено в единицах миллиграмм антитела на килограмм массы тела (т. е. мг/кг) субъекта. Например, антагонист ИЛ-4R можно вводить субъекту в дозе от около 0,0001 до около 100 мг/кг массы тела пациента.
ПРИМЕРЫ
[0108]
Следующие примеры приведены с тем, чтобы предоставить специалистам в данной области техники полное раскрытие и описание способов изготовления и применения способов и композиций согласно изобретению и не предназначены для ограничения объема изобретения, которое изобретатели считают, как свое изобретение. Предприняты меры для обеспечения точности в отношении применяемых чисел (например, количеств, температуры и т.д.), но следует учитывать наличие некоторых экспериментальных погрешностей и отклонений. Если не указано иное, части являются массовыми частями, молекулярная масса представляет собой среднюю молекулярную массу, температура представлена в градусах Цельсия, а давление равно или близко к атмосферному.
Пример 1: Введение анти-ИЛ-4R антитела значительно снижает общий IgE в сыворотке, индуцированный коклюшной вакциной
[0109]
Bordetella pertussis
В этом примере оценивали влияние анти-ИЛ-4R антитела на общие уровни IgE в сыворотке, индуцированные цельноклеточной коклюшной (wP) или бесклеточной коклюшной (aP) вакциной, с использованием инфекционной модели заражения вирусом аэрозольного заражения . В данной области техники известно, что столбнячная, а также wP и aP вакцины индуцируют логарифмическое повышение IgE у некоторых пациентов. В таблице 1 перечислены компоненты aP и wP вакцин, используемые в приведенных в данном документе примерах.
Таблица 1. Компоненты бесклеточной коклюшной (aP; TDaP) и цельноклеточной коклюшной (wP; DTP) вакцин
<b>Компонент вакцины</b>
<b>TDaP</b>
<b>DTP</b>
<b>Адасель</b><b>(sanofi pasteur)</b>
<b>Тройной антиген</b><b>(Институт сыворотки Индии)</b>
Столбнячный анатоксин
5 Lf
≥ 5 Lf
Дифтерийный анатоксин
2 Lf
≤ 25 Lf
Цельноклеточный <i>Bordetella pertussis</i>
┴
≥ 4 МЕ
Инактивированный коклюшный токсин
2,5 мкг
┴
Филаментозный гемагглютинин
5 мкг
┴
Пертактин
3 мкг
┴
Фибрии 2-го и 3-его типов
5 мкг
┴
Алюминий (из фосфата алюминия)
1,5 мг
≥ 1,5 мг
МЕ: международные единицы; Lf: порог флоккуляции
[0110]
B. pertussis
Мышей C57BL/6 иммунизировали или вакциной TDaP [Adacel (Sanofi Pasteur)], или вакциной DTP (Институт сыворотки Индии, Пуна, Индия) за 42 и 14 суток до аэрозольного заражения вирулентным штаммом (0 сутки). Лечение с использованием антитела против ИЛ-4R мыши («анти-ИЛ-4Rα») или изотипического контрольного антитела начиналось за неделю до первоначальной иммунизации и продолжалось еженедельно до 7 суток. Схема лечения изображена на фиг. 1. Анти-ИЛ-4Rα антитело, используемое в этом примере, представляет собой антитело против ИЛ-4R мыши, содержащее HCVR с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 11 и LCVR с аминокислотной последовательностью, содержащей SEQ ID NO: 12.
[0111]
Сыворотку забирали у наивных и иммунизированных мышей (12 мышей на группу) на 0-е сутки. Уровни общего IgE анализировали с помощью ИФА. Уровни общего IgE в сыворотке определяли с помощью ИФА с использованием биотин-конъюгированного антитела против мышиного IgE и конъюгированного с пероксидазой стрептавидина. Уровни антител выражают как общий IgE (мкг/мл), как определено из стандартной кривой.
[0112]
Лечение мышей с помощью анти-ИЛ-4Rα значительно уменьшало уровни общего IgE в сыворотке у мышей, которые были иммунизированы вакцинами TDaP (aP) и DTP (wP) по сравнению с мышами, получавшими лечение с помощью изотипического контрольного антитела (фиг. 2). Снижение IgE в сыворотке указывает на снижение Th2-ответа и/или предотвращение или уменьшение аллергических реакций, вызванных вакциной.
Пример 2: Эффект лечения с использованием анти-ИЛ-4R антитела на антигенспецифические сывороточные антитела IgG у мышей, вакцинированных коклюшной вакциной
[0113]
Bordetella pertussis
B. pertussis
B. pertussis
В этом примере влияние анти-ИЛ-4R антитела на антигенспецифические сывороточные антитела, индуцированные цельноклеточной коклюшной (wP, Th1 иммунный ответ) или бесклеточной коклюшной (aP; Th2 иммунный ответ) вакцины, оценивали с использованием инфекционной модели аэрозольного заражения. Мышей C57BL/6 иммунизировали или бесклеточной коклюшной (aP) вакциной [Adacel TDaP (Sanofi Pasteur)], или цельноклеточной коклюшной (wP) (DTP, Институт сыворотки Индии, Пуна, Индия) за 42 и 14 суток до аэрозольного заражения вирулентным штаммом  (0 сутки). Лечение с использованием антитела против ИЛ-4R мыши («анти-ИЛ-4Rα») или изотипического контрольного антитела начиналось за неделю до первоначальной иммунизации и продолжалось еженедельно до 7 суток. Схема лечения изображена на фиг. 1. Анти-ИЛ-4Rα антитело, используемое в этом примере, представляет собой антитело против ИЛ-4R мыши, содержащее HCVR с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 11 и LCVR с аминокислотной последовательностью, содержащей SEQ ID NO: 12. Сыворотку собирали у наивных и иммунизированных мышей (4 мыши на группу на эксперимент) в день заражения. Антигенспецифические сывороточные антитела анализировали с помощью ИФА с использованием связанной с планшетом убитые нагреванием  или FHA (5 мг/мл). Связанные антитела были обнаружены с использованием биотин-конъюгированных антимышиных антител IgG, IgG1, IgG2a или IgG2c и конъюгированного с пероксидазой стрептавидина. Уровни антител выражаются в виде среднего конечного титра, определяемого экстраполяцией линейной части кривой титрования до 2 СО выше фонового значения, полученного с помощью неиммунной мышиной сыворотки.
[0114]
B. pertussis
B. pertussis
B. pertussis
Сывороточный IgG, специфический для убитых нагреванием , анализировали у мышей, получавших лечение с wP, тогда как сывороточный IgG, специфический для филаментозного гемагглютинина (FHA), анализировали для мышей, получавших лечение с aP. Иммунизация с использованием aP или wP индуцировала -специфический IgG; титры общего IgG не изменялись при помощи лечения с анти-ИЛ-4Rα у мышей, иммунизированных aP, но небольшое (хотя и значительное) увеличение антигенспецифического общего IgG наблюдалось у мышей, иммунизированных wP (фиг. 3). Иммунизация с aP индуцировала преимущественно анти-FHA антитела IgG1 (что указывает на специфический ответ Th2), которые были значительно уменьшены лечение с анти-ИЛ-4Rα (фиг. 4). Титры FHA-специфических IgG2a и IgG2c (указывающие на ответ Th1) были значительно увеличены лечением с использованием анти-ИЛ-4Rα; титры были значительно выше у иммунизированных aP мышей, получавших лечение анти-ИЛ-4Rα, по сравнению с иммунизированными aP мышами, получавшими лечение изотипическим контрольным антителом (фиг. 5 и 6). Не было существенной разницы в титрах антител IgG1, специфических к убитым нагреванием (HK-BP), между экспериментальными группами, иммунизированными wP, но наблюдалось незначительное увеличение титров HK-BP-специфических IgG2a и IgG2c в группе, получавшей лечение с использованием анти-ИЛ-4Rα по сравнению с группой, получавшей лечение с использованием изотипического контрольного антитела. Это увеличение титров IgG2a и IgG2c не является значимым для отдельных экспериментов (каждый из которых состоит из 4 мышей на группу), но является значительным, когда объединены результаты нескольких экспериментов.
[0115]
Таким образом, лечение анти-ИЛ-4Rα уменьшало ответ Th2, индуцированный иммунизацией aP вакциной, и усиливала ответ Th1; это отразилось на переходе от сывороточных IgG1 к IgG2a/c антителам и уменьшении концентрации IgE.
Пример 3: Эффект анти-ИЛ-4R антител на антигенспецифическое продуцирование цитокинов
[0116]
ex vivo
Bordetella pertussis
B. pertussis
B. pertussis
В этом примере было исследовано влияние анти-ИЛ-4R-антител на антигенспецифическое продуцирование цитокинов после повторной стимуляции спленоцитов  с использованием модели аэрозольного заражения . Мышей C57BL/6 иммунизировали или бесклеточной коклюшной (aP) вакциной [Adacel TDaP (Sanofi Pasteur)], или цельноклеточной коклюшной (wP) (DTP, Институт сыворотки Индии, Пуна, Индия) за 42 и 14 суток до аэрозольного заражения вирулентным штаммом  (0 сутки). Лечение с использованием антитела против ИЛ-4R мыши («анти-ИЛ-4Rα») или изотипического контрольного антитела начиналось за неделю до первоначальной иммунизации и продолжалось еженедельно до 7 суток. Схема лечения изображена на фиг. 1. Анти-ИЛ-4Rα антитело, используемое в этом примере, представляет собой антитело против ИЛ-4R мыши, содержащее HCVR с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 11 и LCVR с аминокислотной последовательностью, содержащей SEQ ID NO: 12. Сыворотку собирали у наивных и иммунизированных мышей (4 мыши на группу на эксперимент) в день заражения (0 сутки). Антигенспецифическое продуцирование цитокинов клетками селезенки анализировали с помощью ИФА. Спленоциты получали из селезенки мышей механическим разрушением ткани селезенки. Спленоциты культивировали с указанным количеством или концентрациями убитых нагреванием  или очищенной FHA. Супернатанты удаляли через 72 часа, а концентрации ИЛ-13, ИЛ-17 и ИФН-γ определяли с помощью ИФА.
