СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ СВИНЕЙ, ИНФИЦИРОВАННЫХ ВОЗБУДИТЕЛЕМ Actinobacillus pleuropneumoniae
METHOD OF IDENTIFYING PIGS INFECTED WITH CAUSATIVE AGENT Actinobacillus pleuropneumoniae

Изобретение относится к ветеринарии и может быть использовано для выявления свиней, инфицированных возбудителем Actinobacillus pleuropneumoniaea.
Актинобациллезная (гемофилезная) плевропневмония - высококонтагиозная болезнь свиней, характеризующаяся при остром течении геморрагическим воспалением легких и фибринозным плевритом, а при подостром и хроническом - развитием очаговой гнойной некротизирующей плевропневмонии и серозно-фибринозным плевритом. Болезнь наносит существенный экономический ущерб свиноводческим хозяйствам за счет большого падежа свиней, затрат на лечение больных и проведения ветеринарно-санитарных мероприятий.
Диагностика данного заболевания трудно дифференцируема, поскольку клинические признаки сравнимы с другими легочными заболеваниями, с такими как микоплазмоз, пневмония, репродуктивно-респираторный синдром.
Известен способ диагностики гемофилезной плевропневмонии свиней (см. Сидоров М.А., Скородумов Д.И., Лаврентьев Н.И., Мицаев Ш.Ш., Романова Л.Я., Юдин А.И. Диагностика гемофилезной плевропневмонии свиней / Ж. Ветеринария, - 1981. - 12. - С.66-68), заключающийся в проведении клинических, патологоанатомических и бактериологических исследований.
Однако данная диагностика является длительной и трудоемкой, поскольку требуют посева на специальные питательные среды, проведения микроскопических исследований. Кроме этого, для определения патогенных свойств культуры необходима постановка биопробы.
Известен также способ диагностики актинобациллезной плевропневмонии свиней с использованием серологических исследований, в частности путем постановки реакции агглютинации, реакции непрямой гемагглютинации, реакции коагглютинации (см. Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора ветеринарных наук Скородумова Д.И. «Актинобациллезная (гемофилезная) плевропневмония и гемофилезный полисерозит свиней (этиология, лабораторная диагностика, основы специфической профилактики актинобациллезной плевропневмонии»/ http://uchit.net: или http://www.refstar.ru).
Однако точность идентификации возбудителя с помощью реакций агглютинации, непрямой агглютинации невелика, поскольку не все группы штаммов культуры Actinobacillus pleuropneumoniae удается идентифицировать с помощью этих реакций, что приводит к неправильной или неточной постановке диагноза. В частности, актинобациллезную плевропневмонию необходимо точно отдифференцировать от пастереллеза,пневмоний, вызванных микоплазмами, хламидиями, стрептококками (диплококковая пневмония).
Наиболее близким к заявляемому является способ выявления инфицированных возбудителем Actinobacillus pleuropneumoniae свиней (см. http://www.alekris.ru или http://www.dpri.ru/index), заключающийся в серологических исследованиях животных методом иммуноферментного анализа. Способ позволяет производить дифференциацию между инфицированными и вакцинированными животными и дает возможность выявлять инфицированных особей в популяциях вакцинированных и невакцинированных животных.
Однако процент выявляемости больных животных невысок.
Изобретение направлено на решение задачи создания эффективного способа выявления свиней, инфицированных возбудителем Actinobacillus pleuropneumoniae, за счет усиления специфических и неспецифических иммунных реакций на возбудитель в организме животного, а также за счет изменений некоторых биохимических показателей крови, позволяющих повысить процент выявляемости животных в отношении актинобациллезной плевромневмонии.
Для решения поставленной задачи в способе выявления свиней, инфицированных возбудителем Actinobacillus pleuropneumoniae, заключающемся в проведении серологических исследований и определении положительно реагирующих животных, согласно изобретению дополнительно после проведения серологических исследований свиньям всех возрастных групп вводят препарат в виде смеси медицинского раствора формальдегида с изотоническим раствором хлорида натрия при соотношении их весовых частей 2-6:994-998 двукратно внутримышечно в дозе 5-6 мл на голову с интервалом между инъекциями 7-8 дней, после чего спустя 10-12 дней после введения препарата проводят дополнительные серологические исследования и выявляют инфицированных животных.
В известных авторам источниках патентной и научно-технической информации не описано способа выявления свиней, инфицированных возбудителем Actinobacillus pleuropneumoniae, путем введения препарата в виде смеси медицинского раствора формальдегида с изотоническим раствором хлорида натрия, которое приводит одновременно к усилению специфических и неспецифических факторов иммунитета. При этом усиление специфических факторов происходит за счет увеличения уровня антител к возбудителю актинобациллезной плевропневмонии, а неспецифических - за счет повышения уровня интерлейкинов.
