РЕКОМБИНАНТНЫЕ БЕЛКИ ЭЛАСТАЗЫ И СПОСОБЫ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ И ПРИМЕНЕНИЯ

1. Белок панкреатической эластазы типа I, содержащий (i) последовательность активации эластазы, содержащую последовательность распознавания эластазы, функционально связанную с (ii) аминокислотной последовательностью зрелой панкреатической эластазы типа I.
2. Белок по п.1,
где второй аминокислотный остаток, являющийся N-концевым по отношению к расщепляемой связи, которая расщепляется с образованием зрелого белка панкреатической эластазы типа I, представляет собой пролин, или
где указанная последовательность распознавания эластазы содержит последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 11, 13, 15, 20 и 93, или
где указанная последовательность активации содержит последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 80, 72 и 73, или
где указанный белок содержит домен расщепления, содержащий последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 42, 48, 49, 53 и 55, где, необязательно, указанная последовательность зрелой эластазы содержит последовательность, которая по меньшей мере на 85% идентична аминокислотной последовательности, начинающейся от положения 6 и до конца SEQ ID NO: 84 или SEQ ID NO: 1, или
где указанный белок содержит последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 64, 65, 67 и 69; и/или
где указанный белок содержит сигнальную последовательность.
3. Молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая белок по любому из п.1 или 2.
4. Вектор, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты по п.3.
5. Клетка-хозяин, полученная способами генной инженерии, и экспрессирующая молекулу нуклеиновой кислоты по п.3, или клетка-хозяин, содержащая вектор по п.4, где, необязательно, по меньшей мере одна копия указанного вектора интегрирована в геном клетки-хозяина.
6. Способ получения белка панкреатической эластазы типа I, включающий культивирование клетки-хозяина по п.5 в условиях, при которых продуцируется белок проэластазы, необязательно, дополнительно включающий активирование белка в условиях активации, что приводит к получению зрелого белка панкреатической эластазы типа I.
7. Способ по п.6, где трипсин не используют ни в одной из стадий процесса получения.
8. Способ по п.6 или 7, где клетку-хозяин культивируют в присутствии цитратного, сукцинатного или ацетатного соединения для предотвращения самоактивации самоактивируемой проэластазы, или где одно цитратное, сукцинатное или ацетатное соединение присутствует в указанной культуре в концентрации 5-50 мМ, 7,5-100 мМ, 10-150 мМ, 50-200 мМ, 100-150 мМ, 75-125 мМ или 90-110 мМ; где указанное цитратное, сукцинатное или ацетатное соединение, необязательно, является цитратом натрия, сукцинатом натрия или ацетатом натрия, соответственно, и/или где указанные условия, указанный в пункте 6 включают период роста или индукции при рН 2-6 и указанный способ дополнительно включает увеличение pH раствора, содержащего белок до pH 6-12.
9. Способ получения зрелого белка панкреатической эластазы типа I, где указанный способ включает:
(а) культивирование клетки-хозяина, полученной способами генной инженерии и экспрессирующей нуклеиновую кислоту, по п.3 в условиях, при которых продуцируется белок проэластазы; и
(b) активацию указанного белка проэластазы в условиях активации так, чтобы продуцировался зрелый белок эластазы.
10. Способ по п.9, где указанный зрелый белок панкреатической эластазы типа I выделяют.
11. Способ получения фармацевтической композиции, содержащей зрелый белок панкреатической эластазы типа I, включающий:
(а) самоактивацию самоактивирующегося белка проэластазы в условиях самоактивации с получением зрелого белка панкреатической эластазы типа I; где указанную самоактивацию проводят с помощью активности эластазы, и
(b) включение зрелого белка панкреатической эластазы типа I в состав композиции,
таким образом, получая фармацевтическую композицию, содержащую указанный зрелый белок панкреатической эластазы типа I.
12. Способ по п.11, дополнительно включающий стадии:
(i) получения лиофилизованной зрелой панкреатической эластазы типа I; и
(ii) восстановления лиофилизованной зрелой панкреатической эластазы типа I в воде или фармацевтически приемлемом носителе, с получением, таким образом, фармацевтической композиции, содержащей зрелую панкреатическую эластазу типа I.
13. Способ по любому из пп.6-12, где активацию указанного белка проэластазы индуцируют добавлением каталитического количества эластазы.
14. Фармацевтическая композиция, полученная способом по любому из пп.11, 12 или 13, и/или где фармацевтическая композиция содержит (i) терапевтически эффективное количество зрелой панкреатической эластазы типа I человека и (ii) фармацевтически приемлемый носитель, где зрелая панкреатическая эластаза типа I человека отличается специфической активностью от 1 до 40 Ед/мг белка, и/или трипсиновая активность в указанной композиции соответствует менее 4 нг на 1 мл зрелого белка эластазы.
15. Фармацевтическая композиция по п.14, где в композиции отсутствуют белки, состоящие из SEQ ID NO: 70 и 71, и/или отсутствует трипсин.
16. Фармацевтическая композиция по любому из п.14 или 15, которая представляет собой раствор для парентерального введения и содержит фосфат, фосфатный буфер или фосфатно-солевой буфер.