[0117]
B. pertussis-
Клетки селезенки из иммунизированных aP мышей, получавших лечение анти-ИЛ-4Rα, продуцировали дозозависимую, значительно более высокую концентрацию интерферона-гамма (ИФН-γ) в ответ на стимуляцию FHA, чем из мышей, получающих лечение с помощью изотипического контроля (фиг. 7). Концентрации ИФН-γ были обнаружены в клетках селезенки у всех мышей, получавших лечение анти-ИЛ-4Rα, но в низких концентрациях у одной из четырех иммунизированных aP мышей, получавших лечение изотипическим контролем. Наблюдалась тенденция к уменьшению ИЛ-13 в клетках селезенки из иммунизированных aP мышей, получавших лечение анти-ИЛ-4Rα (данные не показаны). FHA-специфический ИЛ-17 не был обнаружен. Продуцирование специфического ИЛ-17 и ИФН-γ спленоцитами из wP-иммуннизированных мышей после повторной стимуляции было одинаковым во всех иммунизированных группах (данные не показаны).
Пример 4: Лечение с использованием анти-ИЛ-4R антитела повышает эффективность коклюшной вакцины
[0118]
Bordetella pertussis
B. pertussis
В этом примере защитную эффективность анти-ИЛ-4R антитела в качестве адъюванта для цельноклеточной коклюшной (wP) или бесклеточной коклюшной (aP) вакцины оценивали с использованием инфекционной модели аэрозольного заражения . Мышей C57BL/6 иммунизировали или бесклеточной коклюшной (aP) вакцины [Adacel TDaP (Sanofi Pasteur)], или цельноклеточной коклюшной (wP) (DTP, Институт сыворотки Индии, Пуна, Индия) за 42 и 14 суток до аэрозольного заражения вирулентным штаммом  (0 сутки). Лечение с использованием антитела против ИЛ-4R мыши («анти-ИЛ-4Rα») или изотипического контрольного антитела начиналось за неделю до первоначальной иммунизации и продолжалось еженедельно до 7 суток. Схема лечения изображена на фиг. 1. Анти-ИЛ-4Rα антитело, используемое в этом примере, представляет собой антитело против ИЛ-4R мыши, содержащее HCVR с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 11 и LCVR с аминокислотной последовательностью, содержащей SEQ ID NO: 12.
[0119]
B. pertussis
Количество колониеобразующих единиц (КОЕ) на легкое оценивали через 0, 3, 7, 10 и 14 суток после заражения . Вкратце, курс заражения сопровождался определением числа КОЕ на легкие из групп по 4 мыши через интервалы после заражения. Легкие асептически извлекали и гомогенизировали в 1 мл стерильного физиологического раствора на льду. Неразведенный и серийно разведенный гомогенат из отдельных легких был раскапан в трех экземплярах на чашках Петри с питательной средой Борде-Жангу, а количество КОЕ было рассчитано после 5-суточной инкубации. Предел обнаружения составлял приблизительно 0,3 log10 КОЕ на легкое для групп из 4 мышей в каждый момент времени.
[0120]
B. pertussis
Иммунизация wP вакциной обеспечила наивысший уровень защиты от аэрозольного заражения живыми  (фиг. 8). Лечение с использованием анти-ИЛ-4Rα у мышей, иммунизированных wP, устраняло инфекцию, аналогично изотипическому контролю у иммунизированных wP контролю. Лечение анти-ИЛ-4Rα значительно повысило эффективность aP вакцины; мышей, иммунизированных вакциной aP и получавших лечение анти-ИЛ-4α, на 3-и сутки было значительно меньше легочной бактериальной нагрузки по сравнению с мышами, получавшими лечение изотипическим контролем. Лечение анти-ИЛ-4Rα повышало эффективность aP вакцины на треть в зависимости от площади под кривыми клиренса. Результаты этого примера демонстрируют, что блокада ИЛ-4R в целом является полезной терапевтической стратегией для усиления защитного действия вакцин, которые вызывают ответ Th2.
Пример 5: Введение анти-ИЛ-4R антитела повышает эффективность однократной дозы вакцины
[0121]
Bordetella pertussis
В этом примере для оценки влияния анти-ИЛ-4R антитела на эффективность однократной дозы вакцины использовали инфекционную модель аэрозольного заражения .
[0122]
B. pertussis.
Мышей C57BL/6 один раз иммунизировали или aP вакциной (Adacel TDaP, Sanofi Pasteur), или wP вакциной (DTP, Институт сыворотки Индии, Пуна, Индия) за три недели до аэрозольного заражения вирулентным штаммом  Лечение антителом против мышиного ИЛ-4R («анти-ИЛ-4Rα») или изотипическим контрольным антителом было начато за неделю до иммунизации и продолжались еженедельно на протяжении всего исследования. Схема лечения изображена на фиг. 9. Анти-ИЛ-4Rα антитело, используемое в этом примере, представляет собой антитело, содержащее HCVR с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 11 и LCVR с аминокислотной последовательностью, содержащей SEQ ID NO: 12.
[0123]
B. pertussis
Затем мышей заражали ; КОЕ в легком оценивали через 0, 3, 7, 14 и 21 сутки после инфицирования. Вкратце, курс заражения сопровождался определением числа КОЕ на легкие из групп по 4 мыши через интервалы после заражения. Легкие асептически извлекали и гомогенизировали в 1 мл стерильного физиологического раствора на льду. Неразведенный и серийно разведенный гомогенат из отдельных легких был раскапан в трех экземплярах на чашках Петри с питательной средой Борде-Жангу, а количество КОЕ было рассчитано после 5-суточной инкубации. Предел обнаружения составлял приблизительно 0,3 log10 КОЕ на легкое для групп из 4 мышей в каждый момент времени.
[0124]
B. pertussis
10
Иммунизация с помощью wP вакцины обеспечивала наивысший уровень защиты от аэрозольного заражения живыми  (фиг. 10), а эффективность wP вакцины не изменялась лечением с помощью анти-ИЛ-4Rα. Лечение анти-ИЛ-4Rα значительно повысило эффективность aP вакцины, даже когда вакцина была уменьшена до разовой дозы. Мыши, иммунизированные aP и получавшие лечение анти-ИЛ-4α, освобождались от бактериальной инфекции до 14-ых суток, тогда как мыши, иммунизированные aP и получавшие лечение изотипическим контролем, по-прежнему имели 4 log бактерий на 14-е сутки и не полностью были освобождены от инфекции к 21-ым суткам. Лечение анти-ИЛ-4Rα повышало эффективность aP вакцины на треть в зависимости от площади под кривыми клиренса.
[0125]
B. pertussis
Анти-ИЛ-4Rα значительно повышал эффективность aP вакцины, при этом инфекция  полностью устранялась до 14-ых суток. Протокол иммунизации с одной дозой четко иллюстрирует повышенную эффективность aP вакцины в комбинации с лечением анти-ИЛ-4Rα.
Пример 6: Влияние низких доз анти-ИЛ-4R антитела на ответ Th1 на бесклеточную коклюшную вакцину
[0126]
В этом примере влияние анти-ИЛ-4R антитела на общие сывороточные и антигенспецифические антитела, индуцированные aP вакциной, оценивают в мышиной модели (как описано в примерах с 1 по 5 в данном документе). Мышей C57BL/6 иммунизируют бесклеточной коклюшной (aP) вакциной [Adacel TDaP (Sanofi Pasteur)]. Мышей лечили с использованием антитела против мышиного ИЛ-4R («анти-ИЛ-4Rα») или изотипическим контрольным антителом до первоначальной иммунизации (см. ниже). Анти-ИЛ-4Rα антитело, используемое в этом примере, представляет собой антитело против ИЛ-4R мыши, содержащее HCVR с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 11 и LCVR с аминокислотной последовательностью, содержащей SEQ ID NO: 12.
[0127]
В первом эксперименте от 1 до 5 доз анти-ИЛ-4R антитела вводят животным в разных группах в концентрации 25 мг/кг массы тела мыши перед вакцинацией с использованием аР. Одной группе животных дополнительно вводят анти-ИЛ-4R антитело, одновременно с aP вакциной. Одной группе животных дополнительно вводят бустерную дозу aP вакцины через 4 недели после введения усиленной начальной дозы.
[0128]
В другом эксперименте от 1 до 5 доз анти-ИЛ-4R антитела вводят животным в разных группах в концентрации 10 мг/кг массы тела мыши перед вакцинацией с использованием аР. Одной группе животных дополнительно вводят анти-ИЛ-4R антитело, одновременно с aP вакциной. Одной группе животных дополнительно вводят бустерную дозу aP вакцины через 4 недели после введения усиленной начальной дозы.
[0129]
В другом эксперименте от 1 до 5 доз анти-ИЛ-4R антитела вводят животным в разных группах в концентрации 1 мг/кг массы тела мыши перед вакцинацией с использованием аР. Одной группе животных дополнительно вводят анти-ИЛ-4R антитело, одновременно с aP вакциной. Одной группе животных дополнительно вводят бустерную дозу aP вакцины через 4 недели после введения усиленной начальной дозы.
