Сочетания полиморфных маркеров генов молекул адгезии, хемокинов, их рецепторов и гена фактора роста эндотелия сосудов как потенциальные предикторы эссенциальной гипертензии

ЛИТЕРАТУРА

1. Аляев, Ю.Г. Комбинированное применение тамслозина и финастерида перед трансуретральной резекцией простаты / Ю.Г. Аляев, Л.М. Рапопорт, Д.Г. Цариченко // Эффективная фармакотерапия в урологии. - 2010. - № 3. - С. 6-8.

2. Как можно предотвратить прогрессирование заболевания? / Ю.Г. Аляев [и др.] // Consilium medicum. - 2008. - Т. 10, N° 4. - С. 22-24.

3. О выборе способа аденомэктомии / О.И. Братчиков [и др.] // Пленум Всероссийского научного общества урологов : тез. докл. -Курск, 1993. - С. 26-27.

4. Винаров А.З. Медикаментозное лечение больных гиперплазией предстательной железы: дис. ... д-ра мед. наук. - М., 1999. - 273 с.

5. Винаров, А.З. Гиперплазия предстательной железы. Современное лечение / А.З. Винаров, Э.Г. Асламазов // Материалы X Российского съезда урологов. - М., 2002. - С. 33-42.

6. Зайцев, В.П. Вариант психологического теста Mini-Mult / В.П. Зайцев // Психологический журнал. - 1981. - № 3. - С. 118-123.

7. Зайцев, В.П. Психологический тест СМОЛ / В.П. Зайцев // Актуальные вопросы восстановительной медицины. - 2004. - № 2. -С. 17-19.

8. Современные аспекты оперативного лечения доброкачественной гиперплазии предстательной железы / А.А. Камалов [и др.] // Урология. - 2004. - № 1. - С. 30-34.

9. Наш опыт хирургического лечения доброкачественной гиперплазии предстательной железы / Б.К. Комяков [и др.] // Материалы X Российского съезда урологов. - М., 2002. - С. 125-126.

10. Лопаткин, Н.А., Доброкачественная гиперплазия предстательной железы / под ред. Н.А. Лопаткина. - М., 1999. - 216 с.

11. Лопаткин, Н.А. Урология. - М.: ГЭОТАР-МЕДИА, 2004. - 335 с.

12. Мартов, А.Г. Опыт применения дутастерида (Аводарт) перед трансуретральной резекцией доброкачественной гиперплазии простаты больших размеров / А.Г. Мартов, Д.В. Ергаков // Первый Российский конгресс по эндокринологии: тез. докл. - М., 2008. - С. 64-65.

13. Пушкарь, Д.Ю. Современный алгоритм обследования и лечения больных аденомой предстательной железы / Д.Ю. Пушкарь, П.И. Раснер // Урология. - 2007. - № 3. - С. 87-94.

14. Яхин, К.К. Клинический опросник для выявления и оценки невротических состояний / К.К. Яхин, Д.М. Менделевич // Клиническая и медицинская психология: практическое руководство. - М., 1998. - 563 с.

УДК 575.174.015.3 © Коллектив авторов, 2017

Э.Б. Имаева1, Т.Р. Насибуллин1, Я.Р. Тимашева1, В.В. Эрдман1, И.А. Туктарова1, Л.И. Хабибрахманова1, Г.Х. Мирсаева2, О.Е. Мустафина1,3 СОЧЕТАНИЯ ПОЛИМОРФНЫХ МАРКЕРОВ ГЕНОВ МОЛЕКУЛ АДГЕЗИИ, ХЕМОКИНОВ, ИХ РЕЦЕПТОРОВ И ГЕНА ФАКТОРА РОСТА ЭНДОТЕЛИЯ СОСУДОВ КАК ПОТЕНЦИАЛЬНЫЕ ПРЕДИКТОРЫ ЭССЕНЦИАЛЬНОЙ ГИПЕРТЕНЗИИ 1ФГБУН «Институт биохимии и генетики Уфимского научного центра РАН», г. Уфа 2ФГБОУ ВО «Башкирский государственный медицинский университет»

