Определение содержания арбутина в плодах клюквы мелкоплодной методом ВЭЖХ

We also noted that the oleic acid content in herb collected before blossom was somewhat less than in roots collected within the same period (9.52 % and 10.85 % respectively). An inverse trend was observed for this acid in the blossoming herb and roots collected in the blossoming period (10.70 % and 9.98 % respectively).

The lauric acid was found only in birthwort Dutchman's pipe roots, its content being higher in roots collected before blossom (8.00 %).

Conclusion

Thus, the results obtained from the fatty acids composition study of birthwort Dutchman's pipe herb and roots collected at the different vegetation phases may be used and considered in the preparation of new substances and new drugs on the basis of these raw materials.

REFERENCES:

1. Aristolochia clematitis Birthwort a perennial member of the Aristolochia genus in the family Aris-tolochiaceae. https://practicalplants.org/wiki/Aris-tolochia_clematitis

2. Aristolochia Species and Aristolochic Acids. https://monographs.iarc.fr/wp-content/up-loads/2018/06/mono82-6B.pdf

3. Constituents of Aristolochia clematitis L. / D. Kost'alova, V Hrochova, N. Pronayova and J. Lesko. Chem. Papers. 1991. Vol. 45 (5). P. 713-716.

4. Immune-Enhancement and Anti-Inflammatory Activities of Fatty Acids Extracted from Halocyn-thia aurantium Tunic in RAW264.7 Cells / Chaiwat Monmai, Seok Hyeon Go, Il-Shik Shin et al. Mar Drugs. 2018. Vol. 16(9). https ://www. ncbi.nlm. nih. gov/pmc/artic-les/PMC6163248/

5. Ping-Chung Kuo, Yue-Chiun Li and Tian-Shung Wu. Chemical Constituents and Pharmacology of the Aristolochia (ЩЙ^ madou ling) species. J Tradit Complement Med. 2012. Vol. 2(4). P. 249-266.

6. Samsonova O.E., Belous V.N. and Dudar' Yu. A. Pharmacological Characterization Of Aristolochia Clematitis L. Growing In The Stavropol Region. Pharmaceutical Chemistry Journal. 2006. Vol. 40, № 4. P. 199-201.

7. Surender Singh & D K Majumdar. Evaluation of antiinflammatory activity of fatty acids of Ocimum sanctum fixed oil. Indian Journal of Experimental Biology. 1997. Vol. 35. P. 380-383.

8. Terpenoids of Aristolochia and their biological activities / Tian-Shung Wu, Amooru G. Damu, Chung-Ren Su and Ping-Chung Kuo. Nat. Prod. Rep. 2004. Vol. 21. P. 594-624.

9. Вивчення жирнокислотного складу сировини Tribulus terrestris L. / Н.С. Бурда, Б.М. Кливняк, Я.В. Рожковський, 1.О. Журавель. Фтотерапгя. Часопис. 2015. № 4. С. 74-76.

Fatty acids composition study of Tribulus terrestris L raw materials. N.Ye. Burda, B.M. Klyvniak, Ya.V. Rozhkovskiy, I.O. Zhuravel. Fitoterapiia. Chasopys. 2015. # 4. Pp. 74-76 (in Ukrainian).

10. Вивчення жирнокислотного складу сировини моркви поавно! сорпв «Яскрава» та «Нантська харшвська» / Д.-М. В. Пазюк, 1.О. Журавель, В.С. Кисличенко та ш. Фтотерапгя. Часопис. 2016. № 4. С. 21-23.

Fatty acids composition study of sowing carrots, strains Yaskrava and Nantska Kharkivska / D.-M.V.Paziuk, I.O.Zhuravel, V.S., Kyslychenko, et al. Fitoterapiia. Chasopys. 2016. # 4. Pp.21-23 (in Ukrainian).

