Патогенез и диагностика иммунопатологических состояний

Медицинская иммунология 2000, Т. 2, №2 © 2000, СПб РО РААКИ

ПАТОГЕНЕЗ И ДИАГНОСТИКА ИММУНОПАТОЛОГИЧЕСКИХ СОСТОЯНИЙ

Иммунологические предпосылки применения метода аутогемоиммунохимиотерапии в лечении онкологических больных

Айрапетов К.Г., Златник Е.Ю., Верховцева А.И., Закора Г.И.

Научно-исследовательский онкологический институт, Ростов-на-Дону, Россия

В настоящее время не вызывает сомнений роль им-мунодефицитных состояний в патогенезе опухолевой болезни, так же как и необходимость коррекции изменений в иммунной системе при опухолевом росте. В связи с этим, большой интерес представляют методы аутоклеточной иммунокоррекции, в основе которых лежат принципы адоптивной иммунотерапии.

Цель. В нашей работе изучалось влияние in vitro рекомбинантного интерферона a2b - ИНТРОНА-А при инкубации с аутокровью на функциональную активность лимфоцитов онкобольных.

Методы. Аутокровь больных в объеме 10 мл инкубировали с ИНТРОНОМ-А в концентрациях 1,5, 0,15, 0,03 и 0,015 млн МЕ при 37°С в течение 45 мин, затем в опытных и контрольных (без ИНТРОНА-А) пробах определяли функциональную активность лимфоцитов в РБТЛ с КонА, ФГА и ЛПС, цитотоксическую активность лимфоцитов в цито-токсическом тесте с культурой К-562, а также содержание лимфоцитов, экспрессирующих маркер CD16+.

Результаты. Инкубация крови с ИНТРОНОМ-А приводит к повышению спонтанной и митогениндуци-рованной трансформации лимфоцитов в РБТЛ, особенно в реакциях с ФГА, что указывает на активацию Т-клеточного звена. Митогенный эффект ИНТРОНА-А оказался дозозависимым. Активация РБТЛ наблюдалась с максимальными и минимальными дозами препарата. Изучение цитотоксической активности лимфоцитов демонстрирует увеличение ЦИ при инкубации с максимальными и минимальными дозами ИНТРОНА-А в сравнении с фоновой цитотоксичностью. Исследование содержания CD16+ лимфоцитов не выявило каких-либо отличий в контрольной и опытной пробах.

Выводы. Таким образом, полученные в нашей работе данные дают основание для применения ИНТРО-НА-А после инкубации с аутокровью онкобольных в курсе аутогемохимиотерапии и позволяют оптимизировать его дозы с целью стимуляции функциональной активности лимфоцитов.

Антигенные латексы из окрашенных микросфер полистерола в диагностике менингококковой инфекции и брюшнотифозного носительства

Аллилуев А.П., Котельникова О.В.,

Королева И.С., Сапунова О.О., Архипова В.С.

Институт биоорганической химии

им. М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН,

Москва, Россия; НИИ общей и клинической патологии РУДН, Москва, Россия

Многочисленные исследования показали, что выявление антител (АТ) с помощью различных тест-систем является дополнительным приемом, позволяющим наряду с микробиологическими методами, подтверждать этиологию менингококковой инфекции (МИ). Известно также, что хроническое носительство возбудителя брюшнотифозной инфекции приводит к индукции и постоянной персистенции в сыворотках носителей высоких титров ВИ-АТ. Необходимо раннее обнаружение ВИ-АТ в сыворотках у людей, работающих в пищеблоках и других местах, связанных с обслуживанием населения и являющихся источниками вспышек брюшного тифа. Для этого требуются легко воспроизводимые прогностические экспресс-методы, позволяющие сузить круг лиц, подлежащих тщательному бактериологическому обследованию.

Целью работы явилась разработка простых диагностических тест-систем для выявления серогрупповых менингококковых антител и антител к капсульному брюшнотифозному ВИ-антигену.

В качестве диагностикума использовали полисти-роловые микросферы. При изготовлении тест-систем для диагностики МИ микросферы сенсибилизировали очищенными капсульными полисахаридами менинго-кокковых серогрупп А, В и С. В тест-системе для диагностики брюшнотифозного носительства в качестве сенсибилизирующего агента использовали высокоочи-щенный брюшнотифозный ВИ-антиген, выделенный по модифицированному этанол-солевому методу.

Показано, что в сыворотках больных с диагнозом МИ начиная со второй недели болезни у 90-96% обследованных больных обнаруживаются серогрупповые АТ. Диагностические титры АТ в случаях, обусловленных возбудителями серогруппы А составляют 1:128, серогруппы В - 1:64, серогруппы С - 1:32. Обнаружение указанных титров менингококковых АТ в группах

больных МИ с неустановленной этиологией, позволяет уточнить этиологию возбудителя инфекции у высокого процента обследованных лиц.

При скрининговых исследованиях с помощью реакции латексной агглютинации (РЛА) сывороток людей -работников пищевых предприятий целесообразно при выявлении циркулирующих ВИ-АТ, установить их устойчивость к меркапроэтанолу, характерную для хронического носительства брюшнотифозного микроба.

Заключение. Диагностические тест-системы на основе полистироловых латексов, сенсибилизированных капсульными серогрупповыми полисахаридами менингококков и очищенным брюшнотифозным антигеном, являются простыми и легковоспроизводимыми методами для постановки дополнительной серологической диагностики МИ и брюшнотифозного носительства.

Характеристика популяционного состава и активации лимфоцитов менструальной крови у женщин с эндометриозом матки

Анциферова Ю.С., Сотникова Н.Ю.,

Соловьева Т.А., Букина Е.А.

Научно-исследовательский институт материнства и детства им. В.Н. Городкова, Иваново, Россия

Эндометриоз матки является одним из наиболее распространенных заболеваний женщин репродуктивного возраста. До настоящего времени остаются спорными вопросы патогенеза данной патологии, что обуславливает растущий интерес исследователей к изменениям иммунного статуса при данной патологии. В последние годы особое значение отводится возможной роли нарушений локальных иммунных механизмов в развитии эндометриоза. Учитывая особенности кровоснабжения миометрия и эндометриоидных гетеротопий, состояние лимфоидных клеток менструальной крови может непосредственно отражать фенотипический профиль лимфоцитов эндометриоидного очага.

Цель работы. Установить особенности популяционного состава и активации лимфоидных клеток менструальной крови женщин с эндометриозом матки.

Материалы и методы. Всего обследовано 25 женщин с эндометриозом матки и 22 практически здоровые женщины (контрольная группа). Забор менструальной крови осуществляли в 1 день менструального цикла. Исследование экспрессии поверхностных маркеров клетки проводили методом одно- и двухцветной проточной цитофлюориметрии на приборе FACScan фирмы “Becton Dickinson” с использование моноклональных антител фирмы “МедБиоСпектр”.

Результаты. Нами установлено, что в менструальной крови женщин с эндометриозом матки значительно возрастал уровень CD4+, CD16+, CD3-/16+ клеток по сравнению с показателями контрольной группы. При эндо-метриозе матки в менструальной крови резко снижалось

общее количество СО 11Ь+ лимфоцитов. Анализ параметров активации показал, что при эндометриозе матки было повышено содержание СО4+ лимфоцитов, экспрессирующих СО71 молекулы. Параллельно в лимфоцитарном гейте увеличивалось количество HLA-DR позитивных клеток, тогда как экспрессия HLA-DQ АГ значительно снижалась. Следует отметить достоверное уменьшение количества СО95+ клеток в обшей популяции лимфоцитов (СО45+СО14-) и в субпопуляциях СО4+, СО8+ клеток менструальной крови у женщин с эндометриозом матки по сравнению с аналогичными параметрами здоровых женщин.

Заключение. Таким образом, у женщин, страдающих эндометриозом матки, в менструальной крови наблюдается усиление активации лимфоцитов на фоне увеличения содержания клеток с естественной киллер-ной активностью. При этом дисбаланс в экспрессии молекул ГКГС II класса с одновременным снижением экспрессии молекул адгезии позволяет предполагать нарушение процессов межклеточной кооперации и презентации АГ иммунокомпетентными клетками эндо-метриоидных очагов. Снижение готовности лимфоцитов менструальной крови к апоптозу на фоне усиления их готовности к пролиферации может свидетельствовать о том, что при эндометриозе матки нарушен контроль над процессами негативной селекции активированных клеток. Все это вместе может являться основой предположения о роли нарушений механизмов локальной иммунорегуляции в развитии эндометрио-идных очагов миометрия.

Эндогенная интоксикация и вторичный иммунодефицит при шокогенной механической травме

Арискина О.Б., Ассур М.В., Кладухина Н.А., Логинова М.П., Осипова И.В., Пивоварова Л.П.

Санкт-Петербургский НИИ скорой помощи им. И.И. Джанелидзе

Травматический эндотоксикоз является одним из патогенетических факторов шокогенной травмы и определяется тяжестью механического повреждения тканей, степенью нарушения микроциркуляции в тканях и гипоксии в результате кровопотери. Острая массивная антигенемия, сопровождающаяся каскадной активацией протеолитических ферментов и медиаторной бурей, наблюдается уже во время шока и способствует развитию токсикоза.

Цель исследования - определить значение реакций иммунитета в развитии эндогенной интоксикации при шокогенной травме.

Обследовано 298 больных с травматическим шоком. Иммунный статус пострадавших исследовали общепринятыми методами (фенотипирование мононуклеаров с помощью непрямой иммунофлюоресценции, хемилюми-несценция, иммуноферментный анализ и др.). Выражен-

ность эндогенной интоксикации оценивали по содержанию молекул средней массы, лейкоцитарному индексу интоксикации и по уровню креатинина в крови. Анализ изменения функциональной активности клеток иммунной системы, признаков эндогенной интоксикации и динамики их формирования свидетельствует о постоянной взаимообусловленности этих патофизиологических проявлений шока и посттравматического периода. Во время шока мы наблюдали преобладание провоспалительной активности моноцитов и нейтрофильных гранулоцитов (увеличение концентрации ИЛ-10, ФНОа в сыворотке крови, усиление спонтанной миграции лейкоцитов и хемо-кинеза, хемилюминесценции крови, секреторной активности моноцитов и ПМЯЛ) на фоне выраженного снижения числа Т-лимфоцитов и антигенпрезентирующих мо-нонуклеаров. Степень выявляемого дисбаланса иммунных реакций и эндотоксикоза определялась тяжестью травмы и шока, а также предшествующим травме состоянием иммунитета у пострадавших. Наиболее информативными иммунологическими критериями степени выраженности посттравматической эндогенной интоксикации, позволяющими также прогнозировать ее развитие, явились: число мононуклеаров, экспрессирующих молекулы HLA-I, HLA-DR, СО4 и СО8, миграционная активность лейкоцитов, хемилюминесценция моноцитов крови и концентрация ФНОа в сыворотке крови. Величины этих показателей одновременно коррелировали как с тяжестью механических повреждений, так и с числом гнойных осложнений после травмы у пострадавших, перенесших травматический шок. Таким образом, раннее применение целенаправленной иммунокоррекции можно рассматривать одновременно как компонент дезинтоксика-ционной терапии. Наш опыт целенаправленного использования модуляторов активности Т-лимфоцитов, моноцитов и нейтрофильных гранулоцитов в первые дни после травмы подтвердил возможность предупреждения или ограничения проявлений интоксикации и гнойных осложнений. В критических для пациентов ситуациях, обусловленных тяжелым гнойным процессом или сепсисом, внутривенные инфузии ронколейкина и неовира в течение нескольких часов значительно снижали уровень эндотоксикоза и улучшали самочувствие больных.

Показатели общего анализа крови как отражение системного иммунитета у больных остропрогрессирующим туберкулезом легких

Баласанянц Г.С.

Кафедра фтизиатрии медицинской академии последипломного образования,

Санкт-Петербург, Россия

Остропрогрессирующий туберкулез легких характеризуется значительными нарушениями различных звеньев иммунной системы. Идентификация этих нарушений достаточно сложна, в первую очередь, вследствие

невозможности проведения развернутых иммунологических исследований из-за их дороговизны. В то же время, общий анализ крови, доступный любой лаборатории, позволяет оценить состояние иммунной системы при ОПТЛ.

Целью исследования явилось изучение показателей общего анализа крови у 315 больных ОПТЛ: 60 - казеоз-ной пневмонией (КП), 104 - с остропрогрессирующим течением диссеминированного (ДТ) и 151 - инфильтра-тивного туберкулеза легких (ИТ). Показатели оценивали как в относительных, так и в абсолютном величинах.

Клиническая картина ОПТЛ независимо от формы характеризовалась тяжелым состоянием с ярко выраженным интоксикационным синдромом, многочисленными респираторными нарушениями вплоть до дыхательной недостаточности. У всех больных отмечали обильное бактериовыделение. При рентгенологическом обследовании был документирован полисегментарный, полиде-структивный процесс с преобладанием экссудативно-ка-зеозного и казеозного типа воспалительных реакций.

Анализ полученных данных показал, общая тенденция в изменении анализа крови до начала лечения у больных ОПТЛ характеризуется лимфопенией, палочкоядерным сдвигом и моноцитозом по относительным показателям. У больных КП эти изменения выявляются среди всех больных и являются наиболее выраженными. Особенностью больных ДТ можно считать незначительное повышение уровня палочкоядерных нейтрофилов. Больные ИТ сохраняют тенденции, присущие ОПТЛ, но с меньшей напряженностью. Исследование абсолютных показателей иммунокомпетентных клеток, традиционное для изучения содержания лимфоцитов, обнаруживает, что у больных ОПТЛ, независимо от формы, определяют абсолютный уровень лимфоцитов в пределах или немного ниже нормы. В этой связи представляется сомнительной оценка иммунодефицита по абсолютному количеству лимфоцитов. Другие же компоненты (палочкоядерные нейтрофилы и моноциты) обнаруживают однонаправленность изменений как при абсолютном так и при относительном подсчете. Динамическое исследование показывает, что, чем тяжелее пациент, чем хуже прогноз тем, глубже вышеуказанные изменения. Наибольшие сдвиги отмечены у больных КП, в значительно меньшем объеме -изменения при ИТ.

Показатели общего анализа крови указывают на те патофизиологические особенности, которые определяют течение туберкулеза по остро прогрессирующему варианту. Высокое содержание нейтрофилов определяет развитие экссудативно-деструктивного процесса при ОПТЛ. Кроме того, этот показатель, возможно, косвенно указывает на состояние неспецифической флоры у больных ОПТЛ Лимфопения отражает степень истощения основы иммунитета при туберкулезе - лимфоцитарного звена. Моноцитоз при одновременной значительной популяции МБТ, по всей видимости, может быть обусловлен как напряжением, так и несовершенством механизмов фагоцитоза.

Уровень интерлейкина-8 у больных системной красной волчанкой

Батян Г.М., Зафранская М.М.

Белорусский институт

усовершенствования врачей, г. Минск, Беларусь

Поскольку все цитокины, взаимодействуя между собой, образуют единую рабочую сеть, то ослабление или усиление продукции отдельных цитокинов, обладающих плейотропными свойствами, приводит к дисбалансу цитокиновой сети, что может служить важной предпосылкой для развития аутоиммунных заболеваний.

Материалом исследования послужила периферическая и сыворотка больных детей, находящихся на стационарном лечении в течении мая-сентября 1998 года в кардиоревматологическом отделении Минской областной детской клинической больницы. Обследовано 11 детей с диагнозом системная красная волчанка (СКВ) и 12 здоровых детей в качестве контрольной группы.

Иммунологическое исследование включало исследование спонтанной и индуцированной митоге-нами продукции интерлейкина-8 (ИЛ-8) мононук-леарными клетками периферической крови. Для индукции ИЛ-8 применяли пирогенал в концентрации 1,25 мкг/мл. Для определения концентрации ИЛ-8 в полученных супернатантах и сыворотках крови обследованных детей использовался иммунофер-ментный метод. Определение проводилось на поли-стироловых планшетах фирмы “Costar” с сорбированными афинно-очищенными антителами к ИЛ-8 человека (НИИ Особо чистых биопрепаратов, г. Санкт-Петербург).

Анализ полученных результатов продукции ИЛ-8, являющегося мощным индуктором воспалительной реакции и вызывающего миграцию нейтрофилов в очаг воспаления, выявил различия изучаемых параметров у здоровых и больных детей. По предварительным данным установлено увеличение концентрации ИЛ-8, продуцируемого мононуклеарами под действием липополисахарида у детей с СКВ (р<<0,05) (табл.). Причем, спонтанная продукция ИЛ-8 как у больных, так и у здоровых детей обнаруживалась в 100% случаев.

Установлены достоверные изменения как в спонтанной, так и индуцированной продукции ИЛ-8.

Отмечается достоверное увеличение спонтанной продукции ИЛ-8 у детей, имеющих III степень активности патологического процесса. Аналогичная картина наблюдается и при индукции ИЛ-8 в культуре клеток пирогеналом. Полученные на данном этапе результаты позволяют рассматривать ИЛ-8 как один из существенных факторов в развитии воспаления при аутоиммунном процессе.

Таблица. ПРОДУКЦИЯ ИЛ-8 МОНОНУКЛЕАРАМИ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ ДЕТЕЙ С СКВ В ЗАВИСИМОСТИ ОТ СТЕПЕНИ АКТИВНОСТИ ПАТОЛОГИЧЕСКОГО ПРОЦЕССА

Ст патол( зпень активности )гического процесса Контрольная группа

I II III

ИЛ-8 сп. (пг/мл) ИЛ-8 инд. (пг/мл) 1003,3+397,8 2066,0+648,7 2368,0+461,5 3800,0+721,0 2520,0+513,1 ** 5140,0+799,8 ** 1543,0+501,7 1720,0+496,0

Примечание: ИЛ-8 сп. - спонтанная продукция ИЛ-8; ИЛ-8 инд. - индуцированная продукция; **- р<0,05.

Информативность некоторых лейкоцитарных индексов в оценке развития послеоперационных воспалительных осложнений

Бердюгина О.В., Базарный В.В.*

Государственное федеральное учреждение науки Уральский НИИ травматологии и ортопедии, *Уральская государственная медицинская академия, Екатеринбург

К настоящему моменту использование некоторых общепринятых лабораторных тестов (СОЭ, лейкоцитоз и др.) является не всегда достаточным для выявления развития воспалительных осложнений в послеоперационный период. Использование некоторых расчетных величин позволит приблизиться к решению данной задачи без привлечения дополнительных экономических ресурсов.

Целью данной работы явилось изучение информативности некоторых лейкоцитарных индексов в оценке воспалительных осложнений при имплантации эндопротеза тазобедренного сустава.

Нами проведено исследование крови 38 больных с дегенеративно-дистрофическими и посттравматичес-кими заболеваниями тазобедренного сустава. Всем пациентам был имплантирован эндопротез Biomet (Германия). Фиксацию в костномозговом канале и вертлужной впадине осуществляли с использованием костного цемента Polacos. У 31 пациента послеоперационный период протекал без осложнений, у 7 - отмечены воспалительные осложнения (послеоперационная пневмония, острый бронхит, инфекция мочевых путей и т.д).

Кровь для исследования брали до операции на 3, 10 и 30 сутки после ее проведения. По формулам производили расчет 12 лейкоцитарных индексов.

В группе с нормальным течением послеоперационного периода было отмечено значительное увеличение индекса соотношения лейкоцитов и СОЭ (ИЛ СОЭ) на

3 сутки после операции до 6,77± 0,67единиц, по срав-

нению с дооперационным значением в 2,69±0,27, тогда как в группе с воспалительными осложнениями ИЛ СОЭ увеличился на 10 сутки до 7,84±1,95, по сравнению с дооперационным значением 4,06±0,81 единиц.

Однонаправленные изменения в обеих группах показали значения общего индекса (ОИ), индекса соотношения нейтрофилов и лимфоцитов (ИСНЛ), индекса сдвига лейкоцитов (ИСЛ) и лейкоцитарного индекса (ЛИ).

Индекс соотношения нейтрофилов и моноцитов (ИСНМ) был значительно повышен на 3 сутки после операции в группе с воспалительными осложнениями и составил 30,59±9,53 по сравнению с дооперацион-ными значениями в 11,43±1,02 единиц.

В группе с нормальным течением послеоперационного периода было отмечено незначительное снижение индекса соотношения лимфоцитов и моноцитов (ИСЛМ) по сравнению с дооперационными значениями в сроки до 1 месяца, тогда как в группе с воспалительными осложнениями отмечается увеличение данного показателя на 3 сутки.

Лейкоцитарный индекс интоксикации Кальф-Кали-фа (ЛИИ) был более повышен на 3 сутки в группе с послеоперационными осложнениями.

Лимфоцитарно-гранулоцитарный индекс (ИГЛ) существенных отличий в исследуемых группах не показал.

Таким образом, в результате проведенных исследований нами выявлены наиболее информативные лейкоцитарные индексы для оценки развития послеоперационных воспалительных осложнений. К этим величинам относятся ИЛ СОЭ, ИСНМ, ИСЛМ и ЛИИ.

Маркеры воспаления в эякуляте и секрете предстательной железы у больных хроническим простатитом

Бобков Ю.А. , Галкина О.В., Горбачев А.Г., Аль-Шукри С.Х., Козлов В.В., Тотолян А.А.

Санкт-Петербургский Государственный университет им. акад. И.П.Павлова, Санкт-Петербург, Россия

Введение. Хроническим простатитом болеют 30-40% мужчин. В диагностике хронического простатита и определении активности воспаления в предстательной железе до сих пор ведущую роль играет исследование секрета предстательной железы. Реже для этого используют эякулят. Однако до сих пор нет единого мнения о том, в какой степени маркеры воспаления, определяемые в эякуляте характеризуют активность воспалительного процесса. Поэтому основной целью исследования было определить степень взаимосвязи между показателями, характеризующими активность воспалительного процесса (интерлейкин-8, лейкоциты) в секрете предстательной железы и эякуляте.

Материалы и методы. Обследовано 40 больных хроническим простатитом в возрасте от 18 до 61 года. Всем больным выполнена трехстаканная проба мочи, проведены макро- и микроскопические иссследования

секрета предстательной железы и эякулята. С помощью иммуноферментных тест-систем была определена концентрация интерлейкина-8 в секрете предстательной железы и в эякуляте.

Основные результаты. Концентрации интерлейкина-8 характеризуются высокой вариабельностью как в эякуляте (С=126%), так и в секрете предстательной железы (С=142%), и поэтому для оценки содержания интерлейкина-8 в этих биологических жидкостях необходимо пользоваться непараметрическими методами статистического анализа.

Концентрация интерлейкина-8 в секрете предстательной железы (среднее геометрическая, М=722,9 пкг/ мл; разброс значений от 53 до 9714 пкг/мл) не отличалась от содержания интерлейкина-8 в эякуляте (М=2357 пкг/мл; разброс значений от 40 до 2800 пкг/мл) ^=1,00; р>0,10). Корреляционная зависимость между уровнем интерлейкина-8 в секрете предстательной железы и семенной жидкости отсутствовала (г=0,19; р>0,10).

Необходимо отметить, что не было выявлено связи между концентрацией лейкоцитов в третьей порции мочи при проведении трехстаканной пробы и количеством лейкоцитов в секрете предстательной железы (г=0,06; р>0,10), концентрацией лейкоцитов в третьей порции мочи и количеством лейкоцитов в эякуляте (г=0,001; р>0,10), количеством лейкоцитов в секрете предстательной железы и эякуляте (г=0,06; р>0,10). При этом количество лейкоцитов в секрете предстательной железы и в эякуляте у больных хроническим простатитом по средним значениям достоверно не отличалось друг от друга ^=0.42; р>0,10).

Заключение. Несмотря на то, что маркеры воспаления (интерлейкин-8, лейкоциты) не отличаются по средним величинам в эякуляте и секрете предстательной железы, их содержание в данных биологических жидкостях не коррелирует между собой, и поэтому заключение об активности воспалительного процесса необходимо делать после исследования эякулята и секрета простаты.

Сравнительное изучение некоторых параметров апоптоза гранулоцитов у больных атопическими заболеваниями

Бойчук С.В., Мустафин И.Г.,

Фассахов Р.С., Романенко О.М.

Казанский государственный медицинский Университет, Казанская государственная медицинская Академия,Республиканский центр по борьбе и профилактике СПИД М3 РТ,

Казань, Россия

Известно, что апоптоз клеток-эффекторов, участвующих в аллергических реакциях атопического типа, оказывает влияние на их течение. В связи с этим, целью исследования явилось изучение некоторых механизмов апоптоза эозинофилов (Эф) и нейтрофилов (Нф) периферической крови больных атопией.

Гранулоциты выделяли на многоступенчатом градиенте плотности перколла и инкубировали в среде RPMI. В качестве маркеров апоптоза исследовали изменение митохондриального потенциала (МП) и фрагментацию ДНК, оцениваемые с помощью флюорохро-мов CMX-Ros и пропидия йодида (PI) соответственно. Оценку вышеуказанных изменений проводили на проточном цитофлуориметре FACScan. В качестве индуктора апоптоза использовали дексаметазон (DEX) в концентрации 10-6М. Оценку изменений проводили через

0, 3, 6, 9, 24 и 48 часов инкубации.

Было выявлено, что гранулоциты крови имеют различную величину МП. Эф и Нф подразделяются на три и две фракции клеток соответственно, отличающихся по параметрам прямого и бокового рассеивания, коррелирующих с величиной МП. У Нф уменьшение МП наблюдалось после 9 часов инкубации, а у Эф - спустя 6 часов, и имело тенденцию к дальнейшему уменьшению с течением времени. Инкубация клеток с DEX приводила к разнонаправленному эффекту. При инкубации Нф с DEX их МП был достоверно выше на 9, 24, 48 часах инкубации по сравнению с контролем, а у Эф данный показатель достоверно не изменялся.

Фрагментация ДНК наблюдалась у Эф и Нф после

9 часов инкубации в среде и возрастала с течением времени. DEX способствовал фрагментации ДНК у Эф, и препятствовал фрагментации ДНК у Нф.

Таким образом, изменение МП у гранулоцитов больных атопическими заболеваниями предшествует фрагментации ДНК. Однако, только у Нф фрагментация ДНК коррелирует с величиной их МП. Полученные данные свидетельствуют о различных механизмах запуска процессов апоптоза in vitro у двух видов гранулоцитов.

Цитокиновый ответ при бронхообструктивном синдроме у детей

Ботвиньева В.В., Романцов М.Г.,

Антонова С.С., Дмитриева М.Л.

НЦЗД-НИИ педиатрии РАМН, Москва

В результате проведенных исследований нами доказана концепция о превалирующем влиянии CD4+ хел-перов 2 типа у больных бронхиальной астмой над CD4+ хелперами 1 типа, на что указывают высокие уровни общего IgE (631 МЕ /мл при норме до 150МЕ/мл и гиперпродукция IL-4 2,92±0,4 pg/ml при норме 0,8±0,2; на фоне резкого снижения IFN у-0,19±0,08 IU/ml при норме 1,01±0,04 IU/ml, установлено что ИФНу - ингибирует формирование Th 2 клеток, а обратный эффект вызывает ИЛ-4 Th2, переключая B клетки на синтез IgE, играя ведущую роль в формировании Th2/IgE опосредованного иммунного ответа, лежащего в основе не только развития бронхиальной астмы, но и других атопических заболеваний. У 55 больных острым обструктивным синдромом определяли содержание общего IgE и IFN-y,

проведенные исследования показали, что у детей с первичным и рецидивирующим обструктивным синдромом содержание ГЬ4 выше, чем у здоровых детей (2,8 —

3,1 pg/ml при норме 0,8±0,2, при этом содержание ^Е повышено у детей обеих групп, но в большей степени при рецидивирующем обструктивном синдроме, составив соответственно 117 и 359 МЕ/мл, а уровень ШЫ-у, у детей с первичным обструктивным синдромом выше, чем у детей с рецидивирующим, соответственно 6,1±0,6 против 1,7±0,8, при норме 1,04±0,4 Ш/т1. Проведенный анализ показал тесную корреляционную связь между ^Е и ГЬ-4 (г=0,6) и обратную корреляционную зависимость между ^-4, ШЫ-у (г= - 0,5). При индивидуальном анализе установлено, что 46 детей имели высокие уровни ^-4, ^Е, что позволяет отнести этих детей к больным атопией. Таким образом, группа детей с обструктивным синдромом гетерогенна, состоит из больных с атопией и больных инфекционно-воспалительными заболеваниями; терапия их должна быть различна. Воздействуя медикаментозно на отдельные звенья иммунопатогенеза, можно добиться снижения уровней ^Е и повышения ШЫ-у, что позволит предупредить приступы бронхиальной астмы, снизить заболеваемость ОРВИ, приводящей к обострению бронхиальной астмы.

Иммуногенетические особенности ревматоидного артрита

Бубнова Л.Н., Зубарева Т.С., Куклик Л.В., Глазанова Т.В., Павлова И.Е, Беркос М.В, Семенова Е.В., Мазуров В.И.

Российский НИИ гематологии и трансфузиологии, Медицинская Академия последипломного образования, Санкт-Петербург

Ревматоидный артрит (РА) является широко распространенным аутоиммунным заболеванием среди населения Северо-Запада России. Известно, что многие аутоиммунные заболевания ассоциированы с HLA-специфичностями. Целью настоящего исследования явилось изучение особенностей полиморфизма HLA- генов DRB1, DQB1 и DQA1 у больных серопозитивным РА. HLA-типирование аллелей II класса проводили методом полимеразной цепной реакции с использованием панели сиквенс-специфических праймеров (“ДНК-технология”, Москва) у 47 больных серопозитивным РА. Группу контроля составили 110 практически здоровых лиц. Выявленные различия в распределении HLA-аллелей II класса между больными РА и группой контроля представлены в таблице.

Из приведенных данных видно, что у больных РА достоверно повышена частота встречаемости группы аллелей DRB1*04, DQB1*0501 и DQB1*0601, и снижена частота встречаемости группы аллелей DRB1*07, DQB1*0301, DQB1*0602-08 и DQA1*0103. Поскольку HLA-ассоциированная предрасположенность или резистентность к развитию заболевания определяется

i52

Таблица

НІА-аллели Частота встречаемости в группе контроля Частота встречаемости в группе больных РА Х2 RR

ни^ N=110 N=47

DRB1*04 25,5 44,7 * 7 СО Ю 2,37

DRB1*07 24,5 8,5 * 4 со ю -

ни^ N=78 N=39

DQB1*0301 37,2 12,8 7,48** -

DQB1*0501 26,9 46,2 * 3 ,3 4, -

DQB1*0601 5,1 28,2 12,39*** 7,27

DQB1*0602-08 46,2 12,8 12,69*** -

DQA1*0103 25,6 5,1 7,17** -

Примечание: *- р<0,05, ** - р<0,01, *** - р<0,001

комбинацией в генотипе конкретных аллелей DR и DQ локусов, в ходе настоящей работы был проведен сравнительный анализ распределения как отдельных аллелей, так и межлокусных сочетаний. В группе больных РА отмечено достоверное увеличение частоты встречаемости сочетания DRB1*04, DQB1*0601 аллелей (%2=10,45), что характерно только для этого аутоиммунного заболевания. В генотипе больных РА сочетание этих аллелей отмечено в 12,8% случаев и полностью отсутствовало в группе популяционного контроля. Наряду с этим, выявлена тенденция к увеличению в этой группе больных частоты встречаемости гаплотипичес-кого сочетания DRB1*04, DQB1*0302 (25,6% у больных РА по сравнению с 12,8% в контроле, %2=3,02).

Интересно отметить, что как специфичность DRB1*04, так и ее гаплотипическое сочетание со специфичностью DQB1*0302 являются также провоцирующими и в отношении развития инсулинзависимого сахарного диабета, что было показано в наших предыдущих исследованиях.

Изучение соотношения аутоиммунных и воспалительных изменений в ЦНС у детей с острыми вирусными энцефалитами

Воробьева Н.Л., Гервазиева В.Б., Идрисова Ж.Р.

НИИВС им. И.И.Мечникова РАМН

Развитие аутоиммунных реакций в ткани ЦНС при ряде вирусных энцефалитов является безусловным фактором риска увеличения числа хронических демиели-низирующих заболеваний. Однако, в каких случаях противовирусный иммунный ответ трансформируется в демиелинизирующую патологию и имеет ли значение степень непосредственного повреждения вирусом нервной ткани, при этом до конца не понятно.

Нами было обследовано 64 детей с острыми вирусными энцефалитами в возрасте от 3 до 14 лет. Из них у

16 детей диагносцирован краснушный энцефалит и у 16 детей - энцефалиты на фоне гриппа и ОРВИ, у 14 детей герпетический энцефалит и у 18 - ветряночный энцефалит. Всем детям проводилось стандартное неврологическое обследование, включающее исследование ЦСЖ, МРТ, а также исследование ряда иммунологических показателей методом ИФА в динамике (IgG и ^Е антитела (АТ) к основному белку миелина (ОБМ), уровень общего ^Е, ТНФа, ИЛ-4).

Повышенное содержание IgG АТ к ОБМ было выявлено у всех обследуемых и составило в среднем 341±87 мкг/мл. В динамике уровень этих АТ нарастал только у больных с энцефалитами на фоне гриппа и ОРВИ до 511±44 мкг/мл, и при герпетических энцефалитах до 682±32 мкг/мл. При краснушном энцефалите он оставался на одном уровне, а при ветряночном энцефалите снижался. Уровень общего ^Е был повышен при всех вирусных энцефалитах. Специфические к ОБМ ^Е АТ (1-4 классы) были выявлены у 3 детей с краснушным энцефалитом, у 12 детей с энцефалитами на фоне гриппа и ОРВИ и у 14 детей с герпетическими энцефалитами. Кроме того, в разгар заболевания у больных с энцефалитами на фоне гриппа и ОРВИ и с герпетическими энцефалитами выявляли повышенный уровень ИЛ-4 (75±21 ки/1). У детей с ветряночным и краснушным энцефалитами был высокий цитоз - до 301±56 клеток в мл, который тесно коррелировал с высоким содержанием ТНФа (118,7±20,6 ки/1) (г = +0,5). В то же время у детей с энцефалитами на фоне гриппа и ОРВИ и с герпетическими энцефалитами цитоз был незначительным -59±11 клеток в мл, а уровень ТНФа у них был значительно ниже (57,7±10,2 ки/1). Следует отметить, что по данным МРТ очаги демиелинизации были выявлены у 2 больных с краснушным энцефалитом, у 12 больных с энцефалитами на фоне гриппа и ОРВИ и у 14 детей с герпетическими энцефалитами.

Таким образом, можно предположить, что в случае вет-ряночного энцефалита имеют место сугубо воспалительные изменения в ткани мозга, при краснушном энцефалите также преобладают выраженные воспалительные изменения в ЦНС, однако не исключена возможность участия и аутоиммунных реакций. Тем не менее при этих вариантах поражения ЦНС выявленные нами изменения иммунного ответа на ОБМ, по-видимому, отражают вторичное повреждение миелина на фоне острого воспаления в ткани мозга. В случае герпетического энцефалита и энцефалита на фоне гриппа и ОРВИ, мы видим явное преобладание иммунного ответа на ОБМ на фоне менее выраженных воспалительных изменений в ЦНС. Это свидетельствует о первичном вовлечении в патологический процесс белого вещества мозга, с развитием аутоиммунных реакций, подтверждением чему служит выявление только у этих больных периваскулярной де-миелинизации на МРТ. Наличие выраженного ^Е ответа, по-видимому, обусловлено тем, что большинство вирусов при их активной репликации ндуцирует синтез IgE. В связи с этим баланс между ТЫ и ТЬ2 изменяется в сторону компенсаторного увеличения популяции ТЫ. В свою очередь пролиферация этого клона Т-лимфоцитов является тем не-

обходимым условием, при котором развертывается аутоиммунная агрессия. Полученные нами различные соотношения между воспалительными и аутоиммунными маркерами у больных с вирусными энцефалитами различной этиологии возможно отражают степень тропности различных вирусных агентов к ткани ЦНС.

Уровень простат-специфического антигена у больных с новообразованиями предстательной железы

Гайковая Л.Б., Панин А.Г., Ковыршина Л.А., Прялухин АЕ., Багько А.Б., Крапивка Н.А., Топузов М.Э.

Санкт-Петербургская государственная медицинская академия им И.И. Мечникова, Россия

Одной из важных проблем современной урологии является ранняя диагностика новообразований предстательной железы (ПЖ). Рак предстательной железы (РПЖ) в настоящее время занимает второе место среди причин смерти мужчин от злокачественных опухолей. Сложность диагностики РПЖ обусловлена тем, что на начальных стадиях заболевание имеет скудные клинические проявления и для установления диагноза требуются специальные исследования. Ранняя диагностика РПЖ включает определение уровня простат-специ-фического антигена (ПСА).

Всем больным старше 50 лет, находящимся в клинике урологии СПбГМА им И.И. Мечникова с различными заболеваниями, проводили определение уровня общего ПСА в сыворотке. Он является наиболее ценным опухолевым маркером в диагностике новообразований ПЖ. Как правило, уровень ПСА сыворотки крови не превышает 4 нг/мл, но до сих пор нет единого мнения о верхней границе нормы. Причинами повышения уровня ПСА могут быть новообразования простаты (РПЖ, доброкачественная гиперплазия предстательной железы (ДГПЖ)), воспалительный процесс в простате, ее ишемия или эякуляция накануне определения. Исследование проводилось с помощью имму-ноферментной тест-системы VEDALAB (Франция). В период с 1997 по 1999 годы было проведено 232. исследования.

Ряду больных было выполнено оперативное вмешательство (аденомэктомия, эпицистостомия с трансвезикальной биопсией ПЖ и мультифокальная промежностная биопсия) с последующим гистологическим подтверждением диагноза. Целью работы было изучение колебаний уровня ПСА у таких больных разных возрастных групп.

У 7 больных с ДГПЖ в возрасте от 51 до 60 лет- среднее значение ПСА составило 2,23 нг/мл, что не превышает нормальных значений. В группе пациентов 61-70 лет с ДГПЖ (16 человек) среднее значение ПСА было в пределах 10-11 нг/мл. У 28 больных старше 70 лет также отмечалось повышение уровня среднего значения ПСА до 11-12 нг/мл при нодулярной гиперплазия. В 3 7%

случаев у больных старше 60 лет наряду с ДГПЖ при гистологическом исследовании выявлен хронический простатит. По нашему мнению, это обусловлено сдавлением ПЖ аденоматозными узлами, хронической задержкой мочи, присоединением вторичной инфекции. У больных с подтвержденным гистологически РПЖ всех возрастных групп значение ПСА колебалось от 8,317 до 95,05, при среднем значении 38,830.

Таким образом, получена зависимость уровня ПСА от возраста и наличия воспалительных заболеваний в ПЖ у больных с ДГПЖ. Однако, по нашему мнению, следует подходить с осторожностью к интерпретации данных ПСА у больных старше 60 лет.

