БИСПЕЦИФИЧЕСКИЕ АНТИГЕНСВЯЗЫВАЮЩИЕ МОЛЕКУЛЫ

1. Биспецифическая антигенсвязывающая молекула, содержащая:
(i) специфическую в отношении подобного рецепторной тирозинкиназе орфанного рецептора 1 (ROR1) антигенсвязывающую молекулу, содержащую последовательность аминокислот, представленную формулой (I):
FW1-CDR1-FW2-HV2-FW3a-HV4-FW3b-CDR3-FW4 (I),
где
FW1 представляет собой каркасный участок
CDR1 представляет собой последовательность CDR
FW2 представляет собой каркасный участок
HV2 представляет собой гипервариабельную последовательность
FW3a представляет собой каркасный участок
HV4 представляет собой гипервариабельную последовательность
FW3b представляет собой каркасный участок
CDR3 представляет собой последовательность CDR
FW4 представляет собой каркасный участок; и
(ii) специфическую в отношении рецептора эпидермального фактора роста (рЭФР) антигенсвязывающую молекулу;
или ее функциональный вариант.
2. Биспецифическая антигенсвязывающая молекула по п. 1, характеризующаяся тем, что указанная ROR1-специфическая антигенсвязывающая молекула не связывается с подобным рецепторной тирозинкиназе орфанным рецептором 2 (ROR2).
3. Биспецифическая антигенсвязывающая молекула по п. 1 или 2, характеризующаяся тем, что указанная ROR1-специфическая антигенсвязывающая молекула связывается как с ROR1 человека, так и с ROR1 мыши (mROR1).
4. Биспецифическая антигенсвязывающая молекула по любому из пп. 1-3, характеризующаяся тем, что указанная ROR1-специфическая антигенсвязывающая молекула связывается с дегликозилированным ROR1.
5. Биспецифическая антигенсвязывающая молекула по любому из пп. 1-4, характеризующаяся тем, что указанная ROR1-специфическая антигенсвязывающая молекула не связывается с линейной пептидной последовательностью, выбранной из:
YMESLHMQGEIENQI (SEQ ID NO: 34)
CQPWNSQYPHTHTFTALRFP (SEQ ID NO: 35)
RSTIYGSRLRIRNLDTTDTGYFQ (SEQ ID NO: 36)
QCVATNGKEVVSSTGVLFVKFGPPPTASPGYSDEYE (SEQ ID NO: 37)
6. Биспецифическая антигенсвязывающая молекула по любому из пп. 1-5, содержащая ROR1-специфическую антигенсвязывающую молекулу, характеризующаяся тем, что
FW1 представляет собой каркасный участок размером 20-28 аминокислот
CDR1 представляет собой последовательность CDR, выбранную из DTSYGLYS (SEQ ID NO: 1), GAKYGLAA (SEQ ID NO: 2), GAKYGLFA (SEQ ID NO: 3), GANYGLAA (SEQ ID NO: 4) или GANYGLAS (SEQ ID NO: 5)
FW2 представляет собой каркасный участок размером 6-14 аминокислот
HV2 представляет собой гипервариабельную последовательность, выбранную из TTDWERMSIG (SEQ ID NO: 6), SSNQERISIS (SEQ ID NO: 7) или SSNKEQISIS (SEQ ID NO: 8)
FW3a представляет собой каркасный участок размером 6-10 аминокислот
HV4 представляет собой гипервариабельную последовательность, выбранную из NKRAK (SEQ ID NO: 9), NKRTM (SEQ ID NO: 10), NKGAK (SEQ ID NO: 11) или NKGTK (SEQ ID NO: 12)
FW3b представляет собой каркасный участок размером 17-24 аминокислот
CDR3 представляет собой последовательность CDR, выбранную из QSGMAISTGSGHGYNWY (SEQ ID NO: 13), QSGMAIDIGSGHGYNWY (SEQ ID NO: 14), YPWAMWGQWY (SEQ ID NO: 15), VFMPQHWHPAAHWY (SEQ ID NO: 16), REARHPWLRQWY (SEQ ID NO: 17) или YPWGAGAPWLVQWY (SEQ ID NO: 18)
FW4 представляет собой каркасный участок размером 7-14 аминокислот
или ее функциональный вариант с идентичностью последовательности с ней, составляющей по меньшей мере 45%.
