Лазерная интерференционная микроскопия нативных биологических микро- и наноструктур

40

МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ»

Н.И. Игнатова. И.Н. Дружкова, М.В. Ширманова, Е.В. Загайнова

ВЛИЯНИЕ ЭПИТЕЛИАЛЬНО-МЕЗЕНХИМАЛЬНОГО ПЕРЕХОДА НА ХИМИОЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ КЛЕТОК КОЛОРЕКТАЛЬНОГО РАКА

ФГБОУ ВО НижГМА Минздрава России, Нижний Новгород, Россия

Введение. Эпителиально-мезенхимальный переход (ЭМП) — это сложный многоступенчатый процесс и один из ключевых механизмов в прогрессии опухолей колорек-тального рака, приводящий к трансформации эпителиального фенотипа клеток в мезенхимальный, что способствует диссеминации опухолевых клеток. Влияние ЭМП на хими-очувствительность клеток представляет значительный интерес в прогностическом плане и до конца не изучено.

Цель исследования — изучить влияние ЭМП в клетках колоректального рака на химиочувствительность к стандартным препаратам, применяемым в клинической практике.

Материалы и методы. На 1-м этапе работы использованы стандартные клеточные линии колоректального рака человека НСТ-116 и НТ-29. Установлены ингибирующие концентрации IC50 химиопрепаратов иринотекан, окса-липлатин и 5-фторурацил. Лекарственную чувствительность оценивали через 72 ч с помощью МТТ-теста. Индукция ЭМП проводилась у рака HT-29 с использованием StemXVivoTM EMT Inducing Media Supplement (США). Выявление экспрессии маркеров ЭМП — Е-кадгерина, Ki-67 и виментина — проводили методом иммуноцитохимии. На 2-м этапе проведено выделение из операционного материала 14 временных клеточных культур: 9 первичных аденокарцином толстого кишечника и 5 метастазов в печень. Установлена химиочувствительность полученных культур.

Результаты. Установлено, что чувствительность стандартных опухолевых культур НСТ-116 и НТ-29 к разным химиопрепаратам отличается. Наиболее чувствительны клетки к оксалиплатину, наименее — к 5-фторурацилу. При этом чувствительность клеток линии НСТ-116 выше, чем НТ-29. Проанализирована степень выраженности ЭМП у исследуемых клеточных линий: линия НТ-29 не имела признаков ЭМП в отличие от линии НСТ-116. Поэтому клеточная линия HT-29 выбрана для индукции ЭМП in vitro. Индукция ЭМП у HT-29 подтверждена изменением морфологии клеток, а также усилением скорости миграции и пролиферации. Отмечено снижение экспрессии Е-кадгерина у ЭМП-индуцированной культуры HT-29. Кроме того, наблюдалось увеличение чувствительности ко всем тестируемым препаратам, особенно к оксалипла-тину по сравнению с исходной клеточной линией. Затем определена химиочувствительность временных клеточных культур колоректального рака, полученных из операционного материала, и степень выраженности ЭМП методами иммуноцитохимии. Установлена более высокая химиочув-ствительность временных культур с признаками ЭМП.

Заключение. На основании полученных результатов рассматривается возможность использования Е-кадгери-на — маркера ЭМП — в качестве прогностического критерия химиочувствительности при колоректальном раке.

П.С. Игнатьев1, А.С. Рыбалова2 ЛАЗЕРНАЯ ИНТЕРФЕРЕНЦИОННАЯ МИКРОСКОПИЯ НАТИВНЫХ БИОЛОГИЧЕСКИХ МИКРО- И НАНОСТРУКТУР

1АО «ПО «УОМЗ», Екатеринбург, Россия; 2ООО «Швабе-Москва», Москва, Россия

Введение. Предложен оригинальный метод сверхразрешающей лазерной интерференционной микроскопии (МИМ), позволяющий исследовать нативные неокрашенные биологические препараты в реальном времени.

Цель исследования — обосновать перспективность применения МИМ для биомедицинских исследований и в клинической практике.

Материалы и методы. При выполнении исследований применялся отечественный лазерный микроскоп МИМ-340 производства АО «ПО «Уральский оптико-механический завод им Э.С. Яламова». В качестве объектов исследования выступали клетки крови (эритроциты, лимфоциты, тромбоциты) и культуры опухолевых клеток (HeLa, HEX, C6).

Результаты. Показано, что МИМ позволяет регистрировать изменения микроморфологии клеток при различных воздействиях с разрешением не более 0,1 нм по вертикали и от 10 до 100 нм в плоскости объекта. Приведены примеры исследований различных биологических микро-и наноструктур. Показано, что параметры фазовой микроморфологии клеток, регистрируемые МИМ в режиме реального времени, позволяют расширить набор объективных количественных параметров для диагностики патологий на ранних стадиях.

Заключение. Методы лазерной интерференционной микроскопии являются перспективным инструментом для широкого круга медико-биологических исследований, в том числе в онкологии. Применение микроскопа МИМ в клинической практике позволит существенно расширить набор критериев ранней диагностики патологий на клеточном уровне.

Е.В. Игнатьева, И.В. Ярцева, Н.А. Дмитричева, С.А. Сасов, О.Л. Орлова, Д.А. Хоченков, З.С. Шпрах ОЦЕНКА КАЧЕСТВА ЛИОФИЛИЗИРОВАННОЙ ЛЕКАРСТВЕННОЙ ФОРМЫ ДМТ

ФГБУ «РОНЦ им. Н.Н. Блохина» Минздрава России, Москва, Россия

Введение. В ФГБУ «РОНЦ им. Н.Н. Блохина» Минздрава России из соцветий Chamaenerium angustifolium L. выделен димерный макроциклический таннин (ДМТ) и разработана его лекарственная форма (ЛФ) в виде лио-филизата для приготовления раствора для инъекций, не содержащая вспомогательных веществ. Полученный препарат обладает выраженной противоопухолевой активностью и проявляет спектр характерных антиангиогенных свойств.

Цель исследования — стандартизация лиофилизиро-ванной ЛФ ДМТ.

Материалы и методы. Образцы ЛФ ДМТ исследовали методами гравиметрии, спектрофотометрии, ИК-спектрометрии, поляриметрии, потенциометрии.

Результаты. Химико-фармацевтическое изучение ЛФ ДМТ проводилось с учетом требований НД к сухим

Спецвыпуск / том 16 / 2017

РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