АНТИТЕЛА ПРОТИВ VEGF И ИХ ПРИМЕНЕНИЯ

1. Антитело против фактора роста эндотелия сосудов (VEGF) или связывающий фрагмент против VEGF антитела, которые содержат гипервариабельные участки (CDR), имеющие аминокислотные последовательности, соответствующие SEQ ID NO:3 (CDR-H1), SEQ ID NO:4 (CDR-H2), SEQ ID NO:5 (CDR-H3), SEQ ID NO:6 (CDR-L1), SEQ ID NO:7 (CDR-L2) и SEQ ID NO:8 (CDR-L3), где
a) CDR-H2 включает замену K64S и возможно одну или более чем одну дополнительную мутацию или комбинацию мутаций, выбранных из одной или более чем одной из Таблиц 6, 7, 8, 9, 10, 11, от 12-1 до 12-9 или 13-16,
b) CDR-H2 включает замену K64Q и возможно одну или более чем одну дополнительную мутацию или комбинацию мутаций, выбранных из одной или более чем одной из Таблиц 6, 7, 8, 9, 10, 11, от 12-1 до 12-9 или 13-16,
c) CDR-H2 включает замены Y53F и K64Q и возможно одну или более чем одну дополнительную мутацию или комбинацию мутаций, выбранных из одной или более чем одной из Таблиц 6, 7, 8, 9, 10, 11, от 12-1 до 12-9 или 13-16,
d) CDR-H3 включает замены Н97Е и Y98F и возможно одну или более чем одну дополнительную мутацию или комбинацию мутаций, выбранных из одной или более чем одной из Таблиц 6, 7, 8, 9, 10, 11, от 12-1 до 12-9 или 13-16,
e) CDR-L2 включает замену Т51А, где CDR-L2 в указанном антителе против VEGF не состоит из последовательности CDR-L2, изложенной в Таблице 13, и возможно одну или более чем одну дополнительную мутацию или комбинацию мутаций, выбранных из одной или более чем одной из Таблиц 6, 7, 8, 9, 10, 11, от 12-1 до 12-9 или 13-16,
f) CDR-H1 включает замену N31 F и возможно одну или более чем одну дополнительную мутацию или комбинацию мутаций, выбранных из одной или более чем одной из Таблиц 6, 7, 8, 9, 10, 11, от 12-1 до 12-9 и 13, и где CDR-H1 в указанном антителе против VEGF не состоит из последовательности CDR-H1, изложенной в Таблицах от 12-1 до 12-9,
g) CDR-H3 включает замену Н97Е и возможно одну или более чем одну дополнительную мутацию или комбинацию мутаций, выбранных из одной или более чем одной из Таблиц 6, 7, 8, 9, 10, 11, от 12-1 до 12-9 и 13, и где CDR-H3 в указанном антителе против VEGF не состоит из последовательности CDR-H3, изложенной в Таблицах от 12-1 до 12-9,
h) CDR-H3 включает замену H97D и возможно одну или более чем одну дополнительную мутацию или комбинацию мутаций, выбранных из одной или более чем одной из Таблиц 6, 7, 8, 9, 10, 11, от 12-1 до 12-9 и 13, и где CDR-H3 в указанном антителе против VEGF не состоит из последовательности CDR-H3, изложенной в Таблицах от 12-1 до 12-9.
i) CDR-H3 включает замену Н97Р и возможно одну или более чем одну дополнительную мутацию или комбинацию мутаций, выбранных из одной или более чем одной из Таблиц 6, 7, 8, 9, 10, 11, от 12-1 до 12-9 и 13, и где CDR-H3 в указанном антителе против VEGF не состоит из последовательности CDR-H3, изложенной в Таблицах от 12-1 до 12-9,
j) CDR-H3 включает замену Y99E и возможно одну или более чем одну дополнительную мутацию или комбинацию мутаций, выбранных из одной или более чем одной из Таблиц 6, 7, 8, 9, 10, 11, от 12-1 до 12-9 и 13, и где CDR-H3 в указанном антителе против VEGF не состоит из последовательности CDR-H3, изложенной в Таблицах от 12-1 до 12-9,
k) CDR-H3 включает замену Y99D и возможно одну или более чем одну дополнительную мутацию или комбинацию мутаций, выбранных из одной или более чем одной из Таблиц 6, 7, 8, 9, 10, 11, от 12-1 до 12-9 и 13, и где CDR-H3 в указанном антителе против VEGF не состоит из последовательности CDR-H3, изложенной в Таблицах от 12-1 до 12-9,
l) CDR-H3 включает замену S100aG и возможно одну или более чем одну дополнительную мутацию или комбинацию мутаций, выбранных из одной или более чем одной из Таблиц 6, 7, 8, 9, 10, 11, от 12-1 до 12-9 и 13, и где CDR-H3 в указанном антителе против VEGF не состоит из последовательности CDR-H3, изложенной в Таблицах от 12-1 до 12-9,
