Влияние иммуномодулина и соединений фитина на показатели перекисного окисления липидов при экспериментальном токсическом гепатите

Сибирский медицинский журнал, 2009, № 5

ЛЕКАРСТВЕННЫЕ РАСТЕНИЯ

© МИРЗААХМЕДОВА К.Т., АБДУСАМАТОВ А.А., НАБИЕВ А.Н. - 2009

ВЛИЯНИЕ ИММУНОМОДУЛИНА И СОЕДИНЕНИЙ ФИТИНА НА ПОКАЗАТЕЛИ ПЕРЕКИСНОГО ОКИСЛЕНИЯ ЛИПИДОВ ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ТОКСИЧЕСКОМ ГЕПАТИТЕ

К.Т. Мирзаахмедова1, А.А. Абдусаматов1, А.Н. Набиев2 ('Ташкентский педиатрический медицинский институт, Республика Узбекистан, ректор - д.м.н., проф.

А.В. Алимов, кафедра фармакологии, зав. - д.м.н., проф. А.А. Абдусаматов; 2Госудрственный центр экспертизы и стандартизации лекарственных средств Министерства здравоохранения Республики Узбекистан, директор -

д.ф.н., проф. Х.К. Жалилов)

Резюме. Изучено влияние иммуномодулина, соединений фитина-фитин-С и фитата кобальта и их комбинаций на процессы перекисного окисления липидов (ПОЛ) при экспериментальном токсическом гепатите у крыс. Установлено, что исследуемые препараты при отравлении четыреххлористым углеродом оказывали однонаправленное антиоксидантное действие. При комбинированном введении иммуномодулина с соединениями фитина антиоксидантная активность усиливалась.

Ключевые слова: иммуномодулин, фитин-С, фитат-кобальт, токсический гепатит, показатели ПОЛ, конъгиро-ванные диены и диенкетоны, малоновый диальдегид, каталаза, супероксиддисмутаза.

THE EFFECT OF IMMUNOMODULINE AND PHYTIN COMPOUNDS ON LIPID PEROXIDATION

INDICES IN TOXIC HEPATITIS

K.T. Mirzaahmedova1, A.A. Abdusamatov1, A.N. Nabiev2 ('Tashkent Pediatric Medical Institute of Health Ministry of the Republic Uzbekistan,

2Head of Pharmacology Department)

Summary. The influence of immunomoduline, phytin-C and cobalt phytat on lipid peroxidation processes in toxic hepatite were researched. It was determined that researching drugs when poisoning with tetrachloride-methane showed one directed antioxidant action. In combined introduction of immunomoduline with phytin compounds the antioxidant activity sharply increased.

Key words: immunomoduline, phytin-C, cobalt phytat, toxic hepatitis, POL indices, conjunctive diens and dien ketones, catalase, superoxiddismutase.

Изучение вопросов, связанных с лечением и профилактикой заболеваний печени, имеет огромную социальную значимость. По статистике ВОЗ, среди причин нетрудоспособности и смертности существенное место занимают различные заболевания печени - такие, как цирроз, хронический гепатит, печеночная недостаточность, гепатоцеллюлярный рак и др. [12].

Заболевания печени сопровождаются нарушениями функции и структуры печени, которые характеризуются усилением процессов перекисного окисления липидов, изменением метаболизма и снижением иммунного статуса организма.

Сегодня существует большой арсенал лекарственных средств для фармакологической коррекции различных заболеваний печени. Эти препараты применяются в зависимости от этиологических факторов, особенностей патогенеза и клинических проявлений. Но не всегда терапия препаратами оказывают должного лечебного эффекта и часто проявляются побочные действия разного характера, нередки и аллергические реакции. Данные проявления лекарственных препаратов приводят к ограничению их применения.

В связи с этим, изыскание новых соединений. обладающих иммуномодулирующим и антиоксидантным действием, а также изучение комбинаций этих препаратов подводит основу для внедрения их в клиническую медицину, что является одной из актуальных проблем современной медицины.

Целью данной работы явилось изучение влияния иммуномодулина и соединений фитина: фитина-С, фитата кобальта и их комбинации на показатели пере-кисного окисления липидов при токсическом гепатите у лабораторных животных.

Материалы и методы

Впервые нами проведены исследования антиокси-

дантного действия иммуномодулина, фитина-С, фитата кобальта и их комбинации при экспериментальном токсическом гепатите.

Фитин получают из рисовой лузги, является смесью кальциевых и магниевых солей. различных солей инозитфосфорных кислот, главным образом инозит-гексафосфорной кислоты, нерастворим в воде. Водный раствор фитина-С (фитин в смеси с аскорбиновой кислотой) разработан на кафедре технологии приготовления лекарственных средств (зав. каф. проф. К.С. Махмуджонова) Ташкентского фармацевтического института. Иммуномодулин - препарат, получаемый из тимуса животных, представлен в виде ампульного раствора. Фитат кобальта - координационное соединение фитина и кобальта, синтезирован сотрудниками Института.

