ШТАММЫ И СПОСОБЫ ДЛЯ ПРОДУЦИРОВАНИЯ ГЕМСОДЕРЖАЩИХ БЕЛКОВ

1. Клетка, содержащая:
первую экзогенную конструкцию нуклеиновой кислоты, содержащую нуклеотидную последовательность, кодирующую белок аминолевулинатсинтазу (ALAS), функционально связанную с первым промоторным элементом, где ALAS содержит по меньшей мере первый отвечающий на гем мотив (HRM), и где ALAS содержит мутацию в первом HRM; и
вторую экзогенную конструкцию нуклеиновой кислоты, содержащую нуклеотидную последовательность, кодирующую гемсвязывающий белок,
где вторая экзогенная конструкция нуклеиновой кислоты, содержащая нуклеотидную последовательность, кодирующую гемсвязывающий белок, функционально связана с первым промоторным элементом или функционально связана со вторым промоторным элементом.
2. Клетка по п.1, где клетка представляет собой клетку гриба или дрожжевую клетку.
Pichia pastoris
3. Клетка по п.2, где дрожжевая клетка представляет собой клетку .
4. Клетки по любому из пп.1-3, где мутация в первом HRM представляет собой мутацию с цистеина на другую аминокислоту.
5. Клетка по любому из пп.1-4, где белок ALAS содержит второй HRM и где белок ALAS содержит мутацию во втором HRM.
6. Клетка по п.5, где мутация во втором HRM представляет собой мутацию с цистеина на другую аминокислоту.
7. Клетка по п.5, где для мутации в первом HRM и мутации во втором HRM другая аминокислота является одной и той же.
8. Клетка по п.5, где для мутации в первом HRM и мутации во втором HRM другая аминокислота не является одинаковой.
9. Клетка по любому из пп.4-8, где другая аминокислота выбрана из группы, состоящей из аргинина, гистидина, лизина, серина, треонина, аспарагина, глутамина, селеноцистеина, глицина, пролина, аланина, изолейцина, лейцина, метионина, глутаминовой кислоты, аспарагиновой кислоты, фенилаланина, триптофана, тирозина и валина.
10. Клетка по любому из пп.4-8, где другая аминокислота выбрана из неполярной алифатической аминокислоты, ароматической аминокислоты, полярной незаряженной аминокислоты или положительно заряженной аминокислоты.
11. Клетка по любому из пп.4-9, где другая аминокислота представляет собой серин.
12. Клетка по любому из пп.4-9, где другая аминокислота представляет собой аланин.
13. Клетка по любому из пп.4-9, где другая аминокислота представляет собой фенилаланин.
14. Клетка по любому из пп.4-9, где другая аминокислота представляет собой гистидин.
15. Клетка по любому из пп.1-14, где первая экзогенная конструкция нуклеиновой кислоты содержит последовательность нуклеиновой кислоты, обладающую по меньшей мере 90% идентичностью последовательности с последовательностью нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 28.
16. Клетка по любому из пп.1-15, где белок ALAS содержит аминокислотную последовательность, обладающую по меньшей мере 90% идентичностью последовательности с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 29.
17. Клетка по любому из пп.1-16, где гемсвязывающий белок выбран из группы, состоящей из глобина, цитохрома, цитохром c оксидазы, лигниназы, каталазы и пероксидазы.
18. Клетка по любому из пп.1-16, где гемсвязывающий белок представляет собой леггемоглобин.
19. Клетка по любому из пп.1-16, где гемсвязывающий белок содержит аминокислотную последовательность, обладающую по меньшей мере 90% идентичностью последовательности с аминокислотной последовательностью под любым из SEQ ID NO: 1-27.
