ПРОИЗВОДНЫЕ ПИПЕРИДИНМОЧЕВИНЫ
PIPERIDINE UREA DERIVATIVES

ПРЕДПОСЫЛКИ СОЗДАНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Задачей изобретения является обнаружение новых соединений, которые обладают ценными свойствами, в частности, таких, которые можно применять для получения лекарственных средств.
Настоящее изобретение относится к производным пиперидинмочевины, которые ингибируют активность танкираз (TANK) и поли(ADP-рибоза)полимеразы PARP-1. Таким образом, соединения настоящего изобретения пригодны для лечения заболеваний, таких как злокачественное новообразование, рассеянный склероз, сердечнососудистые заболевания, поражения центральной нервной системы и различные формы воспаления. Настоящее изобретение также обеспечивает способы получения этих соединений, фармацевтические композиции, которые содержат эти соединения, и способы лечения заболеваний с использованием фармацевтических композиций, которые содержат эти соединения.
Ядерный фермент поли(ADP-рибоза) полимераза-1 (PARP-1) является представителем семейства ферментов PARP. Это семейство ферментов роста состоит из PARP, таких как, например: PARP-1, PARP-2, PARP-3 и Vault-PARP; и танкираз (TANK), таких как, например: TANK-1 и TANK-2. PARP также обозначается как поли(аденозин5'-дифосфорибоза)полимераза или PARS (поли(ADP-рибоза)синтетаза).
Полагают, что TANK-1 необходима для полимеризации связанной с митотическим веретеном поли(ADP-рибозы). Поли(ADP-рибозил)ирующая активность TANK-1 должна быть решающей для точного образования и поддержания биполярности веретена. Кроме того, показано, что PARP активность TANK-1 необходима для нормального разделения теломер перед анафазой. Интерференция с танкиразной PARP активностью приводит к аберрантному митозу, который вызывает временную остановку клеточного цикла, возможно, вследствие активации контрольной точки веретена, с последующей клеточной гибелью. Таким образом, полагают, что ингибирование танкираз имеет цитотоксическое действие на пролиферирующие опухолевые клетки (WO 2008/107478).
Ингибиторы PARP описаны М. Rouleau и др. в Nature Reviews, том 10, 293-301 в клинических исследованиях злокачественных новообразований (таблица 2, страница 298).
В соответствии с обзором Horvath и Szabo (Drug News Perspect 20(3), April 2007, 171-181) в самых последних исследованиях было показано, что PARP ингибиторы усиливают гибель раковых клеток главным образом в связи с их препятствованием репарации ДНК на различных уровнях. В самых последних исследованиях также было показано, что PARP ингибиторы ингибируют ангиогенез, либо путем ингибирования экспрессии фактора роста, либо путем ингибирования индуцированных фактором роста клеточных пролиферативных ответов. Эти данные также могут оказывать влияния на характер противораковых эффектов PARP ингибиторов in-vivo.
Также в исследовании Tentori и др. (Eur. J. Cancer, 2007, 43 (14) 2124-2133) было показано, что PARP ингибиторы аннулируют индуцированную VEGF или плацентным фактором роста миграцию и предотвращают образование трубочкообразных сетей в клеточных системах, и повреждают ангиогенез in-vivo. В исследовании также показано, что индуцированный фактором роста ангиогенез является дефектным у PARP-1 «knock-out» мышей. Результаты исследования обеспечивают подтверждение для нацеливания PARP на анти-ангиогенез, добавляя новые терапевтические показания к применению PARP ингибиторов при лечении злокачественного новообразования.
Хорошо известно, дефекты в консервативных путях передачи сигналов играют ключевую роль в происхождении и поведении по существу всех злокачественных новообразований (E.A. Fearon, Cancer Cell, том 16, изд. 5, 2009, 366-368). Wnt путь является мишенью для противораковой терапии. Ключевой особенностью Wnt пути является регулированный протеолиз (деградация) β-катенина с помощью комплекса, разрушающего β-катенин. Белки, такие как WTX, АРС или Axin, задействованы в процесс разложения. Правильное разложение β-катенина является важным для избегания несоответствующей активации Wnt пути, которая наблюдается при многих злокачественных новообразованиях. Танкиразы ингибируют активность Axin и, следовательно, ингибируют разложение β-катенина. В результате этого, ингибиторы танкиразы повышают разложение β-катенина. В издании журнала Nature были предложены не только важные новые сведения относительно белков, регулирующих Wnt передачу сигналов, но и дополнительно подтвержден подход антагонизации уровней β-катенина и локализации с помощью небольших молекул (Huang и др., 2009; Nature, том 461, 614-620). Соединение XAV939 ингибирует рост DLD-1-раковых клеток. Авторы обнаружили, что XAV9393 блокирует Wnt-стимулированное накопление β-катенина путем повышения уровней белков AXIN1 и AXIN2. В последующей работе авторами было показано, что XAV939 регулирует уровни AXIN посредством ингибирования танкираз 1 и 2 (TNKS1 и TNKS2), которые обе являются членами семейства белков поли(ADP-рибоза) полимеразы (PARP) (S.J. Hsiao и др., Biochimie 90, 2008, 83-92).
Было обнаружено, что соединения в соответствии с изобретением и их соли обладают чрезвычайно ценными фармакологическими свойствами, а также хорошей переносимостью.
Настоящее изобретение, в особенности, относится к соединениям формулы I, которые ингибируют танкиразу 1 и 2, к композициям, которые содержат эти соединения, и к способам их применения для лечения заболеваний и осложнений, индуцированных TANK.
Кроме того, соединения формулы I могут использоваться для выделения и исследования активности или экспрессии TANK. Дополнительно, они особенно пригодны для применения в методах диагностики заболеваний, связанных с нерегулированной или нарушенной активностью TANK.
Хозяин или пациент может принадлежать к любому из видов млекопитающих, например, к видам приматов, в частности, к людям; грызунам, включая мышей, крыс и хомяков; кроликам, лошадям, коровам, собакам, кошкам и т.д. Животные модели представляют интерес для экспериментальных исследований, обеспечивая модель для лечения болезней человека.
Чувствительность определенной клетки к лечению с помощью соединений в соответствии с данным изобретением может определяться с помощью тестов in-vitro. Типично, к культуре клеток прибавляют соединение в соответствии с настоящим изобретением при различных концентрациях на период времени, который является достаточным для того, чтобы позволить активным агентам, таким, как анти IgM, индуцировать клеточный ответ, такой как экспрессия поверхностного маркера, обычно от одного часа до одной недели. In-vitro тестирование может осуществляться при использовании культивируемых клеток, полученных из крови или из образца биопсии. Количество экспрессированного поверхностного маркера оценивают с помощью проточной цитометрии при использовании специфических антител, которые узнают маркер.
Доза варьирует в зависимости от используемого специфического соединения, специфического заболевания, состояния пациента, и т.д. Терапевтическая доза типично является достаточной для того, чтобы значительно уменьшить нежелательную клеточную популяцию в целевой ткани при поддержании жизнеспособности пациента. Лечение в общем случае продолжается до возникновения значительного снижения, например, снижения, которое составляет, по крайней мере, 50% клеточной нагрузки, и может продолжаться до практически отсутствия обнаружения нежелательных клеток в организме.
ИЗВЕСТНЫЙ УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
Е. Wahlberg и др., Nature Biotechnology (2012), 30(3), 283.
Н. Bregman и др., Journal of Medicinal Chemistry (2013), 56(3), 1341
Другие ингибиторы танкиразы описаны в WO 2013/012723, WO 2013/010092, WO 2012/076898 и в WO 2013/008217.
WO 2004/033427 описывает получение 1,4-дизамещенных производных пиперидина и их применение в качестве ингибиторов 11-βHSD1 для лечения диабета и связанных с ним заболеваний:
4-(4-фторбензоил)-N-метил-N-фенилпиперидин-1-карбоксамид
и
4-(4-фторбензоил)-N-(4-фторфенил)-N-метилпиперидин-1-карбоксамид
.
КРАТКОЕ ИЗЛОЖЕНИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Изобретение относится к соединениям формулы I
,
в которой
1
2
R означает А или СНСООА,
2
3
1
R, R каждый, независимо друг от друга, означает Ar или Het,
1
2
R и R вместе с атомом N, к которому они присоединены, означают гетероциклическое кольцо, выбранное из 2,3-дигидроиндолила или 3,4-дигидрохинолила,
1
Het означает пиридил, пиримидинил, пиразинил или пиридазинил, каждый из которых может быть моно-, ди- или тризамещен посредством Hal, А, ОН, CN и/или OA,
2
m
2
2
2
2
2
2
4
4
4
4
4
4
4
4
4
4
4
2
Ar означает фенил, который незамещен или моно-, ди- или тризамещен посредством Hal, NO, CN, A, OR, S(O)R, N(R), COA, COOR, CON(R), SON(R), NRCOR, NRSOA, NRCON(R) и/или Het,
4
R означает H или A',
2
А означает неразветвленный или разветвленный алкил, содержащий от 1 до 8 атомов С, где одна или две не расположенные рядом СН- и/или СН-группы могут быть заменены на атомы N или О и где от 1 до 7 атомов Н могут быть заменены на F или Cl,
А' означает неразветвленный или разветвленный алкил, содержащий 1, 2, 3 или 4 атома С,
2
3
2
n
Het означает пиразолил, который может быть замещен посредством А или (CH)Het,
3
Het означает пирролидинил, пиперидинил, морфолинил или пиперазинил, каждый из которых может быть замещен посредством А,
Hal означает F, Cl, Br или I,
m означает 0, 1 или 2,
n означает 1, 2, 3 или 4,
при условии, что
4-(4-фторбензоил)-N-метил-N-фенилпиперидин-1-карбоксамид и 4-(4-фторбензоил)-N-(4-фторфенил)-N-метилпиперидин-1-карбоксамид исключены,
и их фармацевтически приемлемым солям, таутомерам и стереоизомерам, включая их смеси во всех соотношениях.
Изобретение также относится к оптически активным формам (стереоизомерам), энантиомерам, рацематам, диастереомерам и гидратам и сольватам этих соединений.
Кроме того, изобретение относится к фармацевтически приемлемым производным соединений формулы I.
Термин сольваты соединений обозначает аддукции молекул инертного растворителя на соединениях, которые образуются благодаря их силе взаимного притяжения. Сольваты представляют собой, например, моно- или дигидраты или алкоголяты.
Подразумевается, что изобретение также относится к сольватам солей.
Термин фармацевтически приемлемые производные обозначает, например, соли соединений в соответствии с изобретением, а также так называемые пролекарства соединений.
Как используется в настоящей заявке и если специально не указано иначе, термин "пролекарство" обозначает производное соединения формулы I, которое может быть гидролизовано, окислено или по-другому реагировать в биологических условиях (in-vitro или in-vivo) с обеспечением активного соединения, в частности соединения формулы I. Примеры пролекарств включают, но не ограничиваются только ими, производные и метаболиты соединения формулы I, которые включают биогидролизируемые остатки, такие как биогидролизируемые амиды, биогидролизируемые сложные эфиры, биогидролизируемые карбаматы, биогидролизируемые карбонаты, биогидролизируемые уреиды и биогидролизируемые фосфатные аналоги. В определенных вариантах осуществления, пролекарства соединений с карбоксильными функциональными группами представляют собой низшие алкиловые сложные эфиры карбоновой кислоты. Карбоксилатные сложные эфиры легко образуются путем эстерификации любых фрагментов карбоновой кислоты, присутствующих в молекуле. Пролекарства типично можно получать, используя хорошо известные методы, такие как методы, описанные в Burger's Medicinal Chemistry and Drug Discovery 6-ое изд. (Donald J. Abraham ред., 2001, Wiley) и Design and Application of Prodrugs (H. Bundgaard ред., 1985, Harwood Academic Publishers Gmfh).
Выражение "эффективное количество" обозначает количество лекарственного средства или фармацевтического активного компонента, которое вызывает в ткани, системе, животном или человеке биологическую или медицинскую ответную реакцию, которую предполагает или желает получить, например, исследователь или лечащий врач.
Дополнительно, выражение "терапевтически эффективное количество" обозначает то количество, которое имеет следующие последствия по сравнению с соответствующим субъектом, который не получал этого количества:
улучшение лечения, излечение, предотвращение или элиминация заболевания, синдрома, состояния, жалобы, расстройства или побочных действий, или также уменьшение прогрессирования заболевания, жалобы или расстройства.
Термин "терапевтически эффективное количество" также охватывает количества, которые эффективны для повышения нормальной физиологической функции.
Изобретение также относится к применению смесей соединений формулы I, например, смесей двух диастереомеров, например, в соотношении 1:1, 1:2, 1:3, 1:4, 1:5, 1:10, 1:100 или 1:1000.
Особенно предпочтительными являются смеси стереоизомерных соединений.
"Таутомеры" относятся к изомерным формам соединения, которые находятся в равновесии друг с другом. Концентрации изомерных форм будут зависеть от окружения, в котором находится соединение, и могут отличаться в зависимости от того, например, будет ли соединение представлять собой твердое вещество или находится в органическом или водном растворе.
Изобретение относится к соединениям формулы I и их солям, и к способу получения соединений формулы I и их фармацевтически приемлемых солей, сольватов, таутомеров и стереоизомеров, который отличается тем, что
соединение формулы II
,
1
2
в которой R и R имеют значения, указанные в пункте 1,
подвергают реакции
с соединением формулы III
,
3
в которой R имеет значения, указанные в пункте 1,
и с фосгеном или трифосген,
и/или
основание или кислоту формулы I превращают в одну из его(ее) солей.
1
2
3
Выше и ниже радикалы R, R, R имеют значения, указанные для формулы I, если специально не указано иное.
А означает алкил, который является неразветвленным (линейным) или разветвленным, и содержит 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 атомов С. А предпочтительно означает этил, пропил, изопропил, бутил, изобутил, втор-бутил или трет-бутил, кроме того, также пентил, 1-, 2- или 3-метилбутил, 1,1-, 1,2- или 2,2-диметилпропил, 1-этилпропил, гексил, 1-, 2-, 3- или 4-метилпентил, 1,1-, 1,2-, 1,3-, 2,2-, 2,3- или 3,3-диметилбутил, 1- или 2-этилбутил, 1-этил-1-метилпропил, 1-этил-2-метилпропил, 1,1,2- или 1,2,2-триметилпропил, кроме того, предпочтительно, например, трифторметил.
А особенно предпочтительно означает алкил, содержащий 2, 3, 4, 5 или 6 атомов С, предпочтительно этил, пропил, изопропил, бутил, изобутил, втор-бутил, трет-бутил, пентил, гексил, трифторметил, пентафторэтил или 1,1,1-трифторэтил.
2
3
2
2
2
2
3
Более того, А предпочтительно означает СНОСН, СНСНОН или СНСНОСН.
2
А предпочтительно также означает неразветвленный или разветвленный алкил, содержащий от 1 до 8 атомов С, где одна или две не расположенные рядом СН-группы могут быть заменены на атомы О.
1
2
R предпочтительно означает метил, этил, 2-гидроксиэтил или CHCOOEt.
2
R предпочтительно означает Ar.
3
R предпочтительно означает Ar.
3
1
R особенно предпочтительно означает Ar или Het.
4
R предпочтительно означает Н, метил, этил, пропил или бутил.
Ar предпочтительно означает о-, м- или п-толил, о-, м- или п-этилфенил, о-, м- или п-пропилфенил, о-, м- или п-изопропилфенил, о-, м- или п-трет-бутилфенил, о-, м- или п-гидроксифенил, о-, м- или п-нитрофенил, о-, м- или п-аминофенил, о-, м- или п-(N-метиламино)фенил, о-, м- или п-(N-метиламинокарбонил)фенил, о-, м- или п-метоксифенил, о-, м- или п-этоксифенил, о-, м- или п-этоксикарбонилфенил, о-, м- или п-(N,N-диметиламино)фенил, о-, м- или п-(N,N-диметиламинокарбонил)фенил, о-, м- или п-(N-этиламино)фенил, о-, м- или п-(N,N-диэтиламино)фенил, о-, м- или п-фторфенил, о-, м- или п-бромфенил, о-, м- или п-хлорфенил, о-, м- или п-(метилсульфонамидо)фенил, о-, м- или п-(метилсульфонил)фенил, о-, м- или п-цианофенил, о-, м- или п-карбоксифенил, о-, м- или п-метоксикарбонилфенил, о-, м- или п-формилфенил, о-, м- или п-ацетилфенил, о-, м- или п-аминосульфонилфенил, более предпочтительно 2,3-, 2,4-, 2,5-, 2,6-, 3,4- или 3,5-дифторфенил, 2,3-, 2,4-, 2,5-, 2,6-, 3,4- или 3,5-дихлорфенил, 2,3-, 2,4-, 2,5-, 2,6-, 3,4- или 3,5-дибромфенил, 2,4- или 2,5-динитрофенил, 2,5- или 3,4-диметоксифенил, 3-нитро-4-хлорфенил, 3-амино-4-хлор-, 2-амино-3-хлор-, 2-амино-4-хлор-, 2-амино-5-хлор- или 2-амино-6-хлорфенил, 2-нитро-4-N,N-диметиламино- или 3-нитро-4-N,N-диметиламинофенил, 2,3-диаминофенил, 2,3,4-, 2,3,5-, 2,3,6-, 2,4,6- или 3,4,5-трихлорфенил, 2,4,6-триметоксифенил, 2-гидрокси-3,5-дихлорфенил, п-йодфенил, 3,6-дихлор-4-аминофенил, 4-фтор-3-хлорфенил, 2-фтор-4-бромфенил, 2,5-дифтор-4-бромфенил, 3-бром-6-метоксифенил, 3-хлор-6-метоксифенил, 3-хлор-4-ацетамидофенил, 3-фтор-4-метоксифенил, 3-амино-6-метилфенил, 3-хлор-4-ацетамидофенил или 2,5-диметил-4-хлорфенил.
2
2
Ar более предпочтительно означает фенил, который незамещен или моно- или дизамещен посредством Hal, CN, A, OA, NHSOA и/или Het.
1
Het предпочтительно означает пиридил, который может быть монозамещен посредством OA.
Для всего изобретения, все радикалы, которые встречаются более одного раза, могут быть одинаковыми или различными, то есть являются независимыми друг от друга.
Соединения формулы I могут иметь один или несколько хиральных центров и поэтому могут встречаться в различных стереоизомерных формах. Формула I охватывает все эти формы.
