3
ПРИМЕНЕНИЕ 2-МЕТИЛЕН-19-НОР-(20S)-1α,25-ДИГИДРОКСИВИТАМИНА D ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ВТОРИЧНОГО ГИПЕРПАРАТИРЕОЗА
USE OF 2-METHYLENE-19-NOR-(20S)-1α,25-DIHYDROXYVITAMIN D3 TO TREAT SECONDARY HYPERPARATHYROIDISM

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
Настоящее изобретение относится к соединениям витамина D, применяемым для лечения и/или предотвращения вторичного гиперпаратиреоза и/или его симптомов, и, более конкретно, к применению соединения витамина D 2-метилен-19-нор-(20S)-1α,25-дигидроксивитамина D3 для лечения и/или предотвращения вторичного гиперпаратиреоза и/или его симптомов.
2
2
Заболевание почек становится все более важной медицинской проблемой практически в каждой стране в мире, включая высоко развитые страны, такие как Соединенные Штаты. В настоящее время существует приблизительно 250000 пациентов, проходящих гемодиализ, функция почек которых почти полностью потеряна. Существует приблизительно в десять раз большее число пациентов, у которых функция почек потеряна до некоторой степени вследствие заболевания почек, и состояние которых прогрессирует к полной почечной недостаточности. О почечной недостаточности свидетельствует сниженная скорость клубочковой фильтрации (GFR) от высокого показателя 110 мл/мин/1,73 мдо 30 мл/мин/1,73 м, при котором, как правило, начинают диализ.
Многие факторы способствуют развитию заболевания почек. Высокое артериальное давление является одним из значительных способствующих факторов, которые бывают при диабете I или II типа. Современные методы лечения почечной недостаточности ограничены гемодиализом, чрезвычайно дорогой процедурой, которая в настоящее время проводится на средства федеральных правительств ввиду того, что пациенты, как правило, не могут позволить себе эту процедуру на свои средства. Годовые затраты на заболевание почек только в Соединенных Штатах Америки составляют более $42 миллиардов. Таким образом, эффективные способы предотвращения заболевания почек и лечения его симптомов не только принесут значительную пользу здоровью, но также и обеспечат значительную экономическую выгоду.
2
3
В настоящее время является общепризнанным, витамин D должен, во-первых, быть 25-гидроксилирован в печени и затем 1α-гидроксилирован в почке перед тем, как сможет функционировать. (См. DeLuca, «Vitamin D: The vitamin and the hormone», Fed. Proc. 33, 2211-2219, 1974). В результате этих двух реакций образуется конечная активная форма витамина D, а именно 1α,25-(OH)D. (См. DeLuca & Schnoes, «Vitamin D: Recent advances», Ann. Rev. Biochem. 52, 411-439, 1983). «Это соединение затем стимулирует ряд физиологических процессов, включая: стимулирование стенок кишечника абсорбировать кальций, стимулирование почки резорбировать кальций, стимулирование стенки кишечника абсорбировать фосфат и стимулирование кости мобилизовать кальций, когда поступает сигнал, заключающийся в высоком уровне паратиреоидного гормона (PTH). Результатом этих действий является повышение уровней кальция и фосфора в плазме, что приводит к заживлению поражений кости, таких как рахит и остеомаляция, и предотвращение неврологического нарушения гипокальциемической тетании.
2
3
2
3
3
3
2
3
Вторичный гиперпаратиреоз является универсальным осложнением у пациентов с хронической почечной недостаточностью. За развитие вторичного гиперпаратиреоза отвечают низкие уровни 1α,25-(OH)D и ретенция фосфата. Низкие уровни циркулирующего 1α,25-(OH)D являются результатом нарушенной функции почки, вызывающей неспособность пациента превращать 25-гидрокси-витамин D в1α,25-дигидроксивитамин D. В качестве результата низких уровней циркулирующего 1α,25-(OH)D, абсорбция кальция стенками кишечника является минимальной, что в результате приводит к недостаточным уровням кальция в сыворотке. Когда паращитовидная железа воспринимает низкий уровень кальция в сыворотке, паращитовидная железа секретирует PTH, который вызывает мобилизацию кальция из кости для регулирования уровня кальция в сыворотке. Оставленная без контроля, эта аномальная секреция PTH приведет к развитию нефрогенной остеодистрофии. Высокие уровни PTH также могут привести к: 1) ослаблению костей; 2) кальцифилаксии (когда кальций образует отложения на коже и ведет к язвам и потенциальному отмиранию окружающей ткани); 3) сердечно-сосудистым осложнениям; 4) аномальному метаболизму жиров и сахаров; 5) зуду (пруриту); и 6) низким показателям крови (анемия).
3
3
3
3
2
3
3
3
1α,25-дигидроксивитамин D применяли в качестве терапии гиперпаратиреоза у пациентов с заболеваниями почек. При лечении вторичного гиперпаратиреоза нефрогенной остеодистрофии, хорошо известно, что 1α,25-дигидроксивитамин D связывает рецептор витамина D (VDR), расположенный в паращитовидных железах, для подавления роста и пролиферации клеток паращитовидной железы и экспрессии паратиреоидного гена. (См. Demay et al., "Sequences in the human parathyroid hormone gene that bind the 1,25-dihydroxyvitamin D receptor and mediate transcriptional repression in response to 1,25-hydroxyvitamin D." Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89 8097-8101,1992; и Darwish & DeLuca, "Identification of a transcription factor that binds to promoter region of the human parathyroid hormone gene», Arch. Biochem. Biophys. 365, 123-130, 1999). Вследствие его способности подавлять паратиреоидный гормон (PTH), 1,25-(OH)D успешно применяли при лечении вторичного гиперпаратиреоза. (См. Slatopolsky et al., "Marked Suppression of secondary hyperparathyroidism by Intravenous Administration of 1,25-dihydroxycholecalciferol in Uremic Patients», J. Clin. Invest. 74: 2136-2143, 1984). Применение 1α,25-дигидроксивитамина D при лечении вторичного гиперпаратиреоза при нефрогенной остеодистрофии, как правило, прекращают из-за развития гиперкальциемии, возникающей из-за сильного воздействия 1α,25-дигидроксивитамина D на абсорбцию кальция стенкой кишечника и мобилизации минерального кальция кости.
Как было отмечено ранее, вторичный гиперпаратиреоз, как правило, встречается у пациентов, подвергающихся почечному диализу. Хроническая почечная недостаточность является самой распространенной причиной вторичного гиперпаратиреоза. Почки с недостаточностью не превращают достаточно витамина D в его активную форму и не адекватно выводят фосфат. Когда это происходит, нерастворимый фосфат кальция образуется в организме и удаляет из циркуляции кальций. В итоге, это ведет к гипокальциемии и вторичному гиперпаратиреозу.
2
3
Вторичный гиперпаратиреоз также может быть результатом желудочно-кишечного синдрома мальабсорбции (например, хронического панкреатита, заболевания тонкого кишечника и бариатрической хирургии, связанной с мальабсорбцией, при которой стенки кишечника не абсорбируют витамины и минералы должным образом), где эти синдромы могут приводить к недостаточной абсорбции жирорастворимого витамина D. Когда витамин D недостаточно абсорбируется, может развиваться гипокальциемия, и может произойти последующее увеличение секреции PTH, когда организм пытается увеличить уровни кальция в сыворотке. Однако гипокальциемия и вторичный гиперпаратиреоз также могут появиться на ранних стадиях заболевания почек из-за низких уровней 1,25(OH)D. Другими менее распространенными причинами вторичного гиперпаратиреоза являются длительная терапия литием, недостаток витамина D, нарушение питания, невосприимчивый к витамину D рахит или гипермагнезиемия (т.е. аномально высокие уровни магния в крови).
Симптомы вторичного гиперпаратиреоза включают повышенные уровни PTH в сыворотке, фосфора в сыворотке и креатинина в сыворотке. Менее явные симптомы включают костную и суставную боль, костные деформации, сломанные кости (переломы), опухшие суставы, камни в почках, увеличение мочеиспускания, мышечную слабость и боль, тошноту и потерю аппетита. Другие менее часто встречающиеся симптомы включают усталость, боль в эпигастральной области и депрессию.
Лечение вторичного гиперпаратиреоза, как правило, связано с обращением к первопричине гипокальциемии. У пациентов с хронической почечной недостаточностью лечение состоит из ограничения диеты в отношении фосфора, добавок с активной формой витамина D, таких как кальцитриол, Hectorol или Земплар(парикальцитол), и фосфат-связывающие средства, которые можно разделить на связывающие средства, основанные на кальции, и связывающие средства, основанные не на кальции. Более новым классом препаратов являются кальцимиметики, один из которых является коммерчески доступным в качестве Sensipar (цинакальцет) в Соединенных Штатах Америки и Австралии, и в качестве Mimpara в Европейском союзе. Кальцимиметики достигли позитивных ответов и являются одобренными FDA для применения у пациентов, подвергающихся диализу, но не оправданы для применения при хроническом заболевании почек перед диализом, ввиду того что, среди прочих опасений, они могут увеличить уровни фосфора. Большинство пациентов с гиперпаратиреозом, вторичным к хроническому заболеванию почек, выздоравливают после пересадки почки, но у многих в некоторой степени будет продолжаться остаточный гиперпаратиреоз (т.е. третичный гиперпаратиреоз) после трансплантации со связанным с ним риском остеопороза.
