ИНЪЕКЦИОННАЯ ЛЕКАРСТВЕННАЯ ФОРМА ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ И ПРОФИЛАКТИКИ ЗАБОЛЕВАНИЙ ПЕЧЕНИ У ЖИВОТНЫХ
INJECTION DRUG FORM FOR TREATMENT AND PREVENTION OF LIVER DISEASES IN ANIMALS

Изобретение относится к области фармацевтики и может быть использовано для терапии патологий печени у животных.
Широко известно, что печень является центральным органом метаболизма, в котором совершается большая часть химических процессов, связанных с обменом белков, углеводов, липидов, витаминов и минеральных веществ. Кроме того, печень активно участвует в пищеварении, дезинтоксикации токсических веществ, поступающих из желудочно-кишечного тракта, а также попадающих в организм извне, поддержании гомеостаза и т.д. Поэтому нарушения ее функциональной активности ведет к довольно значительным нарушениям жизнедеятельности организма. Все это делает актуальным поиск эффективных средств или их комбинаций, позволяющих снизить риск возникновения и осуществить эффективную терапию патологий печени, связанных с неблагоприятными факторами окружающей среды. При этом важно, чтобы лекарственные средства были нетоксичны и обладали высокой (увеличенной) биодоступностью.
Флаволигнаны, выделяемые из лекарственного растения расторопши пятнистой (Silybum marianum (L.) Gaerth), относятся к наиболее перспективным препаратам, отвечающим требованиям современной медицины.
Флаволигнаны из расторопши пятнистой являются сильными антиоксидантами и способны инактивировать как свободные радикалы, так и активные формы кислорода в клетке, блокировать рецепторы и транспортные системы на клеточной мембране, которые обеспечивают перенос токсических веществ в клетку, уменьшать активность макрофагальных клеток, участвующих в презентации антигенов, снижать продукцию гамма-глобулинов, блокировать липооксигеназы и циклооксигеназы, тем самым оказывая противовоспалительное, иммуномодулирующее и антиканцерогенное действие.
Наряду с этим, флаволигнаны расторопши, взаимодействуя с мембранами гепатоцитов, способны ингибировать активность цАМФ и кальций зависимого процесса активации фосфолипаз, оказывают цитопротективный эффект на гепатоциты и вызывают репарацию поврежденных клеток печени, что приводит к улучшению как субъективного состояния пациента (улучшение аппетита, общего состояния, процессов пищеварения), так и нормализации клинических анализов: снижению уровня трансаминаз и билирубина.
Указанные выше свойства позволяют использовать препараты, содержащие флаволигнаны расторопши пятнистой, при лечении таких заболеваний печени, как токсические и вирусные гепатиты, цирроз, лекарственные, радиационные и ишемические повреждения, канцерогенез и др. (см. Kren V.,Walterova D.: Silybin and silymarin - new effects on applications, Biomed. Papers, 2005, 149 (1), 29-41).
Однако флаволигнаны обладают низкой терапевтической активностью, которая обусловлена их низкой растворимостью как в гидрофильных, так и в липофильных растворителях. Флаволигнаны, как правило, нерастворимы или минимально растворимы в воде, вследствие чего скорость высвобождения этих соединений и, следовательно, их биологическая доступность и всасываемость в организме неудовлетворительны. Кроме того, низкая растворимость флаволигнанов в воде и биологических жидкостях не позволяет применять их для инъекций или инфузий, что могло бы значительно повысить эффективность терапевтического действия этих препаратов.
Сумму флаволигнанов силибинина, силикристина, силидианина, изосилибинина и дегидросилибинина, выделяемых из лекарственного сырья расторопши, традиционно называют силимарином.
Силимарин является действующим компонентом многих препаратов, используемых для лечения и профилактики заболеваний печени, например, таких как Карсил (синонимы: Левасил, Гепарсил, Легалон, Силибор, Силимарин Гексал) - см. Машковский М.Д. Лекарственные средства. - М., издание пятнадцатое, Новая волна, 2005, т.1. с.526-527 - или Дарсил - см. Дарсил инструкция по применению - Каталог лекарств - адрес в Интернете:
http://vapteke.com.ua/drugs/darsil.darnitsa.php.
