АНТИТЕЛО, НАПРАВЛЕННОЕ НА СВЯЗАННЫЙ С ОСТЕОКЛАСТАМИ БЕЛОК СИГЛЕК-15

1. Выделенное антитело, способное связывать сиглек-15, которое ингибирует формирование остеокластов и/или остеокластическую резорбцию кости, или его функциональный фрагмент, который содержит (a) тяжелую цепь, содержащую CDRH1, содержащую последовательность, имеющую по меньшей мере 80% идентичность последовательностей c SEQ ID NO: 106, CDRH2, содержащую последовательность, имеющую по меньшей мере 80% идентичность последовательностей c SEQ ID NO: 107, и CDRH3, содержащую последовательность, имеющую по меньшей мере 80% идентичность последовательностей с одной из SEQ ID NO: 80, 55, 65, 35 или 45; и (b) легкую цепь, содержащую CDRL1, содержащую последовательность, имеющую по меньшей мере 80% идентичность последовательностей c SEQ ID NO: 83 или 73, CDRL2, содержащую последовательность, имеющую по меньшей мере 80% идентичность последовательностей c SEQ ID NO: 108, и CDRL3, содержащую последовательность, имеющую по меньшей мере 80% идентичность последовательностей с одной из SEQ ID NO: 90, 60, 100, 70, 40, 50 или 109.
2. Выделенное антитело или его функциональный фрагмент по п.1, где CDRH1 содержит последовательность, имеющую по меньшей мере 80% идентичность последовательностей с одной из SEQ ID NO: 78, 53, 63, 33 или 43.
3. Выделенное антитело или его функциональный фрагмент по п.1, где CDRH2 содержит последовательность, имеющую по меньшей мере 80% идентичность последовательностей с одной из SEQ ID NO: 104, 54, 94, 64, 34, 44 или 79.
4. Выделенное антитело или его функциональный фрагмент по п.1, где CDRL1 содержит последовательность, имеющую по меньшей мере 80% идентичность последовательностей с одной из SEQ ID NO: 88, 58, 68, 38 или 48.
5. Выделенное антитело или его функциональный фрагмент по п.1, где CDRL2 содержит последовательность, имеющую по меньшей мере 80% идентичность последовательностей с одной из SEQ ID NO: 89, 59, 69, 39 или 49.
6. Выделенное антитело или его функциональный фрагмент по п.1, где последовательности CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 и CDRL3 в антителе содержат:
a) SEQ ID NO: 103, 104, 105, 88, 89 и 90, соответственно, или последовательности с по меньшей мере 80%, 90% или 95% идентичностью последовательностей по отношению к ним;
b) SEQ ID NO: 53, 54, 55, 58, 59 и 60, соответственно, или последовательности с по меньшей мере 80%, 90% или 95% идентичностью последовательностей по отношению к ним;
c) SEQ ID NO: 93, 94, 95, 98, 99 и 100, соответственно, или последовательности с по меньшей мере 80%, 90% или 95% идентичностью последовательностей по отношению к ним;
d) SEQ ID NO: 63, 64, 65, 68, 69 и 70, соответственно, или последовательности с по меньшей мере 80%, 90% или 95% идентичностью последовательностей по отношению к ним;
e) SEQ ID NO: 33, 34, 35, 38, 39 и 40, соответственно, или последовательности с по меньшей мере 80%, 90% или 95% идентичностью последовательностей по отношению к ним;
f) SEQ ID NO: 43, 44, 45, 48, 49 и 50, соответственно, или последовательности с по меньшей мере 80%, 90% или 95% идентичностью последовательностей по отношению к ним; или
g) SEQ ID NO: 78, 79, 80, 88, 89 и 90, соответственно, или последовательности с по меньшей мере 80%, 90% или 95% идентичностью последовательностей по отношению к ним.