7. Биспецифическая антигенсвязывающая молекула по п. 6, характеризующаяся тем, что FW1 выбран из: ASVNQTPRTATKETGESLTINCVLT (SEQ ID NO: 19), AKVDQTPRTATKETGESLTINCVLT (SEQ ID NO: 20), TRVDQTPRTATKETGESLTINCVVT (SEQ ID NO: 21), TRVDQTPRTATKETGESLTINCVLT (SEQ ID NO: 22), ASVNQTPRTATKETGESLTINCVVT (SEQ ID NO: 23) или TRVDQSPSSLSASVGDRVTITCVLT (SEQ ID NO: 24), FW2 выбран из: TSWFRKNPG (SEQ ID NO: 25) или TYWYRKNPG (SEQ ID NO: 26); FW3a выбран из: GRYVESV (SEQ ID NO: 27) или GRYSESV (SEQ ID NO: 28), FW3b выбран из: SFSLRIKDLTVADSATYYCKA (SEQ ID NO: 29), SFTLTISSLQPEDSATYYCRA (SEQ ID NO: 30) или SFTLTISSLQPEDFATYYCKA (SEQ ID NO: 31), и FW4 выбран из: DGAGTVLTVN (SEQ ID NO: 32) или DGAGTKVEIK (SEQ ID NO: 33); или функциональных вариантов с идентичностью последовательности, составляющей по меньшей мере 45%.
8. Биспецифическая антигенсвязывающая молекула по любому из пп. 1-7, характеризующаяся тем, что указанная ROR1-специфическая антигенсвязывающая молекула содержит последовательность аминокислот, выбранную из:
ASVNQTPRTATKETGESLTINCVLTDTSYGLYSTSWFRKNPGTTDWERMSIGGRYVESVNKRAKSFSLRIKDLTVADSATYYCKAQSGMAISTGSGHGYNWYDGAGTVLTVN (SEQ ID NO: 39); AKVDQTPRTATKETGESLTINCVLTDTSYGLYSTSWFRKNPGTTDWERMSIGGRYVESVNKRAKSFSLRIKDLTVADSATYYCKAQSGMAIDIGSGHGYNWYDGAGTVLTVN (SEQ ID NO: 40); TRVDQTPRTATKETGESLTINCVVTGAKYGLAATYWYRKNPGSSNQERISISGRYVESVNKRTMSFSLRIKDLTVADSATYYCKAYPWAMWGQWYDGAGTVLTVN (SEQ ID NO: 41); TRVDQTPRTATKETGESLTINCVVTGAKYGLFATYWYRKNPGSSNQERISISGRYVESVNKRTMSFSLRIKDLTVADSATYYCKAVFMPQHWHPAAHWYDGAGTVLTVN (SEQ ID NO: 42); TRVDQTPRTATKETGESLTINCVLTDTSYGLYSTSWFRKNPGTTDWERMSIGGRYVESVNKGAKSFSLRIKDLTVADSATYYCKAREARHPWLRQWYDGAGTVLTVN (SEQ ID NO: 43); ASVNQTPRTATKETGESLTINCVVTGANYGLAATYWYRKNPGSSNQERISISGRYVESVNKRTMSFSLRIKDLTVADSATYYCKAYPWGAGAPWLVQWYDGAGTVLTVN (SEQ ID NO: 44);,
TRVDQSPSSLSASVGDRVTITCVLTGANYGLASTYWYRKNPGSSNKEQISISGRYSESVNKGTKSFTLTISSLQPEDSATYYCRAYPWGAGAPWLVQWYDGAGTKVEIK (SEQ ID NO: 45);
TRVDQSPSSLSASVGDRVTITCVLTGANYGLASTYWYRKNPGSSNQERISISGRYSESVNKRTMSFTLTISSLQPEDSATYYCRAYPWGAGAPWLVQWYDGAGTKVEIK (SEQ ID NO: 46);
TRVDQSPSSLSASVGDRVTITCVLTDTSYGLYSTSWFRKNPGTTDWERMSIGGRYVESVNKGAKSFTLTISSLQPEDFATYYCKAREARHPWLRQWYDGAGTKVEIK (SEQ ID NO: 47);
TRVDQSPSSLSASVGDRVTITCVLTDTSYGLYSTYWYRKNPGSSNKEQISISGRYSESVNKGTKSFTLTISSLQPEDSATYYCRAREARHPWLRQWYDGAGTKVEIK (SEQ ID NO: 48);
TRVDQSPSSLSASVGDRVTITCVLTDTSYGLYSTYWYRKNPGTTDWERMSIGGRYSESVNKGAKSFTLTISSLQPEDSATYYCRAREARHPWLRQWYDGAGTKVEIK (SEQ ID NO: 49); или ее функциональный вариант с идентичностью последовательности по меньшей мере 45%.