Цитомегаловирус, как предиктор осложненного течения атеросклеротического процесса

Гайковая Л.Б., Свегликов А.В., Осегинский П.О., Боганькова Н.А., Крапивка Н.А.

Санкт-Петербургская государственная медицинская академия им. И.И. Мечникова

По данным последних исследований особую роль в процессе развития атеросклероза играет цитомегалови-рус (ЦМВ). ЦМВИ относится к так называемым оппортунистическим инфекциям, клиническое проявление которых становится возможным лишь в условиях первичного или вторичного иммунодефицита. Исследования ин-фицированности ЦМВ и его роли в развитии послеоперационных осложнений проводились у 28 пациентов, которые подвергались реконструктивным вмешательствам на аорто-подвздошном и бедренно-подколенном сегментах. Была поставлена задача выяснить, повышается ли титр антител к ЦМВ после операций, что говорило бы об активизации цитомегаловирусной инфекции.

Возрастной состав обследованных мужчин был в пределах 45-74 лет. Первое исследование проводили за несколько дней до операции, второе - через 2 недели после её выполнения. Известно, что активизация ЦМВ может происходить в период от 7 дней до 2 месяцев после операционной травмы. Нами было установлено, что уровень IgG к ЦМВ сохраняется и в течение последующих 2 месяцев. Кроме того, доказано, что титр антител к ЦМВ не имеет значительных колебаний на протяжении от 2-х недель до 2-х месяцев. Это позволило нам исследовать плазму больных именно через 2 недели после вмешательства. Из числа обследованных антитела против ЦМВ обнаружены у 24 из 28 (86%) оперированных пациентов, при этом у 12 из 28 (43%) повышение титра составило 43% (с 8,6 до 12,3 и/ т1) по сравнению с дооперационными показателями.

Двоим больным с высоким титром IgG при ЦМВ была выполнена ампутация в ближайшем послеоперационном периоде в связи с реокклюзией оперированных сегментов; один из них погиб от сепсиса, а ещё у двоих возникло нагноение послеоперационных ран.

Хирургическое вмешательство при атеросклеротичес-

ком поражении кровеносных сосудов может являться пусковым механизмом для действия цитомегаловируса, который продуцирует IE 84 белок. Последний дезактивирует антионкоген - белок р53, который по своим биологическим функциям индуцирует остановку роста клеток в стадии G1, то есть препятствует пролиферации (E. Speir et al.,

1994). Можно предположить, что именно активация ЦМВ является основным механизмом неоинтимальной гиперплазии в области реконструированного сегмента и, как следствие, тромбоза и нарушения кровотока. Это в свою очередь требует повторного вмешательства, что опять же способствует усугублению иммунодепрессии (P.Wattre et al.,

1995). Вторым фактором, способствующим пролиферации в зоне вмешательства под влиянием ЦМВ, является супрессия продукции ИЛ-1 (S.B. Woodroffe et al., 1993).

Помимо этого, цитомегаловирусная инфекция индуцирует ранний воспалительный ответ в адвентиции (пери-васкулит) и субэндотелиального пространства (эндотелит), а также пролиферацию ГМК и интимальную гиперплазию. Т-клетки отвечают на цитомегаловирусное инфицирование пролиферацией и продукцией ИЛ-2, инфильтрируя су-бэндотелиальное пространство (W.J. Waldman et al., 1992).

По данным F.J. Nieto и соавт.(1997) имеется прямая связь между ЦМВ и нарушениями в системе гемостаза в сторону гиперкоагуляции, в частности, с такими параметрами как фактор Виллебранда, фактор VIII, белок С, антитромбин-III, и фибриноген.

Таким образом, можно с большой долей уверенности утверждать о том, что ЦМВ играет определённую роль в патогенезе атеросклероза и, вероятно, инициирует его развитие.

Количественное определение секреторного иммуноглобулина А в биологических жидкостях с помощью моноклональных антител

Галкина О.В., Грязева И.В.*, Климович В.Б.*, Самойлович М.П.*, Тотолян А.А.

Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им.акад. И.П.Павлова, *Центральный научно-исследовательский ренгенорадиологический институт М3 РФ, Санкт-Петербург, Россия

Секреторный иммуноглобулин A (sIgA) играет важную роль в защите слизистых покровов организма. Определение его концентрации в различных биологических жидкостях может помочь в постановке диагноза и оценке эффективности проводимой терапии. В нашей стране определение sIgA обычно проводилось или методом иммунодиффузии по Манчини, или турбидимет-рическим методом. Оба эти метода недостаточно специфичны и обладают низкой чувствительностью, что существенно ограничивает возможности их применения при работе с различными биологическими жидкостями.

Цель исследования состояла в испытании и адаптации к работе с различными биологическими жидкостями иммуноферментной тест-системы, разработанной в лаборатории гибридомной технологии ЦНИРРИ. Тест-система сконструирована на основе двух моноклональных антител (МКАТ): иммобилизованного на твердой фазе МКАТ против секреторного компонента и меченного пе-роксидазой МКАТ против а-цепи иммуноглобулина А. В качестве калибратора использовали препарат очищенного sIgA. В задачи работы входило определение оптимального разведения исследуемого материала и значений нормы sIgA для каждой биологической жидкости.

Было обследовано 74 практически здоровых человека. Концентрацию sIgA определяли в соответствующем биологическом материале и в полученном параллельно образце сыворотки крови. Для определения значений нормы в смывах из гайморовых пазух были обследованы пациенты, у которых ЛОР-осмотр не выявил признаков воспаления. Результаты представлены в таблице.

Наибольшая степень разведения (1:500) была использована для слюны, слезной жидкости и вагинального секрета. Именно в этом материале уровень sIgA был наибольший. Существенно меньшие значения sIgA выявлялись в бронхо-альвеолярном лаваже, смывах из гайморовых пазух, в назальном и назо-фарингеальном смывах, что связано прежде всего, со способом получения материала. Минимальный уровень sIgA был выявлен в церебро-спинальной жидкости, для которой было использовано минимальное разведение материала (1:2). Также представляет интерес возможность выявления sIgA с помощью данной тест-системы в сыворотке крови, хотя диагностическая значимость этого показателя в настоящее время дискутируется.

Таким образом, разработанная тест-система позволяет определять sIgA в большинстве биологических жидкостей организма человека. Использование разведений образцов в диапазоне 1:100-1:500 позволяет проводить анализ биологического материала, полученного в микроколичествах.

Таблица. УРОВЕНЬ йдА (М±т) В НЕКОТОРЫХ СЕКРЕТАХ И БИОЛОГИЧЕСКИХ ЖИДКОСТЯХ ПРАКТИЧЕСКИ ЗДОРОВЫХ ЛИЦ

Биологическая Количество Оптимальное Значения

жидкость образцов разведение нормы

Сыворотка крови 74 1/100 2,861+1,25

Бронхо-альвеолярный

лаваж 5 1/50 7,3±6,0

Церебро-спинальная

жидкость 10 1/2 0,02+0,014

Слюна 10 1/500 73,92+16,26

Назальный смыв 10 1/200 6,37+2,02

Назо-фарингеальный 6 1/200 2,44+2,37

смыв

Смыв из гайморовых

пазух 17 1/200 3,2+1,23

Слезная жидкость 7 1/500 76,04+17,58

Вагинальный секрет 9 1/500 85,03+27,16

Состояние иммунной системы в зависимости от возраста у часто и длительно болеющих детей, проживающих в условиях промышленного города

Гирко И.Н., Перковская А.Ф., Тарасова Е.Е., Черевко А.Н., Кильчевская Е.В.

НИИ охраны материнства и детства М3 РБ, г.Минск

На протяжении последних лет в динамике здоровья детей определяются отрицательные тенденции, которые обуславливаются нарастающими масштабами загрязнения окружающей среды.

По результатам анализа медико-демографических процессов и общей заболеваемости г. Солигорск можно охарактеризовать как зону повышенного риска для здоровья населения, особенно детского. Неблагоприятные экологические условия, наличие в атмосфере ксенобиотиков вызывают различные нарушения иммунной системы ребенка, приводя к развитию различных иммунодефицитных состояний, причем число таких детей с каждым годом растет.

Обследовано 99 детей, проживающих в г.Солигорс-ке. Дети отнесены к группе часто и длительно болеющих - средняя частота заболеваний в год составляет 8-

9 случаев с длительным затяжным течением. На момент обследования клинических проявлений заболеваний не выявлено. Дети разделены на следующие возрастные группы: I - от 1 до 3 лет, II - от 4 до 6 лет, III -старше 6 лет. Контрольная группа - здоровые дети, проживающих в экологически благополучном г.Мяделе.

У детей I группы из г.Солигорска по сравнению с контролем изменены показатели клеточного и гуморального иммунитета: достоверно снижено число CD3+-лимфоцитов относительное (35,71 ± 1,18%; 51,08 ± 0,44%; р<0,001) и абсолютное (1,74 ± 0,12х109/л; 2,02 ± 0,11х109/л; р<0,001), относительное число CD8+-лим-фоцитов достоверно выше (23,37 ± 0,92%; 18,49 ±

0,82%; р<0,001), что ведет к снижению иммунорегуля-торного индекса (1,27 ± 0,06; 1,70 ± 0,08; р<0,001). Достоверно повышено относительное и абсолютное число CD22+-лимфоцитов, уровни иммуноглобулинов не превышают таковые в контроле. У этих детей выявлено снижение содержания СЦ-компонента (99,04 ± 3,96х1012 эф. молекул/л; 116,42 ± 3,19 х1012 эф. молекул/л; р<0,001) и повышение содержания С4-компонен-та (166,14 ± 13,19 х1012 эф. молекул/л; 138,09 ± 6,31 х1012 эф. молекул/л; р<0,05) системы комплемента, а также снижение ОАА активации системы комплемента.

У детей II группы нарушения в иммунной системе касались тех же показателей, что и в I группе: достоверно снижены относительное и абсолютное числа CD3+-лим-фоцитов и повышены относительное и абсолютное числа CD8+-лимфоцитов. Кроме того, у них отмечается снижение абсолютного числа CD4+-лимфоцитов, иммуноре-гуляторный индекс достоверно снижен (1,21 ± 0,08; 1,70

± 0,084; р<0,001). В этой группе снижено содержание СЦ-компонента (96,69 ± 9,75 х1012 эф. молекул/л; 121,34 ± 2,31 х1012 эф. молекул/л; р<0,001) классического пути активации системы комплемента и общей гемолитической активности СН50 классического пути (82,41 ± 10,84 х1012 эф. молекул/л; 122,79 ± 1,88 х1012 эф. молекул/л; р<0,001) и фактора D альтернативного пути активации системы комплемента (7,23 ± 0,93 х1012 эф. молекул/л ; 10,82 ± 0,36 х1012 эф. молекул/л; р<0,001); снижен фагоцитарный показатель (60,72 ± 0,80; 68,40 ± 0,80; р<001).

Наиболее значительные изменения в системе иммунитета по сравнению с контролем были выявлены у детей III группы: снижение количества лейкоцитов (4,89 ± 0,34х109/л; 7,68 ± 0,28х 109/л; р<0,001) и абсолютного содержания лимфоцитов (2,21 + 0,16х109/л; 3,57 ±

0,15 х109/л; р<0,001), относительного (31,33 ± 1,92%; 51,72 ± 0,31%; р<0,001) и абсолютного (0,66 ± 0,05х 109/л; 1,76 ± 0,08 х109/л; р<0,001) числа CD3+ -лимфоцитов, относительного числа CD4+- лимфоцитов (23,00 ± 1,12%; 29,24 ± 0,97%; р<0,001), а количество CD8+-лимфоцитов повышено (22,37 ± 2,01%; 13,70 ± 1,45%; р<0,001), что приводит к снижению иммунорегулятор-ного индекса (1,12 ± 0,10; 1,97 ± 0,20; р<0,001). В этой возрастной группе отмечается повышение относительного количества CD22+ -лимфоцитов, при этом наблюдается повышение содержания лишь ^А (1,68 ± 0,29 г/ л; 1,06 ± 0,06г/л; р<0,05). Показатели фагоцитарной активности не отличаются от таковых в контроле, но индекс завершенности фагоцитоза у этих детей ниже 1.0. В системе комплемента: достоверно снижена общая гемолитическая активность системы комплемента СН50, содержание эффекторных молекул СЦ-компо-нента и всех показателей альтернативного пути активации системы комплемента, в то же время содержание С2-, С3- и С5-компонентов достоверно повышено.

У часто и длительно болеющих детей г. Солигорс-ка всех обследованных возрастных групп выявлены значительные нарушения системы иммунитета, затрагивающие клеточное и гуморальное звенья. Эти изменения могут быть следствием неблагоприятной экологической обстановки и усугубляться в зависимости от увеличения продолжительности проживания в данном регионе.

Состояние иммунитета у больных ревматоидным артритом и системной красной волчанкой

Глазанова Т.В., Павлова И.Е., Розанова О.Е., Семенова Е.В., Бубнова Л.Н., Мазуров В.И.

НИИ гематологии и трансфузиологии,

Медицинская Академия последипломного образования, Санкт-Петербург

Системная красная волчанка (СКВ) и ревматоидный артрит (РА) занимают значительное место среди системных аутоиммунных заболеваний. Несмотря на су-

Таблица

Группа CD3+ CD4+ CD8+ CD22+ HLA" CD16+ CD25+ CD95+

РА СКВ Норма ,4 ,2 ,3 6, 3, 1 *6 *7 6 36.1 40,9 36.2 24,5 26,4 25,1 СОГ-^_ч— осою 2 1 2 ,7 ,1 ,5 *29,8 *30,8 24,8 **32,8 **34,3 24,6 ,9 ,5 3,9 3, 2 13 *3 *3 1

щественные различия в клинических проявлениях, существуют общие патогенетические звенья развития данных заболеваний. В связи с этим нами было изучено состояние клеточного и гуморального иммунитета и способность мононуклеарных клеток к продукции ряда цитокинов у 46 больных ревматоидным артритом и 30 больных системной красной волчанкой. Пациенты с РА, преимущественно с висцеральной формой заболевания и П-Ш степенью активности, были серопозитивными по ревматоидному фактору. Группу больных СКВ составили лица с подострым или хроническим течением и активностью П-Ш степени. Нами изучено содержание следующих субпопуляций лимфоцитов периферической крови: CD3+, CD4+, CD8+, CD22+, CD16+, CD25+, CD95+ и HLA-DR+ (в стандартном лимфоцитотоксическом тесте). Уровни сывороточных иммуноглобулинов G, А и М определялись методом радиальной иммунодиффузии, а циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) разных размеров - осаждением полиэтиленгликолем с концентрацией 5 % и 7 %. Кроме того, нами определялась способность мононукле-арных клеток к спонтанной и индуцированной продукции Ш-1Р, TNFa (индукция ЛПС) и ГЬ-6 (индукция ФГА).

Результаты. В таблице представлены данные, полученные при изучении субпопуляций лимфоцитов. Из них видно, что как при РА, так и при СКВ отмечается выраженное увеличение относительного содержания СЭ3+ клеток, а также активированных клеток (CD25+ и HLA-DR+), CD16+ и клеток, экспрессирующих Fаs-ре-цептор. Кроме того, в обеих группах больных нами было выявлено возрастание уровней сывороточных иммуноглобулинов: ^А составлял 4,3 г/л, 3,9 г/л и 2,7 г/л для РА, СКВ и контрольной группы соответственно,

- 2,5 г/л, 3,1 г/л и 1,5 г/л соответственно, IgG -

20,1 г/л, 15,8 г/л и 14,5 г/л соответственно; а также -низкомолекулярных ЦИК (80, 69 и 35 усл.ед. соответственно) и среднемолекулярных ЦИК (255, 272 и 132 усл.ед., соответственно). Способность к продукции Ш-1в была значительно угнетена как при РА, так и при СКВ, спонтанная продукция составила около 50 пкг/ мл в обеих группах, индексы стимуляции (ИС) - 2,4 и 2,6, соответственно. Спонтанная продукция ТОТа была выше нормы, в среднем составляя 128 пкг/мл для РА и 296 пкг/мл для СКВ. Однако, ответ на стимуляцию ЛПС был резко снижен, ИС в обеих группах составлял не более 1,8. Спонтанная продукция ГЬ-6 была значительно повышена: 792 пкг/мл при РА и 748 пкг/мл при СКВ, тогда как способность к стимулированной продукции была также нарушена: ИС в среднем составлял 2,7 для

РА и 5,9 для СКВ. Таким образом, РА и СКВ, системные аутоиммунные заболевания, характеризуются по многим сходным изменениям клеточного и гуморального звеньев системы иммунитета: возрастанием содержания зрелых Т-лимфоцитов, активированных клеток и клеток, несущих рецепторы апоптоза, уровня основных сывороточных иммуноглобулинов и ЦИК различных размеров, а также нарушениями цитокинового профиля: угнетением продукции IL-1, возрастанием продукции TNF и, в особенности, IL-6, играющих, как известно, важную роль в развитии аутоиммунного процесса.

Развитие резистентности опухолевых клеток к лимфокин-активированным киллерным клеткам как результат их иммунной и лекарственной селекции in vitro

Гринев В.В.1, Григорович С.А.1, Потапнев М.П. 2

‘НИИ гематологии и переливания крови, 2Республиканский научно-практический центр детской онкологии и гематологии, Минск, Беларусь

Причины неэффективности противоопухолевого иммунитета у онкологических больных, а также механизмы развития устойчивости опухолевых клеток к цито-токсическим лимфоцитам до конца не установлены. По нашему предположению, резистентность опухолевой ткани к эффекторам противоопухолевого иммунитета может развиться в процессе ее клональной микроэволюции под воздействием иммунных и неиммунных факторов. Для проверки этой гипотезы нами были использованы две экспериментальные модели in vitro: 1) модель иммунной селекции опухолевых клеток В-лимфобластоидной линии IM-9, индуцированной лимфокин-активированными киллерными (ЛАК) клетками человека; 2) модель лекарственной селекции клеток линии IM-9, индукцированной этопозидом. В рамках первой модели нами получена ЛАК-резистентная сублиния опухолевых клеток IM-9/SL-15, в рамках второй - этопозид резистентная сублиния IM-9/ER. Представляет интерес, что сублиния IM-9/ER приобрела повышенную устойчивость как к этопозиду, так и цито-токсическому действию ЛАК клеток (в 2,6 и 6,4 раза соответственно).

При изучении механизмов развития устойчивости опухолевых клеток IM-9/SL-15 к ЛАК-клеткам нами установлено, что их резистентность связана с нарушением первого этапа цитотоксического процесса - этапа конъюгации. Это подтверждается снижением константы диссоциации и других параметров связывания в системе [эффектор]/[мишень], данными по анализу ингибирования “холодной мишенью” ЛАК-опосредован-ного цитолиза и изменением экспрессии на поверхности опухолевых клеток адгезивных молекул CD21,

І57

CD58 (LFA-3), CD11a/CD18 (LFA-1) CD11c/CD18 (gp150/95), но не экспрессии CD95 и внутриклеточного Bcl-2. При изучении механизмов устойчивости клеток IM-9/ER к цитолитическому действию ЛАК клеток нами выявлено, что на опухолевых клетках в процессе селекции этопозидом происходит снижение экспрессии только LFA-1, но это не сопровождается изменением параметров конъюгации опухолевых клеток с ЛАК клетками. Изменение экспрессии поверхностного CD95 и внутриклеточного Bcl-2 на клетках IM-9 и IM-9/ER нами также не обнаружено.

Таким образом, результатом иммунной и лекарственной селекции клеток В-лимфобластоидной линии IM-9 in vitro является развитие резистентности этих клеток к цитотоксическому действию ЛАК клеток. При этом иммунная селекция опухолевых клеток приводит к снижению экспрессии поверхностных адгезивных молекул и связывания с клетками-эффекторами (ЛАК-клетками) в конъюгационных тестах. Повышение устойчивости к ЛАК-клеткам лекарственно-резистентных опухолевых клеток сопровождается только снижением экспрессии LFA-1, но не других поверхностных молекул и эффективности конъюгации опухолевых и ЛАК-клеток.

Показатели иммунитета у больных с эндо- и экзогенным остеомиелитом

Давыдова Н.И., Калинина Н.М., Овденко А.Г., Калашникова А.А., Сысоев К.А.

Всероссийский центр экстренной и радиационной медицины МЧС России, Кафедра военной травматологии и ортопедии Военно-медицинской академии Санкт-Петербург, Россия

В последнее десятилетие наблюдается рост частоты гнойных осложнений послеоперационного, пост-травматического и, что особенно актуально, огнестрельного остеомиелита. Хронический характер заболевания, увеличение числа поздних рецидивов, проявление генерализации инфекции, несомненно, связаны с нарушениями в иммунной системе.

Целью настоящего исследования явилось изучение показателей иммунитета и системы естественной резистентности у пациентов с эндо- и экзогенным остеомиелитом для ранней диагностики и коррекции возникающих нарушений.

У пациентов с хроническим остеомиелитом исследовали субпопуляционный состав лимфоцитов крови с использованием моноклональных антител НТЦ Мед-БиоСпектр. Спонтанную, индуцированную продукцию интерлейкинов 1, 6, 8 и фактора некроза опухолей-аль-фа в супернатантах суточных культур клеток и содержание этих цитокинов в сыворотке определяли методом ИФА. Биоцидную способность нейтрофилов оценивали в НСТ-тесте. Спонтанную и индуцированную экспрессию молекул адгезии нейтрофилов изучали микропланшетным фотометрическим методом. При

изучении фагоцитарной активности этих клеток в качестве фагоцитируемого объекта использовали убитые нагреванием клетки дрожжей.

Исследование субпопуляционного состава лимфоцитов крови у пациентов с хроническим остеомиелитом не выявило количественного дефицита зрелых Т-лимфоцитов и их фенотипических вариантов, количество В-лимфоцитов и натуральных киллеров также не отличалось от показателей контрольной группы. Изучение функциональной активности мононуклеаров крови, а именно, способности продуцировать межклеточные медиаторы - цитокины выявило повышенную спонтанную продукцию интерлейкинов-1, 6, 8, ФНО-а. Содержание в сыворотке этих цитокинов также было повышенным. Хроническое течение остеомиелита не сопровождалось снижением индуцированной продукции ИЛ-6, ИЛ-8, ФНО-а, однако, индуцированная продукция ИЛ-1 была снижена. Также у пациентов имело место снижение спонтанной и индуцированной экспрессии молекул адгезии, биоцидной способности не только нестимулированных клеток, но функционального резерва или готовности к осуществлению завершенного фагоцитоза нейтрофилами.

Таким образом, у пациентов с хроническим остеомиелитом (эндо - и экзогеным) нарушена функция ней-трофильных гранулоцитов и активирована спонтанная продукция провоспалительных цитокинов.

Системная воспалительная реакция в иммунной адаптации здоровых новорожденных детей

Дегтярёва М.В., Володин Н.Н.,

Липагина А.А., Долгов В.В., Полякова О.В.,

Котов А.Ю., Симбирцев А.С.

Российский государственный медицинский университет, Российская Медицинская Академия Последипломного Образования, Москва, Россия; Государственный Научно-исследовательский институт особо чистых биопрепаратов, Санкт-Петербург, Россия

Актуальность. При рождении ребенка одновременно происходят разнонаправленные процессы становления адекватного иммунного ответа и поддержания иммунологической толерантности, сдерживания развития гиперергических воспалительных реакций.

Цель работы - исследовать динамику уровней про-и противовоспалительных цитокинов и белков острой фазы в циркуляции здоровых новорожденных детей в раннем периоде адаптации.

Материалы и методы. Было обследовано 94 здоровых доношенных ребенка в возрасте 1-2 и 4-7 суток жизни. Определение плазменных и сывороточных уровней ГЬ-8, ГЬ-1р, ТОТ-а, ГЬ-4 и TGF-P1 проводили методом твердофазного иммуноферментного анализа. Фенотипи-рование лимфоцитов в суспензии мононуклеарных кле-

ток осуществляли методом проточной цитофлуориметрии с использованием моноклональных антител к CD3, CD4, CD8, CD21, CD16, CD25. Исследовали динамику концентрации белков острой фазы (БОФ) в сыворотке крови: С-реактивного белка (СИР), а1-кислого гликопротеида (а1-AG), а1-антитрипсина (а1-АТ), гаптоглобина (Hpt), а2-мак-роглобулина (a2-MG), С3 и С4 компонентов комплемента иммунотурбидиметрическим методом, преальбумина (РАВ), трансферрина (TFR) и иммуноглобулинов G, М, А (IgG, IgM, IgA) - нефелометрически.

Результаты и обсуждение. Физиологический перекрест в формуле крови на первой неделе жизни проявляется резким уменьшением количества циркулирующих нейтрофилов, возрастанием доли моноцитов, эози-нофилов и перераспределением субпопуляций лимфоцитов (увеличением в циркуляции доли CD4+ лимфоцитов, уменьшением процента цитотоксических CD8+ лимфоцитов, возрастанием иммунорегуляторного индекса). Выявлено достоверное увеличение плазменных уровней ГЬ-1р и TNF-a на первой неделе жизни, что можно объяснить активацией клеток моноцитарно-мак-рофагального ряда в ответ на воздействие большого количества экзогенных антигенов. Не отмечалось увеличения концентрации ГЬ-8 в сыворотке крови здоровых доношенных новорожденных. Рост уровней !Ь-1Р и ТОТ-а на первой неделе жизни сопровождался достоверным повышением a1-AG, Нр^ С3, a2-MG и снижением IgG, ^М, РАВ, TRF. Сывороточные концентрации а1-АТ, СИР, С4 компонента комплемента и ^А в раннем периоде адаптации достоверно не изменялись. По-видимому, процесс распознавания и представления антигенов, сопровождающийся повышением секреции моноцитами провоспалительных цитокинов, вызывает усиление синтеза гепатоцитами БОФ. В ходе первичного иммунного ответа изменяется белковосинтетическая функция печени, о чём свидетельствует снижение сывороточного уровня РАВ, расходуются собственные ^М и полученные трансплацентарно IgG.

Однако в физиологических условиях не отмечается клинических признаков системного воспаления. Это обеспечивается увеличением синтеза лимфоцитами ГЬ-4 и TGF-P1. О существовании баланса про- и противовоспалительных цитокинов в раннем периоде адаптации свидетельствует наличие сильной прямой корреляционной связи между уровнями ТОТ-а и ГЬ-4 (г=0,96; р<0,001). С ростом сывороточных концентраций ГЬ-1р у здоровых новорожденных детей увеличивается количество СD3+ лимфоцитов (г=0,88; р<0,001), часть из которых являются продуцентами ГЬ-4 Р и TGF-P1, уменьшается процент цитотоксических CD8+ лимфоцитов (г=-0,8; р<0,001) и естественных киллерных клеток CD16+ (г=-0,74; р<0,001). Возрастание уровня ГЬ-4 сопровождается снижением абсолютного количества лейкоцитов, сегментоядерных нейтрофилов, моноцитов (г=-0,7; р<0,01) как клеток, запускающих и реализующих воспаление.

Выводы: в раннем периоде адаптации у здоровых новорожденных детей на фоне высокой антигенной на-

грузки отмечаются лабораторные признаки системной воспалительной реакции. В физиологических условиях это не сопровождается развитием клинической картины системного воспаления, инфекционного токсикоза и по-лиорганной недостаточности. Поддержание иммунного гомеостаза новорожденного ребенка обеспечивается комплексом механизмов обратной связи и увеличением концентраций противовоспалительных цитокинов в сыворотке крови. Баланс про- и противовоспалительных цитокинов может являться ключевым моментом, обусловливающим клиническое состояние ребенка.

Клинико-нейроиммунологические аспекты в системе “беременная -новорожденный”

Деев И.И., Тузанкина И.А.,

Грудень М.А., Закирова Л.Р.

Уральская государственная медицинская академия

Введение. Итогом изучения иммуных взаимоотношений между матерью и плодом явилось установление кардинального факта —возможности трансплацентарного дрейфа антигенов (АГ) и антител (АТ), как материнского, так и плодового происхождения с последующей сенсибилизацией и развитием иммунных реакций в обоих организмах.

Наиболее частой причиной нарушений в системе “мать-плацента-плод”являются гестозы. В крови беременной с гестозом могут появляться нейроспецифические АГ, а позже и АТ к ним, что при нарушенном плацентарном барьере может привести и к нейроиммунному конфликту между матерью и плодом с развитием нарушения морфофункциональной деятельности мозга у последнего.

Цель и задачи. Выявить возможность развития нейро-иммунных реакций в системе “беременная-новорожденный”, используя тест — определение ряда нейроспецифи-ческих белков-антигенов (НСБ) и АТ к ним в сыворотке крови беременных женщин и их новорожденных детей.

Для реализации цели были поставлены следующие задачи:

1. Определить уровни содержания НСБ и АТ к ним в сыворотке крови беременных женщин и их новорожденных детей.

2. Выяснить диагностическую ценность обнаружения НСБ и АТ к ним у беременных женщин и их детей.

Материалы и методы. Обследована основная группа из 31 женщины до начала лечения по поводу гесто-за, находящихся на стационарном лечении в отделении патологии беременных со сроком беременности 3236 недель. Контрольной группа состояла из 10 неврологически и соматически здоровых женщин с аналогичным сроком, беременность у которых протекала благополучно. Дети, родившиеся у этих женщин, также были обследованы на 1—2 сутки жизни.

В сыворотке венозной крови определялось присутствие следующих НСБ: белки группы S-100, основной белок миелина (ОБМ), пептид В-30, а также выявлялись АТ к ним и лектину R1.

Для сравнительного анализа использовали сыворотки крови, полученные от соматически и неврологически здоровых доноров.

Для оценки нарушения метаболизма клеток мозга посредством определения содержания НСБ и АТ к ним в качестве основного скринингового инструмента использовали прямой твердофазный иммуноферментный анализ (ELISA), выполняемый по общепринятой методике.

Очищенные препараты НСБ, а также моноспеци-фические АТ к ним получены в лаборатории функциональной нейрохимии НИИ НФ им. П.К. Анохина РАМН.

Содержание НСБ S-ЮОи ОБМ определяли с помощью калибровочных графиков, полученных на основании результатов ИФА стандартных растворов НСБ в концентрациях от 50 мкг/мл до 0,05 нг/мл. Оценку содержания других НСБ проводили с использованием условной единицы иммунореактивности, которая представляет собой отношение суммы отклонений величин поглащения каждого повтора данной пробы от их средней к числу повторов проб.

В качестве критерия наличия АТ использовали отношение регистрируемого параметра для исследуемой пробы (Р) к контрольной (N).

Р/N >1 свидетельствует о наличии специфических АТ, но с учетом возможных ошибок анализа и регест-рирующего прибора, мы считали пробу положительной при P/N >=2.

При выборе НСБ мы исходили из того, что S-100 локализован в астроцитах, участвует во многих интегративных процессах мозга и его появление на “периферии” является достоверным маркером неблагополучия в ЦНС; ОБМ-уникальный в нейрофизиологическом и нейроиммунологическом плане белок, обладающий энцефалитогенными субстанциями [3]; лектин R1 и пептид В-30 (фрагмент НСБ нейрогранина) участвуют в регуляции роста и дифференцировке нервных клеток, занимая позиции факторов роста в ходе нейроонтогенеза и являются триггерами в компенсаторных реакциях мозга.

Основные результаты. При исследовании сывороток крови женщин контрольной группы и их детей установлено, что исследуемые НСБ и АТ к ним диагностической концентрации не имели. В контрольной группе все женщины родили в срок, при этом их дети не имели отклонений в течении ранней неонатальной адаптации. Их состояние во время пребывания в родильном доме было удовлетворительным.

У женщин основной группы родился 31 ребенок. Роды до срока составили 13%. Во всех случаях роды протекали с осложнениями, а в 4 случаях оперативное родоразрешение. В этой группе только треть но-

ворожденных родилась в удовлетворительном состоянии, а остальные в состоянии асфиксии, причем половина с тяжелой и средней степенью тяжести; 10 детям позже был выставлен диагноз перинатального поражения ЦНС.

При анализе данных, полученных в результате проведенных исследований парных сывороток крови основной группы “беременная-новорожденный”, определились следующие факты:

1. — у женщин 1-й подгруппы (15 человек) концентрации НСБ находились в пределах нормы и АТ к ним обнаружены не были; 7 детей у этих женщин имели удовлетворительное состояние с момента рождения, и в их крови не обнаружено повышенных концентраций НСБ и АТ к ним; 7 детей имели дистресс-синдром (у

3 имела место антигенемия S-100 и ОБМ; 1 ребенок был с интранатальным поражением ЦНС (крупный плод, слабость родовой деятельности, тугое обвитие пуповиной шеи, асфиксия), в крови определялась ан-тигенемия S-100и ОБМ;

— у женщин 2-й подгруппы (5 человек) имела место НСБ-антигенемия (в 4 случаях изолированная S-100 и в 1 случае совместно с ОБМ) без наличия АТ;

4 детей у этих женщин имели дистресс-синдромом, а в крови антигенемию S-100;

— 1 ребенок имел поражение ЦНС (преждевременное оперативное родоразрешение), в его крови зарегест-рирована антигенемия S-100 и ОБМ как и у его матери;

— у женщин 3-й подгруппы (10 человек) выявлялись только АТ;

2 детей у женщин из этой подгруппы имели дистресс-синдром, а в их крови—антигенемия S-100 и ОБМ, а также выявлялись АТ к лектину И1;

8 детей с поражением ЦНС, в их крови обнаружены только АТ аналогичные материнским;

— у женщины 4-й подгруппы имел место смешанный вариант — определялись S-100, ОБМ, В-30 и выявлялись АТ к ОБМ, В-30 и И1 (женщина девиантного поведения, хронический алкоголизм); ребенок родился раньше срока (32—33 недели) в асфиксии с поражением ЦНС; в сыворотке крови картина аналогичная матери.

2. АТ к суммарным лектинам И1 выявлены в 10 парах, причем в 8 случаях — дети с поражением ЦНС и в их крови выявлялись АТ и к S-100и к ОБМ; в 2 случаях дети имели дистресс — синдром и антигенемию S-100и ОБМ, а их матери только АТ к И1;

3. АТ к пептиду В-30 имели только 2 пары, причем у этих пар обнаруживались АТ и к остальным НСБ — в обоих случаях у детей диагностировано поражение мозга: одна женщина имела грубую патологию плаценты (по УЗИ), оперативное родоразрешение, другая страдала хроническим алкоголизмом, ребенок родился с клинической картиной алкогольной фетопатии и это единственная пара, имевшая и повышенное содержание самого пептида;

4. наличие АТ у беременных женщин во всех случаях сопровождалось выявлением аналогичных АТ и у их

детей, причем без антигенемии у последних; этот факт позволяет предположить материнский характер происхождения АТ у новорожденных первых дней жизни;

5. наличие антигенемии у новорожденных без соответствующих АТ и негативная кровь матери в последние недели беременности позволяют предполагать начало повреждения мозга у плода в момент рождения, или незадолго до родов.

Заключение. Таким образом, появление в крови беременных женщин НСБ, а особенно АТ к ним, следует рассматривать как критерий неблагополучного течения беременности в целом, с одной стороны, а с другой и как вариант нейроиммунопатологического состояния, способствующего развитию церебральной патологии у их детей.

Особенности иммунокомплексного механизма регуляции содержания 1дЕ у больных атопическим дерматитом

Димиева Г.М., Гервазиева В.Б.

НИИ вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова, Москва, Россия

АД - тяжелое аллергическое заболевание, патогенез которого опосредован Т-хелперами 2 типа, пролиферация которых приводит к гиперпродукции ^Е. Уровень ^Е в крови зависит от двух основных составляющих - его синтеза, регулируемого цитокинами, и элиминации, осуществляемой посредством образования иммунных комплексов с анти-^Е антителами (анти-^Е АТ). Целью нашего исследования было выявить особенности иммунокомплексного механизма регуляции уровня ^Е у больных АД.

В результате обследования 31 взрослого и 97 детей в возрасте от 3 до 14 лет было выявлено, что повышение уровня общего ^Е в сыворотке наблюдается у 73,44% больных. Однако между степенью увеличения содержания общего в крови и степенью клинической тяжести заболевания, оцененной по шкале SCORAD, не выявлено достоверной зависимости. Принимая во внимание литературные данные о том, что часть синтезированного ^Е может находиться в иммунных комплексах с анти-^Е антителами, чаще относящимися к IgG4 подклассу, мы модифицировали метод твердофазного ИФА для выявления в сыворотке крови иммунных комплексов ^Е - IgG4 анти-^Е АТ и определения содержания ^Е в их составе. Используя данный метод мы выявили, что у 90,6% больных АД часть ^Е находится в составе иммунных комплексов ^Е - IgG4 анти-^Е АТ, тогда как в сыворотках здоровых доноров иммунные комплексы не выявлялись. Содержание ^Е в комплексах с IgG4 антителами колебалось в пределах 5 - 680 кЕ/л и прямо зависело от уровня общего ^Е в сыворотке крови больных. Анализ клинической картины АД у больных показал, что выявленное нами увеличение количества ^Е в иммунных комплексах является иммунологическим критерием тяжести клинического течения АД.

Определение клинической чувствительности серологического теста “Immunocomb” для диагностики H.pilori

Дрыгина Л.Б., Моносова Е.К.,

Кондрашин А.С., Цвилих С.М.

Всероссийский Центр экстренной и радиационной медицины МЧС России, Санкт-Петербург, Россия

За последние годы получено достаточное количество убедительных данных, указывающих на важную роль Helteobacterpylori (Нр) в этиологии и патогенезе хронического гастрита и язвенной болезни.

Диагностика инфекции, вызванной Нр, осуществляется методами, непосредственно выявляющими бактерию или продукты ее жизнедеятельности в организме больного. В тоже время для скрининговых исследований чаще всего используются методы, основанные на обнаружении специфических anti-Нр антител классов IgG и IgA в сыворотке или капиллярной крови обследуемых. Причем число серологических тестов производства различных фирм, постоянно увеличивается, что диктуется необходимостью быстрой и неинвазивной диагностики Нр.

Цель данного исследования заключалась в определении клинической чувствительности in vitro диагнос-тикума “ImmunoComb II” (Orgenics, Израиль). Особенность данной тест-системы состоит в способности выявлять сумму антител класса IgG к антигенным детерминантам, локализованным на внешнем мембранном белке (Cag A), цитотоксине (Vac A) и уреазе подмножества (Тип I) патогенных ветвей Нр.

В работе использованы сыворотка крови больных с кислотозависимыми заболеваниями желудка (n=25) и биоптаты (n=25), полученные из антрального и фундального отделов желудка стандартным способом при проведении фиброгастродуоденоскопии. Результат оценивали дважды - при поступлении больного на обследование и через 3-4 недели после завершения эрадикации.

