Люминесцентно-гистохимическая характеристика биоаминсодержащих структур пульпы зуба при сочетанной патологии

МЕДИЦИНСКИЙ

АЛЬМАНАХ

эмоксипина, стиллавита может быть рекомендовано в комплексной терапии послеоперационного транзиторного роговично-конъюнктивального ксероза с целью повышения эффективности терапии.

ЛИТЕРАТУРА

1. Grewal D.S., Brar G.S., Grewal S.P.S. Assessment of central corneal thickness in normal, keratoconus, and postlaser in situ keratomileusis eyes using Scheimpflug imaging, spectral domain optical coherence tomography, and ultrasound pachymetry. J Cataract Refract Surg. 2010. № 36. Р. 954-964.

2. Майчук Д.Ю. Патогенетическая роль воспаления в формировании вторичного сухого глаза. Современные методы диагностики в офтальмологии: Сб. науч. статей. М. 2006. С. 412.

Maychuk D.Yu. Patogeneticheskaya rol' vospaleniya v formirovanii vtorichnogo sukhogo glaza. Sovremennye metody diagnostiki v oftal'mologii: Sb. nauch. statey. M. 2006. S. 412.

3. Щипанова А.И., Майчук Ю.Ф., Стирманова Е.Р. Медико-биологическая оценка новой глазной лекарственной формы отечественного препарата дери-нат. Российский офтальмологический журнал. 2012. Т. 5. № 2. С. 88-91.

Schipanova A.I., Maychyk Yu.F, Stirmanova E.R. Mediko-biologicheskaya ocenka novoy glaznoy lekarstvennoy formy otechestvennogo preparata derinat. Rossiyskiy oftal'mologicheskiy zhurnal. 2012. T. 5. № 2. S. 88-91.

4. Тихомирова Н.К., Аверина О.А., Чемоданов Д.В. Развитие синдрома «сухого глаза» в условиях общей анестезии // Актуальные проблемы и достижения в медицине: сб. науч. трудов по итогам междунар. научно-практич. конф. Самара. 2015. № 2. C. 60

Tikhomirova N.K., Averina О.А., Chemodanov D.V. Razvitie sindroma «sukhogo glaza» v usloviyakh obschey anestezii // Aktual'nye problemy i dostizheniya v medicine: Sb. nauch. trudov po itogam mezhdunar. nauchno-practich. konf. Samara. 2015. № 2. S. 60-62.

5. Жданович И.В., РазгулинА.С., Столярова В.В. Патогенетические основы терапии послеоперационного транзиторного роговично-конъюнктивального ксероза. Медицинский альманах. 2016. № 1 (41).3. С. 89-92.

Zhdanovich I.V., Rasgulin A.S., StolyarovaV.V. Patogeneticheskie osnovy terapii posleoperacionnogo tranzitornogo rogovichno-con'junctival'nogo xeroza. MedicinskyAl'manah. 2016. № 1 (41)3. S. 89-92.

6. Alves M., Fonseca E.S. et.al Dry eye disease treatment: a systemic review of published trials and a critical appraisal of therapeutic strategies. Ocular surface. 2013. Vol. 11. № 3. P.182-192.

7. Бржеский В.В., Сомов Е.Е. Роговично-конъюнктивальный ксероз: диагностика, клиника, лечение. СПб.: Левша, 2003. 119 с.

Brgzevsky V.V., Somov E.E. Rogovichno-con'junctival'ny xeroz: diagnostika,clinika, lechenie. SPb.: Levsha, 2003. 119 s.

8. Shen M., Li J., Wang J. et al. Upper and lower tear menisci in the diagnosis of dry eye. IOVS. 2009. № 50. Р. 2722-2726.

9. Chen F., Shen M., Chen W. et al. Tear meniscus volume in dry eye after punctal occlusion. IOVS. 2010. № 51. Р. 1965-1969.

10. Yuan Y., Chen J.W., Tao A. et al. Reduced tear meniscus dynamics in dry eye patients with aqueous tear deficiency. Am. J Ophthalmol. 2010. № 149. Р. 932-938.

