Распределение протромботических полиморфных вариантов генов у детей с ишемическим инсультом

№ 6 - 2015 г. 14.00.00 Медицинские науки

УДК 616.831-005.1-053.2:575.174.015.3

РАСПРЕДЕЛЕНИЕ ПРОТРОМБОТИЧЕСКИХ ПОЛИМОРФНЫХ ВАРИАНТОВ ГЕНОВ У ДЕТЕЙ С ИШЕМИЧЕСКИМ ИНСУЛЬТОМ

М. А. Колесникова. Ю. А. Снигиръ. Л. А. Строзенко. Ю. Ф. Лобанов

ГБОУ ВПО «Алтайский государственный медицинский университет» Минздрава России

Цель исследования: установить распределение протромботических полиморфных вариантов генов у детей с ишемическим инсультом. Материалы и методы. Материалом для изучения распределения полиморфных вариантов протромботических генов послужили образцы ДНК 25-ти детей с диагнозом ишемический инсульт в возрасте 2-17 лет. В основе анализа лежал метод полимеразной цепной реакции в режиме реального времени (Real-Time PCR) с использованием конкурирующих TaqMan зондов. Результаты. Выявлено, что гетерозиготный полиморфный вариант (-675) 4G/5G гена PAI-1 и гетерозиготный полиморфизм 677 СТ гена MTHFR с большей частотой определялись у пациентов с острым нарушением мозгового кровообращения. Сочетание трех и более полиморфных вариантов протромботических генов чаще выявлялись в группе больных детей. Определен высокий уровень концентрации гомоцистеина в сыворотке крови у пациентов с ишемическим инсультом. Выводы. Исследование протромботических полиморфизмов у детей и своевременная фенотипическая корректировка их функциональной реализации позволит существенно уменьшить число пациентов, у которых реализуются тромботические сосудистые события.

Ключевые слова: ишемический инсульт, полиморфные варианты генов, сочетания полиморфизмов, компаунды, гены системы гемостаза, гены фолатного цикла, дети.

Колесникова Марина Анатольевна — аспирант кафедры пропедевтики детских болезней ГБОУ ВПО «Алтайский государственный медицинский университет», рабочий телефон: 8 (3852) 54-23-53, e-mail: marinamed66@mail.ru

Снигирь Ольга Анатольевна — аспирант кафедры пропедевтики детских болезней ГБОУ ВПО «Алтайский государственный медицинский университет», рабочий телефон: 8 (3852) 55-98-90, e-mail: olgs6@rambler.ru

Строзенко Людмила Анатольевна — доктор медицинских наук, профессор кафедры пропедевтики детских болезней ГБОУ ВПО «Алтайский государственный медицинский

университет», рабочий телефон: 8 (3852) 47-75-65, e-mail: strozen@mail.ru

Лобанов Юрий Федорович — доктор медицинских наук, профессор, заведующий кафедрой пропедевтики детских болезней ГБОУ ВПО «Алтайский государственный медицинский университет», рабочий телефон: 8 (3852) 61-91-89, e-mail: ped2@agmu.ru

Введение. Ишемический инсульт (ИИ) или острое нарушение мозгового кровообращения (ОНМК) по ишемическому типу у детей может быть обусловлен различными причинами [1]. В настоящее время определены причины врожденных тромбофилий, при которых имеется высокая склонность к формированию и рецидивированию тромбозов различной локализации, в том числе и головного мозга. С развитием молекулярной генетики стало возможным картировать гены тех или иных белков, участвующих в процессе свертывания крови. Установлена, в частности, роль мутаций фактора V Лейден, протромбина, метилентетрагидрофолатредуктазы (MTHFR), ингибитора активатора плазминогена-1типа (РА1-1) в склонности к раннему формированию и рецидивированию тромбозов. Тем не менее, достоверные сведения о носительстве тромбогенных полиморфизмов у детей как в популяции Алтайского края, так и в России, практически отсутствуют [2, 3]. Анализ факторов риска у детского населения со свершившимся фактом нарушения мозгового кровообращения, отличается от такового у взрослых. Не освящен вопрос и о сочетании гематогенных тромбофилий с аномалиями сосудов головного мозга. Значительные материальные затраты на лечение, высокая степень инвалидизации, снижение уровня качества жизни определяют актуальной тему выявления факторов риска и профилактики нарушений мозгового кровообращения у детей. Изучение факторов риска позволит определить прогноз, принять меры первичной профилактики, что поможет предотвратить заболевание и улучшить качество жизни пациента.

