СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОДЕИНА
METHOD OF CODEINE IDENTIFICATION

Изобретение относится к области аналитической химии и может быть использовано для обнаружения и количественного определения кодеина в различных объектах, в частности в лекарственных препаратах.
В настоящее время известны и широко используются спектрофотометрические методы для определения кодеина в лекарственных препаратах. Большинство этих методов предполагает предварительное разделение компонентов смеси экстракцией или тонкослойной хроматографией (ТСХ). Все это затрудняет проведение анализа, усложняет и удлиняет его. Кроме того, проведение экстракции часто связано с использованием токсичных органических растворителей.
Так, известен способ экстракционно-фотометрического определения 0,01 - 0,1 мг/мл кодеина [Крамаренко В.Ф. Токсикологическая химия. - Киев: Высшая школа, 1989. 447 с.]. Способ основан на реакции кодеина с тропеолином 00, продуктом которой является окрашенный ионный ассоциат, экстрагирующийся хлороформом.
К недостаткам этого способа можно отнести необходимость проведения многократной экстракции, а также использование токсичных органических растворителей (хлороформа и метилового спирта).
Наиболее близким техническим решением, выбранным в качестве прототипа, является способ спектрофотометрического определения не более 1 мг/мл кодеина [Крамаренко В.Ф. Токсикологическая химия. - Киев: Высшая школа, 1989. 447 с.], заключающийся в предварительном разделении компонентов смеси методом ТСХ, элюировании с хроматографической пластины зоны, содержащей кодеин, фильтровании полученного раствора и последующем измерении его оптической плотности при длине волны 285 нм.
К недостаткам данного способа можно отнести затраты времени, связанные со стадиями элюирования и фильтрования, дополнительный расход реагентов и материалов, а также потери целевого компонента.
Техническим результатом, на достижение которого направлено предлагаемое изобретение, является сокращение времени обнаружения и количественного определения кодеина, уменьшение трудоемкости процесса, уменьшение вероятности потерь целевого компонента.
Технический результат достигается тем, что в способе определения кодеина, включающем разделение компонентов смеси методом тонкослойной хроматографии с выделением хроматографической зоны кодеина реактивом Драгендорфа, новым является то, что количественное определение кодеина проводят в области его проявленной зоны непосредственно в твердой фазе путем измерения коэффициента диффузного отражения при длине волны 520 нм.
Указанные отличия позволяют сделать вывод о соответствии заявляемого технического решения критерию «новизна». Признаки, отличающие заявляемый способ от прототипа, не выявлены в других технических решениях при изучении данной и смежных областей химии и, следовательно, обеспечивают заявляемому решению соответствие критерию «изобретательный уровень».
f
Сущность способа заключается в том, что проводят предварительное разделение компонентов смеси методом тонкослойной хроматографии с выделением хроматографической зоны кодеина с характерной для этого алкалоида оранжевой окраской (R=0,23±0,02). Далее измеряют коэффициент диффузного отражения (R) в области проявленной зоны кодеина непосредственно в твердой фазе при длине волны 520 нм на спектрофотометре «Пульсар» по отношению к образцу сравнения - фон пластинки.
Коэффициент диффузного отражения пересчитывают в функцию Гуревича-Кубелки-Мунка по уравнению:
2
2
0
0
ΔF(R)=[(1-R)/2R]-[(1-R)/2R],
0
где R и R - коэффициенты диффузного отражения прореагировавшего образца и фона соответственно.
Концентрацию кодеина определяют по градуировочному графику, построенному в координатах ΔF(R)-С, где С - концентрация кодеина в растворе (мкг/мл).
Заявляемый способ осуществляется следующим образом.
Извлечение кодеина из лекарственного препарата проводят по известной методике (Швайкова М.Д. Токсикологическая химия. - М: Медицина, 1975, 376 с.). Далее сухой остаток растворяют в 20 мл этанола. Полученный раствор 0,2 мл наносят на линию старта хроматографической пластинки. Правее на расстоянии 2 см на линию старта наносят каплю раствора «свидетеля» (стандартный раствор кодеина в этаноле, 1000 мкг/мл). Нанесенные на пластинку пробы растворов подсушивают на воздухе, а затем пластинку переносят в камеру для хроматографирования, насыщенную парами растворителей (ацетон-хлороформ-аммиак в соотношении 24:12:1). После продвижения фронта растворов на 10 см выше линии старта пластинку вынимают из камеры, подсушивают на воздухе и опрыскивают реактивом Драгендорфа (кислотный раствор иодвисмутата калия). В области проявленной зоны кодеина непосредственно в твердой фазе измеряют коэффициент диффузного отражения (R) при длине волны 520 нм, пересчитывают в функцию Гуревича-Кубелки-Мунка, количество кодеина находят по градуировочному графику.
