СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ РЕЦИДИВА РАКА ЯИЧНИКОВ
METHOD FOR PREDICTION OF RECURRENT OVARIAN CARCINOMA

Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использовано для прогнозирования течения заболевания у больных раком яичников.
Несмотря на достигнутые успехи в лечении и диагностике злокачественных опухолей яичников результаты лечения продолжают оставаться неудовлетворительными. Злокачественные опухоли яичников составляют 35% в структуре онкологической заболеваемости женщин и стабильно занимают третье место после рака тела и шейки матки, кроме того, имеет высокие показатели смертности, занимая 5 место в структуре смертности от злокачественных новообразований у женщин. Пятилетняя выживаемость при III-IV стадии заболевания составляет 5-8%.
За последние 10 лет в России показатель заболеваемости увеличился на 7,1% и у около 70% пациенток имеют распространенный опухолевый процесс (см. Старинский В.В., Сергеева Н.С., Маршутина Н.В., Корнеева И.А. Проблемы ранней диагностики и скрининга рака яичников: реальность и перспективы. // Онкология. Журнал им. П.А. Герцена №1, 2013 г. С.56-62), что может быть связано с поздней диагностикой, скрытым течением заболевания, а также с тем, что на настоящий момент способы лечения рака яичников являются лишь отчасти эффективными (см. Мерабишвили В.М., Богданова Е.М., Урманчеева А.Ф., Чепик О.Ф., Сафронникова Н.Р., Лалианци Э.И. Возрастные особенности заболеваемости, смертности, морфологической верификации злокачественных новообразований яичников. // Вопросы онкологии, т.56, № - 2010 г. С.144-151).
Важной проблемой в онкологии является разработка (факторов прогноза течения заболевания, которые смогли бы помочь в оценке дальнейшего прогноза течения заболевания и планировании лечения.
В настоящее время известны такие факторы прогноза как: стадия заболевания, гистологический тип опухоли, степень дифференцировки опухоли, объем остаточных опухолевых масс при циторедуктивных операциях, возраст больных, стадия заболевания. Также имеются данные о прогностической значимости маркера СА-125. Чувствительность для серозного рака яичников колеблется от 42 до 99% при III-IV стадии, поэтому использование СА-125 в комбинации с другими факторами повышает специфичность и чувствительность теста (см. Лактионов К.П., Левкина И.В., Кушлинский Д.Н., Герштейн Е.С. Исследование матриксных металлопротеиназ и их тканевых ингибиторов у больных с новообразованиями яичников. // Опухоли женской репродуктивной системы №2 - 2012 г. С.48-54).
Однако тест не является строго специфичным, так как его повышение может быть связано с беременностью, эндометриозом, воспалительными заболеваниями в малом тазу, доброкачественными опухолевыми процессами (см. Старинский В.В., Сергеева Н.С., Маршутина Н.В., Корнеева И.А. Проблемы ранней диагностики и скрининга рака яичников: реальность и перспективы. // Онкология. Журнал им. П.А. Герцена №1, 2013 г. С.56-62).
Еще одним фактором прогноза является определение плоидности клеток в опухоли методом ДНК-проточной цитофлоурометрии у больных с распространенным раком яичников и, по мнению ряда авторов, этот фактор имеет самостоятельное прогностическое значение и дополняет известные факторы прогноза (см. Новик В.И., Геворкян В.А., Максимов С.Я. Прогностическая значимость плоидности опухолевых клеток у больных распространенным раком яичников. // Вопросы онкологии, т.52, №1, 2006 г. С.54-58; Паниченко И.В., Богатырев В.Н., Жорданиа К.И., Кузнецов В.В., Анурова О.А. Прогностическое значение параметров ДНК-проточной цитофлюорометрии при раке яичников.// Российский онкологический журнал, №3, 2007 г. С.25-28).
Известен способ прогнозирования рецидива рака молочной железы, основанный на биохимическом исследовании менопаузальных женщин после комплексного лечения. Развитие рецидива констатируют при снижении соотношения концентрации эстриола к концентрации эстрона и эстрадиола в моче в зависимости от длительности безрецидивного периода (см. RU №2263319 С2, G01N 33/74, опубл. 27.10.2005, Бюл. №30). Недостатком способа является возможность использовать только при раке молочной железы у женщин в постменопаузе и использование параметров, определяемых при биохимическом исследовании.
