РАЦИОНАЛЬНО РАЗРАБОТАННЫЕ СРЕДЫ ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ КЛЕТОК

1. Способ получения полипептида в культуре клеток, включающий:
(1) обеспечение культуры клеток, содержащей:
а. клетки, содержащие нуклеиновую кислоту, кодирующую полипептид, представляющий интерес, и
б. желаемую среду для культивирования клеток, содержащую концентрацию аминокислот, которую рассчитывают для использования в клеточной массе, концентрацию аминокислот, которую рассчитывают для поддержания жизнедеятельности клеток, и концентрацию аминокислот, которую рассчитывают для введения в полипептид, представляющий интерес; и
(2) поддержание культуры клеток при условиях, которые позволяют экспрессировать полипептид, представляющий интерес.
2. Способ получения полипептида в культуре клеток, включающий
(1) обеспечение культуры клеток, содержащей:
а. клетки, содержащие нуклеиновую кислоту, кодирующую полипептид, представляющий интерес; и
б. желаемую среду для культивирования клеток, содержащую концентрацию аминокислот, которую рассчитывают для использования в клеточной массе, и концентрацию аминокислот, которую рассчитывают для введения в полипептид, представляющий интерес, при этом обе указанные концентрации умножают на коэффициент базового уровня; и
(2) поддержание культуры клеток при условиях, которые позволяют экспрессировать полипептид, представляющий интерес.
3. Способ получения полипептида в культуре клеток, включающий: (1) обеспечение культуры клеток, содержащей:
а. клетки, содержащие нуклеиновую кислоту, кодирующую полипептид, представляющий интерес, и
б. желаемую среду для культивирования клеток, содержащую откорректированную по базовому уровню концентрацию аминокислот А согласно формуле A=[(M·X)+(N·P)+(Y·M·X)]·F, где X - концентрация аминокислоты, которую используют на единицу клеточной массы, Р - концентрация аминокислоты, которую используют для введения в полипептид, представляющий интерес, на единицу титра полипептида, М - коэффициент желаемой пиковой плотности клеток в культуре клеток, N - коэффициент желаемой концентрации полипептида, представляющего интерес, Y - коэффициент стабилизации клеток, a F - коэффициент базового уровня, и
(2) поддержание культуры клеток в условиях, которые позволяют экспрессировать полипептид, представляющий интерес.
4. Способ по п.3, отличающийся тем, что включает также способ извлечения очищенного полипептида из загрузочной жидкости, включающий следующие операции:
пропускание загрузочной жидкости через среду в колонке в рабочих режимах, которые вызывают связывание среды, по меньшей мере, с 2,8 мг полипептида на мл среды, при этом указанную среду выбирают из группы, включающей заряженную ионообменную среду, смолу для хроматографии гидрофобного взаимодействия и смолу для аффинной хроматографии с иммобилизованным металлом, и
извлечение очищенного полипептида из эффлюента колонки.
5. Способ по п.3, отличающийся тем, что включает также способ извлечения очищенного полипептида из загрузочной жидкости, включающий следующие операции:
пропускание загрузочной жидкости через среду в колонке в рабочих режимах, которые определяются коэффициентом распределения, равным, по меньшей мере, 0,1, и
извлечение очищенного полипептида из эффлюента колонки.
6. Способ получения полипептида в культуре клеток, включающий:
(1) обеспечение культуры клеток, содержащей
а. клетки, содержащие нуклеиновую кислоту, кодирующую полипептид, представляющий интерес, и
б. исходную среду для культивирования клеток, при этом объем исходной среды для культивирования клеток составляет примерно 60-99% объема желаемой среды для культивирования клеток;
(2) обеспечение питательной среды для культивирования клеток согласно операции (1), при этом объем питательной среды для культивирования клеток составляет примерно 1-40% объема желаемой среды для культивирования клеток, и получаемая желаемая среда для культивирования клеток содержит концентрацию аминокислот, которую рассчитывают для использования в клеточной массе, концентрацию аминокислот, которую рассчитывают для поддержания жизнедеятельности клеток, и концентрацию аминокислот, которую рассчитывают для введения в полипептид, представляющий интерес; и
(3) поддержание культуры клеток при условиях, которые позволяют экспрессировать полипептид, представляющий интерес.
