Способ лечения болезней бактериальной этиологии у животных
METHOD FOR THE TREATMENT OF DISEASES OF BACTERIAL ETIOLOGY IN ANIMALS

Изобретение относится к области ветеринарной медицины, а именно к способам лечения болезней бактериальной этиологии у животных.
Решение проблемы обеспечения населения продовольствием за счет собственных ресурсов, а именно эта задача поставлена Правительством Российской Федерации, зависит от надежного эпизоотического благополучия животных по инфекционным и незаразным болезням.
Решению поставленной задачи препятствует широкое распространение болезней бактериального происхождения среди всех видов животных, которое приводит к экономическим потерям, складывающимся из падежа, вынужденного убоя, снижения в два-три раза прироста живой массы у больных и переболевших животных, а также затрат на лечебно-профилактические мероприятия, уменьшения потенциала продуктивности и племенных качеств животных.
Таким образом, болезни бактериальной этиологии, как самые распространенные, являются одной из основных причин экономических потерь в животноводстве, т.к. способны снижать экономическую эффективность отрасли на 20-30%, и поэтому поиск эффективных средств и способов защиты животных от этих болезней является актуальным и перспективным направлением.
Известен способ лечения болезней бактериальной этиологии у животных, включающий введение препарата Ветримоксин. Ветримоксин представляет собой суспензию для инъекций, в состав которой входят амоксициллина тригидрат, а также вспомогательные вещества: метилпарагидроксибензоат, пропилпарагидроксибензоат, сорбит моноолеат, коллоидный кремнезем, сложный эфир пропиленгликоля (см., например, Инструкцию по ветеринарному применению лекарственного препарата Ветримоксин от 30.10.2017).
Ветримоксин ввводят животному внутримышечно или подкожно в дозе 1 мл на 10 кг массы тела, однократно или, по необходимости, через 48 часов двукратно. Способ обладает высокой эффективностью при лечении широкого ряда бактериальных болезней у животных.
Разработчик и производитель препарата Ветримоксин - "Ceva Sante Animale", Франция.
Известен также способ лечения болезней бактериальной этиологии у животных путем использования препарата Синулокс RTU. Синулокс RTU представляет собой суспензию для инъекций, в состав которой входят амоксициллина тригидрат и клавулановая кислота в форме кальция клавуланата, а в качестве вспомогательных веществ - фракционированное кокосовое масло. Препарат вводят животным внутримышечно или подкожно из расчета 1 мл препарата на 20 кг массы тела животного 1 раз в сутки в течение 3-5 дней (см., например, Инструкцию по ветеринарному применению лекарственного препарата Синулокс RTU от 07.05.2018).
Данный способ является наиболее близким заявленному.
Синулокс RTU обладает широким спектром бактерицидной активности в отношении большинства грамположительных и грамотрицательных микроорганизмов и высокой эффективностью при лечении широкого ряда болезней бактериальной этиологии у животных, однако, препарат принадлежит также иностранной компании: разработчик препарата "Zoetis Inc.", США, производители - Pfizer Animal Health, США и «Haupt Pharma Latina S.r.l.", Италия.
Задачей изобретения является увеличение ассортимента эффективных противобактериальных средств путем разработки отечественного противобактериального средства с широким спектром бактерицидной активности в отношении большинства грамположительных и грамотрицательных микроорганизмов, и создание на его основе эффективного способа лечения болезней бактериальной этиологии у различных видов животных.
Поставленная задача решается тем, что в способе лечения болезней бактериальной этиологии у животных, включающем введение препарата на основе амоксициллина, согласно изобретению, животным вводят препарат, содержащий, мг/мл: амоксициллина тригидрат - 140,0-160,0, янтарную кислоту - 1,5-2,5, бутилгидрокситолуол - 0,5-1,5, твин-80 - 5,0-15,0 и пропиленгликоля дикаприлат/дикапрат - до 1 мл, при этом препарат животным вводят внутримышечно и/или подкожно в дозе 1 мл на 10 кг живой массы однократно или двукратно с интервалом 48 часов.
Поставленная задача решается также тем, что в качестве животных используют мелкий рогатый скот или крупный рогатый скот, или свиней.
Механизм действия амоксициллина тригидрата заключается в подавлении функциональной активности бактериальных ферментов транспептидаз, локализующихся на цитоплазматической мембране микробной клетки. Связываясь с транспептидазами, амоксициллин ингибирует синтез муреина, основного материала для клеточной стенки бактерий. В результате осмотический баланс микробной клетки нарушается, внешняя оболочка становится менее стабильной и происходит лизис бактерий.
Янтарная кислота увеличивает чувствительность микроорганизмов к амоксициллину за счет увеличения проницаемости мембран бактериальных клеток. Янтарная кислота стимулирует разрушение бактериальных биопленок в организме животных, что увеличивает площадь контакта амоксициллина с бактериальными клетками.
Таким образом, комбинация амоксициллина тригидрата и янтарной кислоты, входящая в состав препарата, обладает широким спектром бактерицидной активности против большинства грамположительных и грамотрицательных микроорганизмов, включая антибиотикорезистентные, которые способны образовывать защитные биопленки.
Введение не описанного ранее в составах амоксициллина стабилизатора янтарной кислоты, а также нового соотношения вспомогательных веществ: бутилгидрокситолуола, твина-80 и пропиленгликоля дикаприлат/дикапрата обеспечивает стабильность заявленного фармацевтического состава в виде суспензии в течение не менее двух лет, а также улучшает его технологические свойства при изготовлении.
Кроме того, янтарная кислота, как эндогенный метаболит, кроме стабилизации состава, участвует в энергетическом метаболизме клеточных мембран, повышает содержание восстановленного глутатиона - показателя антиоксидантной системы.
Техническим результатом, полученным в результате реализации заявленного изобретения, является то, что заявленный способ позволяет эффективно лечить широкий спектр болезней бактериальной этиологии у животных, а используемый в данном способе препарат обладает выраженным антимикробным действием на большинство грамположительных и грамотрицательных микроорганизмов, включая антибиотикорезистентные, способные образовывать защитные биопленки штаммы, не обладает аллергенными свойствами, оказывает стимулирующее влияние на показатели гуморального иммунного ответа и стабилен при хранении.
Изобретение иллюстрируется следующими примерами, которые, однако, не ограничивают объем притязаний заявителя.
Пример 1. Получение препарата.
Загрузку сырья производят из расчета на 1 литр полученной суспензии.
Предварительно в отдельной емкости в течение 10-15 минут смешивают 0,147 кг амоксициллина тригидрата и 0,002 кг янтарной кислоты. Затем в подготовленный реактор загружают 0,820 кг пропиленгликоля дикаприлата/дикапрата. Включают мешалку, устанавливают скорость вращения мешалки 700±50 об./мин. Включают нагрев. Нагревают содержимое реактора до 45±2°С. Перемешивают до образования устойчивой воронки. Загружают 0,001 кг бутилгидрокситолуола. Перемешивают содержимое реактора до полного растворения бутилгидрокситолуола. Загружают 0,010 кг твина-80. Перемешивают до полного растворения. Затем загружают смесь амоксициллина тригидрата с янтарной кислотой. Перемешивают до полного растворения. Полученную суспензию перемешивают в течение 1±0,1 часа до получения однородной суспензии. Проводят контроль отсутствия нерастворенных частиц.
Получают препарат следующего состава, мг/ мл: амоксициллина тригидрат - 140,0-160,0, янтарную кислоту - 1,5-2,5, бутилгидрокситолуол - 0,5-1,5, твин-80 - 5,0-15,0 и пропиленгликоля дикаприлат/дикапрат - остальное.
По внешнему виду лекарственный препарат представляет собой суспензию от белого до светло-желтого цвета.
Заявленная фармкомпозиция по степени воздействия на организм относится к умеренно опасным веществам (3 класс опасности по ГОСТ 12.1.007-76).
