Способ коррекции морфологических изменений в плаценте субстанцией 3-гидрокси-2-этил-6-метилпиридиния никотинат при ADMA-подобной модели преэклампсии
METHOD OF CORRECTING MORPHOLOGICAL CHANGES IN PLACENTA WITH SUBSTANCE OF 3-HYDROXY-2-ETHYL-6-METHYLPYRIDINIUM NICOTINATE IN ADMA-LIKE MODEL OF PREECLAMPSIA

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной фармакологии и может быть использовано для коррекции морфологических нарушений в плаценте.
Наиболее близким к заявленному решению является способ коррекции морфологических изменений в плаценте с помощью резвератрола (Stupakova EG, Lazareva GA, Gureev VV (2018) Correction of morphofunctional disturbances arising when modelling Preeclampsia with resveratrol and nicorandil. Research Results in Pharmacology 4(1): 59–71): Способ коррекции морфологических изменений в плаценте при ADMA-подобной модели преэклампсии, включающий воспроизведение модели преэклампсии у крыс линии Wistar в течение 7 дней ежедневным с 14 по 21 день беременности внутрибрюшинным введением L-нитро-аргинин-метилового эфира в дозе 25 мг/кг, и на фоне моделируемой патологии введение внутрижелудочно резвератрола ежедневно однократно в дозе 2 мг/кг с 14 по 20 сутки беременности.
+
ATP
Недостатком указанного способа является то, что механизм действия резвератрола направлен лишь на активацию K каналов и повышение активности eNOS, стимулируя тем самым повышенную выработку NO, и не оказывает стимулирующего влияния на более значимые ферменты  антиоксидантной системы, такие как супероксиддисмутаза (СОД) и глутатионпероксидаза (ГП), следовательно, способ коррекции морфологических изменений в плаценте при ADMA-подобной перэклампсии  неудовлетворительны.
Соответственно, перспективным направлением является использование веществ, способных вызывать гиперэкспрессию ферментов супероксиддисмутаза и глутатионпероксидаза, обеспечивающих защиту от повреждающего действия свободных радикалов О2.*-и *ОН [Kofler J., Hurn P. D., Traystman R. J. SOD1 overexpression and female sex exhibit region-specific neuroprotection after global erebral ischemia due to cardiac arrest. J. Cereb. Blood Flow Metab. 2005; 25 (9): 1130–1137.].
Одним из таких веществ является производное группы 3-оксипиридина субстанция, а именно  3-гидрокси-2-этил-6-метилпиридиния никотинат под лабораторным шифром ЛХТ-21-16 (ВНЦ БАВ, г. Старая Купавна). Оно обладает:
Ретинопротективным действием (Peresypkina, A.; Pazhinsky, A.; Danilenko, L.; Lugovskoy, S.; Pokrovskii, M.; Beskhmelnitsyna, E.; Solovev, N.; Pobeda, A.; Korokin, M.; Levkova, E.; Gubareva, V.; Korokina, L.; Martynova, O.; Soldatov, V.; Pokrovskii, V. Retinoprotective Effect of 2-Ethyl-3-hydroxy-6-methylpyridine Nicotinate. Biology 2020, 9, 45.)
Антигипоксической активностью, кардиопротективной активностью (Даниленко Л.М.  Фармакологическая коррекция токсических, ишемических, реперфузионных повреждений миокарда и эндотелиальной дисфункции производными 3-(2,2,2-триметилгидразиния) пропионата, 5-гидроксиникотиновой кислоты и 3-оксипиридина. Дисс. д.ф.н. Белгород. 2018).
Задачей изобретения является создание способа коррекции морфологических изменений в плаценте при ADMA-подобной модели преэклампсии, включающей использование соединения ЛХТ-21-16, обладающей антиоксидантными свойствами.
