Использование бактерий для получения биологически активных соединений на основе растительных стеролов

ВЕСТНИК ПЕРМСКОГО НАУЧНОГО ЦЕНТРА 2/2013

УДК 579.66+547.9

Е.М. Ноговицина,

Институт экологии и генетики микроорганизмов УрО РАН

Охарактеризован потенциал бактерий в качестве эффективных биокатализаторов процесса трансформации природных стеролов с целью получения биологически активных веществ.

Ключевые слова: биотрансформация, бактерии, природные стеролы, холестерол, в-ситостерол, биологически активные вещества.

Стеролы - особая группа природных веществ, представляющих собой тетрацикли-ческие спирты с циклопентанопергидрофе-нантреновым углеродным остовом (рис. 1). Данные соединения присутствуют практически во всех тканях животных (холестерол), растений (Р-ситостерол, кампестерол, стигмастерол) и в микроорганизмах (эрго-стерол), являются предшественниками стероидных гормонов и желчных кислот, а также витаминов, некоторых защитных веществ, входят в состав клеточных мембран, стабилизируя их. За счет комплексообразующих свойств стеролов обеспечивается детоксикация вредных для организма веществ, например, сапонинов и полиеновых антибиотиков. Главное отличие стеролов от стероидов заключается в наличии алифатической боковой цепи в молекуле. Сложность молекулярной структуры стеро-

лов нередко является причиной их трудоемкой многостадийной модификации химическими методами с применением дорогостоящих и агрессивных реагентов.

Более эффективная трансформация сте-ролов достигается с использованием бактерий, высокий биокаталитический потенциал которых в отношении данных веществ был обнаружен еще в начале XX века. Однако обстоятельный научный анализ возможностей использования бактерий для одностадийного биокаталитического синтеза стероидных гормонов из стеролов появился только в 40-е годы, что привело к стремительному развитию данной области исследований. Внедрение в промышленное производство биотехнологических способов получения стероидных гормонов и интермедиатов для их синтеза с использованием бактерий позволило значительно сни-

Работа поддержана грантом Министерства образования и науки РФ в рамках Федеральной целевой программы «Научные и научно-педагогические кадры инновационной России» (соглашение № 8793).

Рис. 1. Химическая структура основных представителей стеролов

зить себестоимость создаваемых на их основе лекарственных препаратов [1]. Следует отметить, что, несмотря на высокую селективность и субстратную специфичность индивидуальных бактериальных ферментов, в процессе биотрансформации стеро-лов в основном используются целые клетки бактерий, что позволяет трансформировать не только заданный субстрат, но и его структурные аналоги в одну стадию. Известны отдельные исследования по биотрансформации стеролов с использованием ферментных препаратов, промышленное применение которых, как показывает практика, ограничивается низкой устойчивостью и узким кругом метаболизируемых ими субстратов [3].

Наиболее характерные продукты, образующиеся в процессе бактериальной трансформации стеролов, - это производные андростанового типа андрост-4-ен-3,17-дион (l) и андроста-1,4-диен-3,17-ди-он (2), используемые в качестве ключевых соединений в промышленном синтезе лекарственных гормональных препаратов.

В последнее время наряду с холесте-ролом - основным источником андроста-новых веществ, все чаще в роли субстратов бактериальной трансформации рассматриваются стеролы растительного происхождения (фитостеролы). При этом особое внимание уделяется Р-ситостеро-лу, получаемому в результате химической переработки отходов деревообрабатывающей промышленности. Преимущества использования Р-ситостерола заключаются в широком распространении его в природе, доступности для микроорганиз-

мов и относительно низкой стоимости получения [21]. В медицинской практике применение Р-ситостерола и его производных направлено на профилактику сердечно-сосудистых заболеваний и коррекцию липидно-жирового обмена. Выявлено также, что многие из производных Р-ситостерола проявляют ангиогенное, жаропонижающее, иммуномодулирующее, противоопухолевое, антимутагенное действие.

