Выбор экстрагента и изучение каротинидоного состава Cucurbita maxima Duch

Таким образом, анализируя полученные результаты можно отметить, что максимальное накопление эфирного масла наблюдалось в фазу цветения, а наибольший выход эфирного масла был получен из монарды лимонной и монарды двойчатой. По компонентному составу высокое содержание тимола отмечалось в монарде трубчатой, гибридной и лимонной; п-винилгваякола в монарде двойчатой; цимола - в монарде трубчатой и лимонной, а метилового эфира карвакрола в монарде двойчатой

и лимонной, что позволяет рекомендовать их для дальнейшего изучения в качестве перспективных эфироносов.

Список литературы

1. Государственная фармакопея СССР: Вып. 1. Общие методы анализа/МЗ СССР. - 11-е изд., доп. -М.: Медицина, 1987. - 336с.

2. Сикура И.И., Антонюк Н.Е., Пироженко А.А. Ин-тродуцируемые лекарственные растения.- Киев: Наукова Думка, 1983.- С. 123, 126-127, 135-136.

ВЫБОР ЭКСТРАГЕНТА И ИЗУЧЕНИЕ КАРОТИНИДОНОГО СОСТАВА

CUCURBITA MAXIMA DUCH

Курегян Анна Гургеновна

доцент кафедры фармацевтической и токсикологической химии, Пятигорского медико-фармацевтического

института, канд. фармац. наук, Россия, г. Пятигорск Печинский Станислав Витальевич

старший преподаватель кафедры фармацевтической и токсикологической химии, Пятигорского медико-фармацевтического, института, канд. фармац. наук, Россия, г. Пятигорск

Аталикова Сатаней Ливановна

студентка 4 курса фармацевтического факультета, Пятигорского медико-фармацевтического института,

Россия, г. Пятигорск

АННОТАЦИЯ

В статье представлены данные по выбору экстрагента каротиноидов из мякоти плодов Cucurbita maxima Duch.. Каротиноиды - это растительные пигменты, фармакологическая активность которых наиболее широко используется в профилактических и терапевтических целях. Выбор доступного источника получения каротиноидов, экстрагента и режима их экстракции является актуальной задачей.

Ключевые слова: каротиноиды, Cucurbita maxima Duch., спектрофотометрия, тонкослойная хроматография.

Каротиноиды наравне с антоцианами являются наиболее распространенным классом растительных пигментов, который применяется для профилактики заболеваний и имеет широкие перспективы использования в клинической практике. Физиологическая роль каротиноидов достаточно широка, кроме того, эти биологически активные вещества (БАВ) обладают обширным перечнем фармакологических свойств, например, антиоксидантной, радиопротекторной, провитаминной, антиканцерогенной и другими видами активности [1, с. 4; 8, с. 54]. Актуальной задачей является выбор источника получения этих БАВ и экстрагента, позволяющего экстрагировать каротиноиды в режиме с наименьшим количеством стадий, извлекая эти соединения с минимальным количеством сопутствующих соединений.

Цель исследования - выбор органического растворителя для экстракции каротиноидов из мякоти плодов Cucurbita maxima Duch..

Объекты и методы. В качестве источника каротиноидов была использована мякоть плодов Cucurbita maxima Duch.. Основываясь на физико-химических свойствах этого класса БАВ и учитывая их растворимость [2, с. 121; 3, с. 80], в качестве экстрагентов были выбраны гексан, хлороформ и ацетон. Для выделения каротиноидов из сырья был применен метод жидкостной экстракции с соотношением сырье: растворитель - 1:5.

Методика получения извлечения. Мякоть плодов Cucurbita maxima Duch. предварительно измельчали с помощью блендера, добавляя гидрокарбонат натрия в массовом соотношении 1:10 с целью нейтрализации органических кислот. Около 5,0 г измельченного сырья (точная навеска) трижды экстрагировали гексаном или хлороформом, или ацетоном порциями по 25 мл при постоянном по-

мешивании в делительной воронке при комнатной температуре. Полученные порции извлечений объединяли и подвергали качественному и количественному анализу. В связи с тем, что каротиноиды являются светочувствительными соединениями, на всех этапах изолирования уменьшали воздействия света, оборачивая колбы и делительные воронки черной бумагой или фольгой, а промежуточные продукты хранили в банках оранжевого стекла в темном месте.