Количественное определение IgG антител к Нр проводили методом иммуноферментного анализа с индикаторной меткой щелочной фосфатазой. Для оценки инвазии Нр использовали экспресс-тест определения уреазной активности “ХЕЛПИЛ”-тест, (Россия). Мазки-отпечатки с биопсий слизистой оболочки желудка окрашивали азур-эозином по Романовскому традиционно и оценивали морфологическим методом светооптического изучения цитологических препаратов.

Анализ полученных данных показал, что при первичном исследовании биоптатов, зарегистрировано полное совпадение результатов цитологических исследований и уреазного теста. Обсемененность слизистой оболочки Нр бактериями в 48% случаев соответствовала 1 баллу или легкой степени (до 20 бактерий в отдельных полях зрения при увеличении 900-1000 раз), у 48% пациентов - двум баллам, средней степени (от 20 до 50 бактерий) и 4% обследованных - трем баллам, сильной степени (более 50

бактерий). При сравнении полученных результатов с изменением серологического профиля показано колебание концентрации IgG к Нр от 60 до 320 Ед/мл. В группе больных с легкой степенью обсемененности уровень IgG составил 130,5±23,5 Ед/мл; со средней степенью - 200,0±10,0 Ед/мл; с сильной степенью - 195,0±15,0 Ед/мл. Клиническая чувствительность исследуемого серологического теста составила 94%. Характерно, что не было получено ни одного ложно-отрицательного результата, что является обычным недостатком серологических методик. Быстрое снижение концентрации антител до 45,0±4,5 Ед/мл у пациентов с наиболее плотной бактериальной колонизацией слизистой оболочки желудка через 3 -4 недели после проведения курса эрадикации указывает на санацию гастродуоденальной слизистой оболочки от Нр.

Таким образом, сравнительные исследования показали наличие положительной корреляции между реакцией антител сыворотки на наиболее патогенные антигенные детерминанты Нр и плотностью колоний. Высокая диагностическая эффективность серологического теста позволяет осуществлять надежный контроль инфекции.

Характеристика четырех уровней (типов) иммунного ответа при паротитно-вирусной инфекции у детей

Железникова Г.Ф., Бехтерева М.К., Иванова В.В., Монахова Н.Е., Новожилова Е.В., Сиземов А.Н.

Научно-исследовательский институт детских инфекций Минздрава России, Санкт-Петербург, Россия

Паротитно-вирусная инфекция (ПВИ) протекает как генерализованная вирусная инфекция с вовлечением в патологический процесс, кроме слюнных желез, различных органов и систем (Вайт S., 1995, Rodriguez-Vidigal Е, 1999). Многообразие клинических вариантов течения ПВИ, частая заболеваемость ранее вакцинированных детей свидетельствуют об определяющей роли индивидуальной иммунной реактивности в патогенезе данной инфекции.

Целью настоящего исследования было выявление (по результатам реакции бласттрансформации на ФГА

Таблица

(ФГА-РБТЛ), как предложено ранее) и характеристика четырех уровней (типов) иммунного ответа (ИО) у детей, переносящих ПВИ.

Обследованы 192 ребенка в возрасте от 5 до 15 лет с ПВИ. Большинство детей (65%) ранее были вакцинированы. Иммунологическое обследование, кроме ФГА-РБТЛ, включало оценку гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) к вирусу паротита (ВП) в реакции торможения миграции лейкоцитов, определение в крови ^М, ^А, IgG(1-4), ^Е (ИФА), фактора некроза опухолей (TNF-a) (ИФА) и циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) методом осаждения полиэти-ленглюколем. Для того, чтобы выявить наиболее закономерные черты четырех уровней (типов) ИО, мы сравнили их иммунологические характеристики в острую фазу (2-5-й день болезни) независимо от клинической формы ПВИ и вакцинального анамнеза (в таблице даны только достоверно различающиеся показатели).

Четыре уровня (типа) ИО имели выраженные различия по ряду показателей клеточного и гуморального звеньев иммунитета. Наибольшее число детей с ГЗТ к ВП выявлено среди ответивших по III типу ИО, что сочеталось с минимальным уровнем общего ^Е и ЦИК у детей этой группы. Снижение системной продукции про-воспалительного монокина TNF-a у детей с III типом ИО, возможно, происходило по механизму отрицательной обратной связи. Иммуносупрессия, свойственная IV типу ИО, проявлялась не только в угнетении ответа Т-лимфоцитов на ФГА в обе фазы болезни, но и в сниженной продукции ^М и IgG4, а также в отсутствии активации синтеза IgG3, наблюдающейся при всех остальных типах ИО (при II - в периоде выздоровления).

По представленным данным, III тип ИО, охарактеризованный прежде как “ранний клеточный”, действительно отличается от остальных типов выраженной склонностью к клеточно-опосредованному профилю защиты. По-видимому, именно этим обусловлена его наибольшая эффективность в предотвращении осложненных форм ПВИ у ранее вакцинированных детей, о чем мы сообщали ранее / 1 /.

1. ЖелезниковаГ.Ф., ИвановаВ.В., БехтереваМ.К. и др. // Медицинская иммунология. - 1999. - N 3-4. - С. 60.

Тип ИО N % детей с ГЗТ к ВП TNF-a пг/мл !дм г/л гд л СО №4 г/л !дЕ кЕ/л ЦИК усл. ед.

I 88 33,3 98±17 1,22±0,04 0,79±0,04* 0,30±0,04 535±171 107±4

II 49 42,3 84±16 1,14±0,05 0,64±0,05 0,22±0,03 437±112 92±5

III 37 62,5 58±9* 1,24±0,05 0,70±0,03* 0,25±0,03 161±48* 84±5*

IV 18 28,6 94±32 1,04±0,08* 0,64±0,05 0,18±0,03 232±98 97±14

к 10 55,5 124±33 1,29±0,08 0,58±0,02 0,19±0,05 299±39 115±10

р 1-2 <0,05

1-3 <0,05 <0,05 <0,05 <00,5

1-4 <0,05 <0,05

2-3 <0,05

3-4 <0,05

Примечания: К- здоровые дети, * - достоверное отличие от К при р< 0,05.

Показатели активации и апоптоза у детей с инфекционным мононуклеозом разной степени тяжести

Железникова Г.Ф., Васякина Л.И.,

Монахова Н.Е., Павленко М.А.*,

Новожилова Е.В., Попова Н.А., Родионова О.В.

Научно-исследовательский институт детских инфекций М3 РФ, Институт цитологии РАН*, Санкт-Петербург, Россия

Соотношение процессов активации и апоптоза в разных субпопуляциях иммунокомпетентных клеток определяет направленность иммунного ответа и его конечную эффективность. Возбудители инфекционных заболеваний человека оказывают разнообразное влияние на апоптоз, изменяя экспрессию про- или антиапоптотических молекул. В частности, возбудитель инфекционного мононук-леоза вирус Эпштейна-Барр (ВЭБ) защищает инфицированные В- клетки от апоптоза (Gregory C. et al., 1991).

Цель настоящего исследования состояла в оценке клинической информативности показателей активации и апоптоза у детей, больных инфекционным мононуклеозом (ИМ).

25 детей в возрасте от 5 до 14 лет, переносящих ИМ, были разделены на две группы по степени выраженности и длительности основных синдромов ИМ (интоксикации, лимфопролиферации, гепатоспленомегалии) с относительно легким (1-я группа, 17 чел.) и относительно тяжелым (2-я группа, 8 чел.) течением болезни. Иммунологическое обследование включало фенотипирование лимфоцитов в лимфоцитотоксическом тесте, оценку спонтанного апоп-тоза в 72- часовой культуре мононуклеаров венозной крови с учетом числа погибших клеток (по поглощению три-панового синего) и числа апоптотических клеток с фрагментацией ядра (при окраске propidium iodide), реакцию бласттрансформации лимфоцитов на ФГА (ФГА-РБТЛ), определение IgM, IgA, IgG по Manchini и общего IgE в ИФА. Достоверные различия между группами обнаружили по содержанию в крови CD8+, CD16+ и CD95+ лимфоцитов, причем с более тяжелым течением ИМ ассоциированы сниженные значения всех трех показателей (таблица).

У детей 2-й группы оказались сниженными число клеток с экспрессией рецептора апоптотических сигналов CD95 и уровень спонтанного апоптоза in vitro. Это могло быть связано как с большим количеством зараженных клеток, защищенных ВЭБ от апоптоза, так и с меньшей представленностью в циркуляции лимфоцитов с цитоток-сическими функциями CD8+ и CD16+, осуществляющих элиминацию зараженных клеток с участием апоптоза. Относительно низкое содержание в крови цитотоксических Т-лимфоцитов CD8+ и естественных киллеров CD16+ позволяет предположить выраженную гуморальную направленность иммунного ответа у детей с более тяжелыми клиническими проявлениями ИМ. В самом деле, у детей 2-й группы уже в острую фазу ИМ обнаружено более высо-

Таблица

N % лимфоцитов фенотипа Апоптоз in vitro

г. CD4+ CD8+ CD16+ CD25+ CD95+ % погибших клеток % апоптот. клеток

1 44,8+1,2 20,6+1,5 14,8+1,2 14,6+1,5 26,1+1,6 59,8+3,0 52,4+1,6

2 48,3+2,6 13,1+1,4 9,6+1,1 12,6+1,7 20,7+1,3 52,6+1,7 45,2+1,8

р - <0,001 <0,01 - <0,05 <0,05 <0,05

кое содержание в крови IgA (1,26±0,04 г/л vs 1,07±0,08 г/ л у детей 1-й группы, р<0,05) и IgE (280±30 кЕ/л vs 40±9 кЕ/л, р<0,001). Еще одним подтверждением большей склонности к гуморальной форме иммунного ответа у детей с относительно тяжелым течением ИМ может служить значительная ингибиция ответа Т-лимфоцитов на ФГА: 60,1±1,4% vs 72,5±2,4% - 1 гр., р<0,001. Все обнаруженные различия сохранялись в фазу выздоровления.

Таким образом, наиболее информативными иммунологическими критериями тяжести течения ИМ оказались число (%) CD8+, CD16+ и CD95+ клеток и уровень спонтанного апоптоза мононуклеаров крови, а также функциональные характеристики Т- и В-звеньев иммунитета -ФГА-РБТЛ и уровень продукции IgA и, особенно, IgE.

Динамика сывороточного фактора некроза опухолей-альфа (TNF-a) в процессе развития экспериментального аллергического энцефаломиелита (ЭАЭ) у крыс разных линий

Житнухин Ю.Л., Малышкин К.А., Абдурасулова И.Н., НовиковаТ.А., Фрейдлин И.С.

Научно-исследовательский институт экспериментальной медицины РАМН, Санкт-Петербург, Россия

ЭАЭ - воспалительное демиелинизирующее заболевание центральной нервной системы (ЦНС), моделирующее в эксперименте рассеянный склероз (PC). Среди цитоки-нов, вовлеченных в патогенез ЭАЭ и PC, особое место занимает TNF-a. Цель исследования заключалась в оценке продукции TNF-a у крыс с ЭАЭ в сопоставлении с тяжестью заболевания и патоморфологическими изменениями в ЦНС. ЭАЭ индуцировали у крыс Wistar (W) и Sprague Dawley (SD) однократной подкожной инокуляцией гомо-гената гомологичного мозга в смеси с полным адьюван-том Фрейнда. Клинические признаки ЭАЭ оценивали по 5-бальной шкале. Сыворотки крови тестировали in vitro для определения цитотоксического эффекта содержащегося в них TNF-a на чувствительную линию мышиных фиб-робластов L-929. Патоморфологические изменения в ЦНС исследовали с использованием методов Ниссля и Марки. Неврологические расстройства наблюдали у 88% SD, 54% WQ и 25% WC5. Степень тяжести от 3 до 5 баллов была зарегистрирована соответственно у 47%, 16% и 0% крыс с ЭАЭ. Летальные исходы отмечены только у SD. В мозжеч-

ке, стволе мозга и спинном мозге SD обнаружены менин-геальные, перивентрикулярные и периваскулярные инфильтраты, а также связанные с ними очаги демиелиниза-ции, тогда как у W - лишь немногочисленные воспалительные клетки и единичные инфильтраты; демиелиниза-ция не выявлена. Уровни ТЫР-а у \У(5 возросли на 7 д. после иммунизации с последующим их снижением. При этом не было существенных различий между болевшими и не болевшими животными в середине и конце латентного периода. У крыс \¥у' с ЭАЭ повышенный уровень ТЫБ-а сохранялся также и на 14-й д. (78 пг/мл), а его содержание в сыворотках в этот срок было значительно больше, чем у клинически здоровых крыс (р<0,02). У крыс SD уровень ТЫБ-а уже на 7 д. был достоверно выше среди заболевших животных. Такое различие внутри группы сохранилось в период с 7 по 35 д., когда уровни ТЫБ-а у крыс с ЭАЭ продолжали возрастать в противоположность не болевшим животным. У болевших 50 уровень ТЫР-а был повышенным в течение 2-х недель, тогда как у \\^Р с ЭАЭ аналогичный показатель снизился в течение 7 дней. Таким образом, развитие ЭАЭ сопровождалось усилением цитотоксической активности сывороточного ТЫБ-а. У крыс с более тяжелым ЭАЭ повышенная продукция ТЫБ-а сохранялась продолжительное время, обусловила возрастание показателей содержания ТЫБ-а в сыворотках животных. Результаты свидетельствуют об участии ТЫБ-а в патогенезе ЭАЭ и о наличии определенных клинико-им-муно-патоморфологических корреляций в развитии ЭАЭ у крыс разных линий.

Изучение эффективности применения пневмококковой вакцины у военнослужащих

Жоголев С.Д., Жоголев К.Д.

Военно-медицинская академия,

Санкт-Петербург, Россия

Цель исследования: определение иммуногеннос-ти, реактогенности и эпидемиологической эффективности пневмококковой вакцины “Пневмо-23”, впервые примененной в стране в коллективе военнослужащих с высоким риском развития пневмонии.

Материалы и методы. Испытание пневмококковой вакцины проводили среди военнослужащих 18-20 лет в военном учебном отряде, где ежегодно в зимний период регистрировался высокий уровень заболеваемости ОРЗ, острыми бронхитами и пневмониями. По завершении осеннего приема пополнения в середине декабря опытная группа людей из 100 человек была привита пневмококковой вакциной. Вакцина вводилась в дозе 0,5 мл внутримышечно в ягодичную мышцу однократно. Группа людей из 145 человек, находившихся в аналогичных условиях, являлась контрольной. Личный состав опытной и контрольной группы находился под усиленным медицинским наблюдением и подвергался комплексному иммунологическому, серологичес-

кому, микробиологическому и клинико-лабораторному обследованию на протяжении всех 5 месяцев пребывания в учебном отряде. У личного состава обеих групп были получены 3 порции сывороток крови: перед вакцинацией, а затем через 1 и 5 месяцев после нее.

Антигенную активность вакцины, напряженность и длительность послепрививочного иммунитета изучали по сопоставлению результатов исследования 200 тройных сывороток крови личного состава опытной и контрольной групп в реакции непрямой иммунофлюоресценции. Реактогенность вакцины была изучена путем регистрации общих и местных послепрививочных реакций на протяжении двухнедельного наблюдения. Эпидемиологическая эффективность вакцины определялась путем сравнения ежемесячного уровня заболеваемости ОРЗ, острыми бронхитами и пневмониями, среди привитых и в контрольной группе.

Результаты. При изучении антигенной активности пневмококковой вакцины выявлено значительное нарастание титров пневмококковых антител после прививки и продолжительное их сохранение. По исходному уровню пневмококковых антител в сыворотке крови личный состав опытной и контрольной групп практически не отличался. Среднегеометрические титры антител в этих группах были равными 3,8±0,4 и 3,9±0,5 ^2. Однако, через месяц после прививки среднегеометрическая концентрация антител у привитых возросла до 6,4±0,8 ^2, а в контроле за счет естественного “проэпидемичивания” до 4,8±0,6 ^2. Через 5 месяцев после вакцинации среднегеометрический титр пневмококковых антител у привитых лишь незначительно снизился до 6,2±0,7 ^2, существенно превосходя уровень титров в контрольной группе (4,7±0,6 ^2). Общих реакций на прививку выявлено не было. Лишь у 5 человек сохранялась незначительная местная болезненность до 3-4 дней. Это свидетельствует о слабой реактогенности вакцины.

В период от начала комплектования до введения пневмококковой вакцины статистически значимых различий в уровнях заболеваемости ОРЗ, острыми бронхитами и пневмониями в выделенных группах людей не было. На протяжении первого месяца после применения вакцины уровень заболеваемости ОРЗ у привитых оказался в 1,51 раза меньше (р>0,05), острыми бронхитами - в 2,05 раза меньше (р>0,05), а пневмониями в 1,37 раза меньше (р>0,05), чем в контрольной группе. И хотя при данной численности групп различия в уровне заболеваемости оказались недостоверными, очевидна наметившаяся тенденция к ее снижению у привитых по сравнению с опытной группой уже на первом месяце после вакцинации. В течение 2-5 месяцев после прививки заболеваемость среди вакцинированных была достоверно меньше: ОРЗ - в 2,24 раза (р<0,01), острыми бронхитами - в 12,97 раза (р<0,001), а пневмониями - в 6,14 раза (р<0,001), чем у непривитых. Таким образом, спустя месяц после проведения прививки, необходимый для выработки полноценного поствакцинального иммунитета, за четырехмесячный период эффективность вакцины в отношении ОРЗ

оказалась равной 55,36%, в отношении острых бронхитов - 92,29% и в отношении пневмоний - 83,71%.

Заключение. Результаты испытаний пневмококковой вакцины “Пневмо-23” производства фирмы Пастер Мерье Коннот у военнослужащих Российской армии свидетельствуют о том, что препарат высоко им-муногенен, обладает хорошей переносимостью и имеет значительную эпидемиологическую эффективность. На основании полученных данных можно рекомендовать применение пневмококковой вакцины в коллективах военнослужащих с высоким риском развития пневмоний: новобранцам в учебных отрядах, дислоцированных в неблагоприятных климатических зонах и имеющих неудовлетворительные условия размещения, а также контингенту военнослужащих, направляемых в регионы военных и вооруженных конфликтов.

Иммунный статус при неосложненной варикозной болезни

Зуева Е.Е., Вахитов М.Ш., Алексеева Е.Ф., Марфичева Н.А., Молчанова И.В.,

Буравцова Н.А., Тотолян А. А.

Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им.акад.И.П.Павлова

При обследовании первичного больного с варикозным расширением вен перед врачом всегда стоит вопрос о возможности и необходимости проведения консервативного или оперативного лечения, о вероятных сроках появления осложнений как в течение заболевания, так и в ответ на лечебные мероприятия. Одной из вероятных причин развития таких осложнений является дисфункция иммунной системы. Вероятно, выявление определенных иммунологических нарушений создаст возможность более рационального выбора метода лечения для конкретного больного варикозной болезнью вен.

Целью исследования было выявление особенностей состояния иммунной системы у пациентов с варикозной болезнью. Обследована группа больных (п=10) в возрасте от 23 до 72 лет с неосложненным течением заболевания и подтвержденной проходимостью глубоких вен голени. Сопутствующая патология не выявлена. Длительность варикозной болезни колебалась от 2 до 17 лет. Оценка иммунологического профиля включала определение уровня фагоцитирующей активности нейтрофилов, функциональной активности лейкоцитов, определение количественного соотношения популяций и субпопуляций иммунокомпетентных клеток в периферической крови (СD3+, CD4+, CD8+, CD22+, CD56+, CD25+, HLA-DR+), а также определение активности комплемента, содержания циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) и иммуноглобулинов классов А, М, G.

При статистической обработке полученных данных выявлено не только отклонение отдельных показателей от нормальных значений, но и существование значимых связей между показателями клеточного и гуморального иммунитета по группе в целом. Наибольшее внимание

Таблица

Анализируемые сочетания показателей Коэффициент корреляции

CD3+ ЦИК 0,655

CD4+ СМ-Гр 0,651

CD8+ СМ-Мн -0,655

CD22+ CD25+ 0,753

CD4/CD8 СМ-Мн 0,830

CD4/CD8 СМ-Гр 0,702

СМ-Гр ЦИК 0,721

обращают на себя несколько пар взаимосвязанных показателей. В данной группе пациентов существуют прямые положительные корреляции между содержанием Т-кле-ток (CD3+), спонтанной миграцией гранулоцитов (СМ-Гр) и уровнем ЦИК, а также между иммунорегуляторным коэффициентом (СD4/CD8) и спонтанной миграцией моно-нуклеаров (СМ-Мн) и гранулоцитов. Увеличение содержания В-клеток (CD22+) тесно свзязано с увеличением содержания лимфоцитов, несущих на своей поверхностной мембране а-цепь рецептора к Ш-2 (CD25+). Обнаружена только одна значимая отрицательная корреляция между содержанием цитотоксических лимфоцитов (CD8+) и спонтанной миграцией мононуклеаров.

Вполне возможно, что обсуждаемые показатели иммунограммы являются значимыми при обследовании больных с варикозной болезнью вен и могут быть расценены как наиболее информативные для последующего выбора оптимальной схемы лечения. В этом убеждает выявление иммунологических маркеров воспаления у части обследованых пациентов при полном отсутствовии клинических признаков воспаления. Пациенты с неосложненной варикозной болезнью являются гетерогеннной популяцией по вероятности и срокам развития осложнений. Дальнейшее проспективное наблюдение позволит определить клиническую значимость каждого иммунологического показателя при данной патологии сосудов.

Рецидивирующий полипоз носа и бронхиальная астма: клиника, состояние местного иммунитета

Ильина Н.И., Бондарева Г.П.,

Симонова А.В., Романова О.Н.

Государственный Научный Центр Институт Иммунологии М3 РФ, Москва

Характер течения рецидивирующего полипоза носа зависит от состояния местного иммунитета. Дан обзор современных данных иммунологических исследований

о состоянии местного иммунитета при различных вариантах течения рицидивирующего полипоза носа. Представлены материалы по особенностям фенотипа лимфоцитов, по цитокиновому профилю, по экспрессии рецепторов адгезии, уровню иммуноглобулинов при рецидивирующем полипозе носа в сочетании с ал-

лергическими и инфекционными заболеваниями верхних дыхательных путей. Дан анализ влияния современных консервативных методов лечения на показания местного иммунитета.

Структура аллергической патологии в промышленном городе

Ильинова Е.А., Богова А.В., Гудима Г.О.

ЦГБ г. Электросталь, ГНЦ - Институт иммунологии М3 РФ, Москва, Россия.

Была проанализирована структура аллергической патологии в г. Электросталь Московской области. В черте города находятся крупные энергоемкие предприятия металлургической промышленности, которые выбрасывают в атмосферный воздух более 7 тысяч вредных веществ в год, а сточные воды от промпредприя-тий содержат фенолы, аммиачный азот, нефтепродукты, нитритный азот, фосфор и медь (до 25 ПДК).

В течение года аллергологический кабинет городской больницы посещает около 3000 человек, что составляет 2% всего населения. На диспансерном наблюдении состоит 874 больных с аллергическими заболеваниями, в том числе мужчины составили 33,6%, женщины -66,4%. 96% больных являются лицами трудоспособного возраста, в том числе 44,8% - работающие на вредном производстве. По удельному весу больные распределяются следующимобразом: поллиноз - 28,6%, бронхиальная астма (атопическая форма) - 17,5%, бронхит с астматическим компонентом - 14,2%, аллергический ринит - 13,8%, хроническая рецидивирующая крапивница и аллергический дерматит -16,7%.

Впервые был поставлен правильный диагноз 60,4% больным. По результатам специфического обследования установлено, что у 52% больных бронхиальной астмой существует сенсибилизация к аллергену из домашней пыли, у 40% больных поллинозом - аллергияк пыльце деревьев, у 26% - к злаковым, у 20% - к сложноцветным. Специфическаяиммунотерапия проведена 45 больным с хорошим и отличным эффектом.

Продукция провоспалительных и противовоспалительных цитокинов у больных рассеянным склерозом

Калашникова А.А., Калинина Н.М.,

Давыдова Н.И., Солнцева О.С.

Всероссийский центр экстренной и радиационной медицины МЧС России, Санкт-Петербург, Россия

Рассеянный склероз (РС) является аутоиммунным хроническим воспалительным заболеванием нервной системы. Ведущая роль в его прогрессировании отводится провоспалительным цитокинам, в то время как противовоспалительные цитокины могут оказывать протективное действие.

Целью работы явилось изучение особенностей синтеза и продукции цитокинов клетками периферической крови у больных рассеянным склерозом в зависимости от формы заболевания и его длительности.

Обследованы пациенты с РС в стадии ремиссии и в стадии обострения. Определение содержания цитоки-нов в сыворотке и в супернатантах 24-часовой культуры клеток периферической крови проводилось методом ИФА. Число мононуклеаров, содержащих цитоки-ны внутриклеточно и экспрессирующих их на поверхности, определялось методом проточной цитометрии.

У всех больных РС выявлено увеличение числа клеток, синтезирующих IL-1P и экспрессирующих на поверхности TNF-a. Данные проточной цитометрии совпадали с повышеним уровня спонтанной продукции IL-1 в, TNF-a, IFN-y in vitro и снижением индуцированной по сравнению с контролем. У всех пациентов отмечено повышенное содержание в сыворотке IL-1ra и IL-4. Число клеток, синтезирующих IL-4, превышало нормальные значения, в то время, как число клеток с поверхностной экспрессией IL-4 было ниже нормы. Отмечено значительное увеличение спонтанной продукции IL-1ra и IL-4 in vitro. Индуцированная продукция этих цитокинов практически не отличалась от нормы. Вместе с повышением продукции IL-4 было отмечено повышенное содержание числа клеток, экспрессирующих его рецептор (CD124).

У пациентов с длительно текущим (более 8 лет) или находящимся в стадии обострения ремиттирующим заболеванием и с первично прогрессирующим течением значительно повышено содержание IL-1 в в сыворотке периферической крови. Кроме того, у больных с активной формой РС выявлено высокое содержание IFN-y в сыворотке. Отмечено значительное повышение спонтанной и индуцированной продукции этого цитокина in vitro мононуклеарами периферической крови.

Иммунологические механизмы воспаления при хроническом генерализованном пародонтите

Калинина Н.М., Давыдова Н.И., Дунязина Т.М*.

Всероссийский Центр экстренной и радиационной медицины МЧС России, Санкт-Петербургский институт стоматологии*

Хронический генерализованный пародонтит является достаточно распространенным заболеванием среди взрослого населения. Наличие генетической предрасположенности, множественность факторов риска возникновения заболевания, не изученные иммунологические механизмы манифестации и прогрессирования болезни определили цель исследования - выявить нарушения местного и общего иммунитета при хроническом генерализованном пародонтите.

Были обследованы 25 пациентов с хроническим генерализованным пародонтитом легкой, средней и тяжелой степени. Проводилось фенотипирование моно-

нуклеаров периферической крови (CD3,CD4, CD8, CD16, CD20, CD25, HLAII, CD95), изучение продукции цитокинов - IL-8, IL-4, TNF-a in vivo и in vitro клетками периферической крови. Кроме этого определялся уровень аналогичных цитокинов в десневых карманах. Оценивалась функция нейтрофилов периферической крови, уровень ЦИК и Ig в сыворотке крови. ЦИК определялись в содержимом десневых карманов.

У обследованных пациентов выявлены нарушения функции нейтрофилов периферической крови (повышение спонтанной бактерицидности, снижение индуцированной адгезии, р < 0,05). По уровню продукции общего IgE пациенты разделились на три группы: с низкой продукцией - до 3 КЕ/л, нормальной- 57,5±10,2 и высокой -219,0 ±40,0. Достоверные изменения продукции цитоки-нов выявлены при исследовании периферической крови пациентов с генерализованным хроническим пародонтитом: повышена спонтанная продукция TNF-a, снижена индуцированная продукция IL-4, повышена индуцированная продукция IL-8. Исследование уровня локальной продукции цитокинов (в десневых карманах) выявило достоверно более высокую (по сравнению с уровнем в периферической крови) продукцию IL-8, играющего по данным литературы с одной стороны основную роль в поддержании локального гомеостаза в полости рта и с другой стороны патогенетическую роль в возникновении и прогрессировании генерализованного хронического пародонтита.

Получение моноклональных антител к P. aeruginosa и их иммунохимическая характеристика

Карпова М.В., Храпова Н.П., Свиридов В.В.

Волгоградский НИПЧИ, НИИВС им. Мечникова РАМН, Москва

С целью разработки специфичных чувствительных иммунохимических методов определения P.aeruginosa и её антигенов предприняты эксперименты по получению моноклональных антител к различным антигенам синегнойной палочки. В диагностике и при эпидемиологических исследованиях важнейшим признаком является серогрупповая принадлежность возбудителя, определяемая эпитопами полисахаридных цепей ЛПС. Поскольку при синегнойной инфекции чаще других встречаются серогруппы Н-2/5, Н-6, Н-

11,Н-3, Н-7 (по Habs,у) микроорганизма, для иммунизации мышей использовали в первую очередь ультразвуковые дезинтеграты микробных клеток, водносолевые экстракты из обработанных ацетоном клеток и ЛПС именно этих возбудителей. Партнерами при получении гибридом служили миеломные клетки линий Sp2/0 и P3X63-Ag8.653.

При использовании в качестве иммуногена препаратов ЛПС отчетливо проявилась его иммуномодулирующая активность: более высокие дозы антигена приводили к угнетению иммунного ответа (снижению титров антител, коли-

чества активированные лимфоцитов) и заметному нодавле-нию выкода стабильные клонов-антителонродуцентов. Эффективность нолучения нродуцентов антител к белковым антигенам во многом завжела от дозы антигена, кратности его введения и длительности cxeмы иммунизации.

В cepии экетериментов нолучена нанель гибридом-нродуцентов антител, из которые более нодробно ж-cлeдoваны 13. Вce антитела к белковым антигенам нри-надлежат к клагсу IgG, вce aнтилинoнoлиcaxapидныe

- к IgM. Oцeнeнo взaимoдeйcтвиe мoнoклoнaльныx антител и нpигoтoвлeнныx на ж ocнoвe ФИTЦ-кoнъюгa-тов c различными микроорганизмами и иx антигенами. Установлено, что в стучае нодтвержденной бакте-pиoлoгичecки cинeгнoйнoй инфекции ФИ^Д-М^т P a. -1 взаимодействовали более чем c ноловиной выделенный штаммов P.aeruginosa. По данным иммуно-блотинга выявляемый ими низкомолекулярный антиген (9-13 кДа) пpиcyтcтвyeт в вoднo-coлeвыx экстрак-тax не только cинeгнoйнoгo микроба H-2 и H-3 cepo^ рунн, но и в пpeпapaтax возбудителей P.cepacia, P.pseudoalcaligenes. Природу этого предстоит выметить.

A^^e^ выявляемый МкAт в P.aeruginosa, P.cepacia, P.pseudoalcaligenes, и в oco6o отетые воз-бyдитeляx P.pseudomallei и P.mallei в иммуноблотинге, имеет молекулярную магсу около 60 кДа и окрашивается в элeктpoфopeгpaммax белковыми краеттелями.

ФИTЦ-МкAт Р.а.-10 и Р.а.-11 реагируют практичест ки co вceми типовыми музейными штаммами етнег-нойной палочки. Из вcex нoлyчeнныx лишь эти Мк^т не реагировали в иммуноблотинге c P.cepacia, P.pseudoalcaligenes, P.pseudomallei и P.mallei.

М^т Р.а.-10 проявляют етецифичность к нолдоа-xapиднoй чacти етнегнойного ЛПC cepoгpyнн H-2, -3, -4, -6, -11, PAO-1 P.aeruginosa, а также P.cepacia и P.pseudoalcaligenes.

Панель моноклональные антител к различным антигенным cyбcтaнциям етнегнойного микроба раоти-ряется, а полученные и oxapaктepизoвaнныe МкAт в виде ФИTЦ-кoнъюгaтoв могут иcнoльзoвaтьcя для бак-териологиче^ой экcнpecc-диaгнocтики.

Особенности продукции цитокинов в зависимости от состояния иммунитета у больных туберкулезом легких

Кноринг Б^., Сахарова И.Я.,

Логинова Г.П., Симбирцев A.^

Научно-исследовательский институт фтизиопульмонологии, Санкт-Петербург, Россия

В постедние годы получены м^точи^ен^^ cви-дeтeльcтвa цитокиновой регуляции как нормального, так и пaтoлoгичecки измененного иммунного ответа. O^rna роли различные цитокинов в нротивотуберку-лезном иммунитете представляет трудности, в значительной мере cвязaнныe c многообразием проявлений туберкулезной инфекции.

Целью данной работы явилось изучение продукции ИЛ-1Р, ФНО-а, ИЛ-2, ИЛ-8 с учетом выраженности иммунного ответа у больных туберкулезом.

Обследовано 57 пациентов с различными формами туберкулеза легких. Из них у 39 выявлен инфильтра-тивный туберкулез, у 18 - фиброзно-кавернозный.

Иммунологическое обследование включало определение уровня противотуберкулезных антител (ПТАТ), специфического клеточного ответа (в РБТЛ на ППД), функциональной активности Т-лимфоцитов (в РБТЛ на ФГА) и В-лимфоцитов (по уровню ^А, IgG, ^М), субпопуляций лимфоцитов в цитотоксическом тесте, продукции цитокинов ИЛ-1р,ФНО-а, ИЛ-8 иммунофер-ментным методом и ИЛ-2 — биологическим методом.

В результате проведенных исследований у больных инфильтративным туберкулезом отмечено увеличение индуцированной продукции ИЛ-1 Р при низком уровне ^М, высоком - ^А, снижении специфического клеточного ответа, увеличении относительного числа CD4+, CD8+, CD20+ (р<0,05). Выявлена прямая зависимость ФНО-а с показателями пролиферативной активности лимфоцитов в ответ на ППД и ФГА и обратная с показателями гуморального иммунитета (ПТАТ, иммуноглобулины). Нарастание уровня как спонтанной, так и индуцированной выработки ФНО-а сочетается с повышением относительного числа CD4+, CD8+, но уменьшением абсолютного содержания лимфоцитов.

В группе больных фиброзно-кавернозным туберкулезом имели место тенденции противоположные описанным. Выявлена обратная корреляционная связь индуцированного ФНО-а с показателями клеточного иммунитета (г=-0,56, р<0,02), а ИЛ-1Р, стимулированного ППД и ФГА ,- с показателями гуморального иммунитета (соответственно г=-0,83, р<0,01; г=-0,70, р<0,02).

В продукции ИЛ-2 у больных различными формами туберкулеза выявлена прямая взаимосвязь с количеством лимфоцитов, их функциональной активностью (г=0,61, р<0,05), экспрессией рецепторов для ИЛ-2 и синтезом ^А (р<0,05), и обратная - с гиперпродукцией ПТАТ (г=-0,42, р<0,04). У больных инфильтративным туберкулезом продукция ИЛ-2 при увеличении CD8+достоверно снижалась (г=-0,3, р<0,08), а при фиброзно-кавернозном, напротив, возрастала (г=0,54, р<0,05).

Спонтанная и индуцированная продукция ИЛ-8 у всех больных туберкулезом достоверно повышалась при увеличении количества CD4+ и CD8+ (р<0,05). Оновременно выявлена тенденция к обратной зависимости в продукции ИЛ-8 с показателями гуморального иммунитета.

В результате проведенных исследований установлена связь между уровнями продукции ИЛ-1 р, ФНО-а, ИЛ-

2, ИЛ-8 и параметрами иммунитета. Отмечено, что у больных с разными формами туберкулеза, но идентичными нарушениями иммунитета имеют место отличия в продукции цитокинов. Повышение синтеза ИЛ-1 Р при инфильтративном туберкулезе наблюдается в основном у пациентов с активацией CD4+, по-видимому, преимущественно относящихся к Т2-хелперам, с последующим

Анализируя характер злаковой сенсибилизации было установлено, что наиболее значимым аллергенным растением в области является тимофеевка (74,55%), основные разновидности которой представлены в виде луговой (Phleumplatense) и узловатой (Phleum nodosum). Из сложноцветных лидирующее положение занимает лебеда, которая имеет широкое распространение в области в основном в виде садовой и раскидистой, положительные кожные тесты на аллерген которой выявлен у 69,09% больных и у 52,63% они имели высокий класс оценки.

Частота распространенности поллиноза в среднем составила 1,9%, но имела существенные различия в зависимости характера загрязнения окружающей среды, места проживания и специфики работы населения.

Таким образом, особенностями поллиноза в Новгородской области является преобладающее клиническое значение сенсибилизации к пыльце деревьев и наиболее тяжелое течение заболевания в период поллинации березы. Из сложноцветных, существенное значение по частоте распространенности имеет поллиноз на лебеду, но не имеющий тяжелых клинических проявлений заболевания. Последние годы начинает возрастать значение сложноцветных растений, не являющихся естественными в видовом составе флоры области.

Аллергия в неврологической клинике

Коломыцева Т.Н., Богова А. В., Гудима Г.О., Агасарян Т.С., Нечаева Т.С.

Московский патриархат, ЦКБ святителя Алексия Митрополита Московского,

ГНЦ - Институт иммунологии М3 РФ, Госсинтезбелок, Москва, Россия

Обследовано 643 человека с различной неврологической симптоматикой, направленных в аллергологический кабинет. У 65 больных (10,2%) установлены аллергические заболевания. Мужчины составили 29,6%, женщины - 70,4%. В процессе проведения аллергологического обследованиябыло выделено 5 наиболее часто встречающихся форм аллергической ибронхолегочной патологии. По удельному весу больные распределились следующим образом: бронхиальная астма - 1,5%, хро-ническийобструктивный бронхит -15,6%, поллиноз -17,2%, хроническая рецидивирующая крапивница и ал-лергическийдерматит - 23,4%, лекарственная аллергия

- 42,2%. Результаты специфической диагностики представлены следующим образом: положительные реакции на бытовые аллергены -у 78,1%, на пыльцевые аллергены - у 21,2% больных с бронхолегочной патологией.

У 70,2% больных поллинозом выявлена сенсибилизация к злаковым травам, у 17,7% - к пыльце деревьев, у 12,2% - к сорным травам. У 46,6% больных с хронической рецидивирующей крапивницей отмечены положительные реакции на бытовые и пыльцевые аллергены.

Высокая обращаемость отмечалась по поводу лекарственной аллергии к антибиотикам - 52%, к пре-

паратам пиразолонового ряда - 20,6%, к прочим -20,1%.

При обследовании установлено, что обострение клинических проявлений аллергии связано с недостаточно эффективным лечением, применением непрофильных методов лечения. В ряде случаев отмечена связь обострения основного заболевания неврологического профиля с различными проявлениями.

