Противоопухолевый препарат Лактаптин: способы повышения эффективности

МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ»

55

Заключение. Таким образом, у больных КРР наблюдается повышение уровня экспрессии мРНК гена FcyRIIIß на фоне снижения уровня экспрессии мРНК гена FcyRIIIa. Полученные данные свидетельствуют о том, что повышение сывороточного содержания растворимого CD16 скорее всего связано с более высоким уровнем мРНК гена FcyRIIIß.

Г.И. Кричевская, А.С. Андрюшин, О.С. Слепова, С. В. Саакян, Е.Б. Мякошина, Т.А. Андреева, А. В. Трухина, Г. П. Захарова, А.М. Майбогин РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ МЕТОДОМ ПОЛИМЕРАЗНОЙ ЦЕПНОЙ РЕАКЦИИ БИОПТАТОВ ОПУХОЛЕЙ ОРБИТЫ И ГЛАЗА

ФГБУ «МНИИ ГБ им. Гельмгольца» Минздрава России, Москва

Введение. Известно значение многочисленных офталь-мотропных возбудителей хронических инфекций в воспалительной патологии глаза. Однако только в единичных сообщениях оценивается их роль в этиопатогенезе опухолей глаза и орбиты.

Цель исследования — сравнительное изучение частоты выявления дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК) широко распространенных офтальмотропных возбудителей в биоптатах опухолей глаза, орбиты и в плазме крови.

Материалы и методы. Биоптаты опухолей и плазма крови 28 пациентов с верифицированными лимфомами орбиты (ЛО, n = 7), меланомой хориоидеи (МХ, n = 10), ретинобластомой (РБ, n = 11) исследовали методом поли-меразной цепной реакции в реальном времени на наличие геномов вирусов простого герпеса 1-го и 2-го типа, вируса Эпштейна — Барр (ВЭБ), цитомегаловируса (ЦМВ), вирусов герпеса человека 6-го и 8-го типов (ВГЧ-6, -8), ток-соплазмы, хламидии трахоматис, микоплазмы гоминис и Ureaplasma spc.

Результаты. В целом геномы различных патогенов выявлены в 46 % биоптатов опухолей (86 % ЛО, 45 % РБ и 20 % МХ) и только в 3,6 % анализов плазмы крови (р > 0,05). Спектр возбудителей при ЛО, МХ и РБ разнился: при ЛО обнаружены только лимфотропные герпесвирусы (ВЭБ, ВГЧ-6, -8) с преобладанием ВЭБ; при РБ - ЦМВ, ВЭБ, ВГЧ-6; при МХ - хламидии, ВЭБ, ЦМВ.

Заключение. Выявлена высокая частота детекции ДНК ВЭБ и ВГЧ-6 в ткани ЛО по сравнению с МХ и РБ. Необходимы дальнейшие исследования для оценки роли герпес-вирусов и других обнаруженных микроорганизмов в этиопатогенезе опухолей глаза и орбиты.

М.Е. Кукушкин, А.Г. Мажуга, Е.К. Белоглазкина, Н.В. Зык СОЗДАНИЕ ПОТЕНЦИАЛЬНЫХ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫХ ПРЕПАРАТОВ НА ОСНОВЕ ДИСПИРОПРОИЗВОДНЫХ 2-ТИОКСО-ТЕТРАГИДРО-4Н-ИМИДАЗОЛ-4-ОНОВ

Химический факультет ФГБОУВО «МГУ им. М.В. Ломоносова», Москва

Введение. В настоящее время актуальной является задача поиска непептидных низкомолекулярных ингибиторов белка MDM2, который взаимодействует с белком р53, являющимся опухолевым супрессором, играющим ключевую роль в жизненном цикле клетки и апоптозе. Ингибитор связывается с MDM2, за счет чего высвобождается р53,

который запускает процесс разрушения опухоли. Таким образом, повышение активности клеточного белка р53 путем блокирования взаимодействия с его эндогенным ингибитором онкобелком МБМ2 является новым направлением в терапии раковых заболеваний. Так, большинство синтезируемых соединений-ингибиторов в своей структуре имеют спироиндолиноновый фрагмент, который имитирует взаимодействие Trp23 из р53 с MDM2, заполняя в нем глубокий гидрофобный карман, являющийся наиболее важным участком для их связывания.

Цель исследования — синтез различных производных 2-тиоксо-тетрагидро-4Н-имидазол-4-онов двух структурных типов, содержащих в себе спироиндолиноновый фрагмент, для их дальнейшего биологического тестирования и определения зависимости структура — активность.

