АНТИТЕЛА - АНТАГОНИСТЫ ИНТЕРЛЕЙКИНА-17 (ИЛ-17) ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ РАКА
INTERLEUKIN (IL-17) ANTIBODY ANTAGONISTS FOR CANCER TREATMENT

Настоящее изобретение относится к иммунотерапии, точнее предусматривает применение ИЛ-17-связывающих молекул для лечения пролиферативного заболевания, в частности солидных злокачественных пролиферативных опухолей или гематологических пролиферативных заболеваний.
Интерлейкин-17 (ИЛ-17) - цитокин, образуемый Т-клетками и присутствующий, например, при ревматоидном артрите (РА), действует в качестве провоспалительного цитокина, особенно в сочетании с ИЛ-1 и TNF-α, а блокада ИЛ-1 и ИЛ-17 обладает синергетическим действием в отношении воспаления и деструкции костей in vivo. Несоответствующая или избыточная выработка ИЛ-17 связана с патологией различных заболеваний и расстройств, например с ревматоидным артритом, остеоартритом, расшатыванием костных имплантатов, острым отторжением трансплантата, септицемией, септическим или эндотоксическим шоком, аллергиями, астмой, потерей костной массы, псориазом, ишемией, системным склерозом, ударом и другими воспалительными расстройствами. Антитела к ИЛ-17 предлагали использовать для лечения заболеваний и расстройств, опосредованно связанных с ИЛ-17, см., например, WO 95/18826 и обсуждение, изложенное во введении к этому патенту.
В настоящем изобретении было установлено, что ИЛ-17-связывающие молекулы применимы для подавления роста определенных солидных и гематологических злокачественных заболеваний. В соответствии с первым объектом настоящее изобретение предусматривает применение ИЛ-17-связывающей молекулы для лечения пролиферативного заболевания, например рака, в частности солидных злокачественных заболеваний и гематологических злокачественных пролиферативных заболеваний.
H
Предпочтительно ИЛ-17-связывающую молекулу применяют согласно описанию в патентной заявке РСТ/ЕР2005/008470, которая включена в настоящее описание в виде ссылки, причем в этой молекуле есть по меньшей мере один антигенсвязывающий сайт, включающий ИЛ-17-связывающую молекулу, которая включает антигенсвязывающий сайт, включающий по меньшей мере один вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина (V), включающий последовательно гипервариабельные области CDR1, CDR2 и CDR3, причем указанная область CDR1 обладает аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: I (N-Y-W-M-N), указанная область CDR2 обладает аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 2 (A-I-N-Q-D-G-S-E-K-Y-Y-V-G-S-V-K-G) и указанная область CDR3 обладает аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 3 (D-Y-Y-D-I-L-T-D-Y-Y-I-H-Y-W-Y-F-D-L), или прямые эквиваленты CDR.
L
В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения ИЛ-17-связывающая молекула включает по меньшей мере один вариабельный домен легкой цепи иммуноглобулина (V), который последовательно включает гипервариабельные области CDR1′, CDR2′ и CDR3′, причем указанная область CDR1′ обладает аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 4 (R-A-S-Q-S-V-S-S-S-Y-L-A), указанная область CDR2′ обладает аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 5 (G-A-S-S-R-A-T) и указанная область CDR3′ обладает аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 6 (Q-Q-Y-G-S-S-P-C-T), или прямые эквиваленты CDR′.
H
В другом предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения ИЛ-17-связывающая молекула включает антигенсвязывающий сайт, содержащий по меньшей мере один вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина (V), который последовательно включает гипервариабельные области CDR1-x, CDR2-x и CDR3-x, причем указанная область CDR1-x обладает аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 11 (G-F-T-F-S-N-Y-W-M-N), указанная область CDR2-x обладает аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 12 (A-I-N-Q-D-G-S-E-K-Y-Y) и указанная область CDR3-x обладает аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 13 (C-V-R-D-Y-Y-D-I-L-T-D-Y-Y-I-H-Y-W-Y-F-D-L-W-G), или прямые эквиваленты CDR-х.
H
L
Кроме того, в предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения ИЛ-17-связывающая молекула включает вариабельные домены и тяжелой (V), и легкой цепи (V), причем указанная ИЛ-17-связывающая молекула включает по меньшей мере один антигенсвязывающий сайт, содержащий:
H
а) вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина (V), который включает последовательно гипервариабельные области CDR1, CDR2 и CDR3, причем указанная область CDR1 обладает аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:1, указанная область CDR2 обладает аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:2 и указанная область CDR3 обладает аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:3, или прямые эквиваленты CDR, и
L
б) вариабельный домен легкой цепи иммуноглобулина (V), который включает последовательно гипервариабельные области CDR1′, CDR2′ и CDR3′, причем указанная область CDR1′ обладает аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:4, указанная область CDR2′ обладает аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:5 и указанная область CDR3′ обладает аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:6, или прямые эквиваленты CDR′.
H
L
Кроме того, ИЛ-17-связывающая молекула также может включать вариабельные домены и тяжелой (V), и легкой цепи (V), причем указанная ИЛ-17-связывающая молекула включает по меньшей мере один антигенсвязывающий сайт, содержащий:
H
а) вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина (V), который включает последовательно гипервариабельные области CDR1-x, CDR2-x и CDR3-x, причем указанная область CDR1-x обладает аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:11, указанная область CDR2-x обладает аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:12 и указанная область CDR3-x обладает аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:13, или прямые эквиваленты CDR-x, и
L
б) вариабельный домен легкой цепи иммуноглобулина (V), который включает последовательно гипервариабельные области CDR1′, CDR2′ и CDR3′, причем указанная область CDR1′ обладает аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:4, указанная область CDR2′ обладает аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:5 и указанная область CDR3′ обладает аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:6, или прямые эквиваленты CDR′.
H
L
H
L
Если не указано иначе, у каких-либо полипептидных цепей, описанных в настоящем изобретении, аминокислотная последовательность начинается с N-конца и заканчивается С-концом. Если антигенсвязывающий сайт включает домены и V, и V, они могут быть локализованы в одной и той же полипептидной молекуле или, предпочтительно, каждый домен может на другой цепи, домен V является частью тяжелой цепи иммуноглобулина или ее фрагмента, а V является частью легкой цепи иммуноглобулина или ее фрагмента.
Понятие «ИЛ-17-связывающая молекула» означает какую-либо молекулу, которая способна связываться с антигеном ИЛ-17 либо одна, либо в ассоциации с другими молекулами. Реакция связывания может быть установлена стандартными способами (качественными исследованиями), включая, например, изучение связывания, конкурентное исследование или биоисследование для определения подавления связывания ИЛ-17 с его рецептором, или исследования какого-либо типа связывания, которые сопоставляются с отрицательным контрольным тестом, в котором применяют антитело неродственной специфичности, но того же изотипа, например антитело к CD25.
2
К примерам антигенсвязывающих молекул относятся антитела, продуцируемые В-клетками или гибридомами, и химерные, CDR-пересаженные антитела или антитела человека или какие-либо их фрагментами, например фрагменты F(ab′) и Fab, а также одноцепочечные антитела или антитела с одним доменом.
Одноцепочечное антитело состоит из вариабельных доменов тяжелой и легкой цепей антитела, ковалентно связанных пептидным линкером, обычно содержащим 10-30 аминокислот, предпочтительно 15-25 аминокислот. Следовательно, такая структура не содержит константной части тяжелой и легкой цепей и, предположительно, низкомолекулярный пептидный спейсер может быть менее антигенным по сравнению с целой константной частью. Понятие «химерное антитело» означает антитело, в котором константные области тяжелой или легкой цепи или обеих цепей происходят от антитела человека, а вариабельные домены и тяжелой, и легкой цепи происходят не от антитела человека (например, от антитела грызуна) или от другого антитела человека. Понятие «CDR-пересаженное антитело» означает антитело, в котором гипервариабельные области (CDR) являются производными донорского антитела, например, не принадлежащего человеку (например, антитела грызуна), или другого антитела человека, хотя все или почти все другие части иммуноглобулина, например константные области и высоко консервативные части вариабельных доменов, т.е. каркасных участков, являются производными акцепторного антитела, например, антитела человека. CDR-пересаженное антитело может, тем не менее, содержать несколько аминокислот донорской последовательности в каркасных участках, например, в частях каркасных участках, соединенных с гипервариабельными областями. Понятие «антитело человека» означает антитело, в котором константная и вариабельная области и тяжелой, и легкой цепи происходят от антитела человека или в значительной степени идентичны последовательностям антител человека, необязательно от того же антитела, и включает антитела, вырабатываемые мышами, у которых гены переменной и константной частей иммуноглобулина грызунов замещены на соответствующие гены человека, например, подобно описанному в общих чертах в ЕР 0546073 B1, USP 5545806, USP 5569825, USP 5625126, USP 5633425, USP 5661016, USP 5770429, ЕР 0 438474 B1 и ЕР 0 463151 B1.
Особенно предпочтительными ИЛ-17-связывающими молекулами настоящего изобретения являются антитела человека, особенно антитело AIN457, описанные в примерах 1 и 2 в РСТ/ЕР2005/008470.
Таким образом, в предпочтительных химерных антителах вариабельные домены и тяжелой, и легкой цепей происходят от антител человека, например от антитела AIN457, которое показано в виде последовательности SEQ ID NO: 10 (=вариабельному домену легкой цепи, т.е. аминокислоты 1-109 последовательности SEQ ID NO: 10) и последовательности SEQ ID NO: 8 (=вариабельному домену тяжелой цепи, т.е. аминокислоты 1-127 последовательности SEQ ID NO: 8). Домены константной области также предпочтительно включают соответствующие домены константных областей антител человека, например, описанных в кн. Kabat E.A. и др.: «Sequences of Proteins of Immunological Interest», Министерство здравоохранения и социальных служб США, Служба здравоохранения, Национальный институт здоровья.
Гипервариабельные области могут быть связаны с каким-либо типом каркасных участков, предпочтительно антитела человека. Соответствующие константные участки описаны Kabat E.A. и др. (см. выше). Предпочтительным каркасным участком является каркасный участок тяжелой цепи антитела человека, например антитела AIN457. Оно последовательно состоит, например, из каркасных участков FR1 (аминокислоты 1-30 последовательности SEQ ID NO: 8), FR2 (аминокислоты 36-49 последовательности SEQ ID NO: 8), FR3 (аминокислоты 67-98 последовательности SEQ ID NO: 8) и FR4 (аминокислоты 117-127 последовательности SEQ ID NO: 8). Учитывая определенные гипервариабельные области AIN457, установленные рентгеноструктурным анализом, другая предпочтительная тяжелая цепь последовательно состоит из каркасных участков FRI-x (аминокислоты 1-25 последовательности SEQ ID NO: 8), FR2-x (аминокислоты 36-49 последовательности SEQ ID NO: 8), FR3-x (аминокислоты 61-95 последовательности SEQ ID NO: 8) и FR4 (аминокислоты 119-127 последовательности SEQ ID NO: 8). Сходным образом каркасный участок легкой цепи последовательно состоит из каркасных участков FR1′ (аминокислоты 1-23 последовательности SEQ ID NO: 10), FR2′ (аминокислоты 36-50 последовательности SEQ ID NO: 10), FR3′ (аминокислоты 58-89 последовательности SEQ ID NO: 10) и FR4′ (аминокислоты 99-109 последовательности SEQ ID NO: 10).
ИЛ-17-связывающая молекула по настоящему изобретению включает по меньшей мере один антигенсвязывающий сайт, включающий либо первый домен, имеющий аминокислотную последовательность, в существенной степени идентичную последовательности SEQ ID NO: 8, начиная с аминокислоты в положении 1 и заканчивая аминокислотой в положении 127, или первый домен, описанный выше, и второй домен с аминокислотной последовательностью, в значительной степени идентичной последовательности SEQ ID NO: 10, начиная с аминокислоты в положении 1 и заканчивая аминокислотой в положении 109.
