СПОСОБ ЭЛЕКТРОХИМИЧЕСКОЙ ИДЕНТИФИКАЦИИ ЦЕЛЕВЫХ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ НУКЛЕОТИДОВ

1. Способ электрохимической идентификации целевых последовательностей нуклеотидов, причем указанный метод соответствует типу, по которому:
- обеспечивают биологический образец, который может содержать заданную целевую последовательность нуклеотидов;
- обеспечивают активируемые средства амплификации, содержащие свободные нуклеотиды для того, чтобы вызывать репликацию указанной заданной целевой последовательности нуклеотидов и образование копируемых целевых последовательностей нуклеотидов;
- обеспечивают соединение, способное к окислению-восстановлению, которое может вступать в реакцию с указанными нуклеотидами, и указанное соединение, способное к окислению-восстановлению, приводят в контакт с указанным биологическим образцом;
- активируют указанные активируемые средства амплификации;
- прикладывают электрическое поле к указанному образцу, чтобы активировать указанное соединение, способное к окислению-восстановлению, и измеряют электрический ток, представляющий электрохимическую активность указанного соединения, способного к окислению-восстановлению, который проходит через указанный образец; и
- определяют присутствие указанной заданной целевой последовательности нуклеотидов, если электрический ток уменьшается;
отличающийся тем, что обеспечивают соединение, способное к окислению-восстановлению, способное к интеркаляции в ходе репликации между нуклеотидами, образующими указанные копируемые целевые последовательности, причем указанные копируемые целевые последовательности вызывают ингибирование электрохимической активности указанного интеркалированного соединения, способного к окислению-восстановлению, благодаря которому уменьшается электрический ток.
2. Способ идентификации по п.1, отличающийся тем, что активируемые средства амплификации активируют согласно последовательным циклам амплификации и тем, что при каждом цикле амплификации указанная копируемая целевая последовательность удваивается.
3. Способ идентификации по п.2, отличающийся тем, что число циклов амплификации, соответствующее уменьшению электрического тока, регистрируют, чтобы определить концентрацию указанной целевой последовательности нуклеотидов в указанном образце.
4. Способ идентификации по п.1, отличающийся тем, что он также содержит следующие стадии:
- указанному образцу сообщают тепловую энергию для того, чтобы вызвать освобождение указанного интеркалированного соединения, способного к окислению-восстановлению, и прикладывают электрическое поле к указанному образцу, чтобы одновременно регистрировать изменения электрического тока, который проходит через указанный образец; и
- количество тепловой энергии Q, соответствующее максимальным изменениям электрического тока, которые регистрируют, определяют, чтобы идентифицировать природу указанной заданной целевой последовательности нуклеотидов.
5. Способ идентификации по п.4, отличающийся тем, что указанному образцу сообщают такую тепловую энергию, чтобы вызвать постепенное увеличение температуры указанного образца.
6. Способ идентификации по п.5, отличающийся тем, что указанное постепенное увеличение температуры происходит между 40°С и 98°С.
7. Способ идентификации по п.1, отличающийся тем, что электрический ток, представляющий электрохимическую активность указанного соединения, способного к окислению-восстановлению, измеряют при заданной температуре указанного образца.
8. Способ идентификации по п.5 или 6 и 7, отличающийся тем, что заданная температура заметно ниже, чем температура указанного образца, соответствующая заданному количеству тепловой энергии Q.
9. Способ идентификации по п.1, отличающийся тем, что используют вольтамперометрию для измерения указанного электрического тока.
10. Способ идентификации по п.9, отличающийся тем, что используют квадратно-волновую вольтамперометрию.
11. Способ идентификации по п.1, отличающийся тем, что подаваемое указанное соединение, способное к окислению-восстановлению, представляет собой комплекс переходного металла.
12. Способ идентификации по п.11, отличающийся тем, что указанное соединение, способное к окислению-восстановлению, имеет по меньшей мере один лиганд, интеркалирующийся в последовательность нуклеиновой кислоты.
13. Способ идентификации по п.11 или 12, отличающийся тем, что указанное соединение, способное к окислению-восстановлению, имеет дипиридофеназиновый лиганд.
14. Способ идентификации по п.11, отличающийся тем, что указанное соединение, способное к окислению-восстановлению, имеет по меньшей мере один бипиридиновый лиганд.
15. Способ идентификации по п.1, отличающийся тем, что вызывают репликацию указанной заданной целевой последовательности нуклеотидов и образование копируемых целевых последовательностей нуклеотидов в форме двойных цепей нуклеиновых кислот.
16. Способ идентификации по п.1, отличающийся тем, что указанные активируемые средства амплификации имеют тип ПЦР.
17. Комплект для электрохимической идентификации целевых последовательностей нуклеотидов, причем указанный комплект содержит:
- средства (12, 14) для приема биологического образца, который может содержать заданную целевую последовательность нуклеотидов;
- активируемые средства амплификации, содержащие свободные нуклеотиды для того, чтобы вызвать репликацию указанной заданной целевой последовательности нуклеотидов и образование копируемых целевых последовательностей нуклеотидов;
- соединение, способное к окислению-восстановлению, которое может вступать в реакцию по отношению к указанным нуклеотидам, причем указанное соединение, способное к окислению-восстановлению, приводят в контакт с указанным биологическим образцом;
- средства активации (32, 34, 36) для активации указанных активируемых средств амплификации;
- средства (20, 22, 24, 26, 28, 36) для приложения электрического поля к указанному образцу таким образом, чтобы активировать указанное соединение, способное к окислению-восстановлению, и средства для измерения электрического тока, представляющего электрохимическую активность указанного соединения, способного к окислению-восстановлению, который проходит через указанный образец; и
- средства (24, 36) для определения присутствия указанной заданной целевой последовательности нуклеотидов, если электрический ток уменьшается;
отличающийся тем, что указанное соединение, способное к окислению-восстановлению, выбрано из соединений, способных к интеркаляции в ходе репликации между нуклеотидами, образующими указанные копируемые целевые последовательности, причем указанные копируемые целевые последовательности вызывают ингибирование электрохимической активности указанного интеркалированного соединения, способного к окислению-восстановлению, благодаря которому уменьшается электрический ток.
18. Комплект для идентификации по п.17, отличающийся тем, что указанные средства активации (32, 34, 36) пригодны для активации указанных активируемых средств амплификации согласно последовательным циклам амплификации, чтобы удваивать указанную копируемую целевую последовательность при каждом цикле амплификации.
19. Комплект для идентификации по п.18, отличающийся тем, что он также содержит средства регистрации (36) для регистрации числа циклов амплификации, соответствующих уменьшению электрического тока, чтобы определять концентрацию указанной целевой последовательности нуклеотидов в указанном образце.
20. Комплект для идентификации по любому из пп.17-19, отличающийся тем, что он также содержит:
- средства (32) сообщения указанному образцу тепловой энергии, чтобы вызвать высвобождение указанного интеркалированного соединения, способного к окислению-восстановлению, и средства (20, 22, 24, 26, 28, 36) для приложения электрического поля к указанному образцу так, чтобы одновременно регистрировать изменения электрического тока, который проходит через указанный образец; и
- средства определения количества тепловой энергии, соответствующей максимальным изменениям электрического тока, которые регистрируют, чтобы идентифицировать природу указанной заданной целевой последовательности нуклеотидов.