Разработка поликомпонентного метаболитного пробиотика

активности различных форм липополисахаридов Y. pestis EV 76 моноцитами человека. Известия высших учебных заведений. Северо-Кавказский регион. Естеств. науки. 2012, 2: 75-78.

7. Biswar S. K., Brist P., Dhillon M. K. Role for MyD-88independent, TRIF pathway in lipid A/ TLR4-induced endotoxin tolerance. J. Immunol. 2007, 179: 4083-4092.

8. Carpenter S., O'Neill L. Recent insights into structure of Toll-like receptors and post-translation modification of their associated signaling proteins. Biochem. J. 2009, 422: 1-10.

9. Dalpke A., Lehner M. D., Hartung T. et al. Differential effects of CpG-DNA in Toll-like recep-tor-2/-4/-9 tolerance and cross-tolerance. Immunology. 2005, 116: 203-212.

10. Matsuura M., Takahashi H., Watanabe H. et al. Immunomodulatory properties of Yersinia pestis lipopolysaccharides on human macrophages. Clin. Vaccine Immunol. 2010, 17 (1): 49-55.

11. Montminy S., Khan N., McGrath S. et al. Virulent factors ofYersinia pestis are overcome by a strong lipopolysaccharide response. Nature Immun. 2006, 7 (10): 1066-1073.

12. Nahid Md A., Satoh M., Chan E. MicroRNA in TLR signaling and endotoxin tolerance. Cell. Mol. Immunol. 2011, 8: 383-403.

13. Sato S., Nomura F., Kawai T. et al. Synergy and cross-tolerance between toll-like receptor (TLR)2-and TLR4-mediated signaling pathways. 2000, 165: 7096-7101.

14. Uematsu S., Akira S. Toll-like receptors and type I interferons. J. Biol. Chem. 2007, 282 (21): 15191532.

15. Westphal O., Jann K. Bacterial lipopolysaccharides extraction with phenol-water and further applications of the procedure. Methods carbohydr. Chem. 1965, 5: 83-91.

16. Zughaier S. M., Zimmer S. M., Datta A. et al. Differential induction of the Toll-like receptor 4-MyD88-dependent and —independent signaling pathways by endonoxins. Infect. Immun. 2005, 73 (5): 2940-2950.

Поступила 12.02.13

Контактная информация: Зюзина Вера Павловна, к. б. н.,

3440002, Ростов-на-Дону, ул. М.Горького, 117, р.т. (862)240-27-03

МИКРОЭКОЛОГИЯ И ТЕРАПИЯ

© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2013

Ю.В.Кулакова, А.В.Алешкин, С.С.Афанасьев, О.Г.Жиленкова

РАЗРАБОТКА ПОЛИКОМПОНЕНТНОГО МЕТАБОЛИТНОГО ПРОБИОТИКА

Московский НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н. Габричевского

Цель. Сконструировать рецептуру поликомпонентного пробиотика на основе супер-натанта культуральной жидкости (КЖ) лактобацилл. Материалы и методы. Видовую принадлежность штаммов лактобацилл уточняли с помощью анализа нуклеотидных последовательностей генов 16S рРНК. Для сравнения пробиотического эффекта КЖ, супер-натанта и ультрафильтрата консорциума штаммов лактобацилл проводили исследования спектра содержащихся в них пептидов, амино- и других органических кислот, а также профиль бактерицидной и фунгицидности активности. Результаты. Разработана технология получения безмикробного пробиотического средства на основе КЖ консорциума штаммов лактобацилл. При определении концентрации метаболитов белковой природы была показана аналогичность показателей в супернатанте КЖ и нативных культурах лактобацилл. Также было зафиксировано, что как в испытуемых супернатантах, так и в КЖ присутствовал одинаковый набор органических кислот. При сравнении антибактериальной и антикандидозной активности нативной культуры и супернатанта КЖ лактобацилл в отношении тест-штаммов Staphylococcus aureus 209, Enterococcus faecalis 1154 и Candida albicans 5 был показан равнозначный эффект обоих образцов. Заключение. Поликомпонентный метаболитный пробиотик на основе супернатанта КЖ штаммов Lactobacillus helveticus NKJC, Lactobacillus helveticus JCH и Lactobacillus casei КАА полностью сохраня-

ет бактерицидную и фунгицидную активность нативной культуры консорциума штаммов и при этом лишен недостатков композиций, содержащих живые микроорганизмы.

