ПОЛУЧЕНИЕ ЛИНИЙ КАРДИОМИОЦИТОВ ПРЕДСЕРДИЙ И ЖЕЛУДОЧКОВ ИЗ ПЛЮРИПОТЕНТНЫХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК ЧЕЛОВЕКА

1. Популяция кардиомиоцитов, обогащенная кардиомиоцитами желудочков, где указанная популяция по сути не содержит пейсмейкерных клеток.
2. Популяция по п. 1, где указанная популяция лишена пейсмейкерных клеток.
3. Фармацевтическая композиция для лечения сердечной недостаточности или инфаркта миокарда у пациента, при этом фармацевтическая композиция содержит популяцию кардиомиоцитов по п. 1 или 2 и фармацевтически приемлемый носитель.
4. Способ получения популяции кардиомиоцитов, обогащенной кардиомиоцитами желудочков, при этом способ включает: инкубирование плюрипотентных стволовых клеток в среде для индукции мезодермы, при этом указанная среда для индукции мезодермы содержит компонент, представляющий собой BMP, и эффективное количество компонента, представляющего собой активин, достаточное для образования мезодермы желудочков; и затем культивирование указанных инкубированных клеток в подходящей(подходящих) среде(средах) с образованием популяции кардиомиоцитов, обогащенной кардиомиоцитами желудочков.
5. Способ по п. 4, где концентрация компонента, представляющего собой активин, является большей, чем концентрация компонента, представляющего собой BMP.
6. Способ по п. 4, где соотношение компонента, представляющего собой BMP, к компоненту, представляющему собой активин, составляет приблизительно 0,3-1:1, приблизительно 0,5:1 или приблизительно 0,8:1.
7. Способ по любому из пп. 4-6, где концентрацию компонента, представляющего собой активин, определяют с помощью измерения уровня мезодермальных клеток, экспрессирующих CD235a, и сравнения полученного с уровнем мезодермальных клеток, экспрессирующих RALDH2.
8. Способ по любому из пп. 4-7, где концентрацию компонента, представляющего собой активин, выбирают с помощью определения концентрации, которая предпочтительно приводит к большему количеству мезодермальных клеток, экспрессирующих CD235a, по сравнению с мезодермальными клетками, экспрессирующими RALDH2.
9. Способ по любому из пп. 4-8, где компонент, представляющий собой активин, добавляют в количестве от приблизительно 4 нг/мл до приблизительно 20 нг/мл.
10. Способ по любому из пп. 4-9, где концентрация компонента, представляющего собой активин, составляет 6-20 нг/мл.
11. Способ по любому из пп. 4-10, где концентрация компонента, представляющего собой BMP, составляет от приблизительно 3нг/мл до приблизительно 20нг/мл.
12. Способ по любому из пп. 4-11, где концентрация компонента, представляющего собой BMP, составляет 5нг/мл или 10нг/мл.
13. Способ по любому из пп. 4-12, где концентрация компонента, представляющего собой активин, составляет 12 нг/мл.
14. Способ по любому из пп. 4-13, где указанный компонент, представляющий собой BMP, является BMP4.
15. Способ по любому из пп. 4-14, где указанный компонент, представляющий собой активин, является активином А.
16. Способ по любому из пп. 4-15, где по меньшей мере часть указанной полученной популяции кардиомиоцитов применяют для лечения субъекта, нуждающегося в сердечной репарации.
17. Способ по п. 16, где субъект, нуждающийся в сердечной репарации, имеет риск сердечной недостаточности, страдает от сердечной недостаточности и/или страдает от явления, представляющего собой инфаркт миокарда.
18. Способ по п. 17, где указанное лечение осуществляют до, во время или после явления, представляющего собой инфаркт миокарда.
19. Способ получения популяции кардиомиоцитов, обогащенной кардиомиоцитами предсердий, при этом способ предусматривает: инкубирование плюрипотентных стволовых клеток в среде для индукции мезодермы, при этом указанная среда для индукции мезодермы содержит компонент, представляющий собой BMP, и эффективное количество компонента, представляющего собой активин, достаточное для образования мезодермы предсердий; и затем добавление компонента, представляющего собой ретиноевую кислоту, к клеткам, при этом указанное добавление компонента, представляющего собой ретиноевую кислоту, осуществляют во время или после инкубирования в среде для индукции мезодермы; и культивирование инкубированных клеток, в результате чего образуется популяция кардиомиоцитов, обогащенная кардиомиоцитами предсердий.
20. Способ по п. 19, где указанный компонент, представляющий собой ретиноевую кислоту, добавляют в случае, если указанные клетки являются RALDH2-положительными и CD235a-отрицательными.
21. Способ по п. 19 или 20, где соотношение компонента, представляющего собой BMP, к компоненту, представляющему собой активин, составляет приблизительно 1,5 к 1 или больше.
22. Способ по любому из пп. 19-21, где соотношение компонента, представляющего собой BMP, к компоненту, представляющему собой активин, составляет 3:2.
23. Способ по любому из пп. 19-22, где компонент, представляющий собой BMP, присутствует в концентрации от приблизительно 3 нг/мл до приблизительно 100 нг/мл.
24. Способ по любому из пп. 19-23, где компонент, представляющий собой BMP, присутствует в количестве приблизительно 3 нг/мл.
25. Способ по любому из пп. 19-24, где компонент, представляющий собой активин, присутствует в количестве от приблизительно 0,01 нг/мл до приблизительно 6 нг/мл.
26. Способ по любому из пп. 19-25, где компонент, представляющий собой активин, присутствует в количестве приблизительно 2 нг/мл.
