ТРИСПЕЦИФИЧЕСКИЕ АНТИТЕЛА ПРОТИВ IL-17A, IL-17F И ДРУГОЙ ПРОВОСПАЛИТЕЛЬНОЙ МОЛЕКУЛЫ

1. Триспецифичная связывающая молекула, содержащая первый связывающий домен, который связывается с человеческим IL-17A и человеческим IL-17-F, и второй связывающий домен, который связывается с человеческой провоспалительной молекулой.
2. Связывающая молекула по п. 1, отличающаяся тем, что указанная связывающая молекула представляет собой антитело или его антигенсвязывающий фрагмент.
3. Связывающая молекула по п. 1 или 2, отличающаяся тем, что указанный первый связывающий домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 3.
4. Связывающая молекула по п. 1 или 2, отличающаяся тем, что указанный первый связывающий домен содержит аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 1-3.
5. Связывающая молекула по п. 1 или 2, отличающаяся тем, что указанный первый связывающий домен конкурирует за связывание или связывается с тем же эпитопом, что связывающий домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4.
6. Связывающая молекула по п. 1 или 2, отличающаяся тем, что указанный первый связывающий домен идентичен по последовательности по меньшей мере на 90% аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 4.
7. Связывающая молекула по п. 1 или 2, отличающаяся тем, что указанный первый связывающий домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4.
8. Связывающая молекула по п. 1, отличающаяся тем, что указанный первый связывающий домен гуманизирован.
9. Связывающая молекула по п. 1, отличающаяся тем, что указанный второй связывающий домен связывается с человеческим ФНО-альфа.
10. Связывающая молекула по п. 9, отличающаяся тем, что указанный второй связывающий домен конкурирует за связывание или связывается с тем же эпитопом, что связывающий домен, содержащая:
a) тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10-12, и легкую цепь, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 13-15;
b) вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8, и вариабельный домен легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9; или
c) тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6.
11. Связывающая молекула по п. 9, отличающаяся тем, что указанный второй связывающий домен содержит тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 12, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 15.
12. Связывающая молекула по п. 11, отличающаяся тем, что указанный второй связывающий домен содержит тяжелую цепь, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 10-12, и легкую цепь, содержащую аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 13-15.
13. Связывающая молекула по п. 9, отличающаяся тем, что указанный второй связывающий домен вариабельный домен тяжелой цепи, последовательность которого по меньшей мере на 90% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 8, вариабельный домен, идентичный по меньшей мере на 90% аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 9, или оба домена.
14. Связывающая молекула по п. 9, отличающаяся тем, что указанный второй связывающий домен содержит вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8, вариабельный домен легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9, или оба домена.
15. Связывающая молекула по п. 9, отличающаяся тем, что указанный второй связывающий домен содержит вариабельный домен легкой цепи, состоящий из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 8, и вариабельный домен легкой цепи, состоящий из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 9.
2
16. Связывающая молекула по п. 9, отличающаяся тем, что второй связывающий домен представляет собой химерное антитело, гуманизированное антитело, человеческое антитело, одноцепочное антитело, Fv, Fab, F (ab'), Fd, одноцепочечную Fv молекулу (ScFv), диатело или однодоменное антитело (dAb).
17. Связывающая молекула по п. 9, отличающаяся тем, что указанный второй связывающий домен содержит тяжелую цепь, последовательность которой по меньшей мере на 90% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 5, легкую цепь, последовательность которой по меньшей мере на 90% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 6, или обе цепи.
18. Связывающая молекула по п. 9, отличающаяся тем, что указанный второй связывающий домен содержит тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5, легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6, или обе цепи.
19. Связывающая по п. 9, отличающаяся тем, что указанный второй связывающий домен содержит тяжелую цепь состоящую из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 5, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 6.
20. Триспецифичная связывающая молекула, содержащая первый связывающий домен, который связывается с человеческим IL-17A и человеческим IL-17F, и второй связывающий домен, который связывается с человеческим ФНО-альфа, при этом указанный первый связывающий домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4, и указанный второй связывающий домен содержит тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6.
21. Триспецифичная связывающая молекула, которая связывается с человеческим IL-17A, IL-17F и человеческим ФНО-альфа, при этом указанная связывающая молекула содержит аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 5 и 7.
22. Связывающая молекула по любому из пп. 1, 20 и 21, отличающаяся тем, что указанный первый связывающий домен и указанный второй связывающий домен соединены пептидным линкером из более чем пяти аминокислот.
23. Связывающая молекула по п. 22, отличающаяся тем, что аминокислотные остатки пептидного линкера выбраны из G, A, S, Р, Е, Т, D и К.
24. Связывающая молекула по п. 22, отличающаяся тем, что указанный пептидный линкер содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 16.
25. Связывающая молекула по любому из пп. 1, 20 и 21, отличающаяся тем, что указанная связывающая молекула представляет собой антитело изотипа IgG или его антигенсвязывающей части.
26. Связывающая молекула по п. 25, отличающаяся тем, что указанное антитело относится к подтипу изотипа IgG 1.
