МЫШИ, КОТОРЫЕ ПРОДУЦИРУЮТ АНТИГЕНСВЯЗЫВАЮЩИЕ БЕЛКИ С ЗАВИСИМЫМИ ОТ ВЕЛИЧИНЫ PH ХАРАКТЕРИСТИКАМИ СВЯЗЫВАНИЯ

1. Отличное от человека животное, содержащее в своей зародышевой линии генетически модифицированный локус тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащего нереаранжированную нуклеотидную последовательность вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина человека, где нереаранжированная нуклеотидная последовательность вариабельной области тяжелой цепи включает в себя, по меньшей мере, один гистидиновый кодон, который не кодируются соответствующим генным сегментом вариабельной области тяжелой цепи зародышевой линии человека.
2. Отличное от человека животное по п. 1, где отличное от человека животное представляет собой млекопитающее.
3. Отличное от человека животное по п. 2, где млекопитающее представляет собой грызуна, выбранного из группы, состоящей из мыши, крысы и хомячка.
H
H
4. Отличное от человека животное по п. 1, где добавленный или замещенный гистидиновый кодон находится в человеческом генном сегменте тяжелой цепи иммуноглобулина, выбранном из генного сегмента V человека, генного сегмента D человека, генного сегмента J человека и их комбинации.
H
H
5. Отличное от человека животное по п. 4, где генный сегмент тяжелой цепи иммуноглобулина человека выбран из генного сегмента V зародышевого типа человека, генного сегмента D зародышевого типа человека, генного сегмента J зародышевого типа человека и их комбинации.
6. Отличное от человека животное по п. 5, где добавленный или замещенный гистидиновый кодон находится, по меньшей мере, в одной рамке считывания генного сегмента тяжелой цепи иммуноглобулина человека, которая кодирует вариабельный домен тяжелой цепи, выбранный из N-концевой области, области петли 4, определяющей комплементарность области 1 (CDR1), определяющей комплементарность области 2 (CDR2), определяющей комплементарность области 3 (CDR3) и их комбинации.
7. Отличное от человека животное по п. 1, где эндогенный негистидиновый кодон, который заменяют на гистидиновый кодон, кодирует аминокислоту, выбранную из группы, состоящей из Y, N, D, Q, S, W и R.
8. Отличное от человека животное по п. 1, где добавленный или замещенный гистидиновый кодон находится, по меньшей мере, в одной рамке считывания генного сегмента D человека.
9. Отличное от человека животное по п. 8, где рамка считывания представляет собой гидрофильную рамку считывания генного сегмента D человека, и гидрофильная рамка считывания содержит нуклеотидную последовательность, которая кодирует аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 48, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 56, SEQ ID NO: 58, SEQ ID NO: 60, SEQ ID NO: 62, SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 68, SEQ ID NO: 70, SEQ ID NO: 72, SEQ ID NO: 74, SEQ ID NO: 76, SEQ ID NO: 78, SEQ ID NO: 80, SEQ ID NO: 82, SEQ ID NO: 84, SEQ ID NO: 86 и их комбинации.
10. Отличное от человека животное по п. 1, где нереаранжированная нуклеотидная последовательность вариабельной области тяжелой цепи функционально связана с человеческой или не принадлежащей человеку нуклеотидной последовательностью константной области тяжелой цепи.
H
H
H
11. Отличное от человека животное по п. 10, где нереаранжированная нуклеотидная последовательность вариабельной области тяжелой цепи функционально связана с эндогенной не принадлежащей человеку нуклеотидной последовательностью константной области тяжелой цепи, выбранной из группы, состоящей из C1, шарнира, C2, C3 и их комбинации.
12. Отличное от человека животное по п. 10, где человеческая нуклеотидная последовательность константной области тяжелой цепи содержит модификацию, которая увеличивает аффинность аминокислотной последовательности константной области тяжелой цепи к неонатальному Fc-рецептору (FcRn) при величине pH в диапазоне от приблизительно 5,5 до приблизительно 6,0, где модификация представляет собой мутацию, выбранную из группы, состоящей из M428L, N434S, M428L, V259I, V308F, N434A, M252Y, S254T, Т256Е, T250Q, M248L, H433K, N434Y и их комбинации.
13. Отличное от человека животное по п. 1, где отличное от человека животное является гомозиготным в отношении генетически модифицированного локуса тяжелой цепи иммуноглобулина в зародышевой линии.
14. Отличное от человека животное по п. 1, где отличное от человека животное дополнительно содержит нереаранжированный генный сегмент V легкой цепи иммуноглобулина человека и нереаранжированный генный сегмент J легкой цепи иммуноглобулина человека.
15. Отличное от человека животное по п. 1, где отличное от человека животное
содержит обогащенную В-клеточную популяцию, которая способна продуцировать антигенсвязывающий белок, содержащий вариабельный домен тяжелой цепи, содержащим, по меньшей мере, один остаток гистидина.
16. Отличное от человека животное по п. 15, где В-клеточная популяция была активирована антигеном, и антигенсвязывающий белок подвергся созреванию аффинности посредством соматической сверхмутации (SHM).
