Нарушение иммунного гомеостаза при герпесвирусной инфекцииу новорожденных детей

оригинальные статьи Журнал фундаментальной медицины и биологии

УДК 616 - 053. 31-02: 618.33 - 022

А.А. Афонин, А.Ю. Левкович, М.А. Левкович, Л.В. Кравченко, В.О. Андреева

НАРУШЕНИЕ ИММУННОГО ГОМЕОСТАЗА ПРИ ГЕРПЕСВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИИ У НОВОРОЖДЕННЫХ ДЕТЕЙ

Ростовский научно-исследовательский институт акушерства и педиатрии

Цель: изучение факторов врожденного и адаптивного иммунитета у новорожденных с герпесвирусной инфекции в неонатальном периоде.

Материалы и методы: 60 новорожденных от матерей с персистирующей ВПГ-инфекцией. Из них 40 детей - с клиническими проявлениями герпесвирусной инфекции (I группа), 20 новорожденных с физиологическим течением неонатального периода. Определение экспрессии TLR-2 (CD14+CD282+) и TLR-4 (CD14+CD284+) проводилось методом двухцветной проточной цитофлуориметрии (HyCultbiotechnology) . Определение содержания IL-1 ß, IFN-a, IFN-y методом ИФА ( Цитокин (С-Петербург, Россия), IL-12 -Bender Medsistems (Австрия).

Результаты. Приведены новые данные, подтверждающие роль нарушений врожденного и адаптивного иммунитета в патогенезе герпесвирусной инфекции у новорожденных детей. Установлено, что критерием развития герпесвирусной инфекции является снижение количества моноцитов, экспрессирующих TLR-2, что ассоциировалось со снижением содержания IFN-a, IL-12 и IFN-y в сыворотке крови и свидетельствует о нарушении эффекторных функций иммунокомпетентных клеток.

Выводы. Манифестация герпесвирусной инфекции у новорожденных детей происходит на фоне нарушения механизмов врожденного и адаптивного иммунного ответа

Ключевые слова: внутриутробные инфекции, вирус герпеса, иммунитет.

A.A. Afonin, A.J. Levkovich, M.A. Levkovich, L.V. Kravchenko, V.O. Andreeva

INFRINGEMENT OF THE IMMUNE HOMEOSTASIS AT THE HERPES VIRUS INFECTION AT NEWBORN CHILDREN

Rostov Scientific Research Institute of Obstetrics and Pediatrics

Purpose: To study of the factors of the innate and adaptive immunity in newborns with herpesviral infection in the neonatal period.

Materials and methods. 60 newborns from mothers with persistent HSV-infection. Of these, 40 children with clinical manifestations of herpesviral infections (group I), 20 newborns with normal saline over the neonatal period. The definition of the expression of TLR-2 (CD14+CD282+) and TLR-4 (CD14+CD284+) was conducted by the method of two-running cytofluorometry (HyCultbiotechnology). Determination of lL-1 ß, IFN-a, IFN-y by ELISA ( Cytokine (St. Petersburg, Russia), IL-12 - Bender Medsistems (Austria).

Results. It presents new evidence of the role of violations of the innate and adaptive immunity in the pathogenesis of herpesviral infection in newborn children. It is established, that the criterion of development of the herpesviral infection is a reduction in the number of monocytes, expressing TLR-2, which was associated with lower levels of IFN-a, IL-12 and IFN-y in the blood serum and is evidence of violation of effector functions of immunocompetent cells.

Summary. The demonstration herpesviral infection in newborn children is happening on the background of violations of the mechanisms of innate and adaptive immune response.

Keywords: prenatal infections, herpes virus, immunity.

оригинальные статьи

Журнал фундаментальной медицины и биологии

Введение

на моноцитах

Герпесвирусная инфекция является важнейшей медико-социальной проблемой современной пери-натологии, что обусловлено тяжестью течения заболевания, высокой частотой поражения ЦНС и последующей инвалидизацией детей [1, 2]. К росту частоты инфицирования плода и новорожденного приводит значительное распространение гер-песвирусных инфекций в урогенитальной сфере у женщин во время беременности [3,4]. Клиническая диагностика герпесвирусной инфекции у новорожденных является чрезвычайно трудной из-за отсутствия четко выраженных клинических симптомов, а отрицательный результат обследования крови и мочи методом ПЦР, полученный в первые дни жизни ребенка, не исключает возможности отсроченной реализации инфекции [5]. Кроме того, наличие инфекции у матери не всегда приводит к инфицированию и развитию заболевания новорожденного.

