Иммуногистохимические особенности поджелудочной железы мертворожденных от ВИЧ-инфицированных матерей

НАУЧНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Иммуногистохимические особенности поджелудочной железы мертворожденных от ВИЧ-инфицированных матерей

Шерстюк С.А.1, Сорокина И.В.2

Харьковский национальный университет им. В.Н. Каразина, Украина 2Харьковский национальный медицинский университет, Украина

Sherstiuk S.A.1, Sorokina I.V.2

'V.N. Karazin Kharkiv National University, Ukraine 2Kharkiv State Medical University, Ukraine

Immunohistochemical features of pancreas of deadborn from mothers

with HIV-infection

Резюме. Иммуногистохимическое исследование поджелудочной железы мертворожденных от ВИЧ-инфицированных матерей выявило уменьшение интенсивности свечения в-клеток в препаратах обработанных моноклональными антителами к инсулину, что стало весомым доказательством функционального угнетения в -клеток островков Лангерганса. Следствием развития плода на фоне ВИЧ-инфекции матери в поджелудочной железе также явилось массивное разрастание стромы за счет новообразования междольковой и внутридольковой соединительной ткани.

Ключевые слова: поджелудочная железа, ВИЧ-инфекция, мертворожденные.

Summary. Immunohistochemical study of pancreatic gland stillbirths from HIV-infected mothers showed a decrease of light intensity в-cells in the specimens treated with monoclonal antibody to insulin, which was strong evidence of functional inhibition в-cells of islets of Langerhans. Consequence of the development of the fetus, in HIV-infected mothers in the pancreas was also a massive expansion of the stroma by grows interlobular and intralobular connective tissue. Keywords: a pancreas, a HIV-infection, deadborn.

Развитие организма ребенка в целом и поджелудочной железы в частности непосредственно обусловлено состоянием здоровья матери. В настоящее время внимание педиатров и морфологов направлено на развитие беременности на фоне соматической и инфекционной патологии матери [4, 5, 9, 10, 16]. Во внутриутробном периоде происходит формирование эндо- и экзо-кринной частей поджелудочной железы и частичное становление их функций, которые при благоприятном течении беременности обеспечивают возможность дальнейшего совершенствования морфологических структур и полноценного функционирования органа в постнаталь-ном периоде [3, 4, 9-11, 14].

Учитывая, что особенностью современного этапа пандемии ВИЧ-инфекции является существенное увеличение количества случаев инфицирования женщин репродуктивного возраста и беременных [8], это приведет к развитию целого комплекса проблем, связанных со здоровьем рожденных ими детей. Проведенных ранее исследований в отношении развития поджелудочной железы на фоне ВИЧ-инфекции матери нам найти не удалось, хотя не исключена возможность нарушения эмбриогенеза поджелудочной железы.

Цель исследования - выявление им-муногистохимических особенностей поджелудочной железы мертворожденных от ВИЧ-инфицированных матерей.

Материалы и методы

Материал был получен в Одесском патологоанатомическом бюро на протяжении 1998-2012 гг. Исследуемую группу (группа М) составили 25 мертворожденных от матерей с серологически подтвержденной ВИЧ-инфекцией. Для получения достоверных данных материал подбирался тщательно. Ни в одном из этих наблюдений не были зарегистрированы оппортунистические заболевания. Мертворожденные погибли вследствие острого нарушения пуповинно-плацен-тарного кровообращения (отслойка плаценты, обвитие пуповины вокруг различных частей тела плода) и родовой травмы. Группу контроля (группа К) составили мертворожденные от здоровых матерей (12 случаев). Причиной смерти плодов группы контроля стало острое нарушение пуповинно-плацентарного кровообращения и родовая травма. Срок гестации всех мертворожденных составил от 36 до 40 недель.

Поджелудочные железы измерялись и взвешивались. Вырезались кусочки, которые после спиртовой проводки заливались в целлоидин-парафин. Изготов-

лялись срезы толщиной 5-6 мкм. Срезы окрашивали гематоксилином и эозином, пикрофуксином по ван Гизон и по методу Маллори.

Иммуногистохимическое исследование производилось с использованием непрямого метода Кунса в модификации M. Brosman [1]. а- и ß-клетки выявляли с помощью моноклональных антител (МКА) к глюкагону и инсулину фирмы «Chemicon International».

Иммуногистохимическое исследование проводилось с помощью люминесцентного микроскопа «Axioskor 40» с использованием программного обеспечения Biostat^xe.