После парентерального введения препарата максимальная концентрация амоксициллина тригидрата в сыворотке крови достигается через 1-2 часа и удерживается на терапевтическом уровне в течение 48 часов. Янтарная кислота метаболизируется до фонового уровня в течение 1 часа. Амоксициллина тригидрат выводится из организма с мочой и фекалиями в основном в неизмененной форме.
Далее во всех примерах выполнения заявленного изобретения использовали препарат, полученный по примеру 1, который содержит средние значения указанных в формуле изобретения ингредиентов. Препарат, содержащий ингредиенты в количестве ниже минимальных, указанных в формуле изобретения, в проведенных исследованиях показал сниженную эффективность при лечении болезней бактериальной этиологии, а при содержании ингредиентов в количестве выше максимальных, указанных в формуле изобретения - у препарата появляются побочные эффекты. Также у препаратов с количественным содержанием ингредиентов ниже или выше указанных в формуле изобретения, снижается стабильность при хранении.
Достоверность результатов исследования основана на том, что данные получены с использованием стандартных экспериментальных методов и методов вариационной статистики.
Пример 2. Эффективность заявленного способа при заболеваниях бактериальной этиологии у мелкого рогатого скота.
В опыте были использованы самцы и самки коз зааненской породы в возрасте 1-1,5 года с массой тела 28-35 кг.
В ходе проведения диспансерного обследования коз экспериментального хозяйства были выявлены животные со схожими клиническими признаками заболевания дыхательной системы: у заболевших животных отмечали повышение температуры тела, они отказывались от корма. Козы были вялые, истощенные, малоподвижные, с взъерошенным волосяным покровом. Также у животных наблюдали тремор скелетной мускулатуры, видимые слизистые оболочки были бледные, аппетит снижен, наблюдали сухой болезненный кашель, слизисто-гнойные носовые истечения при кашле, после физической нагрузки - одышка на протяжении 5-10 минут, сухие хрипы. При аускультации - жесткое учащенное дыхание, в бронхах - характерные булькающие хрипы, при перкуссии грудной клетки у некоторых животных были выявлены очаги притупления в средней трети и задних долях легкого.
У коз с тяжелым течением заболевания отмечали выраженное снижение аппетита и двигательной активности, выраженное повышение общей температуры тела, умеренную одышку в спокойном состоянии и выраженное тахипноэ при вставании и движении, интенсивные катарально-гнойные истечения из носовых ходов, сильный приступообразный изнурительный кашель, бледность слизистых оболочек конъюнктивы глаза.
В опытные группы отбирали животных, не подвергавшихся лекарственному воздействию не менее месяца до начала проведения эксперимента.
Экспериментальных животных содержали в одинаковых условиях, оптимальных для данного вида. Кормление коз соответствовало рациону и нормам кормления для данного вида и возраста животных, животные имели постоянный доступ к воде и корму. Корма и вода были безопасными для здоровья целевых животных, обеспечивали потребности коз в питательных веществах и не влияли на результаты исследования.
Критериями постановки диагноза являлись: данные анамнеза, клинические признаки, характерные для данного заболевания, бактериологическое подтверждение наличия возбудителя заболевания, характерные изменения в крови, подтверждающие наличие заболевания.
Лабораторные исследования биоматериала проводили по общепринятым методикам. Наличие секундарной микрофлоры определяли также общепринятыми микробиологическими методами.
С целью лабораторного подтверждения диагноза, отбирали у всех животных смывы со слизистой оболочки носа.
При постановке реакции агглютинации с видоспецифической сывороткой была идентифицирована энтеропатогенная группа кишечной палочки, а именно Escherichia coli серогруппе 0-8, которая вызывает патологический процесс при ослаблении защитных сил организма.
Также по совокупности морфологических, тинкториальных и биологических свойств были идентифицированы штаммы, которые были отнесены к роду Staphylococcus spp.и Streptococcus spp.
После постановки диагноза бронхопневмония сформировали две опытные группы методом парных блоков по принципу аналогов с учетом породы, возраста и массы тела.
В первую опытную группу отобрали коз с диагнозом бронхопневмония в легкой форме. Во вторую опытную группу отобрали коз с диагнозом бронхопневмония в тяжелой форме.
Заявленный препарат применяли животным внутримышечно в дозе 1 мл на 10 кг массы животного при заболеваниях в легкой форме однократно и двукратно с интервалом 48 часов при заболеваниях в тяжелой форме. Препарат сравнения не использовали.
На протяжении всего опыта оценивали общее состояние животных: температуру, потребление корма и воды, дыхание, кашель, наличие и характер истечений из носовой полости, состояние слизистых и кожного покрова, подкожной клетчатки, наличие диареи.
На седьмые сутки в первой группе и на пятые сутки во второй группе после последнего введения препарата у животных опытных групп был повторно взят биоматериал для контроля наличия или отсутствия возбудителей заболевания.
Критериями оценки эффективности препарата являлось: исчезновение клинических признаков заболевания, отсутствие в биоматериале возбудителей заболевания, увеличение прироста и сохранности поголовья.
Критериями оценки безопасности препарата считали отсутствие побочного действия, осложнений, нежелательных явлений, аллергических реакций во время и после применения препарата.
Результаты изучения терапевтической эффективности препаратов в отношении Е. coli, S. aureus и S. pyogenes представлены в таблице 1.
Таким образом, результаты микробиологического исследования показали, что использование заявленного препарата значительно снизило обсемененность верхних дыхательных путей микрофлорой. Эффективность лечения от Е. coli при легком течении бронхопневмонии составила в среднем 30% при тяжелых формах заболевания - 36,8%.
Эффективность лечения от Staphylococcus spp при легком течении составила в среднем 91,4% при тяжелых формах заболевания - 90,9%.
Результаты микробиологического исследования показали, что использование заявленного препарата практически очистило верхние дыхательные пути коз от Streptococcus spp. Так при легком течении заболевания рост микроорганизмов наблюдался только у одного животного, эффективность составила в среднем 96,3%, при тяжелом течении - 95,8.
Кроме того, после введения заявленного препарата в опытных группах коз отмечали положительную динамику физиологического состояния животных.
У животных на 3-ий день после введения препарата наблюдалось улучшение общего состояния, повышение аппетита, снижение температуры тела до субфебрильных значений. На 4-ый день общие физиологические показатели приближались к нормальным значениям, температура тела снижалась до референсных значений
У животных с легким течением заболевания на фоне однократного ведения препарата температурная реакция исчезла уже на следующий день после начала лечения. Восстановление оцениваемых параметров жизнедеятельности - аппетит, двигательная активность, отсутствие одышки - достигается на третий день. К этому же сроку в 60% случаев исчезают кашель и катарально-гнойные носовые истечения.
У коз с тяжелым течением респираторной патологии при двукратном использовании заявленного препарата снижение температуры тела до физиологических значений происходит на 3-ий день лечения. Полное восстановление аппетита и двигательной активности наблюдается на четвертый день после начала лечения. С пятого дня и до конца опыта отмечаются отсутствие одышки в 100%), кашля в 55,6%, а гнойно-катаральных носовых истечений в 66,7% случаев. Побочные действия препарата на организм животных отмечены не были.
Результаты проведенных исследований позволяют сделать вывод о том, что:
- заявленный способ эффективно лечит бронхопневмонию коз при ее легком течении: введение заявленного препарата внутримышечно однократно, в терапевтической дозе 1 мл на 10 кг массы животного приводит к снижению Escherichia coli - на 30%; Staphylococcus spp - на 91,4%; Streptococcus spp - на 96,3%;
- заявленный способ эффективно лечит бронхопневмонию коз при ее тяжелом течении: введение заявленного препарата внутримышечно двукратно, интервалом 48 часов, в терапевтической дозе 1 мл на 10 кг массы животного приводит к снижению Escherichia coli - на 36,8%; Staphylococcus spp - на 90,9%; Streptococcus spp - на 95,8%;
- заявленный препарат не оказывает отрицательного и побочного действия на организм коз при применении в рекомендуемой терапевтической дозе; нежелательные реакции, осложнения, аллергические реакции во время и после применения препарата не наблюдались;
- эффективность применения заявленного препарата при бронхопневмонии коз, как при тяжелом течении заболевания, так и легком, составила 100%.
