АНТИТЕЛА К PD-1 И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ
ANTIBODIES TO PD-1 AND THEIR APPLICATION

ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА НА РОДСТВЕННЫЕ ЗАЯВКИ
[0001] В заявке испрашивается приоритет по предварительной патентной заявке США № 62/416,602, поданной 2 ноября 2016 года, которая включена посредством ссылки во всей ее полноте с любой целью.
ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ
[0002] Предлагаются антитела, которые связываются с белком запрограммированной смерти клеток 1 (PD-1). Также предлагаются способы лечения, включающие введение анти-PD-1 антител.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
[0003] Белок запрограммированной смерти клеток 1 (PD-1) является ингибирующим членом семейства рецепторов CD28, которое также включает CD28, CTLA-4, ICOS и BTLA. PD-1 экспрессируется на поверхности активированных В-клеток, Т-клеток и миелоидных клеток. PD-1 содержит мембранопроксимальный иммунорецепторный ингибирующий мотив на основе тирозина (ITIM) и мембранодистальный мотив переключения на основе тирозина (ITSM). PD-1, хотя и является структурно сходным с CTLA-4, лишен мотива MYPPY, который является критическим для связывания В7-1 и В7-2. Кроме того, хотя CD28, ICOS и CTLA-4 (другие члены семейства CD28) все имеют неспаренный остаток цистеина, дающий возможность гомодимеризации, предполагается, что PD-1 существует в виде мономера, не имея неспаренного остатка цистеина, характерного для других членов семейства CD28. Рецептор PD-1 имеет два лиганда, PD-лиганд-1 (PD-L1) и PD-L2. Термин «PD-L1» относится к лиганду рецептора PD-1, также известному как CD274 и B7H1. PD-L1 представляет собой белок из 290 аминокислот с внеклеточным IgV-подобным доменом, внеклеточным IgC-подобным доменом, трансмембранным доменом и высококонсервативным внутриклеточным доменом из приблизительно 30 аминокислот. PD-L1 конститутивно экспрессируется на многих клетках, например антигенпрезентирующих клетках (например, дендритных клетках, макрофагах и В-клетках), а также на гемопоэтических и негемопоэтических клетках (например, эндотелиальных клетках сосудов, островках Лангерганса и иммунологически привилегированных областях). Термин «PD-L2» относится к лиганду рецептора PD-1, также известному как CD273 и B7-DC. У людей PD-L2 имеет внеклеточный IgV-подобный домен, внеклеточный IgC-подобный домен, трансмембранный домен и внутриклеточный домен из приблизительно 30 аминокислот. PD-L2 имеет более ограниченную экспрессию, чем PD-L1, с его экспрессией в значительной степени ограниченной гемопоэтическими клетками, включая макрофаги, дендритные клетки, некоторые субпопуляции В-клеток и тучные клетки костного мозга.

[0004] PD-1 функционирует как иммунная контрольная точка и предотвращает активацию Т-клеток. Антагонисты PD-1 активируют иммунную систему для атаки опухолей и продемонстрировали успех в лечении рака, а в некоторых случаях и с меньшей токсичностью, чем другие химиотерапевтические лекарственные средства. Антагонисты PD-1 могут также использоваться в схемах лечения в комбинации с другими химиотерапевтическими агентами. Одобренные в настоящее время антагонисты PD-1 включают анти-PD-1 антитела, Opdivo и Keytruda, и анти-PD-1 антитело, Tecentriq™.
[0005] Сохраняется необходимость в дополнительных антагонистах PD-1 для лечения рака и других заболеваний и расстройств.
Сущность изобретения
[0006] Предлагаются антитела, которые связываются с белком запрограммированной смерти клеток 1 (PD-1), причем антитела связываются с PD-1 человека и PD-1 мыши, и при этом антитела блокируют связывание PD-L1 и/или PD-L2 с PD-1.
[0007] В некоторых вариантах осуществления предлагается выделенное антитело, которое связывается с белком запрограммированной смерти клеток 1 (PD-1), причем антитело связывается с эпитопом, содержащим аминокислоты с 126 по 136 PD-1 человека. В некоторых вариантах осуществления аминокислоты с 126 по 136 пронумерованы в соответствии с SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления антитело связывается с PD-1 человека с SEQ ID NO: 382 с по меньшей мере в 10 раз большей аффинностью, чем данное антитело связывается с одним или более вариантами PD-1, выбранными из I126A, L128A, A132L, I134A и E136A.
[0008] В некоторых вариантах осуществления антитело:
a) связывается с ECD-Fc PD-1 человека с SEQ ID NO: 401 с по меньшей мере в 10 раз большей аффинностью, чем данное антитело связывается с вариантом PD-1 I126A ECD-Fc (SEQ ID NO: 389); и/или
b) связывается с ECD-Fc PD-1 человека с SEQ ID NO: 401 с по меньшей мере в 10 раз большей аффинностью, чем данное антитело связывается с вариантом PD-1 L128A ECD-Fc (SEQ ID NO: 390); и/или
c) связывается с ECD-Fc PD-1 человека с SEQ ID NO: 401 с по меньшей мере в 10 раз большей аффинностью, чем данное антитело связывается с вариантом PD-1 A132L ECD-Fc (SEQ ID NO: 391); и/или
d) связывается с ECD-Fc PD-1 человека с SEQ ID NO: 401 с по меньшей мере в 10 раз большей аффинностью, чем данное антитело связывается с вариантом PD-1 I134A ECD-Fc (SEQ ID NO: 392); и/или
e) связывается с ECD-Fc PD-1 человека с SEQ ID NO: 401 с по меньшей мере в 10 раз большей аффинностью, чем данное антитело связывается с вариантом PD-1 E136A ECD-Fc (SEQ ID NO: 393).
[0009] В некоторых вариантах осуществления антитело связывается с ECD-Fc PD-1 мыши с SEQ ID NO: 403. В некоторых вариантах осуществления антитело связывается с ECD-Fc PD-1 мыши с SEQ ID NO: 403 с по меньшей мере в 10 раз большей аффинностью, чем данное антитело связывается с PD-1 мыши H129P ECD-Fc (SEQ ID NO: 394). В некоторых вариантах осуществления антитело связывается с ECD-Fc варианта PD-1 крысы P129H (SEQ ID NO: 397) с по меньшей мере в 10 раз большей аффинностью, чем данное антитело связывается с PD-1 крысы ECD-Fc (SEQ ID NO: 405).
[0010] В различных вариантах осуществления аффинность определяется биослойной интерферометрией.
H
L
H
L
[0011] В некоторых вариантах осуществления антитело содержит (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 21; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 22; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 23; (d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 25; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 26; и (f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 27. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи (V), которая идентична на по меньшей мере 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 20, и вариабельную область легкой цепи (V), которая идентична на по меньшей мере 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 24. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит V, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 20, и V, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 24.
[0012] В некоторых вариантах осуществления предлагается антитело, которое связывается с белком запрограммированной смерти клеток 1 (PD-1), причем антитело содержит:
i) (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7; (d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10; и (f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 11; или
ii) (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 13; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 14; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 15; (d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 17; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 18; и (f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 19; или
iii) (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 21; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 22; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 23; (d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 25; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 26; и (f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 27; или
iv) (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 29; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 30; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 31; (d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 33; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 34; и (f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 35; или
v) (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 37; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 38; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 39; (d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 41; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 42; и (f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 43; или
vi) (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 45, 53, 61, 69, 77, 85, 93, 101, 109 и 117; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 46, 54, 62, 70, 78, 86, 94, 102, 110 и 118; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 47, 55, 63, 71, 79, 87, 95, 103, 111 и 119; (d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 49, 57, 65, 73, 81, 89, 97, 105, 113 и 121; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 50, 58, 66, 74, 82, 90, 98, 106, 114 и 122; и (f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 51, 59, 67, 75, 83, 91, 99, 107, 115 и 123; или
vii) (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 125, 133, 141, 149, 157, 165, 173, 181, 189, 197, 205, 213, 221, 229, 237, 245, 253, 261, 269, 277 и 285; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 126, 134, 142, 150, 158, 166, 174, 182, 190, 198, 206, 214, 222, 230, 238, 246, 254, 262, 270, 278 и 286; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 127, 135, 143, 151, 159, 167, 175, 183, 191, 199, 207, 215, 223, 231, 239, 247, 255, 263, 271, 279 и 287; (d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 129, 137, 145, 153, 161, 169, 177, 185, 193, 201, 209, 217, 225, 233, 241, 249, 257, 265, 273, 281 и 289; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 130, 138, 146, 154, 162, 170, 178, 186, 194, 202, 210, 218, 226, 234, 242, 250, 258, 266, 274, 282, и 290; и (f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 131, 139, 147, 155, 163, 171, 179, 187, 195, 203, 211, 219, 227, 235, 243, 251, 259, 267, 275, 283 и 291; или
viii) (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 293, 301, 309 и 317; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 294, 302, 310 и 318; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 295, 303, 311 и 319; (d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 297, 305, 313 и 321; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 298, 306, 314 и 322; и (f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 299, 307, 315 и 323.
H
L
[0013] В некоторых вариантах осуществления предлагается антитело, которое связывает PD-1, которое содержит вариабельную область тяжелой цепи (V) и вариабельную область легкой цепи (V), причем:
H
L
i) V идентична по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 4 и V идентична по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 8; или
H
L
ii) V идентична по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 12 и V идентична по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 16; или
H
L
iii) V идентична по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 20 и V идентична по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 24; или
H
L
iv) V идентична по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 28 и V идентична по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 32; или
H
L
v) V идентична по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 36 и V идентична по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 40; или
H
L
vi) V идентична по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 44, 52, 60, 68, 76, 84, 92, 100, 108 и 116; и V идентична по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 48, 56, 64, 72, 80, 88, 96, 104, 112 и 120; или
H
L
vii) V идентична по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 124, 132, 140, 148, 156, 164, 172, 180, 188, 196, 204, 212, 220, 228, 236, 244, 252, 260, 268, 276, и 284; и V идентична по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 128, 136, 144, 152, 160, 168, 176, 184, 192, 200, 208, 216, 224, 232, 240, 248, 256, 264, 272, 280 и 288; или
H
L
viii) V идентична по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 292, 300, 308 и 316; и V идентична по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 296, 304, 312 и 320.
H
L
[0014] В некоторых вариантах осуществления предлагается антитело, которое связывает PD-1, которое содержит вариабельную область тяжелой цепи (V) и вариабельную область легкой цепи (V), причем:
H
L
i) V содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4 и V содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8; или
H
L
ii) V содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 12 и V содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 16; или
H
L
iii) V содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 20 и V содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 24; или
H
L
iv) V содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 28 и V содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 32; или
H
L
v) V содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 36 и V содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 40; или
H
L
vi) V содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 44 и V содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 48; или
H
L
vii) V содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 52 и V содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 56; или
H
L
viii) V содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 60 и V содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 64; или
H
L
ix) V содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 68 и V содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 72; или
H
L
x) V содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 76 и V содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 80; или
H
L
xi) V содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 84 и V содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 88; или
H
L
xii) V содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 92 и V содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 96; или
H
L
xiii) V содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 100 и V содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 104; или
H
L
xiv) V содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 108 и V содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 112; или
H
L
xv) V содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 116 и V содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 120; или
H
L
xvi) V содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 124 и V содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 128; или
H
L
xvii) V содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 132 и V содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 136; или
H
L
xviii) V содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 140 и V содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 144; или
H
L
xix) V содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 148 и V содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 152; или
H
L
xx) V содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 156 и V содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 160; или
H
L
xxi) V содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 164 и V содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 168; или
H
L
xxii) V содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 172 и V содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 176; или
H
L
xxiii) V содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 180 и V содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 184; или
H
L
xxiv) V содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 188 и V содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 192; или
H
L
xxv) V содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 196 и V содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 200; или
H
L
xxvi) V содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 204 и V содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 208; или
H
L
xxvii) V содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 212 и V содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 216; или
H
L
xxviii) V содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 220 и V содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 224; или
H
L
xxix) V содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 228 и V содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 232; или
H
L
xxx) V содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 236 и V содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 240; или
H
L
xxxi) V содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 244 и V содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 248; или
H
L
xxxii) V содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 252 и V содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 256; или
H
L
xxxiii) V содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 260 и V содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 264; или
H
L
xxxiv) V содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 268 и V содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 272; или
H
L
xxxv) V содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 276 и V содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 280; или
H
L
xxxvi) V содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 284 и V содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 288; или
H
L
xxxvii) V содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 292 и V содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 296; или
H
L
xxxviii) V содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 300 и V содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 304; или
H
L
xxxix) V содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 308 и V содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 312; или
H
L
xl) V содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 316 и V содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 320.
[0015] В некоторых вариантах осуществления предлагается антитело, которое конкурирует с антителом, представленным в настоящем документе, за связывание с PD-1 человека, причем антитело связывается с PD-1 человека и PD-1 мыши, и при этом антитело ингибирует связывание PD-1 человека с PD-L1 человека, ингибирует связывание PD-1 человека с PD-L2 человека, ингибирует связывание PD-1 мыши с PD-L1 мыши и ингибирует связывание PD-1 мыши с PD-L2 мыши.
D
D
[0016] В некоторых вариантах осуществления антитело, представленное в настоящем документе, связывается с PD-1 человека с аффинностью (K) менее чем 5 нМ. В некоторых вариантах осуществления антитело, представленное в настоящем документе, связывается с PD-1 мыши с аффинностью (K) менее чем 10 нМ. В некоторых вариантах осуществления аффинность определяют с использованием биослойной интерферометрии.
2
[0017] В некоторых вариантах осуществления антитело, представленное в настоящем документе, представляет собой моноклональное антитело. В некоторых вариантах осуществления антитело, представленное в настоящем документе, представляет собой антитело человека, химерное антитело или гуманизированное антитело. В некоторых вариантах осуществления антитело, представленное в настоящем документе, представляет собой фрагмент антитела, выбранный из фрагмента Fab, Fab', Fv, scFv или (Fab'). В некоторых вариантах осуществления антитело, представленное в настоящем документе, представляет собой полноразмерное антитело. В некоторых вариантах осуществления антитело, представленное в настоящем документе, представляет собой антитело IgG1 или IgG4.
[0018] В некоторых вариантах осуществления антитело, представленное в настоящем документе, связывает PD-1 человека. В некоторых вариантах осуществления PD-1 человека содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 382. В некоторых вариантах осуществления антитело, представленное в настоящем документе, связывает PD-1 мыши. В некоторых вариантах осуществления PD-1 мыши содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 383. В некоторых вариантах осуществления антитело, представленное в настоящем документе, связывает PD-1 яванского макака. В некоторых вариантах осуществления PD-1 яванского макака содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 384.
[0019] В некоторых вариантах осуществления антитело, представленное в настоящем документе, ингибирует связывание PD-1 с PD-L1. В некоторых вариантах осуществления антитело, представленное в настоящем документе, ингибирует связывание PD-1 с PD-L2. В некоторых вариантах осуществления антитело, представленное в настоящем документе, ингибирует связывание PD-1 с PD-L1 и ингибирует связывание PD-1 с PD-L2.
[0020] В некоторых вариантах осуществления введение антитела, представленного в настоящем документе, млекопитающему повышает уровень по меньшей мере одного цитокина, выбранного из IFNγ и IL-2. В некоторых вариантах осуществления антитело, представленное в настоящем документе, повышает уровень по меньшей мере одного цитокина, выбранного из IFNγ и IL-2 по меньшей мере в 2 раза. В некоторых вариантах осуществления уровень цитокина измеряется через 1 час, 2 часа, 3 часа, 4 часа, 5 часов, 6 часов, 8 часов, 10 часов, 12 часов, 14 часов, 16 часов, 18 часов, 20 часов, 22 часа, 24 часа, 36 часов или 48 часов после введения антитела. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере один цитокин представляет собой IFNγ. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере один цитокин представляет собой IL-2. В некоторых вариантах осуществления уровень хемокина измеряется через 24 часа после введения антитела.
[0021] В некоторых вариантах осуществления введение млекопитающему антитела, представленного в настоящем документе, усиливает иммунный ответ у млекопитающего. В некоторых вариантах осуществления введение млекопитающему антитела, представленного в настоящем документе, приводит к активации Т-клеток у млекопитающего. В некоторых вариантах осуществления введение млекопитающему антитела, представленного в настоящем документе, уменьшает размер опухоли у млекопитающего с раковым заболеванием. В некоторых вариантах осуществления млекопитающее представляет собой человека. В некоторых вариантах осуществления человек болен раком. В некоторых вариантах осуществления рак выбран из меланомы, немелкоклеточного рака легких (НМРЛ), почечно-клеточного рака (ПКР), рака желудка, рака мочевого пузыря, диффузной В-крупноклеточной лимфомы (ДКВЛ), лимфомы Ходжкина, рака яичников, плоскоклеточного рака головы и шеи (ПРГШ), мезотелиомы и трижды негативного рака молочной железы (ТНРМЖ). В некоторых вариантах осуществления рак выбран из меланомы, рака желудка, плоскоклеточного рака головы и шеи (ПРГШ), немелкоклеточного рака легких (НМРЛ) и трижды негативного рака молочной железы (ТНРМЖ).
[0022] В некоторых вариантах осуществления предлагается выделенная нуклеиновая кислота, которая кодирует антитело, представленное в настоящем документе. В некоторых вариантах осуществления предлагается вектор, который содержит нуклеиновую кислоту. В некоторых вариантах осуществления предлагается клетка-хозяин, которая содержит вектор. В некоторых вариантах осуществления предлагается клетка-хозяин, которая продуцирует антитело, представленное в настоящем документе. В некоторых вариантах осуществления предлагается способ получения анти-PD-1 антитела, включающий культивирование клетки-хозяина в условиях, подходящих для экспрессии антитела. В некоторых вариантах осуществления способ дополнительно включает выделение антитела, продуцируемого клеткой-хозяином.
[0023] В некоторых вариантах осуществления предложена фармацевтическая композиция, содержащая анти-PD-1 антитело, представленное в настоящем документе, и фармацевтически приемлемый носитель.
[0024] В некоторых вариантах осуществления предложен способ лечения рака у млекопитающего, включающий введение эффективного количества анти-PD-1-антитела, представленного в настоящем документе, или фармацевтической композиции, содержащей анти-PD-1-антитело, предоставленное в настоящем документе, и фармацевтически приемлемый носитель. В некоторых вариантах осуществления рак выбран из меланомы, немелкоклеточного рака легких (НМРЛ), почечно-клеточного рака (ПКР), рака желудка, рака мочевого пузыря, диффузной В-крупноклеточной лимфомы (ДКВЛ), лимфомы Ходжкина, рака яичников, плоскоклеточного рака головы и шеи (ПРГШ), мезотелиомы и трижды негативного рака молочной железы (ТНРМЖ). В некоторых вариантах осуществления рак выбран из меланомы, рака желудка, плоскоклеточного рака головы и шеи (ПРГШ), немелкоклеточного рака легких (НМРЛ) и трижды негативного рака молочной железы (ТНРМЖ).
[0025] В некоторых вариантах осуществления предложен способ усиления иммунного ответа у млекопитающего, включающий введение эффективного количества анти-PD-1-антитела, представленного в настоящем документе, или фармацевтической композиции, содержащей анти-PD-1-антитело, представленное в данном документе, и фармацевтически приемлемый носитель.
[0026] В некоторых вариантах осуществления предложен способ увеличения активации Т-клетки у млекопитающего, включающий введение эффективного количества анти-PD-1-антитела, представленного в настоящем документе, или фармацевтической композиции, содержащей анти-PD-1-антитело, предоставленного в настоящем документе, и фармацевтически приемлемый носитель.
[0027] В некоторых вариантах осуществления предложен способ уменьшения размера опухоли у млекопитающего с раковым заболеванием, включающий введение эффективного количества анти-PD-1-антитела, представленного в настоящем документе, или фармацевтической композиции, содержащей анти-PD-1-антитело, представленное в настоящем документе, и фармацевтически приемлемый носитель.
[0028] В любом из представленных в настоящем документе вариантов осуществления млекопитающее может быть человеком.
[0029] В некоторых вариантах осуществления млекопитающему вводят по меньшей мере одно дополнительное лекарственное средство. В некоторых таких вариантах осуществления дополнительное лекарственное средство вводят одновременно или последовательно с анти-PD-1-антителом. В некоторых вариантах осуществления дополнительное лекарственное средство выбрано из анти-ICOS-антитела и анти-CTLA4-антитела. В некоторых вариантах осуществления дополнительное лекарственное средство представляет собой анти-ICOS-антитело. В некоторых вариантах осуществления дополнительное лекарственное средство представляет собой противораковую вакцину. В некоторых вариантах осуществления противораковая вакцина выбрана из ДНК-вакцины, вирусной вакцины, полученной методами генной инженерии, вакцины против опухолевых клеток, полученной методами генной инженерии, и противораковой вакцины, разработанной с использованием неоантигенов.
[0030] В некоторых вариантах осуществления предлагается использование антитела, представленного в настоящем документе, для изготовления лекарственного средства для лечения рака. В некоторых вариантах осуществления рак выбран из меланомы, немелкоклеточного рака легких (НМРЛ), почечно-клеточного рака (ПКР), рака желудка, рака мочевого пузыря, диффузной В-крупноклеточной лимфомы (ДКВЛ), лимфомы Ходжкина, рака яичников, плоскоклеточного рака головы и шеи (ПРГШ), мезотелиомы и трижды негативного рака молочной железы (ТНРМЖ). В некоторых вариантах осуществления рак выбран из меланомы, рака желудка, плоскоклеточного рака головы и шеи (ПРГШ), немелкоклеточного рака легких (НМРЛ) и трижды негативного рака молочной железы (ТНРМЖ). В некоторых вариантах осуществления лекарственное средство предназначено для введения с по меньшей мере одним дополнительным лекарственным средством. В некоторых вариантах осуществления дополнительное лекарственное средство выбрано из анти-ICOS-антитела и анти-CTLA4-антитела. В некоторых вариантах осуществления дополнительное лекарственное средство представляет собой анти-ICOS-антитело. В некоторых вариантах осуществления дополнительное лекарственное средство представляет собой противораковую вакцину. В некоторых вариантах осуществления противораковая вакцина выбрана из ДНК-вакцины, вирусной вакцины, полученной методами генной инженерии, вакцины против опухолевых клеток, полученной методами генной инженерии, и противораковой вакцины, разработанной с использованием неоантигенов.
[0031] В некоторых вариантах осуществления в настоящем раскрытии предлагается применение антитела, представленного в настоящем документе, или фармацевтической композиции, содержащей антитело, представленное в настоящем документе, и фармацевтически приемлемый носитель для лечения рака. В некоторых вариантах осуществления рак выбран из меланомы, немелкоклеточного рака легких (НМРЛ), почечно-клеточного рака (ПКР), рака желудка, рака мочевого пузыря, диффузной В-крупноклеточной лимфомы (ДКВЛ), лимфомы Ходжкина, рака яичников, плоскоклеточного рака головы и шеи (ПРГШ), мезотелиомы и трижды негативного рака молочной железы (ТНРМЖ). В некоторых вариантах осуществления рак выбран из меланомы, рака желудка, плоскоклеточного рака головы и шеи (ПРГШ), немелкоклеточного рака легких (НМРЛ) и трижды негативного рака молочной железы (ТНРМЖ).
[0032] В некоторых вариантах осуществления в настоящем раскрытии для лечения рака предлагается применение антитела, представленного в настоящем документе, или фармацевтической композиции, содержащей антитело, представленное в настоящем документе, и фармацевтически приемлемый носитель, и по меньшей мере одного дополнительного лекарственного средства. В некоторых вариантах осуществления дополнительное лекарственное средство выбрано из анти-ICOS-антитела и анти-CTLA4-антитела. В некоторых вариантах осуществления дополнительное лекарственное средство представляет собой анти-ICOS-антитело. В некоторых вариантах осуществления дополнительное лекарственное средство представляет собой противораковую вакцину. В некоторых вариантах осуществления противораковая вакцина выбрана из ДНК-вакцины, вирусной вакцины, полученной методами генной инженерии, вакцины против опухолевых клеток, полученной методами генной инженерии, и противораковой вакцины, разработанной с использованием неоантигенов. В некоторых вариантах осуществления рак выбран из меланомы, немелкоклеточного рака легких (НМРЛ), почечно-клеточного рака (ПКР), рака желудка, рака мочевого пузыря, диффузной В-крупноклеточной лимфомы (ДКВЛ), лимфомы Ходжкина, рака яичников, плоскоклеточного рака головы и шеи (ПРГШ), мезотелиомы и трижды негативного рака молочной железы (ТНРМЖ). В некоторых вариантах осуществления рак выбран из меланомы, рака желудка, плоскоклеточного рака головы и шеи (ПРГШ), немелкоклеточного рака легких (НМРЛ) и трижды негативного рака молочной железы (ТНРМЖ).
[0033] В некоторых вариантах осуществления предлагается антитело, предоставленное в настоящем документе, или фармацевтическая композиция, содержащая антитело, представленное в данном документе, и фармацевтически приемлемый носитель для применения при лечении рака. В некоторых вариантах осуществления рак выбран из меланомы, немелкоклеточного рака легких (НМРЛ), почечно-клеточного рака (ПКР), рака желудка, рака мочевого пузыря, диффузной В-крупноклеточной лимфомы (ДКВЛ), лимфомы Ходжкина, рака яичников, плоскоклеточного рака головы и шеи (ПРГШ), мезотелиомы и трижды негативного рака молочной железы (ТНРМЖ). В некоторых вариантах осуществления рак выбран из меланомы, рака желудка, плоскоклеточного рака головы и шеи (ПРГШ), немелкоклеточного рака легких (НМРЛ) и трижды негативного рака молочной железы (ТНРМЖ).
[0034] В некоторых вариантах осуществления предлагается способ повышения уровня по меньшей мере одного цитокина, выбранного из IFNγ и IL-2 у млекопитающего, включающий введение млекопитающему антитела, представленного в настоящем документе. В некоторых вариантах осуществления уровень цитокина измеряется через 1 час, 2 часа, 3 часа, 4 часа, 5 часов, 6 часов, 8 часов, 10 часов, 12 часов, 14 часов, 16 часов, 18 часов, 20 часов, 22 часа, 24 часа, 36 часов или 48 часов после введения антитела. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере один цитокин представляет собой IFNγ. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере один цитокин представляет собой IL-2. В некоторых вариантах осуществления уровень цитокина измеряется через 24 после введения антитела. В некоторых вариантах осуществления млекопитающее представляет собой человека. В некоторых вариантах осуществления человек болен раком. В некоторых вариантах осуществления рак выбран из меланомы, немелкоклеточного рака легких (НМРЛ), почечно-клеточного рака (ПКР), рака желудка, рака мочевого пузыря, диффузной В-крупноклеточной лимфомы (ДКВЛ), лимфомы Ходжкина, рака яичников, плоскоклеточного рака головы и шеи (ПРГШ), мезотелиомы и трижды негативного рака молочной железы (ТНРМЖ). В некоторых вариантах осуществления рак выбран из меланомы, рака желудка, плоскоклеточного рака головы и шеи (ПРГШ), немелкоклеточного рака легких (НМРЛ) и трижды негативного рака молочной железы (ТНРМЖ).
[0035] В некоторых вариантах осуществления иммунный ответ усиливается после введения анти-PD-1 антитела. В некоторых вариантах осуществления активация Т-клеток увеличивается после введения анти-PD-1 антитела. В некоторых вариантах осуществления размер опухоли уменьшается после введения анти-PD-1 антитела.
[0036] В некоторых вариантах осуществления млекопитающему вводят по меньшей мере одно дополнительное лекарственное средство. В некоторых вариантах осуществления дополнительное лекарственное средство вводят одновременно или последовательно с анти-PD-1 антителом. В некоторых вариантах осуществления дополнительное лекарственное средство выбрано из анти-ICOS-антитела и анти-CTLA4-антитела. В некоторых вариантах осуществления дополнительное лекарственное средство представляет собой анти-ICOS антитело. В некоторых вариантах осуществления дополнительное лекарственное средство представляет собой противораковую вакцину. В некоторых вариантах осуществления противораковая вакцина выбрана из ДНК-вакцины, вирусной вакцины, полученной методами генной инженерии, вакцины против опухолевых клеток, полученной методами генной инженерии, и противораковой вакцины, разработанной с использованием неоантигенов.
[0037] В некоторых вариантах осуществления образец рака, полученный от млекопитающего, был определен как экспрессирующий PD-1. В некоторых вариантах осуществления образец демонстрирует 1+, 2+ или 3+ окрашивание PD-1 иммуногистохимическим (ИГХ) анализом. В некоторых вариантах осуществления было определено, что образец имеет повышенный уровень PD-L1. В некоторых вариантах осуществления уровни PD-L1 определяют с использованием ИГХ.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ
фиг. 1
[0038] На  проиллюстрированы концентрации IFNγ после того, как спленоцитарные Т-клетки мыши, активированные анти-CD3 и анти-CD28-антителами, приводили в контакт с анти-PD-1-антителами. IgG1 мыши и IgG2a крысы использовали в качестве контролей. RMP1-14 использовали в качестве положительного контроля анти-PD-1-антитела.
фиг. 2
50
[0039] На  проиллюстрирована EC увеличения IL-2 в образцах цельной крови, активированных стафилококковым энтеротоксином B (СЭВ) после инкубации с анти-PD1 антителами. Ниволумаб (Ниво) и пембролизумаб (Пембро) использовали в качестве контрольных анти-PD1 антител. Проиллюстрированы эффекты антител 12228 (28), 13406 (6), 13407 (7), 13408 (8) и 13409 (9).
фиг. 3А-3В
[0040] На  проиллюстрирована способность анти-PD-1-антител, раскрытых в настоящем документе, блокировать связывание мышиных лигандов с PD-1 мыши. Для оценки влияния антител на взаимодействие между PD-L1 мыши и PD-L2 мыши с PD-1 мыши был использован анализ Octet на приборе Forte-Bio.
фиг. 4A-1, 4A-2, 4B-1, 4B-2
4C
[0041] На  и  проиллюстрирована способность анти-PD-1-антител, раскрытых в настоящем документе, блокировать связывание лигандов человека с PD-1 человека. Для оценки влияния антител на взаимодействие между PD-L1 человека и PD-L2 человека с PD-1 человека был использован анализ Octet на приборе Forte-Bio.
фиг. 5
[0042] На  показано уменьшение размеров опухолей на мышиной модели опухоли при введении анти-PD-1-антитела, раскрытого в настоящем документе. Мышам C57BL6/J подкожно в бок инъецировали клетки MC38. IgG1 мыши (MOPC-21) и IgG2a крысы (2A3) использовали в качестве контролей. RMP1-14 использовали в качестве положительного контроля анти-PD1-антитела.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ НЕКОТОРЫХ ВАРИАНТОВ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ
[0043] Предлагаются антитела, которые связывают PD-1. Также предлагаются тяжелые цепи и легкие цепи антител, которые способны образовывать антитела, связывающие PD-1. Кроме того, предлагаются антитела, тяжелые цепи и легкие цепи, содержащие одну или более конкретных определяющих комплементарность областей (CDR). Предлагаются полинуклеотиды, кодирующие антитела к PD-1. Также предлагаются полинуклеотиды, кодирующие тяжелые цепи или легкие цепи антител. Предлагаются способы получения и/или очистки антител к PD-1. Предлагаются способы лечения с использованием антител к PD-1. Такие способы включают, но не ограничиваются ими, способы лечения рака. Предлагаются способы обнаружения PD-1. Такие способы включают способы идентификации индивидуума, которому может получать пользу от лечения анти-PD-1 антителом, мониторинга лечения индивидуума анти-PD-1 антителом и улучшения терапевтической эффективности анти-PD-1 антитела у индивидуума.
[0044] Заголовки разделов, используемые в настоящем документе, предназначены только для организационных целей и не должны рассматриваться как ограничивающие предмет изобретения.
[0045] Все ссылки, цитируемые в настоящем документе, включая патентные заявки, патентные публикации и учетные номера базы данных Genbank, включены в настоящий документ посредством ссылки, как если бы каждая отдельная ссылка была специально и индивидуально указана для включения посредством ссылки во всей ее полноте.
et al.
et al.
eds
eds
eds
ed
ed.
ed
eds
eds
et al.
eds
et al.
eds
ed.
eds
eds
et al.
eds
rd
[0046] Описанные способы и процедуры, или на которые в настоящем документе делается ссылка, как правило, широко распространены и обычно используются с использованием обычной методологии специалистами в данной области техники, например широко используемые методологии, описанные в Sambrook , Molecular Cloning: A Laboratory Manual 3 edition (2001) Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. CURRENT PROTOCOLS IN MOLECULAR BIOLOGY (F. M. Ausubel, ., (2003)); серия METHODS IN ENZYMOLOGY (Academic Press, Inc.): PCR 2: A PRACTICAL APPROACH (M. J. MacPherson, B. D. Hames и G. R. Taylor . (1995)), Harlow and Lane, . (1988) ANTIBODIES, A LABORATORY MANUAL, and ANIMAL CELL CULTURE (R. I. Freshney, . (1987)); Oligonucleotide Synthesis (M. J. Gait, ed., 1984); Methods in Molecular Biology, Humana Press; Cell Biology: A Laboratory Notebook (J. E. Cellis, , 1998) Academic Press; Animal Cell Culture (R. I. Freshney), ., 1987); Introduction to Cell and Tissue Culture (J. P. Mather and P. E. Roberts, 1998) Plenum Press; Cell and Tissue Culture Laboratory Procedures (A. Doyle, J. B. Griffiths, and D. G. Newell, eds., 1993-8) J. Wiley and Sons; Handbook of Experimental Immunology (D. M. Weir and C. C. Blackwell, .); Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells (J. M. Miller and M. P. Calos, ., 1987); PCR: The Polymerase Chain Reaction, (Mullis , ., 1994); Current Protocols in Immunology (J. E. Coligan , ., 1991); Short Protocols in Molecular Biology (Wiley and Sons, 1999); Immunobiology (C. A. Janeway and P. Travers, 1997); Antibodies (P. Finch, 1997); Antibodies: A Practical Approach (D. Catty.,, IRL Press, 1988-1989); Monoclonal Antibodies: A Practical Approach (P. Shepherd and C. Dean, ., Oxford University Press, 2000); Using Antibodies: A Laboratory Manual (E. Harlow и D. Lane (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1999); The Antibodies (M. Zanetti и J. D. Capra, ., Harwood Academic Publishers, 1995); и Cancer: Principles and Practice of Oncology (V. T. DeVita , ., J.B. Lippincott Company, 1993); и их обновленные версии.
I. Определения
[0047] Если не указано иное, научные и технические термины, используемые в связи с настоящим описанием, имеют значения, которые традиционно подразумеваются средними специалистами в данной области техники. Кроме того, если контекст не требует иного или контекстом явно не указано, термины в единственном числе включают множественное число, а термины во множественном числе включают единственное число. В случае любого противоречия в определениях между различными источниками или ссылками, будет главенствующим определение, представленное в данном документе.
[0048] Понятно, что варианты осуществления изобретения, описанные в настоящем документе, включают «состоящий» и/или «состоящие по существу из» вариантов осуществления. В контексте данного документа слова в единственном числе означают также и множественное число, если не указано иное. Применение термина «или» в данном документе не означает представления, что альтернативные варианты являются взаимоисключающими.
[0049] В данной заявке использование «или» означает «и/или», если это особо не оговорено или подразумевается специалистом в данной области техники. В контексте пункта патентной формулы, зависящего от другого зависимого пункта, использование «или» относится к более чем одному предшествующему независимому или зависимому пункту.
[0050] Как понятно специалисту в данной области техники, упоминание «около» со значением или параметром в данном документе включает (и описывает) варианты осуществления, относятся к этому значению или параметру, как таковые. Например, описание, относящееся к «около X», включает описание «X».
[0051] Термины «молекула нуклеиновой кислоты», «нуклеиновая кислота» и «полинуклеотид» могут использоваться взаимозаменяемо и относятся к полимеру нуклеотидов. Такие полимеры нуклеотидов могут включать природные и/или искусственные нуклеотиды и включать в себя, но не ограничиваться ими, ДНК, РНК и ПНК. «Нуклеотидная последовательность» относится к линейной последовательности нуклеотидов, которые включают в себя молекулу нуклеиновой кислоты или полинуклеотид.
[0052] Термины «полипептид» и «белок» используются взаимозаменяемо для обозначения полимера аминокислотных остатков и не ограничены минимальной длиной. Такие полимеры аминокислотных остатков могут содержать природные или искусственные аминокислотные остатки и включают в себя, но не ограничиваются ими, пептиды, олигопептиды, димеры, тримеры и мультимеры аминокислотных остатков. В определение включены как полноразмерные белки, так и их фрагменты. Термины также включают пост-экспрессионные модификации полипептида, например гликозилирование, сиалирование, ацетилирование, фосфорилирование и тому подобное. Кроме того, для целей настоящего изобретения термин «полипептид» относится к белку, который включает в себя модификации, такие как делеции, добавления и замены (обычно консервативные по природе), в нативной последовательности, при условии, что белок поддерживает желаемую активность. Эти модификации могут быть преднамеренными, например путем сайт-направленного мутагенеза, или могут быть случайными, например в результате мутаций хозяев, которые продуцируют белки, или ошибок вследствие ПЦР-амплификации.
[0053] «PD-1» и «белок запрограммированной смерти клетки 1», в контексте настоящего описания, относятся к любому нативному PD-1, который является результатом экспрессии и процессинга PD-1 в клетке. Термин включает PD-1 из любого источника позвоночных, включая млекопитающих, например приматы (например, люди и яванские макаки) и грызуны (например, мыши и крысы), если не указано иное. Термин также включает встречающиеся в природе варианты PD-1, например сплайс-варианты или аллельные варианты. Аминокислотная последовательность типичного белка-предшественника PD-1 человека (с сигнальной последовательностью, аминокислоты 1-20) показана в SEQ ID NO: 1. Аминокислотная последовательность типового зрелого PD-1 человека приведена в SEQ ID NO: 382. Аминокислотная последовательность типового белка-предшественника PD-1 мыши (с сигнальной последовательностью, аминокислоты 1-20) приведена в SEQ ID NO: 2. Аминокислотная последовательность типового зрелого PD-1 мыши приведена в SEQ ID NO: 383. Аминокислотная последовательность типового белка-предшественника PD-1 яванского макака (с сигнальной последовательностью, аминокислоты 1-20) приведена в SEQ ID NO: 3. Аминокислотная последовательность типового зрелого PD-1 яванского макака приведена в SEQ ID NO: 384.
[0054] Термин «специфически связывается» с антигеном или эпитопом является термином, который хорошо известен в данной области техники, и способы определения такого специфического связывания также хорошо известны в данной области техники. Термин применим, когда говорят, что молекула проявляет «специфическое связывание» или «преимущественное связывание», если она реагирует или ассоциируется чаще, быстрее, с большей продолжительностью и/или с большей аффинностью с конкретной клеткой или веществом, чем с альтернативными клетками или веществами. Антитело «специфически связывается» или «предпочтительно связывается» с мишенью, если оно связывается с большей аффинностью, авидностью, более легко и/или с большей продолжительностью, чем оно связывается с другими веществами. Например, антитело, которое специфически или предпочтительно связывается с эпитопом PD-1, представляет собой антитело, которое связывает этот эпитоп с большей аффинностью, авидностью, более легко и/или с большей продолжительностью, чем оно связывается с другими эпитопами PD-1 или эпитопами не-PD-1. Понятно также, что после прочтения этого определения, например, антитело (или фрагмент или эпитоп), которое специфически или предпочтительно связывается с первой мишенью, может или не может специфически или предпочтительно связываться со второй мишенью. В частности, термин «специфическое связывание» или «предпочтительное связывание» не обязательно включает (хотя может включать) исключительное связывание. В большинстве случаев, но не обязательно, ссылка на связывание означает предпочтительное связывание. Термин «специфичность» относится к способности связывающего белка селективно связывать антиген.
[0055] Термин «по существу чистый», в контексте настоящего документа, относится к веществу, которое по меньшей мере на 50% является чистым (то есть не содержит загрязнений), более предпочтительно по меньшей мере на 90% является чистым, более предпочтительно по меньшей мере на 95% является чистым, еще более предпочтительно по меньшей мере на 98% является чистым и наиболее предпочтительно по меньшей мере на 99% является чистым.
[0056] Термин «эпитоп», в контексте настоящего документа, относится к сайту на целевой молекуле (например, антигене, таком как белок, нуклеиновой кислоте, углеводе или липиде), с которым связывается антигенсвязывающая молекула (например, антитело, фрагмент антитела или каркасный белок, содержащий области связывания антител). Эпитопы часто включают в себя химически активную поверхностную группировку молекул, например боковые цепи аминокислот, полипептидов или углеводов, и имеют специфические трехмерные структурные характеристики, а также характеристики удельного заряда. Эпитопы могут быть образованы как из смежных, так и/или расположенных рядом несмежных остатков (например, аминокислот, нуклеотидов, сахаров, липидного фрагмента) целевой молекулы. Эпитопы, образованные из смежных остатков (например, аминокислот, нуклеотидов, сахаров, липидного фрагмента), обычно сохраняются при воздействии денатурирующих растворителей, тогда как эпитопы, образованные третичным складыванием, обычно теряются при обработке денатурирующими растворителями. Эпитоп может включать, но не ограничиваясь этим, по меньшей мере 3, по меньшей мере 5 или 8-10 остатков (например, аминокислот или нуклеотидов). В некоторых примерах эпитоп имеет в длину менее чем 20 остатков (например, аминокислот или нуклеотидов), менее чем 15 остатков или менее чем 12 остатков. Два антитела могут связывать один и тот же эпитоп в антигене, если они демонстрируют конкурентное связывание с антигеном. В некоторых вариантах осуществления эпитоп может быть идентифицирован по определенному минимальному расстоянию до остатка CDR на антигенсвязывающей молекуле. В некоторых вариантах осуществления эпитоп может быть идентифицирован по указанному выше расстоянию и дополнительно ограничен теми остатками, которые вовлечены в образование связи (например, водородной связи) между остатком антитела и остатком антигена. Эпитоп также может быть идентифицирован с помощью различных сканирований, например сканирование аланином или аргинином может указывать на один или более остатков, с которыми может взаимодействовать антигенсвязывающая молекула. Если явно не обозначено, набор остатков в качестве эпитопа не исключает других остатков из того, чтобы быть частью эпитопа для конкретного антитела. Скорее присутствие такого набора обозначает минимальный ряд (или набор видов) эпитопов. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления набор остатков, идентифицированных как эпитоп, обозначает минимальный эпитоп релевантности для антигена, а не исключительный список остатков для эпитопа на антигене.
[0057] «Нелинейный эпитоп» или «конформационный эпитоп» содержит несмежные полипептиды, аминокислоты и/или сахара в пределах антигенного белка, с которым связывается антитело, специфическое к эпитопу. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере один из остатков будет несмежным с другими отмеченными остатками эпитопа; однако, один или более остатков также могут быть смежными с другими остатками.
[0058] «Линейный эпитоп» содержит смежные полипептиды, аминокислоты и/или сахара в пределах антигенного белка, с которым связывается антитело, специфическое к эпитопу. Следует отметить, что в некоторых вариантах осуществления не каждый из остатков в пределах линейного эпитопа должен быть непосредственно связан (или вовлечен в связь) с антителом. В некоторых вариантах осуществления линейные эпитопы могут возникать вследствие иммунизаций пептидом, который эффективно состоит из последовательности линейного эпитопа, или из структурных участков белка, которые относительно отделены от остальной части белка (так что антитело может взаимодействовать по меньшей мере преимущественно), только с этой секцией последовательности.
[0059] Термин «антитело» в данном документе используется в самом широком смысле и охватывает различные структуры антител, включая, но не ограничиваясь ими, моноклональные антитела, поликлональные антитела, мультиспецифические антитела (например, биспецифичные (например, привлекающие T-клетки биспецифические активаторы) и триспецифичные антитела) и фрагменты антител при условии, что они проявляют желаемую антигенсвязывающую активность.
2
2
2
[0060] Термин антитело включает, но не ограничивается ими, фрагменты, которые способны связываться с антигеном, такие как Fv, одноцепочечный Fv (scFv), Fab, Fab', ди-scFv, sdAb (однодоменное антитело) и (Fab') (включая химически связанный F(ab')). При расщеплении антител папаином образуются два идентичных антигенсвязывающих фрагмента, называемых «Fab»-фрагментами, каждый из которых имеет один антигенсвязывающий участок, и остаточный «Fc»-фрагмент, название которого отражает его способность легко кристаллизоваться. Обработка пепсином дает фрагмент F(ab'), который имеет два антигенсвязывающих участка и все еще способен к перекрестному связыванию антигена. Термин антитело также включает, но не ограничивается ими, химерные антитела, гуманизированные антитела и антитела различных видов, таких как мышь, человек, яванский макак и т.д. Кроме того, для всех конструкций антител, представленных в настоящем документе, также рассматриваются варианты, имеющие последовательности, полученные от других организмов. Таким образом, если раскрыта версия антитела человека, специалист в данной области поймет, как преобразовать антитело на основе человеческой последовательности в последовательность мыши, крысы, кошки, собаки, лошади и т.д. Фрагменты антител также включают либо ориентацию одноцепочечного scFv, тандемного ди-scFv, диател, тандемного три-sdcFv, минител и т.д. Фрагменты антител также включают нанотела (sdAb, антитело, имеющее один мономерный домен, такой как пара вариабельных доменов тяжелых цепей без легкой цепи). Фрагмент антитела может относиться к специфическим видам в некоторых вариантах осуществления (например, scFv человека или scFv мыши), что обозначает последовательности по меньшей мере части областей, не относящихся к CDR, а не источника конструкции.
[0061] Термин «моноклональное антитело» относится к антителу по существу гомогенной популяции антител, то есть составляющие популяцию отдельные антитела, являются идентичными, за исключением возможных встречающихся в природе мутаций, которые могут присутствовать в незначительных количествах. Моноклональные антитела являются высокоспецифичными и направлены против одного антигенного сайта. Кроме того, в отличие от препаратов поликлональных антител, которые обычно включают в себя разные антитела, направленные против разных детерминант (эпитопов), каждое моноклональное антитело направлено против одной детерминанты на антигене. Таким образом, образец моноклонального антитела может связываться с одним и тем же эпитопом на антигене. Модификатор «моноклональный» указывает на характер антитела, получаемого из по существу гомогенной популяции антител, и его не следует истолковывать как требующее получения антитела каким-либо конкретным способом. Например, моноклональные антитела могут быть получены гибридомным способом, впервые описанным Kohler and Milstein, 1975, Nature 256:495, или могут быть получены способами рекомбинантной ДНК, например, описанными в патенте США № 4816567. Моноклональные антитела также могут быть выделены из фаговых библиотек, полученных с использованием методик, описанных, например, в McCafferty et al., 1990, Nature 348:552-554.
et al.
J. Mol. Biol.
th
H
[0062] Термин «CDR» обозначает определяющую комплементарность область, как определено по меньшей мере одним способом идентификации для специалиста в данной области техники. В некоторых вариантах осуществления CDR могут быть определены в соответствии с любой из номенклатур Чотиа, Кабата, комбинации номенклатур Кабата и Чотиа, определения AbM, определения контакта и/или комбинации определений Кабата, Чотиа, AbM и/или контактной области. Иллюстративные CDR (CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3, CDR-H1, CDR-H2 и CDR-H3) встречаются в аминокислотных остатках 24-34 L1, 50-56 L2, 89-97 L3, 31-35В Н1, 50-65 Н2 и 95-102 Н3. (Kabat , Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5 Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991)). Определение AbM может включать, например, CDR (CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3, CDR-H1, CDR-H2 и CDR-H3) в аминокислотных остатках 24-34 L1, 50-56 L2, 89-97 L3, H26-H35B H1, 50-58 H2 и 95-102 H3. Определение контакта может включать, например, CDR (CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3, CDR-H1, CDR-H2 и CDR-H3) в аминокислотных остатках 30-36 L1, 46-55 L2, 89-96 L3, 30-35 H1, 47-58 H2 и 93-101 H3. Определение Чотиа может включать, например, CDR (CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3, CDR-H1, CDR-H2 и CDR-H3) в аминокислотных остатках 24-34 L1, 50-56 L2, 89-97 L3, 26-32…34 H1, 52-56 H2 и 95-102 H3. CDR также могут быть предоставлены в том виде, как показано на одной или более сопровождающих фигурах. За исключением CDR1 в V, CDR обычно содержат аминокислотные остатки, которые образуют гипервариабельные петли. Различные CDR в пределах антитела могут быть обозначены их соответствующим числом и типом цепи, включая, без ограничения, следующие: a) CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3, CDR-H1, CDR-H2 и CDR-H3; b) CDRL1, CDRL2, CDRL3, CDRH1, CDRH2 и CDRH3; c) LCDR-1, LCDR-2, LCDR-3, HCDR-1, HCDR-2 и HCDR-3; или d) LCDR1, LCDR2, LCDR3, HCDR1, HCDR2 и HCDR3; т.д. Термин «CDR» используется в данном документе также с целью охватывать HVR или «гипервариабельную область», включая гипервариабельные петли. Типовые гипервариабельные петли встречаются у аминокислотных остатков 26-32 (L1), 50-52 (L2), 91-96 (L3), 26-32 (H1), 53-55 (H2) и 96-101 (H3). (Chothia и Lesk,  196:901-917 (1987).)
[0063] Термин «вариабельная область тяжелой цепи», в контексте настоящего документа, относится к области, содержащей по меньшей мере три CDR тяжелой цепи. В некоторых вариантах осуществления вариабельная область тяжелой цепи содержит три CDR и по меньшей мере FR2 и FR3. В некоторых вариантах осуществления вариабельная область тяжелой цепи содержит по меньшей мере HCDR1 тяжелой цепи, (FR) 2 каркаса, HCDR2, FR3 и HCDR3. В некоторых вариантах осуществления вариабельная область тяжелой цепи также содержит по меньшей мере часть FR1 и/или по меньшей мере часть FR4.
