Тяжелая дерматофития, вызванная Trichophyton mentagrophytes var. interdigitale, в группе зеленых игуан (Iguana iguana)

ОРИГИНАЛЬНАЯ СТАТЬЯ

Тяжелая дерматофития, вызванная Trichophyton mentagrophytes var. interdigitale, в группе зеленых игуан

Цель: описать результаты клинического, микологического, гистологического и молекулярно-биологического исследования отдельных групп зеленых игуан (Iguana iguana), больных тяжелым дерматомикозом, в районе Тегерана, Иран.

Материалы и методы: образцы кожных чешуек с пораженных участков кожи исследовали стандартными микологическими методами, а также методом ПЦР с использованием пары праймеров для амплификации гена хитин-синтазы 1 (^S1) дерматофитов.

Результаты: всем игуанам был поставлен окончательный диагноз дерматофитии традиционными или молекулярно-биологическими методами. Результаты ПЦР-амплификации с праймерами, содержащими простую повторяющуюся последовательность (GACA)4, были сходны у всех игуан. Внутривидовой вариабельности выделенных штаммов не обнаружено. Олигонук-леотидное секвенирование продуктов гена CHS1 подтвердило, что возбудителем является Trichophyton mentagrophytes var. Interdigitale.

Клиническая значимость: полученные результаты позволяют предположить, что ПЦР с использованием праймеров с последовательностью (GACA)4 является простым и быстрым методом видовой идентификации дерматофитов и дифференциации вариантов T. mentagrophytes.

A.R. Khosravi, H. Shokri*, A. Rostami , I.A. Tamai, A. Erfanmanesh* and I. MemarianT

Journal of Small Animal Practice (2012) 53, 286-291 DOI: 10.1111/j.1748-5827.2012.01217.x Принято: 8 марта 2012

Микологический исследовательский центр, ветеринарный факультет, Тегеранский университет, Тегеран, Иран

* Ветеринарный факультет, Мазендеранский университет, Амол, Иран

Кафедра клинических наук, ветеринарный факультет, Тегеранский университет, Тегеран, Иран ’Академический центр образования, культуры и науки (ACECR), Тегеран, Иран

ВВЕДЕНИЕ

Дерматофития - хорошо известный зооноз, вызываемый грибками родов Microsporum, Trichophyton и/или Epidermophyton и поражающий ороговевающие структуры, например ногти, когти, стержни волос и роговой слой кожи. Возбудителями дерматофитии у животных являются, в частности, Microsporum canis, M. persicolor, Trichophyton verrucosum, Trichophyton mentagrophytes и обнаруженный в почве грибок M. Gyp-seum [17]. К инфекции чувствительны животные любой породы, пола и возраста; клинические признаки включают повреждение волосяных фолликулов, прогрессирующее воспаление, зуд, алопецию, покраснение, шелушение и образование корок различной выраженности; пораженные очаги могут располагаться в любом месте [18]. Передача дерматофитии людям обычно происходит при прямом контакте с животным либо косвенно, через загрязненную грибками шерсть, чешуйки кожи, инструменты и предметы [6, 16]. Идентификация видов и штаммов при вспышках заболевания может помочь установить источник инфекции и разработать план ее контроля. Текущие методы видовой идентификации основаны на культивировании и микроскопии и, несмотря на свою точность, обладают значительным недостатком: культивирование занимает много времени, и часто рост возбудителя на средах подавляется комменсальными микроорганизмами. Для идентификации разных видов и штаммов дерматофи-тов разработаны различные молекулярно-биологические методы. Эти методы считаются более стабильными и точными, чем идентификация по фенотипическим характеристикам [10].

