СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КАЧЕСТВА ЭЯКУЛЯТА У МУЖЧИН ПО АКТИВНОСТИ КРЕАТИНФОСФОКИНАЗЫ В СПЕРМАЛЬНОЙ ПЛАЗМЕ
METHOD FOR DETERMINING QUALITY OF EJACULATE IN MALES BY ACTIVITY OF CREATINE PHOSPHOKINASE IN SEMINAL PLASMA

Изобретение относится к медицине, а именно к клинической лабораторной диагностике, андрологии, репродуктологии, и может быть использовано для оценки качества эякулята у мужчин.
Лабораторное исследование эякулята является неотъемлемой частью обследования мужчины для определения его фертильности. Заключение о реальной репродуктивной способности мужчины можно дать лишь по факту наступления беременности. Анализ эякулята не дает однозначного ответа о мужской фертильности, но является важным индикатором его вероятного фертильного потенциала [1]
Основным методом лабораторной диагностики мужского бесплодия является проведение исследования эякулята согласно руководства ВОЗ (5 издание, 2010 г.) [2].
Недостатком данного способа является то, что он направлен на оценку лишь морфологических характеристик сперматозоидов (их концентрация, подвижность, аномалии морфологии). Помимо этого, субъективность данного метода зачастую делает результаты исследований невоспроизводимыми и малосходимыми.
Известен способ оценки качества эякулята по содержанию сперматозоидов с гидроксиметилированной ДНК, заключающийся в проведении иммунофлуоресцентного анализа гидроксиметилированной ДНК в индивидуальных сперматозоидах [3].
Недостатком способа является длительная трудоемкая пробоподготовка (более 24 часов), применение специализированного оборудования и реактивов, сложность и субъективность интерпретации результатов; необходимость использования в анализе 5000 сперматозоидов (что представляется невозможным при тяжелых формах патозооспермий).
Известен способ диагностики мужского бесплодия, заключающийся в определении в образцах эякулята концентрации триклозана [4].
Недостатком данного способа является его трудоемкость, необходимость специализированного оборудования (газового хроматографа, масс-спектрометра), невозможности установления конкретного типа патозооспермии, возможность применения только для диагностики токсической формы мужского бесплодия.
Известен способ определения активности креатинфосфокиназы (КФК) в спермальной плазме при различных морфофункциональных состояниях [5], однако в указанной работе отсутствуют интервалы значений активности креатинфосфокиназы в зависимости от концентрации сперматозоидов в эякуляте по данным спермограммы. Данный способ принят за прототип.
Целью предлагаемого изобретения является разработка способа определения качества эякулята у мужчин по активности КФК в спермальной плазме для улучшения диагностики мужского бесплодия.
Это достигается тем, что интерпретацию результатов проводят следующим образом: активность креатинфосфокиназы более 362,3 Е/л соответствует нормозооспермии; от 167,0 до 362,3 Е/л включительно соответствует олигозооспермии; от 109,4 до 167,0 Е/л включительно соответствует криптозооспермии; активность КФК ниже 109,4 Е/л включительно соответствует азооспермии по данным спермограммы.
Использование предлагаемого способа не требует проведения инвазивных манипуляций, не подразумевает субъективности интерпретации результатов, способ является быстрым и доступным для лечебно-профилактических учреждений, в которых проводятся биохимические исследования.
Критериальные значения активности КФК в спермальной плазме определены нами при обследовании 123 пациентов; на первом этапе проводили исследование эякулята согласно руководству ВОЗ (5 издание, 2010 г.), в дальнейшем, согласно данным спермограммы исследуемые были разделены на 4 группы: пациенты с нормозооспермией (n=61), с азооспермией (n=48), с криптозооспермией (n=9), с азооспермией (n=5). Всем включенным в исследование было проведено биохимическое исследование спермальной плазмы согласно предлагаемому способу. Оказалось, что имеются достоверные различия в активности КФК в спермальной плазме у пациентов при различном состоянии эякулята. В таблице 1 представлена активность КФК в спермальной плазме в зависимости от состояния эякулята.
Проведенный корреляционный анализ выявил достоверные умеренные корреляционные связи активности КФК с концентрацией сперматозоидов в эякуляте (коэффициент корреляции Спирмена составил 0,356; р=0,001).
На фигуре 1 представленны данные ROC-анализа, где А - ROC-кривая, характеризующая зависимость активности КФК в спермальной плазме при нормозооспермии и олигозооспермии (AUC-0,849; р<0,001; пороговое значение: >362,3 Ед/л); В - ROC-кривая, характеризующая зависимость активности КФК в спермальной плазме при олигозооспермии и крипто-/азооспермии (AUC-0,746; р<0,001; пороговое значение: >167,0 Ед/л); С - ROC-кривая, характеризующая зависимость активности КФК в спермальной плазме при криптозооспермии и азооспермии (AUC-0,857; р<0,05; пороговое значение: ≤109,4 Ед/л). Проведенный ROC-анализ продемонстрировал высокую прогностическую способность определения активности КФК в спермальной плазме для определения качества эякулята; позволил установить оптимальные пороговые значение данного показателя и приемлемые уровни чувствительности и специфичности для выбранных пороговых значений, указанный в способе определения качества эякулята у мужчин по активности креатинфосфокиназы в спермальной плазме.
