Характеристика перестроек 11q23/MLL при острых миелоидных лейкозах у детей первого года жизни

ТОМ 5

НОМЕР 4

201 2

КЛИНИЧЕСКАЯ

ОНКО ГЕМАТОЛОГИЯ

КЛИНИКА, ДИАГНОСТИКА И ЛЕЧЕНИЕ МИЕЛОИДНЫХ ОПУХОЛЕЙ

Characteristics of 11q23/MLL rearrangements in infant acute myeloid leukemia

G.A. Tsaur12, E.V. Fleishman3, T.L. Gindina4,

O.M. Plehanova* 1, A.M. Popov12, O.I. Sokova3,

O.V. Aleinikova5, E.V. Volochnik5, A.S. Demina12,

O.V. Kalennik6, I.I. Kalinina7, N.P. Kirsanova5,

K.L. Kondratchik8, A.M. Kustanovich5, T.V. Nasedkina6,

V.A. Ovsepyan9, Yu.V. Olshanskaya7, A.V. Popa3,

T.O. Riger12, L.I. Savelyev1’2’110, O.V. Streneva12,

M.V. Strigaleva1, E.V. Shorikov12, C. Meyer11,

R. Marschalek11, L.G. Fechina1,2

SUMMARY

Prognostic value of 11q23/MLL rearrangements in infant acute myeloid leukemia depends on translocation partner gene. 57 cases of acute myeloid leukemia in infants (<

1 year old) without Down syndrome were included in the current study. 11q23/MLL rearrangements were revealed in 28 patients (49 %). Among this group the majority of patients carried t(10;11)(p12;q23)/MLL-MLLT70 and t(9;11) (p22;q23)/MLL-MLLT3 (in 32 % and 28 % cases, respectively). Incidence of 11q23/MLL rearrangements was similar in children younger and older than 6 months (p = 0,904). Among 11q23/MLL-positive cases AML M5 were detected significantly more often and AML M7 significantly less frequent than in 11q23/MLL-negative patients (p = 0,024 and p = 0,001, correspondingly). The most common breakpoint location within MLL gene was intron 9, detected in 6 out of 12 cases (50 %). Additional chromosomal abnormalities in 11q23/MLL-positive cases were revealed in 7 out of 21 patients with known karyotype (33 %), complex karyotype — in 5 patients (24 %).

Keywords: acute myeloid leukemias, infants less than 1 year old, MLL gene rearrangements.

1 Regional Children’s Hospital No. 1, Ekaterinburg

2 Research Institute of Medical Cell Technologies, Ekaterinburg

3 N.N. Blokhin Russian Cancer Research Center RAMS, Moscow

4 R.M. Gorbacheva Memorial Institute of Children Hematology and Transplantation, I.P. Pavlov State Medical University, St.-Petersburg

5 Belarusian Research Center for Pediatric Oncology, Hematology and Immunology, Minsk

6 Engelhard Institute of Molecular Biology Russian Academy of Science,

Moscow

7 D. Rogachev Federal Research Institute of Pediatric Hematology, Oncology and Immunology Russian Ministry of Health, Moscow

8 Morozov Pediatric Municipal Clinical Hospital, Moscow

9 Kirov Research Institute of Hematology and Transfusiology, Kirov

10 Ural State Medical Academy, Ekaterinburg

11 Diagnostic Center of Acute Leukemia, Institute of Pharmaceutical Biology/ ZAFES, Goethe-University of Frankfurt, Frankfurt/Main, Germany

Контакты: tsaur@mail.ru

Принято в печать: 6 октября 2012 г.

Характеристика перестроек 11q23/MLL при острых миелоидных лейкозах у детей первого года жизни

Г.А. Цаур42, Е.В. Флейшман3, Т.Л. Гиндина4, О.М. Плеханова4, А.М. Попов‘’2, О.И. Сокова3, О.В. Алейникова6, Е.В. Волочник5, А.С. Демина12, О.В. Каленник6, И.И. Калинина7, Н.П. Кирсанова6, К.Л. Кондратчик8, А.М. Кустанович6,

