Дифференциальная диагностика туберкулеза с применением хемилюминисцентного метода

на мясо при плотности посадки до 21 -дневного возраста 14 гол./м2 и с последующей пересадкой до конца выращивания по 7 гол./м2 была выше, чем в базовом варианте на 16,5 % при уровне рентабельности 17,67

%. Сокращение срока выращивания утят до 42-днев-ного возраста позволило снизить общие затраты на производство мяса на 16,02 %, увеличить прибыль на 26,6 % и повысить уровень рентабельности до 26,75 %.

Литература.

1. Авзалов, Р.Х., Гущин П.Я. Этология животных.; под. ред. П.Я. Гущина. — Уфа: Издательство БашГАУ, 2005. — С. 194-246.

2. Антипова J1., Бердников В., Петров ОЛлияние способа содержания цы/ыят-бройлеров на качество мяса. // Птицеводство. — 2005. — № 5. - С. 8-10.

3. Буяров, B.C. Пути совершенствования технологии производства мяса бройлеров// Птица и тпицепродукты. — 2004. — № 1. — С. — 11-

15.

4. Белякова Л., Кочетова 3. Продуктивность перепелов при разной плотности посадки. // Птицеводство. — 2006. — № 2. — С. 21-22.

5. Житенко В.П., Серегин ИГ., Никитченко В.Е. Ветеринарно-санитарная экспертиза и технология переработки птицы — М.: ООО «Аквариум ЛТД», 2001. — 352 с.

6. Кочиш ИМ, Петраш М.Г., Смирнов С.Б. Птицеводство. — М.: Колос, 2004. — 407с.

7. Маннапова Р.Т., Седых ТА., Катюк Е.А. Естественная резистетность утят кросса «Благоварский» в зависимости от плотности посадки // Достижения науки и техники АПК. — 2007. — № 11. — С. 17-18

8. Саитбаталов Т.Ф. Утководство в Республике Башкортостан (селекция и технология). — Уфа: Гилем, 1977. — 264 с.

9. Саитбаталов Т.Ф., Гайсин М.Х., Фаррахов А.Р. Водоплавающая птица Республики Башкортостан: перспективные направления // Птица и ттщепродукты. — 2005. — № 6. — С. 13-15.

10. Филоненко В.И., Салеева И.П., Алексеев Ф.Ф. Химический состав мяса брошеров в зависимости от возраста. //Птица и птицепродук-ты. - 2006. - № 5. - С. 20-24.

OPTIMIZATION OFTIGHTNESSANDTERMSOFGROWTH OF DUCKS ON MEAT T.A. Sedykh, R.R.Gadiev, R. S. Gizatullin

Summary. Are studied productive and meat qualities of ducks of cross «Blagovarsky» at various tightness of ducks on square meter of the area of a farm and terms of growth. The optimum tightness and terms of growth of ducks in conditions intensive technologies production of meat is revealed.

Key words: he ducks of cross «Blagovarsky», tightness of ducks, terms of growth, intensive technologies production of meat.

УДК 619:317 - 619:616.982.2

ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНАЯ ДИАГНОСТИКА ТУБЕРКУЛЕЗА С ПРИМЕНЕНИЕМ ХЕМИЛЮМИНИСЦЕНТНОГО МЕТОДА

В. Г. ОЩЕПКОВ, доктор ветеринарных наук, директор

Л.А. TAJIJIEP, кандидат ветеринарных наук, старший научный сотрудник

Г.М. ДЮСЕНОВА, кандидат биологических наук, научный сотрудник

Т.А. ВАССИМИРСКАЯ, аспирант Е.Ю. СЕКИН, кандидат ветеринарных наук, научный сотрудник

E-mail: vniibtg@rambler.ru

Резюме. Приведены результаты исследований, показывающие высокую эффективность применения хе-милюминесцентного и «культурально-генетического» методов для экспресс-диагностики туберкулеза у крупного рогатого скота.

Ключевые слова: туберкулез, диагностика, патогенные микобактерии

Сегодня основные методы массовой диагностики туберкулеза у сельскохозяйственных животных, в том

числе и крупного рогатого скота, — аллергический, патологоанатомический и бактериологический [1,2]. Их чаще применяют в комплексе и сроки постановки диагноза в этом случае составляют один-три месяца. Кроме того, надежность таких методов часто колеблется в пределах 50...70 % [2, 3, 4 и др.].

В то же время, имеющиеся достижения биофизики, иммунологии и молекулярной биололии свидетельствуют, что надежность диагностики большинства инфекционных болезней человека и животных, в том числе и туберкулеза, можно существенно повысить, а сроки исследований сократить. В частности, это достигается путем измерения биохемилюменес-ценции (БХЛ), то есть сверхслабого квантового излучения (свечения) иммунокомпетентных клеток и плазмы крови, тканевых макрофагов и других биоструктур.

