СПОСОБ РАННЕЙ ДИАГНОСТИКИ ТРАХЕОБРОНХИТА У ТЕЛЯТ
EARLY DIAGNOSTIC TECHNIQUE FOR TRACHEOBRONCHITIS IN CALVES

Изобретение относится к области ветеринарии и касается способа ранней диагностики трахеобронхита у телят.
Трахеит - воспаление слизистой оболочки трахеи. У животных в большинстве случаев регистрируется не как самостоятельное заболевание, а как осложнение ларингита (ларинготрахеит) или бронхита (трахеобронхит).
Бронхит - воспаление слизистой и подслизистой оболочки бронхов. По течению различают острые и хронические бронхиты. В зависимости от локализации воспалительного процесса в бронхах того или иного размера бывают макробронхиты, когда воспалительный процесс локализуется в крупных бронхах, микробронхит, когда в процесс вовлекаются мелкие бронхи, и диффузный бронхит, когда воспаление распространяется по всему бронхиальному дереву. В зависимости от характера воспалительного экссудата бронхиты могут быть катаральными, фибринозными, гнойными, гнилостными и геморрагическими [1, 2].
Среди респираторных болезней телят вирусной этиологии большое значение имеют парагрипп-3 (ПГ-3) и инфекционный ринотрахеит (ИРТ), которые протекают как в виде моно-, так и смешанной инфекциии, проявляющейся кератоконъюнктивитом, ринитом, трахеитом, бронхитом, катаральной бронхопневмонией, нередко переходящей в интерстициальную при осложнении условно-патогенной микрофлорой [3, 4].
Известен способ диагностики трахеита: диагноз ставят на основании осмотра, пальпации, аускультации и рентгенологического исследования.
При инфекционном ринотрахеите, парагриппе-3 проводят серологические, вирусологические и (или) молекулярно-генетические исследования, а в случае осложнения бронхопневмонией и бактериологические [2, 5].
Однако данный метод включает клинические и лабораторные исследования и не позволяет выявить субклиническое течение трахеобронхита.
Известен способ выявления трахеобронхита, включающий пальпацию первого трахеального кольца, при котором в случае повышенной чувствительности слизистой оболочки регистрируется кашель [6].
Недостатком данного способа является то, что повышенная чувствительность первого трахеального кольца и всей трахеи регистрируется при выраженном трахеите и бронхите (сухой или влажный кашель, жесткое везикулярное дыхание, хрипы, экспираторная одышка и т.д.).
Известно, что чувствительность слизистой оболочки гортани, трахеи и бронхов при воспалении повышена. Пальпация в этом случае вызывает кашель и общую двигательную реакцию животных. У здорового крупного рогатого скота кашлевую реакцию при этом вызвать практически невозможно [6].
Известен также способ диагностики легочной гипертензии. Способ основан на внутривенном введении 0,3% раствора перекиси водорода и применяется в медицинской практике [7].
Наиболее близким по сущности к заявленному способу является способ, включающий пальпацию последнего трахеального кольца, в случае повышенной чувствительности диагностируется раннее проявление трахеобронхита [8].
Недостатком способа является то, что пальпация последнего трахеального кольца не позволяет выявить повышения чувствительности слизистой оболочки бронхов, что в конечном счете не дает возможности диагностики трахеобронхита на более ранних этапах течения болезни.
Технический результат изобретения - ускорение диагностики трахеобронхита у телят.
Способ осуществляется следующим образом. Телятам внутривенно вводят 0,6% раствор перекиси водорода на 0,9% растворе хлорида натрия в дозе 0,4 мл на кг массы тела. В случае возникновения кашлевой реакции через 1-7 минут после введения диагностируется трахеобронхит.
Анализ данных в научно-технической и патентной литературе не выявил способа ранней диагностики трахеобронхита у телят с использованием внутривенного введения 0,6% раствора перекиси водорода, что указывает на соответствие заявляемому решению критерия новизны.
Изобретение может применяться для ранней диагностики трахеобронхита у телят как в крупных животноводческих комплексах, так и в небольших фермерских хозяйствах, что весьма важно для животноводов и ветеринарных специалистов для своевременного принятия лечебно-профилактических мероприятий для купирования трахеобронхита, контроля эффективности лечения телят с патологией органов дыхания.