9. Биспецифическая антигенсвязывающая молекула по любому из пп. 1-8, характеризующаяся тем, что указанная ROR1-специфическая антигенсвязывающая молекула является гуманизированной.
10. Биспецифическая антигенсвязывающая молекула по любому из пп. 1-8, характеризующаяся тем, что указанная ROR1-специфическая антигенсвязывающая молекула деиммунизирована.
11. Биспецифическая антигенсвязывающая молекула по любому из пп. 1-10, характеризующаяся тем, что указанная биспецифическая антигенсвязывающая молекула конъюгирована с детектируемой меткой, красителем, токсином, лекарственным средством, пролекарством, радионуклидом или биологически активной молекулой.
12. Биспецифическая антигенсвязывающая молекула по любому из пп. 1-11, характеризующаяся тем, что указанная ROR1-специфическая антигенсвязывающая молекула селективно взаимодействует с белком ROR1, имеющим константу аффинности приблизительно 0,01-50 нМ, предпочтительно 0,1-30 нМ, еще более предпочтительно 0,1-10 нМ.
13. Биспецифическая антигенсвязывающая молекула по любому из пп. 1-12, характеризующаяся тем, что указанная биспецифическая антигенсвязывающая молекула способна опосредовать уничтожение экспрессирующих ROR1 опухолевых клеток.
14. Биспецифическая антигенсвязывающая молекула по любому из пп. 1-12, характеризующаяся тем, что указанная биспецифическая антигенсвязывающая молекула способна ингибировать пролиферацию раковых клеток.
15. Биспецифическая антигенсвязывающая молекула по любому из пп. 1-12, характеризующаяся тем, что указанная биспецифическая антигенсвязывающая молекула способна подвергаться эндоцитозу после связывания с ROR1.
16. Биспецифическая антигенсвязывающая молекула по любому из пп. 1-12, характеризующаяся тем, что указанная биспецифическая антигенсвязывающая молекула способна к понижающей регуляции ROR1 или рЭФР при связывании.
17. Биспецифическая антигенсвязывающая молекула по любому из пп. 1-12, характеризующаяся тем, что указанная биспецифическая антигенсвязывающая молекула способна к понижающей регуляции сигнализации ROR1 или рЭФР.
18. Рекомбинантный слитый белок, содержащий биспецифическую антигенсвязывающую молекулу по любому из пп. 1-17.
19. Рекомбинантный слитый белок по п. 18, в котором указанная биспецифическая антигенсвязывающая молекула слита с одним или более биологически активными белками.
20. Рекомбинантный слитый белок по п. 19, характеризующийся тем, что указанная специфическая антигенсвязывающая молекула слита с одним или более биологически активными белками посредством одного или более линкерных доменов.
21. Рекомбинантный слитый белок по п. 19 или 20, характеризующийся тем, что по меньшей мере один биологически активный белок представляет собой иммуноглобулин, Fc-область иммуноглобулина, Fab-область иммуноглобулина, одноцепочечный Fv (scFv), диатело, триатело, тетратело, биспецифический рекрутер T-клеток (BiTE), интеин, домен VNAR, однодоменное антитело (sdAb), домен VH или скаффолд-белок.
22. Рекомбинантный слитый белок по п. 21, характеризующийся тем, что по меньшей мере один биологически активный белок представляет собой Fc-область иммуноглобулина.
23. Химерный антигенный рецептор (CAR), содержащий по меньшей мере одну биспецифическую антигенсвязывающую молекулу по любому из пп. 1-10, слитую или конъюгированную по меньшей мере с одной трансмембранной областью и по меньшей мере одним внутриклеточным доменом.
24. Клетка, содержащая химерный антигенный рецептор по п. 23, предпочтительно представляющая собой сконструированную T-клетку.
25. Последовательность нуклеиновой кислоты, содержащая полинуклеотидную последовательность, которая кодирует биспецифическую антигенсвязывающую молекулу, рекомбинантный слитый белок или химерный антигенный рецептор по любому из пп. 1-23.
