ЭКСТРАКТ STEVIA ИЛИ СТЕВИОЛ ДЛЯ УХОДА ЗА ВОЛОСАМИ
STEVIA EXTRACT OR HAIR CARE STEVIOL

Область техники
Изобретение относится к применению оральной композиции, содержащей экстракт Stevia, предшественники стевиола (гликозиды стевиола) или свободный стевиол, который улучшает внешний вид волос и препятствует их выпадению. Оно относится также к способам улучшения внешнего вида волос путем орального введения эффективного количества экстракта Stevia, предшественников стевиола или стевиола.
Уровень техники
Stevia rebaudiana - растение, известное тем, что содержит сладкие на вкус вещества, включающие стевиозид и ребаудиозид А. Эти вещества обычно использовали в качестве заменителя сахара в некоторых пищевых продуктах, в том числе, в безалкогольных напитках. Подробное описание их безопасности, токсикологии и метаболизма можно найти в Food and Chemical Toxicology (Пищевая и Химическая Токсикология) 2008 vol 46(7), Supplement I, где все приложение посвящено применению ребаудиозида А в пищевых продуктах и напитках. Стевиозид и ребаудиозид А метаболизируют до агликон стевиола, вещества, не обладающего сладким вкусом.
JP 10265347 (Shiseido Co., Ltd) описывает агент, который удлиняет ростовой период волосяного цикла и может быть получен из некоторых экстрактов растений, включая окопник лекарственный (Symphytum offionale L.), Curcuma domestica, дерево ююба (Zizyphus jujube), Keirin дикий имбирь (Asarum sieboldii), семена коикса бусенника (Coix lachrima), Stevia, cube гамбир (Uncardiagambir roxburgh), горечавку (Gentiana lutea), хмеля (Humulus lupus), Isodon Japonicicus, и фасоль адзуки (Azukia angularis) в добавление к ряду других растений.
ЕР 1666036 описывает стимулятор роста волос, содержащий соединение хромин, такое как метилрипарихромин А, ацетованиллохромин или ортохромин. Хроминовые соединения могут быть экстрагированы из видов Stevia вдобавок к другим растительным видам и разновидностям. Хромины не связаны структурно со стевиозидами или стевиолом.
Существует необходимость создания композиции для ухода за волосами, которую можно вводить орально и которая может улучшить естественное здоровье и красоту волос, и которая может восстановить рост волос и предотвратить связанные со старением их выпадение/истончение.
Краткое описание изобретения
По настоящему изобретению, было показано, что постоянный прием оральной композиции, содержащей стевиол, предшественники стевиола (гликозиды стевиола) или экстракт Stevia, предпочтительно содержащий стевоизид и/или ребаудиозид А (причем оба эти соединения физиологически метаболизируется до стевиола в кишечном тракте млекопитающих), приводит к удивительному улучшению внешнего вида волос/меха.
Таким образом, одно воплощение изобретения - это способ улучшения внешнего вида волос/меха/перьев/чешуи у животных, включающий введение орального нутрицевтика или пищевой композиции, содержащей стевиол, предшественник стевиола, такой как гликозид стевиола, или экстракт Stevia, содержащий стевоизид и/или ребаудиозид А, в течение достаточного времени и в количестве, эффективном для улучшения внешнего вида волос/меха/перьев/чешуи у животных, и наблюдения или оценки результата.
Другое воплощение данного изобретения - это применение стевиола, предшественника стевиола, такого как гликозид стевиола или экстракта Stevia, содержащего стевиозид и/или ребаудиозид А, в производстве орального нутрицевтика или пищевой композиции, которые улучшают внешний вид волос/меха/перьев/чешуи у животных и особенно волос/меха у млекопитающих.
Было также показано, что постоянное оральное добавление стевиола восстанавливает естественный темный цвет меха у старых мышей, которые обычно с возрастом приобретают серый мех. Таким образом, еще один аспект изобретения - это способ восстановления цвета волос/меха и/или задержки поседения волос/меха. Еще один аспект данного изобретения - применение стевиола для приготовления нутрицевтика или пищевой композиции, которые задерживают образование седины и/или восстанавливают цвет волос/меха. По данному изобретению, было также обнаружено, что млекопитающие, которым вводили стевиол или экстракт Stevia, содержащий стевиозид и/или ребаудиозид А, характеризовались меньшим выпадением волос, чем животные, получавшие плацебо. Таким образом, еще один аспект изобретения включает способ:
уменьшения выпадения волос,
восстановления роста волос после того, как наступило облысение,
увеличения толщины волос,
противостояния возрастному утоньшению волос,
предотвращения или уменьшения раннего облысения,
задержки наступления или тяжести возрастного выпадения волос и/или
задержки наступления или тяжести утоньшения волос,
содержащий введение оральной лекарственной формы стевиола, предшественника стевиола или экстракта Stevia, содержащего стевиозид и/или ребаудиозид А. Согласно еще одному аспекту данного изобретения, стевиол, предшественник стевиола или экстракт Stevia, стевиозид и/или ребаудиозид А, применяется в косметической оральной композиции для выполнения перечисленных выше задач, включая выпадение/утоньшение волос.
Композиции по данному изобретению особенно привлекательны, поскольку многие люди, включая имеющих животных и ухаживающих за животными, специально заинтересованы в косметическом лечении, рассматриваемом как «естественное» с мягкими эффектами и без значительных побочных эффектов. Будучи орально доступными веществами, экстракт Stevia и стевиол имеют дополнительные преимущества, поскольку их легко применять, они не оставляют никаких следов на волосах или мехе, и легче контролировать их дозировку, чем при местном применении.
Краткое описание фигур
Фигура 1. Влияние постоянной обработки экстрактом Stevia (450 мг/кг per os, 8 недель) на выпадение волос у мышей C57B I/6J среднего возраста. Приведенные результаты представляют собой средние значения (S.D., причем средний показатель на мышь, полученный для животных, получавших экстракт посконника (SE; n=12), а для контрольных мышей, получавших переносчик (VEH); n=13). Экстракт Stevia значительно улучшал (т.е. уменьшал) выпадение волос по сравнению с контрольными мышами ***p<0.001.
Фигура 2 Влияние постоянной обработки стевиолом (120 мг/кг, per os, 6 недель) на (а) цвет меха и (b) выпадение волос постаревших мышей C57B I/6J. Приведенные результаты представляют собой средние значения (S.D., средний показатель на мышь, до и после обработки стевиолом (STEV; n=7 n=10). Стевиол значительно улучшал цвет волос (т.е. уменьшал седину и значительно улучшал (т.е. уменьшал) выпадение волос (до лечения-уз-после лечения: *p<0,05).
