Диагностика кетоза по биохимическому анализу стекловидного тела глаза

интерес вызывает вердоглобин 8 (или сульфгемоглобин), концентрация которого возрастает при воздействии ряда лекарственных препаратов, а также при ряде заболеваний (хронические колиты).

Полученные результаты опровергают возможность образования МеШЬ при острых отравлениях этанолом. Объясняется это тем, что содержание ацетальдегида в крови весьма незначительное [1], а способность эритроцитов восстанавливать окисленный гем огромна [2]. Повышенное содержание МеШЬ в отдельных случаях можно объяснить индивидуальными особенностями ферментных систем организма. Вместе с тем, в половине всех наблюдений отмечено увеличение содержания 8НЬ, что свидетельствует о разрушении гемоглобина.

Исследование 8НЬ в постмортальном периоде целесообразно проводить в связи с развивающейся гнилостной трансформацией крови. Для уточнения влияния условий хранения крови на содержание МеШЬ и 8НЬ в постмортальном периоде проведено исследование 10 образцов крови, хранившейся в герметически закрытых флаконах при температуре 4-5°С (1 группа) и 10 образцов крови, хранившейся при комнатной температуре (18-20°С) в открытых флаконах (2 группа).

Полученные нами результаты показывают, что при хранении крови в герметически закрытых флаконах при температуре 4-5°С содержание МеШЬ практически не увеличивается в течение месяца, а содержание 8НЬ достоверно увеличивается только в концу месяца хранения (таблица 2).

Таблица 2

Содержание метгемоглобина и сульфгемоглобина при хранении крови при 4-5°С.

1 сутки 13-14 сутки 25 - 27 сутки

MetHb 0,47 ± 0,06 0,66 ± 0,24 0,64 ± 0,16

Р Р > 0,1 Р > 0,1

SHb 0,06 ± 0,06 0,60 ± 0,53 0,93 ± 0,31

Р Р > 0,1 Р < 0,05

При комнатной температуре содержание МеШЬ и 8НЬ имеет тенденцию к увеличению к 3 и 10 суткам, но данные изменения недостоверны (таблица 3). Увеличение содержания МеШЬ может быть связано прежде всего с истощением восстановительных ферментных систем

Таблица 3

Содержание метгемоглобина и сульфгемоглобина при хранении крови при 18-20°С.

1 сутки 3 сутки 10 сутки

MetHb 0,58 ± 0,13 0,87 ± 0,16 1,19 ± 0,28

Р Р > 0,1 Р > 0,05

Р Р > 0,1 *

SHb 0,63 ± 0,28 1,58 ± 0,36 1,03 ± 0,57

Р Р > 0,05 Р > 0,1

Р Р > 0,1 *

* - сравнение показателей на 3 и 10 сутки.

крови и соответственно увеличением окисления гемоглобина. Данное утверждение основано на анализе динамики содержания МеШЬ - стабильное увеличение выявлено в 5 случаях, в остальных случаях наблюдалось как увеличение, так и снижение показателя. Увеличение содержания 8НЬ связано с распадом гемоглобина в процессе гнилостной трансформации крови. При анализе динамики к 3 суткам отмечается увеличение показателя в 8 случаях из 10, в дальнейшем, к 10 суткам, увеличение отмечено только в 2 случаях, в остальных наблюдается стабилизация или некоторое снижение показателя, вероятнее всего, за счет распада вердоглобина.

Таким образом, при острых отравлениях этанолом содержание метгемоглобина не отличается от обычных концентраций данного деривата гемоглобина и не может быть использовано для диагностики.

Исследование крови на наличие метгемоглобина и сульфгемоглобина необходимо проводить сразу после забора крови, а при невозможности проведения данного исследования следует хранить образец крови в герметически закрытой емкости в холодном месте, не выше 4-5°С (в холодильнике), во избежание ложно завышенных результатов.

В описанном выше наблюдении обнаруженное повышенное содержание метгемоглобина в крови у мужчины так и осталось не выясненным — связано ли это с врожденной метгемоглоблинемией, не установленной при жизни, или все же имело место неустановленное метгемог-лобинобразующее вещество. Незначительное повышение как метгемоглобина, так и сульфгемоглобина в крови у женщины связано с гнилостной трансформацией крови.

Литература:

1. Ацетальдегид и некоторые биохимические параметры при алкогольных интоксикациях /Васильева Е. В., Морозов Ю. Е., Лопаткин

О. Н. и др. // Судебно-медицинская экспертиза. - 2004. —№2, — С. 23-27.

