Исследование биологических свойств нового производного теофиллина соединения С-3

сезонного характера, что объясняется наличием выраженного соматического фона,. Типичными были эмоциональная

лабильность, повышенные ранимость и обидчивость,

вегетососудистые нарушения. Представленные данные укладываются в распространенные представления о наличии в группе основных критериев, необходимые для диагностики посттравма-тических стрессовых расстройств.

Во 2 группе доминировали пониженное настроение, депрессия, чувство одиночества, некая притупленность эмоций, а также немотивированная бдительность и подозрительность. В 2/3 наблюдений отмечались нарушения памяти и концентрации внимания, трудности сосредоточения, особенно в социальнозначимых ситуациях. Повышенная тревожность проявлялась как в психической сфере, так и на физиологическом уровне, преимущественно в виде повышенного артериального давления. Типична бессонница (трудности с засыпанием и прерывистый сон). Следует также выделить агрессивность, приступы ярости, коррелирующие с приемом алкоголя или других возбуждающих веществ.

Установленные в работе различия между сравниваемыми группами объясняются природой стрессирования. У большинства ликвидаторов психотравмирующие переживания проявляются значительно позже, под влиянием нарастающих медикосоциальных проблем. Особенностью этих нарушений является ранняя хронизация с присоединением разнообразных нейросома-тических и иммунологических расстройств, органической окраски симптоматики,

Литературы

1. Аксенов, ММ. Психосоматический аспект изучения пограничных состояний / М.М. Аксенов, В.Я. Семке, Т.П. Ветлугина // Сибирский вестник психиатрии и наркологии .2001.- №3.- С. 16-22.

2. Александровский, Ю.А. Проблема посттравматического стрессового расстройства и подходы к лечению / Ю.А. Александровский.- М., 2005.- 223 с.

3. Александровский, Ю.А. Состояние психической дезадаптации в экстремальных условиях / Ю.А. Александровский // Журн. невропатол. и психиатрии им. Корсакова.- 1989.- № 5.-С. 111-117.

4. Бокова, И.А. «Мягкие» технологии лечения больных с астено-агрипническим синдромом / И.А. Бокова, Л.Г. Агасаров,

С. А Радзиевский // Вестник новых медицинских технологий-2012.- Т.Х1Х.- № 3.- С.147-148.

5. Вейн, AM. Медицина сна: проблемы и перспективы / А.М. Вейн // Журн. неврол. и психиатр. им. С.С.Корсакова-2002.- Прил.: 3-16

6. Инсомния: современные диагностические и лечебные подходы / Я.И. Левин [и др.].- М., 2005.- 115 с.

7. Малыгин, В.Л. Психические нарушения радиационного генеза (клиника, патофизиология, терапия) / В.Л. Малыгин, Б.Д. Цыганков.- М., 2005.- 236 с.

8. Румянцева, ГМ. Радиационные инциденты и психическое здоровье населения / Г.М. Румянцева, О.В. Чинкина,

Л.Н. Бежина.- М., 2009.- 285 с.

9. Тарабрина, Н.В. Психология посттравматического

стресса: интегративный подход аспекты: автореф. дисс.

докт.психолог. наук / Н.В. Тарабрина.- СПб., 2008.- 42 с.

10. Физиология и патология сна / В.Н. Цыган [и др.].-СПб., 2006.- 157 с.

УДК 547.857.4-026.8-047.37

ИССЛЕДОВАНИЕ БИОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ НОВОГО ПРОИЗВОДНОГО ТЕОФИЛЛИНА - СОЕДИНЕНИЯ С-3 Д.Н. ЮРЧЕНКО, Е.В. АЛЕКСАНДРОВА, А.С. ШКОДА, И.Ф. БЕЛЕНИЧЕВ, Н.И. РОМАНЕНКО

Запорожский государственный медицинский университет,

Украина, 69035, г. Запорожье, пр. Маяковского 26, e-mail: darja. yurchenko@yandex. ru

Аннотация: исследованы биологические свойства (антиоксидантная, антиамнестическая и противогипоксическая активности) нового производного теофиллина - соединения С-3. Показана перспективность дальнейшего фармакологического изучения с целью применения в медицинской практике.

Ключевые слова: теофиллин, антиоксидантная, антиамнестическая, противогопоксическая активности.

