СПОСОБ СКРИНИНГА СОЕДИНЕНИЙ, КОТОРЫЕ СЕЛЕКТИВНО СНИЖАЮТ КОЛИЧЕСТВО РАКОВЫХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК

1. Способ идентификации агента, который селективно снижает количество раковых стволовых клеток (CSC), включающий:
а) приведение в контакт CSC из популяции клеток с агентом-кандидатом и
б) определение способности указанного агента-кандидата снижать выживаемость или рост CSC или увеличивать дифференцировку CSC по сравнению с CSC, которую не приводят в контакт с агентом-кандидатом.
-
-
+
+
+
-
-
-
-
2. Способ по п. 1, где CSC дополнительно характеризуется следующими свойствами: CD24, CDI33, Notch, Glil, Gli2, цитокератин, Neurofil и глиальный фибриллярный кислый белок (GFAP).
3. Способ по любому из пп. 1 или 2, где CSC дополнительно имеет следующие свойства: способность к самообновлению, способность к асимметричному делению клеток, туморогенная способность, имеет метастатический потенциал, способность к множественной дифференцировке, широкий спектр химиорезистентности и чувствительность к ингибиторам Notch и Hedgehog.
4. Способ по п. 1, где CSC не поддаются лечению методами стандартной химиотерапии.
5. Способ по п. 1, в котором агент-кандидат выбирают из группы, состоящей из химического, биологического агентов и их комбинаций.
6. Способ по п. 1, в котором указанная стадия определения дополнительно включает сравнение процентного содержания CSC в популяции клеток, которые были подвергнуты воздействию агента-кандидата, с процентным содержанием клеток в популяции клеток, которые не были подвергнуты воздействию агента-кандидата, при этом агент-кандидат, который снижает процентное содержание CSC в популяции обработанных клеток по сравнению с процентным содержанием CSC в необработанных клетках, представляет собой агент, селективно снижающий процентное содержание CSC.
7. Способ по п. 1, в котором стадия определения включает выполнение процедуры, выбранной из группы, состоящей из проточной цитометрии, определения жизнеспособности клеток, определения степени дифференцировки клеток, определения интенсивности деления клеток и их комбинаций.
8. Способ по п. 1, в котором популяция клеток содержит CSC и взрослые стволовые клетки, и указанный агент снижает количество CSC в популяции клеток без значительного снижения количества взрослых стволовых клеток.
9. Способ по п. 1, который представляет собой высокопроизводительный скрининг.
10. Способ по п. 1, в котором стадия определения дополнительно включает стадию i и, по меньше мере, одну из стадий ii, iii и iv:
i. сравнение процентного содержания CSC в популяции клеток, которая обработана агентом-кандидатом, с процентным содержанием CSC в популяции клеток, которая не была обработана агентом-кандидатом;
ii. определение процентного содержания жизнеспособных клеток в обработанной популяции клеток и в необработанной популяции клеток;
iii. определение процентного содержания, не являющихся CSC, в обработанной популяции клеток и в необработанной популяции клеток;
iv. определение процентного содержания разделившихся клеток в обработанной популяции клеток и в необработанной популяции клеток;
при этом агент-кандидат, который (I) снижает процентное содержание CSC и уменьшает жизнеспособность клеток; (2) снижает процентное содержание CSC без уменьшения жизнеспособности клеток; (3) снижает процентное содержание CSC и повышает количество клеток, не являющихся CSC; (4) снижает процентное содержание CSC и уменьшает интенсивность деления клеток или (5) снижает процентное содержание CSC без уменьшения интенсивность деления клеток, представляет собой агент, который селективно снижает процентное содержание CSC.
11. Способ по п. 10, в котором стадия определения включает выполнение процедуры, выбранной из группы, состоящей из проточной цитометрии, определения жизнеспособности клеток, определения степени дифференцировки клеток, определения интенсивности деления клеток и их комбинаций.