17. Отличное от человека животное по п. 15, где антигенсвязывающий белок, продуцируемый В-клеточной популяцией, проявляет пониженную аффинность связывания антигена при величине pH в диапазоне от приблизительно 5,5 до приблизительно 6,0 по сравнению с нейтральным значением pH в диапазоне от приблизительно 7,0 до приблизительно 7,4.
18. Отличное от человека животное по п. 1, где отличное от человека животное является гетерозиготным в отношении генетически модифицированного локуса тяжелой цепи иммуноглобулина в зародышевой линии, и отличное от человека животное содержит В-клеточную популяцию, которая способна продуцировать антигенсвязывающий белок, содержащий вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий, по меньшей мере, один остаток гистидина.
19. Отличное от человека животное по п. 1, где отличное от человека животное содержит ген Adam6a, ген Adam6b или и тот, и другой.
20. Генетически модифицированный локус тяжелой цепи иммуноглобулина в зародышевой линии отличного от человека животного, содержащий нереаранжированную человеческую нуклеотидную последовательность вариабельной области тяжелой цепи, где нереаранжированная человеческая нуклеотидная последовательность вариабельной области тяжелой цепи включает в себя, по меньшей мере, один гистидиновый кодон, который не кодируются соответствующим генным сегментом вариабельной области тяжелой цепи зародышевой линии человека.
H
H
21. Генетически модифицированный локус тяжелой цепи иммуноглобулина по п. 20, где добавленный или замещенный гистидиновый кодон находится в генном сегменте тяжелой цепи иммуноглобулина, выбранном из генного сегмента V человека, генного сегмента D человека, генного сегмента J человека и их комбинации.
H
22. Генетически модифицированный локус тяжелой цепи иммуноглобулина по п. 21, где генный сегмент тяжелой цепи иммуноглобулина человека выбран из генного сегмента V зародышевого типа человека, генного сегмента D зародышевого типа
H
человека, генного сегмента J зародышевого типа человека и их комбинации.
23. Генетически модифицированный локус тяжелой цепи иммуноглобулина по п. 20, где добавленный или замещенный гистидиновый кодон находится, по меньшей мере, в одной рамке считывания, кодирующей вариабельный домен тяжелой цепи, выбранный из N-концевой области, области петли 4, определяющей комплементарность области 1 (CDR1), определяющей комплементарность области 2 (CDR2), определяющей комплементарность области 3 (CDR3) и их комбинации.
24. Генетически модифицированный локус тяжелой цепи иммуноглобулина по п. 20, где эндогенный негистидиновый кодон, который заменяют на гистидиновый кодон, кодирует аминокислоту, выбранную из группы, состоящей из Y, N, D, Q, S, W и R.
25. Генетически модифицированный локус тяжелой цепи иммуноглобулина по п. 20, где добавленный или замещенный гистидиновый кодон находится, по меньшей мере, в одной рамке считывания генного сегмента D человека.
26. Генетически модифицированный локус тяжелой цепи иммуноглобулина по п. 25, где рамка считывания представляет собой гидрофильную рамку считывания генного сегмента D человека, и гидрофильная рамка считывания содержит нуклеотидную последовательность, которая кодирует аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 48, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 56, SEQ ID NO: 58, SEQ ID NO: 60, SEQ ID NO: 62, SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 68, SEQ ID NO: 70, SEQ ID NO: 72, SEQ ID NO: 74, SEQ ID NO: 76, SEQ ID NO: 78, SEQ ID NO: 80, SEQ ID NO: 82, SEQ ID NO: 84, SEQ ID NO: 86 и их комбинации.
H
H
H
27. Генетически модифицированный локус тяжелой цепи иммуноглобулина по п. 20, где нереаранжированная нуклеотидная последовательность вариабельной области тяжелой цепи функционально связана с человеческой или не принадлежащей человеку нуклеотидной последовательностью константной области тяжелой цепи, выбранной из группы, состоящей из C1, шарнира, C2, C3 и их комбинации.
H
H
H
28. Генетически модифицированный локус тяжелой цепи иммуноглобулина по п. 27, где нереаранжированная нуклеотидная последовательность вариабельной области тяжелой цепи функционально связана с эндогенной не принадлежащей человеку нуклеотидной последовательностью константной области тяжелой цепи, выбранной из группы, состоящей из C1, шарнира, C2, C3 и их комбинации.
29. Генетически модифицированный локус иммуноглобулина по п. 27, где
человеческая нуклеотидная последовательность константной области тяжелой цепи содержит модификацию, которая увеличивает аффинность аминокислотной последовательности константной области тяжелой цепи к неонатальному Fc-рецептору (FcRn) при величине pH в диапазоне от приблизительно 5,5 до приблизительно 6,0, где модификация представляет собой мутацию, выбранную из группы, состоящей из M428L, N434S, M428L, V259I, V308F, N434A, M252Y, S254T, Т256Е T250Q, M248L, H433K, N434Y и их комбинации.