Разделение суммы каротиноидов и качественный анализ полученных экстрактов проводили методом хроматографии в тонком слое сорбента (ТСХ), дополнительно для идентификации изолированных БАВ применяли метод УФ-спектрофотометрии. Суммарное количественное содержание каротиноидов в извлечениях определяли спе-ктрофотометрически в перечете на Р-каротин.

Методика спектрофотометрического анализа. По 1 мл гексанового или хлороформного, или ацетонового извлечения помещали в мерные колбы вместимостью 25 мл и доводили объемы растворов до метки гексаном, хлороформом и ацетоном соответственно.

Для полученных растворов регистрировали спектры поглощения на спектрофотометре СФ-56 в диапазоне от 250 до 700 нм в кюветах с толщиной рабочего слоя 10 мм, растворы сравнения - гексан, хлороформ и ацетон соответственно.

Для определения количественного содержания ка-ротиноидов в полученных извлечениях использовали способ расчета по удельному показателю светопоглощения.

Методика ТСХ анализа. На линию старта хромато-графической пластинки <^огЬШ» размером 10*20 см наносили по 5 мкл гексанового или хлороформного, или ацетонового извлечений и раствора стандартного образца

ß-каротина с концентрацией 2 10-6 г/мл, сушили при комнатной температуре в течение 5 мин, предохраняя пластинки с нанесенными образцами от действия света.

Пластинку помещали в хроматографическую камеру, насыщенную парами подвижной фазы в течение часа.

В качестве подвижных фаз использовали следующие смеси растворителей: эфир диэтиловый - петролей-ный эфир (3:1) - I; петролейный эфир - диэтиловый эфир

- кислота уксусная (85:15:1) - II; петролейный эфир - гек-сан (10:1) - III.

Когда фронт подвижной фазы проходил около 15 см, пластинку вынимали из камеры, сушили при комнатной температуре.

Детекцию пятен первоначально проводили по окраске зон адсорбции. Далее хроматограммы опрыскивали 10% раствором кислоты фосфорномолибденовой и нагревали до 60°С в течение 10 мин. Зоны адсорбции, соответствующие каротиноидам, проявлялись в виде синих пятен на зелено-желтом фоне.

Результаты и их обсуждение. Согласно литературным данным основной каротиноидный состав плодов Cucurbita maxima Duch. представлен ß-каротином, виолак-сантином, кукурбитаксантином, а-крипоксантином, ß-крипоксантином, лютеином, зеаксантином, неоксантином и другими каротиноидами [6, с. 8; 7, с. 126].

Электронные спектры поглощения растворов каро-тиноидов характеризуются, как правило, тремя максимума или двумя максимумами и плечом в интервале длин волн от 270 до 550 нм. Антоциановые красители поглощают около 549 нм [5, с.,15-19; 4,с.136].

Спектры поглощения гексанового и ацетонового извлечений имели по три максимума поглощения, находящиеся в области, присущей каротиноидным соединениям: 429, 448, 474 нм в ацетоне и 426, 447, 472 нм в гексане. Спектр раствора хлороформного извлечения нее имел «ка-ротиноидного профиля», однако имелись максимумы поглощения при 408, 433 ни и плечо около 455 нм. На спектрах всех извлечений отсутствовали максимумы поглощения около 550 нм, характерные для антоцианов.

В соответствии с данными литературы спектр поглощения раствора ß-каротина в ацетоне имеет максимумы при 429, 452, 478 нм, в тех же условиях для а-каро-тина - 424, 448, 476 нм, для зеаксантина - 430, 452, 479 нм, для неоксантина - 416, 440, 470 нм.

Растворы в гексане имеют следующие максимумы поглощения: для ß-каротина - 425, 450, 477 нм; для а-ка-ротина - 422, 445, 473 нм; для зеаксантина - 424, 449, 476 нм, неоксантина - 416, 438, 467 нм, для кукурбитаксан-тина - 427, 453, 483 нм.

Растворы в хлороформе: спектр раствора ß-каро-тина - максимумы при 435,461, 485 нм; а-каротина - 433, 457, 484 нм; зеаксантина - 433, 462, 493 нм, неоксантина

- 423, 448, 476 нм.

Кроме положений максимумов для идентификации каротиноидов методом спектрофотометрии используется расчет соотношения высот максимумом поглощения, в частности отношение третьего максимума ко второму, выраженное в процентах - III/II [5, с. 15-16].

