КОНСТРУИРОВАНИЕ T-КЛЕТОЧНЫХ РЕЦЕПТОРОВ

1. Модифицированный T-клеточный рецептор или его антигенсвязывающий фрагмент, содержащий Vα и Vβ, полученные из T-клеточного рецептора дикого типа, при этом Vα, Vβ или обе содержат мутацию в одной или нескольких определяющих комплементарность областях (CDR) по сравнению с T-клеточным рецептором дикого типа, при этом модифицированный T-клеточный рецептор связывается с некогнатным пептидом-MHC, не связываемым T-клеточным рецептором дикого типа.
2. Модифицированный T-клеточный рецептор по п.1, в котором T-клеточный рецептор дикого типа содержит аминокислотную последовательность Vα, указанную в SEQ ID NO: 1, и аминокислотную последовательность Vβ, указанную в SEQ ID NO: 2.
3. Модифицированный T-клеточный рецептор по п.2, содержащий модифицированную Vα, содержащую аминокислотную последовательность, имеющую, по меньшей мере, 80% идентичность с аминокислотной последовательностью Vα, указанной в SEQ ID NO: 1, и модифицированную Vβ, содержащую аминокислотную последовательность, имеющую, по меньшей мере, 80% идентичность с аминокислотной последовательностью Vβ, указанной в SEQ ID NO: 2, при этом модифицированный T-клеточный рецептор не связывается с когнатным пептидом-MHC, связываемым T-клеточным рецептором дикого типа.
4. Модифицированный T-клеточный рецептор по п.2, в котором модифицированный T-клеточный рецептор содержит аминокислотную замену в одном или нескольких положениях CDR1α 31, CDR3α 98, CDR3β 99, CDR3α 97, CDR3β 102, CDR3α 99, CDR3β 100, CDR3β 101, CDR1α 32, CDR1β 30, CDR3β 98.
5. Модифицированный T-клеточный рецептор по п.2, в котором модифицированный T-клеточный рецептор содержит аминокислоту дикого типа в положении CDR2α 51.
6. Модифицированный T-клеточный рецептор по п.5, в котором модифицированный T-клеточный рецептор дополнительно содержит аминокислоту дикого типа в положении CDR1α 31.
7. Модифицированный T-клеточный рецептор по п.6, в котором модифицированный T-клеточный рецептор дополнительно содержит аминокислоту дикого типа в положении CD1α 28 и CD1α 52.
8. Модифицированный T-клеточный рецептор по п.1, в котором T-клеточный рецептор дикого типа представляет собой одноцепочечный T-клеточный рецептор A6-X15, содержащий аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID NO: 3.
9. Модифицированный T-клеточный рецептор по п.1, в котором некогнатный пептид-MHC содержит Mart1:HLA.A2, SL9 HIV:HLA.A2, WT-1:HLA.A2 или SURV:HLA.A2.
10. Модифицированный T-клеточный рецептор по п.9, содержащий 1) модифицированную Vα-область, содержащую аминокислотную последовательность, имеющую, по меньшей мере, 90% идентичность с Vα-областью с аминокислотной последовательностью, указанной в одной из последовательностей SEQ ID NO: 33, 41 или 42, и 2) модифицированную Vβ-область, содержащую аминокислотную последовательность, имеющую, по меньшей мере, 90% идентичность с Vβ-областью с аминокислотной последовательностью, указанной в одной из последовательностей SEQ ID NO: 33, 41 или 42.
11. Модифицированный T-клеточный рецептор по п.10, содержащий аминокислотную последовательность, указанную в одной из последовательностей SEQ ID NO: 33, 41 или 42.
12. Модифицированный T-клеточный рецептор по п.1, в котором модифицированный T-клеточный рецептор создан с использованием селекции in vitro библиотеки мутантных T-клеточных рецепторов в дрожжевом дисплее.
13. Модифицированный T-клеточный рецептор по п.1, в котором T-клеточный рецептор дикого типа является рецептором человека.
14. Модифицированный T-клеточный рецептор по п.1, в котором модифицированный T-клеточный рецептор представляет собой одноцепочечный T-клеточный рецептор.
15. Модифицированный T-клеточный рецептор по п.1, в котором T-клеточный рецептор дикого типа связывает HLA-A2.
16. Полипептид, кодирующий модифицированный T-клеточный рецептор по п.1.
17. Полинуклеотид, кодирующий полипептид по п.16.
18. Модифицированный T-клеточный рецептор или его антигенсвязывающий фрагмент, содержащий Vα и Vβ, полученные из T-клеточного рецептора дикого типа, при этом Vα содержит аминокислотные остатки 140 - 256 последовательности SEQ ID NO: 34, и при этом Vβ содержит аминокислотные остатки 1-122 последовательности SEQ ID NO: 34.
19. Модифицированный T-клеточный рецептор или его антигенсвязывающий фрагмент, содержащий Vα и Vβ, полученные из T-клеточного рецептора дикого типа, при этом Vα содержит аминокислотные остатки 140 - 255 последовательности SEQ ID NO: 43, и при этом Vβ содержит аминокислотные остатки 1-122 последовательности SEQ ID NO: 43.
20. Способ конструирования T-клеточного рецептора или его антигенсвязывающего фрагмента с требуемой специфичностью, включающий
a) выделение полинуклеотида, который кодирует T-клеточный рецептор дикого типа или его антигенсвязывающий фрагмент;
b) создание библиотеки мутантных T-клеточных рецепторов или их антигенсвязывающих фрагментов, при этом мутантные T-клеточные рецепторы или их антигенсвязывающие фрагменты содержат мутацию в одной или нескольких определяющих комплементарность областях по сравнению с T-клеточным рецептором дикого типа;
c) экспрессию мутантных T-клеточных рецепторов на поверхности системы дисплея; и
d) селекцию мутантных T-клеточных рецепторов, которые связываются с некогнатным пептидом-MHC.
21. Способ по п.20, в котором T-клеточный рецептор дикого типа содержит аминокислотную последовательность Vα, указанную в SEQ ID NO: 1, и аминокислотную последовательность Vβ, указанную в SEQ ID NO: 2.
22. Способ по п.20, в котором T-клеточный рецептор дикого типа представляет собой одноцепочечный T-клеточный рецептор A6-X15, содержащий аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID NO: 3.
23. Способ по п.20, в котором системой поверхностного дисплея является система дрожжевого дисплея.
24. Способ по п.20, в котором некогнатный пептид-MHC представляет собой Mart1:HLA.A2, SL9 HIV:HLA.A2, WT-1:HLA.A2 или SURV:HLA.A2.
25. Способ по п.20, дополнительно включающий стадию созревания аффинности.