Способ определения антигенной нагрузки животных
METHOD FOR DETERMINING THE ANTIGENIC LOAD IN ANIMALS

Область техники, к которой относится изобретение
Изобретение относится к ветеринарной иммунологии, которое может быть использовано в клинической практике для диагностики антигенной нагрузки животного организма, в частности к способу определения антигенной нагрузки животных и использовать иммунологические методы диагностики для выявления различных заболеваний и уровня антигенной нагрузки животного организма на крупных и мелких животноводческих фермах.
Уровень техники
При изучении патентной и научно-технической информации выявлено несколько способов определения антигенной нагрузки животных путем оценки иммунологической реактивности организма.
2
Известен способ определения иммунологической реактивности организма путем воздействия на организм лекарственным веществом (вводят пирогенал в дозе 0,15-0,18 мкг на 1 кг веса) и при повышении температуры до 37,0-37,5°С определяют иммунологическую реактивность в пределах нормы, при 36,6-36,9°С - определяют недостаточность иммунологической реактивности (См. Авт. св. СССР №1689857, М. Кл. G01N 33/53, 1989 г.). Данный способ имеет ряд недостатков, снижающих его информативность. Так, определяемый показатель температуры тела претерпевает существенные изменения, обусловленные не только физиологическими процессами (испарение влаги с поверхности кожи, вентиляция легких и т.д.), но и неконтролируемыми технологическими параметрами (температура и влажность внешнего воздуха, теплопроводность поверхностей). Высокая вариабельность полученных результатов, также снижает информативность таких параметров для суждения о недостаточности иммунологической реактивности.
2
Известен способ оценки иммунологической реактивности организма, включающий взятие крови, разделение ее на плазму и форменные элементы (См. Авт. св. СССР №1686364, М. Кл. G01N 33/53, 1991 г.). Однако для реализации способа требуется дорогостоящее оборудование и биопрепараты. Кроме того, способ недостаточно информативен, а также сложен.
2
Известен способ оценки иммунологической реактивности организма включающий взятие крови, разделение ее на плазму и форменные элементы и определение концентрации иммуноглобулинов и специфических антител в плазме, отличающийся тем, что, дополнительно определяют концентрацию иммуноглобулинов A, G, М и специфических сывороточных антител, сорбированных на форменных элементах крови и по соотношению концентраций иммуноглобулинов и специфических сывороточных антител в плазме и сорбированных на форменных элементах крови судят о иммунологической реактивности организма (См. Патент РФ №2126154, М. Кл. G01N 33/53, 1999 г.).
Недостаток данного способа в том, что он применим только в специальных лабораторных условиях с применением методов иммунохимии, что сужает диапазон его полезного использования в полевых условиях. Кроме того, определение концентраций иммуноглобулинов и специфических сывороточных антител в плазме и сорбированных на форменных элементах крови достаточно сложно технически и требует значительных временных затрат, специального оборудования и реактивов.
2
Наиболее близким по технической сущности и достигаемому положительному результату, принятый авторами за прототип является способ оценки иммунологической реактивности организма, включающий взятие крови, разделение ее на плазму и форменные элементы и определение иммунологических показателей клеток крови, по которым судят о состоянии организма (См. Патент СССР №1813213, М. Кл. G01N 33/53, 1993 г.).
Однако недостатком данного способа является повышенная травматичность, т.к. отбор крови производится из локтевой вены, что особенно сложно для тяжелобольных и в педиатрической практике. Из-за невозможности проведения анализа после длительного хранения проб исключается проведение скрининговых исследований. Способ недостаточно информативен, т.к. позволяет определить предрасположенность к небольшому количеству заболеваний, характеризуется низкой пропускной способностью из-за длительности процесса.
В известных способах определения антигенной нагрузки животных проводится без выявления и определения значений титра антител и не позволяет достоверно установить наличие и степень тяжести иммунного эффекта. Эффективных методов диагностики антигенной нагрузки животных в настоящее время не существует. Наш способ будет выявлять уже доступные изменения с первых часов жизни у полученного потомства и материнского организма.
Раскрытие изобретения
Задачей предлагаемого изобретения является разработка способа определения антигенной нагрузки у животных, направленного на более релевантное определение иммуногенности антигенов материнского организма в отношении аллоиммунизированых факторов у потомства, позволяющего в относительно короткие сроки определить уровень развития иммунологической толерантности.
Цель изобретения - повышение точности и упрощения процедуры определения нарушения плацентарных условий путем оценки антигенного постоянства материнского организма и организма потомства.
Техническим результатом изобретения является повышение, достоверности лабораторного исследования (неинвазивного пренатального скрининга изоиммунизационных эффектов у плода по крови беременной) за счет выявления состояния повышенной чувствительности материнского организма к антигенам плода реакцией скорости оседания эритроцитов в присутствии специфических белков новорожденного организма. Предлагаемый способ позволяет сформировать группу животных с высоким риском развития иммунологической толерантности.
Технический результат достигается при помощи способа определения антигенной нагрузки животных включающего взятие крови, разделение ее на плазму, при чем, кровь берут у животных сразу после родов из яремной вены и у полученного потомства из пуповинной крови до приема молозива, при этом используют скорость оседания эритроцитов в реакции с пробами крови материнского организма во взаимодействии с сывороткой крови потомства и крови новорожденного животного в присутствии сыворотки крови матери, а также о контрольных пробах крови матери и новорожденного животного с физиологическим раствором, после чего вычисляют коэффициент прогноза по формуле:
где K - коэффициент антигенной нагрузки новорожденного в %; СОЭо - скорость оседания эритроцитов крови новорожденного в присутствии сыворотки крови матери; СОЭк - скорость оседания эритроцитов крови новорожденного о присутствии изотонического раствора хлористого натрия и при значении коэффициента не более 29 животных относят к группе с низкой антигенной нагрузкой, а при повышении коэффициента выше 43 с высокой антигенной нагрузки.