[0130]
B. pertussis
Сыворотку забирают от наивных и иммунизированных мышей через 7 суток и 21 сутки после введения вакцины. Антигенспецифические сывороточные антитела анализируют с помощью ИФА с использованием связанной с планшетом убитых нагреванием  или FHA (5 мг/мл). Связанные антитела обнаруживают с использованием биотин-конъюгированных антимышиных антител IgG, IgG1, IgG2a или IgG2c и конъюгированного с пероксидазой стрептавидина. Уровни антител выражаются в виде среднего конечного титра, определяемого экстраполяцией линейной части кривой титрования до 2 СО выше фонового значения, полученного с помощью неиммунной мышиной сыворотки.
[0131]
Ожидается, что мыши, которым вводили низкие дозы анти-ИЛ-4R антитела до и/или одновременно с введением aP вакцины, демонстрируют переход от сывороточного IgG1 к сывороточным IgG2a/c антителам и снижение концентрации IgE. Кроме того, ожидается, что даже единичная доза анти-ИЛ-4R антитела, введенная до вакцинации с использованием aP вакцины, приведет к снижению уровней IgG1 в сыворотке и увеличению уровней IgG2a/c в сыворотке и снижению уровней IgE (т.е. изменение ответа Th2 на Th1). Таким образом, лечение с анти-ИЛ-4Rα в малых дозах до и/или во время введения вакцины уменьшает ответ Th2, индуцированный иммунизацией с использованием aP вакцины, и усиливает ответ Th1.
Пример 7: Блокада ИЛ-4R в качестве адъюванта к aP вакцине в модели младенца павиана
[0132]
et al
Эффективность анти-ИЛ-4R антитела в качестве адъюванта к бесклеточной коклюшной вакцины (aP) оценивали в клинически значимой модели младенца бабуина (Warfel  2014, PNAS 111: 787). Анти-ИЛ-4Rα антитело, используемое в этом примере, представляет собой антитело против ИЛ-4R мыши, содержащее HCVR с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 14 и LCVR с аминокислотной последовательностью, содержащей SEQ ID NO: 15 (далее именуемое как «mAb1»).
[0133]
Дизайн исследования приведен в таблице 2.
Таблица 2: Дизайн исследования вакцинации и лечения
Группа
Вакцина
Схема вакцинации (месяцы)
Лечение
Схема лечения (месяцы)
Количество животных
1
Невакцинированные
Отсутствует
Плацебо
1, 2, 3, 4, 5, 6
2
2
Невакцинированные
Отсутствует
mAb1
1, 2, 3, 4, 5, 6
2
3
aP
2, 4, 6
Плацебо
1, 2, 3, 4, 5, 6
4
4
aP
2, 4, 6
mAb1
1, 2, 3, 4, 5, 6
4
5
aP
2, 4, 6
mAb1
2, 4, 6
4
6
wP
2, 4, 6
Плацебо
1, 2, 3, 4, 5, 6
4
[0134]
B. pertussis
Павианов иммунизируют человеческими дозами aP или wP, внутримышечно на 2, 4 и 6 месяц. Для исследований с использованием aP животных вакцинируют с помощью Daptacel (Sanofi Pasteur) или Infanrix (GlaxoSmithKline). Для исследований с использованием wP, животных вакцинируют с использованием тройного антигена (Институт сыворотки Индии (Serum Institute of India)). Невакцинированные животные сопоставляются по возрасту. Все животные получают плацебо или mAb1 подкожно в возрасте 1, 2, 3, 4, 5 и 6 месяцев с фиксированной дозой, за исключением группы 5 (таблица 2), которая получает mAb1 в возрасте 2, 4 и 6 месяцев при фиксированной дозе. Цельную кровь забирают на сыворотку и МКПК в возрасте 1, 2, 3, 4, 5 и 6 месяцев. Сыворотку оценивают по уровням mAb1 и уровням коклюш-специфических общих IgG, IgG1, IgG4 и IgE. Животных заражают  в возрасте от 6 до 8 месяцев.
[0135]
B. pertussis
Ожидается, что животные, получавшие лечение анти-ИЛ-4R антителом до вакцинации с использованием aP, демонстрируют увеличение уровней коклюш-специфического IgG1 (Th1-специфический) и снижение уровней коклюш-специфического IgG4 (Th2-специфический). Что более важно, животные, получавшие лечение анти-ИЛ-4R антителом до вакцинации с использованием aP вакцины, защищены от заболевания при заражении , о чем свидетельствует более быстрое освобождение легких от бактериальной инфекции.
Пример 8: Клиническое исследование бесклеточной коклюшной вакцины в комбинации с анти-ИЛ-4R антителом у подростков в возрасте 10-15 лет
[0136]
Эффективность анти-ИЛ-4R антитела в качестве адъюванта определяется в клиническом исследовании у подростков в возрасте 10-15 лет. Одной из целей исследования является изучение эффективности бесклеточной коклюшной вакцины (TDaP, Adacel , Sanofi Pasteur) в комбинации с дупилумабом. Дупилумаб представляет собой полностью человеческое анти-ИЛ-4R антитело, содержащее тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10; пару аминокислотной последовательности HCVR/LCVR, содержащую SEQ ID NO: 1/2; и последовательности CDR тяжелой и легкой цепей, содержащие SEQ ID NO: 3-8.
[0137]
Исследуемое лечение включает 400 мг нагрузочной дозы дупилумаба на 1-е сутки, за которой следуют 200 мг еженедельной дозы; или двойную дозу плацебо на 1-е сутки, за которой следует еженедельная доза плацебо. Субъекты исследования получают инъекцию в 200 мг дупилумаба или плацебо подкожно на 8, 15, 22, 29, 36 и 43 сутки. На 29-е сутки все пациенты получают одну дозу вакцины TDaP (Adacel, sanofi). Субъектов контролируют на аллергическую реакцию на вакцину. Титры вакцин-специфического сывороточного Ig проверяют на 1, 4, 8, 16 и 24 недели после инъекции вакцины.
[0138]
Показатели эффективности, измеренные в этом исследовании, включают: (a) титры IgE; (б) титры FHA-специфического общего IgG; и (с) титры FHA-специфического IgG1 и IgG4.
[0139]
Первичной конечной точкой исследования является доля пациентов, получавших дупилумаб, с положительным ответом на вакцину на 43-и сутки. Положительный ответ определяется как один или более из: (i) более низких титров IgE в исследуемых субъектах, получавших лечение дупилумабом; (ii) более высоких титров вакцин-специфического IgG4 (например, анти-FHA) в исследуемых субъектах, получавших лечение с помощью дупилумаба; и (iii) меньшего количества нежелательных явлений (аллергических реакций) у пациентов, получавших лечение дупилумабом, по сравнению с плацебо.
[0140]
В конце исследования субъекты, получавшие лечение с помощью дупилумаба, имеют одно или более из следующего: (a) более низкий титр IgE по сравнению с плацебо; (б) более высокий уровень общего анти-FHA IgG по сравнению с плацебо; (c) более низкий титр IgG4 и более высокий титр IgG1 по сравнению с плацебо. Более 50% субъектов в исследовании демонстрируют положительный ответ на вакцину.
Пример 9: Клиническое исследование бустерных доз бесклеточной коклюшной вакцины в комбинации с анти-ИЛ-4R антителом у детей в возрасте до 10 лет
[0141]
Эффективность анти-ИЛ-4R антитела в качестве адъюванта определяется в клиническом исследовании у детей в возрасте младше 10 лет. Одной из целей исследования является изучение эффективности бесклеточной коклюшной вакцины (DTaP, Sanofi Pasteur) в комбинации с дупилумабом. Дупилумаб представляет собой полностью человеческое анти-ИЛ-4R антитело, содержащее тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9, и легкую цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10; пару аминокислотной последовательности HCVR/LCVR, содержащую SEQ ID NO: 1/2; и последовательности CDR тяжелой и легкой цепей, содержащие SEQ ID NO: 3-8.
[0142]
Исследуемые лечения включают 50 мг нагрузочной дозы дупилумаба на 1-е сутки, за которой следуют 25 мг дозы; или двойную дозу плацебо на 1-е сутки, за которой следует доза плацебо. Исследуемые субъекты получают подкожную инъекцию 25 мг дупилумаба (или плацебо) раз в две недели на 15, 29, 43, 57, 71, 85, 99 и 113 сутки; за которыми следуют инъекции вторичной дозы на 141, 155, 162, 169, 176 и 183 сутки. Все пациенты получают дозу вакцины (DTaP) на 43-и сутки, за которой следуют бустерные дозы на 113 и 176 сутки.
[0143]
Субъектов контролируют на аллергическую реакцию на вакцину. Титры вакцин-специфического сывороточного Ig проверяют через 1, 4 и 8 недель после каждой дозы вакцины.
[0144]
Показатели эффективности, измеренные в этом исследовании, включают: (a) титры IgE; (б) титры FHA-специфического общего IgG; и (с) титры FHA-специфического IgG1 и IgG4.
[0145]
Первичной конечной точкой исследования является доля пациентов, получавших дупилумаб, с положительным ответом на вакцину на сутки. Положительный ответ определяется как один или более из: (i) более низких титров IgE у исследуемых субъектов, получавших лечение дупилумабом; (ii) более высоких титров вакцин-специфического IgG1 (например, анти-FHA) у исследуемых субъектов, получавших лечение с помощью дупилумаба; и (iii) меньшего количества нежелательных явлений (аллергических реакций) у пациентов, получавших лечение дупилумабом, по сравнению с плацебо.
