ИЗОПРОПИЛАМИД 2-[4-(4,6-ДИМЕТИЛ-2-ПИРИМИДИЛСУЛЬФАМИЛ)АНИЛИНО]ЦИНХОНИНОВОЙ КИСЛОТЫ, ПРОЯВЛЯЮЩИЙ ПРОТИВОВОСПАЛИТЕЛЬНУЮ И АНАЛЬГЕТИЧЕСКУЮ АКТИВНОСТЬ
ISOPROPYLAMIDE OF 2-[4-(4,6-DIMETHYL-2-PYRIMIDYLSULFAMYL)ANILINO]CINCHONIC ACID DEMONSTRATING ANTI-INFLAMMATORY AND ANALGESIC ACTIVITY

Изобретение относится к новым биологически активным соединениям, а именно к изопропиламиду 2-[4-(4,6-диметил-2-пиримидилсульфамил)-анилино]цинхониновой кислоты формулы I:
обладающего противовоспалительной и анальгетической активностью, что позволяет предположить возможность его использования в медицине в качестве лекарственного средства для лечения воспалительных процессов.
Ближайшим аналогом по структуре является изопропиламид 2-(4-хлоранилино)цинхониновой кислоты, который проявляет противовоспалительную и анальгетическую активность [Михалев А.И., Коньшин М.Е., Зуева М.В., Закс А.С., Вахрин М.И. Патент РФ на изобретение №2130018. Изопропиламид 2-(4-хлоранилино)цинхониновой кислоты, проявляющий противовоспалительную и анальгетическую активность. По заявке №97110942 от 02.07.97. Приоритет от 02.07.97. Зарегистрирован в государственном реестре изобретений РФ 10.05.1999 г.].
В медицинской практике широко используется медицинский препарат диклофенак натрия (ортофен) [Машковский М.Д. Лекарственные средства. - М.: Новая Волна, 2002, Т. 1, С.170], который взят нами в качестве эталона сравнения противовоспалительной и анальгетической активности.
Целью изобретения является поиск в ряду амидов цинхониновой кислоты соединения, проявляющего высокую противовоспалительную активность, обладающего при этом низкой токсичностью.
Поставленная цель достигается синтезом изопропиламида 2-[4,6-диметил-2-пиримидилсульфамил)анилино]цинхониновой кислоты взаимодействием изопропиламида 2-хлорцинхониновой кислоты с 2-(4-амино-бензолсульфамидо)-4,6-диметилпиримидином (сульфадимидином, сульфадимезином) [Машковский М.Д. Лекарственные средства, М.: Новая волна, 2002, Т.2, С.277] по следующей схеме:
Пример получения заявляемого соединения.
2,48 г (0,01 моль) изопропиламида 2-хлорцинхониновой кислоты [Павлова М.В., Михалев А.И., Коньшин М.Е., Закс А.С., Зуева М.В., Вахрин М.И. Синтез, противовоспалительная и анальгетическая активность 2-замещенных амидов цинхониновой кислоты // Хим.-фарм. журн., 1999, Т.33, №8, С.18-19] и 2,78 г (0,01 моль) 2-(4-аминобензолсульфамидо)-4,6-диметилпиримидина (сульфадимезина) в 10 мл ДМФА кипятят в течение 6 часов, охлаждают, остаток обрабатывают гексаном. Осадок отфильтровывают и перекристаллизовывают из этанола. Выход 1,9 г (85%)?.
25
26
6
3
Т.пл., 267-269°С. CHNOS.
Найдено, %: C 61,27; H 5,30; N 17,20.
Вычислено, %: C 61,20; H 5,34; N 17,13.
ИК-спектр получен на ИК-спектрометре SPECORD M-80 в вазелиновом масле, ν,
-1
2
см: 1648 (СО); 3300, 3336, 3378 (NH); 1160,1380 (SO).