Зеленая игуана (Iguana iguana) - крупная древесная травоядная ящерица семейства Iguana, обитающая в разных частях Ирана. Несмотря на то что в последние годы этих ящериц все чаще содержат в качестве домашних любимцев, что влечет за собой тесный контакт с людьми, о риске зооантропонозных инфекций, распространяемых этими животными, известно немногое. На данный момент опубликовано несколько работ о распространенности дерматофитий у разных рептилий, в том числе зеленых игуан [25], черепах, ящериц и змей [23]. Настоящее исследование проведено для изучения возможности применения методов молекулярной диагностики для исследования зеленых игуан с тяжелой дерматофи-тией, вызванной T. mentagrophytes var. interdigitale.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ Микологический анализ

На нескольких фермах в Тегеране, Иран, были зарегистрированы случаи кожных заболеваний, предположительно микозов, у зеленых игуан. У животных отмечались такие патологические изменения кожи, как утолщение, шелушение, образование корок и глубокий язвенный дерматит по всему телу, а также на голове, хвосте и дистальных частях конечностей (рис. 1а и b). Пораженные участки кожи дезинфицировали 70 % (об/об.) раствором этанола. Для исследования с помощью стерильных хирургических скальпелей брали соскобы на границе пораженных и нормальных участков кожи. Материал высевали на декстрозный агар Сабуро (Merck) с хлорамфенико-лом и циклогексимидом (0,004 %; Sigma) и на среду для дерматофитов (Merck). Культуры инкубировали при 30 °С в течение месяца. При отсутствии роста грибов через 30 суток результат считали отрицательным.

Гистологическое исследование

Биоптаты кожи фиксировали 10 % нейтральным забуференным формалином, заливали в парафин, приготовляли срезы шириной 5-7 мкм и окрашивали гематоксилином-эозином и перйодной кислотой -реактивом Шиффа (PAS).

Выделение грибковой ДНК

Выделенные культуры грибов помещали в стерильные центрифужные микропробирки объемом 1,5 мл. В каждую пробирку вносили 400 мкл буфера АР1 2 и 4 мкл РНКазы А (входит в набор). Для лизиса грибковых клеток применяли многократные циклы размораживания и оттаивания. Процесс повторяли 7 раз, используя сухой лед / этанол и кипящую водяную баню. После этого сохранившиеся мелкие фрагменты мицелия и споры измельчали между дном пробирки и стерильным наконечником для пипетки 1 мл в течение 5 секунд. ДНК выделяли с помощью набора

DNeasy Plant Mini согласно методике начиная с пункта 4 (добавить 130 мл буфера АР2). ДНК элюировали 50 мл буфера АЕ, для ПЦР брали 5 мл продукта элюирования [11]. Непосредственный экспресс-анализ проводили путем определения последовательности гена хитин-синтазы 1 (CHS1) методом ПЦР

ПЦР

ПЦР проводили в амплификаторе (TC-512). Для реакции использовали праймеры, описанные Chung and others [5], CHS1 1S (5'-CAT CGA GTA CAT GTG CTC GC) и CHS1 1R (5'-CTC GAG GTC AAA AGC ACG CC), чтобы амплифицировать фрагмент гена CHS1 длиной 450 п. о. Конечный объем реакционной смеси был 25 мкл; смесь содержала 3 мкл ДНК-мат-рицы, 2,5 мкл буфера для реакции, 0,4 мМоль дезок-синуклеозидтрифосфатов (дНТФ), 1,5 мМоль MgCl2, 0,3 мкл Taq-полимеразы и 0,4 мМоль каждого праймера. Для предварительной денатурации смесь выдерживали при температуре 94 °C в течение 5 минут; затем следовали 35 циклов денатурации при 94 °C в течение 60 секунд, отжига при температуре 62 °C в течение 2 минут и удлинения цепи при 70 °C в течение 2 минут; окончательная фаза удлинения цепи проходила при температуре 72 °C в течение 7 минут. Продукты ПЦР разделяли методом электрофореза в 2 % агарозном геле в течение полутора часов при 80 В и окрашивали бромидом этидия.