Минздрава России, г. Уфа 3ФГБОУ ВО «Башкирский государственный университет» Минобрнауки России, г. Уфа

Эссенциальная гипертензия (ЭГ) - многофакторное полигенное заболевание, развитие которого обусловлено сложным взаимодействием множества средовых и генетических факторов. В настоящем исследовании проведён анализ ассоциаций с ЭГ сочетаний полиморфных маркеров rs5498 (K469E) гена ICAM1, rs3917010 (c.w928+420A>C), гена VCAM1, rs1024611 (-2518A>G), гена CCL2, rs1799864 (V64I), гена CCR2, rs3732378 (T280M) гена CX3CR1, rs333 (А32 I/D) гена CCR5 и rs35569394 (-2549(18)I/D) гена VEGFA. Материалом для анализа послужили 196 образцов ДНК больных ЭГ мужчин и 301 образец ДНК практически здоровых мужчин. С помощью алгоритма APSampler обнаружены сочетания аллельных вариантов генов-кандидатов, ассоциированные с повышенным риском развития ЭГ, из которых наибольший интерес представляют CCL2*G/G+CCR2*I, ICAM1*E+VCAM1*C+CCR5*D+CX3CR1*M, CAM1*A+CCR2*I+CX3CR1*M.

Ключевые слова: эссенциальная гипертензия, генетика, полиморфные маркеры генов-кандидатов, сочетания аллель-ных вариантов, алгоритм APSampler.

E.B. Imaeva, T.R. Nasibullin, Ya.R. Timasheva, V.V. Erdman, I.A. Tuktarova, L.I. Khabibrakhmanova, G.Kh. Mirsaeva, O.E. Mustafina COMBINATIONS OF ADHESION MOLECULES, CHEMOKINS, THEIR RECEPTORS AND VASCULAR ENDOTHELIAL GROWTH FACTOR A GENE POLYMORPHISMS AS POTENTIAL PREDICTORS OF ESSENTIAL HYPERTENSION

Essential hypertension (EH) is a multifactorial disease, caused by complex interaction between genetic and environmental factors. In this study we performed an analysis of the associations between EH and polymorphic markers in candidate genes: ICAM1 rs5498 (K469E), VCAM1 rs3917010 (c.w928+420A>C), CCL2 rs1024611 (-2518A>G), CCR2 rs1799864 (V64I), CX3CR1 rs3732378 (T280M), CCR5 rs333 (A32 I/D) and VEGFA rs35569394 (-2549(18)I/D). For genotyping we used 196 DNA samples of men with EH and 301 DNA samples of almost healthy men. Using the APSampler algorithm, combinations of polymorphic markers associated with an increased risk of developing EH have been obtained, of which the most interesting are CCL2*G/G+CCR2*I, ICAM1 *E+VCAM 1 *C+CCR5 *D +CX3CR1*M, VCAM1 *A+CCR2*I+CX3 CR 1*M.

Key words: essential hypertension, genetics, polymorphic markers of candidate genes, combinations of allelic variants, APSam-pler algorithm.

Артериальная гипертензия является общепризнанным и независимым фактором риска развития сердечно-сосудистых заболеваний, обусловливающих более половины всех случаев инвалидизации и смертности населения. В России высокое артериальное давление встречается среди 40% взрослого населения [2]. Подавляющее большинство случаев артериальной гипертезии приходится на эссенциальную ги-пертензию (ЭГ, первичная гипертензия или гипертоническая болезнь).

ЭГ - многофакторное полигенное заболевание, развитие которого определяется совместным вкладом множества сложно взаимодействующих генов и факторов внешней среды. При этом вклад каждого из генов в отдельности в формирование такой патологии может быть небольшим. Более того, поскольку многие гены обладают плейотропными эффектами, один и тот же аллельный вариант гена в зависимости от сопутствующих факторов может как способствовать развитию заболевания, так и оказывать противоположное влияние по отношению к изучаемому фенотипу. Возможным решением данной проблемы является исследование ассоциаций с изучаемой патологией сочетаний нескольких факторов. При этом, поскольку увеличение количества факторов сопровождается экспоненциальным ростом возможных их комбинаций и, как следствие, снижением частоты встречаемости таких комбинаций, более рациональным представляется ограничивать количество факторов на основе уже известных данных о патогенезе заболевания.

