СТАБИЛИЗИРОВАННЫЕ БЕЛКИ F RSV И ИХ ПРИМЕНЕНИЯ

1. Рекомбинантный тример белка  F респираторно-синцитиального вируса (RSV), содержащий: три рекомбинантных пептида F RSV, каждый из которых содержит делецию аминокислотных положений 98-146 белка F RSV дикого типа и линкер из восьми-четырнадцати аминокислот между аминокислотными положениями 97 и 147 F RSV дикого типа, где рекомбинантные F-пептиды содержат следующие модификации для стабилизации рекомбинантного тримера F RSV в конформации «до слияния»:
(i) аминокислотные замены 190F и 207L,
(ii) аминокислотные замены 155C и 290C, и одно или более из (a)-(f), приведенных ниже:
(a) аминокислотных замен 486C и 490C;
(b) аминокислотных замен 180C и 186C;
(c) аминокислотных замен 486C и 489C;
(d) аминокислотные замен 512C и 513C;
(е) аминокислотной замены 505С; и
(f) делеции аминокислот 482-513 F RSV дикого типа.
2. Рекомбинантный тример белка F RSV по п.1, где каждый из рекомбинантных пептидов F RSV дополнительно содержит на С-конце делецию аминокислот, соответствующих трансмембранному домену и цистоплазматическому домену белка F RSV дикого типа.
3. Рекомбинантный тример белка F RSV по п.2, где каждый из рекомбинантных пептидов F RSV дополнительно содержит на С-конце делецию аминокислот 514-574 F RSV дикого типа.
4. Рекомбинантный тример белка F RSV по любому из пп.1-3, где каждый из рекомбинантных пептидов F RSV дополнительно содержит последовательность фолдона на С-конце каждого пептида.
5. Рекомбинантный тример белка F RSV по п.4, где последовательность фолдона содержит SEQ ID NO: 8.
6. Рекомбинантный тример белка F RSV по любому из пп.3-5, где каждый из рекомбинантных F-пептидов содержит аминокислотные замены 190F и 207L, аминокислотные замены 155C и 290C, аминокислотные замены 486C и 490C и делецию аминокислот 514-574 белка F RSV дикого типа.
7. Рекомбинантный тример белка F RSV по п.6, где каждый рекомбинантный F-пептид дополнительно содержит ненативную внутрипептидную дисульфидную связь между цистеинами, введенными аминокислотными заменами 155C и 290C, и где тример белка F RSV содержит одну или несколько ненативных межпептидных дисульфидных связей между цистеинами, введенными аминокислотными заменами 486C и 490C.
8. Рекомбинантный тример белка F RSV по любому из пп.3-5, где каждый из рекомбинантных F-пептидов содержит аминокислотные замены 190F и 207L, аминокислотные замены 155C и 290C, аминокислотные замены 180C и 186C и делецию аминокислот 514-574 белка F RSV дикого типа.
9. Рекомбинантный тример белка F RSV по п.8, где каждый рекомбинантный пептид F RSV дополнительно содержит ненативную внутрипептидную дисульфидную связь между цистеинами, введенными аминокислотными заменами 155 и 290С, и ненативную внутрипептидную дисульфидную связь между цистеинами, введенными аминокислотными заменами 190C и 186C.
10. Рекомбинантный тример белка F RSV по любому из пп.3-5, где каждый из рекомбинантных F-пептидов содержит аминокислотные замены 190F и 207L, аминокислотные замены 155C и 290C, аминокислотные замены 486C и 489C и делецию аминокислот 514-574 белка F RSV дикого типа.
11. Рекомбинантный тример белка F RSV по п.10, где каждый рекомбинантный пептид F RSV дополнительно содержит ненативную внутрипептидную дисульфидную связь между цистеинами, введенными аминокислотными заменами 155C и 290C, и где тример белка F RSV содержит ненативную межпептидную дисульфидную связь между цистеинами, введенными аминокислотными заменами 486C и 489C.
12. Рекомбинантный тример белка F RSV по любому из пп.3-5, где каждый из рекомбинантных F-пептидов содержит аминокислотные замены 190F и 207L, аминокислотные замены 155C и 290C, аминокислотные замены 512C и 513C и делецию аминокислот 514-574 белка F RSV дикого типа.