Оптическую плотность иммуноф-луо-ресценции определяли по методу Г.И. [убиной-Вакулик и соавт. (Губт-Вакулик Г.1., Сороюна 1.В., Марковський В.Д., Купрiянова Л.С., Сидоренко Р.В. «Споаб ктькюного визначення вмюту антигену в бюлопчних тканинах». Патент на корисну модель № 46489 G01N 33/00, 24.12.2009).

Комплекс гистологических, морфо-метрических, цитофотометрических исследований проводился на микроскопе «Olympus BX-41» с использованием программ Olympus DP-Soft (Version 3:1) и Microsoft Excel [7]. Плотность клеточных элементов пересчитывалась при увеличе-

№2^ 2013

МЕДИЦИНСКИЕ НОВОСТИ |49

а| Оптическая плотность иммунофлуоресценции гормонов в клетках поджелудочной железы

[руппа сравнения Инсулин Глюкагон

К 0,132 ± 0,003 0,099 ± 0,002

М 0,122 ± 0,004* 0,102 ± 0,007*

* Р < 0,05 по сравнению с группой К.

нии 400, в 10 ограниченных полях зрения. Все цифровые данные обрабатывались методами математической статистики с использованием вариационного, альтернативного и корреляционного анализа [7]. При использовании методов альтернативной и вариационной статистики вычисляли среднюю арифметическую степень дисперсии, среднеквадратическое отклонение, среднюю ошибку разницы, вероятность различия. Вероятность различия между двумя средними при малых выборках определяли по таблице Стью-дента с соблюдением условия (п1 + п2 - 2) [15]. При определении степени вероятности допускали точность р < 0,05, что соответствует Р >95,0%. Оценку взаимосвязей отдельных тканевых и клеточных параметров исследуемой железы проводили методом корреляционного анализа, который был выполнен с использованием программы 51айэ1юа 6.0 [2].

Результаты и обсуждение

Микроскопически можно было выявить соединительнотканные тяжи, отходящие от капсулы и разделяющие железу на дольки. В толще этих тяжей можно различить выводные протоки, а также сосуды и нервы. Паренхима, относительный объем которой составил 74,11 ± 2,89%, была представлена ацинусами и островками Лангерганса.

Ацинусы, представляющие экзокрин-ный аппарат поджелудочной железы, имели достоверно больший размер, чем у контроля. Пространство между аци-нусами было заполнено кровеносными капиллярами, ретикулярными волокнами и другими представителями стромы (рис. 1), относительный объем которой в железе составил 25,89 ± 2,45%. Парен-химатозно-стромальное соотношение равнялось 2,9/1.

Эндокринная часть поджелудочной железы представлена островками Лангерганса, которые состояли из а- и р-клеток, выявленных при помощи окраски препарата по методу Маллори, меж-

ду которыми определялись кровеносные капилляры, окруженные перикапилляр-ными пространствами. Наибольшая концентрация этих островков наблюдалась в хвостовой части железы. Островки имели, как правило, округлую форму, реже овальную. Плотность расположения их в этой части составила 6,21 ± 0,24 экз. в поле зрения. Диаметр островков был равен в среднем 49,53 ± 1,98 мкм. Количество эндокриноцитов в островках Лангерганса составило 229,22 ± 11,41 экз. в поле зрения. Основная масса этих клеток представлена р-клетками диаметром 6,81 ± 0,14 мкм, плотность которых равнялась 142,55 ± 5,76 экз. в поле зрения. Они занимали центральное положение в островках, имели округлое базо-фильное ядро 5,44 ± 0,15 мкм в диаметре и умеренно выраженную эозинофильную цитоплазму. Ядерно-цитоплазматический индекс р-клеток составил 0,80 ± 0,02. В некоторых р-клетках хроматин ядер был сконцентрирован под нуклеолеммой (эффект маргинации хроматина). Плотность а-клеток в островках Лангерганса составила 96,67 ± 5,21 экз. в поле зрения. Эти клетки большей частью были расположены по периферии островков. Форма клеток напоминала овал диаметром 5,61 ± 0,26 мкм. Ядра а-эндокриноцитов светлые, содержали мелкоглыбчатый хроматин и имели диаметр 4,21 ± 0,19 мкм. В цитоплазме при окрашивании по методу Маллори определялись гранулы оранжевого цвета. Ядерно-цитоплазматический индекс в а-клетках равнялся 0,75 ± 0,03.

