КОМПОЗИЦИЯ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ АКНЕ
COMPOSITION FOR TREATING ACNE

Настоящее изобретение относится к косметической или дерматологической композиции для лечения акне, состоящей из комбинации растительных экстрактов, титрованных в салицине и 1,2-алкандиолах, предпочтительно 1,2-декандиоле, и экстракта коры ивы белой (Salix alba).
Обыкновенные (вульгарные) угри - дерматоз, который наиболее часто диагностируется у пациентов в возрасте от 11 до 30 лет. Считается, что акне поражает около 80% людей, входящих в эту возрастную группу, или даже, с учетом малоинтенсивных поражений, 100% молодых людей. Этиопатогенез акне носит многофакторный характер. У всех пациентов с акне возникают следующие симптомы: чрезмерная выработка кожного сала, чрезмерное ороговение кожного покрова в области выводных протоков и отверстий сальных желез, рост бактериальной флоры и высвобождение воспалительных медиаторов в кожном покрове.
В 95% случаев поражение локализуются на лице и верхней части туловища, иногда на других частях тела, и из-за такого расположения и хронического характера заболевания они создают серьезные психологические проблемы.
Чрезмерная выработка и скопление кожного сала, а также закупорка отверстий сальных желез благоприятствуют бактериальной колонизации. Микрокомедоны заселены, в основном, бактерией Propionibacterium acnes - микроорганизмом, главным образом участвующим в образовании акне. Также могут встречаться другие бактерии, в частности, Staphylococcus epidermidis и Malasezzia furfur. В присутствии липазы этот микроорганизм гидролизует ди- и триглицериды кожного сала до свободных жирных кислот. Образовавшиеся в процессе гидролиза свободные жирные кислоты оказывают раздражающее и провоспалительное действие, а также активизируют фолликулярный кератоз. Провоспалительное действие оказывают также гиалуронидаза, протеазы и нейраминидазы, произведенные Propioribacterium acnes. Более того, этот микроорганизм высвобождает низкомолекулярные хемотаксические факторы (пептиды), привлекая тем самым нейтрофилы, а также запускает альтернативный путь активации комплемента и классический иммунный ответ. Запуск альтернативного пути активации комплемента происходит за счет клеточной стенки propionibacterium (B. Bergler-Czop. International Journal of Cosmetic Science. 2014, 36, 187-194).
Такие микроорганизмы как Propionibacterium acnes могут стимулировать секрецию различных дермальных антимикробных пептидов (АМП). Воспалительное действие P. acnes не требует, чтобы организм был живым или присутствовал полностью. В исследованиях in vitro надосадочная жидкость, содержащая либо мембранные пептидогликаны (ПГ) и липополисахариды (ЛПС), либо цитозольное содержимое или мембранные белки, смогла увеличить экспрессию ТПР2 и ТПР4 кератиноцитов.
Хорошо известно, что в дальнейшем цитокины играют значительную роль в развитии и регуляции воспалительной формы акне. Propionibacterium acnes инициируют провоспалительные медиаторы посредством активации Толл-подобного рецептора 2 (ТПР2). Среди таких медиаторов присутствует ИЛ-8, экспрессия которого индуцируется P. acnes.
Фактор некроза опухолей альфа (ФНО-альфа) представляет собой еще один провоспалительный цитокин, участвующий в патогенезе акне (Archives of Dermatological Research 2008, Volume 300, No 7, 371-376).
Экстракт коры ивы белой (Salix alba) содержит салицин и его производные, которые вот уже как более века используются в качестве жаропонижающих средств, а также при лечении многих ревматических заболеваний.
Лекарственные растительные препараты, такие как различные препараты из коры ивы белой, хорошо зарекомендовали себя в Европе при лечении воспалительных заболеваний и болей различного происхождения.
Экстракты Salix проявили свое ярко выраженное анальгезирующее, противовоспалительное и жаропонижающее действие в ходе различных исследований на животных (Loniewski et. al. 2002).