[0146]
В конце исследования субъекты, получавшие лечение с помощью дупилумаба, имеют одно или более из: (a) более низкого титра IgE по сравнению с плацебо; (б) более высокого общего уровня анти-FHA IgG по сравнению с плацебо; (c) более низкого титра IgG4 и более высокого титра IgG1 по сравнению с плацебо. Более 50% субъектов в исследовании демонстрируют положительный ответ на вакцину. Более 50% пациентов, получавших лечение с помощью дупилумаба, демонстрируют более высокие титры IgG1.
Пример 10: Клиническое исследование для изучения ответов на вакцины у взрослых с атопическим дерматитом, получающих лечение с помощью дупилумаба
[0147]

Это было 32-недельное рандомизированное двойное слепое плацебо-контролируемое исследование с параллельными группами, в котором оценивались ответы на иммунизацию адсорбированным столбнячным анатоксином Adacel (столбнячный, дифтерийный и бесклеточный коклюшный [TDaP]) и вакцинирование Меномьюн (менингококковый полисахарид) взрослых с умеренной или тяжелой формой AD, которых лечили подкожным введением дупилумаба. Удовлетворяющие критериям пациенты (194 пациента) были рандомизированы в соотношении 1: 1 для получения дупилумаба или плацебо в течение 16 недель. Рандомизация была стратифицирована по степени тяжести заболевания (IGA умеренной против тяжелой). Период лечения составлял 16 недель с последующим периодом наблюдения 16 недель.
Цели исследования
[0148]
Основная цель исследования заключалась в оценке Т-клеточно-зависимых вакцинных ответов пациентов с умеренным и тяжелым атопическим дерматитом (AD), которые должным образом не контролируются лекарственными средствами местного применения, которые получали лечение с использованием 300 мл подкожно (п/к) еженедельно.
[0149]
Вторичные цели исследования заключались в оценке: (i) Т-клеточно-зависимых вакцинных ответов пациентов с умеренным и тяжелым AD, которые получали лечение с использованием 300 мг дупилумаба, п/к, еженедельно; (ii) безопасности совместно применяемых вакцин и п/к дупилумаба у пациентов с умеренным и тяжелым AD; и (iii) эффективности дупилумаба у пациентов с умеренным и тяжелым AD.
[0150]
Первичной конечной точкой исследования была доля пациентов с положительным ответом на столбнячный анатоксин (вакцина Адасель [TDaP]) на 16-й неделе исследования (т. е. через 4 недели после иммунизации). Положительный ответ был определен как увеличение в 4 раза по сравнению с исходными титрами противостолбнячного IgG через 4 недели после введения Адаселя для пациентов с исходными титрами ≥0,1 МЕ/мл или титром ≥0,2 МЕ/мл для пациентов с исходными титрами <0,1 МЕ/мл.
[0151]
Вторичными конечными точками были: (i) доля пациентов с положительным ответом на 16-й неделе исследования с положительным ответом, определяемым как увеличение в 2 раза по сравнению с исходным титром противостолбнячного IgG перед вакцинацией для пациентов с титрами антител к столбнячному анатоксину перед вакцинацией ≥0,1 МЕ/мл или титром ≥ 0,2 МЕ/мл для пациентов с титрами перед вакцинацией <0,1 МЕ/мл; (ii) ответ на Меномьюн: титр SBA ≥8 для серогруппы C (Immunological Basis for Immunization Series Module 15: Meningococcal Disease, World Health Organization 2010); (iii) доля пациентов, которые достигают общей оценки исследователя (IGA) (0-1) на 16-ой неделе, (iv) доля пациентов, достигших по меньшей мере 50%-ного снижения показателей площади экземы и уровня тяжести (EASI) на 16-й неделе, (v) доля пациентов, достигших как минимум 75% -ного снижения показателей индекса распространенности и тяжести экземы (EASI) на неделе 16; (vi) изменение от исходного показателя в максимальной интенсивности зуда по числовой оценочной шкале зуда (NRS) на 16-ой неделе; (vii) изменение от исходного показателя в BSA на 16-ой неделе; (viii) изменение от исходного показателя в эритеме общей субъективной шкалы оценивания (GISS) на 1-й неделе; (ix) изменение от исходного показателя при инфильтрации/образовании папул GISS на 16-й неделе; (x) изменение от исходного показателя в экскориации GISS на 16-й неделе (xii) изменение от исходного уровня в лихенификации GISS на 16-й неделе; (xii) изменение от исходного показателя до 16-й недели в измеренной по пациент-ориентированной мере экземы (POEM); (xiii) частота возникновения нежелательных явлений, возникших в ходе лечения (НЯВЛ) вплоть до 20 недели; (xiv) частота досрочного завершения терапии исследуемым препаратом по причине НЯВЛ вплоть до 20 недели; и (xv) заболеваемость кожными инфекциями вплоть до 20 недели.
Дизайн исследования
[0152]
Исследование состояло из скринингового периода, периода лечения и периода наблюдения. Пациенты получали еженедельную инъекцию дупилумаба с 1-ых суток по 15-ю неделю. После проведения соответствующей подготовки пациентов для самостоятельного введения препарата/ лицо, осуществляющее уход, самостоятельно вводило дупилумаб в течение недель, в течение которых не планировалось посещение клиники (5, 6, 7, 9, 10, 11, 13, 14 и 15 недели). Сотрудник исследовательского центра связывался с пациентом по телефону для проведения посещений на 5, 6, 7, 9, 10, 11, 13, 14 и 15 недели. На 12 неделе пациенты получали вакцину Адасель (TDaP) и вакцину Меномьюн. Реакция на вакцинацию (титры противостолбнячного IgG и титры сывороточного бактерицидного антитела (SBA) к менингококковым серогруппам) оценивали через 4 недели.
[0153]
Пациенты, которые использовали или не использовали смягчающие средства, от слабо- до более высокоактивных кортикостероидов для местного применения и/или ингибиторов кальциневрина для местного применения, были потенциально пригодными для регистрации. Пациенты получали лечение местной терапией AD и/или с системными кортикостероидами с низкими дозами (≤10 мг преднизона или его эквивалентом) в любое время во время исследования и могли продолжать изучать препарат. Один курс системных кортикостероидов с высокой дозой (любая доза стероидов> 10 мг преднизона или его эквивалента) использовался в качестве резервной терапии в течение 14 суток после начала и заканчивался с 1-ых по 10-ые сутки во время исследования, но временно прекращали применение исследуемого препарата в течение этого времени. У пациентов, получавших системные кортикостероиды с высокой дозой для AD, могли повторно инициировать 5 периодов полувыведения исследуемого препарата после того, как применение системного кортикостероида было остановлено, до тех пор, пока у пациента не было никаких клинически значимых нежелательных явлений (НЯ), связанных с конкретным иммунодепрессантом, и после консультации и согласования с медицинским монитором. После с 10 недели по 16 неделю использование высоких доз системных кортикостероидов было запрещено.
[0154]
Для когорты дупилумаба, пациенты получали нагрузочную дозу 600 мг п/к на 1-е сутки, затем 300 мг р/нед с 1 по 15 неделю.
[0155]
Для когорты плацебо пациенты получали нагрузочную дозу п/к на 1-е сутки, а затем недельную дозу плацебо п/к с 1 по 15 неделю.
[0156]
Вакцина Адасель (TDaP): Пациенты были вакцинированы в/м вакциной Адасель (TDaP) на 12 неделе.
[0157]
Вакцина Меномьюн (Menomune): Пациенты были вакцинированы п/к вакциной Меномьюн на 12 неделе.
[0158]
Адасель (Tdap), изготовленный Sanofi Pasteur, был предоставлен в предварительно заполненных шприцах. Каждая 0,5 мл доза содержала 5 единиц Lf (единицы иммунной флоккуляции) столбнячного анатоксина (T), 2 Lf дифтерийного анатоксина (d) и бесклеточных коклюшных антигенов (2,5 мкг обезвреженного коклюшного токсина, 5 мкг филаментозного гемагглютинина [FHA], 3 мкг пертактина [PRN], 5 мкг фимбрий 2 и 3 типа [FIM]). Другие ингредиенты на 0,5 мл дозы включали 1,5 мг фосфата алюминия (0,33 мг алюминия) в качестве адъюванта, ≤5 мкг остаточного формальдегида, <50 нг остаточного глутарового альдегида и 3,3 мг (0,6% об/об) 2 феноксиэтанола (не в качестве консерванта). Антигены такие же, как в DAPTACELR, адсорбированные дифтерийный и столбнячный анатоксины и бесклеточная коклюшная вакцина (DTaP); однако вакцину Adacel (Tdap) составляют с уменьшенными количествами дифтерийного и обезвреженного коклюшного токсина. Меномьюн производства Sanofi Pasteur был предоставлен в качестве однодозового флакона, для п/к применения. Разбавитель (0,6 мл) для однодозовой лекарственной формы содержал стерильную, апирогенную дистиллированную воду без консерванта. Разбавитель (6 мл) для многодозовой лекарственной формы содержал стерильную, апирогенную дистиллированную воду и тимеросал, производное ртути, которое добавляли в качестве консерванта для восстановленной вакцины.
Исследуемая популяция
[0159]
Целевая популяция включала взрослых с умеренной до тяжелой формы AD, заболевание которых недостаточно контролируется с помощью лекарственных средств для местного применения, в том числе тех, кто не был подходящим кандидатом для лечения эффективной местной терапией.
