ПОЛИПЕПТИДЫ КЛЕТОЧНОСВЯЗЫВАЮЩЕГО ДОМЕНА БОТУЛИНИЧЕСКОГО ТОКСИНА И СПОСОБЫ ПРИМЕНЕНИЯ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ РАССТРОЙСТВ, СВЯЗАННЫХ С ФИБРОЗОМ

1. Способ лечения и/или уменьшения частоты возникновения заболевания внеклеточного матрикса (ВКМ), заболевания соединительной ткани, эндотелиального заболевания или фибротического расстройства у нуждающегося в этом субъекта, включающий:
введение субъекту композиции, содержащей эффективное количество полипептида, имеющего аминокислотную последовательность с по меньшей мере около 90% идентичностью последовательности со связывающем доменом ботулинического токсина, где молекулярная масса указанного полипептида составляет от около 4 кДа до около 60 кДа, и при модулировании параметра качества кожи не происходит паралич лицевой мышцы.
2. Способ по п. 1, где фибротическое расстройство выбрано из группы, состоящей из дермальных рубцов, рубцевания раны, послеоперационных рубцов, послеоперационных интраперитонеальных спаек, фибромы, фиброза печени, цирроза печени, панкреатита, доброкачественной гиперплазии предстательной железы, фиброза мочевого пузыря, интерстициального цистита, фиброза легкого, фиброза почки, гломерулосклероза, фиброза предсердий, эндомиокардиального фиброза, глиального рубца, ригидности артерий, артрофиброза, кистозного фиброза, некистозного фиброза, болезни Крона, контрактуры Дюпюитрена, фиброза средостения, миелофиброза, болезни Пейрони, нефрогенного системного фиброза, прогрессирующего массивного фиброза, ретроперитонеального фиброза, адгезивного капсулита, смешанного заболевания соединительной ткани, глазного фиброза, остеоартрита, склеродермии и бронхиальной астмы.
3. Способ по п. 1, где фибротическое расстройство выбрано из группы, состоящей из фибротического заболевания молочной железы; келоидного рубца; фиброза печени; фиброза мочевого пузыря; гиперплазии фибротической ткани, например доброкачественной гиперплазии предстательной железы; панкреатита; спаек, например интраабдоминальных спаек; образования рубцов, например гипертрофических рубцов, или их комбинации.
4. Способ по п. 3, где субъект представляет собой субъекта-человека.
5. Способ по любому из пп. 1-4, где молекулярная масса полипептида составляет от около 10 кДа до около 60 кДа или от около 12 кДа до около 50 кДа.
6. Способ по любому из пп. 1-4, где полипептид содержит аминокислотную последовательность с по меньшей мере около 90% идентичностью последовательности со связывающем доменом ботулинического токсина.
7. Способ по п. 6, где ботулинический токсин выбран из группы, состоящей из ботулинического токсина серотипа A (BoNT/A), ботулинического токсина серотипа В (BoNT/B), ботулинического токсина серотипа Ci (BoNT/Ci), ботулинического токсина серотипа D (BoNT/D), ботулинического токсина серотипа Ε (ΒοΝΤ/Ε), ботулинического токсина серотипа F (BoNT/F), ботулинического токсина серотипа F (BoNT/FA), ботулинического токсина серотипа G (BoNT/G), ботулинического токсина серотипа Η (ΒοΝΤ/Η), мозаичного ботулинического токсина D/C (BoNT/DC), мозаичного ботулинического токсина C/D (BoNT/CD), ботулинического токсина серотипа Χ (BoNT/X) и BoNT J Enterococcus sp (eBoNT/J).
8. Способ по любому из пп. 14, где полипептид содержит аминокислотную последовательность, обладающую по меньшей мере 30% гомологией с последовательностью, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 3-5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 7-10, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 12 18 и SEQ ID NO: 25 27.
9. Способ по любому из пп. 1-4, где полипептид содержит, состоит по существу из или состоит из последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 3-5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 7-10, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 12-18 и SEQ ID NO: 25-27.
10. Полипептид, содержащий:
аминокислотную последовательность, по существу идентичную аминокислотной последовательности в связывающем домене ботулинического токсина, где молекулярная масса указанного полипептида составляет от около 1 кДа до около 90 кДа.
11. Полипептид, содержащий: последовательность аминокислот, обладающую по меньшей мере 90% идентичностью последовательности со связывающем доменом ботулинического токсина, где молекулярная масса указанного полипептида составляет от около 1 кДа до около 90 кДа.
12. Полипептид по п. 10 или 11, где молекулярная масса полипептида составляет от около 10 кДа до около 60 кДа или от около 12 кДа до около 50 кДа.
13. Полипептид по любому из пп. 10, 12, где ботулинический токсин выбран из группы, состоящей из ботулинического токсина серотипа A (BoNT/А), ботулинического токсина серотипа В (BoNT/B), ботулинического токсина серотипа Ci (BoNT/Ci), ботулинического токсина серотипа D (BoNT/D), ботулинического токсина серотипа Ε (BoNT/E), ботулинического токсина серотипа F (BoNT/F), ботулинического токсина серотипа F (BoNT/FA), ботулинического токсина серотипа G (BoNT/G), ботулинического токсина серотипа Η (ΒοΝΤ/Η), мозаичного ботулинического токсина D/C (BoNT/DC), мозаичного ботулинического токсина C/D (BoNT/CD), ботулинического токсина серотипа Χ (BoNT/X) и BoNT J Enterococcus sp (eBoNT/J).