26. Вектор, содержащий последовательность нуклеиновой кислоты по п. 25, необязательно дополнительно содержащий одну или более регуляторных последовательностей.
27. Клетка-хозяин, содержащая вектор по п. 26.
28. Способ получения биспецифической антигенсвязывающей молекулы, рекомбинантного слитого белка или химерного антигенного рецептора, включающий культивирование или поддержание клетки-хозяина, содержащей полинуклеотид по п. 25, в условиях, обеспечивающих продуцирование указанной клеткой-хозяином указанной связывающей молекулы, необязательно дополнительно включающий выделение указанной связывающей молекулы.
29. Фармацевтическая композиция, содержащая специфическую антигенсвязывающую молекулу, рекомбинантный слитый белок или химерный антигенный рецептор по любому из пп. 1-23.
30. Биспецифическая антигенсвязывающая молекула, рекомбинантный слитый белок или химерный антигенный рецептор по любому из пп. 1- 23 для применения в терапии.
31. Биспецифическая антигенсвязывающая молекула, рекомбинантный слитый белок или химерный антигенный рецептор по любому из пп. 1- 23 для применения в лечении рака.
32. Биспецифическая антигенсвязывающая молекула, рекомбинантный слитый белок или химерный антигенный рецептор по п. 31, характеризующиеся тем, что указанный рак представляет собой ROR1-положительный тип рака.
33. Биспецифическая антигенсвязывающая молекула, рекомбинантный слитый белок или химерный антигенный рецептор по п. 31, характеризующиеся тем, что указанный рак выбран из группы, включающей рак крови, такой как лимфомы и лейкозы, хронический лимфоцитарный лейкоз (ХЛЛ), мантийноклеточная лимфома (МКЛ), B-клеточный острый лимфобластный лейкоз (B-ОЛЛ), лимфома маргинальной зоны (MZL), неходжкинские лимфомы (NHL), острый миелоидный лейкоз (ОМЛ), и солидные опухоли, в том числе нейробластому, рак почек, рак легкого, рак толстой кишки, рак яичников, рак поджелудочной железы, рак молочной железы, рак кожи, рак матки, рак предстательной железы, рак щитовидной железы, рак головы и шеи, рак мочевого пузыря, рак желудка или рак печени.
34. Применение биспецифической антигенсвязывающей молекулы, рекомбинантного слитого белка или химерного антигенного рецептора по любому из пп. 1-23 в изготовлении медикамента для лечения заболевания у нуждающегося в этом пациента.
35. Способ лечения заболевания у нуждающегося в лечении пациента, включающий введение указанному пациенту терапевтически эффективной дозы биспецифической антигенсвязывающей молекулы, рекомбинантного слитого белка или химерного антигенного рецептора по любому из пп. 1-23, или фармацевтической композиции по п. 29.
36. Способ по п. 35, характеризующийся тем, что указанное заболевание представляет собой рак.
37. Способ по п. 36, характеризующийся тем, что указанный рак представляет собой ROR1-положительный тип рака.
38. Способ по п. 36, характеризующийся тем, что указанный рак выбран из группы, включающей рак крови, такой как лимфомы и лейкозы, хронический лимфоцитарный лейкоз (ХЛЛ), мантийноклеточная лимфома (МКЛ), B-клеточный острый лимфобластный лейкоз (B-ОЛЛ), лимфома маргинальной зоны (MZL), неходжкинские лимфомы (NHL), острый миелоидный лейкоз (ОМЛ), и солидные опухоли, в том числе нейробластому, рак почек, рак легкого, рак толстой кишки, рак яичников, рак поджелудочной железы, рак молочной железы, рак кожи, рак матки, рак предстательной железы, рак щитовидной железы, рак головы и шеи, рак мочевого пузыря, рак желудка или рак печени.
39. Способ анализа на присутствие целевого аналита в образце, включающий добавление меченой детектируемой меткой биспецифической антигенсвязывающей молекулы по любому из пп. 1-17 или рекомбинантного слитого белка по пп. 18-22 в образец и детекцию связывания указанной молекулы с целевым аналитом.
40. Способ визуализации сайта заболевания у субъекта, включающий введение субъекту меченой детектируемой меткой биспецифической антигенсвязывающей молекулы по любому из пп. 1-17 или меченного детектируемой меткой рекомбинантного слитого белка по любому из пп. 18-22.
