Т-КЛЕТОЧНЫЕ РЕЦЕПТОРЫ

1. Т-клеточный рецептор (TCR), обладающий свойством связываться с комплексом HLA-A*02 GVYDGREHTV (SEQ ID NO: 1) и содержащий вариабельный домен альфа-цепи TCR и/или вариабельный домен бета-цепи TCR, причем
указанный вариабельный домен альфа-цепи содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90% идентична аминокислотам 1-113 последовательности SEQ ID NO: 2, и/или
указанный вариабельный домен бета-цепи содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90% идентична аминокислотам 1-116 последовательности SEQ ID NO: 3.
2. TCR, который связывается с комплексом HLA-A*02 GVYDGREHTV (SEQ ID NO: 1) с аффинностью более 200 мкМ, причем: CDR 1, 2 и 3 альфа-цепи содержат SEQ ID NO: 6, 7 и 8, соответственно, и/или CDR 1, 2 и 3 бета-цепи содержат SEQ ID NO: 11, 12 и 13, соответственно; и/или по меньшей мере один из CDR содержит одну или более консервативных замен по сравнению с SEQ ID NO: 6-8 и 11-13 и/или по меньшей мере один из CDR содержит до трех допустимых замен по сравнению с SEQ ID NO: 6-8 и 11-13 и/или одну или несколько мутаций, указанных в Таблицах 1, 2 и 3.
3. TCR по п. 1 или 2, отличающийся тем, что указанный вариабельный домен альфа-цепи имеет по меньшей мере одну из следующих мутаций в CDR по отношению к положениям SEQ ID NO: 2:
и/или указанный вариабельный домен бета-цепи имеет по меньшей мере одну из следующих мутаций CDR по отношению к положениям SEQ ID NO: 3:
4. TCR по любому из предыдущих пунктов, отличающийся тем, что указанный вариабельный домен альфа-цепи имеет 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 или 9 мутаций, показанных в Таблице 1, и/или указанный вариабельный домен бета-цепи имеет 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 мутаций, показанных в Таблице 2.
5. TCR по любому из предыдущих пунктов, отличающийся тем, что указанный вариабельный домен альфа-цепи имеет по меньшей мере одну из следующих групп мутаций
Группа 1: M50L, T51D, F52Y, S53A, E54I
Группа 2: H94S, S95A, G96N, S98L
Группа 3: H94R S95A, G96D, S98L
Группа 4: M50L, T51D, F52Y, S53A, E54I, H94R S95A, G96D, S98L
Группа 5: M50L, H94S, S95A, G96S, S98L
Группа 6: M50L, H94S, S95A, G96Q, S98L
и/или указанный вариабельный домен бета-цепи имеет по меньшей мере одну из следующих групп мутаций
Группа 1: М27А, D28P, H29L, E30S, N31К F95S, L96D, M97Q, T98N
Группа 2: Y50R, D51F, V52A, К53Т, M54G, F95S, L96D, M97Q, T98N
Группа 3: F95S, L96D, M97Q, T98N
Группа 4: M27L, Y50R, D51F, V52A, К53Т, M54G, F95S, L96D, M97Q, T98N
Группа 5: М27А, D28P, H29L, E30S, N31 К, M54L, F95S, L96D, M97Q, T98N
6. TCR по любому из предыдущих пунктов, отличающийся тем, что указанный вариабельный домен альфа-цепи и указанный вариабельный домен бета-цепи имеют следующие группы мутаций, соответственно:
7. TCR по любому из предыдущих пунктов, отличающийся тем, что указанный вариабельный домен альфа-цепи имеет по меньшей мере одну из следующих мутаций по отношению к положениям SEQ ID NO: 2:
8. TCR по любому из предыдущих пунктов, отличающийся тем, что в указанном вариабельном домене альфа-цепи последовательность аминокислотных остатков 27-32, 50-56 и 91-103 выбрана из следующих:
9. TCR по любому из пп. 1-4 и 7, отличающийся тем, что указанный вариабельный домен альфа-цепи содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90%, например, на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична SEQ ID NO: 16-24 или 46-64.
10. TCR по любому из предыдущих пунктов, отличающийся тем, что в указанном вариабельном домене бета-цепи последовательность аминокислотных остатков 27-31, 49-54 и 92-107 выбрана из следующих:
11. TCR по любому из пп. 1-4, 7 и 9, отличающийся тем, что указанный вариабельный домен бета-цепи содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90%, например, на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична SEQ ID NO: 25-29 или 65-81.
