Морфология регенераторного процесса в шейке матки крысы при ее экспериментальном рассечении

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1 Канюков В.Н., Стадников А.А., Трубина О.М. и др. Гистоэквивалент биопластического материала в офтальмологии : монография. - Оренбург, 2014. - 176 с.

2 Мирошниченко А.П., Храппо Н.С., Соловьева Л.В. Исследование проходимости слезоотводящих путей при патологии носа и околоносовых пазух // Практическая медицина. - 2016. - № 2. - С. 24-26.

3 Насыров В.А., Медведев И.М., Исламов И.М. Современные тенденции в хирургическом лечении хронического гнойного дакриоцистита // Практическая медицина. - 2012. - № 6. - С. 11-14.

4 Токарева Н.С., Шилов М.В., Староха А.В. и др. Анатомо-морфологические особенности назального устья носослезного протока при патологическом слезотечении // Бюллетень сибирской медицины. - 2006. - № 4. -С. 62-71.

5 Черкунов Б.Ф. Болезни слезных органов : монография. - Самара : ГП «Перспектива», 2001. - 296 с.

Рукопись получена: 8 ноября 2017 г. Принята к публикации: 15 ноября 2017 г.

УДК 618.14-007.63:616-003.93-092.9

МОРФОЛОГИЯ РЕГЕНЕРАТОРНОГО ПРОЦЕССА В ШЕЙКЕ МАТКИ КРЫСЫ ПРИ ЕЕ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ РАССЕЧЕНИИ

© 2017 Ю.В. Григорьева

ФГБОУ ВО «Самарский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации, Самара

Используя гистологические, иммуногистохимический и морфометрический методы исследования уточнены регенераторные потенции тканей шейки матки при экспериментальном ножевом рассечении ее стенки и прослежена динамика течения репаративной регенерации.

Установлено, что ножевое рассечение стенки шейки матки приводит к грубому повреждению ее тканей с развитием очагового некроза с последующим септическим воспалением. Посттравматическая регенерация не приводит в полной мере к восстановлению первоначальной архитектоники оболочек стенки и особенно его миометрия. Процесс регенерации идет по заместительному типу из-за недостатка собственных регенераторных потенций и, вероятно, высокой степени дифференцировки гладких миоцитов миометрия матки. Сформировавшийся соединительнотканный рубец через месяц после травмы образован коллагеном III типа, который расценивается как молодой, неспособный полноценно сохранить прочность структуры.

Ключевые слова: шейка матки, миометрий, гладкие миоциты, коллаген, регенерация.

Введение. Цервикс является чрезвычайно важной анатомической и функциональной структурой матки и хотя его принято считать сегментом матки, травмы и заболевания этой структуры выделяются в отдельную категорию, что требует особого подхода при диагностике и специальных методов при назначении лечения [8, 10, 12]. Повреждения шейки матки, нередко возникающие во время родов, при проведении абортов, вследствие конизации при опухолевых состояниях, могут приводить к ее деформации и в последующем серьезно влиять на ход беременности [1, 4, 5, 6, 9].

Отсутствие адекватного лечения деформации шейки матки может привести к серьёзным проблемам, самыми распространёнными из них являются: осложнённое течение беременности, повышенный риск выкидыша, истмико-цервикальная недостаточность и др. [3, 7, 11].

Помимо этого, деформированная шейка открывает дорогу для восходящей инфекции, результат которой очевиден всем.

Кроме того, пластика шейки матки (трахелопластика), выполняемая оперативным путём, с целью восстановления нормальной анатомии шейки матки, сама нередко является причиной развития ряда патологических состояний, например, несостоятельности цервикса при беременности, вследствие ее укорочения, и ее разрыва в родах, что ограничивает возможность родить через естественные родовые пути [1, 4, 9].

В этой связи представляется актуальным проведение морфологического исследования течения регенераторного процесса в шейке матки при ее экспериментальном ножевом рассечении на биологической модели - крысе, с целью уточнения регенераторных потенций данного участка органа.

Материал и методы. Для проведения исследования был поставлен эксперимент с острым ножевым рассечением стенки шейки матки у нерожавших лабораторных крыс. Экспериментальные исследования проводились в соответствии с «Руководством по содержанию и использованию лабораторных животных», а также с соблюдением правил гуманного обращения с животными [2].

