БИОЛОГИЧЕСКОЕ СРЕДСТВО ДЛЯ АКТИВИЗАЦИИ ВОСПРОИЗВОДИТЕЛЬНОЙ ФУНКЦИИ КАРАКУЛЬСКИХ ОВЕЦ
BIOLOGICAL PREPARATION FOR ACTIVATION OF REPRODUCTIVE FUNCTION IN KARAKUL SHEEP

Изобретение относится к области воспроизводства овец, в частности каракульских овец, и может найти применение в каракулеводстве, ветеринарии, медицине, в фармакологии для производства лекарственных препаратов.
Известны средства: прогестерон, применяемый для синхронизации половой охоты; а также сыворотка крови жеребой кобылы (СЖК) для повышения воспроизводительной функции каракульских маток, а именно:
прогестерон - прегнен-4-дион-3,20, мелкие кристаллы, в воде не растворяются, но хорошо растворяются в спирте и растительных маслах. Прогестерон представляет собой синтетический лютенизирующий гормон в качестве синхронизатора охоты для восстановления цикличности в работе яичников и уменьшения побочного влияния СЖК, вводят его внутримышечно и подкожно. СЖК представляет собой смесь гормонов в определенном соотношении фолликуло-стимулирующий гормон (ФСГ) и лютенизирующий (ЛГ) - для стимуляции роста и развития фолликулов и проявления половой охоты (Справочник. Ветеринарная рецептура с основами терапии и профилактики, М., Агропромиздат, 1988 г., с.114).
Недостатками этой композиции является то, что:
1) средства (прогестерон+СЖК) дорогие, кроме того, есть некоторые затруднения с изысканием и условиями применения СЖК;
2) прогестерон вводят овцематкам трехкратно через день, что говорит о большой кратности введения;
3) масляный раствор прогестерона обладает несколько замедленным свойством всасывания и рассасывания после его введения, чем водные растворы;
4) при введении только прогестерона без СЖК оплодотворяемость либо не происходит, либо остается на низком уровне.
Известна композиция «Бионорм», используемая для повышения воспроизводительной функции каракульских маток, включающая двукратно пастеризованный экстракт плаценты при Т=65-70°С и витамины. Препарат представляет собой прозрачную жидкость, не содержащую осадка. Стерильность биопрепарата определяют посредством высева проб на МПБ и МПА, а безвредность клиническими испытаниями на различных видах животных.
(Ата-Курбанов Ш.Б., Ата-Курбанов Э.А., Алимова Г.Н. Влияние комплексных препаратов «Бионорма» на воспроизводительную функцию каракульских овец». Материалы научной конференции, Самарканд, 2005 г., с.29-32).
Недостатками этой композиции является:
1) недостаточность стимулирующего воздействия для взрослых овец и для молодых ярок;
2) «Бионорм» используется главным образом для нормализации половых циклов, а не для стимуляции;
3) «Бионорм» эффективен для индукции половой функции у ярок и имеет незначительный эффект стимуляции половой охоты у взрослых овец.
Данная композиция выбрана в качестве прототипа.
Целью является активизация (усиление стимуляции) воспроизводительной функции каракульских овец.
Цель достигается тем, что биологическое средство для активизации воспроизводительной функции каракульских овец (БС), включающее экстракт женской плаценты, витамины, согласно изобретению содержит дополнительно фитоэкстракты из пустынных кормовых растений-однолетних солянок: сеты - сухой солянки (Salsola sclerantha C.A.M.), данашура - сочной солянки (Gamanthus gamocarpus Mog.), балык-куза - солянки шерстистой (Climacoptera lanata Pall.) и фитоэкстракты из растений: игира - аира болотного (Acorns calamus L.) и ковула-каперсов (Capparis spinosa L.) в соотношении экстракт плаценты:фитоэкстракты как 1:2 и водорастворимый витаминно- аминокислотный комплекс «Чиктоник» в количестве 2 мл.
