Анализ цитограмм и цитометрических параметров буккального эпителия при хроническом тонзиллите

Д. Х. Рыбалкина

АНАЛИЗ ЦИТОГРАММ И ЦИТОМЕТРИЧЕСКИХ ПАРАМЕТРОВ БУККАЛЬНОГО ЭПИТЕЛИЯ ПРИ ХРОНИЧЕСКОМ ТОНЗИЛЛИТЕ

Кафедра гистологии Карагандинского государственного медицинского университета

Проблема хронического тонзиллита остается одной из актуальных в медицине. Это подтверждается данными о широкой распространенности заболевания [1, 6, 8]. Хронический тонзиллит характеризуется нарушением функционирования лимфоидных образований, ассоциированных со слизистыми оболочками. Реактивность слизистой оболочки ротовой полости в кооперации с лимфоэпителиальными органами, в частности, с небными миндалинами на границе пищеварительного и дыхательного трактов, при воздействии различных внешних и внутренних факторов составляет первый защитный барьер как местного, так и общего иммунитета.

В литературе освещены цитологические данные мазков с поверхности небных миндалин, смывов из ротовой части глотки, мазков зева, мазков-отпечатков лакун и крипт [1, 8], но отсутствуют данные по сореактивности буккальных эпителиоцитов при хроническом тонзиллите. Известно, что одним из объектов в диагностике патологии ротовой полости и соматических заболеваний является буккальный эпителий [2, 9, 10]. Цитологические параметры буккальных эпи-телиоцитов изучены при воспалительных процессах в легких, почках, ЖКТ, при этом наблюдалось уменьшение размеров клеток [7]. При инфекционных заболеваниях с поражением кожи и слизистых в буккальном эпителии отмечено увеличение площади эпителиоцитов [4].

Целью исследования явился анализ цито-грамм и цитометрических показателей буккаль-ного эпителия при хроническом тонзиллите в стадии ремиссии и обострения.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Исследование буккального эпителия проведено на лицах мужского пола в возрасте 18-20 лет. Обследованы 60 человек, из них 20 здоровых, 20 с хроническим тонзиллитом в стадии ремиссии и 20 при обострении процесса. Материалом для исследования служили мазки со слизистой максиллярной зоны щеки, выше линии смыкания зубов, на уровне 5-6 зубов. Обследуемые предварительно полоскали рот физиологическим раствором. Мазки забирали пластмассовым шпателем, переносили на предметные стекла, подсушивали, фиксировали в спирт-ацетоне (1:1, 5 мин), окрашивали по Папенгейму.

При микроскопировании мазков подсчитывали эпителиальные клетки различных стадий дифференцировки, макрофаги, нейтрофилы и лимфоциты. Из расчета на 1 000 клеток определялись индекс дифференцировки (ИДиф) и ин-

декс деструкции (ИД) [3, 5]. ИДиф представляет собой сумму клеток соответствующих стадий дифференцировки в процентах с учетом их цифровых обозначений. ИД определяли по формуле:

ИД=(F1Х1+F2Х2+F3Х3)/n100; где F1-3 - коэффициент сопряжения, Х1-3 -возрастающий порядок величин показателей в процентах от содержания эпителиальных клеток с базофилией цитоплазмы или клеток раздражения, дистрофией и «фагирующих» клеток, n -общее число эпителиальных клеток. Для морфо-метрического исследования использована программа PhotoMl.2,2001. Определяли площадь клеток, их ядер в мкм2 и ЯЦО (ядерно-цитоплазматическое отношение).

