УДАЛЕНИЕ АГРЕГАТОВ С ВЫСОКОЙ МОЛЕКУЛЯРНОЙ МАССОЙ ПУТЕМ ХРОМАТОГРАФИИ НА ГИДРОКСИАПАТИТАХ

1. Способ очистки по меньшей мере одного антитела из препарата антитела, содержащего агрегаты с высокой молекулярной массой, включающий: контактирование гидроксиапатитовой смолы с препаратом антитела в загрузочном буфере, содержащем от 1 до 20 мМ фосфата высокой ионной силы и от 0,2 до 2,5 М NaCl, и пропускание очищенного антитела через колонку.
2. Способ очистки по меньшей мере одного антитела из препарата антитела, содержащего агрегаты с высокой молекулярной массой, включающий проведение для препарата антитела (а) аффинной хроматографии с протеином А, (б) ионообменной хроматографии и (в) гидроксиапатитовой хроматографии, при этом этап (в) включает (ii) контактирование гидроксиапатитовой смолы с препаратом антитела в загрузочном буфере, содержащем от 1 до 20 мМ фосфата высокой ионной силы и от 0,2 до 2,5 М NaCl, и пропускание очищенного антитела через колонку.
3. Способ по п.2, отличающийся тем, что аффинную хроматографию с протеином А производят вначале, а гидроксиапатитовую хроматографию - в конце.
4. Способ по п.2, отличающийся тем, что ионообменная хроматография представляет собой анионообменную хроматографию.
5. Способ очистки по меньшей мере одного антитела из препарата антитела, содержащего агрегаты с высокой молекулярной массой, включающий: (а) контактирование препарата с подложкой из протеина А; (б) адсорбцию антитела на подложке из протеина А; (в) промывку подложки из протеина А и адсорбированного антитела по меньшей мере одним промывным буфером для протеина А; (г) элюирование адсорбированного антитела по меньшей мере одним элюэнтным буфером для протеина А; (д) контактирование элюата протеина А с ионообменной подложкой; (е) пропускание антитела через ионообменную подложку; (ж) промывку ионообменной подложки по меньшей мере одним ионообменным промывным буфером; (и) осуществление обмена ионообменного элюата в загрузочном буфере, содержащем от 1 до 20 мМ фосфата высокой ионной силы и от 0,2 до 2,5 М NaCl; (к) контактирование ионообменного элюата с гидроксиапатитовой смолой; пропускание антитела через гидроксиапатитовую смолу; и (л) промывание ионообменной подложки по меньшей мере одним ионообменным промывным буфером.
6. Способ по п.5, отличающийся тем, что ионообменная хроматография представляет собой анионообменную хроматографию.
7. Способ по п.5, дополнительно включающий фильтрацию ионообменного элюата перед нанесением на гидроксиапатитовую смолу, что обеспечивает снижение загрязнения вирусами.
8. Способ по п.5, включает по меньшей мере одну ультрафильтрацию или диафильтрацию элюата, пропущенного через гидроксиапатит.
9. Способ по любому из пп.1, 2 или 5, отличающийся тем, что очищенное антитело содержит менее 5% агрегатов с высокой молекулярной массой.
10. Способ по любому из пп.1, 2 или 5, отличающийся тем, что очищенное антитело содержит менее 1% агрегатов с высокой молекулярной массой.
11. Способ по любому из пп.1, 2 или 5, отличающийся тем, что загрузочный буфер имеет рН от 6,4 до 7,6.
12. Способ по п.11, отличающийся тем, что загрузочный буфер содержит 3 мМ или 5 мМ фосфата натрия.
13. Способ по п.11, отличающийся тем, что загрузочный буфер содержит 1 М или 0,35 M NaCl.
14. Способ по п.11, отличающийся тем, что загрузочный буфер имеет рН 6,8 или 7,2.
15. Способ по любому из пп.1, 2 или 5, отличающийся тем, что антитело представляет собой антитело IgG, IgA, IgD, IgE или IgM.
16. Способ по любому из пп.1, 2 или 5, отличающийся тем, что антитело является моноклональным, поликлональным, химерным, гуманизированным или их фрагментом.
17. Способ по любому из пп.1, 2 или 5, отличающийся тем, что антитело представляет собой антитело к рецептору анти-IL-21, анти-GDF-8, анти-Abeta, анти-СD22, анти-Lewis Y, анти-IL-13 или анти-IL-22 антитело.
18. Способ по любому из пп.1, 2 или 5, отличающийся тем, что антитело имеет основный рI.
19. Способ по любому из пп.1, 2 или 5, отличающийся тем, что смола представляет собой керамический гидроксиапатит типа I или типа II.
20. Способ по п.18, отличающийся тем, что смола представляет собой керамический гидроксиапатит типа I.
-1
21. Способ по любому из пп.1, 2 или 5, отличающийся тем, что очищенное антитело содержит менее 300 млн протеина А.