Использование способа позволяет выявлять трахеобронхит у телят на 2-6 сутки раньше, чем при использовании прототипа [8]. Кроме того, внутривенное введение 0,6% раствора перекиси водорода на 0,9% растворе хлорида натрия способствует активации межсуточного обмена веществ.
Раннюю диагностику трахеобронхита с использованием заявляемого способа проводили в ООО «Воронежпищепродукт» Новоусманского района Воронежской области на 64 телятах 1-1,5-месячного возраста.
Сущность способа поясняется примерами
Пример 1. Обоснование применения перекиси водорода для выявления трахеобронхита у телят.
В хозяйстве, длительно неблагополучном по ПГ-3 и ИРТ, часто протекающих в виде трахеобронхита, отобрали 40 телят 1-1,5-месячного возраста, из них 14 с патологией органов дыхания (трахеобронхит, бронхопневмония) - первая группа и 26 клинически здоровых телят - вторая группа.
Телятам внутривенно вводили 0,6% раствор перекиси водорода на 0,9% растворе хлорида натрия в дозе 0,4 мл на кг массы тела. В случае возникновения кашлевой реакции через 1-7 минут после введения диагностировали трахеобронхит.
За животными в течение 7 суток вели постоянное клиническое наблюдение, определяли температуру тела, количество дыхательных движений, состояние слизистых оболочек, чувствительность гортани и трахеи, характер кашля, хрипов, наличие или отсутствие одышки, носовых истечений, регистрировали время появления чувствительности последнего трахеального кольца, реакцию телят на введение 0,6% раствора перекиси водорода на 0,9% растворе хлорида натрия. Результаты опыта представлены в таблице 1.
Таблица 1
Реакция телят на введение 0,6% раствора перекиси водорода на 0,9% растворе хлорида натрия.
Показатели
Телята
1-я группа (больные)
2-я группа (здоровые)
Количество телят, голов (%)
14 (100)
26 (100)
Из них реагировало на введение 0,6% раствора перекиси водорода, голов (%)
14 (100)
12 (46,2)
Из них реагировало на пальпацию первого трахеального кольца, голов (%)
14 (100)
-
пальпацию последнего трахеального кольца, голов (%)
14 (100)
-
Время появления чувствительности последнего трахеального кольца, сутки
при пальпации
3,8±0,46
Из таблицы 1 видно, что клинически здоровые телята на пальпацию как первого, так и последнего трахеального колец не реагировали. Однако на введение 0,6% раствора перекиси водорода на 0,9% растворе хлорида натрия в дозе 0,4 мл на кг массы тела из 26 телят у 12 (46,2%) регистрировался кашель (от 2 до 7 кашлевых толчков). Тогда как чувствительность последнего трахеального кольца у этих телят после введения 0,6% раствора перекиси водорода на 0,9% растворе хлорида натрия проявилась на 3,8±0,46 сутки.
У телят с клинической формой трахеобронхита как при пальпации первого и последнего трахеального колец, так и при внутривенном введении 0,6% раствора перекиси водорода на 0,9%-ном растворе хлорида натрия отмечался кашель (от 3 до 9 кашлевых толчков) с выделением мокроты.
То есть внутривенное введение 0,6% раствора перекиси водорода на 0,9% растворе хлорида натрия телятам на 3,8±0,46 суток раньше выявляет субклиническое течение трахеобронхита в сравнении с пальпацией последнего трахеального кольца.
Клинические и биохимические показатели представлены в таблице 2.
Таблица 2
Клинические и биохимические показатели здоровых и больных телят.
Показатели
Телята
Больные
Здоровые
Реагирующие на 0,6% перекись водорода
Не реагирующие на 0,6% перекись водорода
Температура тела, °С
39,8±0,22*
39,0±0,06
38,7±0,06
Частота дыхательных движений, в мин.
54±4,7*
35±3,2
29±3,1
Частота сердечных сокращений, в мин.
