СОПРЯЖЕННЫЙ С G-БЕЛКОМ РЕЦЕПТОР, ИМЕЮЩИЙ ИЗМЕНЕННОЕ СРОДСТВО К ЛИГАНДАМ, И ЕГО ПРИМЕНЕНИЕ

1. Белковый комплекс, включающий рецептор, сопряженный с G-белком, и полипептид,
в котором указанный полипептид представляет собой:
(1) полипептид, имеющий последовательность аминокислот SEQ ID NO: 1;
(2) полипептид (i), который имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO:1 с делецией, вставкой, заменой или добавлением одной или нескольких аминокислот, и (ii) способен изменять сродство к лиганду рецептора, сопряженного с G-белком, с которым указанный полипептид образовал комплекс;
(3) полипептид, кодируемый полинуклеотидом, имеющим последовательность нуклеотидов SEQ ID NO:2;
(4) полипептид (i), кодируемый полинуклеотидом, который имеет последовательность нуклеотидов SEQ ID NO:2 с делецией, вставкой, заменой или добавлением одного или нескольких нуклеотидов, и (ii) способен изменять сродство к лиганду рецептора, сопряженного с G-белком, с которым указанный полипептид образовал комплекс;
(5) полипептид (i), кодируемый полинуклеотидом, способным в жестких условиях гибридизации гибридизоваться с полинуклеотидом, который имеет последовательность, комплементарную последовательности нуклеотидов SEQ ID NO:2, и (ii) способен изменять сродство к лиганду рецептора, сопряженного с G-белком, с которым указанный полипептид образовал комплекс; или
(6) полипептид (i), кодируемый полинуклеотидом, последовательность которого на 70% и более идентична последовательности полинуклеотида, который имеет последовательность нуклеотидов SEQ ID NO:2, и (ii) способен изменять сродство к лиганду рецептора, сопряженного с G-белком, с которым указанный полипептид образовал комплекс.
2. Белковый комплекс по п.1, в котором рецептор, сопряженный с G-белком, представляет собой адренергический рецептор, допаминовый рецептор, мускариновый рецептор или эндотелиновый рецептор.
1
1
3. Белковый комплекс по п.2, в котором адренергический рецептор является α-рецептором или β-рецептором.
1
1A
4. Белковый комплекс по п.3, в котором α-рецептор представляет собой α-рецептор.
5. Белковый комплекс по п.2, в котором допаминовый рецептор представляет собой D2 рецептор.
6. Липидная мембрана, содержащая белковый комплекс по п.1.
7. Способ получения липидной мембраны по п.6, включающий стадию осуществления совместного присутствия рецептора, сопряженного с G-белком, и полипептида на липидной мембране, при этом указанный полипептид представляет собой:
(1) полипептид, который имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO:1;
(2) полипептид (i), который имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO:1 с делецией, вставкой, заменой или добавлением одной или нескольких аминокислот, и (ii) способен изменять сродство к лиганду рецептора, сопряженного с G-белком, с которым указанный полипептид образовал комплекс;
(3) полипептид, кодируемый полинуклеотидом, который имеет последовательность нуклеотидов SEQ ID NO:2;
(4) полипептид (i), кодируемый полинуклеотидом, который имеет последовательность нуклеотидов SEQ ID NO:2 с делецией, вставкой, заменой или добавлением одного или нескольких нуклеотидов, и (ii) способен изменять сродство к лиганду рецептора, сопряженного с G-белком, с которым указанный полипептид образовал комплекс;
(5) полипептид (i), кодируемый полинуклеотидом, способным в жестких условиях гибридизации гибридизоваться с полинуклеотидом, который имеет последовательность, комплементарную последовательности нуклеотидов SEQ ID NO: 2, и (ii) способен изменять сродство к лиганду рецептора, сопряженного с G-белком, с которым указанный полипептид образовал комплекс; или
(6) полипептид (i), кодируемый полинуклеотидом, последовательность которого на 70% или более идентична последовательности полинуклеотида, который имеет последовательность нуклеотидов SEQ ID NO:2, и (ii) способен изменять сродство к лиганду рецептора, сопряженного с G-белком, с которым указанный полипептид образовал комплекс.
