Влияние адаптогенов и Неоселена на иммунитет и антиоксидантную активность в условиях нормобарической гиперкапнической гипоксии в эксперименте

ЛЕКАРСТВЕННЫЕ РАСТЕНИЯ

© КРИВОШЕЕВА Е.М., ФЕФЕЛОВА Е.В., СЕРДЦЕВ М.И., КОХАН С.Т., ТКАЧЕНКО А.Э. — 2009

ВЛИЯНИЕ АДАПТОГЕНОВ И НЕОСЕЛЕНА НА ИММУНИТЕТ И АНТИОКСИДАНТНУЮ АКТИВНОСТЬ В УСЛОВИЯХ НОРМОБАРИЧЕСКОЙ ГИПЕРКАПНИЧЕСКОЙ ГИПОКСИИ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ

Е.М.Кривошеева1, Е.В.Фефелова2, М.И.Сердцев1, проф., С.Т.Кохан1, А.Э.Ткаченко1 ('Читинский государственный университет, ректор — Ю.Н. Ре...к, Институт социально-политических систем, кафедра основ медицины и организации здравоохранения зав. — д.м.н., проф. М.И. Сердцев;

2 Читинская Государственная медицинская академия, ректор — д.м.н., проф. А.В. Говорин)

Резюме. Настоящая работа посвящена экспериментальному исследованию влияния растительных адапто-генов настойки и экстракта из корня молочая Фишера и селенсодержащего препарата «Неоселен» на показатели иммунитета и антиоксидантной защиты в условиях нормоксии и нормобарической гиперкапнической гипоксии. Исследование проводили на 160 белых лабораторных крысах средней массой 167±2,0 гр., которые были разделены на 8 экспериментальных групп, в каждой группе препараты вводились внутрибрюшинно в течении 5 суток, половина животных были подвергнуты гипоксическому воздействию. В результате исследования определено, что в условиях гипоксии наиболее мощным иммуностимулирующим действием обладает экстракт молочая Фишера. У всех исследуемых препаратов зарегистрирован антиоксидантный эффект, наиболее выраженный у настойки молочая Фишера и «Неоселена» в условиях гипоксии.

Ключевые слова: молочай Фишера, иммунитет, антиоксидантная активность, гипоксия.

ADАPTOGENES AND NEOSELENIUM INFLUENCE ON IMMUNITY AND ANTIOXIDANT ACTIVITY IN NORMOBARRIC HYPERCAPNIC HYPOXIA IN EXPERIMENT

E.M. Krivosheeva, E.V. Fefelova, S.T. Ko^an, M.I. Serdtsev, A.E. Tkachenko

Summary. As the title implies the article describes an experimental investigation of vegetable adаptogenes influence of Euphorbia Fisher tincture and extract and seleniumkeeping medicine «Neoselenium» on immunity and antioxidant protection in normobarric hypercapnic hypoxia and normoxia. The experiment included 160 white experimental rats of mean weight 167+2,3gr. divided into 8 groups. Medicines were injected intraperitoneally during 5 days, half of enimals were subjected to hypoxia influence. It should be noted that in hypoxia Euphorbia Fisher extract has the most immunostimulating action. All the medicines under study demonstrated antioxidant effect, especially in Euphorbia Fisher tincture and «Neoselenium» in hypoxia.

Key words: Euphorbia Fisher, immunity, antioxidant protection, hypoxia.

В современных условиях экологического стресса наиболее подвержены повреждению иммунная и антиоксидантная системы организма. Поэтому актуальной задачей современной медицинской науки является поиск биологически активных веществ с иммуномодулирующей, антиоксидантной, антигипоксической активностью. В данном аспекте наибольший интерес представляют природные соединения, они легко включаются в биохимические процессы живого организма, оказывают многостороннее, мягкое, регулирующее и безопасное действие при длительном использовании.

С целью поиска перспективных растительных препаратов в настоящей работе проведена комплексная оценка их влияния на показатели иммунитета, процессы перекисного окисления липидов и антиоксидантной защиты в условиях нормоксии и гипоксии. В народной медицине Забайкалья молочай Фишера (Палласа) применяется в лечении онкологических заболеваний, туберкулеза, эхинококкоза печени, фурункулеза, ожоговой болезни, ХНЗЛ, импотенции, аденомы простаты, анемии любого генеза и воспаления [2,5,6,7,8,13].