2
3
2
3
2
3
2
3
Хотя фосфор в сыворотке является, как правило, нормальным у пациентов с ранней почечной недостаточностью, ограничение фосфата может уменьшить вторичный гиперпаратиреоз. Ограничение пищевого фосфата повышает уровни 1,25-(OH)D. (См. Portale et al., "Effect of Dietary Phosphorus on Circulating Concentrations of 1,25-dihydroxyvitamin D and Immunoreactive Parathyroid Hormone in Children with Moderate Renal Insufficiency», J. Clin. Invest. 73: 1580-1589, 1984). Это в свою очередь понижает PTH, непосредственно подавляя транскрипцию гена PTH и повышая абсорбцию кальция стенками кишечника. На поздних стадиях почечной недостаточности степень гиперпаратиреоза и недостаточности 1,25-(OH)D возрастает, и ограничение фосфата оказывает незначительный эффект на уровни 1,25-(OH)D. (См. Lopez-Hilker et al., "Phosphorus Restriction Reverses Hyperparathyroidism in Uremia Independent of Changes in Calcium and Calcitriol», Am. J. Physiol. 259: F432-F437, 1990). Полагают, что это происходит из-за пониженной почечной массы, доступной для синтеза 1,25-(OH)D.
2
3
2
3
2
3
2
3
Было выявлено, что несколько аналогов витамина D с низкой кальциемической активностью являются почти настолько же эффективными, как 1,25-(OH)D при подавлении секреции PTH посредством культивируемых клеток паращитовидной железы быка. Они включают 22-оксакальцитриол (OCT), (Brown et al., "The Non-Calcemic Analog of Vitamin D, 22-oxacalcitriol (OCT) Suppresses Parathyroid Hormone Synthesis and Secretion», J. Clin. Invest. 84: 728-732, 1989), а также 1,25-(OH)-16-ен-23-ин-D, 1,25-(OH)-24-дигомо-D и 1,25-(OH)-24-тригомо-22-ен-D. 22-оксакальцитриол подробно исследовали на предмет этого действия in vivo. (См. Brown et al., "Selective Vitamin D Analogs and their Therapeutic Applications», Sem. Nephrol 14: 156-174, 1994, в котором сообщают, что 22-оксакальцитриол, несмотря на его быстрый клиренс in vivo, мог подавлять мРНК PTH). Низкие, субмаксимальные дозы кальцитриола и OCT демонстрировали сравнимое ингибирование. Кроме того, было показано, что OCT подавляет PTH сыворотки у крыс и собак с уремией.
2
3
2
2
2
2
2
2
3
2
2
-7
Другим аналогом 1,25-(OH)D с низким кальциемическим и фосфатемическим действием является 19-нор-1,25-(OH)D. Этот аналог кальцитриола имеет углерод 28 и двойную связь у 22 атома углерода, что является типичным для соединений витамина D, но у него отсутствует углерод 19 и экзоциклическая двойная связь, обнаруженная во всех природных соединениях витамина D. Исследования in vitro с применением первичной культуры клеток паращитовидной железы быка продемонстрировали, что 19-нор-1,25-(OH)D оказывал сходный подавляющий эффект на PTH в качестве 1,25-(OH)D. 52% подавление высвобождения PTH получали с применением 19-нор-1,25-(OH)D в концентрации 10M. Не было значимого различия в эффекте подавления секреции PTH между этими двумя соединениями.
2
2
2
3
2
2
2
3
2
2
2
3
2
2
В дальнейшем были проведены предварительные исследования in vivo для определения кальциемической активности 19-нор-1,25-(OH)D. Выявлено, что 1,25-(OH)D (10 нг/крыса/10 сут) повышал кальций в сыворотке до той же величины, как и 19-нор-1,25-(OH)D (100 нг/крыса/10 сут). Ввиду этого, выбирали три различные дозы 1,25-(OH)D (2, 4 и 8 нг) и 19-нор-1,25-(OH)D (8, 25 и 75 нг) для продолжительных исследований. После двух месяцев почечной недостаточности животные получали два указанных выше соединения в трех указанных дозах, четыре раза, в течение периода в восемь суток. Как и ожидалось, 1,25-(OH)D подавлял секрецию пре-про-PTH мРНК и PTH. Однако это снижение было статистически значимым только при дозе 8 нг, и эта доза индуцировала гиперкальциемию и гиперфосфатемию. С другой стороны, ни одна из доз 19-нор-1,25-(OH)D не произвела статистически значимых изменений ионизированного кальция или фосфора в сыворотке.
2
2
2
19-нор-1α,25(OH)D является также известным в качестве парикальцитола и 19-нор-1α,25-дигидрокси-эргокальциферола. Инъекция парикальцитола является коммерчески доступной в качестве Земплар из Abbott Laboratories, Abbott Park, Ill. Инъекция парикальцитола (Земплар) описана в патенте США № 6136799 и была одобрена FDA и продается на рынке для профилактики и лечения вторичного гиперпаратиреоза, связанного с хронической почечной недостаточностью (CKD стадия 5 или терминальная стадия почечной недостаточности (ESRD), GFR <15 мл/мин/1,73 м). Этот внутривенный состав содержит 2-10 микрограмм/милилитр парикальцитола, 30% (об./об.) пропиленгликоля, 20% (об./об.) этанола и приблизительно 50% (об./об.) воды. Исследования показали, что инъекция парикальцитола подавляет повышенные уровни PTH с минимальным эффектом на уровни кальция и фосфора в сыворотке. Ввиду его одобрения FDA в апреле 1998 года существует оценка, что приблизительно 200000 пациентов получили, по меньшей мере, одну дозу инъекции парикальцитола. В клиническом аспекте, безопасность и эффективность инъекции парикальцитола для лечения вторичного гиперпаратиреоза являются прочно установленными.
2
3
2
3
2
3
Гиперфосфатемия также является насущной проблемой у пациентов, подвергающихся хроническому гемодиализу, и может быть дополнительно обострена посредством терапевтических доз 1,25-(OH)D. (См. Delmez et al., "Hyperphosphatemia: Its Consequences and Treatment in Patients with Chronic Renal Disease», Am. J. Kidney Dis. 19: 303-317, 1992; и Quarles et al., "Prospective trial of Pulse Oral versus Intravenous Calcitriol Treatment of Hyperparathyroidism in ESRD», Kidney Int. 45: 1710-1721, 1994). Кроме того, контроль абсорбции фосфата с применением больших доз карбоната кальция только увеличивает риск гиперкальциемии при терапии 1,25-(OH)D. (См. Meyrier et al., "The Influence of a High Calcium Carbonate Intake on Bone Disease in Patients undergoing Hemodialysis», Kidney Int. 4: 146-153, 1973; Moriniere et al., "Substitution of Aluminium Hydroxide by High Doses of Calcium Carbonate in Patients on Chronic Hemodialysis: Disappearance of Hyperaluminaemia and Equal Control of Hyperparathyroidism", Proc. Eur. Dial Transplant Assoc. 19:784-787, 1983; и Slatopolsky et al., "Calcium carbonate as a Phosphate Binder in Patients with Chronic Renal Failure Undergoing Dialysis", New Engl. J. Med. 315:157-161, 1986). Таким образом, аналог 1,25-(OH)D, который может подавлять PTH с меньшим эффектом на метаболизм кальция и фосфата был бы идеальным инструментом для контроля и лечения вторичного гиперпаратиреоза.
3
2
3
Другой аналог витамина D, а именно 2-метилен-19-нор-(20S)-1α,25-дигидроксивитамин D (указываемый в литературе в качестве "2MD") также, как известно, подавляет образование PTH (см. опубликованную заявку США № 2011/0034426 A1). Хотя он, таким образом, оказывается кандидатом для лечения вторичного гиперпаратиреоза, из патента США № 5843928 также хорошо известно, что 2MD обладает очень сильной кальциемической активностью. 2MD значительно увеличивает мобилизацию кальция из кости до уровня, составляющего приблизительно 10-100 уровней 1α,25-(OH)D, в то же время демонстрируя умеренное повышение активности транспорта кальция стенками кишечника. Вследствие его избирательного действия в отношении мобилизации кальция из кости соединение 2MD никогда серьезно не рассматривали как фармацевтическое средство для лечения вторичного гиперпаратиреоза, до настоящего момента.
СУЩНОСТЬ
В настоящее время обнаружено, что аналог витамина D 2MD обладает способностью лечить вторичный гиперпаратиреоз, а также симптомы вторичного гиперпаратиреоза при введении в хорошо контролируемых условиях нуждающемуся в этом индивидууму. Также в настоящее время обнаружено, что аналог витамина D 2MD обладает способностью предотвращать вторичный гиперпаратиреоз, а также симптомы вторичного гиперпаратиреоза при введении в хорошо контролируемых условиях нуждающемуся в этом индивидууму.
3
В одном из вариантов осуществления настоящее изобретение относится к новому способу лечения вторичного гиперпаратиреоза посредством введения терапевтически эффективного количества композиции, содержащей 2-метилен-19-нор-(20S)-1α,25-дигидроксивитамин D (2MD) или его фармацевтически приемлемые соли, в качестве активного средства индивидууму, демонстрирующему симптомы вторичного гиперпаратиреоза без индукции гиперкальциемии у индивидуума.
3
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к новому способу лечения симптомов вторичного гиперпаратиреоза посредством введения терапевтически эффективного количества композиции, содержащей 2-метилен-19-нор-(20S)-1α,25-дигидроксивитамин D (2MD) или его фармацевтически приемлемые соли, в качестве активного средства индивидууму, демонстрирующему симптомы вторичного гиперпаратиреоза, без индуцирования гиперкальциемии у индивидуума.