Иммуногенная и протекгивная активность фрагментов поверхностных белков Neisseria meningitidis

Котельникова О.В., Несмеянов В.А., Вольпина О.М., Архипова В.С., Аллилуев А.П., Куприянова М.А., Короев Д.О., Жмак М.Н., Иванов В.Т.

Институт биоорганической химии им. М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН Москва, Россия; НИИ общей и прикладной патологии РУДН, Москва, Россия

В настоящее время примерно 30% всех заболеваний менингококковой инфекцией вызываются штаммами N. meningitidis серогруппы В. В связи с этим во всем мире продолжается поиск оптимального варианта вакцины для профилактики этой инфекции. Анализ литературных данных показывает, что на поверхности микробной клетки присутствуют белки, фрагменты которых могут быть использованы в качестве протектив-ных антигенов для создания вакцины. В ИБХ им. М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова проводится комплексное исследование, направленное на создание вакцины на основе синтетических пептидов - фрагментов белков наружной мембраны менингококка серогруппы В.

Синтезирован набор пептидов, являющихся фрагментами как вариабельных, так и константных участков белков класса 1 (Por A) и класса 5 (Opa B) наружной мембраны N.meningitidis серогруппы В. При выборе пептидов использовали компьютерные программы, позволяющие предсказать потенциально иммуногенные фрагменты. Полученные пептиды характеризовали по их способности индуцировать у мышей образование специфических антител, а также проверяли наличие антител к этим пептидам у мышей инфицированных N. meningitidis. Протектив-ные свойства пептидов оценивали по способности защищать мышей линии СВА от менингококковой инфекции на модели прямого заражения живой вирулентной культурой менингококка серогруппы В (штамм В:15:Р1.7,16).

Полученные результаты показали,что большинство синтезированных пептидов (как класса 1, так и класса 5) обладают способностью без конъюгации с белками-носителями индуцировать специфические антитела. Антитела к некоторым из этих пептидов выявляются в сыворотках мышей, перенесших менингококковую инфекцию и обладают бактерицидной активностью (титр бактериолизинов на некоторые пептиды достигал 1:5000). Выявлены пептиды, обеспечивающие защиту мышей от гибели при заражения живой культурой

1б9

N.meningitidis, в том числе из константных областей белков. LD50 культуры для мышей, иммунизированных некоторыми пептидами, превышала этот показатель для интактных животных в 10 и более раз.

Заключение. В результате проведенных исследований выявлены пептиды обладающие протективными свойствами и перспективные для включения в состав вакцины.

Сравнительная характеристика спектра антител в сыворотках крови больных пемфигусом, различными дерматозами и здоровых доноров против антигенов эпидермиса кожи

Коцарева О.Д., Вискова Н.Ю.,

Федоритенко М.С., Свирщевская Е.В.

Группа клеточных взаимодействий. Институт биоорганической химии им.М.М.Шемякина и Ю.В.Овчинникова, РАН, Москва.

Пемфигус является аутоиммунным заболеванием, при котором в организме больного формируются антитела против антигена нормального эпидермиса кожи, белка клеточной адгезии десмоглеина 3 (dsg3). Связывание этих антител с клетками эпидермиса кератиноци-тами приводит к потере межклеточной адгезии и акан-толизу эпидермиса. Предрасположенность к заболеванию пемфигусом детерминируется аллелем HLA-DR4. В ряде работ показано, что в сыворотке нормальных доноров антитела к этому белку не обнаруживаются, однако Т-клетки, способные отвечать на рекомбинантный dsg3 in vitro, обнаружены как у родственников больных, так и у доноров. Целью данной работы было определить спектр белков эпидермиса кожи, распознаваемый сыворотками больных пемфигусом, нормальных доноров и больных прочими дерматозами: дерматитом Дюринга, очаговой алопецией, атопическими дерматозами, токсикодермией, эритемой и буллезным пемфигоидом.

Мембранные антигены из эпидермиса кожи здоровых доноров, проходящих косметическую хирургию, выделяли разрушая клетки трехкратным замораживанием (цитоплазматические белки удаляли после первого замораживания) и оттаиванием с озвучиванием между циклами. После последнего цикла мембраны промывали буфером и удаляли центрифугированием. Растворимая фракция содержала мембранные белки. Белки разделяли в полиакриламидном геле и переносили на нит-роцеллюлозную мембрану полусухим методом. Для выявления антител в сыворотках мембраны инкубировали с сыворотками больных или доноров. Антитела выявляли коньюгатом антител против IgG человека, меченных ПХ. Связывание антител с клетками эпидермиса (линия HaCaT) проводили с помощью ИФА, используя клетки эпидермиса в качестве подложки. Связывание с поверхностными белками кератиноцитов определяли с помощью проточной цитометрии, а также с помощью ИФА,

для чего внеклеточные белки выделяли трипсинизаци-ей клеток НаСаТ в присутствии Са2+.

Показали, что предложенный метод выделения мембранных антигенов кератиноцитов позволяет в достаточном количестве выделить белок, являющийся аутоантигеном листовидной пузырчатки с^1 (м.в.160 кДа) и с^3 (130 кДа), а также еще порядка 10 белков. Ранее неоднократно сообщалось, что выделение dsg1 и 3 является значительной проблемой, так как эти белки плохо растворимы. В результате им-муноблотинга выявили, что сыворотки всех больных пемфигусом и всех больных, за исключением больных алопецией, распознавали 1 и 3, и белки с массами 110, 50 и 30

кДа. Часть сывороток доноров также распознавала 1 и 3,

а также белки с массами 110, 87 и 50 кДа. Распознавание сыворотками больных прочими дерматозами и сыворотками доноров белков эпидермиса подтвердили также методом клеточного ИФА, причем показали, что антител к внеклеточной части мембранных белков на порядок больше в сыворотках больных дерматозами по сравнению с сыворотками больных пемфигусом или доноров. Методом проточной цитофлюорометрии показали, что все сыворотки распознавали также часть внутриклеточных белков. Таким образом, образование антител к белкам эпидермиса кожи является частью нормального иммунитета и только малая часть аутоантител, направленных к функционально важным эпитопам молекулы 3, приводит к появлению патологии.

Характеристика популяционного состава лейкоцитарного инфильтрата децидуальной оболочки у женщин с гестозом и гипотрофией плода

Кудряшова А.В., Сотникова Н.Ю.,

Филинова Н.Ю., Панова И.А., Филинов А.Г.

Научно-исследовательский институт материнства и детства им.В.Н.Городкова М3 РФ, Иваново, Россия

С целью выяснения особенностей популяционного состава лейкоцитарного инфильтрата децидуальной оболочки плаценты женщин с гипотрофией плода было проведено обследование 29 беременных с физиологическим течением беременности, 3 8 женщин с гестозом и нормотрофи-ей и 37 беременных с гестозом и гипотрофией плода.

Проведенные исследования показали, что иммунологические параметры децидуальной оболочки зрелой плаценты у женщин с гестозом и гипотрофией плода отличались от таковых при физиологическом течении беременности достоверным повышением уровня СЭ72+, СЭ25+, СЭ11Ь+ и CD3/+HLA-DR+ клеток, а также тенденцией к росту популяции CD71+ лимфоцитов. Однако, тенденция к увеличению популяции СЭ25+ и достоверное увеличение популяции СЭ71 клеток отмечались и при неосложненном развитии плода у женщин с гестозом. Следует отметить тот факт, что увеличение популяции СЭ25+ клеток в группах женщин с гестозом сопровождалось ростом популяции СЭ4-/СЭ25+ лимфоцитов, наиболее выраженным при развитии патологии плода. Это позволяет

предположить, что при гестозе увеличивается популяция цитoтoкcичecкиx клеток c рецепторами к ИЛ-2.

Ocmm^^ изменения в показателе, xapaктepизyющиx cocтoяниe иммyнoкoмнeтeнтныx клеток лейкоцитарного инфильтрата децидуальной оболочки нлацент женщин c гипотрофией плода, выявляли^ в coдepжaнии зрелые В-лимфоцитов, нapaмeтpax поздней активации и адгезионные cвoйcтв клеток. Это проявляло^ в дocтoвepнo более вышк^ нoкaзaтeляx coдepжaния CD72+, CD37HLA-DR+ и CD11b+ лимфоцитов но cpaвнeнию c параметрами грун-пы женщин c гecтoзoм и нормативными значениями ма^ co-pocтoвoгo коэффициента плода.

Выявленная нами для вcex женщин c гecтoзoм общая тенденция к увеличению популяции лимфоцитов, экот-ретеир^щж CD25 молекулу, coxpaнялacь при гипотрофии любой степени тяжести. ^завишмо от степени тяжести гипотрофии, патология нлода ^провожда^ь увеличением удержания зpeлыx В-лимфоцитов и CD11b+ клеток. Данные изменения в пapaмeтpax иммунокомне-тeнтныx клеток лейкоцитарного инфильтрата плацент женщин c гипотрофией нлода, вероятно, аледует cчитaть оотовными, так как они не были отмечены в группе женщин c гестозом и нео^ложненным развитием нлода.

Влияние иммунных комплексов, выделенных из плазмы больных ревматоидным артритом, на экспрессию ICAM-1/CD54 и Fas-рецептoрa/CD95 на поверхности эндотелиальных клеток

^знецова С.Л.1, Коетцкая Л.С. 1, Tихoмиpoв И.И. 2, Дорофейков B.B. 3, Пoлocyхинa E.P.4, Барышников A.Ю. 4, Фрейдлин И.С.1

Научно-исследовательский институт экспериментальной медицины РАМН1, Городской ревматологический центр2, Государственный медицинский университет им. акад. И.П.Павлова3, Санкт-Петербург, Российский Онкологический Научный Центр им. Н.Н.Блохина4, Москва

Пaгoгeнeтичecкaя роль иммунные комплектов (MK) ет-новиальной жидкocти пораженные cycтaвoв у больные ревматоидным артритом (PA) изучена достаточно подробно. В отличие от этого, но поводу участия циpкyлиpyющиx в крови MK в патогенезе PA мнения ^^ледова^ей pacxo-дятся. Показано, что в остове вcex ^CT^^e проявлений PA лежат различной тяжести вacкyлиты, индуцированные ИК В cвeтe этик дaнныx эндотелиальные клетки ^K) co-cyцoв привлекли наше внимание как мишени действия цир-кyлиpyющиx MK. В качестве модельной ^^^^1 были выбрана: чeлoвeчecкиe ЭK перевиваемой линии ЕСУ-З04. Целью нашей работы было выделить MK из плазмы больные PA, oxapaктepизoвaть иx и изучить влияние in vitro этж MK на экстре^ню aдгeзиoнныx молекул ICAM-1/CD54 и Fas-рецептора /CD95 на нoвepxнocти чeлoвeчecкиx эндо-

телиальных клеток. ИК выделяли водно-кислотным методом из плазмы, полученной после плазмофереза. Экспрессию рецепторов на поверхности эндотелиальных клеток оценивали с помощью модифицированного варианта им-муноферментного анализа. ИК после выделения из плазмы больных тестировали индивидуально в концентрациях, соответствующих исходным в организме больного. После 24-часовой инкубации все исследованные образцы ИК (n=8), достоверно и дозо-зависимо усиливали экспрессию молекул ICAM-1. В связи с выгсказанными в литературе предположениями о связывании ИК с ЭК через рецепторы для компонентов системы комплемента мы провели серию исследований влияния ИК на экспрессию ICAM-1 на ЭК в присутствии комплемента. В присутствии комплемента в

4 случаях из 8 стимуляция экспрессии ICAM-1 оказалась достоверно выше, чем в отсутствие комплемента. Однако усиление комплементом эффектов ИК не зависело от ан-тикомплементарности индивидуальных ИК. Кроме того было обнаружено, что те же самые образцы ИК достоверно и дозо-зависимо усиливали экспрессию CD95 на поверхности эндотелиальных клеток. Быта обнаружена сильная положительная корреляция между уровнями экспрессии ICAM-1 и Fas-рецептора, индуцированной ИК (r=0,91). Уровни экспрессии молекул, индуцированной ИК, отрицательно коррелируют с процентным содержанием IgM в составе этих ИК (r = -0,72 и r = -0,82 для CD54 и CD95, соответственно) и положительно коррелируют с величинами соотношений IgG/IgM в составе тех же ИК (r = 0,72 и r = 0,73 для CD54 и CD95, соответственно). Вымвленныге корреляции позволяют предположить, что изученная биологическая активность ИК зависит от соотношений иммуноглобулинов разных изотипов в их составе. Таким образом ИК, циркулирующие в плазме больных РА, обладают способностью индуцировать in vitro экспрессию ICAM-1/ CD54 и Fas-рецептора/CD95 на поверхности эндотелиальных клеток, с чем может быть связана роль ИК в поддержании хронического воспаления при иммунокомплексной патологии.

Работа поддержана грантом РФФИ № 00-04-48064.

Влияние поддерживающей химиотерапии и рефлексотерапии на состояние иммунитета онкологических больных гинекологического профиля после комбинированного лечения

Кузьмина Е. Г., Дорошенко Л.Н.,

Пантелеева Е.С., Неприна Г.С., Ватин О.Е., Сироткина Н.П., Зубова Н.Д.

Медицинский радиологический научный центр РАМН, Обнинск, Россия

Лучевое лечение онкологических заболеваний самостоятельно и в различных комбинациях с химиотерапией и оперативным вмешательством оказывает депрес-

швное действие и/или приводит к развитию ддобалан-ca в иммунной cиcтeмe.

Цель работы - изучить влияние ^pca xимиoтepa-нии (XT) и peфлeкcoтepaпии (PT) на клинико-иммуно-лoгичecкиe показатели бoльныx посте комбинированного лечения (KЛ) злокачественные новообразований яичников (PЯ) и шейки матки ^ШМ).

Mетoды. Oбcлeдoвaны ЗЗ больные PЯ и PШМ III-IV cт. заболевания, нoлyчaвшиx двyxнeдeльныe курга XT нocлe нроведенного 2-7 мecяцeв назад ЕЛ (xимиo-лyчeвo-го, оперативного в отчетании c лучевой и/или XT). XT про-вoдилacь 5-фторурацилом, циcплaтинoм, дoкcopyбицинoм, карбоплатином, CNF, такотлом. 11 больным на фоне Rypca XT была применена PT. Kaждoй больной подбирали методику акупунктуры, микроиглотерапии корпоральные и аурикулярные точек, выполняя но 8-10 процедур.

O^rny отстояния иммунитета проводили до начала очередного кypca XT и посте его завершения. В иммунном CT'ai'yce методом проточной цитометрии (FACScan, фирма Becton Dickinson) c помощью моноклональные антител (фирма Becton Dickinson) определяли количество лейкоцитов, популяционный и cyбпoпyляциoнный отстав лимфоцитов (T-общие, CD3+, T-xeлпepы, CD4+, T-c^pec-отры/киллеры, CD 8+, В-, CD19+, HK-, CD16+CD56+) и иx функциональное отстояние (активированные T- клетки , CD3+HLADR+, PБTЛ на ФГA, уровни ^воротач^е IgM, G и A клаотов, циркулирующие иммунные кoмнлeкcы (ЦИK) цитoтoкcичнocть (ЦИ) но отношению к линии K-562, нейтрофильный фагоцитоз co S. aureus (ФЧ и ФИ).

Pезyльтaты и oбcyждение. Иммунный craxyc боль-ныx через 2-7 мecяцeв нocлe KЛ PЯ и PШМ но cpeднe-грунновым данным xapaктepизyeтcя как кoмнлeкcнoe иммунодефицитное cocтoяниe c умеренным отижени-ем чиcлeннocти T -клеток (нричем T-xeлпepoв, в большей степени, чем T-cyпpeccopoв/киллepoв) и В-клеток и значительным отижением уровня HK-лимфоцитов. Oбщee кoличecтвo aктивиpoвaнныx клеток, в том чдо-ле T-лимфоцитов, CD3+HLADR+, cocтoяниe дpyгиx фyнкциoнaльныx тестов ( PБTЛ на ФГД, уровни гаво-poтoчныx ИГ M, G и A кланов, ЦИK, фагоцитарная активность нейтрофилов) близки к норме.

Kypc XT значительно ycилил иммyнoдeпpeccию. Чиcлeннocть общж T-, T-xeлнepoв и T-cyнpeccopoв/кил-леров cocтaвлялa лишь половину нормы, В- и HK-клеток - одну треть, чисто активированные лимфоцитов и активированные T-клеток отижено более чем вдвое, что проявило^ в отижении PБTЛ на ФГД. XT не повлияла на уровни ^воротач^е ИГ, цитoтoкcичнocть HK-клеток и отстояние нейтрофильного фагоцитоза. PT, проводимая на фоне XT, отизила болевой шндром, значительно улучшила cyбъeктивнoe cocтoяниe бoльныx, co-здав возможность перенести полноценный ^pc XT, и не оказала cyщecтвeннoгo влияния на иммунитет.

T.o., полученные результаты cвидeтeльcтвyют о значительной иммунодепреотии у бoльныx PЯ и PШМ через 2-7 мecяцeв нocлe ИЛ, значительно ycyгyбляющeй-cя кypcoм XT. Применение PT cнocoбcтвyeт улучшению

субъективного состояния больных , возможности перенести полноценный курс ХТ и мало влияет на состояние иммунитета. Поэтому применение РТ оправдано у тяжелых больных в качестве болеутоляющего и улучшающего общее самочувствие средства.

По-прежнему остается необходимым дальнейшее внедрение уже известных методов иммунореабилитации, а также поиск и разработка новых, которые могут быть использованы у онкологических больных на этапах комбинированного лечения и курсов ХТ.

Клинико-иммунологическая эффективность оригинального большого бальзама Биттнера у больных раком гортаноглотки на фоне дистанционной лучевой терапии

Кузьмина Е. Г., Пантелеева Е.С., Политюкова Н.А., Неприна Г.С., Ватин О.Е., Сироткина Н.П., Андреев В.Г., Кирсанов А.Ю.

Медицинский радиологический научный центр РАМН, Обнинск, Россия

Цель исследования - клинико-иммунологическая оценка эффективности Оригинального Большого Бальзама Биттнера, ОБББ, примененного у больных раком гортаноглотки, РГГ, на фоне лучевой терапии.

Материал и методы. ОБББ - лекарственная форма для приема внутрь, полученная спиртовым извлечением из листьев, плодов и корневищ лекарственных растений , подобранных в определенных соотношениях. Поставщиком является фирма “Рихард Биттнер ГмбХ”. Схема лечения и обследования больных РГГ

Прием ОБББ,

недели 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12

Сроки обслед.

больных ^ ^ ^ ^ ^

Лучевая 4-__ ДЛТ 30-40Гр_4-ПЕРЕРЫВ4ДЛТ до 60Гр_^

ПЕРЕРЫВ

Терапия

23 больных РГГ получали дистанционную лучевую гамма терапию, ДЛТ, областей поражения и зон сопряженного метастазирования до СОД 30-40 Гр. После двухнедельного перерыва дозу доводили до 60 Гр (см. схему).

10 больных, кроме облучения, получали 3 раза в день по

10 мл р-ра ОБББ в течение 3 мес на фоне ДЛТ и в перерывах между фракциями облучения. Больные обследованы исходно, через 1 и 3 месяца приема препарата соответственно после доз облучения 30-40 Гр и 60 Гр.

Результаты. В исходном состоянии иммунитета при РГГ выявляется дисбаланс: у 25% больных повышен уровень лейкоцитов и лимфоцитов. В Т-системе иммунитета повышена численность Т-супрессоров/кил-

леров (CD8+) и снижена их РБТЛ на ФГА; в В-системе

- повышен уровень сывороточного ИГА при, нормальной численности В-клеток (СВ19+) и уровней ^М, G классов; в системе НК-клеток - при нормальном числе клеток ( CD16+CD56+) снижена цитотоксичность, ЦИ; в системе фагоцитов - фагоцитарная активность нейт-рофилов в норме.

В контрольной группе больных после облучения в дозе 30-40 Гр в крови снизился уровень лейкоцитов и лимфоцитов, наиболее значимо затронув Т-систему иммунитета: снизилась численность Т-клеток (ниже нормы Т-хел-перов, CD4+, и до нормы Т-супрессоров/киллеров, CD8+) и их пролиферативный ответ на ФГА при сохранении исходного уровня активации Т-клеток (CD3+HLADR+). В системе В-клеток: число CD19+ клеток сократилось в 2 раза при сохранении прежних уровней сывороточных ИГ М, G и А классов. В системе НК-клеток показатели остались на исходном уровне (число CD16+CD56+ клеток и ЦИ). Фагоцитоз существенно не изменился (ФЧ и ФИ).

После завершения ДЛТ в дозе 60 Гр усиление иммунодепрессии проявилось в дальнейшем снижении количества лимфоцитов (за счет Т-общих, CD3+, Т-хел-перов, CD4+). Все остальные показатели иммунитета остались на уровне предыдущего этапа обследования.

Прием ОБББ хорошо переносился больными, не вызывал у них нежелательных субъективных ощущений и негативных реакций со стороны основных биохимических показателей крови и иммунного статуса.

Динамика большинства показателей иммунитета в оба срока оценки действия ОБББ была такая же, как в группе без его использования: отмечено снижение численности циркулирующих лимфоцитов, Т-клеток (Т-хелперов, CD4+, и Т-супрессоров/ киллеров, CD8+). На число и функцию В- и НК-клеток ОБББ значимого влияния не оказал. Т.о., эти эффекты в обеих группах должны быть отнесены за счет фракционирования облучения и действия фактора времени, но не за счет ОБББ.

К особенностям действия ОБББ можно отнести более высокий уровень ответа на стимуляцию ФГА и более быструю нормализацию фагоцитарной активности нейтрофилов. Кроме того, ОБББ также модифицировал спонтанную пролиферацию лимфоцитов, понижая ее уровень. Для выяснения механизмов иммунотропного действия ОБББ необходимо продолжение исследований.

Разработка метода количественного определения в ИФА антител к пероксидазе щитовидной железы

Кузьмина Н.С., Кузнецова Г.И., Яковлева И.В., Буркин М.А., Свиридов В.В.

НИИВС им. И.И.Мечникова РАМН, Москва

С целью совершенствования диагностики аутоиммунных заболеваний щитовидной железы предпринята разработка технологии промышленного выпуска ре-

агентов для иммуноферментного определения антител к тиреопероксидазе (ТПО).

При выборе общего формата диагностикума помимо оптимизации таких параметров, как концентрация антигена при сенсибилизации твердой фазы и свойства самого пластика, разведение конъюгата, создание стандартов для калибровки теста, пробоподготовка исследуемого материала и прочих, особое внимание приходится уделять приготовлению антигена. От степени его очистки, применяемых при работе с ним химических и физических методов зависят во многом аналитические характеристики набора.

При определении аутоантител к антигенам щитовидной железы это обстоятельство имеет особое значение, поскольку аутоантигенами у разных индивидов могут быть тиреоглобулин (ТГ), ТПО, клеточный рецептор тиреотропина. Незначительные примеси какого-либо из них в препаратах другого могут существенно снизить достоверность получаемых данных.

Было показано, что достигаемая степень очистки ТПО при использовании различных солюбилизаторов и гель-хроматографии недостаточна. Получаемые при этом препараты содержат до 1-10% примеси ТГ. В связи с этим была предпринята попытка использования для очистки антигена иммуносорбента, приготовленного на основе полученных нами моноклональных анти-ТПО антител. Антитела не реагировали с ТГ, Т-4- и Т-3-БСА. Иммуноаффинная очистка позволила получить гомогенный препарат ТПО (1) из микросомальной фракции щитовидной железы с

4-8-кратным увеличением выхода продукта и хорошей сохранностью ферментативной активности ТПО по сравнению с очисткой гель-фильтрацией (препарат 2).

Оценка аналитических характеристик наборов, приготовленных на основе препаратов 1 и 2 в сравнении с коммерческими наборами фирм РИА-Ат-ТПО (“Иммунотех”, Чехия), ИФА-Ат-ТПО (“ORGen-tec”, Германия) и ИФА-Ат-ТПО (“ВютеМса”, США) при тестировании сывороток здоровых доноров и 100 пациентов с патологией ЩЖ показала, что ди-агностикум на основе использования аффинно-очищенного антигена позволяет выявлять ауто-АТ к ТПО с чувствительностью 5 МЕ/мл в диапазоне определяемых концентраций 10 - 1000 МЕ/мл, при коэффициенте вариации не более 9%. При этом корреляция с данными, полученными при использовании упомянутых коммерческих наборов, составляла соответственно 91,05; 85,72; 86,94%, соответственно.

Полученные данные свидетельствуют о целесообразности использования моноклональных анти-ТПО антител при разработке промышленной технологии производства реагентов к иммунофермент-ным диагностикумам для определения антител к ТПО.

Диагностика аутоиммунным заболеваний с помощью метода непрямой иммунофлюоресценции

Лапин С.В., Тотолян А.А.

Лаборатория клинической иммунологии СПбГМУ им. акад. И.П. Павлова

Метод непрямой иммунофлюоресценции или метод Кунса в настоящее время активно применяется для диагностики широкого спектра аутоиммунных заболеваний.

Нами были разработаны методы практического выявления аутоантител с помощью непрямой иммунофлюоресценции. Они используются в иммунологической диагностике разнообразных заболеваний в разных разделах клинической медицины от паранеопластических нейропатий до ревматоидного артрита (см. табл.).

В качестве субстратов используются ткани лабораторных животных, перевиваемых клеточных линий, ткани человека и клетки периферической крови здоровых доноров. Применяется разнообразные методы фиксации ткани включающие этиловый спирт, ацетон, глютаровый альдегид. Разработаны методы адгезии криосрезов и клеточных субстратов с помощью аминопропилсилана и поли^-лизина. Были тестированы флюоресцентные конъюгаты различных фирм, удовлетворительно качество метода было отмечено при использовании материалов отечественных производителей.

Методы востребованы клиницистами и активно используются в практической работе.

Взаимодействие с клетками натуральным антител, реагирующих с ДНК

Леках И.В., Замулаева И.А.

Медицинский радиологический научный центр РАМН, Обнинск, Россия.

Введение. В препаратах иммуноглобулинов здоровых доноров присутствуют натуральные полиспеци-фичные аутоантитела, реагирующие с ДНК и рядом других антигенов. Нами ранее показано, что такие антитела представлены двумя субпопуляциями - свободными и скрытыми (находящимися в составе комплексов). По ряду показателей скрытые натуральные антитела сходны с аутоантителами к ДНК и кардиолипину, характерными для СКВ и АФЛС. Известно, что аутоантитела при таких заболеваниях способны взаимодействовать с различными клетками и вызывать их гибель. Выявление подобных свойств у натуральных аутоантител представляет несомненный интерес.

Цель работы состояла в изучении взаимодействия свободных и скрытых натуральных аутоантител с различными клетками, определение их цитотоксичности и механизма гибели.

Материалы и методы. В качестве источника антител использовали препараты иммуноглобулинов для

Taблицa. ПЕРЕЧЕНЬ ВЫЯВЛЯЕМЫХ AyTOAHTm^ И ИХ ДИAГHOCTИЧECKOE ЗHAЧEHИE

Область применения Название аутоантитела Заболевание Тканевой субстрат

Гематология Aнтителa к париетальным клеткам желудка (GPC) В12-дефицит-ная анемия Печень/почка/ желудок крысы

Aнтитрoмбoци-тарные антитела Идиопатичес-кая аутоиммунная тром-боцитопени-ческая пурпура Изотромбоциты человека

Ревматология Aнтикерaтинo-вые антитела (AKA) Ревматоидный артрит Пищевод крысы

Aнтинейтрo-фильные цитоплазматические антитела (ANCA) Некротические васкулиты Нейтрофилы здорового донора

Aнтинyклеaр-ные антитела (AHA) Системные заболевания соединительной ткани Клеточная линия НЕр-2

Неврология Aнтителa к скелетной мышце Миастения Скелетная мышца человека

Aнтителa к клеткам Пуркинье мозжечка Паранеоплас- тическая мозжечковая атаксия Мозжечок человека

Гепатология Aнтимитoxoн-дриальные антитела ^A) Первичный билиарный цирроз Печень/почка/ желудок крысы

Aнтителa к гладким мышцам (SMA) Аутоиммунный гепатит Печень/почка/ желудок крысы

Эндокриноло- гия Aнтителa к островковым клеткам (ICA) Сахарный диабет 1 типа Поджелудочная железа человека

Aнтителa к антигенам щитовидной железы Тиреоидит Хашимото Щитовидная железа человека

Aнтителa к надпочечникам Болезнь Аддисона Надпочечники человека

Кардиология Aнтителa к миокарду Идиопатичес-кая дилятаци-онная кар-диомиопатия Миокард человека

Нефрология Aнтителa к базальной мембране почки (ВMA) Синдром Гудпасчера Почка человека

внутривенного введения. Свободные антитела, реагирующие с ДНК, выделяли с помощью аффинной хроматографии на ДНК-целлюлозе. Истощенную фракцию IgG подвергали ионообменной хроматографии на QAE-сефадексе (в результате чего выявляли активность скрытых антител), а затем - повторной хроматографии на ДНК-целлюлозе для получения скрытых антител. Способность антител реагировать с ДНК определяли методом ИФА. Взаимодействие антител с клетками и их цитотоксические свойства исследовали с помощью проточного цитофлуориметра - сортировщика FACS

Vantage (США). Долю клеток, связавших антитела, определяли с помощью прямой или непрямой иммуно-флуоресцентной реакции, долю погибших клеток - по проникновению пропидий иодида. Апоптотические изменения клеточной мембраны выявляли с помощью ан-нексина V.

Результаты. Установлено, что свободные и скрытые антитела значительно различаются по воздействию на клетки. Только скрытые антитела активно взаимодействовали с клетками различной ткане- и видоспе-цифичности - тимоцитами и тромбоцитами крыс, ти-момы EL-4, клетками костного мозга мышей, фиброб-ластами хомяка, HeLa, эритроцитами и лимфоцитами человека. Свободные антитела связывали не более 510% клеток, в случае скрытых антител эта величина варьировала от 30% для эритроцитов до 70-90% для лимфоцитов, тимоцитов и клеток тимомы (80 мкг антител на 5х105клеток) и до 94% для тромбоцитов (5 мкг антител на 5х105 клеток).

Скрытые антитела в отличие от свободных вызывали гибель клеток (от 14,3% до 73,2% в зависимости от типа клеток, концентрации антител и времени воздействия на клетки). Цитотоксичность антител для нормальных тимоцитов и клеток тимомы достоверно не различалась.

В экспериментах с аннексином V было установлено, что инкубация лимфоцитов со скрытыми антителами приводила к изменениям клеточной мембраны, характерным для апоптоза - доля апоптотических клеток возрастала на 30% по сравнению с контролем.

Выводы. Свободные и скрытые натуральные аутоантитела, перекрестно реагирующие с ДНК и рядом других антигенов, различаются по способности взаимодействовать с различными клетками и вызывать их гибель. Только скрытые антитела (после высвобождения из комплексов) активно реагируют с клетками и приводят к их гибели в апоптозе.

Исследование содержания цитокинов в сыворотке крови больных хроническим вирусным гепатитом

Луговская С.А., Лукина Е.А., Сысоева Е.П., Левина А.А., Маевская М.В.

Российская медицинская академия последипломного образования М3 РФ, Москва

В последние годы накоплено достаточно убедительных данных, свидетельствующих об интеграции и репликации вирусов (HBV и HCV) как в гепатоцитах, так и в мононуклеарных клетках крови, костного мозга, лимфатических узлов, селезенки и других тканей. Длительная персистенция гепатотропных вирусов в клетках иммунной системы (лимфоциты, моноциты) приводит к нарушению их иммунологической функции, что наряду с прямым цитопатическим эффектом этих вирусов лежит в основе патогенеза поражения различных органов и тканей. В связи с этим представляет интерес

изучение содержания цитокинов и влияния их на гемо-поэз у больных хроническим вирусным гепатитом (ХВГ).

С этой целью у 33 больных ХВГ (ХВГ С -26 больных, ХВГ В -5, ХВГ G-1, ХВГ В+С -1) исследовали концентрацию эритропоэтина (ЭПО), интерлейкина-6 (ИЛ-6), растворимых рецепторов ИЛ-6 (рИЛ-6), фактора некроза опухоли а (ФНО-а), растворимых рецепторов ФНО (рФНОРЦ в сыворотке крови имму-ноферментным методом с помощью коммереческих тест-систем фирмы R&D systems (США), “Innogenetics N.V.” (Бельгия). У всех больных ХВГ в биоптатах печени обнаружены признаки низкой активности воспалительного процесса. Повышение активности АЛТ и ACT в сыворотке крови наблюдалось у 100% больных, из них у 24 (80%) в 2 раза, у 6(20%) - от 2 до 5 раз выше нормы. При исследовании периферической крови у 63% больных ХВГ выявлена нормохромная анемия, без признаков гемолиза. Biz - или фолиеводефицитной анемии.

Результаты. Увеличение концентрации ИЛ-6 в сыворотке крови больных ХВГ обнаружено у 16 (48,5%), ФНО-а - у 33 (100%), рФНОР! - у 24 (72,7%), ЭПО - у 14 (42,4%) обследованных. Содержание рИЛ-бР в сыворотке крови больных ХВГ соответствовало норме. При сопоставлении концентрации цитокинов в сыворотке крови больных ХВГ с анемией и без анемии обнаружены достоверные различия в содержании ЭПО и ФНО-а. У больных ХВГ, протекающим с анемическим синдромом, эти показатели были значительно выше, чем у пациентов с нормальной концентрацией гемоглобина в крови - 50,8±16,7 ед/л, 83,8±9,1 пг/мл и 9,06±1,5 ед/л, 52,8±3,9 пг/мл (р<0,02, р<0,001) соответственно. ФНО-а относится к цитокинам, считающимся индукторами программированной гибели клеток. Значительно более высокая концентрация ФНО-а в крови больных ХВГ с анемией может свидетельствовать об усилении апоптоза гемопоэтичес-ких клеток, что является одной из причин развития неэффективного гемопоэза у этих больных. Параллельно с повышением секреции ФНО-а при ХВГ увеличивается содержание рФНОР!, являющихся продуктами катаболизма клеточных рецепторов. Стимуляция синтеза ФНО-а одновременно вызывает усиленное сбрасывание рФНОР^ физиологическая роль которых заключается в связывании и ингибировании ФНО-а, что блокирует его токсичность. Наличие анемии у больных ХВГ при высокой концентрации ЭПО, по-видимому, объясняется недостаточной чувствительностью к ЭПО рецепторов на клетках-предшественни-ках эритропоэза.

Таким образом, репликация вирусов в гепатоцитах, мононуклеарных клетках крови и костного мозга стимулирует моноциты/макрофаги, что приводит к повышенному синтезу провоспалительных цитокинов, играющих роль в патогенезе развития неэффективного гемопоэза у больных ХВГ.

Интерлейкин-8 как возможный маркер иммунной активации у больным ИБС с проявлениями хронической сердечной недостаточности

Максимова Т.А., Ситникова М.Ю., Галкина О.В., Кузьмичева П.И., Тотолян А.А.

Санкт-Петербургский Государственный медицинский университет им. акад. И.П. Павлова, Санкт-Петербург, Россия

Согласно современным концепциям ведущая роль в развитии и прогрессировании хронической сердечной недостаточности (ХСН) принадлежит нарушениям ней-рогуморальной регуляции кровообращения и эндотелиальной дисфункции. Менее изученным остается вклад иммунных механизмов в патогенез ХСН. Результаты экспериментальных и клинических исследований свидетельствуют о негативном влиянии провоспалительных цитокинов (ТОТа, ГЬ-ф, ГЬ-6) на сократимость миокарда, метаболизм скелетной мускулатуры, функциональную активность эндотелия. Однако, значение СХС-хе-мокинов, сравнительно нового класса цитокинов, (к которым относится изучаемый в данном исследовании интерлейкин-8), в патогенезе ХСН остается неясным.

Целью данной работы явилось определение уровней циркулирующего интерлейкина-8 (1Ь-8) и мочевой кислоты (характеризующей активность процессов гибели клеток) у больных ИБС с проявлениями ХСН 2-4 функционального класса (ф.к.) (по классификации Нью-Иор-кской ассоциации кардиологов) и их сопоставление с клиническими и инструментальными данными.

Обследовано 50 мужчин ИБС с проявлениями ХСН 2-

4 ф.к. Средний возраст больных на момент исследования составил 57,5±1,5 года. В качестве контрольной группы обследовано 8 мужчин ИБС, сопоставимых по возрасту, без проявлений ХСН. Уровень ГЬ-8 в плазме крови определялся иммуноферментным методом, уровень мочевой кислоты - ферментативным методом. Всем больным выполнялось стандартное эхокардиографическое (ЭХОКГ) исследование на аппарате “Vmgmed CFM 800”.

По результатам исследования, выявлено достоверное повышение уровня циркулирующего ГЬ-8 у больных с проявлениями ХСН по сравнению с контрольной группой (3,7±0,5 и 0,7±0,4 пг/мл соответственно;р<0,05). При анализе показателей в группах больных ХСН различного функционального класса выявлено достоверное различие в содержании ГЬ-8 и мочевой кислоты (результаты представлены в таблице), причем достоверное повышение уровня ГЬ-8 по сравнению с уровнем мочевой кислоты наблюдалось у больных ХСН более низкого ф.к.

При сопоставлении клинических данных с уровнем циркулирующего ГЬ-8 не выявлено достоверных различий в группах больных в зависимости от функционального класса стенокардии, объективной выраженности одышки и отечного синдрома. Однако у пациентов, отмечавших снижение массы тела в течение последнего

Taблицa

Показатель XCH 2 ф.к., n=18 XCH 3 ф.к., n=22 XCH 4 ф.к.,п=10

IL-8, пг/мл Мочевая кислота, ммоль/л 1,8±0,3 0,34+0,02 4,6+1,0* 0,38+0,02 5,0+1,3* 0,43+0,03*

*p< 0,05

года, по сравнению с пациентами со стабильным весом вымвлено достоверное повышение уровня IL-8 (4,9±1,0 и 2,9±0,9пг/мл соответственно; р<0,05). При сопоставлении уровня IL-8 с данными ЭХОКГ отмечено достоверное повышение исследуемого показателя в группе больных с резко сниженной систолической функцией левого желудочка (ЛЖ) (фракция выброса J0,25, в среднем 0,20±0,01) по сравнению с пациентами с умеренно сниженной систолической функцией ЛЖ (фракция выброса >0,25, в среднем 0,36±0,01), уровень IL-8 составил соответственно 5,6±1,5 и 3,0±0,5пг/мл (р<0,05).