13. Рекомбинантный тример белка F RSV по п.12, где каждый рекомбинантный пептид F RSV дополнительно содержит ненативную внутрипептидную дисульфидную связь между цистеинами, введенными аминокислотными заменами 155C и 290C, и где тример белка F RSV содержит ненативную межпептидную дисульфидную связь между цистеинами, введенными 512C и 513C аминокислотными заменами.
14. Рекомбинантный тример белка F RSV по любому из пп.3-5, где каждый из рекомбинантных F-пептидов содержит аминокислотные замены 190F и 207L, аминокислотные замены 155C и 290C, аминокислотную замену 505C и делецию аминокислот 514-574 белка F RSV дикого типа.
15. Рекомбинантный тример белка F RSV по любому из пп.3-5, где каждый из рекомбинантных F-пептидов содержит аминокислотные замены 190F и 207L, аминокислотные замены 155C и 290C и делецию аминокислот 482-513 и аминокислот 514-574 белка F RSV дикого типа.
16. Рекомбинантный тример белка F RSV по п.14 или 15, где каждый рекомбинантный пептид F RSV дополнительно содержит ненативную внутрипептидную дисульфидную связь между цистеинами, введенными аминокислотными заменами 155С и 290С.
17. Рекомбинантный тример белка F RSV по любому из пп.1-16, где линкер имеет длину из восьми-четырнадцати аминокислот и содержит последовательность, представленную в SEQ ID NO: 46.
18. Рекомбинантный тример белка F RSV по п.17, где линкер имеет длину из восьми аминокислот и имеет последовательность, представленную в SEQ ID NO: 1.
19. Рекомбинантный тример белка F RSV по п.17, где линкер имеет длину из десяти аминокислот и имеет последовательность, представленную в SEQ ID NO: 2.
20. Рекомбинантный тример белка F RSV по п.17, где линкер имеет длину из двенадцати аминокислот и имеет последовательность, представленную в SEQ ID NO: 3.
21. Рекомбинантный тример белка F RSV по п.17, где линкер имеет длину из четырнадцати аминокислот и имеет последовательность, представленную в SEQ ID NO: 4.
22. Рекомбинантный тример белка F RSV по любому из пп.1-5, где каждый из рекомбинантных F-пептидов содержит, состоит по существу из или состоит из зрелой аминокислотной последовательности, представленной в любой из SEQ ID NO: 22, 24, 26, 28, 30 или 44.
23. Рекомбинантный пептид F RSV, содержащий:
(i) делецию аминокислот в положениях 98-146 F RSV дикого типа,
(ii) линкер из восьми-четырнадцати аминокислот между аминокислотными положениями 97-147 белка F RSV дикого типа;
(iii) аминокислотные замены 190F и 207L;
(iv) аминокислотные замены 155C и 290C и одно или более из (a)-(f), приведенных ниже:
(а) аминокислотных замен 486C и 490C;
(b) аминокислотных замен 180C и 186C;
(c) аминокислотных замен 486C и 489C;
(d) аминокислотных замен 512C и 513C;
(е) аминокислотной замены 505С; и
(f) делеции аминокислот 482-513 F RSV дикого типа.
24. Иммуногенная композиция RSV, содержащая рекомбинантный тример белка F RSV по любому из пп.1-22 или рекомбинантный пептид F RSV по п.23.
25. Иммуногенная композиция по п.24, формулированная в эффективном количестве для индукции антигенспецифического иммунного ответа, направленного против рекомбинантного тримера F RSV или рекомбинантного пептида F RSV.
26. Иммуногенная композиция по любому из пп.24-25, которая формулирована с адъювантом.
27. Иммуногенная композиция по п.26, где адъювант представляет адъювант на основе соединения алюминия.
28. Иммуногенная композиция по п.27, где адъювант на основе соединения алюминия представляет МАА или МАРА.
29. Иммуногенная композиция по любому из пп.24-25,  дополнительно содержащая липидную наночастицу, содержащую один или более катионных липидов и поли(этиленгликоль)-липид (PEG-липид).
