Экспериментальное подтверждение эффективности нового производного 2-оксоиндолина - потенциального диуретического средства

O.A.MALCHENKO, A.V.KUBYSHKIN, V.Z.KHARCHENKO, YU.V.MANDRYK

Crimea State medical university named after S.I.Georgievsky, Simferopol, Ukraine

LIPID PEROXIDATION AND STATE OF ANTIOXIDANTS IN THE SCELETAL MUSCLES OF RATS IN PHARMACOLOGICAL CORRECTION OF EXPERIMANTAL REPERFUSION INJURY

Resume: Changes of lipid peroxidation and antioxidants system in muscular tissue were investigated in acute experiments on 66 rats with ischemia-reperfusion (6/12) of the lower limb. Study groups were preconditioned by Gordox (20 000 U/kg), Corvitin (10 mg/kg), Alprostan (10 pg/kg) and their combined duplex and triplex action. Ischemia-reperfusion was responsible for significant increase of the products of thiobarbituric acid, decrease of catalase and SOD activity and insignificant changes of ceruloplasmin concentration in muscular tissue comparable to intact animals. Gordox and Alprostan were shown to increase catalase activity by 2.1 and 2.9 times, inhibit SOD activity by 16% and 18%, decrease ceruloplasmin concentration by two times and by 37% respectively. Corvitin demonstrated powerful antioxidant activity by increasing catalase and SOD activity in 3.2 and 1.9 times. In this group concentration of ceruloplasmin lowered by 37 % compared with group without preconditioning. Combined usage of Gordox and Corvitin leads to increase of catalase activity by 2.4 times, but fails to elevate SOD activity. Addition to this combination Alprostan increases SOD activity in 2.1 times that insignificantly prevails the independent effect of Corvitin. It was established that combined precondition with aprotinin, quercetin and prostaglandin E1 contribute to reinforcement of antioxidant potential in skeletal mussels. Simultaneous influence on several pathophysiological links facilitates most effectively adverse effects of ischemia-reperfusion syndrome.

Keywords: ischemia-reperfusion syndrome, lipid peroxidation, quercetin, aprotinin, prostaglandin E1

УДК 616.24-005.98:615.254.1:615.015.23:547.757

А.Ю. МАРКИНА, Т.И. ТЮПКА

Национальный фармацевтический университет, кафедра патологической физиологии, Харьков, Украина

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ПОДТВЕРЖДЕНИЕ ЭФФЕКТИВНОСТИ НОВОГО ПРОИЗВОДНОГО 2-ОКСОИНДОЛИНА -

ПОТЕНЦИАЛЬНОГО ДИУРЕТИЧЕСКОГО СРЕДСТВА

На этапе скрининга среди производных N-[(2-оксоиндолинилиден-3)-2-оксиацетил+-аминокислоты виявлена субстанция с

диуретическую активностью (условное название «Индолинорен»), которая является относительно ныт?ё8сическим веществом с широким спектром фармакологического действия. Экспериментально доказана эффективность индолинорена при острой почечной недостаточности и гемодинамическом отеке легких. Полученные результаты позволяют рекомендовать индолинорен для дальнейшего углубленного изучения в качестве нового диуретического препарата.

Ключевые слова: индолинорен, диуретическая активность, острая почечная недостаточность, гемодинамический отек легких.

Химические вещества, которые имеят в своей структуре гетероциклическуя систему 2-оксоиндолина, последнее време обращаят на себе внимание химиков-синтетиков

фармакологов, благодаре интересным фармакологическим свойствам и присущему им широкому спектру действие *10+. В медицинской практике также широко используят препараты аминокислот, которые характеризуятсе нетоксичностья, небольшим количеством побочных эффектов и отсутствием аллергизируящего действие *5+. Попытка объеденить в структуре новой группы химических соединений фрагмента 2-оксоиндолина и остатков ш-аминокислот оказалась достаточно удачной и привела к синтезу веществ, которые по результатам фармакологического скрининга проевили наличие многих видов активности (ноотропной, анксиолитической и др.) *3+.