Соответственно, изобретение относится, в частности, к соединениям формулы I, в которой по меньшей мере один из указанных радикалов имеет одно из предпочтительных значений, указанных выше. Некоторые предпочтительные группы соединений могут быть изображены с помощью следующих подформул Ia-Id, которые соответствуют формуле I и в которых радикалы, не определенные более подробно, имеют значения, указанные для формулы I, но в которых
2
2
в Ia Ar означает фенил, который незамещен или моно- или дизамещен посредством Hal, CN, A, OA, NHSOA и/или Het;
2
в Ib А означает неразветвленный или разветвленный алкил, содержащий от 1 до 8 атомов С, где одна или две не расположенные рядом СН-группы могут быть заменены на атомы О;
1
2
в Ic R означает А или СНСООА,
2
3
R, R означают Ar,
1
2
R и R вместе с атомом N, к которому они присоединены, означают гетероциклическое кольцо, выбранное из 2,3-дигидроиндолила или 3,4-дигидрохинолила,
2
2
Ar означает фенил, который незамещен или моно-, ди- или тризамещен посредством Hal, CN, A, OA, NHSOA и/или Het,
4
R означает Н или А',
2
А означает неразветвленный или разветвленный алкил, содержащий от 1 до 8 атомов С, где одна или две не расположенные рядом СН-группы могут быть заменены на атомы О,
А' означает неразветвленный или разветвленный алкил, содержащий 1, 2, 3 или 4 атома С,
2
3
2
n
Het означает пиразолил, который может быть замещен посредством А или (CH)Het,
3
Het означает пирролидинил, пиперидинил, морфолинил или пиперазинил, каждый из которых может быть замещен посредством А,
Hal означает F, Cl, Br или I,
m означает 0, 1 или 2,
n означает 1, 2, 3 или 4;
1
2
в Id R означает А или СНСООА,
2
R означает Ar,
3
1
R означает Ar или Het,
1
2
R и R вместе с атомом N, к которому они присоединены, означают гетероциклическое кольцо, выбранное из 2,3-дигидроиндолила или 3,4-дигидрохинолила,
2
2
Ar означает фенил, который незамещен или моно- или дизамещен посредством Hal, CN, A, OA, NHSOA и/или Het,
4
R означает H или А',
2
А означает неразветвленный или разветвленный алкил, содержащий от 1 до 8 атомов С, где одна или две не расположенные рядом СН-группы могут быть заменены на атомы О,
А' означает неразветвленный или разветвленный алкил, содержащий 1, 2, 3 или 4 атома С,
1
Het означает пиридил, который может быть монозамещен посредством OA,
2
3
2
n
Het означает пиразолил, который может быть замещен посредством А или (CH)Het,
3
Het означает пирролидинил, пиперидинил, морфолинил или пиперазинил, каждый из которых может быть замещен посредством А,
Hal означает F, Cl, Br или I,
m означает 0, 1 или 2,
n означает 1, 2, 3 или 4;
и включают их фармацевтически приемлемые соли, таутомеры и стереоизомеры, включая их смеси во всех соотношениях.
Соединения формулы I, а также исходные вещества для их получения, кроме того, получают при помощи методов, известных per se, как описано в литературе (например, в стандартных работах, таких как Houben-Weyl, Methoden der organischen Chemie [Методы органической химии], Georg-Thieme-Verlag, Штутгарт), точнее, в условиях реакций, которые известны и являются пригодными для указанных реакций. Также при этом можно применять разнообразные модификации, которые известны per se, но о которых здесь подробно не упоминается.
Исходные соединения формулы II и III как правило, известны. Тем не менее, если они являются новыми, то их можно получить при помощи методов, известных per se.
Соединения формулы I предпочтительно можно получить по реакции соединения формулы II с соединением формулы III и с фосгеном или трифосгеном.
Реакцию обычно проводят в присутствии связывающего кислоту вещества, предпочтительно органического основания, такого как DIPEA, триэтиламин, диметиланилин, пиридин или хинолин.
Также может быть полезным добавление гидроксида, карбоната или бикарбоната щелочного или щелочноземельного металла, или другой соли слабой кислоты и щелочного или щелочноземельного металла, предпочтительно, калия, натрия, кальция или цезия.
В зависимости от используемых условий, время реакции находится в интервале от нескольких минут до 14 дней, температура реакции находится в интервале от приблизительно -30° до 140°С, обычно от -10° до 60°С, в частности, от приблизительно 0° до приблизительно 30°С.
Примерами пригодных инертных растворителей являются углеводороды, такие как гексан, петролейный эфир, бензол, толуол или ксилол; хлорированные углеводороды, такие как трихлорэтилен, 1,2-дихлорэтан, четыреххлористый углерод, хлороформ или дихлорметан; спирты, такие как метанол, этанол, изопропанол, н-пропанол, н-бутанол или трет-бутанол; простые эфиры, такие как диэтиловый эфир, диизопропиловый эфир, тетрагидрофуран (ТГФ) или диоксан; гликолевые эфиры, такие как монометиловый или моноэтиловый эфир этиленгликоля, диметиловый эфир этиленгликоля (диглим); кетоны, такие как ацетон или бутанон; амиды, такие как ацетамид, диметилацетамид или диметилформамид (ДМФА); нитрилы, такие как ацетонитрил; сульфоксиды, такие как диметилсульфоксид (ДМСО); сероуглерод; карбоновые кислоты, такие как муравьиная кислота или уксусная кислота; нитросоединения, такие как нитрометан или нитробензол; сложные эфиры, такие как этилацетат, или смеси вышеуказанных растворителей.
Особое предпочтение отдают ацетонитрилу, 1,2-дихлорэтану, дихлорметану и/или ДМФА.
Фармацевтические соли и другие формы
Указанные соединения в соответствии с изобретением могут применяться в своей заключительной, несолевой форме. С другой стороны, настоящее изобретение также охватывает применение таких соединений в форме их фармацевтически приемлемых солей, которые могут быть получены с помощью разнообразных органических и неорганических кислот и оснований в соответствии со способами, хорошо известными в данной области техники. Фармацевтически приемлемые солевые формы соединений формулы I получают, главным образом, при использовании традиционных способов. В случае, если соединение формулы I содержит карбоксильную группу, то его приемлемая соль может быть образована с помощью реакции соединения с приемлемым основанием для получения соответствующей соли присоединения основания. Примерами таких оснований являются гидроксиды щелочных металлов, включая гидроксид калия, гидроксид натрия и гидроксид лития; гидроксиды щелочноземельных металлов, такие, как гидроксид бария и гидроксид кальция; алкоксиды щелочных металлов, например, этанолят калия и пропанолят натрия; а также различные органические основания, такие, как пиперидин, диэтаноламин и N-метилглутамин. Сюда также включены соли алюминия соединений формулы I. В случае определенных соединений формулы I, соли присоединения кислоты могут быть образованы путем обработки указанных соединений фармацевтически приемлемыми органическими и неорганическими кислотами, например, гидрогалогенидами, такими как гидрохлорид, гидробромид или гидройодид, другими минеральными кислотами, и их соответствующими солями, такими как, сульфат, нитрат или фосфат, и т.п., и алкил- и моноарилсульфонатами, такими как этансульфонат, толуолсульфонат и бензолсульфонат, и другими органическими кислотами и их соответствующими солями, такими как ацетат, трифторацетат, тартрат, малеат, сукцинат, цитрат, бензоат, салицилат, аскорбат и т.п. Таким образом, фармацевтически приемлемые соли присоединения кислоты соединений формулы I включают следующие соли, но не ограничиваются только ими: ацетат, адипат, альгинат, аргинат, аспартат, бензоат, бензолсульфонат (безилат), бисульфат, бисульфит, бромид, бутират, камфорат, камфорсульфонат, каприлат, хлорид, хлорбензоат, цитрат, циклопентанпропионат, диглюконат, дигидрофосфат, динитробензоат, додецилсульфат, этансульфонат, фумарат, формиат, галактерат (из слизевой кислоты), галактуронат, глюкогептаноат, глюконат, глутамат, глицерофосфат, гемисукцинат, гемисульфат, гептаноат, гексаноат, гиппурат, гидрохлорид, гидробромид, гидройодид, 2-гидроксиэтансульфонат, йодид, изетионат, изобутират, лактат, лактобионат, малат, малеат, малонат, манделат, метафосфат, метансульфонат, метилбензоат, моногидрофосфат, 2-нафталинсульфонат, никотинат, нитрат, оксалат, олеат, пальмоат, пектинат, персульфат, фенилацетат, 3-фенилпропионат, фосфат, фосфонат, фталат.
Кроме того, основные соли соединений в соответствии с изобретением включают, но не ограничиваются только ими, соли алюминия, аммония, кальция, меди, железа(III), железа(II), лития, магния, марганца(III), марганца(II), калия, натрия и цинка. Предпочтительными среди перечисленных выше солей являются аммонийные; соли щелочных металлов - натрия и калия; и соли щелочноземельных металлов - кальция и магния. Соли соединений формулы I, которые имеют происхождение от фармацевтически приемлемых органических нетоксических оснований, включают, но не ограничиваются только ими, соли первичных, вторичных и третичных аминов, замещенных аминов, также включая природные замещенные амины, циклические амины и основные ионообменные смолы, например, аргинин, бетаин, кофеин, хлорпрокаин, холин, N,N'-дибензилэтилендиамин (бензатин), дициклогексиламин, диэтаноламин, диэтиламин, 2-диэтиламиноэтанол, 2-диметиламиноэтанол, этаноламин, этилендиамин, N-этилморфолин, N-этилпиперидин, глюкамин, глюкозамин, гистидин, гидрабамин, изопропиламин, лидокаин, лизин, меглумин, N-метил-D-глюкамин, морфолин, пиперазин, пиперидин, полиаминные смолы, прокаин, пурины, теобромин, триэтаноламин, триэтиламин, триметиламин, трипропиламин и трис-(гидроксиметил)метиламин (трометамин).
1
4
1
4
10
18
1
4
Соединения в соответствии с настоящим изобретением, которые включают группы, содержащие основной азот, могут быть кватернизированы с использованием таких агентов, как (С-С)-алкилгалогениды, например, метил-, этил-, изопропил- и трет-бутилхлорид, бромид и йодид; ди-(С-С)-алкилсульфаты, например, диметил-, диэтил- и диамилсульфат; (С-C)-алкилгалогениды, например, децил-, додецил-, лаурил-, миристил- и стеарилхлорид, бромид и йодид; и арил-(С-С)-алкилгалогениды, например, бензилхлорид и фенетилбромид. Указанные соли позволяют получать как растворимые в воде, так и растворимые в масле соединения в соответствии с изобретением.
Предпочтительные фармацевтические соли, выбранные из указанных выше солей, включают, но не ограничиваются только ими, ацетат, трифторацетат, безилат, цитрат, фумарат, глюконат, гемисукцинат, гиппурат, гидрохлорид, гидробромид, изетионат, манделат, меглумин, нитрат, олеат, фосфонат, пивалат, фосфат натрия, стеарат, сульфат, сульфосалицилат, тартрат, тиомалат, тозилат и трометамин.
Особенно предпочтительными являются гидрохлорид, дигидрохлорид, гидробромид, малеат, мезилат, фосфат, сульфат и сукцинат.
Кислотно-аддитивные соли основных соединений формулы I получают путем приведения в контакт формы свободного основания с достаточным количеством желаемой кислоты для получения соли традиционным способом. Свободное основание можно регенерировать путем приведения в контакт солевой формы с основанием и выделения свободного основания традиционным способом. Формы свободного основания в некоторой степени отличаются от своих соответствующих солевых форм своими определенными физическими свойствами, такими как растворимость в полярных растворителях, однако во всем остальном соли являются эквивалентными своим соответствующим формам свободных оснований для целей настоящего изобретения.
Как было указано, фармацевтически приемлемые соли присоединения основания соединений формулы I образуют с металлами или аминами, такими как щелочные металлы и щелочноземельные металлы или органические амины. Предпочтительные металлы представляют собой натрий, калий, магний и кальций. Предпочтительные органические амины представляют собой N,N'-дибензилэтилендиамин, хлорпрокаин, холин, диэтаноламин, этилендиамин, N-метил-D-глюкамин и прокаин.
Соли присоединения основания кислых соединений в соответствии с изобретением получают путем приведения в контакт формы свободной кислоты с достаточным количеством желаемого основания для получения соли традиционным способом. Форма свободной кислоты может быть регенерирована путем приведения в контакт солевой формы с кислотой и выделения формы свободной кислоты известным способом. Формы свободной кислоты в некоторой степени отличаются от своих соответствующих солевых форм определенными физическими свойствами, такими как растворимость в полярных растворителях, однако во всем остальном соли являются эквивалентными своим соответствующим формам свободных кислот для целей настоящего изобретения.
Если соединение в соответствии с изобретением включает более, чем одну группу, которая способна к образованию фармацевтически приемлемых солей этого типа, то изобретение также охватывает составные соли. Примеры типичных составных солевых форм включают, но не ограничиваются только ими, битартрат, диацетат, дифумарат, димеглумин, дифосфат, динатрий и тригидрохлорид.
В свете описанного выше можно увидеть, что выражение "фармацевтически приемлемая соль" в контексте данной заявки предназначено для обозначения активного компонента, который включает соединение формулы I в форме одной из его солей, особенно в том случае, если указанная солевая форма обеспечивает указанному активному компоненту улучшенные фармакокинетические свойства по сравнению со свободной формой указанного активного компонента или любой другой солевой формой указанного активного компонента, которые использовались ранее. Фармацевтически приемлемая солевая форма активного компонента может также изначально обеспечивать желаемое фармакокинетическое свойство указанному активному компоненту, которым он ранее не обладал, а также может даже положительно влиять на фармакодинамику указанного активного компонента в отношении его терапевтической активности в организме.
Изотопы
2
3
13
14
15
18
17
31
32
35
18
36
3
14
3
14
2
Далее также предполагается, что соединение формулы I включает его изотопно-меченные формы. Изотопно-меченная форма соединения формулы I является идентичной указанному соединению, за исключением того факта, что один или более атомов указанного соединения заменены на атом или атомы, которые имеют атомную массу или массовое число, отличное от атомной массы или массового числа атома, который обычно встречается в природе. Примеры изотопов, которые легко доступны для приобретения и которые могут быть введены в соединение формулы I хорошо известными способами, включают изотопы водорода, углерода, азота, кислорода, фосфора, фтора и хлора, например, Н, Н, С, С, N, O, O, Р, Р, S, F и Cl, соответственно. Соединение формулы I, его пролекарственная форма или фармацевтически приемлемая соль, которые содержат один или более указанных выше изотопов и/или другие изотопы других атомов также составляют объем настоящего изобретения. Изотопно-меченное соединение формулы I может использоваться в ряде выгодных способов. Например, меченное изотопами соединение формулы I, например, в которое введен радиоактивный изотоп, такой, как Н или С, будет полезным в исследованиях распределения лекарственного средства и/или субстрата в ткани. Такие радиоактивные изотопы, например, тритий (Н) и углерод-14 (С), являются особенно предпочтительными вследствие простоты получения и высокой способности к выявлению. Введение более тяжелых изотопов, например, дейтерия (Н), в соединение формулы I, будет обеспечивать терапевтические преимущества, основывающиеся на большей метаболической стабильности указанного соединения, меченного изотопами. Большая метаболическая стабильность проявляется непосредственно в повышении времени полураспада in-vivo или снижении требуемой дозы, что при большинстве условий будет представлять предпочтительный вариант настоящего изобретения. Меченное изотопом соединение формулы I обычно получают путем осуществления методик, раскрытых в схемах синтеза ив описании, относящемся к ним, в разделах, касающихся примеров и способов получения, описанных в данной заявке, путем замены немеченого изотопами реагента его соответствующим легко доступным реагентом, меченным изотопом.
2
M
D
Дейтерий (Н) также может быть введен в соединение формулы I с целью изменения окислительного метаболизма соединения путем первичного кинетического изотопного эффекта. Первичный кинетический изотопный эффект представляет собой изменение скорости химической реакции, которое происходит по причине замещения изотопного ядра, что, в свою очередь, вызывается изменением энергий основного состояния, что необходимо для образования ковалентной связи после указанного изотопного замещения. Замещение тяжелым изотопом обычно приводит к снижению энергии основного состояния для химической связи, вызывая, таким образом, уменьшение скорости скорость-лимитирующей стадии разрушения связи. Когда происходит разрушение связи в или поблизости участка седлообразной конфигурации вдоль координаты реакции образования нескольких продуктов, коэффициент распределения продуктов может существенно изменяться. Например, в случае, если дейтерий связывается с атомом углерода в положении, в котором не происходит обмен, различия скорости k/k=2-7 являются типичными. Такое отличие в скорости, которое успешно применяется к соединению формулы I, чувствительному к окислению, может в значительной степени влиять на профиль указанного соединения in-vivo и приводить к улучшению фармакокинетических свойств.
max
В процессе обнаружения и совершенствования терапевтических агентов специалист в данной области ищет пути оптимизации фармакокинетических параметров при сохранении желательных in-vitro свойств. Является рациональным предположить, что многие соединения со слабыми фармакокинетическими профилями страдают неустойчивостью к окислительному метаболизму. Исследования in-vitro микросом печени, которые сейчас являются доступными, обеспечивают ценную информацию о процессе окислительного метаболизма такого типа, что, в свою очередь, позволяет получить рациональную модель меченных дейтерием соединений формулы I с улучшенной стабильностью вплоть до резистентности к такому окислительному метаболизму. Таким образом, получают значительное улучшение фармакокинетических профилей соединений формулы I, что может быть количественно выражено в величинах увеличения периода полураспада in-vivo (t/2), концентрации при максимальном терапевтическом эффекте (C), площади под кривой ответа на определенную дозу (AUC) и F; в величинах уменьшения клиренса, дозы и материальных затрат.
Приведенное далее предназначено для иллюстрации сказанного выше: соединение формулы I, которое имеет многочисленные потенциальные сайты для окислительного метаболизма, например, атомы водорода бензила и атомы водорода, соединенные с атомом азота, получают в виде серии аналогов, в которых различные комбинации атомов водорода заменены атомами дейтерия так, что некоторые, большинство или все указанные атомы водорода заменены на атомы дейтерия. Определение периода полураспада обеспечивает подходящее и точное определение степени улучшения резистентности к окислительному метаболизму. Таким образом определяют, что период полураспада исходного соединения может быть продлен вплоть до 100% как результат такого замещения водорода дейтерием.
Замещение водорода дейтерием в соединении формулы I может также использоваться для достижения благоприятного изменения профиля метаболитов исходного соединения как пути уменьшения или устранения нежелательных токсических метаболитов. Например, когда токсический метаболит возникает при окислительном расщеплении углерод-водородной связи С-Н, то с достаточной вероятностью предполагается, что меченый дейтерием аналог значительно уменьшит или устранит выработку нежелательного метаболита, даже в случае, когда отдельное окисление не является лимитирующей скорость стадией. Дополнительная информация, относящаяся к уровню техники в отношении замещения водорода дейтерием, может быть найдена, например, в работе Hanzlik и др., J. Org. Chem. 55, 3992-3997, 1990; Reider и др., J. Org. Chem. 52, 3326-3334, 1987; Foster, Adv. Drug Res. 14, 1-40, 1985; Gillette и др., Biochemistry 33 (10) 2927-2937, 1994; и Jarman и др. Carcinogenesis 16 (4), 683-688, 1993.
Кроме того, изобретение относится к лекарственным средствам, содержащим по меньшей мере одно соединение формулы I и/или его фармацевтически приемлемые производные, сольваты и стереоизомеры, включая их смеси во всех соотношениях, и необязательно наполнители и/или вспомогательные вещества.
Фармацевтические составы могут вводиться в виде дозированных единиц, Которые содержат заранее установленное количество активного компонента на дозированную единицу. Такая единица может включать, например, от 0.5 мг до 1 г, предпочтительно от 1 мг до 700 мг, особенно предпочтительно от 5 мг до 100 мг, соединения в соответствии с изобретением, в зависимости от состояния, подвергаемого лечению, способа введения, а также возраста, веса тела и состояния пациента, или фармацевтические составы могут вводиться в виде дозированных единиц, которые содержат заранее установленное количество активного компонента на дозированную единицу. Предпочтительными составами дозированных единиц являются те, которые содержат суточную дозу или часть суточной дозы, как указано выше, или соответствующую ей порцию активного компонента. Кроме того, фармацевтические составы этого типа могут быть получены способом, который хорошо известен в области фармацевтики.
Фармацевтические составы могут адаптироваться для введения при помощи любого подходящего способа, например, путем перорального (включая буккальное или подъязычное), ректального, назального, местного (включая буккальное, подъязычное или трансдермальное), вагинального или парентерального (включая подкожное, внутримышечное, внутривенное или внутрикожное) введения. Такие препараты могут быть приготовлены с помощью любого способа, известного в области фармацевтики, например, путем объединения активного компонента с наполнителем(-ями) или вспомогательным(-ыми) веществом(-ами).