Материалы и методы. Исходя из наличия коммерчески доступных реагентов, разработаны способы получения спироиндолинонов путем 1,3-диполярного циклоприсо-единения продукта взаимодействия изатинов и N-замещенных аминокислот с производными 2-тиоксо-тетрагидро-4Н-имидазол-4-онов с образованием соединений, в структуре которых имеется жесткий каркас из 3 спиросочлененных гетероциклов, содержащий заместители различной природы, в основе которого лежит спироиндолиноновое ядро. Структура получаемых соединений была подтверждена с использованием комплекса физико-химических методов, таких как корреляционная ядерная магнитно-резонансная спектроскопия, масс-спектрометрия высокого разрешения (HRMS) и рентгеноструктурный анализ.

Результаты. Разработан универсальный синтетический подход к получению новых классов диспиропроизводных на основе 2-тиоксо-тетрагидро-4Н-имидазол-4-онов и предложен препаративно удобный метод синтеза данных соединений. На клеточных линиях LNCap, PC3 и HCT p53(+/+) и HCT p53(-/-) исследована цитотоксичность полученных соединений и определены предварительные соединения-лидеры. Методом конфокальной флуоресцентной микроскопии на примере клеточной культуры HEK-293 показано, что конъюгат диспиропроизводных на основе 2-тиоксо-тетрагидро-4Н-имидазол-4-онов и флуоресцентного красителя diSulfoCy5 проникает через клеточную мембрану.

Заключение. По полученным в ходе работы результатам было установлено, что исследуемые классы спироиндоли-нонов проявляют хорошую аффинность к сайту связывания белков р53 — MDM2, что дает возможность судить о потенциальной перспективности проводимых исследований.

Е.В. Кулигина, А.А. Немудрая, Г. В. Кочнева, В.А. Рихтер ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЙ ПРЕПАРАТ ЛАКТАПТИН: СПОСОБЫ ПОВЫШЕНИЯ ЭФФЕКТИВНОСТИ

ИХБФМ СО РАН, Новосибирск

Введение. Создание систем адресной доставки лекарственных средств к клеткам опухоли является актуальным и активно развивающимся направлением исследований. Противоопухолевый препарат Лактаптин индуцирует апоптоз раковых клеток человека в культуре и тормозит рост и метастазирование опухолей животных и человека. Адресная доставка Лактаптина позволит повысить эффек-

№1 / том 15 / 2016

РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ

56 МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ»