Таким образом, полученные результаты позволяют рекомендовать использовать заявленный способ в комплексных лечебно-оздоровительных мероприятиях при смешанных формах респираторных болезней бактериальной этиологии у коз.
Пример 3. Эффективность заявленного способа при заболеваниях бактериальной этиологии у крупного рогатого скота.
В ходе проведения диспансерного обследования телят красной степной породы экспериментального хозяйства были выявлены животные со схожими клиническими признаками заболевания дыхательной системы, а именно: у заболевших животных отмечали повышение температуры тела, они отказывались от корма, животные были вялыми, истощенными, малоподвижными, волосяной покров был взъерошен, наблюдался тремор скелетной мускулатуры, видимые слизистые оболочки были бледные, аппетит снижен. Также у животных наблюдали сухой болезненный кашель, слизисто-гнойные носовые истечения при кашле, после физической нагрузки - одышку на протяжении 5-10 минут и сухие хрипы. При аускультации - жесткое учащенное дыхание, в бронхах - характерные булькающие хрипы, при перкуссии грудной клетки у некоторых животных были выявлены очаги притупления в средней трети и задних долях легкого.
У телят с тяжелым течением заболевания отмечали одышку в покое, дыхание затрудненное, при этом телята дышали с открытым ртом, у некоторых телят отмечали цианоз слизистых оболочек носа, катарально-гнойные истечения из носовых ходов, тоны сердца глухие, пульс и дыхание учащены.
В опыт были отобраны бычки и телочки одно-трехмесячного возраста с массой тела 45-70 кг, не подвергавшиеся лекарственному воздействию не менее месяца до начала проведения эксперимента.
Экспериментальных животных содержали в одинаковых условиях, оптимальных для данного вида.
Наличие секундарной микрофлоры определяли микробиологическим методом.
С целью лабораторного подтверждения диагноза отбирали у всех животных смывы со слизистой оболочки носа. Контроль состояния животных осуществляли на протяжении всего опыта: оценивали общее состояние, дыхание, кашель, состояние слизистых и кожного покрова, подкожной клетчатки, наличие и характер истечений из носовой полости, потребление корма и воды, уровень смертности, поводили термометрию. Брали кровь для изучения гематологических и биохимических показателей до начала опыта.
При исследовании крови на гематологические показатели учитывали количество эритроцитов, лейкоцитов, эозинофилов, базофилов, лимфоцитов, моноцитов, тромбоцитов, гемоглобин, скорость оседания эритроцитов (СОЭ).
При исследовании крови на биохимические показатели учитывали креатинин, мочевину, билирубин общий, щелочную фосфатазу, глюкозу, общий белок, белковые фракции, альбумины, аланинаминотрансферазу (ALT), аспартатаминотрансферазу (AST).
При проведении общего анализа крови до введения заявленного препарата, у больных телят выявили снижение общего количества эритроцитов и гемоглобина, содержания гемоглобина в эритроците, что указывает на гемолиз и задержку созревания эритроцитов в периферической крови. Также выявили снижение гематокритной величины и увеличение числа микроцитов - это компенсаторная реакция костного мозга на гипоксию, о чем свидетельствует повышение ширины распределения эритроцитов по объему. Данный факт указывает на сокращение потребления кислорода, в результате чего происходит расстройство тканевого газообмена.
При анализе гематологических показателей было установлено наличие нейтрофильного лейкоцитоза со сдвигом ядра влево, лимфопении, эозинопении и относительного моноцитоза, ускоренное СОЭ. Это указывает на воспалительный характер процессов в органах дыхательной системы и интоксикацию организма продуктами метаболизма патогенной флоры дыхательных путей.
Материалом для проведения микробиологических исследований у телят служили выделения из носовых отверстий. Были выявлены Escherichia coli, Pasteurella multocida, Salmonella Dublin.
Критериями постановки диагноза являлись: данные анамнеза, клинические признаки, характерные для данного заболевания, бактериологическое подтверждение наличия возбудителя заболевания, характерные изменения в крови больных животных, подтверждающие наличие заболевания.
После постановки диагноза бронхопневмония, было отобрано 120 голов телят, из которых по принципу аналогов методом парных блоков были сформированы следующие группы:
- опытная группа 1 (n=15) - телята с признаками заболевания бактериальной этиологии (болезни органов дыхания) в тяжелой форме;
- опытная группа 2 (n=15) - телята с признаками заболевания бактериальной этиологии (болезни органов дыхания) в легкой форме;
- контрольная группа 3 (n=15) - телята с признаками заболевания бактериальной этиологии (болезни органов дыхания) в тяжелой форме;
- контрольная группа 4 (n=15) - телята с признаками заболевания бактериальной этиологии (болезни органов дыхания) в легкой форме;
- опытная группа 5 (n=15) - телята с признаками заболевания бактериальной этиологии (болезни органов дыхания) в тяжелой форме;
- опытная группа 6 (n=15) - телята с признаками заболевания бактериальной этиологии (болезни органов дыхания) в легкой форме;
- контрольная группа 7 (n=15) - телята с признаками заболевания бактериальной этиологии (болезни органов дыхания) в тяжелой форме;
- контрольная группа 8 (n=15) - телята с признаками заболевания бактериальной этиологии (болезни органов дыхания) в легкой форме.
Опытным группам назначали испытуемый препарат в терапевтической дозе 1 мл на 10 кг массы тела животного: опытным группам 1 и 2 - внутримышечно однократно, опытной группе 5 - подкожно двукратно с интервалом 48 часов, опытной группе 6 - подкожно однократно. Контрольным группам 3 и 4 назначали коммерческий препарат сравнения Ветримоксин L.A., в дозе 1 мл препарата на 10 кг массы тела, в соответствии с инструкцией по применению. Методы введения и кратность введения соответствовали опытным группам.
Критериями оценки эффективности препарата являлось исчезновение клинических признаков заболевания, нормализация гематологических и биохимических показателей крови, отсутствие в биоматериале возбудителей заболевания, увеличение прироста и сохранности поголовья.
Критериями оценки безопасности препарата являлось отсутствие побочного действия, осложнений, нежелательных явлений, аллергических реакций во время и после применения препарата.
Через 5-7 дней после окончания курса лечения брали у всех групп биоматериал для контроля наличия или отсутствия возбудителей заболевания.
Через 5-7 дней после окончания курса лечения осуществляли взятие крови у всех групп для изучения гематологических и биохимических показателей.
После назначения терапевтических мероприятий положительную динамику физиологического состояния животных отмечали как в опытных, так и в контрольных группах животных.
У животных на 3-ий день после введения препарата наблюдалось улучшение общего состояния, повышение аппетита, снижение температуры тела до субфебрильных значений. На 4-ый день общие физиологические показатели приближались к нормальным значениям, температура тела снижалась до референсных значений
Вместе с этим, через 10 суток после начала эксперимента, отмечена положительная динамика общего анализа крови всех групп подопытных телят. Отмечены также достоверная динамика снижения лейкоцитов, снижение юных и палочкоядерных и повышение сегментоядерных нейтрофилов наряду с повышением до физиологических значений лимфоцитов периферической крови, повышение эритроцитов, гемоглобина и гематокритной величины, что указывает на восстановление тканевого газообмена и усиление клеточного метаболизма за счет нормализации окислительно-восстановительных процессов.
Анализ биохимических показателей сыворотки крови не выявил статистически значимых отличий между группами телят. Биохимические показатели не выходили за пределы референсных значений для данного вида животных, как в опытных, так и в контрольных группах. Также при анализе биохимических показателей не выявлено динамики их изменений до начала терапевтических мероприятий и через 10 дней после назначения антибактериальных препаратов.
