Динамика структурно-функциональных нарушений в печени крыс при экспериментальном циррозе

ВЕСТНИК ВГМУ, 2015, ТОМ 14, №s3

© ЛЕБЕДЕВА Е.И., 2015

ДИНАМИКА СТРУКТУРНО-ФУНКЦИОНАЛЬНЫХ НАРУШЕНИЙ В ПЕЧЕНИ КРЫС ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ЦИРРОЗЕ

ЛЕБЕДЕВА Е.И.

УО «Витебский государственный ордена Дружбы народов медицинский университет», Республика Беларусь

Резюме.

Цель - изучение динамики структурно-функциональных нарушений в печени крыс при экспериментальном циррозе.

Материал и методы. Модель токсического цирроза печени у белых крыс создавали путем длительного внутрижелудочного введения 40%-го масляного раствора CCL4 в течение 19 недель в сочетании с этанолом. Для изучения динамики структурно-функциональных изменений в печени опытных животных их выводили из эксперимента в разные сроки: через 3, 6, 9, 12, 16, 19 недель от начала опыта. Для морфометрической оценки содержания липидов, сукцинатдегидрогеназы, цитохромоксидазы и соединительной ткани использовали метод полуколичественного компьютерного анализа результатов. Осуществляли измерение средней площади гепатоцитов и ядер (в мкм2) с последующим вычислением ядерно-цитоплазматического отношения.

Результаты. В результате цитоморфометрического исследования установлена сложная динамика изменения ядерно-цитоплазматического отношения, значительное увеличение средней площади гепатоцитов и их ядер и плавный процесс склеротизации печени. Следует отметить, что данное исследование позволило выявить статистически достоверные половые различия в выраженности жировой дистрофии через 6, 9, 12, 16 и 19 недель эксперимента. Жировой гепатоз был более выражен у самок. В то же время, половые различия активности ферментов отсутствовали. При гистохимическом изучении сукцинатдегидрогеназы отмечалось мозаичное снижение активности фермента, чего не наблюдалось у цитохромоксидазы. Снижение уровня гистохимической реакции ферментов свидетельствует о нарушении процессов энергообеспечения гепатоцитов при развитии цирротического процесса.

Заключение. Таким образом, проведенное исследование построено по принципу комплексного анализа гистологических и гистохимических показателей, отражающих токсическое поражение печени белых крыс. Полученные данные раскрывают некоторые стороны структурно-функциональных изменений при развитии токсического цирроза печени у животных и могут быть использованы при поиске путей их коррекции.

Ключевые слова: печень, белые крысы, цирроз, динамика структурно-функциональных нарушений.

Abstract.

Objectives. To study the dynamics of structural and functional disorders in the liver of rats with experimental cirrhosis.

Material and methods. Toxic liver cirrhosis in white rats was modelled by prolonged intragastric administration of 40% oil solution of CCl4 during 19 weeks in combination with ethanol. To study the dynamics of structural and functional changes in the liver of experimental animals they were taken from the experiment at different terms: in 3, 6, 9, 12, 16, 19 weeks after the beginning of the experiment. For morphometric evaluation of the content of lipids succinate dehydrogenase, cytochrome oxidase and connective tissue semi-quantitative method of computer analysis of the results was used. The measurement of the average area of hepatocytes and nuclei (in pm2) was taken with subsequent calculation of the nuclear-cytoplasmic ratio.

Results. As a result of cytomorphometric research the complex dynamics of the nuclear-cytoplasmic ratio change, a significant increase in the average area of hepatocytes and their nuclei and a smooth process of sclerotization of the liver were determined. It should be noted that this study enabled the revealing of statistically significant sex differences in the expression of fatty degeneration after 6, 9, 12, 16 and 19 weeks of the experiment. Steatosis was more clearly marked in females. However, sex differences of enzyme activity were absent. On histochemical study of succinate dehydrogenase mosaic decrease in enzyme activity was noted, it being not observed in cytochrome oxidase. The reduction of enzyme histochemical reaction level testifies to the disturbance of energy supply processes

21

СТРУКТУРНО-ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ НАРУШЕНИЯ В ПЕЧЕНИ КРЫС ПРИ ЦИРРОЗЕ

of hepatocytes in case of cirrhotic process development.

