МОЛЕКУЛЫ ХИМЕРНЫХ ИНТЕРНАЛИЗАЦИОННЫХ РЕЦЕПТОРОВ

1. Химерный интернализационный рецептор (CER), включающий одноцепочечный химерный белок, где одноцепочечный химерный белок включает:
внеклеточный домен, включающий связывающий домен, который связывается с фосфатидилсерином (PtdSer);
интернализационный сигнальный домен; и
трансмембранный домен, расположенный между внеклеточным доменом и интернализационным сигнальным доменом и соединяющий их.
2. CER по п.1, где связывающий домен включает scFv, специфичный к PtdSer, или PtdSer-связывающий домен из Tim1, Tim4, Tim3, стабилина-2, рецептора конечных продуктов гликирования (RAGE), специфического для мозга ингибитора ангиогенеза 1 (BAI1), белка EGF-фактора 8 из жировых глобул молока (MFG-E8), специфического белка блокировки роста 6 (GAS6), протеина S, протеина C, Фактора II, Фактора VII, Фактора IX, Фактора X, бета-2-гликопротеина I, интегрина α5β3 и других интегринов, рецептора комплемента CR3, рецептора комплемента CR4, CD14, CD93, аннексина V, рецептора фосфатидилсерина (PSr), протромбина или скавенджер-рецептора.
3. CER по п.2, где связывающий домен включает домен TIM1, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:28, домен TIM4, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:29, домен Tim3, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:34, домен FA58C2, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:30, домен GAS6, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:32, связывающий домен протеина S, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:33, или домен BAI1, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:117.
4. CER по любому из пп.1-3, где внеклеточный домен дополнительно включает внеклеточный спейсерный домен, расположенный между связывающим доменом и трансмембранным доменом.
5. CER по п.4, где внеклеточный спейсерный домен включает шарнирную область иммуноглобулина, внеклеточную область мембранных белков 1-го типа, область ножки C-лектина II типа, константный домен иммуноглобулина или их фрагмент.
6. CER по п.5, где внеклеточный спейсерный домен включает шарнирную область IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA или IgD.
7. CER по п.6, где внеклеточный спейсерный домен включает модифицированную шарнирную область IgG4, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 67.
8. CER по любому из пп.1-7, где трансмембранный домен включает трансмембранный домен Tim1, Tim4, Tim3, FcR, CD8a, CD28, MERTK, Axl, Tyro3, BAI1, CD4, DAP12 или MRC1.
9. CER по п.8, где трансмембранный домен включает трансмембранный домен Tim1, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:35, трансмембранный домен Tim4, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:36, трансмембранный домен FcγRI, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:37, трансмембранный домен CD8a, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:38, трансмембранный домен MERTK, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:39, трансмембранный домен Axl, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:40, трансмембранный домен Tyro3, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:41, трансмембранный домен CD28 SEQ ID NO:68, трансмембранный домен BAI1 SEQ ID NO:142, трансмембранный домен CD4, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:42, трансмембранный домен FcεRIγ, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:89, трансмембранный домен MRC1, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:118, или трансмембранный домен DAP12, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:81.
10. CER по п.8, где трансмембранный домен FcR включает трансмембранный домен FcγR1, FcγR2A, FcγR2B2, FcγR2C, FcγR3A, FcεR1 или FcαR1.
11. CER по любому из пп.1-10, где интернализационный сигнальный домен является гомеостатическим интернализационным сигнальным доменом или провоспалительным интернализационным сигнальным доменом.
12. CER по п.11, где гомеостатический интернализационный сигнальный домен является сигнальным доменом ItgB5, MERTK, Tyro3, Axl, BAI1, ELMO или MRC1.
13. CER по п.11, где провоспалительный интернализационный сигнальный домен является сигнальным доменом PI3K, Traf6, Syk, MyD88, Zap70, FcγR1, FcγR2A, FcγR2B2, FcγR2C, FcγR3A, FcεR1, FcαR1, BAFF-R, DAP12, NFAM1 или CD79b.
14. CER по п.12, где гомеостатический интернализационный сигнальный домен является сигнальным доменом MERTK, включающим аминокислотную последовательность SEQ ID NO:69, сигнальным доменом Tyro3, включающим аминокислотную последовательность SEQ ID NO:45, сигнальным доменом ItgB5, включающим аминокислотную последовательность SEQ ID NO:114, сигнальным доменом MRC1, включающим аминокислотную последовательность SEQ ID NO:119, сигнальным доменом BAI1, включающим аминокислотную последовательность SEQ ID NO:136, сигнальным доменом ELMO, включающим аминокислотную последовательность SEQ ID NO:120, или сигнальным доменом Axl, включающим аминокислотную последовательность SEQ ID NO:44.
15. CER по п.13, где провоспалительный интернализационный сигнальный домен является сигнальным доменом Traf6, включающим аминокислотную последовательность SEQ ID NO:54, сигнальным доменом Syk, включающим аминокислотную последовательность SEQ ID NO:46, сигнальным доменом MyD88, включающим аминокислотную последовательность SEQ ID NO:53, усеченным сигнальным доменом MyD88, включающим аминокислотную последовательность SEQ ID NO:78, сигнальным доменом Zap70, включающим аминокислотную последовательность SEQ ID NO:47, сигнальным доменом FcγR1, включающим аминокислотную последовательность SEQ ID NO:48, сигнальным доменом FcγR2A, включающим аминокислотную последовательность SEQ ID NO:49, сигнальным доменом FcγR2C, включающим аминокислотную последовательность SEQ ID NO:50, сигнальным доменом FcγR3A, включающим аминокислотную последовательность SEQ ID NO:51, сигнальным доменом FcεRIγ, включающим аминокислотную последовательность SEQ ID NO:88, сигнальным доменом BAFF-R, включающим аминокислотную последовательность SEQ ID NO:94, сигнальным доменом DAP12, включающим аминокислотную последовательность SEQ ID NO:82, сигнальным доменом NFAM1, включающим аминокислотную последовательность SEQ ID NO:92, или сигнальным доменом CD79b, включающим аминокислотную последовательность SEQ ID NO:97.
