Молекулярно-генетический анализ факторов наследственной тромбофилии при гестозе

МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ ФАКТОРОВ НАСЛЕДСТВЕННОЙ ТРОМБОФИЛИИ ПРИ ГЕСТОЗЕ

Е.А. Трифонова2, ТА. Агаркова1, Н.А. Габитова1, Т.В. Габидулина1, В.А. Степанов2

1НИИ акушерства, гинекологии и перинатологии СО РАМН, Томск 2НИИ медицинской генетики СО РАМН, Томск E-mail: vadim.stepanov@medgenetics.ru

MOLECULAR-GENETIC FACTOR ANALYSIS OF INHERITED THROMBOPHILIA DURING GESTOSIS

E.A. Trifonova2, T.A. Agarkova1, N.A. Gabitova1, T.V. Gabidulina1, V.A. Stepanov2

Institute of Obstetrics, Gynecology and Perinatology of the Siberian Branch of the Russian Academy of Medical Sciences, Tomsk institute of Medical Genetics of the Siberian Branch of the Russian Academy of Medical Sciences, Tomsk

Исследованы молекулярно-генетические факторы наследственной тромбофилии при гестозе различной степени тяжести у 140 русских женщин. Контрольную группу составили 150 недавно родивших русских женщин с физиологически протекавшей беременностью. Установлено, что наличие у женщин таких маркеров наследственной тромбофилии, как аллельные варианты С677Т и A1298C гена метилентетрагидрофолатредуктазы (MTHFR), маркер G20210A гена протромбина (FII), полиморфизм G1691A гена пятого фактора свертывающей системы крови (FV), мутация -675 4g/5g гена ингибитора активатора плазминогена (PA1-1) значительно увеличивает риск развития гестоза различной степени тяжести. Молекулярно-генетический анализ факторов наследственной тромбофилии может быть учтен при выборе эффективной профилактики гестоза.

Ключевые слова: гестоз, генотип, тромбофилии.

Molecular-genetic factors of inherited thrombophilia of gestosis of different severity of 140 Russian women were studied. Control group was formed out of 150 recently delivered Russian mothers with physiological pregnancy. It was established that women who have inherited thrombophilia markers such as allelic variants C677T and A1298C of methylenetetrahydrofolate reductase gene (MTHFR), G20210A of prothrombin gene (F11), polymorphism of G1691A gene of the fifth factor of blood coagulability (FV), mutation of -675 4G/5G gene inhibitor plasminogen activator (PA1-1) increase the risk of gestosis development of different severity to a great extant. So the molecular-genetic analysis of inherited thrombophilia should be taken into consideration in choosing the effective prophylaxis of gestosis.

Key words: gestosis, genotype, thrombophilia.

Введение ном акушерстве. Одним из наиболее тяжелых и распрос-

Проблема профилактики осложненного течения бе- траненных видов акушерской патологии является гестоз,

ременности занимает одно из ведущих мест в современ- встречающийся у 6-20% беременных. Несмотря на мно-

ЕА Трифонова и соавт.

МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ ФАКТОРОВ..

гочисленные исследования патогенетических механизмов развития заболевания и появление новых методов лечения гестоза, он продолжает занимать ведущее место среди причин материнской и перинатальной заболеваемости и смертности [1]. На долю гестоза приходится до 70% мертворождений и выкидышей, а величина перинатальных потерь при гестозе возрастает почти в 5 раз [2]. Высокая частота гестоза и характер его осложнений для матери и плода диктуют необходимость поиска новых методов профилактики и лечения заболевания. В настоящее время существует множество теорий развития гес-тоза (неврогенная, гормональная, почечная, плацентарная, иммунологическая, генетическая), но ни одна из них не может полностью ответить на все вопросы его генеза. Исследования последних лет показали, что ведущую роль в патогенезе гестоза играют сосудистые расстройства: ангиоспазм, нарушение состояния и проницаемости сосудистой стенки, изменение реологических свойств крови и микроциркуляции. Исходя из современных представлений о патогенезе гестоза, в качестве возможных генетических маркеров данной патологии можно выделить полиморфные варианты генов, ответственных за развитие эндотелиальной дисфункции и гиперкоагуляции.

