ГРАНУЛЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ В КЛЕТОЧНОЙ КУЛЬТУРЕ, И СПОСОБЫ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ

1. Способ получения гранулированной клеточной культуральной среды, включающий:
a) обработку первого сухого порошка суспензией в восходящем столбе газа в аппарате с псевдоожиженным слоем и центрифугирование в дисковом роторе;
b) внесение растворителя и/или второго сухого порошка в аппарат с псевдоожиженным слоем на этапе (a) так, чтобы происходило образование гранул; и
c) высушивание гранул,
причем первый сухой порошок, второй сухой порошок или растворитель содержит связующее вещество, вспомогательное вещество или их оба.
2. Способ получения гранулированной клеточной культуральной среды по п. 1, отличающийся тем, что первый сухой порошок с этапа (a) предварительно смачивают и, необязательно, на этапе (b) не вносят растворитель.
3. Способ получения гранулированной клеточной культуральной среды по п. 1 или 2, отличающийся тем, что первый и второй сухие порошки являются одинаковыми.
4. Способ получения гранулированной клеточной культуральной среды по п. 1 или 2, отличающийся тем, что первый и второй сухие порошки являются разными.
5. Способ получения гранулированной клеточной культуральной среды по любому из предыдущих пунктов, отличающийся тем, что первый сухой порошок выбран из группы, состоящей из порошка базальной среды, порошка полной среды, подпитки, добавки, концентрата среды или подпитки и смеси аминокислот, которые могут способствовать культивированию клетки в культуре.
6. Способ получения гранулированной клеточной культуральной среды по любому из предыдущих пунктов, отличающийся тем, что второй сухой порошок выбран из группы, состоящей из порошка базальной среды, порошка полной среды, подпитки, добавки, концентрата среды или подпитки и смеси аминокислот, которые могут способствовать культивированию клетки в культуре.
7. Способ получения гранулированной клеточной культуральной среды по любому из предыдущих пунктов, отличающийся тем, что связующее вещество или вспомогательное вещество выбрано из группы, состоящей из сахара, природного вещества, синтетического вещества и полусинтетического вещества.
8. Способ получения гранулированной клеточной культуральной среды по п. 7, отличающийся тем, что природное вещество представляет собой микрокристаллическую целлюлозу.
9. Способ получения гранулированной клеточной культуральной среды по п. 7, отличающийся тем, что сахар выбран из группы, состоящей из глюкозы, сахарозы, трегалозы, моносахарида, дисахарида и олигосахарида.
10. Способ получения гранулированной клеточной культуральной среды по п. 9, отличающийся тем, что % композиции глюкозы в грануле составляет от около 0,1 до около 100%.
11. Способ получения гранулированной клеточной культуральной среды по любому из предыдущих пунктов, отличающийся тем, что размер указанной гранулы составляет от около 0,05 мм до 7 мм.
12. Способ получения гранулированной клеточной культуральной среды по п. 11, отличающийся тем, что размер указанной гранулы составляет или от около 0,05 мм до около 0,5 мм, или от около 0,05 мм до около 1 мм, или от около 0,05 мм до около 2 мм, или от около 0,05 мм до около 3 мм, или от около 0,05 мм до около 4 мм, или от около 0,05 мм до около 5 мм, или от около 0,05 мм до около 6 мм, или от около 0,05 мм до около 0,1 мм, или от около 0,05 мм до около 0,2 мм, или от около 0,05 мм до около 0,3 мм, или от около 0,05 мм до около 0,4 мм, или от около 0,1 мм до около 1 мм, или от около 0,1 мм до около 2 мм, или от около 0,1 мм до около 3 мм, или от около 0,1 мм до около 4 мм, или от около 0,1 мм до около 5 мм, или от около 0,1 мм до около 6 мм, или от около 0,5 мм до около 1 мм, или от около 0,5 мм до около 2 мм, или от около 0,5 мм до около 3 мм, или от около 0,5 мм до около 4 мм, или от около 0,5 мм до около 5 мм, или от около 0,5 мм до около 6 мм, или от около 0,5 мм до около 7 мм, или от около 1 мм до около 2 мм, или от около 1 мм до около 3 мм, или от около 1 мм до около 4 мм, или от около 1 мм до около 5 мм, или от около 1 мм до около 6 мм, или от около 1 мм до около 7 мм.