Моноклональные антитела, возникающие против белков, естественным образом присутствующих у всех людей, обычно вырабатываются в организмах животных, но не людей, например в мышах, и, соответственно, обычно они не являются белками человека. В качестве прямого последствия, ксеногенное антитело, вырабатываемое гибридомой, при введении людям вызывает нежелательный иммунный ответ, который преимущественно опосредуется константной частью ксеногенного иммуноглобулина. Это очевидно ограничивает применение таких антител, поскольку их нельзя вводить длительное время. Таким образом, особенно предпочтительно применять одноцепочечные с одним доменом химерные CDR-пересаженные антитела или особенно антитела человека, которые предположительно не вызовут значительного чужеродного ответа при введении людям.
Учитывая вышеуказанное, более предпочтительной ИЛ-17-связывающей молекулой настоящего изобретения является молекула, выбранная из анти-ИЛ-17 антител человека, включающих, по меньшей мере:
а) тяжелую цепь иммуноглобулина или ее фрагмент, которая включает (i) вариабельный домен, содержащий последовательно гипервариабельные области CDR1, CDR2 и CDR3 или их прямые эквиваленты, и (ii) константную часть или ее фрагмент тяжелой цепи человека, причем указанная область CDR1 обладает аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:1, указанная область CDR2 обладает аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:2 и указанная область CDR3 обладает аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:3, и б) легкую цепь иммуноглобулина или ее фрагмент, которая включает (i) вариабельный домен, содержащий последовательно гипервариабельные области, а также необязательно гипервариабельные области CDR1′, CDR2′ и CDR3′ или прямые эквиваленты CDR′ и (ii) константную часть или ее фрагмент легкой цепи иммуноглобулина человека, причем указанная область CDR1′ обладает аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:4, указанная область CDR2′ обладает аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:5 и указанная область CDR3′ обладает аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:6.
В другом варианте ИЛ-17-связывающая молекула по настоящему изобретению может быть выбрана из одноцепочечной связывающей молекулы, которая включает антигенсвязывающий сайт, содержащий:
а) первый домен, последовательно содержащий гипервариабельные области CDR1, CDR2 и CDR3 или прямые эквиваленты CDR, причем указанная область CDR1 обладает аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 1, указанная область CDR2 обладает аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 2, и указанная область CDR3 обладает аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 3, и
б) второй домен, включающий гипервариабельные области CDR1′, CDR2′ и CDR3′ или прямые эквиваленты CDR', причем указанная область CDR1′ обладает аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 4, указанная область CDR2′ обладает аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 5 и указанная область CDR3′ обладает аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 6, и
в) пептидный линкер, связанный либо с N-концом первого домена и с С-концом второго домена, или с С-концом первого домена и с N-концом второго домена.
Известно, что минимальные изменения аминокислотной последовательности, например делеция, добавка или замена одной, нескольких или даже большего числа аминокислот, может привести к аллельной форме исходного белка, которая обладает практически идентичными свойствами.
i
i
i
Таким образом, понятие «эквиваленты, отличающиеся непосредственно по CDR» означает ИЛ-17-связывающие молекулы, включающие последовательно гипервариабельные области CDR1 CDR2 и CDR3 (вместо CDR1, CDR2 и CDR3), в которых
i
(i) гипервариабельная область CDR1 отличается тремя, предпочтительно двумя аминокислотами, более предпочтительно одной аминокислотой, от гипервариабельной области CDR1, показанной в последовательности SEQ ID NO: 1,и
i
(ii) гипервариабельная область CDR2 отличается тремя, предпочтительно двумя аминокислотами, более предпочтительно одной аминокислотой, от гипервариабельной области CDR2, показанной в последовательности SEQ ID NO: 2, и
i
(iii) гипервариабельная область CDR3 отличается тремя, предпочтительно двумя аминокислотами, более предпочтительно одной аминокислотой, от гипервариабельной области CDR3, показанной в последовательности SEQ ID NO: 3, и
i
i
i
(iv) определенная молекула, включающая последовательно гипервариабельные области CDR1, CDR2, и CDR3, способная ингибировать активность 1 нмоля (=30 нг/мл) ИЛ-17 человека в концентрации 50 нМ, предпочтительно 20 нМ, более предпочтительно 10 нМ, более предпочтительно 5 нМ указанной молекулы на 50%, причем указанная ингибиторная активность измеряется по выработке ИЛ-6 в фибробластах кожи человека, индуцированной ИЛ-17 человека.
i
i
i
Сходным образом понятие «эквиваленты, отличающиеся непосредственно по CDR-x» означает ИЛ-17-связывающие молекулы, включающие последовательно гипервариабельные области CDR1-x, CDR2-x и CDR3-x (вместо CDR1-x, CDR2-x и CDR3-x), в которых
i
(i) гипервариабельная область CDR1-x отличается тремя, предпочтительно двумя аминокислотами, более предпочтительно одной аминокислотой, от гипервариабельной области CDR1-x, показанной в последовательности SEQ ID NO: 11, и
i
(ii) гипервариабельная область CDR2-x отличается тремя, предпочтительно двумя аминокислотами, более предпочтительно одной аминокислотой, от гипервариабельной области CDR2-x, показанной в последовательности SEQ ID NO: 12, и
i
(iii) гипервариабельная область CDR3-x отличается тремя, предпочтительно двумя аминокислотами, более предпочтительно одной аминокислотой, от гипервариабельной области CDR3-x, показанной в последовательности SEQ ID NO: 13, и
i
i
i
(iv) определенная молекула, включающая последовательно гипервариабельные области CDR1-x, CDR2-x, и CDR3-x, способная ингибировать активность 1 нмоля (=30 нг/мл) ИЛ-17 человека в концентрации 50 нМ, предпочтительно 20 нМ, более предпочтительно 10 нМ, более предпочтительно 5 нМ указанной молекулы на 50%, причем указанная ингибиторная активность измеряется по выработке ИЛ-6 в фибробластах кожи человека, индуцированной ИЛ-17 человека.
i
i
i
Сходным образом понятие «эквиваленты, отличающиеся непосредственно по CDR′» означает домен, включающий последовательно гипервариабельные области CDR1′, CDR2′, и CDR3′, в котором
i
(i) гипервариабельная область CDR1′ отличается тремя, предпочтительно двумя аминокислотами, более предпочтительно одной аминокислотой, от гипервариабельной области CDR1′, показанной в последовательности SEQ ID NO: 4, и
i
(ii) гипервариабельная область CDR2′ отличается тремя, предпочтительно двумя аминокислотами, более предпочтительно одной аминокислотой, от гипервариабельной области CDR2′, показанной в последовательности SEQ ID NO: 5, и
i
(iii) гипервариабельная область CDR3′ отличается тремя, предпочтительно двумя аминокислотами, более предпочтительно одной аминокислотой, от гипервариабельной области CDR3′, показанной в последовательности SEQ ID NO: 6, и
i
i
i
(iv) определенная молекула, включающая последовательно гипервариабельные области CDR1′, CDR2′, и CDR3′, способна ингибировать активность 1 нмоль (=30 нг/мл) ИЛ-17 человека в концентрации 50 нМ, предпочтительно 20 нМ, более предпочтительно 10 нМ, более предпочтительно 5 нМ указанной молекулы на 50%, причем указанная ингибиторная активность измеряется по выработке ИЛ-6 в фибробластах кожи человека, индуцированной ИЛ-17 человека.
H
В другом варианте ИЛ-17-связывающая молекула по настоящему изобретению может быть ИЛ-17-связывающей молекулой, которая включает по меньшей мере один сайт связывания антигена, содержащий по меньшей мере один вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина (V), который включает в следующей последовательности:
а) гипервариабельные области CDR1 (SEQ ID NO: 1), CDR2 (SEQ ID NO: 2) и CDR3 (SEQ ID NO: 3), или
i
i
i
i
i
i
x
x
x
б) гипервариабельные области CDR1, CDR2, CDR3, причем указанная гипервариабельная область CDR1 отличается тремя, предпочтительно двумя аминокислотами, более предпочтительно одной аминокислотой, от гипервариабельной области CDR1, что показано в последовательности SEQ ID NO: 1, указанная гипервариабельная область CDR2 отличается тремя, предпочтительно двумя аминокислотами, более предпочтительно одной аминокислотой, от гипервариабельной области CDR2, что показано в SEQ ID NO: 2, указанная гипервариабельная область CDR3 отличается тремя, предпочтительно двумя аминокислотами, более предпочтительно одной аминокислотой, от гипервариабельной области CDR3, что показано в последовательности SEQ ID NO: 3, и указанная ИЛ-17-связывающая молекула, содержащая в следующем порядке гипервариабельные области CDR1, CDR2, и CDR3, способна ингибировать активность 1 нмоля (=30 нг/мл) ИЛ-17 человека в концентрации 50 нМ, предпочтительно 20 нМ, более предпочтительно 10 нМ, более предпочтительно 5 нМ указанной молекулы на 50%, причем указанная ингибиторная активность измеряется по выработке ИЛ-6 в фибробластах кожи человека, индуцированной ИЛ-17 человека.
H
Сходным образом ИЛ-17-связывающая молекула по настоящему изобретению может быть ИЛ-17-связывающей молекулой, которая включает по меньшей мере один сайт связывания антигена, включающий по меньшей мере один вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина (V), который включает последовательно:
а) гипервариабельные области CDR1-x (SEQ ID NO: 11), CDR2-x (SEQ ID NO: 12) и CDR3-x (SEQ ID NO: 13), или
i
i
i
i
i
i
i
i
i
б) гипервариабельные области CDR1-x, CDR2-x, CDR3-x, причем указанная гипервариабельная область CDR1-x отличается тремя, предпочтительно двумя аминокислотами, более предпочтительно одной аминокислотой, от гипервариабельной области CDR1-x, показанной в виде последовательности SEQ ID NO: 11, указанная гипервариабельная область CDR2-x отличается тремя, предпочтительно двумя аминокислотами, более предпочтительно одной аминокислотой, от гипервариабельной области CDR2-x, показанной в виде последовательности SEQ ID NO: 12, указанная гипервариабельная область CDR3-x отличается тремя, предпочтительно двумя аминокислотами, более предпочтительно одной аминокислотой, от гипервариабельной области CDR3-x, показанной в виде последовательности SEQ ID NO: 13, и указанная ИЛ-17-связывающая молекула, включающая в следующей последовательности гипервариабельные области CDR1-x, CDR2-x, и CDR3-x, способная ингибировать активность 1 нмоля (=30 нг/мл) ИЛ-17 человека в концентрации 50 нМ, предпочтительно 20 нМ, более предпочтительно 10 нМ, более предпочтительно 5 нМ указанной молекулы на 50%, причем указанная ингибиторная активность измеряется по выработке ИЛ-6 в фибробластах кожи человека, индуцированной ИЛ-17 человека.
