ОБНАРУЖЕНИЕ ГЕНЕТИЧЕСКИХ МАРКЕРОВ РЕЗИСТЕНТНОСТИ К β-ЛАКТАМНЫМ АНТИБИОТИКАМ У ГРАМОТРИЦАТЕЛЬНЫХ МИКРООРГАНИЗМОВ С ПОМОЩЬЮ ПЦР-ДИАГНОСТИКИ

Обнаружение генетических маркеров резистентности к в-лактамным антибиотикам у грамотрицательных микроорганизмов с помощью ПЦР-диагностики

Е. С. ЛИСИЦЫНА', Т. В. ЧЕРНЕНЬКАЯ2, Е. Н. ИЛЬИНА3, И. В. ЛАЗАРЕВА4, В. А. АГЕЕВЕЦ4, С. В. СИДОРЕНКО4

' НПФ «Литех», Москва, Россия

2 НИИ скорой помощи им. Н. В. Склифосовского, Москва

3 НИИ физико-химической медицины ФМБА России, Москва

4 НИИ детских инфекций ФМБА России, Санкт-Петербург

Discovery of Genetic Markers of Resistance to )3-Lactams in Gramnegative Microorganisms by PCR Diagnosis

E. S. LISITSINA, T. V. CHERNENKAYA, E. N. ILYINA, I. V. LAZAREVA, V. A. AGEEVETS, S. V. SIDORENKO Litekh Co., Moscow

N.V.Sklifosovsky Research Institute of Emergency Service, Moscow Research Institute of Physico-Chemical Medicine, Moscow

Research Institute of Children's Infections, Federal Medico-Biological Agency, St.Petersburg

В исследование включены образцы биологического материала (15 образцов гемокультуры и 89 образцов бронхоальвеоляр-ного лаважа), из которого были выделены монокультуры грамотрицательных бактерий устойчивых к цефотаксиму, цефе-пиму, имипенему, меропенему. В отобранных образцах методом ПЦР с детекцией результатов в режиме реального времени (ПЦР-тест систем ООО НПФ «Литех») были обнаружены гены бета-лактамаз: blaCTX_M_like (72/104, 69,2%), blaNDM (6/104, 5,8%), blaylM (49/104, 47,1%) и ¿/a0xA48-iike (59/104, 56,7%). Выявлена корреляция между фенотипом устойчивости Acinetobacter spp., Pseudomonas aeruginosa, Klebsiella pneumoniae и Escherichia coli к цефотаксиму и карбапенемным антибиотикам и выявлением генов blaCTX_M_like и blaNDM. В то же время до 70% K.pneumoniae, выделенных из биологических образцов, положительных на наличие генов карбапенемаз blaylM и blaOXA48-like демонстрировали фенотипическую чувствительность к карбапенемам. Полученные результаты подтверждают прогностические возможности генетической диагностики для улучшения традиционного бактериологического исследования.

Ключевые слова: гемокультуры, бронхоальвеолярный лаваж, генетические маркёры резистентности, ПЦР-тестирование.

Fifteen specimens of the hemoculture and 89 specimens of the broncho-alveolar lavage were used in the study. Monocultures of gramnegative bacteria resistant to cefotaxime, cefepime, imipenem and meropenem were isolated from the specimens. The PCR method with detection of the results in the real time regimen (PCR test-system Litekh) provided detection of the beta-lactamase genes: blaCTX_M_like (72/104, 69.2%), blaNDM (6/104, 5.8%), blaylM (49/104, 47,1%) and blaOXA48_like (59/104, 56.7%). There was identified correlation between the phenotype of resistance of Acinetobacter spp., Pseudomonas aeruginosa, Klebsiella pneumoniae and Escherichia coli to cefotaxime and carbopenems and detection of the blaCTX.M.like and blaNDM genes. At the same time, up to 70% of the K.pneumoniae isolates from the biological specimes positive with respect to the presence of the carbapenase blaylM and blaOXA48-like genes demonstrated their phenotypic susceptibility to carbopenems. The results of the study confirmed the prognostic value of the genetic diagnosis for improvement of the routine bacteriological investigations.

Key words: hemocultures, broncho-alveolar lavage, genetic markers of resistance, PCR method.

