Изделия медицинские для диагностики in vitro для флюоресцентного и иммунофлюоресцентного анализа "сухого пятна" крови новорожденного. Часть II. Расходные материалы (наборы реагентов) для флюоресцентного и иммунофлюоресцентного анализа "сухого пятна" крови новорожденного технические требования для государственных закупок

ПРОЕКТЫ НОРМАТИВНЫХ ДОКУМЕНТОВ

ИЗДЕЛИЯ МЕДИЦИНСКИЕ ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ IN VITRO ДЛЯ ФЛЮОРЕСЦЕНТНОГО И ИММУНОФЛЮОРЕСЦЕНТНОГО АНАЛИЗА «СУХОГО ПЯТНА» КРОВИ НОВОРОЖДЕННОГО

ЧАСТЬ II

РАСХОДНЫЕ МАТЕРИАЛЫ (НАБОРЫ РЕАГЕНТОВ) ДЛЯ ФЛЮОРЕСЦЕНТНОГО И ИММУНОФЛЮОРЕСЦЕНТНОГО АНАЛИЗА «СУХОГО ПЯТНА» КРОВИ НОВОРОЖДЕННОГО ТЕХНИЧЕСКИЕ ТРЕБОВАНИЯ ДЛЯ ГОСУДАРСТВЕННЫХ ЗАКУПОК

Т.И. Лукичева1, В.В. Меньшиков, Е.В. Денисенкова2, Т.Ю. Иванец3

Первый Московский государственный медицинский университет им. И.М. Сеченова Министерства здравоохранения РФ Научно-практический Центр исследования здоровья детей и подростков Департамента здравоохранения Москвы

Научный Центр акушерства, гинекологии и перинатологии им. В.И. Кулакова, Москва

1. ОБЛАСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ

Настоящим стандартом устанавливаются требования к функциональным характеристикам и метрологическим свойствам расходных материалов (наборов реагентов) для флюоресцентных и

1 Лукичева Татьяна Ивановна — канд. мед. наук, вед. научный сотрудник лаборатории проблем клинико-лабораторной диагностики НИИ общественного здоровья и управления здравоохранением Первого МГМУ им. И.М. Сеченова; 119991 Москва, ул. Трубецкая, д. 8; тел.: (495) 708-34-00; е-шаИ: labinfo@mma.ru.

2 Денисенкова Елена Валерьевна — канд. мед. наук, зав. отделением Научно-практического Центра психического здоровья детей и подростков Департамента здравоохранения г. Москвы, отделение генетики; 119334 Москва, 5-й Донской проезд, д. 21 А; тел.: (495) 954-41-27; е-шаД: denisenkova@mail.ru.

3 Иванец Татьяна Юрьевна — канд. мед. наук, зав. лабораторией Научного центра акушерства, гинекологии и перинаталогии им. В.И. Кулакова Министерства здравоохранения РФ; 117997, Москва, ул. Академика Опарина, д. 4 ; тел.: (495) 438-25-66; е-mail: t_iivanets@oparina4.ru.

иммунофлюоресцентных исследований in vitro аналитов в сухих пятнах крови новорожденных при выполнении неонатального скрининга на наследственные заболевания: фенилкетонурию, галактоземию, адреногенитальный синдром, врожденный гипотиреоз, муковисцидоз.

Требования к функциональным характеристикам и метрологическим свойствам расходных материалов (наборов реагентов), установленные настоящим стандартом, применяются при проведении государственных закупок данных изделий для их применения совместно с приборами и оборудованием для флюоресцентных и имму-нофлюоресцентных исследований (см. настоящий стандарт, часть 1).

2. НОРМАТИВНЫЕ ССЫЛКИ

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ Р 51088—97 Наборы реагентов для клинической лабораторной диагностики. Общие технические условия.

ГОСТ Р ИСО 17511—2006 Изделия медицинские для диагностики in vitro. Измерение величин в биологических пробах. Метрологическая про-слеживаемость значений, приписанных калибраторам и контрольным материалам.

ГОСТ Р ИСО 18153—2006 Изделия медицинские для диагностики in vitro. Измерение величин в биологических пробах. Метрологическая прослеживаемость значений каталитической концентрации ферментов, приписанных калибраторам и контрольным материалам.

ГОСТ Р ИСО 15193—2007 Изделия медицинские для диагностики in vitro. Измерения величин в пробах биологического происхождения. Описание референтных методик выполнения измерений.

ГОСТ Р ИСО 14971—2009 Изделия медицинские. Применение менеджмента риска к медицинским изделиям.

ГОСТ Р ЕН 592—2010 Инструкция по применению инструментов для диагностики in vitro для самотестирования.

ГОСТ Р ЕН 123640—2010 Исследование стабильности реагентов для диагностики in vitro.

ГОСТ Р ЕН 13612—2010 Оценка функциональных характеристик медицинских изделий для диагностики in vitro.

ГОСТ Р ЕН 12641—2010 Устранение или снижение риска инфицирования, связанного с реагентами для диагностики in vitro.

3. ТЕРМИНЫ И ОПРЕДЕЛЕНИЯ

В настоящем стандарте применены термины с соответствующими определениями, указанные в разделе 3. Термины и определения и Приложении А ISO 18113.1 [1]; в разделе 3 настоящего стандарта часть 1, а также следующие термины с соответствующими определениями.

3.1. Реагенты для диагностики in vitro (in vitro diagnostic reagent): Химические, биологические или иммунологические компоненты, растворы или препараты, предназначенные изготовителем для применения как медицинское изделие для диагностики in vitro.

Примечание — Адаптировано [2,определение 3.9].

3.2. Набор реагентов (kit): Комплект специально подобранных реагентов (реактивов), составных частей и инструкций по проведению анализа, предназначенный для определения in vitro одного конкретного вещества (или активности

фермента, нескольких конкретных веществ (или суммарной активности ферментов), а также для детекции участка генома. Совокупность компонентов, которые упакованы вместе и предназначены для выполнения специфического исследования диагностики in vitro.

Примечание 1 — Компоненты набора реактивов могут включать в себя реактивы, антитела, ферменты, буферные растворы, разбавители, калибраторы, контрольные материалы и другие предметы и материалы.

Примечание 2 — Адаптировано [ГОСТР 51088—97, определение 3.1 ], [2, определение 3.10].

3.3. Функциональная характеристика (performance characteristic, metrological property): один из параметров, использованных для функциональной характеристики медицинского изделия для диагностики in vitro.

Примеры — Предел обнаружения, прецизионность, специфичность.

Примечание — Информация о более, чем одной функциональной характеристике обычно требуется для того, чтобы оценить пригодность медицинского изделия для диагностики in vitro для предназначенного медицинского применения.

3.4. Заявленная функциональная характеристика (performance claim): Спецификация функциональной характеристики медицинского изделия для диагностики in vitro, которая документирована в информации, предоставленной изготовителем.

Примечание 1 — Может быть основана на исследованиях функциональных характеристик, доступных данных о функциональных характеристиках или исследованиях, опубликованных в научной литературе.

Примечание 2 — Адаптировано [3, определение 2.7].

3.5. Оценка функциональной характеристики (performance evaluation): Изучение медицинского изделия для диагностики in vitro с целью установления или проверки заявленной функциональной характеристики.

Примечание — Адаптировано [3, определение 2.8].

3.6. Реактивный ингредиент (reactive ingredient): Составная часть, которая участвует в реакции, предназначенной для обнаружения или измерения величины

Примеры — Антитела против иммуноре-активного трипсина меченые европием; растворы, усиливающие флюоресценцию при им-

мунофлюоресцентном анализе in vitro 17-ОН прогестерона, ТТГ.

Примечание 1 — Буферные растворы, консерванты и стабилизаторы, которые не участвуют в реакции, не рассматриваются как реактивные ингредиенты.

Примечание 2 — Адаптировано [2, определение 3.1].

3.7. Долговечность при хранении (shelflife): Период времени до истечения срока годности, в течение которого реагент для диагностики in vitro сохраняет свою стабильность в своей первоначальной упаковке в условиях хранения, установленных изготовителем.

Примечание 1 — Стабильность (ГОСТР ИСО 18113.1, определение 3..68 [1] и срок годности (ГОСТ Р ИСО 18113.1, определение 3.17)) [1] являются связанными понятиями.

Примечание 2 — Адаптировано [2, определение 3.16].

3.8. Стабильность (stability): Способность медицинского изделия для диагностики in vitro сохранять свои свойства в пределах, заданных изготовителем.

Примечание 1 — Стабильность применима:

— к реагентам, калибраторам или контрольным материалам, в случае, если они хранятся, транспортируются или используются в заданных условиях;

— к лиофилизированным материалам после восстановления, рабочим растворам, материалам после открытия запечатанной упаковки, в случае, если они приготовлены, использовались и хранились в соответствии с инструкциями изготовителя по применению;

— к измерительным инструментам или измерительным системам после калибровки.

Примечание 2 — Стабильность реагента для диагностики in vitro или измерительной системы обычно рассчитывают по отношению ко времени:

— в терминах продолжительности интервала времени, в течение которого метрологическое свойство изменилось в установленном размере;

— в терминах изменения свойства за установленный интервал времени.

Примечание 3 — Адаптировано [4, определение 4.19].

3.9. Диагностическая чувствительность

(diagnostic sensitivity): Способность методики диагностического исследования in vitro идентифицировать присутствие целевого маркера, сочетающегося с конкретной болезнью или состоянием.

Примечание 1 — Также определяют как процент положительности в пробах, где целевой аналит должен быть. Информацию относительно описания диагностических функциональных характеристик медицинских изделий для диагностики in vitro [5].

Примечание 2 — Диагностическую чувствительность также выражают как процент (числовая доля, умноженная на 100) рассчитанный путем умножения числа истинно--положительных (ИП) значений на 100 и деления на сумму истинно-положительных (ИП) и ложно-отрицательных (ЛО) значений, или 100 х ИП/(ИП + ЛО). Данный расчет основывается на такой организации исследования, при которой у каждого субъекта исследования берут только одну пробу.

Примечание 3 — Целевое состояние [ 1, определение А.3.55.] определяют на основе критерия, независимого от рассматриваемой методики исследования.

Примечание 4 — Адаптировано [6, определение 4.5.1].

3.10. Диагностическая специфичность

(diagnostic specificity): Способность методики диагностического исследования in vitro распознавать отсутствие целевого маркера конкретной болезни или состояния.

Примечание 1 — Также определяют как процент отрицательных значений в пробах, где целевой маркер, как известно, отсутствует. Информацию относительно описания диагностических функциональных характеристик медицинских изделий для диагностики in vitro см. [5].

П р и м е ч а н и е 2 — Диагностическую специфичность выражают процентом (числовой долей, умноженной на 100), рассчитанным как 100, умноженное на число истинно-отрицательных (ИО) значений, деленное на сумму истинно-отрицательных (ИО) и ложно--положительных (ЛП) значений или 100 х ИО/(ИО + ЛП). Данный расчет основывается на такой организации исследования, при которой у каждого субъекта исследования берут только одну пробу.

Примечание 3 — Целевое состояние определяют на основе критерия, независимого от рассматриваемой методики исследования [1, определение А.3.55].

Примечание 4 — Адаптировано [6, определение 4.5.1].

3.11. Образец (specimen): Биологический материал, который получен, чтобы обнаружить или измерить одну или несколько величин.

Пример — Капля капиллярной крови, взятая из пятки новорожденного, нанесенная на кружок фильтровальной бумаги и высушенная на воздухе.

Примечание — Адаптировано. Из [7, определение 3.5].

3.12. Аналитическая порция (analytical portion): Порция материала, взятого из аналитической пробы, в которой проводится измерение или наблюдение [ГОСТ Р ИСО 15193—2007, определение 3.4].

Примечание — Аналитическую порцию берут прямо из первичной или лабораторной пробы, если не требуется подготовки. Аналитическую порцию иногда растворяют для получения аналитического раствора перед помещением ее в измерительный прибор.

Пример — выбитый в лунку планшета диск фильтровальной бумаги определенного диаметра с нанесенной на него капиллярной кровью, взятой из пятки новорожденного и высушенной на воздухе.