Фармацевтические составы, адаптированные для перорального введения, могут вводиться в виде отдельных единиц, таких как, например, капсулы или таблетки; порошки или гранулы; растворы или суспензии в водных или неводных жидкостях; пищевых пен или пенистых пищевых продуктов; или жидких эмульсий масло-в-воде или жидких эмульсий вода-в-масле.
Так, например, в случае перорального введения в виде таблетки или капсулы, активный компонент может быть объединен с пероральным, нетоксичным и фармацевтически приемлемым инертным наполнителем, таким как, например, этанол, глицерин, вода и т.п. Порошки получают путем измельчения соединения до подходящего небольшого размера и смешивания его с фармацевтическим наполнителем, измельченным аналогичным способом, таким как, например, пищевой углеводород, такой как, например, крахмал или маннит. Также можно добавлять ароматизатор, консервант, диспергирующее вещество и краситель.
Капсулы получают путем приготовления порошковой смеси, как описано выше, и заполнения ею желатиновых капсул определенной формы. Перед заполнением капсул к порошковой смеси можно добавлять скользящие и смазывающие вещества, такие как, например, высокодисперсная кремниевая кислота, тальк, стеарат магния, стеарат кальция или полиэтиленгликоль в твердой форме. Для улучшения доступности лекарственного средства, заключенного в капсулу, также можно добавлять дезинтегрирующее вещество или солюбилизатор, такой как, например, агар-агар, карбонат кальция или карбонат натрия.
Дополнительно, если это является желательным или необходимым, в смесь также можно добавлять подходящие связующие, смазывающие вещества, дезинтеграторы, а также красители. Подходящие связующие включают крахмал, желатин, природные сахара, такие как, например, глюкоза или бета-лактоза, подсластители, полученные из кукурузы, природные и синтетические смолы, такие как, например, аравийская камедь, трагакантовая камедь или альгинат натрия, карбоксиметилцеллюлозу, полиэтиленгликоль, воски и т.п. Смазывающие вещества, которые могут применяться в таких дозированных формах, включают олеат натрия, стеарат натрия, стеарат магния, бензоат натрия, ацетат натрия, хлорид натрия и т.п. Дезинтеграторы включают, но не ограничиваются только ими, крахмал, метилцеллюлозу, агар, бентонит, ксантановую камедь и т.п. Лекарственные средства в виде таблеток получают, например, путем приготовления порошковой смеси, гранулирования или сухого прессования смеси, добавления смазывающего вещества и дезинтегратора и прессования полученной смеси в таблетки. Порошковую смесь готовят путем смешивания соединения, измельченного подходящим образом, с разбавителем или основанием, как описано выше, и необязательно со связующим, таким как, например, карбоксиметилцеллюлоза, альгинат, желатин или поливинилпирролидон, замедлителем растворения, таким как, например, парафин, усилителем поглощения, таким как, например, четвертичная соль, и/или абсорбентом, таким как, например, бентонит, каолин или дикальцийфосфат. Порошковую смесь можно гранулировать путем смачивания связующим, таким как, например, сироп, крахмальная паста, слизь акации или растворы целлюлозы или полимерных веществ, и прессования ее через сито. В качестве альтернативы грануляции, порошковую смесь можно пропускать через таблетировочную машину, получая куски неправильной формы, которые распадаются, образуя гранулы. Гранулы можно замасливать путем добавления стеариновой кислоты, стеарата, талька или минерального масла для предотвращения прилипания к таблетировочной литейной форме. После этого смазанную смесь спрессовывают, получая таблетки. Соединения в соответствии с изобретением также можно объединять с сыпучим инертным наполнителем и затем подвергать прямому прессованию, получая таблетки без осуществления стадий грануляции или сухого прессования. Таблетки также можно покрывать прозрачным или светонепроницаемым защитным слоем, состоящим из шеллакового запечатывающего слоя, слоя сахара или полимерного вещества и глянцевого слоя воска. К этим покрытиям также можно добавлять красители для возможности различения разных дозируемых единиц.
Жидкости для перорального введения, такие как, например, раствор, сиропы и эликсиры, могут быть приготовлены в виде дозируемых единиц таким образом, чтобы они содержали заранее установленное количество соединения. Сиропы могут быть получены путем растворения соединения в водном растворе с подходящим ароматизатором, тогда как эликсиры готовят с применением нетоксичного спиртового наполнителя. Суспензии могут быть приготовлены путем диспергирования соединения в нетоксичном наполнителе. Также можно добавлять солюбилизаторы и эмульсификаторы, такие как, например, этоксилированные изостеариловые спирты и полиоксиэтиленовые эфиры сорбита, консерванты, ароматические добавки, такие как, например, масло мяты перечной, или натуральные заменители сахара или сахарин, или другие искусственные заменители сахара и т.п.
Составы для перорального введения в виде дозированных единиц могут быть инкапсулированы в микрокапсулы, если это является желательным. Также состав может быть приготовлен таким образом, чтобы пролонгировать или замедлить высвобождение, например, путем применения покрытий или заделывания вещества в виде частиц в полимеры, воск и т.п.
Соединения формулы I и их фармацевтически приемлемые соли, таутомеры и стереоизомеры также могут вводиться в виде липосомных систем доставки, таких как, например, небольшие однослойные пузырьки, большие однослойные пузырьки и многослойные пузырьки. Липосомы могут быть образованы из различных фосфолипидов, таких как, например, холестерин, стеариламин или фосфатидилхолины.
Соединения формулы I и их соли, таутомеры и стереоизомеры также могут доставляться с использованием моноклональных антител в качестве индивидуальных носителей, к которым присоединены молекулы соединения. Соединения также могут быть соединены с растворимыми полимерами в качестве нацеливающих носителей лекарственных средств. Такими полимерами могут являться поливинилпирролидон, сополимер пирана, полигидроксипропилметакриламидофенол, полигидроксиэтиласпартамидофенол или полиэтиленоксидполилизин, замещенный пальмитоиловыми радикалами. Кроме того, соединения можно связывать с биоразлагаемыми полимерами, которые пригодны для обеспечения контролируемого высвобождения лекарственного средства, например, полимолочной кислотой, поли-эпсилон-капролактоном, полигидроксимасляной кислотой, полиортоэфирами, полиацеталями, полидигидроксипиранами, полицианоакрилатами и перекрестно-сшитыми или амфипатическими блок-сополимерами гидрогелей.
Фармацевтические составы, адаптированные для трансдермального введения, могут вводиться в виде независимых пластырей для удлиненного, тесного контакта с эпидермисом реципиента. Таким образом, например, активный компонент может доставляться из пластыря путем ионофореза, как в общем описано в Pharmaceutical Research, 3(6), 318 (1986).
Фармацевтические соединения, адаптированные для местного введения, могут быть приготовлены в виде мазей, кремов, суспензий, лосьонов, порошков, растворов, паст, гелей, спреев, аэрозолей или масел.
Для лечения глаз или других наружных тканей, например рта и кожи, предпочтительно применяются составы в виде местной мази или крема. Для приготовления состава в виде мази, активный компонент может применяться с парафиновым или смешивающимся с водой мазевым основанием. Альтернативно, для получения крема активный компонент может быть приготовлен с основой для крема типа масло-в-воде или основой вода-в-масле.
Фармацевтические составы, адаптированные для местного введения в глаза, включают глазные капли, в которых активный компонент растворен или суспендирован в подходящем носителе, предпочтительно в водном растворителе.
Фармацевтические составы, адаптированные для местного введения в полость рта, включают лепешки, пастилки и жидкости для полоскания рта.
Фармацевтические составы, адаптированные для ректального введения, могут вводиться в виде суппозиториев или клизм.
Фармацевтические составы, адаптированные для назального введения, в которых носитель представляет собой твердое вещество, включают крупный порошок, имеющий размер частичек, например, в интервале 20-500 микрон, который вводится путем вдыхания, то есть путем быстрого вдоха через нос из контейнера, содержащего порошок, который придерживают возле носа. Подходящие составы для введения в виде назального спрея или носовых капель с жидкостью в качестве носителя включают растворы активного вещества в воде или в масле.
Фармацевтические составы, адаптированные для введения путем ингаляции, включают тонкоизмельченные частички в виде пыли или тумана, которые могут быть получены с помощью различных диспергирующих устройств под давлением с аэрозолями, распылителей или инсуффляторов.
Фармацевтические составы, адаптированные для вагинального введения, могут вводиться в виде пессариев, тампонов, кремов, гелей, паст, пен или аэрозолей.
Фармацевтические составы, адаптированные для парентерального введения, включают водные или неводные стерильные растворы для инъекций, содержащие антиоксиданты, буферы, бактериостатические вещества и растворенные вещества, с помощью которых состав поддерживается изотоническим по отношению к крови реципиента, подвергаемого лечению; и водные или неводные стерильные суспензии, которые могут содержать суспензионную среду и загустители. Составы могут вводиться с помощью емкостей для однократного или многократного введения, например, запечатанных ампул и флаконов, и храниться в лиофилизированном состоянии, при этом непосредственно перед введением необходимо только добавить стерильную жидкость-носитель, например, воду для инъекций. Растворы и суспензии для инъекций, приготовленные согласно рецептуре, могут быть приготовлены из стерильных порошков, гранул и таблеток.
Также является очевидным, что дополнительно к предпочтительным вышеописанным составляющим, составы также могут содержать другие вещества, которые используются в данной области для конкретных типов составов; например, составы, пригодные для перорального введения, могут содержать ароматизаторы.
Терапевтически эффективное количество соединения формулы I зависит от многих факторов, включая, например, возраст и вес животного, определенное состояние, которое необходимо лечить, и его тяжесть, природу состава и способ введения, и в конечном счете оно может быть определено лечащим врачом или ветеринаром. Тем не менее, эффективное количество соединения в соответствии с изобретением, как правило, находится в интервале от 0.1 до 100 мг/кг веса тела реципиента (млекопитающего) в сутки и предпочтительно обычно находится в интервале от 1 до 10 мг/кг веса тела в сутки. Таким образом, действующее суточное количество для взрослого млекопитающего весом 70 кг обычно составляет от 70 до 700 мг, причем это количество может вводиться в виде отдельной дозы один раз в день или обычно в виде циклов частичных доз (таких как, например, два, три, четыре, пять или шесть раз) в день, таким образом, что общая суточная доза является аналогичной. Эффективное количество его соли, сольвата или физиологически функционального производного может быть определено в виде доли эффективного количества соединения в соответствии с изобретением per se. Также можно предположить, что аналогичные дозы пригодны для лечения других состояний, описанных выше.
Комбинированное лечение этого типа можно осуществлять с помощью одновременного, последовательного или раздельного дозирования индивидуальных компонентов лечения. В комбинированных продуктах такого типа применяются соединения в соответствии с изобретением.
Кроме того, изобретение относится к лекарственным средствам, содержащим по меньшей мере одно соединение формулы I и/или его фармацевтически приемлемые соли, таутомеры и стереоизомеры, включая их смеси во всех соотношениях, и по меньшей мере один дополнительный активный компонент лекарственного средства.
Изобретение также относится к комплекту (набору), состоящему из отдельных упаковок
(а) эффективного количества соединения формулы I и/или его фармацевтически приемлемых солей, таутомеров и стереоизомеров, включая их смеси во всех соотношениях,
и
(б) эффективного количества дополнительного активного компонента лекарственного средства.
Комплект включает подходящие емкости, такие как коробки, индивидуальные бутылки, пакеты или ампулы. Комплект может включать, например, отдельные ампулы, каждая из которых содержит эффективное количество соединения формулы I и/или его фармацевтически приемлемых солей, таутомеров и стереоизомеров, включая их смеси во всех соотношениях,
и эффективное количество дополнительного активного компонента лекарственного средства в растворенной или лиофиллизированной форме.
"Лечение", как используется в настоящей заявке, обозначает облегчение, полностью или частично, симптомов, связанных с нарушением или заболеванием, или замедление, или остановку дальнейшего прогрессирования или ухудшения этих симптомов, или предотвращение или профилактику заболевания или нарушения у субъекта, имеющего риск развития такого заболевания или нарушения.
Термин "эффективное количество" применительно к соединению формулы (I) может обозначать количество, способное облегчать, полностью или частично, симптомы, связанные с нарушением или заболеванием, или замедлять или останавливать дальнейшее прогрессирование или ухудшение этих симптомов, или предотвращать или обеспечивать профилактику заболевания или нарушения у субъекта, имеющего заболевание или с риском развития заболевания, раскрытого в настоящей заявке, такого как воспалительные состояния, иммунологические состояния, злокачественные новообразования или метаболические состояния.
В одном варианте осуществления эффективное количество соединения формулы (I) представляет собой количество, которое ингибирует танкиразу в клетке, например, in-vitro или in-vivo. В некоторых вариантах осуществления, эффективное количество соединения формулы (I) ингибирует танкиразу в клетке на 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% или 99%, по сравнению с активностью танкиразы в необработанной клетке. Эффективное количество соединения формулы (I), например, в фармацевтической композиции, может находиться на уровне, который превышает желательный эффект; например, от приблизительно 0.005 мг/кг веса тела субъекта до приблизительно 10 мг/кг веса тела субъекта в единичной лекарственной форме как для перорального, так и для парентерального введения.
ПРИМЕНЕНИЕ
Соединения настоящего изобретения пригодны в качестве фармацевтически активных компонентов для млекопитающих, в особенности для людей, для лечения злокачественного новообразования, рассеянного склероза, сердечнососудистых заболеваний, поражений центральной нервной системы и различных форм воспаления.
Настоящее изобретение охватывает применение соединений формулы I и/или их фармацевтически приемлемых солей, таутомеров и стереоизомеров для приготовления лекарственного средства для лечения или предотвращения злокачественного новообразования, рассеянного склероза, сердечнососудистых заболеваний, поражений центральной нервной системы и различных форм воспаления.
Примеры воспалительных заболеваний включают ревматоидный артрит, псориаз, контактный дерматит, аллергическую реакцию замедленного типа и т.п.
Также охватывается применение соединений формулы I и/или их фармацевтически приемлемых солей, таутомеров и стереоизомеров для приготовления лекарственного средства для лечения или предотвращения заболевания, индуцированного танкиразой, или состояния, индуцированного танкиразой у млекопитающего, при котором в этом способе терапевтически эффективное количество соединения в соответствии с изобретением вводят больному млекопитающему, нуждающемуся в таком лечении. Терапевтическое количество изменяется в зависимости от конкретного заболевания и легко может быть определено специалистом в данной области.
Выражение "заболевания или состояния, индуцированные танкиразой" относится к патологическим состояниям, которые зависят от активности одной или нескольких танкираз. Заболевания, связанные с активностью танкиразы, включают злокачественное новообразование, рассеянный склероз, сердечнососудистые заболевания, поражения центральной нервной системы и различные формы воспаления.
Настоящее изобретение, в особенности, относится к соединениям формулы I и их фармацевтически приемлемым солям, таутомерам и стереоизомерам, включая их смеси во всех соотношениях,
для применения для лечения заболеваний, при которых ингибирование, регуляция и/или модуляция ингибирования танкиразы играет роль.
Настоящее изобретение, в особенности, относится к соединениям формулы I и их фармацевтически приемлемым солям, таутомерам и стереоизомерам, включая их смеси во всех соотношениях, для применения для ингибирования танкиразы.
Настоящее изобретение, в особенности, относится к соединениям формулы I и их фармацевтически приемлемым солям, таутомерам и стереоизомерам, включая их смеси во всех соотношениях, для применения для лечения злокачественного новообразования, рассеянного склероза, сердечнососудистых заболеваний, поражений центральной нервной системы и различных форм воспаления.
Настоящее изобретение, в особенности, относится к способам лечения или предотвращения злокачественного новообразования, рассеянного склероза, сердечнососудистых заболеваний, поражений центральной нервной системы и различных форм воспаления, которые включают введение субъекту, который в этом нуждается, эффективного количества соединения формулы I или его фармацевтически приемлемой соли, таутомера, стереоизомера или сольвата.
Репрезентативные злокачественные новообразования, для лечения или предотвращения которых являются полезными соединения формулы I, включают, но не ограничиваются таковыми, рак головы, шеи, глаз, рта, горла, пищевода, бронхов, гортани, глотки, груди, костей, легких, ободочной кишки, прямой кишки, желудка, предстательной железы, мочевого пузыря, матки, шейки матки, молочной железы, яичников, яичек или других репродуктивных органов, кожи, щитовидной железы, крови, лимфатических узлов, почек, печени, поджелудочной железы, головного мозга, центральной нервной системы, солидных опухолей и злокачественного перерождения крови.
Репрезентативные сердечно-сосудистые заболевания, для лечения или предотвращения которых являются полезными соединения формулы I, включают, но не ограничиваются таковыми, рестеноз, атеросклероз и его последствия, такие как инсульт, инфаркт миокарда, ишемические повреждения сердца, легких, кишечника, почек, печени, поджелудочной железы, селезенки или мозга.
Настоящее изобретение относится к способу лечения пролиферативного, аутоиммунного, воспалительного или инфекционного заболевания или нарушения, который включает введение субъекту, который в этом нуждается, терапевтически эффективного количества соединения формулы I.
Предпочтительно, настоящее изобретение относится к способу, где заболевание представляет собой злокачественное новообразование.
Особенно предпочтительно, настоящее изобретение относится к способу, где заболевание представляет собой злокачественное новообразование, где введение является одновременным, последовательным или чередующимся с введением по меньшей мере одного другого активного лекарственного средства.
Раскрытые соединения формулы I могут вводиться в комбинации с другими известными терапевтическими агентами, включая противораковые средства. Как используется в настоящем изобретении, термин "противораковое средство" относится к любому средству, которое вводят пациенту со злокачественным новообразованием для лечения такого злокачественного новообразования.
