Нитрозодиметиламин (НДМА) - гепатотропный яд и канцероген: нуклеиновый аппарат клеток печени при остром отравлении (сообщение 5)

третьи — от анатомических ориентиров (поперечной складки). По мнению автора данной работы, протяженность ЭПСТ должна быгть максимальной независимо от показаний к данной операции, за исключением так на-зытаемой диагностической папиллосфинктертомии, проводимой исключительно с целью идентификации устья холедоха. По наблюдениям автора среди неполных рассечений БДС эффективность вмешательства едва достигает 35% (42 из 120), а уровень рестенозов в первые два года — 17% (20 из 120). При максимально проведенной ЭПСТ происходит своеобразная инвагинация слизистой оболочки ДПК (на фоне ее избыточности) в просвет общего желчного протока, что препятствует формированию рестеноза. Основными критериями адекватности ЭПСТ автор считает визуализацию просвета холедоха и увеличение угла, образуемого папиллотомом и стенкой ДПК, до близкого к прямому. Среди пациентов с адекватно проведенной ЭПСТ эффективность вмешательства достигала 88,3% (1231 из 1445), а уровень ре-

стенозов в первые два года 0,8% (12 из 1445). Столь низкий уровень рестенозов связан с вышеописанной инвагинацией слизистой оболочки ДПК в просвет дисталь-ного отдела общего желчного протока.

Таким образом, оптимальным торцевым папилло-томом является папиллотом с диаметром электрода 0,3 мм. Препаровка БДС должна, по возможности, проводиться от его основания к устью, при этом целесообразно пользоваться эндопротезированием его ампулы. ЭПСТ во всех случаях, кроме формирования доступа к устью холедоха для выполнения ЭРХПГ, должна проводиться максимально. Основными критериями адекватности служит визуализация просвета холедоха и образования прямого угла между папиллотомом и слизистой оболочкой ДПК. Адекватность ЭПСТ целесообразно проверять с помощью ультразвукового исследования, но при возникновении сомнений следует проводить ЭРХПГ.

SOME ASPECTS OF ENDOSCOPIC SPHINCTEROTOMY AND CORRESPONDING CONTROL

V.V.Yurchenko

l and diagnostic methods for evaluation of the corresponding length of endoscopic sphincterotomy.

2.

3.

ЛИТЕРАТУРА

Бааааыкин А. С. Эндоскопическая абдоминальная хирургия. - М.: ИМА-пресс, 1996. - 152 с. Иванов Ю.В. Интрадукгальное введение даларгина и рибонуклеазы в комплексном лечении острого панкреатита // Внутрипросветная эндоскопическая хирургия: Сб. тез. Рос. сиМп. - М„ 1998. - С.46-47. Мирингоф А.П., Антюхин К.Э., Миляев Е.М. Устройство для проведения высокочастотной электрохирургической эндоскопической папиллосфинктертомии с применением тока высокой частоты в моно- и биполярном режиме // Сб. тез. 6 московского между-Са^-нгресса по эндоскопич. хирургии. - М., 2002. -

4. Наседкин К., Воленко А.В. Новые технологии в профилактике осложнений эндоскопической папилло-сфинктертомии // Сб. тез. 6 московского междунар. С2з6?есса по эндоскопич. хирургии. - М., 2002. -

5. Нуртдинов М.А., Галимов О.В., Гололобов Ю.Н. и др. Новые возможности использования сандостатина в лечении острого панкреатита // Сб. тез. 6 московского ме02д-С25Т1ресса по эндоскопич. хирургии. - М.,

6. Лапкин К.В., Малярчук В.И, Базилевич Ф.В. и др. Прецизионная хирургия доброкачественных заболеваний

желчевыводящих протоков / Новые технологии в диагностике и хирургии органов билиопанкреато-дус^деналыной зоны: Сб. тр. междунар. конф. — М., 1995.

7. Лузин В.А. Интрадуоденальная лимфотропная антибиотико- и иммунотерапия как профилактика осложнений эндоскопической ретроградной панкреатохолангиографии и эндоскопической папилло-сфинктертомии: Авторефер. дис... канд. мед. наук. - М., 1999. - 25 с.

8. Сандаков П.Я., Дьяченко М.И., Самарцев В.А. Профилактика послеоперационного панкреатита при эндоскопических вмешательствах на БДС / Осложнения эндоскопической хирургии: Сб. тр. Рос. симпоз. - М„ 1996. - С.217-218.

9. Martin D.F., England R.., Martin O. The safety sphinctero-tome // The devise the technique and preliminary results Endoscopy. - 1998. - Vol. 30, № 4. - P375-378.

10. Cotton P.B., Williams C.B. Endoscopic Retrog io-pancreatography. — Humberg: Wilson-INC, 1998. - 183 с.

11. Testoni P.A., Lella F., Bagnolo F. et al. Controlled trial of different dosages of octreotide in the prevention of hyper-amylasemia induced by endoscopic papillosphincterotomy // ml. J. Gastroentrol. - 1994. - Vol. 26, № 9. - Р.43Г-436.