Т.В. Наседкина6, В.А. Овсепян9, Ю.В. Ольшанская7, А.В. Попа3,

Т.О. Ригер' 2, Л.И. Савельев4’2 40, О.В. Стренева42, М.В. Стригалева4,

Е.В. Шориков42, C. Meyer44, R. Marschalek44, Л.Г. Фечина4,2

РЕФЕРАТ

Проведен анализ результатов цитогенетического и молекулярно-генетических исследований, в т. ч. флюоресцентной гибридизации in situ и различных вариантов полимеразной цепной реакции, у 57 пациентов с острыми миелоидными лейкозами (ОМЛ) в возрасте до 1 года. Перестройки 11q23/MLL были выявлены у 28 (49 %) детей. Самыми частыми были транслокации t(10;11)(p12;q23)/MLL-MLLT10 и t(9;11) (p22;q23)/MLL-MLLT3 — 32 и 28 % наблюдений соответственно. Перестройки 11q23/MLL встречались приблизительно с равной частотой у пациентов младше и старше 6 мес. (p = 0,904). В группе детей с перестройками 11q23/MLL острый монобластный лейкоз (М5-вариант по FAB) наблюдался статистически значимо чаще, а острый мегакарио-бластный лейкоз (М7-вариант по FAB) — реже, чем в группе пациентов, у которых изменения 11q23/MLL не были обнаружены (p = 0,024 и p = 0,001 соответственно). У 6 (50 %) из 12 больных точка разрыва в гене MLL располагалась в интроне 9. Дополнительные хромосомные аномалии у пациентов с наличием перестроек 11q23/MLL были выявлены в 33 % случаев, комплексный кариотип — в 24 %.

Ключевые слова:

острые миелоидные лейкозы, дети первого года жизни, перестройки гена MLL.

ВВЕДЕНИЕ

Острые миелоидные лейкозы (ОМЛ) представляют собой гетерогенную группу заболеваний, различающихся по своим морфоцитохи-

мическим, иммунофенотипическим, цитогенетическим и молекулярногенетическим характеристикам. На

долю ОМЛ приходится 15—20 % всех случаев острых лейкозов у детей [1].

1 ГБУЗ CO «Областная детская клиническая больница № 1», Екатеринбург

2 ГБУЗ СО «Институт медицинских клеточных технологий», Екатеринбург

3 ФГБУ «Российский онкологический научный центр им. Н.Н. Блохина» РАМН, Москва

4 Институт детской гематологии и трансплантологии им. Р.М. Горбачевой ГБОУ ВПО СПбГМУ им. акад. И.П. Павлова, Санкт-Петербург

5 ГУ «Республиканский научно-практический центр детской онкологии, гематологии и иммунологии», Минск

6 ФГБУН «Институт молекулярной биологии им. В.А. Энгельгардта» РАН, Москва

7 ФГБУ «Федеральный научно-клинический центр детской гематологии, онкологии и иммунологии им. Дмитрия Рогачева» Минздравсоцразвития России Москва

8 Морозовская детская городская клиническая больница, Москва

9 ФГБУН «Кировский НИИ гематологии и переливания крови Федерального медико-биологического агентства», Киров

10 ГБОУ ВПО «Уральская государственная медицинская академия», Екатеринбург

11 Diagnostic Center of Acute Leukemia, Institute of Pharmaceutical Biology/ZAFES, Goethe-University of Frankfurt, Франкфурт-на-Майне, Германия

365

Г.А. Цаур и др.

Среди генетических изменений, характерных для острых лейкозов у детей первого года жизни, наиболее частыми являются перестройки хромосомного района 11q23 [2], которые обнаруживаются как при остром лимфобластном лейкозе (ОЛЛ), так и при ОМЛ. Ген, расположенный в этом хромосомном районе, непосредственно участвующий в процессах лейкозогенеза, получил название mixed-lineage leukemia (ген MLL) [3, 4]. Прогноз ОМЛ с перестройками 11q23/MLL во многом определяется видом гена-партнера [5—8], которых описано более 100 [9]. Из этого числа на молекулярном уровне охарактеризовано 64 гена-партнера MLL [10].

Выявление перестроек 11q23/MLL важно как для прогнозирования течения ОМЛ, так и для мониторинга минимальной остаточной болезни методами флюоресцентной гибридизации in situ (FISH) и полимеразной цепной реакции (ПЦР), которые представляют собой стандартизованные, легко воспроизводимые и относительно быстро выполняемые методы [11 — 18].

Целью данной работы была характеристика перестроек 11q23/MLL при ОМЛ у детей первого года жизни.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

За период с февраля 2000 г. по ноябрь 2011 г. было обследовано 57 детей с ОМЛ в возрасте до 1 года. Пациенты с синдромом Дауна были исключены из анализа. Диагноз ОМЛ устанавливался на основании стандартных морфологических критериев FAB-классификации [19]. В исследуемой группе было 28 (49 %) мальчиков и 29 (51 %) девочек, медиана возраста составила 6,6 мес. (диапазон 0,1 — 11,9 мес.). Пациенты получали лечение по одному из следующих клинических протоколов: AML-BFM 98, AML-BFM 2004, ОМЛ-ММ 2000, ОМЛ-ММ 2006, НИИ ДОГ ОМЛ 2007. Лечение проводилось в детских онкогематологических клиниках Российской Федерации и Республики Беларусь. Информированное согласие на проведение диагностических и лечебных процедур было получено во всех случаях.

