РЕКОМБИНАНТНАЯ ВИРУСОПОДОБНАЯ ЧАСТИЦА КАПСИДА ЦИРКОВИРУСА (VLP): КОМПОЗИЦИИ, СПОСОБЫ И ПРИМЕНЕНИЯ

1. Система экспрессии у млекопитающих для получения рекомбинантных вирусоподобных частиц (VLP) цирковируса свиней типа 2 (PCV2), при этом указанная система экспрессии содержит:
клетку млекопитающего;
плазмиду, содержащую ген PCV2, кодирующий капсидный белок, при этом ген PCV2 оптимизирован по кодонам;
при этом указанная клетка млекопитающего трансфицирована плазмидой; и
при этом указанная система экспрессии продуцирует рекомбинантные VLP PCV2.
2. Система экспрессии по п. 1, отличающаяся тем, что указанная клетка млекопитающего представляет собой клетку эмбриональной почки человека-293 (HEK-293).
3. Система экспрессии по пп. 1, 2, отличающаяся тем, что ген PCV2 включает сайт распознавания NheI, последовательность Козака и сайт распознавания NotI, и
причем сайт распознавания NheI и последовательность Козака расположены выше стартового кодона гена PCV2, и сайт распознавания NotI встроен после кодона терминации гена PCV2.
4. Система экспрессии по пп. 1-3, отличающаяся тем, что большинство продуцируемых рекомбинантных VLP PCV2 присутствует в ядре клеток млекопитающего.
5. Система экспрессии по пп. 1-4, отличающаяся тем, что указанный капсидный белок содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2.
6. Система экспрессии по пп. 1-5, отличающаяся тем, что указанный капсидный белок кодируется нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO: 1.
7. Система экспрессии по пп. 1-4, отличающаяся тем, что указанный капсидный белок модифицирован сигнальной последовательностью секреции, введенной на NH2-конце капсидного белка.
8. Система экспрессии по п. 7, отличающаяся тем, что указанный капсидный белосодержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4.
9. Система экспрессии по пп. 7, 8, отличающаяся тем, что указанный капсидный белоккодируется нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO: 3.
10. Система экспрессии по пп. 1-9, отличающаяся тем, что продуцируемые рекомбинантные VLP PCV2 выбраны из группы, состоящей из: VLP PCV2a, VLP PCV2b, VLP PCV2c, VLP PCV2d и VLP PCV2e.
11. Система экспрессии по пп. 1-10, отличающаяся тем, что продуцируемые рекомбинантные VLP PCV2 представляют собой VLP PVC2d.
12. Система экспрессии по пп. 1-11, отличающаяся тем, что плазмида представляет собой pcDNA3.4-PCV2.
13. Система экспрессии по пп. 1-12, отличающаяся тем, что ген PCV2 оптимизирован по кодонам с применением оптимизированной по кодонам аминокислотной последовательности, приведенной на Фиг. 1А.
14. Способ получения вирусоподобных частиц (VLP) цирковируса свиней типа 2 (PCV2), включающий:
обеспечение суспензии культивируемых клеток млекопитающего;
трансфекцию указанных клеток млекопитающего плазмидой, содержащей ген PCV2, кодирующий капсидный белок;
добавление натриевой соли вальпроевой кислоты (VPA) к трансфицированным клеткам млекопитающего, причем добавление натриевой соли VPA ингибирует пролиферацию клеток;
центрифугирование и промывание трансфицированных клеток млекопитающего;
суспендирование центрифугированных клеток млекопитающего в фосфатно-солевом буферном растворе (PBS);
осуществление нескольких циклов замораживания и оттаивания клеток млекопитающего;
обработку ультразвуком клеток млекопитающего в нескольких циклах; и
осуществление двух последовательных циклов центрифугирования клеток млекопитающего для получения VLP PCV2,
причем большинство продуцируемых VLP PCV2 присутствуют в ядре клеток млекопитающего.
15. Способ по п. 14, согласно которому стадия центрифугирования и промывания трансфицированных клеток млекопитающего включает:
центрифугирование клеток млекопитающего при 2000 × g в течение 15 мин;
промывание клеток млекопитающего раствором PBS; и
центрифугирование клеток млекопитающего снова при 2000 × g в течение 15 мин.
16. Способ по пп. 14, 15, согласно которому центрифугированные клетки млекопитающего замораживают при приблизительно -80°С и оттаивают при приблизительно 37°С во время циклов замораживания и оттаивания.
17. Способ по пп. 14-16, согласно которому первый из двух последовательных циклов центрифугирования осуществляют при 2000 × g в течение 15 минут, и второй из двух последовательных циклов центрифугирования осуществляют при 8000 × g в течение 15 минут.
18. Способ по пп. 14-17, дополнительно включающий очистку VLP PCV2 с помощью ультрацентрифугирования.
19. Способ по пп. 14-18, согласно которому клетки млекопитающего представляют собой клетки эмбриональной почки человека-293 (HEK-293).
20. Способ по пп. 14-19, согласно которому ген PCV2 включает сайт распознавания NheI, последовательность Козака и сайт распознавания NotI, и
причем сайт распознавания NheI и последовательность Козака расположены выше стартового кодона гена PCV2, и сайт распознавания NotI встроен после кодона терминации гена PCV2.
21. Способ по пп. 14-20, согласно которому плазмида представляет собой pcDNA3.4-PCV2.
22. Способ по пп. 14-21, согласно которому продуцируемые VLP PCV2 выбраны из группы, состоящей из: PCV2a VLPs, PCV2b VLPs, PCV2c VLPs, PCV2d VLPs и PCV2e VLP.
23. Способ по пп. 14-22, согласно которому продуцируемые VLP PCV2 представляют собой VLP PVC2d.
24. VLP PCV2, полученная способом по пп. 14-23.