Выделение и исследование микрофлоры пищеварительного канала Hirudo medicinalis

рода заболеваниями, существенно отражаются на продолжительности хозяйственного использования коров. К аналогичным выводам пришли также многие исследователи, занимающиеся проблемой повышения хозяйственного долголетия животных (В.М. Кузнецов, 1990; Л.С. Жебровский, А.А. Барышев, 1992; Р. Кер-тиев, 1996 и др.).

Таким образом, продолжительное использование коров является одним из важнейших условий эффек-

тивной селекционной работы в молочном скотоводстве. Темпы генетического прогресса в популяции определяются сроком хозяйственного долголетия коров, воспроизводящих племенной молодняк. Генетическая обусловленность данного признака и его большая внутрипородная вариабельность дает возможность вести селекцию животных на их продуктивное долголетие.

УДК 59

ВЫДЕЛЕНИЕ И ИССЛЕДОВАНИЕ

микрофлоры пищеварительного канала

HIRudo MEDICINALES

Е.В. Рассадина, Е.М. Романова, А.В.Ионова,

О.М. Климина, ФГОУ ВПО «Ульяновская ГСХА»

В последние годы на фоне усиленного внимания к лечению природными средствами повышается интерес и к гирудотерапии. В естественной среде медицинских пиявок остается все меньше, этот вид занесен в Международную Красную книгу. Для искусственного разведения необходимо знание их биологии и экологии. По вопросам бактериальной микрофлоры пиявки сведений в научной литературе практически нет.

Материалы и методы

Целью данной работы было исследование эндогенной микрофлоры, обитающей в кишечнике медицинской пиявки.

Для исследования использовались 30 медицинских пиявок, которые к моменту проведения эксперимента находились в состоянии голода в течение месяца. У них брались пробы содержимого кишечника. Исследования проводились на базе двух кафедр: биологии, ветеринарной генетики, паразитологии и экологии и микробиологии, эпизоотологии, вирусологии и ВСЭ Ульяновской государственной сельскохозяйственной академии.

Анализировался характер роста колоний микроорганизмов, выделенных из кишечника пиявок, на твердой и жидкой средах. Для видовой идентификации микроорганизмов использовались диагностические тесты.

Результаты и обсуждение

В пробах из кишечника пиявок были обнаружены A. hydrophila и Proteus mirabilis. A. hydrophila представляет собой при микроскопировании подвижные грамотрицательные палочки. Это бактерия-симбионт, постоянно обитающая в кишечном канале пиявки. Симбиотические взаимоотношения этих организмов объясняются отсутствием у пиявки эндогенных ферментов, участвующих в переваривании белков и углеводов.

A. hydrophila встречается не только в кишечном

тракте медицинской пиявки, данный вид бактерий широко распространен в водной среде и является патогенным для рыб, амфибий и млекопитающих, может вызывать заболевание аэромоноз (Сидоров М.А., Скородумов Д.И., Федотов В.Б., 1995).

Механизмы процесса пищеварения у пиявки остаются практически неизученными. Известно, что в переваривании крови участвуют экзопептидазы, секретируемые стенкой кишечника, и эндопептидазы, продуцируемые микрофлорой пищеварительного канала пиявки. Известно также, что микрофлора медицинской пиявки включает бактерию-симбионта А. hydrophila или, по другим данным, А. veronii, которая играет основную роль в переваривании белков, жиров и углеводов. Микроорганизмы компенсируют отсутствие у пиявок эндогенных ферментов, таких, как эндопептидазы, липазы и амилазы. Исследование свойств бактерии - симбионта медицинской пиявки показало, что она является носителем антисвертывающей активности. Есть гипотеза, что выделяемое бактерией антикоагулирующее вещество, наряду с секретом слюнных желез, участвует в поддержании жидкого состояния насосанной крови (Никонов Г.И., 1998).