Conclusions. Thus, the conducted study is built on the principle of complex analysis of histological and histochemical indices which reflect the toxic damage of white rats liver. The obtained data reveal some aspects of structural and functional changes in case of the development of toxic cirrhosis of the liver in animals and can be used in the search for ways to correct them.

Key words: liver, white rats, cirrhosis, dynamics of structural and functional disturbances.

Лечение хронических гепатитов (ХГ) и циррозов печени (ЦП) остается трудной проблемой, далекой от разрешения. Установлено, что острый гепатит, ХГ, ЦП, гепатоцеллюляр-ная карцинома - звенья одного патологического процесса. Частота и темп прогрессирования зависят от хрониогенного потенциала этиологического фактора и состояния макроорганизма [1]. Следует отметить не только медицинскую, но и социальную значимость этой патологии. Помимо высокой заболеваемости и смертности, хронические заболевания печени приводят к существенным экономическим потерям, связанным с лечением, реабилитацией и поддерживающей терапией данной категории пациентов [2].

Сложность строения печени и многообразие ее функций обусловливают необходимость применения разнообразных диагностических приемов и методологических подходов к оценке ее деятельности в норме, при патологии и лечении. До сих пор остаются спорными вопросы о степени повреждения и значении нарушений энергетического обмена. Остаются нерешенными вопросы прогрессирования фиброза как прогностического маркера фатальных осложнений и методы коррекции подобных нарушений [3, 4]. Все это указывает на важность комплексного изучения развития цирроза печени в динамике.

Целью исследования являлось изучение динамики структурно-функциональных нарушений в печени крыс при экспериментальном циррозе.

Материал и методы

Формирование цирроза печени проведено на половозрелых беспородных белых крысах обоего пола массой 180-250 г в осенне-зимний период. За основу взята модель токсического поражения печени органическим гепатотропным ядом - четыреххлористым углеродом (тетрахлорметаном, ССЬ4) [5]. Рас-

твор четыреххлористого углерода готовили из чистого (99,99% чистоты) препарата путем добавления оливкового масла. Конечная концентрация раствора составляла 40%. Введение осуществляли через зонд per os 2 раза в неделю на протяжении 19 нед. Параллельно с этим вместо воды в качестве питья крысы получали 5%-ный раствор этанола из поилок в режиме свободного доступа. На выполнение данных исследований получено разрешение этического комитета Витебского государственного медицинского университета. Содержание животных соответствовало требованиям СанПиН 2.12.12-18.2006 «Устройство, оборудование и содержание экспериментально-биологических клиник (вивариев), утвержденных постановлением Главного государственного санитарного врача Республики Беларусь № 131 от 31.10.2006». Животные были разделены на группы: 6 опытных (n=12, 6 самцов и 6 самок) и контрольную (n=24, 12 самцов и 12 самок). Все исследования проводили в одно и то же время суток с соблюдением принципов, изложенных в Конвенции по защите позвоночных животных, которые используют в экспериментальных и других научных целях (г. Странбург, 1986), и согласно правилам лабораторной практики РБ (приложение к приказу Министерства Здравоохранения Республики Беларусь № 31 от 31.10.2006).

Для изучения динамики структурнофункциональных нарушений опытных животных выводили из эксперимента в разные сроки: через 3, 6, 9, 12, 16, 19 недель от начала опыта. Вывод животных из опыта осуществляли одномоментной гильотинной декапита-цией. Печень отделяли от окружающих тканей и быстро взвешивали с последующим вычислением ее относительной массы (%). Объектом исследования служили фрагменты нормальной и патологически измененной левой боковой доли печени животных. Для морфологических исследований использовали следующие методы:

22

ВЕСТНИК ВГМУ, 2015, ТОМ 14, №s3

1. Общегистологические: окраска гематоксилином и эозином [6].

