ОЧИСТКА ФАКТОРА VIII С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ СМОЛЫ СМЕШАННОГО ТИПА ДЕЙСТВИЯ ИЛИ МУЛЬТИМОДАЛЬНОЙ СМОЛЫ

1. Способ очистки белка Фактора свертывания VIII, содержащего одно или более загрязняющих веществ, включающий стадии, на которых:
(a) приводят в контакт белок Фактора VIII с мультимодальной смолой или смолой смешанного типа действия, содержащей лиганды, которые включают гидрофобную часть и отрицательно заряженную часть;
(b) элюируют указанный белок Фактора VIII с помощью элюирующего буфера, содержащего по меньшей мере 1,5 М соли и по меньшей мере 40% (вес/объем) этиленгликоля, пропиленгликоля или их смеси, а также ионы кальция.
2. Способ по п.1, включающий также стадию (с), в ходе которой собирают содержащий Фактор VIII раствор, получаемый в ходе стадии (b).
3. Способ по п.1, включающий также стадию (а1), в ходе которой через колонку после стадии (а) и перед стадией (b) пропускают один или более чем один промывочный буфер.
4. Способ по п.3, где один или более чем один промывочный буфер содержит от 10 мМ до 1000 мМ соли.
5. Способ по п.4, где промывочный буфер содержит 0,5-0,8 М соли.
6. Способ по любому из пп.1-5, где элюирующий буфер на стадии (b) содержит по меньшей мере 2 М соли и по меньшей мере 45% (вес/объем) этиленгликоля, пропиленгликоля или их смеси.
7. Способ по п.6, где элюирующий буфер на стадии (b) содержит 2,3-2,6 М соли и 48-52% (вес/объем) этиленгликоля, пропиленгликоля или их смеси.
4
4
2
4
3
2
4
8. Способ по любому из пп.1-5, где соль, содержащаяся в элюирующем буфере на стадии (b), выбрана из NaCl, NHCl, KCl, (NH)SO, CHCONH или смеси двух или более из них.
9. Способ по п.8, где указанный элюирующий буфер содержит NaCl и этиленгликоль.
10. Способ по п.1, где элюирующий буфер содержит ионы кальция в концентрации от 1 до 100 мМ.
11. Способ по любому из пп.1-5, где стадию (а) осуществляют:
(i) при значении рН, равному рН раствора для загрузки и/или
(ii) без доведения электропроводности.
12. Способ по любому из пп.1-5, где белок Фактора VIII выбирают из группы, включающей: полноразмерный Фактор VIII, FVIII:C, варианты Фактора VIII с делецией В-домена, ПЭГ-илированные производные Фактора VIII, полисиалированные производные Фактора VIII, а также их комбинации, предпочтительно, варианты Фактора VIII с делецией В-домена.
2
13. Способ по любому из пп.1-5, где элюирующий буфер на стадии (b) включает 20 мМ имидазола, 10 мМ CaCl, 0,02% (вес/объем) Tween 80 и 2,5 М NaCl и 8 М этиленгликоля при рН около 7,5.
14. Одностадийный способ очистки белка Фактора VIII, содержащего одно или более загрязняющих веществ, включающий стадии:
a) приведение в контакт белка с мультимодальной смолой, содержащей лиганды, которые включают гидрофобную часть и отрицательно заряженную часть;
b) элюирование указанного белка с помощью элюирующего буфера, содержащего по меньшей мере 1,5 М соли и по меньшей мере 40% (вес/объем) этиленгликоля, пропиленгликоля или их смеси, а также ионы кальция;
где с помощью указанного способа достигается примерно 250-кратное сокращение объема колонки.
15. Одностадийный способ очистки белка Фактора VIII, содержащего одно или более загрязняющих веществ, включающий стадии:
a) приведение в контакт белка с мультимодальной смолой, содержащей лиганды, которые включают гидрофобную часть и отрицательно заряженную часть;
b) элюирование указанного белка с помощью элюирующего буфера, содержащего по меньшей мере 1,5 М соли и по меньшей мере 40% (вес/объем) этиленгликоля, пропиленгликоля или их смеси, а также ионы кальция;
где с помощью указанного способа достигается примерно 30-кратный «коэффициент очистки».
16. Способ стабилизации белка Фактора VIII, включающий стадии:
a) приведение в контакт белка с мультимодальной смолой, содержащей лиганды, которые включают гидрофобную часть и отрицательно заряженную часть;
b) элюирование указанного белка с помощью элюирующего буфера, содержащего по меньшей мере 1,5 М соли и по меньшей мере 40% (вес/объем) этиленгликоля, пропиленгликоля или их смеси, а также ионы кальция.