Клиническое и молекулярно-генетическое исследование больных с хроническим гломерулонефритом

Статья

соотношении (1:1,31), обеспечивающее образование согласно требованиям ГОСТ. Для получения шипучих гранул и таблеток с рассчитанными количествами минеральных комплексов необходимо было произвести выбор вспомогательных веществ и технологии гранулирования. В первую очередь необходим был выбор связывающих веществ-пленкообразователей, обеспечивающих наибольшую стабильность гранулятов. При получении грануля-тов мы сравнивали два метода - совместный и раздельный. Поэтому нами приготовлены грануляты совместным и раздельным способом с использованием спиртовых растворов ВМВ, указанных в табл. 2. При гранулировании в состав кислотной фракции мы включили лимонную кислоту, калия хлорид и натрия хлорид, как нейтральные и высокостабильные соли. Кальция карбонат, калия бромид, натрия иодид, магния сульфат и натрия гидрокарбонат составили карбонатную фракцию. Для оценки стабильности гранулятов при хранении рассчитывали скорость потери массы за счет выделения углерода диоксида v, %/с-1[5]. Кроме того, грануляты оценивались по времени растворения и качеству получающихся растворов. Пример оценки качества гранулятов солевого комплекса «Ессентуки №17» приведен в табл. 2.

Как следует из табл.2, совместный способ гранулирования показал более высокую стабильность гранулятов. Учитывая то, что он проще в осуществлении и более экономичен, он принят нами за основу при разработке технологии шипучих гранул и таблеток солевых комплексов минеральных вод. Исследованные пленкообразователи-ВМВ по стабилизирующей способности и качеству растворов друг от друга отличались незначительно (кроме коллидона 30, который при растворении давал легкую опалесценцию). Поэтому в качестве связывающего вещества целесообразнее использовать более дешевый отечественный ПВП среднемолекулярный. Готовые гранулы расфасовывались в одноразовые пакетики из ламинированной фольги в разовых дозах, указанным в табл.1. Для получения таблеток в качестве антиадге-зионной добавки мы ввели в состав гранулятов солевых комплексов 6-10% мелкоизмельченного порошка полиэтиленгликоля ПЭГ-6000 (размер частиц не более 0,25 мм), обладающего оптимальными антиадгезионными свойствами для шипучих таблеток. Кроме того, ПЭГ-6000 является пеногасителем, что немаловажно при растворении таблеток. Таблетки 024 мм («Ессентуки №17») и 20 мм («Ессентуки №4» и «Славяновская») средней массой соответственно 4,7 г, 3,6 г и 3,3 г получены на ручном гидропрессе при давлении 120 МН/м2. Способ получения быстрорастворимых таблеток и гранулиз солевых комплексов минеральных вод типа «Ессентуки» и «Славяновская» запатентован [6].

Установлены нормы качества разработанных шипучих таблеток и гранул на основе солевых комплексов минеральных вод: содержание ионов (мг/дм3) Na++K+, Ca2+, Mg2+, SÜ42-,Cl-; средняя масса таблеток или масса гранул в упаковке (г); рН раствора 6,07,0; распадаемость (мин.) - не более 3 мин.; кислото-

нейтрализующая способность (мл/г 0.1N HCl) - не менее 40мл/г; потеря в массе таблеток - не более 2%; содержание CO2 (%, в 1 таблетке) - не менее 17%. Указанные параметры послужили основанием для проверки норм качества разработанных БАД в процессе хранения. Установленный срок стабильного хранения в упаковках с влагопоглотителем составил не менее 3 лет. Исследование специфической активности шипучих гранул солевых комплексов «Ессентуки» показало, что предварительный курс шипучих гранул «Ессентуки № 17» оказал больший профилактический эффект, чем природная минеральная вода и степень поражения СОЖ после предварительного курса составила лишь 58%, Р<0,01 от контрольных значений. Анализ корреляционной матрицы показателей ПОЛ у крыс с нейродистрофическим повреждением желудка при курсовом приеме природной и искусственной гранулированной минеральной воды «Ессентуки №17» показал, что при воздействии в гранулированном виде искусственная минеральная вода практически не оказывала стимулирующего влияния на уровень холестерина в крови, что выгодно отличает ее от природной воды «Ессентуки № 17» [2].