3.13. Тест-бланк (test-blank): бланки (карточки) из специальной фильтровальной бумаги определенных размеров и свойств с напечатанными на них кружками для внесения капель биожидкости (у новорожденных — крови), и с инструкцией для получения образца и внесения сведений по идентификации пациента и взятого у него образца биожидкости. Тест-бланки предназначены для взятия, хранения и транспортировки образцов.

Примечание 1 — Адаптировано [8].

Примечание 2 — Требования к тест-бланку в п.5.1 части 2 настоящего стандарта.

3.14. «Сухое пятно» крови («dried spot» of blood): Высушенное с определенными предосторожностями и в определенных условиях пятно крови, нанесенное предварительно на тест-бланк.

3.15. Скрининг(screening): Просеивание — метод выявления в общей популяции лиц, имеющих риск заболеваний.

Примечание — Скрининг осуществляется по определенной программе с использованием в некоторых случаях ряда методов.

3.16. Неонатальный скрининг (neonatal screening): Массовое обследование новорожденных детей для выявления врожденных наследственных заболеваний на доклинической стадии [9,10].

Примечание — В соответствии с приказом Минздравсоцразвития РФ от 22 марта 2006 г. № 185 «О массовом обследовании новорожденных детей на наследственные заболевания» проводится массовый неонатальный скрининг на фенилкетонурию, галак-тоземию, адреногенитальный синдром, муковисци-доз и врожденный гипотиреоз [10].

4. ТЕХНИЧЕСКИЕ ТРЕБОВАНИЯ

ДЛЯ ГОСУДАРСТВЕННЫХ ЗАКУПОК К РАСХОДНЫМ МАТЕРИАЛАМ

(НАБОРАМ РЕАГЕНТОВ) ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ IN VITRO ДЛЯ ФЛЮОРЕСЦЕНТНОГО И ИММУНОФЛЮОРЕСЦЕНТНОГО АНАЛИЗА «СУХОГО ПЯТНА» КРОВИ НОВОРОЖДЕННОГО

4.1. Общие положения

4.1.1. На преаналитическом этапе им-мунофлюоресцентного и флюоресцентного анализа «сухого пятна» крови, включающем малоинвазивное взятие крови у новорожденных путем прокола кожи пятки, расходные материалы одинаковы и независимы от аналита, который необходимо измерить, в том числе:

— стерильные скарификаторы одноразового пользования или специальные устройства для прокалывания кожи;

— стерильные марлевые тампоны;

— медицинские латексные перчатки без талька или других порошков, стерильные;

— тест-бланки фильтровальной бумаги, предназначенные для нанесения взятых из пятки новорожденного капель капиллярной крови, для приготовления первичного образца, транспортировки и хранения его в виде «сухих пятен».

4.1.2. На аналитическом этапе технологии иммунофлюоресцентного анализа иммунореактивного трипсина, 17-а-гид-роксипрогестерона, тиреотропного гормона или флюоресцентного анализа фенилаланина или галактозы при неонатальном скрининге выполняются с помощью наборов реагентов, предназначенных специально для каждого из аналитов. Конкретные виды закупаемых наборов реагентов зависят от возможности их адаптации к соответствующим приборам и оборудованию для им-мунофлюоресцентного или флюоресцентного анализа.

Технические и функциональные характеристики и соответствующие им требования к тест-бланкам и наборам реагентов для государственных закупок приведены в разделе 5 настоящего стандарта.

4.2. Общие технические, функциональные и метрологические требования к наборам реагентов

Указанные в настоящем разделе требования должны быть представлены в инструкциях, прилагаемых к наборам реагентов.

4.2.1. Идентификация компонентов наборов реагентов

Применительно к набору реагентов каждый компонент должен быть идентифицирован одинаковыми наименованием, буквенным обозначением, номером, символом, цветом окраски или графическим знаком на всех этикетках и в инструкции по применению.

Пример: «Применение для диагностики in vitro» или графический символ: «изделие медицинское для диагностики in vitro».

4.2.2. Условия хранения и обращения

Должны быть указаны условия хранения до открытия упаковки, необходимые для поддержания стабильности реагентов, калибраторов и контрольных материалов.

Должны быть приведены любые иные условия, которые влияют на обращение или хранение реагентов, калибраторов и контрольных материалов, если они отличаются от приведенных на внешней упаковке.

4.2.3. Предназначенное применение

Предназначенное применение должно быть описано с соответствующими деталями, включая измеряемую величину, тип образца. Должен быть указан вид исследования.

Примеры:

— Измерение концентрации тиреотроп-ного гормона в «сухом пятне» крови новорожденного для проведения неонатального скрининга на врожденный гипотиреоз.

— Измерение концентрации свободного тироксина для подтверждения диагноза врожденного гипотиреоза.

4.2.4. Принципы метода исследования

Должен быть описан принцип метода исследования, включая тип реакции (например, флюоресцентный ферментативный метод).

4.2.5. Прослеживаемость значений, приписанных калибраторам и контрольным материалам правильности

Должна быть описана метрологическая прослеживаемость значений, приписанных калибраторам и контрольным материалам правильности, включая идентификацию применяемых референтных материалов или методик референтных измерений.

Примечание — ГОСТ Р ИСО 17511 и ГОСТ Р ИСО 18153 содержат требования по прослеживае-мости до референтных материалов и/или до методик референтных измерений более высокого уровня..

Должны быть предоставлены ссылки на относящиеся к делу источники литературы или другую доступную документацию о методике референтного измерения или референтном материале.

4.2.6. Компоненты

Должны быть приведены данные о природе, числе, количестве, концентрации или содержании ингредиентов реактива.

Пример 1 — Основной раствор антител против 17-а-гидроксипрогестерона (поликло-нальных кроличьих) в Трис-НС1 забуференном (рН 7,8) солевом растворе с бычьим сывороточным альбумином и Декстраном Т 10, содержит азид натрия в качестве консерванта менее 0,1%.

Должна быть приведена информация, касающаяся других ингредиентов, которые могут влиять на процедуру измерения.

Пример 2 — Готовый к использованию усиливающий флюоресценцию хелатов европия раствор с Тритоном Х-100, уксусной кислотой и хелаторами.

П р и м е ч а н и е. — В случае, если изготовителем набора реактивов введены какие-либо изменения в состав реактива или другие изменения компонентов, то при этом должны быть обеспечены гарантии сохранения функциональных и метрологических свойств, которые должны быть не хуже установленных настоящим стандартом

4.2.7. Требующееся дополнительно оборудование

Должно быть перечислено любое специальное оборудование, требующееся для правильного выполнения исследования и безопасного приме-

нения изделия, но не предоставляемое изготовителем.

Должна быть предоставлена информация, необходимая для того, чтобы позволить идентифицировать и правильно присоединить специальное оборудование.

4.2.8. Требующиеся дополнительно материалы

Должны быть перечислены материалы, не входящие в состав набора реагентов, не предоставляемые изготовителем, но необходимые для исследования.

Пример 1. Деионизированная вода.

Пример 2. Тест-бланки.

4.2.9. Подготовка реагента

Должны быть описаны все этапы, необходимые для приготовления реагента(ов).

Примеры — Восстановление, смешивание, инкубация, разведение.

4.2.10. Хранение и долговечность после первого открытия

Должны быть приведены условия хранения и долговечность после первого открытия внутренней упаковки, если они отличаются от условий хранения и долговечности, указанных на маркировке реагента.

При необходимости должны быть приведены условия хранения и стабильность работающих реагентов, калибраторов и контрольных материалов.

4.2.11. Предупреждения и предостережения

В случае если реагент для диагностики in vitro рассматривается как опасный, инструкция по применению должна быть маркирована символом соответствующей опасности или содержать словесное предупреждение.

Если опасность сочетается с хранением, применением или утилизацией реагента для диагностики in vitro, включая возможное неправильное употребление, должна быть приведена информация, которая позволяет пользователю снизить риск.

Примеры — Химическая, радиоактивная или биологическая опасность.

Применяют требования ГОСТ Р ИСО 14971 [11], имеющие отношение к информации по безопасности.

Примечание — Информация, которая позволяет пользователям уменьшить риск, называется «информация по безопасности». См. ГОСТ Р ИСО 14971 [11].

В случае если реагент для диагностики in vitro содержит вещества человеческого или животного происхождения, которые представляют риск инфицирования, должно быть приведено соответствующее предостережение. При необходимости должна быть предоставлена информация о безопасном применении и утилизации использованных материалов. См. ГОСТ Р ЕН 12641—2010.

В случае если реагент для диагностики in vitro предназначен для однократного применения, должно быть приведено соответствующее указание.

4.2.12. Сбор, обращение и хранение образца

Должны быть указаны образец, который должен быть использован, и любые специальные условия его сбора, предварительной обработки и/или условия хранения, включая предельный срок хранения.

Должны быть приведены любые специальные инструкции по подготовке пациента перед взятием образца.

4.2.13. Методика исследования

Должно быть предоставлено полное детальное описание методики исследования, которую следует применить.

Методика должна содержать все стадии, необходимые для подготовки пробы, выполнения исследования и получения результата.

4.2.14. Методика контроля

Должна быть предоставлена адекватная информация относительно функциональных характеристик реагента для диагностики in vitro и средств проверки их соответствия заданным спецификациям.

Примечание — Пользователи ответственны за определение соответствующих методик контроля для своей лаборатории и за их соответствие применяемым правилам для лабораторий.

Примеры — Идентификация приемлемых контрольных материалов, частота исследования контрольных материалов.

4.2.15. Вычисление результатов исследования

Должен быть объяснен математический подход, использованный для вычисления результата исследования, если это применимо.

Примечание — Пример вычисления может помочь пользователю понять способ расчета.

4.2.16. Интерпретация результатов

При необходимости, должны быть заданы критерии подтверждения или отклонения результата диагностического исследования in vitro, а также дополнительные исследования, требующиеся в случае, если получен необычный результат.

Пример — Требование повторить исследование, если первоначальный результат сомнительный.

В случае если методика исследования предназначена получить положительные или отрицательные результаты, должны быть четко определены критерии для положительных и отрицательных результатов с заданными пограничными значениями (отсечными точками), когда это необходимо.

Должно быть объяснено диагностическое значение полученного результата исследования.

Пример — Информация о концентрации иммунореактивного трипсина (IRT) в «сухом пятне» крови более 60 нг/мл до 80 нг/мл, полученная у доношенного новорожденного при неонатальном скрининге, свидетельствует о пограничном состоянии, более 80 нг/мл — о муковисцидозе.

4.2.17. Функциональные характеристики

4.2.17.1. Аналитические функциональные характеристики

Должны быть описаны аналитические функциональные характеристики, относящиеся к предполагаемому применению. См. [1, приложение А].

Примеры — Для методик количественных измерений: предел измерения, аналитическая специфичность (включая интерферирующие вещества), правильность и/или прецизионность (повторяемость, промежуточная прецизионность, воспроизводимость), когда это применимо.

Примечание — Функциональные характеристики могут быть даны в сравнении с медицинским

изделием для диагностики in vitro, представленным на рынке. Может быть полезным графическое представление статистики регрессии и корреляции.

4.2.17.3. Интервал измерения

Для количественных методик исследования должен быть приведен интервал концентраций, в пределах которого функциональные характеристики реагента для диагностики in vitro являются валидными.

Пример — От 5 до 500 ммоль/л.

4.2.18. Биологические референтные интервалы

Для количественных методик исследования должны быть приведены биологические референтные интервалы с описанием референтной популяции, указанием числа субъектов и относящихся к делу источников литературы.

Единицы, в которых выражен референтный интервал, должны соответствовать единицам, в которых выражены результаты измерения.

Примечание — Информацию, относящуюся к описанию биологических референтных интервалов, см. [12—15]. Могут быть приведены относящиеся к делу значения медицинских решений.

4.2.19. Ограничения методики исследования

Должны быть описаны любые ограничения методики исследования, включая информацию, относящуюся к следующим аспектам:

a) известные клинически близкие интерферирующие вещества;

b) исследование несоответствующих требованиям образцов и потенциальные последствия этого, если известны;

c) факторы и обстоятельства, которые могут влиять на результат, вместе с предосторожностями, которые позволят предотвратить получение неверного результата;

d) возможность переноса между пробами, когда это применимо.