Основываясь на этих достижениях современной биоинженерии, было решено создать такие методы диагностики туберкулеза, которые позволяли бы определить диагноз в течение трех-семи или даже одних суток.

Для этого потребовалось изучить динамику хеми-люминесценции (ХЛ) у различных структур иммунной системы здоровых и зараженных возбудителями туберкулеза (больных) животных, разработать ХЛ-ме-тод ранней диагностики туберкулеза и апробировать его в производственных условиях.

В качестве объектов исследования для разработки ХЛ-метода мы использовали клетки и плазму (сыворотку) крови лабораторных животных (кролики, морские свинки) и крупного рогатого скота разного возраста (телята, коровы).

В процессе поиска приемлемых для научных и практических целей методик хемилюминесцентных

ны этапы выделения и исследования клеток крови, учитывали лишь XJ1 биоструктур сыворотки.

На первом этапе исследований, проведенном на лабораторных животных, было установлено, что у морских свинок и кроликов, после заражения возбудителями бычьего и человеческого видов (М. bovis и М. tuberculosis), абсолютная частота ХЛ лейкоцитов резко возрастает. В первые 3...7 дней после введения возбудителей она увеличилась в 3-10 раз, через

14...21 дней - в 15...18 раз. Кконцу первого месяца (26...28 дни) активность XJI лейкоцитов несколько снижается, но все же в 3-7 раз превышает велечину этого показателя у здоровых животных (табл. 1).

исследований были изучены четыре варианта (базо- Таблица 1. Абсолютные значения максимальных показателей ХЛ лейкоцитов крови выйитримодифицирован-М0Рских свинок, экспериментально зараженных М.Ьото штЛ4, при ее стимуляции ных) различными антигенами микобактерий (имп./сек.*), М+ш

При базовом варианте

3-й день 7-й день 14-й день 21-й день 28-й день Контроль

пробы крови брали из яремной вены и стабилизировали ее цитратом натрия или трилоном Б. После доставки проб в лабораторию из крови выделяли полиморфноядерные лейкоциты,добавляли люминол и опсони-зированный зимозан, а затем определяли жизнеспособность и функциональную активность (способность к хемилюминесценции) выделенных лейкоцитов. В заключение в исследуемую популяцию лейкоцитов вносили индуктор специфической хемилюминисцен-ции (антиген микобактерий). Для учета активности (частоты импульсов в секунду) ХЛ использовали 36-канальный хемилюминометр СЬ-3604 с соответствующей автоматической программой управления и регистрацией цифровых и графических показателей на персональном компьютере (ПК).

В лучшем из модифицированных вариантов в качестве объекта исследования использовали сыворот-

Сроки взятия крови после заражения Опытная группа

молекулярный антиген патогенных микобактерий (ВНИИБТЖ) поверхностные антигены живых микобактерий БЦЖ поверхностные антигены инактивированных микобактерий БЦЖ

6882,33±3323,63 14780*4701,74 23433,16±2669,7 38605,5±10,308,4 10357±6589,0 1514±362

16627,6±9815,9 9306,8±1109,76 31608,6±2002,67 43772,5±14110,5 не исследовали 1756±566,0

7881,3±348,91 34936,33±11560,2 47213±11832,76 43371 ±7978,3 16673±1572,0 2040±243,71

ку крови. В этом случае естественно, были исключе-

* число импульсов ХЛ в течение одной секунды

Эта закономерность подтвердилась при экспериментальном заражении телят четырех-пятимесячно-го возраста (см. рисунок) и коров старше трех-четы-рех лет.

Исследования, проведенные в отдаленные сроки (3...6 месяцев и более) после заражения, показали, что у больного (зараженного М.bovis или М.tuberculosis) крупного рогатого скота, в сравнении со здоровым, уровень XJ1 остается увеличенным минимум в 2-5 раз. Время непосредственно ХЛ исследования (без учета времени на доставку проб) было доведено до четырехшести часов.

Цель наших исследовани й—производственная ап-

а) ^ ^ не« ледевания

Рис. Т. Графическое изображение химилюминесцениии (имп/с) лейкоцитов подопытного теленка № 001: а) до за заражения возбудителем туберкулеза; б) на 28 день после заражения возбудителем туберкулеза; НСФ — неспецифическая фаза ХЛ (после внесения люминола и зимозана), Аг - внесение в исследуемую пробу лейкоцитов антигена, извлеченнного из патогенных бактерий (начало специфической фазы ХЛ - СПФ), К - контроль (ХЛ лейкоцитов здорового теленка).

робация разработанного экспресс-метода.