Сущность БС заключается в том, что оно включает жидкий экстракт плаценты с витаминно-аминокислотным комплексом «Чиктоник» и с фитоэкстрактами из пустынных кормовых растений (солянок) и каперсов с аиром. В указанных растениях имеются фитогормоны (фитоэстрогены), стероиды, флавоноиды, каротин, витамины С,Е, алкалоиды, а также сапонины, обладающие депонирующими свойствами. В результате чего БС проявляет новое свойство, заключающееся в активации (стимуляции) и нормализации воспроизводительной функции, т.е. нормализации половых циклов, увеличении прихода в охоту маток, повышения эффективности оплодотворяемости у взрослых овец и у ярок.
Предлагаемое средство отличается от прототипа, тем, что:
во-первых, оно содержит фитоэкстракты из пустынных кормовых растений-солянок и каперсов с аиром;
во-вторых, оно содержит экстракт плаценты в соотношении с фитоэстрактами как 1:2;
в-третьих, прототип оказывает эффект для индукции и нормализации половой функции у ярок и проявляет незначительный эффект стимуляции половой охоты у взрослых овец, а предлагаемое БС высокоэффективно и для ярок, и для взрослых овец;
в-четвертых, прототип содержит двукратно пастеризованный экстракт плаценты при Т=65-70°С, а предлагаемое БС содержит консервированный экстракт плаценты;
в-пятых, БС содержит водорастворимый витаминно-аминокислотный комплекс «Чиктоник», а прототип нет.
Причинно-следственная связь между достигаемым техническим результатом и существенными признаками заключается в том, БС является экологически чистым, положительно влияет на гормональный баланс и способствует его активизации (стимуляции) и нормализации воспроизводительной функции.
Механизм действия БС заключается в том, что кроме биогенных веществ, содержащихся в плаценте, на организм ярок и взрослых маток положительное влияние оказывают фитоэкстракты однолетних солянок и растений аира и каперсов. «...Условия солевого режима (в которых произрастают солянки) оказывают существенное влияние на половую систему животного.» (см. Шиманов В.Г. и др. Основы воспроизводства каракульских овец, Ташкент, Мехнат, 1987, с.33).
Благодаря комплексу биологически активных веществ БС нормализует обменные процессы в организме, оказывает общее тонизирующее действие. Все это положительно сказывается на репродуктивной функции ярок и способствует проявлению полноценных половых циклов, повышают реактивность яичников в ответ на гормональное воздействие. БС усиливает действие эндогенных гонодотропных и половых гормонов, которые присутствуют в организме и являются основными регуляторами половых процессов. Следует особо отметить, что при многократном введение БС у животных ни в одном случае не отметили побочных эффектов типа анафилактического шока или токсикоза.
При проведении патентных исследований не было обнаружено технических решений, имеющих отличительные признаки, сходные с отличительными признаками предлагаемого биологического средства.
Таким образом, предлагаемое биологическое средство обладает новизной и имеет изобретательский уровень.
Биологическое средство получают следующим образом.
Берут экстракт плаценты, затем смешивают его с фитоэкстрактами из пустынных кормовых растений: сеты - сухой солянки (Salsola sclerantha С.А.М.), данашура - сочной солянки (Gamanthus gamocarpus Mog.), балык-куза - солянки шерстистой (Climacoptera lanata Pall.) и фитоэкстракты из растений: игира - аира болотного (Acorns calamus L.) и ковула - каперсов (Capparis spinosa L.) в соотношении экстракт плаценты: фитоэкстракты как 1:2 и водорастворимый витаминно- аминокислотный комплекс «Чиктоник» в количестве 2 мл.
Пример. Опыты проводили в ПШХ Карнаб-Ота в 2005-2007 гг.
Свежеполученную женскую плаценту промывали для удаления остатков крови, очищали, удаляли оболочку и ненужные ткани, промывали физиологическим раствором 4 раза, подсушивали, разрезали на куски толщиной 1,5 см, затем укладывали в эксикатор и помещали в холодильник. Выдержка в холодильнике при температуре +4°С в течение 4 дней для накопления биогенных веществ. На 5-й день осуществляли гомогенизацию и затем экстрагировали физиологическим раствором в соотношении физ. раствор к плаценте как 1:8 при Т=+32°С в течение 45 мин при частом помешивании. Экстракт сливали в стерильные колбы и нагревали до 58°С, затем подвергали фильтрованию, центрифугированию при 6000 об/мин, надосадочную жидкость сливали, а осадок выбрасывали и обеззараживали. Затем добавляли консервант - 0,05% мертиолат, и посуда с экстрактом закрывалась резиновыми пробками.