14. Полипептид по любому из пп. 10, 12, где ботулинический токсин представляет собой не ботулинический токсин серотипа A (BoNT/А).
C
15. Полипептид по любому из пп. 10-14, где связывающий домен содержит область связывающего домена тяжелой цепи ботулинического токсина (H).
CN
16. Полипептид по любому из пп. 10, 15, где связывающий домен содержит амино-конец области связывающего домена тяжелой цепи ботулинического токсина (H).
17. Полипептид по любому из пп. 10, 16, способный к модулированию экспрессии генетической сигнатуры, включающей множество генов, выбранных из FGFR1, ММР1, ММРЗ, TIMP1, FGF7 и ТР63.
18. Полипептид по любому из пп. 10-17, способный к модулированию экспрессии множества генов, выбранных из FGFR1, ММР1, ММР3, TIMP1, FGF7, ТР63, SOD2, UBD, HAS2, HAS3, ADAMTS1, IGF-1, IL-6, IL-32, CCL2, BDKRB1, S100A4 и АСТА2.
19. Полипептид по любому из пп. 10-18, способный к снижению экспрессии генов, связанных с сократительной способностью фибробластов или формированием мио фибро бластов.
20. Полипептид по любому из пп. 10, 19, способный к повышению экспрессии генов в клетке-мишени, выбранной из группы, состоящей из фибробласта, выделенного из рубца фибробласта, фибротической клетки, раковой клетки, кератиноцита, меланоцита, себоцита, иммунной клетки или нейрона.
21. Полипептид по любому из пп. 10-20, способный к изменению функционального признака клетки-мишени.
22. Полипептид по любому из пп. 10, 21, обладающий модифицированной эндопептидазной активностью ботулинического токсина или не обладающий эндопептидазной активностью ботулинического токсина.
23. Полипептид по любому из пп. 10, 22, где полипептид не содержит транслокационный домен ботулинического токсина, содержащий амино-конец тяжелой цепи (Ην).
24. Полипептид по любому из пп. 10-23, содержащий аминокислотную последовательность, обладающую по меньшей мере 30% гомологией с последовательностью, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 3 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 7 10, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 12 18 и SEQ ID NO: 25 27.
25. Полипептид по любому из пп. 10, 23, обладающий по меньшей мере 90% идентичностью последовательности с последовательностью, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 3-5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 7 10, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 12 18 и SEQ ID NO: 25-27.
26. Слитый белок, содержащий полипептид по любому из пп. 10-25.
27. Фармацевтическая композиция, содержащая: полипептид по любому из пп. 10-25 или слитый белок по п. 26 и фармацевтически приемлемый носитель.
28. Фармацевтическая композиция для местного или трансдермального применения, содержащая полипептид по любому из пп. 10, 25 или слитый белок по п. 26 и приемлемый носитель для его местной или трансдермальной доставки.
29. Набор, содержащий в одной или более упаковках полипептид по любому из пп. 10-25 или слитый белок по п. 26 и инструкции по применению.
30. Полинуклеотид, выбранный из группы, состоящей из:
(a) кДНК (комплементарная ДНК), кодирующей полипептид, содержащий связывающий домен ботулинического токсина, где молекулярная масса указанного полипептида составляет от около 1 кДа до около 90 кДа;
(b) синтетической ДНК, кодирующей полипептид, содержащий связывающий домен ботулинического токсина, где молекулярная масса указанного полипептида составляет от около 1 кДа до около 90 кДа;
(c) оптимизированной по кодонам ДНК, кодирующей полипептид, содержащий связывающий домен ботулинического токсина, где молекулярная масса указанного полипептида составляет от около 1 кДа до около 90 кДа; и
(d) ДНК, комплементарной ДНК по любому из (а)-(с).
31. Полинуклеотид, выбранный из группы, состоящей из:
(a) кДНК, кодирующей полипептид, содержащий связывающий домен ботулинического токсина, где молекулярная масса указанного полипептида составляет менее 50 кДа;
(b) синтетической ДНК, кодирующей полипептид, содержащий связывающий домен ботулинического токсина, где молекулярная масса указанного полипептида составляет менее 50 кДа;
(c) оптимизированной по кодонам ДНК, кодирующей полипептид, содержащий связывающий домен ботулинического токсина, где молекулярная масса указанного полипептида составляет менее 50 кДа; и
(d) ДНК, комплементарной ДНК по любому из (а)-(с).
32. Полинуклеотид, обладающий по меньшей мере 50% гомологией последовательности с полинуклеотидной последовательностью SEQ ID NO: 2 или с нуклеиновой кислотой, кодирующей SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 3-5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 7 10, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 12 18 и SEQ ID NO: 25 27.
33. Вектор, содержащий полинуклеотид по пп. 30, 31 32.
34. Клетка-хозяин, содержащая вектор по п. 33.
35. Клетка-хозяин по п. 34, где клетка-хозяин не представляет собой Clostridium botulinum.
36. Набор, содержащий в одной или более упаковках вектор по п. 33 и инструкции по экспрессии полинуклеотид а в подходящей клетке-хозяине.
37. Композиция, содержащая: вектор по п. 33, или клетку-хозяина по п. 34, или клетку-хозяина по п. 35 и фармацевтический эксципиент.
38. Способ лечения или уменьшения частоты возникновения расстройства, связанного с фиброзом, включающий: введение субъекту композиции по п. 37 для достижения экспрессии полипептида.