7. Выделенное антитело или его функциональный фрагмент по п.1, где антитело содержит:
вариабельную область тяжелой цепи, выбранную из группы, состоящей из
a1) аминокислотной последовательности, содержащей: аминокислотные остатки от 20 до 140 SEQ ID NO: 102, аминокислотные остатки от 20 до 137 SEQ ID NO: 52, аминокислотные остатки от 20 до 138 SEQ ID NO: 92, аминокислотные остатки от 20 до 136 SEQ ID NO: 62, аминокислотные остатки от 20 до 136 SEQ ID NO: 32, аминокислотные остатки от 20 до 135 SEQ ID NO: 42 или аминокислотные остатки от 20 до 138 SEQ ID NO: 77;
a2) аминокислотной последовательности, имеющей по меньшей мере 90% идентичность последовательностей с аминокислотной последовательностью из a1);
a3) аминокислотной последовательности, имеющей по меньшей мере 95% идентичность последовательностей с аминокислотной последовательностью из a1); и
a4) аминокислотной последовательности, содержащей добавление, делецию или замену одного или нескольких аминокислотных остатков в аминокислотной последовательности из a1); и
вариабельную область легкой цепи, выбранную из группы, состоящей из
b1) аминокислотной последовательности, содержащей: аминокислотные остатки от 20 до 134 SEQ ID NO: 87, аминокислотные остатки от 20 до 129 SEQ ID NO: 57, аминокислотные остатки от 20 до 133 SEQ ID NO: 97, аминокислотные остатки от 20 до 129 SEQ ID NO: 67, аминокислотные остатки от 20 до 129 SEQ ID NO: 37, или аминокислотные остатки от 20 до 129 SEQ ID NO: 47;
b2) аминокислотной последовательности, имеющей по меньшей мере 90% идентичность последовательностей с аминокислотной последовательностью из b1);
b3) аминокислотной последовательности, имеющей по меньшей мере 95% идентичность последовательностей с аминокислотной последовательностью из b1); и
b4) аминокислотной последовательности, содержащей добавление, делецию или замену одного или нескольких аминокислотных остатков в аминокислотной последовательности из b1).
8. Выделенное антитело или его функциональный фрагмент по п.1, где антитело содержит:
тяжелую цепь, выбранную из группы, состоящей из
a1) аминокислотной последовательности, содержащей последовательность из одной из SEQ ID NO: 102, 52, 92, 62, 32, 42 или 77;
a2) аминокислотной последовательности, имеющей по меньшей мере 90% идентичность последовательностей с аминокислотной последовательностью из a1);
a3) аминокислотной последовательности, имеющей по меньшей мере 95% идентичность последовательностей с аминокислотной последовательностью из a1); и
a4) аминокислотной последовательности, содержащей добавление, делецию или замену одного или нескольких аминокислотных остатков в аминокислотной последовательности из a1); и
легкую цепь, выбранную из группы, состоящей из
b1) аминокислотной последовательности, содержащей последовательность из одной из SEQ ID NO: 87, 57, 97, 67, 37 или 47;
b2) аминокислотной последовательности, имеющей по меньшей мере 90% идентичность последовательностей с аминокислотной последовательностью из b1);
b3) аминокислотной последовательности, имеющей по меньшей мере 95% идентичность последовательностей с аминокислотной последовательностью из b1); и
b4) аминокислотной последовательности, содержащей добавление, делецию или замену одного или нескольких аминокислотных остатков в аминокислотной последовательности из b1).
9. Выделенное антитело или его функциональный фрагмент по п.1, где антитело содержит тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 102, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 87.
10. Выделенное антитело или его функциональный фрагмент по п.1, где антитело содержит тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 52, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 57.
11. Выделенное антитело или его функциональный фрагмент по п.1, где антитело содержит тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 92, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 97.
12. Выделенное антитело или его функциональный фрагмент по п.1, где антитело содержит тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 62, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 67.
13. Выделенное антитело или его функциональный фрагмент по п.1, где антитело содержит тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 32, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 37.
14. Выделенное антитело или его функциональный фрагмент по п.1, где антитело содержит тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 42, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 47.
15. Выделенное антитело или его функциональный фрагмент по п.1, где антитело содержит тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 77, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 87.
16. Функциональный фрагмент антитела по п.1, который выбирают из группы, состоящей из Fab, F(ab')2, Fab' и Fv.
17. Антитело по п.1, которое отличается тем, что представляет собой scFv.
18. Выделенное антитело или его функциональный фрагмент по любому из предыдущих пунктов для использования в лечении и/или профилактике анормального метаболизма костной ткани.
19. Применение выделенного антитела или его функционального фрагмента по любому из пп.1-17 для производства лекарственного средства для лечения или профилактики анормального метаболизма костной ткани.
20. Способ лечения пациента, страдающего анормальным метаболизмом костной ткани, который включает введение терапевтически эффективного количества выделенного антитела или его функционального фрагмента по любому из пп.1-17.
21. Фармацевтическая композиция, которая содержит по меньшей мере одно из антител или их функциональных фрагментов по пп.1-17.
22. Фармацевтическая композиция по п.21, которая отличается тем, что представляет собой терапевтическое и/или профилактическое средство для анормального метаболизма костной ткани.
