СПОСОБ РАЗМНОЖЕНИЯ РАСТЕНИЙ ФРИТИЛЛЯРИЙ МЕТОДОМ КУЛЬТУРЫ in vitro
METHOD OF FRITILLARY PLANT PROPAGATION BY METHOD OF CULTURE in vitro

Изобретение относится к области декоративного садоводства и может быть использовано для массового размножения растений рода фритиллярия.
Известен способ размножения фритиллярий in vitro (Paek K.Y., Murthy H.N. High frequency of bulblet regeneration from bulb scale sections of Fritillaria thunbergii //Plant Cell, Tiss. and Org. Cult. 2002. - №68. - p. 247-252). В качестве первичного экспланта использовали луковичные чешуи, которые культивировали на среде Мурасиге и Скуга с добавлением 1,62 мкМ α-нафтилуксусной кислоты и 4,65 мкМ кинетина. Затем микролуковицы культивировали при 5°С в течение 5 недель. Для адаптации микролуковицы переносили в смесь сфагнового мха, перлита и вермикулита в соотношении 1:1:1. Недостатком данного способа является необходимость постоянного использования регуляторов роста для получения максимального коэффициента размножения.
Технический результат заключается в постоянном высоком выходе растительного материала при минимальных воздействиях регуляторов роста.
Технический результат достигается тем, что в способе размножения фритиллярий in vitro, включающем стерилизацию эксплантов, посадку на питательную среду Данстена и Шорта, отделение микролуковиц от эксплантов, их укоренение и адаптацию в сфагновом мхе, регуляторы роста для индукции побегообразования применяются только на начальных этапах культивирования, экспланты культивируют на среде Данстена и Шорта с добавлением регуляторов роста 5 мкМ 6-бензиламинопурина и 2 мкМ α-нафтилуксусной кислоты, затем отделяют микролуковицы от экспланта и культивируют на среде Данстена и Шорта без регуляторов роста при температуре 24°С, укореняют и адаптируют полученные микролуковицы в пластиковых контейнерах с крышками в сфагновом мхе в темноте при температуре 7°С.
Способ осуществляется следующим образом.
Луковицы фритиллярий разделяют на чешуи, которые используют в качестве эксплантов. После этого чешуи луковиц стерилизуют, разрезают на четыре части и помещают на питательную среду Данстена и Шорта, содержащую 6 г/л агара, 30 г/л сахарозы и регуляторы роста - 5 мкМ 6-бензиламинопурина и 2 мкМ α-нафтилуксусной кислоты. Последующее культивирование микролуковиц осуществляют на среде Данстена и Шорта без регуляторов роста. Подобранная экспериментально питательная среда обеспечивает оптимальные условия для массового размножения микролуковиц (табл.1). Культивирование осуществляют при освещении 3 клк 16 ч свет/8 ч темнота при температуре 24°С. Выращивание эксплантов на агаризованной питательной среде Данстена и Шорта без добавления регуляторов роста в течение 4 недель культивирования обеспечивает максимальное число микролуковиц 4,1 шт/эксплант и высокий процент регенерации 47,7%.
Полученные микролуковицы разделяют друг от друга и помещают в пластиковые контейнеры, заполненные сфагновым мхом, содержат в холодильнике в течение двух месяцев при температуре 7°С. Эти условия были выбраны как наиболее оптимальные для укоренения и адаптации микролуковиц (табл.2). После укоренения и холодовой обработки растения переносят в почву и выращивают обычным способом.
Таблица 1
Регуляторы роста
Регенерация,%
Количество побегов на эксплант, шт.
Без регуляторов роста
47,7
4,1±0,2
5 мкМ 6-бензиламинопурина
40,5
3,3±0,6
5 мкМ 6-бензиламинопурина и 2 мкМ α-нафтилуксусной кислоты
37
4,2±0,6
10 мкМ 6-бензиламинопурина и 2 мкМ α-нафтилуксусной кислоты
47,1
3,1±0,5
5 мкМ тидиазурона и 2 мкМ α-нафтилуксусной кислоты
30,3
3,9±1,4
10 мкМ тидиазурона и 2 мкМ α-нафтилуксусной кислоты
42,9
3,6±1,2
Таблица 2
Способ выращивания
Температура,°С
Процент укоренения
Культивирование in vitro
24
70
Культивирование in vitro
7
85
Культивирование в сфагновом мхе
24
15
Культивирование в сфагновом мхе
7
90
В результате использования предложенного способа удается достигнуть высоких показателей размножения растительного материала при минимальном воздействии регуляторов роста. Инициацию побегообразования достигали на среде Данстена и Шорта с содержанием регуляторов роста 5 мкМ 6-бензиламинопурина и 2 мкМ α-нафтилуксусной кислоты. Дальнейшее культивирование микролуковиц на среде без регуляторов роста при температуре 24°С обеспечивает высокие показатели размножения, выращивание микролуковиц в сфагновом мхе в темноте при температуре 7°С приводит к 100% укоренению растений.