Анализ экспрессии генов в штамме, мутантном по жизненно важному гену sup45, в условияхголодания по азоту

А. В. Петрова, А. Дагкесаманская, С. Сокол, Г. А. Журавлева

АНАЛИЗ ЭКСПРЕССИИ ГЕНОВ В ШТАММЕ,

МУТАНТНОМ ПО ЖИЗНЕННО ВАЖНОМУ ГЕНУ SUP45,

В УСЛОВИЯХ ГОЛОДАНИЯ ПО АЗОТУ*

Введение

Многочисленные исследования процесса терминации трансляции и участвующих в ней белковых факторов у дрожжей показали плейотропность проявления мутаций в генах, кодирующих факторы терминации трансляции eRF1 и eRF3. У дрожжей Sac-charomyces cerevisiae эти факторы кодируются жизненно важными генами SUP4-5 и SUP35 [8, 15]. В то же время оказалось возможным получить жизнеспособные мутанты по этим генам, хотя полученные штаммы характеризовались пониженной жизнеспособностью и высоким уровнем нонсенс-супрессии [2, 21]. Мутанты sup45 и sup35 также могут проявлять температуро- и осмочувствительность, полную или частичную дыхательную некомпетентность, чувствительность к беномилу, действующему на микротрубочки, повышенную чувствительность к аминогликозидным антибиотикам [13]. В большинстве случаев механизм возникновения мутантного фенотипа неизвестен, формируется ли он вследствие накопления белковых фрагментов из-за нарушения работы терминационного комплекса или связан с участием белков Sup45 и Sup35 в клеточных процессах, не взаимодействующих непосредственно с терминацией трансляции. К настоящему моменту выявлена взаимосвязь факторов терминации трансляции с цитоскелетом. С использованием двугибридной системы было показано, что белок Sup35 взаимодействует с фактором элонгации EF-2, белками Reg1 и Eno2, участвующими в метаболизме глюкозы, и белком Sla1, участвующем в сборке кортикальных микрофи-ламентов [5]. Валуев и соавторы показали прямое взаимодействие белка Sup45 (eRF1) с белком Mlc1, представляющим собой легкую цепь миозина [24].

В лаборатории физиологической генетики кафедры генетики и селекции СПбГУ была получена коллекция мутантных аллелей sup45 [21]. Полученные мутации не приводили к летальности штамма в отсутствие аллели гена SUP4-5 дикого типа. В дальнейшем было обнаружено, что диплоидные штаммы дрожжей, несущие как нонсенс, так и миссенс-аллели sup45, теряют способность к псевдогифальному росту. У дрожжей S. cerevisiae в диплоидном состоянии переход от дрожжевой формы роста к фи-ламентозной характеризуется образованием ветвящихся цепочек клеток удлиненной формы, или псевдогиф, врастающих в субстрат, на котором растет колония. Переход к псевдогифальному росту индуцируется в условиях недостатка азота и при наличии доступного источника углерода. Внешний сигнал, природа которого в настоящее время неизвестна, запускает сигнальный каскад, активирующий экспрессию генов семейства FLO. Гены FLO репрессированы в нормальных условиях и кодируют гликопротеины клеточной стенки, необходимые для межклеточных контактов и адгезии к субстрату. Ген FLO11 (MUC1) играет ключевую роль в псевдогифальном росте у диплодных и в адгезивном росте у гаплоидных штаммов [16]. Его промотор является одним из самых

* Работа выполнена при поддержке РФФИ (грант № 07-04-00605-а), а также НШ-197.2008.4, ГК 02.512.12.2009 и FEMS.

© А. В. Петрова, А. Дагкесаманская, С. Сокол, Г. А. Журавлева, 2009

протяженных в геноме дрожжей S. cerevisiae и содержит большое количество сайтов связывания транскрипционных факторов, многие из которых перекрываются. Это отражает многообразие регуляторных механизмов, определяющих форму роста дрожжей в зависимости от условий внешней среды.