30. Иммуногенная композиция по п.29, где один или более катионных липидов представляют ионизируемые катионные липиды.
31. Иммуногенная композиция  по п.30, где ионизируемые катионные липиды выбраны из DLinDMA; DlinKC2DMA; Dlin-МС3-DMA; CLinDMA; S-Octyl CLinDMA;
(2S)-1-{7-[(3β)-холест-5-ен-3-илокси]гептилокси}-3-[(4Z)-дек-4-ен-1-илокси]-N, N диметилпропан-2-амина;
(2R)-1-{4-[(3β)-холест-5-ен-3-илокси]бутокси}-3-[(4Z)-дек-4-ен-1-илокси]-N, N диметилпропан-2-амина;
1-[(2R)-1-{4-[(3β)-холест-5-ен-3-илокси]бутокси}-3-(октилокси)пропан-2-ил]гуанидина;
1-[(2R)-1-{7-[(3β)-холест-5-ен-3-илокси]гептилокси}-N, N-диметил-3-[(9Z,12Z)-октадека-9,12-диен-1-илокси]пропан-2-амина;
1-[(2R)-1-{4-[(3β)-холест-5-ен-3-илокси]бутокси}-N, N-диметил-3-[(9Z,12Z)-октадека-9,12-диен-1-илокси]пропан-2-амина;
(2S)-1-({6-[(3β))-холест-5-ен-3-илокси]гексил}окси)-N, N-диметил-3-[(9Z)-октадека-9-ен-1-илокси]пропан-2-амина;
(3β)-3-[6-{[(2S)-3-[(9Z)-октадек-9-ен-1-илокси]-2-(пирролидин-1-ил)пропил]окси}гексил)окси]холест-5-ена;
(2R)-1-{4-[(3β)-холест-5-ен-3-илокси]бутокси}-3-(октилокси)пропан-2-амина;
(2R)-1-({8-[(3β)-холест-5-ен-3-илокси]октил}окси)-N, N-диметил-3-(пентилокси)пропан-2-амина;
(2R)-1-({8-[(3β)-холест-5-ен-3-илокси]октил}окси)-3-(гептилокси)-N, N-диметилпропан-2-амина;
(2R)-1-({8-[(3β)-холест-5-ен-3-илокси]октил}окси)-N, N-диметил-3-[(2Z)пент-2-ен-1-илокси]пропан-2-амина;
(2S)-1-бутокси-3-({8-[(3β)-холест-5-ен-3-илокси]октил}окси)-N, N-диметилпропан-2-амина;
(2S-1-({8-[(3β)-холест-5-ен-3-илокси]октил}окси)-3-[2,2,3,3,4,4,5,5,6,6,7,7,8,8,9,9-гексадекафторнонил)окси]-N, N-диметилпропан-2-амина;
2-амино-2-{[(9Z,12Z)-октадека-9,12-диен-1-илокси]метил}пропан-1,3-диола;
2-амино-3-((9-(((3S,10R,13R)-10,13-диметил-17-(6-метилгептан-2-ил)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-тетрадекагидро-1Н-циклопента[а]фенантрен-3-ил)окси)нонил)окси)-2 -((((9Z,12Z)-октадека-9,12-диен-1-ил)окси)метил)пропан-1-ола;
2-амино-3-((6-(((3S,10R,13R)-10,13-диметил-17-(6-метилгептан-2-ил)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-тетрагидро-1Н-циклопента[а]фенантрен-3-ил)окси)гексил)окси)-2-((((Z)-октадек-9-ен-1-ил)окси)метил)пропан-1-ола;
(20Z,23Z)-N, N-диметилнонакоза-20,23-диен-10-амина;
(17Z,20Z)-N, N-диметилгексакоза-17,20-диен-9-амина;
(16Z,19Z)-N, N-диметилпентакоза-16,19-диен-8-амина;
(13Z,16Z)-N, N-диметилдокоза-13,16-диен-5-амина;
(12Z,15Z)-N, N-диметилгеникоза-12,15-диен-4-амина;
(14Z,17Z)-N, N-диметилтрикоза-14,17-диен-6-амина;
(15Z,18Z)-N, N-диметилтетракоза-15,18-диен-7-амина;
