Некоторые механизмы регуляции апоптоза при болезни Крона

8. Российское медицинское общество по артериальной гипертонии (РМОАГ), Всероссийское научное общество кардиологов (ВНОК). Диагностика и лечение артериальной гипертензии. Российские рекомендации (третий пересмотр) // Кардиоваскулярная терапия и профилактика. - 2008. - № 6, прил. 2. - 28 с.

9. Справочник Видаль. Лекарственные препараты в России. М. : АстраФармСервис, 2009. - 1760 с.

10. Столбова, С. А. Динамика церебральной гемодинамики на фоне лечения препаратом козаар у больных артериальной гипертонией / С. А. Столбова, Ю. М. Кляшева // Кардиоваскулярная терапия и профилактика. - 2009. - Т. 8, № 82. -С. 58.

11. Чазов, Е. И. Рациональная фармакотерапия сердечно-сосудистых заболеваний: Рук. для практикующих врачей / Е. И. Чазов, Ю. Н. Беленков, Е. О. Борисова, Е. Е. Гогин [и др.]. - М. : Литтерра, 2004, - 972 с.

12. Campbel, N. The 2010 Canadian Hypertension Education Program recommendations / N. Campbel, M. Moy Lum Kwong // Can. Fam. Physician. - 2010. - Vol.56, № 7. - P. 649-653.

13. Kjeldsen, E. Effects of losartan vs candesartan in reducing cardiovascular events in the primary treatment of hypertension / E. Kjeldsen, J. Stalhammar, P. Has-vold [et al.] // J. Hum. Hypertens. - 2010. - Vol. 24. -P. 263-273.

14. Pokrovskii, V.M. Cardiorespiratory Synchronzation. Human / V.M. Pokrovskii, V.G. Abushkevich, I.I. Borisova [et al.] // Physiology. - 2002. - Vol.28, № 6. -P. 728-731. Translated from Fiziologiya Cheloveka. -Vol. 28, № 6. - P. 116-119.

15. The Task Force for the management of arterial hypertension of the European Society of Hypertension and of the European Society of Cardiolody. 2007 Guidelines for the management of arterial hypertension // J. Hypertens. - 2007. - Vol. 25. - P. 11051187.

АДАПТИВНОСТЬ И ГЕМОДИНАМИКА У ПАЦИЕНТОВ

С ГИПЕРТОНИЧЕСКОЙ БОЛЕЗНЬЮ В ОСТРОЙ ФАРМАКОЛОГИЧЕСКОЙ ПРОБЕ ПРИ ПРИЕМЕ ЛОЗАРТАНА

О. Г. КОМПАНИЕЦ, В. М. ПОКРОВСКИЙ

DINAMICS OF FUNCTIAL-ADAPTIVE ABILITIES AND BLOOD PRESSURE OF PATIENTS

WITH ARTERIAL HYPERTENSION IN ACUTE PHARMACOLOGYCAL TEST

KOMPANIETS O. G., POKROVSKI V. M.

Лозартан снизил систолическое и диастолическое артериальное давление в остром фармакологическом тесте. Регистрировалось расширение диапазона сердечно-дыхательного синхронизма, снижение длительности развития синхронизации на минимальной и максимальной границах, что свидетельствует об улучшении регуляторно-адаптивного потенциала у пациентов, достигших целевого уровня артериального давления в острой фармакологической пробе.

Ключевые слова: сердечно-дыхательный синхронизм, регуляторно-адаптивные возможности, лозартан, артериальное давление

Losartan has redused systolic and diastolic blood pressure during acute pharmacologycal test. The width of a range of cardiorespiratory synchronisation increased. There was decrease in duration of development of synchronisation at the minimum and maximum borders of a range of synchronization. Such dynamics of parameters of cardiorespiratory synchronism testified to improvement of functional-adaptable possibilities of the patients using losartan to achieve target level of blood pressure. The phenomenon of cardiorespiratory synchronism is convenient, simple in use, noninvasive test for the characteristics of a complex estimation of dynamics of functional conditions of the organism.

