Экспрессия зрелых микроРНК, участвующих в функционировании р53-зависимой системы сохранения стабильности генома, у лиц, облученных в клинически значимых дозах

20. Khalif IL, Loranskaya ID. Inflammatory bowel disease (ulcerative colitis and Crohn's disease): clinical features, diagnosis and treatment. M.: Miklosh, 2004; 88 p. Russian (Халиф И. Л., Лоранская И. Д. Воспалительные заболевания кишечника (неспецифический язвенный колит и болезнь Крона): клиника, диагностика и лечение. М.: Миклош, 2004; 88 с.).

21. Russian Gastroenterological Association recommendations for the treatment of Crohn's disease in adults (draft). Russian Journal of Gastroenterology, Hepatology, Col-oproctology 2012; 23 (6): 68-82. Russian (Рекомендации Российской гастроэнтерологической ассоциации по лечению болезни Крона у взрослых (проект). Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии 2012; 23 (6): 68-82).

22. Silverberg MS, Satsangi J, Ahmad T, et al. Toward an integrated clinical, molecular and serological classification of inflammatory bowel disease: report of a working party of the 2005 Montreal World Congress of Gastroenterology. Can J Gastroenterol 2005; 19 (Suppl. A); 5-36.

23. Sokolova EI. Clinical Immunology. M.: Medicine, 1998; 45 p. Russian (Соколова Е. И. Клиническая иммунология. М.: Медицина, 1998; 45 с.).

24. Haitov RM. Immunology. M.: GEOTAR-Med, 2009; 320 p. Russian (Хаитов Р. М., Иммунология: учебник. М.: ГЕОТАР-Мед, 2009; 320 с.).

25. Gough SCL, Simmonds MJ. The HLA Region and Autoimmune Disease: Associations and Mechanisms of Action. Current Genomics 2007; 8: 453-465.

26. Bugawan TL, Mack SJ, Stoneking M, et al. HLA class I distributions in six Pacific/Asian populations: evidence of selection at the HLA-A locus. Tissue Antigens 1999; 53: 311-319.

27. Begovich AB, Moonsamy PV, Mack SJ, et al. Genetic variability and linkage disequilibrium within the HLA-DP region: analysis of 15 different populations. Tissue Antigens 2001; 57: 424-439.

28. Sanchez-Mazas A, Meyer D. The Relevance of HLA Sequencing in Population Genetics Studies. Journal of Immunology Research 2014; article ID 971818. http://dx.doi.org/10.1155/2014/971818.

29. Boldyreva MN. HLA (class II) and natural selection: "Functional" genotype hypothesis advantages of "functional" heterozygosity: DSc abstract. Moscow, 2007; 47 p. Russian (Болдырева М. Н. HLA (класс II) и естественный отбор: «Функциональный» генотип, гипотеза преимущества «функциональной» гетерозиготности: автореф. дис.... д-ра мед. наук. М., 2007; 47 с.).

30. Khromova NA Polymorphism of HLA system in representatives of different ethnic groups of Slavic (Russian, Belaru-sian and Ukrainian): PhD abstract. Moscow, 2006; 29 p. Russian (Хромова, Н. А. Полиморфизм системы HLA у представителей разных славянских этнических групп (русской, белорусской и украинской): автореф. дис. ... канд. мед. наук. М., 2006; 29 с.).

31. Loranskaya ID, Khalif IL, Dolbin AG, Yazdovs-kiy VV. Genetic markers HLA-nonspecific inflammatory and functional diseases of the colon. Russian medical news 2001; 2: 43-46. Russian (Лоранская И. Д., Халиф И. Л., Долбин А. Г., Яздовский В. В. Генетические HLA-маркеры при неспецифических воспалительных и функциональных заболеваниях толстой кишки. Российские медицинские вести 2001; 2: 43-46).