Литература

1. Андреева И.Н. и др.// Изв. вузов. Сев.-Кавк. регион. Ес-теств. науки. Спецвыпуск: Фармакология.- 2006.- С. 5-6.

2. Репс В. Ф. Метаболические механизмы лечебнопрофилактического действия питьевых минеральных вод.- Монография.- Пятигорск: Изд-во Пятигорского государственного лингвистического университета, 2001.- 176 с.

3. Иванов В.В., Невраев Г.А. Класификация подземных минеральных вод.- М.: Недра, 1964.- С.27-49.

4. Резников А.А., Муликовская Е.П. Методы анализа природных минеральных вод.- М: Моснаучтехиздательство литературы по геологии и охране недр, 1954.- С.7.

5. Шевченко А.М. и др. // Фармация .- 2004.- №1.- С. 32-34.

6. Пат. 2271729 РФ.- МПК А 23Ь К 2/38.- Композиция для получения минерализованной воды.

УДК 616-079.1:578.52

КЛИНИЧЕСКОЕ И МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ БОЛЬНЫХ С ХРОНИЧЕСКИМ ГЛОМЕРУЛОНЕФРИТОМ

Е.В. НЕКИПЕЛОВА*, Е.В. КАЛМЫКОВА**, М.И. ЧУРНОСОВ*

Введение. Одной из актуальных проблем современной медицины является изучение механизмов развития мультифактор-ных заболеваний. Среди последних значимое место занимает хронический гломерулонефрит (ХГН). Гломерулонефрит - приобретенное полиэтиологическое заболевание почек, для которого характерно иммунное воспаление с преимущественным, инициальным поражением клубочков и возможным вовлечением в патологический процесс любого компонента почечной ткани. Термин «гломерулонефрит» означает наличие двухстороннего иммунопатологического процесса, главным образом в гломеру-лах. В настоящее время принято выделение первичного гломеру-лонефрита, развивающегося в результате воздействия на почечную ткань различных инфекционных, аллергических и других факторов, и системного гломерулонефрита (вторичного), возникающего при системных заболеваниях соединительной ткани (системной красной волчанке, пурпуре Шенлейна - Геноха, узелковом периартрите, ревматизме).

В структуре всей почечной патологии, составляющей около 200 случаев на 100 тыс. населения ХГН является наиболее частым заболеванием, доля которого 40%. В структуре общей заболеваемости в нашей стране больные ХГН составляют 1-2% от всех терапевтических больных. Среди умерших он выявляется в 1% всех вскрытий [8]. Заболевание это чаще встречается у мужчин: от 52,5 до 57-64%. ХГН поражает трудоспособное население молодого и среднего возраста и приводит к инвалидизации больных. У 5-10% больных развивается нефротический синдром или формируется вторичное повышение артериального давления. Затраты на обеспечение государственных программ по хроническому гемодиализу и трансплантации постоянно растут [6].

Значимую роль в патогенезе ХГН играют цитокины, такие как фактор некроза опухоли (ТОТа), интерлейкин 1 (ИЛ-1) и др. Мутации в генах, кодирующих соответствующие цитокины, значительно меняют уровень их экспрессии, что может влиять на развитие хронического воспалительного процесса [7].

Цель исследования — изучение клинических особенностей ХГН и оценка роли полиморфизма генов ТОТа и его рецептора в формировании и течении заболевания.

Материалы и методы. Выборка больных ХГН включает 202 человека, находившихся на стационарном лечении в нефро-логическом отделении Белгородской ОКБ. Контрольную группу (КГ) составили 103 человека, без почечной патологии и 216 человек популяционной выборки (ОГ). Обследовано 202 человека (96 женщин и 106 мужчин) в возрасте от 15 до 76 лет (средний возраст 41 год). Длительность заболевания с момента установления диагноза составила в среднем 11 лет. Оценка клинических особенностей больных ХГН проводилась у 202 больных ретроспективно, на основании данных анамнеза и по архивному материалу отделения нефрологии ОКБ г. Белгорода. Она включала в себя анализ дебюта ХГН, клинических и морфологических вариантов нефритов с характеристикой показателей на момент первичного обследования, биопсию почки, анализ течения ХГН.