THE RESEARCH OF ANTIOXIDANT PROPERTIES OF NEW DERIVATIVE OF THEOPHYLLINE - COMPOUND C-3

D.N. YURCHENKO, E.V. ALEKSANDROVA, A.S. SKODA, I.F. BELENICHEV, N.I. ROMANENKO Zaporizhzhia State medical university, Ukraine

Abstract: The biological properties (antioxidant, antiamnestic, antihypoxic activities) of a new derivative of theophylline - compound C-3 were investigated. It was shown the perspective ways of further study for application in medical practice.

Key words: theophylline, antioxidant activity, antiamnestic activity, antihypoxic activity.

Ишемическое и травматическое повреждение головного мозга являются глобальными проблемами здравоохранения. Распространение сосудистых заболеваний приводит к увеличению количества острых нарушений мозгового кровообращения. В основе ишемического повреждения головного мозга лежат реакции глутамат-кальциевого каскада. В процессе этого активизируются клеточные ферменты, наблюдается избыточный синтез оксида азота, накапливаются низкомолекулярные цитотоксиче-ские соединения. Необратимые деструктивные изменения приводят к некротической гибели клетки; протекают окислительные процессы, повышающие уровень свободных радикалов [8].

Развитие оксидативного стресса в условиях ишемии головного мозга протекает в несколько стадий, однако наиболее важной является продукция активных форм кислорода (АФК) - су-пероксидрадикала, гидроксид-радикала, NO-радикала при разобщении дыхательной цепи и окислительного фосфорилирования. В этих условиях АФК атакуют макромолекулы клеточной мембраны нейрона, что приводит к их окислительной модификации и деструкции. При ишемии АФК также усиливают экспрессию

провоспалительных цитокинов. Это в свою очередь приводит к активации факторов транскрипции белка, которые опосредованно, через активацию индуцибельной NO-синтазы, еще больше усиливают образование АФК [7].

Современные ноотропные препараты - пирацетам, фени-бут, пикамилон [4] улучшают память, умственную деятельность, но, к сожалению, не способны снижать неврологический дефицит, повышать резистентность к экстремальным условиям, к тому же требуют длительности курса применения и имеют некоторые побочные эффекты.

Необходимой задачей является создание препаратов, которые бы активно влияли на патогенетические звенья и тормозили свободнорадикальные реакции, а также были малотоксичными и эффективными.

Объектом исследования послужило синтезированное нами ранее соединение С-3 - гидразид 8-^бензиламинотеофиллинил-7-этановой кислоты [6].

Целью исследования — изучение антиоксидантных свойств, а также антиамнестической и противогипоксической

активности нового производного теофиллина (соединения С-3), которое после проведенных фармакологических исследований может быть использовано в медицинской практике.

Материалы и методы итсследования. Антиоксидантную активность (АОА) исследовали по методу оценки торможения аутоокисления адреналина в адренохром [5]. Неферментативная реакция окисления адреналина в адренохром в сильно щелочной среде сопровождается накоплением супероксидрадикала. В биологических системах скорость процесса зависит от активности фермента супероксиддисмутазы, но в химической системе in vitro эта реакция может быть использована для количественной оценки АОА исследуемого соединения. Результаты приведены в табл. 1.

Таблица 1

Антиоксидантная активность исследуемого соединения С-3

Соединение Оптическая плотность, А АОА %

С-3 0,06 ± 0,002*+ 70

Интакт 0,066 ± 0,0008 -

Контроль 0,2 ± 0,001А -

Тиотриазолин 0,072 ± 0,001* 35,8

Эмоксипин 0,163 ± 0,006* 18,5

Примечания: А - p < 0,05 по отношению до интакту; * - p < 0,05 по отношению к контролю;

+ - p < 0,05 по отношению к эмоксипину

Оценка АОА исследуемого вещества по ингибированию NO’-радикала проведена по методу [2]. Фотоиндукция натрий нитропруссида сопровождается накоплением NO'-радикала, о чем судят по скорости окисления аскорбата, определяя спектрофотометрически оптическую плотность пробы при 265 нм. Результаты исследования приведены в табл. 2.

