КОМПОЗИЦИЯ КОФЕЙНОГО НАПИТКА
COFFEE BEVERAGE COMPOSITION

Настоящее изобретение относится к композиции кофе, обладающей гипотензивным действием.
Примеры гипотензивных средств включают различные нейролептические средства, эффективно действующие на систему нервной регуляции, ингибиторы ACE, эффективно действующие на систему нейрогуморальной регуляции, антагонисты AT рецепторов, антагонисты Ca, связанные с системой регуляции вещества сосудистого эндотелия, и гипотензивные диуретики, связанные с системой регуляции жидкостей организма в почках. Однако в существующих условиях фармацевтическое средство, используемое для лечения гипертензии, связано с большими проблемами для пациентов, поскольку нелегко игнорировать его побочные эффекты, несмотря на его признанную удовлетворительную эффективность.
Методы общей терапии для улучшения образа жизни, например лечение диетой, лечение движением и ограничение потребления алкоголя или курения, широко применяют не только для пациентов с повышенным давлением, включая легкие случаи, но также и для пациентов, страдающих от тяжелой гипертензии. Поскольку растет признание значения общей терапии, особенно важным становится исправление пищевых привычек. Существует множество пищевых продуктов, обладающих гипотензивным действием. До настоящего времени проводился активный поиск снижающих кровяное давление веществ, получаемых из пищевых продуктов, и из них был выделен ряд эффективных ингредиентов, или были идентифицированы такие ингредиенты.
Были сообщения о том, что такие эффективные ингредиенты, как хлорогеновая кислота, кофейная кислота, феруловая кислота и т.п., содержащиеся в пищевых продуктах, таких как кофе, обладают отличным гипотензивным действием (Патентные документы 1-3). С другой стороны, есть сообщение, где указывается, что кофейный напиток, о котором известно, что он содержит большое количество хлорогеновых кислот, не был признан как обладающий явным гипотензивным действием, а скорее повышал уровень кровяного давления (непатентный документ 1).
Патентный документ 1: JP-A-2002-363075
Патентный документ 2: JP-A-2002-22062
Патентный документ 3: JP-A-2002-53464
Непатентный документ: Eur. J. Clin. Nutr., 53(11), 831(1999)
В одном объекте настоящего изобретения предлагается композиция кофе, содержащая следующие компоненты (A) и (B):
от 0,01 до 1 вес.% (A) хлорогеновых кислот,
менее 0,1 вес.%, от количества хлорогеновых кислот, (B) гидроксигидрохинона; также предлагается способ получения этой композиции кофе.
Другой объект настоящего изобретения также предлагает композицию растворимого кофе, содержащую следующие компоненты (A) и (B):
от 0,1 до 10 вес.% (A) хлорогеновых кислот,
менее 0,1 вес.%, от количества хлорогеновых кислот, (B) гидроксигидрохинона; также предлагается способ получения этой композиции растворимого кофе.
В еще одном объекте настоящего изобретения предлагается упаковка напитка, содержащая заключенную в ней композицию кофе, содержащую следующие компоненты (A) и (B):
от 0,01 до 1 вес.% из (A) хлорогеновых кислот,
менее 0,1 вес.%, от количества хлорогеновых кислот, (B) гидроксигидрохинона.
Изобретение также предлагает композицию кофе, содержащую от 0,01 до 1 вес.% хлорогеновых кислот, характеризующуюся тем, что при анализе методом высокоэффективной жидкостной хроматографии композиция не демонстрирует никакого существенного пика в пределах относительного времени удерживания от 0,54 до 0,61 относительно галловой кислоты, используемой в качестве ссылочного материала; способ получения композиции; и упаковку напитка, содержащую эту композицию.
В следующем объекте настоящего изобретения обеспечивается также композиция растворимого кофе, содержащая от 0,1 до 10 вес.% хлорогеновых кислот, характеризующаяся тем, что при анализе методом высокоэффективной жидкостной хроматографии композиция не демонстрирует никакого существенного пика в пределах относительного времени удерживания от 0,54 до 0,61 относительно галловой кислоты, используемой в качестве ссылочного материала; и способ получения этой композиции.
На чертежах:
Фиг.1 - хроматограмма Кофе Q, ВЭЖХ (длина волны детекции: 258 нм).
Фиг.2 - хроматограмма Кофе Q, полученная методом ВЭЖХ (длина волны детекции: 288 нм).
Фиг.3 иллюстрирует гипотензивный эффект композиции кофе, не содержащей HHQ (HHQ(-)C), при ее непрерывном введении SHR. HHQ(+)C представляет группу, которой вводили кофе, из которого были удалены нехлорогеновые кислоты.
Фиг.4 иллюстрирует антигипертензивный эффект (систолическое кровяное давление) композиции кофе, не содержащей HHQ (образец), у человека.
Фиг.5 иллюстрирует антигипертензивный эффект (диастолическое кровяное давление) композиции кофе, не содержащей HHQ (образец), у человека.
Задача настоящего изобретения состоит в создании пищевого продукта или напитка, обеспечивающего отличный эффект уменьшения гипертензии, и который можно принимать ежедневно.
Учитывая тот факт, что кофейный напиток не демонстрирует достаточное гипотензивное действие, несмотря на содержание в нем хлорогеновых кислот, авторы настоящего изобретения провели различные исследования взаимосвязи между антигипертензивным эффектом и компонентами кофейного напитка. В результате было обнаружено, что гидроксигидрохинон, содержащийся в кофейном напитке, нарушает гипотензивное действие хлорогеновых кислот. В результате дальнейших исследований было также обнаружено, что композиция кофе, обладающая отличным гипотензивным действием, может быть получена путем поддержания содержания хлорогеновых кислот в кофейном напитке в заданных пределах и снижения содержания гидроксигидрохинона до не более чем заданного количества, являющегося существенно меньшим, чем его обычное содержание.
Композиция кофе по изобретению обладает отличным эффектом уменьшения гипертензии, иными словами, эффектом снижения кровяного давления или эффектом сдерживания повышения кровяного давления, и ее можно употреблять в течение длительного периода времени. Следовательно, композиция кофе по изобретению является полезной в качестве лекарственного средства для уменьшения гипертензии или в качестве пищевого продукта с этикеткой, указывающей, что этот пищевой продукт является эффективным для снижения кровяного давления или сдерживания повышения кровяного давления, или этот пищевой продукт является эффективным для тех, у кого повышенное кровяное давление.