Введение

Одной из ведущих проблем современного здравоохранения, во многом обусловленной интенсивным применением антибактериальных препаратов, является формирование лекарственной устойчивости у возбудителей как внеболь-ничных, так и особенно внутрибольничных ин-

© Коллектив авторов, 2015

Адрес для корреспонденции: 119435, Москва, Пироговская М. ул., 1, стр. 3. НПФ Литех

фекций. Лечение таких инфекций требует больших затрат в связи с увеличением времени пребывания больного в стационаре и использованием дорогостоящих препаратов.

Современные принципы лечения жизнеуг-рожающих инфекций предусматривают незамедлительное назначение антибактериальных препаратов после установления диагноза [1]. В подавляющем большинстве случаев выбор препаратов происходит в условиях практически полного отсутствия информации об этиологии

инфекционного процесса и антибиотикочувст-вительности возбудителя. На протяжении многих лет основу эмпирической терапии тяжёлых бактериальных инфекций, вызванных грамот-рицательными бактериями, составляли и составляют бета-лактамные антибиотики. Однако эффективность указанных препаратов ограничивается формированием приобретённой микробной резистентности, ведущим механизмом которой у грамотрицательных бактерий являются бета-лактамазы.

Бета-лактамазы представляют собой обширную и крайне разнообразную по своим свойствам группу ферментов [2], но основное клиническое значение имеет их относительно небольшое количество. Появление и распространение отдельных групп бета-лактамаз чётко связано с внедрением в медицинскую практику новых бета-лактамных антибиотиков. Так, вслед за внедрением аминопенициллинов и других полусинтетических пенициллинов у грамотрицательных бактерий появились и быстро распространились плазмидные бета-лактамазы класса А широкого спектра. Вслед за оксииминоцефалоспоринами появились бета-лактамазы расширенного спектра (БЛРС) [3]. Именно с распространением этих ферментов связано снижение эффективности це-фалоспориновых антибиотиков I—IV поколений. Если до середины 90-х годов прошлого века среди БЛРС доминировали TEM- и SHV-типы, то в последующие годы они были постепенно вытеснены ферментами СТХ-М-типа [4]. Ферменты СТХ-М-типа доминируют среди БЛРС и на территории Российской Федерации [5].

Снижение эффективности цефалоспоринов привело к существенному увеличению потребления карбапенемных антибиотиков, что в свою очередь послужило толчком к формированию и распространению микробной резистентности к карбапенемам. Ведущую роль в распространении резистентности к карбапенемам играют четыре группы карбапенемаз: KPC-, VIM-, NDM- и OXA-48 типов [6]. По экспертным оценкам к маю 2015 г. в 13 из 38 стран Европы сформировались эндемичные очаги распространения продуцентов карбапенемаз, в большинстве остальных стран было отмечено региональное распространение этих бактерий, причём по сравнению с 2013 г. ситуация в большинстве стран существенно ухудшилась [7]. Основные глобально распространённые карбапенемазы выявлены и в Российской Федерации [8].

Широкое распространение БЛРС и появление карбапенемаз вызывает потребность в быстром выявлении указанных механизмов устойчивости, однако решение этой проблемы культуральными методами классической микробиологии невозможно. Одним из наиболее реаль-

ных подходов к решению указанной проблемы может быть детекция генов, кодирующих БЛРС и карбапенемазы, непосредственно в клиническом материале, минуя стадию выделения возбудителя в чистой культуре.

В настоящем исследовании продемонстрирована возможность прогнозирования лекарственной устойчивости путём обнаружения методом ПЦР наиболее распространённых генов резистентности, определяющих устойчивость микроорганизмов к цефалоспоринам I—IV поколения и кар-бапенемам, в различном клиническом материале.

Материал и методы

Биологический материал. В исследование вошли 15 образцов гемокультуры и 89 образцов бронхоальвеолярного лаважа, полученных в период с августа 2013 г. по февраль 2014 г. Включение клинических образцов в экспериментальную выборку проводили согласно следующим критериям: присутствие в клиническом материале грамотрицатель-ных бактерий в виде монокультуры; фенотипическая устойчивость выделенных бактерий к цефотаксиму, цефе-пиму, имипенему и меропенему.

