Влияние аденозина на фагоцитарную активность моноцитов-макрофагов селезенки крыс в эксперименте

DIAGNOSTIC POSSIBILIES OF TRIPLEX SCANNING OF LOVER LIMBS ARTERIES

Yu.I. Grinchtein, D.V. Moscov, A.V. Miznicov

The present article presents the results of ultrasound triplex scanning method in researching arteries of femoro-distal segments of patients with aetherosclerosis obliterans.

Литература

1. Кошкин B.M., Зубарев A.P., Ларин С.И., Малютина И.Г. Об информативности методов ультразвукового сканирования при облитерирующих заболеваниях артерий нижних конечностей // Грудная хир.- 1991.-№2-С. 17-20.

2. Куликов В.П. Цветное дуплексное сканирование в диагностике сосудистых заболеваний. - Новосибирск, СО РАМН. - 1997. - 204с.

3. Akkersdijk W.L., de Ruyter J.W., Lapham R. et al. Colour duplex ultrasonographic imaging and provocation of popliteal artery compression // Eur. J. Vase. Endovasc. Surg. - 1995. - Vol. 10, N.3. - P.342-347.

4. Bergamini T.M. Tatum C.M.Jr., Marshall C. et al. Effect of multilevel sequential stenosis on lower extremity arterial duplex scanning // Am. J. Surg. - 1995. -Vol. 169, N.6. - P.564-560.

5. Davies-АН; Willcox-JH; Magee-TR; et al. Colour duplex in assessing the infrainguinal arteries in patients with claudication // Cardiovasc. Surg. - 1995. - Vol.3, N.2.-P.211-213.

6. Elsman-BH; Legemate-DA; van-der-Heyden-FW; et al. The use of color-coded duolex scanning in the selection of patients with lower extremity arterial disease for percutaneous transluminal angioplasty: a prospective study II Cardiovasc. Intervent. Radiol. - 1996. -Vol.19, N.5. - P.313-319.

7. Karacagil-S; Granbo-A; Jonsson-ML; et al. Modified technique of ultrasonic triplex scanning of the lower extremity arteries II Ups. J. Med. Sci. - 1996. -Vol.101, N.I. -P.l 13-133.

8. Karacagil S Lofberg AM Granbo A et al. Value of duplex scanning in evaluation of crural and foot arteries in limbs with severe lower-limb ischaemia. A prospective comparison with angiography // Eur. J. Vase. Endovasc. Surg. - 1996. - Vol. 12, N.3. - P.300-303.

9. Lai-DT; Huber-D; Glasson-R; et al. Colour duplex ultrasonography versus angiography in the diagnosis of lower-extremity arterial disease // Cardiovasc. Surg. - 1996. - Vol.4, N.3. - P.384-392.

10. Larch E, Minar E, Ahmadi R, et al. Value of color duplex sonography for evaluation of tibioperoneal arteries in patients with femoropopliteal obstruction // J. Vase. Surg. - 1997. - Vol.25. - P.629-636.

11. Sensier Y., Hartshorme T., Thrush A., et al. The effect of adjacent segment disease on the accuracy of colour duplex scanning for the diagnosis of lower limb arterial disease // Eur. J. Vase. Endovasc. Surg. -

1996. - Vol. 12, N.2. - P.238-243.

12. Zaag van der E.S., Legemate D.A., Nguen T. et al Aortoiliac reconstructive surgery based upon the results of duplex scanning II Eur. J. Vase. Endovasc. Surg. - 1998. - Vol. 16, N.5. - P.383-389.

© ВОРОПАЕВ А.В. -УДК 612.411:612.112.95:

ВЛИЯНИЕ АДЕНОЗИНА НА ФАГОЦИТАРНУЮ АКТИВНОСТЬ МОНОЦИТОВ-МАКРОФАГОВ СЕЛЕЗЕНКИ КРЫС В ЭКСПЕРИМЕНТЕ

А. В. Воропаев

Резюме. С целью выявления возможного участия аденозина в регуляции функций мононукле-арных фагоцитов было проведене исследование влияния аденозина и циклопентиладенозина на фагоцитарную активность моноцитов-макоофагов селезенки самок крыс. Установлено, что аденозин значимо увеличивает фагоцитоз. Циклопентиладеноэин обладает намного более выраженным эффектом при значительно меньшей концентрации.

Ключевые слова: аденозин, циклопентиладенозин, моноциты, макрофаги.