41. Способ диагностики заболевания или медицинского состояния у субъекта, включающий введение биспецифической антигенсвязывающей молекулы по любому из пп. 1-17 или рекомбинантного слитого белка по пп. 18-22.
42. Антитело, фрагмент антитела или антигенсвязывающая молекула, которые конкурируют за связывание с ROR1 с ROR1-специфической антигенсвязывающей молекулы по любому из пп. 1-17; или биспецифическое антитело против ROR1 и рЭФР, биспецифический фрагмент антитела против ROR1 и рЭФР; или биспецифическая антигенсвязывающая молекула против ROR1 и рЭФР, которые конкурируют за связывание с ROR1 и/или рЭФР с биспецифической антигенсвязывающей молекулой по любому из пп. 1-17.
43. Набор для диагностики рака или предрасположенности к раку у субъекта, или для прогнозирования состояния указанного субъекта, включающий средство детекции для определения концентрации антигена, присутствующего в образце, полученном от тестируемого субъекта, характеризующийся тем, что указанное средство детекции содержит биспецифическую антигенсвязывающую молекулу по любому из пп. 1-17, рекомбинантный слитый белок по любому из пп. 18-22, CAR по п. 23 или нуклеиновую кислоту по п. 25, каждый(ая) из которых необязательно дериватизирован(а), при этом присутствие антигена в образце указывает на то, что указанный субъект страдает раком.
44. Набор по п. 43, характеризующийся тем, что указанный антиген содержит белок ROR1, более предпочтительно - его внеклеточный домен.
45. Набор по п. 43, характеризующийся тем, что его применяют для идентификации присутствия или отсутствия ROR1-положительных клеток в образце или определения их концентрации в образце.
46. Набор по п. 43, характеризующийся тем, что указанный набор содержит положительный контроль и/или отрицательный контроль для сравнения в указанном анализе.
47. Набор по п. 43, характеризующийся тем, что указанный набор дополнительно содержит метку, которая может быть детектирована.
48. Способ диагностики рака или предрасположенности к раку у субъекта, или прогнозирования состояния указанного субъекта, включающий детекцию концентрации антигена, присутствующего в образце, полученном от субъекта, характеризующийся тем, что указанную детекцию осуществляют с применением биспецифической антигенсвязывающей молекулы по любому из пп. 1-17, рекомбинантного слитого белка по любому из пп. 18 -22, CAR по п. 23 или последовательности нуклеиновой кислоты по п. 25, каждый(ая) из которых необязательно дериватизирован(а), при этом присутствие антигена в образце указывает на то, что указанный субъект страдает раком.
49. Способ уничтожения или ингибирования роста клетки, экспрессирующей ROR1, in vitro или у пациента, включающий введение в указанную клетку фармацевтически эффективного количества или фармацевтически эффективной дозы (i) биспецифической антигенсвязывающей молекулы по любому из пп. 1-17, рекомбинантного слитого белка по любому из пп. 18-22, нуклеиновой кислоты по п. 25; или CAR или клетки по п. 23 или 25; или (ii) фармацевтической композиции по п. 29.
50. Способ по п. 49, характеризующийся тем, что указанная экспрессирующая ROR1 клетка представляет собой раковую клетку.
51. Способ по п. 49 или 50, характеризующийся тем, что указанный ROR1 представляет собой ROR1 человека.
52. Способ уничтожения или ингибирования роста клетки, экспрессирующей рЭФР, in vitro или у пациента, включающий введение в указанную клетку фармацевтически эффективного количества или фармацевтически эффективной дозы (i) биспецифической антигенсвязывающей молекулы по любому из пп. 1-17, рекомбинантного слитого белка по любому из пп. 18-22, нуклеиновой кислоты по п. 25; или CAR или клетки по п. 23 или 25; или (ii) фармацевтической композиции по п. 29.
53. Способ по п. 52, характеризующийся тем, что указанная экспрессирующая рЭФР клетка представляет собой раковую клетку.
54. Способ уничтожения или ингибирования роста клетки, экспрессирующей ROR1 и рЭФР, in vitro или у пациента, включающий введение в указанную клетку фармацевтически эффективного количества или фармацевтически эффективной дозы (i) биспецифической антигенсвязывающей молекулы по любому из пп. 1-17; рекомбинантного слитого белка по любому из пп. 18-22, нуклеиновой кислоты по п. 25; или CAR или клетки по п. 23 или 25; или (ii) фармацевтической композиции по п. 29.