Интенсивность свечения р-клеток в поджелудочной железе в препаратах обработанных МКА к инсулину (рис. 2) оказалась ниже по сравнению с группой контроля, тогда как интенсивность свечения глюкагона практически не изменилась, о чем свидетельствуют данные таблицы.

Группа М. Поджелудочная железа. Большой объем ацинарного аппарата на фоне гипотрофии ацинарных клеток. Окраска гематоксилином и эозином, ув. х100

Анализируя морфометрические показатели поджелудочной железы мертворожденных от ВИЧ-инфицированных матерей по сравнению с группой контроля, мы выявили массивное разрастание стромы на фоне уменьшения как количественного, так и качественного состава островков Лангерганса, а также нарушение соотношения популяций а- и р-клеток в сторону уменьшения р-эндокриноцитов (1:1,47). Последний показатель играет ведущую роль в развитии эндокринной дисфункции поджелудочной железы и напряжении ее компенсаторно-приспособительных реакций [3, 5, 16].

Уменьшение плотности островков Лангерганса, обусловленное разрастанием стромы за счет новообразования междольковой и внутридольковой соединительной ткани, на что указывает па-ренхиматозно-стромальное соотношение органа 2,9/1, против 4,2/1, у контроля, а также уменьшение диаметра островка и количества эндокриноцитов в нем, как свидетельствуют данные литературы, указывают на уменьшение функциональной активности и нарушение компенсаторных возможностей железы [3, 5, 16].

Смещение стромально-паренхима-тозного соотношения в сторону увеличения относительного объема стромаль-ного компонента может быть следствием хронической внутриутробной гипоксии [12, 13], по-видимому, обусловленной влиянием материнской ВИЧ-инфекции.

р-клетки островков Лангерганса поджелудочных желез детей группы М имели признаки функционального угнетения в виде уменьшения диаметра клетки, увеличения ядерно-цитоплазматического индекса и уменьшения интенсивности свечения р-клеток в препаратах, обработанных МКА к инсулину. Дисфункция р-клеток, учитывая роль продуцируемого ими инсулина в развитии организма

Группа М. Специфич еское свечение инсулина в цитоплазме р-клеток поджелудочной железы в препаратах, обработанных МКА к инсулину. Прямой метод Кунса с МКА к инсулину, ув. х 600

МЕДИЦИНСКИЕ НОВОСТИ

№2^ 2013

50

ребенка, по-видимому стала причиной нарушения роста и гипотрофии [6, 16], которые мы выявили у детей данной исследуемой группы.

Подобная внутриутробная дисфункция р-клеток и снижение эмбриональной секреции инсулина были выявлены при острой и хронической гипоксии, связанной с фетоплацентарной недостаточностью [12, 13].

Выводы:

1. Иммуногистохимическое исследование поджелудочной железы мертворожденных от ВИЧ-инфицированных матерей выявило уменьшение интенсивности свечения р-клеток в препаратах, обработанных МКА к инсулину, что стало весомым доказательством функционального угнетения р-клеток островков Лан-герганса.

2. Следствием развития плода на фоне ВИЧ-инфекции матери в поджелудочной железе явилось массивное разрастание стромы за счет новообразования междольковой и внутридольковой соединительной ткани.

Л И Т Е Р А Т У Р А

1. Атраментова Л.А., Лутевская О.М. Статистические методы в биологии. - Горловка, 2008. - 247 с.

2. Боровиков В.П. Программа STATISTICA для студентов и инженеров. - М., 2001. - 301 с.

3. Дедов И.И., Балаболкин М.И. // Мед. акад. журн. - 2006. - Т. 6, № 3. - С. 3-15.

4. Дедов И.И., Петеркова В.А. Детская эндокринология. - М., 2006. - 600 с.

5. Деревцов В.В. // Фундаментальные исследования. - 2010. - № 8 - С. 10-21.

6. Евсеева З.П., Сагамонова К.Ю., Палиева Н.В. // Рос. вестн. акушера-гинеколога. - 2008. - Т. 8, № 3. - С. 12-15.

7. Лапач С.К., Чубенко А.В., Бабич П.Н. Статисти-

ческие методы в медико-биологических исследованиях с использованием Exel. - Киев, 2001. -С. 144-155.

8. Марциновская В.А. // УкраУн. мед. часоп. -2006. - № 1. - С. 109-113.