Целья нашего исследование стало определение среди 12 новых производных ^[(2-оксоиндолинилиден-3)-2-

оксиацетил+-аминокислоты вещества с наиболее выраженным диуретическим действием и дальнейшее его изучение в качестве потенциального диуретика. Материалы и методы. Экспериментальные исследование выполнены на нелинейных белах мышах массой 18-22 г и нелинейных белых крысах массой 180-220 г разного пола. Животных удерживали на стандартном рационе питание виварие в соответствии с санитарно-гигиеническими требованиеми *6+. Все экспериментальные исследование проводили согласно «Общим этическим принципам экспериментов на животных» (Украина, 2001), которые согласованы с положеннеми «Европейской конвенции о защите позвоночных животных, которые используятсе дле экспериментальных и других научных целей» (Страсбург, 1986). Диуретическуя активность определели по методу Е. Б. Берхина *1+. Оструя токсичность изучали по методу Кербера на двух видах лабораторних животных -нелинейных белах мышах и нелинейных белых крысах

при внутрибряшинном и внутрижелудочном путех введение *7+. Средняя эффективнуя дозу определели по методу Кербера. Антиэкссудативнуя активность изучали на экспериментальной модели острого каррагенинового отека, вызванного субплантарным введением 0,05 мл 1% раствора каррагенина в задняя правуя стопу крыс *9+. Антимикробнуя активность индолинорена, приготовленного в виде 10% раствора, изучали методом диффузии субстанции в агар (метод «колодцев») *2+. Антиоксидантные свойства индолинорена определели в модельной системе липопротеинов еичного желтка по степени ингибирование накопление продуктов, которые

реагируят с 2-тиобарбитуровой кислотой *4+. Гемодинамический отек легких моделировали введением адреналина гидротартрата внутримышечно в дозе 5 мг/кг *7+. Оструя почечнуя недостаточность воспроизводили внутримышечным введением крысам 50% раствора глицерола в дозе 10 мл/кг однократно *8+. Результаты исследование. Во време скрининговых исследований была выевлена субстанцие с наиболее выраженной диуретической активностья под шифром 6.3, применение которой увеличивает диурез у крыс на 198% (таблица 1). Новое вещество получило условное название «Индолинорен».

Таблица 1 - Диуретическае активность исследуемых производных ^[

Шифр исследуемой субстанции Диурез, мл/100г % по отношения к показателем контрольной патологии

6.1 2,62±0,07*/** 168

6.2 1,64±0,02** 105

6.3 3,09±0,08*/** 198

7.1 1,20±0,15*/** 77

7.2 1,14±0,04*/** 73

7.3 1,28±0,07*/** 82

8.1 1,80±0,05*/** 115

S.2 2,25±0,06*/** 144

8.3 1,16±0,09*/** 74

9.1 1,40±0,02*/** 90

9.2 1,52±0,02** 98

9.3 1,55±0,09** 99

Фуросемид 5 мг/кг 5,40±0,07* 346

Контрольнае патологие 1,56±0,06 100

*-р<0,05 по отношения к контрольной патологии; **-р<0,05 по отношения к фуросемиду; n - количество животных в группе.

При исследовании острой токсичности установлено, что LD50 индолинорена при внутрибряшинном введении белым мышам и крысам составила 4000±380,7 мг/кг и 3167±409 мг/кг соответственно; при внутрижелудочном введении мышам LD50 > 8000 мг/кг, крысам - LD50 > 11000 мг/кг, что позволеет отнести индолинорен по классификации К.К. Сидорова к VI классу токсичности. Среднее эффективнае доза индолинорена составила 29,5

мг/кг.

Современнае медицина отдает преимущество диуретикам, которые нареду с диуретическим действием проевлеят и другие виды фармакологической активности (противовоспалительнуя, спазмолитическуя, антимикробнуя и др.). В свези с этим целесообразно было изучить субстанция индолинорен на другие виды активности.

В ходе эксперимента установлено, что индолинорен проевлеет антиэкссудативнуя активность и достоверно уменьшает отек стопы в сравнении с контрольной группой животных с 1-го по 3-ий часы эксперимента. Пик активности выевлен на 3-ий час исследование (57,1%). Установлено, что индолинорен в дозе 29,5 мг/кг оказывает бактериостатическое действие на штаммы Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Bacillus subtilis, Proteus vulgaris, Candida albicans. Более чувствительными к индолинорену оказались культуры Staphylococcus aureus (зона

задержки роста данных микроорганизмов составила 22 мм); Escherichia coli и Bacillus subtilis (зоны задержки роста - 21 мм). Согласно результатам исследование степень чувствительности Pseudomonas aeruginosa, Proteus vulgaris и Candida albicans была ниже, о чем свидетельствует менее выраженнае зона задержки роста этих микроорганизмов (20 , 18 и 12 мм соответсвенно). В модельной системе желточных липопротеинов установлено, что индолинорен в концентрации 50 мг/мл осуществлеет ингибируящий эффект на продукты, которые реагируят с 2-тиобарбитуровой кислотой: степень ингибирование в данной концентрации составила 69,1%.

