СЛИТЫЙ БЕЛОК И ЕГО ПРИМЕНЕНИЕ

1. Слитый белок, содержащий:
первый связывающий домен, специфически связывающийся с PD-L1; и
второй связывающий домен, специфически связывающийся с белком CD47;
где указанный второй связывающий домен содержит мутанта варианта 1 SIRPα человека, указанный мутант содержит замену, делецию или добавление аминокислотного остатка в одном или более положениях от положения 33 до положения 149 по сравнению с последовательностью, приведенной в SEQ ID NO: 29.
2. Слитый белок по п.1, где указанный мутант содержит замены аминокислот в одном или более аминокислотных остатках, выбранных из группы, состоящей из: I61, V63, E77, Q82, K83, E84, V93, D95, L96, K98, N100, R107, G109 и V132.
3. Слитый белок по п.2, где указанный мутант содержит замены аминокислот в аминокислотных остатках, выбранных из группы, состоящей из:
(1) I61, V63, E77, E84, V93, L96, K98, N100 и V132;
(2) I61, E77, Q82, K83 и E84;
(3) I61, V63, K83, E84 и V132;
(4) I61, E77, E84, R107 и V132;
(5) I61, V63, E77, K83, E84 и N100;
(6) I61, E77, Q82, K83, E84 и R107;
(7) I61, E77, Q82, E84, V93, L96, N100, R107, G109 и V132;
(8) I61, E77, Q82, K83, E84 и V132;
(9) I61;
(10) I61, D95, L96, G109 и V132;
(11) I61, D95, L96, K98, G109 и V132;
(12) I61, E77, E84, V93, R107 и V132;
(13) E77, L96, N100, G109 и V132;
(14) I61, V63, Q82, E84, D95, L96, N100 и V132;
(15) I61, E77, Q82, K83, E84, V93, D95, L96, K98, N100 и V132;
(16) I61, E77, Q82, K83, E84 и V93;
(17) I61, V63, E77, K83, E84, D95, L96, K98 и N100;
(18) I61, V63, E77, K83, D95, L96, K98, N100 и G109;
(19) I61, E77, Q82, E84, V93, D95, L96, K98 и N100; и
(20) I61, V63, E77, Q82 и E84.
4. Слитый белок по любому из пп.1-3, где указанный мутант содержит одну или более замен аминокислот, выбранных из группы, состоящей из: I61L/V/F, V63I, E77I/N/Q/K/H/M/R/N/V/L, Q82S/R/G/N, K83R, E84K/H/D/R/G, V93L/A, D95H/R/E, L96S/T, K98R, N100G/K/D/E, R107N/S, G109R/H и V132L/R/I/S.
5. Слитый белок по п.4, где указанный мутант содержит замены аминокислот, выбранные из группы, состоящей из:
(1) I61L, V63I, E77I, E84K, V93L, L96S, K98R, N100G и V132L;
(2) I61V, E77N, Q82S, K83R и E84H;
(3) I61F, V63I, K83R, E84K и V132I;
(4) I61L, E77Q, E84D, R107N и V132I;
(5) I61L, V63I, E77K, K83R, E84D и N100G;
(6) I61V, E77H, Q82R, K83R, E84H и R107S;
(7) I61L, E77I, Q82G, E84R, V93L, L96T, N100G, R107S, G109R и V132R;
(8) I61L, E77M, Q82G, K83R, E84D и V132L;
(9) I61L;
(10) I61F, D95H, L96S, G109H и V132S;
(11) I61F, D95H, L96S, K98R, G109H и V132S;
(12) I61L, E77Q, E84D, V93A, R107N и V132I;
(13) E77K, L96S, N100K, G109H и V132L;
(14) I61L, V63I, Q82G, E84G, D95R, L96S, N100D и V132I;
(15) I61L, E77R, Q82N, K83R, E84G, V93L, D95E, L96T, K98R, N100D и V132L;
(16) I61V, E77N, Q82S, K83R, E84H и V93A;
(17) I61V, V63I, E77V, K83R, E84D, D95E, L96T, K98R и N100E;
(18) I61L, V63I, E77V, K83R, D95E, L96S, K98R, N100D и G109R;
(19) I61V, E77L, Q82G, E84G, V93L, D95E, L96T, K98R и N100G; и
(20) I61L, V63I, E77N, Q82G и E84G.
