СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БЕЛКОВ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ СОЕДИНЕНИЙ, ПРЕПЯТСТВУЮЩИХ СТАРЕНИЮ

1. Способ получения белка в культуре клеток, включающий следующие этапы:
культивирование клеток млекопитающих, которые содержат ген, кодирующий белок, представляющий интерес, причем экспрессию гена осуществляют в условиях культуры клеток, в культуральной среде, содержащей соединение, препятствующее старению; и
поддержание культуры в условиях и в течение времени, достаточных для экспрессии белка;
при этом клеточная культура демонстрирует улучшенную характеристику культуры клеток, которая отличается от соответствующей характеристики культуры клеток, которую наблюдали бы в идентичных в остальном условиях в идентичной в остальном среде, в которой отсутствует соединение, препятствующее старению;
причем улучшенную характеристику культуры клеток выбирают из группы, состоящей из повышенного титра, повышенной удельной продуктивности клеток, повышенной жизнеспособности клеток, повышенной интегральной плотности жизнеспособных клеток, уменьшенного накопления высокомолекулярных агрегатов, уменьшенного накопления кислотных молекул, и их комбинаций.
2. Способ по п.1, отличающийся тем, что соединение, препятствующее старению, выбрано из группы, состоящей из карнозина, ацетил-карнозина, гомо-карнозина, ансерина и β-аланина и их комбинаций.
3. Способ по п.1, отличающийся тем, что соединение, препятствующее старению, представляет собой карнозин.
4. Способ по любому из пп.1, 2 или 3, отличающийся тем, что соединение, препятствующее старению, присутствует в культуральной среде в концентрации приблизительно от 5 мМ до 100 мМ.
5. Способ по любому из пп.1, 2 или 3, отличающийся тем, что в клеточную культуру дополнительно вносят дополнительные компоненты.
6. Способ по п.5, отличающийся тем, что дополнительные компоненты вносят в питательной среде.
7. Способ по п.6, отличающийся тем, что дополнительные компоненты выбирают из группы, состоящей из гормонов и/или других факторов роста, отдельных ионов (таких как натрий, хлор, кальций, магний и фосфаты), буферов, витаминов, нуклеозидов или нуклеотидов, микроэлементов (неорганические вещества, обычно присутствующие в очень небольших конечных концентрациях), аминокислот, липидов, глюкозы или других источников энергии и их комбинаций.
8. Способ по п.7, отличающийся тем, что дополнительные компоненты включают соединение, препятствующее старению.
9. Способ получения белка, включающий следующие этапы:
культивирование клеток млекопитающих, которые содержат ген, кодирующий белок, представляющий интерес, в культуральной среде, причем экспрессию гена осуществляют в условиях культуры клеток, при первой температуре или в интервале температур, приемлемых для роста клеток в фазе роста;
изменение температуры или интервала температур культуральной среды до второй температуры или интервала температур, приемлемого для получения белка;
культивирование клеток-хозяев в культуральной среде при второй температуре или в интервале температур на протяжении переходной фазы и до фазы образования продукта;
при этом соединение, препятствующее старению, вносят в клеточную культуру таким образом, что культура клеток демонстрирует улучшенную характеристику культуры клеток, которая отличается от соответствующей характеристики культуры клеток, которую наблюдали бы в идентичных в остальном условиях в идентичной в остальном среде, в которой отсутствует соединение, препятствующее старению;
причем улучшенную характеристику культуры клеток выбирают из группы, состоящей из: повышенного титра, повышенной удельной продуктивности клеток, повышенной жизнеспособности клеток, повышенной интегральной плотности жизнеспособных клеток, уменьшенного накопления высокомолекулярных агрегатов, уменьшенного накопления кислотных молекул, и их комбинаций.
10. Способ по п.9, отличающийся тем, что соединение, препятствующее старению, вносят в культуральную среду в начале процесса культивирования клеток.
11. Способ по п.9, отличающийся тем, что соединение, препятствующее старению, вносят в культуральную среду в течение фазы роста.
12. Способ по пп.9, 10 или 11, отличающийся тем, что соединение, препятствующее старению, вносят в культуральную среду в течение переходной фазы.
13. Способ по любому из пп.9, 10 или 11, отличающийся тем, что соединение, препятствующее старению, вносят в культуральную среду в течение фазы образования продукта.
14. Способ по любому из пп.9, 10 или 11, отличающийся тем, что соединение, препятствующее старению, выбирают из группы, состоящей из карнозина, ацетил-карнозина, гомо-карнозина, ансерина и β-аланина и их комбинаций.
15. Способ по п.9, отличающийся тем, что соединение, препятствующее старению, представляет собой карнозин.
16. Способ по любому из пп.9, 10 или 11, отличающийся тем, что соединение, препятствующее старению, присутствует в культуральной среде в концентрации приблизительно от 5 мМ до 100 мМ.
17. Способ по п.16, отличающийся тем, что в клеточную культуру дополнительно вносят дополнительные компоненты.
18. Способ по п.17, отличающийся тем, что дополнительные компоненты вносят в питательной среде.
19. Способ по п.18, отличающийся тем, что дополнительные компоненты выбирают из группы, состоящей из гормонов и/или других факторов роста, определенных ионов (таких как натрий, хлор, кальций, магний и фосфаты), буферов, витаминов, нуклеозидов или нуклеотидов, микроэлементов (неорганические вещества обычно присутствующие в очень небольших конечных концентрациях), аминокислот, липидов, глюкозы или других источников энергии и их комбинаций.