16. CER по любому из пп.11, 12, или 14, где сигнализация посредством гомеостатического интернализационного сигнального домена приводит к экспрессии по меньшей мере одного из противовоспалительного или иммуносупрессорного цитокина.
17. CER по п.16, где противовоспалительным или иммуносупрессорным цитокином является TGF-β, IL-10 или и тот, и другой.
18. CER по любому из пп.11, 13 или 15, где сигнализация посредством провоспалительного интернализационного сигнального домена приводит к экспрессии по меньшей мере одного из воспалительного цитокина, воспалительного хемокина или костимулирующего маркера клеточной поверхности.
19. CER по п.18, где воспалительным цитокином является ФНОα, IL-1, IL-6, IL-12 или IL-23; воспалительным хемокином является CCL5 (RANTES), CXCL9 или CXCL10; и костимулирующим маркером клеточной поверхности является CD80, CD86, HLA-DR, CD40, HVEM или 4-1BBL; или их любая комбинация.
20. CER по любому из пп.1-10, где интернализационный сигнальный домен включает первичный интернализационный сигнальный домен и вторичный интернализационный сигнальный домен.
21. CER по п.20, где первичный интернализационный сигнальный домен является гомеостатическим интернализационным сигнальным доменом, а вторичный интернализационный сигнальный домен является гомеостатическим интернализационным сигнальным доменом.
22. CER по п.20, где первичный интернализационный сигнальный домен является провоспалительным интернализационным сигнальным доменом, а вторичный интернализационный сигнальный домен является провоспалительным интернализационным сигнальным доменом.
23. CER по п.20, где первичный интернализационный сигнальный домен является гомеостатическим интернализационным сигнальным доменом, а вторичный интернализационный сигнальный домен является провоспалительным интернализационным сигнальным доменом.
24. CER по п.20, где первичный интернализационный сигнальный домен является провоспалительным интернализационным сигнальным доменом, а вторичный интернализационный сигнальный домен является гомеостатическим интернализационным сигнальным доменом.
25. CER по п.21 или 22, где первичный интернализационный сигнальный домен и вторичный интернализационный сигнальный домен являются одинаковыми или разными.
26. CER по любому из пп.21, 23, 24 или 25, где гомеостатический интернализационный сигнальный домен является сигнальным доменом ItgB5, MERTK, Tyro3, Axl, BAI1, ELMO или MRC1.
27. CER по п.26, где гомеостатический интернализационный сигнальный домен является сигнальным доменом MERTK, включающим аминокислотную последовательность SEQ ID NO:69, сигнальным доменом Tyro3, включающим аминокислотную последовательность SEQ ID NO:45, сигнальным доменом ItgB5, включающим аминокислотную последовательность SEQ ID NO:114, сигнальным доменом MRC1, включающим аминокислотную последовательность SEQ ID NO:119, сигнальным доменом BAI1, включающим аминокислотную последовательность SEQ ID NO:136, сигнальным доменом ELMO, включающим аминокислотную последовательность SEQ ID NO:120, или сигнальным доменом Axl, включающим аминокислотную последовательность SEQ ID NO:44.
28. CER по любому из пп.22, 23, 24 или 25, где провоспалительный интернализационный сигнальный домен является сигнальным доменом PI3K, Traf6, Syk, MyD88, Zap70, FcγR1, FcγR2A, FcγR2B2, FcγR2C, FcγR3A, FcεR1, FcαR1, BAFF-R, DAP12, NFAM1 или CD79b.
29. CER по п.28, где провоспалительный интернализационный сигнальный домен является сигнальным доменом Traf6, включающим аминокислотную последовательность SEQ ID NO:54, сигнальным доменом Syk, включающим аминокислотную последовательность SEQ ID NO:46, сигнальным доменом MyD88, включающим аминокислотную последовательность SEQ ID NO:53, усеченным сигнальным доменом MyD88, включающим аминокислотную последовательность SEQ ID NO:78, сигнальным доменом Zap70, включающим аминокислотную последовательность SEQ ID NO:47, сигнальным доменом FcγR1, включающим аминокислотную последовательность SEQ ID NO:48, сигнальным доменом FcγR2A, включающим аминокислотную последовательность SEQ ID NO:49, сигнальным доменом FcγR2C, включающим аминокислотную последовательность SEQ ID NO:50, сигнальным доменом FcγR3A, включающим аминокислотную последовательность SEQ ID NO:51, сигнальным доменом FcεRIγ, включающим аминокислотную последовательность SEQ ID NO:88, сигнальным доменом BAFF-R, включающим аминокислотную последовательность SEQ ID NO:94, сигнальным доменом DAP12, включающим аминокислотную последовательность SEQ ID NO:82, сигнальным доменом NFAM1, включающим аминокислотную последовательность SEQ ID NO:92, или сигнальным доменом CD79b, включающим аминокислотную последовательность SEQ ID NO:97.
30. CER по п.1, где:
связывающий домен выбран из PtdSer-связывающего домена Tim4 и PtdSer-связывающего домена FA58C2,
трансмембранный домен выбран из трансмембранного домена Tim4 и трансмембранного домена CD28,
интернализационный сигнальный домен выбран из сигнального домена MERTK и сигнального домена SYK, и
внеклеточный домен необязательно включает внеклеточный спейсерный домен, расположенный между связывающим доменом и трансмембранным доменом.