7. Способ получения полипептида в культуре клеток, включающий:
(1) обеспечение культуры клеток, содержащей
а. клетки, содержащие нуклеиновую кислоту, кодирующую полипептид, представляющий интерес; и
б. исходную среду для культивирования клеток, при этом объем исходной среды для культивирования клеток составляет примерно 60-99% объема желаемой среды для культивирования клеток;
(2) обеспечение питательной среды для культивирования клеток согласно операции (1), при этом объем питательной среды для культивирования клеток составляет примерно 1-40% объема желаемой среды для культивирования клеток, и при этом получаемая желаемая среда для культивирования клеток содержит откорректированную по базовому уровню концентрацию аминокислот А согласно формуле A=[(M·X)+(N·P)+(Y·M·X)]·F, где X - концентрация аминокислоты, которую используют на единицу клеточной массы, Р - концентрация аминокислоты, которую используют для введения в полипептид, представляющий интерес, на единицу титра полипептида, М - коэффициент желаемой пиковой плотности клеток в культуре клеток, N - коэффициент желаемой концентрации полипептида, представляющего интерес, Y - коэффициент стабилизации клеток, a F - коэффициент базового уровня; и
(3) поддержание культуры клеток при условиях, которые позволяют экспрессировать полипептид, представляющий интерес.
8. Способ по п.7, отличающийся тем, что исходная среда для культивирования клеток содержит концентрацию В аминокислоты согласно формуле B=[A-(Z·V)]/(1-V), где Z - концентрация аминокислоты в питательной среде для культивирования клеток, а V - объем питательной среды культуры как доля объема желаемой среды для культивирования клеток.
9. Способ по любому из пп.1-8, отличающийся тем, что Y составляет от 0 до примерно 1,5.
10. Способ по любому из пп.1-8, отличающийся тем, что F составляет примерно 1 до примерно 1,5.
11. Способ по любому из пп.1-8, отличающийся тем, что Y составляет от 0 до примерно 1,5, a F составляет примерно 1 до примерно 1,5.
12. Способ по любому из пп.1-8, отличающийся тем, что содержание тирозина в желаемой среде для культивирования клеток больше или равно примерно 3 мМ.
13. Способ по любому из пп.1-8, отличающийся тем, что содержание лейцина в желаемой среде для культивирования клеток составляет примерно от 7 мМ до примерно 30 мМ.
14. Способ по любому из пп.1-8, отличающийся тем, что содержание лизина в желаемой среде для культивирования клеток составляет примерно от 7 мМ до примерно 30 мМ.
15. Способ по любому из пп.1-8, отличающийся тем, что содержание треонина в желаемой среде для культивирования клеток составляет примерно от 7 мМ до примерно 30 мМ.
16. Способ по любому из пп.1-8, отличающийся тем, что содержание пролина в желаемой среде для культивирования клеток составляет примерно от 7 мМ до примерно 30 мМ.
17. Способ по любому из пп.1-8, отличающийся тем, что содержание валина в желаемой среде для культивирования клеток составляет примерно от 7 мМ до примерно 30 мМ.
18. Способ по любому из пп.1-8, отличающийся тем, что суммарная концентрация лейцина, лизина, треонина, пролина и валина в желаемой среде для культивирования клеток составляет примерно от 35 мМ до примерно 150 мМ.
19. Способ по любому из пп.1-8, отличающийся тем, что суммарная концентрация лейцина, лизина, треонина и валина в желаемой среде для культивирования клеток составляет примерно от 60% до примерно 80% концентрации всех незаменимых аминокислот в желаемой среде для культивирования клеток.
20. Способ по любому из пп.1-8, отличающийся тем, что суммарная концентрация незаменимых аминокислот в желаемой среде для культивирования клеток составляет примерно от 30% до примерно 50% концентрации всех аминокислот в желаемой среде для культивирования клеток.
21. Способ по любому из пп.1-8, отличающийся тем, что концентрация аминокислот в желаемой среде для культивирования клеток составляет примерно от 120 мМ до примерно 350 мМ.
22. Способ по одному из пп.1-8, отличающийся тем, что концентрацию пролина в культуре клеток поддерживают большей, чем примерно 1 мМ.
23. Способ по любому из пп.1-8, отличающийся тем, что концентрацию пролина в культуре клеток поддерживают большей, чем примерно 2 мМ.
24. Способ по любому из пп.1-8, отличающийся тем, что культивирование клеток представляет собой крупномасштабное культивирование.
25. Способ по любому из пп.1-8, отличающийся тем, что указанные клетки представляют собой клетки животных.
26. Способ по любому из пп.1-3, 6 или 7, отличающийся тем, что указанный полипептид очищают.
27. Способ по любому из пп.1-8, отличающийся тем, что указанная среда представляет собой определенную среду.
28. Полипептид, полученный способом по любому из пп.1-27.
29. Фармацевтический состав, содержащий полипептид по п.28 и фармацевтически приемлемый носитель.
30. Способ культивирования клеток, включающий:
(1) обеспечение культуры клеток, содержащей:
а. клетки и
б. желаемую среду для культивирования клеток, содержащую концентрацию аминокислот, которую рассчитывают для использования в клеточной массе, и концентрацию аминокислот, которую рассчитывают для поддержания жизнедеятельности клеток; а также
(2) поддержание культуры клеток в условиях, которые позволяют обеспечить рост и репликацию клеток в культуре клеток.