DETERMINATION OF THE CONTENT OF ARBUTIN IN CRANBERRY FRUITS BY HPLC

Kuznietsova V.,

Candidate of Pharmaceutical Sciences, Associate Professor Dean of Pharmaceutical Department National University of Pharmacy Kharkiv, Ukraine Kyslychenko V. Doctor of Pharmacy, Professor Head of the Department of Chemistry of Natural Compounds

National University of Pharmacy Kharkiv, Ukraine

ОПРЕДЕЛЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ АРБУТИНА В ПЛОДАХ КЛЮКВЫ МЕЛКОПЛОДНОЙ

МЕТОДОМ ВЭЖХ

Кузнецова В.Ю.,

кандидат фармацевтических наук, доцент декан фармацевтического факультета Национальный фармацевтический университет

г. Харьков, Украина Кисличенко В.С. доктор фармацевтических наук, профессор заведующая кафедрой химии природных соединений Национальный фармацевтический университет

г. Харьков, Украина

Abstract

The results of determining the content of arbutin in Cranberry fruits by the method of high performance liquid chromatography (HPLC) are presented in the article. As a result of the research, conditions for identification and determination of content of arbutin in Cranberry fruits were selected. Certain validation characteristics of an ar-butin quantitative determination by HPLC method were determined.

Аннотация

В статье представлены результаты определения содержания арбутина в плодах клюквы мелкоплодной методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). В результате проведенных исследований подобраны условия для идентификации и определения содержания арбутина в плодах клюквы мелкоплодной. Определены некоторые валидационные характеристики методики определения количественного содержания арбутина методом ВЭЖХ.

Keywords: Cranberry, arbutin, HPLC

Ключевые слова: клюква мелкоплодная, арбутин, ВЭЖХ

Введение. Арбутин (4-гидроксифенол P-D-глюкопиранозид) представляет собой производное гидрохинона и относится к группе простых фенолов. Арбутин встречается в растениях семейства Lamiaceae, Ericaceae, Saxifragaceae и Rosaceae [5].

Арбутин представляет собой бесцветные кристаллы с температурой плавления 199-200°С, хорошо растворимые в воде и этиловом спирте, не растворимы в хлороформе и этиловом эфире. Арбутин оптически активен и подвергается ферментативному и кислотному гидролизу, при сухой перегонке расщепляется на гидрохинон и глюкозу. Всасывание арбутина происходит в тонком кишечнике. До 75% арбутина выводится из организма с мочой, а арбутин, трансформированный в гидрохинон, обеспечивает антибактериальное действие в моче-выводящих путях. Поэтому растительные препараты, содержащие арбутин, широко применяются при воспалительных заболеваниях мочевыводящей системы. Кроме того, арбутин обладает свойством подавлять синтез меланина и применяется при лечении заболеваний, которые сопровождаются изменении цвета кожи, таких как меланодермия, гиперпигментация, веснушки [3,5].

Кроме того, проведенными исследованиями [1] были установлены антиоксидантные и проокси-дантные свойства арбутина и его агликона гидрохинона.

Плоды клюквы содержат комплекс биологически активных веществ: органические кислоты, тер-пеноиды, иридоидные гликозиды, флавоноиды, стильбены, дубильные вещества, антоцианы, лей-коантоцианидины [2,4].

Целью работы было определение содержания арбутина в плодах клюквы мелкоплодной методом ВЭЖХ. Известно, что содержание арбутина в лекарственном растительном сырье определяют различными методами: спектрофотометрическим, тит-риметрическим, капиллярного электрофореза, ден-ситометрическим [5].