Например, в ходе теста «горячая пластина» и исследования отека лап, вызванного введением каррагинана, на крысах (установленные процедуры исследования, проводимого с целью выявления аналгезирующего и противовоспалительного эффекта соответственно) сообщалось о дозозависимых эффектах применения экстракта Salix, содержащего 12% салицина (Loniewski et. al. 2002).
Салицин известен своим сильным противовоспалительным действием при пероральном приеме.
Считается, что салицин может иметь омолаживающие свойства при местном применении у человека. Данные исследования показывают, что местное применение сыворотки, содержащей 0.5% салицина, называет благоприятное действие, замедляющее старение, борясь с основными видимыми признаками старения кожи. По признакам старения кожи, связанным с ее структурой, были отмечены статистические улучшения по сравнению с исходным уровнем. Под такими признаками подразумеваются неглубокие и мимические морщинки, контур челюстных зон, упругость, растяжимость и плотность. Статистические улучшения по сравнению с исходным уровнем были также отмечены по таким признакам, как пятнистая пигментация, неровный тон кожи, сияние, увлажненность и шероховатость. Данные результаты подтверждают способность салицина сглаживать видимые признаки старения при местном применении на кожу человека в составе препарата. (Gopaul Remona en al., An evaluation of the effect of a topical product containing salicin on the visible signs of human skin aging Journal of Cosmetic Dermatology, 9, 196-201)
Из предшествующего уровня техники известно, что салицин может быть полезен при использовании в качестве имеющего антираздражающее действие активного вещества в косметических и дерматологических препаратах для местного применения (EP 0801946).
Салицин также полезен в сочетании с дополнительными растительными экстрактами. В патенте DE 10034328 раскрывается информация о косметическом препарате для наружного применения, особенно для кожи, пораженной розовыми угрями, содержащем кверцетин, рутин, салицин и эсцин в водной среде.
1,2-алкандиолы, такие как 1,2-пентадиол (INCI: пентилен гликоль), 1,2-гексан диол (INCI: 1,2-гександиол) и 1,2-октандиол (INCI: каприлил гликоль), а также их комбинации представляют собой многофункциональные игредиенты, широко используемые в средствах личногой гигиены в качестве увлажняющих и бактерицидных компонентов. Специалисту в данной области хорошо известно, что эти вещества проявляют специфическую антибактериальную активность в отношении P. acnes.
В патенте WO 2011117126 описывается комбинация 1,2-декандиола, ликохалкона А и карнитина, эффективная против Propionibacterium acnes (P. acnes) и не вызывающая раздражения кожи.
В патенте EP 1731036 раскрывается информация о смесевых препаратах, содержащих различные 1,2-алкандиолы и используемых для лечения акне.
Обычные продукты для лечения жирной проблемной кожи, например, очищающие средства на водной и спиртовой основе либо очищающие средства, содержащие поверхностно-активные вещества, обычно пересушивают кожу и лишь незначительно ухаживают за ней. Что особенно неблагоприятно, на использование очищающих средств, содержащих спирт и(или) детергенты, в течение более длительного срока организм может отреагировать чрезмерной выработкой кожного сала, что противоречит основной терапевтической цели, заключающейся в снижении выработки кожного сала в проблемой коже, предрасположенной к акне.
Для местного лечения акне используются средства для борьбы с акне, такие как сильные окислители, например, перекись бензоила: альфа-оксикислоты, такие как салициловая и молочная кислота; алифатические дикарбоновые кислоты, такие как азелаиновая кислота; ретиноиды, такие как третиноин (синоним: полностью транс-ретиноевая кислота), полностью - транс-ретиналь и 13-цис-ретиноевая кислота (изотретиноин); антиандрогены (5-альфа-редуктазы) и антибиотики, такие как клиндамицин, тетрациклин и эритромицин.
Указанные вещества обычно проявляют лишь весьма умеренную антибактериальную активность в отношении P. acnes и должны использоваться при относительно высокой концентрации (например, перекись бензоила вплоть до 5% в весовом отношении, азелаиновая кислота вплоть до 20% в весовом отношении) в косметических и дерматологических препаратах.