Key words: cardiorespiratory synchronism, functional-adaptable possibilities, losartan, blood pressure

© В. В. Павленко, Г А. Катаганова, 2011 УДК: 616.344 - 002 - 031.84: 616 - 018

НЕКОТОРЫЕ МЕХАНИЗМЫ РЕГУЛЯЦИИ АПОПТОЗА ПРИ БОЛЕЗНИ КРОНА

В. В. Павленко, Г. А. Катаганова Ставропольская государственная медицинская академия

Апоптоз является одним из наиболее важных регуляторных механизмов поддержания иммунологического гомеостаза. Нарушения путей апоптоза приводят к развитию различных аутоиммунных заболеваний [3]. Болезнь Крона

Павленко Владимир Васильевич, доктор медицинских наук, профессор, заведующий кафедрой пропедевтики внутренних болезней Ставропольской государственной медицинской академии, тел.: (8652)755450; 89034451748; e-mail: PavlenkoVV@yandex.ru

Катаганова Гульнара Арсланбековна, ассистент кафедры пропедевтики внутренних болезней Ставропольской государственной медицинской академии, тел.: 89283194531; e-mail: gulj0811@yandex.ru

(БК) — хроническое иммуновоспалительное заболевание кишечника неизвестной этиологии [1]. Показано, что в развитии этой патологии определенную роль играет повышение иммунологической реактивности Т-лимфоцитов [4]. В нормальной кишке Т-лимфоциты собственной пластинки чувствительны к факторам, запускающим апоптоз, однако, как полагают, при БК формируется резистентность к этим факторам [5].

Цель исследования. Изучение содержания маркеров апоптоза - CD-95, CD-95-L, Вс1-2 в периферической крови больных БК в динамике лечения.

Материал и методы. Обследовано 20 больных БК (8 мужчин и 12 женщин) в возрасте от 20 до 60 лет в стадии обострения и в динамике лечения (в среднем

через 4 недели). Рецидивирующее течение БК установлено у 11 пациентов, острое - у 4, непрерывное - у 5. Для определения тяжести БК использовали индекс активности CDAI (Crohn’s disease activity index) - индекс Беста. Легкая форма БК установлена у 5 пациентов (индекс Беста 150-300), среднетяжелая - у 8 пациентов (индекс Беста 301-450), тяжелая - у 7 больных (индекс Беста >450). В зависимости от тяжести заболевания использовали препараты 5-АСК, глюкокортикостероиды, цитостатики, антицитокиновые средства (инфликсимаб).

Контрольную группу составили 10 практически здоровых людей. Маркеры апоптоза - CD-95, CD-95-L, Bcl-2 определяли в периферической крови методом проточной цитометрии (проточный цитометр FACS CALLIBUR). Содержание в контрольной группе Bcl-2 составило 55,87±4,9%, CD-95 - 58,45±7,4%, CD-95-L - 9,8±0,9%.

Для оценки достоверности различий показателей исследования была проведена статистическая обработка результатов с использованием t-критерия Стъюдента для малых выборок, непараметрического метода ранговой корреляции Спирмена при уровне значимости р<0,05.

Результаты и обсуждение. Установлено, что у больных в стадии обострения БК экспрессия Bcl-2 Т-лимфоцитами периферической крови повышена (81,7±6,9%, р<0,05 с контролем). В динамике лечения экспрессия Bcl-2 Т-лимфоцитами периферической крови нормализовалась (47,6±5,8 %, р>0,05 с контролем).

Содержание CD-95 в периферической крови у больных с ЯК в период обострения также было повышено (84,1±4,2%, р<0,05 с контролем), а в период ремиссии показатели CD-95 в периферической крови снизились, но контрольных значений не достигли (64,5±6,6%, р<0,05 с контролем) .

Содержание CD-95-L в периферической крови, наоборот, в период обострения БК было снижено (5,6±1,6%, р<0,05 с контролем). Через 4 недели лечения уровень CD-95-L в периферической крови превысил контрольный уровень (16,8±1,4%, р<0,05 с контролем и с фазой обострения).

