Вакцинирование белком PRAME сдерживает рост PRAME-экспрессирующей опухоли

МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ»

79

фективности в/а TACE судили по блокированию сосудистого русла под контролем рештеноконтрастной ангиографии. Эффективность в/а TACE оценивали для РС1 по показателю скорости роста опухоли (соотношение объемов опухолевых узлов до и после лечения, Vt/V0), для VX2 — по соотношению площади опухоли (St/S0), времени удвоения объема опухоли «т» и коэффициенту эффективности «К» («т»опыта/«т»контроля) под патоморфологическим контролем степени лечебного патоморфоза (ЛП). На 14 с констатировали число частичных ремиссий (ЧР). Полученные в опытах результаты подвергнуты статистической обработке с оценкой достоверности приp < 0,05.

Результаты. На крысах с в/м РС1 и в/а введением MC/DOX в объемах 0,034-0,1 мл (КД = 3,3-10,5 мг/кг) получен слабый эффект TACE: «т» = 11-16 дней; К = 5,58,9; ЛП = 1 ст. Уровень эффекта связан с малым сечением артерии, не позволяющим ввести необходимые объемы микросфер и дозу DOX. На кроликах с в/м VX2 с введением относительно высоких доз получен значимый достоверный верифицированный патоморфологически циторедук-тивный эффект МС/DOX при максимальной из изученных дозировок. В группе MC/D0X-0,5 мл (КД = 6,4 мг/кг) — эффект TACE на уровне группы МС. Количественные показатели в 2,6 раза меньше группы КРО (p < 0,02): St/S0 = 2,5; «т» = 8,0 дней; К = 2, ЛП = 1 ст., ЧР = 0 на фоне выраженного блокирования мелких артериол при сохранении магистрального кровоснабжения. В группе MC/D0X-1,0 мл (КД = 12,8 мг/кг) — эффект TACE, St1/S0 = 1,75; «т» = 7,0; К = 1,9, ЛП = 3 ст., ЧР = 5/6. Эффект реализован на 16 с после высвобождения полной КД = 32 мг.

Заключение. Последовательное изучение нагруженных цитостатиками МС на моделях внутримышечно транс-планированных перевиваемых опухолей крыс и кроликов позволяет отобрать и выявить значимый эффект TACE с использованием стандартных показателей и необходимого контроля. Полученные данные позволяют считать новые отечественные нагруженные DOX МС перспективными для ТАСЕ и рекомендовать завершение доклинического изучения.

Н.В. Филатова1, E.О. Зазнобина2, М.А. Лапшина1,

А.А. Балакина1, В.Д. Сень1, А.А. Терентьев1

ИНДУКЦИЯ АПОПТОЗА В ОПУХОЛЕВЫХ КЛЕТКАХ

MCF-7 ПРИ ДЕЙСТВИИ АМИНОНИТРОКСИЛЬНЫХ

КОМПЛЕКСОВ ПЛАТИНЫ

ФГБУНИПХФ РАН, Черноголовка, Московская область,

Россия;

2ФГБОУ ВО «Ивановский государственный университет», Иваново, Россия

Введение. Исследование клеточной гибели является важной задачей при разработке новых соединений с противоопухолевой активностью. В связи с высокой токсичностью комплексов платины (цисплатин, оксалиплатин, карбоплатин) проводятся синтез и испытания биологических свойств комплексных соединений платины с различными лигандами и нитроксильными радикалами. Внесение нитроксильного радикала в структуру комплексов платины (IV) снижает их цитотоксичность, в то время

как удлинение аксиальных лигандов усиливает цитотокси-ческие свойства. Ранее нами исследована цитотоксичность аминонитроксильных комплексов платины (IV). На культуре клеток MCF-7, которые обладают повышенной устойчивостью к комплексам платины, показано, что аминони-троксильные комплексы платины (IV) превосходят по цитотоксичности цисплатин.

Цель исследования — изучить механизм клеточной гибели при действии аминонитроксильных комплексов платины (IV).

Материалы и методы. Исследована серия аминонитроксильных комплексов платины (IV) с общей структурой Р1 (IV) (ОТ3) С12Х2, где ^Н2 — нитроксиль-

ный радикал, а X — аксиальные лиганды. Эксперименты проводили на опухолевых клетках MCF-7 (аденокарцино-ма молочной железы человека). В качестве препаратов сравнения использовали цисплатин и сатраплатин. Все исследуемые соединения наносили в дозе ГС50 с экспозицией 6—24 ч. Состояние белка PARP и экспрессию белка р53 определяли с помощью иммуноблотинга. Внутриклеточную локализацию белка р53 исследовали методом флуоресцентной микроскопии после окрашивания ДНК красителем DAPI и белка p53 — флуоресцентно меченными антителами.