3
В еще одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к новому способу предотвращения вторичного гиперпаратиреоза посредством введения терапевтически эффективного количества композиции, содержащей 2-метилен-19-нор-(20S)-1α,25-дигидроксивитамин D (2MD) или его фармацевтически приемлемые соли, в качестве активного средства индивидууму при риске развития вторичного гиперпаратиреоза, без индуцирования гиперкальциемии у индивидуума.
3
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к новому способу предотвращения симптомов вторичного гиперпаратиреоза посредством введения терапевтически эффективного количества композиции, содержащей 2-метилен-19-нор-(20S)-1α,25-дигидроксивитамин D (2MD) или его фармацевтически приемлемые соли, в качестве активного средства индивидууму при риске развития вторичного гиперпаратиреоза, без индуцирования гиперкальциемии у пациента.
3
В одном из вариантов осуществления 2-метилен-19-нор-(20S)-1α,25-дигидроксивитамин D формулируют в пероральной форме, форме для местного применения, трансдермальной, парентеральной, инъецируемой или инфузионной форме для введения в количествах в диапазоне от 10 нг/сут до приблизительно 1 мкг/сут. Предпочтительно, для лечения или предотвращения вторичного гиперпаратиреоза или для лечения или предотвращения симптомов вторичного гиперпаратиреоза, соединение 2MD вводят или перорально, или парентерально (в./в.). Доза может быть выбрана надлежащим образом в соответствии со специфическим путем ведения. Подходящие дозы могут быть дозами в диапазоне приблизительно от 10 нг до приблизительно 1 мкг в сутки. Предпочтительно, дозу вводят три раза в неделю или внутривенно, или перорально индивидуумам, получающим лечение посредством гемодиализа.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ
На фиг. 1 схематично проиллюстрирован протокол интраперитонеального лечения с применением 2MD, рассмотренный в настоящем документе.
На фиг. 2 представлен график, иллюстрирующий эффект интраперитонеального введения 2MD в различных дозах на PTH сыворотки в модели уремии у крысы.
На фиг. 3 представлен график, иллюстрирующий эффект интраперитонеального введения 2MD в различных дозах на кальций сыворотки в модели уремии у крысы.
На фиг. 4 схематично проиллюстрирован протокол перорального лечения с применением 2MD, рассмотренный в настоящем документе.
На фиг. 5 представлен график, иллюстрирующий эффект перорального введения 2MD в различных дозах на PTH сыворотки в модели уремии у крысы.
2
На фиг. 6 представлен график, иллюстрирующий эффект перорального введения 19-нор-1α,25-дигидроксивитамина D (представленного на рынке под торговой маркой Земплар) в различных дозах на PTH сыворотки в модели уремии у крысы.
На фиг. 7 представлен график, иллюстрирующий эффект перорального введения 2MD в различных дозах на кальций сыворотки в модели уремии у крысы.
2
На фиг. 8 представлен график, иллюстрирующий эффект перорального введения 19-нор-1α,25-дигидроксивитамина D (представленного на рынке под торговой маркой Земплар) в различных дозах на PTH сыворотки в модели уремии у крысы.
На фиг. 9 представлен график, иллюстрирующий эффект перорального введение 2MD в различных дозах на фосфор сыворотки в модели уремии у крысы.
2
На фиг. 10 представлен график, иллюстрирующий эффект перорального введения 19-нор-1α,25-дигидроксивитамина D (представленного на рынке под торговой маркой Земплар) в различных дозах на фосфор сыворотки в модели уремии у крысы.
На фиг. 11 представлен график, иллюстрирующий эффект перорального введения 2MD в различных дозах на креатинин сыворотки в модели уремии у крысы.
2
На фиг. 12 представлен график, иллюстрирующий эффект перорального введения 19-нор-1α,25-дигидроксивитамина D (представленного на рынке под торговой маркой Земплар) в различных дозах на креатинин сыворотки в модели уремии у крысы.
На фиг. 13 представлен график, иллюстрирующий эффект перорального введения 2MD в различных дозах на PTH сыворотки в фазе 1B клинического исследования женщин после менопаузы.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ
Раскрыты способы лечения и/или предотвращения вторичного гиперпаратиреоза или его симптомов. Раскрытые способы дополнительно могут быть описаны ниже на основе следующих определений.
Если не определено иначе, все технические и научные термины, применяемые в настоящем документе, имеют те же самые значения, которые широко известны специалисту в данной области, к которой принадлежит данное изобретение. Все публикации и патенты, конкретно упомянутые в настоящем документе полностью включены в качестве ссылки для всех целей, включая описание и раскрытие химических веществ, оборудования, статистических анализов и методов, о которых сообщают в данных публикациях, которые могли бы быть применены в связи с настоящим изобретением. Все цитируемые ссылки в этом описании изобретения должны быть восприняты в качестве указаний на уровень в данной области. Ничто в настоящем документе не должно быть истолковано в качестве допущения, что данное изобретение не правомочно быть противопоставленным такому раскрытию по эффективности или с предшествующей датой.
В описании изобретения и в формуле изобретения, термины "включающий" и "содержащий" являются терминами открытого состава и должны быть истолкованы как "включая в качестве неограничивающих примеров." Эти термины охватывают более ограниченные термины "состоящий существенным образом из" и "состоящий из". Кроме того, следует отметить, что термины "содержащий", "включающий", "характеризующийся" и "имеющий" можно использовать взаимозаменяемо.
Как применяют в настоящем документе и в прилагаемой формуле изобретения, формы единственного числа включают множественное число, если из контекста явно не следует иначе. Также термины "один или несколько" и "по меньшей мере, один" можно использовать взаимозаменяемо в настоящем документе.
Когда идет речь о диапазоне величин, следует понимать, что каждая промежуточная величина, и любая комбинация или субкомбинация промежуточных величин, между верхней и нижней границами этого диапазона и любая другая выраженная или промежуточная величина в данном установленном диапазоне, входит в диапазон указанных величин.
Определенные диапазоны представлены в настоящем документе с численными величинами, которым предшествует термин "приблизительно". Термин "приблизительно" применяют в настоящем документе, чтобы обеспечить литеральную поддержку для точной цифры, которой он предшествует, а также число, которое находится рядом или приблизительно рядом с тем числом, которому он предшествует. В определении, является ли число близким или примерно близким конкретно указанному числу, близкое или находящееся примерно близко неуказанное число может быть числом, которое в контексте, в котором оно присутствует, представляющим существенный эквивалент конкретно указанного числа, и, таким образом, будет, как правило, относиться к числу или величине, которая на 10% ниже или выше конкретно указанного числа или величины.
Раскрытые способы могут быть использованы для лечения и/или предотвращения вторичного гипертиреоза у нуждающегося в этом пациента. Нуждающийся в этом пациент может включать в качестве неограничивающих примеров, пациента, имеющего или находящегося в состоянии риска развития вторичного гипертиреоза, следующего за заболеванием или нарушением функции почек. Нуждающийся в этом пациент может включать, в качестве неограничивающих примеров, пациента, имеющего или находящегося в состоянии риска развития вторичного гипертиреоза, следующего за нефрогенной остеодистрофией, например, из-за почечной недостаточности. Нуждающийся в этом пациент может включать пациента, подвергающегося почечному диализу. Нуждающийся в этом пациент может включать в качестве неограничивающих примеров пациента, имеющего или находящегося в состоянии риска развития вторичного гипертиреоза в качестве результата синдромов желудочно-кишечной мальабсорбции (например, хронического панкреатита, заболевания тонкого кишечника и связанной с мальабсорбцией бариатрической хирургии, при которой стенки кишечника не абсорбируют витамины и минералы должным образом). Нуждающийся в этом пациент может включать, в качестве неограничивающих примеров, пациента, имеющего или находящегося в состоянии риска развития вторичного гипертиреоза в качестве результата длительной терапии литием, недостаточности витамина D, нарушения питания, рахита, устойчивого к витамину D, или гипермагнезиемии (т.е. аномально высоких уровней магния в крови).
Раскрытые способы могут быть использованы для лечения и/или предотвращения симптомов вторичного гипертиреоза у нуждающегося в этом пациента. Симптомы вторичного гипертиреоза, который лечили и/или предотвратили посредством раскрытых способов, могут в качестве неограничивающих примеров включать: ослабление костей; кальцифилаксию (когда кальций образует отложения на коже и приводит к язвам и потенциально к отмиранию окружающей ткани); сердечно-сосудистым осложнениям; аномальному жировому и сахарному метаболизму; зуду (пруриту); и низким показателям крови (анемии). Другие симптомы вторичного гипертиреоза, которые лечили и/или предотвращали посредством раскрытых способов могут включать: повышенные уровни РТН в сыворотке, фосфор в сыворотке, и креатинин в сыворотке. Дополнительные симптомы вторичного гипертиреоза, которые лечили и/или предотвращали описанными способами могут включать: боль в костях и суставах, деформации кости, сломанные кости (переломы), опухшие суставы, камни в почках, повышенное мочеиспускание, мышечную слабость и боль, тошноту и потерю аппетита. Даже дополнительные симптомы вторичного гипертиреоза, которые лечили и/или предотвращали посредством описанных способов могут включать: усталость, боль в эпигастральной области и депрессию.