3
2
23. Фармацевтическая композиция для лечения и/или профилактики анормального метаболизма костной ткани, которая отличается тем, что содержит по меньшей мере одно из антител или функциональных фрагментов антител по пп.1-17 и по меньшей мере один член, выбранный из группы, состоящей из бисфосфонатов, активного витамина D, кальцитонина и его производных, препаратов гормонов, таких как эстрадиол, SERM (избирательные модуляторы рецепторов эстрогена), иприфлавона, витамина K (менатетренон), препаратов кальция, препаратов PTH (паратиреоидный гормон), нестероидных противовоспалительных средств, препаратов растворимого рецептора TNF, антител против TNF-α или функциональных фрагментов антител, антител против PTHrP (родственный паратиреоидному гормону белок) или функциональных фрагментов антител, антагонистов рецептора IL-1, антител против рецептора IL-6 или функциональных фрагментов антител, антител против RANKL или функциональных фрагментов антител и OCIF (ингибирующий остеокластогенез фактор).
24. Антитело или функциональный фрагмент по п.18, применение по п.19, способ по п.20 или фармацевтическая композиция по п.22 или 23, где анормальный метаболизм костной ткани выбирают из группы, состоящей из: остеопороза, разрушения кости, сопровождающего ревматоидный артрит, злокачественной гиперкальцемии, разрушения кости, сопровождающего множественную миелому или метастаз злокачественной опухоли в кость, гигантоклеточной опухоли, выпадения зубов в связи с пародонтитом, остеолиза вокруг протеза сустава, разрушения кости при хроническом остеомиелите, болезни костей Педжета, нефрогенной остеодистрофии и несовершенного остеогенеза.
25. Антитело, функциональный фрагмент, применение, способ или фармацевтическая композиция по п.24, которые отличаются тем, что анормальный метаболизм костной ткани представляет собой остеопороз, разрушение кости, сопровождающее ревматоидный артрит, или разрушение кости, сопровождающее метастаз злокачественной опухоли в кость.
26. Антитело, функциональный фрагмент, использование, способ или фармацевтическая композиция по п.25, которые отличаются тем, что остеопороз представляет собой постменопаузальный остеопороз, сенильный остеопороз, вторичный остеопороз в связи с использованием терапевтического средства, такого как стероид или иммуносупрессант, или остеопороз, сопровождающий ревматоидный артрит.
27. Полинуклеотид, который содержит:
a) нуклеотидную последовательность, которая кодирует одно из антител или их функциональных фрагментов по пп.1-17; или
b) нуклеотидную последовательность полинуклеотида, который гибридизуется с полинуклеотидом, состоящим из нуклеотидной последовательности, комплементарной нуклеотидной последовательности из a), при строгих условиях.
28. Полинуклеотид по п.27, где нуклеотидные последовательности, которые кодируют последовательности CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 и CDRL3, содержат:
a) нуклеотиды со 148 до 162 SEQ ID NO: 101, нуклеотиды с 205 до 261 SEQ ID NO: 101, нуклеотиды с 358 до 387 SEQ ID NO: 101, нуклеотиды со 124 до 165 SEQ ID NO: 86, нуклеотиды с 211 до 231 SEQ ID NO: 86 и нуклеотиды с 328 до 363 SEQ ID NO: 86, соответственно;
b) нуклеотиды со 148 до 162 SEQ ID NO: 51, нуклеотиды с 205 до 255 SEQ ID NO: 51, нуклеотиды с 352 до 378 SEQ ID NO: 51, нуклеотиды со 124 до 156 SEQ ID NO: 56, нуклеотиды с 202 до 222 SEQ ID NO: 56 и нуклеотиды с 319 до 348 SEQ ID NO: 56, соответственно;
c) нуклеотиды со 148 до 162 SEQ ID NO: 91, нуклеотиды с 205 до 255 SEQ ID NO: 91, нуклеотиды с 352 до 381 SEQ ID NO: 91, нуклеотиды со 124 до 165 SEQ ID NO: 96, нуклеотиды с 211 до 231 SEQ ID NO: 96 и нуклеотиды с 328 до 360 SEQ ID NO: 96, соответственно;
d) нуклеотиды со 148 до 162 SEQ ID NO: 61, нуклеотиды с 205 до 255 SEQ ID NO: 61, нуклеотиды с 352 до 375 SEQ ID NO: 61, нуклеотиды со 124 до 156 SEQ ID NO: 66, нуклеотиды с 202 до 222 SEQ ID NO: 66 и нуклеотиды с 319 до 348 SEQ ID NO: 66, соответственно;
e) нуклеотиды со 148 до 162 SEQ ID NO: 31, нуклеотиды с 205 до 255 SEQ ID NO: 31, нуклеотиды с 352 до 375 SEQ ID NO: 31, нуклеотиды со 124 до 156 SEQ ID NO: 36, нуклеотиды с 202 до 222 SEQ ID NO: 36 и нуклеотиды с 319 до 348 SEQ ID NO: 36, соответственно;
f) нуклеотиды со 148 до 162 SEQ ID NO: 41, нуклеотиды с 205 до 255 SEQ ID NO: 41, нуклеотиды с 352 до 372 SEQ ID NO: 41, нуклеотиды со 124 до 156 SEQ ID NO: 46, нуклеотиды с 202 до 222 SEQ ID NO: 46 и нуклеотиды с 319 до 348 SEQ ID NO: 46, соответственно; или
g) нуклеотиды со 148 до 162 SEQ ID NO: 76, нуклеотиды с 205 до 255 SEQ ID NO: 76, нуклеотиды с 352 до 381 SEQ ID NO: 76, нуклеотиды со 124 до 165 SEQ ID NO: 86, нуклеотиды 211 до 231 SEQ ID NO: 86 и нуклеотиды 328 до 363 SEQ ID NO: 86, соответственно.