Статистический анализ данных проводили с помощью программы Statsoft «Statistica-6», методами вариационной статистики. При определении значимости различий использовали критерий Стьюдента.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

При хроническом тонзиллите в стадии ремиссии фон мазка становится мутным, базо-фильным по сравнению с прозрачным у здоровых людей (рис. 1а). Содержание эпителиальных клеток в цитограмме (79,5±1,04%) уменьшается при сравнении с нормой (96,0±0,95%). Эпителиоциты дифференцируются на клетки III, IV, V, VI стадий, причем преобладают поверхностные клетки V стадии (табл. 1). Неэпителиальный компонент увеличивается до 22,5±1,67%. Наблюдается значительное увеличение от нормы (2,7±0,10%) содержания нейтрофилов, среди которых преобладают разрушенные клетки (15,2±1,05%). Содержание макрофагов соответствует таковым у здоровых (0,5±0,08%). По сравнению с контролем (0,8±0,07%) до 5,1±0,43% возрастает содержание лимфоцитов. Наблюдается проникновение лейкоцитов в эпителиоциты в 2,9±0,78% - так называемые фагирующие клетки (рис. 1б). Достоверно увеличивается ИД=4,4±0,17 (р<0,001). В мазках при ремиссии хронического тонзиллита содержание эпителиоцитов III, IV, V стадий диф-ференцировки не меняется (ИДиф=476,7±3,44), но снижается содержание безъядерных клеток.

В стадии обострения тонзиллита сохраняется мутный фон мазка, его базофилия, иногда с мелкозернистым детритом и слизью, при этом обнаруживается увеличение числа кокковых бактерий в виде цепочек или групп (рис. 1в). Наблюдается обильная клеточность, в отличие от мазка в норме с умеренной клеточностью (не более 5-6 клеток в поле зрения микроскопа при увеличении х400). Многоклеточные комплексы содержат более 10 эпителиоцитов.

В цитограмме до 50,5±2,09% увеличивается неэпителиальный компонент. Малоизменен-ные нейтрофилы составляют 22,8±1,36%, разрушенные - 14,9±2,35%. Содержание лимфоцитов повышается до 9,3±0,39%, макрофаги составляют 2,9±0,10%. Появляются голоядерные клетки 0,6±0,09%, что указывает на агрессивность вос-

а * V*" * б Г * - в

1 - эпителиоцит V стадии, 2 - «фагирующий» эпителиоцит III стадии, 3- эпителиоцит IV стадии дифференцировки, 4 - нейтрофильные гранулоциты, 5 - кокковые бактерии. Рис. 1. Мазки с буккального эпителия а) у здоровых; б) при хроническом тонзиллите в стадии ремиссии; в) при хроническом тонзиллите в стадии обострения. Окр. по Папенгейму. Ув.:х630

Таблица 1.

Содержание эпителиоцитов цитограмм щеки в норме, при хроническом тонзиллите в стадии ремиссии и обострения

Стадия эпителиоцитов Норма Хр. тонзиллит, ремиссия Хр. тонзиллит, обострение

I 0,7±0,95

II 2,0±0,33

iii 2,0±0,48 2,8±0,33 10,7±0,69 *** ***

IV 20,2±3,15 19,6±2,47 30,9±4,92 * **

V 72,7±4,75 75,7±6,98 55,0±5,34 ** **

VI 5,1±1,13 1,9±0,56 * 0,7±0,81 *

* р<0,05, ** р<0,01, *** р<0,001, по сравнению с ремиссии и обострения хронического тонзиллита

палительного процесса. Обнаруживаются мало-дифференцированные эпителиоциты I и II стадий, отражающие омоложение клеточного состава и свидетельствующие о снижении дифферен-цировки клеток. Возрастает количество клеток III, IV стадий и достоверно снижается содержание клеток V и VI стадий дифференцировки. Содержание «фагирующих» клеток увеличивается до 9,4±0,11% и указывает на агрессивность воспалительного процесса.

Нередко обнаруживаются эпителиальные клетки с мелкокапельной гидропической дистрофией и базофильными гранулами. Индекс дифференцировки клеток уменьшается до 439,6±2,56, индекс деструкции, напротив, увеличивается до 7,7±0,23 (р<0,001).