3
2
3
3
3
2
3
1pr
Ранее было продемонстрировано, что 300 нг в сутки 1α,25-дигидроксивитамина D (1,25(OHD), введенные с пищей, могут эффективно предотвращать заболевание почек и почечную недостаточность посредством уменьшения симптомов заболевания почек. (См. James Wonkee Kim. Effects of 1α,25-dihydroxyvitamin D on the MRL/MpJ-fas/lpr model of systemic lupus erythematosus (Ph.D. Thesis, University of Wisconsin-Madison (2009)). Например, ранее было показано, что введение 1α,25-дигидроксивитамина D (1,25(OH)D) полностью предотвращает протеинурию в модели системной красной волчанки (SLE) мыши MRL/MpJ-FAS (MRL/lpr). (См. id.). Однако это лечение всегда сопровождает тяжелая гиперкальциемия. Гиперкальциемия (т.е. повышенные уровни кальция в крови) могут привести к серьезным физическим проблемам, включая смерть. Конкретно, повышение уровня кальция до приблизительно 2 мг/100 мл рассматривают в качестве легкой гиперкальциемии и не рассматривают как проблему. Однако повышение уровней кальция более, чем 2 мг/100 мл рассматривают в качестве тяжелой гиперкальциемии, и это может вызвать кальфикацию почки, сердца и аорты. Очевидно, что применение этого соединения не является оптимальным для лечения или предотвращения вторичного гиперпаратиреоза или его симптомов, из-за возникающей гиперкальциемии.
3
2
3
3
2-метилен-19-нор-(20S)-1α,25-дигидроксивитамин D (2MD) является аналогом 1,25(OH)D, которая, как было продемонстрировано, увеличивала in vivo активность в отношении кости, но не в отношении абсорбции кальция стенками кишечника. Общий синтез 2MD проиллюстрирован и описан более полно в патенте США № 5843928, выпущенном 1 декабря 1998 года, и озаглавленном "2-Alkylidene-19-Nor-Vitamin D Compounds", описание которого конкретно включено в настоящий документ в качестве ссылки. О биологической активности 2MD также сообщалось в патенте США № 5843928 и в Shevde et al., "A Potent Analog of 1α,25-dihydroxyvitamin D Selectively Induces Bone Formation" PNAS, Vol. 99, No. 21, pp. 13487-13491 (2002), которые оба конкретно включены в настоящий документ в качестве ссылки.
В способах, описываемых в настоящем документе, 2MD можно вводить для лечения и/или предотвращения вторичного гиперпаратиреоза и/или сопутствующих ему симптомов, не вызывая тяжелой гиперкальциемии, в то же время приводя к сниженным уровням фосфора и креатинина в крови, а также сниженным уровням PTH в крови.
Кроме того, в способах, описываемых в настоящем документе, 2MD можно использовать для лечения и снижения тяжести вторичного гиперпаратиреоза при заболевании почек и сопутствующих ему симптомов, не вызывая тяжелой гиперкальциемии, посредством уменьшения фосфора, креатинина и уровней PTH в крови.
Как применяют в настоящем документе, "гиперкальциемия" означает повышенные уровни кальция в крови более, чем 2 мг/100 мл. У нормального пациента уровни кальция составляют приблизительно 9-10,5 мг/дл или 2,2-2,6 ммоль/л. В случаях тяжелой гиперкальциемии (т.е. уровни кальция выше 15-16 мг/дл или 3,75-4 ммоль/л) может развиться кома и остановка сердца.
3
Таким образом, настоящее изобретение предоставляет новые способы лечения и/или предотвращения вторичного гиперпаратиреоза и/или сопутствующих ему симптомов у индивидуума, находящегося в состоянии риска развития вторичного гиперпаратиреоза, и лечения и/или предотвращения вторичного гиперпаратиреоза и/или сопутствующих ему симптомов у индивидуума, демонстрирующего симптомы вторичного гиперпаратиреоза, посредством введения индивидууму терапевтически эффективного количества 2-метилен-19-нор-(20S)-1α,25-дигидроксивитамина D (2MD) или его фармацевтически приемлемой соли без индуцирования гиперкальциемии у пациента, где 2MD имеет структуру (I):
Как применяют в настоящем документе, "предотвращение" означает предупреждение клинического симптома, указывающего на вторичный гиперпаратиреоз. Такое предупреждение включает, например, поддержание нормальных функций почек у индивидуума, находящегося в состоянии риска развития вторичного гиперпаратиреоза, предшествующего развитию явных симптомов вторичного гиперпаратиреоза, включая в качестве неограничивающих примеров, повышенные уровни PTH, фосфора и креатинина в сыворотке. Таким образом, термин "предотвращение" включает профилактическое лечение индивидуума, чтобы защитить его от появления вторичного гиперпаратиреоза. Предотвращение вторичного гиперпаратиреоза у индивидуума также направлено на то, чтобы включить ингибирование или остановку развития вторичного гиперпаратиреоза. Ингибирование или остановка развития вторичного гиперпаратиреоза включает, например, ингибирование или остановку появления повышенных уровней PTH, фосфора и креатинина в сыворотке.
Как применяют в настоящем документе, "заболевание почек" или "нарушение функции почек" означает состояние, демонстрирующее нарушенную функцию почек у индивидуума, который подвергается диализу, или пациента с хроническим заболеванием почек (CKD) на стадиях 2 или 3, таким как, например, острая почечная недостаточность, острый нефритический синдром, анальгетическая нефропатия, атероэмболическое заболевание почек, хроническая почечная недостаточность, хронический нефрит, врожденный нефротический синдром, синдром Гудпасчера, интерстициальный нефрит, рак почки, повреждение почки, инфекция почки, ушиб почки, камни в почках, мамбранозно-пролиферативный GNI, мембранозно-пролиферативный GNII, мембранозная нефропатия, липоидный нефроз, некротизирующий гломерулонефрит, нефробластома, нефрокальциноз, нефрогенный несахарный диабет, IgA-нефропатия, нефротический синдром при нефрозе, поликистоз почек, постстрептококковый GN, рефлюкс-нефропатия, эмболия почечной артерии, стеноз почечной артерии, нарушения почек, некроз почечных сосочков, почечноканальцевый ацидоз I типа, почечноканальцевый ацидоз II типа, сниженная почечная перфузия, почечный венозный тромбоз.
2
Под "заболеванием почек" также понимают пациентов с установленной почечной недостаточностью (например, уровень клубочковой фильтрации (GFR) менее чем 15 мл/мин/1,73 м или постоянная заместительная почечная терапия (RRT)). Под индивидуумом, имеющим "заболевание почек" подразумевают также индивидуума, имеющего повреждение почки в течение более 3 месяцев, что определяют посредством структурных или функциональных аномалий почки, с или без снижения GFR, проявляющегося или посредством патологических аномалий или маркеров повреждения почки, включая аномалии в составе крови или мочи, или аномалии в диагностических визуализациях. Маркеры повреждения почек включают протеинурию более 300 мкг/сут, как измерено посредством 24-часового скрининга экскреции. (См. таблицу 15, Am. J. of Kidney Disease, v.39, no. 2, Suppl. 1 (Feb. 2002), pp. 546-575, включенную в настоящий документ в качестве ссылки). Это определение может включать пациентов, подвергающихся диализу.
2
2
Как применяют в настоящем документе, пациент, имеющий «2 стадию хронической почечной недостаточности (CKD)» подразумевает пациента, демонстрирующего умеренное снижение GFR (60-89 мл/мин/1,73 м). Повреждения почек определяют как патологические аномалии или маркеры повреждения, включая аномалии в анализе крови или моче или визуализирующих исследованиях. Пациент, имеющий «3 стадию хронического заболевания почек (CKD)», подразумевает пациента, демонстрирующего умеренное снижение GFR (30-59 мл/мин/1,73 м). Руководства для характеристики заболевания почек могут различать стадию 3A (GFR 45-59) и стадию 3B (GFR 30-44) для целей скрининга и направления к врачу-специалисту. Для более подробной информации приблизительные стадии заболевания почек см. Am. J. of Kidney Disease, V. 39, No. 2, Suppl. 1, February 2002, включенный в настоящий документ в качестве ссылки.
Как применяют в настоящем документе, "индивидуум" включает млекопитающих и не млекопитающих. "Млекопитающие" подразумевает любого члена класса Млекопитающие, включая в качестве неограничивающих примеров, людей, не являющихся человеком приматов, таких как шимпанзе, и других приматов и виды обезьян; сельскохозяйственных животных, таких как крупный рогатый скот, лошади, овцы, козы и свиньи; домашних животных, таких как кролики, собаки и кошки; лабораторных животных, включая грызунов, таких как крысы, мыши и морские свинки; и т.п. Примеры немлекопитающих в качестве неограничивающих примеров включают птиц и т.п. Термин "индивидуум" не обозначает конкретный возраст или пол. Первичные индивидуумы, к которым относится настоящее изобретение, являются классом людей, которые получают лечение, или подвергаются гемодиализу. Термин "индивидуум" можно применять в настоящем документе взаимозаменяемо с терминами "пациент" или "человек".
Как применяют в настоящем документе, "введение" означает внесение соединения в организм, предпочтительно в системный кровоток, как описано более подробно ниже. Примеры, в качестве неограничивающих примеров, включают пероральную форму, форму для местного применения, буккальную, сублингвальную, легочную, трансдермальную, чресслизистую, а также подкожную, интраперитонеальную, внутривенную и внутримышечную инъекцию или в форме жидких или твердых дозировок через желудочно-кишечный тракт.