118±10,3*
91±9,3
86±5,2
Лейкоциты, 10<sup>9</sup>/л
8,3±0,90
10,1±1,01
8,9±0,68
Эритроциты, 10<sup>12</sup>/л
5,4±0,11
6,0±0,14
5,9±0,11
Гемоглобин, г/л
81,2±1,97*
83,7±3,70
88,2±3,72
Белки, г/л
61,72±2,61
63,14±2,37
62,31±1,83
Липиды, г/л
3,25±0,34
3,43±0,17
3,72±0,29
Холестерин, мМ/л
3,17±0,34*
4,00±0,46
4,31±0,42
Креатинин, мМ/л
78,3±4,59
71,3±4,29
72,6±3,05
Глюкоза, мМ/л
2,20±0,43*
3,31±0,38*
4,72±0,44
Мочевина, мМ/л
3,90±0,28*
3,57±0,71*
2,19±0,23
Каталаза, мкМ Н<sub>2</sub>О<sub>2</sub>/(л×мин)
31,83±1,40*
33,66±1,19
35,54±1,69
СОД, у.е.
0,52±0,06*
0,75±0,10
0,78±0,14
ГПО, мМ GSH/(л×мин)
25,34±0,75
26,36±1,13
24,92±2,10
МДА, мкМ/л
1,17±0,07*
1,18±0,09*
0,87±0,05
МСМ, у.е.
20,47±0,97*
16,17±0,75
14,69±0,54
ССЭ, %
53,83±1,89
50,42±1,94
50,61±1,69
Примечание: * - Р<0,05-0,001 по сравнению с телятами, не реагирующими на внутривенное введение 0,6% раствора перекиси водорода на 0,9% растворе хлорида натрия.
9
Из таблицы 2 видно, что у клинически здоровых телят, реагирующих на введение 0,6% раствора перекиси водорода на 0,9% растворе хлорида натрия (положительная кашлевая реакция), в сравнении с телятами, не реагирующими на введение 0,6% раствора перекиси водорода на 0,9% растворе хлорида натрия, температура тела выше на 0,3°С, частота дыхания на 6 дыхательных движений в минуту, частота сердечных сокращений на 5 сокращений в минуту, количество лейкоцитов выше на 1,2·10/л (13,5%), концентрация гемоглобина на 4,5 г/л (5,1%), холестерина на 0,31 мМ/л (7,2%), хотя эти отличия статистически не достоверны. В тоже время содержание глюкозы в крови достоверно ниже в 1,43 раза (Р<0,05), а мочевины выше в 1,63 раза (Р<0,05) соответственно.
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
Между активностью антиоксидантных ферментов (каталазы, супероксиддисмутазы (СОД) и глутатионпероксидазы (ГПО)) крови у клинически здоровых телят, реагирующих на 0,6% раствор перекиси водорода на 0,9% растворе хлорида натрия и у нереагирующих телят, не установлено достоверных различий. В то время как концентрация малонового диальдегида (МДА), вторичного продукта перекисного окисления липидов (ПОЛ), у здоровых телят, реагирующих на введение 0,6% раствора перекиси водорода на 0,9% растворе хлорида натрия, в 1,36 раза (Р<0,05) выше по сравнению с телятами, которые на введение 0,6% раствора перекиси водорода на 0,9% растворе хлорида натрия не реагировали. Косвенно это может указывать на повышенное образование активных форм кислорода ( - супероксид аниона,  - гидроксильного радикала и HO - пероксида водорода) у телят, реагирующих на внутривенное введение 0,6% раствора перекиси водорода на 0,9% растворе хлорида натрия. В физиологических концентрациях  не вызывает изменения диаметра трахеи и бронхов, а HO и  вызывают контрактацию и релаксацию соответственно. В патологических концентрациях  вызывает релаксацию трахеи и бронхов, а НО и  вызывают преобладающую контрактацию, что и проявляется в виде кашлевой реакции [9, 10]. У клинически здоровых телят, не реагирующих на введение 0,6% раствора перекиси водорода на 0,9% растворе хлорида натрия, его введение не приводит к превышению физиологической концентрации НО и, следовательно, не вызывает контрактации трахеи и кашлевой реакции. У клинически здоровых телят, реагирующих на введение 0,6% раствора перекиси водорода на 0,9% растворе хлорида натрия, дополнительное введение пероксида водорода в кровяное русло приводит к созданию патологической концентрации НО и, следовательно, вызывает преобладающую контрактацию трахеи и бронхов, что на фоне субклинического повышения чувствительности слизистой оболочки трахеи и бронхов провоцирует кашлевую реакцию.
Показатели, характеризующие состояние системы ПОЛ-АОЗ через 48 часов после внутривенного введения 0,6% раствора перекиси водорода на 0,9% растворе хлорида натрия, представлены в таблице 3.