УДК 577.218 Оригинальная статья

ЭКСПРЕССИЯ ЗРЕЛЫХ МИКРОРНК, УЧАСТВУЮЩИХ В ФУНКЦИОНИРОВАНИИ Р53-ЗАВИСИМОЙ СИСТЕМЫ СОХРАНЕНИЯ СТАБИЛЬНОСТИ ГЕНОМА, У ЛИЦ, ОБЛУЧЕННЫХ В КЛИНИЧЕСКИ ЗНАЧИМЫХ ДОЗАХ

Л. В. Шуленина — ФГБУ «Государственный научный центр Российской Федерации — Федеральный медицинский биофизический центр им. А. И. Бурназяна» ФМБА России, научный сотрудник; И. А. Галстян — ФГБУ «Государственный научный центр Российской Федерации — Федеральный медицинский биофизический центр им. А. И. Бурназяна» ФМБА России, заведующая лабораторией, доктор медицинских наук; Н. М. Надежина — ФГБУ «Государственный научный центр Российской Федерации — Федеральный медицинский биофизический центр им. А. И. Бурназяна» ФМБА России, ведущий научный сотрудник, кандидат медицинских наук; В. Ф. Михайлов — ФГБУ «Государственный научный центр Российской Федерации — Федеральный медицинский биофизический центр им. А. И. Бурназяна» ФМБА России, заведующий лабораторией, кандидат биологических наук; Н. Ф. Раева — ФГБУ «Государственный научный центр Российской Федерации — Федеральный медицинский биофизический центр им. А. И. Бурназяна» ФМБА России, научный сотрудник.

EXPRESSION OF MATURE MICRO-RNA INVOLVED IN THE FUNCTIONING OF P53-DEPENDENT SYSTEM OF MAINTAINING THE GENOME STABILITY OF THE INDIVIDUALS EXPOSED TO RADIATION AT CLINICALLY RELEVANT DOSES

L. V. Shulenina — Federal Medical and Biophysical Center n.a. A. I. Burnazyan, scientist; I. A. Galstyan — Federal Medical and Biophysical Center n.a. A. I. Burnazyan, Head of the laboratory, Doctor of Medical Science; N. M. Nadezhina — Federal Medical and Biophysical Center n.a. A. I. Burnazyan, Leading researcher, Сandidate of Medical Science; V. F. Mikhailov — Federal Medical and Biophysical Center n.a. A. I. Burnazyan, Head of the laboratory, Сandidate of Biological Science; N. F. Raeva — Federal Medical and Biophysical Center n.a. A. I. Burnazyan, Scientist.

Дата поступления — 12.11.2014 г. Дата принятия в печать — 10.12.2014 г.

Шуленина Л. В., Галстян И. А., Надежина Н. М., Михайлов В. Ф., Раева Н. Ф. Экспрессия зрелых микроРНК, участвующих в функционировании р53-зависимой системы сохранения стабильности генома, у лиц, облученных в клинически значимых дозах. Саратовский научно-медицинский журнал 2014; 10 (4): 749-753.

Цель: исследовать содержание зрелых микроРНК, участвующих в функционировании р53-зависимой системы сохранения стабильности генома, в крови пациентов в отдаленные сроки после облучения в клинически значимых дозах и сопоставить эти показатели с развитием злокачественных опухолей в период отдаленных последствий лучевого поражения. Материал и методы. Объектом исследования явилась кровь пациентов с диагнозом: острая лучевая болезнь (ОЛБ), острая лучевая болезнь с развитием местных лучевых поражений (ОЛБ+МЛП) и местные лучевые поражения (МЛП), полученная через 1-51 год после лучевого поражения. Зрелые mir34a, mir21, mir145, mir16, mir125b, let7a, содержащиеся в общей фракции РНК, были обратно транскрибированы с использованием специфических "stem-loop" — праймеров. Методом ПЦР в реальном времени определялось относительное количество микроРНК в крови пациентов. Статистическая обработка результатов

проводилась с использованием непараметрического критерия Манна — Уитни. Данные приведены как медиана и квартили, нормированные к медиане группы «контроль», принятой за 1. Результаты. Обнаружено достоверное снижение mir34a, mir21 в крови пациентов с диагнозом ОЛБ и увеличение содержания mir145 у больных МЛП. Анализ индивидуальных значений микроРНК в крови больных, у которых был выявлен рак, за исключением больных с базалиомами, показал соответствия изменений с риском развития канцерогенеза. Заключение. Впервые исследована функциональная активность р53-зависимой системы сохранения стабильности генома по содержанию микроРНК в крови пациентов, облученных в клинически значимых дозах, спустя годы после лучевого поражения. Обнаружено достоверное снижение mir34a, mir21 в группе больных ОЛБ и увеличение mir145 у больных МЛП. Полученные результаты позволяют надеяться, что дальнейшие исследования, с расширением групп обследуемых пациентов и анализом динамики изменения показателей, позволят использовать микроРНК в качестве показателей риска формирования отдаленных последствий после ОЛБ и МЛП.