Согласно современным представлениям, в патогенезе ЭГ важную роль играют локальное и системное воспаления [9]. Адгезия лейкоцитов к сосудистой стенке и их миграция из сосудистого русла в очаг воспаления контролируются молекулами адгезии и хе-мокинами. Соответственно, аллельные варианты генов молекул адгезии и хемокинов оцениваются как потенциальные гены-кандидаты ЭГ. Ранее нами была показана роль отдельных аллелей (полиморфных маркеров) генов молекул адгезии [7] и хемокинов [1] в формировании наследственной предрасположенности к ЭГ. Цель настоящего исследования состояла в исследовании молекулярно-генетических основ наследственной предрасположенности к ЭГ у мужчин с помощью анализа ассоциаций с заболеванием сочетаний полиморфных маркеров генов 1САМ1 (ге5498, К469Е), УСАМ.1 (те3917010, с^928+420А>СА ССЬ2 (^1024611, -2518А>0), ССИ2 (ге1799864, У64Т), СХ3СЯ1 (ге3732378, Т280М), ССЯ5

(rs333, Д32 I/D) и VEGFA (rs35569394, -2549(18)I/D).

Материал и методы

Материалом для исследования послужили образцы ДНК 497 мужчин, татар по этнической принадлежности, постоянно проживающих на территории Республики Башкортостан. У всех 497 человек было получено письменное информированное согласие на использование персональных данных для проведения исследования. Основная группа больных состояла из 196 мужчин, у которых манифестация заболевания отмечена в возрасте от 25 до 30 лет (средний возраст составил 42,45±6,17 года), а длительность заболевания составила не менее года. Диагноз ЭГ устанавливался на основании Национальных рекомендаций по профилактике, диагностике и лечению артериальной гипертонии второго пересмотра (2009 г.). Все больные прошли обследование, которое включало сбор жалоб и анамнеза, физикальную диагностику, общий и биохимический анализы крови и мочи, ЭКГ в 12-ти стандартных отведениях, эхокардио-графическое и допплеровское исследования, а также велоэргометрию и холтеровское мони-торирование по показаниям. В выборку не включались больные с сахарным диабетом, с выраженными сопутствующими заболеваниями легких, желудочно-кишечного тракта, печени, почек, с заболеваниями крови и нарушениями обмена веществ. Обследование проводилось на базе Республиканского кардиологического центра города Уфы. В контрольную группу были отобраны 301 мужчина без признаков сердечно-сосудистых и других хронических заболеваний, средний возраст которых на момент забора биологического материала составил 43,58±7,13 года.

Образцы ДНК были получены из 6-8 мл цельной венозной крови стандартным методом фенольно-хлороформной экстракции. Процедура генотипирования по полиморфным маркерам генов-кандидатов описана ранее [1,7].

Анализ ассоциаций сочетаний аллелей/генотипов с ЭГ осуществлялся с помощью программы APSampler 3.6.1 (http://sourceforge.net/projects/ apsampler/). Основной алгоритм описан в статье А.В. Фаво-рова с соавт. [3]. В качестве поправки на множественность сравнений использовался перестановочный тест (permutation test), статистически значимыми принимались различия при Pperm<0.05.

Результаты и обсуждение

Ранее нами был осуществлен анализ распределений частот аллелей и генотипов

каждого из анализируемых полиморфных маркеров в выборках больных ЭГ и здоровых мужчин [1,7]. В данном исследовании с помощью программы АР8ашр1ег 3.6.1 проведен поиск возможных сочетаний аллелей и/или генотипов, дана оценка их частот в сравниваемых выборках и анализ ассоциаций с заболеванием. Было обнаружено 900 возможных сочетаний, из которых информативными в качестве маркеров риска оказались только 8 сочетаний (см. таблицу). В сочетаниях в том или ином виде представлены в качестве составных элементов аллели генов молекул адгезии (УСАМ1, 1САМ1), хемокина ССЬ2 и взаимодействующего с ним рецептора ССК2, рецептора к фракталкину СХ3СЯ1, хемокино-вого рецептора ССК5 и васкулярного фактора А роста эндотелия VEGFA, что подтверждает важную роль белковых продуктов этих генов в патогенезе ЭГ.

