Цитоморфологичекая диагностика клеток рака в выпотах и смывах с органов брюшной полости на биочипах

XXI РОССИЙСКИЙ ОНКОЛОГИЧЕСКИЙ КОНГРЕСС

ТЕЗИСЫ

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ОНКОЛОГИЯ

ционирование (26 человек), стереотаксическая радиотерапия (10 наблюдений), радиохирургия (4 больных). Повторному облучению подверглись 15 пациентов; в 1 случае это был третий курс лучевой терапии, еще в одном — четвертый. Результаты. Все пациенты закончили курс протонной терапии без вынужденных перерывов. Сроки наблюдения за 60 больными составили от трех до 18 месяцев. Еще 18 больных наблюдаются менее трех месяцев. В 28 случаях в процессе лечения наблюдались дерматиты, в 4 — мукозиты. При этом только у 7 пациентов острая токсичность достигла Grade 3. Наблюдалась взаимосвязь между близостью мишени к коже или к слизистым и выраженностью лучевых реакций. Через три месяца после лечения у 44 больных наблюдалась стабилизация процесса, в 9 случаях — частичный регресс опухоли, еще у 7 больных (все с глиомами Grade III—IV) — прогресси-рование процесса. Не менее года наблюдается 27 человек. Из них у одного выявлен полный регресс опухоли, у 8 — частичный, в 13 случаях отмечена стабилизация процесса, еще в 5 — его прогрессирование. Все случаи прогрессирова-ния процесса зарегистрированы у больных с высокоагрессивными формами глиом.

Выводы. первые клинические результаты свидетельствуют о хорошей переносимости и непосредственной эффективности разработанных методик лечения. Продолжается набор клинического материала и наблюдение за ранее пролеченными больными.

Влияние тетрайодотироуксусной кислоты на течение рака яичника в эскперименте

И. В. Соболев', К. А. Сулин2, Р. И. Глушаков2, Н. И. Тапильская3 Место работы: 'Санкт-Петербургский КНПЦ СВМТ (онкологический), Санкт-Петербург; 2Военно-медицин-ская академия имени С. М. Кирова, Санкт-Петербург; 3Санкт-Петербургский государственный педиатрический университет МЗ РФ, Санкт-Петербург. e-mail: glushakovruslan@gmail.com

Негеномные эффекты тиреоидных гормонов, заключающиеся в воздействие на интегриновый рецептор клеточной мембраны и проводящие к последующей активации фос-фотидил-инозитол-3-киназы, митоген-активируемой про-теин-киназы и серин-треониновой киназы, осуществляются за счет воздействия на мембранный рецептор — интегрин CD51/CD61). Тетрайодотироуксусная кислота (TETRAC) является блокаторов интегринового рецептора тиреоидных гормонов, что открывает перспективы воздействия на мембранный рецептор.

Задача исследования. В эксперименте установить влияние TETRAC на на течение опухолевого процесса на модели перевиваемого рака яичника.

Материалы и методы. Экспериментальное исследование проведено на 38 половозрелых лабораторных самках белых беспородных крыс (возраст 7—8 недель, масса 200—250 г) с перевитыми клетками рака яичника. Работа проведена в соответствии с этическими принципами, установленными Европейской конвенцией по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и других научных целей (Страсбург, 18.03.1986 г., 15.06.2006 г.) и одобрена локальным этическим комитетом. Культуру опухолевых клеток рака яичника разводили в стерильном растворе Хенкса до концентрации 3,5х106 клеток в 0,1 мл, далее вводили крысам внутрибрюшинно в стерильном физиологическом растворе. Лабораторные животные были рандомизиро-

ванно распределены на 2 равные группы: 1 (основная) группа получала однократное внутрибрюшинное введение TETRAC в дозе 1 мг на 100 г массы животного через 48±2 часа после введения опухолевых клеток, 2 группа служила контролем. Для оценки течения опухолевого процесса оценивались медиана продолжительности жизни и увеличение продолжительности жизни лабораторных животных. При оценке продолжительности жизни животных последним днем жизни считался предыдущий день перед днем гибели. Статистический анализ показателей выживаемости проводили с использованием критерия Лиллиефорса, показателей медианы продолжительности жизни в группах — с помощью непараметрического критерия U (Манна-Уитни), кривых выживаемости — по тесту Мантела-Кокса. Результаты. Медианы продолжительности жизни лабораторных животных составила 16,7±2,7 и 9,2±1,9 дней для основной и контрольной группы соответственно. Увеличение продолжительности жизни составило +81,5% в основной группе (при однократном введении TETRAC). Заключение. Таким образом, медикаментозное воздействие на интегриновый рецептор у лабораторных животных с перевиваемым раком яичника приводит к статистически достоверному торможению роста опухоли.

