СПОСОБ ОБРАБОТКИ ЦЕЛЛЮЛОЗНОГО МАТЕРИАЛА И ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ В НЕМ ФЕРМЕНТЫ

1. Способ обработки целлюлозного материала с помощью целлобиогидролазы, эндоглюканазы и бета-глюкозидазы, в котором упомянутая целлобиогидролаза включает аминокислотную последовательность, имеющую, по меньшей мере, 80%-ную идентичность SEQ ID NO:2, 4, 6 или 8, или ее ферментативно активный фрагмент.
2. Способ по п.1, в котором целлобиогидролаза получена из Thermoascus aurantiacus, Acremonium thermophilum или Chaetomium thermophilum.
3. Способ по п.2, в котором целлобиогидролаза получена из Thermoascus aurantiacus CBS 116239, Acremonium thermophilum CBS 116240 или Chaetomium thermophilum CBS 730.95.
4. Способ по п.1, в котором используют рекомбинантные ферменты, предпочтительно произведенные в штамме из рода Trichoderma или Aspergillus.
5. Способ по п.4, включающий использование целлобиогидролазы, получаемой из Thermoascus aurantiacus или Acremonium thermophilum, к которой генетически присоединен целлюлозосвязывающий домен.
6. Способ по п.5, в котором присоединенный целлюлозосвязывающий домен происходит из Trichoderma reesei или Chaetomium thermophilum, и, предпочтительно, производящий слитый протеин, включающий аминокислотную последовательность, имеющую, по меньшей мере, 80%-ную идентичность SEQ ID NO:28 или 30.
7. Способ по п.1, в котором эндоглюканаза включает аминокислотную последовательность, имеющую, по меньшей мере, 80%-ную идентичность SEQ ID NO:10, 12, 14 или 16, или ее ферментативно активный фрагмент.
8. Способ по п.7, в котором эндоглюканаза получена из Thermoascus aurantiacus, Acremonium thermophilum или Chaetomium thermophilum.
9. Способ по п.8, в котором эндоглюканаза получена из Thermoascus aurantiacus CBS 116239, Acremonium thermophilum CBS 116240 или Chaetomium thermophilum CBS 730.95.
10. Способ по п.1, в котором бета-глюкозидаза включает аминокислотную последовательность, имеющую, по меньшей мере, 80%-ную идентичность SEQ ID NO:22, 44 или 28, или ее ферментативно активный фрагмент.
11. Способ по п.10, в котором бета-глюкозидаза получена из Thermoascus aurantiacus, Acremonium thermophilum или Chaetomium thermophilum, предпочтительно из Thermoascus aurantiacus CBS 116239, Acremonium thermophilum CBS 116240 или Chaetomium thermophilum CBS 730.95.
12. Способ по любому из предшествующих пунктов, в котором целлюлозный материал представляет собой лигноцеллюлозный материал.
13. Способ по п.1, включающий обработку лигноцеллюлозного материала с помощью, по меньшей мере, одного дополнительного фермента, предпочтительно ксиланазы, которая предпочтительно включает аминокислотную последовательность, имеющую, по меньшей мере, 80%-ную идентичность SEQ ID NO:18 или 20, или ее ферментативно активный фрагмент.
14. Способ по п.13, в котором ксиланаза получена из Thermoascus aurantiacus или Acremonium thermophilum, предпочтительно из Thermoascus aurantiacus CBS 116239 или Acremonium thermophilum CBS 116240.
15. Способ по п.1, в котором ферменты добавляют к целлюлозному материалу или одновременно, или последовательно.
16. Способ по п.15, в котором, по меньшей мере, один из ферментов кодируется геном, подобным гену, включенному в микроорганизм, имеющий номер доступа DSM 16723, DSM 16728, DSM 16729, DSM 16727, DSM 17326, DSM 17324, DSM 17323, DSM 17729, DSM 16724, DSM 16726, DSM 16725, DSM 17325 или DSM 17667.
17. Способ по п.1, в котором целлюлозный материал выбран из группы, состоящей из кукурузной соломы, проса, соломы злаков, выжимок сахарного тростника и происходящего из древесины материала.
18. Ферментный препарат, включающий целлобиогидролазу, эндоглюканазу и бета-глюкозидазу, где упомянутая целлобиогидролаза включает аминокислотную последовательность, имеющую, по меньшей мере, 80%-ную идентичность SEQ ID NO:2, 4, 6 или 8, или ее ферментативно активный фрагмент.
19. Ферментный препарат по п.18, где упомянутая целлобиогидролаза получена из Thermoascus aurantiacus, Acremonium thermophilum или Chaetomium thermophilum.
