НАЦЕЛЕННЫЙ НА PD-1 СЛИТЫЕ БЕЛКИ ИЛ-15/ИЛ-15РАЛЬФА-FC И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ В КОМБИНИРОВАННОЙ ТЕРАПИИ

1. Нацеленный гетеродимерный слитый белок ИЛ-15/Рα – Fc, содержащий:
а) первый мономер, содержащий от N-конца до C-конца:
i) белок суши-домена ИЛ-15 Рα;
ii) первый доменный линкер;
iii) белок ИЛ-15; и
iv) первый вариантный домен Fc; и
b) второй мономер, содержащий тяжелую цепь, содержащую VH – CH1 – шарнир – CH2 – CH3, при этом указанный CH2 – CH3 представляет собой второй вариантный домен Fc;
c) третий мономер, содержащий легкую цепь, содержащую VL – CL; при этом указанные домены VH и VL образуют антигенсвязывающий домен, который связывается с PD-1 человека и не конкурирует за указанный PD-1 человека с ниволумабом и (или) пембролизумабом.
2. Нацеленный гетеродимерный слитый белок ИЛ-15/Рα – Fc по п. 1, отличающийся тем, что указанный домен VH представляет собой вариант с SEQ ID NO: 5, содержащий аминокислотную замену F32L, и тем, что указанный домен VL представляет собой вариант с SEQ ID NO: 6, содержащий N27dH.
3. Нацеленный гетеродимерный слитый белок ИЛ-15/Рα – Fc по п. 2, отличающийся тем, что указанный домен VL дополнительно содержит аминокислотные замены K30Y/S93T.
4. Нацеленный гетеродимерный слитый белок ИЛ-15/Рα – Fc по любому предшествующему пункту, отличающийся тем, что указанный VH представляет собой H1 и тем, что указанный VL представляет собой L1.1.
5. Нацеленный гетеродимерный слитый белок ИЛ-15/Рα – Fc по любому предшествующему пункту, отличающийся тем, что указанный белок ИЛ-15 представляет собой вариантный белок ИЛ-15, содержащий аминокислотную замену (аминокислотные замены), выбранную (выбранные) из группы: D30N/E64Q/N65D; D30N/N65D; N1D; N4D; D8N; D30N; D61N; E64Q; N65D; Q108E; N1D/N4D/D8N; N1D/N4D/N65D; N1D/D30N; N1D/D61N; N1D/D61N/E64Q/Q108E; N1D/E64Q; N1D/N65D; N1D/Q108E; N4D; N4D/D30N; N4D/D61N; N4D/D61N/N65D; N4D/D61N/E64Q/Q108E; N4D/E64Q; N4D/N65D; D8N/D61N; D8N/E64Q; D30N/E64Q; D30N/Q180E; D61N/E64Q/N65D; E64Q; E64Q/N65D; E64Q/Q108E; и N65D/Q108E.
6. Нацеленный гетеродимерный слитый белок ИЛ-15/Рα – Fc по любому предшествующему пункту, отличающийся тем, что указанный вариантный белок ИЛ-15 содержит аминокислотную замену (аминокислотные замены), выбранную (выбранные) из группы: N4D/N65D; D30N; D30N/E64Q; D30N/N65D; и D30N/E64Q/N65D.
7. Нацеленный гетеродимерный слитый белок ИЛ-15/Рα – Fc по любому предшествующему пункту, отличающийся тем, что указанный первый вариантный домен Fc и указанный второй вариантный домен Fc содержат аминокислотные замены L368D/K370S : LS364K/E357Q в соответствии с нумерацией ЕС.
8. Нацеленный гетеродимерный слитый белок ИЛ-15/Рα – Fc по любому предшествующему пункту, отличающийся тем, что каждый из указанного первого вариантного домена Fc и указанного второго вариантного домена Fc содержит аминокислотные замены M428L/N343S в соответствии с нумерацией ЕС.