Цитоморфологичекая диагностика клеток рака в выпотах и смывах с органов брюшной полости на биочипах

М. В. Савостикова', Е. Ю. Фурминская', Е. С. Федосеева', А. Г. Кудайбергенова', С. В. Сметанина2, С. В. Зиновьев2, О. В. Уткин3

Место работы: 'ФГБУ «РОНЦ им. Н. Н. Блохина» Минздрава России, Москва; 2ГБУЗ НО «НОКОД», Нижний Новгород; 3ФБУН ННИИЭМ им. академика И. Н. Блохиной, Нижний Новгород

e-mail: savostikovamv@yandex.ru

Для дифференциальной диагностики метастатических и реактивных выпотов и смывов используется монокло-нальное антитело к поверхностному гликопротеину Ber-EP4, конъюгированному с флуорохромом Cy3 на биочипах. Высокая диагностическая специфичность, чувствительность и точность, а также простота и быстрота исполнения этого метода на биочипах позволяют успешно применять его в повседневной практике цитолога.

Цель. Показать преимущества применения флуоресцентного иммуноцитохимического исследования (ФИЦХ) выпотных жидкостей на биочипах.

Материалы и методы. Цитологически и ФИЦХ исследовано 86 выпотных жидкостей и смывов с брюшной полости на биочипах. Биочип — это стеклопрепарат, разделенный на равные ячейки. Каждая ячейка имеет адгезивное покрытие и моно-клональным антителом Ber-Ep4, конъюгированным с флуо-рохромом Cy3. На первом этапе проводили цитологическое исследование смывов и выпотов на жидкостных препаратах Cytospin-3 с использованием светового микроскопа. На втором этапе проводили исследования на биочипах с МКАТ Ber-EP4-Cy3. После оценки флуоресценции материал фиксировали и проводили окраску по Лейшману — третий этап. Результаты. Проведено 86 исследований. При цитологическом исследовании специфический экссудат диагностирован в 35 наблюдениях, экссудат с реактивными изменениями мезотелия в 19, предположительный диагноз о наличии метастатического выпота — 32. Из 35 наблюдений, расцененных

Злокачественные опухоли

www.malignanttumours.org

Том / Vol. 7 № 3 S 1 /2017

Malignant Tumours

www.malignanttumours.org

XXI РОССИЙСКИЙ ОНКОЛОГИЧЕСКИЙ КОНГРЕСС

ТЕЗИСЫ

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ОНКОЛОГИЯ

как выпот с наличием метастатаза аденокарциномы (АК), в 33 подтвердился специфический выпот положительной ФИЦХ с Ber-EP4-Cy3 на биочипах. Два наблюдения из 35 не выявило экспрессию с МКАТ Ber-Ep4-Cy3. В одном случае заключение было изменено на реактивный выпот, а второй — расценен как метастаз низкодифференцированного серозного рака ячников.

Из 19 наблюдений экссудатов и смывов с реактивными изменениями мезотелия после реакции на биочипах с МКАТ Ber-Ep4-Cy3: в 12 наблюдениях изменения были представлены реактивным мезотелием, в 7 — выявлены клетки метастаза АК. В 37% (n=32) наблюдений, требующих проведения дополнительных ФИЦХ исследований, в 17 наблюдениях изменения были представлены реактивным мезотелием, в 15 — выявлены клетки метастаза АК.

Исследования показали преимущества использования биочипов:

• Возможность использования системы обратного контроля.

• Используемый флуорохром имеет длительный срок флуоресценции.

• При малом количестве опухолевых клеток в полученном материале в 15 раз возрастает вероятность их обнаружения.

• Низкая себестоимость

Выводы. ФИЦХ исследование с МКАТ Ber-Ep4 — Cy3 на биочипах является надежным и быстрым методом диагностики характера выпотных жидкостей.

Цитоморфологическая диагностика ликвора при первичных и метастатических поражениях головного мозга с применением иммуноцитохимии

М. В. Савостикова', Л.Я. Фомина', Е. С. Федосеева', Е. Ю. Фурминская'

Место работы: 'ФГБУ «РОНЦ им. Н. Н. Блохина» Минздрава России

e-mail: savostikovamv@yandex.ru

Цитологическое исследование ликвора является «золотым стандартом» диагностики и, наряду с другими современными методами, позволяет повысить выявляемость первичных и метастатических поражений головного мозга. Для обнаружения зачастую немногочисленных клеток злокачественного новообразования в ликворе и уточнения их гистогенеза в нашей работе мы прибегаем к иммуноцитохимическому исследованию (ИЦХ).

