Особенности иммунного ответа у больных внебольничной пневмонией

УДК 616.24-002-097

Т.Ф.Боровская, Е.П.Когут, Э.Х.Курпас

ОСОБЕННОСТИ ИММУННОГО ОТВЕТА У БОЛЬНЫХ ВНЕБОЛЬНИЧНОЙ ПНЕВМОНИЕЙ

Хабаровский филиал ДНЦ ФПД СО РАМН - НИИ охраны материнства и детства, Дальневосточный государственный медицинский университет

РЕЗЮМЕ

Изучали состояние системного и местного иммунитета слизистой оболочки долевого бронха у больных внебольничной пневмонией в остром периоде болезни. Выявлено перераспределение иммуноцитов из кровяного русла в очаг воспаления. Показаны механизмы, участвующие в количественном изменении популяций и субпопуляций иммунокомпетентных клеток. Данное состояние расценено как вариабельная иммунная недостаточность показателей периферической крови.

SUMMARY T.Ph.Borovskaya, E.P.Kogut, E.H.Kurpas

IMMUNITY RESPONSE PECULIARITIES IN PATIENTS WITH AMBULATORY PNEUMONIA

Systemic and local immunity state of lobe bronchi mucosa in patients with ambulatory pneumonia during acute stage have been studied.

It was found that immunocytes relocate from blood circulation into inflammation focus. Mechanisms underlying quantitative changes in populations and subpopulations of immunocompetent cells have been determined. This state has been classified as immune insufficiency of peripheral blood values.

Структурный гомеостаз слизистых оболочек определяется величиной константы численности клеточных популяций. Нарушение структурного равновесия приводит к развитию состояния предболезни и болезни и влияет на исход заболевания.

Роль иммунной системы в поддержании структурного гомеостаза органов, тканей и всего организма в целом трудно переоценить, и она значительно шире, чем защитная или цензорная функции. Общеизвестно, что при любом стрессе, в том числе и при воспалении, реакция иммунной системы занимает одно из центральных мест [4].

При воспалительном процессе в своей оценке иммунного реагирования организма на патоген мы обычно ориентируемся на показатели иммунитета периферической крови. Но всем известно, что воспалительный процесс носит локальный характер, а явления интоксикации индуцируют защитные резервы всего организма.

Материалы и методы

Нами обследовано 84 больных внебольничной

пневмонией в остром периоде болезни (в среднем на 3-и сутки). Все больные основной группы имели вне-больничную форму пневмонии со своевременным разрешением. Возраст обследованных больных колебался от 17 до 26 лет и в среднем составил 20±0,26 лет. Все обследованные больные были мужского пола, из них 89% составили курильщики табака со стажем курения 2-3 года.

У всех больных заболевание, как правило, начиналось с озноба, повышения температуры тела до 39оС, слабости, кашля. Появление болей в грудной клетке в первый день регистрировали у 50% больных внебольничной пневмонией, во 2-й день - 12,5%, на 3-й день - 9,2%, на 4-7-й день - 21,7%, на 9-18-й день - 6,5%. Длительность температурной реакции в среднем составила 7±0,42 суток, кашлевого синдрома -15±0,51 суток, длительность отхождения мокроты -16±0,65 суток, болевого синдрома - 12±0,73 суток.

Группу сравнения составили 12 человек в возрасте от 8 до 15 лет, бронхоскопическое исследование которым проводилось по поводу удаления инородного тела бронха и которые по данным клиникоинструментального обследования признаны здоровыми.

Фибробронхоскопию выполняли в остром периоде болезни на 3-5 день, во время которой производили забор биоптатов из карины долевого бронха на стороне поражения в месте наиболее выраженных изменений.

