ИДЕНТИФИКАЦИЯ МОЛЕКУЛ, МОДУЛИРУЮЩИХ БЕЛОК-БЕЛКОВОЕ ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ

1. Способ идентификации соединения, модулирующего белок-белковое взаимодействие, который включает:
приготовление первого белка, присоединенного к белку, активирующему репортер, и второго белка, присоединенного к протеазе, в котором указанная протеаза способна осуществлять расщепление по сайту расщепления в указанном белке, активирующем репортер, тем самым активируя указанный белок, активирующий репортер;
i) приготовление репортера сигнал которого изменяется из-за активности указанного белка, активирующего репортер;
ii) приготовление указанного соединения;
iii) обеспечение возможности для расщепления указанного сайта расщепления протеазой; и
iv) мониторинг сигнала репортера;
причем изменение сигнала репортера указывает на указанное белок-белковое взаимодействие.
2. Способ по п.1, в котором указанный белок, активирующий репортер, является самоактивирующимся.
3. Способ по п.1, в котором первый белок образует слитый белок с указанным белком, активирующим репортер.
4. Способ по п.1, который дополнительно предусматривает приготовление молекулы, которая является известным модулятором белок-белкового взаимодействия, причем указанное соединение модулирует взаимосвязь указанной молекулы с указанным белок-белковым взаимодействием.
5. Способ по п.1, в котором белок, активирующий репортер, является ферментом.
6. Способ по п.1, в котором белок, активирующий репортер, является белком, который вызывает изменение флуоресценции репортера.
7. Способ по п.6, в котором белок, активирующий флуоресценцию, является репортером.
8. Система анализа, включающая:
i) первый белок, содержащий белок, модулирующий репортер;
ii) второй белок, связанный с протеазой;
iii) указанный белок, модулирующий репортер, активируемый или инактивируемый посредством расщепления указанной протеазой; и
iii) репортер, сигнал которого меняется за счет указанного белка, модулирующего репортер;
iv) причем ассоциация указанного первого белка с указанным вторым белком обеспечивает расщепление указанного белка, модулирующего репортер.
9. Система по п.8, в которой указанный белок, модулирующий репортер, является указанным репортером.
10. Система по п.8, в которой указанный репортер активируется или инактивируется посредством структурной реорганизации полипептидных фрагментов указанного белка, модулирующего репортер.
11. Система по любому способу п.8, в которой по крайней мере один белок, выбираемый из группы, состоящей из указанного первого белка и указанного второго белка, является мембранным белком.
12. Система по п.11, в которой указанный мембранный белок является GPCR.
13. Система по п.8, в которой указанная протеаза имеет последовательность распознавания, состоящую, по крайней мере, из 4 аминокислот.
14. Система по п.8, в которой указанная протеаза является протеазой TEV.
15. Система по любому способу п.8, в которой указанным сигналом является свет и указанный репортер является флуоресцентным белком или люциферином.
16. Система по п.15, в которой указанный репортер является GFP.
17. Система по п.8, в которой, по крайней мере, один белок, выбираемый из группы, состоящей из указанного первого белка и указанного второго белка, является цитоплазматическим белком.
18. Система по п.8, в которой для белок-белкового взаимодействия требуется транслокация указанного первого белка или указанного второго белка в отсек или органеллу клетки.
19. Система по п.18, в которой транслокация указанного первого белка или указанного второго белка в ядро вызывает модулирование сигнала репортера.
20. Система по п.8, в которой указанный репортер или указанная протеаза содержит ядерную целевую последовательность.