Цель исследования: установить распределение протромботических полиморфных вариантов генов у детей с ИИ.

Материалы и методы исследования. В исследование было включено 25 пациентов с диагнозом ИИ по ишемическому типу в возрасте от 2 до 17 лет (средний возраст — 12 лет), из них мальчиков — 11 (44,0 %), девочек — 14 (56,0 %), находившихся на стационарном лечении. Комплексное обследование проводилось всем детям, включающее клиническое, инструментальное и лабораторные методы исследования. Критериями включения пациентов в исследуемую группу являлось наличие доказанного эпизода ИИ в анамнезе. Контрольную группу составили 115 условно здоровых детей, сопоставимые по полу и возрасту исследуемому контингенту больных.

Определение аллельных вариантов генов осуществлялось в лаборатории молекулярной генетики Алтайского краевого диагностического центра (г. Барнаул). В основе анализа лежал метод полимеразной цепной реакции в режиме реального времени (Real-Time PCR) с использованием конкурирующих TagMan зондов. Проведено генетическое исследование 8-ми протромботических полиморфных маркёров генов-кандидатов: фактора II протромбина (G20210A); фактора V Лейден (Arg506Gln); фактора VII свертывания крови ( Arg353Gln); фактора XIII свертывания крови (Val134Leu); фибриногена G(-455)A; тромбоцитарного рецептора к коллагену — ITGA2-a2 интегрин (C807T, rs1126643) GpIa; тромбоцитарного рецептора фибриногена — ITGB3-b интегрин (Т1565С) GPIIIa; ингибитора активатора плазминогена PAI-1 4G(-675)5G и четырех полиморфных

вариантов генов, ассоциированных с нарушениями фолатного цикла: метилентетрагидрофолатредуктазы — (MTHFRAla223Val, С677Т, rs1801133 и MTHFR Е 429А, А1298С, rs1801131), В12-зависимой метионин-синтазы — (MTR Asp919Gly, A2756G, rs1805087) и метионин-синтазы редуктазы — (MTRR Ile22Met, A66G, rs1801394). Кроме того, проведено исследование уровня гомоцистеина в крови у пациентов с диагнозом ИИ методом твердофазного энзим-связанного иммуносорбентного анализа с использованием тест-системы (Axis Homocystein EIA, UK). За нормальные значения концентрации гомоцистеина принимали уровень менее 5 мкмоль/л для больных в возрасте до 10 лет и 7 мкмоль/л для детей пубертатного возраста [4].

Статистическая обработка результатов исследования проводилась с помощью пакета программ «STATISTICA for Windows 5.0» (STATSoft). Для проверки гипотезы о нормальном распределении использовали критерий Шапиро-Уилка. Попарное сравнение частот аллелей и генотипических групп в разных популяциях проводили с помощью двустороннего точного критерия Фишера (ТКФ) и критерия Пирсона. Соответствие распределения генотипических частот равновесию Харди-Вайнберга проверяли посредством критерия х2, используя при этом онлайн калькулятор (http://www.oege.org/software/hardy-weiberg.shtml). Обнаружено отклонение от канонического распределения. Состояние генного разнообразия оценивали вычислением индекса D — относительного отклонения наблюдаемой (Ho) гетерозиготности от ожидаемой (He). Для отдельных показателей (относительный риск, отношение шансов) рассчитывали 95 % доверительный интервал (95 % ДИ). Различия сравниваемых величин считали статистически значимыми при p< 0,05.

Результаты исследования и их обсуждение. В результате проведенного исследования были установлены наиболее часто встречающиеся факторы риска развития ИИ, среди них отягощенность семейного анамнеза — у 32,0 %, отягощенный перинатальный анамнез — 68,0 %, аномалии строения сосудов мозга — 56,0 % обследованных детей.

В ходе исследования у больных детей были рассчитаны частоты аллелей, изученных полиморфных вариантов генов системы гемостаза и фолатного цикла (табл. 1). Результаты генотипирования показали, что частота минорного аллеля Т 677 гена MTHFR( р = 0,047) у детей с ОНМК встречалась статистически значимо больше по сравнению с группой контроля. По остальным частотам аллелей в исследованных протромботических полиморфных вариантах генов статистически значимых различий не наблюдалось.