13. Способ получения гранулированной клеточной культуральной среды по любому из предыдущих пунктов, отличающийся тем, что размер указанной гранулы больше чем около 0,1 мм, или больше чем около 0,2 мм, или больше чем около 0,3 мм, или больше чем около 0,4 мм, или больше чем около 0,5 мм, или больше чем около 0,6 мм, или больше чем около 0,7 мм, или больше чем около 0,8 мм, или больше чем около 0,9 мм, или больше чем около 1 мм, или больше чем около 2 мм.
14. Способ получения гранулированной клеточной культуральной среды по любому из предыдущих пунктов, отличающийся тем, что дисковый ротор вращается с разными скоростями.
15. Способ получения гранулированной клеточной культуральной среды по любому из предыдущих пунктов, отличающийся тем, что растворитель вносят на этапе (a) посредством тангенциального впрыскивания, верхнего впрыскивания или нижнего впрыскивания.
16. Способ получения гранулированной клеточной культуральной среды по любому из предыдущих пунктов, отличающийся тем, что скорость растворителя, вносимого на этапе (a), составляет от около 1 г/мин до около 30 г/мин.
17. Способ получения гранулированной клеточной культуральной среды по п. 16, отличающийся тем, что скорость растворителя, вносимого на этапе (a), составляет около 5 г/мин.
18. Способ получения гранулированной клеточной культуральной среды по любому из предыдущих пунктов, отличающийся тем, что температура входящего газа составляет от около 20ºC до 30ºC.
19. Способ получения гранулированной клеточной культуральной среды по п. 18, отличающийся тем, что температура входящего газа составляет около 25ºC.
20. Способ получения гранулированной клеточной культуральной среды по любому из предыдущих пунктов, отличающийся тем, что температуру гранулы поддерживают на уровне от около 20ºC до 30ºC.
21. Способ получения гранулированной клеточной культуральной среды по любому из предыдущих пунктов, отличающийся тем, что температуру высушивания гранулы составляет от около 50ºC до 60ºC.
22. Способ получения гранулированной клеточной культуральной среды по любому из предыдущих пунктов, отличающийся тем, что гранулу высушивают до влагосодержания от около 0,5% до 3%.
23. Способ получения модуля гранулированного базового порошка, включающий:
a) обработку первого сухого порошка суспензией в восходящем столбе газа в аппарате с псевдоожиженным слоем и центрифугирование в дисковом роторе;
b) внесение растворителя и, необязательно, второго сухого порошка в аппарат с псевдоожиженным слоем на этапе (a) так, чтобы происходило образование гранул модуля базового порошка; и
c) высушивание гранул,
причем первый сухой порошок, второй сухой порошок или растворитель содержит связующее вещество, вспомогательное вещество или их оба.
24. Способ получения модуля гранулированного базового порошка по п. 23, отличающийся тем, что модуль выбран из группы, состоящей из одного или более растворимых в воде витаминов, одного или более растворимых в кислотах витаминов, одного или более растворимых в нейтральных жидкостях витаминов, одной или более растворимых в кислотах аминокислот, одной или более растворимых в основаниях аминокислот, одной или более растворимых в нейтральной воде аминокислот, одной или более растворимых в воде неорганических солей, одной или более растворимых в кислотах неорганических солей, одного или более сахаров, одного или более растворимых в кислотах следовых элементов, одного или более растворимых в спиртах полиаминов, одного или более растворимых в спиртах липидов или одной или более буферных солей.
25. Способ получения модуля гранулированного базового порошка по пп. 23, 24, отличающийся тем, что растворимый в воде или растворимый в кислотах или основаниях, или нейтральных жидкостях витаминный модуль, растворимый в воде или растворимый в кислотах или основаниях, или нейтральных жидкостях аминокислотный модуль или растворимый в воде или растворимый в кислотах или основаниях, или нейтральных жидкостях солевой модуль содержит по меньшей мере одно нерастворимое в воде вспомогательное вещество или нерастворимое в воде связующее вещество или их оба.