Одним из наиболее значимых регуляторов экспрессии гена FLO11 является транскрипционный фактор Flo8 [22]. Штамм S288C, использованный при секвенировании генома дрожжей S. cerevisiae, содержит замену в кодирующем его гене, приводящую к образованию стоп-кодона в открытой рамке считывания [18]. Отсутствие полноразмерного белка Flo8 и, как следствие, отсутствие экспрессии генов семейства FLO, делает штамм S288C непригодным для изучения псевдогифального и адгезивного роста. Для исследований в этом направлении наиболее широко используются штаммы, имеющие генотипический фон £ 1278b [17]. Первоначально фенотип, связанный с нарушением способности к псевдогифальному росту, был обнаружен на штаммах Петергофских генетических линий. Штаммы ПГЛ характеризуются генотипическим фоном отличным от штаммов S288C и J^1278b, и в то же время не содержат замены в последовательности гена FLO8. По сравнению с генотипическим фоном 1278b штаммы ПГЛ обладают более низкой способностью к образованию псевдогиф, что может говорить о более низком уровне экспрессии гена FLO11. Это предположение подтверждается тем фактом, что у гаплоидных штаммов ПГЛ отсутствует способность к адгезивному росту, также обусловленному экспрессией гена FLO11.

В настоящее время нет каких-либо сведений о взаимодействии компонентов терми-национного комплекса с белками семейства Flo или с белками, отвечающими за регуляцию экспрессии кодирующих их генов. Можно предположить, что присутствие мутантной аллели sup45 приводит к изменению экспрессии гена или генов, вовлеченных в регуляцию псевдогифального роста. Для проверки этого предположения был применен анализ транскрипционного профиля у штаммов, содержащих мутантную аллель либо аллель SUP4-5 дикого типа, в условиях индукции псевдогифального роста.

Материалы и методы исследования

Штаммы. В работе использован штамм Д1667 Петергофских генетических линий [3]. Штамм гомозиготен по дизрупции гена SUP4-5 и содержит мутантную аллель или аллель дикого типа на компенсирующей центромерной плазмиде. Использованная в работе мутантная аллель sup45-103 содержит замену L62^S [2]. Генотипы штаммов представлены в табл. 1.

Таблица 1. Генотипы штаммов, использованных в работе

Штамм Генотип Происхождение

D1667 МАТа/а 1еи2 игаЗ SUP45::HIS3 [pRSol 5/SUP45] pRS316 ПГЛ

D1667 MATa/a leu2 uraS SUP45::HIS3 [pRS315/sup45-103] pRS316 ПГЛ

Среды и условия культивирования. Для культивирования дрожжей использовали стандартные среды, применяемые при работе с дрожжами-сахаромицетами: полную среду YPD, минимальную MD на основе YNB [1, 23]. Для индукции псевдогифального роста использовали среду SLAD [11]. Штаммы выращивали при температуре

30°а

Методы. Штамм, несущий мутантную аллель или аллель гена БПР^З дикого типа, выращивали параллельно в жидкой минимальной среде и среде SLAD до плотно-

сти OD600 ^0,6. Полученные культуры использовали для выделения тотальной РНК при помощи Qiagen RNeasy Mini Kit (Qiagen, France) согласно рекомендациям производителя. Количество РНК измеряли спектрофотометрически при длине волны 260 и 280 нм. Чистоту РНК определяли на приборе Agilent 2100 Bioanalyzer (Agilent Technologies, France). РНК использовали в качестве матрицы для обратной транскрипции. Полученную кДНК метили красителями cyanine 3-dCTP и cyanine 5-dCTP и использовали для анализа (http://biopuce.insa-toulouse.fr/protocoles.php). Для каждого штамма было сделано по две независимых повторности. Статистическую обработку данных проводили с использованием программного обеспечения BioPlot (http://biopuce.insa-toulouse.fr/ExperimentExplorer/doc/). Первый отбор генов проводили по ratio 1,5, второй— по тесту Стьюдента с уровнем значимости 0,05.

Результаты исследования и их обсуждение

В данной работе был предпринят транскрипционный анализ двух штаммов, несущих разные аллели гена SUP45, с целью выявления возможной роли фактора термина-ции трансляции Sup45 в регуляции экспрессии генов при переходе к псевдогифальному росту у дрожжей. На фоне аллели дикого типа выявлено изменение экспрессии 350 генов, из которых 230 продемонстрировали снижение уровня экспрессии и 120 —увеличение уровня экспрессии. На фоне мутантной аллели sup45-103 экспрессия изменилась у 245 генов, из которых 139 продемонстрировали снижение уровня экспрессии, и 106 — увеличение уровня экспрессии (рисунок).