Цитогенетическое исследование клеток костного мозга и крови, взятых до начала терапии, проведено у 47 пациентов. Применялась техника приготовления «прямых препаратов» или краткосрочного культивирования клеток (24 и 48 ч). Окраска хромосомных препаратов проведена методом GTG. В большинстве случаев анализировали не менее 20 метафазных пластинок. Кариотипирование проводили в соответствии с международной номенклатурой хромосом человека, принятой ко времени выполнения стандартного цитогенетического исследования [20—22]. В процессе работы осуществлена повторная оценка всех кариотипов с учетом рекомендаций ISCN 2009 г. [22]. Дополнительными хромосомными аберрациями считали все клональные аномалии, сочетавшиеся с 11q23/MLL [23]. Кариотип расценивался комплексным, если каждая клетка лейкозного клона содержала не менее трех хромосомных изменений, включая перестройки района 11q23 [24, 25].

Исследование методом FISH с использованием локусспецифического зонда LSI MLL Dual Color Break Apart Rearrangement Probe (Abbott Molecular, США) проведено у 25 пациентов. Клетки 4 пациентов исследованы также с применением цельнохромосомных зондов для полного окрашивания хромосом 10 и 11: XCP 10 FITC, XCP 11 Texas Red соответственно (Metasystems, Германия). Все методики выполнялись согласно протоколам производителей.

У 37 детей проведена гнездная ПЦР с обратной транскрипцией (ОТ-ПЦР) для выявления следующих типов химерных транскриптов с участием гена MLL: MLL-AF4, MLL-MLLT1, MLL-MLLT3, MLL-MLLT4, MLL-MLLT10 — по ранее описанным методикам [16, 18, 26]. У 6 пациентов с отсутствием указанных химерных транскриптов дополнительно оценивали экспрессию MLL-MLLT6, MLL-MLLT11, MLL-EPS15, MLL-ELL с использованием набора HemaVision (DNA-technology A/S, Дания). Соответствие химерных генов с вовлечением MLL различным транслокациям хромосомного района 11q23 приведено в табл. 1.

Длинная инвертированная ПЦР (ДИ-ПЦР) выполнена 12 пациентам по ранее описанной методике [27].

Таблица 1. Соответствие перестроек гена MLL различным транслокациям хромосомного района 11q23

Химерный ген с участием MLL Транслокации с вовлечением 11q23

MLL-AF4 t

MLL-MLLT1 t

MLL-MLLT3 t

MLL-MLLT4 t

MLL-MLLT6 t

MLL-MLLT10 t

MLL-MLLT11 t

MLL-EPS15 t

MLL-ELL t

MLL-SEPT9 t

MLL-MYO1F t

Для статистической обработки данных применяли программное обеспечение STATISTICA 8.0. При сравнении групп пациентов по качественным признакам использовался критерий х2 с поправкой Йетса. Различия считали статистически значимыми при p < 0,05.

РЕЗУЛЬТАТЫ

Стандартное цитогенетическое исследование выявило транслокации с участием хромосомного района 11q23 у 14 (30 %) из 47 пациентов. С помощью методов ОТ-ПЦР и FISH перестройки гена MLL обнаружены у 17 (46 %) из 37 и 15 (60 %) из 25 детей соответственно. Метод FISH позволял выявлять перестройки MLL более часто по сравнению с двумя другими методами (p = 0,036). Число пациентов в соответствии с проведенными диагностическими методами представлено на рис. 1.

Рис. 1. Число детей, у которых для выявления перестроек гена MLL были использованы различные диагностические методы, а также их комбинации: стандартное цитогенетическое исследование лейкозных клеток (цитогенетика), ОТ-ПЦР и FISH

366

Клиническая онкогематология

Перестройки 11q23/MLL при ОМЛ у детей

Рис. 2. Относительная частота выявления перестроек гена MLL у пациентов с острым миелоидным лейкозом

В дальнейшем результаты цитогенетического и молекулярно-генетических исследований были объединены в группу перестроек 11q23/MLL и оценивались совместно. Суммарно перестройки 11q23/MLL были выявлены у 28 (49 %) из 57 пациентов.