Описанные изменения буккального эпителия в виде увеличения содержания лейкоцитов и дистрофических процессов в эпителиоцитах при обострении хронического тонзиллита свидетельствуют о сореактивности подобным изменениям в эпителии на поверхности миндалин при хроническом тонзиллите [6, 8].

Проанализированы средние значения ци-тометрических параметров при хроническом тонзиллите в стадии ремиссии и при обострении процесса. В стадии ремиссии наблюдается увеличение площадей клеток III, IV и V стадий диффе-ренцировки. Увеличивается площадь ядер и снижается ЯЦО эпителиоцитов III стадии дифферен-

нормой; * р<0,05, ** р<0,01, *** р<0,001 при сравнении

цировки. При обострении процесса наблюдается более значительное увеличение площади эпите-лиоцитов разной стадии дифференцировки, возрастает площадь ядер III и IV стадий, ЯЦО клеток III стадии уменьшается (табл. 2). Площадь клеток VI стадии дифференцировки, которые лишены ядер, также возрастает. Полученные данные являются свидетельством дистрофических процессов в эпителиоцитах.

Таким образом, наряду с уже известными изменениями в поверхностном эпителии миндалин [1, 6, 8], проведенное исследование впервые показало сореактивность клеточных элементов буккального эпителия при хроническом тонзиллите, что отражает единство мукозальной системы слизистых оболочек ротовой полости.

ВЫВОДЫ

1. В цитограмме эпителия щеки при хроническом тонзиллите увеличивается неэпителиальный компонент, преимущественно фракции нейтрофилов с различной степенью активности. При обострении воспалительного процесса этот процесс выражен сильнее.

2. В стадии ремиссии хронического тонзиллита сохраняется содержание буккальных эпителиоцитов III-V стадий. При обострении уменьшается количество клеток V и VI стадий дифференцировки и снижается индекс дифференцировки, что свидетельствует об омоложении клеточного пласта.

Таблица 2.

Цитометрические показатели эпителиальных клеток в норме, при хроническом тонзиллите

в стадии ремиссии и обострения

Стадия клеток Щека Норма Хр. тонзиллит, ремиссия Хр. тонзиллит, обострение

III площадь клеток 1926,90±41,521 2919,52±55,546 *** 3354,91±55,896 *** **

площадь ядер 91,10±1,440 113,44±3,454 ** 123,71±2,156 *** *

ЯЦО 0,054±0,0013 0,041±0,0019 *** 0,039±0,0071 **

IV площадь клеток 2182,90±33,031 2810,61±48,519 *** 2944,22±56,952 ***

площадь ядер 79,70±2,301 83,77±10,059 91,90±3,620 **

ЯЦО 0,041±0,002 0,032±0,0064 *** 0,034±0,0075 **

V площадь клеток 2247,40±38,420 2581,25±39,041 *** 2622,96±41,570 ***

площадь ядер 58,80±2,161 52,24±2,610 * 60,38±3,639 **

ЯЦО 0,030±0,003 0,022±0,0069 ** 0,026±0,0055 * *

VI площадь клеток 1197,7± 17,59 1461,99±43,271 ** 1623,81±29,901 ** **

* р<0,05, ** р<0,01, *** р<0,001, по сравнению с ремиссии и обострения хронического тонзиллита

3. При хроническом тонзиллите по сравнению с контролем увеличивается площадь эпите-лиоцитов всех стадий дифференцировки и повышается индекс деструкции в связи с дистрофическими изменениями в эпителиоцитах.

ЛИТЕРАТУРА

1. Азнабаева Л. Ф. Экология и иммунология слизистых оболочек верхних дыхательных путей / Л. Ф. Азнабаева, Н. А. Арефьева, Ф.А. Хафизова // Рос. ринология. - 1996. - №2-3. - С. 9 - 10.

2. Буккальные эпителиоциты как инструмент клинико-лабораторных исследований /М. А. Абаджиди, Т. В. Махрова, И. В. Маянская и др. // Нижегородский мед. журн. - 2003. - №3-4. - С. 8 - 12.