55. Способ по п. 54, характеризующийся тем, что указанная экспрессирующая ROR1 клетка и рЭФР представляет собой раковую клетку.
56. Биспецифическая антигенсвязывающая молекула, содержащая последовательность аминокислот, представленную формулой (II):
Xb-X-Xa-FW1-CDR1-FW2-HV2-FW3a-HV4-FW3b-CDR3-FW4-Ya-Y-Yb (II)
где
FW1 представляет собой каркасный участок
CDR1 представляет собой последовательность CDR
FW2 представляет собой каркасный участок
HV2 представляет собой гипервариабельную последовательность
FW3a представляет собой каркасный участок
HV4 представляет собой гипервариабельную последовательность
FW3b представляет собой каркасный участок
CDR3 представляет собой последовательность CDR
FW4 представляет собой каркасный участок
где Xa, Xb, Ya и Yb либо отсутствуют, либо представляют собой специфически связывающую рЭФР молекулу,
причем по меньшей мере что-либо одно из Xa, Xb, Ya и Yb представляет собой специфически связывающую рЭФР молекулу,
X и Y представляют собой необязательные последовательности аминокислот,
при этом указанная биспецифическая антигенсвязывающая молекула конъюгирована с вторым фрагментом.
57. Биспецифическая антигенсвязывающая молекула по п. 56, характеризующаяся тем, что X или Y независимо либо отсутствуют, либо выбраны из группы, включающей иммуноглобулин, Fc-область иммуноглобулина, Fab-область иммуноглобулина, одноцепочечный Fv (scFv), диатело, триатело, тетратело, биспецифический рекрутер T-клеток (BiTE), интеин, домен VNAR, однодоменное антитело (sdAb), домен VH или скаффолд-белок.
58. Биспецифическая антигенсвязывающая молекула по п. 56 или 57, характеризующаяся тем, что указанная конъюгация выполнена за счет остатка цистеина в последовательности аминокислот специфической антигенсвязывающей молекулы.
59. Биспецифическая антигенсвязывающая молекула по п. 56 или 57, характеризующаяся тем, что указанная конъюгация выполнена за счет тиольного, аминокси- или гидразинильного фрагмента, включенного на N-конце или C-конце последовательности аминокислот указанной специфической антигенсвязывающей молекулы.
60. Биспецифическая антигенсвязывающая молекула по любому из пп. 56-59, характеризующаяся тем, что указанный второй фрагмент выбран из группы, включающей иммуноглобулин, Fc-область иммуноглобулина, Fab-область иммуноглобулина, одноцепочечный Fv (scFv), диатело, триатело, тетратело, биспецифический рекрутер T-клеток (BiTE), интеин, домен VNAR, однодоменное антитело (sdAb), домен VH или скаффолд-белок.
61. Биспецифическая антигенсвязывающая молекула по любому из пп. 56-59, характеризующаяся тем, что указанный второй фрагмент выбран из группы, включающей детектируемую метку, краситель, токсин, лекарственное средство, пролекарство, радионуклид или биологически активную молекулу.
62. Биспецифическая антигенсвязывающая молекула по любому из пп. 56-59 или 61, характеризующаяся тем, что указанный второй фрагмент представляет собой по меньшей мере один токсин, выбранный из группы, включающей:
мейтансиноиды,
ауристатины,
антрациклины, предпочтительно полученные из PNU антрациклины
производные аманитина, предпочтительно производные α-аманитина
калихеамицины,
тубулизины
дуокармицины
радиоизотопы - например, альфа-излучающий радионуклид, такой как метка 227 Th и 225 Ac
липосомы с токсической нагрузкой,
белковые токсины
таксаны
пирролбензодиазепины и/или
индолинбензодиазепиновые псевдодимеры и/или
ингибиторы сплайсосомы
ингибиторы CDK11
пиридинoбензодиазепины.
63. Биспецифическая антигенсвязывающая молекула по любому из пп. 56-62, характеризующаяся тем, что указанная специфическая антигенсвязывающая молекула представляет собой специфическую в отношении подобного рецепторной тирозинкиназе орфанного рецептора 1 (ROR1) антигенсвязывающую молекулу.
