Мембранодестабилизирующие процессы в прогрессировании острого экспериментального панкреатита и их коррекция

Раздел VI

РЕДАКЦИОННЫЙ ПОРТФЕЛЬ

УДК 616.37-002:612.015.39

МЕМБРАНОДЕСТАБИЛИЗИРУЮЩИЕ ПРОЦЕССЫ В ПРОГРЕССИРОВАНИИ ОСТРОГО ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОГО ПАНКРЕАТИТА И ИХ КОРРЕКЦИЯ

А.Б. КЕЛЕЙНИКОВ, Т.И. ГРИГОРЬЕВА, А.П. ВЛАСОВ, Э.И. НАЧКИНА, А.А. РУБЦОВ, Н.Ю. ЛЕЩАНКИНА, И.В. ПОТЯНОВА*

Проблема терапии острого панкреатита до сих пор остается одной из значимых. Тяжесть состояния больных определяется развивающимся синдромом эндогенной интоксикации, приводящим к полиорганной недостаточности [2, 7]. Одним из важнейших патогенетических механизмов панкреатита являются мембранодеструктивные процессы, в основе которых лежат нарушения липидного метаболизма. Последним отечественными учеными уделяется все большее внимание [3, 4]. По предложению академика В.С. Савельева (1998), заболевания, патогенетически связанные с нарушениями липидного гомеостаза, были объединены в липидный дистресс-синдром [5, 6]. Установлен системный характер липидных дестабилизаций при остром панкреатите [2, 3]. Это явилось обоснованием оптимизации схем терапии острого панкреатита с использованием препаратов, обладающих антиоксидантной активностью. Одним из новых средств этой группы является этоксидол (2-этил-6-метил-3-

гидроксипиридинийгидроксибутан-диоат), эффекты влияния которого на компоненты гомеостаза изучены мало.

Материалы и методы. В основу работы положены экспериментальные исследования. Острый панкреатит моделировали по способу В.М. Буянова с соавт. (1989) [1]. Собакам под тиопен-тал-натриевым наркозом (0,04 г/кг массы) выполняли срединную лапаротомию, пунктировали желчный пузырь, забирали желчь с последующим лигированием места пункции. Затем желчь вводили в паренхиму вертикальной части поджелудочной железы по

0,6 мл в 5 точек. В контрольные сроки (1, 3, 5, 7 суток) животным производили релапаротомию, осуществляли забор крови. В контрольной группе животным в послеоперационном периоде проводилась инфузионная терапия (внутривенные введения 5% раствора глюкозы и 0,89% раствора хлорида натрия из расчета 50 мл/кг массы животного). В опытной группе животным к инфузи-онной терапии включали этоксидол: ежедневно внутривенные введения препарата из расчета 10 мг/кг массы животного.

Выполняли макро- и микроскопические исследования поджелудочной железы. Липиды из плазмы крови экстрагировали хлороформметаноловой смесью, фракционировали методом тонкослойной хроматографии на силикагелевых пластинах. Полярные фосфолипиды разделяли на пластинах фирмы Merk на стеклянной основе, нейтральные липиды - на силикогелевых пластинах для обращено-фазной тонкослойной хроматографии. Молекулярный анализ липидов проводили на денситометре Model GS-670 (BIO-RAD, США) с соответствующим программным обеспечением (Phosphor Analyst/PS Sowtware). Эффективную (ЭКА) и общую (ОКА) концентрацию альбумина в сыворотке крови определяли флуоресцентным методом на специализированном анализаторе АКЛ-01 «Зонд». Уровень диеновых (ДК) и триеновых конъюгатов (ТК) определяли спект-

рофотометрическим методом по наличию максимумов поглощения при длинах волн соответственно 232 и 275 нм. Содержание молекул средней массы (МСМ) определяли спектрофотометрическим методом. Активность супероксиддисмутазы (СОД) определяли по способности фермента тормозить аэробное восстановление нитросинего тетразолия до формазана. Активность фосфо-липазы А2 оценивали в среде, содержащей 10 ммоль трис-HCL-буфер (pH 8,0), 150 ммоль тритон Х-100, 10 ммоль CaCl2 и субстрат (1,2 ммоль). В качестве субстрата использовали фосфати-