Таблица 1

Распределение частот аллелей генов системы гемостаза и фолатного цикла

у подростков с ИИ и у здоровых детей

Локус Аллели ИИ n Всего (%) Здоровые n Всего (%) P

FII G20210A G A 49 (98,0) 1 (2,0) n = 25 226 (98,3) 4 (1,7) n = 115 1,000 1,000

FV G1691A G A 50 (100) 0 n = 25 221 (96,1) 9 (3,9) n = 115 0,892 0,214

FVII G10976A G A 48 (96,0) 2 (4,0) n=25 65 (90,3) 7 (9,7) n= 36 0,866 0,286

FXIII G226A G A 41 (82,0) 9 (18,0) n = 25 79 (76,0) 25 (24,0) n = 52 0,852 0,340

FGB G(-455)A G A 41 (82,0) 9 (18,0) n = 25 60 (78,9) 16 (21,1) n = 38 1,000 0,793

ITGA2 С(807)Т С Т 29 (58,0) 21 (42,0) n = 25 101 (60,8) 65 (39,2) n = 83 0,785 0,589

GPIIIa T1565C Т С 43 (86,0) 7 (14) n = 25 92 (86,8) 14 (13,2) n = 53 1,000 1,000

PAI-1 4G (-675)5G 5G 4G 21 (42,0) 29 (58,0) n = 25 94 (40,9) 136 (59,1) n = 115 1,000 1,000

MTHFR С677Т С Т 32 (64,0) 18 (36,0) n = 25 171 (74,4) 59 (25,6) n = 115 0,421 0,047

MTHFR А1298С А С 41 (82,0) 9 (18,0) n = 25 73 (70,2) 31 (29,8) n = 52 0,441 0,087

MTR A2756G А G 43 (86,0) 7 (14,0) n = 25 73 (81,1) 17 (18,9) n = 45 0,858 0,444

MTRR A66G A G 19 (38,0) 31 (62,0) n = 25 44 (44,0) 56 (56,0) n = 50 0,316 0,356

Примечание. Статистика: р — точный критерий Фишера (ТКФ); в скобках — %

Распределение частот аллелей и генотипов в изученных генах системы гемостаза и фолатного цикла у пациентов с ОНМК проверено на соответствие равновесию Харди-Вайнберга (табл. 2). Обнаружено отклонение от канонического распределения для частот генотипа 4G(-675)5G гена PAI-1 (х2 = 7,838; p= 0,005) и для частот генотипа A2756G гена MTR (/2 = 6,291; р = 0,012).

Таблица 2

Распределение генотипов и аллелей генов факторов свертывания крови и фолатного цикла в популяции подростков, перенесших ОНМК

Локус Генотип N.O. % N.E. % X2 d.f. = 1 Частота аллеля Ho ± s.e. He ± s.e. D

FII G20210A (n = 25) GG 96,0 96,0

GA 4,0 4,0 0,010 p=0,919 G= 0,980 A= 0,2 Ho = 0,040 ± 0,002 He = 0,040 ± 0,002 0

AA 0 0

FV G1691A (n = 25) GG 100 100

GA 0 0 p=0,919 G= 1,00 A= 0 Ho = 0 He = 0 0

AA 0 0

С10976А (п = 25) GG 92,0 92,2 0,043 р=0,835 G= 0,960 А= 0,400 Но = 0,080 ± 0,003 Не = 0,077 ± 0,003 +0,039

GA 8,0 7,7

АА 0 0,1

ЕКШ в226А (п = 25) GG 68,0 67,2 0,066 р=0,797 G= 0,820 А= 0,180 Но = 0,280 ± 0,008 Не = 0,295 ± 0,008 —0,051

GA 28,0 29,5

АА 4,0 3,3

FGB G(-455)A (п = 25) GG 72,0 67,2 2,600 р=0,107 G= 0,820 А= 0,180 Но = 0,200 ± 0,006 Не = 0,295 ± 0,008 —0,322

GA 20,0 29,5

АА 8,0 3,3

\TGN2 С(807)Т (п = 25) СС 36,0 33,6 0,235 р=0,628 С = 0,580 Т = 0,420 Но = 0,440 ± 0,01 Не = 0,487 ± 0,01 —0,096

