МОДИФИЦИРОВАННЫЙ ЭРИТРОПОЭТИН ЧЕЛОВЕКА

1. Модифицированный эритропоэтин человека с эритропоэтической активностью менее 0,5% относительно нативного эритропоэтина, у которого сохраняется его нейропротективная и нейропластическая способность, при этом содержащий по меньшей мере одну мутацию в сайте связывания с гомодимерным или гетер од имерным рецептором посредством добавления консенсусных сайтов гликозилирования, причем такая мутация выбрана из совокупности, включающей:
a. Lys45Asn и Asn47Thr;
b. Tyr15Asn и Leu17Thr;
c. Ser104Asn;
d. Ala98Asn и Ser100Thr;
e. Thr106Asn и Leu108Thr;
f. Leu149Thr;
g. Gly151Asn и Leu153Thr;
h. Arg76Asn и Gln78Thr;
1. Glu72Asn и Val74Thr;
j. Glu62Asn и Trp64Thr;
k. Gln65Asn и Leu67Thr.
2. Модифицированный эритропоэтин человека по п. 1, отличающийся тем, что такие сайты связывания с рецептором выбраны из совокупности аминокислот, содержащей положения: 45-47, 15-17, 104, 98-100, 106-108, 149, 151-153, 76-78, 72-74, 62-64, 65-67 и их комбинаций.
3. Модифицированный эритропоэтин человека по п. 1, характеризующийся тем, что он проявляет эритропоэтическую активность до 0,2% относительно эритропоэтина человека.
4. Модифицированный эритропоэтин человека по п. 1, характеризующийся тем, что он не проявляет эритропоэтической активности.
5. Модифицированный эритропоэтин человека по п. 1, характеризующийся тем, что он кодируется последовательностью ДНК, содержащей последовательность нуклеотидов, выбранную из совокупности, включающей: SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 21 и SEQ ID NO: 23.
6. Модифицированный эритропоэтин человека по п. 1, характеризующийся тем, что он содержит последовательность аминокислот, выбранную из совокупности, включающей: SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 22 и SEQ ID NO: 24.
7. Нуклеиновая кислота, содержащая по меньшей мере последовательность нуклеотидов, выбранную из совокупности, включающей: SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 21 и SEQ ID NO: 23.
8. Трансформирующий вектор, характеризующийся тем, что он содержит последовательность нуклеотидов, выбранную из совокупности, включающей: SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 21 и SEQ ID NO: 23.
9. Вектор экспрессии, характеризующийся тем, что он содержит последовательность нуклеотидов, выбранную из совокупности, включающей: SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 21 и SEQ ID NO: 23.
10. Лентивирусный вектор, характеризующийся тем, что он содержит последовательность нуклеотидов, выбранную из совокупности, включающей: SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 21 и SEQ ID NO: 23.
11. Генетически модифицированная клетка, содержащая молекулу нуклеиновой кислоты, выбранную из совокупности, включающей: SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 21 и SEQ ID NO: 23.
12. Генетически модифицированная клетка по п. 11, характеризующаяся тем, что она включает линию клеток животного или растения или любую клетку-хозяина, которая обеспечивает добавление N-гликанов.
13. Генетически модифицированная клетка по п. 11, характеризующаяся тем, что она включает линию клеток животного.
14. Генетически модифицированная клетка по п. 11, характеризующаяся тем, что она выбрана из совокупности, включающей СНО.К1, НЕК293, NSO, ВНК-21 и HeLa.
15. Фармацевтическая композиция, характеризующаяся тем, что она содержит терапевтически эффективное количество модифицированного эритропоэтина человека по п. 1 для лечения патологий, выбранных из совокупности, включающей болезнь Альцгеймера, болезнь Паркинсона, боковой амиотрофический склероз (БАС), заболевания двигательных нейронов, болезнь Гентингтона, спиноцеребеллярные атрофии, болезнь Крейцфельда-Якоба, инвалидизирующие заболевания, такие как депрессия или шизофрения, пороки развития, такие как синдром Дауна, повреждение нервной ткани в результате острого нарушения мозгового кровообращения и черепно-мозговой травмы.