Кроме этого, обработка животных этим препаратом приводит к достоверному изменению биохимических показателей, в частности - повышению концентрации неорганического фосфора, глюкозы, каротина.
Таком образом, эффект выявляемости животных основан одновременно на изменении специфических, неспецифических факторов иммунитета и изменении биохимических показателей, что в комплексе позволяет эффективнее дифференцировать инфицированных животных от здоровых среди невакцинированного поголовья.
Сказанное позволяет сделать вывод о наличии в заявляемом решении «изобретательского уровня».
Способ осуществляется следующим образом.
Выявляют инфицированных животных, например, с помощью реакции иммуноферментного анализа и определяют положительно реагирующих животных.
Осуществляют обработку этих животных препаратом в виде смеси медицинского раствора формальдегида с раствором хлорида натрия 0,85-0,95%-ной концентрации при соотношении их весовых частей 2-6:994-998. При этом препарат вводят внутримышечно однократно в дозе 4-6 мл на голову.
Через 7-10 дней после обработки препаратом проводят повторный иммуноферментный анализ, по результатам которого повторно выявляют инфицированных животных.
Пример 1
Доказательство повышения неспецифических факторов иммунитета за счет введения препарата
Эксперимент проводился на лабораторных животных: на 7 морских свинках и 10 белых крысах. Животных каждого вида делили на 2 группы: контрольную (которым препарат не вводили) и опытную (которых обрабатывали препаратом).
Животным опытных групп препарат вводили в количестве 0,5 мл на голову и через 7-10 дней после инъекции определяли содержание интерлейкинов (ИЛ-4, ИЛ-6, ИЛ-8), а животным контрольных групп инъецировали в той же дозе физиологический раствор.
Результаты представлены в таблице 1.
Таблица 1
Результаты исследования интерлейкинов на лабораторных животных
№ животного п/п
Содержание интерлейкинов в пг/мл (абс. значение)
ИЛ-6
ИЛ-4
ИЛ-8
БЕЛЫЕ КРЫСЫ (контроль)
1
17,5
31,6
0
2
39,9
33,7
10,1
3
47,9
11,9
56,4
4
32,2
10,7
62,6
5
15,6
31,6
18,3
Среднее
30,62±6,26
23,9±5,16
29,48±12,63
БЕЛЫЕ КРЫСЫ (опыт)
6
12,5
31,3
18,5
7
166,1
31,7
43,8
8
123,8
21,6
44,3
9
137,9
29,9
57,8
10
10,7
31,5
15,3
Среднее
90,2±32,8
29,2±1,92
35,94±8,18
МОРСКИЕ СВИНКИ (контроль)
1
10,7
31,2
15,5
2
41,5
46,1
11,8
3
11,7
12,4
16,3
4
16,5
38,5
96,2
Среднее
20,1±7,24
32,05±7,22
34,95±20,44
МОРСКИЕ СВИНКИ (опыт)
5
46,1
30
15,1
6
29,9
32,8
59,1
7
38,5
31
61,7
Среднее
38,17±4,67
31,27±0,81
45,3±15,11
Результаты исследований показали наличие тенденции к повышению содержания интерлейкинов ИЛ-4, ИЛ-6 и ИЛ-8 в крови лабораторных животных после введения препарата, обеспечивающего активизацию неспецифических факторов иммунитета и, как следствие, повышение сопротивляемости организма к возбудителю.
Пример 2
Доказательство повышения процента выявляемости инфицированных животных и, как следствие, эффективности заявляемого способа
Эксперимент проводился на базе хозяйства, неблагополучного по актинобациллезной плевропневмонии.
С помощью иммуноферментного анализа была исследована сыворотка крови 22 поросят 6-месячного возраста на наличие возбудителя Actinobacillus pleuropneumoniae. Полученные результаты показали, что из 22 сывороток наличие специфических антител к возбудителю, свидетельствующих об инфицированности животных, было обнаружено только у 1 (4,5%) поросенка.
Всем поросятам был введен препарат в виде смеси медицинского раствора формальдегида с раствором хлорида натрия 0,85-0,95%-ной концентрации при соотношении их весовых частей 2-6:994-998 двукратно внутримышечно в дозе 5-6 мл на голову с интервалом между инъекциями 7-8 дней.
Спустя 10 дней после обработки препаратом был снова проведен иммуноферментный анализ на наличие антител к возбудителю Actinobacillus pleuropneumoniae. Результаты эксперимента представлены в таблице 2.
Таблица 2
Результаты иммуноферментного анализа сывороток крови свиней
№ п/п
Наличие антител к возбудителю Actinobacillus pleuropneumoniae
До обработки препаратом
После обработки препаратом
1
-
-
2
-
-
3
-
-
4
-
-
5
-
+
6
-
-
7
-
-
8
-
-
9
+
+
10
-
-
11
-
+
12
-
+
13
-
-
14
-
+
15
-
+
16
-
+
17
-
+
18
-
-
19
-
-
20
-
+
21
-
-
22
-
+
Из таблицы 2 следует, что после обработки препаратом было выявлено дополнительно 9 (42,8%) инфицированных животных из 21 головы, ранее считавшихся неинфицированными.
