Спонтанная и индуцированная продукция цитокинов, секретируемых клетками крови обезьян вида макак-резус, иммунизированных кандидатной живой рекомбинантной коклюшной вакциной (доклиническое изучение)

2017, Т. 19, Специальный выпуск 2017, Vol. 19, Special Issue

Экспериментальные модели Experimental models

гических процессов, формированию аутоиммунных и аллергических реакций.

Цель. Выявить закономерности структурных изменений в органах иммуногенеза крыс при токсическом воздействии и фармакологической коррекции.

Задачи. Оценить структурные изменения в тимусе и селезенке крыс при токсическом воздействии и фармакологической коррекции; определить вклад Ти В-лимфоцитов в процессы регенерации в органах им-мунопоэза.

Материалы и методы. Эксперимент проведен на 25-ти крысах — самцах линии Wistar массой 180±10 г в соответствии с принципами международных этических комитетов (Директива Совета ЕС 2010/63/EU) и одобрен этическим комитетом Института иммунологии и физиологии УрО РАН (протокол ( No-D-nM-2015-28) . Все животные были разделены на экспериментальные группы: 1 группа — интактные животные, 2, 3 группа — внутрибрюшин-ное введение тетрахлорметана, 4 и 5 группы — на фоне моделирования токсического гепатита вводился иммуно-модулятор макрофагов 3-аминофталгидразид (АФГ) по схеме. Выведение животных из эксперимента осуществлялось на 3 и 7 сутки.

Проводилось морфометрическое исследование препаратов тимуса и селезенки. Для иммуногистохимиче-ского (ИГХ) исследование тимуса и селезенки применяли моноклональные антитела mouse antirat CD3 clone G 4.18, CD45 RA clone OX-33 Количественную оценку Т- и В-лимфоцитов производили в единице площади в 20 полях зрения при увеличении микроскопа х1000.

Результаты. Введение СС14 на 3 и 7 сутки приводит к резкому угнетению иммуногенеза в селезенке, о чем свидетельствует достоверное сокращение площади белой пульпы и увеличение площади красной пульпы по сравнению с показателями у интактных животных. У экспериментальных животных наблюдается увеличение количества фолликулов на 3 и 7 сутки эксперимента по сравнению с интактными, однако средняя площадь фолликула снижается.

По данным морфометрии, в центральном органе им-мунопоэза — тимусе, введение иммуномодулятора после токсического повреждения приводит к усилению лим-фопоэза, что подтверждается достоверным увеличением площади коркового и мозгового вещества на 7 сутки эксперимента.

При ИГХ исследовании Т- и В-лимфоцитов установлено, что на 3 сутки токсического воздействия уменьшается количество Т-лимфоцитов в тимусе и В-лимфоцитов в селезенке. Уменьшение количества лимфоцитов в органах иммуногенеза при действии СС14 может быть связано с деструкцией лимфоцитов и подавлением метаболических процессов в клетках, резким и длительным подавлением пролиферации. Наряду с этим разрушение лимфоидной ткани при токсическом воздействии можно считать главной причиной уменьшения их количества. Применение АФГ приводило к увеличению количества иммуноцитов белой и красной пульпы селезенки, в тимусе зафиксировано увеличение численности преимущественно В-лимфоцитов, а количество Т-лимфоцитов на фоне введения иммуномодулятора на 7 сутки достигает значения близкого к интактным.

Заключение и выводы. Действие гепатотропного яда вызывает лимфопению, выражающуюся уменьшением Ти В-лимфоцитов в органах иммунопоэза. Введение иммуномодулятора при токсическом повреждении усиливает лимфопоэз в тимусе и селезенке, что подтверждается увеличением числа Т- и В-лимфоцитов. Полученные результаты дают основание для применения иммуномодулятора АФГ в качестве перспективной стратегии в стимуляции репаративных процессов в органах иммунной системы после токсического воздействия.

Исследование проведено в рамках бюджетной программы «Изучение механизмов регенераторных процессов в органах и тканях с использованием экспериментальных моделей экстремальных факторов и токсического воздействия на организм», № гос. регистрации - 01201352042.