31. CER по п.30, включающий: PtdSer-связывающий домен Tim4, трансмембранный домен Tim4 и сигнальный домен MERTK.
32. CER по п.30, включающий: PtdSer-связывающий домен FA58C2, внеклеточный спейсерный домен, где внеклеточный спейсерный домен включает шарнирную область IgG4, трансмембранный домен CD28 и сигнальный домен MERTK.
33. CER по п.30, включающий: PtdSer-связывающий домен FA58C2, внеклеточный спейсерный домен, где внеклеточный спейсерный домен включает шарнирную область IgG4, трансмембранный домен CD28 и сигнальный домен SYK.
34. CER по п.30 или 31, где PtdSer-связывающий домен Tim4 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO:29.
35. CER по п.30 или 31, где трансмембранный домен Tim4 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO:36.
36. CER по любому из пп.30, 31 и 32, где сигнальный домен MERTK включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO:69.
37. CER по п.31, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:71 или аминокислоты 23-776 из SEQ ID NO:71.
38. CER по любому из пп.30, 32 и 33, где PtdSer-связывающий домен FA58C2 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO:30.
39. CER по любому из пп.30, 32, и 33, где трансмембранный домен CD28 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO:68.
40. CER по п.32 или 33, где шарнирная область IgG4 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO:67.
41. CER по п.30 или 33, где сигнальный домен SYK включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO:46.
42. CER по п.32, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 75 или аминокислоты 23-699 из SEQ ID NO:75.
43. CER по п.33, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:70 или аминокислоты 23-484 из SEQ ID NO:70.
44. Химерный интернализационный рецептор (CER), включающий одноцепочечный химерный белок, где одноцепочечный химерный белок включает:
внеклеточный домен, включающий связывающий домен, который связывается с проинтернализационным маркером или антигеном-мишенью;
провоспалительный интернализационный сигнальный домен; и
трансмембранный домен, расположенный между внеклеточным доменом и провоспалительным интернализационным сигнальным доменом и соединяющий их.
45. CER по п.44, где проинтернализационный маркер выбран из фосфатидилсерина (PtdSer), ICAM-3, окисленного липопротеина низкой плотности, кальретикулина, аннексина I, C1q компонента комплемента и тромбоспондина.
46. CER по п.45, включающий связывающий домен, который связывается с PtdSer и является scFv, специфичным к PtdSer, или PtdSer-связывающим доменом из Tim1, Tim4, Tim3, стабилина-2, рецептора конечных продуктов гликирования (RAGE), специфического для мозга ингибитора ангиогенеза 1 (BAI1), белка EGF-фактора 8 из жировых глобул молока (MFG-E8), специфического белка блокировки роста 6 (GAS6), протеина S, протеина C, Фактора II, Фактора VII, Фактора IX, Фактора X, бета-2-гликопротеина I, интегрина α5β3 и других интегринов, рецептора комплемента CR3, рецептора комплемента CR4, CD14, CD93, аннексина V, рецептора фосфатидилсерина (PSr), протромбина или скавенджер-рецептора.
47. CER по п.44, где связывающим доменом является scFv, специфичный к опухолевому антигену.
48. CER по п.47, где опухолевым антигеном является CD138, CD38, CD33, CD123, CD72, CD79a, CD79b, мезотелин, PSMA, BCMA, ROR1, MUC-16, L1CAM, CD22, CD19, CD20, CD23, CD24, CD37, CD30, CA125, CD56, c-Met, EGFR, GD-3, HPV E6, HPV E7, MUC-1, HER2, рецептор фолата α, CD97, CD171, CD179a, CD44v6, WT1, VEGF-α, VEGFR1, IL-13Rα1, IL-13Rα2, IL-11Rα, PSA, FcRH5, лиганд NKG2D, NY-ESO-1, TAG-72, CEA, эфрин A2, эфрин B2, антиген Льюис А, антиген Льюис Y, MAGE, MAGE-A1, RAGE-1, рецептор фолата β, EGFRviii, VEGFR-2, LGR5, SSX2, AKAP-4, FLT3, фукозил GM1, GM3, o-ацетил-GD2 или GD2.
49. CER по п.44, где связывающим доменом является scFv, специфичный к антигену микроорганизма, способного вызывать хроническую инфекцию у хозяина.
50. CER по любому из пп.44-49, где внеклеточный домен дополнительно включает внеклеточный спейсерный домен, расположенный между связывающим доменом и трансмембранным доменом.
51. CER по п.50, где внеклеточный спейсерный домен включает шарнирную область иммуноглобулина, внеклеточную область мембранных белков 1-го типа, область ножки C-лектина II типа, константный домен иммуноглобулина или их фрагмент.
52. CER по п.51, где внеклеточный спейсерный домен включает шарнирную область IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA или IgD.
53. CER по п.52, где внеклеточный спейсерный домен включает модифицированную шарнирную область IgG4, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:67.
54. CER по любому из пп.44-53, где трансмембранный домен включает трансмембранный домен Tim1, Tim4, Tim3, FcR, CD8a, CD28, MERTK, Axl, Tyro3, BAI1, CD4, MRC1 или DAP12.
55. CER по п.54, где трансмембранный домен включает трансмембранный домен Tim1, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:35, трансмембранный домен Tim4, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:36, трансмембранный домен FcγRI, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:37, трансмембранный домен CD8a, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:38, трансмембранный домен MERTK, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:39, трансмембранный домен Axl, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:40, трансмембранный домен Tyro3, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:41, трансмембранный домен CD28 SEQ ID NO:68, трансмембранный домен BAI1 SEQ ID NO:142, трансмембранный домен CD4, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:42, трансмембранный домен FcεRIγ, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:89, трансмембранный домен MRC1, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:118, или трансмембранный домен DAP12, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:81.
