ЧЕЛОВЕЧЕСКИЕ АНТИТЕЛА, СВЯЗЫВАЮЩИЕСЯ С ROR2

1. Полностью человеческое антитело или его производное, модифицированный формат или фрагмент, которые специфично связываются с внеклеточным доменом подобного рецепторной тирозинкиназе орфанного рецептора 2 (ROR2).
2. Антитело, производное, модифицированный формат или фрагмент по п. 1, которые представляют собой антитело, связывающий белок на основе антитела, модифицированный формат антитела, сохраняющий способность к связыванию с мишенью, производное или фрагмент антитела, сохраняющие способность к связыванию с мишенью.
3. Антитело, производное, модифицированный формат или фрагмент по п. 1 или 2, которые связываются с тем же эпитопом ROR2 и/или конкурируют за связывание с ROR2 с антителом, содержащим последовательность вариабельного участка тяжелой цепи Ig и последовательность вариабельного участка легкой цепи Ig, соответственно, представленные в:
(i) SEQ ID NO: 2 и SEQ ID NO: 3;
(ii) SEQ ID NO: 4 и SEQ ID NO: 5;
(iii) SEQ ID NO: 6 и SEQ ID NO: 7;
(iv) SEQ ID NO: 8 и SEQ ID NO: 9;
(v) SEQ ID NO: 10 и SEQ ID NO: 11;
(vi) SEQ ID NO: 12 и SEQ ID NO: 13;
(vii) SEQ ID NO: 14 и SEQ ID NO: 15;
(vii) SEQ ID NO: 16 и SEQ ID NO: 17;
(ix) SEQ ID NO: 18 и SEQ ID NO: 19;
(x) SEQ ID NO: 20 и SEQ ID NO: 21;
(xi) SEQ ID NO: 22 и SEQ ID NO: 23 или
(xii) SEQ ID NO: 24 и SEQ ID NO: 25.
4. Антитело, производное, модифицированный формат или фрагмент по любому из предыдущих пунктов, которые содержат последовательность вариабельного участка тяжелой цепи и последовательность вариабельного участка легкой цепи, соответственно, одна или обе из которых являются по меньшей мере на 90%, предпочтительно, по меньшей мере на 95%, более предпочтительно, по меньшей мере на 98%, еще более предпочтительно, по меньшей мере на 99% и, наиболее предпочтительно, на 100% идентичными последовательности вариабельного участка тяжелой цепи или последовательности вариабельного участка легкой цепи, соответственно, которые представлены в:
(i) SEQ ID NO: 2 и SEQ ID NO: 3;
(ii) SEQ ID NO: 4 и SEQ ID NO: 5;
(iii) SEQ ID NO: 6 и SEQ ID NO: 7;
(iv) SEQ ID NO: 8 и SEQ ID NO: 9;
(v) SEQ ID NO: 10 и SEQ ID NO: 11;
(vi) SEQ ID NO: 12 и SEQ ID NO: 13;
(vii) SEQ ID NO: 14 и SEQ ID NO: 15;
(vii) SEQ ID NO: 16 и SEQ ID NO: 17;
(ix) SEQ ID NO: 18 и SEQ ID NO: 19;
(x) SEQ ID NO: 20 и SEQ ID NO: 21;
(xi) SEQ ID NO: 22 и SEQ ID NO: 23 или
(xii) SEQ ID NO: 24 и SEQ ID NO: 25.