Краткое описание чертежей и иных материалов
На фиг. 1 приведена скорость оседания эритроцитов крови системы «мать-плод-новорожденный» и степень антигенной нагрузки у новорожденных животных
Осуществление изобретения
В период беременности со стороны материнского организма и со стороны плода устанавливается иммунобиологический контроль за антигенным постоянством в функциональной системе «мать-плод». При возникающих нарушениях функционального состояния данной системы происходит нарушение иммунологического равновесия, что влечет за собой структурные нарушения иммунной системы матери и плода. Исходя из этого для полноценного воспроизводства сельскохозяйственных животных необходимо разработать способы оценки антигенного постоянства материнского организма и организма потомства.
Примеры конкретного выполнения способа определения антигенной нагрузки животных.
Пример 1.
У 20 свиноматок сразу после родов из яремной вены и у полученного потомства (180 поросят) из пуповинной крови до приема молозива отбирают кровь для оценки антигенного влияния на иммунную систему новорожденного животного в период внутриутробного развития. Полученную кровь используют для получения сыворотки крови материнского организма и новорожденного животного. Сыворотку получают путем центрифугирования 2500 об/мин. Затем в пипетку Панченкова отбирают сыворотку крови новорожденного и переносят на часовое стекло в имеющуюся в нем лунку. Затем после ополаскивания пипетки в растворе гепарина, для предотвращения свертываемости крови, отбирают кровь материнского организма. После в течении 1 минуты полученную смесь перемешивают концом пипетки и набирают пипетку (сыворотка крови новорожденного + кровь материнского организма) в соотношении 1:2, устанавливая в штатив по наклоном 45°. В качестве контроля используют постановку реакции скорости оседания эритроцитов, в которой вместо крови материнского организма используют изотонический физиологический раствор NaCl 0,9%.
Учет реакции проводят через 1 час анализируя качественные изменения в пробирке Панченкова с наклоном на 45° в опытном и контрольном образце. В опытных пробирках происходит реакция эритрогемолиза - разрушения эритроцитов. Животных относят в группу с нарушением антигенного равновесия с разницей СОЭ в опытной и контрольной пробах в пределах 3,9-8,9 мм за 1 час.
Для определения антигенной нагрузки животных вычисляют коэффициент антигенной нагрузки по формуле
где K - коэффициент антигенной нагрузки новорожденного в %; СОЭо - скорость оседания эритроцитов крови новорожденного в присутствии сыворотки крови матери; СОЭк - скорость оседания эритроцитов крови новорожденного о присутствии изотонического раствора хлористого натрия и при значении коэффициента не более 29 животных относят к группе с низкой антигенной нагрузкой, а при повышении коэффициента выше 43 с высокой антигенной нагрузки.
Степень антигенной нагрузки определяли по результатам исследования скорости оседания эритроцитов животных в опыте и контроле через 1 ч. СОЭ жизнеспособных новорожденных животных составляла в среднем в опыте 3.1 и 2.4 в контроле соответственно 2.3 и 1,7 мм в 1 ч. Коэффициент антигенной нагрузки у жизнеспособных новорожденных составил о пределах 26-29 и приведен в таблице.
Пример 2.
У 10 свиноматок после родов и полученных от них 96 новорожденных поросят отбирали кровь. Взятие крови, проведение исследования и изоантигенную нагрузку новорожденных животных определяли в соответствии с примером 1, по результатам СОЭ в опытной и контрольной пробах через 1 ч. Скорость оседания эритроцитов (средние значения) поросят составила в опытной реакции 8,2 и 9,3, а в контрольном опыте 4,2-5,7 мм в 1 час (см. таблицу).
Пример 3.
У 11 свиноматок после родов и 121 поросенка при рождении брали кровь для определения степени антигенной нагрузки новорожденных животных. Взятие крови и проведение исследования проводят в соответствии с примером 1. Для осуществления способа антигенной нагрузки новорожденных поросят определяли скорость оседания эритроцитов материнской крови в присутствии сыворотки новорожденного и СОЭ крови новорожденного о присутствии сыворотки крови матери. По результатам исследования скорости оседания эритроцитов через 1 ч о опыте и контроле определяли степень жизнеспособности поросят при рождении. СОЭ у нежизнеспособных животных составила о среднем опыте 15.3 и 13,9 мм в 1 ч. а в контроле соответственно 6.4 и 5.2 мм о 1 ч. Коэффициент антигенной нагрузки у нежизнеспособных поросят был высоким и составил в пределах 57-69. Все новорожденные животные были подвержены к различным заболеваниям, которые приводили к отходу. Причиной падежа поросят были заболевания системы органов дыхания и пищеварения. Использование способа обеспечивает повышение точности и снижение трудоемкости определения антигенной нагрузки животного организма при различных функциональных состояниях.
Из проведенного исследования можно сделать вывод о том, что предлагаемое изобретение обладает в отношении известных разработок следующими преимуществами: 1. Предлагаемый способ предназначен для определения антигенной нагрузки животных; 2. Обладает меньшей трудоемкостью в применении, делая его простым и доступным по техническому выполнению на любом сельскохозяйственном предприятии.