2. Герман С. В. Метгемоглобинемии: особенности патогенеза и клиники //Клиническая медицина. - 1999. —№4. — С. 9-12.

3. Хохлов В. В., Кузнецов Л. Е. Судебная медицина. Руководство. - 1998. - 800 с.

© П.А. Акимов, Н.А. Терёхина, 2010 УДК 340.6

П.А. Акимов, Н.А. Терёхина ДИАГНОСТИКА КЕТОЗА ПО БИОХИМИЧЕСКОМУ АНАЛИЗУ СТЕКЛОВИДНОГО ТЕЛА ГЛАЗА

ГУЗОТ «Пермское краевое бюро судебно-медицинской экспертизы» (нач. - к.м.н. В.Н. Коротун); Кафедра биохимии (зав. кафедрой - проф. Н.А. Терёхина) ГОУ ВПО «Пермская государственная медицинская академия имени академика Е.А. Вагнера Росздрава»

Изучено содержание ацетоуксусной кислоты в стекловидном теле глаза от 95 больных сахарным диабетом и 66 лиц, не страдавших при жизни сахарным диабетом. Разработан способ постмортальной диагностики кетоза по биохимическому анализу стекловидного тела глаза.

Ключевые слова: кетоновые тела, стекловидное тело глаза.

THE DIAGNOSIS OF KETOSIS BY VITREOUS HUMOR BIOCHEMICAL ANALYSIS P.A. Akimov, N.A. Terekhina

Acetoacetic acid concentration in vitreous humor was determined in 95 cases death from diabetes mellitus and in 66 cases death without diabetes mellitus. The method of postmortem biochemical ketosis diagnostic of vitreous humor was suggested.

Key words: ketone bodies, vitreous humor.

Кетозом называют состояние при котором содержание кетоновых тел (КТ) в крови выше 7 ммоль/л [2]. Концентрация КТ представляет собой баланс между образованием их в печени и утилизацией периферическими тканями. Соотношение между ацетоацетатом и гидроксибутиратом (кетоновыми телами) в крови сильно варьирует - от 1 : 1 в норме до 1 : 16 при тяжелом кетозе у больных [4]. В постмортальном периоде использование крови ограничено ввиду развивающегося гемолиза крови, поэтому альтернативным объектом исследования было выбрано стекловидное тело глаза. Стекловидное тело находится в замкнутом пространстве, ограниченном плотными, устойчивыми к гниению оболочками, меньше подвержено нарушению водного баланса. Использование этого объекта исследования возможно от нескольких часов до 2 недель постмортального периода [1, 5]. Ранее стекловидное тело было использовано в диагностике алкоголизма, наркомании, отравлений, сахарного диабета и установления давности наступления смерти [5, 7, 8].

Цель нашей работы - использовать биохимический анализ стекловидного тела глаза для разработки способа постмортальной диагностики кетоза.

Материалы и методы.

Объектом исследования служили стекловидные тела глаз от 95 больных сахарным диабетом и 66 лиц, не страдавших при жизни сахарным диабетом. Определение содержания кетоновых тел в виде ацетоуксусной кислоты проводилось полуколичественным методом с применением индикаторных полосок «Биоскан-кетоны». Анализ проводили при комнатной температуре. Индикаторную полоску смачивали исследуемой пробой и через две минуты регистрировали изменение окрашивания. Сравнивали со шкалой и оценивали результат. Минимальное изменение окраски расценивалось по цветной шкале как 0,5 ммоль/л. При получении положительного результата делали ряд разведений исследуемого образца физиологическим раствором в 2, 3, 4 и т.д. раз и вновь проводили цветную реакцию. При полуколичественной оценке результата учитывали разведение пробы.

Результаты и обсуждение.

В таблице 1 представлено содержание ацетоацетата в стекловидном теле лиц, не страдавших при жизни сахарным диабетом в зависимости от причины смерти.

Таблица 1

Содержание ацетоацетата в стекловидном теле лиц, не страдавших при жизни сахарным диабетом в зависимости от причины смерти

Среди лиц этой группы кетоновые тела в стекловидном теле практически отсутствовали; только в 5 случаях из 66 отмечено наличие ацетоуксусной кислоты в концентрации, не превышающей 1,0 ммоль/л (табл. 1). Аналогичные показатели отмечены в группах больных СД, скончавшихся в результате сердечной патологии, травм, эндогенной интоксикации, прочих заболеваний и гипог-ликемической комы (табл. 2). Интенсивность кетогенеза и скорость поглощения кетокислот тканями - величины крайне вариабельные, индивидуальные, не поддающиеся прогнозу и количественной оценке [3]. Умеренный кетоз, сопровождающие длительное голодание или хроническое недоедание представляет собой не патологическое расстройство энергетического обмена, а компенсаторноприспособительную реакцию. Этим можно объяснить единичные случаи увеличения ацетоацетата в стекловидном теле.