Проведен анализ содержания CD-95, CD-95-L, Bcl-2 в периферической крови в зависимости от пола и возраста пациентов. Установлено, что содержание CD-95, CD-95-L, Bcl-2 в периферической крови мужчин (69,66±11,6%, 21,82±13,75% и 45,8±26,92 соответственно) и женщин - (78± 10,1%, 11,28±6,49 и 55,5±20,36 соответственно) не различалось (Р>0,05). Не выявлено различий в содержании CD-95 в периферической крови в возрастных группах пациентов БК от 20 до 60 лет (р>0,1 между группами больных). Уровень Bcl-2 в периферической крови у пациентов различных возрастных групп также существенно не различался (р>0,05 между группами). В то же время показатели CD-95-L были наиболее низкими (P<0,05) в группе пациентов от 30 до 49 лет (15,34±11,7%) в сравнении с пациентами от 20 до 29 лет (18,2±0,28%) и от 50 до 60 лет (20,2±18,38%).

Представлял определенный интерес анализ содержания CD-95, CD-95-L, Bcl-2 в периферической крови в зависимости от характера течения БК.

Установлено (табл. 1), что наибольшие значения Bcl-2 и CD-95 в периферической крови больных БК наблюдались при непрерывном его течении, а наименьшие исследуемые показатели регистрировались при остром течении заболевания. Содержание CD-95-L в периферической крови было более низким при непрерывном течении БК.

Таблица 1

Содержание CD-95, CD-95-L, Bcl-2 в периферической крови у больных БК в зависимости от характера (формы) течения заболевания

Течение БК Маркеры апоптоза

Bcl-2 CD-95 CD-95-L

Острое (1) 43,06±3,02* P1< 0,05 67,2±0,81* Р1< 0,05 29,3±5,82* Р1< 0,05

Рецидивирующее (2) 62,3±4,19* P2< 0,05 77,57±4,39* Р2< 0,05 17,43±1,34* Р2< 0,05

Непрерывное (3) 86,63±2,82* Р3 < 0,05 85,97±1,5* Р3 < 0,05 3,36±1,01* Р3< 0,05

*- р<0,05 с контролем;

Р1 - различия показателей 1 и 2 групп;

Р2 - различия показателей 2 и 3 групп;

Р3 - различия показателей 1 и 3 групп.

Был проведен корреляционный анализ между показателями апоптоза и клиническим индексом активности БК (индекс Беста) с использованием непараметрического метода ранговой корреляции Спирмена (табл. 2).

Таблица 2

Взаимосвязь между показателями апоптоза в периферической крови и показателями индекса клинической активности по Бесту

Индекс Беста Bcl-2 CD-95-L CD-95

150-300 0,663* -0,344* 0,652 *

301-450 0,620* -0,371* 0,675*

>450 0,548* -0,246 0,519*

*P<0,05

Выявлена прямая достоверная связь между индексом клинической активности и содержанием Вс1-2 и CD-95 и обратная - между уровнем CD-95-L и тяжестью заболевания.

С целью изучения влияния фармакологических препаратов и их комбинаций, используемых в терапии БК, на продукцию изучаемых показателей больные были условно разделены на группы в зависимости от вида лечения (рис.). Первую группу составили 5 пациентов с легким течением БК (индекс Беста = 150300), получавших препараты 5-аминосалициловой кислоты (5-АСК) в виде монотерапии. Вторую группу составили 8 больных со среднетяжелым течением БК (индекс Беста = 301-450), получавших комбинацию препаратов 5-АСК с ГКС (преднизолон). Третью группу составили 4 больных с тяжелой формой БК (индекс Беста >450), которые получали в течение 4-х недель сочетанную терапию преднизолоном и азатиоприном в рекомендованных дозировках. В четвертую группу вошли 3 пациента с БК высокой степени клинической активности, получавшие в дополнение к базисной терапии трехкратное введение Инфликсимаба (Реми-кейд) в дозе 5 мг/кг массы тела по схеме 0-2-6 недель (индукционный курс).