[0160]
Критерии включения:
Пациент должен был отвечать следующим критериям, чтобы иметь право на включение в исследование: (1) взрослые мужчины или женщины в возрасте от 18 до 64 лет с хроническим AD (согласно единым критериям Американской академии дерматологии [Eichenfeld 2004]), которые присутствовали как минимум за 3 года до осмотра; (2) пациенты с задокументированной недавней историей (в течение 6 месяцев до скринингового визита) недостаточного ответа на достаточный курс амбулаторного лечения с помощью лекарственных средств против AD для местного применения или для которых нецелесообразно применять лекарственные средства против AD для местного применения (например, из-за побочных эффектов или рисков безопасности); (3) показатель индекса распространенности и тяжести экземы (EASI) ≥16 при скрининговом визите и визите для оценки исходного состояния; (4) показатель общей оценки исследователя (IGA) ≥3 (по шкале 0-4 IGA) при скрининговом визите и визите для оценки исходного состояния; и (5) ≥10% площади поверхности тела (BSA), вовлеченной в AD при скрининговом визите и визите для оценки исходного состояния.
[0161]
Примечание для критерия № 2: недостаточный ответ определялся как неспособность достичь и поддерживать ремиссию или состояние низкой активности заболевания (сопоставимо с IGA от 0=чистое до 2=легкое), несмотря на каждодневное лечение с использованием средне- и сильнодействующих кортикостероидов для местного применения (± ингибитор кальциневрина для местного применения), применяемые в течение не менее 28 суток или в течение максимальной продолжительности, рекомендованной инструкцией по применению препарата (например, 14 суток для сильнодействующих кортикостероидов для местного применения), в зависимости от того, что было короче. Пациенты с документированным системным лечением AD за последние 6 месяцев также считались пациентами, недостаточно ответившими на лечение препаратами для местного применения, и были пригодны для лечения с помощью дупилумаба после соответствующего периода вымывания. Важными побочными эффектами или рисками для безопасности были те, которые перевешивали потенциальные преимущества лечения и включали непереносимость лечения, реакции гиперчувствительности, значительную атрофию кожи и системные эффекты, как оценивает исследователь или лечащий врач пациента. Приемлемая документация включала одновременные записи на диаграмме, в которых фиксировались актуальные рецепты лечения и результаты лечения, или документация исследователя, основанная на коммуникации с лечащим врачом пациента. Если документация была недостаточной, потенциальные пациенты подвергались повторному скринингу после того, как была получена такая документация (например, у пациентов, продемонстрировавших, что они не смогли провести 28-дневный курс лечения с использованием средне- и высокоэффективных кортикостероидов для местного применения [± ингибитор кальциневрина для местного применения]).
[0162]
К участию в исследование допускались пациенты, применяющие или не применяющие смягчающие средства, кортикостероиды для местного применения +/- ингибиторы кальциневрина для местного применения, но они должны были отвечать следующим требованиям: (i) пациенты, получавшие агент(ы) против AD для местного применения в начале исследования, должны были находится на неизменяемой схеме применения в течение по меньшей мере 14 суток или по меньшей мере максимальной длительности лечения, рекомендованный инструкцией по применению препарата, в зависимости от того, что меньше; и (ii) пациенты, не получавшие агента(ы) против AD для местного применения в начале исследования, возможно, не использовали их в течение 7 суток до визита для оценки исходного состояния.
Процедуры и методы оценки
[0163]
Эффективность дупилумаба в этой популяции оценивали путем измерения титров противостолбнячного IgG и титров SBA для менингококковых серогрупп, опросника качества жизни (КЖ) и результатов, основанных на опросе пациентов. Ответ на вакцины оценивали путем измерения титров противостолбнячного IgG и титров SBA для менингококковых серогрупп.
Переменные анализа
[0164]
Были обобщены следующие переменные демографических характеристик и исходных характеристик:
[0165]
Демографические переменные: возраст при скрининге (лет), возрастная группа (<65, >= 65), пол, этническая принадлежность, раса, исходный вес (кг), рост (м) и ИМТ (кг/м2)
[0166]
Характеристики исходного уровня: (i) продолжительность заболевания AD, (ii) изотипы иммуноглобулина (общий IgG, IgM, IgA и IgE), титры противостолбнячнного IgG и титры SBA для групп полисахаридных антигенов A, C, Y и W-135, (iii) параметры, связанные с атопическим дематитом (AD), включая показатель числовой оценочной шкалы зуда (NRS), показатель глобальной шкалы оценки исследователя (IGA), показатель индекса распространенности и тяжести экземы (EASI), общую субъективную шкалу оценивания (GISS), площадь поверхности тела, вовлеченную в атопический дерматит (BSA), общую оценку пациентом состояния болезни и пациент-ориентированную меру экземы (POEM). Параметры, связанные с AD, описаны в публикации патентной заявки США № US2014/0072583, включенной в данный документе в качестве ссылки во всей своей полноте.
Статистический план
[0167]
Полная выборка пациентов для анализа (FAS) включала всех рандомизированных пациентов, которые получали любой исследуемый препарат; она основана на назначении лечения (согласно рандомизации). Конечные точки оценки эффективности были проанализированы с использованием FAS. Выборка для анализа безопасности (SAF) включает всех рандомизированных пациентов, которые получали любой исследуемый препарат; она основана на полученном лечении (согласно фактически полученному лечению). Комплаентность/применение и все клинические параметры безопасности были проанализированы с использованием SAF. Пациентов с ответом на столбнячную вакцину на 16-й неделе исследования изучали путем сравнения пропорций пациентов с положительным ответом на лечение между дупилумабом и плацебо с использованием критерия Кохрана-Мантеля-Гензеля (CMH), стратифицированного по рандомизированным стратам (тяжести заболевания). 90% ДИ был представлен со статистическим p-значением. Для непрерывных конечных точек использовали модель со смешанными эффектами для повторных измерений (MMRM). Эта модель включает факторы (фиксированные эффекты) для лечения, рандомизированные страты (тяжесть заболевания), предусмотренные исследованием визиты, взаимодействие с эффектом фактора лечения в зависимости от визита, и соответствующее исходное значение. Статистические выводы были получены из MMRM. Среднее значение, полученное методом наименьших квадратов, и 90% ДИ было выведено из модели MMRM, а p-значение не было определено.
Результаты
[0168]
Демографические и исходные характеристики представлены в таблицах 3-6.
[0169] Таблица 3: Демографические характеристики исследуемой популяции
Плацебо (N=97)
300 мг дупилумаба (N=97)
Общее (N=194)
Возраст (годы) (СО)
40 (14,0)
39 (13,6)
40 (13,8)
Этническая группа (n, %)
Не испанского или латиноамериканского происхождения
84 (86,6%)
81 (83,5%)
165 (85,1%)
Испанского или латиноамериканского происхождения
13 (13,4%)
15 (15,5%)
28 (14,4%)
Не регистрировалось
0
1 (1,0%)
1 (0,5%)
Раса N (%)
Европеоидная
67 (69,1%)
60 (61,9%)
127 (65,5%)
Негроидная
17 (17,5%)
23 (23,7%)
40 (20,6%)
Монголоидная
11 (11,3%)
12 (12,4%)
23 (11,9%)
Коренные американцы (индейцы)
0
1 (1,0%)
1 (1,5%)
Другое
2 (2,1%)
1 (1,0%)
3 (1,5%)
Пол n (%)
Мужской
46 (47,4%)
49 (50,5%)
95 (49,0%)
Женский
51 (52,6%)
48 (49,5%)
99 (51,0%)
Рост (см) (СО)
167,7 (11,31)
169,0 (10,08)
168,3 (10,71)
Масса (кг) (СО)
81,4 (19,00)
81,1 (19,08)
81,3 (18,99)
ИМТ (кг/м2) (СО)
29,0 (7,72)
27,9 (5,64)
28,5 (6,78)
[0170] Таблица 4: Исходные титры антител
Плацебо (N=97)
300 мг дупилумаба (N=97)
Общее (N=194)
Общий IgG (г/л) (СО)
12,4 (3,4)
12,2 (3,5)
12,3 (3,4)
Общий IgM (г/л) (СО)
1,0 (0,6)
1,0 (0,5)
1,0 (0,6)
Общий IgA (г/л) (СО)
2,8 (1,2)
2,5 (1,0)
2,7 (1,1)
Общий IgE (г/л) (СО)
1275,7 (1298,2)
1051,4 (1250,5)
1157,1 (1273,5)
Титр противостолбнячного IgG, МЕ/мл
1,7 (1,9)
1,5 (1,3)
1,6 (1,6)
Титр сывороточного бактерицидный Ат (БАС (бактерицидная активность сыворотки)), среднее (СО)
132,5 (639,26)
62,2 (252,70)
97,5 (486,98)
[0171] Таблица 5: Исходные характеристики для AD-ассоциированных параметров
Плацебо (N=97)
300 мг дупилумаба (N=97)
Общее (N=194)
Площадь поверхности тела (BSA)
49,3 (24,6)
45,8 (23,0)
47,5 (23,8)
Индекс распространенности и тяжести псориаза (EASI)
31,2 (13,8)
29,0 (13,1)
30,1 (13,4)
Показатель общей оценки исследователя (IGA)
3,4 (0,5)
3,4 (0,5)
3,4 (0,5)
Пациенты с оценкой IGA 3
60 (61,9%)
58 (59,8%)
118 (60,8%)
Пациенты с оценкой IGA 4
37 (38,1%)
39 (40,2%)
76 (39,2%)
Еженедельное пиковое значение числовой оценочной шкалы зуда (NRS)
7,3 (2,2)
7,4 (2,2)
7,3 (2,2)
Общий балл глобальной субъективной шкалы оценивания
8,8 (1,8)
8,8 (1,8)
8,8 (1,8)
Оценка пациент-ориентированной меры экземы (POEM)
20,6 (5,6)
21,5 (6,0)
21,1 (5,8)
Общая оценка пациентом стадии заболевания
Неудовлетворительно (1)
35 (36,1%)
40 (41,2%)
75 (38,7%)
Удовлетворительно (2)
44 (45,4%)
35 (36,1%)
79 (40,7%)
Хорошо (3)
15 (15,5%)
18 (18,6%)
33 (17,0%)
Очень хорошо (4)
3 (3,1%)
2 (2,1%)
5 (2,6%)
Отлично (5)
0
2 (2,1%)
2 (1,0%)
Таблица 6: Краткое описание медицинского анамнеза AD
Плацебо, р/нед (N=97)
300 мг дупилумаба, р/нед (N=97)
Всего (N=194)
Продолжительность атопического дерматита (лет)
N
97
97
194
Среднее (СО)
27 (17,2)
28 (15,0)
28 (16,1)
Медиана
26
26
26
Мин.: Макс.