Журн. микробиол., 2013, № 5, С. 80-86

Ключевые слова: лактобациллы, метаболитные пробиотики, органические кислоты, антибактериальный эффект

Yu.V.Kulakova, A.V.Aleshkin, S.S.Afanasiev, O.G.Zhilenkova DEVELOPMENT OF POLYCOMPONENT METABOLITE PROBIOTIC Gabrichevsky Research Institute of Epidemiology and Microbiology, Moscow, Russia

Aim. Construct composition of polycomponent probiotic based on lactobacilli cultural fluid (CF) supernatant. Materials and methods. Species membership of lactobacilli strains was specified by analysis of nucleotide sequences of 16S RNA genes. For comparison of probiotic effect of CF, supernatant and ultrafiltrate of a consortium of lactobacilli strains, studies of specter of peptides, amino- and other organic acids contained in them as well as profile of bactericidal and fungicidal activity was carried out. Results. Technology of production of amicrobial probiotic agent based on CF of the consortium of lactobacilli strains was developed. During determination of concentration of metabolites of protein nature analogy of parameters was shown in CF supernatant and native lactobacilli cultures. In both the studied supernatants and CF the same set of organic acids was also reported to be present. During comparison of antimicrobial and anticandidosis activity of lactobacilli native culture and CF supernatant against Staphylococcus aureus 209, Enterococcus faecalis 1154 and Candida albicans 5 test-strains, an equivalent effect of both samples was shown. Conclusion. Polycomponent metabolite probiotic based on CF supernatant of Lactobacillus helve-ticus NKJC, Lactobacillus helveticus JCH and Lactobacillus casei КАА strains completely retains bactericidal and fungicidal activity of the native culture of the consortium of strains and at the same time lacks disadvantages of compositions containing live microorganisms.

Zh. Mikrobiol. (Moscow), 2013, No. 5, P. 80-86

Key words: lactobacilli, metabolite probiotics, organic acids, antibacterial effect ВВЕДЕНИЕ

В последнее десятилетие заметно возрос интерес к проблеме поддержания и восстановления микроэкологического статуса человека. Для этих целей все шире используют бактериотерапевтические препараты — пробиотики. Повышенное внимание к пробиотикам вызвано ростом контингента лиц, которым требуется коррекция ау-тофлоры, и прогрессом в изучении состава и биологических свойств микрофлоры, заселяющей различные биотопы человеческого организма, ее роли в поддержании здоровья макроорганизма [2, 3, 6, 11].

Вместе с тем, появляются данные, характеризующие негативные стороны влияния пробиотиков на организм человека. К ним, в частности, относится встречающаяся несовместимость штаммов, входящих в состав препарата, с индигенной микрофлорой, что может усугублять дисбиотические явления [4].

Ведущую роль при отборе пробиотических штаммов в качестве производственно перспективных играет их антагонистическая активность. Механизм реализации данного свойства связан с продукцией этими бактериями органических кислот, в первую очередь, молочной и уксусной, антибиотикоподобных веществ — бактериоцинов, витаминов и микроэлементов [8]. Бактериоцины и кислоты подавляют рост патогенных микробов, оказывают противовоспалительное действие, пептиды способствуют повышению местного иммунитета, углеводы, аминокислоты и витамины стимулируют обменные и репаративные процессы в организме. Таким образом, пробиотический эффект осуществляется за счет выделения целого набора биологически активных веществ — продуктов жизнедеятельности микроорганизмов. В связи с этим, пред-

6. ЖМЭИ 5 № 5186

81

ставляется целесообразным создание лечебно-профилактических препаратов для осуществления заместительной терапии с последующим восстановлением нарушенного бактериоценоза и оптимизацией микроэкологии ЖКТ на основе комплексного набора метаболитов, обеспечивающих выполнение этих функций [1].

Согласно целому ряду лабораторных и клинических исследований, проведенных в МНИИЭМ им. Г.Н.Габричевского, наиболее перспективными пробиотическими продуцентами биологически активных веществ являются штаммы лактобацилл, составляющие трехкомпонентный консорциум, входящий в состав препарата ацилакт [9]. В связи с этим, целью настоящего исследования явилась разработка рецептуры пробиотического средства на основе супернатанта данных штаммов лактобацилл с подтвержденной бактерицидной и фунгицидной активностью.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Изучение фенопитических и молекулярно-генетических свойств лактобацилл осуществляли в соответствии с [10]. Видовую идентификацию микроорганизмов проводили с помощью сравнительного анализа нуклеотидных последовательностей генов 16S рРНК.