Таблица 2

Антиоксидантная активность исследуемого соединения С-3

Соединение Оптическая плотность, А АОА, %

С-3 0,202 ± 0,001*+# 65,7

Контроль 0,59 ± 0,03

N-АЦЦ 0,48 ± 0,002* 18,6

Тиотриазолин 0,392 ± 0,006*+ 33,5

Примечания: * - p < 0,05 по отношению к контролю; # - p < 0,05 по отношению до тиотриазолину;

+ - p < 0,05 по отношению к N-АЦЦ

Метод определения АОА по ингибированию окислительной модификации белка, вызванной реактивом Фентона [2]. Для выявления глубины патологического процесса и степени развития окислительного стресса в тканях головного мозга определяли продукты окислительной модификации белка по реакции взаимодействия окисленных аминокислотных остатков с 2,4-динитрофенигидразином. Инициацию окислительной модификации белка проводили в гомогенате мозга нелинейных белых крыс с использованием реактива Фентона. К 250 мг гомогената ткани добавляли 7 мл 0,5 М фосфатного буфера (температура разведения 5°С) и центрифугировали при 11000 % 30 мин (при температуре 10°С). К 0,1 мл подготовленного супернатанта добавляли 0,1 мл исследуемого вещества в концентрации 10-6 М, 0,1 мл 2,8% раствора трихлоруксусной кислоты и центрифугировали 30 мин при 3000 об/мин (при температуре 15°С). К оставшемуся после центрифугирования осадку добавили 1 мл 2,2% 2,4-динитрофенилгидразина (приготовленного на 7 % растворе соляной кислоты), инкубировали 1 ч при температуре 37°С и центрифугировали 10 мин при 3000 об/мин. Осадок промыли 3 мл этилацетата, высушили и добавили 3 мл 8 М раствора мочевины и 1 мл 2 М раствора соляной кислоты. Подготовленный раствор спектрофотометрировали при длинах волн 274 и 363 нм. По показателю экстинкции определили количество карбонильных и карбоксильных групп. В качестве эталона сравнения использовали эмокиспин и тиотриазолин. Результаты эксперимента приведены в табл. 3.

Антиамнестическую активность соединения оценивали по сохранению у крыс аверсивного стимула в тесте условной реакции пассивного избегания - УРПИ [1]. Методика базируется на врожденном стремлении крыс к ограниченному затемненному пространству. Исследуемое вещество вводили крысам в дозах 1,

10, 100 мг/кг внутрижелудочно с помощью металлического зонда в виде суспензии, стабилизированной Твином-80, за час до обучения. Затем через 30 мин для моделирования антероградной амнезии внутрибрюшинно вводили атропина гидрохлорид (40 мг/кг). Через 1 час после введения препарата животных обучали в двухкамерной установке, состоящей из двух отсеков -светлого и темного. Крысу помещали в темный отсек, фиксировали латентное время захода в темный отсек, где крыса получала удар током и выбегала в светлый отсек. Воспроизведение УРПИ проверяли через 24 часа. Об активности соединения судили по изменению латентного времени захода крысы в темный отсек по сравнению с контролем (животное без введения исследуемого вещества). В качестве эталона сравнения использовали пираце-там, который вводился в дозе 250 мг/кг. Результаты исследования отображены в табл. 4.

Таблица 3

Антиоксидантная активность исследуемого соединения С-3

Соединение АФГ, у.е./г АОА,% КФГ, у.е./г АОА,%

С-3 4,87±0,01*+ 52,0 2,41±0,02*+ 65,0

Интакт 1,07±0,002А 1,37±0,02А

Контроль 9,95±0,07 6,87±0,002

Эмоксипин 7,0±0,002* 30 4,87±0,01* 30,0

Тиотриазолин 6,00±0,01* 40 3,75±0,01* 45,5

Примечания: А - p < 0,05 по отношению к интакту; * - p < 0,05 по отношению к контролю;

+ - p < 0,05 по отношению к эмоксипину

Таблица 4

Влияние исследуемого соединения С-3 на сохранение УРПИ у крыс при моделировании антероградной амнезии

Соединение Доза, мг/кг (n=5) Латентный период захода в темный отсек,с Сохранение памятного следа, %

С-3 1,0 8,7 ± 0,87* 335,0

10,0 16,0 ± 1,8*+ 700,0

100,0 3,0 ± 0,81 50,0

Интакт 32,7 ± 1,6

Контроль 2,0 ± 0,1А

Пирацетам 250,0 4,7 ± 0,18а* 135,0

Примечания: * - p < 0,05 по отношению к контролю; + - p < 0,05 по отношению к пирацетаму;

А - p < 0,05 по отношению к интакту

Для изучения противогипоксического действия исследуемого соединения использовали белых мышей, с которыми проводили гипоксический тест [1]. Животных помещали в герметически закрытый сосуд, вызывая гипоксическую гипоксию. О степени противогипоксической активности судили по удлинению времени до первого апноэ у животных. Соединение С-3 вводили за час до тестирования в различных дозах (1, 10, 100 мг/кг), внут-рижелудочно с помощью металлического зонда, в виде суспензии, стабилизированной Твином-80. В качестве эталона сравнения использовали пирацетам. Результаты приведены в табл. 5.

