СПОСОБ ОЦЕНКИ РАЗВИТИЯ СИНГЕННОГО ПЕРЕВИВНОГО МИЕЛОБЛАСТНОГО ЛЕЙКОЗА У МЫШЕЙ ЛИНИИ AKR/JY
METHOD FOR ASSESSING DEVELOPING SYNGENEIC GRAFTED LYMPHOBLASTIC LEUKAEMIA IN AKR/JY MICE

Изобретение относится к области медицины, а именно к экспериментальной гематологии и может найти применение в научно-исследовательской работе при оценке развития лейкозного процесса у мышей линии AKR/JY способом перевивки им клеток селезенки от мышей с миелобластным лейкозом. В последние годы для оценки развития лейкоза применяют морфологические, физиологические, гистологические, молекулярно-генетические и биохимические критерии (Клиническая онкогематология: руководство для врачей; под ред. М.А. Волковой. - 2-е изд., перераб., доп. - М.: Медицина, 2007. - 120 с.; [WHO Classification of Tumours of Haematopoietic and Lymphoid Tissues. - Ed. Steven H. Swerdlow, Elias Campo, Nancy Lee Harris [et al]. - International Agency for Research of Cancer, Lyon. 2008. - 439 p.]; В.Н. Титов, Д.М. Лисицин, С.Д. Разумовский / Методические вопросы и диагностическое значение определения перекисного окисления липидов в липопротеинах низкой плотности. Олеиновая жирная кислота как биологический антиоксидант. // Клиническая лабораторная диагностика. - 2005. - N4. - С.3-10.
Основными недостатками используемых методов являются низкая информативность, трудоемкость и высокая затратность. Положительные результаты при оценке развития сингенного перевивного миелобластного лейкоза у мышей линии AKR/GY возможны при комплексной оценке течения заболевания с включением биохимических, морфологических, физиологических показателей и органных нарушений у подопытных животных.
Задачей предлагаемого изобретения является повышение точности и упрощение способа при оценке развития сингенного перевивного миелобластного лейкоза у мышей линии AKR/JY.
Поставленная задача решается тем, что через 10-12 дней после введения в брюшную полость здоровым мышам линии AKR/JY взвеси лейкозных селезеночных клеток определяют уровень липопротеинов низкой и очень низкой плотности в плазме крови, массу печени, содержание в ней миелобластов и по этим показателям оценивают развитие лейкозного процесса.
Известен способ оценки развития перевивного лейкоза La у мышей линии C57B1/6jG путем определения антиоксидантного комплекса витаминов A, E и C (В.А. Кувшинников и др. «Применение антиоксидантного комплекса витаминов A, E и C при лейкозе мышей» / Гематология и трансфузиология - 1989. - т.34, №8. - С.23-28), взятый нами за прототип. Этот способ является наиболее близким техническим решением к предполагаемому изобретению.
Недостатками известного способа являются низкая информативность и трудоемкость. В частности:
а) в известном способе отсутствуют данные о массе печени и количества в ней миелобластов.;
б) он требует проведения большого количества тестов и расходных материалов.
Предлагаемый способ по сравнению с известным имеет следующие преимущества:
а) проведенные тесты более специфичны для оценки развития сингенного перевивного миелобластного лейкоза у мышей линии AKR/JY;
б) проще известного способа в методическом отношении, позволяет более быстро и точно диагностировать развитие перевивного миелобластного лейкоза у мышей линии AKR/JY.
Результаты сравнительного анализа заявляемого и известного способов оценки развития перевивных лейкозов у мышей представлены в таблице 1.
Таблица 1
Способы оценки развития перевивных лейкозов у мышей
Известный способ
Лейкоз La
Исследуемые морфологические и физиологические показатели
Супероксиддисмутаза, глутатионредуктаза, глутатион-SH, токоферол, убихинон, ретинол, аскорбиновая, дигидроаскорбиновая и дикетоглютаровая кислоты, уровень белка, малоновый диальдегид (в селезенке и эритроцитах).
Масса органов и количество бластных элементов не определяется
Заявляемый способ
Сингенный перевивной лимфобластный лейкоз
Исследуемые морфологические и физиологические показатели
Определяются липопротеины низкой и очень низкой плотности в плазме крови
Определяется количество миелобластов в мазках-отпечатках печени и масса печени
В процессе проведения патентно-информационного поиска не выявлено источников, порочащих новизну предлагаемого изобретения.
Заявляемое изобретение разработано в лаборатории патоморфологии крови ФГБУН КНИИГиПК ФМБА России в соответствии с планом НИР.
Опыты проведены на 16 мышах линии AKR/JY обоего пола, массой 25,0±2,7 г, в возрасте 92±8,5 суток без признаков лейкоза. Перевивку лейкозных клеток от мышей линии AKR/JY с миелобластным лейкозом начинали с введения в наркоз мыши-донора, лапаротомии, удаления селезенки, ее измельчения, фильтрации фрагментов и приготовления 1%-процентной суспензии лейкозных клеток на 0,9% растворе хлорида натрия. Через 10-12 дней после внутрибрюшинного введения 0,5 мл 1%-ой суспензии лейкозных клеток и развитии сингенного перевивного миелобластного лейкоза животных забивали декапитацией, определяли в плазме крови уровень липопротеинов и при значениях липопротеинов низкой плотности от 0,7 до 1,0 ммоль/л и липопротеинов очень низкой плотности от 0,15 до 0,7 ммоль/л, массе печени выше 2,2 г и содержании в ней миелобластов более 25% констатируют развитие сингенного перевивного миелобластного лейкоза у мышей линии AKR/JY.
Уровень липопротеинов низкой и очень низкой плотности в плазме крови определяли с использованием диагностических наборов «Ольвекс-Диагностикум» (С.-Петербург). Количество миелобластов в мазках-отпечатках печени после их окрашивания азур-эозином подсчитывали с использованием метода световой микроскопии.
Заявляемое изобретение обладает новизной, существенными отличиями, дает при использовании положительный эффект, заключающийся в повышении точности, упрощении способа и снижении затратности при оценке развития сингенного перевивного миелобластного лейкоза у мышей линии AKR/JY.
Пример конкретного использования
Мыши линии AKR/JY, возраст 85 суток, вводили внутрибрюшинно 0,5 мл 1% суспензии лейкозных клеток селезенки на 0,9% растворе хлорида натрия. Через 10 суток животное забивали декапитацией под наркозом, вскрывали, извлекали и взвешивали печень (масса 2,6 г). В мазках-отпечатках печени подсчитывали содержание миелобластов (29%) и определяли в плазме крови уровень липопротеинов низкой плотности (0,74 ммоль/л) и очень низкой плотности (0,25 ммоль/л). На основании этих показателей констатируют развитие сингенного перевивного миелобластного лейкоза у мышей линии AKR/JY.
Предлагаемый способ позволяет более точно оценивать развитие сингенного перевивного миелобластного лейкоза, более прост в реализации, менее затратный и дает стабильный положительный результат при оценке развития сингенного перевивного миелобластного лейкоза у мышей линии AKR/JY. Предлагаемая технология может быть использована в учреждениях медицинского и биологического профиля для оценки развития сингенного перевивного миелобластного лейкоза у мышей линии AKR/JY в условиях эксперимента и скрининга лечебного эффекта противоопухолевых препаратов на течение лейкозного процесса.