СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ МУЛЬТИСПЕЦИФИЧЕСКИХ АНТИТЕЛ

1. Способ получения мультиспецифического антитела, которое содержит по меньшей мере три различных полипептида, включающий следующие стадии:
- культивирование клетки млекопитающего в среде для культивирования, где клетка млекопитающего создана путем
а) трансфекции клетки млекопитающего первым экспрессионным вектором и одним, двумя или тремя дополнительными экспрессионными векторами,
при этом первый экспрессионный вектор содержит строго одну нуклеотидную последовательность, которая кодирует полипептид мультиспецифического антитела, и один, два или три дополнительных экспрессионных вектора, каждый содержит по меньшей мере две нуклеотидные последовательности, каждая из которых кодирует различные полипептидные цепи мультиспецифического антитела,
где строго одна нуклеотидная последовательность первого экспрессионного вектора представляет собой нуклеотидную последовательность, которая кодирует полипептид легкой цепи мультиспецифического антитела,
- выделение мультиспецифического антитела из клетки или среды для культивирования,
и получение тем самым мультиспецифического антитела.
2. Способ по п. 1, в котором две из полипептидных цепей мультиспецифического антитело содержат обмен доменами.
3. Способ по п. 2, в котором строго одна нуклеиновая кислота первого экспрессионного вектора кодирует полипептид легкой цепи с обменом доменами мультиспецифического антитела.
4. Способ по одному из пп. 1-3, в котором стадия а) включает совместную трансфекцию первым экспрессионным вектором и одним, двумя или тремя дополнительными экспрессионными векторами.
5. Способ по одному из пп. 1-3, в котором клетку млекопитающего трансфектируют сначала одним, двумя или тремя дополнительными экспрессионными векторами и затем трансфектируют первым экспрессионным вектором.
6. Способ по одному из пп. 1-5, в котором клетка млекопитающего стабильно экспрессирует мультиспецифическое антитело.
7. Способ по одному из пп. 1-6, в котором клетка млекопитающего представляет собой СНО-клетку.
8. Способ по одному из пп. 2-7, в котором обмен доменами представляет собой CH1-CL-кроссовер или VH-VL-кроссовер.
9. Способ по одному из пп. 1-8, в котором мультиспецифическое антитело представляет собой двухвалентное биспецифическое антитело, которое содержит
а) первую легкую цепь и первую тяжелую цепь антитела, специфически связывающегося с первым антигеном, и
б) вторую легкую цепь и вторую тяжелую цепь антитела, специфически связывающегося со вторым антигеном, в котором вариабельные домены VL и VH второй легкой цепи и второй тяжелой цепи заменены друг на друга.
10. Способ по одному из пп. 1-8, в котором мультиспецифическое антитело представляет собой двухвалентное биспецифическое антитело, которое содержит
а) первую легкую цепь и первую тяжелую цепь антитела, специфически связывающегося с первым антигеном, и
б) вторую легкую цепь и вторую тяжелую цепь антитела, специфически связывающегося со вторым антигеном, в котором константные домены CL и СН1 второй легкой цепи и второй тяжелой цепи заменены друг на друга.
11. Способ по одному из пп. 1-8, в котором мультиспецифическое антитело представляет собой трехвалентное биспецифическое антитело, которое содержит
а) первую легкую цепь и первую тяжелую цепь полноразмерного антитела, которое специфически связывается с первым антигеном,
б) вторую тяжелую цепь полноразмерного антитела, которая при спаривании с первой легкой цепью специфически связывается с первым антигеном, и
в) Fab-фрагмент, который специфически связывается со вторым антигеном, слитый через пептидный линкер с С-концом одной из тяжелых цепей, указанных в подпункте а) или б), в котором константные домены CL и СН1 второй легкой цепи и второй тяжелой цепи заменены друг на друга.
12. Способ по одному из пп. 1-11, где способ предназначен для получения препарата мультиспецифического антитела с низким/пониженным количеством родственных продукту примесей.