Применяют требования ГОСТ Р ИСО 14971 [11] относительно информации по безопасности.

Примечание — Информация, которая позволяет пользователям уменьшить риск, называется «информацией по безопасности». См. ИСО 14971 [11].

4.2.20. Литературные ссылки

Должны быть приведены ссылки на источники из литературы.

5. ТЕХНИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ РАСХОДНЫХ МАТЕРИАЛОВ ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ IN VITRO

ДЛЯ ИММУНОФЛЮОРЕСЦЕНТНОГО АНАЛИЗА «СУХОГО ПЯТНА» КРОВИ НОВОРОЖДЕННОГО

5.1. Технические характеристики тест — бланков для получения «сухого пятна» капиллярной крови новорожденного

Примечание — Технические характеристики фильтровальной бумаги для тест-бланков и тест-бланков должны быть представлены изготовителем по запросу пользователя.

5.1.1. Внешний вид тест-бланка

Тест-бланк должен представлять собой карту — прямоугольник размером 70 х 120 мм с текстом инструкции по взятию крови на русском языке, пунктами для внесения шариковой ручкой информации о новорожденном и 4 или 5 кружками, напечатанными с одной стороны (или с обеих сторон) пунктирной или точечной линией для нанесения крови. Тест-бланки должны быть изготовлены из фильтровальной бумаги типа Whatman № 903 или аналогичной по своим свойствам.

П р и м е ч а н и е 1 — Полоски фильтровальной бумаги с «сухими пятнами» крови с калибраторами для построения калибровочной кривой и контрольными материалами поставляются в наборах реагентов для измерения соответствующих аналитов, изготавливаются из той же фильтровальной бумаги, что и тест-бланки для взятия крови у новорожденных.

Примечание 2 — Любые химические средства, которые используются для напечатания кружков, инструкции по нанесению крови на них или пунктов информации о новорожденном не должны интерферировать в аналитическом процессе [8]

5.1.2. Содержание хлопка в фильтровальной бумаге тест-бланков

Фильтровальная бумага для тест-бланков, должна быть изготовлена из 100% чистого хлопкового волокна.

5.1.3. Стандартизация фильтровальной бумаги для тест-бланков

Фильтровальная бумага для тест — бланков должна быть стандартизована в соответствии с

характеристиками, указанными в Приложениях С и D [8] ип. п. 5.1.1—5.1.9 настоящего ГОСТ Р.

5.1.4. Плотность фильтровальной бумаги для тест-бланков

Плотность фильтровальной бумаги должна быть 186,3- (160—195) г/м3.

5.1.5. Толщина фильтровальной бумаги для тест-бланков

Толщина фильтровальной бумаги для тест-бланков должна составлять 0,531 • (0,46— 0,58) мм.

5.1.6. рН фильтровальной бумаги для тест-бланков

рН фильтровальной бумаги для тест-бланков следует соблюдать в пределах от 5,7 до 7,5 (по методу ISO 6588: 1981) [16,8].

5.1.7. Зола

Содержание золы максимально 0,1% [8, приложение D].

5.1.8. Время абсорбции крови на фильтровальной бумаге

Для пятен, которые образуются при нанесении 100 мкл крови

5.1.9. Диаметр пятна крови и средний объем сыворотки

в диске диаметром 3,2 мм

Диаметр пятна 100 мкл нанесенной крови (ге-матокрит 55 ± 1%) должен быть 16 мм (референтные пределы от 15 до 17 мм). Средний объем сыворотки для диска диаметром 3,2 мм выбитого из пятна из 100 мкл крови с интактными эритроцитами и гематокритом 55%, должен быть 1,54 ± 0,17 мкл на диск или 1,3 ± 0,19 мкл из 100 мкл гемолизированной крови [8].

5.1.10. Условия хранения

Хранение невскрытой упаковки при температуре +8°С...+25°С.

5.1.11. Срок годности

Срок годности не менее 2 лет с момента производства.

5.1.12. Информация изготовителя на тест-бланке

На тест-бланке должны быть указаны наименование изготовителя (поставщика), его место-

нахождение, адрес, телефон, наименование продукции, номер партии, номер бланка, условия хранения, срок годности с момента производства, информация на русском языке о способе нанесения крови на кружки тест-бланка и мерах предосторожности.

Примечание. Способ взятия образцов крови из пятки новорожденного и нанесения капли крови на кружок тест-бланка описан [8,17].

5.1.13. Информация о новорожденном на тест-бланке

На тест-бланке должно быть место для указания:

— наименование учреждения здравоохранения, в котором произведен забор образцов крови у новорожденного ребенка,

— Ф.И.О. матери ребенка;

— адрес выбытия матери ребенка;

— порядковый номер тест-бланка с образцом крови;

— пол ребенка (женский, мужской);

— дата родов;

— номер истории родов;

— вес при рождении;

— состояние ребенка (здоров/болен — диагноз);

— дата взятия образца крови;

— доношенный/недоношенный/срок геста-ции;

— фамилия, имя, отчество лица, осуществляющего забор [17].

5.2. Устройства для взятия капиллярной крови из пятки новорожденного ребенка

Для получения достаточного количества крови для прокола пятки на ее плантарной поверхности следует использовать стерильные скарификаторы одноразового пользования либо устройство для надреза кожи пятки новорожденного.

Глубина прокола не должна превышать 2 мм во избежание повреждения кости новорожденного. Устройство для надреза кожи пятки новорожденного позволяет получить достаточное количество крови при стандартизованном разрезе глубиной 1 мм и длиной 2,5 мм [8].

5.3. Технические и функциональные характеристики наборов реагентов для измерения аналитов методом флюоресцентного и иммунофлюоресцентного анализа «сухого пятна» крови

новорожденного для диагностики in vitro

Приведенные требования к характеристикам наборов реактивов являются минимально допустимыми. Наборы реактивов различных изготовителей, предназначенные для измерения анали-тов при неонатальном скрининге в «сухом пятне» крови с использованием других методик должны иметь функциональные аналитические характеристики не хуже установленных настоящим стандартом.

5.3.1. Набор реагентов для измерения концентрации фенилаланина в «сухих пятнах» крови новорожденных методом флюоресцентного анализа in vitro при неонатальном скрининге

5.3.1.1. Технические и функциональные характеристики набора

5.3.1.1.1. Предназначенное применение набора

Набор реактивов предназначен для измерения концентрации фенилаланина методом флюоресцентного анализа in vitro на флюорометре планшетного типа в образцах крови новорожденных в виде «сухих пятен» крови на тест-бланках из фильтровальной бумаги с целью выявления новорожденных с высоким уровнем фенилала-нина крови.

5.3.1.1.2. Принцип метода

Определение основано на флюоресценции комплекса фенилаланина в реакции с нингидри-ном. Реакция усиливается дипептидом Е — лей-цил — Е-аланином в присутствии буфера. Медный реагент используется для дальнейшего усиления флуоресценции и снижения фона. Реакция проводится в 96-луночных планшетах с белыми стенками. В зависимости от типа планшета и типа флюорометра измерение интенсивности флюоресценции может проводиться при длине волны возбуждения 390 нм и длине волны испускания флюоресценции 486 нм или при длине волны возбуждения флюоресценции в диапазоне от 330 нм до 430 нм, при длине волны испускания флюоресценции в диапазоне от 440 до 620 нм.

П р и м е ч а н и е — Тип флюорометра и тип планшета должен быть указан изготовителем в инструкции к набору реактивов.

Интенсивность флюоресценции пропорциональна количеству фенилаланина в пробе.

5.3.1.1.3. Первичные образцы для анализа

Непосредственное определение проводится в дисках диаметром 3,2 мм, которые выбиваются с помощью специального устройства (инструмента для выбивания дисков, пробойника, см. п. 4.4, часть 1) из «сухих пятен» крови новорожденных на тест-бланках фильтровальной бумаги марки 903 Whatman или Schleicherand Schuel марки 903 или 2992.

5.3.1.1.4. Количество определений — 1 набор рассчитан на 960 определений.

5.3.1.1.5. Компоненты набора.

В состав набора должны входить:

— Калибраторы с аттестованной концентрацией фенилаланина в интервале измерения от 0 до 1240,9 мкмоль/л, предназначены для построения калибровочной кривой. Должны содержаться в закрытом пластиковом конверте с влагопог-лотителем и представлять собой высушенные пятна крови на фильтровальной бумаге той же марки, на которой выполняются исследования «сухих пятен» крови новорожденных. Полная калибровочная кривая должна быть построена для каждого планшета.

Примечание 1 — Значения концентрации фенилаланина в калибраторах, количество калибраторов, срок годности и хранения должны быть указаны в инструкции к набору. Точные значения концентрации фенилаланина зависят от лота набора реактивов, серии калибратора, и должны быть указаны в контрольном сертификате — сертификате качества, прилагаемом к набору, либо на этикетках к каждому калибратору.

Примечание 2 — Изготовитель должен представить информацию о методах аттестации значений в калибровочных материалах, а также данные о прослеживаемости значений результатов измерений в калибровочных материалах. Эта информация должна быть указана в инструкции к набору реактивов.

— Контрольные материалы.

Должно быть 2 контрольных образца с различной концентрацией фенилаланина: 80,0—270,0 мкмоль/л и высокой в диапазоне 300,0—900,0 мкмоль/л. Контрольные материалы каждой концентрации должны содержаться в

закрытом пластиковом конверте с влагопоглоти-телем и представлять собой высушенные пятна крови на фильтровальной бумаге той же марки, на которой выполняются исследования «сухих пятен» крови новорожденных. Контрольные материалы разной концентрации по 3—4 пятна для каждой концентрации располагают на полосках фильтровальной бумаги той же марки, на которой выполняются исследования «сухих пятен» крови новорожденных.

Примечание 1 — Значения концентрации фенилаланина в «сухих пятнах» контрольных материалов правильности, количество контрольных материалов, срок годности и хранения должны быть указаны в инструкции к набору. Точные значения концентрации фенилаланина в контрольных материалах зависят от лота набора реактивов, серий контрольных материалов, и должны быть указаны в контрольном сертификате (сертификате качества), прилагаемом к набору реактивов, либо на этикетках к контрольным материалам.

Примечание 2 — Информация о методах аттестации значений концентрации фенилаланина в контрольных материалах должна быть представлена в инструкции к набору реактивов или в паспорте к контрольным материалам.

Примечание 3 — Информация о прослежи-ваемости значений результатов измерения концентрации фенилаланина в калибровочных и контрольных материалах правильности должна быть представлена в инструкции к набору реактивов. См. часть 2 настоящего стандарта, п. 4.2.5.

Примечание 4 — Рекомендуется участие лаборатории в программах внешней оценки качества результатов определения фенилаланина в «сухих пятнах» крови при неонатальном скрининге.

— Реактив для выделения (экстракции фенилаланина) из цельной крови (этанол, цинк-сульфатный или другой реактив, если это применимо).

— Реагент с нингидрином.

— Буферный раствор, рН 5,8.

— L-лейцил-L-аланин порошок или раствор в буфере.

— Медный реагент.

— Сертификат контроля качества.

— Микропланшеты на 96-лунок каждый, с плоским дном, с белыми стенками или прозрачные в зависимости от типа планшетного флюо-рометра, как указано изготовителем.

— Инструкция к набору реактивов на русском языке.

— Штрих-кодовые метки для планшетов — 10 шт. Штрих коды одинаковые в пределах одного и того же лота.

5.3.1.1.6. Аналитические характеристики

а) Прецизионность результатов.

Используя контрольные материалы из набора

изготовителя, следует выполнять двойные определения каждого контрольного материала в каждой серии измерений.

Могут быть использованы контрольные материалы других изготовителей с аттестованными значениями концентрации фенилаланина в «сухих пятнах» крови флюоресцентным методом. Полученное среднее арифметическое значение концентрации в измеренном контрольном материале должно укладываться в диапазон ± 2 средних квадратических отклонения (± 2SD) от среднего значения результата, что должно быть указано в сертификате контроля качества для этого контрольного материала.

При внешней оценке качества для концентрации фенилаланина в «сухих пятнах» крови могут быть приняты следующие допускаемые значения:

— относительный внутридневной размах между двумя измерениями в одной серии — в среднем не более 13% (от 10 до 15%);

— относительный междневной размах между двумя сериями (средними из 2 измерений) — 20% (17—23%);

— смещение среднего из 4 измерений (2 серии по 2 измерения) — в среднем не более 17% (от 15 до 18%).