4: 60
3: 60
3: 60
Диагностический возраст хронического атопического дерматита
97
97
194
Возраст до 5 лет
47 (48,5%)
58 (59,8%)
105 (54,1%)
Возраст от 5 до 9 лет
13 (13,4%)
8 (8,2%)
21 (10,8%)
Возраст от 10 до 19 лет
15 (15,5%)
12 (12,4%)
27 (13,9%)
Возраст от 20 до 29 лет
6 (6,2%)
4 (4,1%)
10 (5,2%)
Возраст от 30 до 39 лет
4 (4,1%)
3 (3,1%)
7 (3,6%)
Возраст 40 лет и старше
12 (12,4%)
12 (12,4%)
24 (12,4%)
Число (%) пациентов с личной историей болезни атопических/аллергических патологических состояний
97
97
194
Атопический дерматит
97 (100%)
97 (100%)
194 (100%)
Обострение AD/Инфекция кожи
93 (95,9%)
81 (83,5%)
174 (89,7%)
Другие аллергии
70 (72,2%)
65 (67,0%)
135 (69,6%)
Аллергический ринит
50 (51,5%)
54 (55,7%)
104 (53,6%)
Астма
54 (55,7%)
51 (52,6%)
105 (54,1%)
Пищевая аллергия
35 (36,1%)
42 (43,3%)
77 (39,7%)
Аллергический конъюнктивит
20 (20,6%)
22 (22,7%)
42 (21,6%)
Аллергическая сыпь
29 (29,9%)
21 (21,6%)
50 (25,8%)
Иммунодепрессивная терапия
22 (22,7%)
13 (13,4%)
35 (18,0%)
Хронический риносинусит
13 (13,4%)
10 (10,3%)
23 (11,9%)
Чувствительность к аспирину
1 (1,0%)
4 (4,1%)
5 (2,6%)
Число (%) пациентов с личной историей болезни атопических/аллергических патологических состояний
Полипы носа
6 (6,2%)
4 (4,1%)
10 (5,2%)
Хирургическое лечение полипов носа
2 (2,1%)
3 (3,1%)
5 (2,6%)
Эозинофильный эзофагит
1 (1,0%)
0
1 (0,5%)
Число (%) пациентов с семейной историей болезни атопических/аллергических патологических состояний
68
68
136
Атопический дерматит
41 (42,3%)
51 (52,6%)
92 (47,4%)
Астма
32 (33,0%)
31 (32,0%)
63 (32,5%)
Аллергический ринит
26 (26,8%)
27 (27,8%)
53 (27,3%)
Другие аллергии
28 (28,9%)
21 (21,6%)
49 (25,3%)
Пищевая аллергия
15 (15,5%)
18 (18,6%)
33 (17,0%)
Аллергическая сыпь
9 (9,3%)
11 (11,3%)
20 (10,3%)
Аллергический конъюнктивит
8 (8,2%)
10 (10,3%)
18 (9,3%)
Хронический риносинусит
5 (5,2%)
7 (7,2%)
12 (6,2%)
Полипы носа
1 (1,0%)
3 (3,1%)
4 (2,1%)
Эозинофильный эзофагит
0
1 (1,0%)
1 (0,5%)
[0172]
Доля пациентов с положительным ответом на столбнячный анатоксин на 16-й неделе в группе лечения дупилумабом (83,3%) была аналогична таковой в группе лечения плацебо (83,7%). При 90% ДИ разница между группами лечения составила (-9,41%, 8,69%).
[0173]
Вторичные измерения ответа включают: долю пациентов с положительным ответом на вакцинацию против столбняка, определяемую как увеличение в ≥2 раза титров противостолбнячного IgG через 4 недели после вакцинации (16-ая неделя); и долю пациентов с положительным ответом на Меномьюн, определяемая как ответ сывороточного бактерицидного антитела (SBA) на серогруппу C через ≥8, 4 недель после вакцинации (16-ая неделя).
[0174]
Аналогичная доля пациентов в группе, получавшей дупилумаб (95,6%), достигла ≥2-кратного увеличения титров противостолбнячного IgG по сравнению с пациентами, получавшими плацебо (94,6%). Единый ответ на вакцину Меномьюн также наблюдался для обеих групп лечения; 86,7% пациентов, получавших лечение с помощью дупилумаба, достигли SBA> 8 по сравнению с 87,0% для пациентов, получавших плацебо. При 90% ДИ различия между группами лечения в ответах на столбнячный анатоксин (увеличение ≥2 раза) и ответах на Меномьюн составляла (-4,29%, 6,27%) и (-8,54%, 7,96%), соответственно. Тем не менее, пациенты, получавшие лечение с помощью дупилумаба, проявляли сниженную токсичность, связанную со столбнячным анатоксином (например, кожные реакции), по сравнению с плацебо.
[0175]
Результаты других конечных точек вторичной эффективности представлены в таблице 7.
Таблица 7: Вторичные конечные точки оценки эффективности (16-ая неделя)
Плацебо, р/нед (N=97)
300 мг дупилумаба, р/нед (N=97)
Число (%) пациентов с IGA 0-1
10 (10,3%)
43 (44,3%)
Разница в % (90% ДИ)
34,0% (24,29%, 43,75%)
Число (%) пациентов с EASI 50
31 (32,0%)
70 (72,2%)
Разница в % (90% ДИ)
40,2% (29,40%, 51,01%)
Число (%) пациентов с EASI 75
19 (19,6%)
52 (53,6%)
Разница в % (90% ДИ)
34,0% (23,38%, 44,66%)
Изменение недельного пика NRS
-2,33 (0,267)
-4,46 (0,256)
Различие средних значений, определенных методом наименьших квадратов (90% ДИ)
-2,13 (-2,74, -1,51)
% изменение недельного пика NRS
-27,89 (4,256)
-60,79 (4,045)
Различие средних значений, определенных методом наименьших квадратов (90% ДИ)
-32,89 (-42,54, -23,25)
Число (%) пациентов со снижением NRS ≥ 3
26 (26,8%)
55 (56,7%)
Разница в % (90% ДИ)
29,9% (18,80%, 41,00%)
Число (%) пациентов со снижением NRS ≥ 4
19 (19,6%)
49 (50,5%)
Разница в % (90% ДИ)
30,9% (20,27%, 41,59%)
Изменение BSA
-12,0 (2,15)
-30,0 (2,04)
Различие средних значений, определенных методом наименьших квадратов (90% ДИ)
-18,0 (-22,9, -13,2)
Изменение POEM
-4,8 (0,73)
-13,3 (0,70)
Различие средних значений, определенных методом наименьших квадратов (90% ДИ)
-8,5 (-10,2, -6,9)
Изменение GISS
-1,8 (0,29)
-4,2 (0,28)
Различие средних значений, определенных методом наименьших квадратов (90% ДИ)
-2,5 (-3,1, -1,8)
Все P<0,0001
[0176]
Дополнительные анализы включают титры полного IgE и FHA-специфических IgG1 и IgG4 у пациентов, получавших плацебо и дупилумаб. Ожидается, что пациенты, получавшие дупилумаб, по сравнению с пациентами, получавшими плацебо, имеют более низкие титры IgE.
[0177]
Пациенты, принимающие дупилумаб, имели значительно более низкий общий IgE по сравнению с плацебо (таблица 8).
