РЕЦИПИЕНТНЫЙ БЛОК ДЛЯ ПРОИЗВОДСТВА ТКАНЕВЫХ МИКРОЧИПОВ

Относится к области гистологического, иммуно-гистохимического, молекулярно-генетического анализа образцов нормальных и патологических тканей человека или животных и используется для производства тканевых микрочипов - организованных на одном предметном стекле гистологических срезов, включающих образцы тканей, подлежащих анализу в одних условиях.
Известен реципиентный блок для производства тканевых микрочипов по европейскому патенту ЕР 1238286 (G01N 1/31, G01N 35/00, приор. 13.12.2000 г.). Блок представляет собой параллелепипед из парафина с цилиндрическими выемками, заполненными равными выемкам по диаметру кернами (цилиндрами, биоптатами) различных тканей человека или животного. Забор кернов осуществляется из парафиновых препаратов требуемых тканей. Блок предназначен для производства гистологических срезов, включающих образцы всех тканей, подлежащих анализу.
Один блок обычно включает образцы 10-12 тканей в трех-четырех повторах. Для выполнения задач анализа требуется, как правило, набор как минимум 39 тканей, для чего необходимо создание не одного, а нескольких реципиентных блоков с разным набором тканей (обычно 3-4 блока). Для качественного анализа необходимо, чтобы в изготовленном из блока посредством микротомии гистологическом срезе отсутствовали дефекты и артефакты составляющих его образцов тканей. Вместе с тем различные ткани существенно различаются по своим физико-химическим свойствам. Соответственно, при случайном наборе тканей в пределах блока часто возникают проблемы с неравномерностью качества составляющих его компонентов тканей. В процессе изготовления гистологических срезов и помещения их на предметное стекло образцы донорских тканей могут выпадать из среза, деформироваться, крошиться, рваться, смещаться по расположению, накладываться одна на другую. Расположенные ниже по ходу движения микротомного ножа образцы могут быть повреждены вследствие попадания на лезвие частиц от расположенных выше более твердых образцов либо за счет затуплению режущей поверхности лезвия выше расположенными тканями. Это приводит к существенным затруднениям при проведении последующих манипуляций с гистологическими срезами (депарафинизация, окраска тканевых объектов, обработка их многочисленными реагентами) и анализе окрашенных срезов, а также необходимости многочисленных повторов.
Ставится задача создания реципиентного блока, позволяющего производить срезы без потери качества, и повысить повторяемость результатов анализов.
Задача решается за счет того, что в одном реципиентном блоке для производства тканевых микрочипов, представляющем собой прямоугольный параллелепипед из парафина с цилиндрическими выемками, заполненными равными выемкам по диаметру кернами (цилиндрами) различных тканей человека или животного, собирают образцы (керны, биоптаты) тканей из необходимого для анализа набора образцов, наиболее близких друг к другу по характеристикам, которые определяют их поведение при прохождении через них ножа при микротомии.
Ткани должны быть близки в первую очередь, по содержанию жировой ткани, наличие которой существенно усложняет как процесс пробоподготовки, так и микротомиии, иметь сходные характеристики по плотности и вязкости. Подбор для одного блока образцов тканей, имеющих сходные тканевые характеристики (соотношение содержаний в образце паренхимы и стромальной соединительной ткани, которые существенно отличаются по плотности, приводя к неравномерности резки образца ножом микротома), при изготовлении гистологического препарата позволит производить гистологические срезы без существенных потерь качества элементов реципиентного блока. Изготовленные из таких блоков тканевые микрочипы будут содержать необходимые для последующих исследований ткани в пригодном для гистологических, иммуно-гистохимических окрасок, выявления молекулярно-генетических повреждений, а также для анализа и обобщений состояний. Преимущество использования таких тканевых микрочипов состоит в том, что для полноценных разнообразных морфологических исследований требуется меньшее количество гистологических срезов (соответственно, самих микрочипов), при этом существенно сокращение времени на выполнение работ и значительная экономия реагентов, расходных материалов, других ресурсов. Это ведет к повышению качества результатов исследований и последующего их анализа за счет того, что все образцы (биоптаты) тканей обрабатываются одновременно одинаковым способом с использованием установленных (рекомендованных) протоколов (концентрация реагентов, время инкубации, температурные режимы, состав растворов).
На Фиг. 1. Представлена фотография варианта реципиентного блока.
На Фиг. 2. Представлена схема оптимального состава и расположения тканей в пределах блока.
На Фиг. 3. Представлена фотография гистологического среза, окрашенного гистохимически антителами к актину, сделанного с разработанного блока.
На фотографии (фиг. 1) показан реципиентный блок (один из набора блоков, необходимых для выполнения задач анализа, обычно таких блоков создается 3-4) с выемками, которые заполнены равными выемкам по диаметру кернами (цилиндрами) различных тканей человека или животного. Образцы тканей в блоке имеют близкие физико-химические и иные свойства, что позволяет производить гистологические срезы с использованием микротома без потери качества элементов среза.
Одним из блоков такого набора может быть представленный на фиг. 2. Ткани, показанные на фиг. 2, - желудок, тонкий кишечник, толстый кишечник, желчный пузырь, мочевой пузырь, матка (цервикальный канал), матка (эндометрий), кровеносные сосуды, фаллопиева труба и уретра - оптимально сочетаются по этим показателям.
Другим вариантом оптимального сочетания тканей может являться, например, набор из надпочечника, щитовидной железы, гипофиза, поджелудочной железы, паращитовидной железы, слюнной железы, предстательной железы, миндалины, лимфоузла и печени.
На фиг. 3, показывающей микротомный срез с такого блока, приведенного на фиг. 1, видно, что все элементы блока (равные по диаметру выемкам блока образцы тканей) присутствуют на срезе, не деформированы, не смещены, не разорваны и не накладываются одна на другую.
Это достигается выполнением условий, декларируемых в качестве особенностей полезной модели: сочетания в пределах одного блока тканей, близких друг к другу по соотношению паренхимы и стромальной соединительной ткани, количеству жировой ткани, плотности и вязкости, что и позволяет производить гистологические срезы с использованием микротома без потери качества элементов среза.
Поскольку все полученные в процессе работы срезы были хорошего качества, повторяемость результатов анализов была на высоком уровне.