Примечание — Данные ФСВОК, полученные при внешней оценке качества результатов определения концентрации фенилаланина в «сухих пятнах» крови в специализированных лабораториях при действующей схеме внешнего контроля качества, предоставлены ФСВОК.

б) Чувствительность.

Минимальная достоверно определяемая концентрация фенилаланина в «сухих пятнах» крови должна быть меньше или равна 15 мкмоль/л.

в) Интервал измерения: 0,0—1240,9 мкмоль/л.

г) Калибровочная кривая: линейная зависимость между логарифмами концентрации и значениями соответствующих им показаний флюо-рометра.

При подсоединении компьютера и наличии программного обеспечения, калибровочная кривая для каждой серии измерений рассчитывается и строится автоматически.

д) Пороговое значение концентрация (cut— off): общепринятое значение 120 мкмоль/л (2 мг/100 мл). Пороговое значение для обследуемого контингента рекомендуется установить в каждой лаборатории.

е) Ожидаемые результаты.

В инструкции к набору должны быть приведены значения концентрации фенилаланина при определении в «сухом пятне» крови здоровых доношенных и недоношенных новорожденных при неонатальном скрининге — референтные величины, которые выбираются как ориентиры для оценки и интерпретации результатов. В каждой лаборатории при использовании набора рекомендуется уточнить это значение, которое может незначительно отличаться в данном конкретном регионе. В инструкции к набору реактивов следует указать способ установления положительных результатов, сомнительной зоны, т. е. результатов, которые нельзя считать ни положительными, ни отрицательными. Их следует повторить как можно скорее, а также следует указать, как интерпретировать результаты ниже калибратора с наименьшей концентрацией фенилаланина и выше калибратора с наибольшей его концентрацией.

ж) Интерференция.

Гемоглобин до концентрации 200 г/л не должен влиять на результаты. У пациентов с транзи-торной и врожденной гипертирозинемией концентрация фенилаланина в крови может быть повышена. Билирубин до 0,684 ммоль/л, аскорбиновая кислота до 0,17 ммоль/л, D-глюкоза до 67 ммоль/л не должны оказывать влияние на результаты.

5.3.1.1.7. Сертификат контроля качества

Должен представлять собой документ на русском языке, который предоставляется пользователю изготовителем, вместе с набором конкретного лота. В сертификате контроля качества должно быть указано:

— наименование изготовителя набора реагентов;

— номер набора по каталогу;

— номер партии (номер лота);

— состав набора (компоненты);

— номер лота каждого реагента (компонента набора);

— дата истечения срока хранения набора и каждого из его компонентов;

— калибраторы, концентрация фенилаланина в крови и сыворотке в каждом калибраторе в единицах СИ;

— контрольный материал в нормальном диапазоне концентрации;

— результаты аттестации концентрации фенилаланина в контрольном материале с нормальной концентрацией фенилаланина (средняя арифметическая ± 1 SD);

— контрольный материал в патологическом диапазоне концентрации;

— результаты аттестации концентрации фе-нилаланина в контрольном материале с патологической концентрацией фенилаланина (средняя арифметическая ± 1 SD);

— фактор конверсии единиц из мг/100 мл в мкмоль /л (коэффициент пересчета): 1 мг/ 100 мл = 60,5 мкмоль/л;

— метод анализа;

— меры предосторожности при работе с калибраторами и контрольными материалами, подтверждение того, что изготовителем получены отрицательные результаты при исследовании в калибраторах и контрольных материалах антигена вируса гепатита В, антител к вирусу гепатита С, а также антител к вирусам ВИЧ 1 + 2;

— дата анализа.

Сертификат контроля качества должен быть подтвержден (заверен) специалистом изготовителя.

5.3.1.2. Условия хранения

Наборы реагентов должны храниться в защищенном от влаги месте, при температуре + 2°С...+8°С.

5.3.1.3. Расходные материалы,

не поставляемые с набором реагентов:

— одноразовые V-образные 96-луночные микропланшеты с усеченным дном, прозрачные;

— пленка для накрывания микропланшетов.

5.3.1.4. Срок годности

Срок годности 12 месяцев с момента производства и не менее 8 месяцев с момента поставки. Срок годности должен быть указан на упаковке набора.

5.3.1.5. Условия транспортирования набора

Температура окружающей среды при транспортировке до + 25°C.

5.3.1.6. Требования к инструкции к набору реагентов

Инструкция к набору реагентов должна быть предоставлена изготовителем на русском языке и содержать разделы, указанные в ИСО 18113.2, раздел 7, и п. 4.2. настоящего стандарта.

Особое внимание должно быть уделено мерам предосторожности. Потенциальный риск применения набора — класс 2а [11].

5.3.1.7. Документация

Документы, подтверждающие соответствие наборов требованиям, установленным в соответствии с законодательством РФ (если требования установлены .законодательством):

а) сертификат соответствия;

б) регистрационное удостоверение Министерства здравоохранения Российской Федерации;

в) сертификат качества на средство диагностики;

г) инструкция к набору реактивов на русском языке, подготовленная изготовителем набора в соответствии с ИСО 18113.2, раздел 7, и п. 4.2. настоящего стандарта, часть 2;

д) должны быть представлены документы, подтверждающие положительный опыт применения набора в широкой медицинской практике в лечебно-профилактических учреждениях (не менее 3 отзывов).

5.3.1.8. Наличие сервисной службы в регионе, для которого закупаются наборы реагентов

При закупках наборов реагентов должно быть обеспечено наличие сервисной службы в регионе. Поставщик или производитель наборов должен сообщить наименование, адрес, телефон/факс, электронный адрес организации сервисной службы.

5.3.2. Набор реагентов для измерения концентрации галактозы ферментативным галактозооксидазным флюорометрическим методом в «сухих пятнах» крови новорожденных при неонатальном скрининге

5.3.2.1. Технические характеристики набора

5.3.2.1.1. Предназначенное применение набора.

Набор реагентов должен быть предназначен для измерения суммарной концентрации галактозы и галактозо-1-фосфата в образцах крови новорожденных в виде «сухих пятен» на тест-

бланках фильтровальной бумаги с целью выявления новорожденных с высоким уровнем галакто-земии при неонатальном скрининге.

5.3.2.1.2. Принцип метода

Определение основано на измерении интенсивности флюоресценции димера 3-(р-гидрокси-фенил)-пропионовой кислоты (димер-НРРА)-флюорофора, образующегося в результате взаимодействия общей галактозы с галактозооксида-зой и перекисью водорода в присутствии перок-сидазы.

Реакция проводится в 96-луночных планшетах с белыми стенками. Измерение интенсивности флюоресценции в планшетах проводится на планшетном флюорометре при длине волны возбуждения 320—340 нм и длине волны испускания флюресценции 405 нм.

5.3.2.1.3. Первичные образцы для анализа

Непосредственное определение проводится в дисках диаметром 3,2 мм, которые выбиваются с помощью специального устройства (устройства для выбивания дисков, пробойника, см. п. 4.4, часть 1) из «сухих пятен» крови новорожденных на тест-бланках фильтровальной бумаги марки 903 Whatman или бумаги с аналогичными свойствами.

5.3.2.1.4. Количество определений

1 набор рассчитан на 960 определений.

5.3.2.1.5. Компоненты набора

В состав набора должны входить:

— Калибраторы с аттестованным значением концентрации галактозы; 6 уровней концентрации. Представляют собой высушенные пятна крови на фильтровальной бумаге той же маркис аналогичными свойствами, на которой выполняются исследования «сухих пятен» крови новорожденных по 3—5 пятен крови для каждой концентрации в запечатанных пакетах с влагопоглотите-лем. Концентрация галактозы в калибровочных пробах в интервале от 0 до 2220 мкмоль/л (0—40,0 мг/100 мл). Калибровочная кривая должна быть построена для каждого планшета.

Примечание 1 — Значения концентрации галактозы, количество калибраторов, срок годности и хранения должны быть указаны в инструкции к набору. Точные значения концентрации галактозы зависят от лота набора реактивов, серии калибратора, и указаны в контрольном сертификате (сертифика-

те качества), прилагаемом к набору, или на этикетках на калибраторах.

Примечание 2 — Изготовитель должен представить информацию о методах аттестации значений концентрации галактозы в калибровочных материалах.

П р и м е ч а н и е 3 — Измерения калибровочных образцов должны проводиться с каждой серией образцов пациентов. Калибровочные пробы каждой концентрации измеряются в дубликатах.

— Контрольные материалы

2 уровня концентрации галактозы: уровень — 190,0—220,0 мкмоль/л и патологический — 600,0—690,0 мкмоль/л. Должны содержаться в пластиковом конверте с осушителем.

Примечание 1 — Значения концентрации галактозы, количество контрольных материалов, срок годности и хранения их должны быть указаны в инструкции к набору. Точные значения концентрации галактозы зависят от лота набора реактивов, серии калибратора, и должны быть указаны в контрольном сертификате (сертификате качества), прилагаемом к набору, или на этикетках на контрольных материалах.

Примечание 2 — Изготовитель должен представить информацию о методах аттестации значений в контрольных материалах правильности.

П р и м е ч а н и е 3 — Измерения контрольных образцов проводятся с каждой серией измерения образцов пациентов по 2 образца с каждой концентрацией на планшет.

Примечание 4 — Информация о методах аттестации значений концентрации галактозы в контрольных материалах правильности должна быть представлена в инструкции к набору реактивов или в сертификате качества или паспорте к контрольным материалам.

П р и м е ч а н и е 5 — Информация о прослежи-ваемости значений результатов измерения концентрации галактозы в калибровочных и контрольных материалах правильности должна быть представлена в инструкции к набору реактивов. См. п. 42.5 часть 2 настоящего стандарта.

П р и м е ч а н и е 6 — Рекомендуется участие лаборатории в программах внешней оценки качества результатов определения галактозы в «сухих пятнах» крови при неонатальном скрининге.

— Цинк-сульфатный реагент.

— Реагент с субстратом [3-(р-(гидроксифе-нил) пропионовой кислотой)].

— Ферментный реагент: реагент с галакто-зооксидазой, пероксидазой и щелочной фосфа-тазой.

— Буфер для разведения реагентов.

— Реагент для остановки реакции.

— Микропланшеты на 96 ячеек (10 шт.), белые.

— Микропланшеты со скошенным У-образ-ным дном.

— Сертификат контроля качества специфический для каждого лота набора реактивов.

— Инструкция к набору реактивов на русском языке.

— Штрих-кодовые метки для планшетов — 10 шт., штрих-коды одинаковые в пределах одного и того же лота.

5.3.2.1.6. Аналитические характеристики

а) Прецизионность результатов.

— Используя контрольные материалы в наборе изготовителя, следует выполнять двойные определения каждого контрольного материала. Могут быть использованы контрольные материалы других изготовителей, с аттестованными значениями концентрации галактозы в «сухих пятнах» крови флюоресцентным методом (контрольные материалы правильности). Полученное среднее арифметическое значение концентрации в измеренном контрольном материале должно укладываться в пределы средняя арифметическая ± 2 средних квадратических отклонения (±2 SD), от указанного в сертификате контроля качества для этого материала. Общая вариация внутри партии набора должна быть не хуже 8,6—12,7% при концентрации галактозы от 194 до 2000 мкмоль/л.

Примечание 1 — При внешней оценке качества для галактозы приняты следующие допускаемые значения:

— относительный внутридневной размах между двумя измерениями в одной серии — в среднем не более 14% (от 12 до 15%);

— относительный междневной размах меду двумя сериями (средними из 2 измерений) — 21% (от 18 до 24%);

— смещение среднего из 4 измерений (2 серии по 2 измерения) — в среднем не более 21% (от 19 до 23%).

П р и м е ч а н и е 2 — Приведены данные, полученные при внешней оценке качества результатов измерения концентрации галактозы в специализированных лабораториях неонатального скрининга, полученные в соответствии с действующей схемой внешней оценки качества. Предоставлены ФСВОК.

б) Чувствительность.

