ОПРЕДЕЛЕНИЕ РЕСПОНДЕРОВ НА ХИМИОТЕРАПИЮ

1. Способ определения чувствительности биологического образца, включающего клетки рака легкого человека, к комбинации ингибитора рецептора фактора роста эпидермиса и химиотерапевтического агента, включающий определение сверхэкспрессии фосфорилированного белка протеинкиназы АКТ и/или фосфорилированного белка МАПК (митоген-активированой протеинкиназы) в биологическом образце, причем сверхэкспрессия фосфорилированного белка АКТ и/или фосфорилированного белка МАПК указывает на то, что биологический образец, включающий клетки рака легкого человека, является чувствительным к комбинации ингибитора рецептора фактора роста эпидермиса и химиотерапевтического агента.
2. Способ по п.1, в котором сверхэкспрессию фосфорилированного белка АКТ и/или фосфорилированного белка МАПК в биологическом образце устанавливают путем
а) определения уровня экспрессии фосфорилированного белка АКТ и/или фосфорилированного белка МАПК в биологическом образце,
б) определения уровня экспрессии фосфорилированного белка АКТ и/или фосфорилированного белка МАПК в биологическом образце, включающем клетки рака легкого человека, которые не чувствительны к комбинации ингибитора фактора роста эпидермиса и химиотерапевтического агента,
в) определения разности уровней экспрессии фосфорилированного белка АКТ и/или фосфорилированного белка МАПК, установленных на стадиях а) и б), таким образом, устанавливают сверхэкспрессию фосфорилированного белка АКТ и/или фосфорилированного белка МАПК.
3. Способ по п.2, согласно которому разница уровней экспрессии фосфорилированного белка АКТ и/или фосфорилированного белка МАПК, установленных на стадиях а) и б), составляет, по меньшей мере, 10%.
4. Способ по п.2, согласно которому разница уровней экспрессии фосфорилированного белка АКТ и/или фосфорилированного белка МАПК, установленных на стадиях а) и б), составляет, по меньшей мере, 25%.
5. Способ по п.1, в котором биологический образец является первичной опухолью легкого или метастазом.
6. Способ по п.1, в котором ингибитор EGFR является эрлотинибом или N-(3-этинилфенил)-6,7-бис(2-метоксиэтокси)хиназолин-4-амином.
7. Способ по п.1, в котором химиотерапевтический агент является гемцитабином или цисплатином.
8. Способ по п.1, в котором сверхэкспрессию фосфорилированного белка Akt или фосфорилированного белка МАПК устанавливают, используя реагент, который специфически связывается с фосфорилированным белком.
9. Способ по п.8, в котором антитело, производное антитела или фрагмент антитела специфически связывается с фосфорилированным белком АКТ или фосфорилированным белком МАПК.
10. Способ по п.1, в котором фосфорилированный белок АКТ фосфорилирован по аминокислоте в положении, соответствующем аминокислотному положению 473 белка Akt1, или белок МАПК фосфорилирован по аминокислотам в положениях, соответствующих аминокислотным положениям 202 и 204 белка МАПК1.
11. Способ по п.1, в котором аминокислотная последовательность белка МАПК соответствует аминокислотной последовательности SEQ ID NO:1 или 2, а аминокислотная последовательность белка АКТ соответствует аминокислотной последовательности SEQ ID NO:6, 7 или 8.
12. Способ по п.1, в котором уровень экспрессии определяют, используя метод, выбранный из группы, включающей методы протеомики, проточной цитометрии, иммуноцитохимии, иммуногистохимии и твердофазного иммуноферментного анализа.
13. Способ по п.1, в котором сверхэкспрессию фосфорилированного белка АКТ и/или фосфорилированного белка МАПК определяют путем
а) иммуногистохимического окрашивания биологического образца,
б) присвоения оценки по шкале баллов 1, 2, 3 и 4 уровню экспрессии фосфорилированного белка АКТ и/или фосфорилированного белка МАПК на основе визуального контроля окрашивания клеток в биологическом образце, в соответствии с чем устанавливают наивысшую выявляемую оценку уровня экспрессии,
в) определения процентного отношения клеток с наивысшей выявляемой оценкой в иммуногистохимически окрашенном биологическом образце,
г) умножения присвоенной оценки с процентным отношением клеток с наивысшей выявляемой оценкой в иммуногистохимически окрашенном биологическом образце на 100, и
д) определения сверхэкспрессии фосфорилированного белка АКТ и/или фосфорилированного белка МАПК в биологическом образце, если результат умножения на стадии г) превышает 100.
