Изыскание метода получения бруцеллезного эритроцитарного антигена для РНГА

Иппология и ветеринария. 2014. № 1 (11). С. 50-52. 5. Щипакин, М.В., Прусаков, А.В., Вирунен, С.В., Былинская, Д.С., Куга, С.А. Особенности хода и ветвления артерий головы таксы обыкновенной / М.В. Щипакин, А.В. Прусаков, С.В. Вирунен, Д.С. Былинская, С.А. Куга // Иппология и ветеринария. 2014. № 1 (11). С. 109-114.

МОРФОЛОГИЯ ОСНОВНЫХ ИСТОЧНИКОВ АРТЕРИАЛЬНОГО КРОВОСНАБЖЕНИЯ ОРГАНОВ РОТОВОЙ ПОЛОСТИ БЫКА ДОМАШНЕГО

Щипакин М.В., Прусаков А.В., Вирунен С.В. Резюме

Для изучения морфологии основных источников артериального кровоснабжения органов ротовой полости быка домашнего использовали методику вазорентгенографии. Инъекцию сосудистого русла проводили через общую сонную артерию. Для уточнения топографии кровеносных сосудов использовали методику тонкого анатомического препарирования. В результате проведенного исследования установили, что большинство органов ротовой полости быка домашнего получают артериальную кровь от ветвей верхнечелюстной артерии. Установлено что нижняя губа получает артериальную кровь от подбородочной артерии и артерии нижней губы. Язык, верхняя и нижняя губа получает кровь от лицевой артерии, которая является продолжением наружной сонной артерии. Последняя берет свое начало от наружной сонной артерии.

MORPHOLOGY OF THE MAIN SOURCES OF ARTERIAL BLOOD SUPPLY MOUTH OF BULL

HOME

Shchipakin M.V., Prusakov A.V., Virunen S.V.

Summary

To study the morphology of the main sources of arterial blood supply of the mouth of the bull home vazorentgenografii technique was used. The injection was carried through the vascular bed common carotid artery. To clarify the topography of the blood vessels using the technique of thin anatomical dissection. The study established that most of the oral cavity bull home arterial blood obtained from the branches of the maxillary artery. It is established that the lower lip receives arterial blood from the submental artery and arteries of the lower lip. Language upper and lower lip receives blood from the facial artery which is a continuation of the external carotid artery. Last originates from the external carotid artery.

УДК 619:616:98:579.841.935-07

ИЗЫСКАНИЕ МЕТОДА ПОЛУЧЕНИЯ БРУЦЕЛЛЕЗНОГО ЭРИТРОЦИТАРНОГО

АНТИГЕНА ДЛЯ РНГА

Яникова Э.А. - соискатель; Хаиров С.Г. - д.в.н.; Юсупов О.Ю. - д.в.н., профессор;

Алиев А.Ю. - к.в.н.

Прикаспийский зональный научно-исследовательский ветеринарный институт, г. Махачкала

e-mail: alievayb1@mail.ru

Ключевые слова: Республика Дагестан, бруцеллезный антиген, вакцинный штамм B. abortus 19, крупный и мелкий рогатый скот и свиньи.

Key words: Republic of Dagestan, brucellosis antigene, strain B. abortus 19, large and shallow cattle and pigs.

Разработке и усовершенствованию методов диагностики бруцеллеза ветеринарными и медицинскими

специалистами уделяется огромное внимание на протяжении всей истории изучении этой болезни.

Важное значение при этом имеет своевременное и полное выявление больных животных, которое зависит от достоверности и чувствительности методов диагностики. Одно из важных мест в мероприятиях по профилактике и оздоровлению хозяйств от этой болезни занимает лабораторная диагностика.

Многими исследователями большое внимание уделяется изучению реакции непрямой гемагглютинации (РНГА) при различных бактериальных и вирусных болезнях и отмечается ее специфичность и высокая чувствительность. При бруцеллезе РНГА изучали многие авторы, которые установили специфичность и более высокую чувствительность, по сравнению с РА, РСК, РДСК, роз бенгал пробой (РБП) и РИД с О-ПС антигеном [1-8].

Цель исследований.

Усовершенствовать технологию получения стандартного, стабильного,

высокоактивного и специфичного бруцеллезного антигена для РНГА.

Материал и методы исследования. Для изготовления по ранее разработанной нами методике и нового способа приготовления антигена используют 3-х суточную культуру B. abortus 19, выращенную в матровых колбах, смывают 12%-ным раствором хлорида натрия, доводят концентрацию бруцелл

соответственно до 100 и 50-60 млрд микробных клеток в 1 см3 и подвергают взвесь бруцеллавтоклавированию при температуре 1200С в течение 20 минут. Вбактериальную массу добавляют вторичный алкилсульфат натрия (детергент) с таким расчетом, чтобы концентрация его составила 2 %.