Микробиологические исследования. Видовую идентификацию возбудителей в образцах проводили стандартными бактериологическими методами. Чувствительность к антибиотикам выявленных патогенных микроорганизмов определяли диско-диффузионным методом и интерпретировали в соответствии со стандартами EUCAST [9]. С учётом рода выделенного штамма определение чувствительности проводили к следующим антимикробным препаратам: цефотаксим, цефепим, имипенем, меропенем.

ПЦР исследование. Образцы ДНК выделяли согласно соответствующим методикам для бронхоальвеолярного лаважа и гемокультуры с использованием реагента «ДНК-экспресс» без красителя для флуоресцентных методов детекции (ООО НПФ «Литех», № ФСР 2007/00362).

Выделенные образцы ДНК анализировали с использованием экспериментальных диагностических наборов производства ООО НПФ «Литех» для выявления:

• резистентности к карбапенемам — Enterobacteriaceae и Pseudomonas (выявление генов VIM);

• резистентности к карбапенемам — Enterobacteriaceae и Pseudomonas (выявление генов NDM);

• резистентности к карбапенемам — Enterobacteriaceae и Pseudomonas (выявление генов OXA-48);

• резистентности к карбапенемам — Enterobacteriaceae и Pseudomonas (выявление генов KPC);

• резистентности к цефалоспоринам — Enterobacteriaceae (выявление генов CTX-M).

Тестирование проводилось согласно рекомендациям производителя методом ПЦР с детекцией результатов в режиме реального времени.

Результаты и обсуждение

В ходе испытаний были проанализированы 104 клинических образца, полученных от пациентов различных отделений НИИ СП им. Н. В. Склифо-совского. Отобранный клинический материал после микробиологического исследования и поступал в лабораторию ПЦР для выделения ДНК и тестирования на наличие генетических маркёров резистентности.

На основании бактериологических данных была проведена оценка видового разнообразия

Результаты бактериологического анализа чувствительности

Антибиотики Фенотипы Acinetobacter spp. K.pneumoniae P.aeruginosa E.coli

Карбапенемы чувствительные 4

промежуточные 1 (2,2%) 5 (12,8%) 1 (6,3%) 0

резистентные 41 (89,1%) 7 (18,0%) 12 (75,0%) 0

Цефотаксим чувствительные 0 5

резистентные 46

Цефепим чувствительные 1

резистентные 45

возбудителей, выявленных в клинических образцах. Микробный пейзаж представлен следующими видами: Acinetobacter spp. (46/104, 44%), Klebsiella pneumoniae (39/104, 38%), Pseudomonas aeruginosa (16/104, 15%) и Escherichia coli (3/104, 3%).

По результатам микробиологического анализа на чувствительность к цефалоспоринам и карбапенемам бактериальные культуры были отнесены к трём фенотипическим группам:

— чувствительные к исследуемым антибиотикам;

— резистентные, обладающие устойчивостью к тестируемым препаратам, а также, в случае карбапене-мов, показывающие промежуточную чувствительность к одному из карбапенемов на фоне устойчивости к другому;

— с промежуточной чувствительностью к препаратам, а также, в случае карбапенемов, чувствительные к одному из карбапенемов на фоне устойчивости к другому.

Результаты бактериологического определения чувствительности выявленных возбудителей к цефалоспоринам и карбапенемам представлены в табл. 1. Согласно полученным данным, большинство штаммов Acinetobacter spp. и P.aeruginosa обладали резистентным к цефалоспоринам и к карбапенемам фенотипом. В отношении штаммов K.pneumoniae и E.coliкарбапенемы продемонстрировали высокую активность.

В предоставленной коллекции, состоящей из 104 клинических образцов, были обнаружены носители следующих генов резистентности: blaCxX_M_Hke (72/104, 69,2%), blaNDM (6/104, 5,8%), b'laVlM (49/104, 47,1%) и blaOXA48.Hke (59/104, 56,7%). Гены blaKPC в клинических образцах обнаружены не были.

Вследствие того, что генетические маркёры резистентности ассоциированы с различными фенотипами лекарственной устойчивости, сопоставление результатов бактериологического и ПЦР исследования проводили отдельно для каждого класса антимикробных препаратов.