H
H
H
1
2
3
4
1
2
[0064] Термин «константная область тяжелой цепи», в контексте настоящего документа, относится к области, содержащей по меньшей мере три константных домена тяжелой цепи, C1, C2 и C3. Конечно, неизменяющие функции делеции и изменения в пределах доменов включены в объем термина «константная область тяжелой цепи», если не указано иное. Неограничивающие типовые константные области тяжелой цепи включают γ, δ и α. Неограничивающие типовые константные области тяжелой цепи также включают ε и μ. Каждая тяжелая константная область соответствует изотипу антитела. Например, антитело, содержащее константную область γ, представляет собой антитело IgG, антитело, содержащее константную область δ, представляет собой антитело IgD и антитело, содержащее константную область α, представляет собой антитело IgA. Кроме того, антитело, содержащее константную область μ, представляет собой антитело IgM, и антитело, содержащее константную область ε, представляет собой антитело IgE. Определенные изотипы могут быть далее подразделены на подклассы. Например, антитела IgG включают, но не ограничиваются ими, антитела IgG1 (содержащие константную область γ), IgG2 (содержащие константную область γ), IgG3 (содержащие константную область γ) и IgG4 (содержащие константную область γ); антитела IgA включают, но не ограничиваются ими, антитела IgA1 (содержащие константную область α) и антитела IgA2 (содержащие константную область α); и антитела IgM включают, но не ограничиваются ими, IgM1 и IgM2.
[0065] Термин «тяжелая цепь», в контексте настоящего документа, относится к полипептиду, содержащему по меньшей мере вариабельную область тяжелой цепи, с лидерной последовательностью или без нее. В некоторых вариантах осуществления тяжелая цепь содержит по меньшей мере часть константной области тяжелой цепи. Термин «полноразмерная тяжелая цепь», в контексте настоящего документа, относится к полипептиду, содержащему вариабельную область тяжелой цепи и константную область тяжелой цепи, с лидерной последовательностью или без нее.
[0066] Термин «вариабельная область легкой цепи», в контексте настоящего документа, относится к области, содержащей по меньшей мере три легких цепи CDR. В некоторых вариантах осуществления вариабельная область легкой цепи содержит три CDR и по меньшей мере FR2 и FR3. В некоторых вариантах осуществления вариабельная область легкой цепи содержит по меньшей мере легкую цепь LCDR1, каркас (FR) 2, LCDR2, FR3 и LCDR3. Например, вариабельная область легкой цепи может содержать легкую цепь CDR1, каркас (FR) 2, CDR2, FR3 и CDR3. В некоторых вариантах осуществления вариабельная область легкой цепи также содержит по меньшей мере часть FR1 и/или по меньшей мере часть FR4.
L
[0067] Термин «константная область легкой цепи», в контексте настоящего документа, относится к области, содержащей константный домен легкой цепи C. Неограничивающие типовые константные области легкой цепи включают λ и κ. Конечно, не изменяющие функции делеции и изменения в пределах доменов включены в объем термина «константная область легкой цепи», если не указано иное.
[0068] Термин «легкая цепь», в контексте настоящего документа, относится к полипептиду, содержащему по меньшей мере вариабельную область легкой цепи, с лидерной последовательностью или без нее. В некоторых вариантах осуществления легкая цепь содержит по меньшей мере часть константной области легкой цепи. Термин «полноразмерная легкая цепь», в контексте настоящего документа, относится к полипептиду, содержащему вариабельную область легкой цепи и константную область легкой цепи, с лидерной последовательностью или без нее.
L
H
L
L
[0069] «Акцепторный человеческий каркас» для целей настоящего изобретения представляет собой каркас, содержащий аминокислотную последовательность каркаса вариабельного домена легкой цепи (V) или каркас вариабельного домена тяжелой цепи (V), полученный из каркаса иммуноглобулина человека или консенсусного человеческого каркаса, как определено ниже. Акцепторный человеческий каркас, полученный из каркаса иммуноглобулина человека или консенсусного человеческого каркаса, может содержать такую же аминокислотную последовательность или может содержать изменения аминокислотной последовательности. В некоторых вариантах осуществления число замен аминокислот составляет 10 или менее, 9 или менее, 8 или менее, 7 или менее, 6 или менее, 5 или менее, 4 или менее, 3 или менее, или 2 или менее. В некоторых вариантах осуществления акцепторный человеческий каркас V идентичен по последовательности каркасной последовательности иммуноглобулина человека V или консенсусной каркасной последовательности человека.
D
D
[0070] «Аффинность» относится к силе общей суммы нековалентных взаимодействий между одним сайтом связывания молекулы (например, антителом) и его партнером по связыванию (например, антигеном). Аффинность молекулы X к ее партнеру Y обычно может быть представлена константой диссоциации (K). Аффинность может быть измерена общепринятыми способами, известными в данной области техники (такими как, например, ELISA K, KinExA, интерферометрией биослоя (BLI) и/или устройства поверхностного плазмонного резонанса (например, устройство BIAcore), включая те, которые описаны в настоящем документе).
D
[0071] Термин «K», в контексте настоящего документа, относится к константе равновесной диссоциации взаимодействия антитело-антиген.
D
d
on
off
d
off
on

6
-1
-1
См., например
et al.
J. Mol. Biol.
[0072] В некоторых вариантах осуществления «K», «K», «Kd» или «значение Kd» антитела измеряется с использованием анализов поверхностного плазмонного резонанса с использованием BIACORE-2000 или BIACORE-3000 (BIAcore, Inc., г. Пискатауэй, штат Нью-Джерси, США) при 25°С с чипами CM5 с иммобилизованными антигенами при ~10 единицах ответа (response units - RU). Вкратце, биосенсорные чипы с карбоксиметилированным декстраном (CM5, BIACORE, Inc.) активируют гидрохлоридом N-этил-N’-(3-диметиламинопропил)карбодиимида (EDC) и N-гидроксисукцинимидом (NHS) в соответствии с инструкциями поставщика. Антиген разбавляют 10 мМ ацетатом натрия, рН 4,8, до 5 мкг/мл (~0,2 мкМ) перед инъекцией со скоростью потока 5 мкл/минуту, чтобы получить приблизительно 10 единиц ответа (RU) связанного белка. После инъекции антигена вводят 1 М этаноламин для блокировки непрореагировавших групп. Для измерения кинетики серийные разведения полипептида, например полноразмерного антитела, вводят в PBS с 0,05% поверхностно-активным веществом TWEEN-20™ (PBST) при 25°C при скорости потока приблизительно 25 мкл/мин. Скорости ассоциации (k) и скорости диссоциации (k) рассчитываются с использованием простой мономолекулярной модели связывания Ленгмюра (BIACORE Evaluation версия программы 3.2) путем одновременного подбора сенсограмм ассоциации и диссоциации. Равновесная константа диссоциации (K) рассчитывается как соотношение k/k. , Chen ,  293:865-881 (1999). Если скорость ассоциации превышает 10 Mс с помощью анализа поверхностного плазмонного резонанса, описанного выше, то скорость ассоциации может быть определена с помощью методики гашения флуоресценции, который измеряет увеличение или уменьшение интенсивности флуоресцентного излучения (возбуждение = 295 нм; испускание = 340 нм, полоса пропускания 16 нм) при 25°С 20 нМ антиантигенного антитела в PBS, pH 7,2, в присутствии возрастающих концентраций антигена, измеренных в спектрометре, таком как спектрофотометр, оборудованный установкой для метода остановленного потока (Aviv Instruments) или спектрофотометр SLM-AMINCO™ серии 8000 (ThermoSpectronic) с кюветой с мешалкой.
d
[0073] В некоторых вариантах осуществления разница между упомянутыми двумя значениями (например, значениями K) является по существу одинаковой, например, менее чем около 50%, менее чем около 40%, менее чем около 30%, менее чем около 20% и/или менее чем около 10% в зависимости от эталонного/компараторного значения.
d
[0074] В некоторых вариантах осуществления разница между упомянутыми двумя значениями (например, значениями K) существенно отличается, например, на более чем около 10%, более чем около 20%, более чем около 30%, более чем около 40% и/или более чем около 50% в зависимости от значения для эталонной/компараторной молекулы.
Ann. Biol. Clin
[0075] «Поверхностный плазмонный резонанс» обозначает оптическое явление, которое позволяет анализировать биоспецифические взаимодействия в реальном времени путем обнаружения изменений концентрации белка в матрице биосенсора, например, с использованием системы BIAcore™ (BIAcore International AB, компания GE Healthcare, г. Упсала, Швеция и г. Пискатауэй, штат Нью-Джерси, США). Для дальнейших описаний см. Jonsson et al. (1993) . 51:19-26.
См., например
Anal. Biochem.
[0076] «Биослойная интерферометрия» относится к оптическому аналитическому способу, который анализирует интерферограмму света, отраженного от слоя иммобилизованного белка на кончике биосенсора и внутреннего слоя сравнения. Изменения в количестве молекул, связанных с кончиком биосенсора, вызывают сдвиги в интерферограмме, которые могут быть измерены в режиме реального времени. Неограничивающим примером устройства для биослойной интерферометрии является система ForteBio Octet RED96 (Pall Corporation). , Abdiche et al., 2008,  377: 209-277.
on
on
off
on
on
off
off
off
[0077] Термин «k», в контексте настоящего документа, относится к константе скорости ассоциации антитела с антигеном. В частности, константы скорости (k и k) и равновесные константы диссоциации измеряют с использованием IgG (двухвалентных) с одновалентным антигеном PD-1. «K», «k», «константа скорости ассоциации» или «ka» используются в настоящем документе взаимозаменяемо. Значение указывает на скорость связывания связывающего белка с его антигеном-мишенью или скорость образования комплекса между антителом и антигеном, представленную уравнением: Антитело(«Ab»)+Антиген(«Ag»)→Ab-Ag. Термин «k», в контексте настоящего документа, относится к константе скорости диссоциации антитела из комплекса антитело/антиген. K также обозначается как «k» или «константа скорости диссоциации». Это значение указывает на скорость диссоциации антитела от его антигена-мишени или разделения комплекса Ab-Ag с течением времени на свободные антитело и антиген, как показано уравнением:
Ab+Ag←Ab-Ag.
in vivo
[0078] Термин «биологическая активность» относится к любому одному или более биологическим свойствам молекулы (независимо от того, представлены ли они в естественном виде так, как были обнаружены , или предоставлены или включены рекомбинантным способом). Биологические свойства включают, но не ограничиваются ими, связывание рецептора, индукцию пролиферации клеток, ингибирование роста клеток, индукцию других цитокинов, индукцию апоптоза и ферментативную активность. В некоторых вариантах осуществления биологическая активность белка PD-1 включает, например, стимулирование апоптоза в антиген-специфических Т-клетках, уменьшение апоптоза в регуляторных Т (Treg) клетках, ингибирование активации Т-клеток, ингибирование пролиферации Т-клеток и облегчение Т-клеточной анергии или истощение.
[0079] Антитело «с созревшей аффинностью» относится к антителу с одним или более изменениями в одной или более CDR по сравнению с родительским антителом, которое не обладает такими изменениями, такими изменениями, приводящими к улучшению аффинности антитела к антигену.
[0080] Термин «химерное антитело», в контексте настоящего документа, относится к антителу, в котором участок тяжелой и/или легкой цепи получен из конкретного источника или вида, в то время как по меньшей мере часть остатка тяжелой и/или легкой цепи получены из другого источника или вида. В некоторых вариантах осуществления химерное антитело относится к антителу, содержащему по меньшей мере одну вариабельную область от первого вида (такого как мышь, крыса, яванский макак и т.д.) и по меньшей мере одну константную область от второго вида (такого как человек, яванский макак и т.д.). В некоторых вариантах осуществления химерное антитело содержит по меньшей мере одну вариабельную область мыши и по меньшей мере одну константную область человека. В некоторых вариантах осуществления химерное антитело содержит по меньшей мере одну вариабельную область яванского макака и по меньшей мере константную область человека. В некоторых вариантах осуществления все вариабельные области химерного антитела относятся к первому виду и все константные области химерного антитела относятся ко второму виду. Химерная конструкция также может представлять собой функциональный фрагмент, как отмечено выше.
2
2
[0081] Термин «гуманизированное антитело», в контексте настоящего документа, относится к антителу, в котором по меньшей мере одна аминокислота в каркасной области нечеловеческой вариабельной области была заменена соответствующей аминокислотой из вариабельной области человека. В некоторых вариантах осуществления гуманизированное антитело содержит по меньшей мере одну человеческую константную область или ее фрагмент. В некоторых вариантах осуществления гуманизированное антитело представляет собой фрагмент антитела, такой как Fab, scFv, (Fab') и т.д. Термин гуманизированный также обозначает формы нечеловеческих (например, мышиных) антител, которые представляют собой химерные иммуноглобулины, цепи иммуноглобулинов или их фрагменты (такие как Fv, Fab, Fab', F(ab') или другие антигенсвязывающие подпоследовательности антител), которые содержат минимальную последовательность иммуноглобулина, не относящегося к человеку. Гуманизированные антитела могут включать иммуноглобулин человека (реципиентное антитело), в которых остатки определяющей комплементарность области (CDR) реципиента замещены остатками из CDR вида, не относящегося к человеку (донорское антитело), такого как мышь, крыса или кролик, имеющий желаемую специфичность, аффинность и способность. В некоторых случаях остатки каркасной области Fv (FR) иммуноглобулина человека заменены соответствующими остатками, не относящимися к человеку. Кроме того, гуманизированное антитело может содержать остатки, которые не обнаружены ни в реципиентном антителе, ни в импортированных CDR или каркасных последовательностях, но включены для дальнейшего уточнения и оптимизации характеристик антитела. В общем, гуманизированное антитело может содержать по существу все из по меньшей мере одного и, как правило, двух вариабельных доменов, в которых все или по существу все области CDR соответствуют доменам иммуноглобулина, не относящегося к человеку, и все или по существу все области FR являются последовательностями консенсусной последовательности иммуноглобулина человека. В некоторых вариантах осуществления гуманизированное антитело также может содержать по меньшей мере часть константной области или домена (Fc) иммуноглобулина, обычно иммуноглобулина человека. Другие формы гуманизированных антител имеют одну или более CDR (CDR L1, CDR L2, CDR L3, CDR H1, CDR H2 и/или CDR H3), которые изменены по отношению к исходному антителу, которые также называются одной или более CDR «полученными из» одной или более CDR из исходного антитела. Следует иметь в виду, что гуманизированная последовательность может быть идентифицирована по ее первичной последовательности и необязательно обозначает способ, с помощью которого было создано антитело.
[0082] Термин «CDR-привитое антитело», в контексте настоящего документа, относится к гуманизированному антителу, в котором одна или более определяющих комплементарность областей (CDR) первого (не принадлежащего человеку) вида, были привиты к каркасным областям (FR) второго (принадлежащего человеку) вида.

in vitro
[0083] Термин «антитело человека», в контексте настоящего документа, охватывает антитела, продуцируемые у людей, антитела, продуцируемые у животных, отличных от человека, которые содержат гены иммуноглобулина человека, например мыши XenoMouse, и антитела, отобранные с использованием методов , например с использованием фагового дисплея (Vaughan et al., 1996, Nature Biotechnology, 14:309-314; Sheets et al., 1998, Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 95:6157-6162; Hoogenboom and Winter, 1991, J. Mol. Biol., 227:381; Marks et al., 1991, J. Mol. Biol., 222:581), причем репертуар антител основан на последовательности иммуноглобулина человека. Термин «антитело человека» обозначает семейство последовательностей, которые являются последовательностями человека. Таким образом, этот термин обозначает не способ, с помощью которого было создано антитело, а семейство родственных последовательностей.
[0084] «Функциональная Fc-область» обладает «эффекторной функцией» нативной последовательности Fc-области. Типовые «эффекторные функции» включают связывание с Fc-рецептором; связывание C1q; CDC (комплементзависимая цитотоксичность); АЗКЦ (ADCC); фагоцитоз; подавление рецепторов клеточной поверхности (например, B-клеточного рецептора; BCR) и т.д. Такие эффекторные функции обычно требуют, чтобы Fc-область была объединена с доменом связывания (например, вариабельным доменом антитела), и может быть оценена с использованием различных анализов.
[0085] «Нативная последовательность Fc-области» включает аминокислотную последовательность идентичную аминокислотной последовательности Fc-области, встречающейся в природе. Нативные последовательности Fc-областей человека включают нативную последовательность Fc-области IgG1 человека (аллотипы не A и A); нативную последовательность Fc-области IgG2 человека; нативную последовательность Fc-области IgG3 человека и нативную последовательность Fc-области IgG4 человека, а также существующие в природе варианты указанных последовательностей.
[0086] «Вариантная Fc-область» содержит аминокислотную последовательность, которая отличается от нативной последовательности Fc-области благодаря по меньшей мере одной модификации аминокислоты. В некоторых вариантах осуществления «вариантная Fc-область» содержит аминокислотную последовательность, которая отличается от нативной последовательности Fc-области благодаря по меньшей мере одной модификации аминокислоты, но при этом сохраняет по меньшей мере одну эффекторную функцию нативной последовательности Fc-области. В некоторых вариантах осуществления вариантная Fc-область имеет по меньшей мере одну аминокислотную замену по сравнению с нативной последовательностью Fc-области или с Fc-областью родительского полипептида, например от около одной до около десяти аминокислотных замен и, предпочтительно, от около одной до около пяти аминокислотных замен в нативной последовательности Fc-области или в последовательности Fc-области родительского полипептида. В некоторых вариантах осуществления вариантная Fc-область в данном документе будет иметь по меньшей мере на около 80% идентичности с нативной последовательностью Fc-области и/или с Fc-областью родительского полипептида, по меньшей мере на около 90% идентичности с указанной последовательностью, по меньшей мере на около 95%, по меньшей мере на около 96%, по меньшей мере на около 97%, по меньшей мере на около 98% или по меньшей мере на около 99% идентичности с указанной последовательностью.
См., например
Annu. Rev. Immunol
Annu. Rev. Immunol
et al
Immunomethods
et al
J. Lab. Clin. Med
[0087] Термины «Fc-рецептор» или «FcR» используются для описания рецептора, который связывается с Fc-областью антитела. В некоторых вариантах осуществления FcγR представляет собой нативный FcR человека. В некоторых вариантах осуществления FcR представляет собой рецептор, который связывает антитело IgG (гамма-рецептор) и включает рецепторы подклассов FcγRI, FcγRII и FcγRIII, в том числе аллельные варианты и формы данных рецепторов, которые подверглись альтернативному сплайсингу. Рецепторы FcγRII включают FcγRIIA («активирующий рецептор») и FcγRIIB («ингибирующий рецептор»), которые содержат аналогичные аминокислотные последовательности, отличающиеся преимущественно цитоплазматическими доменами. Активирующий рецептор FcγRIIA содержит в цитоплазматическом домене иммунорецепторный тирозиновый активирующий мотив (ITAM). Ингибирующий рецептор FcγRIIB содержит в цитоплазматическом домене иммунорецепторный тирозиновый ингибирующий мотив (ITIM). (, Daeron, . 15:203-234 (1997)). Обзор FcR приведен в публикациях Ravetch and Kinet,  9:457-92 (1991); Capel .,  4:25-34 (1994) и de Haas ., . 126:330-41 (1995). Другие FcR, в том числе те из них, которые будут обнаружены в будущем, охватываются в настоящей заявке термином «FcR».
et al
J. Immunol
et al
J. Immunol
см., например
Immunol. Today
et al
Nature Biotechnology
et al
J. Biol. Chem.
et al
[0088] Термин «Fc-рецептор» или «FcR» также включает неонатальный рецептор, FcRn, отвечающий за перенос материнских IgG в плод (Guyer ., . 117:587 (1976) и Kim ., . 24:249 (1994)) и регуляция гомеостаза иммуноглобулинов. Способы измерения связывания с FcRn являются известными (, Ghetie and Ward.,  18(12):592-598 (1997); Ghetie ., , 15(7):637-640 (1997); Hinton .,  279(8):6213-6216 (2004); WO 2004/92219 (Hinton .).
[0089] «Эффекторные функции» относятся к биологической активности, присущей Fc-области антитела, которая варьируется в зависимости от изотипа антитела. Примеры эффекторных функций антитела включают: связывание с C1q и комплементзависимую цитотоксичность (CDC); связывание с Fc-рецептором; антителозависимую клеточноопосредованную цитотоксичность АЗКЦ (ADCC); фагоцитоз; отрицательную регуляцию рецепторов клеточной поверхности (например, B-клеточного рецептора) и активацию B-клеток.
[0090] «Эффекторные клетки человека» представляют собой лейкоциты, которые экспрессируют один или более FcR и осуществляют эффекторные функции. В некоторых вариантах осуществления такие клетки экспрессируют по меньшей мере FcγRIII и осуществляют эффекторную (-ые) функцию (-и) АЗКЦ (ADCC). Примеры лейкоцитов человека, которые опосредуют АЗКЦ (ADCC), включают мононуклеарные клетки периферической крови (МКПК), клетки естественные киллеры (NK), моноциты, цитотоксические Т-клетки и нейтрофилы. Эффекторные клетки могут быть выделены из нативного источника, например из крови.
Annu. Rev. Immunol
in vivo
et al
Proc. Natl. Acad. Sci.
(USA)
[0091] «Антителозависимая клеточноопосредованная цитотоксичность» или «ADCC» относится к форме цитотоксичности, при которой секретированный Ig, связанный с Fc-рецепторами (FcR), присутствующими на определенных цитотоксических клетках (например, клетках NK, нейтрофилах и макрофагах), позволяет этим цитотоксическим эффекторным клеткам специфически связываться с антиген-несущей клеткой-мишенью, а затем убивают клетку-мишень цитотоксинами. Первичные клетки для опосредования АЗКЦ (ADCC), клетки NK, экспрессируют только FcγRIII, тогда как моноциты экспрессируют FcγRI, FcγRII и FcγRIII. Экспрессия FcR на гемопоэтических клетках суммирована в таблице 3 на странице 464 публикации Ravetch and Kinet,  9:457-92 (1991). Для оценки активности АЗКЦ (ADCC) интересующей молекулы можно проводить анализ АЗКЦ (ADCC) in vitro, описанный в патенте США № 5500362 или 5821337 или патенте США № 6737056 (Presta). Пригодные эффекторные клетки для таких анализов включают МКПК и клетки NK. Альтернативно или дополнительно, активность АЗКЦ (ADCC) интересующей молекулы может быть оценена , например, на модели животного, как, например, раскрыто в Clynes . 95:652-656 (1998). Дополнительные варианты полипептидов с измененными аминокислотными последовательностями Fc-области (полипептиды с вариантной Fc-областью) и повышенной или пониженной активностью АЗКЦ (ADCC) описаны, например, в патенте США № 7923538 и патенте США 7994290.
et al
J. Immunol. Methods
et al
J. Immunol.
[0092] «Комплементзависимая цитотоксичность» или «CDC» относится к лизису клетки-мишени в присутствии комплемента. Активация классического пути комплемента инициируется связыванием первого компонента системы комплемента (C1q) с антителами (соответствующего подкласса), которые связаны с их распознаваемым антигеном. Для оценки активации комплемента может быть выполнен анализ CDC, например, как описано в Gazzano-Santoro .,  202:163 (1996). Полипептидные варианты с измененными аминокислотными последовательностями Fc-области (полипептиды с вариантной Fc-областью) и повышенной или пониженной способностью связывания C1q описаны, например, в патенте США № 6194551 B1, в патенте США № 7923538, в патенте США № 7994290 и WO 1999/51642. Также, см., например, Idusogie .,  164: 4178-4184 (2000).
[0093] Полипептидный вариант с «измененной» аффинностью связывания FcR или активностью АЗКЦ (ADCC) представляет собой вариант, который имеет либо повышенную, либо пониженную активность связывания FcR и/или активность АЗКЦ (ADCC) по сравнению с родительским полипептидом или с полипептидом, содержащим нативную последовательность Fc-области. Полипептидный вариант который «демонстрирует повышенное связывание» с FcR, связывает по меньшей мере один FcR с лучшей аффинностью, чем родительский полипептид. Полипептидный вариант, который «демонстрирует пониженное связывание» с FcR, связывает по меньшей мере один FcR с более низкой аффинностью, чем родительский полипептид. Такие варианты, которые демонстрируют пониженное связывание с FcR, могут обладать незначительным или не обладать заметным связыванием с FcR, например, 0-20% связывания с FcR по сравнению с нативной последовательностью Fc-области IgG.
in vitro
in vivo
in vitro,
[0094] Полипептидный вариант, который «опосредует антителозависимую клеточноопосредованную цитотоксичность АЗКЦ (ADCC) в присутствии эффекторных клеток человека более эффективно», чем родительское антитело, представляет собой полипептидный вариант, который более эффективно опосредует АЗКЦ (ADCC) или , когда количества полипептидного варианта и родительского антитела, применяемые в анализе, по существу одинаковы. Как правило, такие полипептиды можно обнаружить с применением анализа АЗКЦ (ADCC)  раскрытого в настоящем документе, однако можно также применять другие анализы или методы определения активности АЗКЦ (ADCC), например модель на животных и т.д.
[0095] Термин «по существу аналогичный» или «по существу одинаковый», в контексте настоящего документа, обозначает достаточно высокую степень сходства между двумя или более числовыми значениями, так что специалист в данной области техники будет рассматривать разницу между этими двумя или более значениями как малую или нулевую биологическую и/или статистическую значимость в контексте биологической характеристики, измеряемой указанным значением. В некоторых вариантах осуществления два или более по существу одинаковых значения отличаются не более чем на около любое из 5%, 10%, 15%, 20%, 25% или 50%.
[0096] Фраза «существенно различающийся», в контексте настоящего документа, обозначает достаточно высокую степень различия между двумя числовыми значениями, так что специалист в данной области техники будет считать, что различие между этими двумя значениями имеет статистическую значимость в контексте биологической характеристики, измеренной указанными значениями. В некоторых вариантах осуществления два по существу различных числовых значения отличаются более чем на около любое из 10%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% или 100%.
[0097] Термин «существенно уменьшенный», в контексте настоящего документа, обозначает достаточно высокую степень уменьшения между числовым значением и эталонным числовым значением, так что специалист в данной области техники сочтет, что разница между этими двумя значениями имеет статистическую значимость в пределах контекста биологической характеристики, измеренной указанными значениями. В некоторых вариантах осуществления существенно уменьшенные числовые значения уменьшаются более чем на около любое из 10%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% или 100% по сравнению с эталонным значением.
[0098] Термин «лидерная последовательность» относится к последовательности аминокислотных остатков, расположенных на N-конце полипептида, которая облегчает секрецию полипептида из клетки млекопитающего. Лидерная последовательность может быть отщеплена при экспорте полипептида из клетки млекопитающего, образуя зрелый белок. Лидерные последовательности могут быть природными или синтетическими, и могут быть гетерологичными или гомологичными белку, к которому они присоединены.
[0099] Полипептид с «нативной последовательностью» включает полипептид, имеющий ту же аминокислотную последовательность, что и полипептид, встречающийся в природе. Таким образом, полипептид с нативной последовательностью может иметь аминокислотную последовательность встречающегося в природе полипептида от любого млекопитающего. Такой полипептид с нативной последовательностью может быть выделен из природного источника или может быть получен рекомбинантным или синтетическим путем. Термин полипептид «с нативной последовательностью», в частности, охватывает встречающиеся в природе укороченные или секретируемые формы полипептида (например, последовательность внеклеточного домена), встречающиеся в природе вариантные формы (например, которые подверглись альтернативному сплайсингу) и встречающиеся в природе аллельные варианты полипептида.
[00100] «Вариант» полипептида означает биологически активный полипептид, имеющий по меньшей мере около 80% идентичности аминокислотной последовательности с полипептидом с нативной последовательностью после выравнивания последовательностей и введения гэпов, если необходимо, для достижения максимальной процентной идентичности последовательности и без учета каких-либо консервативных замен, как части идентичности последовательности. Такие варианты включают, например, полипептиды, в которых один или более аминокислотных остатков добавлены или удалены на N- или C-конце полипептида. В некоторых вариантах осуществления вариант будет иметь по меньшей мере около 80% идентичности аминокислотной последовательности. В некоторых вариантах осуществления вариант будет иметь по меньшей мере около 90% идентичности аминокислотной последовательности. В некоторых вариантах осуществления вариант будет иметь по меньшей мере около 95% идентичности аминокислотной последовательности с полипептидом с нативной последовательностью.
[00101] В контексте настоящего документа, термины «процент (%) идентичности аминокислотной последовательности» и «гомология» в отношении последовательности пептида, полипептида или антитела определяется как процент аминокислотных остатков в кандидатной последовательности, которые идентичны аминокислотным остаткам в конкретной пептидной или полипептидной последовательности после выравнивания последовательностей и введения гэпов, если необходимо, для достижения наибольшего процента идентичности последовательности и не принимая во внимание какие-либо консервативные замены как часть идентичной последовательности. Выравнивание с целью определения процента идентичности аминокислотной последовательности может быть выполнено различными способами, известными специалисту в данной области техники, например, с помощью общедоступного компьютерного программного обеспечения, такого как BLAST, BLAST-2, ALIGN или MEGALIGN™ (DNASTAR). Специалисты в данной области техники могут выбрать подходящие параметры для определения выравнивания, включая любые алгоритмы, необходимые для достижения максимального выравнивания по всей длине сравниваемых последовательностей.
[00102] Замена аминокислоты может включать, но не ограничивается этим, замену одной аминокислоты в полипептиде другой аминокислотой. Иллюстративные замены приведены в таблице 1. Аминокислотные замены могут быть введены в интересующее антитело, и продукты подвергнутые скринингу для желаемой активности, например, сохраненного/улучшенного связывания антигена, пониженной иммуногенности или улучшенной АЗКЦ (ADCC) или CDC.
ТАБЛИЦА 1
Исходный остаток
Типовые замещения
Ala (A)
Val; Leu; Ile
Arg (R)
Lys; Gln; Asn
Asn (N)
Gln; His; Asp, Lys; Arg
Asp (D)
Glu; Asn
Cys (C)
Ser; Ala
Gln (Q)
Asn; Glu
Glu (E)
Asp; Gln
Gly (G)
Ala
His (H)
Asn; Gln; Lys; Arg
Ile (I)
Leu; Val; Met; Ala; Phe; Норлейцин
Leu (L)
Норлейцин; Ile; Val; Met; Ala; Phe
Lys (K)
Arg; Gln; Asn
Met (M)
Leu; Phe; Ile
Phe (F)
Trp; Leu; Val; Ile; Ala; Tyr
Pro (P)
Ala
Ser (S)
Thr
Thr (T)
Val; Ser
Trp (W)
Tyr; Phe
Tyr (Y)
Trp; Phe; Thr; Ser
Val (V)
Ile; Leu; Met; Phe; Ala; Норлейцин
[00103] Аминокислоты могут быть сгруппированы в соответствии с общими свойствами боковой цепи:
(1) гидрофобные: норлейцин, Met, Ala, Val, Leu, Ile;
(2) нейтральные гидрофильные: Cys, Ser, Thr, Asn, Gln;
(3) кислотные: Asp, Glu;
(4) основные: His, Lys, Arg;
(5) остатки, которые влияют на ориентацию цепи: Gly, Pro;
(6) ароматические: Trp, Tyr, Phe.
[00104] Неконсервативные замены влекут за собой замену представителя одного из данных классов на представителя другого класса.
[00105] Термин «вектор» используется для описания полинуклеотида, который может быть сконструирован таким образом, чтобы содержать клонированный полинуклеотид или полинуклеотиды, которые могут реплицироваться в клетке-хозяине. Вектор может включать один или более из следующих элементов: точку начала репликации, одну или более регуляторных последовательностей (таких как, например, промоторы и/или энхансеры), которые регулируют экспрессию интересующего полипептида, и/или один или более селективные маркерные гены (такие как, например, гены устойчивости к антибиотикам и гены, которые могут быть использованы в колориметрических анализах, например, β-галактозидаза). Термин «экспрессионный вектор» относится к вектору, который используется для экспрессии интересующего полипептида в клетке-хозяине.

in vivo
[00106] «Клетка-хозяин» относится к клетке, которая может быть или стала реципиентом вектора или выделенного полинуклеотида. Клетки-хозяева могут быть прокариотическими клетками или эукариотическими клетками. Типовые эукариотические клетки включают клетки млекопитающих, такие как клетки приматов или клетки животных, не относящихся к приматам; клетки грибов, таких как дрожжи; растительные клетки; и клетки насекомых. Неограничивающие типовые клетки млекопитающих включают, но не ограничиваются ими, клетки NSO, клетки PER.C6 (Crucell), клетки 293 и CHO и их производные, например клетки 293-6E и DG44, соответственно. Клетки-хозяева включают потомство одной клетки-хозяина, и потомство необязательно может быть полностью идентичным (по морфологии или по комплементарности геномной ДНК) исходной родительской клетке из-за естественной, случайной или преднамеренной мутации. Клетка-хозяин включает клетки, трансфицированные  полинуклеотидом (-ами), представленным (-и) в настоящем документе.
[00107] Термин «выделенный», в контексте настоящего документа, относится к молекуле, которая была отделена по меньшей мере от некоторых компонентов, с которыми она обычно встречается или продуцируется в природе. Например, полипептид называется «выделенным», когда он отделен по меньшей мере от некоторых компонентов клетки, в которой он был продуцирован. В случае, когда полипептид секретируется клеткой после экспрессии, физическое отделение супернатанта, содержащего полипептид, от клетки, которая его продуцирует, считается «выделением» полипептида. Подобным образом, полинуклеотид называют «выделенным», когда он не является частью более крупного полинуклеотида (такого как, например, геномная ДНК или митохондриальная ДНК, в случае ДНК-полинуклеотида), в котором он обычно находится в природе, или отделен по меньшей мере от некоторых компонентов клетки, в которой он был продуцирован, например в случае полинуклеотида РНК. Таким образом, ДНК-полинуклеотид, который содержится в векторе внутри клетки-хозяина, может называться «выделенным».
[00108] Термины «индивидуум» или «субъект» используются в настоящем документе взаимозаменяемо для обозначения животного; например млекопитающего. В некоторых вариантах осуществления предлагаются способы лечения млекопитающих, включая, но не ограничиваясь ими, людей, грызунов, обезьян, кошачьих, собак, лошадей, крупный рогатый скот, свиней, овец, коз, лабораторных животных-млекопитающих, сельскохозяйственных животных-млекопитающих, спортивных животных-млекопитающих и домашних животных-млекопитающих. В некоторых примерах «индивидуум» или «субъект» относится к индивидууму или субъекту, нуждающемуся в лечении заболевания или расстройства. В некоторых вариантах осуществления субъектом, который должен получать лечение, может быть пациент, определяющий тот факт, что субъект был идентифицирован как имеющий расстройство, относящееся к лечению, или имеющий достаточный риск заболевания данным расстройством.
[00109] Термин «заболевание» или «расстройство», в контексте настоящего документа, относится к состоянию, при котором лечение необходимо и/или желательно.
[00110] «Рак» и «опухоль», в контексте настоящего документа, являются взаимозаменяемыми терминами, которые относятся к любому аномальному росту клеток или тканей или пролиферации у животного. Термины «рак» и «опухоль», в контексте настоящего документа, охватывают солидную и гематологическую злокачественную/лимфатическую опухоль, а также охватывают злокачественный, предзлокачественный и доброкачественный рост, такой как дисплазия. Примеры рака включают, но не ограничиваются ими, карциному, лимфому, бластому, саркому и лейкоз. Более конкретные неограничивающие примеры таких видов рака включают плоскоклеточный рак, мелкоклеточный рак легкого, рак гипофиза, рак пищевода, астроцитому, саркому мягких тканей, немелкоклеточный рак легкого, аденокарциному легкого, плоскоклеточную карциному легкого, рак брюшины, гепатоцеллюлярный рак, рак желудочно-кишечного тракта, рак поджелудочной железы, глиобластому, рак шейки матки, рак яичника, рак печени, рак мочевого пузыря, гепатому, рак молочной железы, рак толстой кишки, колоректальный рак, карциному эндометрия или матки, карциному слюнной железы, рак почки, рак печени, рак простаты, рак вульвы, рак щитовидной железы, карциному печени, рак головного мозга, рак эндометрия, рак яичка, холангиокарциному, карциному желчного пузыря, рак желудка, меланому, мезотелиому и различные типы рака головы и шеи.
[00111] Термин «лечение», в контексте настоящего документа, относится к подходу для получения полезных или желаемых клинических результатов. Термин «лечение», в контексте настоящего документа, охватывает любое введение или применение лекарственного средства для лечения заболевания у млекопитающего, включая человека. Для целей настоящего раскрытия полезные или желательные клинические результаты включают, но не ограничиваются ими, любое одно или более из: ослабление одного или более симптомов, уменьшение степени заболевания, предотвращение или задержку распространения (например, метастазирования, например, метастазирования в легкое или в лимфатический узел) заболевания, предотвращение или задержка рецидива заболевания, задержка или замедление прогрессирования заболевания, ослабление болезненного состояния, ингибирование заболевания или прогрессирования заболевания, ингибирование или замедление заболевания или его прогрессирования, задержка его развития и ремиссию (частичную или полную). Термин «лечение» также включает уменьшение патологических последствий пролиферативного заболевания. Способы, представленные в настоящем документе, предусматривают любой один или более из этих аспектов лечения. В соответствии с вышеизложенным, термин «лечение» не требует стопроцентного устранения всех аспектов расстройства.
[00112] «Улучшение» означает уменьшение или улучшение одного или более симптомов по сравнению со случаем отсутствия введения анти-PD-1 антитела. «Улучшение» также включает сокращение или уменьшение продолжительности симптома.
[00113] В контексте рака термин «лечение» включает любое или все из: ингибирования роста раковых клеток, ингибирования репликации раковых клеток, уменьшения общей опухолевой нагрузки и ослабления одного или более симптомов, связанных с заболеванием.
[00114] Термин «биологический образец» означает количество вещества из живого или ранее живого существа. Такие вещества включают, но не ограничиваются ими, кровь (например, цельную кровь), плазму, сыворотку, мочу, амниотическую жидкость, синовиальную жидкость, клетки эндотелия, лейкоциты, моноциты, другие клетки, органы, ткани, костный мозг, лимфоузлы и селезенку.
HIGH
[00115] Образец, который имеет «повышенный уровень PD-1» или «экспрессирует PD-1 на повышенном уровне» или имеет значение «PD-1», означает, что уровень PD-1 таков, что специалист в данной области техники может сделать вывод о том, что рак можно лечить с помощью анти-PD-1-терапевтического средства, такого как антитело, представленное в настоящем документе. В некоторых вариантах осуществления «повышенный уровень PD-1» представляет собой уровень, при котором 1% клеток в образце опухоли демонстрируют окрашивание на PD-1. В некоторых вариантах осуществления «высокий уровень» в отношении PD-1 составляет 1% или более окрашивания, например 1, 5, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 или 100% клеток в образце опухоли демонстрируют окрашивание. В некоторых вариантах осуществления уровни PD-1 могут быть измерены с помощью хромогенного ИГХ анализа или иммунофлуоресцентного ИГХ анализа (показатель Aqua).
HIGH
[00116] Образец, который «экспрессирует PD-1» или имеет «позитивное окрашивание на PD-1» или является «PD-1 позитивным», означает, что 1% или более клеток в образце демонстрируют окрашивание на PD-1. В некоторых вариантах осуществления образец, который является PD-1 позитивным, проявляет по меньшей мере слабое, умеренное и/или сильное окрашивание клеток (на основе мембранной экспрессии PD-1). Образец с умеренным или сильным окрашиванием клеток для PD-1 также рассматривается как «PD-1».
LOW
[00117] Образец, который имеет «низкий уровень PD-L1» или экспрессирует «PD-L1 на низком уровне» или имеет значение «PD-L1», означает, что уровень PD-L1 ниже порогового уровня экспрессии рака, который обычно указывается для лечения с помощью терапии PD-1. В некоторых вариантах осуществления «низкий уровень PD-L1» представляет собой уровень, при котором менее чем 5% клеток в опухоли демонстрируют окрашивание мембран на PD-L1. В некоторых вариантах осуществления «низкий уровень» в отношении PD-L1 составляет менее 5% окрашивания, например, 4%, 3%, 2%, 1% или 0% клеток опухоли демонстрируют окрашивание. В некоторых вариантах осуществления уровни PD-L1 могут быть измерены с помощью хромогенного ИГХ анализа или иммунофлуоресцентного ИГХ анализа (показатель Aqua). Можно также сказать, что образец, который не экспрессирует обнаруживаемый PD-L1, «экспрессирует низкий уровень PD-L1». Таким образом, отсутствие детектируемого PD-L1 охвачено термином «низкий».
HIGH
[00118] Образец, который имеет «повышенный уровень PD-L1» или «экспрессирует PD-L1 на повышенном уровне» или имеет значение «PD-L1», означает, что уровень PD-L1 является таким, что специалист в данной области техники сможет сделать вывод о том, что рак можно лечить с помощью терапии PD-1. В некоторых вариантах осуществления «повышенный уровень PD-L1» представляет собой уровень, при котором 50% клеток в опухоли или более имеют мембранное окрашивание PD-L1, например, 50, 60, 70, 80, 90 или 100% клеток опухоли демонстрируют окрашивание мембраны. В некоторых вариантах осуществления уровни PD-L1 могут быть измерены с помощью хромогенного ИГХ анализа или иммунофлуоресцентного ИГХ анализа (показатель AQUA).
[00119] Образец, который «экспрессирует PD-L1» или имеет «позитивное окрашивание на PD-L1» или является «PD-L1 позитивным», означает, что 1% или более клеток имеют окрашивание мембраны на PD-L1. В некоторых вариантах осуществления образец, который является PD-L1 позитивным, проявляет по меньшей мере слабое, умеренное и/или сильное окрашивание клеток (на основе мембранной экспрессии PD-L1).
LOW
[00120] Образец, который «не имеет экспрессии PD-L1» или имеет «отрицательное окрашивание на PD-L1» или является «PD-L1 отрицательным », означает, что экспрессия PD-L1 на поверхности клеток образца не обнаруживается с помощью ИГХ, такого как хромогенный ИГХ анализ или иммунофлуоресцентный ИГХ анализ (показатель Aqua). Отрицательный PD-L1 образец также рассматривается как «PD-L1».
HIGH

[00121] В некоторых вариантах осуществления может быть использован любой способ измерения уровня PD-L1. В некоторых вариантах осуществления это может включать использование теста PD-L1 ИГХ 22C3 pharmDx (Dako, Inc., г. Карпинтерия, штат Калифорния, США), который является клинически подтвержденным и одобренным FDA тестом для оценки экспрессии PD-L1 в НМРЛ. ИГХ PD-L1 22C3 pharmDx представляет собой качественный иммуногистохимический анализ с использованием моноклонального анти-PD-L1 антитела мыши (клон 22C3), который может быть использован для обнаружения белка PD-L1 в зафиксированных в формалине и залитых парафином (FFPE) тканях немелкоклеточного рака легкого (НМРЛ). Анализ может быть выполнен в системе Autostainer Link 48 и визуализирован с использованием системы EnVision FLEX. Экспрессия белка PD-L1 определяется с использованием пропорционального опухолевого показателя (TPS), который представляет собой процент жизнеспособных опухолевых клеток, демонстрирующих частичное или полное окрашивание мембран. В некоторых вариантах осуществления образец считается PD-L1 позитивным, если TPS ≥1% жизнеспособных опухолевых клеток проявляет окрашивание мембраны с любой интенсивностью. В некоторых вариантах осуществления образец считается PD-L1, если TPS ≥50% жизнеспособных опухолевых клеток демонстрирует окрашивание мембраны с любой интенсивностью. ИГХ PD-L1 22C3 pharmDx указывается в качестве средства при идентификации пациентов с НМРЛ для лечения с помощью KEYTRUDA (пембролизумаб). Дополнительные подробности о системе оценки и ответа на пембролизумаб описаны Garon et al. (N Engl J Med 2015;372:2018-28).
[00122] Термин «контроль» относится к композиции, которая, как известно, не содержит аналит («отрицательный контроль») или содержащей аналит («положительный контроль»). Положительный контроль может содержать известную концентрацию аналита. «Контроль», «положительный контроль» и «калибратор» могут использоваться в настоящем документе взаимозаменяемо для обозначения композиции, содержащей известную концентрацию аналита. «Положительный контроль» может использоваться для определения характеристик анализа и является полезным индикатором пригодности реагентов (например, аналитов).
[00123] «Предварительно определенный предел» и «предварительно определенный уровень» обычно относятся к граничному значению анализа, которое используется для оценки результатов диагностической/прогностической/терапевтической эффективности путем сравнения результатов анализа с предварительно определенным пределом/уровнем, где предварительно определенный предел/уровень уже связан или ассоциирован с различными клиническими параметрами (например, тяжесть заболевания, прогрессия/отсутствие прогрессии/улучшение и т.д.). Хотя настоящее раскрытие может обеспечить примерные заранее определенные уровни, хорошо известно, что граничные значения могут варьироваться в зависимости от природы иммуноанализа (например, используемых антител и т.д.). Кроме того, специалист в данной области техники может приспособить раскрытие, приведенное в настоящем документе, для других иммуноанализов для получения специфичных для иммуноанализа предельных значений для данных других иммуноанализов на основе настоящего раскрытия. Принимая во внимание, что точное значение предварительно определенного предела/уровня может варьироваться между анализами, корреляции, как описано в настоящем документе (если таковые имеются), могут быть в целом применимы.
[00124] Термины «ингибирование» или «ингибировать» относятся к уменьшению или прекращению любого фенотипического свойства или к снижению или прекращению частоты возникновения, степени или вероятности этого свойства. «Снизить» или «ингибировать» означает уменьшить, снизить или остановить активность, функцию и/или количество по сравнению с эталоном. В некоторых вариантах осуществления «снизить» или «ингибировать» означает способность вызывать общее уменьшение на 20% или более. В некоторых вариантах осуществления «снизить» или «ингибировать» означает способность вызывать общее уменьшение на 50% или более. В некоторых вариантах осуществления «снизить» или «ингибировать» означает способность вызывать общее уменьшение на 75%, 85%, 90%, 95% или более. В некоторых вариантах осуществления количество, указанное выше, ингибируется или уменьшается в течение периода времени относительно контрольной дозы (такой как плацебо) в течение того же периода времени. Термин «эталонный», в контексте настоящего документа, относится к любому образцу, стандарту или уровню, которые используются для целей сравнения. Эталонный образец может быть получен из здорового и/или нездорового образца. В некоторых примерах эталонный образец может быть получен из необработанного образца. В некоторых примерах эталонный образец получен от не заболевшего необработанного образца индивидуума-субъекта. В некоторых примерах эталонный образец получен от одного или более здоровых индивидуумов, которые не являются субъектом или пациентом.
[00125] Термин «задержка развития заболевания», в контексте настоящего документа, означает задержку, препятствование, замедление, торможение, стабилизацию, подавление и/или откладывание развития заболевания (такого как рак). Эта задержка может быть различной продолжительности, в зависимости от истории болезни и/или индивидуума, который подлежит лечению. Как очевидно для специалиста в данной области техники, достаточная или значительная задержка может, по сути, включать предотвращение, поскольку у индивидуума не развивается заболевание. Например, поздняя стадия рака, такая как развитие метастазирования, может быть отсрочена.
[00126] «Предотвращение», в контексте настоящего документа, включает предоставление профилактических мероприятий в отношении возникновения или рецидива заболевания у субъекта, который может быть предрасположен к заболеванию, но заболевание еще не было диагностировано. Если не указано иное, термины «уменьшить», «ингибировать» или «предотвратить» не обозначают и не требуют полного предотвращения в течение всего времени.
[00127] В контексте настоящего документа термин «подавлять» функцию или действие означает уменьшение функции или активности по сравнению с другими такими же условиями, за исключением интересующего условия или параметра или, альтернативно, по сравнению с другим условием. Например, антитело, которое подавляет рост опухоли, снижает скорость роста опухоли по сравнению со скоростью роста опухоли в отсутствие антитела.
[00128] «Терапевтически эффективное количество» вещества/молекулы, агониста или антагониста может варьироваться в зависимости от таких факторов, как состояние заболевания, возраст, пол и вес индивидуума, а также способность вещества/молекулы, агониста или антагониста вызывать желаемый ответ у индивидуума. Терапевтически эффективное количество также является таким, при котором любые токсичные или вредные эффекты вещества/молекулы, агониста или антагониста перевешиваются терапевтически полезными эффектами. Терапевтически эффективное количество может быть доставлено за одно или более введений. Терапевтически эффективное количество относится к количеству, эффективному в дозировках и в течение периодов времени, необходимых для достижения желаемого терапевтического и/или профилактического результатов.
[00129] «Профилактически эффективное количество» относится к количеству, эффективному в дозировках и в течение периодов времени, необходимых для достижения желаемого профилактического результата. Как правило, но не обязательно, поскольку профилактическая доза используется у субъектов до или на более ранней стадии заболевания, профилактически эффективное количество будет меньше чем терапевтически эффективного количества.
[00130] Термины «фармацевтический состав» и «фармацевтическая композиция» относятся к препарату, который находится в такой форме, которая позволяет биологической активности активного(-ых) ингредиента(-ов) быть эффективной, и которая не содержит никаких дополнительных компонентов, которые неприемлемо токсичны для субъекта, которому будет вводиться состав. Такие составы могут быть стерильными.
[00131] «Фармацевтически приемлемый носитель» относится к нетоксичному твердому, полутвердому или жидкому наполнителю, разбавителю, инкапсулирующему материалу, вспомогательному составу или носителю, общепринятому в данной области техники для применения с терапевтическим агентом, которые вместе составляют «фармацевтическую композицию» для введения субъекту. Фармацевтически приемлемый носитель нетоксичен для реципиентов в используемых дозировках и концентрациях и совместим с другими ингредиентами состава. Фармацевтически приемлемый носитель подходит для используемого состава.
[00132] «Стерильная» композиция является асептической или практически не содержит живых микроорганизмов и их спор.