Ключевые слова: радиационные поражения, экспрессия микроРНК, р53.

Shulenina LV, Galstyan IA, Nadezhina NM, Mikhailov VF, Raeva NF. Expression of mature micro-RNA involved in the functioning of p53-dependent system of maintaining the genome stability of the individuals exposed to radiation at clinically relevant doses. Saratov Journal of Medical Scientific Research 2014; 10 (4): 749-753.

Purpose: to explore the content of mature micro-RNA involved in the functioning of p53-dependent system of maintaining the genome stability in the blood of patients in distant time after irradiation at clinically relevant doses and to compare these micro-RNA with the development of malignant tumors in the period of late consequences of radiation injury. Materials and methods. We used the blood samples of patients with acute radiation syndrome (ARS), acute radiation syndrome with the development of local radiation injury (ARS+LRI) and local radiation injury (LRI) obtained through 1-51 year after radiation injury. The mature mir34a, mir2l, mir145, mir16, mir125b, let7a which contained in the common fractions of RNA were reverse transcribed by using specific "stem-loop" — primers. The relative amount of micro-RNA in blood of patients by real-time PCR. Statistical analysis of the results was carried out using the non-parametric Mann — Whitney test. Data are presented as median and quartiles, normalized to median of control group accepted for 1. Results. We found a significant reduction of content of mir34a, mir21 in the blood of patients with a diagnosis ARS and the increase of content of mir145 in patients with LRI. Analysis of the individual values of micro-RNA expression in the blood of patients whose cancer was detected, except for patients with a bazalioma, showed consistency of changes with risk of carcinogenesis. Conclusion. For the first time was investigated the functional activity of p53-dependent system of maintaining the genome stability by measuring of micro-RNA in the blood of patients after many years post radiation injury. We found a significant reduction of content of mir34a, mir21 in blood of patients with ARS, and increased mir145 in patients with LRI. Our results suggest that further research with groups of patients, and analysis the dynamics of micro-RNA intent would allow for use the micro-RNA as indicators of risk of late consequences after ARS and LRI.

Key words: radiation injury, expression of p53, micro-RNA.

Введение. Острая лучевая болезнь (ОЛБ) может возникнуть как в военное, так и в мирное время при несоблюдении правил работы с источниками ионизурующих излучений в медучреждениях, в случае выхода из строя различных атомных предприятий и т.д. Однако общее число зарегистрированных людей, пострадавших в радиационных авариях и в последующем перенесших ОЛБ, невелико. В литературе подробно описаны основные клинические проявления ОЛБ, имеются немногочисленные сведения о состоянии здоровья в отдаленные сроки после облучения лиц, перенесших ОЛБ [1, 2]. Около половины всех случаев ОЛБ сопровождаются тяжелыми местными лучевыми поражениями (МЛП), что обусловлено крайне неравномерным распределением поглощенной дозы по телу человека при некоторых условиях и случаях облучения.

Одним из тяжелых последствий перенесенной ОЛБ является учащение развития онкогематологиче-ских образований, а в случае возникновения МЛП — рака кожи с длительным латентным периодом [3]. Поэтому врачи должны быть осведомлены о потенциальном онкологическом риске перенесенных ОЛБ и МЛП, иметь представление о существующих факторах риска и умело управлять ими, т.е. уметь прогнозировать.

