КСАНТОФИЛЬНЫЕ КОМПОЗИЦИИ И СПОСОБЫ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ
XANTHOPHYLL COMPOSITIONS AND METHODS FOR USE THEREOF

ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА НА РОДСТВЕННЫЕ ЗАЯВКИ
[0001] Данная заявка утверждает приоритет заявки США с серийным № 61/739074 от 19 декабря 2012, которая включена здесь в виде ссылки во всей своей полноте.
ОБЛАСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[0002] Настоящее изобретение включает композицию каротиноидов, способ получения композиции каротиноида и способы ее применения.
ПРЕДПОСЫЛКИ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[0003] Каротиноиды, в том числе лютеин и другие ксантофиллы, представляют собой природные соединения, применяемые в пигментных композициях. Их можно обнаружить в экстрактах нескольких различных растений, в том числе календулы и паприки. Эти растительные экстракты, называемые живицей, перерабатывают в препараты каротиноидов, которые можно применять в разнообразных областях промышленности.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ
[0004] На ФИГ. 1 схематически показана описанная здесь проточная установка непрерывного действия.
[0005] На ФИГ. 2A, B показаны результаты поляризационной микроскопии при 100-кратном увеличении. На ФИГ. 2A показан X-40; на ФИГ. 2B показан XCT.
[0006] На ФИГ. 3A, B показаны результаты оптической микроскопии при 400-кратном увеличении. На ФИГ. 3A показан X-40; на ФИГ. 3B показан XCT.
[0007] На ФИГ. 4 показаны ДСК-кривые для XCT и X-40.
[0008] На ФИГ. 5A-D показано плавление X-40. На ФИГ. 5A показано плавление при 40°C; на ФИГ. 5B показано плавление при 80°C; на ФИГ. 5C показано плавление при 150°C; и на ФИГ. 5D показано плавление при 200°C.
[0009] На ФИГ. 6 приведена схема сравнительного процесса X-40.
[0010] На ФИГ. 7A, B показаны сравнительные исследования стабильности для XCT, X-40, конкурентного продукта 3, конкурентного продукта 4, конкурентного продукта 5 и конкурентного продукта 6.
[0011] На ФИГ. 8A-D показаны результаты анализа цвета по Minolta и цветовому вееру DSM/Roche для исследований без добавления красного пигмента относительно альтернативных продуктов.
[0012] На ФИГ. 9A, B показано общее содержание ксантофиллов в яйце, когда вводят XCT, относительно альтернативных продуктов.
[0013] На ФИГ. 10A-D показаны результаты анализа цвета по Minolta и цветовому вееру DSM/Roche для исследований без добавления красного пигмента относительно альтернативных продуктов.
[0014] На ФИГ. 11A, B показано общее содержание ксантофиллов в яйце, когда введен XCT, относительно альтернативных продуктов.
[0015] На ФИГ. 12A-D показано общее содержание ксантофиллов в яйце, когда введен XCT, относительно апоэфира (этилового эфира β-апо-8'-каротиновой кислоты).
[0016] На ФИГ. 13 показаны результаты анализа по цветовому вееру DSM/Roche, когда добавлен синтетический красный краситель.
[0017] На ФИГ. 14 показаны результаты анализа по цветовому вееру DSM/Roche, когда добавлен природный красный краситель.
-1
[0018] На ФИГ. 15A-C показаны результаты различных спектроскопических исследований. На ФИГ. 15A показаны FTIR-спектры для X-40 и XCT. На ФИГ. 15B показана растянутая область от 1800 до 600 см. На ФИГ. 15C показаны рамановские спектры для X-40 и XCT.
[0019] На ФИГ. 16A-C показаны результаты тонкослойной хроматографии (ТСХ) для X-40 и XCT.
КРАТКОЕ СОДЕРЖАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[0020] В некоторых аспектах настоящее раскрытие касается композиции, содержащей мыло, получаемое омылением природной каротиноидсодержащей живицы, где мыло содержит частицы неэтерифицированных ксантофиллов и сохраняет общую концентрацию ксантофиллов выше 80%, если хранится при комнатной температуре в проницаемом для кислорода темном пакете в течение трех месяцев.
[0021] В другом аспекте настоящее раскрытие касается композиции, содержащей мыло, получаемое омылением природной каротиноидсодержащей живицы, где мыло содержит частицы неэтерифицированных ксантофиллов, и 90% частиц неэтерифицированных ксантофиллов имеют наибольший диаметр менее 0,5 мкм.
[0022] Еще один аспект касается способа получения конечного продукта, содержащего более 10% композиции неэтерифицированных каротиноидов. Способ включает (a) щелочное омыление природной каротиноидсодержащей живицы, где омыление происходит в присутствии гидроксида металла при тщательном перемешивании и температуре примерно от 110°C до примерно 180°C с получением в результате композиции, содержащей неэтерифицированные каротиноиды, (b) тонкое измельчение результирующего мыла, содержащего неэтерифицированные каротиноиды, с получением мелкодисперсного мыла и (c) изомеризацию неэтерифицированных каротиноидов, при которой мелкодисперсное мыло нагревают таким образом, что более 80% присутствующих неэтерифицированных каротиноидов имеют полностью транс-изомерную конфигурацию, и концентрация неэтерифицированных каротиноидов конечного мыльного продукта составляет более 10%.
[0023] Еще один альтернативный аспект касается способа получения водного продукта из воды и конечного продукта с концентрацией неэтерифицированных каротиноидов выше 10%. Способ включает (a) щелочное омыление природной каротиноидсодержащей живицы, где омыление происходит в присутствии гидроксида металла при тщательном перемешивании и температуре примерно от 110°C до примерно 180°C, в результате чего получают мыло, содержащее неэтерифицированные каротиноиды, (b) изомеризацию неэтерифицированных каротиноидов, где мыло нагревают таким образом, что более 80% присутствующих неэтерифицированных каротиноидов имеют полностью транс-изомерную конфигурацию, с получением концентрации неэтерифицированных каротиноидов в конечном мыльном продукте выше 10% и (c) контакт конечного мыльного продукта с водой в количестве, достаточном для создания водного продукта, имеющего от 5% до примерно 25% конечного мыльного продукта.
[0024] Здесь приведены другие аспекты и признаки настоящего раскрытия.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[0025] Настоящее изобретение включает композицию каротиноидов, способ получения каротиноидного препарата и способы применения композиции каротиноидов. Преимущественно композиция каротиноидов по изобретению имеет улучшенную биодоступность и повышенную красящую эффективность по сравнению с композициями каротиноидов, полученными другими способами.
I. Композиция
[0026] Один аспект настоящего изобретения включает композицию, содержащую мыло, полученное омылением природной каротиноидсодержащей живицы. Такое мыло содержит частицы неэтерифицированных ксантофиллов. Мыло по изобретению также содержит остальные компоненты исходной природной каротиноидсодержащей живицы.
[0027] Композиция по изобретению может быть жидкой или твердой, например, может представлять собой гранулы или порошок. Вообще говоря, содержание влаги в твердой композиции по изобретению составляет менее 10%. В некоторых вариантах содержание влаги составляет менее 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 или 1%. В типичных вариантах содержание влаги составляет менее 3%. В других типичных вариантах содержание влаги составляет менее 2%.
(a) Природная каротиноидсодержащая живица
[0028] Композиция по изобретению содержит мыло, получаемое омылением природной каротиноидсодержащей живицы. Используемый здесь термин "живица" относится к композиции, содержащей растительный экстракт. Выражение "каротиноидсодержащая живица" относится к живице, которая содержит один или более каротиноидов, которые представляют собой органические пигменты. В конечном счете, используемое здесь выражение "природная каротиноидсодержащая живица" относится к каротиноидсодержащей живице, производимой из растения.
[0029] Подходящие примеры природной каротиноидсодержащей живицы известны в данной области. Например, природная каротиноидсодержащая живица может представлять собой живицу календулы, или живицу паприки, или их комбинацию. В одном варианте природная каротиноидсодержащая живица является живицей календулы. Например, живица календулы может представлять собой живицу Tagetes erecta, Tagetes patula, Tagetes tenuifolia, Tagetes pumila или гибридов Tagetes. В другом варианте природная каротиноидсодержащая живица является живицей паприки. Например, живица паприки может представлять собой живицу Capsicum annum linn, Capsicum bacatum, Capsicum buforum или Capsicum frutescens. В других вариантах природная каротиноидсодержащая живица представляет собой комбинацию живиц календулы и паприки. Например, природная каротиноидсодержащая живица может иметь соотношение живицы календулы к живице паприки примерно 10:1, 9:1, 8:1, 7:1, 6:1, 5:1, 4:1, 3:1, 2:1, 1:1, 1:2, 1:3, 1:4, 1:5, 1:6, 1:7, 1:8, 1:9 или 1:10.
[0030] Способы получения живицы из растения известны в данной области. В качестве альтернативы, живицу можно купить.
(b) Частицы неэтерифицированных ксантофиллов
[0031] Композиция по изобретению содержит частицы неэтерифицированных ксантофиллов. Используемое здесь выражение "частицы ксантофилла" относится к ксантофиллу, независимо от того, является ли ксантофилл кристаллическим или аморфным. Представляют различные соотношения кристаллического ксантофилла к аморфному ксантофиллу в диапазоне примерно от 100% кристаллического до примерно 100% аморфного. В одном варианте композиция по изобретению содержит оба вида ксантофилла, кристаллический и аморфный. В другом варианте композиция по изобретению содержит по меньшей мере примерно 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% кристаллического ксантофилла. Еще в одном варианте композиция по изобретению содержит по меньшей мере примерно 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% аморфного ксантофилла.
[0032] Используемое здесь выражение "неэтерифицированный" относится к ксантофиллу, который получен гидролизом из жирнокислотного эфира. Как подробно описано в параграфе III данной заявки, ксантофилл можно получить гидролизом из жирнокислотного эфира, проводя омыление природной каротиноидсодержащей живицы.
[0033] Термин "ксантофилл" относится к каротиноиду, который содержит по меньшей мере один атом кислорода. Такое соединение также можно обозначить как филлоксантин. Подходящие ксантофиллы включают ксантофиллы, обнаруживаемые в природной каротиноидсодержащей живице. Например, подходящие ксантофиллы могут включать лютеин, зеаксантин, неоксантин, виолаксантин, α- 8 β-криптоксантин, капсантин и капсорубин. В одном варианте композиция по изобретению содержит по меньшей мере один тип ксантофилла. В другом варианте композиция по изобретению содержит по меньшей мере два типа ксантофиллов. Еще в одном варианте композиция по изобретению содержит по меньшей мере три типа ксантофиллов. В типичном варианте композиция по изобретению содержит лютеин. В другом типичном варианте композиция по изобретению содержит зеаксантин. Еще в одном типичном варианте композиция по изобретению содержит и лютеин, и зеаксантин.
i. Величина наибольшего диаметра
[0034] Вообще говоря, частицы ксантофилла в композиции по изобретению имеют очень маленький размер, например, менее 1 мкм. Это относится к величине наибольшего диаметра частицы. Этот малый размер вносит вклад в повышенную биодоступность и повышенную стабильность по сравнению с большими размерами частиц.
[0035] В некоторых вариантах по меньшей мере примерно 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% частиц неэтерифицированных ксантофиллов имеют наибольший диаметр менее 1,0 мкм. В других вариантах по меньшей мере примерно 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% частиц неэтерифицированных ксантофиллов имеют наибольший диаметр менее 0,9. В некоторых вариантах по меньшей мере примерно 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% частиц неэтерифицированных ксантофиллов имеют наибольший диаметр менее 0,8 мкм. В некоторых вариантах по меньшей мере примерно 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% частиц неэтерифицированных ксантофиллов имеют наибольший диаметр менее 0,7 мкм. В специальных вариантах по меньшей мере примерно 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% частиц неэтерифицированных ксантофиллов имеют наибольший диаметр менее 0,6 мкм.
[0036] В одном варианте по меньшей мере примерно 75% частиц неэтерифицированных ксантофиллов имеют наибольший диаметр менее 0,5 мкм. Например, в некоторых вариантах по меньшей мере примерно 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89 или 90% частиц неэтерифицированных ксантофиллов имеют наибольший диаметр менее 0,5 мкм. В других вариантах по меньшей мере примерно 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% частиц неэтерифицированных ксантофиллов имеют наибольший диаметр менее 0,5 мкм. В одном варианте по меньшей мере примерно 90% частиц неэтерифицированных ксантофиллов имеют наибольший диаметр менее 0,5 мкм.
[0037] В альтернативном варианте по меньшей мере примерно 75% частиц неэтерифицированных ксантофиллов имеют наибольший диаметр менее 0,4 мкм. Например, в некоторых вариантах по меньшей мере примерно 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89 или 90% частиц неэтерифицированных ксантофиллов имеют наибольший диаметр менее 0,4 мкм.
ii. Количество частиц неэтерифицированных ксантофиллов
[0038] Преимущественно композиция по изобретению имеет высокую концентрацию частиц неэтерифицированных ксантофиллов. Например, в одном варианте композиция по изобретению содержит примерно 75 мг неэтерифицированного ксантофилла на г мыла, полученного омылением природной каротиноидсодержащей живицы. В других вариантах композиция по изобретению содержит по меньшей мере примерно 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109 или 110 мг неэтерифицированного ксантофилла на г мыла, полученного омылением природной каротиноидсодержащей живицы. Еще в других вариантах композиция по изобретению содержит примерно 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119 или 120 мг неэтерифицированного ксантофилла на г мыла, полученного омылением природной каротиноидсодержащей живицы. В типичном варианте композиция по изобретению содержит примерно от 90 мг до примерно 110 мг неэтерифицированного ксантофилла на г мыла, полученного омылением природной каротиноидсодержащей живицы. Еще в одном типичном варианте композиция по изобретению содержит по меньшей мере примерно 99 мг неэтерифицированного ксантофилла на г мыла, полученного омылением природной каротиноидсодержащей живицы. В варианте, где проводят удаление диоксина из живицы, композиция по изобретению содержит примерно 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119 или 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140 мг неэтерифицированного ксантофилла на г мыла, полученного омылением природной каротиноидсодержащей живицы.
[0039] В некоторых вариантах сухая композиция по изобретению содержит по меньшей мере 5, по меньшей мере 6, по меньшей мере 7, по меньшей мере 8, по меньшей мере 9, по меньшей мере 10, по меньшей мере 11, по меньшей мере 12, по меньшей мере 13, по меньшей мере 14, по меньшей мере 15% ксантофилла или более. Например, сухая композиция по изобретению может содержать, по меньшей мере примерно 8, 8,25, 8,5, 8,75, 9, 9,25, 9,5, 9,75, 10, 10,25, 10,5, 10,75 или 11% ксантофилла. В типичном варианте сухая композиция по изобретению содержит по меньшей мере примерно 9,5% ксантофилла. Еще в одном типичном варианте сухая композиция по изобретению содержит по меньшей мере примерно 10% ксантофилла. В другом альтернативном варианте с удалением диоксина из живицы концентрация ксантофилла может быть выше. В таких аспектах композиция может содержать по меньшей мере 9, 9,25, 9,5, 9,75, 10, 10,25, 10,5, 10,75, 11, 11,25, 11,5, 11,75, 12, 12,25, 12,5, 12,75, 13, 13,25, 13,5, 13,75, 14, 14,25, 14,5, 14,75, 15, 15,25, 15,5, 15,75, 16% или более.
[0040] В других вариантах жидкая композиция по изобретению содержит по меньшей мере 0,5, по меньшей мере 1, по меньшей мере 2 или по меньшей мере 3% ксантофилла. Например, жидкая композиция по изобретению может содержать по меньшей мере примерно 0,5, 0,75, 1,0, 1,25, 1,5, 1,75, 2,0, 2,25, 2,5, 2,75 или 3,0% ксантофилла. В типичном варианте, жидкая композиция по изобретению может содержать по меньшей мере примерно 1% ксантофилла. Еще в одном типичном варианте жидкая композиция по изобретению содержит примерно от 1% до примерно 3% ксантофилла.
iii. Изомерия
[0041] Как известно в данной области, ксантофиллы могут существовать в виде различных изомеров. В частности они могут существовать в виде цис-изомеров или полностью транс-изомеров. Способы определения количества цис-изомера или количества полностью транс-изомера в композиции также известны в данной области. Например, смотри включенные здесь примеры. Вообще говоря, композиция по изобретению может содержать по меньшей мере примерно 50% полностью транс-изомера. В некоторых вариантах композиция по изобретению может содержать по меньшей мере примерно 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95 или 99% полностью транс-изомера. В других вариантах композиция по изобретению может содержать по меньшей мере примерно 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84 или 85% полностью транс-изомера. В типичных вариантах композиция по изобретению может содержать по меньшей мере примерно 80% полностью транс-изомера.
(c) Стабильность
[0042] Частицы ксантофилла композиции по изобретению имеют замечательную стабильность. Например, если композицию по изобретению хранят при комнатной температуре в проницаемом для кислорода пакете, то через месяц присутствует по меньшей мере примерно 80% от начальной концентрации ксантофилла. В одном варианте при комнатной температуре и в проницаемом для кислорода пакете через месяц присутствует по меньшей мере примерно 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% от начальной общей концентрации ксантофилла. В типичном варианте при комнатной температуре и в проницаемом для кислорода пакете через месяц присутствует по меньшей мере примерно 98, 99 или 100% от начальной общей концентрации ксантофилла.
[0043] В другом варианте при комнатной температуре и в проницаемом для кислорода пакете через три месяца присутствует по меньшей мере примерно 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% от начальной общей концентрации ксантофилла. В типичном варианте при комнатной температуре и в проницаемом для кислорода пакете через три месяца присутствует по меньшей мере примерно 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% от начальной общей концентрации ксантофилла.
[0044] Еще в одном варианте при комнатной температуре и в проницаемом для кислорода пакете через шесть месяцев присутствует по меньшей мере примерно 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97 или 98% от начальной общей концентрации ксантофилла. В типичном варианте при комнатной температуре и в проницаемом для кислорода пакете через шесть месяцев присутствует по меньшей мере примерно 90% от начальной общей концентрации ксантофилла.
[0045] Еще в одном варианте при комнатной температуре и в проницаемом для кислорода пакете через девять месяцев присутствует по меньшей мере примерно 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97 или 98% от начальной общей концентрации ксантофилла. В типичном варианте при комнатной температуре и в проницаемом для кислорода пакете через девять месяцев присутствует по меньшей мере примерно 85, 86, 87, 88, 89 или 90% от начальной общей концентрации ксантофилла.
[0046] В вариантах, где композицию по изобретению хранят при 50°C в непроницаемом пакете, через шесть месяцев присутствует по меньшей мере примерно 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% от начальной общей концентрации ксантофилла. В типичном варианте примерно через шесть месяцев присутствует по меньшей мере примерно 95, 96, 97, 98, 99 или 100% от начальной общей концентрации ксантофилла.