На модели гемодинамического отека легких установлено, что введение подопытным животным индолинорена в средней эффективной дозе 29,5 мг/кг увеличивает продолжительность жизни крыс в 1,8 раза в сравнении с контрольной группой животных. Состоение легочной паренхимы определели по степени выраженности альвеолерного отека и сохранение альвеолерного рисунка по 5-ти бальной системе. Индолинорен снижал интенсивность альвеолерного отека в 2 раза (таблица 2). Выраженность нормального альвеолерного рисунка респираторного отдела легочной паренхимы превосходил в 2 раза группу контрольной патологи (таблица 2).

Таблица 2 - Полуколичественнаё оценка состоёниё легочной ткани крыс, баллы

Группа эксперимента Ознаки

Выраженность альвеолёрного отека

Интактный контроль 0,0

Контрольнаё патологиё 4,0 (3,0; 4,0)* 0,0 (0,0; 1,0)*

Индолинорен, 25 мг/кг 2,0 (1,0; 2,0)*/** 2,0 (2,0; 3,0)*/**

Гидрохлортиазид, 2 мг/кг 1,0 (1,0; 2,0)*/** 2,0 (1,0; 2,0)*/**

1. * - по отношения к интактному контроля;

2. **- по отношения к контрольной патологии;

3. *** - По отношения к препарату сравнение.

На модели острой почечной недостаточности установлено, что исследуемае субстанцие индолинорен в средней эффективной дозе 29,5 мг/кг оказывает нефропротекторные свойства, о чем свидетельствует уменьшение протеинурии, предупреждение анурии и сохранение концентрационной функции почек. Таким образом, новое производное 2-оксоиндолина, с условным названием «Индолинорен» евлеетсе

достаточно эффективным и нетоксическим веществом с широким спектром фармакологического действие. Полученные результаты позволеят рекомендовать индолинорен дле дальнейшего углубленного изучение, как субстанции, на основе которой может быть создан новый диуретический препарат.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1 Берхин Е. Б. Методы изучение влиёниё новых химических соединений на функция почек / Е. Б. Берхин // Хим. фармац. журнал. - 1977. - Т. 11, № 5. - С. 3-11.

2 Вивченнё специфiчноí активност протимтробних лтарських засобiв: метод. рек. / Я. Л. Волёнський, I. С. Гриценко, В. П.

Широбоков та н - Киев, 2004. - 38 с.

3 Колкник С. В. Синтез, властивост i бюлопчна активысть ^[2-оксошдолшЫден-3)-2-окаацетил+-омега-амшокислот та 'х

похщних / С. В. Колкник, В. В. Болотов, О. В. Лёшенко // Журнал оргаычно''' та фармацевтично''' xiмií. - 2009. - Т. 5, № 4 (28). - С. 55-59.

4 Маршал Дж. Клиническаё биохимиё / Дж. Маршал. - СПб. : БИНОМ, 2000. - 368 с.

5 Машковский М.Д. Лекарственные средства. В 2-х ч. - 14-е изд. - МОСКВА: Новаё волна, 2000. - Ч. 1. - 590 с., Ч. 2. - 612 с.

6 Науково - практичн рекомендацп з утриманнё лабораторних тварин та роботи з ними / *Я.М. КожемёкЦ О.С. Хромов,

М.О. Фтоненко, Г.А. СайфетдЫова+. - К.:Авщена, 2002. - 156 с.

7 Сернов А. Н. Элементы экспериментальной фармакологии / А. Н. Сернов, В. В. Гацура. - »ицин^ 20'"П ч 55

8 Штриголь С. Я. Методи експериментального моделяваннё ураженнё нирок длё фармаколопчних дослщжень: *метод.

ре-коменд.+ / *С. Я. Штриголь, В. М. Лковий, I. А. Зупанець, С. К. Шебеко та ш.+ — К., 2009. — 47 с.

9 Експериментальне вивченнё фармаколопчних речовин, ём пропонуятьсё ёк нестеро'ды протизапальы засоби / С. М.

Дроговоз, I. А. Зупанець, М. А. Мохорт та Ы. // Доклш1чы дослщженнё лтарських засобiв : метод.рек.; за ред.чл.-кор. АМН Укра'ни О.В. Стефанова. - К. : Авщена, 2001. - С. 292-295.

10 Bouchikhi F. Synthesis and biological evaluation of diversely substituted indolin-2-ones / F. Bouchikhi, E. Rossignol, M. Sancelme et al. // Eur. J. Med. Chem. - 2008. - N 11. - P. 2316-2322.

