МОДИФИЦИРОВАННЫЕ ЭРИТРОИДНЫЕ КЛЕТКИ, ВКЛЮЧАЮЩИЕ НАГРУЖАЕМЫЕ АНТИГЕНПРЕЗЕНТИРУЮЩИЕ ПОЛИПЕПТИДЫ, И СПОСОБЫ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ

1. Модифицированная энуклеированная эритроидная клетка, включающая нагружаемый экзогенный антигенпрезентирующий полипептид на ее клеточной поверхности, где нагружаемый экзогенный антигенпрезентирующий полипептид включает одну или более аминокислотных замен, стабилизирующих нагружаемый экзогенный антигенпрезентирующий полипептид на клеточной поверхности.
2. Модифицированная энуклеированная эритроидная клетка по п. 1, где нагружаемый экзогенный антигенпрезентирующий полипептид стабилизирован без присутствия полипептида, связанного с экзогенным антигенпрезентирующим полипептидом.
3. Модифицированная энуклеированная эритроидная клетка по п. 1 или 2, где модифицированная энуклеированная эритроидная клетка дополнительно содержит экзогенный антигенный полипептид, связанный с нагружаемым экзогенным антигенпрезентирующим полипептидом.
4. Модифицированная энуклеированная эритроидная клетка по любому из пп. 1-3, где нагружаемый экзогенный антигенпрезентирующий полипептид обладает более высокой аффинностью к экзогенному антигенному полипептиду, чем к экзогенному заменяемому полипептиду.
5. Модифицированная энуклеированная эритроидная клетка по п. 3 или 4, где экзогенный антигенный полипептид включает аминокислотную последовательность, представленную в любой из Таблиц 7-8, 16-26 и B.
6. Модифицированная энуклеированная эритроидная клетка по любому из пп. 3-5, где экзогенный антигенный полипептид нековалентно присоединен к нагружаемому экзогенному антигенпрезентирующему полипептиду.
7. Модифицированная энуклеированная эритроидная клетка по любому из пп. 3-5, где экзогенный антигенный полипептид ковалентно присоединен к нагружаемому экзогенному антигенпрезентирующему полипептиду.
8. Модифицированная энуклеированная эритроидная клетка по п. 1 или 2, где нагружаемый экзогенный антигенпрезентирующий полипептид включает линкер, где линкер включает акцепторную последовательность для конъюгации экзогенного антигенного полипептида.
9. Модифицированная энуклеированная эритроидная клетка по любому из пп. 1-8, где нагружаемый экзогенный антигенпрезентирующий полипептид включает трансмембранный домен.
10. Модифицированная энуклеированная эритроидная клетка по п. 1, где модифицированная энуклеированная эритроидная клетка дополнительно содержит заменяемый экзогенный полипептид, связанный с нагружаемым экзогенным антигенпрезентирующим полипептидом.
11. Модифицированная энуклеированная эритроидная клетка по п. 10, где экзогенный заменяемый полипептид включает аминокислотную последовательность, представленную в Таблице 6.
12. Модифицированная энуклеированная эритроидная клетка по п. 10 или 11, где нагружаемый экзогенный антигенпрезентирующий полипептид и экзогенный заменяемый полипептид содержатся в одноцепочечном слитом белке.
13. Модифицированная энуклеированная эритроидная клетка по п. 12, где одноцепочечный слитый белок включает трансмембранный домен.
14. Модифицированная энуклеированная эритроидная клетка по любому из пп. 1-13, где нагружаемый экзогенный антигенпрезентирующий полипептид включает полипептид тяжелой цепи человеческого лейкоцитарного антигена α (HLA) и полипептид бета-2-микроглобулина (β2M) или их фрагмент.
15. Модифицированная энуклеированная эритроидная клетка по п. 14, где полипептид тяжелой цепи HLA получен из полипептида HLA класса I.