0
Для построения градуировочного графика из исходного раствора кодеина в этаноле (1000 мкг/мл) путем разбавления готовят рабочие растворы следующих концентраций: 25, 50, 100, 250, 500, 750 мкг/мл. На хроматографические пластинки наносят по 0,2 мл полученных рабочих растворов, повторяют вышеописанные операции ТСХ и измеряют соответствующие значения R и R. Предел обнаружения кодеина, рассчитанный по 3S-критерию, составил 9 мкг/мл (n=5, Р=0,95). Градуировочный график линеен до 1000 мкг кодеина на 1 мл раствора.
Оценку правильности результатов определения кодеина проводят методом «введено-найдено». С этой целью готовят модельные растворы кодеина с концентрациями 40, 200, 400, 600, 800 мкг/мл растворением точных навесок кодеина фосфата в этаноле.
Результаты определения кодеина в модельных растворах приведены в табл.1, в лекарственных препаратах в табл.1, где С - концентрация кодеина (мкг/мл), S - стандартное отклонение, Sr - относительное стандартное отклонение, δ - доверительный интервал.
Таблица 1 - Результаты количественного определения кодеина в модельных растворах (n=5, Р=0,95)
Концентрация кодеина (С±δ), мкг/мл
S
S<sub>r</sub>
Введено
Найдено
40
42±3
2,5
0,06
200
193±12
9,7
0,05
400
412±20
16,5
0,04
600
590±22
17,7
0,03
800
808±20
16,2
0,02
Относительное стандартное отклонение в пределах линейного участка градуировочного графика не превышает 0,06 (6%).
Способ иллюстрируется следующими примерами.
Пример 1. Обнаружение и количественное определение кодеина в лекарственном препарате «Пенталгин Плюс» (ОАО «Фармстандарт-Лексредства», г.Курск, Россия).
Таблетку лекарственного препарата тщательно измельчают в фарфоровой чашке, переносят в делительную воронку на 100 мл, растворяют в 10 мл 0,01н НСl и экстрагируют диэтиловым эфиром трижды порциями по 10, 5, 5 мл в течение 15 мин. Экстракт, так называемое «кислое извлечение» из лекарственного препарата, содержит фенобарбитал, напроксен, а также часть кофеина.
Водный остаток подщелачивают 25%-ным раствором аммиака до рН 10 и экстрагируют 5 мл хлороформа в течение 15 мин. Органическую фазу фильтруют через бумажные фильтры (красная лента) и выпаривают досуха при комнатной температуре. Экстракт, так называемое «щелочное извлечение», содержит кодеин, парацетамол, метамизол натрия, а также оставшуюся часть кофеина.
«Щелочное извлечение» из лекарственного препарата используют для количественного определения содержания кодеина. Для этого сухой остаток растворяют в 20 мл этанола. Полученный раствор 0,2 мл наносят на линию старта хроматографической пластинки. Правее на расстоянии 2 см на линию старта наносят каплю раствора «свидетеля» (стандартный раствор кодеина в этаноле, 1000 мкг/мл). Нанесенные на пластинку пробы растворов подсушивают на воздухе, а затем пластинку переносят в камеру для хроматографирования, насыщенную парами растворителей (ацетон-хлороформ-аммиак в соотношении 24:12:1). После продвижения фронта растворов на 10 см выше линии старта пластинку вынимают из камеры, подсушивают на воздухе и опрыскивают реактивом Драгендорфа (кислотный раствор иодвисмутата калия). В области проявленной зоны кодеина непосредственно в твердой фазе измеряют коэффициент диффузного отражения (R) при длине волны 520 нм, пересчитывают в функцию Гуревича - Кубелки - Мунка, количество кодеина находят по градуировочному графику.
Пример 2. Обнаружение и количественное определение кодеина в лекарственном препарате «Пенталгин Н» (ОАО «Фармстандарт-Лексредства», г.Курск, Россия) проводится по описанному в примере 1 способу.
Пример 3. Обнаружение и количественное определение кодеина в лекарственном препарате «Седальгин-Нео» («Балканфарма-Дупница АД», г.Дупница, Болгария) проводится по описанному в примере 1 способу.
Результаты количественного определения кодеина в лекарственных препаратах приведены в табл.2.
Таблица 2 - Результаты количественного определения кодеина* в лекарственных препаратах (n=5, P=0,95)
Наименование препарата
Концентрация кодеина (С±δ), мкг/мл
S
S<sub>r</sub>
Расчетные рецептурные данные
Найдено
Пенталгин Плюс
400
386±24
19,3
0,05
Пенталгин Н
400
417±26
20,9
0,05
Седальгин-Нео
500
512±25
20,5
0,04
∗в пересчете на кодеина фосфат
Приведенные примеры подтверждают пригодность предлагаемого способа количественного определения кодеина в интервале концентраций до 1000 мкг кодеина на 1 мл раствора. Предел обнаружения по предлагаемому способу составляет 9 мкг/мл.
Таким образом, в результате использования заявляемого технического решения существенно сокращается время определения кодеина без ухудшения других метрологических характеристик, уменьшается трудоемкость процесса. Кроме того, уменьшается вероятность потерь целевого компонента, имеющих место в прототипе при элюировании с хроматографической пластины зоны, содержащей кодеин, и фильтровании полученного раствора.