Сохранность телят, как при тяжелом, так и легком течении бронхопневмонии, составила 100%.
На 10 сутки эксперимента проводили повторное бактериологическое исследование.
Результаты микробиологического исследования показали, что использование заявленного препарата значительно снизило обсемененность верхних дыхательных путей микрофлорой. Эффективность лечения от Escherichia, coli при внутримышечном введении составила в среднем 93,4% при тяжелых формах заболевания и 100% при легких формах, а при подкожном введении - 93,6% при тяжелых формах заболевания и 100% при легких формах. Данные показатели не уступают показателям препарата сравнения Ветримоксин L.A., эффективность лечения которым составила составила 86,6%; 100% и 86,4%; 100% соответственно.
Эффективность лечения от Pasteurella multocida при внутримышечном введении заявленного препарата составила в среднем 90,6% при тяжелых формах заболевания и 100% при легких формах, а при подкожном введении - 83,8% при тяжелых формах заболевания и 100% при легких формах. Эффективность лечения Ветримоксин L.A. составила соответственно 75,0%; 100% и 87,5%; 100% соответственно.
Также результаты микробиологического исследования показали, что использование заявленного препарата практически очистило верхние дыхательные пути телят от Salmonella Dublin, и это действие заявленного препарата не уступает действию препарата Ветримоксин L.A.
Полное выздоровление в группах телят с легким течением заболевания наступало через 4-5 дней. Побочные действия препарата на организм животных не отмечены. У животных опытных и контрольных групп с тяжелым течением заболевания значительное улучшение общего состояния наступало в среднем на 4-5 сутки лечения, однако, у некоторых животных отмечались слабость, слегка пониженный аппетит и кашель.
Таким образом, результаты проведенных исследований позволяют сделать вывод о том, что:
- введение заявленного препарата внутримышечно или подкожно двукратно с интервалом 48 часов, в терапевтической дозе 1 мл на 10 кг массы животного, является эффективным терапевтическим средством при тяжелом течении бронхопневмонии телят, при которой выявлены Escherichia coli, Pasteurella multocida. Salmonella Dublin;
- введение заявленного препарата внутримышечно или подкожно однократно, в терапевтической дозе 1 мл на 10 кг массы животного, является эффективным терапевтическим средством при легком течении бронхопневмонии телят, при которой выявлены Escherichia coli, Pasteurella multocida, Salmonella Dublin;
- введение заявленного препарата не оказывает отрицательного и побочного действия на организм телят при применении в рекомендуемой терапевтической дозе. Нежелательные реакции, осложнения, аллергические реакции со стороны организма телят во время и после применения заявленного препарата не зафиксированы;
- эффективность заявленного способа при бронхопневмонии телят при легком ее течении составила 100%.
Полученные результаты позволяют рекомендовать заявленный способ в комплексных лечебно-оздоровительных мероприятиях при смешанных формах респираторных болезней бактериальной этиологии у крупного рогатого скота.
Пример 4. Эффективность заявленного препарата при стрептококкозе поросят.
В опытные и контрольные группы отобрали животных, не подвергавшихся лекарственному воздействию препаратами, относящимися к фармакотерапевтической группе - пенициллины.
Использовали поросят породы крупная белая в возрасте 4-13 недель с массой тела 7-30 кг.
В помещениях для содержания экспериментальных животных были обеспечены параметры микроклимата, соответствующие зоотехническим требованиям. Кормление и поение проводили по стандартным рационам и нормам в соответствии с физиологической потребностью.
В ходе проведения диспансерного обследования поросят экспериментального хозяйства были выявлены животные со схожими клиническими признаками заболевания дыхательной системы: у заболевших поросят отмечали повышение температуры тела, они отказывались от корма, были угнетены, больше лежали, отмечали одышку смешанного типа с хрипами, болезненный кашель с отделением гнойной, у некоторых поросят кровоточащей, мокроты. Поросята принимали позу сидячей собаки с широко расставленными передними конечностями. Критериями постановки диагноза были: данные анамнеза, клинические признаки, характерные для данного заболевания, бактериологические исследования, подтверждающие наличия возбудителя заболевания, характерные изменения крови.
При использовании классических микробиологических методов был выделен возбудитель заболевания - Streptococcus spp.
При проведении общего анализа крови до назначения терапевтических мероприятий у больных поросят наблюдали снижение общего количества эритроцитов и гемоглобина, а также снижение содержания гемоглобина в эритроците, что указывает на гемолиз и задержку созревания эритроцитов в периферической крови. Регистрировали снижение гематокритной величины и увеличение числа микроцитов, что является компенсаторной реакцией костного мозга на гипоксию. Данный факт указывает на сокращение потребления кислорода, в результате чего происходит расстройство тканевого газообмена.
При анализе гематологических показателей было установлено наличие нейтрофильного лейкоцитоза со сдвигом ядра влево, лимфопении, эозинопении и относительного моноцитоза, ускоренное СОЭ. Это указывает на воспалительный характер процессов в органах дыхательной системы и интоксикацию организма продуктами метаболизма патогенной флоры дыхательных путей.
Формирование опытных и контрольных групп поросят осуществляли по принципу аналогов, методом парных блоков, в зависимости от заболевания, по мере выявления клинических симптомов и постановке диагноза
В первую опытную группу (n=15) вошли поросята с клиническими признаками стрептококкоза в тяжелой форме. Во вторую контрольную (n=15) - также поросята с клиническими признаками стрептококкоза в тяжелой форме. Третья опытная группа (n=15) состояла из поросят с признаками стрептококкоза в легкой форме. Четвертая контрольная (n=15) - поросята с клиническими признаками стрептококкоза в легкой форме.
Опытным группам поросят ввели заявленный препарат внутримышечно в терапевтической дозе 1 мл на 10 кг массы животного. Контрольным группам поросят ввели коммерческий препарат сравнения Синулокс RTU внутримышечно однократно в дозе 1 мл препарата на 20 кг живой массы, в соответствии с инструкцией по применению.
Критериями оценки эффективности препарата являются: ослабление, а затем и исчезновение клинических признаков заболевания, нормализация гематологических показателей крови, отсутствие в биоматериале возбудителя заболевания, увеличение прироста и сохранности поголовья.
Критериями оценки безопасности препарата являются: отсутствие побочного действия, осложнений, нежелательных явлений, аллергических реакций во время и после применения препарата.
После назначения терапевтических мероприятий положительную динамику физиологического состояния животных отмечали как в опытных, так и в контрольных группах животных. Однако после начала эксперимента в первой опытной группе поросят через сутки пал один поросенок, а во второй контрольной группе пали два поросенка на первые и вторые сутки терапии.
При вскрытии наблюдали характерные признаки стрепткоккоза: серозно-геморрагическая инфильтрация тканей в области глотки, заглоточные лимфатические узлы увеличены, буро-красного цвета, капсула напряжена, точечные кровоизлияния на поверхности. На эпикарде и внутренней поверхности сердечной сумки визуализируется скопление фибринозного экссудата. Легкие имеют неоднородную окраску, пораженный участок легкого красного цвета, уплотненной (тестоватой) консистенции, напоминающий селезенку (спленизация). С поверхности разреза выдавливается мутная жидкость, а из бронхов - тягучая слизь. На реберной и легочной плевре диффузно виден фибрин в виде серовато-белых пленок. Пленки легко отделяются. Поверхность наложений шероховатая, после их снятия видна тусклая, гиперемированная плевра, с кровоизлияниями.