12. TCR по любому из предыдущих пунктов, отличающийся тем, что последовательность указанного вариабельного домена альфа-цепи из аминокислотных остатков 27-32, 50-56 и 91-103 и последовательность указанного вариабельного домена бета-цепи из аминокислотных остатков 27-31, 49-54 и 92-107 выбрана из следующих:
13. TCR по любому из предыдущих пунктов, отличающийся тем, что указанный вариабельный домен альфа-цепи содержит любую одну из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 16-24 или 46-64, и указанный вариабельный домен бета-цепи содержит любую одну из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 25-29 или 65-81.
14. TCR по любому из предыдущих пунктов, отличающийся тем, что указанный вариабельный домен альфа-цепи и указанный вариабельный домен бета-цепи выбраны из следующих аминокислотных последовательностей:
15. TCR по любому из предыдущих пунктов, который представляет собой альфа-бета-гетеродимер, имеющий последовательность константного домена альфа-цепи TRAC и последовательность константного домена бета-цепи TRBC1 или TRBC2.
16. TCR по п. 15, отличающийся тем, что последовательности константного домена альфа- и бета-цепи модифицированы путем усечения или замены для удаления нативной дисульфидной связи между Cys4 экзона 2 TRAC и Cys2 экзона 2 TRBC1 или TRBC2.
17. TCR по п. 15 или 16, отличающийся тем, что последовательность(-ти) константного домена альфа- и/или бета-цепи модифицирована(-ы) путем замены остатков Thr 48 TRAC и Ser 57 TRBC1 или TRBC2 на цистеин, причем указанные цистеины образуют ненативную дисульфидную связь между константными доменами альфа- и бета-цепи TCR.
18. TCR по любому из предыдущих пунктов, который представлен в одноцепочечном формате типа Vα-L-Vβ, Vβ-L-Vα, Vα-Cα-L-Vβ, Vα-L-Vβ-Cβ, в котором Vα и Vβ представляют собой вариабельные области α и β цепей TCR, соответственно, Сα и Сβ представляют собой константные области α и β цепей TCR, соответственно, и L представляет собой линкерную последовательность.
19. TCR по любому из предыдущих пунктов, ассоциированный с детектируемой меткой, терапевтическим агентом или группой, модифицирующей фармакокинетику (ФК).
20. TCR по п. 19, отличающийся тем, что анти-СD3 антитело ковалентно связано с С- или N-концом альфа- или бета-цепи TCR.
21. TCR по п. 20, отличающийся тем, что указанное анти-СD3 антитело ковалентно связано с С- или N-концом бета-цепи TCR через линкерную последовательность.
22. TCR по п. 21, отличающийся тем, что указанная линкерная последовательность выбрана из группы, состоящей из GGGGS (SEQ ID NO: 30), GGGSG (SEQ ID NO: 31), GGSGG (SEQ ID NO: 32), GSGGG (SEQ ID NO: 33), GSGGGP (SEQ ID NO: 34), GGEPS (SEQ ID NO: 35), GGEGGGP (SEQ ID NO: 36) и GGEGGGSEGGGS (SEQ ID NO: 37).
23. Гибридная молекула TCR-анти-СD3, в которой вариабельный домен альфа-цепи содержит аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 16-24 или 46-64, и вариабельный домен бета-цепи содержит аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 25-29 или 65-81, и при этом указанное анти-СD3 антитело ковалентно связано с N-концом или С-концом бета-цепи TCR через линкерную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 30-37.
24. Гибридная молекула TCR-анти-СD3 по п. 23, содержащая аминокислотную последовательность альфа-цепи, выбранную из SEQ ID NO: 38-41, или аминокислотную последовательность альфа-цепи, которая идентична по меньшей мере на 90%, например, на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотным последовательностям SEQ ID NO: 38-41, и аминокислотную последовательность бета-цепи, выбранную из SEQ ID NO: 42-45, или аминокислотную последовательность бета-цепи, которая идентична по меньшей мере на 90%, например, на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95 %, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотным последовательностям SEQ ID NO: 42-45.
