Влияние различных режимов системной фотодинамической терапии на процессы метастазирования в эксперименте

XXI РОССИЙСКИЙ ОНКОЛОГИЧЕСКИЙ КОНГРЕСС

ТЕЗИСЫ

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ОНКОЛОГИЯ

нием ионов Са++ также увеличивалось концу культивирования количество клеток со 100±5,4 до 340,5±6,8. Культивация в среде с добавлением физиологического раствора выявляла аналогичные результаты. Проведенный по завершению культивирования на 8 сутки автоматический подсчет клеток и оценка их жизнеспособности показали, что существенных различий между анализируемыми опытами нет. Анализ серии экспериментов по культивированию злокачественных клеток А549 показал статистически значимые различия по показателям при культивировании в среде с добавлением ионов Са++, Fe3, наночастиц трехвалентного железа и диметилбигуанида. Изменение количества клеток в поле зрения в контрольной среде № 2 (без добавок) происходило от 30,0±3,4 до 112,5±3,6 в конце культивирования. В среде с добавлением изучаемых блокаторов хемосинтети-ческих реакций к концу культивирования количество клеток было в 2,3 раза меньше (48,0±2,7), чем в контрольной среде № 2 (112,5±3,6). Абсолютное количество клеток в конце культивирования в среде с добавлением блокаторов составило 2,21±1,6 х 105, а в контрольной среде № 2 — 3,54±1,3 х 105. Жизнеспособность культуры А549 в опытной среде достоверно снижалась в процессе культивирования и на 8-ой день составила 43,7%, против 86,2% в контрольной среде № 2. Культивация в среде с физиологическоготраствора не выявляла торможения роста клеток и снижения их жизнеспособности. Проведенные in vitro поэтапные исследования с примене-нем блокаторов хемосинтеза выявили различные реакции изучаемых клеток. Культура МСК достоверно не реагирует на блокаторы хемосинтеза в культуральной среде, а культура злокачественных клеток А549 резко останавливает свой рост. Эти данные могут указывать на наличие хемосинтетических реакций у раковых клеток А549 и отсутствие их у клеток МСК. Таким образом, у злокачественных клеток А549 возможны хемосинтетические реакции связанные с окислением железа, что указывает на смену способа получения энергии злокачественной клеткой в процессе онкогенеза.

Избирательная цитотоксичность катионных пептидов in vitro

А. А. Лушникова, Д. А. Понкратова, Л. Ф. Морозова, А. А. Рудакова, С. М. Андреев, Н. И. Моисеева, Е. Ю. Рыбалкина Место работы: 'ФГБУ «РОНЦ им. Н. Н. Блохина» Минздрава РФ; ФГБУ Институт иммунологии ФМБА России e-mail: LAN21@yandex.ru

Для молекулярно направленной терапии злокачественных опухолей представляют интерес низкомолекулярные катионные пептиды (КП) со специфической структурой, взаимодействующие как с поверхностными, так и внутриклеточными мишенями в опухолевых клетках. В качестве мишеней рассматриваются гиперэкспрессированные в опухолях, но не в норме многофункциональные шаперонные белки нуклеолин/С23 и нуклеофозмин/В23.

Цель. Изучение цитотоксичности КП на перевиваемых клеточных линиях солидных опухолей.человека. Материалы и методы. Цитотоксичность пяти КП с дендритной структурой молекулы изучали на полученных в РОНЦ перевиваемых клеточных линиях меланомы кожи (МК) — mellS и melH, глиобоастомы (Гл) — Glb-Sh и Glb-17, рака яичника (РЯ) — CrovCel., линии рака молочной железы (РМЖ) с множественной лекарственной устойчивостью (МЛУ) — HBL-100 и линии РМЖ — HBL, контроль — фибробласты кожи перевиваемой линии Н1036. Клеточную суспензию в полной питательной среде RPMI-1640 + 10% эмбриональ-

ная телячья сыворотка культивировали в 96-луночных планшетах, по 180 мкл среды и 7—10 тыс. клеток в лунке. После 24-часовой инкубации в лунки, за исключением контрольных, вносили по 20 мкл водного раствора каждого из тестируемых катионных пептидов в конечной концентрации от 0,25 мкг/мл до 4 мкг/мл, в 3-кратных повторах.