14. Применение антитела, которое связывается с фосфорилированным белком АКТ, или антитела, которое связывается с фосфорилированным белком МАПК, для определения чувствительности биологического образца, включающего клетки рака легкого человека, к комбинации ингибитора рецептора фактора роста эпидермиса и химиотерапевтического агента.
15. Способ выбора композиции для ингибирования прогрессирования рака легкого у пациента, включающий:
а) раздельную экспозицию аликвот полученного от пациента биологического образца, включающего клетки рака легкого, которые чувствительны к комбинации ингибитора EGFR и химиотерапевтического агента, в присутствии множества тестируемых композиций,
б) сравнение уровня экспрессии фосфорилированного белка Akt и/или фосфорилированного белка МАПК в аликвотах биологического образца, подвергавшихся контакту с тестируемыми композициями, с уровнем экспрессии фосфорилированного белка Akt и/или фосфорилированного белка МАПК в аликвоте биологического образца, не подвергавшейся контакту с тестируемыми композициями,
в) выбор одной из тестируемых композиций, которая изменяет уровень экспрессии фосфорилированного белка Akt и/или фосфорилированного белка МАПК в аликвоте, содержащей эту тестируемую композицию, по сравнению с аликвотой, не контактировавшей с тестируемой композицией, согласно которому, по меньшей мере, 10% различие между уровнем экспрессии фосфорилированного белка Akt и/или фосфорилированного белка МАПК в аликвоте биологического образца, подвергавшейся контакту с тестируемой композицией, и уровнем экспрессии фосфорилированного белка Akt и/или фосфорилированного белка МАПК в аликвоте биологического образца, не подвергавшейся контакту с тестируемой композицией, является основанием для выбора тестируемой композиции.
16. Способ выявления потенциального агента, включающий:
а) контактирование аликвоты биологического образца, содержащего клетки рака легкого, которые чувствительны к ингибитору EGFR и химиотерапевтическому агенту, с потенциальным агентом,
б) определение уровня экспрессии фосфорилированного белка Akt и/или фосфорилированного белка МАПК в аликвоте биологического образца, подвергавшейся контакту с потенциальным агентом, и определение уровня экспрессии фосфорилированного белка Akt и/или фосфорилированного белка МАПК в аликвоте биологического образца, не подвергавшейся контакту с потенциальным агентом,
в) выявление действия потенциального агента путем сравнения уровня экспрессии фосфорилированного белка Akt и/или фосфорилированного белка МАПК в аликвоте биологического образца, подвергавшейся контакту с потенциальным агентом, и уровня экспрессии фосфорилированного белка Akt и/или фосфорилированного белка МАПК в аликвоте биологического образца, не подвергавшейся контакту с потенциальным агентом,
г) выявление указанного агента по указанному наблюдаемому эффекту, при котором по меньшей мере 10% различие между уровнем экспрессии фосфорилированного белка Akt и/или фосфорилированного белка МАПК в аликвоте биологического образца, подвергавшейся контакту с потенциальным агентом, и уровнем экспрессии фосфорилированного белка Akt и/или фосфорилированного белка МАПК в аликвоте биологического образца, не подвергавшейся контакту с потенциальным агентом, указывает на действие потенциального агента.
17. Способ по п.16, в котором указанный потенциальный агент является потенциальным ингибирующим агентом.
18. Способ по п.16, в котором указанный потенциальный агент является агентом, усиливающим действие потенциального агента.
19. Потенциальный агент, полученный способом по одному из пп.16-18.
20. Фармацевтический препарат, включающий агент по п.19.
21. Применение агента по п.19 для получения композиции для ингибирования прогрессирования рака легкого.
22. Способ получения лекарственного препарата, включающий стадии способа по одному из пп.16-18, а также
i) синтез потенциального агента, идентифицированного на стадии (в), или его аналога или производного, в количестве, достаточном, чтобы обеспечить субъекта указанным лекарственным средством в терапевтически эффективном количестве, и/или
ii) комбинирование потенциального лекарственного средства, идентифицированного на стадии (в), или его аналога, или его производного с фармацевтически приемлемым носителем.
23. Применение белка Akt, белка МАПК, фосфорилированного белка Akt, фосфорилированного белка МАПК, антитела, селективно связывающегося с фосфорилированным белком Akt или фосфорилированным белком МАПК, для выявления потенциального агента или выбора композиции для ингибирования прогрессирования рака легкого у пациента.
24. Набор, включающий антитело к фосфорилированному белку МАПК и/или фосфорилированному белку Akt.