[00133] Термин «IDO-ингибитор» относится к агенту, способному ингибировать активность индоламин 2,3-диоксигеназы (IDO) и, таким образом, обращать IDO-опосредованную иммуносупрессию. IDO-ингибитор может ингибировать IDO1 и/или IDO2 (INDOL1). IDO-ингибитор может быть обратимым или необратимым IDO-ингибитором. «Обратимый IDO-ингибитор» представляет собой соединение, которое обратимо ингибирует активность фермента IDO на каталитическом сайте или на некаталитическом сайте, а «необратимый IDO-ингибитор» представляет собой соединение, которое необратимо ингибирует активность фермента IDO путем образования ковалентной связи с ферментом. Неограничивающие типовые IDO-ингибиторы включают индоксимод (New Link Genetics), INCB024360 (Incyte Corp.), 1-метил-D-триптофан (New Link Genetics) и GDC-0919 (Genentech, Inc.).
J Natl Cancer Inst
Blood Rev
Immunol Rev
[00134] «Т-клеточная терапия с химерным антигенным рецептором» или «CAR-T-терапия» относится к терапевтическому агенту, содержащему генетически модифицированную Т-клетку для экспрессии рецептора, который распознает антиген, экспрессируемый опухолевой клеткой. Антиген может представлять собой антиген, специфически экспрессируемый опухолью, или антиген, экспрессируемый как раковыми клетками, так и здоровой тканью. В некоторых вариантах осуществления CAR-T-терапия представляет собой адоптивную CAR-T-терапию, в которой Т-клетки пациента удаляются и модифицируются для экспрессии химерного антигенного рецептора, а затем возвращаются пациенту. См., например, Dai et al., 2016, , 108 (7): djv439, doi: 10.1093/jnci/djv439; Gill et al., 2015, , pii: S0268-960X(15)00080-6, doi: 10.1016/j.blre.2015.10.003; Gill et al., 2015, , 263(1):68-89. doi: 10.1111/imr.12243.
[00135] Введение «в сочетании с» одним или более дополнительными терапевтическими агентами включает одновременное (совместное) и последующее или последовательное введение в любом порядке.
[00136] Термин «одновременно» используется в данном документе для обозначения введения двух или более терапевтических агентов, когда по меньшей мере часть введения перекрывается во времени или когда введение одного терапевтического агента происходит в течение короткого периода времени относительно введения другого терапевтического агента. Например, два или более терапевтических агентов вводят с временным интервалом не более чем около определенного количества минут.
[00137] Термин «последовательно» используется в данном документе для обозначения введения двух или более терапевтических агентов, когда введение одного или более агентов продолжается после прекращения введения одного или более других агентов, или когда введение одного или более агентов начинается до введения одного или более других агентов. Например, введение двух или более терапевтических агентов вводят с временным разделением, превышающим определенное количество минут.
[00138] Термин «в сочетании с», в контексте настоящего документа, относится к применению одного способа лечения в дополнение к другому способу лечения. Таким образом, «в сочетании с» относится к применению одного способа лечения до, во время или после применения другого способа лечения для индивидуума.
[00139] Термин «листок-вкладыш» используется для обозначения инструкций, обычно включаемых в коммерческие упаковки терапевтических продуктов, которые содержат информацию о показаниях, применении, дозировке, введении, комбинированной терапии, противопоказаниях и/или предупреждениях относительно использования таких терапевтических продуктов.
[00140] «Готовое изделие» представляет собой любое изделие (например, упаковку или контейнер) или набор, содержащий по меньшей мере один реагент, например лекарственное средство для лечения заболевания или расстройства (например, рака), или зонд для специфического обнаружение биомаркера, описанного в настоящем документе. В некоторых вариантах осуществления готовое изделие или набор рекламируются, распространяются или продаются как единица для выполнения способов, описанных в настоящем документе.
3
14
35
90
99
111
125
131
177
166
153
[00141] Термины «метка» и «детектируемая метка» обозначают фрагмент, присоединенный к антителу или его аналиту для обнаружения взаимодействия (например, связывания) между членами пары специфического связывания. Меченый член пары специфического связывания относится к «обнаруживаемо меченному». Таким образом, термин «меченый связывающий белок» относится к белку с внедренной меткой, которая обеспечивает идентификацию связывающего белка. В некоторых вариантах осуществления метка представляет собой обнаруживаемый маркер, который может продуцировать сигнал, который можно обнаружить с помощью визуальных или инструментальных средств, например, включения радиоактивно меченной аминокислоты или присоединения к полипептиду биотинильных фрагментов, которые могут быть обнаружены с помощью маркированного авидина (например, стрептавидин, содержащий флуоресцентный маркер или ферментативную активность, которые могут быть обнаружены оптическими или колориметрическими методами). Примеры меток для полипептидов включают, но не ограничиваются ими, следующие: радиоизотопы или радионуклиды (например, H, C, S, Y, Tc, In, I, I, Lu, Ho или Sm); хромогены, флуоресцентные метки (например, FITC, родамин, лантаноидные люминофоры), ферментативные метки (например, пероксидаза хрена, люцифераза, щелочная фосфатаза); хемилюминесцентные маркеры; биотинильные группы; предварительно определенные полипептидные эпитопы, распознаваемые вторичным репортером (например, последовательности пар лейциновой молнии, сайты связывания для вторичных антител, домены связывания металлов, эпитопные метки) и магнитные агенты, такие как хелаты гадолиния. Типичные примеры меток, обычно используемых для иммуноанализов, включают фрагменты, которые продуцируют свет, например, соединения акридиния, и фрагменты, которые продуцируют флуоресценцию, например флуоресцеин. В связи с этим сам фрагмент может быть не детектируемо мечен, но может стать обнаруживаемым при реакции с еще одним фрагментом.
[00142] Термин «конъюгат» относится к антителу, которое химически связано со вторым химическим фрагментом, таким как терапевтический или цитотоксический агент. Термин «агент» включает химическое соединение, смесь химических соединений, биологическую макромолекулу или экстракт, полученный из биологических материалов. В некоторых вариантах осуществления терапевтические или цитотоксические агенты включают, но не ограничиваются ими, коклюшный токсин, таксол, цитохалазин B, грамицидин D, бромид этидия, эметин, митомицин, этопозид, тенопозид, винкристин, винбластин, колхицин, доксорубицин, дауномицин, дигидроксиантрациндион, митоксантрон, митрамицин, актиномицин D, 1-дегидротестостерон, глюкокортикоиды, прокаин, тетракаин, лидокаин, пропранолол и пуромицин, и их аналоги или гомологи. При использовании в контексте иммуноанализа конъюгатное антитело может представлять собой детектируемо меченое антитело, используемое в качестве детектирующего антитела.
II. Анти-PD-1 антитела
[00143] Предлагаются новые антитела, направленные против PD-1. Анти-PD-1 антитела включают, но не ограничиваются ими, гуманизированные антитела, химерные антитела, мышиные антитела, человеческие антитела и антитела, содержащие CDR тяжелой цепи и/или легкой цепи, обсуждаемые в настоящем документе. В некоторых вариантах осуществления предлагается выделенное антитело, которое связывается с PD-1. В некоторых вариантах осуществления предлагается моноклональное антитело, которое связывается с PD-1. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело представляет собой анти-PD-1 антитело-антагонист. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело, представленное в настоящем документе, ингибирует связывание PD-1 с PD-L1 и/или PD-L2. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело, представленное в настоящем документе, ингибирует связывание PD-1 с PD-L1. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело, представленное в настоящем документе, ингибирует связывание PD-1 с PD-L1 и PD-L2. В некоторых вариантах осуществления введение анти-PD-1-антител, описанных в настоящем документе, усиливает иммунный ответ у субъекта и/или увеличивает активацию Т-клеток у субъекта.
[00144] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит по меньшей мере одну, две, три, четыре, пять или шесть CDR, выбранных из (a) HCDR1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5; (b) HCDR2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6; (c) HCDR3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7; (d) LCDR1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9; (e) LCDR2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10; и (f) LCDR3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 11.
[00145] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит по меньшей мере одну, две, три, четыре, пять или шесть CDR, выбранных из (a) HCDR1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 13; (b) HCDR2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 14; (c) HCDR3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 15; (d) LCDR1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 17; (e) LCDR2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 18; и (f) LCDR3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 19.
[00146] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит по меньшей мере одну, две, три, четыре, пять или шесть CDR, выбранных из (a) HCDR1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 21; (b) HCDR2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 22; (c) HCDR3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 23; (d) LCDR1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 25; (e) LCDR2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 26; и (f) LCDR3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 27.
[00147] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит по меньшей мере одну, две, три, четыре, пять или шесть CDR, выбранных из (a) HCDR1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 29; (b) HCDR2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 30; (c) HCDR3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 31; (d) LCDR1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 33; (e) LCDR2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 34; и (f) LCDR3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 35.
[00148] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит по меньшей мере одну, две, три, четыре, пять или шесть CDR, выбранных из (a) HCDR1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 37; (b) HCDR2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 38; (c) HCDR3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 39; (d) LCDR1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 41; (e) LCDR2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 42; и (f) LCDR3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 43.
[00149] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит по меньшей мере одну, две, три, четыре, пять или шесть CDR, выбранных из (a) HCDR1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 45, 53, 61, 69, 77, 85, 93, 101, 109 и 117; (b) HCDR2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 46, 54, 62, 70, 78, 86, 94, 102, 110 и 118; (c) HCDR3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 47, 55, 63, 71, 79, 87, 95, 103, 111 и 119; (d) LCDR1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 49, 57, 65, 73, 81, 89, 97, 105, 113 и 121; (e) LCDR2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 50, 58, 66, 74, 82, 90, 98, 106, 114 и 122; и (f) LCDR3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 51, 59, 67, 75, 83, 91, 99, 107, 115 и 123.
[00150] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит по меньшей мере одну, две, три, четыре, пять или шесть CDR, выбранных из (a) HCDR1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 125, 133, 141, 149, 157, 165, 173, 181, 189, 197, 205, 213, 221, 229, 237, 245, 253, 261, 269, 277 и 285; (b) HCDR2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 126, 134, 142, 150, 158, 166, 174, 182, 190, 198, 206, 214, 222, 230, 238, 246, 254, 262, 270, 278 и 286; (c) HCDR3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 127, 135, 143, 151, 159, 167, 175, 183, 191, 199, 207, 215, 223, 231, 239, 247, 255, 263, 271, 279 и 287; (d) LCDR1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 129, 137, 145, 153, 161, 169, 177, 185, 193, 201, 209, 217, 225, 233, 241, 249, 257, 265, 273, 281 и 289; (e) LCDR2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 130, 138, 146, 154, 162, 170, 178, 186, 194, 202, 210, 218, 226, 234, 242, 250, 258, 266, 274, 282 и 290; и (f) LCDR3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 131, 139, 147, 155, 163, 171, 179, 187, 195, 203, 211, 219, 227, 235, 243, 251, 259, 267, 275, 283 и 291.
[00151] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит по меньшей мере одну, две, три, четыре, пять или шесть CDR, выбранных из (a) HCDR1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 285, 237, 245, 253, 261 и 269; (b) HCDR2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 286, 238, 246, 254, 262 и 270; (c) HCDR3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 287, 239, 247, 255, 263 и 271; (d) LCDR1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 289, 241, 249, 257, 265 и 273; (e) LCDR2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 290, 242, 250, 258, 266 и 274; и (f) LCDR3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 291, 243, 251, 259, 267 и 275.
[00152] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит по меньшей мере одну, две, три, четыре, пять или шесть CDR, выбранных из (a) HCDR1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 189, 197, 205, 213, 221 и 229; (b) HCDR2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 190, 198, 206, 214, 222 и 230; (c) HCDR3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 191, 199, 207, 215, 223 и 231; (d) LCDR1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 193, 201, 209, 217, 225 и 233; (e) LCDR2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 194, 202, 210, 218, 226 и 234; и (f) LCDR3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 195, 203, 211, 219, 227 и 235.
[00153] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит по меньшей мере одну, две, три, четыре, пять или шесть CDR, выбранных из (a) HCDR1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 277, 125, 133, 141, 149, 157, 165, 173 и 181; (b) HCDR2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 278, 126, 134, 142, 150, 158, 166, 174 и 182; (c) HCDR3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 279, 127, 135, 143, 151, 159, 167, 175 и 183; (d) LCDR1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 281, 129, 137, 145, 153, 161, 169, 177 и 185; (e) LCDR2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 282, 130, 138, 146, 154, 162, 170, 178 и 286; и (f) LCDR3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 283, 131, 139, 147, 155, 163, 171, 179 и 187.
[00154] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит по меньшей мере одну, две, три, четыре, пять или шесть CDR, выбранных из (a) HCDR1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 293, 301, 309 и 317; (b) HCDR2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 294, 302, 310 и 318; (c) HCDR3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 295, 303, 311 и 319; (d) LCDR1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 297, 305, 313 и 321; (e) LCDR2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 298, 306, 314 и 322; и (f) LCDR3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 299, 307, 315 и 323.
[00155] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит по меньшей мере одну тяжелую цепь, содержащую вариабельную область тяжелой цепи и по меньшей мере часть константной области тяжелой цепи, и по меньшей мере одну легкую цепь, содержащую вариабельную область легкой цепи и по меньшей мере часть константной области легкой цепи. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит две тяжелые цепи, причем каждая тяжелая цепь содержит вариабельную область тяжелой цепи и по меньшей мере часть константной области тяжелой цепи, и две легкие цепи, причем каждая легкая цепь содержит вариабельную область легкой цепи и по меньшей мере часть константной области легкой цепи. В контексте настоящего описания считается, что одноцепочечное Fv (scFv) или любое другое антитело, которое содержит, например, одну полипептидную цепь, содержащую все шесть CDR (три CDR тяжелой цепи и три CDR легкой цепи), имеет тяжелую цепь и легкую цепь. В некоторых вариантах осуществления тяжелая цепь представляет собой область анти-PD-1 антитела, которое содержит три тяжелых цепи CDR. В некоторых вариантах осуществления легкая цепь представляет собой область анти-PD-1 антитела, которое содержит три легких цепи CDR.
[00156] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит шесть CDR, включая (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7; (d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10; и (f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 11.
[00157] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит шесть CDR, включая (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 13; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 14; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 15; (d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 17; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 18; и (f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 19.
[00158] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит шесть CDR, включая (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 21; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 22; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 23; (d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 25; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 26; и (f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 27.
[00159] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит шесть CDR, включая (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 29; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 30; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 31; (d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 33; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 34; и (f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 35.
[00160] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит шесть CDR, включая (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 37; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 38; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 39; (d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 41; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 42; и (f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 43.
[00161] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит шесть CDR, включая (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 45, 53, 61, 69, 77, 85, 93, 101, 109 и 117; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 46, 54, 62, 70, 78, 86,94, 102, 110 и 118; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 47, 55, 63, 71, 79, 87, 95, 103, 111 и 119; (d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 49, 57, 65, 73, 81, 89, 97, 105, 113 и 121; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 50, 58, 66, 74, 82, 90, 98, 106, 114 и 122; и (f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 51, 59, 67, 75, 83, 91, 99, 107, 115 и 123.
[00162] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит шесть CDR, включая (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 125, 133, 141, 149, 157, 165, 173, 181, 189, 197, 205, 213, 221, 229, 237, 245, 253, 261, 269, 277 и 285; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 126, 134, 142, 150, 158, 166, 174, 182, 190, 198, 206, 214, 222, 230, 238, 246, 254, 262, 270, 278 и 286; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 127, 135, 143, 151, 159, 167, 175, 183, 191, 199, 207, 215, 223, 231, 239, 247, 255, 263, 271, 279 и 287; (d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 129, 137, 145, 153, 161, 169, 177, 185, 193, 201, 209, 217, 225, 233, 241, 249, 257, 265, 273, 281 и 289; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 130, 138, 146, 154, 162, 170, 178, 186, 194, 202, 210, 218, 226, 234, 242, 250, 258, 266, 274, 282 и 290; и (f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 131, 139, 147, 155, 163, 171, 179, 187, 195, 203, 211, 219, 227, 235, 243, 251, 259, 267, 275, 283 и 291.
[00163] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит шесть CDR, включая (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 285, 237, 245, 253, 261 и 269; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 286, 238, 246, 254, 262 и 270; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 287, 239, 247, 255, 263 и 271; (d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 289, 241, 249, 257, 265 и 273; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 290, 242, 250, 258, 266 и 274; и (f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 291, 243, 251, 259, 267 и 275.
[00164] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит шесть CDR, включая (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 189, 197, 205, 213, 221 и 229; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 190, 198, 206, 214, 222 и 230; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 191, 199, 207, 215, 223 и 231; (d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 193, 201, 209, 217, 225 и 233; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 194, 202, 210, 218, 226 и 234; и (f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 195, 203, 211, 219, 227 и 235.
[00165] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит шесть CDR, включая (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 277, 125, 133, 141, 149, 157, 165, 173 и 181; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 278, 126, 134, 142, 150, 158, 166, 174 и 182; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 279, 127, 135, 143, 151, 159, 167, 175 и 183; (d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 281, 129, 137, 145, 153, 161, 169, 177 и 185; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 282, 130, 138, 146, 154, 162, 170, 178 и 286; и (f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 283, 131, 139, 147, 155, 163, 171, 179 и 187.
[00166] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит шесть CDR, включая (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 293, 301, 309 и 317; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 294, 302, 310 и 318; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 295, 303, 311 и 319; (d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 297, 305, 313 и 321; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 298, 306, 314 и 322; и (f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 299, 307, 315 и 323.
[00167] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит шесть CDR, как описано выше, и связывается с PD-1. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит шесть CDR, как описано выше, и связывается с PD-1 и ингибирует связывание PD-1 с PD-L1 и/или PD-L2. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит шесть CDR, как описано выше, и связывается с PD-1 и ингибирует связывание PD-1 с PD-L1. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит шесть CDR, как описано выше, и связывается с PD-1 и ингибирует связывание PD-1 с PD-L1 и PD-L2. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит шесть CDR, как описано выше, и связывается с PD-1 и усиливает иммунный ответ у субъекта и/или увеличивает активацию Т-клеток у субъекта после введения антитела субъекту.
[00168] В некоторых вариантах осуществления предлагается анти-PD-1 антитело, которое конкурирует с анти-PD-1 антителом, описанным в настоящем документе, за связывание с PD-1. В некоторых вариантах осуществления антитело, которое конкурирует за связывание с любым из антител, представленных в настоящем документе, может быть получено и/или использовано.
[00169] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности CDR VH, выбранные из (a) HCDR1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5; (b) HCDR2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6; (c) HCDR3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7.
[00170] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности CDR VH, выбранные из (a) HCDR1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 13; (b) HCDR2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 14; (c) HCDR3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 15.
[00171] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности CDR VH, выбранные из (a) HCDR1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 21; (b) HCDR2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 22; (c) HCDR3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 23.
[00172] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности CDR VH, выбранные из (a) HCDR1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 29; (b) HCDR2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 30; (c) HCDR3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:31.
[00173] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности CDR VH, выбранные из (a) HCDR1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 37; (b) HCDR2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 38; (c) HCDR3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 39.
[00174] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности CDR VH, выбранные из (a) HCDR1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 61; (b) HCDR2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 62; и (c) HCDR3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 63.
[00175] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности CDR VH, выбранные из (a) HCDR1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 45, 53, 61, 69, 77, 85, 93, 101, 109 и 117; (b) HCDR2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 46, 54, 62, 70, 78, 86, 94, 102, 110 и 118; (c) HCDR3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 47, 55, 63, 71, 79, 87, 95, 103, 111 и 119.
[00176] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности CDR VH, выбранные из (a) HCDR1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 125, 133, 141, 149, 157, 165, 173, 181, 189, 197, 205, 213, 221, 229, 237, 245, 253, 261, 269, 277 и 285; (b) HCDR2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 126, 134, 142, 150, 158, 166, 174, 182, 190, 198, 206, 214, 222, 230, 238, 246, 254, 262, 270, 278 и 286; (c) HCDR3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 127, 135, 143, 151, 159, 167, 175, 183, 191, 199, 207, 215, 223, 231, 239, 247, 255, 263, 271, 279 и 287.
[00177] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности CDR VH, выбранные из (a) HCDR1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 285, 237, 245, 253, 261 и 269; (b) HCDR2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 286, 238, 246, 254, 262 и 270; (c) HCDR3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 287, 239, 247, 255, 263 и 271.
[00178] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности CDR VH, выбранные из (a) HCDR1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 189, 197, 205, 213, 221 и 229; (b) HCDR2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 190, 198, 206, 214, 222 и 230; (c) HCDR3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 191, 199, 207, 215, 223 и 231.
[00179] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности CDR VH, выбранные из (a) HCDR1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 277, 125, 133, 141, 149, 157, 165, 173 и 181; (b) HCDR2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 278, 126, 134, 142, 150, 158, 166, 174 и 182; (c) HCDR3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 279, 127, 135, 143, 151, 159, 167, 175 и 183.
[00180] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности CDR VH, выбранные из (a) HCDR1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 293, 301, 309 и 317; (b) HCDR2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 294, 302, 310 и 318; (c) HCDR3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 295, 303, 311 и 319.
[00181] В некоторых вариантах осуществления антитело содержит по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности CDR VL, выбранные из (a) LCDR1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9; (b) LCDR2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10; и (c) LCDR3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 11.
[00182] В некоторых вариантах осуществления антитело содержит по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности CDR VL, выбранные из (a) LCDR1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 17; (b) LCDR2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 18; и (c) LCDR3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 19.
[00183] В некоторых вариантах осуществления антитело содержит по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности CDR VL, выбранные из (a) LCDR1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 25; (b) LCDR2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 26; и (c) LCDR3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 27.
[00184] В некоторых вариантах осуществления антитело содержит по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности CDR VL, выбранные из (a) LCDR1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 33; (b) LCDR2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 34; и (c) LCDR3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 35.
[00185] В некоторых вариантах осуществления антитело содержит по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности CDR VL, выбранные из (a) LCDR1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 41; (b) LCDR2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 42; и (c) LCDR3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 43.
[00186] В некоторых вариантах осуществления антитело содержит по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности CDR VL, выбранные из (a) LCDR1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 49, 57, 65, 73, 81, 89, 97, 105, 113 и 121; (b) LCDR2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 50, 58, 66, 74, 82, 90, 98, 106, 114 и 122; и (c) LCDR3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 51, 59, 67, 75, 83, 91, 99, 107, 115 и 123.
[00187] В некоторых вариантах осуществления антитело содержит по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности CDR VL, выбранные из (a) LCDR1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 129, 137, 145, 153, 161, 169, 177, 185, 193, 201, 209, 217, 225, 233, 241, 249, 257, 265, 273, 281 и 289; (b) LCDR2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 130, 138, 146, 154, 162, 170, 178, 186, 194, 202, 210, 218, 226, 234, 242, 250, 258, 266, 274, 282 и 290; и (c) LCDR3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 131, 139, 147, 155, 163, 171, 179, 187, 195, 203, 211, 219, 227, 235, 243, 251, 259, 267, 275, 283 и 291.
[00188] В некоторых вариантах осуществления антитело содержит по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности CDR VL, выбранные из (a) LCDR1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 289, 241, 249, 257, 265 и 273; (b) LCDR2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 290, 242, 250, 258, 266 и 274; и (c) LCDR3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 291, 243, 251, 259, 267 и 275.
[00189] В некоторых вариантах осуществления антитело содержит по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности CDR VL, выбранные из (a) LCDR1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 193, 201, 209, 217, 225 и 233; (b) LCDR2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 194, 202, 210, 218, 226 и 234; и (c) LCDR3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 195, 203, 211, 219, 227 и 235.
[00190] В некоторых вариантах осуществления антитело содержит по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности CDR VL, выбранные из (a) LCDR1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 281, 129, 137, 145, 153, 161, 169, 177 и 185; (b) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 282, 130, 138, 146, 154, 162, 170, 178 и 286; и (c) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 283, 131, 139, 147, 155, 163, 171, 179 и 187.
[00191] В некоторых вариантах осуществления антитело содержит по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности CDR VL, выбранные из (a) LCDR1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 297, 305, 313 и 321; (b) LCDR2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 298, 306, 314 и 322; и (c) LCDR3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 299, 307, 315 и 323.
[00192] В некоторых вариантах осуществления любой из шести CDR, представленных в настоящем документе, может быть объединен в качестве составных участков с любым из других CDR, предоставленных в настоящем документе, для получения в конструкции в общей сложности шести CDR. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления два CDR из первого антитела (например, HCDR1 и HCDR2) могут быть скомбинированы с четырьмя CDR из второго антитела (HCDR3, LCDR1, LCDR2 и LCDR3). В некоторых вариантах осуществления два или менее остатка в одной или более CDR могут быть заменены для получения их варианта. В некоторых вариантах осуществления два или менее остатка могут быть заменены в 1, 2, 3, 4, 5 или 6 CDR.
[00193] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит (I) домен VH, содержащий по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности VH CDR, выбранные из (a) HCDR1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5; (b) HCDR2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6; (c) HCDR3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7; и (II) домен VL, содержащий по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности VL CDR, выбранные из (d) LCDR1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10; и (f) LCDR3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 11.
[00194] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит (I) домен VH, содержащий по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности VH CDR, выбранные из (a) HCDR1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 13; (b) HCDR2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 14; (c) HCDR3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 15; и (II) домен VL, содержащий по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности VL CDR, выбранные из (d) LCDR1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 17; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 18; и (f) LCDR3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 19.
[00195] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит (I) домен VH, содержащий по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности VH CDR, выбранные из (a) HCDR1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 21; (b) HCDR2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 22; (c) HCDR3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 23; и (II) домен VL, содержащий по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности VL CDR, выбранные из (d) LCDR1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 25; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 26; и (f) LCDR3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 27.
[00196] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит (I) домен VH, содержащий по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности VH CDR, выбранные из (a) HCDR1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 29; (b) HCDR2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 30; (c) HCDR3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 31; и (II) домен VL, содержащий по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности VL CDR, выбранные из (d) LCDR1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 33; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 34; и (f) LCDR3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 35.
[00197] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит (I) домен VH, содержащий по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности VH CDR, выбранные из (a) HCDR1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 37; (b) HCDR2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 38; (c) HCDR3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 39; и (II) домен VL, содержащий по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности VL CDR, выбранные из (d) LCDR1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 41; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 42; и (f) LCDR3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 43.
[00198] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит (I) домен VH, содержащий по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности VH CDR, выбранные из (a) HCDR1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 45, 53, 61, 69, 77, 85, 93, 101, 109 и 117; (b) HCDR2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 46, 54, 62, 70, 78, 86, 94, 102, 110 и 118; (c) HCDR3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 47, 55, 63, 71, 79, 87, 95, 103, 111 и 119; и (II) домен VL, содержащий по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности VL CDR, выбранные из (d) LCDR1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 49, 57, 65, 73, 81, 89, 97, 105, 113 и 121; (e) LCDR2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 50, 58, 66, 74, 82, 90, 98, 106, 114 и 122; и (f) LCDR3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 51, 59, 67, 75, 83, 91, 99, 107, 115 и 123.
[00199] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит (I) домен VH, содержащий по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности VH CDR, выбранные из (a) HCDR1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 125, 133, 141, 149, 157, 165, 173, 181, 189, 197, 205, 213, 221, 229, 237, 245, 253, 261, 269, 277 и 285; (b) HCDR2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 126, 134, 142, 150, 158, 166, 174, 182, 190, 198, 206, 214, 222, 230, 238, 246, 254, 262, 270, 278 и 286; (c) HCDR3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 127, 135, 143, 151, 159, 167, 175, 183, 191, 199, 207, 215, 223, 231, 239, 247, 255, 263, 271, 279 и 287; и (II) домен VL, содержащий по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности VL CDR, выбранные из (d) LCDR1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 129, 137, 145, 153, 161, 169, 177, 185, 193, 201, 209, 217, 225, 233, 241, 249, 257, 265, 273, 281 и 289; (e) LCDR2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 130, 138, 146, 154, 162, 170, 178, 186, 194, 202, 210, 218, 226, 234, 242, 250, 258, 266, 274, 282 и 290; и (f) LCDR3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 131, 139, 147, 155, 163, 171, 179, 187, 195, 203, 211, 219, 227, 235, 243, 251, 259, 267, 275, 283 и 291.
[00200] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит (I) домен VH, содержащий по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности VH CDR, выбранные из (a) HCDR1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 285, 237, 245, 253, 261 и 269; (b) HCDR2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 286, 238, 246, 254, 262 и 270; (c) HCDR3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 287, 239, 247, 255, 263, и 271; и (II) домен VL, содержащий по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности VL CDR, выбранные из (d) LCDR1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 289, 241, 249, 257, 265 и 273; (e) LCDR2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 290, 242, 250, 258, 266 и 274; и (f) LCDR3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 291, 243, 251, 259, 267 и 275.
[00201] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит (I) домен VH, содержащий по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности VH CDR, выбранные из (a) HCDR1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 189, 197, 205, 213, 221 и 229; (b) HCDR2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 190, 198, 206, 214, 222 и 230; (c) HCDR3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 191, 199, 207, 215, 223 и 231; и (II) домен VL, содержащий по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности VL CDR, выбранные из (d) LCDR1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 193, 201, 209, 217, 225 и 233; (e) LCDR2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 194, 202, 210, 218, 226 и 234; и (f) LCDR3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 195, 203, 211, 219, 227 и 235.
[00202] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит (I) домен VH, содержащий по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности VH CDR, выбранные из (a) HCDR1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 277, 125, 133, 141, 149, 157, 165, 173 и 181; (b) HCDR2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 278, 126, 134, 142, 150, 158, 166, 174 и 182; (c) HCDR3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 279, 127, 135, 143, 151, 159, 167, 175, и 183; и (II) домен VL, содержащий по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности VL CDR, выбранные из (d) LCDR1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 281, 129, 137, 145, 153, 161, 169, 177 и 185; (e) LCDR2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 282, 130, 138, 146, 154, 162, 170, 178 и 286; и (f) LCDR3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 283, 131, 139, 147, 155, 163, 171, 179 и 187.
[00203] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит (I) домен VH, содержащий по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности VH CDR, выбранные из (a) HCDR1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 293, 301, 309 и 317; (b) HCDR2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 294, 302, 310 и 318; (c) HCDR3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 295, 303, 311 и 319; и (II) домен VL, содержащий по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности VL CDR, выбранные из (d) LCDR1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 297, 305, 313 и 321; (e) LCDR2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 298, 306, 314 и 322; и (f) LCDR3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 299, 307, 315 и 323.
[00204] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит последовательность вариабельного домена тяжелой цепи (VH), имеющего по меньшей мере 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичности последовательности с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 4, 12, 20, 28, 36, 44, 52, 60, 68, 76, 84, 92, 100, 108, 116, 124, 132, 140, 148, 156, 164, 172, 180, 188, 196, 204, 212, 220, 228, 236, 244, 252, 260, 268, 276, 284, 292, 300, 308 или 316. В некоторых вариантах осуществления последовательность VH, идентичная на по меньшей мере 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99%, содержит замены (например, консервативные замены), вставки или делеции относительно эталонной последовательности, но анти-PD-1 антитело, содержащее эту последовательность, сохраняет способность связываться с PD-1. В некоторых вариантах осуществления от 1 до 10 аминокислот были замещены, вставлены и/или удалены в SEQ ID NO: 4, 12, 20, 28, 36, 44, 52, 60, 68, 76, 84, 92, 100, 108, 116, 124, 132, 140, 148, 156, 164, 172, 180, 188, 196, 204, 212, 220, 228, 236, 244, 252, 260, 268, 276, 284, 292, 300, 308 или 316. В некоторых вариантах осуществления замены, вставки или делеции происходят в областях за пределами CDR (то есть в FR). Необязательно, анти-PD-1-антитело содержит последовательность VH в SEQ ID NO: 4, 12, 20, 28, 36, 44, 52, 60, 68, 76, 84, 92, 100, 108, 116, 124, 132, 140, 148, 156, 164, 172, 180, 188, 196, 204, 212, 220, 228, 236, 244, 252, 260, 268, 276, 284, 292, 300, 308 или 316, включая посттрансляционные модификации этой последовательности.
[00205] В некоторых вариантах осуществления VH содержит: (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7.
[00206] В некоторых вариантах осуществления VH содержит: (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 13; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 14; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 15.
[00207] В некоторых вариантах осуществления VH содержит: (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 21; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 22; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 23.
[00208] В некоторых вариантах осуществления VH содержит: (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 29; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 30; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 31.
[00209] В некоторых вариантах осуществления VH содержит: (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 37; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 38; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 39.
[00210] В некоторых вариантах осуществления VH содержит: (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 45, 53, 61, 69, 77, 85, 93, 101, 109 и 117; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 46, 54, 62, 70, 78, 86, 94, 102, 110 и 118; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 47, 55, 63, 71, 79, 87, 95, 103, 111 и 119.
[00211] В некоторых вариантах осуществления VH содержит: (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 125, 133, 141, 149, 157, 165, 173, 181, 189, 197, 205, 213, 221, 229, 237, 245, 253, 261, 269, 277 и 285; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 126, 134, 142, 150, 158, 166, 174, 182, 190, 198, 206, 214, 222, 230, 238, 246, 254, 262, 270, 278 и 286; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 127, 135, 143, 151, 159, 167, 175, 183, 191, 199, 207, 215, 223, 231, 239, 247, 255, 263, 271, 279 и 287.
[00212] В некоторых вариантах осуществления VH содержит: (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 285, 237, 245, 253, 261 и 269; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 286, 238, 246, 254, 262 и 270; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 287, 239, 247, 255, 263 и 271.
[00213] В некоторых вариантах осуществления VH содержит: (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 189, 197, 205, 213, 221 и 229; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 190, 198, 206, 214, 222 и 230; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 191, 199, 207, 215, 223 и 231.
[00214] В некоторых вариантах осуществления VH содержит: (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 277, 125, 133, 141, 149, 157, 165, 173 и 181; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 278, 126, 134, 142, 150, 158, 166, 174 и 182; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 279, 127, 135, 143, 151, 159, 167, 175 и 183.
[00215] В некоторых вариантах осуществления VH содержит: (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 293, 301, 309 и 317; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 294, 302, 310 и 318; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 295, 303, 311 и 319.
[00216] В некоторых вариантах осуществления предлагается анти-PD-1 антитело, причем антитело содержит вариабельный домен легкой цепи (VL), имеющий по меньшей мере 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, или 100% идентичности последовательности с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 8, 16, 24, 32, 40, 48, 56, 64, 72, 80, 88, 96, 104, 112, 120, 128, 136, 144, 152, 160, 168, 176, 184, 192, 200, 208, 216, 224, 232, 240, 248, 256, 264, 272, 280, 288, 296, 304, 312 или 320. В некоторых вариантах осуществления последовательность VL, идентичная на по меньшей мере 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99%, содержит замены (например, консервативные замены), вставки или делеции относительно эталонной последовательности, но анти-PD-1 антитело, содержащее эту последовательность, сохраняет способность связываться с PD-1. В некоторых вариантах осуществления от 1 до 10 аминокислот были замещены, вставлены и/или удалены в SEQ ID NO: 8, 16, 24, 32, 40, 48, 56, 64, 72, 80, 88, 96, 104, 112, 120, 128, 136, 144, 152, 160, 168, 176, 184, 192, 200, 208, 216, 224, 232, 240, 248, 256, 264, 272, 280, 288, 296, 304, 312 или 320. В некоторых вариантах осуществления замены, вставки или делеции происходят в областях за пределами CDR (то есть в FR). Необязательно, анти-PD-1-антитело содержит последовательность VL в SEQ ID NO: 8, 16, 24, 32, 40, 48, 56, 64, 72, 80, 88, 96, 104, 112, 120, 128, 136, 144, 152, 160, 168, 176, 184, 192, 200, 208, 216, 224, 232, 240, 248, 256, 264, 272, 280, 288, 296, 304, 312 или 320, включая посттрансляционные модификации этой последовательности.
[00217] В некоторых вариантах осуществления VL содержит: (a) LCDR1, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9; (b) LCDR2, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10; и (c) LCDR3, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 11.
[00218] В некоторых вариантах осуществления VL содержит: (a) LCDR1, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 17; (b) LCDR2, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 18; и (c) LCDR3, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 19.
[00219] В некоторых вариантах осуществления VL содержит: (a) LCDR1, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 25; (b) LCDR2, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 26; и (c) LCDR3, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 27.
[00220] В некоторых вариантах осуществления VL содержит: (a) LCDR1, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 33; (b) LCDR2, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 34; и (c) LCDR3, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 35.
[00221] В некоторых вариантах осуществления VL содержит: (a) LCDR1, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 41; (b) LCDR2, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 42; и (c) LCDR3, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 43.
[00222] В некоторых вариантах осуществления VL содержит: (a) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 49, 57, 65, 73, 81, 89, 97, 105, 113 и 121; (b) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 50, 58, 66, 74, 82, 90, 98, 106, 114 и 122; и (c) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 51, 59, 67, 75, 83, 91, 99, 107, 115 и 123.
[00223] В некоторых вариантах осуществления VL содержит: (a) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 129, 137, 145, 153, 161, 169, 177, 185, 193, 201, 209, 217, 225, 233, 241, 249, 257, 265, 273, 281 и 289; (b) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 130, 138, 146, 154, 162, 170, 178, 186, 194, 202, 210, 218, 226, 234, 242, 250, 258, 266, 274, 282 и 290; и (c) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 131, 139, 147, 155, 163, 171, 179, 187, 195, 203, 211, 219, 227, 235, 243, 251, 259, 267, 275, 283 и 291.
[00224] В некоторых вариантах осуществления VL содержит: (a) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 289, 241, 249, 257, 265 и 273; (b) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 290, 242, 250, 258, 266 и 274; и (c) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 291, 243, 251, 259, 267 и 275.
[00225] В некоторых вариантах осуществления VL содержит: (a) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 193, 201, 209, 217, 225 и 233; (b) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 194, 202, 210, 218, 226 и 234; и (c) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 195, 203, 211, 219, 227 и 235.
[00226] В некоторых вариантах осуществления VL содержит: (a) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 281, 129, 137, 145, 153, 161, 169, 177 и 185; (b) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 282, 130, 138, 146, 154, 162, 170, 178 и 286; и (c) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 283, 131, 139, 147, 155, 163, 171, 179 и 187.
[00227] В некоторых вариантах осуществления VL содержит: (a) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 297, 305, 313 и 321; (b) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 298, 306, 314 и 322; и (c) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 299, 307, 315 и 323.
[00228] В некоторых вариантах осуществления антитело против PD-1 содержит последовательность вариабельного домена тяжелой цепи (VH), имеющую по меньшей мере 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичности последовательности с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 4, 12, 20, 28, 36, 44, 52, 60, 68, 76, 84, 92, 100, 108, 116, 124 , 132, 140, 148, 156, 164, 172, 180, 188, 196, 204, 212, 220, 228, 236, 244, 252, 260, 268, 276, 284, 292, 300, 308 или 316, и последовательность вариабельного домена легкой цепи (VL), имеющую по меньшей мере 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичности последовательности с аминокислотой последовательность SEQ ID NO: 8, 16, 24, 32, 40, 48, 56, 64, 72, 80, 88, 96, 104, 112, 120, 128, 136, 144, 152, 160, 168, 176, 184, 192, 200, 208, 216, 224, 232, 240, 248, 256, 264, 272, 280, 288, 296, 304, 312 или 320. В некоторых вариантах осуществления последовательность VH, имеющая идентичность по меньшей мере 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99%, содержит замены (например, консервативные замены), вставки или делеции относительно эталонной последовательности, и последовательность VL, имеющая идентичность, по меньшей мере, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99%, содержит замены (например, консервативные замены), вставки или делеции относительно эталонной последовательности, но анти-PD-1-антитело, содержащее данную последовательность, сохраняет способность связываться с PD-1. В некоторых вариантах осуществления от 1 до 10 аминокислот были замещены, вставлены и/или удалены в SEQ ID NO: 4, 12, 20, 28, 36, 44, 52, 60, 68, 76, 84, 92, 100, 108, 116, 124, 132, 140, 148, 156, 164, 172, 180, 188, 196, 204, 212, 220, 228, 236, 244, 252, 260, 268, 276, 284, 292, 300, 308 или 316. В некоторых вариантах осуществления от 1 до 10 аминокислот были замещены, вставлены и/или удалены в SEQ ID NO: 8, 16, 24, 32, 40, 48, 56, 64, 72, 80, 88, 96, 104, 112, 120, 128, 136, 144, 152, 160, 168, 176, 184, 192, 200, 208, 216, 224, 232, 240, 248, 256, 264, 272, 280, 288, 296, 304, 312 или 320. В некоторых вариантах осуществления замены, вставки или делеции происходят в областях за пределами CDR (то есть в FR). Необязательно, анти-PD-1-антитело содержит последовательность VH в SEQ ID NO: 4, 12, 20, 28, 36, 44, 52, 60, 68, 76, 84, 92, 100, 108, 116, 124, 132, 140, 148, 156, 164, 172, 180, 188, 196, 204, 212, 220, 228, 236, 244, 252, 260, 268, 276, 284, 292, 300, 308 или 316 и последовательность VL SEQ ID NO: 8, 16, 24, 32, 40, 48, 56, 64, 72, 80, 88, 96, 104, 112, 120, 128, 136, 144, 152, 160, 168, 176, 184, 192, 200, 208, 216, 224, 232, 240, 248, 256, 264, 272, 280, 288, 296, 304, 312 или 320, включая посттрансляционные модификации одной или обеих последовательностей.
[00229] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело содержит (а) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7; (d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10; и (f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 11.
[00230] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело содержит (а) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 13; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 14; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 15; (d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 17; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 18; и (f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 19.
[00231] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело содержит (а) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 21; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 22; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 23; (d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 25; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 26; и (f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 27.
[00232] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело содержит (а) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 29; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 30; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 31; (d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 33; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 34; и (f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 35.
[00233] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело содержит (а) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 37; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 38; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 39; (d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 41; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 42; и (f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 43.
[00234] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело содержит (а) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 45, 53, 61, 69, 77, 85, 93, 101, 109 и 117; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 46, 54, 62, 70, 78, 86, 94, 102, 110 и 118; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 47, 55, 63, 71, 79, 87, 95, 103, 111 и 119; (d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 49, 57, 65, 73, 81, 89, 97, 105, 113 и 121; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 50, 58, 66, 74, 82, 90, 98, 106, 114 и 122; и (f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 51, 59, 67, 75, 83, 91, 99, 107, 115 и 123.
[00235] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело содержит (а) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 125, 133, 141, 149, 157, 165, 173, 181, 189, 197, 205, 213, 221, 229, 237, 245, 253, 261, 269, 277 и 285; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 126, 134, 142, 150, 158, 166, 174, 182, 190, 198, 206, 214, 222, 230, 238, 246, 254, 262, 270, 278 и 286; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 127, 135, 143, 151, 159, 167, 175, 183, 191, 199, 207, 215, 223, 231, 239, 247, 255, 263, 271, 279 и 287; (d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 129, 137, 145, 153, 161, 169, 177, 185, 193, 201, 209, 217, 225, 233, 241, 249, 257, 265, 273, 281 и 289; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 130, 138, 146, 154, 162, 170, 178, 186, 194, 202, 210, 218, 226, 234, 242, 250, 258, 266, 274, 282 и 290; и (f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 131, 139, 147, 155, 163, 171, 179, 187, 195, 203, 211, 219, 227, 235, 243, 251, 259, 267, 275, 283 и 291.
[00236] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело содержит (а) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 285, 237, 245, 253, 261 и 269; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 286, 238, 246, 254, 262 и 270; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 287, 239, 247, 255, 263 и 271; (d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 289, 241, 249, 257, 265 и 273; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 290, 242, 250, 258, 266 и 274; и (f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 291, 243, 251, 259, 267 и 275.
[00237] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело содержит (а) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 189, 197, 205, 213, 221 и 229; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 190, 198, 206, 214, 222 и 230; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 191, 199, 207, 215, 223 и 231; (d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 193, 201, 209, 217, 225 и 233; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 194, 202, 210, 218, 226 и 234; и (f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 195, 203, 211, 219, 227 и 235.
[00238] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело содержит (а) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 277, 125, 133, 141, 149, 157, 165, 173 и 181; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 278, 126, 134, 142, 150, 158, 166, 174 и 182; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 279, 127, 135, 143, 151, 159, 167, 175 и 183; (d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 281, 129, 137, 145, 153, 161, 169, 177 и 185; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 282, 130, 138, 146, 154, 162, 170, 178 и 286; и (f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 283, 131, 139, 147, 155, 163, 171, 179 и 187.
[00239] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело содержит (а) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 293, 301, 309 и 317; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 294, 302, 310 и 318; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 295, 303, 311 и 319; (d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 297, 305, 313 и 321; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 298, 306, 314 и 322; и (f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 299, 307, 315 и 323.
[00240] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело содержит VH, как в любом из вариантов осуществления предложенных в данном документе, и VL, как в любом из вариантов осуществления предложенных в данном документе. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 4 и SEQ ID NO: 8, соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 12 и SEQ ID NO: 16, соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 20 и SEQ ID NO: 24 соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 28 и SEQ ID NO: 32, соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 36 и SEQ ID NO: 40, соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 44 и SEQ ID NO: 48, соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 52 и SEQ ID NO: 56, соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 60 и SEQ ID NO: 64, соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 68 и SEQ ID NO: 72, соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 76 и SEQ ID NO: 80, соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 84 и SEQ ID NO: 88, соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 92 и SEQ ID NO: 96, соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 100 и SEQ ID NO: 104, соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 108 и SEQ ID NO: 112, соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 116 и SEQ ID NO: 120, соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 124 и SEQ ID NO: 128, соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 132 и SEQ ID NO: 136, соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 140 и SEQ ID NO: 144, соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 148 и SEQ ID NO: 152, соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 156 и SEQ ID NO: 160, соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 164 и SEQ ID NO: 168, соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 172 и SEQ ID NO: 176, соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 180 и SEQ ID NO: 184, соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 188 и SEQ ID NO: 192, соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 196 и SEQ ID NO: 200, соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 204 и SEQ ID NO: 208, соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 212 и SEQ ID NO: 216, соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 220 и SEQ ID NO: 224, соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 228 и SEQ ID NO: 232, соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 236 и SEQ ID NO: 240, соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 244 и SEQ ID NO: 248, соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 252 и SEQ ID NO: 256, соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 260 и SEQ ID NO: 264, соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 268 и SEQ ID NO: 272, соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 276 и SEQ ID NO: 280, соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 284 и SEQ ID NO: 288, соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 292 и SEQ ID NO: 296, соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 300 и SEQ ID NO: 304, соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 308 и SEQ ID NO: 312, соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 316 и SEQ ID NO: 320, соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей.
[00241] В некоторых вариантах осуществления изобретения предлагаются антитела, которые конкурируют с анти-PD-1-антителами, представленными в данном документе, за связывание с PD-1. В некоторых вариантах осуществления антитела конкурируют с анти-PD-1-антителами, представленными в данном документе, за связывание с эпитопом на PD-1.
[00242] В некоторых вариантах осуществления конкурентные анализы могут использоваться для идентификации моноклонального антитела, которое конкурирует с анти-PD-1-антителом, описанным в данном документе (таким как 12228, 13406, 13407, 13408 и 13409) за связывание с PD-1. Конкурентные анализы можно использовать для определения того, связывают ли два антитела один и тот же эпитоп, распознавая идентичные или стерически перекрывающиеся эпитопы, или одно антитело конкурентно ингибирует связывание другого антитела с антигеном. В некоторых вариантах осуществления такое конкурирующее антитело связывается с тем же эпитопом, который связан антителом, описанным в данном документе. Типичные конкурентные анализы включают, но не ограничиваются ими, обычные анализы, такие как те, которые представлены в Harlow and Lane (1988) Antibodies: A Laboratory Manual ch.14 (Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, N.Y.). Подробные иллюстративные способы картирования эпитопа, с которым связывается антитело, представлены в Morris (1996) “Epitope Mapping Protocols,” в Methods in Molecular Biology vol. 66 (Humana Press, Totowa, N.J.). В некоторых вариантах осуществления считается, что два антитела связываются с одним и тем же эпитопом, если каждое блокирует связывание другого на 50% или более. В некоторых вариантах осуществления антитело, которое конкурирует с анти-PD-1-антителом, описанным в данном документе, представляет собой химерное, гуманизированное или человеческое антитело. В некоторых вариантах осуществления предложено антитело, которое конкурирует с химерным, гуманизированным или человеческим анти-PD-1-антителом, как описано в данном документе.
[00243] В некоторых вариантах осуществления изобретения предлагаются антитела, которые связываются с любым одним или более эпитопами, которые представлены в данном документе. В некоторых вариантах осуществления предложены антитела, которые связывают и перекрывают эпитоп, с которым связываются настоящие антитела. В некоторых вариантах осуществления предложено антитело, которое конкурирует по меньшей мере с одним из антител, предложенных в данном документе. В некоторых вариантах осуществления предложено антитело, которое конкурирует по меньшей мере с двумя из антител, предложенных в данном документе. В некоторых вариантах осуществления предложено антитело, которое конкурирует по меньшей мере с тремя из антител, предложенных в данном документе. В некоторых вариантах осуществления антитело связывается с перекрывающимся эпитопом в качестве антитела, описанного в приведенных в данном документе примерах. В некоторых вариантах осуществления весь эпитоп связан и/или заблокирован конкурирующим антителом. В некоторых вариантах осуществления часть эпитопа связана и/или заблокирована конкурирующим антителом. В некоторых вариантах осуществления паратоп конкурирующего антитела связывается по меньшей мере с частью эпитопа антитела, представленного в данном документе. В некоторых вариантах осуществления паратоп конкурирующего антитела связывает мишень, а другой участок структуры конкурирующего антитела препятствует по меньшей мере части эпитопа антитела, представленного в данном документе.
