ВАРИАНТЫ КИСЛОЙ АЛЬФА-ГЛЮКОЗИДАЗЫ И ИХ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ

1. Усеченный полипептид GAA, который содержит делецию по меньшей мере одной аминокислоты с N-конца родительского полипептида GAA, где родительский полипептид соответствует форме предшественника полипептида GAA, свободной от ее сигнального пептида,
где указанный усеченный полипептид GAA имеет от 1 до 75 последовательных аминокислот, удаленных на его N-конце, по сравнению с родительским полипептидом GAA, и
где указанный усеченный полипептид GAA дополнительно содержит сигнальный пептид, слитый с его N-концом.
2. Усеченный полипептид GAA по п. 1, где указанный усеченный полипептид GAA имеет от 1 до 75 последовательных аминокислот, удаленных на его N-конце, по сравнению с родительским полипептидом GAA, в частности 6, 7, 8, 9, 10, 40, 41, 42, 43, 44, 45 или 46 последовательных аминокислот, удаленных на его N-конце, по сравнению с родительским полипептидом GAA, даже более конкретно 8, 42 или 43 последовательные аминокислоты, усеченные на его N-конце, по сравнению с родительским полипептидом GAA.
3. Усеченный полипептид GAA по п. 1 или 2, где родительский полипептид представляет собой GAA человека (hGAA), в частности hGAA, имеющую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 1 или в SEQ ID NO: 33, в частности в SEQ ID NO: 1, или hGAA, которая представляет собой функциональный вариант hGAA, имеющей аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 1 или в SEQ ID NO: 33, в частности в SEQ ID NO: 1.
4. Усеченный полипептид GAA по любому из пп. 1-3, где усеченный полипептид GAA имеет аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 34 или SEQ ID NO: 35.
5. Усеченный полипептид GAA по любому из пп. 1-4, в котором указанный слитый сигнальный пептид выбирают из группы, состоящей из SEQ ID NO: 3 - 7, в частности сигнальный пептид с SEQ ID NO: 3.
6. Молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая усеченный полипептид GAA по любому из пп. 1-5, указанная молекула нуклеиновой кислоты, в частности, представляет собой нуклеотидную последовательность, оптимизированную для того, чтобы усовершенствовать экспрессию и/или усовершенствовать иммунологическую толерантность для усеченного полипептида GAA in vivo, например, последовательность нуклеиновой кислоты, приведенную в SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13 SEQ ID NO: 48, SEQ ID NO: 49, SEQ ID NO: 50 или SEQ ID NO: 51.
7. Конструкция нуклеиновой кислоты, которая содержит молекулу нуклеиновой кислоты по п. 6, которая содержит указанную молекулу нуклеиновой кислоты, функционально связанную с промотором, в частности промотором, который представляет собой специфический промотор печени, предпочтительно выбранный в группе, состоящей из промотора α-1-антитрипсина (hAAT), промотора транстиретина, промотора альбумина и промотора тироксинсвязывающего глобулина (TBG), где указанная конструкция нуклеиновой кислоты дополнительно необязательно содержит интрон, в частности интрон, выбранный в группе, состоящей из интрона β-глобина b2 человека (или HBB2), интрона FIX, интрона β-глобина курицы и интрона SV40, где указанный интрон необязательно представляет собой модифицированный интрон, такой как модифицированный интрон HBB2 из SEQ ID NO: 17, модифицированный интрон FIX из SEQ ID NO: 19 или модифицированный интрон β-глобина курицы из SEQ ID NO: 21.
8. Конструкция нуклеиновой кислоты по п. 7, которая содержит, предпочтительно в этом порядке: энхансер; интрон; промотор, в частности специфический промотор печени; последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую белок GAA; и сигнал полиаденилирования, конструкция содержит, предпочтительно в этом порядке: управляющую область ApoE; интрон HBB2, в частности модифицированный интрон HBB2; промотор hAAT; последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую усеченный полипептид GAA; и сигнал полиаденилирования бычьего гормона роста, указанная конструкция нуклеиновой кислоты более конкретно содержит нуклеотидную последовательность с любой из SEQ ID NO: 22 - 26.
9. Вектор, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты или конструкцию нуклеиновой кислоты по любому из пп. 6-8, который представляет собой вирусный вектор, предпочтительно ретровирусный вектор, такой как лентивирусный вектор, или AAV вектор.
10. Вектор по п. 9, который представляет собой одноцепочечный или двухцепочечный самокомплементарный AAV вектор, предпочтительно AAV вектор с происходящим из AAV капсидом, таким как капсид AAV1, AAV2, варианта AAV2, AAV3, варианта AAV3, AAV3B, варианта AAV3B, AAV4, AAV5, AAV6, варианта AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, например, AAVcy10 и AAVrh10, AAVrh74, AAVdj, AAV-Anc80, AAV-LK03, AAV2i8 и AAV свиньи, например, AAVpo4 и AAVpo6, или с химерным капсидом.
11. Вектор по п. 10, где AAV вектор имеет капсид AAV8, AAV9, AAVrh74 или AAV2i8, в частности капсид AAV8, AAV9 или AAVrh74, более конкретно капсид AAV8.
12. Клетка, трансформированная молекулой нуклеиновой кислоты по п. 6, конструкцией нуклеиновой кислоты по любому из пп. 7-8 или вектором по любому из пп. 9-11, где клетка в частности представляет собой клетку печени или клетку мышцы.
13. Фармацевтическая композиция, которая содержит, в фармацевтически приемлемом носителе, усеченный полипептид GAA по любому из пп. 1-5, молекулу нуклеиновой кислоты по п. 6, конструкцию нуклеиновой кислоты по любому из пп. 7-8, вектор по любому из пп. 9-11 или клетку по п. 12.
14. Усеченный полипептид GAA по любому из пп. 1-5, молекула нуклеиновой кислоты по п. 6, конструкция нуклеиновой кислоты по любому из пп. 7-8, вектор по любому из пп. 9-11 или клетка по п. 12 для применения в качестве лекарственного средства.
15. Усеченный полипептид GAA по любому из пп. 1-5, молекула нуклеиновой кислоты по п. 6, конструкция нуклеиновой кислоты по любому из пп. 7-8, вектор по любому из пп. 9-11 или клетка по п. 12 для применения в способе лечения болезни накопления гликогена, такой как GSDI (болезнь Гирке), GSDII (болезнь Помпе), GSDIII (болезнь Кори), GSDIV, GSDV, GSDVI, GSDVII, GSDVIII и летальная врожденная болезнь накопления гликогена в сердце, более конкретно GSDI, GSDII или GSDIII, даже более конкретно GSDII и GSDIII и наиболее конкретно GSDII.