Материалы и методы

Экстракт и настойку из корня молочая Фишера получали из предварительно очищенного от смол сырья. Экстракт (ЭМФ) получали путем 4-х этапного экстрагирования методом горячего хлороформно-спиртового извлечения (Т.В.Хомова с соавт., 1983 г.). Настойку (НМФ) получали путем спиртового извлечения из растительного сырья без нагревания и удаления экстрагента согласно ГФ XI (1990). Препарат «Неоселен» зарегистрирован Минздравмедпромом России № 0431/344. Код ОКП — 9325740288. Код ОКДП 423257 от 20.06.96, утвержден Государственным Фармкомитетом Минздрава России (№ 11-15-2133 от 26.06.96).

Исследования проводили на 160 белых лабораторных крысах средней массой 167+2,3 г, выращенных в виварии Читинской государственной медицинской академии. Животные содержались в стационарных условиях вивария, получали стандартный корм и воду без ограничения [9]. Животные были разделены на 8 групп для оценки иммунитета и активности процессов пере-кисного окисления липидов и антиоксидантной защиты в норме и в условиях гиперкапнической гипоксии. Экстракт молочая Палласа вводили внутрибрюшинно в дозе 1 мл/кг. Животным контрольной группы вводили изотонический раствор натрия хлорида 0,9% в эквивалентном объеме. Все опытные животные получали в течении 5 суток исследуемые препараты. Дозы экстракта и настойки молочая Палласа были определены в предварительных исследованиях на острую токсичность.

Влияние селена на состояние системы Перекисное окисление-Антиоксидантная защита изучали путем введения препарата «Неоселен» в дозе 7,1 мкг/кг массы животного. Гиперкапническую нормобарическую гипоксию моделировали методом Ковалева Г.В. в условиях гермокамеры [3,6].

Животные были разделены на следующие экспериментальные группы:

I (n=21) физ. раствор 0,1 мл /100 г внутрибрюшинно

II (n=21) НМФ 0,1 мл /100 г внутрибрюшинно

III (n=21) ЭМФ 0,1 мл /100 г внутрибрюшинно

IV (n=21) Гиперкапническая Гипоксия

V (n=21) НМФ 0,1 мл /100 г внутрибрюшинно + гипоксия

VI (n=21) ЭМФ 0,1 мл /100 г внутрибрюшинно + гипоксия

VII (n=17) «Неоселен» 7,1 мкг/кг внутрибрюшинно

VIII (n=17) «Неоселен» 7,1 мкг/кг внутрибрюшинно + гипоксия

В работе использованы следующие методы исследования:

Реакция локального гемолиза в модификации Genningham. Была проведена предварительная иммунизация животных путем внутрибрюшинного введения 5% суспензии ксеногенных эритроцитов барана в количестве 0,1 мл. Объектом исследований явилась иммунизированная эритроцитами барана ткань селезенки.

ТБК-тест по методу Л.И.Андреевой с соавт. (1988) [1].

Реакция хемилюминесценции по методу Ю.А. Владимирова, (1972). В работе использовали хемилюми-нометр BioOrbit 1251, диспенсер LKB 1291, аналоговоцифровой преобразователь фирмы Ampersand Ltd, программно-аппаратный комплекс МультиХром для Windows, версия 1.52k [4,5].

Статистическую обработку данных проводили по методу Стьюдента, используя пакет статистических программ Statistic 11.0 [11].

Результаты и методы

При исследовании влияния настойки и экстракта из корней молочая Палласа на иммунный статус были получены следующие данные. У крыс в условиях нормок-сии настойка молочая Фишера увеличивала содержание гемолизированных спленоцитов в 3,6 раза (62,8+5,0; Р <

0, 001), экстракт молочая Фишера — в 1,6 раза (27,5+2,3; Р < 0,05) по сравнению с интактными крысами (17,5+3,3). Воздействие гипоксического фактора также явилось стимулятором клеточного иммунитета. В контрольной группе животных, подвергнутых гипоксическому влиянию в гермокамере, содержание гемолизированных спленоцитов увеличилось в 3,5 раза (62,01+4,15; Р < 0, 001). В условиях гипоксии наиболее выраженным иммуностимулирующим действием обладал ЭМФ: количество гемолизированных спленоцитов было выше на 57 % по сравнению с контрольной группой (85,1+5,5). В группе животных, получавших НМФ на фоне гипоксии, этот показатель возрос на 25,5 % (77,8+4,32).