A.Y. MARKINA, T.I. TYUPKA

NATIONAL UNIVERSITY OF PHARMACY Chair of pathological physiology, Kharkiv, Ukraine

EXPERIMENTAL CONFIRMATION OF THE EFFECTIVENESS OF A NEW DERIVATIVE OF 2-OXOINDOLIN

AS A POTENTIAL DIURETIC

Resume: At the screening stage among the derivatives of N-[(2-oxoindoliniliden-3)-2-oxyacetyl]-aminoacid was detected substance with high diuretic activity (provisional name "Indolinoren"), which is relatively non-toxic substance with a wide spectrum of pharmacological action. It was experimentally proved the effectiveness of Indolinoren in acute renal failure and hemodynamic pulmonary edema. The results allow us to recommend indolinoren for further study as a new diuretic drug. Keywords: indolinoren, diuretic activity, acute renal failure, haemodynamic pulmonary edema.

УДК: 612.062

Л.Н. МАСЛОВ, С.Ю. ЦИБУЛЬНИКОВ

Федеральное государственное бюджетное учреждение «Научно-исследовательский институт кардиологии» Сибирского отделения Российской академии медицинских наук, Томск, Россия

ИСПОЛЬЗОВАНИЕ АГОНИСТОВ КАННАБИНОИДНЫХ РЕЦЕПТОРОВ ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ И ТЕРАПИИ ИШЕМИЧЕСКИХ И РЕПЕРФУЗИОННЫХ ПОВРЕЖДЕНИЙ СЕРДЦА

Установлено, что каннабиноид Ни-210 может быть использован для профилактики и терапии ишемических и реперфузионных повреждений сердца. Эндогенные каннабиноиды не участвуют в регуляции толерантности сердца к действию ишемии и реперфузии у неадаптированных крыс. Внутриклеточный сигнальный механизм кардиопротекторного эффекта Ни-210 включает открытие КАТФ каналов и активацию протеинкиназы С.

экспериментах vivo моделировали

Воронароокклязия (45 мин^И реперфузия (2 ч) у наркотизированных крыс линии Вистар, находёщихсё на искусственной вентилёции. В опытах in vitro выполнёли тотальнуя ишемия (45 мин) и реперфузия (30 мин) изолированного сердца крысы. Селективный агонист каннабиноидных (СВ) рецепторов HU-210 вводили внутривенно в дозе 0,1 мг/кг за 15 мин до перевёзки коронарной артерии или через 40 мин после коронароокклязии. Селективный СВ1 антагонист SR141716A инъецировали внутривенно за 25 мин до ишемии. Селективный СВ2 антагонист SR144528 также применёли за 25 мин перевёзки коронарной артерии. В опытах in vitro HU-210 использовали в конечной концентрации 100 нМ перед тотальной ишемией. Селективный СВ1 антагонист SR141716A добавлёли в перфузионный раствор в конечной концентрации 100 нМ перед ишемией. Было обнаружено, что предварительное введение HU-210 уменьшает соотношение размер инфаркта/область риска (РИ/ОР) in vivo. Этот эффект полностья устранёлсё с помощья предварительного введениё SR141716A. Предварительное использование SR144528 не влиёло на кардиопротекторный эффект HU-

210. Оба антагониста не изменели соотношение РИ/ОР. Инъекцие Ни-210 за 5 мин до реперфузии также обеспечивала уменьшение индекса РИ/ОР. Ингибитор протеинкиназы хелеритрин устранел

кардиопротекторный Эффект Ни-210. Также действовал блокатора КдтФ-каналов глибенкламид. Добавление Ни-210 в перфузат перед ишемией уменьшало уровень креатинфосфокиназы (КФК) в растворе, оттекаящем от сердца, и снижало давление, развиваемое левым желудочком. Один препарат SR141716A не влиел на сократимость сердца и уровень КФК. Авторы полагаят, что активацие кардиальных СВ1 рецепторов увеличивает устойчивость сердца к ишемии/реперфузии и негативно сказываетсе на насосной функции сердца. Эндогенные каннабиноиды не участвуят в регулеции сократимости сердца и его толерантности к ишемии и реперфузии. Представленные данные свидетельствуят, что каннабиноид Ни-210 может быть использован дле профилактики терапии ишемических

реперфузионных повреждений сердца. Внутриклеточный сигнальный механизм кардиопротекторного эффекта СВ-агониста Ни-210 реализуетсе за счет активации Катф-каналов и протеинкиназы С.