3. Быкова И. А. Цитологическая характеристика отпечатков слизистой оболочки полости рта с применением индекса дифференцировки клеток / И. А. Быкова, А. А. Агаджанян, Г. В. Банченко // Лаб. дело. - 1987. - №1. - С. 33 - 35.

4. Куркин А. В. Реактивность буккальных эпите-лиоцитов у детей при ветряной оспе /А. В. Куркин, Д. Х. Рыбалкина //Астана мед. журн. - 2007. - №1. - С. 119 - 121.

5. Новый диагностический метод оценки состояния пародонта по данным цитоморфометрии от-

нормой; * р<0,05, ** р<0,01, *** р<0,001, при сравнении

печатков с десны /А. С. Григорьян, А. И. Грудя-нов, З. П. Антипова и др. //Стоматология. - 2000.

- №5. - С. 4 - 9.

6. Полякова Т. С. Хронический тонзиллит: диагностика, лечение, профилактика /Т. С. Полякова, Е. П. Полякова //Рус. мед. журн. - 2004. -№12. - С. 2 - 7.

7. Рыжавский В. Я. Изменения буккального эпителия при некоторых заболеваниях у детей /В. Я. Рыжавский, Г. Н. Холодок //Лаб. дело. - 1995. -№2. - С. 39 - 40.

8. Хмельницкая Н. М. Оценка морфофункцио-нального состояния небных миндалин у больных хроническим тонзиллитом /Н. М. Хмельницкая, В. В. Власова, В. А. Косенко //Вестн. оториноларингологии. - 2000. - №4. - С. 33 - 39.

9. Юй Р. И. Цитологический анализ слизистой оболочки полости рта как достоверный критерий оценки ее гистофизиологии, патологии и эффективности лечения //Вестн. КазНМУ. - 2006. - №1.

- С. 299 - 314.

10. Nayar A. K. Cytomorphometric analysis of exfoliated normal buccal mucosa cells /A. K. Nayar, B.S. Sundharam //Indian. J. Dent. Res. - 2003. - V. 14.

- Р. 87 - 93.

Поступила 02.09.10

D. H. Rybalkina

THE ANALYSIS OF CYTOGRAMM AND A CYTOMETRIC PARAMETERS OF BUCCAL EPITHELIUM DURING CHRONIC TONSILLITIS

During chronic tonsillitis on cytogram of buccal epithelium non-epithelial components of neutrophils was decreased. During exacerbation of inflammation process has changes of characters of ripening and differentiation of epitheliocytes, which has in norma of mucous layer of oral cavity in cheeks zone.

Д. Х. Рыбалкина

СОЗЫЛМАЛЫ ТОНЗИЛЛИТ КЕЗ1ЦДЕГ1 БУККАЛЬД1 ЭПИТЕЛИЙ ЦИТОГРАММАСЫ МЕН ЦИТОМЕТ-РИЯЛЫК ПАРАМЕТРЛЕР1Н ТАЛДАУ

Созылмалы тонзиллит кезщде буккальдi эпителий цитограммасында эр тYрлi бенсендiлiктегi нейтро-фил фракциясыныч эпителийлi емес компонентi жорарлайды. К,абыну процесшщ вршуi кезщде эпителио-циттер тап жетiлуi мен дифференцирленушщ сипаты взгередк бдетте, бул процесс ауыз куысы шырышты кабатыныч урт аймарына тэн.

И. В. Ким

ПЕРСПЕКТИВЫ СУДЕБНО-МЕДИЦИНСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ СМЕШАННЫХ ПЯТЕН

Карагандинский филиал РГКП «Центр судебной медицины» МЗ рК

Преступления, совершаемые на сексуальной почве, составляют достаточно большой процент всех преступлений. При расследовании такого рода преступлений одним из основных факторов является обнаружение и, что несомненно более важно, идентификация спермы, оставленной преступником на вещественных доказательствах и/или теле жертвы. Методов обнаружения спермы известно много. Основными до сих пор остаются: физический (ультрафиолетовый свет длиной 254 и 365 нм), микроскопический анализ окрашенных препаратов, биохимический (кислая фосфатаза), специфический антиген простаты (РБД).