Транслокация t( 10; 11)(p 12;q23) и ее вариант ins( 10; 11)(p 12;q23q21), ведущие к образованию химерного гена MLL-MLLT10, обнаружены у 9 (32 %) из 28 детей. На 2-м месте по частоте в этой группе оказалась t(9;11)(p22;q23)/MLL-MLLT3 — 28 %. Другие перестройки 11q23/MLL наблюдались значительно реже. В 4 (14 %) случаях методом FISH на интерфазных ядрах была выявлена перестройка гена MLL, однако идентифицировать ген-партнер не удалось (рис. 2).

Для исследования взаимосвязи между типом перестроек 11q23/MLL и возрастом пациентов все случаи ОМЛ у детей первого года жизни были разделены на шесть групп (рис. 3). Перестройки 11q23/MLL чаще всего встречались в возрастной группе 0—2 мес. — 67 %. Наименьшая частота отмечена в группе 8—10 мес. — 30 %. Транслокации t(10;11)(p12;q23)/MLL-MLLT10 и t(9;11)(p22;q23)/MLL-MLLT3 были представлены во всех возрастных группах. При разделении пациентов на две группы — старше и младше 6 мес. — значимых различий в частоте перестроек 11q23/MLL выявлено не было (р = 0,907).

Исследование пунктата костного мозга было выполнено у 50 (88 %) детей, в т. ч. у 24 с перестройками 11q23/ MLL и у 26 — без таковых. У большинства 11q23/MLL-

позитивных больных был установлен острый моно-бластный лейкоз (М5) — 14 (58 %) детей, включая 6 из 9 пациентов с наличием t(10;11)(p12;q23)/MLL-MLLT10 и 6 из 8 пациентов с t(9;11)(p22;q23)/MLL-MLLT3). Острый миеломонобластный лейкоз (М4) был диагностирован у 6 (25 %) больных, острый миелобластный лейкоз с признаками созревания (М2) — у 2 (8 %), острый мие-лобластный лейкоз без признаков созревания и острый миелобластный лейкоз с минимальной дифференцировкой (М1 и М0) — по 1 (4 %). Варианты М3 и М6 отсутствовали. Следует отметить, что у обоих пациентов с химерным геном MLL-MYO1F был М2-вариант ОМЛ. В группе пациентов без перестроек 11q23/MLL преобладал острый мегакариобластный лейкоз (M7) — 11 (42 %) случаев. У 6 (23 %) больных выявлен М5-вариант, у 4 (15 %) — М4, у 2 (8 %) — М2, у 2 (8 %) — М0 и у 1 (4 %) — М1. Таким образом, у пациентов с наличием перестроек 11q23/MLL М5-вариант ОМЛ диагностировался чаще (р = 0,024), а М7 — реже (р = 0,001) по сравнению с группой пациентов, у которых перестройки 11q23/MLL не были обнаружены. Существенных различий в частоте других FAB-вариантов ОМЛ между сравниваемыми группами не выявлено.

Точки разрывов в ДНК MLL при образовании разных химерных генов определены у 12 больных, в т. ч. у 5 с наличием химерного гена MLL-MLLT10, у 3 — с MLL-MLLT3, у 2 — с MLL-MYOF1 и по 1 — с MLL-AF4 и MLL-SEPT9. В 6 (50 %) из 12 случаев точка разрыва локализовалась в интроне 9 гена MLL. Распределение точек разрыва в ДНК

MLL-MLLT10  MLL-MLLT3  MLL-AF4  MLL-MYOIfD Другие 11q23/MLL (+)  MLL (-) Рис. 3. Частота перестроек гена MLL в различных возрастных группах детей первого года жизни с острым миелоидным лейкозом

www.medprint.ru

367

Г.А. Цаур и др.

Рис. 4. Зоны разрывов в ДНК гена MLL в зависимости от типа гена-партнера MLL [28]

гена MLL приведено на рис. 4 [28]. В гене MLLT10 в 2 случаях точка разрыва находилась в интроне 8. Выявлено также по 1 случаю ее локализации в интронах 3, 9 и 14. В гене MLLT3 у 2 пациентов точка разрыва обнаружена в интроне 5, у одного — в интроне 4.

Дополнительные хромосомные аномалии (ДХА) выявлены у 7 (33 %) из 21 пациента с наличием перестроек 11q23/MLL и информативным цитогенетическим исследованием (табл. 2). В 2 случаях обнаружены только количественные ДХА, в 1 — только структурные. В 4 случаях наблюдалось сочетание количественных и структурных ДХА (рис. 5) Наиболее частыми количественными ДХА были дополнительные хромосомы 8 и 19 (5 и 2 случая соответственно), а также моносомия 10 (2 случая). Комплексный кариотип обнаружен у 5 (24 %) пациентов с перестройками 11q23/MLL. У детей без перестроек 11q23/ MLL комплексный кариотип наблюдался в 5 (19 %) из 26 исследованных случаев. Среди всех пациентов, которым проводилось стандартное цитогенетическое исследование, частота комплексного кариотипа составила 21 % (10 из 47 случаев).