© ОСИПЕНКО Б.Г., ПОЛЯКОВА Л.О. -

НИТРОЗОДИМЕТИЛАМИН

Б.Г. Осипенко, Л.О. Полякова

Резюме. Интерес к изучению состояния нуклеинового аппарата клеток печени обусловлен возникновением эффектов угнетения синтеза белков в гепатоцитах при остром отравлении НДМА [6]. Определяющее значение нуклеиновых кислот в процессах синтеза белков требовало детального исследования содержания внутриклеточных ДНК и РНК, которое отражает состояние обмена нуклеиновых кислот, их деполимеризацию и синтез, а также белково-синтези-рующую активность.

Ключевые слова. Печень, повреждение, генетический материал.

В настоящее время экспериментально при остром отравлении НДМА показана только повреждаемость полирибосомального материала. Косвенным доказательством повреждения ядерного генетического материала в этих условиях могли быгть эффекты торможения синтеза белков и РНК в ядре [6].

Материалы и методы

В работе использовали беспородный белых крыс весом 180-200 граммов. Вводили животным НДМА внутрибрю-шинно в дозе 30 мг/кг (DL50). Материал для исследования брали через каждые 2 часа с момента затравки до 36 часов интоксикации (к этому времени в печени всех подопыгт-ных крыс формировались децентролобулярные некрозы). В каждой временной группе использовали 12 животных.

В клетках печени цитоспектрофотометрическим методом определено содержание ДНК, ядерных и цитоплазма-тических РНК (3), а также седиментационный профиль рибосом [5]. В работе использовали цитоспектрофотомер на базе микроскопа МБИ-15, имеющий в качестве источника света стабилизированную по напряжению ртутно-кварцевую лампу СВД- 120А, и фотометрируемое поле = 0,5 мк. Содержание ДНК определяли в препаратах толщиной 7 мк после экстракции РНК рибонуклеазой фиры «Flika» (Швейцария). Содержание РНК исследовали после экстракции ДНК дезоксирибонуклеазой фирмы «Koch-liqht labor Ltd» (Англия). В препарате, полученном от каждого животного, исследовали 50 клеток центролобулярных областей и 50 — периферических зон печени. В каждой клетке производили измерения НК в пяти фотометрируе-мых полях. Седиментационный профиль полирибосом исследовали с помощью ультрацентрифугирования гомоге-натов в градиенте плотности сахарозы [2]. В работе исполь-

за более длительное время [4].

Не вдаваясь в настоящем разделе в анализ причин деполимеризации нуклеиновых кислот, отметим, что повреждение структуры внутриклеточных ДНК и РНК, ведущее к их деградации, является, по-видимому, одним из основных моментов в развитии феномена торможения белковых синтезов в печени при отравлении НДМА. Это особенно справедливо для ДНК, незначительные изменения первичной или вторичной структуры которой могут вызывать полное торможение бел-ково-синтезирующей активности клеток.

Не менее важным следует считать и выявляемые сравнительно рано после введения НДМА признаки повреждения ядерных РНК. Они занимают ключевые позиции в регуляции генетических функций ДНК и в переносе информации с ДНК на рибосомы.

Сравнение величин цитоспектрофотометрических измерений содержания нуклеиновых кислот в клетках различных областей печеночных долек показало, что в периферических зонах лобул изменения происходили менее интенсивно. При этом, в период возникновения центролобулярных некрозов в периферических отделах долек содержание ДНК в клетках превышало уровень контроля. Подчеркнем, что в этих условиях не обнару-

Рис. 1. Содержание ДНК (  РНК в ядре ( А А) и в цитоплазме гепатоцитов ( + центролобулярных ( Щ ) и периферических (  ) отделов долек печени при остром отравлении НДМА в дозе 30 мг/кг. Результаты выфажены в % к

контролю. Статистически достоверные данные при р < 0,05.

зовали ультрацентрифугу VAC-601 и сканирующий денситометр фирмы «1аСО». Морфологическое исследование проводили после окраски гистологических препаратов гематоксилин-эозином. Во всех случаях использовали фиксацию по Карнуа.

Математическую обработку препаратов вытолняли по Стьюденту по специальной программе на языке «Алгол-60».

Результаты и обсуждения

Согласно цитоспектрофотометрическим данным, содержание ДНК в гепатоцитах центролобулярных зон долек снижалось к шестому часу интоксикации и в последующем это снижение прогрессировало

Наиболее значительная убыль ДНК обнаруживалась в период развития некроза (в нелизированных клетках) и в последние предшествующие ему часы. В гепатоци-тах, локализованных в периферических отделах пече-

ночных долек, уменьшение содержания ДНК можно быто видеть с 8 до 18 часов интоксикации, т.е. времени формирования первый некрозов. С 22 по 30 часы интоксикации содержание ДНК в клетках этих зон возрастало. Когда процесс деградации клеток распространялся из центра долек на интермедиарные отделы, содержание ДНК снижалось и в краевык зонах лобул. Количество РНК в ядрах гепатоцитов центролобулярных зон уменьшалось уже через 2 часа после введения НДМА.

