КОНСТРУКЦИИ НА ОСНОВЕ БЕЛКА, РОДСТВЕННОГО ЛИПОПРОТЕИНАМ НИЗКОЙ ПЛОТНОСТИ, 6(LRP6), И УДЛИНИТЕЛЯ ПОЛУПЕРИОДА СУЩЕСТВОВАНИЯ

1. Выделенная конструкция на основе белка, родственного липопротеинам низкой плотности, 6(LRP6), включающая первую и вторую LRP6 одноцепочечные Fv молекулы (scFv), которые связываются с LRP6, и человеческий сывороточный альбумин, где первая и вторая молекулы scFv связаны с N- и C-концами человеческого сывороточного альбумина, где конструкция LRP6 ингибирует канонический каскад передачи сигнала Wnt и где конструкция LRP6 не демонстрирует никакого существенного потенцирования сигнала Wnt в присутствии LRP6-связующего белка.
2. Выделенная конструкция по п.1, где первый LRP6 scFv соединен с N-концом человеческого сывороточного альбумина и связывается с Пропеллерной областью 1 LRP6, а второй LRP6 scFv соединен с С-концом человеческого сывороточного альбумина и связывается с Пропеллерной областью 3 LRP6.
3. Выделенная конструкция по п.1, где первый LRP6 scFv соединен с С-концом человеческого сывороточного альбумина и связывается с Пропеллерной областью 1 LRP6, а второй LRP6 scFv соединен с N-концом человеческого сывороточного альбумина и связывается с Пропеллерной областью 3 LRP6.
4. Выделенная конструкция по п.1, где LRP6-связующий белок представляет собой Wnt-связующий белок, выбираемый из группы, состоящей из Wnt 1, Wnt 3 и Wnt 3a.
5. Выделенная конструкция по п.1, где первый и второй LRP6 scFv опосредованно соединены с N- и C-концами человеческого сывороточного альбумина через соединительный линкер, выбранный из группы, состоящей из Fc линкера, шарнирного линкера, Gly-Ser линкера, Ala линкера и KTHT линкера.
6. Выделенная конструкция по п.1, где первый и второй LRP6 scFv непосредственно соединены с N- и C-концами человеческого сывороточного альбумина путем прямого слияния с человеческим сывороточным альбумином.
7. Выделенная конструкция по п.1, где человеческий сывороточный альбумин выбран из группы, состоящей из мутантного человеческого сывороточного альбумина или фрагмента человеческого сывороточного альбумина.
8. Выделенная конструкция по п.7, где мутантный человеческий сывороточный альбумин включает мутации C34S и N503Q.
9. Выделенная конструкция по п.7, где фрагмент человеческого сывороточного альбумина включает по меньшей мере один домен человеческого сывороточного альбумина, выбранный из группы, состоящей из DI, DII, DIII и DIV.
10. Выделенная конструкция по п.1, где scFv фрагмент включает по меньшей мере одну аминокислотную мутацию, которая повышает стабильность scFv по сравнению с немутированным scFv фрагментом, где аминокислотная мутация выбрана из фиг. 32-35.
11. Выделенная конструкция по п. 10, где scFv фрагмент связывается с Пропеллерной областью 1 LRP6 и включает по меньшей мере одну аминокислотную мутацию, которая повышает стабильность scFv по сравнению с немутированным scFv фрагментом, где аминокислотная мутация выбрана из группы, состоящей из S34M и S49A.
12. Выделенная конструкция по п.10, где scFv фрагмент связывается с Пропеллерной областью 3 LRP6 и включает по меньшей мере одну аминокислотную мутацию, которая повышает стабильность scFv по сравнению с немутированным scFv фрагментом, где аминокислотной мутацией является M95F.
13. Выделенная конструкция по п. 10, где scFv фрагмент связывается с Пропеллерной областью 1 LRP6 и включает по меньшей мере одну аминокислотную мутацию, которая повышает стабильность scFv по сравнению с немутированным scFv фрагментом, где аминокислотная мутация выбрана из группы, состоящей из S34M и S49A; и scFv фрагмент, который связывается с Пропеллерной областью 3 LRP6 и включает по меньшей мере одну аминокислотную мутацию, которая повышает стабильность scFv по сравнению с немутированным scFv фрагментом, где аминокислотной мутацией является M95F.
14. Выделенная конструкция по п. 1, где конструкция ингибирует фосфорилирование LRP6 согласно оценке с помощью анализа Wnt-лигандиндуцированного фосфорилирования.
15. Выделенная конструкция по п. 1, где конструкция обладает функциональной активностью истощения популяции клеток, ингибирования или уменьшения пролиферации популяции клеток, ингибирования или уменьшения секреции медиаторов воспаления из популяции клеток, ингибирования или уменьшения секреции цитоплазматических гранул из популяции клеток, где популяция клеток выбрана из группы, состоящей из клеток опухоли и Wnt-зависимых клеток.
16. Выделенная конструкция по п. 1, где конструкция демонстрирует увеличенный приблизительно на 5 ч полупериод существования по сравнению с LRP6-связующей молекулой без удлинителя полупериода существования.
