Коррекция этанолом иммунометаболических нарушений при остром холодовом стрессе

натрий-уретического пептида (МНП=503,649 пг/мл), наличия диастолической дисфункции левого желудочка, желудочковой экстрасистолии и мерцательной аритмии.

Как следует из табл. 2, модель является статистически значимой на 99,99% доверительном уровне и имеет вид: Prob (event)=exp(eta)/(1+exp(eta)), где Prob(event) - вероятность прогрессирования ХСН, eta=-0,332674+2,12648xX1+6,34589xX2-

0,00574387хХ3+3,38776хХ4=1- 0,574371хХ4+2-3,01702хХ5=0.

Для определения прогностической точности предложенного способа прогнозирования прогрессирования хронической сердечной недостаточности на ранних стадиях заболевания была использована обучающая выборка, в которую были рандомизированы 39 пациентов (18 мужчин и 21 женщина) в возрасте от 60 до 72 лет (средний возраст 64,2±0,99 лет), у которых основной причиной ХСН была ишемическая болезнь сердца (ИБС) и/или артериальная гипертензия (АГ). Давность ХСН составила 2,19±

0,18 лет. Все больные получали стандартную терапию указанных заболеваний и ХСН. Пациентов наблюдали в течение 1 года, клинико-инструментальное и лабораторное обследование проводили на этапе включения в исследование и через 12 мес. терапии. АГ II стадии была у 22 больных (56,41%), ИБС, стабильная стенокардия напряжения - у 24 (61,54%), 5 человек (12,82%) перенесли ранее острый крупноочаговый инфаркт миокарда; повторный инфаркт миокарда наблюдался у 2 (5,13%) пациентов. При оценке тяжести ХСН по NYHA (классификация Нью-Йоркской Ассоциации Сердца) I ФК выявлен у 14 (35,89%), II ФК - у 25 (64,11%) пациентов. Из сопутствующих заболеваний хроническая обструктивная болезнь легких выявлена у 10 (25,64%) больных, анемический синдром - у 8 (20,51%), синдром гипотиреоза - у 11 (12,82%) человек. В зависимости от параметров, входивших в модель, больные распределились следующим образом (табл. 3).

Рис. 1. Прогностическая модель прогрессирования ХСН на начальных стадиях у лиц пожилого возраста

Таблица 3

Характеристика больных ХСН в зависимости от параметров прогностической модели клинического течения ХСН

Параметры модели (Х1-Х5) ФК I, n=14 ФК II, n=25

Абс. % Абс. %

Ме2+ , норма 5 35,71 7 28,00

Ме2+ , гипомагниемия 9 64,29 18 72,00

К+ , норма 6 42,86 9 36,00

К+ , гипокалиемия 8 57,14 16 64,00

МНП, норма 7,14 0,00

МНП, более 86 пг/мл 13 92,86 25 100,00

Диастолическая дисфункция =0 7 50,00 6 24,00

Диастолическая дисфункция =1 7 50,00 19 76,00

ЖЭ=0 8 57,14 18 72,00

ЖЭ=1 6 42,86 7 28,00

МА=0 8 57,14 17 68,00

МА=1 6 42,86 8 32,00

Через 1 год наблюдения в группе пациентов с исходным I ФК ХСН его повысили до II ФК 6 человек из 14 (42,86%), в группе пациентов с исходным II ФК его повысили до III ФК 7 человек (28,00%), снижения ФК заболевания не зарегистрировано. У пациентов (табл. 4), повысивших свой ФК заболевания, по предложенной прогностической модели клинического течения ХСН, был уровень калия сыворотки крови 4,02974 ммоль/л и менее, уровень МНП 503,649 пг/мл и выше, отсутствовала диастолическая дисфункция левого желудочка (Диаст. дисфункция=0), имелась желудочковая экстрасистолия высоких градаций (ЖЭ=1), регистрировались пароксизмы мерцательной аритмии (МА=1).

Таким образом, использование предложенного способа прогнозирования прогрессирования ХСН на начальных стадиях позволяет предсказывать увеличение функционального класса ХСН у лиц пожилого возраста с сопутствующей патологией на основе определения уровня магния и калия сыворотки крови, мозгового натрий-уретического пептида, анализа данных эхокардиографического (оценка диастолической дисфункции ЛЖ) и электрокардиографического исследования (наличие пароксизмов

мерцательной аритмии и желудочковой экстрасистолии высоких градаций).

