ПОЛИПЕПТИДЫ, ИНГИБИРУЮЩИЕ CD40L

1. Полипептид, содержащий, по меньшей мере, один одиночный вариабельный домен иммуноглобулина (ISVD), специфически связывающийся с CD40L, и необязательно включающий ISVD, связывающий сывороточный альбумин, и/или С-концевое удлинение, где связывание с CD40L модулирует активность CD40L.
2. Полипептид по п. 1, где указанный ISVD, специфически связывающийся с CD40L, по существу состоит из 4 каркасных областей (FR1-FR4, соответственно) и 3 областей, определяющих комплементарность (CDR1-CDR3, соответственно), в которых
(i) CDR1 выбирают из группы, состоящей из SEQ ID NO: 33, 61, 40 и 68; и
из аминокислотных последовательностей, которые имеют 1, 2 или 3 аминокислотных различия с SEQ ID NO: 33, 61, 40 или 68;
(ii) CDR2 выбирают из группы, состоящей из SEQ ID NO: 35, 63, 42 и 70; и
аминокислотных последовательностей, которые имеют 1, 2 или 3 аминокислотных различия с SEQ ID NO: 35, 63, 42 или 70; и
(iii) CDR3 выбирают из группы, состоящей из SEQ ID NO: 37, 65, 44 и 72; и
аминокислотных последовательностей, которые имеют 1, 2, 3 или 4 аминокислотных различия с SEQ ID NO: 37, 65, 44 или 72.
3. Полипептид по п. 2, в котором CDR1 выбирают из группы, состоящей из
(a) SEQ ID NO: 61 и
(b) аминокислотных последовательностей, которые имеют 1, 2 или 3 аминокислотных различия с SEQ ID NO: 61, где
- в положении 1 G была изменена на E или R;
- в положении 2 R была изменена на H или G;
- в положении 3 T была изменена на I, A, S или P;
- в положении 4 P была изменена на S;
- в положении 5 L была изменена на P;
- в положении 6 N была изменена на S, D или I;
- в положении 7 Y была изменена на H;
- в положении 8 H была изменена на N;
- в положении 9 M была изменена на K, T или V; и/или
- в положении 10 А была изменена на G, S или T;
и/или
CDR2 выбирают из группы, состоящей из
(a) SEQ ID NO: 63; и
(b) аминокислотных последовательностей, которые имеют 1, 2 или 3 аминокислотных различия с SEQ ID NO: 63, где
- в положении 1 А была изменена на G;
- в положении 2 I была изменена на V;
- в положении 4 S была изменена на N, R или G;
- в положении 6 L была изменена на I;
- в положении 7 G была изменена на S или D;
- в положении 8 S была изменена на G, I или F; и/или
- в положении 9 T была изменена на P или S;
и/или
CDR3 выбирают из группы, состоящей из
(a) SEQ ID NO: 65; и
(b) аминокислотных последовательностей, которые имеют 1, 2, 3 или 4 аминокислотных различия с SEQ ID NO: 65, где
- в положении 1 R была изменена на Q или L;
- в положении 2 E была изменена на D или K;
- в положении 3 Т была изменена на S, M, A или K;
- в положении 4 T была изменена на I, S, A или R;
- в положении 5 H была изменена на Y или N;
- в положении 6 Y была изменена на I, H или N;
- в положении 7 S была изменена на T, G, N или I;
- в положении 8 T была изменена на I или A;
- в положении 9 S была изменена на N или R;
- в положении 10 D была изменена на A;
- в положении 11 R была изменена на S или G;
- в положении 13 N была изменена на D, Y или S;
- в положении 14 E была изменена на V, A, D или N;
- в положении 15 M была изменена на I, V, K или T;
- в положении 16 R была изменена на K, S, W, M, G или T;
- в положении 17 H была изменена на N, L, Q, R или D;
- в положении 19 D была изменена на N; и/или
- в положении 20 Y была изменена на H, F или N.
4. Полипептид по любому из пп. 2-3, в котором
- CDR1 представляет собой SEQ ID NO: 33, CDR2 представляет собой SEQ ID NO: 35, и CDR3 представляет собой SEQ ID NO: 37; или
- CDR1 представляет собой SEQ ID NO: 61, CDR2 представляет собой SEQ ID NO: 63, и CDR3 представляет собой SEQ ID NO: 65.
5. Полипептид по любому из пп. 2-4, в котором указанный ISVD представляет собой SEQ ID NO: 8 или SEQ ID NO: 6.