В таблице 2 представлено содержание ацетоацетата в стекловидном теле больных сахарным диабетом в зависимости от причины смерти. В группе больных СД, скончавшихся в результате диабетической комы с гипергликемией (гиперосмолярной некетоацидотической комы) содержание ацетоацетата наблюдалось в половине всех случаев, но максимальное содержание не превышало 2,0 ммоль/л (табл. 2). Резкое увеличение содержания ацетоацетата в стекловидном теле наблюдалось у всех больных СД, скончавшихся в результате диабетической комы с кетоацидозом (кетоацидотической комы) - 5,8 ± 1,1 (от 3,0 до 10,5) ммоль/л. Наибольшее содержание ацетоацетата отмечено в группе больных СД, скончавшихся от кетоа-цидотической комы в сочетании с гипергликемией (гипе-росмолярной кетоацидотической комы) - 10,3 ± 3,1 (от 4,5 до 22,0) ммоль/л. Аналогичные результаты были описаны в литературе по отношению к в-оксибутирату [6]. Было отмечено, что в некоторых случаях в группах больных хроническим алкоголизмом и больных СД наблюдалось резкое повышение кетоновых тел. Авторы указывают, что это может быть использовано для объяснения внезапной смерти в результате кетоацидотической комы.

Выводы.

Таким образом, разработан способ постморталь-ной диагностики кетоза по биохимическому анализу стекловидного тела глаза. Установлено, что определение

Таблица 2

Содержание ацетоацетата в стекловидном теле больных

сахарным диабетом в зависимости от причины смерти

Сердечная патология Травмы Эндогенная интоксикация Прочие заболевания Гипогликемическая кома я а к с е ч иа мм s 1 ик лг е п пиГ Диабетический кетоацидоз Г Г + с « я

n 36 5 7 3 7 23 7 7

+ рез. 6 1 0 0 0 10 7 7

min - 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 3,0 4,5

Max - 1,5 - 0,5 - 0,0 - 0,0 - 0,0 - 2,0 - 10,5 - 22,0

Сердечная патология травмы Переохлаждение организма Отравления Механическая асфиксия Гипогликемия Прочие заболевания О Г W С м

n 28 14 5 6 5 1 7 66

+ рез. 2 0 1 1 0 0 1 5

min - 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0

Max - 1,0 - 0,0 - 1,0 - 1,0 - 0,0 0,0 - 0,5 - 1,0

содержания ацетоуксусной кислоты в стекловидном является очень информативным. Способ гарантирует

теле для постановки диагноза кетоацидотической комы в высокую точность и достоверность результата, в то время

постмортальном периоде у больных сахарным диабетом как затраты на проведение анализа минимальны.

Литература:

1. Акимов П.А., Терёхина Н.А. Содержание глюкозы в стекловидном теле глаза при различных видах наступления смерти // Акту-

альные вопросы современной биохимии. -Всеросс. научно-практич. конф. - Киров, 2007. - С. 35-36.

2. Аникеева С.П., Панченко Л.Ф., Штернберг Ю.М. Биохимические и регуляторные аспекты функции кетоновых тел в организме

(обзор) //Вопр. мед. химии. - 1987. -№6.-С. 11-23.

3. Лукьянчикое B.C. Кетоз и кетоацидоз. Патобиохимический и клинический аспект //Русский медицинский журнал. - 2004. - Т. 12,

№ 23. - С. 1301-1305.

4. Марри Р., ГреннерД., Мейес П., Родуэл В. Биохимия человека: Пер. с англ. - М., 1993. - Т. 1-2.

5. Терёхина Н.А., Акимов П.А. Биохимический анализ стекловидного тела глаза в постмортальной диагностике диабетических ком

//Патологическая физиология и экспериментальная терапия. - 2005. -№2.-С. 24-25.

6. Pounder D.J., Stevenson R.J., Taylor К.К. Alcoholic ketoacidosis at autopsy // J. Forensic Sci. - 1998. - Vol. 43, №4.-P. 812-816.

7. A new perspective in the estimation of postmortem interval (PMI) based on vitreous / J.I. Munoz, J.M. Suarez-Penaranda, X.L. Otero et al.