Исследование изменения активности ПОЛ показало, что все исследуемые вещества достоверно снижали содержание ТБК-активных продуктов (ТБК-АП) в сыворотке. Наиболее выраженное действие исследуемых препаратов наблюдалось в условиях гипоксии. Так,

НМФ снижала концентрацию ТБК-АП на 86%, ЭМФ — на 71%, «Неоселен» — на 64% по сравнению с контролем. Уменьшение концентрации ТБК-активных продуктов коррелировало с повышением активности антиок-сидантной защиты (АОЗ). Так, по данным хемилюмино-граммы, антиоксидантный фон увеличивался при введении НМФ на 89%, ЭМФ — на 28%, «Неоселена» — на 67% по сравнению с контролем.

Обсуждение. Нами получены данные о наличии выраженных иммуностимулирующих свойств у исследуемых препаратов из корня молочая Фишера, возрастающих в условиях гипоксии. В условиях гипоксии иммуностимулирующий эффект ЭМФ превосходит более чем в два раза эффект НМФ.

Все исследуемые препараты блокировали процессы ПОЛ и активировали антирадикальную защиту. Наличие антиоксидантных свойств у препаратов из корня молочая Фишера объясняется высоким содержанием антиоксидантов. Так, по данным Е.Д. Петряева и Б.И.Дулеповой, в корнях молочая Фишера содержатся флавоноиды, сапонины, гликозиды, селен, следы ан-траценпроизводных, аскорбиновая кислота [7,10,12]. Флавоноиды предохраняют стенки капилляров от повреждающего действия свободных радикалов путем нейтрализации активных форм кислорода и обрыва цепных свободнорадикальных реакций [14]. Кроме флавоноидов, большое влияние на антиокислительную активность оказывает селен, который входит в состав селензависимой глутатионпероксидазы, инактивирующей активные формы кислорода [5,8].

Таким образом, экстракт и настойка молочая Фишера, препарат «Неоселен» обладают иммуностимулирующими свойствами, возрастающими в условиях гипоксии. Наиболее выраженным стимулирующим действием на реакции клеточного иммунитета в условиях гиперкапнической нормобарической гипоксии обладает экстракт молочая Фишера.

2. Все исследуемые препараты блокируют процессы перекисного окисления липидов и активируют антира-дикальную защиту.

Таким образом, исследуемые средства являются перспективными в плане создания на их основе безопасных препаратов для адаптации организма к гипоксическим воздействиям.

ЛИТЕРАТУРА

1. Андреева Л.И., Кожемякин Л.А., Кишкун А.А. // Лаб. Дело. — 1988. — № 11. — С. 41-43.

2. Буданцева А.А. Дикорастущие полезные растения России. СПб., Изд. сПхФА, 2001. — 663 с.

3. Буреш Я. Методики и основные эксперименты по изучению мозга и поведения. — М: Высшая школа, 1999. — 399 с.

4. Владимиров Ю.А., Шерстнев М.П.

Хемилюминесценция клеток животных.// Итоги Науки и Техники, Сер. Биофизика, Т.24. —М., ВИНИТИ, 1989.

5. Зенков Н.К., Ланкин В.З., Меньшикова Е.Б.3. Окислительный стресс/Маик: Наука/Интерпериодика, 2001. — 344 с.

6. Ковалев Г.В. Ноотропные средства. — Волгоград, 1990. — 355 с.

7. Лекарственные растения Забайкалья: методические рекомендации/ Б.И Дулепова и др. Чита, 1991.

8. Мартышин И.А. Влияние «Неоселена» в сочетании

с препаратами железа на течение железодефицитной анемии. Автореф. к-та мед. наук. — Улан-Удэ, 2003. — 21 с.

9. Методические рекомендации по оценке качества лабораторных животных для медико-биологических исследований / А.М.Беспалов, Р.Ф.Кузина. — М., 1985. — 63 с.

10. Петряев Е.Д. Лекарственные растения Забайкалья./ Е.Д.Петряев. — Чита: ЧИТГИЗ, 1952. — С. 106-108.

11. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. — М., 2000.- 398 с.

12. Телятьев В.В. Целебные клады Центральной Сибири. — Иркутск, 2000.

13. Шашков С.И., Бураева Л.Б., Старостенко Ф.М. Влияние настойки корней молочая Фишера на коагуляционное звено при воспалительном процессе // Человек и лекарство. — М., 2001. — С. 85.

14. Surata Y., Takahama U., Kimura M. // Biochim. et biophys. Acta. 1984. — Vol. 799. — P. 313-317.

Адрес для переписки: 672000, г. Чита, ул. Балябина, д. 14, к. 205. Телефон: 26-34-18, 32-18-55, 8-924-389-95-19.

Факс: (3022) 26-34-18. Электронный адрес: krivosheeva_e_m@mail.ru