Варианты химозина с улучшенными свойствами

1. Выделенный вариант полипептида химозина, отличающийся тем, что он:
(а) имеет удельную свертывающую активность (IMCU(международная молокосвертывающая единица)/мг общего белка), которая составляет по меньшей мере 70% удельной свертывающей активности выделенного полипептида верблюжьего химозина, характеризующегося SEQ ID NO: 4; и
(б) расщепляет β-казеин с частотой меньше, чем 50% от частоты расщепления β-казеина выделенного полипептида верблюжьего химозина, характеризующегося SEQ ID NO: 4, где расщепление β-казеина определяют посредством количественного определения пептидов β-казеина, полученных инкубированием обезжиренного молока с вариантом химозина или верблюжьим химозином, где количественное определение осуществляют посредством RP-HPLC (высокоэффективная жидкостная хроматография с обращенной фазой) в сочетании с ESI-Q-TOF масс-спектрометром (времяпролетный квадрупольный масс-спектрометр с электрораспылительной ионизацией).
2. Выделенный вариант полипептида химозина по п. 1, где родительский полипептид имеет по меньшей мере 80%-ую, например, по меньшей мере например 85%-ую, 95%-ую, 97%-ую, 98%-ую, 99%-ую, 100%-ую идентичность последовательности с полипептидом с SEQ ID NO: 4 (верблюжий химозин).
3. Выделенный вариант полипептида химозина по п. 1 или 2, который обладает по меньшей мере 70%, например, по меньшей мере например 75%, 80%, 90%, 100%, 110%, 120%, 130% или 150% удельной свертывающей активности выделенного полипептида верблюжьего химозина, характеризующегося SEQ ID NO: 4.
4. Выделенный вариант полипептида химозина по любому из пп. 1-3, который обладает менее чем 50%, например, менее чем 40%, менее чем 30%, менее чем 20%, менее чем 15%, менее чем 10% или менее чем 6% неспецифичной протеолитической активности (Р) выделенного полипептида верблюжьего химозина, характеризующегося SEQ ID NO: 4.
5. Выделенный вариант полипептида химозина по любому из пп. 1-4, который имеет отношение С/Р по меньшей мере 300%, 400%, 500%, 600%, 700%, 800%, 1000%, 1200%, 1400% или 1600% от отношения С/Р выделенного полипептида верблюжьего химозина, характеризующегося SEQ ID NO: 4.
6. Выделенный вариант полипептида химозина по любому из пп. 1-5, который содержит одну или более чем одну аминокислотную замену, где данная одна или более чем одна замена определена по отношению к аминокислотной последоваельности SEQ ID NO: 4: Y11, L130, S132, V32, S226, R266, L12, V221, S255, S277, L222, L253, М157, V260, S271, Н76, K19, V183, S164, I263, V51, Т239, Y307, R67, G251, R61, Q288, Е83, D59, V309, S273, G251, S154, Y21, V203, L180, Е294, G289, L215, D144, I303, L105, Т284, Y127, V248, K321, V205, Е262, K231, R316, М256, D158, D59, N249, L166, R242 или I96.
7. Выделенный вариант полипептида химозина по любому из пп. 1-6, который содержит одну или более чем одну аминокислотную замену, где данная одна или более чем одна замена определена по отношению к аминокислотной последоваельности SEQ ID NO: 4: Y11I, Y11V, L130I, S132A, V32L, S226T, R266V, L12M, V221M, S255Y, S277N, L222I, L253I, M157L, V260T, S271P, H76Q, K19T, V183I, S164G, I263L, V51L, T239S, Y307F, R67Q, G251D, R61Q, Q288E, E83S, D59N, V309I, S273Y, G251W, S154A, Y21S, V203A, L180I, E294Q, G289S, L215V, D144Q, I303L, L105E, T284S, Y127F, V248I, K321P, V205I, Е262Т, K231N, R316L, M256L, D158S, D59N, N249E, L166V, R242E и/или I96L.