Значительный интерес представляет обнаружение ассоциаций с ЭГ сочетаний, включающих аллельные варианты гена ССЬ2 и име-

ющих как протективную (ССЬ2*0/А+ 1САМ1*К/К, 0Я=0,31), так и предрасполагающую значимость (CCL2*G/G+CCR2*I, 0Я=10/84). Согласно литературным данным, с более высокими показателями экспрессии гена ССЬ2 ассоциирован аллель *0 (ге1024611), который является элементом как сочетаний-маркеров повышенного риска развития заболевания, так и сочетаний-маркеров пониженного риска ЭГ [12]. Этот результат проведенного нами исследования демонстрирует функциональную значимость полиморфизма ге1024611 гена ССЬ2, неодназночность его эффектов при сочетаниях с аллельными вариантами разных генов, а также и неоднозначную роль самого хемокина ССЬ2 в этиологии и патогенезе ЭГ. Установлено, что хемокин ССЬ2 может стимулировать пролиферацию гладкомышечных клеток артерий и тем самым способствовать сужению просвета артерий, но ингибирование экспрессии ССЬ2 может вызывать повышение артериального давления, в частности у спонтанно гипертензивных крыс [11].

Таблица

Результаты анализа ассоциаций эссенциальной гипертензии с сочетаниями аллелей/генотипов полиморфных маркеров генов-кандидатов

Сочетания аллелей/генотипов Частота, % р

контроль ЭГ

CCL2*G/A+ICAM 1 *K/K 15,89 5,50 0,0001 0,31

VCAM1*A+CCR2*I+CX3CR1*M 4,64 13,07 0,0005 3,09

VEGFA*D+CCR2*V/V 61,92 47,96 0,0019 0,57

CCR2*I+CX3CR1 *M 5,94 13,30 0,0153 2,42

CCL2*G+ICAM 1 *K/K 17,55 9,00 0,0197 0,46

VCAM1 *A+VEGFA*I+CCR2*I 14,62 24,48 0,0201 1,89

ICAM1 *E+VCAM1*C+CCR5 *D+CX3CR1 *M 1,00 5,05 0,0214 5,28

CCL2*G/G+CCR2*I 0,33 3,47 0,0223 10,84

Примечание: р - уровень значимости различий; (ррегт) - уровень значимости с поправкой на множественность сравнений; OR (odds ratio) - показатель соотношения шансов; CI - 95% доверительный интервал показателя соотношения шансов.

Нами установлено, что в составе сочетаний, являющихся маркерами повышенного риска ЭГ, присутствуют аллели ССК5*Б (ге333) и СХ3СЯ1*М (ге3732378), 1САМ1*Е (ге5498), УСАМ1*С и УСАМ1*А (ге3917010). Полученные данные соответствуют результатам исследования других авторов, которые подтверждают, что функционально не активный аллель ССК5*Б ассоциирован с повышенным артериальным давлением [6]. Также обнаружена ассоциация аллеля СХ3СЯ1*М с показателями толщины комплекса интима-медиа сонных артерий [4]. Как показал анализ литературных данных, у носителей аллеля 1САМ1*Е (ге5498) наблюдаются более высокие показатели 81САМ1 в плазме крови в сравнении с носителями генотипа 1САМ1*К/К [8]. Генотип УЕОРА*Б/Б (^35569394) ассоциирован с более тяжелым течением преэкламсии [10]. Аллель УСАМ1*С (гв3917010) ассоции-

рован с пониженным риском ожирения, которое является одним из основных факторов риска ЭГ [5]. Можно полагать, что его присутствие в составе сочетания, являющегося маркером повышенного риска ЭГ, указывает на значимость остальных маркеров такого сочетания для выявления риска ЭГ у мужчин с нормальной массой тела.

