КОМПОЗИЦИЯ И ПОЛИПЕПТИД ДЛЯ СТИМУЛИРОВАНИЯ ИММУНОЛОГИЧЕСКОЙ РЕАКЦИИ НА ШИГА ТОКСИН 2 ТИПА

1. Композиция для стимулирования иммунного ответа на Stx2, включающая фармацевтически приемлемый носитель и по меньшей мере один очищенный полипептид, причем указанный полипептид включает:
(i) SEQ ID NO:1; или
(ii) SEQ ID NO:1 и 2; или
(iii) SEQ ID NO:1, 2 и 3;
и не ассоциированный с шига-токсином Stx2 белковый каркас, причем SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:1 и 2; или SEQ ID NO:1, 2 и 3 вставлены в указанный не ассоциированный с шига-токсином Stx2 белковый каркас, и указанный полипептид обладает антигенными свойствами Stx2.
2. Композиция по п.1, в которой указанный каркас включает белок, в значительной степени идентичный Stx1, или его фрагмент.
3. Композиция по п.1, в которой указанный полипептид включает SEQ ID NO:1, 2 и 3 и не ассоциированный с шига-токсином Stx2 белковый каркас.
4. Композиция по п.1, в которой указанный полипептид включает SEQ ID NO:1 и 2 и не ассоциированный с шига-токсином Stx2 белковый каркас.
5. Композиция по п.1, в которой указанная композиция не стимулирует иммунный ответ на Stx1.
6. Композиция по п.1, в которой указанный полипептид включает последовательности аминокислот, в значительной степени идентичные последовательности аминокислот SEQ ID NO:8.
7. Композиция по п.1, в которой указанный полипептид включает последовательности аминокислот, перечисленные под SEQ ID NO:8.
8. Композиция для стимулирования иммунного ответа на Stx2, включающая фармацевтически приемлемый носитель и по меньшей мере один очищенный полипептид, включающий последовательность аминокислот, которая по меньшей мере на 92% идентична последовательности аминокислот SEQ ID NO:8, причем указанный полипептид обладает антигенными свойствами Stx2.
9. Композиция по п.1 или 8, причем указанная композиция, кроме того, включает адъювант.
10. Очищенный полипептид, включающий:
(i) SEQ ID NO:1; или
(ii) SEQ ID NO:1 и 2; или
(iii) SEQ ID NO:1, 2 и 3;
и не ассоциированный с шига-токсином Stx2 белковый каркас, где SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:1 и 2; или SEQ ID NO:1, 2 и 3 вставлены в указанный не ассоциированный с шига-токсином Stx2 белковый каркас, и указанный полипептид обладает антигенными свойствами Stx2.
11. Очищенный полипептид по п.10, в котором указанный каркас включает белок, в значительной степени идентичный Stx1, или его фрагмент.
12. Очищенный полипептид по п.10, включающий SEQ ID NO:1, 2 и 3 и не ассоциированный с шига-токсином Stx2 белковый каркас.
13. Очищенный полипептид по п.10, включающий SEQ ID NO:1 и 2 и не ассоциированный с шига-токсином Stx2 белковый каркас.
14. Очищенный полипептид, включающий последовательность аминокислот, по меньшей мере на 92% идентичную последовательности аминокислот SEQ ID NO:8, причем указанный полипептид включает по меньшей мере одну последовательность аминокислот, перечисленных в SEQ ID NO:1, 2 и 3, и обладает антигенными свойствами Stx2.
15. Очищенный полипептид по п.14, включающий последовательность аминокислот, по меньшей мере на 93% идентичную последовательности аминокислот SEQ ID NO:8.
16. Очищенный полипептид по п.15, включающий последовательность аминокислот, по меньшей мере на 95% идентичную последовательности аминокислот SEQ ID NO:8.
17. Очищенный полипептид по п.16, включающий последовательность аминокислот SEQ ID NO:8.
18. Очищенный полипептид по п.17, состоящий из последовательности аминокислот SEQ ID NO:8.
19. Очищенный полипептид, который является фрагментом последовательности аминокислот SEQ ID NO:8, и включает фрагмент, по меньшей мере на 80% идентичный последовательности аминокислот 64-122 в SEQ ID NO:8, и указанный фрагмент включает SEQ ID NO:1.
20. Очищенный полипептид по п.19, в котором указанный фрагмент включает SEQ ID NO:1 и 2.
21. Очищенный полипептид по п.20, в котором указанный фрагмент включает SEQ ID NO:1, 2 и 3.
22. Очищенный полипептид по любому из пп.10-21, который инактивирован.
23. Изолированная молекула полинуклеотида, кодирующая любой из полипептидов по любому из пп.10-22.
24. Изолированная молекула полинуклеотида по п.23, которая функционально связана с последовательностью, контролирующей экспрессию.
25. Вектор, способный регулировать экспрессию полипептида, состоящий из молекулы полинуклеотида по п.23.
26. Клетка-хозяин, содержащая вектор по п.25.
27. Способ приготовления полипептида, включающего любой из полипептидов по пп.10-22, причем указанный способ включает этапы:
(a) введение молекулы полинуклеотида по п.23 в клетку-хозяина и
(b) извлечение указанного полипептида из клетки-хозяина.
28. Способ продуцирования анти-Stx2 антитела, которое специфически связывается с эпитопом 11Е10 белка шига-токсина типа 2 (Stx2), причем указанный способ включает этапы:
a) иммунизация млекопитающего одним из полипептидов по пп.10-22; и
b) очистка анти-Stx2 антител, которые специфически связываются с эпитопом 11Е10 белка токсина Stx2, полученного из ткани указанного млекопитающего или из гибридомы, созданной с использованием такой ткани.