Таблица 4

Характеристика больных ХСН, которых заболевание прогрессировало

Параметры модели (X1-X5) ФК I, n=6 ФК II, n=7

M±m % M±m %

Mg2+ , ммоль 0,58±0,07 100,00 0,51±0,05 100,00

К+ , моль/л 3,62±0,13 100,00 3,51±0,11 100,00

МНП, >503,6 пг/мл 587,6± 7,2 100,00 599,1±8,1 100,00

Диастолическая дисфункция =0 6 100,00 7 100,00

ЖЭ=1 6 100,00 7 100,00

МА=1 6 100,00 7 100,00

Примечание: % - процент совпадений с параметрами модели

Выводы. У пожилых больных ХСН на ранних стадиях в течение 1 года наблюдения возможно прогнозирование клинической эффективности терапии заболевания на ранних стадиях на основе определения электролитов сыворотки, МНП и инструментальных данных, что надо учитывать при разработке подходов к терапии ХСН с применением компьютерных технологий.

Литература

1.Лазебник Л.Б., Постникова С.Л. // РМЖ.- 2000.- Т 6, № 21.- С. 1372-1380.

2.Малая Л.Т., Горб Ю.Г. Хроническая сердечная недостаточность.- М.: Эксмо, 2004.

3.Cleland J.G. // Europ. Heart. J.- 2001.- Vol.22.- P.623-626

УДК:616-097:616-005.1

КОРРЕКЦИЯ ЭТАНОЛОМ ИММУНОМЕТАБОЛИЧЕСКИХ НАРУШЕНИЙПРИ ОСТРОМ ХОЛОДОВОМ СТРЕССЕ

И.Л. БРОВКИНА, С.А. ЛОСЕНОК, Л.Г. ПРОКОПЕНКО*

Острый холодовой стресс индуцирует адренергическую реакцию, составными звеньями которой являются последовательно возникающие - катехоламиновая экспансия, усиление липолиза, гиперлипацидемия, разобщение окислительного фосфорилирова-ния. Последнее служит причиной увеличения утечки электронов из дыхательной цепи, ускорения генерации активных форм кислорода, повышения интенсивности перекисного окисления липидов клеточных мембран, снижения функциональной активности клеток различных физиологических систем, в том числе иммунной системы [3,12]. Нарушение функций иммунной системы приводит к возникновению острых и обострению хронических инфекционных заболеваний при остром холодовом стрессе. Поступление в организм небольших доз этанола приводит к повышению иммунологической реактивности [1].

Цель работы - изучение влияния этанола на иммунологическую реактивность организма, функционально-

метаболическую активность нейтрофилов, метаболические параметры печени и эритроцитов и их иммунотропные свойства.

Методы исследования. Эксперименты проведены на крысах Вистар массой 180-200 г. Острый холодовой стресс моделировали содержанием животных в воде, имеющей температуру 5±1°С, в течение 60 минут. Этанол вводили внутрижелудочно 5-кратно с 12-часовым интервалом в разовой дозе 1 или 2 мг/кг.

Животных иммунизировали внутрибрюшинно эритроцитами барана (ЭБ) (108 клеток/100 г массы тела) через 5 суток определяли выраженность гуморального иммунного ответа (ГИО) (по количеству антителообразующих клеток (АОК) в селезенке [6] и гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) (по разнице массы регионарного и контралатерального лимфатических узлов РМЛ). Активность кислородзависимых бактерицидных механизмов нейтрофилов оценивали в спонтанном и индуцированном зимозаном тесте восстановления нитросинего тетразолия (НСТсп. и НСТинд.) [13]. Фагоцитарную активность лейкоцитов периферической крови исследовали после их инкубации в течение 30 минут при 37°С с латексом. При этом фагоцитарное число (количество частиц латекса, захваченных одним нейтрофилом, ФЧ) и