SUP 4 5 SUP45-103

Сравнение списка генов, экспрессия которых изменилась в условиях азотного голодания у штамма Д1667, несущего аллель SUP45 или мутантную аллель sup45-103.

Для каждого штамма представлено число генов, уровень экспрессии которых изменился у первого, но не изменился у второго штамма. В перекрывающейся зоне приведено число генов, экспрессия которых изменилась у обоих штаммов.

Изменение экспрессии генов в ответ на дефицит азота в среде. Изменение транскрипционных профилей обоих штаммов отражает адаптивную реакцию дрожжей на дефицит необходимых компонентов среды. Общим для обоих штаммов оказалось повышение уровня экспрессии семейства генов HXT, кодирующих транспортеры гексозы. Увеличилась экспрессия генов, чьи продукты вовлечены в процессы гликолиза, синтеза АТФ и аэробное дыхание. Для обоих штаммов также было характерно увеличение уровня экспрессии генов, кодирующих пермеазы и транспортеры азота, аминокислот и других азотсодержащих соединений, и одновременное снижение экспрессии генов, участвующих в биосинтезе аминокислот. Несмотря на отсутствие способности к псевдогифальному росту у мутанта sup45-103, в нем, как и в штамме дикого типа, наблюдали изменение экспрессии генов, участвующих в регуляции псевдогифального роста — PAM1 и DLD3. Точная функция продукта гена PAM1 на данный момент неизвестна, а его сверхэкспрессия вызывает образование филаментов. Ген DLD3 кодирует D-лактат дегидрогеназу, его экспрессия чувствительна к источнику азота.

Изменение экспрессии генов в штамме с мутантной аллелью sup45—103. При анализе профилей транскрипции у штамма, несущего аллель SUP4-5 дикого типа, и штамма с мутантной аллелью sup45-103 был выявлен ряд генов, экспрессия которых изменилась только в мутантном штамме. Наиболее интересные для рассмотрения гены представлены в табл. 2.

В штамме с мутантной аллелью sup45-103 наблюдается изменение экспрессии генов, вовлеченных в разнообразные клеточные процессы. Многие из этих генов в норме индуцируются в ответ на стресс, что может отражать накопление аномально длинных пептидов в результате нарушения терминации трансляции. Обращает на себя внимание снижение экспрессии ряда генов, чьи продукты вовлечены в контроль сегрегации хромосом, а также типа почкования и морфогенез. Ранее было показано, что мутанты по гену SUP4-5 демонстрируют нестабильность хромосом [7] и нарушение биполярного типа почкования у диплоидов (неопубликованные данные). Возможно, причиной этих дефектов является недостаточная экспрессия генов DAD2, BUD2 и HYM1. Некоторые из выявленных генов, демонстрирующих снижение уровня экспрессии, кодируют компоненты клеточной стенки или ферменты, участвующие в биосинтезе GPI-якоря. Нормальное функционирование этих белков необходимо при переходе к псевдогифальному росту.

Примечательным является изменение экспрессии гена ECM32 (MTT1), который кодирует ДНК-зависимую ДНК-геликазу, взаимодействующую с фактором терминации трансляции eRF3 [9]. Экспрессия гена ECM32 в штамме, несущем мутантную аллель sup45-103, возросла в 1,7 раза в условиях дефицита азота, в то время как в штамме дикого типа она осталась без изменений. Сверхэкспрессия гена ECM32 приводит к повышению уровня нонсенс-супрессии, что позволяет предположить роль его продукта в регуляции точности терминации трансляции. В то же время не исключено, что изменение экспрессии гена ECM32 в присутствии мутантной аллели гена SUP45 не зависит от источника азота.

Особый интерес представляет ген DAL80, кодирующий негативный регулятор генов, участвующих в различный путях метаболизма азота [19]. Его продукт связывается с ТАТА-последовательностями в промоторе генов, подверженных азотной ката-болитной репрессии. Можно предположить, что мутация в факторе терминации eRF1 изменяет уровень трансляции мРНК гена DAL80 и, соответственно, количество белка в цитоплазме. Это, в свою очередь, может модулировать экспрессию генов, отвечающих за определение качества источника азота и его утилизацию. В таком случае может нарушаться способность штамма определять количество и качество источника азота в среде, и, как следствие, не будет индуцироваться псевдогифальный рост.