20. Ферментный препарат по п.19, где целлобиогидролаза получена из Thermoascus aurantiacus CBS 116239, Acremonium thermophilum CBS 116240 или Chaetomium thermophilum CBS 730.95.
21. Ферментный препарат по п.18, где ферменты являются рекомбинантными ферментами, предпочтительно продуцируемыми штаммом из рода Trichoderma или Aspergillus.
22. Ферментный препарат по п.21, включающий целлобиогидролазу, получаемую из Thermoascus aurantiacus, к которой генетически присоединен целлюлозосвязывающий домен.
23. Ферментативный препарат по п.22, где целлюлозосвязывающий домен происходит из Trichoderma reesei или Chaetomium thermophilum, и, предпочтительно, производящий слитый протеин, включающий аминокислотную последовательность, имеющую, по меньшей мере, 80%-ную идентичность SEQ ID NO:28 или 30.
24. Ферментативный препарат по п.18, где эндоглюканаза включает аминокислотную последовательность, имеющую, по меньшей мере, 80%-ную идентичность SEQ ID NO:10, 12, 14 или 16, или ее ферментативно активный фрагмент.
25. Ферментный препарат по п.24, где эндоглюканаза получена из Thermoascus aurantiacus, Acremonium thermophilum или Chaetomium thermophilum, предпочтительно из Thermoascus aurantiacus CBS 116239, Acremonium thermophilum CBS 116240 или Chaetomium thermophilum CBS 730.95.
26. Ферментный препарат по п.18, где бета-глюкозидаза включает аминокислотную последовательность, имеющую, по меньшей мере, 80%-ную идентичность SEQ ID NO:22, 24 или 26, или ее ферментативно активный фрагмент.
27. Ферментный препарат по п.26, где бета-глюкозидаза получена из Thermoascus aurantiacus, Acremonium thermophilum или Chaetomium thermophilum, предпочтительно из Thermoascus aurantiacus CBS 116239, Acremonium thermophilum CBS 116240 или Chaetomium thermophilum CBS 730.95.
28. Ферментный препарат по любому из пп.18-27, включающий, по меньшей мере, один дополнительный фермент, предпочтительно ксиланазу, которая предпочтительно включает аминокислотную последовательность, имеющую, по меньшей мере, 80%-ную идентичность SEQ ID NO:18 или 20, или ее ферментативно активный фрагмент.
29. Ферментный препарат по п.28, где ксиланаза получена из Thermoascus aurantiacus или Acremonium thermophilum, предпочтительно из Thermoascus aurantiacus CBS 116239 или Acremonium thermophilum CBS 116240.
30. Ферментный препарат по п.18, где, по меньшей мере, один из ферментов кодируется геном, подобным гену, включенному в микроорганизм, имеющий номер доступа DSM 16723, DSM 16728, DSM 16729, DSM 16727, DSM 17326, DSM 17324, DSM 17323, DSM 17729, DSM 16723, DSM 16726, DSM 16725, DSM 17325 или DSM 17667.
31. Ферментный препарат по п.18, который представлен в форме отработанной среды культивирования, порошка, гранул или жидкости.
32. Применение ферментного препарата согласно любому из пп.18-31 для деградирования целлюлозного материала.
33. Применение по п.32, где целлюлозный материал выбран из группы, состоящей из кукурузной соломы, проса, соломы злаков, выжимок сахарного тростника и происходящего из древесины материала.
34. Применение способа согласно любому из пп.1-17 в процессе получения этанола из целлюлозного материала.
35. Полипептид, включающий фрагмент, имеющий целлюлолитическую активность, и выбранный из группы, состоящей из
a) полипептида, включающего аминокислотную последовательность, имеющую, по меньшей мере, 66%-ную идентичность с SEQ ID NO:4, 79%-ную идентичность с SEQ ID NO:6, 78%-ную идентичность с SEQ ID NO:12, 68-ную идентичность с SEQ ID NO:14, 72%-ную идентичность с SEQ ID NO:16, 68%-ную идентичность с SEQ ID NO:20, 74%-ную идентичность с SEQ ID NO:22 или 24, или 78%-ную идентичность с SEQ ID NO:26;
b) варианта а), включающего фрагмент, имеющий целлюлолитическую активность;
и
c) фрагмента a) или b), имеющего целлюлолитическую активность.
36. Полипептид по п.35, включающий
а) аминокислотную последовательность, имеющую, по меньшей мере, 80%-ную идентичность SEQ ID NO:4, 6, 12, 14, 16, 20, 22, 24 или 26;
b) вариант а), включающий фрагмент, имеющий целлобиогидролазную, эндоглюканазную, ксиланазную или бета-глюкозидазную активность; или
c) фрагмент a) или b), имеющий целлобиогидролазную, эндоглюканазную, ксиланазную или бета-глюкозидазную активность.
