ГЕН-ВОССТАНОВИТЕЛЬ RF4 ДЛЯ ЦИТОПЛАЗМАТИЧЕСКОЙ МУЖСКОЙ СТЕРИЛЬНОСТИ (CMS) C-ТИПА КУКУРУЗЫ, МОЛЕКУЛЯРНЫЕ МАРКЕРЫ И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ

Rf4
1. Способ выделения гена  из кукурузы, причем способ включает:
1
скрещивание растения кукурузы с мужской стерильностью, имеющего признак цитоплазматической мужской стерильности C-типа, с растением кукурузы, являющимся восстановителем мужской стерильности, имеющим признак способности отвечать на цитоплазматическую мужскую стерильность C-типа, с получением растений кукурузы F;
1
2
самоопыление растений кукурузы F с получением растений кукурузы F;
2
классификацию фенотипов фертильности множества растений кукурузы F;
2
определение нуклеотидной последовательности по меньшей мере части области, соответствующей положениям от 86247 до 98188 8 хромосомы геномной ДНК, выделенной из каждого из множества растений кукурузы F;
Rf4
идентификацию кодирующей последовательности в области, соответствующей положениям с 86247 по 98188 8 хромосомы, имеющей наибольшую частоту сцепления с фенотипом восстановленной фертильности, где идентифицированная кодирующая последовательность является геном  в кукурузе.
2. Способ по п. 1, где растением кукурузы с мужской стерильностью, имеющим признак цитоплазматической мужской стерильности C-типа, является BE4207.
3. Способ по п. 1, где растением кукурузы, являющимся восстановителем мужской стерильности, имеющим признак способности отвечать на цитоплазматическую мужскую стерильность C-типа, является XJH58.
4. Способ по п. 1, где растением кукурузы с мужской стерильностью, имеющим признак цитоплазматической мужской стерильности C-типа, является BE4207, и где растением кукурузы, являющимся восстановителем мужской стерильности, имеющим признак способности отвечать на цитоплазматическую мужскую стерильность C-типа, является XJH58.
Rf4
Rf4-bHLH
5. Способ по п. 1, где геном  является фактор транскрипции спираль-петля-спираль GRMZM2G021276 ().
2
6. Способ по п. 1, где множество растений кукурузы F включает по меньшей мере 500 растений кукурузы.
3
7. Способ по п. 1, где множество растений кукурузы F включает по меньшей мере 5000 растений кукурузы.
Rf4-bHLH
8. Способ восстановления фертильности в кукурузе, причем способ включает введение гена фактора транскрипции спираль-петля-спираль GRMZM2G021276 ()в женское растение кукурузы, имеющее признак цитоплазматической мужской стерильности C-типа.
Rf4-bHLH
Rf4-bHLH
9. Способ по п. 8, где ген  вводят в женское растение кукурузы, имеющее признак цитоплазматической мужской стерильности C-типа, путем скрещивания с растением кукурузы, являющимся восстановителем мужской стерильности, содержащим ген .
10. Способ получения гибридных семян кукурузы, причем способ включает:
предоставление женского растения кукурузы, имеющего признак цитоплазматической мужской стерильности C-типа;
фактора транскрипции спираль-петля-спираль GRMZM2G021276 (Rf4-bHLH)
оплодотворение женского растения кукурузы пыльцой из мужского растения кукурузы, содержащего ген ; и
сбор гибридных семян кукурузы, развившихся в женском растении кукурузы.
Rf4
11. Способ выделения гомолога  из растения, причем способ включает:
получение геномной ДНК из растения;
приведение геномной ДНК в контакт с нуклеотидной последовательностью, которая специфично гибридизуется с выделенной молекулой нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид, содержащий аминокислотную последовательность, которая по существу гомологична SEQ ID NO:225; и
Rf4-bHLH
выделение одной или нескольких последовательности(ей) геномной ДНК, которая специфично гибридизуется с нуклеотидной последовательностью, которая специфично гибридизуется с молекулой нуклеиновой кислоты, где одна или несколько последовательность (ей) геномной ДНК представляет собой гомолог .
12. Способ восстановления цитоплазматической мужской стерильности в кукурузе, причем способ включает:
1
скрещивание женского стерильного растения кукурузы, имеющего признак цитоплазматической мужской стерильности C-типа, с растением кукурузы, являющимся восстановителем мужской стерильности, содержащим средства для восстановления фертильности кукурузы CMS-C, с получением растений кукурузы F;
1
идентификацию растения кукурузы F, содержащего средства для восстановления фертильности кукурузы CMS-C; и
1
размножение идентифицированного растения кукурузы F, тем самым, восстанавливая мужскую стерильность в кукурузе.
13. Способ идентификации растения, содержащего функциональный ген-восстановитель для цитоплазматической мужской стерильности C-типа кукурузы, причем способ включает:
выделение молекул нуклеиновых кислот из растения; и
приведение в контакт выделенных молекул нуклеиновых кислот со средствами для идентификации растений кукурузы, имеющих ген для восстановления фертильности кукурузы CMS-C, с получением поддающегося детекции сигнала, который указывает на присутствие функционального гена-восстановителя для цитоплазматической мужской стерильности кукурузы в растении.
Rf4
14. Способ переноса гена  кукурузы, причем способ включает:
Rf4
анализ с помощью зондов, которые специфично гибридизуются по меньшей мере с одним маркером, который сцеплен с геном  геномной ДНК первого растения с донорным генотипом и ДНК второго растения с реципиентным генотипом;
половое скрещивание генотипов двух родительских растений с получением популяции потомков;
Rf4
анализ популяции потомков в отношении присутствия по меньшей мере одного маркера, который сцеплен с геном ;
Rf4,
обратное скрещивание особи из популяции потомков, которая содержит по меньшей мере один маркер, который сцеплен с геном  с реципиентным генотипом с получением популяции следующего поколения;
Rf4
определение того, содержит ли представитель популяции следующего поколения желаемый признак из генотипа реципиента и гена ; и
Rf4
Rf4
если ни один представитель популяции следующего поколения не содержит желаемый признак из реципиентного генотипа и гена , повторение стадий (d) и (e) до тех пор, пока не идентифицируют особь, который содержит желаемые признаки из реципиентного генотипа и гена .
Rf4
15. Способ по п. 35, где проводят селекцию с помощью анализа маркеров  индивидуального потомства, полученного на каждой стадии скрещивания и обратного скрещивания в каждом поколении.
Rf4-bHLH
16. Способ введения гена  кукурузы в организм хозяина путем генетической трансформации, причем способ включает:
Rf4
Rf4
анализ геномной ДНК растения с помощью зондов, которые специфично гибридизуются с маркерами, сцепленными с геном , для идентификации гена  в растении;
Rf4
выделение сегмента геномной ДНК растения, который специфично гибридизуется с зондами, которые специфично гибридизуются с маркерами, сцепленными с геном ;
введение выделенного сегмента геномной ДНК в организм хозяина; и
Rf4
Rf4
анализ ДНК организма хозяина с помощью зондов, которые специфично гибридизуются с маркерами, сцепленными с геном , для идентификации гена  в организме хозяина.
17. Способ по п. 16, где выделенный сегмент ДНК стабильно встраивается в геном организма хозяина.
18. Способ по п. 16, где организмом хозяина является цветущее растение.
Zea mays
19. Способ по п. 18, где организмом хозяина является .