1
2
3
1
2
3
Композиция кофе по изобретению содержит от 0,01 до 1 вес.%, предпочтительно от 0,05 до 1 вес.%, более предпочтительно от 0,1 до 1 вес.% (A) хлорогеновых кислот, с учетом антигипертензивного эффекта, эффекта сдерживания повышения кровяного давления и вкуса. Композиция растворимого кофе по изобретению содержит от 0,1 до 10 вес.%, предпочтительно от 0,5 до 10 вес.%, более предпочтительно от 1 до 10 вес.% хлорогеновых кислот. Композиция содержит, в качестве хлорогеновых кислот (A), (A) монокофеоилхинную кислоту, (A) ферулоилхинную кислоту и (A) дикофеоилхинную кислоту. В качестве монокофеоилхинной кислоты (A) используют, по меньшей мере, одну кислоту, выбранную из 3-кофеоилхинной кислоты, 4-кофеоилхинной кислоты и 5-кофеоилхинной кислоты. В качестве ферулоилхинной кислоты (A) используют, по меньшей мере, одну кислоту, выбранную из 3-ферулоилхинной кислоты, 4-ферулоилхинной кислоты и 5-ферулоилхинной кислоты. В качестве дикофеоилхинной кислоты (A) используют, по меньшей мере, одну кислоту, выбранную из 3,4-дикофеоилхинной кислоты, 3,5-дикофеоилхинной кислоты и 4,5-дикофеоилхинной кислоты. Содержание хлорогеновых кислот можно определить методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). Традиционно используемым средством детекции в анализе ВЭЖХ является УФ-детекция, но можно достичь и более высокочувствительной детекции, используя метод CL (хемилюминисцентной) детекции, EC (электрохимической) детекции или ЖХ-Масс детекции.
Композиция кофе или композиция растворимого кофе по изобретению содержит менее 0,1 вес.% гидроксигидрохинона (B) по отношению к количеству хлорогеновых кислот. Когда количество гидроксигидрохинона по отношению к хлорогеновым кислотам составляет менее 0,1 вес.%, гипотензивный эффект хлорогеновых кислот может проявляться в полной мере. Содержание гидроксигидрохинона, предпочтительно, составляет не более чем 0,03 вес.%, особенно предпочтительно, не более чем 0,01 вес.%. Когда количество гидроксигидрохинона по отношению к хлорогеновым кислотам составляет не более чем 0,01 вес.%, гипотензивное действие хлорогеновых кислот абсолютно не нарушается. Содержание гидроксигидрохинона в композиции по настоящему изобретению может быть равно 0.
Содержание гидроксигидрохинона можно определить методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). УФ-детекцию обычно используют в качестве средства детекции для ВЭЖХ, но можно достичь и более высокочувствительной детекции, используя метод CL (хемилюминисцентной) детекции, EC (электрохимической) детекции или ЖХ-Масс детекции. Определение количества гидроксигидрохинона методом ВЭЖХ можно осуществлять после концентрирования кофейного напитка.
Хотя содержание гидроксигидрохинона можно определить непосредственно при помощи ВЭЖХ, его можно определить путем концентрирования гидроксигидрохинона, содержащегося в композиции кофе или композиции растворимого кофе, любым типом хроматографии с последующим определением количества концентрированной фракции. В случае упаковки напитка предпочтительным является определение количества хлорогеновых кислот и гидроксигидрохинона после добавления к напитку, например, 0,1н. раствора хлористоводородной кислоты для получения кислотного раствора, имеющего pH 3 или менее, сразу после открытия упаковки.
Композиция кофе или композиция растворимого кофе по изобретению, предпочтительно, содержит обычно содержащиеся в кофе компоненты, за исключением того, что она имеет пониженное содержание гидроксигидрохинона.
Композиция кофе по изобретению, предпочтительно, содержит от 30 до 300 мг/100 г, более предпочтительно от 40 до 250 мг/100 г, особенно предпочтительно от 50 до 200 мг/100 г калия в расчете на 100 г композиции кофе. Композиция растворимого кофе по изобретению, предпочтительно, содержит от 20 до 200 мг/1 г, более предпочтительно от 30 до 180 мг/1 г, еще более предпочтительно от 40 до 150 мг/1 г калия, в каждом случае в расчете на 1 г композиции растворимого кофе, с учетом вкуса, который кофе изначально имеет. Для поддержания содержания калия в указанных выше пределах, предпочтительно, чтобы калий решительным образом не удаляли в процессе получения композиции кофе.
Композиция кофе по изобретению, предпочтительно, имеет зольность 280 мг или менее, более предпочтительно 250 мг или менее, еще более предпочтительно 220 мг или менее, и даже еще более предпочтительно 200 мг или менее, каждый раз в расчете на 100 г композиции кофе, с учетом вкуса, который кофе обычно имеет. Зольность можно определить в соответствии с методом, описанным в STANDARD TABLES OF FOOD COMPOSITION IN JAPAN Fourth Revised and Enlarged Edition (p28, published in 1982, edited by Resources Review Commission/THE SCIENCE AND TECHNOLOGY AGENCY OF JAPAN), более конкретно, путем нагревания при 550°C с продолжением сжигания до исчезновения остаточного углерода для достижения постоянного веса. Для поддержания зольности в указанных выше пределах предпочтительно, чтобы операцию, которая может повысить зольность, не осуществляли на стадиях получения композиции кофе, например, операцию обработки сильной щелочью с последующим возвращением pH в нейтральную область при помощи кислоты.
2
2
Композиция кофе по изобретению, предпочтительно, имеет содержание HO (перекись водорода) не более чем 1 ч/млн, более предпочтительно не более чем 0,1 ч/млн, еще более предпочтительно не более чем 0,01 ч/млн, с учетом вкуса, который кофе изначально имеет. Содержание перекиси водорода можно определить при помощи обычно используемого измерителя перекиси водорода, например, высокочувствительного измерителя перекиси водорода “SUPER ORITECTOR MODEL 5” от Central Kagaku Co.
Хотя нет никаких конкретных ограничений в отношении сортов кофейных зерен для использования в композиции кофе по изобретению, можно использовать, например, бразильский, колумбийский, танзанийский кофе, Mocha и т.п. Кофе может быть таких сортов как арабика и робуста. В качестве кофейных зерен можно использовать либо зерна одного сорта, либо смесь двух или более сортов. Никаких конкретных ограничений не предъявляется к способу обжаривания кофейных зерен или к условиям обжаривания, включая температуру обжаривания, и можно использовать обычные способы. Также нет никаких ограничений в отношении способа экстракции из кофейных зерен. Экстракцию осуществляют, например, путем экстрагирования обжаренных или обжаренных и молотых кофейных зерен при помощи воды (от 0 до 100°C) в течение времени от 10 секунд до 30 минут. Примеры способа экстракции включают систему варки, систему эспрессо, систему сифонирования и систему выжимания (через бумагу, фланель или т.п.).
Термин “композиция кофе”, как он использован в настоящем описании, означает композицию напитка, в которой используют 1 г или более, предпочтительно 2,5 г или более, более предпочтительно 5 г или более кофейных зерен в расчете на сырые зерна, на 100 г композиции. Когда композицию кофе по изобретению обеспечивают в виде упаковки напитка, она, предпочтительно, представляет собой композицию одинарной крепости. Термин “одинарная крепость”, как он использован в настоящем описании, означает напиток, который можно употреблять без разбавления в его обычном состоянии после вскрытия упаковки напитка.
