СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ АМИТРИПТИЛИНА
METHOD FOR QUANTITATIVE DETERMINATION OF AMITRIPTYLINE

Изобретение относится к аналитической химии и может быть использовано для определения медицинского препарата амитриптилина при контроле в процессе его производства и реализации, а также при проведении медико-биологических исследований.
Сущность количественного определения заключается в экстрагировании ионных ассоциатов амитриптилина с метиловым оранжевым хлороформом из ацетатного буферного раствора с pH 3.
Амитриптилин 5-(3-Диметиламинопропилиден)-10,11-дигидродибензоциклогептена гидрохлорид - это представитель антидепрессантов. Он является ингибитором обратного нейронального захвата медиаторных моноаминов, включая норадреналин, дофамин, серотонин и др. Характерна значительная М-холинолитическая (антихолинергическая), антигистаминная и альфа-адренолитическая активность. Антидепрессивное (тимоаналептическое) действие сочетается у амитриптилина с выраженным седативным, снотворным и анксиолитическим (противотревожным) эффектом. Вместе с тем амитриптилин не полностью лишен и стимулирующего, психоэнергизирующего эффекта.
3
Известен способ определения амитриптилина в крови методом газовой хроматографии - масс-спектрометрии. Данная методика включает введение внутренних стандартов - мапротилина и его метилированного производного, жидкость - жидкостную экстракцию и дериватизацию с трифторуксусным ангидридом для улучшения газохроматографических свойств. Предел количественного обнаружения составляет 0,5 мкг/см [1]. Недостатком способа является использование внутренних стандартов и, кроме того, дериватизацию амитриптилина трифторуксусным ангидриридом. Несмотря на высокую воспроизводимость определения амитриптилина по данному способу, введение в анализируемую систему реагентов, обеспечивающих получение аналитической формы, усложняет анализ.
3
3
3
3
Также известен способ определения амитриптилина в трупной крови с использованием газовой хроматографии с масс-селективным детектированием, взятый нами в качестве прототипа. Пробоподготовка включает жидкость-жидкостную экстракцию и дериватизацию с трифторуксусным ангидридом. Предел обнаружения амитриптилина - 0,05 мкг/см крови. Диапазон количественного определения - 0,05-3,0 мкг/см. Максимальные внутрисерийные погрешности определения анализируемых веществ не превышают 12,9% для концентраций 0,10 мкг/см и 10,6% для концентраций 2,0 мкг/см. Метод апробирован на экспертном материале при производстве судебно-химических исследований [2]. Недостаток данного способа - проведение дериватизации амитриптилина с трифторуксусным ангидридом, что делает определение сложным и длительным.
Целью изобретения является разработка высокочувствительного и экспрессивного способа определения амитриптилина в лекарственных формах, основанного на экстрагировании его ионных ассоциатов с метиловым оранжевым хлороформом из ацетатного буферного раствора с рН 3 и измерении оптических плотностей хлороформных экстрактов при длине волны 430 нм в кювете толщиной 0,5 см.
Предлагаемое изобретение включает следующие стадии:
1) формирование ионных ассоциатов амитриптилина с метиловым оранжевым;
2) экстрагирование образовавшихся ионных ассоциатов хлороформом из ацетатного буферного раствора с pH 3; 3) фотометрирование экстрактов и определение содержания амитриптилина по градуировочному графику.
3
3
3
3
3
Градуировочный график. Взвешивают две таблетки амитриптилина и тщательно их растирают. Аккуратно взвешивают навеску, эквивалентную 25 мг амитриптилина и смешивают ее с водой. Смесь перемешивают 15 минут и затем фильтруют через бумажный фильтр. Остаток на фильтре тщательно промывают водой. Фильтрат и промывные растворы собирают в мерную колбу емкостью 100 см и разбавляют до метки водой. Далее в 10 центрифужных пробирок вносят 0; 0,05; 0,1; 0,2; 0,3; 0,4; 0,6; 0,8; 1; 2 см полученного раствора, вводят ацетатный буферный раствор с pH от 3 до 5 см, 1 см раствора метилового оранжевого, доводят до 10 см хлороформом, встряхивают 5 минут, центрифугируют 5 минут при 3000 об/мин и измеряют оптические плотности хлороформных экстрактов при длине волны 430 нм в кювете толщиной 0,5 см. Градуировочный график линеен в диапазоне концентраций от 0,07 до 0,51. (Градуировочный график представлен на чертеже).
3
3
3
3
Выполнение определения: Взвешивают две таблетки амитриптилина и тщательно их растирают. Аккуратно взвешивают навеску, эквивалентную 25 мг амитриптилина и смешивают ее с водой. Смесь перемешивают 15 минут и затем фильтруют через бумажный фильтр. Остаток на фильтре тщательно промывают водой. Фильтрат и промывные растворы собирают в мерную колбу емкостью 100 см и разбавляют до метки водой. Аликвотную порцию раствора переносят в серию мерных центрифужных пробирок, в каждую из которых вводят ацетатный буферный раствор с рН 3 до 5 см, 1 см раствора метилового оранжевого, доводят до 10 см хлороформом, встряхивают 5 минут, центрифугируют 5 мин при 3000 об/мин и измеряют оптические плотности хлороформных экстрактов при длине волны 430 нм в кювете толщиной 0,5 см.
3
Найдено, что данным способом можно определить 0,0015 мг амитриптилина в 1 см раствора.
Метрологические характеристики разработанной методики приведены в табл.1.
Таблица 1
Метрологические характеристики методики определения амитриптилина в таблетках, число опытов n=6; степень надежности р=0,95; критерий Стьюдента t<sub>p</sub>=2,57
Взято для определения раствора амитриптилина, см<sup>3</sup>
Содержание в растворе амитриптилина, мг
Найдено, мг <img file="00000002.tif" he="13" wi="28" img-content="undefined" img-format="tif" />
Предлагаемым способом
По способу [2]
0
0,0000
0,0000
0,0000
0,05
0.0125
0,0125±0,0010
0,0125±0,0010
0,1
0.0250
0,0250±0,0030
0,0250±0,0030
0,2
0.0500
0,0500±0,0220
0,0500±0,0150
0.3
0.0750
0,0750±0,0170
0,0750±0,0150
0.4
0.1000
0,1000±0,0290
0,1000±0,0200
0.6
0.1500
0.1500±0,0110
0,1500±0,0900
0.8
0.2000
0.2000±0,0280
0,2000±0,0130
1
0.2500
0.2500±0.0420
0,2500±0,0250
*х - найденная величина;
- среднеарифметическое из n опытов;
S - среднеквадратичное отклонение.
Сравнение предлагаемой методики и методики, взятой в качестве прототипа, показывает, что прототип обладает лучшими метрологическими характеристиками, однако предлагаемый способ является высокочувствительным, экспрессным, что и входило в цель работы. Метрологические характеристики предлагаемой методики вполне могут удовлетворить любого химика-аналитика.
Литература
1. Иванова. Е.П., Мелентьев А.Б. Количественное определение амитриптилина и нортриптилина в крови методом газовой хроматографии - масс-спектрометрии. Проблемы теоретической и экспериментальной химии: Тезисы докладов 17 Российской молодежной научной конференции, Екатеринбург, 17-20 апр., 2007. С.87.
2. А.Б. Мелентьев, С.С. Катаев, Е.П. Иванова. Судебно-медицинская экспертиза 2007, т.50, с.31-34.
3. Булатов М.И., Калинкин И.П. Практическое руководство по фотоколориметрическим и спектрофотометрическим методам анализа. Л.: Химия, 1976, - 376 с.