Таблица 8: Уровни общего IgE от начала до окончания исследования
Плацебо, р/нед (N=79)
300 мг дупилумаба, р/нед (N=76)
P-значение<sup>a</sup>
Исходный показатель МЕ/МЛ (МКИ)
1886 (397:7200)
798 (214:2784)
12-ая неделя, МЕ/мл (МКИ)
1943 (361:9000)
468,5 (129:1366)
16-ая неделя, МЕ/мл (МКИ)
1679 (333:8700)
363,5 (97,25:1172)
32-ая неделя, МЕ/мл (МКИ)
1754 (284:7900)
323,5 (85,75:969,3)
Процентное изменение к 32-ой неделе относительно исходного состояния (МКИ)
-7,229% (-24,87:18,07)
-54,78% (-72,69: -46,58)
<0,0001
a
процентное изменение IgE между группами, получавшими плацебо и дупилумаб, сравнивали с помощью критерия Манна - Уитни
[0178]

Уровни IgE в ответ на компоненты вакцины TDaP [коклюшный токсин (ПТ), коклюшный пертактин (PRN) и столбнячный анатоксин (ТТ)]. В дополнение к вакцин-специфическому IgE в анализ были включены два аллергена (Fel d 1, кошачий аллерген и Bet v 1, березовый аллерген). Аллергические ответы на антитела к аллергенам и антигенам TDaP оценивали путем измерения уровней IgE к Ful d 1, Bet v 1, столбнячному анатоксину (TT), коклюшному токсину (PT) и коклюшному пертактину (PRN) посредством модифицированного анализа антител Luminex. Сыворотку с 12-й недели (время иммунизации TDaP) по 16-ую неделю (окончание периода лечения) и 32-ую неделю (окончание исследования) обрабатывали с использованием GullSORB™ и инкубировали с микросферами, покрытыми Fel d 1, Bet v 1, TT, PT или PRN. Уровни связанных специфическых IgE детектировали с помощью анти-hIgE антитела, конъюгированного с R-фикоэритрином (ФЭ), и отражали как среднюю интенсивность флуоресценции (СИФ) IgE, специфического к TT, PT или PRN TDaP или аллергену Fel d 1, или Bet v 1. Значения трех СО выше среднего отрицательной контрольной сыворотки считались IgE-положительными для этого соответствующего антигена TDaP или аллергена.
[0179]
IgE-ответы на Fel d 1 были ниже, а IgE-ответы на Bet v 1 были значительно ниже у лиц, получавших лечение с помощью дупилумаба, особенно на 32-ой неделе (окончание исследования). Пятьдесят четыре и 12,1% пациентов, получавших дупилумаба, против 65,2% и 30,4% пациентов, получавших плацебо, были положительными по Fel d 1-специфическому IgE (p=0,067) и Bet v 1-специфическому IgE (p <0,001), соответственно на 32-ой неделе. Аллергический статус пациентов к этим аллергенам был неизвестен.
[0180]
Пациенты, получавшие дупилумаб и плацебо, имели сходные СИФ TDaP-специфических IgE; однако пациенты, получавшие плацебо, продемонстрировали более высокую частоту вызывания TDaP-специфического IgE-ответа. В таблице 9 показана сероположительность TDaP-специфического IgE между пациентами, получавшими плацебо и дупилумаб, на 12-ой неделе (время иммунизации TDaP), 16-ой неделе (окончание периода лечения) и 32-ой неделе (окончание исследования).
Таблица 9: Сероположительность TDaP-специфического IgE у пациентов, получавших плацебо, и пациентов, получавших дупилумаб, от времени иммунизации до окончания исследования
Плацебо (N=69)
300 мг дупилумаба, р/нед (N=74)
P-значение<sup>a</sup>
12 неделя
Количество (%) IgE-положительных для 1 антигена TdaP
13 (18,84%)
11 (14,86%)
Количество (%) IgE-положительных для 2 антигенов TdaP
9 (13,04%)
7 (9,46%)
Количество (%) IgE-положительных для 3 антигенов TdaP
12 (17,39%)
5 (6,76%)
Общее количество (%) IgE-положительных к TDaP
34 (49,27%)
23 (31,08%)
0,0398
16 неделя
Количество (%) IgE-положительных для 1 антигена TdaP
7 (10,14%)
12 (16,22%)
Количество (%) IgE-положительных для 2 антигенов TdaP
17 (24,64%)
6 (8,11%)
Количество (%) IgE-положительных для 3 антигенов TDaP
16 (23,19%)
8 (10,81%)
Общее количество (%) IgE-положительных к TDaP
40 (57,97%)
26 (35,15%)
0,0074
32 неделя
Количество (%) IgE-положительных для 1 антигена TDaP
14 (20,29%)
9 (12,16%)
Количество (%) IgE-положительных для 2 антигенов TDaP
8 (11,59%)
6 (8,11%)
Количество (%) IgE-положительных для 3 антигенов TDaP
23 (33,33%)
13 (17,57%)
Общее количество (%) IgE-положительных к TDaP
45 (65,21%)
28 (37,83%)
0,0014
a
IgE-позитивность к TDaP между индивидуумами, получавшими плацебо, и индивидуумами, получавшими дупилумаб, сравнивали при помощи точного критерия Фишера
[0181]
Как показано в таблице 9, большинство пациентов, получавших лечение с помощью дупилумаба (62,16%), были серонегативными для вакцин-специфических IgE по сравнению с плацебо (34,78%) к концу исследования (32-ая неделя).
[0182]
В целом, у индивидуумов, получавших лечение с помощью дупилумаба, значительно уменьшился (-54,7% от исходного уровня) уровень общего IgE по сравнению с индивидуумами, получавшими плацебо, (-7,2%) к концу исследования (p=<0,0001). У пациентов, получавших лечение с помощью дупилумаба, реже развивались TDaP-специфические IgE-ответы. К 32-й неделе (конец исследования) 37,8% пациентов, получавших лечение с помощью дупилумаба, против 65,22% пациентов, получавших плацебо, выработали TDaP-специфические антитела IgE (большинство пациентов были IgE-положительными к TDaP для всех трех измеренных вакцинных антигенов).
[0183]
Титры FHA-специфических IgG1 и IgG4 определяли на 4, 16 и 32 неделях у пациентов, получавших плацебо и дупилумаб. Пациенты, получающие дупилумаб, продемонстрировали значительное увеличение FHA-специфического IgG1 через 4 недели и 16 недель после вакцинации, но никаких ответов, специфических для лечения, не наблюдалось. Было высказано предположение, что в зависимости от их возраста пациенты, возможно, получили полный курс wP в детстве. Если это правда, это указывало на то, что у пациентов, примированных wP, наблюдалось отклонение в Th1, которое сохранялось во взрослой жизни.
Безопасность
[0184]
Изучались НЯ, возникшие в ходе лечения (НЯВЛ, НЯ, которые развивались или ухудшались по степени тяжести по сравнению с исходным уровнем в течение периода лечения и наблюдения), и потенциально клинически значимых значений (PCSV), возникших в ходе лечения, в лабораторных показателях, ЭКГ и показателях жизненно важных функций. Было 3 серьезных НЯВЛ у 3 пациентов, получавших дупилумаб (3,1%). Была одна фунгоидная гранулема IV стадии, одна плоскоклеточная карцинома кожи и один сывороточноподобный синдром. В группе плацебо серьезных побочных эффектов не возникало. Частота возникновения нежелательных явлений, возникших в ходе лечения, была ниже в группе дупилумаба по сравнению с группой плацебо (55,7%, против 61,9%, соответственно). Обзор нежелательных явлений, проведенных в системно-органном классе по словарю MedDRA (СОК), не показал признаков, свидетельствующих о неблагоприятном воздействии препарата на конкретную систему органов. Наиболее часто сообщаемыми СОК были «Инфекционные и паразитарные заболевания» (32,0% для плацебо, против 35,1% для дупилумаба), «Общие расстройства и нарушения в месте введения» (7,2% для плацебо против 16,5% для дупилумаба), «Нарушения со стороны кожи и подкожных тканей» (16,5% для плацебо против 7,2% для дупилумаба), «Нарушения со стороны органов дыхания, грудной клетки и средостения» (10,3% для плацебо против 7,2% для дупилумаба) «Желудочно-кишечные расстройства» (5,2% для плацебо против 11,3% для дупилумаба). Наиболее распространенные НЯВЛ включают инфекцию верхних дыхательных путей (14,4% для плацебо против 11,3% для дупилумаба), атопический дерматит (11,3% для плацебо против 1,0% для дупилумаба) и назофарингит (5,2% для плацебо против 4,1% для дупилумаба). Группа, получавшая лечение с использованием дупилумаба, продемонстрировала более низкую частоту реакций на месте инъекции, локализованный отек, припухлость лимфатических узлов, связанных с инъекциями вакцин, по сравнению с плацебо.
Выводы
[0185]
Дупилумаб не подавлял реакцию пациентов на Т-клеточно-зависимую вакцину (dTap) и T-клеточно-независимую вакцину (Меномьюн). Ответ пациентов, получавших 300 мг дупилумаба, р/нед, на Т-клеточно-зависимую вакцину (dTap) и T-клеточно-независимую вакцину (Меномьюн), был сопоставим с ответом пациентов, получавших плацебо. Все вторичные конечные точки эффективности показали статистическую значимость в пользу группы дупилумаба. 300 мг дупилумаба, р/нед был безопасным и хорошо переносимым. Оказалось, что профиль безопасности дупилумаба соответствует результатам предыдущих исследований.
Пример 11: Продолжительность ответа Th1 против Th2 на коклюшную вакцину у людей
[0186]
et al
В этом примере исследуется продолжительность ответа Th1/Th2 на коклюшные вакцины у людей, получавших цельноклеточную (wP) или бесклеточную коклюшную вакцину (aP) в детском возрасте. Индивидуумов, примированных с использованием wP или aP вакциной, делили на 6 групп. Индивидуумов, примированных с использованием wP или aP, стимулировали wP, aP или без вакцины (контроль). В группах изучали изотипы антител (общие и антигенспецифические изотипы IgG и IgE). В более раннем исследовании изучались Т-клеточные ответы у этих индивидуумов (Bancroft  2016; 304-305: 35-43).