* Мордовский госуниверситет им. Н.П. Огарева, каф. факультетской хирургии, 430000 г. Саранск, ул. Большевистская, 68

дилхолины яичного желтка. Регистрацию каталитической деятельности фермента проводили титрометрическим методом по мере образования свободных жирных кислот. Содержание малонового диальдегида (МДА) выявляли в реакции с 2-тиобарбитуровой кислотой. Полученные данные обрабатывали методом вариационной статистики по критерию Стьюдента.

Результаты. Хронические опыты показали, что в контрольной группе животных при указанной модели панкреатита в поджелудочной железе после введения желчи возникали выраженные воспалительно-некротические явления. При динамическом наблюдении в 33,3% острый панкреатит трансформировался в панкреонекроз, что вело к гибели животных.

В динамике заболевания у животных возникала эндогенная интоксикация. Установлено, что общая концентрация альбумина в крови в динамике изменялась несущественно. Эффективная же концентрация альбумина уменьшалась на 24,3 - 42,2% (р<0,001), резерв связывающей способности альбумина снижался на 31,3 -46,2% (р<0,01), индекс токсичности плазмы возрастал 176,5 -236,3 6% (р<0,001), содержание МСМ увеличивалось на 35,9 -167,4% (р<0,01). В плазме крови отмечены изменения качественного и количественного состава липидов. Анализ их говорил о развитии при панкреатите мембранодеструктивных явлений. Указанные процессы сопровождались интенсификацией процессов ПОЛ и активизацией фосфолипазных систем: уровень ДК и ТК в плазме крови повышался на 49,4-156,2% (р<0,05), МДА -на 34,3-126,4% (р<0,05), активность фосфолипазы А2 - в 4,6 -13,2 раза (р<0,05), активность а-амилазы - на 56,3-264,2% (р<0,05), активность СОД падала на 14,3-33,4% (р<0,05).

Таким образом, при панкреатите у животных возникают выраженные расстройства гомеостаза, одним из центральных звеньев которого выступает расстройство липидного обмена. Следовательно, выбранная модель вполне адекватна для исследования эффектов и механизмов действия лекарственных средств, оказывающих антиоксидантный эффект.

В группе животных с этоксидолом воспалительные явления в поджелудочной железе по сравнению с контролем купировались быстрее, отмечено существенное (на 23,6%) уменьшение перехода отечной формы панкреатита в панкреонекроз.

Оказалось, что при использовании этоксидола снижение уровня эндогенной интоксикации наблюдалось уже после первого введения препарата. В контрольные этапы наблюдения зарегистрировано снижение содержания гидрофобных и гидрофильных токсических продуктов. Уровень эффективной концентрации альбумина взрастал на 10,5 - 33,2% (р<0,05), резерв связывающей способности альбумина - на 13,4 (38,1%, р<0,05), индекс токсичности плазмы уменьшался на 17,3 (42,2%, р<0,05), содержание МСМ снижалось на 11,3-27,4% (р<0,05) (рис. 1).

нм)

Рис. 1. Некоторые показатели эндогенной интоксикации при остром

панкреатите на фоне применения этоксидола ( - достоверность отли-

чия показателей по отношению к контролю при р<0,05; к - данные контрольной группы; о - данные опытной группы)

При анализе результатов влияния препарата на липидный состав плазмы крови выявлено, что восстановление качественного и количественного состава происходило быстрее, чем в кон-

троле. Подчеркнем, что заметный липидрегулирующий эффект отмечен после первого приема препарата (рис. 2).