Цель исследования: выявление роли факторов наследственной тромбофилии в развитии гестоза в популяции русских.

Материал и методы

В рамках данной работы обследованы 140 русских женщин с беременностью, осложненной гестозом. В работе применяли отечественную классификацию гестоза: водянка беременной, нефропатия (легкой, средней, тяжелой степени тяжести), преэклампсия, эклампсия. Оценку степени тяжести гестоза проводили по балльной шкале Goecke в модификации Г.М. Савельевой [3]. Контрольную группу (150 человек русской национальности) составили недавно родившие женщины с физиологически протекавшей беременностью. Были изучены частоты следующих маркеров наследственной тромбофилии: аллельные варианты С677Т и A1298C гена метилентетра-гидрофолатредуктазы (MTHFR), маркер G20210A гена протромбина (FII), полиморфизм G1691A гена пятого фактора свертывающей системы крови (FV), мутация -675 4G/5G гена ингибитора активатора плазминогена (PA1-1).

У обследованных индивидуумов была выделена ДНК, проамплифицированы интересующие полиморфные локусы (методом ПЦР) с последующим рестрикционным анализом с помощью специфических эндонуклеаз. Продукты амплификации и рестрикции анализировали с помощью электрофореза в 2%-ном агарозном и 8%-ном полиакриламидном гелях соответственно, окрашивая бромистым этидием.

Статистическая обработка результатов исследования проводилась с помощью пакета статистических программ “Statistica 7.0”. Для определения характера распределения полученных данных использовали критерий Колмогорова-Смирнова. При проведении попарного сравнения частот аллелей, генотипов и гаплотипов между анализиру-

емыми группами использовали критерий х2 с поправкой Йейтса. В исследуемых группах для SNPs вычисляли отношение шансов (OR) и доверительные интервалы (CI) для отношения шансов (95% CI). Соответствие распределения частот аллелей и генотипов равновесию Харди-Вайнберга проверяли по критерию х2. Различие двух сравниваемых величин считали статистически значимыми при р<0,05.

Результаты и обсуждение

По всем исследованным локусам частоты аллелей и генотипов находились в диапазоне мировых, а распределение частот генотипов соответствовало равновесию Харди-Вайнберга. При сравнительном анализе изученных полиморфизмов было выявлено достоверное повышение частоты генотипа 677ТТ локуса MThFr в группе женщин с гестозом (15%) по сравнению с контрольной группой - 2% (х2=16,66; р<0,05). При попарном сравнении частоты аллелей по локусу С677Т гена MTHFR значимо отличались в группе беременных с гестозом и контрольной группе (х2=13,89, р<0,05). Необходимо подчеркнуть, что согласно полученным данным, носительство аллеля 677Т гена MTHFR увеличивает риск гестоза в 2 раза, а генотипа 677ТТ - в 8 раз (OR=8,17, CI 2,37-28,17 и 0R=2,05, CI 1,40-3,01 соответственно). Второй изученный маркер гена MTHFR - А1298С также показал статистически значимую ассоциацию с гестозом (при сравнении частот генотипов х2=7,14, р<0,05): генотип 1298СС в группе больных гестозом встречался в 2 раза чаще (21%), чем в контрольной группе (10%). При анализе частот генотипов полиморфного варианта -675 4G/5G гена PA1-1 в группе беременных с гестозом генотип 4G/4G встречался в 1,7 раз (48%) чаще, чем в контроле (28%) (х2=12,24, р<0,05; 0R=2,36, CI 1,45-3,84). Сравнение частот аллеля 4G в исследуемых группах также выявило достоверно более высокие значения частоты данного аллеля в группе с гестозом (х2=11,23, р<0,05; 0R=1,77, CI 1,27-2,47). При сравнительном анализе частот генотипов и аллелей по полиморфизмам G1691A гена FV и G20210A гена FII значимых отличий не найдено.