Анализ простых повторов методом «отпечатков пальцев»

Анализ простых повторов в последовательности проводили для идентификации возбудителя в образцах, оказавшихся положительными при анализе методом ПЦР. В качестве сердцевинной последовательности микросателлита при ПЦР-амплификации использовали простую повторяющуюся последовательность (GACA)4.

Реакции амплификации проводили в реакционной смеси объемом 50 мкл, содержащей 25 нг матрицы ДНК, 10 ммоль/л трис-HCl (pH = 8,3) и 50 ммоль/л

Рис. 1 (а и б). Кожные поражения у зеленых игуан, пораженных дерматофитами

Рис. 2. Колонии Trichophyton mentagrophytes var. interdigitale с «припудренным» или «замшевым» видом поверхности и желтоватой или розово-коричневой пигментацией обратной стороны колоний

KCl в качестве буфера для реакции; 2,5 ммоль/л MgCl2; 200 ммоль/л каждого дНТФ; 160 нг праймера и 2,5 мкг Taq-полимеразы. Всего в амплификаторе (TC-512) проводили 35 циклов ПЦР, состоявших из денатурации при 93 °С в течение минуты, отжига при 50 °С в течение минуты, удлинения цепи при 68 °С в течение минуты и окончательного удлинения цепи при 68 °С в течение 10 минут. Продукты ПЦР (объем пробы 10 мкл) разделяли электрофорезом в 1 % агарозном геле в течение двух часов при 70 В в 0,5 % буфере ТВЕ. Для видовой идентификации возбудителя гель окрашивали бромидом этидия и рассматривали гель в уФ-свете.

Секвенирование продуктов ПЦР гена CHS1 для окончательного диагноза

Один из 10 образцов с одинаковым составом фрагментов, полученных методом «отпечатков пальцев», выбирали произвольно и секвенировали на анализаторе ДНК Applied Biosystems 3730 xl (Macrogene).

Рис. 3. Макро- и микроконидии со спиральными гифами Trichophyton mentagrophytes var. interdigitale

РЕЗУЛЬТАТЫ

Диагностика дерматофитии

Всем зеленым игуанам был поставлен диагноз дерматофитии на основании положительных результатов посева на среду для грибов и ПЦР гена CHS1. При микологическом исследовании соскобов с кожи в 10 % растворе гидроксида калия были обнаружены разветвленные гифы грибов с гиалиновыми перегородками. При посеве кожных чешуек и биоптатов был выделен T. mentagrophytes var. interdigitale. Через 20 дней колонии T. mentagrophytes var. interdigitale приобретали белый или кремовый цвет, «припудренный» или «замшевый» вид поверхности и желтоватую/розовато-коричневую пигментацию обратной стороны (рис. 2). При микроскопии были видны многочисленные микроконидии от сферической до грушевидной формы, редкие спиральные гифы и сферические хламидиоспоры; последние были обильнее в более старых культурах. Иногда обнаруживались также тонкие, булавовидные колонии с коричневой

Рис. 4

Рис. 5. Результаты электрофореза продуктов ПЦР гена CHS; полоса, соответствующая фрагменту 540 п. о., была классифицирована как очевидно подтверждающая видовую принадлежность дерматофита

пигментацией обратной стороны, принадлежащие Trichophyton entagrophytes var. Interdigitale; при окрашивании лактофеноловым красителем для хлопка были видны разделенные многочисленными перегородками макроконидии с гладкими стенками (рис. 3).

Видовую принадлежность этого дерматофита подтверждали по виду колоний и гиф под микроскопом, а также по способности гидролизовать мочевину в течение 5 дней, способности проникать в волос в течение 12 дней и росту плоских, кремовых или белых колоний с «замшевой» поверхностью и приподнятым белым опушенным центром на 1 % пептоном агаре (Merck).