11. Ibrahim O.M., Dogru M., Takano Y. et al. Application of Visante optical coherence tomography tear meniscus height measurement in the diagnosis of dry eye disease. Ophthalmology. 2010. № 117. Р. 1923-1929.

ш

УДК: 611.314.013.395:616.314.003.725 Код специальности ВАК: 14.01.14

ЛЮМИНЕСЦЕНТНО-ГИСТОХИМИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА БИОАМИНСОДЕРЖАШИХ СТРУКТУР ПУЛЬПЫ ЗУБА ПРИ СОЧЕТАННОЙ ПАТОЛОГИИ

А.В. Московский, Л.А. Воропаева, В.Н. Викторов, С.В. Леженина, О.В. Скворцов, В.П. Цыганов,

ФГБОУ ВПО «Чувашский государственный университет им. И.Н. Ульянова», г. Чебоксары

Московский Александр Владимирович - e-mail: moskov_av@mail.ru

С помощью люминесиентно-гистохимических методов исследования описаны качественные и количественные изменения биоаминсодержащих структур пульпы зуба человека при кариесе и его осложнениях в сочетании с пародонтитом. Обнаружено, что участие в нейромедиаторной регуляции гомеостаза пульпы зуба в норме и патологии наряду с нервными волокнами принимают тучные и гранулярные люминесиирующие клетки, создающие биоаминное обеспечение структур пульпы зуба взрослого человека.

Ключевые слова: пульпа зуба, тучные клетки, гранулярные люминесиирующие клетки,

биогенные амины, кариес, пульпит, пародонтит.

For the qualitative and quantitative change of bioamine containing human pulp structures at the caries and its complications in combination with parodontitis were described by means of luminescent-histochemical methods of study. It was discovered that mast cells and luminescenting granular cells alongside with nervous filaments take part in neurotrasmitteral regulation of normal and inflammated tooth pulp homeostasis. This structures ensure bioamines normal and inflammated pulp of adult person teeth.

Key words: dental pulp, mast cells, granular luminescenting cells, biogenic amines, caries, pulpitis, periodontitis.

Введение

В настоящее время достаточно подробно изучено строение пульпы зуба, детально описаны морфологические изменения при кариесе и пульпите [1]. Это связано с тем, что в практику стоматологии всё чаще внедряются различные методы прижизненного морфологического анализа [2]. Кроме того, научные исследования в стоматологии в своём большинстве базируются на сопоставлении клинических данных с морфологическими [3].

Большая распространённость и постоянный рост среди населения заболеваемости кариесом, его осложнениями в сочетании с заболеваниями пародонта, роль данной патологии в формировании хронического одонтогенного очага инфекции в организме, трудности лечения и профилактика заболевания вызывают постоянный интерес к этой проблеме [4, 5].

Представляют интерес и сообщения об участии биогенных аминов (БА) - катехоламинов (КА), серотонина (СТ), гистамина (Г) - в регуляции биологических процессов в развивающейся, интактной и воспалённой пульпе зуба [6, 7]. Изучены локализация, а также роль биогенных аминов в процессе дифференцировки и созревания клеток развивающейся пульпы зуба и пародонта [8]. В пульпе зуба обнаружены рецепторы к БА и ферменты, участвующие в их инактивации [9]. Исследуя пульпу здоровых и больных пародонтитом пациентов, было отмечено трехкратное увеличение уровня норадреналина и адреналина по сравнению с нормой [6]. Катехоламины играют важную роль в регуляции внутрипульпарного давления в воспаленной пульпе как медиаторы вазоконстрикции [6, 7]. Было выявлено значительное увеличение катехоламинов в воспаленной пульпе при пародонтите по сравнению с нормой. При пульпите и пародонтите гистамин продуцируется вновь при помощи гистидиндекарбоксилазы пульпы зуба [10].

Известно, что тучные клетки (ТК) участвуют в воспалительном повреждении при заболеваниях полости рта у человека, в том числе пародонтите, их ферменты участвуют в разрушении межклеточного матрикса [11, 12]. При хроническом пародонтите их количество значительно увеличивается, они тесно контактируют с макрофагами, через секрецию цитоки-нов они принимают активное участие в регуляции иммунного ответа и клеточной миграции [13, 14]. Поскольку ТК играют основную роль в воспалительном процессе, изменение в них содержания БА представляет собой важную составляющую развития хронических заболеваний полости рта [15].