Условия, материалы и методы. Оценку эффективности базового («клеточного») ХЛ-метода, в котором в качестве объекта использовали клетки (лейкоциты) извлеченные из проб крови животных, проводили в трех скотоводческих хозяйствах: ЗАО «Дружба» и ЗАО «Азовское» в Омской области и ОАО «Неудачно» в Новосибирской области. Особенность этих предприятий в том, что они считаются благополучными по туберкулезу, но периодически при плановых обследованиях на туберкулез 2...5 % животных показывают положительные аллергические реакции на внутрикожное введение диагностического ППД-туберкулина, то есть считаются подозрительными в заболевании туберкулезом.

ХЛ-метод применяли в качестве дополнительно ускоренного дифференциального теста для уточнения инфекционного статуса животных, реагирующих на ППД-туберкулин. При этом его сравнивали с другими традиционными тестами (патологоанатомическим, бактериологическим, пальпебральная проба ППД-туберкулином), рекомендуемыми в таких сомнительных случаях.

Производственную апробацию «сывороточного» варианта ХЛ метода, проводили в 7 скотоводческих хозяйствах Омской, Новосибирской и Ивановской областей, где его применяли для обследования только реагирующих на ППД-туберкулин коров и молодняка (для уточнения специфичности показаний аллергической пробы).

Результаты и обсуждение. В ходе исследований было установлено, что оба варианта ХЛ-метода отличаются высокой специфичностью и чувствительностью. Так, при проверке сравнительной эффективности «клеточного» ХЛ-метода положительные результаты при использовании внутрикожной аллергической пробы были зафиксированы у 3,3 % животных, пальпебральной аллергической пробы — у 0,9 %. Однако в случае применения остальных методов, в том числе и хемилюминисцентного, они не подтвердились (табл. 2). При этом срок получения окончатель-

ного результата при использовании внутрикожной и пальпебральной аллергических проб составил 72часа, бактериологического метода — 20...40 суток, патологоанатомического — 3...6 часов после убоя животных, «клеточного» ХЛ-метода—4...6 часов. Крометого, для

диагностики с помощью патологоанатомического метода 15 животных, имевших положительные аллергические кожные или пальпебральные реакции было подвергнуто выборочному убою.

На основании полученных данных было сделано заключение, что обследованные хозяйства действительно благополучны по туберкулезу, а периодически проявляющиеся аллергические кожные реакции на диагностический ППД-туберкулин относятся к «неспецифическим», то есть вызываются не возбудителем туберкулеза (М. bovis), а другими факторами бактериального или небактериального происхождения.

В целом «клеточный» ХЛ-метод, в сравнении с другими, показал заметное преимущество либо в специфичности (внугрикожная и пальпебральная пробы ППД-туберкулином), либо во времени постановки диагноза (бактериологический), либо в экономической значимости (патологоанатомический).

При проверке «сывороточного» ХЛ-метода в 4 хозяйствах, где уровень хемилюминесценции в 2-5 раз и более превышал показатели контрольных проб (от здоровых животных), наличие туберкулеза было доказано также патологоанатомическим и бактериологическим методами. При этом ХЛ-методом заболевание было подтверждено у 79,9 % животных, при совпадении результатов с бактериологическим методом в 94... 100 % случаев и превышении информативности патологоанатомического — на 13,3 %.

В 3 хозяйствах с неясной эпизоотической ситуацией уровень хемилюминесценции лейкоцитов у животных, давших выраженную аллергическую реакцию на ППД-туберкулин (124 гол.), был такой же, как и у здоровых. Комплексом традиционных методов (патологоанатомический + бактериологический) туберкулез также был исключен, хотя и в более поздние сроки (в течение 2...3 месяцев). Все прореагировавшие на ППД-туберкулин коровы были оставлены в стаде и от них продолжали получать молоко и телят. При сравнении технологичности «клеточного» и «сывороточного» вариантов ХЛ-метода предпочтение, по-нашему мнению, следует отдать второму, так как выделение лейкоцитов из проб крови требует определенного навыка и умения, а пригодность их для диагностических исследований не превышает 3...4 часов, тогда как сыворотку, получаемую обычным способом отстаивания, можно использовать в течение

3...5 суток.

Выводы. По результатам производственного испытания XJI-метода видно, что специфичность (надежность) обоих вариантов («клеточный» и «сывороточный») его применения выше, чем у широко используемой для массовой диагностики внутрикожной

Таблица 2. Диагностическая эффективность (значимость) «клеточного» ХЛ метода, примененного в хозяйствах с неясной обстановкой по туберкулезу

Наименование хозяйства Чис- ло, гол Положительные рез ультаты при использовании

внутри- кожной аллерги- ческой пробы пальпеб- ральной аллерги- ческой пробы патолого- анатоми- ческого метода бакте- риологи- ческого метода* ХЛ- ме- тода

ЗАО «Дружба» 1748 79 2 - - -ЗАО «Азовское» 1970 19 5 ОАО «Неудачино» 836 53 7 - - -Итого 4554 151

* исследовано 15 биоматериалов

аллергической пробы ППД-туберкулином и равнозначна патологоанатомическому и бактериологическому методам. Причем сроки постановки диагноза в случае применения ХЛ-метода значительно (в 20-40 раз) меньше, чем при бактериологическом методе. А по сравнению с патологоанатомическим методом, при использовании ХЛ-метода не требуется убоя исследуемых животных.