m) CDR-H3 включает замену S100aG и возможно одну или более чем одну дополнительную мутацию или комбинацию мутаций, выбранных из одной или более чем одной из Таблиц 6, 7, 8, 9, 10, 11, от 12-1 до 12-9 и 13, и где CDR-H3 в указанном антителе против VEGF не состоит из последовательности CDR-H3, изложенной в Таблицах от 12-1 до 12-9, и где положение 3 в CDR-H3 указанного антитела против VEGF не является тирозином,
n) CDR-H1 включает по меньшей мере одну замену, выбранную из Т28Р, N31F, N31G и N31M, и возможно одну или более чем одну дополнительную мутацию или комбинацию мутаций, выбранных из одной или более чем одной из Таблиц 6, 7, 8, 9, 10, 11, от 12-1 до 12-9 и 13, и где CDR-H1 в указанном антителе против VEGF не состоит из последовательности CDR-H1, изложенной в Таблицах от 12-1 до 12-9,
о) CDR-H3 включает по меньшей мере одну замену, выбранную из Н97А, H97Q, H97S, Н97Т, S100aD, S100aE и S100aV, и возможно одну или более чем одну дополнительную мутацию или комбинацию мутаций, выбранных из одной или более чем одной из Таблиц 6, 7, 8, 9, 10, 11, от 12-1 до 12-9 и 13, и где CDR-H3 в указанном антителе против VEGF не состоит из последовательности CDR-H3, изложенной в Таблицах от 12-1 до 12-9,
р) CDR-H1 включает замену T30W, T30R или T30Q и возможно одну или более чем одну дополнительную мутацию или комбинацию мутаций, выбранных из одной или более чем одной из Таблиц 6, 7, 8, 9, 10, 11, от 12-1 до 12-9 и 13, и где CDR-H1 в указанном антителе против VEGF не состоит из последовательности CDR-H1, изложенной в Таблицах от 12-1 до 12-9,
q) CDR-H2 включает по меньшей мере одну замену, выбранную из Y53F, T58F, A61G, A61K, A61R, А61Н, A61Y, K64G, К64Е, R65L, R65T, R65A, R65E и R65D, и возможно одну или более чем одну дополнительную мутацию или комбинацию мутаций, выбранных из одной или более чем одной из Таблиц 6, 7, 8, 9, 10, 11, от 12-1 до 12-9 и 13, и где CDR-H2 в указанном антителе против VEGF не состоит из последовательности CDR-H1, изложенной в Таблицах от 12-1 до 12-9,
r) CDR-H3 включает по меньшей мере одну замену, выбранную из Y98F и Y100eF, и возможно одну или более чем одну дополнительную мутацию или комбинацию мутаций, выбранных из одной или более чем одной из Таблиц 6, 7, 8, 9, 10, 11, от 12-1 до 12-9 и 13, и где CDR-H3 в указанном антителе против VEGF не состоит из последовательности CDR-H3, изложенной в Таблицах от 12-1 до 12-9,
s) CDR тяжелой цепи включают комбинацию замен, выбранную из:
(1) N31F в CDR-H1, H97D в CDR-H3, Y99D в CDR-H3 и S100aG в CDR-Н3;
(2) N31F в CDR-H1, Н97Р в CDR-H3, Y99D в CDR-H3 и S100aG в CDR-H3;
(3) N31F в CDR-H1, Н97Р в CDR-H3 и Y99E в CDR-H3;
(4) N31F в CDR-H1, Н97Е в CDR-H3 и Y99E в CDR-H3;
(5) N31F в CDR-H1, H97D в CDR-H3 и Y99E в CDR-H3;
(6) N31F в CDR-H1, Н97Е в CDR-H3, Y99D в CDR-H3 и S100aG в CDR-H3;
(7) N31F в CDR-H1, Y99D в CDR-H3 и S100aG в CDR-H3;
(8) N31F в CDR-H1, Н97Р в CDR-H3 и Y99D в CDR-H3;
(9) N31F в CDR-H1, H97D в CDR-H3 и S100aG в CDR-H3;
(10) N31F в CDR-H1 и S100aG в CDR-H3; или
(11) N31F в CDR-H1, Н97Р в CDR-H3 и S100aG в CDR-H3;
где указанное антитело или связывающий фрагмент возможно содержат одну или более чем одну дополнительную мутацию или комбинацию мутаций, выбранных из одной или более чем одной из Таблиц 6, 7, 8, 9, 10,11, от 12-1 до 12-9 и 13, или
t) тяжелая цепь включает по меньшей мере одну замену, выбранную из A61F в CDR-H2, А61Е в CDR-H2, A61D в CDR-H2, D62L в CDR-H2, D62G в CDR-Н2, D62Q в CDR-H2, D62T в CDR-H2, D62K в CDR-H2, D62R в CDR-H2, D62E в CDR-H2, D62H в CDR-H2, K64S в CDR-H2, K64V в CDR-H2, K64Q в CDR-H2, R65V в CDR-H2, R65F в CDR-H2, R65H в CDR-H2, R65N в CDR-H2, R65S в CDR-H2, R65Q в CDR-H2, R65K в CDR-H2, R65I в CDR-H2 и Y98H в CDR-H3, и возможно одну или более чем одну дополнительную мутацию или комбинацию мутаций, выбранных из одной или более чем одной из Таблиц 7, 8, 9, 10, 11, от 12-1 до 12-9 или 13;
где шесть CDR в целом имеют вплоть до 17 аминокислотных замен по сравнению с последовательностями CDR антитела бевацизумаб или антитела ранибизумаб.