20. Способ по пп.17, 18 или 19, отличающийся тем, что дополнительные компоненты включают соединение, препятствующее старению.
21. Способ по любому из пп.1-3, 6-11, 15 или 17-19, отличающийся тем, что получаемый белок является гетерологичным по отношению к клеткам млекопитающих.
22. Способ по любому из пп.1-3, 6-11, 15 или 17-19, отличающийся тем, что клетки млекопитающих представляют собой клетки СНО.
23. Белок, полученный согласно способу по любому из предыдущих пунктов.
24. Белок по п.23, отличающийся тем, что белок представляет собой антитело.
25. Белок по п.24, отличающийся тем, что антитело представляет собой анти-GFD-8 антитело, выделенное из группы, состоящей из Муо29, Муо28, Муо22 и их комбинаций.
26. Способ получения белка по любому из пп.1-3, 6-11, 15 или 17-19, дополнительно включающий этап выделения белка из культуральной среды.
27. Способ по п.26, отличающийся тем, что белок дополнительно очищают или перерабатывают в лекарственную форму.
28. Способ по п.27, отличающийся тем, что белок изготавливают в виде фармацевтической композиции.
29. Способ получения белка, включающий
культивирование клеток млекопитающих, трансформированных геном, кодирующим белок, представляющий интерес, в культуральной среде;
добавление в указанную культуральную среду эффективного количества соединения, препятствующего старению;
поддержание указанной культуральной среды до накопления указанного белка, представляющего интерес;
выделение указанного белка, представляющего интерес;
где продукция указанного белка, представляющего интерес, повышена, жизнеспособность клеток сохранена и содержание высокомолекулярных агрегатов снижено по сравнению с получением указанного белка, представляющего интерес, в отсутствие соединения, препятствующего старению, в идентичных в остальном условиях.
30. Способ по п.29, отличающийся тем, что указанная клетка-хозяин представляет собой клетку млекопитающего.
31. Способ по п.30, отличающийся тем, что указанная клетка млекопитающего представляет собой клетку СНО.
32. Способ по п.29, отличающийся тем, что белок, представляющий интерес, представляет собой антитело.
33. Способ по п.32, отличающийся тем, что указанное антитело принадлежит к изотипу IgG.
34. Способ по п.32, отличающийся тем, что указанное антитело представляет собой рекомбинантное антитело человека.
35. Способ по п.32, отличающийся тем, что указанное антитело специфическим образом взаимодействует с фактором дифференцировки роста-8 (GDF-8) или его эпитопом.
36. Способ по п.32, отличающийся тем, что указанное антитело специфическим образом связывает BMP-11.
37. Способ по п.29, отличающийся тем, что соединение, препятствующее старению, представляет собой карнозин или аналог карнозина.
38. Способ по п.37, отличающийся тем, что указанный аналог карнозина выбран из группы, состоящей из ацетил-карнозина, гомо-карнозина, ансерина и β-аланина и их комбинаций.
39. Способ по п.29, отличающийся тем, что соединение, препятствующее старению, присутствует в концентрации приблизительно от 5 мМ до 100 мМ.
40. Способ по п.29, отличающийся тем, что соединение, препятствующее старению, присутствует в концентрации приблизительно от 10 мМ до 40 мМ.
41. Способ по п.29, отличающийся тем, что соединение, препятствующее старению, присутствует в концентрации приблизительно 20 мМ.
42. Способ по п.29, отличающийся тем, что соединение, препятствующее старению, добавляют в комбинации с питательной средой.
43. Способ по п.29, отличающийся тем, что указанная жизнеспособность клеток к моменту сбора сохраняется.
44. Способ по п.29, отличающийся тем, что продукция указанного белка, представляющего интерес, повышена.
45. Способ по п.29, отличающийся тем, что специфичная клеточная продуктивность указанного белка, представляющего интерес, повышена.
46. Способ по п.29, отличающийся тем, что качество указанного белка, представляющего интерес, повышено за счет снижения количества высокомолекулярных агрегатов.
47. Способ по п.29, отличающийся тем, что качество указанного белка, представляющего интерес, повышено за счет снижения количества кислотных молекул.
48. Способ получения белка, включающий
культивирование линии клеток в культуральной среде при температуре, приемлемой для роста клеток в фазе роста
изменение указанной температуры указанной культуральной среды по крайней мере один раз на температуру, приемлемую для получения белка;
культивирование указанных клеток-хозяев в культуральной среде при указанной температуре, приемлемой для получения белка на протяжение переходной фазы и до фазы образования продукта;
добавление указанного соединения, препятствующего старению, в культуральную среду в течение переходной фазы в концентрации, при которой продукция указанного белка, представляющего интерес, повышена, жизнеспособность клеток сохранена, и содержание высокомолекулярных агрегатов снижено, по сравнению с получением указанного белка, представляющего интерес, в отсутствие соединения, препятствующего старению, в идентичных в остальном условиях.
49. Способ по п.48, отличающийся тем, что указанное соединение, препятствующее старению, присутствует в концентрации приблизительно от 5 мМ до 100 мМ.
50. Способ по п.48, отличающийся тем, что указанное соединение, препятствующее старению, присутствует в концентрации приблизительно от 10 мМ до 40 мМ.
51. Способ по п.48, отличающийся тем, что указанное соединение, препятствующее старению, присутствует в концентрации приблизительно 20 мМ.