20. Способ продуцирования гемсвязывающего белка в клетке, включающий:
экспрессию первой экзогенной конструкции нуклеиновой кислоты, содержащей нуклеотидную последовательность, кодирующую белок аминолевулинатсинтазу (ALAS), функционально связанную с первым промоторным элементом, где ALAS содержит по меньшей мере первый отвечающий на гем мотив (HRM), и где ALAS содержит мутацию в первом HRM; и
экспрессию второй экзогенной конструкции нуклеиновой кислоты, содержащей нуклеотидную последовательность, кодирующую гемсвязывающий белок,
где вторая экзогенная конструкция нуклеиновой кислоты, содержащая нуклеотидную последовательность, кодирующую гемсвязывающий белок, функционально связана с первым промоторным элементом или функционально связана со вторым промоторным элементом.
21. Способ по п.20, где способ обеспечивает продуцирование гемсвязывающего белка в титре, который по меньшей мере на 5% превышает титр в соответствующем способе без первой экзогенной конструкции нуклеиновой кислоты.
22. Способ по п.20 или 21, где способ обеспечивает продуцирование гемсвязывающего белка в титре, который по меньшей мере на 10% превышает титр в соответствующем способе без первой экзогенной конструкции нуклеиновой кислоты.
23. Способ по п.20, где способ обеспечивает продуцирование гемсвязывающего белка в титре, который по меньшей мере на 5% превышает титр в соответствующем способе без мутации в первом HRM.
24. Способ по п.20, где способ обеспечивает продуцирование гемсвязывающего белка в титре, который по меньшей мере на 10% превышает титр в соответствующем способе без мутации в первом HRM.
25. Способ по любому из пп.20-24, где способ проводят в отсутствии добавленного метанола.
26. Способ по любому из пп.20-25, где мутация в первом HRM представляет собой мутацию с цистеина на другую аминокислоту.
27. Способ по любому из пп.20-26, где белок ALAS содержит второй HRM и где белок ALAS содержит мутацию во втором HRM.
28. Способ по п.26, где способ обеспечивает продуцирование гемсвязывающего белка в титре, который по меньшей мере на 5% превышает титр в соответствующем способе без мутаций в первом HRM и втором HRM.
29. Способ по п.26, где способ обеспечивает продуцирование гемсвязывающего белка в титре, который по меньшей мере на 10% превышает титр в соответствующем способе без мутаций в первом HRM и втором HRM.
30. Способ по любому из пп.27-29, где мутация во втором HRM представляет собой мутацию с цистеина на другую аминокислоту.
31. Способ по п.30, где для мутации в первом HRM и мутации во втором HRM другая аминокислота является одной и той же.
32. Способ по п.30, где для мутации в первом HRM и мутации во втором HRM другая аминокислота не является одинаковой.
33. Способ по любому из пп.26-32, где другая аминокислота выбрана из группы, состоящей из аргинина, гистидина, лизина, серина, треонина, аспарагина, глутамина, селеноцистеина, глицина, пролина, аланина, изолейцина, лейцина, метионина, аспарагиновой кислоты, глутаминовой кислоты, фенилаланина, триптофана, тирозина и валина.
34. Способ по любому из пп.26-33, где другая аминокислота представляет собой серин.
35. Способ по любому из пп.26-33, где другая аминокислота представляет собой аланин.
36. Способ по любому из пп.26-33, где другая аминокислота представляет собой фенилаланин.
37. Способ по любому из пп.26-33, где другая аминокислота представляет собой гистидин.
38. Способ по любому из пп.20-37, где первая экзогенная конструкция нуклеиновой кислоты содержит последовательность нуклеиновой кислоты, обладающую по меньшей мере 90% идентичностью последовательности с последовательностью нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 28.
39. Способ по любому из пп.20-38, где белок ALAS содержит аминокислотную последовательность, обладающую по меньшей мере 90% идентичностью последовательности с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 29.
40. Способ по любому из пп.20-39, где гемсвязывающий белок выбран из группы, состоящей из глобина, цитохрома, цитохром c оксидазы, лигниназы, каталазы и пероксидазы.
41. Способ по любому из пп.20-39, где гемсвязывающий белок представляет собой леггемоглобин.
42. Способ по любому из пп.20-39, где гетерологичный гемсвязывающий белок содержит аминокислотную последовательность, обладающую по меньшей мере 90% идентичностью последовательности с аминокислотной последовательностью под любым из SEQ ID NO: 1-27.