Выявление группоспецифических антигенов системы АВ0 в смешанных пятнах представляет собой сложную проблему, так как в основном исследуются выделения из открытых полостей человека: ротовой, вагинальной, анальной. В таком материале всегда содержится большое количество микрофлоры, обладающей серологической активностью, способной искажать истинный фенотип индивидуума, обусловливая в ряде случаев кажущееся несовпадение антигенных характеристик крови и выделений одного и того же человека. Кроме того, в разных участках одного и того же пятна может находиться различное количество клеточного материала [1].

При половых преступлениях или при подозрении на них для решения вопроса о групповой принадлежности спермы в представленных на экспертизу следах на вещественных доказательствах, которые, как правило, имеют примесь эпителиальных клеток или крови, возникает необходимость их разделения. С этой целью к уже существующим методикам разделения спермы от крови, спермы от пота экспертами-генетиками РГКП ЦСМ МЗ РК было предложено применение техники дифференциального лизиса для разделения спермы от различного вида эпителиальных клеток (влагалища, ротовой полости, прямой кишки и т.д.), используемого при ДНК-анализе выделения генетического материала сперматозоидов из смешанных следов. Этот метод основан на разнице в химическом строении клеточных

оболочек сперматозоидов и эпителиальных клеток, а именно - наличие в мембране сперматозоидов большого количества дисульфидных связей способствует повышенной устойчивости сперматозоидов к воздействию факторов внешней среды. Во время предварительной инкубации при температуре 37-56° в течение 60-120 мин в растворе, содержащем лизирующие агенты и про-теолитический фермент (протеиназа К), происходит разрушение клеточных оболочек и ядер бук-кального и влагалищного эпителия, клеток крови. Без разрушения дисульфидных связей специальными химическими агентами эти связи не позволяют эффективно расщеплять белки сперматозоидов протеолитическими ферментами (в частности, протеиназой К). После центрифугирования сперматозоиды преимущественно сохраняются, а остальные разрушенные клетки оказываются в надосадочной жидкости (супернатант) [2]. Осадок же представляет собой обогащенную фракцию сперматозоидов насильника.

При проведении судебно-медицинской экспертизы вещественных доказательств по делу об изнасиловании гр-ки К. следователем были поставлены вопросы о наличии спермы в содержимом влагалища и ее групповой принадлежности. Изнасилованная К. имеет группу крови A(II). В содержимом влагалища обнаружена сперма. При определении групповой принадлежности выявлены антигены А и В, которые могли произойти как за счет спермы лица с группой крови В (III), так и за счет спермы лица с группой крови АВ (IV). Также антиген А может происходить за счет влагалищного секрета потерпевшей. Следует отметить, что в процессе реакций, применяемых в биологической практике, не удается точно установить, какому виду выделений соответствует в данном случае антиген А. Либо он выявляется за счет влагалищных выделений, либо - за счет спермы.

Исследуемый материал (содержимое влагалища потерпевшей К.) экстрагировали 18 ч в условиях холодильника. После центрифугирования в течение 3 мин при 8000 об/мин, надосадоч-ную жидкость удаляли, а к взвеси клеточного осадка добавляли протеиназу К и инкубировали при 50° в течение 120 мин с последующим центрифугированием 9 000 об/мин - 5 мин. На данном этапе происходит разрушение клеток крови, слюны, в исследованном случае - влагалищного эпителия. Более короткие и более длительные сроки инкубации не рекомендованы, так как могут привести либо к неполному лизису эпителиальных клеток, либо к лизису сперматозоидов.