Сравнительная оценка биоэквивалентности оригинального и разработанного препаратов модифицированного высвобождения на основе триметазидина

ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ ХИМИЯ УДК 615.1

СРАВНИТЕЛЬНАЯ ОЦЕНКА БИОЭКВИВАЛЕНТНОСТИ ОРИГИНАЛЬНОГО И РАЗРАБОТАННОГО ПРЕПАРАТОВ МОДИФИЦИРОВАННОГО ВЫСВОБОЖДЕНИЯ НА ОСНОВЕ ТРИМЕТАЗИДИНА

Е.В. Блынская1, К.В. Алексеев1, Т.П.Калмыкова 2 С.Э. Кондаков3

Проведено сравнительное фармакокинетическое изучение оригинального препарата на основе триметазидина - «Предуктал МВ» («Сервье», Франция), а также разработанных таблеток триметазидина модифицированного высвобождения. Проведена оценка их фар-макокинетических показателей, значений биодоступности. В опытах in vivo показано, что процессы всасывания, распределения, метаболизма и выведения триметазидина при применении таблеток оригинального препарата и триметазидина модифицированного высвобождения одинаковы, что свидетельствует о биоэквивалентности оригинальной и разработанной лекарственных форм.

Ключевые слова: триметазидин, фармакокинетика, биоэквивалентность.

Традиционный подход к лечению ишемии миокарда у больных с хронической стабильной стенокардией заключается в применении лекарственных препаратов гемодинамического действия, позволяющих уменьшить потребление миокардом кислорода и увеличить коронарный кровоток (бета-блокаторы, нитраты, антагонисты кальция).

В повседневной клинической практике триметазидин (1-[(2,3,4-триметоксифенил)метил]пиперазин (в виде дигидрохлорида)), широко используется в виде лекарственного препарата в таблетках по 20 мг более 20 лет. Антиангинальная эффективность триметази-дина в лечении стабильной стенокардии была доказана как при монотерапии, так и при комбинированном назначении с другими антиангинальными средствами [1]. Триметазидин уменьшает внутриклеточный ацидоз и содержание фосфатов, что обусловлено ишемией миокарда и реперфузией, предотвращает активацию нейтрофилов в зоне ишемии, препятствует повреждающему действию свободных радикалов, сохраняет целостность клеточных мембран, увеличивает продолжительность электрического потенциала, что приводит к улучшению механической функции сердца [2]. Установлено, что применение препаратов на основе триметазидина позволяет сократить частоту приступов при стенокардии, снизить перепады АД и повысить толерантность к физической нагрузке [3].

Некоторое время назад была разработана и внедрена в клиническую практику лекарственная форма препарата с модифицированным высвобождением действующего вещества, в таблетках по 35 мг - Предуктал МВ. Данная лекарственная форма сохраняет антиангинальную эффективность на протяжении 12 ч после приема одной таблетки и обеспечивает круглосуточную кардиопротекцию [4]. Создание модифицированных лекарственных форм триметазиди-на с помощью специального подбора вспомогательных веществ снижает риск проявления негативных эффектов благодаря непрерывному высвобождению препарата из таблетки, обеспечивающему равномерное всасывание и устойчивый уровень действующего вещества в крови в течение длительного времени [5].

Материалы и методы

Для изучения фармакокинетики использовали следующие приборы и оборудование: центрифуга «Beckman J-6B» (США), аппарат для встряхивания («Laboratory shaker type 358S», Польша), жидкостный хроматограф «Series 200» фирмы «Perkin Elmer» (США), оснащенный градиентным насосом, спектрофотометрическим детектором и компьютером «Pentium 4» с программным обеспечением «MultiChrom», петлевым краном-дозатором фирмы «Rheodyne» (США), модель 7125.