Фигура 3 демонстрирует корреляцию между уровнем свободного стевиола в плазме и фенотипической оценкой, характеризующей предотвращение выпадения волос, приводимой в Примере 1.
Фигура 4 демонстрирует гены, регулируемые стевиолом, которые были впоследствии сопоставлены с биологическими процессами с применением статистических методов программного обеспечения Genedata package.
Экстракт Stevia, содержащий стевиозид и/или ребаудиозид А по настоящему изобретению, может быть приготовлен с применением известных способов. Это изобретение не предназначено специально для использования экстракта Stevia как подслащивающего агента для композиций, где для индукции улучшения внешнего вида или роста волос/меха применяют ингредиенты, иные чем экстракт Stevia, стевиозид ребаудиозид А и/или ребаудиозид. Кроме того, экстракт Stevia по данному изобретению не содержит биоактивного количества хроминов, достаточного, чтобы стимулировать активность роста волос.
Стевиол может быть получен путем ферментативного гидролиза стевиозида по способам, описанным в литературе. С другой стороны, поскольку гликозиды стевиола, такие как стевиозид и ребаудиозид А метаболизируют до стевиола, может применяться растительный экстракт, содержащий и ребаудиозиды и/или стевиозиды. Предпочтительно, количество гликозидов стевиола велико (>50%). Однако эти композиции имеют очень сладкий аромат и послевкусие, так что в продукты питания желательно добавлять вещества, маскирующие или усиливающие вкус.
В качестве альтернативы растительному экстракту могут применяться композиции, содержащие активные ингредиенты стевиозид или ребаудиозид А. Напротив, в частности, если улучшающее состояние волос активное соединение должно поступать с пищей, а сладкий вкус нежелателен, можно применять композиции, содержащие стевиол. Особенно предпочтителен стевиол в случае его применения для восстановления цвета волос.
ОПРЕДЕЛЕНИЯ
Применяемый в заявке термин «композиция нутрицевтиков» включает пищевые продукты, продукты питания, диетические добавки, добавки нутрицевтиков или композиции для добавления к пищевым продуктам или продуктам питания, включая напитки (например, напитки для занятий спортом, функциональные воды, соки, фруктовые коктейли, быстрорастворимые напитки, но не ограничивающиеся ими), супы, молочные продукты (например, йогуртовые напитки однократного применения, но не ограничивающиеся ими), пищевые концентраты и джемы.
Применяемый в заявке термин «пищевой продукт» относится к любой пище или к любому корму, подходящему для приема человеком или животным.
Применяемый в заявке термин «диетические добавки» относится к небольшому количеству вещества для добавления в диету человека или животного, упакованного в однократные или многократные дозировки. Диетические добавки обычно не обеспечивают значительного количества калорий, но могут содержать другие питательные микроэлементы (например, витамины или минералы).
Термин «питательные добавки» относится к композиции, содержащей диетическую добавку в сочетании с источником калорий. В некоторых воплощениях, питательные добавки являются пищевыми замещениями или добавлениями (например, питательные или энергетические концентраты или питательные напитки или концентраты).
Применяемый в заявке термин «предотвращение» не предназначен для обозначения события, которое никогда не случится, но означает задержку наступления состояния или события и уменьшение тяжести состояния или события, если они наступили.
«Постоянное введение» означает регулярное введение активного ингредиента в течение значительного периода времени, например, один или два раза в день в течение по меньшей мере двух недель, предпочтительно, в течение одного месяца, и более предпочтительно, по меньшей мере, в течение двух месяцев. С другой стороны, возможно регулярное введение раз в два дня или раз в неделю или два раза в неделю.
«Волосы» - означает волосы у людей или мех у животных. Этот термин может включать также перья у птиц и чешую у рыб.
«Продолжительный период времени» означает практически ежедневно в течение, по меньшей мере, около двух недель, предпочтительно, по меньшей мере, около месяца и даже еще более предпочтительно, около двух месяцев.
«Предшественник стевиола» означает гликозид стевиола, который может быть ферментативно гидролизован до свободного агликон стевиола. См., например, EFSA Journal 2010, 8(4); 1537, включенный в настоящую заявку в виде ссылки. Подходящие для гидролиза ферменты присутствуют в микроорганизмах, а также в кишечном тракте человека и животных. См. Gardans et al. 2003 J. Agric. Food Chem. 51: 6618-22, включенный в настоящую заявку в виде ссылки.
«Экстракт Stevia» согласно спецификации и формуле данного изобретения следует понимать как активный ингредиент, способствующий улучшению состояния волос. Таким образом, он либо присутствует в качестве единственного активного ингредиента, улучшающего состояние волос, либо, при употреблении в комбинации с другим ингредиентом, он не предназначен быть подсластителем, и/или количество экстракта Stevia не достаточно для подслащения композиции или пищевого продукта или он не содержит хромины в количестве, стимулирующем рост волос.
«Наблюдение» или «оценка» могут быть выполнены лицами, принимавшими активный ингредиент, или могут быть выполнены третьей стороной. Состояние после введения препарата можно сравнить с состоянием до введения препарата, и оно может быть проанализировано с применением стандартного теста или с помощью субъективного анализа.
«Улучшенный вид» означает, что качество волос/меха улучшилось по меньшей мере, по одному из следующих показателей:
цвет (т.е. задержка сохранения/восстановления естественного цвета по отношению к седине),
облысение (т.е. сохраняются волосы/мех, выпадение волос прекращается или замедляется; или волосы повторно отрастают),
толщина волос/меха (утоньшение волос замедляется, прекращается или обращается),
блеск меха (мех больше не выглядит запущенным и кажется более лоснящимся),
ранки/повреждения на коже заживают или зажили,
сияние или глянец волос/меха (волосы/мех кажутся менее тусклыми и более сияющими/блестящими).
Анти-Седина
Более предпочтительно, настоящее изобретение относится к применению оральных композиций, содержащих стевиол или предшественники стевиола, для ухода за волосами, особенно для предотвращения поседения волос и/или для восстановления и/или сохранения естественного цвета волос. Оно относится также к вводимым орально композициям для ухода за волосами, особенно для предотвращения поседения волос и/или для восстановления и/или поддержания естественного цвета волос, содержащим экстракт Stevia или стевиол или предшественник стевиола и переносчик, обычно применяемым для оральных нутрицевтиков или пищевых композиций с той оговоркой, что присутствуя в комбинации со вторым активным ингредиентом, экстракт Stevia не присутствует в количестве, достаточном для подслащивания композиции. Кроме того, изобретение относится к способу предотвращения поседения волос и/или восстановления и/или поддержания естественного цвета волос, который включает оральное введение млекопитающему, нуждающемуся в такой обработке, композиции, содержащей эффективное количество экстракта Stevia, стевиола или предшественника стевиола и приводящей к предотвращению поседения и/или сохранению естественного цвета волос с учетом того, что, присутствуя в комбинации со вторым активным ингредиентом, экстракт Stevia не предназначен для подслащивания композиции. Для этих способов и применений особенно предпочтителен стевиол.