56. CER по п.54, где трансмембранный домен FcR включает трансмембранный домен FcγR1, FcγR2A, FcγR2B2, FcγR2C, FcγR3A, FcεR1 или FcαR1.
57. CER по любому из пп.44-56, где провоспалительный интернализационный сигнальный домен является сигнальным доменом PI3K, Traf6, Syk, MyD88, Zap70, FcγR1, FcγR2A, FcγR2B2, FcγR2C, FcγR3A, FcεR1, FcαR1, BAFF-R, DAP12, NFAM1 или CD79b.
58. CER по п.57, где провоспалительный интернализационный сигнальный домен является сигнальным доменом Traf6, включающим аминокислотную последовательность SEQ ID NO:54, сигнальным доменом Syk, включающим аминокислотную последовательность SEQ ID NO:46, сигнальным доменом MyD88, включающим аминокислотную последовательность SEQ ID NO:53, усеченным сигнальным доменом MyD88, включающим аминокислотную последовательность SEQ ID NO:78, сигнальным доменом Zap70, включающим аминокислотную последовательность SEQ ID NO:47, сигнальным доменом FcγR1, включающим аминокислотную последовательность SEQ ID NO:48, сигнальным доменом FcγR2A, включающим аминокислотную последовательность SEQ ID NO:49, сигнальным доменом FcγR2C, включающим аминокислотную последовательность SEQ ID NO:50, сигнальным доменом FcγR3A, включающим аминокислотную последовательность SEQ ID NO:51, сигнальным доменом FcεRIγ, включающим аминокислотную последовательность SEQ ID NO:88, сигнальным доменом BAFF-R, включающим аминокислотную последовательность SEQ ID NO:94, сигнальным доменом DAP12, включающим аминокислотную последовательность SEQ ID NO:82, сигнальным доменом NFAM1, включающим аминокислотную последовательность SEQ ID NO:92, или сигнальным доменом CD79b, включающим аминокислотную последовательность SEQ ID NO:97.
59. CER по любому из пп.44-58, где сигнализация посредством провоспалительного интернализационного сигнального домена приводит к экспрессии по меньшей мере одного из воспалительного цитокина, воспалительного хемокина или костимулирующего маркера клеточной поверхности.
60. CER по п.59, где воспалительным цитокином является ФНОα, IL-1, IL-6, IL-12 или IL-23; воспалительным хемокином является CCL5 (RANTES), CXCL9 или CXCL10; и костимулирующим маркером клеточной поверхности является CD80, CD86, HLA-DR, CD40, HVEM или 4-1BBL; или их любая комбинация.
61. Химерный интернализационный рецептор (CER), включающий одноцепочечный химерный белок, где одноцепочечный химерный белок включает:
внеклеточный домен, включающий связывающий домен, который связывается с проинтернализационным маркером или антигеном-мишенью;
интернализационный сигнальный домен, включающий первичный интернализационный сигнальный домен и вторичный интернализационный сигнальный домен; и
трансмембранный домен, расположенный между внеклеточным доменом и первичным интернализационным сигнальным доменом и соединяющий их.
62. CER по п.61, где проинтернализационный маркер выбран из фосфатидилсерина (PtdSer), ICAM-3, окисленного липопротеина низкой плотности, кальретикулина, аннексина I, C1q компонента комплемента и тромбоспондина.
63. CER по п.62, включающий связывающий домен, который связывается с PtdSer и является scFv, специфичным к PtdSer, или PtdSer-связывающим доменом из Tim1, Tim4, Tim3, стабилина-2, рецептора конечных продуктов гликирования (RAGE), специфического для мозга ингибитора ангиогенеза 1 (BAI1), белка EGF-фактора 8 из жировых глобул молока (MFG-E8), специфического белка блокировки роста 6 (GAS6), протеина S, протеина C, Фактора II, Фактора VII, Фактора IX, Фактора X, бета-2-гликопротеина I, интегрина α5β3 и других интегринов, рецептора комплемента CR3, рецептора комплемента CR4, CD14, CD93, аннексина V, рецептора фосфатидилсерина (PSr), протромбина или скавенджер-рецептора.
64. CER по п.61, где связывающим доменом является scFv, специфичный к опухолевому антигену.
65. CER по п.64, где опухолевомым антигеном является CD138, CD38, CD33, CD123, CD72, Cd79a, CD79b, мезотелин, PSMA, BCMA, ROR1, MUC-16, L1CAM, CD22, CD19, CD20, CD23, CD24, CD37, CD30, CA125, CD56, c-Met, EGFR, GD-3, HPV E6, HPV E7, MUC-1, HER2, рецептор фолата α, CD97, CD171, CD179a, CD44v6, WT1, VEGF-α, VEGFR1, IL-13Rα2, IL-13Rα1, IL-11Rα, PSA, FcRH5, лиганд NKG2D, NY-ESO-1, TAG-72, CEA, эфрин A2, эфрин B2, антиген Льюис А, антиген Льюис Y, MAGE, MAGE-A1, RAGE-1, рецептор фолата β, EGFRviii, VEGFR-2, LGR5, SSX2, AKAP-4, FLT3, фукозил GM1, GM3, o-ацетил-GD2 или GD2.
66. CER по п.61, где связывающим доменом является scFv, специфичный к микробному антигену.
67. CER по любому из пп.61-66, где внеклеточный домен дополнительно включает внеклеточный спейсерный домен, расположенный между связывающим доменом и трансмембранным доменом.
68. CER по п.67, где внеклеточный спейсерный домен включает шарнирную область иммуноглобулина, внеклеточную область мембранных белков 1-го типа, область ножки C-лектина II типа, константный домен иммуноглобулина или их фрагмент.
69. CER по п.68, где внеклеточный спейсерный домен включает шарнирную область IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA или IgD.