2. Гистохимические методы: выявление нейтральных липидов смесью суданов III и IV в собственной модификации [7]. В нефиксированных срезах печени толщиной около 10 мкм, приготовленных на микротоме-криостате НМ525 (Германия) из замороженного в жидком азоте материала, изучали активность сукцинатдегидрогеназы (СДГ; КФ 1.3.99.1) по методу Нахласа с нитро-СТ и цитохромокси-дазы (ЦХО; КФ 1.9.3.1) по методу Берстона. Приготовление красителей, буферных растворов и окраску препаратов осуществляли в соответствии с прописями, приведенными в руководствах [8, 9]. При проведении гистоэнзимологических реакций для контроля специфичности гистохимического обнаружения ферментов ставили контроли: инактивация ферментов высокой температурой (+80°С) и проведение реакций без субстратов. В обоих контролях в клетках, обладающих соответствующей ферментативной активностью, выявлялась отрицательная реакция. По методу А.Л. Шабадаша выявляли динамику изменения содержания гликогена. Данные описаны в предыдущей работе [10].

3. Специальный метод выявления соединительной ткани по Маллори в собственной модификации [11].

Для морфометрической оценки содержания липидов, СДГ, ЦХО и соединительной ткани использовали метод полуколичественного компьютерного анализа результатов. С помощью программного обеспечения анализа изображений Image Scope Color высчитывали процент относительной площади от площади среза, занимаемой соответственно липидами, СДГ, ЦХО и соединительной тканью. С этой целью производили микрофотосъемку случайных полей зрения гистологических препаратов цифровой камерой OLYMPUS XC 30 на базе микроскопа OLYMPUS BX 51 (Япония) при увеличении х200 не менее чем в 10 полях зрения в каждом гистологическом срезе. Определяли среднюю площадь гепатоцитов (Sr) и их ядер (S^ в мкм2. Путем определения разности между Si^ и Sя получали площадь цитоплазмы клеток, после чего вычисляли ядерно-цитоплазматическое отношение (ЯЦО). Цитоморфометрию проводили при увеличении х600.

Статистическую обработку данных и

построение диаграмм проводили с помощью лицензионной компьютерной программы Statistica 10.0 Advanced (русская версия). Так как размер групп не превышал 50 особей, для выявления нормальности частотного распределения использовали критерий Шапиро-Уилка [12], данные которого соответствовали результатам критерия Лиллиефорса. Изучение влияния продолжительности эксперимента и пола животных на рассматриваемый признак проводили с помощью параметрического двухфакторного дисперсионного анализа. При обработке данных параметрической статистикой о достоверности различий судили по t-критерию Стьюдента, а статистические данные представлены в виде средних и их соответствующих доверительных интервалов (М (95% ДИ: j-q)). При обработке данных непараметрической статистикой использовали U-критерия Манна-Уитни. Данные представлены в виде медианы (Ме) и значения 15-го и 85-го процентиля. Различия считали статистически достоверными при р<0,05.

Результаты и обсуждение

Морфологические и гистохимические особенности печени контрольных животных.

Печень белых крыс имеет следующие доли: левую боковую (самая большая), левую внутреннюю, правую внутреннюю, правую боковую, хвостатую, на которой имеется вдавление от почки, и добавочную. Масса печени составляет 4-6% от массы животного [13]. Белые крысы, в отличие от других грызунов, лишены желчного пузыря. Кроме того, у них имеются существенные особенности в образовании желчи, обмене билирубина, процессах регенерации печени. Крысы способны регидроксилировать литохолевую кислоту в ди- и тригидрокси-желчные кислоты, чего не наблюдается у людей. Результаты исследования показали, что относительная масса печени контрольных животных составила у самцов 3,23 (95% ДИ: 2,883,57), а у самок - 3,52 (95% ДИ: 3,28-3,75).

Печень белых крыс покрыта тонкой соединительнотканной глиссоновой капсулой, отдающей вглубь органа очень тонкие прослойки, которые разделяют ее на дольки. Эти прослойки выражены очень слабо и практически не выявляются. Границы печеночных долек определяются только по расположению

23

СТРУКТУРНО-ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ НАРУШЕНИЯ В ПЕЧЕНИ КРЫС ПРИ ЦИРРОЗЕ

междольковых сосудов и желчных протоков, которые формируют триады. Непосредственно под капсулой лежит один ряд гепатоцитов, образующих наружную терминальную пластинку. Гепатоциты - основной вид клеток печени, выполняющий ее основные функции. Они организованы в печеночные балки, исходящие радиально от центральной вены. Границы клеток четкие, цитоплазма гомогенная (рис. 1).