Широкое распространение первичных и вторичных иммунодефицитных состояний, понимание важной роли иммунологических нарушений в патогенезе большинства заболеваний человека

придают особую актуальность изучению механизмов регуляции иммунного ответа. Хорошо известно, что реакции иммунной системы находятся под контролем иммуноцитокинов, гормональная

же регуляция достаточно хорошо изучена только в отношение глюкокортикоидов. С 1994 года стали появляться сообщения, касающиеся влияния аденозина на иммунную систему.

Аденозин - важный регулятор биологических процессов, обладающий широким спектром действия. Он вызывает седацию депрессию нервной активности, увеличивает устойчивость головного мозга к ишемии [3]. Аденозин снижает эффекты катехоламинов на органы-мишени, снижает потребление кислорода клеткой, повышает уровень глюкозы в крови, снижает гликогенолиз в печени и мышцах. Обладает отрицательным ино-, хроно-, дромотропным эффектом на сердце, расширяет сосуды большинства внутренних органов и гопов-ного мозга, вызывает бронходилятацию, понижает артериальное давление и температуру тела и др. [6]. Аденозин в целом увеличивает устойчивость клетки и организма к неблагоприятным условиям путем реализации толерантной стратегии, связанной со снижением пагребления кислорода и температуры тела [2].

Аденозин ингибирует активацию Т-лимфоци-тов [9], увеличивает активность в тесте нитроси-него тетразолия и снижает активность миелопе-роксидазы нейтрофилов [5], увеличивает продукцию интерлейкина 10 и N0 у ингибированных фактором некроза опухолей (ФИО) моноцитов [8,10,11], снижает выраоотку ФНО резидентными макрофагами легких при респираторном дистресс синдроме [7]. Поскольку в отечественной и зарубежной литературе влияние аденозина на фагоцитарную активность моноцитов и макрофагов не исследовалось, мы исследовали этот вопрос.

Материалы и методы

Исследование проводилось на клеточной культуре моноцитов-макрофагов селезенки самок крыс. Всего исследовали 54 крысы. Методика получения мононуклеарных фагоцитов заключалась в следующем. Крысу забивали избыточным эфирным наркозом, вскрывали брюшную полость, извлекали селезенку и измельчали в среде 199 с помощью стеклянного гомогенизатора. Полученную культуру клеток селезенки в количестве 200 мкл помещали на обезжиренные стекла, которые инкубировались во влажной камере при 37°С в течение 1ч. Выход клеток при такой процедуре составляет 95% [4]. Затем неприлипшие клетки отмывались 0,86% раствором ЫаС1, к контрольным стеклам добавляли 0,86% раствор №С1. К опытным пробам добавляли исследуемые концентрации аденозина.

Дальнейшая процедура заключалась в инкубации в течение 10 мин, прополаскивании 0,86% раствором ЫаС1 и добавлении 200 мкл стандартной взвеси частиц латекса с повторной инкубацией в течение 30 мин. После этого стекла снова прополаскивались, фиксировались в 96% этаноле в течение 10 мин. и окрашивались в течение 3 мин азурэозином.

Фагоцитарная активность определялась с использованием показателей: общее количество по-

глощенных гранул латекса, доля фагоцитирующих клеток. Результаты были обработаны при помощи методов непараметоической статистики для связанных выборок с использованием двустороннего парного критерия Уилкокса [1].

Результаты и обсуждение В табл. 1 представлена зависимость активности фагоцитоза от времени инкубации с аденози-ном в концентрации 10 мкМ. Установлено, что максимальная стимуляция фагоцитоза наблюдается при инкубации 10 мин (рис.1), при которой общее количество поглощенных 1-ранул латекса увеличилось на 91% и доля фагоцитирующих клеток на 51% по сравнению с контролем. С увеличением времени эффект снижается, что можно объяснить разрушением аденозина адснозиндеза-миназой. Интенсивность изучавшегося влияния представлена в табл. 2. Очевидно, что аденозин в значительной мере активирует фагоцитоз. Значимое увеличение фагоцитарной активности наблюдается при действии аденозина, начиная с концентрации 1 мкМ (рис. 2), и при увеличении его концентрации эффект возрастает. Уже в физиологических рамках 0,1-3 мкМ [12] аденозин, как видно из графика, активирует моноциты-макрофаги Максимальная стимуляция фагоцитоза наблюдалась при концентрации аденозина 10 мкМ, составляя для доли фагоцитирующих клсюк увеличение на 64%, а для общего количества поглощенных гранул латекса 152%.

