Способ получения безмаркерных трансгенных растений каланхоэ перистого, экспрессирующих ген цекропина Р1

1. Способ получения безмаркерных трансгенных растений каланхоэ перистого, экспрессирующих ген цекропина Р1, включающий генетическую трансформацию растений вакуумной инфильтрацией семян агробактериями вида Agrobacterium tumafaciens или кокультивацией листовых эксплантов с агробактериями, элиминацию агробактерий, отбор полученных трансгенных растений, отличающийся тем, что одновременно определяют присутствие и количественное содержание пептида цекропина Р1 вестерн-блот анализом экстрактов проростков каланхоэ перистого, регенерировавших из тканей растений или выросших из семян после генетической трансформации, при этом для количественного определения синтезируемого пептида цекропина Р1 в растениях проводят сравнение калибровочных данных с различными количествами синтетического цекропина Р1 с данными вестерн-блот анализа экстрактов проростков каланхоэ перистого.
2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что в качестве штамма бактерии вида Agrobacterium tumafaciens используют штамм, выбранный из ряда A. tumefaciens СВЕ21, A. tumafaciens GV3101 (pMP90RK), A. tumafaciens LBA4404 (pAL4404), содержащий безмаркерную рекомбинантную плазмиду рВМ с геном цекропина Р1.
3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что агробактерий A. tumafaciens перед трансформацией активизируют в питательной среде МС ацетосирингоном 100 мкМ.
4. Способ по п. 1, отличающийся тем, что семена растений Kalanchoe pinnata подвергают обработке вакуумом при отрицательном давлении (-0,01)-(-1,0) атм в течение 1-15 мин.
5. Способ по п. 1, отличающийся тем, что для элиминации агробактерий используют антибиотик тикарциллин или цефатоксим или ванкомицин в количестве 250-500 мг/л.
6. Способ по п. 1, отличающийся тем, что для количественного определения синтезируемого пептида цекропина Р1 в растениях проводят сравнение калибровочных данных с разными количествами синтетического препарата цекропина Р1 с данными вестерн-блот анализа экстрактов проростков каланхоэ перистого, регенерировавших из тканей растений или выросших из семян после генетической трансформации.
7. Способ по п. 1, отличающийся тем, что для приготовления экстрактов полученных растений каланхоэ осаждают пептид 5%-ой трихлоруксусной кислотой и растворяют в 0.1Н растворе гидроксида натрия.