Также известен способ прогнозирования рецидива серозного рака яичников (см. патент RU №2290078 С1, опубл. 27.12.2006, Бюл. №36). Сущностью изобретения является то, что оцениваются только морфологические параметры опухоли и вероятность повторного роста определяют по формуле
<mrow><mi>Y</mi><mo>=</mo><mfrac><mn>1</mn><mrow><mn>1</mn><mo>+</mo><msup><mi>e</mi><mrow><mo>−</mo><mo stretchy="false">(</mo><mn>266,67</mn><mo>−</mo><mn>2,30</mn><mo>⋅</mo><mi>Х</mi><mn>1</mn><mo>−</mo><mn>26,93</mn><mo>⋅</mo><mi>Х</mi><mn>2</mn><mo>+</mo><mn>68,06</mn><mo>⋅</mo><mi>Х</mi><mn>3</mn><mo>−</mo><mn>24,33</mn><mo>⋅</mo><mi>Х</mi><mn>4</mn><mo>−</mo><mn>0,78</mn><mo>⋅</mo><mi>Х</mi><mn>5</mn><mo stretchy="false">)</mo></mrow></msup></mrow></mfrac></mrow>
2
где X1 - площадь раковой клетки (мкм), измеряется окуляром-микрометром или анализатором телевизионного изображения, мкм; Х2 - средняя плоидность ядер опухолевых клеток (с) измеряется фотометром в единицах количества наборов хромосом (с); Х3 - интенсивность мечения р53 (балл), отсутствие экспрессии р53 в опухолевых клетках - 0 баллов; экспрессия р53 выявлена в 1-10% клеток - 1 балл; онкоген-супрессор р53 визуализируется в 11-50% клеток опухоли - 2 балла; р53 определяется в 51-100% раковых клеток - 3 балла; Х4 - интенсивность мечения рецепторов эстрогена (балл), отсутствие экспрессии рецепторов прогестерона в опухолевых клетках - 0 баллов; экспрессия рецепторов прогестерона выявлена в 1-10% клеток 1 балл; рецепторы прогестерона визуализируется в 11-50% клеток опухоли - 2 балла; рецепторы прогестерона определяется в 51-100% раковых клеток - 3 балла; Х5 - величина экспрессии PCNA (ядерного антигена пролиферирующих клеток), %, определяется по количеству PCNA - позитивных клеток в опухоли, при этом конечная переменная Y может принимать значения в диапазоне от 0 до 1, значения 0≤Y≤0,5 следует расценивать как показатель низкого риска возобновления опухолевого роста, в то время как 0,5<Y≤1 свидетельствует в пользу высокой вероятности рецидивирования.
Однако недостатком данного способа, на наш взгляд, является использование большого количества параметров и использование сложных вычислений.
Техническим результатом настоящего изобретения является возможность прогноза развития рецидива рака яичников по данным ДНК-цитометрического анализа опухолевой ткани.
Технический результат достигается тем, что в опухолевой ткани яичников определяют долю клеток в S фазе клеточного цикла, при значении этого показателя менее 15,9% прогнозируют благоприятный исход, а при значении этого показателя более 15,9% прогнозируют неблагоприятный исход.
Способ осуществляется следующим образом.
Для анализа ДНК клеток опухолевой ткани яичников, полученной после операции, используют CycleTEST™PLUS DNA ReagentKit (Кат. №340242, Becton Dickinson).
3
3
Подготовка тканей опухоли для цитометрического анализа осуществляют с использованием дезагрегирующего устройства BD Medimachine. Образец ткани опухоли яичника (10-20 мм) нарезают небольшими кусочками по 1-2 мм и помещают с 1 мл буфера в медикон. Время дезагрегации составляет 40 сек.
После центрифугирования суспензии 5 минут при 250 g концентрация клеток доводят до миллиона клеток/мл.
Образцы (не менее 20000 клеток) после окрашивания пропидиумом йодидом (PI) анализируют на проточном цитофлуориметре BD FacsCantooII, оборудованном модулем дискриминации дуплетов. Для тестирования и подтверждения оптимальной работы проточного нитометра используют универсальные биологические частицы DNA QC Particles (BD, кат. №349523).