Опыты поставлены на 42 белоголовых крысах-самцах с массой 120-150 г., содержавшихся в условиях и на рационе вивария.

Токсическое поражение печени вызывали подкожной инъекцией 50% масляного (подсолнечного) раствора тетрахлорметана (СС14 ) в объеме 0,4 мл/100 г массы крыс в течение 4-х дней [5].

Экспериментальные животные были разделены на семь групп по 6 голов в каждой:

1 - интактные, здоровым крысам давали воду и подкожно вводили подсолнечное масло в объеме 0,4 мл/100 г массы тела животного в течение 4 х дней;

2 - контрольные, предварительно получали растворитель воду и затем подкожно инъекцию СС14;

3 - опытные, подкожно вводили раствор иммуномодулина в дозе 2 мкг/кг + СС14;

4 - опытные, подкожно вводили фитина-С в дозе 100 мг/кг + СС14;

5 - группе сравнения внутрь вводили силибор в дозе 100 мг/кг + СС14;

6 - комбинированное применение, подкожно вводили иммуномодулин 2 мкг/кг + фитина-С 100 мг/кг + СС14;

7 - комбинированное применение, перорально вводили фитата кобальта в дозе 200 мг/кг + подкожно иммуномодулин 2 мкг/кг + СС14.

Исследуемые препараты вводили предварительно в течение 10 дней профилактически до интоксикаци и затем одновременно с гепатотоксином.

После последнего введения препаратов животных декапитировали, соблюдая условия эвтаназии, извлекали печень общепринятыми методами. В гомогенате ткани печени определяли содержание диеновых конъгатов [9], малонового диальдегида [4] и активность ферментов антиоксидантной системы - каталазы [3] и суперок-сиддисмутазы (СОД) [2].

Полученные результаты обрабатывали методом вариационной статистики с использованием программного пакета Statistica V. 6.0 (StatSoft, ША, 1999). Статистически значимыми считались различия при р<0,05 [6,8].

Результаты и обсуждение

При токсическом поражении печени СС14 у крыс наблюдаются нарушения общего состояния в виде взьеро-шенности шерсти, понижения аппетита, общая слабость и потеря массы тела. Наряду с общими нарушениями в гомогенате ткани печени обнаруживалось усиление интенсивности процессов ПОЛ и снижение активности ферментов антиоксидантной системы. В частности повышалось содержание конъюгированных диенов на 73,9%, диенкетонов - 93,4% и малонового диальдегида -122,3% (при р <0, 001) в сравнении с уровнем интактных крыс. Снижалась активность каталазы на 43,6% и супе-роксиддисмутазы на 60,6% по отношению к данным животных интактной группы (табл. 1).

Полученные результаты подверждают что, интоксикация СС14 происходит вследствие образования продуктов его распада, что приводит к усилению пере-кисного окисления липидов в результате депрессии антиоксидантной системы печени. Известно, что образовавшиеся в процессе развития перекисного окисления липидов диеновые конъюгаты и малоновый диальдегид в больших концентрациях обладают выраженной цитотоксичностью, тем самым подавляют процессы гликолиза и окислительного фосфорилирования, ингибируют синтез белка, подавляется активность цитозольных и мембраносвязанных ферментов, что способствует повреждению мембранных структур гепатоцитов [11].

Профилактическое введение исследуемых препаратов - иммуномодулина, фитина-С и фитата кобальта как в отдельности, так и в комбинации, предохраняло развитие патологических процессов перекисного окис-

ления липидов и накопление токсических продуктов в гепатоцитах. Наблюдалась активация ферментов анти-оксидантной системы, превосходящей уровень контрольных крыс и была близкой к уровню животных ин-тактной группы.

Профилактическое введение иммуномодулина до гепатотоксемии СС14 привело к значимому снижению содержания диеновых конъюгатов на 27% и 33,3%. В этом случае содержание малонового диальдегида было ниже уровня контрольной грппы на 33,2%. Повышалась активность каталазы на 18,2% и супероксиддисмутазы на 78,8% при сравнении с контролем. У животных, получавших фитин-С, содержащий в своем составе биоактивные лиганды как фитина, так и аскорбиновой кислоты, выявлено выраженное антиоксидантное действие, которое проявилось значимым (р<0,001) снижением содержания конъгированных диенов на 37,4% и конъюгированных диенкетонов - на 41,9%. Уровень малонового диальдегида снизился на 44,7% при сравнении с контролем. Активность энзимов антиоксидантной системы усиливалась по сравнению с контрольными, к примеру, уровень каталазы возрос на 40,9% и супероксиддисму-тазы более чем в 2 раза.

