ЖИВЫЕ АТТЕНУИРОВАННЫЕ ШТАММЫ МИКОПЛАЗМ

1. Живая аттенуированная бактерия Mycoplasma, которая проявляет пониженную экспрессию одного или более чем одного белка, выбранного из группы, состоящей из пируватдегидрогеназы, фосфопируватгидратазы, 2-дезоксирибозо-5-фосфатальдолазы и рибосомального белка L35, относительно бактерии Mycoplasma дикого типа того же вида.
2. Бактерия по п.1, где указанная бактерия:
(1) имеет происхождение из патогенной для животных бактерии Mycoplasma;
(2) имеет происхождение из непатогенной для человека бактерии Mycoplasma;
(3) проявляет по меньшей мере на 25% меньшую, по меньшей мере на 50% меньшую или по меньшей мере на 75% меньшую экспрессию указанного одного или более чем одного белка относительно указанной бактерии дикого типа;
(4) проявляет пониженную экспрессию пируватдегидрогеназы;
(5) проявляет пониженную экспрессию фосфопируватгидратазы;
(6) проявляет пониженную экспрессию 2-дезоксирибозо-5-фосфатальдолазы;
(7) проявляет пониженную экспрессию рибосомального белка L35 или
(8) проявляет пониженную экспрессию пируватдегидрогеназы, фосфопируватгидратазы, 2-дезоксирибозо-5-фосфатальдолазы и рибосомального белка L35.
3. Бактерия по п.2, где указанная патогенная для животных бактерия Mycoplasma представляет собой патогенную для человека бактерию Mycoplasma.
4. Бактерия по п.3, где указанная патогенная для человека бактерия Mycoplasma представляет собой вид, выбранный из группы, состоящей из M.genitalium, M.fermentans, M.salivarium, M.hominis, M.pneumonia, M.incognitus, M.penetrans, M.pirum, M.faucium, M.lipophilum и M.buccale.
5. Бактерия по п.2, где указанная непатогенная для человека бактерия представляет собой патогенную для птиц бактерию Mycoplasma, патогенную для свиней бактерию Mycoplasma или патогенную для овец, коров, коз или собак бактерию Mycoplasma.
6. Бактерия по п.5, где указанная патогенная для птиц бактерия Mycoplasma представляет собой вид, выбранный из группы, состоящей из M.cloacale, M.gallinarum, M.gallisepticum, M.gallopavonis, M.glycophilum, M.iners, M.iowae, M.lipofaciens, M.meleagridis и M.synoviae.
7. Бактерия по п.5, где указанная патогенная для овец, коров, коз или собак бактерия Mycoplasma представляет собой вид, выбранный из группы, состоящей из M.capricolum subsp.capricolum, M.capricolum subsp.capripneumoniae, M.mycoides subsp.mycoides LC, M.mycoides subsp.capri, M.bovis, M.bovoculi, M.canis, M.californicum и M.dispar.
8. Вакцинная композиция, содержащая:
(а) живую аттенуированную бактерию Mycoplasma, которая проявляет пониженную экспрессию одного или более чем одного белка, выбранного из группы, состоящей из пируватдегидрогеназы, фосфопируватгидратазы, 2-дезоксирибозо-5-фосфатальдолазы и рибосомального белка L35, относительно бактерии Mycoplasma дикого типа того же вида, и
(б) фармацевтически приемлемый носитель.
9. Вакцинная композиция по п.8, где указанная бактерия:
(1) проявляет по меньшей мере на 25% меньшую, по меньшей мере на 50% меньшую или по меньшей мере на 75% меньшую экспрессию указанного одного или более чем одного белка относительно указанной бактерии дикого типа;
(2) проявляет пониженную экспрессию пируватдегидрогеназы;
(3) проявляет пониженную экспрессию фосфопируватгидратазы;
(4) проявляет пониженную экспрессию 2-дезоксирибозо-5-фосфатальдолазы;
(5) проявляет пониженную экспрессию рибосомального белка L35 или
(6) проявляет пониженную экспрессию пируватдегидрогеназы, фосфопируватгидратазы, 2-дезоксирибозо-5-фосфатальдолазы и рибосомального белка L35.