[0047] В других вариантах, где композицию по изобретению хранят при 50°C в непроницаемом пакете, через девять месяцев присутствует по меньшей мере примерно 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% от начальной общей концентрации ксантофилла. В типичном варианте через девять месяцев присутствует по меньшей мере примерно 85, 86, 87, 88, 89 или 90% от начальной общей концентрации ксантофилла.
[0048] Еще в одном типичном варианте, композиция по изобретению, смешанная с кормом для животных и хранящаяся при комнатной температуре в темном проницаемом для кислорода пакете, через месяц сохраняет по меньшей мере примерно 90% от начальной концентрации ксантофилла и в некоторых вариантах, сохраняет через месяц по меньшей мере 90, 91, 92, 93 или 94% от начальной концентрации ксантофилла. Еще в одном типичном варианте композиция по изобретению, смешанная с кормом для животных и хранящаяся при комнатной температуре в темном проницаемом для кислорода пакете, сохраняет по меньшей мере примерно 80% от начальной концентрации ксантофилла через три, четыре или шесть месяцев, и в некоторых вариантах сохраняет по меньшей мере примерно 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89 или 90% от начальной концентрации ксантофилла через три, четыре или шесть месяцев.
(d) Препараты
[0049] Композиция по изобретению может быть жидкой или твердой. Если композиция является твердой, частицы мыла (которые частично состоят из частиц неэтерифицированных ксантофиллов) обычно имеют наибольший диаметр частиц примерно от 40 мкм до примерно 300 мкм. Эти частицы также могут образовывать агрегаты размером примерно до 850 мкм. В одном варианте 90% частиц мыла или агрегатов имеют размер примерно от 40 мкм до примерно 850 мкм. В другом варианте 90% частиц мыла или агрегатов имеют размер примерно от 70 мкм до 700 мкм. Еще в одном варианте 90% частиц мыла или агрегатов имеют размер примерно от 100 мкм до 550 мкм. Еще в одном варианте 90% частиц мыла или агрегатов имеют размер примерно от 200 мкм до примерно 500 мкм. Такое мыло содержит частицы неэтерифицированных ксантофиллов.
[0050] В некоторых вариантах композицию по изобретению можно приготовить саму по себе или как часть корма. Сухую кормовую добавку можно равномерно диспергировать в жидкости, жидкой пище, сухой пище, гранулах, белковых продуктах, кормовых добавках или их смесях.
[0051] В некоторых вариантах композицию по изобретению можно приготовить в виде водного препарата. Водный препарат может представлять собой раствор, дисперсию или эмульсию. Водный препарат можно добавлять непосредственно в питьевую воду для животного или можно подмешивать или вносить в сухую или жидкую пищу.
(e) Антиоксиданты
[0052] Композиция по изобретению также может включать по меньшей мере один антиоксидант. Для применения в композиции по изобретению подходят разнообразные антиоксиданты или комбинации антиоксидантов. Антиоксидант может содержать хинолиновое соединение. Обычно хинолиновое соединение представляет собой замещенный 1,2-дигидрохинолин. Замещенные 1,2-дигидрохинолиновые соединения, подходящие для применения в изобретении, обычно имеют формулу (I):
где:
1
2
3
4
R, R, R и R независимо выбраны из группы, включающей атом водорода и алкильную группу, имеющую от 1 до примерно 6 атомов углерода; и
5
R обозначает алкоксигруппу, имеющую от 1 до примерно 12 атомов углерода.
[0053] В качестве повторения, замещенный 1,2-дигидрохинолин имеет формулу (I), где:
1
2
3
4
R, R, R и R независимо выбраны из группы, включающей атом водорода и алкильную группу, имеющую от 1 до примерно 4 атомов углерода;
5
и R обозначает алкоксигруппу, имеющую от 1 до примерно 4 атомов углерода.
[0054] В одном предпочтительном варианте замещенный 1,2-дигидрохинолин представляет собой 6-этокси-1,2-дигидро-2,2,4-триметилхинолин, имеющий формулу (II):

[0055] Соединение 6-этокси-1,2-дигидро-2,2,4-триметилхинолин, общеизвестное как этоксихин, продается под торговой маркой AGRADO. Настоящее изобретение также включает соли этоксихина и другие соединения, имеющие формулу (I). Этоксихин и другие соединения, имеющие формулу (I), можно приобрести коммерчески от Novus International, Inc. (St. Louis, MO) или получить согласно способам, общеизвестным в данной области, например, как подробно описано в патенте США №4772710, который включен здесь во всей своей полноте в виде ссылки.
[0056] Для применения в композиции по настоящему изобретению подходят различные другие антиоксиданты. В некоторых вариантах антиоксидант может представлять собой соединение, которое обрывает цепь свободнорадикальных окислительных реакций, протонируя свободные радикалы, тем самым их инактивируя. В качестве альтернативы, антиоксидант может представлять собой соединение, которое убирает виды химически активного кислорода. Еще в других вариантах антиоксидант может быть синтетическим соединением, полусинтетическим соединением или природным (или полученным из природного) соединением.
[0057] Подходящие антиоксиданты могут включать, но не ограничены этим, следующие соединения: аскорбиновая кислота и ее соли, аскорбилпальмитат, аскорбилстеарат, аноксомер, н-ацетилцистеин, бензилизотиоцианат, мета-аминобензойная кислота, орто-аминобензойная кислота, пара-аминобензойная кислота (PABA), бутилированный гидроксианизол (BHA), бутилированный гидрокситолуол (BHT), кофеиновая кислота, кантаксантин, альфа-каротин, бета-каротин, бета-апокаротиновая кислота, карнозол, карвакрол, катехины, цетилгаллат, хлорогеновая кислота, лимонная кислота и ее соли, гвоздичный экстракт, экстракт кофейных зерен, пара-кумаровая кислота, 3,4-дигидроксибензойная кислота, N,N'-дифенил-пара-фенилендиамин (DPPD), дилаурилтиодипропионат, дистеарилтиодипропионат, 2,6-ди-трет-бутилфенол, додецилгаллат, эдетовая кислота, эллаговая кислота, эриторбовая кислота, эриторбат натрия, эскулетин, эскулин, 6-этокси-1,2-дигидро-2,2,4-триметилхинолин (этоксихин), этилгаллат, этилмальтол, этилендиаминтетрауксусная кислота (EDTA), экстракт эвкалипта, эвгенол, феруловая кислота, флавоноиды (например, катехин, эпикатехин, эпикатехингаллат, эпигаллокатехин (EGC), эпигаллокатехингаллат (EGCG), полифенол эпигаллокатехин-3-галлат, флавоны (например, апигенин, хризин, лутеолин), флавонолы (например, датисцетин, мирицетин, daemfero), флаваноны, фраксетин, фумаровая кислота, галловая кислота, экстракт горечавки, глюконовая кислота, глицин, гваяковая камедь, хесперетин, альфа-гидроксибензилфосфиновая кислота, гидроксикоричная кислота, гидроксиглутаровая кислота, гидрохинон, н-гидроксиянтарная кислота, гидрокситрирозол, гидроксимочевина, экстракт рисовых отрубей, молочная кислота и ее соли, лецитин, лецитинцитрат; r-альфа-липоевая кислота, лютеин, ликопен, яблочная кислота, мальтол, 5-метокситриптамин, метилгаллат, моноглицеридцитрат; моноизопропилцитрат; морин, бета-нафтофлавон, нордигидрогваяретовая кислота (NDGA), октилгаллат, щавелевая кислота, пальмитилцитрат, фенотиазин, фосфатидилхолин, фосфорная кислота, фосфаты, фитиновая кислота, фитилубихромель, экстракт красного перца, пропилгаллат, полифосфаты, кверцетин, транс-ресвератрол, экстракт розмарина, розмариновая кислота, экстракт шалфея, сезамол, силимарин, синаповая кислота, янтарная кислота, стеарилцитрат, сиреневая кислота, винная кислота, тимол, токоферолы (например, альфа-, бета-, гамма- и дельта-токоферол), токотриенолы (например, альфа-, бета-, гамма- и дельта-токотриенолы), тирозол, ванилиновная кислота, 2,6-ди-трет-бутил-4-гидроксиметилфенол (например, lonox 100), 2,4-(трис-3',5'-би-трет-бутил-4'-гидроксибензил)-мезитилен (например, lonox 330), 2,4,5-тригидроксибутирофенон, убихинон, трет-бутилгидрохинон (TBHQ), тиодипропионовая кислота, тригидроксибутирофенон, триптамин, тирамин, мочевая кислота, витамин K и производные, витамин Q10, масло проростков пшеницы, зеаксантин или их комбинации.
[0058] Типичные антиоксиданты могут включать синтетические замещенные фенольные соединения, такие как трет-бутилгидрохинон (TBHQ), бутилированный гидроксианизол (BHA) или бутилированный гидрокситолуол (BHT); 6-этокси-1,2-дигидро-2,2,4-триметилхинолин (этоксихин); производные галловой кислоты, такие как н-пропилгаллат; производные витамина C, такие как аскорбилпальмитат; лецитин и соединения витамина E, такие как альфа-токоферол.
[0059] Композиция по изобретению может содержать по меньшей мере один антиоксидант. В некоторых вариантах композиция по изобретению может содержать более одного антиоксиданта. При составлении комбинации антиоксидантов таким образом можно использовать с композицией по изобретению широкий спектр источников жиров, в том числе источники жиров с относительно высоким содержанием ненасыщенных жирных кислот, например, в рационе питания животных или источнике воды.
(f) Другие компоненты
2
[0060] В некоторых вариантах композиция по изобретению может содержать другие компоненты, такие как носитель, консервант, антислеживающий агент и др. В некоторых вариантах композиция по изобретению может содержать антислеживающий агент. Подходящие антислеживающие агенты известны в данной области и могут включать, например, соль стеариновой кислоты, SiO и/или тальк. В некоторых вариантах антислеживающий агент может присутствовать в количестве от 0% до 15% масс. всей композиции, более предпочтительно количество антислеживающего агента составляет от 3% до 15% или от 5% до 10%. Аналогично, композиция по изобретению может содержать консервант. Подходящие консерванты известны в данной области. Еще в других вариантах композиция может содержать эмульгатор. Подходящие эмульгаторы могут включать, например, неионный эмульгатор, производное пропиленгликоля или полиэтиленгликольрицинолеата (E-484).
(g) Типичные варианты
[0061] В типичном варианте композицию по изобретению получают из живицы календулы. В другом типичном варианте 90% частиц ксантофилла композиции по изобретению имеют наибольший диаметр менее 0,5 мкм, конечный мыльный продукт содержит по меньшей мере примерно 75 мг ксантофиллов на г мыла, и 80% неэтерифицированных ксантофиллов представляют собой полностью транс-изомер. Еще в одном типичном варианте композиция по изобретению содержит этоксихин. Еще в одном типичном варианте через месяц хранения при комнатной температуре в проницаемом для кислорода пакете остается 98% ксантофилла, присутствующего изначально.
[0062] В другом типичном варианте, порошковая композиция по изобретению содержит примерно от 70% до примерно 99% мыла с календулой, примерно от 0% до примерно 15% антислеживающего агента, примерно от 0,1% до примерно 3% гидроксида металла, примерно от 0,1% до примерно 2% влаги и примерно от 0% до примерно 1% антиоксиданта, такого как этоксихин.
[0063] Еще в одном типичном варианте порошковая композиция по изобретению содержит примерно от 75% до примерно 95% мыла с календулой, примерно от 0% до примерно 15% антислеживающего агента и примерно от 0% до примерно 8% стеариновой кислоты.
2
[0064] Еще в одном типичном варианте порошковая композиция по изобретению содержит примерно от 75% до примерно 95% мыла с календулой, примерно от 0% до примерно 15% SiO и примерно от 0% до примерно 8% стеариновой кислоты.
[0065] Еще в одном типичном варианте порошковая композиция по изобретению содержит примерно от 75% до примерно 95% мыла с календулой, примерно от 0% до примерно 15% талька и примерно от 0% до примерно 8% стеариновой кислоты.
2
[0066] Еще в одном типичном варианте порошковая композиция по изобретению содержит примерно от 75% до примерно 95% мыла с календулой, примерно от 0% до примерно 6% SiO, примерно от 2% до примерно 10% талька и примерно от 0% до примерно 8% стеариновой кислоты.
[0067] В некоторых типичных вариантах жидкая композиция по изобретению содержит примерно от 5 до примерно 25% мыла с календулой, примерно от 0 до примерно 0,6% антиоксиданта, такого как этоксихин, примерно от 0 до примерно 1% эмульгатора и примерно от 82 до примерно 89% воды. Еще в одном типичном варианте жидкая композиция по изобретению содержит от 0,5 до 3% ксантофиллов, примерно от 0 до примерно 0,6% антиоксиданта, такого как этоксихин, примерно от 0 до примерно 1% эмульгатора и примерно от 82 до примерно 89% воды.
[0068] В других типичных вариантах жидкая композиция по изобретению содержит примерно от 5 до примерно 25% мыла с календулой, примерно от 0 до примерно 0,6% антиоксиданта, такого как этоксихин, примерно от 0 до примерно 1% глицерилполиэтиленгликольрицинолеата (E-484) и примерно от 82 до примерно 89% воды. Еще в одном типичном варианте жидкая композиция по изобретению содержит примерно от 0 до примерно 3% ксантофиллов, примерно от 0 до примерно 0,6% антиоксиданта, такого как этоксихин, примерно от 0 до примерно 1% глицерилполиэтиленгликольрицинолеата (E-484) и примерно от 82 до примерно 89% воды.
II. Кормовые рационы
[0069] Другой аспект настоящего изобретения включает корм для животных. Корм для животных по изобретению содержит композицию, которая подробно описана выше в параграфе I. Точный рецепт композиции корма для животных некритичен для настоящего изобретения. Кормовые ингредиенты выбирают в соответствии с требованиями к корму конкретного животного, для которого этот корм предназначен; эти требования зависят, среди прочего, от возраста и стадии развития животного, пола животного и других факторов. Кормовые ингредиенты можно сгруппировать в восемь классов на основании их состава и применения при составлении кормов: сухой фураж и грубая пища; пастбища, зональные растения и свежий фураж; силосы; энергетические корма; белковые добавки; минеральные добавки; витаминные добавки и дополнения. Смотри таблицы кормовых композиций США-Канады, National Research Council (U.S.) Subcommittee on Feed Composition, 3d rev., National Academy Press, pp. 2, 145 (1982). Эти классы, в известной степени произвольно, можно классифицировать как некоторые кормовые ингредиенты на несколько классов. Обычно кормовой препарат зависит также от затрат, связанных с каждым ингредиентом, причем предпочтительным препаратом является наименее дорогостоящая композиция ингредиентов, которая дает необходимые питательные вещества.
th
[0070] В одном варианте в качестве неограничительного примера готовят кормовой рацион для домашней птицы. Как отмечается выше, кормовые препараты зависят частично от возраста и стадии развития животного, которое предполагают кормить. Leeson и Summers (Nutrition Chicken, 4 ed., pp. 502-510, University Books, 2001) описывают несколько типичных кормов для домашней птицы: для кур, несушек, бройлеров и бройлеров-производителей. Например, большинство кормов для цыплят содержит энергетические концентраты, такие как кукуруза, овес, пшеница, ячмень или сорго; источники белка, такие как соевая мука, мука других семян масличных культур (например, арахиса, кунжута, сафлора, подсолнечника и др.), мука из хлопковых семян, животные источники белка (мясо и костная мука, высушенная сыворотка, рыбная мука и др.), зернобобовые (например, сухие бобы, горох огородный и др.) и люцерна; и, если необходимо, витаминные и минеральные добавки (например, мясо и костная мука богаты кальцием и фосфором и, следовательно, эти минералы не требуют добавок в кормовой рацион, содержащий мясо и костную муку).
[0071] В другом варианте готовят кормовой рацион для свиней. Кормовой препарат варьируют для поросят, откормочных свиней и свиней на заключительной стадии откорма, для развития подсвинков, беременных свиноматок и кормящих свиноматок. Кормовые препараты для свиней обычно содержат хлебные злаки (например, кукурузу, ячмень, сорго, овес, соевые бобы, пшеницу и др.), сырые белки (например, рыбную муку, глютеновую муку, мясную муку, соевую муку, кормовую шквару, представляющую собой остаток, который остается после вытапливания жира в скотобойне, и др.), сырой жир (например, рыбий жир, растительные масла, животные жиры, желтый жир и др.), дополнительные аминокислоты (например, лизин, метионин или аналоги метионина и др.), витамины, минералы и другие дополнительные агенты.
[0072] В другом варианте готовят кормовой рацион для водных животных, например, находящихся на аквакультурном корме. Как оценивают специалисты по аквакультуре, кормовой препарат зависит от культивируемого организма и стадии развития организма. Типичные аквакультурные препараты содержат источники энергии, например, белок из животной кровяной муки, мясо и костную муку, муку из домашней птицы, крабовую муку, рыбную муку, креветочную муку, кальмаровую муку и криль; белок/углеводы из растений (например, альгинаты, канола, кукурузу, кукурузную клейковину, муку из семян хлопка, муку из бурых водорослей, мелассу, бобовые, арахисовую муку, рис, соевые бобы, соевый белковый концентрат, соевую муку, пшеницу и пшеничную клейковину); и масла (например, рыбий жир, растительное масло). Кроме того, кормовой препарат можно дополнять аминокислотами (например, аргинином, гистидином, изолейцином, лизином, метионином, фенилаланином, треонином, триптофаном и валином); витаминами, минералами и другими дополнительными агентами.
[0073] В другом варианте готовят рацион для жвачных животных. Питательное и энергетическое содержание многих обычных кормовых ингредиентов для жвачных животных определено и общедоступно. The National Research Council опубликовал книги, которые содержат таблицы обычных кормовых ингредиентов для жвачных животных и их соответствующее питательное и энергетическое содержание. Кроме того, проведены оценки требований по питательным веществам и энергии поддержания для крупного откормочного рогатого скота и на заключительной стадии откорма в соответствии с массой крупного рогатого скота. National Academy of Sciences, требования к питанию мясного крупного рогатого скота, таблицы приложения 1-19, 192-214, National Academy Press, (2000); требования к питанию молочного крупного рогатого скота (2001), каждый документ включен здесь во всей своей полноте. Данную информацию может использовать специалист в данной области для оценки требований по питательным веществам и энергии поддержания для крупного рогатого скота с нефункциональным рубцом, например, для телят примерно до 500 фунтов массы или крупного рогатого скота с функциональным рубцом, например, для откормочного крупного рогатого скота или молочного крупного рогатого скота.