Иллюстративные химерные антитела
[00244] В некоторых вариантах осуществления антитело, предложенное в данном документе, представляет собой химерное антитело. Некоторые химерные антитела описаны, например, в патенте США № 4816567 и Morrison et al., (1984) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81 :6851-6855 (1984)). В одном примере химерное антитело содержит вариабельную область, не являющуюся человеческой (например, вариабельную область, полученную от мыши, крысы, хомяка, кролика или не являющегося человеком примата, такого как обезьяна) и человеческую константную область. В дополнительном примере химерное антитело представляет собой антитело с «переключенным классом», в котором класс или подкласс был изменен по сравнению с родительским антителом. Химерные антитела включают их антигенсвязывающие фрагменты.
[00245] Неограничивающие иллюстративные химерные антитела включают химерные антитела, содержащие вариабельные области тяжелой и/или легкой цепи антитела, выбранного из, например, антитела 11606; антитела 11613; антитела 11645; антитела 12191; антитела 12195; антитела 12220; антитела 12228; антитела 12535; антитела 12536; антитела 12541; антитела 12543; антитела 12544; антитела 12545; антитела 12549; антитела 12550; антитела 12553; антитела 12554; антитела 12562; антитела 12563; антитела 12564; антитела 12565; антитела 12571; антитела 12572; антитела 12576; антитела 12583; антитела 12584; антитела 13396; антитела 13398; антитела 13399; антитела 13401; антитела 13402; антитела 13403; антитела 13404; антитела 13405; антитела 13406; антитела 13407; антитела 13408; антитела 13409; антитела 11624 и антитела 12190, как описано в данном документе. Дополнительные неограничивающие примерные химерные антитела включают химерные антитела, содержащие тяжелую цепь CDR1, CDR2 и CDR3 и/или легкую цепь CDR1, CDR2 и CDR3 антитела, выбранного из антитела 11606; антитела 11613; антитела 11645; антитела 12191; антитела 12195; антитела 12220; антитела 12228; антитела 12535; антитела 12536; антитела 12541; антитела 12543; антитела 12544; антитела 12545; антитела 12549; антитела 12550; антитела 12553; антитела 12554; антитела 12562; антитела 12563; антитела 12564; антитела 12565; антитела 12571; антитела 12572; антитела 12576; антитела 12583; антитела 12584; антитела 13396; антитела 13398; антитела 13399; антитела 13401; антитела 13402; антитела 13403; антитела 13404; антитела 13405; антитела 13406; антитела 13407; антитела 13408; антитела 13409; антитела 11624 и антитела 12190, как описано в данном документе. В некоторых вариантах осуществления химерное анти-PD-1-антитело содержит вариабельные области, описанные выше, и связывается с PD-1. В некоторых вариантах осуществления химерное анти-PD-1-антитело содержит вариабельные области, описанные выше, связывается с PD-1 и ингибирует связывание PD-1 с PD-L1 и/или PD-L2. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело содержит вариабельные области, описанные выше, связывается с PD-1 и ингибирует связывание PD-1 с PD-L1. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело содержит вариабельные области, описанные выше, связывается с PD-1 и ингибирует связывание PD-1 с PD-L1 и PD-L2. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело содержит вариабельные области, описанные выше, связывается с PD-1 и усиливает иммунный ответ у субъекта и/или увеличивает активацию Т-клеток у субъекта после введения антитела субъекту. В некоторых вариантах осуществления введение анти-PD-1-антител, описанных в данном документе, стимулирует активность иммунной клетки, уменьшает подавление модуляции иммунной клетки или увеличивает ответ Т-клеток у субъекта.
[00246] В некоторых вариантах осуществления химерное анти-PD-1-антитело содержит тяжелую цепь, содержащую последовательность вариабельной области, которая по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентична последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 4, 12, 20, 28, 36, 44, 52, 60, 68, 76, 84, 92, 100, 108, 116, 124, 132, 140, 148, 156, 164, 172, 180, 188, 196, 204, 212, 220,228, 236, 244, 252, 260, 268, 276, 284, 292, 300, 308 или 316, причем антитело связывает PD-1. В некоторых вариантах осуществления химерное анти-PD-1-антитело содержит легкую цепь, содержащую последовательность вариабельной области, которая по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентична последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 8, 16, 24, 32, 40, 48, 56, 64, 72, 80, 88, 96, 104, 112, 120, 128, 136, 144, 152, 160, 168, 176, 184, 192. 200, 208, 216, 224, 232, 240, 248, 256, 264, 272, 280, 288, 296, 304, 312 или 320, причем антитело связывает PD-1. В некоторых вариантах осуществления химерное анти-PD-1-антитело содержит тяжелую цепь, содержащую последовательность вариабельной области, которая по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или, по меньшей мере на 99% идентична последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 4, 12, 20, 28, 36, 44, 52, 60, 68, 76, 84, 92, 100, 108, 116, 124, 132, 140, 148, 156, 164, 172, 180, 188, 196, 204, 212, 220, 228, 236, 244, 252, 260, 268, 276, 284, 292, 300, 308 или 316; и легкую цепь, содержащую последовательность вариабельной области, которая по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или меньшей мере на 99% идентична последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 8, 16, 24, 32, 40, 48, 56, 64, 72, 80, 88, 96, 104, 112, 120, 128, 136, 144, 152, 160, 168, 176, 184, 192, 200, 208, 216, 224, 232, 240, 248, 256, 264, 272, 280, 288, 296, 304, 312 или 320; причем антитело связывает PD-1.
[00247] Иллюстративные химерные анти-PD-1-антитела также включают в себя химерные антитела, которые конкурируют за связывание с PD-1 с антителом или его фрагментом, описанным в данном документе. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления предложено химерное анти-PD-1-антитело, которое конкурирует за связывание с PD-1 антителом, выбранным из антитела 11606; антитела 11613; антитела 11645; антитела 12191; антитела 12195; антитела 12220; антитела 12228; антитела 12535; антитела 12536; антитела 12541; антитела 12543; антитела 12544; антитела 12545; антитела 12549; антитела 12550; антитела 12553; антитела 12554; антитела 12562; антитела 12563; антитела 12564; антитела 12565; антитела 12571; антитела 12572; антитела 12576; антитела 12583; антитела 12584; антитела 13396; антитела 13398; антитела 13399; антитела 13401; антитела 13402; антитела 13403; антитела 13404; антитела 13405; антитела 13406; антитела 13407; антитела 13408; антитела 13409; антитела 11624 и антитела 12190 или его фрагмента. В некоторых вариантах осуществления химерное анти-PD-1-антитело конкурирует за связывание с PD-1 с антителом, описанным в данном документе, и ингибирует связывание PD-1 с PD-L1 и/или PD-L2. В некоторых вариантах осуществления химерное анти-PD-1-антитело конкурирует за связывание с PD-1 с антителом, описанным в данном документе, и ингибирует связывание PD-1 с PD-L1. В некоторых вариантах осуществления химерное анти-PD-1-антитело конкурирует за связывание с PD-1 с антителом, описанным в данном документе, и ингибирует связывание PD-1 с PD-L1 и PD-L2. В некоторых вариантах осуществления химерное анти-PD-1-антитело конкурирует за связывание с PD-1 с антителом, описанным в данном документе, и усиливает иммунный ответ у субъекта и/или увеличивает активацию Т-клеток у субъекта после введения антитела субъекту.
[00248] В некоторых вариантах осуществления химерное антитело, описанное в данном документе, содержит одну или более константных областей человека. В некоторых вариантах осуществления константная область тяжелой цепи человека имеет изотип, выбранный из IgA, IgG и IgD. В некоторых вариантах осуществления константная область легкой цепи человека имеет изотип, выбранный из κ и λ. В некоторых вариантах осуществления химерное антитело, описанное в данном документе, содержит константную область IgG человека. В некоторых вариантах осуществления химерное антитело, описанное в данном документе, содержит константную область тяжелой цепи IgG4 человека. В некоторых вариантах осуществления химерное антитело, описанное в данном документе, содержит константную область IgG4 человека и легкую цепь к человека.
[00249] Как отмечено выше, желательна ли эффекторная функция или нет, может зависеть от конкретного способа лечения, для которого предназначено антитело. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления когда желательна эффекторная функция, выбирают химерное анти-PD-1-антитело, содержащее константную область тяжелой цепи IgG1 человека или константную область тяжелой цепи IgG3 человека. В некоторых вариантах осуществления когда эффекторная функция нежелательна, выбирают химерное анти-PD-1-антитело, содержащее константную область тяжелой цепи IgG4 человека или IgG2 человека.
Иллюстративные гуманизированные антитела
[00250] В некоторых вариантах осуществления предложены гуманизированные антитела, которые связывают PD-1. Гуманизированные антитела полезны в качестве терапевтических молекул, потому что гуманизированные антитела уменьшают или устраняют иммунный ответ человека по сравнению с нечеловеческими антителами, что может приводить к иммунному ответу на терапевтическое антитело (такое как ответная реакция в виде антител человека против антител мыши (HAMA)) и снижению эффективности терапии.
[00251] В некоторых вариантах осуществления химерное антитело представляет собой гуманизированное антитело. Как правило, не относящееся к человеку антитело гуманизируют для снижения иммуногенности для людей, сохраняя при этом специфичность и аффинность родительского не относящегося к человеку антитела. Обычно гуманизированное антитело содержит один или более вариабельных доменов, в которых CDR (или их части) получены из не относящегося к человеку антитела, а FR (или их части) получены из последовательностей антител человека. Гуманизированное антитело необязательно также будет содержать по меньшей мере часть человеческой константной области. В некоторых вариантах осуществления некоторые остатки FR в гуманизированном антителе заменены соответствующими остатками не относящегося к человеку антитела (например, антитела, из которого получены остатки CDR), например, для восстановления или улучшения специфичности или аффинности антитела.
et al
Nature
et al
Proc. Natl Acad. Sci. USA
et al
Methods
Mol. Immunol.
et al
Methods
et al
Methods
et al
Br. J. Cancer
[00252] Гуманизированные антитела и способы их получения рассматриваются, например, в Almagro and Fransson, (2008) Front. Biosci. 13: 1619-1633, и дополнительно описаны, например, в Riechmann ., (1988)  332:323-329; Queen ., (1989)  86: 10029-10033; патентах США № 5,821,337, 7,527,791, 6,982,321 и 7087409; Kashmiri ., (2005)  36:25-34; Padlan, (1991)  28:489-498 (описание «изменение поверхности»); Dall'Acqua ., (2005)  36:43-60 (описание «перестановки FR»); и Osbourn ., (2005)  36:61-68 и Klimka ., (2000) , 83:252-260 (описание подхода «управляемого отбора» к перестановке FR).
et al
J. Immunol.
et al
Proc. Natl. Acad. Sci. USA
et al
J. Immunol
Front. Biosci
et al
J. Biol. Chem
et al
J. Biol. Chem.
[00253] Каркасные области человека, которые могут быть использованы для гуманизации, включают, но не ограничиваются ими: каркасные области, выбранные с использованием способа «наилучшего соответствия» (см., например, Sims . (1993)  151:2296); каркасные области, полученные из консенсусной последовательности антител человека определенной подгруппы вариабельных областей легкой или тяжелой цепи (см., например, Carter . (1992) , 89:4285; и Presta . (1993) , 151:2623); зрелые каркасные области человека (соматически мутированные) или каркасные области зародышевой линии человека (см., например, Almagro and Fransson, (2008) . 13:1619-1633) и каркасные области, полученные при скрининге FR-библиотек (см., например, Baca ., (1997) . 272: 10678-10684 и Rosok ., (1996)  271 :22611-22618).
[00254] Иллюстративные гуманизированные анти-PD-1-антитела, включают в себя антитела, которые конкурируют за связывание с PD-1 с антителом или его фрагментом, описанным в данном документе. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления предложено гуманизированное анти-PD-1-антитело, которое конкурирует за связывание с PD-1 с антителом или его фрагментом, выбранным из антитела 11606; антитела 11613; антитела 11645; антитела 12191; антитела 12195; антитела 12220; антитела 12228; антитела 12535; антитела 12536; антитела 12541; антитела 12543; антитела 12544; антитела 12545; антитела 12549; антитела 12550; антитела 12553; антитела 12554; антитела 12562; антитела 12563; антитела 12564; антитела 12565; антитела 12571; антитела 12572; антитела 12576; антитела 12583; антитела 12584; антитела 13396; антитела 13398; антитела 13399; антитела 13401; антитела 13402; антитела 13403; антитела 13404; антитела 13405; антитела 13406; антитела 13407; антитела 13408; антитела 13409; антитела 11624 и антитела 12190. В некоторых вариантах осуществления гуманизированное анти-PD-1-антитело конкурирует за связывание с PD-1 с антителом, описанным в данном документе, и ингибирует связывание PD-1 с PD-L1 и/или PD-L2. В некоторых вариантах осуществления гуманизированное анти-PD-1-антитело конкурирует за связывание с PD-1 с антителом, описанным в данном документе, и ингибирует связывание PD-1 с PD-L1. В некоторых вариантах осуществления гуманизированное анти-PD-1-антитело конкурирует за связывание с PD-1 с антителом, описанным в данном документе, и ингибирует связывание PD-1 с PD-L1 и PD-L2. В некоторых вариантах осуществления гуманизированное анти-PD-1-антитело конкурирует за связывание с PD-1 с антителом, описанным в данном документе, и усиливает иммунный ответ у субъекта и/или увеличивает активацию Т-клеток у субъекта после введения антитела субъекту.
Иллюстративные антитела человека
Curr. Opin. Pharmacol
Curr. Opin. Immunol
[00255] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело, предложенное в данном документе, представляет собой антитело человека. Антитела человека могут быть получены с использованием различных методик, известных в данной области техники. Антитела человека описаны в основном в van Dijk and van de Winkel, (2001) . 5:368-374 и Lonberg, (2008) . 20:450-459. В некоторых вариантах осуществления антитело человека не является встречающимся в природе антителом. В некоторых вариантах осуществления антитело человека представляет собой моноклональное антитело; таким образом, в некоторых вариантах осуществления каждое из антител человека в наборе может связываться с одним и тем же эпитопом на антигене.
Nat. Biotech

[00256] Антитела человека могут быть получены введением иммуногена трансгенному животному, которое было модифицировано для продукции интактных антител человека или интактных антител с вариабельными областями человека в ответ на антигенную стимуляцию. Такие животные обычно содержат все или часть локусов иммуноглобулинов человека, которые заменяют эндогенные локусы иммуноглобулинов или которые присутствуют внехромосомно или случайным образом интегрированы в хромосомы животного. У таких трансгенных мышей эндогенные локусы иммуноглобулина обычно инактивированы. Обзор способов получения антител человека от трансгенных животных см. в Lonberg, (2005) . 23: 1117-1125. См. также, например, патенты США № 6075181 и 6150584, описывающие технологию XENOMOUSE™; патент США № 5770429, описывающий технологию HUMAB; патент США № 7041870, описывающий технологию K-M MOUSE, и публикацию заявки на патент США № US 2007/0061900, описывающую технологию VELOCIMOUSE. Вариабельные области человека из интактных антител, генерируемых такими животными, можно дополнительно модифицировать, например, путем объединения с другой константной областью человека.
J. Immunol
et al
Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications
et al
J. Immunol.
et al
Proc. Natl. Acad. Sci. USA
Xiandai Mianyixue
Histology and Histopathology
Methods and Findings in Experimental and Clinical Pharmacology
[00257] Антитела человека также могут быть получены с помощью гибридомных способов. Описаны клеточные линии миеломы человека и гетеромиеломы человека-мыши для продуцирования моноклональных антител человека. (См., например, Kozbor (1984) , 133: 3001; Brodeur ., , pp. 51-63 (Marcel Dekker, Inc., New York, 1987) и Boerner , (1991) , 147:86). Антитела человека, полученные с помощью технологии гибридомных B-клеток человека, также описаны в Li ., (2006) , 103:3557-3562. Дополнительные способы включают способы, описанные, например, в патенте США № 7,189,926 (описывающем получение моноклональных антител-IgM человека из линий гибридомных клеток) и Ni, (2006) , 26(4):265-268 (описывающей гибридомы человек-человек). Технология гибридом человека (технология Триома) также описана Vollmers and Brandlein, (2005) , 20(3):927-937 (2005) и Vollmers and Brandlein, (2005) , 27(3): 185-191.
[00258] Антитела человека также могут быть получены путем выделения последовательностей клона вариабельного домена Fv, выбранного из библиотек фагового дисплея, полученных от человека. Такие последовательности вариабельного домена затем можно комбинировать с желаемым константным доменом человека. Методики отбора антител человека из библиотек антител описаны ниже.
et al
et al
ed
et al.
Nature
et al.
Nature
et al.
J. Mol. Biol
Methods in Molecular Biology
ed
et al.
J. Mol. Biol.
et al
J. Mol. Biol
Fellouse
roc. Natl. Acad. Sci. USA
et al.
J. Immunol. Methods
[00259] Антитела могут быть выделены путем скрининга комбинаторных библиотек на наличие антител с желаемой активностью или активностями. Например, в данной области техники известны различные способы создания библиотек фагового дисплея и скрининга таких библиотек на наличие антител, обладающих желаемыми характеристиками связывания. Такие способы рассмотрены, например, в Hoogenboom . в Methods in Molecular Biology 178: 1-37 (O'Brien ., ., Human Press, Totowa, NJ, 2001) и дополнительно описаны, например, в McCafferty , (1990)  348:552-554; Clackson , (1991)  352: 624-628; Marks , (1992)  222: 581-597; Marks and Bradbury, в  248: 161-175 (Lo, ., Human Press, Totowa, NJ, 2003); Sidhu , (2004)  338(2): 299-310; Lee ., (2004) . 340(5): 1073-1093; , (2004) P 101(34): 12467-12472; и Lee , (2004) 284(1-2): 119-132 и PCT публикации WO 99/10494.
H
L
et al
Ann. Rev. Immunol.
et al
EMBO J
J. Mol. Biol,
[00260] В некоторых способах фагового дисплея репертуары генов V и V по отдельности клонируют с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР) и случайным образом рекомбинируют в фаговых библиотеках, которые затем могут быть подвергнуты скринингу на антигенсвязывающий фаг, как описано в Winter ., (1994) , 12:433-455. Фаг обычно содержит фрагменты антител, либо в виде одноцепочечных фрагментов Fv (scFv), либо в виде фрагментов Fab. Библиотеки из иммунизированных источников предоставляют высокоаффинные антитела к иммуногену без необходимости конструирования гибридом. Альтернативно, наивный репертуар может быть клонирован (например, от человека), чтобы обеспечить единый источник антител к широкому спектру неаутоантигенов, а также аутоантигенов без какой-либо иммунизации, как описано в Griffiths ., (1993) 12:725-734. Наконец, наивные библиотеки также могут быть созданы синтетически путем клонирования неупорядоченных сегментов V-гена из стволовых клеток и использования ПЦР-праймеров, содержащих случайную последовательность, для кодирования высоко вариабельных областей CDR3 и для осуществления перегруппировки in vitro, как описано в Hoogenboom and Winter (1992), 227:381-388. Патентные публикации, описывающие фаговые библиотеки антител человека, включают в себя, например: патент США № 5750373 и патентные публикации США № 2005/0079574, 2005/0119455, 2005/0266000, 2007/0117126, 2007/0160598, 2007/0237764, 2007/0292936 и 2009/0002360.
[00261] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело человека связывается с полипептидом, имеющим последовательность SEQ ID NO: 1, 2, 3, 382, 383 или 384. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело человека связывается с PD-1 и ингибирует связывание PD-1 с PD-L1 и/или PD-L2. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело человека связывается с PD-1 и ингибирует связывание PD-1 с PD-L1. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело человека связывается с PD-1 и ингибирует связывание PD-1 с PD-L1 и PD-L2. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело человека связывается с PD-1 и усиливает иммунный ответ у субъекта и/или увеличивает активацию Т-клеток у субъекта после введения антитела субъекту.
[00262] Типичные анти-PD-1-антитела человека также включают антитела, которые конкурируют за связывание с PD-1 с антителом человека или его фрагментом, описанными в данном документе. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления предложено анти-PD-1-антитело человека, которое конкурирует за связывание с PD-1 с антителом или его фрагментом, выбранным из антитела 11606; антитела 11613; антитела 11645; антитела 12191; антитела 12195; антитела 12220; антитела 12228; антитела 12535; антитела 12536; антитела 12541; антитела 12543; антитела 12544; антитела 12545; антитела 12549; антитела 12550; антитела 12553; антитела 12554; антитела 12562; антитела 12563; антитела 12564; антитела 12565; антитела 12571; антитела 12572; антитела 12576; антитела 12583; антитела 12584; антитела 13396; антитела 13398; антитела 13399; антитела 13401; антитела 13402; антитела 13403; антитела 13404; антитела 13405; антитела 13406; антитела 13407; антитела 13408; антитела 13409; антитела 11624 и антитела 12190. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело человека конкурирует за связывание с PD-1 с антителом, описанным в данном документе, и ингибирует связывание PD-1 с PD-L1 и/или PD-L2. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело человека конкурирует за связывание с PD-1 с антителом, описанным в данном документе, и ингибирует связывание PD-1 с PD-L1. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело человека конкурирует за связывание с PD-1 с антителом, описанным в данном документе, и ингибирует связывание PD-1 с PD-L1 и PD-L2. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело человека конкурирует за связывание с PD-1 с антителом, описанным в данном документе, и усиливает иммунный ответ у субъекта и/или увеличивает активацию Т-клеток у субъекта после введения антитела субъекту.
[00263] В некоторых вариантах осуществления предложено химерное анти-PD-1-антитело человека, причем антитело содержит вариабельную область из антитела человека, которая связывает PD-1, и константную область из другого антитела человека. В некоторых вариантах осуществления предложено химерное анти-PD-1-антитело человека, причем антитело содержит CDR из антитела человека, которое связывает PD-1, и каркас из другого антитела человека. В некоторых вариантах осуществления антитело не является встречающимся в природе антителом человека.
[00264] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело человека содержит одну или более константных областей человека. В некоторых вариантах осуществления константная область тяжелой цепи человека имеет изотип, выбранный из IgA, IgG и IgD. В некоторых вариантах осуществления константная область легкой цепи человека имеет изотип, выбранный из κ и λ. В некоторых вариантах осуществления антитело человека, описанное в данном документе, содержит константную область IgG человека. В некоторых вариантах осуществления антитело человека, описанное в данном документе, содержит константную область тяжелой цепи IgG4 человека. В некоторых вариантах осуществления антитело человека, описанное в данном документе, содержит константную область IgG4 человека и легкую цепь к человека.
[00265] В некоторых вариантах осуществления когда желательна эффекторная функция, выбирают анти-PD-1-антитело человека, содержащее константную область тяжелой цепи IgG1 человека или константную область тяжелой цепи IgG3 человека. В некоторых вариантах осуществления когда эффекторная функция нежелательна, выбирают анти-PD-1-антитело человека, содержащее константную область тяжелой цепи IgG4 человека или IgG2 человека.
[00266] Как отмечено в данном документе, термин «антитело человека» обозначает род возможных последовательностей для конструкции антитела, а не источник антитела.
Иллюстративные константные области антител
[00267] В некоторых вариантах осуществления антитело, описанное в данном документе, содержит одну или более константных областей человека. В некоторых вариантах осуществления константная область тяжелой цепи человека имеет изотип, выбранный из IgA, IgG и IgD. В некоторых вариантах осуществления антитело, описанное в данном документе, содержит константную область IgG человека. В некоторых вариантах осуществления когда желательна эффекторная функция, выбирают анти-PD-1-антитело, содержащее константную область тяжелой цепи IgG1 человека или константную область тяжелой цепи IgG3 человека. В некоторых вариантах осуществления когда эффекторная функция нежелательна, выбирают анти-PD-1-антитело, содержащее константную область тяжелой цепи IgG4 человека или IgG2 человека. В некоторых вариантах осуществления константная область легкой цепи человека имеет изотип, выбранный из κ и λ. В некоторых вариантах осуществления антитело, описанное в данном документе, содержит константную область тяжелой цепи IgG4 человека. В некоторых вариантах осуществления антитело, описанное в данном документе, содержит константную область IgG4 человека и легкую цепь κ человека.
et al
Sequences of Proteins of Immunological Interest
[00268] В настоящем описании и формуле изобретения, если явно не указано или не известно специалисту в данной области, нумерация остатков в тяжелой цепи иммуноглобулина соответствует индексу ЕС, как в Kabat ., , 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991), специально включенному в данный документ посредством ссылки. «Индекс EU, как у Кабата» относится к нумерации остатков антитела IgG1 EU человека.
[00269] Как отмечено выше, желательна ли эффекторная функция или нет, может зависеть от конкретного способа лечения, для которого предназначено антитело. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления когда желательна эффекторная функция, выбирают анти-PD-1-антитело, содержащее константную область тяжелой цепи IgG1 человека или константную область тяжелой цепи IgG3 человека. В некоторых вариантах осуществления когда эффекторная функция нежелательна, выбирают анти-PD-1-антитело, содержащее константную область тяжелой цепи IgG4 человека или IgG2 человека.
[00270] В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вариант Fc-области, имеющий по меньшей мере одну аминокислотную замену по сравнению с Fc-областью IgG дикого типа или антитела дикого типа. В некоторых вариантах осуществления вариант Fc-области имеет две или более аминокислотных замен в Fc-области антитела дикого типа. В некоторых вариантах осуществления вариант Fc-области имеет три или более аминокислотных замен в Fc-области антитела дикого типа. В некоторых вариантах осуществления вариант Fc-области имеет по меньшей мере одну, две или три или более аминокислотных замен Fc-области, описанных в данном документе. В некоторых вариантах осуществления вариант Fc-области в данном документе будет иметь по меньшей мере около 80% гомологию с нативной последовательностью Fc-области и/или с Fc-областью родительского полипептида. В некоторых вариантах осуществления вариант Fc-области в данном документе будет иметь по меньшей мере около 90% гомологию с нативной последовательностью Fc-области и/или с Fc-областью родительского полипептида. В некоторых вариантах осуществления вариант Fc-области в данном документе будет иметь по меньшей мере около 95% гомологию с нативной последовательностью Fc-области и/или с Fc-областью родительского полипептида. В некоторых вариантах осуществления в константной области тяжелой цепи отсутствует C-концевой остаток лизина (K). В некоторых таких вариантах осуществления тяжелая цепь или константная область тяжелой цепи может называться «desK». В некоторых вариантах осуществления константная область тяжелой цепи, в которой отсутствует С-концевой лизин, представляет собой IgG, такой как IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4.
[00271] В некоторых вариантах осуществления антитело, предложенное в данном документе, изменено для увеличения или уменьшения степени, до которой антитело является гликозилированным. Добавление или удаление сайтов гликозилирования антитела может быть удобно осуществлено путем изменения аминокислотной последовательности так, что один или более сайтов гликозилирования создаются или удаляются.
et al.
TIBTECH
[00272] Когда антитело содержит область Fc, присоединенный к ней углевод может быть изменен. Нативные антитела, продуцируемые клетками млекопитающих, обычно содержат разветвленный двухантенный олигосахарид, который обычно присоединяется посредством N-связи к Asn297 домена CH2 области Fc. См., например, Wright  15:26-32 (1997). Олигосахарид может включать в себя различные углеводы, например маннозу, N-ацетилглюкозамин (GlcNAc), галактозу и сиаловую кислоту, а также фукозу, присоединенную к GlcNAc в «стволе» структуры двухантенного олигосахарида. В некоторых вариантах осуществления могут быть выполнены модификации олигосахарида в антителе для создания вариантов антитела с определенными улучшенными свойствами.
et al. J. Mol. Biol
et al. Biotech. Bioeng
et
al
Arch. Biochem. Biophys.
et al
et al. Biotech. Bioeng.
et al., Biotechnol. Bioeng.
[00273] В некоторых вариантах осуществления предлагаются варианты антител, имеющие углеводную структуру, в которой отсутствует фукоза, присоединенная (прямо или косвенно) к области Fc. Например, количество фукозы в таких антителах может составлять от 1 до 80%, от 1 до 65%, от 5 до 65% или от 20 до 40%. Количество фукозы определяется путем расчета среднего количества фукозы в углеводной цепи при Asn297 относительно суммы всех гликоструктур, связанных с Asn 297 (например, сложных, гибридных и содержащих повышенное количество маннозы структур), измеренных путем MALDI-TOF масс-спектрометрии, как описано, например, в WO 2008/077546. Asn297 относится к остатку аспарагина, расположенному около положения 297 в области Fc (нумерация остатков в области Fc согласно EU); однако Asn297 также может быть расположен около на ±3 аминокислоты выше или ниже положения 297, то есть между положениями 294 и 300, из-за незначительных вариаций последовательности в антителах. Такие варианты фукозилирования могут иметь улучшенную функцию ADCC. См., например, патентные публикации США US 2003/0157108 (Presta, L.); US 2004/0093621 (Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd). Примеры публикаций, относящихся к «дефукозилированным» или «фукозо-дефицитным» вариантам антител, включают в себя: US 2003/0157108; WO 2000/61739; WO 2001/29246; US 2003/0115614; US 2002/0164328; US 2004/0093621; US 2004/0132140; US 2004/0110704; US 2004/0110282; US 2004/0109865; WO 2003/085119; WO 2003/084570; WO 2005/035586; WO 2005/035778; WO 2005/053742; WO 2002/031140; Okazaki . 336:1239-1249 (2004); Yamane-Ohnuki . 87: 614 (2004). Примеры клеточных линий, способных продуцировать дефукозилированные антитела, включают в себя клетки Lec13 CHO с дефицитом фукозилирования белка (Ripka . 249:533-545 (1986); заявка на патент США US 2003/0157108 A1, Presta, L; и WO 2004/056312 A1, Adams ., особенно в примере 11), и нокаутные клеточные линии, такие как нокаутные клетки СНО по гену альфа-1,6-фукозилтрансферазы, FUT8, (см., например, Yamane-Ohnuki  87: 614 (2004); Kanda, Y. , 94(4):680-688 (2006); и WO 2003/085107).
et al
et al
et al
et al
[00274] Варианты антител дополнительно снабжают разделенными пополам олигосахаридами, например, в которых двухантенный олигосахарид, присоединенный к области Fc антитела, делится пополам с помощью GlcNAc. Такие варианты антител могут иметь пониженное фукозилирование и/или улучшенную функцию ADCC. Примеры таких вариантов антител описаны, например, в WO 2003/011878 (Jean-Mairet .); патенте США № 6602684 (Umana .) и US 2005/0123546 (Umana .). Также предлагаются варианты антител с по меньшей мере одним остатком галактозы в олигосахариде, присоединенном к области Fc. Такие варианты антител могут иметь улучшенную функцию CDC. Такие варианты антител описаны, например, в WO 1997/30087 (Patel .); WO 1998/58964 (Raju, S.) и WO 1999/22764 (Raju, S.).
[00275] Варианты антител также снабжены лидерными дополнениями на аминоконце цепи. Например, один или более аминокислотных остатков лидерной аминоконцевой последовательности присутствуют на аминоконце любой одной или более тяжелых или легких цепей антитела. Типичное лидерное дополнение на аминоконце цепи включает в себя или состоит из трех аминокислотных остатков, VHS, присутствующих в одной или обеих легких цепях варианта антитела.
et al
International Immunology
[00276] Время полужизни in vivo или в сыворотке крови человека полипептидов, связывающих с высокой аффинностью FcRn, можно анализировать, например, у трансгенных мышей, людей или приматов, не являющихся человеком, которым вводят полипептиды с вариантом области Fc. См. также, например, Petkova .  18(12):1759-1769 (2006).
,
[00277] В некоторых вариантах осуществления вариант антитела опосредует ADCC в присутствии эффекторных клеток человека более эффективно, чем родительское антитело. В некоторых вариантах осуществления вариант антитела существенно более эффективен при опосредовании ADCC in vitro, когда количества варианта полипептида и родительского антитела, использованные в анализе, по существу одинаковы. В некоторых вариантах осуществления вариант антитела существенно более эффективен при опосредовании ADCC in vivo, когда количества варианта полипептида и родительского антитела, использованные в анализе, по существу одинаковы. Как правило, такие полипептиды можно обнаружить с применением анализа ADCC in vitro раскрытого в настоящем документе, однако можно также применять другие анализы или методы определения активности ADCC, например модель на животных и т.д.
Иллюстративные конъюгаты антител
[00278] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело конъюгировано с другой молекулой. В некоторых вариантах осуществления дополнительная молекула может быть детектируемым маркером, таким как метка. В некоторых вариантах дополнительная молекула может представлять собой терапевтическую молекулу, такую как цитотоксическое средство. В некоторых вариантах осуществления метка и/или цитотоксическое средство могут быть конъюгированы с антителом. В данном документе метка представляет собой фрагмент, который облегчает обнаружение антитела и/или облегчает обнаружение молекулы, с которой связывается антитело. Неограничивающие иллюстративные метки включают, но не ограничиваются ими, радиоизотопы, флуоресцентные группы, ферментные группы, хемилюминесцентные группы, биотин, эпитопные метки, металлсвязывающие метки и т.д. Специалист в данной области техники может выбрать подходящую метку в соответствии с конкретным применением.
[00279] Используемое в данном документе цитотоксическое средство представляет собой фрагмент, который уменьшает пролиферативную способность одной или более клеток. Клетка обладает пониженной пролиферативной способностью, когда клетка становится менее способной к пролиферации, например, потому что клетка подвергается апоптозу или иным образом умирает, клетка не проходит через клеточный цикл и/или не может делиться, клетка дифференцируется и т.д. Неограничивающие типичные цитотоксические средства включают в себя, но не ограничиваются ими, радиоизотопы, токсины и химиотерапевтические средства. Специалист в данной области техники может выбрать подходящее цитотоксическое средство в соответствии с предполагаемым применением. В некоторых вариантах осуществления цитотоксическое средство представляет собой по меньшей мере одно из антиметаболитов, алкилирующих агентов, антибиотиков, факторов роста, цитокинов, антиангиогенных средств, антимитотических средств, антрациклинов, токсинов или апоптотического средства.
[00280] В некоторых вариантах осуществления метка и/или цитотоксическое средство конъюгированы с антителом с использованием химических способов in vitro. Неограничивающие иллюстративные химические способы конъюгации известны в данной области техники и включают услуги, методы и/или реагенты, коммерчески доступные, например, от Thermo Scientific Life Science Research Productions (ранее Pierce; г. Рокфорд, штат Иллинойс, США), Prozyme (г. Хэйворд, Калифорния, США), SACRI Antibody Services (г. Калгари, Канада), AbD Serotec (г. Роли, штат Северная Каролина, США) и т.п. В некоторых вариантах осуществления когда метка и/или цитотоксическое средство представляют собой полипептид, метка и/или цитотоксическое средство могут быть экспрессированы из одного и того же экспрессионного вектора по меньшей мере с одной цепью антитела для получения полипептида, содержащего метку и/или цитотоксическое средство, слитое с цепью антитела. Специалист в данной области техники может выбрать подходящий способ конъюгирования метки и/или цитотоксического средства с антителом в соответствии с предполагаемым применением.
[00281] В некоторых вариантах осуществления конъюгация может быть ковалентной. В некоторых вариантах осуществления конъюгация может быть нековалентной. В некоторых вариантах осуществления конъюгирование может осуществляться посредством специфического связывающего взаимодействия, например посредством связывания вторичного антитела.
Иллюстративные лидерные последовательности
[00282] Для того чтобы некоторые секретируемые белки экспрессировались и секретировались в больших количествах, может быть желательным использование лидерной последовательности из гетерологичного белка. В некоторых вариантах осуществления использование гетерологичных лидерных последовательностей может быть выгодным тем, что полученный зрелый полипептид может оставаться неизменным, поскольку лидерная последовательность удаляется в ER во время процесса секреции. Добавление гетерологичной лидерной последовательности может быть полезным для экспрессии и секреции некоторых белков.
et al
BMC Bioinformatics
[00283] Некоторые иллюстративные лидерные последовательности описаны, например, в онлайн базе данных лидерных последовательностей, поддерживаемой факультетом биохимии Национального университета Сингапура. См. Choo ., , 6: 249 (2005) и публикацию РСТ № WO 2006/081430.
III. Экспрессия и продуцирование антител
Молекулы нуклеиновых кислот, кодирующие анти-PD-1-антитела
[00284] В данном документе представлены молекулы нуклеиновых кислот, содержащие полинуклеотиды, которые кодируют одну или более цепей анти-PD-1-антитела. В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты содержит полинуклеотид, который кодирует тяжелую цепь или легкую цепь анти-PD-1-антитела. В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты содержит как полинуклеотид, который кодирует тяжелую цепь, так и полинуклеотид, который кодирует легкую цепь, анти-PD-1-антитела. В некоторых вариантах осуществления первая молекула нуклеиновой кислоты содержит первый полинуклеотид, который кодирует тяжелую цепь, а вторая нуклеиновая кислота содержит второй полинуклеотид, который кодирует легкую цепь.
[00285] В некоторых вариантах осуществления тяжелая цепь и легкая цепь экспрессируются из одной молекулы нуклеиновой кислоты или из двух отдельных молекул нуклеиновых кислот в виде двух отдельных полипептидов. В некоторых вариантах, например, когда антитело представляет собой scFv, один полинуклеотид кодирует один полипептид, содержащий как тяжелую цепь, так и легкую цепь, связанные вместе.
[00286] В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид, кодирующий тяжелую цепь или легкую цепь анти-PD-1-антитела, содержит нуклеотидную последовательность, которая кодирует по меньшей мере один из CDR, предложенных в данном документе. В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид, кодирующий тяжелую цепь или легкую цепь анти-PD-1-антитела, содержит нуклеотидную последовательность, которая кодирует по меньшей мере 3 из CDR, предложенных в данном документе. В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид, кодирующий тяжелую цепь или легкую цепь анти-PD-1-антитела, содержит нуклеотидную последовательность, которая кодирует по меньшей мере 6 из CDR, предложенных в данном документе. В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид, кодирующий тяжелую цепь или легкую цепь анти-PD-1-антитела, содержит нуклеотидную последовательность, которая кодирует лидерную последовательность, которая при трансляции находится на N-конце тяжелой цепи или легкой цепи. Как обсуждалось выше, лидерная последовательность может быть нативной лидерной последовательностью тяжелой или легкой цепи, или может быть другой гетерологичной лидерной последовательностью.
[00287] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота представляет собой нуклеиновую кислоту, которая кодирует любую из аминокислотных последовательностей для антител в приведенной в данном документе таблице последовательностей. В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота представляет собой кислоту, которая по меньшей мере на 80% идентична нуклеиновой кислоте, кодирующей любую из аминокислотных последовательностей для антител в таблице последовательностей, приведенной в данном документе, например идентична по меньшей мере на 80, 85, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99%. В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота представляет собой кислоту, которая гибридизуется с любой одной или более последовательностями нуклеиновой кислоты, представленными в данном документе. В некоторых вариантах осуществления гибридизация происходит в нормальных условиях. В некоторых вариантах осуществления гибридизация происходит в очень жестких условиях, таких как: по меньшей мере около 6X SSC и 1% SDS при 65°C, с первой промывкой в течение 10 минут при около 42°C с около 20% (об./об.) формамида в 0,1X SSC и с последующей промывкой 0,2X SSC и 0,1% SDS при 65°C.
[00288] Молекулы нуклеиновой кислоты могут быть сконструированы с использованием методов рекомбинантной ДНК, известных в данной области техники. В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота представляет собой экспрессионный вектор, который подходит для экспрессии в выбранной клетке-хозяине.
[00289] Предложены векторы, содержащие полинуклеотиды, которые кодируют тяжелые цепи анти-PD-1-антитела и/или легкие цепи анти-PD-1-антитела. Также предложены векторы, содержащие полинуклеотиды, которые кодируют тяжелые цепи анти-PD-1-антитела и/или легкие цепи анти-PD-1-антитела. Такие векторы включают, но не ограничиваются ими, ДНК-векторы, фаговые векторы, вирусные векторы, ретровирусные векторы и т.д. В некоторых вариантах осуществления вектор содержит первую полинуклеотидную последовательность, кодирующую тяжелую цепь, и вторую полинуклеотидную последовательность, кодирующую легкую цепь. В некоторых вариантах осуществления тяжелая цепь и легкая цепь экспрессируются из вектора в виде двух отдельных полипептидов. В некоторых вариантах осуществления тяжелая цепь и легкая цепь экспрессируются как часть одного полипептида, такого как, например, когда антитело является scFv.
[00290] В некоторых вариантах осуществления первый вектор содержит полинуклеотид, который кодирует тяжелую цепь, и второй вектор содержит полинуклеотид, который кодирует легкую цепь. В некоторых вариантах осуществления первый вектор и второй вектор трансфицируют в клетки-хозяева в близких количествах (таких как близкие молярные количества или близкие массовые количества). В некоторых вариантах осуществления мольное или массовое соотношение находятся между 5:1 и 1:5 первого вектора и второго вектора трансфицируемых в клетки-хозяева. В некоторых вариантах осуществления используется массовое соотношение между 1:1 и 1:5 для вектора, кодирующего тяжелую цепь, и вектора, кодирующего легкую цепь. В некоторых вариантах осуществления используется массовое соотношение 1:2 для вектора, кодирующего тяжелую цепь, и вектора, кодирующего легкую цепь.
et al
Biotechnol. Prog
[00291] В некоторых вариантах осуществления выбран вектор, который оптимизирован для экспрессии полипептидов в клетках СНО или СНО-производных, или в клетках NSO. Типичные векторы описаны, например, в Running Deer ., . 20:880-889 (2004).
Клетки-хозяева

[00292] В некоторых вариантах осуществления тяжелые цепи анти-PD-1-антитела и/или легкие цепи анти-PD-1-антитела могут экспрессироваться в клетках прокариотов, таких как клетки бактерий; или в клетках эукариотов, таких как клетки грибов (такие как дрожжи), клетки растений, клетки насекомых и клетки млекопитающих. Такая экспрессия может быть выполнена, например, в соответствии с процедурами, известными в данной области техники. Иллюстративные клетки эукариотов, которые можно использовать для экспрессии полипептидов, включают, но не ограничиваются ими, клетки COS, включая клетки COS 7; клетки 293, включая клетки 293-6E; клетки CHO, включая CHO-S, DG44, клетки СНО Lec13 и клетки СНО FUT8; клетки PER.C6 (Crucell) и клетки NSO. В некоторых вариантах осуществления тяжелые цепи анти-PD-1-антитела и/или легкие цепи анти-PD-1-антитела могут экспрессировать в дрожжах. См., например, патентную публикацию США № US 2006/0270045 A1. В некоторых вариантах осуществления конкретная эукариотическая клетка-хозяин выбирается на основании ее способности производить желательные посттрансляционные модификации тяжелых цепей анти-PD-1-антитела и/или легких цепей анти-PD-1-антитела. Например, в некоторых вариантах осуществления клетки СНО продуцируют полипептиды, которые имеют более высокий уровень сиалилирования, чем тот же полипептид, продуцируемый в клетках 293.
et al
rd
[00293] Введение одной или более нуклеиновых кислот в желаемую клетку-хозяина может быть осуществлено любым способом, включая, но не ограничиваясь ими, трансфекцию, опосредованную фосфатом кальция, трансфекцию, опосредованную DEAE-декстраном, трансфекцию, опосредованную катионными липидами, электропорацию, трансдукцию, инфекцию и т.д. Неограничивающие иллюстративные способы описаны, например, в Sambrook ., Molecular Cloning, A Laboratory Manual, 3 ed. Cold Spring Harbor Laboratory Press (2001). Нуклеиновые кислоты могут быть временно или стабильно трансфицированы в желаемых клетках-хозяевах в соответствии с любым подходящим способом.
E. coli
B. subtillis
S. cerevisae
S. pombe
K. lactis
[00294] Также предусмотрены клетки-хозяева, содержащие любой из полинуклеотидов или векторов, описанных в данном документе. В некоторых вариантах осуществления предоставляется клетка-хозяин, содержащая анти-PD-1-антитело. Любые клетки-хозяева, способные сверхэкспрессировать гетерологичные ДНК, могут быть использованы с целью выделения генов, кодирующих антитело, полипептид или интересующий белок. Неограничивающие примеры клеток-хозяев млекопитающих включают, но не ограничиваются ими, клетки COS, HeLa и CHO. См. также публикацию PCT № WO 87/04462. Подходящие клетки-хозяева немлекопитающих включают прокариоты (такие как  или ) и дрожжи (такие как ,  или ).
Очистка антител
[00295] Анти-PD-1-антитела могут быть очищены любым подходящим способом. Такие способы включают, но не ограничиваются ими, использование аффинных матриц или хроматографию гидрофобного взаимодействия. Подходящие аффинные лиганды включают ECD ROR1 и лиганды, которые связывают константные области антител. Например, для связывания константной области и очистки анти-PD-1-антитела можно использовать колонку с белком A, белком G, белком A/G или аффинную колонку с антителом. Гидрофобная интерактивная хроматография, например бутильная или фенильная колонка, также может подходить для очистки некоторых полипептидов, таких как антитела. Ионообменная хроматография (например, анионообменная хроматография и/или катионообменная хроматография) также может подходить для очистки некоторых полипептидов, таких как антитела. Хроматография в смешанном режиме (например, обращенная фаза/анионный обмен, обращенная фаза/катионный обмен, гидрофильное взаимодействие/анионный обмен, гидрофильное взаимодействие/катионный обмен и т.д.) также может подходить для очистки некоторых полипептидов, таких как антитела. В данной области техники известны многие способы очистки полипептидов.
Бесклеточное продуцирование антител
et al
Methods Mol. Biol.
Trends Biotechnol.
et al
Biotechnol. Adv
[00296] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело продуцируется в бесклеточной системе. Неограничивающие иллюстративные бесклеточные системы описаны, например, в Sitaraman .,  498: 229-44 (2009); Spirin,  22: 538-45 (2004); Endo ., . 21: 695-713 (2003).
Композиции
[00297] В некоторых вариантах осуществления изобретения предлагаются антитела, полученные способами, описанными выше. В некоторых вариантах осуществления антитело получают в клетке-хозяине. В некоторых вариантах осуществления антитело получают в бесклеточной системе. В некоторых вариантах осуществления антитело является очищенным. В некоторых вариантах осуществления антитело, полученное в клетке-хозяине или бесклеточной системе, представляет собой химерное антитело. В некоторых вариантах осуществления антитело, полученное в клетке-хозяине или бесклеточной системе, представляет собой гуманизированное антитело. В некоторых вариантах осуществления антитело, полученное в клетке-хозяине или бесклеточной системе, представляет собой антитело человека. В некоторых вариантах предлагается среда для культивирования клеток, содержащая анти-PD-1-антитело. В некоторых вариантах осуществления предлагается жидкость для культивирования клеток-хозяина, содержащая анти-PD-1-антитело.
[00298] В некоторых вариантах осуществления предлагаются композиции, содержащие антитела, полученные способами, описанными выше. В некоторых вариантах осуществления композиция содержит антитело, полученное в клетке-хозяине. В некоторых вариантах осуществления композиция содержит антитело, полученное в бесклеточной системе. В некоторых вариантах композиция содержит очищенное антитело. В некоторых вариантах осуществления композиция содержит химерное антитело, полученное в клетке-хозяине или бесклеточной системе. В некоторых вариантах осуществления композиция содержит гуманизированное антитело, полученное в клетке-хозяине или бесклеточной системе. В некоторых вариантах осуществления композиция содержит антитело человека, полученное в клетке-хозяине или бесклеточной системе.
[00299] В некоторых вариантах осуществления предлагается композиция, содержащая анти-PD-1-антитело в концентрации более чем около любая из 10 мг/мл, 20 мг/мл, 30 мг/мл, 40 мг/мл, 50 мг/мл, 60 мг/мл, 70 мг/мл, 80 мг/мл, 90 мг/мл, 100 мг/мл, 125 мг/мл, 150 мг/мл, 175 мг/мл, 200 мг/мл, 225 мг/мл или 250 мг/мл. В некоторых вариантах осуществления композиция содержит химерное антитело, полученное в клетке-хозяине или бесклеточной системе. В некоторых вариантах осуществления композиция содержит гуманизированное антитело, полученное в клетке-хозяине или бесклеточной системе. В некоторых вариантах осуществления композиция содержит антитело человека, полученное в клетке-хозяине или бесклеточной системе.
IV. Терапевтические композиции и способы
Способы лечения заболеваний с использованием анти-PD-1-антител
[00300] Предложены антитела и композиции, содержащие антитела, для использования в способах лечения человека или животных. Также предложены способы лечения заболевания, включающие введение анти-PD-1-антител. Неограничивающие иллюстративные заболевания, которые можно лечить анти-PD-1-антителами, включают, но не ограничиваются раком.
[00301] В некоторых вариантах осуществления предложен способ лечения рака, причем клетки в образце опухоли экспрессируют PD-L1. В некоторых таких вариантах осуществления опухоль может считаться PD-L1-положительной или экспрессировать PD-L1. Экспрессия PD-L1 может быть определена с помощью ИГХ анализа, например, как обсуждено в данном документе. В некоторых вариантах осуществления считается, что опухоль экспрессирует PD-L1, когда образец опухоли демонстрирует окрашивание 1+, 2+ или 3+ PD-L1 посредством ИГХ. В некоторых вариантах осуществления образец опухоли демонстрирует 2+ или 3+ окрашивание PD-L1 посредством ИГХ. В некоторых вариантах осуществления образец опухоли субъекта анализируют на экспрессию PD-L1, и субъекта отбирают для лечения антителом, описанным в данном документе, если образец опухоли демонстрирует экспрессию PD-L1. В некоторых вариантах осуществления субъекта выбирают, если образец опухоли демонстрирует повышенную экспрессию PD-L1.
HIGH
LOW
HIGH
LOW
HIGH
HIGH
[00302] В некоторых вариантах осуществления субъекта выбирают для лечения анти-PD-1-антителом, представленным в данном документе, если опухоль субъекта представляет собой PD-L1. В некоторых вариантах осуществления субъекта выбирают для лечения анти-PD-1-антителом, представленным в данном документе, если опухоль субъекта представляет собой PD-L1. В некоторых вариантах осуществления субъекта выбирают для лечения анти-PD-1-антителом, представленным в данном документе, если опухоль субъекта представляет собой PD-1/PD-L1. В некоторых вариантах осуществления субъекта выбирают для лечения анти-PD-1-антителом, представленным в данном документе, если опухоль субъекта представляет собой PD-1/PD-L1.