30. Способ получения отличного от человека животного, которое содержит генетически модифицированный локус тяжелой цепи иммуноглобулина в своем зародышевом геноме, причем способ включает:
(a) модификацию генома отличного от человека животного для того, чтобы удалить или привести в нефункциональное состояние эндогенные генные сегменты V, D и J тяжелой цепи иммуноглобулина в локусе тяжелой цепи иммуноглобулина; и
(b) встраивание в геном нереаранжированной человеческой нуклеотидной последовательности вариабельной области тяжелой цепи, включающей в себя добавление, по меньшей мере, одного гистидинового кодона или замену, по меньшей мере, одного эндогенного негистидинового кодона на гистидиновый кодон.
H
H
31. Способ по п. 30, где добавленный или замещенный гистидиновый кодон находится в генном сегменте тяжелой цепи иммуноглобулина, выбранном из генного сегмента V человека, генного сегмента D человека, генного сегмента J человека и их комбинации.
H
H
32. Способ по п. 31, где генный сегмент тяжелой цепи иммуноглобулина человека выбран из генного сегмента V зародышевого типа человека, генного сегмента D зародышевого типа человека, генного сегмента J зародышевого типа человека и их комбинации.
33. Способ по п. 30, где добавленный или замещенный гистидиновый кодон находится, по меньшей мере, в одной рамке считывания, кодирующей вариабельный домен тяжелой цепи, выбранный из N-концевой области, области петли 4, определяющей комплементарность области 1 (CDR1), определяющей комплементарность области 2 (CDR2), определяющей комплементарность области 3 (CDR3) и их комбинации.
34. Способ по п. 30, где эндогенный негистидиновый кодон, который заменяют на гистидиновый кодон, кодирует аминокислоту, выбранную из группы, состоящей из Y, N, D, Q, S, W и R.
35. Способ по п. 30, где добавленный или замещенный гистидиновый кодон находится, по меньшей мере, в одной рамке считывания генного сегмента D человека.
36. Способ по п. 35, где рамка считывания представляет собой гидрофильную рамку считывания генного сегмента D человека, и гидрофильная рамка считывания содержит нуклеотидную последовательность, которая кодирует аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 48, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 56, SEQ ID NO: 58, SEQ ID NO: 60, SEQ ID NO: 62, SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 68, SEQ ID NO: 70, SEQ ID NO: 72, SEQ ID NO: 74, SEQ ID NO: 76, SEQ ID NO: 78, SEQ ID NO: 80, SEQ ID NO: 82, SEQ ID NO: 84, SEQ ID NO: 86 и их комбинации.
H
H
H
37. Способ по п. 30, где нереаранжированная нуклеотидная последовательность вариабельной области тяжелой цепи функционально связана с человеческой или не принадлежащей человеку нуклеотидной последовательностью константной области тяжелой цепи, выбранной из группы, состоящей из C1, шарнира, C2, C3 и их комбинации.
H
H
H
38. Способ по п. 37, где нереаранжированная нуклеотидная последовательность вариабельной области тяжелой цепи функционально связана с эндогенной не принадлежащей человеку нуклеотидной последовательностью константной области тяжелой цепи, выбранной из группы, состоящей из C1, шарнира, C2, C3 и их комбинации.
39. Способ по п. 38, где человеческая нуклеотидная последовательность константной области тяжелой цепи содержит модификацию, которая увеличивает аффинность аминокислотной последовательности константной области тяжелой цепи к неонатальному Fc-рецептору (FcRn) при величине pH в диапазоне от приблизительно 5,5 до приблизительно 6,0, где модификация представляет собой мутацию, выбранную из группы, состоящей из M428L, N434S, M428L, V259I, V308F, N434A, M252Y, S254T, Т256Е T250Q, M248L, H433K, N434Y и их комбинации.
40. Способ по п. 30, где отличное от человека животное является гомозиготным в отношении генетически модифицированного локуса тяжелой цепи иммуноглобулина в зародышевом геноме.
41. Способ по п. 30, где отличное от человека животное, содержащее
генетически модифицированный локус тяжелой цепи иммуноглобулина, содержит В-клеточную популяцию, которая способна продуцировать антигенсвязывающий белок, содержащий вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий, по меньшей мере, один остаток гистидина.
42. Способ по п. 41, где В-клеточная популяция была активирована антигеном, и антигенсвязывающий белок подвергся созреванию аффинности посредством соматической сверхмутации (SHM).
43. Способ по п. 41, где антигенсвязывающий белок, продуцируемый В-клеточной популяцией, проявляет пониженную аффинность связывания антигена при величине pH в диапазоне от приблизительно 5,5 до приблизительно 6,0 по сравнению с нейтральным значением pH в диапазоне от приблизительно 7,0 до приблизительно 7,4.
44. Способ по п. 29, где отличное от человека животное содержит ген Adam6a, ген Adam6b или и тот, и другой.
45. Способ по п. 29, где способ приводит к получению генетически модифицированного животного, которое содержит популяцию В-клеток, обогащенную в отношении антител, проявляющих зависимое от величины pH связывание представляющего интерес антигена.