ОЧИЩЕННАЯ АРИЛСУЛЬФАТАЗА A И КОМПОЗИЦИИ НА ЕЕ ОСНОВЕ

1. Способ лечения метахроматической лейкодистрофии (MLD), при этом способ включает введение интратекально субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективной дозы состава, содержащего очищенный белок, представляющий собой рекомбинантную человеческую арилсульфатазу A (rhASA),
где очищенный белок rhASA характеризуется картой протеогликанов, содержащей один или более пиков, соответствующих нейтральному рекомбинантному белку ASA (нейтральному белку ASA), сиалированному рекомбинантному белку ASA (белку ASA с сиаловой кислотой), манноза-6-фосфатированному рекомбинантному белку ASA (белку ASA с M6P), N-ацетил-глюкозамин-манноза-6-фосфатированному рекомбинантному белку ASA (белку ASA, кэппированному M6P) и гибридному рекомбинантному белку ASA (гибридному белку ASA), и
где введение состава приводит к стабилизации или уменьшению прогрессирования по меньшей мере одного симптома MLD.
2. Способ по п. 1, где терапевтически эффективная доза составляет 100 мг.
3. Способ по п. 1, где терапевтически эффективная доза составляет 150 мг.
4. Способ по п. 1, где состав вводят один раз в неделю.
5. Способ по п. 1, где субъект имеет позднюю младенческую форму MLD.
6. Способ по любому из предыдущих пунктов, где стабилизацию или уменьшение прогрессирования MLD оценивают на основании изменения согласно системе классификации общей моторики (GMFC-MLD).
7. Способ по любому из предыдущих пунктов, где введение состава приводит к изменению по уровню GMFC-MLD у субъекта на ≤ 4, ≤ 3 или ≤ 2 уровня от исходного уровня через 2 года лечения.
8. Способ по любому из предыдущих пунктов, где введение состава приводит к сохранению показателя GMFC-MLD через два года лечения.
9. Способ по п. 7 или 8, где сохранение показателя GMFC-MLD представляет собой изменение согласно GMFC-MLD на не более чем 2 уровня от исходного уровня через два года лечения.
10. Способ по любому из пп. 7-9, где исходный уровень представляет собой оценочный показатель согласно GMFC-MLD до первого введения состава.
11. Способ по любому из предыдущих пунктов, где стабилизацию или уменьшение прогрессирования MLD оценивают на основании изменения по шкале оценки общей моторики (GMFM-MLD).
12. Способ по п. 11, где введение состава приводит к сохранению показателя GMFM-MLD через два года лечения.
13. Способ по п. 11 или 12, где показатель GMFM-MLD сохраняется на уровне > 40.
14. Способ по любому из предыдущих пунктов, где стабилизацию или уменьшение прогрессирования MLD оценивают по уровням сульфатидов в спинномозговой жидкости.
15. Способ по любому из предыдущих пунктов, где стабилизацию или уменьшение прогрессирования MLD оценивают по соотношению N-ацетиласпартата/креатина (NAA/cr) в головном мозге.
16. Способ по любому из предыдущих пунктов, где стабилизацию или уменьшение прогрессирования MLD оценивают с использованием уровня согласно системе классификации функции экспрессивной речи при MLD (ELFC-MLD).
17. Способ по любому из пп. 5-16, где субъект имеет исходный уровень GMFC-MLD 1-2.
18. Способ по любому из пп. 5-16, где субъект имеет исходный уровень GMFC-MLD 3.
19. Способ по любому из пп. 5-16, где субъект имеет исходный уровень GMFC-MLD 4.
20. Способ по любому из пп. 5-16, где субъект находится на предсимптоматической стадии.
21. Способ по п. 20, где возраст субъекта составляет менее 18 месяцев.
22. Способ по п. 21, где субъекта оценивают согласно Альбертской шкале двигательной функции у младенцев.