Минимальная достоверно определяемая концентрация галактозы в «сухих пятнах» крови должна быть не более 70 мкмоль/л (1,3 мг/100 мл). Предел значений результатов для холостых проб не выше 39 мкмоль/л (0,7 мг/100 мл).

в) Интервал измерения: 72,0 мкмоль/л— 2220 мкмоль/л (1,3—40,0 мг/100 мл).

г) Калибровочная кривая.

Должна быть линейная зависимость между логарифмом концентрации галактозы и показателями флюорометра, соответствующими каждой концентрации калибратора в интервале измерения от 72 мкмоль/л до 2220 мкмоль/л. Подходящий алгоритм для построения и аппроксимации калибровочной кривой — невзвешен-ная регрессия. При использовании компьютера и соответствующего программного обеспечения расчет и построение калибровочной кривой осуществляется автоматически.

д) Ожидаемые результаты.

Поскольку концентрация галактозы зависит от возраста новорожденных, времени взятия крови и многих других условий, в каждой лаборатории при использовании набора рекомендуется уточнить референтные значения, которые указывает изготовитель, поскольку они могут несколько отличаться в данном регионе. Использование метода перцентилей популяции позволяет рассчитать пороговое значение, и снизить неправильность результатов, которая может возникать вследствие различий в калибровках методов.

е) Пороговое значение (cut-off).

Следует уточнить в лаборатории по указанному в инструкции к набору методу.

ж) Интерференция.

Высокая концентрация глютатиона (более 60 мг/100 мл) не должна вызывать клинически достоверное снижение результатов. Гемоглобин в концентрации до или равной 250 г/л не должен влиять на результаты. Липемия обычно вызывает завышение результатов.

5.3.2.1.7. Сертификат контроля качества

Должен представлять собой документ на русском языке, в котором указано:

— наименование изготовителя набора реагентов;

— номер набора по каталогу;

— номер партии (номер лота);

— состав набора (компоненты);

— номер лота каждого реагента (компонента набора);

— дата истечения срока хранения набора и каждого из его компонентов;

— калибраторы, концентрация галактозы в крови в каждом калибраторе в единицах СИ — мкмоль/л и мг/100 мл;

— контрольный материалы в нормальном диапазоне концентрации;

— результаты аттестации концентрации галактозы в контрольном материале с нормальной концентрацией галактозы (средняя арифметическая ± 1 среднее квадратическое отклонение (±1 SD);

— контрольный материал в патологическом диапазоне концентрации;

— результаты аттестации концентрации га-лактозыв контрольном материале с патологической концентрацией галактозы (средняя арифметическая ± 1 среднее квадратическое отклонение, (±1 SD);

— фактор конверсии единиц из мг/100 мл в мкмоль/л (коэффициент пересчета): 1 мг/ 100 мл = 55,5 мкмоль/л;

— метод анализа;

— меры предосторожности при работе с калибраторами и контрольными материалами: подтверждение того, что изготовителем получены отрицательные результаты при исследовании в калибраторах и контрольных материалах антигена вируса гепатита В, антител к вирусу гепатита С, а также антител к вирусам ВИЧ 1 + 2;

— дата анализа.

Сертификат контроля качества должен быть подтвержден (заверен) специалистом изготовителя

5.3.2.2. Условия хранения

Наборы реагентов должны храниться в защищенном от влаги месте, при температуре + 2°С—+8°С.

5.3.2.3. Расходные материалы,

не поставляемые с набором реактивов

Должны быть указаны требуемые, но не поставляемые изготовителем расходные материалы. Обычно это наконечники для пипеток, сосуды для реактивов, абсолютный этанол, деионизиро-

ванная вода, тест-бланки для взятия, транспортировки и хранения «сухих пятен» крови.

5.3.2.4. Срок годности

Срок годности не менее 8 месяцев. Срок годности должен быть указан на упаковке набора.

5.3.2.5. Условия транспортирования набора

Температура окружающей среды при транспортировке до +25°С.

5.3.2.6. Требования к инструкции к набору реагентов

Инструкция к набору реагентов должна быть предоставлена изготовителем на русском языке и содержать разделы, указанные в разделе 7 ИСО 18113.2 и в п. 4.2. настоящего стандарта.

Особое внимание должно быть уделено мерам предосторожности Потенциальный риск применения набора — класс 2а [11].

5.3.2.7. Документация

Должны быть представлены документы, подтверждающие соответствие наборов требованиям, установленным в соответствии с законодательством РФ (если требования установлены законодательством):

а) сертификат соответствия;

б) регистрационное удостоверение Министерства здравоохранения России;

в) сертификат качества на средство диагностики;

г) инструкция к набору реактивов на русском языке, подготовленная изготовителем набора в соответствии с разделом 7 ИСО 18113.2 и п. 4.2. настоящего стандарта;

д) должны быть представлены документы, подтверждающие положительный опыт применения набора в лечебно-профилактических учреждениях (не менее 3 отзывов).

5.3.2.8. Наличие сервисной службы в регионе, для которого закупаются наборы реагентов

При закупках наборов реагентов должно быть обеспечено наличие сервисной службы в регионе. Поставщик или производитель наборов должен сообщить наименование, адрес, телефон/факс, электронный адрес организации сервисной службы.

5.3.3. Набор реагентов для измерения концентрации 17а-гидроксипрогестерона (17а-ОН-прогестерона) в «сухих пятнах» крови иммунофлюоресцентным методом с разрешением во времени на основе лантанидной (Ей) метки для выявления врожденного адреногенитального синдрома у новорожденных при неонатальном скрининге

5.3.3.1. Технические характеристики набора

5.3.3.1.1. Предназначенное применение набора

Набор реагентов должен быть предназначен для измерения концентрации 17 а-ОН-прогесте-рона в образцах крови новорожденных в виде «сухих пятен» на тест-бланках фильтровальной бумаги с целью выявления новорожденных с дефицитом 21 р- и 11 р-гидроксилаз. Дефицит этих ферментов является причиной адреногениталь-ного синдрома, врожденной гиперплазии надпочечников, в 95% случаев этого заболевания у новорожденных. Как метаболит прогестерона, 17-а-ОН-прогестерон образуется в плаценте, поэтому концентрация его у здоровых новорожденных тотчас после рождения высока. Однако вскоре после рождения она быстро уменьшается у всех здоровых новорожденных. 17-а-ОН-про-гестерон является предшественником корти-зола, и концентрация его увеличивается в крови в упомянутых двух случаях дефицита 21-р- и 11-р-гидроксилаз, но не в других случаях гиперплазии надпочечников.

5.3.3.1.2. Принцип метода

Метод основан на твердофазном конкурентном иммунофлюоресцентном анализе. 17а-ОН-про-гестерон элюируется буфером из дисков диаметром 3,2 мм, выбитых в лунки планшетов из высушенных пятен крови. Реакция проводится в стрипах 96-луночных прозрачных планшетов с плоским дном. Конкуренция создается между 17а-ОН-прогестероном, меченым европием и 17а-ОН-прогестероном образца за ограниченное число мест связывания на специфических, по отношению к 17а-ОН-прогестерону, кроличьих поликлональных антителах. Даназол способствует освобождению 17а-ОН-прогестерона из связи с белками. Вторые антитела, направленные против кроличьего ^С, нанесенные на твердую фазу, позволяют разделить свободный и связанный с антителами антиген. Усиливающий

раствор диссоциирует ионы европия из меченого антигена в раствор, образуя сильно флюоресцирующие хелаты. Интенсивность флюоресценци-иизмеряется в каждой лунке на планшетном флюорометре для измерения разрешающей во времени флюоресценции при длине волны возбуждающего света 340 нм и длине волны испускания 615 нм и обратно пропорциональна концентрации 17а-ОН-прогестерона в пробах.

5.3.3.1.3. Первичные образцы для анализа

Непосредственное определение должно проводиться в дисках диаметром 3,2 мм, которые выбиваются с помощью специального устройства (инструмента для выбивания дисков из «сухих пятен» крови новорожденных на тест-бланках фильтровальной бумаги марки 903 Whatman или аналогичной по своим свойствам. См. часть 1 настоящего стандарта п. 4.4.

5.3.3.1.4. Количество определений

1 набор должен быть рассчитан на 960 определений.

5.3.3.1.5. Компоненты набора

— Калибраторы 17-а-ОН-прогестерона с аттестованными его концентрациями — 6 уровней концентрации.

Примечание 1 — Значения концентрации 17-а-ОН-прогестерона, количество калибраторов, срок годности и хранения должны быть указаны в инструкции к набору. Точные значения концентрации зависят от лота набора реагентов, серии калибратора, и указаны в контрольном сертификате (сертификате качества), прилагаемом к набору, или на этикетках на калибраторах.

Примечание 2 — Изготовитель должен представить информацию о методах аттестации значений концентрации 17а-ОН-прогестерона в калибровочных материалах.

Примечание 3 — Измерения калибровочных образцов должны проводиться с каждой серией образцов пациентов. Калибровочные пробы каждой концентрации измеряются в дубликатах.

— Контрольные материалы — полоски фильтровальной бумаги (Whatman 903 или аналогичная по свойствам), содержащая каждая высушенные пятна крови с концентрациями 17-а-ОН-прогестерона на 2—3 — уровнях: нормальный 15,0 нмоль/л—23 нмоль/л; 2 высоких уровня, концентрация 17-а-ОН-прогестерона 42,6 нмоль/л— 46,4 нмоль/л и 100,0—150,0 нмоль/л. Должны

содержаться в закрытом конверте с влагопогло-тителем.

Примечание 1 — Значения концентрации 17-а-ОН-прогестерона, количество контрольных материалов, срок годности и хранения их должны быть указаны в инструкции к набору. Точные значения концентрации 17-а-ОН-прогестерона зависят от номера лота набора реактивов, серии калибратора, и должны быть указаны в контрольном сертификате (сертификате качества), прилагаемом к набору, или на этикетках на контрольных материалах.

Примечание 2 — Изготовитель должен представить информацию о методах аттестации значений в контрольных материалах правильности.

Примечание 3 — Измерения контрольных образцов проводятся с каждой серией измерения образцов пациентов по 2 образца с каждой концентрацией на планшет.

Примечание 4— Информация о методах аттестации значений концентрации 17а-ОН-прогесте-рона в контрольных материалах правильности должна быть представлена в инструкции к набору реактивов или в сертификате качества или паспорте к контрольным материалам.

Примечание 5 — Информация о прослежи-ваемости значений результатов измерения концентрации 17а-ОН-прогестерона в калибровочных и контрольных материалах правильности должна быть представлена в инструкции к набору реактивов. См. п. 4.2.5 часть 2 настоящего стандарта.

Примечание 6 — Рекомендуется участие лаборатории в программах внешней оценки качества результатов определения в «сухих пятнах» крови при неонатальном скрининге.

— Основной раствор 17а-ОН-прогестерона, меченного европием, приблизительная концентрация 17а-ОН-прогестерона, меченного европием, должна быть около 40 нмоль/л.

— Основной раствор антисыворотки (поли-клональные кроличьи антитела) против 17а-ОН-прогестерона в буфере (рН 7,8), азид натрия в концентрации до 0,1% — консервант.

— Концентрированный раствор для промывки планшетов.

— Буфер для инкубации с инертным красителем красного цвета и азидом натрия в качестве консерванта < 0,1%.

— Усиливающий флюоресценцию хелатов европия раствор.

— Микротитровальные стрипы из 8 х 12 ячеек (10 планшетов), покрытые антителами против кроличьего ^С, полученными от коз.

— Штрих-кодовые метки для планшетов — 10 шт. Штрих коды специфичны для одного и того же лота.

— Инструкция к набору реактивов на русском языке.

— Специфический для каждого лота набора реактивов Сертификат контроля качества.

5.3.3.1.6. Аналитические характеристики

а) Прецизионность результатов.