Таблица 5

Противогипоксическая активность исследуемого соединения С-3 в условиях замкнутого пространства

Соединение Доза, мг/кг (П = 5) Длительность жизни мышей, мин Удлинение длительности жизни, %

С-3 1,0 6,45 ± 0,21*+ 100

10,0 11,59 ± 0,02*+ 260

100,0 4,50 ± 0,88 39,7

Контроль 3,22 ± 0,12

Пирацетам 250,0 5,17 ± 0,11* 60,0

Примечания: * - p < 0,05 по отношению к контролю; + - p < 0,05 по отношению к пирацетаму

Статистическую обработку данных [3] проводили с использованием параметрического t-критерия Стьюдента, непараметрического U-критерия Уитни-Манна, MS Excell, а также программы «STATISTICA for Windows 6.0» (StatSoft Inc. AXXR712D833214FAN5). Достоверными считали отличия с уровнем значимости более 95% (p<0,05). Данные в таблицах представлены в виде: среднее арифметическое±стандартная ошибка.

Результаты и их обсуждения. Исследование АОА по ингибированию супероксирадикала в системе аутоокисления адреналина в адренохром показало, что соединение С-3 проявляет искомую активность и по силе антиоксидантного эффекта превосходит АОА эталонных препаратов тиотриазолина (на 34,2%) и эмоксипина (на 51,5%).

Степень ингибирования свободного радикала монооксида азота у изучаемого соединения превышает референтные препараты - тиотриазолин и К-АЦЦ на 32,2 и 47,1% соответственно.

По отношению к ингибированию окислительной модификации белка исследование АОА вещества показало, что соединение С-3 по данному параметру превышает активность эмоксипи-на и тиотриазолина на 22,0 и 12,0% соответственно при определении АФК, а при определении КФГ активнее, чем эмоксипин на

38.0 и на 19,5% по сравнению с тиотриазолином.

Изучение антиамнестической активности исследуемого соединения подтвердило, что оно проявляет указанное действие и активнее, чем пирацетам на 200 и 565% при введении в дозах

1.0 и 10,0 мг/кг соответственно. Исследование противогипокси-ческих свойств соединения С-3 показало, что при введении в дозе

1.0 мг/кг оно превышает активность эталонного препарата (пир-ацетама) на 40%, и на 200% - в дозе 10,0 мг/кг. В дозе 100,0 мг/кг в обоих случаях соединение С-3 уступает пирацетаму.

Выводы. Изучение антиоксидантной, антиамнестической и противогипоксической активностей нового производного тео-филлина соединения С-3 (гидразид 8-К-бензиламинотеофилинил-7-ацетатной кислоты) показало, что исследуемое соединение по силе проявляемого действия превосходит эталонные препараты и

после дополнительных фармакологических испытаний может быть рекомендовано для использования в медицинской практике.

Литература

1. Буреш, Я. Методики и основные эксперименты по изучению мозга и поведения / Я. Буреш, О. Бурешова, Д.П. Хьюстон -Москва: Медицина, 1991.- 248 с.

2. Ванин, А.Ф. Динитрозольные комплексы железа и S-нитротиолы - две возможные формы стабилизации и транспорта оксида азота в биосистемах / А.Ф. Ванин // Биохимия.- 1998.-Т.63, Вып.7.- С. 924-938.

3. Закс, Л. Статистическое оценивание / Л. Закс.- М.: «Статистика», 1976.- 598 с.

4. Машковский, М.Д. Лекарственные средства / М.Д. Маш-ковский.- М.: Новая Волна, 2005.- 1200 с.

5. Методи оцінки антиоксидантних властивостей фізіологічно активних сполук при ініціюванні вільнорадикальних процесів у дослідах in vitro / Губський Ю.І. [та ін.] // Метод. ре-ком.- Київ: ДФЦ МОЗ України, 2002.- 26 с.

6. Пат. 66127 Україна, МПК C07D 473/00. Гідразид 8-N-бензиламінотеофілініл-7-ацетатної кислоти, що виявляє антиам-нестичну та протигіпоксичну дії / Юрченко Д.М., Бєленічев І.Ф., Александрова К.В., Романенко М.І., Бухтіярова Н.В.; заявник та патентовласник Запорізький держ. мед. університет та автори.-№ u201106739 ; заявл. 30.05.2011; опубл. 26.12.2011, Бюл. № 24.