Однако в литературе отсутствуют сведения о состоянии биоаминного статуса структур пульпы при кариесе, его осложнениях в сочетании с пародонтитом, причинах тенденции воспаления в пульпе к хронизации и роли БА в этом процессе.

Цель исследования: изучение биоаминсодержащих структур пульпы зуба взрослого человека в норме, при кариесе и его осложнениях в сочетании с пародонтитом.

Материал и методы

В ходе работы исследована пульпа зубов 294 человек обоего пола в возрасте от 23 до 49 лет, взятая по ортопедическим и терапевтическим показаниям. Пациенты были разделены на группы (таблица 1).

Из пульпы зуба готовились криостатные и парафиновые срезы. Люминесцентно-гистохимические методы Фалька

и Кросса применялись для избирательного выявления КА, СТ и Г в структурах пульпы зуба. Исследование на моноа-миноксидазу (МАО) по Гленнеру и окраска суданом черным «В» на внутриклеточные комплексно связанные липи-ды применялись для контроля состояния веществ, инакти-вирующих БА. Количественный подсчёт уровня БА проводили на люминесцентном микроскопе МЛ-4 с применением фотометрической насадки ФМЭЛ-1А. Оценку статистической значимости полученных данных проводили по 1:-критерию Стьюдента.

ТАБЛИЦА 1.

Группы обследуемых лиц

Группа Нозология Количество обследованных

I Контрольная группа 33

II Поверхностный кариес в сочетании с пародонтитом лёгкой степени 36

III Средний кариес в сочетании с пародонтитом лёгкой степени 38

IV Глубокий кариес в сочетании с пародонтитом лёгкой степени 34

V Острый очаговый пульпит в сочетании с пародонтитом средней степени 42

VI Острый диффузный пульпит в сочетании с пародонтитом средней степени 37

VII Хронический фиброзный пульпит в сочетании с пародонтитом тяжёлой степени 38

VIII Хронический гангренозный пульпит в сочетании с пародонтитом тяжёлой степени 36

Результаты исследований

По данным люминесцентно-гистохимического исследования основным морфологическим субстратом, создающим биоаминное обеспечение структур пульпы зуба взрослого человека, наряду с нервными волокнами и кровеносными сосудами, являются биоаминсодержащие клетки - тучные клетки и гранулярные люминесцирующие клетки (ГЛК).

При исследовании пульпы по методу Фалька во всех срезах пульпы зубов контрольной группы в центральном слое выявляются адренергические нервные волокна, расположенные по ходу кровеносных сосудов. От нервно-сосудистых сплетений отходят одиночные нервные терми-нали в виде изумрудно-зелёных нитей с варикозными расширениями.

Выявленная адренергическая иннервация наиболее обильной была в субодонтобластическом слое пульпы. Здесь же были обнаружены единичные ГЛК-клетки полигональной формы, со множеством ярких, желтовато-белых глыбовидных гранул, тесно контактирующих с нервными терминалями. Одонтобласты, а также собственная соединительная ткань пульпы дают диффузное слабое желтовато-зелёное свечение. ТК выявляются по ходу кровеносных сосудов. Они отличаются от ГЛК меньшими размерами, удлинённой формой, наличием тёмного нелюминесцирующего ядра и мелкозернистых, одинаковых по размеру гранул в цитоплазме.

МЕДИЦИНСКИЙ

АЛЬМАНАХ

Обработка криостатных срезов пульпы парами ортофта-левого альдегида по методу Кросса позволила нам обнаружить Г во всех вышеназванных структурах.

Прямую идентификацию БА в структурах пульпы зубов взрослого человека дополнили используемые нами методы косвенного выявления этих веществ - обнаружение МАО по методу Гленнера, аргентаффинная реакция Массона-Фонтаны на индолсодержащие вещества (СТ и его метаболиты), метод окраски суданом чёрным «В» на фосфолипиды, являющиеся субстратом для связывания БА.