L
Сходным образом ИЛ-17-связывающая молекула по настоящему изобретению может быть ИЛ-17-связывающей молекулой, которая включает по меньшей мере один сайт связывания антигена, включающий по меньшей мере один вариабельный домен легкой цепи иммуноглобулина (V), который включает в следующей последовательности:
а) гипервариабельные области CDR′1 (SEQ ID NO: 4), CDR′2 (SEQ ID NO:
5) и CDR′3 (SEQ ID NO: 6), или
i
i
i
i
i
i
i
i
i
б) гипервариабельные области CDR1′, CDR2′, CDR3′, причем указанная гипервариабельная область CDR′1, отличается тремя, предпочтительно двумя аминокислотами, более предпочтительно одной аминокислотой, от гипервариабельной области CDR′1, показанной в виде последовательности SEQ ID NO: 4, указанная гипервариабельная область CDR′2 отличается тремя, предпочтительно двумя аминокислотами, более предпочтительно одной аминокислотой, от гипервариабельной области CDR′2 показанной в виде последовательности SEQ ID NO: 5, указанная гипервариабельная область CDR′3 отличается тремя, предпочтительно двумя аминокислотами, более предпочтительно одной аминокислотой, от гипервариабельной области CDR'3, показанной в виде последовательности SEQ ID NO: 6, и указанная ИЛ-17-связывающая молекула, включающая последовательно гипервариабельные области CDR′1, CDR′2, и CDR′3, способна ингибировать активность 1 нмоля (=30 нг/мл) ИЛ-17 человека в концентрации 50 нМ, предпочтительно 20 нМ, более предпочтительно 10 нМ, более предпочтительно 5 нМ указанной молекулы на 50%, причем указанная ингибиторная активность измеряется по выработке ИЛ-6 в фибробластах кожи человека, индуцированной ИЛ-17 человека.
H
L
В другом варианте ИЛ-17-связывающей молекулой по настоящему изобретению может быть ИЛ-17-связывающая молекула, включающая вариабельные домены и тяжелой (V), и легкой (V) цепей, содержащая по меньшей мере один антигенсвязывающий сайт, включающий:
H
а) вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина (V), который содержит последовательно гипервариабельные области CDR1 (SEQ ID NO: 1), CDR2 (SEQ ID NO: 2) и CDR3 (SEQ ID NO: 3),
L
и вариабельный домен легкой цепи иммуноглобулина (V), который последовательно содержит гипервариабельные области CDR1′ (SEQ ID NO: 4), CDR2′ (SEQ ID NO: 5) и CDR3′ (SEQ ID NO: 6), или
H
i
i
i
i
i
б) вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина (V), который содержит последовательно гипервариабельные области CDR1, CDR2, и CDR3, указанная гипервариабельная область CDR1i; отличается тремя, предпочтительно двумя аминокислотами, более предпочтительно одной аминокислотой, от гипервариабельной области CDR1, показанной в последовательности SEQ ID NO: 1, указанная гипервариабельная область CDR2 отличается тремя, предпочтительно двумя аминокислотами, более предпочтительно одной аминокислотой, от гипервариабельной области CDR2, показанной в последовательности SEQ ID NO: 2, и указанная гипервариабельная область CDR3 отличается тремя, предпочтительно двумя аминокислотами, более предпочтительно одной аминокислотой, от гипервариабельной области CDR3, показанной в последовательности SEQ ID NO: 3, и
L
i
i
i
i
i
вариабельный домен легкой цепи иммуноглобулина (V), которая последовательно включает гипервариабельные области CDR1′, CDR2′, CDR3′, указанная гипервариабельная область CDR′1i отличается тремя, предпочтительно двумя аминокислотами, более предпочтительно одной аминокислотой, от гипервариабельной области CDR′1, показанной в последовательности SEQ ID NO: 4, указанная гипервариабельная область CDR′2 отличается тремя, предпочтительно двумя аминокислотами, более предпочтительно одной аминокислотой, от гипервариабельной области CDR′2, показанной в последовательности SEQ ID NO: 5, и указанная гипервариабельная область CDR′3 отличается тремя, предпочтительно двумя аминокислотами, более предпочтительно одной аминокислотой, от гипервариабельной области CDR′3, показанной в последовательности SEQ ID NO: 6, и
i
i
i
i
i
i
указанная ИЛ-17-связывающая молекула, описанная в пункте б), включает последовательно гипервариабельные области CDR1, CDR2, CDR3, CDR′1, CDR′2, и CDR′3 способна ингибировать активность 1 нмоля (=30 нг/мл) ИЛ-17 человека в концентрации 50 нМ, предпочтительно 20 нМ, более предпочтительно 10 нМ, более предпочтительно 5 нМ указанной молекулы на 50%, причем указанная ингибиторная активность измеряется по выработке ИЛ-6 в фибробластах кожи человека, индуцированной ИЛ-17 человека.
H
L
В другом варианте ИЛ-17-связывающей молекулой по настоящему изобретению может быть ИЛ-17-связывающая молекула, включающая вариабельные домены и тяжелой цепи (V), и легкой цепи (V), причем указанная ИЛ-17-связывающая молекула включает по меньшей мере один сайт связывания антигена, включающий:
H
а) вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина (V), который последовательно включает гипервариабельные области CDR1-x (SEQ ID NO: 11), CDR2-x (SEQ ID NO: 12) и CDR3-x (SEQ ID NO: 13), и
L
вариабельный домен легкой цепи иммуноглобулина (V), который последовательно включает гипервариабельные области CDR1′ (SEQ ID NO: 4), CDR2′ (SEQ ID NO: 5) и CDR3′ (SEQ ID NO: 6), или
H
i
i
i
i
i
i
б) вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина (V), который последовательно включает гипервариабельные области CDR1-x, CDR2-x и CDR3-x, указанная гипервариабельная область CDR1-x отличается тремя, предпочтительно двумя аминокислотами, более предпочтительно одной аминокислотой, от гипервариабельной области CDR1-x, показанной в виде последовательности SEQ ID NO: 11, указанная гипервариабельная область CDR2-x отличается тремя, предпочтительно двумя аминокислотами, более предпочтительно одной аминокислотой, от гипервариабельной области CDR2-x, показанной в виде последовательности SEQ ID NO: 12, и указанная гипервариабельная область CDR3-x отличается тремя, предпочтительно двумя аминокислотами, более предпочтительно одной аминокислотой, от гипервариабельной области CDR3-x, показанной в виде последовательности SEQ ID NO: 13, и
L
i
i
i
i
i
i
вариабельный домен легкой цепи иммуноглобулина (V), который включает последовательно гипервариабельные области CDR1′, CDR2′, CDR3′, указанная гипервариабельная область CDR′1 отличается тремя, предпочтительно двумя аминокислотами, более предпочтительно одной аминокислотой, от гипервариабельной области CDR′1, показанной в виде последовательности SEQ ID NO: 4, указанная гипервариабельная область CDR′2 отличается тремя, предпочтительно двумя аминокислотами, более предпочтительно одной аминокислотой, от гипервариабельной области CDR′2, показанной в виде последовательности SEQ ID NO: 5, и указанная гипервариабельная область CDR′3 отличается тремя, предпочтительно двумя аминокислотами, более предпочтительно одной аминокислотой, от гипервариабельной области CDR′3, показанной в виде последовательности SEQ ID NO: 6, и
i
i
i
i
i
i
указанная ИЛ-17-связывающая молекула, описанная в пункте б), включает последовательно гипервариабельные области CDR1, CDR2, CDR3, CDR′1, CDR′2, и CDR′3 и способна ингибировать активность 1 нмоля (=30 нг/мл) ИЛ-17 человека в концентрации 50 нМ, предпочтительного нМ, более предпочтительно 10 нМ, более предпочтительно 5 нМ указанной молекулы на 50%, причем указанная ингибиторная активность измеряется по выработке ИЛ-6 в фибробластах кожи человека, индуцированной ИЛ-17 человека.
50
50
Ингибирование связывания ИЛ-17 с его рецептором может быть исследовано различными методами, включая, например, методы, описанные в РСТ/ЕР2005/008470. Понятие «в той же степени» означает, что контрольная и равноценные молекулы проявляют, на статистической основе, в высокой степени идентичную ИЛ-17-ингибирующую активность в одном из исследований, указанных в настоящем изобретении. Например, ИЛ-17-связывающие молекулы настоящего изобретения обычно обладают величинами IC для ингибирования действия ИЛ-17 человека на выработку ИЛ-6, индуцируемую ИЛ-17 человека в фибробластах кожи человека, которые находятся в пределах +/-x5, т.е. ниже 10 нМ, более предпочтительно 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3 или 2 нМ, предпочтительно практически равны величине IC соответствующей контрольной молекулы, при исследовании согласно описанию, приведенному в примере 1 в РСТ/ЕР2005/008470.
В другом варианте используемым методом исследования может быть исследование конкурентного ингибирования связывания ИЛ-17 растворимыми рецепторами ИЛ-17 (например, конструкциями ИЛ-17 R/Fc примера 1) и ИЛ-17-связывающими молекулами настоящего изобретения.
Наиболее предпочтительно антитело ИЛ-17 человека включает по меньшей мере
а) одну тяжелую цепь, которая включает вариабельный домен, обладающий аминокислотной последовательностью, в существенной степени идентичной последовательности SEQ ID NO: 8, начиная с аминокислоты в положении 1 и заканчивая аминокислотой в положении 127, и константную часть тяжелой цепи человека, и
б) одну легкую цепь, которая включает вариабельный домен, обладающий аминокислотной последовательностью, в существенной степени идентичной последовательности SEQ ID NO: 10, начиная с аминокислоты в положении 1 и заканчивая аминокислотой в положении 109, и константную часть легкой цепи человека.
1
2
3
4
1
2
1
1
2
3
Константная часть тяжелой цепи человека может быть типа γ, γ, γ, γ, µ, α, α, δ или ε, предпочтительно типа γ, более предпочтительно типа γ, а константная часть легкой цепи человека может быть типа κ или λ (к которому относятся подтипы λ, λ и λ), но предпочтительно относится к типу κ. Аминокислотные последовательности всех константных частей приведены в работе Kabat и др. (см. выше).
Конъюгаты связывающих молекул настоящего изобретения, например конъюгаты с ферментом, или токсином, или радиоизотопом, также относятся к области охвата настоящего изобретения.
Понятие «полипептид», если в настоящем изобретении не указано иначе, относится к какому-либо пептиду или белку, содержащему аминокислоты, связанные друг с другом пептидными связями, у которых обозначаемые аминокислотные последовательности начинаются с N-конца и заканчиваются на С-конце. Предпочтительно полипептидом настоящего изобретения является моноклональное антитело, более предпочтительно химерное (также называемое V-пересаженным) или гуманизированное (также называемое CDR-пересаженным) моноклональное антитело, наиболее предпочтительно полностью антитело человека, получаемое, например, методом, описанным в примере 1. Гуманизированное (CDR-пересаженное) или полностью принадлежащее человеку моноклональное антитело может включать (или не включать) дополнительные мутации, интродуцированные в последовательности каркасного участка (framework - FR) акцепторного антитела.
К функциональным производным полипептида, применяемого в настоящем изобретении, относится молекула, обладающая качественной биологической активностью вместе с полипептидом настоящего изобретения, т.е. обладающая способностью связываться с ИЛ-17 человека. К функциональному производному относятся фрагменты и пептидные аналоги полипептида настоящего изобретения. Фрагменты включают области с полипептидной последовательностью по настоящему изобретению, например определенной последовательности. Понятие «производное» применяют для определения вариантов аминокислотных последовательностей и ковалентных модификаций полипептида по настоящему изобретению, например, определенной последовательности. Функциональные производные полипептида по настоящему изобретению, например, определенной последовательности, например гипервариабельной области легкой и тяжелой цепи, предпочтительно содержат по меньшей мере примерно 65%, более предпочтительно по меньшей мере примерно 75%, более предпочтительно по меньшей мере примерно 85%, наиболее предпочтительно по меньшей мере примерно 95, 96, 97, 98, 99% полной последовательности, гомологичной с аминокислотной последовательностью полипептида по настоящему изобретению, например определенной последовательностью, в значительной степени сохраняют способность связывать ИЛ-17 человека, или, например, нейтрализовать выработку ИЛ-6 в фибробластах кожи человека, индуцированную ИЛ-17 человека.