Как применяют в настоящем документе, "терапевтический эффект" означает количество соединения, которое при введении индивидууму при лечении или предотвращении заболевания, является достаточным для осуществления такого лечения или предотвращения заболевания. "Терапевтически эффективное количество" варьирует в зависимости от соединения, состояния заболевания, которое подвергается лечению, тяжести заболевания, возраста и относительного здоровья индивидуума, пути и формы введения, врачебного мнения лечащего врача или ветеринара и других факторов. Как описано в настоящем документе, самцам-отъемышам крыс линии Харлан Спраг Доули вводили несколько уровней дозирования 2MD, которые не вызывали бы значительной гиперкальциемии. Авторами выявлено, что 2 1/2 нанограмм/килограмм массы тела (нг/кг массы тела) 2MD на крысу в сутки является достаточным для предотвращения и лечения вторичного гиперпаратиреоза, или предотвращения или лечения симптомов вторичного гиперпаратиреоза, без повышения уровней кальция в сыворотке. Кроме того, 400 нг в сутки 2MD у женщин после менопаузы продемонстрировало 60% снижение уровней PTH в сыворотке, в то же время поддерживая уровни кальция в сыворотке в пределах физиологически нормального диапазона (фиг. 13).
В одном из вариантов осуществления терапевтически эффективное количество варьирует от приблизительно 10 нг/сут до приблизительно 1 мкг/сут, и предпочтительно от приблизительно 20 нг/сут до приблизительно 1 мкг/сут. В более предпочтительном варианте осуществления терапевтически эффективное количество варьирует от приблизительно 40 нг/сут до приблизительно 600 нг/сут, или приблизительно от 50 нг/сут до приблизительно 600 нг/сут. В наиболее предпочтительном варианте осуществления терапевтически эффективное количество варьирует от приблизительно 100 нг/сут до приблизительно 400 нг/сут.
Как применяют в настоящем документе, "лечить", "проведение лечения" или "лечение" означает улучшение состояния, смягчение или устранение клинического симптома, указывающего на вторичный гиперпаратиреоз. Улучшение состояния, смягчение или устранение клинического симптома включает, например, купирование, уменьшение тяжести или замедление прогрессирования или вызывание затухания симптома вторичного гиперпаратиреоза. Например, снижение количества PTH в сыворотке, уровней фосфора или уровней креатинина в сыворотке в ответ на лечение 2MD. Конкретно, лечение может включать снижение количества PTH в сыворотке, фосфора в сыворотке или креатинина в сыворотке, по меньшей мере, приблизительно на 20%. В одном из вариантов осуществления количество PTH в сыворотке, фосфора в сыворотке или креатинина в сыворотке крови пациента снижено приблизительно на 20-40% или приблизительно на 35-50%. Другие патологические состояния, хронические осложнения или фенотипические проявления вторичного гиперпаратиреоза известны специалистам в данной области и могут быть сходным образом применены в качестве показателя лечения вторичного гиперпаратиреоза при условии, что присутствует снижение тяжести состояния, осложнения или проявлений, связанных с заболеванием.
Эффективные составы соединений описаны в патенте США № 5843928 и включают фармацевтическое применение в качестве раствора в нетоксичных растворителях, или в качестве эмульсии, суспензии или дисперсии в подходящих растворителях или носителях, или в качестве пилюль, таблеток, капсул, комбинированных с твердыми носителями. Другие составы также могут включать другие фармацевтически приемлемые и нетоксичные эксципиенты, такие как стабилизаторы, антиоксиданты, связывающие средства, красители или эмульгирующие или модифицирующие вкус средства и составы с продолжительным высвобождением.
В одном из вариантов осуществления соединение 2MD является активным фармацевтическим ингредиентом (API), вводимым описанными способами. API можно формулировать в пероральную фармацевтическую дозированную форму в качестве раствора в нетоксичных растворителях, эмульсии, суспензии или дисперсии в подходящих растворителях или носителях. API можно также формулировать в различные пероральные дозированные формы, такие как пилюли, таблетки или капсулы с применением подходящих фармацевтических твердых носителей. Такие фармацевтические составы могут также содержать другие фармацевтически подходящие одобренные USP неактивные ингредиенты, эксципиенты, такие как стабилизаторы, антиоксиданты, связывающие средства, красители, эмульгаторы и/или модифицирующие вкус средства, которые обозначают как одобренные USP неактивные фармацевтические ингредиенты.
API можно вводить перорально, местно, парентерально или трансдермально или посредством ингаляции. Соединение можно вводить посредством инъекции или внутривенного вливания с применением подходящих стерильных растворов. Местными дозированными формами могут быть кремы, мази, пластыри или подобные носители, подходящие для трансдермальных и местных дозированных форм.
В некоторых вариантах осуществления API можно формулировать в дозировках для доставки дозы в диапазоне приблизительно от 10 нг/сут до приблизительно 1 мкг/сут, предпочтительно от приблизительно 20 нг/сут до приблизительно 1 мкг/сут и более предпочтительно от приблизительно 40 нг/сут до приблизительно 600 нг/сут или от приблизительно 50 нг до приблизительно 600 нг в сутки и наиболее предпочтительно от приблизительно 100 нг/сут до приблизительно 400 нг/сут. API предпочтительно формулируют в дозе, которую можно использовать для предотвращения или лечения вторичного гиперпаратиреоза, или для предотвращения или лечения симптомов вторичного гиперпаратиреоза. Как правило, положительные эффекты 2MD наблюдают на уровнях дозирования, которые не поднимают существенно уровень кальция в сыворотке. Такая доза и режимы дозирования могут быть скорректированы для приведения в соответствие с тяжестью или прогрессированием заболевания, предрасположенностью/состоянием риска/чувствительностью пациента и другими известными критериями.
Фармацевтически подходящие пероральные системы носителей (также обозначаемые как системы доставки лекарственных средств, которые являются современной технологией, распространенной посредством или в качестве части продукта лекарственного средства, которая способствует равномерному высвобождению или доставке к мишени лекарственного средства в организме), предпочтительно, включают одобренные FDA и/или одобренные USP неактивные ингредиенты. В соответствии с 21 CFR 210,3(b)(8) неактивный ингредиент является любым компонентом лекарственного продукта, предназначенным обеспечивать фармацевтическую активность или другой прямой эффект в диагнозе, или влиять на структуру или любую функцию организма людей или других животных. Активные ингредиенты включают те компоненты продукта, которые могут подвергаться химическому изменению во время производства лекарственного продукта и присутствовать в лекарственном продукте в модифицированной форме, предназначенной обеспечивать конкретную активность или эффект. Как применяют в настоящем документе, набор (также обозначаемый как дозированная форма) является упакованным комплектом соответствующего материала.
Как применяют в настоящем документе, "пероральные дозированные" формы могут включать капсулы (т.е. твердую пероральную дозированную форму, состоящую из оболочки и наполнителя), где оболочка составлена из единого герметичного слоя, или двух половинок, которые подогнаны друг к другу и которые иногда герметизированы полоской, и где оболочки капсул могут быть изготовлены из желатина, крахмала или целлюлозы или других подходящих материалов, могут быть мягкими или твердыми, и заполнены твердыми или жидкими ингредиентами, которые могут быть отлиты или сжаты. Пероральная дозированная форма может также быть капсулой или таблетками в оболочке, в которых лекарственное средство заключено внутри твердого или мягкого растворимого контейнера или "оболочки", изготовленной из подходящей формы желатина. Само лекарственное средство может быть в форме гранул, для которых может быть использовано различное количество материала оболочки или капсул с покрытием для продолжительного высвобождения, в которых заключено лекарственное средство внутри твердого или мягкого растворимого контейнера или "оболочки", изготовленной из подходящей формы желатина. Дополнительно, капсула может быть покрыта предназначенным для этого покрытием, которое высвобождает лекарственное средство или лекарственные средства таким образом, чтобы обеспечить, по меньшей мере, снижение частоты приема лекарственного средства по сравнению с тем лекарственным средством или лекарственными средствами, которые представлены в качестве общепринятых дозированных форм.
Пероральная дозированная форма дополнительно может быть капсулой с отсроченным высвобождением, в которой лекарственное средство заключено внутри твердого или мягкого растворимого контейнера, изготовленного из подходящей формы желатина, и которая высвобождает лекарственное средство (или лекарственные средства) в другое время, нежели сразу же после введения, где покрытые кишечно растворимой оболочкой препараты являются дозированными формами с отсроченным высвобождением. Также являются пригодными капсулы с отсроченным высвобождением, в которых лекарственное средство заключено внутри твердого или мягкого контейнера или "оболочки". В этих случаях само лекарственное средство находится в форме гранул, в которых применяют растворяющееся в кишечнике покрытие, таким образом откладывая высвобождение лекарственного средства, пока оно не пройдет в стенку кишечника. Капсула с продолжительным высвобождением и капсула, покрытая пленочной оболочкой с продолжительным высвобождением, также являются пригодными.
Дополнительно, капсула покрытая предназначенным для этого пленочным покрытием, и которая высвобождает лекарственное средство или лекарственные средства таким образом, чтобы обеспечить, по меньшей мере, снижение частоты приема лекарственного средства по сравнению с тем лекарственным средством или лекарственными средствами, которые представлены в качестве общепринятой дозированной формы), капсула, покрытая желатином (твердая дозированная форма, внутри которой лекарственное средство заключено в твердом или мягком растворимом контейнере, изготовленном из подходящей формы желатина; посредством процесса обволакивания капсулу покрывают дополнительными слоями желатина для образования сплошного герметичного слоя), капсула, заполненная жидким содержимым (твердая дозированная форма, в которой лекарственное средство заключено внутри растворимой желатиновой оболочки, которая пластифицирована посредством добавления полиола, такого как сорбит или глицерин, и, таким образом, представляет до некоторой степени более густую консистенцию, чем консистенция капсулы с твердой оболочкой).