Спектрофлуориметрическое исследование срезов контрольной группы пациентов показало наличие БА в одон-тобластах и структурных элементах собственно соединительной ткани пульпы (фибробластах, фиброцитах, колла-геновых волокнах, межклеточном веществе и др.), не

дифференцирующихся люминесцентно-гистохимически-ми методами и в связи с этим обозначающихся нами таким общим понятием как «фон пульпы» (таблица 2).

При глубоком кариесе в сочетании с пародонтитом лёгкой степени отмечено повышение содержания Г в ТК и КА, СТ в ГЛК. Развитию острого пульпита в сочетании с пародонтитом средней степени тяжести предшествуют ранние изменения нейромедиаторного статуса пульпы зуба при кариесе в сочетании с пародонтитом.

Топографическая и функциональная связь ГЛК и ТК пульпы зуба с нервными терминалями и кровеносными сосудами позволяет сделать предположение об их важной роли в биоаминной регуляции гомеостаза пульпы зуба, что приобретает особое значение в развитии патологии.

При остром воспалении пульпы зуба в сочетании с пародонтитом средней степени БА концентрируются в

ТАБЛИЦА 2.

Интенсивность люминесценции биогенных аминов в структурах пульпы зуба в норме, при кариесе и его осложнениях в сочетании с пародонтитом

Группы Структуры БА I II III IV V VI VII VIII

КА 4,3 10,1 8,2 9,5 17,4 28,3 21,7 3,8

±0,3 ±0,9* ±0,7* ±0,8* ±1,5** ±2,7*** ±2,1*** ±0,2

Одонтобласты СТ 15,3 ±1,4 18,7 ±1,6 21,5 ±1,9 18,7 ±1,7 6,1 ±2,2 35,1 ±2,6** 22,3 ±2,1 8,6 ±0,6