Однако из-за высокой дозировки кожа чрезвычайно сильно изнашивается, что проявляется, в частности, в очень сухой коже, при этом сухость частично обусловлена сильным раздражением из-за сильного снижения уровня pH кожи.
Эффективность сильного окислителя, такого как перекись бензоила, альфа-оксикислот, таких как салициловая и молочная кислота, и алифатических дикарбоновых кислот, таких как азелаиновая кислота, основываются на ингибировании P. acnes.
Желательно, чтобы косметический или дерматологический препарат для лечения акне обладал повышенной активностью в отношении Propionibacterium acnes (P. acnes) и повышенной противовоспалительной активностью, особенно в отношении воспаленных комедонов, не оказывая при этом сильного раздражающего действия на кожу.
Такая задача решается с помощью косметической или дерматологической композиции, состоящей из комбинации 1,2-декандиола и экстракта ивовой коры. Этот препарат на удивление проявляет синергетическое бактерицидное и противовоспалительное действие по сравнению с отдельными веществами.
Экспериментальная часть
Определение МИК и МБК в отношении грамположительных бактерий
Цель исследования
Цель исследования заключалась в определении антибактериальной активности одного или нескольких образцов в отношении микроорганизма. Полученные значения должны считаться характерными для исследуемого образца в отношении определенного вида микробов в определенных условиях проведения исследования.
Описание метода
Приготовили серию пробирок с культуральным бульоном, инокулированным исследуемым микроорганизмом, а исследуемое вещество вводили при постепенном уменьшении концентраций.
Культуры инкубировали при оптимальной температуре и в условиях оптимального роста предварительно выбранного микроорганизма, а также в течение достаточного долгого периода времени, помогающего зафиксировать рост.
Затем пробирки, в которых росла микробная популяция, визуально осматривали на наличие мутности, которая свидетельствует о росте. Пробирки, в которых вещество присутствует в концентрации, достаточной для ингибирования роста, остаются прозрачными. В случае, когда сама природа образца делает невозможным визуальное считывание или если необходимо установить, связано ли отсутствие роста с микробостатическим или микробоцидным действием, для подтверждения производили перенос в соответствующие агаровые питательные среды.
Критерии толкования
Концентрация образца, при которой ингибируется рост микроорганизмов, считается минимальной ингибирующей концентрацией (МИК), тогда как концентрация, при которой живые микроорганизмы больше не присутствуют, считается минимальной бактерицидной концентрацией (МБК)
А) Оценка антибактериальной активности различных веществ в отношении видов Staphylococcus
В ходе проведенного исследования по оценке антибактериальной активности в отношении грамположительных бактерий оценивали следующие вещества: бакучиол, лактоферрин, лауриновая кислота, ресвератрол, экстракт Salix alba.
Исследования антибактериальной активности этих веществ в отношении Staphylococcus aureus acnes ATCC 25923 и Staphylococcus epidermidis АТСС 12228 проводили в соответствии с вышеописанным методом. Результаты представлены в таблице 1.
Минимальная ингибирующая концентрация (МИК) и минимальная бактерицидная концентрация (МБК) различных веществ в отношении Staphylococcus aureus acnes и Staphylococcus epidermidis
Исследование показало слабую активность экстракта Salix alba в отношении грамположительных бактерий по отношению к другим исследуемым веществам.
В) Оценка антибактериальной активности различных веществ в отношении P. acnes
В последующей серии экспериментов мы исследовали антибактериальную активность экстракта Salix alba и 1,2-декандиола - вещества, которое, как известно, проявляет антибактериальную активность в отношении P. acnes, по отдельности и в комбинации в соответствии с вышеописанным методом.
В качестве микробных тест-культур использовали штамм бактерий Propionibacterium acnes АТСС 11827 с концентрацией 2,6×104 клетки на 1 мл среды.
Результаты представлены в таблице 2.
Минимальная ингибирующая концентрация (МИК) и минимальная бактерицидная концентрация (МБК) 1,2-декандиола и экстракта Salix alba в отношении Propionibacterium acnes
Экстракт Salix alba взятый отдельно проявляет лишь слабую антибактериальную активность.
Известно, что 1,2-декандиола эффективен против P. acnes.