Цефалоспорины. Согласно бактериологическим данным, из образцов, положительных по ге-

Рис. 1. Распределение штаммов бактерий, изолированных из положительного по гену b/aCTX_M_Mke клинического материала, по фенотипам чувствительности к цефотаксиму (в %).

ну blaCxX_M_like (n=72), были выделены следующие возбудители: Acinetobacter spp. (27/72, 37,5%), K.pneumoniae (38/72, 52,8%), P.aeruginosa (5/72, 6,9%) и E.coli (2/72, 2,8%). Все штаммы Acinetobacter spp., P.aeruginosa и E.coli, изолированные из данных образцов, были фенотипичес-ки устойчивы к цефотаксиму. Среди штаммов K.pneumoniae преобладали резистентные к цефо-таксиму (33/38, 86,8%) (рис. 1).

Обнаружение гена blacxX_M_like среди фенотипи-чески чувствительных образцов можно объяснить гетерогенностью исходной бактериальной популяции, в которой доля чувствительных штаммов превышает резистентные. В этом случае при культивировании в неселективных условиях возможно вытеснение резистентных штаммов за счёт преимущественного роста «дикой» популяции.

Из клинического материла, отрицательного по гену blacXX_M_like (n=32), были изолированы 1 штамм K..pneumoniae, 19 штаммов Acinetobacter spp. и 11 штаммов P.aeruginosa, фенотипически устойчивые к цефалоспоринам, а также 1 чувствительный к цефотаксиму штамм E.coli. В данных образцах ПЦР исследованием были выявлены гены карбапене-маз, выработка которых обуславливает устойчивость микроорганизма ко всем классам бета-лак-тамных антибиотиков, в том числе к цефалоспоринам. В частности, частота обнаружения генетических маркёров карбапенемаз для об-

разцов, ассоциированных с монокультурой К.рпеытотае, составила 100,0% (1/1), для образцов с монокультурой ЛстеЬЬа^ег 8рр. — 73,7% (14/19), для образцов с монокультурой Р.аегы^пот — 72,7% (8/11). В образце, бактериологически охарактеризованном как монокультура Е.соН, детерминант резистентности обнаружено не бышо.

Результат сопоставления данныгх бактериологического и ПЦР исследований свидетельствует о хорошей корреляции между фенотипом устойчивости ЛстеОЬа^ег 8рр., Р.а^еты^^-тояа, К.рпеытотае и Е.соН к цефо-таксиму и обнаружением в клиническом материале генетических детерминант цефалоспориназ и карбапенемаз, обуславливающих устойчивость к цефалоспоринам ¡—IV поколений.

Карбапенемы. Генетические маркёры резистентности к карбапенемам суммарно были выявлены в 76 образцах (76/104, 73%), из которых были изолированы монокультуры К.рпеытотае (32/76, 42,1%), ЛстеоЬа^ег 8рр. (32/76, 42,1%) и Р.аегы^1по&а (12/76, 15,8%). Гены Ь/аотм были обнаружены в 6 образцах, в которых микробиологическими методами были выявлены К.рпеытотае (2/6), ЛсМоЬа^ег 8рр. (3/6) и Р.аеты^по5а (1/6), устойчивые ко всем тестируемым карбапенемам (рис. 2).

Гены Ь/а^м были обнаружены в 49 образцах, из которых в 22 образцах бактериологически определялся ЛстеоЬа^ег 8рр., в 19 — К.рпеытотае и в 8 — Р.аегы^1по&а. Среди изолированных из клинического материала, положительного по гену Ь/а^м, штаммов ЛстеоЬа^ег 8рр. и P.aerыginosa, преобладали возбудители с резистентным к карбапенемам фенотипом (86,4 и 75,0% штаммов соответственно), однако, среди выделенных К.рпеытотае только 15,8% были резистентны к имипенему и к меропенему (рис. 3).

Гены Ь/аОХА48_ике были обнаружены в 59 образцах, из которые микробиологическими методами были изолированы Лсте^ЬаШг 8рр. (27/59), Крпеытотае (27/59) и P.aerыginosa (5/59). Фено-типически устойчивыми к карбапенемам оказалась большая часть штаммов ЛстеоЬаШг 8рр. и P.aerыginosa (88,9 и 60,0% штаммов, соответственно), в то время как среди штаммов К.рпеытотае преобладали чувствительные к тестируемым карбапенемам (70,4% штаммов) (рис. 4).

