ИНСТРУМЕНТ ДЛЯ ЗАБОРА ПРОБЫ КЛЕТОЧНОГО МАТЕРИАЛА КОНЪЮНКТИВЫ

Предлагаемая полезная модель относится к медицине, а именно к офтальмологии, и может быть использована для дозированного забора клеточного материала конъюнктивы у лиц различных возрастных групп.
В течение последних десятилетий способ импрессионной цитологии получил распространение в офтальмологии для диагностики различных заболеваний и контроля эффективности терапии (Singh R. et al. Impression cytology of the ocular surface. - Br. J. Of Ophthalmol, 2005. - Vol.89; №7. - P.1655-1659). Это объясняется его простотой и нетравматичностью, в отличие от инцизионной биопсии (иссечение ткани) или brush-биопсии (соскабливание эпителия скальпелем), что позволяет многократно повторять исследования с помощью импрессионной цитологии на этапах лечения. Забор клеточного материала в ходе импрессионной цитологии проводят путем удаления нескольких слоев эпителия за счет прижатия (импрессии) к поверхности глаза различных материалов: стекла, стерилизованного ластика, полоски целлюлозно-ацетатной фильтровальной бумаги. «Классическая» техника забора клеточного материала для проведения имперссионного цитологического исследования включает прижатие целлюлозно-ацетатного фильтра к поверхности эпителиальной выстилки конъюнктивы или роговицы, при этом, на поверхности фильтра остается 1-2 слоя эпителия.
В существующих аналогах прижатие фильтровальной бумаги к поверхности конъюнктивы или роговицы осуществляют стеклянной палочкой или головкой тонометра Гольдмана. Авторы описывают оказываемое на ткани давление различными субъективными терминами, характеризуя его как «нежное прижатие» или «легкое давление» (Murube J. Impression cytology on conjunctiva and cornea in dry eye patients establishes a correlation between squamous metaplasia and dry eye clinical severity - Eur. J. Ophthalmol., 2003. - Vol.13; №2. - P.115-127; Tole D, McKelvie PA, Daniell M. Reliability of impression cytology for the diagnosis of ocular surface squamous metaplasia employing the Biopre membrane // Br J Ophthalmol., 2001. - Vol.85; - P.154-158; Aragona P., Romeo G., Puzzolo D. et al. Impression cytology of the conjunctival epithelium in patients with vernal conjunctivitis // Eye. 1996. - Vol.10; -P.82-85).
Недостатком указанной техники является отсутствие дозированного усилия компрессии. Указанное обстоятельство снижает воспроизводимость результатов забора (так как, от усилия компрессии зависит количество клеток в отпечатке эпителия), и затрудняет трактовку полученных результатов. Кроме этого, существующие аналоги предусматривают последовательное трехэтапное использование двух инструментов (размещение фильтра на поверхности глаза пинцетом, прижатие фильтра стеклянной палочкой, извлечение прижатого фильтра пинцетом), что не исключает ятрогенное повреждение тканей.
За ближайший аналог принят инструмент для дозированного взятия клеточного материала (Инструмент для дозированного взятия клеточного материала с конъюнктивы глазной поверхности / С.В.Янченко, А.И.Еременко, А.А.Евглевский, Е.В.Варлашина, А.С.Зарубина, В.А.Шипилов // Патент РФ на изобретение №2373905 (Россия). Заявл. 29.07.2008. Зарегистрировано в Государственном реестре изобретений Российской Федерации 27 ноября 2009 г. Бюлл. №30). Схематично общий вид инструмента в разрезе изображен в приложении, фиг.1, где 1 - корпус; 2 - шток; 3 - пружина; 4 - упорная втулка; 5 - фиксатор пружины; 6 - торец; 7 - сменный стерилизуемый наконечник с резьбой; 8 - полоска целлюлозно-ацетатного фильтра с размером пор 0,45 мкм (Millipore, США); 9 - сменное стерилизуемое кольцо для фиксации фильтра. Все детали инструмента за исключением п.п.8, 9 выполнены из нержавеющей стали марки 12Х18Н10Т.
Ближайший аналог в работе позволяет проводить дозированный забор клеточного материала конъюнктивы путем обеспечения стандартизации усилия компрессии, которая составляет 15 граммов. Использование инструмента снижает вариабельность результатов забора (количество клеток в единичном отпечатке конъюнктивального эпителия) и значительно повышает воспроизводимость результатов исследования.
Забор клеточного материала конъюнктивы (после ее инстилляционной анестезии) проводят на целлюлозно-ацетатный фильтр, закрепленного на рабочей поверхности сменной стерилизуемой головки разработанного инструмента (приложение, фиг.1). Целлюлозно-ацетатный фильтр 8 путем компрессии пружины штока 2 инструмента дозировано усилием 15 г, равномерно прижимая к назальному сектору конъюнктивы в пределах экспонируемой глазной щели в течение 5 секунд. После этого, фильтр со снятым слоем эпителиальных клеток прижимают к обезжиренному предметному стеклу в течение 5 секунд. Дозирование достигается путем обеспечения стандартизации усилия компрессии, которая составляет 15 граммов.