* 305041 г. Курск, ул. К.Маркса, 3, КГМУ Тел.: (4712) 58-81-53

фагоцитарный индекс (процент нейтрофилов участвующих в фагоцитозе, ФИ) определяли в мазках, окрашенных по Романовскому - Гимзе [7]. В сыворотке крови определяли биохимические показатели, характеризующие выраженность перекисного окисления липидов (ПОЛ) - по концентрации диеновых коньюгатов (ДК) [10] и малонового диальдегида (МДА) [11], синдрома цитолиза гепатоцитов - по активности аспартат- и аланинами-нотрансфераз (ACT и АЛТ) [8]. В эритроцитах - активность ан-тиоксидантных ферментов - супероксиддисмутазы (СОД) и глу-татионредуктазы (ГР) [5]. Эритроциты выделяли по B.Beutler [14], фракционировали в градиенте плотности яичного альбумина [4] и получали 3 фракции: легкие, плотность которых < 1,079 г/см3, промежуточные с плотностью 1, 091-1, 105 г/см3 и тяжелые, плотность которых >1,117 г/см3. Иммуномодулирующую активность эритроцитов и их фракций определяли путем 3-кратного (с 24-часовым интервалом) внутрибрюшинного введения клеток (107 /100 г массы) аллогенным животным.

Клетки селезенки интактных животных освобождали от эритроцитов гемолитическим шоком и фракционировали по их способности прилипать к стеклу при различной температуре [9]. К прилипающим и неприлипающим спленоцитам интактных крыс (107 клеток на 1 мл среды) добавляли эритроциты охлажденных и получавших этанол крыс (соотношение спленоцитов и эритроцитов 1:2) и инкубировали в течение 48 часов. После инкубации клетки осаждали центрифугированием, супернатанты прилипающих и неприлипающих к стеклу клеток концентрировали путем диализа и фракционировали на сефадексе G -150 [2]. Получали 3 белковые фракции: фракция I, содержащая белки с молекулярной массой более 150 кД, фракция II - белки с молекулярной массой 50- 60 кД, и фракция III - белки с молекулярной массой 10-15 кД и ниже. Активность супернатантов оценивали путем пятикратного (с 24- часовым интервалом) внутрибрюшинного введения их интактным крысам в объеме, содержавшем 100 мкг белка на 100 г массы тела. Одновременно с первой инъекцией исследуемого материала животных иммунизировали ЭБ. Результаты обрабатывали статистически с использованием критериев Стьюдента и Вилкоксона - Манна - Уитни.

Таблица 1

Влияние этанола на содержание ДК и МДА, активности АЛТ и АСТ в крови

Условия опыта ДК нмоль/мл МДА нмоль/мл АЛТ моль/чхл АСТ моль/чхл

Контроль (без охлаждения и введения этанола) 3,7±0,8 П,8±1,6 0,72±0,10 0,41±0,08

Охлаждение 7,0±1,2*1 27,4±2,3*1 2,87±0,21 1 1,73±0,121

Охлаждение, введение этанола, 1 мг/кг 5,3±0,9*1-2 19,5±1,8*1,2 1,62±0,17*1,2 0,95±0Д9*1,2

Охлаждение, введение этанола, 2 мг/кг 3,4±0,7*2,3 12,4±1,7*2,3 0,80±0,11*2’3 0,46±0,09*2,3

Примечание: * - р<0,05 по сравнению со значениями групп 1-3

сирующих свойств у легких эритроцитов. Введение охлажденным крысам этанола дозозависимо снижало содержание ДК и МДА, активность АЛТ и ACT в сыворотке крови (табл. 1).

Введение этанола в дозе 1 мг/кг не влияло, а в дозе 2 мг/кг повышало ФМА нейтрофилов усиливало, но не нормализовало развития иммунного ответа на ЭБ (табл. 2).

Обе дозы этанола не влияли на выраженность иммуносу-прессирующей активности легких эритроцитов, большая доза индуцировала появление иммуносупрессирующих свойств у тяжелых эритроцитов охлажденных крыс.