Исследование морфометрических характеристик эритроцитов производилось на мазках крови с использованием компьютерной системы для визуализации изображений, включающей микроскоп (Микмед-2), цветную матричную видеокамеру (1УС-ТК-С1380), компьютер с картой для видеоввода изображения. С

**Областная клиническая больница, г. Белгород, Россия ГОУ ВПО Белгородский госууниверситет, г. Белгород, Россия

Е.В. Некипелова, Е.В. Калмыкова, М.И. Чурносов

помощью стандартной методики эритроцитометрии ВидеоТест-Мастер [1] осуществлялось измерение среднего размера эритроцитов, расчет их толщины, сферичности и объема (МСУ) на основе предварительно определенных значений гематокрита (НТС) и числ эритроцитов (ЯБС). В соответствии со средними размерами все эритроциты были разделены на четыре класса: микроциты (4-6,8 мкм), нормоциты (6,9-7,9 мкм), макроциты (8-9,4 мкм), мегалоциты (9,5-11 мкм) [1]. Для анализа измерялось не менее 1000 эритроцитов в каждом мазке для достоверных результатов.

Материалом для изучения полиморфизмов генов ТОТа и его рецептора служили образцы ДНК из венозной крови методом фенольно-хлороформной экстракции. ТОТа - вещество, играющее важную роль в регуляции нормальной дифференцировки, роста и метаболизма клеток, и в то же время - мощный провос-палительный цитокин. Биологическая активность ТОТа опосредуется связыванием со специфическими мембранными рецепторами с молекулярной массой 55 Кё (типа I или СЭ120а) и 75 Кё (типа II или СЭ120Ь). Последние относятся к трансмембранным рецепторам типа I и экспрессируются на многих клетках, включая полиморфно-ядерные лейкоциты, эндотелиальные клетки (ЭК), фибробласты, кератиноциты и др. Связывание ТОТ-альфа с рецепторами приводит к активации факторов транскрипции ОТ-кВ, АР-1, которые регулируют активность ряда генов, кодирующих синтез провоспалительных цитокинов и др. медиаторов воспаления и индуцируют гибель клеток (апоптоз) [2].

Таблица 1

Основные биологические эффекты TNFa

Клетки Эффект

Клетки сосудистого эндотелия Усиление экспрессии молекул адгезии

Лимфоциты Развитие лимфоидной ткани, модификация СБ44 и способности связываться с лигандом

Дендритные клетки Способствует созреванию клеток и их миграции из не лимфоидных органов во вторичные лимфоцидные органы

Нейтрофилы Активация

Тромбоциты Активация

Клетки - предшественники кроветворения Усиление роста

Фибробласты Пролиферация

Синовиоциты Пролиферация

Провоспалительны е цитокины Индуцируют синтез 1Ь-1, П.-6, гранулоцитарно-макрофагального колониестимулирующего фактора

Провоспалительны е хемокины Индуцируют синтез ЯАКТЕ8, 1Ь-8, МГР-1а, МСР-1

Другие провоспалитель-ные медиаторы Индуцируют синтез ПГЕ2 посредством активация ЦОГ-2, лейкотриенов, фактора активации тромбоцитов, оксида азота и реактивных форм кислорода

Металлопротеиназы Индуцирует синтез коллагеназы, желатиназы, стро-мелизина

Другие эффекты Усиливают боль Индуцирует кахексию Индуцирует лихорадку Мобилизует кальций из костей Модулирует апоптоз

Существует два рецептора ТОТа - ТОТИЛ и ТОТЯ2, являющихся составной частью суперсемейства рецепторов, расположенных в пределах одного домена, связывающего различные лиганды и способного индуцировать клеточные ответы. ТОТИ!, расположенный на хромосоме 6р55, в первом экзоне, ответственен за острый воспалительный ответ и найден в большинстве клеток, а ТОТЯ2 локализован только на плазматической мембране клеток иммунной системы. ТОТа, соединяясь со своими рецепторами, образует димер, дающий конформационные изменения этого рецепторного домена и инициацию клеточного сигнала.

Биологические эффекты ТОТа определяются не только его концентрацией в крови, но и содержанием соответствующих

рецепторов на клетках-мишенях и, возможно, генетически опосредованной гетерогенностью структуры этой макромолекулы.

