ОПТИМАЛЬНО АКТИВИРОВАННЫЕ ДЕНДРИТНЫЕ КЛЕТКИ, ИНДУЦИРУЮЩИЕ УЛУЧШЕННЫЙ ИЛИ ПОВЫШЕННЫЙ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЙ ИММУННЫЙ ОТВЕТ

1. Способ получения выделенных частично зрелых и оптимально активированных дендритных клеток человека, включающий
i) выделение популяции клеток, содержащей РВМС человека, из периферической
крови;
ii) обогащение популяции клеток, содержащей РВМС человека, моноцитарными предшественниками дендритных клеток человека;
ш) культивирование популяции клеток, обогащенной моноцитарными предшественниками дендритных клеток человека, в среде для культивирования тканей, дополненной эффективным количеством средства для индукции дифференцировки дендритных клеток, в течение периода времени, достаточного для дифференцировки моноцитарных предшественников дендритных клеток человека в незрелые дендритные клетки человека;
iv) культивирование популяции клеток, обогащенной незрелыми дендритными клетками человека, с эффективным количеством средства для индукции созревания дендритных клеток с целью активации незрелых дендритных клеток человека в течение от около 10 до около 19 часов; и
v) выделение и промывание активированных дендритных клеток человека.
2. Способ получения выделенных частично зрелых и активированных дендритных клеток человека, включающий:
i) выделение популяции клеток, содержащей моноцитарные предшественники дендритных клеток человека;
ii) культивирование популяции клеток, обогащенной моноцитарными предшественниками дендритных клеток человека, в среде для культивирования тканей, дополненной эффективным количеством средства для индукции дифференцировки дендритных клеток, в течение периода времени, достаточного для дифференцировки моноцитарных предшественников дендритных клеток человека в незрелые дендритные клетки человека;
iii) культивирование популяции клеток, обогащенной незрелыми дендритными клетками человека, с эффективным количеством средства для индукции созревания дендритных клеток с целью активации незрелых дендритных клеток человека в течение от около 10 до около 19 часов; и
iv) выделение и промывание активированных дендритных клеток человека.
3. Способ по п. 2, в котором моноцитарные предшественники дендритных клеток получают из кожи, селезенки, костного мозга, тимуса, лимфатических узлов, пуповинной крови или периферической крови.
4. Способ по любому из пп. 1-3, в котором клетки, являющиеся моноцитарными предшественниками дендритных клеток, представляют собой неактивированные моноцитарные предшественники дендритных клеток.
5. Способ по любому из пп. 1-4, в котором моноцитарные предшественники дендритных клеток получают от подлежащего лечению отдельного субъекта.
6. Способ по любому из пп. 1-4, в котором моноцитарные предшественники дендритных клеток получают от здорового отдельного субъекта, совместимого по HLA с подлежащим лечению отдельным субъектом.
7. Способ по любому из пп. 1 и 2, в котором средство для индукции дифференцировки дендритных клеток представляет собой GM-CSF без какого-либо другого цитокина или GM-CSF в комбинации с IL-4, IL-7, IL-13 или IL-15.
8. Способ по любому из пп. 1 и 2, в котором средство для индукции созревания дендритных клеток представляет собой инактивированную бациллу Кальметта-Герена (BCG), интерферон-γ (IFNγ), липополисахарид (LPS), фактор некроза опухоли-α (TNFα), соединение имидазохинолина, синтетический двунитевой полирибонуклеотид, агонист толл-подобного рецептора (TLR), последовательность нуклеиновых кислот, содержащую неметилированные CpG-мотивы, которые, как известно, индуцируют созревание дендритных клеток, или любую их комбинацию.
9. Способ по п. 8, в котором инактивированная BCG содержит полную BCG, элементы клеточной стенки BCG, полученные из BCG липоарабидоманнаны или компоненты BCG.
10. Способ по п. 9, в котором инактивированная BCG представляет собой термоинактивированную BCG, обработанную формалином BCG или термоинактивированную и обработанную формалином BCG.
5
7
11. Способ по любому из пп. 8-10, в котором эффективное количество BCG составляет от около 10 до около 10 КОЕ на миллилитр среды для культивирования тканей, а эффективное количество IFNγ составляет от около 100 до около 1000 единиц на миллилитр среды для культивирования тканей.
12. Способ по п. 8, в котором соединение имидазохинолина представляет собой соединение имидазохинолин-4-амина.
13. Способ по п. 12, в котором соединение имидазохинолин-4-амина представляет собой 4-амино-2-этоксиметил-α,α-диметил-1 Н-имидазол[4,5-с]хинолин-1 -5-этанол или 1-(2-метилпропил)-1Н-имидазо[4,5-с]хинолин-4-амин или их производное.
14. Способ по п. 8, в котором синтетический двунитевой полирибонуклеотид представляет собой поли[1]:поли[С(12)U].
15. Способ по любому из пп. 1-14, в котором частично зрелые и оптимально активированные дендритные клетки вводят непосредственно в опухоль, в ложе опухоли после хирургического удаления или резекции опухоли, в область ткани, окружающую опухоль, в лимфатический узел, непосредственно дренирующий опухолевую область; непосредственно в проток кровеносного сосуда, который несет кровь или лимфу в опухоль или пораженный опухолью орган, или в кровеносную систему, за счет чего осуществляется доставка клеток в опухоль или пораженный опухолью орган.
16. Способ по любому из пп. 1-15, в котором частично зрелые и оптимально активированные дендритные клетки вводят в качестве вспомогательного средства при лучевой терапии, химиотерапии или их комбинации.
17. Способ по любому из пп. 1-15, в котором активированные дендритные клетки вводят до лучевой терапии, химиотерапии или их комбинации, после них или одновременно с ними.
18. Способ вызова противоопухолевого иммунного ответа, вклюающий введение композиции, содержащей популяцию клеток, обогащенную дендритными клетками человека, которые были подвержены частичному созреванию и оптимальной активации in vitro с помощью средства для индукции созревания дендритных клеток человека в течение от около 10 до около 19 часов, и фармацевтически приемлемый носитель; где композицию вводят в опухоль, ложе опухоли или область ткани, окружающую опухоль, у индивидуума, нуждающегося в таком лечении.
19. Композиция, содержащая частично зрелые и оптимально активированные дендритные клетки человека, индуцированные к созреванию путем культивирования незрелых дендритных клеток со средством для индукции созревания дендритных клеток человека в течение от около 10 до около 19 часов, где частично зрелые и оптимально активированные дендритные клетки продуцируют цитокины, ассоциированные с воспалительным ответом.
20. Композиция по п. 19, в которой цитокины представляют собой фактор некроза опухоли-α (TNFα), интерлейкин 6 (IL-6) и/или интерлейкин 8 (IL-8).