26. Гранулы, полученные по любому из пп. 1-25.
27. Гранулированная клеточная культуральная среда, подпитка, добавка или присадка, содержащая одну или более аминокислот, одно или более связующих веществ и один или более следовых компонентов.
28. Гранулированная клеточная культуральная среда, подпитка, добавка или присадка по п. 27, дополнительно содержащая витамины.
29. Гранулированная клеточная культуральная среда, подпитка, добавка или присадка по пп. 27, 28, отличающаяся тем, что витамины выбраны из одного или более из витамина B12, биотина, холина, фолиевой кислоты, ниацинамида, пиридоксина, рибофлавина, тиамина, аскорбиновой кислоты, пара-аминобензойной кислоты (PABA) и т. д.
30. Гранулированная клеточная культуральная среда, подпитка, добавка или присадка по пп. 27-29, дополнительно содержащая соли.
31. Гранулированная клеточная культуральная среда, подпитка, добавка или присадка по п. 30, отличающаяся тем, что соли выбраны из одной или более буферных солей, солей железа, цинка, кальция, меди, магния, марганца, аммония, ванадия и т. д.
32. Гранулированная клеточная культуральная среда, подпитка, добавка или присадка по пп. 27-31, отличающаяся тем, что аминокислоты выбраны из одной или более из двадцати аминокислот, их солей или производных.
33. Гранулированная клеточная культуральная среда, подпитка, добавка или присадка по пп. 27-31, отличающаяся тем, что аминокислоты выбраны из одной или более аминокислот из глицина, аланина, аргинина, аспарагиновой кислоты, глутаминовой кислоты, гистидина, изолейцина, метионина, фенилаланина, пролина, гидроксипролина, серина, треонина, триптофана, валина, тирозина, цистеина и лизина.
34. Гранулированная клеточная культуральная среда, подпитка, добавка или присадка по пп. 27-31, отличающаяся тем, что связующие вещества выбраны из группы, состоящей из сахара, природного вещества, синтетического вещества и полусинтетического вещества, микрокристаллической целлюлозы, глюкозы, сахарозы, трегалозы, моносахарида, дисахарида и олигосахарида, вспомогательных веществ и/или разрыхлителей.
35. Гранулированная клеточная культуральная среда, подпитка, добавка или присадка по пп. 27-34, отличающаяся тем, что связующие вещества представляют собой микрокристаллическую целлюлозу и глюкозу.
36. Гранулированная клеточная культуральная среда, подпитка, добавка или присадка по пп. 27-35, отличающаяся тем, что % композиции связующего (их) вещества (еств) в грануле составляет от около 0,1 до около 100%.
37. Гранулированная клеточная культуральная среда, подпитка, добавка или присадка по пп. 27-36, отличающаяся тем, что % композиции связующего (их) вещества (еств) в грануле составляет от около 30 до около 60%.
38. Гранулированная клеточная культуральная подпитка по пп. 27-37, содержащая одно или более из 25-40% аминокислот, 20-65% связующих веществ, 1-5% витаминов, 2-10% солей, 0,01-0,05% следовых компонентов.
39. Гранулированная клеточная культуральная подпитка по п. 38, содержащая одно или более из 31-32% аминокислот, 59-60% связующих веществ, 25% витаминов, 6-7% солей, 0,01-0,05% следовых компонентов.
40. Гранулированная клеточная культуральная подпитка по п. 39, отличающаяся тем, что связующее вещество представляет собой D-глюкозу.
41. Способ получения гранулы питательной среды, гранулы питательной среды с добавками, гранулы подгруппы питательной среды или гранулы буфера, включающий: обработку сухой порошковой среды, добавки, подгруппы среды или буфера среды растворителем и/или порошком и образование гранулы с помощью вращающегося диска в псевдоожиженном слое, причем гранула содержит связующее вещество или вспомогательное вещество.
42. Способ получения гранулы питательной среды, гранулы питательной среды с добавками, гранулы подгруппы питательной среды или гранулы буфера по п. 41, отличающийся тем, что связующее вещество или вспомогательное вещество впрыскивают посредством растворителя или вмешивают в сухой порошок.