(a) Дополнительные ингредиенты
[0074] Композицию по изобретению можно доставлять животному в виде кормового премикса или кормовой добавки. Премикс обычно добавляют к разным составам зерновых концентратов и фуражу, получая полный кормовой рацион для животных. Квалифицированному специалисту понятно, что конкретный премикс можно варьировать и варьируют в зависимости от кормового рациона и животного, которому предназначен данный кормовой рацион. Кроме комбинаций по изобретению премикс может необязательно дополнительно включать один или более из следующих компонентов: смесь природных аминокислот, аналоги природных аминокислот, витамины и их производные, ферменты, лекарства для животных, гормоны, эффективные микроорганизмы, консерванты и ароматизаторы.
[0075] В одном варианте кормовой премикс может включать один или более аминокислот. Подходящие примеры аминокислот в зависимости от препарата могут включать аланин, аргинин, аспарагин, аспартат, цистеин, глутамат, глутамин, глицин, гистидин, изолейцин, лейцин, лизин, метионин, фенилаланин, пролин, серин, треонин, триптофан, тирозин и валин. Другие аминокислоты, применимые в качестве кормовых добавок, включают в качестве неограничительного примера, N-ациламинокислоты, гидрокси-гомологичные соединения и их физиологически приемлемые соли, такие как гидрохлориды, гидросульфаты, соли аммония, калиевые соли, кальциевые соли, магниевые соли и натриевые соли аминокислот.
2
3
4
[0076] Еще в одном варианте кормовой премикс может включать витамины или производные витаминов. Примеры подходящих витаминов и их производных могут включать витамин A, витамин A пальмитат, витамин А ацетат, ββ-каротин, витамин D (например, D, D и D), витамин E, бисульфит менадиона натрия, витамин B (например, тиамин, тиамин гидрохлорид, рибофлавин, никотиновая кислота, никотинамид, пантотенат кальция, пантотенат холин, пиридоксин гидрохлорид, цианокобаламин, биотин, фолиевая кислота, пара-аминобензойная кислота), витамин K, витамин Q, витамин F и витамин C.
[0077] Еще в одном варианте кормовой премикс может включать один или более ферментов. Подходящие примеры ферментов могут включать протеазу, амилазу, липазу, целлулазу, ксиланазу, глюканазу, пектиназу, фитазу, хемицеллюлазу и другие физиологически эффективные ферменты.
[0078] Еще в одном варианте кормовой премикс может включать лекарство, одобренное для применения на животных. Неограничительные примеры подходящих лекарств для животных могут включать антибиотики, такие как антибиотики типа тетрациклина (например, хлортетрациклин и окситетрациклин), типа аминосахаров, ионофоры (например, румензин, виргиниамицин и бамбермицин) и типа макролидов.
[0079] В дополнительном варианте кормовой премикс может включать гормон. Подходящие гормоны могут включать эстроген, стилбестрол, гексестрол, тиропротеин, глюкокортикоиды, инсулин, глюкагон, гастрин, кальцитонин, соматотропин и goitradien.
[0080] В дополнительном варианте кормовой премикс может включать вещество для повышения вкусовой привлекательности кормового рациона. Подходящие примеры таких веществ могут включать природные подсластители, такие как меласса, и искусственные подсластители, такие как сахарин и аспартам.
[0081] Квалифицированному специалисту понятно, что можно использовать любое из веществ, которые можно включать в кормовой премикс, содержащий композицию по изобретению, само по себе или в комбинации с другим. Концентрация этих добавок зависит от животного, для которого предназначен премикс, и требуемого результата.
(b) Инкапсулирование
[0082] Еще в одном варианте продукт инкапсулируют. Применяемая здесь инкапсулированная композиция представляет собой композицию, которая упакована в некоторый материал. Во многих случаях инкапсулирование обеспечивает защиту от разрушения под действием света, тепла, кислорода и влаги. Инкапсулирование также может обеспечить высвобождение в специфических условиях или защитить активный ингредиент от разрушения до достижения места в пищеварительной системе, где он может абсорбироваться. В некоторых случаях инкапсулирование обеспечивают, нанося покрытие распылением или посредством сушки при распылении, экструзии, покрытия, которое обычно включает продавливание материала сердцевины в расплавленный материал для стенок через фильеру в ванну с осушающей жидкостью. После контакта с жидкостью материал покрытия затвердевает, образуя внешнее инкапсулирование. В некоторых случаях инкапсулирование можно обеспечить, получая комплекс включения или молекулярное включение с использованием, например, циклодекстрина. Еще в других вариантах инкапсулирование можно обеспечить посредством коацервации, отделения эмульсионной фазы или липосомного захвата. В другом типичном варианте продукт неинкапсулирован.
III. Способ
[0083] В другом аспекте изобретение включает непрерывный способ производства конечного мыльного продукта с концентрацией неэтерифицированных каротиноидов выше 10%. Способ включает (a) щелочное омыление природной каротиноидсодержащей живицы, где омыление происходит в присутствии гидроксида металла при тщательном перемешивании и температуре примерно от 110°C до примерно 180°C, в результате чего получают мыло, содержащее неэтерифицированные каротиноиды, (b) тонкое измельчение мыла со стадии (a) и (c) изомеризацию неэтерифицированных каротиноидов, где мелкодисперсное мыло нагревают таким образом, что больше 80% или более неэтерифицированных каротиноидов присутствуют в мыле в виде полностью транс-изомерной конфигурации, и концентрация неэтерифицированных каротиноидов в конечном продукте составляет более 10%. В некоторых вариантах мыло также сушат. Сушку можно проводить, например, во время тонкого измельчения, после тонкого измельчения, до изомеризациии, во время изомеризации, после изомеризации или комбинируя способы.
(a) Щелочное омыление
[0084] Способ включает щелочное омыление природной каротиноидсодержащей живицы, где омыление происходит в присутствии гидроксида металла при тщательном перемешивании и температуре примерно от 110°C до примерно 180°C, в результате чего получают мыльную композицию, содержащую неэтерифицированные каротиноиды. В этом способе каротиноиды, обнаруженные в природной каротиноидсодержащей живице, которые сначала связаны с жирными кислотами через сложноэфирные фрагменты, могут высвобождаться из жирнокислотного фрагмента посредством гидролиза или деэтерификации. В результате имеем неэтерифицированные каротиноиды или каротиноиды, больше не связанные с мылом в виде сложных эфиров.
i. Природная каротиноидсодержащая живица
[0085] Природную каротиноидсодержащую живицу, подлежащую омылению, подают в проточную установку непрерывного действия. В зависимости от того, как экстрагируют природную каротиноидсодержащую живицу из растения, подходящие живицы могут быть на 100% без растворителя (например, при сверхкритической экстракции) или содержать следовые количества растворителя (например, летучих органических растворителей, в том числе, но не ограничиваясь этим, бутана и гексана). В некоторых вариантах природную каротиноидсодержащую живицу закупают у коммерческого поставщика. Природная каротиноидсодержащая живица может содержать антиоксидант, когда ее закупают, или антиоксидант могут смешивать с природной каротиноидсодержащей живицей. В некоторых вариантах смешивают ПАВ, растворитель или антислеживающий агент с природной каротиноидсодержащей живицей до осуществления способа.
ii. Антиоксидант
[0086] В некоторых вариантах антиоксидант дополнительно вводят в проточную установку непрерывного действия, либо когда добавляют ингредиент, либо когда проводят предварительное смешивание с другим реагентом, таким как живица. Подходящие антиоксиданты могут включать, но не ограничены этим, антиоксиданты, перечисленные выше в параграфе 1(e).
[0087] Антиоксидант можно обеспечить в количестве примерно от 0,25% до примерно 5% от массы природной каротиноидсодержащей живицы. В некоторых вариантах антиоксидант можно обеспечить в количестве 0,25%, примерно 0,5%, примерно 0,75%, примерно 1%, примерно 2%, примерно 3%, примерно 4% или примерно 5% от массы природной каротиноидсодержащей живицы. В одном предпочтительном варианте антиоксидант обеспечивают в количестве 3% масс. от природной каротиноидсодержащей живицы. Антиоксидант можно обеспечить, предварительно смешав его с природной каротиноидсодержащей живицей, или можно обеспечить отдельно.
iii. Акцептор протонов
[0088] Омыление происходит в присутствии акцептора протонов или сильного основания, которое может представлять собой щелочной реагент. В некоторых вариантах омыление достигается в присутствии гидроксида металла. Подходящие гидроксиды металлов включают, но не ограничены этим, гидроксид натрия, гидроксид калия, гидроксид кальция и гидроксид магния. В одном предпочтительном варианте акцептор протонов представляет собой гидроксид калия.
[0089] Гидроксид металла обычно присутствует в растворе, который предпочтительно является водным раствором. В некоторых вариантах раствор гидроксида металла имеет концентрацию примерно от 10% до примерно 70% или в других вариантах раствор имеет концентрацию примерно от 20% до примерно 60%. В других вариантах гидроксид металла присутствует в виде примерно 10% раствора, примерно 20% раствора, примерно 30% раствора, примерно 40% раствора, примерно 50% раствора, примерно 60% раствора или примерно 70% раствора. В одном предпочтительном варианте гидроксид металла присутствует в виде 50% водного раствора гидроксида калия.
[0090] Соотношение природной каротиноидсодержащей живицы к гидроксиду металла можно варьировать и варьируют в альтернативных вариантах, и на него может влиять концентрация гидроксида металла и скорость введения в проточную установку непрерывного действия. В некоторых вариантах соотношение раствора гидроксида металла к природной каротиноидсодержащей живице составляет примерно от 10% до примерно 50% масс. или более предпочтительно примерно от 28 до примерно 30%. В некоторых вариантах соотношение раствора гидроксида металла к природной каротиноидсодержащей живице составляет примерно 10%, примерно 15%, примерно 20%, примерно 25%, примерно 30%, примерно 35%, примерно 40%, примерно 45% или примерно 50% масс.
iv. Температура
[0091] На стадии омыления обеспечивают нагрев для содействия взаимодействию. Вообще, температура может составлять примерно от 110°C до примерно 180°C. Тепло можно подавать, нагревая устройства, связанные с проточной установкой непрерывного действия. Можно устанавливать температуру этих устройств в диапазоне примерно от 110°C до примерно 120°C, примерно от 115°C до примерно 125°C, примерно от 120°C до примерно 130°C, примерно от 125°C до примерно 135°C, примерно от 130°C до примерно 140°C, примерно от 135°C до примерно 145°0, примерно от 140°C до примерно 150°C, примерно от 145°C до примерно 155°C, примерно от 150°C до примерно 160°C, примерно от 165°C до примерно 175°C, примерно от 170°C до примерно 180°C. В одном предпочтительном варианте нагревание обеспечивают, применяя кожух, окружающий проточную установку непрерывного действия, температуру которого устанавливают примерно 140°C.
v. Предварительное нагревание
[0092] В одном варианте раствор, содержащий акцептор протонов, природную каротиноидсодержащую живицу или то и другое, предварительно до контакта нагревают. Реагенты можно предварительно нагревать в контейнере для реагентов перед входом в проточную установку непрерывного действия или можно нагревать в проточной установке непрерывного действия до контакта двух реагентов. Нагревание можно осуществлять при помощи разнообразных источников, в том числе посредством теплопроводности или конвекции. Типичные источники тепла включают нагревательные кожухи, теплообменники и подобное.
[0093] Предпочтительно природную каротиноидсодержащую живицу предварительно нагревают и выдерживают в контейнере для реагентов перед входом в проточную установку непрерывного действия. В таких вариантах нагретая природная каротиноидсодержащая живица демонстрирует повышенную текучесть и возможность перекачки в проточную установку непрерывного действия. Природную каротиноидсодержащую живицу можно выдерживать при температуре в диапазоне примерно от 50°C до примерно 70°C. В некоторых вариантах природную каротиноидсодержащую живицу нагревают до температуры примерно 50°C, примерно 55°C, примерно 60°C, примерно 65°C или примерно 70°C. В одном предпочтительном варианте природную каротиноидсодержащую живицу нагревают до температуры примерно 60°C до введения в проточную установку непрерывного действия.
[0094] Акцептор протонов можно предварительно нагреть до контакта с природной каротиноидсодержащей живицей. Гидроксид металла можно нагреть до температуры примерно от 60°C до примерно 150°C. Более предпочтительно гидроксид металла нагревают до температуры примерно от 80°C до примерно 90°C. В альтернативных вариантах гидроксид металла нагревают до температуры примерно 75°C, примерно 80°C, примерно 85°C или примерно 90°C. В одном предпочтительном варианте гидроксид металла нагревают до температуры 90°C при помощи пластинчатого теплообменника внутри проточной установки непрерывного действия.
vi. Тщательное перемешивание
[0095] Стадия омыления включает тщательное перемешивание. Используемое здесь выражение «тщательное перемешивание», относится к перемешиванию с высоким усилием сдвига, гомогенизации, например, с использованием гомогенизатора (в том числе гомогенизатора типа ротор-статор, гомогенизатора, работающего при высоком давлении), обработке звуком или обработке ультразвуком. В одном предпочтительном варианте перемешивание обеспечивают при помощи высокосдвигового миксера внутри проточной установки непрерывного действия. В некоторых вариантах тщательное перемешивание обеспечивают в комбинации с другими видами перемешивания, например, со статическим перемешиванием.
(b) Тонкое измельчение
[0096] Способ дополнительно включает стадию, на которой неэтерифицированное каротиноидное мыло, получаемое на стадии (a), тонко измельчают. Методы тонкого измельчения известны в данной области. Например, можно осуществить стадию тонкого измельчения, распыляя получаемый на стадии (a) продукт, содержащий неэтерифицированные каротиноиды, через форсунку или вращая диск в распылительной камере. Также можно вводить в распылительную камеру поток газа навстречу распыляющему потоку или в том же направлении. Когда жидкий продукт из (a) высвобождается, мыльная композиция, содержащая неэтерифицированные каротиноиды, распределяется в виде маленьких капелек в потоке газа. Распыленные капельки можно высушить или охладить потоком газа. Газ может представлять собой атмосферный воздух или инертный газ, выбранный из аргона, азота и их комбинации. В некоторых вариантах используют поток газа с целью доставки дополнительного антислеживающего агента, который распределяется среди капелек мелкодисперсного мыла, когда они проходят через распылитель.
i. Температура
[0097] Температура, при которой происходит тонкое измельчение, может составлять примерно от 15°C до примерно 100°C. Более предпочтительно температура внутри распылителя составляет примерно от 30°C до примерно 80°C. В альтернативных вариантах температура в распылителе составляет примерно 45°C, примерно 55°C, примерно 65°C или примерно 75°C. В одном предпочтительном варианте температура в распылителе составляет примерно 50°C.
ii. Антислеживающий агент
[0098] Для повышения текучести конечного мыльного продукта можно использовать антислеживающий агент. Антислеживающий агент можно вводить в распылитель с потоком газа во время тонкого измельчения. Антислеживающий агент может быть выбран из антислеживающих агентов, известных в данной области. Подходящие примеры могут включать, но не ограничены этим, трикальцийфосфат, порошковую целлюлозу, стеарат кальция, стеарат магния, бикарбонат натрия, ферроцианид натрия, ферроцианид кальция, ферроцианид калия, костный фосфат, силикат натрия, диоксид кремния, силикат кальция, трисиликат магния, порошок талька, алюмосиликат натрия, алюмосиликат калия, алюмосиликат кальция, бентонит, алюмосиликат, стеариновую кислоту, полидиметилсилоксан, глюкозу, мальтодекстрин, гидрофобно модифицированный крахмал и подобное. В одном предпочтительном варианте антислеживающий агент представляет собой диоксид кремния. В другом предпочтительном варианте антислеживающий агент представляет собой тальк.
[0099] Количество антислеживающего агента, которое добавляют, может составлять примерно от 3% до примерно 15% или более предпочтительно примерно от 5% до примерно 10% от массы конечного мыльного продукта. В некоторых вариантах антислеживающий агент составляет примерно 0,5%, примерно 1%, примерно 1,5%, примерно 2%, примерно 2,5%, примерно 3%, примерно 4%, примерно 5%, примерно 6%, примерно 7%, примерно 8%, примерно 9%, примерно 10%, примерно 11%, примерно 12%, примерно 13%, примерно 14% или примерно 15% от массы конечного мыльного продукта.
iii. Содержание влаги
[0100] Распылитель может снижать содержание влаги в продукте, выходящем из распылителя. В некоторых вариантах содержание влаги продукта после тонкого измельчения составляет примерно от 5% до примерно 15%, более предпочтительно примерно от 10% до примерно 13%. В некоторых вариантах содержание влаги в продукте, выходящем из распылителя, составляет примерно 5%, примерно 6%, примерно 7%, примерно 8%, примерно 9%, примерно 10%, примерно 11%, примерно 12%, примерно 13%, примерно 14% или примерно 15%.
(c) Изомеризация
[0101] Проточный способ дополнительно включает изомеризацию неэтерифицированных каротиноидов, где мелкодисперсное мыло нагревают таким образом, что более 80% присутствующих неэтерифицированных каротиноидов имеют полностью транс-изомерную конфигурацию, и концентрация неэтерифицированных каротиноидов в конечном продукте выше 10%.
[0102] Изомеризация трансформирует цис-ксантофиллы в полностью транс-изомеры и обычно достигается при нагревании. Нагревание продукта можно обеспечить рядом способов, в том числе при помощи сушилки с псевдоожиженным слоем, нагретого вибрационного конвейера, печи или термопроцессора.
[0103] Температуру, при которой проводят изомеризацию, можно варьировать и варьируют в разных вариантах и в течение стадии изомеризации. Температура может составлять примерно от 40°C до примерно 120°C. В аналогичных вариантах стадию изомеризации можно проводить при температуре в диапазоне примерно от 75°C до примерно 80°C, примерно от 80°C до примерно 85°C, примерно от 85°C до примерно 90°C, примерно от 90°C до примерно 95°C, примерно от 95°C до примерно 100°C или примерно от 100°C до примерно 105°C.
[0104] Изомеризацию можно проводить в течение периода времени примерно от 1 ч до примерно 48 ч. В некоторых вариантах изомеризацию проводят в течение периода времени примерно 1 ч, примерно 2 ч, примерно 3 ч, примерно 4 ч, примерно 5 ч, примерно 6 ч, примерно 7 ч, примерно 8 ч, примерно 9 ч, примерно 10 ч, примерно 11 ч, примерно 12 ч, примерно 13 ч, примерно 14 ч, примерно 15 ч, примерно 16 ч, примерно 17 ч, примерно 18 ч, примерно 19 ч, примерно 20 ч, примерно 21 ч, примерно 22 ч, примерно 23 ч или примерно 24 ч. В одном варианте, изомеризация происходит при температуре примерно от 75°C до примерно 95°C за период примерно от 1 ч до примерно 3 ч.