Результаты гистологического исследования

При исследовании срезов кожи был обнаружен очаговый акантоз и гиперкератоз с многочисленными фрагментами гиф и артроконидиями (рис. 4а и b). Также отмечена псориазоподобная гиперплазия с продолговатыми и булавовидными эпидермальными гребнями. В гистологических препаратах обнаруживались глубоко проникающие гифы T. mentagrophytes var. interdigitale, перемежающиеся с нейтрофила-ми, лимфоцитами, гистиоцитами и плазматическими клетками.

Исследование методом «отпечатков пальцев»

С помощью праймера (GACA)4 мы амплифи-цировали образцы грибковой ДНК от 10 игуан в целях видовой идентификации. При анализе всех образцов был получен одинаковый состав фрагментов, образовавших при электрофорезе девять полос различной интенсивности. Во всех образцах длина фрагментов ДНК варьировала от 270 до 1800 п.о. Образцы, в которых присутствовала полоса 450 п.о., считали очевидно положительными. Результаты предварительно подтвердили, что все игуаны были инфицированы одним возбудителем дерматофитии (рис. 5 и 6).

Mlkb Mlkb

4*1 TVU TIB V4 IVB TM6 TW7 ПИ ЛУИ two

, ш • iso:

И1 111 1111 : I II

75C

* * W il Ы M I < 14 M ш и

500

250

Рис. 6. Результаты электрофореза фрагментов ДНК 10 культур Trichophyton mentagrophytes var. interdigitale, полученных путем амплификации с праймерами

Секвенирование продуктов ПЦР гена CHS1 для окончательного диагноза

После секвенирования (рис. 7) результаты сравнивали с данными из базы BLAST (www.Ncbi.nlm.nih. gov/BLAST/). Последовательность гена CHS1, идентифицированная в настоящем исследовании как известная последовательность T. mentagrophytes var. Interdigitale, оказалась на 100 % идентичной последовательности AB005794 из банка GenBank (последовательность CHS1 T. mentagrophytes var. interdigitale, выделенного от человека).

ОБСУЖДЕНИЕ

Диагностика дерматофитии осложняется наличием нескольких видов и вариантов дерматофитов, а также медленным ростом дерматофитов в культуре и вариабельностью морфологии [19, 21, 22]. Недавние разработки в области амплификации нуклеиновых кислот дали возможность повысить качество и скорость постановки диагноза дерматофитии [15]. Для идентификации разных дерматофитов разработаны различные молекулярно-биологические методы. Такие методы, как, например, анализ полиморфизма длины рестрикционных фрагментов митохондриальной ДНК, секвенирование внутренней транскрибирующейся спейсерной области рибосомной ДНК, секвенирование генов, кодирующих белки, ПЦР, ПЦР с произвольными праймерами и «отпечатки пальцев», позволили достичь значительного прогресса в дифференциации видов и штаммов [13, 14, 26]. Наиболее распространенным видом игуан, содержащихся в неволе, является зеленая игуана (Iguana iguana); популяция домашних игуан быстро увеличивается [2]. Несмотря на большое число публикаций, посвященных

H

>' dbiIAB005794.11 Trichophyton interdigitale gene for chitin synthase 1, partial

Length=622

Score = 665 bits

Strand=Plus/Plus

GTATCGTCTCAGACGGTCGTGCAAAGATAAATCCGCGTACGAGAGCTGTCCTTGCCGGTC 6 0 I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I GTATCGTCTCAGACGGTCGTGCAAAGATAAATCCGCGTACGAGAGCTGTCCTTGCCGGTC 200

TAGGCGTTTACCAAGATGGCATTGCCAAACAGCAGGTCAACGGTAAAGACGTCACTGCGC 120 I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I TAGGCGTTTACCAAGATGGCATTGCCAAACAGCAGGTCAACGGTAAAGACGTCACTGCGC 260

ACATCTACGAATATACCACCCAGATAGGCATGGAGGTCAAGGGCACCCAGGTTATTCTCA 180 I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I ! I I I I I I I I I I I I ACATCTACGAATATACCACCCAGATAGGCATGGAGGTCAAGGGCACCCAGGTTATTCTCA 320