ЛФЛ

СЖК

Рис. 2 Состав липидов плазмы крови при ОП на фоне применения этокси-

дола (к - данные контрольной группы; о - данные опытной группы; -

изменения показателей, достоверные по отношению к контрольному уровню р<0,05)

Экспериментально выявлено, что на фоне этоксидолотера-пии процессы перекисного окисления липидов, фосфолипазная и а-амилазная активность также корригировались эффективнее и раньше: содержание ДК, ТК и ТБК-реагирующих продуктов уменьшалось по сравнению с контролем на 14,1-31,4% (р<0,05), активность СОД повышалась на 12,4—33,1% (р<0,05), активность фосфолипазы А2 падала на 17,2-44,2% (р<0,05), активность а-амилазы снижалась на 16,3-36,1% (р<0,05).

Анализируя результаты экспериментальных исследований отметим, что при остром панкреатите, судя по липидным перестройкам, возникают выраженные мембранодестабилизирующие явления. Нарушения липидного метаболизма возникают достаточно быстро: уже в течение первых суток регистрируются существенные изменения показателей липидного гомеостаза. В генезе патологических отклонений липидного обмена при остром панкреатите решающее значение имели активизация фосфолипазных систем, интенсификация процессов перекисного окисления липидов на фоне депрессии антиоксидантного энзимного потенциала. Безусловно, возникшие изменения являются одними из значимых в прогрессировании острого панкреатита.

Исследования показали, что этоксидол, обладающий анти-оксидантной активностью, при остром панкреатите наделен способностью изменять характер и направленность воспалительного процесса в поджелудочной железе. Положительный эффект отмечается и на организменном уровне в виде снижения выраженности эндогенной интоксикации. Важнейший эффект препарата - уменьшать уровень лизофосфолипидов и свободных жирных кислот, которые обладают детергентоподобной активностью и способностью лабилизировать состояние клеточных мембран. Эти показатели надо признать наиболее демонстративными как с точки зрения определения глубины патологического процесса, так и по оценке эффективности мембранопротекторной терапии.

Новый антиоксидант этоксидол обладает способностью существенно сдерживать прогрессирование острого панкреатита: воспалительно-некротические процессы в поджелудочной железе значительно уменьшаются, наблюдается изменения биохимических маркеров острого панкреатита (уменьшение альфа-амилазной активности, снижение выраженности эндогенной интоксикации). Реализация эффекта препарата обусловлена его способностью корригировать не только интенсивность процессов пероксидации липидов, но и фосфолипазную активность, которые выступают в качестве мембранодеструктивных агентов.

Литература

1.Буянов В.М. и др. // Клин. хир.- 1989.- № 11.- С. 24-26.

2.Власов А.П. и др. Системный липидный дистресс-синдром при панкреатите.- Саранск: Красный Октябрь.- 2004.- 316 с.

3.Власов А.П. и др. Липидмодифицирующий компонент в патогенетической терапии.- М.: Наука, 2008.- 374 с.

4.Каган В.Е. Механизмы структурно-функциональной модификации биомембран при перекисном окислении липидов: Автореф. дис. ...докт. биол. наук.- М., 1981.- 24 с.

5.Петухов В.А. и др.//Трудный пациент.-2004.-№4(2).- С. 3.

6.Савельев В.С. и др. // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины.- 1999.- № 6 (127).- С. 604-611.

7.Савельев В.С. и др. // Анн. хир. гепатол.- 2000.- № 2 (5).-С. 6-67.

УДК 616.314-089-053

БИОФЛАВОНОИДЫ ИЗ ПРОИЗРАСТАЮЩИХ НА ТЕРРИТОРИИ АЛЬПИЙСКИХ ПРЕДГОРИЙ СЕВЕРНОГО И ЗАПАДНОГО КАВКАЗА ТРАВ, КАК ПРИРОДНЫЕ ИММУНОМОДУЛЯТОРЫ В РАМКАХ КОМПЛЕКСНОЙ ВОССТАНОВИТЕЛЬНОЙ ТЕРАПИИ, НОРМАЛИЗУЮЩЕЙ ПАРАМЕТРЫ ИММУННОГО СТАТУСА ПОСТОПЕРАЦИОННЫХ БОЛЬНЫХ

