ПОЛИПЕПТИДНЫЙ АНТАГОНИСТ

1. Молекула нуклеиновой кислоты, содержащая последовательность, представленную в SEQ ID NO:1, которая кодирует полипептид, представленный в SEQ ID NO:2, где аминокислотная последовательность модифицирована так, что она включает аминокислотную вставку, делецию или замену аминокислотного остатка 176.
2. Молекула нуклеиновой кислоты, содержащая последовательность, представленную в SEQ ID NO:1, которая кодирует полипептид, представленный в SEQ ID NO:2.
3. Молекула нуклеиновой кислоты по п.1, которая кодирует полипептид, содержащий аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO:9.
4. Молекула нуклеиновой кислоты по любому из пп.1 или 2, которая кодирует полипептидный антагонист гормона роста.
5. Полипептид, содержащий аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO:2, которая была модифицирована посредством вставки, делеции или замены по меньшей мере одного аминокислотного остатка, причем указанная модификация включает аминокислотный остаток 176, и указанный полипептид представляет собой антагонист рецептора гормона роста.
6. Полипептид по п.5, модифицированный посредством замены глицина в положении 176 аминокислотой, выбранной из группы, состоящей из гистидина, аспарагиновой кислоты, валина, аргинина, аланина, лизина, триптофана, тирозина, фенилаланина и глутаминовой кислоты.
7. Полипептид по п.6, где остаток глицина 176 заменен аргинином, либо лизином, либо аланином.
8. Полипептид по п.7, где указанная модификация представляет собой замену глицина аргинином.
9. Полипептид по п.5, представленный аминокислотной последовательностью в SEQ ID NO:9.
10. Полипептид по пп.5, который соединен со вторым полипептидом, содержащим внеклеточный связывающий домен рецептора гормона роста.
11. Полипептид по п.10, где указанный второй полипептид состоит из внеклеточного домена рецептора гормона роста.
12. Полипептид по п.11, где указанный второй полипептид состоит из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO:4.
13. Полипептид по п.11, где указанный внеклеточный домен представляет собой домен А внеклеточного домена рецептора гормона роста, состоящий из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO:5.
14. Полипептид по п.11, где указанный внеклеточный домен представляет собой домен В внеклеточного домена рецептора гормона роста, состоящий из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO:6.
15. Слитый полипептид, содержащий по меньшей мере два полипептида по любому из пп.5-9, соединенных в тандем.
16. Слитый полипептид по п.15, который состоит из двух полипептидов, соединенных в тандем.
17. Слитый полипептид, содержащий совокупность полипептидов по любому из пп.5-9.
18. Слитый полипептид по любому из пп.10, 15 или 17, где указанные полипептиды соединены вместе посредством пептидной линкерной молекулы.
19. Слитый полипептид по п.18, где указанная пептидная линкерная молекула представляет собой гибкий пептидный линкер.
20. Слитый полипептид по п.18, где линкер представляет собой пептид, который состоит из 5-30 аминокислотных остатков.
21. Слитый полипептид по п.20, где пептидный линкер состоит из 10-20 аминокислотных остатков.
22. Слитый полипептид по п.18, где линкер содержит по меньшей мере одну копию пептида
Gly-Gly-Gly-Gly-Ser (обозначаемого как Gly4Ser) (SEQ ID NO:3).
23. Слитый полипептид по п.22, где пептидный линкер имеет 10 аминокислот в длину и содержит две копии Gly4Ser.
24. Слитый полипептид по п.22, где пептидный линкер имеет 15 аминокислот в длину и содержит три копии Gly4Ser.
25. Слитый полипептид по п.22, где пептидный линкер имеет 20 аминокислот в длину и содержит четыре копии линкера Gly4Ser.
26. Слитый полипептид, содержащий по меньшей мере два полипептида по любому из пп.5-9, причем указанный полипептид дополнительно содержит по меньшей мере один внеклеточный связывающий домен рецептора гормона роста.
27. Слитый полипептид по п.26, который состоит из двух полипептидов по любому из пп.5-9 и одного внеклеточного связывающего домена рецептора гормона роста.
28. Химерный слитый полипептид, содержащий полипептид по любому из пп.5-9, соединенный либо непосредственно, либо опосредованно с полипептидом пролактина.
29. Химерный слитый полипептид по п.28, где указанный полипептид пролактина содержит аминокислотную последовательность, которая модифицирована в положении 129 человеческого пролактина, как представлено в SEQ ID NO 7, или эквивалентную аминокислоту в альтернативном полипептиде пролактина.
30. Химерный слитый полипептид по п.29, где указанная модификация в положении 129, как представлено в SEQ ID NO:7, является аминокислотной заменой.
31. Химерный слитый полипептид по п.30, где указанная замена представляет собой замену аминокислотного остатка глицина аминокислотным остатком аргинина.