23. Способ по любому из предыдущих пунктов, где белок rhASA имеет аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 70% идентичную SEQ ID NO:1.
24. Способ лечения поздней младенческой формы MLD, при этом способ включает:
введение субъекту состава, содержащего очищенный белок, представляющий собой рекомбинантную человеческую арилсульфатазу A (rhASA), с аминокислотной последовательностью, по меньшей мере на 70% идентичной SEQ ID NO:1,
где очищенный белок rhASA характеризуется картой протеогликанов, содержащей один или более пиков, соответствующих нейтральному рекомбинантному белку ASA (нейтральному белку ASA), сиалированному рекомбинантному белку ASA (белку ASA с сиаловой кислотой), манноза-6-фосфатированному рекомбинантному белку ASA (белку ASA с M6P), N-ацетил-глюкозамин-манноза-6-фосфатированному рекомбинантному белку ASA (белку ASA, кэппированному M6P) и гибридному рекомбинантному белку ASA (гибридному белку ASA), и
где состав вводят интратекально в дозе, составляющей 150 мг, с интервалом, предусматривающим введение один раз в неделю.
25. Способ по любому из предыдущих пунктов, где состав содержит менее приблизительно 150 нг/мг белка клетки-хозяина (HCP).
26. Способ по любому из предыдущих пунктов, где очищенный рекомбинантный белок ASA составляет по меньшей мере приблизительно 23% от общего очищенного рекомбинантного белка ASA, соответствующие манноза-6-фосфатированному рекомбинантному белку ASA (белку ASA с M6P).
27. Способ по любому из предыдущих пунктов, где карта протеогликанов очищенного рекомбинантного белка ASA предусматривает:
от приблизительно 15% до приблизительно 25% нейтрального рекомбинантного белка ASA (нейтрального белка ASA),
от приблизительно 35% до приблизительно 45% сиалированного рекомбинантного белка ASA (белка ASA с сиаловой кислотой),
от приблизительно 23% до приблизительно 33% манноза-6-фосфатированного рекомбинантного белка ASA (белка ASA с M6P),
от приблизительно 1% до приблизительно 10% N-ацетил-глюкозамин-манноза-6-фосфатированного рекомбинантного белка ASA (белка ASA, кэппированного M6P) и
от приблизительно 5% до приблизительно 15% гибридного рекомбинантного белка ASA (гибридного белка ASA).
28. Способ по п. 27, где карта протеогликанов очищенного рекомбинантного белка ASA предусматривает:
от приблизительно 18% до приблизительно 22% нейтрального белка ASA,
от приблизительно 37% до приблизительно 41% белка ASA с сиаловой кислотой,
от приблизительно 26% до приблизительно 29% белка ASA с M6P,
от приблизительно 4% до приблизительно 6% белка ASA, кэппированного M6P, и
от приблизительно 7% до приблизительно 9% гибридного белка ASA.
29. Композиция, содержащая очищенный белок, представляющий собой рекомбинантную человеческую арилсульфатазу A (rhASA), с аминокислотной последовательностью, по меньшей мере на 70% идентичной SEQ ID NO:1, где очищенный белок rhASA характеризуется одним или более видами протеогликанов, выбранными из нейтрального рекомбинантного белка ASA (нейтрального белка ASA), сиалированного рекомбинантного белка ASA (белка ASA с сиаловой кислотой), манноза-6-фосфатированного рекомбинантного белка ASA (белка ASA с M6P), N-ацетил-глюкозамин-манноза-6-фосфатированного рекомбинантного белка ASA (белка ASA, кэппированного M6P) или гибридного рекомбинантного белка ASA (гибридного белка ASA).
30. Композиция по п. 29, где по меньшей мере приблизительно 23% от общего очищенного рекомбинантного белка ASA соответствуют манноза-6-фосфатированному рекомбинантному белку ASA (белку ASA с M6P).
