СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ СТОРОЖЕВЫХ ЛИМФОУЗЛОВ ПРИ РАКЕ ЖЕЛУДКА

Способ диагностики сторожевых лимфоузлов при раке желудка, включающий визуализацию сторожевого лимфатического узла и путей лимфооттока с последующим исследованием лимфатического узла на проточном питометре методом подсчета клеток в камере Горяева при реакции прямой иммунофлуоресценции, отличающийся тем, что перед анализом на цитометре в пробу к клеткам добавляют 500 мкл забуференного фосфатом физиологического раствора и проводят проточную цитометрию прямыми флуорохромными коньюгатами по 6 параметрам: флуоресцеинизотиоцианат, фикоэритрин, перидинин-хлорофилл протеин, фикоэритрин-Су77, аллофикоцианин, аллофикоцианин-Су7, с обязательным присутствием в пробе нуклеотропных красителей, общелейкоцитарного антигена и пан-эпителиальных маркеров, далее получают суспензию клеток материла биопсии лимфатического узла: биопсийный материал помещают в физиологический раствор или раствор Хенкса или питательную среду 199 с солями Хенкса с добавлением глутамина и гентамицина, ткань с небольшим количеством буферного раствора аккуратно измельчают в ступке и переносят в пробирку объемом 10 мл, клеточную взвесь отмывают от эритроцитов и разрушенных клеток центрифугированием 1000 оборотов в минуту при 200g, процедуру проводят дважды, далее к клеточному осадку добавляют 2 мл PBS-BSA, ресуспендируют, производят подсчет клеток в камере Горяева; после получения клеточной суспензии проводят прямую реакцию иммунофлуоресценции: клетки в количестве от 1000000-2000000 помещают в пробирки 12×75, объем клеточной суспензии 150 мкл мм с прямыми флуорохромными коньюгатами монокланальных антител и используют многопараметровой метод: 6-специфических параметров и 2 неспецифических - прямое и боковое светорассеяние проточной цитометрии и делят на образцы: первая проба анализируемый образец, вторая - изотипический контроль для оценки неспецифического связывания антигена, далее проводят иммунофлуоресценцию на двухлазерном проточном цитометре, причем из каждой пробы набирают от 2000000 до 10000000 клеток без ограничения области сбора и проводят анализ данных проточной цитометрии, после чего оценивают количество клеток, экспрессирующих пан-эпителиальные маркеры CD326 и BerEP4 в пределах всех анализируемых клеток образца с использованием программ FCSexpress Version 3.0 и Kaluza, и если количество детектированных клеток составляет выше 0,01%, а именно 1 клетка на 10000 ядросодержащих клеток, то это свидетельствует о метастатическом поражении лимфатического узла.