Рис. 2. Распределение штаммов бактерий, изолированных из положительного по гену Ь/а№М клинического материала, по фенотипам чувствительности к карбапенемам (в %).

Рис. 3. Распределение штаммов бактерий, изолированных из положительного по гену Ыауш клинического материала, по фенотипам чувствительности к карбапенемам (в %).

Таким образом, в случае ЛстеоЬа^ег 8рр. и P.aerыginosa наблюдалась хорошая корреляция между фенотипом выделенных бактериальных культур и обнаружением генетических маркёров резистентности в исходном клиническом материале. Однако, фенотип изолированных штаммов К.рпеытотае плохо коррелировал с обнаружением генов

Ь/аЖм

и Ь/а0ХА48-11ке-Возможны две основные причины несоответствия между фенотипической чувствительностью к карбапенемам патогенов, выделенных из биологических образцов, и наличия в образцах генов карбапенемаз. Одной из них может быть низкий уровень экспрессии генов, который не обеспечивал фенотипически выявляемую устойчивость. Низкие значения МПК карбапенемов часто выявляются у бактерий, продуцирующих карбапе-немазы группы ОХА-48 [10]. Возможно также наличие в биологических образцах, положительных

Рис. 4. Распределение штаммов бактерий, изолированных из положительного по гену Ь/а0ХА48_Ике клинического материала, по фенотипам чувствительности к карбапенемам (в %).

на гены карбапенемаз, бактерий, которые не удалось выделить при традиционном культивировании. Для подтверждения данной гипотезы исходные blaVlM_ и Ь/аОХА48_ике_-положительные образцы, из которых были получены чувствительные к карбапенемам штаммы K.pneumoniae в виде монокультуры (n=22), дополнительно были протестированы набором «Септоскрин» (ООО НПФ «Литех», № ФСР 2012/13945), позволяющем обнаружить наиболее часто встречаемых возбудителей инфекций в стационарах методом ПЦР. Согласно полученным результатам в 95,5% (21/22), случаях в тестируемых образцах детектировалась ДНК P.aeruginosa. На основании этих данным мы можем предположить, что носителем регистрируемых в клиническом материале генов blaVlM и blaOXA48_like является P.aeruginosa. Распространение P.aeruginosa, продуцирующих VIM-2 карбапене-мазы характерно для Российской Федерации и ряда соседних стран [11].

Клинические критерии антибиотикочувстви-тельности, разработанные на основании данных о фармакокинетике и фармакодинамике антибактериальных препаратов ведущими международными профессиональными организациями (EUCAST [9] и CLSI [12]), позволяют достаточно надёжно прогнозировать результат терапии на основании значений МПК или зон задержки роста. Несмотря на то что значимость детекции генов антибиотикорезис-тентности для прогнозирования исходов терапии гораздо менее очевидна, направление по детекции генов резистентности в различных биологических образцах интенсивно развивается.

ЛИТЕРАТУРА

1. De/linger R.P., Levy M.M., Rhodes A., Annane D, Ger/ach H, Opal S.M., Sevransky J.E., Sprung C.L., Douglas I.S., Jaeschke R. et al. Surviving sepsis campaign: international guidelines for management of severe sepsis and septic shock: 2012. Crit Care Med 2013; 41: 2: 580-637.

В настоящее время производителями предлагаются различные подходы для повышения информативности традиционных микробиологических методов, при этом наибольший интерес представляют генетические методы благодаря возможности предсказывать клиническую эффективность антибиотиков, анализируя непосредственно клинический материал [13]. В последние годы появились целые серии коммерческих продуктов, основанных на различных модификациях ПЦР или микрочиповых технологиях, предназначенных для детекции в крови и других стерильных жидкостях наиболее актуальных генетических маркёров резистентности [14—16]. Результаты испытаний таких систем в европейских лабораториях свидетельствуют о высокой чувствительности данных методик и возможности быстрого и точного предсказания фенотипа резистентности микроорганизмов [17—19].