(18Z,21Z)-N, N-диметилгептакоза-18,21-диен-10-амина;
(15Z,18Z)-N, N-диметилтетракоза-15,18-диен-5-амина;
(14Z,17Z)-N, N-диметилтрикоза-14,17-диен-4-амина;
(19Z,22Z)-N, N-диметилоктакоза-19,22-диен-9-амина;
(18Z,21Z)-N, N-диметилгептакоза-18,21-диен-8-амина;
(17Z,20Z)-N, N-диметилгексакоза-17,20-диен-7-амина;
(16Z,19Z)-N, N-диметилпентакоза-16,19-диен-6-амина;
(22Z,25Z)-N, N-диметилгентриаконта-22,25-диен-10-амина;
(21Z,24Z)-N, N-диметилтриаконта-21,24-диен-9-амина;
(18Z)-N, N-диметилгептакоз-18-ен-10-амина;
(17Z)-N, N-диметилгексакоз-17-ен-9-амина;
(19Z,22Z)-N, N-диметилоктакоза-19,22-диен-7-амина;
N, N-диметилгептакозан-10-амина;
(20Z,23Z)-N-этил-N-метилнонакоза-20,23-диен-10-амина;
1-[(11Z,14Z)-1-нониликоза-11,14-диен-1-ил]-пирролидина;
(20Z)-N, N-диметилгептакоз-20-ен-10-амина;
(15Z)-N, N-диметилгептакоз-15-ен-10-амина;
(14Z)-N, N-диметилнонакоз-14-ен-10-амина;
(17Z)-N, N-диметилнонакоз-17-ен-10-амина;
(24Z)-N, N-диметилтритриаконт-24-ен-10-амина;
(20Z)-N, N-диметилнонакоз-20-ен-10-амина;
(22Z)-N, N-диметилгентриаконт-22-ен-10-амина;
(16Z)-N, N-диметилпентакоз-16-ен-8-амина;
(12Z,15Z)-N, N-диметил-2-нонилгеникоза-12,15-диен-1-амина;
(13Z,16Z)-N, N-диметил-3-нонилдокоза-13,16-диен-1-амина;
N, N-диметил-1-[(1S,2R)-2-октилциклопропил]гептадекан-8-амина;
1-[(1S,2R)-2-гексилциклопропил]-N, N-диметилнонадекан-10-амина;
N, N-диметил-1-[(1S,2R)-2-октилциклопропил]нонадекан-10-амина;
N, N-диметил-21-[(1S,2R)-2-октилциклопропил]геникозан-10-амина;
N, N-диметил-1-[(1S,2S)-2-{[(1R,2R)-2-пентилциклопропил]метил}циклопропил]нонадекан-10-амина;
N, N-диметил-1-[(1S,2R)-2-октилциклопропил]гексадекан-8-амина;
N, N-диметил-1-[(1R,2S)-2-ундецилциклопропил]тетрадекан-5-амина;
N, N-диметил-3-{7-[(1S,2R)-2-октилциклопропил]гептил} додекан-1-амина;
1-[(1R,2S)-2-гептилциклопропил]-N, N-диметилоктадекан-9-амина;
1-[(1S,2R)-2-децилциклопропил]-N, N-диметилпентадекан-6-амина;
N, N-диметил-1-[(1S,2R)-2-октилциклопропил]пентадекан-8-амина; и
(11E,20Z,23Z)-N, N-диметилнонакоза-11,20,23-триен-10-амина;
или фармацевтически приемлемой соли, или стереоизомера любого из вышеуказанного.
32. Иммуногенная композиция по п.31, где ионизируемые катионные липиды выбраны из группы, состоящей из (2S)-1-({6-[(3β))-холест-5-ен-3-илокси]гексил}окси)-N, N-диметил-3-[(9Z)-октадек-9-ен-1-илокси]пропан-2-амина; (13Z,16Z)-N, N-диметил-3-нонилдокоза-13,16-диен-1-амина и N, N-диметил-1-[(1S,2R)-2-октилциклопропил]гептадекан-8-амина; или фармацевтически приемлемой соли, или стереоизомера любого из вышеуказанного.