8. Трансформант, экспрессирующий белковый комплекс по п.1.
9. Способ получения трансформанта по п.8, включающий стадию совместной экспрессии рецептора, сопряженного с G-белком, и полипептида в клетке, причем указанный полипептид представляет собой:
(1) полипептид, который имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO:1;
(2) полипептид (i), который имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO:1 с делецией, вставкой, заменой или добавлением одной или нескольких аминокислот, и (ii) способен изменять сродство к лиганду рецептора, сопряженного с G-белком, с которым указанный полипептид образовал комплекс;
(3) полипептид, кодируемый полинуклеотидом, который имеет последовательность нуклеотидов SEQ ID NO:2;
(4) полипептид (i), кодируемый полинуклеотидом, который имеет последовательность нуклеотидов SEQ ID NO:2 с делецией, вставкой, заменой или добавлением одной или нескольких аминокислот, и (ii) способен изменять сродство к лиганду рецептора, сопряженного с G-белком, с которым указанный полипептид образовал комплекс;
(5) полипептид (i), кодируемый полинуклеотидом, способным в жестких условиях гибридизации гибридизоваться с полинуклеотидом, который имеет последовательность, комплементарную последовательности нуклеотидов SEQ ID NO:2, и (ii) способен изменять сродство к лиганду рецептора, сопряженного с G-белком, с которым указанный полипептид образовал комплекс; или
(6) полипептид (i), кодируемый полинуклеотидом, последовательность которого на 70% или более идентична последовательности полинуклеотида, который имеет последовательность нуклеотидов SEQ ID NO:2, и (ii) способен изменять сродство к лиганду рецептора, сопряженного с G-белком, с которым указанный полипептид образовал комплекс.
10. Способ изменения сродства к лиганду рецептора, сопряженного с G-белком, включающий стадию осуществления совместного присутствия рецептора, сопряженного с G-белком, и полипептида на липидной мембране, причем указанный полипептид представляет собой:
(1) полипептид, который имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO:1;
(2) полипептид (i) который имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO:1 с делецией, вставкой, заменой или добавлением одной или нескольких аминокислот, и (ii) способен изменять сродство к лиганду рецептора, сопряженного с G-белком, с которым указанный полипептид образовал комплекс;
(3) полипептид, кодируемый полинуклеотидом, который имеет последовательность нуклеотидов SEQ ID NO:2;
(4) полипептид (i), кодируемый полинуклеотидом, который имеет последовательность нуклеотидов SEQ ID NO:2 с делецией, вставкой, заменой или добавлением одной или нескольких аминокислот, и (ii) способен изменять сродство к лиганду рецептора, сопряженного с G-белком, с которым полипептид образовал комплекс;
(5) полипептид (i), кодируемый полинуклеотидом, способным в жестких условиях гибридизации гибридизоваться с полинуклеотидом, который имеет последовательность, комплементарную последовательности нуклеотидов SEQ ID NO:2, и (ii) способен изменять сродство к лиганду рецептора, сопряженного с G-белком, с которым указанный полипептид образовал комплекс; или
(6) полипептид (i), кодируемый полинуклеотидом, последовательность которого на 70% или более идентична последовательности полинуклеотида, который имеет последовательность нуклеотидов SEQ ID NO:2, и (ii) способен изменять сродство к лиганду рецептора, сопряженного с G-белком, с которым указанный полипептид образовал комплекс.