Результаты испытаний ПЦР-тест-систем ООО НПФ «Литех» подтверждают прогностические возможности генетической диагностики для улучшения традиционного бактериологического исследования. Патогенные микроорганизмы, выделенные из образцов гемокультуры и бронхо-альвеолярного лаважа, положительных на наличие генетических маркёров резистентности, показавали ожидаемый фенотип устойчивости, в частности в случае устойчивых к цефалоспори-нам штаммов К.рпеытотае и устойчивых к карбапенемам штаммов P.aerыginosa и ЛетеОЬа^ег 8рр. Выявление в образцах биологического материала, положительных на продукцию ЫаУ1М и Ь/аОХА48_ике, фенотипически чувствительных изолятов К.рпеытотае требует дальнейшего изучения.

В настоящем исследовании продемонстрирован потенциал применения ПЦР-детекции генетических маркёров резистентности как дополнительного инструмента тестирования при бактериологических исследованиях, способствующего повышению информативности исследования и позволяющего прогнозировать устойчивость возбудителей к антибиотикам.

Исследование выполнено за счёт гранта Российского фонда фундаментальный исследований (проект № 14-04-00563).

Bush K, Jacoby G.A. Updated functional classification of {beta}-lacta-mases. Antimicrob Agents Chemother 2010; 54: 3: 969—976. Lynch J.P., 3rd, Clark N.M., Zhanel G.G. Evolution of antimicrobial resistance among Enterobacteriaceae (focus on extended spectrum beta-lactamases and carbapenemases). Expert Opin Pharmacother 2013; 14: 2: 199—210.

4. Livermore D.M., Canton R., Gniadkowski M., Nordmann P., Rossolini G.M., Arlet G., Ayala J., Coque T.M., Kern-Zdanowicz I, Luzzaro F. et al. CTX-M: changing the face of ESBLs in Europe. J Antimicrob Chemother 2007; 59: 2: 165-174.

5. Edelstein M., Pimkin M., Palagin I., Edelstein I., Stratchounski L. Prevalence and molecular epidemiology of CTX-M extended-spec -trum beta-lactamase-producing Escherichia coli and Klebsiella pneumoniae in Russian hospitals. Antimicrob Agents Chemother 2003; 47: 12: 3724-3732.

6. Canton R., Akova M., Carmeli Y., Giske C.G., Glupczynski Y., Gniadkowski M., Livermore D.M., Miriagou V., Naas T., Rossolini G.M. et al. Rapid evolution and spread of carbapenemases among Enterobacteriaceae in Europe. Clin Microbiol Infect 2012; 18: 5: 413-431.

7. Albiger B., Glasner C., Struelens M., Grundmann H., Monnet D., group tESoC-PEEw. May 2015. Carbapenemase-producing Enterobacteriaceae in Europe: assessment by national experts from 38 countries. Euro Surveill 2015; 20 (45): pii=30062 DOI: http://dxdoiorg/102807/1560-7917ES 2015204530062 2015.

8. Ageevets V.A., Partina I.V., Lisitsyna E.S., Ilina E.N., Lobzin Y.V., Shlyapnikov S.A., Sidorenko S.V. Emergence of carbapenemase-produc-ing Gram-negative bacteria in Saint Petersburg, Russia. Int J Antimicrob Agents 2014; 44: 2: 152-155.

9. Hakenbeck R., Martin C., Dowson C., Grebe T.Penicillin-binding protein 2b of Streptococcus pneumoniae in piperacillin-resistant laboratory mutants. J Bacteriol 1994, 176: 17: 5574-5577.

10. Oueslati S., Nordmann P., Poirel L. Heterogeneous hydrolytic features for OXA-48-like beta-lactamases. J Antimicrob Chemother 2015; 70: 4: 1059-1063.

11. Edelstein M.V., Skleenova E.N., Shevchenko O.V., D'Souza J. W., Tapalski D.V., Azizov I.S., Sukhorukova M.V., Pavlukov R.A., Kozlov R.S., Toleman M.A. et al. Spread of extensively resistant VIM-2-positive ST235 Pseudomonas aeruginosa in Belarus, Kazakhstan, and Russia: a longitudinal epidemiological and clinical study. Lancet Infect Dis 2013; 13: 10: 867-876.

