СИНТЕЗ НМО

1. Клетка, стабильно культивируемая в среде, где клетка адаптирована для продукции олигосахаридов, клетка трансформирована таким образом, что она содержит по меньшей мере одну последовательность нуклеиновых кислот, кодирующую фермент, задействованный в синтезе олигосахарида,
которая характеризуется тем, что
клетка дополнительно трансформирована таким образом, что она содержит по меньшей мере одну последовательность нуклеиновых кислот, кодирующую белок семейства эффлюксного переносчика сахара, ее функциональный гомолог или производное.
2. Клетка в соответствии с п.1, отличающаяся тем, что клетку выбирают из группы, включающей клетки бактерий, грибов, животных и растений.
3. Клетка в соответствии с п.2, отличающаяся тем, что клетка представляет собой клетку Escherichia coli.
4. Клетка в соответствии с любым из пп.1-3, отличающаяся тем, что фермент выбирают из группы, включающей гликозилтрансферазу, гликозилтрансферазу Leloir типа, гликозилтрансферазу не-Leloir типа, фукозилтрансферазу, сиалилтрансферазу, галактозилтрансферазу, маннозилтрансферазу, N-Ацетилглюкозаминилтрансферазу, N-Ацетилгалактозаминилтрансферазу.
5. Клетка в соответствии с п.4, отличающаяся тем, что фермент представляет собой фукозилтрансферазу.
6. Клетка по одному из пп.1-3, отличающаяся тем, что эффлюксный переносчик сахара представляет собой SetA или его производное.
7. Клетка по одному из пп.1-3, отличающаяся тем, что она дополнительно трансформирована таким образом, что она содержит по меньшей мере одну последовательность нуклеиновых кислот, кодирующую белок, облегчающий или промотирующий импорт эдуктов, необходимых для синтеза олигосахарида.
8. Клетка в соответствии с п.7, отличающаяся тем, что она трансформирована таким образом, что она содержит по меньшей мере одну последовательность нуклеиновых кислот, кодирующую белок, выбранный из группы, включающей переносчик лактозы, переносчик фукозы, переносчик сиаловой кислоты, переносчик галактозы, переносчик маннозы, переносчик N-ацетилглюкозамина, переносчик N-ацетилгалактозамина, АВС-переносчик, переносчик для нуклеотид-активированного сахара и переносчик для нуклеинового основания, нуклеозида или нуклеотида.
9. Клетка по одному из пп.1-3, отличающаяся тем, что она дополнительно трансформирована таким образом, что она содержит по меньшей мере одну последовательность нуклеиновых кислот, кодирующую белок, выбранный из группы, включающей нуклеотидилтрансферазу, гуанилилтрансферазу, уридилилтрансферазу, Fkp, L-фукозокиназу, фукоза-1-фосфат гуанилилтрансферазу, синтетазу СМР-сиаловой кислоты, галактозокиназу, галактоза-1-фосфат уридилилтрансферазу, глюкозокиназу, глюкозу-1-фосфат уридилилтрансферазу, маннозокиназу, манноза-1-фосфат гуанилилтрансферазу, GDP-4-кето-6-дезокси-D-манноза редуктазу, глюкозамин киназу, глюкозамин-фосфат ацетилтрансферазу, N-ацетил-глюкозамин-фосфат уридилилтрансферазу, UDP-N-ацеталглюкозамин 4-эпимеразу, UDP-N-ацетил-глюкозамин 2-эпимеразу.
10. Клетка по одному из пп.1-3, отличающаяся тем, что она содержит катаболический путь для выбранных моно-, ди- или олигосахаридов, который по меньшей мере частично инактивирован, моно-, ди- или олигосахариды вовлечены и/или необходимы для синтеза олигосахаридов.
11. Клетка по одному из пп.1-3, отличающаяся тем, что олигосахариды содержат по меньшей мере три субъединицы и/или характеризуются молекулярным весом по меньшей мере приблизительно 480 г/моль.
12. Способ продукции олигосахаридов, который включает стадии:
а) обеспечение клетки в соответствии с любым из пп.1-11,
b) культивирование клетки в среде в условиях, предоставляющих возможность продукции указанных олигосахаридов,
с) экстрагирование указанных олигосахаридов из культуральной среды.
13. Способ в соответствии с п.12, отличающийся тем, что стадию b) осуществляют, используя биореактор с непрерывным потоком.
14. Способ в соответствии с п.12 или 13, отличающийся тем, что среда на стадии b) содержит одно или несколько веществ, выбранных из группы, включающей основные добавочные компоненты для поддержания роста и размножения клеток, селективные агенты, эдукты, необходимые для синтеза олигосахаридов, эффекторы активности генов.
15. Способ в соответствии с п.14, отличающийся тем, что эдукты выбирают из группы, включающей арабинозу, треозу, эритрозу, рибозу, рибулозу, ксилозу, глюкозу, D-2-дезокси-2-амино-глюкозу, N-ацетилглюкозамин, глюкозамин, фруктозу, маннозу, галактозу, N-ацетилгалактозамин, галактозамин, сорбозу, фукозу, М-ацетилнейраминовую кислоту, гликозид, искусственный сахар, нуклеиновое основание, нуклеозид, нуклеотид и любой возможный их ди- или полимер.
16. Способ по п.12 или 13, отличающийся тем, что олигосахариды содержат по меньшей мере три субъединицы и/или характеризуются молекулярным весом по меньшей мере приблизительно 480 г/моль.
17. Способ в соответствии с п.16, отличающийся тем, что олигосахарид представляет собой фукозиллактозу.