В основном подбор оптимальных условий процесса биотрансформации холе-стерола, Р-ситостерола и их аналогов в андростановые вещества проводится с использованием бактерий, активно растущих в жидких питательных средах. Повышение растворимости в водной среде и биодоступности для бактерий стеролов, имеющих липофильную природу, являются основными задачами при разработке эффективных способов биотрансформации данных соединений [6, 21, 23]. Это достигается в результате исследования влияния на процесс биотрансформации стеролов состава питательной среды, индукторов каталитической активности бактерий, дополнительных источников углерода, растворителей и поверхностно-активных веществ (сурфактантов), модификации клеточной стенки бактерий, их генетической трансформации, а также адаптации к экстремально высоким (до 56 г/л) концентрациям стеролов. В качестве поверхностно-активных веществ (ПАВов) в процессе биотрансформации стеролов в андростановые соединения наиболее часто применяются Твины - синтетические сурфактанты неионной природы, и циклодекстрины - циклические олигосахариды, образующие комплексы с липофиль-ными соединениями.

Описаны также примеры биоконверсии стеролов с использованием липида лецитина или неионных сурфактантов Тритона Х-100 и Х-114 [9, 18]. Несмотря на многочисленные сведения по биотрансформации стеролов в андростановые соединения в присутствии ПАВов, подобные исследования не утратили свою актуаль-

ность. Постоянно проводится оценка трансформирующей активности новых бактериальных биокатализаторов в присутствии Твинов и циклодекстринов, исследуется процесс биотрансформации сте-ролов в условиях добавления в питательную среду ПАВов, ранее не применяемых в подобных исследованиях [8, 16, 23].

Начальная стадия биотрансформации стеролов в андростановые соединения -отдельная область исследования каталитической активности бактерий и их ферментов. Окисление стеролов на данном этапе происходит, как правило, под действием холестеролоксидазы - фермента, относящегося к группе оксидоредуктаз, использующих в качестве акцептора электронов молекулярный кислород (рис. 2). Интерес к бактериальным продуцентам холестеролоксидазы обусловлен широким практическим использованием данного фермента в диагностике уровня холестерола в биологических жидкостях при переработке холестеролсодержащего сырья в диетические продукты, промышленном получении физиологически активных стероидов.

Данный фермент наиболее активно продуцируется бактериями родов Arthro-bacter, Mycobacterium, Pseudomonas,

Rhodococcus, а также представителями Brevibacterium sterolicum, Schizophyllum commune, Streptomyces violascens, Streptoverticillium cholesterolicum [10]. При этом наиболее высокой активностью характеризуются представители Rhodo-coccus equi, патогенная природа которых ограничивает их коммерческое применение. Описаны непатогенные продуценты данного фермента (Rhodococcus erythro-polis, в частности), которые используются для окисления в препаративных масштабах как стероидных, так и нестероидных соединений (аллиловых, моно- и полицикличе-ских спиртов) [7, 13, 25].

Практически во всех работах холесте-рол применяется как индуктор ферментативной активности холестеролоксидазы, при этом в качестве основного продукта реакции образуется холест-4-ен-3-он.

Холестерол ^ = Н) Кампестерол ^ = СН3) Р-Ситостерол

Холест-5-ен-3-он

Холест-4-ен-3-он

Кампест-4-ен-3-он

Стигмаст-4-ен-3-он

Рис. 2. Биотрансформация стеролов под действием холестеролоксидазы с образованием 4-ен-3-оновых продуктов

Вместе с тем описаны соединения, получаемые из растительных стеролов под действием данного фермента, обладающие ценной физиологической активностью. Так, стигмаст-4-ен-3-он, образующийся из Р-ситостерола, перспективен при лечении доброкачественной опухоли простаты и способствует снижению глюкозы в крови при гипергликемии [4, 28]. В основном исследования, касающиеся биокаталитического образования стиг-маст-4-ен-3-она, ограничиваются оценкой активности холестеролоксидазы в отношении Р-ситостерола. Описан процесс биотрансформации 5 г/л Р-ситостерола с образованием 40 % стигмаст-4-ен-3-она под действием холестеролоксидазы родо-кокков [17]. Недавно в результате изучения трансформирующей активности бактерий R. вгу^горо^, поддерживаемых в Региональной профилированной коллекции алканотрофных микроорганизмов Института экологии и генетики микроорганизмов УрО РАН (акроним ИЭГМ, номер во Всемирной федерации коллекций культур 768, www.iegm.ru/iegmcol), раз-

работан эффективный способ биокатали-тического получения стигмаст-4-ен-3-она из Р-ситостерола [2]. Проведены детальные исследования процесса биотрансформации Р-ситостерола в высоких концентрациях в присутствии углеводородов, жирных кислот в условиях добавления ПАВов Твина-80 и Р-циклодекстрина (рис. 3). Установлено, что добавление в инкубационную среду свободной пальмитиновой кислоты в качестве индуктора холестеролоксидазной активности родо-кокков позволяет сократить продолжительность процесса биоконверсии Р-ситостерола в стигмаст-4-ен-3-он с 7 до 5 сут. Отобраны бактерии, трансформирующие 10 г/л Р-ситостерола с образованием от 45 до 75 % стигмаст-4-ен-3-она (табл. 1).