43. Способ получения гранулы питательной среды, гранулы питательной среды с добавками, гранулы подгруппы питательной среды или гранулы буфера по пп. 41-42, отличающийся тем, что указанный сухой порошок выбран из группы, состоящей из одной или более растворимых в воде групп, одной или более растворимых в основаниях групп, одной или более растворимых в кислотах групп, одной или более растворимых в кислотах реактивных групп, одной или более растворимых в спиртах групп, одной или более растворимых в спиртах реактивных групп и одной или более pH-модифицирующих групп.
44. Способ получения гранулы питательной среды, гранулы питательной среды с добавками, гранулы подгруппы питательной среды или гранулы буфера по пп. 41-43, отличающийся тем, что растворимая в воде группа выбрана из группы, состоящей из витаминов, объемных неорганический солей и сахаров.
45. Способ получения гранулы питательной среды, гранулы питательной среды с добавками, гранулы подгруппы питательной среды или гранулы буфера по пп. 41-44, отличающийся тем, что сахар представляет собой D-глюкозу.
46. Гранулы, полученные способами по пп. 41-45.
47. Способ получения гранулы для культивирования клеток, включающий:
приготовление микросуспензии сухой порошковой среды или модуля;
экструдирование микросуспензии через экструдирующее устройство для образования капель;
высушивание капель до гранул.
48. Гранулы, полученные способом по п. 47.
49. Применение гранул, полученных способами по любому из предыдущих пунктов, для культивирования клетки.
50. Применение по п. 49, отличающееся тем, что клетка выбрана из группы, состоящей из клеток эукариот, прокариот, животных, растений, грибов, водорослей, насекомых, дрожжей, или клетку используют для культивирования вируса или вирусной частицы.
51. Применение по пп. 49, 50, отличающееся тем, что клетка представляет собой клетку животного.
52. Применение по пп. 49, 50, отличающееся тем, что клетка представляет собой клетку млекопитающего.
53. Применение по п. 52, отличающееся тем, что клетка млекопитающего выбрана из группы, состоящей из CHO, BHK, HEK, 293, VERO и т. д.
54. Способ культивирования клетки в жидкости, восстановленной из гранулы по пп. 26-40, 46 или 48, включающий:
i) восстановление гранулы в подходящей жидкости или буфере; причем указанная гранула представляет собой клеточную культуральную среду, подпитку, добавку или концентрат;
ii) культивирование клетки в восстановленной жидкости в условиях, благоприятных для роста клетки.
55. Способ по п. 54, отличающийся тем, что клетка выбрана из группы, состоящей из клеток эукариот, прокариот, животных, растений, грибов, водорослей, насекомых, дрожжей, или клетку используют для культивирования вируса или вирусной частицы.
56. Способ культивирования клетки по пп. 54, 55, отличающийся тем, что клеточную культуру используют для получения повышенного количества полипептида.
57. Способ культивирования клетки по п. 56, отличающийся тем, что полипептид представляет собой рекомбинантный полипептид.
58. Способ культивирования клетки по пп. 54, 55, отличающийся тем, что культивирование повышает выработку продукта, повышая клеточный рост, по сравнению с культурой с жидкой средой, не полученной из гранул.
59. Набор, содержащий:
i) первый контейнер, содержащий одну или более гранул по пп. 26-40, 46 или 48;
ii) инструкции по применению гранулы.
60. Система, содержащая жидкую среду, восстановленную из гранулы по пп. 26-40, 46 или 48, и клетку.
61. Система по п. 60, отличающаяся тем, что клетка выбрана из группы, состоящей из клеток эукариот, прокариот, животных, растений, грибов, водорослей, насекомых, дрожжей, или клетку используют для культивирования вируса или вирусной частицы.
62. Система по пп. 60 и 61, отличающаяся тем, что восстановленную из жидкой среды используют для культивирования клетки, которая вырабатывает рекомбинантный полипептид, вирус, секретируемый белок, или клетки в суспензии или прикрепленной клетки.