тивность его противоопухолевого действия и снизить воз- венная форма винкристина (ВК-В), в лаборатории фарма-можное цитотоксическое действие на нормальные клетки. кологии и токсикологии проведено доклиническое токси- Цель исследования — разработка систем адресной до- кологическое изучение ВК-В в сравнении с винкристином ставки Лактаптина к опухолевым клеткам. фирмы Тева, Израиль (ВК-Т). Материалы и методы. Отбор опухоль-адресованных Цель исследования — сравнительное изучение острой пептидов, экспонированных в составе поверхностного бел- и субхронической токсичности ВК-В и ВК-Т на мелких ка pIII нитчатого бактериофага M13, проводили из фаго- лабораторных животных для подтверждения их идентич-вой пептидной библиотеки в системах in vitro и in vivo. ности. Плазмиды, несущие гены, кодирующие рекомбинантный Материалы и методы. Исследования проведены на 70 мы-слитый белок, состоящий из опухоль-адресованного пеп- шах-самцах гибридах B6D2F1 и 160 неинбредных крысах-тида и Лактаптина, получали методами генной инженерии. самцах, полученных из разведения РОНЦ им. Н.Н. Блохина. Таким образом выведены рекомбинантные штаммы виру- ВК-В — раствор для внутривенного (в/в) введения с кон-са осповакцины со встройкой 2 трансгенов — апоптозин- центрацией ВК 0,93 мг/мл, во флаконе по 2 мл, серия 031014. дуцирующего белка лактаптина и гранулоцитарно-макро- ВК-Т — раствор для в/в введения с концентрацией ВК фагального колониестимулирующого фактора (ГМ-КСФ) 1 мг/мл, во флаконе по 1 мл, серия 14F20КF. В опытах по ост-человека — в районы генов тимидинкиназы и вирусного рой токсичности препараты вводили мышам однократно в/в ростового фактора. в диапазоне доз от 2 до 10 мг/кг, крысам — от 0,25 до 1,5 мг/кг. Результаты. Проведен отбор опухоль-адресованных В опытах по субхронической токсичности препараты вво-пептидов в системе in vitro на культурах раковых клеток дили в/в ежедневно трехкратно в 3 суммарных дозах 0,25; 0,5 мыши и человека и in vivo на мышиной опухолевой модели и 0,75 мг/кг. Срок наблюдения за животными составил 30 сут. и на опухоли молочной железы человека в модели ксено- Результаты. В результате проведенных исследований графтов. Получены рекомбинантные плазмиды, кодирую- установлено, что ВК-В и ВК-Т у животных вызывают оди-щие рекомбинантные слитые белки, состоящие из ото- наковые проявления токсичности: пилоэрекцию, сужение бранных пептидов и Лактаптина, и штаммы Escherichia глазных щелей, гиподинамию, диарею, анорексию, сукро-coli — продуценты слитых белков. Цитотоксическая и апо- вичные выделения из носа и глаз. Установлено, что сроки птотическая активность рекомбинантных белков в отно- гибели и число павших животных, как в опытах на мышах, так шении раковых клеток человека в культуре не уступает и в опытах на крысах, получавших ВК-В и ВК-Т, практиче-активности Лактаптина, при этом тропность слитых белков ски не отличаются. Получены расчетные токсические дозы к опухоли превышает тропность Лактаптина в 3—5 раз. для крыс ВК-В: ЛД10 = 0,54 мг/кг; ЛД50 = 0,77 (0,66 ^ 0,91) мг/кг Получены рекомбинантные штаммы вируса осповакцины и ВК-Т: ЛД10 = 0,42 мг/кг; ЛД50 = 0,61 (0,48 0,71) мг/кг, с двойной делецией генов тимидинкиназы и ростового которые практически не отличаются друг от друга. По ре-фактора и встройкой в делетированные участки генома зультатам изучения субхронической токсичности установлено, 2 трансгенов — апоптозиндуцирующего белка лактаптина что ВК-В и ВК-Т по показателям токсичности (клинические и ГМ-КСФ человека: VV-GMCSF Lact — вариант с несе- проявления токсичности, летальность, гепатотоксичность, кретируемой формой лактаптина; VV-GMCSF-S (long) — биомаркеры токсичности, морфометрия органов) и по ре-Lact — вариант с секретируемой формой лактаптина зультатам патоморфологического исследования практиче-с длинной лидерной последовательностью; VV-GMCSF- ски не отличаются друг от друга. S-Lact — вариант с секретируемой формой лактаптина с ко- Заключение. На основании результатов, полученных роткой лидерной последовательностью. Все полученные при сравнительном изучении ВК-В и ВК-Т, установлено, рекомбинанты продемонстрировали высокую цитотокси- что препараты практически идентичны по показателям ческую активность в отношении клеток рака молочной как острой, так и субхронической токсичности. железы человека MCF7 и MDA-MB-231. Также показано, что вирус с двойными делециями (аттенуированный вирус Н.Ю. Кульбачевская1, О. И. Коняева1, Н.П. Ермакова1 осповакцины) адресно накапливается в клетках опухоли В.А. Чалей1, И. Б. Меркулова1, Т. В. Абрамова1, при внутриопухолевом введении и способен находить от- В.М. Бухман1, Т. И. Малова2 даленные метастазы и реплицироваться в них. ИЗУЧЕНИЕ СУБХРОНИЧЕСКОЙ Заключение. Разработаны системы адресной доставки ТОКСИЧНОСТИ БОРХЛОРИНА - НОВОГО противоопухолевого препарата Лактаптин, позволяющие ФОТОСЕНСИБИЛИЗАТОРА повысить противоопухолевую эффективность лекарствен- В ЛИОФИЛИЗИРОВАННОЙ ЛИПОСОМАЛЬНОЙ ного средства. ЛЕКАРСТВЕННОЙ ФОРМЕ НА КРЫСАХ 1ФГБУ«РОНЦ им. Н. Н. Блохина» Н.Ю. Кульбачевская, О.И. Коняева, Н.П. Ермакова, Минздрава России, Москва: В.А. Чалей, А.А. Сергеев, К.А. Сережин, В.М. Бухман 2ООО «ВЕТА-Гранд», Москва СРАВНИТЕЛЬНОЕ ТОКСИКОЛОГИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ Введение. Борированный хлорин е6 синтезирован ОТЕЧЕСТВЕННОГО ВОСПРОИЗВЕДЕННОГО в ИНЭОС им. АН. Несмеянова РАН. В РОНЦ им. Н.Н. Бло-ВИНКРИСТИНА И ВИНКРИСТИНА ФИРМЫ TEVA хина разработана лиофилизированная липосомальная ле-ФГБУ «РОНЦим. Н.Н. Блохина» Минздрава России, Москва карственная форма (ЛЛЛФ) борхлорина. Введение. В лаборатории разработки лекарственных Цель исследования — изучение субхронической токсич-форм РОНЦ им. Н.Н. Блохина воспроизведена лекарст- ности ЛЛЛФ борхлорина.

№1 / том 15 / 2016 РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