Полученные отпечатки эпителия подвергают фиксации и окрашиванию по методу ШИК (для выявления ШИК-положительных компонентов цитоплазмы). После этого, отпечатки эпителия фотографируют при увеличении х400 и х600.
Недостатки ближайшего аналога.
- Инструмент является недостаточно эргономичным, поскольку в ходе его применения быстро развивается утомление мышц кисти врача-исследователя, что может снижать безопасность процедуры забора клеточного материала. Указанный недостаток обусловлен отсутствием надежной системы фиксации инструмента в момент взятия пробы.
- Инструмент не предназначен для использования в педиатрической практике, так как не учтен меньший размер глазного яблока у детей. Усилие прижатия фильтра к глазному яблоку свыше 10 граммов может быть причиной чрезмерного субъективного дискомфорта у ребенка.
- Инструмент не предусматривает дифференциацию усилия прижатия фильтра при различных вариантах забора клеточного материала (прижатие фильтра непосредственно к конъюнктиве; прижатие фильтра к конъюнктиве через толщу века).
- Рабочая головка инструмента выполнена из стали и имеет резьбу, что усложняет, удорожает ее изготовление и применение.
- Использование инструмента требует стерилизации рабочей головки и сменного резинового кольца для фиксации полоски фильтра, что усложняет процедуру забора клеточного материала.
- Применение целлюлозно-ацетатного фильтра с размером пор 0,45 мкм далеко не всегда обеспечивает хороший съем слоя эпителиальных клеток.
- Изготовление деталей инструмента из стали утяжеляет его и увеличивает расходы на его производство.
Задачи:
- Обеспечить индивидуальное дозирование взятия клеточного материала - дифференцировать усилие прижатия рабочей головки при использовании инструмента в диагностике детей, взрослых, а также контактным и бесконтактным методом.
- Разработать одноразовые пластиковые рабочие головки различного диаметра (8 и 10 мм) к инструменту для дозированного взятия клеточного материала.
- Сократить время взятия пробы, упростить процедуру, снизить риск травматизации, снизить себестоимость устройства.
Сущностью полезной модели является:
Пружина откалибрована на усилие 10, 15, 20, 30 г, рабочий конец инструмента выполнен как одноразовая пластиковая головка, причем инструмент фиксирован на жесткой основе щелевой лампы через систему последовательных штанг, соединенных между собой шарнирами, а на дистальном конце рабочей головки инструмента, при взятии пробы контактным или бесконтактным способом, имеется целлюлозно-ацетатный фильтр с размером пор 0,22 мкм.
Техническим результатом полезной модели является:
- упрощение процедуры взятия клеточного материала конъюнктивы и сокращения времени его проведения;
- предусмотрено взятие пробы контактным и бесконтактным способом;
- обеспечено улучшение дозирования забора клеточного материала конъюнктивы;
- снижение риска ятрогенного повреждения органа зрения при проведении манипуляции, связанного с утомлением мышц кисти врача-исследователя при ручной фиксации инструмента;
- уменьшение стоимости инструмента;
- расширение области применения инструмента (возможность применения в педиатрической и взрослой практике);
- облегчение съема пласта эпителиальных клеток конъюнктивы для цитологического исследования;
- устранение процедуры стерилизации инструмента.
Технический результат достигается тем, что подвижная шарнирная система фиксации инструмента для дозированного взятия клеточного материала, позволяет легко перемещать его в горизонтальной, фронтальной и сагиттальной плоскостях. Инструмент модифицирован для дозированного взятия клеточного материала путем дифференциации усилия прижатия фильтра к конъюнктиве или веку в 10, 15, 20, 30 граммов. Модифицированные одноразовые рабочие головки выполнены из пластмассы, лишены резьбы, поставляются в стерильных упаковках. Целлюлозно-ацетатный фильтр с размером пор 0,22 мкм фиксируют на поверхности головки без помощи стерилизуемого кольца. Все детали инструмента, за исключением пружины (сталь), выполнены из пластмассы.
Для лучшего понимания модифицированный инструмент для дозированного взятия клеточного материала конъюнктивы схематично изображен в приложении, фиг.2 - общий вид инструмента в разрезе по оси, где 1 - корпус; 3 - пружина; 4 - упорная втулка; 5 - фиксатор пружины; 6 - торец; 10 - шток инструмента со шкалой усилия прижатия в граммах (10-30 г) на рабочем конце; 11 - разовая пластиковая рабочая головка инструмента; 12 - целлюлозно-ацетатный фильтр с размером пор 0,22 мкм.
В приложении, фиг.3 изображен инструмент в общем виде в рабочем состоянии, где 13 - штанга; 14 - шарнир; 15 - инструмент для забора пробы клеточного материала конъюнктивы; 16 - фиксационный винт; 17 - устройство для фиксации головы пациента при офтальмобиомикроскопии.
Полезную модель используют следующим способом
К устройству для фиксации головы пациента при офтальмобиомикроскопии крепят подвижную шарнирную систему фиксации инструмента для дозированного взятия клеточного материала, позволяющую легко перемещать его в горизонтальной, фронтальной и сагиттальной плоскостях.