[0105] В некоторых вариантах изомеризация может происходить за несколько температурных стадий. Изомеризацию можно проводить в первом температурном диапазоне примерно от 40°C до примерно 60°C. Не связываясь какой-либо теорией, считают, что термический контакт в первом температурном диапазоне может снизить содержание влаги примерно на 2-5%. Первую температуру можно поддерживать в течение периода примерно от 15 мин до примерно 2 ч. Второй температурный диапазон используют для увеличения содержания полностью транс-изомера. Второй температурный диапазон может составлять примерно от 70°C до примерно 90°C, и вторую температуру можно поддерживать в течение периода примерно от 30 мин до примерно 3 ч. В одном предпочтительном варианте изомеризацию проводят при первой температуре примерно 50°C в течение примерно 30 мин и при второй температуре 80°C в течение примерно 1,5 ч. В альтернативном варианте температуру повышают в течение реакции от меньшей температуры в диапазоне примерно от 40°C до примерно 60°C до более высокой температуры в диапазоне примерно от 70°C до примерно 90°C.
[0106] В некоторых вариантах изомеризация происходит в инертной атмосфере. Инертную атмосферу можно выбрать (в качестве неограничительного примера) из аргона, азота или их комбинации. В одном предпочтительном варианте изомеризацию проводят в присутствии газообразного азота.
[0107] В некоторых вариантах более 70% неэтерифицированных каротиноидов, присутствующих после тонкого измельчения, являются полностью транс-изомерами. В других вариантах более 75%, или 80%, или 85%, или 90% каротиноидов трансформируются в полностью транс-изомеры. Стадия изомеризации может повышать общее содержание полностью транс-каротиноидов в конечном мыльном продукте. Изомеризация может повышать содержание полностью транс-каротиноидов конечного мыльного продукта на величину более 5%, или более 10%, или более 15%. В одном варианте общее содержание полностью транс-каротиноидов конечного мыльного продукта составляет более 10%.
[0108] После изомеризации конечный мыльный продукт можно перенести в контейнер для продукта. Конечный мыльный продукт обладает свойствами, описанный в параграфе I. В некоторых вариантах после изомеризации можно добавлять к продукту дополнительные агенты, такие как антислеживающие агенты, в дополнение к агентам, добавляемым во время стадии тонкого измельчения.
(d) Проточная установка непрерывного действия
[0109] Процесс проводят в потоке непрерывным способом в проточной установке непрерывного действия. Выражение "проточная непрерывного действия" означает, что взаимодействие происходит при движении внутри реактора или что исходные материалы и условия непрерывно добавляют и отводят после производства. Схема проточной установки непрерывного действия и связанного оборудования показана на ФИГ. 1. Притом что предпочтительным является непрерывный способ, можно также осуществлять способ периодическим образом. То есть процесс можно остановить и снова запустить в другое время или в другом физическом месте.
[0110] Что касается ФИГ. 1, первый раствор гидроксида металла в первом контейнере для реагентов 102 можно провести через первый трубопровод 106 к первому статическому миксеру 112. Второй раствор, содержащий природную каротиноидсодержащую живицу, во втором контейнере для реагентов 104 можно перенести в первый статический миксер 112 через второй трубопровод 108. В одном варианте контейнер для реагентов 104 нагревают при помощи теплообменного устройства 105. Теплообменное устройство можно выбрать, без ограничения, из электрических нагревателей, индукционных нагревателей, газовых нагревателей, масляных нагревателей, керамических нагревателей и подобных, или более конкретно из пластинчатых теплообменных устройств и трубчатых теплообменных устройств. В одном варианте используют теплообменник 110 для нагревания гидроксида металла, когда он проходит через проточную установку непрерывного действия.
[0111] Трубопроводы 106 и 108 можно регулировать посредством перекачивающих насосов для подачи реагентов из контейнеров для реагентов, расположенных по ходу трубопроводов, в первый статический миксер 112. Трубопроводы можно контролировать при помощи нагнетательных насосов, которые нагнетают реагенты, хранящиеся в контейнерах для реагентов, до предварительно определенных выбранных давлений для перемещения реагентов из контейнеров с требуемыми скоростями переноса, и любой их комбинации. Неограничительные примеры насосов, подходящих для применения в качестве перекачивающих насосов, включают шестеренчатые насосы, мембранные насосы, центробежные насосы, поршневые насосы и шланговые насосы. В некоторых вариантах трубопроводы представляют шланговые насосы и отвечают (кроме размера различных частей проточной установки непрерывного действия) за скорость потока.
[0112] Скорость потока для непрерывного способа можно варьировать в разных вариантах. В частности скорость потока может быть выше или ниже в зависимости от требований производства и других факторов, известных квалифицированному специалисту. В некоторых вариантах скорость потока может составлять от 100 кг/ч до 300 кг/ч, или от 50 кг/ч до 250 кг/ч, или от 50 кг/ч до 300 кг/ч. В некоторых вариантах скорость потока может составлять примерно от 50 кг/ч до примерно 100 кг/ч, примерно от 75 кг/ч до примерно 125 кг/ч, примерно от 100 кг/ч до примерно 150 кг/ч, примерно от 125 кг/ч до примерно 175 кг/ч, примерно от 150 кг/ч до примерно 200 кг/ч, примерно от 175 кг/ч до примерно 225 кг/ч, примерно от 200 кг/ч до примерно 250 кг/ч, примерно от 225 кг/ч до примерно 275 кг/ч, примерно от 250 кг/ч до примерно 300 кг/ч. В других вариантах скорость потока может составлять примерно от 100 кг/ч до примерно 200 кг/ч, примерно от 150 кг/ч до примерно 250 кг/ч, примерно от 200 кг/ч до примерно 300 кг/ч. В предпочтительных вариантах скорость потока составляет примерно от 150 кг/ч до примерно 250 кг/ч.
[0113] Первый статический миксер 112 принимает реагенты непрерывно. Первый статический миксер обычно имеет трубчатую форму и может быть прямым, изогнутым или представлять комбинацию прямых и изогнутых трубок. Статический миксер содержит разнообразные элементы внутри трубок, дающие возможность течения образцов и обеспечивающие перемешивание реагентов, когда они проходят через трубки. Эти элементы могут обеспечивать перемешивание, например, создавая ламинарный поток или, например, создавая радиальное перемешивание. Первый статический миксер имеет диаметр и длину, которые в сопряжении со скоростью потока обеспечивают конкретное время пребывания реагентов.
[0114] В некоторых вариантах первый статический миксер имеет диаметр примерно от 20 мм до примерно 150 мм. В некоторых вариантах первый статический миксер имеет диаметр примерно от 20 мм до примерно 30 мм, примерно от 25 мм до примерно 35 мм, примерно от 30 мм до примерно 40 мм, примерно от 35 мм до примерно 45 мм, примерно от 40 мм до примерно 50 мм, примерно от 45 мм до примерно 55 мм, примерно от 50 мм до примерно 60 мм, примерно от 55 мм до примерно 65 мм, примерно от 60 мм до примерно 70 мм, примерно от 65 мм до примерно 75 мм, примерно от 70 мм до примерно 80 мм, примерно от 75 мм до примерно 85 мм, примерно от 80 мм до примерно 90 мм, примерно от 95 мм до примерно 105 мм, примерно от 100 мм до примерно 110 мм, примерно от 105 мм до примерно 115 мм, примерно от 110 мм до примерно 120 мм, примерно от 115 мм до примерно 125 мм, примерно от 120 мм до примерно 130 мм, примерно от 125 мм до примерно 135 мм, примерно от 130 мм до примерно 140 мм, примерно от 135 мм до примерно 145 мм, примерно от 140 мм до примерно 150 мм. В одном предпочтительном варианте диаметр первого статического миксера равен 50 мм.
[0115] В одном варианте первый статический миксер 112 соединяют с высокосдвиговым миксером 116, который обеспечивает тщательное перемешивание в дополнение к статическому миксеру. В одном варианте применяют цилиндрический статор с четырьмя прорезями для лезвий. Размер статора можно варьировать и варьируют в зависимости от других параметров. В различных вариантах можно варьировать количество оборотов лезвий в минуту (об/мин). В некоторых вариантах скорость вращения составляет от 2000 об/мин до примерно 3500 об/мин. В некоторых вариантах скорость составляет 2000 об/мин, 2100 об/мин, 2200 об/мин, 2300 об/мин, 2400 об/мин, 2500 об/мин, 2600 об/мин, 2700 об/мин, 2800 об/мин, 2900 об/мин, 3000 об/мин, 3100 об/мин, 3200 об/мин, 3300 об/мин, 3400 об/мин или 3500 об/мин.
[0116] Высокосдвиговой миксер 116 можно соединить непосредственно или в качестве дополнительного трубопровода со вторым статическим миксером 118. Где имеется второй статический миксер, там этот второй статический миксер 118 может иметь форму трубы и быть прямым, изогнутым или представлять комбинацию прямых и изогнутых труб. В некоторых вариантах второй статический миксер имеет диаметр примерно от 20 мм до примерно 200 мм. В некоторых вариантах первый статический миксер имеет диаметр примерно от 20 мм до примерно 30 мм, примерно от 25 мм до примерно 35 мм, примерно от 30 мм до примерно 40 мм, примерно от 35 мм до примерно 45 мм, примерно от 40 мм до примерно 50 мм, примерно от 45 мм до примерно 55 мм, примерно от 50 мм до примерно 60 мм, примерно от 55 мм до примерно 65 мм, примерно от 60 мм до примерно 70 мм, примерно от 65 мм до примерно 75 мм, примерно от 70 мм до примерно 80 мм, примерно от 75 мм до примерно 85 мм, примерно от 80 мм до примерно 90 мм, примерно от 95 мм до примерно 105 мм, примерно от 100 мм до примерно 110 мм, примерно от 105 мм до примерно 115 мм, примерно от 110 мм до примерно 120 мм, примерно от 115 мм до примерно 125 мм, примерно от 120 мм до примерно 130 мм, примерно от 125 мм до примерно 135 мм, примерно от 130 мм до примерно 140 мм, примерно от 135 мм до примерно 145 мм, примерно от 140 мм до примерно 150 мм. В одном предпочтительном варианте диаметр первого статического миксера составляет 125 мм.
[0117] Во время статического перемешивания также можно регулировать температуру, производя перемешивание посредством теплопередающих устройств. В некоторых вариантах первый и второй статические миксеры закрывают кожухом с теплообменником для поддержания заданной температуры проходящей жидкости.
[0118] Время пребывания от введения реагентов до окончания второго статического миксера может составлять примерно от 30 с до примерно 5 мин и частично зависит от температуры. Вообще говоря, для более высоких температур требуется меньшее время пребывания. Аналогично, для меньших температур требуется большее время пребывания. В некоторых вариантах время пребывания составляет примерно 30 с, 45 с, примерно 1 мин, примерно 1,5 мин, примерно 2 мин, примерно 2,5 мин, примерно 3 мин, примерно 3,5 мин, примерно 4 мин, примерно 4,5 мин или примерно 5 мин. В одном варианте время пребывания составляет примерно 95 с.
[0119] Второй статический миксер соединяют либо непосредственно, либо через дополнительный трубопровод с поршневым проточным реактором 120. Поршневой проточный реактор представляет собой трубчатый реактор, который может быть разделен на отдельные отсеки, каждый из которых включает меньший трубчатый реактор. В некоторых вариантах трубчатый реактор содержит четыре трубчатых реактора. Внутри поршневого проточного реактора регулируют температуру. В одном варианте поршневой проточный реактор термостатируют при помощи кожуха до температуры выше 100°C. В одном варианте поршневой проточный реактор термостатируют при помощи кожуха до температуры в диапазоне примерно от 130°C до примерно 150°C. В одном предпочтительном варианте температура кожуха составляет примерно 140°C. Поршневой проточный реактор предпочтительно ориентирован вверх таким образом, что трубчатый аппарат дольше направляет поток реагентов перпендикулярно земле, чем они ориентированы параллельно земле. Время пребывания в поршневом проточном реакторе можно варьировать и варьируют предпочтительно примерно от 5 мин до примерно 10 мин. В конкретных вариантах время пребывания в поршневом проточном реакторе составляет 5 мин, 6 мин, 7 мин, 8 мин, 9 мин или 10 мин. В одном предпочтительном варианте время пребывания составляет 8 мин.
[0120] Давление в проточной установке непрерывного действия можно регулировать посредством барометрического чувствительного датчика и одного или более клапанов 124, установленных вдоль проточной установки непрерывного действия. Клапаны закрыты, но могут открываться на среду, окружающую проточную установку непрерывного действия. Если давление достигает порогового уровня, клапаны можно открыть и выпустить газ в среду, окружающую проточную установку непрерывного действия. В предпочтительных вариантах клапан расположен перед распылителем 122.
[0121] Распылитель 122 может содержать вращающийся круговой диск для введения продукта из поршневого проточного реактора. В результате вращения диска может происходить разбрызгивание жидкости. Рядом с вращающимся диском может присутствовать одна или более газодувок, чтобы газ и разбрызгиваемая жидкость контактировали при их движении через распылительную камеру. В этом месте может происходить сушка и/или отверждение жидкого продукта, содержащего неэтерифицированные каротиноиды. В некоторых вариантах одна или более газодувок могут содержать поток антислеживающего агента из контейнера 128 для антислеживающего агента. Кроме того, антислеживающий агент можно вдувать в камеру таким образом, чтобы он контактировал с разбрызгиваемым продуктом с образованием высушенного продукта, содержащего антислеживающий агент, когда он проходит через проточную установку непрерывного действия.
[0122] Жидкий продукт можно вводить в распылитель со скоростью подачи в диапазоне примерно от 100 кг/ч до примерно 300 кг/ч, или примерно от 50 кг/ч до примерно 250 кг/ч, или примерно от 150 кг/ч до 250 кг/ч. В некоторых вариантах скорость подачи может составлять примерно от 50 кг/ч до примерно 100 кг/ч, примерно от 75 кг/ч до примерно 125 кг/ч, примерно от 100 кг/ч до примерно 150 кг/ч, примерно от 125 кг/ч до примерно 175 кг/ч, примерно от 150 кг/ч до примерно 200 кг/ч, примерно от 175 кг/ч до примерно 225 кг/ч, примерно от 200 кг/ч до примерно 250 кг/ч, примерно от 225 кг/ч до примерно 275 кг/ч, примерно от 250 кг/ч до примерно 300 кг/ч. В других вариантах скорость потока может составлять примерно от 100 кг/ч до примерно 200 кг/ч, примерно от 150 кг/ч до примерно 250 кг/ч, примерно от 200 кг/ч до примерно 300 кг/ч. В предпочтительном варианте скорость подачи составляет примерно 150 кг/ч.
[0123] В некоторых вариантах подача при помощи вращающегося диска на распылитель происходит при скорости примерно от 10000 об/мин до примерно 30000 об/мин, или более предпочтительно примерно от 20000 об/мин до примерно 25000 об/мин. В конкретных вариантах подача при помощи вращающегося диска происходит при скорости примерно 20000 об/мин, примерно 21000 об/мин, примерно 22000 об/мин, примерно 23000 об/мин, примерно 24000 об/мин или примерно 25000 об/мин.
[0124] Время пребывания в распылителе можно варьировать и варьируют среди различных вариантов. В одном варианте среднее время пребывания составляет примерно от 10 до примерно 14 с. В других вариантах среднее время пребывания составляет примерно 10 с, примерно 11 с, примерно 12 с, примерно 13 с и примерно 14 с.
[0125] Размеры камеры распылителя могут составлять от диаметра примерно 2000 мм до примерно 2500 мм. В альтернативных вариантах размеры камеры распылителя могут составлять примерно от 2200 мм до примерно 2400 мм. В одном предпочтительном варианте размеры камеры распылителя составляют примерно 2300 мм.
3
3
3
3
3
[0126] Газы, вводимые в распылитель, вводят при конкретной скорости потока. Эта скорость потока может составлять примерно от 2500 м/ч до примерно 3500 м/ч. В некоторых вариантах скорость потока газов, вводимых в распылитель, составляет примерно от 2900 м/ч до 3100 м/ч. В предпочтительном варианте скорость потока составляет примерно 3000 м/ч.
[0127] Распылитель соединяют либо непосредственно, либо через систему труб с изомеризационным аппаратом 126. Реагенты из распылителя 122 подают в изомеризационный аппарат 126. Изомеризационный аппарат может представлять собой закрытый резервуар с серией вращающихся круговых лотков внутри резервуара. Реагенты подают на верхний вращающийся лоток, где дополнительные вращающиеся лотки располагаются непосредственно ниже верхнего вращающегося лотка. После каждого поворота продукты стекают на нижний лоток и выравниваются стационарными перегородками, когда лоток поворачивается. Закрытый резервуар можно нагревать до определенной температуры, и, кроме того, он может включать текущий газ.
[0128] Из изомеризационного аппарата реагенты можно подавать в контейнер для продукта 130. Контейнер для продукта может иметь размер и конфигурацию, подходящие для приема продукта из проточной установки непрерывного действия. В некоторых вариантах контейнер для продукта соединяют с контейнером 128 для антислеживающего агента, который необязательно может содержать такой же антислеживающий агент как распылитель 122. Антислеживающий агент можно вдувать в контейнер для продукта 130 при помощи потока воздуха для повышения процентного содержания антислеживающего агента.
[0129] Различные компоненты проточной установки непрерывного действия могут быть изготовлены из различных подходящих материалов. Подходящие примеры материалов могут включать, но не ограничены этим, металл (в том числе нержавеющую сталь, латунь), стекло (в том числе, но не ограничиваясь этим, боросиликатные стекла) и полимеры (в том числе, но не ограничиваясь этим, фторированный полиэтилен (FPE), фторированный этилен-полипропилен (FEP), полиэтилен высокой плотности (HDPE), полихлортрифторэтилен (PCT), полиэфирэфиркетон (PEEK), политетрафторэтилен (PTFE), поливинилфторид (PVF), перфторалкокси (PFA)-полимеры и их комбинации или сополимеры).
(e) Необязательный способ для жидкого препарата
[0130] В одном альтернативном варианте способ дает жидкий препарат. В таких вариантах не проводят стадию тонкого измельчения (b), а продукт, получаемый на стадии (a), изомеризуют, как описано в (c) и затем гасят в резервуаре с водой. Проточный реактор непрерывного действия, который описан в параграфе (d) и показан на ФИГ. 1, можно модифицировать таким образом, чтобы не присутствовал распылитель, и изомеризованный продукт направляют в резервуар с водой, где изомеризованный продукт разводят в воде.
[0131] Соотношение изомеризованного продукта к воде можно варьировать и варьируют. В некоторых вариантах раствор имеет концентрацию примерно от 0,25% раствора до примерно 10% раствора в воде. В других вариантах раствор имеет концентрацию примерно от 0,5% раствора в воде до примерно 5% раствора в воде. В одном предпочтительном варианте раствор представляет собой примерно от 1% раствора до примерно 2% раствора в воде.
