Способ in vitro определения биосовместимости скаффолдов для нейротрансплантации

1. Способ in vitro определения биосовместимости скаффолдов для нейротрансплантации, включающий сокультивирование первичных нейрональных культур со скаффолдами на поверхности конструктов, определение показателей жизнеспособности, морфометрических параметров и показателей функциональной активности клеток в культуре, оценку уровня цитотоксичности материала скаффолда, его адгезивных свойств и оптимальности архитектоники скаффолда для нейротрансплантации на основании регистрируемых параметров, при этом оценку жизнеспособности проводят с использованием флуоресцентных красителей пропидий йодида и бис-бензимида, а также качественно с использованием шкалы цитотоксичности согласно ГОСТ Р ИСО 10993-5:2009 ISO 10993-5:2009, по результатам которой скаффолд считают биосовместимым, если количество живых клеток составляет 90% и более от всех клеток культуры, оценку морфометрических параметров клеточной культуры, культивируемой на поверхности конструкта, осуществляют с использованием сканирующей микроскопии и программы ImageJ, по результатам которой при снижении показателей в группе со скаффолдом относительно контрольной в 1,5 раза и более, считают, что материал конструкта и его структура оказывает деструктивное воздействие на культуру клеток, анализ спонтанной кальциевой активности проводят с использованием специфического кальциевого красителя Oregon Green 488 BAPTA-1 АМ и конфокального лазерного сканирующего микроскопа, по результатам которого скаффолд считают биосовместимым при количестве клеток, проявляющих кальциевую активность, 80% и более, длительности кальциевых событий 8-10 секунд, частоты кальциевых осцилляций 1,5-2 количество кальциевых событий/мин.
2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что первичные нейрональные культуры получают из эмбриональной ткани головного мозга мыши.
3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что экспериментальные методы, позволяющие оценить безопасность использования конструктов, проводят на 14 день культивирования клеточных культур.