Изучаемые фармацевтические препараты: три-метазидин в таблетках модифицированного высвобождения, покрытых оболочкой и содержащих по 35 мг триметазидина гидрохлорида (тестируемая лекарственная форма Т). «Предуктал МВ» в таблетках модифицированного высвобождения, покрытых оболочкой, содержащий по 35 мг триметазидина гидрохлорида (производство «Сервье», Франция, лекарственная форма сравнения R). Физико-химические свойства и концентрация действующего начала триметазидина гидрохлорида в препаратах Т и R эквивалентны.

Фармакокинетические исследования

Для исследования использовали 6 здоровых беспородных собак-самцов средней массой 11,4±1,8 кг, возрастом около 3-4 лет. Удельные дозы препаратов, полученных животными, составляли 3,12±0,43 мг/кг. Животных содержали в стационарных условиях при естественном световом режиме и стандартном рационе. Акклиматизационный период (карантин) длился 12 дней. В течение карантина проводили ежедневный осмотр каждого животного (поведение и общее состояние). За 12 ч до начала эксперимента животных лишали пищи и доступа к воде. Исследуемые препараты вводили собакам внутрь, давая однократно по одной таблетке с небольшим количеством мясного фарша. Стандартное питание животные получали через 2 ч после начала эксперимента. Испытания препаратов осуществляли по перекрестной схеме - каждая собака попеременно получала изучаемую лекарственную форму (Т) и (Я). Временной интервал между приемом препаратов составлял две недели [6].

Пробы крови в объеме, достаточном для получения 1,0 мл плазмы, отбирали из вен передних и задних конечностей шприцом в гепаринизированные пластмассовые пробирки до применения препарата (контрольная проба) и через 0,5; 1; 1,5; 2; 3; 4; 6; 10 и 24 ч после введения. Плазму крови отделяли центрифугированием при 5000 об./мин и хранили до анализа при температуре 20° С.

Экстракцию триметазидина осуществляли по следующей схеме: пробы плазмы крови (1,0 мл) подщелачивали 0,1 мл 0,25 N раствора №ОН и добавляли 3,0 мл дихлорметана. Встряхивали пробирку в течение 15 мин в аппарате для встряхивания и затем центрифугировали 10 мин при 5000 об./мин. Органическую фазу (2,0 мл) отделяли и выпаривали на водяной бане при 55°С в токе азота [7]. Сухой остаток растворяли в 0,1 мл подвижной фазы. В хроматогра-фическую колонку вводили 20 мкл полученного рас-

твора. Процент экстракции триметазидина из плазмы крови определяли по формуле:

^экстр = (tg a/tg в)х100%,

где tg a, tg в - тангенс угла наклона внутренней и внешней калибровочных кривых по отношению к оси абсцисс.

В результате измерений установлено, что процент экстракции триметазидина (среднее из трех определений на точку) составил 90,80±3,14%.

Количественное определение триметазидина в биологических пробах осуществляли методом ВЭЖХ. Условия хроматографирования были следующие: стационарная фаза - колонка «Luna» фирмы «Phenomenex» с обращенно-фазным сорбентом C18(2) (4,6x250 мм; 5 мкм); подвижная фаза - смесь 700 мл дистиллированной воды, KH2PO4 (0,02 M) и 300 мл ацетонитрила; рН 6,0, (нужное значение рН смеси устанавливали введением триэтиламина); скорость подвижной фазы 1,0 мл/мин; детектирование на УФ-спектрофотометре при длине волны 285 нм, соответствующей максимуму поглощения вещества; объем петли хроматографа 20 мкл. Образцы хромато-графировали при комнатной температуре (22-23°С). Перед хроматографированием подвижную фазу фильтровали и дегазировали на ультразвуковой бане. Такая система очистки позволила избежать появления дополнительных пиков во время анализа. В этих условиях время удерживания триметазидина составило ~6,4±0,4 мин. Предел обнаружения разработанной методики по триметазидину ~23 нг/мл.

Метрологическая характеристика методики количественного определения триметазидина в плазме крови (in vitro) представлена в табл. 1.