Известно, что физиологическое состояние бактериальных клеток может оказывать значительное влияние на процесс биотрансформации органических веществ.

Как показывает практика, высокая трансформирующая способность бактерий в неростовых условиях достигается реже, чем при использовании ростовых

Изопропанол

Т вин-40

Т вин-60

Т вин-80

Т вин-80

Т вин-80

л о н а п о р п о Изо + н и три кст е д о л к Цик — Р

Комплекс включения с Р-циклодекстрином + изопропанол

Р—Циклодекстрин + Твин-80

40 60 80

Стигмаст-4-ен-3-он, %

100

120

Рис. 3. Биотрансформация в-ситостерола в стигмаст-4-ен-3-он R. erythropolis ИЭГМ487 в присутствии н-гексадекана и пальмитиновой кислоты в условиях добавления Твинов и в-циклодекстрина. В скобках приведена исходная концентрация в-ситостерола в ростовой среде

Таблица 1

Биотрансформация в-ситостерола представителями R. еуЬгороГ^

Штамм Cтигмаст-4-ен-3-он, % Штамм Cтигмаст-4-ен-3-он, %

Абиотический контроль 0 R. е^горо^ ИЭГМ 270 47

R. е^горо^ ИЭГМ 10 52 R. е^горо^ ИЭГМ 487 45

R. е^горо^ ИЭГМ 11 61 R. еіуї^оро^ ИЭГМ 490 75

R. е^горо^ ИЭГМ 18 59 R. е^горо^ ИЭГМ 503 54

R. е^горо^ ИЭГМ 20 57 R. е^горо^ ИЭГМ 507 60

R. е^горо^ ИЭГМ 179 44 R. е^горо^ ИЭГМ 609 55

R. е^горо^ ИЭГМ 183 57 R. е^горо^ ИЭГМ 682 49

R. е^горо^ ИЭГМ 190 52 R. е^горо^ ИЭГМ 683 51

R. е^горо^ ИЭГМ 212 57 R. еіуї^оро^ ИЭГМ 698 49

R. е^горо^ ИЭГМ 244 57 R. е^горо^ ИЭГМ 745 52

R. е^горо^ ИЭГМ 267 51 R. е^горо^ ИЭГМ 766 60

сред, в которых бактериальные культуры, как правило, проявляют максимальную метаболическую активность. Вместе с тем использование нерастущих форм биокатализаторов позволяет значительно сократить продолжительность процесса биотрансформации по сравнению с таковой при использовании активно растущих культур, при этом процесс может проводиться в нестерильных условиях, в присутствии более высоких концентраций субстратов [9].

Данные преимущества достигаются также при использовании иммобилизованных клеток бактерий. Иммобилизацией (от лат. mmoЫШs - неподвижный) в биотехнологии называют процесс фиксации целых клеток или индивидуальных ферментов на нерастворимой основе в результате их адсорбции на поверхности или включения внутрь носителя. Нерастущие и иммобилизованные бактериальные клетки более стабильны, пригодны к многократному использованию, устойчивы к экстремальным факторам внешней среды. Применение нерастущих и иммобилизованных бактериальных клеток в процессе биотрансформации стеролов носит фрагментарный характер. При этом в качестве сред культивирования активно используются двухфазные системы (органический растворитель/вода), что позволяет не только решить проблему растворимости гидрофобных субстратов, но и снизить токсический эффект образующихся продуктов.

Установлено, что при использовании фталатов, силиконового масла или поли-пропиленгликоля в качестве органиче-

ской фазы достигается количественная конверсия Р-ситостерола в анд-рост-4-ен-3,17-дион нерастущими бактериями. В табл. 2 приведены сведения по биотрансформации Р-ситостерола или обогащенной Р-ситостеролом смеси растительных стеролов иммобилизованными бактериями с образованием анд-рост-4-ен-3,17-диона.