2
Композицию кофе или композицию растворимого кофе по изобретению получают путем обработки экстракта обжаренных кофейных зерен адсорбентом для снижения содержания в нем гидроксигидрохинона. Примеры адсорбента включают активированный уголь и обращенно-фазовый носитель. Более конкретно, композицию получают путем добавления адсорбента к экстракту обжаренных кофейных зерен или водному раствору высушенного экстракта обжаренных кофейных зерен, перемешивания полученной смеси при температуре от 0 до 100°C в течение времени от 10 минут до 5 часов и затем удаления адсорбента. Активированный уголь или обращенно-фазовый носитель, служащие в качестве адсорбента, предпочтительно, добавляют, соответственно, в 0,02-1,0 или 2-100-кратном количестве, каждый раз в расчете на вес обжаренных кофейных зерен. Активированный уголь имеет средний размер пор, в области микропор, 5 Ангстрем (Å) или менее, более предпочтительно от 2 до 5 Ангстрем, еще более предпочтительно от 3 до 5 Ангстрем. В настоящем изобретении средний размер пор в области микропор можно определить способом MP (принятым для использования в Sumika Chemical Analysis Service, Ltd. и Toray Research Center, Inc.), как описано в документе (Colloid and Interface Sc., 26, 46(1968)). Предпочтительным типом активированного угля является активированный уголь из скорлупы кокосового ореха, при этом более предпочтительным является активированный уголь из скорлупы кокосового ореха, активированный водяным паром. Примеры коммерчески доступного активированного угля включают “Shirasagi WHc” (продукт от Japan EnviroChemicals, Ltd.), “Taiko CW” (продукт от Futamura Chemical Co., Ltd.) и “KURARAYCOAL GW” (продукт от KURARAY CHEMICAL CO., LTD). Примеры обращенно-фазового носителя включают “YMC·ODS-A“ (продукт от YMC Co., Ltd.) и C18 (продукт от GL Sciences, Inc).
Из вышеперечисленного обработка с использованием активированного угля в качестве адсорбента является предпочтительной, поскольку может селективно снижать содержание гидроксигидрохинона, без уменьшения содержания хлорогеновых кислот, и является выгодной для промышленного использования, более того, она не снижает содержание калия (содержание калия поддерживается на уровне 1/5 или более, более предпочтительно 1/2 или более, в расчете на весовое соотношение).
Активированный уголь, полученный активированием водяным паром, демонстрирует отличный эффект селективного снижения содержания гидроксигидрохинона, без уменьшения содержания хлорогеновых кислот. Более конкретно, использование в качестве сырьевого материала экстракта обжаренных кофейных зерен, содержащего от 0,01 до 1 вес.% хлорогеновых кислот и содержащего в расчете на количество хлорогеновых кислот от 5 вес.% или более гидроксигидрохинона, может обеспечить эффективное получение композиции кофе с пониженным содержанием гидроксигидрохинона. В частности, обработка активированным углем обеспечивает возможность получения композиции кофе с содержанием хлорогеновых кислот 80% или более, и даже 90% или более, в расчете на их содержание в сырьевом материале, и в то же время с пониженным содержанием гидроксигидрохинона.
Содержание гидроксигидрохинона в композиции кофе или композиции растворимого кофе по изобретению можно определить методом высокоэффективной жидкостной хроматографии, в виде пика в пределах относительного времени удерживания от 0,54 до 0,61 относительно галловой кислоты, используемой в качестве ссылочного материала. Следовательно, композицию кофе по изобретению можно определить как композицию кофе, содержащую от 0,01 до 1 вес.% хлорогеновых кислот, отличающуюся тем, что композиция, в анализе методом высокоэффективной жидкостной хроматографии, не имеет никакого существенного пика в пределах относительного времени удерживания от 0,54 до 0,61 относительно галловой кислоты, используемой в качестве ссылочного материала. Композицию растворимого кофе по изобретению можно определить как композицию растворимого кофе, содержащую от 0,1 до 10 вес.% хлорогеновых кислот, отличающуюся тем, что композиция не имеет никакого существенного пика в пределах относительного времени удерживания от 0,54 до 0,61 относительно галловой кислоты, используемой в качестве ссылочного материала. Анализ методом высокоэффективной жидкостной хроматографии, на который ссылаются в приведенных выше определениях, осуществляют в условиях анализа B, описанных ниже.
Для подтверждения того, что композиция кофе по изобретению не имеет никакого существенного пика в пределах относительного времени удерживания от 0,54 до 0,61 относительно галловой кислоты, используемой в качестве ссылочного материала, можно использовать традиционный метод ВЭЖХ. Например, это можно подтвердить путем детекции с использованием градиентного элюирования, используя 0,05M водный раствор уксусной кислоты и раствор 0,05M уксусной кислоты в 100% ацетонитриле в качестве элюентов, колонку ODS и ультрафиолетовый абсорбциометр или т.п.
“Композиция по изобретению не имеет никакого существенного пика в пределах относительного времени удерживания от 0,54 до 0,61 относительно галловой кислоты, используемой в качестве ссылочного материала” означает, что применимо следующее уравнение: S2/S1 < 0,01, где S1 представляет площадь пика раствора 1 ч/млн галловой кислоты на время анализа, и S2 представляет сумму площадей пиков, полученных от компонентов, элюирующих в указанной выше области, при анализе композиции кофе в тех же условиях.
Композиция кофе по изобретению может содержать сахар, такой как сахароза, глюкоза, фруктоза, ксилоза, богатая фруктозой кукурузная патока и полученный из сахара спирт, молочный компонент, антиоксидант, регулятор pH, эмульгатор и отдушку, если это желательно. Примеры молочного компонента включают сырое молоко, цельное молоко, цельное сухое молоко, обезжиренное сухое молоко, сливки, сгущенное молоко без сахара, обезжиренное молоко, частично обезжиренное молоко и сгущенное молоко с сахаром. Композиция кофе по изобретению, предпочтительно, имеет pH от 3 до 7,5, более предпочтительно от 4 до 7, еще более предпочтительно от 5 до 7, с учетом стабильности композиции.
Термин “композиция растворимого кофе” означает измельченный в порошок пищевой продукт, такой как порошок быстрорастворимого кофе и т.п. Порошок быстрорастворимого кофе можно получить традиционным способом. Например, его можно получить распылительной сушкой, т.е. путем распыления кофейного экстракта из форсунки и погружения его в поток горячего воздуха с температурой от 210 до 310°C, образуя, таким образом, пористые и водорастворимые порошкообразные частицы кофе; или сублимационной сушкой, т.е. путем замораживания кофейного экстракта при помощи жидкого азота или холодильника, измельчения замороженного кофейного экстракта, просеивания полученных частиц и сублимации воды в условиях вакуума для снижения содержания воды до 3% или менее.