Старая методика позволила получить активный и специфичный антиген для РНГА, путем сенсибилизации 5% эритроцитов при 16-18 часов при температуре 37°С. Однако, недостатком указанного метода является более сложная технология изготовления антигена, который заключается в центрифугировании бакмассыбруцелл при 14-15 тыс. об/мин и получения небольшого количества антигена (150-200 мл).

В связи с этим поставили перед собой задачу изыскать способ получения специфичного, высокоактивного антигена,

отвечающего требованиям практики в отношении технологии изготовления и пригодного для массовых исследований на бруцеллез крупного рогатого скота, овец, коз и других животных.

В процессе работы нам удалось внести ряд усовершенствований в методике получения эритроцитарного бруцеллезного антигена для РНГА, отличающегося экономичностью, доступностью для массового производства антигена и позволяющего с меньшими затратами труда и времени диагностировать бруцеллез крупного и мелкого рогатого скота.

Таким образом, сенсибилизация эритроцитов барана усовершенствованным методом, из расчета 0,75-1,0 см3 антигена на 1 см3 10%-ной взвеси эритроцитов, позволяет получить стандартный, стабильный, высокоактивный и

специфичный бруцеллезный

эритроцитарный антиген для РНГА. При этом в 17 раз уменьшается время проведения сенсибилизации эритроцитов, отпадает необходимость осаждения бакмассы путем центрифугирования, в 2 раза повышается рентабельность изготовления препарата, значительно упрощается способ приготовления антигена и экономия его повышается в 2,6 раза.

Для приготовления антигена 3-х суточную агаровую культуру B. abortus 19, выращенную в матровых колбах, смывают стерильным 12%-ным раствором хлорида натрия, полученную суспензию доводят до концентрации 50-60 млрд микробных клеток в 1 см3 и автоклавируют при температуре 1200С в течение 20-30 минут.

Исследования проведены на 395 животных искусственно зараженных вирулентными культурами бруцелл, 7155 голов крупного рогатого скота и 7779 овец и коз в неблагополучных по бруцеллезу хозяйствах с различным течением инфекции с целью изучения активности эритроцитарного антигена. Для проверки специфичности исследовали 7069 крупного рогатого скота и 5524 овец, коз в благополучных по бруцеллезу хозяйствах.

Результаты исследований.

Суммарные данные о результатах испытания РНГА для диагностики бруцеллеза крупного рогатого скота и овец, коз приведены в таблице.

Таблица - Результаты изучения диагностической ценности РНГА в сравнении с РА и РСК

Вид Исследовано РА РСК РНГА

животных голов полож. сомнит. полож. сомнит. полож. сомнит.

В благополучных по бруцеллезу хозяйствах

Крупный 7069 - - - - - -

рогатый

скот

Овцы и 5524 - - - - - -

козы

В неблагополучных по бруцеллезу хозяйствах

Крупный 7155 392 263 487 34 1147 95

рогатый

скот

Овцы и 7779 328 73 476 14 718 69

козы

Экспериментально зараженные животные

Крупный 330 83 73 132 12 250 35

рогатый

скот

Овцы и 65 63 1 59 - 65 -

козы

Исследованиями, проведенными на большом количестве животных в хозяйствах с различным эпизоотическим состоянием по бруцеллезу, установлена специфичность и высокая чувствительность РНГА с усовершенствованным нами диагностикумом.

Результаты испытания РНГА на здоровых, искусственно зараженных и естественно больных животных, а также на значительном количестве крупного рогатого скота и овец, коз с бактериологически подтвержденным

бруцеллезом показали целесообразность широкого практического использования ее в системе профилактических и оздоровительных противобруцеллезных мероприятиях.

Исследования, проведенные в Прикаспийском ЗНИВИ, ВГНКИ, ВНИИБТЖ и других научно-исследовательских учреждениях РФ в течение более 30 лет, в соответствии с утвержденной Гостематикой, показали целесообразность широкого практического применения указанного антигена для исследования в РНГА крупного рогатого скота и овец на бруцеллез.

В соответствии с Постановлением Ветфармбиосовета и приказа Департамента ветеринарии Минсельхоза России, антиген

для РНГА в течение 5 лет (1999-2003 гг.) подвергался широкому производственному испытанию в 17 областях, краях и республиках Российской Федерации.

На большом фактическом материале установлено, что РНГА с разработанным новым эритроцитарным антигеном по диагностической эффективности

значительно превосходит применяемые в ветеринарной практике другие методы диагностики бруцеллеза (РА, РСК, РДСК, РБП, РИД с О-ПС антигеном и др.), вместе взятые, выявляет больных бруцеллезом животных в более ранние сроки после заболевания и может заменить все эти реакции.