31. Композиция, содержащая очищенный белок, представляющий собой рекомбинантную арилсульфатазу A (rhASA), с аминокислотной последовательностью, по меньшей мере на 70% идентичной SEQ ID NO:1, где
по меньшей мере приблизительно 23% от общего очищенного рекомбинантного белка ASA соответствуют манноза-6-фосфатированному рекомбинантному белку ASA (белку ASA с M6P), характеризующемуся картой протеогликанов; и
композиция содержит менее приблизительно 150 нг/мг белка клетки-хозяина (HCP).
32. Композиция по п. 30 или 31, где белок ASA с M6P присутствует в количестве, которое составляет по меньшей мере приблизительно 26% от содержания общего очищенного белка rhASA.
33. Композиция по п. 30 или 31, где белок ASA с M6P присутствует в количестве, которое составляет по меньшей мере приблизительно 28% от содержания общего очищенного белка rhASA.
34. Композиция по любому из предыдущих пунктов, где белок ASA с M6P присутствует в количестве, которое составляет от приблизительно 20% до приблизительно 33% от содержания общего очищенного белка rhASA.
35. Композиция по любому из пп. 29-34, где общий очищенный белок rhASA предусматривает нейтральный рекомбинантный белок ASA (нейтральный белок ASA), сиалированный рекомбинантный белок ASA (белок ASA с сиаловой кислотой), N-ацетил-глюкозамин-манноза-6-фосфатированный рекомбинантный белок ASA (белок ASA, кэппированный M6P) или гибридный рекомбинантный белок ASA (гибридный белок ASA) или любую их комбинацию.
36. Композиция по п. 30 или 31, где общий очищенный белок rhASA предусматривает:
от приблизительно 23% до приблизительно 33% манноза-6-фосфатированного рекомбинантного белка ASA (белка ASA с M6P),
от приблизительно 15% до приблизительно 25% нейтрального рекомбинантного белка ASA (нейтрального белка ASA),
от приблизительно 35% до приблизительно 45% сиалированного рекомбинантного белка ASA (белка ASA с сиаловой кислотой),
от приблизительно 1% до приблизительно 10% N-ацетил-глюкозамин-манноза-6-фосфатированного рекомбинантного белка ASA (белка ASA, кэппированного M6P) и
от приблизительно 5% до приблизительно 15% гибридного рекомбинантного белка ASA (гибридного белка ASA).
37. Композиция по любому из пп. 29-36, где нейтральный белок ASA присутствует в количестве, которое составляет от приблизительно 16% до приблизительно 22% от общего очищенного белка rhASA.
38. Композиция по любому из пп. 29-37, где нейтральный белок ASA присутствует в количестве, которое составляет от приблизительно 20% до приблизительно 25% от общего очищенного белка rhASA.
39. Композиция по любому из пп. 29-38, где белок ASA с сиаловой кислотой присутствует в количестве, которое составляет от приблизительно 35% до приблизительно 40% от общего очищенного белка rhASA.
40. Композиция по любому из пп. 29-39, где белок ASA с сиаловой кислотой присутствует в количестве, которое составляет от приблизительно 37% до приблизительно 42% от общего очищенного белка rhASA.
41. Композиция по любому из пп. 29-40, где белок ASA, кэппированный M6P, присутствует в количестве, которое составляет от приблизительно 3% до приблизительно 5% от общего очищенного белка rhASA.
42. Композиция по любому из пп. 29-41, где белок ASA, кэппированный M6P, присутствует в количестве, которое составляет от приблизительно 4% до приблизительно 6% от общего очищенного белка rhASA.
43. Композиция по любому из пп. 29-42, где белок ASA, кэппированный M6P, присутствует в количестве, которое составляет от приблизительно 4,5% до приблизительно 5,5% от общего очищенного белка rhASA.
44. Композиция по любому из пп. 29-43, где гибридный белок ASA присутствует в количестве, которое составляет от приблизительно 7% до приблизительно 10% от общего очищенного белка rhASA.