3
2
Композиция кофе или композиция растворимого кофе по изобретению может быть заключена в контейнер, такой как бутылка из полиэтилентерефталата (PET), банка (алюминиевая или стальная), бумага, стерильный пакет или бутыль (стеклянная), и поставляться в виде упаковки напитка. В этом случае 50-2500-мл упаковку напитка можно получить путем заполнения такого контейнера композицией кофе по изобретению. Композицию растворимого кофе по изобретению можно употреблять после растворения ее в от 25 до 500 мл/г воды или горячей воды. Упаковка напитка, предпочтительно, имеет pH от 5 до 7,5, особенно предпочтительно от 5,4 до 7. Что касается соотношения в композиции упакованного напитка монокофеоилхинных кислот, весовое отношение 4-кофеоилхинная кислота/3-кофеоилхинная кислота, предпочтительно, составляет от 0,6 до 1,2, а весовое отношение 5-кофеоилхинная кислота/3-кофеоилхинная кислота, предпочтительно, составляет от 0,01 до 3. В качестве контейнера предпочтительным является герметичный, не пропускающий кислород контейнер для предотвращения порчи компонентов в кофе. Например, предпочтительной является банка, такая как алюминиевая банка, или стальная банка, или бутыль из стекла. Термин “банка” или “бутыль” также означает герметично закрываемые после вскрытия банку или бутыль, которые снова закрываются крышкой при дальнейшем использовании продукта. Термин “герметичный, не пропускающий кислород контейнер”, как он использован в настоящем описании, означает, что контейнер, предпочтительно, имеет кислородопроницаемость (см·мм/м·день·атом) 5 или менее, более предпочтительно 3 или менее, еще более предпочтительно 1 или менее.
Получение напитков в упаковке обычно требует стерилизационной обработки. После заполнения напитком контейнера, такого как металлическая банка, контейнер, содержащий напиток, затем стерилизуют в условиях, которые определены Законом о Санитарном Контроле Пищевых Продуктов (Food Sanitation Law), если он может выдержать высокотемпературную стерилизацию. Когда контейнер не может выдержать стерилизацию в автоклаве, например, бутыль из полиэтилентерефталата или бумажный контейнер, используют способ стерилизации напитка в условиях стерилизации, подобных тем, которые определены Законом о Санитарном Контроле Пищевых Продуктов, например, подвергая напиток высокотемпературной кратковременной стерилизации на пластинчатом теплообменнике, охлаждая его до заданной температуры и затем загружая его в контейнер. Или можно стерилизовать напиток путем нагревания в стерильных условиях и доведения pH снова до нейтрального значения в стерильных условиях; или стерилизовать напиток путем нагревания в нейтральных условиях и доведения pH снова до кислотного значения в стерильных условиях.
Композиция кофе или композиция растворимого кофе по изобретению содержит хлорогеновые кислоты в количестве, эффективном для уменьшения гипертензии, и, в то же время, имеет пониженное количество гидроксигидрохинона, который нарушает действие хлорогеновых кислот по уменьшению гипертензии, и, таким образом, является полезной в качестве фармацевтической композиции, понижающей кровяное давление или сдерживающей повышение кровяного давления, понижающего кровяное давление напитка или сдерживающего повышение кровяного давления напитка. Она также полезна в качестве напитка с этикеткой, указывающей, что этот напиток используют для снижения кровяного давления или сдерживания повышения кровяного давления, или этот напиток является эффективным для тех, у кого повышенное кровяное давление.
Примеры
Пример 1
(a) Композицию кофе по изобретению получали следующим способом. Быстрорастворимый кофе (“NESCAFFEE CAFEINLESS”, 2,5 г) вводили в колонку, заполненную 500 г наполнителя ODS (октадецилсилилированный силикагель) (“YMC TGEL ODS-A” с размером пор 6 нм и средним размером частиц 150 мкм), с последующим элюированием гидроксигидрохинонсодержащей фракции 6 л 0,5% водного раствора уксусной кислоты и элюированием фракции, содержащей хлорогеновые кислоты и остальные компоненты, 6 л метанола. Из фракции A, содержащей хлорогеновые кислоты и остальные компоненты, метанол удаляли полностью методом сублимационной сушки. Из 2,5 г быстрорастворимого кофе получали 0,933 г фракции A.
(b) Хлорогеновые кислоты и гидроксигидрохинон в композиции кофе анализировали следующим способом. Условия анализа, описанные ниже, указаны как условия анализа A. В качестве аналитического инструмента использовали ВЭЖХ (продукт от Shimadzu Corporation). Каждый компонент для ВЭЖХ имел следующий номер модели: детектор: “SPD-M10A”, печь: “CTO-10AC”, насос: “LC-10AD”, автоматический дозатор: “SIL-10AD” и колонка: “Inertsil ODS-2” 4,6 мм (внутренний диаметр) · 250 мм (длина).
Условия анализа были следующими: объем вводимой пробы: 10 мкл, скорость потока: 1,0 мл/мин, длина волны детекции УФ-абсорбциометра: 325 нм (хлорогеновые кислоты), 290 нм (гидроксигидрохинон), элюент A: раствор 0,05M уксусной кислоты в 3% ацетонитриле, элюент B: раствор 0,05M уксусной кислоты в 100% ацетонитриле.
Условия градиента концентрации
Время
Элюент A
Элюент B
0 минут
100%
0%
20 минут
80%
20%
35 минут
80%
20%
45 минут
0%
100%
60 минут
0%
100%
70 минут
100%
0%
120 минут
100%
0%
1
2
3
Время удерживания (единица: мин) хлорогеновых кислот: (A) монокофеоилхинная кислота: три точки 17,9, 20,4 и 22,0; (A) ферулоилхинная кислота: три точки 22,8, 25,8 и 27,0, и (A) дикофеоилхинная кислота: три точки 32,3, 33,0 и 35,8. На основании рассчитанной согласно этим данным площади определяли содержание (вес.%) хлорогеновых кислот, используя 5-кофеоилхинную кислоту в качестве ссылочного материала.
Время удерживания гидроксигидрохинона: 5,5 минут. На основании полученной согласно этим данным площади определяли содержание гидроксигидрохинона (вес.%), используя гидроксигидрохинон в качестве ссылочного материала.
Содержание гидроксигидрохинона в композиции кофе также можно определить при помощи описанного ниже метода анализа. Следующие условия анализа указаны как условия анализа B. В качестве аналитического инструмента использовали ВЭЖХ (продукт от Hitachi, Ltd.). Каждый компонент для ВЭЖХ имел следующий номер модели: детектор: L-7455, печь: L-7300, насос: L-7100, автоматический дозатор: L-7200, колонка: Inertsil ODS-2, 4,6 мм(внутренний диаметр) Ч 250 мм(длина).
