СПОСОБ КОРРЕКЦИИ ЭНДОТЕЛИАЛЬНОЙ ДИСФУНКЦИИ КОМБИНАЦИЕЙ АТОРВАСТАТИНА И РЕЗВЕРАТРОЛА ПРИ L-NAME ИНДУЦИРОВАННОМ ДЕФИЦИТЕ ОКСИДА АЗОТА
METHOD OF ENDOTHELIAL DYSFUNCTION CORRECTION BY COMBINATION OF ATORVASTATIN AND RESVERATROL IN L-NAME INDUCED NITROGEN OXIDE DEFICIENCY

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной кардиофармакологии.
Наиболее близким к заявленному решению является способ коррекции эндотелиальной дисфункции аторвастатином в присутствии L-NAME, описанный Lorkowska В, Chlopicki S. в статье «Statins as coronary vasodilators in isolated bovine coronary arteries-involvement of PGI2 and NO» Prostaglandins Leukot Essent Fatty Acids, 2005 Feb; 72(2): 133-8.
Основным недостатком способа является то, что коррекция эндотелиальной дисфунции связана с плейотропными эффектами статинов активацией гена экспрессии эндотелиальной NO-синтазы (eNOS) и противовоспалительными эффектами. Поэтому результаты коррекции эндотелиальной дисфункции при повреждении в системе L-аргинин-еNOS -NO, которая связана в основном со снижением активности и «разобщения» эндотелиальной NO-синтазы на фоне окислительного стресса с помощью только аторвастатина, неудовлетворительны.
Задачей изобретения является способ коррекции эндотелиальной дисфункции, включающий использование аторвастатина, относящегося к ингибиторам ГМГ-КоА-редуктазы и активатора NO-синтазы, антиоксиданта - резвератрола.
Поставленная задача достигается тем, что на фоне моделирования эндотелиальной дисфункции в эксперименте внутрибрюшинным введением лабораторному животному в течение 7 суток блокатора синтеза NO L-нитро-аргинин-метилового эфира (L-NAME) в дозе 25 мг/кг проводится ее коррекция внутрижелудочным введением аторвастатина в дозе 2,2 мг/кг однократно в сутки и внутрибрюшинным введением активатора NO-синтазы резвератрола в дозе 2 мг/кг также однократно в сутки, которая приводит к активизации коррекции эндотелиальной дисфункции, так как резвератрол является активатором фермента NO-синтазы и антиоксидантом, посредством которого образуется NO в сосудистом эндотелии и увеличивается его биодоступность.
СПОСОБ ОСУЩЕСТВЛЯЕТСЯ СЛЕДУЮЩИМ ОБРАЗОМ
Опыты проводят на белых крысах-самцах линии Wistar массой 250-300 г. N-нитро-L-аргинин метиловый эфир (L-NAME) вводится внутрибрюшинно в дозе 25 мг/кг/сут. На 8 день от начала эксперимента под наркозом (хлоралгедрат 300 мг/кг) вводят катетер в левую сонную артерию для регистрации показателей артериального давления (АД), болюсное введение фармакологических агентов осуществляют в правую бедренную вену. Показатели гемодинамики: систолическое артериальное давление (САД), диастолическое артериальное давление (ДАД) и частоту сердечных сокращений (ЧСС), измеряют непрерывно посредством датчика TSD104А и аппаратно-програмного комплекса МР 100, производства Вiopac System, Inc., США. Функциональные пробы: эндотелий зависимая вазодилатация (ЭЗВ) - внутривенное введение ацетилхолина (АХ) в дозе 40 мкг/кг, эндотелий независимая вазодилатация (ЭНЗВ) - внутривенное введение нитропруссида натрия (НП) в дозе 30 мкг/кг.
При статистической обработке данных рассчитывали среднее значение, величину стандартного отклонения. Различия считали достоверными при р<0,05.
