Анализ статуса метилирования гена RARb2 в крови больных раком легкого для оценки эффективности проведенной комбинированной терапии

всех пациенток проводилось в стандартных дозах 46-50 Гр одновременно с облучением грудной стенки. Частота и качество неоадъювантной и адъювантной лекарственной терапии в группах не отличались. Медиана наблюдения составила 111 и 95 мес в каждой группе соответственно.

Результаты. Частота местнорегионарного прогрессирования в группе нормодозной и низ-кодозной лучевой терапии составила 6,2 ± 2,1% и 3,7 ± 2,1 % соответственно (р=0,4). Местнорегионарный рецидив развился в среднем через 41 мес при проведении низкодозной и 21 мес - в группе нормодозной ЛТ (р=0,003). Отдаленные метастазы выявлены у 34,6 ± 4,2 % и 19,5±4,4 % больных соответственно (р<0,05). 5-летняя актуариальная безрецидивная выживаемость составила 71,5 ± 6,4 % в группе низкодозной и 53,5 ± 5,4 % в группе нормодозной ЛТ (р=0,07),

5-летняя общая выживаемость - 72,2 ± 6,3 % и 65,3 ± 5,6 % соответственно (р=0,08). Отдаленные кардиальные изменения на ЭКГ у больных с левосторонней локализацией опухолевого процесса отмечены в 55 ± 11,1 % в группе низкодозной и в 75 ± 9,7 % - в группе нормодозной лучевой терапии (р<0,05).

Выводы. Полученные результаты свидетельствуют об отсутствии статистически значимых различий в общей и безрецидивной выживаемости в группах нормодозного и низкодозного облучения. Предложенная методика редуцированного постмастэктомического облучения грудной клетки, сочетающегося с современными схемами лекарственной терапии, позволяет уменьшить риск кардиотоксичности, не снижая уровня эффективности лечения, характерного для традиционной методики.

АНАЛИЗ СТАТУСА МЕТИЛИРОВАНИЯ ГЕНА RARB2 В КРОВИ БОЛЬНЫХ РАКОМ ЛЕГКОГО ДЛЯ ОЦЕНКИ ЭФФЕКТИВНОСТИ ПРОВЕДЕННОЙ КОМБИНИРОВАННОЙ ТЕРАПИИ

А.А. ПОНОМАРЕВА 1, Т.Э. СКВОРЦОВА 2, А.Ю. ДОБРОДЕЕВ 1

НИИ онкологии СО РАМН, г. Томск1 Институт химической биологии и фундаментальной медицины СО РАН, г. Новосибирск2

Актуальность. В настоящее время показано, что изменение уровня метилирования генов опухолевой супрессии как одно из наиболее ранних событий, ассоциированных с малигнизацией, связано также с прогрессией заболевания, что свидетельствует о важном патогенетическом значении этих нарушений. Тот факт, что ДНК трансформированных (опухолевых) клеток обнаруживается в ДНК, циркулирующих в плазме крови (цирДНК), указывает на перспективность детекции эпигенетических изменений цирДНК для малоинвазивной диагностики опухолей и прогнозирования течения рака легкого. Ранее нами было показано, что внеклеточные ДНК присутствуют как в плазме крови, так и во фракции, связанной с поверхностью клеток крови, причем эпигенетические ДНК-онкомаркеры выявлялись в обеих фракциях цирДНК при раке желудка.

Цель исследования - сравнительный анализ уровня метилирования гена опухолевой супрес-

сии RARP2 в циркулирующих ДНК плазмы и циркулирующих ДНК, связанных с клеточной поверхностью, при раке легкого до лечения и после комбинированной терапии (на 10-15-е сут после операции).

Материал и методы. В исследование включено 55 больных немелкоклеточным раком легкого (НМРЛ) и 30 здоровых мужчин. Венозную кровь разделяли на плазму и клетки крови, фракцию цирДНК, связанных с клеточной поверхностью, получали последовательной обработкой клеток фосфатным буфером, содержащим 5мМ ЭДТА, и 0,125 % раствором трипсина. Для выделения цирДНК из плазмы и фракций крови и цирДНК после модификации бисульфитом натрия использовали наборы «Blood DNA Isolation Kit» фирмы «BioSilica Ltd.» (Новосибирск, Россия). Уровень метилирования гена опухолевой супрессии RARP2 определяли методом количественной метил-специфичной ПЦР в реальном времени.

