Способ получения средства с диуретической активностью
METHOD OF OBTAINING AN AGENT WITH DIURETIC ACTIVITY

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности и касается способа получения лекарственного средства растительного происхождения, обладающего диуретической активностью.
Известен способ получения экстракта алоэ (см. патент RU 2125882 опуб. 10.02.199), при котором сырье консервируют в темноте и на холоде, с последующей экстракцией путем кипячения в воде.
Недостатком являются наличие дополнительных стадий производства - экстракции, кипячения, которое приводит к деферментации сырья.
Технической задачей
изобретения является расширение арсенала средств обладающих диуретической активностью, повышение качества получаемого продукта и упрощение технологии.
Техническим результатом
изобретения является повышение качества получаемого продукта, достоверное превосходство по диуретической активности средства, полученного заявленным способом, по сравнению с настоем манжетки обыкновенной, диуретическая активность средства сопровождается калийсберегающим эффектом.
Преимуществом предлагаемого способа является отсутствие процесса нагревания и как следствие - сохранение ферментной системы в сырье с преобладанием пероксидаз и каталаз, которые способствуют образованию множества форм фенольных соединений, обусловливающих широкий спектр фармакологических активностей, в том числе диуретической [3,7].
Поиск новых лекарственных средств обладающих диуретическим действием обусловлено широким распространением заболеваний сердечно - сосудистой системы и заболеваний почек. Преимущество имеют диуретические средства с калий сберегающим эффектом.
Прогностическая оценка проявления диуретической активности сока манжетки основалась на химическом составе. Согласно литературным данным окисленные формы флавоноидов (флавоны, флавонолы и их гликозиды) в совокупности с другими группами БАВ (полисахариды, сапонины, терпены) обусловливают диуретический эффект [6].
Источником получения сока является надземная часть манжетки обыкновенной свежая. На данный момент этот вид сырья мало изучен, о чем свидетельствуют ограниченные публикации. В доступной нам литературе описано получение этанольного экстракта с противовирусной активностью [4,5].
Способ получения конечного продукта:
Трава манжетки обыкновенной свежая, собранная в фазу цветения и начала плодоношения, подвергается биогенной стимуляции, для этого герметично упаковывается и помещается в темное прохладное место при температуре +4°С и выдерживается в этих условиях в течение 7суток. По истечении этого времени сырье измельчается до частиц размером 3-5 мм. Полученную массу отжимают через 4 слоя марли и консервируют 95% этиловым спиртом в соотношении сок: спирт - 10:2. Сок выдерживают при температуре +4°С в течение 10 дней, по истечении которых сок очищают от образовавшегося осадка фильтрованием через бумажный фильтр. Объем полученного сока составляет от 42% до 51%, при влажности сырья от 55% до 84%.
Оценку диуретической активности осуществляли в соответствии с методическим руководством [1.2]. Исследование проводили на белых беспородных самцах крыс массой 180 - 220 г, которых содержали в стандартных условиях вивария с естественным световым режимом, при комнатной температуре, без ограничений с доступом к пище (стандартный, сертифицированный комбикорм в соответствии с действующими нормами) и воде. Содержание животных отвечало требованиям Приказа Минздравсоцразвития России от 23 августа 2010 г. № 708н «Об утверждении правил лабораторной практики» и «Правилам Европейской конвенции по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и научных целей» (Страсбург, 1986).
Для изучения диуретической активности апробируемой субстанции самцов крыс разделяли на четыре группы по шесть животных (1 - интактные, получали питьевую воду; 2 - опытные получали питьевую воду с пероральным введением настоя манжетки обыкновенной в дозе 20 мг/кг (в пересчете на сухой остаток); 3 - опытные получали питьевую воду с пероральным введением сока биостимулированной травы манжетки обыкновенной в дозе 20 мг/кг, в пересчете на сухой остаток; 4 - опытные получали питьевую воду с пероральным введением препарата сравнения настоя земляники лесной в дозе 20 мг/кг, в пересчете на сухой остаток). Исследуемым животным перорально вводили питьевую воду в количестве 5% от массы тела, после чего помещали в мочесборники, забор мочи проводили через 1, 3 и 5 часов [1, 2]. Для образцов полученной мочи определяли объем и концентрацию электролитов натрия и калия, рентгенфлуоресцентным методом, на энергодисперсионном рентгенофлуоресцентном спектрометре марки QUANT’X компании Thermo Scientific. На основании полученных данных рассчитывали диуретический индекс (ДИ) как отношение объема мочи в опытном образце к объему контрольного и салуретический индекс (СИ) как отношение концентрации элемента в опытном образце к концентрации в контрольном.
При введении сока манжетки из биостимулированного сырья наблюдалось статистически значимое увеличение диуреза через 5 часов в сравнении с интактной группой, что привело к увеличению суммарного объема мочи (ДИ = 2,8). Исследуемая субстанция достоверно превосходила по диуретической активности настой манжетки обыкновенной в периоды 1 и 5 часов. Диуретическая активность апробируемой субстанции сопоставима с таковой настоя земляники лесной; препарат сравнения проявил большую активность в период 1 - 3 часа, в то время как сок был более активен в период 3 - 5 часов (табл.1).
Выявлено, что сок биостимулированой травы манжетки обыкновенной достоверно снижал концентрацию натрия и не изменял концентрацию калия. Настой травы манжетки обыкновенной в дозе 20 мг/кг достоверно снижал концентрацию натрия и вызывал повышение калия в моче. Препарат сравнения настой земляники лесной снижал экскрецию натрия и калия (табл.2).
