РЕКОМБИНАНТНОЕ ПОЛИКЛОНАЛЬНОЕ АНТИТЕЛО ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ИНФЕКЦИЙ РЕСПИРАТОРНО-СИНЦИТИАЛЬНОГО ВИРУСА

1. Рекомбинантное поликлональное антитело против RSV, способное нейтрализовать RSV подтипа A и B, где указанное поликлональное антитело содержит разные антитела, которые в совокупности специфически связываются, по меньшей мере, с тремя разными эпитопами, по меньшей мере, одного белка оболочки RSV.
2. Рекомбинантное поликлональное антитело против RSV по п.1, где указанное поликлональное антитело содержит разные антитела, которые в совокупности обладают специфической реакционноспособностью по отношению к, по меньшей мере, двум белкам оболочки RSV.
3. Рекомбинантное поликлональное антитело против RSV по п.1, где белки оболочки RSV выбраны из белка G RSV, белка F RSV и белка SH RSV.
4. Рекомбинантное поликлональное антитело против RSV по п.1, где реакционная способность против белка оболочки представляет собой реакционную способность против белка G и против белка F, где указанная реакционная спсобность обеспечивается, по меньшей мере, двумя разными антителами против белка G и, по меньшей мере, одним отличным антителом против белка F.
5. Рекомбинантное поликлональное антитело против RSV по п.4, где первое антитело против белка G способно специфически связываться с консервативным эпитопом G-белка, второе антитело против белка G способно специфически связываться с цистеин-обогащенным участком белка G (GCRR), а реакционная способность в отношении белка F направлена против, по меньшей мере, одного из антигенных участков I, II, IV, V, VI, C или F1.
6. Рекомбинантное поликлональное антитело против RSV по п.4, где, по меньшей мере, часть реакционной способности в отношении белка G направлена против мотива CX3C.
7. Рекомбинантное поликлональное антитело против RSV по п.4, где реакционная способность в отношении белка G дополнительно направлена против, по меньшей мере, одного штамм-специфичного эпитопа.
8. Рекомбинантное поликлональное антитело против RSV по п.4, где реакционная способность в отношении белка F, по меньшей мере, направлена против антигенного участка II и антигенного участка IV.
9. Рекомбинантное поликлональное антитело против RSV по любому из пп.1-8, где реакционная способность в отношении белка оболочки направлена против, или, в отношении пп.4-8, дополнительно направлена против белка SH.
10. Рекомбинантное поликлональное антитело против RSV по любому из пп.1-8, где композиция различных антител, отражает гуморальный иммунный ответ у донора с точки зрения разнообразия, сродства и специфичности против антигенов оболочки RSV.
11. Рекомбинантное поликлональное антитело против RSV по любому из пп.1-8, где разные антитела кодируются последовательностями нуклеиновых кислот, полученными от одного или нескольких доноров-людей, у которых выработался гуморальный иммунный ответ против RSV, а поликлональное антитело представляет собой полностью человеческое антитело.
H
L
12. Рекомбинантное поликлональное антитело против RSV по п.10, где различные антитела состоят из пар V и V, исходно присутствующих у донора (доноров).
H
L
13. Рекомбинантное поликлональное антитело против RSV по любому из пп.1-8, где каждое отдельное антитело содержит участки CDR1, CDR2 и CDR3, выбранные из группы пар V и V, приведенных в таблице 5.
14. Фармацевтическая композиция, содержащая в качестве активного ингредиента рекомбинантное поликлональное антитело против RSV по любому из пп.1-13, и фармацевтически приемлемый наполнитель.
15. Способ предотвращения, лечения или улучшения одного или нескольких симптомов, связанных с инфекцией RSV у млекопитающего, включающий введение указанному млекопитающему эффективного количества рекомбинантного поликлонального антитела против RSV по любому из пп.1-13, или фармацевтической композиции по п.14.