— коэффициент вариации — показатель прецизионности внутри партии набора: 9,8—12,2% при продолжительности инкубации 18—22 часов в холодильнике (при максимальной температуре + 8°С); при продолжительности инкубации 3 часа при комнатной температуре;

— (максимально +32°С) коэффициент вариации должен быть не более 12,6 —13,7%;

— коэффициент вариации между партиями наборов 0,3—1% в случае инкубации 18—22 часов в холодильнике (при максимальной температуре +8°С) и 0,6—3,8% при продолжительности инкубации 3 часа при комнатной температуре;

— общий коэффициент вариации 9,8—12,3% при продолжительности инкубации в холодильнике 18—22 часов, 11 —13,9% при продолжительности инкубации 3 часа при комнатной температуре. Используя контрольные материалы в наборе изготовителя, следует выполнять двойные определения каждого контрольного материала. Могут быть использованы контрольные материалы других изготовителей, содержащие 17а-ОН-прогестерон в высушенных пятнах крови.

Полученное среднее арифметическое значение концентрации в измеренном контрольном материале должно укладываться в диапазон ± 2 средних квадратических отклонения (± SD), указанном в сертификате контроля качества для него.

Примечание 1 — При внешней оценке качества значений результатов измерений концентрации 17а-ОН-прогестерона приняты следующие допускаемые значения:

— относительный внутридневной размах между двумя измерениями в одной серии — в среднем не более 14% (от 13 до 16%);

— относительный междневной размах между двумя сериями (средними из 2 измерений) — 29% (от 29 до 29%);

— смещение среднего из 4 измерений (2 серии по 2 измерения) — в среднем не более 21% (от 20 до 23%).

П р и м е ч а н и е 2 — Приведены данные, полученные при внешней оценке качества результатов измерения концентрации! 7 а-ОН-прогестерона в специализированных лабораториях неонатального скрининга, полученные в соответствии с действующей схемой внешней оценки качества. Предоставлены ФСВОК.

б) Чувствительность.

Предел обнаружения (определен на холостой пробе крови) 0,63 нмоль/л при инкубации 18—22 часов в холодильнике и 0,56 нмоль/л при инкубации в течение 3 часов при комнатной температуре. Минимальная достоверно определяемая концентрация 17а-ОН-прогестерона в «сухих пятнах» крови менее 2 нмоль/л.

в) Калибровочная кривая: алгоритм построения и расчета калибровочной кривой: сглаженный сплайн.

При подсоединении компьютера и наличии программного специалиста.

г) Интервал измерения: 0 нмоль/л— 260 нмоль/л обеспечения, калибровочная кривая для каждой серии измерений рассчитывается и строится автоматически.

д) Ожидаемые результаты.

Концентрация 17а-ОН-прогестерона в «сухих пятнах» крови здоровых новорожденных зависит от демографических вариаций, возраста, веса, недоношенности, рождения двойни. В соответствии с Рекомендациями Рабочей Группы по Неонатальному Скринингу Европейского Общества в Педиатрической эндокринологии для доношенных новорожденных на 3—5-й день жизни 30 нмоль/л принимается как пороговое значение, 30—90 нмоль /л указывают на необходимость наблюдения за новорожденным и уровнем 17а-ОН-прогестерона, свыше 90 нмоль/л — на врожденный адреногенитальный синдром. У недоношенных новорожденных значения 17а-ОН-прогестерона выше, значения более 100 нмоль/л могут свидетельствовать о врожденной гиперплазии надпочечников. [18] Приведенные в инструкции к набору реактивов значения могут служить ориентирами. Каждой лаборатории при использовании набора рекомендуется уточнить пороговое значение (cut-off), которое может незначительно отличаться в конкретном регионе.

е) Пороговое значение (cut-off).

Для доношенных новорожденных в возрасте 3—5 дней рекомендуется принять значение cutoff для концентрации 17а-ОН-прогестерона рав-

ное 30 нмоль/л, значения от 30 до 90 нмоль/л указывают на необходимость наблюдения за новорожденным и уровнем 17а-ОН-прогестерона, концентрация выше 90 нмоль/л указывает на врожденную гиперплазию надпочечников;

ж) Интерференция.

Должно быть доказано отсутствие перекрестной реактивности иммунофлюоресцентного метода измерения 17а-ОН-прогестерона набором реактивов с другими соединениями стероидной структуры, например, — 17а-гидроксипрегне-нолона сульфата, 11-дезоксикортизола, прогестерона, их перекрестная реактивность должна быть ничтожной, менее 1%. Эти данные должны быть указаны в инструкции к набору.

з) Выход добавок.

Выход 17а-ОН-прогестерона, добавленного к цельной крови в известных концентрациях, при определении в «сухих пятнах» должен быть не менее 60—96%.

5.3.3.1.7. Сертификат контроля качества.

Должен представлять собой документ на русском языке, в котором указано:

— наименование изготовителя набора реагентов;

— номер набора по каталогу;

— номер партии (номер лота);

— состав набора (компоненты);

— номер лота каждого реагента (компонента набора);

— дата истечения срока хранения набора и каждого из его компонентов;

— калибраторы, концентрация 17а-ОН-про-гестерона в крови в каждом калибраторе в единицах СИ — нмоль/л, нг/мл, среднее количество импульсов для каждой концентрации, коэффициент вариации при оценке прецизионности;

— контрольный материал в нормальном диапазоне концентрации;

— результаты аттестации изготовителем концентрации 17а-ОН-прогестерона в контрольном материале с нормальной концентрацией 17-а-ОН-прогестерона, приемлемый интервал (среднее арифметическое значение ± 20%);

— контрольный материал в патологическом диапазоне концентрации;

— результаты аттестации изготовителем концентрации 17а-ОН-прогестерона в контрольном материале с патологической концентрацией средняя арифметическая ± 20%);

— фактор конверсии единиц для крови из нмоль/л в нг/мл (коэффициент пересчета): 1 нмоль/л = 0,33 нг/мл крови;

— метод анализа;

— меры предосторожности при работе с калибраторами и контрольными материалами: подтверждение того, что изготовителем получены отрицательные результаты при исследовании в калибраторах и контрольных материалах антигена вируса гепатита В, антител к вирусу гепатита С, а также антител к вирусам ВИЧ 1 + 2;

— дата анализа.

Сертификат контроля качества должен быть подтвержден (заверен) специалистом изготовителя.

5.3.3.2. Условия хранения

Наборы реагентов должны храниться в защищенном от влаги месте, при температуре +2°С...+8°С.

5.3.3.3. Расходные материалы, не поставляемые с набором

Должны быть указаны требуемые, но не поставляемые изготовителем расходные материалы.

Обычно это наконечники для пипеток, сосуды для реактивов, абсолютный этанол, деионизи-рованная вода, тест-бланки для взятия крови, транспортировки и хранения «сухих пятен» крови, см. п. 5.1.

5.3.3.4. Срок годности

Срок годности не менее 8 месяцев. Срок годности должен быть указан на упаковке набора.

5.3.3.5. Условия транспортирования набора

Температура окружающей среды при транспортировке до +25°С.

5.3.3.6. Требования к инструкции к набору реагентов

Инструкция к набору реагентов должна быть предоставлена изготовителем на русском языке и содержать разделы, указанные

ИСО 18113.2, раздел 7 и в п. 4.2. настоящего стандарта.

Особое внимание должно быть уделено мерам предосторожности. Потенциальный риск применения набора — класс 2а [11].

5.3.3.7. Документация

Документы, подтверждающие соответствие наборов требованиям, установленным в соот-

ветствии с законодательством РФ (если требования установлены законодательством ):

а) сертификат соответствия ГОСТ Р;

б) регистрационное удостоверение Министерства здравоохранения России;

г) сертификат качества на средство диагностики;

д) инструкция к набору реактивов на русском языке, подготовленная изготовителем набора в соответствии с ИСО 18113.2.

Должны быть представлены документы, подтверждающие положительный опыт применения набора в широкой медицинской практике в лечебно-профилактических учреждениях (не менее 3-х отзывов).

5.3.3.8. Наличие сервисной службы в регионе, для которого закупаются наборы реагентов

При закупках наборов реагентов должно быть обеспечено наличие сервисной службы в регионе. Поставщик или производитель наборов должен сообщить наименование, адрес, телефон/факс, электронный адрес организации сервисной службы

5.3.4. Набор реагентов для измерения концентрации иммунореактивного трипсина (IRT) иммунофлюоресцентным методом с разрешением во времени на основе лантанидной метки (Eu) для проведения неонатального скрининга на муковисцидоз

5.3.4.1. Технические характеристики набора

5.3.4.1.1. Предназначенное применение набора

Набор реагентов должен быть предназначен

для измерения концентрации иммунореактив-ного трипсина (IRT) в образцах крови новорожденных в виде «сухих пятен» на тест-бланках фильтровальной бумаги с целью выявления новорожденных с высоким уровнем IRT при неонатальном скрининге на муковисцидоз (кистозный фиброз).

5.3.4.1.2. Принцип метода

Из «сухого пятна» крови на тест-бланке выбивают в ячейку планшета или стрипа диск диаметром 3,2 мм. В буфере для инкубации IRT элюи-руется с дисков 3,2 мм. Определение основано на твердофазном двусайтовом иммунофлюоромет-рическом прямом сэндвич-методе, в котором используются мышиные моноклональные антитела против двух различных антигенных детерминант

на молекуле IRT. Молекулы IRT, содержащегося в калибраторах, контрольных материалах и тестируемых образцах, связываются с меченными европием моноклональными антителами и антителами, направленными против других специфических антигенных сайтов на молекулах IRT, им-мобилизированных на лунках стрипов микротит-ровальных планшетов.

Усиливающий раствор диссоциирует ионы европия из связанных с меченными европием антителами IRT в раствор, где образуются высокофлюоресцентные хелатные комплексы, интенсивность разрешающей во времени флюоресценции которых измеряется в 96-луночных прозрачных планшетах (стрипах). Измерение интенсивности флуоресценции в планшетах должно проводиться на планшетном флюорометре для измерения разрешающей во времени флюоресценции при длине волны возбуждения 320—340 нм и длине волны испускания флюоресценции 615 нм. Интенсивность флюоресценции увеличивается с увеличением концентрации IRT.

5.3.4.1.3. Первичные образцы для анализа

Непосредственное определение проводится в дисках диаметром 3,2 мм, которые выбиваются с помощью специального устройства — инструмента для выбивания дисков из «сухих пятен» крови новорожденных на тест-бланках фильтровальной бумаги марки 903 Whatman или Schleicher and Schuel марки 903 или 2992. См. часть 1 настоящего стандарта, п. 4.4.

5.3.4.1.4. Количество определений с помощью 1 набора.

1 набор должен быть рассчитан на 960 определений.

5.3.4.1.5. Компоненты набора

В состав набора должны входить:

— Калибраторы — содержащие IRT калибровочные образцы для построения калибровочной кривой, представляют собой высушенные пятна крови с аттестованной концентрацией IRT на фильтровальной бумаге марки Whatman 903 или аналогичной по своим свойствам 1 комплекту в запечатанных пакетах с влагопоглотителем. Концентрация IRT в калибровочных пробах должна быть в диапазоне от 0 до 500 нг/мл, 6 уровней. Полная калибровочная кривая должна быть построена для каждого планшета.

Примечание 1 — Значения концентрации IRT, количество калибраторов, срок годности и хранения должны быть указаны в инструкции к набору. Точные значения концентрации зависят от лота набора реактивов, серии калибратора, и указаны в контрольном сертификате (сертификате качества), прилагаемом к набору, или на этикетках на калибраторах вместе со средними значениями импульсов флюоресценции для каждой концентрации

Примечание 2 — Изготовитель должен представить информацию о методах аттестации значений концентрации IRT в калибровочных материалах.

Примечание 3 — Измерения калибровочных образцов должны проводиться с каждой серией образцов пациентов. Калибровочные пробы каждой концентрации измеряются в дубликатах.

— Контрольные материалы, представляют собой высушенные пятна крови на полосках фильтровальной бумаги Whatman 903 или аналогичной по своим свойствам.

— В наборе, как правило, должно быть 3 контрольных образца с различной концентрацией IRT (около): 40 нг/мл, 70 нг/мл, 120 нг/мл. Контрольные материалы должны быть упакованы в пластиковый конверт с влагопоглотителем.

П римечание 1 — Значения концентрации IRT, количество контрольных материалов, срок годности и хранения их должны быть указаны в инструкции к набору. Точные значения концентрации IRT зависят от лота набора реактивов, серии контрольных материалов и должны быть указаны в контрольном сертификате (сертификате качества), прилагаемом к набору, или на этикетках на контрольных материалах.