[0132] В одном варианте изомеризация неэтерифицированных каротиноидов, где разбавленное мыло нагревают таким образом, что более 80% присутствующих неэтерифицированных каротиноидов имеют полностью транс-изомерную конфигурацию, дает концентрацию неэтерифицированных каротиноидов в конечном мыльном продукте выше 10%.
[0133] Еще в одном альтернативном варианте способ обеспечивает жидкий препарат. В таких вариантах не проводят стадию тонкого измельчения (b), а продукт, получаемый на стадии (a), гасят в резервуаре с водой и затем изомеризуют, как описано в параграфе (c).
IV. Способы применения композиции по изобретению
[0134] Композицию по изобретению можно применять для повышения содержания каротиноидов в различных изделиях, включая продукты для животных. Такие способы включают способы повышения эффективности окрашивания. Композицию по изобретению также можно применять для улучшения здоровья и производительности животных. Кроме того, композицию по изобретению можно применять с целью содействия сохранности кормовых композиций. Ниже каждый из этих способов обсуждается более подробно.
(a) Способы повышения содержания каротиноидов в изделии
[0135] Композицию по изобретению можно применять для повышения содержания каротиноидов в изделии. Например, можно применять композицию по изобретению для повышения содержания каротиноидов в корме животных или добавке для животных. В таких вариантах способ включает комбинирование композиции по изобретению с кормом для животных или добавками для животных. Например, корм или добавка для животных может содержать примерно 100, 95, 90, 85, 80, 75, 70, 65, 60, 55, 50, 45, 40, 35, 30, 25, 20, 15, 10 или 5% композиции.
[0136] В некоторых вариантах композицию по изобретению можно давать животному для повышения содержания каротиноидов в некоторых продуктах для животных. В таких вариантах можно давать животному композицию по изобретению саму по себе или как часть корма для животных или добавки для животных. Например, домашней птице (или другим яйценесущим птицам) можно давать композицию по изобретению, саму по себе или как часть корма или добавки для домашней птицы, с целью повышения содержания каротиноидов в яичном желтке или содержания каротиноидов в коже, ножках или других органах бройлерных цыплят.
[0137] Количество композиции каротиноидов для введения животному с целью повышения содержания каротиноидов в животном продукте можно определять, применяя способы, хорошо известные в данной области. Вообще говоря, количество может составлять примерно от 1 мг ксантофиллов/кг полного корма до примерно 100 мг ксантофиллов/кг полного корма. В некоторых вариантах количество композиции каротиноидов для введения может составлять примерно 1, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100 или более 100 мг ксантофиллов/кг корма. В других вариантах количество может составлять примерно 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 мг ксантофиллов/кг полного корма.
[0138] Композицию по изобретению можно применять с целью повышения окрашивания продукта, главным образом, пищевого продукта для потребления человеком. Например, композицию по изобретению можно применять для обеспечения окрашивания яичного желтка (разных птиц), мышечной ткани некоторых животных, потребляемых человеком (например, кожи бройлеров, или мышечной ткани или мяса некоторых аквакультур, в том числе рыб), или других органов животных, потребляемых человеком. Преимущественно равное количество композиции по изобретению имеет большую эффективность окрашивания, чем другие мыльные композиции каротиноидов. Например, по сравнению с другими мыльными композициями каротиноидов композиция по изобретению может иметь эффективность окрашивания, увеличенную более чем на 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190 или 200%. В некоторых вариантах композиция может иметь эффективность окрашивания, увеличенную более чем на 100, 105, 110, 115, 120, 125 или 130%, по сравнению с другими мыльными композициями каротиноидов.
[0139] В одном варианте композицию по изобретению добавляют к корму домашней птицы. Специалисту в данной области понятно, что скармливаемое в день количество зависит от размера и требуемого окрашивания. В некоторых вариантах корм для несушек включает примерно 2 м.д. композиции по изобретению, примерно 3 м.д., примерно 4 м.д., примерно 5 м.д., примерно 6 м.д., примерно 7 м.д., или примерно 8 м.д. Еще в одном варианте корм для бройлеров содержит примерно 20 м.д., примерно 25 м.д., примерно 30 м.д., примерно 35 м.д., примерно 40 м.д., примерно 45 м.д. или примерно 50 м.д. композиции по изобретению.
(b) Способы улучшения здоровья и производительности животных
[0140] Другой аспект изобретения касается способов улучшения здоровья и производительности животного посредством обеспечения представляющего интерес животного композицией по изобретению. Специалистам в данной области понятно, что количество композиции, даваемое конкретному животному, можно варьировать и варьируют в зависимости от вида, пола и возраста животного. Кроме того, введение композиции по изобретению может оказывать воздействие на различные медицинские параметры и параметры производительности.
[0141] В некоторых вариантах можно обеспечивать композицией по изобретению домашнюю птицу, например, кур-несушек, бройлерных цыплят, индеек и уток. Примеры подходящих медицинских параметров могут включать, но не ограничены этим, массу тела, оценку упитанности, температуру тела, прием пищи, антиоксидантный статус, маркеры оксидативного стресса, уровни белка сыворотки, уровни минералов сыворотки, функцию иммунной системы (иммунная стимуляция), здоровье и многообразие микрофлоры кишечника, фекальные бактерии, здоровье костей и суставов и т.д. Неограничительные примеры подходящих параметров производительности могут включать привес, соотношение корм : привес, усвояемость питательных веществ, коэффициент кормоотдачи, яйценоскость, качество яиц, качество яичной скорлупы, цвет желтка, цвет кожи, качество туши, выход туши, сорт мяса, выход мяса, соотношение белок-жир в мясе и подобное.
[0142] В некоторых вариантах можно обеспечить композицией по изобретению жвачных животных молочных пород, таких как крупный рогатый скот молочных пород, молочные овцы и молочные козы. В предпочтительном варианте жвачные животные молочных пород представляют собой молочных коров. Неограничительные примеры подходящих медицинских параметров, которые будут оцениваться, могут включать массу тела, оценку упитанности, температуру тела, прием пищи, антиоксидантный статус, маркеры оксидативного стресса, уровни белка сыворотки, уровни минералов сыворотки, функцию иммунной системы, здоровье и многообразие микрофлоры рубца, фекальные бактерии и т.д. Подходящие параметры производительности могут включать, но не ограничены этим, надои молока, молочную продуктивность, молочный жир, молочный белок, подсчет соматических клеток, FCM, ECM привес, соотношение корм : привес, усвояемость питательных веществ, коэффициент кормоотдачи, частоту наступления беременности, число потомков, массу потомков и т.д.
[0143] В других вариантах композицию по изобретению можно давать в пищу жвачным животным немолочных пород, таким как мясной крупный рогатый скот, телята и ягнята. Примеры подходящих медицинских параметров могут включать, но не ограничены этим, массу тела, оценку упитанности, температуру тела, прием пищи, антиоксидантный статус, маркеры оксидативного стресса, уровни белка сыворотки, уровни минералов сыворотки, функцию иммунной системы, здоровье и многообразие микрофлоры рубца, фекальные бактерии, здоровье костей и суставов и т.д. Неограничительные примеры подходящих параметров производительности могут включать привес, соотношение корм : привес, усвояемость питательных веществ, коэффициент кормоотдачи, качество туши, выход туши, сорт мяса, выход мяса, соотношение белок-жир в мясе и подобное.
[0144] Еще в других вариантах можно обеспечить композицией по изобретению свиней; т.е. свиноматок, поросят на начальных стадиях развития, откормочных свиней, свиней на заключительной стадии откорма и хряков. Неограничительные примеры медицинских параметров могут включать массу тела, оценку упитанности, температуру тела, прием пищи, антиоксидантный статус, маркеры оксидативного стресса, уровни белка сыворотки, уровни минералов сыворотки, функцию иммунной системы, здоровье и многообразие микрофлоры кишечника, фекальные бактерии, здоровье костей и суставов и подобное. Примеры подходящих параметров производительности могут включать, но не ограничены этим, привес, соотношение корм : привес, усвояемость питательных веществ, коэффициент кормоотдачи, интервал между концом лактации и течкой, коэффициент фертильности, число потомков, массу потомков, процент опороса, количество дней до отъема, качество туши, выход туши, сорт мяса, выход мяса, соотношение белок-жир в мясе и подобное.
[0145] В дополнительных вариантах можно обеспечить композицией по изобретению лошадей. Неограничительные примеры медицинских параметров могут включать массу тела, оценку упитанности, температуру тела, прием пищи, антиоксидантный статус, маркеры оксидативного стресса, уровни белка сыворотки, уровни минералов сыворотки, функцию иммунной системы, здоровье и многообразие микрофлоры кишечника, фекальные бактерии, здоровье костей и суставов и подобное. Неограничительные примеры подходящих параметров производительности могут включать привес, соотношение корм : привес, усвояемость питательных веществ, коэффициент кормоотдачи, длину шага, длину скачка, скорость и подобное.
[0146] В дополнительных вариантах можно обеспечить композицией по изобретению аквакультурных животных, таких как рыба, креветки, устрицы, мидии и подобные. Примеры подходящих медицинских параметров могут включать, но не ограничены этим, массу тела, оценку упитанности, прием пищи, антиоксидантный статус, маркеры оксидативного стресса, уровни белка сыворотки, уровни минералов сыворотки, функцию иммунной системы, здоровье и многообразие микрофлоры кишечника, фекальные бактерии, и т.д. Неограничительные примеры подходящих параметров производительности могут включать привес, соотношение корм : привес, усвояемость питательных веществ, коэффициент кормоотдачи, качество раковины, качество туши, выход туши, сорт мяса, выход мяса, соотношение белок-жир в мясе и подобное.
[0147] Еще в других вариантах композицию по изобретению можно давать в пищу домашним животным, таким как коты, собаки и подобные. Примеры подходящих медицинских параметров могут включать, но не ограничены этим, массу тела, оценку упитанности, прием пищи, антиоксидантный статус, маркеры оксидативного стресса, уровни белка сыворотки, уровни минералов сыворотки, функцию иммунной системы, температуру тела, здоровье и многообразие микрофлоры кишечника, фекальные бактерии, здоровье костей и суставов и т.д. Неограничительные примеры подходящих параметров производительности могут включать привес, соотношение корм : привес, усвояемость питательных веществ, коэффициент кормоотдачи, мобильность, ловкость, качество жизни и подобное.
(c) Способы консервации
[0148] В других вариантах изобретение включает способ консервации продукта. В частности способ включает добавление композиции по изобретению к продукту, требующему консервации. Это можно выполнить, добавляя композицию по изобретению непосредственно к продукту, или скармливая композицию по изобретению животному-источнику получения продукта. Например, в одном варианте, способ по изобретению включает консервирование корма для животных или добавки. Способ включает объединение корма для животных или добавки с композицией по изобретению. В другом варианте способ включает контакт композиции по изобретению с продуктом, требующим консервации.
[0149] Подходящие количества включают количества, которые подробно описаны выше в параграфе IV(a).
ПРИМЕРЫ:
[0150] Следующие примеры иллюстрируют различные варианты изобретения.
Пример 1: Влияние на цвет яичного желтка несушек.
[0151] Испытание проводят на курах-несушках, находящихся в клетках, сравнивая пигментирующую эффективность Xamacol 40 ("X-40") по сравнению с композицией по настоящему изобретению - Xamacol ColorTek ("XCT") по цвету яичного желтка несушек.
[0152] Испытание продолжается 7 недель, включая 3 недели ксантофилл-истощающего кормления по «белой» базисной диете, затем 4 недели кормления экспериментальными кормами. Животных (168 кур-несушек Isa Brown, 48-недельного возраста в начале испытания) размещают с 18-недельного возраста в испытательную комнату с такими же соседями по клетке. Экспериментальные корма с пигментами дают через 3 недели ксантофильного истощения у птиц при кормлении по "белой" базисной диете. Обеспечивают свободный доступ к корму и воде. Базисные диеты составляют таким образом, чтобы они соответствовали или превышали требования к корму для кур-несушек. Отдельную базисную диету составляют в соответствии с ожидаемым потреблением корма. Каждую методику кормления готовят, добавляя соответствующее количество продукта (при многостадийной программе смешивания) к 100 кг корма.
[0153] Всего имеется 7 методик кормления (в том числе "белый" контроль). Методики кормления являются результатом добавления к базисной диете экспериментального продукта при соответствующей дозе (продукта X-40 или XCT, обеспечивая 4, 6 или 9 мг ксантофиллов/кг полного корма), также включают в план отрицательный контроль без добавления пигмента.
[0154] Переменные характеристики контролируют и регистрируют, дублируя, каждую вторую неделю при кормлении экспериментальными кормами (ежедневно массу тела, потребление корма, скорость яйцекладки, массу яиц, процент разбитых, яйца с мягкой скорлупой и грязные). Цвет яичного желтка оценивают в конце фазы ксантофильного истощения (-1d и 0d) еженедельно в течение трех недель (7d, 14d, 21d) и ежедневно в течение 4-ой недели (с 24d по 28d) за исключением двух дней, когда яйца оставляют для анализа на ксантофиллы (22d и 23d). Все яйца, отложенные за каждый отдельный день, берут на оценку цвета яичного желтка или анализ ксантофиллов.
[0155] Результаты настоящего испытания являются хорошими, согласно стандартам Isa Brown (2010), при 4,7% улучшении в скорости яйцекладки (90,6% относительно 86,6%), на 1,6% меньшей средней массой яйца (63,6 г относительно 64,6 г), 6,0% улучшении коэффициента кормоотдачи (FCR) (1,884 относительно 2,005) и 3% улучшении продуктивности (57,6 г относительно 55,9 г). Контраст для эффекта пигмента (X-40 относительно XCT) является существенным для массы яйца (различия в 2,3%: 62,92 г относительно 64,37 г).
*
*
*
*
*
*
*
*
[0156] Анализ яиц с 4-ой недели демонстрирует существенный эффект пигмента и дозы при существенных взаимосвязях пигмент х доза (указывая, что отклонения от линейных регрессий существенно различаются) для переменных CIE (Commission Internationale de L'Eclairage) a, отношения CIE a/b и цветового веера Roche Yolk (RYCF). Для каждого уровня доз пигмент XCT имеет лучшие значения, чем пигмент X-40, для переменных CIE b, отношения CIE a/b и RYCF. Яркость менее чувствительна к различиям между пигментами или дозой. Пигмент XCT имеет на 1,6 пунктов более высокое значение желтизны в среднем (39,84 относительно 38,28) и на 2 пункта более высокое значение точки пересечения. Для CIE a/b и RYCF переменных пигмент XCT 100 имеет эффективность, соответствующую 117% эффективности пигмента X-40. Результаты нелинейных регрессий, включающие значения для 0 м.д., предлагают аналогичные выводы: пигмент XCT имеет эффективность, соответствующую 122% эффективности пигмента X-40 для значения желтизны и 118-119% эффективности для соотношения краснота/желтизна и RYCF.
[0157] На массу яичного желтка существенно не влияет ни пигмент, ни доза, тогда как содержание ксантофиллов в яичном желтке испытывает существенное влияние со стороны обоих факторов при существенных или почти существенных взаимосвязях, если выражено как м.д. или общее содержание, соответственно. Взаимосвязь означает, что увеличение содержания ксантофиллов в яичном желтке с увеличением дозы выше для пигмента XCT: пигмент XCT имеет эффективность, соответствующую 137-133% эффективности пигмента X-40. Скорость отложения, скорректированная на скорость яйцекладки, испытывает существенное воздействие пигмента, но не дозы (взаимосвязь несущественна): пигмент XCT имеет скорость отложения в среднем на 0,63 пунктов выше, чем пигмент X-40 (3,28% относительно 2,65%), это означает, что пигмент XCT имеет эффективность, соответствующую 124% эффективности пигмента X-40. Пигмент XCT имеет эффективность, соответствующую 119% эффективности пигмента X-40 по окрашиванию яичного желтка, 135% эффективности для содержания ксантофиллов яйца и 124% эффективности для скорости отложения ксантофиллов.
Пример 2: Влияние на цвет яичного желтка несушек
[0158] Испытание проводят на курах-несушках, находящихся в клетках, сравнивая пигментирующую эффективность различных желтых пигментов (X-40, XCT и конкурентный продукт 3 ("C3")) по цвету яичного желтка несушек.
[0159] Испытание продолжается 9 недель, включая 5 недель ксантофилл-истощающего кормления по «белой» базисной диете, затем 4 недели кормления экспериментальными кормами. Животных (305 кур-несушек HyLine Brown 23-недельного возраста в начале испытания) размещают с 18-недельного возраста в испытательную комнату с такими же соседями по клетке. Экспериментальные корма с пигментами дают через 5 недель ксантофильного истощения у птиц при кормлении по "белой" базисной диете. Обеспечивают свободный доступ к корму и воде. Базисные диеты составляют таким образом, чтобы они соответствовали или превышали требования к корму для кур-несушек (Hy-Line, 2009). Отдельную базисную диету составляют в соответствии с ожидаемым потреблением корма. Каждую методику кормления готовят, добавляя соответствующее количество продукта (при многостадийной программе смешивания) к 64 или 74 кг корма.
[0160] Всего имеется 16 методик кормления. Методики кормления являются результатом добавления к базисной диете экспериментальных продуктов при соответствующей дозе (X-40 или XCT, обеспечивая 2,5, 5, 10, 20, 40 и 80 мг ксантофиллов/кг полного корма, или C3, обеспечивая 2,5, 5, 10 и 20 мг ксантофиллов/кг полного корма).
[0161] Переменные характеристики контролируют и регистрируют, дублируя, каждую вторую неделю при кормлении экспериментальными кормами (ежедневно массу тела, потребление корма, скорость яйцекладки, массу яиц, процент разбитых, яйца с мягкой скорлупой и грязные). Цвет яичного желтка оценивают в конце фазы ксантофильного истощения (0d), еженедельно в течение трех недель (7d, 14d, 21d) и ежедневно в течение 4-ой недели (с 24d по 28d) за исключением одного дня, когда яйца оставляют для анализа на ксантофиллы (25d); анализ ксантофиллов также проводят после фазы истощения (-1d). Все яйца, отложенные за каждый отдельный день, берут на оценку цвета яичного желтка или анализ ксантофиллов.
[0162] Не детектируют существенных различий между обработками, пигментами или дозами, для массы тела (BW) в начале или в конце испытания или для изменения BW. Не детектируют существенного эффекта обработки или взаимосвязи обработка × период для любых переменных характеристик, за исключением доли непродаваемых яиц из числа обработанных, но эти различия не касаются пигмента или дозы.