Содержание гистамина в питательной среде до и после культивирования лакто-бацилл измеряли методом определения гистидиндекарбоксилазной активности бактерий [7].

Для получения супернатантов 50 мл суточной культуры лактобацилл центрифугировали при 5500 об/мин в течение 30 мин. Супернатант, представляющий собой надосадочную жидкость, отбирали, не затрагивая осевших бактериальных клеток. Центрифугирование проводили на центрифуге РС-6 (Россия).

Количественное определение белка проводили биуретовым методом в соответствии с [5].

Органические кислоты определяли по методу газовой хроматографии в соответствии с [10]. Разделение органических кислот происходило в капиллярной колонке с метилсиликоновой привитой фазой HP-5ms (Agillent technologies). Концентрацию веществ определи по масс-спектрам, используя стандартную программу идентификации прибора, основанную на базе данных NIST.

Для анализа содержания свободных аминокислот использовали анализатор Биотроник 1С-2000 (Германия) с аналитической колонкой, заполненной ионообменной смолой Durrum DC-4A с размером частиц 6 — 8 микрон в трехбуферной системе (буфер «А» рН=3,25; буфер «В» рН=3,90; буфер «С» рН=4,75). Анализ на суммарное наличие свободных и связанных аминокислот проводили после предварительного гидролиза образцов.

Изучение бактерицидной активности проводили с помощью капельного, диффузии в агар и серийных разведений методов.

РЕЗУЛ ЬТАТЫ

В качестве пробиотических штаммов-продуцентов метаболитов на предварительном этапе конструирования разрабатываемого средства были отобраны и исследованы с точки зрения их производственнной перспективности на основании [10] штаммы лактобацилл, входящие в трехкомпонентный консорциум препарата ацилакт, отличающиеся высокой антагонистической активностью. В том числе, нами решалась задача по подтверждению видовой подлинности штаммов-претендентов, которая была уточнена в результате проведенных молекулярно-генетических исследований. По особенностям строения гена 16S рРНК, полученным с помощью секвенирования лактобацилл по Сенгеру, определена принадлежность штамма Lactobacillus acidophilus NKi к виду Lactobacillus helveticus, L. acidophilus 100аш к виду L.helveticus, L. acidophilus К3Ш24 к виду Lactobacillus casei. В связи с уточненным таксонометрическим положением штаммы были депонированы в ГКНМ МНИИЭМ им.Г.Н.Габричевского: NK1 как L.helveticus NKJC, 100аш как L.helveticus JCH, К3Ш24 как L.casei КАА.

Принимая во внимание данные зарубежной литературы о возможности продуци-

бнимискж + МЗЬВДДОДОВДйДО йммирий +

остатки птэталы-сй с рада)

1

I тАНТ^Мф^-НрСИв!- ASf При ¿ЬК rjlJ/UL- А Я ТДОДОИ* К ММ А

I

ГфИ »ftjtftfep*.

FhH 1111 г ел . США!, лиами-р icip Z 22 мгм

МьмСцвш-ш ji b -раонлыйдиин s ¿жжк*» ченчвчф^^дайл^ий: в и^ифйпчвдччрм tTmqw »ОклМОНЛПиц--70* (Ьви^ргр, OtfiW. мймбрйна Тдеряисие- биипшимеры - мшижулнрсий -ййПйй Ж КДр

Схема получения супернатантов и ультрафильтратов.

рования лактобациллами метаболитов, обладающих провоспалительным свойством (например, L.acidophilus, Lactobacillus buchneri, Lactobacillus delbrueckii синтезируют гистамин [12, 13]), и учитывая частоту встречаемости в гастроэнтерологической практике заболеваний, сопровождающихся неблагоприятным аллергологическим анамнезом, мы провели ряд экспериментов с отобранными штаммами L.helveticus NKJC, L.helveticus JCH и L.casei КАА, в результате которых было показано, что как при раздельном, так и при их совместном культивировании исходное содержание гистамина в питательной среде КД-5С не повышается и составляет 4,5±0,4 мкмоль/мл до и 4,4±0,4 мкмоль/мл после культивирования.

Получив фенотипическую и молекулярно-генетическую оценку отобранных штаммов, перешли к получению супернатантов и ультрафильтратов на их основе. Для этого была разработана следующая технология их получения (рис.).