Материалы и методы. Свежие плоды клюквы мелкоплодной перед экстрагированием лиофилизи-ровали жидким азотом. Затем 1,0 г (точная навеска) плодов экстрагировали четыре раза по 10 мл метанола на ультразвуковой бане по 20 минут, затем доводили до объема 50,0 мл тем же растворителем. Определение арбутина проводили методом ВЭЖХ с использованием оборудования Shimadzu Nexera X2 LC-30AD (Shimadzu, Япония), состоящей из четвертичного насоса, оперативного дегазатора, регулятора температуры в колонке, автосамплера SIL-30AC (Shimadzu, Япония); термостат CTO-20AC (Shimadzu, Япония), а также диодно-матричный детектор SPD-M20A (DAD).

Хроматографическое разделение проводили с использованием колонки ACE C18 (250 мм х 4,6 мм, 5,0 мкм; Пенсильвания, США). Элюирование проводили при скорости потока 1 мл/мин. Подвижная фаза: элюент A (метанол) и элюент B (ацетони-трил). Температура колонки была постоянной 30°C. Объем впрыска раствора образца составлял 10 мкл. Детекцию проводили при длине волны 270 нм.

Результаты и обсуждения. В результате проведенных исследований были подобраны условия, которые дают возможность идентифицировать и определить количественное содержание арбутина в плодах клюквы мелкоплодной.

Специфичность метода основана на возможности избирательного разделения хроматографиче-ской зоны основного вещества от других возможных зон на хроматограмме и устойчивости положения хроматографической зоны основного вещества на хроматограмме испытуемого раствора в сравнении с хроматограммой внешнего стандарта (стандартного образца арбутина). Для проверки специфичности методики были получены хромато-граммы подвижной фазы и модельных растворов стандартного образца арбутина. На рисунке 1 представлена хроматограмма стандартного образца арбутина, а на рисунке 2 хроматограмма метаноль-ного извлечения плодов клюквы мелкоплодной.

26 5.0 7.5 10.0 125

Рис. 1. Хроматограмма стандартного образца арбутина

Рис. 2. Хроматограмма метального извлечения плодов клюквы мелкоплодной Данные линейности методики определения арбутина в плодах клюквы мелкоплодной представлены в

таблице 1.

Таблица 1

Уравнение градуировочного графика f(x)=2048.45*x-1401.60

Коэффициент корреляции г2 0,9999486

Предел обнаружения (дт/тЬ) 1,25-134

RSD, % 1,78

LODb (^/тЬ) 90

LOQc (^/тЬ) 270

Содержание арбутина в плодах клюквы мелкоплодной составляет 0,66±0,032 мг/г. Результаты представлены в таблице 2.

Таблица 2

Метрологические характеристики методики определения арбутина в плодах клюквы мелкоплодной

m n X, Хср S2 Scp P t(P, n) Доверительный интервал e , %

0,630

0,690

5 4 0,660 0,660 0,00065 0,01140 0,95 2,78 0,660 ± 0,032 4,80

0,686

0,640

Выводы.

1. Методом ВЭЖХ определено содержание арбутина в плодах клюквы мелкоплодной.

2. Определены некоторые валидационные характеристики методики определения количественного содержания арбутина в плодах клюквы.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ:

1. Антиоксидантные и прооксидантные эффекты арбутина и гидрохинона в эксперименте in vitro / Н.Л. Волобой, Я.Ф. Зверев, В.М. Брюханова и др. // Бюллетень сибирской медицины. - 2011. -№ 5. - С. 41-44.

2. Лютикова М.Н. Химический состав и практическое применения ягод брусники и клюквы / М.Н. Лютикова, Э.Х. Ботиров // Химия растительного сырья. - 2015. - № 2. - С. 5-27.

3. Методика получения арбутина из надземной части серпухи пятилистной (Serratula quinquefolia bied. Ex will) интродуцированной на Северном Кавказе / Т.Г. Могиленко, О.Н. Денисенко, И.В. Галяутдинов // Журнал научных статей «Здоровье и образование в XXI веке». - 2016. - Т. 18, № 8. - С. 116-119.

4. Процианидины плодов клюквы и смородины черной / В. Ю. Кузнецова, В. С. Кисличенко, Л. Н. Горячая, Н. А. Сущук // Вестник ЮКГФА. 2017. №4 (81), Т. VI. С. 5-8.