При всем разнообразии нарушений экспрессии генов и эпигенетических изменений при онкотранс-формации важнейшими являются изменения функционирования систем, отвечающих за сохранение стабильности генома, пролиферации клеток и их

Ответственный автор — Шуленина Лилия Викторовна

Тел. 8-916-435-93-20

E-mail: shulenina2010@mail.ru

инвазии. Проявление нестабильности генома является специфическим признаком, присущим раковым клеткам. Среди обширного набора механизмов, использованных раковыми клетками для выживания, инактивация р53 — одна из наиболее частых и эффективных стратегий. В настоящее время р53 активно изучается не только в «мутационной и транскрипционной плоскостях», но и на постранскрипционном уровне, поскольку важным остается не столько количество этого белка в клетке, как его функциональная активность. Более того, с терапевтической точки зрения, по мнению некоторых авторов, наиболее перспективным является использование именно малых молекул, регулирующих деятельность р53 ^^Нп-3а, М1-319, М1-219), в связи с их низкой генотоксично-стью [4]. Система белка р53 и его взаимоотношения с регуляторами и эффекторами изучены на многих клеточных и животных моделях. Известно, что малые некодирующие РНК-микроРНК встраиваются в работу этой системы, а конкретно 1тлМ25Ь комплементарно связывается с мРНК гена Р53 и инактивирует ее, а сам белок р53 опосредует апоптоз и остановку клеточного цикла через взаимодействие с тИ45, т^34а, тИ6. Диалектика взаимоотношений этих молекул может быть разной в зависимости от типа повреждающего воздействия и может иметь ткане-специфический характер.

Отдельный интерес представляет собой т^21, поскольку показана диагностическая ценность его содержания в крови, сыворотке, плазме и в тканях пациента для обнаружения рака молочной железы [5]. Мета-анализ прогностической значимости высокой экспрессии т^21 выявил корреляцию с метастазами и стадиями заболевания у больных раком желудка [6], плохой выживаемостью больных колоректальным раком [7]. В клетке т^21 действует

как антогонист р53, т.е. способствует пролиферации и ингибированию апоптоза.

Вопрос о том, как изменяется функциональная активность р53 после перенесенных ОЛБ и МЛП и какова роль р53-зависимой системы в инициации радиационного канцерогенеза, остается открытым. Поэтому целью данного исследования было изучить изменения экспрессии зрелых микроРНК, модулирующих активность онкосупрессора р53, в крови у пациентов через десятки лет после перенесенных ОЛБ и МЛП и сопоставить полученные результаты с особенностями проявления рака в зависимости от лучевого воздействия на организм.

Материал и методы. Пациенты, перенесшие ОЛБ, ОЛБ+МЛП и МЛП.

Объектом исследования явились образцы крови от 28 пациентов: 14 пациентов имели в анамнезе диагноз ОЛБ, 8 ОЛБ+МЛП и 6 МЛП. Больные наблюдались в клинике ФМБЦ им. А. И. Бурназяна со времени лечения лучевых поражений и до момента взятия крови: от двух лет до 5l года. В группах ОЛБ и ОЛБ+МЛП в поздние сроки после облучения были диагностированы онкогематологические заболевания и солидные опухоли у больных в каждой группе. Но большая нагруженность эпизодами возникновения опухолей выявлялась у больных ОЛБ+МЛП. В группе ОЛБ+МЛП обнаружено 9 эпизодов опухолей на 5 человек, из которых 5 базалиом. В группе ОЛБ установлены 6 эпизодов опухолей на 5 человек, из них 2 базалиомы. Во время очередного стационарного обследования в 2004-2007 гг. были взяты образцы крови. В течение 7-10 лет до настоящего исследования они сохранялись в условиях морозильной камеры при минус 750С, наиболее оптимальных для хранения РНК.

В качестве контрольной группы исследованы здоровые доноры в количестве 27 человек (по данным Центра переливания крови Минздравсоцразвития России за период 2004-2008 гг). Все доноры обследованы на ВИЧ-носительство и признаны практически здоровыми по результатам стандартной процедуры медицинского освидетельствования. Возрастной диапазон группы «доноры» статистически значимо не отличался от группы «пациенты» (от 1927 по 1982 год рождения).

Выделение РНК. Выделение тотальной РНК проводили тризольным методом с использованием набора Trizol RNA Prep 100 (ООО «Лаборатория Изоген») в соответствии с протоколом фирмы-производителя. Суммарная РНК содержала фракцию зрелых микроРНК.