Таким образом, было выявлено около 100 генов, уровень экспрессии которых в условиях азотного голодания различается в зависимости от того, какая аллель гена SUP45 присутствует в штамме.

Идентификация генов, экспрессия которых не изменена у мутантного штамма по сравнению со штаммом дикого типа. Для того чтобы выявить возможные нарушения в путях сигнальной трансдукции, мы проанализировали, экспрессия каких генов изменилась в штамме дикого типа и не изменилась у мутантного штамма. Некоторые гены из этого списка представлены в табл. 3.

Наиболее вероятными кандидатами, отвечающими за нарушение псевдогифально-го роста, являются гены PKC1 и SIT4. Ген SIT4 кодирует фосфатазу семейства РРР, вовлеченную в различные клеточные процессы, в том числе в систему ответа на со-

Ген* Функция Соотношение**

SUP4-5 sup45-103

ENA1 Транспорт ионов К+; ответ на глюкозное голодание, гиперос-мотический стресс — 2,2

ENA2 Транспорт ионов Na+; ответ на глюкозное голодание, гиперо-смотический стресс — 1,89

SHY1 Компонент внутренней мембраны митохондрии, предположительно участвует в сборке цитохром С оксидазы — 2,12

GAC1 Регуляторная субъединица фосфатазы Glc7, необходима для транскрипции ряда генов в условиях температурного шока 1,01 1,86

DAL80 Негативный регулятор генов во многих путях деградации азота; экспрессия регулируется уровнем азота и Gln3; относится к семейству GATA-связывающих белков 1,26 1,8

ЕСМ32/МТТ1 ДНК-зависимая АТФаза/ДНК геликаза, вовлеченная в регуляцию терминации трансляции 1,06 1,72

OST5 Зета субъединица олигосахарил-трансферазного комплекса в просвете ЭР; катализирует гликозилирование новосинтезиро-ванных белков 1,0 1,69

GAD1 Глутамат декарбоксилаза, превращает глутамат в гамма-ами-нобутировую кислоту (GABA); вовлечена в ответ на оксида-тивный стресс 1,71

MSS11 Транскрипционный фактор, вовлеченный в регуляцию инвазивного роста и деградацию крахмала; контролирует активацию FL011 и STA2 в ответ на сигналы среды 1,17 1,59

FZOl Компонент внутренней мембраны митохондрий, вовлеченный в слияние митохондрий и поддержание митохондриального генома 0,98 1,53

SED1 Основной стресс-индуцируемый структурный GPI гликопротеин клеточной стенки, ассоциированный с транслирующими рибосомами; предполагается роль в поддержании митохондриального генома 0,99 1,5

MSG5 Фосфатаза с двойной специфичностью, необходимая для поддержания низкого уровня сигналинга в пути, обеспечивающем целостность клетки; регулирует и регулируется Slt2 1,1 0,66

BUD 2 Фактор, необходимый для аксиального и биполярного типа почкования 1,6 0,64

HYM1 Компонент сигнальной сети RAM, вовлеченной в регуляцию клеточного морфогенеза; локализован в сайтах полярного роста в ходе почкования и ответа на феромоны 0,62

HSP82 Цитоплазматический шаперон семейства Hsp90, необходимый для сигналинга, опосредованного феромонами и негативной регуляции Hsfl 0,58

DAD2 Необходимая субъединица Daml комплекса, обеспечивающая передачу кинетохорам энергии от деполиверизации микротрубочек, способствует сегрегации хромосом 1,0 0,57

ARV1 Белок, необходимый для нормального распределения стерола и метаболизма сфинголипидов 1,47 0,51

GPI1 Мембранный белок, вовлеченный в синтез N-ацетилглюкоза-мил фосфатидилинозитола, первого интермедиата в пути биосинтеза GPI якоря 0,81 0,5

* Использована информация с сайта www.yeastgenome.org.

** Представлено соотношение уровня экспрессии гена в индуцибельных (среда 8ЬАО) и неинду-цибельных (среда МО с YNB) условиях. Приведены данные для штамма дикого типа (контроль) и штамма с мутантной аллелью впр45-103.