80 -70 -60 -50 -40 -30 -20 -10 0

Рис. 1. Иммуномодулирующая активность эритроцитов охлажденных крыс, получавших этанол. По оси абсцисс: 1 - контроль; 2,3 - введение легких и тяжёлых эритроцитов КПО; 4,5 - введение лёгких и тяжёлых эритроцитов охлажденных крыс, получавших 0,15 мг/кг этанола; 6,7 -введение лёгких и тяжёлых эритроцитов охлажденных крыс, получавших 2 мг/кг этанола. По оси ординат: АОК, тыс./орган

Инъекции эритроцитов охлажденных и получавших этанол (2 мг/кг) крыс интактным особям индуцируют выделение спле-ноцитами, прилипающими к стеклу при 4-10°С, иммуносупрес-сирующего фактора, а клетками, прилипающими при 32-37°С -хелперного фактора. Это позволяет считать, что в сосудистом русле охлажденных и получавших лизоцим крыс есть популяции эритроцитов, одни из которых имеют свойство индуцировать выделение супрессирующего, а другие - хелперного факторов разных по адгезивным свойствам фракциям спленоцитов (рис. 2).

Таблица 2

Влияние этанола на ФМА нейтрофилов и развитие иммунного ответа

Условия опыта АОК, тыс/орган РМЛ, мг ФИ ФЧ НСТсп НСТинд

Контроль (без охлаж-денияи введения этанола) 28,4±3,5 5,7±0,6 48,6±2,3 1.7±0,1 12,5±1,3 39,7±2,0

Охлаждение 7,3±0,9*1 2,2±0,3*1 22,7±1,4*1 0,5±0,06*1 6,4±0,8*1 22,8±1,9*1

Охлаждение, введение этанола 1 мг/кг 6,7±0,8*1 2,6±0,3*1- 3 24,8±1,7*1 0,6±0,07*1 6,7±0,9*1-2 21,4±2,0*и

Охлаждение, введение этанола 2 мг/кг 15,9±1,9*1- 3 4,1±0,4*1- 3 32,2±1,9*1- 3 1,0±0,1*1- 3 9,8±1,6*1- 3 31,3±2,2*1- 3

Рис. 2. Иммуномодулирующая активность супернатантов спленоцитов крыс, получавших инъекции эритроцитов охлажденных крыс, которым вводили 5 мг/кг этанола.По оси абсцисс: 1-контроль; 2,3-введение супернатантов прилипающих к стеклу при 4-10°С и 32-37°С спленоцитов крыс, получавших инъекции эритроцитов охлажденных крыс; 4,5- введение супернатантов прилипающих к стеклу при 4-10°С и 32-37°С спленоцитов крыс, получавших инъекции эритроцитов охлажденных крыс, которым вводили 1 мг/кг этанола; 6,7- введение супернатантов прилипающих к стеклу при 4-10°С и 32-37°С спленоцитов крыс, получавших инъекции эритроцитов охлажденных крыс, которым вводили 2 мг/кг этанола. По оси ординат: АОК, тыс./орган.

Примечание: * - р<0,05 по сравнению со значениями групп 1-3.

Результаты. Охлаждение ведет к росту содержания ДК и МДА, увеличению активности АЛТ и ACT крови, значительному снижению функционально-метаболической активности (ФМА) нейтрофилов, развитию гуморального иммунного ответа и гиперчувствительности замедленного типа, появлению иммуносупрес-

Введение интактным особям супернатанта спленоцитов, содержащего иммуносупрессирующий фактор, не оказывало влияние на содержание продуктов ПОЛ и активность ферментов в сыворотке крови. В отличие от этого введение охлажденным, не получавшим этанол крысам супернатанта спленоцитов, содержащего хел-перный фактор, снижало величины показателей, характеризующих выраженность ПОЛ и проницаемость мембран гепатоцитов. Антиоксидантное действие этанола при охлаждении опосредуется факторами, выделяющимися клетками селезенки. Факторы являются элементами механизма, обеспечивающего сохранение структурного гомеостаза при остром холодовом стрессе. Вызывает ли иммуностимулирующий и мембранопротекторный эффекты один и тот же фактор или их возникновение обусловлено разными соединениями. Установлено, что фракция I супернатантов прилипающих при температуре 32-37°С сплено-

7

цитов охлажденных крыс при введении охлажденным, не получавшим этанол крысам, вызывала снижение содержания ДК и МДА, активность АЛТ и ACT, усиливала иммунный ответ на ЭБ, фракция II была неактивной, а фракция III стимулировала иммунную реакцию на ЭБ, но не влияла на содержание продуктов ПОЛ и активность ферментов в крови реципиента (табл. 3).

