СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ТКАНЕПОДОБНЫХ СТРУКТУР ИЗ КЛЕТОК ЖИВОТНОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ ДЛЯ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ ИХ ПРИ СОЗДАНИИ ЗАМЕНИТЕЛЕЙ ТКАНИ

2
1. Способ получения тканеподобных структур из клеток животного происхождения для использования их при создании заменителей ткани на основе использования гистонов из ткани тимуса телят, которые наносят на поверхность субстрата и после их адсорбции на субстрате неадсорбированный белок удаляют, клетки животного происхождения наносят на модифицированную гистонами поверхность субстрата и культивируют в среде, содержащей минимальное количество сыворотки, отличающийся тем, что используемые гистоны предварительно иммобилизуют на поверхности биосовместимых полимерных микросфер из кристаллизованного декстрана диаметром не более 1,0 мкм, причем перед иммобилизацией гистонов проводят активацию микросфер, которую осуществляют добавлением к водной суспензии микросфер сшивающего агента, при температуре не более 4°С и времени инкубации не более 2 мин, затем активированные микросферы осаждают при центрифугировании и осадок промывают дистиллированной водой и повторно центрифугируют, после чего проводят повторное суспензирование микросфер в растворе гистона, при весовом соотношении белка и микросфер равном 1:100, а иммобилизацию белка осуществляют ковалентным связыванием при рН 7,5-8,0, температуре не более 4°С, времени инкубации не более 2 ч, затем микросферы с иммобилизованными гистонами осаждают центрифугированием, после чего микросферы, содержащие 160-200 мкг белка на 1,0 г, наносят на поверхность субстрата в количестве 0,5-1,0 мг на 1,0 см и высушивают при комнатной температуре, затем промывают буферным раствором рН 7,5 для удаления несвязанного с субстратом материала, а полученный слой микросфер на поверхности субстрата, с нанесенными на него клетками, используют в качестве основы для получения тканеподобных клеточных структур.
2. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве сшивающего агента выбирают бромциан при концентрации не более 0,42 моль/л.
3. Способ по п.1, отличающийся тем, что требуемое количество иммобилизованного белка определяют аминокислотным анализом.
4. Способ по п.3, отличающийся тем, что за оптимальное количество иммобилизованного гистона принимают 180 мкг белка на 1,0 г микросфер.
5. Способ по п.1, отличающийся тем, что для иммобилизации выбирают комбинации различных типов гистонов и их ковалентные конъюгаты.
6. Способ по п.5, отличающийся тем, что выбирают суммарный гистон, коровью гистоны и их ковалентные конъюгаты.
7. Способ по п.1, отличающийся тем, что клетки культивируют в бессывороточной среде с ростовыми добавками.