ОБСУЖДЕНИЕ

Перестройки 11q23/MLL относятся к наиболее частым генетическим нарушениям при ОМЛ у детей первого года жизни [2]. У детей старше 1 года и взрослых их обнаруживают значительно реже [6, 7, 29]. Полученная в нашей работе частота перестроек 11q23/MLL составила

49 %, что несколько ниже, чем ранее опубликованные данные — 56—66 % [30—32]. Возможной причиной этого служит сравнительно редкое (менее половины случаев) использование метода FISH, который позволяет выявлять любые перестройки MLL, включая криптические [11 — 14, 33]. В тех случаях, в которых данный метод диагностики был нами использован, частота перестроек 11q23/MLL составила 60 %.

Неожиданным оказалось преобладание в нашей серии наблюдений транслокации t( 10; 11)(p 12;q23)/ MLL-MLLT10, которая, по данным литературы, чаще всего бывает на 2-м по частоте месте после t(9; 11) (p22;q23)/MLL-MLLT3 [30, 32]. Отчасти это может объясняться относительно небольшой выборкой па-

Таблица 2. Клинико-лабораторная характеристика пациентов с дополнительными хромосомными аномалиями и перестройками 11q23/MLL

Пациент Комплексный Достижение ремиссии

№ Пол Возраст, мес. FAB-вариант Кариотип FISH кариотип Исходы терапии

1 Ж 11,9 М4 47,XX, +19, t(9;11)(p22;q23) [13] MLLr* Нет Да Пациент остается под наблюдением в ППР** 7,1 мес.

2 М 2,2 М2 46,XY, del(1)(p13), add(4)(p16), add(11)(q23) [7]/46,XY [7] MLLr Да Нет Смерть в индукции через 1,8 мес. от начала лечения

3 М 10,9 — 48,XY, +8, +8 [20]/50, XY, +Y, +8, +8, +9 [2] MLLr Нет — —

4 М 8,0 М5 45,XY, -10, der(11)t(10;11)(p?;q?11), der(16) t(11;16)(q11;p13) [41]/46,XY [3] MLLr Да Да Рецидив через 5,1 мес. от начала лечения. Смерть от рецидива при сроке наблюдения 8,2 мес.

5 Ж 2,1 М5 49,ХХ, +8, +8, der(10)t(10;11;12) (p12;q23q13;q15), -11, -12, +3 mar[14] MLLr Да Да Пациент остается под наблюдением в ППР 59,8 мес.

6 М 4,4 М5 46,XY, t(2;7)(q33;q32) [10]/53, XY, t(2;7) (q33;q32), +6, +8, t(9;11)(p22;q23), +der(9) t(9;11), +19, +20, +21, +22 [10] MLLr Да Нет Отсутствие эффекта через 1,5 мес. от начала лечения; пациент остается под наблюдением 4,2 мес.

7 М 10,5 М5 46-48,XY, t(9;11)(p21;q23), i(12q), -13, +1-3r [21] MLLr Да Да Рецидив через 12 мес. от начала лечения. Пациент остается под наблюдением 17,3 мес.

* MLLr (здесь и далее) — перестройка гена MLL, выявленная методом FISH с зондом LSI MLL Dual Color Break Apart Rearrangement Probe. ** ППР — полная продолжающаяся ремиссия.

368

Клиническая онкогематология

Перестройки 11q23/MLL при ОМЛ у детей

Рис. 5. Частота дополнительных хромосомных аномалий

циентов, но данный вопрос заслуживает дальнейшего изучения.

Особый интерес представляет выявление у детей первого года жизни с ОМЛ редких или нехарактерных для этой возрастной группы транслокаций/генов-партнеров MLL. К редким можно отнести обнаруженные нами химерные гены MLL-MYO1F, MLL-SEPT9, к нехарактерным — t(6;11)(q27;q23).

Полученные нами данные о том, что большинство перестроек 11q23/MLL обнаруживается у пациентов с М5-вариантом ОМЛ, совпадают с ранее опубликованными работами [5—7, 34]. Следует отметить, что оба случая, в которых был выявлен химерный ген MLL-MYOF1, относились к М2-варианту ОМЛ, который редко сочетается с перестройками гена MLL. Ранее было показано, что на его долю приходится 4—5 % всех 11q23/MLL-позитивных случаев [5, 7]. В 2 из 3 описанных в литературе случаев с MLL-MYO1F наблюдался М5а-вариант ОМЛ [35, 36].