H
5. Антитело, производное, модифицированный формат или фрагмент по любому из предыдущих пунктов, которые содержат цепь V, содержащую три CDR, причем:
H
1
2
3
4
5
6
1
2
3
4
5
6
CDR №1 V содержит или состоит из пептидной последовательности GYSISSGYY (SEQ ID NO. 26) или GXXFXXXX (SEQ ID NO. 67), в которой X=F или G; Х=Т или S; X=R или S; X=S, Т, R или G; Х=Н, Y или Q; Х=С, Y или R; и/или
H
7
8
9
10
7
8
9
10
CDR №2 V содержит или состоит из пептидной последовательности IYQSGST (SEQ ID NO. 27), INHSRTT (SEQ ID NO. 59), INHSGIT (SEQ ID NO. 93) или IXXDGXXK (SEQ ID NO. 68), в которой X=W или K; X=Y, N, F или Q; X=S или T; Х=K, N или E; и/или
H
CDR №3 V содержит или состоит из пептидной последовательности, выбранной из: CAREDRAGWYPFDCW (SEQ ID NO. 28), CARVGAGLYLDYW (SEQ ID NO. 33), CAREGSGWYDYYYGMDVW (SEQ ID NO. 40), CQHYNTYSRTF (SEQ ID NO. 62), CARPGIAMTGLDYW (SEQ ID NO. 37), CARGGDQWLVPFDNW (SEQ ID NO. 95), CARVAAALHFHYW (SEQ ID NO. 47), CARGGEQWLVPFDYW (SEQ ID NO. 60), CARPGVAMTGLDLW (SEQ ID NO. 43), CIRVKFGDLYFQHW (SEQ ID NO. 49), CVRVRFGELYFQHW (SEQ ID NO. 44), CARDGYRNGWHIPEDYW (SEQ ID NO. 65), CARMGAINRGGGGFDYW (SEQ ID NO. 52) и CARDKGEWFGELRYYYYGMDVW (SEQ ID NO. 55).
L
6. Антитело, производное, модифицированный формат или фрагмент по любому из предыдущих пунктов, которые содержат цепь V, содержащую три CDR, причем:
L
11
12
13
11
12
13
CDR №1 V содержит или состоит из пептидной последовательности QSLLHSNGYNY (SEQ ID NO. 56), QSIDNW (SEQ ID NO. 48) или QXISXX (SEQ ID NO. 69), в которой X=S, T или G; X=S, N или H; и X=W или Y; и/или
L
CDR №2 V содержит или состоит из пептидной последовательности KAS, AAS или LGS; и/или
L
14
15
16
17
18
19
20
21
22
14
15
16
17
18
19
20
21
22
CDR №3 V содержит или состоит из пептидной последовательности CXXXXXXXXXF (SEQ ID NO. 70), в которой X=Q или М; X=K, Н или Q; X=H, Y или A; X=N или L; X=R, Т, Q, S или N; X=A, Y или Т; Х=Р, S или W; X=W, R, Y или отсутствует; X=S или Т.
7. Антитело, производное, модифицированный формат или фрагмент по любому из предыдущих пунктов, которые характеризуются перекрестной реактивностью с (i) человеческим ROR2 (hROR2) и (ii) по меньшей мере одним из ROR2 яванского макака (cROR2) и мышиного RoR2 (mROR2).
8. Антитело, производное, модифицированный формат или фрагмент по п. 7, которые содержат один из следующих наборов CDR:
a) CDR 1-3 тяжелой цепи, которые изложены в SEQ ID NO 38, 39 и 40, и CDR 1 и 3 легкой цепи, которые изложены в SEQ ID NO 29 и 41, с CDR 2 легкой цепи, имеющим последовательность KAS,
b) CDR 1-3 тяжелой цепи, которые изложены в SEQ ID NO 26-28, и CDR 1-3 легкой цепи, которые изложены в SEQ ID NO 29, 30 и 73,
c) CDR 1-3 тяжелой цепи, которые изложены в SEQ ID NO 94, 32 и 44, и CDR 1 и 3 легкой цепи, которые изложены в SEQ ID NO 29 и 42, с CDR 2 легкой цепи, имеющим последовательность KAS,
d) CDR 1-3 тяжелой цепи, которые изложены в SEQ ID NO 38, 46 и 52, и CDR 1 и 3 легкой цепи, которые изложены в SEQ ID NO 50 и 53, с CDR 2 легкой цепи, имеющим последовательность AAS,
e) CDR 1-3 тяжелой цепи, которые изложены в SEQ ID NO 38, 54 и 55, и CDR 1 и 3 легкой цепи, которые изложены в SEQ ID NO 56 и 57, с CDR 2 легкой цепи, имеющим последовательность LGS,
f) CDR 1-3 тяжелой цепи, которые изложены в SEQ ID NO 58-60, и CDR 1 и 3 легкой цепи, которые изложены в SEQ ID NO 61 и 62, с CDR 2 легкой цепи, имеющим последовательность KAS,
g) CDR 1-3 тяжелой цепи, которые изложены в SEQ ID NO 63-65, с CDR 1 и 3 легкой цепи, которые изложены в SEQ ID NO 50 и 66, с CDR 2 легкой цепи, имеющим последовательность AAS, и при этом CDR содержатся в подходящем белковом каркасе для того, чтобы они были способны к связыванию с hROR2, а также по меньшей мере с одним из ROR2 яванского макака (cROR2) и мышиного RoR2 (mROR2) с достаточной аффинностью.