СТ 44,0 48,7

ТТ 20,0 17,7

GРIIIa Т1565С (п = 25) ТТ 72,0 74,0 0,663 р=0,416 Т = 0,860 С = 0,140 Но = 0,280 ± 0,008 Не = 0,240 ± 0,007 +0,167

ТС 28,0 24,0

СС 0 2,0

РА1-1 4G (-675^ (п = 25) 5G/5G 4,0 17,6 7,838 р=0,005 5G= 0,420 4G= 0,580 Но = 0,760 ± 0,007 Не = 0,487 ± 0,01 +0,561

4G/5G 76,0 48,7

4G/4G 20,0 33,7

MTHFR С677Т (п = 25) СС 36,0 41,0 1,159 р=0,282 С= 0,640 Т= 0,360 Но = 0,560 ± 0,01 Не = 0,460 ± 0,01 +0,217

СТ 56,0 46,0

ТТ 8,0 13,0

MTHFR А1298С (п = 25) АА 64,0 67,2 1,205 р=0,272 А= 0,820 С= 0,180 Но = 0,360 ± 0,009 Не = 0,295 ± 0,008 +0,220

АС 36,0 29,5

СС 0 3,3

MTR A2756G (п = 25) АА 80,0 74,0 6,291 р=0,012 А= 0,860 G= 0,140 Но = 0,120 ± 0,004 Не = 0,240 ± 0,007 —0,500

AG 12,0 24,0

GG 8,0 2,0

MTRR A66G (п = 25) АА 20,0 14,4 1,392 р=0,238 А= 0,380 G= 0,620 Но = 0,360 ± 0,009 Не = 0,421 ± 0,01 —0,145

AG 36,0 42,1

GG 44,0 38,5

Примечание. N.0. — наблюдаемые частоты генотипов; №Е. — ожидаемые частоты генотипов; критерий х2 — оценка соответствия равновесию Харди-Вайнберга; число степеней свободы; Но ± S.E. и Не ± S.E. — соответственно наблюдаемая и ожидаемая гетерозиготность с ошибкой; D — относительное отклонение наблюдаемой гетерозиготности от ожидаемой

Установлено, что у пациентов с ОНМК фактическое распределение генотипа (-675) 4G/5G гена РА1-1 было существенно увеличено (76,0 %) по сравнению с теоретическим (48,7 %), тогда как наблюдаемое распределение генотипа (-675) 4G/4G гена РА1-1 было уменьшено (20,0 % против 33,7 % — ожидаемого распределения). Напротив, фактическое

распределение Htzg (AG) гена MTR статистически значимо снижено по сравнению с теоретическим, а наблюдаемая частота Hmzg (GG) гена MTR достоверно выше, чем ожидаемая.

Выявлен высокий уровень ожидаемой гетерозиготности по полиморфным вариантам для двух генов системы гемостаза: С807Т гена ITGA2-a2 (0,487); 4G(-675)5G гена PAI-1 (0,487); и двух генов фолатного цикла: С677Т гена MTHFR (0,460) и A66G гена MTRR(0,421).

В результате исследования нами было выявлено распределение генотипов генов системы гемостаза и генов фолатного цикла у пациентов с ОНМК и здоровых детей (табл. 3).

Анализ показал, что в группе пациентов с ОНМК гетерозиготный полиморфный вариант гена FVЛейден не встречался, тогда как в группе контроля зафиксирован у 7,8 % детей. Вместе с тем, гетерозиготный полиморфизм 20210 GA гена FII определялся с одинаковой частотой в обеих группах детей (р = 1,000). Гомозиготных полиморфизмов (минорных аллелей) 20210 АА гена FII, 1691 АА гена FV у детей с ИИ и детей контрольной группы обнаружено не было.

Интересно, что гетерозиготный полиморфный вариант (-675) 4G/5G гена PAI-1 с большей частотой определялся у пациентов с ОНМК (76,0 % против 47,0 % здоровых детей; р = 0,014). Расчет относительного риска (ОР) показал, что в группе больных детей частота гетерозиготного полиморфизма (-675) 4G/5G гена PAI-1 была в 1,3 раза значимо выше, чем у детей группы сравнения (р < 0,005). Оценка отношения шансов (ОШ) показала, что при наличии гетерозиготного полиморфного варианта (-675) 4G/5G гена PAI-1 вероятность развития ИИ в 7,04 раза выше, чем у здоровых детей (р < 0,005).