2. Антитело против VEGF или связывающий фрагмент против VEGF антитела по п.1, где CDR-H2 включает замену K64S и возможно одну или более чем одну дополнительную мутацию или комбинацию мутаций, выбранных из одной или более чем одной из Таблиц 6, 7, 8, 9, 10, 11, от 12-1 до 12-9 или 13-16.
3. Антитело против VEGF или связывающий фрагмент против VEGF антитела по п.1, где CDR-H1 включает замену N31F и возможно одну или более чем одну дополнительную мутацию или комбинацию мутаций, выбранных из одной или более чем одной из Таблиц 6, 7, 8, 9, 10, 11, от 12-1 до 12-9 и 13, и где CDR-H1 в указанном антителе против VEGF не состоит из последовательности CDR-H1, изложенной в Таблицах от 12-1 до 12-9.
4. Антитело против VEGF или связывающий фрагмент против VEGF антитела по п.1, где CDR-H1 включает по меньшей мере одну замену, выбранную из Т28Р, N31F, N31G и N31M, и возможно одну или более чем одну дополнительную мутацию или комбинацию мутаций, выбранных из одной или более чем одной из Таблиц 6, 7, 8, 9, 10, 11, от 12-1 до 12-9 и 13, и где CDR-H1 в указанном антителе против VEGF не состоит из последовательности CDR-H1, изложенной в Таблицах от 12-1 до 12-9.
5. Антитело против VEGF или связывающий фрагмент против VEGF антитела по п.1, где CDR тяжелой цепи включают комбинацию замен, выбранную из:
(1) N31F в CDR-H1, H97D в CDR-H3, Y99D в CDR-H3 и S100aG в CDR-Н3;
(2) N31F в CDR-H1, Н97Р в CDR-H3, Y99D в CDR-H3 и S100aG в CDR-H3;
(3) N31F в CDR-H1, Н97Р в CDR-H3 и Y99E в CDR-H3;
(4) N31F в CDR-H1, Н97Е в CDR-H3 и Y99E в CDR-H3;
(5) N31F в CDR-H1, H97D в CDR-H3 и Y99E в CDR-H3;
(6) N31F в CDR-H1, Н97Е в CDR-H3, Y99D в CDR-H3 и S100aG в CDR-H3;
(7) N31F в CDR-H1, Y99D в CDR-H3 и S100aG в CDR-H3;
(8) N31F в CDR-H1, Н97Р в CDR-H3 и Y99D в CDR-H3;
(9) N31F в CDR-H1, H97D в CDR-H3 и S100aG в CDR-H3;
(10) N31F в CDR-H1 и S100aG в CDR-H3; или
(11) N31F в CDR-H1, Н97Р в CDR-H3 и S100aG в CDR-H3;
где указанное антитело или связывающий фрагмент возможно содержат одну или более чем одну дополнительную мутацию или комбинацию мутаций, выбранных из одной или более чем одной из Таблиц 6, 7, 8, 9, 10,11, от 12-1 до 12-9 и 13.
6. Антитело против VEGF или связывающий фрагмент против VEGF по любому из пп.1-5, в которых, кроме комбинации замен, выбранных из (1)-(11), CDR тяжелой цепи не содержат дополнительные мутации по сравнению с последовательностями CDR тяжелой цепи антитела бевацизумаб или по сравнению с последовательностями CDR тяжелой цепи антитела ранибизумаб.
7. Антитело против VEGF или связывающий фрагмент против VEGF по любому из пп.1-5, где шесть CDR в целом имеют вплоть до 16, вплоть до 15, вплоть до 14, вплоть до 13, вплоть до 12, вплоть до 11, вплоть до 10, вплоть до 9, вплоть до 8, вплоть до 7, вплоть до 6, вплоть до 5, вплоть до 4 аминокислотных замен по сравнению с последовательностями CDR антитела бевацизумаб или антитела ранибизумаб.