Ветеринарные применения
В другом аспекте данного изобретения экстракт Stevia вводили животным, преимущественно млекопитающим, но не людям. Поскольку кератиновые соединения в волосах улучшаются в результате применения данного изобретения, выигрыш применения изобретения не ограничивается млекопитающими и может распространяться на других животных, таких как птицы или рыбы, или другие животные, окраска или улучшение качества которых представляет интерес. Например, птица может быть домашней, особенный интерес представляют те особи, которые участвуют в демонстрационных конкурсах. Усиление окраски может быть полезным и для рыб, например, например, для золотых рыбок.
В предпочтительном аспекте данного изобретения, животное является не человеком, но млекопитающим, таким как домашнее животное (собака, кошка, хорек) или животное, используемое в меховой промышленности (норки, шиншиллы и т.п.), или животные, демонстрируемые на конкурсах (такие как собаки, лошади, кошки, кролики и другие сельскохозяйственные животные). Добавление к диете животных экстракта Stevia, стевиола или предшественника стевиола по данному изобретению улучшит внешний вид меха животного. Таким образом, другой аспект этого изобретения - это ветеринарный нутрицевтик или продукт питания, содержащий улучшающее мех количество экстракта Stevia, стевиола или предшественника стевиола.
Поскольку некоторым животным может не нравиться вкус сладкого экстракта Stevia для ветеринарного применения, может оказаться желательным, чтобы экстракт содержал стевиол, а не предшественники стевиола, так как стевиол не обладает специфическим вкусом.
Другой аспект данного изобретения - это добавка, особенно показанная для демонстрируемых животных, которая содержит экстракт Stevia, стевиол или предшественник стевиола. Животные должны получать эту добавку ежедневно в течение по меньшей мере одного месяца и предпочтительно в течение по меньшей мере двух месяцев перед конкурсом, чтобы его мех был в оптимальном состоянии. В предпочтительных воплощениях, добавка должна быть в форме лакомства или жвачки.
Предпочтительные пищевые продукты
Пищевой продукт может быть приготовленной и расфасованной пищей (например, майонезом, заправкой для салата, хлебом или сыром) или кормом для животных (например, формованным или гранулированным кормом для животных, грубым смешанным кормом, пищевыми композициями для домашних животных, лакомствами или жвачкой).
Пищевые продукты или пища - это, например, напитки, такие как безалкогольные и алкогольные напитки, а также жидкие концентраты, предназначенные для добавления в питьевую воду и жидкую пищу. Безалкогольные напитки - это, например, сладкая вода, спортивные напитки, фруктовые соки (например, апельсиновый сок, яблочный сок и грейпфрутовый сок); лимонады, чаи, разбавленные напитки, молоко и другие молочные напитки (например, йогурты) и диетические напитки. В другом воплощении, пищевые продукты или пища относятся к твердой или полутвердой пище, содержащей композицию по настоящему изобретению. Эти формы могут включать, не ограничиваясь ими, хлебобулочные изделия, такие как кексы и печенье, пудинги, молочные продукты, сладости, закусочные пищевые продукты или замороженные сладости, или новые виды продуктов (например, мороженое, молочные коктейли), приготовленные из замороженных продуктов, конфеты, закусочные пищевые продукты (например, хрустящий картофель или картофельные чипсы), жидкая пища, такая как супы, паштеты, соусы, заправки для салатов, приготовленные мясные продукты, сыр, йогурт и любая другая содержащая жир или масло пища и ингредиенты пищи (например, пшеничная мука).
Корм для животных, включающий пищевые композиции для домашних животных, преимущественно содержит пищевые продукты, предназначенные для удовлетворения необходимым диетическим требованиям, а также лакомства (например, собачьи бисквиты) или другие пищевые добавки. Корм для животных, содержащий композицию по настоящему изобретению, может быть в форме сухой композиции (например, гранул), полувлажной композиции, влажной композиции или их смесей. В альтернативном варианте или сверх того корм для животных - это добавка, такая как подливка, питьевая вода, йогурт, пудра, суспензия, жвачка, лакомство (например, бисквит) или любая другая поставляемая форма.
Диетические добавки по настоящему изобретению составлены для орального применения. Ингредиенты диетической добавки по данному изобретению содержатся в подходящих наполнителях и/или переносчиках для орального приема. Действующая форма переносчика и, соответственно, сама диетическая добавка не критична. Переносчиком может быть жидкость, гель, желатиновая капсула, капсула, порошок, твердая таблетка (покрытая или не покрытая), чай или тому подобное. Диетическая добавка предпочтительно существует в форме таблетки или капсулы и наиболее предпочтительно, в форме жесткой (оболочечной) желатиновой капсулы. Подходящие наполнители и/или переносчики включают мальтодекстрин, карбонат кальция, дикальций фосфат, микрокристаллическую целлюлезу, декстрозу, рисовую муку, стеарат магния, стеариновую кислоту, кроскармеллезу натрия, натрий крахмал гликолат, кросповидон, сахарозу, растительные смолы, лактозу, метилцеллюлезу, повидоп, карбокси метилцеллюлезу, кукурузный крахмал и прочие соединения (включая их смеси). Предпочтительные переносчики включают карбонат кальция, стеарат магния, мальтодекстрин и их смеси. Различные ингредиенты и наполнители и/или переносчики смешивают и формируют в требуемые формы с помощью обычных методов. Таблетки или капсулы по настоящему изобретению могут быть покрыты кишечнорастворимой оболочкой, которая растворяется при рН от около 6,0 до около 7,0. Подходящая кишечнорастворимая оболочка, которая растворяется в тонком кишечнике, но не в желудке, - это целлулеза ацетат фосфат. Дополнительные детали методов образования и введения можно найти в последнем издании Remington's Pharmaceutical Sciences (Maack Publishing Co., Easton, PA).
В других воплощениях, диетическую добавку поставляют в виде порошка или жидкости, подходящих для добавления потребителем в пищу или напиток. Например, в некоторых воплощениях диетическую добавку можно вводить индивидууму в виде порошка, например, для смешивания с напитком или размешивая в полутвердой пище, например, такой как пудинг, подлива, соус, пюре, каша или заправка для салата или, напротив, добавляя в пищу, например, заключая ее в крышки или сосуды для напитка, чтобы освободить добавку непосредственно перед употреблением. Диетическая добавка может содержать один или более инертных ингредиентов, особенно если требуется ограничить количество калорий, добавляемых к диете диетической добавкой. Например, диетическая добавка по настоящему изобретению может содержать также произвольные ингредиенты, включающие, например, травы, витамины, минералы, усилители, красители, подсластители, ароматизаторы, инертные ингредиенты и тому подобные вещества.