Рисунок 1 - Срез печени контрольных белых крыс.

Окраска гематоксилином и эозином х200.

При проведении цитоморфометрических исследований выявлено, что средняя площадь гепатоцитов у самцов составила 498,86 (396,85; 553,83), а у самок - 422,09 (343,92; 505,01). Ге-патоциты имеют одно или несколько ядер округлой формы. Расположены они в основном центрально. Средняя площадь ядер по результатам исследования составила у самцов 77,02 (95% ДИ: 73,26-80,77), а у самок - 66,57 (95% ДИ: 62,64-70,51). Ядерно-цитоплазматическое отношение у самцов было равно 0,18 (0,15; 0,24), а у самок - 0,18 (0,15: 0,22).

Содержание соединительной ткани в печени контрольных белых крыс невелико. Результаты исследования показали, что у животных процент относительной площадь соединительной ткани от площади среза составил у самцов и самок 1,00 (1,00; 2,00). На гистологических препаратах она выявлялась в основном вокруг сосудов триад и, в меньшей степени, около вокругдольковых сосудов.

При окрашивании криостатных срезов смесью суданов липидные включения в гепа-тоцитах интактных животных практически не

выявлялись. Лишь иногда на отдельных срезах гистологических препаратов встречались гепатоциты, в цитоплазме которых обнаруживались единичные мелкие капли жира. Это связано с тем, что образующиеся в печени в условиях нормы триацилглицеролы не накапливаются в ней, а сразу же транспортируются из нее в составе липопротеинов очень низкой плотности (ЛПОНП). При затруднении удаления жира из печени вследствие снижения синтеза или секреции ЛПОНП возникают условия для развития жирового гепатоза [14].

При изучении активности фермента внутренней мембраны митохондрий СДГ у контрольных крыс на препаратах отчетливо выявлялась максимальная активность фермента в гепатоцитах периферических отделов печеночных долек и вокруг сосудов. В то же время в центральных отделах дольки активность СДГ была значительно ниже, что подтверждает представления о структурно-функциональной гетерогенности гепатоцитов в печеночных дольках. В целом активность СДГ проявлялась в виде интенсивной диффузной сине-лиловой и сине-фиолетовой окраски цитоплазмы гепатоцитов и наличием в ней мелких, почти одинаковых по величине темно-синих гранул диформазана. Процент относительной площади активности СДГ от площади среза составил у самцов 47,50 (38,50; 50,00), а у самок - 43,50 (37,50; 50,00).

Активность фермента ЦХО в печени контрольных крыс была в основном равномерно распределена по цитоплазме гепатоци-тов. Фермент выявлялся в виде мелких зерен коричневого цвета. Иногда на срезах встречались единичные клетки с более интенсивной, чем в остальных клетках, окраской зерен. Редко обнаруживались также гепатоциты с участками цитоплазмы, в которых активность фермента была значительно ниже, чем в остальных участках. По данным гистохимического исследования процент относительной площади активности ЦХО от площади среза составил у самцов и самок 37,00 (31,00; 47,00).

Полученные результаты морфометрического исследования позволили выявить статистически достоверные половые различия средней площади гепатоцитов (р=0,002, U-критерий Манна-Уитни) и их ядер (р=0,000, t-критерий Стьюдента) у самцов и самок. В то же время показатели ЯЦО не имели гендерных

24

ВЕСТНИК ВГМУ, 2015, ТОМ 14, №s3

различий (р=0,446, U-критерий Манна-Уитни). Установлена гетерогенность распределения фермента внутренней мембраны митохондрий СДГ по печеночной дольке. Вместе с тем, при гистохимическом изучении активности ЦХО гетерогенность распределения не выявлена. В гепатоцитах практически полностью отсутствуют липиды.

Динамика морфометрических изменений в паренхиме печени животных, подвергнутых воздействию четыреххлористого углерода и этанола. Исследование относительной массы печени экспериментальных животных показа-

ло, что она была достоверно увеличена на всех этапах эксперимента по сравнению с группой контроля как у самцов так и у самок. Увеличение массового коэффициента печени свидетельствует о гемодинамических нарушениях в этом органе (рис. 2).

