СПОСОБЫ ПРОИЗВОДСТВА БЕЛКА С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ СОЕДИНЕНИЙ, ПРЕПЯТСТВУЮЩИХ СТАРЕНИЮ

1. Способ производства гибридного белка TNFR в культуре клеток, включающий следующие стадии:
выращивание клеток млекопитающего, содержащих ген, кодирующий гибридный белок TNFR, где ген экспрессируется в условиях культуры клеток, в среде культуры клеток, содержащей соединение, препятствующее старению; и
поддержание культивирования при условиях и на протяжении времени, достаточного для возможности экспрессии белка;
где культура клеток проявляет улучшенную характеристику культуры клеток, отличающуюся от соответствующей характеристики культуры клеток, которая будет наблюдаться при других идентичных условиях в другой идентичной среде, не содержащей соединение, препятствующее старению;
где улучшенную характеристику культуры выбирают из группы, включающей увеличение титра, увеличение удельной клеточной продуктивности, увеличение жизнеспособности клеток, увеличение интегральной плотности жизнеспособных клеток, уменьшение аккумулирования высокомолекулярных агрегатов, уменьшение аккумулирования кислот и их комбинации.
2. Способ по п.1, где соединение, препятствующее старению, выбирают из группы, включающей карнозин, ацетил-карнозин, гомо-карнозин, ансерин и бета-аланин и их комбинации.
3. Способ по п.1, где соединением, препятствующим старению, является карнозин.
4. Способ по п.1, 2 или 3, где соединение, препятствующее старению, присутствует в среде культуры клеток в концентрации от приблизительно 5 мМ до приблизительно 100 мМ.
5. Способ по п.1, где культуру клеток также обеспечивают дополнительными компонентами.
6. Способ по п.5, где дополнительные компоненты вводят в питательную среду.
7. Способ по п.5 или 6, где дополнительные компоненты выбирают из группы, включающей гормоны и/или другие факторы роста, отдельные ионы (такие как натрий, хлорид, кальций, магний и фосфат), буферы, витамины, нуклеозиды или нуклеотиды, микроэлементы (неорганические соединения, обычно присутствующие в очень низких конечных концентрациях), аминокислоты, липиды, глюкозу или другие источники энергии, и их комбинации.
8. Способ по п.7, где дополнительные компоненты включают соединение, препятствующее старению.
9. Способ по п.1, где продуцируемый гибридный белок TNFR является гетерологичным для клеток млекопитающего.
10. Способ по п.1, где клетками млекопитающего являются СНО клетки.
11. Способ по п.1, где гибридный белок TNFR включает TNFR-Fc.
12. Способ по п.11, где TNFR-Fc является этанерцепт.
13. Способ производства белка по п.1, дополнительно включающий стадию выделения белка из среды культуры клеток.
14. Способ по п.13, где белок дополнительно очищают или обрабатывают для получения композиции.
15. Способ по п.14, где белок вводят в фармацевтическую композицию.
16. Способ производства белка по п.1, где высокомолекулярные агрегаты включают неправильно свернутый белок.
17. Способ производства гибридного белка TNFR включающий следующие стадии:
выращивание клеток млекопитающего, содержащих ген, кодирующий гибридный белок TNFR, в среде культуры клеток, где ген экспрессируется в условиях культуры клеток, при первой температуре или интервале температур, пригодном для роста клеток во время фазы роста;
сдвиг температуры или интервала температур среды культуры клеток ко второй температуре или интервалу температур, пригодной для продуцирования белка;
выращивание хозяйских клеток в среде культуры при второй температуре или интервале температур во время переходной фазы и на фазе производства;
где соединение, препятствующее старению, прибавляется к культуре клеток и при этом культура клеток проявляет улучшенную характеристику культуры клеток, отличающуюся от соответствующей характеристики культуры клеток, которая будет наблюдаться при других идентичных условиях в другой идентичной среде, не содержащей соединение, препятствующее старению;
где улучшенную характеристику культуры выбирают из группы, включающей увеличение титра, увеличение удельной клеточной продуктивности, увеличение жизнеспособности клеток, увеличению интегральной плотности жизнеспособных клеток, уменьшение аккумулирования высокомолекулярных агрегатов, уменьшение аккумулирования кислот и их комбинации.
18. Способ по п.17, где соединение, препятствующее старению, прибавляют к среде культуры клеток в начале процесса культивирования клеток.
19. Способ по п.17, где соединение, препятствующее старению, прибавляют к среде культуры клеток во время фазы роста.
20. Способ по п.17, где соединение, препятствующее старению, прибавляют к среде культуры клеток во время переходной фазы.
21. Способ по п.17, где соединение, препятствующее старению, прибавляют к среде культуры клеток во время фазы производства.
22. Способ по п.17, где соединение, препятствующее старению, выбирают из группы, включающей карнозин, ацетил-карнозин, гомо-карнозин, ансерин и бета-аланин и их комбинации.
23. Способ по п.17, где соединением, препятствующим старению, является карнозин.
24. Способ по любому из пп.1-17, где соединение, препятствующее старению, присутствует в среде культуры клеток в концентрации от приблизительно 5 мМ до приблизительно 100 мМ.
25. Способ по п.24, где культуру клеток также обеспечивают дополнительными компонентами.
26. Способ по п.25, где дополнительные компоненты вводят в питательную среду.
27. Способ по п.25 или 26, где дополнительные компоненты выбирают из группы, включающей гормоны и/или другие факторы роста, отдельные ионы (такие как натрий, хлорид, кальций, магний и фосфат), буферы, витамины, нуклеозиды или нуклеотиды, микроэлементы (неорганические соединения, обычно присутствующие в очень низких конечных концентрациях), аминокислоты, липиды, глюкозу или другие источники энергии, и их комбинации.
28. Способ по п.27, где дополнительные компоненты включают соединение, препятствующее старению.
29. Способ по п.17, где продуцируемый гибридный белок TNFR является гетерологичным для клеток млекопитающего.
30. Способ по п.17, где клетками млекопитающего являются СНО клетки.
31. Способ по п.17, где гибридный белок TNFR включает TNFR-Fc.
32. Способ по п.31, где TNFR-Fc является этанерцепт.
33. Способ по п.17, дополнительно включающий стадию выделения белка из среды культуры клеток.
34. Способ по п.33, где белок дополнительно очищают или обрабатывают для получения композиции.
35. Способ по п.34, где белок вводят в фармацевтическую композицию.
36. Способ по п.17, где высокомолекулярные агрегаты включают неправильно свернутый белок.
37. Гибридный белок TNFR, полученный с помощью способа по любому из пп.1-16.
38. Белок по п.37, где гибридный белок TNFR включает TNFR-Fc.
39. Гибридный белок TNFR, полученный с помощью способа по любому из пп.17-36.
40. Белок по п.39, где гибридный белок TNFR включает TNFR-Fc.