Противораковое лечение, определенное выше, может применяться в виде монотерапии, или, может включать, дополнительно к применению соединений формулы I, раскрытых в данной заявке, обычные хирургические методы или радиотерапию или лекарственную терапию. Такая лекарственная терапия, например, химиотерапия или таргетная терапия, может включать применение одного или нескольких, однако предпочтительно одного, противоопухолевого(-ых) средства(-в), выбранного(-ых) из следующих:
Алкилирующие агенты
такие как алтретамин, бендамустин, бусульфан, кармустин, хлорамбуцил, хлорметин, циклофосфамид, дакарбазин, ифосфамид, импросульфан тозилат, ломустин, мельфалан, митобронитол, митолактол, нимустин, ранимустин, темозоломид, тиотепа, треосульфан, мехлорэтамин, карбоквон;
4
4
апазиквон, фотемустин, глуфосфамид, палифосфамид, пипоброман, трофосфамид, урамустин ТН-302, VAL-083;
Соединения платины
такие как карбоплатин, цисплатин, эптаплатин, мириплатин гидрат, оксалиплатин, лобаплатин, недаплатин, пикоплатин, сатраплатин;
лобаплатин, недаплатин, пикоплатин, сатраплатин;
Средства, изменяющие ДНК
такие как амрубицин, бисантрен, децитабин, митоксантрон, прокарбазин, трабектедин, клофарабин;
1,3
амсакрин, бросталлицин, пиксантрон, ларомустин;
Ингибиторы топоизомеразы
такие как этопозид, иринотекан, разоксан, собузоксан, тенипозид, топотекан;
амонафид, белотекан, эллиптиния ацетат, ворелоксин;
Модификаторы микротрубочек
такие как кабазитаксел, доцетаксел, эрибулин, иксабепилон, паклитаксел, винбластин, винкристин, винорелбин, виндезин, винфлунин;
фосбретабулин, тезетаксел;
Антиметаболиты
3
такие как аспарагиназа, азацитидин, левофолинат кальция, капецитабин,
кладрибин, цитарабин, эноцитабин, флоксуридин, флударабин, фторурацил, гемцитабин, меркаптопурин, метотрексат, неларабин, пеметрексед, пралатрексат, азатиоприн, тиогуанин, кармофур;
2,3
доксифлуридин, элацитарабин, ралтитрексед, сапацитабин, тегафур, триметрексат;
Противораковые антибиотики
такие как блеомицин, дактиномицин, доксорубицин, эпирубицин, идарубицин, левамизол, милтефозин, митомицин С, ромидепсин, стрептозоцин, валрубицин, зиностатин, зорубицин, даунуробицин, пликамицин;
акларубицин, пепломицин, пирарубицин;
Гормоны/антагонисты
такие как абареликс, абиратерон, бикалутамид, бусерелин, калустерон, хлортрианизен, дегареликс, дексаметазон, эстрадиол, флуокортолон,
флуоксиместерон, флутамид, фулвестрант, гозерелин, гистрелин, лейпрорелин, мегестрол, митотан, нафарелин, нандролон, нилутамид, октреотид, преднизолон, ралоксифен, тамоксифен, тиротропин альфа, торемифен, трилостан, трипторелин, диэтилстильбэстрол;
1,3
аколбифен, даназол, деслорелин, эпитиостанол, ортеронел, энзалутамид;
Ингибиторы ароматазы
такие как аминоглутетимид, анастрозол, эксеместан, фадрозол, летрозол, тестолактон;
форместан;
Низкомолекулярные ингибиторы киназ
такие как кризотиниб, дазатиниб, эрлотиниб, иматиниб, лапатиниб, нилотиниб, пазопаниб, регорафениб, руксолитиниб, сорафениб, санитиниб, вандетаниб, вемурафениб, босутиниб, гефитиниб, акситиниб;
4
1,3
1,3
4
2
4
1,3
1,3
1
4
афатиниб, алисертиб, дабрафениб, дакомитиниб, динациклиб, довитиниб, энзастаурин, нинтеданиб, ленватиниб, линифаниб, линситиниб, маситиниб, мидостаурин, мотесаниб, нератиниб, орантиниб, перифосин, понатиниб, радотиниб, ригосертиб, типифарниб, тивантиниб, тивозаниб, траметиниб, пимазертиб, бриваниб аланинат, седираниб, апатиниб, кабозантиниб S-малат, ибрутиниб, икотиниб, бупарлисиб, ципатиниб, кобиметиниб, иделалисиб, федратиниб, XL-647;
Фотосенсибилизаторы
3
такие как метоксален;
порфимер натрия, талапорфин, темопорфин;
Антитела
2,3
такие как алемтузумаб, бесилесомаб, брентуксимаб ведотин, цетуксимаб, деносумаб, ипилимумаб, офатумумаб, панитумумаб, ритуксимаб, тозитумомаб, трастузумаб, бевацизумаб, пертузумаб;
1,2,3
1,3
1
1,3
4
1,3
катумаксомаб, элотузумаб, эпратузумаб, фарлетузумаб, могамулизумаб, нецитумумаб, нимотузумаб, обинутузумаб, окаратузумаб, ореговомаб, рамуцирумаб, рилотумумаб, силтуксимаб, тоцилизумаб, залутумумаб, занолимумаб, матузумаб, далотузумаб, онартузумаб, ракотумомаб, табалумаб, EMD-525797, ниволумаб;
Цитокины
2
3
2,3
такие как альдеслейкин, интерферон альфа, интерферон альфа2а, интерферон альфа2b;
1,3
4
целмолейкин, тазонермин, тецелейкин, опрелвекин, рекомбинантный интерферон бета-1а;
Конъюгаты лекарственных препаратов
такие как денилейкин дифтитокс, ибритумомаб тиуксетан, йобенгуан I123, преднимустин, трастузумаб эмтансин, эстрамустин, гемтузумаб, озогамицин, афлиберцепт;
1,3
1,3
цинтредекин бесудотокс, эдотреотид, инотузумаб озогамицин, наптумомаб эстафенатокс, опортузумаб монатокс, технеций (99mTc) арцитумомаб, винтафолид;
Вакцины
3
3
3
4
3
4
4
4
такие как сипулейцел, витеспен, эмепепимут-S, онковакс, риндопепимут, тровакс, MGN-1601, MGN-1703;
Прочие препараты
3
алитретиноин, бексаротен, бортезомиб, эверолимус, ибандроновая кислота, имиквимод, леналидомид, лентинан, метирозин, мифамуртид, памидроновая кислота, пэгаспаргаза, пентостатин, сипулейцел, сизофиран, тамибаротен, темсиролимус, талидомид, третиноин, висмодегиб, золедроновая кислота, вориностат;
4
целекоксиб, циленгитид, энтиностат, этанидазол, ганетеспиб, идроноксил, инипариб, иксазомиб, лонидамин, ниморазол, панобиностат, перетиноин, плитидепсин, помалидомид, прокодазол, ридафоролимус, тасквинимод, телотристат, тимальфазин, тирапазамин, тоседостат, трабедерсен, убенимекс, вальсподар, гендицин,
4
4
1,3
2,3
4
1,3
4
4
3
4
пицибанил, реолизин, гидрохлорид ретаспимицина, требананиб, вирулизин, карфилзомиб, эндостатин, иммукотел, белиностат, MGN-1703;
1
Предл. МНН (предложенное международное непатентованное название)
2
Рекоменд. МНН (рекомендуемое международное непатентованное название)
3
Название в США (наименование препарата по Справочнику национальных непатентованных названий США)
4
нет МНН.
Следующие сокращения относятся соответственно к определениям, приведенным ниже:
3
3
3
6
2
2
3
4
3
4
водн. (водный), ч (час), г (грам), л (литр), мг (миллиграм), МГц (мегагерц), мин. (минута), мм (милиметр), ммоль (милимоль), мМ (милимолярный), т.пл. (температура плавления), экв. (эквивалент), мл (милилитр), мкл (микролитр), ACN (ацетонитрил), AcOH (уксусная кислота), CDCl (дейтерированный хлороформ), CDOD (дейтерированный метанол), CHCN (ацетонитрил), c-hex (циклогексан), DCC (дициклогексил карбодиимид), ДХМ (дихлорметан), DIC (диизопропил карбодиимид), DIEA (диизопропилэтил-амин), ДМФА (диметилформамид), ДМСО (диметилсульфоксид), ДМСО-d (дейтерированный диметилсульфоксид), EDC (1-(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимид), ЭРИ (электрораспылительная ионизация), EtOAc (этилацетат), EtO (простой диэтиловый эфир), EtOH (этанол), HATU гексафторфосфат (диметиламино-([1,2,3]триазоло[4,5-b]пиридин-3-илокси)-метилен]-диметиламмония), ВЭЖХ (высокоэффективная жидкостная хроматография), i-PrOH (2-пропанол), KCO (карбонат калия), ЖХ (жидкостная хроматография), МеОН (метанол), MgSO (сульфат магния), МС (масс-спектрометрия), МТВЕ (метил-трет-бутиловый эфир), NaHCO (бикарбонат натрия), NaBH (борогидрид натрия), NMM (N-метилморфолин), ЯМР (ядерный магнитный резонанс), РуВОР (гексафторфосфат бензотриазол-1-илокси-трис-пирролидинофосфония), КТ (комнатная температура), Rt (время удержания), SPE (твердофазная экстракция), TBTU (тетрафторборат 2-(1-Н-бензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметилурония), TEA (триэтиламин), ТФУ (трифторуксусная кислота), ТГФ (тетрагидрофуран), ТСХ (тонкослойная хроматография), УФ (ультрафиолет).
Описание исследований in-vitro
Сокращения:
GST = глутатион-S-трансфераза
FRET = резонансный перенос энергии флуоресценции
HTRF = (гомогенная флуоресценция с временным разрешением)
HEPES = буфер 4-(2-гидроксиэтил)-1-пиперазин-этансульфоновая кислота
DTT = дитиотреитол
BSA = бычий сывороточный альбумин
CHAPS = детергент;
CHAPS = 3-[(3-холамидопропил)диметиламмонио]-1-пропансульфонат
Стрептавидин-XLent представляет собой высококачественный конъюгат стрептавидин-XL665, для которого были оптимизированы условия сочетания для получения конъюгата с улучшенными характеристиками для некоторых исследований, в частности тех, для которых требуется высокая чувствительность.
Тестирование биохимической активности танкираз 1 и 2: Исследование аутопарсилирования
Исследование аутопарсилирования осуществляют за две стадии: ферментативная реакция, в которой GST-меченая танкираза-1, соотв. танкираза-2 переносит биотинилированную ADP-рибозу на себя из биотинилированного NAD в качестве ко-субстрата, и реакция обнаружения, где анализируют FRET с временным разрешением между меченным криптатом анти-GST, который связан с GST меткой фермента и Xlent-меченным стрептавидином, связанным с биотин-парсилированным остатком. Аутопарсилирующую активность определяют непосредственно через повышение HTRF сигнала.
Исследование аутопарсилирования осуществляют в формате исследования на 384 лунки HTRF (Cisbio, Codolet, France) в микротитровальных низкообъемных планшетах на 384 лунки Greiner nb и используют для экрана с высокой пропускной способностью. 250 нМ GST-меченную танкиразу-1 (1023-1327 а/к), соответственно приблизительно 250 нМ GST-меченную танкиразу-2 (873-1166 а/к) и 5 мкМ bio-NAD (Biolog, Life science Inst., Bremen, Germany) в качестве ко-субстрата инкубируют в общем объеме 5 мкл (50 мМ HEPES, 4 мМ Mg-хлорид, 0.05% Pluronic F-68, 1.4 мМ DTT, 0.5% ДМСО, pH 7.7) при отсутствии или в присутствии тестируемого соединения (10 концентраций разведения) в течение 90 мин при 30°С. Реакцию останавливают путем добавления 1 мкл 50 мМ EDTA раствора. Добавляют 2 мкл раствора для обнаружения (1.6 мкМ SA-Xlent (Cisbio, Codolet, France), 7.4 нМ анти-GST-K (Eu-меченное анти-GST, Cisbio, Codolet, France) в 50 мМ HEPES, 800 мМ KF, 0.1% BSA, 20 мМ EDTA, 0.1% CHAPS, pH 7.0). После инкубирования в течение 1 ч при комнатной температуре HTRF измеряют с помощью многорежимного планшет-ридера Envision (Perkin Elmer LAS Germany GmbH) при длине волны возбуждения 340 нм (лазерный режим) и длинах волн эмиссии 615 нм и 665 нм. Определяют соотношение сигналов эмиссии. Полное используемое значение представляет реакцию без ингибитора. Используемое значение фармакологического нуля представляет собой XAV-939 (Tocris) в конечной концентрации 5 мкМ. Ингибирующие значения (IC50) определяют, используя либо программу Symyx Assay Explorer, либо Condosseo от GeneData.
Измерение клеточного ингибирования танкиразы
Поскольку было описано, что танкиразы модулируют клеточный уровень Axin2 (Huang и др., 2009; Nature), то повышение уровня Axin2 используют в качестве считываемых данных для определения клеточного ингибирования танкираз в исследовании на основе Luminex.
4
200
50
Клетки клеточной линии карциномы ободочной кишки DLD1 высевают в планшеты на 96 лунок при плотности 1.5×10 клеток на лунку. На следующий день, клетки обрабатывают серийными разведениями тестируемого соединения за семь стадий в виде трех повторов с конечной концентрацией ДМСО 0.3%. Через 24 часа, клетки лизируют в лизирующем буфере (20 мМ Tris/HCl pH 8.0, 150 мМ NaCl, 1% NP40, 10% глицерин) и лизаты очищают путем центрифугирования через фильтровальный планшет на 96 лунок (0.65 мкм). Белок Axin2 выделяют из клеточных лизатов путем инкубирования с моноклональным анти-Ахт2 антителом (R&D Systems #МАВ6078), которое связывается с флуоресцентными карбоксишариками. После этого, связанный Axin2 специфически обнаруживают с помощью поликлонального анти-Axin2 антитела (Cell Signaling #2151) и подходящего РЕ-флуоресцентного вторичного антитела. Количество выделенного Axin2 белка определяют с помощью прибора Luminex (Luminex Corporation) в соответствии с инструкциями производителя путем подсчитывания 100 событий на лунку. Ингибирование танкиразы тестируемыми соединениями приводит к более высоким уровням Axin2, которые прямо коррелируют с повышением обнаруживаемой флуоресценции. В качестве контролей клетки обрабатывают только растворителем (нейтральный контроль) и сравнительным ингибитором танкиразы IWR-2 (3Е-06 М), который служит в качестве контроля для максимального повышения Axin2. Для анализа, полученные данные нормализуют по отношению к необработанному контролю с растворителем и подгоняют для определения значений ЕС, используя программное обеспечение Assay Explorer (Accelrys).
Описание исследования PARP1
Тестирование биохимической активности PARP-1: Исследование аутопарсилирования
Исследование аутопарсилирования осуществляют за две стадии: ферментативная реакция, в которой His-меченная Parp-1 переносит биотинилированную ADP-рибозу/ADP-рибозу на себя с биотинилированного NAD/NAD в качестве ко-субстрата, и реакция обнаружения, где анализируют FRET с временным разрешением между меченным криптатом анти-His антителом, связанным с His меткой фермента и Xlent-меченным стрептавидином, связанным с биотин-парсилированным остатком. Аутопарсилирующую активность определяют непосредственно через повышение HTRF сигнала.
Исследование аутопарсилирования осуществляют в формате исследования на 384 лунок HTRF (Cisbio, Codolet, France) в микротитровальных низкообъемных планшетах на 384 лунки Greiner nb. 35 нМ His-меченную Parp-1 (человеческая, рекомбинантная, Enzo Life Sciences GmbH, Lorrach, Germany) и смесь 125 нМ bio-NAD (Biolog, Life science Inst., Bremen, Germany) и 800 нМ NAD в качестве ко-субстрата инкубируют в общем объеме 6 мкл (100 мМ Tris/HCl, 4 мМ Mg-хлорид, 0,01% IGEPAL СА630, 1 мМ DTT, 0,5% ДМСО, pH 8, 13 нг/мкл активированной ДНК (BPS Bioscience, San Diego, US)) при отсутствии или в присутствии тестируемого соединения (10 концентраций разведения) в течение 150 мин при 23°С. Реакцию останавливают путем добавления 4 мкл раствора стоп/обнаружение (70 нМ SA-Xlent (Cisbio, Codolet, France), 2.5 нМ анти-His-K (Eu-меченное анти-His, Cisbio, Codolet, France) в 50 мМ HEPES, 400 мМ KF, 0.1% BSA, 20 мМ EDTA, pH 7.0). После инкубирования в течение 1 ч при комнатной температуре HTRF измеряют с помощью многорежимного планшет-ридера Envision (Perkin Elmer LAS Germany GmbH) при длине волны возбуждения 340 нм (лазерный режим) и длинах волн эмиссии 615 нм и 665 нм. Определяют соотношение сигналов эмиссии. Полное используемое значение представляет реакцию без ингибитора. Используемое значение фармакологического нуля представляет собой Olaparib (LClabs, Woburn, US) в конечной концентрации 1 мкМ. Определяют ингибирующие значения (IC50), используя либо программу Symyx Assay Explorer, либо Condosseo от GeneData.
Описание ELISA исследования TNKS1 и TNKS2
Тестирование биохимической активности TNK 1 и 2: определение активность с помощью ELISA (исследование аутопарсилирования)
Для исследования аутопарсилирующей активности TNKS 1 и 2 осуществляют ELISA: На первой стадии GST меченную TNKS захватывают на покрытом глутатионом планшете. После этого осуществляют исследование активности с биотинилированным NAD при отсутствии/в присутствии соединений. В процессе ферментативной реакции GST меченная TNKS переносит биотинилированную ADP-рибозу на себя с биотинилированного NAD в качестве ко-субстрата. Для обнаружения добавляют конъюгат стрептавидин-HRP, который связывается с биотинилированной TNKS и таким образом захватывается на планшеты. Определяют количество биотинилированной соотв. аутопарсилированной TNKS с люминесцентным субстратом для HRP. Уровень сигнала люминесценции прямо коррелируется с количеством аутопарсилированной TNKS и, следовательно, с активностью TNKS.
Определение активности с помощью ELISA осуществляют в микротитровальных планшетах на 384 лунки, покрытых глутатионом (планшеты для захвата Express, покрытые глутатионом, Biocat, Heidelberg, Germany). Планшеты предварительно уравновешивают с помощью PBS. Затем планшеты инкубуют с 50 мкл 20 нг/лунку GST-меченной Tnks-1 (1023-1327 а/к, собственного производства), соответственно GST-меченной Tnks-2 (873-1166 а/к, собственного производства) в буфере для исследования (50 мМ HEPES, 4 мМ Mg-хлорид, 0.05% Pluronic F-68, 2 мМ DTT, pH 7.7) в течение ночи при 4°C. Планшеты промывают 3 раза с помощью PBS-Tween-20. Лунки блокируют путем инкубирования при комнатной температуре в течение 20 минут с 50 мкл блокирующего буфера (PBS, 0.05% Tween-20, 0.5% BSA). После этого планшеты промывают 3 раза с помощью PBS-Tween-20. Ферментативную реакцию осуществляют в 50 мкл реакционного раствора (50 мМ HEPES, 4 мМ Mg-хлорид, 0.05% Pluronic F-68, 1.4 мМ DTT, 0.5% ДМСО, pH 7.7) с 10 мкМ bio-NAD (Biolog, Life science Inst., Bremen, Germany) в качестве ко-субстрата при отсутствии или присутствии тестируемого соединения (10 концентраций разведения) в течение 1 часа при 30°С. Реакцию останавливают путем промывания 3 раза PBS-Tween-20. Для обнаружения добавляют 50 мкл 20 нг/мкл стрептавидин, HRP конъюгата (MoBiTec, , Germany) в PBS/0.05%Tween-20/0.01%BSA и планшеты инкубируют в течение 30 минут при комнатной температуре. После трехразового промывания PBS-Tween-20 добавляют 50 мкл SuperSignal ELISA Femto Maximum чувствительного субстратного раствора (ThermoFisherScientific (Pierce), Bonn, Germany). После инкубирования в течение 1 минуты при комнатной температуре, измеряют люминесцентные сигналы с помощью многорежимного планшет-ридера Envision (Perkin Elmer LAS Germany GmbH) при 700 нм. Полное используемое значение представляет реакцию без ингибитора. Используемое значение фармакологического нуля представляет собой XAV-939 (Tocris) в конечной концентрации 5 мкМ. Определяют ингибирующие значения (IC50), используя либо программу Symyx Assay Explorer, либо Condosseo от GeneData.
Выше и ниже, все температуры указаны в градусах Цельсия °C. В последующих примерах "обычная обработка" обозначает: при необходимости добавляют воду, pH устанавливают, при необходимости, на значение от 2 до 10, в зависимости от строения конечного продукта, смесь экстрагируют этилацетатом или дихлорметаном, фазы разделяют, органическую фазу высушивают над сульфатом натрия и упаривают, и остаток очищают при помощи хроматографии на силикагеле и/или кристаллизации. Rf значения на силикагеле; элюент : этилацетат/метанол 9:1.
1
1
1
6
Н ЯМР записывали на спектрометре Bruker 400 МГц, используя остаточный сигнал дейтерированного растворителя в качестве внутреннего стандарта. Химические сдвиги (δ) представлены в виде м.д. относительного остаточного сигнала растворителя (δ=2.49 м.д. для Н ЯМР в ДМСО-d). Данные Н ЯМР представляли следующим образом: химический сдвиг (мультиплетность, константы взаимодействия и число водородов). Мультиплетность сокращали следующим образом: s (синглет), d (дублет), t (триплет), q (квартет), m (мультиплет), br (широкий).
