САМОИНДУЦИРУЕМАЯ ЭКСПРЕССИОННАЯ СИСТЕМА И ЕЕ ПРИМЕНЕНИЕ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ПОЛЕЗНЫХ МЕТАБОЛИТОВ С ПОМОЩЬЮ БАКТЕРИИ СЕМЕЙСТВА ENTEROBACTERIACEAE

1. Генетическая экспрессионная система, включающая:
транскрипционный аппарат, регулируемый белком типа LysR, который включает промотор и оператор, экспрессия которых положительно регулируется регуляторным белком типа LysR и коиндуктором, и
целевой(ые) ген(ы), с которым(и) указанный транскрипционный аппарат функционально связан, причем целевой(ые) ген(ы) кодирует(ют) белок(ки), вовлеченный(е) в биосинтез указанного коиндуктора, субстрата или предшественника указанного коиндуктора,
отличающаяся тем, что самоиндуцируемая положительная регуляция по типу обратной связи указанной экспрессионной системы опосредована коиндуктором.
2. Экспрессионная система согласно п.1, отличающаяся тем, что указанная система из бактерии, принадлежащей к семейству Enterobacteriaceae или Pseudomonadaceae.
3. Экспрессионная система согласно п.1, отличающаяся тем, что указанная система из бактерии, принадлежащей к семейству Enterobacteriaceae.
4. Экспрессионная система согласно п.3, отличающаяся тем, что указанная система из бактерии, принадлежащей к роду Escherichia.
5. Экспрессионная система согласно п.4, отличающаяся тем, что указанная бактерия принадлежит к виду Escherichia coli.
6. Экспрессионная система согласно любому из пп.1-4, отличающаяся тем, что указанная система из биосинтетического пути L-аминокислоты, выбранной из группы, состоящей из разветвленных L-аминокислот, L-лизина, L-цистеина, L-метионина и L-триптофана.
7. Экспрессионная система согласно п.6, отличающаяся тем, что указанная система из биосинтетического пути L-аминокислот с разветвленной цепью.
ilvC
8. Экспрессионная система согласно любому из пп.1-5 и 7, отличающаяся тем, что промотор есть промотор P, указанный регуляторный белок типа LysR есть белок IlvY и коиндуктор есть 2-ацетомолочная кислота, 2-ацето-2-гидроксимаслянная кислота или их соли.
9. Экспрессионная система согласно п.8, отличающаяся тем, что коиндуктор есть 2-ацетомолочная кислота или ее соль.
10. Экспрессионная система согласно любому из пп.1-5 и 7, отличающаяся тем, что целевой(ые) ген(ы) кодирует(ют) ацетогидроксикислотасинтетазу.
11. Экспрессионная система согласно п.10, отличающаяся тем, что указанные целевые гены кодируют белки, выбранные из группы, состоящей из:
(A) комбинации из п.п.A1 и A2:
(A1) белка, содержащего аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2, или белка, содержащего аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2, которая содержит замену, делецию, вставку или добавление одного или нескольких аминокислотных остатков, и обладающего активностью ацетолактатсинтазы с белком A2; и
(A2) белка, содержащего аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4, или белка, содержащего аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4, которая содержит замену, делецию, вставку или добавление одного или нескольких аминокислотных остатков, и обладающего активностью ацетолактатсинтазы с белком A1;
(B) комбинации из п.п.B1 и B2:
(B1) белка, содержащего аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6, или белка, содержащего аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6, которая содержит замену, делецию, вставку или добавление одного или нескольких аминокислотных остатков, и обладающего активностью ацетолактатсинтазы с белком B2; и
(B2) белка, содержащего аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8, или белка, содержащего аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8, которая содержит замену, делецию, вставку или добавление одного или нескольких аминокислотных остатков, и обладающего активностью ацетолактатсинтазы с белком B1; и
(C) комбинации из п.п.C1 и C2:
(C1) белка, содержащего аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 32, или белка, содержащего аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 32, которая содержит замену, делецию, вставку или добавление одного или нескольких аминокислотных остатков, и обладающего активностью ацетолактатсинтазы с белком C2; и
(C2) белка, включающего аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 34, или белка, включающего аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 34, которая содержит замену, делецию, вставку или добавление одного или нескольких аминокислотных остатков, и обладающего активностью ацетолактатсинтазы с белком C1.
12. Экспрессионная система согласно п.11, отличающаяся тем, что указанная ацетогидроксикислотасинтетаза является мутантной ацетолактатсинтазой I, устойчивой к ингибированию по типу обратной связи L-валином.
13. Экспрессионная система согласно любому из п.п.1-5 и 7, отличающаяся тем, что указанный оператор включает участок, с которым связывается указанный регуляторный белок типа LysR.
14. Экспрессионная система согласно п.13, отличающаяся тем, что указанный регуляторный белок типа LysR выбран из группы, состоящей из:
(D) белка, содержащего аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10; и
(E) варианта белка, содержащего аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10, которая содержит замену, делецию, вставку или добавление одного или нескольких аминокислотных остатков, и имеющего активность регуляторного белка типа LysR.
15. Экспрессионная система согласно любому из п.п.1-5 и 7, отличающаяся тем, что указанный промотор включает:
(F) ДНК, содержащую нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 30; или
(G) вариант ДНК, содержащий нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 30, которая содержит замену, делецию, вставку или добавление одного или нескольких нуклеотидных остатков, и имеющий активность нуклеотидной последовательности SEQ ID NO: 30.
16. Бактерия-продуцент L-аминокислоты, принадлежащая к семейству Enterobacteriaceae, отличающаяся тем, что указанная бактерия модифицирована таким образом, что она содержит экспрессионную систему согласно любому из п.п.1-15.
17. Бактерия согласно п.16, отличающаяся тем, что указанная бактерия содержит ген, кодирующий регуляторный белок типа LysR.
18. Бактерия согласно п.16, отличающаяся тем, что указанная бактерия принадлежит к роду Escherichia.
19. Бактерия согласно п.18, отличающаяся тем, что указанная бактерия принадлежит к виду Escherichia coli.
20. Бактерия согласно любому из пп.16-19, отличающаяся тем, что указанная L-аминокислота есть L-аминокислота с разветвленной цепью.
21. Бактерия согласно п.20, отличающаяся тем, что L-аминокислота с разветвленной цепью выбрана из группы, состоящей из L-валина, L-лейцина и L-изолейцина.
22. Способ получения L-аминокислоты с разветвленной цепью, включающий:
(i) выращивание бактерии согласно п.20 в питательной среде, так что указанная L-аминокислота с разветвленной цепью накапливается в культуральной жидкости; и
(ii) выделение указанной L-аминокислоты с разветвленной цепью из культуральной жидкости.
23. Способ получения L-аминокислоты с разветвленной цепью согласно п.22, отличающийся тем, что указанная L-аминокислота с разветвленной цепью выбрана из группы, состоящей из L-валина, L-лейцина и L-изолейцина.