Установлено, что у больных 1-й группы на фоне приема 5-АСК уровень изучаемых маркеров апоп-тоза к концу 4-й недели достоверно снизился (не до нормы). Во 2-й группе больных с исходно более высокими изучаемыми показателями использование комбинации препаратов 5-АСК с преднизолоном также привело к снижению их содержания в крови, но не до контрольного уровня. В группе больных с тяжелым

%

100

90

80

70

60

50

40

30

20

10

0

і 5 АСК До лечения і 5 АСК После лечения ] 5 АСК После лечения ] 5 АСК+ГКС до лечения і 5 АСК+ГКС после лечения ] 5 АСК+ГКС после лечения і ГКС+азатиоприн до лечения і ГКС+азатиоприн после лечения I ГКС+азатиоприн после лечения I Инфликсимаб до лечения ] Инфликсимаб после лечения

CD-95 CD-95-L Bcl-2

*- P< 0,05 с контролем,

** - Р< 0,05 между группами до и после лечения.

Рис. Динамика маркеров апоптоза в зависимости от вида базисной терапии

течением БК (3-я группа) применение глюкокорти-коидов и цитостатиков способствовало умеренному снижению содержания CD-95 и Вс1-2 и повышению CD-95-L в периферической крови. В 4-й группе больных с исходно более высокими показателями CD-95, Вс1-2 и низким содержанием CD-95-L добавление к ГКС и иммунодепрессантам антицитокинового препарата (Инфликсимаба) достоверно снизило уровень антиапоптотических изучаемых маркеров и способствовало повышению (не до нормы) проапоптотиче-ского показателя CD-95-L.

Таким образом, не вызывает сомнений ведущая роль иммунных нарушений в развитии воспалительной реакции в кишечнике при БК. Данные литературы свидетельствуют о многочисленных, но не закономерных изменениях клеточного и гуморального иммунитета при БК [4]. Как следует из полученных нами результатов, в период обострения БК происходит снижение экспрессии CD-95-L, способствующее апоптозу CD-95. В то же время повышение экспрессии Вс1-2 на им-мунокомпетентных клетках крови может ингибировать апоптотическую активность митохондрий Т-клеток, повышать их жизнестойкость, способствуя чрезмерному накоплению в стенке кишечника, пролонгируя таким образом хроническое воспаление.

Позитивное влияние используемых лекарственных средств при разнообразных формах БК связано с их различным действием на механизмы апоптоза. Так, апоптотический эффект препаратов 5-АСК (сульфа-салазин) осуществляется по FAS-зависимому пути, но при этом вовлекается митохондриальный путь апоптоза. В результате 4-недельной терапии препаратами 5-АСК экспрессия проапоптотических и антиапоптотических факторов на Т-лимфоцитах снизилась. Однако такой дисбаланс, видимо, способен индуцировать апоптоз иммунокомпетентных клеток путем активации внутриклеточных каспаз (каспазы 9).

Не исключено, что к тяжелому течению БК приводит и нарастающая резистентность иммуноцитов к факторам апоптоза. Добавление к терапии ГКС и иммуносупрессоров, вероятно, в какой-то степени способствует преодолению этой резистентности.

Действие ГКС опосредовано внутриклеточными специфическими рецепторами. Рецептор, связывая лиганд, регулирует транскрипцию гормоночувствительных генов. Это могут быть гены, продукты

которых регулируют продвижение клетки по клеточному циклу, или апоптоз-специфические гены. Терапевтический эффект азатиоприна объясняется про-апоптотическим действием его метаболита 6-тиогуанина, который, подвергаясь фосфори-лированию, снижает активацию антиапоптотических факторов. При воздействии инфликсимаба нейтрализация растворимого ФНО-, стимулирующего активизацию фактора транскрипции NFkB, приводит к редукции ан-тиапоптотического механизма в Т-лимфоцитах, когда клетки подвергаются апоптозу через путь взаимодействия Fas/Fas-лиганда.