16. Способ по п.15, где эффективное количество составляет максимум 100 мг антитела на кг массы тела, например, максимум 90, максимум 80, максимум 70, максимум 60, максимум 50, максимум 40, максимум 30, максимум 20, максимум 10, максимум 9, максимум 8, максимум 7, максимум 6, максимум 5, максимум 4, максимум 3, максимум 2, максимум 1, максимум 0,9, максимум 0,8, максимум 0,7, максимум 0,6, максимум 0,5, максимум 0,4, максимум 0,3, максимум 0,2 и максимум 0,1 мг на кг массы тела.
17. Способ по п.15, где эффективное количество составляет, по меньшей мере, 0,01 мг антитела на кг массы тела, например, по меньшей мере, 0,05, 0,1, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7 и 0,8.
18. Способ по п.15, где эффективное количество составляет от 0,1 до 20 мг антитела на кг массы тела.
19. Способ по любому из пп.15-18, где антитело вводят, по меньшей мере, 1 раз в год, например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18 и 19 раз в год.
20. Способ по п.19, где антитело вводят с регулярными интервалам на протяжении года, когда существует повышенный риск заражения инфекцией RSV.
21. Способ по п.20, где регулярные интервалы представляют собой неделю, две недели, месяц или два месяца.
22. Применение рекомбинантного поликлонального антитела против RSV по любому из пп.1-13, или фармацевтической композиции по п.14, для получения композиции для лечения, облегчения или предотвращения одного или нескольких симптомов, связанных с инфекцией RSV у млекопитающего.
H
L
23. Способ получения набора V и V-кодирующих пар, члены которого отражают пары генов, отвечающие за гуморальный иммунный ответ, возникающий в результате инфекции RSV, где способ включает:
a. получение клеточной фракции, содержащей лимфоциты, от донора, инфицированного RSV, или от донора, перенесшего инфекцию RSV;
b. необязательно обогащение В-клеток или плазматических клеток из указанной клеточной фракции;
c. получение популяции выделенных отдельных клеток, включающее распределение клеток из указанной клеточной фракции по отдельности в несколько сосудов; и
H
L
d. амплификацию и соединение V и V-кодирующих пар методом множественной ОТ-ПЦР с перекрыванием-удлинением, с использованием матрицы, полученной из указанных выделенных отдельных клеток;
H
L
e. необязательно проведение вложенной ПЦР связанных V и V-кодирующих пар.
24. Поликлональная клеточная линия, способная экспрессировать рекомбинантное поликлональное антитело против RSV по любому из пп.1-13.
H
L
H
L
H
L
25. Поликлональная клеточная линия, где каждая отдельная клетка способна экспрессировать одну V и V-кодирующую пару, а поликлональная клеточная линия в целом способна экспрессировать коллекцию V и V-кодирующих пар, где каждая V и V-кодирующая пара кодирует антитело против RSV.
H
L
26. Поликлональная клеточная линия по п.25, где указанную коллекцию V и V-кодирующих пар получают способом по п.23.
27. Выделенная молекула человеческого антитела против RSV, выбранная из молекул антител, приведенных в таблице 5 данного описания, или специфически связывающийся фрагмент указанной молекулы антитела, или синтетический или полусинтетический аналог антитела, где указанный связывающий фрагмент или аналог содержат, по меньшей мере, гипервариабельные участки (CDR) указанной молекулы выделенного антитела.
28. Молекула, фрагмент или аналог антитела по п.27, которые получают из антител, перечисленных в таблице 8, или которые содержат аминокислотные последовательности CDR тяжелой цепи, входящие в состав одной из SEQ ID No: 1-44, а также сопутствующие аминокислотные последовательности CDR легкой цепи, имеющие SEQ ID NO на 88 больше, чем аминокислотная последовательность, выбранная из SEQ ID NO: 1-44.
29. Молекула, фрагмент или аналог антитела по п.27, которые получают из антител, перечисленных в таблице 6 или 7.