Для изучения полиморфизма TNFa -308G/A и TNFR1-36A/G амплификацию ДНК проводили методом полимеразной цепной реакции с использованием стандартных олигонуклеотид-ных праймеров. После проведения ПЦР, продукты амплификации подвергались рестрикции эндонуклеазами Bsp 19I и MspAl I («Сибэнзим»). Продукты рестрикции разделяли в 2-3% агарозном геле, результаты анализировали в проходящем ультрафиолетовом свете, предварительно окрасив гель бромистым этидием. Фрагменты длиной 107 п.н. соответствовали аллелю TNF2, 87 и 20 п.н. - TNF1, а 107, 87 и 20 п.н. выявлены у гетерозигот TNF1/TNF2. Фрагменты длиной 183 п.н. соответствовали аллелю А гена TNFR1, 108 и 75 п.н. - аллелю G, фрагменты длиной 183, 108 и 75 п.н. наблюдались у гетерозигот AG [9]. Аллели TNF*2 гена TNFa и аллель А его рецептора обусловливают повышенную экспрессию TNFa, а следовательно, биологические эффекты, приведенные в табл. 1, согласно данным Е.Л.Насонова [5].

Для обнаружения ассоциаций между аллелями и генотипами применяли стандартные генетико-статистические методы. Попарное сравнение частот в КГ и ОГ проводили с помощью критерия Фишера. Относительный риск (RR) вычисляли по формуле [4], рассматривая RR=1, как отсутствие ассоциации, RR>1, как фактор риска, RR<1, как протективный фактор. Результаты подвергались статистической обработке с помощью Microsoft Office Excel 2003 и STATISTIKA for Windows 6.0.

Результаты. Все больные были разделены на 4 клинических группы. В 1-ю группу включены 81 больной ХГН в стадии клинико-лабораторной ремиссии, во 2-ю - 57 с обострением ХГН, в 3-ю - 49 больных, получающих заместительную почечную терапию по поводу терминальной стадии ХГН, и в 4-й группе обследовано 15 лиц с почечным аллотрансплантатом. Клинические синдромы в дебюте ХГН проанализированы у 185 пациентов. В равной степени заболевание манифестировало мочевым синдромом (протеинурии [ПУ] без гипоальбуминемии) нефротическим синдромом (НС) (ПУ более 3,5 г/сут. в сочетании со сниженным уровнем альбумина <35 г/л), 35% и 31,9% соответственно. Второе место занимал гематурический синдром (гематурия - 18,9%), остронефритический синдром (гематурии различной степени выраженности; ПУ <3,5 г/сут.; АГ; рост уровня креатинина крови >140 мкМоль/л) имелся у 13 больных, что составило 7%. С той же частотой встречалось сочетание остронефритического и нефротического синдромов - у 15 больных (8,1%).

Повышение уровня креатинина крови (более 140 мкМоль/л) в дебюте ХГН имело место у 28 пациентов, у 18 из них это было расценено как проявление активности нефрита. У мужчин наблюдалась тенденция к более частому выявлению нарушений функции почек в дебюте заболевания по сравнению с женщинами (185 больных) - в 8,6% и в 6,4% соответственно (р<0,05). Синдром АГ (АД систолическое >140 , диастолическое >90 мм рт.ст.) в начале заболевания встречался у 96 человек из 202. Среди них у 74 (36,6%) пациентов АД находилось в пределах от 140/90 до 160/110 мм рт.ст., а у 22 (10,9%) - превышало 160/110 мм рт.ст.

Достоверные данные об уровне ПУ в дебюте ХГН удалось получить у 188 пациентов. У 55,3 % больных ПУ не превышалось 1 г/сут., у 20,2% - имел место НС, у остальных пациентов (24,4%) наблюдалась выраженная ПУ, часто достигавшая нефротического уровня (>3,5 г/сут.), но не сопровождавшаяся развитием гипоальбуминемии. Среди больных с НС у 44,9% наблюдалась АГ различной степени выраженности. Гематурия в начале ХГН наблюдается у 98 (56,9%) больных из 172. Среди них у 12 отмечались эпизоды макрогематурии. Клинические варианты нефрита оценены в соответствии с классификацией И.Е.Тареевой [6] на момент первичного обследования у 186 лиц. Распределение их было следующим: ХГН латентного течения диагностирован у 22% больных, ХГН гемату-рического типа - у 23,1%, ХГН гипертонического типа - у 16,7% и ХГН смешанного типа - у 19,9%.