Примечание 2 — Изготовитель должен представить информацию о методах аттестации значений концентрации IRTв контрольных материалах правильности.

Примечание 3 — Измерения контрольных образцов проводятся с каждой серией измерения образцов пациентов по 2 образца с каждой концентрацией на планшет.

Примечание 4 — Информация о методах аттестации значений концентрации IRT в контрольных материалах правильности должна быть представлена в инструкции к набору реактивов или в сертификате качества или паспорте к контрольным материалам.

Примечание 5 — Информация о прослежи-ваемости значений результатов измерения концентрации IRT в калибровочных и контрольных материалах правильности должна быть представлена в инструкции к набору реактивов. См. п. 4.2.5 часть 2 настоящего стандарта.

Примечание 6 — Рекомендуется участие лаборатории в программах внешней оценки качества результатов определения IRT в «сухих пятнах» крови при неонатальном скрининге.

— Мышиные моноклональные антитела к IRT, меченные европием.

— Буфер для инкубации.

— Реагент для промывки планшета.

— Микротитровальные 96 — луночные планшеты (10 шт.) с плоским дном прозрачные, покрытые антителами к IRT.

— Усиливающий реагент.

— Наклейки со штрих-кодами, специфичными для одного и того же лота планшетов.

— Сертификат контроля качества специфичный для лота набора, прилагаемый к набору.

— Инструкция к набору реактивов на русском языке.

5.3.4.1.6. Аналитические характеристики

а) Прецизионность результатов:

— При оперативном внутрилабораторном контроле качества используя контрольные материалы, заложенные в наборе изготовителя, следует выполнять двойные определения каждого контрольного материала.

— Коэффициент вариации внутри планшета, характеризующий повторяемость, должен быть не выше 8,4—6% для концентраций IRT от 24,3 нг/мл до 96,9 нг/мл.

— Коэффициент вариации внутри партии наборов от 10,5 до 8,2% для тех же концентраций.

— Общая вариация 11,8—8,3% для тех же концентраций IRT. Могут быть использованы контрольные материалы других изготовителей с аттестованными значениями концентрации IRT в «сухих пятнах» крови иммунофлюоресцентным методом.

Примечание 1 — При внешней оценке качества для IRT могут быть приняты следующие допускаемые значения:

— относительный внутридневной размах между двумя измерениями в одной серии — в среднем не более 10% (от 10% до 11%);

— относительный междневной размах между двумя сериями (средними из 2 измерений) не более 20%;

— смещение среднего из 4 измерений (2 серии по 2 измерения) — в среднем не более 16% (от 15 до 18%).

Примечание 2 — Приведены данные, полученные при внешней оценке качества результатов из-

мерения концентрации IRT в специализированных лабораториях неонатального скрининга в соответствии с действующей схемой внешней оценки качества. Предоставлены ФСВОК.

б) Чувствительность.

Минимальная достоверно определяемая концентрация IRT в «сухих пятнах» крови должна быть не более 4 нг/мл. Предел значений для холостых проб не более 0,43 нг/мл.

в) Интервал измерения: не менее чем 0— 500 нг/мл.

г) Калибровочная кривая.

Калибровочный график строится на основе

расчета зависимости между логарифмами концентраций IRT в калибраторах и соответствующих им значений ответов флюорометра. Алгоритм аппроксимации калибровочной кривой — сглаженный сплайн.

При подсоединении компьютера и наличии соответствующего программного обеспечения расчет, оценка и построение калибровочной кривой осуществляется автоматически.

д) Ожидаемые результаты.

Указанные в инструкциях к наборам реактивов для измерения концентрации IRT иммуно-флюоресцентным методом референтные значения концентрации у новорожденных при нео-натальном скрининге в «сухом пятне» крови являются лишь ориентирами для интерпретации результатов, полученных в лабораториях. Каждая лаборатория должна установить свои собственные референтные и пороговые значения для набора реактивов, который используется в повседневной практике, с учетом национальных и региональных правил. Альтернативные алгоритмы принятия решений для диагностики муковис-цидоза см. [19,20].

е) Пороговое значение (cut-off).

Должен быть указан способ расчета порогового значения, использованный изготовителем. В связи со снижением значений концентраций IRT с возрастом значения cut-off для диагностики муковисцидоза периодически пересматриваются.

ж) Интерференция.

Должны быть указаны вещества, которые влияют на результаты или не влияют на них до определенной концентрации: концентрация три-глицеридов в крови до 5000 мг/100 мл и билирубина до 30 мг/100 мл не влияет на результаты. При оценке перекрестной реактивности изготовителем должно быть установлено, что a-2-мак-

роглобулин в концентрации 5 мг/мл крови, а1-антитрипсин в концентрации 2 мг/мл крови, фосфолипаза PLA 2 в концентрации 500 мг/мл крови, химотрипсин в концентрации 800 мг/мл крови, человеческий ^ С в концентрации 15 мг/мл крови, уропепсиноген 150 мг/мл кровидают результаты, соответствующие концентрации ЖТ в крови менее 4 нг/мл, не обладают перекрестной реактивностью.

5.3.4.1.7. Сертификат контроля качества

Должен представлять собой документ на русском языке, в котором указано:

— наименование изготовителя набора реагентов;

— номер набора по каталогу;

— номер партии (номер лота);

— состав набора (компоненты);

— номер лота каждого реагента (компонента набора);

— дата истечения срока хранения набора и каждого из его компонентов;

— калибраторы, концентрация ЖТ в крови в каждом калибраторе (нг/мл); коэффициент вариации, количество импульсов на флюорометре для каждой концентрации;

— контрольные материалы в 3 диапазонах концентрации;

— результаты аттестации концентрации ЖТ в контрольном материале для каждого диапазона, коэффициент вариации, приемлемый интервал значений результатов для каждого контрольного материала (±20%);

— метод анализа, используемый изготовителем для установления значений результатов в контрольных материалах;

— меры предосторожности при работе с калибраторами и контрольными материалами: подтверждение того, что изготовителем получены отрицательные результаты при исследовании в калибраторах и контрольных материалах антигена вируса гепатита В, антител к вирусу гепатита С, а также антител к вирусам ВИЧ 1 + 2;

— дата анализа;

— сертификат контроля качества должен быть подтвержден (заверен) специалистом изготовителя.

5.3.4.2. Условия хранения

Наборы реагентов должны храниться в защищенном от влаги месте, при температуре +2°С...+8°С.

5.3.4.3. Расходные материалы, не поставляемые с набором

Должны быть указаны требуемые, но не поставляемые изготовителем расходные материалы.

Обычно это наконечники для пипеток, сосуды для реактивов, абсолютный этанол, деионизи-рованная вода, тест-бланки для взятия, транспортировки и хранения «сухих пятен» крови, см. п. 5.1. часть 2 настоящего стандарта.

5.3.4.4. Срок годности

Срок годности не менее 8 месяцев с момента поставки. Срок годности должен быть указан на упаковке набора.

5.3.4.5. Условия транспортирования набора

Температура окружающей среды при транспортировке до +25°С.

5.3.4.6. Требования к инструкции к набору реагентов.

Инструкция к набору реагентов должна быть предоставлена изготовителем на русском языке в соответствии с разделом 7 ИСО18113.2 и п. 4.2. настоящего стандарта.

Особое внимание должно быть уделено мерам предосторожности Потенциальный риск применения набора — класс 2а [11].

5.3.4.7. Документация

Документы, подтверждающие соответствие наборов требованиям, установленным в соответствии с законодательством РФ (если требования установлены законодательством):

а) сертификат соответствия;

б) регистрационное удостоверение Министерства здравоохранения России;

в) сертификат качества на средство диагностики (сертификат соответствия);

г) инструкция к набору реактивов на русском языке, подготовленная изготовителем набора в соответствии с ИСО18113.2, раздел 7, и п. 4.2. настоящего стандарта;

д) должны быть представлены документы, подтверждающие положительный опыт применения набора в широкой медицинской практике в лечебно-профилактических учреждениях, (не менее 3 отзывов).

5.3.4.8. Наличие сервисной службы в регионе, для которого закупаются наборы реагентов

При закупках наборов реагентов должно быть обеспечено наличие сервисной службы в

регионе. Поставщик или производитель наборов должен сообщить наименование, адрес, телефон/факс, электронный адрес организации сервисной службы

5.3.5. Набор реагентов для измерения концентрации тиреотропного гормона (ТТГ) в «сухих пятнах крови» иммунофлуоресцентным методом с разрешением во времени на основе лантанидной метки (Ей) для проведения неонатального скрининга на врожденный гипотиреоз

5.3.5.1. Технические характеристики набора

5.3.5.1.1. Предназначенное применение набора

Набор реагентов должен быть предназначен для измерения концентрации тиреотропного гормона в образцах крови новорожденных в виде «сухих пятен» на тест-бланках фильтровальной бумаги с целью выявления новорожденных при неона-тальном скрининге на врожденный гипотиреоз.

5.3.5.1.2. Принцип метода

ТТГ элюируется буфером для инкубации из дисков диаметром 3,2 мм выбитых из «сухих пятен» крови в лунки стрипов (планшетов). Определение основано на твердофазном двусайтовом иммунофлюрометрическом методе (прямой сэндвич метод), в котором используются мышиные моноклональные антитела против двух различных антигенных детерминант на молекуле ТТГ. Одни из антител против бета-субъединицы молекулы ТТГ иммобилизованы на стрипах микро-титровальных планшетов. Другие моноклональ-ные антитела, меченные европием, реагируют с другой детерминантой молекулы ТТГ. Реакция протекает в течение одной ступени инкубации: ТТГ, содержащийся в стандартах, контрольных материалах и тестируемых образцах, одновременно реагирует с меченными европием монокло-нальными антителами и антителами, направленными против других специфических антигенных детерминант на молекулах ТТГ, иммобилизиро-ванных на лунках стрипов микротитровальных планшетов. Усиливающий раствор диссоциирует ионы европия из связанного с меченым европием антителом ТТГ в раствор, где образуются высокофлюоресцентные хелатные комплексы, интенсивность разрешающей во времени флюоресценции которых измеряется в 96-луночных

прозрачных планшетах (стрипах). Измерение интенсивности флюоресценции в стрипах (планшетах) должно проводиться на планшетном флю-орометре при длине волны возбуждения 340 нм и длине волны испускания флюоресценции 615 нм. Интенсивность флюоресценции пропорциональна концентрации ТТГ в образце.

5.3.5.1.3. Первичные образцы для анализа

Непосредственное определение проводится в дисках диаметром 3,2 мм, которые выбиваются с помощью специального инструмента для выбивания дисков (см. ч. 1, п. 4.4 настоящего стандарта) из кружков «сухих пятен» крови новорожденных на тест-бланках фильтровальной бумаги марки 903 Whatman или аналогичной по своим свойствам.

5.3.5.1.4. Количество определений

1 набор должен быть рассчитан на 960 определений.

5.3.5.1.5. Компоненты набора

В состав набора должны входить:

— Калибраторы, содержащие ТТГ. Это — калибровочные образцы для построения калибровочной кривой, должны представлять собой высушенные пятна крови с аттестованной концентрацией Т^ на фильтровальной бумаге марки Whatman 903 или аналогичной по своим свойствам в запечатанных пакетах с влагопоглотите-лем. Концентрация Т^ в калибровочных пробах должна быть в диапазоне от 1 до 250 мкЕд/л, 6 уровней. Диапазон измерения флюоресценции от 0 до 170 000 импульсов. Полная калибровочная кривая должна быть построена для каждого планшета.

П р и м е ч а н и е 1 — Значения концентрации ТТГ, количество калибраторов, срок годности и хранения их должны быть указаны в инструкции к набору. Точные значения концентрации зависят от лота набора реактивов, серии калибратора, и указаны в контрольном сертификате (сертификате качества), прилагаемом к набору, или на этикетках калибраторов вместе со средними значениями импульсов флюоресценции для каждой концентрации.

Примечание 2 — Изготовитель должен представить информацию о методах аттестации значений концентрации ТТГ в калибровочных материалах.

Примечание 3 — Измерения калибровочных образцов должны проводиться с каждой серией образцов пациентов. Калибровочные пробы каждой концентрации измеряются в дубликатах.