9. Нацеленный гетеродимерный слитый белок ИЛ-15/Рα – Fc, содержащий:
а) первый мономер, содержащий от N-конца до C-конца:
i) белок суши-домена ИЛ-15 Рα;
ii) первый доменный линкер;
iii) вариантный белок ИЛ-15;
iv) второй доменный линкер; и
v) первый вариантный домен Fc, содержащий CH2 – CH3; и
b) второй мономер, содержащий от N-конца до C-конца:
i) домен оцFv;
ii) третий доменный линкер;
iii) второй вариантный домен Fc, содержащий CH2 – CH3;
при этом указанный домен оцFv содержит первый вариабельный домен тяжелой цепи, линкер оцFv и первый вариабельный домен легкой цепи, при этом указанный домен оцFv связывается с PD-1 человека и не конкурирует за указанный PD-1 человека с ниволумабом и (или) пембролизумабом.
10. Нацеленный гетеродимерный слитый белок ИЛ-15/Рα – Fc, содержащий:
а) первый мономер, содержащий от N-конца до C-конца:
i) белок суши-домена ИЛ-15 Рα;
ii) первый доменный линкер;
iii) первый вариантный домен Fc, содержащий CH2 – CH3;
b) второй мономер, содержащий от N-конца до C-конца:
i) домен оцFv;
ii) третий доменный линкер;
iii) второй вариантный домен Fc, содержащий CH2 – CH3;
при этом указанный домен оцFv содержит первый вариабельный домен тяжелой цепи, линкер оцFv и первый вариабельный домен легкой цепи, и указанный домен оцFv связывается с PD-1 человека и не конкурирует за указанный PD-1 человека с ниволумабом и (или) пембролизумабом; и
c) третий мономер, содержащий вариантный белок домена ИЛ-15.
11. Нацеленный гетеродимерный слитый белок ИЛ-15/Рα – Fc, содержащий:
а) первый мономер, содержащий тяжелую цепь, содержащую VH – CH1 – шарнир – CH2 – CH3, при этом указанный CH2 – CH3 представляет собой первый вариантный домен Fc;
b) второй мономер, содержащий от N-конца до C-конца:
i) белок суши-домена ИЛ-15 Рα;
ii) второй доменный линкер;
iii) второй вариантный домен Fc, содержащий CH2 – CH3;
b) третий мономер, содержащий вариантный белок домена ИЛ-15;
c) четвертый мономер, содержащий легкую цепь, содержащую VL – CL; при этом указанные домены VH и VL образуют антигенсвязывающий домен, который связывается с PD-1 человека и не конкурирует за указанный PD-1 человека с ниволумабом и (или) пембролизумабом.
12. Нацеленный гетеродимерный слитый белок ИЛ-15/Рα – Fc, содержащий:
а) первый мономер, содержащий тяжелую цепь, содержащую VH – CH1 – шарнир – CH2 – CH3, при этом указанный CH2 – CH3 представляет собой первый вариантный домен Fc;
b) второй мономер, содержащий VH – CH1 – шарнир – CH2 – CH3 – доменный линкер – белок суши-домена ИЛ-15Рα – доменный линкер – вариантный белок домена ИЛ-15, при этом указанный CH2 – CH3 представляет собой второй вариантный домен Fc;
c) третий мономер, содержащий легкую цепь, содержащую VL – CL;
при этом указанные домены VH и VL образуют антигенсвязывающий домен, который связывается с PD-1 человека и не конкурирует за указанный PD-1 человека с ниволумабом и (или) пембролизумабом.
13. Нацеленный гетеродимерный слитый белок ИЛ-15/Рα – Fc, содержащий:
а) первый мономер, содержащий тяжелую цепь, содержащую VH – CH1 – шарнир – CH2 – CH3, при этом указанный CH2 – CH3 представляет собой первый вариантный домен Fc;
b) второй мономер, содержащий VH – CH1 – шарнир – CH2 – CH3 – доменный линкер – белок суши-домена ИЛ-15Рα, при этом указанный CH2 – CH3 представляет собой второй вариантный домен Fc;
c) третий мономер, содержащий вариантный белок домена ИЛ-15;
d) четвертый мономер, содержащий легкую цепь, содержащую VL – CL;
при этом указанные домены VH и VL связываются с PD-1 человека и не конкурирует за указанный PD-1 человека с ниволумабом и (или) пембролизумабом.