В результате исследования генов фолатного цикла выявлено, что гетерозиготный полиморфизм 677 СТ гена MTHFRдостоверночаще встречался у больных детей (р = 0,044) по сравнению с контрольной группой. По остальным частотам распределения генотипов генов системы гемостаза и фолатного цикла у больных и здоровых детей статистически значимых различий не наблюдалось (p > 0,05). Расчет ОР показал, что в группе детей с ОНМК частота гетерозиготного полиморфизма 677 СТ гена MTHFR была в 1,64 раза значимо выше, чем в группе здоровых детей (р < 0,005). В результате расчета ОШ выявлено, что при наличии гетерозиготного полиморфного варианта 677 СТ гена MTHFR вероятность развития сосудистых событий повышается в 2,54 раза, чем в контрольной группе (р < 0,005).

Таблица 3

Распределение частот генотипов генов факторов свертывания крови и генов фолатного метаболизма у подростков с ИИ и у здоровых детей

Ген Генотип ИИ n Всего (%) Здоровые n Всего (%) P

FII G20210A 20210 GG 20210 GA 20210 AA 24 (96,0) 1 (4,0) 0 n = 25 111 (96,5) 4 (3,5) 0 n = 115 1,000 1,000

FV G1691A 1691 GG 1691 GA 1691 AA 25 (100) 0 0 n = 25 106 (92,2) 9 (7,8) 0 n = 115 0,214 0,214

¥Щ1 С10976А 10976 GG 10976 GA 10976 AA 23 (92,0) 2 (8,0) 0 п = 25 29 (80,6) 7 (19,4) 0 п = 36 0,286 0,286

ЕХ111 G226A 226 GG 226 GA 226 AA 17 (68,0) 7 (28,0) 1 (4,0) п = 25 30 (57,7) 19 (36,5) 3 (5,8) п = 52 0,459 0,608 1,000

FGB G(-455)A (-455) GG (-455) GA (-455) AA 18 (72,0) 5 (20,0) 2 (8,0) п = 25 23 (60,5) 14 (36,8) 1 (2,6) п = 38 0,424 0,175 0,557

1Тв.А2 С(807)Т 807 СС 807 СТ 807 ТТ 9 (36,0) 11 (44,0) 5 (20,0) п = 25 33 (39,7) 35 (42,2) 15 (18,1) п = 83 0,817 1,000 1,000

GР111A Т1565С 1565 7Г 1565 ^ 1565 СС 18 (72,0) 7 (28,0) 0 п = 25 40 (75,5) 12 (22,6) 1 (1,9) п = 53 0,785 0,778 1,000

РА1-1 4G (-675^ (-675) 5G5G (-675) 4G5G (-675) 4G4G 1 (4,0) 19 (76,0) 5 (20,0) п = 25 20 (17,4) 54 (47,0) 41 (35,6) п = 115 0,123 0,014 0,162

MTHFR С677Т 677СС 677 СТ 677 П 9 (36,0) 14 (56,0) 2 (8,0) п = 25 66 (57,4) 39 (33,9) 10 (8,7) п = 115 0,076 0,044 1,000

MTHFR А1298С 1298 AA 1298 AC 1298 СС 16 (64,0) 9 (36,0) 0 п = 25 24 (46,1) 25 (48,1) 3 (5,8) п = 52 0,154 0,340 0,547

MTR A2756G 2756 AA 2756 AG 2756 GG 20 (80,0) 3 (12,0) 2 (8,0) п = 25 30 (66,7) 13 (28,9) 2 (4,4) п = 45 0,280 0,142 0,613

MTRR A66G 66 AA 66 AG 66 GG 5 (20,0) 9 (36,0) 11 (44,0) п = 25 15 (30,0) 14 (28,0) 21 (42,0) п = 50 0,417 0,596 1,000

Примечание. Статистика: р — точный критерий Фишера (ТКФ); в скобках — %

Известно, что риск возникновения сосудистых событий увеличивается при одновременном носительстве двух и более полиморфизмов в генах-кандидатах [5-7]. Поскольку генетические компаунды усиливают выраженность фенотипических проявлений, мы оценили их частоты распределения у детей с ИИ и здоровых детей и получили следующие данные (табл. 4).