Результаты исследования продемонстрировали повышение уровня циркулирующего IL-8 , что указывает на роль СХС-хемокинов при ХСН. Особенно значимое повышение содержания исследуемого хемокина наблюдается у больных с тяжелой ХСН (3-4 ф.к.), сниженной массой тела и значимыми нарушениями систолической функции ЛЖ. Следует отметить большую информативность определения IL-8 в сыворотке крови у больных с ХСН по сравнению с определением уровня мочевой кислоты.

Прогностическая значимость уровня ИФНу в сыворотке крови больных с политравмой

Маркелова Е.В., Силич Е.В, Недобыльская Ю.П.

ВГМУ, Владивосток, Россия

Тяжелая механическая травма приводит к развитию иммунной недостаточности, преимущественно клеточного типа. За клеточно-опосредованный иммунный ответ ответственны Th1, которые продуцируют ИФНу, активирующий эффекторные функции макрофагов, их цитотоксичность, микробицидность, продукцию других цитоки-нов, а также повышают функциональную активность Т-лимфоцитов. В связи с этим целью нашей работы бышо изучение динамики ИФНу у больных с политравмой.

Нами исследована сыворотка крови 35 больных с политравмой тяжелой степени, находившихся на лечении в отделении реанимации, в динамике заболевания (на 1, 5-7 и 10-12 сутки). У 20 пациентов во время лечения развились инфекционные осложнения (пневмония, сепсис), 15 больных были без инфекционных осложнений. Контролем служила сыворотка 20 здоровых доноров соответствующего возраста. Определение ИФНу проводилось иммуноферментным методом с применением тест-систем фирмы “Genzyme Diagnostics” , США.

В результате исследования установлено, что у всех больных в начале заболевания отмечалось достоверное повышение ИФНу по сравнению со здоровыми донорами (37,6±3,6 пг/мл и 11,2±0,4пг/мл, соответственно), тогда как на 5-7 сутки у больных без инфекционных осложнений уровень ИФНу закономерно повышался, а у больных с инфекционно-воспалительными осложнениями, напротив, регистрировалось снижение содержания ИФНу в сыворотке крови (р<0,001). При анамнезе уровня ИФНу на 10-12 сутки заболевания найдено повышение его у больных обеих групп.

Таким образом, снижение уровня ИФНу на 5 сутки заболевания можно считать прогностическим признаком развития инфекционных осложнений у больных с политравмой.

Фенотипические особенности лимфоцитов периферической крови при синдроме Клайнфелтера

Мартенова А.А., Семенов А.В., Сотникова Н.Ю., Жукова Т.П., Гужева А.Е.

НИИ “Материнства и детства” им. В.Н. Городкова, Государственная медицинская академия,

Иваново, Россия

Синдром Клайнфелтера является наиболее частой формой врожденного первичного гипогонадизма у мужчин. Синдром обусловлен аномалией половых хромосом (в типичном случае больные имеют кариотип 47XXY). В результате гиалинизации семенных канальцев и атрофии сперматогенного эпителия яичек, у всех пациентов отмечается азооспермия и бесплодие. Кроме того, благодаря низкому уровню тестостерона для всех пациентов характерен высокий уровень гонадотропных гипофизарных гормонов - ФСГ и ЛГ. В литературе имеются сведения о наличии гипотиреоза у большинства обследованных. Таким образом, при синдроме Клайн-фелтера хромосомная аномалия ведет к значительному гормональному дисбалансу, что не может не сказаться на состоянии иммунной системы пациентов.

Цель работы. Оценить иммунный статус мужчин с синдромом Клайнфелтера для поиска новых путей адекватной терапии.

Материалы и методы. Методом проточной цитоф-люориметрии с использованием моноклональных антител фирмы (МедБиоСпектр) и стандартными иммунологическими методами оценивали иммунный статус у 5 мужчин в возрасте 22-28 лет, обратившихся на анд-рологический прием по поводу бесплодного брака. Синдром Клайнфелтера был впервые диагносцирован при цитогенетическом исследовании, проведенном после обращения, то есть гормонального лечения больные не получали. Для всех пациентов были характерны азооспермия и гипоспермия и изменения гормонального фона, признаки хронического воспалительного процесса в урогенитальном тракте. Контрольную группу со-

ставили 10 практически здоровых фертильных мужчин соответствующего возраста.

Результаты. Иммунологическое обследование больных показало, что при синдроме Клайнфелтера у пациентов наблюдались достоверные изменения в иммунном статусе. Так, у них снижалось содержание основных популяций Т-лимфоцитов (CD3+, CD4+, CD8+), при этом соотношение CD4+/CD8+ клеток не менялось. Со стороны В-звена иммунной системы наблюдалось уменьшение количества В-лимфоцитов и концентрации сывороточного IgG на фоне повышения уровня циркулирующих иммунных комплексов. Следует отметить выраженное снижение резервных возможностей фагоцитов при высокой исходной НСТ-активности нейтрофилов. Отличительной чертой больных синдромом Клайнфелте-ра бышо уменьшение содержания естественных киллеров в периферической крови. Анализ экспрессии активационных молекул на поверхности лимфоидных клеток позволил установить, что количество CD25+ и HLA-DR+ клеток в лимфоцитарном гейте было достоверно снижено. Уровень лимфоцитов, несущих рецепторы к трансферрину и С3 компоненту комплемента существенно не изменялся. У больных с синдромом Клайнфелте-ра достоверно снижалась экспрессия Fas-антигена на поверхности периферических лимфоцитов.

Фенотипический профиль лимфоидных клеток при хроническом вагинальном кандидозе

Мартенова А.А., Сотникова Н.Ю.,

Бойко Е.Л., Лопаткина Н.А.

Ивановский НИИМиД им. В.Н. Гродкова,

Иваново, Россия

Исследования последних десятилетий свидетельствуют об увеличении частоты кандидозных поражений у женщин. Слудует отметить. что кандидозные кольпиты в преобладающем большинстве случаев (до 78%) вызываются видом Candida albicans. В последние годы значительно возросло число больных, устойчивых к стандартной терапии. Как неспецифические, так и специфические иммунологические механизмы защиты при этом заболевании, несмотря на проводимые исследования, остаются не до конца ясными. В нарушении динамического равновесия между паразитирующим грибом и иммунологической защитой макроорганизма значительную роль играет популяционный состав иммунокомпетентных клеток и их спосбность адекватно ответить на активирующий сигнал, однако данные по этому вопросу недостаточны. Знание иммунологических механизмов защиты от кандидоинфек-ции, позволило бы улучшить результаты лечения путем внедрения иммунокорригирующих средств, повысить эффективность профилактических мероприятий.

Цель работы - изучение фенотипических особенностей иммунокомпетентных клеток периерической

крови у женщин репродуктивного возраста с истинным хроническим вагинальным кандидозом.

Методы изучения. Было обследовано 35 больных в возрасте от 19-35 лет, страдающих истинным хроническим вагинальным кандидозом. Контрольную группу составили 20 здоровых женщин того же возраста. Иммунный статус пациенток оценивали методом проточной цитофлюориметрии, с использованием моноклональных антител (фирмы МедБиоСпектр). Тесты на определение функциональной активности клеток включали оценку НСТ- и фагоцитарной активности нейтрофилов, ваработки фактора, угнетающего миграцию лейкоцитов в ответ на стимуляцию ФГА фї&о, ^А), количества сывороточных иммуноглобулинов (IgG, ^А, ^М) и содержания циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК),

Результаты. При развитии хронического вагинальнор-го кандидоза отмечалась тенденция к уменьшению количества CD3+ и CD4+лимфоцитов, но достоверное снижение относительного содержаняе CD8+ клеток, без изменения индекса регуляции CD4+/CD8+. Наблюдалась незначительная тенденция к уменьшению количества CD16+ клеток в лимфоцитарном гейте. Содержание лимфоцитов с ранними (CD25) и поздними маркерами активации (^А-DR) достоверно снижалось. Количество клеток, экспрессирующих на своей поверхности CD71+ и СD95+ молекулы существенно не изменялось. Происходило достоверное накопление клеток лимфоидного ряда, экспрессирующих молекулы CD45RA+, относящихся к пулу покоящихся клеток, то есть не стимулированных антигеном после их выхода из тимуса. Отмечалось достоверное понижение уровня лимфоцитов, несущих рецепторы к С3Ь (CD11b+). Молекула CD11Ь+ в лимфоцитарном гейте экспрессируется, в основном, на КК клетках, а содержание клеток, экспрессирующих ее варьирует от степени активации и диффе-ренцировки КК. Дефицит адгезивных молекул CD11b на поверхности ИКК может свидетельствовать о нарушении процессов межклеточной кооперации и соответственно механизмов противогрибковой защиты. Снижение содержания лимфоцитов, несущих активационные маркеры, позволяет предположить наличие нарушений функциональной активности лимфоцитов, что подтверждается снижением продукции МІЕ У женщин с вагинальным кандидозом не отмечалось достоверных сдвигов в показателях В-звена иммунитета, при этом количество ЦИК в периферической крови больных было увеличено. Фагоцитарное звено иммунитета характеризовалось повышением количества ней-трофильных гранулоцитов (НГ), отсутствием повышения НСТ-активности после кондиционирования нейтрофилов зимозаном, понижением фагоцитарной активности.

Заключение. Таким образом, истинный хронический вагинальный кандидоз развивается на фоне нарушения активационных процессов, участвующих в функционировании клеточно-субстратных и межклеточных взаимодействий и несостоятельности и неспособности фагоцитарной системы нейтрофилов адекватно реагировать на инфекционный процесс.

Иммунный статус мужчин при простатите смешанного хламидийно-трихомонадного генеза с низкой активностью воспалительного процесса

Мартенова А.А., Сотникова Н.Ю.,

Семенов А.В., Паникратов К.Д.

НИИ материнства и детства им. В.Н. Городкова, Государственная медицинская академия,

Иваново, Россия

Урогенитальная хламидийная инфекция является самой распространенной среди заболеваний, передающихся половым путем. Внедрение в клиническую практику различных новых антибиотиков, зачастую приводит к увеличению потока больных с хроническим персистирующим урогенитальным хламидиозом (ХП УГХ), а течение хлами-дийной инфекции зачастую осложняется дополнительной инфекцией, в частности трихомониазом. Сочетанное инфицирование больного Chlamidia trachomatis и Trichomonas vaginalis ведет к более рефрактерному к терапии течению заболевания и вызывает специфические изменения иммунного статуса. В доступных литературных источниках мы не встретили подобных исследований. Проблема смешанной хламидийно-трихомонадной урогенитальной инфекции осложняется еще и тем, что при назначении терапии обычно не учитывается продолжительность инфекции, степень выраженности воспалительного процесса, особенности проводившегося ранее лечения, нет четкого представления о состоянии иммунной системы и значении иммунологических сдвигов в развитии заболевания у больных с хронически протекающими процессами.

Целью нашей работы быта оценка иммунного статуса у мужчин, страдающих хроническим хламидийно-трихо-монадным простатитом с низкой активностью воспаления.

Материалы и методы. Было обследовано 10 мужчин в возрасте 21-29 лет, страдающих хроническим, хла-мидийно-трихомонадным простатитом. Контрольную группу составили 10 клинически здоровых людей. Урогенитальный хламидиоз и трихомониаз диагностирован методом ИФА (”MultiScan”). Определение экспрессии поверхностных маркеров периферическими лимфоцитами проводили методом проточной цитофлюориметрии на проточном цитометре FACScan (’’Becton Dickincon’’, USA) с использованием моноклональных антител фирмы “МедБиоСпектр”. Оценку функциональных параметров ИКК проводили стандартными методами.

Результаты и обсуждение. Сравнительный анализ популяционного состава лимфоцитов периферической крови мужчин с ХП УГХ и трихомониазом, с показателями доноров показал, что при низкой активности воспаления, достоверно снижалось содержание CD3+ зрелыгх лимфоцитов. Отмечалась тенденция к незначительному увеличению количества клеток с фенотипом CD4+ и понижению содержания CD8+ лимфоцитов, без изменения индекса регуляции CD4+/ CD8+. В наших исследованиях отмечалось достоверное повышение количества NK-клеток (CD16+). Экспрессия акти-

вационных маркеров периферическими лимфоцитами (CD25+, CD71+, HLA-DR+) существенно не изменялась. Количество клеток, экспрессирующих на своей поверхности молекулу CD95, в периферической крови больных с ХП УГХ и трихомониазом, было достоверно снижено. В периферической крови больных происходило также накопление клеток лимфоидного ряда, экспрессирующих молекулы CD45RA+. При ХП УГХ и трихомониазе, было достоверно снижено количество клеток с адгезивными молекулами CD11Ь+. Таким образом, при ХП УГХ наблюдались изменения в экспрессии активационных маркеров и адгезионных молекул, что позволяет предположить наличие нарушений в функциональной активности лимфоцитов, что подтверждается снижением МШ. В показателях В-звена не отмечалось достоверных сдвигов. Фагоцитарное звено иммунитета характеризовалось повышением количества нейтрофи-лов с рецепторами к С3 компоненту комплемента, снижением резервных возможностей фагоцитов при высоком исходном уровне НСТ активности нейтрофилов.

Заключение. Таким образом, ХП УГХ в сочетании с трихомониазом, проявляющийся хроническим простатитом со слабой выраженностью воспалительного процесса, приводит к изменению не только клеточного иммунитета, но и факторов неспецифической защиты организма. Наиболее уязвимыми при этом оказываются процессы активации лимфоидных клеток, межклеточного взаимодействия и фагоцитарная система нейтрофилов.

Новые взгляды на вакцинацию против кори детей с бронхиальной астмой

Марцишевская Е.А., Осипова З.А., Монахова Н.Е.

НИИ детских инфекций М3 РФ,

Санкт-Петербург, Россия

Вопрос о вакцинации детей с бронхиальной астмой (БА) против кори остается актуальным до настоящего времени, так как опасение возможного обострения основного заболевания заставляет врачей назначать массивную антигистаминную (АГТ) и спазмолитическую терапию. Имеются сомнения и в иммунологической эффективности вакцинации таких детей.

Цель исследования - разработать тактику вакцинации детей с БА с минимальным использованием медикаментозных средств или совсем без лекарственных препаратов.

Для решения поставленной задачи в 1997-2000 гг в амбулаторных условиях проведена иммунизация 45 детей с БА (23 человека - 1 группа - получали увеличенную дозу базовой, спазмолитическую и АГТ, 22 человека - 2 группа

- не получали никакой терапии при легкой и среднетяжелой формах БА, а при тяжелой - базовые средства без изменения дозировки). Группы детей были сопоставимы по полу, возрасту (6-16 лет) и формам БА (тяжелые - 26,5% в

1 группе, 22,7% - во 2 группе, среднетяжелые - 43,5% и 54,5 % и легкие - 30% и 22,8% соответственно). В качестве группы сравнения (3 группа) привито и обследовано 20 человек такого же возраста без аллергических заболеваний. За всеми привитыми проведено клиническое наблюдение в поствакцинальном периоде (ПВП) в течение 1 месяца. Лабораторное обследование включало определение содержания общего ^Е, специфических противокоревых антител (АТ) на 14-й, 30-й дни и через 1 год.

Первичную иммунизацию (V) получили 28 детей (11

- в 1 гр., 10 - во 2 гр. и 7- в 3 гр.), ревакцинировано

- 37 ( по 12 - в 1 и 2 гр. и 13 в 3 гр.). ПВП у большинства привитых протекал бессимптомно, число нормальных слабых общих реакций составило в 1 группе 26,1%, во 2

- 27,3%, в 3 - 10%.Сильных и патологических реакций выявлено не было. Местные реакции были у 1 ребенка во

2 группе и 1 - 3 группе. У 3 детей (2 человека, из получавших АГТ и 1 из 2 группы) отмечалось обострение основного заболевания, купировавшееся в течение 1 суток. Определение уровня общего подтвердило, что у детей с БА его уровень значительно выше (в 7-10 раз), чем в группе сравнения. В динамике вакцинального процесса уровень ^ Е не увеличивался ни в одной из групп. У детей с обострениями основного заболевания в ПВП уровень общего ^Е соответствовал средним значениям и не увеличивался за время наблюдения. Изучение титров коревых АТ выявило существенные различия между группами детей (табл.). Из таблицы видно, что у детей с БА, привитых с применением АГТ, отмечалась замедленная динамика АТ- образования по сравнению с детьми, не получавшими дополнительных лекарственных препаратов. Уровень АТ у детей с обострениями основного заболевания не отличался от средних значений.

Заключение: вакцинация против кори детей с БА безопасна и иммунологически эффективна. Назначение дополнительной медикаментозной подготовки не рекомендуется, так как АГТ не влияет на течение вакци-

Таблица. ДИНАМИКА СРЕДНЕГЕОМЕТРИЧЕСКИХ ТИТРОВ КОРЕВЫХ АТ У ДЕТЕЙ, ПРИВИТЫХ ПРОТИВ КОРИ

Группы детей /и/ п До прививки 14-й день 30-й день % СН на 30-й день Через 1 год р

1 V 11 0* 0,39+0,3 0,81+0,57 75,0 4,49+1,4* 0,001

группа ГС/ 12 3,42+0,86* 5,66+2,08 7,72+0,67* 10,0 6,32+0,5 0,001

2 V 10 0* 1,77+1,23 1,49+0,75* 37,5 4,74+1,5 0,05

группа ГС/ 12 3,36+0,78* 9,08+1,92* 7,07+0,46 10,0 6,32+0,4 0,01

3 V 7 0* 2,16+1,09* 2,47+0,3 42,8 4,88+1,5 0,05

группа ГС/ 13 3,14+0,27* 7,2+0,88* 7,02+0,59 7,7 6,62+0,7 0,001

Примечания: СН - серонегативные, р - достоверность

нального процесса и частоту обострения основного заболевания и тормозит антителообразование.

Новый способ определения специфической сенсибилизации организма к пищевым аллергенам

Матышева Н.Н.

Детская больница св. Марии Магдалины, Санкт-Петербург, Россия

Для определения специфической сенсибилизации организма к пищевым аллергенам применяются несколько методов, среди которых значительное распространение получила реакция торможения миграции лейкоцитов (РТМЛ). Многолетний опыт автора настоящей работы указывает на то, что РТМЛ дает положительные результаты далеко не во всех случаях, в которых пищевая аллергия диагностируется клинически, поскольку учитывается только клеточный фактор реакции.

В работе описывается существо модификации РТМЛ, заключающееся в том, что, помимо клеточного фактора, учитываются также и гуморальное звено РТМЛ. Модификация РТМЛ состоит в следующем. Кровь, полученную из вены больного, помещают в пробирку, содержащую гепарин (из расчета 20 единиц на 1 мл. крови). Пробирки с кровью ставят в холодильник при +4°С на 30 минут, затем раскапывают в лунки пластмассовых планшетов в объеме 0,1 мл. К порциям крови добавляют 0,025 мл раствора готового пищевого аллергена, смешивают и набирают в капилляры свободным током. В ходе определения в качестве аллергенов могут быть использованы готовые коммерческие аллергены или аллергены собственного изготовления. Используют капилляры для определения С-реактивного белка или капилляры аналогичного размера, которые запаивают пицеином и центрифугируют 3 минуты при 1000 об/мин. Оставляют в термостате при температуре + 37 °С на 22 часа. Контролем служат капилляры с кровью и физиологическим раствором

В результате центрифугирования лейкоциты располагаются слоем над поверхностью большего слоя эритроцитов. Величину миграции определяют с помощью окуляр-микрометра под увеличением 8х6, сравнивая с контролем. Уменьшение величины столбика более, чем на 20%, говорит о наличии сенсибилизации к исследуемому аллергену. Преципитацию выявляют путем исследования надосадочной части плазмы в опытном капилляре по сравнению с контрольным капилляром. Исследование проводят в проходящем свете на темном фоне. Преципитация определяется как помутнение надосадка. Для определения степени (интенсивности) помутнения надосадка может быть использован, например, визуальный учет реакции. В этом случае степень помутнения оценивается в крестах. При этом слабое помутнение надосадка оценивается в один крест; отчетливое помутнение надосадка оценивается в два креста; помутнение надосадка “молочного” цвета оценивается в три креста.

При определении наличия или отсутствия специфической сенсибилизации организма к аллергенам принимаются во внимание как торможение миграции лейкоцитов, так и наличие преципитации в надосадке. В случае отсутствия торможения миграции лейкоцитов и наличия положительной преципитации (два-три креста) специфическая сенсибилизация считается подтвержденной. В случае наличия выраженного торможения миграции лейкоцитов и отсутствия преципитации специфическая сенсибилизация к исследуемому аллергену также считается подтвержденной.

РТМЛ в новой модификации более экономичный метод, увеличивающий информативность в 1.5 раза. Новый метод успешно используется в детской больнице св.Марии Магдалины более десяти лет: Косицкая Л.С., Сергиенко (Матышева) Н.Н. Способ определения специфической сенсибилизации организма к аллергенам. Авторское свидетельство № 1734018 от 3.07.89.

Изменение выработки интерлейкина-4 у больным рассеянным склерозом

Мезенцева М.В., Оспельникова Т.П.,

*Кобякина Н.А., Чекнёв С.Б., Ершов Ф.И.

НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф.Гамалеи РАМН,

*Российский государственный медицинский университет, Москва, Россия

Рассмотрение рассеянного склероза (РС) в качестве “болезни иммунорегуляции” основано на обнаруженных выраженных изменениях в спектре иммуноактив-ных цитокинов, которые могут существенно влиять на развитие заболевания, усиливая опосредованное иммунными механизмами повреждение нервной ткани.

Целью исследования явилось изучение особенностей спонтанной и индуцированной выработки клетками крови больных РС интерферона (ИФН)-а, ИФН-у, интерлейкина (ИЛ)-1р, ИЛ-4 и ИЛ-6.

Обследовали 9 больных (2 мужчин и 7 женщин в возрасте от 25 до 56 лет) с верифицированным диагнозом РС, церебро-спинальной (8 пациентов) или спинальной (1 пациент) формой заболевания и ремиттирующим (8 человек) или первично прогрессирующим (1 человек) течением процесса. Контрольную группу составили здоровые доноры соответствующего возраста. Определение показателей ИФН-статуса включало биологическую оценку уровня сывороточного ИФН и продукции ИФН-а и ИФН-у индуцированными лейкоцитами периферической венозной крови. Количественно содержание ИЛ-1Р, ИЛ-

4, ИЛ-6 и ИФН-а в сыворотке и супернатантах индуцированных к выработке ИФН-а или ИФН-у культур клеток определяли с использованием иммуноферментных тест-систем “РгоСоп” (Санкт-Петербург, Россия).

Установлено, что в условиях недостаточности продукции клетками крови ИФН-а и ИФН-у у больных РС сохраняется способность эффекторов к выработке ИЛ-1Р и ИЛ-

6, а воздействие препаратов ИФН или индукторов ИФН

вoccтaнaвливaeт in vitro cинтeтичecкий потенциал продуцентов ИФ^ В то же время, в отектре иммyнoaктивныx цитокинов, продуцируемые клетками цельной крови отон-танно, oтcyтcтвyeт ИЛ-4. В отличие от клеток здоровые доноров, oтвeчaющиx на обработку индукторами ИФH-a или ИФ^у выработкой (в чиcлe дpyгиx) этого цитокина, клетки крови больные PC не вырабатывают ИЛ-4 и в культуре, индуцированной к продукции ИФH-a или ИФ^у Полученные данные cвидeтeльcтвyют о возникающем в yc-лoвияx демиелинизирующего нpoцeccа pacщeплeнии ме-xaнизмoв, кoнтpoлиpyющиx выработку ИФH-a и ИФ^у c одной стороны, и ИЛ-4, - c другой.

C учетом выполнения ИЛ-4 в xoдe фopcиpoвaннoгo иммуногенеза роли тормозного медиатора, его недостаточность может значимо оалаблять функциональный комплекс ограничивающий проявления аутореактивности, и вно^ть тем caмым онределенный вклад в развитие у больные PC иммунорегуляторного д^бала^а и ^бивенно патогенез заболевания.

Оценка клеточного и гуморального иммунитета у больных с хроническими эрозиями желудка в периоде динамического наблюдения

Mocкaлев A.B., Ocипoвa O.H., Панова ЪФ., Шулєнин C.H., Шзаров B.E.

Военно-медицинская академия, Балтийская клиническая центральная бассейновая больница, Детская областная клиническая больница, Санкт-Петербург, Россия

Hecмoтpя на изученные многочисленные звенья патогенеза у больные c xpoничecкими эрозиями желудка ^ЭЖ), применение coвpeмeнныx препаратов: H2-rac-таминоблокаторов, блокаторов H+/K+-ATФ-aзы чacтoтa рецидивов у больные c данной патологией не отижена.

Целью нашего доследования было изучить cocтoяниe остовные показателей клеточного и гуморального иммунитета у больные c XЭЖ c рецидивом заболевания и без него в период двyxлeтнeгo динaмичecкoгo наблюдения.

Под динaмичecким наблюдением нaxoдилиcь 20З больные c XЭЖ. Cpeдний вoзpacт больные: 52,2±З,6 года, ча^ тота рецидивов до 2-3-x раз в год, длительность заболевания от 5 до 15 лет. У большинства больные эрозии были множественными и раотолагалжь в антральном отделе желудка. В результате рецидив заболевания на 1 -м году был у 6З человек (31%), на 2-м году у 64 (З1,5%), отсутствовал у 76 (З7,4%) больные. Kлeтoчный иммунитет (CD3, CD4, CD8, CD20, CD16, CD25) оценивали в реакции непрямой иммyнoфлюopecцeнции c ^пользованием моноклональные антител научно-производственного центра “МEДБИ-OCDEKTP” (Мо^ва, Poccrn). Гуморальный иммунитет доследовали но Manchini et al. c ^пользованием моноотеци-фичecкиx ^вороток против иммуноглобулинов человека.

Больные, имевшие количество лимфоцитов c фенотипом CD4 в гpaницax 26-25%, CD20, CD25 ниже 1 З%, CD 16

ниже 6%, находились в границах риска возможного рецидива заболевания, что достоверно (р<0,05) подтверждал рецидив заболевания у 63 больных на 1-м году динамического наблюдения. Несмотря на рецидив заболевания у 64 больных на 2-м году динамического наблюдения, достоверных значений оцениваемых популяций лимфоцитов по сравнению с показателями группы больных, где рецидив отсутствовал, не получено, однако имелась выраженная тенденция снижения количества лимфоцитов, перечисленных выше популяций. Уровни сывороточного IgG, sIgA у больные с рецидивом заболевания на

1-м году динамического наблюдения были достоверно (р<0,01) ниже по сравнению с больными, не имевшими рецидив в периоде динамического наблюдения, и составляли соответственно:14,0±0,1 и 17,5±0,3 г/л; 0,42±0,07 и 0,81±0,06 г/л. У 64 больных с рецидивом заболевания на

2-м году динамического наблюдения достоверно (р<0,01) ниже были только уровни sIgA.

Таким образом, установленная недостаточная активность клеточного и гуморального иммунитета в ответ на воспаление у больных с рецидивом заболевания в периоде динамического наблюдения позволяет, используя количественные значения, относить таких больных в группу риска. Полученные результаты позволяют рекомендовать использовать в комплексной терапии больных с эрозивно-язвенными поражениями желудка и двенадцатиперстной кишки иммуномодулирующие препараты, как в фазу обострения заболевания, так и в периоде динамического наблюдения.

Влияние аллергенов на рецидив заболевания у больных с хроническими эрозиями желудка

Москалев А.В., Осипова О.Н., Панова Т.Ф., Шуленин С.Н., Назаров В.Е.

Военно-медицинская академия, Балтийская клиническая центральная бассейновая больница, Детская областная клиническая больница Санкт-Петербург, Россия

Увеличение количества больных с эрозивно-язвенными поражениями желудка в последние годы все чаще связывают с высокой аллергенной нагрузкой, неблагоприятным воздействием среды и наследственностью.

Целью нашего исследования было изучение влияния аллергенов инфекционной и неинфекционной природы на рецидив заболевания у больных с хроническими эрозиями желудка (ХЭЖ) в периоде динамического наблюдения.

Нами было обследовано72 больных ХЭЖ с рецидивом заболевания на 1 -м году динамического наблюдения. Определение специфических ^Е осуществляли методом ИФА с помощью диагностических тест-систем НПО “АЛЛЕРГЕН” (г. Ставрополь) и классифицировали результаты как высокие, умеренные, низкие и отрицательные.

Рецидив заболевания эндоскопически был подтвержден у 39 больных (54,2%), отсутствие рецидива у 33 больных (45,8%). Проведенный сравнительный анализ еще раз

подтвердил, что у больные c XЭЖ c рецидивом заболевания на нервом году динамиче^ого имеется вытекая антигенная и аллергенная нагрузка на иммунную cиcтeмy. У больные c рецидивом заболевания достоверно чаще (P>95%) выявлялиcь вышкие и умеренные уровни отеци-фичecкиx IgE к пищевым (мжные продукты, продукты моря, куриное яйцо, цитpycoвыe) аллергенам. Важным, на наш взгляд, было выявление у больные, имевшж рецидив заболевания c достоверностью P>95% умеренные и c до^ товерностью P>99% выcoкиx уровней cнeцифичecкиx IgE к инфекционным антигенам, что cнocoбcтвyeт ддобалажу иммунного гoмeocтaзa и, видимо, более частому рецидиву заболевания. У больные без рецидива заболевания достоверно чаще (P>99%) выявлялдоь низкие уровни отецифи-чecкиx IgE к бытовым, пищевым и инфекционным аллергенам и антигенам и c достоверностью P>99,9% отсутствие повышенные уровней c^u^^ec^x IgE.

Выявление вытект уровней cпeцифичecкиx IgE к инфекционным антигенам в периоде динaмичecкoгo наблюдения cнocoбcтвyeт, на наш взгляд, рецидиву заболевания. Taк нocитeльcтвo A. flavus приводит к cнижeнию бактероидов, бифидобактерий, лактобактерий, что cнocoбcтвyeт диcбиoтичecким изменениям и увеличению аллергенной нагрузки на иммунную шотему, а также ингибирующим действием на прицелы миелопоэза. Oбнapyжeниe выгсо-кж уровней cпeцифичecкиx IgE к S. aureus, S. pyogenes,

S.pneumoniae, C. albicans коррелировало co отижением уровней sIgA, эффективности показателей фагоцитоза. Taк процент фaгoцитиpyющиx микрофагов, микробное чиcлo, количество активные нейтрофилов, aбcoлютный фагоцитарный показатель были достоверно (P<0,05) выше, а показатель завершенности фагоцитоза, индегс завершенно^ ти фагоцитоза, xapaктepизyющиe эффeктивнocть микро-бицидные cиcтeм фагоцита, ниже (P<0,01).

Taким образом, выявление вытект уровней отеци-фичecкиx IgE к пищевым, бытовым и инфекционным аллергенам и антигенам c выгсокой вероятностью позволяет прогнозировать рецидив заболевания у больные c XЭЖ в периоде динамиче^ого наблюдения и, наоборот, больные, у которые не было выявлено повышенные уровней и c низкими уровнями cпeцифичecкиx IgE имели рецидив заболевания достоверно реже (P>99%).

Некоторые механизмы апоптоза лимфоцитов у больных атопическими заболеваниями

Mycтaфин И.Г., Бойчук С.В.,

Фатеахов Р.С., Романенко O.M.

Республиканский центр по борьбе и профилактике СПИД МЗ РТ, Казань, Казанский государственный медицинский Университет, Казанская государственная медицинская Академия, Казань, Россия

Известно, что анонтоз играет важную роль в патогенезе многт заболеваний, в том чдоле агентете^. В cвязи c этим целью нашего иccлeдoвaния явило№ изу-

чение некоторые прицелов анонтоза лимфоцитов пе-риферичетеой крови у бoльныx атонией.

В качестве маркеров анонтоза изучали изменение митoxoндpиaльнoгo потенциала (МП) и фрагментацию ДHK, оцениваемые c помощью флюopoxpoмoв CMX-Ros и нронидия йодида (PI), ^ответственно. Oцeнкy вышeyкaзaнныx изменений проводили на проточном цитофлуориметре FACScan. В качестве индуктора анонтоза донользовали дeкcaмeтaзoн (DEX) в концентрации 10-6 М. Kлeтки выделяли на градиенте плотники Перколла и инкубировали в RPMI. Oцeнкy изменений проводили через 0, З, 6, 9,

24 и 48 ча^в инкубации.

Peзyльтaты проведенные иccлeдoвaний показали, что у Лф величина МП уменьшала^ только на 24 и 48 чacax инкубации клеток. Инкубация Лф c DEX приводила к увеличению данного показателя уже посте 9 чашв инкубации и препятствовала его отижению но cpaвнeнию c контролем на 24 и 48 чacax инкубации.

Oпpeдeлeниe фрагментации ДHK у Лф, оцениваемое но возникновению гинодинлоидного ника, ноказа-ло, что достоверное увеличение количества клеток c гиподиплоидным ником наблюдало^ лишь к 48 ча-caм инкубации. Фрагментация ДHK у Лф, инкубируе-мыx c DEX нaблюдaлacь уже к 24 чacaм.

Taким образом, в результате проведенные до^едо-ваний можно сделать заключение о том, что изменение МП у Лф перифериче^ой крови больные агенте^ кими заболеваниями предшествует фрагментации ДHK. DEX индуцирует фрагментацию ДHK у Лф, но, тем не менее, препятствует отижению МП данного тина клеток. Полученные данные cвидeтeльcтвyют о том, величина МП у Лф и её изменения не является факторами, однозначно определяющими течение по^ледующ^ прицелов, наблюдаемые при индукции анонтоза in vitro, в частности, фрагментацию ДHK.

Изучение превентивной эффективности рефлексо- и галотерапии у больных поллинозом и бронхиальной астмой

^забу^кин C.H., Aнтoнoвa ЪИ.,

Карташова H.K., Варнаков П.Х.

Аллергологический центр реабилитации детей и подростков (ТМО-39), Санкт-Петербург, Россия

Проблема применения немедикаментозные методов лечения больные аллергичетеими заболеваниями ддо-кутабельна.

Цель и задачи работы: в paмкax программы ВOЗ “Медицина доказательств” cфopмиpoвaть научно обо-отованный пoдxoд к ^пользованию peфлeкcoтepaнии и галотерапии для превентивного лечения больные поллинозом и бротиальной астмой; для этого донользо-вать рандомизированные доследования co “слепым” и двойным “cлeным” плацебо контролем.

Материалы и методы: противорецидивную эффективность рефлексо- и галотерапии изучали у 150 больных пол-линозом и у 54 больных атопической бронхиальной астмой. Возраст больных от 6 до 35 лет. Для оценки противо-рецидивной эффективности методов применяли эндоназальный провокационный тест (ЭПП) с пыльцевыми аллергенами и ингаляторный провокационный тест (ИПП) с ацетилхолином или гистамином. Для ЭПП использовали свежеприготовленные растворы пыльцевых аллергенов в 10-кратных разведениях от 10*(-9) до цельного аллергена (10 000 Р^и/мл). Для И1111 применяли свежеприготовленные растворы ацетилхолина в концентрациях 0,1, 0,5 и 1 мг/мл и гистамина в концентрациях 0,01, 0,05 и 0,1 мг/мл. Из методов рефлексотерапии использовали корпоральную акупунктуру (КА), аурикулярную акупунктуру (АА) и кор-поральную лазеропунктуру (КЛ).При проведении корпо-ральной рефлексотерапии применяли стандартные проце-дуры.Для контроля и оценки эффективности рефлексотерапии использовали лазер-плацебо: наложение на проекции точек акупунктуры тубуса невключенного лазерного аппарата. При изучении плацебо эффекта АА вводили иглы бессистемно вне точек акупунктуры. Для галотерапии применяли стандартные галопалатки при стандартном режиме дозирования. В качестве плацебо использовали галопа-латку, галогенератор которой не заряжали солью.При исследовании эффективности рефлексо и галотерапии проводился двойной слепой контроль, т.е. ни пациент, ни врач, проводящий тестирование, не знали о реальности воздействия. Все больные из группы плацебо в дальнейшем получили реальное лечение.

Основные результаты: методы рефлексотерапии достоверно снизили специфическую чувствительность слизистой оболочки носа, уменьшив чувствительность к аллергену в среднем на 2 - 3 десятикратных разведения (с 0,31±0,05PNU до 34,4±5,2 PNU); (Р<0,001) и методы рефлексотерапии плацебо снизили специфическую чувствительность в среднем менее чем на 1 порядок с 0,37±0,06 РМи до 1,62±0,22 РМи (Р<0,05). Галотерапия как при реальном, так и при плацебо лечении практически не изменила чувствительность слизистой оболочки носа к пыльцевому аллергену (с 0,36±0,06 PNU до 0,38±0,06РМи). КА снизила чувствительность к ингаляциям ацетилхолина и гистамина в среднем в 6,5 раз, КЛ снизила в среднем в 5 раз. Использование лазера-плацебо привело к снижению чувствительности бронхов в среднем менеее чем в 2 раза.

Заключение: доказана возможность эффективного применения методов рефлексотерапии при противоре-цидивном лечении и реабилитации больных поллино-зом и бронхиальной астомой. В механизмах действия рефлексотерапии значимый фрагмент занимает аутосуггестивный компонент, который отмечен при двойном слепом контроле с использованием невключенного лазера. При АА эффект плацебо более значим и это связано с массивным афферентным потоком в стволовые и корковые структуры при любом характере раздражения. В то же время введение игл по четко отобранным сочетаниям точек приводит к существенно большим резуль-

татам. Отмечена большая противорецидивная эффективность классической акупунктуры (КА и АА); в то же время лазеропунктура перспективна для использования у детей раннего возраста, т.к. является безболезненным и неинвазивным методом лечения. Показана целесообразность применения феномена снижения реактивности дыхательных путей (по данным ЭПП, ИПП) для прогноза эффективности при индивидуальном подборе методов противорецидивного лечения больных бронхиальной астмой и поллинозом. Рефлексотерапия и другие немедикаментозные методы могут помочь найти дешевый альтернативный путь в решении проблемы лечения аллергических заболеваний дыхательной системы.

Сравнительная диагностическая значимость различных аллергологических тестов

Незабудкин С.Н., Антонова Т.И., Карташова Н.К.

Аллергологический центр реабилитации детей и подростков (ТМО-39) Санкт-Петербург, Россия

В этиологической диагностике аллергических ринитов традиционно используются кожные скарификационные пробы (КСП), эндоназальные провокационные пробы (ЭПП), иммуноферментный анализ (ИФА). В настоящее время имеются лишь единичные исследования, в которых проведено сопоставление результатов кожных проб, эндоназальных провокационных проб и иммуноферментного анализа.

Цель и задачи: сопоставление результатов указанных методов диагностики у больных поллинозом и бронхиальной астмой для уточнения объективности и возможности контроля эффективности лечения.