Объектом исследования служили иммунокомпе-тентные клетки ИКК периферической крови и слизистой оболочки крупных бронхов (СОКБ). Клеточную суспензию лимфоцитов СОКБ получали по методике С.Л.Нестерчук с соавт. [1]. Мононуклеары выделяли на градиенте фиколл-верографина с последующим центрифугированием при 1500 об/мин в течение 40 минут. Подсчет процента живых клеток проводили в камере Горяева в смеси с трипановым синим (0,1%). После пипетирования лимфоциты инкубировали в присутствии моноклональных антител (МКА) в течение 30 минут с последующей трехкратной отмывкой средой 199 и инкубацией клеток с флюорохромом (ФИТЦ). Образцы анализировали на проточном ци-тофлюориметре «РАС8сап” фирмы “Beckton Dickinson” (США). Для идентификации ИКК использовались моноклональные антитела фирмы “Caltag” (Burlingame, СА).

Результаты исследований и их обсуждение

При определении иммунного статуса у больных с воспалительными заболеваниями с целью подбора адекватной коррекции решается вопрос о наличии

той или инои степени недостаточности иммуннои системы. Но, довольно часто, эти колебания характеризуют степень вариабельности исследуемых параметров, а не иммунную недостаточность. Сравнительный анализ параметров системного и местного иммунитета в группе сравнения и у больных вне-больничной пневмонией выявил эти особенности (табл.). У больных внебольничной пневмонией в периферической крови в остром периоде болезни наблюдали тотальное снижение численности клеток лимфоидного ряда в исследуемых популяциях и субпопуляциях. В СОКБ регистрировали не только достоверное уменьшение уровня клеток ряда популяций, но и их увеличение по отношению к группе сравнения.

Снижение уровня процентного содержания ИКК в периферической крови не сопровождалось увеличением тех же популяций в СОКБ. В периферической крови зарегистрировано достоверное снижение в 6-ти субпопуляциях: СБ3+, СБ4+, СБ8+, СБ25+,

ИЬЛ-БК+, СБ45КЛ+, в то время как в СОКБ имело место снижение только в 2-х из перечисленных выше показателей (СБ4+, СБ45ЯЛ+), а увеличение процентного содержания наблюдали совершенно в других субпопуляциях: СБПЪ+, СБ71+, СБ95+. Кроме того, в СОКБ у больных внебольничной пневмонией отмечен достоверно более высокий уровень СБ25+, ИЬЛ-БЯ+, СБПЪ+, СБ14+, СБ71+, СБ95+, СБ18+ по сравнению с уровнем этих показателей в периферической крови.

Данный феномен был расценен как перераспределение и активация ИКК в организме при наличии очага воспаления. Биологический смысл воспаления, как эволюционно сложившегося процесса, заключается в отграничении и ликвидации очага повреждения и вызвавших его патогенных факторов, под дей-

ствием которых формируется общая вариабельная иммунная недостаточность.

Закономерная миграция клеток из кровотока в ткани опосредована экспрессией адгезионных молекул (СБПЪ, СБ18+), усиливающейся под действием таких провоспалительных цитокинов, как ИЛ-1, ИЛ-

6, ЮТ-у, ТОТ-а [5].

Как известно, антиген СБ14+ является наиболее специфичным для макрофагов и рассматривается как рецептор для факторов роста (вЫ-С8Р, 1Ь-3, 1Ь-4, 1Ь-9) макрофагов. Факторами, активирующими макрофаги, могут быть бактерии, вирусы, а также продукты эндогенного происхождения (ЦИК, продукты деструкции органов и тканей и др.). Наиболее мощным и специфическим индуктором активации макрофагов является ЮТ-у - продукт секреции активированных лимфоцитов (СБ4+) и МК-клеток.

Известно, что цитотоксические клетки и, в частности, натуральные киллеры, играют ключевую роль в элиминации возбудителя. В наших исследованиях мы регистрировали достоверное в сравнении с контролем повышение уровня СБ16+ в СОКБ. Известно, что покоящиеся естественные киллеры экспрессируют рецепторы для ГЬ-12 и являются его мишенями. Продукцию же ГРМ-у, которая носит транзиторный характер и предназначена для контроля развития инфекции в ранней стадии, клетки СБ16+ запускают после незначительного сигнала ГЬ-12 [6].

