Основы повышения эффективности стафило стрептококковых биопрепаратов

ОСНОВЫ ПОВЫШЕНИЯ ЭФФЕКТИВНОСТИ СТАФИЛО - СТРЕПТОКОККОВЫХ БИОПРЕПАРАТОВ

Д.А. Евглевский, А.В. Поздеев, Б.М. Тагирмирзоев

Аннотация. Разработанные способы получения стафило-стрептококковой анатоксин-вакцины и иммунной сыворотки позволили повысить лечебную и профилактическую эффективность при лучевых и ожоговых поражений кожи, бронхопневмонии, мастите, дерматите.

Ключевые слова: стафилококки, стрептококки, анатоксин-вакцина, детоксикаторы.

В основе регламентированных требований к штаммам стафилококков и стрептококков положена гемолитическая коагулазная, инвазивная и дермонекротиче-ская активность.

Недостатком отечественных и импортных вакцин является выращивание микроорганизмов на мясо-, ка-зеиногидролизатно-глицериновых средах без учета их полирезистентности к антибиотикам и проведение де-токсикации и полимеризации стафило-стрептококковых суперэнтеротоксинов одним 0,5 - 0,7 % раствором формальдегида, который практически не обеспечивает их полноту детоксикации и, следовательно, образования высокоэффективных анатоксинов или анатоксин-вакцин (Коротяев А. И., Бабичев С. А., 1998 г; Нетрусов А. И., Котова И. Б., 2012 г; Дерябин Д. Г., 2000 г; Евглевский Д. А., 2012 г).

Выраженная перекрестная защита согласуется с многолетним применением разработанной анатоксин-вакцины при стафило-стрептококкозе разных видов и пород животных инактивированной вакциной НИИВе им. Мечникова при аэрозольной вакцинации птиц.

В последнее время в НИИ вакцин и сывороток изготавливается вакцина «Стафиловак», представляющая собой комплекс антигенов клеточной «стенки» стафилококков, полученных методом водной экстракции из высушенных ацетоном Б.аигеш.

В целом стафило-стрептококковые анатоксин-вакцины проявляют иммуногенную и протективную (защитная) активность, и в отношении условнопатоген-ной микрофлоры через эффекторную систему иммунитета, осуществляющих процессинг и презентацию антигена Т-лимфоцитами.

Устранение указанных недостатков является актуальной задачей современной иммунопрофилактики.

Известно, что стафилококки и стрептококки являются убикварными (встречающиеся повсеместно) микроорганизмами, а наличие капсулы, состоящей из гиа-луроновой кислоты, аналогичной тканевой, позволяет им избегать действия фагоцитов и тем самым беспрепятственно проявлять свое патогенное действие. Кроме этого, микроорганизмы способны продуцировать суперантигены (САГ), обладающие высоким митогенным действием на Т-клетки.

Суперантигены стрептококков по структуре и биологическим свойствам близки к стафилококковым САГ, которые в большинстве своем представляющие глобулярные белки с молекулярной массой 24-28 кД, способные продуцировать целую панель цитоксинов и вызывать различные заболевания. Однако до сих пор не удалось связать тяжесть заболеваний с определенными суперантигенами данных микроорганизмов, а в защите организма от заболевания основную роль играет не количество антител, а их нейтрализующая активность. Причем спектр нейтрализующих антител должен быть оптимально широким, чтобы инактивировать смесь САГ, продуцируемых стафилококками и стрептококками.

Остается неизученным лечебно-профилактическое действие одновременного применения антитоксических и антимикробных иммунопрепаратов и их влияние на образование антилейкоцидина и антигемозилина при иммунизации животных в зависимости от способа их получения.

Получали стафило-стрептококковую анатоксин-вакцину путем выращивания микроорганизмов на жидкой питательной синтетической среде вместо гидрози-лата Хоттингера в течение 12-15 дней до концентрации стафилококков и стрептококов (10-12 млрд./мл) с последующим автоклавированием, детоксикацией формальдегидом отдельно и с этонием, а в последующем глутаровым альдегидом.

В исследованиях использованы свежевыделенные стафилококки и стрептококки и штаммы микроорганизмов, применяемые при изготовлении анатоксинов и анатоксин-вакцин. Получение иммунных сывороток проводили гипериммунизацией кроликов и 1-2 летних беспородных собак с последующим определением титра гемагглотининов и антилейкоцидина и состояния гуморального и клеточного иммунитета.

Изучение лечебной и профилактической эффективности препаратов проводили при лечении дерматитов, гнойно-некротических ран, пневмоний, маститов.

Для приготовления корпускулярной стафилококковой и стрептококковой анатоксин-вакцины проводили выращивание микроорганизмов в 2-х литровых биобутылях на разработанной питательной синтетической среде с лимонной и янтарной кислотами, глицином, цитратом аммония, фосфорнокислым калием, хлористым натрием, глицерином и т.д. вместо гидрозилата Хоттингера. Инкубирование микроорганизмов проводили в течение 12-15 дней до концентрации 10-12 млрд./мл взвеси стрептококков при ежедневном встряхивании содержимого биобутылей.

После автоклавирования при 1,0 атм. в течение 30 минут, а для инактивации и детоксикации токсино-аллергенов к взвеси микроорганизмов прибавляли формальдегид в два этапа до 0,3% содержания с интервалом 7-8 дней. По окончании детоксикации и инактивации токсиноаллергенов концентрация формалина снижалась с 0,6% до 0,3-0,4%. Для создания депо в биопрепарате к взвеси микроорганизмов прибавляли гидроокись алюминия до 3-5 мг/мл А12О3 .

Полученные биопрепараты использовали для лечения и профилактики стафило-стрептококкозов плотоядных и других видов животных.