70. CER по п.69, где внеклеточный спейсерный домен включает модифицированную шарнирную область IgG4, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:67.
71. CER по любому из пп.61-70, где трансмембранный домен включает трансмембранный домен Tim1, Tim4, Tim3, FcR, CD8a, CD28, MERTK, Axl, Tyro3, BAI1, CD4, MRC1 или DAP12.
72. CER по п.71, где трансмембранный домен включает трансмембранный домен Tim1, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:35, трансмембранный домен Tim4, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:36, трансмембранный домен FcγRI, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:37, трансмембранный домен CD8a, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:38, трансмембранный домен MERTK, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:39, трансмембранный домен Axl, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:40, трансмембранный домен Tyro3, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:41, трансмембранный домен CD28 SEQ ID NO:68, трансмембранный домен BAI1 SEQ ID NO:142, трансмембранный домен CD4, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:42, трансмембранный домен FcεRIγ, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:89, трансмембранный домен MRC1, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:118, или трансмембранный домен DAP12, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:81.
73. CER по п.71, где трансмембранный домен FcR включает трансмембранный домен FcγR1, FcγR2A, FcγR2B2, FcγR2C, FcγR3A, FcεR1 или FcαR1.
74. CER по любому из пп.61-73, где первичный интернализационный сигнальный домен является гомеостатическим интернализационным сигнальным доменом, а вторичный интернализационный сигнальный домен является гомеостатическим интернализационным сигнальным доменом.
75. CER по любому из пп.61-73, где первичный интернализационный сигнальный домен является провоспалительным интернализационным сигнальным доменом, а вторичный интернализационный сигнальный домен является провоспалительным интернализационным сигнальным доменом.
76. CER по любому из пп.61-73, где первичный интернализационный сигнальный домен является гомеостатическим интернализационным сигнальным доменом, а вторичный интернализационный сигнальный домен является провоспалительным интернализационным сигнальным доменом.
77. CER по любому из пп.61-73, где первичный интернализационный сигнальный домен является провоспалительным интернализационным сигнальным доменом, а вторичный интернализационный сигнальный домен является гомеостатическим интернализационным сигнальным доменом.
78. CER по п.74 или 75, где первичный интернализационный сигнальный домен и вторичный интернализационный сигнальный домен являются одинаковыми или разными.
79. CER по любому из пп.74, 76, 77 и 78, где гомеостатический интернализационный сигнальный домен является сигнальным доменом ItgB5, MERTK, Tyro3, Axl, BAI1, ELMO или MRC1.
80. CER по п.79, где гомеостатический интернализационный сигнальный домен является сигнальным доменом MERTK, включающим аминокислотную последовательность SEQ ID NO:69, сигнальным доменом Tyro3, включающим аминокислотную последовательность SEQ ID NO:45, сигнальным доменом ItgB5, включающим аминокислотную последовательность SEQ ID NO:114, сигнальным доменом MRC1, включающим аминокислотную последовательность SEQ ID NO:119, сигнальным доменом BAI1, включающим аминокислотную последовательность SEQ ID NO:136, сигнальным доменом ELMO, включающим аминокислотную последовательность SEQ ID NO:120, или сигнальным доменом Axl, включающим аминокислотную последовательность SEQ ID NO:44.
81. CER по любому из пп.75-78, где провоспалительный интернализационный сигнальный домен является сигнальным доменом PI3K, Traf6, Syk, MyD88, Zap70, FcγR1, FcγR2A, FcγR2B2, FcγR2C, FcγR3A, FcεR1, FcαR1, BAFF-R, DAP12, NFAM1 или CD79b.
82. CER по п.81, где провоспалительный интернализационный сигнальный домен является сигнальным доменом Traf6, включающим аминокислотную последовательность SEQ ID NO:54, сигнальным доменом Syk, включающим аминокислотную последовательность SEQ ID NO:46, сигнальным доменом MyD88, включающим аминокислотную последовательность SEQ ID NO:53, усеченным сигнальным доменом MyD88, включающим аминокислотную последовательность SEQ ID NO:78, сигнальным доменом Zap70, включающим аминокислотную последовательность SEQ ID NO:47, сигнальным доменом FcγR1, включающим аминокислотную последовательность SEQ ID NO:48, сигнальным доменом FcγR2A, включающим аминокислотную последовательность SEQ ID NO:49, сигнальным доменом FcγR2C, включающим аминокислотную последовательность SEQ ID NO:50, сигнальным доменом FcγR3A, включающим аминокислотную последовательность SEQ ID NO:51, сигнальным доменом FcεRIγ, включающим аминокислотную последовательность SEQ ID NO:88, сигнальным доменом BAFF-R, включающим аминокислотную последовательность SEQ ID NO:94, сигнальным доменом DAP12, включающим аминокислотную последовательность SEQ ID NO:82, сигнальным доменом NFAM1, включающим аминокислотную последовательность SEQ ID NO:92, или сигнальным доменом CD79b, включающим аминокислотную последовательность SEQ ID NO:97.
83. Химерный интернализационный рецептор (CER), включающий одноцепочечный химерный белок, где одноцепочечный химерный белок включает:
внеклеточный домен, включающий scFv, который связывается с проинтернализационным маркером или антигеном-мишенью;
интернализационный сигнальный домен; и
трансмембранный домен, расположенный между внеклеточным доменом и интернализационным сигнальным доменом и соединяющий их,
где трансмембранный домен и интернализационный сигнальный домен получены из разных молекул.
84. CER по п.83, где scFv связывается с проинтернализационным маркером, выбранным из фосфатидилсерина (PtdSer), ICAM-3, окисленного липопротеина низкой плотности, кальретикулина, аннексина I, C1q компонента комплемента и тромбоспондина.