[0163] Цвет яичного желтка после одной недели кормления экспериментальными кормами почти достигает своих конечных значений, получаемых через четыре недели испытаний. Во все недели детектируют существенные различия между X-40, XCT и C3 до 20 м.д. и между X-40 и XCT до 80 м.д. почти для всех исследуемых переменных; взаимосвязи между пигментами и дозами также являются существенными, означая различную реакцию у пигментов при возрастающих дозах.
[0164] Сравнение нелинейных регрессий для всех трех пигментов до 10 или 20 м.д. дает аналогичные результаты, при этом XCT и C3 являются существенно более эффективными, чем X-40, в отношении желтизны (от 121% до 128%, при отсутствии различия между XCT и C3: перекрытие 95% доверительного интервала), соотношение краснота/желтизна (для XCT составляет 158% эффективности X-40; для C3 от 117% до 120% эффективности X-40; причем XCT более эффективен, чем C3, так как 95% доверительный интервал не перекрывается) и значение RYCF (для XCT от 159% до 161% эффективности X-40; для C3 от 117% до 120% эффективности X-40; причем XCT более эффективен, чем C3, так как 95% доверительный интервал не перекрывается). Если используют весь диапазон доз (до 80 м.д.) для сравнения X-40 и XCT, то также получают результаты, аналогичные результатам, полученным с меньшими уровнями включения: XCT является существенно более эффективным, чем X-40, в отношении желтизны (122%), соотношения краснота/желтизна (165%) и значения RYCF (157%); также краснота представляет значения регрессии с биологическим смыслом, эффективность XCT составляет 159% эффективности X-40.
[0165] Концентрация и содержание ксантофиллов яичного желтка и скорость отложения ксантофиллов существенно выше для XCT (например, средняя скорректированная скорость отложения, %, до 20 м.д. составляет 3,02, 3,64 и 3,18 для X-40, XCT и C3, соответственно; и до 80 м.д. составляет 2,82 и 3,46 для X-40 и XCT, соответственно), хотя детектируют существенные взаимосвязи между пигментами и дозами для концентрации, общего содержания и отложения (либо нескорректированного, либо скорректированного по скорости яйценоскости) ксантофиллов в яичном желтке. Xamacol 40 при 2,5 м.д. имеет наивысшую скорость отложения, %, вследствие низкого уровня общего содержания ксантофиллов, детектируемого при этой диете, по сравнению с другими пигментами и, следовательно, меньшего поглощения ксантофиллов, а не вследствие более высокой концентрации TX в яичном желтке. Xamacol 40 имеет меньшие скорости отложения, чем другие пигменты, при всех дозах за исключением 2,5 м.д. Если рассчитывают среднюю скорректированную скорость отложения, %, исключая значение 2,5 м.д. и до 20 м.д., то для всех пигментов имеют следующие результаты: 2,52, 3,54 и 3,17 для X-40, XCT и C3, соответственно (отношение 100%, 141% и 126%), и до 80 м.д. для X-40 и XCT имеют 2,48 и 3,36, соответственно (отношение 100% и 135%).
[0166] Общую концентрацию ксантофиллов и содержание в яичном желтке, повышенное при возрастающих дозах пигментов в корме, и отклики можно отрегулировать посредством линейной регрессии. Улучшение эффективности по сравнению с X-40 из отношения угловых коэффициентов линейных регрессий для всех пигментов до 10 м.д. составляет примерно 190% для XCT, тогда как для C3 улучшение не достигает статистической значимости. Если рассматривают дозы до 20 м.д., то улучшение составляет примерно 170% для XCT и примерно 147% для C3.
[0167] При рассмотрении только X-40 и XCT для всего диапазона доз (до 80 м.д.) отношение угловых коэффициентов показывает улучшенные эффективности в отношении содержания ксантофиллов в яйце и скорости отложения ксантофиллов 125% для XCT.
[0168] Xamacol CT является более эффективным, чем X-40. Улучшение для цветовых переменных варьируется в зависимости от исследуемой переменной, но не в диапазоне доз, включенных в сравнение (до 10, 20 или 80 м.д.); примерные улучшения составляют: 125% для желтизны и 160% для соотношения краснота/желтизна и RYCF. Улучшение общей концентрации и содержания ксантофиллов в яичном желтке составляет 190% до дозы 10 м.д., 170% до 20 м.д. и 125% до 80 м.д. Для средней скорректированной скорости отложения, %, исключая значение 2,5 м.д., улучшение составляет примерно 137%.
[0169] Конкурентный продукт 3 является более эффективным, чем X-40. Улучшение варьируется в зависимости от исследуемой переменной, но не в диапазоне доз, включенных в сравнение (до 10 или 20 м.д.) для цветовых переменных; примерные улучшения составляют: 125% для желтизны и 120% для соотношения краснота/желтизна и RYCF. Улучшение для общей концентрации и содержания ксантофиллов в яичном желтке составляет 139%, но не является значимым до дозы 10 м.д., и 147% до 20 м.д. Для средней скорректированной скорости отложения, %, исключая значение 2,5 м.д., улучшение составляет примерно 126%.
[0170] Xamacol CT является более эффективным, чем C3. Улучшение варьируется в зависимости от исследуемой переменной, но не в диапазоне доз, включенных в сравнение (до 10 или 20 м.д.) для цветовых переменных; примерные улучшения составляют: 134% для соотношения краснота/желтизна и RYCF. Улучшение для общей концентрации и содержания ксантофиллов в яичном желтке составляет 137%, но не является значимым до дозы 10 м.д., и 117%, но не является значимым до 20 м.д.
Пример 3: Влияние на пигментацию бройлерных цыплят
2
[0171] Проводят испытание по откорму, сравнивая эффективности двух разных желтых пигментов из календулы (X-40 и XCT) по пигментации и производительности бройлерных цыплят до возраста 47 дней. Используют всего 1078 1-дневных самок цыплят Ross-308 в период от 1 до 47 дней и распределяют случайным образом для экспериментальных обработок. Экспериментальный план полностью рандомизирован при 7 кормовых обработках: T1 - базисная диета (отрицательный контроль); T2 - базисная диета + продукт X-40 30 м.д.; T3 - базисная диета + продукт X-40 40 м.д.; T4 - базисная диета + продукт X-40 50 м.д.; T5 - базисная диета + продукт XCT 30 м.д.; T6 - базисная диета + продукт XCT 40 м.д.; T7 - базисная диета + продукт XCT 50 м.д. Обработки повторяют 7 раз и предлагают на стадии откорма (в возрасте от 22 до 35 дней) и конечной стадии откорма (в возрасте от 36 до 47 дней). Животных содержат в загонах по 22 бройлера на загон при плотности посадки, аналогичной коммерческой практике в EU (30 кг/м).
[0172] Пюре (начальная стадия) и гранулированные корма (на стадии откорма и конечной стадии) дают без ограничения, их основу составляет пшеничная и соевая мука без добавления стимулятора роста или ветеринарных антибиотиков. Начальные корма дают животным в возрасте с 0 по 21 день, откормочные корма с 22 по 35 день и конечные корма с 35 по 47 день. Через 4 дня вводят вакцину Paracox с питьевой водой и добавляют к откормочным диетам кокцидиостат.
[0173] Наблюдения включают измерение роста, массы тела, потребление корма, эффективность корма, EPEF (European Production Efficiency Factor), общее здоровье и процент падежа и отбраковки. Также определяют пигментацию кожи на тушках после заморозки. Кроме того, оценивают окисление двуглавой мышцы бедра (методика TBARs) и гистологию кишечника.
[0174] Данные анализируют по полностью рандомизированному плану методами General Lineal Methods (GLM) по программе Statistical Analysis Software (SAS). Заявляют значимость, если вероятность P≤0,05, и почти существенную тенденцию, если 0,05<P≤0,10. Параметры производительности и цвета кожи анализируют как 7 независимых обработок и как факторный план, исключая отрицательную обработку. Параметры цвета кожи также анализируют методом линейной регрессии относительно принимаемого пигмента, применяя GLM процедуру SAS v. 9.0 (SAS, 2002) и нелинейную регрессию при подгонке данных к двум различным моделям, используя NLIN-процедуру SAS v. 9.0 (SAS, 2002).
[0175] Здоровье животных считают нормальным в ходе исследования и не отмечают неблагоприятных событий. Производительность животных соответствует условиям испытания (бройлеров выращивают в загонах для птицы и кормят пюре/гранулированным кормом). Не наблюдают существенных различий в массе тела животных между обработками, между типами пигментов или между различными дозами, используемыми при исследовании животных разных возрастов. Как ожидалось, не наблюдают существенных различий в производительности с 0 по 21 день, если все животные употребляют обычный корм. Не наблюдают существенных различий впоследствии между типами пигментов (X-40 относительно XCT) или между разными тестируемыми дозами.
[0176] Имеется 20 случаев падежа/отбраковки (1,86%) с 0 по 21 день, 8 случаев падежа/отбраковки (0,74%) с 21 по 35 день и 34 случаев падежа/отбраковки (3,15%) с 35 по 47 день (таблица 10). Детектируют неожиданный существенный эффект в смертности на конечной стадии (с 35 по 47 день), обусловленный типом пигмента. Не наблюдают существенных различий в смертности между дозировками.
[0177] Пигментацию кожи определяют по лапе, грудке (в двух разных областях: 1-подмышечной впадине, 2-центральной части грудки) и бедру в замороженных тушках бройлеров 47-дневного возраста. Принимая во внимание отсутствие сырых материалов, поставляющих природные пигменты в базисную диету, этот параметр представляет чистую разницу между отрицательными контролями и остальными экспериментальными обработками, и контрольные животные всегда демонстрируют более бледные цвета. Также детектируют различия между дозировками и всегда получают более темный цвет при повышении дозы пигмента, независимо от оцениваемой области.
a
b
a
b
a
b
a
b
*
*
*
*
*
*
*
*
*
*
*
[0178] Различия между пигментами четко детектируются во всех оцениваемых областях при помощи колориметра RCF и спектрофотометра. Бройлеры, принимающие пигмент XCT, демонстрируют повышенные уровни Roche на лапах (7,0 относительно 6,4; P<0,0001), на грудке (7,1 относительно 6,5 и 7,9 относительно 6,9, для точек 1 и 2, соответственно; P<0,0001) и бедре (6,8 относительно 6,2; P<0,0001), если птицам дают в пищу пигмент X-40. Также значения a и b на грудке и бедре тушек птиц, принимающих пигмент XCT, всегда существенно выше, чем значения для пигмента X-40 (1,48 относительно 1,14 и 28,09 относительно 26,05 для a и b на грудке в точке 1, соответственно; P<0,05; 2,11 относительно 1,68 и 33,41 относительно 30,27 для a и b на грудке в точке 2, соответственно; P<0,05; 0,90 относительно 0,75, P=0,10, и 25,89 относительно 24,60, P=0,0002; для a и b на бедре, соответственно). Эффект уровня включения пигментов в корм также является ясным и значимым. Значения по цветовому вееру Roche и a и b повышены, и значения L понижены во всех оцениваемых областях при повышенных дозах пигмента.
[0179] Вообще, линейные уравнения различны для разных пигментов, и угловые коэффициенты уравнений для пигмента XCT больше, чем угловые коэффициенты для пигмента X-40 для значения a* на грудке в области 2 (+25,7%; P<0,001), для значения b* на грудке (+13,8%; P=0,0655), грудке в области 2 (+27,8%; P<0,0001) и бедре (+8,5%; P=0,0491) и для RCF-значения на лапах (+7,6%; P=0,0384), грудке в области 2 (+9,8%; P=0,0044) и бедре (+7,1%; P=0,0565). Также оценивают нелинейные функции цветовой насыщенности, и значения K (концентрация пигмента, необходимая для достижения половины максимальной пигментации) для пигмента X-40 выше, чем значения K для пигмента XCT.
[0180] Оценивают также эффект обработки на уровень TBARS в двуглавой мышце бедра бройлеров 47-дневного возраста после 0 и 10 дней хранения в холодильнике. Не детектируют существенных различий в окислении липидов для образцов мяса, хранившихся 0 или 10 дней при 4°C, между обработками, между типами пигментов (X-40 относительно XCT) или между разными тестируемыми дозами.
*
*
[0181] Оценивают также эффект обработки на высоту ворсинок, глубину крипт и толщину мышечного слоя, измеряемую на пяти участках ЖКТ. Ни по одному из гистологических параметров не детектируют существенных различий между отрицательным контролем и другими обработками. Вообще, в оцениваемых областях не детектируют существенных различий между пигментами. Имеется четкая разница в пигментации кожи между отрицательными контролями и остальными экспериментальными обработками, и контрольные животные всегда демонстрируют более бледные цвета во всех оцениваемых областях. Различия между пигментами четко детектируют при помощи RCF и спектрофотометра во всех оцениваемых областях. Бройлеры, принимающие пигмент XCT, демонстрируют повышенные уровни Roche, значения a и b, чем птицы, принимающие с пищей пигмент X-40. Вообще, линейные уравнения различаются между пигментами, и угловые коэффициенты уравнений для пигмента XCT больше, чем угловые коэффициенты для пигмента X-40, для значения a* на грудке в области 2 (+25,7%), для значения b* на грудке (+13,8%), грудке в области 2 (+27,8%) и бедре (+8,5%) и для значений RCF на лапах (+7,6%), грудке в области 2 (+9,8%) и бедре (+7,1%). Вообще, нелинейные функции цветовой насыщенности различаются между пигментами, и значения K для пигмента X-40 выше, чем значения K для пигмента XCT.
Пример 4: Эффект на пигментацию бройлерных цыплят.
[0182] Испытание проводят на бройлерных цыплятах, помещенных в загоны для птицы, сравнивая пигментирующую эффективность разных желтых пигментов (X-40, XCT и C3) по окрашиванию бройлеров.
[0183] Испытание продолжается 6 недель, включая 3 недели кормления по "белой" базисной диете с последующим кормлением в течение 3 недель экспериментальными кормами. При поступлении животных (1223 однодневных самок бройлерных цыплят Ross 308) размещают случайным образом по 56 загонам. Экспериментальные корма с пигментами дают после 3 недель кормления по "белой" базисной диете. Обеспечивают свободный доступ к корму и воде. Базисные диеты составляют таким образом, чтобы они удовлетворяли или превышали требования к корму цыплят (Ross, 2006). Составляют две базисные диеты соответственно возрасту птиц (начальную для первых 3 недель и затем откормочную). Каждую методику кормления готовят, добавляя соответствующее количество продукта (при многостадийной программе смешивания).
[0184] Всего имеется 10 методик кормления. Методики кормления являются результатом добавления к базисной диете экспериментальных продуктов при соответствующей дозе (X-40 или XCT, обеспечивая 20, 40, 60 и 80 мг ксантофиллов/кг полного корма, или C3, обеспечивая 40 мг ксантофиллов/кг полного корма).
[0185] Переменные характеристики контролируют и регистрируют, дублируя, каждую третью неделю; качество помета оценивают субъективно в конце испытания. Окрашивание бройлеров оценивают на скотобойне по тушкам, охлаждаемым в течение одного дня.
[0186] Ни пигменты, ни доза не влияют на производительность или качество помета.
[0187] Xamacol CT добивается лучшего окрашивания, чем X-40, по яркости грудной птерилии (60,65 относительно 61,09), желтизне подмышечного аптерия (28,78 относительно 28,03) и яркости, красноте и отношению краснота/желтизна подушечек на лапах (65,60 относительно 66,16; 5,27 относительно 4,36 и 0,11 относительно 0,09 для яркости, красноты и отношения краснота/желтизна, соответственно). Различия в других переменных, а также взаимосвязи пигменты × доза не являются значимыми.
[0188] Линейные регрессии по красноте и отношению краснота/желтизна подушечек на лапах представляют существенные различия в точках пересечения, причем XCT на 0,9 пункта выше для красноты и на 0,02 пункта выше для отношения краснота/желтизна, чем X-40. Улучшение эффективности, определяемое как отношение угловых коэффициентов (для линейных регрессий) или параметр k (для нелинейных регрессий), колеблется от 103% для желтизны грудной птерилии и цвета плюсны по вееру до 109% для цвета кожи по вееру и 120% для красноты и отношения краснота/желтизна подушечек на лапах. Однако ни одно из улучшений не достигает значимости.
d
b
bcd
de
C
cd
[0189] Окрашивание, получаемое с конкурентом (C3) при 40 м.д. несущественно отличается от окрашивания, получаемого с X-40 или XCT при 40 м.д., для любой исследуемой переменной, но не для яркости подушечек на лапах (для C3 значение меньше, чем для X-40 или XCT; 64,3, 66,4 и 65,8, соответственно) и желтизны подушечек на лапах (для C3 значение меньше, чем X-40, не для XCT; 43,6, 47,7 и 47,2, соответственно).
a
b
a
b
b
a
[0190] Коэффициенты вариации для X-40 выше по сравнению с XCT для красноты грудной птерилии и подушечек на лапах (90,3 относительно 78,1; 62,5 относительно 52,2, соответственно); однако CV для X-40 меньше по сравнению с XCT для соотношения краснота/желтизна подушечек на лапах (0,09 относительно 0,11), но не для других переменных. Наименьшее значение CV получают при определении цвета кожи по цветовому вееру, далее следуют яркость и желтизна в любом месте и цвет подушечек на лапах по вееру. Краснота и отношение краснота/желтизна имеют наибольшее значение CV. CV, получаемые на грудной птерилии, подмышечной аптерии или подушечках на лапах, находятся в тех же диапазонах.
Пример 5: Исследования стабильности.
[0191] Выполняют тесты с целью сравнения стабильности композиции по изобретению, содержащей антислеживающий агент, относительно X-40. В одном исследовании определяют снижение общего содержания ксантофиллов ("TX") для XCT с антислеживающим агентом в открытом пакете при комнатной температуре. Соответственно, результаты представляют разрушение в условиях открытого пакета (воздействие кислорода, влаги и др.). Результаты показаны в таблице A. Аналогичное исследование проводят при повышенных температурах (50°C). Результаты показаны в таблице B. В таблице C показано разрушение TX при комнатной температуре для обоих препаратов, XCT и X-40, в проницаемом для кислорода темном пакете. В таблице D показаны результаты для XCT относительно X-40, где оба препарата смешивают с кормом при комнатной температуре в проницаемых для кислорода темных пакетах. Для XCT ни в одном из примеров после производства не применяют инкапсулирование.
ТАБЛИЦА AСтабильность XCT в присутствии и в отсутствие антислеживающего агента (FFA) при комнатной температуре в проницаемом для кислорода темном пакете
Стабильность (открытый пакет) при комн. темп.
1 месяц
3 месяца
6 месяцев
9 месяцев
TX(мг/г)
% стаб.
TX(мг/г)
% стаб.
TX(мг/г)
% стаб.
TX(мг/г)
% стаб.
XCT без FFA
88,98
колич.
83,94
94
81,46
96
79,36
93
XCT c FFA
74,30
колич.