У животных на 3-ий день после введения препаратов наблюдали улучшение общего состояния, повышение аппетита, снижение температуры тела до субфебрильных значений. На 4-ый день общие физиологические показатели приближались к нормальным значениям, температура тела снижалась до референсных значений. Полное выздоровление поросят, заболевание у которых протекало в легкой форме, наступало через 4-5 дней. Побочные действия препарата на организм животных не отмечались. У животных опытной и контрольной групп с тяжелым течением заболевания, значительное улучшение общего состояния наступало в среднем на 4-5-ые сутки лечения, однако, у некоторых животных отмечались слабость, слегка пониженный аппетит.
Вместе с этим, через 10 суток после начала эксперимента, отмечается положительная динамика общего анализа крови всех групп подопытных поросят. Отмечается достоверная динамика снижения лейкоцитов, снижение юных и палочкоядерных и повышение сегментоядерных нейтрофилов наряду с повышением до физиологических значений лимфоцитов периферической крови. Отмечается повышение эритроцитов, гемоглобина и гематокритной величины, что указывает на восстановление тканевого газообмена и усиление клеточного метаболизма за счет нормализации окислительно-восстановительных процессов.
Значительные улучшения физиологических параметров поросят, больных стрептококковой пневмонией, происходило в среднем на 5 сутки проведения терапевтических мероприятий.
В результате проведенных исследований установлено, что эффективность применения заявленного способа при стрептококковой инфекции у поросят при тяжелом течении заболевания составила 93,3%, у поросят при легком течении - 100%.
Отрицательное и побочное действия на организм заявленного препарата в рекомендуемой терапевтической дозе не зафиксированы. Нежелательные реакции, осложнения, аллергические реакции на организм поросят во время и после применения препарата не зарегистрированы. Полученные результаты позволяют рекомендовать использовать заявленный способ в комплексных лечебно-профилактических и оздоровительных мероприятиях при стрептококковой инфекции у поросят.
Пример 5. Терапевтическая эффективность заявленного способа при синдроме метрит-мастит-агалактия (ММА) у свиней.
В опыте использовали свиноматок породы крупная белая, возраст 12-18 месяцев, масса тела - 150-180 кг.
В ходе проведения диспансерного обследования после опороса свиноматок одного из экспериментальных хозяйств выявляли схожие клинические симптомы послеродовой патологии: угнетение и потеря аппетита вплоть до полного отказа от корма, повышение ректальной температуры, проявление беспокойства и агрессии при попытке сосания вымени, уплотнение и болезненность отдельных пакетов молочных желез, прекращение лактации. Из половых путей выделялся слизисто-гнойный экссудат полужидкой консистенции с бурым или красноватым оттенком, особенно это было заметно в утренние часы. Вульва отечна, складчатость кожи незначительна. Слизистая оболочка преддверия влагалища гиперемирована с кровоизлияниями, эрозиями или небольшими разрывами тканей.
Диагноз синдром метрит-мастит-агалактия у свиноматок ставили на основании анамнеза и клинических признаков: лихорадка, болезненность и воспаление молочных «пакетов», эндометрит, бактериологическое исследование влагалищного содержимого.
Лабораторные исследования биоматериала проводили по общепринятым методикам.
При микробиологическом исследовании выделений из половых путей были выявлены условно-патогенные микроорганизмы E. coli, Streptococcus spp, Staphylococcus spp. У поросят, полученных от данных свиноматок, отмечалось заметное истощение, беспокойство, у большинства животных наблюдали диспептические расстройства в виде диареи, наблюдалась гибель поросят.
При анализе гематологических исследований до начала заболевания, выявлено достоверное повышение лейкоцитов за счет нейтрофильной группы клеток. Также установлен регенеративный сдвиг ядра влево, что указывает на гнойно-воспалительный характер процессов в репродуктивных органах и интоксикацию организма продуктами метаболизма условно патогенной микрофлоры половых путей.
При проведении бактериологических исследований были выявлены E. coli, Streptococcus spp, Staphylococcus spp.
Анализ красного ростка костного мозга показал достоверное снижение эритроцитов и гемоглобина на фоне увеличения среднего содержания гемоглобина в эритроците, снижения среднего объема эритроцита и, как следствие, снижение гематокритной величины. Данные признаки указывают на гемолитический характер анемии на фоне воспалительно-деструктивных процессов в органах половой системы и поступления большого количества продуктов деструкции тканей, а также продуктов метаболизма условно-патогенных бактерий из очага воспаления в системный кровоток.
После постановки диагноза ММА-синдром сформировали 4 группы: 2 опытные и 2 контрольные методом парных блоков по принципу аналогов, с тяжелой и легкой формой течения заболевания соответственно, т.е. каждой опытной группе соответствовала контрольная по степени тяжести течения заболевания.
Опытной группе свиноматок №1 (n=15) с диагнозом синдром мастит-метрит-агалактия в тяжелой форме назначили заявленный препарат внутримышечно в дозе 1 мл на 10 кг массы животного двукратно с интервалом 48 часов.
Контрольной группе свиноматок №2 (n=15) с диагнозом синдром мастит-метрит-агалактия в тяжелой форме назначали препарат сравнения Синулокс RTU внутримышечно в дозе 1 мл на 20 кг массы животного двукратно с интервалом 48 часов.
Опытной группе свиноматок №3 (n=15) с диагнозом синдром мастит-метрит-агалактия в легкой форме назначили заявленный препарат внутримышечно в дозе 1 мл на 10 кг массы животного однократно.
Контрольной группе свиноматок №4 (n=15) с диагнозом синдром мастит-метрит-агалактия в легкой форме назначили препарат сравнения Синулокс RTU внутримышечно в дозе 1 мл на 20 кг массы животного внутримышечно однократно.
В качестве сопутствующей терапии свиноматкам всех групп назначили:
- Кетопрофен 1% раствор для инъекций внутримышечно по инструкции в течение 5 суток;
- Окситоцин 30 МЕ/гол в сутки в течение 5 суток, внутримышечно.
Критериями оценки эффективности заявленного способа являются: ослабление, а затем и исчезновение клинических признаков заболевания, нормализация гематологических показателей крови, отсутствие в биоматериале возбудителя(лей) заболевания, увеличение прироста и сохранности поголовья.
Критериями оценки безопасности препарата являются: отсутствие побочного действия, осложнений, нежелательных явлений, аллергических реакций во время и после применения препарата.
После проведенного лечения положительную динамику физиологического состояния животных отмечали как в опытных, так и в контрольных группах животных. Так, на вторые сутки лечения у большинства свиноматок в опытной и контрольной группах с тяжелым течением заболевания наблюдали снижение температуры тела до субфебрильных значений. У свиноматок с легкой формой течения заболевания, у которых была повышена температура до назначения лечения, уже в день введения препарата наблюдали снижение температура тела до физиологических значений. На третьи сутки у животных с тяжелым течением болезни температура тела снизилась до референсных значений. Вместе с этим на вторые сутки проведения лечебных мероприятий у животных улучшилось общее состояние, появился аппетит, снизилось количество выделений из половых путей, свиноматки начали подпускать поросят к соскам вымени. Сохранность поросят, полученных от свиноматок опытной группы №1 с тяжелым течением заболевания, составила в среднем 87,3% за 5 суток эксперимента, у свиноматок контрольной группы №2 сохранность составила также 86,8%. При легкой форме течения заболевания, у свиноматок в группах №3 и №4, сохранность поросят составила 94,1% и 93,4% соответственно.
На третьи сутки терапии уменьшилась отечность и напряжение тканей молочной железы. Прекращение выделения экссудата из половых путей отмечали на пятые сутки эксперимента, вместе с этим исчезали покраснения и видимые изменения слизистой оболочки влагалища.
Через 5 суток после окончания лечебных мероприятий прослеживается положительная динамика общего анализа крови всех групп подопытных свиноматок. Отмечается достоверное снижение общего количества лейкоцитов, хотя в группах свиноматок №1 и №2, они были все еще выше верхней границы референсных значений. Наблюдалось снижение юных и палочкоядерных нейтрофилов и повышение до физиологических значений лимфоцитов периферической крови. Отмечалось повышение эритроцитов, гемоглобина и гематокритной величины, что указывает на восстановление тканевого газообмена и усиление клеточного метаболизма за счет нормализации окислительно-восстановительных процессов.