29. Способ по п.28, в котором указанные анти-Stx2 антитела, которые специфически связываются с эпитопом 11Е10 белка токсина Stx2, не связываются с Stx1.
30. Способ по п.28, дополнительно включающий этап:
c) скрининга указанного антитела к Stx2 и Stx1 в пробе по нейтрализации in vitro, при этом антитело, которое нейтрализует по меньшей мере 50% цитотоксического эффекта Stx2, является анти-Stx2 антителом, которое специфически связывается с эпитопом 11Е10 белка токсина Stx2.
31. Способ по п.28, в котором этап (а) включает использование адъюванта.
32. Способ по п.28, в котором указанное антитело является поликлональным антителом или его фрагментом.
33. Способ по п.28, в котором указанное антитело является моноклональным антителом или его фрагментом.
34. Способ по п.28, в котором указанное антитело является модифицированным антителом.
35. Способ по п.28, в котором указанное антитело является химерным или гуманизированным антителом.
36. Способ индуцирования иммунного ответа против Stx2 у пациента, включающий применение пациентом композиции по пп.1-9.
37. Способ лечения или профилактики заболевания, вызванного шига-токсинами, у пациента, включающий применение пациентом композиции по пп.1-9.
38. Способ по п.37, в котором заболевание, вызванное шига-токсинами, является гемолитико-уремическом синдромом.
39. Способ по п.37, в котором инфекционное заболевание вызвано шига-токсин-продуцирующими Е. coli или S. dysenteriae.
40. Анти-Stx2 антитело или его фрагмент, которые специфически связываются с эпитопом 11Е10 белка шига-токсина 2-го типа (Stx2), включающие любой полипептид по пп.10-22, при этом указанное антитело подавляет связывание антитела 11Е10 (АТСС 1907), химерного антитела 11Е10 или гуманизированного антитела 11Е10 с указанным белком Stx2.
41. Анти-Stx2 антитело или его фрагмент, которые специфически связываются с эпитопом 11Е10 белка шига-токсина 2-го типа (Stx2), при этом указанный эпитоп включает любой полипептид по пп.10-22, где указанное антитело подавляет связывание антитела 5С12, химерного антитела 5С12 или гуманизированного антитела 5С12 с указанным белком Stx2.
42. Антитело или его фрагмент по п.40 или 41, причем указанное антитело специфически связывается с эпитопом в указанном полипептиде, который включает последовательности SEQ ID NO:1, 2 и 3.
43. Антитело или его фрагмент по п.40 или 41, при этом указанный эпитоп 11Е10 является конформационным эпитопом.
44. Антитело или его фрагмент по п.40 или 41, которое является моноклональным антителом или его фрагментом.
45. Антитело или его фрагмент по п.40 или 41, которое является химерным или гуманизированным антителом.
46. Антитело или его фрагмент по п.40 или 41, которое является поликлональным антителом или его фрагментом.
d
47. Антитело или его фрагмент по п.40, которое связывание между Stx2 и антителом 11Е10, и указанное антитело 11Е10 имеет значение K 0,50 нМ или ниже.
48. Антитело по п.40, которое блокирует энзиматическую активность Stx2 или изменяет внутриклеточное распределение Stx2.
49. Антитело или его фрагмент по п.40 или 41, которое является IgG, IgM, IgE, IgD или IgA.
50. Антитело или его фрагмент по п.40 или 41, которое является фрагментом Fab или Fv.
51. Фармацевтическая композиция, включающая одно или более антител по пп.40-50 и фармацевтически приемлемый носитель.
52. Линия гибридных клеток, которые продуцируют антитела по пп.40-50.
53. Способ обнаружения Stx2 в биологическом образце, состоящий из этапов:
(a) контактирование указанного биологического образца с антителом или его фрагментом по пп.40-50 при условиях, допускающих образование соединения между указанным антителом и Stx2; и
(b) обнаружение указанного соединения.
54. Способ по п.53, в котором указанный биологический образец взят из ткани, клеток, экстракта клеток, органической жидкости или является биопсийным образцом.
55. Способ по п.53, в котором указанный образец обнаружен с использованием иммуносорбентного ферментного анализа (ELISA), радиоиммуноанализа (RIA), вестерн-блоттинга, иммунопреципитации и проточной цитометрии.
56. Способ предотвращения заболеваний, вызванных шига-токсинами, у пациента, состоящий из этапов:
(а) получение биологического образца у пациента;
(а) контактирование биологического образца с любым антителом по пп.40-50 при условиях, допускающих образование соединения между указанным антителом и Stx2; и
(с) обнаружение комплекса, образованного на этапе (b);
при этом присутствие Stx2 в указанных образцах определяет у пациента диагноз заболевания, вызванного шига-токсинами.
57. Способ по п.56, в котором заболевание, вызванное шига-токсинами, является гемолитико-уремическом синдромом.
58. Способ по п.56, в котором инфекционное заболевание вызвано шига-токсин-продуцирующими Е. coli или S. dysenteriae.
59. Набор для иммунологического анализа для выявления заболеваний, вызванных шига-токсинами, включающий одно из антител по пп.40-50.
60. Способ лечения или профилактики заболевания, вызванного шига-токсинами у пациента, включающий введение пациенту фармацевтически эффективной дозы одного из антител по пп.40-50.
61. Способ по п.60, в котором заболевание, вызванное шига-токсинами, является гемолитико-уремическом синдромом.
62. Способ по п.60, в котором инфекционное заболевание вызвано шига-токсин-продуцирующими Е. coli или S. dysenteriae.