14. Нацеленный гетеродимерный слитый белок ИЛ-15/Рα – Fc, содержащий:
а) первый мономер, содержащий от N-конца до C-конца: VH – CH1 – доменный линкер – вариантный белок домена ИЛ-15 – доменный линкер – CH2 – CH3, при этом указанный CH2 – CH3 представляет собой первый вариантный домен Fc;
b) второй мономер, содержащий от N-конца до C-конца: VH – CH1 – доменный линкер – белок суши-домена ИЛ-15 Рα – доменный линкер – CH2 – CH3, при этом указанный CH2 – CH3 представляет собой второй вариантный домен Fc;
c) третий мономер, содержащий легкую цепь, содержащую VL – CL;
при этом указанные домены VH и VL образуют антигенсвязывающий домен, который связывается с PD-1 человека и не конкурирует за указанный PD-1 человека с ниволумабом и (или) пембролизумабом.
15. Нацеленный гетеродимерный слитый белок ИЛ-15/Рα – Fc, содержащий:
а) первый мономер, содержащий от N-конца до C-конца: VH – CH1 – доменный линкер – вариантный белок суши-домена ИЛ-15 Рα – доменный линкер – вариантный белок домена ИЛ-15 – доменный линкер – CH2 – CH3, при этом указанный CH2 – CH3 представляет собой первый вариантный домен Fc;
b) второй мономер, содержащий тяжелую цепь, содержащую VH – CH1 – шарнир – CH2 – CH3, при этом указанный CH2 – CH3 представляет собой второй вариантный домен Fc;
c) третий мономер, содержащий легкую цепь, содержащую VL – CL;
при этом указанные домены VH и VL образуют антигенсвязывающий домен, который связывается с PD-1 человека и не конкурирует за указанный PD-1 человека с ниволумабом и (или) пембролизумабом.
16. Композиция нуклеиновых кислот, содержащая соответственно:
а) первую нуклеиновую кислоту, кодирующую первый мономер, заявленный по любому одному из пп. 1-8 и 9-15;
b) вторую нуклеиновую кислоту, кодирующую второй мономер, заявленный по любому одному из пп. 1-8 и 9-15; и
c) третью нуклеиновую кислоту, кодирующую третий мономер, заявленный по любому одному из пп. 1-8 и 9-15.
17. Композиция экспрессионных векторов, содержащая:
a) экспрессионный вектор, содержащий первую нуклеиновую кислоту, заявленную по п. 16;
b) экспрессионный вектор, содержащий вторую нуклеиновую кислоту, заявленную по п. 16; и
c) экспрессионный вектор, содержащий третью нуклеиновую кислоту, заявленную по п. 16.
18. Клетка-хозяин, содержащая композицию экспрессионных векторов, заявленную по п. 17.
19. Способ получения нацеленного гетеродимерного слитого белка ИЛ-15/Рα – Fc, заявленного по любому одному из пп. 1-8 и 9-15, включающий в себя: культивирование клетки-хозяина, заявленной по п. 18, в условиях, при которых экспрессируется указанный гетеродимерный слитый белок ИЛ-15/Рα – Fc; и выделение указанного белка.
20. Способ лечения онкологического заболевания, включающий в себя введение пациенту, нуждающемуся в этом, фармацевтической композиции, содержащей нацеленный гетеродимерный слитый белок ИЛ-15/Рα – Fc, заявленный по любому одному из пп. 1-8 и 9-15.
21. Способ по п. 20, дополнительно включающий в себя введение терапевтически эффективного количества антитела против PD-1.
22. Способ по п. 21, отличающийся тем, что указанное антитело против PD-1 представляет собой ниволумаб или пембролизумаб.