В результате исследования стерол-трансформирующей способности актино-бактерий рода Rhodococcus, закрепленных на поверхности твердых носителей, нами получены иммобилизованные биокатализаторы с относительно высокой окислительной активностью в отношении Р-ситостерола. При этом установлено, что, несмотря на высокий (80 %) уровень адсорбции родококков на каталитическом волокнистом углероде, использование данного биокатализатора не перспективно ввиду его низкой (3,5 %) активности в отношении Р-ситостерола. Эффективная (57 %) биотрансформации Р-ситостерола в стигмаст-4-ен-3-он достигается при использовании клеток родококков, закрепленных на технической полимерной ткани (рис. 4).

Наряду с подбором оптимальных условий образования характерных продуктов биотрансформации стеролов постоянно выявляются новые каталитические свойства бактерий в отношении данных субстратов. Так, установлено, что помимо андрост-4-ен-3,17-диона и андро-ста-1,4-диен-3,17-диона, в качестве продуктов биотрансформации холестерола или Р-ситостерола бактериями образуют-

Таблица 2

Биотрансформация в-ситостерола в андрост-4-ен-3,17-дион иммобилизованными клетками микобактерий_________________

Среда культивирования Носитель Выход продукта, % Ссылка

Органический растворитель бис(2-этилгексил) фталат Целит 70 [12]

Двухфазная система с бис(2-этилгексил) фталатом Хризотил 90 [11]

Трис-НС1 буфер Силикон 40 [15]

Среда с глюкозой Г идрогель поливинилового спирта и поливинилпиролидона 82 [5]

80

х’

о4

40

Н

О

(Й

§

s

н

о

20

П Каталитический волокнистый углерод  Т ехническая полимерная ткань

Рис. 4. Биотрансформация в-ситостерола иммобилизованными родококками в минеральной среде «К» с добавлением н-гексадекана

ся мужской половой гормон тестостерон (3), продукты с частично редуцированной боковой цепью, а также важные предшественники в синтезе биологически активных стероидов, в том числе глюко-кортикоидных гормонов [19, 20, 24, 27]. Сравнительно недавно выявлено, что в процессе биотрансформации смеси растительных стеролов бактериями Могахе11а ovis и СогупеЬа^егшт теа1уЫсит в качестве продукта реакции наряду с соединениями андростанового типа регистрируется образование женского полового гормона эстрона (4) [22].

OH

O

Детально исследована реакция этери-фикации стеролов жирными кислотами, при этом в качестве биокатализаторов ис-

пользованы иммобилизованные бактериальные ферменты. Разработаны эффективные методы получения эфиров холе-стерола или разделения смеси растительных стеролов под действием липаз бактерий родов Alcaligenes, Pseudomonas, Chromatobacter или ацилтрансферазы Aeromonas salmonicida [26, 29, 30]. Интерес представляют результаты, полученные нами в процессе биотрансформации родококками Р-ситостерола, в неростовых условиях. Установлено, что в фосфатно-щелочном буфере с нейтральным или слабощелочным pH при участии данных бактерий происходит процесс биотрансформации Р-ситостерола с образованием этерифицированного продукта -ацетата Р-ситостерола (5).

Приведенные в статье сведения свидетельствуют о том, что, несмотря на большое число работ по бактериальной трансформации стеролов, данная область исследования по-прежнему остается актуальной. Выявляются новые закономерно-

0

2

3

4

5

6

сти процесса биоконверсии исходных субстратов бактериями; разрабатываются эффективные методы биотрансформации стеролов с образованием известных или ранее не описанных фармакологически активных соединений. Необходимо отметить, что биотрансформация стеролов не-

растущими и иммобилизованными биокатализаторами в большинстве исследований проводится с применением фитосте-ролов, а не холестерола, активно используемого для получения андростановых соединений в условиях роста бактерий в питательных средах.

Библиографический список

1. АхремАА., ТитовЮА. Микробиологические трансформации стероидов. - М.: Наука, 1965. - 504 с.

2. Гришко В.В., Ноговицина Е.М., Ившина И.Б. Оптимизация условий биокаталитического получения стигмаст-4-ен-3-она // Химия природных соединений. - 2012. - № 3. - С. 390-392.

3. Толстиков А.Г., Гришко В.В., Ившина И.Б. Энантиоселективное биокаталитическое окисление органических сульфидов в хиральные сульфоксиды // Современные проблемы асимметрического синтеза. - Екатеринбург, 2003. - С. 165-205.