25. Гибридная молекула TCR-анти-СD3 по п. 24, содержащая
(a) аминокислотную последовательность альфа-цепи, соответствующую SEQ ID NO: 38, и аминокислотную последовательность бета-цепи, соответствующую SEQ ID NO: 42;
(b) аминокислотную последовательность альфа-цепи, соответствующую SEQ ID NO:
38, и аминокислотную последовательность бета-цепи, соответствующую SEQ ID NO: 43;
(c) аминокислотную последовательность альфа-цепи, соответствующую SEQ ID NO:
39, и аминокислотную последовательность бета-цепи, соответствующую SEQ ID NO: 44;
(d) аминокислотную последовательность альфа-цепи, соответствующую SEQ ID NO:
40, и аминокислотную последовательность бета-цепи, соответствующую SEQ ID NO: 45; или
(e) аминокислотную последовательность альфа-цепи, соответствующую SEQ ID NO:
41, и аминокислотную последовательность бета-цепи, соответствующую SEQ ID NO: 45.
26. Нуклеиновая кислота, кодирующая альфа-цепь TCR и/или бета-цепь TCR по любому из предыдущих пунктов.
27. Вектор экспрессии, содержащий нуклеиновую кислоту по п. 26.
28. Клетка, несущая
(a) вектор экспрессии по п. 27, кодирующий альфа- и бета-цепи TCR по любому из пп. 1-25, в одной открытой рамке считывания или двух различных открытых рамках считывания; или
(b) первый вектор экспрессии, который содержит нуклеиновую кислоту, кодирующую альфа-цепь TCR по любому из пп. 1-25, и второй вектор экспрессии, который содержит нуклеиновую кислоту, кодирующую бета-цепь TCR по любому из пп. 1-25.
29. Не встречающаяся в природных условиях и/или выделенная и/или сконструированная клетка, в частности Т-клетка, презентирующая TCR по любому из пп. 1-22.
30. Фармацевтическая композиция, содержащая TCR по любому из пп. 1-22, гибридную молекулу TCR-анти-СD3 по любому из пп. 23-25, нуклеиновую кислоту по п. 26 и/или клетку по п. 28 или 29, вместе с одним или более фармацевтически приемлемым носителем или вспомогательным веществом.
31. TCR по любому из пп. 1-22, гибридная молекула TCR-анти-СD3 по любому из пп. 23-25, нуклеиновая кислота по п. 26, фармацевтическая композиция по п. 30 и/или клетка по п. 28 или 29 для применения в медицине, предпочтительно у субъекта, представляющего собой человека.
32. TCR по любому из пп. 1-22, гибридная молекула TCR-анти-CD3 по любому из пп. 23-25, нуклеиновая кислота по п. 26, фармацевтическая композиция по п. 30 и/или клетка по п. 28 или 29 для применения в способе лечения рака или опухоли, предпочтительно у субъекта, представляющего собой человека.
33. TCR, гибридная молекула TCR-анти-СD3, нуклеиновая кислота, фармацевтическая композиция и/или клетка для применения по п. 32, при этом указанный субъект, представляющий собой человека, имеет опухоль, экспрессирующую MAGE А4.
34. TCR, гибридная молекула TCR-анти-CD3, нуклеиновая кислота, фармацевтическая композиция и/или клетка для применения по п. 32 или 33, причем указанная опухоль представляет собой солидную опухоль.
35. TCR, гибридная молекула TCR-анти-СD3, нуклеиновая кислота, фармацевтическая композиция и/или клетка для применения по любому из пп. 32-34, причем указанный субъект, представляющий собой человека, принадлежит к подтипу HLA-A*02.
36. TCR, гибридная молекула TCR-анти-СD3, нуклеиновая кислота, фармацевтическая композиция и/или клетка для применения по любому из пп. 32-35, которые вводят путем инъекции, такой как внутривенная инъекция или инъекция напрямую в опухоль.
37. Способ лечения нуждающегося в этом субъекта, представляющего собой человека, включающий введение указанному субъекту фармацевтически эффективной дозы фармацевтической композиции по п. 30.
38. Способ по п. 37, который дополнительно включает отдельное введение, в комбинации или последовательно, антинеопластического средства.
39. Композиция для введения путем инъекции субъекту, представляющему собой человека, содержащая TCR по любому из пп. 1-22 или гибридную молекулу TCR-анти-СD3 по любому из пп. 23-25.
40. Способ получения TCR по любому из пп. 1-22 или гибридной молекулы TCR-анти-СD3 по любому из пп. 23-25, включающий: а) поддержание клетки по п. 28 в оптимальных условиях для экспрессии цепей TCR, и b) выделение указанных цепей TCR.