Для оценки динамики течения репаративной регенерации забор материала осуществляли через сутки и на 3, 5, 7, 10, 15, 21 и 30 сутки после травмы (по 3 крысы на срок). Для проведения световой микроскопии материал фиксировали в 10 % забуференном формалине, проводку материала осуществляли в гистологическом процессоре замкнутого типа с вакуумом Leica ASP 300. Заливали материал в парафин «Histomix» фирмы Bio Optica. Срезы толщиной 4 мкм готовили на роторном микротоме и окрашивали гематоксилином и эозином. Для уточнения роли соединительной ткани проведено иммуногистохимическое исследование с использованием моноклонального антитела к коллагену III типа («Dako», Дания). Для идентификации гладкой мышечной ткани применяли антитело к а-гладкомышечному актину, клон 1А4 («Dako», Дания). Для оценки клеточной пролиферации использовали антитело Ki-67 клон SP6 (Labvision, США). Постановку иммуногистохимической реакции проводили с одношаговой системой визуализации BioGenex (QD 630-XAK) Super Sensitive one-step Polymer - HRP Kit/DAB.

Результаты исследования и их обсуждение. Ножевое рассечение участка стенки шейки матки приводит к гибели большого числа соединительнотканных и мышечных клеток на ограниченном участке (рис. 1). В результате четко определяются зоны: центральная зона, при-раневые и зона структурной целостности. Центральная зона соответствует месту рассечения стенки, в которой в первые сутки развивается очаговый фибриноидный некроз. Прираневые зоны располагаются по периферии от центральной и отграничены от последней лейкоцитарным валом. Клеточный состав зоны демаркации сменяется во времени, играя ведущую роль в исходе регенераторного процесса в шейке матки.

В первые сутки после травмы отмечается кровотечение из центральной зоны повреждения, что обусловлено хорошей васкуляризацией миометрия. В сосудах прираневых зон отмечается стаз и миграция лейкоцитов через стенку сосудов. Вследствие повышения проницаемости сосудистой стенки, в течение первых суток развивается выраженный отек интерстици-альной ткани и гидропическая дистрофия миоцитов с последующим некрозом отдельных групп клеток.

На 3 сутки восстановительного периода очаг некроза (рис. 1) увеличивается за счет распространения в прираневую зону. С 3-х по 5-е сутки формируется демаркационный вал, где в

инфильтрате определяются не только нейтрофилы и макрофаги, но и фибробласты, мигрирующие со стороны соединительной ткани эндометрия прираневой зоны.

На 5-7 сутки после травмы нарастают проявления экссудативной фазы воспаления. Развивается септическое воспаление в прираневых и даже интактной зонах, затрагивающее все оболочки. Воспалительная инфильтрация представлена в основном нейтрофильными лейкоцитами с примесью эозинофилов и лимфоцитов. В центральной зоне повреждения на границе с прираневыми зонами со стороны эндометрия заметно активное размножение клеток рыхлой соединительной ткани и синтез межклеточного вещества, что приводит к началу заполнения посттравматического дефекта. В прираневой зоне на уровне миометрия определяются мелкие очаги жирового перерождения мышечной ткани.

К 10-15 суткам эксперимента пролиферативная фаза становится преобладающей. В миометрии зона некроза заметно уменьшается, за счет деятельности макрофагов, в том числе и гигантских клеток (рис. 2). В центральной части некроза определяются гемосидерофаги и свободно лежащий гемосидерин (рис. 2). Такое длительное существование гемоглобинового пигмента, вероятно обусловлено обширностью кровоизлияний. Стоить отметить, что данный пигмент локализуется преимущественно на уровне сосудистого слоя миометрия. Здесь же заметна воспалительная инфильтрация и нарастающая пролиферация клеток соединительной ткани. Среди ядер гладких миоцитов положительной экспрессии гена пролиферации кь67 не выявлено.

Рис. 1. Участок некроза в стенке шейки матки крысы после ножевого рассечения. 3-е сутки регенерации. Окраска: гематоксилином и эозином. Увел. 100Х

Рис. 2. Участок регенерации в стенке шейки матки крысы после ножевого рассечения. 15-е сутки регенерации. Окраска: гематоксилином и эозином. Увел. 100Х

На 21 сутки посттравматической регенерации продолжает формироваться соединительнотканный рубец. Проведенное гистохимическое типирование позволило выявить в зоне формирующегося рубца выраженную положительную экспрессию коллагена III типа (рис. 3). Соединительная ткань в составе рубца состоит из рыхло упакованных тонких фибрилл коллагена. В центральной зоне все еще встречаются гемосидерофаги, макрофаги, лимфоциты, плазмоци-ты. Количество ядер, экспрессирующих ген пролиферации, к этому времени начинает снижаться.