64. Биспецифическая антигенсвязывающая молекула по п. 63, характеризующаяся тем, что указанная ROR1-специфическая антигенсвязывающая молекула не связывается с подобным рецепторной тирозинкиназе орфанным рецептором 2 (ROR2).
65. Биспецифическая антигенсвязывающая молекула по п. 63 или 64, характеризующаяся тем, что указанная ROR1-специфическая антигенсвязывающая молекула связывается как с ROR1 человека, так и с ROR1 мыши (mROR1).
66. Биспецифическая антигенсвязывающая молекула по любому из пп. 63-65, характеризующаяся тем, что указанная ROR1-специфическая антигенсвязывающая молекула связывается с дегликозилированным ROR1.
67. Биспецифическая антигенсвязывающая молекула по любому из пп. 63-66, характеризующаяся тем, что указанная ROR1-специфическая антигенсвязывающая молекула не связывается с линейной пептидной последовательностью, выбранной из:
YMESLHMQGEIENQI (SEQ ID NO: 34),
CQPWNSQYPHTHTFTALRFP (SEQ ID NO: 35),
RSTIYGSRLRIRNLDTTDTGYFQ (SEQ ID NO: 36),
QCVATNGKEVVSSTGVLFVKFGPPPTASPGYSDEYE (SEQ ID NO: 37).
68. Биспецифическая антигенсвязывающая молекула по любому из пп. 63-67, характеризующаяся тем, что:
FW1 представляет собой каркасный участок размером 20-28 аминокислот
CDR1 представляет собой последовательность CDR, выбранную из DTSYGLYS (SEQ ID NO: 1), GAKYGLAA (SEQ ID NO: 2), GAKYGLFA (SEQ ID NO: 3), GANYGLAA (SEQ ID NO: 4) или GANYGLAS (SEQ ID NO: 5)
FW2 представляет собой каркасный участок размером 6-14 аминокислот
HV2 представляет собой гипервариабельную последовательность, выбранную из TTDWERMSIG (SEQ ID NO: 6), SSNQERISIS (SEQ ID NO: 7) или SSNKEQISIS (SEQ ID NO: 8)
FW3a представляет собой каркасный участок размером 6-10 аминокислот
HV4 представляет собой гипервариабельную последовательность, выбранную из NKRAK (SEQ ID NO: 9), NKRTM (SEQ ID NO: 10), NKGAK (SEQ ID NO: 11) или NKGTK (SEQ ID NO: 12)
FW3b представляет собой каркасный участок размером 17-24 аминокислот
CDR3 представляет собой последовательность CDR, выбранную из QSGMAISTGSGHGYNWY (SEQ ID NO: 13), QSGMAIDIGSGHGYNWY (SEQ ID NO: 14), YPWAMWGQWY (SEQ ID NO: 15), VFMPQHWHPAAHWY (SEQ ID NO: 16), REARHPWLRQWY (SEQ ID NO: 17) или YPWGAGAPWLVQWY (SEQ ID NO: 18)
FW4 представляет собой каркасный участок размером 7-14 аминокислот;
или ее функциональный вариант с идентичностью последовательности с ней по меньшей мере на 45%.
69. Биспецифическая антигенсвязывающая молекула по любому из пп. 63-68, характеризующаяся тем, что FW1 выбран из ASVNQTPRTATKETGESLTINCVLT (SEQ ID NO: 19), AKVDQTPRTATKETGESLTINCVLT (SEQ ID NO: 20), TRVDQTPRTATKETGESLTINCVVT (SEQ ID NO: 21), TRVDQTPRTATKETGESLTINCVLT (SEQ ID NO: 22), ASVNQTPRTATKETGESLTINCVVT (SEQ ID NO: 23) или TRVDQSPSSLSASVGDRVTITCVLT (SEQ ID NO: 24), FW2 выбран из TSWFRKNPG (SEQ ID NO: 25) или TYWYRKNPG (SEQ ID NO: 26), FW3a выбран из GRYVESV (SEQ ID NO: 27) или GRYSESV (SEQ ID NO: 28), FW3b выбран из SFSLRIKDLTVADSATYYCKA (SEQ ID NO: 29), SFTLTISSLQPEDSATYYCRA (SEQ ID NO: 30) или SFTLTISSLQPEDFATYYCKA (SEQ ID NO: 31), и FW4 выбран из DGAGTVLTVN (SEQ ID NO: 32) или DGAGTKVEIK (SEQ ID NO: 33), или функциональных вариантов с идентичностью последовательности, составляющей по меньшей мере 45%.