3. Иванов К..П. // Успехи физиол. наук.- 1996.- Т.27, №3.-С. 84-105

4. Кобзев Т.В. и др. // Патол. системы крови и кровообращения.- Симферополь, 1978.— 38 с.

5. Макаренко Е.В. //Лаб. дело.- 1988.- № 11.- С. 48-50.

6. Малъберг К, Зигль Э. // Иммунологические методы; Пер. с нем. / под ред. Г. Фримеля.- М.: Медицина.- 1987.- С. 57-72.

7. Медведев А.Н., Чаленко В.В. // Лаб. дело.-1991.- № 2.- С. 19-20.

8. Меньшиков В.В., Делектарская Л.Н. Методы клинической биохимии.- М.: Медицина, 1987.- С. 174.

9. Родионов СМ. и др/ Иммунол.- 1985., № 3.-С. 34-37.

10. Стальная Н.Д. Соврем, методы в биохимии, Под. ред. В.Н. Ореховича.- М.- 1977.- С. 63-64.

11. Стальная Н.Д., Гаришвили Т.Г. Метод определения малонового диальдегида с помощью тиабарбиту-ровой кислоты Соврем, методы в биохимии.- М.-1977.- С. 66-68.

12. Хочачка П, Сомеро Дж. Биохимическая адаптация.- М.: Мир.- 1988.- 568 с.

13. Щербаков В.И. // Лаб. дело.-1989.- №2.- С. 30.

14. Beutler Ве al.// Cachection tumor necrosis factor: production, distribution and metabolic fate in vivo.-1985.- Vol. 135.- P. 3972-3977.

Таблица 3

Влияние фракций супернатанта спленоцитов, прилипающих к стеклу при 32-37°С, на содержание ДК и МДА, активность АЛТ и АСТ в сыворотке крови, количество АОК в селезенке и РМЛ охлажденных крыс

Условия опыта ДК нмоль/мл МДА нмоль/мл АЛТ моль/чхл АСТ моль/чхл АОК, ыс./орган РМЛ, мг

Контроль (без охлаждения и введения этанола) 3,7±0,8 11,8±1,6 0,72±0,10 0,41±0,08 28,4±3,2 5,7±0,6

Охлаждение 7,0±1,2'1 27,4±2,3'1 2,87±0,21 1 1,73±0,121 7,3±0,9 '1 2,2±0,3'1

Охлаждение, введение фракции I 4,8±1,0*1'2 18,2±1,8*1'2 1,26±1,3*1-2 0,87±0,09*1-2 8,6±0,9*1 2,1±0,3*1

Охлаждение, введение фракции II 7,3±1,5*1'3 24,9±3,0*1-3 2,93±0,32*1-3 1,80±0,14*1-3 8,2±0,9*1 2,3±0,3*1

Охлаждение, введение фракции III 6,7±1,5*1'3 27,0±3,4*1-3 2,66±0,30*1-3 1,68±0,15*1-3 22,3±2,8*2- 5,4±0,6*1-

Примечание: * - р<0,05 по сравнению со значениями групп 1-4.

Прилипающие к стеклу клетки селезенки в основной массе (около 85%) являются макрофагами, которые в процессе поглощения объекта фагоцитоза выделяют пептиды, обладающие различной функциональной активностью. Вероятно, иммуностимулирующий фактор является одним из таких пептидов или группой близких по молекулярной массе и перекрывающихся по функциональной активности цитокинов пептидной природы. Не исключено, что среди выделяемых макрофагами факторов есть соединения, усиливающие синтез антиоксидантов различной химической природы. Учитывая это, исследовано влияние высоко- и низкомолекулярных фракций супернатантов клеток селезенки, прилипающих к стеклу при 32-37°С (ВФСС и НФСС) на активность СОД и ГР в эритроцитах не получавших этанол крыс. Охлаждение приводит к снижению активности СОД и ГР в эритроцитах. Введение охлажденным крысам ВФСС существенно повышало активность СОД и ГР, а инъекции охлажденным крысам НФСС не влияли на биохимические показатели эритроцитов. Таким образом, в составе ВФСС получавшим этанол, содержится фактор, активирующий синтез антиоксидантных ферментов и ограничивающих выраженность ПОЛ клеточных мембран. Эритроциты охлажденных крыс, получавшие инъекции высокомолекулярной фракции, не обладали иммуносупрессирующими свойствами, а эритроциты животных, которым вводили низкомолекулярную фракцию, при аллогенном переносе супрессировали развитие иммунного ответа на ЭБ.