ЖХМС-анализ:
Метод А: растворитель А: вода + 0.1% ТФУ; растворитель В: ACN + 0.1% ТФУ; поток: 2 мл/мин; градиент: 0 мин: 5% В, 8 мин: 100% В, 8.1 мин: 100% В, 8.5 мин: 5% В, 10 мин 5% В.
Колонка: XBridge С8, 3.5 мкм, 4.6×50 мм;
4
3
Метод В: растворитель А: 10 мМ NHHCO, растворитель В: ACN; скорость потока: 1.0 мл/мин
Колонка: XBridge С8, 3.5 мкм, 4.6×50 мм;
ВЭЖХ:
2
Метод А: А-0.1% ТФУ в HO, В-0.1% ТФУ в ACN: поток - 2.0 мл/мин.
Колонка: XBridge С8 (50×4.6 мм, 3.5 мкм).
Примеры
Фенил(пиперидин-4-ил)метанон
2
4
2
4
1-Ацетил пиперидин-4-карбоновую кислоту (3.0 г, 0.018 моль) небольшими порциями добавляли к тионилхлориду (10 мл, 0.143 моль) и перемешивали в течение 4 ч при комнатной температуре. Реакционную смесь концентрировали в вакууме и упаривали вместе с толуолом (2×200 мл). Остаток растворяли (умеренно растворимый) в 1,2-дихлорэтане и добавляли к перемешиваемой суспензии безводного хлорида алюминия в бензоле (20 мл). Полученную в результате смесь кипятили с обратным холодильником в течение 2 ч, выливали на измельченный лед и экстрагировали хлороформом (2×200 мл). Объединенный органический слой промывали солевым раствором, сушили над безводным NaSO и упаривали с получением коричневой смолы. Полученную смолу кипятили с обратным холодильником в течение 6 ч с 6 н. соляной кислотой (60 мл). Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и промывали диэтиловым эфиром (100 мл). Водную часть подщелачивали 10%-ным гидроксидом натрия и экстрагировали диэтиловым эфиром (2×100 мл). Объединенный органический слой промывали солевым раствором, сушили над безводным NaSO и упаривали досуха. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии, используя силикагель (60-120) и смеси петролейный эфир/этилацетат при градиентном элюировании с получением указанного в заголовке соединения; выход: 1.5 г (45%); ЖХМС (метод В): 190.3 (М+Н), Rt: 2.01 мин, чистота: 85.3%;
1
6
Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d): δ 7.45-7.34 (m, 5Н), 3.13 (s, 1Н), 2.83 (s, 1Н), 2.50-2.48 (m, 2Н), 1.80-1.70 (m, 1Н), 1.30-1.25 (m, 3Н), 1.14-1.19 (m, 1H).
Пример 1
Метил-м-толиламид 4-бензоилпиперидин-1-карбоновой кислоты ("А1")
2
4
К суспензии фенил(пиперидин-4-ил)метанона (0.15 г, 0.79 ммоль) в ДХМ (10 мл) добавляли диизопропилэтиламин (0.30 г, 2.37 ммоль) и, далее, трифосген (0.23 г, 0.79 ммоль) по каплям при 0°С. После перемешивания в течение 30 мин, реакционную смесь охлаждали до 0°С и добавляли метил-м-толиламин (0.093 г, 0.87 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 16 ч при комнатной температуре. Реакционную смесь разбавляли ДХМ (20 мл), промывали 10%-ным бикарбонатом натрия (50 мл), 1.5 н. HCl (50 мл), водой (50 мл) и солевым раствором (50 мл). Органический слой сушили над безводным NaSO и упаривали досуха. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии, используя силикагель (60-120) и смеси петролейный эфир/этилацетат при градиентном элюировании с получением указанного в заголовке соединения; выход: 58 мг (26%); ЖХМС (метод А): 337.2 (М+Н), Rt. 4.93 мин, чистота 99.8% (254 нм); ВЭЖХ (метод A): Rt. 4.84 мин, чистота 99.8% (254 нм);
1
6
Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d): δ 7.94 (t, J=8.52 Гц, 2Н), 7.61 (t, J=14.68 Гц, 1Н), 7.50 (t, J=15.32 Гц, 2Н), 7.22 (t, J=15.48 Гц, 1Н), 6.93-6.89 (m, 3Н), 3.74-3.71 (m, 2Н), 3.55-3.49 (m, 1Н), 3.06 (s, 3Н), 2.79-2.73 (m, 2Н), 2.28 (s, 3Н), 1.61-1.58 (m, 2Н), 1.33-1.24 (m, 2Н).
Пример 2
Метил-п-толиламид 4-бензоилпиперидин-1-карбоновой кислоты ("А2")
Соединение получали аналогично примеру 1.
Выход: 79 мг (35%); ЖХМС (метод А): 337.3 (М+Н), Rt. 5.57 мин, чистота: 98.2% (254 нм); ВЭЖХ (метод A): Rt. 4.86 мин, чистота 97.8% (254 нм);
1
6
Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d): δ 7.92 (d, J=8.52 Гц, 2Н), 7.63-7.61 (m, 1H), 7.52-7.48 (m, 2Н), 7.15 (d, J=8.24 Гц, 2Н), 6.99 (t, J=1.96 Гц, 2Н), 3.70 (d, J=13.00 Гц, 2Н), 3.53-3.48 (m, 1Н), 3.04 (s, 3Н), 2.76-2.70 (m, 2Н), 2.26 (s, 3Н), 1.60 (d, J=11.00 Гц, 2Н), 1.32-1.22 (m, 2Н).
Пример 3
(3-Метоксифенил)-метиламид 4-бензоилпиперидин-1-карбоновой кислоты ("A3")
Соединение получали аналогично примеру 1.
Выход: 56 мг (29%); ЖХМС (метод А): 367.0 (М+Н), Rt. 4.73 мин, чистота 96% (254 нм); ВЭЖХ (метод A): Rt. 4.57 мин, чистота 98.5% (254 нм);
1
6
Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d): δ 7.96-7.94 (m, 2Н), 7.62-7.57 (m, 1Н), 7.51-7.47 (m, 2Н), 7.29 (t, J=16.16 Гц, 1Н), 6.76-6.71 (m, 3Н), 3.88 (d, J=13.48 Гц, 2Н), 3.81 (s, 3Н), 3.56-3.49 (m, 1Н), 3.19 (s, 3Н), 2.85 (t, J=18.16 Гц, 2Н), 1.70-1.68 (m, 2Н), 1.52-1.48 (m, 2Н).
Пример 4
(4-Метоксифенил)-метиламид 4-бензоилпиперидин-1-карбоновой кислоты ("А4")
Соединение получали аналогично примеру 1.
Выход: 28 мг (12%); ЖХМС (метод А): 353.2 (М+Н), Rt. 4.47 мин, чистота 98.9% (254 нм); ВЭЖХ (метод A): Rt. 4.45 мин, 99% (254 нм);
1
6
Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d): δ 7.93 (d, J=8.48 Гц, 2Н), 7.61 (t, J=14.72 Гц, 1H), 7.50 (t, J=15.28 Гц, 2Н), 7.07 (dd, J=8.88, Гц, 2Н), 6.92 (dd, J=12.40 Гц, 2Н), 3.73-3.69 (m, 5Н), 3.52-3.45 (m, 1Н), 3.01 (s, 3Н), 2.73 (t, J=14.16 Гц, 2Н), 1.58 (d, J=11.08 Гц, 2Н), 1.30-1.20 (m, 2Н).
Пример 5
(4-Метоксифенил)-метиламид 4-(4-метилбензоил)-пиперидин-1-карбоновой кислоты ("А5")
Соединение получали аналогично примеру 1.
Выход: 132 мг (29%); ЖХМС (метод А): 367.3 (М+Н), Rt. 4.80 мин, чистота 99.9% (254 нм); ВЭЖХ (метод A): Rt. 4.74 мин, 99.8% (254 нм);
1
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl): δ 7.79 (d, J=8.24 Гц, 2Н), 7.27-7.23 (m, 2Н), 7.08-7.04 (m, 2Н), 6.89-6.85 (m, 2Н), 3.87 (d, J=13.36 Гц, 2Н), 3.80 (s, 3Н), 3.26 (s, 1Н), 3.18 (s, 3Н), 2.78-2.72 (m, 2H), 2.40 (s, 3Н), 1.68-1.66 (m, 2H).
Пример 6
(4-Метоксифенил)-метиламид 4-(4-метоксибензоил)-пиперидин-1-карбоновой кислоты ("А6")
Соединение получали аналогично примеру 1.
Выход: 8 мг (16%); ЖХМС (метод А): 383.3 (М+Н), Rt. 4.43 мин, чистота 99.7% (254 нм); ВЭЖХ (метод A): Rt. 4.42 мин, 99.7% (254 нм);
1
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl): δ 7.88 (dd, J=8.92 Гц, 2Н), 7.06 (dd, J=9.00 Гц, 2Н), 6.92 (dd, J=8.92 Гц, 2Н), 6.87 (dd, J=8.96 Гц, 2Н), 3.90-3.82 (m, 5Н), 3.80 (s, 3Н), 3.27-3.21 (m, 1Н), 3.18 (s, 3Н), 2.78-2.71 (m, 2Н), 1.68-1.55 (m, 2Н), 1.53-1.47 (m, 2Н).
Пример 7
(4-Метоксифенил)-метиламид 4-(3-фторбензоил)-пиперидин-1-карбоновой кислоты ("А7")
Соединение получали аналогично примеру 1.
Выход: 77 мг (17%); ЖХМС (метод А): 371.3 (М+Н), Rt. 4.59 мин, чистота 98.3% (254 нм); ВЭЖХ (метод A): Rt. 4.76 мин, 98.2% (254 нм);
1
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl): δ 7.67-7.65 (m, 1Н), 7.58-7.55 (m, 1Н), 7.46-7.41 (m, 1H), 7.27-7.23 (m, 1H), 7.09-7.04 (m, 2Н), 6.90-6.86 (m, 2Н), 3.89-3.86 (m, 2Н), 3.81 (s, 3Н), 3.26-3.20 (m, 4Н), 2.79-2.72 (m, 2Н), 1.70-1.64 (m, 2Н), 1.55-1.45 (m, 2Н).
Пример 8
(4-Метоксифенил)-метиламид 4-(4-фторбензоил)-пиперидин-1-карбоновой кислоты ("А8")
Соединение получали аналогично примеру 1.
Выход: 8 мг (16%); ЖХМС (метод А): 371.2 (М+Н), Rt. 4.63 мин, чистота 99.6% (254 нм); ВЭЖХ (метод A): Rt. 4.60 мин, 99.8% (254 нм);
1
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl): δ 7.94-7.90 (m, 2Н), 7.13 (t, J=8.64 Гц, 2Н), 7.10 (d, J=2.04 Гц, 2Н), 6.89-6.87 (m, 2Н), 3.90-3.86 (m, 2Н), 3.81 (s, 3Н), 3.27-3.21 (m, 1Н), 3.18 (s, 3Н), 2.76 (t, J=14.44 Гц, 2Н), 1.69-1.65 (m, 2Н), 1.55-1.49 (m, 2Н).
Пример 9
(4-Метоксифенил)-метиламид 4-(4-хлорбензоил)-пиперидин-1-карбоновой кислоты ("А9")
Соединение получали аналогично примеру 1.
Выход: 183 мг (16%); ЖХМС (метод А): 387.0 (М+Н), Rt. 4.93 мин, чистота 99.5% (254 нм); ВЭЖХ (метод A): Rt. 4.90 мин, 99.6% (254 нм);
1
3
H ЯМР (400 МГц, CDCl): δ 7.84-7.81 (m, 2Н), 7.44-7.41 (m, 2Н), 7.07-7.05 (m, 2Н), 6.89-6.87 (m, 2Н), 3.87 (t, J=13.32 Гц, 2Н), 3.81 (s, 3Н), 3.26-3.18 (m, 1Н), 3.07 (s, 3Н), 2.79-2.72 (m, 2Н), 1.70-1.54 (m, 2Н), 1.52-1.48 (m, 2Н).
Пример 10
(3-Цианофенил)-метиламид 4-бензоилпиперидин-1-карбоновой кислоты ("А10")
Соединение получали аналогично примеру 1.
Выход: 4 мг (2%); ЖХМС (метод А): 405.2 (М+Н), Rt. 4.76 мин, чистота 96.8% (254 нм); ВЭЖХ (метод A): Rt. 4.34 мин, 94.9% (254 нм);
1
6
Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d): δ 7.98-7.96 (m, 2Н), 7.62-7.44 (m, 7Н), 3.85 (t, J=10.56 Гц, 2Н), 3.61-3.56 (m, 1Н), 3.24 (s, 3Н), 2.95 (t, J=13.36 Гц, 2Н), 1.78-1.58 (m, 2Н), 1.57-1.41 (m, 2Н).
Пример 11
(4-Цианофенил)-метиламид 4-бензоилпиперидин-1-карбоновой кислоты ("А11")
Соединение получали аналогично примеру 1.
Выход: 12 мг (5%); ЖХМС (метод А): 348.0 (М+Н), Rt. 4.30 мин, чистота 98.6% (254 нм); ВЭЖХ (метод A): Rt. 4.46 мин, 94.9% (254 нм);
1
6
Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d): δ 7.98-7.96 (m, 2Н), 7.75-7.74 (m, 2Н), 7.63 (t, J=13.48 Гц, 1Н), 7.52 (t, J=15.20 Гц, 1Н), 7.17-7.14 (m, 2Н), 3.80-3.76 (m, 2Н), 3.66-3.61 (m, 1Н), 3.14 (s, 3Н), 2.95 (t, J=12.52 Гц, 2Н), 1.76-1.73 (m, 2Н), 1.49-1.39 (m, 2Н).
Пример 12
(3-Фторфенил)-метиламид 4-бензоилпиперидин-1-карбоновой кислоты ("А12")
Соединение получали аналогично примеру 1.
Выход: 23 мг (10%); ЖХМС (метод А): 341.3 (М+Н), RT. 4.68 мин, чистота 99% (254 нм); ВЭЖХ (метод В): Rt. 6.09 мин, 94.7% (254 нм);
1
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl): δ 7.91-7.89 (m, 2Н), 7.57 (t, J=9.16 Гц, 1Н), 7.46 (t, J=15.12 Гц, 2Н), 7.32-7.27 (m, 1Н), 6.90-6.88 (m, 1H), 6.85-6.79 (m, 2Н), 3.91-3.86 (m, 2Н), 3.36-3.32 (m, 1H), 3.24 (s, 3Н), 2.87-2.80 (m, 2Н), 1.78-1.74 (m, 2Н), 1.66-1.63 (m, 1H), 1.62-1.56 (m, 2Н).
Пример 13
(4-Фторфенил)-метиламид 4-бензоилпиперидин-1-карбоновой кислоты ("А13")
Соединение получали аналогично примеру 1.
Выход: 26 мг (11%); ЖХМС (метод А): 341.2 (М+Н), Rt. 4.70 мин, чистота 98.8% (254 нм); ВЭЖХ (метод A): Rt. 4.61 мин, 98.6% (254 нм);
1
6
Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d): δ 7.94 (d, J=7.60 Гц, 2Н), 7.61 (t, J=14.68 Гц, 1H), 7.50 (t, J=15.32 Гц, 2Н), 7.19-7.17 (m, 4Н), 3.71-3.68 (m, 2Н), 3.55-3.49 (m, 1H), 3.05 (s, 3H), 2.76 (t, J=23.28 Гц, 2H), 1.62-1.59 (m, 2H), 1.32-1.22 (m, 2H).
Пример 14
Этил-(4-метоксифенил)-амид 4-бензоилпиперидин-1-карбоновой кислоты ("А14")
Соединение получали аналогично примеру 1.
Выход: 103 мг (42%); ЖХМС (метод А): 367.2 (М+Н), Rt. 4.82 мин, чистота 100% (254 нм); ВЭЖХ (метод A): Rt. 4.75 мин, 100% (254 нм);
1
6
Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d): δ 7.92 (d, J=7.44 Гц, 2Н), 7.61 (t, J=14.72 Гц, 1Н), 7.49 (t, J=15.40 Гц, 2Н), 7.06 (d, J=1.96 Гц, 2Н), 6.93 (d, J=3.32 Гц, 2Н), 3.73 (s, 3Н), 3.69-3.66 (m, 2Н), 3.51-3.46 (m, 3Н), 2.68 (t, J=23.16 Гц, 2Н), 1.57-1.54 (m, 2Н), 1.23-1.20 (m, 2Н), 0.99-0.95 (m, 3Н).
Пример 15
(2-Гидроксиэтил)-(4-метоксифенил)-амид 4-бензоилпиперидин-1-карбоновой кислоты ("А15")
Соединение получали аналогично примеру 1, очистку осуществляли с помощью препаративной ВЭЖХ; выход: 13 мг (17%); ЖХМС (метод А): 383.2 (М+Н), Rt. 4.07 мин, чистота 98.2% (254 нм); ВЭЖХ (метод A): Rt. 4.04 мин, 98% (254 нм);
1
6
Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d): δ 7.91-7.93 (m, 2Н), 7.59-7.63 (m, 1Н), 7.48-7.51 (m, 2Н), 7.09 (dd, J=2.20, 6.74 Гц, 2Н), 6.91 (dd, J=2.16, 6.78 Гц, 2Н), 4.74 (t, J=5.20 Гц, 1H), 3.73 (s, 3Н), 3.67-3.70 (m, 2Н), 3.51-3.54 (m, 2Н), 3.42 (q, J=12.16 Гц, 2Н), 2.66-2.71 (m, 2Н), 1.54-1.57 (m, 2Н), 1.21-1.27 (m, 2Н).
Пример 16
(4-Бензоилпиперидин-1-ил)-(2,3-дигидроиндол-1-ил)-метанон ("А16")
Соединение получали аналогично примеру 1.
Выход: 59 мг (26%); ЖХМС (метод А): 335.2 (М+Н), Rt. 4.78 мин, чистота 98.5% (254 нм); ВЭЖХ (метод A): Rt. 4.74 мин, 98.5% (254 нм);
1
6
Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d): δ 8.01 (d, J=8.48 Гц, 2Н), 7.65 (t, J=14.72 Гц, 1Н), 7.54 (t, J=15.16 Гц, 2Н), 7.18 (d, J=7.20 Гц, 1Н), 7.12 (t, J=15.24 Гц, 1Н), 6.99 (d, J=7.88 Гц, 1Н), 6.85 (t, J=14.56 Гц, 1Н), 3.82 (t, J=16.56 Гц, 2Н), 3.67-3.76 (m, 3Н), 2.96-3.09 (m, 4Н), 1.81 (d, J=11.20 Гц, 2Н), 1.55-1.64 (m, 2Н).
Пример 17
(2,3-Дигидроиндол-1-ил)-[4-(4-метилбензоил)-пиперидин-1-ил]-метанон ("А17")
Соединение получали аналогично примеру 1.
Выход: 221 мг (52%); ЖХМС (метод А): 349.2 (М+Н), Rt. 5.11 мин, чистота 98.6% (254 нм); ВЭЖХ (метод A): Rt. 5.05 мин, 97.2% (254 нм);
1
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl): δ 7.87 (d, J=8.24 Гц, 2Н), 7.29 (d, J=8.04 Гц, 2Н), 7.19-7.14 (m, 2Н), 7.07-7.05 (m, 1Н), 6.92-6.88 (m, 1Н), 3.96-3.89 (m, 4Н), 3.50-3.44 (m, 1H), 3.08-3.01 (m, 4Н), 2.43 (s, 3Н), 1.94-1.86 (m, 4Н).