Макрофаг также участвует в элиминации возбудителя из организма посредством фагоцитоза. Кроме того, макрофаг является ключевой клеткой, как острой фазы воспаления, так и маркером хронизации процесса. Выработка им цитокинов провоспалитель-ного или воспалительного характера зависит от многих причин и факторов, а уровень цитокинов влияет на исход заболевания.

Таблица

Сравнительная характеристика показателей системного и местного иммунитета СОКБ у больных внебольничной пневмонией в остром периоде болезни

Показатели периферическая кровь СОКБ р р1

основная группа, п=84 группа сравнения, п=12 основная группа, п=84 группа сравнения, п=12

СБ3+ 33,69±4,11* 50,06±4,21 30,00±2,99 33,55±4,21 <0,02 >0,05

СБ22+ 23,46±2,47 27,67±3,15 25,71±4,47 24,53±3,51 >0,05 >0,05

СБ4+ 17,54±2,90” 39,33±3,76 20,50±2,14* 29,26±3,14 <0,05 >0,05

СБ8+ 21,05±3,53” 32,17±3,76 23,10±3,04 23,73±3,86 >0,05 >0,05

СБ25+ 15,47±2,88+ 29,58±3,64 24,70±3,10 24,70±4,01 >0,05 <0,01

СБ16+ 15,21±3,13 20,86±3,72 20,36±2,36* 26,06±3,60 >0,05 >0,05

ИЬЛ-БК+ 15,22±2,94# 30,52±2,34 30,57±2,75 25,21±3,41 >0,05 <0,001

СБ11Ъ+ 13,70±2,68 23,86±4,98 24,33±3,30л 13,41±2,71 >0,05 <0,01

СБ14+ 16,84±3,73 24,17±3,60 25,84±4,00 26,91±3,61 >0,05 <0,02

СБ71+ 21,91±2,98 28,77±3,51 28,45±3,83* 21,68±2,89 >0,05 <0,05

СБ95+ 21,00±3,58 28,00±4,53 30,87±3,77” 14,35±5,56 >0,05 <0,005

СБ45ЯЛ+ 19,86±3,15* 33,24±5,37 17,91±2,24* 22,56±2,87 >0,05 >0,05

СБ18+ 20,55±2,61 19,40±2,66 33,14±4,45 17,70±3,11 >0,05 <0,02

Примечание

л - р<0,002; “ - р<0,001; р - достоверность различий между показателями периферической крови и СОКБ в группах сравнения; р! - достоверность различий между показателями периферической крови и СОКБ у больных пневмонией.

Нами показано достоверное повышение уровня CD14+ в СОКБ больных внебольничной пневмонией в сравнении с уровнем в периферической крови. Как известно, антиген CD 14+ является наиболее специфичным для макрофагов. Он функционирует как рецептор для ЛПС клеточной стенки грамотрицатель-ных бактерий. Связывание антигеном CDH-комплекса бактериальных ЛПС вызывает немедленную активацию макрофагов, включение синтеза провоспалительных цитокинов и стимуляцию моноцитопоэза. В связи с этим антиген CD 14 рассматривается как рецептор для факторов роста (GM-CSF, IL-3, IL-4, IL-9) макрофагов. Помимо бактериальных антигенов факторами, активирующими макрофаги, могут быть вирусы и продукты эндогенного происхождения (ЦИК, токсические метаболиты, продукты деградации и деструкции органов и тканей). Наиболее мощным и специфическим индуктором активации макрофагов является INF-y - продукт секреции активированных лимфоцитов (CD4+) и NK-клеток [2, 3, 8]. В ранней стадии развития инфекции макрофаги и NK-клетки взаимодействуют посредством паракринной позитивной связи с обратной петлей регуляции, что формирует механизм противоин-фекционной защиты [6].