Таблица 1

Зависимость величины фагоцитоза от времени инкубации саденозином

Время инкубации, мин. Доля фагоцитирующих клеток, % Общее количество поглощенных гранул латекса

Контроль 37

10 52 (36-63)с 138 (119-183)0

20 48 (39-59)с 107 (85-129)с

30 39 (30-51)а 90 (68-126)“

Примечание: в скобках величина разброса показателей: а - Р<0,1, Ь - Р<0,05, с - Р<0,01

Рис. 1 Зависимость величины фагоцитоза от времени инкубации с аденозином, 10 мкМ

Примечание: 1 - общее количество поглощенных гранул латекса, 2 - доля фагоцитирующих клеток, о - р>0,1  -р<0,01

Таблица 2 Зависимость величины фагоцитоза от концентрации аденозина

Таблица 3 Зависимость величины фагоцитоза от концентрации ЦПА

Концентрация аденозина, мкМ Доля фагоцитирующих клеток, % Общее количество поглощенных гранул латекса

Контроль 28

0,1 28 (15-42)' 44(18-67)'

1,0 36(14-51)' 62(26-81)'

10 46(20-62)* 106(78-131)*

Примечание: в скобках величина разброса показателей: а - Р<0,1, Ь - Р<0,05, с - Р<0,01

Рис.2. Влияние аденозина на фагоцитоз

Концентрация циклопентиладенозина, мкМ Доля фагоцитирующих клеток, % Общее количество поглощенных гранул латекса

Контроль 29

0,005 47 (37-58)' 60 (46-77)'

0,01 48 (39-55)с 62 (52-73)*

0,1 73 (68-82)' 128 (93-136)'

1,0 74(65-74)' 126 (115-138)'

Примечание: в скобках величина разброса показателей: а - Р<0,!, Ь - Р<0,05, с — Р<0,01

Рис.З. Влияние циклопентиладенозина на фагоцитоз

Примечание: см.рис. 1

0і7 I Примечание: см.рис. 1

1дС. нМ

В дальнейшем аналогичным образом исследовали влияние на фагоцитарную активность моно-нуклеарных фагоцитов циклопентиладенозина -селективного агониста А1 аденозиновых рецепторов, который обладает значительно более выраженным эффектом (табл. 3). Значимая стимуляция фагоцитоза наблюдалась уже при концентрации 0,005 мкМ, достигая максимума с выходом на насыщение при концентрации 0,1 мкМ (рис.З), при которой показатели увеличились на 151% и 251% соответственно. Циклопентиладенозин обладает равновеликим стимулирующим эффектом при концентрации на три порядка (в 830 раз) меньше, чем аденозин (рис.4). Это, вероятно, объясняется его селективностью и устойчивостью к ферментативному разрушению. Таким образом, циклопентиладенозин является более мощным стимулятором фагоцитоза, чем аденозин.

Известно, что иммунологические стимулы повышают уровень аденозина в крови [12]. Поэтому можно предположить, что аденозин, активируя макрофаги - центральные иммунорегуляторные клетки, инициирующие клеточнокооперативные процессы, обладает способностью стимулировать гуморальные и клеточные реакции иммунной системы. Полученные данные свидетельствуют о возможности участия аденозина и синтетических агонистов его рецепторов в регуляции функций

мононуклеарных фагоцитов, что существенно расширяет знания о спектре иммунорегуляторно-го действия данного гормона. Таким образом, аденозин и циклопентиладенозин активируют фагоцитарную активность мононуклеарных фагоцитов и это влияние имеет дсзозависимый характер. Циклопентиладенозин обладает более выраженной способностью активировать фагоцитоз, опосредуемый мононуклеарными фагоцитами.

Рис.4. Сравнительная характеристика аденозина и циклопентиладенозина

300

8

II 50

5 о

5 о ----------------------------------------------

0.7 I 2 3 4

ІдС.нМ

Примечание: см.рис. 1

ADENOSNE INFLUENCE ON RAT’S SPLEEN MONOCYTES-MACROPHAGS PHAGOCYTIC ACTIVITY IN EXPERIMENT

A.V. Voropaev

Aiming to assess the role of adenosine in regulation of immune system we investigate the influence of adenosine and cyclopenthyladenosine (CPA) on the phagocytic activity of monocytes and macrophages of rats spleen. Adenosine stimulate phagocytose. CPA possess more pronounsed effects in considerebly smaller concentration.