Классический гепатопротектор - силибор в условиях нашего эксперимента также оказывал антиоксидантное действие, уменьшил уровень продуктов перекисного окисления липидов и повысил активность ферментов каталазы и супероксиддисмутазы (табл. 1). Как видно из таблицы, ряд показателей антиоксидантной активности силибора уступали действию фитина-С и комбинированного введения иммуномодулина с фитатом кобальта. Видимо, антиоксидантная активность фитина-С связана с мембраностабилизирующим и антиоксидантным действием фитина и аскорбиновой кислоты.

При комбинированном введении иммуномодулина с фитином-С (шестая группа) отмечалось резкое усиление антиоксидантного эффекта. Отмечалось значи-

мое уменьшение содержания продуктов перекисного окисления липидов конъюгированных диенов на 42%, диенкетонов - 47,3% и малонового диальдегида - 49,3% по отношению к контролю. Повышалась активность каталазы на 50% и супероксиддисмутазы - на 130,8% по сравнению с результатами животных контрольной группы (р <0, 001) (табл. 1).

При одновременном введении иммуномодулина с фитатом кобальта также отмечались аналогичные изменения. Снижался уровень диеновых конъюгатов на 41%, 43,3% и малонового диальдегида - на 48,8% (при р <0,001 в сравнении с контролем). Усиливалась активность ферментов антиоксидантной системы соответственно на 45,4% и 130,8% в сравнениис контролем при р<0,001.

Полученные результаты исследований свидетельствуют о том, что одновременное применение имму-

Таблица 1

Влияние иммуномодулина и соединений фитина на процессы перекисного окисления липидов при токсическом гепатите

Условия опыта Показатель достоверности р Исследуемые показатели

Конъюгированные диены Д/1мг липида Конъюгированные диен-кетоны Д/1мг липида Малоновый диальдегид, нмоль/г. ткани Каталаза нмоль/ мин.мг. белка СОД условная единица/ мин.мг. белка 1г.ткани

І.Интактная (подсолнеч. масло) 0,551±0,022 0,258±0,018 39,9±1,4 0,39±0,011 1,32±0,14

2.Контроль (ССІ.) 0,958±0,027* 0,499±0,019* 88,7±1,5* 0,22±0,01* 0,52±0,1*

3. иммуномодулин +СС14 Р 0,699±0,011 <0,001 0,333±0,02 <0,001 <5 02 0 , 4^ 0,26±0,011 <0,05 0,93±0,09 <0,02

4. фитин-С+ СС14 Р 0,600±0,005 <0,001 0,290±0,005 <0,001 ,3 01±101 о о о <4< 0,31±0,02 <0,01 ,0 0 1 , 3

5. Силибор+ СС14 Р 0,629±0,033 <0,001 0,314±0,01 <0,001 ,5 01±101 00 о *-^о <5< 0,28±0,013 <0,01 0,90±0,072 <0,02

фО ну ну я Сд РІ и + 0,556±0,016 <0,001 0,263±0,014 <0,001 45,0±2,5 <0,001 0,33±0,014 <0,001 ,2 0 1,

7. иммуномодулин + фитат кобальт + ССІ. р 0,565±0,036 <0,001 0,283±0,028 <0,001 <4 04 11 3 0,32±0,014 <0,001 1,2±0,097 <0,001

Примечание :*-значимость раличий при р<0,05 в сравнении с интактными.

номодулина с соединениями фитина приводит к повышению антиоксидантной активности как одного из основных механизмов гепатопротекторного действия при тетрахлорметановой гепатотоксемии.

Видимо, выраженное антиоксидантное действие комбинации препаратов может быть обусловлено не только усилением активности ферментов каталазы и супероксиддисмутазы, но и свойством повышать детоксицирующую функцию печени, иммунную систему, оказывать антигипоксическое и антиоксидантное действие. Известно, что иммуномодулин стимулирует иммунную систему, повышает активность ферментов монооксигеназной системы печени и регенеративный потенциал гепатоцитов [1], тогда как, фитин устраняет гипоксию и стимулирует детоксицирующую функцию печени [6], а аскорбиновая кислота и биометалл кобальт обладают антиоксидантным эффектом. Кроме этого,

ЛИТЕРАТУРА

1. Гариб Ф.Ю., ГарибВ.Ф. Иммуномодулин. - Ташкент: Мед. лит. им. Абу Али ибн Сино, 2000. - 240 с.

2. Гуревич В.С., Конторщикова К.Н., Шатилина Л.В. Сравнительный анализ двух методов определения активности супероксиддисмутазы // Лабор. дело. - 1990.

- № 4. - С.44-47.