Нарушение функции почек (креатинин крови >140 мкМоль/л) на момент первичного обследования отмечалось у 32 больных (22,9%). Синдром АГ был выявлен у 96 пациентов (68,5%). Наблюдалась тесная корреляция между уровнями креа-тинина крови и АД: у больных с сохраненной функцией почек

Е.В. Некипелова, Е.В. Калмыкова, М.И. Чурносов

синдром АГ отличался в 45,7% случаев, а у лиц с повышенным уровнем креатинина в 90,6% случаев (р<0,01). ПУ нефротического уровня была у 69 больных (49,2%), из них у 38 (55,1%) был диагностирован НС.

Чрезкожная пункционная биопсия почки с гистологическим исследованием биоптатов была произведена 40 пациентам

Далее рассматривали морфометрческие характеристики эритроцитов у больных ХГН в зависимости от наличия анемии и степени ее проявления. Установлено, что в группе больных с

анемией значительно снижаются значения гематокрита (с 0,41 до 0,29), количества (с 4,23 до 3,13) и объема эритроцитов (с 96,09 до 92,97), удельный вес нормацитов (с 74,45 до 60,7) при увеличении доли микроцитов (с 11,25 до 20,17), макроцитов (с 14,28 до

19,05) и мегалоцитов (с 0,01 до 0,08). С увеличением степени выраженности анемии снижаются значения гематокрита, количества и объема эритроцитов, а также доли нормацитов (с 68% до 60%), за счет повышения удельного веса микроцитов (с 15% до 24). Анализ параметров эритроцитов в зависимости от наличия ХПН выявил снижение значений гематокрита, количества и объема эритроцитов, доли нормаци-тов, с одновременным увеличением доли микро и мегалоцитов у больных ХГН с ХПН по сравнению, как с контролем, так и с группой больных без ХПН. С увеличением степени ХПН наблюдается достоверное снижение гематокрита, количества и объема эритроцитов, удельного веса нормацитов (с 67% до 60%) при увеличении доли микроцитов (с 14% до 22%) и мега-лоцитов. У больных с ХПН чаще наблюдается анемия (53% - у больных с ХПН 1-2 степени, 96% - у

больных с ХПН 3 степени), по сравнению с больными без ХПН (13%).

При анализе групп больных ХГН в стадии ремиссии, с обострением ХГН, на гемодиализе и почечным аллотрансплантатом было выявлено снижение удельного веса нормоцитов, повышение доли микроцитов и мегалоцитов в каждой группе по сравнению с контролем. Группы больных в стадиях ремиссии и обострения характеризуются макроцитозом и мегалоцитозом, а группы больных на гемодиализе и с почечным трансплантатом характеризуются микроцитозом и мегалоцитозом.

Наиболее выраженные изменения морфометрического профиля эритроцитов характерны для больных, не получавших лечения. У них наблюдаются более низкие значения гематокрита, количества эритроцитов и удельного веса нормацитов, с одновременным возрастанием доли микро- и мегалоцитов, как по сравнению с контролем, так и с больными получавшими регулярное и эпизодическое лечение. Необходимо отметить, что у больных, лечившихся регулярно, анемия наблюдается у 37%, среди эпизодически лечившихся анемия - у 43% больных. У пациентов, ни разу не лечившихся анемия встречалась в 77% случаев.

Для больных ХГН с наследственной отягощенностью по линии матери характерен макроцитов (удельный вес макроцитов - 21,39), а у больных по линии отца - микроцитоз (удельный вес

Таблица 2

Морфометрические характеристики эритроцитов среди различных групп больных ХГН

№ Средний размер эритр. Гематокрит Количество эритроцитов Объем эритроцитов Толщина Сферичность % количества

Микроциты Нормациты ы ит ц о р к М Мегалоциты

Контроль 103 7,495 0,41 4,23 96,09 2,20 3,44 11,25 74,45 14,28 0,015

Больные 202 7,46 0,36*** 3,85*** 94,86 2,20 3,47 17,49*** 64,75*** 17,67* 0,05***

Анемия

ХГН без анемии 115 7,47 0,42** 4,40** 96,28 2,23 3,43 15,46** 67,82*** 16,63 0,03*