На основании полученных данных можно сделать вывод о том, что введение заявленного препарата внутримышечно, в дозе 1 мл на 10 кг массы животного, двукратно с интервалом 48 часов с тяжелой формой течения заболевания и однократно с легкой формой, является эффективным способом лечения подсосных свиноматок с диагнозом ММА. Установлено, что эффективность заявленного препарата при синдроме метрит-мастит-агалактия у подсосных свиноматок составила 100%. Значительные улучшения физиологических параметров свиноматок с диагнозом ММА наблюдали в среднем на 2-3 сутки проведения терапевтических мероприятий. Кроме того, на вторые сутки терапии свиноматки начали подпускать поросят к соскам вымени, что способствовало предотвращению гибели поросят-сосунов и поддержанию их сохранности на приемлемом уровне: при тяжелом течении заболевания 83-84%, при легком течении - 93-94%.
Заявленный препарат не оказывает отрицательного и побочного действия на организм свиноматок и полученных от них поросят при применении в рекомендуемой терапевтической дозе. Нежелательные реакции, осложнения, аллергические реакции у подсосных свиноматок и полученных от них поросят во время и после применения препарата отсутствовали. Полученные результаты позволяют рекомендовать заявленный способ в комплексных лечебно-профилактических и оздоровительных мероприятиях при смешанных формах болезней половых путей у свиноматок, осложненных условно-патогенной микрофлорой E. coli, Streptococcus spp, Staphylococcus spp.
Пример 6. Эффективность заявленного способа при гнойно-некротических поражениях копытец у коров.
Клинические исследования проводили на коровах в возрасте от 4 до 6 лет с гнойно-некротическими поражениями копытец.
У всех животных до начала лечения были отобраны смывы с поверхности гнойно-некротического поражения и были проведены гематологические исследования.
В период проведения опыта животные каждой группы находились в животноводческих помещениях. Рацион питания у коров всех групп был одинаковый и соответствовал нормам для данного вида и возраста животных.
Клинические исследования проводили по классическим методикам. Контроль состояния животных осуществляли на протяжении всего опыта.
При исследовании крови на гематологические показатели учитывали количество эритроцитов, лейкоцитов, эозинофилов, базофилов, лимфоцитов, моноцитов, тромбоцитов, уровень гемоглобина, скорость оседания эритроцитов
2
2
Все животные до начала лечения имели сходное клиническое состояние: были угнетены, плохо поедали корм. У животных отмечали сильную степень хромоты, частые переступания ногами, большинство исследуемых коров опирались на зацеп. При диагностической расчистке отмечали локализацию гнойно-некротических поражений в области мякиша и межпальцевой щели. Копытца имели остроугольную форму. Язвенные поражения имели различную глубину, неровные края и округлую, овально-вытянутую, звездчатую форму дефектов размером от 1,03 см до 19,28 см. На поверхности язвенных поражений наблюдали гнойный экссудат желто-розового цвета, слизистой или жидкой консистенции, с сильным специфическим запахом. Во время кюретажа у животных наблюдали яркую болевую реакцию, в процессе удаления гнойного экссудата и некротизированных тканей с язвенных поверхностей выделялось небольшое количество крови, язвенные дефекты были ярко-красного цвета.
В результате бактериологического исследования, проведенного до начала лечения, были выделены следующие виды микроорганизмов: Staphylococcus aureus - от 53,3 до 86,7% исследуемых проб; Staphylococcus epidermidis - от 40,0 до 86,7% исследуемых проб; Streptococcus pyogenes - от 33,3 до 93,3% исследуемых проб; Esherichia coli - от 60 до 73,3% исследуемых проб; Proteus mirabilis - от 33,3 до 93,3% исследуемых проб; Proteus myxofaciens - от 33,3 до 86,7% исследуемых проб; Enterobacter spp. - от 46,7 до 93,3% исследуемых проб; Citrobacter spp. - от 20,0 до 80,0% исследуемых проб.
При анализе показателей крови больных коров было установлено увеличение количества лейкоцитов за пределами верхней границы видовой нормы. Уровень СОЭ также был увеличен. Изменение содержания эритроцитов и гемоглобина, вероятно, связано с всасыванием в кровь токсических веществ из очага гнойно-некротического воспаления в области копытец, а также с интоксикацией, возникающей при нарушении рубцового пищеварения, которые в свою очередь способствуют разрушению эритроцитов в крови, и тем самым снижают их количественный состав. Повышенное количество лейкоцитов у больных коров связано с усиленной продукцией белых кровяных телец лейкобластическим аппаратом на фоне развивающегося гнойно-некротического процесса в области копытец, и в целом расценивается как положительная ответная реакция организма.
По результатам проведенных исследований, а также с учетом физиологических показателей и тяжести поражения копытец, животных разделили на 6 групп по 15 голов в каждой (см. табл. 2).
После проведения ортопедической расчистки и обрезки копытец на гнойно-некротическую поверхность накладывали дегтярный бинт.
Все животные во время проведения опыта находились в одинаковых условиях содержания и кормления.
Критериями оценки эффективности препарата являются: исчезновение клинических признаков заболевания, нормализация гематологических и биохимических показателей крови, отсутствие в биоматериале возбудителя заболевания.
Критериями оценки безопасности препарата являются: отсутствие побочного действия, осложнений, нежелательных явлений, аллергических реакций во время и после применения препарата.
Отсутствие у коров, больных гнойно-некротическими поражениями копытец, таких признаков как повышение температуры тела, вынужденные позы, гнойные истечения из гнойно-некротического очага копытец, хромота, угнетение аппетита, расценивалось как клиническое благополучие.
Отсутствие у животных опытных групп реакции на препарат в виде раздражения кожи, беспокойства, зуда, отечности, гиперемии, слюнотечения, аллергических реакций, считалось отсутствием побочного действия препарата на организм животного.
На 7-е сутки после последнего введения препаратов у животных опытных и контрольных групп был взят биоматериал для бактериологического анализа, а также была взята кровь для анализа.
В ходе проведенного лечения у всех подопытных животных отмечали повышение количества эритроцитов и гемоглобина при снижении СОЭ, что, вероятно, связано с усилением окислительно-восстановительных процессов в организме на фоне выздоровления больных животных.
Установленный характер изменений в динамике лейкоцитов и показателей лейкограммы у всех подопытных животных, а именно, увеличение количества зрелых форм нейтрофилов и, одновременно, уменьшение числа лимфоцитов, может свидетельствовать о благоприятном течении заболевания. Следует отметить, что данные изменения могут быть обусловлены купированием местных воспалительных процессов в области патологического очага и более ранней нормализацией обменных процессов в пораженных тканях у животных. Наблюдаемые процессы свидетельствуют о начале снижения во всех группах животных реактивных клеточных процессов, сопутствующих воспалительной реакции. Все зарегистрированные изменения происходили на фоне достигнутого клинического благополучия животных.
В контрольных группах на 7-ые сутки после начала лечения у всех животных отмечали удовлетворительное общее состояние. У животных контрольных групп на язвенной поверхности наблюдался рост мелкозернистой грануляционной ткани красно-розового цвета, покрытой небольшим количеством слизистого экссудата. Отмечалась хромота сильной степени. По окружности дефекта формировалась эпителиальная ткань, коричневого цвета, плотной консистенции
В целом можно отметить, что в контрольных группах наблюдались позитивные изменения в течении болезни, при этом регистрировали снижения процента хромоты и уменьшения диаметра язвенного поражения. Симптоматика заболевания выглядела следующим образом: появление полноценного струпа отмечали на 3 сутки после лечения, что является доброкачественным признаком и необходимым условием для заживления. Одновременно с уменьшением клинического признака хромоты у животных, пропорционально происходило и уменьшение диаметра поражений. В среднем сроки заживления гнойно-некротического дефекта по контрольной группе №3 составили 10,93±1,67 сутки, и в контрольной группе №4 - соответственно 11,20±1,70 сутки.