9. Антитело, производное, модифицированный формат или фрагмент про п. 7, которые содержат одну из следующих пар последовательностей:
a) последовательность вариабельного участка тяжелой цепи антитела GK-5A1, представленную в SEQ ID NO. 8, и последовательность вариабельного участка легкой цепи антитела GK-5A1, представленную в SEQ ID NO. 9,
b) последовательность вариабельного участка тяжелой цепи антитела MK-3В12, представленную в SEQ ID NO. 2, и последовательность вариабельного участка легкой цепи антитела MK-3В12, представленную в SEQ ID NO. 3,
c) последовательность вариабельного участка тяжелой цепи антитела GK-5E1, представленную в SEQ ID NO. 12, и последовательность вариабельного участка легкой цепи антитела GK-5E1, представленную в SEQ ID NO. 13,
d) последовательность вариабельного участка тяжелой цепи антитела GK-21D3, представленную в SEQ ID NO. 18, и последовательность вариабельного участка легкой цепи антитела GK-5E1, представленную в SEQ ID NO. 19,
e) последовательность вариабельного участка тяжелой цепи антитела MK-24С10, представленную в SEQ ID NO. 20, и последовательность вариабельного участка легкой цепи антитела MK-24С10, представленную в SEQ ID NO. 21,
f) последовательность вариабельного участка тяжелой цепи антитела MK-24F9, представленную в SEQ ID NO. 22, и последовательность вариабельного участка легкой цепи антитела MK-24F9, представленную в SEQ ID NO. 23,
g) последовательность вариабельного участка тяжелой цепи антитела GK-22G12, представленную в SEQ ID NO. 24, и последовательность вариабельного участка легкой цепи антитела GK-22G12, представленную в SEQ ID NO. 25.
10. Антитело, производное, модифицированный формат или фрагмент по любому из предыдущих пунктов, которые являются би- или мультиспецифичными, и которые содержат
первую часть, которая связывается с внеклеточным доменом подобного рецепторной тирозинкиназе орфанного рецептора 2 (ROR2), и
по меньшей мере вторую часть, которая связывается с эффекторным антигеном, выбранным из группы, состоящей из CD3, CD 16, NKG2D, NKp46, CD2, CD28 и/или CD25.
11. Конъюгат антитело-лекарственное средство (ADC), имеющий общую формулу A-(L)n-(T)m, в которой:
А представляет собой антитело, производное, модифицированный формат или фрагмент по любому из пп. 1-6;
L представляет собой линкер;
Т представляет собой полезную нагрузку в виде цитотоксического или цитостатического средства;
и в которой n и m представляют собой целые числа от >1 до <10.
12. Конъюгат антитело-эффекторная молекула (АЕС), имеющий общую формулу А-(L)n-(E)m, в которой
А представляет собой антитело, производное, модифицированный формат или фрагмент по п. 1;
L представляет собой линкер;
Т представляет собой метку;
и в которой n и m представляют собой целые числа от >1 до <10.
13. Конъюгат по любому из пп. 11 и 12, причем линкер содержит или состоит по меньшей мере из одного, выбранного из группы, состоящей из
олиго пептидного линкера,
малеимидного линкера, необязательно содержащего расщепляемые спейсеры, которые могут расщепляться при изменениях рН, окислительно-восстановительного потенциала и/или конкретными внутриклеточными ферментами.
14. Конъюгат по любому из пп. 11-13, причем линкер имеет по меньшей мере одну из следующих аминокислотных последовательностей: -LPXTGn-, -LPXAGn-, -LPXSGn-, -LAXTGn-, -LPXTGn-, -LPXTAn- или -NPQTGn-, причем Gn представляет собой олиго- или полиглицин, при этом n представляет собой целое число от ≥1 до ≤21, An представляет собой олиго- или полиаланин, при этом n представляет собой целое число от ≥1 до ≤21, и X представляет собой любую возможную аминокислотную последовательность.
15. Конъюгат по любому из пп. 11-14, причем линкер конъюгирован с С-концом по меньшей мере одного субдомена антитела, производного, модифицированного формата или фрагмента.