Биологический процесс Функция* Соотношение* *

SUP4 5 sup45-103

Организация актиновых фила-ментов, организация клеточной стенки РКС1 Серин-треониновая киназа 1,81 1,36

SIT4 Серин-треониновая фосфатаза 1,7 1,23

Организация митохондрии MDM10 Субъединица ЭАМ комплекса 2,51 0,95

Образование везикул, Транспорт: цитоплазма—вакуоль ATG2 Периферический мембранный белок 3,51 0,84

Транспорт ЭПР —> Гольджи ЕМР46 Компонент мембраны везикул ЭПР 2,01 1,07

RER2 Фермент синтеза долихола 1,5 0,86

Синтез белка TUF1 Митохондриальный фактор элонгации трансляции 1,54 1,02

Регуляция клеточного цикла SIC1 Ингибитор Сс1с28-С1Ь киназного комплекса 1,72 0,98

SKM1 Серин-треониновая киназа 1,52 1,18

Другие процессы FIP1 Процессинг мРНК 1,7 1,04

CAF17 Усвоение железа 1,65 0,85

SMY1 Экзоцитоз 1,63 1,1

UBC11 У биквитинирование 1,58 1,05

CDC54 Геликаза 1,51 0,85

STR2 Метаболизм серы 1,51 0,93

Организация актиновых филаментов YSC84 Организация актинового цитоскелета 0,66 1,19

SRV2 Субъединица аденилил-циклазного комплекса 0,65 1,19

COF1 Кофилин, деполимеризация актиновых фламентов 0,62 0,88

Организация клеточной стенки CIS3 Компонент клеточной стенки 0,66 1,05

GAS1 Бета-1,3-глюканозилтрансфераза 0,59 0,79

ЕСМ27 Функция неизвестна 0,41 —

Синтез белка RPS19A Белок малой субъединицы рибосомы 0,66 0,82

MRPL32 Белок большой субъединицы 0,65 1,01

РТН1 михондриальной рибосомы Митохондриальная пептидил-тРНК 0,64 0,92

TEF2 гидролаза Фактор элонгации трансляции Г’Г-ЬПрЬн 0,63 1,01

GCD7 Бета субъединица фактора инициации 0,63 0,94

RSM26 трансляции е| \ '2\’> Белок малой субъединицы 0,59 0,93

RPL5 михондриальной рибосомы Белок большой субъединицы рибосомы 0,56 0,88

Биогенез рибосом HOG1 Предположительно ГТФаза 0,58 1,01

Ответ на стресс TIR1 Маннопротеин клеточной стенки 0,61 0,98

SSA2 Шаперон семейства 11вр70 0,59 0,87

Биосинтез аминокислот

РШ2 Фермент биосинтеза пролина 0,61 0,79

МЕТ6 Фермент биосинтеза метионина 0,51 0,78

МЕТ32 Регуляция биосинтеза метионина 0,66 0,91

Регуляция клеточного цикла

эсл Ко-шаперон, вовлеченный в сборку 0,54 —

СБС40 кинетохорного комплекса Пре-мРНК сплайсинг фактор 0,53 _

УНР1 ЕЭА1 Репрессор транскрипции Каталитическая субъединица ацетилтрансферазы гистона 0,53 0,53 0,88 0,91

АСЕ2 Транскрипционный фактор 0,45

Ответ на нарушение фолдинга белков

01Ш1 Белок, необходимый для устойчивости к агентам, вызывающим нарушение фолдинга 0,66 1,35

Другие РН05 Репрессибельная фосфатаза 0,66 1,27

РЯР4 Сплайсинг 0,58 1,1

* Использована информация с сайта www.yeastgenome.org.

** Представлено соотношение уровня экспрессии гена в индуцибельных (среда SLAD) и неинду-цибельных (среда MD с YNB) условиях. Приведены данные для штамма дикого типа (контроль) и штамма с мутантной аллелью sup45-103.

став среды TOR [6]. Кроме того, Sit4 регулирует организацию актинового цитоскелета и функционирует при переходе клетки из G1 в S фазу [20]. Киназа Pkc1 функционирует в PKC1-MAPK киназном каскаде, обеспечивая передачу сигналов, влияющих на клеточную стенку [10]. Также этот комплекс осуществляет контроль почкования [25] и синтеза клеточной стенки через регуляцию экспрессии генов, кодирующих компоненты клеточной стенки [14], и организацию актинового цитоскелета [12]. Sit4 контролирует работу модуля PKC1-MAPK в течение клеточного цикла [4]. Возможно, изменение экспрессии кодирующих их генов дестабилизирует клеточную стенку и/или изменяет организацию актинового цитоскелета, что может прямо влиять на способность штамма к псевдогифальному росту.