Таблица 3.
Активность основных антиоксидантных ферментов и концентрация вторичных продуктов ПОЛ в крови у телят через 48 часов после внутривенного введения 0,6% раствора перекиси водорода на 0,9% растворе хлорида натрия.
Показатели
Клинически здоровые телята
Реагирующие на 0,6% перекись водорода
Не реагирующие на 0,6% перекись водорода
Каталаза, мкМ Н<sub>2</sub>О<sub>2</sub>/(л×мин)
42,79±2,19*
37,55±2,74
СОД, у.е.
0,81±0,21
0,63±0,16
ГПО, мМ GSH/(л×мин)
26,07±0,73
28,96±0,37
МДА, мкМ/л
0,98±0,08*
0,88±0,05
Примечание: * - Р<0,05-0,001 по сравнению с исходными значениями.
Из таблицы 3 видно, что через 48 часов после внутривенного введения 0,6% раствора перекиси водорода на 0,9% растворе хлорида натрия у телят, реагирующих на его введение кашлевой реакцией, активность каталазы достоверно повышается на 27,1% (Р<0,05), а концентрация МДА в крови снижается на 20,4% (Р<0,05) по сравнению с исходными значениями, что свидетельствует о повышении активности ферментативного звена антиоксидантной системы и снижении содержания в крови вторичных продуктов ПОЛ.
Показатели сорбционной способности эритроцитов (ССЭ) и содержания среднемолекулярных продуктов протеолиза в крови так называемых молекул средней массы (МСМ), отражающие влияние окислительного стресса на биологические мембраны и степень эндогенной интоксикации, представлены в таблице 4.
Таблица 4.
Показатели сорбционной способности эритроцитов (ССЭ) и содержания среднемолекулярных продуктов протеолиза в крови телят через 48 часов после введения 0,6% раствора перекиси водорода на 0,9% растворе хлорида натрия
Показатели
Клинически здоровые телята
Реагирующие на 0,6% перекись водорода
Не реагирующие на 0,6% перекись водорода
МСМ, у.е.
14,88±0,91
14,86±0,70
ССЭ, %
48,16±1,56
47,58±2,45
Из таблицы 4 видно, что у всех клинически здоровых телят через 48 часов после внутривенного введения 0,6% раствора перекиси водорода на 0,9% растворе хлорида натрия отмечается тенденция к снижению сорбционной способности эритроцитов, а у телят, реагирующих на введение 0,6% раствора перекиси водорода на 0,9% растворе хлорида натрия, и концентрации в крови МСМ, что свидетельствует об уменьшении степени эндогенной интоксикации и улучшении состояния биомембран.
Содержание мочевины и глюкозы в крови через 48 часов после введения 0,6% раствора перекиси водорода на 0,9% растворе хлорида натрия представлено в таблице 5.
Таблица 5.
Уровень глюкозы и мочевины в крови через 48 часов после внутривенного введения 0,6% раствора перекиси водорода на 0,9% растворе хлорида натрия.
Показатели
Клинически здоровые телята
Реагирующие на 0,6% перекись водорода
Не реагирующие на 0,6% перекись водорода
Глюкоза, мМ/л
5,13±1,20*
5,37±0,54
Мочевина, мМ/л
2,35±0,54*
1,63±0,27
Примечание: * - Р<0,05-0,001 по сравнению с исходными значениями
Из таблицы 5 видно, что через 48 часов после введения 0,6% раствора перекиси водорода на 0,9% растворе хлорида натрия у телят, реагирующих на его введение кашлевой реакцией, содержание глюкозы в крови повышается на 55,0% (Р<0,05), а концентрация мочевины в сыворотке крови снижается на 65,8% (Р<0,05). У телят, не реагирующих на введение 0,6% раствора перекиси водорода на 0,9% растворе хлорида натрия, отмечается тенденция к повышению уровня глюкозы и снижению мочевины в крови. Приведенные данные свидетельствуют об улучшении обменных процессов и оксидантно-антиоксидантного статуса у телят через 48 часов после внутривенного введения 0,6% раствора перекиси водорода на 0,9% растворе хлорида натрия в дозе 0,4 мл на кг массы тела.
Пример 2. Обоснование взаимосвязи ранней диагностики трахеобронхита у телят с титрами противовирусных антител.