74,49
колич.
66,23
92
68,55
95
XCT без FFA
99,15
колич.
91,32
92
89,65
90
85,23
86
XCT c FFA
85,51
колич.
77,11
90
72,86
86
69,26
82
ТАБЛИЦА BСтабильность XCT в присутствии и в отсутствие FFA при 50°C в непроницаемом пакете
Стабильность (закрытый пакет) при 50°C
12 недель
18 недель
6 месяцев
9 месяцев
TX(мг/г)
% стаб.
TX(мг/г)
% стаб.
TX(мг/г)
% стаб.
TX(мг/г)
% стаб.
XCT без FFA
101,6
колич.
97,3
98
95,0
96
89,2
90
XCT c FFA
83,7
99
84,0
99
80,4
95
72,9
86
XCT без FFA
94,4
колич.
93,8
колич.
85,7
колич.
81,9
96
XCT c FFA
79,3
колич.
69,8
97
67,4
93
65,9
91
<sup>*</sup> колич. = не детектируют разрушения
ТАБЛИЦА CСтабильность XCT относительно X-40 при комнатной температуре в проницаемом для кислорода темном пакете
Стабильность (открытый пакет) при комн. темп.
1 месяц
3 месяца
4 месяца
6 месяцев
TX(м.д.)
% стаб.
TX(м.д.)
% стаб.
TX(м.д.)
% стаб.
TX(м.д.)
% стаб.
Xamacol 40
26,6
62
25,4
60
24,0
56
20,5
48
XCT
99,0
колич.
99,2
колич.
91,3
92
89,6
90
<sup>*</sup> колич. = не детектируют разрушения
ТАБЛИЦА DСтабильность XCT относительно X-40 в смеси с кормом при комнатной температуре в проницаемых для кислорода темных пакетах
Стабильность (открытый пакет) при комн. темп.
1 месяц
3 месяца
4 месяца
6 месяцев
TX(м.д.)
% стаб.
TX(м.д.)
% стаб.
TX(м.д.)
% стаб.
TX(м.д.)
% стаб.
X-40 в смеси с кормом
382
96
248
63
192
50
117
30
XCT в смеси с кормом
339
93
303
83
270
80
315
87
Пример 6: Сравнения с Xamacol 40 методом микроскопии.
[0192] Xamacol ColorTek (XCT), который получают, как здесь описано, анализируют методами поляризационной и оптической микроскопии. На ФИГ. 2A показано мыло Xamacol 40 (X-40) под поляризационным микроскопом при 100-кратном увеличении. На ФИГ. 2B показан XCT под поляризационным микроскопом при 100-кратном увеличении. Наблюдаемые наночастицы лютеина в мыле X-40 показаны методом ПОМ как изотропный материал. На ФИГ. 1B показано, что размер частиц XCT очень мал для анализа. На ФИГ. 3A. показан Xamacol 40 под оптическим микроскопом при 400-кратном увеличении. На ФИГ. 3B показан XCT под оптическим микроскопом при 400-кратном увеличении.
Пример 7: Дифференциальная сканирующая калориметрия.
[0193] Композицию сравнивают с Xamacol 40 методом дифференциальной сканирующей калориметрии при 10°C/мин с целью определения фазовых переходов. Эндотермические процессы показаны как отрицательные пики или минимумы и экзотермические процессы показаны как положительные пики. На ФИГ. 4 показана красная кривая для X-40 и черная кривая для XCT. В случае Xamacol 40 мыло показывает узкий эндотермический пик при 158°C, который может соответствовать температуре плавления кристаллов лютеина.
[0194] Для того, чтобы определить, что происходит при каждом переходе, оба образца наблюдают под поляризационным микроскопом, оснащенным нагревательным устройством, с целью визуализации фазовых переходов в образцах мыла при разных температурах. Первый эндотермический минимум для обоих образцов соответствует небольшому плавлению при 58-60°C, которое не дает изменений в мыле. После этого начинается новый широкий эндотермический пик (для XCT он начинается при 62-64°C и для X-40 он начинается при 78-80°C). В этом процессе основная часть мыла плавится. Этот переход перекрывается с другим эндотермическим пиком (он начинается приблизительно при 110°C), который соответствует плавлению наночастиц лютеина в обоих препаратах, Xamacol 40 и XCT. Этот процесс заканчивается в обоих случаях при 145°C. Для XCT больше не наблюдают переходов. Для Xamacol 40 часть микрокристаллов лютеина плавится до 150°C. В заключение, образец X-40 нагревают до 200°C для исследования последнего эндотермического пика. При помощи микроскопа наблюдают плавление микрокристаллов лютеина приблизительно при 180-190°C. Последний эндотермический узкий пик соответствует температуре плавления некоторых микрокристаллов лютеина, которые находятся в мыле X-40. Часть микрокристаллов лютеина плавится до 150°C. Наночастицы лютеина плавятся при 110-150°C, или они могут растворяться в расплавленном мыле. Существует важное различие между ДСК-термограммами мыла X-40 и XCT, соответствующее плавлению микрокристаллов при 160-170°C. Широкие эндотермические пики могут быть обусловлены плавлением аморфных частиц, и узкие эндотермические пики обусловлены плавлением чистых кристаллов.
[0195] По данным ДСК наиболее важная разница составляет 70-120°C, где XCT имеет большой эндотермический пик и X-40 имеет очень маленький пик.
[0196] После изучения ДСК-кривых можно сделать вывод, что омыление живицы календулы с получением XCT не проводят выше температуры плавления лютеина. Основной причиной получения кристаллов при 70-80°C является медленное движение мыла в сочетании с достаточной вязкостью, чтобы допустить организацию молекул лютеина. Но при 130-140°C высокая подвижность молекул мыла не допускает кристаллизации. Фотографирование плавления X-40 показывает, что только при 80°C наблюдают кристаллы лютеина (оба типа частиц, нано и микро). При 150°C наблюдают только микрокристаллы лютеина. При 200°C плавление микрокристаллов лютеина визуализируется. Движение при 100°C затрудняет получение фотоизображения. Фотографии показаны на ФИГ. 5A-D.
Пример 8: Рентгеновская дифракция.
[0197] Три образца композиции по изобретению (XCT), мыло Xamacol 40 и чистый лютеин анализируют методом рентгеновской дифракции (XRD) с целью определения кристалличности лютеина в Xamacol 40 и XCT.
[0198] Кристаллическая часть X-40 дает 4 пика при 4,44, 6,57, 6,85 и 8,89 (4,44 × 2). Среди этих пиков имеются две группы. В первую можно сгруппировать широкие пики (4,44, 6,85 и 8,89 °2θ), которые соответствуют кристаллической фазе с очень малым размером частиц <30 нм. Более острый пик при 6,57 °2θ обусловлен кристаллическими частицами более 150 нм.
[0199] Кристаллическая часть XCT представлена 2 пиками 4,69 и 6,96 °2θ. Пик при 4,69 аналогичен пику при 4,44 в Xamacol 40. Этот пик обусловлен размером кристаллов менее 30 нм.
Пример 9: Способ получения XCT.
2
[0200] 50% водный раствор KOH добавляют в контейнер для реагентов проточной установки непрерывного действия. Живицу календулы добавляют во второй контейнер для реагентов проточного реактора непрерывного действия. Живицу календулы нагревают до температуры 60°C. Раствор KOH закачивают в проточную установку непрерывного действия при скорости подачи примерно 46 кг/ч. Живицу календулы закачивают в проточный реактор непрерывного действия со скоростью подачи примерно 154 кг/ч. KOH нагревают перед входом в статический миксер посредством пластинчатого теплообменника. Температуру KOH повышают примерно до 90°C. KOH и живицу календулы смешивают в статическом миксере, который имеет кожух с температурой 140°C. Время пребывания в статическом миксере составляет примерно 21 с. Перед входом в другой статический миксер раствор прогоняют через гомогенизатор типа ротор-статор. После гомогенизатора типа ротор-статор раствор пропускают через второй статический миксер, который имеет кожух с температурой 140°C. Время пребывания во втором статическом миксере составляет примерно 72 с. Затем пропускают раствор через поршневой проточный реактор с температурой кожуха 140°C. Время пребывания в поршневом проточном реакторе составляет примерно 8 мин. После поршневого проточного реактора раствор пропускают через распылитель и далее через осушитель. На распыленный продукт вдувают SiO. Продукт не инкапсулируют.
Пример 10: Сравнительное производство X-40.
[0201] Живицу календулы E-484 (глицерилполиэтиленгликольрицинолеат) и пропиленгликоль смешивают вместе в реакторе для омыления. Температура в реакторе для омыления составляет от 58°C до примерно 63°C. Промежуток времени для данной стадии составляет примерно 10'. Затем вливают в реактор для омыления водный раствор гидроксида натрия. Позволяют протекать взаимодействию между живицей календулы и гидроксидом калия в течение 2-3 ч. Температура в это время составляет 75-80°C. Затем добавляют в реактор для омыления фосфорную кислоту, чтобы загасить избыток гидроксида калия. Температура повышается от 5 до 10°C вследствие экзотермической природы данного взаимодействия. Мыло вливают в лопастной миксер, загруженный карбонатом кальция и диоксидом кремния. Мыло адсорбируется антислеживающим агентом. Общее время этой операции составляет примерно 20', включая загрузку и перемешивание. Миксер разгружают и содержимое пропускают через мельницу для разрушения комков. Продукт просеивают через вибрационный грохот (схематически показан на ФИГ. 6). В таблице E показаны физические свойства конечного продукта, полученного данным способом и способом по изобретению. На протяжении всей заявки продукт по данному способу обозначен как X-40.
ТАБЛИЦА EСравнение физических свойств XCT и X-40
Физические свойства
XCT
X-40
Общий вид
Желто-коричневый порошок
Оранжево-желтый порошок
Размер кристаллов ксантофиллов
99% менее 0,5 мкм
64% менее 0,5 мкм
Внешний вид частиц
Частицы от сфероидных до продолговатых
Гетерогенные
Распределение частиц
100%<0,85 мм98%<0,105 мм
95%<0,85 ммОтсутствует спецификация по макс. содержанию очень мелких частиц
Прочность частиц
Выдерживает давление до 100 г/см<sup>2</sup>
Выдерживает давление до 100 г/см<sup>2</sup>
Температура плавления
Выше 90°С
Полностью не плавится
Твердые наполнители
Тальк/SiO<sub>2</sub>
CaCO<sub>3</sub>/SiO<sub>2</sub>
Макс. содержание твердых наполнителей
Макс. 12%
67%
Запыленность
84
50,7
Объемная плотность
0,44-0,53
0,6-0,8
Макс. влажность (%)
2
8
Содержание ксантофиллов (мг/г)
100,0-104,0
40-42
Миним. содержание полностью транс-ксантофиллов (%)
82,0
88,0
Пример 11: Исследование стабильности при использовании этоксихина.
[0202] Композиции по изобретению (XCT) изучают с разными количествами этоксихина (ETQ). Образцы готовят, как описано в примере 9. Образцы определяют, применяя утвержденный аналитический метод определения общего содержания ксантофиллов. В начале исследования анализируют общее содержание ксантофиллов для каждого образца. Все образцы хранят в проницаемом для кислорода темном пластиковом пакете при 25°C. Все образцы выдерживают в одинаковых условиях (темнота, кислород, температура, свет и время).
[0203] Как можно видеть в таблице F, отсутствует различие между продуктами с разными количествами этоксихина. Вместо этого, композиции, произведенные согласно настоящему изобретению, являются более стабильными и оказывают больший эффект, чем композиции, произведенные при добавлении этоксихина.
ТАБЛИЦА FИсследование стабильности при использовании этоксихина
Стабильность при разном содержании ETQ
Начальная
15 дней
1 месяц
3 месяца
6 месяцев
9 месяцев
TX
% стаб.
TX
% стаб.
TX
% стаб.
TX
% стаб.
TX
% стаб.
XCT (3% ETQ)
91,96
90,1
98%
88,5
96%
81,2
88%
78,6
85%
75,8
82%
XCT (3% ETQ)
83,39
81,6
98%
80,1
96%
74,3
89%
74,1
89%
73,7
88%
XCT (0,7%ETQ)
89,37
83,0
93%
84,0
94%
80,8
90%
78,9
88%
78,0
87%
XCT (без ETQ)
102,35
94,2
92%
91,0
89%
91,6
90%
91,0
89%
91,6
89%
XCT (без ETQ)
92,7
0%
89,8
97%
81,2
88%
75,6
82%
73,8
80%
Пример 12: Сравнительное исследование стабильности.
[0204] Проводят несколько сравнительных исследований при разных температурных условиях с чистой композицией или смесью с витаминно-минеральным премиксом. Исследования стабильности проводят, как описано в примере 11. Композиции тестируют относительно композиций, приготовленных, как описано в примере 10 (X-40), конкурента 1 и конкурента 2. Конкурент 2 так разрушается, что определения, предпринимаемые через 30 дней, прекращают. Результаты при разных условиях и для смесей с витаминным премиксом показаны в таблице G-1.
ТАБЛИЦА G-1Исследование стабильности - комнатная температура, открытый пакет
Комнатная температура,открытый пакет
Начальная
TXначальная
15 дней
30 дней
TX
% стаб.
TX
% стаб.
100,1
103,0
95,9
XCT
98,4
99,0
100,7
Колич.
97,9
98
98,5
101,5
98,5
42,5
34,1
29,2
X-40
42,4
42,3
34,0
80
29,8
70
41,9
33,8
30,0
22,5
21,5
20,8
Конкурент 1
24,5
23,2
23,2
97
19,1
88
21,8
23,0
21,5
18,7
13,1
7,4
Конкурент 2
19,5
19,1
11,9
65
7,5
40
19
12,1
7,8
ТАБЛИЦА G (продолжение)Исследование стабильности - комнатная температура, открытый пакет
Комнатная температура,открытый пакет
45 дней
60 дней
90 дней
4 мес
6 мес
TX
% стаб.
TX
% стаб.
TX
% стаб.
TX
% стаб.
TX
% стаб.
97,6
95,6
97,7
97,5
94,0
XCT
99,4
Колич.
96,1
98
96,7
97
96,8
98
94,4
95
99,9
98,8
93,8
95,4
94,3
29,4
29,4
29,3
29,3
29,0
X-40
30,0
71
29,7
70
29,7
70
28,2
68
29,0
69
30,4
30,2
29,6
28,3
29,5
22,2
17,1
21,5
17,6
17,5
Конкурент 1
20,9
92
17,9
77
23,2
97
19,3
79
17,2
78
20,7
18,3
23,0
18,1
19,4
Конкурент 2
Прервано исследование
ТАБЛИЦА HСравнительное исследование стабильности - 45°С, открытый пакет
45°С, открытый пакет
Начальная
TX начальная
15 дней
30 дней
45 дней
60 дней
90 дней
TX
% стаб.
TX
% стаб.
TX
% стаб.
TX
% стаб.
TX
% стаб.
ХСТ
100,1
99,0
101,4
Колич.
100,0
98%
92,2
94%
89,7
92%
86,5
87%
98,4
104,2
96,1
93,0
91,7
86,7
98,5
98,4
96,2
94,8
92,6
84,1
Х-40
42,5
42,3
31,4
75%
29,1
69%
27,2
65%
24,8
59%
19,3
46%
42,4
31,8
29,1
27,4
25,2
20,2
41,9
32,5
29,6
27,8
24,3
19,5
Конкурент 1
22,5
23,2
19,0
82%
15,4
65%
10,9
44%
9,0
39%
9,6
42%
24,5
19,1
14,6
9,6
8,8
10,0
21,8
18,7
15,5
10,2
9,3
9,8
Конкурент 2
18,7
19,1
4,2
21%
Прервано
19,5
3,9
19
4,0
ТАБЛИЦА IСравнительное исследование стабильности, 45°C, открытый пакет с витаминно-минеральным премиксом
Комнатная температура, открытый пакет, витаминно-минеральный премикс
Начальная
TXначальная
15 дней
30 дней
TX
% стаб.
TX
% стаб.
XCT + витаминно-минеральный премикс
2,1
2,0
1,9
2,1
2,08
2,0
96
1,9
92
2,1
2,0
1,9
X-40 + витаминно-минеральный премикс
2,0
1,4
1,3
1,8
1,91
1,3
70
1,2
64
1,9
1,3
1,2
Конкурент 1 + витаминно-минеральный премикс
3,7
3,7
4,0
3,6
3,74
3,5
99
4,1
Колич.
3,9
3,9
3,9
Конкурент 2 + витаминно-минеральный премикс
2,0
1,1
0,9
2,1
2,01
1,2
59
0,9
44
2,0
1,2
0,9
<sup>*</sup>колич. = разрушения не детектируют
ТАБЛИЦА I (продолжение)Сравнительное исследование стабильности - 45°C, открытый пакет с витаминно-минеральным премиксом
Комнатная температура, открытый пакет, витаминно-минеральный премикс
45 дней
60 дней
90 дней
4 месяца
6 месяцев
TX
% стаб.
TX
% стаб.
TX
% стаб.
TX
% стаб.
TX
% стаб.
XCT + витаминно-минеральный премикс
1,8
92%
1,7
86%
1,7
80%
1,8
83%
1,5
75%
1,9
1,8
1,7
1,7
1,5
1,9
1,8
1,6
1,7
1,6
X-40 + витаминно-минеральный премикс
Прервано
Конкурент 1 + витаминно-минеральный премикс
3,3
90%
3,0
77%
2,4
68%
2,6
74%
2,5
67%
3,5
2,6
2,7
2,7
2,5
3,4
3,2
2,5
2,9
2,6
Конкурент 2 + витаминно-минеральный премикс
Прервано
Пример 13: Исследования стабильности в закрытом пакете
[0205] Общее содержание ксантофиллов исследуют в условиях закрытого пакета, моделируя упаковку. Все образцы производят, как описано в примере 9. Образцы (в присутствии или в отсутствие антислеживающего агента) хранят в непроницаемом запечатанном алюминием пластиковом пакете при 25°C. Все образцы находятся в одинаковых условиях низкого содержания кислорода, температуры и темноты. Все препараты демонстрируют хорошую стабильность в течение 24 месяцев, как показано в таблице J. Образцы содержат примерно 18% диоксида кремния в качестве антислеживающего агента (FFA).
ТАБЛИЦА JСтабильность XCT и диоксида кремния
Начальная
Стабильность
15 дней
1 месяц
2 месяца
3 месяца
Закрытый пакет с низким содержанием кислорода
TX (мг/г)
TX (мг/г)
% стаб.
TX (мг/г)
% стаб.
TX (мг/г)
% стаб.
TX (мг/г)
% стаб.
XCT без FFA
85,05
85,5
Колич.
89,0
Колич.
81,8
96%
83,9
94%
XCT с FFA
72,29
73,6
Колич.
74,3
Колич.