Для подтверждения гипотезы о сохранении основных пробиотических свойств в супернатанте, полученном по нашей технологии, мы провели сравнительное исследование спектра биологически активных веществ, содержащихся в нативной культуре, супернатанте, ультрафильтрате и пероральном коммерческом препарате хилак-форте. При определении концентрации метаболитов белковой природы была показана аналогичность показателей в супернатантах (18,5±1 мг/мл) с концентрацией таковых в нативных культурах (18,6±1 мг/мл). Также было зафиксировано, что как в испытуемых супернатантах, так и в нативной культуре лактобацилл присутствовал одинаковый набор карбоновых кислот — молочная, уксусная, масляная, пропионовая, яблочная, валериановая, янтарная, изовалериановая, капроновая (табл. 1). Отмечено,

Таблица 1. Содержание карбоновых кислот в КЖ, супернатантах

Карбоновые кислоты Лактобациллы, выращенные на питательной среде КД-5С Хилак-форте

Консорциум штаммов L.helveticus NKJC, L.helveticus JCH и L.casei КАА как основа для: Супернатанты, полученные из КЖ отдельных штаммов

КЖ СН УФ L^^ticus NKJC L.casei КАА ^he^ticus JCH

Молочная 538+1,0 602+1,0 456+1,0 406+1,0 415+1,0 397+1,0 313+1,0

Уксусная 236+0,5 243+1,0 206+0,5 205+1,0 144+0,5 102+0,5 297+0,5

Пропионовая 23+0,1 57+0,5 25+0,1 63+0,5 72+0,5 61+0,5 135+0,5

Масляная 123+0,5 150+1 105+0,5 132+1,0 150+1,0 150+1,0 131+0,5

Яблочная 187+0,5 157+1 157+0,5 161+1 132+0,5 158+1,0 111+0,5

Валериановая 79+0,1 82+0,1 82+0,1 91+0,1 43+0,1 39+0,1 45+0,5

Таблица 2. Изучение бактерицидной и фунгицидной активности КЖ и СН методом серийных разведений

Разведение исследуемого образца

Исследуемый образец S.aureus 209 E.faecalis 1154 C.albicans 54

контр. исх. 1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 контр. исх. 1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 контр. исх. 1:2 1:4 1:8

КЖ — + + + + + ± — + + + + + + — + + + —

СН — + + + + + — — + + + + + + — + + + —

Примечание. + Высокий бактерицидный и фунгицидный эффект (отсутствует рост тест-штаммов), ± слабый бактерицидный и фунгицидный эффект (слабый рост тест-штаммов), — отсутствие бактерицидного и фунгицидного эффекта (рост тест-штаммов).

Таблица 3. Изучение бактерицидной и фунгицидной активности пробиотиков методом диффузии в агар

Тест-штаммы ^^ S.aureus 209 S.aureus 34 E.faecalis 1154 E.coli 224 C.albicans 54

Разведение Разведение Разведение Разведение Разведение

Состав пробиотика пробиотика пробиотика пробиотика пробиотика

^^ пробиотиков исх. 1:2 исх. 1:2 исх. 1:2 исх. 1:2 исх. 1:2

Диаметр зон задержки роста, мм

КЖ консорциума 17±1 13±1 20±1 17±2 18±2 6±1 15±1 6±2 0 0

лактобацилл

СН (консорциум 16±1 13±1 20±2 8±2 19±1 7±1 15±1 7±1 3±1 0

лактобацилл)

СН (L.helveticus NKJC) 21±2 8±1 23±2 15±2 22±2 8±2 13±1 5±1 3±1 0

СН (L.casei КАА) 19±1 7±1 23±1 14±2 20±2 7±1 13±1 3±1 3±1 0

СН (L.helveticus JCH) 20±1 11±1 21±1 16±1 18±1 9±1 16±1 6±1 3±1 0

Хилак-форте 16±1 4±1 15±1 3±1 20±1 7±1 8±1 0 4±2 0

что содержание карбоновых кислот отчетливо зависело от среды культивирования штаммов лактобацилл. В молоке продуцирование всех карбоновых кислот существенно уменьшалось. При сравнении абсолютного количества карбоновых кислот существенной разницы между супернатантом и нативной культурой также не обнаружено. В то же время, необходимо отметить снижение концентрации некоторых видов карбоновых кислот в ультрафильтратах. Принимая во внимание ведущую роль в осуществлении антагонистических свойств лактобациллами молочной кислоты, необходимо отметить двухкратное количественное превосходство данного метаболита в суперна-танте на основе консорциума в сравнении с коммерческим препаратом.

