Влияние ресвератрола на экспрессию генов, кодирующих ключевые ферменты гликолиза (KHK, GCK, PKLR) и липогенеза (acaca, FASN, SCD-1), у крыс, получавших высокожировой высокоуглеводный рацион

Конкурс молодых ученых

Калибровка. Для калибровки готовили совместные разведения 3-МХПД и глицидола, а также PP-3-МХПД и PP-2-МХПД концентрациями 0,01; 0,05; 0,5 и 5 ppm. Процедуру приготовления проб осуществляли согласно официальному методу AOCS Cd 29b-13.

Подготовка проб. Подготовку проб масел также осуществляли в соответствии с AOCS Cd 29b-13 с небольшими модификациями.

Условия газохроматографического разделения и идентификации. Пробы анализировали на газовом хроматографе Agilent Technologies 7890А с тройным квадрупольным масс-детектором Agilent Technologies 7000 (США). Колонка HP-5MS 30 м х 250 мкм х 0,25 мкм (Agilent, США). Условия разделения выставляли согласно AOCS Cd 29b-13. Газ-носитель - гелий, скорость потока 1,2 мл/мин, режим без деления потока. Параметры МС-детектирования: MRM-режим (режим мониторинга выбранных реакций), ионизация электронным ударом. Для идентификации и количественного определения использовали экспериментально подобранные параметры и переходы, представленные в табл. 1.

Таблица 1. Параметры переходов и соответствующих энергий соударения MRM-режима

Целевое соединение Время сканирования перехода, мс Переход для количественного анализа, m/z

3-МХПД-С15

3-МХПД

2-МХПД-С15

2-МХПД

3-МБПД-С15 250 247—>150

3-МБПД 250 242->147

Обработку результатов проводили в программном обеспечении Agilent MassHunter Qualitative Analysis B.06.00 и Agilent MassHunter Quantitative Analysis B.06.00.

Результаты. В работе были проанализированы 5 различных пищевых масел, полученные результаты представлены в табл. 2. Для сливочного и растительно-сливочного масла результат посчитан на килограмм жировой фракции. Стоит отметить, что настоящий метод еще находится на стадии разработки, поэтому экспериментально установленные показатели точности, правильности и воспроизводимости будут приведены в последующих работах.

Таблица 2. Содержание монохлорпропанолов и глицидола в различных пищевых маслах*.

Показатель Сливочное Оливковое Пальмовое РСМ Подсолнечное

Сумма 3-МХПД, мг/кг <<0,01 0,01 1,21 6,37 20,36

Сумма 2-МХПД, мг/кг <<0,01 <<0,01 0,33 2,31 7,96

Сумма глицидола (3-МБПД), мг/кг <<0,01 <0,01 1,41 32,42 54,09

П р и м е ч а н и е. * - результаты представлены в виде суммы свободной и этерифицированных форм 3-МХПД, 2-МХПД и глицидола соответственно. Погрешность определения ±20%.

Обсуждение. Использование MRM-режима позволило не только улучшить селективность анализа по сравнению с SIM-режимом (режим поиска заданных ионов), но и увеличить соотношение сигнал/шум. Это дало возможность определить содержание 3-МХПД в нерафинированном оливковом масле аналитов на уровне 0,01 ррт. Наибольшее содержание монохлорпропанолов и глицидола было обнаружено для пальмового, подсолнечного и растительно-сливочного масел. Такие высокие значения, особенно в подсолнечном масле, могут являться следствием жестких температурных условий при рафинации и дезодорации.

Заключение. Разработанный метод после прохождения соответствующих процедур метрологической аттестации может быть успешно использован для мониторинга содержания эфиров 3-МХПД и 2-МХПД, а также глицидола в различных пищевых маслах.

Мжельская К.В., Трусов Н.В., Балакина А.С., Гусева Г.В., Аксенов И.В.

ВЛИЯНИЕ РЕСВЕРАТРОЛА НА ЭКСПРЕССИЮ ГЕНОВ, КОДИРУЮЩИХ КЛЮЧЕВЫЕ ФЕРМЕНТЫ ГЛИКОЛИЗА (KHK, GCK, PKLR) И ЛИПОГЕНЕЗА (ACACA, FASN, SCD-1), У КРЫС, ПОЛУЧАВШИХ ВЫСОКОЖИРОВОЙ ВЫСОКОУГЛЕВОДНЫЙ РАЦИОН

ФГБУН «ФИЦ питания и биотехнологии», Москва

Актуальность. Многочисленные исследования показывают, что развитие ожирения напрямую связано с увеличением потребления продуктов питания, насыщенных жирами и простыми углеводами. Одним из перспективных

Часть I. Нутрициология и диетология

направлений коррекции ожирения и других метаболических нарушений считается включение в рацион минорных биологически активных веществ растительного происхождения - полифенолов.

Цель - изучить влияние различных доз ресвератрола на экспрессию генов основных ферментов гликолиза (KHK, GCK, PKLR) и липогенеза (ACACA, FASN, SCD-1) у крыс линии Wistar, получавших высокожировой высокоуглеводный рацион.