Условия анализа были следующими: объем вводимой пробы: 10 мкл, скорость потока: 1,0 мл/мин, длина волны детекции УФ-абсорбциометра: 258 или 288 нм, элюент A: водный раствор 0,05M уксусной кислоты, элюент B: раствор 0,05M уксусной кислоты в 100% ацетонитриле.
Условия градиента концентрации
Время
Элюент A
Элюент B
0 минут
100%
0%
15 минут
100%
0%
15,1 минут
0%
100%
25 минут
0%
100%
25,1 минут
100%
0%
30 минут
100%
0%
Время удерживания гидроксигидрохинона: 6,8 минут. На основании рассчитанной согласно этим данным площади определяли содержание гидроксигидрохинона (вес.%), используя гидроксигидрохинон в качестве ссылочного материала. Время удерживания галловой кислоты, определенное аналогичным способом, составило 11,5 минут.
Общее количество хлорогеновых кислот и количество гидроксигидрохинона в быстрорастворимом кофе и фракции A, полученной в примере 1(a), показано в таблице 1.
Таблица 1
Общее количество хлорогеновых кислот (мг/г)
Количество гидроксигидрохинона (мг/г)
Быстрорастворимый кофе
54
0,7
Фракция A
145
не определяли
Количество перекиси водорода в композиции кофе по изобретению анализировали при помощи высокочувствительного измерителя перекиси водорода, но количество перекиси водорода не смогли определить, поскольку оно было ниже предела чувствительности прибора. Перекись водорода анализировали следующим способом. Для измерений использовали высокочувствительный измерительный прибор для определения количества перекиси водорода “SUPER ORITECTOR MODEL 5” (продукт от Central Kagaku Corp.). В реакционную камеру измерительного прибора вводили 2 мл пробы, точно отмеренной при помощи пипетки с одной меткой. После того как реакционную камеру герметично закрывали, выбирали нужный диапазон измерений и включали прибор для начала измерений. Как только звучал сигнал, указывающий, что инструмент готов начать измерения, вводили через микрошприц 20 мкл каталазы для ORITECTOR и считывали показываемое прибором значение.
Инструмент калибровали при помощи каждого из стандартных растворов 0,1, 1 и 5 мг/л перекиси водорода.
Для получения стандартного раствора перекиси водорода использовали исходный раствор, полученный разбавлением перекиси водорода (30% водный раствор, специального сорта, продукт от Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) деионизированной водой до 1000 мг/л. Исходный раствор разбавляли экстрагирующим раствором с получением 5 мг/л стандартного раствора перекиси водорода. Используя экстрагирующий растворитель, стандартный раствор 5 мг/л перекиси водорода разбавляли далее экстрагирующим раствором с получением стандартных растворов 1 мг/л и 0,1 мг/л.
Экстрагирующий раствор (0,2M фосфатный буфер, содержащий 0,5% бромата калия, pH 7,0) получали путем растворения 11,0 г дигидрофосфата калия (специального сорта), 44,8 г вторичного кислого фосфата натрия, 12 гидрата (специального сорта), и 5,0 г бромата калия (специального сорта) в деионизированной воде с получением ровно 1 л конечного раствора. Когда полученный экстрагирующий раствор предоставляли для использования, в раствор водили газообразный азот в течение, по меньшей мере, одного часа, в условиях предварительного охлаждения льдом.
Пример 2
Оценка гипотензивного эффекта
i) Материалы и метод испытания
(a) Оценочное испытание начинали после того, как перед этим в течение последовательных пяти дней измеряли кровяное давление у каждого из самцов спонтанно гипертензивных крыс (SHR) возраста 12 недель при помощи коммерчески доступного неинвазивного сфигмоманометра для крыс (изготовлен фирмой Softron Co., Ltd.), чтобы крысы привыкли к сфигмоманометрической операции. Всех этих крыс выращивали в условиях (помещение для содержания в области обитания крыс) комнатной температуры при 25±1°C, относительной влажности 55±10% и освещения в течение 12 часов (от 7:00 до 19:00 часов).
(b) Способ и количество введения: в группе испытания в качестве вещества для введения использовали фракцию A, полученную удалением гидроксигидрохинона из быстрорастворимого кофе. В контрольной группе использовали быстрорастворимый кофе. И фракцию A, и быстрорастворимый кофе растворяли в физиологическом солевом растворе, так чтобы общее вводимое количество хлорогеновых кислот составляло 200 мг/кг. Каждое из этих веществ вводили перорально через оральный зонд. Доза составляла 5 мл/крыса.
(c) Метод испытания: Одна группа состояла из трех-шести SHR. Систолическое кровяное давление в хвостовой артерии измеряли перед пероральным введением и через 12 часов после введения, и на основании этого рассчитывали процентное изменение кровяного давления через 12 часов.
(d) Метод статистической обработки
Результаты измерений представляли в виде среднего значения и стандартного отклонения. В результате применения t-критерия Стьюдента значимый уровень был указан как 5%.
ii) Результаты
Как видно из таблицы 2, введение композиции кофе по изобретению приводило к заметному снижению кровяного давления по сравнению с введением коммерчески доступного быстрорастворимого кофе.
Таблица 2
Вводимое вещество
Количество случаев
Снижение кровяного давления через 12 часов после введения (%)
Стандартное отклонение
Контрольная группа
Быстрорастворимый кофе
3
-5,8
1,1
Группа испытания
Фракции A
6
-14,4 *
1,4
*: Существует значительная разница на уровне значимости 5% или менее по сравнению с контрольной группой.
Пример 3
Оценка гипотензивного эффекта
i) Материалы и метод испытания
(a) Так же, как и в примере 2, самцов спонтанно гипертензивных крыс (SHR) возраста 12 недель предварительно выращивали.
(b) Способ и количество введения: физиологический солевой раствор перорально вводили контрольной группе. Экстракт из сырых кофейных зерен (“Flavor Holder FH1041”, продукт от T. Hasegawa Co., Ltd.), содержащий хлорогеновые кислоты в качестве основного компонента, вводили группе сравнения. Экстракт был приготовлен таким образом, чтобы вводимое количество составляло 300 мг/кг в расчете на общее количество хлорогеновых кислот. В группе испытания 1 вещество для введения было приготовлено так, чтобы обеспечить возможность введения FH1041 в количестве от 300 мг/кг, в расчете на общее количество хлорогеновых кислот, и введение гидроксигидрохинона в количестве от 0,03 мг/кг (0,01% по отношению к общему количеству хлорогеновых кислот). В группе испытания 2 вещество для введения было приготовлено так, чтобы обеспечить возможность введения FH1041 в количестве от 300 мг/кг, в расчете на общее количество хлорогеновых кислот, и введение гидроксигидрохинона в количестве от 0,3 мг/кг (0,1% по отношению к общему количеству хлорогеновых кислот). В группе испытания 3 вещество для введения было приготовлено так, чтобы обеспечить возможность введения FH1041 в количестве от 300 мг/кг, в расчете на общее количество хлорогеновых кислот, и введение гидроксигидрохинона в количестве от 3 мг/кг (1% по отношению к общему количеству хлорогеновых кислот). Каждое из указанных веществ вводили перорально через оральный зонд. Доза составляла 5 мл/крыса.