Предложенный способ позволяет получить лекарственное средство с диуретической активностью, сопровождающейся калийсберегающим эффектом.
Предложенный способ реализуется в следующем примере:
Свежую траву манжетки обыкновенной собранную в фазу цветения и начала плодоношения массой 1000,0 герметично упаковали в полиэтилен и поместили в прохладное темное место с температурой +4°С на 7 суток, по истечении этого времени сырье измельчили до частиц размером 3-5 мм, и отжали из него через 4 слоя марли 490 мл сока. Консервировали полученный сок добавлением 82мл этилового спирта 95%. Очистку проводили отстаиванием в прохладном месте при температуре +4°С в течение 10 суток, образовавшийся осадок отфильтровывали через бумажный фильтр.
Предложенный способ получения сока достаточно прост, не требует сложных технологических схем, позволяет получить диуретическое средство с калийсберегающим эффектом и расширить ассортимент лекарственных средств с заявленной активностью.
Литература:
1. Брюханов В.М., Зверев Я.Ф., Лампатов В.В., Жариков А.Ю. Методические подходы к изучению функции почек в эксперименте на животных / Нефрология, 2009 vol.13. №.3, p.52-62.
2. Берхин, Е.Б. Методы изучения влияния новых химических соединений на функцию почек / Е.Б. Берхин // Хим.-фармац. журн. -1977 -Т.11, № 5 -С. 3-11.
3. Колесникова, Л. И. Свободнорадикальное окисление: взгляд патофизиолога / Л. И. Колесникова, М. А. Даренская, С. И. Колесников // Бюллетень сибирской медицины. - 2017. - Т. 16. - № 4. - С. 16-29. - DOI 10.20538/1682-0363-2017-4-16-29.
Alchemilla vulgaris
4. Мазуркова Н.А., Проценко М.А., Филиппова Е.И., Кукушкина Т.А., Высочина Г.И., Лобанова И.Е., Мазурков О.Ю., Шишкина Л.Н., Агафонов А.П. Исследование противовирусной активности экспериментальных образцов препаратов, полученных из травы и корней  L. в отношении вирусов осповакцины и оспы мышей. Разработка и регистрация лекарственных средств. 2019;8(4):9-15.
5. Филиппова Е. И., Кукушкина Т. А., Лобанова И. Е., Высочина Г.И.,
Alchemilla vulgaris
Мазуркова Н. А. Противовирусные свойства препарата на основе суммы флавоноидов манжетки обыкновенной (L.) в отношении вируса гриппа. Фундаментальные исследования. 2015; 2: 5139-5144.
6. Халматов Х.Х. Растения Узбекистана с диуретическим действием. Медицина, Ташкент, 1979.- С.126
7. Червяковский, Е. М. Роль флавоноидов в биологических реакциях с переносом электронов / Е. М. Червяковский, В. П. Курченко, В. А. Костюк // Труды Белорусского государственного университета. Серия: Физиологические, биохимические и молекулярные основы функционирования биосистем. - 2009. - Т. 4. - № 1. - С. 9-26.
Таблица 1Диуретическая активность сока манжетки обыкновенной
Группаживотных
Доза мг/кг
Объем мочи, мл
Диуретический индекс
1 час
3 часа
5 часов
Сумма
Интактные
20
0,7±0,4
1,2±0,6
0,1±0,1
2,0±0,2
Опытные:
Настой манжетки обыкновенной
20
0,1±0,1*<sup>1, 2</sup>
1,4±0,1*<sup>2</sup>
1,6±0,2*<sup>1</sup>
3,1±0,1*<sup>1, 2</sup>
1,6
Сок манжетки из биостимулированного сырья
20
1,5±0,5 <sup>*3</sup>
1,1±0,4
<sup>*2</sup>
3,1±0,5 <sup>*1, 2, 3</sup>
5,6±0,6
<sup>*1, 3</sup>
<b>2,8</b>
Препарат сравнения настой земляники лесной
20
1,6±0,6
2,5±0,6*<sup>1</sup>
1,2±0,4*<sup>1</sup>
5,2±0,6*<sup>1</sup>
2,6
1
2
3
Примечание: p <0,05 * - по сравнению с интактными животными; * - по сравнению с препаратом сравнения, настоем земляники лесной; * - по сравнению с настоем манжетки обыкновенной.
Таблица 2Влияние соков из травы манжетки обыкновенной на концентрациюнатрия (ммоль/л) и калия (ммоль/л) в моче
Группаживотных
Доза мг/кг
Концентрация элементов, мМоль\л за 5ч.
Салуретический индекс
Соотношение Na\K
Na
K
Na
K
Интактные
182±14
247±10
1
1
0,7
Опытные:
Настой манжетки обыкновенной
20
100±10*<sup>1</sup>
295±6*<sup>1,</sup><sup>2</sup>
0,55
1,19
0,3
Сок манжетки из биостимулированного сырья
20
81±12*<sup>1</sup>
251±16*<sup>3</sup>
0,44
1,01
0,3
Препарат сравнения настой земляники лесной
20
119±11*<sup>1</sup>
198±13*<sup>1</sup>
0,7
0,8
0,6
1
2
3
Примечание: p <0,05 * - по сравнению с интактными животными; * - по сравнению с препаратом сравнения, настоем земляники лесной; * - по сравнению с настоем манжетки обыкновенной.