10. Вакцинная композиция, содержащая живую аттенуированную бактерию Mycoplasma, имеющую пониженную экспрессию одного или более чем одного белка, выбранного из группы, состоящей из пируватдегидрогеназы, фосфопируватгидратазы, 2-дезоксирибозо-5-фосфатальдолазы и рибосомального белка L35, относительно бактерии Mycoplasma дикого типа того же вида, для применения в вакцинации животного против инфекции Mycoplasma.
11. Вакцинная композиция по п.10, где указанная бактерия:
(1) проявляет по меньшей мере на 25% меньшую, по меньшей мере на 50% меньшую или по меньшей мере на 75% меньшую экспрессию указанного одного или более чем одного белка относительно указанной бактерии дикого типа;
(2) проявляет пониженную экспрессию пируватдегидрогеназы;
(3) проявляет пониженную экспрессию фосфопируватгидратазы;
(4) проявляет пониженную экспрессию 2-дезоксирибозо-5-фосфатальдолазы;
(5) проявляет пониженную экспрессию рибосомального белка L35 или
(6) проявляет пониженную экспрессию пируватдегидрогеназы, фосфопируватгидратазы, 2-дезоксирибозо-5-фосфатальдолазы и рибосомального белка L35.
12. Вакцинная композиция по п.10, где указанную вакцинную композицию вводят указанному животному прямой инъекцией, распылением или с питьевой водой.
13. Способ идентификации аттенуированных клонов Mycoplasma, включающий:
(а) помещение исходной популяции бактерий Mycoplasma в аттенуирующие условия, создание посредством этого предположительно аттенуированной бактериальной популяции, и
(б) анализ отдельных клонов указанной предположительно аттенуированной бактериальной популяции в отношении пониженной экспрессии одного или более чем одного белка, выбранного из группы, состоящей из пируватдегидрогеназы, фосфопируватгидратазы, 2-дезоксирибозо-5-фосфатальдолазы и рибосомального белка L35, относительно бактерии Mycoplasma дикого типа того же вида, и
(в) тестирование клонов, идентифицированных в (б) как имеющих пониженную экспрессию указанного одного или более чем одного белка, в отношении вирулентности,
где клон Mycoplasma, который проявляет пониженную экспрессию указанного одного или более чем одного белка и пониженную вирулентность относительно бактерии Mycoplasma дикого типа того же вида, представляет собой аттенуированный клон Mycoplasma.
14. Способ по п.13, где указанные аттенуирующие условия в (а) включают:
(1) пассирование указанной исходной популяции бактерий Mycoplasma по меньшей мере 2 раза in vitro, по меньшей мере 5 раз in vitro или по меньшей мере 10 раз in vitro;
(2) трансформацию указанной исходной популяции бактерий Mycoplasma транспозоном, который случайным образом встраивается в геном Mycoplasma; или
(3) воздействие на указанную исходную популяцию бактерий Mycoplasma химическим мутагеном или ультрафиолетовым излучением.
15. Способ по п.13, где указанные отдельные клоны указанной предположительно аттенуированной бактериальной популяции анализируют в (б) в отношении пониженной экспрессии указанного одного или более чем одного белка посредством полимеразной цепной реакции с обратной транскриптазой (RT-PCR) или посредством вестерн-блоттинга.
16. Способ по п.13, где указанные клоны, идентифицированные в (б), тестируют в отношении вирулентности в (в) путем введения одного или более чем одного из указанных клонов животному, восприимчивому к заражению указанной бактерией Mycoplasma дикого типа, и сравнения клинических симптомов, наблюдаемых у указанных животных после введения указанного одного или более чем одного клона, с клиническими симптомами контрольных животных, которым не вводили указанные клоны.