85. CER по п.83, где scFv связывается с опухолевым антигеном.
86. CER по п.85, где опухолевым антигеном является CD138, CD38, CD33, CD123, CD72, CD79a, CD79b, мезотелин, PSMA, BCMA, ROR1, MUC-16, L1CAM, CD22, CD19, CD20, CD23, CD24, CD37, CD30, CA125, CD56, c-Met, EGFR, GD-3, HPV E6, HPV E7, MUC-1, HER2, рецептор фолата α, CD97, CD171, CD179a, CD44v6, WT1, VEGF-α, VEGFR1, IL-13Rα2, IL-11Rα, PSA, FcRH5, лиганд NKG2D, NY-ESO-1, TAG-72, CEA, эфрин A2, эфрин B2, антиген Льюис А, антиген Льюис Y, MAGE, MAGE-A1, RAGE-1, рецептор фолата β, EGFRviii, VEGFR-2, LGR5, SSX2, AKAP-4, FLT3, фукозил GM1, o-ацетил GD2 или GD2.
87. CER по п.83, где связывающим доменом является scFv, специфичный к микробному антигену.
88. CER по любому из пп.83-87, где внеклеточный домен дополнительно включает внеклеточный спейсерный домен, расположенный между связывающим доменом и трансмембранным доменом.
89. CER по п.88, где внеклеточный спейсерный домен включает шарнирную область иммуноглобулина, внеклеточную область мембранного белка 1-го типа, область ножки C-лектина II типа, константный домен иммуноглобулина или их фрагмент.
90. CER по п.89, где внеклеточный спейсерный домен включает шарнирную область IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA или IgD.
91. CER по п.90, где внеклеточный спейсерный домен включает модифицированную шарнирную область IgG4, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:67.
92. CER по любому из пп.83-91, где трансмембранный домен включает трансмембранный домен Tim1, Tim4, Tim3, FcR, CD8a, CD28, MERTK, Axl, Tyro3, BAI1, CD4, MRC1 или DAP12.
93. CER по п.92, где трансмембранный домен включает трансмембранный домен Tim1, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:35, трансмембранный домен Tim4, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:36, трансмембранный домен FcγRI, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:37, трансмембранный домен CD8a, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:38, трансмембранный домен MERTK, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:39, трансмембранный домен Axl, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:40, трансмембранный домен Tyro3, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:41, трансмембранный домен CD28 SEQ ID NO:68, трансмембранный домен BAI1 SEQ ID NO:142, трансмембранный домен CD4, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:42, трансмембранный домен FcεRIγ, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:89, трансмембранный домен MRC1, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:118, или трансмембранный домен DAP12, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:81.
94. CER по п.92, где трансмембранный домен FcR включает трансмембранный домен FcγR1, FcγR2A, FcγR2B2, FcγR2C, FcγR3A, FcεR1 или FcαR1.
95. CER по любому из пп.83-94, где интернализационный сигнальный домен является гомеостатическим интернализационным сигнальным доменом или провоспалительным интернализационным сигнальным доменом.
96. CER по п.95, где гомеостатическим интернализационным сигнальным доменом является сигнальный домен ItgB5, MERTK, Tyro3, Axl, BAI1, ELMO или MRC1.
97. CER по п.95, где провоспалительным интернализационным сигнальным доменом является сигнальный домен PI3K, Traf6, Syk, MyD88, Zap70, FcγR1, FcγR2A, FcγR2B2, FcγR2C, FcγR3A, FcεR1, FcαR1, BAFF-R, DAP12, NFAM1 или CD79b.
98. CER по п.96, где гомеостатический интернализационный сигнальный домен является сигнальным доменом MERTK, включающим аминокислотную последовательность SEQ ID NO:69, сигнальным доменом Tyro3, включающим аминокислотную последовательность SEQ ID NO:45, сигнальным доменом ItgB5, включающим аминокислотную последовательность SEQ ID NO:114, сигнальным доменом MRC1, включающим аминокислотную последовательность SEQ ID NO:119, сигнальным доменом BAI1, включающим аминокислотную последовательность SEQ ID NO:136, сигнальным доменом ELMO, включающим аминокислотную последовательность SEQ ID NO:120, или сигнальным доменом Axl, включающим аминокислотную последовательность SEQ ID NO:44.
99. CER по п.97, где провоспалительный интернализационный сигнальный домен является сигнальным доменом Traf6, включающим аминокислотную последовательность SEQ ID NO:54, сигнальным доменом Syk, включающим аминокислотную последовательность SEQ ID NO:46, сигнальным доменом MyD88, включающим аминокислотную последовательность SEQ ID NO:53, усеченным сигнальным доменом MyD88, включающим аминокислотную последовательность SEQ ID NO:78, сигнальным доменом Zap70, включающим аминокислотную последовательность SEQ ID NO:47, сигнальным доменом FcγR1, включающим аминокислотную последовательность SEQ ID NO:48, сигнальным доменом FcγR2A, включающим аминокислотную последовательность SEQ ID NO:49, сигнальным доменом FcγR2C, включающим аминокислотную последовательность SEQ ID NO:50, сигнальным доменом FcγR3A, включающим аминокислотную последовательность SEQ ID NO:51, сигнальным доменом FcεRIγ, включающим аминокислотную последовательность SEQ ID NO:88, сигнальным доменом BAFF-R, включающим аминокислотную последовательность SEQ ID NO:94, сигнальным доменом DAP12, включающим аминокислотную последовательность SEQ ID NO:82, сигнальным доменом NFAM1, включающим аминокислотную последовательность SEQ ID NO:92, или сигнальным доменом CD79b, включающим аминокислотную последовательность SEQ ID NO:97.
100. CER по любому из пп.95, 96, и 98, где сигнализация посредством гомеостатического интернализационного сигнального домена приводит к экспрессии по меньшей мере одного из противовоспалительного или иммуносупрессорного цитокина.