Г 5,3 11,5 14,2 16,7 44,5 47,8 18,2 5,1

±0,3 ±1,1 ±1,6 ±1,8* ±4,2*** ±3,5*** ±1,9* ±0,2

КА 29,3 31,4 32,6 46,9 37,8 34,2 26,5 21,1

±2,8 ±2,9 ±3,2 ±3,7* ±2,9* ±2,5 ±2,3 ±1,8

Кровеносные сосуды СТ 47,8 63,7 58,3 61,6 58,4 56,2 50,8 34,7

пульпы зуба ±3,9 ±5,4 ±4,3 ±5,1 ±4,5 ±2,3 ±3,7 ±3,2

Г 19,5 31,7 32,1 30,2 87,4 167,1 43,9 13,7

±2,1 ±3,8 ±2,2 ±3,1 ±7 9*** ±14,5*** ±4,1* ±1,2

КА 25,2 28,5 37,1 40,7 66,4 59,8 37,2 13,4

Нервные волокна пульпы зуба ±2,3 ±1,5 ±2,9* ±3,5* ±5,3** ±3,7** ±2,6* ±1,2*

СТ 43,6 45,9 64,1 53,7 97,6 156,4 113,2 27,6

±3,5 ±3,8 ±5,3** ±4,1** ±8,5*** ±13,7*** ±11,8*** ±2,4

Г 12,3 24,1 32,9 20,3 69,2 105,8 31,6 8,7

±1,1 ±2,3 ±3,4* ±4,1 ±7,5** ±11,3*** ±2,9* ±1,6

КА 7,6 11,7 14,8 30,6 19,5 18,1 13,4 6,9

±0,5 ±1,1* ±1,3** ±3,2*** ±1,9** ±1,7** ±1,4* ±0,5

ТК СТ 15,6 21,5 22,3 40,3 25,6 22,4 16,9 11,7

пульпы зуба ±1,5 ±1,8 ±2,1 ±3,4 ±2,2 ±1,9 ±1,5 ±1,2

Г 26,2 48,9 87,1 192,4 97,6 25,3 16,1 14,8

±2,4 ±4,5** ±9,3** ±17,8*** ±8,9** ±2,6 ±1,5* ±1,2*

КА 40,9 47,6 75,8 128,9 95,6 81,2 58,7 29,1

ГЛК ±3,6 ±3,9 ±6,7** ±10,4*** ±7,8** ±7,3** ±5,2* ±2,6

СТ 57,9 63,2 81,4 94,6 97,8 102,4 79,7 43,2

пульпы зуба ±4,2 ±5,4 ±7,1* ±8,3** ±8,5** ±10,6** ±7,8* ±3,4

Г 15,8 39,6 68,7 103,9 52,7 26,5 22,3 10,9

±1,3 ±3,5* ±4,6** ±10,1*** ±4,6** ±2,5 ±2,1 ±0,7*

Фон пульпы зуба КА 3,9 ±0,2 8,7 ±0,7* 6,6 ±0,5 7,6 ±0,6 15,3 ±1,3** 26,3 ±2,4*** 12,7 ±1,2** 2,6 ±0,1

СТ 13,5 ±2,2 15,9 ±1,0 18,2 ±1,7 17,6 ±2,1 27,3 ±3,5 33,6 ±2,8 20,4 ±1,7 6,6 ±0,4

Г 4,1 6,5 7,1 9,2 33,4 36,2 14,5 2,3

±0,3 ±0,5 ±1,8 ±1,1* ±2 9*** ±3,4*** ±1,3* ±0,2

Примечание: * - р<0,05; ** - р<0,01; *** - р<0,001.

собственной соединительной ткани пульпы. Максимальное содержание гистамина при данных патологиях выявляется в нервных волокнах и кровеносных сосудах пульпы зуба.

При хроническом пульпите в сочетании с пародонтитом тяжёлой степени наблюдается истощение нейромедиатор-ной системы пульпы зуба: происходит снижение содержания БА во всех исследуемых структурах по сравнению с контрольной группой.

Заключение

Таким образом, в данной работе было показано, что выявленная адренергическая иннервация наиболее обильной была в субодонтобластическом слое пульпы. Здесь же выявляются единичные ГЛК, тесно контактирующие с нервными терминалями. Эти данные могут указывать на наличие функциональной связи между названными структурами. Люминесцентно-гистохимическими методами в пульпе зуба нами также были выявлены клетки, относящиеся к тканевым базофилам, которые расположены по ходу кровеносных сосудов, и связанные с адвен-тициальными нервными волокнами. Количественный цитоспектрофлуометрический анализ светящихся структур пульпы зуба показал, что БА в определённых концентрациях содержатся в одонтобластах, собственно соединительной ткани пульпы, нервных волокнах, кровеносных сосудах. При сочетании одонтогенной и пародонтальной патологии в пульпе зуба отмечается максимальный динамический подъём биоаминов: увеличение содержания гиста-мина в тучных клетках и кровеносных сосудах, катехола-минов и серотонина - в гранулярных люминесцирующих клетках. При глубоком кариесе в сочетании с пародонти-том лёгкой степени отмечено повышение содержания Г в ТК и КА, СТ в ГЛК. По-видимому, при прогрессировании кариеса в сочетании с пародонтитом лёгкой степени био-аминсодержащие ГЛК и ТК играют основную роль в биоа-минном обеспечении пульпы зуба. Эти ранние изменения предшествуют развитию острого пульпита в сочетании с пародонтитом средней степени тяжести. При остром пульпите в сочетании с пародонтитом средней степени БА концентрируются в окружающей соединительной ткани. Максимальное содержание Г при данных патологиях выявляется в кровеносных сосудах пульпы зуба. При хронических формах пульпита в сочетании с пародонтитом тяжелой степени наблюдается истощение нейромедиатор-ной системы пульпы зуба. Их концентрация снижается в клетках-продуцентах, в первую очередь в ТК.

Итак, обеспечение БА пульпы зуба взрослого человека осуществляется не только нервными волокнами и кровеносными сосудами, но и биоаминсодержащими клетками - ГЛК и ТК. При прогрессировании кариеса и его осложнений в сочетании с пародонтитом ГЛК, расположенные в субодонтобластическом слое в непосредственной близости к пульпарно-дентинной границе, и ТК,

локализованные преимущественно по ходу кровеносных сосудов, чутко реагируют даже на незначительные патологические сдвиги в пульпе зуба изменением уровня БА. Биоаминные сдвиги в пульпе значительно опережают развитие иммунных реакций. Топографическая и функциональная связь ГЛК и ТК пульпы зуба с нервными тер-миналями и кровеносными сосудами позволяет сделать предположение об их основной роли в биоаминной регуляции гомеостаза пульпы зуба, что приобретает особое значение в развитии патологии.