Таблица 4

Распределение сочетаний протромботических полиморфных вариантов генов

у детей с ИИ и здоровых детей

Количество генетических полиморфизмов ИИ п = 25 (%) Здоровые п = 115 (%) Р

1 полиморфизм 1 (4,0) 30 (26,1) 0,015

2 полиморфизма 0 39 (33,9) 0,001

3 полиморфизма 3 (12,0) 17 (14,8) 0,771

4 полиморфизма 9 (36,0) 11 (9,6) 0,002

5 полиморфизмов 8 (32,0) 6 (5,2) 0,0005

6 полиморфизмов 2 (8,0) 5 (4,3) 0,608

7 полиморфизмов 1 (4,0) 2 (1,7) 1,000

8 полиморфизмов — — —

9 полиморфизмов 1 (4,0) 0 0,178

Отсутствие замен 0 5 (4,3) 0,585

Всего сочетаний 25 (100,0) 110 (95,6) 0,585

Примечание. Статистика: р — точный критерий Фишера (ТКФ); в скобках — %

Представленные результаты исследования свидетельствуют о наличии особенностей в носительстве количества протромботических полиморфных вариантов генов у пациентов с ОНМК. Так, носительство одного, двух генетических полиморфизмов чаще встречалось у здоровых детей (26,1 %, р = 0,015 и 33,9 %, р = 0,001), для больных детей было характерно носительство 4-х (36,2 %, р = 0,002) и 5-ти генетических полиморфизмов (32,0 %, р = 0,0005). В целом максимальное количество генетических полиморфизмов, ассоциированных с наследственной предрасположенностью к тромбофилии, составило у детей с ИИ — 100 %, а у детей из группы контроля — 95,6 %. Следовательно, сочетание трех и более исследуемых нами полиморфных замен наблюдалось в 2,7 раз чаще в группе больных ИИ по сравнению с контрольной группой (96,0 и 35,6 % соответственно, р < 0,005). Отсутствие носительства полиморфизмов зафиксировано только у 4,3 % здоровых детей.

По данным большинства авторов, именно сочетание различных протромботических полиморфных вариантов генов усиливает прокоагулянтную составляющую тромбофилического статуса [8-10]. В нашем исследовании сочетания компаундов С677Т гена МТНЕЯ и 4G (-675ДО гена РА1-1 чаще выявлялись у пациентов с ОНМК (64,0 и 57,0 % соответственно, р > 0,05), но не имели достоверных различий. Однако сочетание трех компаундов С677Т гена МТНГЯ, А66G гена МТЯЯи гена ингибитора активатора плазминогена 4G(-675)5G достоверно чаще выявлялись в группе больных с ИИ по сравнению с контрольной группой (52,0 и 15,6 % соответственно, р < 0,001). Вместе с тем, у детей с ИИ, в отличие от контрольной группы, уровня статистической значимости достигали сочетания следующих полиморфизмов: С677Т гена МТНГЯ, А66G гена МТЯЯ, гена РА1-1 4G(-675)5G, гена тромбоцитарного рецептора к коллагену — С807Т гена GpIa и тромбоцитарного рецептора фибриногена — Т1565С гена GРШa (32,0 и 6,9 % соответственно, р = 0,002), которые имеют наибольшую патогенетическую значимость для развития сосудистых событий.

Методом разностного анализа проведен расчет уровня гомоцистеина в крови у больных и здоровых детей. Сравнительный анализ позволил выявить высокую концентрацию гомоцистеина в сыворотке крови в группе больных детей, превышающую возрастную норму (8,9 ± 2,6 мкмоль/л), которая была значимо выше, чем у здоровых детей (3,5 ± 2,2 мкмоль/л), р < 0,001.

Известно, что основными причинами развития гипергомоцистеинемии являются полиморфные замены в генах фолатного метаболизма, в частности, полиморфизм С677Т

гена MTHFR является генетической детерминантой гипергомоцистеинемии, поскольку приводит к уменьшению активности протеина и накоплению гомоцистеина [19, 20]. Результаты нашего исследования показали, что уровень гомоцистеина в крови у больных с ИИ при носительстве сочетаний одного или двух гетерозиготных либо гомозиготных (минорных аллей) полиморфных вариантов генов фолатного цикла был повышен в 2,5 раза по сравнению с группой здоровых детей (р < 0,001).

