2-ГИДРОКСИ-4-ОКСО-4-(4-ХЛОРФЕНИЛ)-2-БУТЕНОАТ ТИАЗОЛИНАММОНИЯ, ОБЛАДАЮЩИЙ АНТИКОАГУЛЯНТНОЙ АКТИВНОСТЬЮ
THIAZOLINE AMMONIUM 2-HYDROXY-4-OXO-4-(4-CHLOROPHENYL)-2-BUTENOATE, HAVING ANTICOAGULATION ACTIVITY

Изобретение относится к области органической химии, к новым биологически активным веществам класса 4-арил-2-гидрокси-4-оксо-2-бутеноатов гетериламмония, а именно к 2-гидрокси-4-оксо-4-(4-хлорфенил)-2-бутеноату тиазолинаммония (1) формулы
обладающему антикоагулянтной активностью, что позволяет предположить его использование в медицине в качестве антикоагулянтного средства.
Ближайшим аналогом по структуре заявляемому соединению является 2-гидрокси-4-оксо-4-(4-хлорфенил)-2-бутеноат 5-этил-1,3,4-тиадиазолил-аммония (2) [Синтез и биологическая активность солей гетероциклических аминов и гетериламидов на основе 4-арил-2,4-диоксобутановых кислот / Н.А.Пулина., В.В Залесов, В.В.Юшков [и др.]. // Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии. - 2008. - №2. - С.37-40] формулы
Структурный аналог 2 обладает более слабой антикоагулянтной активностью. Эталоном сравнения выбран гепарин (3), который широко применяется в лечебной практике и является аналогом по действию [Машковский М.Д. Лекарственные средства. - 15-е изд., перераб., испр. и доп. - М.: ООО «Новая волна», 2005. - Т.2. - С.475].
Задачей изобретения является поиск в ряду 4-арил-2-гидрокси-4-оксо-2-бутеноатов гетериламмония веществ с выраженной антикоагулянтной активностью и низкой токсичностью.
Поставленная задача достигается получением 2-гидрокси-4-оксо-4-(4-хлорфенил)-2-бутеноата тиазолинаммония (1), обладающего высокой антикоагулянтной активностью и низкой токсичностью. Заявляемое соединение 1 синтезируют взаимодействием 2-гидрокси-4-оксо-4-(4-хлорфенил)-2-бутеновой кислоты (4) с 2-аминотиазолином в безводном хлороформе при эквимолярном соотношении реагентов, при температуре 20-25°С с последующим выделением целевого продукта известными методами по схеме
13
13
2
4
Пример 1 получения соединения 1. К раствору 1.02 г (0.01 моль) 2-аминотиазолина в 30 мл безводного хлороформа прибавляют суспензию 2.27 г (0.01 моль) 4-(4-хлорфенил)-2-гидрокси-4-оксо-2-бутеновой кислоты (2) в 20 мл того же растворителя. Реакционную смесь перемешивают при температуре 20-25°С в течение одного часа до полного растворения реагента. Раствор выдерживают 24 ч, реакционную смесь охлаждают до 0°С, выпавший осадок отфильтровывают, перекристаллизовывают из спирта этилового. Выход 2.98 г (91%). Т.пл. 156-158°С. Найдено, %: С 47.38; Н 4.12; N 8.47. CHClNOS. Вычислено, %: С 47.49; Н 3.99; N 8.52.
-1
+
1
4
1
3
6
2
2
6
4
3
ИК-спектр (Specord M80, вазелиновое масло, ν, см): 3170 ш (NH, ОН), 1682 (С=О), 1650, 1600 (С=О, C=N, C=C). Спектр ЯМР H (BS-567A (100 МГц), ДМСО-d, ГМДС, δ, м.д.): 3.55 т (2 Н, СH), 3.80 т (2 Н, CH), 6.13 с (1 Н, СН), 7.37-7.84 м (7 Н, СН, NH).
Заявляемое соединение 1 представляет собой бесцветное кристаллическое вещество, растворимое в воде, спирте этиловом, диоксане, труднорастворимое в хлороформе.
У соединения 1 изучена прямая антикоагулянтная активность. Исследования проводили с помощью коагулометра «Минилаб 701». Для изучения использовали нитратную (3,8%) кровь собаки (9:1). Влияние соединения на свертывание крови изучали в концентрации 1 мг/мл. В качестве эталона прямой антикоагулянтной активности использовали гепарин, который испытывали в концентрации 1 ЕД/мл крови. Результаты обработаны статистически с определением критерия Стьюдента с помощью статистических программ Windows XP (Excel) и представлены в таблице.