Для изготовления БС в полученный экстракт плаценты добавляли фитоэкстракты из: 1) пастбищных растений - однолетних солянок: сеты - сухой солянки (Salsola sclerantha C.A.M.), данашура - сочной солянки (Gamanthus gamocarpus Mog.), балык-куза - солянки шерстистой (Climacoptera lanata Pall.), 2) растений - игира (Acorns calamus L.) и ковула - каперсов (Capparis spinosa L.).
1. Для приготовления фитоэкстракта из однолетней солянки сеты - сухой солянки (Salsola sclerantha C.A.M.) брали 1 часть измельченных (на мельнице) семян растений и добавляли к ней 5 частей физиологического раствора. Затем проводили экстрагирование при Т=+55°С в течение 10 часов. После чего осуществляли фильтрацию и центрифугирование, надосадочную жидкость сливали в колбы и консервировали 0,05% мертиолатом, а осадок выбрасывали.
2. Для приготовления фитоэкстракта из однолетней солянки данашура - сочной солянки (Gamanthus gamocarpus Mog.), брали 1 часть измельченных (на мельнице) семян растений и добавляли к ней 6 частей физиологического раствора. Затем проводили экстрагирование при Т=+55°С в течение 10 часов. После чего осуществляли фильтрацию и центрифугирование, надосадочную жидкость сливали в колбы и консервировали 0,05% мертиолатом а осадок выбрасывали.
3. Для приготовления фитоэкстракта из однолетней солянки  балык-куза - солянки шерстистой (Climacoptera lanata Pall.), брали 1 часть измельченных (на мельнице) семян растений и добавляли к ней 5 частей физиологического раствора. Затем проводили экстрагирование при Т=+50°С в течение 10 часов. После чего осуществляли фильтрацию и центрифугирование, надосадочную жидкость сливали в колбы и консервировали 0,05% мертиолатом, а осадок выбрасывали.
4. Для приготовления фитоэкстракта из растения игира - аира болотного (Acorns calamus L.), брали 1 часть измельченных (на мельнице) корневищ растений и добавляли к ней 6 частей физиологического раствора. Затем проводили экстрагирование при Т=+55°С в течение 7 часов. После чего осуществляли фильтрацию и центрифугирование, надосадочную жидкость сливали в колбы и консервировали 0,05% мертиолатом, а осадок выбрасывали.
5. Для приготовления фитоэкстракта из ковула - каперсов (Capparis spinosa L.), брали 1 часть измельченных (на мельнице) семян растений и добавляли к ней 7 частей физиологического раствора. Затем проводили экстрагирование при Т=+55°С в течение 8 часов. После чего осуществляли фильтрацию и центрифугирование, надосадочную жидкость сливали в колбы и консервировали 0,05% мертиолатом, а осадок выбрасывали.
Затем брали 100 мл экстракта плаценты и к ней прибавляли 200 мл фитоэкстрактов:
экстракта сеты - сухой солянки (Salsola sclerantha C.A.M.) - 30 мл;
экстракта донашура - сочной солянки (Gamanthus gamocarpus Mog.) - 40 мл;
экстракта балык-куза - солянки шерстистой (Climacoptera lanata Pall.) -40 мл;
экстракта игира - аира болотного (Acorns calamus L.) - 40 мл;
экстракта ковула - каперсов (Capparis spinosa L.) - 50 мл и затем полученную смесь тщательно перемешивали.
После этого прибавляли водорастворимый витаминно-аминокислотный комплекс «Чиктоник» в количестве 2 мл и перемешивали. «Чиктоник» содержит витамины А, Д3, B1, B6, В12 и аминокислоты.
Готовое биологическое средство представляет собой прозрачную, слегка аполесцирующую жидкость, не содержащую осадка.
Стерильность БС определяли посредством высева проб на МПБ и МПА (МПА-мясо-пептонный агар, МПБ-мясо-пептонный бульон).
