ОЧИСТКА ПОДВИДОВ ФАКТОРА VIII

1. Способ очистки подвидов фактора VIII (FVIII) из композиции, содержащей FVIII, включающий стадии:
(1) подвергания композиции, содержащей FVIII, анионообменной хроматографии и сбора элюата, содержащего указанные подвиды FVIII;
(2) подвергания элюата, полученного на стадии (1) и содержащего указанные подвиды FVIII, эксклюзионной хроматографии и сбора элюата, содержащего указанные подвиды FVIII; и
(3) концентрирования элюата, полученного на стадии (2) и содержащего указанные подвиды FVIII.
2. Способ по п.1, где стадия концентрирования (3) является стадией подвергания элюата, полученного на стадии (2) и содержащего указанные подвиды FVIII, анионообменной хроматографии и сбора элюата, содержащего указанные подвиды FVIII.
3. Способ по п.1 или 2, где FVIII является рекомбинантным FVIII (rFVIII), и подвиды FVIII являются подвидами рекомбинантного FVIII (rFVIII).
4. Способ по любому из пп.1-3, где подвиды FVIII представляют собой тяжелую цепь FVIII, соединенную с легкой цепью FVIII.
5. Способ по любому из пп.1-4, где на стадии (1) для анионообменной хроматографии используют Q-смолу высокого разрешения с размером частиц менее 20 мкм.
6. Способ по любому из пп.1-5, где на стадии (2) для эксклюзионной хроматографии используют смолу для эксклюзионной хроматографии с диапазоном разрешения от 10000 Да до 60000 Да.
7. Способ по любому из пп.1-6, где способ дополнительно включает следующую стадию (0) перед стадией (1):
(0) подвергания FVIII, содержащегося в композиции, обработке протеазой фурином.
8. Способ по любому из пп.1-7, где элюирование на стадии (1) осуществляют посредством элюирования в линейном градиенте, и где градиент при элюировании в линейном градиенте имеет длину по меньшей мере приблизительно 16 объемов колонки, по меньшей мере приблизительно 24 объема колонки или по меньшей мере приблизительно 32 объема колонки.
9. Способ по любому из пп.1-8, где стадию (2) заменяют стадией:
(2) подвергания элюата, полученного на стадии (1) и содержащего указанные подвиды FVIII, хроматографии гидрофобных взаимодействий, и где хроматография гидрофобных взаимодействий является отрицательной хроматографией.
10. Способ по любому из пп.1-9, где подвиды FVIII представляют собой тяжелую цепь FVIII массой 90 кДа, связанную с легкой цепью FVIII, где стадию (2) способа пропускают, и где на стадии (3) элюатом, полученным на стадии (1) и содержащим указанные подвиды FVIII, заменяют элюат, полученный на стадии (2) и содержащий указанные подвиды FVIII.
11. Композиция, содержащая очищенные подвиды FVIII, получаемые по любому из пп.1-10.
12. Композиция по п.11 для применения в лечении нарушения свертывания, такого как гемофилия A.
13. Способ обработки рекомбинантного фактора VIII (rFVIII) протеазой фурином.
14. Способ по п.13, где способ предназначен для повышения активности rFVIII.
15. Композиция, содержащая rFVIII, где rFVIII получают по п.13 или 14, для применения в лечении нарушения свертывания, такого как гемофилия A.