Результаты. Показано, что уровень мети-

лирования гена RARp2 в цирДНК плазмы и цирДНК, связанных с клеточной поверхностью, значимо выше у больных НМРЛ, чем в норме (3589 коп/мл и 1068 коп/мл - в цирДНК плазмы, 7620 коп/мл и 1083 коп/мл - в связанных цирДНК, р=0,003 и р=0,001 соответственно). После удаления опухоли на этапе оперативного лечения больных НМРЛ в 93 % случаев обнаружено существенное снижение уровня метилирования гена RARp2 в цирДНК плазмы и цирДНК, связанных с клеточной поверхностью, по сравнению с его уровнем до лечения (439 ± 52 коп/ мл и 547 ± 62 коп/мл соответственно, р<0,001), до уровня показателя практически здоровых лиц, не имеющих онкологических заболеваний.

Выводы. Повышенный уровень метилирования гена RARp2 во фракциях цирДНК крови

обусловлен присутствием в организме опухолевой ткани. Снижение уровня до нормального является результатом успешной резекции опухоли у большинства пациентов, что свидетельствует о потенциальной возможности использования этого показателя для оценки эффективности проводимой комбинированной терапии. Определение уровня метилирования гена RARp2 в цирДНК крови у больных НМРЛ через 1 мес после операции и затем каждые 3 мес в процессе наблюдения позволит определить значимость выявленных количественных изменений для мониторинга течения заболевания.

Работа поддержана грантом РФФИ (№ 09-04-01334-а), ФЦП «Научные и научно-

педагогические кадры инновационной России», Госконтракт №П256.

ЭФФЕКТЫ И МЕХАНИЗМЫ ГЕМОПОЭЗСТИМУЛИРУЮЩЕГО ДЕЙСТВИЯ ИММОБИЛИЗИРОВАННЫХ ОЛИГОНУКЛЕОТИДОВ ПРИ ЦИТОСТАТИЧЕСКОЙ МИЕЛОСУПРЕСИИ

А.М. ПОПОНИНА, Т.В. АНДРЕЕВА, Е.С. ХМЕЛЕВСКАЯ

НИИ фармакологии СО РАМН, г. Томск

Актуальность. Перспективным лекарственным средством, оказывающим стимулирующее влияние на различные ростки кроветворения при отсутствии токсического воздействия, являются препараты олигонуклеотидов. Однако низкая доставка олигонуклеотидов в клетку, быстрая деградация нуклеазами в лизосомах во многом ограничивают их клиническое применение. Возможным решением данной проблемы является использование транспортных систем, способствующих проникновению нуклеотидного материала через гистогематические барьеры и клеточные мембраны. Пегилированные нуклеиновые кислоты более активно захватываются клетками, чем неиммобилизированные молекулы, при этом полимер повышает растворимость и время по-лувыведения нуклеотидного материала.

Целью исследования являлось изучение гемопоэзстимулирующей активности препарата иммобилизированных олигонуклеотидов на моделях цитостатических миелосупрессий.

Материал и методы. Эксперименты выполнены на 520 мышах линии CBA/CaLac. Ци-

тостатическую миелосупрессию моделировали однократным внутрибрюшинным введением алкилирующего агента циклофосфана в дозе 200 мг/кг или фторпиримидинового антиметаболита 5-фторурацила в дозе 83 мг/кг. На следующий день после введения цитостатика в течение 7 дней мышам перорально вводили препарат иммобилизированных олигонуклеотидов (имОН) в дозах 50, 100, 150, 200 и 250 мг/кг (ООО «Саентифик фьючер менеджмент», г. Новосибирск). На 2-13-е сут после цитостатического воздействия стандартными гематологическими и культуральными методами определяли показатели периферической крови и костного мозга. Математическую обработку результатов производили с применением стандартных методов вариационной статистики.

Результаты. Скрининговые эксперименты позволили установить, что в условиях цитоста-тической миелосупрессии, вызванной введением циклофосфана, препарат имОН вызывал увеличение общего количества лейкоцитов в периферической крови во всех исследуемых до-