31. Способ культивирования клеток, включающий:
(1) обеспечение культуры клеток, содержащей:
а. клетки и
б. желаемую среду для культивирования клеток, содержащую концентрацию аминокислот А', откорректированную по базовому уровню согласно формуле A'=[(M·X)+(Y·M·X)]·F, где X - концентрация аминокислоты, которую используют на единицу клеточной массы, М - коэффициент желаемой пиковой плотности клеток в культуре клеток, Y - коэффициент стабилизации клеток, a F - коэффициент базового уровня; а также
(2) поддержание культуры клеток в условиях, которые позволяют обеспечить рост и репликацию клеток в культуре клеток.
32. Способ по п.30 или 31, отличающийся тем, что культивирование клеток представляет собой крупномасштабное культивирование.
33. Способ по п.30 или 31, отличающийся тем, что указанные клетки представляют собой клетки животных.
34. Среда для культивирования клеток, содержащая суммарную концентрацию аминокислот примерно от 120 мМ до примерно 350 мМ.
35. Среда для культивирования клеток, предназначенная для получения полипептида, представляющего интерес, и содержащая суммарную концентрацию аминокислот примерно от 120 мМ до примерно 350 мМ.
36. Среда для культивирования клеток, предназначенная для получения полипептида, представляющего интерес, и содержащая концентрацию аминокислот, которую рассчитывают для использования в клеточной массе, концентрацию аминокислот, которую рассчитывают для поддержания жизнедеятельности клеток, и концентрацию аминокислот, которую рассчитывают для введения в полипептид, представляющий интерес.
37. Среда для культивирования клеток, содержащая концентрацию аминокислоты А', откорректированную по базовому уровню согласно формуле
A'=[(M·X)+(Y·M·X)]·F, где X - концентрация аминокислоты, которую используют на единицу клеточной массы, М - коэффициент желаемой пиковой плотности клеток в культуре клеток, Y - коэффициент стабилизации клеток, a F - коэффициент базового уровня.
38. Среда для культивирования клеток, предназначенная для получения полипептида, представляющего интерес, и содержащая концентрацию А аминокислоты, откорректированную по базовому уровню согласно формуле A=[(M·X)+(N·P)+(Y·M·X)]·F, где X - концентрация аминокислоты, которую используют на единицу клеточной массы, Р - концентрация аминокислоты, которую используют для введения в полипептид, представляющий интерес, на единицу титра полипептида, М - коэффициент желаемой пиковой плотности клеток в культуре клеток, N - коэффициент желаемой концентрации полипептида, представляющего интерес, Y - коэффициент стабилизации клеток, a F - коэффициент базового уровня.
39. Среда для культивирования клеток по любому из пп.34-38, отличающаяся тем, что указанная среда для культивирования клеток представляет собой среду для крупномасштабного культивирования клеток.
40. Среда для культивирования клеток по любому из пп.34-38, отличающаяся тем, что указанная среда для культивирования клеток представляет собой среду для культивирования клеток животных.
41. Среда для культивирования клеток по любому из пп.34-38, отличающаяся тем, что указанная среда для культивирования клеток представляет собой определенную среду.
42. Способ определения оптимизированной концентрации аминокислоты, используемой в среде для культивирования клеток, предназначенной для получения полипептида, представляющего интерес, в культуре клеток, включающий:
(1) определение концентрации аминокислот, которая требуется для клеточной массы клеток при целевой плотности клеток;
(2) определение концентрации аминокислоты, необходимой для продуцирования полипептида, представляющего интерес, при целевом титре полипептида;
(3) определение концентрации аминокислоты, которая требуется для поддержания жизнедеятельности клеток, и
(4) сложение концентраций с операции (1), операции (2) и операции (3) для получения оптимизированной концентрации аминокислоты, применяемой в среде для культивирования клеток с целью продуцирования полипептида, представляющего интерес.
43. Способ определения оптимальной концентрации аминокислоты А, используемой в среде для культивирования клеток, предназначенной для продуцирования полипептида, представляющего интерес, в культуре клеток, включающий:
(1) определение концентрации аминокислоты X, необходимой для клеточной массы клеток при установленной плотности клеток;
(2) определение концентрации аминокислоты Р, необходимой для продуцирования полипептида, представляющего интерес, при установленном титре полипептида; и
(3) определение оптимальной концентрации аминокислоты А согласно формуле A=[(M·X)+(N·P)+(M·Y·X)]·F, где М - коэффициент желаемой целевой плотности клеток в культуре клеток, N - коэффициент желаемой целевой концентрации полипептида, представляющего интерес, Y - коэффициент стабилизации клеток, a F - коэффициент базового уровня.
44. Способ по п.42 или 43, отличающийся тем, что культивирование клеток представляет собой крупномасштабное культивирование.
45. Способ по п.42 или 43, отличающийся тем, что указанная культура клеток представляет собой культуру клеток животных.