Биологический потенциал и антагонистическая активность метаболитов культур лактобацилл определяется не только набором пептидов и органических кислот, но и во многом зависит от состава продуцируемых аминокислот. Супернатанты лактобацилл содержат 17 видов аминокислот, причем в гидролизованных образцах, т.е. при суммарном определении свободных и связанных аминокислот концентрация по всем кислотам существенно выше. Необходимо отметить, что среди выявленных аминокислот присутствуют такие, например, как глицин, аланин, глутамин, которые входят в комплекс пептидогликанов клеточной стенки лактобацилл и играют ведущую роль в их иммуномодулирующей активности в отношении гуморального и клеточного звеньев иммунной системы человека [8]. Сравнение спектра и концентрации аминокислот, содержащихся в супернатантах и коммерческом пероральном препарате, отражает количественное превосходство супернатантов.

Таким образом, при переходе от состояния культуральной жидкости к суперна-тантам, полученным по приведенной выше технологии, абсолютное количество и соотношения метаболитов претерпевают лишь незначительные изменения, которыми, на наш взгляд, можно пренебречь при комплексной оценке пробиотических свойств действующего начала.

Существенным подтверждением пробиотического действия супернатантов явля-

ется уровень их бактерицидной и фунги-цидной активности. Так, при сравнении данного свойства, проявляемого натив-ной культурой и супернатантом в отно-шениии тест-штаммов Staphylococcus aureus 209, Enterococcus faecalis 1154 и Candida albicans 54 методом серийных разведений был показан равнозначный бактерицидный и фунгицидный эффект обоих образцов (табл. 2).

При сравнении супернатантов, на-тивного консорциума и коммерческого препарата по степени проявления бактерицидной и фунгицидной активности в отношении тест-штаммов на плотных питательных средах методом диффузии в агар установлено: с одной стороны, практически одинаковая антибактериальная и фунгицидная активность супернатан-тов и нативной культуры, с другой стороны, превосходство данных показателей у супернатантов и нативной культуры над коммерческим препаратом (табл. 3).

Необходимо отметить, что наиболее выраженная бактерицидная активность испытуемых супернатантов была выявлена капельным методом в отношении штаммов золотистого стафилококка, выделенных от пациентов клинико-диагностического центра, что имеет существенное значение для пробиотического средства (табл. 4).

ОБСУЖДЕНИЕ

Проведенные исследования по определению спектра и концентрации органических кислот в метаболитном пробиотике показали значительное преимущество су-пернатантов перед ультрафильтратами, которые теряют биологически активные вещества при дополнительной фильтрации, что дало нам основание использовать супернатант, полученный из культуральной жидкости консорциума лактобацилл, в качестве действующего вещества для разрабатываемого средства.

Супернатант культуральной жидкости лактобацилл штаммов L.helveticus NKJC, L.helveticus JCH и L.casei KAA, лишенный ряда недостатков бактериальных препаратов, содержащих живые микроорганизмы (антигенной нагрузки, возможной несовместимости с индигенной микрофлорой и т.д.), по своей пробиотической эффективности, характеризующейся спектром биологически активных веществ и бактерицидной активностью, не уступает нативной культуре данных штаммов. В то же время, действующее вещество разработанного метаболитного пробиотика с технологической точки зрения подлежит более точному дозированию, сохранению стабильности действующей биологической субстанции при взаимодействии с консервантами, а также позволяет сократить допустимые отклонения параметров, контролируемых в рамках НТД между последовательными партиями продукта.

ЛИТЕРАТУРА

1. Алешкин В.А., Афанасьев С.С., Поспелова В.В. и др. Становление пробиотикотерапии в России. Вестн. РАМН. 2005, 12: 3-13.

2. Бондаренко В.М., Мацулевич Т.В. Дисбактериоз кишечника как клинико-лабораторный синдром: современное состояние проблемы. М., ГЭОТАР-медиа, 2007.

3. Бондаренко В.М. Обоснование и тактика назначения в медицинской практике различных форм пробиотических препаратов. Фарматека. 2013, 13: 77-87.

Таблица 4. Бактерицидная активность супернатантов КЖ лактобацилл при испытании капельным методом в отношении клинических штаммов S. aureus

Клинические штаммы Супернатант на основе:

консорциума из 3 штаммов штамма ^he^ticus NKJC штамма L.casei КАА штамма ^he^ticus JCH

677к + — — +

78 — + + —

79 — + + —

82 — + + —

887 + — — +

908 — — — +

411 ± ± ± ±

408 — ± ± ±

180 ± ± ± ±

513 ± ± ± —

532 ± ± ± ±

Примечание. + Высокий бактерицидный эффект(отсутствует рост тест-штаммов), ± слабый бактерицидный эффект (слабый рост тест-штаммов), — отсутствие бактерицидного эффекта (рост тест-штаммов).