Как правило, активные ингредиенты могут быть растворенными или суспендированными в жидком носителе, гранулой (маленькая частица или крупинка), таблеткой (небольшое количество стерильной твердой массы, состоящей из высоко очищенного лекарственного средства, с или без эксципиентов, изготовленной посредством формирования гранул или посредством компрессии и формовки), или таблеткой с покрытием с продолжительным высвобождением (твердая дозированная форма, в которой само лекарственное средство находится в форме гранул, к которым применяют различные количества покрытия, и которая высвобождает лекарственное средство или лекарственные средства таким образом, чтобы обеспечить снижение частоты приема лекарственного средства по сравнению с лекарственном средством или лекарственными средствами, представленными в качестве общепринятой дозированной формы).
Другие формы включают пилюли (маленькая, круглая твердая дозированная форма, содержащая лекарственное средство, предназначенное для перорального введения), порошок (однородная смесь сухих, мелко дисперсных лекарственных средств и/или химических веществ, которые могут предназначаться для внутреннего или внешнего применения), эликсир (прозрачная, с приятным ароматом, подслащенная водно-спиртовая жидкость, содержащая растворенное лекарственное средство; она предназначена для перорального применения), жевательная резинка (подслащенный и ароматизированный нерастворимый пластичный материал различных форм, который при жевании высвобождает лекарственное средство в пероральную полость), сироп (пероральный раствор, содержащий высокие концентрации сахарозы или других сахаров; термин также использовали для включения любых других жидких дозированных форм, изготовленных в сладком и вязком носителе, включая пероральные суспензии), таблетка (твердая дозированная форма, содержащая лекарственные вещества с или без подходящих разбавителей), жевательную таблетку (твердая дозированная форма, содержащая лекарственные вещества с или без подходящих разбавителей, которая предназначена для жевания, оставляя в ротовой полости остаток с приятным вкусом, который легко проглатывается и не оставляет горького или неприятного послевкусия), таблетку в оболочке или таблетку с отсроченным высвобождением, таблетку для рассасывания, шипучую таблетку, таблетку с продолжительным высвобождением, таблетку покрытую пленочной оболочкой, или таблетку, покрытую пленочной оболочкой, с продолжительным высвобождением, где таблетку формулируют таким образом, чтобы сделать содержащееся там лекарственное средство доступным в течение длительного периода времени, следующего за приемом внутрь.
В других формах может быть представлена таблетка для растворения, таблетка для суспензии, многослойная таблетка, многослойная таблетка с продолжительным высвобождением, где таблетку формулируют таким образом, чтобы обеспечить, по меньшей мере, снижение частоты приема лекарственного средства по сравнению с лекарственным средством, представленным в общепринятой дозированной форме. Также являются пригодными таблетка, растворяющая в ротовой полости, таблетка, растворяющая в ротовой полости, с отсроченным высвобождением, растворимая таблетка, таблетка, покрытая сахаром, осмотическая и т.п.
Композиция в пероральной дозированной форме может содержать активный фармацевтический ингредиент и один или несколько неактивных фармацевтических ингредиентов, таких как разбавители, солюбилизаторы, спирты, связывающие средства, полимеры с контролируемым высвобождением, растворимые в кишечнике полимеры, дезинтегранты, эксципиенты, красители, ароматизаторы, подсластители, антиоксиданты, консерванты, пигменты, добавки, наполнители, суспендирующие средства, поверхностно-активные вещества (например, анионные, катионные, амфотерные и неионные) и т.п. Различные одобренные FDA неактивные ингредиенты местного применения находятся в "Базе данных неактивных ингредиентов" FDA, которая содержит неактивные ингредиенты, конкретно предназначенные как таковые производителем, где неактивные ингредиенты можно рассматривать в качестве активных ингредиентов при определенных обстоятельствах, в соответствии с определением активного ингредиента, данным в 21 CFR 210.3(b)(7). Спирт является хорошим примером ингредиента, который можно рассматривать в качестве активного или неактивного в зависимости от состава продукта.
Как применяют в настоящем документе, инъекционные и инфузионные дозированные формы в качестве неограничивающих примеров включают липосомные инъекционные, которые состоят из липосом или образуют липосомы (двухслойный липидный носитель, как правило, составленный из фосфолипидов, которые применяют, чтобы заключить в капсулу активное вещество лекарственного средства). Также пригодной является инъекция, которая включает стерильный препарат, предназначенный для парентерального применения; как определяют в USP, существуют пять отличных друг от друга классов инъекций. Также пригодными являются эмульсионная инъекция, которая включает эмульсию, состоящую из стерильного, апирогенного препарата, предназначенного для парентерального введения, или липидная комплексная инъекция.
Другие формы включают порошок для приготовления раствора для инъекции, который является стерильным препаратом, предназначенным для разведения, чтобы образовать раствор для парентерального применения; порошок для приготовления суспензии для инъекции, который является стерильным препаратом, предназначенным для разведения для формирования суспензии для парентерального применения; порошок, лиофилизированный для приготовления липосомной суспензии для инъекции, которая является стерильным высушенным сублимацией препаратом, предназначенным для разведения, для парентерального применения, который был сформулирован таким образом, чтобы обеспечить образование липосом (липидный двухслойный носитель, как правило, составлен из фосфолипидов, который применяют для заключения активного вещества лекарственного средства, или внутри липидного бислоя или в водной среде) посредством разведения; порошок лиофилизированный для приготовления раствора для инъекций, который является дозированной формой, предназначенной для раствора, полученного посредством лиофилизации ("сушка сублимацией"), процесса, который включает удаление воды из продуктов в замороженном состоянии при экстремально низких давлениях.
Это предназначено для последующего добавления жидкости для создания раствора, который во всех отношениях отвечает требованиям к инъекциям; порошок, лиофилизированный для приготовления суспензии для инъекции, находясь в жидком виде, предназначен для парентерального применения, которая содержит твердые частицы, взвешенные в подходящей жидкой среде и во всех отношениях отвечает требованиям к стерильным суспензиям; лекарственные средства, предназначенные для суспензий, получают посредством лиофилизации ("сушка сублимацией"), процесса, который включает удаление воды из продуктов в замороженном состоянии при экстремально низких давлениях; раствор для инъекций, будучи жидким препаратом, содержащим одно или несколько веществ лекарственного средства, растворенных в подходящих растворителях или смеси взаимно смешивающихся растворителей, которые являются подходящими для инъекций; концентрированный раствор для инъекций, будучи стерильным препаратом для парентерального применения, который при добавлении подходящего растворителя дает раствор, отвечающий во всех отношениях требованиям к инъекциям.
Суспензионная инъекция содержит жидкий препарат, подходящий для инъекции, который состоит из твердых частиц, диспергированных во всем объеме жидкой фазы, в которой частицы не являются растворимыми, которая также может состоять из масляной фазы, диспергированной во всем объеме водной фазы, или vice-versa. Липосомная суспензия для инъекций содержит жидкий препарат, подходящий для инъекции, который состоит из масляной фазы, диспергированной во всем объеме водной фазы таким образом, что образуются липосомы (двухслойный липидный носитель, как правило, составленный из фосфолипидов, который применяют, чтобы заключить в капсулу активное вещество лекарственного средства, внутри липидного бислоя или в водной среде). Обработанная ультразвуком суспензия для инъекций содержит жидкий препарат, подходящий для инъекций, который состоит из твердых частиц, диспергированных во всем объеме жидкой фазы, в которой частицы не являются растворимыми. Кроме того, продукт, обработанный ультразвуком, когда через суспензию барботируют газ, и это приводит к образованию микросфер посредством твердых частиц.
Система парентерального носителя включает один или несколько фармацевтически подходящих эксципиентов, таких как растворители и сорастворители, солюбилизаторы, средства для смачивания, суспендирующие средства, загустители, эмульгаторы, хелатирующие средства, буферы, регуляторы pH, антиоксиданты, восстановители, противомикробные консерванты, наполнители, протективные средства, регуляторы тоничности и специальные добавки. Составы, подходящие для парентерального введения подходящим образом содержат стерильный масляный или водный препарат активного ингредиента, который предпочтительно является изотоничным крови реципиента.
Как применяют в настоящем документе, ингаляционные дозированные формы в качестве неограничивающих примеров включают аэрозоль, являющийся продуктом, который упаковывают под давлением и который содержит терапевтически активные ингредиенты, которые высвобождаются при активации соответствующего клапанного механизма, предназначенный для местного применения на коже, а также местного применения в носовой полости (назальные аэрозоли), ротовой полости (лингвальные и сублингвальные аэрозоли), или в легких (ингаляционные аэрозоли); пенящиеся аэрозоли, являющиеся дозированной формой, содержащей один или несколько активных ингредиентов, поверхностно-активные вещества, водные или неводные жидкости и пропелленты, где если пропеллент находится во внутренней фазе (дисперсной) фазе (т.е. типа масло-в-воде), высвобождается стабильная пена, и если пропеллент находится во внешней фазе (диспергирующая фаза) (т.е. типа воды-в-масле), высвобождается спрей или быстро распадающаяся пена; дозируемый аэрозоль, являющийся дозированной формой, находящейся под давлением, состоящей из дозирующих клапанов, которые обеспечивают доставку универсального количества спрея при каждой активации; порошковый аэрозоль, являющийся продуктом, который упаковывают под давлением и который содержит терапевтически активные ингредиенты в форме порошка, которые высвобождаются при активации соответствующей клапанной системы; и, аэрозольный спрей, являющийся аэрозольным продуктом, который использует сжатый газ в качестве пропеллента для обеспечения силы, необходимой для вытеснения продукта в качестве влажного спрея и являющийся применимым к растворам лекарственных средств в водных растворителях.