8. Выделенный вариант полипептида химозина по любому из пп. 1-7, который содержит комбинацию замен, выбранную из списка, содержащего:
Y11I+K19T+D59N+I96L+S164G+L166V+L222I+R242E+N249E+G251D;
Y11V+K19T+D59N+I96L+S164G+L222V+R242E+G251D;
Y11V+K19T+D59N+I96L+S164G+L166I+R242E+N249E+G251D+L253I;
Y11I+K19T+I96L+S164G+L166V+R242E+N249E+G251D;
Y11V+K19T+D59N+I96L+S164G+L222V+R242E+N249E+G251D;
Y11V+K19T+I96L+S164G+L166V+L222V+R242E+N249E+G251D;
Y11I+K19T+D59N+I96L+S164G+L222V+R242E+N249E;
Y11I+K19T+D59N+I96L+S164G+L166V+R242E+G251D;
Y11I+I96L+S164G+L222I+R242E;
Y11I+D59N+I96L+S164G+L222I+R242E+G251D или
Y11I+K19T+D59N+I96L+S164G+L222I+R242E+N249E+G251D,
где каждая замена определена по отношению к аминокислотной последоваельности SEQ ID NO: 4.
9. Способ получения выделенного варианта полипептида химозина по любому из пп. 1-8, включающий следующие стадии:
(а) осуществление изменения в одном или более чем одном положении в последовательности ДНК, кодирующей полипептид с SEQ ID NO: 4, где данное изменение включает замену в по меньшей мере одном аминокислотном положении, соответствующем любому из положений:
Y11, L130, S132, V32, S226, R266, L12, V221, S255, S277, L222, L253, М157, V260, S271, Н76, K19, V183, S164, I263, V51, Т239, Y307, R67, G251, R61, Q288, Е83, D59, V309, S273, G251, S154, Y21, V203, L180, Е294, G289, L215, D144, I303, L105, Т284, Y127, V248, K321, V205, Е262, K231, R316, М256, D158, D59, N249, L166, R242 и/или I96;
(б) продуцирование и выделение измененного полипептида стадии (а).
10. Способ получения выделенного варианта полипептида химозина по п. 9, где:
(а) данный вариант содержит одну или более чем одну из следующих замен: Y11I, Y11V, L130I, S132A, V32L, S226T, R266V, L12M, V221M, S255Y, S277N, L222I, L253I, M157L, V260T, S271P, H76Q, K19T, V183I, S164G, I263L, V51L, T239S, Y307F, R67Q, G251D, R61Q, Q288E, E83S, D59N, V309I, S273Y, G251W, S154A, Y21S, V203A, L180I, E294Q, G289S, L215V, D144Q, I303L, L105E, T284S, Y127F, V248I, K321P, V205I, Е262Т, K231N, R316L, M256L, D158S, D59N, N249E, L166V, R242E и/или I96L.
11. Способ получения выделенного варианта полипептида химозина по п. 9 или 10, где:
(а) данный вариант содержит одну или более чем одну комбинацию следующих замен, и где каждая замена определена по отношению к аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 4:
Y11I+K19T+D59N+I96L+S164G+L166V+L222I+R242E+N249E+G251D;
Y11V+K19T+D59N+I96L+S164G+L222V+R242E+G251D;
Y11V+K19T+D59N+I96L+S164G+L166I+R242E+N249E+G251D+L253I;
Y11I+K19T+I96L+S164G+L166V+R242E+N249E+G251D;
Y11V+K19T+D59N+I96L+S164G+L222V+R242E+N249E+G251D;
Y11V+K19T+I96L+S164G+L166V+L222V+R242E+N249E+G251D;
Y11I+K19T+D59N+I96L+S164G+L222V+R242E+N249E;
Y11I+K19T+D59N+I96L+S164G+L166V+R242E+G251D;
Y11I+I96L+S164G+L222I+R242E;
Y11I+D59N+I96L+S164G+L222I+R242E+G251D или
Y11I+K19T+D59N+I96L+S164G+L222I+R242E+N249E+G251D.
12. Способ изготовления пищевого или кормового продукта, включающий добавление эффективного количества выделенного варианта полипептида химозина по любому из пп. 1-8 к пищевому(ым) или кормовому(ым) ингредиенту(ам) и осуществление дальнейших стадий производства с получением пищевого или кормового продукта.
13. Способ по п. 12, где пищевой или кормовой продукт представляет собой продукт на основе молока.
14. Пищевой или кормовой продукт, содержащий вариант полипептида химозина по любому из пп. 1-8.
15. Применение варианта полипептида химозина по любому из пп. 1-8 в способе изготовления сыра.
16. Применение варианта полипептида химозина по п. 15 в способе изготовления «паста филата», чеддара, сыров континентального типа, мягкого сыра или белого рассольного сыра.
17. Применение по п. 15 или 16 для уменьшения горечи в сыре.