Комбинация (1:1) экстракта Salik alba и 1,2-декандиола на удивление проявила синергическое бактерицидное действие против P. acnes.
Комбинация 1,2-декандиола и экстракта Salix alba способна достичь той же МИК, что и двойная концентрация 1,2-декандиола, и значительно повысить его МБК.
Выбранный порядок степени связанности соответствует перекиси бензоила, которая широко известна как сильное антибактериальное средство против P. acnes.
Оценка in vitro противовоспалительной активности экстракта Salix alba и 1,2-декандиола
Цель исследования заключалась в оценке противовоспалительной активности экстракта Salix alba, 1,2-декандиола и их комбинации путем изучения ФНО-альфа, ИЛ-1 альф, ИЛ-8 в биологической экспериментальной модели (культура клеток кератиноцитов HaCat).
ФНО-альфа, ИЛ-1 альфа, ИЛ-8 представляют собой воспалительные медиаторы, связанные с процессом образования акне.
Кератиноцитарная клеточная культура была выбрана в качестве экспериментальной модели на основе того, что процесс формирования акне происходит внутри фолликула сальных желез - ткани, состоящей из кератиноцитов.
Для стимулирования воспалительного процесса в нашей экспериментальной модели были выбраны липополисахариды (ЛПС). ЛПС представляют собой провоспалительные медиаторы, секретируемые бактериями, например, P. acnes.
1,2-декандиол (SMAL) эмульгировали кукурузным маслом (37°С) при механическом перемешивании и добавлении культуральной среды, исходя из следующего соотношения: 0,05 г эмульгированного 100 мкл кукурузного масла в конечном объеме культуральной среды 1 мл (37°С).
Экстракт Salix alba (WMAL) непосредственно разбавляли в культуральной среде, исходя из следующего соотношения: 0,05 г в 1 мл (37°С); последующие разведения в культуральной среде (37°С).
В рамках выполнения исследования человеческие кератиноциты (HaCat) обрабатывали ЛПС (липополисахарид из Escherichia coli, 10 нг/мл) и исследуемым продуктом в 3 концентрациях, выбранных среди нецитотоксических концентраций, после предварительного испытания на цитотоксичность.
В конце контролируемого экспериментального периода уровни цитокинов измеряли с помощью иммуноферментного анализа (ИФА).
Сравнивали результаты негативного контроля (клетки, которые не подвергались ЛПС, CTR-) и положительного контроля (клетки, обработанные ЛПС, CTR+).
Предварительное испытание на цитотоксичность проводили на двух продуктах с использованием диапазона концентраций от 5,0% до 0,0012% (серийное разведение 1:2). В соответствии с полученными результатами для анализа противовоспалительной активности были выбраны следующие концентрации:
1,2-декандиол (SMAL): 0,002%
Экстракт Salix alba (WMAL): 0,04%-0,02%-0,01%
Второе испытание на цитотоксичность проводили на соединении двух исходных материалов до начала исследования с целью проверки синергизма действия при противовоспалительной активности: испытываемые концентрации были следующими:
SMAL 0,002% + WMAL: 0,04%-0,02%-0,01%
Контрольные культурные среды и клетки, обработанные исследуемым продуктом, использовали для дозирования провоспалительных цитокинов ФНО-альфа, ИЛ-1 альфа и ИЛ-8 методом ИФА.
Для определения количества цитокинов использовали коммерческие наборы ИФА.
При количественном определении применяли калибровочную кривую, построенную по стандартным известным и растущим концентрациям стандартного цитокина.
Данные, полученные в разных экспериментальных группах, подвергали статистическому анализу и сравнивали по t-критерию. Отклонения считали значимыми при p<0,05.
В нижеприведенной таблице 3 указаны данные, полученные для каждой исследуемой серии.
Результаты выражены в виде цитокина, высвобождаемого в среду в течение экспериментального периода (среднее значение ± станд. отклон.) и как среднее  процентное отклонение по сравнению с контрольными показателями.