Понятие «ковалентная модификация» относится к модификациям полипептида по настоящему изобретению, например, специфической последовательности, или ее фрагмента, органическим дериватизирующим агентом белковой или небелковой природы, гибридам гетерологичных полипептидных последовательностей и посттрансляционным модификациям. Ковалентно модифицированные полипептиды, например, определенной последовательности, сохраняют способность связывать ИЛ-17 человека или, например, нейтрализовать выработку ИЛ-6 в фибробластах кожи человека, индуцированную ИЛ-17 человека, например, сшиванием. Ковалентные модификации обычно производят взаимодействием целевых аминокислотных остатков с органическим дериватизирующим агентом, способным взаимодействовать с выборочными боковыми или концевыми остатками, или путем механизмов пост-трансляционных модификаций, которые функционируют в отдельных рекомбинантных клетках-хозяевах. Определенные посттрансляционные модификации являются результатом воздействия рекомбинантных клеток-хозяев на экспрессируемый полипептид. Остатки глутаминила и аспарагинила наиболее часто посттрансляционно деамидируются в соответствующие глутамиловые и аспартиловые остатки. В другом варианте эти остатки дезаминируют в умеренно кислых условиях. К другим посттрансляционным модификациям относятся гидроксилирование пролина и лизина, фосфорилирование гидроксильных групп остатков серила, тирозина или треонила, метилирование α-аминогрупп боковых цепей лизина, аргинина и гистидина, см., например, Т. Е. Creighton в кн.: «Proteins: Structure and Molecular Properties», 1983, изд-во W. H. Freeman & Co., Сан-Франциско, ее. 79-86. К ковалентным модификациям, например, относятся гибридные белки, включающие полипептид по настоящему изобретению, например определенной последовательности, и варианты его аминокислотной последовательности, например иммуноадгезины, и N-концевые гибриды с гетерологичными сигнальными последовательностями.
Понятие «гомология» относительно нативного полипептида и его функционального производного в контексте настоящего изобретения означает процент аминокислотных остатков в исследуемой последовательности, которые идентичны остаткам соответствующего нативного полипептида, после сопоставления последовательностей и интродукции гэпов, если необходимо, для достижения максимального процента гомологии и без рассмотрения каких-либо консервативных замещений в качестве части идентичности последовательностей. Ни N- или С-концевые удлинения, ни инсерции не могут быть сконструированы для понижения идентичности или гомологии. Способы и компьютерные программы для выверки хорошо известны.
Понятие «аминокислота (аминокислоты)» относится ко всем природным L-α-аминокислотам, а также к D-аминокислотам. Аминокислоты выражают с помощью общепризнанного одно- или трехбуквенного обозначения.
Понятие «вариант аминокислотной последовательности» относится к молекулам, обладающим некоторыми отличиями аминокислотных последовательностей по сравнению с полипептидом настоящего изобретения, например, с указанной последовательностью. Варианты аминокислотной последовательности полипептида по настоящему изобретению, например, определенной последовательности, сохраняют способность связывать ИЛ-17 человека или, например, нейтрализовать выработку ИЛ-6 в фибробластах кожи человека, индуцированную ИЛ-17 человека. Замещающими вариантами являются те, которые содержат по меньшей мере один удаленный остаток аминокислоты и внедренный остаток другой аминокислоты, внедренный на его место в том же положении в полипептиде по настоящему изобретению, например, определенной последовательности. Такие замещения могут быть одиночными, если была замещена только одна аминокислота в молекуле, или они могут быть множественными, если в той же молекуле были замещены две или несколько аминокислот. Инсерционными являются те варианты, которые содержат одну или несколько вставленных аминокислот, непосредственно присоединенных к аминокислоте в определенном положении в полипептиде по настоящему изобретению, например, определенной последовательности. Непосредственное присоединение к аминокислоте означает присоединение либо к α-карбокси-, либо α-амино- функциональной группе аминокислоты. Делегированными являются те варианты, у которых в полипептиде по настоящему изобретению, например в определенной последовательности, удалены одна или две аминокислоты. Обычно делегированные варианты могут иметь одну или две делеции аминокислот в определенной области молекулы.
Требуемое антитело может быть получено в культуре клеток или в трансгенном животном. Соответствующее трансгенное животное может быть получено стандартными методами, к которым относятся микроинъекции в яйцеклетки первой и второй конструкций ДНК, помещенных под соответствующие контрольные последовательности, перенос приготовленных таким образом яйцеклеток в соответствующих псевдо-беременных самок и отбором потомства, экспрессирующего желаемое антитело.
Если цепи антитела образуются в культуре клеток, конструкции ДНК должны быть сначала инсертированы либо в один экспрессирующий вектор, либо в два отдельных, но совместимых вектора экспрессии, последний вариант является предпочтительным.
Таким образом, настоящее изобретение также предусматривает вектор экспрессии, способный реплицироваться в прокариотической или эукариотической клеточной линии, включающей по меньшей мере одну из описанных выше конструкций ДНК.
Каждый экспрессирующий вектор, содержащий конструкцию ДНК, затем переносят в соответствующий организм хозяина. Если конструкции ДНК раздельно инсертируют на двух векторах экспрессии, они могут переноситься раздельно, т.е. один тип вектора на клетку, или могут быть перенесены совместно, эта последняя возможность является предпочтительной. Приемлемым организмом-хозяином может быть бактерия, дрожжи или линия клеток млекопитающих, последняя возможность является предпочтительной. Более предпочтительно линия клеток млекопитающего имеет лимфоидное происхождение, например, миеломная, гибридомная или нормальная иммортализованная линия В-клеток, которая в норме не экспрессирует какой-либо тяжелой или легкой цепи эндогенного антитела.
Для экспрессии в клетках млекопитающего предпочтительно, если ИЛ-17-связывающая молекула, кодирующая последовательность, интегрирована в ДНК клетки-хозяина в локус, который допускает или способствует высокому уровню экспрессии ИЛ-17-связывающей молекулы. Клетки, в которых кодирующая последовательность ИЛ-17-связывающей молекулы интегрирована в такой благоприятный локус, могут быть идентифицированы и отобраны на основе уровней ИЛ-17-связывающей молекулы, которую они экспрессируют. Какой-либо селективный маркер может быть использован для получения клеток-хозяев, содержащих кодирующую последовательность ИЛ-17-связывающей молекулы, например, dhfr ген/метотрексат, или равноценная система отбора. К другим системам экспрессии ИЛ-17-связывающих молекул настоящего изобретения относятся системы амплификации/селекции на основе GS, например системы, описанные в ЕР 0256055 В, ЕР 0323997 В и заявке на патент ЕР 89303964.4.
Для целей настоящего описания антитело «способно ингибировать связывание ИЛ-17, например антитело AIN457», если антитело способно ингибировать связывание ИЛ-17 с его рецептором существенно в той же степени, что и антитело AIN457, причем понятие «в той же степени» имеет значение, описанное выше.
D
Антитело AIN457 обладает связывающим сродством в отношении ИЛ-17, которое выше сродства, описанного ранее для анти-ИЛ-17 антител, в частности сродства в отношении каких-либо анти-ИЛ-17 антител человека. Так, антитело AIN457 обладает константой равновесия диссоциации K по связыванию с ИЛ-17, примерно составляющей величину примерно 0,188±0,036 нМ (определенную с помощью сенсора BIAcore, например, согласно описанию в патентной заявке РСТ/ЕР2005/008470). Благодаря такому высокому связывающему сродству антитело AIN457 является особенно применимым для терапевтического применения.
В настоящее описании понятие «лечение» или «обработка» относится к профилактике или превентивному лечению, а также к целебному или модифицирующему болезнь лечению, включая лечение пациента с риском заражения определенным заболеванием или предположительно заразившегося определенным заболеванием, а также пациентов, которые больны или которым поставлен диагноз заболевания или состояния, и включая подавление клинических рецидивов.
ИЛ-17-связывающие молекулы, описанные выше, которые обладают специфичностью связывания с ИЛ-17 человека, в частности антитела, способные ингибировать связывание ИЛ-17 с его рецептором, и антитела к ИЛ-17, которые способны ингибировать активность 1 нмоля (=30 нг/мл) ИЛ-17 человека в концентрации 50 нМ, предпочтительно 20 нМ, более предпочтительно 10 нМ, более предпочтительно 5 нМ указанной молекулы на 50%, указанную ингибирующую активность измеряют по выработке ИЛ-6, индуцированной ИЛ-17 человека в фибробластах кожи человека, в настоящем изобретении именуются антителами настоящего изобретения.
Предпочтительно антителами настоящего изобретения являются антитела человека, наиболее предпочтительно антитело AIN457 или его прямые эквиваленты.
Фармакологические активности антител настоящего изобретения могут быть показаны стандартными методами, например, описанными ниже.
Нейтрализация ИЛ-17-зависимой выработки интерлейкина-6 первичными фибробластами человека.
Выработка ИЛ-6 первичными (кожными) фибробластами человека зависит от ИЛ-17 (Hwang S.Y. и др.. Arthritis Res Ther, 6, 2004, cc. R120-128).

50
50
Вкратце, фибробласты кожи человека стимулируются рекомбинантным ИЛ-17 в присутствии различных концентраций антитела настоящего изобретения или рецептора ИЛ-17 человека с частью Fc. Химерное анти-СВ25 антитело продукт Simulect (базиликсимаб) применяют в качестве отрицательного контроля. Супернатант, взятый через 16 ч стимулирования, исследуют методом ELISA для выявления ИЛ-6. Антитела настоящего изобретения показывают величины IC по подавлению выработки ИЛ-6 (в присутствии 1 нМ ИЛ-17 человека), примерно равные 50 нМ или менее (например, примерно от 0,01 до примерно 50 нМ), при тестировании указанным выше методом, т.е. указанную ингибирующую активность измеряют по выработке ИЛ-6 в фибробластах кожи человека, индуцированной ИЛ-17 человека. Предпочтительно у антитела настоящего изобретения величина IC для подавления выработки ИЛ-6 согласно описанному выше составляет примерно 20 нМ или меньше, более предпочтительно примерно 10 нМ или меньше, более предпочтительно примерно 5 нМ или меньше, более предпочтительно примерно 2 нМ или меньше, более предпочтительно примерно 1 нМ или меньше.
В приведенном выше исследовании указано, что антитела настоящего изобретения способны блокировать действие ИЛ-17. Соответственно антитела настоящего изобретения имеют следующие фармацевтические применения:
Антитела настоящего изобретения применимы для профилактики и лечения ИЛ-17-опосредованных заболеваний или медицинских состояний, например, для подавления роста солидных или гематологических злокачественных пролиферативных заболеваний.
Солидные злокачественные заболевания могут включать злокачественные опухолевые заболевания с разной локализацией опухолей (или метастазов). Предпочтительно злокачественным опухолевым заболеванием является рак груди, рак мочеполовой системы, рак легких, желудочно-кишечный рак, например, рак прямой кишки или рак мочеполовой системы, особенно рак простаты или желудочно-кишечный стромальный рак (ЖКСР), плоскоклеточный рак, меланома, рак яичника, рак поджелудочной железы, нейробластома, рак головы и шеи, например, рак ротовой полости или рак гортани, рак мочевого пузыря или, в более широком смысле, рак почек, мозга или желудка, опухоль легких, особенно немелкоклеточный рак легких.