Обратная транскрипция. Обратная транскрипция зрелых miR21, miR34a, mir125b, mir145, mir16, let7a осуществлялась с использованием специфических праймеров особой шпилькообразной структуры, последовательности которых взяты из зарубежных работ, и готового набора реагентов фирмы Applied Biosystems. Температурный профиль синтеза к ДНК, проводимый на амплификаторе «Терцик» (НПФ «ДНК-технология»), был следующим: 1б0С/30 мин, 420С/30 мин и 850С/5 мин. Для оценки специфичности обратной транскрипции использованы отрицательные контроли, не содержащие РНК.

ПЦР в реальном времени. ПЦР в реальном времени проводили на амплификаторе «DTprime 5М3» (НПО «ДНК-Технология») в присутствии интеркали-рующего красителя SYBR Green (Thermo Scientific Maxima SYBR Green/ROX qPCR Master Mix (2X) или специфического TaqMan-зонда (ООО «ДНК-синтез»).

Олигонуклеотидная последовательность праймеров и зондов, а также температурные условия ПЦР были взяты из зарубежных работ и адаптированы к нашим экспериментам.

Полученные данные анализировали с использованием метода определения порогового цикла амплификации ДДС(, где С(-пороговый цикл.

Статистическая обработка результатов осуществлялась с использованием программы Statistica 7.0 и включала в себя определение медианы и интерк-вартильного размаха. Каждая ПЦР проводилась не менее двух раз, для оценки достоверности различий применялся непараметрический критерий Манна — Уитни. Значения медианы в контрольной группе приняты условно за 1, а значения медианы в исследуемых группах показывали, во сколько раз уровень экспрессии гена выше или ниже по отношению к контрольной группе.

Результаты. Общие данные об экспрессии зрелых микроРНК, модулирующих активность р53-зависимой системы сохранения стабильности генома, в крови пациентов с диагнозом ОЛБ, ОЛБ+МЛП и МЛП представлены на рисунке.

Изменение содержания микроРНК, модулирующих активность р53-зависимой системы сохранения стабильности генома в крови пациентов с диагнозом ОЛБ, ОЛБ+МЛП, МЛП в отдаленные роки после облучения. В качестве контрольной группы взяты здоровые доноры

Как видно из рисунка, у пациентов через десятки лет после перенесенной ОЛБ в крови наблюдается снижение содержания зрелой 1тлг34 по сравнению с группой «здоровые доноры» (Д). Медиана этого показателя уменьшалась в 3,3 раза по сравнению с контролем (медиана равна 0,3), а содержание т^21 в крови у этой группы больных достоверно снижалось в 3 раза (медиана равна 0,37).

При обследовании пациентов с диагнозом МЛП обнаружено статистически значимое увеличение содержание ^г145 по сравнению с контролем (медиана равна 6,07).

Не обнаружено статистически значимых отличий в экспрессии ^г125Ь, ^г16, ^7а у всех обследованных групп пациентов вне зависимости от диагноза, хотя и отмечены существенные внутригрупповые индивидуальные различия.

Обсуждение. В настоящее время в литературе активно обсуждается роль микроРНК в р53-зависимой

системе сохранения стабильности генома. Ми-кроРНК представляют собой малые некодирующие РНК, которые включены в регуляцию генов-мишеней на посттранскрипционном уровне. МикроРНК могут ковалентно связываться с комплементарными последовательностями 3' — UTR-региона мРНК и репрессировать трансляцию, а могут взаимодействовать с белковыми факторами и обеспечивать стабильность мРНК. МикроРНК управляют многими биологическими процессами, в том числе принимают прямое участие в онкогенезе [8]. Известно, что р53 опосредует клеточный ответ, действуя как транскрипционный фактор на различные гены-мишени, запуская процессы остановки клеточного цикла и апоптоза. Работа р53-программы обеспечивается комплексом взаимодействий р53 с различными его регуляторами и эффекторами. Современные достижения системной биологии и математического моделирования позволяют предсказывать итог работы такой системы с учетом времени жизни белка и мРНК, скорости синтеза и распада этих молекул, их количественного баланса в клетке. Поэтому в клинической практике не достаточно определения содержания онкосупрес-сора р53 в качестве биомаркера заболевания, так как функциональная активность белка модулируется многими факторами.