Микрофлора кишечника пиявки препятствует загниванию крови благодаря своим бактериостатиче-ским свойствам. Бактерицидное и бактериостатиче-ское действие содержимого пищеварительного канала пиявки также проявляется в способности патогенных организмов сохранять жизнеспособность при заражении ими пиявок: возбудители брюшного тифа охраняются в организме пиявки в течение 30 дней, паратифа В - 4 месяцев, сибирской язвы - 14-17 дней, туберкулеза - 28 дней, золотистый стафилококк сохраняет жизнеспособность в организме медицинской пиявки 3-10 дней, гемолитический стрептококк - 1 месяц (Шишкина И.Д., 1953).

1. П-:-ТСч]ч таилор ф^ХОГкПЯСКИХИ^» Н«И«С№ХГфНЗЖКОЕ A ityärepit&

Тнст XSC СТfcТр-Jт Пр оЕхж

1 2 3 4 5 G 7 3 P 10

Поллам пасть hl H H H H H hl hl H H

ÜlflEEtDDD Гр ELUТ - - - - - - - - -

F'iежп.вл ВГ.ЩПЗТ ы d M hl d d hl M

ГПОІШТ hl H lbl lbl Ibl lbl hl hl H H

raiLTmf hl H H H H H hl hl H H

лпаилт hl H - - lbl lbl hl hl d d

лпгътеззт hl H d d H H hl - H

тратппзт hl H H H H lbl - - H

hl Іь1 lbl lbl H lbl hl hl H H

UIJUBL hl H H H H H hl hl H H

¿жі-чтшпт hl H lbl H H lbl hl - H

итшшт L L L L L L L hl Ibl H

мот erran f - - - - - - hl - -

L[1 EX1, .'J EVI hl - - - - hl - - -

CT П Л] П  [D П hl M M hl hl hl hl 14 hl M

Утіпвапіл патлата - - - - - - - -

rfiflCBD hl H H H H hl hl - H

Фапз: — ГТ [DO. DT ^ID - - - - M H - - -

ГТ[ .итч їв: : — Ll-I Lili штилі лісп оашніпіьои^ ' 'd " — [і- 'í!?Й штилі ли і опо:іітопь  ы і,

М" — 7Й-И1І штплілшз аапін imuiut, " — QÛ-1 Ш"Й шішілаї аапа-і втоіиіис

d целим можно скнкпь. что хотя и существует возможность передачи пиявками возбудителей от одного животного другому, но только в том случае, если пиявка после зараженного животного немедленно приставлялась к здоровому. При суточном перерыве между кормлениями на больном и здоровом животных возбудитель не передается (Андреев П.Н., 1923).

A. hydrophila бактерия-симбионт, постоянно обитающая в кишечном канале пиявки и обеспечивающая процессы пищеварения и бактерицидное действие пиявочного секрета (постоянная бактериофлора играет важную превентивную роль против поселения в кишечном тракте других бактерий).

Выделенные нами штаммы бактерий A. hydrophila хорошо росли на простых питательных средах: МПА, МПБ, среде Эндо.

При посеве на МПА культуры образовывали выпуклые, округлые, блестящие, полупрозрачные с беловато-желтым оттенком колонии. На МПБ вызывали равномерное помутнение с образованием сероватосеребристой поверхностной пленки и хлопьевидного серого осадка.

Изучение ферментативных свойств бактерий рода Aeromonas способствовало установлению их видовой принадлежности. Все выделенные нами штаммы принадлежали к виду A. hydrophila, они не разжижали желатину, выделяли сероводород, ферментировали сахарозу, глюкозу, лактозу и маннит. Результаты изучения биохимических свойств штаммов аэромоноса

представлены в таилице і.

Имеются многочисленные данные о присутствии A. hydrophila в продуктах животноводства, питьевой воде и продуктах моря.

Присутствие A. hydrophila в пищеварительном канале медицинской пиявки обусловливает риск заражения пациентов при гирудотерапии.

В целях профилактики аэромоноза при гирудоте-рапии предложена обработка места укуса антибиотиками, а также профилактическая антибиотикотерапия пациентов.

Кроме данного вида бактерий в кишечниках всех пиявок был также обнаружен P. mirabilis. Это грамотрицатель-ные подвижные аэробные палочки, способные вызывать заболевания у человека и животных только в тех случаях, когда выходят за пределы своего нормального места обитания (кишечный тракт). Протеи нередко обнаруживают при хронических инфекциях мочевыводящих путей, а также при сепсисе, пневмониях и очаговых поражениях у ослабленных больных.