Известно, что в раннюю стадию воспаления LPS инфекционного агента бактериальной или вирусной природы активирует макрофаги, что проявляется синтезом и секрецией провоспалительных цитоки-нов, в том числе ИЛ-1 и TNF-a [7, 9]. Помимо этого, при повреждении ткани слизистой оболочки макрофаги, являясь антигенпрезентирующими клетками и воздействуя через рецепторный аппарат иммуноком-петентных клеток слизистых оболочек, индуцируют их на секрецию провоспалительных цитокинов, опосредующих запуск как неспецифического, так и специфического иммунного ответа.

Таким образом, системный и местный иммунные

ответы при воспалительном процессе имеют отличительные особенности, а выявленная вариабельная иммунная недостаточность иммунологических показателей периферической крови не всегда точно отражает состояние местных иммунных механизмов.

ЛИТЕРАТУРА

1. Выделение и характеристика популяций лейкоцитов эндометрия методом проточной цитомет-рии/С.Л.Нестерчук, Н. С. Сулейманова, Э.Р.Ткаченко и др.//Бюл. эксперим. биол. и мед.-1994.-Т.117, №1.-С.68-71.

2. Фрейндлин И. С. Система мононуклеарных фа-гоцитов.-М.: Медицина, 1984.-272 с.

3. Фрейндлин И.С. Ключевая позиция макрофагов в цитокиновой регуляции сети//Иммунология.-1995.-№3.-С.44-48.

4. Иммунофизиология/В.А.Черешнев, Б.Г.Юш-ков, В.Г.Климин, Е.В.Лебедева.-УрО РАН, 2002.257 с.

5. Bacon K., Oppenheim J. Chemokines in disease models and pathogenesis//Cytokine Growth Factor Rev.-1998.-Vol.9, №1.-P.167-173.

6. Biron Ch., Gazzinelly R. Effects of IL-12 on immune responses to microbial infection: a key mediator in regulating disease outcome//Curr. Opinion Immunol.-1995.-Vol.7, №3.-P.485-496.

7. Dinarello C.A., Wolff S.M. The role of interleukin-1 in disease//New Engl. J. Med.-1993.-Vol.328, №2.-P.106-113.

8. Fuocar R., Foucar E. The mononuclear phagocyte and immunoregulatory effector (M-PIRE) system: Evolving concepts//Semin. Diagnostic Pathol.-1990.-№7.-P.4-18.

9. Jaattela M. Biologic activities and mechanisms of action necrosis a-cachectin//Lab. Invest.-1991.-Vol.64, №9.-P.724-741.

УДК 616.25-002.-071

Л.В.Куколь, Б.И.Гельцер, А.В.Пупышев

БИОМАРКЕРЫ ВОСПАЛЕНИЯ КАК КРИТЕРИИ ОЦЕНКИ ТЯЖЕСТИ ЗАБОЛЕВАНИЯ НА АМБУЛАТОРНОМ ЭТАПЕ У ПАЦИЕНТОВ С ВНЕБОЛЬНИЧНОЙ ПНЕВМОНИЕЙ

Владивостокский государственный медицинский университет, Дальневосточная государственная академия экономики и управления, г. Владивосток

РЕЗЮМЕ

Алгоритмы принятия решений и прогностические правила должны базироваться на более информативных и формализованных методах оценки состояния больного, позволяющих обеспечивать адекватный уровень помощи. Задача исследования заключалась в отборе клинических и ла-

бораторных прогностических признаков, которые отражают основные этапы развития и течения заболевания, в частности таких, как маркеры активности воспалительного процесса, показатели выраженности степени интоксикации и изменений иммунологической реактивности. Получено, что пороговые значения лейкоцитарного индекса интоксикации и уровня С-реактивного белка в