Также можно отметить, что в штамме с мутантной аллелью sup45-103 в меньшей степени по сравнению со штаммом дикого типа снижается экспрессия генов, вовлеченных в синтез белка и ряда аминокислот, что является ответом клетки на дефицит азота. Это также может свидетельствовать о нарушении способности штамма оценивать количество источника азота в среде. Альтернативным объяснением этого факта может быть повышение уровня синтеза белка в присутствии мутантного фактора термина-ции трансляции для увеличения выхода функциональных белков. Это предположение согласуется с меньшим снижением экспрессии генов, кодирующих шапероны и белки, участвующие в ответе на стресс. Не исключено, что в клетке в состоянии «ответа на стресс» блокируются некоторые сигнальные пути, в том числе регулирующие псевдо-гифальный рост.

Проведенный анализ показал, что на фоне мутантной аллели гена SUP45 изменяется профиль экспрессии ряда генов, что выражается в том числе в отсутствии экспрессии в условиях, являющихся индуцибельными. Участие выявленных генов в различных клеточных процессах свидетельствует о необходимости поддержания высокого уровня

точности трансляции для сохранения способности клетки к адекватному ответу на изменения внешней среды.

В настоящее время нет данных, позволяющих объяснить изменение экспрессии генов в присутствии мутантного фактора терминации трансляции. Работа в этом направлении будет продолжена с целью более тщательного определения уровня экспрессии ряда генов, выявленных в данной работе, и идентификации их возможной взаимосвязи с аппаратом трансляции и регуляцией псевдогифального роста.

Литература

1. Захаров И. А. Сборник методик по генетике дрожжей-сахаромицетов. Л., 1984. 143 с.

2. Москаленко С.Е., Журавлева Г. А., Соом М. Я., Шабельская С. В., Волков К. В., Землянко О. М., Филипп М., Миронова Л. Н., Инге-Вечтомов С. Г. Характеристика миссенс-мута-ций в гене SUP45 дрожжей Saccharomyces cerevisiae, кодирующем фактор терминации трансляции eRF1 // Генетика. 2004. Вып. 40 (№5). C. 599-606.

3. Andrianova V. M., Samsonova M. G., Sopova Y. V., Inge-Vechtomov S. G. Catalogue of Pe-terhof Genetic Collection of yeast Saccharomyces cerevisiae. St. Petersburg, 2003. 31 p.

4. Angeles de la Torre-Ruiz M., Torres J., Arino J., Herrero E. Sit4 is required for proper modulation of the biological functions mediated by Pkc1 and the cell integrity pathway in Saccharomyces cerevisiae // J. Biol. Chem. 2002. Vol. 277, N36. P. 33468-33476.

5. Bailleul P. A., Newnam G. P., Steenbergen J. N., Chernoff Y. O. Genetic study of interactions between the cytoskeletal assembly protein Sla1 and prion-forming domain of the release factor Sup35 (eRF3) in Saccharomyces cerevisiae // Genetics. 1999. Vol. 153. P. 81-94.

6. Beck T., Hall M. N. The TOR signaling pathway controls nuclear localization of nutrient-regulated transcription factors // Nature. 1999. Vol. 402, N6762. P. 689-92.

7. Borchsenius A. S., Tchourikova A. A. and Inge-Vechtomov S. G. Recessive mutations in SUP35 and SUP45 genes coding for translation release factors affect chromosome stability in Sac-charomyces cerevisiae // Curr. Genet. 2000. Vol. 37. P. 285-291.

8. Breining P., Piepersberg W. Yeast omnipotent suppressor SUP1 (SUP45): nucleotide sequence of the wild-type and a mutant gene // Nucl. Acids Res. 1986. Vol. 14. P. 5187-5197.

9. Czaplinski K., Majlesi N., Banerjee T., Peltz S. W. Mtt1 is a Upf1-like helicase that interacts with the translation termination factors and whose overexpression can modulate termination efficiency // RNA. 2000. Vol. 6. P. 730-743.