Полученные данные обрабатывают с помощью компьютерной программы ModFit LT, позволяющей анализировать распределение клеток опухоли по фазам клеточного цикла и детализировать число клеток в фазах S. Долю клеток в S фазе клеточного цикла выражают в процентах. Диплоидным стандартом служат лимфоциты здоровых доноров. При доле клеток в S фазе клеточного цикла менее 15,9% прогнозируют благоприятный исход, а при доле клеток в S фазе клеточного цикла более 15,9% прогнозируют неблагоприятный исход.
Пример 1.
Больная Д., 62 года, история болезни С-1678/6, поступила в отделение гинекологии РНИОИ в ноябре 2011 г. с диагнозом: рак яичников St. IV, гр.2, метастаз в паховый лимфатический узел справа.
Жалобы на одышку, дискомфорт внизу живота, частое мочеиспускание малыми порциями, образование в правой паховой области, общую слабость.
Объективно: Сознание ясное. Кожные покровы бледно-розовые. Дыхание везикулярное, одышка при физической нагрузке. Гемодинамика стабильная. Живот мягкий, в акте дыхания участвует.
Генитальный статус: Наружные половые органы развиты правильно. Выраженное опущение передней стенки влагалища. Шейка матки макроскопически не изменена. Матка несколько больше нормы. В малом тазу определяется объемное образование до 25 см в диаметре, верхним полюсом доходит до гипогастрия. В заднем своде опухолевая инфильтрация. Увеличение пахового лимфатического узла справа до 2,5 см в диаметре.
30.11.11 выполнено удаление паховых лимфатических узлов справа (гистологический анализ (ГА) №73105/11 - метастаз серозной аденокарциномы).
Больная получила 2 неоадъювантных курса ПХТ.
08.02.12 выполнена операция полного объема: надвлагалищная ампутация матки с придатками; экстирпация большого сальника.
ГА №7628-7643/12 - в правом яичнике папиллярный рак умеренно-дифференцированный с гиалинозом стромы. В левом яичнике серозно-папиллярный рак умеренно-дифференцированный с гиалипозом стромы. В большом сальнике метастаз рака папиллярного строения.
В опухолевой ткани, полученной после операции, с помощью проточной цитометрии определена доля клеток в S фазе клеточного цикла - 10,02%, что соответствует благоприятному прогнозу.
В дальнейшем больная получила 6 адъювантных курсов ПХТ.
В настоящее время больная жива без признаков рецидива и метастазов. Наблюдается 16 мес.
Пример 2. Больная О., 58 лет, история болезни С-3600/б, поступила в отделение гинекологии РНИОИ 8.10.11 с диагнозом: рак яичников StIIIC, гр.2.
Жалобы на боли внизу живота, увеличение живота в размерах. Объективно: Сознание ясное. Кожные покровы бледно-розовые. Дыхание везикулярное. Гемодинамика стабильная. Живот увеличен в размерах за счет асцита.
Генитальный статус: Наружные половые органы развиты правильно. Шейка матки макроскопически не изменена. Матка нормального размера. Придатки с обеих сторон исследовать не представляется возможным за счет наличия асцитической жидкости. В заднем своде определяется опухолевая инфильтрация.
С целью верификации процесса выполнена пункция заднего свода ЦА №24827-29 аденокарцинома.
Больная получила неоадъювантных 3 курса.
20.03.12 выполнена операция полного объема: надвлагалищная ампутация матки с придатками, экстирпация большого сальника. Гистологический анализ (Г.А.) №16888-95/12. В правом и левом яичнике умереннодифференцированная папиллярная аденокарцинома. В большом сальнике метастаз рака.
В опухолевой ткани, полученной после операции, с помощью проточной цитометрии доля клеток в S фазе клеточного цикла составила 19,02%, что соответствует неблагоприятному прогнозу.
В послеоперационном периоде больная получила адъювантный курс ПХТ и была выписана для продолжения лечения по месту жительства.
Через 4 месяца у больной отмечен рецидив заболевания.
Данный способ применялся для прогноза рецидива рака яичников у 24 больных.
Способ является промышленно применимым и может быть воспроизведен и многократно повторен в гинекологических клиниках общей лечебной сети и специализированных стационарах онкоучреждений.