В хозяйстве, стационарно неблагополучном по ПГ-3 и ИРТ, отобрали 10 телят 1-1,5-месячного возраста, не реагирующих на пальпацию последнего трахеального кольца, но реагирующих на внутривенное 0,6% раствора перекиси водорода на 0,9% растворе хлорида натрия кашлевой реакцией (субклинический трахеобронхит). За животными в течение месяца вели клиническое наблюдение, определяли температуру тела, частоту сердечных сокращений и дыхательных движений, учитывали аппетит, состояние слизистых оболочек, чувствительность гортани, трахеи и межреберных промежутков, характер кашля, хрипов, одышки, носовых истечений, сроки возникновения и длительность заболевания трахеобронхитом, учитывали осложнения в виде бронхопневмонии. У телят в возрасте 1-1,5 и 1,5-2 месяца брали кровь для определения противовирусных антител. Титры противовирусных антител у телят представлены в таблице 6.
Таблица 6.
Титры противовирусных антител у телят при трахеобронхите.
№ п/п
Титры антител к антигену возбудителя
ПГ-3
ИРТ
Субклинический
Клинически выраженный
Субклинический
Клинически выраженный
1
1:20
1:20
1:2
1:32
2
1:40
1:80
1:4
1:4
3
1:80
1:160
1:8
1:16
4
1:80
1:160
отр.
1:8
5
1:160
1:320
отр.
отр.
6
1:160
1:160
1:16
1:16
7
1:80
1:320
1:8
1:16
8
1:160
1:320
отр.
1:8
9
1:40
1:80
1:4
1:8
10
1:160
1:480
1:4
1:16
ср.
1:98
1:210
1:4,6
1:10,8
Из таблицы 6 видно, что средний титр к возбудителю ПГ-3 у телят, не реагирующих на пальпацию последнего трахеального кольца, но реагирующих на внутривенное введение 0,6% раствора перекиси водорода на 0,9% растворе хлорида натрия в дозе 0,4 мл на кг массы тела животного (субклиническое течение трахеобронхита), составляет 1:98, при клиническом течении - 1:210, а к возбудителю ИРТ составляет 1:4,6 и 1:10,8 соответственно.
Однако при детальном анализе установлено, что у телят №2, 3, 4, 5, 7, 8, 9, 10 имеет место прирост титра антител к антигену возбудителя ПГ-3 (в среднем с 1:100 до 1:240). У телят №1 и 6 он остался без изменений. Кроме того, у телят №3, 4, 7, 8, 9, 10 отмечен прирост титра антигемагглютининов к антигену возбудителя ИРТ, а у телят №2 и 5 он остался без изменений.
То есть у всех телят при клиническом проявлении трахеобронхита регистрируется либо прирост титров антител к одному или нескольким возбудителям острых респираторных болезней (ПГ-3 и ИРТ) либо величина их остается без изменений.
Сроки возникновения и длительность течения респираторных болезней у вышеуказанных телят представлены в таблице 7.
Из таблицы 7 видно, что в среднем у телят, не реагирующих на пальпацию, но реагирующих на внутривенное введение 0,6% раствора перекиси водорода на 0,9% хлориде натрия в дозе 0,4 мл на кг массы тела кашлевой реакцией, свидетельствующей о субклиническом трахеобронхите, последний выявлялся на 36,4±1,68 сутки, а клиническое его проявление (слизистая оболочка носа, конъюнктива, носо-губное зеркало гиперемированы, с эрозиями, серозные истечения из носа, повышена чувствительность как первого, так и последнего трахеального колец и гортани, при аускультации прослушиваются сухие и влажные хрипы, отмечается экспираторная одышка) на 44,4±1,66 сутки. То есть время от субклинического трахеобронхита до клинического его проявления в среднем составляет 8,0±0,33 суток. Кроме того, у 6 (60%) из 10 заболевших трахеобронхитом телят регистрировали осложнение в виде бронхопневмонии.
Пример 3. Обоснование эффективности.
В хозяйстве, стационарно неблагополучном по трахеобронхиту вирусной этиологии (ПГ-3 и ИРТ), отобрали 14 телят 1-1,5-месячного возраста, не реагирующих на пальпацию последнего трахеального кольца, но реагирующих на внутривенное введение 0,6% раствора перекиси водорода на 0,9% растворе хлорида натрия в дозе 0,4 мл на кг массы тела кашлевой реакцией. У телят регистрировали время появления кашлевой реакции после внутривенного введения 0,6% раствора перекиси водорода на 0,9% растворе хлорида натрия, а также время появления чувствительности последнего трахеального кольца при пальпации. Результаты представлены в таблице 8.