Метод испытания: Одна группа состояла из трех SHR. Систолическое кровяное давление в хвостовой артерии измеряли перед пероральным введением и через 12 часов после введения, и на основании этого рассчитывали процентное изменение кровяного давления.
(d) Метод статистической обработки
Результаты измерения представляли в виде среднего значения и стандартного отклонения. В результате применения множественного сравнительного критерия (Scheffe) уровень значимости был указан как 5%.
ii) Результаты
Как видно из таблицы 3, гипотензивное действие хлорогеновых кислот нарушалось при добавлении гидроксигидрохинона в композицию.
Таблица 3
Вводимое вещество
Количество случаев
Снижение кровяного давления через 12 часов после введения (%)
Стандартное отклонение
Контрольная группа
Физиологический солевой раствор
3
-2,1
1,1
Группа сравнения
FH1041
3
-13,8
1,5
Группа испытания 1
FH1041HHQ (0,03 мг/кг)
3
-14,3
2,4
Группа испытания 2
FH1041HHQ (0,3 мг/кг)
3
-8,8*
1,4
Группа испытания 3
FH1041HHQ (3 мг/кг)
3
-6,7*
1,0
HHQ: гидроксигидрохинон
*: Существует значительная разница на уровне значимости 5% или менее по сравнению с контрольной группой.
Пример 4
(Получение баночного кофе с использованием фракции A, полученной в примере 1)
Баночный кофе получали путем растворения 0,75 г фракции A в 140 мл воды, заполнения металлической банки полученным раствором, закатывания банки и стерилизации банки в автоклаве (в течение 10 минут при 121°C).
Пример 5
(Получение порошка кофе с использованием фракции A, полученной в примере 1)
Порошок кофе получали путем помола фракции A.
Пример 6
Композицию кофе по изобретению также получали следующим способом.
Получение кофе, обработанного активированным углем.
2
a
b
c
b
c
a
После растворения 20 г коммерчески доступного быстрорастворимого кофе (Nescafe Gold Blend Red Label) в 1400 мл дистиллированной воды (раствор, который далее будет указан как “Кофе P”) к полученному раствору добавляли 30 г активированного угля “Shirasagi WHc 28/42” (продукт от Japan EnviroChemicals, Ltd. со средним размером пор 4,2 Ангстрем). Полученную смесь перемешивали в течение одного часа и затем фильтровали через фильтр с пористой фильтрующей перегородкой (0,45 мкм) с получением фильтрата (который далее будет указан как “Кофе Q”). Полученный фильтрат подвергали сублимационной сушке, получая, таким образом, 15,8 г коричневого порошка. Полученный коричневый порошок растворяли в дистиллированной воде и количество хлорогеновых кислот и HHQ определяли анализом ВЭЖХ, как указано в примере 1. В результате анализа было определено, что содержание хлорогеновых кислот составляет 4,12 вес.%, тогда как содержание HHQ было ниже предела чувствительности (в соответствии с условиями анализа B). Кроме того, содержание калия измеряли методом ICP эмиссионной спектрометрии. Содержание калия как в используемом в качестве исходного продукта быстрорастворимом кофе, так и в кофе, обработанном активированным углем, было 4,2 вес.% Результаты ВЭЖХ-анализа кофе P, кофе Q и галловой кислоты графически представлены на Фиг.1 и 2. В кофе Q пик в непосредственной близости от времени удерживания 6,8 минут исчезает и, по существу, наблюдается отсутствие пика. На Фиг.1 линия  представляет кофе P, линия  представляет кофе Q и линия  представляет галловую кислоту. На Фиг.2 линия  представляет кофе P, линия  представляет кофе Q и линия  представляет галловую кислоту.
Содержание гидроксигидрохинона (HHQ) в композиции кофе по изобретению также измеряли следующим способом.
Определение количества гидроксигидрохинона
Гидроксигидрохинон в композиции кофе анализировали, как описано ниже. В качестве аналитического инструмента использовали “CoulArray System” (Model 5600A, разработано и изготовлено фирмой ESA/USA, импортируется и продается фирмой MC Medical Inc.), электрохимический детектор для ВЭЖХ (вольтметрическая система). Название и номер модели составляющих оборудование единиц были следующими:
Аналитическая камера: “Модель 5010”, органайзер CoulArray, электронный модуль·програмное обеспечение CoulArray: “Модель 5600A”, модуль доставки растворителя: “Модель 582”, градиентный смеситель, автоматический дозатор: “Модель 542”, гаситель колебаний, дегазатор: “Degasys Ultimate DU3003”, термостат колонки: 505, колонка: “CAPCELL PAK C18 AQ” 4,6 мм (внутренний диаметр) · 250 мм (длина), размер частиц: 5 мкм (Shiseido Co., Ltd.)
Анализ осуществляли в следующих условиях.
Объем вводимой пробы: 10 мкл, скорость потока: 1,0 мл/мин, напряжение, прилагаемое к электрохимическому детектору: 0 мВ, установленная температура термостата колонки: 40°C, элюент A: 0,1 (вес./об.)% фосфорной кислоты, 0,1 мМ 1-гидроксиэтан-1,1-диалкилфосфиновой кислоты, 5 (об./об.)% метанольного раствора, элюент B: 0,1 (вес./об.)% фосфорной кислоты, 0,1 мМ 1-гидроксиэтан-1,1-дифосфоновой кислоты, 50 (об./об.)% метанольного раствора.
Для получения каждого из элюентов A и B использовали дистиллированную воду для высокоэффективной жидкостной хроматографии (продукт от Kanto Chemical Co., Inc.), метанол для высокоэффективной жидкостной хроматографии (продукт от Kanto Chemical Co., Inc.), фосфорную кислоту (специальный сорт, продукт от Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) и 1-гидроксиэтан-1,1-дифосфоновую кислоту (60% водный раствор, продукт от Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.).