8. Антитело против VEGF или связывающий фрагмент против VEGF по п.1, где любой индивидуальный CDR имеет не более трех аминокислотных замен по сравнению с соответствующей последовательностью CDR антитела бевацизумаб или антитела ранибизумаб.
9. Антитело против VEGF или связывающий фрагмент против VEGF по п.1, где любой индивидуальный CDR имеет не больше чем две аминокислотные замены по сравнению с соответствующей последовательностью CDR антитела бевацизумаб или антитела ранибизумаб.
10. Антитело против VEGF или связывающий фрагмент против VEGF по п.1, представляющие собой моноклональное антитело или связывающий фрагмент против VEGF моноклонального антитела, соответственно.
11. Антитело против VEGF или связывающий фрагмент против VEGF по п.1, представляющие собой человеческое или гуманизированное антитело или связывающий фрагмент против VEGF человеческого или гуманизированного антитела, соответственно.
12. Антитело против VEGF или связывающий фрагмент против VEGF по п.1, представляющие собой IgG.
13. Антитело против VEGF или связывающий фрагмент против VEGF по п.1, включающие одну или более чем одну мутацию в Fc области, которые увеличивают активность ADCC (антиген-зависимая клеточная цитотоксичность).
14. Антитело против VEGF или связывающий фрагмент против VEGF по п.1, которые являются нефукозилированными.
15. Антитело против VEGF или связывающий фрагмент против VEGF по п.1, включающие одну или более чем одну мутацию в Fc области, которые увеличивают связывание с FcγR.
16. Антитело против VEGF или связывающий фрагмент против VEGF по п.1, включающие одну или более чем одну мутацию в Fc области, которые увеличивают связывание с FcRn.
17. Антитело против VEGF или связывающий фрагмент против VEGF по п.1, включающие одну или более чем одну мутацию в Fc области, которые снижают активность ADCC.
H
L
18. Антитело против VEGF или связывающий фрагмент против VEGF по п.1, которые, кроме указанной одной или более чем одной мутации, имеют последовательность V, соответствующую SEQ ID NO:1, и последовательность V, соответствующую SEQ ID NO:2.
19. Антитело против VEGF или связывающий фрагмент против VEGF по п.1, которые, кроме указанной одной или более чем одной мутации, имеют последовательность тяжелой цепи, соответствующую SEQ ID NO:9, и последовательность легкой цепи, соответствующую SEQ ID NO:10.
H
L
20. Антитело против VEGF или связывающий фрагмент против VEGF по п.1, имеющие аффинность, которая в 1,5-50 раз выше, чем аффинность антитела, имеющего последовательность V, соответствующую SEQ ID NO:1, и последовательность V, соответствующую SEQ ID NO:2.
21. Антитело против VEGF или связывающий фрагмент против VEGF по п.1, имеющие аффинность, которая в 1,5-50 раз выше, чем аффинность антитела, имеющего последовательность тяжелой цепи, соответствующую SEQ ID NO:9, и последовательность легкой цепи, соответствующую SEQ ID NO:10.
H
L
22. Антитело против VEGF или связывающий фрагмент против VEGF по п.20, имеющие аффинность, которая в 2-30 раз выше, чем аффинность антитела, имеющего последовательность V, соответствующую SEQ ID NO:1, и последовательность V, соответствующую SEQ ID NO:2.
23. Антитело против VEGF или связывающий фрагмент против VEGF по п.21, имеющие аффинность, которая в 2-30 раз выше, чем аффинность антитела, имеющего последовательность тяжелой цепи, соответствующую SEQ ID NO:9, и последовательность легкой цепи, соответствующую SEQ ID NO:10.
24. Конъюгат антитело-лекарственное средство, содержащий антитело против VEGF или связывающий фрагмент против VEGF по любому из пп.1-23.
25. Фармацевтическая композиция, содержащая антитело против VEGF или связывающий фрагмент против VEGF по любому из пп.1-23 или конъюгат антитело-лекарственное средство по п.24 и фармацевтически приемлемый носитель.
26. Нуклеиновая кислота, содержащая нуклеотидную последовательность, кодирующую антитело против VEGF или связывающий фрагмент против VEGF по любому из пп.1-23.
27. Вектор, содержащий нуклеиновую кислоту по п.26.
28. Прокариотическая клетка-хозяин, трансформированная вектором по п.27.
29. Эукариотическая клетка-хозяин, трансформированная вектором по п.27.
30. Эукариотическая клетка-хозяин, модифицированная посредством генной инженерии для экспрессии нуклеотидной последовательности по п.26.
31. Эукариотическая клетка-хозяин по п.30, представляющая собой клетку-хозяина млекопитающего.