В некоторых воплощениях, диетические добавки содержат также витамины и минералы, включая, но не ограничиваясь ими, трехосновной фосфат кальция или ацетат кальция; фосфат калия, двухосновной; сульфат или оксид магния; соль (хлорид натрия); хлорид или ацетат калия; аскорбиновую кислоту; ортофосфат железа; никотинамид; сульфат или оксид цинка; пантотенат кальция; глюконат меди; рибофлавин; бета-каротин; пиридоксин гидрохлорид; тимин мононитрат; фолиевая кислота; биотин; хлорид или пиколинат хрома; иодид калия; селенат натрия; молибдат натрия; филлохинон; витамин D3; цианокобаламин; селенит натрия; сульфат меди; витамин А; витамин С; инозитол; иодид калия.
В других воплощениях изобретение поставляет питательные добавки (то есть энергетические концентраты или концентраты, замещающие пишу или напитки), содержащие композицию по данному изобретению. Питательная добавка может служить заместителем пищи или закусочных продуктов и в целом, обеспечивая пищевые калории. Предпочтительно, питательные добавки поставляют углеводы, белки и жиры в сбалансированных количествах. Питательная добавка может также содержать простые углеводы со средней длиной цепи или полисахариды или их комбинацию. Простой сахар может быть выбран для достижения желаемых органолептических эффектов. Одним из примеров сложного углевода является сырой кукурузный крахмал. Если требуется, чтобы он сохранял структуру, соответствующую высокому молекулярному весу, его следует включать только в такие пищевые конструкции или их порции, которые не подвергаются тепловой обработке, поскольку она разрушит сложные углеводы до простых углеводов, а именно, до моно- и дисахаридов. В одном воплощении, питательная добавка содержит комбинации источников углеводов с тремя уровнями значений длины цепи (простые, средние и сложные; например, сахароза, мальтодекстрины и сырой кукурузный крахмал).
Источниками белка, который должен быть включен в питательную добавку по данному изобретению, могут быть любые подходящие белки, использованные в питательных композициях и могут включать белки сыворотки, концентрат белков сыворотки, порошок из сыворотки, яйца, соевую муку, соевое молоко, соевый белок, выделенный соевый белок, казеинат (например, казеинат натрия, казеинат натрия и кальция, казеинат кальция, казеинат калия), животные и растительные белки и гидролизаты их смесей. При выборе источника белка следует в первую очередь рассматривать биологическую ценность белка, причем наивысшая биологическая ценность была найдена в казеинате, сыворотке, лактальбумине, яичном альбумине и белках цельного яйца. В предпочтительном воплощении, белок представляет собой комбинацию концентрата белков сыворотки и казеината кальция. Эти белки имеют высокую биологическую ценность; что связано с тем, что они имеют высокую долю эссенциальных амино кислот. См. Modem Nutrion in Health and Dsease, Eighth Edition, Lea & Febiger, publishiers, 1986, особенно Volume 1, pages 30-32.
Питательная добавка может содержать также другие ингредиенты, такие как один или комбинация других витаминов, минералов, антиоксидантов, волокон и других диетических добавок (например, белков, аминокислот, холина, лецитина, омега-3-жирных кислот). Выбор одного или нескольких из этих ингредиентов зависит от препарата, дизайна, потребителя и предпочтений конечного пользователя. Количество этих ингредиентов, включенных в пищевые добавки по настоящему изобретению, хорошо известно специалистам. Руководство для определения таких количеств может быть обеспечено дозами US RDA для детей и взрослых. Кроме того, добавляемые витамины и минералы включают, не ограничиваясь ими, фосфат или ацетат кальция, трехосновной; фосфат калия двухосновной; сульфат или оксид магния; соль (хлорид натрия); хлорид или ацетат калия; аскорбиновую кислоту; ортофосфат железа; никотинамид; сульфат или оксид цинка; пантотенат кальция; глюконат меди; рибофлавин; бета-каротин; пиридоксин гидрохлорид; тимин мононитрат; фолиевая кислота; биотин; хлорид или пиколинат хрома; иодид калия; селенат натрия; молибдат натрия; филлохинон; витамин D3; цианокобаламин; селенит натрия; сульфат меди; витамин А; витамин С; витамин Е, инозитол; и йодид калия. Сверх того, мультивитаминные и минеральные добавки могут быть привнесены в пищевые композиции по настоящему изобретению для получения адекватного количества эссенциальных продуктов, отсутствующих в некоторых диетах. Мультивитаминные и минеральные добавки могут также применяться для предотвращения заболеваний и для защиты от недостатка питательных веществ и дефицитов, вызванных характером уклада жизни.
Питательные добавки могут поставляться в разных формах и производиться разными способами. В предпочтительном воплощении, для производства пищевого концентрата применяют жидкие ингредиенты; сухие ингредиенты добавляют к жидким ингредиентам в смеси и перемешивают до получения густой массы. Массу помещают в экструдер и выталкивают; подвергнутую экструзии массу нарезают на отрезки определенной длины; и охлаждают продукт. Концентраты могут содержать другие питательные вещества и наполнители для улучшения вкуса, помимо специфических ингредиентов, перечисленных в заявке.
Специалисты понимают, что другие ингредиенты, например, наполнители, эмульсификаторы, предохранители и т.д. могут быть добавлены к перечисленным в заявке для разработки и производства питательных добавок.
Кроме того, в пищевые добавки могут быть включены ароматизаторы, красящие агенты, специи, орехи и аналогичные соединения. Ароматизаторы могут быть применены в форме ароматических экстрактов, летучих масел, шоколадных отдушек, ароматизаторов на основе арахисового масла, панировочных сухарей, легкого риса, ванили или любого коммерчески доступного ароматизатора. Примеры полезных ароматизаторов включают, не ограничиваясь ими: чистый анисовый экстракт, имитацию бананового экстракта, имитацию вишневого экстракта, шоколадный экстракт, чистый лимонный экстракт, чистый апельсиновый экстракт, чистый перцовый экстракт, имитацию ананасного экстракта, имитацию ромового экстракта, имитацию клубничного экстракта, или чистый ванильный экстракт, или летучие масла, такие как лимонное масло, лавровое масло, бергамотное масло, кедровое масло, масло грецкого ореха, масло корицы, масло гвоздики или масло мяты перечной; арахисовое масло, шоколадный ароматизатор, ванильные крошки, ириски или тоффи. В одном воплощении диетическая добавка содержит какао или шоколад.
