РЕКОМБИНАНТНАЯ ПЛАЗМИДА pD1spGBD, ШТАММ Escherichia coli-ПРОДУЦЕНТ РЕКОМБИНАНТНОГО БЕЛКА D1-GBD, РЕКОМБИНАНТНЫЙ БЕЛОК D1-GBD И СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ, СПОСОБ ИССЛЕДОВАНИЯ СВЯЗЫВАНИЯ БЕЛКА D1-GBD С АНТИТЕЛАМИ СЫВОРОТОК БОЛЬНЫХ, СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СПЕЦИФИЧЕСКИХ АНТИТЕЛ К БЕЛКУ D1-GBD

1. Рекомбинантная плазмида pD1spGBD размером 4247 н.п., обеспечивающая экспрессию бифункционального рекомбинантного белка D1-GBD, состоящего из домена 1 белка LigA L. interrogans, спейсера из остатков глицина и серина и 1,3 β-глюкансвязывающего домена Cl. thermocellum (GBD), содержащая
искусственный бактериальный оперон химерного белка, включающий
промоторную область раннего промотора бактериофага Т5 (7-87 п.н.),
рекомбинантный ген (115-970 н.п.), кодирующий целевой химерный белок D1-GBD,
нетранслируемую область терминации транскрипции бактериального оперона (993-1089 н.п.);
бактериальный оперон bla (4042-3182 н.п. комплементарной цепи), кодирующий бета-лактамазу, являющуюся селективным маркером для отбора клонов-трансформантов Е. coli методом контр-селекции;
бактериальный участок инициации репликации типа ColE 1 (2419 н.п.).
2. Штамм Escherichia coli M15 [pREP4, pD1spGBD], полученный трансформацией штамма Escherichia coli M15 /pREP4 плазмидой pD1spGBD, депонированный во Всероссийской Коллекции Промышленных Микроорганизмов ФГУП ГосНИИгенетика под номером В-9899 - продуцент рекомбинантного белка D1-GBD, состоящего из домена 1 белка LigA L. Interrogans, спейсера из остатков глицина и серина и 1,3 β-глюкансвязывающего домена Cl. thermocellum (GBD).
3. Способ получения рекомбинантного белка D1-GBD, включающий выращивание клеток штамма Escherichia coli M15 [pREP4, pDlspGBD], получение супернатанта, содержащего белок, иммобилизацию белка путем добавления к супернатанту суспензии 1,3-β-глюкансодержащего сорбента - зимозана А, инкубирование, отмывание сорбента со связавшимся белком, концентрированно иммобилизованного на зимозане А белка на колонке; снятие белка с сорбента, проведение очистки для получения целевого белка.
4. Рекомбинантный белок D1-GBD, состоящий из домена 1 белка LigA L. interrogans,, спейсера из остатков глицина и серина и 1,3 β-глюкансвязывающего домена Cl. thermocellum (GBD), обладающий антигенными свойствами белка LigA L. interrogans, и способностью самопроизвольно связываться с 1,3-β-глюкансодержащим сорбентом - зимозаном А.
5. Способ исследования связывания белка D1-GBD по п.4 с антителами сывороток больных, включающий определение титра специфических антител методом твердофазного непрямого иммуноферментного анализа, для проведения которого в качестве антигена используют рекомбинантный белок D1-GBD по п.4, сорбированный на дне лунок микропланшета.
6. Способ получения специфических антител к белку D1-GBD по п.4, включающий иммобилизацию белка D1-GBD по п.4 на 1,3-β-глюкансодержащем сорбенте - зимозане А, иммунизацию животных иммобилизованным рекомбинантным белком D1-GBD путем трехкратного введения препарата нарастающими дозами без применения дополнительных адъювантов, с последующим отбором крови для определения титра специфических антител, приготовление сыворотки и проведение твердофазного непрямого иммуноферментного анализа для определения титра специфических антител.