ВАКЦИНА И СПОСОБ ВАКЦИНАЦИИ ПРОТИВ ПАРВОВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИИ ГУСЕЙ
VACCINE AND METHOD OF GOOSE PARVOVIRUS INFECTION VACCINATION

Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии, в частности к производству вакцин для специфической профилактики парвовирусной инфекции гусей (вирусного энтерита гусей), а также к способам лечения и профилактики этого заболевания.
Парвовирусная инфекция гусей (вирусный энтерит гусей) - острая контагиозная болезнь молодняка гусей и мускусных уток, характеризующая поражением желудочно-кишечного тракта, печени, сердца, поджелудочной железы и других паренхиматозных органов, и сопровождается высокой смертностью (от 30 до 100%). Возбудителем является парвовирус, который относится к семейству Parvoviridae.
Болезнь широко распространена в европейских странах (Германия, Франция, Англия, Венгрия, Чехословакия) и на других континентах. В Российской Федерации она зарегистрирована во многих хозяйствах различных зон.
Наиболее эффективным способом борьбы против ПВИ гусей является вакцинопрофилактика наряду с применением цитратной крови и сыворотки крови гусей реконвалесцентов и гипериммунных сывороток, полученных на различных биологических моделях.
Известна вакцина против вирусного энтерита гусей и способ профилактики вирусного энтерита гусей (1).
6,0
7
3
3
50
50
50
Вакцина содержит культуральную жидкость, штамм вируса Goosa parvovirus ВГНКИ №71, клон 6 с биологической активностью 10-10 ТЦД и защитную среду высушивания при соотношении культуральной жидкости и защитной среды 1:1-1,0:1,5. Способ профилактики заболевания предусматривает введение предлагаемой вакцины гусятам 1-2-суточного возраста в дозе 50-70 тыс. ТЦД в 0,50-0,75 см или взрослым гусям двукратно, за 50-30 суток до начала яйцекладки в дозе 75-100 тыс. ТЦД в 0,75-1,00 см.
Однако эта вакцина даже при двукратном применении не создает длительного напряженного иммунитета у птиц на весь репродуктивный период.
Известна разработанная в Институте птицеводства УААН инактивированная вакцина против вирусного энтерита гусей (2). Однако данная вакцина содержит патогенный штамм парвовируса ХМ-99, выделенный в Украине. К тому же, при разработке схемы вакцинации родительских стад гусей с использованием данного инактивированного биопрепарата его испытывали как в сочетании с живой вакциной (через 14 дней после прививки живой вакциной), так и самостоятельно, применяя однократно или двукратно с интервалом в 14 дней. Однако для подтверждения иммунизаторного эффекта от применения одно- или двукратной прививки инактивированной вакциной необходимы, по мнению авторов, дальнейшие исследования.
Известна вакцина против вирусного заболевания гусей, вызываемого парвовирусом, являющаяся прототипом заявленного изобретения, которая содержит патогенный вирус, инактивированный β-пропиолактоном, что не исключает возможности его реактивации (3).
Задачей, решаемой в рамках заявленной группы изобретений, является создание инактивированной вакцины против парвовирусной инфекции гусей, применяемой в условиях промышленного гусеводства, фермерских хозяйств, создающей длительный напряженный иммунитет у гусей родительского стада на весь репродуктивный период, а также экономичного и технологичного способа вакцинации против парвовирусной инфекции гусей, сокращающего количество вакцинаций с целью уменьшения стрессов и нагрузки на иммунную систему птицы при одновременном сохранении безвредности, антигенной активности и длительности хранения вакцинного препарата.
50/
3
Поставленная задача решена путем создания вакцины, содержащей инактивированный димерэтиленимином антиген парвовируса гусей Штамма Goosa Parvovirus ВГНКИ №71, клон 6 с активностью 6,5-7,5 lg ТЦДсм в смеси с масляным адъювантом Монтанид ISA-70, взятых в соотношении 1:1-1:4, причем концентрация димерэтиленимина составляет не менее 0,1%.
4
5
3
50
Способ вакцинации против парвовирусной инфекции гусей включает внутримышечное введение заявленного вакцинного препарата птице родительского стада однократно за 30 суток до предполагаемой яйцекладки в дозе 2,5·10-2,5·10 ТЦД/см. Как правило, показанием к применению вакцины является неблагополучие в хозяйствах по парвовирусной инфекции гусей.
Штамм Goosa parvovirus ВГНКИ №71, клон 6 используется для приготовления вакцинных препаратов против вирусного энтерита гусей (4).
Штамм депонирован в коллекции ВГНКИ ветеринарных препаратов под номером 71. Вакцинный штамм №71 получают методом селекции. Штамм имеет следующие морфологические, физиологические и культуральные характеристики.
50
Вирионы являются мелкими сферическими с размером 20±2 нм, нуклеокапсид содержит ДНК. В культуре клеток под агаровым покрытием индуцируется образование бляшек с ровными краями размером 1-2 мм. Вирус репродуцируется в культуре клеток гусиных эмбрионов, вызывая острую форму инфекции с выраженным цитопатическим эффектом через 3-4 суток в титрах 6,5-7,0 логарифма ТЦД/05 мл. Штамм апатогенен для развивающихся гусиных эмбрионов, гусят, лабораторных млекопитающих при парэнтеральном введении в дозах, в 100 раз превышающих вакцинальную, не обладает гемагглютинирующей и гемадсорбирующей активностью, устойчив к воздействию эфира и хлороформа, выдерживает температуру 60°C в течение 60 минут, имеет полное антигенное родство с вирулентным вирусом, вызывающим заболевание в гусеводческих хозяйствах.