33. Иммуногенная композиция по п.32, которая содержит 30-75 мол.% ионизируемого катионного липида и 0,1-20 мол.% ПЭГ-липида.
34. Иммуногенная композиция по любому из пп.29-33, дополнительно включающая один или более некатионных липидов, выбранных из фосфолипида, производного фосфолипида, жирной кислоты, стерола или их комбинации.
35. Иммуногенная композиция по п.34, где стерол представляет холестерин, стигмастерол или стигмастанол.
36. Иммуногенная композиция по п.34, где фосфолипид выбран из фосфатидилсерина, 1,2-дистеароил-sn-глицеро-3-фосфохолина (DSPC), 1,2-дипальмитолеоил-sn-глицеро-3-фосфохолина, 1,2-димиристоил-sn-глицеро-3-фосфохолина (DMPC), дилауроилфосфатидилхолина (DLPC), 1,2-диейкозеноил-sn-глицеро-3-фосфохолина и 1,2-диолеоил-sn-глицеро-3-фосфохолина (DOPC).
37. Иммуногенная композиция по любому из пп.29-36, где ПЭГ-липид представляет 1,2-димиристоил-sn-глицерин- метоксиполиэтиленгликоль (PEG-DMG), ПЭГ-дистерилглицерин (PEG-DSG), ПЭГ-дипальметолеил, ПЭГ-диолеил, ПЭГ-дистеарил, ПЭГ-диацилгликамид (PEG-DAG), ПЭГ-дипальмитоилфосфатидилэтаноламин (PEG-DPPE) или ПЭГ-1,2-димиристилоксилпропил-3-амин (PEG-c-DMA).
38. Иммуногенная композиция по любому из пп.34-37, которая содержит 20-99,8 мол.% ионизируемых катионных липидов, 0,1-65 мол.% некатионных липидов и 0,1-20 мол.% ПЭГ-липида.
39. Иммуногенная композиция по п.38, где некатионные липиды включают смесь холестерина и DSPC.
40. Иммуногенная композиция по п.34, которая содержит 34-59 мол.% ионизируемых катионных липидов, выбранных из группы, состоящей из (2S)-1-({6-[(3β))-холест-5-ен-3-илокси]гексил}окси)-N, N-диметил-3-[(9Z)-октадек-9-ен-1-илокси]пропан-2-амина; (13Z,16Z)-N, N-диметил-3-нонилдокоза-13,16-диен-1-амина; и N, N-диметил-1-[(1S,2R)-2-октилциклопропил]гептадекан-8-амина, 30-48 мол.% холестерина, 10-24% DSPC и 1-2 мол.% PEG-DMG.
41. Способ индукции иммунного ответа на белок F RSV у субъекта, где способ включает введение субъекту эффективного количества тримера белка F RSV по пп.1-22 или иммуногенной композиции RSV по любому из пп.22-40.
42. Способ по п.41, где субъекту вводят однократную дозу тримера белка F RSV или иммуногенной композиции RSV.
43. Способ по п.41, где субъекту вводят по меньшей мере одну бустер-дозу тримера белка F RSV или иммуногенной композиции RSV.
44. Способ по любому из пп.41-43, где тример белка F RSV или иммуногенную композицию RSV вводят субъекту внутрикожной инъекцией или внутримышечной инъекцией.
45. Способ по любому из пп.41-44, где субъект подвергался воздействию вируса, где субъект инфицирован вирусом или где субъект подвергается риску заражения вирусом.
46. Тример белка F RSV по любому из пп.1-22 или иммуногенная композиция RSV по любому из пп.24-40 для применения в способе индукции иммунного ответа на белок F RSV у субъекта, где способ включает введение субъекту тримера белка F RSV или иммуногенной композиции RSV в количестве, эффективном для индукции антигенспецифического иммунного ответа у субъекта.
47. Применение тримера белка F RSV по любому из пп.1-22 или иммуногенной композиции RSV по любому из пп.24-40 в производстве лекарственного средства для применения в способе индукции иммунного ответа на белок F RSV у субъекта, где способ включает введение субъекту тримера белка F RSV или иммуногенной композиции RSV в количестве, эффективном для получения антигенспецифического иммунного ответа у субъекта.