СПОНТАННАЯ И ИНДУЦИРОВАННАЯ ПРОДУКЦИЯ ЦИТОКИНОВ, СЕКРЕТИРУЕМЫХ КЛЕТКАМИ КРОВИ ОБЕЗЬЯН ВИДА МАКАК-РЕЗУС, ИММУНИЗИРОВАННЫХ КАНДИДАТНОЙ ЖИВОЙ РЕКОМБИНАНТНОЙ КОКЛЮШНОЙ ВАКЦИНОЙ

Медкова А.Ю.1, Амичба А.А.2, Матуа А.З.2, Синяшина Л.Н.1, Шевцова З.В.2, Семин Е.Г.1, Лядова И.А.1, Цыганов Е.Н.1, Конджария И.Г.2, Баркая В.С.2, Миквабиа З.Я.2, Каратаев Г.И.1

1ФГБУ «Федеральный научно-исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии» им. Н.Ф. Гамалеи Министерства здравоохранения России, Москва, Россия 2 Научно-исследовательский институт экспериментальной патологии и терапии АНА, Сухум, Абхазия

В последние десятилетия коклюш снова привлек к себе внимание в связи со вспышками заболевания даже в странах с подавляющей долей привитого населения. Это тяжелое инфекционное респираторное заболевание до сих пор остается одной из главных причин смертности младенцев в возрасте до 1 года. Из-за ослабления коллективного иммунитета, связанного с краткосрочной эффективностью применяемых вакцин, наблюдается адаптация возбудителя вследствие геномных изменений бактерий B. pertussis. Более того, поствакцинальный амнестический иммунный ответ (бустер-эффект) ослабевает и не поддерживается циркулирующими в настоящее время штаммами коклюшных бактерий. Такое развитие событий ставит вопрос о создании новых, более эффективных вакцин, способных обеспечивать поствакцинальную защиту от коклюша, сравнимую с постинфекционной.

Новая стратегия в достижении необходимого защитного иммунитета против коклюша заключается в создании препарата, максимально имитирующего природную инфекцию, но не проявляющую патогенных свойств вирулентных бактерий B. pertussis. В НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи нами сконструированы рекомбинантные бактерии B. pertussis4МКS, продуцирующие нетоксичную имму-ногенную форму коклюшного токсина — рКТ и не проявляющие активности непротективного антигена — дер-монекротического токсина. На основе этих генетически аттенуированных бактерий — B. pertussis4МКS — разра-

Медицинская Иммунология Medical Immunology (Russia)/Meditsinskaya Immunologiya

«Дни иммунологии в СПб 2017» Immunology Days in St. Petersburg 2017

ботана кандидатная рекомбинантная живая коклюшная вакцина (рЖКВ) для интраназального применения. Ранее нами было показано, что количество и сроки регистрации специфических антител в крови обезьян после иммунизации рЖКВ и экспериментального инфицирования вирулентными бактериями B. pertussis475 не коррелировали с показателями защитного противококлюш-ного иммунитета. Вероятно, именно клеточно-опосре-дованный иммунный ответ необходим для обеспечения длительной защиты от возбудителя коклюша и быстрого бустер-эффекта при контакте с возбудителем. Нами была изучена спонтанная и индуцированная продукция цито-кинов клетками крови обезьян, как одна из достоверных характеристик местной защитной реакции и иммуномо-дулирующего эффекта от инвазии бактерий B. pertussis. Поскольку коклюш — это антропонозное заболевание, обезьяны представляются наиболее адекватной моделью. Иммунизация рЖКВ и экспериментальное инфицирование вирулентными бактериями B. pertussis475 обезьян вида макак-резус сопровождались однотипной цито-кин-секреторной пролиферацией клеточного иммунного ответа по типу Th1/Th17 с формированием защитной реакции, препятствующей размножению возбудителя в носоглотке с ускоренными темпами его элиминации. Инфекционная провокация у иммунизированных обезьян рЖКВ сопровождалось выраженным бустерным эффектом. Сравнительная характеристика иммуномо-дулирующего действия рЖКВ и вирулентных бактерий B. pertussis475подтвердила общие механизмы формирования долгосрочного защитного иммунитета.

КОМБИНИРОВАННАЯ ИММУНОМОДУЛИРУЮЩАЯ, АНТИОКСИДАНТНАЯ И МЕМБРАНОПРОТЕКТОРНАЯ ТЕРАПИЯ ПРИ РАЗЛИЧНЫХ ФОРМАХ ОСТРОГО ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОГО ПАНКРЕАТИТА

Микаелян П.К., Локтионов А.Л., Караулов А.В., Назаренко П.М., Тарасов О.Н.