На основании зависимости концентрации от времени модельно-независимым методом (программа «M-IND») рассчитывали следующие фармакокинети-ческие параметры, используемые для интерпретации экспериментальных данных [8, 9]:

AUC(0_х) (нгхч/мл) - площадь под фармакокинети-ческой кривой «концентрация лекарственного вещества - время». AUCрассчитывается от момента введения до бесконечности;

T„„„,. (ч) - время достижения максимальной кон-

макс 4 '

центрации лекарственного вещества в плазме крови;

Смакс (нг/мл)- максимальная концентрация лекарственного вещества в плазме крови;

T1/2 (ч) - период полувыведения, т.е. период, за который выводится половина введенной и всосавшейся дозы лекарственного вещества;

Кэл (ч-1) - константа скорости элиминации, т.е. па-

Т а б л и ц а 1

Метрологическая характеристика методики количественного определения триметазидина с применением

ВЭЖХ в плазме крови

Взято

100,0 98,5 100,7 104,2 101,05 2,90 2,323 2,299

97,9 99,4 102,7

500,0 504,7 493,5 496,7 499,48 4,29 3,434 0,687

498,2 503,9 499,9

1000,0 1000,6 1000,3 999,7 999,9 5,43 4,344 0,434

1002,0 1006,7 990,1

раметр, характеризующим скорость выведения вещества из плазмы крови;

Смакс /AUC(0^œ) (ч-1) - параметр, характеризующий скорость всасывания препарата в системный кровоток.

Относительную биодоступность таблеток триметазидина модифицированного высвобождения (T) по сравнению с таблетками (R) определяли, используя уравнения:

F=AUCjxDE Х10 , =^£1х100о/

AUCR XDJ

Смакс R

F

(С макс

(Смаке / AUCq^^

)R

х100%,

макокинетические параметры по полученным фарма-кокинетическим кривым [10]. Полученные значения основных параметров после однократного перораль-ного введения таблеток триметазидина (Т) и (R) собакам в дозе 3,12 мг/кг приведены в табл. 2.

В нулевое время (до введения лекарственной формы) исследование проб крови у всех животных не показало присутствия в плазме триметазидина. В последующие сроки наблюдения в пробах крови было обнаружено достаточное для анализа количество триметазидина. На рисунке представлены фармако-кинетические кривые усредненного содержания триметазидина после перорального введения изучаемых препаратов собакам в дозе (в среднем) 3,12 мг/кг. Из представленных данных видно, что концентрации

AUC - площадь под кривой зависимости «концентрация-время», нгхч/мл; D - введенная доза, мг/кг; Смакс - максимальная концентрация триметазидина, нг/мл; Смак/AUC -------------------------1

-(o^œ) - скорость всасывания, ч .

Полученные экспериментальные данные были подвергнуты статистической обработке с помощью программы «Statistica v6.0». В таблицах представлены средние арифметические значения величин (M), стандартные отклонения среднего результата (SD), стандартная ошибка среднего арифметического (SEM), доверительный интервал (а = 0,05), ошибка среднего результата (в%). Достоверность различий оценивали по /-критерию Стьюдента для независимых выборок, как это было описано ранее [9].

Результаты и обсуждение

Для решения вопроса о биоэквивалентности таблеток (Т) и (R) измеряли концентрации триметазидина в плазме крови собак в моменты времени, определенные протоколом исследования, и рассчитывали фар-

Фармакокинетические кривые усредненных концентраций триметазидина в крови собак после однократного перорального введения таблеток триметазидина (Т) и (R) животным в дозе 3,12 мг/кг (n = 6, M±SD): 1 - таблетки триметазидина модифицированного высвобождения, таблетки, 2 - Предуктал МВ

Т а б л и ц а 2

значения основных фармакокинетических параметров триметазидина после однократного перорального введения