30. Молекула, фрагмент или аналог антитела по п.27, которые представляют собой антитело, представленное в таблице 6 или 7.
D
31. Выделенная молекула антитела, фрагмент антитела или синтетический или полусинтетический аналог антитела, которые содержат CDR, идентичные CDR, присутствующим во фрагменте Fab, полученном из человеческого антитела, причем константа диссоциации K комплекса указанного Fab с белком G RSV составляет максимум 500 нМ по данным анализа поверхностного плазмонного резонанса, проведенного на Biacore 3000, с использованием рекомбинантного белка G RSV, иммобилизованного на сенсорной поверхности с очень низкой плотностью, чтобы избежать ограничений по переносу массы.
D
32. Выделенная молекула антитела, фрагмент антитела или синтетическое или полусинтетическое антитело по п.31, где K составляет максимально 400 нМ, например, максимально 300 нМ, максимально 200 нМ, максимально 100 нМ, максимально 1 нМ, максимально 900 пМ, максимально 800 пМ, максимально 700 пМ, максимально 600 пМ, максимально 500 пМ, максимально 400 пМ, максимально 300 пМ, максимально 200 пМ, максимально 100 пМ, максимально 90 пМ и максимально 80 пМ.
D
33. Выделенная молекула антитела, фрагмент антитела или синтетическое или полусинтетическое антитело, которые содержат антиген-связывающий участок, идентичный антиген-связывающему участку фрагмента Fab, полученного из человеческого антитела, причем константа диссоциации K комплекса указанного Fab с белком F RSV составляет максимум 500 нМ по данным анализа поверхностного плазмонного резонанса, проведенного на Biacore 3000, с использованием рекомбинантного белка F RSV, иммобилизованного на сенсорной поверхности с очень низкой плотностью, чтобы избежать ограничений по переносу массы.
D
34. Выделенная молекула антитела, фрагмент антитела или синтетическое или полусинтетическое антитело по п.33, где K составляет максимально 400 нМ, например, максимально 300 нМ, максимально 200 нМ, максимально 100 нМ, максимально 1 нМ, максимально 900 пМ, максимально 800 пМ, максимально 700 пМ, максимально 600 пМ, максимально 500 пМ, максимально 400 пМ, максимально 300 пМ, максимально 200 пМ, максимально 100 пМ, максимально 90 пМ, максимально 80 пМ, максимально 70 пМ, максимально 60 пМ, максимально 50 пМ, максимально 40 пМ, максимально 30 пМ, максимально 25 пМ, максимально 20 пМ, максимально 15 пМ, максимально 10 пМ, максимально 9 пМ, максимально 8 пМ, максимально 7 пМ, максимально 6 пМ и максимально 5 пМ.
35. Молекула антитела, или специфически связывающий фрагмент антитела, или синтетический или полусинтетический аналог антитела по любому из пп.27-34, которые содержат CDR человеческого антитела, продуцируемого клоном № 810, 818, 819, 824, 825, 827, 858 или 894.
36. Композиция антитела, содержащая молекулу антитела, специфически связывающий фрагмент антитела, или синтетический или полусинтетический аналог антитела по любому из пп.27-35 в смеси с фармацевтически приемлемым носителем, наполнителем, средой или разбавителем.
37. Композиция по п.36, которая содержит 2 разные молекулы антитела, и/или разных специфически связывающих фрагмента антитела, и/или разных синтетических или полусинтетических аналогов антитела по любому из пп.27-35.
38. Композиция по п.36, которая содержит, по меньшей мере, 3 разные молекулы антитела и/или разных фрагмента антитела, и/или разных синтетических или полусинтетических аналогов антитела по любому из пп.27-35, например, композиция содержит 4, 5, 6, 7, 9, 10, 11, 12, 13, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 или 30 разных молекул антитела и/или фрагментов антитела, и/или синтетических или полусинтетических аналогов антитела.