Из таблицы 8 видно, что у 50% телят кашлевая реакция регистрировалась через 1-2,5 минуты после введения 0,6% раствора перекиси водорода на 0,9% растворе хлорида натрия в дозе 0,4 мл на кг массы тела, у 28,6% через 3-4,5 минуты и у 21,4% животных через 6,5-7 минут. То есть среднее время появления кашлевой реакции после внутривенного введения 0,6% раствора перекиси водорода на 0,9% растворе хлорида натрия составляло 3,5±0,56 минут.
У 7,1% телят чувствительность последнего трахеального кольца (субклинический трахеобронхит, выявленный при пальпации) регистрировалась на 2-е сутки после выявления кашлевой реакции заявляемым способом, у 50% животных на 3-4-е сутки и у 42,9% телят на 5-6-е сутки. То есть использование заявляемого способа в сравнении с известным позволяет раньше на 4,1±0,36 суток диагностировать субклинический трахеобронхит.
Таким образом, воспалительный процесс в слизистой оболочке трахеи и бронхов при активном участии вирусов ПГ-3 и ИРТ повышал чувствительность сначала слизистой оболочки бронхов и последних трахеальных колец, затем первых колец трахеи, что в конечном счете проявилось симптомокомплексом трахеобронхита. На фоне повышенной чувствительности слизистой оболочки трахеи и бронхов внутривенное введение 0,6% раствора перекиси водорода на 0,9% растворе хлорида натрия в дозе 0,4 мл на кг массы тела животного приводило к контрактации трахеи и бронхов и, как следствие, к кашлевой реакции.
Проведенные опыты показывают целесообразность использования способа, учитывающего реакцию телят на внутривенное введение 0,6% раствора перекиси водорода на 0,9% растворе хлорида натрия, что позволяет проводить раннюю диагностику трахеобронхита и своевременно осуществлять лечебно-профилактические мероприятия.
Источники информации
1. Внутренние незаразные болезни сельскохозяйственных животных. / Под ред. И.Г.Шарабрина. Изд. 5-е испр. и допол. М., Колос, 1976. - С.139-140.
2. Профилактика незаразных болезней молодняка. / С.С.Абрамов, И.Г.Арестов и др. - М.: Агропромиздат, 1990. - C.110-115.
3. Эколого-адаптационная стратегия защиты здоровья и продуктивности животных в современных условиях. / Отв. ред. Шахов А.Г. - Воронеж: Воронежский государственный университет, 2004. - С.154.
4. Нахмансон В.М., Бурба Л.Г. Дифференциальная диагностика инфекционных болезней сельскохозяйственных животных. Справочник. - М.: Росагропромиздат, 1990. - 225 с.
5. Вирусные болезни животных. / Сюрин В.Н., Самуйленко А.Я., Соловьев Б.В., Фомина Н.В. - М: ВНИТИБП, 1998. - 928 с.
6. Беляков И.М. Диагностика внутренних незаразных болезней сельскохозяйственных животных. - М.: Колос, 1975. - 45 с.
7. Способ диагностики легочной гипертензии. Патент РФ на изобретение №2103910, Е.Ф.Онищенко, Н.В.Крашенинникова.
8. Способ ранней диагностики трахеобронхита у новорожденных телят. Патент РФ на изобретение №2320254, Золотарев А.И., Шахов А.Г., Рецкий М.И., Близнецова Г.Н.
9. Bannenberg G. Hydrogen peroxide-induced broncho- and vasoconstriction in the isolated perfused and ventilated guinea pig lung. / Bannenberg G., Kimland М., Ryrfeldt A., Moldeus P. // Pharmacol. Toxicol. 1993 Apr-May; 72 (4-5): 314-320.
10. Olafsdottir K. Mechanisms of hydroperoxide-induced broncho- and vasoconstriction in isolated and perfused rat lung. / Olafsdottir K., Atzori L., Ryrfeldt A., Berggren М., Kumlin М., Moldeus P. // Pharmacol. Toxicol. 1991 Mar; 68 (3): 181-186.