Цель. Оценить возможности цитоморфологической и ИЦХ при исследовании ликвора с первичными и метастатическими поражениями головного мозга.

Материалы и методы. Проведено 60 цитологических исследований ликвора, полученного посредством люмбальной или вентрикулярной пункции, а также пункции объемных образований головного мозга, от 27 пациентов. У женщин подавляющее большинство вторичных поражений ЦНС (12 случаев) было представлено метастазами рака молочной железы, в одном случае диагностирована метастатическая меланома; у мужчин в трех случаях были выявлены метастазы рака легкого и в одном — метастаз плеоморфной липосаркомы. У 7 пациентов были верифицированы первичные опухоли головного мозга (медуллобластомы — 2, глиобластомы — 3, лимфома — 1, тератоидная рабдоидная опухоль — 1). Еще у трех пациентов по данным МРТ имели место доброкачественные, либо неопухолевые изменения головного мозга (аденома гипофиза — 1, очаг ишемии — 1, очаг атрофии — 1). Весь объем СМЖ был использован

для приготовления серии монослойных препаратов с помощью системы Cytospin-3. С целью уточнения цитологического диагноза 7 пациентам были проведены ИЦХ реакции с использованием моноклональных антител к общим цито-кератинам (panCK), СК7, CD3, CD20, CD45, ER, ki67, S100, HMB45, melan A, десмину, ЭМА, Ber-EP4, p63, TTF-1, синапто-физину (Dako) на иммуногистостейнере Ventana. Результаты исследования. У 13 из 17 пациентов метастатические поражения головного мозга подтвердились цитологически. У 7 обследованных по поводу первичных опухолей ЦНС клетки опухоли в СМЖ были обнаружены в трех случаях. В трех наблюдениях с доброкачественными и неопухолевыми образованиями головного мозга клетки опухоли обнаружены не были. Из 60 цитологических исследований СМЖ в 29 случаях удалось выявить клетки опухоли. Чувствительность цитологического исследования составила 51%, что согласуется с данными мировой литературы. Иммуноцитохимическое исследование позволило определить гистогенез метастатической опухоли в 4 наблюдениях, в 2 — первичной опухоли головного мозга (лимфома, медул-лобластома), в 1 доказать отсутствие опухоли. Выводы. ИЦХ исследования расширяют возможности цито-морфологии в выявлении опухолевых клеток и определении их гистогенеза, однако традиционно малый объем ликвора и его низкая клеточность иногда ограничивает применение данного метода.

Новый взгляд на цитоморфологическую диагностику рака яичников

М. В. Савостикова', К. И. Жорданиа', Ю. Г. Паяниди', Н. Н. Гокадзе'

Место работы: 'ФГБУ «РОНЦ им. Н. Н. Блохина» Минздрава России, Москва

e-mail: savostikovamv@yandex.ru

Рак яичников — одна из самых трудных проблем для онкологов всего медицинского мира. За последние 30 лет выживаемость больных этой патологией увеличилась лишь на 13%. Материалы и методы. В лаборатории клинической цитологии ФГБУ РОНЦ им. Н. Н. Блохина выполнено 79 цитологических и 218 иммуноцитохимических исследований интраоперационных смывов и аспиратов из полости матки при патологии яичников и профосмотре: 36-карцином яичника, 5 — рак после нерадикального или ХТ лечения, 10 — метастазов в яичник, 12 — доброкачественные опухоли яичников, 16 — без патологии яичников.

Выводы.

— При цитологическом исследовании у 29 (74%) из 39 пациенток с диагнозом «рак яичников» в материале из полости матки (в 20 смывах и 19 аспиратах) отмечались единичные клетки и комплексы клеток соответствующих АК яичников. При ИЦХ исследовании материала из полости матки у пациенток с диагнозом «рак яичников» — в 79% (в 31 из 39 наблюдений) определяется коэкспрессия белка р53, WT1 в клетках соответствующего рака яичника. При совместном использовании цитологического и ИЦХ методов — в 82% (в 32 из 39 наблюдений) определяются клетки карциномы яичника в полости матки.

— При серозном раке яичников в 80% (в 20 из 25 наблюдений) в аспирате из полости матки, либо смыве, при цитологическом анализе определяются клетки карциномы, при ИЦХ исследовании 84% (в 21 из 25 наблюдений), при совместном использовании цитологического и ИЦХ методов — 88% (в 22 из 25 наблюдений).

Злокачественные опухоли

www.malignanttumours.org

Том / Vol. 7 № 3 S 1 /2017

Malignant Tumours

www.malignanttumours.org