69,9
97%
74,5
Колич.
XCT без FFA
99,45
99,0
Колич.
99,1
Колич.
99,2
Колич.
91,3
92%
XCT с FFA
84,53
84,6
Колич.
85,5
Колич.
79,4
94%
77,1
90%
ТАБЛИЦА J (продолжение)Стабильность XCT и диоксида кремния в закрытом пакете
Стабильность
6 месяцев
9 месяцев
12 месяцев
18 месяцев
24 месяца
Закрытый пакет с низким содержанием кислорода
TX (мг/г)
% стаб.
TX (мг/г)
% стаб.
TX (мг/г)
% стаб.
TX (мг/г)
% стаб.
TX (мг/г)
% стаб.
XCT без FFA
81,5
96%
79,4
93%
79,5
93%
79,8
94%
74,5
88%
XCT с FFA
66,2
92%
68,6
95%
69,1
96%
65,4
90%
63,7
88%
XCT без FFA
89,6
90%
85,2
86%
79,5
80%
83,8
84%
78,8
79%
XCT с FFA
72,9
86%
69,3
82%
65,7
78%
66,4
79%
65,8
78%
Пример 14: Порошковый препарат
[0206] Ниже представлен типичный порошковый препарат для XCT-способа, состав которого выражен в процентах массы.
ТАБЛИЦА KТипичный порошковый препарат
XCT
Состав
Мыло из календулы
75-95%
SiO<sub>2</sub>
0-5%
Тальк
2-10%
Стеариновая кислота
0-7%
Влага
0,3-1%
ETQ
0,6%
Пример 15: Препарат, не содержащий этоксихина.
[0207] Ниже представлен типичный порошковый препарат для XCT-способа, не содержащий этоксихина.
ТАБЛИЦА LТипичный порошковый препарат без антиоксиданта
XCT порошок без ETQ
Состав
Мыло из календулы
76-95%
SiO<sub>2</sub>
0-5%
Тальк
2-10%
Стеариновая кислота
0-8%
KOH
0,1-1%
Влага
0,3-1%
Пример 16: Жидкий препарат.
[0208] Жидкие препараты получают аналогично порошковым препаратам. Однако вместо разбрызгивания мыла с календулой в распылителе его разбрызгивают в воду. Температуру воды поддерживают 15-30°C. При добавлении мыла температуру повышают до 40-50°C. Смесь перемешивают в течение одного часа на установке Ultraturrax. Жидкий продукт нагревают при 70-80°C в течение 6-9 ч, осуществляя изомеризацию до желательных уровней транс-лютеина и транс-зеаксантина. После охлаждения жидкий продукт готов.
ТАБЛИЦА MТипичный жидкий препарат
XCT жидкий
Состав
Мыло из календулы
12-17%
ETQ
0,6%
Е-484
1%
Вода
82-87%
Пример 17: Исследования табильности жидкого препарата
[0209] Жидкий препарат представляет собой стабильную эмульсию мыла с календулой в воде. Стабильность жидкого препарата обусловлена, главным образом, малым контактом с кислородом. Результаты показаны в таблице N.
ТАБЛИЦА NИсследование стабильности жидких препаратов
Комнатная
Начальн
3 месяца
6 месяцев
12 месяцев
температура открытый пакет
TX(мг/г)
TX (мг/г)
% стаб.
TX (мг/г)
% стаб.
TX (мг/г)
% стаб.
Xamacol 15 (X-40 в жидкости)
15,7
--
--
16,4
колич.
16,3
колич.
XCT 12/006 жидкость pH 12,5
16
16,4
колич.
15,4
96
16,3
колич.
XCT 12/006жидкостьpH 13
15,9
15,9
колич.
17,5
колич.
15,8
99
<sup>*</sup>колич. = разрушений не детектируют.
Пример 18: Сравнительные исследования продуктов.
[0210] Исследования стабильности проводят, как описано в примерах 5 и 11, и сравнивают с апоэфирными продуктами. Ниже в таблице приведены результаты этих исследований относительно конкурента 4 (C4) и конкурента 5 (C5) в апоэфирной колонке, где представлены два значения: первое для C4 и второе для C5. На ФИГ. 7A показаны результаты относительно C4 и C5. На ФИГ. 7B показаны результаты относительно C3 и C6.
ТАБЛИЦА OСравнительное исследование с апоэфирами
Условия хранения
Время(мес)
XCT, %
X40, %
Апоэфир, %
Открытый пакет
1
98
75
100-100
3
94
67
95-100
25°C
6
91
30
98-88
9
88
-
87 (С5)
12
87
-
85 (С4)
Открытый пакет - низкое содержание ETQ
25°C
6
92,5
-
90-98
Открытый пакет - без ETQ
25°C
6
87,5
-
-
Открытый пакет
50°C
6
94
67
90-95
Открытый пакет
75°C
48 ч
100
55
100 (С4)
В витаминном премиксе - открытый пакет
25°C
3
76
-
81-96
25°C
3
69
15
-
В корме - открытый пакет
25°C
3
97,5
60-65
100-100
45°C
1
100
-
100-100
Закрытый пакет
25°C
12
100
100
100 (С4)
Пример 19: Эффект желтых пигментов на цвет яичного желтка несушек
[0211] Испытание проводят на курах-несушках, находящихся в клетках, сравнивая пигментирующую эффективность разных желтых пигментов (A, B и C) по цвету яичного желтка несушек. Испытание продолжается 9 недель, включая 5 недель ксантофилл-истощающего кормления по «белой» базисной диете, затем 4 недели кормления экспериментальными кормами.
[0212] Животные: 305 кур-несушек HyLine Brown 23-недельного возраста в начале испытания.
[0213] Обеспечивают свободный доступ к корму и воде. Базисные диеты составляют таким образом, чтобы они соответствовали или превышали требования к корму для кур-несушек (Hy-Line, 2009). Отдельную базисную диету составляют в соответствии с ожидаемым потреблением корма. Каждую методику кормления готовят, добавляя соответствующее количество продукта.
[0214] Всего имеется 16 методик кормления (6 повторов 3 курицы/клетка на обработку). Методики кормления являются результатом добавления к базисной диете экспериментальных продуктов при соответствующей дозе (продукта A или B, обеспечивая 2,5, 5, 10, 20, 40 и 80 мг ксантофиллов/кг полного корма, или продукта C, обеспечивая 2,5, 5, 10 и 20 мг ксантофиллов/кг полного корма).
[0215] Переменные характеристики контролируют и регистрируют, дублируя, каждую вторую неделю при кормлении экспериментальными кормами (ежедневно: массу тела, потребление корма, скорость яйцекладки, массу яиц, процент разбитых, яйца с мягкой скорлупой и грязные). Цвет яичного желтка оценивают в конце фазы ксантофильного истощения (0d), еженедельно в течение трех недель (7d, 14d, 21d) и ежедневно в течение 4-ой недели (с 24d по 28d) за исключением одного дня, когда яйца оставляют для анализа на ксантофиллы (25d); также проводят анализ ксантофиллов после фазы истощения (-1d). Все яйца, отложенные за каждый отдельный день, берут на оценку цвета яичного желтка или анализ ксантофиллов.
*
*
*
*
*
*
*
*
[0216] Оценку цвета выполняют, применяя колориметр Minolta. Колориметр описывает цвет в CIE Lab. L показывает яркость, представляя темное-светлое по шкале (0-100). Значение a (краснота) дает степень красного-зеленого цвета, причем большее положительное значение a указывает на более красный цвет. Значение b (желтизна) показывает степень желтого-синего цвета, причем большее положительное значение b указывает на более желтый цвет. Результаты показаны на ФИГ. 8A-8D. Линейная регрессия по переменным для всех доз пигмента до 20 м.д. и в течение четвертой недели экспериментальных диет показывает, что XCT имеет эффективность, соответствующую 121% эффективности X-40 для желтизны. XCT имеет эффективность, соответствующую 159% эффективности X-40 для RYCF.
[0217] Общее содержание ксантофиллов в яичных желтках показано на ФИГ. 9A и 9B. Линейный регрессионный анализ показывает, что на 25 день XCT имеет эффективность, соответствующую 172% эффективности X-40 для концентрации ксантофиллов яйца.
Пример 20: испытания на несушках без добавления красного пигмента.
[0218] Испытание проводят на курах-несушках, находящихся в клетках, определяя сравнительную эффективность Xamacol ColorTek относительно апоэфира (C4) по приданию желтого цвета яичному желтку.
[0219] Испытание продолжается 9 недель, включая 5 недель ксантофилл-истощающего кормления по «белой» базисной диете, затем 4 недели кормления экспериментальными кормами.
[0220] Животные: 216 кур-несушек Hy-line W-36 57-недельного возраста в начале испытания.
[0221] Это исследование проводят на MRP птицефабрике. Климат в помещении контролируют. Обеспечивают свободный доступ к корму и воде. Все рационы составляют таким образом, чтобы они соответствовали или превышали все рекомендации по корму для W-36 (на основании инструкции Hy-line 2009-11).
[0222] Всего имеется 9 методик с повторами в 24 загонах (клетках) на обработку. В каждой клетке содержится одна курица.
[0223] Переменные характеристики контролируют и регистрируют, дублируя, каждую вторую неделю при кормлении экспериментальными кормами (ежедневно массу тела, потребление корма, скорость яйцекладки, массу яиц, процент разбитых, яйца с мягкой скорлупой и грязные). Цвет яичного желтка оценивают в конце фазы ксантофильного истощения (0d), еженедельно в течение трех недель (7d, 14d, 21d) и более часто в течение 4-ой недели (с 25d по 28d). Все яйца, отложенные за каждый отдельный день, берут на оценку цвета яичного желтка. В таблице P показаны обработки.
ТАБЛИЦА PОбработки
Обработки
Описание
1
T1: ”0” добавка пигмента (контроль)
2
T2: 2 м.д. XCT
3
T3: 4 м.д. XCT
4
T4: 6 м.д. XCT
5
T5: 9 м.д. XCT
6
T6: 12 м.д. XCT
7
T7: 2 м.д. апоэфира (С4)
8
T8: 4 м.д. апоэфира (С4)
9
T9: 6 м.д. апоэфира (С4)
[0224] Результаты показаны на ФИГ. 10A-10D. Линейная регрессия по переменным для всех доз пигмента до 80 м.д. и в течение четвертой недели экспериментальных диет показывает, что XCT имеет эффективность, соответствующую 159% эффективности X-40 для значения красноты, 122% для значения желтизны, 165% эффективности X-40 для соотношения краснота/желтизна, 157% эффективности X-40 для RYCF.
[0225] Общее содержание ксантофиллов показано на ФИГ. 11A-11B. Линейная регрессия содержания ксантофиллов в яйце и скорости отложения ксантофиллов показывает, что XCT имеет эффективность, соответствующую 126% эффективности X-40 для концентрации ксантофиллов в яйце, и XCT имеет эффективность, соответствующую 124% эффективности X-40 для содержания ксантофиллов в яйце. XCT имеет эффективность, соответствующую 131% эффективности конкурентного продукта 3 для соотношения краснота/желтизна, 133% эффективности конкурентного продукта 3 для RYCF и 117% эффективности конкурентного продукта 3 для общего содержания ксантофиллов в яичном желтке.
[0226] Производят аналогичные сравнения с эфирными продуктами. Результаты показаны на ФИГ. 12A-12D.
Пример 21: Испытания на несушках с добавлением синтетического красного пигмента.
[0227] Испытание проводят на курах-несушках, находящихся в клетках, сравнивая пигментирующую эффективность 2 желтых пигментов (A и B) по цвету яичных желтков несушек при добавлении красного пигмента синтетической природы (C).
[0228] Испытание продолжается 7 недель, включая 3 недели ксантофилл-истощающего кормления по «белой» базисной диете, затем 4 недели кормления экспериментальными кормами.
[0229] Животные: 360 несушек Hy-line (Isa brown plus) 32-недельного возраста в начале испытания.
[0230] Обеспечивают свободный доступ к корму и воде. Базисные диеты составляют таким образом, чтобы они удовлетворяли или превышали требования по питанию Hy-line 2009 для кур-несушек (Isa Brown, 2009-10). Отдельную базисную диету составляют в соответствии с ожидаемым потреблением корма. Каждую методику кормления готовят, добавляя соответствующее количество продукта.
[0231] Всего имеется 10 методик кормления (6 повторов 6 кур/клетка на обработку).
[0232] Переменные характеристики контролируют и регистрируют, дублируя каждую вторую неделю при кормлении экспериментальными кормами (ежедневно массу тела, потребление корма, скорость яйцекладки, массу яиц, процент разбитых, яйца с мягкой скорлупой и грязные). Цвет яичного желтка оценивают в конце фазы ксантофильного истощения (0d), еженедельно в течение трех недель (7d, 14d, 21d) и более часто в течение 4-ой недели (с 25d по 28d). Все яйца, отложенные за каждый отдельный день, берут на оценку цвета яичного желтка.
[0233] Анализ по цветовому вееру проводят, используя цветовой веер DSM Yolk (также известный как цветовой веер Roche). Анализ имеет 15 шкал цветовых индексов, используемых для различения плотности цвета желтка. Способ включает оценку желтка как визуальное сравнение и определение каротиноидов. Результат оценки желтка по цветовому вееру показывает, что при добавлении красного пигмента CXT сопоставим с многими конкурентами. На ФИГ. 13 показан результат анализа по цветовому вееру в присутствии красного пигмента и без красного пигмента. Различия не детектируемы для потребителей.
Пример 22: Испытание на несушках с добавлением природного красного пигмента.
[0234] Испытание проводят на курах-несушках, находящихся в клетках, сравнивая пигментирующую эффективность по цвету яичного желтка несушек для 2 желтых пигментов (A и B) при добавлении красного пигмента природного происхождения (C).
[0235] Испытание продолжается 7 недель, включая 3 недели ксантофилл-истощающего кормления по «белой» базисной диете, затем 4 недели кормления экспериментальными кормами.
[0236] Животные: используют 240 коммерческих коричневых кур-несушек (Hy-line Brown) 38-недельного возраста в начале испытания.
[0237] Обеспечивают свободный доступ к корму и воде. Базисные диеты составляют в соответствии с рекомендациями Hy-line Brown (Hy-Line International Red Book, 2009). Отдельную базисную диету составляют в соответствии с ожидаемым потреблением корма. Каждую методику кормления готовят, добавляя соответствующее количество продукта.
[0238] Всего имеется 10 методик кормления (24 повторов 1 курица/клетка на обработку).
[0239] Переменные характеристики контролируют и регистрируют, дублируя, каждую вторую неделю при кормлении экспериментальными кормами (ежедневно массу тела, потребление корма, скорость яйцекладки, массу яиц, процент разбитых, яйца с мягкой скорлупой и грязные). Цвет яичного желтка оценивают в конце фазы ксантофильного истощения (0d), еженедельно в течение трех недель (7d, 14d, 21d) и более часто в течение 4-ой недели (с 25d по 28d). Все яйца, отложенные в один день, берут на оценку цвета яичного желтка.
[0240] Переменные характеристики контролируют и регистрируют, дублируя, каждую вторую неделю при кормлении экспериментальными кормами (ежедневно массу тела, потребление корма, скорость яйцекладки, массу яиц, процент разбитых, яйца с мягкой скорлупой и грязные). Цвет яичного желтка оценивают в конце фазы ксантофильного истощения (0d), еженедельно в течение трех недель (7d, 14d, 21d) и более часто в течение 4-ой недели (с 24d по 28d). Все яйца, отложенные за каждый отдельный день, берут на оценку цвета яичного желтка.
[0241] Анализ по цветовому вееру проводят, используя цветовой веер DSM/Roche Yolk Colir Fan (также известный как цветовой веер Roche). Анализ имеет 15 шкал цветовых индексов, используемых для различения плотности цвета желтка. Способ включает оценку желтка как визуальное сравнение и определение каротиноидов. Результат оценки желтка по цветовому вееру показывает, что при добавлении красного пигмента CXT сопоставим с многими конкурентами. На ФИГ. 14 показан результат анализа по цветовому вееру в присутствии красного пигмента и без красного пигмента. Различия не детектируемы для потребителей.
Пример 23: Спектроскопические исследования.
-1
-1
-1
-1
-1
-1
[0242] Выполняют спектроскопические исследования с X-40 и XCT. На ФИГ. 15A показаны рядом ИК-Фурье спектры. X-40 и XCT имеют аналогичные характеристики с полосами, соответствующими колебательным переходам ароматических и алифатических функциональных групп. =C-H валентные колебания (3033 и 3010 см), C-H деформационные внеплоскостные колебания (710 см) и C-C валентные колебания в ароматическом цикле (1560, 1473 см) указывают присутствие ненасыщенных фрагментов в структуре. Кроме того, в обоих образцах присутствуют полосы, соответствующие -C-H валентным колебаниям алкильных групп (2915/2849 см), указывающие существование алифатических групп. В случае ИК-Фурье спектроскопии T40 интенсивные полосы при 1400, 1063 и 1024 см, соответствующие фосфатным группам, перекрываются с некоторыми полосами в области молекулы "отпечаток пальца". На ФИГ. 15B показана растянутая область от 1800 до 600 см. Нижняя и верхняя линии такие же, как на ФИГ. 15A.
[0243] На ФИГ. 15C показаны рамановские спектры X-40 (черный) относительно XCT (красный).
Пример 24: Тонкослойная хроматография
2
[0244] Образцы XCT и X-40 растворяют в хлороформе и центрифугируют, удаляя белый осадок. Тонкослойную хроматографию (ТСХ) проводят в подвижной фазе гексан : этилацетат (1:1 об./об.). ТСХ пластины проявляют при облучении Уф-светом и визуализируют, воздействуя посредством I. Начальная ТСХ, представленная на ФИГ. 16A, демонстрирует три основных соединения. Для выделения соединений из смеси образцов применяют хроматографические колонки с силикагелем. Начальные фракции элюируют, используя в качестве растворителя смесь гексан : этилацетат = 2:1 (фракции 1-5). Затем повышают полярность смеси растворителей, элюируя этилацетатом (фракции с 6 по 14), и в заключение 20% метанолом в этилацетате (фракции с 15 по 19). На ФИГ. 16B показаны результаты для X-40.
[0245] По результатам ТСХ можно сделать вывод, что пропорции основных соединений не являются одинаковыми для X-40 и XCT. Для обоих образцов основным соединением является соединение номер 3, что также подтверждается для количества, выделяемого в чистом виде, методом колоночной хроматографии X-40 и XCT. В случае XCT соединение 2 не удается успешно выделить из колонки, как показано на ФИГ. 16C, наряду с тем, что во фракции 2 присутствуют другие соединения. Для XCT количество соединения 2 существенно меньше, чем для X-40. Кроме того, количество выделяемого из колонки соединения 3 больше для XCT, чем для X-40.