7. Рациональная нейропротекция / И.Ф. Беленичев [и др.].-Донецк : ИП Заславский, 2009.- 260 с.

8. Neurology on the global health agenta // The Lancet Neurol.-2007.- Vol. 6.- P. 287.

УДК 616-006.04-08-039.75

ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ВОЗМОЖНОСТИ ПРИМЕНЕНИЯ КОМПРЕССИОННОЙ СОНОЭЛАСТОГРАФИИ И МАЛОИНВАЗИВНОЙ БИОИМПЕДАНСОМЕТРИИ У БОЛЬНЫХ СО ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫМИ НОВООБРАЗОВАНИЯМИ МОЛОЧНЫХ ЖЕЛЕЗ

А.В. БОРСУКОВ, М.А.САФРОНОВА, В.И.СОЛОВЬЕВ

Проблемная научно-исследовательская лаборатория «Ультразвуковые исследования и малоинвазивные технологии»,кафедра онкологии, кафедра факультетской терапии Смоленской государственной медицинской академии, ул. Крупской, 28, Смоленск

Аннотация: обследовано 20 пациенток с подозрением на злокачественные новообразования молочных желез. Наряду со стандартным алгоритмом оценивали компрессионные соноэластографические и биоимпедансные показатели как опухоли, так и лимфатические узлы первого порядка аксиллярных зон. Определены наиболее информативные показатели. Выявлены перспективы диагностических алгоритмов злокачественных новообразований с применением новых методик.

Ключевые слова: Рак молочной железы, компрессионная соноэластография, малоинвазивная биоимпедансометрия.

DIAGNOSTIC POSSIBILITIES OF THE USE OF COMPRESSIONAL SONOELASTOGRAPHY AND SMALL INVASIVE BIOIMPEDANCEMETRY IN THE PATIENTS WITH MALIGNANT TUMORS OF MAMMARY GLANDS

A.V. BORSUKOV, M.A.SAFRONOVA, V.I.SOLOVYEV

The problem research laboratory of Ultrasonic research and minimally invasive technologies, Department of Oncology, Department offaculty therapy Smolensk state medical Academy

Abstract: the 20 patients with suspected malignant tumors of mammary glands were examined. The compressional sonoelastographic and bio-impedant parameters of the tumor and the lymphotic nodes of axillary areas were estimated along with standard compression algorithm. The informative indicators and prospects of cancer diagnostic algorithms by means of new techniques were revealed.

Key words: comedocarcinoma, compressional sonoelastography, mini-invasive bioimpedancemetry.

В Российской Федерации рак молочной железы стоит на первом месте по заболеваемости злокачественными опухолями у женщин. Ежегодно насчитывается около 45 тысяч новых случаев. За 10 лет прирост заболеваемости составил 32.5% [1].

Основным методом лечения локализованных и местнораспространенных форм рака молочной железы остается хирургическим. При выборе объема оперативного вмешательства необходимо учитывать ряд факторов влияющих на безрецидивное течение и выживаемость. К этим факторам относят размер, локализация опухолевого узла, наличие изменений регионарных лимфатических узлах. Причиной аксиллярной лимфодиссекции является частое лимфогенное распространение рака молочной железы на регионарные лимфатические узлы, при отсутствии достоверных методов определения их состояния [2].

Существующие до последнего времени методы оценки состояния лимфатических узлов аксиллярного коллектора примерно в 47-50% случаев не позволяют адекватно определить наличие или отсутствие их метастатического поражения [2,9]. В литературе имеются данные указывающие на более высокую достовер-

ность тонкоигольной биопсии лимфатических узлов аксиллярной области, проводимую под контролем ультразвукового исследования, точность исследования, по разным данным, составляет 58,6-97% [8]. Проблема состоит в том, что при лимфатических узлах размером менее 1 см достоверность обеих методов снижается и составляет порядка 44% [7,8,10].

Эхографическими критериями злокачественности лимфатических узлов считаются следующие признаки: 1) Нечеткость изображения области ворот лимфатического узла вплоть до полного его отсутствия; 2) Смещение и деформация изображения области ворот; 3) Патологические гиперэхогенные включения; 4) Неровность и нечеткость контуров; 5) Сниженная эхогенность лимфатического узла; 6) Образование конгломератов [4,5,11].

В последнее время активно разрабатывается новое направление визуализации сдвиговых упругих характеристик биологических тканей - метод соноэластографии [9,11].

Новым методом диагностики является биоимпедансомет-рия. Измерение комплексного сопротивления тела человека при прохождении через него разночастотного переменного электри-