Материалы и методы: у 718 больных бронхиальной астмой, поллинозом, аллергическим ринитом проведены КСП (333 чел.), ЭПП (280 чел.), ИФА (105 чел.). Для сопоставления по степени выраженности аллергологических и иммунологических показателей проведено их ранжирование на 4 балла. Для КСП использовали стандартные растворы пылевых, пыльцевых аллергенов. Для ЭПП использовали свежеприготовленные растворы пылевых, пыльцевых аллергенов в 10-кратных разведениях от 10-9(0,00001РКи/мл) до цельного аллергена (10 000 Р^и/мл). Стандартные аллергены определяли с помощью ИФА на основе реагентов, разработанных в лаборатории гибридомной технологии ЦНИРРИ (Санкт-Петербург).

Основные результаты: при сравнении КСП и ЭПП совпадение данных о наличии сенсибилизации выявлено в 65% случаев; совпадение степени выраженности сенсибилизации - в 32%.Частота получения ложноположительных результатов в кожных тестах составляет 24,3%, что подтверждает возможную сенсибилизацию кожи к аллергенам без формирования повышенной чувствительности к ним органов - мишеней. Отрицательные КСП при положительных ЭПП обнаружены в 11,1% исследований, 16% исследований показывают резкое несоответствие степени выраженности КСП и ЭПП. С равной частотой

(8,3%) отмечались резкоположительные результаты КСП, при минимальной (1-26.) выраженности ЭПП и высокая (3-46.) выраженность ЭПП при умеренной интенсивности КСП. При сопоставлении ЭПП и ИФА (21 человек) совпадение данных о наличии сенсибилизации выявлено в 86%, совпадение степени выраженности - у 19%, при этом ИФА со степенью оценки 3 и более в большем количестве случаев коррелирует с ЭПП при разведении 10(-1) до 10(-5) (1 и 2 балла) - 72,2%. При сопоставлении КСП и ИФА (84 чел.) совпадение данных о наличии сенсибилизации определялось в 94%, при этом совпадение степени выраженности сенсибилизации определялось в 30%. При отсутствии сенсибилизации по данным КСП у 51% подтверждается сенсибилизация по данным ИФА и, наоборот, при отсутствии сенсибилизации по данным ИФА, КСП были положительны в 18,8% случаев, а совпадение данных об отсутствии сенсибилизации в 50%. Наибольшее совпадение степени сенсибилизации отмечено при

3-4 бальных результатах ИФА и КСП (41%).

Выводы: практически все изучаемые методы позволяют с высокой достоверностью судить о наличии сенсибилизации. Методы ИФА, как наименее агрессивные, целесообразно использовать в фазу обострения заболевания, а также у детей до 3 лет. Наиболее объективными в отношении степени выраженности сенсибилизации являются ЭПП. Постановка ЭПП на фоне пробного курса лечения дает возможность прогнозировать эффективность последующей терапии.

Связывание лимфоцитами биоактивных частиц

Новиков Д.К., Новиков П.Д.,

Зубарева И.В., Янченко В.В.

Витебский медицинский университет, г. Витебск, Беларусь

Цель: выяснить сходство и различие связывания лимфоцитами антител различных белков, бактериальных антигенов, липополисахаридов в свободном виде и связанных с частицами и на этой основе моделировать лигандрецептор-ные взаимодействия. Антителами и антигенами в условиях мягкой сорбции покрывали инертные частицы (латекс, активированные эритроциты) и определяли связывание частиц - носителей с лимфоцитами крови в тестах розеткооб-разования. Для оценки специфичности взаимодействия использовали блокировку связывания свободными лигандами. Связывание свободных лиганд оценивали по их изотопной, флюоресцентной и ферментным меткам.

Частицы, покрытые моноклональными антителами против СD-антигенов, связывались соответствующими лимфоцитами. Уровень CD3+-лимфоцитов у здоровых и больных был выше при использовании проточной цитометрии, а CD25+ при применении анти- CD25-частиц, что объясняется особенностями структуры разных CD-молекул.

Установлено, что 18-25% лимфоцитов крови человека связывают частицы, покрытые бычьим сывороточным аль-

Таблица. ИММУНОФЕНОТИПИРОВАНИЕ ЛИМФОЦИТОВ КРОВИ ДЕТЕЙ, БОЛЬНЫХ ОСТРЫМ БРОНХИТОМ МЕТОДАМИ АНТИ^-ДИАГНОСТИКУМОВ, ИММУНОФЛЮОРЕСЦЕНЦИИ, ПРОТОЧНОЙ ЦИТОМЕТРИИ

Методы СЭ3+ СЭ4+ СЭ8+ СЭ25+

Диагностикум на основе мкАТ Непрямая иммунофлуоресценция Проточная цитометрия 48,9+2,7 51,5+4,3** 61,5+3,2* 33,4+4,1 34,3+3,6 39,1+2,8 19,5+2,4 20,2+3,6 21,7+4,6 22,4+2,8 13,7+4,3*** 7,4+3,2*

бумином, 15-38% - инсулином, 30-40% - туберкулином, 1637% - белком А стафилококка, 10-35% - различными бактериальными антигенами (стафилококка, кишечной палочки, протея и др.). степень связывания разных лиганд - частиц существенно отличалась у больных с различными заболеваниями. В норме - 46-65% лимфоцитов связывали ЛПС-частицы. Их количество снижалось до 20% при гнойно-воспалительных заболеваниях, сопровождавшихся иммунодефицитами. Адгезия к лимфоцитам целых бактерий варьировала: 20-30% связывали стафилококки, 6-8%: кишечную палочку, 2-3% микробактерии БЦЖ. При соответствующих инфекциях это связывание изменялось. Следовательно, лимфоциты способны связывать различные бактериальные и небактериальные лиганды как за счет специфических рецепторов, так и молекул адгезии; вероятно, такое связывание может индуцировать иммунный ответ. Связывание некоторых лиганд, агрегированных на частицах, более выражено, чем свободных. Оно отражает динамику и тяжесть различных заболеваний и может использоваться для оценки иммунного статуса.

Особенности экспрессии 0й71 и С095 на лимфоцитах периферической крови онкологических больных в Карелии

Олейник Е.К., Шибаев М.И.

Институт биологии Карельского НЦ РАН, г. Петрозаводск

При опухолевом росте отмечено изменение экспрессии поверхностных маркеров на лимфоцитах периферической крови. Особый интерес при раковом процессе представляет исследование CD71 - рецептора транс-феррина и CD95 - рецептора апоптоза.

Цель работы - сравнительная оценка экспрессии активационных маркеров на лимфоцитах периферической крови онкологических больных.

Иммунофенотипирование лимфоцитов проводили методом непрямой иммунофлюоресценции с помощью моноклональных антител ЛТ. Обследовано 33 больных из разных регионов республики Карелия с различной локализацией и

стадией опухоли. Контроль составили 15 практически здоровых лиц. Больные были разделены на две группы: с 1-П стадиями заболевания - 1 группа, и с III стадией - 2 группа.

Было показано, что общее количество Т-лимфоцитов (CD3) и их субпопуляций (CD4, CD8) не отличалось у онкологических больных и здоровых, в то время как доля КК-клеток (CD16) и В-лимфоцитов (CD19) была существенно больше в группах больных, чем в контроле.

В целом экспрессия активационных маркеров (CD71, CD95) оказалась выше у больных по сравнению со здоровыми лицами: 15,83±2,38 и 5,07±2,64; 12,41±2,92 и 3,93±2,59, соответственно (р<0,05).

Сравнение полученных данных по группам больных показало, что по мере развития опухолевого процесса уровень CD71+ и CD95+лимфоцитов значительно повышается: 18,65±2,57 и 12,15±3,77; 15,40±4,15 и 9,21±3,87 (р<0,05).

Таким образом, для онкологических больных, проживающих в Карелии, характерна значительная активация лимфоцитов периферической крови, особенно выраженная при III стадии процесса.

Работа поддержана Российским Фондом Фундаментальных Исследований, проект № 98-04-03521.

Диагностическая ценность определения антител против цитоплазмы нейтрофилов при легочной патологии с элементами васкулита

Орлов А.Б., Ильина О.Б., Старк Т.М.

Городская многопрофильная больница №2, Санкт-Петербург, Россия

Васкулит часто выступает как патогенетическое звено с аутоиммунным компонентом при различных нозологических формах. Представляется важным его выявление с помощью иммунологических методов при легочной патологии. Определение антител против цитоплазмы нейтрофилов (АНЦА) в данном случае может быть методом выбора.

Проводили исследование 13 пациентов (2 мужчин,

11 женщин) в возрасте от 25 до 54 лет, диагностически неясных, ведущей жалобой которых являлась одышка при физической нагрузке. Кроме того, отмечались: слабость (у всех больных), повышение температуры у 85%, непродуктивный кашель у 92% и артралгии различной локализации у 85% больных. У 5 пациентов при рентгенографии выявлялись инфильтративные и/или очаговые изменения, у 8 - процесс был рентгеннегативен. У всех больных отмечалось снижение диффузионной способности легких, умеренная гипоксемия со снижением сатурации кислорода и повышение давления в легочной артерии. Всем больным проводили иммунологическое обследование с определением ревматоидного фактора, Е-клеток, антинуклеарного фактора, реакции торможения миграции лейкоцитов (РТМЛ) с коллагеном, АНЦА.

В качестве рабочего диагноза предполагался первичный или вторичный легочный васкулит, гистологическая верификация которого осуществлена в 12 случаях. В результате проведенного обследования у 3 больных установлен диагноз диффузного заболевания соединительной ткани (системная красная волчанка, дерматополимиозит, системная склеродермия) с поражением легких; в одном случае диагностирован гранулематоз Вегенера, в 3 случаях - саркоидоз органов дыхания 2 стадии, в 5 - легочный васкулит, в 1 - идиопатический фиб-розирующий альвеолит. АНЦА оказались положительными у 11 из 13 больных. У 5 из них подтвержден диагноз изолированного легочного васкулита, у 6 остальных— легочного васкулита на фоне другого основного заболевания. АНЦА не выявлялись у 2 пациентов с дерматополимиозитом и системной красной волчанкой,по-лучавших терапию цитоостатиками и кортикостероидами и имевших на момент обследования клинические признаки ремиссии. У 2 больных, кроме выявления АНЦА, отмечалась положительная РТМЛ с коллагеном. Антинуклеарный фактор у всех обследованных оказался отрицательным. В нашем наблюдении у 2 больных саркоидозом, положительных на АНЦА, отмечалось хроническое рецидивирующее течение, что может указывать на прогностическое значение выявления АНЦА.

Таким образом, АНЦА выявлялись в 100% случаев предположения диффузной болезни соединительной ткани с поражением легких, системного или легочного васкулита. Дальнейшее исследование в этой области, возможно, позволит выявить корреляции между титром АНЦА, тяжестью и активностью заболевания.

Клинико-имунологические особенности стенозирующих ларинготрахеобронхитов ОРВИ у детей

Орлова Т.А.

Научный центр здоровья детей РАМН, Москва, Ярославская государственная медицинская академия, Ярославль, Россия

Возросший интерес к проблеме стенозирующих ла-ринготрахеобронхитов (СЛТБ) объясняется ростом их частоты в последние десятилетия и склонностью значительной части больных (до 50%) к рецидивам заболевания.

Изучены клинические и иммунологические особенности СЛТБ у 118 детей в возрасте от 9 мес. до 11 лет, причем у 78 детей (66,1%) отмечен рецидивирующий СЛТБ (РСЛТБ) с 3 и более эпизодами крупа в анамнезе.

Среди заболевших преобладали мальчики. Наибольшая заболеваемость выявлена у детей от 1 года до 3 лет. Рецидивирующая форма СЛТБ формировалась на

3 году жизни и старше. У 112 больных (94,9%) диагностирован стеноз гортани ЬП степени, у 6 (5,1%) - III степени. Большинство детей (72,5%) имели неблагополучно протекавший перинатальный период и ранний перевод на искусственное вскармливание. Лимфатико-

гипопластический диатез, кожные проявления аллергии и высокая степень стигматизации чаще отягощали преморбидный фон больных с РСЛТБ.

Из общего числа больных лишь у 72 (61,01%) обнаружена связь эпизодов СЛТБ исключительно с вирусной инфекцией. У 46 детей (38,99%) в возникновении крупа анамнестически установлено “провоцирующее” воздействие облигатных аллергенов, прежде всего пищевых.

Оценка некоторых показателей гуморального иммунитета (п=54) выявила незначительное снижение уровня IgG1 и резкое увеличение содержание IgG2 (р<0,05) в сыворотке крови у большинства больных СЛТБ. Показатели IgGз существенно не отличались от нормативных (РІеЬапі, 1989). Значительно изменялся уровень IgG4, концентрация которого, по средним данным, была достоверно (р<0,05) снижена более, чем в 2 раза. Уровень общего ^Е не превышал 100 МЕ/мл (среднее геометрическое 68,07 МЕ/мл).

Таким образом, факторами, способствующими возникновению СЛТБ, являются ранний возраст и мужской пол ребенка, отягощенный перинатальный анамнез и наличие преморбидной аллергии. “Лимфатическая” конституция и высокая степень стигматизации больных РСЛТБ предполагают наличие у них дисфункции иммунной системы. Выявленное у большинства больных СЛТБ увеличение уровня объясняется антигенной стимуляцией

его синтеза, особенно при вирусно-бактериальной природе заболевания. Низкий уровень IgG4, с одной стороны, отражает “физиологический” дефицит этого субкласса у детей раннего возраста, а с другой - позволяет ^Е реализовать свое мембраноатакующее действие. Это свидетельствует о важной роли аллергической линии в патогенезе стенозирующих ларинготрахеобронхитов у детей.

Типологические варианты иммунных нарушений при гнойно-хирургической патологии

Останин А.А., Леплина О.Ю., Шевела Е.Я., Пальцев А.В., Черных Е.Р.

Институт клинической иммунологии СО РАМН, Новосибирск, Россия

Введение. Общепризнанно, что развитие хирургической инфекции тесно связано с наличием вторичного иммунодефицита, который, по данным разных авторов, проявляется нарушением количества и/или функциональной активности различных клеток иммунной системы (нейтрофилов, моноцитов/макрофагов, Т- или В-лимфоцитов). При этом нельзя не отметить вариабельность значений, характеризующих те или иные параметры иммунитета. Кроме того, регистрируемые изменения в иммунной системе больных с гнойно-хирургическими заболеваниями диагностируются, как правило, описательно, без расшифровки их патогенетической сущности. Между тем, отсутствие целостного и четкого представления о характере иммунодепрессии, о типологических вариантах функционирования иммунной си-

стемы и последовательности их возможной трансформации существенно затрудняет прогнозирование течения инфекции и обоснование целесообразности назначения и выбора иммунокорригирующей терапии.

Цель и задачи. Выделить и охарактеризовать основные, патогенетически значимые варианты (типы) иммунных нарушений при гнойно-хирургической патологии.

Материалы и методы. Исследования количества и функциональной активности Т-лимфоцитов (абсолютное и относительное количество CD3+, CD4+, CD8+Т-кле-ток, интенсивности пролиферации и продукции IL-2 in vitro) и моноцитов (относительное содержание HLA-DR+моноцитов, интенсивность продукции TNF-a/IL-1 in vitro) были выполнены в группе 205 больных с хирургической инфекцией. Исследуемая группа включала 129 мужчин и 76 женщин в возрасте от 17 до 85 лет (в среднем 43,5 ± 1,2), у которых регистрировалась острая хирургическая патология органов брюшной полости или гнойная инфекция мягких тканей в 53 и 47 % случаев соответственно. У 107 из 205 обследованных пациентов (52,2 %) течение основного заболевания и/или послеоперационного периода осложнилось развитием хирургического сепсиса или разлитого гнойного перитонита.

Основные результаты. На основе патогенетического принципа оценки иммунного статуса (Чередеев А.Н., Ковальчук Л.В., 1997) у больных с гнойно-хирургической патологией были выделены и охарактеризованы 4 типа Т-клеточных расстройств. Первый - проявляется снижением только относительного содержания CD3+ Т-лимфоцитов или их основных субфракций (CD4+, CD8+). Второй и третий - дополнительно характеризуются либо абсолютной Т-лимфопенией, либо митогенной ареактив-ностью Т-клеток соответственно. Четвертый вариант представляет сочетанные изменения количественного содержания Т-лимфоцитов и их пролиферативной активности. Получены доказательства сопряженности выделенных типов Т-клеточных расстройств с тяжестью инфекции (наличием генерализованных осложнений, затяжным характером течения заболевания, выраженностью эндотоксикоза), а также показана возможность их последовательной трансформации (из первого через второй или третий в четвертый тип) и обратной регрессии в динамике болезни. В отдельную и наиболее тяжелую форму выделен вариант иммунных нарушений, обозначенный как состояние “иммунопаралича”, который проявляется развитием феномена деактивации моноцитов в комбинации с 4-м типом Т-клеточных расстройств и эндотоксикозом крайней степени выраженности.

Заключение. Выделение типологических вариантов иммунных нарушений позволяет более четко прогнозировать характер развития хирургической инфекции. Полученные результаты обосновывают также необходимость проведения своевременной и эффективной иммунокоррекции/иммунотерапии либо на этапе предоперационной подготовки, либо в программе комплексного лечения больных с различными формами гнойно-септических заболеваний или высоким риском их развития в послеоперационном периоде.

Продукция интерферона-у в децидуальной оболочке плаценты при гестозе

Панова И.А., Крошкина Н.В., Сотникова Н.Ю., Астраух Н.В., Царькова Р.Х.

Научно-исследовательский институт материнства и детства им. В.Н.Городкова М3 РФ, Иваново, Россия

В настоящее время развитие поздних гестозов (нефропатий) беременных рассматривают как проявление иммунной дезадаптации и на системном и на локальном уровнях. Известно, что децидуальная оболочка плаценты способна синтезировать и акцептировать широкий спектр ци-токинов. В связи с этим, целью нашей работы было изучение продукции одного из важных медиаторов, опосредующих ответ по типу ТЫ, интерферона-у (ИФ-у) в децидуальной оболочке плаценты in vivo (в экстрактах ) и in vitro (в 24-х часовых культурах децидуальных лимфоидных клеток) при различных формах позднего гестоза .

Материалом для исследования служили экстракты децидуальной ткани зрелой плаценты, а так же супернатанты, полученные после 24 ч инкубации децидуальных лимфоидных клеток. Концентрацию ИФ-у определяли методом твердофазного ИФА (ТОО “Цитокин”, Санкт-Петербург).

Нами было установлено, что при развитии водянки беременных концентрация ИФ-у в экстрактах децидуальной ткани достоверно возрастала по сравнению с неосложненной беременностью. Причем, усиление степени тяжести позднего гестоза сопровождалось более выраженным увеличением продукции данного цитокина in vivo.

Вместе с тем, изучение продукции in vitro ИФ-у децидуальными лимфоидными клетками показало, что концентрация данного цитокина в супернатантах децидуальных лимфоидных клеток как при водянке, так и при нефропатии резко снижалась.

Таким образом, продукция ИФ-у in vivo при позднем гестозе существенно возрастала в соответствии с тяжестью течения данной патологии, а in vitro, наоборот, снижалась. Полученные данные позволяют рассматривать продуцируемый децидуальной оболочкой плаценты ИФ-у как один из факторов, участвующих в развитии позднего гестоза.

Возможности иммуноцитофлуориметрии лимфоцитов лимфатических узлов при диагностике неходжкинских лимфом

Пантелеева Е.С., Неприна Г.С.,

Кузьмина Е.Г., Шахтарина С.В.

Медицинский радиологический научный центр РАМН, Обнинск, Россия

Иммунофенотипирование лимфоцитов периферической крови и костного мозга при неходжкинских лим-фомах (НХЛ) имеет диагостическую значимость в основном при лейкемизации процесса. При локализован-

ных формах лимфом необходимо исследование опухолевых клеток непосредственно из пораженных органов.

Целью настоящей работы явилось изучение возможностей иммуноцитофлуориметрии тканевых лимфоцитов из гиперплазированных лимфатических узлов (ЛУ) для определения природы опухолевых клеток (НХЛ или негемопоэтические опухоли), для установления иммунологического варианта гемобластозов ( лимфоидный - В или Т, миелоидный), для характеристики степени зрелости опухолей.

Материалы и методы. Исследовали иммунофенотип клеточной суспензии ЛУ от 36 больных, поступивших с подозрением на гемобластоз. Суспензию ЛУ (биопсийный или операционный материал) получали стандартным методом.

Иммунофенотипирование лимфоидных элементов ЛУ проводили в реакции иммунофлюоресценции на проточном цитофлюориметре FACScan по программе SIMULSET с автоматическим поиском лимфоцитарного гейта и при необходимости с последующей ручной коррекцией.

Использовали моноклональные антитела фирмы Вейоп Dickinson с двойной флюоресцентной меткой -РЕ и FITC (наборы Simultest IMK Plus, Acute Leukemia) для определения экспрессии и коэкспрессии CD-антигенов: CD14/CD45, CD3/CD19, CD4/CD8, CD3/HLA-DR, CD16+CD56/CD3, CD10/CD19, CD20/CD5, CD3/CD22, CD7/CD33, HLA-DR/CD13, а также Simultest: CD3/CD4, CD3/CD8, CD8/HLA-DR, CD57/CD8 , анти-лямбда/антикаппа, CD8/CD38; антитела к антигенам стволовоклеточному - CD34, пролиферирующих клеток - CD71, ранних этапов активации - CD69.

Результаты. Анализ иммунограмм лимфоцитов ЛУ позволил по экспрессии линейноспецифических антигенов четко определить иммунологический вариант НХЛ у 12 больных, подтвердивший гистологический диагноз.

Cреди них у 4 больных в суспензии пораженных ЛУ обнаружена В-лимфоидная зрелоклеточная пролиферация, признаками которой явилось значительное усиление экспрессии основных пан-В-клеточных маркеров CD19 - 65100%, CD20 - 47-93%, CD22 - 65-95%, HLA-DR - 80-95%, CD5 - 80-95% при снижении уровней экспрессии основных пан-Т-лимфоидных маркеров в среднем - до 9-20%).

У 6 больных в суспензии ЛУ обнаружена Т-лимфо-идная пролиферация: усиление экспрессии пан-Т-кле-точных маркеров, в том числе маркеров активации (CD3HLA-DR) при значительном снижении уровней В-клеток, причем у 4 больных определена опухоль Т-хел-перного фенотипа (CD4), у 1 имела фенотип Т-супрес-соров/киллеров (CD8).

В одном случае в суспензии ЛУ обнаружен клон клеток с миелоидноассоциированными антигенами CD13, CD33 на ранней стадии дифференцировки (CD34), в другом - клон незрелых Т-лимфоцитов фенотипа CD34+ CD7+ CD3- CD4- CD8-.

Таким образом, иммуноцитофлуориметрия тканевых лимфоцитов при лимфопролиферативных заболеваниях позволила получить информативные материа-

лы по линейной принадлежности опухолевых клеток, степени их зрелости и уровню активации.

Учитывая быстроту и точность определения, меньшую трудоемкость по сравнению с иммуноморфологическим методом, иммуноцитофлуориметрия опухолевых клеток может быть применена как один из дополнительных методов уточнения или подтверждения диагноза гемоблас-тозов, особенно при отсутствии лейкемизации процесса.

Особенности иммунофенотипа лимфоцитов лимфатических узлов, костного мозга и периферической крови при лимфогранулематозе

Пантелеева Е.С., Неприна Г.С.,

Кузьмина Е.Г., Шахтарина С.В.

Медицинский радиологический научный центр РАМН, Обнинск, Россия

Цель работы - изучение особенностей фенотипа поверхностных маркеров лимфоидных элементов костного мозга (КМ), лимфатических узлов (ЛУ) и периферической крови у больных лимфогранулематозом (ЛГМ) до лечения.

Материалы и методы. Обследовали 15 больных ЛГМ и 10 больных реактивным лимфаденитом (ЛА) в качестве группы сравнения.

Исследовали клетки КМ, полученные стандартным методом при пункции грудины или гребня крыла подвздошной кости, клеточную суспензию ЛУ из биопсийного или операционного материала ( у 7 больных ЛГМ и 10 больных ЛА) и периферическую кровь.

Иммунофенотипирование лимфоидных элементов КМ и ЛУ проводили в реакции иммунофлюоресценции на проточном цитофлюориметре FACScan по программе SIMULSET с автоматическим поиском лимфоцитарного гейта и при необходимости с последующей ручной коррекцией.

Использовали моноклональные антитела фирмы Весton Dickinson c двойной флюоресцентной меткой -РЕ и FITC для определения экспрессии и коэкспрес-сии CD-антигенов: CD14/CD45, CD3/CD19, CD4/CD8, CD3/HLA-DR, CD16+CD56/CD3, CD10/CD19, CD20/ CD5, CD3/CD22, CD7/CD33, HLA-DR/CD13, CD3/CD4, CD3/CD8, CD8/HLA-DR, CD57/CD8, пролиферирующих клеток - CD71, ранних этапов активации - CD69.

Результаты. В КМ больных ЛГМ уровни экспрессии основных лимфоидных маркеров Т-лимфоцитов (CD3, CD5, CD7) составили 46 - 56%, иммунорегуля-торных Т-лимфоцитов (CD4, CD8) - 35 - 36%, НК -клеток (CD16CD56) - 30%, что соответствовало уровням экспрессии Т- и НК- лимфоидных маркеров КМ при ЛА, но уровни экспрессии маркеров В-лимфоци-тов (CD19, CD20, CD22) в КМ при ЛГМ (17-18%) были несколько ниже, чем при ЛА (22 - 27%).

Особенностью иммунофенотипа лимфоидных элементов КМ при ЛГМ явилось повышение уровня активации Т-лимфоцитов: раннего активационного марке-

ра CD69 до 24,7±2,03% и CD3HLA-DR - до 19,7±2,53% по сравнению с их уровнями в КМ при ЛА (соответственно -17,5±2,5% (р<0,05) и 9,6±1,5% (р<0,05).

Иммунограммы суспензии ЛУ и КМ оказались различны по уровням экспрессии основных лимфоидных маркеров: в ЛУ, независимо от патологии, экспрессия маркеров В-^19, CD20, CD22) и Т-клеток ^3, CD4) в 1,6- 2 раза выше, CD8-цитотоксических лимфоцитов и НК-лимфоцитов в 2-6 раз ниже, чем в КМ. Иммуно-регуляторный индекс ( соотношение CD4/CD8) в ЛУ составляет 2,5:1 ( в КМ - 1:1).

Тем не менее, при ЛГМ для лимфоцитов ЛУ, подобно КМ, характерен повышенный уровень экспрессии раннего активационного маркера CD69 до 59,7±8,57% и CD3HLA-DR - до 37,3±5,82% по сравнению с их уровнями при ЛА (соответственно - 32,4±3,28% (р<0,05) и 18,7±3,84% (р<0,05).

Более высокая степень активации Т-лимфоцитов при ЛГМ по двум изучаемым маркерам выявлена и в периферической крови.

Таким образом, при ЛГМ - злокачественном лимфопролиферативном заболевании, в периферической крови, лимфатических узлах и костном мозге отмечено двукратное повышение уровня активации Т-клеток по сравнению с реактивным процессом, что в совокупности с другими методами может иметь определенную диагностическую значимость.

Скрининговый тест для формирования групп риска по развитию патологии респираторной системы у детей, проживающих в неблагоприятных экологических условиях

Перковская А.Ф., Черевко А.Н., Тарасова Е.Е., Гирко И.Н., Кильчевская Е.В.

НИИ охраны материнства и детства М3 РБ, Минск, Беларусь

Для иммунной системы критическими являются как экстремальные физические воздействия, так и большое число веществ-загрязнителей окружающей среды. Характер и степень выраженности нарушений зависят не только от природы повреждающих агентов, но и от сочетанного их воздействия на организм. У детей из регионов с неблагоприятной экологической обстановкой, состояние системы иммунитета определяется разной чувствительностью ее компонентов к экопатогенным факторам, что обуславливает стадийность изменений (Р. В. Петров, 1995).

Нами были обследованы 98 детей, проживавших в г. Мозыре в условиях сочетанного влияния малых доз ионизирующей радиации (загрязнение территории радионуклидами от 37 до 185 кБк/м2 по Cs-137) и комплекса наиболее распространенных в городах антропогенных агентов (повышенные шумовые нагрузки; загрязнение атмосферного воздуха пылью, бенз(а)пиреном). Контрольную груп-

пу составили 194 ребенка из региона Минской области, относящегося к “условно чистой” территории. Обследование детей включало врачебный осмотр, лабораторное исследование (исследование морфологического состава периферической крови, иммунологические тесты).

Проводился направленный отбор контингента детей, предусматривавший такое формирование групп, чтобы четко определялся основной критерий их различия - условия окружающей среды. Обследованы дети, болеющие не более 4 раз в год, только острыми заболеваниями; не болевшие в течение двух предшествовавших обследованию месяцев; родители которых не имели контакта с вредными факторами на производстве. Учитывая особенности возрастной динамики иммунологических показателей, обследованные разделены на две подгруппы: 1,5-3 года и 4-6 лет.

У детей 1,5 - 3 лет из г. Мозыря отмечается по сравнению с контролем достоверное снижение Т- клеток (1,41 ± 0,238% 2,02 + 0,108,3%; р<0,05) и их субпопуляции Т- цитотоксических лимфоцитов (0,22 ± 0,055х109/л; 0,41 ± 0,050х109/л; р<0,05), а также относительных (13,89 ± 0,776%; 18,36 ± 0,993%; р<0,01) и абсолютных значений (0,55 ± 0,069х109/л; 0,74 ± 0,045х109/л; р<0,05) численности В-лимфоцитов. У этих детей выявлены повышенные значения фагоцитарного показателя (79,7 ± 4,49; 67,7 ± 1,22; р<0,001) и фагоцитарного числа (7,4 ± 0,51; 6,4 ± 0,168; р<0,05). В системе комплемента изменения коснулись только показателей его активации по альтернативному пути: снижены значения фактора В (5,95 ± 1,804х1012 эф. молекул/л; 11,78 ± 0,695х1012 эф. молекул/л; р<0,001), D (5,78 ± 1,716х1012 эф. молекул/л 11,66 ± 0,691х1012 эф. молекул/л; р<0,00) и ОАА (7,14 ± 1,956х1012 эф. молекул/л; 16,12 ± 0,929х1012 эф. молекул/л; р<0,001).

У детей 4 - 6 лет наряду с изменениями, характерными для подгруппы 1,5 - 3 лет выявлено следующее: снижение общей численности лейкоцитов (6,07 ± 0,189х109/л; 7,68 ± 0,277х109/л; р<0,001), абсолютного числа лимфоцитов (2,89 ± 0,158х109/л; 3,37 ± 0,117х109/л; р<0,05), относительной (30,24 ± 1,171%; 50,72 ± 0,310 %; р<0,001) и абсолютной численности (0,86 ± 0,082х109/л; 1,71 ± 0,062х109/л; р<0,001) Т- клеток за счет уменьшения не только числа Т -цитотоксических клеток как в группе от 1,5 до 3 лет, но и более устойчивых к воздействию различных повреждающих факторов Т-хелперов (0,19 ± 0,026х109/л; 0,38 ±

0,081х109/л; р<0,05). Среди всех обследованных детей только в подгруппе от 4 до 6 лет повышен по сравнению с контролем уровень Ig А (1,03±0,376г/л; 0,90±0,33 8 г/л; р<0,05) в сыворотке крови, что может быть обусловлено более длительной по сравнению с детьми от 1,5 до 3 лет антигенной и аллергенной стимуляцией поступающими в организм респираторным путем антропогенными загрязнителями. Уровни IgG и ^М не отличаются от контроля ни в одной из групп. В системе комплемента у этих детей снижен как уровень компонентов, активирующихся по альтернативному, так и по классическому пути.

Таким образом, у детей, проживавших в регионе с напряженной экологической обстановкой, изменения кле-

точных и гуморальных факторов иммунной системы более выражены в подгруппе от 4 до 6 лет по сравнению с детьми 1,5 - 3 лет. Возможно, это обусловлено большей длительностью воздействия экопатогенных факторов. Отклонения в иммунной системе детей из экологически неблагополучных регионов соответствуют I и II стадиям иммунных нарушений, что соответствует в свою очередь доклинической стадии и носит обратимый характер. Поэтому очень важно, именно на этом этапе, изучить иммунологическую реактивность организма, а также определить его адаптационные возможности, что позволит своевременно провести необходимые корригирующие мероприятия. Для формирования групп риска по развитию патологии респираторной системы у детей 4 - 6 лет, проживающих в условиях интенсивного поступления в организм техногенных загрязнителей с атмосферным воздухом, в качестве скринингового теста может служить выявление повышенного уровня IgA в сыворотке крови.

Особенности показателей иммунного статуса у больных йоддефицитными заболеваниями

Поздняк А.О., Скороходкина О.В.

Кафедра клинической аллергологии с иммунологией КГМУ, кафедра эндокринологии КГМА, Казань, Россия

Данные отечественных и зарубежных исследований последних лет указывают на появление нарушений иммунного статуса больных с йоддефицитными заболеваниями. Так, выявлено повышение уровня антител к тиреоглобулину и микросомальной фракции при этой патологии. Это может быть объяснено деструкцией тиреоцитов ввиду низкого поступления йода в щитовидную железу с выходом в кровь основного тиреоидного антигена - тиреоглобулина, что приводит к повышенному образованию антител к нему. В связи с этим дальнейшее изучение изменений иммунного статуса при йоддефицитных заболеваниях является актуальным.

В процессе настоящего исследования изучены показатели иммунограммы с определением количества СЭ4 и СЭ8 Т-клеток методом проточной цитометрии, проведено НЬА-типирование у 35 больных йоддефицитными заболеваниями. У 15 больных (42,8%) выявлено повышение соотношения CD4/CD8 до 2,3-3,2 (норма 1,4-1,8), что свидетельствует о возможности снижения популяции Т-суп-рессорных клеток. У 11 больных (31,4%) выявлена ассоциация с HLA-антигеном В35, наличие которого наблюдается при такой патологии щитовидной железы, как подо-стрый тиреоидит, диффузный токсический зоб (заболевания с постоянными или преходящими аутоиммунными нарушениями). Полученные данные свидетельствуют о появлении изменений иммунного статуса у ряда больных с йоддефицитными заболеваниями. Особое внимание следует уделить относительному снижению содержания Т-суп-рессорных клеток, что, в основном, наблюдается при аутоиммунном тиреоидите, но, как видно из настоящего исследования, встречается и при йоддефицитных заболеваниях.

Пути развития гуморальных иммунных реакций слизистых оболочек при различных патологиях ЛОР-органов

Полевщиков А.В., Рязанцев С.В.

НИИ экспериментальной медицины РАМН,

НИИ уха, горла, носа и речи М3 РФ, Санкт-Петербург, Россия

Механизмы иммунных реакций, протекающих в слизистых оболочках взрослых и детей при заболеваниях ЛОР-органов во многом остаются неясными. Это связано со сложной этиологией процессов, возникающих в большинстве случаев в результате комбинированного воздействия вирусов и бактерий, и с оппозит-ным характером противовирусного и противобактери-ального иммунных ответов. Анализ полученных ранее результатов свидетельствует о незначительной амплитуде изменений показателей общего иммунитета при многих заболеваниях ЛОР-органов, особенно в тех случаях, когда патологический процесс не выходит за пределы слизистых оболочек. Это прежде всего касается различных риносинусопатий, при которых изменения уровней сывороточных иммуноглобулинов не имеют диагностической и прогностической ценности, ибо не выходят за пределы физиологической нормы и существенно отстают по времени от периода заболевания. Количественные и функциональные показатели, характеризующие активность иммунокомпетентных клеток, также мало информативны, поскольку обычно соответствуют динамике изменений при любом воспалительном процессе, а их изменения находятся в пределах погрешности используемых методов.

Целью данной работы было изучение уровней иммуноглобулинов классов ^М, ^А, ^Е, а также подклассов IgG1-4 при острых первичных гайморитах (ОПГ) и рецидивирующих гаймороэтмоидитах (РГЭ) различной этиологии в различных биологических жидкостях у детей 7-14 лет. Параллельно проводилась оценка уровней субклассов иммуноглобулинов у больных той же возрастной группы при хроническом компенсированном и декомпенсированном тонзиллитах (ХКТ, ХДТ). Самостоятельной задачей стала оценка концентраций антител указанных классов в сыворотке крови, слюне и лакунарном секрете у детей указанной возрастной группы в норме.

С помощью твердофазного иммуноферментного анализа уровни субклассов IgG, а также ^М, ^А, ^Е определяли в сыворотке крови, слюне, содержимом пазух (при ОПГ и РГЭ), лакунарном секрете (при ХКТ и ХДТ). Одной из важнейших особенностей исследования стало использование очень высокой чувствительности метода ИФА, поэтому при заборе биологического материала не использовались смывы с различных поверхностей, материал получали в минимальном объеме без разбавления, а затем разводили его в пробирке в

100-1000 раз в соответствии с методикой подготовки образцов для анализа, что существенно повышало достоверность результатов.

Сывороточные уровни ^М, ^А, IgG1 находятся в пределах физиологической нормы у всех обследованных детей с заболеваниями ЛОР-органов. Одновременно ^Е практически не проникает через слизистые оболочки, о чем свидетельствует его крайне низкий уровень в лакунарном секрете и в слюне. В слюне уровни IgG1-4 мало изменяются при синуситах и тонзиллитах. Наиболее значимые результаты связаны с оценкой уровней антител разных классов в секрете пазух и в лакунарном секрете. Уровни ^М в местных секретах оказались примерно на одном уровне (около 10-15 мкг/мл). Уровни ^А в секрете пазух были незначительно выше, чем в секрете лакун, но как при синуситах, так и при тонзиллитах они не зависели от давности патологического процесса. Оценка уровней IgG1-4 в местных секретах, произведенная впервые, позволила получить принципиально важные результаты. Установлено, что при тонзиллитах уровни IgG1-3 в лакунарном секрете не зависят от характера процесса. Одновременно переход от компенсированной к декомпенсированной форме хронического тонзиллита сопровождается почти 4-кратным приростом уровня IgG4. В содержимом пазух от больных ОПГ и РГЭ найден гораздо более высокий (в 50-100 раз по сравнению с больными хроническим тонзиллитом) уровень местных IgG1 и IgG3, а также зависимость концентрации IgG2 и IgG4 от тяжести процесса, которые при переходе от ОПГ к РГЭ возрастают в 100 раз. При РГЭ уровень IgG4 в секрете пазух в 2 раза превышает уровень IgG1 в сыворотке крови. На основании современной концепции о роли Тх1/Тх2 в иммунорегуляции можно предположить, что первичная вирусная инфекция сопровождалась клеточным иммунным ответом с активацией цитотоксических CD8+ Т-лим-фоцитов, №К-клеток, а также CD4+ Тх0 и их диффе-ренцировкой в Тх1 в присутствии ^-2 и №N7. Однако из-за наличия №N7 развивающийся параллельно гуморальный ответ сопровождается усилением продукции IgG2 и IgG4, которые хорошо нейтрализуют вирусы, но не опосредуют антителозависимой клеточной цитотоксичности и почти не активируют каскад комплемента. В придаточных пазухах носа начинается развитие бактериальной микрофлоры, что сопровождается усилением отека слизистой под действием ГИ, ^-6, TNFa, перекрытием естественного устья пазух и формированием замкнутого воспалительного очага, в котором иммунные реакции протекают по типу хронического воспаления. Одновременно не происходит переключения на синтез IgG1 (опосредуемый ^-4) и ^А (опосредуемый TGFP), которые связаны с развитием оппозитного гуморального ответа через переход Тх0 в Тх2 в присутствии ^-4 и ^-10.