101. CER по п.100, где противовоспалительным или иммуносупрессорным цитокином является TGF-β, IL-10 или и тот, и другой.
102. CER по любому из пп.95, 97 и 99, где сигнализация посредством провоспалительного интернализационного сигнального домена приводит к экспрессии по меньшей мере одного из воспалительного цитокина, воспалительного хемокина или костимулирующего маркера клеточной поверхности.
103. CER по п.102, где воспалительным цитокином является ФНОα, IL-1, IL-6, IL-12 или IL-23; воспалительным хемокином является CCL5 (RANTES), CXCL9 или CXCL10; и костимулирующим маркером клеточной поверхности является CD80, CD86, HLA-DR, CD40, HVEM или 4-1BBL; или их любая комбинация.
104. CER по п.83, включающий:
внеклеточный домен, включающий: связывающий домен, включающий scFv, специфичный к CD19, и внеклеточный спейсерный домен, включающий шарнирную область IgG4;
интернализационный сигнальный домен, включающий сигнальный домен MERTK;
трансмембранный домен, включающий трансмембранный домен CD28, расположенный между внеклеточным доменом и интернализационным сигнальным доменом и соединяющий их;
где внеклеточный спейсерный домен расположен между связывающим доменом и трансмембранным доменом.
105. CER по п.104, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:64 или аминокислоты 23-783 из SEQ ID NO:64.
106. Молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая CER по любому из пп.1-105.
107. Молекула нуклеиновой кислоты по п.106, дополнительно включающая последовательность, кодирующую по меньшей мере одну малую ГТФазу.
108. Молекула нуклеиновой кислоты по п.107, где малой ГТФазой является Rac1, Rab5, Rab7, Rap1, RhoA или CDC42.
109. Молекула нуклеиновой кислоты по п.108, где малой ГТФазой является Rac1, включающая аминокислотную последовательность SEQ ID NO:76, Rab5, включающая аминокислотную последовательность SEQ ID NO:77, Rab7, включающая аминокислотную последовательность SEQ ID NO:122, Rap1A, включающая аминокислотную последовательность SEQ ID NO:123, RhoA, включающая аминокислотную последовательность SEQ ID NO:124, CDC42, включающая аминокислотную последовательность SEQ ID NO:125, или их любая комбинация.
110. Молекула нуклеиновой кислоты по любому из пп.107-109, где последовательность IRES, последовательность сайта расщепления фурина или последовательность вирусного 2А пептида расположена между последовательностью, кодирующей CER, и последовательностью, кодирующей малую ГТФазу.
111. Молекула нуклеиновой кислоты по любому из пп.106-110, дополнительно включающая последовательность, кодирующую маркер трансдукции, суицидный ген или и тот, и другой.
112. Молекула нуклеиновой кислоты по п.111, где маркером трансдукции является усеченный белок EGFR, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:121.
113. Вектор, включающий молекулу нуклеиновой кислоты по любому из пп.106-112.
114. Вектор по п.113, где вектор является полицистронным вектором.
115. Вектор по п.113 или 114, где вектор является вирусным вектором, вектором на основе модифицированной мРНК или вектором для опосредованного транспозоном переноса генов.
116. Вектор по п.115, где вирусный вектор является ретровирусным вектором или лентивирусным вектором.
117. Клетка-хозяин, включающая CER по любому из пп.1-105, нуклеиновая кислота по любому из пп.106-112 или вектор по любому из пп.113-116.
118. Клетка-хозяин по п.117, включающая по меньшей мере два разных CER-рецептора по любому из пп.1-105.
119. Клетка-хозяин по п.117 или 118, дополнительно включающая рекомбинантную молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую малую ГТФазу.
120. Клетка-хозяин по п.119, где CER и малая ГТФаза кодируются на одном векторе.
121. Клетка-хозяин по п.119, где CER и малая ГТФаза кодируются на отдельных векторах.
122. Клетка-хозяин по любому из пп.119-121, где малой ГТФазой является Rac1, Rab5, Rab7, Rap1, RhoA или CDC42.
123. Клетка-хозяин по п.122, где малой ГТФазой является Rac1, включающая аминокислотную последовательность SEQ ID NO:76, Rab5, включающая аминокислотную последовательность SEQ ID NO:77, Rab7, включающая аминокислотную последовательность SEQ ID NO:122, Rap1A, включающая аминокислотную последовательность SEQ ID NO:123, RhoA, включающая аминокислотную последовательность SEQ ID NO:124, CDC42, включающая аминокислотную последовательность SEQ ID NO:125, или их любая комбинация.
+
+
+
+
+
124. Клетка-хозяин по любому из пп.117-123, где клетка-хозяин является T-клеткой, включающей CD4, CD8, наивную (CD45 RA+, CCR7+, CD62L+, CD27+, CD45RO-), центральной памяти (CD45RO, CD62L, CD8), эффекторной памяти (CD45RA+, CD45RO-, CCR7-, CD62L-, CD27-), вирусспецифическую, инвариантную слизистой оболочки, γδ (gd), естественную киллерную и тканерезидентную T-клетки, естественной киллерной клеткой, B-клеткой, лимфоидной клеткой-предшественником, включая обычные клетки-предшественники лимфоцитов, антигенпрезентирующей клеткой, включая дендритные клетки, клеткой Лангерганса, миелоидной клеткой-предшественником или зрелой миелоидной клеткой.
125. Клетка-хозяин по п.124, где B-клетка является наивной B-клеткой, плазматической клеткой, регуляторной B-клеткой, B-клеткой маргинальной зоны, фолликулярной B-клеткой, лимфоплазмоцитоидной клеткой, плазмобластной клеткой или B-клеткой памяти.