К гематологическим злокачественным заболеваниям («жидким неоплазмам») относятся, например, лимфома, лейкоз, особенно те заболевания, которые экспрессируют c-kit, KDR, Flt-1 или Flt-3, миелома или лимфоидные злокачественные заболевания, а также рак селезенки и рак лимфатических узлов. Более конкретными примерами таких форм рака, связанных с В-клетками, например, являются высоко, средне и низко дифференцированные формы лимфомы (в том числе В-клеточные лимфомы, например, В-клеточная лимфома лимфоидной ткани, связанной со слизистой, и не-ходжкинская лимфома, фунгоидная гранулема, синдром Сезари, лимфома клеток оболочки, лимфома Беркитта, лимфома малых лимфоцитов, лимфома краевой зоны, диффузная крупноклеточная лимфома, фолликулярная лимфома и ходжкинская лимфома, а также лимфомы Т-клеток) и лейкозы (включая вторичный лейкоз, хронический лейкоз лимфоцитов, например, лейкоз В-клеток (CD5+В лимфоцитов), миелоидный лейкоз, например, острый миелоидный лейкоз, хронический миелоидный лейкоз, лимфоидный лейкоз, например, острый лимфобластный лейкоз и миелодисплазия), множественная миелома, например, злокачественное заболевание плазмоцитов, и другие гематологические и/или ассоциированные с В- или Т-клетками формы рака. К таким заболеваниям также относятся раковые заболевания кроветворных клеток, включая полиморфоядерные лейкоциты, например, базофилы, эозинофилы, нейтрофилы и моноциты, дендроидные клетки, тромбоциты, эритроциты и природные клетки-киллеры. Происхождение рака В-клеток следующее: краевая зона В-клеточной лимфомы происходит из В-клеток с иммунологической памятью в краевой зоне, фолликулярная лимфома и диффузная крупноклеточная В-клеточная лимфома зарождаются в центроцитах в светлой зоне центров размножения, множественная лимфома зарождается в плазмоцитах, хронический лимфоцитарный лейкоз и лейкоз малых лимфоцитов зарождается в В1-клетках (CD5+), лимфома клеток оболочки зарождается в здоровых В-клетках краевой зоны и лимфома Беркитта зарождается в центробластах в темной зоне центра размножения.
Для таких показаний соответствующая доза может варьировать, например, в зависимости от определенного применяемого антитела настоящего изобретения, организма хозяина, способа введения, природы и тяжести состояния, подвергаемого лечению. Однако для профилактического применения, дающего удовлетворительные результаты, обычно назначают дозы примерно от 0,05 мг до примерно 20 мг или 10 мг/кг массы тела, чаще примерно от 0,1 мг до примерно 5 мг/кг массы тела. Частота дозирования для профилактического применения обычно находится в диапазоне примерно от одного раза в неделю до примерно одного раза каждые три месяца, чаще в диапазоне примерно от одного раза каждые три недели до примерно одного раза каждые 10 недель, например один раз каждые 4-8 недель. Антитело настоящего изобретения обычно вводят парентерально, внутривенно, например, в локтевую или другую периферийную вену, внутримышечно или подкожно. Профилактическое лечение обычно заключается во введении антитела настоящего изобретения с частотой от одного раза в месяц до одного раза каждые два-три месяца или реже.
Антитела настоящего изобретения могут вводиться в виде одного действующего ингредиента или совместно, например, с адъювантом или в комбинации с другими лекарственными средствами, например, лекарственными средствами, применимыми для лечения, предупреждения, облегчения и/или излечения рака, например, для лечения или предупреждения заболеваний, указанных выше. Например, антитела настоящего изобретения могут применяться в комбинации с химиотерапевтическим агентом. Химиотерапевтическими агентами, которые могут вводиться с антителами настоящего изобретения, являются, но ими не ограничиваются, производные антибиотиков (например, доксорубицина (адриамицина), блеомицина, даунорубицина и дактиномицина), антиэстрогены (например, тамоксифен), антиметаболиты (например, фторурацил, 5-ФУ, метотрексат, флоксиуридин, интерферон альфа-2b, пликамицин, меркаптопурин и 6-тиогуанин), цитотоксические агенты (например, кармустин, BCNU, ломустин, CCNU, цитозин арабинозид, циклофосфамид, эстрамустин, гидроксимочевина, прокарбазин, митомицин, бусульфан, цис-платин и винкристин сульфат), гормоны (например, медроксипрогестерон, натриевая соль эстрамустин фосфата, этинил эстрадиол, эстрадиол, мегестрол ацетан, метилтестостерон, диэтилстилбестрол дифосфат, хлортрианизен и тестолактон), производные горчичного азота (например, мефален, хлорамбуцил, мехлорэтамин (горчичный азот) и тиотепа), стероиды и комбинации (например, натриевая соль бетаметазон фосфата) и другие (например, дикарбазин, аспарагиназа, митотан, винкристин сульфат, винбластин сульфат, этопозид, топотекан, 5-фторурацил, паклитаксел (таксол), цисплатин, цитарабин и IFN-гамма, иринотекан (камптосар, СРТ-11), аналоги иринотекана, гемцитабин (продукт GEMZAR) и оксалиплатин, ифосамид и соединения нитрозомочевины).
В определенных вариантах осуществления настоящего изобретения антитела настоящего изобретения могут вводиться в комбинации с одним или несколькими химиотерапевтическими или другими терапевтическими агентами, применимыми для лечения, предупреждения, облегчения и/или излечения рака, включая, но не ограничиваясь ими, один или несколько агентов из табл.1.
Таблица 1
81С6 (моноклональное антитело к тнасцину), 2-хлордезоксиаденозин, А007 (4-4′-дигидроксибензофенон-2,4-динитрофенилгидразон), продукт Abarelix (продукт Abarelix-Depot-M, PPI-149, R-3827), продукт Abiraterone acetate (СВ-7598, СВ-7630), АВТ-627 (ЕТ-1 ингибитор), АВХ- EGF (анти-EGFr моноклональное антитело), ацетилдиналин (CI-994, GOE-5549, GOR-5549, PD-130636), AG-2034 (AG-2024, AG-2032, GARFT (ингибитор глицинамидрибонуклеозидтрансформилазы), аланозин, алдезлейкин (ИЛ-2, продукт Proleukin), продукт Alemtuuumab (продукт Campath), алитретиноин (панретинг, LGN-1057), аллопуринол (продукт Aloprim, продукт Zyloprim), алтретамин (продукт Hexalen, гексаметилмеламин, продукт Hexastat), амифостин (продукт Ethyol), аминокамптотецин (9-АС, 9-аминокамптотецин, NSC 603071), аминоглютетимид (продукт Cytadren), аминолевулиновая кислота (продукт Levulan, продукт Kerastick), аминоптерин, амсакрин, анастрозол (продукт Arimidex), ангиостатин, аннамицин (AR-522, аннамицин LF, продукт Агопех), анти-идиотипическая терапия (BsAb), анти-CD19/CD3 моноклональное антитело (анти-CD19/CD3 scFv, анти-NHL моноклональное антитело), АРС-8015 (продукт Provenge, терапия дендрических клеток), аплидин (продукт Aplidin, продукт Aplidina), арабинозилгуанин (Ara-G, GW506U78, продукт Nelzarabine, соединение 506U78), триоксид мышьяка (продукт Trisenox, АТО, продукт Atrivex), продукт Avorelin (продукт Meterelin, MF-6001, ЕР-23904), В43-генистеин (анти- CD19 Ab/генистеин конъюгат), В43-РАР (конъюгат анти-СD19 Ab/антивирусного белка локоноса), конъюгаты антитела В7, BAY 43-9006 (ингибитор Raf-киназы), BBR 3464, бетатин (Beta-LT), продукт Avastin (Bevacizumab, анти-VEGF моноклональное антитело, rhuMAb-VEGF), продукт Sutent (сунитиниб малат), продукт Nexavar (сорафениб тозилат), RAD001 (эверолимус), бексаротен (продукт Targretin, LGD1069), BIBH- 1 (анти-FAP моноклональное антитело), BIBX-1382, биклутамид (продукт Casodex), бирикодар дицитрат (продукт Incel, Incel - ингибитор множественной лекарственной устойчивости (MDR)), блеомицин (продукт Blenoxane), BLP-25 (пептид MUC-1), антагонисты BLyS, BMS-214662 (BMS-192331, BMS-193269, BMS- 206635), BNP-1350 (BNPI-1100, каренитецины), протопорфирин борат (PDIT, фотодинамическая иммунотерапия), бриостатин-1 (продукт Bryostatin, BMY-45618, NSC-339555), будесонид (продукт Rhinocort), бусульфан (продукт Busulfex, продукт Myleran), C225 (IMC-225, ингибитор EGFR, анти-EGFr МАb, продукт Erbitux (цетуксимаб), C242-DM1 (huC242-DM1), каберголин (продукт Dostinex), капецитабин (продукт Xeloda, продукт Doxifluridine, пероральная форма 5-ФУ), продукт Carbendazin (FB-642), карбоплатин (продукт Paraplatin, CBDCA), карбоксиамидотриазол (NSC 609974, CAI, L-651582), кармустин (DTI-015, BCNU, BiCNU, продукт Gliadel Wafer), СС49-зета генная терапия, продукт CEA-cide) (продукт Labetuzumab, анти-СЕА моноклональное антитело, hMN-14), продукт CeaVac (моноклональное антитело 3H1), целекоксиб (продукт Celebrex), СЕР-701 (КТ-5555), продукт Cereport (продукт Lobradimil, RMP-7), хлорамбуцил (продукт Leukeran), CHML (цитотропные гетерогенные молекулярные липиды), холекалиферол, CI-1033 (Pan-erbB RTK ингибитор), циленгитид (EMD-121974, антагонист интегрина alphavbeta3), цисплатин (продукт Platinol, CDDP), цисплатин-эпинефриновый гель (продукт IntraDose, продукт FocaCist), липосомальная форма цисплатина (SPI-077), 9-цис ретиноевая кислота (9-cRA), кладрибин (2- CdA, продукт Leustatin), клофарабин (хлор-фтор-агаА), клонадин гидрохлорид (продукт Duraclon), СМВ-401 (анти-РЕМ моноклональное антитело/калихимицин), СМТ-3 (COL-3, продукт Metastat), кордицепин, продукт Cotara (chTNT-1/B, [1311] -chTNT-1/B), CN-706, CP-358774 (продукт Tarceva, OSI-774, ингибитор EGFR), CP-609754, CP ИЛ-4-токсин (гибридный токсин ИЛ-4), CS-682, CT-2584 (продукт Apra, CT- 2583, СТ-2586, СТ-3536), СТР-37 (продукт Avicine, блокирующая вакцина hCG), циклофосфамид (продукт Cytoxan, продукт Neosar, CTX), цитарабин (продукт Cytosar-U, ara-C, цитозин арабинозид, продукт DepoCyt, D-лимонен, DAB389-EGF (гибридный токсин EGF), дакарбазин (DTIC), продукт Daclizumab (продукт Zenapax), дактиномицин (продукт Cosmegen), дауномицин (продукт Daunorubicin, продукт Cerubidine, даунорубицин (продукт DaunoXome, продукт Daunorubicin, продукт Cerubidine), продукт DeaVac (анти-идиотипическая вакцина СЕА), децитабин (5-аза-2′-дезоксиитидин), деклопрамид (Oxi-104), денилейкин дифтитокс (продукт Ontak), депсипептид (FR901228, FK228), дексаметазон (продукт Decadron), дексразоксан (продукт Zinecard), диэтилнорспермин (DENSPM), диэтилстилбестрол (DES), дигидро-5-азацитидин, доцетаксел (продукт Taxotere, продукт Тахаnе), доласетрон мезилат (продукт Anzemet), доластатин-10 (DOLA-10, NSC- 376128), доксорубицин (продукт Adriamycin, продукт Doxil, продукт Rubex), DPPE, DX-8951f(DX- 8951), эдатрексат, вакцина EGF-P64k, физиологический раствор Elliott's В Solution, EMD-121974, эндостатин, энилурацил (776с85), ЕО9 (ЕO1, ЕO4, ЕO68, ЕO70, ЕO72), эпирубицин (продукт Ellence, EPI, 4′ эпи-доксорубицин), продукт Epratuzumab (продукт Lymphocide, гуманизированные анти-СВ22, HAT), эритропоэтин (продукт ЕРО, продукт Epogen, продукт Procrit), эстрамустин (продукт Emcyt), этанидазол (продукт Radinyl), этопозид фосфат (продукт Etopophos), этопозид (VP-16, продукт Vepesid), экземестан (продукт Aromasin, продукт Nikidess), эксетекан мезилат (DX-8951, DX-8951f), эксизулинд (SAAND, продукт Aptosyn, cGMP-PDE2 и ингибитор), F19 (анти-FAP моноклональное антитело, иодированное анти-FАР моноклональное антитело), фадрозол (продукт Afema, фадрозол гидрохлорид, продукт Arensin), продукт Fenretinide (4HPR), фентанил цитрат (продукт Actiq), филграстим (Neupogen, G-CSF), FK-317 (FR-157471, FR-70496), флавопиридол (HMR-1275), лиганд Fly3/flk2 (продукт продукт Mobista), флуастерон, флударабин (продукт Fludara, FAMP), флудеоксиглюкоза (F-18), фторурацил (5-ФУ, продукт Adrucil, продукт Fluoroplex, продукт Efudex), флутамид (продукт Eulexin), FMdC (KW-2331, MDL-101731), форместан (продукт Lentaron), фотемустин (продукт Nuphoran, продукт Mustophoran), FUDR (продукт Floxuridine), фулвестрант (продукт Faslodex), G3139 (продукт Genasense, продукт GentaAnticode, антисмысловой Bcl-2), гадолиний тексафирин (мотексафин гадолиний, продукт Gd-Tex, продукт Xcytrin), галарубицин гидрохлорид (DA-125), GBC-590, продукт Gastrimmune (иммуноген анти-гастрин-17, анти-g17), гемцитабин (продукт Gemto, продукт Gemzar), гентузумаб-озогамицин (продукт Mylotarg), GL331, Globo H гексасахарид (Globo H- KLH), глуфосфамидег (горчичный β-D-глюкозил-изофосфамид, D 19575, INN), гозерелин ацетат (продукт Zoladex), гранисетрон (продукт Kytril), GVAX (генная терапия GM-CSF), вакцина Her-2/Neu, продукт Herceptin (продукт Trastuzumab, анти-НЕR-2 моноклональное антитело, анти-EGFR-2 моноклональное антитело), HSPPC-96 (противоопухолевая вакцина HSP, gp96 протеин-пептидный комплекс теплового шока), HulDI0 (анти-HLA-DR MAb, SMART 1D 10), HumaLYM (анти-СD20 моноклональное антитело), гидрокортизон, гидроксимочевина (продукт Hydrea), продукт Hypericin (продукт VItRxyn), продукт I-131 Lipidiol, продукт Ibritumomabtiuxetan (продукт Zevalin), идарубицин (продукт Idamycin, DMDR, IDA), ифосфамид (продукт IFEX), иматиниб мезилат (STI-571, продукт Imatinib, продукт Glivec, продукт Gleevec, ингибитор Abl тирозинкиназы), INGN-101 (р53 генная терапия/ретровирус), INGN-201 (р53 генная терапия/аденовирус), интерферон альфа (продукт Alfaferone, продукт Alpha-IF), интерферон альфа 2а (продукт Intron А), интерферон гамма (гамма-интерферон, продукт Gamma 100, гамма-IF), интерлейкин-2 (продукт ProleiukinR), интоплицин (RP 60475), иринотекан (продукт Camptosar, СРТ-11, продукт Topotecin, CaptoCPT-1), ирофульвен (MGI-114, ивофульван, аналог ацилфульвена), ISIS-2053 (антисмысловой РКС-альфа), ISIS-2503 (антисмысловой Ras), ISIS-3521 (антисмысловой РКС-альфа), ISIS-5132 (антисмысловой K-ras/raf), изотретиноин (13-CRA, 13-цис ретиноевая кислота, продукт Accutane), кетоконазол (продукт Nizoral), KRN-8602 (MX, MY-5, NSC-619003, MX-2), L-778123 (ингибиторы Ras), L-аспарагиназа (продукт Elspar, продукт Crastinin, продукт Asparaginase medac, продукт Kidrolase), лефлуномид (SU-101, SU- 0200), летрозол (продукт Femara), лейковорин (продукт Leucovorin, продукт Wellcovorin), лейпролид ацетат (продукт Viadur, продукт Lupron, продукт Leuprogel, продукт Eligard), продукт Leuvectin (цитофектин+ИЛ-2 ген, ИЛ-2 генная терапия), левамизол (продукт Ergamisol), лиарозол (лиазал, лиазол, R-75251, R-85246, Ro-85264), иммунотоксин Lmb-2 (анти-СD25 рекомбинантный иммунотоксин, анти-Тас(Fv)-РЕ38), лометрексол (Т-64, Т-904064), ломустин (продукт CCNU, продукт CeeNU), LY-335979, Lym-1 (131-1 LYM-1), вакцина от лимфомы (фирма Genitope), вакцина Mannan-MUCl, продукт Marimastat (ВВ-2516, ТА-2516, ингибитор ММР), MDX-447 (MDX-220, BAB-447, EMD-82633, Н-447, анти-EGFr/FcrammaRlr), мехлорэтамин (горчичный азот, HN2, продукт Mustargen), мегестрол ацетат (продукт Megace, продукт Pallace), мелфалан (L-PAM, продукт Alkeran, горчичный фенилаланин), меркаптопурин (6-меркаптопурин, 6-МР), месна (продукт Mesnex), продукт Methotrexate (МТХ, продукт Mexate, продукт Folex), метокссален (продукт Uvadex), 2-метоксиэстрадиол (2-МЕ, 2-МЕ2), метилпреднизолон (продукт Solumedrol), метилтестостерон (продукт Android-10, продукт Testred, продукт Virilon), MGV, митомицин С (продукт Mitomycin, продукт Mutamycin, продукт Mito Extra), митоксантрон (продукт Novantrone, DHAD), продукт Mitumomab (ВЕС-2, EMD-60205), мивобулин изетионат (CI-980), MN-14 (анти-СЕА иммунорадиотерапия, 131I-MN-14, 188Re-MN-14), лютеций мотексафин (продукт Lutrin, продукт Optrin, продукт Lu-Tex, лютеций тексафирин, продукт Lucyn, продукт Antrin), MPV-2213ad (продукт Finrozole), MS-209, вакцина Muc-1, NaPro паклитаксел, неларабин (соединение 506, U78), продукт Neovastat (АЕ-941, ингибитор ММР), соединения Neugene (онкомик-NG, Resten-NG, антисмысловой ген myc), нилутамид (продукт Nilandron), NovoMAb-G2 scFv (NovoMAb-G2 IgM), O6-бензилгуанин (BG, продукт Procept), октреотид ацетат (продукт Sandostatin LAR Depot), одансетрон (продукт Zofran), онконас (продукт Ranpirnase), OncoVAX-CL, OncoVAX-CL Jenner (вакцина GA-733-2), OncoVAX-P (OncoVAX-PrPSA), оникс-015 (р53 генная терапия), опрелвекин (продукт Neumage), орцел (тегафур+урацил+лейковорин), оксалиплатин (продукт Eloxatine, продукт Eloxatin), продукт Pacis (живая вакцина BCG), паклитаксел (продукт Рахепе, продукт Тахоl), паклитаксел-DHA (продукт Taxoprexin), памидронат (продукт Aredia), PC SPES, пегадемас (продукт Adagen, бычий пегадемас), продукт Pegaspargase (продукт Oncospar), пелдезин (ВСХ-34, ингибитор PNP), двунатриевая соль пеметрекседа (продукт Alimta, MTA, многоцелевой антифолат, LY 231514), пентостатин (продукт Nipent, 2-дезоксикоформицин), перфосфамид (4-гидропероксициклофосфамид, 4-НС), перилловый спирт (perillol, NSC-641066), фенилбутират, пирарубицин (ТНР), пивалойлоксиметил бутират (AN-9, продукт Pivanex), порфимер натрия (продукт Photofrin), преднизон, продукт Prinomastat (AG-3340, ингибитор ММР), прокарбазин (продукт Matulane), PROSTVAC, вакцина от рака груди медицинского центра Providence Portland, PS-341 (LDP- 341, протеосомный ингибитор 26S), PSMA MAb (моноклональное антитело мембранного антигена, специфичного в отношении простаты), пиразолоакридин (NSC-366140, PD-115934), хинин, R115777 (продукт Zarnestra), ралоксифен гидрохлорид (продукт Evista, кеоксифен гидрохлорид), ралтитрексед (продукт Tomudex, ZD-1694), ребеккамицин, ретиноевая кислота, R-флюрбипрофен (флуризан, Е-7869, МРС-7869), RFS-2000 (9-нитрокамптотекан, 9-NC, продукт rubitecan), продукт Rituximab (продукт Rituxan, анти-CD20 MAb), RSR-13 (GSJ-61), сатраплатин (BMS-182751, JM-216), SCH-6636, SCH-66336, продукт Sizofilan (SPG, продукт Sizofiran, продукт Schizophyllan, продукт Sonifilan), SKI-2053R (NSC-D644591), собузоксан (MST-16, продукт Perazolin), скваламин (MSI-1256F), SR-49059 (ингибитор рецептора вазопрессина V1a), стрептозоцин (продукт Zanosar), SU5416 (продукт Semaxanib, ингибитор VEGF), SU6668 (ингибитор PDGF-TK), Т-67 (Т- 138067, Т-607), тальк (продукт Sclerosol), тамоксифен (продукт Nolvadex), тауролидин (продукт Taurolin), темозоламид (продукт Temodar, NSC 362856), тенипозид (VM-26, продукт Vumon), TER-286, тестостерон (продукт Andro, продукт Androderm, продукт Testoderm TTS, продукт Testoderm, продукт DepoTestosterone, продукт Androgel, продукт depoAndro), Tf-CRM107 (Transferrin-CRM-107), талидомид, тератоп, тиогуанин (6-тиогуанин, 6-ТГ), тиотепа (триэтилтиофосфорамид, продукт Thioplex), тимозин альфа I (продукт Zadaxin, продукт Thymalfasin), тиазофурин (продукт Tiazole), тирапазамин (SR- 259075, SR-4233, продукт Tirazone, Win-59075), TNP-470 (AGM-1470, фумагиллин), токладезин (8-С1-сАМР), топотекан (продукт Hycamtin, SK&F-104864, NSC- 609699, продукт Evotopin), торемифен (продукт Estrirnex, продукт Fareston), продукт Tositumomab(продукт Веххаг), третиноин (продукт Retin-A, продукт Atragen, ATRA, продукт Vesanoid), продукт TriAb (иммунный стимулятор антиидиотипического антитела), трилостан (продукт Modrefen), трипторелин памоат (продукт Trelstar Depot, продукт Decapeptyl), триметрексат (продукт Neutrexin), троксацитабин (ВСН-204, ВСН-4556, продукт Troxatyl), TS-1, UCN-01 (7-гидроксистауроспорин), валрубицин (продукт Valstar), валсподар (PSC 833), продукт Vapreotide (BMY-41606), ваксид (вакцина ДНК В-клеточной лимфомы), винбластин (продукт Velban, VLB), винкристин (продукт Oncovin, продукт Onco TCS, VCR, продукт Leurocristine), виндезин (продукт Eldisine, продукт Fildesin), винфлунин (продукт JaVLor, ингибитор полимеризации тубулина), винорелбин (продукт Navelbine), продукт Vitaxin (LM-609, интегрин альфаvбета3 антагонистическое моноклональное антитело), WF10 (регулятор макрофагов), WHI- P131, вакцина WT1, XR-5000 (DACA), XR-9576 (XR-9351, Р-гликопротеин/ингибитор MDR), ZD-9331, ZD-1839 (продукт IRESSA), золедронат (продукт Zometa).