12. Способ высокопроизводительного скрининга для идентификации агентов, которые селективно снижают процентное содержание раковых стволовых клеток (CSC) в популяции клеток, включающий:
а) приведение в контакт CSC из популяции клеток с агентом-кандидатом;
б) определение способности агента снижать выживаемость или рост CSC или увеличивать дифференцировку CSC по сравнению с CSC, которую не приводили в контакт с агентом-кандидатом, путём:
i. сравнения процентного содержания CSC в популяции клеток, которая обработана агентом-кандидатом, с процентным содержанием CSC в популяции клеток, которая не была обработана агентом-кандидатом;
ii. определения процентного содержания жизнеспособных клеток в обработанной популяции клеток и в необработанной популяции клеток;
iii. определения процентного содержания клеток, не являющихся CSC в обработанной популяции клеток и в необработанной популяции клеток;
iv. определения процентного содержания делящихся клеток в обработанной популяции клеток и в необработанной популяции клеток;
при этом агент-кандидат, который (I) снижает процентное содержание CSC и уменьшает жизнеспособность клеток; (2) снижает процентное содержание CSC без уменьшения жизнеспособности клеток; (3) снижает процентное содержание CSC и повышает процентное содержание клеток, не являющихся CSC; (4) снижает процентное содержание CSC и уменьшает интенсивность деления клеток или (5) снижает процентное содержание CSC без уменьшения интенсивности деления клеток, представляет собой агент, который селективно снижает процентное содержание CSC.
-
-
+
+
+
-
-
-
-
13. Способ по п. 12, где CSC дополнительно характеризуется следующими свойствами: CD24, CDI33, Notch, Glil, Gli2, цитокератин, Neurofil и глиальный фибриллярный кислый белок (GFAP).
14. Способ по любому из пп. 12 или 13, где CSC дополнительно имеет следующие свойства: способность к самообновлению, способность к асимметричному делению клеток, туморогенная способность, имеет метастатический потенциал, способность к множественной дифференцировке, широкий спектр химиорезистентности и чувствительность к ингибиторам Notch и Hedgehog.
15. Способ по п. 12, в котором стадию (i) выполняют методом проточной цитометрии.
16. Способ по п. 12, в котором стадию (И) выполняют путём определения жизнеспособности клеток.
17. Способ по п. 12, в котором стадию (iii) выполняют путём определения степени дифференцировки клеток.
18. Способ по п. 12, в котором стадию (iii) выполняют путём определения интенсивности деления клеток.
19. Способ по п. 12, в котором агент-кандидат выбирают из группы, состоящей из химического, биологического агентов и их комбинаций.
20. Способ по п. 12, в котором CSC не поддаются лечению методами стандартной химиотерапии.
21. Способ высокопроизводительного скрининга для идентификации агентов, которые селективно снижают процентное содержание раковых стволовых клеток (CSC) в популяции клеток, причем CSC не поддаются лечению методами стандартной химиотерапии, включающий:
а) приведение в контакт CSC из популяции клеток с агентом-кандидатом, при этом CSC имеет следующие характеристики: HLA Г и HLAII";
б) определение способности агента снижать выживаемость или рост CSC или увеличивать дифференцировку CSC по сравнению с CSC, которая не приведена в контакт с агентом-кандидатом, путём:
i. сравнения процентного содержания CSC в популяции клеток, которая обработана агентом-кандидатом, с процентным содержанием CSC в популяции клеток, которая не была обработана агентом-кандидатом, при помощи метода проточной цитометрии;
ii. определения процентного содержания жизнеспособных клеток в обработанной популяции клеток и в необработанной популяции клеток при помощи метода анализа жизнеспособности клеток;
iii. определения процентного содержания клеток, не являющихся CSC, в обработанной популяции клеток и в необработанной популяции клеток при помощи метода анализа степени дифференцировки клеток; и
iv. определения процентного содержания делящихся клеток в обработанной популяции клеток и в необработанной популяции клеток при помощи метода анализа интенсивности клеточного деления;
при этом агент-кандидат, который (I) снижает процентное содержание CSC и уменьшает жизнеспособность клеток; (2) снижает процентное содержание CSC без уменьшения жизнеспособности клеток; (3) снижает процентное содержание CSC и повышает процентное содержание клеток, не являющихся CSC; (4) снижает процентное содержание CSC и уменьшает интенсивность деления клеток или (5) снижает процентное содержание CSC без уменьшения интенсивности деления клеток, представляет собой агент, который селективно снижает процентное содержание CSC.
22. Способ по п. 21, в котором агент-кандидат выбирают из группы, состоящей из химического, биологического агентов и их комбинаций.
23. Агент для селективного уничтожения CSC, идентифицированный способом по любому из пп. 1, 12 или 21.
24. Фармацевтическая композиция, содержащая фармацевтически приемлемый носитель и агент по п. 23 или его фармацевтически приемлемую соль.