45. Композиция по любому из пп. 29-44, где гибридный белок ASA присутствует в количестве, которое составляет от приблизительно 7,5% до приблизительно 8,5% от общего очищенного белка rhASA.
46. Композиция по п. 30 или 31, где общий очищенный белок rhASA предусматривает:
от приблизительно 16% до приблизительно 23% нейтрального белка ASA,
от приблизительно 37% до приблизительно 42% белка ASA с сиаловой кислотой,
от приблизительно 23% до приблизительно 27% белка ASA с M6P,
от приблизительно 4% до приблизительно 8% белка ASA, кэппированного M6P, и
от приблизительно 7% до приблизительно 10% гибридного белка ASA.
47. Композиция по п. 30 или 31, где общий очищенный белок rhASA предусматривает:
от приблизительно 20% до приблизительно 23% нейтрального белка ASA,
от приблизительно 35% до приблизительно 39% белка ASA с сиаловой кислотой,
от приблизительно 26% до приблизительно 32% белка ASA с M6P,
от приблизительно 3% до приблизительно 5% белка ASA, кэппированного M6P, и
от приблизительно 7% до приблизительно 9% гибридного белка ASA.
48. Композиция по п. 30 или 31, где общий очищенный белок rhASA предусматривает:
от приблизительно 18% до приблизительно 22% нейтрального белка ASA,
от приблизительно 37% до приблизительно 41% белка ASA с сиаловой кислотой,
от приблизительно 26% до приблизительно 29% белка ASA с M6P,
от приблизительно 4% до приблизительно 6% белка ASA, кэппированного M6P, и
от приблизительно 7% до приблизительно 9% гибридного белка ASA.
49. Композиция по любому из пп. 29-48, где общий очищенный белок rhASA присутствует в концентрации, составляющей от приблизительно 20 мг/мл до приблизительно 45 мг/мл.
50. Композиция по п. 49, где общий очищенный белок rhASA присутствует в концентрации, составляющей от приблизительно 25 мг/мл до приблизительно 34 мг/мл или от приблизительно 28 мг/мл до приблизительно 32 мг/мл.
51. Композиция по п. 49, где общий очищенный белок rhASA присутствует в концентрации, составляющей приблизительно 25 мг/мл, приблизительно 26 мг/мл, приблизительно 27 мг/мл, приблизительно 28 мг/мл, приблизительно 29 мг/мл, приблизительно 30 мг/мл, приблизительно 31 мг/мл, приблизительно 32 мг/мл, приблизительно 33 мг/мл или приблизительно 34 мг/мл.
52. Композиция по любому из пп. 29-51, где очищенный белок rhASA имеет специфическую активность, составляющую от приблизительно 50 до приблизительно 130 ед./мл.
53. Композиция по п. 52, где очищенный белок rhASA имеет специфическую активность, составляющую от приблизительно 70 до приблизительно 100 ед./мг.
54. Композиция по п. 52, где очищенный белок rhASA имеет специфическую активность, составляющую от приблизительно 80 до приблизительно 90 ед./мг.
55. Композиция по п. 52, где очищенный белок rhASA имеет специфическую активность, составляющую от приблизительно 75 до приблизительно 95 ед./мг.
56. Композиция по любому из пп. 29-55, где очищенный белок rhASA содержит менее приблизительно 140 нг/мг белка клетки-хозяина (HCP).
57. Композиция по п. 56, где очищенный белок rhASA содержит менее приблизительно 100 нг/мг HCP.
58. Композиция по п. 56, где очищенный белок rhASA содержит менее приблизительно 80 нг/мг HCP.
59. Композиция по п. 56, где очищенный белок rhASA содержит менее приблизительно 60 нг/мг HCP.
60. Композиция по любому из пп. 29-59, где очищенный белок rhASA содержит менее приблизительно 100 пг/мг ДНК клетки-хозяина (HCD).