Большая протяженность зон разрывов в гене MLL и генах-партнерах значительно усложняет определение индивидуальных точек слияния на уровне геномной ДНК в рутинной лабораторной практике. Применение ДИ-ПЦР, которая наравне с FISH позволяет выявлять любой химерный ген с участием MLL, дает возможность использовать эти индивидуальные перестройки в качестве мишеней для мониторинга минимальной остаточной болезни методом количественной ПЦР [37]. Результаты оценки минимальной остаточной болезни при ОЛЛ у детей первого года жизни путем мониторирования индивидуальных перестроек химерных генов с участием MLL показали хорошую качественную и количественную сопоставимость со стандартным методом определения минимальной остаточной болезни у данной категории пациентов (по индивидуальным перестройкам генов IgHи TCR) [38].

Изучение структуры химерных генов с участием MLL продемонстрировало, что при ОЛЛ у детей точки разрыва в гене MLL наиболее часто локализуются в интроне 11, а при ОМЛ — в интроне 9 [10].

Ранее было показано, что ДХА имеют важное значение для оценки прогноза ОМЛ с перестройками 11q23/MLL. Пациенты, у которых было выявлено сочетание перестроек

11q23/MLL с определенными структурными и/или количественными хромосомными нарушениями, имели более низкие показатели бессобытийной выживаемости и более высокий кумулятивный риск рецидивов по сравнению с пациентами без ДХА. Среди количественных ДХА E. Coenen и соавт. [23] выделяют трисомию 8, ассоциированную с благоприятным прогнозом, а также трисомию 19, которая, наоборот, считается прогностически неблагоприятной. Структурные ДХА в сочетании с перестройками 11q23/ MLL также относятся к маркерам плохого прогноза [23].

Особый интерес вызывает вопрос о сложном (комплексном) кариотипе при ОМЛ у детей первого года жизни. Этот тип нарушений у взрослых больных имеет крайне неблагоприятное прогностическое значение [39]. В настоящее время большинство авторов считают кариотип клеток лейкозного клона сложным, если он содержит не менее трех цитогенетических аномалий. В классическом варианте термин «комплексный кариотип» исключал перестройки 11q23 [39]. В настоящее время некоторые авторы [6, 23—25] включают перестройки 11q23/MLL в число аномалий, которые формируют комплексный кариотип.

В 2008 г. была опубликована статья, специально посвященная вопросу о сложном кариотипе при ОМЛ у детей. В этой работе аномалии района 11q23 в сочетании с двумя или более другими изменениями относили к сложному кариотипу. Частота случаев ОМЛ со сложным кариотипом оказалась самой высокой у детей в возрасте 0—2 года (27,3 %), значительно превосходя этот показатель в других возрастных группах (диапазон 3,3—5,4 %) и даже у пожилых больных (диапазон 8,1 — 12,7 %). Различия статистически высокозначимы (р < 0,001). Очевидно, причиной отмеченных различий является, во-первых, более высокая частота перестроек хромосомного района 11q23 при ОМЛ у детей младшего возраста; во-вторых, перестройки 11q23 нередко сочетаются с несколькими другими аномалиями кариотипа. [40].

Мы относили к сложному кариотипу все случаи с тремя и более хромосомными нарушениями, включая перестройки района 11q23. В результате комплексный кариотип был выявлен с относительно высокой частотой (21 %) у пациентов во всей обследованной группе и в

www.medprint.ru

369

Г.А. Цаур и др.

24 % случаев с перестройками 11q23/MLL. В настоящее время все больше исследователей склоняются к тому, что комплексный кариотип не является самостоятельным прогностическим фактором [6, 23].

ВЫВОДЫ

1. Частота выявления перестроек хромосомного района 11q23/MLL при ОМЛ у детей первого года жизни составила 49 %.

2. Самыми частыми перестройками 11q23/MLL были t(100;11)(p12;q23)/MLL-MLLT10 и t(9;11)(p22;q23)/ MLL-MLLT3.

3. Перестройки 11q23/MLL встречались приблизительно с равной частой у детей младше и старше 6 мес.

4. В группе пациентов с перестройками 11q23/MLL статистически значимо чаще диагностировался М5-вариант ОМЛ и статистически значимо реже — М7-вариант ОМЛ, чем в группе пациентов, у которых перестройки 11q23/MLL не были обнаружены.

5. Чаще всего зоной разрыва в гене MLL служит интрон 9.

6. Дополнительные хромосомные аномалии при ОМЛ с перестройками района 11q23/MLL встречались в 33 % случаев, комплексный кариотип — в 24 %.