Выводы. Таким образом, проведенное нами исследование показало, что частота минорного аллеля Т 677 гена MTHFR статистически значимо выше определялась в группе больных детей. Установлено отклонение от канонического равновесия Харди-Вайнбергадля частот генотипа 4G(-675)5G гена PAI-1 и для частот генотипа A2756G гена MTR у детей с ИИ в анамнезе. Выявлено, что гетерозиготный полиморфный вариант (-675) 4G/5G гена PAI-1 и гетерозиготный полиморфизм 677 СТ гена MTHFR большей частотой определялись у пациентов с ОНМК. Сочетание трех и более полиморфных вариантов протромботических генов чаще выявлялись в группе больных детей. Определен высокий уровень концентрации гомоцистеина в сыворотке крови у пациентов с ИИ.

Исследование протромботических полиморфных вариантов генов у детей и своевременная фенотипическая корректировка их функциональной реализации позволит существенно уменьшить число пациентов, у которых реализуются тромботические сосудистые события.

Список литературы

1. Numis A. L. Arterial ischemic stroke in children: risk factors and etiologies / A. L. Numis, C. K. Fox // Neurol. Neurosci Rep. - 2014. - N 14 (1). - Р. 422.

2. Первичная тромбопрофилактика у детей на основе выявления и модификации постоянных и временных факторов тромбогенного риска : методические рекомендации для врачей-педиатров, клинических ординаторов и интернов / А. П. Момот [и др.] ; под научн. ред. д-ра мед. наук, профессора А. П. Момота. — Барнаул : Изд-во АГМУ, 2013. — 83 с.

3. Баркаган З. С. Учение о тромбофилиях на современном этапе / З. С. Баркаган // Консилиум. — 2000. — № 6. — С. 61-65.

4. Шевченко О. П. Гипергомоцистеинемия и ее клиническое значение / О. П. Шевченко, Г. А. Олефриенко // Лаборатория. — 2002. — № 1. — С. 3-7.

5. Жарков П. А. Влияние носительства протромботических полиморфизмов на риск

развития тромбозов у детей : автореф. дис.....канд. мед. наук / П. А. Жарков. — М.,

2013. — 24 с.

6. Проблема наследственной тромбофилии в практике детского нефролога / О. Л. Чугунова [и др.] // Педиатрия. — 2012. — № 91 (6). — С. 34-40.

7. Спиридонова М. Г. О роли полиморфных вариантов гена 5,10-метилентетрагидрофолатредуктазы (MTHFR) в патогенезе сердечно-сосудистых заболеваний / М. Г. Спиридонова, В. А. Степанов, В. П. Пузырев // Клин. медицина. — 2001. — № 2. — С. 10-16.

8. Наследственные прокоагулянтные и протромботические нарушения как ведущий этиологический фактор ишемических инсультов у детей раннего возраста / О. А. Львова [и др.] // Журн. неврологии и психиатрии. Инсульт. — 2013. — № 9. — С. 13-20.

9. Анализ полиморфизмов генов гемостаза и фибринолиза у детей с ишемическим инсультом / О. Е. Громыко [и др.] // Рос. педиатр. журн. — 2014. — № 6. — С. 4-10.

10. Строзенко Л. А. Полиморфные варианты сочетаний генов системы гемостаза

и фолатного цикла в популяции подростков Алтайского края / Л. А. Строзенко, В. В. Гордеев, Ю. Ф. Лобанов // Рос. педиатр. журн. — 2015. — № 4. — С. 26-31.