Курский государственный медицинский университет, Курск, Россия

Введение. Экспериментальное изучение заболеваний и разработка методов лечения являются способом подтверждения существующих и предполагаемых гипотез и механизмов развития болезни, помогает обозначить точки приложения для эффективного воздействия фармакологической коррекции установленных нарушений в системах регуляции. Достаточно сложной в клиническом плане проблемой является острый панкреатит, имеющий несколько форм с большим количеством осложнений.

Цель и задачи. На экспериментальных моделях различных форм острого панкреатита оценить характер и степень иммунных нарушений, выявить корригирующие эффекты сочетания полиоксидоний, эмоксипин и эссенциале Н.

Материалы и методы. Эксперименты проведены на 118 здоровых половозрелых крысах Вистар, массой 150200 г, с соблюдением всех правил работы с лабораторными животными. Моделирование острой отечной формы панкреатита (ООП) осуществляли путем дозированного криогенного воздействия жидкого азота на одну из долей поджелудочной железы. Острый деструктивный панкреа-

тит (ОДП) воспроизводили перевязкой протоков поджелудочной железы и трехкратной через 60 мин стимуляцией прозерином в дозе 0,2 мг/кг. Животных с ООП и ОДП делили на 2 равные группы: без введения препаратов и с применением комбинации полиоксидония (0,03 мг внутримышечно через 24 часа, № 10), эмоксипина (1 мл 1% раствора разводили в 20 мл 0,9% раствора натрия хлорида; 0,5 мл готового раствора вводили внутримышечно, через 24 часа, № 10) и эссенциале Н (0,03 мл внутрибрюшин-но через 24 часа, № 10). В качестве контроля использовали 15 животных без внешних признаков заболеваний. Формирование гуморального иммунного ответа (ГИО) оценивали на пятые сутки после иммунизации эритроцитами барана, подсчитывая в селезенке число иммунных антителообразующих клеток (АОК). Гиперчувствительность замедленного типа (ГЗТ) определяли по разнице масс регионарного и контрлатерального лимфатических узлов (РМ) и по разнице количества в них кариоцитов (РК) после введения разрешающей дозы антигена — эритроцитов барана. Фагоцитарная активность нейтрофилов циркулирующей крови оценивалась по фагоцитарному показателю (ФП), фагоцитарному числу (ФЧ) и индексу активности фагоцитоза (ИАФ). Кислородзависимую метаболическую активность полиморфно-ядерных лейкоцитов оценивали по НСТ-тестам спонтанному (НСТ-сп.) и стимулированному опсонизированным и неопсонизи-рованным зимозаном (НСТ-ст. н/з, НСТ-ст. о/з), коэффициентам активации на опсонизированный и неопсо-низированный зимозан и коэффициенту опсонизации (Кан, КАо, КО).

Результаты. В группе животных с ООП установлена супрессия формирования ГИО и ГЗТ (снижение всех исследованных показателей), снижение показателей фагоцитоза с одновременным повышением метаболической активности нейтрофилов периферической крови. У экспериментальных животных с ОДП выявлено более выраженное, по сравнению с отечной формой, снижение количества иммунных АОК в селезенке, РМ и РК регионарного и контралатерального лимфатических узлов, фагоцитирующих кариоцитов и поглощенных ими частиц, повышение показателей, характеризующих кислородза-висимую активность нейтрофилов на фоне снижения резервов гранулоцитов (КАн, КАо, КО). Применение при ООП комбинации полиоксидония, эмоксипина и эссен-циале Н нормализовало формирование ГИО, ГЗТ и фагоцитарную активность нейтрофилов периферической крови и корригировало, но не до параметров контроля, их метаболическую активность. В условиях ОДП введение комбинации полиоксидония, эмоксипина и эссенциале Н нормализовало развитие ГИО, показатели фагоцитоза (ФП, ФЧ и ИАФ), корригировало, но не до уровня нормы, формирование ГЗТ (РК и РМ) и показатели кисло-родзависимой активности нейтрофилов циркулирующей крови.

Заключение. Таким образом, при отечной и деструктивной формах острого панкреатита развиваются различные по степени выраженности нарушения адаптивного и врожденного иммунитета, что, вероятно, связано с масштабом поражения тканей железы. Комбинированная иммуномодулирующая, мембранопротекторная и антиоксидантная терапия оказалась эффективной при деструктивной, в большей степени при отечной, форме