Для стабильности пищевых добавок могут быть добавлены эмульсификаторы.
Примеры подходящих эмульсификаторов включают, не ограничиваясь ими, лецитин (из яиц или из сои) и/или моно- и диглицериды. Специалистам хорошо известны другие эмульсификаторы, и выбор подходящего(их) эмульсификатора(ов) будет отчасти зависеть от состава и конечного продукта. Для увеличения времени хранения продукта к пищевой добавке могут быть добавлены также предохранители. Предпочтительно, применяются также такие предохранители, как сорбат калия, сорбат натрия, бензоат калия, бензоат натрия или кальций динатрий ЭДТА.
Помимо перечисленных выше углеводов, композиция нутрицевтиков может содержать естественные или искусственные (предпочтительно, низкокалорийные) заменители сахара, такие как сахариды, цикламаты, аспартамин, аспартам, ацесульфам К и/или сорбит, не ограничиваясь ими. Такие искусственные заменители сахара могут быть желательны, если пищевая добавка предназначена для лиц с избыточным весом или тучных или лиц с диабетом второго типа, предрасположенных к гипергликемии.
Дозировки
Рекомендованные для людей и животных дозировки экстракта Stevia находятся в интервале от 0,1 до 500 мг/кг веса тела в день, предпочтительно от 0,5 до 250 мг/кг веса тела в день, и более предпочтительно, от 1,0 до 50 мг/кг веса тела в день.
Предпочтительные дозировки стевиола находятся в интервале от 0,01 до 100 мг/кг веса тела в день, предпочтительно, от 1,0 до 50 мг/кг веса тела в день и более предпочтительно, от 0,5 до 25 мг/кг веса тела в день и/или от 0,5 до 10 мг/кг веса тела в день.
Предпочтительные дозировки предшественников стевиола находятся в интервале от 0,05 до 1000 мг/кг веса тела в день, предпочтительно, от 0,5 до 500 мг/кг веса тела в день и более предпочтительно, от 1,0 до 100 мг/кг веса тела в день.
Предпочтительную ежедневную дозировку описанной выше обсуждаемой композиции можно вводить в виде одной или двух дозированных единиц, таких как таблетки. Наиболее предпочтительно, ежедневная дозировка обсуждаемой композиции вводится по одной единице два раза в день или в форме двух единиц, принимаемых дважды в день, всего по четыре единицы в день. По сравнению с приемом всей ежедневной дозы раз в день, двукратный прием ежедневной дозировки в форме одной или нескольких единиц на дозу способствует лучшему поглощению и лучшему поддержанию уровня эссенциальных ингредиентов в крови. В случае экстракта Stevia или предшественников стевиолов дозировка на прием составляет от 30 до 1000 мг, для стевиола от 10 до 500 мг.
Для применения у людей и животных рекомендованная доза стевиол гликозидов находится в интервале от 0,05 мг на кг живого веса до приблизительно 100 мг на кг живого веса в день. Более предпочтительно, ежедневная доза от около 0,1 до 20 мг на кг живого веса и особенно предпочтительна ежедневная доза от около 0,1 до 20 мг мг на кг живого веса и особенно предпочтительна ежедневная доза от около 1,0 до 10,0 на кг живого веса.
Рекомендованные уровни в пищевых продуктах
Категория пищи
Предшественник стевиола (стевиол гликозид, например, Ребаудиозид А или стевиозид) мг/кг пищи
Предшественник стевиола (стевиол (стевиол гликозид,) мг на дозу
Свободный стевиол мг/кг пищи
Свободный стевиол мг на дозу
Злаки (овсяная мука, зерновые брикеты
50-1000
2-40/40 г
250-750
10-30/40 г
Готовый чай
20-480
5-120/0,25 л
20-200
5-50/0,25 л
Фруктовые соки
50-600
12,5-150/0,25 л
30-200
5-100/0,25 л
Диетические малоалкогольные напитки
50-600
12,5-150/0,25 л
30-200
5-50/0,25 л
Энергетические напитки
50-600
12,5-150/0,25 л
20-600
30-150/0,25 л
Ароматические напитки
20-400
5-100/0,25 л
20-1200
5-30/0,25 л
Мелкие булочные Продукты
50-1000
2-40/40 г
250-750
10-3 0/40 г
Кондитерские изделия
1000-6000
20-120/20 г
5-20/20 г
В предпочтительном воплощении, экстракт Stevia или стевиол или предшественник стевиола, содержащие нутрицевтики или пищу, съедают регулярным образом, то есть по меньшей мере ежедневно в течение постоянного периода времени (т.е. по меньшей мере, в течение одной недели, предпочтительно по меньшей мере, в течение двух недель и более предпочтительно, в течение трех недель или по меньшей мере одного или двух месяцев) пока не станет заметно улучшение состояния волос. После этого потребитель может снижать дозу.
Следующие не ограничивающие примеры представлены для лучшей иллюстрации изобретения.
Пример 1
Действие постоянной обработки экстрактом Stevia на состояние меха и кожи у мышей дикого типа среднего возраста.
Мышам C57B 1/6J среднего возраста (18 месяцев) вводили экстракт Stevia (450 мг/кг, р.о.) или переносчик (смесь 1:1 воды с кукурузным маслом) ежедневно в течение восьми недель.
К концу периода обработки мышей анестезировали (2,2-2,4% изофлуораном) и каждую мышь фотографировали. Опрашивали восемь участников, имеющих богатый опыт экспериментальной работы с мышами, предлагая им оценивать субъективное состояние меха и кожи каждой мыши по трехбальной шкале (См. Таблицу 1). Параметры для оценки качества меха включали цвет меха, выпадение волос, блеск (лоск) и общий внешний вид (ухоженный/неухоженный); для оценки состояния кожи участники должны были оценить появление ранок. Средние показатели для каждой мыши, полученные из 8 индивидуальных показаний участников, позволяли затем сравнивать мышей, получавших экстракт Stevia и контрольных мышей, получавших переносчик.
Как можно видеть на Фигуре 1, обработка экстрактом Stevia значительно снижала степень выпадения волос по сравнению с контрольными мышами, как показано более высокими показателями субъективной оценки этого параметра (p<0,01, непарный t-тест).