Цитотоксичность КП анализировали в стандартных МТТ-те-стах через 2—3 суток инкубации клеток с КП, а также после 1—4-часовой инкубации суточной культуры клеток Мк, Гл, РЯ и РМЖ с КП, флуоресцентно меченным Су-5 (1 мкг/мл) в мини-ячейках на предметном стекле. После инкубации с КП клетки окрашивали красителем Хекст 33342 или трипановым синим и иодистым пропидием Для вестерн-блотинга и ИГХ спользо-вали коммерческие моноклональные тела к С23, В23 и р53 Результаты. МТТ-тесты выявили высокую цитотоксичность 5 КП в отношении всех изученных линий, включая линию РМЖ с МЛУ. Количество выживших клеток варьировало от 8% до 25% по сравнению с клетками в контрольных лунках без добавления КП. (100%). В. культуре фибробластов после инкубации с КП цитотоксичность не обнаружена. По результататм вестерн-блотинга, механизм избирательной токсичности связан с гиперэкспрессией в опухолевых клетках шаперонных белков С23/В23, регулирующих ключевые функции клетки и апоптоз. После инкубации клеток МК, РЯ и Гл и РМЖ в присутствии Cy-5-КП также наблюдался апоптоз, подтвержденный путем микроскопического анализа клеток, и дополнительно окрашенных Хекст 33342. ИГХ-окрашивание выявило совместную локализацию КП, С23 и В23 и р53 в клеточном ядре/ядрышках с последующим экспортом С23/В23 в цитоплазму. Заключение. На перевиваемых клеточных линиях МК, РЯ, Гл, РМЖ с МЛУ и РМЖ показана специфичная цитотоксич-ность пяти КП, нетоксичных для морфологически нормальных фибробластов кожи. Механизм цитотоксичности связан с р53-зависимым апоптозом.

Влияние различных режимов системной фотодинамической терапии на процессы метастазирования в эксперименте

Т. М. Литвинова', И. А. Косенко', Д. А. Церковский', М. В. Хорошун', И. М. Пранович'

Место работы: 'БГМУ, РНПЦ ОМР им. Н. Н. Александрова e-mail: doctor.litvinova@gmail.com

Системная фотодинамическая терапия (СФДТ) — новый адъювантный метод лечения злокачественных опухолей, разработанный сотрудниками РНПЦ ОМР им. Н. Н. Александрова, который был использован как этап химиолучевой терапии нерезектабельного рака шейки матки. До клинического применения метода в эксперименте на животных было установлено, что СФДТ статистически значимо индуцирует исчезновение опухоли, уменьшает площадь под кривой опухолевого роста, увеличивает среднюю продолжительность жизни животных и снижает индекс роста новообразований. Однако остался не изученным вопрос о влиянии СФДТ на процессы метастазирования экспериментальных опухолей. Цель. Оценить влияние различных режимов системной фотодинамической терапии на процессы метастазирования экспериментальных опухолей in vivo.

Материалы и методы. В исследовании использовано 50 линейных мышей C57Black в возрасте 2,0—2,5 месяца, массой тела 20,0±3,0 грамм, полученных из вивария РНПЦ ОМР им. Н. Н. Александрова. Эксперимент проведен в соответствии с техническим кодексом «Надлежащая лабораторная прак-

Злокачественные опухоли

www.malignanttumours.org

Том / Vol. 7 № 3 S 1 /2017

Malignant Tumours

www.malignanttumours.org

XXI РОССИЙСКИЙ ОНКОЛОГИЧЕСКИЙ КОНГРЕСС

ТЕЗИСЫ

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ОНКОЛОГИЯ

тика», утвержденным постановлением Министерства здравоохранения Республики Беларусь от 28 марта 2008 г. № 56, а также Международными этическими и научными стандартами качества планирования и проведения исследования на животных (Хельсинкская декларация Всемирной медицинской ассоциации, 2000 г.). Все манипуляции на животных проводились после введения их в состояние нейролептаналгезии путем введения дропередола в дозе 5 мг/кг. Умерщвление мышей выполняли с помощью общепринятых методик эвтаназии. В качестве опухолевого штамма в эксперименте использовали эпидермоидную карциному легких Льюис (РЛ-67), которую перевивали в мягкие ткани подошвенной поверхности левой стопы путем введения 0,1—0,15 мл 10% опухолевой взвеси в растворе Хенкса.

Все животные были разделены на 3 группы: контрольную (1-я группа), состоящую из 30 мышей, и две исследуемые (2-я и 3-я группы) — по 10 особей в каждой. Животным 2-й и 3-й групп на пятые сутки после перевивки опухоли проводили сеанс системной фотодинамической терапии, состоящей из введения отечественного фотосенсибилизатора «Фотолон» внутрибрюшинно в дозе 5 мг/кг и сеанса лазерной гемотерапии, который осуществляли на аппарате «ЛЮЗАР-МП» (длина волны 670 нм, мощность на выходе световода 1,5—2,0 мВт) в течение 15 мин. Во 2-й группе животных Введение фотолона и сеанс внутривенного лазерного облучения крови проводили одновременно, в 3-й — через 3 часа после введения фотосенсибилизатора. Для оценки процессов метастазирования использовали следующие параметры: частоту метастазирования опухоли, общее и среднее число метастазов в легких, степень поражения легочной ткани метастазами и индекс торможения мета-стазирования. Количество метастазов в легких определяли после фиксации органа в жидкости Карнуа с использованием бинокулярной лупы.

Статистическую обработку полученных данных проводили с помощью прикладных программ «Microsoft Exсel» и «Origin Pro 7.0». Для оценки достоверности различий использовали U критерий Манна-Уитни.