Условия градиента концентрации
Время
Элюент A
Элюент B
0,0 минут
100%
0%
10,0 минут
100%
0%
10,1 минут
0%
100%
20,0 минут
0%
100%
20,1 минут
100%
0%
50,0 минут
100%
0%
Образец для анализа получали следующим способом. После точного отвешивания 2 г образца добавляли элюент A с получением общего количества 10 мл. Полученную смесь фильтровали через фильтр с пористой фильтрующей перегородкой (“HLC-DISK25 для растворителей”, размер пор: 0,45 мкм, для высокоэффективной жидкостной хроматографии, продукт от Kanto Chemical Co., Inc.) и около 2,5 мл полученного фильтрата вводили в “Bond Elut SCX” (продукт от GL Science Co,, Ltd,, количество вводимой твердой фазы: 500 мг, емкость резервуара: 3 мл). Сразу после удаления около 0,5 мл исходного фильтрата остаток предоставляли для анализа.
В анализе, проводимом в описанных выше условиях, время удерживания гидроксигидрохинона составило 6,38 минут. Из полученной, таким образом, площади пика определяли его содержание (вес.%) с использованием гидроксигидрохинона (продукт от Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) в качестве ссылочного материала.
Когда определяли количество перекиси водорода в композиции кофе по изобретению при помощи высокочувствительного измерителя перекиси водорода, количество перекиси водорода не смогли определить, поскольку оно было ниже предела чувствительности прибора. Зольность измеряли описанным выше способом, и в результате было обнаружено, что показатель зольности в кофе P составил 186 мг/100 г, а в кофе Q он составил 176 мг/100 г, при этом каждое количество получали в расчете на 100 г кофейного напитка.
Пример 7
После растворения 20 г коммерчески доступного быстрорастворимого кофе (Nescafe Gold Blend Red Label) в 1400 мл дистиллированной воды (раствор, который далее будет указан как “Кофе P”) к полученному раствору добавляли 10 г активированного угля “Kurarycoal GW-H 48/100” (средний размер пор 3,9 Ангстрем). Полученную смесь перемешивали в течение одного часа и затем фильтровали через фильтр с пористой фильтрующей перегородкой (0,45 мкм) с получением фильтрата (который далее будет указан как “Кофе Q”). Полученный фильтрат подвергали сублимационной сушке, получая, таким образом, 16,5 г коричневого порошка. Полученный коричневый порошок растворяли в дистиллированной воде и количество хлорогеновых кислот и HHQ определяли анализом ВЭЖХ, как указано в примере 1. В результате анализа было определено, что содержание хлорогеновых кислот составляет 4,31 вес.%, тогда как содержание HHQ было ниже предела чувствительности (в соответствии с условиями анализа B). Кроме того, содержание калия измеряли методом ICP эмиссионной спектрометрии. Содержание калия как в используемом в качестве исходного продукта быстрорастворимом кофе, так и в кофе, обработанном активированным углем, было 4,2 вес.%
Пример 8
Оценка гипотензивного эффекта композиции кофе, полученной в примере 6
Материалы и метод испытания
(a) Оценочное испытание начинали после того, как перед этим в течение последовательных пяти дней измеряли кровяное давление у каждого из самцов спонтанно гипертензивных крыс (SHR) возраста 13-14 недель при помощи коммерчески доступного неинвазивного сфигмоманометра для крыс (изготовлен фирмой Softron Co., Ltd.), чтобы крысы привыкли к сфигмоманометрической операции. Всех этих крыс выращивали в условиях (помещение для содержания в области обитания крыс) комнатной температуры при 25±1°C, относительной влажности 55±10% и освещения в течение 12 часов (от 7:00 до 19:00 часов).
(b) Способ и количество введения: в группе испытания использовали композицию кофе (кофе, обработанное активированным углем), полученную в примере 6. В контрольной группе использовали коммерчески доступный быстрорастворимый кофе. Кофе, обработанный активированным углем, и быстрорастворимый кофе - каждый растворяли в физиологическом солевом растворе, так чтобы вводимое количество составило 200 мг/кг в расчете на общее количество хлорогеновых кислот. Каждое из этих веществ вводили перорально через оральный зонд. Доза составляла 5 мл/крыса.
(c) Метод испытания: Систолическое кровяное давление в хвостовой артерии измеряли перед пероральным введением и через 12 часов после введения, и на основании этого рассчитывали процентное изменение кровяного давления через 12 часов.
(d) Метод статистической обработки
Результаты измерения представляли в виде среднего значения и стандартного отклонения. В результате применения t-критерия Стьюдента значимый уровень был указан как 5%.
Результаты: Как видно из таблицы 4, введение композиции кофе по изобретению приводило к заметному снижению кровяного давления по сравнению с введением обычного быстрорастворимого кофе.
Таблица 4
Количество случаев
Снижение кровяного давления через 12 часов после введения
Стандартное отклонение
Контрольная группа
Быстрорастворимый кофе
4
-5,1
1,0
Группа испытания
Фракция A
6
-10,0 *
0,6
*: Существует значительная разница на уровне значимости 5% или менее по сравнению с контрольной группой.
Оценка гипотензивного действия композиции кофе, полученной в примере 6
(оценка действия по сдерживанию повышения кровяного давления с использованием крыс).
Материалы и метод испытания
(a) Испытываемые животные: Оценочное испытание начинали после того, как перед этим в течение последовательных семи дней измеряли кровяное давление у каждого из самцов спонтанно гипертензивных крыс (SHR) возраста 6 недель при помощи коммерчески доступного неинвазивного сфигмоманометра для крыс (изготовлен фирмой Softron Co., Ltd.), чтобы крысы привыкли к сфигмоманометрической операции. Всех этих крыс выращивали в условиях (помещение для содержания в области обитания крыс) комнатной температуры при 25±1°C, относительной влажности 55±10% и освещения в течение 12 часов (от 7:00 до 19:00 часов).
(b) Способ и количество введения: Были получены графики испытания 1 и 2 и контрольный график. Композицию принудительно вводили пероральным путем с использованием металлического желудочного зонда. Доза составляла 10 мл/кг/день, и это количество вводили пять дней в неделю в течение 4 недель.
(c) Метод испытания: Одна группа состояла из шести-девяти крыс SHR возраста семи недель. Систолическое кровяное давление в хвостовой артерии измеряли перед испытанием и в течение семи недель после начала испытания.
(d) Метод статистической обработки: Полученные таким образом результаты представляли в виде среднего значения и стандартного отклонения. В результате применения t-критерия Стьюдента значимый уровень был указан как 5%.
Результаты: Показатели систолического кровяного давления (SBP) перед началом испытания и в течение последующих семи недель после начала испытания представлены на графике. Как видно из фиг.3, на графике испытания 2 для кофе, из которого был удален HHQ, повышение кровяного давления существенно сдерживалось по сравнению с результатами контрольного графика и графика испытания 1.
Образцы для оценки гипотензивного эффекта были получены, как описано ниже, и предоставлены для испытания снижения кровяного давления.