37. Выделенный полинуклеотид, выбранный из группы, состоящей из
a) нуклеотидной последовательности SEQ ID NO:3, 5, 11, 13, 15, 19, 21, 23 или 25, или последовательности, кодирующей полипептид по п.35;
b) нити, комплементарной а);
c) фрагмента а) или b), включающего, по меньшей мере, 20 нуклеотидов; и
d) последовательности, которая является вырожденной как результат генетического кода относительно любой последовательности, охарактеризованной в а), b) или с).
38. Полинуклеотид по п.37, имеющий последовательность, включенную в SEQ ID NO:3, 5, 11, 13, 15, 19, 21, 23 или 25.
39. Полинуклеотид по п.37, включающий ген, подобный гену, включенному в микроорганизм, имеющий номер доступа, выбранный из группы, состоящей из DSM 16728, DSM 16729, DSM 17324, DSM 17323, DSM 17729, DSM 16726, DSM 16725, DSM 17325 или DSM 17667.
40. Вектор, который включает в качестве гетерологичной последовательности полинуклеотид по любому из пп.37-39.
41. Вектор по п.40, который способен экспрессировать полипептид по п.35.
42. Хозяйская клетка, включающая вектор по п.40.
43. Хозяйская клетка по п.42, которая способна экспрессировать полипептид, кодируемый гетерологичной полинуклеотидной последовательностью.
44. Хозяйская клетка по п.43, которая представляет собой штамм из рода Trichoderma или Aspergillus.
45. Штамм Escherichia coli, имеющий номер доступа DSM 16728, DSM 16729, DSM 17324, DSM 17323, DSM 17729, DSM 16726, DSM 16725, DSM 17325 или DSM 17667.
46. Ферментный препарат, включающий полипептид по п.35.
47. Ферментный препарат по п.46, который представлен в форме отработанной среды культивирования, порошка, гранул или жидкости.
48. Ферментный препарат по п.46 или 47, который имеет целлобиогидролазную, эндоглюканазную, бета-глюкозидазную и, при необходимости, ксиланазную активность и/или другие ферментативные активности.
49. Ферментный препарат по п.46, который дополнительно включает традиционные добавки.
50. Применение полипептида согласно п.35 или ферментного препарата согласно п.46 в топливной, текстильной, детергентной, целлюлозно-бумажной, пищевой промышленности, производстве кормов или напитков.
51. Применение по п.50, где фермент используют при обработке крафт-целлюлозы, механической целлюлозы или утилизированной бумаги.
52. Применение по п.50, где ферментный препарат представляет собой отработанную среду культивирования.
53. Способ получения полипептида, включающего фрагмент, имеющий целлюлолитическую активность, и выбранного из группы, состоящей из
a) полипептида, включающего аминокислотную последовательность, имеющую, по меньшей мере, 66%-ную идентичность с SEQ ID NO:4, 79%-ную идентичность с SEQ ID NO:6, 78%-ную идентичность с SEQ ID NO:12, 68-ную идентичность с SEQ ID NO:14, 72%-ную идентичность с SEQ ID NO:16, 68%-ную идентичность с SEQ ID NO:20, 74%-ную идентичность с SEQ ID NO:22 или 24, или 78%-ную идентичность с SEQ ID NO:26;
b) варианта а), включающего фрагмент, имеющий целлюлолитическую активность;
и
c) фрагмента а) или b), имеющего целлюлолитическую активность, причем указанный способ включает трансформирование хозяйской клетки вектором, кодирующим упомянутый полипептид, и культивирование этой хозяйской клетки в условиях, обеспечивающих экспрессию упомянутого полипептида и, при необходимости, извлечение и очистку произведенного полипептида.
54. Способ обработки целлюлозного материала отработанной средой культивирования, по крайней мере, одного микроорганизма, способного продуцировать полипептид, включающий фрагмент, имеющий целлюлолитическую активность, и выбранный из группы, состоящей из
а) полипептида, включающего аминокислотную последовательность, имеющую, по меньшей мере, 66%-ную идентичность с SEQ ID NO:4, 79%-ную идентичность с SEQ ID NO:6, 78%-ную идентичность с SEQ ID NO:12, 68-ную идентичность с SEQ ID NO:14, 72%-ную идентичность с SEQ ID NO:16, 68%-ную идентичность с SEQ ID NO:20, 74%-ную идентичность с SEQ ID NO:22 или 24, или 78%-ную идентичность с SEQ ID NO:26;
b) варианта а), включающего фрагмент, имеющий целлюлолитическую активность;
и
с) фрагмента а) или b), имеющего целлюлолитическую активность, причем указанный способ включает реагирование целлюлозного материала с отработанной средой культивирования для получения гидролизированного целлюлозного материала.