Следовательно используемые в терапии БК лекарственные препараты оказывают то или иное влияние на процессы индукции апоптоза Т-клеток у больных БК. В то же время перспективным подходом к лечению БК является использование селективных антиапоптотических лекарственных средств [2].

Выводы

1. В период обострения БК содержание CD-95 и Bcl-2 в периферической крови повышено, а CD-95-L - снижено.

2. С наступлением клинической ремиссии содержание CD-95 и CD-95-L в периферической крови снижается, а экспрессия Bcl-2 нормализуется.

3. Содержание маркеров апоптоза CD-95, CD-95-L и Bcl-2 в периферической крови зависит от характера течения БК.

4. Уровни CD-95 и Bcl-2 в периферической крови прямо пропорциональны, а cD-95-L обратно пропорционален клинической активности заболевания.

5. Динамика показателей апоптоза зависит от используемых в лечении БК лекарственных препаратов.

Литература

1. Воробьева, Г. И. Неспецифические воспалительные заболевания кишечника / Г. И. Воробьева, И. Л. Халиф // М. Миклош - 2008-399 с.

2. Ardizzone, S. Biologic therapy for inflammatory bowel disease / S. Ardizzone, G. Bianchi Porro // Drugs. - 2005. - Vol. 65. - P. 2253-2286.

3. Doering, J. Induction of T lymphocyte apoptosis by sulphasalazine in patients with Crohn’s disease / J. Doering, B. Begue, M.J. Lentze [et al.] // Gut. -2004. - Vol. 53. - P. 1632-1638.

4. Neurath, M. F. Regulation of T-cell apoptosis in inflammatory bowel disease: to die or not to die, that is the mucosal question / M. F. Neurath, S. Fi-notto, I. Fuss [et al.] // Trends Immunol. - 2001. -Vol. 22. - P. 21-26.

5. Mudter, J. Mucosal T-cells: mediators or guardians of inflammatory bowel disease? / J. Mudter, M. F. Neurath // Curr. Opin. Gastroenterol. - 2003. -Vol. 19. - P. 343-349.

6. Wehkamp, J. Mechanisms of disease: defensins in gastrointestinal diseases / J. Wehkamp, K. Fellermann, K.R. Herrlinger [et al.] // Nat. Clin. Pract. Gastroenterol. Hepatol. - 2005. - Vol. 2 - P. 406415.

НЕКОТОРЫЕ МЕХАНИЗМЫ РЕГУЛЯЦИИ

АПОПТОЗА ПРИ БОЛЕЗНИ КРОНА

В. В. ПАВЛЕНКО, Г. А. КАТАГАНОВА

Изучена роль биологических маркеров апоптоза -CD-95, CD-95-L, Вс1-2 в патогенезе болезни Крона. Обследовано 20 пациентов с болезнью Крона (БК) в динамике лечения различными комбинациями лекарственных препаратов. Маркеры апоптоза определяли в периферической крови методом проточной цитометрии. Установлено, что в период обострения БК CD-95 и Вс1-2 в периферической крови повышена, а CD-95-L -снижен. Выявлена корреляционная взаимосвязь между индексом клинической активности (индекс Беста), с одной стороны, и показателями апоптоза, с другой. Динамика изучаемых показателей апоптоза зависела от используемых в лечении БК лекарственных препаратов.

Ключевые слова: болезнь Крона, апоптоз

SOME OF THE MECHANISMS

OF APOPTOSIS IN CROHN'S DISEASE

PAVLENKO V. V., KATAGANOVA G. A.

Research is devoted to the study of the role of biological markers of apoptosis - CD - 95, CD-95-L, Bcl-2 in the pathogenesis of Crohn’s disease (CD). Examined 20 patients with Crohn’s disease in the dynamics of the treatment of the different combinations of drugs. Markers of apoptosis was determined in the peripheral blood by flow cytometry. It is established that in the period of aggravation of disease CD-95 and Bcl-2 in the peripheral blood, and CD-95-L has been reduced and found the correlation relationship between the index of clinical activity index (As Best), on the one hand, and the indicators of apoptosis on the other hand. Dynamics of the studied indicators of apoptosis depended on used in the treatment of CD drugs.

