СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КОМПЛЕКСА ФИЗИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНОГО ПОЛИПЕПТИДА

1. Способ получения конъюгата физиологически активного полипептида и непептидного полимера, включающий:
(1) взаимодействие физиологически активного полипептида с непептидным полимером в реакционном растворе, содержащем органический растворитель, для связывания физиологически активного полипептида с непептидным полимером; и
(2) выделение и очистку конъюгата физиологически активного полипептида, ковалентно связанного с непептидным полимером, из реакционной смеси со стадии (1).
2. Способ по п. 1, где органический растворитель представляет собой спирт, имеющий от 1 до 10 атомов углерода.
3. Способ по п. 2, где спирт выбран из группы, состоящей из изопропанола, этанола и метанола.
4. Способ по п. 1, где реакционный раствор содержит органический растворитель в количестве от 10 до 60% по объему от общего объема реакционного раствора.
5. Способ по п. 1, где pH реакционного раствора составляет от 4,5 до 7,0.
6. Способ по п. 1, где физиологически активный полипептид имеет два или более N-конца.
7. Способ по п. 1, где физиологически активный полипептид выбран из группы, состоящей из инсулина, лютеотропного гормона (LTH), фолликулостимулирующего гормона (FSH), фактора свертывания крови VIII, фактора свертывания крови VII, адипонектина, антитела, фрагментов антител scFv, Fab, Fab′, F(ab′)2 и релаксина.
8. Способ по п. 7, где инсулин представляет собой нативный инсулин или вариант или производное, полученные любым из замены, присоединения, делеции, модификации или их комбинаций в одной или более аминокислотах нативного инсулина или его фрагмента.
9. Способ по п. 7, где непептидный полимер связан с N-концом бета-цепи инсулина.
10. Способ по п. 8, где непептидный полимер связан с аминогруппой или тиоловой группой инсулина или производного инсулина.
11. Способ по п. 1, где непептидный полимер выбран из группы, состоящей из полиэтиленгликоля, полипропиленгликоля, сополимера этиленгликоля и пропиленгликоля, полиоксиэтилированного полиола, поливинилового спирта, полисахарида, декстрана, поливинилэтилового эфира, биоразлагаемого полимера, липидного полимера, хитина, гиалуроновой кислоты и их комбинаций.
12. Способ по п. 1, где непептидный полимер имеет реакционноспособную группу, выбранную из группы, состоящей из альдегидной группы, пропиональдегидной группы, бутиральдегидной группы, малеимидной группы, орто-пиридилдисульфида, тиолового и сукцинимидного производного.
13. Способ по п. 12, где сукцинимидное производное представляет собой сукцинимидилпропионат, сукцинимидилкарбоксиметил, гидроксисукцинимидил или сукцинимидилкарбонат.
14. Способ по п. 1, где непептидный полимер имеет реакционноспособные группы по обоим концам или по трем концам.
15. Способ по п. 1, где непептидный полимер имеет альдегидные группы в качестве реакционноспособных групп по обоим концам.
16. Способ по п. 1, где выделение и очистку проводят путем ионообменной хроматографии.
17. Способ получения комплекса физиологически активного полипептида, включающий:
(1) получение конъюгата физиологически активного полипептида и непептидного полимера способом по любому из пп. 1-16; и
(2) ковалентное связывание носителя, выбранного из группы, состоящей из Fc-области иммуноглобулина, антитела, альбумина и трансферрина, с непептидным полимером конъюгата с получением пептидного комплекса, в котором концы непептидного полимера связаны соответственно с физиологически активным полипептидом и носителем.
18. Способ по п. 17, где Fc-область иммуноглобулина состоит из 1-4 доменов, выбранных из группы, состоящей из доменов CH1, CH2, CH3 и CH4.
19. Способ по п. 17, где Fc-область иммуноглобулина дополнительно содержит шарнирную область.
20. Способ по п. 17, где Fc-область иммуноглобулина представляет собой Fc-область, имеющую происхождение из IgG, IgA, IgD, IgE или IgM.
21. Способ по п. 17, где Fc-область иммуноглобулина представляет собой Fc-область IgG4.
22. Способ по п. 17, где Fc-область иммуноглобулина представляет собой агликозилированную Fc-область человеческого IgG4.