ХГН с анемией 87 7,44 0,29*** 3,13*** 92,97* 2,17 3,52 20,17*** 60,70*** 19,05** 0,08***

ХГН с легкой анемией 50 7,49 0,33*** 3,47*** 95,04 2,18 3,54 17,67** 61,52*** 20,73*** 0,07***

ХГН с умер. анемией 16 7,41 0,26*** 2,92*** 88,91*** 2,09 3,60 22,52*** 59,03*** 18,34 0,12***

ХГН с выраж. анемией 21 7,35** 0,22*** 2,46*** 91,16** 2,19 3,42 24,34*** 60,00*** 15,58 0,07***

Хроническая почечная недостаточность

ХГН без ХПН 109 7,48 0,41 4,33 96,11 2,22 3,46 14,90** 67,39*** 17,50* 0,04**

ХГН с ХПН 93 7,43 0,31*** 3,31*** 93,49* 2,19 3,47 20,33*** 61,64*** 17,95* 0,07***

ХГН с ХПН 1-2 степени 38 7,47 0,36*** 3,82*** 96,26 2,24 3,45 17,71*** 62,35*** 18,87** 0,05**

ХГН с ХПН 3 степени 56 7,39 0,27*** 2,96*** 91,49*** 2,16 3,49 22,34*** 60,39*** 17,18 0,09***

Группы больных ХГН

ХГН, ремиссия 81 7,47 0,41 4,29 94,45 2,18 3,49 15,54* 67,12*** 17,23* 0,03*

ХГН, обострение 54 7,52 0,40 4,16 97,81 2,24 3,47 14,81* 65 34*** 19,79*** 0,05**

ХГН, гемодиализ 52 7,39* 0,26*** 2,91*** 91,00*** 2,14 3,49 22,30*** 60,39*** 17,22 0,09***

С донорской почкой 15 7,37** 0,37*** 3,70*** 99,79*** 2,37** 3,23* 20,99*** 64,95*** 13,98 0,07***

Характер лечения

Регулярное лечение 139 7,47 0,38*** 4,00** 95,14 2,20 3,47 16,76*** 65,12*** 18,02** 0,04**

Эпизодическое 37 7,50 0,35*** 3,69*** 93,63 2,14 3,57 14,65* 66,30*** 18,97** 0,07***

Не лечившиеся 26 7,32*** 0,31*** 3,29*** 95,08 2,30 3,31 25,41*** 60,57*** 13,92 0,10***

Наследственная отягощенность

Нет 147 7,46 0,36*** 3,79*** 95,58 2,22 3,45 17,43*** 64,95*** 17,52* 0,05***

По матери 24 7,57 0,36*** 3,87** 92,59* 2,09* 3,69** 12,04 66,49*** 21,39*** 0,06***

По отцу 31 7,37** 0,38* 4,13 93,20 2,22 3,40 21,97*** 62,49*** 15,49 0,04*

По матери или отцу 55 7,46 0,37*** 4,02* 92,94* 2,16 3,53 17,64*** 64,23*** 18,06* 0,05**

Клинические группы

Латентный ХГН 39 7,41* 0,34*** 3,64*** 94,53 2,23 3,43 20,44*** 62,97*** 16,50 0,08***

Нефротический 31 7,52 0,39 4,12 96,10 2,19 3,50 14,19 65,68*** 20,08*** 0,04*

Гипертониче- ский 49 7,41* 0,36*** 3,87*** 91,99** 2,17 3,51 20,05*** 63,29*** 16,60 0,04**

Смешанный 51 7,51 0,35*** 3,58*** 97,90 2,24 3,44 15,60** 63,98*** 20,35*** 0,07***

Гематурический 30 7,41* 0,41 4,36 94,36 2,21 3,41 16,67*** 70,39*** 12,73 0,01

*- р<0,05; ** - р<0,01; ***- р<0,001

Статья

микроцитов - 21,97). При анализе морфологии эритроцитов выявлены следующие особенности морфометрического профиля эритроцитов. При латентной и гипертонической формах ГН наблюдается микроцитоз и мегалоцитоз, при снижении доли нор-мацитов, тогда как группы больных нефротическим и смешанным ГН отличаются макроцитозом и мегалоцитозом, при уменьшении доли нормацитов. Больные с гематурической формой ГН имеют незначительные изменения морфометрических характеристик эритроцитов. У больных с латентным и гематурическим и гломерулонефритом достоверно снижены значения средних размеров и числа эритроцитов, а также гематокрита в сравнении с контролем.