3. Королюк М.А., Иванова Л.И., Майорова Н.Г., Токарев В.Е. Метод определения активности каталазы // Лабор. дело. - 1988. - № 1 - С.16-18.

4. Кричевская А.А., Лукаш А.Н., Кесельман Н.А. Изменение перекисного окисления и содержания фосфолипидов в мозге при гипероксии и защитное действие мочевины // Украинский биохим. журнал. - 1976.

- № 2. - С.190-194.

5. Левшин Б.И. К экспериментальной фармакотерапии токсического гепатита // Патол. физиология и экспериментальная терапия. - 1972. - № 2. - С.66-72.

6. Майборода А.А., Калягин А.Н., Зобнин Ю.В., Щербатых А.В. Современные подходы к подготовке оригинальной статьи в журнал медико-биологической направленности в свете концепции «доказательной медицины» // Сибирский медицинский журнал (Иркутск).

- 2008. - Т. 76. № 1. - С.5-8.

аскорбиновая кислота как донор электронов может отдавать электроны свободным радикалам и снижать их реактивность [9].

Полученные результаты при исследовании отдельных препаратов дают основание к рекомендации их клинического применения при токсических гепатитах. Вместе с этим показано, что комбинированное применение при токсическом гепатите иммуномодулина с фитином-С и фитата кобальтом приводит к синергизму антиоксидантного эффекта.

Таким образом, иммуномодулин, фитин-С, фита-та кобальт, также как и силибор, оказывают выраженное однонаправленное антиоксидантное действие. Применение иммуномодулина в комбинации с соединениями фитина приводит к потенцированию антиоксидантного действия и по данному показателю они превосходят применяемый гепатопротектор силибор.

7. Рaхмaтуллaев Ф.Х., Хaкuмов З.З. Эффективность фитина в коррекции нарушений детоксицирующей функции печени крыс при синдроме длительного сдавливания в препубертатном периоде // Экспериментальная и клиническая фармакология. - 2001. - № 1. - С.71-73.

8. Стрелков Р.Б. Статистические таблицы для ускоренной количественной оценки фармакологического эффекта // Фармакология и токсикология. - 198б. - №

4. - С.100-104.

9. Тошев Э.С., Блохиш Н.П., Некрacов Е.А. Биологически активные вещества, улучшающие функциональное состояние печени // Вопросы питания. -2007. - № 4. - С.4-8.

10. Шилиш Н.К., Чершвиш Г.В., Мacловa Л.А. Количественное определение продуктов перекисно-го окисления липидов сыворотки крови практически здоровых лиц методом спектроскопии // Лабораторное дело. - 1978. - № 3. - С.140-142.

11. Шепелев А.П., Корниенко Н.В., Шеcmопaлов А.В, Антипов А.Ю. Роль процессов свободнорадикального окисления в патогенезе инфекционных болезней // Вопросы медицинской химии. - 2000. - № 2. - С.110-11б.

12. The world health report: 2004: changing history. -Geneva: World Health Organization, 2004. - 170 p.

Адрес для переписки: Республика Узбекистан, г.Ташкент, 100002, ул. Усманходжаева пр. К. Умарова .д. 1б; Государственный центр экспертизы и стандартизации лекарственных средств МЗ РУз. Набиев Абдували Набиевич Тел.(998712) 49 47 93, 244 48 2з, E-mail: farmako_toxik@mail.ru, факс: (99871) 244 48 23.

Лаборатория Фармакологии и токсикологии, старший научный сотрудник, к.м.н. Набиев Абдували Набиевич, Ташкент, 100140, ул. Дж.Абидовой, 223.Ташкентский педиатрический институт, Fax.8 (371) 2б2 33 14. E-mail:tpmi@ uzsci.net; кафедра фармакологии, зав. - д.м.н., проф., Абдусаматов Абдулазиз Абдусаматовия, ассистент -

Мирзаахмедова Камола Тохировна.

СЛУЧАИ ИЗ ПРАКТИКИ

© ТОЛКАЧЕВ К.С., ЩЕРБАТЫХ А.В. - 2009

ОЦЕНКА ЭФФЕКТИВНОСТИ НОВОГО СПОСОБА ТЕРАПИИ HELICOBACTER PYLORI-АССОЦИИРОВАННОГО

ГАСТРИТА КУЛЬТИ ЖЕЛУДКА

К.С. Толкачёв1, А.В. Щербатых1

Резюме. На примере нового способа лечения представлены результаты терапии НР-ассоциированного ГКЖ. При использовании новой методики определена выраженная тенденция к значимой разнице в частоте колонизации НР бактериями СОКЖ, выраженному эффекту в купировании клинических и патоморфологических изменений СОКЖ, происходящих под влиянием НР инфекта, в отличие от показателей, полученных при проведении