Гистологический анализ органа подопытных крыс показал развитие хронического патологического процесса, основным проявлением которого являлся цирроз печени. Морфометрически установлено достоверное увеличение средней площади гепатоцитов и ядер на всех этапах эксперимента по сравнению с группой контроля как у самцов, так и у

6.5

6,0

и 5,5 ш

5.0

со

о

0

1 4,5

о:

4.0 с;

ш

g 3,5

О

3.0

2.5

2.0

нед эксперимента*пол; МНК средние Текущ. эффект: F(6, 70)=3,8520, p=,00223 Декомпозиция гипотезы

Вертик. столбцы равны 0,95 доверительных интервалов

6 9 12

нед эксперимента

пол

самцы

пол

самки

Рисунок 2 - Динамика изменения относительной массы печени крыс в различные сроки эксперимента.

900

850 800 ™ 750 2 700

со

0

ё 650

3"

1 600

550

л

500

о

Ё 450

400

350

300

нед эксперимента*пол; МНК средние Текущ. эффект: F(6, 546)=2,9114, p=,00838 Декомпозиция гипотезы

Вертик. столбцы равны 0,95 доверительных интервалов

6 9 12

нед эксперимента

пол самц ы пол самки

Рисунок 3 - Динамика изменения средней Sr в различные сроки эксперимента.

3

16

19

3

16

19

25

СТРУКТУРНО-ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ НАРУШЕНИЯ В ПЕЧЕНИ КРЫС ПРИ ЦИРРОЗЕ

нед эксперимента*пол; МНК средние Текущ. эффект: F(6, 546)=1,7284, p=,11217 Декомпозиция гипотезы

Вертик. столбцы равны 0,95 доверительных интервалов

1 3 6 9 12 16 19

нед эксперимента

пол

самцы

пол

самки

Рисунок 4 - Динамика изменения средней 8я в различные сроки эксперимента.

Рисунок 5 - Гигантские клетки и их ядра на срезе печени экспериментальных животных через 19 недель эксперимента. Окраска по методу Шабадаша х1000.

самок (рис. 3, 4). Гипертрофию гепатоцитов и их ядер можно рассматривать как адаптацию к повышенной функциональной нагрузке, в частности, к возрастанию дезинтоксикационной функции. Через 16 и 19 нед. эксперимента отмечалось некоторое снижение средних значений S и S .

Необходимо также отметить, что на всех этапах эксперимента на гистологических препаратах встречались клетки и ядра с площадью как наименьшего значения, так и наибольшего, а также гигантских размеров (рис. 5). При окраске по методу Шабадаша у отдельных ядер отмечалось утолщение оболочки.

Ядерно-цитоплазматическое отношение - это одна из важных морфологических ха-

рактеристик, позволяющая оценить уровень метаболизма, выявить проявление компенсаторных реакций в клетке [15]. На фоне гипертрофии клеток и ядер выявлено статистически достоверное волнообразное разнонаправленное изменение ЯЦО (рис. 6).

В результате исследования в печени установлено статистически достоверное увеличение площади соединительной ткани на всех этапах эксперимента (рис. 7). Основной путь прогрессирования хронических заболеваний печени, независимо от этиологического фактора, приводящего к его повреждению, - это процесс фиброгенеза. Общие вопросы структуры и функции соединительной ткани освещены в классических трудах авторов [15, 17]. Гораздо меньше работ по морфологии и биохимии соединительной ткани печени. Большинство таких работ выполнено при изучении фиброза, когда в результате действия патогенного фактора происходит избыточное разрастание соединительной ткани. Изучение механизмов фиброгенеза и возможности обратимости патологического состояния являются актуальной задачей как теоритической, так и практической медицины [18].