В опытных группах на 7-ые сутки после начала лечения состояние животных улучшилось, появлялся аппетит, отмечалась хромота средней степени. Язвенные дефекты сухие, заполненные почти здоровой тканью. При пальпации болезненность была слабая. По окружности дефекта формировалась эпителиальная ткань, коричневого цвета, плотной консистенции
В опытных группах клиническая картина процесса заживления гнойно-некротических дефектов была более выраженной, чем в контрольных. У всех животных было отмечено значительное снижение уровня хромоты и образование доброкачественного полноценного струпа. Предпринятое лечение в данных группах способствовало улучшению всех регистрируемых показателей. Данный факт выражался в более быстрым исчезновением хромоты, постепенным уменьшением очага поражения с его дальнейшей эпителизацией. Выздоровление коров в опытной группе №1 наступило на 10,27±1,79 сутки, в опытной группе №2 наступало на 10,53±1,060 сутки, в опытной группе №5 на 11,40±1,55 сутки и в опытной группе №6 на 11,47±1,48 сутки.
Очищение от гнойно-некротических тканей в области инфицированной гнойно-некротической язвы в области копытец наиболее выраженным было в 1 и 2 группах и соответственно составляло - 3,47±1,68 сутки и 3,13±0,99. Образование и постепенное восполнение гнойно-некротического очага более выраженно происходило на фоне внутримышечного применения заявленного препарата больным животным и составляло - 4,57±1,46 сутки и 3,47±0,64 сутки. Появление зачатков эпидермизации также регистрировали в более ранние сроки в 1 и 2 опытных группах: 4,20±1,15 сутки и 4,20±1,08 сутки.
Результаты микробиологического исследования показали, что в исследуемых пробах после проведенного лечения во всех группах происходило снижение количества микроорганизмов. Так, отмечено снижение Staphylococcus aureus до 20-53,3% исследуемых проб; Staphylococcus epidermidis до 20-53,3% исследуемых проб; Streptococcus pyogenes до 13,3-60,0%; Esherichia coli до 33,3-40,0% исследуемых проб; Proteus mirabilis до 26,7-53,2% исследуемых проб; Proteus mixofaciens до 20,0-53,3% исследуемых проб; Enterobacter spp. до 26,7-46,7% исследуемых проб; Citrobacter spp. до 6,7-53,2% исследуемых проб.
При использовании заявленного препарата в первой группе отмечалось выраженное снижение в высевах содержания Staphylococcus aureus, Proteus mirabilis, E. coli; во второй группе - Proteus mirabilis, E. coli; в третьей группе при использовании препарата сравнения - Proteus mirabilis, Staphylococcus aureus, E. coli.
При этом в конце опыта происходило повышение процентного содержания комменсальной микрофлоры: Staphylococcus sciuri в первой и второй группах, а также Staphylococcus arlettae во второй и третьей группах. Появление данной микрофлоры отмечалось на фоне клинического выздоровления, что говорит о нормализации миикробиоценоза копытец.
После использования заявленного препарата в рекомендуемой дозировке внутримышечно произошло уменьшение представительства: Staphylococcus aureus до 26,7-46,7%, Staphylococcus epidermidis - до 20%; Streptococcus pyogenes - до 40,0-46,7%, Esherichia coli - до 33,3-40,0%; Proteus mirabilis - до 33,3%, Proteus mixofaciens - до 20,0-33,3%, Enterobacter spp. - до 26,7-46,7% и Citrobacter spp. - до 20,0-53,3%.
После использования заявленного препарата в рекомендуемой дозировке подкожно произошло уменьшение представительства: Staphylococcus aureus до 20-53,3%, Staphylococcus epidermidis - до 26,7-40,0%; Streptococcus pyogenes - до 13,3-46,7%, Esherichia coli - до 40,0%; Proteus mirabilis - до 40,0-53,3%, Proteus mixofaciens - до 20,0-3,3%, Enterobacter spp. - до 26,7-46,1% и Citrobacter spp. - до 6,7-40,0%.
Таким образом, использование заявленного способа способствует восстановлению двигательной активности коров при лечении гнойно-некротических поражений дистального отдела конечностей у 100% исследуемых животных. Основные клинические проявления раневого дефекта в фазе гнойно-некротического процесса восстанавливались в течение двухнедельного терапевтического цикла. При этом необходимо отметить, что в опытных группах динамика заживления была более выраженной. Использование заявленного антибактериального препарата внутримышечно и подкожно для лечения коров с гнойно-некротическими инфицированными дефектами копытец приводит к снижению лейкоцитарной реакции, перестройке лейкоцитарной формулы, повышению количества эритроцитов, уровня гемоглобина и гематокритной величины, повышению количества тромбоцитов.
Негативных последствий от использования препарата не наблюдалось.
Препарат хорошо переносится животными, нежелательных явлений не было выявлено.
Пример 7. Эффективность заявленного способа при раневых инфекциях у коз.
При обследовании коз одного хозяйств на их теле и конечностях диагностировали открытые раны различной глубины и размера, инфицированные бактериальной микрофлорой. На поверхности ран отмечались гнойные наложения, загрязненные частицами корма, фекалий, фрагментами почвы и подстилки. У животных были снижены аппетит и двигательная активность.
У всех больных животных взяли образцы смывов с раневой поверхности и для определения возбудителя инфекции, а также произвели забор крови для определения гематологических показателей.
Контроль состояния животных осуществляли на протяжении всего опыта, оценивали общее состояние, двигательную активность, аппетит, потребление воды, уровень смертности.
При анализе показателей крови коз было установлено увеличение количества лейкоцитов за пределами верхней границы видовой нормы. Уровень СОЭ также был увеличен. При этом в лейкограмме периферической крови установлено достоверное повышение палочкоядерных и сегментоядерных нейтрофилов. Настоящая картина свидетельствует о наличии в организме воспалительного процесса, что, однако, не вызвало выраженных реактивных изменений со стороны отдельных морфологических форм лейкоцитов. Количество клеток красной крови не выходит за пределы референсных значений для данного вида животных. Уровень гемоглобина и гематокритная величина находятся в пределах минимально допустимых референсных значений.
В начале лечения антибактериальными препаратами провели туалет ран у всех больных животных
После постановки диагноза и с учетом клинических симптомов и проведенных лабораторных исследований, по принципу аналогов, методом парных блоков, сформировали следующие группы коз (см. табл. 3)
При анализе бактериального состава смыва с раневых поверхностей у коз в I группе выявлены следующие микроорганизмы: Staphylococcus arlettae - 70%; Proteus mirabilis - 40%; Escherichia coli и Staphylococcus sciuri - 50% и 40% соответственно; Vagococcus lutrae и Corynebacterium callunae - 10%; Providencia rettgeri, Aerococcus viridans, Alcaligenes faecalis, Brachybacterium paraconglomeratum, Enterobacter cloacae, Enterococcus casseliflavus, Psychrobacter phenylpyruvicus, Staphylococcus aureus, Staphylococcus gallinarum,, Staphylococcus lentus, Streptococcus gallolyticus, Streptococcus gallolyticus, Vagococcus lutrae и Wohlfahrtiimonas chitiniclastica высевались по одному разу - 10%.
При анализе бактериального состава смыва с раневых поверхностей у коз во II группе выявлены следующие микроорганизмы: Proteus mirabilis - 50%; Escherichia coli - 40%; Enterococcus hirae, Staphylococcus arlettae, Staphylococcus sciuri, Corynebacterium stationis, Vagococcus lutrae и Wohlfahrtiimonas chitiniclastica - в 20% случаев, Streptococcus spp., Bacillus pumilus, Solibacillus silvestris, Lysinibacillus boronitolerans, Providencia rettgeri, Acinetobacter johnsonii, Ignatzschineria indica, Aerococcus viridans, Psychrobacter phenylpyruvicus и Kurthia gibsonii высевались по одному разу - 10%.