6. Полипептид по п. 2, в котором CDR1 выбирают из группы, состоящей из
(a) SEQ ID NO: 40; и
(b) аминокислотных последовательностей, которые имеют 1, 2 или 3 аминокислотных различия с SEQ ID NO: 40, где
- в положении 3 T была изменена на S, N, A или I;
- в положении 4 L была изменена на Q, S, M или G;
- в положении 8 А была изменена на N или V;
- в положении 9 I была изменена на L или V; и/или
- в положении 10 G была изменена на A;
и/или
в котором CDR2 выбирают из группы, состоящей из
(a) SEQ ID NO: 42; и
(b) аминокислотных последовательностей, которые имеют 1, 2 или 3 аминокислотных различия с SEQ ID NO: 42, где
- в положении 2 I была изменена на V;
- в положении 3 S была изменена на G;
- в положении 5 E была изменена на G;
- в положении 6 G была изменена на S;
- в положении 7 S была изменена на G, N, T или I;
- в положении 8 T была изменена на A, P, I или S; и/или
- в положении 9 S была изменена на I, R или G; и/или
в котором CDR3 выбирают из группы, состоящей из
(а) SEQ ID NO: 44; и
(b) аминокислотных последовательностей, которые имеют 1, 2, 3 или 4 аминокислотных различия с SEQ ID NO: 44, где
- в положении 4 R была изменена на S;
- в положении 7 L была изменена на F, M или W;
- в положении 8 G была изменена на D, A или S;
- в положении 9 S была изменена на G, N или R;
- в положении 10 S была изменена на G, N, T или R;
- в положении 12 D была изменена на G, N, E или V;
- в положении 13 T была изменена на N или A;
- в положении 14 Q была изменена на H, K, L или R;
- в положении 15 S была изменена на P или T;
- в положении 16 H была изменена на N или Y;
- в положении 17 Q была изменена на L, R или H;
- в положении 18 Y была изменена на F;
- в положении 19 D была изменена на G; и/или
- в положении 20 Y была изменена на F или N.
7. Полипептид по любому из пп. 2 и 6, в котором CDR1 представляет собой SEQ ID NO: 40, CDR2 представляет собой SEQ ID NO: 42, и CDR3 представляет собой SEQ ID NO: 44, предпочтительно в котором указанный ISVD представляет собой SEQ ID NO: 7 или SEQ ID NO: 3.
8. Полипептид по любому из пп. 1-7, отличающийся тем, что указанный полипептид связывается с CD40L:
-07
-13
-08
-12
- 07
-08
-09
-10
-11
-11
-11
-11
-11
-11
-12
-12
-12
-12
с KD от 1E M до 1E М, как например, от 1E М до 1E М, предпочтительно по большей мере 1Е M, предпочтительно ниже, чем 1E M или 1E M или даже ниже, чем 1E M, как например, 5E M, 4E M, 3E M, 2E M, 1.7E M, 1E или даже 5E M, 4E M, 3E M, 1E M, например, как определено с помощью KinExA;
50
-07
-12
-08
-11
- с IC от 1E M до 1E M, как например, от 1E M до 1E M, например, как определено с помощью анализа В-клеточной пролиферации или, как определено с помощью анализа В-клеточной сигнализации; и/или
50
-07
-08
-09
-10
-10
-10
-10
-10
- с IC по большей мере 1E M, предпочтительно 1E M, 1E M или 5E M, 4E M, 3E M, 2E M, как например, 1E M; и/или
-04
-1
- со скоростью диссоциации менее чем 5E (с), например, как определено с помощью SPR.
9. Полипептид по любому из пп. 1-8, отличающийся тем, что указанный CD40L предпочтительно представляет собой CD40L человека, предпочтительно SEQ ID NO: 1.
10. Полипептид по любому из пп. 1-9, отличающийся тем, что указанная модуляция активности представляет собой:
- антагонизирование активности CD40L;
- блокирование связывание CD40L с CD40, по меньшей мере, на 20%, как, например, по меньшей мере, на 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% или даже более, например, как определено конкуренцией лиганда, анализом В-клеточной активации, AlphaScreen или конкурентного связывания, таким как конкурентный ELISA или конкурентный FACS);
- антагонизирование CD40-опосредованной индукции Т-клеточных костимулирующих молекул, таких как CD80 и CD86, и/или иммуностимулирующих молекул, таких как IL12;
- ингибирование активации В-клеток, например, как определено анализом TT IgG;
- не индуцирование по существу фосфорилирования JNK в Т-клетках Jurkat;
- не индуцирование по существу секреции IFNγ с помощью Т-клеток Jurkat, ко-стимулированных антителом против CD3;
- не индуцирование по существу активации первичных эндотелиальных клеток; и/или
- не индуцирование по существу активации тромбоцитов или агрегации тромбоцитов, например, как определено анализом активации тромбоцитов или анализом агрегации тромбоцитов.