Выделенные нами штаммы бактерий P. mirabilis хорошо росли на простых питательных средах: МПА, среде Эндо.

При посеве на МПА культуры быстро покрывали (в течение 18-24 часов) всю поверхность агара. На среде Эндо через 12 - 18 часов бактерии группы протея росли в виде бесцветных наложений с характерным запахом сероводорода. На полужидком агаре культуры давали обильное помутнение серовато-белого цвета с наличием на дне пробирки осадка, легко разбиваю-

TüüniLQü 2. По™ іатехі™ op фо ж атестата и (и^тиичмчта признак™ Л .нсго&й^г, хшдоха-тогоиэ тііют-іига ледр^ци^^АпипЕЖ

Тест гаи страт Ірм Ьш

1 î 3 4 5 ç 7 Б S 10

Подшвсп + + + + + + + + + +

i^UlAZt Гр-їіу - - - - - - - - - -

Рьлтгпт тл- G-HWZV PI Р1 [+1 [+1 [+1 Р1 П ГІ [+1

паїюзу - - - - - - - - - -

ТТ. ТТм ту і і і - - - 1 1 і -

T.h 1   L  - - - 4 - 4 - - - 4

T.hTTWY. ïy і - - - - - - 4 - -

ЕШ'71/ + + + + + + + + + +

ШЕШ - - - - - - - - - -

T.hTATPiy ЕЧ ЕЧ [+1 + + + + [1 [1 [+1

дццду н н [+] н [+] [+] н [і [і [+]

сиро ж. Д'р:-Д н н [+] [+] [+] т [і [і [+]

Рьизца с жьішр'їож - - і 4 - - і - - 4

Фоте - TTj.-.ñT.y р.*. і - - - 4 4 - - - і

ГТ [ .и тч  ев і : |-'1 — Ll-І Lili штилі.'jeu аапіміїчгьпи^ ' У11 — Ї [i- "i15"ü шталілпз m п  :«  таї ь  ы і,

' |l]m — "Jü-Hili шTnлш з аапін ітаїиис,11 L" — VÚ- І Líllí штплілшз оіпіі ішиис

ідеї о с я при встряхивании. гс 'Ллы;иы изучения иио-химических свойств штаммов протея представлены в таблице 2.

Изучение ферментативных свойств бактерий рода Proteus способствовало установлению их видовой принадлежности. Все выделенные нами штаммы принадлежали к виду P. mirabilis, они разжижали желатину, выделяли сероводород, ферментировали сахарозу, практически не ферментировали глюкозу, лактозу и маннит.

Выводы

1. В пробах крови из кишечника H. medicinalis были

оинаружены иактерии родив легошопаь ( вид м.. hydrophila) и Proteus (вид Р. mirabilis) из семейства Enterobacteriaceae.

2. A. hydrophila - постоянный обитатель кишечного тракта пиявки, находящийся с ней в симбиотических отношениях.

3. В целях профилактики аэромоноза при гирудоте-рапии необходимо обрабатывать места укуса антибиотиками, а также проводить профилактическую антибиотикотерапию пациентов.

Литература

1. Андреев П.Н. О сохраняемости микроорганизмов и иммунных тел в пищеварительном канале пиявки и о роли последних в распространении заразных заболеваний// Архив научно-практической ветеринарии, 1923. - №1. - С. 54-59.

2. Никонов Г.И. Медицинская пиявка. Основы гирудотерапии. - СПб.: СДС, 1998. - 294 с.

3. Определитель бактерий Берджи. Т.1.: Пер. с англ./Под ред. Дж. Хоулта и других - М.: Мир, 1997. - 257 с.

4. Покровский В.И. Медицинская микробиология - М., 1999. - 350 с.

5. Сидоров М.А., Скородумов Д.И., Федотов В.Б. Определитель зоопатогенных микроорганизмов - М.: Колос, 1995. - 250 с.

6. Шишкина И.Д. Влияние медицинских пиявок на микроорганизмы и на организм человека: автореф. дис. ... канд.