При анализе бактериального состава смыва с раневых поверхностей у коз в III группе выявлены следующие микроорганизмы: Proteus mirabilis и Staphylococcus sciuri - 50%; Corynebacterium stationis и Escherichia coli - 30%; Providencia rettgeri и Wohlfahrtiimonas chitiniclastica - 20%. По одному случаю (10%) регистрировались следующие микроорганизмы: Acinetobacter johnsonii, Aerococcus viridans. Burkholderia anthina, Citrobacter sedlakii, Comamonas kerstersii, Corynebacterium glutamicum, Enterococcus hirae, Glutamicibacter mysorens, Ignatzschineria indica, Pseudomonas proteolytica, Staphylococcus arlettae, Staphylococcus chromogenes и Vagococcus lutrae
Таким образом, наиболее часто выявлялись условно-патогенные микроорганизмы: Proteus mirabilis, Staphylococcus sciuri, Escherichia coli, Staphylococcus arlettae, которых в общей ассоциации микробиоценоза раневой поверхности можно расценивать как возбудителей воспалительного гнойного инфекционного процесса.
В первый день после введения лекарственных препаратов у всех подопытных коз инфицированные раны имели гнойные наложения, аппетит и двигательная активность животных были снижены в 100% случаев.
На вторые сутки после начала лечения у животных гнойные истечения сменились ростом грануляции, а также улучшились аппетит и двигательная активность в I, II и III группах в 20%, 10% и 20% случаев соответственно.
На четвертые сутки от начала лечения аппетит и двигательная активность среди больных коз повысились в I, II и III группах в 80, 70 и 80% случаев. Появился рост грануляционной ткани у 80% животных в I и III группах и 70% во II группе, а также отмечалось подсыхание и рубцевание краев ран у одного животного из I и III групп и у двух животных из II группы.
Полное восстановление двигательной активности и полноценного аппетита во всех группах коз произошло на 5-е сутки от начала лечения. К этому времени гнойные массы не регистрировались ни в одной группе. Рост грануляционной ткани отмечался в I и III группах в 70% случаев, а во II группе в 80% случаев. Начало подсыхания и рубцевания ткани отмечались у 30% животных I и III групп и 20% животных II группы.
На 6-й день после начала лечения подсыхание и рубцевание ран регистрировалось в 90%, 80% и 80% случаев у коз I, II и III групп соответственно. На 7 сутки эти изменения отмечались в 100% случаев.
Температура тела у всех подопытных групп на всем протяжении опыта не выходила за пределы референсных значений.
После использования препарата в конце опыта было установлено значимое снижение СОЭ до верхней границы нормы в I и II группах на 65 и 56% соответственно. В III группе СОЭ снизилось более чем в два раза, не достигнув при этом границы допустимого предела. Количество эритроцитов во всех группах в конце опыта достоверно увеличилось: в I группе - на 33%, во II - на 29%, в III - на 42% соответственно.
Отмечено увеличение гемоглобина в I, II и III группах соответственно на 32%, 33% и 27%. Таким образом, отмечается улучшение характеристик красной крови. При анализе белой крови было выявлено снижение количества лейкоцитов в I и II группах на 48% и в III группе на 49%. Этому сопутствует снижение доли палочкоядерных нейтрофилов на 16%, 55% и 71% в группах I, II и III соответственно. А также снижение сегментоядерных нейтрофилов на 11%, 23%, 14%) в этих же группах и также увеличение количества лимфоцитов на 51%, 47%, 42% соответственно. Отмечалось недостоверное увеличение процента эозинофилов и моноцитов в рамках физиологических границ во всех группах и снижение уровня базофилов. Наблюдаемые процессы свидетельствуют о начале снижения реактивных клеточных процессов во всех группах животных, сопутствующих воспалительной реакции. Все зарегистрированные изменения происходили на фоне достигнутого клинического благополучия животных.
После использования препарата в конце опыта у коз I группы произошло снижение количества Escherichia coli - на 80%, Staphylococcus arlettae - на 57%; Proteus mirabilis - на 50%.
В исходном количестве встречались: Aerococcus viridans, Enterococcus casseliflavus, Proteus vulgaris, Vagococcus lutrae.
В конце опыта более не встречались: Aerococcus viridans, Brachybacterium paraconglomeratum, Corynebacterium callunae, Corynebacterium stationis, Enterobacter cloacae, Klebsiella pneumoniae, Providencia rettgeri, Psychrobacter phenylpyruvicus, Staphylococcus aureus, Staphylococcus gallinarum, Staphylococcus lentus, Streptococcus gallolyticus, Wohlfahrtiimonas chitiniclastica.
Появились ранее не встречаемые микроорганизмы: Providencia stuartii - 20%, Bacillus subtillis, Ignatzschineria indica, Solibacillus silvestris no 10%.
В конце опыта у коз II группы произошло снижение количества Proteus mirabilis - на 60%.
Увеличилась высеваемость для Staphylococcus arlettae на 60%>, Staphylococcus sciuri - на 33,4%.
В конце опыта более не встречались следующие микроорганизмы: Enterococcus hirae, Escherichia coli, Corynebacterium stationis, Vagococcus lutrae, Streptococcus spp., Wohlfahrtiimonas chitiniclastica, Bacillus pumilus, Solibacillus silvestris, Lysinibacillus boronitolerans, Providencia rettgeri, Acinetobacter johnsonii, Ignatzschineria indica, Aerococcus viridans, Psychrobacter phenylpyruvicus и Kurthia gibsonii.
В завершающий день опыта были отмечены бактерии, которые ранее не высевались: Staphylococcus gallinarum - 30%, Paenibacillus polymyxa, Streptococcus hyovaginalis, Proteus hauseri, Staphylococcus xylosus, Providencia stuartii по одному случаю - 10%.
Появление микрофлоры, которая до этого не высевалась, на фоне клинического выздоровления, свидетельствует о ее естественном присутствии на кожных покровах животных.
После использования препарата сравнения у коз в III группе произошло снижение Staphylococcus sciuri - на 40%; Escherichia coli - на 33% и Proteus mirabilis - на 20%.
Повысилось количество Staphylococcus arlettae - на 75%, Aerococcus viridans - на 50%.
Более не высевались: Acinetobacter johnsonii, Burkholderia anthina, Citrobacter sedlakii, Comamonas kerstersii, Corynebacterium glutamicum, Corynebacterium stationis, Enterococcus hirae, Glutamicibacter mysorens, Ignatzschineria indica, Providencia rettgeri, Pseudomonas proteolytica, Staphylococcus chromogenes, Vagococcus lutrae, Wohlfahrtiimonas chitiniclastica.
Вновь появились и высеивались по одному разу: Bacillus thuringiensis, Klebsiella pneumoniae, Paraburkholderia phenazinium, Providencia stuartii, Staphylococcus gallinarum, Staphylococcus xylosus - 10%. Solibacillus silvestris высеивалась у двух животных - 20%.
Таким образом, проведенные исследования позволяют сделать вывод о том, что заявленный способ имеет высокую терапевтическую эффективность при лечении раневой инфекции у коз. При использовании заявленного препарата восстановление параметров жизненной активности у 100% животных достигается на 5-й день от начала лечения, устойчивые признаки подсыхания краев раны с признаками рубцевания регистрируется у всех животных на 7-е сутки от начала лечения. В ходе исследования по опытным и контрольной группам животных не было выявлено значимых отличий.
Сохранность животных в конце опыта по всем группам составила 100%.
Препарат хорошо переносится животными, нежелательных явлений не было выявлено, и поэтому заявленный способ может быть рекомендован для лечения инфекционно-воспалительной раневой патологии коз, вызванной производственным травматизмом и усугубленной обсеменением бактериальной микрофлорой.