16. Модифицированная энуклеированная эритроидная клетка по п. 15, где нагружаемый экзогенный антигенпрезентирующий полипептид включает:
(i) аминокислотную замену на аланин по аминокислотному остатку, соответствующему положению 84 полипептида тяжелой цепи HLA;
(ii) аминокислотную замену на цистеин по аминокислотным остаткам, соответствующим положениям 84 и 139 полипептида тяжелой цепи HLA;
(iii) аминокислотную замену на цистеин по аминокислотным остаткам, соответствующим положениям 51 и 175 полипептида тяжелой цепи HLA;
(iv) по меньшей мере одну пару аминокислотных замен на цистеин по аминокислотным остаткам, соответствующим положениям 84 и 139, 51 и 175, 5 и 168, 130 и 157, 135 и 140, 11 и 74, 45 и 63 или 33 и 49 полипептида тяжелой цепи HLA;
(v) аминокислотную замену на цистеин по аминокислотному остатку, соответствующему положению 84 полипептида тяжелой цепи HLA, заменяемый экзогенный полипептид и линкер, расположенный между полипептидом β2M и заменяемым экзогенным полипептидом, где линкер содержит цистеин; или
(vi) полипептид тяжелой цепи HLA, полученный из аллеля HLA-A*02:01, где полипептид тяжелой цепи HLA содержит аминокислотную замену на глутаминовую кислоту по аминокислотному остатку, соответствующему положению 115 полипептида тяжелой цепи HLA.
17. Модифицированная энуклеированная эритроидная клетка по п. 14, где полипептид тяжелой цепи HLA получен из полипептида HLA класса II.
18. Способ лечения субъекта, нуждающегося в измененном иммунном ответе, включающий:
a) определение статуса HLA субъекта;
b) выбор модифицированной энуклеированной эритроидной клетки, включающей нагружаемый экзогенный антигенпрезентирующий полипептид на ее клеточной поверхности, где антигенпрезентирующий полипептид иммунологически совместим с субъектом, и экзогенный антигенпрезентирующий полипептид включает одну или более аминокислотных замен, стабилизирующих нагружаемый экзогенный антигенпрезентирующий полипептид на клеточной поверхности;
c) контакт модифицированной энуклеированной эритроидной клетки с экзогенным антигенным полипептидом; и
d) введение модифицированной энуклеированной эритроидной клетки субъекту,
осуществляя, таким образом, лечение субъекта.
19. Способ получения модифицированной энуклеированной эритроидной клетки, включающей нагруженный антигеном экзогенный антигенпрезентирующий полипептид, включающий:
a) получение модифицированной энуклеированной эритроидной клетки, включающей нагружаемый экзогенный антигенпрезентирующий полипептид на ее клеточной поверхности, где нагружаемый экзогенный антигенпрезентирующий полипептид включает одну или более аминокислотных замен, стабилизирующих нагружаемый экзогенный антигенпрезентирующий полипептид на клеточной поверхности; и
b) контакт модифицированной энуклеированной эритроидной клетки с экзогенным антигенным полипептидом;
с генерацией в результате модифицированной энуклеированной эритроидной клетки, включающей нагруженный антигеном экзогенный антигенпрезентирующий полипептид.
20. Способ получения модифицированной энуклеированной эритроидной клетки, включающей нагружаемый экзогенный антигенпрезентирующий полипептид на ее клеточной поверхности, включающий:
введение экзогенной нуклеиновой кислоты, кодирующей нагружаемый экзогенный антигенпрезентирующий полипептид, в ядросодержащую эритроидную клетку-предшественника, где, нагружаемый экзогенный антигенпрезентирующий полипептид включает одну или более аминокислотных замен, стабилизирующих нагружаемый экзогенный антигенпрезентирующий полипептид на клеточной поверхности; и
культивирование ядросодержащей эритроидной клетки-предшественника при условиях, подходящих для энуклеации и продукции нагружаемого экзогенного антигенпрезентирующего полипептида, с получением в результате модифицированной энуклеированной эритроидной клетки.