Эффективность выявляемое™ инфицированных животных увеличилась в 9,5 раз.
Пример 3
Спустя 6 месяцев после обработки животных препаратом, как описано в примере 2, были проведены исследования по определению биохимических показателей крови у свиней, подвергавшихся и не подвергавшихся обработке препаратом.
Определяли такие показатели, как концентрация общего белка, общего кальция, неорганического фосфора, глюкозы, каротина по общепринятым методикам. Результаты исследований представлены в таблице 3.
Таблица 3
Биохимические показатели крови опытных и контрольных животных спустя 6 месяцев после обработки
№ п\п
Номер животного
Общий белок, мг %
Общий кальций, мг %
Фосфор неорганический, мг %
Глюкоза, ммоль\л
Каротин, мг %
Контроль
1
7250
6,94
11,75
5,00
1,15
0,47
2
6640
7,00
11,25
5,29
3,07
0,56
3
6569
6,70
13,50
3,82
1,28
4
7293
6,53
12,25
3,52
1,28
0,69
5
7315
7,29
12,75
3,23
1,28
0,59
6
6772
6,76
12,00
4,41
1,41
0,62
7
7148
7,23
10,00
4,70
1,53
0,69
8
7404
6,12
13,75
4,11
1,28
0,66
9
7213
7,00
11,00
3,52
1,28
0,56
10
7694
5,89
12,50
3,82
1,53
0,47
Средн.
6,75
12,08
4,14
1,51
0,59
Откл.
0,14
0,36
0,22
0,18
0,02
Опыт
11
7114
7,58
10,50
5,00
2,43
0,62
12
7825
7,05
11,50
4,70
1,02
0,75
13
1894
6,41
10,75
4,41
2,82
0,66
14
8109
7,00
11,25
3,82
1,66
0,53
15
8116
5,83
12,50
4,11
1,79
16
А 3027
7,29
11,75
5,29
2,56
0,59
17
3098
7,11
12,25
6,47
3,33
0,66
18
1682
6,47
12,75
5,88
2,30
0,84
19
6583
5,89
12,00
6,17
2,17
0,90
20
7061
7,05
10,75
5,58
1,92
0,97
Средн.
6,77
11,60
5,14
2,20
0,72
Откл.
0,19
0,25
0,28
0,21
0,04
Достоверность
-0,09
1,08
-2,81
-2,55
-2,64
Установлено, что у обработанных животных достоверно повышалась концентрация неорганического фосфора (на 24,2%), глюкозы (на 45,7%) и каротина (на 22,0%). Причем концентрация всех этих параметров у обработанных животных находилась в пределах физиологической нормы, а у необработанных - концентрация глюкозы и каротина была ниже нормы.
Биологическое значение каротина для сельскохозяйственных животных определяется, во-первых, тем, что он служит предшественником витамина А. Кроме того, каротин защищает гемоглобин от разрушительного действия нитратов, стимулирует неспецифические факторы иммунитета, защищает организм от канцерогенного воздействия агрессивных прооксидантов - активных форм кислорода и свободных радикалов, образующихся в клетках в процессе клеточного дыхания.
Каротин также повышает стрессоустойчивость, клеточный иммунитет и оказывает большое влияние на репродуктивную функцию, увеличивает скорость гликолиза в мышцах, обеспечивая митохондрии субстратами.
Повышение концентрации неорганического фосфора указывает на увеличенную активность щелочной фосфатазы, что подтверждается тенденцией к снижению концентрации кальция, который направляется на формирование костной ткани.
В то же время витамин А, синтезирующийся из каротина, необходим для нормального формирования костной ткани. Данные по фосфору и кальцию позволяют говорить об усилении анаболических обменных процессов в костной ткани. Увеличение массы костной ткани сопровождается возрастанием массы костного мозга и, как следствие, повышением иммунного статуса и оксигенации организма.
В совокупности с повышением концентрации каротина создаются условия для увеличения роли аэробного энергетического обмена, реализация которого подтверждается достоверно более высокой, чем в контроле, концентрацией глюкозы.
Все вышесказанное (одновременное увеличение неспецифических факторов иммунитета - интерлейкинов, специфических - титров антител к возбудителю Actinobacillus pleuropneumoniae, а также изменения биохимических параметров крови свиней - повышение количества неорганического фосфора, глюкозы и каротина) позволяет сделать вывод об увеличении выявляемости свиней, инфицированных возбудителем Actinobacillus pleuropneumoniae, и повышении способа выявления инфицированных животных более чем в 9 раз.