За счет дифференциации усилия компрессии целлюлозно-ацетатного фильтра (10, 15, 20, 30 граммов) инструмент может применяться в педиатрической практике, а так же у лиц молодого, зрелого и пожилого возраста.
В педиатрической практике применяется прижатие фильтра инструментом непосредственно к конъюнктиве с силой 10 граммов; прижатие фильтра к конъюнктиве через толщу нижнего века с силой 20 граммов, такая методика позволяет избежать чрезмерного субъективного дискомфорта у детей в ходе процедуры.
У лиц молодого, зрелого и пожилого возраста используют прижатие фильтра инструментом непосредственно к конъюнктиве с силой 15 граммов; прижатие фильтра к конъюнктиве через толщу нижнего века с силой 30 граммов.
Таким образом, дифференциация усилия компрессии позволяет расширить область применения инструмента (взрослая и педиатрическая практика). Благодаря прижатию фильтра через толщу нижнего века, процедуру возможно выполнять даже при отсутствии достаточного количества сменных разовых рабочих головок инструмента и/или при массовых скрининговых осмотрах.
Пример 1. Пациент - В. 63 года, дата забора материала 18.07.12.
Диагноз - фармакологическая форма синдрома «сухого глаза» средней степени тяжести обоих глаз.
Цель исследования - Цитологическое исследование бульбарной конъюнктивы.
Осуществили однократную инстилляцию в конъюнктивальную полость 0,4% раствора оксибупрокаина («Инокаин»). Предварительно подготовили систему для взятия пробы с конъюнктивы глазной поверхности. На столике, на котором установлена щелевая лампа, при помощи винтов и гаек, закрепили предлагаемое устройство (15). Рабочий конец устройства с одноразовой пластиковой рабочей головкой (11) и с целлюлозно-ацетатным фильтром (12) подвели к глазу пациента и с заданным усилием (15 г) прижали к назальному сектору конъюнктивы в пределах экспонируемой глазной щели в течение 5 секунд. Во время проведения процедуры веки исследуемого глаза фиксируют пальцами левой руки, корпус инструмента удерживают тремя пальцами правой руки (большим, указательным и средним); безымянный палец и мизинец правой руки расположили на окологлазничной области пациента.
После пятисекундной дозированной компрессии целлюлозно-ацетатный фильтр извлекли с поверхности конъюнктивы вместе с инструментом. В глаз пациента инстиллированы капли антибиотика ципрофлоксацина 0,3%.
После этого клетки конъюнктивы переносят с целлюлозно-ацетатного фильтра на обезжиренное предметное стекло. Для этого целлюлозно-ацетатный фильтр (12) прижимают к поверхности предметного стекла. Необходимое время контакта фильтровальной бумаги и предметного стекла - 5 секунд. Затем клетки конъюнктивы, перенесенные на предметное стекло, подсушивают на воздухе 30-40 минут и проводят фиксацию, окрашивание, патоморфологическое исследование. Забор пробы занимает 3-5 минут, при этом пациент не испытывает дискомфорта, манипуляция простая, удобная и быстро выполнимая.
Пример 2. Пациент - И. 16 лет, дата забора материала 18.07.12.
Диагноз - врожденная глаукома, компенсированная инстилляциями 0,5% раствором тимолола малеата.
Цель исследования - Цитологическое исследование бульбарной конъюнктивы.
Осуществили однократную инстилляцию в конъюнктивальную полость 0,4% раствора оксибупрокаина («Инокаин»). Предварительно подготовили систему для взятия пробы с конъюнктивы глазной поверхности. На столике, на котором установлена щелевая лампа, при помощи винтов и гаек, закрепили предлагаемое устройство (15). В конъюнктивальную полость помещают целлюлозно-ацетатный фильтр с диаметром пор 0,22 мкм к назальному сектору конъюнктивы в пределах экспонируемой глазной щели и предлагают пациенту закрыть глаза. Рабочий конец устройства с одноразовой пластиковой рабочей головкой (11) подвели к глазу и с заданным усилием (20 г) прижали через закрытые веки к назальному сектору конъюнктивы в течение 5 секунд. Во время проведения процедуры корпус инструмента удерживают тремя пальцами правой руки (большим, указательным и средним); безымянный палец и мизинец правой руки расположили на окологлазничной области пациента.
После пятисекундной дозированной компрессии целлюлозно-ацетатный фильтр извлекли с поверхности конъюнктивы. В глаз пациента инстиллированы капли антибиотика ципрофлоксацина 0,3%.
После этого клетки конъюнктивы переносят с целлюлозно-ацетатного фильтра на обезжиренное предметное стекло. Для этого целлюлозно-ацетатный фильтр прижимают к поверхности предметного стекла. Необходимое время контакта фильтровальной бумаги и предметного стекла - 5 секунд. Затем клетки конъюнктивы, перенесенные на предметное стекло, подсушивают на воздухе 30-40 минут и проводят фиксацию, окрашивание, патоморфологическое исследование. Забор пробы занимает 3-5 минут, не причиняет пациенту дискомфорта, манипуляция простая, удобная и быстро выполнимая.