Задача достигается тем, что на фоне моделирования преэклампсии в эксперименте внутрибрюшинным введением беременным самкам крыс линии Wistar в течение 7 суток ADMA-подобного блокатора эндотелиальной NO-синтазы - N-нитро-L-аргинин-метилового эфира (L-NAME) в дозе 25 мг/кг проводится коррекция морфологических изменений в плаценте внутрибрюшинным введением 3-гидрокси-2-этил-6-метилпиридиния никотинат (ЛХТ-21-16) в дозировке 260 мг/кг с 14 по 20 сутки беременности. Это способствует снижению морфологических изменений в плаценте. Данный эффект связан с выраженным антиоксидантным действием исследуемого соединения.
СПОСОБ ОСУЩЕСТВЛЯЕТСЯ СЛЕДУЮЩИМ ОБРАЗОМ
Опыты проводят на белых беременных крысах самках линии Wistar массой 250-300 г. N-нитро-L-аргинин метиловый эфир (L-NAME) вводится внутрибрюшинно в дозе 25 мг/кг/сут в течение 7 дней (с 14 по 20 день беременности). Соединение ЛХТ-21-16 вводится внутибрюшинно за 30 минут до введения L-NAME также в течение 7 дней (с 14 по 20 день беременности) в дозировке 260мг/кг.
Для подтверждения морфологических изменений проводилось гистологическое исследование плаценты. Материал фиксирован в 10% формалине с последующей заливкой в парафин. Гистологические срезы плаценты производили в строго вертикальном направлении через середину плацентарного диска с захватом всех слоев плаценты и стенки рога матки. Изучение микропрепаратов, фотопротоколирование и морфометрию проводили на микроскопе Leica DM4000B с системой видеорегистрации и обработки изображений. При всех морфологических исследованиях использовали окраску гематоксилином и эозином.
Для всех данных была применена описательная статистика: данные проверены на нормальность распределения. Тип распределения определялся критерием Шапиро-Уилка. В случае нормального распределения были подсчитаны среднее значение (M) и стандартная ошибка среднего (m).   Межгрупповые различия анализировались параметрическими (t-критерий Стьюдента) или непараметрическими (критерий Манна-Уитни) методами, в зависимости от типа распределения. Различия считаются достоверными при p<0,05. Расчеты выполнены с помощью статистических программ Microsoft Excel 7.0.
ПРИМЕР КОНКРЕТНОГО ВЫПОЛНЕНИЯ
Блокада NO-синтазы, вызванная 7-дневным введением L-NAME беременным крысам, приводила к разительным морфологическим изменениям в плаценте у группы экспериментальных животных. Происходило значительное увеличение ширины децидуальной пластинки до 0,545±0,008мкм (в группе контроля данный показатель составил 0,344±0,006мкм). Ширина плодной части плаценты также претерпевала значимые изменения, чему свидетельствует ее истончение до 0,640±0,0079мкм, что значимо отличается от данного параметра в группе интактных животных - 0,961±0,0116 мкм. Кроме этого наблюдалось снижение плотности клеточного пула как материнской так плодной части плаценты и уменьшение диаметра ворсин (табл.1). В группе животных с применением соединения ЛХТ-21-16  ширина децидуальной пластинки составила 0,410±0,008мкм, что статистически достоверно отличается от группы с моделированием преэклампсии. Данное соединение также оказывает положительное влияние на толщину плодной части плаценты - 0,806±0,0080. Влияние исследуемого соединения на плотность клеток материнской и плодной части плаценты, а также на ширину ворсин предтавлены в таблице 1.
Таблица 1
Влияние ЛХТ-21-16 на морфологические показатели при ADMA-подобной преэклампсии
Таким образом, полученные результаты убедительно свидетельствуют о выраженной коррекции морфологических изменений в плаценте в условиях воспроизводимой ADMA подобной модели преэклампсии у беременных крыс субстанцией 3-гидрокси-2-этил-6-метилпиридиния никотинат ЛХТ-21-16.