По результатам нашего исследования гестоз достоверно ассоциировал с мутацией 677Т, которая представляет интерес в связи с патологическими состояниями, ведущими к накоплению гомоцистеина в организме и повреждению эндотелия сосудов. Ряд исследований показали, что носительство аллелей 677T и 1298С предрасполагает к развитию умеренной гипергомоцистеинемии и повышению риска развития многих распространенных заболеваний, особенно на фоне снижения фолатного статуса [4]. Результаты современных работ по выявлению ассоциации полиморфизмов С677Т и А1298С гена MTHFR с нарушением физиологического течения беременности весьма противоречивы. Обнаружено, что в два раза чаще мутация С677Т присутствует в группе женщин с гесто-зом, при этом гомозиготная форма ТТ встречается в 4 раза чаще, чем в контроле. Имеется выраженная тенденция к прямой зависимости частоты встречаемости маркера С677Т от тяжести гестоза [5]. Наиболее часто он встречается при тяжелых формах гестоза (77,8%) и по-

Сибирский медицинский журнал, 2010, Том 25, № 4, Выпуск 2

вторном гестозе (86,7%). У женщин с генотипом 677ТТ гена МТНБИ достоверно повышен риск развития гестоза тяжелой степени при последующих беременностях (53,8%) [6]. Тем не менее, исследования, проведенные в шотландской, чешской, бразильской и чилийской популяциях, не выявили ассоциации аллеля Т с преэклампси-ей (ПЭ) [7, 11, 13, 14]. Недавняя работа австралийских ученых также не подтвердила значения наследственной тромбофилии в патогенезе данной патологии [10]. В исследовании Ба1шаг С. и соавт. показано отсутствие ассоциации отдельных с преэклампсией, но было идентифицировано совместное влияние на развитие ПЭ полиморфизмов генов МТНБИ, БЫ, FV и РА1-1 [7]. Роль комбинации генетически обусловленных факторов тромбо-филии на развитие осложненного течения беременности была также продемонстрирована в работе Vefring Н. и соавт. - при сочетании гомозиготных вариантов 677ТТ гена МТНга и 1691АА гена FV наблюдалось пятикратное повышение риска ПЭ, в то время как носительство генотипа 677ТТ увеличивало риск данной патологии только в два раза [15]. В данном исследовании также была показана ассоциация полиморфизма -675 40/50 гена РА1-1, являющегося одним из важнейших генов плазменного звена гемостаза. Аналогичные данные были получены также в работе японских [16], немецких [9] и отечественных авторов [2]. Протеин РА1-1 регулирует тканевый/уро-киназный активаторы плазминогена. Носительство аллеля 40 приводит к повышенной экспрессии гена и увеличенному уровню РА1-1 в крови, снижению активности тром-болитической системы и возрастанию риска тромбооб-разования [8]. Показано, что гомозиготная мутация 40/ 40 полиморфизма -675 40/50 является фактором риска для развития тромбозов и инфаркта миокарда [12].

Результаты проведенного исследования позволяют с большой долей вероятности предположить, что аллельные варианты 677Т и 1298С гена МТНБИ и 40/50-полиморфизм гена РА1-1 вносят значительный вклад в развитие гестоза и могут быть учтены при выборе эффективной профилактической тактики ведения пациента.

Работа выполнена при финансовой поддержке РФФИ (грант № 09-04-99028-р_офи).

Литература

1. Акушерство / под ред. Г. М. Савельевой. - М. : Медицина, 2000. - 816 с.

2. Генетический паспорт - основа индивидуальной и предиктивной медицины / под ред. В.С. Баранова. - СПб. : Изд. Н-Л., 2009. - 528 с.