После сравнения максимумов поглощения полученных спектров с литературными сведениями установлено, что гексановое извлечение преимущественно содержит ß-каротин, что подтверждается величиной соотношения III/II - 25,9%, согласно данным литературы этот параметр должен составлять - 25%. Наиболее вероятным сопутствующим каротиноидом является а-каротин, однако соотношение III/II для этого каротиноида должно

быть 55%. Суммарное содержание каротиноидов в пересчете на ß-каротин в гексановом извлечении составило 3,55 10-3% (удельный показатель поглощения - 2592, относительная погрешность определения - около 3,1%).

Анализ характера спектра поглощения ацетонового экстракта показал, что по положению первого максимума (428 нм) он наиболее близок к спектру ß-каротина, второго (448 нм) и третьего (476 нм) - к спектру а-каротина и зеаксантина. Соотношение III/II для спектра раствора ß-каротина в ацетоне должно быть - 15%, расчетное значение составило - 9%, содержание каротиноидов в перечете на зеаксантин - 5,3110-3% (удельный показатель поглощения - 2340, относительная погрешность определения -около 4,0%).

Хлороформное извлечение суммарно содержало 5,21 • 10-3% каротиноидов (удельный показатель поглощения - 2396, относительная погрешность определения -около 3,8%).

Далее все извлечения были проанализированы методом ТСХ в системах растворителей: эфир диэтиловый-петролейный эфир (3:1) (I); петролейный эфир-диэтило-вый эфир-кислота уксусная (85:15:1) (II), петролейный эфир-гексан (10:1) - III.

Система I позволила разделить шесть соединений каротиноидного типа в гексановом извлечении с коэффициентами подвижности: 0,024; 0,065; 0,230; 0,336; 0,451; 0,746 (ß-каротин).

По четыре соединения в хлороформном извлечении: 0,065; 0,230; 0,443; 0,750 (ß-каротин) и ацетоновом экстракте - 0,066; 0,123; 0,254; 0,750 (ß-каротин).

В системе растворителе II были разделены по два соединения в гексановом извлечении: 0,284; 0,850 (ß-каротин); хлороформном - 0,310, 0,845 (ß-каротин); ацетоновом - 0,284 и 0,845 (ß-каротин);

Таким образом, результат анализа извлечений в хроматографической системе I показал, что качественный состав гексанового извлечения значительно шире, чем у ацетонового и хлороформного, при этом составы ацетонового и хлороформного извлечений можно считать практически идентичным. Система II показала наличие двух ка-ротиноидов в каждом из извлечений, причем, для всех трех экстрактов был идентифицирован ß-каротин. Система растворителей III не дала разделения каротиноидов.

Вводы. В ходе исследования установлено, максимальное количество каротиноидов экстрагируется ацетоном, при этом методом ТСХ разделены только два кароти-ноида. Наибольшее число каротиноидных соединений содержит гексановое извлечение из сырья. Для дальнейшей работы в качестве экстрагентов были выбраны ацетон и гексан. Сравнение результатов анализа извлечений методом спектрофотометрии и ТСХ, показал, что необходимо повысить очистку получаемых извлечений.

Литература

1. Печинский С.В., Курегян А.Г. Влияние каротиноидов на иммунитет // Хим. -фармац. журн. - 2013.- Т. 47. - №10. - С. 3 - 8 (4).

2. Писарев Д.И., Новиков О.О., Романова Т.А. Разработка экспресс-метода определения каротиноидов в сырье растительного происхождения // Научные ведомости БелГУ Серия Медицина. Фармация. -2010. - № 22

3. Рудаков О.Б., Перикова Л.И., Болотов В.М. и др. Хроматографическое определение натуральных и искусственных каротиноидов в пищевых продуктах // Вестник ВГУ. Серия: Химия. Биология. Фармация. - 2004. - №4. - С. 78 - 84

4. Саввин П.Н., Комарова Е.В., Болотов В.М. и др. Исследование натуральных каротиноидно-антоциано-вых красителей // Химия растительного сырья. -2010. - №4. - С. 135-138.