Это снижение прогрессировало вплоть до лизиса клеток. В ядрах периферических отделов долек эти изменения быти менее выфаженныши. Аналогичная направленность изменений была выявлена со стороны цитоплазматических РНК. Однако первые достоверные

0,4 -

0,3 -

o.i

о

КШТРОДЬ

Г"

НДМА 4 ЧАСА MP

ВД1А 24 ЧАСА

MP

ПР

Рис. 2. Седиментационный профиль рибосом печени крысы к концу 4-го и 24-го часов после введения НДМА в дозе 30 мг/кг. (Препаративное ультрацентрифугирование проведено в линейном градиенте сахарозы — 10-40% при 105000g. Градиентный анализ выполнен с помощью абсорбционного монитора иА-5 и прибора для фракционирования градиентов плотности модели 640 фирмы «КСО»: МР — монорибосомы; ОР — олигорибосомы; ПР — полирибосомы).

результаты были получены только к 4-му часу после введения НДМА.

Отметим, что развитие указанных выше изменений и повреждение полирибосомального аппарата, которое известно в литературе как один из ранних признаков воздействия НДМА на внутриклеточные структуры печени, совпадали во времени. Достаточно выраженная дисагрегация полирибосом при воздействии НДМА обнаруживалась к концу 4-го часа после введения (рис. 2).

Согласно полученным данным, повреждение нуклеинового аппарата печеночных клеток при воздействии НДМА происходило почти одновременно в ядре и в цитоплазме. Такие данные о седиментационном профиле рибосом, (рис. 2), давали возможность считать, что это явление обусловлено, в основном, процессом деполимеризации. Одно ингибирование синтеза нуклеиновых кислот, имеющее место при интоксикации НДМА приводило бы к развитию подобного эффекта

живались фигуры митозов. Такие данные указывали на то, что синтез ДНК в клетках периферических зон мог не прекращаться. Но в постсинтетический период не происходило расхождение хромосом, что приводило к формированию полиплоидных клеток.

Такая полиплоидизация не являлась компенсаторным процессом [1], поскольку интенсификация функциональной активности гепатоцитов, равно как и белковых синтезов, свойственная такому феномену, невозможна в условиях резкого снижения содержания РНК в ядрах и цитоплазме клеток [4].

В совокупности результаты цитоспектрофотометри-ческого исследования содержания нуклеиновых кислот, и седиментационного анализа полирибосом позволяют считать, что ингибирование синтеза белков в гепа-тоцитах при отравлении НДМА опосредовано деполимеризацией ядерных РНК и ДНК и деградацией поли-рибосомального материала.

DIMETYLNITROSAMINE - HEPATOTROPIC POISON AND CANCEROGEN: NUCLEIC APPARATUS OF CELLS OF LIVER IN ACUTE POISONING

B.G.Osipenko, L.O.Polyakova

The interest to study of condition of nucleic cells of a liver is stipulated by origin of effects of depressing of synthesis of fibers in hepatocyties for acute poisoning H^MA [6]. The defining significance of nucleic acids during synthesis of fibers required detail research of the contents of intracellular DNA and RNA, which reflect condition of exchange nucleic acids, their depolymerisation and synthesis, and also their protein-synthesizing activity.

ЛИТЕРАТУРА

1. Бродский В.Я. Трофика клетки. — М.: Наука, 1966. — 4.

2. Allinqton R, Brokke M., Nelson J.

itimum conditions for CO Applications Res.

Bullenin. — 1996. — vol. 22 — P.1-15. 3. Einarsson L. On the theory of qallocyanin-chromolum stainq

'imation of basophilia 1951. - Vol. 28; №1.

Allinqton R Brokke M., Nelson J. Opti hiqh-resolutuon qradient analisis // ISC Bullenin. - 1996 - Vol. 22 - P.1-/15. Einarsson L. On the theory of qallocyani and its application for quantitative estimation of basophilia a patol. et microbial., Scand. -

5.

- P.82-102.

Kieb J., NowellR., Tomkins Y. Turnover of ribosomal RNA in rat liver // Science. - 2003. - Vol. 249, №№ 5688. -P.1093-1095.

Kleihues P., Doerjer Y., Swanberg J. RNA repair as requlato-ry factor in the organotropy or alkylating carcinoqens // Arch. Toxicol. - 1979. - Syppb. 2, №> 2. - P.253-261. Magee P. Toxicity of nitrosamines their possible hyman health hazards // Food and Cosmetics Toxicol. - 1977. -Vol. 9, №№ 2. - P.207-218.