Отсутствие иммуносупрессирующих свойств у эритроцитов охлажденных и получавших этанол крыс может быть объяснено блокирующим влиянием ВФСС на выделение в сосудистое русло или образование в нем соединений, индуцирующих появление иммуносупрессирующих свойств у эритроцитов или индуцирующих влияние ВФСС на выход в сосудистое русло эритроцитов, резистентных к действию сывороточных субстанций охлажденных крыс. Результаты экспериментов показывают, что иммуномодулирующее действие этанола при охлаждении обусловлено модификацией эритроцитов и выделением под влиянием модифицированных эритроцитов хелперных цитокинов прилипающими к стеклу клетками селезенки, и что наряду с этим этанол опосредовано, через цитокины спленоцитов вызывает изменение антиоксидантного статуса эритроцитов. Не ясной остается взаимосвязь между иммуномодулирующим и антиоксидантным действием этанола на уровне эритроцитов. Повышение антиоксидантного потенциала и снижение выраженности ПОЛ стабилизируют клеточную мембрану эритроцитов и повышают ее устойчивость к действию сывороточных субстанций, индуцирующих появление у этих клеток иммуносупрессирующих свойств.

Литература

1. Алиев Н.А. // Иммунология.- 1989.- № 1.- С. 7-11.

2. Детерман Г. Гель-хроматография.- М.: Меер, 1970.- 252 с

УДК 618.1-053.2

НАРУШЕНИЯ УРОДИНАМИКИ ВЕРХНИХ МОЧЕВЫХ ПУТЕЙ ПРИ ХРОНИЧЕСКОЙ ИНФРАВЕЗИКАЛЬНОЙ ОБСТРУКЦИИ

Л.Е. БЕЛЫЙ, Д.А. СОЛОВЬЕВ*

Под обструктивными уропатиями (ОУ) понимают комплекс патоморфологических и патофизиологических изменений, происходящих в почке и мочевых путях в результате нарушения оттока мочи и ведущих к угнетению функции почек. Одним из распространенных вариантов обструктивной уропатии является инфра-везикальная обструкция (ИВО). Наиболее частой ее причиной у взрослых мужчин является доброкачественная гиперплазия предстательной железы (ДГПЖ). Одним из аспектов, определяющих тактику ведения больных с ДГПЖ является степень и выраженность ИВО, однако состоянию верхних мочевых путей при хронической ИВО уделяется куда меньше внимания. В то же время известно, что ИВО и повышение давления в мочевом пузыре, кроме дизурических расстройств, приводит к нарушению уроди-намики верхних мочевых путей. Иными словами тяжесть заболевания при ИВО определяется не только изменениями в нижних отделах мочевого тракта, но и состоянием уродинамики верхних мочевых путей, функциональным состоянием почечной паренхимы. Важное место в диагностике ОУ принадлежит ультрасоно-графии как неинвазивному, доступному и информативному методу исследования. Основными признаками ОУ при ультразвуковом исследовании в режиме реального времени является дилата-ция чашечно-лоханочной системы почки. Однако у больных с ИВО дилатация чашечно-лоханочной системы возникает, как правило, при далеко зашедших стадиях. Это диктует необходимость поиска других диагностических критериев, позволяющих обнаруживать ОУ на ранних этапах.

С целью определения проходимости верхних мочевых путей, а также оценки состояния функции почек, определения зависимости выделительной функции почек от диуреза и степени наполнения мочевого пузыря предлагается использование цветовой и импульсной допплерографии с определением качественных и количественных параметров потоков мочи из терминальных отделов мочеточников [1]. Анализ допплерограмм мочеточниковых выбросов дает представление о состоянии тонуса мочевыводящих путей, их сократительной активности и имеющихся нарушениях уродинамики. Однако имеются лишь единичные научные сообщения, касающиеся исследований мочеточниковых выбросов при инфравезикальной обструкции [2].

Цель исследования - изучение нарушений уродинамики верхних мочевых путей при хронической ИВО путем оценки количественных показателей мочеточниковых выбросов.

*Ульяновский ГУ, 432970, г. Ульяновск, ул. Л. Толстого, д. 42