Пример 18
(2,3-Дигидроиндол-1-ил)-[4-(4-метоксибензоил)-пиперидин-1-ил]-метанон ("А18")
Соединение получали аналогично примеру 1.
Выход: 8 мг (16%); ЖХМС (метод А): 365.0 (М+Н), Rt. 4.70 мин, чистота 99.9% (254 нм); ВЭЖХ (метод A): Rt. 4.71 мин, 99.7% (254 нм);
1
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl): δ 7.97 (d, J=8.92 Гц, 2Н), 7.20-7.14 (m, 2Н), 7.07 (d, J=7.92 Гц, 1Н), 6.97 (d, J=11.76 Гц, 2H), 6.90 (d, J=14.72 Гц, 1H), 3.97-3.89 (m, 7H), 3.45 (t, J=14.36 Гц, 1H), 1.93-1.88 (m, 4H).
Пример 19
(2,3-Дигидроиндол-1-ил)-[4-(3-фторбензоил)-пиперидин-1-ил]-метанон ("А19")
Соединение получали аналогично примеру 1.
Выход: 60 мг (14%); ЖХМС (метод А): 353.2 (М+Н), Rt. 5.01 мин, чистота 96.8% (254 нм); ВЭЖХ (метод A): Rt. 5.19 мин, 96.9% (254 нм);
1
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl): δ 7.75 (d, J=7.76 Гц, 1H), 7.67-7.63 (m, 1H), 7.51-7.46 (m, 1H), 7.32-7.28 (m, 1H), 7.20-7.14 (m, 2H), 7.06 (d, J=7.92 Гц, 1H), 6.91 (t, J=14.72 Гц, 1H), 3.97-3.90 (m, 4H), 3.50-3.41 (m, 1H), 3.09-3.02 (m, 4H), 1.96-1.87 (m, 4H).
Пример 20
(2,3-Дигидроиндол-1-ил)-[4-(4-фторбензоил)-пиперидин-1-ил]-метанон ("А20")
Соединение получали аналогично примеру 1.
Выход: 8 мг (16%); ЖХМС (метод А): 353.2 (М+Н), Rt. 4.93 мин, чистота 98.9% (254 нм); ВЭЖХ (метод A): Rt. 5.19 мин, 96.9% (254 нм);
1
3
H ЯМР (400 МГц, CDCl): δ 8.03-7.99 (m, 2Н), 7.20-7.15 (m, 4Н), 7.06 (d, J=7.88 Гц, 2Н), 6.93-6.89 (m, 1Н), 3.97-3.90 (m, 4Н), 3.47-3.43 (m, 1Н), 3.08-3.02 (m, 4Н), 1.93-1.88 (m, 4Н).
Пример 21
[4-(4-Хлорбензоил)-пиперидин-1-ил]-(2,3-дигидроиндол-1-ил)-метанон ("А21")
Соединение получали аналогично примеру 1.
Выход: 108 мг (26%); ЖХМС (метод А): 369.0 (М+Н), Rt. 5.18 мин, чистота 98% (254 нм); ВЭЖХ (метод A): Rt. 5.19 мин, 96.9% (254 нм);
1
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl): δ 7.92-7.90 (m, 2Н), 7.49-7.46 (m, 2Н), 7.27-7.14 (m, 2Н), 7.06 (d, J=7.84 Гц, 1Н), 6.93-6.89 (m, 1Н), 3.97-3.89 (m, 4Н), 3.50-3.42 (m, 1Н), 3.08-3.01 (m, 4Н), 1.93-1.61 (m, 4Н).
Пример 22
(4-Бензоилпиперидин-1-ил)-(3,4-дигидро-2Н-хинолин-1-ил)-метанон ("А22")
Соединение получали аналогично примеру 1.
Выход: 8 мг (16%); ЖХМС (метод А): 349.2 (М+Н), Rt. 4.85 мин, чистота 97.3% (254 нм); ВЭЖХ (метод A): Rt. 4.84 мин, 97.6% (254 нм);
1
6
Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d): δ 7.98 (t, J=8.52 Гц, 2Н), 7.64 (t, J=13.64 Гц, 1Н), 7.53 (t, J=15.20 Гц, 2Н), 7.08-7.04 (m, 2Н), 6.92 (d, J=7.92 Гц, 1Н), 6.87-6.83 (m, 1H), 3.77 (d, J=13.16 Гц, 2Н), 3.64-3.54 (m, 1H), 3.47-3.44 (m, 2Н), 2.99-2.92 (m, 2Н), 2.73-2.66 (m, 2Н), 1.88-1.83 (m, 2Н), 1.76-1.73 (m, 2Н), 1.54-1.44 (m, 2Н).
Пример 23
Синтез (4-метоксифенил)-метиламида 4-(4-метокси-3-метилбензоил)-пиперидин-1-карбоновой кислоты ("А23")
23.1 Сложный моно-трет-бутиловый эфир пиперидин-1,4-дикарбоновой кислоты
К раствору пиперидин-4-карбоновой кислоты (20.00 г, 150.20 ммоль) в воде (200 мл) добавляли гидроксид натрия (18.21 г, 450.61 ммоль) и, далее, по каплям ВОС ангидрид (38.34 мл, 165.23 ммоль) при 0°С. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч и подкисляли 10%-ной лимонной кислотой. Осажденные твердые вещества собирали с помощью фильтрования, промывали водой (100 мл) и сушили с отсасыванием; выход: 25.0 г (72%), бесцветное твердое вещество (сырой продукт);
1
6
Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d): δ 3.82 (d, J=13.0 Гц, 2Н), 2.90-2.75 (m, 2Н), 2.42-2.35 (m, 1Н), 1.77 (dd, J=3.1, 13.3 Гц, 2Н), 1.41 (s, 9Н), 1.40-1.35 (m, 2Н);
ЖХ/МС (метод А): 130.2 (М+Н; масса после отщепления ВОС), Rt. 3.29 мин, чистота 99%.
23.2 Сложный трет-бутиловый эфир 4-(метоксиметилкарбамоил)-пиперидин-1-карбоновой кислоты
2
4
К раствору сложного моно-трет-бутилового эфира пиперидин-1,4-дикарбоновой кислоты (25.00 г, 107.72 ммоль) в ДМФА (250 мл) добавляли N,N-диизопропилэтиламин (57.01 мл, 323.16 ммоль), гидрат 1-гидроксибензотриазола (1.67 г, 10.77 ммоль), гидрохлорид (3-диметиламинопропил)-этилкарбодиимида (25.03 г, 129.27 ммоль) с последующим добавлением небольшими порциями гидрохлорида O,N-диметилгидроксиламина (11.68 г, 118.49 ммоль) при 0°С в атмосфере азота. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 18 ч. После завершения реакции растворитель упаривали при пониженном давлении. Остаток растворяли в этилацетате (300 мл), промывали 10%-ным бикарбонатом натрия (2×200 мл), 0.5 н. HCl (2×100 мл), водой (200 мл) и солевым раствором (200 мл). Органический слой сушили над безводным NaSO и упаривали в вакууме; выход: 24.0 г (81%), бесцветная жидкость (сырой продукт);
1
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl): δ 4.15-4.09 (m, 2Н), 3.70 (s, 3Н), 3.17 (s, 3Н), 2.79-2.72 (m, 3Н), 1.72-1.60 (m, 4Н), 1.44 (s, 9Н);
ЖХ/МС (метод А): 173.2 (М+Н; масса после отщепления ВОС), Rt. 3.54 мин, чистота 99%.
23.3 Сложный трет-бутиловый эфир 4-(4-метокси-3-метилбензоил)-пиперидин-1-карбоновой кислоты
2
4
Йод (0.93 мг) и 5 мл 4-бром-2-метиланизола (5.96 г, 29.06 ммоль), растворенные в ТГФ (40 мл), добавляли к суспензии магниевых стружек (0.72 г, 29.06 ммоль) в сухом ТГФ (40 мл) в атмосфере азота. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 мин и затем нагревали до 50°С. Смесь охлаждали до комнатной температуры и по каплям добавляли оставшийся раствор 4-бром-2-метиланизола в ТГФ в течение периода 20 мин. Смесь перемешивали в течение дополнительных 2 ч при комнатной температуре до завершения растворения магния. Этот раствор реактива Гриньяра добавляли по каплям к раствору сложного трет-бутилового эфира 4-(метоксиметилкарбамоил)-пиперидин-1-карбоновой кислоты (4.00 г, 14.53 ммоль) в ТГФ (40.00 мл) при -78°С. Реакционную смесь оставляли перемешиваться при комнатной температуре в течение 15 ч. Затем ее охлаждали до 0°, гасили насыщенным раствором хлорида аммония (100 мл) и экстрагировали этилацетатом (2×100 мл). Органический слой промывали 10%-ным бикарбонатом натрия (100 мл), водой (100 мл) и солевым раствором (100 мл), сушили над безводным NaSO и упаривали в вакууме. Сырое вещество очищали с помощью флэш-хроматографии, используя силикагель (230-400) и смеси петролейный эфир/этилацетат (0-30%) при градиентном элюировании;
выход: 1.50 г (30%);
1
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl): δ 7.82 (dd, J=2.2, 8.6 Гц, 1H), 7.76 (d, J=1.6 Гц, 1Н), 6.86 (d, J=8.6 Гц, 1Н), 4.17 (d, J=13.0 Гц, 2Н), 3.90 (s, 3Н), 3.41-3.34 (m, 1Н), 2.93-2.86 (m, 2Н), 2.26 (s, 3Н), 1.83-1.80 (m, 2Н), 1.76-1.65 (m, 2Н), 1.45 (s, 9Н);
ЖХ/МС (метод А): 234.3 (М+Н; масса после отщепления ВОС), Rt. 5.31 мин, чистота 99%.
23.4 Гидрохлорид (4-метокси-3-метилфенил)-пиперидин-4-илметанона
Раствор сложного трет-бутилового эфира 4-(4-метокси-3-метилбензоил)-пиперидин-1-карбоновой кислоты (1.50 г, 4.36 ммоль) в растворе HCl/диоксан (3М, 14.53 мл, 43.60 ммоль) перемешивали при комнатной температуре в течение 6 ч в атмосфере азота. Растворитель упаривали досуха при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения; выход: 1.10 г (92% сырой продукт);
1
6
Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d): δ 9.25 (brs, 1Н), 8.92 (brs, 1H), 7.90 (dd, J=2.2, 8.6 Гц, 1Н), 7.81 (d, J=1.6 Гц, 1H), 7.05 (d, J=8.6 Гц, 1Н), 3.87 (s, 3Н), 3.75-3.67 (m, 1Н), 3.29-3.25 (m, 2Н), 3.06-2.97 (m, 2Н), 2.19 (s, 3Н), 1.89-1.86 (m, 2Н), 1.81-1.78 (m, 2Н);
ЖХ/МС (метод А): 234.3 (М+Н), Rt. 2.65 мин, чистота 98%.
23.5 (4-Метоксифенил)-метиламид 4-(4-метокси-3-метилбензоил)-пиперидин-1-карбоновой кислоты ("А23")
2
4
К раствору 4-метокси-N-метиланилина (0.28 г, 2.01 ммоль) в ДХМ (10 мл) добавляли этилдиизопропиламин (1.61 мл, 9.15 ммоль) и, далее, трифосген (0.66 г, 2.20 ммоль) при 0°С в атмосфере азота. После перемешивания в течение 1 ч при 0°С добавляли гидрохлорид (4-метокси-3-метилфенил)-пиперидин-4-илметанона (0.50 г, 1.83 ммоль) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. Реакционную смесь разбавляли ДХМ (100 мл), промывали водой (100 мл), 10% бикарбонатом натрия (2×100 мл), солевым раствором (100 мл), сушили над безводным NaSO и упаривали в вакууме. Сырое вещество очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии, используя силикагель (230-400) и смеси петролейный эфир/этилацетат (0-40%) в качестве элюента; выход: 60 мг (8%);
1
6
Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d): δ 7.82 (dd, J=2.1, 8.6 Гц, 1H), 7.73 (d, J=1.5 Гц, 1H), 7.06 (dd, J=2.2, 6.8 Гц, 2Н), 7.00 (d, J=8.6 Гц, 1Н), 6.91 (dd, J=2.1, 6.8 Гц, 2Н), 3.84 (s, 3Н), 3.74-3.69 (m, 5Н), 3.46-3.40 (m, 1Н), 3.01 (s, 3Н), 2.73-2.67 (m, 2Н), 2.16 (s, 3Н), 1.55-1.52 (m, 2Н), 1.29-1.19 (m, 2Н);
ЖХ/МС (метод А): 397 (М+Н), Rt. 4.76 мин, чистота 100%.
Пример 24
Этил-(4-метоксифенил)-амид 4-(4-метокси-3-метилбензоил)-пиперидин-1-карбоновой кислоты ("А24")
Соединение получали аналогично примеру 22 из этил-(4-метоксифенил)-амина (0.31 г, 2.01 ммоль), этилдиизопропиламина (1.61 мл, 9.15 ммоль), трифосгена (0.66 г, 2.20 ммоль) и гидрохлорида (4-метокси-3-метилфенил)-пиперидин-4-илметанона (0.50 г, 1.83 ммоль) в ДХМ (10 мл);
Очистка: препаративная ВЭЖХ; выход: 40 мг (5%);
1
6
H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d): δ 7.81 (dd, J=2.2, 8.6 Гц, 1Н), 7.73 (d, J=1.5 Гц, 1Н), 7.05-6.99 (m, 3Н), 6.94-6.90 (m, 2Н), 3.84 (s, 3Н), 3.73 (s, 3Н), 3.69-3.66 (m, 2Н), 3.51-3.41 (m, 3Н), 2.67 (t, J=12.5 Гц, 2Н), 2.16 (s, 3Н), 1.52-1.50 (m, 2Н), 1.26-1.16 (m, 2Н), 0.97 (t, J=6.96 Гц, 3Н);
ЖХ/МС (метод А): 411 (М+Н), Rt. 5.06 мин, чистота 100%.
Пример 25
25.1 Гидрохлорид пиперидин-4-ил-м-толилметанона
Соединение получали аналогично примеру 23.1.-23.4.
Выход: 2.80 г (95% сырой продукт);
1
6
Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d): δ 9.27 (brs, 1Н), 8.98 (brs, 1Н), 7.80 (d, J=8.4 Гц, 2Н), 7.48-7.40 (m, 2Н), 3.79-3.71 (m, 1Н), 3.27 (d, J=12.6 Гц, 2Н), 3.06-2.97 (m, 2Н), 2.38 (s, 3Н), 1.92-1.89 (m, 2Н), 1.81-1.74 (m, 2Н);
ЖХ/МС (метод А): 204.3 (М+Н), Rt. 2.48 мин, чистота 100%.
25.2 (4-Метоксифенил)-метиламид 4-(3-метилбензоил)-пиперидин-1-карбоновой кислоты ("А25")
Соединение получали как описано для примера 22 из 4-метокси-N-метиланилина (0.32 г, 2.27 ммоль), этилдиизопропиламина (1.82 мл, 10.33 ммоль), трифосгена (0.75 г, 2.48 ммоль) и гидрохлорида пиперидин-4-ил-м-толилметанона (0.50 г, 2.07 ммоль) в ДХМ (10 мл).
Очистка: колоночная флэш-хроматография, используя силикагель (230-400) и смеси петролейный эфир/этилацетат (0-30%) в качестве элюента; выход: 100 мг (13%);
1
6
Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d): δ 7.73-7.71 (m, 2Н), 7.43-7.35 (m, 2Н), 7.06 (dd, J=2.2, 6.8 Гц, 2Н), 6.91 (dd, J=2.2, 6.8 Гц, 2Н), 3.73-3.69 (m, 5Н), 3.50-3.44 (m, 1Н), 3.01 (s, 3Н), 2.71 (t, J=12.2 Гц, 2Н), 2.35 (s, 3Н), 1.57 (d, J=11.1 Гц, 2Н), 1.29-1.19 (m, 2Н);
ЖХ/МС (метод А): 367 (М+Н), Rt. 4.76 мин, чистота 97%.
Пример 26
Этил-(4-метоксифенил)-амид 4-(3-метилбензоил)-пиперидин-1-карбоновой кислоты ("А26")
Соединение получали аналогично примеру 22 из этил-(4-метоксифенил)-амина (0.35 г, 2.27 ммоль), этилдиизопропиламина (1.82 мл, 10.33 ммоль), трифосгена (0.75 г, 2.48 ммоль) и гидрохлорида пиперидин-4-ил-м-толилметанона (0.50 г, 2.07 ммоль) в ДХМ (10 мл).
Очистка: колоночная флэш-хроматография, используя силикагель (230-400) и смеси петролейный эфир/этилацетат (0-30%) в качестве элюента; выход: 30 мг (4%);
1
6
Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d): δ 7.72-7.70 (m, 2Н), 7.43-7.35 (m, 2Н), 7.04 (dd, J=2.2, 6.7 Гц, 2Н), 6.92 (dd, J=2.2, 6.7 Гц, 2Н), 3.73 (s, 3Н), 3.69-3.66 (m, 2Н), 3.51-3.42 (m, 3Н), 2.67 (t, J=12.4 Гц, 2H), 2.35 (s, 3Н), 1.56-1.53 (m, 2Н), 1.26-1.17 (m, 2Н), 0.97 (t, J=6.92 Гц, 3Н); ЖХ/МС (метод А): 381.2 (М+Н), %; Rt. 5.05 мин, чистота 97%.
Пример 27
(4-Метоксифенил)-метиламид 4-(3-метоксибензоил)-пиперидин-1-карбоновой кислоты ("А27")
Соединение получали аналогично примеру 22 из 4-метокси-N-метиланилина (0.30 г, 2.15 ммоль), этилдиизопропиламина (1.72 мл, 9.76 ммоль), трифосгена (0.71 г, 2.34 ммоль) и гидрохлорида (3-метоксифенил)-пиперидин-4-илметанона (0.50 г, 1.95 ммоль) в ДХМ (10 мл).
Очистка: колоночная флэш-хроматография, используя силикагель (230-400) и смеси петролейный эфир/этилацетат (0-40%) в качестве элюента; выход: 160 мг (21%);
1
6
Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d): δ 7.53 (d, J=7.7 Гц, 1H), 7.43-7.38 (m, 2Н), 7.18 (dd, J=2.6, 8.1 Гц, 1Н), 7.06 (dd, J=2.1, 6.7 Гц, 2Н), 6.91 (dd, J=2.2, 6.8 Гц, 2Н), 3.79 (s, 3Н), 3.73-3.68 (m, 5Н), 3.52-3.45 (m, 1Н), 3.01 (s, 3Н), 2.72 (t, J=12.2 Гц, 2Н), 1.58-1.56 (m, 2Н), 1.29-1.19 (m, 2Н). ЖХ/МС (метод А): 383.2 (М+Н), Rt. 4.52 мин, 100%.
Пример 28
Этил-(4-метоксифенил)-амид 4-(3-метоксибензоил)-пиперидин-1-карбоновой кислоты ("А28")
Соединение получали аналогично примеру 22 из этил-(4-метоксифенил)-амина (0.33 г, 2.15 ммоль), этилдиизопропиламина (1.72 мл, 9.76 ммоль), трифосгена (0.71 г, 2.34 ммоль) и гидрохлорида (3-метоксифенил)-пиперидин-4-илметанона (0.50 г, 1.95 ммоль) в ДХМ (10 мл).