К концу месяца процессы репаративной регенерации окончательно не завершены, несмотря на уменьшение центральной зоны и сближение прираневых зон. В прираневых зонах мио-метрия наблюдаются изменения компенсаторного характера, проявляющиеся как гипертрофией, так и атрофией миоцитов. На этом этапе в зоне травматизации заметно уменьшение толщины всех оболочек стенки шейки матки, особенно миометрия и его внутреннего слоя (рис. 4).

Рис. 3. Участок регенерации в стенке шейки матки Рис. 4. Участок регенерации в стенке шейки матки

крысы после ножевого рассечения. 21-е сутки крысы после ножевого рассечения. 30-е сутки

регенерации. ИГХ. Коллаген III типа. Увел. 100Х регенерации. ИГХ. а-гладкомышечный

актин. Увел. 100Х

Заключение. Таким образом, посттравматическая регенерация после ножевого рассечения стенки шейки матки не приводит в полной мере к восстановлению первоначальной архитектоники миометрия. Процесс регенерации идет по заместительному типу из-за недостатка собственных регенераторных потенций и, вероятно, высокой степени дифференцировки гладких миоцитов миометрия матки. Сформировавшийся соединительнотканный рубец образован коллагеном III типа, который расценивается как молодой, неспособный полноценно сохранить прочность структуры.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1 Голикова Т.П., Дурандин Ю.М., Ермолова Н.П. Отдаленные результаты хирургического лечения родовых травм // Вестник Российского университета дружбы народов. Серия: Медицина. - 2001. - № 1. - С. 90-93.

2 Западнюк И.П., Западнюк В.И., Захария Е.А. и др. Лабораторные животные. Разведение, содержание, использование в эксперименте. - 3-е изд., перераб. и доп. - Киев: Вища школа. Головное изд-во, 1983. - 383 с.

3 Лукьянова Е.А. Истмико-цервикальная недостаточность: взгляд на проблему // Охрана материнства и детства. - 2010. - № 1-15. - С. 73-77.

4 Сашкина А.Е., Попков С. А., Федосенко А.И. и др. Анализ оценки функциональной полноценности шейки матки после пластических операций // Журнал Российского общества акушеров-гинекологов. - 2005. - № 1. -С. 44-45.

5 Сергеева Ю.А., Густоварова Т.А., Кузьминых В.В. Рубцовая деформация шейки матки: факторы риска, отдаленные результаты пластической операции в раннем послеродовом периоде // Смоленский медицинский альманах. - 2017. - № 4. - С. 42-46.

6 Серова О.Ф., Зароченчева Н.В., Титченко Л.И. и др. Особенности течения беременности у женщин, перенесших инвазивное лечение цервикальных интраэпителиальных неоплазий // Вопросы гинекологии, акушерства и перинатологии. - 2009. - Т. 8. - № 1. - С. 47-51.

7 Сидельникова В.М. Привычная потеря беременности. - М., Триада-Х, 2002. - С. 166-167.

8 Тарабанова О. В., Григорова А. Н., Черноусова Т. В. и др. Органосберегающая тактика лечения пациенток с шеечной беременностью // Кубанский медицинский вестник. - 2011. - № 5 (128). - С. 160-163.

9 Baldauf J.J., Ritter J., Cuerin С. Therapeutic outcame of loop electrosurgical excision of the cervix // Contra-cept.Fertil. Sexual. - 1999. - N 27 (2). - P. 140--146.

10 Koullali B, Westervelt AR, Myers KM, House MD Prevention of preterm birth: Novel interventions for the cervix. Semin Perinatal. 2017 Oct 5. pii:S0146-0005(17)30097-6. doi:10.1053/j.semperi.2017.08.009. [Epub ahead of print] Review. PubMed PMID: 28988725.

11 The mechanical role of the cervix in pregnancy Kristin M. Myers, Helen Feltovich, Edoardo Mazza, Joy Vink, Michael Bajka, Ronald J. Wapner, Timothy J. Hall, Michael House J Biomech. Author manuscript; available in PMC 2016 Jun 25. Published in final edited form as: J Biomech. 2015 Jun 25; 48(9): 1511-1523. Published online 2015 Mar 11. doi: 10.1016/j.jbiomech.2015.02.065 PMCID: PMC4459908

12 Ueda M, Ueki K, Kanemura M, Izuma S, Yamaguchi П, Nishiyama K, Tanaka Y, Terai Y, Ueki M. Diagnostic and tera-peutic laser conization for cervical intraepithelial neoplasia // Gynecol Oncol. - 2006. - V. 101. - N 1. - P. 143-146.

Рукопись получена: 13 ноября 2017 г. Принята к публикации: 16 ноября 2017 г.