ПРИМЕР КОНКРЕТНОГО ВЫПОЛНЕНИЯ
Болюсное внутривенное введение АХ в течение 3-5 сек приводило к резкому падению артериального давления, достигающего пика у интактных животных для систолического давления (САД) 84,3±4,4, для диастолического давления (ДАД) 38,7±2,8 и для среднего артериального давления (СрАД) 53,9±2,7 мм рт.ст., при этом в течение первых 2-3 сек развивалась резкая брадикардия до 130-150 ударов в минуту. Восстановление АД происходило в среднем за 42,2±0,8 сек после нормализации сердечного ритма. ЭНЗВ также характеризовалась снижением САД до 83,0±3,7, ДАД до 42,1±4,4 и СрАД до 55,7±3,5 мм рт.ст. с последующим полным восстановлением в среднем в течение 45,1±1,0 сек. Блокада NO-синтазы с помощью ежедневного в течение 7-ми суток внутрибрюшинного введения L-NAME (N-нитро-L-аргинин метиловый эфир в дозе 25 мг/кг) вызывала артериальную гипертензию (САД 190,3±6,7, ДАД 145,0±3,9, СрАД 160,1±4,6 мм рт.ст.) и приводила к меньшему снижению показателей АД после введения АХ (САД до 110,6±5,2, ДАД до 82,8±6,6, СрАД до 92,1±6,1 мм рт.ст.) и НП (САД до 88,7±4,7, ДАД до 50,8±4,2 и СрАД до 63,4±4,1 мм рт.ст.) по сравнению с интактными животными.
Одновременное введение L-NAME и аторвастатина (2,2 мг/кг внутрижелудочно) приводило к снижению показателей исходных значений АД (САД 162,8±20,9, ДАД 117,5±14,4 мм рт.ст.), а в экспериментах, где дополнительно вводился резвератрол (2 мг/кг внутрибрюшинно), также отмечалось гипотензивное действие, так как исходные цифры АД были ниже: САД 177,3±14,0, ДАД 137±9,6 мм рт.ст. (табл.1).
Таблица 1
Динамика показателей АД и ЧСС при моделировании дефицита оксида азота и коррекции эндотелиальной дисфункции аторвастатином с использованием резвератрола
Группы животных
Функциональные пробы
САД, мм рт.ст.
ДАД, мм рт.ст.
ЧСС, уд. в мин
Интактные
Исходные
137,7±3,7
101,9±4,3
420,0±9,0
ЭЗВ с АХ
84,3±4,5
38,7±2,8
416,0±14,0
ЭНЗВ с НП
83,0±3,7
42,1±4,4
415,0±10,0
Получавшие L-NAME (25 мг/кг)
Исходные
190,3±6,7*
145,0±3,9*
428,0±11,0
ЭЗВ с АХ
110,6±5,2*
82,8±6,6*
426,0±14,0
ЭНЗВ с НП
88,7±4,7
50,8±4,2
426,0±13,0
L-NAME(25 мг/кг) + Аторвастатин (2,2 мг/кг)
Исходные
162,8±20,9
117,5±14,4
317,5±26,2
ЭЗВ с АХ
96,3±9,9
57,2±4,9
303,3±28,4
ЭНЗВ с НП
96,5±13,7
53,0±6,4
352,2±36,7
L-NAME + Аторвастатин (2,2 мг/кг) + резвератрол (2 мг/кг)
Исходные
177,3±14,0**
137,7±9,6**
356,0±20,5
ЭЗВ с АХ
82,3±8,6**
56,7±6,2**
324,0±18,6
ЭНЗВ с НП
89,1±7,0
63,3±5,8
358,4±21,1
* - р<0,05 в сравнении с группой интактных
** - р<0,05 в сравнении с группой L-NAME+аторвастатин
Также отмечалось потенциирование снижения показателей артериального давления в ответ на ведение АХ. Принципиальная разница в ЭЗВ и ЭНЗВ у интактных животных и животных с введением ингибитора NO-синтазы L-NAME закономерно привело нас к необходимости выведения специального показателя, характеризующего степень эндотелиальной дисфункции, являющегося отношением площади треугольника над трендом реакции восстановления АД в ответ на введение НП к площади треугольника над трендом реакции восстановления АД в ответ на введение АХ.
Мы рассчитывали это отношение у каждого животного интактной группы и крыс после моделирования блокады NO-синтазы и получили разницу данного показателя в 5 раз - соответственно 1,1 у интактных и 5,4 у животных, получавших L-NAME.
Таким образом, для дальнейшей оценки влияния АХ и НП при ЭЗВ и ЭНЗВ нами использовано это отношение, как показатель коррекции эндотелиальной дисфункции. Так, в группе, где на фоне введения ингибитора NO-синтазы L-NAME вводился только аторвастатин, это отношение соответствовало значению 2,8±0,5, а в группе с дополнительным введением к аторвастатину резвератрола - 2,1±0,4 (табл.2).
Таким образом, полученные результаты позволяют констатировать активизацию коррекции эндотелиальной дисфункции аторвастатином при сочетанном его применении с резвератролом.