Антикоагулянтная активность и острая токсичность соединения 1, структурного аналога 2 и гепарина
Соединение
Время свертывания, с
% изменения свертываемости
Р
ЛД<sub>50</sub>, мг/кг
Контроль
опыт
1
45,4±1,57
82,5±4,52
-81,7
<0,001
379
2
29,4±2,40
36,4±4,2
-23,8
<0,05
282
Гепарин
29,9±0,48
36,6±1,82
-22,4
<0,01
3000
Как видно из таблицы, исследуемое соединение 1 достоверно увеличивает время свертывания цитратной крови на 81,7%, значительно превышая активность гепарина и структурного аналога 2.
50
50
Острую токсичность заявляемого соединения 1 при внутрибрюшинном введении изучали на белых мышах обоего пола массой 18-20 г с определением ЛД [Методические указания по изучению общетоксического действия фармакологических веществ. // Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. / Под общей редакцией чл.-корр. РАМН, проф. Р.У.Хабриева. - 2-изд., перераб., и доп.. - М.: ОАО «Издательство «Медицина», 2005. - С.41-54]. В каждой серии использовались 6 животных. Наблюдение вели ежечасно в течение суток после введения соединения 1 в виде взвеси в 2% крахмальном растворе. Контрольным животным вводили эквиобъемное количество 2% крахмального раствора. Результаты обрабатывали по Прозоровскому с вычислением средней смертельной дозы (ЛД) при Р=0,05 [Прозоровский В.Б., Прозоровская М.П., Демченко В.И. // Фармакология и токсикология, - 1978. - №4. - С.497-502].
50
50
Установлено, что ЛД соединения 1 составляет 379 мг/кг, оно в 1,34 раза менее токсично, чем структурный аналог 2. Также известно, что ЛД гепарина составляет 3000 мг/кг [Розкин М.Я., Левина М.Н., Ефимов В.С. И др. Сравнительное исследование антикоагулянтной активности сульфатированных полисахаридов бурых морских водорослей. // Фармакол. и токсикол. - 1988. - №4. - С.63-68]. Согласно классификации токсичности препаратов, соединение 1 относится к классу малотоксичных веществ [Измеров И.Ф., Саноцкий И.В., Сидоров К.К. Параметры токсикометрии промышленных ядов. - М.: Медицина, 1977, с.196-197].
Таким образом, 2-гидрокси-4-оксо-4-(4-хлорфенил)-2-бутеноат тиазолинаммония (1) проявляет высокую антикоагулянтную активность и меньшую токсичность по сравнению со структурным аналогом 2, что делает возможным его использование в медицине для создания новых лекарственных препаратов, обладающих антикоагулянтной активностью.
ЛИТЕРАТУРА
1. Синтез и биологическая активность солей гетероциклических аминов и гетериламидов на основе 4-арил-2,4-диоксобутановых кислот / Н.А.Пулина, В.В.Залесов, В.В.Юшков [и др.]. // Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии. - 2008. - №2. - С.37-40.
2. Машковский М.Д. Лекарственные средства. - 15-е изд., перераб., испр. и доп. - М.: ООО «Новая волна», 2005. - Т.2, - С.562-563.
3. Методические указания по изучению общетоксического действия фармакологических веществ. // Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. / Под общей редакцией чл.-корр. РАМН, проф. Р.У.Хабриева. - 2-изд., перераб., и доп. - М.: ОАО «Издательство «Медицина», 2005. - С.41-54.
4. Прозоровский В.Б., Прозоровская М.П., Демченко В.И. Экспресс-метод определения средней эффективной дозы и ее ошибки. // Фармакология и токсикология. - 1978. - №4. - С.497-502.
5. Розкин М.Я., Левина М.Н., Ефимов В.С. и др. Сравнительное исследование антикоагулянтной активности сульфатированных полисахаридов бурых морских водорослей. // Фармакол. и токсикол. - 1988. - №4. - С.63-68.
6. Измеров И.Ф., Саноцкий И.В., Сидоров К.К. Параметры токсикометрии промышленных ядов. - М.: Медицина, 1977. - С.196-197.