МАЛОМАСШТАБНЫЙ СПОСОБ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ СУСПЕНДИРОВАННЫХ КЛЕТОК

1. Способ культивирования клеток в суспензии, включающий
получение культуры клеток;
культивирование клеток в культуре клеток, где культуру клеток перемешивают;
прекращение перемешивания культуры клеток;
удаление части среды для культивирования из культуры клеток после, по меньшей мере, частичной седиментации клеток в культуре клеток; и
добавление свежей среды для культивирования в культуру клеток.
2. Способ симуляции крупномасштабной перфузионной культуры клеток в суспензии, включающий
получение маломасштабной культуры клеток, имеющей культуральный объем 10% или менее от крупномасштабной перфузионной культуры;
культивирование клеток в маломасштабной культуре клеток с использованием одного или нескольких условий культивирования крупномасштабной перфузионной культуры, подлежащей симуляции, где маломасштабную культуру клеток перемешивают;
прекращение перемешивания маломасштабной культуры клеток;
удаление части среды для культивирования маломасштабной культуры клеток после, по меньшей мере, частичной седиментации клеток в маломасштабной культуре клеток; и
добавление свежей среды для культивирования в маломасштабную культуру клеток.
3. Способ по п.2, где одно или несколько условий культивирования крупномасштабной перфузионной культуры, подлежащей симуляции, используемых для культивирования клеток в маломасштабной культуре клеток, выбраны из группы, состоящей из среды для культивирования, температуры, значения pH, концентрации кислорода, плотности клеток, добавления питательных веществ для клеток, включая время добавления и целевую концентрацию питательных веществ в среду для культивирования, время культивирования, конкретную мощность на входе, скорость подачи газа, скорость перфузии и осмолярность среды для культивирования.
4. Способ скрининга условий культивирования и/или клона клетки для крупномасштабной перфузионной культуры клеток в суспензии, включающий
получение маломасштабных культур клеток, имеющих культуральный объем 10% или менее от крупномасштабной перфузионной культуры;
культивирование клеток в маломасштабных культурах клеток, где маломасштабные культуры клеток перемешивают;
прекращение перемешивания маломасштабных культур клеток;
удаление части среды для культивирования маломасштабных культур клеток после, по меньшей мере, частичной седиментации клеток в маломасштабных культурах клеток; и
добавление свежей среды для культивирования в маломасштабные культуры клеток;
где отдельные маломасштабные культуры клеток отличаются условиями культивирования и/или клоном клетки, скрининг на которые проводят.
5. Способ по п.4, где условия культивирования, скрининг на которые проводят, выбраны из группы, состоящей из среды для культивирования, температуры, значения pH, концентрации кислорода, плотности клеток, добавления питательных веществ для клеток, включая время добавления и целевую концентрацию питательных веществ в среде для культивирования, время культивирования, конкретную мощность на входе, скорость подачи газа, скорость перфузии и осмолярность среды для культивирования.
6. Способ по п.4 или 5, где при скрининге выбирают условия культивирования и/или клоны клеток, обеспечивающие высокую жизнеспособность клеток, высокую и/или стабильную плотность клеток, высокий и/или стабильный выход интересующей биомолекулы, продуцируемой клетками в культуре клеток, и желаемое свойство интересующей биомолекулы, продуцируемой клетками в культуре клеток.
7. Способ по любому из пп.2-6, где крупномасштабная перфузионная культура имеет объем по меньшей мере 1 л, и/или где маломасштабная культура клеток имеет объем 50 мл или менее.
8. Способ по любому из пп.1-7, где после прекращения перемешивания на стадии (c) осуществляют седиментацию клеток в течение по меньшей мере 35 мин перед удалением части среды для культивирования на стадии (d).
9. Способ по любому из пп.1-7, где после прекращения перемешивания на стадии (c) осуществляют седиментацию клеток в течение 30 мин или менее перед удалением части среды для культивирования на стадии (d), и где на стадии (d) также удаляют часть клеток в культуре клеток для осуществления слива клеток.
10. Способ по любому из пп.1-9, где на стадии (d) удаляют от 15% до 50% и 30% среды для культивирования; и/или где среду для культивирования удаляют на стадии (d) из верхней части культуры клеток.
11. Способ по любому из пп.1-10, где количество свежей среды для культивирования, добавляемой на стадии (e), по существу, идентично количеству среды для культивирования, удаляемой на стадии (d).
12. Способ по любому из пп.1-11, где значение pH и/или концентрацию кислорода в среде для культивирования контролируют в течение культивирования клеток; и где контроль значения pH и/или концентрации кислорода прекращают по меньшей мере за 5 мин до прекращения перемешивания культуры клеток на стадии (c).
13. Способ по любому из пп.1-12, где стадии (b)-(e) повторяют один или несколько раз, и где после стадии (e) клетки культивируют при перемешивании в течение по меньшей мере 1 ч. перед прекращением перемешивания на стадии (c) следующего цикла.
14. Способ по любому из пп.1-13, где клетки, подлежащие культивированию, являются эукариотическими клетками, выращиваемыми в суспензии, предпочтительно, иммортализованными клетками крови человека, такими как иммортализованные клетки человека миелолейкозного происхождения, или клетками CHO.
15. Способ по любому из пп.1-14, где клетки рекомбинантно продуцируют интересующую биомолекулу, предпочтительно, гликопротеин.