Таблица 1
Система оценки состояния меха и кожи
Цвет меха
Седой и старый 1
Не очевидный 2
Темный и молодой 3
Плешивость/выпадение волос
Значительное выпадение волос 1
Частичное выпадение волос 2
Нормальные волосы 3
Блестящий мех
Тусклый мех 1
Не очевидный 2
Блестящий и здоровый 3
Внешний вид меха
Запущенный, неухоженный 1
Не очевидный 2
Ухоженный 3
Заметные ранки/повреждения
Много 1
Мало 2
Нет3
Пример 2
Действие постоянной обработки стевиолом на состояние меха и кожи у мышей дикого типа старшего возраста
У самок мышей C57B 1/6J старшего возраста (22-24 месяца) оценивали качество меха в начале и в конце шестинедельного исследования. Перед началом обработки были сделаны фотографии всех мышей, пока они находились под легкой анестезией (2,2-2,4% изофлуорана). Затем мыши получали либо плацебо, либо диету, обогащенную стевиолом (120 мг/кг/день) в течение шести недель. К концу фазы шестинедельной обработки мышей вновь анестезировали и делали новые фотографии.
Опрашивали одиннадцать участников, имеющих богатый опыт экспериментальной работы с мышами, предлагая им заполнить тот же опросник (См. Таблицу 1) для субъективной оценки ряда параметров, характеризующих качество меха и появление ранок на коже, сравнивая фотографии до и после обработки.
Статистический анализ осуществляли с помощью Призмы 5 (Программное обеспечение GraphPad,La Jolla, CA, USA) с применением при необходимости Bonferroni post-hoc теста.
Стевиол значительно улучшал цвет меха, то есть уменьшал седину, что следует из значительно большей величины среднего показателя после 6 недельного добавления стевиола (p<0,05, Фигура 2b).
Сразу после фотографирования мышей забивали и собирали кровь.
Пример 3
Корреляция между уровнем свободного стевиола в плазме и фенотипической оценкой
Образцы плазмы хранили при -80°С до их забора для экстракции и приготовления проб. «Свободные» (агликоновые) вещества экстрагировали из образцов плазмы/сыворотки с помощью экстрагирующего буфера (50 мкл ацетата аммония (10 мМ), добавленного к 400 мкл этилового ацетата). Органическую фазу выпаривали, и высушенный остаток восстанавливали в мобильной фазе. Осуществляли хроматографическое разделение с помощью скоростного квадрупольного Agilent масс-спектрометра, оснащенного 1100 Agilent LC системой на RP-амидной колонке (3 мкм, 100×2,1 мм) с градиентом (А: 20 мМ ацетата аммония и 0,1% уксусной кислоты в воде. В:
0,1% уксусной кислоты в ацетонитриле; 20% В (выдержать 2 мин) до 100% В через 18 мин (выдержать 2 мин), затем post-run 2 мин, run time 24 мин. Масс-спектрометрическое детектирование выполняли с отрицательной электрораспылительной ионизацией в SIM-mode (317 м/z). Идентификацию и количественную оценку выполняли с помощью относительных стандартов стевиола.
Корреляцию между концентрацией стевиола в плазме и улучшением фенотипа оценивали с помощью Призмы 5 (GraphPad Software, La Jolla, CA, USA). Результаты представлены на Фигуре 3.
Пример 4
Рост волосяного фолликула человека
Фолликулы волос человека получали из фрагментов человеческой кожи (полученных при пластических операциях) и выращивали в обогащенной среде William's Е, содержащей пенициллин/стрептомицин, L-глутамин (2 мМ/л), инсулин (10 мкг/мл) и гидрокортизон (8 нМ/л). Рост волосяного фолликула оценивали по длине (на 0, 4 и 7 день). В качестве положительного контроля использовали триодотиронин (Т3, 30 мкМ/л). Параллельно определяли эффект стевиола (при 0,625-5 мкг/мл). На 7-й день из волосяных фолликул, подвергавшихся разным воздействиям (контроль, Т3, стевиол), экстрагировали РНК (RNA). RNA обрабатывали для Affymetrix DNA микроанализа, чтобы идентифицировать влияние веществ на экспрессию генов. В подходящих случаях количественно определяли экспрессию RNA с помощью RT-PCR, используя приборы ABI 7900 Taqman. При всех процедурах строго следовали протоколам, предложенным производителями.
Результаты
Влияние на рост фолликул: стевиол дозозависимым образом благоприятствовал удлинению волосяных фолликул (Таблица 2, внизу). При низких концентрациях эффект был значительным, в то время как при более высоких концентрациях это соединение не влияло существенно на рост.
Таблица 2
Обработка
Концентрация
Рост (% от контроля)
Значение p
Контроль
100
-
Трииодотиронин
30 мкМ
133
<0,01
Стевиол
0,625 мкг/мл
122
0,1
Стевиол
1,25 мкг/мл
121
<0,1
Стевиол
2,5 мкг/мл
113
Незначительно
Стевиол
5 мкг/мл
117
Незначительно
Влияние на экспрессию гена
Глобальные эффекты стевиола на экспрессию гена определяли методом транскриптомики, то есть микроматричного анализа DNA.
Полученные данные обрабатывали с помощью программного обеспечения Genedata. При этом получали список генов, которые имели существенно другие уровни экспрессии в обработанных стевиолом волосяных фолликулах (по сравнению с необработанными волосяными фолликулами). Примеры генов, которые были по-разному стимулированы стевиолом и которые включены в эпидермальную физиологию, приведены в Таблице 3. Перечислены только гены, прямо или косвенно участвующие в пролиферации или дифференциации эпидермиса, и которые стимулированы по меньшей мере двукратно. Таким образом, другой аспект данного изобретения - это способ стимуляции по меньшей мере одного гена из перечисленных в Таблице 3, содержащих введенный стевиол и демонстрирующих эффект роста волос.
Таблица 3
Ген
Отношение обработанных стевиолом/необработанных
Значение p
Трансмембранный белок с EGF-подобным и двумя фоллистатин-подобными доменами 2
3,10
0,0001
Фибробластный фактор роста 7 (фактор роста кератиноцитов)
2,91
0,0006
CASP8 и FADD-подобный регулятор апоптоза
2,58
0,0004
Топоизомераза (DNA) II альфа 170 kDa
2,45
0,0004
TIMP ингибитор металлопротеиназы 3
2,32
0,0001
Хемокин (С-Х-С мотив) лиганд 12 (стромальный происходяший из клетки фактор 1)
2,22
0,0005
Интегрин, альфа 6
2,15
0,0004
Коллаген, тип IV, альфа 6
2,04
0,0008
Инсулино-подобный рецептор фактора роста
2,00
0,001
Гены, регулируемые стевиолом, были далее соотнесены с биологическими путями с использованием статистических методов, предоставляемых программным обеспечением Genedata (Фигура 4): модулированная стевиолом экспрессия гена путей развития эпидермиса, эктодермиса и дифференцирования кератиноцитов с высокой статистической достоверностью (обозначенной значением p в Таблице 3), причем другие пути не были существенно затронуты. Эти данные соответствуют наблюдаемому эффекту стевиола на удлинение волосяного фолликула (См. Таблицу 2) и подтверждают тот факт, что стевиол модулирует молекулярные пути, ведущие к изменениям роста волос.