[00303] Анти-PD-1-антитело можно вводить субъектам при необходимости. Специалисты в данной области техники могут определить частоту введения, например, лечащий врач, на основании соображений о состоянии, которое лечат, возраста субъекта, которого лечат, тяжести состояния, которое лечат, общего состояния здоровья субъекта, которого лечат и тому подобное. В некоторых вариантах осуществления эффективная доза анти-PD-1-антитела вводится субъекту один или более раз. В некоторых вариантах осуществления эффективная доза анти-PD-1-антитела вводится субъекту один раз в месяц, реже одного раза в месяц, например, каждые два месяца или каждые три месяца. В некоторых вариантах осуществления эффективную дозу анти-PD-1-антитела вводят менее одного раза в месяц, например, один раз каждые три недели, один раз каждые две недели или один раз каждую неделю. Эффективная доза анти-PD-1-антитела вводится субъекту по меньшей мере один раз. В некоторых вариантах осуществления эффективная доза анти-PD-1-антитела может вводиться большее количество раз, в том числе в течение периодов по меньшей мере одного месяца, по меньшей мере шести месяцев или по меньшей мере года.
[00304] В некоторых вариантах осуществления фармацевтические композиции вводят в количестве, эффективном для лечения (включая профилактику) рака. Терапевтически эффективное количество обычно зависит от веса субъекта, которого лечат, его или ее физического состояния или состояния здоровья, степени распространенности состояния, которое лечат, или возраста субъекта, которого лечат. В общем, анти-PD-1-антитела можно вводить в количестве в диапазоне от около 10 мкг/кг массы тела до около 100 мг/кг массы тела на дозу. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитела можно вводить в количестве в диапазоне от около 50 мкг/кг массы тела до около 5 мг/кг массы тела на дозу. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитела можно вводить в количестве в диапазоне от около 100 мкг/кг массы тела до около 10 мг/кг массы тела на дозу. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитела можно вводить в количестве в диапазоне от около 100 мкг/кг массы тела до около 20 мг/кг массы тела на дозу. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитела можно вводить в количестве в диапазоне от около 0,5 мг/кг массы тела до около 20 мг/кг массы тела на дозу.
[00305] Фармацевтические композиции вводят в количестве, эффективном для усиления иммунного ответа и/или увеличения активации Т-клеток у субъекта.
[00306] Терапевтически эффективное количество обычно зависит от веса субъекта, которого лечат, его или ее физического состояния или состояния здоровья, степени распространенности состояния, которое лечат, или возраста субъекта, которого лечат. В общем, анти-PD-1-антитела можно вводить в количестве в диапазоне от около 10 мкг/кг массы тела до около 100 мг/кг массы тела на дозу. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитела можно вводить в количестве в диапазоне от около 50 мкг/кг массы тела до около 5 мг/кг массы тела на дозу. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитела можно вводить в количестве в диапазоне от около 100 мкг/кг массы тела до около 10 мг/кг массы тела на дозу. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитела можно вводить в количестве в диапазоне от около 100 мкг/кг массы тела до около 20 мг/кг массы тела на дозу. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитела можно вводить в количестве в диапазоне от около 0,5 мг/кг массы тела до около 20 мг/кг массы тела на дозу.
Фармацевтические композиции
th
th
rd
et al
et al
[00307] В некоторых вариантах осуществления композиции, содержащие анти-PD-1-антитела, предложены в композициях с широким разнообразием фармацевтически приемлемых носителей (см., например, Gennaro, Remington: The Science and Practice of Pharmacy with Facts and Comparisons: Drugfacts Plus, 20 ed. (2003); Ansel ., Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, 7 ed., Lippencott Williams and Wilkins (2004); Kibbe ., Handbook of Pharmaceutical Excipients, 3 ed., Pharmaceutical Press (2000)). Доступны различные фармацевтически приемлемые носители, которые включают носители, адъюванты и разбавители. Кроме того, также доступны различные фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества, такие как регуляторы рН и буферные агенты, регуляторы тоничности, стабилизаторы, смачивающие агенты и тому подобное. Неограничивающие типичные носители включают физиологический раствор, забуференный физиологический раствор, декстрозу, воду, глицерин, этанол и их комбинации.
[00308] В некоторых вариантах осуществления предлагается фармацевтическая композиция, содержащая анти-PD-1-антитело. В некоторых вариантах осуществления фармацевтическая композиция содержит химерное антитело. В некоторых вариантах осуществления фармацевтическая композиция содержит гуманизированное антитело. В некоторых вариантах осуществления фармацевтическая композиция содержит антитело, полученное в клетке-хозяине или бесклеточной системе, как описано в данном документе. В некоторых вариантах осуществления фармацевтическая композиция содержит фармацевтически приемлемый носитель.
[00309] В некоторых вариантах осуществления фармацевтические композиции вводят в количестве, эффективном для лечения (включая профилактику) рака. Терапевтически эффективное количество обычно зависит от веса субъекта, которого лечат, его или ее физического состояния или состояния здоровья, степени распространенности состояния, которое лечат, или возраста субъекта, которого лечат. В общем, анти-PD-1-антитела можно вводить в количестве в диапазоне от около 0,05 мкг/кг массы тела до около 100 мг/кг массы тела на дозу. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитела можно вводить в количестве в диапазоне от около 10 мкг/кг массы тела до около 100 мг/кг массы тела на дозу. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитела можно вводить в количестве в диапазоне от около 50 мкг/кг массы тела до около 5 мг/кг массы тела на дозу. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитела можно вводить в количестве в диапазоне от около 100 мкг/кг массы тела до около 10 мг/кг массы тела на дозу. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитела можно вводить в количестве в диапазоне от около 100 мкг/кг массы тела до около 20 мг/кг массы тела на дозу. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитела можно вводить в количестве в диапазоне от около 0,5 мг/кг массы тела до около 20 мг/кг массы тела на дозу. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитела можно вводить в количестве в диапазоне от около 0,5 мг/кг массы тела до около 10 мг/кг массы тела на дозу. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитела можно вводить в количестве в диапазоне от около 0,05 мг/кг массы тела до около 20 мг/кг массы тела на дозу. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитела можно вводить в количестве в диапазоне от около 0,05 мг/кг массы тела до около 10 мг/кг массы тела на дозу. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитела можно вводить в количестве в диапазоне около 5 мг/кг массы тела или ниже, например менее 4, менее 3, менее 2 или менее 1 мг/кг.
[00310] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитела могут присутствовать в количестве в диапазоне от около 50 мкг/кг массы тела до около 5 мг/кг массы тела на дозу. Например, в некоторых вариантах осуществления доза для человека весом 20 кг может находиться в диапазоне от около 1 мг до около 100 мг. В некоторых вариантах осуществления доза может находиться в диапазоне от 2 мг до 200 мг анти-PD-1-антитела. В некоторых вариантах осуществления доза может находиться в диапазоне от 10 мг до 400 мг анти-PD-1-антитела.
Способы введения
in vivo
[00311] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитела можно вводить  различными способами, включая, но не ограничиваясь ими, внутривенный, внутриартериальный, парентеральный, внутриопухолевый, внутрибрюшинный или подкожный. Соответствующий состав и способ введения могут быть выбраны в соответствии с предполагаемым применением
Комбинированная терапия
[00312] Анти-PD-1-антитела можно вводить отдельно или с другими способами лечения. Они могут быть введены до, по существу одновременно и/или после других способов лечения, например хирургического вмешательства, химиотерапии, лучевой терапии или введения биологического средства, такого как другое терапевтическое антитело. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело вводят в комбинации с другим противораковым средством.
[00313] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело вводят одновременно со вторым терапевтическим средством. Например, два или более терапевтических средства вводят с временным интервалом не более около 60 минут, например не более около 30, 15, 10, 5 или 1 минуты. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело вводят последовательно со вторым терапевтическим средством. Например, два или более терапевтических средств вводят с временным разделением более чем около 15 минут, например около 20, 30, 40, 50 или 60 минут, 1 день, 2 дня, 3 дня 1 неделя, 2 недели или 1 месяц или дольше.
[00314] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело вводят со вторым терапевтическим способом лечения. Таким образом, введение антитела, представленного в данном документе, может производиться в сочетании с другой системой лечения.
[00315] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело, представленное в данном документе, вводят с анти-ICOS-терапией. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело, представленное в данном документе, вводят с антителом, которое связывает индуцибельный Т-клеточный костимулятор (ICOS). В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело, представленное в данном документе, вводят с выделенным антителом, которое связывает ICOS, причем анти-ICOS-антитело является агонистом CD4+ T-клеток (таких как CD4+ T эффекторные (Teff) клетки). В некоторых вариантах осуществления антитело, которое связывает ICOS, является агонистом CD4+ T-клеток (таких как CD4+ Teff) и истощает T-регуляторные (Treg) клетки. В некоторых вариантах осуществления антитело, которое связывает ICOS, истощает клетки Treg, но не истощает клетки Teff. В некоторых вариантах осуществления антитело, которое связывает ICOS, индуцирует передачу сигнала pAKT на CD4+ T-клетки. В некоторых вариантах осуществления выделенное антитело, которое связывает ICOS, индуцирует передачу сигнала pAKT на CD4+ T-клетки и истощает клетки Treg. В некоторых вариантах осуществления выделенное антитело, которое связывает ICOS, содержит:
i) (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 326; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 327; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 328; (d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 329; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 330; и (f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 331; или
ii) (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 334; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 335; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 336; (d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 337; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 338; и (f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 339; или
iii) (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 342; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 343; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 344; (d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 345; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 346; и (f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 347; или
iv) (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 350; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 351; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 352; (d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 353; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 354; и (f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 355; или
v) (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 358; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 359; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 360; (d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 361; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 362; и (f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 363; или
vi) (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 366; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 367; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 368; (d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 369; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 370; и (f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 371; или
vii) (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 374; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 375; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 376; (d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 377; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 378; и (f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 379.
H
L
В некоторых вариантах осуществления предлагается антитело, которое связывается с ICOS, причем антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи (V) и вариабельную область легкой цепи (V), при этом:
H
L
i) V идентична по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 324 и V идентична по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 325; или
H
L
ii) V идентична по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 332 и V идентична по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 333; или
H
L
iii) V идентична по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 340 и V идентична по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 341; или
H
L
iv) V идентична по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 348 и V идентична по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 349; или
H
L
v) V идентична по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 356 и V идентична по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 357; или
H
L
vi) V идентична по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 364 и V идентична по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 365; или
H
L
vii) V идентична по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 372 и V идентична по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 373.
[00316] Обычно анти-ICOS-антитела можно вводить в количестве в диапазоне от около 10 мкг/кг массы тела до около 100 мг/кг массы тела на дозу. В некоторых вариантах осуществления анти-ICOS-антитела можно вводить в количестве в диапазоне от около 50 мкг/кг массы тела до около 5 мг/кг массы тела на дозу. В некоторых вариантах осуществления анти-ICOS-антитела можно вводить в количестве в диапазоне от около 100 мкг/кг массы тела до около 10 мг/кг массы тела на дозу. В некоторых вариантах осуществления анти-ICOS-антитела можно вводить в количестве в диапазоне от около 100 мкг/кг массы тела до около 20 мг/кг массы тела на дозу. В некоторых вариантах осуществления анти-ICOS-антитела можно вводить в количестве в диапазоне от около 0,5 мг/кг массы тела до около 20 мг/кг массы тела на дозу.

[00317] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело, представленное в данном документе, вводят с агонистическим анти-OX40-антителом (таким как Medi6469, MedImmune; MOXR0916/RG7888, Roche). В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело, представленное в данном документе, вводят с анти-CTLA4-антителом (таким как ипилимумаб, YERVOY, BMS).

[00318] В некоторых вариантах осуществления дополнительное терапевтическое средство представляет собой химиотерапевтическое средство. Типичные химиотерапевтические средства, которые могут быть скомбинированы с анти-PD-1-антителами, представленными в данном документе, включают, но не ограничиваются ими, капецитабин, циклофосфамид, дакарбазин, темозоломид, циклофосфамид, доцетаксел, доксорубицин, даунорубицин, цисплатин, карбоплатин, эпирубицин, эрибулин, 5-ФУ, гемцитабин, иринотекан, иксабепилон, метотрексат, митоксантрон, оксалиплатин, паклитаксел, наб-паклитаксел, ABRAXANE (связанный с белками паклитаксел), пеметрексед, винорелбин и винкристин. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело, представленное в данном документе, вводят по меньшей мере с одним ингибитором киназы. Неограничивающие типичные ингибиторы киназы включают эрлотиниб, афатиниб, гефитиниб, кризотиниб, дабрафениб, траметиниб, вемурафениб и кобиметаниб.
[00319] В некоторых вариантах осуществления дополнительный терапевтический агент представляет собой ингибитор IDO. Неограничивающие иллюстративные ингибиторы IDO описаны, например, в US 2016/0060237 и US 2015/0352206. Неограничивающие иллюстративные ингибиторы IDO включают индоксимод (New Link Genetics), INCB024360 (Incyte Corp), 1-метил-D-триптофан (New Link Genetics) и GDC-0919 (Genentech).
[00320] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело, представленное в данном документе, вводят в комбинации с иммуномодулирующим лекарственным средством (IMiD). Неограничивающие иллюстративные IMiD включают талидомид, леналидомид и помалидомид.
[00321] В некоторых вариантах осуществления дополнительное терапевтическое средство представляет собой противораковую вакцину. Противораковые вакцины были исследованы как потенциальный подход для переноса антигена и активации дендритных клеток. В частности, вакцинация в сочетании с иммунологическими контрольными точками или агонистами для костимуляторных путей показала доказательства преодоления толерантности и генерирования повышенного противоопухолевого ответа. Был протестирован ряд противораковых вакцин, в которых используются различные подходы для стимулирования иммунного ответа против опухоли (см., например, Emens LA, Expert Opin Emerg Drugs 13(2): 295-308 (2008)). Были разработаны подходы для усиления ответа В-клеток, Т-клеток или профессиональных антигенпрезентирующих клеток против опухолей. Иллюстративные типы противораковых вакцин включают, но не ограничиваются ими, вакцины на основе пептидов, в которых применяют нацеливание на отдельные опухолевые антигены, которые могут доставляться в виде пептидов/белков или в виде генно-инженерных ДНК-векторов, вирусов, бактерий или тому подобного; и подходы клеточной биологии, например, для разработки противораковых вакцин против менее четко определенных мишеней, включая, но не ограничиваясь ими, вакцины, разработанные из дендритных клеток, полученных от пациентов, аутологичных опухолевых клеток или лизатов опухолевых клеток, аллогенных опухолевых клеток и тому подобное.
[00322] Таким образом, в определенных вариантах осуществления анти-PD-1-антитела, представленные в данном документе, можно использовать в комбинации с противораковой вакциной. Типичные противораковые вакцины включают, но не ограничиваются ими, вакцины из дендритных клеток, онколитические вирусы, вакцины из опухолевых клеток и т.д. В некоторых вариантах осуществления такие вакцины усиливают противоопухолевый ответ. Примеры противораковых вакцин, которые можно использовать в комбинации с анти-PD-1-антителами, представленными в данном документе, включают, но не ограничиваются ими, вакцину MAGE3 (например, для лечения меланомы и рака мочевого пузыря), вакцину MUC1 (например, для лечения рака молочной железы), EGFRv3 (например, Rindopepimut, например, для лечения рака головного мозга, включая мультиформную глиобластому), или ALVAC-CEA (например, для лечения рака CEA+).
N Engl J Med
ex vivo
ex vivo
[00323] Неограничивающие типичные противораковые вакцины также включают Sipuleucel-T, который получают из аутологичных мононуклеарных клеток периферической крови (МКПК), которые включают в себя антигенпрезентирующие клетки (см., например, Kantoff PW et al.,  363:411-22 (2010)). В поколении Sipuleucel-T МКПК пациента активируются  с помощью PA2024, рекомбинантного белка слияния фосфатазы простатической кислоты (антиген простаты) и колониестимулирующего фактора гранулоцитов-макрофагов (активатор иммунных клеток). Другой подход к потенциальной противораковой вакцины заключается в создании иммунного ответа против специфических пептидов, мутированных в опухолевой ткани, такой как меланома (см., например, Carreno BM et al., Science 348:6236 (2015)). Такие мутированные пептиды могут в некоторых вариантах осуществления называться неоантигенами. В качестве неограничивающего примера использования неоантигенов в противоопухолевых вакцинах, неоантигены в опухоли, для которых предсказано связывание с основным белком комплекса гистосовместимости HLA-A*02:01, идентифицированы для отдельных пациентов с раковым заболеванием, таким как меланома. Дендритные клетки пациента созревают , затем инкубируются с неоантигенами. Затем активированные дендритные клетки вводят пациенту. В некоторых вариантах осуществления после введения противораковой вакцины обнаруживается устойчивый Т-клеточный иммунитет против неоантигена.
Expert Rev Vaccines
[00324] В некоторых таких вариантах осуществления противораковая вакцина разработана с использованием неоантигена. В некоторых вариантах осуществления противораковая вакцина представляет собой ДНК-вакцину. В некоторых вариантах осуществления противораковая вакцина представляет собой сконструированный вирус, содержащий раковый антиген, такой как PROSTVAC (рилимоген галвасирепвек/рилимоген глафоливек). В некоторых вариантах осуществления противораковая вакцина, такая как GVAX, включает в себя сконструированные опухолевые клетки, и представляет собой вакцину с опухолевыми клетками трансфицированными геном гранулоцитарно-макрофагального колониестимулирующего фактора (GM-CSF) (см., например, Nemunaitis, 2005, , 4: 259-74).
[00325] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело, описанное в данном документе, вводят до, одновременно и/или после противораковой вакцины. В некоторых вариантах осуществления противораковые вакцины, разработанные с использованием неоантигенов, используют в комбинации с анти-PD-1-антителами, описанными в данном документе. В некоторых таких вариантах осуществления комбинация используется для лечения рака с высокой мутационной нагрузкой, такого как меланома, рак легких, рак мочевого пузыря или колоректальный рак.
[00326] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело, представленное в данном документе, вводят в сочетании с терапией химерным антигенным рецептором с Т-клетками (терапия CAR-T).
Диагностическое использование
[00327] В данном документе представлены способы использования анти-PD-1-антител, полипептидов и полинуклеотидов для выявления, диагностики и мониторинга заболевания, расстройства или состояния, связанного с экспрессией эпитопа анти-PD-1-антитела (либо увеличенной, либо уменьшенной относительно нормального образца и/или несоответствующей экспрессией, такой как наличие экспрессии в ткани(-ях) и/или клетке(-ах), в которых обычно отсутствует экспрессия эпитопа). В данном документе представлены способы определения того, будет ли пациент отвечать на терапию анти-PD-1-антителом.
[00328] В некоторых вариантах осуществления способ включает определение наличия у пациента клеток, которые экспрессируют PD-1, с использованием анти-PD-1-антител. В некоторых вариантах осуществления способ обнаружения включает приведение в контакт образца с антителом, полипептидом или полинуклеотидом и определение того, отличается ли уровень связывания от уровня эталонного или сравнительного образца (такого как контроль). В некоторых вариантах осуществления способ может быть полезен для определения, являются ли антитела или полипептиды, описанные в данном документе, подходящим лечением для субъекта.
[00329] В некоторых вариантах осуществления клетки или лизат клетки/ткани приводят в контакт с анти-PD-1-антителом, и определяют связывание между антителом и клеткой. Когда тестируемые клетки проявляют активность связывания по сравнению с контрольной клеткой того же типа ткани, это может указывать на то, что субъект получит пользу от лечения анти-PD-1-антителом. В некоторых вариантах осуществления тестируемые клетки взяты из тканей человека. В некоторых вариантах осуществления тестируемые клетки взяты из крови человека.
125
131
35
3
32
[00330] Могут быть использованы различные способы, известные в данной области техники, для выявления специфического связывания антитело-антиген. Типичные иммуноанализы, которые могут быть проведены, включают флуоресцентный поляризационный иммуноанализ (FPIA), флуоресцентный иммуноанализ (FIA), иммуноферментный анализ (EIA), нефелометрический иммуноферментный анализ ингибирования(NIA), иммуноферментный твердофазный анализ (ELISA) и радиоиммуноанализ (RIA). Индикаторный фрагмент или группа-метка может быть присоединена к рассматриваемым антителам и выбирается так, чтобы удовлетворить потребности различных применений способа, которые часто продиктованы наличием оборудования для анализа и совместимых процедур иммуноанализа. Подходящие метки включают, без ограничения, радионуклиды (например, I, I, S, H или P), ферменты (например, щелочную фосфатазу, пероксидазу хрена, люциферазу или β-галактозидазу), флуоресцентные фрагменты или белки (например флуоресцеин, родамин, фикоэритрин, GFP или BFP) или люминесцентные фрагменты (например, наночастицы Qdot™, поставляемые Quantum Dot Corporation, г. Пало-Альто, Калифорния, США). Общие методики, которые должны использоваться при выполнении различных иммуноанализов, отмеченных выше, известны средним специалистам в данной области техники.
[00331] В целях диагностики включающий антитела полипептид может быть мечен детектируемым фрагментом, включая, но не ограничиваясь ими, радиоизотопы, флуоресцентные метки и различные фермент-субстратные метки, известные в данной области техники. Способы конъюгирования меток с антителами известны в данной области техники.
[00332] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитела не нужно метить, и их присутствие можно обнаружить с использованием второго меченого антитела, которое связывается с первым анти-PD-1-антителом.
[00333] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело можно использовать в любом известном способе анализа, таком как анализах конкурентного связывания, прямом и непрямом сэндвич-анализах и анализах иммунопреципитации. Zola, Monoclonal Antibodies: A Manual of Techniques, pp. 147-158 (CRC Press, Inc. 1987).
111
99
14
131
125
3
[00334] Антитела и полипептиды против PD-1 также можно использовать для диагностических анализов in vivo, таких как визуализация in vivo. Как правило, антитело или полипептид метят радионуклидом (таким как In, Tc, C, I, I, H или любой другой радионуклидной меткой, включая те, что указаны в данном документе), так что интересующие клетки или ткани могут быть локализованы с использованием иммуносцинтиграфии.
[00335] Антитело также можно использовать в качестве окрашивающего реагента в лаборатории патологии с использованием методик, хорошо известных в данной области техники.
[00336] В некоторых вариантах осуществления первое антитело используется для диагностики, а второе антитело используется в качестве терапевтического. В некоторых вариантах осуществления первое и второе антитела являются разными. В некоторых вариантах осуществления первое антитело является нечеловеческим антителом, а терапевтическое антитело является антителом человека. В некоторых вариантах осуществления первое и второе антитела могут одновременно связываться с антигеном посредством связывания с отдельными эпитопами.
Наборы/Готовые изделия
[00337] В данном документе также представлены наборы, лекарственные средства, композиции и стандартные лекарственные формы для использования в любом из способов, описанных в данном документе.
[00338] Наборы могут включать один или более контейнеров, содержащих анти-PD-1-антитело (или стандартные лекарственные формы и/или изделия). В некоторых вариантах осуществления предложена стандартная дозировка, причем стандартная дозировка содержит заранее определенное количество композиции, содержащей анти-PD-1-антитело, с одним или более дополнительными агентами или без них. В некоторых вариантах осуществления такая стандартная дозировка поставляется в одноразовом предварительно заполненном шприце для инъекции. В некоторых вариантах осуществления композиция, содержащаяся в стандартной дозировке, может включать физиологический раствор, сахарозу или тому подобное; буфер, такой как фосфат или тому подобное; и/или быть составлена в стабильном и эффективном диапазоне рН. В некоторых вариантах осуществления композиция может быть представлена в виде лиофилизированного порошка, который может быть восстановлен после добавления подходящей жидкости, например стерильной воды. В некоторых вариантах осуществления композиция содержит одно или более веществ, которые ингибируют агрегацию белка, включая, но не ограничиваясь ими, сахарозу и аргинин. В некоторых вариантах осуществления композиция содержит гепарин и/или протеогликан.
[00339] В некоторых вариантах осуществления количество анти-PD-1-антитела, используемого в стандартной дозе, может быть любым из количеств, предложенных в данном документе для различных описанных способов и/или композиций.
[00340] В некоторых вариантах осуществления наборы дополнительно содержат инструкции по применению для лечения рака в соответствии с любым из способов, описанных в данном документе. Набор может дополнительно содержать описание выбора подходящего индивидуума или лечения. Инструкции, поставляемые в наборах, обычно представляют собой письменные инструкции на этикетке или вкладыше в упаковку (например, лист бумаги, входящий в комплект), но машиночитаемые инструкции (например, инструкции, хранящиеся на магнитном или оптическом диске) также приемлемы. В некоторых вариантах осуществления набор дополнительно содержит другое терапевтическое средство. В некоторых вариантах осуществления дополнительное терапевтическое средство представляет собой анти-ICOS-антитело, например, как описано в данном документе, или анти-CTLA4-антитело.
[00341] Наборы находятся в подходящей упаковке. Подходящая упаковка включает, но не ограничивается ими, флаконы, бутылки, банки, гибкую упаковку (например, герметичные майларовые или пластиковые пакеты) и тому подобное. Наборы могут дополнительно содержать дополнительные компоненты, такие как буферы и интерпретирующая информация. Таким образом, настоящая заявка также предлагает изделия, которые включают флаконы (такие как герметичные флаконы), бутылки, банки, гибкую упаковку и тому подобное.
ПРИМЕРЫ
[00342] Приведенные ниже примеры предназначены исключительно для иллюстрации изобретения и не должны рассматриваться как ограничивающие изобретение каким-либо образом. Примеры не предназначены для представления того, что приведенные ниже эксперименты являются всеми или единственными проведенными экспериментами. Были предприняты усилия для обеспечения точности в отношении используемых чисел (например, количеств, температуры и т.д.), но следует учитывать некоторые экспериментальные ошибки и отклонения. Если не указано иное, части представляют собой части по массе, молекулярная масса представляет собой средневесовую молекулярную массу, температура выражена в градусах Цельсия, а давление равно атмосферному давлению или близко к нему.
Пример 1. Получение анти-PD-1-антител
9
10
8
see, e.g
et al
et al.
2
[00343] Восемь наивных синтетических дрожжевых библиотек человека, каждая из которых имеет ~10 разнообразия, были сконструированы, созданы и размножены, как описано ранее (., WO2009036379; WO2010105256; WO2012009568; Xu ., Protein Eng Des Sel. 2013 Oct;26(10):663-70) В течение первых 2 этапов отбора была проведена методика сортировки магнитными гранулами с использованием системы Miltenyi MAC, по существу как описано (Siegel, J Immunol Methods. 2004 Mar;286(1-2):141-53) Вкратце, дрожжевые клетки (~10 клеток/библиотеку) инкубировали с 3 мл 10 нМ биотинилированного антигена слияния человеческого PD-1-Fc в течение 15 минут при комнатной температуре в промывочном буфере PBS для FACS с 0,1% BSA (биотинилирование проводили с использованием набора EZ-Link сульфо-NHS-биотинилирования, Thermo Scientific, кат. №21425). После однократной промывки 50 мл ледяного промывочного буфера осадок клеток ресуспендировали в 40 мл промывочного буфера и 500 мкл стрептавидиновых микроносителей (Miltenyi Biotec, г. Бергиш-Гладбах, Германия, кат. № 130-048-101) добавляли к дрожжам и выдерживали в течение 15 мин при 4°С. Затем дрожжи осаждали, ресуспендировали в 5 мл промывочного буфера и загружали на колонку MACS LS (Miltenyi Biotec, г. Бергиш-Гладбах, Германия, кат. № 130-042-401). После загрузки 5 мл на колонку, ее промывали 3 раза 3 мл промывочного буфера FACS. Колонку затем удаляли из магнитного поля и дрожжи элюировали 5 мл питательной среды и затем выращивали в течение ночи. Следующие три раунда сортировки были выполнены с использованием проточной цитометрии. Приблизительно 1×10 дрожжей осаждали, трижды промывали промывочным буфером и инкубировали с 200, 100 или 10 нМ биотинилированного PD-1 человека или 10 нМ или 1 нМ биотинилированного антигена слияния человека PD-1-Fc от 10 минут до 2 часов при комнатной температуре. Время инкубации зависит от концентрации антигена. Затем дрожжи дважды промывали и окрашивали козьим анти-человеческим F(ab') каппа-FITC, разведенным 1:100 (Southern Biotech, г. Бирмингем, штат Алабама, США, кат. № 2062-02) и либо стрептавидином-Alexa Fluor 633 (Life Technologies, Гранд Айленд, г. Нью-Йорк, США, кат. № S21375), разведенным 1:500, или экстравидином-фикоэртирином (Sigma-Aldrich, г. Сент-Луис, кат. № E4011), разведенным 1:50, вторичными реагентами в течение 15 мин при 4°C. После промывки дважды ледяным промывочным буфером клеточные осадки ресуспендировали в 0,4 мл промывочного буфера и переносили в сортировочные пробирки с крышками-фильтрами. Сортировку проводили с использованием сортировщика FACS ARIA (BD Biosciences) и определяли сортировочные гейты для отбора только клонов, связывающих PD-1, для двух раундов. В зависимости от популяций третий раунд был отрицательной сортировкой, чтобы уменьшить количество связующих реагентов или дальнейшее положительное обогащение. После последнего раунда сортировки дрожжи высевали и отбирали отдельные колонии для определения характеристик.
6
[00344] Популяция связывания раунда 5 или раунда 6 использовалась для диверсификации легкой цепи. Плазмиду тяжелой цепи экстрагировали и трансформировали в библиотеку легкой цепи с разнообразием 1×10. Отборы осуществляли, как описано выше, с одним раундом сортировки MACS и тремя раундами сортировки FACS с использованием различных концентраций биотинилированного антигена.
Созревание аффиности
[00345] Оптимизацию связывания наивных пробных перестановочных клонов легкой цепи проводили с использованием диверсификации CDRH1 и CDRH2.
8
[00346] Отбор CDRH1 и CDRH2: CDRH3 из клонов, отобранных в результате процедуры диверсификации легких цепей (пробные перестановочные клоны легкой цепи), были рекомбинированы в предварительно созданную библиотеку с вариантами CDRH1 и CDRH2 с разнообразием 1×10, и отбор проводился с использованием антигена PD-1, как описано выше. Давление аффинности применяли путем титрования биотинилированного антигена до субнаномолярных концентраций и инкубации с дрожжами, презентующими антитела.
Продуцирование и очистка антител
[00347] Клоны дрожжей выращивали до насыщения и затем индуцировали в течение 48 ч при 30°С при встряхивании. После индукции дрожжевые клетки осаждали и супернатанты собирали для очистки. IgG очищали с использованием колонки с белком А и элюировали уксусной кислотой, рН 2,0. Fab-фрагменты были получены путем расщепления папаином и очищены на KappaSelect (GE Healthcare LifeSciences, кат. № 17-5458-01).
Измерения аффинности анти-PD-1-антител
D
et al.
[00348] Аффинность антител к PD-1 определяли путем измерения их K с помощью ForteBio или MSD-SET. Измерения аффинности ForteBio выполняли, в целом, как описано ранее (Estep, MAbs. 2013 Mar-Apr; 5(2):270-8). Вкратце, измерения аффинности ForteBio выполняли, нагружая IgG онлайн на сенсоры AHQ. Сенсоры уравновешивали офлайн в буфере для анализа в течение 30 минут и затем контролировали в режиме онлайн в течение 60 секунд для установления исходного уровня. Сенсоры с нагруженными IgG подвергали воздействию 100 нМ антигена в течение 5 минут, после чего их переносили в буфер для анализа на 5 минут для измерения скорости диссоциации. Кинетику анализировали с использованием модели связывания 1:1.
et al.
D
[00349] Измерения равновесной аффинности выполняли, как описано ранее (Estep, 2013). Равновесное титрование в растворе (SET) проводили в PBS + 0,1% BSA, не содержащем IgG (PBSF), с постоянно поддерживаемой концентрацией антигена на уровне 50 пМ и инкубировали с 3-5-кратными серийными разведениями антител, начиная с 10 нМ. Антитела (20 нМ в PBS) наносили на стандартные планшеты для связывания MSD-ECL в течение ночи при 4°C или при комнатной температуре в течение 30 минут. Затем планшеты блокировали в течение 30 минут при встряхивании при 700 об/мин, после чего трижды промывали промывочным буфером (PBSF + 0,05% Tween 20). Образцы SET наносили и инкубировали на планшетах в течение 150 секунд при встряхивании при 700 об/мин с последующей одной промывкой. Антиген, захваченный на планшете, детектировали с меченным сульфотагом стрептавидином в концентрации 250 нг/мл в PBSF путем инкубации на планшете в течение 3 минут. Планшеты трижды промывали промывочным буфером и затем считывали на приборе MSD Sector Imager 2400, используя 1x считывающий буфер T с поверхностно-активным веществом. Процент свободного антигена наносили на график как функцию титрованного антитела в Prism и подбирали квадратное уравнение для определения K. Для повышения производительности в ходе экспериментов MSD-SET, включая подготовку образцов SET, использовались роботы для работы с жидкостями. В таблице 1 приведены результаты измерений аффинности с помощью ForteBio.
Таблица 1
Антитело
PD-1 человека моновалентная аффиность (K<sub>D</sub>)
PD-1 мыши моновалентная аффиность (K<sub>D</sub>)
mAb 1 (12228)
49 нМ
6,3 нМ
mAb 2 (13405)
73 нМ
7,2 нМ
mAb 3 (13406)
3,2 нМ
3,5 нМ
mAb 4 (13407)
3,9 нМ
3,2 нМ
mAb 5 (13408)
1,2 нМ
5,3 нМ
Пример 2. Ответ активированных спленоцитов мыши на анти-PD-1-антитела
[00350] Когда Т-клетки мыши, полученные из спленоцитов, активируются анти-CD3-антителами и анти-CD28-антителами, они экспрессируют молекулу клеточной поверхности и секретируют растворимую молекулу интерферона-гамма (IFNγ). Блокирующие антитела к PD-1 вызывают увеличение выработки IFNγ. Спленоциты мыши были получены и инкубированы с растворимыми анти-CD3 и анти-CD28 антителами. Через 5 дней их смешивали с равным количеством Т-клеток, очищенных из свежеприготовленных спленоцитов и анти-PD-1-антител в различных концентрациях. Положительные и отрицательные контрольные антитела RMP1-14, 2A3 и C1.18.4 были приобретены у BioXCell. Через 24 часа супернатанты собирали и концентрации IFNγ измеряли мультиплексным анализом с гранулами для определения цитокинов. Анти-PD-1-антитела, раскрытые в данном документе, были способны увеличивать выработку IFNγ аналогично эталонным антителам. См. Фиг 1. По меньшей мере антитела 12191, 13396, 13398, 13399, 12195, 13406, 13407, 13408 и 13409 значительно повышали экспрессию IFNγ. Антитела 13396, 13399, 12195, 13406, 13407 и 13408 вызывали наибольшее увеличение экспрессии IFNγ.
Пример 3. Активированные периферические мононуклеарные клетки крови человека отвечают на анти-PD-1-антитела
50
[00351] Было показано, что образцы цельной крови, активированные стафилококковым энтеротоксином B (SEB), реагируют на блокаду иммунной контрольной точки с использованием анти-PD-1-антитела, что измерено по увеличению секреции IL-2 (см., например, EP2170959B1). Анти-PD-1-антитела готовили в диапазоне концентраций и добавляли в лунки 96-луночных планшетов. Цельную кровь от четырех доноров разводили 1:10 в полной среде RPMI и добавляли в те же лунки. Планшеты инкубировали при комнатной температуре в течение 30 минут перед добавлением 50 мкл SEB на лунку в концентрации 40 мкг/мл до конечной концентрации 10 мкг/мл. Планшеты инкубировали при 37°С в течение 4 дней и супернатанты собирали для измерения секретируемого IL-2 мультиплексным анализом с гранулами для определения цитокинов (CBA). Анти-PD-1-антитела, раскрытые в данном документе, были способны увеличивать выработку IL-2 из данных культур до того же уровня, что и контрольные анти-PD-1-антитела. На Фиг. 2 показано значение EC данного увеличения для каждого протестированного антитела в четырех образцах, взятых у здоровых доноров.
Пример 4. Блокирование антителами связывания мышиного PD-L1 и мышиного PD-L2 с мышиным PD-1
[00352] PD-L1 и PD-L2 являются двумя природными лигандами для PD-1, и взаимодействие любого лиганда с PD-1 может подавлять активирующий ответ в Т-клетках. Было показано, что одобренные терапевтические антитела, такие как ниволумаб и пембролизумаб, блокируют это взаимодействие и подавляют ответы Т-клеток человека, хотя ни одно это антитело не связывается с PD-1 мыши, ни блокирует взаимодействие PD-1 мыши с PD-L1 мыши или PD-L2 мыши. Анализ Octet на приборе Forte-Bio был использован для оценки влияния анти-PD-1-антител, раскрытых в данном документе, на взаимодействие между PD-L1 мыши и PD-1 мыши и между PD-L2 мыши и PD-1 мыши. Антитела разбавляли до 10 мкг/мл, включая антитело изотипического контроля для использования в вычитании фона. Слияние PD-1-Fc мыши разбавляли до желаемых концентраций (например, 100 нМ). Растворимое изотипическое антитело мыши для использования в качестве блокирующего реагента разбавляли до 250 мкг/мл. PD-1 мыши был нанесен на сенсоры, затем был нанесен Fc человека. Добавляли анти-PD-1-антитела и, наконец, измеряли связывание либо PD-L1 мыши, либо PD-L2 мыши. На фиг. 3 показано, что протестированные анти-PD-1-антитела были способны блокировать связывание обоих лигандов мыши с PD-1 мыши. Напротив, ни пембролизумаб, ни ниволумаб не связывались с PD-1 мыши и не блокировали связывание лиганда мыши с PD-1 мыши.
Пример 5. Блокирование антителами связывания PD-L1 человека и PD-L2 человека с PD-1 человека
[00353] PD-L1 и PD-L2 являются двумя природными лигандами для PD-1, и взаимодействие любого лиганда с PD-1 может подавлять активирующий ответ в Т-клетках. Было показано, что одобренные терапевтические антитела, такие как ниволумаб и пембролизумаб, блокируют это взаимодействие и подавляют ответы Т-клеток человека. Анализ Octet на приборе Forte-Bio был использован для оценки влияния анти-PD-1-антител, раскрытых в данном документе, на взаимодействие между PD-L1 человека и PD-1 человека и между PD-L2 человека и PD-1 человека. Антитела разбавляли до 10 мкг/мл, включая антитело изотипического контроля для использования в вычитании фона. Слияние PD-1-Fc человека разбавляли до желаемых концентраций (например, 100 нМ). Растворимый Fc человека, предназначенный для использования в качестве блокирующего реагента, разбавляли до 250 мкг/мл. PD-1 человека был нанесен на сенсоры, и затем был нанесен Fc человека. Добавляли анти-PD-1-антитела и, наконец, измеряли связывание PD-L1 человека или PD-L2 человека. На фиг. 4 показано, что протестированные анти-PD-1-антитела были способны блокировать связывание обоих лигандов человека с PD-1 человека, подобно пембролизумабу и ниволумабу.
Пример 6. Прививание опухолей
in vivo
3
[00354] Способность анти-PD-1-антител снижать рост опухоли на мышиной модели исследовали путем подкожной инъекции клеток MC38 в бока мышей C57BL6/J. Мышей рандомизировали в группы со средним размером опухоли приблизительно 100 мм на день 11 и внутрибрюшинно инъецировали 200 мкг анти-PD-1-антитела 13407. Повторные дозы вводили в дни 14, 18 и 21. Контрольные антитела, IgG1 мыши (MOPC-21), IgG2a крысы (2A3) и положительный контрольный антитело крысы против PD-1 (RMP1-14) были приобретены у BioXcell. Размеры опухолей измеряли два раза в неделю, и эксперимент прекращали через 24 дня. Масса опухолей в конце эксперимента показана на фиг. 5 и указывает, что анти-PD-1-антитело 13407 снижало рост опухоли у мышей в той же степени, что и эталонное анти-PD-1-антитело.
Пример 7. Картирование эпитопов антител
[00355] Гены, кодирующие различные варианты PD-1, фрагменты PD-L1, PD-L2 и Fab антител, были синтезированы и оптимизированы по кодонам Atum inc. Сигнальная последовательность легкой цепи каппа человека (MGTPAQLLFLLLLWLPDTTG; SEQ ID NO: 400) была присоединена на 5'-конец всех генов. Гены были клонированы в экспрессионный вектор млекопитающих, а последовательность проверена до экспрессии белка.
2
[00356] Рекомбинантные белки экспрессировали в экспрессионной системе Expi293™ (Thermo Fisher Scientific) с использованием набора производителя для сред, трансфекционного реагента, питающих слоев и клеток. Клетки трансфицировали в соотношении 1 мкг/мл плазмидной ДНК к среде с использованием Expifectamine™ в соответствии с протоколом производителя. Клетки культивировали во встряхиваемых колбах в инкубаторе, который поддерживали при температуре 37°С и 5% СО. Через 5 дней культуры собирали центрифугированием при 3000 об/мин в течение 15 минут с последующей фильтрацией с использованием фильтра 0,2 мкм.
[00357] Собранные супернатанты подвергали аффинной очистке. Белки содержали либо гексагистидиновый маркер, либо Fc маркер, который обеспечивал либо аффинную очистку Ni, либо аффинную очистку белком А.
[00358] Аффинную очистку с Ni осуществляли на колонках HisTrap™ Excel IMAC (GE Healthcare Life Sciences) с использованием 43 мМ фосфата натрия, 0,5 М хлорида натрия, рН 7,4 в качестве связующего буфера. Связанный белок промывали связывающим буфером с последующим промыванием связывающим буфером, содержащим 20 мМ имидазол. Стадии элюирования осуществляли с помощью связывающего буфера, содержащего 90 мМ, 150 мМ и 250 мМ имидазол. Аффинную очистку с белком A проводили на колонках HiTrap MabSelect Sure (GE Healthcare Life Sciences) с использованием PBS, pH 7,4 в качестве связующего буфера. Стадии элюирования проводили для элюирования связанного белка с использованием 0,1 М цитратного буфера при рН 4,0, рН 3,5 и рН 2,0. Все кислотные элюируемые фракции нейтрализовали 1М Tris, рН 9,0, используя 20% об./об. Все элюированные фракции анализировали с помощью SEC-ВЭЖХ для определения фракций выше целевой чистоты (> 90% мономеров). Для результатов очистки, которые не давали фракций выше целевой чистоты, проводили препаративную эксклюзионную хроматографию с использованием хроматографической колонки Superdex200 для достижения целевой чистоты. Перед замораживанием очищенные белки обменивали в конечный буфер (либо 20 мМ гистидин, 150 мМ NaCl, pH 6,0, либо 20 мМ HEPES, 150 мМ NaCl, pH 7,5), сохраняя их при pH по меньшей мере на 1 единицу отклоняясь от предсказанного pI целевого белка.
[00359] Все белковые взаимодействия оценивали на приборе ForteBio OctetRED96. Белки разводили в буферном составе (PBS + 0,1% BSA, 0,02% Tween 20, 0,05% азида натрия) для кинетических исследований с объемом образца 220 мкл/лунку. Концентрации лигандов были нормализованы до 10 мкг/мл, а концентрации аналитов - до 100 нМ. Блокирующий реагент использовали в концентрации 250 мкг/мл. Время уравновешивания сенсора было установлено на 60 секунд, а время загрузки образца было установлено на 300 секунд. Время блокировки Fc человека было установлено на 300 с. Анализ времени ассоциации был установлен на 300 с, а времени диссоциации - на 600 с.
[00360] в данном методе представляющие интерес антитела ориентируют и захватывают на биосенсорах, дериватизированных античеловеческими (антимышиными) антителами к Fc. Затем анализируют связывание представляющих интерес белков-мишеней в растворе с нагруженными антителами сенсорами.
[00361] Для взаимодействий, в которых белки содержат домены Fc сходных видов, включена дополнительная стадия блокирования, чтобы минимизировать прямое связывание белка-мишени с биосенсором, не зависимым от захваченного антитела.
[00362] События связывания были подтверждены с помощью Y (да), если аффинность к варианту PD-1 или PD-1 другого вида была в пределах приблизительно 5-кратного увеличения по сравнению с аффинностью к PD-1 человека дикого типа. Аффинность, которая была уменьшена >10 раз и <100 раз, обозначена как «Уменьшенная». Аффинность, уменьшенная >100 раз, обозначена как N (нет). Взаимодействия, которые не были оценены, указаны как НО (не определены).
6
[00363] Варианты PD-1 человека получали в виде слияний внеклеточного домена (ECD)-Fc с C-концевыми метками His и использовали для анализа связывания лигандов PD-1, а также Fab-фрагментов ниволумаба, пембролизумаба и 13407. Результаты представлены в таблице 2.
Таблица 2. Обобщенные данные связывания PD-1
Виды PD-1
Вариант PD-1 (слияния ECD-Fc)
Слияние PD-L1 Fc
Слияние PD-L2 Fc
Fab ниво
Fab пембро
13407 Fab
Человек
Дикий тип
Да
Да
Да
Да
Да
D85G
НО
НО
Да
Нет
Да
R86L
НО
НО
Да
Да
Да
D85G/R86L
НО
НО
Да
Нет
Да
N33-Q167
Да
Да
Нет
Да
Да
K78A
Нет
Нет
Да
Да
Да
I126A
Нет
Да
Да
Да
Уменьшенная
L128A
Уменьшенная
Да
Да
Да
Уменьшенная
A132L
Да
Да
Да
Да
Нет
I134A
Нет
Да
Да
Да
Нет
E136A
Нет
Да
Да
Да
Уменьшенная
Мышь
Дикий тип
Да
Да
Нет
Нет
Да
H129P
НО
НО
Нет
Нет
Нет
Крыса
Дикий тип
НО
НО
Нет
Нет
Нет
P129H
НО
НО
Нет
Нет
Да
Собака
Дикий тип
НО
НО
Нет
Нет
Нет
Яванский макак
Дикий тип
Да
Да
Да
Да
Да
[00364] Аминокислотные замены, о которых сообщалось, что они влияют на связывание пембролизумаба, были оценены на связывание с панелью молекул (Na et al., 2017, Cell Res., 27: 147-150). Связывание пембролизумаба с PD-1 устраняется заменой D85G, тогда как связывание ниволумаба и 13407 не затрагивается. Связывание ниволумаба с PD-1 также уменьшается при оценке по сравнению с усеченным по N-концу вариантом N33-Q167. Данные результаты показывают, что 13407 вступает в контакт с аминокислотами, которые значительно отличаются от тех, с которыми связываются пембролизумаб и ниволумаб.
[00365] Были получены дополнительные варианты, которые были предварительно оценены для лигандов PD-L1 и PD-L2 ( et al., 2008, PNAS, 105: 10483-10488). Данные аминокислотные замены в основном не влияли на связывание ниволумаба и пембролизумаба, в то время как аффинность связывания 13407 была значительно снижена заменами I126A, L128A и E136A и устранена заменами A132L и I134A. Данные показывают профиль связывания для 13407, аналогичный профилю PD-L1.
[00366] Панель Fab-фрагментов также оценивали на связывание с дополнительными видами PD-1. Пембролизумаб и ниволумаб не связываются с PD-1 мыши, крысы или собаки. Напротив, 13407 связывается с мышиным PD-1. Удивительно, но 13407 не связывается с PD-1 крысы, несмотря на высокую гомологию между PD-1 крысы и мыши. Был создан вариант PD-1 мыши, в котором остаток 129 заменен соответствующим остатком из последовательности крысы (H129P), и было обнаружено, что это устраняет связывание 13407. Когда в последовательность крысы была введена реципрокная мутация, P129H, то 13407 связался с вариантом. Примечательно, что в последовательности PD-1 собаки, с которой 13407 не связывается, в этой позиции отсутствует пролин.
[00367] Таким образом, 13407 связывает эпитоп PD-1, отличный от эпитопов, связываемых с ниволумабом и пембролизумабом.
[00368] Данное раскрытие может быть воплощено в других конкретных формах без отклонения от его сущности или существенных характеристик. Таким образом, вышеприведенные варианты осуществления следует рассматривать во всех отношениях как иллюстративные, а не как ограничивающие раскрытие. Объем раскрытия, таким образом, обозначен прилагаемой формулой изобретения, а не вышеприведенным описанием, и поэтому все изменения, которые входят в содержание и диапазон эквивалентности формулы изобретения, следовательно, предназначены для охвата данным документом.