4. Alexander-Lindo R.L., Morrison E.Y.SA., Nair M.G. Hypoglycaemic effect of stigmast-4-en-3-one and its corresponding alcohol from the bark of Anacardium occidentale (Cashew) // Phytother. Res. - 2004. -Vol. 18. - № 5. - P. 403-407.

5. Amin HA.S., El-Hadi A A., Mohamed S.S. Immobilization of Mycobacterium sp. NRRL B-3805 cells onto radiation crosslinked PVA/PVP hydrogels for production of androstenones from p-sitosterol // Aust. J. Basic Appl. Sci. - 2010. - Vol. 4. - № 8. - P. 2196-2205.

6. Andhale M.S., Sambrani SA. Cholesterol biotransformation in monophasic systems by solvent tolerant Bacillus subtilis AF 333249 // Indian J. Biotechnol. - 2006. - Vol. 5. - № 3. - P. 389-393.

7. Biellmann J.F. Resolution of alcohols by cholesterol oxidase from Rhodococcus erythropolis: Lack of enantiospecificity for the steroids // Chirality. 2001. - Vol. 13. - № 1. - P. 34-39.

8. Biotransformation of cholesterol to 1,4-androstadiene-3,17-dione (ADD) by Nocardia species / P. Sharma, P.S. Slathia, P. Somal, P. Mehta // Ann. Microbiol. - 2012. - Vol. 62. - № 4. - P. 1651-1659.

9. Biotransformation of phytosterol to produce androstadienedione by resting cells of Mycobacterium in cloud point system / Z. Wang, F. Zhao, D. Chen, D. Li // Process Biochem. - 2006. - Vol. 41. - № 3. -P. 557-561.

10. Cholesterol oxidase: sources, physical properties and analytical applications / J. MacLachlan, A.T.L. Wotherspoon, R.O. Ansell, C.J.W. Brooks // J. Steroid Biochem. Mol. Biol. - 2000. - Vol. 72. -№ 5. - P. 169-195.

11. Chrysotile as a support for the immobilization of Mycobacterium sp. NRRL B-3805 cells for the bioconversion of P-sitosterol in an organic-aqueous two-liquid phase system / R. Wendhausen, M. Frigato, P. Fernandes, C.C.C.R. Carvalho, A. Cruz, HM. Pinheiro, J.M.S. Cabral // J. Mol. Catal. B: Enzymatic. -2005. - Vol. 32. - № 3. - P. 61-65.

12. Dias A.C., Cabral J.M., Pinheiro H.M. Sterol side-chain cleavage with immobilized Mycobacterium cells in water-immiscible organic solvents // Enzym. Microb. Technol. - 1994. - Vol. 16. - № 8. - P. 708-714.

13. Hydroxyl groups at C-3 and at C-17 of the unnatural enantiomer ent-androsta-5,9(11)-diene-3p,17p-diol are oxidised by cholesterol oxidase from Rhodococcus erythropolis / D. Kitamoto, S. Dieth, A. Burger, D. Tritscha, J.-F. Biellmann // Tetrahedron Lett. - 2001. - Vol. 42. - № 3. - P. 505-507.

14. Identification of cholesterol oxidase from fast-growing mycobacterial strains and Rhodococcus sp. / D. Wilmanska, J. Dziadek, A. Sajduda, K. Milczarek, A. Jaworski, Y. Murooka // J. Ferment. Bioeng. -1995. - Vol. 79. - № 2. - P. 119-124.

15. Immobilization of mycobacterial cells onto silicone - assessing the feasibility of the immobilized biocatalyst in the production of androstenedione from sitosterol / M.J.C. Claudino, D. Soares, F. Van Keulen, M.P.C. Marques, J.M.S. Cabral, P. Fernandes // Bioresource Technology. - 2008. - Vol. 99. -№ 7. - P. 2304-2311.

16. Influence of hydroxypropyl-p-cyclodextrin on phytosterol biotransformation by different strains of Mycobacterium neoaurum / Y.-B. Shen, M. Wang, H.-N. Li, Y.-B. Wang, J.-M. Luo // J. Ind. Microbiol. Biotechnol. - 2012. - Vol. 39. - № 9. - P. 1253-1259.