таблеток триметазидина (т) и (К) собакам в дозе 3,12 мг/кг

Номер животного Т макс Cмакс AUC

таблетки триметазидина

1 3 872 9836 10,45 0,0663 0,0887

2 3 946 9577 9,33 0,0743 0,0988

3 3 864 8015 9,57 0,0724 0,1078

4 3 1070 9546 10,99 0,0631 0,1121

5 3 998 9133 9,97 0,0695 0,1093

6 3 869 8196 10,39 0,0667 0,1060

М 3 936,5 9050,5 10,12 0,0687 0,1038

SD 0 84,5 768,0 0,61 0,0042 0,0087

Доверительный интервал а = 0,05 - 67,6 614,5 0,49 0,0033 0,0069

таблетки

1 3 901 9213 10,09 0,0687 0,0978

2 3 898 8271 9,87 0,0702 0,1086

3 3 726 8198 11,67 0,0594 0,0886

4 3 931 9620 10,02 0,0692 0,0968

5 3 881 8362 10,2 0,0679 0,1054

6 3 854 8193 10,18 0,0681 0,1042

М 3 865,2 8642,8 10,34 0,0672 0,1002

SD 0 72,7 616,0 0,66 0,0039 0,0073

Доверительный интервал а = 0,05 - 58,2 492,9 0,53 0,0032 0,0058

Т а б л и ц а 3

Результаты стандартного сравнения средних значений основных фармакокинетических параметров триметазидина

после приема таблеток триметазидина

? Т макс Смакс AUC

Т/R 1,000 1,085 1,048 0,983 1,040

T - 1,568 1,014 -0,601 0,772

R - 0,148 0,334 0,562 0,457

триметазидина в крови собак после введения таблеток триметазидина (Т) и (R) практически совпадают. Средние значения концентраций достоверно не отличаются ни в одной временной точке. В табл. 3 приведены рассчитанные по полученным кривым основные фармакокинетические параметры: Смакс,

Тмакс, AUC(0-^ ^ ^л и отношение Cмакс/AUC(0-»), ОТражающие степень, скорость всасывания и элиминацию триметазидина при применении изучаемых лекарственных препаратов.

Оценку относительной биодоступности лекарственной формы триметазидина проводили путем

Т а б л и ц а 4

Параметры биоэквивалентности

Номер животного F F ' F ' '

1 106,76% 96,78% 90,65%

2 115,79% 105,35% 90,98%

3 97,77% 119,01% 121,73%

4 99,23% 114,93% 115,82%

5 109,22% 113,28% 103,72%

6 100,04% 101,76% 101,72%

М 104,80% 108,52% 104,10%

SD 7,03% 8,57% 12,70%

Доверительный интервал, а = 0,05 5,63% 6,86% 10,16%

сравнения значений следующих параметров: максимальной концентрации

Максимальная концентрация Смакс. Достигается через ~3 ч (Тмакс) после введения препаратов и составляет 936,5±84,5 нг/мл для изучаемого препарата и 865,2±72,7 нг/мл для препарата сравнения.

Период полувыведения Т1/2. После введения изучаемой лекарственной формы данный параметр составил 10,12±0,61 ч, после введения препарата сравнения - 10,34±0,66 ч.

Площадь под фармакокинетической кривой АиС(0-ж). Для изучаемой лекарственной формы этот параметр составляет 9050,5±768,0 нгхч/мл, для препарата сравнения площадь под фармакокинетической кривой равна 8642,8±616,0 нгхч/мл.

Отношение Cмяк/AUC(0-c¿). Этот показатель составил 0,1038±0,0087 и 0,1002±0,0073 ч-1 для изучае-

мой лекарственной формы и препарата сравнения соответственно.

Из данных, приведенных выше, видно, что перечисленные фармакокинетические параметры не имеют между собой достоверных отличий. В табл. 4 приведены параметры F, F' и F", позволяющие оценить биоэквивалентность изучаемых лекарственных препаратов. Как видно из данных табл. 4, средние величины F (104,80±7,03%) укладываются в пределы 80-125%, а F ' (108,52±8,57%) и F '' (104,10±12,70%) - в пределы 75-133%.