61. Композиция по п. 60, где очищенный белок rhASA содержит менее приблизительно 50 пг/мг HCD.
62. Композиция по п. 60, где очищенный белок rhASA содержит менее приблизительно 10 пг/мг HCD.
63. Композиция по п. 60, где очищенный белок rhASA содержит менее приблизительно 5 пг/мг HCD, менее приблизительно 4 пг/мг HCD, менее приблизительно 3 пг/мг HCD, менее приблизительно 2 пг/мг HCD или менее приблизительно 1 пг/мг HCD.
64. Композиция по любому из пп. 29-63, где очищенный белок rhASA имеет аминокислотную последовательность, на по меньшей мере 80% идентичную SEQ ID NO:1.
65. Композиция по п. 64, где очищенный белок rhASA имеет аминокислотную последовательность, на по меньшей мере 90% идентичную SEQ ID NO:1.
66. Композиция по п. 64, где очищенный белок rhASA имеет аминокислотную последовательность, на по меньшей мере 95% идентичную SEQ ID NO:1.
67. Композиция по п. 64, где очищенный белок rhASA имеет аминокислотную последовательность, которая идентична SEQ ID NO:1.
68. Композиция по любому из пп. 29-67, содержащая от приблизительно 0,001% до приблизительно 0,01% полисорбата-20 (P20).
69. Состав, содержащий композицию по любому из пп. 29-68 и физиологически приемлемый носитель.
70. Состав по п. 69, где состав является подходящим для внутривенного введения.
71. Состав по п. 69, где состав является подходящим для интратекального введения.
72. Состав по п. 69, где состав является подходящим для подкожного введения.
73. Способ очистки белка, представляющего собой рекомбинантную арилсульфатазу A (ASA), при этом способ включает:
очистку белка, представляющего собой рекомбинантную арилсульфатазу A (ASA), из неочищенного препарата путем проведения одного или более этапов хроматографии;
объединение элюата из одного или более этапов хроматографии;
необязательно регулирование pH объединенного элюата до pH, который составляет от приблизительно 6,0 до приблизительно 8,0;
необязательно подвергание объединенного элюата или отрегулированного по pH элюата ультрафильтрации и/или диафильтрации;
получение элюата, содержащего очищенный белок, представляющий собой рекомбинантную арилсульфатазу A (ASA); и
добавление поверхностно-активного вещества к элюату, содержащему очищенный белок, представляющий собой рекомбинантную арилсульфатазу A (ASA).
74. Способ по п. 73, включающий этап регулирования pH объединенного элюата до pH, который составляет от приблизительно 6,0 до приблизительно 8,0.
75. Способ по п. 74, включающий этап подвергания отрегулированного по pH элюата ультрафильтрации и/или диафильтрации.
76. Способ по любому из пп. 73-75, где указанное добавление поверхностно-активного вещества происходит до холодильного хранения элюата, содержащего очищенный рекомбинантный белок ASA.
77. Способ по любому из пп. 73-75, где указанное поверхностно-активное вещество присутствует в концентрации, которая составляет от приблизительно 0,0001% (объем/объем) до приблизительно 0,01% (объем/объем).
78. Способ по п. 77, где указанное поверхностно-активное вещество присутствует в концентрации, которая составляет от приблизительно 0,001% (объем/объем) до приблизительно 0,01% (объем/объем).
79. Способ по любому из пп. 73-78, где указанное поверхностно-активное вещество представляет собой полисорбат-20 (P20).
80. Способ по любому из пп. 73-79, где этап проведения одного или более этапов хроматографии предусматривает проведение анионообменной хроматографии, хроматографии в комбинированном режиме, хроматографии с гидрофобным взаимодействием, т.е. хроматографии с использованием фенильного сорбента, и катионообменной хроматографии, в указанном порядке.
81. Способ по п. 80, где при анионообменной хроматографии применяют колонку со смолой TMAE.