11. Способ скрининга агониста или антагониста рецептора, сопряженного с G-белком, имеющего измененное сродство к лиганду, включающий стадии:
получения белкового комплекса посредством осуществления совместного присутствия рецептора, сопряженного с G-белком, и полипептида на липидной мембране; и
инкубации белкового комплекса с исследуемым фактором,
причем указанный полипептид представляет собой:
(1) полипептид, который имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO:1;
(2) полипептид (i), который имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO:1 с делецией, вставкой, заменой или добавлением одной или нескольких аминокислот, и (ii) способен изменять сродство к лиганду рецептора, сопряженного с G-белком, с которым указанный полипептид образовал комплекс;
(3) полипептид, кодируемый полинуклеотидом, который имеет последовательность нуклеотидов SEQ ID NO:2;
(4) полипептид (i), кодируемый полинуклеотидом, который имеет последовательность нуклеотидов SEQ ID NO:2 с делецией, вставкой, заменой или добавлением одной или нескольких аминокислот, и (ii) способен изменять сродство к лиганду рецептора, сопряженного с G-белком, с которым указанный полипептид образовал комплекс;
(5) полипептид (i), кодируемый полинуклеотидом, способным в жестких условиях гибридизации гибридизоваться с полинуклеотидом, который имеет последовательность, комплементарную последовательности нуклеотидов SEQ ID NO:2, и (ii) способен изменять сродство к лиганду рецептора, сопряженного с G-белком, с которым указанный полипептид образовал комплекс; или
(6) полипептид (i), кодируемый полинуклеотидом, последовательность которого на 70% или более идентична последовательности полинуклеотида, который имеет последовательность нуклеотидов SEQ ID NO:2, и (ii) способен изменять сродство к лиганду рецептора, сопряженного с G-белком, с которым указанный полипептид образовал комплекс.
2+
12. Способ по п.11, дополнительно включающий стадию измерения внутриклеточной концентрации Са или стадию измерения метаболизма внутриклеточного инозитолфосфата.
13. Способ получения трансформанта, экспрессирующего рецептор, сопряженного с G-белком с измененным сродством к лиганду, включающий стадию подавления экспрессии полипептида в клетке, в которой экспрессируется рецептор, сопряженный с G-белком,
причем указанный полипептид представляет собой:
(1) полипептид, который имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO:1;
(2) полипептид (i), который имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO:1 с делецией, вставкой, заменой или добавлением одной или нескольких аминокислот, и (ii) способен изменять сродство к лиганду рецептора, сопряженного с G-белком, с которым указанный полипептид образовал комплекс;
(3) полипептид, кодируемый полинуклеотидом, который имеет последовательность нуклеотидов SEQ ID NO:2;
(4) полипептид (i), кодируемый полинуклеотидом, который имеет последовательность нуклеотидов SEQ ID NO:2 с делецией, вставкой, заменой или добавлением одного или нескольких нуклеотидов, и (ii) способен изменять сродство к лиганду рецептора, сопряженного с G-белком, с которым указанный полипептид образовал комплекс;
(5) полипептид (i), кодируемый полинуклеотидом, способным в жестких условиях гибридизации гибридизоваться с полинуклеотидом, который имеет последовательность, комплементарную последовательности нуклеотидов SEQ ID NO:2, и (ii) способен изменять сродство к лиганду рецептора, сопряженного с G-белком, с которым указанный полипептид образовал комплекс; или
(6) полипептид (i), кодируемый полинуклеотидом, последовательность которого на 70% или более идентична последовательности полинуклеотида, который имеет последовательность нуклеотидов SEQ ID NO:2, и (ii) способен изменять сродство к лиганду рецептора, сопряженного с G-белком, с которым указанный полипептид образовал комплекс.
14. Способ по п.13, отличающийся тем, что указанный полипептид представляет собой эндогенный белок.
15. Способ по п.13, отличающийся тем, что стадию подавления экспрессии полипептида осуществляют способом РНК-интерференции.
16. Способ по п.15, отличающийся тем, что способ РНК-интерференции осуществляют посредством вставки олигонуклеотида, который имеет последовательность нуклеотидов SEQ ID NO:5.