ПМР-спектр (спектрометр ЯМР MERCURY-300 фирмы Varian, 100 МГц),
6
3
3
3
2
2
CH
NH
NH
в ДМСО-d, внутренний стандарт ГМДС, σ, м.д.: 1,20 д (6H, 2 CH); 2,27 с (6H, 2CH); 4,16 м (1H, (CH); 6,77-8,15 м (10H, HetH, ArH); 8,67 д (1H, -амид); 10,00 с (1H, Het); 11,41 уш. с (1H, SONH). Полученное соединение представляет собой бесцветное кристаллическое вещество, нерастворимое в воде. При хранении на воздухе соединение устойчиво.
Заявляемое соединение и ортофен изучены на наличие противовоспалительного и анальгетического действия и острой токсичности. Исследования были проведены на 100 белых нелинейных крысах, сгруппированных по 5 особей массой 120-200 г на 70 нелинейных мышах массой 30-40 г.
50
50
Острая токсичность полученного соединения и ортофена изучена на белых мышах по методу [Прозоровский В.Б. Практическое пособие по ускоренному определению среднеэффективных доз и концентраций биологически активных веществ. - С.-Петербург, НПП-Наука, 1992, с.42] при внутрибрюшинном введении и установлено, что ЛД для заявляемого соединения >1260 мг/кг, и оно относится по классификации Сидорова К.К. [Сидоров К.К., Измеров Н.Ф. Параметры токсикометрии промышленных ядов при однократном воздействии. М.: Медицина, 1977, 240 с.] к практически нетоксичным веществам, а ЛД для ортофена 132±46,8 мг/кг. Соединение 1 является менее токсичным, чем структурный аналог и ортофен, соответственно в 2 и 9,5 раз.
Противовоспалительная активность (ПВА) изучена на белых крысах обоего пола массой 120-200 г. на каррагениновой модели воспаления, создаваемой субплантантным введением в заднюю лапу крыс 0,1 мл 1% водного раствора каррагенина (Marine Colloids Inc., N.Y). В качестве эталона сравнения использовался ортофен (Россия). Исследуемое вещество и ортофен вводили в виде водной взвеси с твином-80 внутрибрюшинно за один час до моделирования воспаления. Прирост объема воспаленной стопы оценивали онкометрически через 3 и 5 часов после введения флогогенного агента и вычисляли процент торможения отека к контролю [Шварц Г.Я. Методические указания по изучению новых нестероидных противовоспалительных препаратов / Шварц Г.Я., Сюбаев Р.Д. // Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. М.: Ремедиум, 2000, С.234-241].
Анальгетическую активность (АА) соединения изучали на модели «уксусных корчей» на беспородных белых мышах обоего пола. Мышам внутрибрюшинно вводили 0,75% водный раствор уксусной кислоты в объеме 0,25 мл и сразу после этого подсчитывали количество «корчей» в течение 10 минут [Winter C.A. Carrageenininduced oedema in an assay for antiinflammatory drugs / Winter C.A., Risley E.A., Nuss G.M. // Proc. Soc. Exp. Biol. Med. - 1962. Yol.111. P.544-547]. Исследуемое вещество вводили перорально через желудочный зонд в виде водной взвеси с твином-80 за 1 час до введения уксусной кислоты. Результаты оценивали по способности тормозить количество «корчей» в процентах по сравнению с контрольными животными, получавшими эквивалентную водную взвесь с твином-80.
Данные опытов по ПВА и АА обрабатывали статистически с вычислением критерия достоверности [Беленький М.Л. Элементы количественной оценки фармакологического эффекта, 2-е изд. Л.: Медгиз, 1963, с.81-106]. Результаты исследований представлены в таблице.