Характеристика изменений В-клеточного иммунитета у детей с острым лимфобластным лейкозом

‘Потапнев М.П., ‘Белевцев М.В., ‘Буглова С.Е., ‘Мигаль Н.В., 2Гринев В.В., ‘Черновецкий М.А., 3Борткевич Л.Г., 2Петевка Н.В., 4Марцев С.П.

‘Республиканский научно-практический центр детской онкологии и гематологии, 2Научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови, 2Международный экологический университет им. А.Д. Сахарова, 4Институт биоорганической химии НАН, Минск, Беларусь

Роль иммунологических отклонений в патогенезе острых лейкозов человека по-прежнему привлекает внимание исследователей. Целью настоящей работы было выявление нарушений гуморального звена иммунитета у детей с острым лимфобластным лейкозом (ОЛЛ) в стадии выраженной прогрессии заболевания.

Под нашим наблюдением было 44 больных в возрасте 4 месяца-15 лет. Контрольную группу составляли 28 детей соответствующего возраста. Оценку уровня IgM, IgG, IgA в сыворотке крови проводили турбидиметри-ческим методом. Уровни IgG1, IgG2, IgG3, IgG4 оценивали в иммуноферментном анализе. Противо-опухоле-вые антитела выявляли в сыворотке крови методом CELISA с опухоле-выми клетками линий Raji и IM-9. Бактерицидную активность сыворотки (БАО) крови определяли по подавлению роста колоний S. aureus в присутствии прогре-тых (56°C, 30 мин) и непрогретых образцов сыворотки крови. Антитела к дифте-рийному и столбнячному анатоксинам выявляли в реакции пассивной гемагглютинации. Конформационные изменения IgG оценивали по результатам зондового взаимодействия молекул с антителами к H-цепям Ig и протеином А ста-филокок-ка в конкурентном и двуцентровом вариантах.

Полученные результаты не выявили различий средних показателей содержания IgM, IgG, IgA между детьми с ОЛЛ и контрольной группой. В то же время у больных достоверно чаще (p<0,05) встречалось значительное отклонение от среднего уровня содержания Ig. ^держа-ние разичных субклассов IgG практически не отличалось у группы здоровых и больных детей. Противоопухолевые антитела, реагирующие с опухолевыми клетками линии IM-9, но не Raji, были выявлены методом CELISA в образцах сывороток крови больных с ОЛЛ, но не здоровых детей. Напротив, уровень антитоксических антител (против дифтерийного и столбнячного анатоксинов) был достоверно снижен (P<0,05) у детей с ОЛЛ по сравнению с контрольной группой. Cравнение БАC крови показало ее достоверное повышение в образцах нативной, но не прогретой сыворотки крови у детей с ОЛЛ по сравнению с контрольной группой. Оценка конформационных изменений IgG выявило гомогенность пула IgG у 31,8% больных с ОЛЛ и у 10% здоровых детей. Наличие аберрантных молекул IgG выявлено у 20% детей контрольной группы и у 40,9% детей с ОЛЛ.

Tаким образом, реакция иммунной системы на прогрессирующий лейкозный процесс характеризуется у большей части детей изменением уровня синтеза и свойств сывороточных IgG, появлением противоопухолевых антител к высокодифференцированным опухолевым клеткам IM-9, падением уровня вакцинальных антител к дифтерийному и столбнячному анатоксинам, повышением Ig-независимой бактерицидности сыворотки крови.

Гиперреактивность бронхов на ингаляцию гипо-и гиперосмолярных растворов у детей с бронхиальной астмой

^темкина A.M., Клыкова T.B.

Казанская государственная медицинская академия последипломного образования, Казань, Россия

В патогенезе бронхиальной астмы ^A) большое значение имеет гиперреактивность бронхов (^Б), для выявления которой применяются различные фармакологические и нефармакологические провокационные пробы, имеющие неодинаковую информативность и неоднозначный механизм вызываемого бронхоспазма.

Цель работы - исследовать реакцию дыхательных путей на ингаляцию гипотонического (дистиллированная вода) и гипертонического (З,6% раствор хлорида натрия) растворов у детей с БA. Обследовано З7 детей 8-15 лет с атопической БA пылевой (6) и сочетанной - пылевой и пищевой и/или эпидермальной (З1) этиологии, преимущественно легкого (З1), реже средне-тяжелого (4) и тяжелого (З) течения. C каждым раствором проводили по четыре 2х минутных ингаляции с помощью ингалятора ‘Аэрозоль-УГ’ под контролем клиники и показателей кривой “поток-объем форсированного выдоха” на автоматизированном пневмотахометре “Этон-01”. Проба считалась положительной, если появлялись кашель,свистящие хрипы в легких и/ или снижение на 20% ОФВ1 или двух или более скоростных показателей ^C50, MОC75, TOC25-75, TOC75-85).

Положительные результаты получены у 54,05% детей с неодинаковой частотой на растворы различной осмо-лярности: на ингаляцию гипертонического раствора - у 51,З 5%, гипотонического - у 27,0З%, из них у 24,З2% - на оба раствора. Бронхоспастическая реакция у всех больных сопровождалась снижением функциональных показателей, у части из них в сочетании с клиническими симптомами, чаще при ингаляции гипертонического раствора (6З,16%) по сравнению с гипотоническим (40,0%). Частота возникновения ^Б зависела также от тяжести течения БA: при тяжелом и средне-тяжелом течении она определялась у всех больных и преимущественно к обоим растворам, а при легком течении - лишь у 45,16% и чаще к одному из ингалируемых препаратов.

Положительная реакция возникала как на фоне нормальных, так и исходно сниженных показателей бронхиальной проходимости, однако отсутствие ^Б к обоим препаратам в 2 раза чаще регистрировалось на фоне

нормальных показателей и наоборот, наличие ГРБ к обоим растворам в 2 раза чаще выявлялось на фоне исходно сниженных параметров.

Таким образом, использование неизоосмолярных растворов является одним из информативных тестов регистрации неспецифической ГРБ у больных БА. C другой стороны, параллельное использование гипо- и гипертонических растворов позволяет дифференцировать тяжесть ее течения у детей.

Сравнение эффективности ингаляционного и внутрижелудочного введения антагонистов H1 гистаминовых рецепторов на модели гистамининдуцированного бронхоспазма in vivo

Прокофьев П.С., Утешев Д.Б., Карабиненко А.А., Ковалева В.Л., Утешев Б.С.

Российский государственный медицинский университет, Москва, Россия.

В связи со ставшей относительно доступной в последнее время технологией получения стабильных аэрозолей для ингаляции с помощью компрессорных небулайзеров, перед клинической фармакологией стоят задачи повторного изучения эффективности антигистаминных препаратов при ингаляционном пути введения. Целью настоящего исследования явилось изучение антигистаминного эффекта широко используемых в клинической практике хлорпира-мина и клемастина при ингаляционном пути введения с помощью компрессорного небулайзера в сравнении с их эффективностью при внутрижелудочном применении у морских свинок. Ингаляционно клемастин и хлорпирамин применяли за 60 мин и 120 мин до ингаляции гистамина в концентрации 40 мкг/мл и 1 мг/мл соответственно. Ингаляционное применение клемастина за 60 мин до ингаляции гистамина, полностью предотвращало бронхоспазм у 50% животных, а за 120 мин до введения гистамина - у 100% животных. При ингаляции хлорпирамина, как за 60 мин., так и за 120 мин. до использования гистамина, у всех животных отмечалось полное предотвращение бронхоспастической реакции. Нами не было отмечено развития побочных эффектов, в том числе и седативного, при ингаляционном пути введения препаратов. В группах сравнения клемастин и хлорпирамин вводили внутрижелудочно в эквимолекулярных ингаляционному пути введения дозах

0,8 и 2 мг/кг веса соответственно. При внутрижелудочном введение клемастина за 60 минут до ингаляции гистамина бронхоспастическая реакция развивалась у всех животных, а за 120 мин - бронхоспастическая реакция тормозилась лишь в 25% случаев. При внутрижелудочном введение хлорпирамина за 60 и 120 мин бронхоспастическая реакция развилась у 25% лабораторных животных. Необходимо отметить, что при внутрижелудочном пути введения препаратов, все животные были заторможены и у них

наблюдались пониженные рефлексы, что свидетельствует о развитии у них побочных эффектов, связанных с влиянием на ЦНС Таким образом, результаты проведенного исследования свидетельствуют, что ингаляционное введение антагонистов H1 гистаминовых рецепторов оказывало более выраженный, по сравнению с внутрижелудочным путем введения, протективный эффект на модели гистамин-индуцированной бронхоспастической реакции у морских свинок in vivo.

Преимущества и органичения анализа иммуноглобулинов

Самойлович М.П., Грязева И.В.,

Крутецкая И.Ю., Пашкова С.Ф., Кузенкова А.В., Карасева Н.Е., Климович В.Б.

Центральный научно-ииследовательский рентгено-радиологический институт, М3 РФ, Санкт-Петербург, Россия

Ig разных типов, изотипов и субизотипов обладают высокой степенью структурной гомологии, что затрудняет их дифференциальное определение. Иммунохи-мические методы выявления, основанные на антигенных различиях Ig, признаны в настоящее время наиболее надежными. Эпитопная направленность МКА обеспечивает высокую специфичность иммуноанализа, однако именно это свойство может ограничивать применение МКА при анализе Ig.

Цель работы состояла в исследовании преимуществ и ограничений использования МКА для определения концентраций Ig, свободных легких цепей и секреторного компонента (SC).

Материал и методы - объектом исследования служили Ig человека и их фрагменты, содержащиеся в сыворотке и биологических жидкостях здоровых людей и пациентов с различными заболеваниями. Работа выполнена методом иммуноферментного анализа с помощью МКА против Ig человека, созданных в лаборатории гибридомной технологии ЦНИРРИ.

Результаты. Для определения концентраций Ig отдельных изотипов и субизотипов, свободных легких цепей и SC сконструированы двухцентровые иммунофер-ментные системы, имеющие общий принцип построения (табл.). МКА против эпитопа, специфичного для исследуемого Ig, иммобилизованы на твердой фазе и обеспечивают извлечение лиганда из анализируемой пробы. Ig, связавшиеся с твердой фазой, выявляют с помощью меченого пероксидазой МКА, направленного против второго эпитопа, топографически удаленного от первого.

Применение двух МКА с разной эпитопной направленность обеспечивает специфичность и высокую чувствительность тест-систем, что позволяет исследовать биологические жидкости с низким содержанием Ig без предварительного концентрирования. Использование МКА против эпитопов, экспонируемых только на свобод-

Таблица. ИMMУHOФEPMEHTHЫE MCTEMbl BЫЯBЛEHИЯ iG ЧEЛOBEKA HA OCHOBE MKA

Система определения ^юцифичность MKA Динамический диапазон

иммобилизованных меченых

igG Y-Fc к + Х- или g-Fc 50-10000

igM ц-Fab к + Х или ц-Fab 100-2000

igA a-Fc к + Х или a-Fc 20-3000

igGi Yl-Fc Y-Fc 90-5800

igG2 Y2-Fc Y-Fc 100-3500

igG3 Y3-шарнир Y-Fc 50-900

igG4 Y4-рFc Y-Fc 20-400

igE e -Fc (Ce2 домен) e-Fc(Ce3 домен) 0,3-100

секреторный

igA SC a-Fc 5-200

SC свободный SC SC 50-5000

свободные свободная

к цепи к-цепь к-цепь 20-500

свободные свободная

Х-цепи l-цепь Х-цепь 1-50

ных фрагментах Ig и маскируемых в составе полных молекул, позволило создать системы для определения свободных легких цепей и SC. Эти системы не требуют освобождения исследуемых образцов от полных молекул Ig. Параметры каждой тест-системы определяются аффинитетом взаимодействия иммобилизованных и меченых МКА с соответствующими эпитопами. При исследовании образцов сыворотки крови от пациентов с множественной миеломой было установлено, что эпитопы некоторых парапротеинов обладают аномальным сродством (высоким или низким) к используемым МКА. Это обстоятельство затрудняет оценку содержания парапротеина. Особенностью молекул Ig является их конформационная подвижность. Она проявляется при изменениях физикохимических параметров среды, а также при взаимодействии Ig с лигандами Fab- и Fc-областей (антигенами, Fc-рецепторами и другими субстанциями) и приводит к изменениям экспрессии отдельных эпитопов.

Заключение. МКА, будучи реагентами с эпитопной специфичностью, обеспечивают высокую чувствительность, избирательность и воспроизводимость иммуноанализа Ig, если при проведении его учтены пределы конформационной изменчивости и генетического консерватизма распознаваемых ими эпитопов.

Корреляционное моделирование рецепторно-цитокинового фенотипа клеток периферической крови в исследовании иммунного ответа

Снопов С.А.

Институт цитологии Российской Академии наук, Санкт-Петербург, Россия

Работа проводилась в рамках исследования, направленного на поиск путей повышения иммуноре-

зистентности у детей, подверженных частым инфекциям. Одна из целей работы состояла в выявлении клеточных и гуморальных параметров периферической крови, которые могут отражать противоинфек-ционный ответ и служить для его характеристики. Обследовали 17 детей в возрасте 13-36 месяцев с инфекционным риноконъюнктивитом, начальные клинические проявления которого были зарегистрированы за неделю до обследования. Определяли процентное содержание основных типов лейкоцитов - с помощью морфометрической микроскопии, субпопуляций лимфоцитов - иммунохимическим окрашиванием антителами против CD3, CD4, CD8, CD20, CD25, HLADR (DAKO, Denmark) с последующей количественной цитофлюориметрией; уровни нескольких цитокинов в плазме - IL-1 в, IL-2, TNF-a, IL-10 IFN-y иммуноферментным методом с помощью соответствующих наборов (R&D Systems Europe, United Kingdom). На момент обследования у детей обнаруживали в крови признаки формируемого иммунного ответа и четко разделялись на две группы, полярные по числу лимфоцитов, экспрессирующих активационные маркеры CD25 и HLADR. Ретроспективный анализ возможных причин выявленного различия показал, что оно могло быть связано с небольшой разницей во времени, прошедшем с момента инфицирования до забора крови в этих группах. В то время как процент CD20+ клеток был повышен у всех детей, проценты CD3+, CD4+, CD8+ клеток оказывались, в очевидном соответствии с указанным повышением, несколько ниже возрастных норм. Cреди CD4+ клеток у части детей из обеих групп выявлялись две отчетливо различимые фракции, характеризующиеся более бледной и более яркой специфической флуоресценцией после иммунохимического окрашивания этого рецептора. Корреляционный анализ всех одновременно измеренных показателей позволил моделировать предполагаемый рецепторно-ци-токиновый фенотип клеточных субпопуляций, указывая, в частности, на наличие CD3+CD4+brlghtCD8+, CD3+CD8+HLADR+, CD20+CD4+dim, CD20+HLADR+, CD20+CD25+клеток, на продукцию IFN-y CD8+ клетками и IL-1 в эозинофильными лейкоцитами, а также на возможную ассоциацию экспрессии рецепторов CD4, CD8, HLADR, CD25 с представительством в крови моноцитов. Полученные фактические данные вместе с рассчитанными фенотипическими характеристиками дают некоторое представление о тех многообразных изменениях репертуара поверхностных рецепторов и продукции/потребления цитокинов субпопуляциями клеток крови, которые происходят in vivo на одной из стадий формирования иммунитета при инфекционном (аденовирусном) риноконъюн-ктивите. Предлагаемое моделирование может быть использовано для исследования кооперативных клеточных взаимодействий при любом иммунном ответе.

^шез ИФ^ оценивали по содержанию его в кондиционированной среде 24-часовых культур лимфоцитов методом ELISA с помощью наборов фирмы “Цитокин”.

Результаты. Эндометрий небеременных женщин содержал все типы иммунокомпетентных клеток (ИКК) в пределах, соответствующих показателям периферической крови, однако, общий уровень Т-лимфоцитов, в т.ч. и CD4+ клеток был достоверно ниже, чем в периферической крови. Характерной чертой ткани эндометрия было увеличение содержания клеток с цитотоксической активностью, особенно уникального пула CD3+CD16+ лимфоцитов, осуществляющих цитотоксичность не ре-стриктированную по АГ главного комплекса гистосовместимости 2 класса. В эндометрии значительно выше был также уровень CD16+ и CD16-CD56+ субпопуляций ЕКК. Установлено, что эндометриальные лимфоциты продуцировали ИФН^ Начало беременности характеризовалось снижением содержания основных популяций лимфоцитов (CD3+, CD4+, CD8+) и повышением количества активированных лимфоцитов (CD25+, HLA-DR+). Параллельно отмечалось резкое падение уровня CD3+CD16+ лимфоцитов на фоне выраженного накопления пула CD16-CD56+ ЕКК. ^шез ИФ^ в этот период был минимальным. Во 2 триместре число лимфоцитов с классическим фенотипом нарастало, но снижалось количество активированных клеток. Отмечался шифт в субпопуляциях ЕКК, то есть, содержание CD16-CD56+ клеток начинало снижаться, а CD16+ - нарастать. В 3 триместре уровень клеток с классическим фенотипом приближался к таковому в эндометрии небеременных женщин, CD3+CD16+ лимфоциты становились единичными, а CD16+ ЕКК - доминирующими. Этот период характеризовался максимальной продукцией ИФН^

Заключение. Таким образом, можно предположить, что во время неосложненной беременности происходят

2 шифта дифференцировки Th на локальном уровне - в начале и в конце беременности, причем первый шифт идет в сторону Th2, а второй - Th1 типа иммунного ответа. Выраженные локальные изменения в содержании различных субпопуляций ЕКК позволяют предположить участие ЕКК в регуляции типа иммунного ответа.

Сравнительная оценка влияния медикаментозного и хирургического методов прерывания беременности на показатели иммунного статуса у подростков

Сотникова Н.Ю., Богатова И.К.,

Горбуля С.С., Анциферова Ю.С.

Научно-исследовательский институт материнства и детства им. В.Н.Городкова М3РФ, Иваново, Россия

Прерывание беременности в подростковом возрасте связано со значительным риском как для физического здоровья, так и для последующего материнства. В

связи с этим, вопросы безопасного аборта у подростков приобретают особую актуальность. Альтернативой хирургическому аборту является медикаментозный метод прерывания беременности. К числу лекарственных препаратов, применяемых для этой цели, относится пенкрофтон (синтетический аналог мифепристона). До настоящего времени возможность его применения в подростковом возрасте не изучалась. В связи с этим нами была проведена сравнительная оценка влияния медикаментозного метода прерывания беременности с помощью мифепристона и ваккум-аспирации на показатели функциональной активности иммунокомпетен-тных клеток периферической крови подростков.

Материалом для исследований служила гепаринизи-рованная венозная кровь. Изучение экспрессии активационных маркеров лимфоцитов (CD25, CD11b, CD95, HLA-DR), уровня продукции МЩ содержания сывороточных иммуноглобулинов, а также оценку бактерицидной и фагоцитарной активности нейтрофилов проводили стандартными методами в динамике до и после аборта.

Нами было установлено, что наступление беременности в подростковом возрасте характеризуется значительными негативными изменениями в состоянии иммунной системы, проявляющимися в усилении экспрессии лимфоцитами активационных маркеров, угнетении продукции МШ и отрицательном кондиционировании нейтрофилов. На 3-й день после медикаментозного аборта нами отмечалась нормализация количества CD25+ лимфоцитов и продукции МЩ усиление индуцированной бактерицидной активности нейтрофилов и повышение функционального резерва нейтрофилов до уровня нормы, что является показателем позитивного прими-рования фагоцитов периферической крови и свидетельствует о снятии функционального напряжения А-звена иммунитета, которое отмечалось нами у подростков при беременности. Позитивные изменения иммунологических показателей функциональной активности лимфоцитов и нейтрофилов периферической крови подростков сохранялись и на 10-й день после медикаментозного прерывания беременности. Изучение динамики изменения иммунологических параметров у подростков после мини-аборта показало, что содержание CD25+ лимфоцитов на 3 день после аборта значительно превышало таковое у здоровых подростков. На 10-е сутки после мини-аборта нами отмечалось снижение уровня экспрессии лимфоцитами рецептора к ИЛ-2, но при этом значения содержания CD25+ клеток все еще превышали нормативный параметр. Заслуживает особого внимания тот факт, что количество CD95+ клеток прогрессивно снижалось от 3-их к 10-м суткам после мини-аборта. Это может свидетельствовать об угнетении элиминации активированных клонов лимфоцитов и, вероятно, о нарушении процессов регуляции иммунного ответа у подростков после мини-аборта. Анализ динамики изменения содержания сывороточных иммуноглобулинов после мини-аборта у подростков показал значительное повышение уровня IgG на 10-сутки. Принимая во внимание

тот факт, что на 10-е сутки после мини-аборта у подростков отмечалось угнетение продукции лимфоцитами МШ и резко снижалась индуцированная бактерицидная активность нейтрофилов, можно говорить о том, что после мини-аборта развивается воспалительный процесс, обусловленный инвазивностью данного метода прерывания беременности.

Таким образом, медикаментозное прерывание беременности с помощью пенкрофтона не оказывало отрицательного влияния на показатели функциональной активности иммунокомпетентных клеток периферической крови у подростков. Мини-аборт нельзя рассматривать как оптимальный метод прерывания беременности в подростковом возрасте, так как после него в течение длительного времени сохраняются и углубляются негативные изменения иммунитета, свидетельствующие о развитии воспалительного процесса.

Особенности содержания CD56+ и CD16+ клеток и параметров активации лимфоцитов у детей с минимальной мозговой дисфункцией

Сотникова Н.Ю., Кудряшова А.В., Филькина О.М., Кочерова О.Ю., Чиненова Н.С., Васильев М.Д.

Научно-исследовательский институт материнства и детства им. В.Н. Городкова М3 РФ, Иваново, Россия

В настоящее время в литературе все чаще дискутируется вопрос о роли иммунной системы в патогенезе целого ряда заболеваний нервной системы. Известно, что между нервной и иммунной системой существует тесная взаимосвязь, опосредованная наличием идентичных рецепторов на клетках и способностью к восприятию медиаторов, продуцируемых клетками как иммунной системы, так и нервной системы. Однако, роль иммунной системы в патогенезе и этиологии энцефалопатии детей дошкольного возраста остается малоизученной.

Проводили иммунологическое обследование 16 детей от 1 до 7 лет жизни с минимальной мозговой дисфункцией (ММД). Контрольную группу составили 13 детей 1-7 лет жизни 1 группы здоровья. Иммунологическое обследование включало определение экспрессии активационных молекул CD25 и HLA-DR на поверхности лимфоцитов, а также активированных КК-клеток с помощью моноклональных антител анти-CD16 и анти-CD56 в периферической венозной крови (“МедБиоС-пектр”, г. Москва) на проточном цитофлюориметре “FACScan”. Наличие у обследованных детей энцефалопатии сопровождалось изменением показателей активации лимфоцитов по сравнению с нормативными параметрами, причем, наиболее выраженными в 1-3 года жизни. У детей с ММД в 1-3 года жизни содержание CD25+ клеток незначительно превышало параметры контрольной группы, однако, индивидуальный анализ данных показал, что у детей 1 группы показатель содержания CD25+ лимфоцитов в 71,4% случаев не превышал

6%, в то время как в группе детей с ММД в 66,6% случаев он был выше 6%. Содержание HLA-DR позитивных клеток детей 1-3 лет жизни с ММД не отличалось от такового в контрольной группе ни по средним значениям, ни при индивидуальном анализе. Выраженную тенденцию к увеличению, по сравнению с нормативными значениями, имел показатель содержания CD56+ клеток в периферической крови детей с ММД в 1-3 года. Индивидуальный анализ данных показал, что во всех случаях в контрольной группе данный параметр не превышал порогового значения - 9%, в то время как у детей с ММД в 100% случаев он был выше 9%. В группе детей с ММД достоверно повышалось содержание CD16+ клеток. У детей с минимальной мозговой дисфункцией в 3-7 лет жизни параметры ранней и поздней активации лимфоцитов достоверно не отличались от аналогичных в контрольной группе, как при сравнении средних величин, так и при индивидуальном анализе показателей. Однако, сохранялась тенденция к более высокому уровню СD25+ лимфоцитов в группе детей с ММД. Отмеченная нами тенденция к повышению уровня CD56+ клеток в группе детей 1-3 лет жизни с ММД, к 3-7 годам жизни приобретала достоверный характер, но индивидуальный анализ данных показал снижение пограничного значения показателя содержания CD56+ клеток до 7%. Так у детей 1 группы в 100% случаев содержание CD56+ клеток было меньшим или равным 7%, в то время как их уровень в группе детей с ММД в 70% случаев не превышал пограничное значение. В группе детей с ММД сохранялись достоверно более высокие значения содержания CD16+ клеток. Известно, что в большинстве случаев энцефалопатия у детей раннего возраста развивается как следствие перинатального повреждения ЦНС в основе которого могут лежать нарушения иммунного гомеостаза у беременных женщин и синтез аутоантител к антигенам нервной ткани. Возможно, выявленная нами устойчивая тенденция к усилению активации лимфоцитов, определяется повышенным уровнем нейроспецифи-ческих белков в циркуляции крови, а продуцируемые нейроспецифические антитела обуславливают развитие аутоиммунных реакций, вызывая деструкцию ткани. Антигенные структуры разрушающихся клеток, попадая в кровеносное русло вызывают активацию специфических клонов лимфоцитов, определяя тем самым саморегуляцию патологического процесса.

Особенности системного и местного иммунитета у женщин с привычным невынашиванием различного генеза

Сотникова Н.Ю., Посисеева Л.В.,

Анциферова Ю.С., Колесникова И.К., Бойко Е.Л.

Научно-исследовательский институт материнства и детства им. В.Н.Городкова М3 РФ, Иваново, Россия

Невынашивание беременности является одним из наиболее распространенных заболеваний в акушерстве. Из-

вестно, что невынашивание беременности сопровождается значительными нарушениями в иммунной системе, однако роль системных и локальных иммунных факторов в развитии этой патологии, а также связь изменений в иммунной системе с другими патогенетическими факторами невынашивания беременности до конца еще не установлена. Целью нашей работы было выявить особенности популяционного состава лимфоцитов периферической крови и эндометрия у женщин с привычным невынашиванием гормонального и инфекционного генеза.

Материалом для исследований служила гепарини-зированная венозная кровь и биоптаты эндометрия женщин с привычным невынашиванием гормонального и инфекционного генеза. Диагноз был подтвержден данными клинико-лабораторного, гормонального, бактериологического обследования. Контролем служила группа соматически здоровых женщин с нормальной фертильностью. Популяционный состав лимфоцитов и экспрессию ими активационных маркеров оценивали с помощью моноклональных антител (“МедБиоС-пектр”, Москва) методом проточной цитометрии.

При изучении состояния системного иммунитета было установлено, что в периферической крови женщин с невынашиванием гормонального генеза значительно повышалось содержание CD72+ клеток и увеличивалась экспрессия лимфоцитами CD25 молекул, при этом количество CD95+ лимфоцитов достоверно снижалось по сравнению с аналогичными параметрами в контрольной группе. У женщин с привычным невынашиванием, обусловленным инфекционным фактором, отмечалось усиление экспрессии периферическими лимфоцитами CD25 и CD71 молекул в популяции CD4+ клеток. Изменения на местном уровне у женщин с невынашиванием имели ряд особенностей. В эндометрии женщин с невынашиванием гормонального генеза было значительно снижено содержание CD4+ и CD11b+ клеток на фоне увеличения количественного содержания CD72+, CD25+ и CD38+ популяций лимфоцитов. При невынашивании инфекционного гене-за также отмечалось высокое содержание в эндометрии CD25+ и CD38+ лимфоцитов, при этом для женщин этой группы было также характерно повышенное содержание CD4+CD71+ популяции лимфоцитов.

Складывается впечатление, что у женщин с невынашиванием гормонального генеза и на системном, и на локальном уровне происходит активация В-звена иммунитета. При этом снижение экспрессии Fas-антигена лимфоцитами периферической крови на фоне повышенного содержания активированных клеток, по-видимому, приводит к накоплению в циркуляции атипических клонов В-лимфоцитов и к развитию аутоиммунных процессов. При невынашивании, обусловленным инфекционным фактором, как в периферической крови, так и в эндометрии повышается интенсивность пролиферативных процессов. Таким образом, привычное невынашивании различного генеза развивается на фоне неодинаковых иммунных нарушений, что необходимо учитывать при назначении лечебных мероприятий при данной патологии.

Гиперчувствительность к местным анестетикам (МА): сравнение некоторых методов аллергодиагностики

Степанова Е.В., Гюнтер Е.А.,

Кузнецова Н.М., Гервазиева В.Б.

Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток РАМН, Москва, Россия

Лидокаин и новокаин, медикаменты, наиболее часто применяемые в России для местного обезболивания, вызывают, по данным литературы, аллергические осложнения в 0,1-1% случаях их применения. Назрела необходимость решения вопроса об эффективной диагностике этой патологии.

Обследовали 85 пациентов с аллергическими реакциями на новокаин и 145 больных с гиперчувствительностью к лидокаину в анамнезе. Из них 87% составляли женщины в возрасте от 20 до 50 лет. Большинство реакций возникали не позднее 6-8 час. после инъекции медикамента и протекали по типу крапивницы и/или ангионевротического отека (73%). У 97 пациентов аллергическая реакция появилась при первой встрече с лекарством, у 107 человек после повторного введения препаратов. Остальные предъявляли жалобы при каждом применении МА, отмечая, что каждое последующее применение лекарства, вызывало сокращение латентного периода и утяжеление клинических проявлений. Контрольную группу составили 58 здоровых доноров.

Скарификационные кожные пробы с 1% р-рами медикаментов, проведенные у 59 больных с реакцией на новокаин и у 76 на лидокаин, позволили установить причинный препарат в 15% случаев их применения. Внутрикожные инъекции лекарств, разведенных изотоническим раствором хлорида натрия в пропорции 1:100, оказались позитивными у 15 из 79 больных (19%), причем в подавляющем большинстве случаев вызванные ими эффекты носили общий характер (парестезия в области носогубного треугольника, головокружение, тошнота, зуд, крапивница). Два случая контактного дерматита удалось диагностировать, применив аппликационное накожное тестирование с 2% р-ром лидокаина в белом вазелине (экспозиция 48 час.).

Методом хемилюминесценции (ХЛ) исследовали пробы крови от 12 больных с непереносимостью новокаина в виде анафилактического шока, крапивницы, бронхиальной астмы и макулопапулезных высыпаний. Во всех случаях на основании угнетения индуцированной ХЛ диагностировали гиперчувствительность к новокаину. В контрольной группе (12 человек), ХЛ показано 2 ложноположительных результата. В целом, результаты метода ХЛ в 92% совпали с анамнезом.

Тест аллергической альтерации лейкоцитов (ТААЛ), основанный на учете дегрануляции и внут-

риклеточных дегенеративных изменений, возникающих в гранулоцитах под влиянием причинного медикамента, проводили всем обследованным (288 человек), при этом у 89% больных была установлена повышенная чувствительность к причинному МА. В контрольной группе не было ни одного положительного результата.

Заключение. Применение лабораторных методов диагностики таких как ХЛ и ТААЛ позволяет, избегая риска для пациента, установить медикамент, вызвавший аллергическую реакцию в подавляющем проценте случаев.

Прогностическое значение иммуногистохимического определения экспрессии молекулярных биомаркеров (Р53, Вс1-2, Вах, VEGF) при плоскоклеточном раке легкого

Степанова Е.В., Лактионов К.К.,

Полоцкий Б.Е., Барышников А.Ю.

Российский Онкологический Научный Центр им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва, Россия

В последнее время большое внимание обнаружено, что многие белки, отвечающие за процессы апоптоза и ангиогенез, имеют важное прогностическое значение для многих типов опухолей. Целью работы было провести иммуногистохимическое определение экспрессии белков р53, Вс1-2, VEGF в опухолевой ткани плоскоклеточного рака легкого.

Метод: исследование проводилось иммуногисто-химическим методом на парафиновых срезах опухолей с использованием антител к р53, Вс1-2, Вах, VEGF.

Результаты. Экспрессия р53 выявлена в 64% случаев плоскоклеточного рака легкого. Экспрессия р53 является неблагоприятным маркером трехлетней выживаемости для больных плоскоклеточным раком легкого (р=0,031). Экспрессия Вс1-2 наблюдается в 48% случаев плоскоклеточного рака легкого. При наличии в опухолевых клетках Вс1-2 наблюдается тенденция к улучшению выживаемости больных (данные не достоверны). Экспрессия Вах обнаружена в 50% случаев и не коррелировала с прогнозом опухоли. Было показано, что VEGF экспрессируется в 59% случаев плоскоклеточного рака легкого. В ходе исследования показано, что VEGF является неблагоприятным маркером выживаемости (р=0,01). Экспрессия VEGF коррелировала с экспрессией р53 (р=0,026), что говорит о положительной регуляции синтеза VEGF мутантным р53.

Заключение: показана прогностическая значимость определения р53, VEGF в определении трехлетней выживаемости плоскоклеточного рака легкого.

Иммунологический мониторинг для прогнозирования и лечения инфекционных осложнений при вспомогательном и искусственном кровообращении

Сускова В.С., Шальнев Б.И., Шумаков Д.В., Анташев А.В., Сусков С.И., Емец В.И.,

Ермакова Л.П., Струкова О.К.

Научно - исследовательский институт трансплантологии и искусственных органов М3 РФ, Москва, Россия

Механическая перфузия может стать источником инфекции и пусковым моментом развития системной восполительной реакции ^ВР). Опыт зарубежных исследователей подтверждает, что инфекционные осложнения являются основными при искусственном и вспомогательном кровообращении (ИиВК), хотя эпизоды CВР имеют место у всех больных.

Для своевременного купирования эпизодов инфекции и проведения адекватной иммунотерапии важно определить фазу и выраженность инфекционно-воспалительной реакции и характер иммунологических нарушений.

C этой целью нами проводился иммунологический мониторинг у 10 кардиохирургических больных, оперируемых в условиях ИК, и после ВК по тестам клеточного, гуморального и иммунорегуляторного звена иммунитета с использованием моноклональных антител (“Cорбент” и “МедБиоспектр”) и проточной цитофлюо-рометрии (FACScan Becman Dickinson, CША) методом двойного окрашивания; одновременно с этим исследовали системы фагоцитов и комплемента. Цитокиновый статус ( ИЛ - 1в, ИЛ - 4, ИЛ - 6, ИЛ - 8, ФНОa) оценивали с использованием отечественных наборов (ООО “Ци-токин” и “Про Контур”, C.-Петербург).

По результатам иммунологического обследования устанавливали тип и степень CВР, сопряженность с активацией инфекции, корреляцию с бактериемией и клиническим синдромом, что являлось обоснованием для иммунокоррекции. Выявлены 4 периода риска возникновения септических осложнений: 1 - период адаптации (первые 11 суток после операции); 2 - замена головки насоса и магистралей насоса; 3 - обострение хронической инфекции; 4 - лихорадка неясного генеза.

Уже в первые дни после ИиВК у больных отмечалась лимфопения, активация гуморального иммунитета, нейтрофилов, системы комплемента и натуральных киллеров. Одновременно с этим в условиях ИК и ВК отмечалось повышение ИЛ - 6 (268 - 131) и ИЛ - 8 (370

- 420) без повышения ФНОa и ИЛ - 1в. Данные изменения были обусловлены наличием циркуляторного дисбаланса и оперативной травмы и определяли различное течение периода адаптации. У больных с благоприятным течением этого периода (1 гр. N=6) было выявлено нарастание недостаточности клеточного и фагоцитарного звена иммунитета, НК и незначительное снижение ак-

тивности системы комплемента. У больных с неблагоприятным течением (2 гр. N=4) отмечалось повышение уровня IgM и ЦИК, а также резкое падение активности системы комплемента на фоне лимфопении, лихорадки и бактериемии, что являлось прямым показанием для проведения комплексной иммунокоррекции с использованием отечественных иммуномодуляторов (миелопи-да, спленопида, полиоксидония и ликопида), а также плазмофереза и УФО-крови. Длительность и комбинация иммунотерапии определялась клиническими и лабораторными показателями.

Результаты иммунологического обследования больных в течение всего срока ИиВК показали, что в организме этой группы больных, сохраняется нормальное функционирование иммунной системы. Многочисленные факторы, провоцирующие развитие иммунной недостаточности, заставляют проводить иммунокоррекцию. Иммунологический мониторинг отражает адекватность и эффективность проведения терапии, поэтому должен быть неотьемлемой частью у больных с ИиВК.

Диагностика цитомегаловирусной инфекции при трансплантации почки методом nested полимеразной цепной реакции

Сучков С.В., Иваненко Т.В., Москалец О.В., Прокопенко Е.И., Демкин В.В., Гнедой С.Н.

Московский областной научно-исследовательский клинический институт им. М.Ф. Владимирского, Москва

Инфекция, обусловленная цитомегаловирусом (ЦМВ), является одной из основных причин осложнений и смертности пациентов, перенёсших трансплантацию почки. Важным направлением в борьбе с посттрансплантационными инфекциями является их ранняя диагностика. Продолжает оставаться актуальной потребность практической медицины в высокочувствительных, специфичных методах экспресс-диагностики ЦМВ-инфекции.

Целью работы явился поиск метода ранней диагностики герпесвирусных инфекций и определение эффективности его использования при трансплантации почки.

Разработан высокочувствительный тест для выявления ДНК ЦМВ, основанный на использовании nested варианта ПЦР, что повышает в сотни раз чувствительность определения в сравнении с традиционным одностадийном вариантом ПЦР. Изучены чувствительность и специфичность разработанного теста. Оптимизированы условия проведения ПЦР-анализа, ориентированного на выявление минимальных количеств вирусной ДНК.

Проведена апробация теста на клиническом материале. Обследовано 60 больных, которым проводилась трансплантация почки, и 25 их HLA- ^вместимых доноров. Обследования проводили до операции и спустя

1, 2, 4, 8, 12, 24 недели после трансплантации почки. В 80 случаях образцы крови исследовали параллельно ме-

тодами ПЦР, выделения вируса в культуре ткани фиб-робластов эмбриона человека и иммунокондуктомет-рическим методом выявления раннего антигена ЦМВ.