Таблица последовательностей
SEQ ID NO
Описание
Последовательность
1
PD-1 человека, аминокислотная последовательность; UniProtKB/Swiss-Prot: Q15116;01-AUG-2016
MQIPQAPWPV VWAVLQLGWR PGWFLDSPDR PWNPPTFSPA LLVVTEGDNA TFTCSFSNTS ESFVLNWYRM SPSNQTDKLA AFPEDRSQPG QDCRFRVTQL PNGRDFHMSV VRARRNDSGT YLCGAISLAP KAQIKESLRA ELRVTERRAE VPTAHPSPSP RPAGQFQTLV VGVVGGLLGS LVLLVWVLAV ICSRAARGTI GARRTGQPLK EDPSAVPVFS VDYGELDFQW REKTPEPPVP CVPEQTEYAT IVFPSGMGTS SPARRGSADG PRSAQPLRPE DGHCSWPL
382
Зрелый PD-1 человека, аминокислотная последовательность (без сигнальной последовательности)
PGWFLDSPDR PWNPPTFSPA LLVVTEGDNA TFTCSFSNTS ESFVLNWYRM SPSNQTDKLA AFPEDRSQPG QDCRFRVTQL PNGRDFHMSV VRARRNDSGT YLCGAISLAP KAQIKESLRA ELRVTERRAE VPTAHPSPSP RPAGQFQTLV VGVVGGLLGS LVLLVWVLAV ICSRAARGTI GARRTGQPLK EDPSAVPVFS VDYGELDFQW REKTPEPPVP CVPEQTEYAT IVFPSGMGTS SPARRGSADG PRSAQPLRPE DGHCSWPL
401
PD-1 человека, внеклеточный домен (ECD)-Fc-His<sub>6</sub>
ldspdrpwnp ptfspallvv tegdnatftc sfsntsesfv lnwyrmspsn qtdklaafpe drsqpgqdcr frvtqlpngr dfhmsvvrar rndsgtylcg aislapkaqi keslraelrv terraevpta hpspsprpag qfqggsggDK THTCPPCPAP ELLGGPSVFL FPPKPKDTLM ISRTPEVTCV VVDVSHEDPE VKFNWYVDGV EVHNAKTKPR EEQYNSTYRV VSVLTVLHQD WLNGKEYKCK VSNKALPAPI EKTISKAKGQ PREPQVYTLP PSREEMTKNQ VSLTCLVKGF YPSDIAVEWE SNGQPENNYK TTPPVLDSDG SFFLYSKLTV DKSRWQQGNV FSCSVMHEAL HNHYTQKSLS LSPGKGSGHH HHHH
385
PD-1 человека D85G ECD-Fc-His<sub>6</sub>
dspdrpwnpp tfspallvvt egdnatftcs fsntsesfvl nwyrmspsnq tdklaafpeG rsqpgqdcrf rvtqlpngrd fhmsvvrarr ndsgtylcga islapkaqik eslraelrvt erraevptah pspsprpagq fqtlvggsgg DKTHTCPPCP APELLGGPSV FLFPPKPKDT LMISRTPEVT CVVVDVSHED PEVKFNWYVD GVEVHNAKTK PREEQYNSTY RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKALPA PIEKTISKAK GQPREPQVYT LPPSREEMTK NQVSLTCLVK GFYPSDIAVE WESNGQPENN YKTTPPVLDS DGSFFLYSKL TVDKSRWQQG NVFSCSVMHE ALHNHYTQKS LSLSPGKGSG HHHHHH
386
PD-1 человека R86L ECD-Fc-His<sub>6</sub>
dspdrpwnpp tfspallvvt egdnatftcs fsntsesfvl nwyrmspsnq tdklaafped Lsqpgqdcrf rvtqlpngrd fhmsvvrarr ndsgtylcga islapkaqik eslraelrvt erraevptah pspsprpagq fqtlvggsgg DKTHTCPPCP APELLGGPSV FLFPPKPKDT LMISRTPEVT CVVVDVSHED PEVKFNWYVD GVEVHNAKTK PREEQYNSTY RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKALPA PIEKTISKAK GQPREPQVYT LPPSREEMTK NQVSLTCLVK GFYPSDIAVE WESNGQPENN YKTTPPVLDS DGSFFLYSKL TVDKSRWQQG NVFSCSVMHE ALHNHYTQKS LSLSPGKGSG HHHHHH
402
PD-1 человека D85G/R86L ECD-Fc-His<sub>6</sub>
dspdrpwnpp tfspallvvt egdnatftcs fsntsesfvl nwyrmspsnq tdklaafpeG Lsqpgqdcrf rvtqlpngrd fhmsvvrarr ndsgtylcga islapkaqik eslraelrvt erraevptah pspsprpagq fqtlvggsgg DKTHTCPPCP APELLGGPSV FLFPPKPKDT LMISRTPEVT CVVVDVSHED PEVKFNWYVD GVEVHNAKTK PREEQYNSTY RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKALPA PIEKTISKAK GQPREPQVYT LPPSREEMTK NQVSLTCLVK GFYPSDIAVE WESNGQPENN YKTTPPVLDS DGSFFLYSKL TVDKSRWQQG NVFSCSVMHE ALHNHYTQKS LSLSPGKGSG HHHHHH
387
PD-1 человека N33-Q167 ECD-Fc-His<sub>6</sub>
npptfspall vvtegdnatf tcsfsntses fvlnwyrmsp snqtdklaaf pedrsqpgqd crfrvtqlpn grdfhmsvvr arrndsgtyl cgaislapka qikeslrael rvterraevp tahpspsprp agqfqggsgg DKTHTCPPCP APELLGGPSV FLFPPKPKDT LMISRTPEVT CVVVDVSHED PEVKFNWYVD GVEVHNAKTK PREEQYNSTY RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKALPA PIEKTISKAK GQPREPQVYT LPPSREEMTK NQVSLTCLVK GFYPSDIAVE WESNGQPENN YKTTPPVLDS DGSFFLYSKL TVDKSRWQQG NVFSCSVMHE ALHNHYTQKS LSLSPGKGSG HHHHHH
388
PD-1 человека K78A ECD-Fc-His<sub>6</sub>
dspdrpwnpp tfspallvvt egdnatftcs fsntsesfvl nwyrmspsnq tdAlaafped rsqpgqdcrf rvtqlpngrd fhmsvvrarr ndsgtylcga islapkaqik eslraelrvt erraevptah pspsprpagq fqtlvggsgg DKTHTCPPCP APELLGGPSV FLFPPKPKDT LMISRTPEVT CVVVDVSHED PEVKFNWYVD GVEVHNAKTK PREEQYNSTY RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKALPA PIEKTISKAK GQPREPQVYT LPPSREEMTK NQVSLTCLVK GFYPSDIAVE WESNGQPENN YKTTPPVLDS DGSFFLYSKL TVDKSRWQQG NVFSCSVMHE ALHNHYTQKS LSLSPGKGSG HHHHHH
389
PD-1 человека I126A ECD-Fc-His<sub>6</sub>
dspdrpwnpp tfspallvvt egdnatftcs fsntsesfvl nwyrmspsnq tdklaafped rsqpgqdcrf rvtqlpngrd fhmsvvrarr ndsgtylcga Aslapkaqik eslraelrvt erraevptah pspsprpagq fqtlvggsgg DKTHTCPPCP APELLGGPSV FLFPPKPKDT LMISRTPEVT CVVVDVSHED PEVKFNWYVD GVEVHNAKTK PREEQYNSTY RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKALPA PIEKTISKAK GQPREPQVYT LPPSREEMTK NQVSLTCLVK GFYPSDIAVE WESNGQPENN YKTTPPVLDS DGSFFLYSKL TVDKSRWQQG NVFSCSVMHE ALHNHYTQKS LSLSPGKGSG HHHHHH
390
PD-1 человека L128A ECD-Fc-His<sub>6</sub>
dspdrpwnpp tfspallvvt egdnatftcs fsntsesfvl nwyrmspsnq tdklaafped rsqpgqdcrf rvtqlpngrd fhmsvvrarr ndsgtylcga isAapkaqik eslraelrvt erraevptah pspsprpagq fqtlvggsgg DKTHTCPPCP APELLGGPSV FLFPPKPKDT LMISRTPEVT CVVVDVSHED PEVKFNWYVD GVEVHNAKTK PREEQYNSTY RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKALPA PIEKTISKAK GQPREPQVYT LPPSREEMTK NQVSLTCLVK GFYPSDIAVE WESNGQPENN YKTTPPVLDS DGSFFLYSKL TVDKSRWQQG NVFSCSVMHE ALHNHYTQKS LSLSPGKGSG HHHHHH
391
PD-1 человека A132L ECD-Fc-His<sub>6</sub>
dspdrpwnpp tfspallvvt egdnatftcs fsntsesfvl nwyrmspsnq tdklaafped rsqpgqdcrf rvtqlpngrd fhmsvvrarr ndsgtylcga islapkLqik eslraelrvt erraevptah pspsprpagq fqtlvggsgg DKTHTCPPCP APELLGGPSV FLFPPKPKDT LMISRTPEVT CVVVDVSHED PEVKFNWYVD GVEVHNAKTK PREEQYNSTY RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKALPA PIEKTISKAK GQPREPQVYT LPPSREEMTK NQVSLTCLVK GFYPSDIAVE WESNGQPENN YKTTPPVLDS DGSFFLYSKL TVDKSRWQQG NVFSCSVMHE ALHNHYTQKS LSLSPGKGSG HHHHHH
392
PD-1 человека I134A ECD-Fc-His<sub>6</sub>
dspdrpwnpp tfspallvvt egdnatftcs fsntsesfvl nwyrmspsnq tdklaafped rsqpgqdcrf rvtqlpngrd fhmsvvrarr ndsgtylcga islapkaqAk eslraelrvt erraevptah pspsprpagq fqtlvggsgg DKTHTCPPCP APELLGGPSV FLFPPKPKDT LMISRTPEVT CVVVDVSHED PEVKFNWYVD GVEVHNAKTK PREEQYNSTY RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKALPA PIEKTISKAK GQPREPQVYT LPPSREEMTK NQVSLTCLVK GFYPSDIAVE WESNGQPENN YKTTPPVLDS DGSFFLYSKL TVDKSRWQQG NVFSCSVMHE ALHNHYTQKS LSLSPGKGSG HHHHHH
393
PD-1 человека EI136A ECD-Fc-His<sub>6</sub>
dttgdspdrp wnpptfspal lvvtegdnat ftcsfsntse sfvlnwyrms psnqtdklaa fpedrsqpgq dcrfrvtqlp ngrdfhmsvv rarrndsgty lcgaislapk aqikAslrae lrvterraev ptahpspspr pagqfqtlvg gsggDKTHTC PPCPAPELLG GPSVFLFPPK PKDTLMISRT PEVTCVVVDV SHEDPEVKFN WYVDGVEVHN AKTKPREEQY NSTYRVVSVL TVLHQDWLNG KEYKCKVSNK ALPAPIEKTI SKAKGQPREP QVYTLPPSRE EMTKNQVSLT CLVKGFYPSD IAVEWESNGQ PENNYKTTPP VLDSDGSFFL YSKLTVDKSR WQQGNVFSCS VMHEALHNHY TQKSLSLSPG KGSGHHHHHH
2
PD-1 мыши; UniProtKB/Swiss-Prot: Q02242;01-AUG-2016
MWVRQVPWSF TWAVLQLSWQ SGWLLEVPNG PWRSLTFYPA WLTVSEGANA TFTCSLSNWS EDLMLNWNRL SPSNQTEKQA AFCNGLSQPV QDARFQIIQL PNRHDFHMNI LDTRRNDSGI YLCGAISLHP KAKIEESPGA ELVVTERILE TSTRYPSPSP KPEGRFQGMV IGIMSALVGI PVLLLLAWAL AVFCSTSMSEARGAGSKDDT LKEEPSAAPV PSVAYEELDF QGREKTPELP TACVHTEYAT IVFTEGLGAS AMGRRGSADG LQGPRPPRHE DGHCSWPL
383
Зрелый PD-1 мыши, аминокислотная последовательность (без сигнальной последовательности)
SGWLLEVPNG PWRSLTFYPA WLTVSEGANA TFTCSLSNWS EDLMLNWNRL SPSNQTEKQA AFCNGLSQPV QDARFQIIQL PNRHDFHMNI LDTRRNDSGI YLCGAISLHP KAKIEESPGA ELVVTERILE TSTRYPSPSP KPEGRFQGMV IGIMSALVGI PVLLLLAWAL AVFCSTSMSE ARGAGSKDDT LKEEPSAAPV PSVAYEELDF QGREKTPELP TACVHTEYAT IVFTEGLGAS AMGRRGSADG LQGPRPPRHE DGHCSWPL
403
PD-1 мыши ECD-Fc-His<sub>6</sub>
levpngpwrs ltfypawltv seganatftc slsnwsedlm lnwnrlspsn qtekqaafcn glsqpvqdar fqiiqlpnrh dfhmnildtr rndsgiylcg aislhpkaki eespgaelvv teriletstr ypspspkpeg rfqggsggDK THTCPPCPAP ELLGGPSVFL FPPKPKDTLM ISRTPEVTCV VVDVSHEDPE VKFNWYVDGV EVHNAKTKPR EEQYNSTYRV VSVLTVLHQD WLNGKEYKCK VSNKALPAPI EKTISKAKGQ PREPQVYTLP PSREEMTKNQ VSLTCLVKGF YPSDIAVEWE SNGQPENNYK TTPPVLDSDG SFFLYSKLTV DKSRWQQGNV FSCSVMHEAL HNHYTQKSLS LSPGKGSGHH HHHH
394
PD-1 мыши H129P ECD-Fc-His<sub>6</sub>
levpngpwrs ltfypawltv seganatftc slsnwsedlm lnwnrlspsn qtekqaafcn glsqpvqdar fqiiqlpnrh dfhmnildtr rndsgiylcg aislPpkaki eespgaelvv teriletstr ypspspkpeg rfqggsggDK THTCPPCPAP ELLGGPSVFL FPPKPKDTLM ISRTPEVTCV VVDVSHEDPE VKFNWYVDGV EVHNAKTKPR EEQYNSTYRV VSVLTVLHQD WLNGKEYKCK VSNKALPAPI EKTISKAKGQ PREPQVYTLP PSREEMTKNQ VSLTCLVKGF YPSDIAVEWE SNGQPENNYK TTPPVLDSDG SFFLYSKLTV DKSRWQQGNV FSCSVMHEAL HNHYTQKSLS LSPGKGSGHH HHHH
3
PD-1 яванского макака; UniProtKB/Swiss-Prot: B0LAJ3;01-AUG-2016
MQIPQAPWPV VWAVLQLGWR PGWFLDSPDR PWNPPTFSPA LLVVTEGDNATFTCSFSNTS ESFVLNWYRM SPSNQTDKLA AFPEDRSQPG QDCRFRVTQLPNGRDFHMSV VRARRNDSGT YLCGAISLAP KAQIKESLRA ELRVTERRAEVPTAHPSPSP RPAGQFQTLV VGVVGGLLGS LVLLVWVLAV ICSRAARGTIGARRTGQPLK EDPSAVPVFS VDYGELDFQW REKTPEPPVP CVPEQTEYAT IVFPSGMGTS SPARRGSADG PRSAQPLRPE DGHCSWPL
384
Зрелый PD-1 яванского макака (без сигнальной последовательности)
PGWFLDSPDR PWNPPTFSPA LLVVTEGDNA TFTCSFSNTS ESFVLNWYRM SPSNQTDKLA AFPEDRSQPG QDCRFRVTQL PNGRDFHMSV VRARRNDSGT YLCGAISLAP KAQIKESLRA ELRVTERRAE VPTAHPSPSP RPAGQFQTLV VGVVGGLLGS LVLLVWVLAV ICSRAARGTI GARRTGQPLK EDPSAVPVFS VDYGELDFQW REKTPEPPVP CVPEQTEYAT IVFPSGMGTS SPARRGSADG PRSAQPLRPE DGHCSWPL
404
PD-1 яванского макака ECD-Fc-His<sub>6</sub>
LESPDR PWNAPTFSPA LLLVTEGDNA TFTCSFSNAS ESFVLNWYRM SPSNQTDKLA AFPEDRSQPG QDCRFRVTRL PNGRDFHMSV VRARRNDSGT YLCGAISLAP KAQIKESLRA ELRVTERRAE VPTAHPSPSP RPAGQFQGGS GGDKTHTCPP CPAPELLGGP SVFLFPPKPK DTLMISRTPE VTCVVVDVSH EDPEVKFNWY VDGVEVHNAK TKPREEQYNS TYRVVSVLTV LHQDWLNGKE YKCKVSNKAL PAPIEKTISK AKGQPREPQV YTLPPSREEM TKNQVSLTCL VKGFYPSDIA VEWESNGQPE NNYKTTPPVL DSDGSFFLYS KLTVDKSRWQ QGNVFSCSVM HEALHNHYTQ KSLSLSPGKG SGHHHHHH
395
PD-1 крысы; NCBI Ref. NP_001100397.1; 02-OCT-2017
MWVQQVPWSF TWAVLQLSWQ SGWLLEVLNK PWRPLTFSPT WLTVSEGANA TFTCSFSNWS EDLKLNWYRL SPSNQTEKQA AFCNGYSQPV RDARFQIVQL PNGHDFHMNI LDARRNDSGI YLCGAISLPP KAQIKESPGA ELVVTERILE TPTRYPRPSP KPEGQFQGLV IVIMSVLVGI PVLLLLAWAL AAFCSTGMSE AREAGRKEDP PKEAHAAAPV PSVAYEELDF QGREKTPEPA PCVHTEYATI VFTEGLDASA IGRRGSADGP QGPRPPRHED GHCSWPL
396
Зрелый PD-1 крысы, аминокислотная последовательность (без сигнальной последовательности)
LEVLNKPWRP LTFSPTWLTV SEGANATFTC SFSNWSEDLK LNWYRLSPSN QTEKQAAFCN GYSQPVRDAR FQIVQLPNGH DFHMNILDAR RNDSGIYLCG AISLPPKAQI KESPGAELVV TERILETPTR YPRPSPKPEG QFQGLVIVIM SVLVGIPVLL LLAWALAAFC STGMSEAREA GRKEDPPKEA HAAAPVPSVA YEELDFQGRE KTPEPAPCVH TEYATIVFTE GLDASAIGRR GSADGPQGPR PPRHEDGHCS WPL
405
PD-1 крысы ECD-Fc-His<sub>6</sub>
levlnkpwrp ltfsptwltv seganatftc sfsnwsedlk lnwyrlspsn qtekqaafcn gysqpvrdar fqivqlpngh dfhmnildar rndsgiylcg aislppkaqi kespgaelvv teriletptr yprpspkpeg qfqggsggDK THTCPPCPAP ELLGGPSVFL FPPKPKDTLM ISRTPEVTCV VVDVSHEDPE VKFNWYVDGV EVHNAKTKPR EEQYNSTYRV VSVLTVLHQD WLNGKEYKCK VSNKALPAPI EKTISKAKGQ PREPQVYTLP PSREEMTKNQ VSLTCLVKGF YPSDIAVEWE SNGQPENNYK TTPPVLDSDG SFFLYSKLTV DKSRWQQGNV FSCSVMHEAL HNHYTQKSLS LSPGKGSGHH HHHH
397
PD-1 крысы P129H ECD-Fc-His<sub>6</sub>
levlnkpwrp ltfsptwltv seganatftc sfsnwsedlk lnwyrlspsn qtekqaafcn gysqpvrdar fqivqlpngh dfhmnildar rndsgiylcg aislHpkaqi kespgaelvv teriletptr yprpspkpeg qfqggsggDK THTCPPCPAP ELLGGPSVFL FPPKPKDTLM ISRTPEVTCV VVDVSHEDPE VKFNWYVDGV EVHNAKTKPR EEQYNSTYRV VSVLTVLHQD WLNGKEYKCK VSNKALPAPI EKTISKAKGQ PREPQVYTLP PSREEMTKNQ VSLTCLVKGF YPSDIAVEWE SNGQPENNYK TTPPVLDSDG SFFLYSKLTV DKSRWQQGNV FSCSVMHEAL HNHYTQKSLS LSPGKGSGHH HHHH
398
PD-1 собаки, аминокислотная последовательность; NCBI Ref. NP_001301026.1
MGSRRGPWPL VWAVLQLGWW PGWLLDSPDR PWSPLTFSPA QLTVQEGENA TFTCSLADIP DSFVLNWYRL SPRNQTDKLA AFQEDRIEPG RDRRFRVTRL PNGRDFHMSI VAARLNDSGI YLCGAIYLPP NTQINESPRA ELSVTERTLE PPTQSPSPPP RLSGQLQGLV IGVTSVLVGV LLLLLLTWVL AAVFPRATRG ACVCGSEDEP LKEGPDAAPV FTLDYGELDF QWREKTPEPP APCAPEQTEY ATIVFPGRPA SPGRRASASS LQGAQPPSPE DGPGLWPP
399
Зрелый PD-1 собаки, аминокислотная последовательность (без сигнальной последовательности)
LDSPDRPWSP LTFSPAQLTV QEGENATFTC SLADIPDSFV LNWYRLSPRN QTDKLAAFQE DRIEPGRDRR FRVTRLPNGR DFHMSIVAAR LNDSGIYLCG AIYLPPNTQI NESPRAELSV TERTLEPPTQ SPSPPPRLSG QLQGLVIGVT SVLVGVLLLL LLTWVLAAVF PRATRGACVC GSEDEPLKEG PDAAPVFTLD YGELDFQWRE KTPEPPAPCA PEQTEYATIV FPGRPASPGR RASASSLQGA QPPSPEDGPG LWPP
406
PD-1 собаки ECD-Fc-His<sub>6</sub>
LDSPDR PWSPLTFSPA QLTVQEGENATFTCSLADIP DSFVLNWYRL SPRNQTDKLA AFQEDRIEPG RDRRFRVTRL PNGRDFHMSI VAARLNDSGI YLCGAIYLPP NTQINESPRA ELSVTERTLE PPTQSPSPPP RLSGQLQGGS GGDKTHTCPP CPAPELLGGP SVFLFPPKPK DTLMISRTPE VTCVVVDVSH EDPEVKFNWY VDGVEVHNAK TKPREEQYNS TYRVVSVLTV LHQDWLNGKE YKCKVSNKAL PAPIEKTISK AKGQPREPQV YTLPPSREEM TKNQVSLTCL VKGFYPSDIA VEWESNGQPE NNYKTTPPVL DSDGSFFLYS KLTVDKSRWQ QGNVFSCSVM HEALHNHYTQ KSLSLSPGKG SGHHHHHH
4
12228Последовательность VH
QVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYTFT SYYMHWVRQA PGQGLEWMGI INPSGGSTSY AQKFQGRVTM TRDTSTSTVY MELSSLRSED TAVYYCARGG TYYDYTYWGQ GTLVTVSS
5
12228HCDR1
YTFTSYYMH
6
12228HCDR2
IINPSGGSTSYAQKFQG
7
12228HCDR3
ARGGTYYDYTY
8
12228Последовательность VL
DIQMTQSPST LSASVGDRVT ITCRASQSIS SWLAWYQQKP GKAPKLLIYE ASSLESGVPS RFSGSGSGTE FTLTISSLQP DDFATYYCQQ YNSFPPTFGG GTKVEIK
9
12228LCDR1
RASQSISSWLA
10
12228LCDR2
EASSLES
11
12228LCDR3
QQYNSFPPT
12
13406Последовательность VH
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFDQYYMHWVRQAPGQGLEWMGIINPSGGSTAYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGGTYYDYTYWGQGTLVTVSS
13
13406HCDR1
YTFDQYYMH
14
13406HCDR2
IINPSGGSTAYAQKFQG
15
13406HCDR3
ARGGTYYDYTY
16
13406Последовательность VL
DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYEASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYNSFPPTFGGGTKVEIK
17
13406LCDR1
RASQSISSWLA
18
13406LCDR2
EASSLES
19
13406LCDR3
QQYNSFPPT
20
13407Последовательность VH
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFPSYYMHWVRQAPGQGLEWMGIINPEGGSTAYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGGTYYDYTYWGQGTLVTVSS
21
13407HCDR1
YTFPSYYMH
22
13407HCDR2
IINPEGGSTAYAQKFQG
23
13407HCDR3
ARGGTYYDYTY
24
13407Последовательность VL
DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYEASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYNSFPPTFGGGTKVEIK
25
13407LCDR1
RASQSISSWLA
26
13407LCDR2
EASSLES
27
13407LCDR3
QQYNSFPPT
28
13408Последовательность VH
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFSDYYMHWVRQAPGQGLEWMGIINPSGGVTAYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGGTYYDYTYWGQGTLVTVSS
29
13408HCDR1
YTFSDYYMH
30
13408HCDR2
IINPSGGVTAYAQKFQG
31
13408HCDR3
ARGGTYYDYTY
32
13408Последовательность VL
DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYEASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYNSFPPTFGGGTKVEIK
33
13408LCDR1
RASQSISSWLA
34
13408LCDR2
EASSLES
35
13408LCDR3
QQYNSFPPT
36
13409Последовательность VH
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFESYYMHWVRQAPGQGLEWMGIINPSGGVTAYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGGTYYDYTYWGQGTLVTVSS
37
13409HCDR1
YTFESYYMH
38
13409HCDR2
IINPSGGVTAYAQKFQG
39
13409HCDR3
ARGGTYYDYTY
40
13409Последовательность VL
DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYEASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYNSFPPTFGGGTKVEIK
41
13409LCDR1
RASQSISSWLA
42
13409LCDR2
EASSLES
43
13409LCDR3
QQYNSFPPT
44
13396 последовательность VH
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYMHWVRQAPGQGLEWMGIINPDAGSTAYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARDQGHYYGMGVWGQGTTVTVSS
45
13396HCDR1
YTFTSYYMH
46
13396HCDR2
IINPDAGSTAYAQKFQG
47
13396 HCDR3
ARDQGHYYGMGV
48
13396 последовательность VL
DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYEASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQHNSYPPTFGGGTKVEIK
49
13396 LCDR1
RASQSISSWLA
50
13396 LCDR2
EASSLES
51
13396 LCDR3
QQHNSYPPT
52
13398 последовательность VH
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFGEYYMHWVRQAPGQGLEWMGIINPSEGSTGYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARDQGHYYGMGVWGQGTTVTVSS
53
13398HCDR1
YTFGEYYMH
54
13398HCDR2
IINPSEGSTGYAQKFQG
55
13398 HCDR3
ARDQGHYYGMGV
56
13398 последовательность VL
DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYEASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQHNSYPPTFGGGTKVEIK
57
13398 LCDR1
RASQSISSWLA
58
13398 LCDR2
EASSLES
59
13398 LCDR3
QQHNSYPPT
60
13399 последовательность VH
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFSDYYMHWVRQAPGQGLEWMGIINPSAGSTGYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARDQGHYYGMGVWGQGTTVTVSS
61
13399HCDR1
YTFSDYYMH
62
13399HCDR2
IINPSAGSTGYAQKFQG
63
13399 HCDR3
ARDQGHYYGMGV
64
13399 последовательность VL
DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYEASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQHNSYPPTFGGGTKVEIK
65
13399 LCDR1
RASQSISSWLA
66
13399 LCDR2
EASSLES
67
13399 LCDR3
QQHNSYPPT
68
13401 последовательность VH
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFNSYYMSWVRQAPGQGLEWMGIIDPSKGSTAYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARHEYGMDVWGQGTTVTVSS
69
13401HCDR1
YTFNSYYMS
70
13401HCDR2
IIDPSKGSTAYAQKFQG
71
13401 HCDR3
ARHEYGMDV
72
13401 последовательность VL
DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYEASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYNSFPPTFGGGTKVEIK
73
13401 LCDR1
RASQSISSWLA
74
13401 LCDR2
EASSLES
75
13401 LCDR3
QQYNSFPPT
76
13402 последовательность VH
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTHYYMSWVRQAPGQGLEWMGMINPEGGSTAYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARHEYGMDVWGQGTTVTVSS
77
13402HCDR1
YTFTHYYMS
78
13402HCDR2
MINPEGGSTAYAQKFQG
79
13402 HCDR3
ARHEYGMDV
80
13402 последовательность VL
DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYEASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYNSFPPTFGGGTKVEIK
81
13402 LCDR1
RASQSISSWLA
82
13402 LCDR2
EASSLES
83
13402 LCDR3
QQYNSFPPT
84
13403 последовательность VH
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFDSYYMSWVRQAPGQGLEWMGMINPSVGSTAYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARHEYGMDVWGQGTTVTVSS
85
13403HCDR1
YTFDSYYMS
86
13403HCDR2
MINPSVGSTAYAQKFQG
87
13403 HCDR3
ARHEYGMDV
88
13403 последовательность VL
DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYEASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYNSFPPTFGGGTKVEIK
89
13403 LCDR1
RASQSISSWLA
90
13403 LCDR2
EASSLES
91
13403 LCDR3
QQYNSFPPT
92
13404 последовательность VH
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFASYAMSWVRQAPGQGLEWMGIIFPGGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARHEYGMDVWGQGTTVTVSS
93
13404HCDR1
YTFASYAMS
94
13404HCDR2
IIFPGGGSTSYAQKFQG
95
13404 HCDR3
ARHEYGMDV
96
13404 последовательность VL
DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYEASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYNSFPPTFGGGTKVEIK
97
13404 LCDR1
RASQSISSWLA
98
13404 LCDR2
EASSLES
99
13404 LCDR3
QQYNSFPPT
100
13405 последовательность VH
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFASYYMGWVRQAPGQGLEWMGIINPAGGSTAYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARHEYGMDVWGQGTTVTVSS
101
13405HCDR1
YTFASYYMG
102
13405HCDR2
IINPAGGSTAYAQKFQG
103
13405 HCDR3
ARHEYGMDV
104
13405 последовательность VL
DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYEASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYNSFPPTFGGGTKVEIK
105
13405 LCDR1
RASQSISSWLA
106
13405 LCDR2
EASSLES
107
13405 LCDR3
QQYNSFPPT
108
12191 последовательность VH
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYMHWVRQAPGQGLEWMGIINPGGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARDQGHYYGMGVWGQGTTVTVSS
109
12191HCDR1
YTFTSYYMH
110
12191HCDR2
IINPGGGSTSYAQKFQG
111
12191 HCDR3
ARDQGHYYGMGV
112
12191 последовательность VL
DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYEASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQHNSYPPTFGGGTKVEIK
113
12191 LCDR1
RASQSISSWLA
114
12191 LCDR2
EASSLES
115
12191 LCDR3
QQHNSYPPT
116
12195 последовательность VH
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYMSWVRQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARHEYGMDVWGQGTTVTVSS
117
12195HCDR1
YTFTSYYMS
118
12195HCDR2
IINPSGGSTSYAQKFQG
119
12195 HCDR3
ARHEYGMDV
120
12195 последовательность VL
DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYEASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYNSFPPTFGGGTKVEIK
121
12195 LCDR1
RASQSISSWLA
122
12195 LCDR2
EASSLES
123
12195 LCDR3
QQYNSFPPT
124
12535 последовательность VH
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYLMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGKSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVYYGMPYWGQGTLVTVSS
125
12535HCDR1
FTFSHYLMS
126
12535HCDR2
AISGSGKSTYYADSVKG
127
12535 HCDR3
AKVYYGMPY
128
12535 последовательность VL
DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGIDSWLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQASDVPWTFGGGTKVEIK
129
12535 LCDR1
RASQGIDSWLA
130
12535 LCDR2
AASSLQS
131
12535 LCDR3
QQASDVPWT
132
12536 последовательность VH
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSQYLMSWVRQAPGKGLEWVSAIGGSGASTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVYYGMPYWGQGTLVTVSS
133
12536HCDR1
FTFSQYLMS
134
12536HCDR2
AIGGSGASTYYADSVKG
135
12536 HCDR3
AKVYYGMPY
136
12536 последовательность VL
DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGIDSWLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQASDVPWTFGGGTKVEIK
137
12536 LCDR1
RASQGIDSWLA
138
12536 LCDR2
AASSLQS
139
12536 LCDR3
QQASDVPWT
140
12541 последовательность VH
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFRSYMMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGRDTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVYYGMPYWGQGTLVTVSS
141
12541HCDR1
FTFRSYMMS
142
12541HCDR2
AISGSGRDTYYADSVKG
143
12541 HCDR3
AKVYYGMPY
144
12541 последовательность VL
DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGIDSWLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQASDVPWTFGGGTKVEIK
145
12541 LCDR1
RASQGIDSWLA
146
12541 LCDR2
AASSLQS
147
12541 LCDR3
QQASDVPWT
148
12543 последовательность VH
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSQYMMSWVRQAPGKGLEWVSGISGSGGETYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVYYGMPYWGQGTLVTVSS
149
12543HCDR1
FTFSQYMMS
150
12543HCDR2
GISGSGGETYYADSVKG
151
12543 HCDR3
AKVYYGMPY
152
12543 последовательность VL
DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGIDSWLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQASDVPWTFGGGTKVEIK
153
12543 LCDR1
RASQGIDSWLA
154
12543 LCDR2
AASSLQS
155
12543 LCDR3
QQASDVPWT
156
12544 последовательность VH
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYLMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGSSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVYYGMPYWGQGTLVTVSS
157
12544HCDR1
FTFSSYLMS
158
12544HCDR2
AISGSGSSTYYADSVKG
159
12544 HCDR3
AKVYYGMPY
160
12544 последовательность VL
DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGIDSWLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQASDVPWTFGGGTKVEIK
161
12544 LCDR1
RASQGIDSWLA
162
12544 LCDR2
AASSLQS
163
12544 LCDR3
QQASDVPWT
164
12545 последовательность VH
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYLMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGQTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVYYGMPYWGQGTLVTVSS
165
12545HCDR1
FTFSHYLMS
166
12545HCDR2
AISGSGGQTYYADSVKG
167
12545 HCDR3
AKVYYGMPY
168
12545 последовательность VL
DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGIDSWLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQASDVPWTFGGGTKVEIK
169
12545 LCDR1
RASQGIDSWLA
170
12545 LCDR2
AASSLQS
171
12545 LCDR3
QQASDVPWT
172
12549 последовательность VH
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSQYSMSWVRQAPGKGLEWVSAISGGGGQTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVYYGMPYWGQGTLVTVSS
173
12549HCDR1
FTFSQYSMS
174
12549HCDR2
AISGGGGQTYYADSVKG
175
12549 HCDR3
AKVYYGMPY
176
12549 последовательность VL
DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGIDSWLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQASDVPWTFGGGTKVEIK
177
12549 LCDR1
RASQGIDSWLA
178
12549 LCDR2
AASSLQS
179
12549 LCDR3
QQASDVPWT
180
12550 последовательность VH
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSLYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGQTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVYYGMPYWGQGTLVTVSS
181
12550HCDR1
FTFSLYAMS
182
12550HCDR2
AISGSGGQTYYADSVKG
183
12550 HCDR3
AKVYYGMPY
184
12550 последовательность VL
DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGIDSWLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQASDVPWTFGGGTKVEIK
185
12550 LCDR1
RASQGIDSWLA
186
12550 LCDR2
AASSLQS
187
12550 LCDR3
QQASDVPWT
188
12553 последовательность VH
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFGEYAISWVRQAPGQGLEWMGLIIPIFGTAQYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGASDGETGRLDLWGRGTLVTVSS
189
12553HCDR1
GTFGEYAIS
190
12553HCDR2
LIIPIFGTAQYAQKFQG
191
12553 HCDR3
ARGASDGETGRLDL
192
12553 последовательность VL
DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSNNKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQSYSLPFTFGGGTKVEIK
193
12553 LCDR1
KSSQSVLYSSNNKNYLA
194
12553 LCDR2
WASTRES
195
12553 LCDR3
QQSYSLPFT
196
12554 последовательность VH
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGLIIPAFGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGASDGETGRLDLWGRGTLVTVSS
197
12554HCDR1
GTFSSYAIS
198
12554HCDR2
LIIPAFGTANYAQKFQG
199
12554 HCDR3
ARGASDGETGRLDL
200
12554 последовательность VL
DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSNNKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQSYSLPFTFGGGTKVEIK
201
12554 LCDR1
KSSQSVLYSSNNKNYLA
202
12554 LCDR2
WASTRES
203
12554 LCDR3
QQSYSLPFT
204
12562 последовательность VH
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGVIIPIFGEANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGASDGETGRLDLWGRGTLVTVSS
205
12562HCDR1
GTFSSYAIS
206
12562HCDR2
VIIPIFGEANYAQKFQG
207
12562 HCDR3
ARGASDGETGRLDL
208
12562 последовательность VL
DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSNNKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQSYSLPFTFGGGTKVEIK
209
12562 LCDR1
KSSQSVLYSSNNKNYLA
210
12562 LCDR2
WASTRES
211
12562 LCDR3
QQSYSLPFT
212
12563 последовательность VH
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFGSYAISWVRQAPGQGLEWMGVIIPIFGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGASDGETGRLDLWGRGTLVTVSS
213
12563HCDR1
GTFGSYAIS
214
12563HCDR2
VIIPIFGTANYAQKFQG
215
12563 HCDR3
ARGASDGETGRLDL
216
12563 последовательность VL
DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSNNKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQSYSLPFTFGGGTKVEIK
217
12563 LCDR1
KSSQSVLYSSNNKNYLA
218
12563 LCDR2
WASTRES
219
12563 LCDR3
QQSYSLPFT
220
12564 последовательность VH
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSQYAISWVRQAPGQGLEWMGVIIPSFGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGASDGETGRLDLWGRGTLVTVSS
221
12564HCDR1
GTFSQYAIS
222
12564HCDR2
VIIPSFGTANYAQKFQG
223
12564 HCDR3
ARGASDGETGRLDL
224
12564 последовательность VL
DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSNNKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQSYSLPFTFGGGTKVEIK
225
12564 LCDR1
KSSQSVLYSSNNKNYLA
226
12564 LCDR2
WASTRES
227
12564 LCDR3
QQSYSLPFT
228
12565 последовательность VH
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFGEYAISWVRQAPGQGLEWMGLIIPIFGTAQYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGASDGETGRLDLWGRGTLVTVSS
229
12565HCDR1
GTFGEYAIS
230
12565HCDR2
LIIPIFGTAQYAQKFQG
231
12565 HCDR3
ARGASDGETGRLDL
232
12565 последовательность VL
DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSNNKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQSYSLPFTFGGGTKVEIK
233
12565 LCDR1
KSSQSVLYSSNNKNYLA
234
12565 LCDR2
WASTRES
235
12565 LCDR3
QQSYSLPFT
236
12571 последовательность VH
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFGSSAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPLFGTAAYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDGPGYSSSWYLDVWGQGTMVTVSS
237
12571HCDR1
GTFGSSAIS
238
12571HCDR2
GIIPLFGTAAYAQKFQG
239
12571 HCDR3
ARDGPGYSSSWYLDV
240
12571 последовательность VL
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQGYALPITFGGGTKVEIK
241
12571 LCDR1
RASQSVSSYLA
242
12571 LCDR2
DASNRAT
243
12571 LCDR3
QQGYALPIT
244
12572 последовательность VH
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSEYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGTAVYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDGPGYSSSWYLDVWGQGTMVTVSS
245
12572HCDR1
GTFSEYAIS
246
12572HCDR2
GIIPIFGTAVYAQKFQG
247
12572 HCDR3
ARDGPGYSSSWYLDV
248
12572 последовательность VL
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQGYALPITFGGGTKVEIK
249
12572 LCDR1
RASQSVSSYLA
250
12572 LCDR2
DASNRAT
251
12572 LCDR3
QQGYALPIT
252
12576 последовательность VH
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGTAVYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDGPGYSSSWYLDVWGQGTMVTVSS
253
12576HCDR1
GTFSSYAIS
254
12576HCDR2
GIIPIFGTAVYAQKFQG
255
12576 HCDR3
ARDGPGYSSSWYLDV
256
12576 последовательность VL
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQGYALPITFGGGTKVEIK
257
12576 LCDR1
RASQSVSSYLA
258
12576 LCDR2
DASNRAT
259
12576 LCDR3
QQGYALPIT
260
12583 последовательность VH
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSSVISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGTATYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDGPGYSSSWYLDVWGQGTMVTVSS
261
12583HCDR1
GTFSSSVIS
262
12583HCDR2
GIIPIFGTATYAQKFQG
263
12583 HCDR3
ARDGPGYSSSWYLDV
264
12583 последовательность VL
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQGYALPITFGGGTKVEIK
265
12583 LCDR1
RASQSVSSYLA
266
12583 LCDR2
DASNRAT
267
12583 LCDR3
QQGYALPIT
268
12584 последовательность VH
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGGTFDSYVISWVRQAPGQGLEWMGGIIPGFGVANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDGPGYSSSWYLDVWGQGTMVTVSS
269
12584HCDR1
GTFDSYVIS
270
12584HCDR2
GIIPGFGVANYAQKFQG
271
12584 HCDR3
ARDGPGYSSSWYLDV
272
12584 последовательность VL
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQGYALPITFGGGTKVEIK
273
12584 LCDR1
RASQSVSSYLA
274
12584 LCDR2
DASNRAT
275
12584 LCDR3
QQGYALPIT
276
11613 последовательность VH
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVYYGMPYWGQGTLVTVSS
277
11613HCDR1
FTFSSYAMS
278
11613HCDR2
AISGSGGSTYYADSVKG
279
11613 HCDR3
AKVYYGMPY
280
11613 последовательность VL
DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGIDSWLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQASDVPWTFGGGTKVEIK
281
11613 LCDR1
RASQGIDSWLA
282
11613 LCDR2
AASSLQS
283
11613 LCDR3
QQASDVPWT
284
11645 последовательность VH
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGTASYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDGPGYSSSWYLDVWGQGTMVTVSS
285
11645HCDR1
GTFSSYAIS
286
11645HCDR2
GIIPIFGTASYAQKFQG
287
11645 HCDR3
ARDGPGYSSSWYLDV
288
11645 последовательность VL
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQGYALPITFGGGTKVEIK
289
11645 LCDR1
RASQSVSSYLA
290
11645 LCDR2
DASNRAT
291
11645 LCDR3
QQGYALPIT
292
11606 последовательность VH
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYMHWVRQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARAGGYSYSWGGSNIWGQGTMVTVSS
293
11606HCDR1
YTFTSYYMH
294
11606HCDR2
IINPSGGSTSYAQKFQG
295
11606 HCDR3
ARAGGYSYSWGGSNI
296
11606 последовательность VL
DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQDGSFPYTFGGGTKVEIK
297
11606 LCDR1
RASQSISSWLA
298
11606 LCDR2
KASSLES
299
11606 LCDR3
QQDGSFPYT
300
12220 последовательность VH
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYMHWVRQAPGQGLEWMGIINPGGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARDPRYTTLTGSYYYGMDVWGQGTTVTVSS
301
12220HCDR1
YTFTSYYMH
302
12220HCDR2
IINPGGGSTSYAQKFQG
303
12220 HCDR3
ARDPRYTTLTGSYYYGMDV
304
12220 последовательность VL
DIQLTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQDISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQAVNFPPITFGGGTKVEIK
305
12220 LCDR1
RASQDISSWLA
306
12220 LCDR2
AASSLQS
307
12220 LCDR3
QQAVNFPPIT
308
11624 последовательность VH
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYYMHWVRQAPGQGLEWMGWINPNSGGTKYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCAREASWLPGSLDVWGKGTTVTVSS
309
11624HCDR1
YTFTGYYMH
310
11624HCDR2
WINPNSGGTKYAQKFQG
311
11624 HCDR3
AREASWLPGSLDV
312
11624 последовательность VL
DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSNNKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYDNFPITFGGGTKVEIK
313
11624 LCDR1
KSSQSVLYSSNNKNYLA
314
11624 LCDR2
WASTRES
315
11624 LCDR3
QQYDNFPIT
316
12190 последовательность VH
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYMHWVRQAPGQGLEWMGIINPGGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARDPRYTTLTGSYYYGMDVWGQGTTVTVSS
317
12190HCDR1
YTFTSYYMH
318
12190HCDR2
IINPGGGSTSYAQKFQG
319
12190 HCDR3
ARDPRYTTLTGSYYYGMDV
320
12190 последовательность VL
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSANTPPWTFGGGTKVEIK
321
12190 LCDR1
RASQSISSYLN
322
12190 LCDR2
AASSLQS
323
12190 LCDR3
QQSANTPPWT
324
37A10 вариабельная область тяжелой цепи
E V Q L V E S G G G L V K P G G S L K L S C A A S G F T F S D Y W M D W V R Q A P G K G L E W V G N I D E D G S I T E Y S P F V K G R F T I S R D N V K N T L Y L Q M N S V K S E D T A T Y Y C T R W G R F G F D S W G Q G T L V T V S S
325
37A10 вариабельная область легкой цепи
D I V M T Q S P S S L A V S A G D R V T I N C K S S Q S L L S G S F N Y L T W Y Q Q K T G Q A P K L L I F Y A S T R H T G V P D R F M G S G S G T D F T L T I N S F Q T E D L G D Y Y C H H H Y N A P P T F G P G T K L E L R
326
37A10 VH CDR1
G F T F S D Y W M D
327
37A10 VH CDR2
N I D E D G S I T E Y S P F V K G
328
37A10 VH CDR3
W G R F G F D S
329
37A10 VL CDR1
K S S Q S L L S G S F N Y L T
330
37A10 VL CDR2
Y A S T R H T
331
37A10 VL CDR3
H H H Y N A P P T
332
37A10S713 вариабельная область тяжелой цепи
EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFS DYWMDWVRQA PGKGLVWVSN IDEDGSITEY SPFVKGRFTI SRDNAKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCTRWG RFGFDSWGQG TLVTVSS
333
37A10S713 вариабельная область легкой цепи
DIVMTQSPDS LAVSLGERAT INCKSSQSLL SGSFNYLTWY QQKPGQPPKL LIFYASTRHT GVPDRFSGSG SGTDFTLTIS SLQAEDVAVY YCHHHYNAPP TFGPGTKVDI K
334
37A10S713 VH CDR1
GFTFSDYWMD
335
37A10S713 VH CDR2
NIDEDGSITEYSPFVKG
336
37A10S713 VH CDR3
WGRFGFDS
337
37A10S713 VL CDR1
KSSQSLLSGSFNYLT
338
37A10S713 VL CDR2
YASTRHT
339
37A10S713 VL CDR3
HHHYNAPPT
340
37A10S714 вариабельная область тяжелой цепи
EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFS DYWMDWVRQA PGKGLVWVSN IDEDGSITEY SPFVKGRFTI SRDNAKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCTRWG RFGFDSWGQG TLVTVSS
341
37A10S714 вариабельная область легкой цепи
DIVMTQSPDS LAVSLGERAT INCKSSQSLL SGSFNYLTWY QQKPGQPPKL LIFYASTRET GVPDRFSGSG SGTDFTLTIS SLQAEDVAVY YCHHHYNAPP TFGPGTKVDI K
342
37A10S714 VH CDR1
GFTFSDYWMD
343
37A10S714 VH CDR2
NIDEDGSITEYSPFVKG
344
37A10S714 VH CDR3
WGRFGFDS
345
37A10S714 VL CDR1
KSSQSLLSGSFNYLT
346
37A10S714 VL CDR2
YASTRET
347
37A10S714 VL CDR3
HHHYNAPPT
348
37A10S715 вариабельная область тяжелой цепи
EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFS DYWMDWVRQA PGKGLVWVSN IDEDGSITEY SPFVKGRFTI SRDNAKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCTRWG RFGFDSWGQG TLVTVSS
349
37A10S715 вариабельная область легкой цепи
DIVMTQSPDS LAVSLGERAT INCKSSQSLL SGSFNYLTWY QQKPGQPPKL LIFYASTRQT GVPDRFSGSG SGTDFTLTIS SLQAEDVAVY YCHHHYNAPP TFGPGTKVDI K
350
37A10S715 VH CDR1
GFTFSDYWMD
351
37A10S715 VH CDR2
NIDEDGSITEYSPFVKG
352
37A10S715 VH CDR3
WGRFGFDS
353
37A10S715 VL CDR1
KSSQSLLSGSFNYLT
354
37A10S715 VL CDR2
YASTRQT
355
37A10S715 VL CDR3
HHHYNAPPT
356
37A10S716 вариабельная область тяжелой цепи
EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFS DYWMDWVRQA PGKGLVWVSN IDESGSITEY SPFVKGRFTI SRDNAKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCTRWG RFGFDSWGQG TLVTVSS
357
37A10S716 вариабельная область легкой цепи
DIVMTQSPDS LAVSLGERAT INCKSSQSLL SGSFNYLTWY QQKPGQPPKL LIFYASTRHT GVPDRFSGSG SGTDFTLTIS SLQAEDVAVY YCHHHYNAPP TFGPGTKVDI K
358
37A10S716 VH CDR1
GFTFSDYWMD
359
37A10S716 VH CDR2
NIDESGSITEYSPFVKG
360
37A10S716 VH CDR3
WGRFGFDS
361
37A10S716 VL CDR1
KSSQSLLSGSFNYLT
362
37A10S716 VL CDR2
YASTRHT
363
37A10S716 VL CDR3
HHHYNAPPT
364
37A10S717 вариабельная область тяжелой цепи
EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFS DYWMDWVRQA PGKGLVWVSN IDESGSITEY SPFVKGRFTI SRDNAKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCTRWG RFGFDSWGQG TLVTVSS
365
37A10S717 вариабельная область легкой цепи
DIVMTQSPDS LAVSLGERAT INCKSSQSLL SGSFNYLTWY QQKPGQPPKL LIFYASTRET GVPDRFSGSG SGTDFTLTIS SLQAEDVAVY YCHHHYNAPP TFGPGTKVDI K
366
37A10S717 VH CDR1
GFTFSDYWMD
367
37A10S717 VH CDR2
NIDESGSITEYSPFVKG
368
37A10S717 VH CDR3
WGRFGFDS
369
37A10S717 VL CDR1
KSSQSLLSGSFNYLT
370
37A10S717 VL CDR2
YASTRET
371
37A10S717 VL CDR3
HHHYNAPPT
372
37A10S718 вариабельная область тяжелой цепи
EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFS DYWMDWVRQA PGKGLVWVSN IDESGSITEY SPFVKGRFTI SRDNAKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCTRWG RFGFDSWGQG TLVTVSS
373
37A10S718 вариабельная область легкой цепи
DIVMTQSPDS LAVSLGERAT INCKSSQSLL SGSFNYLTWY QQKPGQPPKL LIFYASTRQT GVPDRFSGSG SGTDFTLTIS SLQAEDVAVY YCHHHYNAPP TFGPGTKVDI K
374
37A10S718 VH CDR1
GFTFSDYWMD
375
37A10S718 VH CDR2
NIDESGSITEYSPFVKG
376
37A10S718 VH CDR3
WGRFGFDS
377
37A10S718 VL CDR1
KSSQSLLSGSFNYLT
378
37A10S718 VL CDR2
YASTRQT
379
37A10S718 VL CDR3
HHHYNAPPT
380
37A10S713 тяжелая цепь IgG1 человека
EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFS DYWMDWVRQA PGKGLVWVSN IDEDGSITEY SPFVKGRFTI SRDNAKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCTRWG RFGFDSWGQG TLVTVSSAST KGPSVFPLAP SSKSTSGGTA ALGCLVKDYF PEPVTVSWNS GALTSGVHTF PAVLQSSGLY SLSSVVTVPS SSLGTQTYIC NVNHKPSNTK VDKKVEPKSC DKTHTCPPCP APELLGGPSV FLFPPKPKDT LMISRTPEVT CVVVDVSHED PEVKFNWYVD GVEVHNAKTK PREEQYNSTY RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKALPA PIEKTISKAK GQPREPQVYT LPPSREEMTK NQVSLTCLVK GFYPSDIAVE WESNGQPENN YKTTPPVLDS DGSFFLYSKL TVDKSRWQQG NVFSCSVMHE ALHNHYTQKS LSLSPGK
381
37A10S713 легкая цепь κ человека
DIVMTQSPDS LAVSLGERAT INCKSSQSLL SGSFNYLTWY QQKPGQPPKL LIFYASTRHT GVPDRFSGSG SGTDFTLTIS SLQAEDVAVY YCHHHYNAPP TFGPGTKVDI KRTVAAPSVF IFPPSDEQLK SGTASVVCLL NNFYPREAKV QWKVDNALQS GNSQESVTEQ DSKDSTYSLS STLTLSKADY EKHKVYACEV THQGLSSPVT KSFNRGEC
--->
ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
<110>  JOUNCE THERAPEUTICS, INC.