39. Композиция по любому из пп.36-38, которая содержит, по меньшей мере, одну молекулу антитела, один фрагмент или один аналог антитела, которые связываются с белком F RSV, и которая содержит, по меньшей мере, одну молекулу антитела, один фрагмент или один аналог антитела, которые связываются с белком G RSV.
40. Выделенный фрагмент нуклеиновой кислоты, который кодирует аминокислотную последовательность, по меньшей мере, одного CDR, определенного в любом из пп.27-35.
41. Выделенный фрагмент нуклеиновой кислоты по п. 40, который, по меньшей мере, кодирует участки CDR антитела, продуцируемого одним из клонов, перечисленных в таблице 5.
42. Выделенный фрагмент нуклеиновой кислоты, который кодирует последовательности CDR аминокислотной последовательности тяжелой цепи, представленные в любой из SEQ ID NO 1-44.
43. Выделенный фрагмент нуклеиновой кислоты, который кодирует последовательности CDR аминокислотной последовательности легкой цепи, представленные в любой из SEQ ID NO 89-132.
44. Выделенный фрагмент нуклеиновой кислоты, который кодирует последовательности CDR аминокислотной последовательности тяжелой цепи, представленные в любой из SEQ ID NO 1-44, а также сопутствующие аминокислотные последовательности CDR легкой цепи, имеющие SEQ ID NO на 88 больше, чем аминокислотная последовательность, выбранная из SEQ ID NO: 1-44.
45. Фрагмент нуклеиновой кислоты по любому из пп.40-44, который включает кодирующие последовательности, содержащиеся в SEQ ID NO: 45-88 и/или 133-176.
46. Вектор, содержащий фрагмент нуклеиновой кислоты по любому из пп.40-45.
47. Вектор по п.46, способный к автономной репликации.
48. Вектор по п.46 или 47, выбранный из группы, состоящей из плазмиды, фага, космиды, минихромосомы и вируса.
49. Вектор по п.46, содержащий,
по меньшей мере, один функционально связанный промотор в 5'→3' направлении, управляющий экспрессией первого фрагмента нуклеиновой кислоты по любому из пп.40-45, который кодирует, по меньшей мере, один CDR легкой цепи вместе с необходимыми каркасными участками, необязательно последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую лидерный пептид, указанный первый фрагмент нуклеиновой кислоты, необязательно последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую константые участки, и необязательно последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую первый терминатор, и/или
по меньшей мере, один функционально связанный промотор в 5'→3' направлении, управляющий экспрессией второго фрагмента нуклеиновой кислоты по любому из пп.40-45, который кодирует, по меньшей мере, один CDR тяжелой цепи вместе с необходимыми каркасными участками, необязательно последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую лидерный пептид, указанный второй фрагмент нуклеиновой кислоты, необязательно последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую константые участки, и необязательно последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую второй терминатор.
50. Вектор по п.46, который при введении в клетку-хозяина интегрируется в ее геном.
51. Трансформированная клетка, несущая вектор по любому из пп.46-50.
52. Стабильная клеточная линия, которая несет вектор по любому из пп.46-50, и экспрессирует фрагмент нуклеиновой кислоты по любому из пп.40-45, и необязательно секретирует или несет на своей поверхности рекомбинантный продукт экспрессии.
53. Способ получения композиции различных рекомбинантных молекул антител, включающий экспрессию указанных различных молекул антител клетками или клеточной линией, трансфицированными векторами экспрессии, содержащими последовательности, кодирующие молекулы антител, которые в природе не связаны с данными клетками или клеточной линией, где отдельные члены в совокупности способны связываться, по меньшей мере, с тремя разными эпитопами, по меньшей мере, одного белка оболочки RSV, и где поликлональная композиция способна нейтрализовать RSV подтипов А и В.
54. Способ по п.53, где указанные различные молекулы антител составляют рекомбинантное поликлональное антитело против RSV по любому из пп.1-13.