По заключению республиканских, краевых и областных ветеринарных лабораторий РНГА пригодна для массовых исследования животных на бруцеллез. Она проста в постановке, позволяет сократить время, необходимое для исследования сывороток крови на бруцеллез, уменьшает материальные затраты на проведение исследований, т.к. на ее постановку не используются такие дорогостоящие компоненты, как комплемент,

гемолитическая сыворотка, эритроциты барана, единый бруцеллезный антиген для РА и РСК.

На основании результатов экспертизы

и решения Научно-методической Комиссии по иммунологическим лекарственным средствам для животных ФГУ «ВГНКИ» антиген для РНГА в 2006 г. зарегистрирован Россельхознадзором с утверждением нормативных документов (Свидетельство о Госрегистрации, Инструкция по применению, ТУ и др.). На способ его изготовления выдан патент на изобретение (№ 2415434), 2011 г.

С 2007 г. антиген для РНГА широко применяется в Российской Федерации в ветеринарной лабораторной практике. Производство и серийный выпуск его налажен в ООО «Ветмедсервис», созданном на базе Прикаспийского зонального НИВИ. В настоящее время антиген выпускается в виде «Набора для серологической диагностики бруцеллеза крупного и мелкого рогатого скота в реакции непрямой гемагглютинации (РНГА)».

Заключение. Усовершенствована

стабильного, высокоактивного и

высокоспецифичного эритроцитарного антигена для реакции непрямой и пассивной гемагглютинации (РНГА, РПГА) для диагностики бруцеллеза крупного и мелкого рогатого скота, отличающаяся экономичностью, доступностью для массового производства антигена и позволяющая с меньшими затратами труда и времени получить больше продукции.

На значительном фактическом материале установлено, что РНГА с разработанным новым эритроцитарным антигеном по диагностической

эффективности значительно превосходит применяемые в ветеринарной практике другие методы диагностики бруцеллеза (РА, РСК, РДСК, РБП и РИД с О-ПС антигеном), вместе взятые, выявляет больных бруцеллезом животных в более ранние сроки после заболевания и может заменить все эти реакции.

технология изготовления стандартного,

ЛИТЕРАТУРА: 1. Алиев Э.А. РНГА при диагностике бруцеллеза буйволов и крупного рогатого скота: тем. сб. науч. тр. /Азерб. НИВИ; Баку: Из-во Главка сельхознауки и пропаганды, 1984. Т. 30. С. 12-17. 2. Бельченко Н.П. Иванов. //Ветеринария. 1973. № 1. С. 109112. 3. Изучение диагностической ценности РНГА при бруцеллезе / П.А. Вершилова и др. //Сов. Медицина. 1969. № 1. С. 128-131. 4. Дегтяренко Л.В., Красиков А.П. Диагностическая ценность Я-антигенов для РА и РНГА при бруцеллезе крупного рогатого скота: сб. науч. тр. /Ин-т экспер. ветерин. СиДВ; Новосибирск, 1981. Т. 33. С. 9-13. 5. Поздеев К.А., Игнатьева О.А. Применение непрямого метода реакции гемагглютинации при диагностике бруцеллеза: уч. записки / Казанский вет. ин-т; Казань, 1962. Т. 89. С. 75-78. 6. Садыков С.Ж. Диагностическая эффективность реакции непрямой гемагглютинации и реакции нейтрализации антител при бруцеллезе: автореф. дис. канд. вет. наук. М., 1975.7. Хаиров С.Г. Антиген бруцеллезный эритроцитарный для реакции непрямой гемагглютинации: автореф. дис. докт. вет. наук. М., 2001. 8. Христофоров Л. Въерхудиагностичнатастойност на посивнатахемаглутинационна реакция (РХА) при бруцелозата. 2 Опитиспълниантигени. //Ветеринарно-мед. науки. 1965. №№ 2, 10. С. 965-973.

ИЗЫСКАНИЕ МЕТОДА ПОЛУЧЕНИЯ БРУЦЕЛЛЕЗНОГО ЭРИТРОЦИТАРНОГО

АНТИГЕНА ДЛЯ РНГА

Яникова Э.А., Хаиров С.Г., Юсупов О.Ю., Алиев А.Ю.

Резюме

Описан способ получения усовершенствованного бруцеллезного эритроцитарного антигена для реакции непрямой гемагглютинации (РНГА) для диагностики бруцеллеза крупного и мелкого рогатого скота, отличающегося экономичностью, доступностью для массового производства антигена и позволяющего с меньшими затратами труда и времени.

RESEARCH OF THE METHOD OF RECEIPT BRUCELLA RED CORPUSCLES ANTIGENE FOR

RNGA

Yanikova E.A., Hairov S.G., YusupovO.Yu., AlievA.Yu. Summary

Described is a method of obtaining improved brucellosis erythrocyte antigen for the reaction of indirect haemagglutination (RIGA) for the diagnosis of brucellosis in cattle, characterized by efficiency, availability for mass production of antigen and allowing lower cost of labor and time.