<120>  АНТИТЕЛА К PD-1 И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ
<130>  01140-0006-00PCT
<150>  США 62/416 602
<151>  02.11.2016
<160>  406
<170>  PatentIn версия 3.5
<210>  1
<211>  288
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  1
Met Gln Ile Pro Gln Ala Pro Trp Pro Val Val Trp Ala Val Leu Gln
1               5                   10                  15
Leu Gly Trp Arg Pro Gly Trp Phe Leu Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp
20                  25                  30
Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu Leu Val Val Thr Glu Gly Asp
35                  40                  45
Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val
50                  55                  60
Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala
65                  70                  75                  80
Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg
85                  90                  95
Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp Phe His Met Ser Val Val Arg
100                 105                 110
Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu
115                 120                 125
Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val
130                 135                 140
Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr Ala His Pro Ser Pro Ser Pro
145                 150                 155                 160
Arg Pro Ala Gly Gln Phe Gln Thr Leu Val Val Gly Val Val Gly Gly
165                 170                 175
Leu Leu Gly Ser Leu Val Leu Leu Val Trp Val Leu Ala Val Ile Cys
180                 185                 190
Ser Arg Ala Ala Arg Gly Thr Ile Gly Ala Arg Arg Thr Gly Gln Pro
195                 200                 205
Leu Lys Glu Asp Pro Ser Ala Val Pro Val Phe Ser Val Asp Tyr Gly
210                 215                 220
Glu Leu Asp Phe Gln Trp Arg Glu Lys Thr Pro Glu Pro Pro Val Pro
225                 230                 235                 240
Cys Val Pro Glu Gln Thr Glu Tyr Ala Thr Ile Val Phe Pro Ser Gly
245                 250                 255
Met Gly Thr Ser Ser Pro Ala Arg Arg Gly Ser Ala Asp Gly Pro Arg
260                 265                 270
Ser Ala Gln Pro Leu Arg Pro Glu Asp Gly His Cys Ser Trp Pro Leu
275                 280                 285
<210>  2
<211>  288
<212>  Белок
<213>  Mus musculus
<400>  2
Met Trp Val Arg Gln Val Pro Trp Ser Phe Thr Trp Ala Val Leu Gln
1               5                   10                  15
Leu Ser Trp Gln Ser Gly Trp Leu Leu Glu Val Pro Asn Gly Pro Trp
20                  25                  30
Arg Ser Leu Thr Phe Tyr Pro Ala Trp Leu Thr Val Ser Glu Gly Ala
35                  40                  45
Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Leu Ser Asn Trp Ser Glu Asp Leu Met
50                  55                  60
Leu Asn Trp Asn Arg Leu Ser Pro Ser Asn Gln Thr Glu Lys Gln Ala
65                  70                  75                  80
Ala Phe Cys Asn Gly Leu Ser Gln Pro Val Gln Asp Ala Arg Phe Gln
85                  90                  95
Ile Ile Gln Leu Pro Asn Arg His Asp Phe His Met Asn Ile Leu Asp
100                 105                 110
Thr Arg Arg Asn Asp Ser Gly Ile Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu
115                 120                 125
His Pro Lys Ala Lys Ile Glu Glu Ser Pro Gly Ala Glu Leu Val Val
130                 135                 140
Thr Glu Arg Ile Leu Glu Thr Ser Thr Arg Tyr Pro Ser Pro Ser Pro
145                 150                 155                 160
Lys Pro Glu Gly Arg Phe Gln Gly Met Val Ile Gly Ile Met Ser Ala
165                 170                 175
Leu Val Gly Ile Pro Val Leu Leu Leu Leu Ala Trp Ala Leu Ala Val
180                 185                 190
Phe Cys Ser Thr Ser Met Ser Glu Ala Arg Gly Ala Gly Ser Lys Asp
195                 200                 205
Asp Thr Leu Lys Glu Glu Pro Ser Ala Ala Pro Val Pro Ser Val Ala
210                 215                 220
Tyr Glu Glu Leu Asp Phe Gln Gly Arg Glu Lys Thr Pro Glu Leu Pro
225                 230                 235                 240
Thr Ala Cys Val His Thr Glu Tyr Ala Thr Ile Val Phe Thr Glu Gly
245                 250                 255
Leu Gly Ala Ser Ala Met Gly Arg Arg Gly Ser Ala Asp Gly Leu Gln
260                 265                 270
Gly Pro Arg Pro Pro Arg His Glu Asp Gly His Cys Ser Trp Pro Leu
275                 280                 285
<210>  3
<211>  288
<212>  Белок
<213>  Macaca fascicularis
<400>  3
Met Gln Ile Pro Gln Ala Pro Trp Pro Val Val Trp Ala Val Leu Gln
1               5                   10                  15
Leu Gly Trp Arg Pro Gly Trp Phe Leu Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp
20                  25                  30
Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu Leu Val Val Thr Glu Gly Asp
35                  40                  45
Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val
50                  55                  60
Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala
65                  70                  75                  80
Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg
85                  90                  95
Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp Phe His Met Ser Val Val Arg
100                 105                 110
Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu
115                 120                 125
Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val
130                 135                 140
Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr Ala His Pro Ser Pro Ser Pro
145                 150                 155                 160
Arg Pro Ala Gly Gln Phe Gln Thr Leu Val Val Gly Val Val Gly Gly
165                 170                 175
Leu Leu Gly Ser Leu Val Leu Leu Val Trp Val Leu Ala Val Ile Cys
180                 185                 190
Ser Arg Ala Ala Arg Gly Thr Ile Gly Ala Arg Arg Thr Gly Gln Pro
195                 200                 205
Leu Lys Glu Asp Pro Ser Ala Val Pro Val Phe Ser Val Asp Tyr Gly
210                 215                 220
Glu Leu Asp Phe Gln Trp Arg Glu Lys Thr Pro Glu Pro Pro Val Pro
225                 230                 235                 240
Cys Val Pro Glu Gln Thr Glu Tyr Ala Thr Ile Val Phe Pro Ser Gly
245                 250                 255
Met Gly Thr Ser Ser Pro Ala Arg Arg Gly Ser Ala Asp Gly Pro Arg
260                 265                 270
Ser Ala Gln Pro Leu Arg Pro Glu Asp Gly His Cys Ser Trp Pro Leu
275                 280                 285
<210>  4
<211>  118
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  4
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20                  25                  30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35                  40                  45
Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe
50                  55                  60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Gly Gly Thr Tyr Tyr Asp Tyr Thr Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100                 105                 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210>  5
<211>  9
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  5
Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Tyr Met His
1               5
<210>  6
<211>  17
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  6
Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1               5                   10                  15
Gly
<210>  7
<211>  11
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  7
Ala Arg Gly Gly Thr Tyr Tyr Asp Tyr Thr Tyr
1               5                   10
<210>  8
<211>  107
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  8
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Glu Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Phe Pro Pro
85                  90                  95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210>  9
<211>  11
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  9
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp Leu Ala
1               5                   10
<210>  10
<211>  7
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  10
Glu Ala Ser Ser Leu Glu Ser
1               5
<210>  11
<211>  9
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  11
Gln Gln Tyr Asn Ser Phe Pro Pro Thr
1               5
<210>  12
<211>  118
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  12
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Asp Gln Tyr
20                  25                  30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35                  40                  45
Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ala Tyr Ala Gln Lys Phe
50                  55                  60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Gly Gly Thr Tyr Tyr Asp Tyr Thr Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100                 105                 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210>  13
<211>  9
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  13
Tyr Thr Phe Asp Gln Tyr Tyr Met His
1               5
<210>  14
<211>  17
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  14
Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ala Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1               5                   10                  15
Gly
<210>  15
<211>  11
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  15
Ala Arg Gly Gly Thr Tyr Tyr Asp Tyr Thr Tyr
1               5                   10
<210>  16
<211>  107
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  16
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Glu Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Phe Pro Pro
85                  90                  95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210>  17
<211>  11
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  17
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp Leu Ala
1               5                   10
<210>  18
<211>  7
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  18
Glu Ala Ser Ser Leu Glu Ser
1               5
<210>  19
<211>  9
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  19
Gln Gln Tyr Asn Ser Phe Pro Pro Thr
1               5
<210>  20
<211>  118
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  20
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Pro Ser Tyr
20                  25                  30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35                  40                  45
Gly Ile Ile Asn Pro Glu Gly Gly Ser Thr Ala Tyr Ala Gln Lys Phe
50                  55                  60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Gly Gly Thr Tyr Tyr Asp Tyr Thr Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100                 105                 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210>  21
<211>  9
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  21
Tyr Thr Phe Pro Ser Tyr Tyr Met His
1               5
<210>  22
<211>  17
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  22
Ile Ile Asn Pro Glu Gly Gly Ser Thr Ala Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1               5                   10                  15
Gly
<210>  23
<211>  11
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  23
Ala Arg Gly Gly Thr Tyr Tyr Asp Tyr Thr Tyr
1               5                   10
<210>  24
<211>  107
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  24
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Glu Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Phe Pro Pro
85                  90                  95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210>  25
<211>  11
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  25
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp Leu Ala
1               5                   10
<210>  26
<211>  7
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  26
Glu Ala Ser Ser Leu Glu Ser
1               5
<210>  27
<211>  9
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  27
Gln Gln Tyr Asn Ser Phe Pro Pro Thr
1               5
<210>  28
<211>  118
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  28
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Asp Tyr
20                  25                  30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35                  40                  45
Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Val Thr Ala Tyr Ala Gln Lys Phe
50                  55                  60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Gly Gly Thr Tyr Tyr Asp Tyr Thr Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100                 105                 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210>  29
<211>  9
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  29
Tyr Thr Phe Ser Asp Tyr Tyr Met His
1               5
<210>  30
<211>  17
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  30
Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Val Thr Ala Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1               5                   10                  15
Gly
<210>  31
<211>  11
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  31
Ala Arg Gly Gly Thr Tyr Tyr Asp Tyr Thr Tyr
1               5                   10
<210>  32
<211>  107
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  32
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Glu Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Phe Pro Pro
85                  90                  95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210>  33
<211>  11
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  33
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp Leu Ala
1               5                   10
<210>  34
<211>  7
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  34
Glu Ala Ser Ser Leu Glu Ser
1               5
<210>  35
<211>  9
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  35
Gln Gln Tyr Asn Ser Phe Pro Pro Thr
1               5
<210>  36
<211>  118
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  36
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Glu Ser Tyr
20                  25                  30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35                  40                  45
Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Val Thr Ala Tyr Ala Gln Lys Phe
50                  55                  60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Gly Gly Thr Tyr Tyr Asp Tyr Thr Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100                 105                 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210>  37
<211>  9
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  37
Tyr Thr Phe Glu Ser Tyr Tyr Met His
1               5
<210>  38
<211>  17
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  38
Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Val Thr Ala Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1               5                   10                  15
Gly
<210>  39
<211>  11
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  39
Ala Arg Gly Gly Thr Tyr Tyr Asp Tyr Thr Tyr
1               5                   10
<210>  40
<211>  107
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  40
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Glu Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Phe Pro Pro
85                  90                  95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210>  41
<211>  11
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  41
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp Leu Ala
1               5                   10
<210>  42
<211>  7
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  42
Glu Ala Ser Ser Leu Glu Ser
1               5
<210>  43
<211>  9
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  43
Gln Gln Tyr Asn Ser Phe Pro Pro Thr
1               5
<210>  44
<211>  119
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  44
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20                  25                  30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35                  40                  45
Gly Ile Ile Asn Pro Asp Ala Gly Ser Thr Ala Tyr Ala Gln Lys Phe
50                  55                  60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Asp Gln Gly His Tyr Tyr Gly Met Gly Val Trp Gly Gln Gly
100                 105                 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210>  45
<211>  9
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  45
Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Tyr Met His
1               5
<210>  46
<211>  17
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  46
Ile Ile Asn Pro Asp Ala Gly Ser Thr Ala Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1               5                   10                  15
Gly
<210>  47
<211>  12
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  47
Ala Arg Asp Gln Gly His Tyr Tyr Gly Met Gly Val
1               5                   10
<210>  48
<211>  107
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  48
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Glu Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Asn Ser Tyr Pro Pro
85                  90                  95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210>  49
<211>  11
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  49
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp Leu Ala
1               5                   10
<210>  50
<211>  7
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  50
Glu Ala Ser Ser Leu Glu Ser
1               5
<210>  51
<211>  9
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  51
Gln Gln His Asn Ser Tyr Pro Pro Thr
1               5
<210>  52
<211>  119
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  52
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Gly Glu Tyr
20                  25                  30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35                  40                  45
Gly Ile Ile Asn Pro Ser Glu Gly Ser Thr Gly Tyr Ala Gln Lys Phe
50                  55                  60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Asp Gln Gly His Tyr Tyr Gly Met Gly Val Trp Gly Gln Gly
100                 105                 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210>  53
<211>  9
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  53
Tyr Thr Phe Gly Glu Tyr Tyr Met His
1               5
<210>  54
<211>  17
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  54
Ile Ile Asn Pro Ser Glu Gly Ser Thr Gly Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1               5                   10                  15
Gly
<210>  55
<211>  12
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  55
Ala Arg Asp Gln Gly His Tyr Tyr Gly Met Gly Val
1               5                   10
<210>  56
<211>  107
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  56
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Glu Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Asn Ser Tyr Pro Pro
85                  90                  95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210>  57
<211>  11
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  57
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp Leu Ala
1               5                   10
<210>  58
<211>  7
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  58
Glu Ala Ser Ser Leu Glu Ser
1               5
<210>  59
<211>  9
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  59
Gln Gln His Asn Ser Tyr Pro Pro Thr
1               5
<210>  60
<211>  119
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  60
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Asp Tyr
20                  25                  30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35                  40                  45
Gly Ile Ile Asn Pro Ser Ala Gly Ser Thr Gly Tyr Ala Gln Lys Phe
50                  55                  60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Asp Gln Gly His Tyr Tyr Gly Met Gly Val Trp Gly Gln Gly
100                 105                 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210>  61
<211>  9
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  61
Tyr Thr Phe Ser Asp Tyr Tyr Met His
1               5
<210>  62
<211>  17
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  62
Ile Ile Asn Pro Ser Ala Gly Ser Thr Gly Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1               5                   10                  15
Gly
<210>  63
<211>  12
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  63
Ala Arg Asp Gln Gly His Tyr Tyr Gly Met Gly Val
1               5                   10
<210>  64
<211>  107
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  64
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Glu Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Asn Ser Tyr Pro Pro
85                  90                  95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210>  65
<211>  11
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  65
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp Leu Ala
1               5                   10
<210>  66
<211>  7
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  66
Glu Ala Ser Ser Leu Glu Ser
1               5
<210>  67
<211>  9
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  67
Gln Gln His Asn Ser Tyr Pro Pro Thr
1               5
<210>  68
<211>  116
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  68
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Asn Ser Tyr
20                  25                  30
Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35                  40                  45
Gly Ile Ile Asp Pro Ser Lys Gly Ser Thr Ala Tyr Ala Gln Lys Phe
50                  55                  60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg His Glu Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val
100                 105                 110
Thr Val Ser Ser
115
<210>  69
<211>  9
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  69
Tyr Thr Phe Asn Ser Tyr Tyr Met Ser
1               5
<210>  70
<211>  17
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  70
Ile Ile Asp Pro Ser Lys Gly Ser Thr Ala Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1               5                   10                  15
Gly
<210>  71
<211>  9
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  71
Ala Arg His Glu Tyr Gly Met Asp Val
1               5
<210>  72
<211>  107
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  72
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Glu Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Phe Pro Pro
85                  90                  95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210>  73
<211>  11
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  73
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp Leu Ala
1               5                   10
<210>  74
<211>  7
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  74
Glu Ala Ser Ser Leu Glu Ser
1               5
<210>  75
<211>  9
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  75
Gln Gln Tyr Asn Ser Phe Pro Pro Thr
1               5
<210>  76
<211>  116
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  76
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr His Tyr
20                  25                  30
Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35                  40                  45
Gly Met Ile Asn Pro Glu Gly Gly Ser Thr Ala Tyr Ala Gln Lys Phe
50                  55                  60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg His Glu Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val
100                 105                 110
Thr Val Ser Ser
115
<210>  77
<211>  9
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  77
Tyr Thr Phe Thr His Tyr Tyr Met Ser
1               5
<210>  78
<211>  17
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  78
Met Ile Asn Pro Glu Gly Gly Ser Thr Ala Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1               5                   10                  15
Gly
<210>  79
<211>  9
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  79
Ala Arg His Glu Tyr Gly Met Asp Val
1               5
<210>  80
<211>  107
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  80
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Glu Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Phe Pro Pro
85                  90                  95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210>  81
<211>  11
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  81
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp Leu Ala
1               5                   10
<210>  82
<211>  7
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  82
Glu Ala Ser Ser Leu Glu Ser
1               5
<210>  83
<211>  9
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  83
Gln Gln Tyr Asn Ser Phe Pro Pro Thr
1               5
<210>  84
<211>  116
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  84
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Asp Ser Tyr
20                  25                  30
Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35                  40                  45
Gly Met Ile Asn Pro Ser Val Gly Ser Thr Ala Tyr Ala Gln Lys Phe
50                  55                  60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg His Glu Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val
100                 105                 110
Thr Val Ser Ser
115
<210>  85
<211>  9
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  85
Tyr Thr Phe Asp Ser Tyr Tyr Met Ser
1               5
<210>  86
<211>  17
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  86
Met Ile Asn Pro Ser Val Gly Ser Thr Ala Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1               5                   10                  15
Gly
<210>  87
<211>  9
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  87
Ala Arg His Glu Tyr Gly Met Asp Val
1               5
<210>  88
<211>  107
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  88
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Glu Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Phe Pro Pro
85                  90                  95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210>  89
<211>  11
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  89
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp Leu Ala
1               5                   10
<210>  90
<211>  7
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  90
Glu Ala Ser Ser Leu Glu Ser
1               5
<210>  91
<211>  9
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  91
Gln Gln Tyr Asn Ser Phe Pro Pro Thr
1               5
<210>  92
<211>  116
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  92
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ala Ser Tyr
20                  25                  30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35                  40                  45
Gly Ile Ile Phe Pro Gly Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe
50                  55                  60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg His Glu Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val
100                 105                 110
Thr Val Ser Ser
115
<210>  93
<211>  9
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  93
Tyr Thr Phe Ala Ser Tyr Ala Met Ser
1               5
<210>  94
<211>  17
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  94
Ile Ile Phe Pro Gly Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1               5                   10                  15
Gly
<210>  95
<211>  9
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  95
Ala Arg His Glu Tyr Gly Met Asp Val
1               5
<210>  96
<211>  107
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  96
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Glu Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Phe Pro Pro
85                  90                  95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210>  97
<211>  11
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  97
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp Leu Ala
1               5                   10
<210>  98
<211>  7
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  98
Glu Ala Ser Ser Leu Glu Ser
1               5
<210>  99
<211>  9
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  99
Gln Gln Tyr Asn Ser Phe Pro Pro Thr
1               5
<210>  100
<211>  116
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  100
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ala Ser Tyr
20                  25                  30
Tyr Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35                  40                  45
Gly Ile Ile Asn Pro Ala Gly Gly Ser Thr Ala Tyr Ala Gln Lys Phe
50                  55                  60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg His Glu Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val
100                 105                 110
Thr Val Ser Ser
115
<210>  101
<211>  9
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  101
Tyr Thr Phe Ala Ser Tyr Tyr Met Gly
1               5
<210>  102
<211>  17
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  102
Ile Ile Asn Pro Ala Gly Gly Ser Thr Ala Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1               5                   10                  15
Gly
<210>  103
<211>  9
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  103
Ala Arg His Glu Tyr Gly Met Asp Val
1               5
<210>  104
<211>  107
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  104
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Glu Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Phe Pro Pro
85                  90                  95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210>  105
<211>  11
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  105
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp Leu Ala
1               5                   10
<210>  106
<211>  7
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  106
Glu Ala Ser Ser Leu Glu Ser
1               5
<210>  107
<211>  9
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  107
Gln Gln Tyr Asn Ser Phe Pro Pro Thr
1               5
<210>  108
<211>  119
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  108
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20                  25                  30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35                  40                  45
Gly Ile Ile Asn Pro Gly Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe
50                  55                  60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Asp Gln Gly His Tyr Tyr Gly Met Gly Val Trp Gly Gln Gly
100                 105                 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210>  109
<211>  9
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  109
Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Tyr Met His
1               5
<210>  110
<211>  17
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  110
Ile Ile Asn Pro Gly Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1               5                   10                  15
Gly
<210>  111
<211>  12
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  111
Ala Arg Asp Gln Gly His Tyr Tyr Gly Met Gly Val
1               5                   10
<210>  112
<211>  107
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  112
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Glu Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Asn Ser Tyr Pro Pro
85                  90                  95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210>  113
<211>  11
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  113
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp Leu Ala
1               5                   10
<210>  114
<211>  7
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  114
Glu Ala Ser Ser Leu Glu Ser
1               5
<210>  115
<211>  9
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  115
Gln Gln His Asn Ser Tyr Pro Pro Thr
1               5
<210>  116
<211>  116
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  116
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20                  25                  30
Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35                  40                  45
Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe
50                  55                  60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg His Glu Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val
100                 105                 110
Thr Val Ser Ser
115
<210>  117
<211>  9
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  117
Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Tyr Met Ser
1               5
<210>  118
<211>  17
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  118
Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1               5                   10                  15
Gly
<210>  119
<211>  9
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  119
Ala Arg His Glu Tyr Gly Met Asp Val
1               5
<210>  120
<211>  107
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  120
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Glu Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Phe Pro Pro
85                  90                  95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210>  121
<211>  11
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  121
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp Leu Ala
1               5                   10
<210>  122
<211>  7
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  122
Glu Ala Ser Ser Leu Glu Ser
1               5
<210>  123
<211>  9
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  123
Gln Gln Tyr Asn Ser Phe Pro Pro Thr
1               5
<210>  124
<211>  116
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  124
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser His Tyr
20                  25                  30
Leu Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Lys Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Lys Val Tyr Tyr Gly Met Pro Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100                 105                 110
Thr Val Ser Ser
115
<210>  125
<211>  9
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  125
Phe Thr Phe Ser His Tyr Leu Met Ser
1               5
<210>  126
<211>  17
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  126
Ala Ile Ser Gly Ser Gly Lys Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1               5                   10                  15
Gly
<210>  127
<211>  9
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  127
Ala Lys Val Tyr Tyr Gly Met Pro Tyr
1               5
<210>  128
<211>  107
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  128
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Asp Ser Trp
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Ser Asp Val Pro Trp
85                  90                  95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210>  129
<211>  11
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  129
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Asp Ser Trp Leu Ala
1               5                   10
<210>  130
<211>  7
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  130
Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser
1               5
<210>  131
<211>  9
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  131
Gln Gln Ala Ser Asp Val Pro Trp Thr
1               5
<210>  132
<211>  116
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  132
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Gln Tyr
20                  25                  30
Leu Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ser Ala Ile Gly Gly Ser Gly Ala Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Lys Val Tyr Tyr Gly Met Pro Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100                 105                 110
Thr Val Ser Ser
115
<210>  133
<211>  9
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  133
Phe Thr Phe Ser Gln Tyr Leu Met Ser
1               5
<210>  134
<211>  17
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  134
Ala Ile Gly Gly Ser Gly Ala Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1               5                   10                  15
Gly
<210>  135
<211>  9
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  135
Ala Lys Val Tyr Tyr Gly Met Pro Tyr
1               5
<210>  136
<211>  107
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  136
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Asp Ser Trp
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Ser Asp Val Pro Trp
85                  90                  95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210>  137
<211>  11
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  137
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Asp Ser Trp Leu Ala
1               5                   10
<210>  138
<211>  7
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  138
Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser
1               5
<210>  139
<211>  9
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  139
Gln Gln Ala Ser Asp Val Pro Trp Thr
1               5
<210>  140
<211>  116
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  140
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Ser Tyr
20                  25                  30
Met Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Arg Asp Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Lys Val Tyr Tyr Gly Met Pro Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100                 105                 110
Thr Val Ser Ser
115
<210>  141
<211>  9
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  141
Phe Thr Phe Arg Ser Tyr Met Met Ser
1               5
<210>  142
<211>  17
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  142
Ala Ile Ser Gly Ser Gly Arg Asp Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1               5                   10                  15
Gly
<210>  143
<211>  9
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  143
Ala Lys Val Tyr Tyr Gly Met Pro Tyr
1               5
<210>  144
<211>  107
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  144
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Asp Ser Trp
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Ser Asp Val Pro Trp
85                  90                  95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210>  145
<211>  11
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  145
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Asp Ser Trp Leu Ala
1               5                   10
<210>  146
<211>  7
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  146
Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser
1               5
<210>  147
<211>  9
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  147
Gln Gln Ala Ser Asp Val Pro Trp Thr
1               5
<210>  148
<211>  116
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  148
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Gln Tyr
20                  25                  30
Met Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ser Gly Ile Ser Gly Ser Gly Gly Glu Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Lys Val Tyr Tyr Gly Met Pro Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100                 105                 110
Thr Val Ser Ser
115
<210>  149
<211>  9
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  149
Phe Thr Phe Ser Gln Tyr Met Met Ser
1               5
<210>  150
<211>  17
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  150
Gly Ile Ser Gly Ser Gly Gly Glu Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1               5                   10                  15
Gly
<210>  151
<211>  9
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  151
Ala Lys Val Tyr Tyr Gly Met Pro Tyr
1               5
<210>  152
<211>  107
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  152
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Asp Ser Trp
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Ser Asp Val Pro Trp
85                  90                  95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210>  153
<211>  11
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  153
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Asp Ser Trp Leu Ala
1               5                   10
<210>  154
<211>  7
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  154
Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser
1               5
<210>  155
<211>  9
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  155
Gln Gln Ala Ser Asp Val Pro Trp Thr
1               5
<210>  156
<211>  116
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  156
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20                  25                  30
Leu Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Ser Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Lys Val Tyr Tyr Gly Met Pro Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100                 105                 110
Thr Val Ser Ser
115
<210>  157
<211>  9
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  157
Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Leu Met Ser
1               5
<210>  158
<211>  17
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  158
Ala Ile Ser Gly Ser Gly Ser Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1               5                   10                  15
Gly
<210>  159
<211>  9
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  159
Ala Lys Val Tyr Tyr Gly Met Pro Tyr
1               5
<210>  160
<211>  107
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  160
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Asp Ser Trp
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Ser Asp Val Pro Trp
85                  90                  95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210>  161
<211>  11
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  161
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Asp Ser Trp Leu Ala
1               5                   10
<210>  162
<211>  7
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  162
Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser
1               5
<210>  163
<211>  9
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  163
Gln Gln Ala Ser Asp Val Pro Trp Thr
1               5
<210>  164
<211>  116
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  164
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser His Tyr
20                  25                  30
Leu Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Gln Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Lys Val Tyr Tyr Gly Met Pro Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100                 105                 110
Thr Val Ser Ser
115
<210>  165
<211>  9
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  165
Phe Thr Phe Ser His Tyr Leu Met Ser
1               5
<210>  166
<211>  17
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  166
Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Gln Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1               5                   10                  15
Gly
<210>  167
<211>  9
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  167
Ala Lys Val Tyr Tyr Gly Met Pro Tyr
1               5
<210>  168
<211>  107
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  168
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Asp Ser Trp
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Ser Asp Val Pro Trp
85                  90                  95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210>  169
<211>  11
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  169
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Asp Ser Trp Leu Ala
1               5                   10
<210>  170
<211>  7
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  170
Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser
1               5
<210>  171
<211>  9
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  171
Gln Gln Ala Ser Asp Val Pro Trp Thr
1               5
<210>  172
<211>  116
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  172
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Gln Tyr
20                  25                  30
Ser Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ser Ala Ile Ser Gly Gly Gly Gly Gln Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Lys Val Tyr Tyr Gly Met Pro Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100                 105                 110
Thr Val Ser Ser
115
<210>  173
<211>  9
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  173
Phe Thr Phe Ser Gln Tyr Ser Met Ser
1               5
<210>  174
<211>  17
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  174
Ala Ile Ser Gly Gly Gly Gly Gln Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1               5                   10                  15
Gly
<210>  175
<211>  9
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  175
Ala Lys Val Tyr Tyr Gly Met Pro Tyr
1               5
<210>  176
<211>  107
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  176
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Asp Ser Trp
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Ser Asp Val Pro Trp
85                  90                  95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210>  177
<211>  11
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  177
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Asp Ser Trp Leu Ala
1               5                   10
<210>  178
<211>  7
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  178
Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser
1               5
<210>  179
<211>  9
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  179
Gln Gln Ala Ser Asp Val Pro Trp Thr
1               5
<210>  180
<211>  116
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  180
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Leu Tyr
20                  25                  30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Gln Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Lys Val Tyr Tyr Gly Met Pro Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100                 105                 110
Thr Val Ser Ser
115
<210>  181
<211>  9
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  181
Phe Thr Phe Ser Leu Tyr Ala Met Ser
1               5
<210>  182
<211>  17
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  182
Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Gln Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1               5                   10                  15
Gly
<210>  183
<211>  9
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  183
Ala Lys Val Tyr Tyr Gly Met Pro Tyr
1               5
<210>  184
<211>  107
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  184
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Asp Ser Trp
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Ser Asp Val Pro Trp
85                  90                  95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210>  185
<211>  11
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  185
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Asp Ser Trp Leu Ala
1               5                   10
<210>  186
<211>  7
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  186
Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser
1               5
<210>  187
<211>  9
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  187
Gln Gln Ala Ser Asp Val Pro Trp Thr
1               5
<210>  188
<211>  121
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  188
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Gly Glu Tyr
20                  25                  30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35                  40                  45
Gly Leu Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Gln Tyr Ala Gln Lys Phe
50                  55                  60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Gly Ala Ser Asp Gly Glu Thr Gly Arg Leu Asp Leu Trp Gly
100                 105                 110
Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115                 120
<210>  189
<211>  9
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  189
Gly Thr Phe Gly Glu Tyr Ala Ile Ser
1               5
<210>  190
<211>  17
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  190
Leu Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Gln Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1               5                   10                  15
Gly
<210>  191
<211>  14
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  191
Ala Arg Gly Ala Ser Asp Gly Glu Thr Gly Arg Leu Asp Leu
1               5                   10
<210>  192
<211>  113
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  192
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1               5                   10                  15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser
20                  25                  30
Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35                  40                  45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50                  55                  60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65                  70                  75                  80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85                  90                  95
Ser Tyr Ser Leu Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile
100                 105                 110
Lys
<210>  193
<211>  17
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  193
Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu
1               5                   10                  15
Ala
<210>  194
<211>  7
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  194
Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser
1               5
<210>  195
<211>  9
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  195
Gln Gln Ser Tyr Ser Leu Pro Phe Thr
1               5
<210>  196
<211>  121
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  196
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr
20                  25                  30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35                  40                  45
Gly Leu Ile Ile Pro Ala Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50                  55                  60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Gly Ala Ser Asp Gly Glu Thr Gly Arg Leu Asp Leu Trp Gly
100                 105                 110
Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115                 120
<210>  197
<211>  9
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  197
Gly Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Ile Ser
1               5
<210>  198
<211>  17
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  198
Leu Ile Ile Pro Ala Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1               5                   10                  15
Gly
<210>  199
<211>  14
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  199
Ala Arg Gly Ala Ser Asp Gly Glu Thr Gly Arg Leu Asp Leu
1               5                   10
<210>  200
<211>  113
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  200
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1               5                   10                  15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser
20                  25                  30
Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35                  40                  45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50                  55                  60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65                  70                  75                  80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85                  90                  95
Ser Tyr Ser Leu Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile
100                 105                 110
Lys
<210>  201
<211>  17
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  201
Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu
1               5                   10                  15
Ala
<210>  202
<211>  7
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  202
Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser
1               5
<210>  203
<211>  9
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  203
Gln Gln Ser Tyr Ser Leu Pro Phe Thr
1               5
<210>  204
<211>  121
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  204
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr
20                  25                  30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35                  40                  45
Gly Val Ile Ile Pro Ile Phe Gly Glu Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50                  55                  60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Gly Ala Ser Asp Gly Glu Thr Gly Arg Leu Asp Leu Trp Gly
100                 105                 110
Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115                 120
<210>  205
<211>  9
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  205
Gly Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Ile Ser
1               5
<210>  206
<211>  17
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  206
Val Ile Ile Pro Ile Phe Gly Glu Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1               5                   10                  15
Gly
<210>  207
<211>  14
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  207
Ala Arg Gly Ala Ser Asp Gly Glu Thr Gly Arg Leu Asp Leu
1               5                   10
<210>  208
<211>  113
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  208
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1               5                   10                  15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser
20                  25                  30
Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35                  40                  45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50                  55                  60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65                  70                  75                  80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85                  90                  95
Ser Tyr Ser Leu Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile
100                 105                 110
Lys
<210>  209
<211>  17
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  209
Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu
1               5                   10                  15
Ala
<210>  210
<211>  7
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  210
Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser
1               5
<210>  211
<211>  9
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  211
Gln Gln Ser Tyr Ser Leu Pro Phe Thr
1               5
<210>  212
<211>  121
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  212
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Gly Ser Tyr
20                  25                  30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35                  40                  45
Gly Val Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50                  55                  60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Gly Ala Ser Asp Gly Glu Thr Gly Arg Leu Asp Leu Trp Gly
100                 105                 110
Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115                 120
<210>  213
<211>  9
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  213
Gly Thr Phe Gly Ser Tyr Ala Ile Ser
1               5
<210>  214
<211>  17
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  214
Val Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1               5                   10                  15
Gly
<210>  215
<211>  14
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  215
Ala Arg Gly Ala Ser Asp Gly Glu Thr Gly Arg Leu Asp Leu
1               5                   10
<210>  216
<211>  113
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  216
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1               5                   10                  15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser
20                  25                  30
Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35                  40                  45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50                  55                  60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65                  70                  75                  80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85                  90                  95
Ser Tyr Ser Leu Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile
100                 105                 110
Lys
<210>  217
<211>  17
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  217
Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu
1               5                   10                  15
Ala
<210>  218
<211>  7
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  218
Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser
1               5
<210>  219
<211>  9
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  219
Gln Gln Ser Tyr Ser Leu Pro Phe Thr
1               5
<210>  220
<211>  121
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  220
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Gln Tyr
20                  25                  30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35                  40                  45
Gly Val Ile Ile Pro Ser Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50                  55                  60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Gly Ala Ser Asp Gly Glu Thr Gly Arg Leu Asp Leu Trp Gly
100                 105                 110
Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115                 120
<210>  221
<211>  9
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  221
Gly Thr Phe Ser Gln Tyr Ala Ile Ser
1               5
<210>  222
<211>  17
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  222
Val Ile Ile Pro Ser Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1               5                   10                  15
Gly
<210>  223
<211>  14
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  223
Ala Arg Gly Ala Ser Asp Gly Glu Thr Gly Arg Leu Asp Leu
1               5                   10
<210>  224
<211>  113
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  224
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1               5                   10                  15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser
20                  25                  30
Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35                  40                  45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50                  55                  60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65                  70                  75                  80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85                  90                  95
Ser Tyr Ser Leu Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile
100                 105                 110
Lys
<210>  225
<211>  17
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  225
Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu
1               5                   10                  15
Ala
<210>  226
<211>  7
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  226
Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser
1               5
<210>  227
<211>  9
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  227
Gln Gln Ser Tyr Ser Leu Pro Phe Thr
1               5
<210>  228
<211>  121
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  228
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Gly Glu Tyr
20                  25                  30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35                  40                  45
Gly Leu Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Gln Tyr Ala Gln Lys Phe
50                  55                  60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Gly Ala Ser Asp Gly Glu Thr Gly Arg Leu Asp Leu Trp Gly
100                 105                 110
Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115                 120
<210>  229
<211>  9
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  229
Gly Thr Phe Gly Glu Tyr Ala Ile Ser
1               5
<210>  230
<211>  17
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  230
Leu Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Gln Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1               5                   10                  15
Gly
<210>  231
<211>  14
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  231
Ala Arg Gly Ala Ser Asp Gly Glu Thr Gly Arg Leu Asp Leu
1               5                   10
<210>  232
<211>  113
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  232
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1               5                   10                  15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser
20                  25                  30
Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35                  40                  45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50                  55                  60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65                  70                  75                  80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85                  90                  95
Ser Tyr Ser Leu Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile
100                 105                 110
Lys
<210>  233
<211>  17
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  233
Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu
1               5                   10                  15
Ala
<210>  234
<211>  7
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  234
Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser
1               5
<210>  235
<211>  9
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  235
Gln Gln Ser Tyr Ser Leu Pro Phe Thr
1               5
<210>  236
<211>  122
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  236
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Gly Ser Ser
20                  25                  30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35                  40                  45
Gly Gly Ile Ile Pro Leu Phe Gly Thr Ala Ala Tyr Ala Gln Lys Phe
50                  55                  60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Asp Gly Pro Gly Tyr Ser Ser Ser Trp Tyr Leu Asp Val Trp
100                 105                 110
Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
115                 120
<210>  237
<211>  9
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  237
Gly Thr Phe Gly Ser Ser Ala Ile Ser
1               5
<210>  238
<211>  17
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  238
Gly Ile Ile Pro Leu Phe Gly Thr Ala Ala Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1               5                   10                  15
Gly
<210>  239
<211>  15
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  239
Ala Arg Asp Gly Pro Gly Tyr Ser Ser Ser Trp Tyr Leu Asp Val
1               5                   10                  15
<210>  240
<211>  107
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  240
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1               5                   10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Tyr Ala Leu Pro Ile
85                  90                  95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210>  241
<211>  11
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  241
Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr Leu Ala
1               5                   10
<210>  242
<211>  7
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  242
Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr
1               5
<210>  243
<211>  9
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  243
Gln Gln Gly Tyr Ala Leu Pro Ile Thr
1               5
<210>  244
<211>  122
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  244
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Glu Tyr
20                  25                  30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35                  40                  45
Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Val Tyr Ala Gln Lys Phe
50                  55                  60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Asp Gly Pro Gly Tyr Ser Ser Ser Trp Tyr Leu Asp Val Trp
100                 105                 110
Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
115                 120
<210>  245
<211>  9
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  245
Gly Thr Phe Ser Glu Tyr Ala Ile Ser
1               5
<210>  246
<211>  17
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  246
Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Val Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1               5                   10                  15
Gly
<210>  247
<211>  15
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  247
Ala Arg Asp Gly Pro Gly Tyr Ser Ser Ser Trp Tyr Leu Asp Val
1               5                   10                  15
<210>  248
<211>  107
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  248
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1               5                   10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Tyr Ala Leu Pro Ile
85                  90                  95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210>  249
<211>  11
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  249
Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr Leu Ala
1               5                   10
<210>  250
<211>  7
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  250
Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr
1               5
<210>  251
<211>  9
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  251
Gln Gln Gly Tyr Ala Leu Pro Ile Thr
1               5
<210>  252
<211>  122
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  252
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr
20                  25                  30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35                  40                  45
Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Val Tyr Ala Gln Lys Phe
50                  55                  60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Asp Gly Pro Gly Tyr Ser Ser Ser Trp Tyr Leu Asp Val Trp
100                 105                 110
Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
115                 120
<210>  253
<211>  9
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  253
Gly Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Ile Ser
1               5
<210>  254
<211>  17
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  254
Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Val Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1               5                   10                  15
Gly
<210>  255
<211>  15
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  255
Ala Arg Asp Gly Pro Gly Tyr Ser Ser Ser Trp Tyr Leu Asp Val
1               5                   10                  15
<210>  256
<211>  107
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  256
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1               5                   10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Tyr Ala Leu Pro Ile
85                  90                  95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210>  257
<211>  11
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  257
Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr Leu Ala
1               5                   10
<210>  258
<211>  7
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  258
Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr
1               5
<210>  259
<211>  9
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  259
Gln Gln Gly Tyr Ala Leu Pro Ile Thr
1               5
<210>  260
<211>  122
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  260
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Ser
20                  25                  30
Val Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35                  40                  45
Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Thr Tyr Ala Gln Lys Phe
50                  55                  60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Asp Gly Pro Gly Tyr Ser Ser Ser Trp Tyr Leu Asp Val Trp
100                 105                 110
Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
115                 120
<210>  261
<211>  9
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  261
Gly Thr Phe Ser Ser Ser Val Ile Ser
1               5
<210>  262
<211>  17
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  262
Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Thr Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1               5                   10                  15
Gly
<210>  263
<211>  15
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  263
Ala Arg Asp Gly Pro Gly Tyr Ser Ser Ser Trp Tyr Leu Asp Val
1               5                   10                  15
<210>  264
<211>  107
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  264
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1               5                   10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Tyr Ala Leu Pro Ile
85                  90                  95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210>  265
<211>  11
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  265
Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr Leu Ala
1               5                   10
<210>  266
<211>  7
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  266
Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr
1               5
<210>  267
<211>  9
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  267
Gln Gln Gly Tyr Ala Leu Pro Ile Thr
1               5
<210>  268
<211>  122
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  268
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Asp Ser Tyr
20                  25                  30
Val Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35                  40                  45
Gly Gly Ile Ile Pro Gly Phe Gly Val Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50                  55                  60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Asp Gly Pro Gly Tyr Ser Ser Ser Trp Tyr Leu Asp Val Trp
100                 105                 110
Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
115                 120
<210>  269
<211>  9
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  269
Gly Thr Phe Asp Ser Tyr Val Ile Ser
1               5
<210>  270
<211>  17
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  270
Gly Ile Ile Pro Gly Phe Gly Val Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1               5                   10                  15
Gly
<210>  271
<211>  15
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  271
Ala Arg Asp Gly Pro Gly Tyr Ser Ser Ser Trp Tyr Leu Asp Val
1               5                   10                  15
<210>  272
<211>  107
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  272
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1               5                   10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Tyr Ala Leu Pro Ile
85                  90                  95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210>  273
<211>  11
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  273
Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr Leu Ala
1               5                   10
<210>  274
<211>  7
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  274
Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr
1               5
<210>  275
<211>  9
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  275
Gln Gln Gly Tyr Ala Leu Pro Ile Thr
1               5
<210>  276
<211>  116
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  276
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20                  25                  30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Lys Val Tyr Tyr Gly Met Pro Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100                 105                 110
Thr Val Ser Ser
115
<210>  277
<211>  9
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  277
Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met Ser
1               5
<210>  278
<211>  17
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  278
Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1               5                   10                  15
Gly
<210>  279
<211>  9
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  279
Ala Lys Val Tyr Tyr Gly Met Pro Tyr
1               5
<210>  280
<211>  107
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  280
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Asp Ser Trp
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Ser Asp Val Pro Trp
85                  90                  95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210>  281
<211>  11
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  281
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Asp Ser Trp Leu Ala
1               5                   10
<210>  282
<211>  7
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  282
Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser
1               5
<210>  283
<211>  9
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  283
Gln Gln Ala Ser Asp Val Pro Trp Thr
1               5
<210>  284
<211>  122
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  284
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr
20                  25                  30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35                  40                  45
Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Ser Tyr Ala Gln Lys Phe
50                  55                  60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Asp Gly Pro Gly Tyr Ser Ser Ser Trp Tyr Leu Asp Val Trp
100                 105                 110
Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
115                 120
<210>  285
<211>  9
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  285
Gly Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Ile Ser
1               5
<210>  286
<211>  17
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  286
Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Ser Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1               5                   10                  15
Gly
<210>  287
<211>  15
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  287
Ala Arg Asp Gly Pro Gly Tyr Ser Ser Ser Trp Tyr Leu Asp Val
1               5                   10                  15
<210>  288
<211>  107
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  288
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1               5                   10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Tyr Ala Leu Pro Ile
85                  90                  95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210>  289
<211>  11
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  289
Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr Leu Ala
1               5                   10
<210>  290
<211>  7
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  290
Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr
1               5
<210>  291
<211>  9
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  291
Gln Gln Gly Tyr Ala Leu Pro Ile Thr
1               5
<210>  292
<211>  122
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  292
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20                  25                  30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35                  40                  45
Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe
50                  55                  60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Ala Gly Gly Tyr Ser Tyr Ser Trp Gly Gly Ser Asn Ile Trp
100                 105                 110
Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
115                 120
<210>  293
<211>  9
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  293
Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Tyr Met His
1               5
<210>  294
<211>  17
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  294
Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1               5                   10                  15
Gly
<210>  295
<211>  15
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  295
Ala Arg Ala Gly Gly Tyr Ser Tyr Ser Trp Gly Gly Ser Asn Ile
1               5                   10                  15
<210>  296
<211>  107
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  296
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Asp Gly Ser Phe Pro Tyr
85                  90                  95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210>  297
<211>  11
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  297
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp Leu Ala
1               5                   10
<210>  298
<211>  7
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  298
Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser
1               5
<210>  299
<211>  9
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  299
Gln Gln Asp Gly Ser Phe Pro Tyr Thr
1               5
<210>  300
<211>  126
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  300
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20                  25                  30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35                  40                  45
Gly Ile Ile Asn Pro Gly Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe
50                  55                  60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Asp Pro Arg Tyr Thr Thr Leu Thr Gly Ser Tyr Tyr Tyr Gly
100                 105                 110
Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115                 120                 125
<210>  301
<211>  9
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  301
Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Tyr Met His
1               5
<210>  302
<211>  17
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  302
Ile Ile Asn Pro Gly Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1               5                   10                  15
Gly
<210>  303
<211>  19
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  303
Ala Arg Asp Pro Arg Tyr Thr Thr Leu Thr Gly Ser Tyr Tyr Tyr Gly
1               5                   10                  15
Met Asp Val
<210>  304
<211>  108
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  304
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Ser Trp
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Val Asn Phe Pro Pro
85                  90                  95
Ile Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210>  305
<211>  11
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  305
Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Ser Trp Leu Ala
1               5                   10
<210>  306
<211>  7
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  306
Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser
1               5
<210>  307
<211>  10
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  307
Gln Gln Ala Val Asn Phe Pro Pro Ile Thr
1               5                   10
<210>  308
<211>  120
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  308
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr
20                  25                  30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35                  40                  45
Gly Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Lys Tyr Ala Gln Lys Phe
50                  55                  60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Glu Ala Ser Trp Leu Pro Gly Ser Leu Asp Val Trp Gly Lys
100                 105                 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115                 120
<210>  309
<211>  9
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  309
Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr Tyr Met His
1               5
<210>  310
<211>  17
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  310
Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Lys Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1               5                   10                  15
Gly
<210>  311
<211>  13
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  311
Ala Arg Glu Ala Ser Trp Leu Pro Gly Ser Leu Asp Val
1               5                   10
<210>  312
<211>  113
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  312
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1               5                   10                  15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser
20                  25                  30
Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35                  40                  45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50                  55                  60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65                  70                  75                  80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85                  90                  95
Tyr Asp Asn Phe Pro Ile Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile
100                 105                 110
Lys
<210>  313
<211>  17
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  313
Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu
1               5                   10                  15
Ala
<210>  314
<211>  7
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  314
Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser
1               5
<210>  315
<211>  9
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  315
Gln Gln Tyr Asp Asn Phe Pro Ile Thr
1               5
<210>  316
<211>  126
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  316
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20                  25                  30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35                  40                  45
Gly Ile Ile Asn Pro Gly Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe
50                  55                  60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Asp Pro Arg Tyr Thr Thr Leu Thr Gly Ser Tyr Tyr Tyr Gly
100                 105                 110
Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115                 120                 125
<210>  317
<211>  9
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  317
Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Tyr Met His
1               5
<210>  318
<211>  17
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  318
Ile Ile Asn Pro Gly Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1               5                   10                  15
Gly
<210>  319
<211>  19
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  319
Ala Arg Asp Pro Arg Tyr Thr Thr Leu Thr Gly Ser Tyr Tyr Tyr Gly
1               5                   10                  15
Met Asp Val
<210>  320
<211>  108
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  320
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
20                  25                  30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Ala Asn Thr Pro Pro
85                  90                  95
Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210>  321
<211>  11
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  321
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr Leu Asn
1               5                   10
<210>  322
<211>  7
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  322
Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser
1               5
<210>  323
<211>  10
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  323
Gln Gln Ser Ala Asn Thr Pro Pro Trp Thr
1               5                   10
<210>  324
<211>  117
<212>  Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223>  Гуманизированное антитело
<400>  324