Сущность предложенного метода заключается в следующем: образцы эякулята, полученные путем мастурбации и семяизвержения, собирают в чистый контейнер из пластика; время доставки образцов в лабораторию не превышает 30 минут, во время транспортировки контейнеры с образцами держат при температуре от 20°С до 37°С. Образцы помещают в инкубатор (37°С) для разжижения. После полного разжижения образцы спермы центрифугируют в течение 10 мин при 1000 g. Затем спермальную плазму переносят в чистую пробирку и проводят определение активности КФК на автоматическом биохимическом анализаторе кинетическим методом с последующей оценкой качества эякулята: активность КФК более 362,3 Е/л соответствует нормозооспермии по данным спермограммы; от 167,0 до 362,3 Е/л включительно соответствует олигозооспермии; от 109,4 до 167,0 Е/л включительно соответствует криптозооспермии; активность КФК ниже 109,4 Е/л включительно соответствует азооспермии.
Предлагаемый способ позволяет получить данные о показателях спермограммы у мужчин по активности КФК в спермальной плазме.
Способ поясняется следующими клиническими примерами:
1. Пациент А., 25 лет. Имеет 1 ребенка. Обратился в рамках прегравидарной подготовки. Предлагаемым способом определена активность КФК в спермальной плазме 1349,3 Е/л, что соответствует нормозооспермии (более 362,3 Е/л). По результатам спермограммы установлена нормозооспермия (количество сперматозоидов - 249,9 млн; концентрация сперматозоидов - 119 млн/мл), что подтверждает полученные с помощью предлагаемого способа данные.
2. Пациент К., 28 лет. Детей не имеет. Обратился в рамках прегравидарной подготовки. Предлагаемым способом определена активность КФК в спермальной плазме 350,4 Е/л, что соответствует олигозооспермии (167,0-362,3 Е/л). По результатам спермограммы установлена олигозооспермия (количество сперматозоидов - 7 млн; концентрация сперматозоидов - 1,4 млн/мл), что подтверждает полученные с помощью предлагаемого способа данные.
3. Пациент Б., 31 год. Детей не имеет. Обратился в связи с безуспешными попытками зачатия в течение 3 лет. Клинический диагноз: Первичное бесплодие. Предлагаемым способом определена активность КФК в спермальной плазме 111,1 Е/л, что соответствует состоянию криптозооспермии (109,4-167,0 Е/л). По результатам спермограммы установлена криптозооспермия (количество сперматозоидов - 0,96 млн; концентрация сперматозоидов - 0,6 млн/мл), что подтверждает полученные с помощью предлагаемого способа данные.
4. Пациент С., 28 лет. Детей не имеет. Обратился в связи с безуспешными попытками зачатия в течение 2 лет. Клинический диагноз: Первичное бесплодие. Предлагаемым способом определена активность КФК в спермальной плазме 96,7 Е/л, что соответствует состоянию азооспермии (менее 109,4 Е/л). По результатам спермограммы установлена азооспермия (количество сперматозоидов - 0; концентрация сперматозоидов - 0), что подтверждает полученные с помощью предлагаемого способа данные.
Способ может быть использован в центрах планирования семьи и репродукции.
Источники информации
1. И.В. Виноградов, В.А. Божедомов, М.Ю. Габлия, Л.М. Виноградова, М.М. Ужахов. Способы оценки качества спермы в клинической практике. Вопросы урологии и андрологии. 2013; 2(4): 54-59.
2. World Health Organization. WHO Laboratory Manual for the Examination and processing of human semen. 5th ed. Prepublication version. 2010.
3. Пендина A.A., Ефимова О.А., Парфеньев C.E., Мекина И.Д., Комарова Е.М., Тихонов А.В., Мазилина М.А., Коган И.Ю., Гзгзян A.M., Крапивин М.И., Петровская-Каминская А.В., Чиряева О.Г., Баранов B.C. Способ оценки качества эякулята по содержанию сперматозоидов с гидроксиметилированной ДНК. Патент RU 2673472 С1, 2018.
4. Брюхин Г.В., Чигринец С.В. Способ диагностики мужского бесплодия. Патент RU 2675856 С1, 2018.
5. Гусякова О.А., Мурский С.И., Тукманов Г.В., Комарова М.В. Особенности метаболического состава спермальной плазмы при различных морфофункциональных патологиях эякулята. Клиническая лабораторная диагностика. 2019; 64 (8): 469-476.
Способ определения качества эякулята у мужчин по активности креатинфосфокиназы в спермальной плазме