27. Способ по любому из пп. 19-26, где компонент, представляющий собой ретиноевую кислоту, является транс-ретиноевой кислотой или ретинолом.
28. Способ по любому из пп. 19-27, где компонент, представляющий собой ретиноевую кислоту, добавляют в концентрации от 50 нм до  5мкΜ.
29. Способ по любому из пп. 19-28, где компонент, представляющий собой ретиноевую кислоту, добавляют в концентрации 500 нМ.
30. Способ по любому из пп. 19-29, где компонент, представляющий собой BMP, является BMP4.
31. Способ по любому из пп. 19-30, где компонент, представляющий собой активин, является активином А.
32. Способ по любому из пп. 19-31, где компонент, представляющий собой BMP, добавляют к среде для индукции мезодермы через один день.
33. Способ по любому из пп. 19-31, где компонент, представляющий собой активин, добавляют к среде для индукции мезодермы через один день.
34. Способ по любому из пп. 19-33, где компонент, представляющий собой ретиноевую кислоту, добавляют в период от приблизительно 3-го дня до 5-го дня осуществления способа.
35. Способ по любому из пп. 19-34, где дополнительный компонент, представляющий собой BMP, не добавляют к среде для индукции мезодермы на 3-ий день осуществления способа.
36. Способ по любому из пп. 19-35, где ингибитор FGF исключают из среды для индукции мезодермы на 3-й день осуществления способа.
37. Способ по любому из пп. 4-36, дополнительно предусматривающий: инкубирование плюрипотентных стволовых клеток в среде, подходящей для образования агрегатов и/или эмбриоидных тел, перед инкубированием плюрипотентных стволовых клеток в среде для индукции мезодермы.
in vitro
38. Способ по любому из пп. 4-37, где клетки, полученные с помощью способа, применяют в анализе для скрининга потенциальных терапевтических соединений.
39. Выделенная популяция кардиомиоцитов, обогащенная кардиомиоцитами предсердий, содержащая по меньшей мере или приблизительно 50% кардиомиоцитов предсердий, по меньшей мере или приблизительно 60% кардиомиоцитов предсердий, по меньшей мере или приблизительно 70% кардиомиоцитов предсердий, по меньшей мере или приблизительно 80% кардиомиоцитов предсердий или по меньшей мере или приблизительно 90% кардиомиоцитов предсердий.
40. Популяция кардиомиоцитов по п. 39, где указанная популяция получена в соответствии со способом по любому из пп. 18-38.
41. Выделенная популяция кардиомиоцитов, обогащенная кардиомиоцитами желудочков, содержащая по меньшей мере или приблизительно 50% кардиомиоцитов желудочков, по меньшей мере или приблизительно 60% кардиомиоцитов желудочков, по меньшей мере или приблизительно 70% кардиомиоцитов желудочков, по меньшей мере или приблизительно 80% кардиомиоцитов желудочков или по меньшей мере или приблизительно 90% кардиомиоцитов желудочков.
42. Популяция по п. 41, где указанная популяция по сути не содержит пейсмейкерных клеток или лишена пейсмейкерных клеток.
43. Популяция по п. 41 или 42, где указанная популяция получена в соответствии со способом по любому из пп. 4-17.
44. Способ лечения субъекта, нуждающегося в сердечной репарации, предусматривающий введение субъекту популяции кардиомиоцитов по любому из пп. 1, 2 или пп. 41-43.
45. Способ по п. 44, где указанный субъект имеет риск сердечной недостаточности, страдает от сердечной недостаточности и/или перенес явление, представляющее собой инфаркт миокарда.
46. Способ по п. 45, где инфаркт миокарда имеет место в желудочке пациента.
47. Популяция кардиомиоцитов по любому из пп. 1, 2 или пп. 40-42 для применения в лечении субъекта, нуждающегося в сердечной репарации.
48. Применение популяции кардиомиоцитов по любому из пп. 1, 2 или пп. 41-43 в получении лекарственного препарата, предназначенного для лечения субъекта, нуждающегося в сердечной репарации.
49. Способ выявления мезодермы предсердий в популяции мезодермальных клеток, предусматривающий выявление RALDH2, где присутствие RALDH2 указывает на мезодерму предсердий.
50. Способ выявления мезодермы желудочков в популяции мезодермальных клеток, предусматривающий выявление CD235a, где присутствие CD235a указывает на мезодерму желудочков.
51. Способ получения популяции кардиомиоцитов, обогащенной пейсмейкерными клетками синоатриального узла или эпикардиальными клетками, при этом способ предусматривает: инкубирование плюрипотентных стволовых клеток в среде для индукции мезодермы, при этом указанная среда для индукции мезодермы дополнительно содержит компонент, представляющий собой BMP, и компонент, представляющий собой активин, в количествах, достаточных для образования ALDH+/CD235- мезодермы; и затем культивирование указанных инкубированных клеток в подходящей(подходящих) среде(средах) с одним или более из WNT, FGFi и BMP с образованием популяции кардиомиоцитов, обогащенной пейсмейкерными клетками синоатриального узла или эпикардиальными клетками.
52. Популяция кардиомиоцитов, полученная с помощью способа по п. 51.
53. Способ скрининга или оценки потенциальной кардиотоксичности исследуемого соединения или средства, предусматривающий стадии воздействия в отношении популяции кардиомиоцитов по любому из предыдущих пунктов, касающихся клеточных популяций, исследуемого соединения и оценки жизнеспособности, сократительной способности, изменений электрических потенциалов и/или других функциональных характеристик клеток.