PROTHROMBOTIC DISTRIBUTION POLYMORPHIC OPTIONS OF GENES AT CHILDREN WITH ISCHEMIC STROKE

M. A. Kolesnikova. Y. A. Snigir, L. A. Strozenko, Y. F. Lobanov

SBEIHPE «Altai state medical university» of the Russian Ministry of Health

Research objective: to establish distribution the prothrombotic polymorphic options of genes at children with an ischemic stroke. Materials and methods. Samples of DNA at 25 children with the diagnosis of ischemic stroke at the age of 2-17 years were the material for studying of distribution of polymorphic the options of prothrombotic genes. The method of polymerase chain reaction in real time (Real-Time of PCR) with usage of the competing TaqMan probes was the cornerstone of the analysis. Results. It was revealed that the heterozygotic polymorphic option (-675) 4G/5G of a gene of PAI-1 and a heterozygotic polymorphism of 677 ST of a gene of MTHFR with a larger frequency were defined at patients on acute disturbance of a cerebral circulation. A combination of three and more polymorphic options the prothrombotic of genes were more often revealed in group of sick children. High level of concentration of a homocysteine in blood serum at patients with an ischemic stroke is registered. Conclusions. Research of the prothrombotic of polymorphisms at children and well-timed phenotypic correction of their functional realization will allow to reduce significantly number of patients who have had thrombotic vascular events.

Keywords: ischemic stroke, polymorphic options of genes, combinations of polymorphisms, compounds, genes of hemostasis system, genes of folate cycle, children.

About authors:

Kolesnikova Marina Anatolyevna — post-graduate student of children's propaedeutics chair at SBEI HPE «Altai state medical university», office phone: 8 (3852) 54-23-53, e-mail: marinamed66@mail.ru

Snigir Olga Anatolyevna — post-graduate student of children's propaedeutics chair at SBEI HPE «Altai state medical university», office phone: 8 (3852) 55-98-90, e-mail: olgs6@rambler.ru

Strozenko Lyudmila Anatolievna — doctor of medical science, professor of children's propaedeutics chair at SBEI HPE «Altai state medical university», office phone: 8 (3852) 47-75-65, e-mail: strozen@mail.ru

Lobanov Yury Fedorovich — doctor of medical science, professor, head of children's propaedeutics chair at SBEI HPE «Altai state medical university», office phone: 8 (3852) 61-91-89, e-mail: ped2@agmu.ru

List of the Literature:

1. Numis A. L. Arterial ischemic stroke in children : risk factors and etiologies / A. L. Numis, C. K. Fox // Neurol. Neurosci Rep. — 2014. — N 14 (1). — P. 422.

2. Primary thromboprophylaxis at children on the basis of identification and modification of constant and temporary factors of thrombogenic risk : methodical references for pediatricians, clinical interns and interns / A. P. Momot [et al.] ; under scient. edition of the doctor of medical science, professor A. P. Momota. — Barnaul : Publishing house of ASMU, 2013. — 83 p.

3. Barkagan Z. S. The doctrine on thrombophilias at the present stage / Z. S. Barkagan // Consultation. — 2000. — N 6. — P. 61-65.

4. Shevchenko O. P. Hyperhomocysteinemia and her clinical value / O. P. Shevchenko, G. A. Olefriyenko // Laboratory. — 2002. — N 1. — P. 3-7.

5. Zharkov P. A. Influence of a carriage prothrombotic polymorphisms on risk of development of clottages in children : theses.....cand. of medical science / P. A. Zharkov. — M., 2013.

— 24 p.

6. A problem of a heriditary thrombophilia in practice of the children's nephrologist / O. L. Chugunova [et al.] // Pediatrics. — 2012. — N 91 (6). — P. 34-40.

7. Spiridonova M. G. About a role of polymorphic options of a gene of 5,10-methylenetetrahydrofolate reductase (MTHFR) in pathogenesis of cardiovascular diseases / M. G. Spiridonova, V. A. Stepanov, V. P. Puzyrev // Clin. medicine. — 2001.

— N 2. — P. 10-16.

8. Heriditary procoagulant and prothrombotic disturbances as the leading etiological factor of ischemic strokes at children of early age / O. A. Lvova [et al.] // Journal of neurology and psychiatry. Stroke. — 2013. — N 9. — P. 13-20.

9. The analysis of polymorphisms of genes of a hemostasis and fibrinolysis at children with an ischemic stroke / O. E. Gromyko [et al.] // Rus. pediatrician. journal. — 2014. — N 6.

— P. 4-10.

10. Strozenko L. A. Polymorphic options of combinations of genes of hemostasis system and a folate cycle in population of teenagers of Altai Krai / L. A. Strozenko, V. V. Gordeev, Y. F. Lobanov // Rus. pediatrician. journal. — 2015. — N 4. — P. 26-31.