Изучение специфической активности антирабического иммуноглобулина и иммунных сывороток in vitro в дот-иммуноанализе

2012, Т. 2, № 1-2

Перспективы развития вакцинологии

следователей, бесклеточные вакцины могут и не формировать полную степень защиты против коклюша среди новорожденных и детей до 5-летнего возраста. В связи с этим целесообразно для основного курса вакцинации использовать цельноклеточные вакцины, а для ревакцинации использовать бесклеточную коклюшную вакцину оптимального состава.

ИЗУЧЕНИЕ СПЕЦИФИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ АНТИРАБИЧЕСКОГО ИММУНОГЛОБУЛИНА И ИММУННЫХ СЫВОРОТОК IN VITRO В ДОТ-ИММУНОАНАЛИЗЕ

Н.А. Шарапова, Е.Г. Абрамова, А.К. Никифоров, М.Н. Киреев, Л.В. Савицкая, С.В. Генералов

ФКУЗ «Российский научно-исследовательский противочумный институт «Микроб», г. Саратов

Разработка методов in vitro для определения специфической активности антирабических препаратов является актуальной задачей и рекомендовано ВОЗ. Одним из решений данной задачи является применение дот-иммуноанализа (ДИА).

Цель работы — конструирование конъюгатов с использованием в качестве маркера наночастиц коллоидного золота (КЗ) для определения уровня содержания специфических антител в антираби-ческих препаратах в прямом и непрямом вариантах ДИА. Золь готовили с использованием цитрата натрия в качестве восстановителя золотохлористо-водородной кислоты при 100°С, были получены стабильные и гомодисперсные золи золота с частицами диаметром 15—17 нм. При конструировании конъюгатов для проведения прямого варианта ДИА

в качестве биологической составляющей использовали инактивированный фиксированный вирус бешенства «Москва 3253» органо-тканевого происхождения, а также выделенный из фиксированного вируса бешенства гликопротеид (ГП). Для определения активности гетерологичного антирабиче-ского иммуноглобулина и иммунных сывороток лошадей-продуцентов в непрямом ДИА готовили конъюгаты с аффинно-очищенными антителами кролика к иммуноглобулинам лошади и белком А. Для изучения уровня активности сывороток людей, вакцинированных против бешенства, был сконструирован конъюгат с аффинно-очищенными антителами овцы к иммуноглобулинам (О+А+М) человека. Указанные реагенты метили наночастицами КЗ. При определении специфической активности препарата гетерологичного антирабического иммуноглобулина в прямом и непрямом ДИА с применением полученных конъюгатов положительный результат регистрировали в разведении 1:5000—1:10 000, у отдельных серий — до 1:20 000. Уровень активности иммунных антирабических лошадиных сывороток соответствовал значениям 1:320—1:640. При исследовании иммунных сывороток людей, вакцинированных по показаниям антирабической вакциной, положительный результат выявляли в разведении 1:1280.

Таким образом, полученные результаты указывают на возможность использования ДИА как экспресс-метода для выявления уровня содержания специфических антител в антирабическом иммуноглобулине, иммунных сыворотках лошадей-продуцентов, а также в сыворотках вакцинированных людей.