Key words: Crohn’s disease, apoptosis

© Коллектив авторов, 2011 УДК 612.861

ОСОБЕННОСТИ ПСИХОТРОПНОЙ АКТИВНОСТИ ЕСТЕСТВЕННЫХ АДАПТОГЕНОВ И УЧАСТИЕ В НЕЙ ЭПИФИЗА

Э. Б. Арушанян, С. С. Наумов, А. В. Попов Ставропольская государственная медицинская академия

Мозговая железа эпифиз представляется своеобразным адаптогенным органом, который приспосабливает деятельность организма к меняющимся фотопериодиче-ским процессам во внешней среде, в том числе за счёт поправочной регуляции поведения. Основным способом реализации эпифизарных влияний на физиологические процессы служит секреторная активность железы, в частности, связанная с периодической выработкой ведущего гормона мелатонина. В качестве естественного хронобиотика он обнаруживает способность к организации суточного периодизма и одновременно является типичным адаптогеном с отчётливой психотропной активностью [3, 13, 14].

Наряду с мелатонином в последние годы внимание исследователей с хронобиологических позиций привлекают адаптогенные свойства ряда натуральных средств, которые получают из растений, произрастающих преимущественно в регионе Дальнего Востока (женьшень, родиола, элеутерококк и др.) [7]. Недавно Томскими фармакологами предложен для клинических целей комплексный растительный препарат тонизид, в состав которого одновременно входят, помимо женьшеня, действующие начала родиолы розовой, аралии и элеутерококка [10]. В этой связи представлялось ин-

Арушанян Эдуард Бениаминович, доктор медицинских наук, профессор, Заслуженный деятель науки РФ, заведующий кафедрой фармакологии Ставропольской государственной медицинской академии, тел.: (8652) 354881; e-mail: arushanyan@inbox.ru.

Наумов Станислав Сергеевич, ассистент кафедры фармакологии Ставропольской государственной медицинской академии, тел.: (8652) 354881.

Попов Алексей Викторович, доктор медицинских наук, профессор кафедры фармакологии Ставропольской государственной медицинской академии, тел.: (8652) 354881; e-mail: popov2003@bk.ru.

тересным оценить профиль его психотропной активности с учётом фактора времени в сравнении с мелатонином, а также возможный вклад в действие обоих средств эпифиза.

Материал и методы. Выполнено несколько серий опытов на 120 белых беспородных крысах массой 180-220 г. Животных содержали в обычных условиях вивария при фиксированном (свет-темнота 12:12) световом режиме со свободным доступом к пище и воде.

Поведение оценивали посредством методик условнорефлекторного пассивного избегания (УРПИ) и приподнятого крестообразного лабиринта (ПКЛ), традиционно используемых для характеристики когнитивной и эмоциональной активности крыс [9]. Регистрацию УРПИ производили в челночной камере, имеющей электрифицированный пол с выработкой условного избегательного ответа на болевое наказание. При этом латентный период реакции (в сек.), регистрируемой на следующий опытный день, являлся критерием прочности сформированного памятного следа. ПКЛ, который представлял собой расположенную на высоте (50 см от пола) крестообразную установку с открытыми и закрытыми рукавами, применяемую для определения степени тревожности и исследовательской активности крыс. Критерием первой служила длительность пребывания животных в том и другом рукавах, а учёт числа вертикальных стоек и свешиваний с горизонтальной платформы позволял судить об уровне исследовательского поведения.

Удаление эпифиза производили под кетаминовым наркозом. Для экстирпации железы пользовались щадящим методом, разработанным в нашей лаборатории [11]. После завершения опытов факт экстирпации верифицировали макроскопически. Контролем для этой серии служили ложнооперированные животные, у которых трепанировали череп, повреждали твёрдую