AGCCGCGGCCGGGAATGCCGGTCCAGCTCCTCTTCTGTCTTAAAGAGAAGAACCAGAAGA 240 I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I AGCCGCGGCCGGGAATGCCGGTCCAGCTCCTCTTCTGTCTTAAAGAGAAGAACCAGAAGA 380

AGATCAACTCTCACAGATGGTTCTTCCAAGCCTTTGGTCGCGTCCTCGACCCCAATATCT 300 I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I AGATCAACTCTCACAGATGGTTCTTCCAAGCCTTTGGTCGCGTCCTCGACCCCAATATCT 4 40

GTGTTCTCCTCGACGCGGGAACAAAACCAGGCGGCCGAAGTATATACCAACTCTGGCGTG 360 I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I ! I I I I I I I I I I I I I I I I ! I I I I I I I I I I I I GTGTTCTCCTCGACGCGGGAACAAAACCAGGCGGCCGAAGTATATACCAACTCTGGCGTG 500

Query 1

Sbjct 141

Query 61

Sbjct 201

Query 121

Sbjct 261

Query 181

Sbjct 32;

Query 241

Sbjct 381

Query 301

Sbjct 441

Рис. 7. Результаты сравнения с данными из базы BLAST: 100 % соответствие информации, найденной в банке генов (NCBI), указывает на то, что возбудителем является Trichophyton mentagrophytes var. Interdigitale

заболеваниям рептилий и выделенным от них штаммам бактерий и грибов, информации о зеленых игуанах недостаточно [1, 3, 12, 25]. В Иране имеется большая популяция зеленых игуан, с чем связан растущий интерес к их содержанию в качестве домашних любимцев.

В настоящем исследовании описаны результаты микологического исследования зеленых игуан с тяжелой инфекцией T. mentagrophytes var. interdigitale, содержащихся в неволе. Грибковые инфекции кожи у игуан вызываются разнообразными нитчатыми грибами и дрожжами, хотя часто они идентифицируются неправильно [20]. К другим распространенным возбудителям дерматомикозов у игуан относятся Chry-sosporium anamorph Nannizziopsis vriesii (CANV) [4]. В настоящем исследовании для определения возбудителей использовались разные методы. В целом, T. mentagrophytes var. interdigitale были устойчивы к циклогек-симиду, а морфологические особенности дерматофита в культуре отличались от таковых у Chrysosporium. Действительно, спиральные гифы с макроконидиями наблюдались только у T. Mentagrophytes, но не у Chrysosporium. Кроме того, видовая принадлежность T. mentagrophytes var. interdigitale была подтверждена дополнительными исследованиями, например, способности расщеплять мочевину и проникать в волос, в сочетании с молекулярным типированием с использованием специфических праймеров.

Для секвенирования в настоящем исследовании было выбрано 10 положительных образцов. По нашему

мнению, существует потребность в более удобном и быстром методе диагностики, позволяющем исследовать большое число проб. Мы использовали метод на основе ПЦР с одним коротким олигонуклеотид-ным праймером ^АСА)4. Показано, что этот праймер является полезным инструментом молекулярной идентификации дерматофитов [5, 8, 9, 24]. Недавнее исследование показало, что олигонуклеотидный праймер с простой повторяющейся последовательностью ^АСА)4 позволяет амплифицировать ДНК всех изученных дерматофитов с образованием видоспецифичного состава фрагментов. Однако при разных условиях ПЦР возможны различия в картине электрофореза. Поскольку при наших условиях ПЦР было возможно получение разной картины, мы использовали метод «отпечатков пальцев» в качестве быстрого и удобного метода идентификации возбудителя [7, 8]. После исследования этим методом была показана эквивалентность состава фрагментов стандартному Полученные результаты дали предварительное доказательство инфекции всех игуан одним видом дерма-тофитов. Для анализа последовательности гена СН81 было взято 10 образцов на основании результатов «отпечатков пальцев». Результаты этого исследования показали высокую чувствительность и специфичность ПЦР по сравнению с «золотым стандартом» - посевом на среды для грибов. Десять образцов, оказавшихся положительными по результатам ПЦР гена СН81, также дали положительный результат при посеве. При секвенировании продуктов ПЦР была обнаружена