3. Беспалова О.Н. Генетика невынашивания беременности // Журн. акуш. и жен. бол. - 2007. - Т. Ш, № 1. - С. 81-95.

4. Родионов Р.Н., Лентц С.Р. Современные представления о

гипергомоцистеинемии как факторе риска сердечно-сосудистых заболеваний // Артериальная гипертензия. - 2008.

- Т. 14, № 1. - С. 110-115.

5. Спиридонова М.Г., Трифонова Е.А., Фадюшина С.В. и др. Молекулярно-генетический анализ полиморфных маркеров генов метилентетрагидрофолат-редуктазы, эндотелиальной синтазы окиси азота и ангиотензинпревращающе-го фермента у женщин с осложненным протеканием беременности // Сиб. мед. журн. [Томск]. - 2006. - № 4. - С. 2125.

6. Доброхотова Ю.Э., Сухих Г.Т., Джобава Э.М. и др. Гиперго-моцистеинемия и фолиевая кислота при невынашивании беременности // Рос. вестник акушера-гинеколога. - 2007.

- № 5. - С. 8-11.

7. Dalmaz C.A., Santos K.G., Botton M.R. et al. Relationship between polymorphisms in thrombophilic genes and preeclampsia in a Brazilian population // Blood Cells, Molecules and Diseases. -

2006. - No. 37. - P. 107-110.

8. Dawson S.J., Wiman B., Hamsten A. et al. The two allele sequences of a common polymorphism in the promoter of the plasminogen activator inhibitor-1 (PAI-1) gene respond differently to interleukin-1 in HepG2 cells // J. Biol. Chem. -1993. - Vol. 25, No. 268 (15). - P 10739-10745.

9. Gerhardt A., Goecke T.W., Beckmann M.W. et al. The G20210A prothrombin-gene mutation and the plasminogen activator inhibitor (PAI-1) 5G/5G genotype are associated with early onset of severe preeclampsia // J. Thromb. Haemost. - 2005. - Vol. 3.

- P. 686-691.

10. Gibson C.S., MacLennan A.H., Janssen N.G. et al. Associations between fetal inherited thrombophilia and adverse pregnancy outcomes // Am. J. Obstet. Gynecol. - 2006. - Vol. 194, No. 4. -P. 947-957.

11. Goddard A.B., Tromp G., Romero R. et al. Candidate-Gene Association Study of Mothers with Pre-Eclampsia, and Their Infants, Analyzing 775 SNPs in 190 Genes // Hum. Hered. -

2007. - Vol. 63. - P 1-16.

12. Lu Y., Wang M., Liu Z. et al. No association between the promoter polymorphisms of PAI-1 gene and sporadic Alzheimer’s disease in Chinese Han population // Neuroscience Letters. - 2009. -Vol. 455. - P. 97-100.

13. Morrison E.R., Miedzybrodzka Z.H., Campbell D.M. et al. Prothrombotic genotypes are not associated with pre-eclampsia and gestational hypertension: results from a large population-based study and systematic review // Thromb. Haemost. - 2002.

- Vol. 87, No. 5. - P. 777-778.

14. Prochazka M., Krcova V., Kudela M. et al. Occurrence of gene mutations in factor V Leiden, prothrombin and methylenetetrahydrofolate reductase in patients with preeclampsia // Ceska Gynekol. - 2003. - Vol. 68, No. 3. -P. 162-166.

15. Vefring H., Lie R.T., Degard R. et al. Maternal and fetal variants of genetic thrombophilias and the risk of preeclampsia // Epidemiology. - 2004. - Vol. 15, No. 3. - P. 317-322.

16. Yamada N., Arinami T., Yamakawa-Kobayashi K. et al. The 4G/ 5G polymorphism of the plasminogen activator inhibitor-1 gene is associated with severe preeclampsia // J. Hum. Genet. - 2000.

- Vol. 45, No. 3. - P. 138-141.

Поступила 10.06.2010