Предпочтительная комбинация включает продукт Erbitux (цетуксимаб), продукт Avastin (бевацизумаб), продукт Nexavar (сорафениб тозилат), продукт Sutent (сунитиниб малат), продукт Tarceva (эрлотиниб), продукт RAD001 (эверолимус), доцетаксел (продукт Taxotere), цисплатин, капецитабин (продукт Xeloda, продукт Doxifluridine, пероральная форма 5-фторурацила).
В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения предусмотрена фармацевтическая композиция, включающая антитело настоящего изобретения, в частности AIN457, в качестве действующего ингредиента и по меньшей мере один дополнительный противоопухолевый агент из табл.1, в которой действующие ингредиенты присутствуют в каждом случае в свободной форме или в форме фармацевтически приемлемой соли и необязательно по меньшей мере одного фармацевтически приемлемого носителя, для одновременного, раздельного или последовательного применения. В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения антитело настоящего изобретения, в частности антитело AIN457, и по меньшей мере один дополнительный противоопухолевый агент, представленный в табл.1, включены в единую фармацевтическую комбинацию. Такая комбинация в соответствии с настоящим изобретением, в частности, применима для лечения пролиферативного заболевания, например рака, особенно солидных злокачественных заболеваний или гематологических злокачественных заболеваний.
В связи с указанным выше, настоящее изобретение также предусматривает:
способ, описанный выше, заключающийся в совместном введении, например, одновременно или последовательно терапевтически эффективного количества ИЛ-17-связывающей молекулы, например, антитела настоящего изобретения, и по меньшей мере одного второго лекарственного вещества, причем указанное второе лекарственное вещество является иммуносупрессивным/иммуномодулирующим, противовоспалительным химиотерапевтическим или противоинфекционным лекарственным средством, например, указанным выше;
или терапевтическую комбинацию, например набор, включающий терапевтически эффективное количество а) ИЛ-17-связывающей молекулы, например, антитела настоящего изобретения, и б) по меньшей мере, одного второго вещества, выбранного из иммуносупрессивного/иммуномодулирующего, противовоспалительного химиотерапевтического или противоинфекционного лекарственного средства, например, указанного выше. Набор может включать инструкции по введению комбинации.
Если антитела настоящего изобретения вводят вместе с другим иммуносупрессивным/иммуномодулирующим противовоспалительным химиотерапевтическим или противоинфекционным лекарственным средством, дозировки совместно вводимого комбинируемого соединения могут варьировать в зависимости от типа совместно применяемого лекарственного средства, например, от того, является ли оно DMARD, анти-TNF, блокатором ИЛ-1 или другим лекарственным средством, от специфичности применяемого лекарственного средства, от подвергаемого лечению состояния и т.д.
Фармацевтические композиции настоящего изобретения могут быть получены традиционным способом. Композицию по настоящему изобретению предпочтительно предусматривают в лиофилизированной форме. Для немедленного введения композицию растворяют в соответствующем водном носителе, например стерильной воде для инъекций или стерильном буферном физиологическом растворе. Если считается целесообразным получать большой объем раствора для введения путем инфузии, а не болюсной инъекции, предпочтительно включить сывороточный альбумин человека или собственную обработанную гепарином кровь пациента в состав физиологического раствора на момент приготовления. В другом варианте состав вводят подкожно. Наличие избытка такого физиологически инертного белка предупреждает потерю антитела в результате адсорбции на стенках контейнера и пробирок, применяемых для инфузионного раствора. При использовании альбумина его соответствующая концентрация составляет 0,5-4,5 мас.% в физиологическом растворе. Другие составы представляют жидкий или лиофилизированный состав.
Настоящее изобретение далее поясняется примерами, которые приводятся в качестве иллюстраций.
Примеры
Пример 1.
D
50
Антитело AIN457 получают и показывают, что оно связывается с очень высоким сродством с рекомбинантным интерлейкином человека ИЛ-17 (чИЛ-17), величина K составляет 0,188±0,036 нмоля (сенсор BIAcore), и нейтрализует выработку ИЛ-6 человека, индуцированную чИЛ-17, в фибробластах кожи человека. Величина IC составляет 2,1±0,1 нмоля в концентрации 1,87 нМ чИЛ-17, согласно описанию в патентной заявки РСТ/ЕР2005/008470.
Пример 2. Таблица 2: Нуклеотидные и аминокислотные последовательности легкой цепи.
Аминокислотная последовательность, кодирующая вариабельный домен, выделена жирным шрифтом и подчеркнута. Олигонуклеотидные праймеры, применяемые для клонирования, подчеркнуты.
ТАА
781 --- 783
АТТ *
Таблица 4. Аминокислотные последовательности петель CDR
Легкая цепь
L-CDR1
По классификации Kabat
R-A-S-Q-S-V-S-S-S-Y-L-A
По классификации Chothia/рентгеноскопии
R-A-S-Q-S-V-S-S-S-Y-L-A
L-CDR2
По классификации Kabat
G-A-S-S-R-A-T
По классификации Chothia/рентгеноскопии
G-A-S-S-R-A-T
L-CDR3
По классификации Kabat
Q-Q-Y-G-S-S-P-C-T
По классификации Chothia/рентгеноскопии
Q-Q-Y-G-S-S-P-C-T
Тяжелая цепь
Н-CDR1
По классификации Kabat
N-Y-W-M-N
По классификации Chothia/рентгеноскопии
G-F-T-F-S-N-Y-W-M-N
Н-CDR2
По классификации Kabat
A-I-N-Q-D-G-S-E-K-Y-Y-V-G-S-V-K-G
По классификации Chothia/рентгеноскопии
A-I-N-Q-D-G-S-E-K-Y-Y
Н-CDR3
По классификации Kabat
D-Y-Y-D-I-L-T-D-Y-Y-I-H-Y-W-Y-F-D-L
По классификации Chothia/рентгеноскопии
C-V-R-D-Y-Y-D-I-L-T-D-Y-Y-I-H-Y-W-Y-F-D-L-W-G
Пример 3.
3
5
5
4
2
Исследуют клеточную пролиферацию (по включению красителя MTS или [H]тимидина): пролиферацию клеток подвергают мониторингу, например, колориметрическим методом CellTiter 96 AQueous One Solution Cell Proliferation Assay (фирма Promega, Великобритания). В предварительных экспериментах подготавливают культуры различных клеточных линий, например 5 разных клеточных линий, (1×10 клеток/мл в колбах для культуры ткани) в присутствии или отсутствие антитела AIN457. Пролиферацию оценивают по аликвотам, которые отбирают ежедневно с 1 по 4 сутки для установления наиболее характерной временной точки. Затем планируют повторные эксперименты, помещая клетки непосредственно в 96-луночные планшеты и окрашивая их красителем MTS. Оценивают, что необходимо минимум 95% жизнеспособных клеток, выявляемых по окраске трипановым синим, для начала какого-либо эксперимента. Для каждой линии клеток 50 мкл клеточной суспензии в соответствующей культуральной среде засевают в количестве 1×10 клеток/мл в плоскодонные лунки (1×10 клеток/лунку), к которым добавляют 50 мкл культуральной среды или 2х ИЛ-17-связывающей молекулы, например AIN457, в соответствующей культуральной среде. Все образцы исследуют в четырех повторах. Планшеты инкубируют во влажной атмосфере с 5% СO. На 3 сутки по 20 мкл красителя MTS вносят в каждую лунку, и планшет повторно инкубируют еще на протяжении 3-4 ч для окрашивания. К концу этого периода планшеты осторожно встряхивают и записывают поглощение при 490 нм с помощью автоматического считывающего устройства для микропланшеток (прибор MRX, фирма Dynatech, Billingshurst, Великобритания). Средние контрольные величины (без клеток, без ИЛ-связывающих молекул, например без антитела AIN457) вычитают от величин образцов, и эти откорректированные величины антитела А490 подсчитывают в виде процентов роста контрольных культур в отсутствие ИЛ-17-связывающей молекулы, например AIN457. Планки погрешностей показывают диапазон, определяемый повторами экспериментов, и расхождения оценивают в качестве значительных, если они выходят за пределы области перекрытия в диапазонах средних значений.
Пример 4. Модель ксенотрансплантата.
3
Воздействие на модели ксенотрансплантата (опухоли человека, имплантированные в мышей линии SCID): опухоли прививают мышам линии SCID подкожной инъекцией суспензии клеток опухоли человека, выращенных в культурах клеток опухоли человека в колбах или в организмах животных. Лечение начинают после достижения опухолями определенного размера (например, 150 мм) или по прошествии определенного времени после инокуляции клеток (например, 4-7 суток). ИЛ-17-связывающую молекулу, например тестируемое антитело AIN457, вводят внутрибрюшинно или внутривенно один раз в сутки (или один раз в 2-4 суток). Противоопухолевое действие выражают в виде соотношения Т/С% (средние увеличения объемов опухолей подвергшихся лечению животных, поделенные на среднюю величину увеличения объемов опухолей контрольных животных, умноженные на 100) и % регрессий (объем опухоли минус начальный объем опухоли, поделенный на первоначальный объем опухоли и умноженный на 100).
Пример 5. Оценка действия ИЛ-7 на высвобождение цитокина опухолевыми клетками.
5
Линии опухолевых клеток или свежевысеянные опухолевые клетки (1×10мл) культивируют в среде RPMI 1640, содержащей 10% ФСТ, 2 мМ L-глутамина, 100 ЕД/мл пенициллина и 100 мкг/мл стрептомицина вместе с ИЛ-17 (в диапазоне от 0,1 нг/мл до 1 мкг/мл) или без ИЛ-17 плюс 10-100-кратный избыток AIN457 в течение 48 или 72 ч. Не содержащие клеток супернатанты могут быть немедленно собраны и исследованы или могут быть сохранены при -70°С в течение нескольких суток или даже месяцев. Концентрации многих различных цитокинов, например ИЛ-6, ИЛ-8, CXCL1, CXCL5 (однако ими перечень не ограничивается) измеряют, используя коммерчески доступный набор для ИФА, например, фирмы R&D Systems. Концентрация PGE2 также может быть оценена с помощью коммерческих источников, например, фирмы Cayman Chemicals. Концентрация измеряемых цитокинов может быть существенно ниже, если опухолевые клетки выращивают в присутствии ИЛ-17-связывающей молекулы, например AIN457.
Пример 6. Модель канцерогенеза.
Мышей обрабатывают 9,10-диметил-1,2-бензатраценом (ДМБА, фирма Sigma) в 200 мл ацетона в количестве 100 мг на мышь однократно в возрасте 2-3 месяцев, затем обрабатывают дважды в неделю промотором опухолей 12-О-тетрадеканоил-форбол ацетатом (ТРА, фирма Fisher) в 200 мл ацетона, 30 мкг на мышь сроком до 1 года. Наблюдаемые опухоли возникают в виде папиллом (кератоакантом), но могут прогрессировать в карциномы и метастазировать с током лимфы. Папилломы подсчитывают, оценивая визуально, и оценивают статистически. Роль ИЛ-17 оценивают введением AIN457, например, 1 мг на мышь в неделю, в сутки, через сутки или через двое суток. Мыши, обработанные ИЛ-17-связывающей молекулой, например AIN457, могут показать существенно меньшую частоту встречаемости папиллом и более медленное их прогрессирование в карциномы и метастазы.
Пример 7.
Клиническое исследование: фаза 1, исследование дозировки антитела AIN457, вводимого один раз каждые три недели взрослым пациентам с развитыми солидными опухолями.
Первичные задачи
Описать профиль безопасности, включая и острую, и кумулятивную токсичность, и определить максимально переносимую дозу отдельно применяемого агента AIN457, вводимого путем внутривенной инфузии один раз каждые три недели взрослым пациентам с развитыми солидными опухолями, которым не помогает стандартная системная терапия или в отношении которых стандартной системной терапия нет.