Однако известные лекарственные препараты выпускаются в виде таблеток, гранул, драже или капсул, предназначены для перорального введения, обладают низкой терапевтической активностью, а также наличием различного рода побочных эффектов.
Так, Карсил содержит лактозу и сахарозу, и поэтому надлежит соблюдать осторожность при назначении его пациентам с галактоземией, недостаточностью лактозы, синдромом мальабсорбции глюкозы-галактозы, глюкозо-изомальтозным дефицитом.
Входящий в состав продукта сорбитол может вызывать расстройство стула и гастропатию. Наличие пшеничного крахмала в продукте может быть опасно для больных целиакией, а входящий в состав Карсила глицерин может вызывать головную боль и диарею (см. Григорьев П.Я. и др. Диагностика и лечение хронического гепатита и цирроза печени. - Советская медицина, 1985, №12, с.61-67 или Блинков И.Л. и др. Опыт клинического применения гепатопротективного средства Легалон, Симпозиум «Клиническое значение препарата Легалон». - М., 1981, с 113-123).
Задачей изобретения является разработка стабильной инъекционной формы лекарственного средства, содержащего силимарин, которая позволит повысить его биодоступность и снизить побочные эффекты.
Поставленная задача решается тем, что согласно изобретению инъекционная лекарственная форма для лечения и профилактики заболеваний печени у животных содержит силимарин, органический растворитель, солюбилизатор, консервант и сорастворитель при следующем соотношении компонентов, мас.%:
силимарин
1-10
органический растворитель
5-50
солюбилизатор
3-30
консервант
0,01-1
сорастворитель
остальное
При этом в качестве органического растворителя лекарственное средство содержит диметилацетамид, или 1-метил-2-пирролидон, или солюфор P (2-пирролидон), или транскутол, или пропиленгликоль, или этиленгликоль, или глицероформаль, или диметилсульфоксид.
В качестве солюбилизатора лекарственное средство содержит кремофор EL, или кремофор ELP (полиоксиэтилен-глицерол-тригидрокси-тририцинолевт), или кремофор RH40 (полиоксиэтилен-глицерол-тригидрокси-стеарат), или твин 80 (полиоксиэтиленсорбитанмоноолеат), или солютол HS15 (полиэтиленгликоль 660 12-гидрокси-стеарат).
Поставленная задача решается также тем, что в качестве консерванта лекарственное средство содержит бензиловый спирт или парабены.
А в качестве сорастворителя заявленное лекарственное средство содержит дистиллированную воду или раствор смеси водорастворимых витаминов.
В качестве раствора смеси водорастворимых витаминов лекарственное средство содержит витамины В1 тиамин, В2 рибофлавин, ВЗ (РР) никатинамид, В4 холин, В5 пантотеновую кислоту, В6 пиридоксин, В7(Н) биотин, В8 инозит, В9 фолиевую кислоту, В10 -n-аминобензойную кислоту, В11 левокарнитин, В12 цианкобаламин, В13 оротовую кислоту, В15 пангамовую кислоту, В17 амигдалин, С аскорбиновую кислоту, взятые в равных соотношениях.
Кроме того, поставленная задача решается тем, что лекарственное средство дополнительно содержит жирорастворимые витамины А, или Д, или Е, или F в количестве 1-10 мас.%.
Поставленная задача решается также тем, что лекарственное средство дополнительно содержит эссенциальные фосфолипиды в количестве 0,1-10 мас.%.
Лекарственное средство также дополнительно содержит метионин в количестве 0,1-10 мас.%.
Техническим результатом заявленного изобретения является получение стабильной инъекционной формы силимарина с достаточно низкой вязкостью, что позволяет снизить болезненность инъекции.
Изобретение характеризуется следующими примерами, которые не ограничивают объем притязаний заявителя.
