ПРОТИВОРАКОВОЕ ЛЕКАРСТВЕННОЕ СРЕДСТВО В ФОРМЕ CAPE-НАГРУЖЕННЫХ МИКРОВЕЗИКУЛ НАПРАВЛЕННОГО ДЕЙСТВИЯ И СПОСОБ ЕГО РАЗРАБОТКИ

1. Противораковое лекарственное средство, полученное посредством нагрузки лекарственным средством (CAPE (фенетиловый эфир кофеиновой кислоты) клеточных везикул, которые образуются путем изменения таких факторов, как температура 37°С, рН, 5% диоксид углерода и среда DMEM, F12, RPMI, которые обеспечивают рост клеток, в дополнение к собственным условиям роста клеток (стволовые клетки, клеточные линии, праймерные клетки, раковые клетки, клетки, полученные из тканей).
2. Противораковое лекарственное средство, полученное посредством нагрузки лекарственным средством (CAPE (фенетиловый эфир кофеиновой кислоты) клеточных везикул, которые образуются путем обработки клеток (стволовые клетки, клеточные линии, праймерные клетки, раковые клетки, клетки, полученные из тканей) другими химическими веществами (факторы роста, такие как bFGF, EGF, NGF; гормоны, такие как мелатонин, инсулин, лактоферрин; витамины, такие как аскорбиновая кислота, фолиевая кислота и минералы, такие как кальций, магний, бор) в дополнение к собственным условиям роста клеток.
3. Противораковое лекарственное средство по п.1 или 2, которое используют для оказания цитотоксического действия на раковые клетки.
4. Противораковое лекарственное средство по п. 3, где используют микровезикулы, которые продуцируются клетками, специфичными для определенного типа рака, посредством дифференциации клеток в клетки ткани, где наблюдается указанное образование опухоли, которые получены на 12-14 сутки, а не на 25-30 сутки.
5. Противораковое лекарственное средство по п. 4, где микровезикулы, которые продуцируются клетками, поскольку специфические характеристики клеток SHSY5Y, которые приобретаются путем дифференцировки стволовых клеток, подвергаемых дифференцировке нервных клеток, передаются на ранней стадии дифференцировки нервов путем дифференцировки в течение 12-14 дней, а не 25-30 дней, используются для загрузки CAPE в очень низких концентрациях.
6. Противораковое лекарственное средство по п. 5, где CAPE загружают в диапазоне от 5 мкМ до 100 мкМ в клеточные микровезикулы, которые продуцируют с помощью нервных клеток, с целью разработки противоракового лекарственного средства в форме микровезикул, нагруженных CAPE, целенаправленно действующего на нейробластому SH-SY5Y.
7. Способ получения противоракового лекарственного средства в форме микровезикул, нагруженных CAPE, целенаправленно действующего на нейробластому SH-SY5Y, по любому из предшествующих пунктов, включающий стадии
посев (культивирование) стволовых клеток кожи в среду,
осуществление протокола специализации, который предусматривает, что клетки в культуральной среде, которые достигли достаточной конфлюентности (70-80)%, высевают в 6-луночные планшеты для культуры клеток, придавая таким образом клеткам свойство распознавания нейробластомы, обеспечивая для них возможность стать нацеливаемыми,
получение исходного раствора путем растворения CAPE (фенетиловый эфир кофеиновой кислоты) в DMSO (диметилсульфоксид),
осуществление выделения микровезикул из специализированных клеток кожи,
добавление CAPE в микровезикулы,
отделение микровезикул, нагруженных CAPE, от CAPE, который присутствует в растворе в свободном состоянии и не загружен в микровезикулу,
получение противоракового лекарственного средства в форме микровезикул, нагруженных CAPE, целенаправленно действующего на нейробластому SH-SY5Y, которое является конечным продуктом.
2
8. Способ получения противоракового лекарственного средства по п. 7, где стволовые клетки кожи, клетки SH-SY5Y, PNT-1A, PC-3 предпочтительно культивируют в среде DMEM (среда Игла в модификации Дульбекко), содержащей 10% эмбриональную бычью сыворотку и 1% PSA, в инкубаторах клеточных культур, предпочтительно при 37°С и 5% CO.
9. Способ получения противоракового лекарственного средства по п. 7, где во время стадии специализации клеток в культуральной среде, получают нейробазальный раствор, предпочтительно содержащий 10 нг/мл bFGF, 10 нг/мл EGF, 1% добавку B7, 1% ITS (инсулин, трансферрин и селен), 10% глютамин и 1% PSA, а затем применяют протокол специализации путем введения этого специализированного раствора в клетки, посеянные в 6-луночные планшеты для культивирования клеток, один раз в два дня в течение 12-14 дней.
10. Способ получения противоракового лекарственного средства по п. 7, где исходный раствор с конечной концентрацией приблизительно 50000 мкМ получают растворением 45,75 мг CAPE в 3,22 мл DMSO (диметилсульфоксид).
11. Способ получения противоракового лекарственного средства по п. 7, где на стадии выделения микровезикул из специализированных клеток кожи раствор, собранный из культуральной среды, центрифугируют при 300 g в течение 10 мин для удаления ненужных клеток.
12. Способ получения противоракового лекарственного средства по п. 11, где супернатант, оставшийся в верхней части пробирки после центрифугирования, переносят в новую пробирку и центрифугируют при 14000 g в течение 30 мин для удаления возможных компонентов клетки.
13. Способ получения противоракового лекарственного средства по п. 11, где супернатант, оставшийся в верхней части пробирки после центрифугирования, переносят в новую пробирку и добавляют 1/2 объема раствора A и инкубируют в течение одного дня при +4°С.
2
14. Способ получения противоракового лекарственного средства по п.13, где после 1 дня инкубации, после центрифугирования при 16000 g в течение 1 часа осадок растворяют в дистиллированной воде (dHO).
15. Способ получения противоракового лекарственного средства по п. 7, где загрузку CAPE в микровезикулярную структуру осуществляют путем инкубации при комнатной температуре.
16. Способ получения противоракового лекарственного средства по п. 15, где раствор микровезикул добавляют к 50 мкМ раствору CAPE, полученному в 2 мл PBS, так что конечная концентрация составлет 100 мкг/мл, и смесь инкубируют в течение 20 мин при комнатной температуре (25°C).
2
17. Способ получения противоракового лекарственного средства по п. 16, где осадок, нагруженный веществом, осажденный для получения везикул, нагруженных веществом, растворяют в дистиллированной воде (dHO).