ВЫДЕЛЕНИЕ И ОЧИСТКА АНТИТЕЛ ПРОТИВ IL-13 С ПРИМЕНЕНИЕМ АФФИННОЙ ХРОМОТОГРАФИИ С БЕЛКОМ А

1. Способ получения антитела против IL-13 или его антигенсвязывающего фрагмента со сниженным содержанием белков клетки-хозяина (HCP), полученного из смеси образца, содержащего антитело против IL-13 или его антигенсвязывающий фрагмент и по меньшей мере один HCP, при этом указанный способ включает:
(a) приведение указанной смеси образца в контакт со смолой для аффинной хроматографии и сбор образца после аффинной хроматографии;
(b) подвергание указанного образца после аффинной хроматографии снижению pH, таким образом, получение образца со сниженным pH, где указанное снижение pH составляет от приблизительно 3 до приблизительно 4;
(c) доведение указанного сниженного pH образца до pH от приблизительно 4,5 до приблизительно 6,5 и приведение указанного образца с доведенным pH в контакт с ионообменной смолой и сбор образца после ионообменной хроматографии;
(d) приведение указанного образца после ионообменной хроматографии в контакт со смолой для хроматографии с гидрофобным взаимодействием (HIC) и сбор образца после HIC, где указанный образец после HIC содержит указанный препарат антитела со сниженным содержанием HCP.
2. Способ по п.1, где указанное снижение pH осуществляют примешиванием подходящей кислоты в указанную смесь образца, и где указанная подходящая кислота выбрана из группы, состоящей из лимонной кислоты, уксусной кислоты, каприловой кислоты и т.п.
3. Способ по п.1, где указанная смола для аффинной хроматографии является смолой с белком A.
4. Способ по п.3, где указанная смола с белком A является смолой MabSelect™.
5. Способ по п.1, где указанная ионообменная смола является анионообменной смолой или катионообменной смолой.
6. Способ по п.5, где указанная ионообменная смола является катионообменной смолой.
7. Способ по п.6, где указанная катионообменная смола выбрана из группы, состоящей из Fractogel с заместителями карбоксиметил (CM), сульфоэтил (SE), сульфопропил (SP), фосфат (P) и сульфонат (S).
3
-
8. Способ по п.7, где указанная катионообменная смола представляет собой Fractogel™ SO .
9. Способ по п.5, где указанная ионообменная смола является анионообменной смолой.
10. Способ по п.9, где указанная анионообменная смола выбрана из группы, состоящей из Q Sepharose с диэтиламиноэтильной (DEAE), четвертичной аминоэтильной (QAE) и четвертичной амино-(Q) группами.
11. Способ по п.10, где указанная анионообменная смола представляет собой Q Sepharose.
12. Способ по п.1, где указанная стадия ионного обмена включает первую стадию ионного обмена и вторую стадию ионного обмена.
13. Способ по п.1, где указанную HIC осуществляют с использованием колонки, содержащей одну или более гидрофобных групп.
14. Способ по п.13, где указанные одна или более гидрофобных групп выбраны из группы, состоящей из алкильной, арильной групп и их сочетания.
3
15. Способ по п.14, где указанная колонка выбрана из группы, состоящей из Phenyl Sepharose (такой как колонка Phenyl Sepharose™ 6 Fast Flow, колонка Phenyl Sepharose™ High Performance), колонки Octyl Sepharose™ High Performance, колонок Fractogel™ EMD Propyl, Fractogel™ EMD Phenyl, подложек Macro-Prep™ Methyl, Macro-Prep™ t-Butyl, колонки WP ΗΙ-Propyl (C)™ и колонок Toyopearl™ на основе простого эфира, фенила или бутила.
16. Способ по п.15, где указанная колонка содержит Phenyl Sepharose.
17. Способ по п.1, дополнительно включающий стадию фильтрации, где указанный образец после HIC подвергают фильтрации для удаления вирусных частиц и облегчения замены буфера.
18. Способ по п.11, где указанное антитело против IL-13 или его антигенсвязывающая часть является гуманизированным антителом, химерным антителом или поливалентным антителом.
19. Способ по п.18, где указанное антитело против IL-13 или его антигенсвязывающая часть является гуманизированным антителом.
20. Способ по п.1, где указанный препарат, по существу, не содержит HCP.
21. Способ по п.1, дополнительно включающий стадию глубинной фильтрации.
22. Фармацевтическая композиция, содержащая препарат антитела со сниженным содержанием HCP, получаемый способом по п.1, и фармацевтически приемлемый носитель.
23. Фармацевтическая композиция по п.22, где указанная композиция, по существу, не содержит HCP.