Результаты. У всех 30 мышей, вошедших в контрольную группу, были обнаружены метастазы в легких, т. е. частота метастазирования у этих животных составила 100%. Во 2-й группе мышей опухолевые очаги появились только в 20% случаев, а в 3-й — в 10%. Общее число возникших метастазов во трех группах мышей было различным. В 1 -й группе диагностировано 373 метастаза, во 2-й — 5, в 3-й — 2. Таким образом, использование СФДТ привело к уменьшению количества метастазов в легких во 2-й группе в 74,6 раза, во 3-й — 196,5 раз. Среднее число опухолевых очагов в исследуемых группах также было значительно меньше, чем в контроле, и составило 0,5±0,3 и 0,2±0,2 против 12,4±2,6. Также установлена разница в величине индекса торможения опухоли. У мышей контрольной этот показатель был равен 0, у животных 2-й группы — 98,5%, 3-ей — 99,8%. Мыши, вошедшие в контрольную группу, имели различную степень метастатического поражения легочной ткани: в 40% была обнаружена I степень, в 23% — II, в 17% — III. В исследуемых группах была обнаружена только I степень изменений, при этом у мышей в 3-ей группы их было на 20% меньше. Заключение. В результате проведенного экспериментального исследования установлено, что наиболее выраженным про-тивометастатическим действием обладает такой режим проведения системной фотодинамической терапии, при котором сеанс внутривенного лазерного облучения крови проводится через 3 часа после введения фотосенсибилизатора.

Экспериментальное обоснование режимов фотодинамической терапии при опухолях брюшины

А. А. Панкратов', Э. А. Сулейманов', Е. В. Филоненко', Ю. Б. Венедиктова', А. Д. Плютинская', Р. И. Якубовская', А.Н. Урлова', М.А. Шульгин', А. В. Бутенин' Место работы: 'Московский научно-исследовательский онкологический институт им. П.А. Герцена» — филиал ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский радиологический центр» Министерства здравоохранения Российской Федерации, г. Москва, РФ e-mail: shulgin.mike.a@gmail.com

Актуальность. Метод фотодинамической терапии (ФДТ) широко применяется для лечения опухолей различных локализаций. Разработаны оптимальные режимы ФДТ при лечении первичного и рецидивного рака кожи, мочеполовой системы, пищеварительного тракта, дыхательных путей. Однако использование данных режимов лечения невозможно при ФДТ опухолей брюшины в связи с высоким риском развития тяжелых побочных реакций.

Цель. Отработка оптимальных режимов лазерного облучения для проведения интраоперационной ФДТ брюшины. Материалы и методы. Исследования in vitro проводили на культуре опухолевых клеток человека — эпидермоид-ной карциноме гортаноглотки (Шр2). В качестве источника излучения применяли светодиодный источник с максимумом излучения 670 нм. Исследования in vivo выполнены на мышах-гибридах BDF1, самках, весом 20-25 г. В качестве опухолевой модели использовали саркому мыши S-37. Источником оптического излучения при проведении процедуры ФДТ служил лазер MRL250 (КНР) с длиной волны генерации, равной 671 нм.

Результаты. Проведенные исследования в биологических системах in vitro на культуре опухолевых клеток человека и in vivo на животных с перевиваемой злокачественной опухолью показали высокую противоопухолевую эффективность метода ФДТ с препаратами фотосенс и фотогем в «низкоинтенсивном» режиме облучения. Максимальная противоопухолевая эффективность фотодинамического воздействия с препаратом фотосенс in vitro на монослой опухолевых клеток была достигнута при Ps 10 мВт/см2 и Pw 3 Дж/см2, а in vivo на опухолевый узел объемом 48—75 см3 — при Ps 10 мВт/см2 и Pw 30 Дж/см2. Максимальная противоопухолевая эффективность ФДТ с препаратом Фотогем in vivo на опухолевый узел объемом 48—75 см3 — при Ps 10 и 20 мВт/см2 и Pw 30 Дж/см2. При этом высокие показатели противоопухолевой эффективности (ТРО 90%—79%) зарегистрированы на дозах — 10 Дж/см2 для фотосенса и 20 Дж/см2 — для фотогема. Выводы. В результате работы был выработан оптимальный режим лазерного облучения для проведения интраопераци-онной ФДТ брюшины, который может быть рекомендован для клинического использования.

Возможность использования микрочастиц железоуглеродных сорбентов в качестве магнитоуправляемых переносчиков для адресной доставки рубомицина

Л.Х. Комиссарова', В.Н. Ерохин', В. А. Семенов', Н. А. Марна-утов', А. С. Татиколов'

Место работы: Место работы: 'ФГБУН Институт биохимической физики им. Н. М. Эмануэля РАН, Москва e-mail: komissarova-lkh@mail.ru

Злокачественные опухоли

www.malignanttumours.org

Том / Vol. 7 № 3 S 1 /2017

Malignant Tumours

www.malignanttumours.org