Определялась клубочковая фильтрация - количество миллилитров ультрафильтрата плазмы, образовавшегося в клубочках обеих почек за одну минуту. Клубочковая фильтрация происходит за счет разности гидростатического давления крови по обе стороны базальной мембраны клубочков. Уровень клубочковой фильтрации зависит от нескольких факторов: от величины гидростатического давления крови в клубочковых капиллярах, от он-котического давления плазмы, от величины внутрипочечного давления, проницаемости клубочкового фильтра, а также от действия ряда внепочечных факторов. Наиболее частой причиной снижения скорости клубочковой фильтрации является Острая и хроническая почечная недостаточность, преимущественно за счет уменьшения числа функционирующих нефронов. При изучении корреляции клубочковой фильтрации с морфометрическими показателями эритроцитов выявлена прямая связь с гематокритом, количеством эритроцитов, удельным весом нормацитов и обратная корреляционная взаимосвязь с долей мегалоцитов (табл. 3). Снижение клубочковой фильтрации, характерное для ХГН и наиболее выраженное при возрастании степени тяжести заболевания (развитие ХПН, анемии), обусловливает снижение значений гематокрита, количества эритроцитов, удельного веса норма-цитов и увеличение доли мегалоцитов.

Изучение полиморфизма гена ТОТа и его рецептора выявило более высокую частоту аллелей ТОТ2 и А в группе больных (16% и 50% соответственно) по сравнению с контролем (11% и 45% соответственно), при снижении частот аллелей ТОТ1 и О (табл.5). Эти различия связаны с достоверным увеличением частот этих генов у лиц женского пола (аллель ТОТ2 - 19% против 9% в контроле; ТОТЯ*А - 54% против 46% в контроле). Выявлено, что генотип ТОТ1/ТОТ1 выступает в качестве протективного фактора (ЯЯ=0,25, р<0,001) у женщин, а генотип АО - как про-тективный фактор у мужчин (ЯЯ=0,51, р<0,05).

Таблица 3

Коэффициент ранговой корреляции Спирмена между клубочковой фильтрацией и морфометрическими характеристиками эритроцитов у больных ХГН

Параметры R р

Гематокрит 0,68 <0,001

Количество эритроцитов 0,67 <0,001

Удельный вес нормацитов 0,29 <0,001

Удельный вес мегалоцитов - 0,19 <0,01

Таблица 4

Распределение частот аллелей и генотипов генов TNFa и TNFR1 у больных ХГН

Аллели, генотипы Больные ХГН Контроль

муж жен в целом муж жен в целом

TNF*1 87,13 80,85* 84,10 86,54 90,63 88,50

TNF*2 12,87 19,15* 15,90 13,46 9,37 11,50

TNF1/ TNF1 76,24 69,15* 72,82 76,92 83,33 80,00

TNF1/ TNF2 21,78 23,40 22,56 19,23 14,58 17,00

TNF2/ TNF2 1,98 7,45 4,62 3,85 2,08 3,00

TNFR1*G 53,53 45,83 49,70 56,36 53,26 54,95

TNFR1*A 46,47 54,17 50,30 43,64 46,74 45,05

GG 32,94 25,00 28,99 32,73 34,78 33,66

AG 41,18 41,67 41,42 47,27 36,96 42,57

AA 25,88 33,33 29,59 20,00 28,26 23,76

*- p<0,05

Анализ полиморфизмов двух изучаемых генов выявил комбинации генотипов, обусловливающих изменение морфометрического профиля эритроцитов. Комбинация генотипов ТОТ1/ТОТ2; АА ведет одновременно к изменениям морфометрического профиля эритроцитов, заключающимся в одновременном

микроцитозе, макроцитозе и мегалоцитозе. Одна комбинация генотипов (TNF1/TNF1; GG) ведет к микроцитозу и мегалоцито-зу, а другая (TNF1/TNF2; GG) - к макроцитозу и мегалоцитозу.