Очистка: препаративная ВЭЖХ; выход: 17 мг (22%);
1
6
Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d): δ 7.52 (d, J=7.7 Гц, 1H), 7.43-7.37 (m, 2Н), 7.18 (dd, J=2.5, 8.1 Гц, 1Н), 7.04 (dd, J=2.1, 6.8 Гц, 2Н), 6.92 (dd, J=2.1, 6.9 Гц, 2Н), 3.78 (s, 3Н), 3.73 (s, 3Н), 3.67 (d, J=13.1 Гц, 2Н), 3.51-3.43 (m, 3Н), 2.71-2.65 (m, 2Н), 1.56-1.53 (m, 2Н), 1.26-1.16 (m, 2Н), 0.99-0.97 (m, 3Н);
ЖХ/МС (метод А): 397 (М+Н), Rt. 4.81 мин, чистота 99%.
Пример 29
(4-Метоксифенил)-метиламид 4-(3-фтор-4-метоксибензоил)-пиперидин-1-карбоновой кислоты ("А29")
Соединение получали аналогично примеру 22 из 4-метокси-N-метиланилина (0.28 г, 1.97 ммоль), этилдиизопропиламина (1.57 мл, 8.93 ммоль), трифосгена (0.65 г, 2.14 ммоль) и гидрохлорида (3-фтор-4-метоксифенил)-пиперидин-4-илметанона (0.50 г, 1.79 ммоль) в ДХМ (10 мл).
Очистка: колоночная флэш-хроматография, используя силикагель (230-400) и смеси петролейный эфир/этилацетат (0-40%) в качестве элюента; выход: 250 мг (34%);
1
6
Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d): δ 7.82-7.73 (m, 2Н), 7.25 (t, J=8.6 Гц, 1H), 7.06 (dd, J=2.2, 6.8 Гц, 2Н), 6.91 (dd, 7=2.2, 6.8 Гц, 2Н), 3.90 (s, 3Н), 3.73-3.68 (m, 5Н), 3.49-3.40 (m, 1Н), 3.01 (s, 3Н), 2.71 (t, J=12.2 Гц, 2Н), 1.55 (d, J=11.1 Гц, 2Н), 1.25-1.22 (m, 2Н);
ЖХ/МС (метод А): 401.2 (М+Н), Rt. 4.55 мин, чистота 97%.
Пример 30
Синтез (4-метоксифенил)-метиламид 4-{4-[1-(2-метоксиэтил)-1Н-пиразол-4-ил]-бензоил}-пиперидин-1-карбоновой кислоты ("А30")
30.1 (4-Бромфенил)-пиперидин-4-илметанон
2
4
2
4
Смесь 1-ацетилпиперидин-4-карбоновой кислоты (10.00 г, 57.24 ммоль) и тионилхлорида (20.85 г, 171.73 ммоль) перемешивали при комнатной температуре в течение 6 ч в атмосфере азота. Тионилхлорид удаляли при пониженном давлении и остаток перегоняли вместе с ДХМ (2×200 мл). Этот хлорангидрид кислоты затем добавляли по каплям к суспензии бромбензола (27.24 г, 171.73 ммоль) и безводного хлорида алюминия (9.25 г, 68.69 ммоль) в DCE (200 мл) при 0°С в атмосфере азота. Полученную в результате смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч, гасили льдом и экстрагировали ДХМ (2×200 мл). Органический слой промывали водой (2×200 мл), солевым раствором (200 мл), сушили над безводным NaSO и упаривали в вакууме. Полученный в результате черный остаток вносили в 6М HCl (200 мл), кипятили с обратным холодильником в течение 12 ч и концентрировали до половины его первоначального объема. Водную часть подщелачивали 10%-ным бикарбонатом натрия и экстрагировали ДХМ (2×200 мл), промывали водой (2×200 мл), солевым раствором (200 мл), сушили над безводным NaSO и упаривали в вакууме. Сырое вещество очищали с помощью колоночной хроматографии, используя силикагель (60-120) и смеси ДХМ/метанол при градиентном элюировании; выход: 3.50 г (21%);
1
6
Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d): δ 7.95-7.92 (m, 2Н), 7.78-7.74 (m, 2Н), 3.71-3.68 (m, 1Н), 3.25-3.22 (m, 2Н), 2.98-2.92 (m, 2Н), 1.90-1.87 (m, 2Н), 1.76-1.70 (m, 2Н);
ЖХ/МС (метод А): 268/270 (М+Н), Rt. 2.73 мин, чистота 93%.
30.2 (4-Метоксифенил)-метиламид 4-(4-бромбензоил)-пиперидин-1-карбоновой кислоты
Соединение получали аналогично примеру 22 из 4-метокси-N-метиланилина (0.81 г, 5.78 ммоль), этилдиизопропиламина (4.62 мл, 26.28 ммоль), трифосгена (1.91 г, 6.31 ммоль) и (4-бромфенил)-пиперидин-4-илметанона (1.50 г, 5.26 ммоль) в ДХМ (30 мл).
Очистка: колоночная флэш-хроматография, используя силикагель (230-400) и смеси петролейный эфир/этилацетат (0-30%) в качестве элюента; выход: 1.10 г (46%);
1
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl): δ 7.75 (dd, J=1.9, 6.7 Гц, 2Н), 7.59 (dd, J=2.0, 6.7 Гц, 2Н), 7.06 (dd, J=2.2, 6.7 Гц, 2Н), 6.87 (dd, J=2.3, 6.7 Гц, 2Н), 3.89-3.85 (m, 2Н), 3.80 (s, 3Н), 3.23-3.21 (m, 1Н), 3.18 (s, 3Н), 2.78-2.71 (m, 2Н), 1.68-1.64 (m, 2Н), 1.51-1.47 (m, 2Н), 1.28-1.24 (m, 2Н);
ЖХ/МС (метод А): 431/433 (М+Н), Rt. 4.99 мин, чистота 94%.
30.3 (4-Метоксифенил)-метиламид 4-{4-[1-(2-метоксиэтил)-1Н-пиразол-4-ил]-бензоил}-пиперидин-1-карбоновой кислоты ("А30")
2
4
Раствор (4-метоксифенил)-метиламида 4-(4-бромбензоил)-пиперидин-1-карбоновой кислоты (100.0 мг, 0.22 ммоль), 1-(2-метоксиэтил)-4-(4,4,5,5-тетраметил-[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)-1Н-пиразола (93.5 мг, 0.24 ммоль) и карбоната цезия (216 мг, 0.66 ммоль) в смеси диоксан (2 мл)/вода (0.20 мл) дегазировали в течение 5 мин. Затем добавляли комплекс 1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]дихлорпалладия(II) с дихлорметаном (18.43 мг, 0.02 ммоль) и кипятили с обратным холодильником в течение 16 ч в атмосфере азота. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и фильтровали через целит. Фильтрат упаривали в вакууме. Остаток растворяли в этилацетате (50 мл), промывали водой (50 мл) и солевым раствором (50 мл), сушили над безводным NaSO и упаривали в вакууме. Сырое вещество очищали с помощью препаративной ВЭЖХ; выход: 69 мг (62%);
1
6
Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d): δ 8.29 (s, 1Н), 8.00 (s, 1H), 7.91 (d, J=8.4 Гц, 2Н), 7.68 (d, J=8.4 Гц, 2Н), 7.07 (dd, J=2.0, 6.9 Гц, 2Н), 6.92 (dd, J=2.0, 6.9 Гц, 2Н), 4.27 (t, J=5.2 Гц, 2Н), 3.73-3.69 (m, 7Н), 3.55-3.45 (m, 1Н), 3.22 (s, 3Н), 3.01 (s, 3Н), 2.72 (t, J=12.08 Гц, 2Н), 1.59-1.56 (m, 2Н), 1.31-1.21 (m, 2Н);
ЖХ/МС (метод А): 477.2 (М+Н), Rt. 4.2 мин, чистота 93%.
Пример 31
31.1 (4-Бромфенил)-метиламид 4-(4-метоксибензоил)-пиперидин-1-карбоновой кислоты
Соединение получали аналогично примеру 22 из (4-бромфенил)-метиланилина (1.96 г, 10.22 ммоль), этилдиизопропиламина (6.06 г, 46.43 ммоль), трифосгена (3.37 г, 11.14 ммоль) и гидрохлорида (4-метоксифенил)-пиперидин-4-илметанона (2.50 г, 9.29 ммоль) в ДХМ (50 мл).
Очистка: колоночная флэш-хроматография, используя силикагель (230-400) и смеси петролейный эфир/этилацетат (0-40%) в качестве элюента; выход: 1.70 г (41%);
1
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl): δ 7.89 (dd, J=2.0, 9.3 Гц, 2Н), 7.45 (dd, J=2.0, 6.8 Гц, 2Н), 6.99 (dd, J=2.1, 6.8 Гц, 2Н), 6.93 (d, J=8.9 Гц, 2Н), 3.89 (s, 3Н), 3.87-3.84 (m, 2Н), 3.32-3.25 (m, 1Н), 3.21 (s, 3Н), 2.83-2.76 (m, 2H), 1.74-1.69 (m, 2H), 1.64-1.53 (m, 3Н);
ЖХ/МС (метод А): 430/432 (М+Н), Rt. 4.98 мин, чистота 98%.
31.2 {4-[1-(2-Метоксиэтил)-1Н-пиразол-4-ил]-фенил}-метиламид 4-(4-метоксибензоил)-пиперидин-1-карбоновой кислоты ("А31")
Соединение получали аналогично примеру 29 из (4-бромфенил)-метиламида 4-(4-метоксибензоил)-пиперидин-1-карбоновой кислоты (100.0 мг, 0.23 ммоль), 1-(2-метоксиэтил)-4-(4,4,5,5-тетраметил-[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)-1Н-пиразола (96.4 мг; 0.25 ммоль), карбоната цезия (222.8 мг, 0.68 ммоль) и комплекса 1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]дихлорпалладия(II) с дихлорметаном (1.90 мг) в смеси диоксан/вода.
Очистка: препаративная ВЭЖХ; выход: 14 мг (13%);
1
6
Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d): δ 8.12 (s, 1Н), 7.92 (d, J=8.8 Гц, 2Н), 7.85 (s, 1Н), 7.54 (d, J=8.5 Гц, 2Н), 7.10 (d, J=8.5 Гц, 2Н), 7.00 (d, J=8.9 Гц, 2Н), 4.25 (t, J=5.2 Гц, 2Н), 3.81 (s, 3Н), 3.75-3.68 (m, 4Н), 3.49-3.42 (m, 1H), 3.23 (s, 3Н), 3.08 (s, 3Н), 2.76 (t, J=12.12 Гц, 2Н), 1.59-1.56 (m, 2Н), 1.36-1.27 (m, 2Н);
ЖХ/МС (метод А): 477.2 (М+Н), Rt. 4.16 мин, чистота 95%.
Пример 32
32.1 (4-Бромфенил)-метиламид 4-(4-бромбензоил)-пиперидин-1-карбоновой кислоты
Соединение получали аналогично примеру 22 из (4-бромфенил)-метиланилина (1.11 г, 5.78 ммоль), этилдиизопропиламина (4.62 мл, 26.28 ммоль), трифосгена (1.91 г, 6.31 ммоль) и (4-бромфенил)-пиперидин-4-илметанона (1.50 г, 5.26 ммоль) в ДХМ (30 мл).
Очистка: колоночная флэш-хроматография, используя силикагель (230-400) и смеси петролейный эфир/этилацетат (0-30%) в качестве элюента; выход: 1.20 г (45%);
1
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl): δ 7.76 (dd, J=1.9, 6.7 Гц, 2Н), 7.60 (dd, J=2.0, 6.7 Гц, 2Н), 7.45 (dd, J=2.1, 6.7 Гц, 2Н), 6.99 (dd, J=2.2, 6.7 Гц, 2Н), 3.87-3.82 (m, 2Н), 3.27-3.25 (m, 1Н), 3.21 (s, 3Н), 2.82-2.75 (m, 2H), 1.73-1.69 (m, 2H), 1.59-1.54 (m, 2H);
ЖХ/МС (метод А): 480/482 (М+Н), Rt. 5.52 мин, чистота 95%.
32.2 {4-[1-(2-Метоксиэтил)-1Н-пиразол-4-ил]-фенил}-метиламид 4-{4-[1-(2-метоксиэтил)-1Н-пиразол-4-ил]-бензоил}-пиперидин-1-карбоновой кислоты ("А32")
Соединение получали аналогично примеру 29 из (4-бромфенил)-метиламида 4-(4-бромбензоил)-пиперидин-1-карбоновой кислоты (100.0 мг, 0.20 ммоль), 1-(2-метоксиэтил)-4-(4,4,5,5-тетраметил-[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)-1Н-пиразола (169.6 мг, 0.44 ммоль), карбоната цезия (391.9 мг, 1.19 ммоль) и комплекса 1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]дихлорпалладия(II) с дихлорметаном (3.3 мг) в смеси диоксан/вода.
Очистка: препаративная ВЭЖХ; выход: 21 мг (17%);
1
6
Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d): δ 8.29 (s, 1Н), 8.12 (s, 1Н), 7.99 (s, 1Н), 7.92 (dd, J=8.4 Гц, 2Н), 7.86 (s, 1Н), 7.68 (dd, J=8.3 Гц, 2Н), 7.55 (dd, J=8.5 Гц, 2Н), 7.10 (dd, J=8.5 Гц, 2Н), 4.26 (q, J=5.4 Гц, 4Н), 3.76-3.69 (m, 6Н), 3.54-3.49 (m, 1Н), 3.23 (s, 3Н), 3.22 (s, 3Н), 3.09 (s, 3Н), 2.78 (t, J=12.08 Гц, 2Н), 1.63-1.60 (m, 2Н), 1.38-1.28 (m, 2Н);
ЖХ/МС (метод А): 571.3 (М+Н), Rt. 3.96 мин, чистота 93%.
Пример 33
(4-Метоксифенил)-метиламид 4-[4-(1-этил-1Н-пиразол-4-ил)-бензоил]-пиперидин-1-карбоновой кислоты ("А33")
Соединение получали аналогично примеру 29 из (4-метоксифенил)-метиламида 4-(4-бромбензоил)-пиперидин-1-карбоновой кислоты (150.0 мг; 0.33 ммоль), 1-этил-4-(4,4,5,5-тетраметил-[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)-1Н-пиразола (139.3 мг, 0.39 ммоль), карбоната цезия (324.2 мг, 0.99 ммоль) и комплекса 1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]дихлорпалладия(II) с дихлорметаном (27.6 мг, 0.03 ммоль) в смеси диоксан/вода.
Очистка: колоночная хроматография, используя силикагель (230-400) и смеси ДХМ/метанол при градиентном элюировании; выход: 19 мг (12%),
1
6
Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d): δ 8.33 (s, 1Н), 7.98 (s, 1Н), 7.91 (d, J=8.2 Гц, 2Н), 7.68 (d, J=8.2 Гц, 2Н), 7.07 (d, J=8.7 Гц, 2Н), 6.92 (d, J=8.7 Гц, 2Н), 4.15 (t, J=7.2 Гц, 2H), 3.73-3.70 (m, 5H), 3.51-3.46 (m, 1H), 3.01 (s, 3H), 2.75-2.69 (m, 2H), 1.59-1.56 (m, 2H), 1.39 (t, J=7.36 Гц, 3Н), 1.31-1.24 (m, 2H);
ЖХ/МС (метод A): 447.3 (M+H), Rt. 4.38 мин, чистота 96%.
Пример 34
[4-(1-Этил-1Н-пиразол-4-ил)-фенил]-метиламид 4-(4-метоксибензоил)-пиперидин-1-карбоновой кислоты ("А34")
Соединение получали аналогично примеру 29 из (4-бромфенил)-метиламида 4-(4-метоксибензоил)-пиперидин-1-карбоновой кислоты (150.0 мг, 0.34 ммоль), 1-этил-4-(4,4,5,5-тетраметил-[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)-1Н-пиразола (143.6 мг, 0.41 ммоль), карбоната цезия (334.1 мг, 1.02 ммоль) и комплекса 1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]дихлорпалладия(II) с дихлорметаном (28.5 мг, 0.03 ммоль) в смеси диоксан/вода.
Очистка: колоночная хроматография, используя силикагель (230-400) и смеси ДХМ/метанол при градиентном элюировании; выход: 52 мг (32%);
1
6
Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d): δ 8.15 (s, 1Н), 7.92 (d, J=8.7 Гц, 2Н), 7.83 (s, 1Н), 7.54 (d, J=8.3 Гц, 2Н), 7.10 (d, J=8.3 Гц, 2Н), 7.00 (d, J=8.7 Гц, 2Н), 4.13 (q, J=7.3 Гц, 2Н), 3.81 (s, 3Н), 3.75-3.72 (m, 2Н), 3.49-3.46 (m, 1H), 3.08 (s, 3Н), 2.79-2.73 (m, 2Н), 1.59-1.56 (m, 2Н), 1.39 (t, J=7.28 Гц, 3Н), 1.36-1.32 (m, 2Н);
ЖХ/МС (метод А): 447.3 (М+Н), Rt. 4.31 мин, чистота 96%.
Пример 35
(4-Метоксифенил)-метиламид 4-{4-[1-(2-пирролидин-1-илэтил)-1Н-пиразол-4-ил]-бензоил}-пиперидин-1-карбоновой кислоты ("А35")
Соединение получали аналогично примеру 29 из (4-метоксифенил)-метиламида 4-(4-бромбензоил)-пиперидин-1-карбоновой кислоты (150.0 мг, 0.33 ммоль), 1-(2-пирролидин-1-илэтил)-4-(4,4,5,5-тетраметил-[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)-1Н-пиразола (118.0 мг, 0.39 ммоль), карбоната цезия (324.2 мг, 0.99 ммоль) и комплекса 1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]дихлорпалладия(II) с дихлорметаном (27.6 мг, 0.03 ммоль) в смеси диоксан/вода.
Очистка: препаративная ВЭЖХ; выход: 16 мг (9%);
1
6
Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d): δ 8.33 (s, 1Н), 7.98 (s, 1Н), 7.91 (d, J=8.3 Гц, 2Н), 7.68 (d, J=8.2 Гц, 2Н), 7.07 (d, J=8.8 Гц, 2Н), 6.92 (d, J=8.7 Гц, 2Н), 4.22 (t, J=6.4 Гц, 2Н), 3.73-3.70 (m, 5Н), 3.55-3.45 (m, 1H), 3.01 (s, 3Н), 2.83 (t, J=6.60 Гц, 2Н), 2.76-2.66 (m, 2Н), 2.49-2.45 (m, 4Н), 1.65-1.63 (m, 4Н), 1.59-1.56 (m, 2Н), 1.30-1.22 (m, 2Н);
ЖХ/МС (метод А): 516 (М+Н), Rt. 3.48 мин, чистота 97%.
Пример 36
Метил-{4-[1-(2-пирролидин-1-илэтил)-1Н-пиразол-4-ил]-фенил}-амид 4-(4-метоксибензоил)-пиперидин-1-карбоновой кислоты ("A36")
Соединение получали аналогично примеру 29 из (4-бромфенил)-метиламида 4-(4-метоксибензоил)-пиперидин-1-карбоновой кислоты (150.0 мг, 0.34 ммоль), 1-(2-пирролидин-1-илэтил)-4-(4,4,5,5-тетраметил-[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)-1Н-пиразола (121.6 мг, 0.41 ммоль), карбоната цезия (334.1 мг, 1.02 ммоль) и комплекса 1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]дихлорпалладия(II) с дихлорметаном (28.5 мг, 0.03 ммоль) в смеси диоксан/вода.