Пример 1. Получение инъекционной лекарственной формы для лечения и профилактики заболеваний печени у животных.
Лекарственное средство получают путем смешивания расчетных количеств входящих в его состав компонентов в условиях постоянного термостатирования при температуре 45°C.
Функциональное назначение компонента
Пример компонента
Концентрация компонентов, мас.%
Активно действующее вещество (АДВ)
Силимарин
5
Органический растворитель
Диметилацетамид
25
Солюбилизатор
Кремофор EL
20
Дополнительное АДВ
Витамин E
5
Консервант
Бензиловый спирт
0,5
Сорастворитель
Дистиллированная вода
До 100
Полученный раствор характеризуется следующими показателями:
1. ρ=1,035 г/мл (плотность при 28°C).
2. η=2,038 (относительная вязкость).
3. абсолютная вязкость 1,706 мПа*с, при 28°C.
4. pH 5,13.
5. Установлено, что данный раствор стабилен при 25°C, 4°C, при охлаждении до 18°C раствор замерзает, после размораживания видимых изменений не наблюдается. Под действием света в течение 10 часов изменений в растворе не наблюдалось.
Таким образом, лекарственное средство представляет собой водный раствор гидрофобных экстрактов расторопши пятнистой, для стабилизации которых используют органический растворитель, солюбилизатор и консервант.
В качестве органического растворителя в составе заявленного лекарственного средства были испытаны также 1-метил-2-пирролидон, солюфор P, транскутол, пропиленгликоль, этиленгликоль, глицероформаль и диметилсульфоксид.
В качестве солюбилизатора (поверхностно-активного вещества, способствующего переходу частиц нерастворимых в воде веществ в коллоидный раствор) в составе заявленного лекарственного средства были испытаны также кремофор ELP, кремофор RH40, твин 80 и солютол HS15.
В качестве консерванта в составе заявленного лекарственного средства были испытаны также парабены.
Результаты испытаний показали, что использование в составе заявленного лекарственного средства указанных выше органического растворителя, солюбилизатора и консерванта в соотношениях, приведенных в формуле изобретения, позволяет получить данное лекарственное средство в форме стабильной водной дисперсии, которую очень удобно вводить путем инъекции.
Увеличение содержания растворителя в композиции приводит к увеличению острой токсичности композиции в опытах на мышах и соответственно снижению терапевтического индекса композиции, а также увеличению местных токсических явлений при применении. Данный эффект зависит от типа выбранного растворителя, т.к. связан с токсичностью самого растворителя. Токсичность возрастает в ряду солюфор-диметилацетамид-метилпирролидон.
Уменьшение содержания солюбилизатора приводит к невозможности мицеллообразования в композиции и, как следствие, к расслоению раствора. При увеличении содержания солюбилизатора выше 30%, вязкость композиции поднимается скачкообразно, что серьезно затрудняет ее введение через инъекционные иглы, применяемые в животноводстве.
В качестве сорастворителя в составе заявленного лекарственного средства может быть использована смесь водорастворимых витаминов, которая содержит витамины В1 тиамин, В2 рибофлавин, ВЗ (РР) никатинамид, В4 холин, В5 пантатеновую кислоту, В6 пиридоксин, В7(Н) биотин, В8 инозит, В9 фолиевую кислоту, В10 -n-аминобензойную кислоту, В11 левокарнитин, В12 цианкобаламин, В13 оротовую кислоту, В15 пангамовую кислоту, В17 амигдалин, С аскорбиновую кислоту, взятые в равных соотношениях.
Для обеспечения улучшения работы клеток печени, а также восстановления их (клеточных) стенок, состав предложенной инъекционной формы может быть дополнен жирорастворимыми витаминами A, или Д, или F в количестве 1-10 мас.%, а также эссенциальными фосфолипидами в количестве 0,1-10 мас.%.
Метионин необходим для нормального обмена веществ, обладает гепатопротекторным действием. Метионин активирует действие гормонов, витаминов и ферментов, снижает концентрацию холестерина в крови и увеличивает содержание фосфолипидов, и поэтому может быть введен в состав предложенной инъекционной формы в количестве 0,1-10 мас.%.