Заключение. Результаты говорят о влиянии полиморфизма генов TNFa и TNFR1 на формирование и течение ХГН. Выявлена высокая частота аллелей TNF2 и А генов TNFa и его рецептора в группе больных в сравнении с контролем. Генотипы TNF1/TNF1 гена TNFa и AG его рецептора выступают в качестве протектив-ных факторов у женщин и мужчин соответственно. Анализ морфометрических характеристик эритроцитов при ХГН выявил изменения морфометрических характеристик эритроцитов в сравнении с контролем. Выявлена корреляция между клубочковой фильтрацией и некоторыми характеристиками эритроцитов.

Литература

1. ВидеоТест. Методики.- Санкт-Петербург, 2000.- 54 с.

2. Визель А. А. и др. // Клин.мед.- 2003.- № 9.- С.4-7.

3. Корытина Г.Ф. и др. // Медицинская генетика.- 2004.-№7.- С. 333-337.

4. Математич. методы в изучении генетики мультифакто-риальных заболеваний / Под ред. В.Н. Шабалина- М., 1994.- 80 с.

5. Насонов Е.Л. Противовоспалительная терапия ревматических болезней.- М.а: М-Сити, 1996.- 345 с.

6. Нефрология: Рук-во для врачей / Под ред. И.Е. Тарее-вой.- М.: Медицина, 2000.- 688 с.

7. Рыдловская А.В., Симбирцев А.С. // Цитокины и воспаление.- 2005.- Т. 4, № 3.- С. 4-10

8. Рябов С.И., Наточин Ю.В. Функциональная нефрология.- СПб: Лань, 1997.- 304 с.

9. Hulkkonen J. Inflammotory Cytokines and Cytokine Gene Polymorphisms in Chronic Lymphocytic Leukaemia, in Primary Sjögren’s Syndrome and Haelthy Subjects.- Tampere.- 2002.- 81 р.

УДК [615.917:547.261].036.11.07:616-092

СУПРЕССИЯ ИММУННЫХ РЕАКЦИЙ, СВЯЗАННЫХ С ФУНКЦИЕЙ

ТН1- И ТН2-ЛИМФОЦИТОВ И ПРОДУЦИРУЕМЫХ ИМИ ЦИТОКИ-НОВ, ПРИ ОСТРОМ ОТРАВЛЕНИИ МЕТАНОЛОМ

П. Ф. ЗАБРОДСКИЙ, В.Ф. КИРИЧУК, А.В. ПОЛНИКОВ, В.В. СЕРОВ*

Метанол (метиловый спирт, карбинол) применяется в качестве топлива для двигателей, в лабораторной практике, как растворитель в химической промышленности, для денатурирования этилового спирта, входит в состав ряда антифризов. Отравления чаще всего связаны с использованием его ошибочно вместо этилового спирта с целью опьянения (при этом возможны групповые и даже массовые интоксикации). Острые отравления метанолом (ООМ) характеризуются значительной тяжестью и высокой смертностью, одной из причин которой могут являться инфекционные осложнения, связанные со снижением показателей иммунного статуса. Изменения иммунного гомеостаза при острой интоксикации метанолом исследованы недостаточно описаны [1,7]. Не ясна роль ТЫ- и ТЪ2'-лимфоцитов в реализации супрессии иммунных реакций при отравлении данным спиртом. ООМ могут сопровождаются инфекционными осложнениями и заболеваниями, связанными с формированием постинтоксикационного имму-нодефицитного состояния [1,3]. Разработка наряду с антидотны-ми средствами способов снижения поражения системы иммунитета ООМ назначением иммуномодуляторов предполагает дальнейшее изучение его иммунотропных эффектов [1, 2, 7].

Цель работы - оценка супрессии иммунных реакций, связанных с функцией ТЫ- и ТЪ2'-лимфоцитов и продуцируемых ими интерлейкинов (ИЛ-2, ИЛ-4), при ООМ.

Материал и методы исследования. Эксперименты проводились на крысах Wistar обоего пола массой 180-240 г. метанол вводили перорально в дозе 0,75 DL50 однократно (DL50 метанола при пороральном введении составляло 8,7+1,1 г/кг) через 3 сут. после иммунизации Т-зависимым антигеном. Показатели системы иммунитета оценивали общепринятыми методами в экспериментальной иммунотоксикологии [2]. Гуморальную иммунную реакцию к тимусзависимому (эритроцитам барана - ЭБ) антигену

*410017; Саратовский военно-медицинский институт, пл. Ильинская 17