Заключение. Полученные нами данные подтверждают предположение о существенной роли полиморфизма генов 1САМ1, УСАМ1, ССЬ2, ССИ2, СХ3СЯ1,ССИ5, УЕОБА в формировании предрасположенности к ЭГ. Полученные результаты нуждаются в подтверждении на независимой выборке и в случае их подтверждения могут служить основой для создания теста по идентификации лиц с высоким риском развития ЭГ и последующей разработки подходов к профилактике осложнений заболевания.

Сведения об авторах статьи: Имаева Эльвира Богдановна - заочный аспирант ФГБУН ИБГ УНЦ РАН. Адрес: 450054, г. Уфа, пр. Октября, 71. E-mail: anmareg@mail.ru.

Насибуллин Тимур Русланович - к.м.н., старший научный сотрудник ФГБУН ИБГ УНЦ РАН. Адрес: 450054, г. Уфа, пр. Октября, 71. E-mail: anmareg@mail.ru.

Тимашева Янина Римовна - к.м.н., научный сотрудник ФГБУН ИБГ УНЦ РАН. Адрес: 450054, г. Уфа, пр. Октября, 71. E-mail: anmareg@mail.ru.

Эрдман Вера Викторовна - к.б.н., научный сотрудник ФГБУН ИБГ УНЦ РАН. Адрес: 450054, г. Уфа, пр. Октября, 71. E-mail: anmareg@mail.ru.

Туктарова Ильсия Авхатовна - к.б.н., старший научный сотрудник ФГБУН ИБГ УНЦ РАН. Адрес: 450054, г. Уфа, пр. Октября, 71. E-mail: anmareg@mail.ru.

Хабибрахманова Лилия Ирековна - соискатель ФГБУН ИБГ УНЦ РАН. Адрес: 450054, г. Уфа, пр. Октября, 71. E-mail: anmareg@mail.ru.

Мирсаева Гульчагра Ханифовна - д.м.н., профессор, зав. кафедрой факультетской терапии ФГБОУ ВО БГМУ Минздрава России. Адрес: 450008, г. Уфа, ул. Ленина 3. E-mail: mirsaeva@inbox.ru.

Мустафина Ольга Евгеньевна - д.б.н., профессор ФГБУН ИБГ УНЦ РАН, профессор кафедры генетики и фундаментальной медицины ФГБОУ ВО БГУ. Адрес: 450054, г. Уфа, пр. Октября, 71. E-mail: anmareg@mail.ru.

ЛИТЕРАТУРА

1. Анализ ассоциаций полиморфных маркеров генов хемокинов и хемокиновых рецепторов с эссенциальной гипертензией / Я.Р. Тимашева [и др.] // Молекулярная медицина. - 2015. - №. 3. - С. 62-64.

2. Диагностика и лечение артериальной гипертонии: рекомендации Российского медицинского общества по артериальной гипертонии и Всероссийского научного общества кардиологов) / KE. Чазова [и др.] // Системные гипертензии. - 2010. - N°. 3. - С. 5-26.

3. A Markov chain Monte Carlo technique for identification of combinations of allelic variants underlying complex diseases in humans / A.V. Favorov [et al.] // Genetics. - 2005. - Vol. 171, № 4. - P. 2113-2121.

4. Association of V249I and T280M variants of fractalkine receptor CX3CR1 with carotid intima-media thickness in a mexican population with type 2 diabetes / R.A. Gómez-Díaz [et al.] // Gac. Med. Mex. - 2017. - Vol. 153. - P. 49-56.

5. Associations of VCAM-1 gene polymorphisms with obesity and inflammation markers / G.I. Yu [et al.] // Inflamm Res. - 2017. - Vol. 66, № 3. - P. 217-225.

6. Blood pressure regulation by CCR genes / M. Mettimano [et al.] // Clin. Exp. Hypertens. - 2006. - Vol. 28, № 7. - P. 611-618.