32. Химерный слитый полипептид по п.28, где указанный полипептид пролактина дополнительно содержит делеции по меньшей мере 9, 10, 11, 12, 13 или 14 аминоконцевых аминокислотных остатков.
33. Химерный слитый полипептид по п.29, где указанный полипептид дополнительно содержит лиганд-связывающий домен цитокинового рецептора.
34. Химерный слитый полипептид по п.33, где указанный цитокиновый рецептор содержит внеклеточный связывающий домен рецептора гормона роста.
35. Химерный слитый полипептид по п.34, где указанный цитокиновый рецептор содержит внеклеточный связывающий домен рецептора пролактина.
36. Химерный слитый полипептид по п.34, где указанный цитокиновый рецептор состоит из внеклеточного домена рецептора гормона роста.
37. Химерный слитый полипептид по п.35, где указанный цитокиновый рецептор состоит из внеклеточного домена рецептора пролактина.
38. Молекула нуклеиновой кислоты, которая кодирует слитый или химерный полипептид по любому из пп.10-37.
39. Вектор, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты по любому из пп.1-3 или 38.
40. Вектор по п.39, который адаптирован для рекомбинантной экспрессии указанной молекулы нуклеиновой кислоты.
41. Клетка, трансфицированная молекулой нуклеиновой кислоты по любому из пп.1-3 или 38 или вектором по п.39 или 40.
42. Клетка, трансформированная молекулой нуклеиновой кислоты по любому из пп.1-3 или 38 или вектором по п.39 или 40.
43. Клетка по п.41, которая представляет собой эукариотическую клетку.
44. Клетка по п.42, которая представляет собой прокариотическую клетку.
45. Способ получения полипептида, при котором:
1) берут клетку по любому из пп.41-44;
2) инкубируют указанную клетку в условиях, подходящих для продуцирования указанного полипептида; и возможно
3) выделяют указанный полипептид из указанной клетки или ростовой среды, окружающей указанную клетку.
46. Способ по п.45, где указанный полипептид снабжен аминокислотной аффинной меткой для облегчения выделения указанного полипептида.
47. Полипептид по любому из пп.5-37 для применения в качестве фармацевтического средства.
48. Нуклеиновая кислота по любому из пп.1-3 или 38 для применения в качестве фармацевтического средства.
49. Фармацевтическая композиция, содержащая полипептид по любому из пп.3-36 и включающая эксципиент или носитель.
50. Фармацевтическая композиция, содержащая молекулу нуклеиновой кислоты по любому из пп.1-3 или 38 и включающая эксципиент или носитель.
51. Композиция по п.50, где указанная молекула нуклеиновой кислоты представляет собой часть вектора.
52. Композиция по п.51, где указанный вектор представляет собой экспрессионный вектор, адаптированный для эукариотической экспрессии.
53. Композиция по любому из пп.49-52 в комбинации с дополнительным терапевтическим агентом.
54. Применение полипептида по любому из пп.5-37 в изготовлении лекарственного средства для лечения состояния, выбранного из группы, состоящей из гигантизма, акромегалии, рака; диабетической ретинопатии; диабетической нефропатии и других осложнений диабета и избытка GH (гормон роста).
55. Способ лечения животного, включающий введение эффективного количества полипептида по любому из пп.5-37 указанному животному, нуждающемуся в лечении заболевания или состояния, при котором полезно ингибирование активности гормона роста или пролактина.
56. Способ по п.55, где указанное заболевание или состояние выбрано из группы, состоящей из гигантизма, акромегалии, рака; диабетической ретинопатии; диабетической нефропатии и других осложнений диабета и избытка GH.
57. Способ модификации антагонистической активности полипептида, включающий стадии, на которых:
1) берут полипептид, кодируемый молекулой нуклеиновой кислоты, содержащей последовательность нуклеиновой кислоты, представленную в SEQ ID NO:1; и
2) осуществляют мутирование кодона, который кодирует первый аминокислотный остаток указанного полипептида, с получением вариантного полипептида.
58. Вариантный полипептидный антагонист, который получен или может быть получен способом по п.57.
59. Способ рационального конструирования мутаций в полипептиде, включающий стадии, на которых:
1) берут трехмерную модель первого полипептида, представленного аминокислотной последовательностью в SEQ ID NO:2;
2) берут трехмерную модель вариантного полипептида, который представляет собой вариант модифицированной последовательности указанного первого полипептида, который модифицирован посредством вставки, делеции или замены по меньшей мере одного аминокислотного остатка, как представлено в SEQ ID NO:2;
3) сравнивают эффект этой мутации на трехмерной модели указанного второго полипептида по сравнению с трехмерной моделью указанного первого полипептида; и возможно
4) исследуют эффект указанной модификации на активацию рецептора гормона роста вторым полипептидом по сравнению с первым полипептидом.
60. Гомодимер, содержащий два полипептида по любому из пп.10-14.