Таким образом, проведенное на собаках исследование сравнительной фармакокинетики и относительной биодоступности лекарственных форм триметази-дина показало, что процессы всасывания, распределения, метаболизма и выведения триметазидина при применении таблеток триметазидина модифицированного высвобождения и таблеток «Предуктал МВ» («Сервье», Франция) одинаковы и лекарственные формы являются биоэквивалентными.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Fragasso G, Palloshi A, Puccetti P et al. // J. Am. Coll. Cardiol. 2006. 48. N 5. P. 992.

2. Инжутова А.И., Ларионов А.А., Петрова М.М., Салми-на А.Б. // Кардиология. 2011. № 4. С. 52.

3. Belardinelli R, Lacalaprice F, Faccenda E, Volpe L. // Eur. J. Cardiovasc. Prev. Rehabil. 2008. 15. № 5. Р. 533.

4. Морозова Т.Е., Иванова Е.П., Рыкова С.М. // Кардиология. 2011. № 9. С. 35.

5. Белоусов Ю.Б., Бухман В.М., Ерофеева С.Б. и др. Лекрственные формы с модифицированным высвобождением и системы доставки лекарств: особенности фармакокинетики и клиническая эффективность. М., 2011.

6. Методические рекомендации по проведению качественных

клинических исследований биоэквивалентности лекарственных препаратов. М., 2001.

7. Jackson P.J., BrownsillR.D., Taylor A.R. et al. // Xenobiotica. 1996. 26. N 2. Р. 221.

8. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / Под общ. ред. Р.У Хабриева. М., 2005.

9. Блынская Е.В., Алексеев К.В., Кондаков С.Э., Аляутдин Р.Н., Балабаньян В.Ю. //Вестн. Моск. ун-та. Сер2. Химия. 2011. 52. С. 154.

10. Раменская Г.В., Шохин И.Е., Шлыков В.С. и др. Изучение in vivo-in vitro корреляции для пролонгированного лекарственного средства триметазидина // Медицинский альманах. 2010. № 4. С. 60.

Поступила в редакцию 15.05.12

COMPARATIVE ESTIMATION OF FEATURES OF PHARMACOKINETICS OF THE MODIFIED MEDICINAL FORM TRIMETAZIDINE

E.V. Blynskaya, K.V. Alekseev, T.P. Kalmikova, S.E. Kondakov

«Preductal MB» («Servier», France) and tablets of trimetazidine the modified liberation is spent comparative ^apMaKOKHHeTmecKoe preparation studying. Their estimation pharmacokinetics indicators, values of bioavailability is carried out. In experiences in vivo it is shown that processes of an absorption, distribution, a metabolism and deducing of trimetazidine at application of tablets of trimetazidine the modified liberation and «Preductal MB» are identical also medicinal forms are bioequivalent.

Key words: trimetazidine, pharmacokinetics, bioequivalence.

Сведения об авторах: Блынская Евгения Викторовна - ст. науч. сотр. лаборатории готовых лекарственных форм НИИ фармакологии им. В.В. Закусова РАМН, канд. фарм. наук (eaureus@mail.ru); Алексеев Константин Викторович - зав. лабораторией готовых лекарственных форм НИИ фармакологии им. В.В. Закусова РАМН, докт. фарм. наук (convieck@ yandex.ru); Калмыкова Татьяна Петровна - доцент факультета послевузовского профессионального образования провизоров Первого московского государственного медицинского университета им. И.М. Сеченова, канд. биол. наук (newlofty@mail.ru),• Кондаков Сергей Эмильевич - вед. науч. сотр. кафедры химической кинетики химического факультета МГУ, докт. фарм. наук (ksekse@mail.ru).