126. Клетка-хозяин по любому из пп.117-125, где клетка-хозяин является клеткой человека.
127. Клетка-хозяин по любому из пп.117-126, где клетка-хозяин демонстрирует интернализационную активность, когда внеклеточный домен CER связывается с проинтернализационным маркером или антигеном-мишенью.
128. Клетка-хозяин по п.127, где клетка-хозяин демонстрирует фагоцитарную активность, когда внеклеточный домен CER связывается с проинтернализационным маркером или антигеном-мишенью.
129. Популяция клеток-хозяев по любому из пп.117-128.
130. Популяция клеток-хозяев по п.129, включающая популяцию T-клеток, B-клеток, естественных киллерных клеток, лимфоидных клеток-предшественников, антигенпрезентирующих клеток, клеток Лангерганса, миелоидных клеток-предшественников, зрелых миелоидных клеток или их любую комбинацию.
131. Популяция клеток-хозяев по п.129 или 130, где популяцию клеток-хозяев подвергают этапу обогащения.
132. Клетка-хозяин по любому из пп.117-128 или популяция клеток-хозяев по любому из пп.129-131, где клетка-хозяин или популяция клеток-хозяев демонстрирует индекс фагоцитоза по меньшей мере 20 в отношении клетки-мишени.
133. Фармацевтическая композиция, включающая молекулу нуклеиновой кислоты по любому из пп.106-112, вектор по любому из пп.113-116, клетку-хозяина по любому из пп.117-128 или популяцию клеток-хозяев по любому из пп.129-131 и фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество.
134. Способ лечения субъекта с раком, включающий введение субъекту эффективного количества клетки, генетически модифицированной для экспрессии CER по любому из пп.1-105; клетки-хозяина по любому из пп.117-128, популяции клеток-хозяев по любому из пп.129-131 или фармацевтической композиции по п.133.
135. Способ лечения субъекта, имеющего заболевание, нарушение или нежелательное состояние, связанное с оверэкспрессией опухолевого антигена, где способ включает введение субъекту эффективного количества клетки, генетически модифицированной для экспрессии CER по любому из пп.1-105; клетки-хозяина по любому из пп.117-128, популяции клеток-хозяев по любому из пп.129-131 или фармацевтической композиции по п.133.
136. Способ лечения субъекта, имеющего аутоиммунное заболевание, нарушение или нежелательное состояние, где способ включает введение субъекту эффективного количества клетки, генетически модифицированной для экспрессии CER по любому из пп.1-105; клетки-хозяина по любому из пп.117-128, популяции клеток-хозяев по любому из пп.129-131 или фармацевтической композиции по п.133.
137. Способ лечения или предотвращения инфекционного заболевания у субъекта, включающий введение субъекту эффективного количества клетки, генетически модифицированной для экспрессии CER по любому из пп.1-105; клетки-хозяина по любому из пп.117-128, популяции клеток-хозяев по любому из пп.129-131 или фармацевтической композиции по п.133.
+
+
+
+
+
138. Способ по любому из пп.134-137, где генетически модифицированная клетка является T-клеткой, включающей CD4, CD8, наивную (CD45 RA+, CCR7+, CD62L+, CD27+, CD45RO-), центральной памяти (CD45RO, CD62L, CD8), эффекторной памяти (CD45RA+, CD45RO-, CCR7-, CD62L-, CD27-), вирусспецифическую, инвариантную слизистой оболочки, γδ (gd), естественную киллерную и тканерезидентную T-клетки, естественной киллерной клеткой, B-клеткой, лимфоидной клеткой-предшественником, включая обычные клетки-предшественники лимфоцитов, антигенпрезентирующей клеткой, включая дендритные клетки, клеткой Лангерганса, миелоидной клеткой-предшественником или зрелой миелоидной клеткой.
139. Способ по п.138, где B-клетка является наивной B-клеткой, плазматической клеткой, регуляторной B-клеткой, B-клеткой маргинальной зоны, фолликулярной B-клеткой, лимфоплазмоцитоидной клеткой, плазмобластной клеткой или B-клеткой памяти.
140. Способ по п.138 или 139, где генетически модифицированная клетка является аутологичной клеткой.
141. Способ по п.138 или 139, где генетически модифицированная клетка является аллогенной клеткой.
142. Способ лечения субъекта с раком, включающий введение субъекту эффективного количества вектора по любому из пп.113-116.
143. Способ лечения субъекта, имеющего заболевание, нарушение или нежелательное состояние, ассоциированное с оверэкспрессией опухолевого антигена, где способ включает введение субъекту эффективного количества вектора по любому из пп.113-116.
144. Способ лечения субъекта, имеющего аутоиммунное заболевание, нарушение или нежелательное состояние, где способ включает введение субъекту эффективного количества вектора по любому из пп.113-116.
145. Способ лечения инфекционного заболевания у субъекта, включающий введение субъекту эффективного количества вектора по любому из пп.113-116.
146. Способ по любому из пп.142-145, дополнительно включающий введение второго вектора, включающего молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую малую ГТФазу.
147. Способ по п.146, где малой ГТФазой является Rac1, Rab5, Rab7, Rap1, RhoA или CDC42.
148. Способ по любому из пп.134-147, где генетически модифицированную клетку, популяцию клеток-хозяев, фармацевтическую композицию или вектор вводят субъекту в комбинации со вторым терапевтическим средством.
149. Способ по п.148, где вторым терапевтическим средством является антитело, лучевая терапия, химиотерапевтическое средство, клеточная иммунотерапия, антибиотик, противогрибковое средство или противовирусное средство.
150. Способ по п.148 или 149, где CER вводят после введения второго терапевтического средства.
151. Способ по любому из пп.148-149, где второе терапевтическое средство вводят в субтерапевтической дозе.