Как применяют в настоящем документе, трансдермальная дозированная форма в качестве неограничивающих примеров включает, пластырь, являющийся системой доставки лекарственного средства, которая, как правило, содержит адгезивную подкладку, которую, как правило, либо прикладывают к наружной части тела, где ингредиенты или пассивно диффундируют из, или активно транспортируются с некоторой частью пластыря, и где в зависимости от пластыря ингредиенты доставляются или к наружной поверхности тела или внутрь организма; и, другие различные типы трансдермальных пластырей, таких как матричный, резервуарный и другие известные в данной области.
Как применяют в настоящем документе, дозированная форма для местного применения включает различные дозированные формы, известные в данной области, такие как лосьоны (эмульсия, жидкая дозированная форма, где эта дозированная форма предназначена, как правило, для наружного применения к коже), лосьон усиленного действия (дозированная форма в виде лосьона, которая усиливает доставку лекарственного средства, где усиление не относится к силе действия лекарственного средства в дозированной форме), гели (полутвердая дозированная форма, которая содержит гелеобразующее средство для обеспечения жесткости раствора или коллоидной дисперсии, где гель может содержать суспендированные частицы) и мази (полутвердая дозированная форма, как правило, содержащая менее 20% воды и летучих веществ и более 50% углеводородов, воска или полиолов в качестве носителя, где эту дозированную форму, как правило, используют для наружного применения к коже или слизистым оболочкам).
Мазь усиленного действия (дозированная форма в виде мази, которая усиливает доставку лекарственного средства, где усиление не относится к силе лекарственного средства в дозированной форме), кремы (эмульсия, полутвердая дозированная форма, как правило, содержащая более 20% воды и летучих веществ и/или менее 50% углеводородов, воска или полиолов, также можно использовать в качестве носителя, где эта дозированная форма, как правило, предназначена для наружного применения к коже или слизистым оболочкам. Также являются пригодными крем усиленного действия (дозированная форма в виде крема, которая усиливает доставку лекарственного средства, где усиление не относится к силе лекарственного средства в дозированной форме), эмульсии (дозированная форма, состоящая из двухфазной системы, содержащей, по меньшей мере, две несмешивающиеся жидкости, одна из которых диспергирована в виде капель, внутренняя или диспергированная, внутри другой жидкости, наружная или диспергирующая фаза, как правило, стабилизированная в одном или нескольких эмульгаторах, где эмульсию применяют в качестве термина для обозначения дозированной формы, если не применяют более конкретный термин, например, крем, лосьон, мазь), суспензии (жидкая дозированная форма, которая содержит твердые частицы, диспергированные в жидком носителе), суспензия с продолжительным высвобождением, пасты (полутвердая дозированная форма, содержащая большую долю, 20-50%, твердых мелко диспергированных в жирном носителе, где эта дозированная форма, как правило, предназначена для наружного применения к коже или слизистым оболочкам), растворы (прозрачная гомогенная жидкая дозированная форма, которая содержит одно или несколько химических веществ, растворенных в растворителе или смеси взаимно смешивающихся растворителей) и порошки.
Как правило, применяют шампуни (дозированная форма в виде лосьона, которая содержит мыло или поверхностно-активное вещество, которое, как правило, применяют для очищения волос и кожи головы), как правило, применяют в качестве носителя для дерматологических средств. Например, шампуни в суспензии (жидкое мыло или поверхностно-активное вещество, содержащее одно или несколько твердых, нерастворимых веществ, диспергированных в жидком носителе, которые применяют для очищения волос и кожи головы и которые, как правило, применяют в качестве носителя дерматологических средств). Также являются подходящими аэрозольные пены (т.е. дозированная форма, содержащая один или несколько активных ингредиентов, поверхностно-активные вещества, водные или неводные жидкости и пропелленты; если пропеллент находится во внутренней дисперсной фазе, т.е. типа масло-в-воде, получают стабильную пену, и если пропеллент находится в наружной диспергирующей фазе, т.е. типа воды-в-масле, получают спрей или быстро распадающуюся пену), спреи (жидкость, дробящаяся струей воздуха или воды), дозированный спрей (не находящаяся под давлением дозированная форма, состоящая из клапанов, которые способствуют распределению конкретного количества спрея на каждую активацию), и спрей-суспензия (жидкий препарат, содержащий твердые частицы, диспергированные в жидком носителе и в форме крупных капель или в качестве мелко раздробленных твердых частиц, для местного применения, в большей степени, как правило, в носоглоточном воздуховоде, или местно на коже).
Кроме того, подходящими являются желе (класс гелей, который является полутвердыми системами, которые состоят из суспензий, изготовленных из небольших неорганических частиц или крупных органических молекул, взаимопроникающих посредством жидкости, в которой структурный сцепленный матрикс содержит высокую долю жидкости, как правило, воды) и пленки (тонкий слой или покрытие), включающая пленку с продолжительным высвобождением (система доставки лекарственного средства в форме пленки, которая высвобождает лекарственное средство на протяжении длительного периода таким образом, чтобы поддерживать постоянные уровни лекарственного средства в крови или ткани-мишени) и растворимая пленка (тонкий слой или покрытие, которое подвержено растворению при контакте с жидкостью).
Спонжи (пористый имеющий сетчатую структуру абсорбирующий материал, который содержит лекарственное средство, где его, как правило, используют для применения или введения лекарственного средства или для очищения, и где спонж, как правило, сохраняет свою форму), марлевые тампоны (небольшой кусок относительно плоского абсорбирующего материала, который содержит лекарственное средство, где марлевый тампон можно также прикрепить к одному концу небольшой палочки, и где марлевый тампон, как правило, используют для применения лекарственного средства или для очищения).
Пластыри (система доставки лекарственного средства, которая, как правило, содержит адгезивную подкладку, которую, как правило, применяют к наружной части тела, откуда ее ингредиенты или пассивно диффундируют, или активно транспортируют некоторую долю пластыря, где в зависимости от пластыря ингредиенты доставляются или к наружной поверхности тела или внутрь организма, и где пластырь иногда является синонимом терминов "пленка с продолжительным высвобождением" и "система"), пластырь с продолжительным высвобождением (система доставки лекарственного средства в форме пластыря, которая высвобождает лекарственное средство таким образом, что происходит снижение частоты введения лекарственного средства по сравнению с частотой введения лекарственного средства в общепринятой дозированной форме, например, растворе или общепринятой твердой дозированной форме с быстрым высвобождением лекарственного средства), электронно-контролируемый пластырь с продолжительным высвобождением (система доставки лекарственного средства в форме пластыря, которая контролируется посредством электрического тока, которая высвобождает лекарственное средство таким образом, что происходит снижение частоты введения лекарственного средства по сравнению с частотой введения лекарственного средства, представленного в качестве общепринятой дозированной формы, например, раствора или общепринятой твердой дозированной формы с быстрым высвобождением лекарственного средства) и т.п. Различные дозированные формы для местного применения также могут быть в качестве форм с немедленным высвобождением, контролируемым высвобождением, длительным высвобождением или т.п.
Композиция дозированной формы для местного применения содержит активный фармацевтический ингредиент и один или несколько неактивных фармацевтических ингредиентов, таких как эксципиенты, красители, пигменты, добавки, наполнители, смягчающие средства, поверхностно-активные вещества (например, анионные, катионные, амфотерные и неионные), усилители впитывания (например, спирты, жирные спирты, жирные кислоты, сложные эфиры жирных кислот и полиолы) и т.п. Различные одобренные FDA неактивные ингредиенты для местного применения находятся в "Базе данных неактивных ингредиентов" FDA, которая содержит неактивные ингредиенты, конкретно предназначенные как таковые производителем, где неактивные ингредиенты также можно рассматривать как активные ингредиенты при определенных обстоятельствах, в соответствии с определением активного ингредиента, данным в 21 CFR 210.3(b)(7). Спирт является хорошим примером ингредиента, который можно рассматривать как активный или неактивный ингредиент в зависимости от состава продукта.
ПРИМЕРЫ
2
3
Следующие примеры представлены исключительно с иллюстративными целями и не предназначены для ограничения объема настоящего изобретения каким-либо образом. В примерах проиллюстрировано, что 2MD, аналог 1,25(OH)D, первоначально предполагаемый быть значительным в предотвращении и лечении остеопороза, является также значительным в предотвращении и лечении вторичного гиперпаратиреоза и сопутствующих ему симптомов. В исследовании, проведенном на крысах, в котором их почки были хирургически удалены, было продемонстрировано, что ежесуточное пероральное и интраперитонеальное (ip) введение 2MD приводит к пониженным уровням PTH, фосфора и креатинина в сыворотке, всех показателей почечной недостаточности, по сравнению с контрольными животными, получающими носитель. Кроме того, введение 2MD приводит к пониженным уровням PTH, фосфора и креатинина при уровнях дозирования, которые не повышают кальций в сыворотке.