[0187]
Предполагается, что индивидуумы, примированные wP, демонстрируют изотипы антител, специфические для ответа Th1 (увеличение уровней антигенспецифических IgG1 в сыворотке), независимо от того, стимулированы ли они aP или wP. Аналогично, индивидуумы, примированные aP, демонстрируют изотипы антител, специфические для ответа Th2 (увеличение уровней антигенспецифических IgG4 в сыворотке) независимо от повторной вакцинации с aP/wP. Это указывает на то, что ответ, вызванный в ответ на первоначальную вакцинацию aP (Th2-специфический ответ) или wP (Th1-специфический ответ), сохраняется в течении взрослой жизни.
[0188]
Исходя из результатов, предлагается вводить антагонист ИЛ-4R во время и/или до введения усиленной начальной дозы. Индивидуумы, которым вводили aP вакцину, вводят анти-ИЛ-4R антитело до и/или одновременно с aP вакциной, чтобы осуществить импринтинг ответа Th1 во время начальной вакцинации.
Пример 12: Сравнение анти-ИЛ-4R антител в качестве адъюванта с другими адъювантами
[0189]
В этом примере исследуется эффективность анти-ИЛ-4R антитела в качестве адъюванта по сравнению с другими адъювантами. Анти-ИЛ-4Rα антитело, используемое в этом примере, представляет собой антитело против ИЛ-4R мыши, содержащее HCVR с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 11 и LCVR с аминокислотной последовательностью, содержащей SEQ ID NO: 12 (ʺанти-ИЛ-4Rαʺ).
[0190]
Мышей иммунизируют овальбумином в качестве модельного антигена в комбинации с различными адъювантами, такими как квасцы, AS04, AS03, MF59 и анти-ИЛ-4Rα. Сывороточные общие и антигенспецифические антитела анализируют. Ожидается, что введение анти-ИЛ-4Rα стимулирует иммунитет к овальбумину и индуцирует Th1-ответ по сравнению с самим овальбумином.
[0191]
В другом эксперименте анти-ИЛ-4Rα вводят в комбинации с овальбумином и квасцами. В данной области техники известно, что квасцы индуцируют Th2-ответ. В данном документе предполагается, что введение анти-ИЛ-4Rα действует как специфический иммунологический модулятор/блокатор к квасцам и приводит к переключению на Th1-ответ.
Данное изобретение не должно быть ограничено в объеме конкретными вариантами осуществления изобретения, описанными в данном документе. Действительно, различные модификации изобретения в дополнение к тем, которые описаны в данном документе, станут очевидными для специалистов в данной области техники из предшествующего описания и сопроводительных чертежей. Такие модификации предназначены для того, чтобы охватываться прилагаемой формулой изобретения.
--->
ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
<110> Regeneron Pharmaceuticals, Inc.
<120> СПОСОБЫ ПОВЫШЕНИЯ ЭФФЕКТИВНОСТИ ВАКЦИНЫ ПУТЕМ ВВЕДЕНИЯ
АНТАГОНИСТА ИЛ-4R
<130> 10209WO01
<150> 62/297257
<151> 2016-02-19
<150> 62/409936
<151> 2016-10-19
<160> 15
<170> FastSEQ для Windows версии 4.0
<210> 1
<211> 124
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> HCVR
<400> 1
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Glu Gln Pro Gly Gly
1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Gly Ser Gly Phe Thr Phe Arg Asp Tyr
20                  25                  30
Ala Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ser Ser Ile Ser Gly Ser Gly Gly Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Lys Asp Arg Leu Ser Ile Thr Ile Arg Pro Arg Tyr Tyr Gly Leu
100                 105                 110
Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser
115                 120
<210> 2
<211> 112
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> LCVR
<400> 2
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1               5                  10                  15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser
20                  25                  30
Ile Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Ser Gly Gln Ser
35                  40                  45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro
50                  55                  60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65                  70                  75                  80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Phe Tyr Tyr Cys Met Gln Ala
85                  90                  95
Leu Gln Thr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100                 105                 110
<210> 3
<211> 8
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> HCDR1
<400> 3
Gly Phe Thr Phe Arg Asp Tyr Ala
1               5
<210> 4
<211> 8
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> HCDR2
<400> 4
Ile Ser Gly Ser Gly Gly Asn Thr
1               5
<210> 5
<211> 18
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> HCDR3
<400> 5
Ala Lys Asp Arg Leu Ser Ile Thr Ile Arg Pro Arg Tyr Tyr Gly Leu
1               5                  10                  15
Asp Val
<210> 6
<211> 11
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> LCDR1
<400> 6
Gln Ser Leu Leu Tyr Ser Ile Gly Tyr Asn Tyr
1               5                  10
<210> 7
<211> 3
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> LCDR2
<400> 7
Leu Gly Ser
1
<210> 8
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> LCDR3
<400> 8
Met Gln Ala Leu Gln Thr Pro Tyr Thr
1               5
<210> 9
<211> 451
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> HC
aa1-124: HCVR
aa125-451: константная HC
<400> 9
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Glu Gln Pro Gly Gly
1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Gly Ser Gly Phe Thr Phe Arg Asp Tyr
20                  25                  30
Ala Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ser Ser Ile Ser Gly Ser Gly Gly Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Lys Asp Arg Leu Ser Ile Thr Ile Arg Pro Arg Tyr Tyr Gly Leu
100                 105                 110
Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr
115                 120                 125
Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser
130                 135                 140
Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu
145                 150                 155                 160
Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His
165                 170                 175
Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser
180                 185                 190
Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys
195                 200                 205
Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu
210                 215                 220
Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu
225                 230                 235                 240
Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
245                 250                 255
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
260                 265                 270
Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
275                 280                 285
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr
290                 295                 300
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
305                 310                 315                 320
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser
325                 330                 335
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
340                 345                 350
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val
355                 360                 365
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
370                 375                 380
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
385                 390                 395                 400
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr
405                 410                 415
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
420                 425                 430
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
435                 440                 445
Ser Leu Gly
450
<210> 10
<211> 219
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> LC
aa1-112: LCVR
aa113-219: константная LC
<400> 10
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1               5                  10                  15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser
20                  25                  30
Ile Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Ser Gly Gln Ser
35                  40                  45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro
50                  55                  60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65                  70                  75                  80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Phe Tyr Tyr Cys Met Gln Ala
85                  90                  95
Leu Gln Thr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100                 105                 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115                 120                 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130                 135                 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145                 150                 155                 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165                 170                 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180                 185                 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195                 200                 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210                 215
<210> 11
<211> 117
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> HCVR мышиного Ат
<400> 11
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1               5                  10                  15
Ser Val Arg Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20                  25                  30
Asn Ile His Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile
35                  40                  45
Gly Tyr Ile Tyr Pro Asn Asn Gly Asp Asn Gly Tyr Asn Gln Lys Phe
50                  55                  60
Arg Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Asp Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Gly Arg Leu Arg Tyr Phe Asp Val Trp Gly Thr Gly Thr Thr
100                 105                 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 12
<211> 111
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> LCVR мышиного Ат
<400> 12
Asn Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1               5                  10                  15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Asn Tyr
20                  25                  30
Gly His Ser Phe Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35                  40                  45
Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala
50                  55                  60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Leu Asp
65                  70                  75                  80
Pro Val Glu Ala Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn
85                  90                  95
Glu Asp Pro Pro Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100                 105                 110
<210> 13
<211> 207
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> hIL-4R-альфа
<400> 13
Met Lys Val Leu Gln Glu Pro Thr Cys Val Ser Asp Tyr Met Ser Ile
1               5                  10                  15
Ser Thr Cys Glu Trp Lys Met Asn Gly Pro Thr Asn Cys Ser Thr Glu
20                  25                  30
Leu Arg Leu Leu Tyr Gln Leu Val Phe Leu Leu Ser Glu Ala His Thr
35                  40                  45
Cys Ile Pro Glu Asn Asn Gly Gly Ala Gly Cys Val Cys His Leu Leu
50                  55                  60
Met Asp Asp Val Val Ser Ala Asp Asn Tyr Thr Leu Asp Leu Trp Ala
65                  70                  75                  80
Gly Gln Gln Leu Leu Trp Lys Gly Ser Phe Lys Pro Ser Glu His Val
85                  90                  95
Lys Pro Arg Ala Pro Gly Asn Leu Thr Val His Thr Asn Val Ser Asp
100                 105                 110
Thr Leu Leu Leu Thr Trp Ser Asn Pro Tyr Pro Pro Asp Asn Tyr Leu
115                 120                 125
Tyr Asn His Leu Thr Tyr Ala Val Asn Ile Trp Ser Glu Asn Asp Pro
130                 135                 140
Ala Asp Phe Arg Ile Tyr Asn Val Thr Tyr Leu Glu Pro Ser Leu Arg
145                 150                 155                 160
Ile Ala Ala Ser Thr Leu Lys Ser Gly Ile Ser Tyr Arg Ala Arg Val
165                 170                 175
Arg Ala Trp Ala Gln Cys Tyr Asn Thr Thr Trp Ser Glu Trp Ser Pro
180                 185                 190
Ser Thr Lys Trp His Asn Ser Tyr Arg Glu Pro Phe Glu Gln His
195                 200                 205
<210> 14
<211> 120
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> HCVR Ат обезьяны
<400> 14
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Leu Gln Pro Gly Gly
1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ile Thr Phe Ser Thr Tyr
20                  25                  30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Arg Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Asp Ser Thr Ser Tyr Ala Asp Ser Val
50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ser Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Lys Val Ile Ala Ala Arg Pro His Trp Asn Phe Asp Leu Trp Gly
100                 105                 110
Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
115                 120
<210> 15
<211> 107
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> LCVR Ат обезьяны
<400> 15
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1               5                  10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Arg Tyr
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asp Trp Pro Leu
85                  90                  95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<---