Полученные результаты свидетельствуют, что с помощью nested ПЦР ЦМВ в лейкоцитах периферической крови обнаруживается на две недели раньше, чем при использовании методов изоляции вируса в культуре и определения раннего антигена. ПЦР является и более чувствительным индикатором наличия вируса в крови. Так, у пациентов, получавших в посттрансплантацион-ном периоде ганцикловир, вирусная ДНК определялась ПЦР ещё 15 дней после начала антивирусной терапии, в то время как ранний антиген выявляли ещё 8 дней, вирусологическим методом - 4 дня.

Таким образом, метод nested ПЦР является высокочувствительным, высокоспецифичным и быстрым. Метод обеспечивает более раннее выявление ЦМВ в лейкоцитах периферической крови у больных по сравнению с другими методами лабораторной диагностики. Предлагается использовать с целью ранней диагностики ЦМВ-виремии при трансплантации почки.

ДНК-абзимы и механизмы цитотоксичности при системной красной волчанке

Сучков С.В.1, Козырь А.В.2, Зеленова Н.А.2, Сащенко Л.П.3, Бурдакова Ю.А.1, Габибов А.Г.2

‘МОНИКИ (Московский областной научноисследовательский клинический институт им. М.Ф. Владимирского, 2 Институт биоорганической химии им. М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН,

3Институт биологии гена РАН

Введение. Абзимы или каталитические аутоантитела (аутоАТ) стали в последние годы объектом особого интереса в связи с их возможной ролью в патогенезе аутоиммунных заболеваний соединительной ткани (Naparstek & Plotz, 1993). Cпециальное внимание уделяется группе аутоАТ, направленных против ДНК и обладающих при этом ДНК-гидролизующей активностью. Часть таких аутоАТ способна проникать в клетку, вызывая соотвеству-ющие деструктивные изменения и гибель клетки (Alarcon-Segovia et al., 1996). Вместе с тем, физиологическая функция ДНК-абзимов и их возможное участие в патогенезе аутоиммунных заболеваний остаются неясными.

Цель и задачи. В данной работе исследовались механизмы цитотоксичности у больных CКВ, опосредуемые ДНК-абзимами (аутоАТ с ДНК-гидролизующей активностью). Одновременно изучалось действие ДНК-абзимов, полученных из крови больных CКВ, на клетки линий L929, HL60 и др. in vitro и ДНК-гидролизую-щие свойства абзимов в экспериментах на природных и модельных субстратах.

Материалы и методы. Образцы крови от здоровых доноров и больных с различными клиническими фор-

мами CКВ в количестве 28 и 148, соответственно; клеточные линии L929, HL60, Raia и K562. Методы выделения и анализа ДНК-абзимов описаны ранее (Gololobov et al., 1995, 1997). Технология оценки ауто-АТ-опосредованной цитотоксичности, а также методы определения уровня апоптоза, динамики проникновения абзимов в живую клетку и ядро описаны в предыдущих работах (Gololobov et al., 1997; Kozyr et al, 1999).

Основные результаты. Клетки линии L929 проявили наиболее высокую чувствительность к абзимам, причем ДНК-гидролизующая активность этих абзимов и уровень опосредуемой ими цитотоксичности выявили прямую корреляцию. Обработка живых клеток in vitro абзимами вызывает межнуклеосомную фрагментацию ДНК, а также стимулирует связывание аннексина V с клеточной поверхностью, что характерно для апопто-за. Динамика цитотоксичности показала, что в гибели клеток-мишеней L929 с участием ДНК-абзимов участвуют, как минимум, два механизма. Первый пик, отмеченный спустя 3 часа после начала инкубации, полностью подавляется ингибитором каспазы I - YVAD-CHO, тогда как второй, более поздний, пик стабилен. Методом прямой иммунофлюоресценции доказана способность ДНК-абзимов проникать в живую клетку и локализоваться в ядре. Показано, что ДНК-абзимы от больных с различными клиническими формами CКВ могут отличаться по уровню своей ДНК-гидролизую-щей активности, с одной стороны, и по уровню опосредуемой ими цитоткосичности, с другой.

Заключение. Показано, что ДНК-абзимы от больных CКВ способны индуцировать цитотоксический механизм в клетках-мишенях двумя основными путями:

1. прямой фрагментацией ядерной ДНК при проникновении ДНК-абзимов в клеточное ядро и 2. путем индукции апоптоза. Для дальнейшего изучения этих механизмов необходимы аналогичные эксперименты с клеточнымит линиями от больных CКВ, а также скрининг таких больных по ряду иммунологических признаков, в том числе, маркеров апоптоза.

Кинетика местного противодифтерийного иммунитета у реконвалесцентов дифтерии в процессе вакцинации ДДС-М анатоксином

Тарасова А.А., Костинов М.П., Миловидова О.В.

Государственное учреждение “Нижегородская областная детская клиническая больница”, Россия, НИИ вакцин и сывороток им.И.И.Мечникова,

Москва, Россия, Нижегородское Государственное предприятие по производству бактерийных препаратов М3 РФ (“ИмБИО”), Россия

В последние годы широко проводятся исследования секреторного иммунитета. ^стема местного иммуни-

тета, функционирующая автономно, имеет большое значение в защите от дифтерийной инфекции. Между тем, работы, посвященные исследованию местного специфического противодифтерийного иммунитета, единичны. Ранее нами была изучена динамика снижения антитоксических противодифтерийных антител в слюне и в сыворотке крови у ранее непривитых реконва-лесцентов дифтерии. Показано, что дифтерийный антитоксин определяется лишь в течение первого месяца после купирования острого инфекционного процесса независимо от тяжести перенесенной инфекции.

Целью работы явилось определение уровней дифтерийных антител в слюне у непривитых реконвалес-центов дифтерии при вакцинации их АДС - М анатоксином.

Материалы и методы: количественное определение дифтерийного антитоксина в слюне проводилось по методике, разработанной в Нижегородском НИИ эпидемиологии и микробиологии. Условно - защитным титром считалось разведение 1:2. Исследовалась слюна у детей в возрасте от 5 до 15 лет (1-я группа), перенесших токсическую (6 человек) и локализованную дифтерию (2 человека) дифтерию. Группу контроля составили непривитые не болевшие дифтерией дети (2-я группа, п = 11). Иммунизацию проводили коммерческим препаратом АДС - М анатоксина (АООТ “Биомед” им.И.И.Мечникова) спустя 6 - 12 месяцев после выписки из инфекционного стационара с учетом особенностей течения восстановительного периода дифтерийных кардитов различной степени тяжести.

Результаты. Перед началом иммунизации ни у кого из детей в слюне дифтерийный антитоксин не обнаруживался. Через 1 месяц (перед 2-й вакцинацией) противодифтерийные антитела не достигли защитного титра и составили в 1-й группе 1:1,3 (^ = 0,11 + 0,08) и во 2-й - 1:1,29 (^ = 0,12 + 0,1). Перед первой ревакцинацией у реконвалесцентов дифтерии средняя геометрическая титров противодифтерийных антител была практически на прежнем уровне (1:1,26; ^ = 0,1 + 0,08), в то время как в группе контроля возросла до 1:3,28 (^ = 0,52 + 0,31, Р > 0,05 по сравнению с предшествующим значением). После первой ревакцинации произошло дальнейшее нарастание уровня дифтерийного антитоксина. Спустя 6 месяцев после ревакцинации у реконвалесцентов дифтерии средняя геометрическая титров составила 1: 6,33 (^ = 0,8 + 0,36, Р > 0,05 по сравнению с предыдущим значением), во второй группе - 1:4,0 (^ = 0,6, Р > 0,05). Различия между группами во все периоды обследования были несущественны.

Заключение.Таким образом, выработка антитоксических противодифтерийных антител в слюне у реконвалесцентов дифтерийной инфекции идет по типу первичного иммунного ответа. Для создания напряженного местного антитоксического иммунитета в условиях неблагоприятной эпидобстановки и риска повторного заболевания дифтерийной инфекцией требуется не только более ранняя иммунизация детей - реконвалес-центов дифтерии, но и вакцинация тремя дозами АДС

- М анатоксина, как и неболевших дифтерией детей.

Некоторые аспекты иммунологической реактивности больных туберкулезом глаз

Хокканен В.М., Шендерова Р.И., Соловьева М.В.

Санкт-Петербургский НИИ фтизиопульмонологии Минздрава России, Санкт-Петербург, Россия

Туберкулез глаз (ТГ) является одним из проявлений туберкулезной инфекции с локализацией специфической гранулемы в тканях глаза. Проблеме общего иммунного статуса у больных ТГ посвящены единичные публикации, но они касаются лишь реакций серологических или бласттрансформации Т-лимфоцитов.

С целью углубленного изучения общего иммунного статуса у 21 больного ТГ с максимальной активностью были проведены исследования с помощью моноклональных антител (фирма DAKO) методом иммуно-флюоресцентного анализа, позволяющие выявить популяции и субпопуляции иммунокомпетентных клеток: СD3, СD4, СD8, СD16, СD25, СD22. Функциональную активность нейтрофиль-ных гранулоцитов (НГ) оценивали с помошью лизосомно-катионного теста (ЛКТ) и по уровню сывороточных мие-лопероксидазы и лактоферрина (МПО и ЛФ - в ИФА).

Статистический анализ полученного материала показал, что средние величины всех показателей были в границах физиологической нормы. Однако у 54,5% больных СD3, СD4, СD22 и СD25 были выше физиологической нормы. При этом следует отметить, что у 8 наиболее тяжелых больных этой группы, с выраженным экссудативным компонентом воспаления и деструктивными изменениями повышенные значения отмечались в 4 - 5 показателях. Корреляционный анализ, выполненный по системе Statgraphics показал, что между содержанием лимфоцитов, НГ и моноцитов имелась четкая корреляция ( R> 0,7; Р<0,05), что свидетельствует о нормальной реализации иммунного ответа у больных ТГ в фазе максимальной активности. У всех больных обнаружены повышенные значения факторов неспецифической резистентности: ЛКТ- 1,9±00,9, МПО-762±76,8 нг/мл и ЛФ -5104±752,8 нг/мл. Оказалось, что напряжение этих факторов естественного иммунитета в несколько раз превышало норму. Полученные данные еще раз подчеркивают тот факт, что даже при таком “маленьком” клиническом проявлении туберкулёза, как ТГ, происходят существенные сдвиги в общей иммунной системе и они имеют свои собственные особенности в реализации ответа на воспаление в тканях глаза. Данный небольшой материал не позволяет сделать более глубоких выводов, однако со всей очевидностью доказывает необходимость дальнейших исследований в этом направлении.

Сравнительный клинический анализ трех случаев атаксии-телеангиэктазии

Цибулькина В.Н., Васильева А.А., Хакимова Р.Ф.

Кафедра клинической иммунологии с аллергологией КГМУ, Казань, Россия

До настоящего времени любой клинический случай первичной иммунологической недостаточности пред-

ставляет научный и практический интерес, поскольку патология является редкой и имеет серьезный прогноз.

Трехлетнее наблюдение за группой больных с атак-сией-телеангиэктазией позволили нам проследить связь тяжести клинических проявлений с изменениями иммунологических параметров.

Обратили на себя внимание особенности течения трех случаев указанного синдрома.

Больная Н.,10 лет манифестация инфекционного синдрома состоялась в двухлетнем возрасте, а неврологической симптоматики - в пятилетнем возрасте. После ревакцинации БЦЖ и ЖКВ отмечалось прогрессирование неврологических нарушений. У ребенка наблюдались рецидивирующие “мягкие” инфекции преимущественно верхних дыхательных путей и частые респираторные вирусные инфекции. Клинические наблюдения и анализ лабораторных данных показали, что наряду с незначительными отклонениями в иммунограмме (IgG - 6,98 мг/мл; остальные параметры - в пределах нормы) ведущей оказалась неврологическая симптоматика. Отмечалось относительно благоприятное течение болезни с минимальными инфекционными осложнениями.

Прогрессирующая неврологическая симптоматика (тяжелая церебральная атаксия) и телеангиэктазии со 2-го года жизни отмечались у больного Х., 9 лет. Иммунная недостаточность (дефицит IgA при нормальном содержании других классов иммуноглобулинов в сыворотке крови) клинически проявлялась в виде рецидивирующих вирусных инфекций верхних дыхательных путей и диареи, которые, однако, протекали без тяжелых осложнений.

В случае крайне неблагоприятного течения болезни у ребенка Г.,2 лет и 5 мес. наблюдалось быстрое прогрессирование инфекционного синдрома с поражением легких на фоне нарастающей депрессии гуморального и клеточного звеньев иммунитета (Т-л (CD3) -48,5%; Тхелп./инд. ^4) - 10,5%; Тх./Тс.=0,5; ^М -

10,2 мг/мл; IgG - 3,9 мг/мл; ^А - следы). Манифестация инфекционного синдрома состоялась на втором году жизни ребенка после иммунопрофилактики вакциной АКДС. Тяжесть его превалировала над неврологической симптоматикой и, несмотря на проводимую интенсивную терапию, в том числе и заместительную, явилась основной причиной летального исхода.

Таким образом, относительно благоприятное течение атаксии-телеангиэктазии отмечалось при более позднем дебюте инфекционного синдрома на фоне незначительных изменений иммунного статуса.

Наличие и течение инфекционного синдрома, выраженность дефектов иммунитета по данным иммунограммы определяют структуру комплексного лечения, включая заместительную терапию иммуноглобулинами. Целью заместительной терапии является восполнение недостающих IgG-антител, в том числе направленного действия, и усиление опсонической активности иммуноглобулинов сыворотки крови. Первым двум больным проводилась заместительная терапия препа-

ратом октагам, в результате которой отмечалась длительная ремиссия в течении инфекционного синдрома.

Вопрос о возможности проведения иммунопрофилактики в каждом конкретном случае должен решаться индивидуально.

Клинико-иммунологическая характеристика больных хроническими вирусными гепатитами В и С

Цыган В.Н., Никитин В.Ю., Жданов К.В.,

Жоголев К.Д., Сухина И.А.

Военно-медицинская академия,

Санкт-Петербург, Россия

Задачей данного исследования являлась оценка клинического течения и изучение состояния иммунной системы у больных хроническими вирусными гепатитами В и С.

С этой целью были обследованы 115 больных хроническим гепатитом С (ХГС, анти-НСУ+) и 80 больных хроническим гепатитом В (ХГВ, HBsAg+). Всем пациентам, подавляющее большинство которых составили мужчины молодого возраста, выполнялась биопсия печени. Клинически манифестное течение наблюдалось в 55% случаев у больных ХГС и в 25% у больных ХГВ; увеличение печени в 45% и в 40%, соответственно; увеличение селезенки в 29% и в 10%; цитолитический синдром в 71% и в 35%; наличие активной вирусной репликации методом ПЦР в 61% (РНК НСУ+) и в 29% (ДНК НВ^). Гистологический индекс активности воспалительного процесса по шкале Knodell составил 4,1+0,3 балла для пациентов ХГС и 2,3+0,2 балла для пациентов ХГВ, а выраженность фиброза - 1,2+0,1 и 1,1+0,1, соответственно.

Оценка состояния иммунной системы включала в себя исследование систем клеточного и гуморального иммунитета, интерлейкинового и интерферонового статуса.

У больных хроническими вирусными гепатитами В и С выявлены количественные нарушения популяционного состава Т- и В-лимфоцитов: уменьшение относительного содержания и абсолютного числа основных субпопуляций Т-лимфоцитов (CD3, CD4, CD8, CD57), повышение содержания В-лимфоцитов (CD20), а также снижение функциональной активности лимфоцитов. При ХГС эти изменения были менеее выражены, чем при ХГВ. Анализ показателей гуморального иммунитета выявил увеличение уровней иммуноглобулинов всех классов в сыворотке крови у больных как ХГВ, так и ХГС. Различия в содержании ^М и IgA у пациентов с ХГС были достоверно выше, чем в группе с ХГВ. Комплексная оценка системы фагоцитоза позволила обнаружить снижение функциональной активности макрофагов. В исследуемых группах отмечалось достоверное снижение по сравнению с контрольной группой показателя индуцированного НСТ-теста, изменение метаболической активности фагоцитов. нарушение процессов киллинга и расщепления микроорганизмов.

Исследование интерферонового статуса у больных ХГВ и ХГС обнаружило снижение выработки а- и 0-ин-терферонов иммуноцитами под влиянием индукторов, в то время как содержание сывороточных интерферонов было увеличено. Отмечены следующие изменения в ци-токиновом статусе пациентов ХГС и ХГВ: угнетение индуцированной продукции ИЛ-2, некоторое увеличение спонтанной продукции ИЛ-1 в и ИЛ-8. Отклонений спонтанной продукции ИЛ-6 и ФНО-а не выявлено.

Некоторые показатели системного и местного иммунитета в динамике сальмонеллезной инфекции

Чайникова И.Н., Смолягин А.И.,

Калинина Т.Н., Попова Е.В., Лившиц Н.М.

Медицинская академия, Оренбург, Россия

Наблюдаемый рост сальмонеллезной инфекции сопровождается повышением частоты формирования ре-конвалесцентного сальмонеллезного бактерионосительства. Исход взаимодействия сальмонелл во многом зависит от иммунного статуса хозяина. Целью работы явилось изучение особенностей иммунореактивности организма в различные периоды инфекционного процесса в экспериментальных и клинических условиях на фоне длительного бактериовыделения.

Материалы и методы. Экспериментальная инфекция воспроизводилась на мышах линии (СВАхС57 В1^1 обоего пола, инфицированных энтерально госпитальным штаммом S. typhimurium 178. У зараженных животных в течение 60 суток проводили бактериологические и иммунологические исследования. Клинико-иммунологическое обследование больных сальмонеллезом проводилось в острый период и период ре-конвалесценции. Иммунологическое обследование больных включало определение показателей клеточного (количество Т- и В-лимфоцитов и их субпопуляций) и гуморального иммунитета (уровень сывороточных ^А, М, G, ЦИК), состояния фагоцитоза и кислородозависимого метаболизма лейкоцитов. В динамике заболевания проводилось также определение в сыворотке крови и копрофильтратах ИЛ-1Р, ИЛ-8, ФНО-а, лак-тоферрина методом твердофазного ИФА с использованием тест-системы ТОО “Цитокин” (Санкт-Петербург).

Результаты. Установлено, что при сальмонеллезной экспериментальной инфекции на фоне сохраняющегося бактериовыделения отмечалось снижение количества Т-лимфоцитов и антигеннеспецифических супрессоров в селезенке мышей. Изменения гуморального ответа характеризовались ростом числа АОК в селезенке к О-антигену сальмонелл и нарастанием титра антител к данному антигену в сыворотки крови в РПГА, а также увеличением числа АОК в селезенке к Т-зивисимому антигену - эритроцитам барана. У больных в остром периоде сальмонеллеза отмечалось увеличение количества

лейкоцитов крови, преимущественно за счет палочкоядерных нейтрофилов, уровня ЦИК, сывороточных ^А и М и напротив снижением числа Т-лимфоцитов, Т-суп-рессоров и уровня сывороточных IgG. В остром периоде отмечалось также увеличение показателей кислородозависимого метаболизма нейтрофилов в реакциях спонтанного и индуцированного зимозаном НСТ-теста. Установлено, что уровень цитокинов и лактоферрина в сыворотке крови и копрофильтратах существенно не отличался и был особенно высоким в острый период инфекции. В период реконвалесценции на фоне снижения Т-супрессоров были повышены показатели стимулированного НСТ-теста, а также уровень ИЛ-1 в, ИЛ-8 и лак-тоферрина в сыворотке и в копрофильтратах.

Заключение. Сальмонеллезная инфекция, сопровождающаяся длительным бактериовыделением, протекает на фоне развития иммунологического дисбаланса с преимущественным поражением клеточного звена иммунитета, снижением функции Т-супрессоров и активацией местных защитных механизмов. Выявленные длительно сохраняющиеся изменения уровня ци-токинов и лактоферрина в копрофильтратах могут использоваться для прогностической оценки затяжных форм сальмонеллезной инфекции с формированием ре-конвалесцентного бактерионосительства.

Изменения пролиферативного ответа лимфоцитов в культурах с ФГА у больных эндометриозом и злокачественными новообразованиями женской половой сферы

Черникова И.А., Шилов Ю.И.,

Шилова Н.А., Старцева Н.В.

Институт экологии и генетики микроорганизмов УрО РАН, Пермская государственная медицинская академия М3 РФ, Пермь, Россия

Хотя эндометриоз не относится к опухолевым процессам, некоторые особенности его течения (в частности, способность эндометриоидных клеток к эктопической имплантации) сближают его с опухолями.

Цель настоящей работы - сравнительный анализ изменений пролиферативного ответа лимфоцитов в культурах с разными концентрациями фитогемагглютини-на П (ФГА) у больных эндометриозом и злокачественными новообразованиями женской половой сферы.

Материалы и методы. Обследовано 11 больных эн-дометриозом, 9 больных со злокачественными новообразованиями женской половой сферы преимущественно 1-й стадии (у 8 больных), не подвергавшихся до исследования хирургическим методам лечения, химиотерапии или лучевой терапии. Контрольную группу составили 10 здоровых женщин. Исследование проводили на 7-8-й день менструального цикла. Пролиферативный ответ лимфоцитов оценивали по включению 3Н-

тимидина в 72-часовых культурах (2х105 клеток/лунку в 96-луночных круглодонных планшетах в среде 199 с добавлением 10% аутоплазмы, 2 мМ L-глутамина и 10 мМ HEPES) с различными концентрациями ФГА-П. Параллельно проведена оценка регуляторного эффекта молодых посттимических Т-лимфоцитов, оказывающих супрессивный (down) регуляторный эффект в тесте с 24-часовой преинкубацией культур без митогена [Г.З. Шубинский с соавт., 1983; 1985; 1987].

Основные результаты. У больных эндометриозом в сравнении со здоровыми женщинами выявлено снижение пролиферативного ответа лимфоцитов в культурах с высокой концентрацией ФГА (таблица). Обращает на себя внимание смещение оптимума концентрации ФГА в сравнении со здоровыми женщинами, которое подтверждается и проведенным нелинейным регрессионным анализом зависимости доза-эффект. Преинкуба-ция мононуклеарных клеток без митогена восстанавливала зависимость доза-эффект у больных эндометрио-зом, что указывает на вклад регуляторных клеток. У больных злокачественными новообразованиями выявлено значительное снижение ответа лимфоцитов на ФГА как в обычных (таблица), так и в преинкубированных культурах вплоть до его полного отсутствия по данным дисперсионного анализа. Выявлены отрицательные линейные и нелинейные связи между индексом преинку-бации и показателями пролиферации во всех группах.

Заключение. Полученные результаты указывают на различие механизмов нарушения регуляции пролиферации лимфоцитов у больных злокачественными опухолями и эндометриозом.

Таблица. ИЗМЕНЕНИЯ ПРОЛИФЕРДТИВНОГО ОТВЕТА ЛИМФОЦИТОВ В РЕДКЦИИ БЛДСТТРДНСФОРМДЦИИ С ФГД У БОЛЬНЫХ ЭНДОМЕТРИОЗОМ И ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫМИ ОПУХОЛЯМИ ЖЕНСКОЙ ПОЛОВОЙ СФЕРЫа

Группа Без митогена ФГД мкг/мл

10 50 100 200

Здоровые 3,1718+ 3,3762+ 3,9393+ 3,9820+ 4,0136+

0.0787 0.0741 0,1602 0,1490 0,1284

Эндометриоз 3,1084+ 3,3477+ 3,9576+ 3,8811+ 3,8331+

0.0487 0,0832 0,1608 0,1458 0,1249W

Злокачест- 3,2355+ 3,2783+ 3,5033+ 3,5087+ 3,5733+

венные 0.0977 0,1022 0,1845W* 0,1843W* 0,2031W

опухоли

а - Приведены значения М+т для 1од10 имп/мин (включение 3Н-тимидина), а в скобках - средние геометрические имп/мин (антилогарифм из М 1од10 имп/мин); * - р <0,05 по сравнению с контролем по W-критерию суммы рангов Вилкоксона; * - то же между больными злокачественными новоообразованиями и эндометриозом.

Особенности иммунологической реактивности у больных туберкулезом почек

Шендерова Р.И., Ягафарова Р.К.,

Чужова Н.М., Потапенко Е.И., Новикова Н.С., Косицкая Л.С., Якунова О.А.

Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт фтизиопульмонологии Минздрава России, Научно-исследовательский институт экспериментальной медицины РАМН, Санкт-Петербург, Россия

Весьма тяжелая и полиморфная клиническая картина туберкулеза почек (ТП), характерная для современной эпидемиологической обстановки, дает основания предполагать наличие разнообразных отклонений в иммунном статусе больных. Цель работы - изучение количественных и функциональных показателей клеток иммунного ответа (КИО) у больных ТП. Обследованы 37 бакте-риовыделителей обоего пола 20-65 лет: 16 лиц с ограниченными деструктивными процессами (1-я группа), 21 пациент с кавернозным и поликавернозным ТП (2-я группа). Cостав лимфоцитов изучали с помощью МКАТ им-мунофлюоресцентным методом, потенциальную и специфическую пролиферацию Т-клеток - в РБТЛ с ФГА и ППД; спонтанную и индуцированную продукцию TNF-a, IL-2, IL-2SR-a в ИФА (RD Systems). Определяли спектр циркулирующих противотуберкулезных антител (ПТАТ) и уровень IgA, M, G. Нейтрофильные гранулоциты (НГ) характеризовали по лизосомно-катионному тесту (ЛКТ), содержанию сывороточных миелопероксидазы и лакто-феррина (МПО и ЛФ - в ИФА). У преобладающего большинства обследованных отметили нормальное абсолютное содержание КИО, лишь субпопуляция активированных Т- и В-клеток с рецепторами к IL-2 была снижена и составляла <210 клеток в 1 мкл крови. Удержание TNF-a, IL-2, IL-2-SR-a в сыворотке было > 80, > 23, >1100 пг/ мл; в надосадках под влиянием ФГА соответственно > 200, >50, >400 пг/мл. У лиц 2-й группы продукция ПТАТ , специфическая пролиферация Т-клеток, индуцированная ППЭ продукция цитокинов и IL-2-SR-a оказались выше, чем в 1-й группе, и составили соответственно >0,400 и >0,230 ед. ОП для ИФА; >10 и 6,7%%; >800 и >300; >105 и >70; >1900 и >600 пг/мл. Высокая функциональная активность НГ практически не зависела от тяжести процесса (ЛКТ>1,67; МПО>900 нг/мл; ЛФ>8000 нг/ мл), но удельное содержание МПО в пересчете на 1 млн НГ у больных 2-й группы было в 1,7 раза выше, чем у пациентов 1 -й группы. Cкладывается впечатление, что КИО - при преимущественно нормальном содержании -не утрачивают функциональной активности даже у наиболее тяжелых больных ТП. Заметные стимулирующие эффекты туберкулезного антигена in vitro на РБТЛ и продукцию цитокинов, повышенный уровень ПТАТ у таких больных свидетельствуют, видимо, в пользу адекватной отвечаемости КИО на ППЭ. Но невысокая и одинаковая в обеих группах продукция цитокинов под влиянием ФГА,

сниженное содержание CD25 - эти факты наводят на мысль о неполноценной реализации клеточно-опосредованного ответа, необходимого для успешной борьбы организма с возбудителем.

Pоль фаз менструального цикла в регуляции фагоцитарной активности моноцитов хорионическим гонадотропином

Ширшев C.B., Заморина C.A., Лялина O.F,

Институт Экологии и Генетики Микроорганизмов УрО РАН, Пермь, Россия

Moron^ra как основные эффекторы неспецифической защиты играют центральную роль в механизмах резистентности организма и в большом количестве присутствуют в матке во время беременности, вследствие чего представлялось важным оценить функции этих клеток в плане регуляции их хорионическим гонадотропином (X^.

Целью работы являлось изучение влияния XГ на процессы фагоцитоза в моноцитах. В работе использовали фракционированные моноциты периферической крови женщин, находящихся в фолликулярной (эстрогендоми-нантной) и лютеиновой (прогестерондоминантной) фазах овариального цикла. Чистота выделения, оцениваемая иммунофлуоресцентным методом с использованием моноклональных антител к CD14, составила 7З-85%. В моноцитах оценивали фагоцитарную активность по уровню поглощения формалинизированных эритроцитов барана, рассчитывая стандартные показатели: 1) процент фагоцитоза, 2) фагоцитарное число и З) фагоцитарный индекс. XГ применяли в дозах 10, 50 и 100 ME/ мл, что соответствует его физиологическим концентрациям в разные триместры беременности. Фагоцитарную активность моноцитов оценивали в динамике после инкубации с XГ in vitro в течение 10, З0, 60 мин.

Показано, что XГ регулировал фагоцитарную активность моноцитов, и эффект зависел от фазы менструального цикла женщин, дозы гормона и времени инкубации. Tак, моноциты женщин, находящихся в эстро-гендоминантной фазе цикла оказались нечувствительны к действию XГ на ранних сроках инкубации (10, З0 мин). В то же время, после часовой инкубации низкие дозы ^Г 10 и 50 ME/мл) оказывали депрессивный эффект на поглотительную активность моноцитов, а XГ 50 ME/мл снижал также и процент фагоцитирующих моноцитов. Выявлено, что после 10 минутной инкубации с XГ 50 и 100 ME/мл угнетался процент фагоцитирующих моноцитов, полученных от женщин, находящихся в прогестерондоминантной фазе цикла. He выявлено влияния XГ на моноцитарный фагоцитоз после З0 мин. инкубации. После часовой инкубации высокая доза гормона, соответствующая пику его секреции на 7-10 неделе беременности (Xn00 ME/мл), напротив, стимулировала процент фагоцитирующих моноцитов , не изменяя их поглотительную способность. Интересно отметить,

что эффект ХГ100 МЕ/мл в данном случае касался только процента фагоцитирующих клеток, но не их поглотительной активности и зависел от времени инкубации.

Таким образом, фазы менструального цикла женщин имеют принципиальное значение в реализации модулирующих эффектов ХГ на фагоцитарную активность моноцитов, что, по-видимому, связано с уровнем женских половых стероидов.

Динамика функциональной активности фагоцитирующих клеток при реакциях трансплантационного иммунитета и ее модуляция женскими стероидными гормонами

Ширшев С.В., Шилов Ю.И., Владыкина В.П.

Институт экологии и генетики микроорганизмов УрО РАН, Пермь, Россия

Реакции клеточноопосредованного и, в частности, трансплантационного иммунитета являются филогенетически древними формами иммунного реагирования и реализуются иммунокомпетентными эффекторными клетками и вторично вовлекаемыми неспецифическими эффекторами. К последним относятся клетки мо-ноцитарно-макрофагального происхождения, а также гранулоциты, мигрирующие в очаг иммунного воспаления при реакциях трансплантационного иммунитета. Однако роль этих клеток в межклеточных взаимодействиях при трансплантации изучена недостаточно. Известно, что реакции трансплантационного иммунитета играют важную роль в процессах репродукции, поскольку беременность рассматривают как феномен аллотрансплантации. Целью настоящей работы было исследование совместного влияния эстрадиола и прогестерона как основных гормонов беременности на динамику функциональной активности фагоцитирующих клеток при формировании реакции “хозяин против трансплантата” (РХПТ). Аллотрансплантацию производили путем подкожного введения аллогенных спле-ноцитов (107клеток), предварительно обработанных митомицином С, в стопу овариэктомированным самкам крыс популяции Wistar (контрольная группа). Ова-риэктомированным животным опытной группы сразу же после трансплантации и в течение 6-ти суток после нее ежедневно подкожно вводили комбинацию масляных растворов официнальных препаратов эстрадиола дипропионата (0,025 мг/сут) и прогестерона (2 мг/сут). Установлено, что на 7-е сутки после трансплантации увеличивалась клеточность регионарных лимфатических узлов по отношению к отдаленным (контрольным). Этот эффект отменялся введением женских половых стероидов. Активация нейтрофильного фагоцитоза зарегистрирована через 24 и 48 часов, а моноцитарного -через 48 и 72 часа после аллотрансплантации. Эозинофильный фагоцитоз на фоне РХПТ не изменялся. Че-

рез 24 часа после трансплантации фиксировалось угнетение продукции фагоцитами крови активных форм кислорода (по данным спектрофотометрического варианта теста с нитросиним тетразолием), которое отменялось введением гормонов. Инъекции женских половых стероидов продлевали активацию нейтрофильно-го фагоцитоза до 72 часов, а активация моноцитарного фагоцитоза, наоборот, была выражена в более ранние сроки (с 0,5 до 24 часов), а также на 7-е сутки РХПТ. Эозинофильный фагоцитоз на фоне введения гормонов угнетался через 2 и 72 часа после аллотрансплантации в сравнении с показателями исходного фона. Несмотря на то, что гормоны изменяли динамику фагоцитарной активности нейтрофилов, моноцитов и эозинофи-лов в сравнении с исходным фоном, в то же самое время они не влияли на поглотительную активность этих клеток в каждый отдельно взятый момент времени по отношению к контрольной группе. Таким образом, эстрогены и гестагены в концентрациях, характерных для периода беременности, способны модулировать реакции трансплантационного иммунитета на уровне гра-нулоцитов и моноцитов, что подтверждает важную эф-фекторную роль этих клеток в процессах репродукции.

Экспрессия FAS-антигена на лимфоцитах периферической крови и антиген-специфический апоптоз лимфоцитов при туберкулезе легких

Юсупова Р.Ш., Сибиряк С.В., Каюмова Э.Ю., Сибиряк Д.С.

Всероссийский центр глазной и пластической хирургии, Уфа, Россия; Фтизиопульмонологический диспансер, Уфа, Россия

^временные достижения в области иммунологии позволили по-новому оценить многие, уже известные феномены. Это касается и иммунопатогенеза внутриклеточных инфекций, в том числе и микобактериозов. Cогласно одной из гипотез, развитие специфических поражений при туберкулезе легких связано с дисбалансом Th1/Th2 активности в сторону преобладания последней, что, в свою очередь в значительной мере зависит от баланса уровней кортизола и дегидроэпи-андростерона (Grange J, 1996). Cуществуют косвенные свидетельства избыточного апоптоза активированных Т-хелперов при туберкулезе (А.Г. Хоменко и соавт., 1996).

Исследования, проведенные в нашей лаборатории (S. Sibiryak et al.,1999) показали, что при инфильтративном туберкулезе легких (ИТЛ) наблюдается существенное увеличение содержания Fas-экспрессиирующих лимфоцитов в периферической крови. Было выявлено, что максимальное увеличение Fas+ клеток наблюдалось у больных с неблагоприятным течением микобактериоза, характеризующихся также значительной активацией гуморального звена иммунитета (и) или глубоким Т-дефицитом. У этих

Тдблицд

Таблица

Свежевыделенные мононуклеары

FAS+ лимфоциты, % М+SD Дпопти-рующие клетки, % М+sd Корре- ляция

Доноры (n=12) ИТЛ (n=17) 44,7+8,0 50,0±6,6 р<0,05 9,6+4,8 12,4+5,2 n.s. R=0,16 R=0,51 R<0,05

24-часовая инкубация (среда RPMI-1640/5%FCS/ гентамицин

Содержание апоптирую-щих клеток, % М+SD

Контроль PPD 5 мкг/мл PPD 25 мкг/мл

14,3+9,2 18,5+13,6 n.s. 11,0+5,9 21,7+13,5 p=0,021 p*=0,015 13,1+5,6 19,0+10,0 n.s.

Р* - использован критерий Стьюдента для сопряженных пар признаков; п^. - статистически не существенная разница.

же больных наблюдалась резкая гиперкортизолемия, значительное нарастание уровня ФНОа и ИЛ-4.

В настоящем исследовании обнаружено, что в отличие от здоровых доноров, у больных ИТЛ выявляется значимая корреляция между содержанием CD95+ лимфоцитов и клеток с морфологическими признаками апоп-тоза в периферической крови (окраска бис-бензимидом

- Hoechst 33342). В культурах лимфоцитов больных ИТЛ при инкубации с низкой, но не с высокой дозой PPD, наблюдается статистически значимое увеличение содержания апоптирующих лимфоцитов (таблица).

Полученные данные свидетельствуют о возможной роли антигенспецифического апоптоза примированных Т-лимфоцитов как субстрата иммунорегуляторного дисбаланса и иммунодефицита при туберкулезе легких.

Твердофазная иммуноферментная тест-система для выявления антител к аррестину и ее использование в офтальмоспецифическом иммунологическом мониторинге

Яковлева В.Г., Сибиряк С.В., Головин В.П.*

Всероссийский центр глазной и пластической хирургии, Уфа, Россия;

ГУП “Иммунопрепарат”, Уфа, Россия

Ретинальный S-антиген (аррестин) является наиболее “увеитогенным” тканеспецифическим белком сет-

ИФД+ резуль- таты ИФД- резуль- таты X2 P

Здоровые доноры 5 95

Острые увеиты 13 14 32,8 <0,001

Туберкулез 4 16 5,41 =0,02

Диабетическая ретинопатия 16 18 33,9 <0,001

Геморрагическая лихорадка 2 12 2,91 =0,088

Симпатическая офтальмия 6 0 24,9 <0,001

чатки (Nussenblatt, 1996). Сенсибилизация к аррести-ну определяется при многих видах офтальмопатологии, а ее оценка имеет важное диагностическое и прогностическое значение.

Разработан простой метод выделения и очистки ретинального S-антигена, пригодного для проведения твердофазного иммуноферментного анализа.

S-антиген выделяли из сетчаток крупного рогатого скота путем экстракции 5 mM Tris-HCl (pH 7,2) с последующем осаждением сульфатом аммония. Очистку белка осуществляли ионо-обменной хроматографией (DE52) и гель-фильтрацией (Ultragel AcA 44).

S-антиген идентифицирован аналитическим вариантом ВЭЖХ с колонкой Superose 12, SDS-PAGE-элект-рофорезом и реакцией иммунопреципитации с антисывороткой против аффинно-очищенного на родопсине S-антигена. Cуммарный “выход” антигена превосходил таковой при использовании метода Wacker (1977). Адсорбцию S-антигена на твердой фазе (96-луночные планшеты) осуществляли стандартным методом. Концентрация белка составляла 50 нг/лунку. В качестве конъюгата при проведении имунофермент-ного анализа использован конъюгат белка А стафилококка с пероксидазой хрена (Вю-Rad Lab). Результаты клинической апробации тест системы иллюстрирует таблица.

Полученные результаты свидетельствуют о довольно высокой специфичности разработанной твердофазной иммуноферментной тест-системы и возможности ее использования для выявления аутоагрессии к тканеспецифическому S-ретинальному антигену.