16. Применение фармацевтической композиции, по п. 15 для лечения патологий, выбранных из совокупности, включающей болезнь Альцгеймера, болезнь Паркинсона, боковой амиотрофический склероз (БАС), заболевания двигательных нейронов, болезнь Гентингтона, спиноцеребеллярные атрофии, болезнь Крейцфельда-Якоба, инвалидизирующие заболевания, такие как депрессия или шизофрения, пороки развития, такие как синдром Дауна, повреждение нервной ткани в результате острого нарушения мозгового кровообращения и черепно-мозговой травмы.
17. Применение модифицированного эритропоэтина человека по п. 1 для лечения патологий, выбранных из совокупности, включающей болезнь Альцгеймера, болезнь Паркинсона, боковой амиотрофический склероз (БАС), заболевания двигательных нейронов, болезнь Гентингтона, спиноцеребеллярные атрофии, болезнь Крейтцфельда-Якоба, инвалидизирующие заболевания, такие как депрессия или шизофрения, пороки развития, такие как синдром Дауна, повреждение нервной ткани в результате острого нарушения мозгового кровообращения и черепно-мозговой травмы.
18. Способ получения модифицированного эритропоэтина человека по п. 1, характеризующийся тем, что он включает следующие этапы:
a. Обеспечение последовательностей нуклеиновых кислот, которые кодируют модифицированный эритропоэтин человека;
b. Конструирование по меньшей мере одного котрансфекционного вектора для пакующих клеток;
c. Котрансфекцию указанных пакующих клеток, которые продуцируют указанные лентивирусные частицы, содержащие указанную последовательность нуклеиновой кислоты, которая кодирует модифицированный эритропоэтин человека;
d. Сбор указанных лентивирусных частиц, продуцированных пакующими клетками из этапа с;
e. Трансдукцию клеток, способных экспрессировать и осуществлять укладку модифицированного эритропоэтина человека, указанными лентивирусными частицами из этапа d;
f. Селекцию клеток из этапа е, которые содержат последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую указанный модифицированный эритропоэтин человека;
g. Культивирование клеток из этапа f таким образом, чтобы они экспрессировали указанный модифицированный эритропоэтин человека; и
h. Выделение и очистку указанного модифицированного эритропоэтина человека.
19. Способ по п. 18, отличающийся тем, что на указанном этапе а последовательности нуклеиновых кислот выбраны из совокупности, включающей SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 21 и SEQ ID NO: 23.
20. Способ по n. 18, отличающийся тем, что указанный этап b включает вектор, который обеспечивает проникновение лентивирусной частицы в клетку, вектор, кодирующий матриксный белок, капсид, протеазу, обратную транскриптазу и интегразу; вектор для переноса генов, содержащий последовательность модифицированного эритропоэтина человека; и вектор, который вызывает ядерный экспорт указанного вектора для переноса генов.
21. Способ по п. 18, отличающийся тем, что на указанном этапе е указанные клетки выбраны из совокупности, включающей СНО.К1, НЕК293, NSO, ВНК-21 и HeLa.
22. Способ по п. 18, отличающийся тем, что указанный этап h представляет собой очистку с помощью иммуноаффинного способа, который включает антитело против rhEPO и элюент.
23. Способ по п. 22, отличающийся тем, что указанный элюент выбран из группы, включающей глицин, уксусную кислоту-NaCl, ацетатные соли, лимонную кислоту, фосфатные соли, этанол, изопропиловый спирт, диоксан, этиленгликоль, трис-HCl и их смеси.
24. Способ по п. 22, отличающийся тем, что указанный элюент выбран из группы, включающей глицин, уксусную кислоту-NaCl.
25. Способ по п. 22, отличающийся тем, что указанный элюент выбран из группы, включающей 0,1 М глицин (рН=2); 0,15 М глицин (рН=2,5) и 0,2 М уксусную кислоту, 0,15 М NaCl (рН=3).