70. Биспецифическая антигенсвязывающая молекула по любому из пп. 63-68, характеризующаяся тем, что указанная ROR1-специфическая антигенсвязывающая молекула содержит последовательность аминокислот, выбранную из
ASVNQTPRTATKETGESLTINCVLTDTSYGLYSTSWFRKNPGTTDWERMSIGGRYVESVNKRAKSFSLRIKDLTVADSATYYCKAQSGMAISTGSGHGYNWYDGAGTVLTVN (SEQ ID NO: 39);
AKVDQTPRTATKETGESLTINCVLTDTSYGLYSTSWFRKNPGTTDWERMSIGGRYVESVNKRAKSFSLRIKDLTVADSATYYCKAQSGMAIDIGSGHGYNWYDGAGTVLTVN (SEQ ID NO: 40);
TRVDQTPRTATKETGESLTINCVVTGAKYGLAATYWYRKNPGSSNQERISISGRYVESVNKRTMSFSLRIKDLTVADSATYYCKAYPWAMWGQWYDGAGTVLTVN (SEQ ID NO: 41); TRVDQTPRTATKETGESLTINCVVTGAKYGLFATYWYRKNPGSSNQERISISGRYVESVNKRTMSFSLRIKDLTVADSATYYCKAVFMPQHWHPAAHWYDGAGTVLTVN (SEQ ID NO: 42); TRVDQTPRTATKETGESLTINCVLTDTSYGLYSTSWFRKNPGTTDWERMSIGGRYVESVNKGAKSFSLRIKDLTVADSATYYCKAREARHPWLRQWYDGAGTVLTVN (SEQ ID NO: 43); ASVNQTPRTATKETGESLTINCVVTGANYGLAATYWYRKNPGSSNQERISISGRYVESVNKRTMSFSLRIKDLTVADSATYYCKAYPWGAGAPWLVQWYDGAGTVLTVN (SEQ ID NO: 44);,
TRVDQSPSSLSASVGDRVTITCVLTGANYGLASTYWYRKNPGSSNKEQISISGRYSESVNKGTKSFTLTISSLQPEDSATYYCRAYPWGAGAPWLVQWYDGAGTKVEIK (SEQ ID NO: 45);
TRVDQSPSSLSASVGDRVTITCVLTGANYGLASTYWYRKNPGSSNQERISISGRYSESVNKRTMSFTLTISSLQPEDSATYYCRAYPWGAGAPWLVQWYDGAGTKVEIK (SEQ ID NO: 46);
TRVDQSPSSLSASVGDRVTITCVLTDTSYGLYSTSWFRKNPGTTDWERMSIGGRYVESVNKGAKSFTLTISSLQPEDFATYYCKAREARHPWLRQWYDGAGTKVEIK (SEQ ID NO: 47);
TRVDQSPSSLSASVGDRVTITCVLTDTSYGLYSTYWYRKNPGSSNKEQISISGRYSESVNKGTKSFTLTISSLQPEDSATYYCRAREARHPWLRQWYDGAGTKVEIK (SEQ ID NO: 48);
TRVDQSPSSLSASVGDRVTITCVLTDTSYGLYSTYWYRKNPGTTDWERMSIGGRYSESVNKGAKSFTLTISSLQPEDSATYYCRAREARHPWLRQWYDGAGTKVEIK (SEQ ID NO: 49); или функционального вариант с идентичностью последовательности, составляющей по меньшей мере 45%.
71. Биспецифическая антигенсвязывающая молекула по любому из пп. 63-70, характеризующаяся тем, что указанная ROR1-специфическая антигенсвязывающая молекула является гуманизированной.
72. Биспецифическая антигенсвязывающая молекула по любому из пп. 63-70, характеризующаяся тем, что указанная ROR1-специфическая антигенсвязывающая молекула деиммунизирована.
73. Биспецифическая антигенсвязывающая молекула по любому из пп. 56-71, характеризующаяся тем, что указанную рЭФР-специфическую антигенсвязывающую молекулу выбран из группы, включающей иммуноглобулин, Fab-область иммуноглобулина, одноцепочечный Fv (scFv), диатело, триатело, тетратело, биспецифический рекрутер T-клеток (BiTE), интеин, домен VNAR, однодоменное антитело (sdAb), домен VH или скаффолд-белок.