ЛИТЕРАТУРА

1. Иванов В.С., Винниченко Ю.Л., Иванова Е.В. Воспаление пульпы зуба. М.: Медицинское информационное агентство, 2003. 264 с.

Ivanov V.S., Vinnichenko Yu.L., Ivanova E.V. Vospalenie pul'py zuba. М.: Меdicinskoe informacionnoe agentstvo, 2003. 264 s.

2. Григорьян А.С. Общая патология и проблемы теории и практики стоматологии. Стоматология. 2002. № 5. С. 7-10.

Grigor'yan A.S. Obschaya patologiya iproblem teoriiipraktikistomatologii. Stomatologiya. 2002. № 5. S. 7-10.

3. Гемонов В.В., Лаврова В.В., Фалин Л.И. Развитие и строение органов полости рта и зубов. М.: Медицина, 2002. 185 с.

Gemonov V.V., Lavrova V.V., Falin L.I. Razvitie istroenie organovpolostirta i zubov. М.: Меdicina, 2002. 185 s.

4. Jonasson A., Eriksson С., Jenkinson H.F., Ка11еБ1а1 C. et al. Innate immunity glycoprotein gp-340 variants may modulate human susceptibility to dental caries. BMC Infect Dis. 2007. Vol. 11. № 7. P. 57.

5. Shelburne C.E., Shelburne P.S., Dhople V.M., Sweier D.G. et al. Serum antibodies to Porphyromonas gingivalis chaperone HtpG predict health in periodontitis susceptible patients. PLoS ONE. 2008. Vol. 23. № 3 (4). Р. 1984.

6. Nagy G., Bartha Y., Keresztes T., Olveti E., Madlena М. Quantitative analysis of catecholamines in human dental pulp. J. Endod. 2000. Vol. 26. № 10. P. 596-598.

7. Nup C., Rosenberg P., Linke H., Tordik P. Quantitation of catecholamines in inflamed human dental pulp by high-performance liquid chromatography. J. Endod. 2001. Vol. 27. № 2. P. 73-75.

8. Московский А.В. Характеристика развития зуба человека в антенатальном периоде (люминесцентно-гистохимическое исследование). Морфология. 2005. № 6. С. 45-49.

Moskovskiy A.V. Kharakteristika razvitiya zuba cheloveka v antenatal'nom periode (lyuminescentno-gistokhimicheskoe issledovanie). Morfologiya. 2005. № 6. S. 45-49.

9. Inoue K., Mogi M., Mori R., Naito J. et al. Immunocytochemical localization of serotonin, monoamine oxidase and assessment of monoamine oxidase activity in human dental pulp. Brain Res. 2000. Vol. 853. № 2. P. 374-376.

10. Shoji N., Yoshida А., Yu Z., Endo Y., Sasano T. Lipopolysaccharide stimulates histamine-forming enzyme (histidine decarboxylase) activity in murine dental pulp and gingival. Arch Oral Biol. 2006. № 7. P. 137-142.

11. Steinsvoll S., Helgeland К., Schenck К. Mast cells - a role in periodontal diseases. J. Clin. Periodontol. 2004. Vol. 31. № 6. Р. 413-419.

12. Verma D.K., Nair P.N., Luder H.U. Quantitative histological features and ultrastructure of opercula of human teeth showing normal and delayed eruption. J. Oral Pathol Med. 2005. Vol. 34. № 2. P. 109-115.

13. Batista A.C., Rodini C.O., Lara V.S. Quantification of mast cells in different stages of human periodontal disease. Oral. Dis. 2005. Vol. 11. № 4. P. 249-254.

14. Steinsvoll S.A. 35-year-old man with aggressive periodontitis. Tidsskr. Nor. Laegeforen. 2006. Vol. 126. № 5. P. 613-614.

15. Walsh L.J. Mast cells and oral inflammation. Crit. Rev. Oral Biol. Med. 2003. Vol. 14. № 3. P. 188-198.