Плацебо (P): Горячую воду 95°C добавляли к 400 г декофеинированных зерен кофе Columbia средней обжарки (L=22), молотым (среднего помола), загруженным в обычный экстрактор, с получением, таким образом, 3200 г экстракта. К экстракту добавляли деионизированную воду и бикарбонат натрия с получением значения pH 6,3. Полученной смесью заполняли металлическую банку емкостью 190 г, после чего банку герметично закрывали. Металлическую банку подвергали стерилизации в автоклаве при 118,1°C в течение 10 минут с получением, таким образом, испытываемого напитка для плацебо. pH после стерилизации был равен 5,8.
Образец (S): Горячую воду 95°C добавляли к 400 г декофеинированных зерен кофе Columbia средней обжарки (L=22), молотым (среднего помола), загруженным в обычный экстрактор, с получением, таким образом, 3200 г экстракта. К экстракту добавляли 50% (вес./вес.), относительно содержания твердого вещества в экстракте, активированного угля “WH2C” (продукт от Japan EnviroChemicals, Ltd.) и после перемешивания в течение 30 минут реакционную смесь центрифугировали для удаления активированного угля, с получением, таким образом, кофейного экстракта, из которого был удален HHQ. К экстракту добавляли деионизированную воду и бикарбонат натрия с получением значения pH 6,3. Полученной смесью заполняли металлическую банку емкостью 190 г, после чего банку герметично закрывали. Металлическую банку подвергали стерилизации в автоклаве при 118,1°C в течение 10 минут с получением, таким образом, испытываемого напитка для образца. pH после стерилизации был равен 5,8.
(Испытание на гипотензивное действие у здоровых субъектов)
Испытываемый напиток (190 мл/банка)
(P) Плацебо: 433 мг/банка хлорогеновой кислоты, 194 мг/банка кофеина, HHQ: 3,0 ч/млн.
(S) Образец: 448 мг/банка хлорогеновой кислоты, 142 мг/банка кофеина, HHQ: 0,1 ч/млн или менее.
Метод испытания:
Гипотензивное действие кофейного напитка, из которого был удален HHQ, оценивали в перекрестном испытании с интервалами в 4 недели, в котором принимали участие девять добровольцев - мужчины возраста от 30 до 40 лет.
1) Было приготовлено два кофейных напитка, а именно баночный кофейный напиток (S), который был обработан активированным углем для удаления из него HHQ, и обычный баночный кофе (P). Была подтверждена идентичность вкуса этих напитков. Добровольцев просили пить баночный напиток (190 мл) каждый день в любое время, не информируя их о содержимом банки. Они пили (P) в течение четырех недель и (S) в течение четырех недель, всего в течение восьми последовательных недель.
2) Измерение кровяного давления: Кровяное давление измеряли прибором для измерения давления крови OMRON. Давление измеряли перед началом употребления напитков и в течение четырех недель после начала употребления напитков, в определенное время каждую неделю и после десятиминутного отдыха перед измерением. Среднее кровяное давление перед началом испытания составило 138 мм Hg (систолическое). Добровольцев просили не употреблять другой кофейный напиток в процессе испытания.
Падение систолического кровяного давления после употребления напитка показано на Фиг.4, а падение диастолического кровяного давления после употребления напитка показано на Фиг.5. Эти диаграммы показывают, что кофейный напиток по изобретению, из которого был удален HHQ, демонстрирует антигипертензивный эффект.
Пример 9
В 140 мл воды растворяли 2 г обработанного активированным углем кофе, полученного в примере 6. Полученный раствор разливали в банки. Банку герметично закатывали и затем подвергали стерилизации в автоклаве (в течение 10 минут при 121°C) с получением, таким образом, баночного кофе.
Пример 10
Приготовленный методом сублимационной сушки продукт, полученный в примере 6, предоставляли в виде порошка кофе.
Примеры 11-13
Получение кофейного экстракта, получение напитка в упаковке и их оценка.
2
В многостадийном экстракторе к обжаренным (средней обжарки, L=22) и молотым кофейным зернам Guatemala добавляли горячую воду 120°C с последующим охлаждением с получением, таким образом, кофейного экстракта. Относительно количества загруженных в экстрактор зерен, получали 30% твердого вещества. К экстракту добавляли 50% (вес./вес.), относительно содержания твердого вещества в экстракте, активированного угля “WH2C” (продукт от Japan EnviroChemicals, Ltd.) и затем перемешивали в течение 30 минут, реакционную смесь центрифугировали для удаления активированного угля, с получением, таким образом, кофейного экстракта, из которого был удален HHQ. К экстракту добавляли деионизированную воду и бикарбонат натрия с получением значения pH 6,3. Полученную смесь нагревали до 85°C и затем загружали в металлическую банку емкостью 190 г. После продува верхнего пространства газообразным N банку закрывали и герметично уплотняли. Герметично закрытую металлическую банку подвергали стерилизации в автоклаве при 118,1°C в течение 10 минут с получением, таким образом, напитка в упаковке. pH после стерилизации был равен 5,8. Данные анализа и оценка полученного таким образом напитка в упаковке представлены в таблице 5.
Таблица 5
Пример 11
Пример 12
Пример 13
<Композиция>
CQA 100 мг/банка
CQA 300 мг/банка
CQA 800 мг/банка
Количество кофейного экстракта (GUA)
вес.%
0,6
1,7
4,5
Бикарбонат натрия
вес.%
0,03
0,10
0,21
Деионизированная вода
вес.%
баланс
баланс
баланс
Всего
вес.%
100
100
100
<Условия приготовления>
Условия высокотемпературной стерилизации
Автоклав
Автоклав
Автоклав
Контейнер (емкость 190 мл)
Металлическая банка
Металлическая банка
Металлическая банка
<Результаты анализа после стерилизации>
Хлорогеновые кислоты
мг/100 г
55,7
158,1
418,4
Хлорогеновые кислоты
вес.%
0,05
0,15
0,41
Гидроксигидрохинон
мг/100 г
0,0067
0,019
0,05
Отношение количества гидроксигидрохинона к количеству хлорогеновых кислот
вес.%
0,012
0,012
0,012
Наличие пика в пределах относительного времени удерживания от 0,54 до 0,61 относительно галловой кислоты, используемой в качестве ссылочного материала в анализе методом высокоэффективной жидкостной хроматографии
нет
нет
нет
4-Кофеоилхинная кислота/3-кофеоилхинная кислота
Весовое отношение
0,94
0,94
0,94
5-Кофеоилхинная кислота/3-кофеоилхинная кислота
Весовое отношение
1,01
1,01
1,01
Гидроксигидрохинон (HHQ)/общее количество хлорогеновых кислот
мг/100 г
1,2/10000
1,2/10000
1,2/10000
Количество K
мг/л
38,8
110,0
291,1
Количество H<sub>2</sub>O<sub>2</sub> (количество перекиси водорода в жидком кофе сразу после открытия упаковки)
н.о.
н.о.
н.о.
pH
5,8
5,8
5,8