Содержание и количественное соотношение ингредиентов в вакцине диктуется ее функциональными особенностями.
Изменение соотношения антигена и адъюванта в сторону увеличения количества антигена влечет за собой сокращение срока хранения вакцины и перерасход антигена, что экономически не выгодно. При большем содержании адъюванта по отношению к антигену снижается активность вакцины и вырабатывается недостаточный для защиты от заболевания иммунитет.
Для получения вакцины компоненты, входящие в ее состав, смешивают в гомогенизаторе в течение 5-10 минут при скорости 3000 об/мин.
Вакцина представляет собой однородную эмульсию розовато-беловатого цвета с высокой стабильностью в процессе хранения при t=+(2-8)°C.
4
5
3
50
Заявленный способ вакцинации птиц заключается во введении вышеупомянутой инактивированной вакцины в организм птицы внутримышечно однократно в дозе 2,5·10-2,5·10 ТЦД/см.
3
Как правило, показанием к применению вакцины является неблагополучие по парвовирусной инфекции гусей. Вакцинируют всю клинически здоровую птицу родительского стада за 30 сут перед началом репродуктивного периода. Препарат вводят внутримышечно в объеме 0,5 см/голову.
Сущность и практическая применимость заявленной группы изобретений иллюстрируется следующими примерами.
Пример 1: Приготовление инактивированной вакцины в различных соотношениях 1:4; 1:2,33; 1:1,5; 1:1
Вакцину против парвовирусной инфекции гусей готовят по стандартной методике получения инактивированных эмульсионных препаратов. К 100 объемам инактивированного антигена добавляют 400, 233, 150 и 100 объемов масляного адъюванта Монтанид ISA-70 соответственно. Полученная смесь тщательно перемешивается и разливается во флаконы, хранится при температуре +(2-8)°C.
Вакцину использовали для профилактики парвовирусной инфекции гусей в условиях опытной базы ГНУ ВНИВИП.
Иммуногенную активность контролировали путем выявления специфических антител к парвовирусу гусей в реакции нейтрализации и методом иммуноферментного анализа согласно Методическим указаниям по лабораторной диагностике вирусного энтерита (парвовирусной инфекции) гусей методом иммуноферментного анализа (5, 6).
Полученные результаты испытаний представлены в таблице 1.
Таблица 1
Влияние соотношения Аг:Ад на иммунологические показатели вакцины (титр антител в ИФА)
№ п/п
Кол-во птиц
Соотношение Аг:Ад
Титр антител до вакцинации
Титр антител после вакцинации на (сут)
Иммунная птица, %
28
42
1
10
1:4
414±31
3521±67
3476±136
80
2
10
1:2,33
414±31
11299±92
10220±61
100
3
10
1:1,5
414±31
12050±132
11825±125
100
4
10
1:1
414±31
1200±142
10382±252
100
5
5
контроль
414±31
414±31
414±31
0
Примечание: Аг - антиген; Ад - адъювант
Как следует из приведенных результатов, оптимальным является соотношение антигена и адъюванта 1:2,33. Препарат безвреден для птицы, обладает выраженной антигенной и иммуногенной активностью.
Пример 2
3
4
5
3
50
Полученную вакцину использовали в условиях опытной базы ГНУ ВНИВИП. Для профилактики парвовирусной инфекции гусей вакцинный препарат вводили в объеме 0,5 см/голову однократно в дозе 2,5·10-2,5·10 ТЦД/см внутримышечно в организм птицы родительского стада за 30 суток до начала репродуктивного периода. Полученные результаты испытаний представлены в таблице 2.
Таблица 2
Воздействие различных доз вакцины на иммунологические показатели
№ п/п
Кол-во птиц
Доза вакцины, ТЦД<sub>50</sub>/0,5 см<sup>3</sup>
Титр антител в ИФА*
Иммунная птица, %
до вакцинации
через 28 сут после вакцинации
через 42 сут после вакцинации
1
10
2,5·10<sup>4</sup>
414±31
7011±67
8671±41
100
2
10
2,5·10<sup>4,5</sup>
414±31
9030±72
8390±82
100
3
10
2,5·10<sup>5</sup>
414±31
11299±92
10220±61
100
4
10
контроль
414±31
414±31
414±31
0
Примечание: * - значение титров в обратных величинах
Как следует из приведенных данных, вакцина в испытанных дозах вызывает напряженный иммунитет у гусей.
3
Препарат в 5-кратной дозе (2,5 см/гол.) безвреден для птицы. Однократное применение инактивированной вакцины по сравнению с живой вирусвакциной (1) более экономично и технологично и вызывает длительный иммунитет на весь период яйцекладки.
Источники информации
1. Патент Российской Федерации №2118539, 10.09.1998.
2. Разработка схемы вакцинации гусей против вирусного энтерита с использованием инактивированной вакцины /А.В.Белецкая и др. // Достижения в современном птицеводстве: исследования и инновации. Материалы XVI конференции ВНАП. Сергиев Посад, 2009. - С.336-337.
3. Патент Франции №7406981, 1974.
4. SU №1499917, 15.10.1994.
5. Методические указания для лабораторной диагностики вирусного энтерита (парвовирусной инфекции) гусей методом иммуноферментного анализа / Б.Б.Трефилов, Н.В.Никитина, Д.В.Маслов. - СПб., 2005. - С.12.
6. Патент Российской Федерации №2323743, 10.12.2007.