17. Способ по п.13, отличающийся тем, что указанная клетка представляет собой трансформант, экспрессирующий экзогенный рецептор, сопряженный с G-белком.
18. Способ изменения сродства к лиганду рецептора, сопряженного с G-белком, включающий стадию подавления экспрессии полипептида в клетке, в которой экспрессируется указанный рецептор, сопряженный с G-белком,
причем указанный полипептид представляет собой:
(1) полипептид, который имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO:1;
(2) полипептид (i) который имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO:1 с делецией, вставкой, заменой или добавлением одной или нескольких аминокислот, и (ii) способен изменять сродство к лиганду рецептора, сопряженного с G-белком, с которым указанный полипептид образовал комплекс;
(3) полипептид, кодируемый полинуклеотидом, который имеет последовательность нуклеотидов SEQ ID NO:2;
(4) полипептид (i) кодируемый полинуклеотидом, который имеет последовательность нуклеотидов SEQ ID NO:2 с делецией, вставкой, заменой или добавлением одной или нескольких нуклеотидов, и (ii) способен изменять сродство к лиганду рецептора, сопряженного с G-белком, с которым указанный полипептид образовал комплекс;
(5) полипептид (i), кодируемый полинуклеотидом, способным в жестких условиях гибридизации гибридизоваться с полинуклеотидом,
который имеет последовательность, комплементарную последовательности нуклеотидов SEQ ID NO:2, и (ii) способен изменять сродство к лиганду рецептора, сопряженного с G-белком, с которым указанный полипептид образовал комплекс; или
(6) полипептид (i), кодируемый полинуклеотидом, последовательность которого на 70% или более идентична последовательности полинуклеотида, который имеет последовательности нуклеотидов SEQ ID NO:2, и (ii) способен изменять сродство к лиганду рецептора, сопряженного с G-белком, с которым указанный полипептид образовал комплекс.
19. Способ скрининга агониста или антагониста рецептора, сопряженного с G-белком, имеющего измененное сродство к лиганду, включающий стадии:
подавления экспрессии полипептида в клетке, в которой экспрессируется рецептор, сопряженный с G-белком; и
инкубации указанной клетки совместно с исследуемым фактором,
причем указанный полипептид представляет собой:
(1) полипептид, который имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO:1;
(2) полипептид (i), который имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO:1 с делецией, вставкой, заменой или добавлением одной или нескольких аминокислот, и (ii) способен изменять сродство к лиганду рецептора, сопряженного с G-белком, с которым указанный полипептид образовал комплекс;
(3) полипептид, кодируемый полинуклеотидом, который имеет последовательность нуклеотидов SEQ ID NO:2;
(4) полипептид (i), кодируемый полинуклеотидом, который имеет последовательность нуклеотидов SEQ ID NO:2 с делецией, вставкой, заменой или добавлением одной или нескольких нуклеотидов, и (ii) способен изменять сродство к лиганду рецептора, сопряженного с G-белком, с которым указанный полипептид образовал комплекс;
(5) полипептид (i), кодируемый полинуклеотидом, способным в жестких условиях гибридизации гибридизоваться с полинуклеотидом,
который имеет последовательность, комплементарную последовательности нуклеотидов SEQ ID NO:2, и (ii) способен изменять сродство к лиганду рецептора, сопряженного с G-белком, с которым указанный полипептид образовал комплекс; или
(6) полипептид (i), кодируемый полинуклеотидом, последовательность которого на 70% или более идентична последовательности полинуклеотида, который имеет последовательность нуклеотидов SEQ ID NO:2, и (ii) способен изменять сродство к лиганду рецептора, сопряженного с G-белком, с которым указанный полипептид образовал комплекс.
2+
20. Способ по п.19, дополнительно включающий стадию измерения концентрации внутриклеточного Са или стадию измерения метаболизма внутриклеточного инозитолфосфата.