17. Kreit J., Lefebvre G., Germain P. Membrane-bound cholesterol oxidase from Rhodococcus sp. cells. Production and extraction // J. Biotechnol. - 1994. - Vol. 33. - № 15. - P. 271-282.

18. Lecithin-enhanced biotransformation of cholesterol to androsta-1,4-diene-3,17-dione and androst-4-ene-3,17-dione / Z.F. Wang, Y.L. Huang, J.F. Rathman, S.T. Yang // J. Chem. Technol. Biotecnol. - 2002. -Vol. 77. - № 12. - P. 1349-1357.

19. Liu W.H., Lo C.K. Production of testosterone from cholesterol using a single-step microbial transformation by mutant of Mycobacterium sp. // J. Ind. Microbiol. Biotechnol. - 1997. - Vol. 19. - № 4. - P. 269-272.

20. Lo C.K, Pan C.P., Liu W.H. Production of testosterone from phytosterol using a single-step microbial transformation by mutant of Mycobacterium sp. // J. Ind. Microbiol. Biotechnol. - 2002. - Vol. 2S. -№ 5. - P. 280-283.

21. Malaviya A, Gomes J. Androstenedione production by biotransformation of phytosterols // Bioresour. Technol. - 200S. - Vol. 99. - № 15. - P. 6725-67З7.

22. Microbial transformation of phytosterols mixture from rice bran oil unsaponifiable matter by selected bacteria / L.A.R. Sallam, M.E. Osman, A.A. Hamdy, G.M. Zaghlol // World J. Sci. Technol. 200S. -Vol. 24. - № 9. - P. 164З-1656.

23. Optimization of biotransformation from phytosterol to androstenedione by a mutant Mycobacterium neoaurum ZJUVN-0S /X.-y. Zhang, Y. Peng, Z.-r. Su, Q.-h. Chen, H. Ruan, G.-q. He // J. Zhejiang. Univ.-Sci. B (Biomed. Biotechnol.). - 201З. - Vol. 14. - № 2. - P. 1З2-14З.

24. Pawar K, Bhatt M. Accumulation of a pharmacologically important 17-ketosteroid during side chain cleavage of cholesterol by Pseudomonas putida MTCC 1259 // World J. Sci. Technol. - 2011. - Vol. 1. -№ 5. - P. 62-65.

25. Pollegioni L., Piubelli L., Mollas G. Cholesterol oxidase: biotechnological applications // FEBS J. -2009. - Vol. 276. - № 2З. - P. 6S57-6S70.

26. Selective transesterification of stanols in mixtures comprising sterols and stanols / M.I. Basterrechea, MA.F. Diaz, MA. Rojas, M.E. Schersl. - 2006. Filed 0S.0S.2002. Published 26.02.200З. Appl. № EP20020255546.

27. US patent. No. 492З40З. Microbiological process for degradation of steroids / N.P. Ferreira. - 1990. Filed 15.0S.19S5. Published 0S.05.1990. Appl. № 06/766.126.

2S. US patent No. 526442S. Use stigmasta-4-en^-on in the treatment of androgen dependent disease / S. Streber. - 199З. Filed: 29.04.1992. Published: 2З.11.199З. Appl. № 07/S76.131.

29. US patent No. 2004/01059З1 А1. Enzymatic modification of sterols using sterol-specific lipase / S. Basheer, D. Plat. - 2004. Filed 0З.04.2001. Published 0З.06.2004. Appl. № 10/240.546.

30. US patent No. 7638293 B2. Method / A. de Kreij, S.M. Madrid, J.D. Mikkelsen, J.B. S0e. - 2009. Filed 15.07.2005. Published 29.12.2009. Appl. № 11/182.480.

PRODUCTION OF BIOLOGICALLY ACTIVE COMPOUNDS FROM PLANT STEROLS USING BACTERIA

E.M. Nogovitsina

The paper describes the capabilities of bacteria as effective biocatalysts of the natural sterol transformation process to produce biologically active substances.

Keywords: biotransformation, bacteria, natural sterols, cholesterol, в-sitosterol, biologically active substances.

Сведения об авторах

Ноговицина Екатерина Михайловна, кандидат биологических наук, научный сотрудник лаборатории алканотрофных микроорганизмов, Институт экологии и генетики микроорганизмов УрО РАН (ИЭГМ УрО РАН), 614081, г. Пермь, ул. Голева, 1З; e-mail: nogov@iegm.ru

Материал поступил в редакцию 16.04.2013 г.