ОЧИСТКА ПОЛИСАХАРИДБЕЛКОВЫХ КОНЪЮГАТОВ

1. Способ очистки полисахаридбелкового конъюгата от одной или более примесей, включающий стадии:
a. приведения неочищенного полисахаридбелкового конъюгата в контакт со смолой смешанного типа, содержащей инертную пористую оболочку и активированное ядро, в условиях низкой проводимости, обеспечивающих связывание указанных примесей, и
b. сбор несвязавшегося полисахаридбелкового конъюгата в выходящем потоке.
2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что инертная пористая оболочка содержит поры, имеющие отсечку по молекулярной массе от 2000 кДа до 500 кДа.
3. Способ по п. 2, отличающийся тем, что отсечка по молекулярной массе составляет от 1000 кДа до 700 кДа.
4. Способ по п. 3, отличающийся тем, что на активированном ядре иммобилизованы лиганды, содержащие функциональные группы.
5. Способ по п. 4, отличающийся тем, что функциональные группы иммобилизованных лигандов содержат алкильную цепь и аминогруппу.
6. Способ по п. 5, отличающийся тем, что алкильная цепь содержит от 4 до 14 атомов углерода.
7. Способ по п. 6, отличающийся тем, что алкильная цепь взаимодействует с примесями посредством гидрофобных взаимодействий.
8. Способ по п. 7, отличающийся тем, что аминогруппа взаимодействует с примесями посредством ионных взаимодействий.
9. Способ по п. 8, отличающийся тем, что примеси содержат свободные полисахариды.
10. Способ по п. 7, отличающийся тем, примеси содержат свободный белок.
11. Способ по п. 8, отличающийся тем, что примеси содержат свободный белок.
12. Способ по п. 7, отличающийся тем, что примеси содержат конъюгаты с низкой молекулярной массой.
13. Способ по п. 8, отличающийся тем, что примеси содержат конъюгаты с низкой молекулярной массой.
14. Способ п. 7, отличающийся тем, что примеси содержат линкеры или связующие агенты.
15. Способ п. 8, отличающийся тем, что примеси содержат линкеры или связующие агенты.
16. Способ по любому из пп. 1-15, отличающийся тем, что полисахаридный компонент полисахаридбелкового конъюгата содержит полисахариды из Haemophilus influenzae типа b, Neisseria meningitidis, Streptococcus pneumoniae, Salmonella enterica серовара Typhi, Vibrio cholerae или Shigella flexneri.
17. Способ по п. 16, отличающийся тем, что компонент полисахаридбелкового конъюгата, представляющий собой белок-носитель, выбран из группы, состоящей из столбнячного анатоксина, дифтерийного анатоксина, CRM 197, белка D из Haemophilus influenzae, коклюшного токсина (детоксифицированного химическим или генетическим способами), белка С наружной мембраны Neisseria meningitides, белка С наружной мембраны Salmonella, пневмолизина (в том числе детоксифицированных вариантов) или пневмококкового поверхностного белка A (PspA) или пневмококкового белка адгезина (PSaA) Streptococcus pneumoniae или рекомбинантного экзотоксина A Pseudomonas aeruginosa (rEPA).
18. Способ по любому из пп. 1-15 или 17, отличающийся тем, что стадию (а) осуществляют путем загрузки полисахаридбелкового конъюгата в хроматографическую колонку, содержащую смолу смешанного типа, содержащую инертную пористую оболочку и активированное ядро, в условиях низкой проводимости, которые обеспечивают связывание указанных примесей.
19. Способ по п. 18, отличающийся тем, что загрузку осуществляют при скорости потока 2-120 см/ч.
20. Способ п. 19, отличающийся тем, что скорость потока составляет 10-120 см/ч, 20-110 см/ч, 30-100 см/ч, 40-90 см/ч, 50-80 см/ч или 60-70 см/ч.
21. Способ п. 20, отличающийся тем, что скорость потока составляет предпочтительно 10-80 см/ч.
22. Способ по п. 18, отличающийся тем, что низкая проводимость означает проводимость менее 10 мСм/см, менее 5 мСм/см или предпочтительно менее 3 мСм/см.
23. Способ по п. 22, отличающийся тем, что проводимость поддерживают посредством регулировки ионной концентрации буфера.
24. Способ по п. 23, отличающийся тем, что буфер выбран из фосфатного, Трис, MES, HEPES, цитратного буферов или их комбинаций.
25. Способ п. 24, отличающийся тем, что рН буфера составляет от 5,0 до 7,5.
26. Способ по п. 25, отличающийся тем, что буфер предпочтительно представляет собой фосфатный буфер.
27. Способ п. 26, отличающийся тем, что проводимость буфера составляет менее 5 мСм/см.
28. Способ п. 1, необязательно включающий стадию разбавления и стадию диафильтрации перед стадией (а).
29. Способ по п. 28, отличающийся тем, что диафильтрацию осуществляют непрерывно 20-25 раз.
30. Способ по п. 29, отличающийся тем, что диафильтрацию осуществляют через мембрану, имеющую отсечку по молекулярной массе 30 кДа.
31. Способ получения вакцины на основе полисахаридного конъюгата, включающий получение по существу очищенного полисахаридбелкового конъюгата по способу по любому из пп. 1-30 и применение указанного по существу очищенного полисахаридбелкового конъюгата для получения комбинированной вакцины.