С целью сравнения двух разных рабочих сеансов, полученные данные были нормализованы в масштабе от 0 до 100%, в которых CTR- равен 0 и CTR+ составляет 100%, все остальные данные были рассчитаны в этом интервале.
На основании этих данных провели статистический анализ по t-критерию, а отклонения считали значимыми при p<0,05.
На основании полученных результатов отмечали, что SMAL и WMAL, способны значительно снизить ЛПС-индуцированное высвобождение воспалительных маркеров ФНО-альфа, ИЛ-1 альфа и ИЛ-8, которые связаны с акне.
По сравнению со всеми проанализированными веществами синергическое действие проявляли вещества WMAL и SMAL в комбинации.
Дозировка цитокина в клеточных культурах CTR-, CTR+, обработанных SMAL, WMAL и их соединениями. Результаты выражены в виде среднего значения ± станд. отклон. (выраженное в нг/л) и в виде среднего процентного отклонения по сравнению с контрольными показателями.
Препараты могут быть разных типов: как на водной или водно-спиртовой основе, так и безводные. Среди наиболее час то используемых можно назвать смеси поверхностно-активных веществ (включая даже такие, как шампунь, пена для ванны, гель для душа, жидкое или твердое мыло, мицеллярная вода, жидкие моющие средства), эмульсии воды в масле, эмульсии масла в воде, сыворотки, гели, масла, водные растворы, водно-спиртовые растворы, безводные карандаши, прессованные пудры-основы, лосьоны, молочко, солнцезащитные кремы, продукты для ухода за кожей после загара и маскирующие средства (например, СС-кремы, ВВ-кремы).
Дополнительно возможно и целесообразно использовать композиции в соответствии с изобретением в качестве основы для фармацевтических препаратов.
Специалисту в данной области наверняка известно, что косметические композиции обычно немыслимы без обычных вспомогательных веществ и добавок. Среди них можно назвать, например, вещества, регулирующие консистенцию и формирующие текстуру, наполнители, отдушки, красители, эмульгаторы, дополнительные активные соединения, такие как витамины или белки, солнцезащитные фильтры, стабилизаторы, репелленты, спирт, воду, соли, вещества, обладающие протеолитической или кератолитической активностью, загустители, смягчители, жирные кислоты, желатирующие вещества, успокаивающие средства, гликоли, красители, буферные вещества.
Экстракт ивовой коры готовили в соответствии с указаниями монографии «Экстракта» Европейской фармакопеи. Высушенные целые или фрагментированные части коры молодых ветвей или высушенные целые выросшие за год веточки различных видов рода Salix, включая S. purpurea L., S. saphnoides Vill. и S. fragilis L. экстрагировали водой и (или) спиртом. Общее содержание салициловых производных, выраженное в салицине, должно составлять не менее 5%; предпочтительно - от 10 до 20%.
Экстракт Salix alba в соответствии с настоящим изобретением должен быть титрован до общей концентрации салициловых производных, выраженных как салицин, не менее 20% (в весовом отношении).
Соотношение между экстрактом Salix alba и 1,2-декандиолом составляет от 1:100 до 100:1 или от 1:50 до 50:1, или от 1:10 до 10:1, предпочтительно - от 1:5 до 5:1, более предпочтительно - 1:1.
Общее количество экстракта Salix alba в формуле находится в диапазоне от 0,001 до 10%, предпочтительно - от 0,01 до 5% (в весовом отношении), более предпочтительно - от 0,3 до 1% (в весомом отношении).
Общее количество 1,2-декандиола в формуле находится в диапазоне от 0,001 до 10% (в весовом отношении), предпочтительно - от 0,01 до 5% (в весовом отношении), более предпочтительно - от 0,3 до 1% (в весовом отношении).
Примеры
Изобретение не ограничивается нижеописанными примерами.
Образец № 1
Солнцезащитный крем
Образец №2
Сыворотка
Образец №3
Увлажняющий крем
Образец №4
Гель
Образец №5
Жидкое моющее средство
Образец №6
СС-крем
Образец №7
Увлажняющий крем
Образец №8
Моющее средство
Образец №9
Солнцезащитный крем
Образец №10
Солнцезащитный крем 2