Результаты. Результаты иммуноблотинга показали, что все исследуемые соединения в дозе ГС50 вызывали увеличение экспрессии белка р53 с максимумом на 12 ч и его снижение к 24 ч. Методами иммуноблотинга и иммуно-флуоресценции установлено накопление белка р53 в ядре через 12 ч после введения исследуемых соединений. Показано, что все комплексы платины вызывают деградацию белка РАЯР, характерную для процесса апоптоза. В связи с тем что в клетках MCF-7 отстутствует каспаза-3, развитие апоптоза происходит с участием других эффекторных кас-паз, таких как каспаза-6 и каспаза-7.

Заключение. Аминонитроксильные комплексы платины (IV) в дозе ГС50 вызывают гибель клеток MCF-7 по пути р53-зависимого, каспаза-3-независимого апоптоза.

Ю.П. Финашутина, Н.А. Лыжко, Л.А. Кесаева, В.А. Мисюрин, О.Н. Солопова, Н.Н. Касаткина, А.В. Мисюрин

ВАКЦИНИРОВАНИЕ БЕЛКОМ РММЕ СДЕРЖИВАЕТ РОСТ РАМЕ-ЭКСПРЕССИРУЮЩЕЙ ОПУХОЛИ

ФГБУ«РОНЦим. Н.Н. Блохина» Минздрава России, Москва, Россия

Введение. Ген PRAME не экспрессируется в нормальных тканях, но избыточно экспрессируется в различных новообразованиях, включая солидные опухоли и гемобла-стозы. Белок способен вызывать специфический иммунный ответ у пациентов с меланомой и другими опухолями. В единичных случаях может происходить спонтанный лизис PRAME-экспрессирующей опухоли с длительным периодом выживаемости без рецидива болезни в последующем. Некоторые исследователи успешно выделили из крови пациентов острыми лейкозами Т-клетки, специфические к некоторым эпитопам белка PRAME. Возможность развития Т-клеточного ответа не исключает возможность развития В-клеточного ответа против PRAME.

Спецвыпуск/ том 16 / 2017

РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ

80

МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ»

Развившийся гуморальный ответ может быть серьезным фактором контроля над развитием опухоли. Таким образом, разработка новых подходов для оценки иммунотера-певтического потенциала белка PRAME является перспективным исследованием.

Цель исследования — разработать модели для изучения in vivo противоопухолевого потенциала антигена PRAME. Оценить эффект профилактической вакцинации реком-бинантным человеческим белком PRAME на животной модели развития опухоли.

Материалы и методы. Мыши породы С57В1/6 иммунизированы 4 раза с интервалами в 14 дней внутрибрюшинно хроматографически очищенным рекомбинантным белком PRAME, сорбированном на гидроокиси алюминия в роли адъюванта, в дозе 100 мкг белка на мышь. Клетки мышиной меланомы B16-F10 были трансфецированы плазмид-ным вектором для экспрессии человеческого гена PRAME. При последующей селекции в культуре отобраны клетки, стабильно экспрессирующие ген PRAME по данным ПЦР в реальном времени. Клетки опухоли B16-F10-PRAME были подкожно трансплантированы в дозе 2 х 105 клеток на мышь через 14 дней после последней иммунизации. Размеры опухолей измерялись на 14-й, 21-й и 26-й день после введения клеток. Титр антител в сыворотке измеряли методом непрямого иммуноферментного анализа. Для статистического анализа использовался критерий Манна-Уитни.

Результаты. Получена линия клеток мышиной меланомы B16-F10, экспрессирующая человеческий ген PRAME на уровне 5,32 %. Предварительная иммунизация мышей рекомбинантным человеческим белком PRAME замедляет развитие меланомы B16-F10, экспрессирующей человеческий антиген PRAME, в два раза в сравнении с неиммуни-зированными животными (p = 0,0003). Титр антител к белку PRAME в группе мышей с опухолью, экспрессирующей PRAME, был на порядок выше, чем в контрольной группы с опухолью, трансфецированной контрольной неэкспрес-сирующей плазмидой (p = 0,0044).

Заключение. Показана иммуногенность рекомбинант-ного белка PRAME на мышах с генетически модифицированной PRAME-экспрессирующей меланомой. Предварительная вакцинация рекомбинантным белком PRAME значимо замедляет рост меланомы на животной модели.