Л.В. ШЕВЧЕНКО*

Исторический аспект применения биофлавоноидов в стоматологии восходит к церковным книгам XIII века, где указывалось, что русские лекари еще в тот период закладывали в кариозную полость зуба цветок гвоздики. Современные стоматологи в этих случаях применяют препараты гвоздики - эвгенол, гвоздичное масло [3]. Контент-анализ отечественных и зарубежных источников выявил отсутствие целостных воззрений на использование биофлавоноидов (как природных иммуномодуляторов) при лечении постоперационных больных с флегмонами полости рта и периапикальными абсцессами.

Цель исследования - решение задачи получения доказательств перспективности задействования биофлавоноидов, произрастающих на территории альпийских предгорий Северного и Западного Кавказа для коррекции иммунного статуса постоперационных больных (К 04.6; К 04.7; К 12.2 по МКБ-Х).

Материалы и методы. Для сравнительного анализа эффективности постоперационной реабилитации этих пациентов автором были сформированы (из числа больных основной группы наблюдения) подгруппа А (n=281), куда вошли пациенты, лечившиеся в 2002-2008 годах в санаториях Белгородской области «Красиво» и «Красная Поляна», а также подгруппа Б (n=281), состоящая из больных, направлявшихся на лечение в сочинские санатории «Правда», «Волна», «Южное взморье» и в Архипо-Осиповский санаторий «Вулан». В отличие от основной группы наблюдения пациенты контрольной группы (n=279), перенесшие идентичные оперативные вмешательства в отделении челюстнолицевой хирургии Белгородской областной больницы, направлялись (после выписки из стационара) на поликлинический этап диспансерного наблюдения по месту жительства, где проходили комплекс восстановительных процедур по тривиальным методикам, рекомендованным действующим федеральным Стандартом лечения подобных больных. Суммарно среди больных основной и контрольной групп наблюдения (Побщ=841) лица в возрасте до 30 лет составили 22,47% (n=189), от 31 до 50 лет составили 43,64% (n=367), от 51 до 60 лет составили 19,14% (n=161), свыше 60 лет составили 14,75% (n=124); количество мужчин составило 65,16% (n=548), а женщин - 34,84% (n=293).

Общее число прооперированных больных с флегмонами полости рта и периапикальными абсцессами составило в 20022008 годах почти 16% от количества пациентов, лечившихся в указанный шестилетний период на основной базе исследования. Для объективизации результатов исследования широко использовались приемы саливодиагностики, когда в пробах смешанной слюны с помощью отечественного фотометра ФПЛ-1 содержание общего кальция определяли фотометрическим методом по H. Gitelman (1967); концентрацию неорганического фосфора оценивали с помощью фотометрического метода по J.A. Daly, G. Ertingschausen (1972), O. Gamst, K. Try (1980); калий и натрий определяли методом пламенной фотометрии (Н.С. Полуэктов, 1967); хлориды определяли фотометрически (R. Richterich, 1965) с тиоцианатом ртути. Слюна собиралась в стеклянные емкости (пузырьки от пенициллина) без стимуляции, натощак, после полоскания полости рта. Затем ее центрифугировали на скорости 5000 об./мин. Чистую слюну, отделенную от примесей, переливали в стерильные пробирки и замораживали в морозильной камере. Для определения активности лизоцима в слюне (до и после лечения) использовалась количественная турбодиметрическая методика К.А. Каграновой и З.В. Ермольевой в модификации М.П. Захарченко (1997), в основе которой лежит фотоэлектроко-лориметрическое (турбодиметрическое) измерение степени светопропускания микробной взвеси суточной агаровой культуры микрококка до и после контакта (при задействовании фосфатного буферного раствора рН 6.2 и зелёных светофильтров, регистрирующих в режиме турбометрического учета световые импульсы

Каф. стоматологии Белгородского госуниверситета; отделение челюстнолицевой хирургии Белгородской ОКБ