27. Связывающая молекула по любому из пп. 1, 20, 21, отличающаяся тем, что связывающая молекула содержит FC-фрагмент по меньшей мере с одной мутацией, которая снижает антитело-зависимую клеточно-опосредованную цитотоксичность (ADCC) и/или комплемент-зависимую цитотоксичность (CDC) по сравнению с той же связывающей молекулой без мутации.
28. Связывающая молекула по любому из пп. 1, 20 и 21, отличающаяся тем, что указанная связывающая молекула имеет по меньшей мере одно из следующих свойств:
a) KD для IL-17A, составляющая 10-11 М или менее;
b) KD для IL-17F, составляющая 10-7 М или ниже;
c) KD для ФНО-альфа, составляющая 10-11 М или менее;
d) подавляет активность IL-17A и/или IL-17A /ФНО-альфа по меньшей мере на 50% при концентрациях IL-6 ниже 200 нг/мл в анализе на клетках линии НТ1080;
e) подавляет IL-17А-зависимое высвобождение IL-6 клетками линии НТ080;
f) подавляет продукцию IL-6 в клетках линии НТ1080;
g) подавляет ФНО-альфа-зависимую цитотоксичность по меньшей мере на 50% при концентрациях ниже 100 нг/мл в клетках линии WEHI-13VAR;
h) не связывается с ФНО-альфа кролика, мыши или морской свинки;
i) одновременно связывается с IL-17A и ФНО-альфа;
j) связывается с IL-17A и ФНО-альфа яванского макака;
k) остается стабильной после семи дней инкубации при температуре 37°С в сыворотке крови человека;
l) имеет период полувыведения более 12 дней in vivo;
m) оказывает противовоспалительный эффект в модели артрита in vivo; а также
I) подавляет активность IL-17 и ФНО-альфа in vivo.
29. Фармацевтическая композиция, содержащая связывающую молекулу по любому из пп. 1-28 и фармацевтически приемлемый наполнитель.
30. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, содержащая нуклеотидную последовательность, которая кодирует первый связывающий домен связывающей молекулы по любому из пп. 3-20.
31. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, содержащая нуклеотидную последовательность, которая кодирует тяжелую цепь, легкую цепь или обе цепи второго связывающего домена связывающей молекулы по любому из пп. 11-20.
32. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, содержащая:
a) нуклеотидную последовательность, которая кодирует первый связывающий домен связывающей молекулы по любому из пп. 3-20;
b) нуклеотидную последовательность, которая кодирует тяжелую цепь второго связывающего домена связывающей молекулы по любому из пп. 11-20;
c) нуклеотидную последовательность, которая кодирует легкую цепь второго связывающего домена связывающей молекулы по любому из пп. 11-20; или
d) любое сочетание а)-с).
33. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, содержащая нуклеотидную последовательность, кодирующую первый связывающий домен связывающей
молекулы по пп. 3-20, и нуклеотидную последовательность, кодирующую легкую цепь второго связывающего домена связывающей молекулы по любому из пп. 11-20, в некоторых случаях дополнительно содержащая нуклеотидную последовательность, кодирующую пептидный линкер.
34. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, которая кодирует любую из аминокислотных последовательностей SEQ ID N0: 1-15.
35. Вектор, содержащий любую из выделенных молекул нуклеиновой кислоты по любому и пп. 30-34, при этом указанный вектор далее содержит последовательности, контролирующие экспрессию.
36. Клетка-хозяин, содержащая:
a) нуклеотидную последовательность, которая кодирует первый связывающий домен связывающей молекулы по любому из пп. 3-20;
b) нуклеотидную последовательность, которая кодирует тяжелую цепь второго связывающего домена связывающей молекулы по любому из пп. 11-20; а также
c) нуклеотидную последовательность, которая кодирует легкую цепь второго связывающего домена связывающей молекулы по любому из пп. 11-20.
37. Клетка-хозяин, которая содержит нуклеотидную последовательность, кодирующую SEQ ID NO: 5, и нуклеотидную последовательность, кодирующую SEQ ID NO: 7.
38. Способ получения связывающей молекулы по любому пп. 1-28, содержащий получение клетки-хозяина по п. 36 или 37, культивирование указанной клетки-хозяина в условиях, подходящих для экспрессии связывающей молекулы, и выделение полученной связывающей молекулы.
39. Способ лечения пациента, нуждающегося в таком лечении, содержащий введение пациенту связывающей молекулы по любому из пп. 1-28 или фармацевтической композиции по п. 29.
40. Способ по п. 39, отличающийся тем, что пациент имеет заболевание, опосредованное IL-17A, IL-17F или ФНО-альфа.
41. Способ лечения ревматоидного артрита, псориаза или псориатического артрита лечения у пациента, содержащий введение пациенту связывающей молекулы по любому из пп. 1-28 или фармацевтической композиции по п. 29.
42. Способ по п. 41, отличающийся тем, что указанный способ далее содержит введение противовоспалительного или иммунодепрессивного агента.
43. Способ по п. 39, отличающийся тем, что пациент является человеком.