ФЕРМЕНТЫ И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ

1. Способ получения (-)-амброксида или смеси, содержащей (-)-амброксид, где (3Е,7Е)-гомофарнезол (ЕЕН) или смесь стереоизомеров, содержащую ЕЕН, ферментативно конвертируют в (-)-амброксид или в смесь, содержащую (-)-амброксид, где ферментативную конверсию осуществляют с использованием фермента сквален-гопен-циклазы/гомофарнезол-амброксид-циклазы (SHC/HAC) в реакционных условиях, подходящих для получения (-)-амброксида, и где смесь стереоизомеров, содержащая ЕЕН, по существу состоит из изомеров гомофарнезола, выбранных из одной или более чем одной из следующих групп, состоящих из [(3Е,7Е) и [(3Z,7E)] и/или [(3Е,7Е) и (3E,7Z)] и/или [(3Z,7E), (3Е,7Е) и (3E,7Z)], также обозначенных как [EE:EZ], [EE:ZE] и [EE:EZ:ZE], соответственно.
2. Способ по п. 1, который осуществляют с использованием полипептидной последовательности фермента SHC/HAC, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3; SEQ ID NO: 4, или производного SHC/HAC, выбранного из таблицы 1, таблицы 5, таблицы 2, таблицы 6, таблицы 3, таблицы 7, таблицы 4, таблицы 8 или таблицы 13, таблицы 14, или выбранного из SEQ ID NO: 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 171, 173, 175, 177 и/или 178 или последовательности с по меньшей мере 30% идентичностью, по меньшей мере 40% идентичностью, по меньшей мере 50% идентичностью, или по меньшей мере 60% идентичностью, или по меньшей мере 70% идентичностью, или по меньшей мере 80% идентичностью, или по меньшей мере 90% идентичностью, или по меньшей мере 95% идентичностью, или по меньшей мере 96% идентичностью, или по меньшей мере 97% идентичностью, или по меньшей мере 98% идентичностью, или по меньшей мере 99% идентичностью SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3 или SEQ ID NO: 4.
3. Способ по любому из пп. 1-2, где используют рекомбинантные клетки-хозяева, продуцирующие фермент SHC/HAC.
4. Способ по п. 2 или 3, где нуклеотидная последовательность, кодирующая фермент SHC/HAC, выбрана из группы, состоящей из SEQ ID NO: 165, 166, 167, 168, 169 или SEQ ID NO: 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40 и/или 170, 172, 174 и/или 176.
5. Способ по любому из пп. 1-4, где конверсию гомофарнезола в (-)-амброксид проводят при температуре в диапазоне от 30°C до 60°C, при рН в диапазоне приблизительно 4-8.
6. Способ по любому из пп. 1-5, где конверсию гомофарнезола в (-)-амброксид проводят с использованием одного или более чем одного из реакционных условий для ферментов, представляющих собой SHC/HAC дикого типа или производное SHC/HAC, которые представлены в таблице 24 или в таблице 24а, предпочтительно при рН в диапазоне от 5,0 до 6,2, предпочтительно при температуре 35°C.
7. Способ по любому из пп. 1-6, где соотношение SDS/клетки находится в диапазоне от 10:1 до 20:1, предпочтительно составляет 16:1 при соотношении биокатализатора и ЕЕН, которое составляет приблизительно 2:1.
8. Способ по любому из пп. 1-7, где массовое соотношение биокатализатора к гомофарнезолу находится в диапазоне от приблизительно 0,5-2:1, предпочтительно составляет приблизительно 1:1 или 0,5:1.
9. Способ по любому из пп. 1-8, где стадии выращивания клеток и реакции биоконверсии проводят в одном и том же реакционном сосуде.
10. Способ по любому из пп. 1-9, где субстрат гомофарнезол содержит или по существу состоит из двух стереоизомеров гомофарнезола.
11. Способ по п. 10, где субстрат гомофарнезол содержит или по существу состоит из стереоизомеров EE:EZ.
12. Способ по п. 11, где гомофарнезол содержит или по существу состоит из смеси стереоизомеров EE:EZ в массовых соотношениях, выбранных из группы, состоящей из: 100:00; 99:01; 98:02; 97:03; 96:04; 95:05; 94:06; 93:07; 92:08; 91:09; 90:10; 89:11; 88:12; 87:13; 86:14; 85:15; 84:16; 83:17; 82:18; 81:19; 80:20; 79:21; 78:22; 77:23; 76:24; 75:25; 74:26; 73:27; 72:28; 71:29; 70:30; 69:31; 68:32; 67:33; 66:34; 65:35; 64:36; 63:37; 62:38; 61:39; и 60:40.
13. Способ по п. 12, где гомофарнезол содержит или по существу состоит из смеси стереоизомеров EE:EZ в массовом соотношении, выбранном из группы, состоящей из: EE:EZ 92:08; EE:EZ 90:10; EE:EZ 80:20; EE:EZ 86:14; EE:EZ 70:30; EE:EZ 69:31; и EE:EZ 66:34.
14. Способ по п. 13, где гомофарнезол содержит или по существу состоит из смеси стереоизомеров EE:EZ в массовом соотношении 80:20.
15. Способ по любому из пп. 1-14, где (-)-амброксид получают в смеси с по меньшей мере одним или более чем одним побочным продуктом (II), (IV) и/или (III).
16. Способ по любому из пп. 1-15, где (-)-амброксид выделяют из биоконверсионной реакционной смеси с использованием стадии экстракции/дистилляции органическим растворителем или паром или фильтрования.
17. Способ по любому из пп. 1-16, где (-)-амброксид выделяют из твердой фазы биоконверсионной реакционной смеси с использованием стадии экстракции/дистилляции органическим растворителем или паром.
18. Способ по п. 16 или по п. 17, где (-)-амброксид выделяют из реакционной смеси с использованием органического растворителя, предпочтительно представляющего собой этанол или толуол.
19. Способ по любому из пп. 16-18, где (-)-амброксид селективно кристаллизуют с использованием органического растворителя.
20. Способ по п. 19, где (-)-амброксид по существу не содержит побочных продуктов (II), (IV) и/или (III).
21. Способ по любому из пп. 1-20, где (-)-амброксид получают в диапазоне концентраций приблизительно 125-200 г/л.
22. Применение (-)-амброксида, полученного согласно любому из пп. 1-20 в качестве составной части ароматизирующего продукта, или косметического продукта, или потребительского продукта, такого как продукт для ухода за тканями, гигиено-косметический продукт, продукт для заботы о красоте и/или чистящий продукт.