6. Слитый белок по любому из пп.1-5, где указанный мутант содержит аминокислотную последовательность, приведенную в любой из SEQ ID NO: 30-49.
7. Слитый белок по любому из пп.1-6, где указанный первый связывающий домен содержит антитело или его антигенсвязывающий фрагмент.
8. Слитый белок по п.7, где указанное антитело выбрано из группы, состоящей из: моноклонального антитела, одноцепочечного антитела, химерного антитела, гуманизированного антитела и полностью человеческого антитела.
2
9. Слитый белок по любому из пп.7-8, где указанный антигенсвязывающий фрагмент выбран из группы, состоящей из: Fab, Fab’, F(ab), dAb, выделенной определяющей комплементарность области CDR, Fv и scFv.
10. Слитый белок по любому из пп.1-9, где указанный PD-L1 является PD-L1 человека.
11. Слитый белок по любому из пп.7-10, где указанное антитело содержит тяжелую цепь антитела или его фрагмента, указанная тяжелая цепь антитела или его фрагмента содержит HCDR1-3, указанная HCDR1 содержит аминокислотную последовательность, приведенную в любой из последовательностей из группы, состоящей из: SEQ ID NO: 4 и SEQ ID NO: 18.
12. Слитый белок по п.11, где указанная HCDR2 содержит аминокислотную последовательность, приведенную в любой из последовательностей из группы, состоящей из: SEQ ID NO: 5 и SEQ ID NO: 19.
13. Слитый белок по любому из пп.11-12, где указанная HCDR3 содержит аминокислотную последовательность, приведенную в любой из последовательностей из группы, состоящей из: SEQ ID NO: 6 и SEQ ID NO: 20.
14. Слитый белок по любому из пп.11-13, где указанная тяжелая цепь антитела или его фрагмента содержит вариабельную область тяжелой цепи VH, и указанная вариабельная область тяжелой цепи VH содержит аминокислотную последовательность, приведенную в любой из последовательностей из группы, состоящей из: SEQ ID NO: 8 и SEQ ID NO: 22.
15. Слитый белок по любому из пп.11-14, где указанная тяжелая цепь антитела или его фрагмента содержит константную область тяжелой цепи, и указанная константная область тяжелой цепи содержит IgG.
16. Слитый белок по п.15, где указанный IgG выбран из группы, состоящей из: IgG1 и IgG4.
17. Слитый белок по любому из пп.11-16, где указанная тяжелая цепь антитела содержит аминокислотную последовательность, приведенную в любой из последовательностей из группы, состоящей из: SEQ ID NO: 13 и SEQ ID NO: 27.
18. Слитый белок по любому из пп.7-17, где указанное антитело содержит легкую цепь антитела или его фрагмента, указанная легкая цепь антитела или его фрагмента содержит LCDR1-3, указанная LCDR1 содержит аминокислотную последовательность, приведенную в любой из последовательностей из группы, состоящей из: SEQ ID NO: 1 и SEQ ID NO: 15.
19. Слитый белок по п.18, где указанная LCDR2 содержит аминокислотную последовательность, приведенную в любой из последовательностей из группы, состоящей из: SEQ ID NO: 2 и SEQ ID NO: 16.
20. Слитый белок по любому из пп.18-19, где указанная LCDR3 содержит аминокислотную последовательность, приведенную в любой из последовательностей из группы, состоящей из: SEQ ID NO: 3 и SEQ ID NO: 17.
21. Слитый белок по любому из пп.18-20, где указанная легкая цепь антитела или его фрагмента содержит вариабельную область легкой цепи VL, и указанная вариабельная область легкой цепи VL содержит аминокислотную последовательность, приведенную в любой из последовательностей из группы, состоящей из: SEQ ID NO: 7 и SEQ ID NO: 21.