Через 3 нед. эксперимента наблюдалось степени выраженности околососудистой соединительной ткани. Эти изменения свидетельствуют о начале развития склеротических процессов. На фоне продолжающегося введения CCL4 (через 6 нед.) на срезах гистологических препаратов появлялись тонкие септы соедини-

26

ВЕСТНИК ВГМУ, 2015, ТОМ 14, №s3

нед эксперимента*пол; МНК средние Текущ. эффект: F(6, 546)=5,6388, p=,00001 Декомпозиция гипотезы

Вертик. столбцы равны 0,95 доверительных интервалов

пол

самцы

пол

самки

Рисунок 6 - Динамика изменения ЯЦО в различные сроки эксперимента.

нед эксперимента*пол; МНК средние Текущ. эффект: F(5, 468)=23,433, p=0,0000 Декомпозиция гипотезы

Вертик. столбцы равны 0,95 доверительных интервалов

нед эксперимента

пол

самцы

пол

самки

Рисунок 7 - Динамика изменения относительной площадь соединительной ткани от площади среза

в различные сроки эксперимента.

Рисунок 8 - Тонкие септы соединительной ткани соединяющие сосуды, на срезе печени экспериментальных крыс через 6 недель эксперимента. Окраска по методу Маллори в собственной модификации х200.

Рисунок 9 - Соединительная ткань, окружающая сформированные ложные дольки, на срезе печени экспериментальных крыс через 9 недель эксперимента. Окраска по методу Маллори в собственной модификации х200.

27

СТРУКТУРНО-ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ НАРУШЕНИЯ В ПЕЧЕНИ КРЫС ПРИ ЦИРРОЗЕ

тельной ткани, соединяющие триады (рис. 8). Через 9 нед. эксперимента были сформированы ложные дольки, окруженные незрелой соединительной тканью (рис. 9).

Таким образом, в результате цитоморфометрического исследования установлена сложная динамика изменения ЯЦО , значительное увеличение средней площади гепато-цитов и их ядер и плавный процесс склероти-зации печени.

Динамика гистохимических показателей функциональной активности гепатоцитов животных, подвергнутых воздействию четыреххлористого углерода и этанола. Отравле-

ние белых крыс ССL4 и этанолом обусловило развитие жировой дистрофии, что подтверждалось интенсивной окраской цитоплазмы многих гепатоцитов специфическими красителями суданами. При этом относительная площадь печени, окрашенная этими красителями, у самок через 6 нед. эксперимента была статистически достоверно ниже, чем у самцов, а на последующих этапах эксперимента - выше (рис. 10). После 9 нед. эксперимента выявлено достоверное снижение относительной площади срезов, окрашенной на липиды.

Одновременно с накоплением жира в цитоплазме через 3 нед. эксперимента наблюдалось резкое статистически достоверное сни-

нед эксперимента*пол; Невзвеш. средние Текущ. эффект: F(5, 468)=52,161, p=0,0000 Декомпозиция гипотезы

Вертик. столбцы равны 0,95 доверительных интервалов

22

20

18 S' со о

16 с S

с. л

14 Э-о с.

12

10 8

3 6 9 12 16 19

нед эксперимента

Рисунок 10 - Динамика изменения относительной площадь липидов от площади среза

в различные сроки эксперимента.

нед эксперимента*пол; Невзвеш. средние Текущ. эффект: F(6, 546)=1,2930, p=,25845 Декомпозиция гипотезы

Вертик. столбцы равны 0,95 доверительных интервалов

пол самц ы пол самки

Рисунок 11 - Динамика изменения относительной площади активности СДГ от площади среза

в различные сроки эксперимента.

28

ВЕСТНИК ВГМУ, 2015, ТОМ 14, №s3

жение площади, на которой выявлялась активность СДГ (рис. 11). На последующих этапах эксперимента происходило незначительное достоверное увеличение показателя по сравнению с 3 нед., но уровня контрольной группы он не достигал.

Можно предположить, что увеличение содержания СДГ в этих условиях было обусловлено повышенной проницаемостью мембран митохондрий и не отражало непосредственно активность ферментов цикла Кребса. Следует отметить, что на начальных этапах эксперимента на гистохимических препаратах обнаруживались более крупные гранулы и глыбки диформазана, причем эта комковатость встречалась в тех участках среза, где отсутствовало

Рисунок 12 - Снижение площади активности СДГ в печени экспериментальных крыс через 19 недель эксперимента. Окраска по Нахласу х100.