Уровень mRNA некоторых генов-маркеров, участвующих в росте и/или дифференцировании клеток кожи и волосяных фолликул, определяли с помощью RT-PCR (См. Таблицу 4).
Таблица 4
Ген
Обработка волосяного фолликула человека (концентрация)
Относительное изменение (по сравнению с контролем)
Все гены
Контроль (не обработанные)
1
Кератин 6
Стевиол (10 мкг/мл)
1,33±0,11
СОХ-2
Стевиол (1,25 мкг/мл)
0,46±0,17
Интегрин альфа 6
Стевиол (0,б25 мкг/мл)
1,62±0,06
НО-1
Стевиол (1,25 мкг/мл)
0,64±0,08
Инволюкрин
Стевиол (1,25 мкг/мл)
0,51±0,22
Роль этих генов в развитии эпидермиса и, соответственно, развития волос описана и детально рассмотрена, например, Adriani et al. J. Invest Dermatol 120:923-931 ((2003); Grochot-Preczek et al. Thromb Haemost 104 (on-line 10-June 2010); Li et al. Exp Dermat 9:431-438 (2000); Ma et al. Ann Acad Med Singapore 33:784-8 (2004); Neufang et al. Proc Nat Acad Sci (USA) 98:7629-7634 (2001). Таким образом, другой аспект данного изобретения - это способ стимуляции связанного с развитием волос гена, выбранного из группы, состоящей из Кератина 6 или Интегрина альфа-6 или обоих, включающий введение стевиола и наблюдение за ростом волос. Другой аспект данного изобретения - это способ ингибирования СОХ-2 (участвующей в воспалении) и/или НО-1 (участвующей в окислении), включающий введение стевиола и наблюдение за ростом волос.
Пример 5
Действие на кожу мышей
Действие стевиола на экспрессию гена анализировали также на цельной мышиной коже (содержащей также волосяные фолликулы). Для этого мышей содержали на нормальной диете или на диете, обогащенной стевиолом (см. также приведенные выше соответствующие данные). Через 8 недель содержания на диете со стевиолом мышей забивали, кожу выделяли и освобождали от волос. Проводили RT-полимеразную цепную реакцию для выделенных генов с помощью той же техники, что была описана для волосяных фолликулов (см. выше). Удивительно, что были обнаружены те же изменения уровня экспрессии некоторых генов, которые наблюдались в физиологии и гомеостазе кожи. Они перечислены в Таблице 5.
Роль этих генов в биологии кожи была показана Pirila et al. Wound Repair & Regeneration 151:47-5 7(2007); Varani et al. Brit. J Cancer 82:657-665(2000); Fisher et al. J. Invest Dermatol. 117:219-26 (2001); Kaesler et al. Cytokine 17:157-163 (2002); Tanabe et al. J Dermatol Sci 43: 210-213 (2006); Schmutt et al. Horm Metab Res 39:96-105 (2007) для матричных металлопротеиназ, хемокинов, интерлейкина PPAR, соответственно.
Таблица 5
Ген
Диетическая добавка с
% от контроля (на основании кратных изменений)
Любой ген
-
100
ММР-8
стевиол
73±23
ММР-13
стевиол
53±9
СХС10
стевиол
132±50
IL-6
стевиол
130±31
PPAR-5
стевиол
60±37
ММР-8 и ММР-13 обладают коллагеназной активностью. Таким образом, другой аспект данного изобретения - это способ снижения активности ММР-8 и ММР-13, включающий введение стевиола и наблюдение за улучшенным видом волос и/или кожи.
Пример 6
Таблетка
Стевиол
150 мг
Микрокристаллическая целлюлоза
300 мг
Лактоза
300 мг
Кросповидон
10 мг
Ме-стеарат
2,5 мг
Si0<sub>2</sub>
2,5 мг
2
Стевиол, микрокристаллическую целлюлозу и SiO смешивали в миксере в течение 10 мин. Затем добавляли лактозу, и композицию еще перемешивали в течение 10 минут. Кросповидон объединяли с другими ингредиентами и перемешивали в течение 10 минут. Наконец, Mg-стеарат объединяли с другими ингредиентами и перемешивали еще 2 минуты. Смесь спрессовывали в таблетки. Принимали одну таблетку в день утром вместе с завтраком.
Пример 7
Приготовление твердых желатиновых капсул
Ингредиент
Количество на капсулу
Стевиол
100 мг
Лактоза
295 мг
SiO<sub>2</sub>
5 мг
2
Стевиол, лактозу и SiO смешивали в миксере в течение 15 минут и затем наполняли смесью капсулы.
При выпадении волос взрослым можно принимать по две капсулы в день в течение 3 месяцев. Если требуется, доза может быть увеличена до трех капсул в день. Чтобы поддерживать рост волос на постоянном уровне и чтобы предотвратить утоньшение и поседение волос, можно регулярно принимать по 1 капсуле.
Пример 8
Приготовление быстрорастворимого ароматизированного безалкогольного напитка
Ингредиент
Количество (г)
Стевиол
0,5
Сахароза, мелкая пудра
763,1
Аскорбиновая кислота, мелкая пудра
2,0
Лимонная кислота безводная пудра
55,0
Лимонный ароматизатор
8,0
Тринатрийцитрат безводная пудра
6,0
Трикальцийфосфат
5,0
В-каротин 1%CWS из DNP AG, Kaiseraugst, Switzerland
0,4
Полное количество
840
Все ингредиенты смешивали и просеивали через 500 мкм сито. Полученный порошок помещали в подходящий контейнер и смешивали в блендере по меньшей мере 20 минут. Для приготовления питья 105 г полученного смешанного порошка смешивали с водой до получения 1 литра напитка.
Готовый для употребления безалкогольный напиток содержит 15 мг обогащенного экстракта стевиола на порцию (250 мл). Для регулярного поддержания роста волос можно пить по 2 дозы в день.