— Контрольные материалы, высушенные пятна крови на фильтровальной бумаге с концентрацией ТТГ на 2 уровнях, концентрация ТТГ в контроле № 1 должна иметь значение 15 мкЕд/мл, в контроле № 2 — 60 мкЕд/мл; контрольные материалы должны быть упакованы в пластиковый пакет с влагопоглотителем.

П р и м е ч а н и е 1 — Значения концентрации ТТГ, количество контрольных материалов, срок годности и хранения их должны быть указаны в инструкции к набору. Точные значения концентрации ТТГ зависят от лота набора реактивов, серии контрольных материалов и должны быть указаны в контрольном сертификате (сертификате качества), прилагаемом к набору, или на этикетках на контрольных материалах.

Примечание 2 — Изготовитель должен представить информацию о методах аттестации значений концентрации ТТГ в контрольных материалах правильности.

П р и м е ч а н и е 3 — Измерения контрольных образцов проводятся с каждой серией измерения образцов пациентов по 2 образца каждой концентрации на планшет.

Примечание 4 — Информация о методах аттестации значений концентрации ТТГ в контрольных материалах правильности должна быть представлена в инструкции к набору реактивов или в сертификате качества или паспорте к контрольным материалам.

П р и м е ч а н и е 5 — Информация о прослежи-ваемости значений результатов измерения концентрации ТТГ в калибровочных и контрольных материалах правильности должна быть представлена в инструкции к набору реактивов. См. п. 4.2.5 часть 2 настоящего стандарта.

П р и м е ч а н и е 6 — Рекомендуется участие лаборатории в программах внешней оценки качества результатов определения ТТГ в «сухих пятнах» крови при неонатальном скрининге.

— Мышиные моноклональные антитела к ТТГ, меченные европием.

— Буфер для инкубации.

— Реагент для промывки планшетов.

— Микротитровальные 96-луночные планшеты (10 шт., каждый состоит из 12 х 8 или 8 х 12 стрипов) с плоским дном, прозрачные, покрытые антителами к ТТТ против бета-субъ-единицы молекулы ТТГ.

— Усиливающий реагент.

— Наклейки со штрих-кодами, специфичными для одного и того же лота планшетов.

— Сертификат контроля качества специфичный для лота набора, прилагаемый к набору.

— Инструкция к набору реактивов на русском языке.

5.3.5.1.6. Аналитические характеристики

а) Прецизионность результатов.

При внутрилабораторном контроле качества контрольные образцы измеряют при каждом выполнении исследования в каждом планшете одновременно с образцами пациентов. Лаборатория должна установить свои собственные значения концентраций и доверительный интервал. Измеряемая средняя концентрация должна быть в пределах 20% отклонений от значений, указанных в сертификате контроля качества.

Примечание 1 — При внешней оценке качества для ТТГ могут быть приняты следующие допускаемые значения:

— относительный внутридневной размах между двумя измерениями в одной серии — в среднем не более 15% (от 13 до 17%);

— относительный междневной размах между двумя сериями (средними из 2 измерений) — 21% (от 21 до 24%);

— смещение среднего из 4 измерений (2 серии по 2 измерения) — в среднем не более 23% (от 22 до 24%).

П римечание 2. Приведены — данные, полученные при внешней оценке качества результатов измерения концентрации ТТГ в специализированных лабораториях неонатального скрининга в соответствии с действующей схемой внешней оценки качества. Предоставлены ФСВОК.

б) Чувствительность.

Минимальная достоверно определяемая концентрация ТТГ в «сухих пятнах» крови должна быть менее 2 мкЕД/мл.

в) Интервал измерения.

Не менее, чем от 0 мкЕд/мл до 250 мкЕд/мл.

г) Калибровочная кривая: алгоритм аппроксимации калибровочной кривой — сглаженный сплайн. При подсоединении компьютера и наличии соответствующего программного обеспечения расчет, оценка и построение калибровочной кривой осуществляется автоматически.

д) Ожидаемые результаты.

В каждой лаборатории при использовании конкретного набора реагентов рекомендуется уточнить это значение, так как оно зависит от обследуемой популяции новорожденных и используемых наборов реактивов. Приведенные в

инструкции значения для здоровых доношенных новорожденных являются ориентирами, требующими уточнения

е) Пороговое значение (си1:-о1¥) концентрации ТТГ должно быть установлено в каждой лаборатории.

ж) Интерференция.

Должны быть указаны вещества, которые влияют на результаты или не влияют на них до определенной концентрации. При иммунофлуорес-центном измерении концентрации ТТГ установлено, что концентрация триглицеридов в крови до 5000 мг/100 мл и билирубина до 20 мг/100 мл не влияет на результаты. Изготовителем должна быть изучена перекрестная реакция с пролакти-ном, ФСГ, ЛГ, ХГЧ и доказано, что их присутствие в «сухих пятнах» крови не влияет на результаты анализа ТТГ в них.

5.3.5.1.7. Сертификат контроля качества

Должен представлять собой документ на русском языке, в котором указано:

— наименование изготовителя набора реагентов;

— наименование набора реагентов;

— номер набора по каталогу;

— номер партии (номер лота);

— состав набора (компоненты);

— номер лота каждого реагента (компонента набора);

— дата истечения срока хранения набора и каждого из его компонентов;

— калибраторы, концентрация ТТГ в крови в каждом калибраторе, мкЕд/мл;

— коэффициент вариации, количество импульсов на флуорометре для каждой концентрации.

— контрольные материалы в 2 диапазонах концентрации;

— результаты аттестации концентрации ТТГ в контрольном материале для каждого диапазона, коэффициент вариации, приемлемый интервал значений результатов для каждого контрольного материала (±20%);

— метод анализа, используемый изготовителем для установления значений результатов в контрольных материалах;

— меры предосторожности при работе с калибраторами и контрольными материалами: подтверждение того, что изготовителем получены отрицательные результаты при исследовании в

калибраторах и контрольных материалах антигена вируса гепатита В, антител к вирусу гепатита С, а также антител к вирусам ВИЧ 1 + 2; — дата анализа.

Сертификат контроля качества должен быть подтвержден (заверен) специалистом изготовителя.

5.3.5.2. Условия хранения

Наборы реагентов должны храниться в защищенном от влаги месте, при температуре +2°С...+8°С.

5.3.5.3. Расходные материалы,

не поставляемые с набором реактивов

Тест-бланки из фильтровальной бумаги с кружками для нанесения, транспортировки и хранения крови.

Дистиллированная вода.

5.3.5.4. Срок годности

Срок годности не менее 8 месяцев, минимальный остаточный срок годности набора не менее 80% после поставки. Срок годности должен быть указан на упаковке набора.

5.3.5.5. Условия транспортирования набора Температура окружающей среды при транспортировке до +25°С.

5.3.5.6. Требования к инструкции к набору реагентов

Инструкция к набору реагентов должна быть представлена изготовителем на русском языке в соответствии ИСО 18113.2 с раздел 7 и п. 4.2. настоящего стандарта.

Особое внимание должно быть уделено мерам предосторожности. Потенциальный риск применения набора — класс 2а [11].

5.3.5.7. Документация

Документы, подтверждающие соответствие наборов требованиям, установленным в соответствии с законодательством РФ (если требования установлены законодательством):

а) сертификат соответствия;

б) регистрационное удостоверение Министерства здравоохранения России;

в) сертификат качества на средство диагностики (сертификат соответствия);

г) инструкция к набору реактивов на русском языке, подготовленная изготовителем набора в соответствии с ИСО 18113.2;

д) Должны быть представлены документы, подтверждающие положительный опыт применения набора в широкой медицинской практике в лечебно-профилактических учреждениях (не менее 3 отзывов).

5.3.5.8. Наличие сервисной службы в регионе, для которого закупаются наборы реагентов

При закупках наборов реагентов должно быть обеспечено наличие сервисной службы в регионе. Поставщик или производитель наборов должен сообщить наименование, адрес, телефон/факс, электронный адрес организации сервисной службы.

БИБЛИОГРАФИЯ

1. ISO 18113.1 —2009. In vitro diagnostic medical devices. — Information supplied by the manufacturer (labelling). — Part 1: Terms, definitions and general requirements.

2. EN 575:2001 Information supplied by manufacturer with in vitro diagnostic reagent for professional use.

3. ГОСТ Р ЕН 13612—2010 Оценка функциональных характеристик медицинских изделий для диагностики in vitro.

4. ISO | IEC Guide 99—2007. International vocabulary of metrology — Basic general concepts and associated terms (VIM).

5. Galen R.S., Gambino S.R., Beyond Normality: The Predictive Values and Efficiency Medical Diagnosis. A Wiley Biomedical Publication, 1975.

6. CLSI GP10 — A/Assessment of Clinical Accuracy of Laboratory Tests Using Receiver Operating Characteristics (ROC) Plots; Approved Guideline, CLSI: Wayne, PA, 1995.

7. ГОСТ Р ЕН 592—2010. Инструкция по применению инструментов для диагностики in vitro для самотестирования. Стандартинформ, 2011.

8. Clinical and Laboratory Standards Institute (2007): Blood Collection on Filter Paper for Newborn Screening Programs Approved Standard — Fifth edition, CLSI Document LA4—A5, CLSI, Wayne, Pennsylvania. 19087—1898. Vol. 27. № 20.

9. Долгов В.В., Меньшиков В.В. Массовый скрининг новорожденных на наследственные болезни обмена веществ. Клиническая лабораторная диагностика. Национальное руководство. М.: Геотар-Медиа. 2011, Т. 1. С. 844—859.

10. Приказ Министерства здравоохранения и социального развития от 22 марта 2006 г. № 185 «О массовом обследовании новорожденных детей на наследственные болезни».

11. ГОСТ Р ИСО 14971—2009. Изделия медицинские. Применение менеджмента риска к медицинским изделиям. М.: Стандартинформ, 2010.

12. CLSIC28-A2 How to Define and Determine Reference Intervals in the Clinical Laboratory / Approved Guideline. Second Edition. CLSI Wayne, PA USA, 2000.

13. Dybkayer R and Solberg H. Approved recommendations

(1987) on the theory of reference values. Part 6. Presentation of observed values related to reference values // J. Clin. Chem. Clin. Biochem. 1987. Vol. 25. Р. 651—662.

14. Sollberg H.E., Petitclerc C. Approved recommendations

(1988) on the theory of reference values. Part 3. Prepаra-tion of individuals and collection of specimens for production of reference values // J. Clin. Chim. Acta. 1988. Vol. 3. Р. S3—S11.

15. Sollberg H.E. Approved recommendations (1988) on the theory of reference values. Part 5.Statistical Treatment of collected reference values. determination of reference limits // J. Clin. Chem. Clin. Biochem. 1987. Vol. 25.

Р.645—656.

16. ИСО 6588: 1981. Бумага, картон, целлюлоза. Определение рН водных экстрактов.

17. Рекомендации по забору образцов крови при проведении массового обследования новорожденных детей на наследственные заболевания. Приложение № 2 к Приказу Министерства здравоохранения и социального развития от 22 марта 2006 г. № 185 «О массовом обследовании новорожденных детей на наследственные болезни».

18. Working Group on Neonatal Screening the European Society for Pediatric Endocrinology. (2001). Procedure for neonatal Screening for congenital hyperplasia due 2-1hydroxylase deficiency // Hom. Res. Vol. 55 Р. 201—205.

19. Newborn Screening Act Scheets and Confirmatory algorithms. 06.09.2007. American College of Medical Genetics. http: www.acmg.netIresourches policies/ACT/Visio — IRT(4-17-06) pdf/.

20. Corneau A.M., Accursof G., White T.B., Campbell P.W., Hoffman G., Parad, R.B., Willfond B.S., Rosenfeld M., Sontag M.K., Massie J., Farrel P.M., Sullivan B.P. Guidelines for Implemantation of Cystic Fibrosis Newborn Screening Program. Cystic Fibrosis Foundation. Workshop Report // Pediatrics. 2007. Vol. 119. Р. 495—518.

21. ISO 18113.2—2009. In vitro diagnostic medical devices — Information supplied by the manufacturer (labelling). Part 2: In vitro diagnostic reagents for professional use.