последовательность гена CHS1 T. mentagrophytes var. interdigitale. Это исследование показало, что анализ методом ПЦР превосходит традиционный культуральный метод по способности к выявлению грибковой инфекции, так как характеризуется лучшей чувствительностью, специфичностью и особенно быстротой. Вероятно, что такая быстрая диагностика позволила бы снизить вероятность распространения инфекции. Однако источник грибковой инфекции остается неясным. Известно, что разные варианты T. mentagrophytes могут сохраняться в почве, а также на покровах грызунов; возможно, что в настоящем исследовании источником инфекции были владельцы. Результаты позволяют предположить, что технология ПЦР для обнаружения гена CHS1 и метод «отпечатков пальцев» с использованием праймеров (GACA)4 изменит стратегии лечения распространенных домашних животных. Эти методы просты в применении, однако основным фактором, ограничивающим их использование в обычной клинической диагностике, является большая стоимость. Тем не менее их можно использовать для идентификации атипичных культур, а также в случаях, когда традиционные методы диагностики дали сомнительный результат.

Конфликт интересов

Ни один из авторов данной статьи не состоит в финансовых или личных взаимоотношениях с другими лицами или организациями, способными повлиять на точность информации и содержание работы.

Благодарности

Данное исследование финансировалось Научным советом Тегеранского университета. Авторы хотели бы поблагодарить д-ра Ашрафи за ценное сотрудничество при исследовании гистологических препаратов.

Литература

1. Abarca M.L., Martorell J. & Castella G. Cutaneous hyalohyphomycosis caused by a Chrysosporium species related to Nannizziopsis vriesii in two green iguanas (Iguana iguana) // Medical Mycology, 2008, 46, 349-354.

2. Ackman D.M., Drabkin P, Birkhead G. & Cieslak P Reptile-associated salmonellosis in New York State // The Pediatric Infectious Disease Journal, 1995, 14, 955-959.

3. Anderson N.L. Diseases of Iguana iguana // Compendium on Continuing Education for the Practicing Veterinarian, 1992, 14, 1335-1338.

4. Bowman M.R., Pare J.A., Sigler L., Naeser J.P, Sladky K.K., Hanley C.S., Helmer P, Phillips L.A., Brower A. & Porter R. Deep fungal dermatitis in three inland bearded dragons (Pogona vitticeps) caused by the Chrysosporium anamorph of Nannizziopsis vriesii // Medical Mycology, 2007, 45, 371-376.

5. Chung TH., Park G.B., Lim C.Y, Park G.C., Choi G.C., Youn H.Y, Chae J.S. & Hwang C.Y A rapid molecular method for diagnosing epidemic dermatophytosis in a racehorse facility // Equine Veterinary Journal, 2010, 42, 73-78.

6. Duek L., Kaufman G., Ulman Y & Berdicevsky I. The pathogenesis of dermatophyte infections in human skin sections // Journal of Infection, 2004, 48, 175-180.

7. Faggi E., Pini G., Campisi E., Bertellini C., Difonzo E. & Mancianti F Application of PCR to distinguish common species of dermatophytes // Journal of Clinical Microbiology, 2001, 39, 3382-3385.

8. Faggi E., Pini G. & Campisi E. PCR Fingerprinting for identification of common species of dermatophytes // Journal of Clinical Microbiology, 2002, 40, 4804-4805.

9. Fari E.L. & Tietz H. Identification of common dermatophytes (Trichophyton, Microspo-rum, Epidermophyton) using polymerase chain reactions // British Journal of Dermatology, 1998, 138, 576-582.