4. Глушанова Н.А., Вербицкая Н.Б., Петров Л.Н. и др. Исследование ауто-, изо- и гомоантаго-низма пробиотических штаммов лактобацилл. Бюлл. ВСНЦ СО РАМН. 2005, 6 (44): 138142.

5. Государственная фармакопея СССР. Общие методы анализа. Лекарственное растительное сырье. М., Медицина, 1989.

6. Грачева Н.М., Бондаренко В.М. Пробиотические препараты в терапии и профилактике дис-бактериоза кишечника. Инфекционные болезни. 2004, 2 (2): 53-58.

7. Куяров А.В., Воропаева Е.А., Алешкин В.А. и др. Способ определения гистидидекарбокси-лазной активности бактерий (варианты). Патент RU 2299440 C1, МПК G01N 33/68, опубликован 20.05.2007.

8. Онищенко Г.Г., Алешкин В.А., Афанасьев С.С., Поспелова В.В. Иммунобиологические препараты и перспективы их применения в инфектологии. М., ГОУ ВУНМЦ МЗ РФ, 2002.

9. Поспелова В.В., Лахтин В.М., Криворучко Е.В. и др. Изучение вариантов пробиотика Ацилакт на живых моделях. Вестник РУДН. 2009, 1: 5-10.

10. Тутельян В.А., Шевелева С.А., Хотимченко С.А. и др. Методические указания по санитарно-эпидемиологической оценке безопасности и функционального потенциала пробиотических микроорганизмов, используемых для производства пищевых продуктов. МУ 2.3.2. 2789-10. М., Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2010.

11. Шендеров Б.А. Молекулярный язык пробиотических микроорганизмов. Пищевые ингредиенты. 2009, 1: 48-49.

12. Azcarate-Peril M.A., Altermann E., Hoover-Fitzula R.L. et al. Identification and inactivation of genetic loci involved with Lactobacillus acidophilus acid tolerance. Appl. Environment. МюгоЬю1. 2004, 70 (9): 5315-5322.

13. Garai G., Duenas M.T., Irastorza A., Moreno-Arribas M.V Biogenic amine production by lactic acid bacteria isolated from cider. Lett. Аppl. МюгоЬю1. 2007, 45 (5): 473-478.

Поступила 12.02.13

Контактная информация: Алешкин Андрей Владимирович, д.б.н,

125212, Москва, ул. Адмирала Макарова, 10, р.т. (495)452-18-16

© Е.А.СЕЛИВАНОВА, Н.В.НЕМЦЕВА Е.А.Селиванова1,2, Н.В.Немцева12

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ ГАЛОФИЛЬНЫХ ПРОКАРИОТ И УСЛОВНО ПАТОГЕННЫХ БАКТЕРИЙ В РАПЕ

1Институт клеточного и внутриклеточного симбиоза, Оренбург; 2Оренбургская государственная медицинская академия

Цель. Изучить влияние экстремально галофильных архей и умеренно галофильных бактерий на сохранение условно патогенных бактерий в рапе. Материалы и методы. Из континентального гипергалинного озера Развал Соль-Илецкого района Оренбургской области были выделены 17 штаммов умеренно галофильных бактерий и 2 штамма экстремально галофильных архей. Идентификацию чистых культур прокариот проводили с учетом их фенотипических свойств и на основании определения последовательности гена 16S рРНК. Влияние галофильных прокариот на элиминацию Escherichia coli из рапы оценивали при сокультивировании. Антагонистическую активность экстрактов клеток исследуемых микроорганизмов оценивали фотометрическим методом. Результаты. Установлено более длительное сохранение штамма E. coli в рапе в присутствии живых клеток экстремально галофильных архей Halorubrum tebenquichense и умеренно галофильных бактерий Marinococcus halophilus. Экстракты клеток экстремально галофильных архей и умеренно галофильных бактерий, напротив, проявляли антагонистическую активность. Заключение. Протективное действие живых клеток галофильных прокариот и антагонистическая активность их клеточных экстрактов изменяют сроки сохранения условно патогенных бактерий в рапе, регулируя межмикробные взаимоотношения и изменяя сроки самоочищения, что отражается на санитарном состоянии гипергалинного водоема.

Журн. микробиол., 2013, № 5, С. 86—91