Пример 1
Материалы и методы
Модель крыс с нефрэктомией. Вызывание заболевания. Самцы-отъемыши крыс линии Харлан Спраг Доули получали из Харлана (Madison, Wis.). В течение последующего периода акклимации длительностью 10-13 суток у животных удаляли две трети одной почки. Через неделю удаляли полностью другую почку. Животных перевели со смешанной пищи на очищенную диету для грызунов (Suda et al., Purified Rodent Diet-Diet 11), содержащую 0,6% Ca и 0,9% фосфора и жирорастворимые витамины A, D, E и K. Воду и пищу обеспечивали ad libitum.
Условия содержания животных. Животных содержали в подвесных, пластиковых клетках, напоминающих коробки из-под обуви с подстилкой из початка кукурузы (до хирургического вмешательства) или в клетках из нержавеющей стали с сетчатым дном (приблизительно в течение одной недели после хирургического вмешательства). Помещения для животных поддерживали при температуре от 68 до 72°F и относительной влажности от 25 до 75%. Помещения для животных устанавливали таким образом, чтобы обеспечить их светом в течение 12 часов в сутки.
Лечебные группы. Приблизительно через четыре недели после второго хирургического вмешательства животных распределяли по лечебным группам (14-15 животных/группа) таким образом, чтобы в каждой группе был одинаковый средний уровень PTH.
Доза препарата (состав носителя). Материал для отрицательного контроля получали посредством измерения объемным способом этанола (5%) и масла Neobee, смешивания, а затем помещения их на хранение при температуре от 2 до 8°C.
max
Доза препарата (состав 2MD). Составы 2MD (DP001, Sigma Aldrich Fine Chemicals, Madison, Wis.) получали посредством, во-первых, определения концентрации исходного раствора этанола с применением УФ спектрофотометрии (коэффициент экстинкции=42000; λ=252 нм). Затем растворы объемным способом добавляли к маслу Neobee таким образом, чтобы в окончательном растворе было более 5% этанола. При необходимости, добавляли дополнительный этанол, чтобы привести окончательное количество этанола к 5%. Раствор смешивали и хранили при температуре от 2 до 8°C.
Способ введения дозы. И носитель, и 2MD вводили перорально на спинку языка в дозе 0,5 мл/кг массы тела один раз в день в течение 8 недель или интраперитонеально три раза в неделю в течение 4 недель.
Уровни паратиреоидного гормона (PTH) в сыворотке. Под "уровнями PTH в сыворотке" авторы имеют ввиду количество PTH, высвобожденного посредством паращитовидной железы. PTH является наиболее значительным регулятором уровней кальция и фосфора в организме, и контролируется посредством уровня кальция в крови. Низкие уровни кальция в крови вызывают повышенный PTH, который должен высвободиться, в то время как высокие уровни кальция в крови ингибируют высвобождение PTH. Нормальные показатели составляют 10-55 пикограмм на миллилитр (пг/мл). Через четыре недели после хирургического вмешательства и 4 и 8 недель после начала лечения, кровь собирали из хвостовой артерии, и концентрацию биоактивного РТН в сыворотке измеряли с применением биоактивного интактного набора для крыс PTH ELISA от Immutopics, Inc. (San Clemente, Calif.).
Анализ кальция в сыворотке. Через четыре недели, следующие за хирургическим вмешательством и 4 и 8 недель после начала лечения кровь собирали из хвостовой артерии каждого экспериментального животного. Допускали коагуляцию крови при комнатной температуре, и затем центрифугировали при 3000×g в течение 15 мин. Сыворотку переносили в полипропиленовую пробирку и хранили в замороженном виде при температуре -20°C. Уровень кальция определяли посредством растворения сыворотки в 0,1% хлориде лантана и измерения оптической плотности на атомно-абсорбционном спектрофотометре (Perkin Elmer Model 3110, Shelton, Conn.).
Анализ фосфора. Через четыре недели после хирургического вмешательства и 8 недель после начала лечения кровь собирали из хвостовой артерии каждого экспериментального животного. Допускали коагуляцию крови при комнатной температуре и затем ее центрифугировали при 3000×g в течение 15 мин. Сыворотку переносили в полипропиленовую пробирку и хранили в замороженном виде при температуре -20°C. Уровень фосфора определяли с применением клинического анализатора (Pentra 400, Horiba ABX Diagnostics--France; УФ способ с применением фосфомолибдата).
Анализ креатинина. Измерение уровней креатинина в сыворотке является подходящим и недорогостоящим способом оценки почечной дисфункции. Креатинин является небелковым продуктом выделения при метаболизме фосфокреатинина скелетной мышечной ткани. Образование креатинина является непрерывным и пропорциональным мышечной массе. Креатинин свободно фильтруется, и, таким образом, уровень креатинина в сыворотке зависит от уровня клубочковой фильтрации (GFR). Почечная дисфункция уменьшает способность фильтровать креатинин, и креатинин сыворотки поднимается. Если уровень креатинина в сыворотке удваивается, то считают, что GFR становится в два раза меньше. Трехкратное повышение рассматривают в качестве отражения 75% потери функции почки.
В следующих примерах уровни креатинина в сыворотке оценивали через четыре недели после хирургического вмешательства и через 8 недель после начала лечения. Кровь собирали из хвостовой артерии каждого экспериментального животного. Допускали коагуляцию крови при комнатной температуре, и затем ее центрифугировали при 3000×g в течение 15 мин. Сыворотку переносили в полипропиленовую пробирку и хранили в замороженном виде при -20°C. Уровень креатинина определяли с применением клинического анализатора (Pentra 400, Horiba ABX Diagnostics--France; реакция Яффе), и он являлся показателем нарушенной функции почек и хронического нефрита. В одном из вариантов осуществления изобретения ожидают минимальное снижение уровней креатинина в сыворотке приблизительно на 30% после лечения в соответствии со способом по настоящему изобретению.
Пример 2
Модель уремии у крысы - интраперитонеальное (ip) введение 2MD
На фиг. 1 схематически проиллюстрирован ip протокол лечения с применением 2MD. Как представлено на фиг. 2, ip введение 2MD по 5 нг/кг веса тела три раза в неделю предотвращало повышение PTH в сыворотке, и подавляло уровни циркулирующего PTH при 10 нг/кг массы тела. Как представлено на фиг. 3, ip введение 2MD не поднимало уровни кальция в сыворотке до тех пор пока не вводили дозу 10 нг/кг массы тела.
Пример 3
Модель уремии у крысы - пероральное введение 2MD по сравнению с Земплар
На фиг. 4 схематически проиллюстрирован протокол перорального лечения с применением 2MD. Как представлено на фиг. 5, пероральное введение 2MD в суточных дозах 1-5 нг/кг массы тела предотвращало повышение или производило снижение уровней PTH в сыворотке. Наблюдаемый эффект продолжался в течение восьми недель терапии. Как представлено на фиг. 6, пероральное введение Земплар при суточных дозах 30-300 нг/кг массы тела предотвращало повышение уровней PTH в сыворотке, но терапевтический эффект терялся по мере прогрессирования заболевания. На фиг. 7 проиллюстрировано, что при пероральном введении 2MD в дозе 5 нг/кг массы тела наблюдали клинически значимое повышение кальция в сыворотке. На фиг. 8 проиллюстрировано, что при пероральном введении Земплар в дозах 100 и 300 нг/кг массы тела наблюдали клинически значимое повышение кальция в сыворотке.
Как представлено на фиг. 9, пероральное введение 2MD в суточных дозах 1-5 нг/кг массы тела уменьшало уровни фосфора в сыворотке у нефрэктомизированных крыс. В противопоставление этому, пероральное введение Земплар не понижало уровни фосфора в сыворотке у нефрэктомизированных крыс.
Как представлено на фиг. 11, пероральное введение 2MD в суточных дозах 1-5 нг/кг массы тела приводило к пониженным уровням креатинина в сыворотке по сравнению с контрольными животными, получающими носитель. В противоположность этому, пероральное введение Земплар понижало уровни креатинина в сыворотке по сравнению с контрольными животными, получающими носитель, однако только на уровнях дозирования, которые значительно увеличивали кальций в сыворотке.
Пример 4
Фаза 1B исследования - пероральное введение 2MD женщинам после менопаузы
На фиг. 13 проиллюстрировано, что пероральное введение 2MD один раз в день в течение 28 суток женщинам после менопаузы в дозе 110 нанограмм (нг) уменьшало уровни PTH в сыворотке на 21%, и доза 440 нг уменьшала уровни PTH в сыворотке на 67%.
Интерпретация данных
3
2MD или 2-метилен-19-нор-(20S)-1α,25-дигидроксивитамин D эффективно уменьшает вторичный гиперпаратиреоз в модели почечной недостаточности у крысы. У крыс, которые имеют всю, кроме одной шестой массы почки, удаленной посредством хирургического вмешательства, и которые получают диету с высоким содержанием фосфора, происходит повышение уровней PTH в крови. Схема лечения с пероральным или интраперитонеальным введением 2MD один раз в день или 3 раза в неделю уменьшает уровни циркулирующего РТН. Кроме того, 2MD обладает дополнительным положительным эффектом предотвращения дальнейшего повышения или возможно уменьшения уровней как фосфор, так и креатинина в крови. Таким образом, 2MD демонстрирует долговременные эффекты того, что крысы, получавшие пероральное лечение, в течение 8 недель все еще демонстрируют пониженные уровни PTH; в то время как, другие соединения витамина D теряют свою эффективность после 4 недель лечения этой модели на животных.