9. Милованов А.П. Савельев С.В. Внутриутробное развитие человека: рук-во для врачей. - М., 2006. -384 с.

10. Молдавская A.A., Савищев А.В., Донской М.В. // Морфологические ведомости. - 2008. - № 3. -С. 9-10.

11. Молдавская A.A., Савищев А.В. Анатомо-х1рурпчн1 аспекти дитячо1 гастроентерологИ. -Черн1вц1, 2007. - С. 74-75.

12. Савищев A.B., Бархина Т.Г., Донской М.В. // Труды науч. конф. «Актуальные вопросы морфогенеза в норме и патологии». - М., 2008. - С. 140-143.

13. Савищев A.B. // Морфология. - 2008. - № 4. -С. 91.

14. Савищев A.B. // Фундаментальные исследования. - 2010. - № 9. - С. 97-104.

15. Сергиенко В.И., Бондарева И.Б. Математическая статистика в клинических исследованиях. - М., 2000. - 256 с.

16. Степанов A.A., Яцык Г.В., Бомбардирова Е.П. // Рос. педiатр. журн. - 2007. - № 3. - С. 55-58.

Поступила 29.11.2012 г.

Активация родовой деятельности окситоцином - фактор риска гипоксии плода и новорожденного

Воскресенский CA1, Шилкина Е.В.1, Зеленко Е.Н.1, Тесакова М.Л.1, Мосько П.Л.2, Федосеева Н.А.2

1Белорусская медицинская академия последипломного образования, Минск 2Родильный дом Минской области, Минск

Voskresensky S.L.1, Shilkina E.V.1, Zelenko E.N.1, Tesakova M.L.1, Mosko P.L.2, Fedoseeva N.A.2

Belarusian Medical Academy of Post-Graduate Education, Minsk 2Minsk Regional Maternity Hospital, Belarus

The activation of labor with oxytocin is a risk factor for fetus

and newborn hypoxia

Резюме. Проведен ретроспективный анализ 92 историй родов. Установлено, что оценка новорожденного по Апгар на 1-й минуте взаимосвязана с длительностью инфузии окситоцина, что говорит о риске развития гипоксии плода и новорожденного в родах с применением оксито-цина более 3 ч. При ведении родов с применением утеротонических средств, необходим мониторинг состояния плода и маточной активности c целью своевременной коррекции плана ведения родов.

Ключевые слова: активация родовой деятельности, окситоцин, маточная активность, пуповинная кровь, гипоксия плода, асфиксия новорожденных, гипоксия новорожденных, дистресс плода.

Summary. A retrospective analysis of 92 histories of labor was performed. We defined that newborn Apgar score on the 1st minute correlates wtth the duration of oxytocin infusion, which indicates the risk of development of fetus and newborn hypoxia during labor when using oxytocin more than 3 hours. The conduction of labor with uterotonics requires monitoring of fetus and uterine activity in order to timely correct the plan of labor conduction. Keywords: activation of labor, oxytocin, uterine activity, umbilical cord blood, fetal hypoxia, asphyxia, hypoxia infants, fetal distress.

Применение окситоцина для стимуляции родовой деятельности прочно вошло в акушерскую практику. Однако оно сопровождается более высокой частотой развития дистресса плода, чем при родах без его использования. Средняя встречаемость гипоксии плода при родах через естественные родовые пути без медикаментов для родоактивации составляет 0,3-9,0% [1], а при индуцированных родах с использованием окситоцина - 5,5-17,8%, т.е.

в 2-3 раза чаще, чем в среднем в популяции [2-6].

С учетом того, что частота индуцированных родов с каждым годом возрастает и соответственно увеличивается активность вмешательств в родовой процесс [5, 8-10], вероятность рождения детей в гипоксическом состоянии может увеличиваться. Поэтому исследования, связанные с безопасным для плода применением окситоцина в родах, являются актуальными [11].

Наиболее вероятный неблагоприятный фактор развития гипоксии плода в родах - длительность применения окси-тоцина. Она прямо связана с выраженностью патологии родовой деятельности. Но, возможно, существуют другие причины развития дистресса плода на фоне применения окситоцина в родах. В то же время в доступной литературе мы не нашли однозначного подтверждения приведенному выше предположению о зависимости времени введения окситоцина с

№2^ 2013

МЕДИЦИНСКИЕ НОВОСТИ |б1