5. Quantitative Determination of Arbutin and Hydroquinone in Different Plant Materials by HPLC / Izabela RYCHLINSK A, Slawomira NOWAK Rychlinska I. and Nowak S. // Not Bot Horti Agrobo, 2012, 40(2):109-113.

STUDY OF THE QUALITATIVE COMPOSITION AND QUANTITATIVE CONTENT OF AMINO ACIDS IN SPINACH PLANT RAW MATERIAL OF KRASEN POLISSIA AND FANTASY

CULTIVARS

Petrovska U.,

PhD student of the Chemistry of Natural Compounds Department, National University of Pharmacy

Zhuravel I.,

Professor, Doctor of Pharmaceutical Sciences, Professor of the Chemistry of Natural Compounds Department, National University of Pharmacy

Gurieva I.

Associate Professor, PhD (PharmSc), Associate Professor of the Chemistry of Natural Compounds Department, National University of Pharmacy

Abstract

Spinach (Spinacia oleracea L.) is a herbaceous plant spread worldwide. Its leaves are consumed in food in both raw and cooked forms. Such popularity is due to its nutritional qualities and diverse chemical composition. Thus, according to the literature, spinach leaves contains phenolic compounds, vitamins, proteins, amino acids, fiber, chlorophylls, carotenoids, mineral compounds, etc. In addition, spinach leaves are used in folk medicine as an anti-inflammatory, antioxidant and general tonic agent.

Using the method of ion-exchange liquid column chromatography, 9 essential and 9 nonessential amino acids were identified in spinach leaves and seeds of Krasen Polissia and Fantasy cultivars. Glutamic acid prevailed by the quantitative content in the studied plant raw material of both cultivars. Its quantitative content in spinach leaves of Krasen Polissia cultivar comprised 2.903 mg/g, while in spinach leaves of Fantasy cultivar - 2.145 mg/g. Spinach seeds of Krasen Polissia cultivar contained 3.096 mg/g of glutamic acid, and spinach seeds of Fantasy cultivar - 2.154 mg/g.

The results obtained will be used for planning further phytochemical research of spinach plant raw material and creation of new herbal remedies on its basis.

Keywords: Spinacia oleracea, amino acids, ion-exchange chromatography.

Introduction.

Spinach (Spinacia oleracea L.) is a herbaceous plant of Spinacia genus, the Amaranth family (Amaranthaceae). Spinach originates from south-eastern Asia, from Ancient Persia, where spinach was first cultivated about 2000 ago. Nowadays it is one of the most widespread and consumed leafy green vegetable all over the world [12, p. 154; 19, p. 451.]. It is grown in America, Japan, countries of Western Europe and is widely cultivated in Ukraine.

The rosette of spinach leaves comprises of 15-20 leaves; it is dense, semi-submerged, 35-40 cm in diameter and 20-22 cm in height. The leaves are up to 20 cm long and 11-14 cm wide. They are petiolate, elongated-elliptic, the leaf margin is entire, vesicular. The shape

of the leaf blade is orbicular, elongated-elliptic, ovate or spear-shaped depending on the cultivar. Spinach is a dioecious plant [16, p. 77; 17, p. 1].

Spinach leaves are consumed fresh, boiled, baked, frozen, and are used in folk medicine as an anti-inflammatory, antioxidant and general tonic agent. Spinach leaves are used in anemia, for the treatment of digestive organs, upper respiratory tract disorders, after severe illnesses, etc. [2, p. 60; 9, p. 192]. Spinach are known to be used in cardiovascular diseases, Alzheimer's disease and diabetes mellitus [13, p. 37; 14, p. 80; 15, p. 106].

Such spectrum of application is explained by the diverse chemical composition of the plant. Its leaves contain phenolic compounds, proteins, organic acids,