17. Выделенная конструкция на основе белка, родственного липопротеинам низкой плотности, 6(LRP6), содержащая SEQ ID NO: 293 или аминокислотную последовательность, содержащую по меньшей мере 95%-ную идентичность последовательности с SEQ ID NO: 293.
18. Выделенная конструкция на основе белка, родственного липопротеинам низкой плотности, 6(LRP6), содержащая SEQ ID NO: 295 или аминокислотную последовательность, содержащую по меньшей мере 95%-ную идентичность последовательности с SEQ ID NO: 295.
19. Нуклеиновая кислота, содержащая нуклеотидную последовательность, кодирующую конструкцию на основе белка, родственного липопротеинам низкой плотности, 6(LRP6), по п. 1.
20. Нуклеиновая кислота, содержащая нуклеотидную последовательность, кодирующую конструкцию на основе белка, родственного липопротеинам низкой плотности, 6(LRP6), содержащую SEQ ID NO: 293 или нуклеотидную последовательность, содержащую по меньшей мере 98%-ную идентичность последовательности с SEQ ID NO: 293.
21. Нуклеиновая кислота, содержащая нуклеотидную последовательность, кодирующую конструкцию на основе белка, родственного липопротеинам низкой плотности, 6(LRP6), содержащую SEQ ID NO: 295 или нуклеотидную последовательность, содержащую по меньшей мере 98%-ную идентичность последовательности с SEQ ID NO: 295.
22. Вектор, содержащий нуклеиновую кислоту по пп. 19-21.
23. Фармацевтическая композиция, содержащая конструкцию на основе белка, родственного липопротеинам низкой плотности, 6(LRP6), по пп. 1-18 и фармацевтически приемлемый носитель.
24. Способ создания конструкции на основе белка, родственного липопротеинам низкой плотности, 6(LRP6), по п. 1, включающий: (a) получение первой одноцепочечной молекулы Fv, которая связывается с первым сайтом связывания рецептора-мишени LRP6; (b) получение второй одноцепочечной молекулы Fv, которая связывается со вторым сайтом связывания рецептора-мишени LRP6; и (c) прямое или опосредованное соединение первого scFv и второго scFv с молекулой-удлинителем полупериода существования, где конструкция LRP6 ингибирует канонический каскад передачи сигнала Wnt и где конструкция LRP6 не демонстрирует никакого существенного потенцирования сигнала Wnt в присутствии LRP6-связующего белка.
25. Способ лечения заболевания, опосредованного каноническим Wnt-сигнальным каскадом, с применением конструкции на основе белка, родственного липопротеинам низкой плотности, 6(LRP6), по любому из предыдущих пунктов.
26. Способ лечения злокачественного новообразования, включающий отбор субъекта, имеющего LRP6-экспрессирующий рак, посредством введения субъекту, нуждающемуся в этом, эффективного количества композиции, включающей конструкцию на основе белка, родственного липопротеинам низкой плотности, 6(LRP6), по любому из предыдущих пунктов.
27. Способ по п. 26, где субъектом является человек.
28. Способ лечения злокачественного новообразования, включающий отбор субъекта, имеющего LRP6-экспрессирующий рак, посредством введения субъекту, нуждающемуся в этом, эффективного количества композиции, включающей конструкцию на основе белка, родственного липопротеинам низкой плотности, 6(LRP6), по любому из пп. 1-18, где злокачественное новообразование выбрано из группы, состоящей из рака молочной железы, рака легкого, множественной миеломы, рака яичников, рака печени, рака желудка, рака предстательной железы, острого миелоидного лейкоза, хронического миелоидного лейкоза, остеосаркомы, плоскоклеточной карциномы и меланомы.
29. Применение конструкции на основе белка, родственного липопротеинам низкой плотности, 6(LRP6), по любому из пп. 1-18 в производстве лекарственного средства для лечения злокачественного новообразования, выбранного из группы, состоящей из рака молочной железы, рака легкого, множественной миеломы, рака яичников, рака печени, рака желудка, рака предстательной железы, острого миелоидного лейкоза, хронического миелоидного лейкоза, остеосаркомы, плоскоклеточной карциномы и меланомы.
30. Конструкция LRP6 на основе белка, родственного липопротеинам низкой плотности, 6(LRP6), по любому из пп. 1-18 для применения в качестве лекарственного средства.
31. Конструкция на основе белка, родственного липопротеинам низкой плотности, 6(LRP6), имеющая SEQ ID NO: 293, для применения в лечении рака, опосредованного каноническим Wnt-сигнальным каскадом.
32. Конструкция на основе белка, родственного липопротеинам низкой плотности, 6(LRP6), имеющая SEQ ID NO: 295, для применения в лечении рака, опосредованного каноническим Wnt-сигнальным каскадом.
33. Конструкция на основе белка, родственного липопротеинам низкой плотности, 6(LRP6), имеющая SEQ ID NO: 293, для применения в качестве лекарственного средства.
34. Конструкция на основе белка, родственного липопротеинам низкой плотности, 6(LRP6), имеющая SEQ ID NO: 295, для применения в качестве лекарственного средства.