Пример 2. Изучение аллергического действия препарата.
Для изучения аллергического действия препарата двум кроликам массой тела ~5 кг, ввели внутримышечно по 0,1 мл (1 мг/кг по ДВ) препарата, полученного по примеру 1 - концентрация силимарина в препарате 50 г/л.
До введения препарата произвели забор крови для общего анализа крови (OAK) - с антикоагулянтом и для биохимическаого анализа крови (БАК).
Волосяной покров на месте введения препарата - область бедра левой задней конечности - выстригли. Через 4 часа повторно взяли кровь для OAK и БАК.
На месте инъекции в первые 4 часа после введения препарата кожных реакций не отмечалось, уплотнения, припухания и другие изменения отсутствовали.
Таблица 1
Общий анализ крови опытных кроликов до введения и через 4 часа после введения заявленного лекарственного средства в дозе 1 мг/кг по ДВ (0,1 мл на кролика)
№
Показатель
Ед.
Кролик
Кролик
Кролик 1
Кролик 2
Норма
п/п
изм
1 до
2 до
после
после
введения
введения
введения
введения
1
RBC
×10<sup>12</sup>/л
5,67
6,03
6,37
5,35
5-8
2
MCV
Фл
65
61
59
57
58-67
3
нет
%
36.6
36,8
37
30,7
33-50
4
WBC
×10<sup>9</sup>/л
12,2
10,0
П,2
6,0
5-12,5
5
HGB
г/л
137
139
134
129
100-
170
6
МСН
пг
24,2
23,1
21,4
24,1
17-24
7
менее
г/л
37,4
37,8
36,2
42,0
29-37
Из приведенных данных видно, что после инъекции препарата резких изменений показателей крови не наблюдалось, они колебались в пределах физиологической нормы.
Пример 3. Изучение местного раздражающего действия заявленного лекарственного средства.
Для изучения местного раздражающего действия препарата проводили конъюнктивальную пробу.
Опыт по определению раздражающего действия препарата на слизистые оболочки ставили на кроликах. В коньюнктивальный мешок левого глаза закапывали по 2 капли полученного препарата, в коньюнктивальный мешок правого глаза аналогично закапывали по 2 капли физиологического раствора. После инсталляции препарата в коньюнктивальный мешок - кроликам через 5 мин, через 24 и 48 ч покраснение конъюнктивы и истечение экссудата у всех кроликов не наблюдалось. Роговица глаза прозрачная, гладкая, без изъязвлений и помутнения.
Контрольное введение также было отрицательным (2 капли физиологического раствора натрия хлорида в коньюнктивальный мешок правого глаза).
Вывод: препарат не обладает местным раздражающим и аллергизирующим свойствами.
Пример 4. Определение острой токсичности полученного препарата.
Для определения острой токсичности был использован препарат, полученный по примеру 1.
Таблица 3
Изучение токсичности полученной инъекционной формы силимарина.
№
Вид
Пол
Доза по
Доза
Количество
Путь
Число
ЛД<sub>50</sub>
п/п
животных
силимарину,
по
препарата,
введения
погибших
(количество
мг/кг
Вит.
мл
животных
n=)
Е, мг/кг
1
Мыши (n=6)
самцы
18
3
0,04
в/б
0
2
Мыши (n=6)
самцы
36
6
0,08
в/б
0
185,4 мг/кг
3
Мыши (n=6)
самцы
130
6
0,27
в/б
0
4
Мыши (n=6)
самцы
180
6
0,37
в/б
4
Все мыши после введения препарата в дозах по силимарину соответственно 18 и 36 мг/кг живой массы остались живы. Токсических явлений не отмечалось.
Таким образом, получена стабильная инъекционная форма лекарственного средства, содержащего силимарин. Инъекционная форма нетоксична, не обладает местным раздражающим и аллергизирующим свойствами, позволит повысить биодоступность силимарина и снизить побочные эффекты.