5. Britton G., Liaaen-Jensen S., Pfander H. Carotenoids Handbook, Basel.: Springer Basel AG, 2004. - 646 р.

6. Delia B. Rodriguez-Amaya A guide to carotenoid analysis in foods, Washington, 2001 - 64 р.

7. Muntean E. Quantification of carotenoids from pumpkin juice by HPLC-DAD / Scientifical Researches.

Agroalimentary Processes and Technologies. - 2005.-№1 (11) - P. 123 - 128.

Rosdina Rahiman, Mohd Alauddin Mohd Ali, Mohammad Syuhaimi Ab-Rahman Carotenoids Concentration Detection Investigation: A Review of Current Status and Future Trend // International Journal of Bioscience, Biochemistry and Bioinformatics. - 2013. - №5 (3). -P. 446 - 472.

СРАВНИТЕЛЬНАЯ ОЦЕНКА СОДЕРЖАНИЯ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ В НАДЗЕМНЫХ И ПОДЗЕМНЫХ ОРГАНАХ НЕКОТОРЫХ РАСТЕНИЙ

ИЗ ФЛОРЫ БАШКОРТОСТАНА

Пупыкина Кира Александровна

д-р фарм. наук, профессор кафедры фармакогнозии БГМУ, г. Уфа

Казеева Алина Рамилевна аспирант кафедры фармакогнозии БГМУ, г. Уфа Шамсутдинова Светлана Рафидовна

аспирант кафедры фармакогнозии БГМУ, г. Уфа

Флора Республики Башкортостан богата и разнообразна, что обусловлено ее особым географическим расположением. Высокая антропогенная нагрузка на экосистему в Башкортостане требует особого внимания к вопросам охраны природной среды. В связи с тем, что вопросы биологии, экологии, распространения дикорастущих лекарственных растений изучены недостаточно, актуальным остается изучение запасов лекарственных растений для осуществления рациональной их заготовки, а также более подробное изучение химического состава лекарственных растений с целью расширения возможностей их использования.

Целью исследования являлось изучение содержания биологически активных веществ в надземных и подземных органах некоторых дикорастущих растений, произрастающих в условиях Республики Башкортостан.

Объектами исследования служили образцы сырья некоторых растений Республики Башкортостан: трава и корневища с корнями кровохлебки лекарственной (Sanquisorba officinalis), трава и корни бодяка полевого (Cirsium arvense). Сырье собирали в различные фазы вегетации растений, высушивали и проводили определение

количественного содержания биологически активных веществ. Определение содержания эфирного масла в образцах сырья проводили по методу 1 (ГФ-XI); содержание суммы каротиноидов определяли спектрофотометриче-ским методом, в пересчете на ß-каротин в мг%; определение содержания дубильных веществ проводили титримет-рическим методом; количественное определение органических кислот проводили методом алкалиметрии, а содержание аскорбиновой кислоты определяли при титровании извлечения раствором 2,6-дихлорфенолиндофенолята натрия [1, 2].

Для исследуемых растений методами фармакогно-стического анализа выявлены и установлены характерные морфологические и анатомо-диагностические признаки, необходимые для установления подлинности кровохлебки лекарственной и бодяка полевого. Определены показатели влажности сырья, содержание золы общей. При изучении количественного содержания некоторых групп биологически активных веществ подбирались условия, позволяющие наиболее полно извлечь БАВ. Результаты исследования представлены в таблице 1.

Числовые показатели качества и содержания БАВ исследуемых растений

Таблица 1

Исследуемый объект Кровохлебка лекарственная Бодяк полевой

корневища с корнями трава корни трава

Влажность, % 6,64±0,24 7,71±0,29 5,18±0,18 5,59±0,21

Зола общая, % 7,32±0,22 2,39±0,09 7,34±0,25 7,64±0,29

Эфирные масла, % 0,051±0,004 0,23±0,01 0,26±0,01 0,37±0,01

Дубильные вещества,% 30,84±1,05 16,45±0,44 6,85±0,21 4,76±0,16

Каротиноиды, мг % 32,69±1,05 36,94±1,42 33,84±1,12 38,51±1,48

Органические кислоты, % 1,81±0,05 1,07±0,04 1,6±0,07 1,3±0,04

Аскорбиновая кислота, % 0,142±0,005 0,061±0,001 0,283±0,006 0,182±0,003

Анализ полученных данных позволяет отметить, исследуемых растений в большем количестве накаплива-что содержание биологически активных веществ в расте- ются дубильные вещества, органические кислоты, в том ниях варьирует в широких пределах. В подземных органах