16. Конъюгат по любому из пп. 11-15, причем перед конъюгированием антитело, производное, модифицированный формат или фрагмент несут мотив для распознавания сортазой, слитый или конъюгированный с С-концом по меньшей мере одного его субдомена, и токсин или метка содержит глициновый отрезок длиной от ≥1 до ≤21 глициновых остатков, предпочтительно, длиной от ≥2 до ≤5 глициновых остатков.
17. Конъюгат антитело-лекарственное средство по любому из пп. 11-16, причем токсин представляет собой по меньшей мере один, выбранный из группы, состоящей из:
майтансиноидов,
ауристатинов,
антрациклинов, предпочтительно, антрациклинов, полученных из PNU-159682,
калихеамицинов,
тубулизинов,
дуокармицинов,
радиоактивных изотопов,
липосом, содержащих полезную нагрузку в виде анатоксина,
белковых токсинов,
таксанов,
псевдодимеров индилино-бензодиазепина и/или
пирролобензодиазепинов, или представляет собой их производное.
18. Конъюгат по любому из пп. 11-17, который получен посредством опосредованного сортазой конъюгирования (i) антитела, несущего один или несколько мотивов для распознавания сортазой, и (ii) одного или нескольких токсинов или меток, несущих олигоглициновый тэг.
19. Способ получения конъюгата по любому из пп. 11-18, причем способ предусматривает следующие стадии:
a) обеспечения антитела, производного, модифицированного формата или фрагмента по любому из пп. 1-6, причем антитело несет один или несколько мотивов для распознавания сортазой,
b) обеспечения одного или нескольких токсинов или меток, несущих олигоглициновый тэг, и
c) конъюгирование антитела и токсина или метки с помощью опосредованного сортазой конъюгирования.
20. Химерный антигенный рецептор (CAR) ROR2, использующий антитело, производное, модифицированный формат или фрагмент по любому из пп. 1-10, слитые или конъюгированные по меньшей мере с одним трансмембранным участком и по меньшей мере одним внутриклеточным доменом.
21. Клетка, содержащая химерный антигенный рецептор по п. 20, причем клетка предпочтительно представляет собой подвергнутую воздействию методов генной инженерии Т-клетку.
22. Применение антитела, производного, модифицированного формата или фрагмента по любому из пп. 1-10, конъюгата антитело-лекарственное средство по любому из пп. 11 или 13-18 или CAR или клетки по п. 20 или 21 для лечения пациента, который
страдает от неопластического заболевания,
имеет риск развития неопластического заболевания, и/или
у которого диагностировано неопластическое заболевание.
23. Применение по п. 22, причем неопластическое заболевание представляет собой по меньшей мере одно, выбранное из группы, состоящей из
почечно-клеточной карциномы,
остеосаркомы,
рака почки.
24. Фармацевтическая композиция, содержащая антитело, производное, модифицированный формат или фрагмент по любому из пп. 1-10, конъюгат антитело-лекарственное средство по любому из пп. 11 или 13-18 или CAR или клетку по п. 20 или 21 вместе с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми ингредиентами.
25. Способ уничтожения или ингибирования роста клетки, экспрессирующей ROR2 in vitro или у пациента, причем способ предусматривает введение в клетку фармацевтически эффективного количества или дозы антитела, производного, модифицированного формата или фрагмента по любому из пп. 1-10, конъюгата антитело-лекарственное средство по любому из пп. 11 или 13-18 или CAR или клетки по п. 20 или 21, или (ii) фармацевтической композиции по п. 24.
26. Способ по п. 25, причем клетка, экспрессирующая ROR2, представляет собой раковую клетку.
27. Способ определения того,
страдает ли предполагаемый пациент от неопластического заболевания или иммунного заболевания,
имеет ли предполагаемый пациент риск развития неопластического заболевания или иммунного заболевания, и/или
диагностировано ли у предполагаемого пациента неопластическое заболевание или иммунное заболевание,
причем указанный способ предусматривает обработку образца, взятого у субъекта, конъюгатом антитело-эффекторная молекула по любому из пп. 12-16 или 18.
28. Способ по п. 27, причем неопластическое заболевание или иммунное заболевание является подходящим для лечения антителом к ROR2, производным, модифицированным форматом или фрагментом, конъюгатом антитело к ROR2-лекарственное средство или Т-клеткой с CAR, содержащим антитело к ROR2, производное, модифицированный формат или фрагмент.