Вторичные задачи
1. Описать фармакокинетические показатели единственного агента AIN457, введенного путем внутривенной инфузии один раз в три недели группе пациентов, полученные данные применяют во взаимодействии с данными по фармакодинамике для получения корреляций фармакокинетики/фармакодинамики (ФК/ФД), что помогает прогнозировать безопасность и эффективность.
2. Получить предварительное доказательство противоопухолевого действия антитела AIN457, вводимого внутривенной инфузией один раз каждые три недели пациентам данной группы.
3. Установить соотношение уровней лекарственных средств в опухолях у взрослых пациентов со сформированными солидными опухолями, получавших AIN457 внутривенной инфузией один раз каждые три недели, и соответствующих уровней, связанных с эффективностью, установленной на предклинических моделях.
4. Накопить информацию по опухолям на основании биопсийных образцов опухолей, когда это возможно, до терапии и после терапии, для идентификации биологических факторов, коррелирующих с эффективностью и ответом.
Схема исследования. Открытое с увеличением дозы исследование для оценки безопасности фармакокинетики и фармакодинамики антитела AIN457, вводимого внутривенной инфузией один раз каждые три недели взрослым пациентам со сформированными солидными опухолями, для которых стандартная системная терапия оказалась неэффективной или для которых нет стандартной системной терапии.
Длительность лечения составляет до шести 21-суточных циклов. Если у пациентов проявляется неприемлемая токсичность или прогрессирование заболевания, лечение прекращают раньше намеченного срока. Пациенты, достигающие полного или частичного ответа, или пациенты с устойчивым заболеванием к концу шести циклов, продолжают дальнейшее лечение по продленному протоколу по усмотрению исследователя и после одобрения попечителя. Соответствующие пациенты получают дополнительные циклы лечения, пока устанавливают прогрессирования заболевания или нежелательной токсичности.
Если отсутствует токсичность, из-за которой ограничивают дозировку (доза, ограничиваемая токсичностью - ДОТ), увеличение дозировки проводят следующим образом.
1. Первое увеличение дозы: 100% увеличение дозы (если токсичность второй степени выявляют в первой группе, дозу увеличивают на 25-67%).
2. Повышение дозы после 100% увеличения дозы от первой до второй группы: увеличение дозы на 67%, пока не выявляют вторую степень токсичности.
3. Последнее увеличение дозы после идентификации второй степени токсичности: 25-67% увеличение дозы, основанное на согласии, достигаемом среди исследователей и попечителей.
Увеличение дозы обосновывают по токсичности после первого цикла для каждой группы пациентов. Предварительная максимально переносимая доза (МПД) означает дозу, уровень которой непосредственно ниже той дозы, которая является ДОТ по меньшей мере у двух из 3-6 пациентов. Группа, в которой определяют предварительную МПД, затем пополняют дополнительными пациентами до общего числа 12 для подтверждения МПД путем дополнительной оценки профилей безопасности, фармакокинетики и фармакодинамики антитела AIN457.
Повышения дозы внутри пациента не допускается.
Все величины токсичности выражают согласно пересмотренным общим критериям токсичности Национального института рака США. Дозы, ограничиваемые токсичностью (ДОТ), описывают в протоколе, однако обычно природа ДОТ такова, что эту дозу считают неприемлемой, даже если солидная опухоль признана неизлечимой.
Пациенты
Критерии введения в группу исследования
Пациенты должны соответствовать следующим критериям для включения в исследование.
1. Пациенты мужского или женского пола в возрасте ≥18 лет.
2. Пациенты имеют опухоль на поздней стадии, которая подтверждена гистологическим исследованием, не поддается лечению стандартной системной терапией и не более чем одной дополнительной системной терапией, или применительно к данным пациентам стандартную системную терапию не проводили.
3. Имеется по меньшей мере одно умеренное, поддающееся или не поддающееся оценке, место заболевания, основанное на критериях ответа солидной опухоли, Онкологической группы юго-западных штатов США (SWOG), включая величину опухолевого маркера, превышающую установленный верхний предел нормы.
4. Женщины детородного возраста должны иметь отрицательный результат анализа на беременность (отсутствие в сыворотке β-HCG) перед началом исследования лекарственного средства. Пациенты мужского или женского пола в детородном возрасте должны нести ответственность за применение эффективного способа контрацепции на протяжении исследования и в течение 3 месяцев после его прекращения.
5. Оценка статуса по шкале Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ) составляет ≤2.
6. Предполагаемая продолжительность жизни составляет по меньшей мере 3 месяца.
7. Перед проведением каких-либо процедур, связанных со скринингом, следует получить письменное согласие пациента.
Критерии, исключающие пациента из группы исследования
Пациентов необходимо исключить из исследования при наличии какого-либо из следующих признаков.
1. В случае беременности или кормления грудью. У женщины постклимактерического возраста не должно быть менструации по меньшей мере 12 месяцев, следовательно, у нее нет способности к деторождению.
2. У пациента тяжелое и/или неподдающееся лечению заболевание (т.е. неконтролируемый диабет, застойная сердечная недостаточность, инфаркт миокарда не позднее чем за 6 месяцев до начала исследования, хроническая почечная недостаточность или активная неконтролируемая инфекция).
3. Известно, что у пациента метастазы в мозге.
4. У пациента острое или установленное хроническое заболевание печени (т.е. хронический активный гепатит, цирроз).
5. У пациента установлено заболевание, связанное с инфицированием вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ).
6. Пациент получал какое-либо исследуемое средство не позднее чем за 30 суток до начала исследования.
7. Пациент, которого лечили методом химиотерапии не позднее чем за 4 недели (6 недель для соединений нитрозомочевины или митомицина С) до начала исследования.
8. Пациента ранее подвергали радиационной терапии не позднее чем за 4 недели до начала исследования.
9. Пациент, у которого ранее радиотерапия затронула ≥25% костного мозга.
10. Пациент, у которого было крупное хирургическое вмешательство не позднее чем за 2 недели до начала исследования.
11. История болезни пациента несовместима с лекарственным лечением.
12. Пациенты имеют повышенную функцию почек, печени или кроветворения, что следует из ледующих лабораторных показателей:
9
Число тромбоцитов <100×10/л
9
Абсолютное число нейтрофильных лейкоцитов (АЧНЛ)<1,5×10/л
Показатель аланинаминотрансферазы (АЛТ, также называемой трансаминазой глютаминовой пировиноградной - ТГПВ) или аспарагиновой трансаминазы (ACT, также называемой сывороткой глютаминовой оксалоацетиновой трансаминазы - СГОТ) сыворотки составляет >2,5 х установленного верхнего предела нормы - УВПН (>5 х УВПН для пациентов с матастазами в печень)
Общий билирубин сыворотки >1,5 х установленный нормальный верхний предел (УНВП)
Креатинин в сыворотке >1,5 х УНВП
13. Пациенты на протяжении <5 лет не имеют других первичных злокачественных заболеваний, однако, немеланоматозный кожный рак и цервикальную карциному in situ исключают, только если у пациентов имеется активная форма заболевания.
Размер образца. Для этого исследования требуется примерно 40 пациентов.
Лечение. Антитело AIN457 поставляют в отдельных флаконах объемом 6 мл, содержащих по 50 мг AIN457 в виде лиофилизированной массы. Восстанавливают лиофилизированное антитело, используя 1,2 мл воды для инъекций, и получают прозрачный или опалесцирующий бесцветный раствор. Концентрат раствора для инфузии, содержащий 47 мг/мл, в количестве по меньшей мере 1 мл может быть удален из флакона калибровочной иглой стандарта 20 с присоединенным шприцем. Вещество перерабатывают в изотоническом буфере (pH 5,8±0,5), содержащем гистидин, сахарозу и полисорбат 80, и обязательно разводят в пакете для инфузии объемом 250 мл, содержащем 5% раствор глюкозы, перед введением пациенту.
2
Уровень начальной дозы составляет 0,3 мг/м. При расчете эта доза составляет одну третью часть от дозы низкой токсической (ДНТ) в отношении антитела AIN457 у собак - наиболее чувствительного вида из числа исследованных видов. Поскольку при токсикологическом исследовании ДНТ отсутствовали случаи смертности при введении собакам менее двух доз - 0,1 мг/кг, с одним повторным введением через три недели - установили, что ДНТ составляет предельную величину 0,05 мг/кг. Используя коэффициент 20 для конверсии мг/кг у собак в мг/м у людей, начальную дозу рассчитывают следующим образом:
2
2
1/3×0,05 мг/кг ×20 кг/м=0,3 мг/м
Увеличение дозы проводят по схеме, очерченной выше. Исследование определяет отсрочку лечения, снижение дозы или отмену лечения отдельных пациентов, у которых проявляются гематологические или другие типы токсичности, о которых известно, что они возникают в результате применения антитела AIN457. Лечение продолжают максимум на протяжении 6 циклов, до тех пор, пока у пациента продолжается прогрессирование заболевания или проявляется неприемлемая токсичность. К концу шести циклов пациенты, получившие полный или частичный ответ, и пациенты, у которых стабильно протекает заболевание, могут продолжить дополнительное лечение по протоколу продления по усмотрению исследователя и после одобрения попечителя.
Переменные безопасности. Безопасность антитела AIN457 оценивают по физическим признакам и по основным показателям состояния организма, клиническим лабораторным результатам, неблагоприятным случаям и по применению сопутствующих лекарственных средств. Вредные эффекты выявляют, устанавливают и классифицируют, используя пересмотренные критерии общей токсичности Института рака США.
Переменные эффективности.
Хотя настоящая фаза 1 не предназначена для обнаружения эффективности, действие демонстрируют в качестве функции степени объективного ответа опухоли, а также длительности периода отсутствия прогрессирования и общего выживания. К оценкам базового уровня опухоли относят оптимальную оценку всех умеренных, поддающихся и не поддающихся оценке признаков заболевания. К оцениваемым признакам относят физическое состояние, рентгенограмму грудной клетки, компьютеризированную томограмму грудной клетки, брюшной полости и таза, эхограмму брюшной полости и таза, костную сцинтиграмму с костной рентгенограммой всех известных костных поражений, определение величин маркеров опухолей. Последующие исследования проводят каждые два цикла, а также после отмены лечения.
Объективный статус оценивают клинически, используя рекомендации фирмы Новартис, которые основаны на критериях ответа SWOG Онкологической группы юго-западных штатов США (South-west Oncology Group - SWOG). Все полные и частичные ответы должны быть подтверждены вторично по меньшей мере через четыре недели. Наилучшие ответы подсчитывают для каждого пациента, используя критерии ответа SWOG.
Фармакокинетика
max
max
Z
1/2
A
A
цикл2
цикл1
Приводимые ниже фармакокинетические параметры подсчитывают и анализируют для циклов 1 и 2: t, C, λ, t, AUC и R. R=соотношению AUCτ/ AUCτ которое оценивают в качестве индекса накопления. Предварительная оценка пропорциональности дозы основывается на величине AUC по последней дозе у групп разного дозирования. Корреляции PK/PD с наблюдаемыми токсичностями (например, гематопоэтической) представляют в виде показателя безопасности.
Фармакодинамика
Отбирают образцы опухолей для биопсии при выполнимой и доступной предварительной терапии, а также после первого цикла терапии для выявления биологических факторов, которые коррелируют с эффективностью и ответом.
Методы статистики
Пациентов с неблагоприятными клиническими последствиями, возникшими в результате лечения (особенно пациенты с ограничиваемой дозой токсичностью), или лабораторными показателями, основными показателями состояния организма или нарушениями физического состояния (заново возникающие или ухудшающиеся относительно базового уровня), выявляют и величины отмечают. Степень нарушений классифицируют по группам. Степени объективных ответов (включая и полные, и частичные ответы) отражает принадлежность к группе. Описательную статистику используют для суммирования базовых фармакокинетических параметров по группе.