Опытные образцы БС высевали в чашках Петри с МПА, а также в пробирках с МПБ и выдерживали в термостате при t=37 C° в течение 24 часов. В качестве контроля были взяты чашки Петри с МПА и пробирки с МПБ без высева БС. После 24 часов выдержки роста микробов и колоний в чашках Петри с БС не было обнаружено.
Безвредность и токсичность определяли клиническими испытаниями на 10 голов белых лабораторных мышей массой 18-20 г путем внутрибрюшинного введения в дозе 0,5 мл БС, а контрольной группе мышей в количестве 10 голов вводили физиологический раствор в той же дозе.
Наблюдения за состоянием белых мышей велось в течение 10 дней со дня введения препарата, в течение времени наблюдения падеж отсутствовал, не было обнаружено резких клинических и физиологических изменений.
При вскрытии животных не было обнаружено каких-либо патологических изменений.
Определение гормональной активности.
Для этого БС вводили 6 инфантильным яркам подкожно: 3-м яркам 1-й опытной группы в дозе 3 мл два раза с интервалом 7 дней и 3-м яркам 2-й опытной группы в дозе 5 мл 2 раза с интервалом 7 дней, а контрольной группе ярок вводили физ. раствор в дозе 5 мл с таким же интервалом.
При этом обращали внимание на изменения в наружных половых органах (гиперемию, отек, состояние шейки матки). Через 96 часов после введения препарата была проведена лапаротомия. Результаты лапаротомии показали, что у подопытных ярок наружные половые органы были отечными, наблюдалась гиперемия, шейка матки раскрыта, матка увеличена и отечная, а в яичниках 3-х ярок 1 опытной группы обнаружено по 1 фолликулу при дозе введения 3 мл, а у 2-х ярок 2-й группы по 1 фолликулу и у одной ярки 2 фоликула при дозе 5 мл.
Все эти показатели свидетельствовали о гормоноподобном действии БС. Каких-либо изменений в репродуктивных органах контрольных животных не обнаружили.
При испытании БС на инфантильных каракульских ярках совместно с гонадотропными гормонами установили, что БС повышает реактивность яичников в ответ на гормональное воздействие.
Однако прототип  «Бионорм» не вызывает развития фолликулов в яичниках.
БС и прототип испытывали в качестве индуктора и нормализатора полового созревания у каракульских овец. В возрасте 5-6 месяцев у каракульских ярок в крови начинает обнаруживаться небольшое количество гонадотропных гормонов гипофиза, что указывает на начало становления половых циклов или периода полового созревания.
Поэтому прототип «Бионорм» вводили именно с этого периода двукратно с промежутком 7-10 дней по 5-6 мл подкожно на 1 инъекцию, а предлагаемую биологически активное средство (БС) также с этого периода вводили по 5 мл подкожно 2 раза с интервалом в 7 дней.
Результаты исследований представлены в таблице 1.
Таблица 1
Влияние биопрепаратов на проявление полноценных половых циклов у ярок
Наименование биопрепаратов
Число ярок (гол)
Проявили Охоту (гол.)
Всего проявили охоту
Из них оплодотворилось по отношению к общему числу ярок
В возрасте 7 мес
В возрасте 9 мес
Гол.
%
Гол.
%
Предлагаемое биологическое средство (БС)
25
7
14
21
84
19
76
Прототип «Бионорм»
25
6
12
18
72
17
68
Контрольная группа (физ. раствор)
25
1
5
6
20
4
16
Результаты исследований, представленные в таблице 1, указывают на то, что под влиянием БС у каракульских ярок намного ускоряется проявление половых циклов по сравнению с прототипом.
Под влиянием «Бионорма» из 25 ярок проявили охоту 72%, а под влиянием предлагаемого БС из 25 ярок проявили охоту 84% и их оплодотворяемость составила 76% по отношению к общему числу ярок, а в прототипе оплодотворяемость составила 68%. Это можно объяснить тем, что кроме биогенных веществ, содержащихся в плаценте, на организм ярок положительное влияние оказывают фитоэкстракты солянок, каперсов и аира. Благодаря комплексу биологически активных веществ БС нормализует обменные процессы в организме и оказывает стимулирующий эффект на воспроизводительную функцию. Все это положительно сказывается на репродуктивной функции ярок и способствует проявлению полноценных половых циклов.