11. Полипептид по любому из пп. 1-10, отличающийся тем, что указанный ISVD, связывающийся с сывороточным альбумином, по существу состоит из 4 каркасных областей (FR1-FR4, соответственно) и 3 областей, определяющих комплементарность (CDR1-CDR3, соответственно), в которых CDR1 представляет собой SEQ ID NO: 74, CDR2 представляет собой SEQ ID NO: 75, CDR3 представляет собой SEQ ID NO: 76, предпочтительно указанный ISVD, связывающийся с сывороточным альбумином выбран из группы, состоящей из ALB135 (SEQ ID NO: 15), ALB129 (SEQ ID NO: 13), ALB8 (SEQ ID NO: 11), ALB23 (SEQ ID NO: ID NO: 12) и ALB132 (SEQ ID NO: 14).
12. Полипептид по любому из пп. 1-11, отличающийся тем, что указанное С-концевое удлинение представляет собой С-концевое удлинение (Х)n, в котором n равно 1-10, предпочтительно 1-5, как например, 1, 2, 3, 4 или 5 (и предпочтительно 1 или 2, например, 1); и каждый Х представляет собой (предпочтительно природный) аминокислотный остаток, который независимо выбирают, и предпочтительно независимо выбирают из группы, состоящей из аланина (А), глицина (G), валина (V), лейцина (L) или изолейцина (I).
13. Полипептид по любому из пп. 1-12, отличающийся тем, что указанный полипептид имеет, по меньшей мере, 80%, 90%, 95% или 100% идентичности последовательности с C010003318 (SEQ ID NO: 9) или C010003313 (SEQ ID NO: 78).
14. Способ лечения или предотвращения заболеваний или расстройств у индивидуума, например, при котором участвует неадекватная активация CD40L/CD40-опосредованного пути, причем способ включает введение полипептида по любому из пп. 1-13 указанному индивидууму в количестве, эффективном для лечения или предотвращения симптома указанного заболевания или расстройства.
15. Способ по п. 14, отличающийся тем, что указанные заболевания или расстройства выбраны из группы, состоящей из аутоиммунного заболевания, системной красной волчанки (SLE), волчаночного нефрита, иммунной тромбоцитопенической пурпуры (ITP), отторжения трансплантата, болезни Крона, синдрома Шегрена, воспалительного заболевания кишечника (IBD), колита, астмы/аллергии, атеросклероза, миастении Гравис, рассеянного склероза, псориаза, ревматоидного артрита, анкилозирующего спондилоартрита, ишемической болезни сердца, диабет типа 1, бокового амиотрофического склероза (ALS) и иммунного ответа на рекомбинантные лекарственные продукты, например, фактор VII при гемофилии.
16. Полипептид по любому из пп. 1-13 для применения в качестве лекарственного средства.
17. Полипептид по любому из пп. 1-13 для применения при лечении или предотвращении симптома аутоиммунного заболевания, системной красной волчанки (SLE), волчаночного нефрита, иммунной тромбоцитопенической пурпуры (ITP), отторжения трансплантата, болезни Крона, синдрома Шегрена, Воспалительного заболевания кишечника (IBD), колита, астмы/аллергии, атеросклероза, миастении Гравис, рассеянного склероза, псориаза, ревматоидного артрита, анкилозирующего спондилита, ишемической болезни сердца, диабета типа 1, бокового амиотрофического склероза (ALS) и/или иммунного ответа на рекомбинантный лекарственные продукты, например, фактор VII при гемофилии.
18. Полипептид по любому из пп. 1-13, отличающийся тем, что указанный полипептид перекрестно блокирует связывание с CD40L, по меньшей мере, одного из полипептидов 46B03 (SEQ ID NO: 6), 28B02 (SEQ ID NO: 3) C010003290 (SEQ ID NO: 8) и C010003318 (SEQ ID NO: 9) и/или перекрестно блокируется от связывания с CD40L, по меньшей мере, одним из полипептидов 46B03 (SEQ ID NO: 6), 28B02 (SEQ ID NO: 3) C010003290 (SEQ ID NO: 8) и C010003318 (SEQ ID NO: 9).
19. Полипептид, перекрестно блокирующий связывание с CD40L, по меньшей мере, одним из 46B03 (SEQ ID NO: 6), 28B02 (SEQ ID NO: 3) C010003290 (SEQ ID NO: 8) и C010003318 (SEQ ID NO: 9), и/или перекрестно блокируется от связывания с CD40L, по меньшей мере, одним из 46B03 (SEQ ID NO: 6), 28B02 (SEQ ID NO: 3) C010003290 (SEQ ID NO: 8) и C010003318 (SEQ ID NO: 9), где указанный полипептид содержит, по меньшей мере, один VH, VL, dAb, одиночный вариабельный домен иммуноглобулина (ISVD), специфически связывающийся с CD40L, где связывание с CD40L модулирует активность CD40L.