Ю.М. Фоменко1, Н.А. Кабилдина1, И.М. Омарова2, Г.Х. Тулеуова3, С.С. Жумакаева1, В.Б. Сирота1 ОТДАЛЕННЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ ПРИМЕНЕНИЯ АРГЛАБИНА ПРИ МЕСТНОРАСПРОСТРАНЕННОМ РАКЕ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ

Карагандинский государственный медицинский университет, Караганда, Казахстан;

2КГП«Областной онкологический диспансер», Караганда, Казахстан;

3АО «Международный научно-производственный холдинг «Фитохимия», Караганда, Казахстан

Цель исследования — изучить выживаемость больных местнораспространенным раком молочной железы (МРР-МЖ) после комплексной терапии, включающей применение арглабина.

Материалы и методы. В исследование включены 93 больных МРРМЖ (T2N1-2M0, T3N0-2M0) с гистологической и иммуногистохимической верификацией в возрасте от 28 до 75 лет. Из них 50 женщин имели IIB и 43 — III стадии рака. Все пациентки разделены на 3 группы: 2 исследуемые, одна контрольная. В контрольной группе 36 больным проводили 4 курса неоадъювантной химиотерапии (ХТ) по схеме АС (доксорубицин — 50 мг/м2, циклофос-фан — 500 мг/м2) каждый 21-й день, радикальную мастэк-томию, 4 курса адъювантной ХТ (АС), лучевую терапию и гормонотерапию по показаниям. Исследуемая группа 1 (30 пациенток) получала лечение по аналогичной схеме, только режим ХТ (АС) сочетался с арглабином (арглабин 370 мг/м27 дней). Исследуемая группа 2 (27 больных) получала лечение по аналогичной схеме, но в неоадъювант-ном и адъювантном режимах применяли монотерапию арглабином. Общую выживаемость определяли по E. Kaplan — P. Meier, достоверность с помощью критериев Геха-на — Вилкоксона и %-квадрата в программе Statistica 7.

Результаты. Общая 1- и 2-годичная выживаемость во всех 3 группах равна 100 %. Трехлетняя выживаемость у больных, принимавших полихимиотерапию АС в сочетании с арглабином, составила 60,0 ± 8,9 %. Самые низкие показатели 3-летней выживаемости у пациенток, принимавших монотерапию арглабином, — 28,0 ± 8,6 %, а также у пациенток, получавших ХТ по схеме АС, — 30,0 ± 7,6 %. Различия показателей 3 групп статистически незначимы по х-квадрату, р = 0,11042. При парном сравнении исследуемых групп имеется достоверное различие 3-летней выживаемости по критерию Гехана — Вилкоксона (р = 0,02197) выше в группе, получавших ХТ по схеме АС + арглабин.

Заключение. Трехлетняя выживаемость пациенток, получавших ХТ по схеме АС и монотерапию арглабином, одинакова и сопоставима. Включение арглабина в ХТ по схеме АС повысило показатель общей 3-летней выживаемости больных МРРМЖ на 30 %.

Н.А. Харькова1, Н.Д. Олтаржевская2, Т. С. Быркина2, И.В. Гусев2

ГИДРОГЕЛЕВЫЕ ДЕПО-МАТЕРИАЛЫ «КОЛЕГЕЛЬ» В ЛЕЧЕНИИ РАНЕВОГО ПРОЦЕССА ПРИ РОСТЕ ГРАНУЛЯЦИОННОЙ ТКАНИ В ЗОНЕ ТРАХЕОСТОМЫ У БОЛЬНЫХ С ОНКОПАТОЛОГИЕЙ ГОРТАНИ

1БУЗ ВО «Воронежская городская клиническая больница скорой медицинской помощи № 1», Воронеж, Россия; 2ООО «Колетекс», Москва, Россия

Цель исследования — определить эффективность использования гидрогелевого депо-материала «Колегель» у пациентов с онкологической патологией гортани после трахеостомии с целью профилактики избыточного образования грануляционной ткани в краевой зоне трахеостомы, выполненной у больных с онкопатологией гортани, а также боковых поверхностей трахеи дистальнее трахеостомы (ТС), что может стимулировать рост гранулемы и злокачественных новообразований.

Материалы и методы. Высокоструктурированный гидрогель (ВГ) «Колегель-АДЛ», содержащий диоксидин,

Спецвыпуск / том 16 / 2017

РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