Таким образом, при испытании БС на инфантильных каракульских ярках установили, что оно повышает реактивность яичников в ответ на гормональное воздействие. Однако прототип «Бионорм» оказывает значительно меньшее влияние на образование фолликулов в яичниках. Предлагаемое же БС усиливает действие эндогенных гонадотропных гормонов, которые присутствуют в организме, являются основными регуляторами половых процессов и вызывают развитие фолликулов в яичниках. Следует особо отметить, что при многократном введение БС у животных ни в одном случае не отметили побочных эффектов типа анафилактического шока или токсикоза.
В другом опыте в основной сезон случки (октябрь) БС было испытано на взрослых овцематках на эффект синхронизации и стимуляции половой охоты. Для этого маткам 3-летнего возраста в количестве 25 голов вводили БС по 6 мл подкожно 2 раза с интервалом в 7 дней. Контрольным маткам вводили физиологический раствор. Затем проводили выборку маток в охоте и последующее их искусственное осеменение.
В таблице 2 показано влияние БС на синхронизацию и стимуляцию половой охоты у взрослых овец.
Результаты табл.2 показывают, что в опытной группе под влиянием БС пришло в охоту 96% маток, в контрольной группе проявили охоту 72% маток, а в прототипе - 80% маток. При этом в группе, где применялось БС, срок прихода в охоту маток был более сжатым, чем в других группах.
Были проведены также опыты по влиянию БС на оплодотворяемость овец в весенне-летний период.
В каракулеводстве для получения дополнительной продукции - каракульских шкурок и каракульчи, проводится весенне-летняя случка. Известно, что этот период является анэстральным и гормональная активность овец понижена. Проявление половой охоты в этот период резко снижено. Поэтому для активизации половой охоты необходимо применение гормональных препаратов. Для этого в основном применяют аналог «прогестерон+СЖК». С целью активизации воспроизводительной функции к аналогу прибавляли БС.
В таблице 3 показано влияние комплекса БС+аналог (прогестерон+СЖК) на оплодотворяемость овцематок.
Результаты, приведенные в табл.3, показывают, что при применении БС приход в охоту увеличился на 20%, а оплодотворяемость на 8,5% по сравнению с аналогом.
Таким образом, было выявлено что БС обладает стимулирующим действием на воспроизводительную функцию каракульских маток и активизирует гипоталамо-гипофизарно-овариальную систему как у ярок, так и у взрослых овцематок, способствует синхронизации половой охоты и повышает оплодотворяемость.
Срок хранения БС составляет 12 месяцев.
При увеличении количества экстракта плаценты происходит перерасход препарата.
При уменьшении количества экстракта плаценты может снизиться биогенное и стимулирующее действие препарата
При увеличении количества фитоэкстрактов происходит перерасход препарата.
При уменьшении количества фитоэкстрактов снижается интенсивность созревания фолликулов и гормональная активность БС.
При увеличении количества «Чиктоника» происходит перерасход препарата.
При уменьшении количества «Чиктоника» положительное влияние на обменные процессы в организме снижаются.
БС может быть использовано для активации воспроизводительной функции и увеличения эффективности воспроизводства при проведении биотехнологических мероприятий. Следует особо отметить, что при многократном введении биопрепарата у животных ни в одном случае не обнаружено побочных эффектов.
Стоимость 1 дозы - 0,01 минимальной зарплаты в сумах на 1 гол, а при двукратном применении - 0,02 мин зарплаты в сумах (в перерасчете на сумы 1 российский рубль составляет примерно 57 сум на 1 марта 2011 г.)
При промышленном применении БС на поголовье из 1000 овцематок можно достичь увеличения синхронности прихода маток в охоту в 1,5-2 раза, повышения прихода маток в охоту на 12-24% и оплодотворяемости на 20% по отношению к обработанным животным, что свидетельствует об активизации (усиление стимуляции) воспроизводительной функции каракульских овец.
Препарат изготовлен из местного сырья, произрастающего на территории Узбекистана и в 2-3 раза дешевле известных импортных биопрепаратов, обладает выраженным влиянием на репродуктивные функции овец.
Таким образом, предлагаемое биологическое средство (БС) обладает новизной, соответствует условию «изобретательский уровень» и может быть промышленно применимо.