//J.Forensic Sci. - 2001. - Vol. 46, №2.-P. 209-214.

8. Vitreous humor carbohydrate-deficient transferrin concentrations in the postmortem diagnosis of alcoholism / E. Osuna, M.D. Perez-Carceles, M. Moreno et al. // Forensic Sci. Int. - 2000. - Vol. 108, №3.-P. 205-213.

© С.С. Катаев, Е.А. Крылова, Н.Б. Зеленина, Л.Н. Курдина, 2010 УДК 340.67:543:615.214.24

С.С. Катаев, Е.А. Крылова, Н.Б. Зеленина, Л.Н. Курдина ИДЕНТИФИКАЦИЯ МЕТИЛЕНДИОКСИПИРОВАЛЕРОНА И ЕГО МЕТАБОЛИТОВ В МОЧЕ МЕТОДОМ ГХ-МС

ГУЗОТ «Пермское краевое бюро судебно-медицинской экспертизы» (нач. - к.м.н. В.Н. Коротун);

ГУЗ «Краевой наркологический диспансер №1» (гл. врач - С.Н. Еловиков), г. Пермь

В статье представлены основные направления метаболической трансформации метилендиоксипиро-валерона (МДПВ), соединения с психостимулирующей активностью. Проведена оценка наиболее подходящих приемов для изолирования метаболитов МДПВ из мочи. При этом установлено, что для этой цели предпочтительнее проведение ферментативного гидролиза с последующей твердофазной экстракцией. Выполнена идентификация основных метаболитов МДПВ в моче потребителей, полученные газохроматографические и масс-спектрометрические характеристики некоторых производных метаболитов МДПВ суммированы и представлены в виде сводных данных, которые могут быть полезны в практике химико-токсикологического анализа.

Ключевые слова: метилендиоксипировалерон (МДПВ), метаболизм, ферментативный гидролиз, твердофазная экстракция, газовая хроматография - масс-спектрометрия.

IDENTIFICATION OF METHYLENEDIOXYPYROVALERONE AND ITS METABOLITES IN URINE BY GC-MS S.S. Kataev, E.A. Krilova, N.B. Zelenina, L.N. Kudrina

The basic pathways of the metabolic transformation of methylenedioxypyrovalerone (MDPV), the psychoactive chemical substance, are presented in this paper. The evaluation of the most applicable means for the isolation of the metabolites of MDPV from urine is described. It appears that performing of enzyme hydrolysis with following solid phase extraction is preferential for this purpose. The identification of the main metabolites of MDPV in urine of the users has performed and received gas chromatographic and mass spectral characteristics of the some derivates of metabolites of MDPV are summarized and shown as essential data which can be useful in chemical and toxicological practice.

Key words: methylenedioxypyrovalerone (MDPV), metabolism, enzyme hydrolysis, solid phase extraction, gas chromatography - mass-spectrometry.

В последнее время широкое распространение в возникновения зависимости к данному препарату [3]. В

Пермском крае получили различные психотропные России пировалерон отнесен к психотропным веществам

синтетические субстанции, реализуемые под видом удоб- и включен в Список III Переченя наркотических средств,

рений, соли для ванн или ароматических отдушек. Одним психотропных веществ и их прекурсоров, подлежащих

из часто встречающихся соединений является метилен- контролю в Российской Федерации [1]. Сам МДПВ в РФ

диоксипировалерон (МДПВ), а так же его смеси с другими не включен в перечни и списки контролируемых веществ,

психоактивными веществами и наполнителями. чем пользуются недобросовестные предприимчивые

МДПВ, химическое название 1-(1,3-бензодиоксол-5- субъекты. В то же время, например, в Великобритании, ил)-2-(1-пирролидинил)-1-пентанон (CAS № 687603-66- благодаря деятельности Консультативного совета по

3), является психотропным веществом, возбуждающим злоупотреблению наркотиками, МДПВ с 16 апреля 2010

ЦНС, и действует как ингибитор обратного нейрональ- г. отнесен к контролируемым веществам (класс В) [4],

ного захвата норадреналина и допамина. МДПВ не нашел аналогично Дании и Швеции.

широкого применения в медицине. За первое полугодие 2010 г. в химико-токсикологи-

Во Франции и Германии в качестве психостимуля- ческой лаборатории «Краевого наркологического дис-

тора и аноректика использовался пировалерон (аналог пансера №1» зафиксированы случаи острых отравлений

МДПВ), при чем описаны случаи злоупотреблений и МДПВ и обнаружения данного вещества в моче водителей