сине-фиолетовое окрашивание. К 16-й и 19-й нед эксперимента размеры гранул практически не отличались от таковых в контроле (рис. 12). Мозаичное снижение активности фермента сохранялось на всех этапах эксперимента. Снижение активности СДГ можно рассматривать как стадию истощения адаптивной реакции системы энергопродукции. Она развивается, если компенсаторные механизмы не справляются с нарастающим расходом макроэргов, либо если перегружаются сервисные системы поставки субстратов и удаление продуктов реакций [19].

Важное место в энергетическом обеспечении клетки принадлежит цитохромоксида-зе - конечному ферменту дыхательной цепи, который обеспечивает перенос электронов от цитохрома на кислород [20]. Проведенное исследование по изучению активности ЦХО указало на плавное статистически достоверное падение активности фермента во все сроки эксперимента (рис. 13). На всех этапах эксперимента наблюдалось равномерное распределение фермента. Выявлялся он в основном в виде гомогенного окрашивания коричневого и светло-коричневого цвета. Иногда на препаратах по периферии ложных долек и вокруг сосудов встречались небольшие группы клеток с темно-коричневой окраской фермента. В гепатоцитах, расположенных непосредственно под капсулой Глиссона (наружная терминальная пластинка), уровень гистохимической реакции ЦХО был выше.

нед эксперимента*пол; МНК средние Текущ. эффект: F(6, 546)=,04489, p=,99963 Декомпозиция гипотезы

Вертик. столбцы равны 0,95 доверительных интервалов

42

40

38

36

34

32

6 9 12

нед эксперимента

пол

самцы

пол

самки

30

3

16

19

Рисунок 13 - Динамика изменения относительной площади активности ЦХО от площади среза

в различные сроки эксперимента.

29

СТРУКТУРНО-ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ НАРУШЕНИЯ В ПЕЧЕНИ КРЫС ПРИ ЦИРРОЗЕ

Рисунок 14 - Снижение площади активности ЦХО в печени экспериментальных крыс через 16 недель эксперимента. Окраска по Берстону х200.

Можно предположить, что уменьшение площади активности ЦХО связано со склеротическими изменениями органа (рис. 14).

Следует отметить, что данное исследование позволило выявить статистически достоверные половые различия в выраженности жировой дистрофии через 6 (р=0,000, U-критерий Манна-Уитни), 9 (р=0,000, t-критерий Стью-дента), 12 (р=0,000, U-критерий Манна-Уитни), 16 (р=0,000, U-критерий Манна-Уитни) и 19 (р=0,000, t-критерий Стьюдента) нед эксперимента. Жировой гепатоз был более выражен у самок. В то же время, половые различия активности СДГ и ЦХО отсутствовали. При гистохимическом изучении СДГ отмечалось мозаичное снижение активности фермента, чего не наблюдалось у ЦХО. Снижение уровня гистохимической реакции ферментов свидетельствует о нарушении процессов энергообеспечения гепатоцитов при развитии цирротического процесса.

Заключение

Таким образом, проведенное исследование построено по принципу комплексного анализа гистологических и гистохимических показателей, отражающих токсическое поражение печени белых крыс. Полученные данные раскрывают некоторые стороны структурно-функциональных изменений при развитии токсического цирроза печени у животных и могут быть использованы при поиске путей их коррекции.

Литература

1. Стимуляция регенерации в лечении хронических гепатитов и циррозов печени / С. А. Пыш-кин [и др.] // Анналы хирургической гепатологии. - 2004. - Т. 9, № 1. - С. 60-68.

2. Разводовский, Ю. Е. Экономическая доступность алкоголя и связанная с алкоголем смертность в Беларуси / Ю. Е. Разводовский // Вопросы организации и информатизации здравоохранения. - 2013. - № 1. - С. 48-52.

3. Современные представления о фиброзе печени и методах его коррекции / С. Н. Мехтиев [и др.] // Фарматека. - 2014. - № 6. - С. 80-87.

4. Состояние активности ядрышковых организаторов в гепатоцитах крыс после индукции четыреххлористым углеродом цирроза печени и лечения / В. Е. Рябинин [и др.] // Фундаментальные исследования. - 2012. - № 11. - С. 1055-1058.

5. Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств / под ред. А. Н. Миронова. - М. : Гриф и К, 2012. - Ч. 1. - 944 с.

6. Роскин, Г. И. Микроскопическая техника / Г. И. Роскин. - М. : Советская наука, 1951. - 447 с.

7. Лебедева, Е. И. Модификация гистохимического метода окрашивания липидов в паренхиме печени / Е. И. Лебедева // Минский консилиум - 2014 : сб. материалов республ. науч.-практ. конф. молодых ученых с междунар. участием, Минск, 10-11 июня 2014 г. - Минск : БелМА-ПО, 2014. - С. 143-145.

8. Лилли, Р. Патогистологическая техника и практическая гистохимия / Р. Лилли. - М. : Мир, 1969. - 645 с.

9. Луппа, Х. Основы гистохимии / Х. Луппа ; под ред. Н. Т. Райхлина. - М. : Мир, 1980. - 343 с.

10. Лебедева, Е. И. Качественные и количественные показатели содержания гликогена в печени крыс в динамике развития токсического цирроза / Е. И. Лебедева, О. Д. Мяделец // Журнал Гродненского государственного медицинского университета. - 2015. - № 1. - С. 31-35.

11. Лебедева, Е. И. Модификация метода окрашивания соединительной ткани в печени при ее фиброзах / Е. И. Лебедева // Инновации в медицине и фармации - 2014 : материалы дистан-цион. науч.-практ. конф. студентов и молодых ученых. - Минск, 2014. - С. 389-394.

12. Океанов, А. Е. Применение статистических методов в биомедицинских исследованиях : (учеб.-метод. пособие) / А. Е. Океанов, И. В. Дардынская. - М. : Международный экологический университет, 2011. - 82 с.

30

ВЕСТНИК ВГМУ, 2015, ТОМ 14, №s3

13. Лабораторные животные. Разведение, содержание, использование в эксперименте / И. П. Западнюк [и др.]. - Киев : Вища школа, 1983.

- 382 с.

14. Биохимия человека. В 2 т. Т. 1 / Р. Мари [и др.].

- М. : Мир, 1993. - 384 с.

15. Морфометрическая характеристика гепатоци-тов при экспериментальном воспроизведении лихорадки Западного Нила / В. Н. Григорьева [и др.] // Вестник ВолгГМУ. - 2012. - № 1. - С. 52-54.

16. Серов, В. В. Соединительная ткань: функциональная морфология и общая патология / В. В. Серов, А. Б. Шехтер. - М. : Медицина, 1981. -312 с.

17. Юрина, Н. А. Морфофункциональная гетерогенность и взаимодействие клеток соедини-

тельной ткани / Н. А. Юрина, А. И. Радостина.

- М. : Изд-во УДН, 1981. - 312 с.

18. Относительные показатели в оценке состояния паренхимы и соединительной ткани печени при различных экспериментальных условиях / А. А. Косых [и др.] // Вятский медицинский вестник.

- 2010. - № 3. - С. 28-32.

19. Хазанов, В. А. Фармакологическая регуляция энергетического обмена / В. А. Хазанов // Экспериментальная и клиническая фармакология.

- 2009. - Т. 72, № 4. - С. 61-64.

20. Олещук, А. М. Показатели системы оксида азота и морфофункционального состояния печени при экспериментальном циррозе / А. М. Оле-щук, А. З. Миколенко, С. В. Трач-Росоловская // Медицина и образование в Сибири. - 2013.

- № 2. - С. 26-30.

Поступила 27.04.2015 г. Принята в печать 10.06.2015 г.

Сведения об авторах:

Лебедева Е.И. - аспирант кафедры гистологии, цитологии и эмбриологии УО «Витебский государственный ордена Дружбы народов медицинский университет».

Адрес для корреспонденции: Республика Беларусь, 210023, г. Витебск, пр. Фрунзе, 27, УО «Витебский государственный ордена Дружбы народов медицинский университет», кафедра гистологии, цитологии и эмбриологии. E-mail: Lebedeva.ya-elenale2013@yandex.ru - Лебедева Елена Ивановна.

31