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20                  25                  30
Trp Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Gly Asn Ile Asp Glu Asp Gly Ser Ile Thr Glu Tyr Ser Pro Phe Val
50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Val Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Val Lys Ser Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Thr Arg Trp Gly Arg Phe Gly Phe Asp Ser Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100                 105                 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210>  325
<211>  111
<212>  Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223>  Гуманизированное антитело
<400>  325
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ala Val Ser Ala Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Ser Gly
20                  25                  30
Ser Phe Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Thr Gly Gln Ala Pro
35                  40                  45
Lys Leu Leu Ile Phe Tyr Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Asp
50                  55                  60
Arg Phe Met Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn
65                  70                  75                  80
Ser Phe Gln Thr Glu Asp Leu Gly Asp Tyr Tyr Cys His His His Tyr
85                  90                  95
Asn Ala Pro Pro Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Leu Glu Leu Arg
100                 105                 110
<210>  326
<211>  10
<212>  Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223>  Гуманизированное антитело
<400>  326
Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr Trp Met Asp
1               5                   10
<210>  327
<211>  17
<212>  Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223>  Гуманизированное антитело
<400>  327
Asn Ile Asp Glu Asp Gly Ser Ile Thr Glu Tyr Ser Pro Phe Val Lys
1               5                   10                  15
Gly
<210>  328
<211>  8
<212>  Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223>  Гуманизированное антитело
<400>  328
Trp Gly Arg Phe Gly Phe Asp Ser
1               5
<210>  329
<211>  15
<212>  Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223>  Гуманизированное антитело
<400>  329
Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Ser Gly Ser Phe Asn Tyr Leu Thr
1               5                   10                  15
<210>  330
<211>  7
<212>  Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223>  Гуманизированное антитело
<400>  330
Tyr Ala Ser Thr Arg His Thr
1               5
<210>  331
<211>  9
<212>  Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223>  Гуманизированное антитело
<400>  331
His His His Tyr Asn Ala Pro Pro Thr
1               5
<210>  332
<211>  117
<212>  Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223>  Гуманизированное антитело
<400>  332
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20                  25                  30
Trp Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Val Trp Val
35                  40                  45
Ser Asn Ile Asp Glu Asp Gly Ser Ile Thr Glu Tyr Ser Pro Phe Val
50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Thr Arg Trp Gly Arg Phe Gly Phe Asp Ser Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100                 105                 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210>  333
<211>  111
<212>  Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223>  Гуманизированное антитело
<400>  333
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1               5                   10                  15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Ser Gly
20                  25                  30
Ser Phe Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35                  40                  45
Lys Leu Leu Ile Phe Tyr Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Asp
50                  55                  60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65                  70                  75                  80
Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys His His His Tyr
85                  90                  95
Asn Ala Pro Pro Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys
100                 105                 110
<210>  334
<211>  10
<212>  Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223>  Гуманизированное антитело
<400>  334
Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr Trp Met Asp
1               5                   10
<210>  335
<211>  17
<212>  Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223>  Гуманизированное антитело
<400>  335
Asn Ile Asp Glu Asp Gly Ser Ile Thr Glu Tyr Ser Pro Phe Val Lys
1               5                   10                  15
Gly
<210>  336
<211>  8
<212>  Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223>  Гуманизированное антитело
<400>  336
Trp Gly Arg Phe Gly Phe Asp Ser
1               5
<210>  337
<211>  15
<212>  Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223>  Гуманизированное антитело
<400>  337
Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Ser Gly Ser Phe Asn Tyr Leu Thr
1               5                   10                  15
<210>  338
<211>  7
<212>  Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223>  Гуманизированное антитело
<400>  338
Tyr Ala Ser Thr Arg His Thr
1               5
<210>  339
<211>  9
<212>  Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223>  Гуманизированное антитело
<400>  339
His His His Tyr Asn Ala Pro Pro Thr
1               5
<210>  340
<211>  117
<212>  Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223>  Гуманизированное антитело
<400>  340
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20                  25                  30
Trp Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Val Trp Val
35                  40                  45
Ser Asn Ile Asp Glu Asp Gly Ser Ile Thr Glu Tyr Ser Pro Phe Val
50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Thr Arg Trp Gly Arg Phe Gly Phe Asp Ser Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100                 105                 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210>  341
<211>  111
<212>  Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223>  Гуманизированное антитело
<400>  341
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1               5                   10                  15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Ser Gly
20                  25                  30
Ser Phe Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35                  40                  45
Lys Leu Leu Ile Phe Tyr Ala Ser Thr Arg Glu Thr Gly Val Pro Asp
50                  55                  60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65                  70                  75                  80
Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys His His His Tyr
85                  90                  95
Asn Ala Pro Pro Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys
100                 105                 110
<210>  342
<211>  10
<212>  Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223>  Гуманизированное антитело
<400>  342
Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr Trp Met Asp
1               5                   10
<210>  343
<211>  17
<212>  Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223>  Гуманизированное антитело
<400>  343
Asn Ile Asp Glu Asp Gly Ser Ile Thr Glu Tyr Ser Pro Phe Val Lys
1               5                   10                  15
Gly
<210>  344
<211>  8
<212>  Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223>  Гуманизированное антитело
<400>  344
Trp Gly Arg Phe Gly Phe Asp Ser
1               5
<210>  345
<211>  15
<212>  Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223>  Гуманизированное антитело
<400>  345
Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Ser Gly Ser Phe Asn Tyr Leu Thr
1               5                   10                  15
<210>  346
<211>  7
<212>  Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223>  Гуманизированное антитело
<400>  346
Tyr Ala Ser Thr Arg Glu Thr
1               5
<210>  347
<211>  9
<212>  Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223>  Гуманизированное антитело
<400>  347
His His His Tyr Asn Ala Pro Pro Thr
1               5
<210>  348
<211>  117
<212>  Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223>  Гуманизированное антитело
<400>  348
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20                  25                  30
Trp Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Val Trp Val
35                  40                  45
Ser Asn Ile Asp Glu Asp Gly Ser Ile Thr Glu Tyr Ser Pro Phe Val
50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Thr Arg Trp Gly Arg Phe Gly Phe Asp Ser Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100                 105                 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210>  349
<211>  111
<212>  Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223>  Гуманизированное антитело
<400>  349
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1               5                   10                  15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Ser Gly
20                  25                  30
Ser Phe Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35                  40                  45
Lys Leu Leu Ile Phe Tyr Ala Ser Thr Arg Gln Thr Gly Val Pro Asp
50                  55                  60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65                  70                  75                  80
Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys His His His Tyr
85                  90                  95
Asn Ala Pro Pro Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys
100                 105                 110
<210>  350
<211>  10
<212>  Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223>  Гуманизированное антитело
<400>  350
Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr Trp Met Asp
1               5                   10
<210>  351
<211>  17
<212>  Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223>  Гуманизированное антитело
<400>  351
Asn Ile Asp Glu Asp Gly Ser Ile Thr Glu Tyr Ser Pro Phe Val Lys
1               5                   10                  15
Gly
<210>  352
<211>  8
<212>  Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223>  Гуманизированное антитело
<400>  352
Trp Gly Arg Phe Gly Phe Asp Ser
1               5
<210>  353
<211>  15
<212>  Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223>  Гуманизированное антитело
<400>  353
Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Ser Gly Ser Phe Asn Tyr Leu Thr
1               5                   10                  15
<210>  354
<211>  7
<212>  Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223>  Гуманизированное антитело
<400>  354
Tyr Ala Ser Thr Arg Gln Thr
1               5
<210>  355
<211>  9
<212>  Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223>  Гуманизированное антитело
<400>  355
His His His Tyr Asn Ala Pro Pro Thr
1               5
<210>  356
<211>  117
<212>  Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223>  Гуманизированное антитело
<400>  356
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20                  25                  30
Trp Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Val Trp Val
35                  40                  45
Ser Asn Ile Asp Glu Ser Gly Ser Ile Thr Glu Tyr Ser Pro Phe Val
50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Thr Arg Trp Gly Arg Phe Gly Phe Asp Ser Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100                 105                 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210>  357
<211>  111
<212>  Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223>  Гуманизированное антитело
<400>  357
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1               5                   10                  15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Ser Gly
20                  25                  30
Ser Phe Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35                  40                  45
Lys Leu Leu Ile Phe Tyr Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Asp
50                  55                  60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65                  70                  75                  80
Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys His His His Tyr
85                  90                  95
Asn Ala Pro Pro Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys
100                 105                 110
<210>  358
<211>  10
<212>  Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223>  Гуманизированное антитело
<400>  358
Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr Trp Met Asp
1               5                   10
<210>  359
<211>  17
<212>  Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223>  Гуманизированное антитело
<400>  359
Asn Ile Asp Glu Ser Gly Ser Ile Thr Glu Tyr Ser Pro Phe Val Lys
1               5                   10                  15
Gly
<210>  360
<211>  8
<212>  Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223>  Гуманизированное антитело
<400>  360
Trp Gly Arg Phe Gly Phe Asp Ser
1               5
<210>  361
<211>  15
<212>  Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223>  Гуманизированное антитело
<400>  361
Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Ser Gly Ser Phe Asn Tyr Leu Thr
1               5                   10                  15
<210>  362
<211>  7
<212>  Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223>  Гуманизированное антитело
<400>  362
Tyr Ala Ser Thr Arg His Thr
1               5
<210>  363
<211>  9
<212>  Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223>  Гуманизированное антитело
<400>  363
His His His Tyr Asn Ala Pro Pro Thr
1               5
<210>  364
<211>  117
<212>  Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223>  Гуманизированное антитело
<400>  364
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20                  25                  30
Trp Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Val Trp Val
35                  40                  45
Ser Asn Ile Asp Glu Ser Gly Ser Ile Thr Glu Tyr Ser Pro Phe Val
50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Thr Arg Trp Gly Arg Phe Gly Phe Asp Ser Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100                 105                 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210>  365
<211>  111
<212>  Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223>  Гуманизированное антитело
<400>  365
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1               5                   10                  15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Ser Gly
20                  25                  30
Ser Phe Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35                  40                  45
Lys Leu Leu Ile Phe Tyr Ala Ser Thr Arg Glu Thr Gly Val Pro Asp
50                  55                  60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65                  70                  75                  80
Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys His His His Tyr
85                  90                  95
Asn Ala Pro Pro Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys
100                 105                 110
<210>  366
<211>  10
<212>  Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223>  Гуманизированное антитело
<400>  366
Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr Trp Met Asp
1               5                   10
<210>  367
<211>  17
<212>  Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223>  Гуманизированное антитело
<400>  367
Asn Ile Asp Glu Ser Gly Ser Ile Thr Glu Tyr Ser Pro Phe Val Lys
1               5                   10                  15
Gly
<210>  368
<211>  8
<212>  Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223>  Гуманизированное антитело
<400>  368
Trp Gly Arg Phe Gly Phe Asp Ser
1               5
<210>  369
<211>  15
<212>  Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223>  Гуманизированное антитело
<400>  369
Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Ser Gly Ser Phe Asn Tyr Leu Thr
1               5                   10                  15
<210>  370
<211>  7
<212>  Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223>  Гуманизированное антитело
<400>  370
Tyr Ala Ser Thr Arg Glu Thr
1               5
<210>  371
<211>  9
<212>  Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223>  Гуманизированное антитело
<400>  371
His His His Tyr Asn Ala Pro Pro Thr
1               5
<210>  372
<211>  117
<212>  Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223>  Гуманизированное антитело
<400>  372
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20                  25                  30
Trp Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Val Trp Val
35                  40                  45
Ser Asn Ile Asp Glu Ser Gly Ser Ile Thr Glu Tyr Ser Pro Phe Val
50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Thr Arg Trp Gly Arg Phe Gly Phe Asp Ser Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100                 105                 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210>  373
<211>  111
<212>  Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223>  Гуманизированное антитело
<400>  373
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1               5                   10                  15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Ser Gly
20                  25                  30
Ser Phe Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35                  40                  45
Lys Leu Leu Ile Phe Tyr Ala Ser Thr Arg Gln Thr Gly Val Pro Asp
50                  55                  60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65                  70                  75                  80
Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys His His His Tyr
85                  90                  95
Asn Ala Pro Pro Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys
100                 105                 110
<210>  374
<211>  10
<212>  Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223>  Гуманизированное антитело
<400>  374
Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr Trp Met Asp
1               5                   10
<210>  375
<211>  17
<212>  Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223>  Гуманизированное антитело
<400>  375
Asn Ile Asp Glu Ser Gly Ser Ile Thr Glu Tyr Ser Pro Phe Val Lys
1               5                   10                  15
Gly
<210>  376
<211>  8
<212>  Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223>  Гуманизированное антитело
<400>  376
Trp Gly Arg Phe Gly Phe Asp Ser
1               5
<210>  377
<211>  15
<212>  Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223>  Гуманизированное антитело
<400>  377
Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Ser Gly Ser Phe Asn Tyr Leu Thr
1               5                   10                  15
<210>  378
<211>  7
<212>  Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223>  Гуманизированное антитело
<400>  378
Tyr Ala Ser Thr Arg Gln Thr
1               5
<210>  379
<211>  9
<212>  Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223>  Гуманизированное антитело
<400>  379
His His His Tyr Asn Ala Pro Pro Thr
1               5
<210>  380
<211>  447
<212>  Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223>  Гуманизированное антитело
<400>  380
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20                  25                  30
Trp Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Val Trp Val
35                  40                  45
Ser Asn Ile Asp Glu Asp Gly Ser Ile Thr Glu Tyr Ser Pro Phe Val
50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Thr Arg Trp Gly Arg Phe Gly Phe Asp Ser Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100                 105                 110
Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu
115                 120                 125
Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys
130                 135                 140
Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser
145                 150                 155                 160
Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
165                 170                 175
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser
180                 185                 190
Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn
195                 200                 205
Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His
210                 215                 220
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
225                 230                 235                 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245                 250                 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
260                 265                 270
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275                 280                 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290                 295                 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305                 310                 315                 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
325                 330                 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340                 345                 350
Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355                 360                 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370                 375                 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385                 390                 395                 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405                 410                 415
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420                 425                 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435                 440                 445
<210>  381
<211>  218
<212>  Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223>  Гуманизированное антитело
<400>  381
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1               5                   10                  15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Ser Gly
20                  25                  30
Ser Phe Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35                  40                  45
Lys Leu Leu Ile Phe Tyr Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Asp
50                  55                  60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65                  70                  75                  80
Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys His His His Tyr
85                  90                  95
Asn Ala Pro Pro Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys Arg
100                 105                 110
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
115                 120                 125
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
130                 135                 140
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
145                 150                 155                 160
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
165                 170                 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
180                 185                 190
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
195                 200                 205
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210                 215
<210>  382
<211>  268
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  382
Pro Gly Trp Phe Leu Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp Asn Pro Pro Thr
1               5                   10                  15
Phe Ser Pro Ala Leu Leu Val Val Thr Glu Gly Asp Asn Ala Thr Phe
20                  25                  30
Thr Cys Ser Phe Ser Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val Leu Asn Trp Tyr
35                  40                  45
Arg Met Ser Pro Ser Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala Ala Phe Pro Glu
50                  55                  60
Asp Arg Ser Gln Pro Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg Val Thr Gln Leu
65                  70                  75                  80
Pro Asn Gly Arg Asp Phe His Met Ser Val Val Arg Ala Arg Arg Asn
85                  90                  95
Asp Ser Gly Thr Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu Ala Pro Lys Ala
100                 105                 110
Gln Ile Lys Glu Ser Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val Thr Glu Arg Arg
115                 120                 125
Ala Glu Val Pro Thr Ala His Pro Ser Pro Ser Pro Arg Pro Ala Gly
130                 135                 140
Gln Phe Gln Thr Leu Val Val Gly Val Val Gly Gly Leu Leu Gly Ser
145                 150                 155                 160
Leu Val Leu Leu Val Trp Val Leu Ala Val Ile Cys Ser Arg Ala Ala
165                 170                 175
Arg Gly Thr Ile Gly Ala Arg Arg Thr Gly Gln Pro Leu Lys Glu Asp
180                 185                 190
Pro Ser Ala Val Pro Val Phe Ser Val Asp Tyr Gly Glu Leu Asp Phe
195                 200                 205
Gln Trp Arg Glu Lys Thr Pro Glu Pro Pro Val Pro Cys Val Pro Glu
210                 215                 220
Gln Thr Glu Tyr Ala Thr Ile Val Phe Pro Ser Gly Met Gly Thr Ser
225                 230                 235                 240
Ser Pro Ala Arg Arg Gly Ser Ala Asp Gly Pro Arg Ser Ala Gln Pro
245                 250                 255
Leu Arg Pro Glu Asp Gly His Cys Ser Trp Pro Leu
260                 265
<210>  383
<211>  268
<212>  Белок
<213>  Mus musculus
<400>  383
Ser Gly Trp Leu Leu Glu Val Pro Asn Gly Pro Trp Arg Ser Leu Thr
1               5                   10                  15
Phe Tyr Pro Ala Trp Leu Thr Val Ser Glu Gly Ala Asn Ala Thr Phe
20                  25                  30
Thr Cys Ser Leu Ser Asn Trp Ser Glu Asp Leu Met Leu Asn Trp Asn
35                  40                  45
Arg Leu Ser Pro Ser Asn Gln Thr Glu Lys Gln Ala Ala Phe Cys Asn
50                  55                  60
Gly Leu Ser Gln Pro Val Gln Asp Ala Arg Phe Gln Ile Ile Gln Leu
65                  70                  75                  80
Pro Asn Arg His Asp Phe His Met Asn Ile Leu Asp Thr Arg Arg Asn
85                  90                  95
Asp Ser Gly Ile Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu His Pro Lys Ala
100                 105                 110
Lys Ile Glu Glu Ser Pro Gly Ala Glu Leu Val Val Thr Glu Arg Ile
115                 120                 125
Leu Glu Thr Ser Thr Arg Tyr Pro Ser Pro Ser Pro Lys Pro Glu Gly
130                 135                 140
Arg Phe Gln Gly Met Val Ile Gly Ile Met Ser Ala Leu Val Gly Ile
145                 150                 155                 160
Pro Val Leu Leu Leu Leu Ala Trp Ala Leu Ala Val Phe Cys Ser Thr
165                 170                 175
Ser Met Ser Glu Ala Arg Gly Ala Gly Ser Lys Asp Asp Thr Leu Lys
180                 185                 190
Glu Glu Pro Ser Ala Ala Pro Val Pro Ser Val Ala Tyr Glu Glu Leu
195                 200                 205
Asp Phe Gln Gly Arg Glu Lys Thr Pro Glu Leu Pro Thr Ala Cys Val
210                 215                 220
His Thr Glu Tyr Ala Thr Ile Val Phe Thr Glu Gly Leu Gly Ala Ser
225                 230                 235                 240
Ala Met Gly Arg Arg Gly Ser Ala Asp Gly Leu Gln Gly Pro Arg Pro
245                 250                 255
Pro Arg His Glu Asp Gly His Cys Ser Trp Pro Leu
260                 265
<210>  384
<211>  268
<212>  Белок
<213>  Macaca fascicularis
<400>  384
Pro Gly Trp Phe Leu Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp Asn Pro Pro Thr
1               5                   10                  15
Phe Ser Pro Ala Leu Leu Val Val Thr Glu Gly Asp Asn Ala Thr Phe
20                  25                  30
Thr Cys Ser Phe Ser Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val Leu Asn Trp Tyr
35                  40                  45
Arg Met Ser Pro Ser Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala Ala Phe Pro Glu
50                  55                  60
Asp Arg Ser Gln Pro Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg Val Thr Gln Leu
65                  70                  75                  80
Pro Asn Gly Arg Asp Phe His Met Ser Val Val Arg Ala Arg Arg Asn
85                  90                  95
Asp Ser Gly Thr Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu Ala Pro Lys Ala
100                 105                 110
Gln Ile Lys Glu Ser Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val Thr Glu Arg Arg
115                 120                 125
Ala Glu Val Pro Thr Ala His Pro Ser Pro Ser Pro Arg Pro Ala Gly
130                 135                 140
Gln Phe Gln Thr Leu Val Val Gly Val Val Gly Gly Leu Leu Gly Ser
145                 150                 155                 160
Leu Val Leu Leu Val Trp Val Leu Ala Val Ile Cys Ser Arg Ala Ala
165                 170                 175
Arg Gly Thr Ile Gly Ala Arg Arg Thr Gly Gln Pro Leu Lys Glu Asp
180                 185                 190
Pro Ser Ala Val Pro Val Phe Ser Val Asp Tyr Gly Glu Leu Asp Phe
195                 200                 205
Gln Trp Arg Glu Lys Thr Pro Glu Pro Pro Val Pro Cys Val Pro Glu
210                 215                 220
Gln Thr Glu Tyr Ala Thr Ile Val Phe Pro Ser Gly Met Gly Thr Ser
225                 230                 235                 240
Ser Pro Ala Arg Arg Gly Ser Ala Asp Gly Pro Arg Ser Ala Gln Pro
245                 250                 255
Leu Arg Pro Glu Asp Gly His Cys Ser Trp Pro Leu
260                 265
<210>  385
<211>  386
<212>  Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223>  PD-1 человека D85G ECD-Fc-His6
<400>  385
Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu
1               5                   10                  15
Leu Val Val Thr Glu Gly Asp Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser
20                  25                  30
Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser
35                  40                  45
Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala Ala Phe Pro Glu Gly Arg Ser Gln Pro
50                  55                  60
Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp
65                  70                  75                  80
Phe His Met Ser Val Val Arg Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr
85                  90                  95
Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser
100                 105                 110
Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr
115                 120                 125
Ala His Pro Ser Pro Ser Pro Arg Pro Ala Gly Gln Phe Gln Thr Leu
130                 135                 140
Val Gly Gly Ser Gly Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
145                 150                 155                 160
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
165                 170                 175
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
180                 185                 190
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
195                 200                 205
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
210                 215                 220
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
225                 230                 235                 240
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
245                 250                 255
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
260                 265                 270
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
275                 280                 285
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
290                 295                 300
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
305                 310                 315                 320
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
325                 330                 335
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
340                 345                 350
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
355                 360                 365
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Ser Gly His His His His
370                 375                 380
His His
385
<210>  386
<211>  386
<212>  Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223>  PD-1 человека R86L ECD-Fc-His6
<400>  386
Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu
1               5                   10                  15
Leu Val Val Thr Glu Gly Asp Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser
20                  25                  30
Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser
35                  40                  45
Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala Ala Phe Pro Glu Asp Leu Ser Gln Pro
50                  55                  60
Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp
65                  70                  75                  80
Phe His Met Ser Val Val Arg Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr
85                  90                  95
Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser
100                 105                 110
Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr
115                 120                 125
Ala His Pro Ser Pro Ser Pro Arg Pro Ala Gly Gln Phe Gln Thr Leu
130                 135                 140
Val Gly Gly Ser Gly Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
145                 150                 155                 160
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
165                 170                 175
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
180                 185                 190
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
195                 200                 205
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
210                 215                 220
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
225                 230                 235                 240
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
245                 250                 255
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
260                 265                 270
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
275                 280                 285
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
290                 295                 300
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
305                 310                 315                 320
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
325                 330                 335
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
340                 345                 350
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
355                 360                 365
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Ser Gly His His His His
370                 375                 380
His His
385
<210>  387
<211>  376
<212>  Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223>  PD-1 человека N33-Q167 ECD-Fc-His6
<400>  387
Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu Leu Val Val Thr Glu Gly Asp
1               5                   10                  15
Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val
20                  25                  30
Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala
35                  40                  45
Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg
50                  55                  60
Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp Phe His Met Ser Val Val Arg
65                  70                  75                  80
Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu
85                  90                  95
Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val
100                 105                 110
Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr Ala His Pro Ser Pro Ser Pro
115                 120                 125
Arg Pro Ala Gly Gln Phe Gln Gly Gly Ser Gly Gly Asp Lys Thr His
130                 135                 140
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
145                 150                 155                 160
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
165                 170                 175
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
180                 185                 190
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
195                 200                 205
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
210                 215                 220
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
225                 230                 235                 240
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
245                 250                 255
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
260                 265                 270
Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
275                 280                 285
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
290                 295                 300
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
305                 310                 315                 320
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
325                 330                 335
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
340                 345                 350
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly
355                 360                 365
Ser Gly His His His His His His
370                 375
<210>  388
<211>  386
<212>  Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223>  PD-1 человека K78A ECD-Fc-His6
<400>  388
Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu
1               5                   10                  15
Leu Val Val Thr Glu Gly Asp Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser
20                  25                  30
Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser
35                  40                  45
Asn Gln Thr Asp Ala Leu Ala Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro
50                  55                  60
Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp
65                  70                  75                  80
Phe His Met Ser Val Val Arg Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr
85                  90                  95
Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser
100                 105                 110
Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr
115                 120                 125
Ala His Pro Ser Pro Ser Pro Arg Pro Ala Gly Gln Phe Gln Thr Leu
130                 135                 140
Val Gly Gly Ser Gly Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
145                 150                 155                 160
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
165                 170                 175
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
180                 185                 190
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
195                 200                 205
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
210                 215                 220
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
225                 230                 235                 240
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
245                 250                 255
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
260                 265                 270
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
275                 280                 285
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
290                 295                 300
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
305                 310                 315                 320
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
325                 330                 335
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
340                 345                 350
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
355                 360                 365
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Ser Gly His His His His
370                 375                 380
His His
385
<210>  389
<211>  386
<212>  Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223>  PD-1 человека I126A ECD-Fc-His6
<400>  389
Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu
1               5                   10                  15
Leu Val Val Thr Glu Gly Asp Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser
20                  25                  30
Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser
35                  40                  45
Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro
50                  55                  60
Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp
65                  70                  75                  80
Phe His Met Ser Val Val Arg Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr
85                  90                  95
Leu Cys Gly Ala Ala Ser Leu Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser
100                 105                 110
Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr
115                 120                 125
Ala His Pro Ser Pro Ser Pro Arg Pro Ala Gly Gln Phe Gln Thr Leu
130                 135                 140
Val Gly Gly Ser Gly Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
145                 150                 155                 160
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
165                 170                 175
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
180                 185                 190
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
195                 200                 205
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
210                 215                 220
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
225                 230                 235                 240
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
245                 250                 255
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
260                 265                 270
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
275                 280                 285
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
290                 295                 300
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
305                 310                 315                 320
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
325                 330                 335
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
340                 345                 350
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
355                 360                 365
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Ser Gly His His His His
370                 375                 380
His His
385
<210>  390
<211>  386
<212>  Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223>  PD-1 человека L128A ECD-Fc-His6
<400>  390
Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu
1               5                   10                  15
Leu Val Val Thr Glu Gly Asp Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser
20                  25                  30
Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser
35                  40                  45
Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro
50                  55                  60
Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp
65                  70                  75                  80
Phe His Met Ser Val Val Arg Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr
85                  90                  95
Leu Cys Gly Ala Ile Ser Ala Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser
100                 105                 110
Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr
115                 120                 125
Ala His Pro Ser Pro Ser Pro Arg Pro Ala Gly Gln Phe Gln Thr Leu
130                 135                 140
Val Gly Gly Ser Gly Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
145                 150                 155                 160
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
165                 170                 175
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
180                 185                 190
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
195                 200                 205
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
210                 215                 220
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
225                 230                 235                 240
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
245                 250                 255
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
260                 265                 270
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
275                 280                 285
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
290                 295                 300
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
305                 310                 315                 320
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
325                 330                 335
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
340                 345                 350
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
355                 360                 365
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Ser Gly His His His His
370                 375                 380
His His
385
<210>  391
<211>  386
<212>  Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223>  PD-1 человека A132L ECD-Fc-His6
<400>  391
Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu
1               5                   10                  15
Leu Val Val Thr Glu Gly Asp Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser
20                  25                  30
Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser
35                  40                  45
Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro
50                  55                  60
Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp
65                  70                  75                  80
Phe His Met Ser Val Val Arg Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr
85                  90                  95
Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu Ala Pro Lys Leu Gln Ile Lys Glu Ser
100                 105                 110
Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr
115                 120                 125
Ala His Pro Ser Pro Ser Pro Arg Pro Ala Gly Gln Phe Gln Thr Leu
130                 135                 140
Val Gly Gly Ser Gly Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
145                 150                 155                 160
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
165                 170                 175
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
180                 185                 190
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
195                 200                 205
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
210                 215                 220
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
225                 230                 235                 240
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
245                 250                 255
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
260                 265                 270
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
275                 280                 285
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
290                 295                 300
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
305                 310                 315                 320
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
325                 330                 335
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
340                 345                 350
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
355                 360                 365
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Ser Gly His His His His
370                 375                 380
His His
385
<210>  392
<211>  386
<212>  Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223>  PD-1 человека I134A ECD-Fc-His6
<400>  392
Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu
1               5                   10                  15
Leu Val Val Thr Glu Gly Asp Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser
20                  25                  30
Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser
35                  40                  45
Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro
50                  55                  60
Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp
65                  70                  75                  80
Phe His Met Ser Val Val Arg Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr
85                  90                  95
Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu Ala Pro Lys Ala Gln Ala Lys Glu Ser
100                 105                 110
Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr
115                 120                 125
Ala His Pro Ser Pro Ser Pro Arg Pro Ala Gly Gln Phe Gln Thr Leu
130                 135                 140
Val Gly Gly Ser Gly Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
145                 150                 155                 160
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
165                 170                 175
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
180                 185                 190
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
195                 200                 205
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
210                 215                 220
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
225                 230                 235                 240
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
245                 250                 255
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
260                 265                 270
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
275                 280                 285
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
290                 295                 300
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
305                 310                 315                 320
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
325                 330                 335
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
340                 345                 350
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
355                 360                 365
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Ser Gly His His His His
370                 375                 380
His His
385
<210>  393
<211>  390
<212>  Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223>  PD-1 человека E136A ECD-Fc-His6
<400>  393
Asp Thr Thr Gly Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp Asn Pro Pro Thr Phe
1               5                   10                  15
Ser Pro Ala Leu Leu Val Val Thr Glu Gly Asp Asn Ala Thr Phe Thr
20                  25                  30
Cys Ser Phe Ser Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val Leu Asn Trp Tyr Arg
35                  40                  45
Met Ser Pro Ser Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala Ala Phe Pro Glu Asp
50                  55                  60
Arg Ser Gln Pro Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg Val Thr Gln Leu Pro
65                  70                  75                  80
Asn Gly Arg Asp Phe His Met Ser Val Val Arg Ala Arg Arg Asn Asp
85                  90                  95
Ser Gly Thr Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu Ala Pro Lys Ala Gln
100                 105                 110
Ile Lys Ala Ser Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val Thr Glu Arg Arg Ala
115                 120                 125
Glu Val Pro Thr Ala His Pro Ser Pro Ser Pro Arg Pro Ala Gly Gln
130                 135                 140
Phe Gln Thr Leu Val Gly Gly Ser Gly Gly Asp Lys Thr His Thr Cys
145                 150                 155                 160
Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu
165                 170                 175
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
180                 185                 190
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys
195                 200                 205
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
210                 215                 220
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
225                 230                 235                 240
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
245                 250                 255
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
260                 265                 270
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
275                 280                 285
Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
290                 295                 300
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
305                 310                 315                 320
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
325                 330                 335
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
340                 345                 350
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
355                 360                 365
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Ser Gly
370                 375                 380
His His His His His His
385                 390
<210>  394
<211>  384
<212>  Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223>  PD-1 мыши H129P ECD-Fc-His6
<400>  394
Leu Glu Val Pro Asn Gly Pro Trp Arg Ser Leu Thr Phe Tyr Pro Ala
1               5                   10                  15
Trp Leu Thr Val Ser Glu Gly Ala Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Leu
20                  25                  30
Ser Asn Trp Ser Glu Asp Leu Met Leu Asn Trp Asn Arg Leu Ser Pro
35                  40                  45
Ser Asn Gln Thr Glu Lys Gln Ala Ala Phe Cys Asn Gly Leu Ser Gln
50                  55                  60
Pro Val Gln Asp Ala Arg Phe Gln Ile Ile Gln Leu Pro Asn Arg His
65                  70                  75                  80
Asp Phe His Met Asn Ile Leu Asp Thr Arg Arg Asn Asp Ser Gly Ile
85                  90                  95
Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu Pro Pro Lys Ala Lys Ile Glu Glu
100                 105                 110
Ser Pro Gly Ala Glu Leu Val Val Thr Glu Arg Ile Leu Glu Thr Ser
115                 120                 125
Thr Arg Tyr Pro Ser Pro Ser Pro Lys Pro Glu Gly Arg Phe Gln Gly
130                 135                 140
Gly Ser Gly Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
145                 150                 155                 160
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
165                 170                 175
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
180                 185                 190
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
195                 200                 205
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
210                 215                 220
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
225                 230                 235                 240
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
245                 250                 255
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
260                 265                 270
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
275                 280                 285
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
290                 295                 300
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
305                 310                 315                 320
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
325                 330                 335
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
340                 345                 350
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
355                 360                 365
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Ser Gly His His His His His His
370                 375                 380
<210>  395
<211>  287
<212>  Белок
<213>  Rattus norvegicus
<400>  395
Met Trp Val Gln Gln Val Pro Trp Ser Phe Thr Trp Ala Val Leu Gln
1               5                   10                  15
Leu Ser Trp Gln Ser Gly Trp Leu Leu Glu Val Leu Asn Lys Pro Trp
20                  25                  30
Arg Pro Leu Thr Phe Ser Pro Thr Trp Leu Thr Val Ser Glu Gly Ala
35                  40                  45
Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser Asn Trp Ser Glu Asp Leu Lys
50                  55                  60
Leu Asn Trp Tyr Arg Leu Ser Pro Ser Asn Gln Thr Glu Lys Gln Ala
65                  70                  75                  80
Ala Phe Cys Asn Gly Tyr Ser Gln Pro Val Arg Asp Ala Arg Phe Gln
85                  90                  95
Ile Val Gln Leu Pro Asn Gly His Asp Phe His Met Asn Ile Leu Asp
100                 105                 110
Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Ile Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu
115                 120                 125
Pro Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser Pro Gly Ala Glu Leu Val Val
130                 135                 140
Thr Glu Arg Ile Leu Glu Thr Pro Thr Arg Tyr Pro Arg Pro Ser Pro
145                 150                 155                 160
Lys Pro Glu Gly Gln Phe Gln Gly Leu Val Ile Val Ile Met Ser Val
165                 170                 175
Leu Val Gly Ile Pro Val Leu Leu Leu Leu Ala Trp Ala Leu Ala Ala
180                 185                 190
Phe Cys Ser Thr Gly Met Ser Glu Ala Arg Glu Ala Gly Arg Lys Glu
195                 200                 205
Asp Pro Pro Lys Glu Ala His Ala Ala Ala Pro Val Pro Ser Val Ala
210                 215                 220
Tyr Glu Glu Leu Asp Phe Gln Gly Arg Glu Lys Thr Pro Glu Pro Ala
225                 230                 235                 240
Pro Cys Val His Thr Glu Tyr Ala Thr Ile Val Phe Thr Glu Gly Leu
245                 250                 255
Asp Ala Ser Ala Ile Gly Arg Arg Gly Ser Ala Asp Gly Pro Gln Gly
260                 265                 270
Pro Arg Pro Pro Arg His Glu Asp Gly His Cys Ser Trp Pro Leu
275                 280                 285
<210>  396
<211>  263
<212>  Белок
<213>  Rattus norvegicus
<400>  396
Leu Glu Val Leu Asn Lys Pro Trp Arg Pro Leu Thr Phe Ser Pro Thr
1               5                   10                  15
Trp Leu Thr Val Ser Glu Gly Ala Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe
20                  25                  30
Ser Asn Trp Ser Glu Asp Leu Lys Leu Asn Trp Tyr Arg Leu Ser Pro
35                  40                  45
Ser Asn Gln Thr Glu Lys Gln Ala Ala Phe Cys Asn Gly Tyr Ser Gln
50                  55                  60
Pro Val Arg Asp Ala Arg Phe Gln Ile Val Gln Leu Pro Asn Gly His
65                  70                  75                  80
Asp Phe His Met Asn Ile Leu Asp Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Ile
85                  90                  95
Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu Pro Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu
100                 105                 110
Ser Pro Gly Ala Glu Leu Val Val Thr Glu Arg Ile Leu Glu Thr Pro
115                 120                 125
Thr Arg Tyr Pro Arg Pro Ser Pro Lys Pro Glu Gly Gln Phe Gln Gly
130                 135                 140
Leu Val Ile Val Ile Met Ser Val Leu Val Gly Ile Pro Val Leu Leu
145                 150                 155                 160
Leu Leu Ala Trp Ala Leu Ala Ala Phe Cys Ser Thr Gly Met Ser Glu
165                 170                 175
Ala Arg Glu Ala Gly Arg Lys Glu Asp Pro Pro Lys Glu Ala His Ala
180                 185                 190
Ala Ala Pro Val Pro Ser Val Ala Tyr Glu Glu Leu Asp Phe Gln Gly
195                 200                 205
Arg Glu Lys Thr Pro Glu Pro Ala Pro Cys Val His Thr Glu Tyr Ala
210                 215                 220
Thr Ile Val Phe Thr Glu Gly Leu Asp Ala Ser Ala Ile Gly Arg Arg
225                 230                 235                 240
Gly Ser Ala Asp Gly Pro Gln Gly Pro Arg Pro Pro Arg His Glu Asp
245                 250                 255
Gly His Cys Ser Trp Pro Leu
260
<210>  397
<211>  384
<212>  Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223>  PD-1 крысы P129H ECD-Fc-His6
<400>  397
Leu Glu Val Leu Asn Lys Pro Trp Arg Pro Leu Thr Phe Ser Pro Thr
1               5                   10                  15
Trp Leu Thr Val Ser Glu Gly Ala Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe
20                  25                  30
Ser Asn Trp Ser Glu Asp Leu Lys Leu Asn Trp Tyr Arg Leu Ser Pro
35                  40                  45
Ser Asn Gln Thr Glu Lys Gln Ala Ala Phe Cys Asn Gly Tyr Ser Gln
50                  55                  60
Pro Val Arg Asp Ala Arg Phe Gln Ile Val Gln Leu Pro Asn Gly His
65                  70                  75                  80
Asp Phe His Met Asn Ile Leu Asp Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Ile
85                  90                  95
Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu His Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu
100                 105                 110
Ser Pro Gly Ala Glu Leu Val Val Thr Glu Arg Ile Leu Glu Thr Pro
115                 120                 125
Thr Arg Tyr Pro Arg Pro Ser Pro Lys Pro Glu Gly Gln Phe Gln Gly
130                 135                 140
Gly Ser Gly Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
145                 150                 155                 160
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
165                 170                 175
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
180                 185                 190
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
195                 200                 205
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
210                 215                 220
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
225                 230                 235                 240
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
245                 250                 255
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
260                 265                 270
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
275                 280                 285
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
290                 295                 300
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
305                 310                 315                 320
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
325                 330                 335
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
340                 345                 350
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
355                 360                 365
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Ser Gly His His His His His His
370                 375                 380
<210>  398
<211>  288
<212>  Белок
<213>  Canis lupus familiaris
<400>  398
Met Gly Ser Arg Arg Gly Pro Trp Pro Leu Val Trp Ala Val Leu Gln
1               5                   10                  15
Leu Gly Trp Trp Pro Gly Trp Leu Leu Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp
20                  25                  30
Ser Pro Leu Thr Phe Ser Pro Ala Gln Leu Thr Val Gln Glu Gly Glu
35                  40                  45
Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Leu Ala Asp Ile Pro Asp Ser Phe Val
50                  55                  60
Leu Asn Trp Tyr Arg Leu Ser Pro Arg Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala
65                  70                  75                  80
Ala Phe Gln Glu Asp Arg Ile Glu Pro Gly Arg Asp Arg Arg Phe Arg
85                  90                  95
Val Thr Arg Leu Pro Asn Gly Arg Asp Phe His Met Ser Ile Val Ala
100                 105                 110
Ala Arg Leu Asn Asp Ser Gly Ile Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Tyr Leu
115                 120                 125
Pro Pro Asn Thr Gln Ile Asn Glu Ser Pro Arg Ala Glu Leu Ser Val
130                 135                 140
Thr Glu Arg Thr Leu Glu Pro Pro Thr Gln Ser Pro Ser Pro Pro Pro
145                 150                 155                 160
Arg Leu Ser Gly Gln Leu Gln Gly Leu Val Ile Gly Val Thr Ser Val
165                 170                 175
Leu Val Gly Val Leu Leu Leu Leu Leu Leu Thr Trp Val Leu Ala Ala
180                 185                 190
Val Phe Pro Arg Ala Thr Arg Gly Ala Cys Val Cys Gly Ser Glu Asp
195                 200                 205
Glu Pro Leu Lys Glu Gly Pro Asp Ala Ala Pro Val Phe Thr Leu Asp
210                 215                 220
Tyr Gly Glu Leu Asp Phe Gln Trp Arg Glu Lys Thr Pro Glu Pro Pro
225                 230                 235                 240
Ala Pro Cys Ala Pro Glu Gln Thr Glu Tyr Ala Thr Ile Val Phe Pro
245                 250                 255
Gly Arg Pro Ala Ser Pro Gly Arg Arg Ala Ser Ala Ser Ser Leu Gln
260                 265                 270
Gly Ala Gln Pro Pro Ser Pro Glu Asp Gly Pro Gly Leu Trp Pro Pro
275                 280                 285
<210>  399
<211>  264
<212>  Белок
<213>  Canis lupus familiaris
<400>  399
Leu Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp Ser Pro Leu Thr Phe Ser Pro Ala
1               5                   10                  15
Gln Leu Thr Val Gln Glu Gly Glu Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Leu
20                  25                  30
Ala Asp Ile Pro Asp Ser Phe Val Leu Asn Trp Tyr Arg Leu Ser Pro
35                  40                  45
Arg Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala Ala Phe Gln Glu Asp Arg Ile Glu
50                  55                  60
Pro Gly Arg Asp Arg Arg Phe Arg Val Thr Arg Leu Pro Asn Gly Arg
65                  70                  75                  80
Asp Phe His Met Ser Ile Val Ala Ala Arg Leu Asn Asp Ser Gly Ile
85                  90                  95
Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Tyr Leu Pro Pro Asn Thr Gln Ile Asn Glu
100                 105                 110
Ser Pro Arg Ala Glu Leu Ser Val Thr Glu Arg Thr Leu Glu Pro Pro
115                 120                 125
Thr Gln Ser Pro Ser Pro Pro Pro Arg Leu Ser Gly Gln Leu Gln Gly
130                 135                 140
Leu Val Ile Gly Val Thr Ser Val Leu Val Gly Val Leu Leu Leu Leu
145                 150                 155                 160
Leu Leu Thr Trp Val Leu Ala Ala Val Phe Pro Arg Ala Thr Arg Gly
165                 170                 175
Ala Cys Val Cys Gly Ser Glu Asp Glu Pro Leu Lys Glu Gly Pro Asp
180                 185                 190
Ala Ala Pro Val Phe Thr Leu Asp Tyr Gly Glu Leu Asp Phe Gln Trp
195                 200                 205
Arg Glu Lys Thr Pro Glu Pro Pro Ala Pro Cys Ala Pro Glu Gln Thr
210                 215                 220
Glu Tyr Ala Thr Ile Val Phe Pro Gly Arg Pro Ala Ser Pro Gly Arg
225                 230                 235                 240
Arg Ala Ser Ala Ser Ser Leu Gln Gly Ala Gln Pro Pro Ser Pro Glu
245                 250                 255
Asp Gly Pro Gly Leu Trp Pro Pro
260
<210>  400
<211>  20
<212>  Белок
<213>  Homo sapiens
<400>  400
Met Gly Thr Pro Ala Gln Leu Leu Phe Leu Leu Leu Leu Trp Leu Pro
1               5                   10                  15
Asp Thr Thr Gly
20
<210>  401
<211>  384
<212>  Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> PD-1 человека, внеклеточный домен (ECD)-Fc-His6
<400>  401
Leu Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala
1               5                   10                  15
Leu Leu Val Val Thr Glu Gly Asp Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe
20                  25                  30
Ser Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro
35                  40                  45
Ser Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln
50                  55                  60
Pro Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg
65                  70                  75                  80
Asp Phe His Met Ser Val Val Arg Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr
85                  90                  95
Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu
100                 105                 110
Ser Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro
115                 120                 125
Thr Ala His Pro Ser Pro Ser Pro Arg Pro Ala Gly Gln Phe Gln Gly
130                 135                 140
Gly Ser Gly Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
145                 150                 155                 160
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
165                 170                 175
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
180                 185                 190
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
195                 200                 205
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
210                 215                 220
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
225                 230                 235                 240
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
245                 250                 255
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
260                 265                 270
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
275                 280                 285
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
290                 295                 300
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
305                 310                 315                 320
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
325                 330                 335
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
340                 345                 350
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
355                 360                 365
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Ser Gly His His His His His His
370                 375                 380
<210>  402
<211>  386
<212>  Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223>  PD-1 человека D85G/R86L ECD-Fc-His6
<400>  402
Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu
1               5                   10                  15
Leu Val Val Thr Glu Gly Asp Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser
20                  25                  30
Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser
35                  40                  45
Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala Ala Phe Pro Glu Gly Leu Ser Gln Pro
50                  55                  60
Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp
65                  70                  75                  80
Phe His Met Ser Val Val Arg Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr
85                  90                  95
Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser
100                 105                 110
Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr
115                 120                 125
Ala His Pro Ser Pro Ser Pro Arg Pro Ala Gly Gln Phe Gln Thr Leu
130                 135                 140
Val Gly Gly Ser Gly Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
145                 150                 155                 160
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
165                 170                 175
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
180                 185                 190
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
195                 200                 205
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
210                 215                 220
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
225                 230                 235                 240
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
245                 250                 255
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
260                 265                 270
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
275                 280                 285
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
290                 295                 300
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
305                 310                 315                 320
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
325                 330                 335
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
340                 345                 350
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
355                 360                 365
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Ser Gly His His His His
370                 375                 380
His His
385
<210>  403
<211>  384
<212>  Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223>  PD-1 мыши ECD-Fc-His6
<400>  403
Leu Glu Val Pro Asn Gly Pro Trp Arg Ser Leu Thr Phe Tyr Pro Ala
1               5                   10                  15
Trp Leu Thr Val Ser Glu Gly Ala Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Leu
20                  25                  30
Ser Asn Trp Ser Glu Asp Leu Met Leu Asn Trp Asn Arg Leu Ser Pro
35                  40                  45
Ser Asn Gln Thr Glu Lys Gln Ala Ala Phe Cys Asn Gly Leu Ser Gln
50                  55                  60
Pro Val Gln Asp Ala Arg Phe Gln Ile Ile Gln Leu Pro Asn Arg His
65                  70                  75                  80
Asp Phe His Met Asn Ile Leu Asp Thr Arg Arg Asn Asp Ser Gly Ile
85                  90                  95
Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu His Pro Lys Ala Lys Ile Glu Glu
100                 105                 110
Ser Pro Gly Ala Glu Leu Val Val Thr Glu Arg Ile Leu Glu Thr Ser
115                 120                 125
Thr Arg Tyr Pro Ser Pro Ser Pro Lys Pro Glu Gly Arg Phe Gln Gly
130                 135                 140
Gly Ser Gly Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
145                 150                 155                 160
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
165                 170                 175
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
180                 185                 190
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
195                 200                 205
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
210                 215                 220
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
225                 230                 235                 240
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
245                 250                 255
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
260                 265                 270
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
275                 280                 285
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
290                 295                 300
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
305                 310                 315                 320
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
325                 330                 335
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
340                 345                 350
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
355                 360                 365
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Ser Gly His His His His His His
370                 375                 380
<210>  404
<211>  384
<212>  Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223>  PD-1 яванского макака ECD-Fc-His6
<400>  404
Leu Glu Ser Pro Asp Arg Pro Trp Asn Ala Pro Thr Phe Ser Pro Ala
1               5                   10                  15
Leu Leu Leu Val Thr Glu Gly Asp Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe
20                  25                  30
Ser Asn Ala Ser Glu Ser Phe Val Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro
35                  40                  45
Ser Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln
50                  55                  60
Pro Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg Val Thr Arg Leu Pro Asn Gly Arg
65                  70                  75                  80
Asp Phe His Met Ser Val Val Arg Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr
85                  90                  95
Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu
100                 105                 110
Ser Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro
115                 120                 125
Thr Ala His Pro Ser Pro Ser Pro Arg Pro Ala Gly Gln Phe Gln Gly
130                 135                 140
Gly Ser Gly Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
145                 150                 155                 160
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
165                 170                 175
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
180                 185                 190
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
195                 200                 205
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
210                 215                 220
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
225                 230                 235                 240
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
245                 250                 255
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
260                 265                 270
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
275                 280                 285
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
290                 295                 300
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
305                 310                 315                 320
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
325                 330                 335
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
340                 345                 350
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
355                 360                 365
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Ser Gly His His His His His His
370                 375                 380
<210>  405
<211>  384
<212>  Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223>  PD-1 крысы ECD-Fc-His6
<400>  405
Leu Glu Val Leu Asn Lys Pro Trp Arg Pro Leu Thr Phe Ser Pro Thr
1               5                   10                  15
Trp Leu Thr Val Ser Glu Gly Ala Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe
20                  25                  30
Ser Asn Trp Ser Glu Asp Leu Lys Leu Asn Trp Tyr Arg Leu Ser Pro
35                  40                  45
Ser Asn Gln Thr Glu Lys Gln Ala Ala Phe Cys Asn Gly Tyr Ser Gln
50                  55                  60
Pro Val Arg Asp Ala Arg Phe Gln Ile Val Gln Leu Pro Asn Gly His
65                  70                  75                  80
Asp Phe His Met Asn Ile Leu Asp Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Ile
85                  90                  95
Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu Pro Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu
100                 105                 110
Ser Pro Gly Ala Glu Leu Val Val Thr Glu Arg Ile Leu Glu Thr Pro
115                 120                 125
Thr Arg Tyr Pro Arg Pro Ser Pro Lys Pro Glu Gly Gln Phe Gln Gly
130                 135                 140
Gly Ser Gly Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
145                 150                 155                 160
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
165                 170                 175
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
180                 185                 190
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
195                 200                 205
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
210                 215                 220
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
225                 230                 235                 240
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
245                 250                 255
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
260                 265                 270
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
275                 280                 285
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
290                 295                 300
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
305                 310                 315                 320
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
325                 330                 335
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
340                 345                 350
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
355                 360                 365
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Ser Gly His His His His His His
370                 375                 380
<210>  406
<211>  384
<212>  Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223>  PD-1 собаки ECD-Fc-His6
<400>  406
Leu Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp Ser Pro Leu Thr Phe Ser Pro Ala
1               5                   10                  15
Gln Leu Thr Val Gln Glu Gly Glu Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Leu
20                  25                  30
Ala Asp Ile Pro Asp Ser Phe Val Leu Asn Trp Tyr Arg Leu Ser Pro
35                  40                  45
Arg Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala Ala Phe Gln Glu Asp Arg Ile Glu
50                  55                  60
Pro Gly Arg Asp Arg Arg Phe Arg Val Thr Arg Leu Pro Asn Gly Arg
65                  70                  75                  80
Asp Phe His Met Ser Ile Val Ala Ala Arg Leu Asn Asp Ser Gly Ile
85                  90                  95
Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Tyr Leu Pro Pro Asn Thr Gln Ile Asn Glu
100                 105                 110
Ser Pro Arg Ala Glu Leu Ser Val Thr Glu Arg Thr Leu Glu Pro Pro
115                 120                 125
Thr Gln Ser Pro Ser Pro Pro Pro Arg Leu Ser Gly Gln Leu Gln Gly
130                 135                 140
Gly Ser Gly Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
145                 150                 155                 160
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
165                 170                 175
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
180                 185                 190
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
195                 200                 205
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
210                 215                 220
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
225                 230                 235                 240
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
245                 250                 255
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
260                 265                 270
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
275                 280                 285
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
290                 295                 300
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
305                 310                 315                 320
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
325                 330                 335
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
340                 345                 350
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
355                 360                 365
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Ser Gly His His His His His His
370                 375                 380
<---