Разработанный во ВНИИБТЖхемшиоминесцен-тный метод обладает необходимой специфичностью и чувствительностью и может быть использован при ранней диагностике туберкулеза у крупного рогатого

скота. Он позволяет в 78...100 % случаев надежно поставить диагноз через 4... 6 часов после доставки в лабораторию проб нитрированной крови или сыворотки крови от животных, подлежащих исследованию.

Хемилюминисцентный метод можно использовать в любых производственных ветеринарных лабораториях, имеющих хемилюминометр. Особенно перспективно его применение для дифференциации «истинных» аллергических реакций на ППД-туберкулин от «неспецифических», часто проявляющихся у крупного рогатого скота на благополучных по туберкулезу фермах.

Литература

1. Наставление по диагностике туберкулеза животных (утв. Департаментом ветеринарии МСХ РФ, 23.03.2002 г.), Москва, 2002. - 22 с.

2. Донченко А.С., Овдиенко Н.П., Донченко НА. Диагностика туберкулеза крупного рогатого скота. - Новосибирск, 2004. — 309 с.

3. Донченко В.II., Ионина С.В. Скорость и интенсивность роста М. bovis (uim.8 ВИЭВ) на различных питательных средах/ Материалы Всероссийской научной конференции по проблеме хронических инфекций (16-17 мая 2001г.): Сборник научных трудов. СО РАСXII ВНИИБТЖ. - Омск - 2001. - С.159-160.

4. Найманов А.Х., Овдиенко Н.П., Осипова Е.П. и др. ПЦР при диагностике туберкулеза крупного рогатого скота// Ветеринария. - 2004. - №10. - С. 19-23.

DIFFERENTIAL DIAGNOSIS OF TUBERCULOSIS WITH APPLICATION OF CHEMILUMINESCENT

METHOD

V.G. Oschepkov, L.A. Taller, G.M. Dyusenova, T.A. Vassimirskaya, E.Yu. Sekin

Summery. There are given results of researches showing high efficiency of application chemiluminescent and «culture-genetic» methods for express-diagnostics of tuberculosis at cattle.

Key words: tuberculosis, diagnostics, pathogenic mycobacterium

УДК 619:616.98

ИЗУЧЕНИЕ ВЛИЯНИЯ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ПРЕПАРАТОВ НАИММУНОБИОХИМИЧЕСКУЮ РЕАКТИВНОСТЬ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА

В. В. ХРАМЦОВ, доктор ветеринарных наук, зав. лабораторией

H.A. ОСИПОВА, кандидат биологических наук, старший научный сотрудник

Т. А. АГАРКОВА, кандидат ветеринарных наук, старший научный сотрудник

Н.Г. ДВОЕГЛАЗОВ, кандидат ветеринарных наук, научный сотрудник ИЭВСиДВ

E-mail: agarkova_t@ngs.ru

Резюме. Изучено влияние биологически активных препаратов (БАП), прежде всего випраксина, на им-мунобиохимическую реактивность животных. Ключевые слова: иммуномодуляторы, биологически активные препараты, альнорин, вестин, корригин, випраксин, иммунобиохимическая реактивность, антигенная нагрузка, интактный, гемопоэз.

В условиях изменения окружающей среды увеличивается влияние биотических и абиотических факторов на адаптивные реакции организма животных, зависящие главным образом от резервов их иммун-

ной системы, основная задача которой — контроль постоянства внутренней среды и защита от экзо- и эндоантигенов [11,12].

Согласно сведениям из специальной литературы, у животных чаще всего встречается функциональная иммунологическая недостаточность, когда организм не в состоянии противодействовать антигенной нагрузке, вызванной, как правило, ассоциациями бактерий, грибов, вирусов и других биологических агентов [3].

При лейкозе крупного рогатого скота также развивается иммунологическая недостаточность, обусловленная влиянием ВЛКРС [5, 6, 9]. Это определяет необходимость количественной или качественной коррекции иммунной системы, в том числе с помощью биологически активных препаратов.

Испытания иммуномодулирующих средств, проведенные ранее при инфекционных и незаразных болезнях животных, показали разную степень их эффективности [1,4, 13].

Цель наших иследований — дальнейшее изучение свойств и характеристик биологически активных препаратов, а также возможности их обоснованного и рационального использования в системе противоэпи-