СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ НАЛИЧИЯ β-КАЗЕИНА АЛЛЕЛЕЙ А1 И/ИЛИ А2 ГРУППЫ В МОЛОКЕ КРС

1. Способ определения β-казеина А1 группы и/или β-казеина А2 группы в пробе молока или молокосодержащего продукта, включающий:
a. концентрирование β-казеина в исследуемой пробе до достижения содержания β-казеина в пробе не менее 80 мас. % относительно содержания других белков,
b. ферментативный гидролиз полученного концентрата,
c. хромотографический анализ полученного гидролизата,
d. анализ хромотограммы,
при этом ферментативный гидролиз полученного на этапе (а) β-казеина осуществляют с использованием в качестве ферментов ТРСК-обработанного трипсина, в количестве, обеспечивающем реакцию гидролиза, а хромотографический анализ полученного гидролизата проводят с выявлением, по меньшей мере, двух специфичных пептидов, один из которых характеризует общее содержания β-казеина в гидролизате, а второй характеризует содержание казеина А1 и/или А2 группы в гидролизате.
2. Способ по п. 1, характеризующийся тем, что в процессе хроматографического анализа выявляют пики на хроматограмме, соответствующие специфичным пептидам, а выводы о количественном содержании β-казеина А1 группы и/или β-казеина А2 группы в пробе делают на основании сравнения интенсивностей поглощения этих пиков поглощения на характеристической для пептидов длине волны.
3. Способ по п. 1, характеризующийся тем, что концентрирование (а) осуществляют в четыре стадии, на первой из которых осуществляют обезжиривание пробы центрифугированием, на второй стадии осуществляют выделение казеинсодержащей фракции подкислением, на третьей удаляют альфа-казеина подкислением в присутствии хаотропных агентов, на четвертой - удаляют каппа-казеин при нормальном рН с понижением концентрации хаотропных агентов, после чего полученный β-казеин переносят в буфер, пригодный для гидролиза;
4. Способ по п. 3, характеризующийся тем, что обезжиривание пробы осуществляют центрифугированием в течение 8-12 мин с силой 15000. - 20000g с последующим удалением образовавшегося верхнего слоя продукта.
5. Способ по п. 3, характеризующийся тем, что выделение казеинсодержащей фракции осуществляют посредством снижения рН раствора до 4, 4-4,6.
6. Способ по п. 5, характеризующийся тем, что снижение рН раствора осуществляют 1М раствором ацетата аммония.
7. Способ по п. 3, характеризующийся тем, что удаление альфа-казеина подкислением в присутствии хаотропного агента осуществляют следующим образом: осадок казеиновой фракции растворяют в воде с содержанием хаотропных агентов с последующим добавлением к раствору сильной минеральной кислоты и разбавлением водой 3-4 раза по объему, выдерживают полученный раствор при температуре 30-35°С до прекращения формирования осадка, удаляют супернатант центрифугированием.
8. Способ по п. 7, характеризующийся тем, что в качестве сильной минеральной кислоты используют серную кислоту.
9. Способ по п. 8, характеризующийся тем, что серную кислоту используют в количестве из расчета 2,5 мкм на 0,5 мл исходного продукта/пробы для достижения рН 1,5 -2.
10. Способ по п. 3, характеризующийся тем, что удаление каппа-казеина при нормальном рН с понижением концентрации хаотропного агента осуществляют следующим образом: осадок казеиновой фракции растворяют в воде с содержанием хаотропного агента с последующим добавлением к раствору 1-2 кратного объема 0,5-1 М раствора ацетата аммония, после чего смесь перемешивают с последующим центрифугированием полученной смеси для удаления осадка от супернатанта.
11. Способ по п. 3, характеризующийся тем, что в качестве хаотропного агента используют растворы мочевины, гуанидин хлорид, гуанидин изотиоционат.
12. Способ по п. 3, характеризующийся тем, что для перенесения β-казеин в буфер, пригодный для гидролиза, полученный супернатант разбавляют в 8-10 раз водой по объему, полученный осадок β-казеина отделают центрифугированием и растворяют в подходящем для гидролиза буфере.
13. Способ по п. 12, характеризующийся тем, что в качестве буфера, подходящего для гидролиза, используют 50 мМ раствора ТРИС-HCl с рН 8,5.
14. Способ по п. 1, характеризующийся тем, что хроматографический анализ проводят на колонке с обращенной фазой С18 с шириной пор от 200 до 400 А в системе вода- ацетонитрил, 0,1% трифторуксусной кислоты в градиенте от 20 до 55% ацетонитрила.
15. Способ по п. 1, характеризующийся тем, что хромотографический анализ полученного гидролизата проводят при длине волны 280 нм.