Пример 9
Приготовление обогащенного непеченого зернового батончика
Ингредиент
Количество (г)
Стевиол
0,3
Вода
54,0
Соль
1,5
Глюкозный сироп
130,0
Инвертированный сахарный сироп
95,0
Сироп из сорбита
35,0
Жир из пальмовых косточек
60,0
Жир для выпекания
40,0
Лецитин
1,7
Затвердевшее пальмовое масло
2,5
Высушенные и нарезанные яблоки
63,0
Зерновые хлопья
100,0
Rice crispies
120,0
Wheat crispies
90.0
Обжареные орехи
40,0
Снятое сухое молоко
45,0
Яблочный ароматизатор 74863-33
2,0
Лимонная кислота
5,0
Полное количество
885
Обогащенный стевиол предварительно смешивали со снятым сухим молоком и помещали в планетарный чашечный миксер. Добавляли зерновые хлопья и рисовые хлопья, и все мягко перемешивали. Затем добавляли сушеные нарезанные яблоки. В одном сосуде смешивали воду и соль в указанных выше количествах (раствор 1). Во втором сосуде смешивали сиропы из глюкозы, инвертированного сахара и сорбита в указанных выше количествах (раствор 2). Жирная фаза содержит смесь жира для выпекания, затвердевшее пальмовое масло, лецитин и эмульсификатор. Раствор 1 нагревали до 110°С. Раствор 2 нагревали до 113°С и затем охлаждали на бане с холодной водой. Затем соединяли растворы 1 и 2. К смеси сахарного раствора и жира добавляли яблочный ароматизатор и лимонную кислоту. Жидкую массу добавляли к сухим ингредиентам и хорошо перемешивали в планетарном чашечном миксере. Массу выкладывали на мраморную доску и вращали до желаемой толщины. Массу охлаждали до комнатной температуры и разрезали на кусочки. Непеченый зерновой батончик содержит 10 мг стевиола на порцию (30 г). Для поддержания устойчивого здоровья и роста волос можно съедать 1-2 порции в день.
Пример 10
Сухой корм для собак, содержащий стевиол
Основной коммерческий корм для собак (например, Mera Dog «Broken», MERA-Tiemahrung GMbH, Marienstraube 80-84, D-47625 Kevelayer-Wetten, Germany) обрызгивали раствором экстракта стевии в воде вместе с антиоксидантами, такими как витамин С (например, ROVIMIX С-ЕС из DSM Nutritional Products Ltd, Kaiseraugst, Switzerland) и их производными, то есть, натрий аскорбил монофосфатом (например, STAY-C  35 из DSM Nutritional Products Ltd, Kaiseraugst, Switzerland) в количестве, достаточном для введения собаке при суточной дозе 4 мг стевиола на кг живого веса. Пищевую композицию высушивали до 90% весового содержания сухого вещества. Корм для собаки со средним весом 10 кг, получающей приблизительно 200 г сухого корма в день, содержит приблизительно 200 мг стевиола на кг корма. Для собак с большим весом пищевую смесь готовят соответственно.
Для постоянного улучшения шкуры собаки ей дают сухой корм, содержащий стевиол, ежедневно, в зависимости от сезона, например, в зимнее время, или при специальных условиях, например, перед выставками, животным можно давать лакомства или капсулы, содержащие стевиол, 2-3 раза в день в течение нескольких недель, чтобы увеличить дозу.
Пример 11
Влажный корм для кошек, содержащий стевиол
Основной коммерческий корм для кошек (например. Happy Cat «Adult», Tierfeinnahrung, Sudliche Hauptstraube 38, D-86517 Wehringen, Germany) смешивают с раствором экстракта стевии в воде вместе с антиоксидантами, такими как витамин С (например, ROVIMIX С-ЕС из DSM Nutritional Products Ltd, Kaiseraugst, Switzerland) и их производными, то есть, натрий аскорбил монофосфатом (например, STAY-C  35 из DSM Nutritional Products Ltd, Kaiseraugst, Switzerland) или смеси три-, ди- и монофосфатных эфиров натрий/кальций L-аскорбата (например, ROVIMIX С-ЕС из DSM Nutritional Products Ltd, Kaiseraugst, Switzerland) в количестве, достаточном для введения кошке 4 мг стевиола на кг живого веса. Корм для кошки со средним весом 5 кг, получающей приблизительно 400 г влажного корма в день, содержит приблизительно 50 мг стевиола на кг корма. Пищевую композицию высушивают до 90% весового содержания сухого вещества.
Для постоянного улучшения шкуры кошки ей дают сухой корм, содержащий стевиол, ежедневно. В зависимости от сезона, например, в зимнее время, или при специальных условиях, например, перед выставками, животных можно давать им лакомства или капсулы, содержащие стевиол, 2-3 раза в день в течение нескольких недель, чтобы увеличить дозу.
Пример 12
Лакмства для собак, содержащие стевиол
Коммерческие лакомства для собак, (например, Mera Dog «Biscuit» for dogs, поставляемые MERA-Tiemahrung GMbH, Marienstraube 80-84, D-47625 Kevelayer-Wetten, Germany) обрызгивают раствором экстракта стевии в воде вместе с антиоксидантами, такими как витамин С (например, ROVIMIX C-EC из DSM Nutritional Products Ltd, Kaiseraugst, Switzerland) и их производными, то есть, натрий аскорбил монофосфатом (например, STAY-C  50 из DSM Nutritional Products Ltd, Kaiseraugst, Switzerland) или смеси три-, ди- и моно-фосфатных эфиров натрий/кальций L-аскорбата (например, ROVIMIX С-ЕС из DSM Nutritional Products Ltd, Kaiseraugst, Switzerland) в количестве, достаточном для введения в лакомство 0,5-5 мг стевиола на г лакомства. Пищевую композицию высушивают до 90% весового содержания сухого вещества. Для снижения выпадения волос и поседения лакомство можно давать 2-3 раза в день либо отдельно, либо в качестве добавки к ежедневному кормлению, содержащему стевиол. Это можно также делать до показаний к увеличению дозы и подготовке блестящей глянцевой шкурки.
Пример 13
Лакомства для кошек, содержащие экстракт Stevia
Коммерческие кошачьи лакомства (например, Whiskas Dentabits для кошек, поставляемые Whiskas, Masterfoods GmbH, Eitzer Str. 215, 27283 Verden/Aller, Germany) обрызгивают водным раствором экстракта Stevia вместе с антиоксидантами, такими как витамин С (например, ROVIMIX С-ЕС из DSM Nutritional Products Ltd, Kaiseraugst, Switzerland) и их производные, то есть натрий аскорбил монофосфат (например, STAY-C  35 из DSM Nutritional Products Ltd, Kaiseraugst, Switzerland) или смеси три-, ди- и монофосфатных эфиров натрий/кальций L-аскорбата (например, ROVIMIX С-ЕС из DSM Nutritional Products Ltd, Kaiseraugst, Switzerland) в количестве, достаточном для введения в лакомства 0,5-5 мг стевиола на г лакомства. Пищевую композицию высушивают до 90% весового содержания сухого вещества. Можно давать от 2 до 4 порций лакомства в день.