Благодарности

Авторы выражают искреннюю благодарность врачам-гематологам, детским онкологам, предоставившим данные о пациентах первого года жизни с ОМЛ, а также сотрудникам цитогенетических и молекулярно-генетических лабораторий Российской Федерации и Республики Беларусь, принимавших участие в диагностике ОМЛ у детей первого года жизни.

ЛИТЕРАТУРА

1. Downing J., Shannon K. Acute leukemia: a pediatric perspective. Cancer Cell 2002; 2(6): 437-45.

2. Biondi A, Cimino G., Pieters R., Pui C.H. Biological and therapeutic aspects of infant leukemia. Blood 2000; 96: 24-33.

3. Ziemin van der Poel S., McCabe N., GUI H. et al. Identification of a gene, MLL, that spans the breakpoint in 11q23 translocations associated with human leukemias. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1991; 88: 10735-9.

4. Tkachuk D., Kohler S., Cleary M. Involvement of a homolog of Drosophila tritorax by 11q23 chromosomal translocations in acute leukemias. Cell 1992; 71: 691-700.

5. Balgobind B., Raimondi S., Harbott J. et al. Novel prognostic subgroups in childhood 11q23/MLL-rearranged acute myeloid leukemia: results of an international retrospective study. Blood 2009; 114: 2489-96.

6. Harrison C., Hills R., Moorman A. et al. Cytogenetics of childhood acute myeloid leukemia: United Kingdom Medical Research Council Treatment trials AML 10 and 12. J. Clin. Oncol. 2010; 28(16): 2674-81.

7. Neuhoff von C., Reinhardt D., Sander A. et al. Prognostic Impact of Specific Chromosomal Aberrations in a Large Group of Pediatric Patients With Acute Myeloid Leukemia Treated Uniformly According to Trial AML-BFM 98. J. Clin. Oncol. 2010; 28(16): 2682-9.

8. Balgobind B., Zwaan C., Pieters R., Heuvel-Eibrink van den M. The heterogeneity of pediatric MLL-rearranged acute myeloid leukemia. Leukemia 2011; 25: 1237-48.

9. Chantrain C.F., Poirel H.A. The genetic signature of acute leukemia in infancy. Hem. Oncol. 2010; 1: 1-8.

10. Meyer С., Kowarz E., Hofmann J. et al. New insights to the MLL recombi-nome of acute leukemias. Leukemia 2009; 23: 1490-9.

11. Thirman M., Gill H., Burnett R. et al. Rearrangement of the MLL gene in acute lymphoblastic and acute myeloid leukemias with 11q23 chromosomal translocations. N. Engl. J. Med. 1993; 329: 909-14.

12. Cuthbert G., Thompson K., Breese G. et al. Sensitivity of FISH in detection of MLL translocations. Genes Chromos. Cancer 2000; 29: 180-5.

13. von Bergh A, Emanuel B., Zelderen-Bhola van S. et al. A DNA probe combination for improved detection of MLL/11q23 breakpoints by double-color interphase-FISH in acute leukemias. Genes Chromos. Cancer 2000; 28: 14-22.

14. Dyson M., Talley P., Reilly J. et al. Detection of cryptic MLL insertions using a commercial dual-color fluorescence in situ hybridization probe. Cancer Genet. Cytogenet. 2003; 147: 81-3.

15. Saxe F., Persons D., Wolff D., Theil K. Validation of Fluorescence In Situ Hybridization Using an Analyte-Specific Reagent for Detection of Abnormalities Involving the Mixed Lineage Leukemia Gene. Arch. Pathol. Lab. Med. 2012; 136: 47-52.

16. Pallisgaard N., Hokland P., Riishoj D. et al. Multiplex reverse transcription-polymerase chain reaction for simultaneous screening of 29 translocations and chromosomal aberrations in acute leukemia. Blood 1998; 92: 574-88.

17. Dongen van J., Macintyre E., Gabert J. et al. Standardized RT-PCR analysis of fusion gene transcripts from chromosome aberrations in acute leukemia for detection of minimal residual disease. Leukemia 1999; 13: 1901-18.

18. Цаур Г.А., Наседкина Т.В., Попов А.М. и др. Время достижения молекулярной ремиссии как фактор прогноза у детей первого года жизни острым лимфобластным лейкозом. Онкогематология 2010; 2: 46-54.

19. Bennett J., Catovsky D., Daniel M. et al. Proposals for the classification of the acute leukaemias. French-American-British (FAB) cooperative group. Br. J. Hematol. 1976; 33: 451-8.