Таблица 1
Острая токсичность, противовоспалительная и анальгетическая активность соединения I в сравнении с аналогом по структуре и ортофеном
Соединение
ЛД<sub>50</sub>, мг/кг
ПВА, % торможения отека к контролю после введения каррагенина через
Анальгетическая активность, % торможения "уксусных корчей"
Терапевтический индекс по ПВАЛД<sub>50</sub>/ЕД<sub>50</sub>
Доза, мг/кг
3 ч
5 ч
Заявляемое соединение I
>1260
25
57,1****
52,2****
50,2***
143,2
20
67,4****
64,6****
…
…
15
62,8****
61,0****
…
…
10
56,5**
49,5**
…
…
5
38,6**
36,3**
…
…
1
43,8**
41,1**
…
…
1<sup>1</sup>
47,6***
44,4***
43,7***
…
0,5
43,8**
42,4**
…
…
0,1
37,8**
20,7*
…
…
Аналог по структуре
631±25,0
25
56,8****
61,0****
34,4***
79,0
10
50,0****
51,8****
…
…
5
44,2***
49,2***
…
…
1
40,0****
44,0****
…
…
Ортофен
132±46,8
25
69,4****
72,2**
…
16,5
25<sup>1</sup>
65,6****
66,4***
50,0**
…
10
55,4**
52,2**
22,0**
…
5
40,8**
41,0**
0
…
* - p>0,05; ** - p<0,05; *** - p<0,01; **** - p<0,001
<sup>1 </sup>- соединение вводили через рот
В результате опытов установлено, что заявляемое соединение при внутрибрюшинном введении обладает противовоспалительным действием в дозах 25-1 мг/кг (таблица), которое проявляется торможением каррагенинового воспаления во все сроки наблюдения. Разница между ПВА соединения 1 в дозе 10 мг/кг и активностью ортофена в этой же дозе стастически незначима. По анальгетическому действию исследуемое соединение в дозе 25 мг/кг превосходит аналог по структуре и не уступает активности ортофена в этой же дозе.
50
50
Для заявляемого соединения и ортофена математическим методом (методом наименьших квадратов) [Государственная фармакопея СССР, 11-е изд., вып.1. М.: Медицина, 1987, 334 с.] определена среднеэффективная доза ЕД, вызывающая уменьшение отека лапы животных на 50% при внутрибрюшинном способе введения, и ЕД для заявляемого соединения составляет 8,8 мг/кг, а ортофена - 8,0 мг/кг.
50
50
Положительным отличием заявляемого соединения от применяемого в медицине противовоспалительного средства - ортофена является большая величина терапевтичекого индекса по ПВА (ЛД/ЕД), которые соответственно равны 143,2 и 16,5, т.е. терапевтический индекс соединения 1 в 8,7 раза больше, чем у ортофена.
Изучены эффекты заявляемого соединения при воспалительных реакциях, вызываемых классическими флогогенными агентами: гистамином, серотонином, брадикинином. Опыты проведены на 55 белых нелинейных крысах обоего пола массой 140-200 г, сгруппированных по 5 особей.
Исследуемое соединение 1 вводили внутрибрюшинно за 1 час до субплантарной инъекции в заднюю лапу крыс 0,1 мл водных растворов: 0,1% гистамина («Fluka» Швейцария), 0,01% серотонина («Rеanal»), 0,01% брадикинина («Sandoz», Швейцария). Соединение 1 вводили в дозе 1 мг/кг в водной суспензии с твином-80, контрольные животные получали эквиобъемные количества водной взвеси твина без вещества. Онкометрию лап животных проводили через 15, 30, 45, 90 минут. ПВА соединения 1 оценивали на пике воспаления: 45 мин при серотониновом, 30 мин - гистаминовом и 15-18 мин при брадикининовом. Эффект рассчитывали по формуле, используемой при определении влияния исследуемого соединения на каррагениновое воспаление [Шварц Г.Я. Методические указания по изучению новых нестероидных противовоспалительных препаратов / Шварц Г.Я., Сюбаев Р.Д. // Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. М.: Ремедиум, 2000, С.234-24]. Результаты исследований представлены в таблице 2.
Таблица 2
Эффект соединения I после инъекции флогогена, мин.
Флогоген
Доза, мг/кг
15
30
45
90
Гистамин
1
24,0*
27,8**
23,2**
29,5**
Серотонин
1
6,4*
4,4*
7,1*
3,9*
Брадикинин
1
16,5*
8,7*
13,0*
0,5*
*p>0,05; **p<0,05 по сравнению с контролем
Из данных, приведенных в таблице 2 следует, что соединение 1 в дозе 1 мг/кг достоверно, но слабо тормозит гистаминовый отек через 30,45, 90 мин после инъекции флогогена, но не изменяет интенсивность и динамику воспалительной реакции на экзогенный серотонин и брадикинин.