RAW 264.7 macrophages and in endotoxemic mic // J.Immunol. - 1996. -N10. -P.4634-40.

8. Hill R., Oleynek J , Magee W., Knight D., Tracey W Relative importance of adenosine A1 and A3 receptors in mediating physiological or pharmacological protection from ischemic myocardial injury in the rabbit heart // J. Mol.Cell.Cardiol. - 1998. - Vol.30. - N3. -P.579-85.

9. Huang S., Apasov S., Koshiba M., Sitkovsky M. Role of A2a extracellular adenosine receptor-mediated signaling in adenosine-mediated inhibition of T-cell activation and expansion // Blood. - 1997. - Vol.90. -N4.-P. 1600-10.

10. Le Moine O., Stordeur P., Schandeur L., Marchant A., Goldman M., Devoire J. Adenosine enhances 1L-10 secretion by human monocytes // J.Immunol. - 1996. -Vol.156. - N11. — P.4408-14.

11. Merill J., Shen C., Cronstein B. Adenosine A1 receptor promotion of multinuclear cell formation by human monocytes: a mechanism for methotrexate-induced nodulosis in reumatoid arthritis // Arthritis. Rheum. -

1997. - Jul.-P 1308-15.

12. Olah M.E. Stiles C.R. Adenosine receptor subtypes Characterisation and therapeutic regulation II Ann. Rev. Pharmacol. Toxicol. - 1995. -N35. -P.581-606.

© КЛИМЕНКО Г.С., РАДЖАБОВ А.А., ЗЕДГЕНИДЗЕ И.В. -УДК 616.584-07-08

РЕЗУЛЬТАТЫ ЛЕЧЕБНО-ДИАГНОСТИЧЕСКОЙ АРТРОСКОПИИ ГОЛЕНОСТОПНОГО СУСТАВА У БОЛЬНЫХ.С ПРОНАЦИОННО-АБДУКЦИОННЫМИ ПОВРЕЖДЕНИЯМИ

Г. С. Клименко, А. А. Раджабов, И. В. Зедгенидзе

* (Иркутский государственный медицинский университет, ректор - акад. МТА и АН ВШ А.А. Майбо-

рода, кафедра травматологии, ортопедии и В.П.Х., зав. - д.м.н Г.С. Клименко)

Резюме. Нами проведена лечебно-диагностическая артроскопия голеностопного сустава 30 больным с пронационно-абдукционными повреждениями. У зсех больных выявлено повреждение гиалинового хряща суставных поверхностей сочленяющихся костей. Причем локализация травматических изменений была типична для данного механизма травмы, а характер и размеры этих повреждений носят вариабельный характер.

При механической травме голеностопного ного рода осложнений в отдаленном периоде. При

сустава в связи с наличием трансхондральных по- этом недооценивается роль травмы хряща сустав-

вреждений появляется возможность развития раз- них поверхностей голеностопного сустава при от-

Литература

1. Закс JI. Статистическое оценивание. - М : Статистика, 1976. -591с.

2. Кулинский В. И.. Ольховский Н.А. Успехи современной биологии. - 1992. - Т.112. -С.697-714.

3. Кулинский В И., Усов JI.A., Суфианова Г.З. Сравнительная характеристика и рецепторный механизм эффекта А-1 аденозиновых рецепторов при полной ишемии головного мозга. // Экспериментальная и клиническая фармакология. - 1993. -Т.56. - С.13-16.

4. Оценка иммунного статуса. Методические рекомендации. - М., 1984. - 21с.

5. Порядин Г.В., Сапмаси Ж.М., Гаврилов Е.В., Макаров А.И. Аденозин как модулятор функциональной активности фагоцитов периферической крови здоровых людей и больных различными формами бронхиальной астмы II Rus.J.Immunol. - 1992. -Vol.2. - Р.15-21.

6. Collis M.G., Hourani S.M. Adenosine receptor sub-types // Trends in Pharmacol. Sci. — 1993. - N14. -P.360-366.

7. Hasky G., Szaby C., Nimeth Z., Kvetan V., Pastores S. Adenosine receptor agonists differentially regulate IL-10, TNF-alpha, and nitric oxide production in