20. ISCN 1995: An International System for Human Cytogenetic Nomenclature. Ed. by F. Mitelman Basel: S. Karger, 1995.

21. ISCN 2005: An International System For Human Cytogenetic Nomenclature. Ed. by L. Shaffer, N. Tommerup. Basel: S. Karger, 2005.

22. ISCN 2009: An International System For Human Cytogenetic Nomenclature. Ed. by L. Schaffer, M. Slovak, L. Campbell. Basel: S. Karger, 2009.

23. Coenen E., Raimondi S., Harbott J. et al. Prognostic significance of additional cytogenetic aberrations in 733 de novo pediatric 11q23/MLL-rearranged AML patients: results of an international study. Blood 2011; 117: 7102-11.

24. WHO Classification of Tumours of Haematopoietic and Lymphoid Tissues. Ed. by S. Swerdlow, E. Campo et al. Lyon: IARC Press, 2008.

25. Betts D., Ammann R., Hirt A. et al. The prognostic significance of cytogenetic aberrations in childhood acute myeloid leukaemia. A study of the Swiss Paediatric Oncology Group (SPOG). Eur. J. Hematol. 2007; 78(6): 468-76.

26. Borkhardt A, Repp R., Haupt E. et al. Molecular analysis of MLL/AF4 recombination in infant acute lymphoblastic leukemia. Leukemia 1994; 8: 549-53.

27. Meyer C., Schneider B., Reichel M. et al. Diagnostic tool for the identification of MLL rearrangements including unknown partner genes. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 2005; 102(2): 449-54.

28. Nilson I., Loechner K., Siegler G. et al. Exon/intron structure of ALL1 (MLL) gene involved in translocations to chromosomal region 11q23 and acute leukemias. Br. J. Hematol. 1996; 94(4): 966-72.

29. Schoch C., Schnittger S., Klaus M. et al. AML with 11q23/MLL abnormalities as defined by the WHO classification: incidence, partner chromosomes, FAB subtype, age distribution, and prognostic impact in an unselected series of 1897 cytogenetically analyzed AML cases. Blood 2003; 102: 2395-402.

30. Hilden J., Smith F., Frestedt J. et al. MLL Gene Rearrangement, Cytogenetic 11q23 Abnormalities, and Expression of the NG2 Molecule in Infant Acute Myeloid Leukemia. Blood 1997; 89(10): 3801-5.

31. Satake N., Maseki N., Nishiyama M. et al. Chromosome abnormalities and MLL rearrangements in acute myeloid leukemia of infants. Leukemia 1999; 13: 1013-7.

32. Creutzig U., Zimmermann M., Bourquin J.-P. et al. Favorable outcome in infants with AML after intensive first- and second-line treatment: an AML-BFM study group report. Leukemia 2012; 26: 654-61.

33. Kobayashi H., Espinosa R., Thirman M. et al. Heterogeneity of breakpoints of 11q23 rearrangements in hematologic malignancies identified with fluorescence in situ hybridization. Blood 1993; 82: 547-51.

34. Kawasaki H., Isoyama K., Eguchi M. et al. Superior outcome of infant acute myeloid leukemia with intensive chemotherapy: results of the Japan Infant Leukemia Study Group. Blood 2001; 98(13): 3589-90.

35. DuhouxF., Ameye G., Libouton J. et al. The t(11;19)(q23;p13) fusing MLL with MYO1F is recurrent in infant acute myeloid leukemias. Leuk. Res. 2011; 35(9): e171-2.

36. Taki T., Akiyama M., Saito S. et al. The MYO1F, unconventional myosin type 1F, gene is fused to MLL in infant acute monocytic leukemia with a complex translocation involving chromosomes 7, 11, 19 and 22. Oncogene 2005; 24: 5191-7.

37. Burmeister T., Marschalek R., Schneider B. et al. Monitoring minimal residual disease by quantification of genomic chromosomal breakpoint sequences in acute leukemias with MLL aberrations. Leukemia 2006; 20: 451-7.

38. Velden van der V., Corral L., Valsecchi M. et al. Prognostic significance of minimal residual disease in infants with acute lymphoblastic leukemia treated within the Interfant-99 protocol. Leukemia 2009; 23(6): 1073-9.

39. Schoch C., Haferlach T., Haase D. et al. Patients with de novo acute myeloid leukemia and complex karyotype aberrations show a poor prognosis despite intensive treatment: a study of 90 patients. Br. J. Hematol. 2001; 112: 118-26.

40. Флейшман Е.В., Сокова О.И., Кириченко О.П. и др. Сложные аномалии кариотипа при остром миелоидном лейкозе детей. Вестн. РАМН 2008; 5: 3-7.

370

Клиническая онкогематология