СВЕДЕНИЯ ОБ АВТОРАХ:

Лисицына Евгения Сергеевна - научный сотрудник ООО «Научно-производственная фирма ЛИТЕХ», Москва Черненькая Татьяна Витальевна - к.м.н., руководитель отдела клинической микробиологии Государственного бюджетного учреждения здравоохранения города Москвы «Научно-исследовательский институт скорой помощи им. Н.В. Склифосовского Департамента здравоохранения города Москвы», Москва

Ильина Елена Николаевна - д.м.н., профессор, заместитель директора по научной работе Федерального государственного бюджетного учреждения «Федеральный научно-клинический центр физико-химической медицины Федерального медико-биологического агентства», Москва

Лазарева Ирина Владимировна - научный сотрудник, отдел медицинской микробиологии и молекулярной эпиде-

12. CLSI.: Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing. Twenty-Fourth Informational Supplement. CLSI document M100-S24. In. Wayne, PA: Clinical and Laboratory Standards Institute; 2014.

13. LupoA., Papp-WallaceK.M., SendiP., Bonomo R.A., EndimianiA. Non-phenotypic tests to detect and characterize antibiotic resistance mechanisms in Enterobacteriaceae. Diagn Microbiol Infect Dis 2013; 77: 3: 179-194.

14. Cuzon G., Naas T., Bogaerts P., Glupczynski Y., Nordmann P. Evaluation of a DNA microarray for the rapid detection of extended-spectrum beta-lactamases (TEM, SHV and CTX-M), plasmid-mediated cephalospori-nases (CMY-2-like, DHA, FOX, ACC-1, ACT/MIR and CMY-1-like/MOX) and carbapenemases (KPC, OXA-48, VIM, IMP and NDM). J Antimicrob Chemother 2012; 67: 8: 1865-1869.

15. Avlami A., Bekris S., Ganteris G., Kraniotaki E., Malamou-Lada E., Orfanidou M., Paniara O., Pantazatou A., Papagiannitsis C.C., Platsouka E. et al. Detection of metallo-beta-lactamase genes in clinical specimens by a commercial multiplex PCR system. J Microbiol Methods 2010; 83: 2: 185-187.

16. Cuzon G., Naas T., Bogaerts P., Glupczynski Y., Nordmann P. Probe ligation and real-time detection of KPC, OXA-48, VIM, IMP, and NDM carbapenemase genes. Diagn Microbiol Infect Dis 2013; 76: 4: 502—505.

17. Spanu T., Fiori B., DTnzeo T., Canu G., Campoli S., Giani T, Palucci I., Tumbarello M., Sanguinetti M., Rossolini G.M. Evaluation of the New NucliSENS EasyQ KPC test for rapid detection of Klebsiella pneumoniae carbapenemase genes (blaKPC). J Clin Microbiol 2012; 50: 8: 2783—2785.

18. Willemsen T., Hille L., Vrolijk A., Bergmans A., Kluytmans J. Evaluation of a commercial real-time PCR for the detection of extended spectrum beta-lactamase genes. J Med Microbiol 2014, 63: Pt 4: 540—543.

19. Uno N., Suzuki H., Yamakawa H., Yamada M., Yaguchi Y., Notake S., Tamai K., Yanagisawa H., Misawa S., Yanagihara K. Multicenter evaluation of the Verigene Gram-negative blood culture nucleic acid test for rapid detection of bacteria and resistance determinants in positive blood cultures. Diagn Microbiol Infect Dis 2015; 83: 4: 344—348.

миологии Федерального государственного бюджетного учреждения «Научно-исследовательский институт детских инфекций Федерального медико-биологического агентства», Санкт-Петербург

Агеевец Владимир Андреевич — младший научный сотрудник, отдел медицинской микробиологии и молекулярной эпидемиологии Федерального государственного бюджетного учреждения «Научно-исследовательский институт детских инфекций Федерального медико-биологического агентства», Санкт-Петербург

Сидоренко Сергей Владимирович — д.м.н., профессор, заведующий отделом медицинской микробиологии и молекулярной эпидемиологии Федерального государственного бюджетного учреждения «Научно-исследовательский институт детских инфекций Федерального медико-биологического агентства», Санкт-Петербург