7. Genetic determinants of essential hypertension in the population of Tatars from Russia / Y. Timasheva [et al.] // J. Hypertens. - 2017. -Vol. 35, Suppl. 1 - P. S16-S23.

8. Polymorphisms in the ICAM1 gene predict circulating soluble intercellular adhesion molecule-1(sICAM-1) / S.J. Bielinski [et al.] // Atherosclerosis. - 2011. - Vol. 216, № 2. - P. 390-394.

9. Roles of inflammation, oxidative stress, and vascular dysfunction in hypertension / Q.N. Dinh [et al.] // BioMed Res. Int. - 2014. - Vol. 2014. - P. 1-11. - doi:10.1155/2014/406960.

10. The placental vascular endothelial growth factor polymorphisms and preeclampsia/preeclampsia severity / F. Keshavarzi [et al.] // Clin. Exp. Hypertens. - 2017. - P. 1-6. doi:10.1080/10641963.2017.1299751

11. The role of chemokines in hypertension / H. Martynowicz [et al.] // Adv. Clin. Exp. Med. - 2014. - Vol. 23, № 3. - P. 319-325.

12. The regulatory region polymorphism is associated with CCL2 allelic expression imbalance / M. H. T. Pham [et al.] // PLoS One. - 2012. -Vol. 7, N 11. - P. e49498. - doi: 10.1371/journal.pone.0049498.

УДК б1б.12-07 © Коллектив авторов, 2017

ИА. Мустафина, ВЖ Павлов, В.Ш. Ишметов, Hffi. Загидуллин

ДИАГНОСТИКА МОРФОЛОГИИ БЛЯШКИ ПРИ ОСТРОМ КОРОНАРНОМ СИНДРОМЕ МЕТОДОМ ОПТИЧЕСКОЙ КОГЕРЕНТНОЙ ТОМОГРАФИИ

ФГБОУ ВО «Башкирский государственный медицинский университет» Минздрава России, г. Уфа

Оптическая когерентная томография (ОКТ) является методом внутрисосудистой визуализации коронарных артерий со сверхточной разрешающей способностью, эффективным в том числе и при остром коронарном синдроме (ОКС). Целью данного исследования явился сравнительный анализ морфологических характеристик разрыва и эрозии бляшки с использованием метода ОКТ у пациентов c острым коронарным синдромом (ОКС) с подъемом сегмента ST. В исследовании участвовали 115 пациентов c ОКС, среди которых 59 пациентов с разрывом и 56 с эрозией внутрикоронарной атеросклеро-тической бляшки, вызвавших окклюзию. Обследование проводилось на аппарате ОКТ в частотной области (C7-XR OCT In-travascular Imaging System, St. Jude Medical, St. Paul, Minnesota).

Возраст пациентов с эрозией бляшки был более молодым, чем у пациентов с разрывом бляшки (52,78±10,5 года против 57,55±9,13 года, p=0,011). Липидная бляшка и фиброатерома с тонкой фиброзной капсулой чаще диагностировались в группе пациентов с разрывом, чем у пациентов с эрозией (100% против 51,8%, p<0,001; 96,6% против 27,6%, p<0,001 соответственно). Больший угол липидного ядра, меньшая толщина фиброзной капсулы (p<0,001), присутствие макрофагальной инфильтрации и кристаллов холестерина чаще наблюдались в группе пациентов с разрывом бляшки (p<0,001).

Таким образом, по полученным данным ОКТ внутрикоронарная атеросклеротическая бляшка при ее разрыве чаще обладала признаками нестабильности, чем при эрозии.

Ключевые слова: внутрисосудистая оптическая когерентная томография; атеросклеротическая бляшка; острый коронарный синдром.

I.A. Mustafina, V.N. Pavlov, V.Sh. Ishmetov, N.Sh. Zagidullin IDENTIFICATION OF PLAQUE MORPHOLOGY IN ACUTE CORONARY SYNDROM BY OPTICAL COHERENCE TOMOGRAPHY