10. Delley P. A. and Hall M. N. Cell wall stress depolarizes cell growth via hyperactivation of RHO1 // J. Cell Biol. 1999. Vol. 147, N1. P. 163-174.

11. Gimeno C. J., Ljungdahl P. O., Styles C. A., Fink G. R. Unipolar cell divisions in the yeast S. cerevisiae lead to filamentous growth: regulation by starvation and RAS // Cell. 1992. Vol. 68. P. 1077-1090.

12. Helliwell S.B., Schmidt A., Ohya Y., Hall M. N. The Rho1 effector Pkc1, but not Bni1, mediates signalling from Tor2 to the actin cytoskeleton // Curr Biol. 1998. Vol. 8, N22. P. 12111214.

13. Inge-Vechtomov S., Zhouravleva G., Philippe M. Eukaryotic release factors (eRFs) history // Biol. Cell. 2003. Vol. 95, N3-4. P. 195-209.

14. Ketela P., Green R., Bussey H. Saccharomyces cerevisiae mid2p is a potential cell wall stress sensor and upstream activator of the PKC1-MPK1 cell integrity pathway // J. Bacteriol. 1999. Vol. 181. N11. P. 3330-3340.

15. Kushnirov V. V., Ter-Avanesyan M.D., Telckov M. V., Surguchov A. P., Smirnov V.N., Inge-Vechtomov S. G. Nucleotide sequence of the SUP2 (SUP35) gene of Saccharomyces cerevisiae // Gene. 1988. Vol. 66. P. 45-54.

16. Lambrechts M. G., Bauer F. F., Marmur J., Pretorius I. S. Muc1, a mucin-like protein that is regulated by Mss10, is critical for pseudohyphal differentiation in yeast // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1996. Vol. 93, N16. P. 8419-8424.

17. Liu H., Styles C. A., Fink G. R. Elements of the yeast pheromone response pathway required for filamentous growth of diploids // Science. 1993. Vol. 262, N 5140. P. 1741-1744.

18. Liu H., Styles C.A., Fink G. R. Saccharomyces cerevisiae S288C has a mutation in FLO8, a gene required for filamentous growth // Genetics. 1996. Vol. 44, N 3. P. 967-978.

19. Magasanik B. and Kaiser C. A. Nitrogen regulation in Saccharomyces cerevisiae // Gene. 2002. Vol. 290, N 1-2. P. 1-18.

20. Mann D. J., Dombradi V., Cohen P. T. Drosophila protein phosphatase V functionally complements a SIT4 mutant in Saccharomyces cerevisiae and its amino-terminal region can confer this complementation to a heterologous phosphatase catalytic domain // EMBO J. 1993. Vol. 12. P. 4833-4842.

21. Moskalenko S.E., Chabelskaya S. V., Inge-Vechtomov S. G., Philippe M., Zhouravleva G. A. Viable nonsense mutants for the essential gene SUP45 of Saccharomyces cerevisiae [Electronic resource] // BMC Mol. Biol. 2003. Vol. 4:2. BioMed Central Ltd., 1999-2009. URL: http://www.biomedcentral.com/1471-2199/4/2 (дата обращения: 14.11.2008).

22. Rupp S., Summers E., Lo H. J., Madhani H., Fink G. MAP kinase and cAMP filamentation signaling pathways converge on the unusually large promoter of the yeast FLO11 gene // EMBO J. 1999. Vol. 18, N5. P. 1257-1269.

23. Sherman F., Fink G. R., Hicks J. B. Methods in yeast genetics. Cold Spring Harbor: New-York, 1986. 367 p.

24. Valouev I. A., Urakov V.N., Kochneva-Pervukhova N. V., Smirnov V.N., Ter-Avanesyan M. D. Translation termination factors function outside of translation: yeast eRF1 interacts with myosin light chain, Mlc1p, to effect cytokinesis // Mol. Microbiol. 2004. Vol. 53. P. 687-696.

25. Zarzov P., Mazzoni C., Mann C. The SLT2 (MPK1) MAP kinase is activated during periods of polarized cell growth in yeast // EMBO J. 1996. Vol. 15, N 1. P. 83-91.

Статья поступила в редакцию 31 июня 2009 г.