В 2007 г в журнале «Nature» опубликована статья Lin He с соавт., где авторами показано, что р53 активирует транскрипцию генного кластера mir34, который действует по механизму РНК-интерференции на гены-мишени, определяющие процессы апоптоза и прохождения клеточного цикла [9]. Для оценки важности участия mir34 в р53-зависимом клеточном ответе сравнивали профиль экспрессии микроРНК в мышиных эмбриональных фибробластах с «диким» типом и «выключенным» р53. Обнаружено, что различные ДНК-повреждения вызывали экспрессию mir34 только в клетках с «диким» типом р53. Установлено, что р53 активирует промоутер гена mir34. Чуть позже американцами был зарегистрирован патент по использованию mir34 в качестве биомаркера р53-статуса.

Результаты нашего исследования показали, что mir34a достоверно снижен у больных ОЛБ, но у этой группы больных понижен также mir21. Однако снижение уровня mir34 характеризует активность онкосу-прессора р53, в то время как уменьшение экспрессии mir21 сказывается на потере пролиферативной активности и радиорезистентности клеток. Поэтому способность клеток к р53-зависимому сохранению стабильности генома, включающая не только уничтожение дефектных клеток, но и активацию процессов репарации, страдает в большей степени, чем при снижении уровня mir21, что, скорее всего, может способствовать развитию онкотрансформации.

Из литературы известно, что р53 индуцирует mir145 путем связывания непосредственно с его про-моутером, после чего mir145 ингибирует с-Мус, демонстрируя свои р53-опосредованные онкосупрес-сорные возможности.

Многими исследователями была показана прямая корреляция между р53 и mir145. Suh с соавт. обнаружили, что подавление mir145 вызвано метилированием ДНК и мутациями в р53 [10], которые часто возникают в различных злокачественных опухолях; p53 может повысить посттранскрипционное созревание mir145 в ответ на повреждение ДНК, а транс-крипционно неактивные «р53-мутанты» приводят к ослаблению экспрессии mir145. Наши результаты

демонстрируют достоверное увеличение 1тлМ45 у больных МЛП по сравнению с контрольной группой, что, возможно, свидетельствует об активности р53 и способствует хорошей выживаемости и благоприятному прогнозу. Стоит отметить, что на сегодняшний день нет единого регламента оценки р53-зависимой системы сохранения стабильности генома. Было показано, что экспрессия т^34 под влиянием р53 в различных клеточных линиях изменяется в десятки раз. Тем не менее микрРНК — довольно стабильные молекулы, которые могут находиться и вне клеток и являть собой надежные критерии определения работы р53. Однако из-за своего плейотропного характера р53 действует на многие микроРНК, задействуя разные механизмы: активируя либо их транскрипцию, либо их биогенез, что в конечном итоге сопровождается гибелью клеток и остановкой клеточного цикла.

Отсутствие изменений показателей ^г16, ^М25Ь, ^7а, характеризующих средний уровень (медиану) в группах ОЛБ, ОЛБ+МЛП и МЛП, говорит о том, что данные показатели не могут служить для характеристики работы р53-зависимой системы сохранения стабильности генома после такого гено-токсического воздействия при их измерении в крови. Однако, учитывая большой индивидуальный разброс данных, связанных с гетерогенностью групп, возможность индивидуальной прогностической значимости сохраняется.