Для элиминации вирусной инфекции организму необходимо координированное взаимодействие систем врожденного и адаптивного иммунитета. Согласно современным представлениям приобретенный компонент иммунной системы в неонатальном периоде характеризуется значительной незрелостью, в связи с чем у новорожденных отсутствует иммунологическая память и снижена способность к формированию специфических антител к патогенам. Поэтому защита от инфекции зависит главным образом от показателей врожденного иммунитета и их гуморальных компонентов [6]. Реализация специфичности врожденной иммунной системы ложится на семейство TLR-рецепторов, связывание которых микробными продуктами приводит к воспалительному ответу, опосредованному продукцией цитокинов, хемокинов, что в дальнейшем определяет характер, направление и интенсивность адаптивного иммунного ответа [7,8].

В этой связи, цель работы - изучение факторов врожденного и адаптивного иммунитета у новорожденных с герпесвирусной инфекции в неона-тальном периоде.

Материалы и методы

Под наблюдением находились 60 новорожденных от матерей с персистирующей ВПГ-инфекцией. Из них 40 детей - с клиническими проявлениями герпесвирусной инфекции (I группа). Контрольную группу составили 20 новорожденных с физиологическим течением неонатально-го периода. Состояние здоровья детей оценивали на основании результатов осмотра, общего клини-ко-биохимического анализа крови, ультразвукового исследования внутренних органов и головного мозга, транскраниальной допплерографии параметров мозгового кровотока. Диагноз ВПГ-инфекции ставился на основании клинической картины заболевания, динамики уровня специфических антител и результатов ПЦР диагностики.

Определение экспрессии TLR-2 (CD14+ CD282+) и TLR-4 (CD14+CD284+) рецепторов

периферической крови проводилось методом двухцветной проточной цитофлуориме-трии с использованием диагностических наборов HyCultbiotechnology (Нидерланды). Определение содержания IL-1 ß, IFN-a, IFN-y проводилось методом иммуноферментного анализа с использованием тест-систем фирмы Цитокин (С-Петербург, Россия), IL-12 - с использованием тест-систем Bender Medsistems (Австрия).

Статистическую обработку данных проводили с помощью пакета прикладных программ Statistica 6. При определении статистской обоснованности различия исследуемых групп применялся критерий Манна-Уитни для независимых групп и критерий Вилкоксона для зависимых групп при максимально допустимом уровне ошибки первого рода р=0,05.

Результаты и обсуждение

Анализ акушерского и гинекологического анамнеза матери показал, что перинатальными факторами риска развития внутриутробной герпесвирусной инфекции явились: иммуносупрессивная терапия у матерей, проводимая в связи с гормональным дисбалансом, - у 22 (55,0%); у 18 (45,0%) женщин были выявлены хронические воспалительные заболевания органов малого таза; у 16 (40,0%) отмечен отягощенный акушерский анамнез - антенатальная гибель плода, самопроизвольные выкидыши, невынашивание беременности. ВПГ-инфекция развивалась у детей, родившихся у матерей с высокой частотой угрозы прерывания беременности — 20 (50%), ОРВИ -13 (32,5%), заболеваний мочевы-делительной системы — 14 (35%), фетоплацентар-ной недостаточности - 9 (22,5%), эндоцервицита — 16 (40%), преждевременных родов — 11 (27,5%), низкой оценки по шкале Апгар (4-6 баллов) — 13 (32,5%).

При изучении клинической картины пациентов I группы увеличение печени отмечено у 22 (55%) новорожденных, гипотрофия - у 19 (47,5%), конъ-югационная желтуха — у 13 (32,5%), геморрагический синдром — у 10 (25%), синдром дыхательных расстройств — у 26 (65%), пневмония — у 20 (50%), синдром вегетовисцеральных дисфункций — у 26 (65%), синдром угнетения - у 25 (62,5%), судорожный синдром - у 13 (32,5%), гидроцефалия - у 11 (27,5%), менингоэнцефалит - у 15 (37,5%).