29. Полинуклеотид по п.27, где полинуклеотид содержит:
нуклеотидную последовательность, кодирующую вариабельную область тяжелой цепи, выбранную из группы, состоящей из
a1) нуклеотидной последовательности, содержащей: нуклеотиды с 58 до 420 SEQ ID NO: 101, нуклеотиды с 58 до 411 SEQ ID NO: 51, нуклеотиды с 58 до 414 SEQ ID NO: 91, нуклеотиды с 58 до 408 SEQ ID NO: 61, нуклеотиды с 58 до 408 SEQ ID NO: 31, нуклеотиды с 58 до 405 SEQ ID NO: 41 или нуклеотиды с 58 до 414 SEQ ID NO: 76;
a2) нуклеотидной последовательности полинуклеотида, который гибридизуется с полинуклеотидом, состоящим из нуклеотидной последовательности, комплементарной нуклеотидной последовательности из a1), при строгих условиях; и
a3) нуклеотидной последовательности, содержащей добавление, делецию или замену одного или нескольких нуклеотидов в нуклеотидной последовательности из a1); и
нуклеотидную последовательность, кодирующую вариабельную область легкой цепи, выбранную из группы, состоящей из
b1) нуклеотидной последовательности, содержащей: нуклеотиды с 58 до 402 SEQ ID NO: 86, нуклеотиды с 58 до 387 SEQ ID NO: 56, нуклеотиды с 58 до 399 SEQ ID NO: 96, нуклеотиды с 58 до 387 SEQ ID NO: 66, нуклеотиды с 58 до 387 SEQ ID NO: 36 или нуклеотиды с 58 до 387 SEQ ID NO: 46;
b2) нуклеотидной последовательности полинуклеотида, который гибридизуется с полинуклеотидом, состоящим из нуклеотидной последовательности, комплементарной нуклеотидной последовательности из b1) при строгих условиях; и
b3) нуклеотидной последовательности, содержащей добавление, делецию или замену одного или нескольких нуклеотидов в нуклеотидной последовательности из b1).
30. Полинуклеотид по п.29, где полинуклеотид содержит:
нуклеотидную последовательность, кодирующую тяжелую цепь, выбранную из группы, состоящей из
a1) нуклеотидной последовательности последовательности из одной из SEQ ID NO: 101, 51, 91, 61, 31, 41 или 76;
a2) нуклеотидной последовательности полинуклеотида, который гибридизуется с полинуклеотидом, состоящим из нуклеотидной последовательности, комплементарной нуклеотидной последовательности из a1), при строгих условиях; и
a3) нуклеотидной последовательности, содержащей добавление, делецию или замену одного или нескольких нуклеотидов в нуклеотидной последовательности из a1); и
нуклеотидную последовательность, кодирующую легкую цепь, выбранную из группы, состоящей из
b1) нуклеотидной последовательности, содержащей последовательность из одной из SEQ ID NO: 86, 56, 96, 66, 36 или 46;
b2) нуклеотидной последовательности полинуклеотида, который гибридизуется с полинуклеотидом, состоящим из нуклеотидной последовательности, комплементарной нуклеотидной последовательности из b1) при строгих условиях; и
b3) нуклеотидной последовательности, содержащей добавление, делецию или добавление одного или нескольких нуклеотидов в нуклеотидной последовательности из b1).
31. Вектор, содержащий по меньшей мере один полинуклеотид по любому из пп.27-30.
32. Трансформированная клетка, содержащая по меньшей мере один полинуклеотид по любому из пп.27-30.
33. Трансформированная клетка, содержащая по меньшей мере один вектор по п.31.
34. Способ получения антител по пп.1-17, включающий стадии культивирования трансформированной клетки по п.32 или 33, сбора культивируемых материалов и очистки указанных антител от указанных культивируемых материалов.