Анализ экспрессии зрелых т^34 и т^21 у пациентов, у которых уже после обследования были диагностированы онкозаболевания, показал, что за 4-6 лет до образования базалиом экспрессия этих микроРНК не отличалась от уровня нормы. Уровень т^34 в крови у пациента за два года до появления рака толстой кишки был в 800 раз ниже контрольных значений. У 3 онкологических больных (с диагнозом «рак щитовидной железы», «рак мочевого пузыря» и «хронический миелолейкоз»), перенесших ранее ОЛБ, во время лечения уровень т^34 составлял 0,0036. Кроме этого, у пациента с миелолейкозом содержание т^21 в крови в 22 раза превышало контрольные значения. Таким образом, показано, что определение микроРНК, модулирующих активность р53, по-видимому, может дать информацию о риске развития ряда онкологических заболеваний после ОЛБ. Проведенные нами ранее исследования больных с раком молочной железы, раком предстательной железы и раками области головы и шеи также выявили существенные изменения экспрессии изученных нами микроРНК. Обнаружено, что не только уменьшение экспрессии зрелой т^34, но и значительное увеличение уровня этой микроРНК является неблагоприятным признаком, поскольку сигнализирует о высоком метастази-ровании.

Сделанные нами предположения о снижении эффективности функционирования р53-зависимой системы сохранения стабильности генома у больных, основанные на результатах по определению содержания т^34 и т^21 в крови, в большинстве своем согласуются с риском выявления онкологических заболеваний как у отдельно взятых индивидуумов, так и у всей группы больных ОЛБ. Высокий уровень ^г145 у больных МЛП, возможно, коррелирует с благоприятным прогнозом в случае необнаруживаемых на момент исследования признаков онкотрасформа-ции и, возможно, связан с тем, что локальное переоблучение перепрограммирует р53-систему в сторону стимуляции процессов репарации.

Для заключений о прогностической значимости изученных показателей риска формирования новообразований необходимы дальнейшие исследования в сопоставлении с возникающими отдаленными последствиями лучевого поражения при регулярном динамическом наблюдении за данными показателями.

Заключение. Используя уникальный материал в виде крови пациентов, перенесших ОЛБ, ОЛБ+МЛП и МЛП, наблюдавшихся в ФМБЦ им. А. И. Бурназяна, мы оценили эпигенетические изменения функционирования р53-зависимой системы по содержанию mir34a, mit145, mir16, mir125b, let7a в крови в отдаленные сроки после облучения. Обнаружены достоверное снижение mir34a, mir21 в группе больных ОЛБ и увеличение mir145 у больных МЛП. Полученные результаты позволяют надеяться, что дальнейшие исследования, с расширением групп обследуемых пациентов и анализом динамики изменения показателей, позволят использовать микроРНК в качестве показателей риска формирования онкологических заболеваний в период отдаленных последствий ОЛБ и МЛП.

Конфликт интересов не заявляется.

References

1. Gus'kova AK, Baysogolov GD. Human radiation syndrome

2. Nadezhina NM, Galstyan IA, Savitskiy AA, et. al. Long-term consequences of acute radiation syndrome. Med Radiol

3. Galstjan IA. Health status of persons during remote period after acute radiation syndrome: DScabstract. Moscow, 2011; 44 p. Russian

4. Brummelkamp TR, Fabius AW, Mullenders J, et al. An shR-NA barcode screen provides insight into cancer cell vulnerability to MDM2 inhibitors. Nat Chem Biol 2006; 2: 202-206.

5. Pan F, Mao H, Deng L. Prognostic and clinicopathological significance of microRNA-21 overexpression in breast cancer: a meta-analysis. Int J Clin Exp Pathol 2014; 15; 7 (9): 5622-5633.

6. Zhenqiang W, Qiang C, Zhaoyan J. Prognostic Role of Mi-croRNA-21 in Gastric Cancer: a Meta-Analysis. Med Sci Monit 2014; 18 (20): 1668-1674.

7. Xiaochun X, Baixia, Xiaogang Zh, et al. Prognostic Role of microRNA-21 in Colorectal Cancer: a Meta-Analysis. PLoS One 2013; 8 (11): e80426.

8. Kolesnikov NN, Titov SE, Veryaskina YuA, et al. MicroR-NA, evolution and cancer. Tsitologiya 2013; 55

9. Lin H, Xingyue H, Lee P, et al. A microRNA component of the p53 tumor suppressor network. Nature 2007; 447: 11301134.

10. Suh SO, Chen Y, Zaman MS, et al. MicroRNA-145 is regulated by DNA methylation and p53 gene mutation in prostate cancer. Carcinogenesis 2011; 32: 772-778.