КРИОГЕННАЯ КОНСЕРВАЦИЯ ГЕПАТОЦИТОВ

1. Способ подготовки клеток печени для криогенной консервации, содержащий стадии:
(а) подготовки матрицы,
(b) подготовки изолированных клеток печени,
3
-2
(с) высевания клеток печени на матрицу с плотностью от 2 до 4·10 мм,
(d) оставления в покое покрытой клетками матрицы в течение 10-180 мин, так что клетки могут прилипать к матрице,
(е) смывания не прилипших клеток с покрытой клетками матрицы,
(f) оставления в покое покрытой клетками матрицы в течение максимально 180 мин, и
(g) замораживания покрытой клетками матрицы в среде замораживания.
2. Способ по п.1, при этом матрица является коллагеновой матрицей.
3. Способ по п.1, при этом оставление в покое в стадии (d) происходит в течение 30-90 мин.
4. Способ по п.1, при этом в стадии (е) покрывают слоем культуральной среды, а затем откачивают жидкий остаток над покрытой клетками матрицей.
5. Способ по п.1, при этом оставление в покое в стадии (f) происходит в течение 30-180 мин.
-2
6. Способ по п.1, при этом в стадии (g) добавляют среду замораживания в количестве 0,5 мкл мм.
7. Способ по п.6, при этом среда замораживания содержит фетальную телячью сыворотку (FCS) и DMSO.
-1
8. Способ по п.1, при этом в стадии (g) замораживание происходит за счет покрытия покрытой клетками матрицы слоем среды замораживания и контролируемого охлаждения до -80°С или ниже со скоростью охлаждения от 0,5 до 20°С мин, при необходимости с компенсацией фазового перехода.
9. Способ хранения и рекультивирования изолированных клеток печени, содержащий стадии:
(а)-(g) способа по любому из пп.1-8,
(h) хранения замороженной, покрытой клетками матрицы,
(i) размораживания замороженной, покрытой клетками матрицы,
(j) смывания не прилипших клеток с покрытой клетками матрицы,
(k) покрывания размороженной, покрытой клетками матрицы слоем второй матрицы, и
(l) рекультивирования заделанных между матрицами клеток.
10. Способ по п.9, при этом хранение в стадии (h) происходит при температуре -150°С.
11. Способ по п.9, при этом в стадии (i) покрытую клетками матрицу покрывают слоем теплой культуральной среды.
12. Способ по п.9, при этом в стадии (j) покрытую клетками матрицу покрывают слоем теплой культуральной среды, а затем откачивают жидкий остаток над покрытой клетками матрицей.
13. Способ получения сэндвичной культуры изолированных клеток печени, содержащий стадии (а)-(l) способа по любому из пп.9-12.
14. Способ по п.13, при этом стадия (а) содержит стадии:
(а1) подготовки ткани печени из животного или человеческого организма и
(а2) изолирования клеток печени из ткани.
15. Сэндвичная культура клеток печени, получаемая с помощью способа по любому из п.13 или 14.