Материал и методы. Эксперимент проводили в течение 10 нед на 4 группах крыс самцов Wistar (n=6): 1-я (контрольная) группа получала полусинтетический (п/с) рацион и воду; 2-я группа - высокожировой рацион (30% жира) и 20% раствор фруктозы (ВУВЖР); 3-я группа - ВУВЖР и ресвератрол в дозировке 10 мг/кг м.т./сут, 4-я группа -ВУВЖР и ресвератрол в дозировке 100 мг/кг м.т./сут. Животных содержали в клетках по 2 особи. В конце эксперимента оценивали относительные уровни экспрессии генов ферментов гликолиза (KHK, GCK, PKLR) и липогенеза (ACACA, FASN, SCD-1) в печени крыс методом ПЦР в режиме реального времени.

Результаты. Относительные уровни экспрессии мРНК KHK и PKLR были достоверно ниже - в 1,9 и 5 раз соответственно, а гена GCK достоверно повышался в 23,5 раза у животных 2-й группы по сравнению с контролем (р<0,05), в то же время экспрессия мРНК ACACA, FASN, SCD-1 была достоверно ниже - в 3,8, 6,5 и 16,7 раза у животных 2-й группы по сравнению с контролем (р<0,05). При включении в рацион ресвератрола в количестве 10 мг/кг м.т./сут экспрессия мРНК KHK, PKLR и SCD-1 не отличалась от крыс во 2-й группе и была также ниже контроля, в то время как генов ACACA и FASN достоверно снижалась по сравнению с ВУВЖР на 14% и 22% (на уровне тенденции, р=0,091), соответственно. При включении в рацион ресвератрола в количестве 100 мг/кг м.т./сут относительные уровни экспрессии мРНК KHK, PKLR и GCK были достоверно ниже - в 1,2, 1,3 и 3,4 раза, соответственно, ACACA -на 19%(р<0,05) и SCD-1 - на 47% (на уровне тенденции, р=0,074) по сравнению с группой, получавшей высококалорийный рацион без ресвератрола. Экспрессия мРНК FASN в группе, получавшей ВУВЖР с ресвератролом в количестве 100 мг/кг м.т./сут, не изменялась.

Обсуждение. Потребление высокоуглеводного (за счет фруктозы) высокожирового рациона в течение длительного времени приводит к значительным изменениям в экспрессии генов ферментов липидного и углеводного обмена.

Снижение относительных уровней экспрессии генов KHK, PKLR, кодирующих ключевые ферменты метаболизма фруктозы, кетогексокиназу и пируваткиназу, возможно, является ответом клетки на избыточное поступление моносахарида, а повышение относительного уровня экспрессии гена GCK, кодирующего глюкокиназу, фермент, превращающий глюкозу в глюкозу-6-фосфат, возможно, активируется в качестве альтернативного. Снижение относительных уровней экспрессии генов SCD-1, FASN, и ACACA, кодирующих ключевые ферменты биосинтеза жирных кислот в печени, - стеароил-КоА-десатуразу-1, синтазу жирных кислот и ацетил-КоА-карбоксилазу, может также являться следствием избыточного поступления жиров в клетку.

Добавление в рацион ресвератрола независимо от дозировки не влияло на уровни экспрессии генов KHK, PKLR, SCD-1, FASN и ACACA, сниженные при ВУВЖР, но снижало экспрессию гена GCK на 56% и 26% относительно 2-й группы, на малой и большой дозировке БАВ, соответственно.

Вывод. Изменение состава рациона (добавление жира и фруктозы), как и включение различных доз ресвератрола, вызвало значительный дисбаланс в относительных уровнях экспрессии генов основных ферментов гликолиза (KHK, PKLR, GCK) и липогенеза (SCD-1,FASN и ACACA) в печени крыс Wistar. Полученные результаты выявили способность ресвератрола снижать вызванную рационом индукцию экспрессии гена GCK, кодирующего фермент глюкокиназу.

Назарова А.М.1, Шарафетдинов Х.Х.1-3, Плотникова О.А.1, Пилипенко В.В.1, Алексеева Р.И.1, Кондратьева О.В.1, Сасунова А.Н.1, Кочеткова А.А.1, Воробьева В.М.1

ОЦЕНКА ЭФФЕКТИВНОСТИ СПЕЦИАЛИЗИРОВАННОГО ПИЩЕВОГО ПРОДУКТА С МОДИФИЦИРОВАННЫМ УГЛЕВОДНЫМ ПРОФИЛЕМ У БОЛЬНЫХ САХАРНЫМ ДИАБЕТОМ 2 ТИПА

1 ФГБУН «ФИЦ питания и биотехнологии», Москва

2 ФГБОУ ДПО «Российская медицинская академия непрерывного профессионального образования» Минздрава России, Москва

3 ФГАОУ ВО «Первый Московский государственный медицинский университет им. И.М. Сеченова» Минздрава России

Актуальность. В последние годы значительное внимание уделяется разработке персонализированных подходов к лечению сахарного диабета (СД) 2 типа с учетом индивидуальных показателей пациента, полиморфизма генов, контролирующих обмен глюкозы и липидов. Многочисленные клинические исследования свидетельствуют о том, что включение в персонализированный рацион специализированного пищевого продукта (СПП) с заданным химическим составом оптимизирует химический состав диеты, корригирует нарушение пищевого статуса у пациентов с СД 2 типа.

Цель - оценить эффективность комплексной терапии у больных СД 2 типа при включении СПП с модифицированным углеводным профилем (желейного мармелада с сублимированным соком) в стандартную гипокалорийную диету у больных СД 2 типа.