Очистка: колоночная хроматография, используя силикагель (230-400) и смеси ДХМ/метанол при градиентном элюировании; выход: 30 мг (16%);
1
6
H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d): δ 8.16 (s, 1H), 7.92 (d, J=8.8 Гц, 2Н), 7.84 (s, 1Н), 7.54 (d, J=8.4 Гц, 2Н), 7.10 (d, J=8.5 Гц, 2Н), 7.00 (d, J=8.8 Гц, 2Н), 4.20 (t, J=6.5 Гц, 2Н), 3.81 (s, 3Н), 3.75-3.72 (m, 2Н), 3.50-3.43 (m, 1Н), 3.08 (s, 3Н), 2.84 (t, J=6.44 Гц, 2H), 2.79-2.73 (m, 2H), 2.49-2.45 (m, 4H), 1.65-1.57 (m, 6H), 1.36-1.29 (m, 2H);
ЖХ/МС (метод А): 516.3 (М+Н), Rt. 3.46 мин, чистота 95%.
Пример 37
Метил-{4-[1-(2-пирролидин-1-илэтил)-1Н-пиразол-4-ил]-фенил}-амид 4-{4-[1-(2-пирролидин-1-илэтил)-1Н-пиразол-4-ил]-бензоил}-пиперидин-1-карбоновой кислоты ("А37")
Соединение получали аналогично примеру 29 из (4-бромфенил)-метиламида 4-(4-бромбензоил)-пиперидин-1-карбоновой кислоты (100.0 мг, 0.20 ммоль), 1-(2-пирролидин-1-илэтил)-4-(4,4,5,5-тетраметил-[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)-1Н-пиразола (130.8 мг, 0.44 ммоль), карбоната цезия (391.9 мг, 1.19 ммоль) и комплекса 1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]дихлорпалладия(II) с дихлорметаном (33.4 мг, 0.04 ммоль) в смеси диоксан/вода.
Очистка: препаративная ВЭЖХ; выход: 6 мг (5%);
1
6
Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d): δ 8.33 (s, 1Н), 8.16 (s, 1Н), 7.97 (s, 1Н), 7.92 (d, J=8.4 Гц, 2Н), 7.84 (s, 1H), 7.67 (d, J=8.3 Гц, 2Н), 7.54 (d, J=8.4 Гц, 2Н), 7.10 (d, J=8.5 Гц, 2Н), 4.21 (dd, J=6.4, 12.9 Гц, 4Н), 3.76-3.73 (m, 2Н), 3.54-3.48 (m, 1Н), 3.08 (s, 3Н), 2.84-2.75 (m, 6Н), 2.49-2.44 (m, 8Н), 1.65-1.60 (m, 10Н), 1.36-1.31 (m, 2Н);
ЖХ/МС (метод А): 649.3 (М+Н), Rt. 2.84 мин, чистота 95%.
Следующие соединения получали аналогично:
метилфениламид 4-(4-метансульфониламинобензоил)-пиперидин-1-карбоновой кислоты ("A38")
;
сложный этиловый эфир [(4-бензоилпиперидин-1-карбонил)-фениламино]-уксусной кислоты ("А39")
;
сложный этиловый эфир {[4-(4-метоксибензоил)-пиперидин-1-карбонил]-фениламино}-уксусной кислоты ("А40")
;
N-этил-4-(3-фтор-4-метоксибензоил)-N-(4-метоксифенил)пиперидин-1-карбоксамид ("А41")
;
4-(3-фтор-4-метоксибензоил)-N-(6-метокси-3-пиридил)-N-метилпиперидин-1-карбоксамид ("А42")
;
1
6
Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d) δ 7.98 (t, J=0.32 Гц, 1Н), 7.83-7.80 (m, 1Н), 7.76 (dd, J=2.08, 12.32 Гц, 1Н), 7.57 (dd, J=2.88, 8.80 Гц, 1Н), 7.26 (t, J=8.60 Гц, 1Н), 6.82 (d, J=8.88 Гц, 1Н), 3.91 (s, 3Н), 3.82 (s, 3Н), 3.67 (d, J=13.12 Гц, 2Н), 3.51-3.45 (m, 1Н), 3.04 (s, 3Н), 2.79-2.72 (m, 2Н), 1.58 (d, J=10.96 Гц, 2Н), 1.30-1.20 (m, 2Н); ЖХ/МС (метод А): 402 (М+Н), Rt. 3.80 мин;
N-этил-N-(4-метоксифенил)-4-(6-метоксипиридин-3-карбонил)пиперидин-1-карбоксамид ("А43")
;
1
6
Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d) δ 8.81 (d, J=2.04 Гц, 1Н), 8.15 (dd, J=2.48, 8.78 Гц, 1Н), 7.04 (dd, J=2.40, 6.74 Гц, 2Н), 6.93-6.88 (m, 3Н), 3.91 (s, 3Н), 3.73 (s, 3Н), 3.69-3.65 (m, 1Н), 3.50-3.40 (m, 1Н), 3.48 (t, J=7.04 Гц, 2Н), 3.40-3.30 (m, 1H), 2.66 (q, J=6.52 Гц, 2Н), 1.56-1.53 (m, 2Н), 1.27-1.17 (m, 2Н), 0.97 (t, J=7.00 Гц, 3Н);
ЖХ/МС (метод А): 398 (М+Н), Rt. 4.36 мин;
4-бензоил-N-(6-метокси-3-пиридил)-N-метилпиперидин-1-карбоксамид ("А44")
;
1
6
Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d) δ 7.98 (t, J=0.40 Гц, 1H), 7.94-7.92 (m, 2Н), 7.64-7.55 (m, 2Н), 7.52-7.48 (m, 2Н), 6.82 (dd, J=0.44, 8.86 Гц, 1Н), 3.82 (s, 3Н), 3.73-3.64 (m, 2H), 3.56-3.31 (m, 1H), 3.04 (s, 3H), 2.80-2.73 (m, 2H), 1.61 (d, J=10.84 Гц, 2H), 1.32-1.21 (m, 2H); ЖХ/МС (метод A): 354 (M+H), Rt. 3.84 мин;
N-(6-метокси-3-пиридил)-N-метил-4-(3-метилбензоил)пиперидин-1-карбоксамид ("A45")
;
1
6
H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d) δ 7.99 (d, J=2.68 Гц, 1H), 7.73 (d, J=7.28 Гц, 2Н), 7.57 (dd, J=2.84, 8.84 Гц, 1Н), 7.44-7.38 (m, 2Н), 6.83 (d, J=8.76 Гц, 1Н), 3.82 (s, 3Н), 3.67 (d, J=12.84 Гц, 2Н), 3.51 (s, 1Н), 3.04 (s, 3Н), 2.76 (t, J=10.96 Гц, 2Н), 2.35 (s, 3Н), 1.60 (d, J=10.88 Гц, 2Н), 1.26 (q, J=3.92 Гц, 2Н);
ЖХ/МС (метод А): 368 (М+Н), Rt. 4.21 мин;
N-(6-метокси-3-пиридил)-N-метил-4-(4-метилбензоил)пиперидин-1-карбоксамид ("А46")
;
1
6
H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d) δ 7.98 (d, J=2.76 Гц, 1H), 7.84 (d, J=8.20 Гц, 2Н), 7.57 (dd, J=2.84, 8.80 Гц, 1H), 7.30 (d, J=8.16 Гц, 2Н), 6.82 (d, J=8.80 Гц, 1Н), 3.82 (s, 3Н), 3.67 (d, J=13.12 Гц, 2Н), 3.51-3.46 (m, 1Н), 3.04 (s, 3Н), 2.77 (t, J=1.32 Гц, 2Н), 2.35 (s, 3Н), 1.59 (d, J=11.16 Гц, 2Н), 1.31-1.20 (m, 2Н);
ЖХ/МС (метод А): 368 (М+Н), Rt. 4.18 мин;
4-(3-метоксибензоил)-N-(6-метокси-3-пиридил)-N-метилпиперидин-1-карбоксамид ("А47")
;
1
6
Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d) δ 7.98 (d, J=2.76 Гц, 1Н), 7.58-7.53 (m, 2Н), 7.44-7.39 (m, 2Н), 7.20-7.18 (m, 1Н), 6.82 (d, J=8.76 Гц, 1H), 3.82 (s, 3Н), 3.81 (s, 3Н), 3.79-3.65 (m, 2Н), 3.54-3.49 (m, 1H), 3.04 (s, 3Н), 2.79-2.74 (m, 2H), 1.60 (d, J=10.96 Гц, 2H), 1.31-1.21 (m, 2H);
ЖХ/МС (метод A): 384 (M+H), Rt. 3.96 мин;
4-[4-(1-этилпиразол-4-ил)бензоил]-N-(6-метокси-3-пиридил)-N-метилпиперидин-1-карбоксамид ("А48")
;
1
6
Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d) δ 8.34 (s, 1H), 7.99 (t, J=0.40 Гц, 2Н), 7.92 (d, J=8.48 Гц, 2Н), 7.69 (s, 2Н), 7.58 (dd, J=2.84, 8.82 Гц, 1Н), 6.83 (d, J=8.88 Гц, 1Н), 4.15 (q, J=7.28 Гц, 2Н), 3.83 (s, 3Н), 3.68 (d, J=13.00 Гц, 2Н), 3.55-3.49 (m, 1Н), 3.05 (s, 3Н), 2.77 (t, J=10.84 Гц, 2Н), 1.61 (d, J=10.80 Гц, 2Н), 1.40 (t, J=7.28 Гц, 3Н), 1.33-1.23 (m, 2Н); ЖХ/МС (метод А): 448 (М+Н), Rt. 3.81 мин;
4-(4-метоксибензоил)-N-(6-метокси-3-пиридил)-N-метилпиперидин-1-карбоксамид ("А49")
;
1
6
Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d) δ 7.98 (d, J=2.56 Гц, 1H), 7.92 (dd, J=1.96, 6.96 Гц, 2Н), 7.57 (dd, J=2.88, 8.82 Гц, 1H), 7.01 (dd, J=1.88, 7.02 Гц, 2Н), 6.83 (d, J=8.64 Гц, 1H), 3.82 (s, 6Н), 3.37 (d, J=16.7 Гц, 2Н), 3.66-3.43 (m, 1Н), 3.04 (s, 3Н), 2.78-2.73 (m, 2Н), 1.58 (d, J=11.04 Гц, 2Н), 1.31-1.21 (m, 2Н); ЖХ/МС (метод А): 384 (М+Н), Rt. 3.71 мин;
4-(3-фторбензоил)-N-(6-метокси-3-пиридил)-N-метилпиперидин-1-карбоксамид ("А50")
;
1
6
Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d) δ 7.99 (d, J=2.80 Гц, 1H), 7.79 (d, J=7.68 Гц, 1H), 7.72 (d, J=9.72 Гц, 1H), 7.59-7.54 (m, 2H), 7.50-7.46 (m, 1H), 6.83 (d, J=8.80 Гц, 1H), 3.82 (s, 3H), 3.69 (t, J=13.16 Гц, 2H), 3.55-3.50 (m, 1H), 3.04 (s, 3H), 2.76 (t, J=11.40 Гц, 2H), 1.62 (d, J=11.20 Гц, 2H), 1.30-1.20 (m, 2H); ЖХ/МС (метод A): 372 (M+H), Rt. 4.04 мин;
4-(4-фторбензоил)-N-(6-метокси-3-пиридил)-N-метилпиперидин-1-карбоксамид ("A51")
;
1
6
H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d) δ 8.05-7.98 (m, 3Н), 7.57 (dd, J=2.84, 8.80 Гц, 1Н), 7.35-7.31 (m, 2Н), 6.83 (d, J=8.80 Гц, 1Н), 3.82 (s, 3Н), 3.67 (d, J=13.16 Гц, 2Н), 3.54-3.48 (m, 1Н), 3.04 (s, 3Н), 2.78-2.73 (m, 2Н), 1.60 (d, J=11.20 Гц, 2Н), 1.31-1.22 (m, 2Н); ЖХ/МС (метод А): 372 (М+Н), Rt. 3.99 мин;
4-(4-метокси-3-метилбензоил)-N-(6-метокси-3-пиридил)-N-метилпиперидин-1-карбоксамид ("А52")
;
1
6
Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d) δ 7.98 (d, J=2.36 Гц, 1H), 7.82 (dd, J=2.20, 8.60 Гц, 1Н), 7.74 (d, J=1.52 Гц, 1Н), 7.58-7.55 (m, 1Н), 7.01 (d, J=8.68 Гц, 1Н), 6.82 (dd, J=0.40, 8.84 Гц, 1H), 3.85 (s, 3Н), 3.82 (s, 3Н), 3.67 (d, J=13.20 Гц, 2Н), 3.49-3.41 (m, 1H), 3.04 (s, 3Н), 2.75 (t, J=10.76 Гц, 2Н), 2.16 (s, 3Н), 1.57 (d, J=10.84 Гц, 2Н), 1.31-1.16 (m, 2Н); ЖХ/МС (метод А): 398 (М+Н), Rt. 4.25 мин;
N-(4-метоксифенил)-4-(6-метоксипиридин-3-карбонил)-N-метилпиперидин-1-карбоксамид ("А53")
;
1
6
Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d) δ 8.82 (d, J=2.08 Гц, 1H), 8.16 (dd, J=2.48, 8.76 Гц, 1Н), 7.06 (dd, J=2.28, 6.70 Гц, 2Н), 6.92-6.89 (m, 3Н), 3.91 (s, 3Н), 3.72-3.68 (m, 5Н), 3.68-3.41 (m, 1H), 3.01 (s, 3Н), 2.73-2.65 (m, 2Н), 1.58-1.55 (m, 2Н), 1.30-1.20 (m, 2Н); ЖХ/МС (метод А): 384 (М+Н), Rt. 4.04 мин;
[4-(1-этил-1Н-пиразол-4-ил)-фенил]-метиламид 4-[4-(1-этил-1Н-пиразол-4-ил)-бензоил]-пиперидин-1-карбоновой кислоты ("А57")
;
1
6
Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d) δ 8.33 (s, 1Н), 8.15 (s, 1H), 7.97 (s, 1H), 7.91 (d, J=8.5 Гц, 2H), 7.83 (s, 1H), 7.68 (d, J=8.4 Гц, 2H), 7.54 (d, J=8.6 Гц, 2H), 7.13-7.09 (m, 2H), 4.17-4.10 (m, 4H), 3.76-3.73 (m, 2H), 3.54-3.48 (m, 1H), 3.08 (s, 3H), 2.81-2.75 (m, 2H), 1.62-1.60 (m, 2H), 1.41-1.37 (m, 6H), 1.34-1.28 (m, 2H); ЖХ/МС (метод A): 511 (M+H), Rt. 4.25 мин;
N-(4-цианофенил)-4-(4-метоксибензоил)-N-метилпиперидин-1-карбоксамид ("A58")
;
N-(4-цианофенил)-N-(2-гидроксиэтил)-4-(4-метоксибензоил)пиперидин-1-карбоксамид ("А59")
;
N-(6-циано-3-пиридил)-4-(4-метоксибензоил)-N-метилпиперидин-1-карбоксамид ("А60")
;
N-(4-цианофенил)-4-(3-фтор-4-метоксибензоил)-N-метилпиперидин-1-карбоксамид ("А61")
;
N-(4-цианофенил)-N-(2-гидроксизтил)-4-(4-метокси-3-метилбензоил)пиперидин-1-карбоксамид ("А62")
;
N-(4-цианофенил)-4-(3-фтор-4-метоксибензоил)-N-(2-гидроксиэтил)пиперидин-1-карбоксамид ("А63")
;
N-(2-гидроксиэтил)-4-(4-метоксибензоил)-N-(4-метоксифенил)пиперидин-1-карбоксамид ("А64")
;
N-(2-гидроксиэтил)-4-(4-метокси-3-метилбензоил)-N-(4-метоксифенил)пиперидин-1-карбоксамид ("А65")
;
4-(3-фтор-4-метоксибензоил)-N-(2-гидроксиэтил)-N-(4-метоксифенил)пиперидин-1-карбоксамид ("А66")
;
N-(2-гидроксиэтил)-4-(4-метокси-3-метилбензоил)-N-(6-метокси-3-пиридил)пиперидин-1-карбоксамид ("А67")
;
4-(3-фтор-4-метоксибензоил)-N-(2-гидроксиэтил)-N-(6-метокси-3-пиридил)пиперидин-1-карбоксамид ("А68")
;
N-(2-гидроксиэтил)-4-(4-метоксибензоил)-N-(6-метокси-3-пиридил)пиперидин-1-карбоксамид ("А69")
;
4-(4-метоксибензоил)-N-(6-метоксипиридазин-3-ил)-N-метилпиперидин-1-карбоксамид ("А70")
;
4-(4-метоксибензоил)-N-(2-метоксипиримидин-5-ил)-N-метилпиперидин-1-карбоксамид ("А71")
.
Синтез 4-[4-(1-гидрокси-1-метилэтил)бензоил]-N-(4-метоксифенил)-N-метилпиперидин-1-карбоксамида ("А54")
Следующие соединения получали аналогично:
N-[4-(1-гидрокси-1-метилэтил)фенил]-4-(4-метоксибензоил)-N-метилпиперидин-1-карбоксамид ("А55")
;
4-[4-(1-гидрокси-1-метилэтил)бензоил]-N-[4-(1-гидрокси-1-метилэтил)фенил]-N-метилпиперидин-1-карбоксамид ("А56")
.
Фармакологические данные
50
IC: <0.3 мкМ = A 0.3-3 мкМ = В 3-50 мкМ = С
50
ЕС: <0.3 мкМ = А 0.3-3 мкМ = В 3-50 мкМ = С
Соединения, показанные в таблице 2, являются особенно предпочтительными соединениями в соответствии с изобретением.
50
IC: <0.3 мкМ = A 0.3-3 мкМ = В 3-50 мкМ = С
Соединения, показанные в таблице 3, являются особенно предпочтительными соединениями в соответствии с изобретением.
Следующее примеры относятся к лекарственным средствам:
Пример А: Флаконы для инъекций
2
4
pH раствора 100 г активного компонента формулы I и 5 г NaHPO в 3 л бидистиллированной воды устанавливают на 6.5, используя 2 н. соляную кислоту, стерилизуют фильтрацией, переносят во флаконы для инъекций, лиофилизируют в стерильных условиях и запечатывают в стерильных условиях. Каждый флакон для инъекций содержит 5 мг активного компонента.
Пример Б: Суппозитории
Смесь 20 г активного компонента формулы I расплавляют с 100 г соевого лецитина и 1400 г какаового масла, разливают в пресс-формы и дают охладиться. Каждый суппозиторий содержит 20 мг активного компонента.
Пример В: Раствор
2
4
2
2
4
2
Раствор приготавливают из 1 г активного компонента формулы I, 9.38 г NaHPO⋅2HO, 28.48 г NaHPO⋅12HO и 0.1 г бензалконийхлорида в 940 мл бидистиллированной воды. pH раствора устанавливают на 6.8 и объем раствора доводят до 1 л и стерилизуют путем облучения. Этот раствор может использоваться в форме глазных капель.
Пример Г: Мазь
500 мг активного компонента формулы I смешивают с 99.5 г вазелина в асептических условиях.
Пример Д: Таблетки
Смесь 1 кг активного компонента формулы I, 4 кг лактозы, 1.2 кг картофельного крахмала, 0.2 кг талька и 0.1 кг стеарата магния спрессовывают для получения таблеток обычным способом таким образом, чтобы каждая таблетка содержала 10 мг активного компонента.
Пример Е: Драже
Таблетки спрессовывают аналогично примеру Д и затем покрывают обычным способом покрытием из сахарозы, картофельного крахмала, талька, трагаканта и красителя.
Пример Ж: Капсулы
2 кг активного компонента формулы I помещают в твердые желатиновые капсулы обычным способом таким образом, чтобы каждая капсула содержала 20 мг активного компонента.
Пример 3: Ампулы
Раствор 1 кг активного компонента формулы I в 60 л бидистиллированной воды стерилизуют фильтрацией, переносят в ампулы, лиофилизируют в стерильных условиях и запечатывают в стерильных условиях. Каждая ампула содержит 10 мг активного компонента.