Получение гипериммунной сыворотки проводили путем подкожного введения стафилококковой анатоксин-вакцины кроликам по 1,0; 1,5; 2,0; 2,5; и 3,0-4,0 мл с интервалом 4-5 дней, а собакам по 2,0; 3,0; 4,0; 5,0; 6,0; и 7,0 мл с указанным интервалом.

В общей сложности кролики получали 14-15 мл, а собаки 27-28 мл стафилококковой анатоксин-вакцины (11,0±1,0 млрд/мл микроорганизмов). Через 10-12 дней после 6-ти кратной гипериммунизации животных определяли титр противостафилококковых антител в реакции непрямой гемагглютинации (РНГА) в диффузионной реакции преципитации в агаровом геле бактериологических чашек и проводили заключительную подкожную инъекцию анатоксин-вакцины - кроликам по 5,0 мл, а собакам по 10 мл.

Исследование сывороток крови кроликов после 6-ти кратной иммунизации показало, что титр гемагглю-тинов составлял 1:1000±100, а у собак 1:1200±100.

После заключительной 7-ми кратной подкожной иммунизации титр гемагглютинов в сыворотке крови кроликов повысился до 1:1250±100, а у собак 1:1500±100, при 3-х линиях преципитации в агаре.

Полученные сыворотки после консервирования мертиолятом 1:10000, расфасовывали по флаконам.

Исследования показали, что кролики и собаки хорошо переносили весь цикл гипериммунизации, не болели, а кролики прибавляли в весе.

В последующем было установлено, что стафилококковая и стрептококковая анатоксин-вакцина, представляющая автоклавированную суспензию микроорганизмов и их токсинов, инактивированных после дву- кратного подкожного или внутримышечного введения по 2-3 мл с интервалом 10-12 дней предохраняли собак от заболевания пневмониями, маститами и поражениями кожи.

Вакцинация щенков перед или после отъема по 1,5 мл с интервалом 10-12 дней предохраняет животных от заболеваний стафилококковой этиологии и повышает резистентность к возбудителям чумы, энтерита, а для лечения использовали учащенные подкожные введения препарата с 1 мл до 7 мл.

Лечение инфицированных гнойно-некротических ран у собак, а также свиней, кошек проводили путем хирургической обработки раны, т.е. удаляли мертвые ткани, грязь, а затем раневую поверхность у животного орошали из шприца стафилококковой анатоксин-вакциной и к раневой поверхности накладывали марлевую повязку, смоченную биопрепаратом.

Контролем служили животные, у которых после хирургической обработки раны орошали аэрозолью кубатола.

За характером заживления ран наблюдали в течение 15-20 дней с периодическим отбором материала в виде биопсии для гистоисследования с целью сравнительного воздействия анатоксин-вакцины и кубатола на процесс заживления.

Стафило-стрептококковая анатоксин-вакцина с успехом использована при лечении коров, кошек и свиноматок, больных катаральным и гнойно-катаральным маститом (от греч. mastos - грудь, сосок, воспаление молочной железы и сайагЬе - серозное истечение) в сравнении с мастисаном-А.

Анатоксин-вакцину вводили коровам интрацистер-нально по 4-5 мл, а мастисан-А по 15 мл. При этом установлено, что срок лечения коров, больных маститом анатоксин-вакциной, составлял 6-7 суток, а при использовании мастисана-А 10-12 суток.

При этом следует учитывать, что мастисан-А содержит пенициллин и стрептомицин по 50000 ЕД, нор-

сульфазол - 0,25 г, растительного масла 4,5 мл и эмульгатора (воск) - 0,05 г, которые выделяются с молоком.

В то же время при применении САВ молоко можно использовать без ограничения.

Более эффективным оказалось применение стафи-ло-стрептококковой анатоксин-вакцины с диметил-сульфоксидом в соотношении 1:1 и 1:2.

В последующем стафило-стрептококковая анатоксин-вакцина с успехом использована путем двукратного аэрозольного распыления с интервалом 7-12 суток из расчета 1,5-2 литра на птичник с 40-45 тысячами цыплят для профилактики и лечения стафило-стрептококкоза и гриппа птиц.

Повышение лечебно-профилактической эффективности стафило-стрептококковой анатоксин-вакцины было достигнуто вместо формальдегида путем детокси-кации и полимеризации супертоксинов вначале 0,3%-0,4% раствором глутарового альдегида при 40-42еС в течение 3-4 суток, а затем 0,2%-0,3% раствором этония в том же режиме или Биопага-Д или алкилдиметилбен-зиламмония.

Изготовленная по новой технологии стафило-стрептококковкая анатоксин-вакцина с использованием глутарового альдегида и этония проявляла более повышенное лечебно-профилактическое действие при дерматите плотоядных, мастите коров, свиноматок, кошек, бронхопневмоний.

Список использованных источников

1 Коротяев А. И., Бабичев С. А. - Медицинская микробиология, вирусология и иммунология. - СПб., 1998. - С.173-240.

2 Нетрусов А. И., Котова И. Б. Микробиология. - М., 2012.-378 с.

3 Евглевский Д. А., Худяков С. И., Тагирмирзоев Б. М. Физиологические свойства стафилококков, сальмонелл и кишечной палочки, подвергнутых магнитному воздействию // Вестник Курской государственной сельскохозяйственной академии. - 2011. - №6. - С.74-75.

4 Дерябин Д. Г. Стафилококки - экология и патоген-ность. - Екатеринбург, 2000.-236 с.

Информация об авторах

Евглевский Дмитрий Анатольевич, кандидат ветеринарных наук, научный сотрудник ГНУ Курский НИИ агропромышленного производства

Поздеев Александр Владимирович, кандидат ветеринарных наук.

Тагирмирзоев Багир Маилович, ветеринарный врач.