10. Graser Y, Kuijpers A.F.A., Presber W. & de Hoog G.S. Molecular taxonomy of the Trichophyton rubrum complex // Journal of Clinical Microbiology, 2000, 38, 3329-3336

11. Griffin D.W., Kellogg C.A., Peak K.K. & Shinn E.A. A rapid and efficient assay for extracting DNA from fungi // Letter Applied Microbiology, 2002, 34, 210-214.

12. Han J.I., Lee S.J. & Na K.J. Necrotizing dermatomycosis caused by Chrysosporium spp. in three captive green iguanas (Iguana iguana) in South Korea // Journal of Exotic Pet Medicine, 2010, 19, 240-244.

13. Hirai A., Kano R., Nakamura Y, Watanabe S. & Hasegawa A. Molecular taxonomy of dermatophytes and related fungi by chitin synthase 1 (CHS1) gene sequences // Antonie van Leeuwenhoek, 2003, 83, 11-20.

14. Kano R., Aihara S., Nakamura Y, Watanabe S. & Hasegawa A. Chitin synthase 1 (Chs1) gene sequences of Microsporum equinum and Trichophyton equinum // Veterinary Microbiology, 2001, 78, 85-90.

15. Liu D., Coloe S., Baird R. & Pedersen J. Application of PCR to the identification of dermatophyte fungi // Journal of Medical Microbiology, 2000, 49, 493-497.

16. Mahmoudabadi A.Z. Laboratory instrument contamination with dermatophytes a risk for dermatophytosis // Letter Applied Microbiology, 2007, 44, 112-113.

17. Mancianti F, Nardoni S., Cecchi S., Corazza M. & Taccini F. Dermatophytes isolated from asymptomatic dogs and cats in Tuscany, Italy during a 15-year period // Mycopathologia, 2002, 156, 13-18.

18. Moriello K.A. Treatment of dermatophytosis in dogs and cats: review of published studies // Veterinary Dermatology, 2004, 15, 99-107.

19. Ninet B., Jan I., Bontems O., Lechenne B., Jousson O., Panizzon R., Lew D. & Monod M. Identification of dermatophyte species by 28S ribosomal DNA sequencing with a commercial kit // Journal of Clinical Microbiology, 2003, 41, 826-830.

20. Pare J.A., Sigler L., Rosenthal K.L. & Mader D.R. Microbiology: fungal and bacterial diseases of reptiles. In: Reptile Medicine and Surgery. 2nd edn. Ed D.R. Mader. Saunders Elsevier, St Louis, MO, USA, 2006, pp. 217-238.

21. Roque H.D., Vieira R., Rato S. & Luz-Martins M. Specific primers for rapid detection of Microsporum audouinii by PCR in clinical samples? // Journal of Clinical Microbiology, 2006, 44, 4336-4341.

22. Scott D., Muller G., Miller W. & Griffin C. Muller and Kirk’s Small Animal Dermatology. W.B. Saunders, Philadelphia, PA, USA, 2001, pp. 121-122.

23. Schlossberg D. Infections of Leisure. 3rd edn. AMS Press, American Society for Microbiology: Washington, DC, USA, 2009, pp. 206-208.

24. Shehata A.S., Mukherjee PK., Aboulatta H.N., el Akhras A.I., abbadi A.I. & Ghan-noum M.A. Single-step PCR using (GACA)4 primer: utility for rapid identification of dermatophyte species and strains // Journal of Clinical Microbiology, 2008, 46, 2641-2645.

25. Wissman M.A. & Parsons B. Dermatophytosis of green iguanas (Iguana iguana) // Journal of Small Exotic Animal Medicins, 1993, 2, 133-136.

26. Yu J., Wan Z., Chen W., Wang W. & Li R. Molecular typing study of the Microsporum canis strains isolated from an outbreak of tinea capitis in a school // Mycopathologia, 2004, 157, 37-41.