Было установлено, что у новорожденных с манифестацией герпесвирусной инфекции по сравнению с контрольной группой отмечались выраженные изменения показателей врожденного иммунитета в виде статистически значимого снижения экспрессии TLR-2 на моноцитах (CD14+CD282+) (49,5+5,4% и 70,7+12,1% соответственно), снижения содержания IFN-a в сыворотке крови (18,2+6,2 пг/мл и 39,7+10,6 пг/мл соответственно). Снижение экспрессии рецепторов врожденного иммунитета отражает нарушения функционирования в TLR-системе и может быть одной из причин повышенной чувствительности к инфекционным заболеваниям, особенно в период раннего постнатального развития, когда механизмы приобретенного иммунитета еще не являются

34

№ 1 2013

оригинальные статьи

Журнал фундаментальной медицины и биологии

достаточно эффективными. При корреляционном анализе выявлена взаимосвязь между уровнем экспрессии TLR-2 и содержанием IFN-a (r= 0,5, p= 0,02), что согласуется с данными [9] о том, что герпесвирусная инфекция может приводить к снижению TLR2-опосредованной воспалительной реакции, в частности, синтеза IFN-a.

В последние годы было показано, что IL-12 является ключевым цитокином для усиления клеточ-но-опосредованного иммунного ответа и инициации противоинфекционной защиты против внутриклеточных патогенов, формируя важнейшее связующее звено между механизмами неспецифической защиты и специфического иммунитета [10]. Полученные нами результаты исследования IL-12 выявили , что в I группе его содержание было достоверно ниже показателей, характерных для группы с физиологическим течением неонатального периода (0,5+0,08 пг/мл против 1,3 +0,9пг/мл), что сочеталось со снижением продукции IFN-y (61,2,8+ 5,4 пг/мл против 106,0+14,8 пг/мл, соответственно). Известно, что IL-12 активирует дифференци-ровку Т-лимфоцитов, повышает их цитотоксическую

активность, усиливает пролиферацию NK — клеток и Т-лимфоцитов и продукцию IFN-y. С учетом этого можно предположить, что снижение IL-12 приводит к сдвигу дифференцировки Т-хелперов в направлении Th2, не обеспечивающих формирование эффективного противовирусного иммунного ответа. Статистически значимых различий содержания IL-1 в сыворотке крови новорожденных обследуемых групп обнаружено не было.

Выводы

Манифестация герпесвирусной инфекции у новорожденных детей происходит на фоне нарушения механизмов врожденного и адаптивного иммунного ответа, а выявленные иммунологические сдвиги дают основание для разработки схем ранней диагностики, что позволит снизить тяжесть течения заболевания за счет своевременного назначения патогенетической терапии.

ЛИТЕРАТУРА

1. Бочарова И.И., Аксенов А.Н. и соавт. Итоги и перспективы научных исследований по проблеме внутриутробной инфекции новорожденных //Российский вестник акушера-гинеколога.- 2007. -Т. 7, №5. - С.60-63.

2. Иванова В.В., Иванова М.В., А.С. Левина и соавт. Современные принципы диагностики и лечения перинатальных герпес-вирусных инфекций // Рос.вестник перинатологии и педиатрии. -2008.-№1.-С.10-18.

3. Ганковская Л.В., Ковальчук Л.В., Бахарева И.В.. Внутриутробная инфекция: роль TLR-опосредованной активации врожденного иммунитета // Russian Journal of Immunology. -2007. - Vol. 9, №4. - P. 35 -40.

4. Pusztai R., Lukacsi A., Kovacs I. Mother-to-fetus transmission of cytomegalovirus // Acta Microbiol. Immunol. Hung. - 2004. -Vol. 51, N 4. - P. 385-401.

5. Воронцова Ю.Н., Володин Н.Н., Дегтярев Д.Н. Сравнительный анализ клинических и лабораторных характеристик врожденной цитомегаловирусной инфекции у недоношенных детей // Российский вестник перинатологии. - 2004. -

№2. - С. 60. - 65.

6. Medzhitov R., Janeway Jr. C.A. Innate immune induction of the adaptive immune response. Cold spring Harb. Symp. Quant. Biol. -2002. - V. 64. - P. 429-435.

7. Козлов И.Г. Лекарственные воздействия через рецепторы врожденного иммунитета. Сборник научных трудов «Ликопид в комплексном лечении и профилактике имму-нодефицитных состояний. 10-летний опыт клинической практики».М. 2005; 6-18.

8. Akira S., Takeda K. Toll-like receptors in innate immunity// Immunology. -2005.-№17 (1). - p. 1-14.

9. Van Lint AL, Murawski MR, Goodbody RE, et al. Herpes simplex virus immediateearly ICP0 protein inhibits TLR2-dependent inflammatory responses and NF-kappa B signaling//J Virol. -2004.-№78. - р.20- 92.

10. Zenclusssen A.C. Questioning the Th1/Th2 paradigm in reproduction: peripheral levels of IL-12 are down-regulated in miscarriage patients // Am. J. Reprod. Immunol.-2002. - Vol. 48. -P.245-251.