22. Слитый белок по любому из пп.18-21, где указанная легкая цепь антитела или его фрагмента содержит константную область легкой цепи, и константная область легкой цепи содержит Igκ.
23. Слитый белок по любому из пп.18-22, где указанная легкая цепь антитела содержит аминокислотную последовательность, приведенную в любой из последовательностей из группы, состоящей из: SEQ ID NO: 11 и SEQ ID NO: 25.
24. Слитый белок по любому из пп.1-23, где указанный первый связывающий домен находится на N-конце второго связывающего домена.
25. Слитый белок по любому из пп.1-24, где указанный слитый белок дополнительно содержит линкер, линкер находится на C-конце первого связывающего домена и N-конце второго связывающего домена.
26. Слитый белок по п.25, где указанный линкер содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 52.
27. Слитый белок по любому из пп.1-26, содержащий по меньшей мере два вторых связывающих домена.
28. Слитый белок по п.27, где каждый из указанных вторых связывающих доменов находится на C-конце первого связывающего домена, соответственно.
29. Иммуноконъюгат, содержащий слитый белок по любому из пп.1-28.
30. Одна или более выделенных молекул нуклеиновой кислоты, кодирующих слитый белок по любому из пп.1-28 или иммуноконъюгат по п.29.
31. Один или более векторов, содержащих молекулы нуклеиновой кислоты по п.30.
32. Композиция, содержащая слитый белок по любому из пп.1-28, иммуноконъюгат по п.29 или молекулу нуклеиновой кислоты по п.30 и, необязательно, фармацевтически приемлемый эксципиент.
33. Клетка, содержащая слитый белок по любому из пп.1-28, иммуноконъюгат по п.29, молекулу нуклеиновой кислоты по п.30 или вектор по п.31.
34. Способ получения слитого белка по любому из пп.1-28, включающий культивирование клетки по п.33 в условиях, делающих возможной экспрессию указанного слитого белка.
35. Применение слитого белка по любому из пп.1-28, иммуноконъюгата по п.29, молекулы нуклеиновой кислоты по п.30, вектора по п.31, композиции по п.32 или клетки по п.33 для лечения опухоли.
36. Применение по п.35, где указанная опухоль включает солидную опухоль и несолидную опухоль.
37. Применение по п.36, где указанная солидная опухоль и несолидная опухоль включает множественную миелому, лейкоз, неходжкинскую лимфому, лимфому Ходжкина, нейроглиому, герминому, саркому, мезотелиому, плацентому, злокачественное новообразование головного мозга, злокачественное новообразование костной ткани, рак кожи, рак носоглотки, рак легких, рак ротовой полости, рак пищевода, рак желудка, рак печени, рак поджелудочной железы, рак предстательной железы, рак кишечника, рак молочной железы, рак шейки матки, рак яичников и рак яичка, опухоль лобных пазух, гипофарингеальный рак, ольфакторную нейробластому, рак языка, карциному десен, карциному ампулы фатерова сосочка, рак толстого кишечника, рак прямой кишки, рак почки, карциному мочеточника, рак мочевого пузыря, рак полового члена, карциному фаллопиевых труб, рак века, ретинобластому.
38. Способ блокирования взаимодействия между белок PD-L1 и PD-1, включающий введение нуждающемуся в этом индивидууму эффективного количества слитого белка по любому из пп.1-28, иммуноконъюгата по п.29, молекулы нуклеиновой кислоты по п.30, вектора по п.31, композиции по п.32 или клетки по п.33.
39. Способ блокирования взаимодействия между белком CD47 и SIRPα, включающий введение нуждающемуся в этом индивидууму эффективного количества слитого белка по любому из пп.1-28, иммуноконъюгата по п.29, молекулы нуклеиновой кислоты по п.30, вектора по п.31, композиции по п.32 или клетки по п.33.
40. Способ ингибирования роста и/или пролиферации опухолей или опухолевых клеток, включающий введение нуждающемуся в этом индивидууму эффективного количества слитого белка по любому из пп.1-28, иммуноконъюгата по п.29, молекулы нуклеиновой кислоты по п.30, вектора по п.31, композиции по п.32 или клетки по п.33.