Обнаружение лекарственных веществ и наркотических средств в биологических жидкостях методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с времяпролетным масс-спектрометрическим детектором

I Обнаружение лекарственных веществ и наркотических средств в биологических жидкостях методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с времяпролетным масс-спектрометрическим детектором

• В. Г. Унчикова, М. В. Ковальская, Н. А. Крупина

ГБУЗ МО «Бюро СМЭ» МЗ МО (нач.— д.м.н., проф. В. А. Клевно) Аннотация: Доклад посвящен методу обнаружения наркотических средств и лекарственных веществ в крови, моче методом жидкостной хроматографии на жидкостном хроматографе «Agilent Technologies 1200» с квадрупольным времяпролетным масс-спектрометрическим детектором «Agilent Technologies 6520». За основу был взят метод, разработанный немецкими специалистами S. Broecker, S. Herre, F. Pragst. Ключевые слова: гибридный квадрупольный времяпролётный масс-спектрометр (Q-TOF), скрининг на неизвестное, судебная токсикология

Detection of drugs of abuse and medicaments in biological fluids by high-performance liquid chromatography with time of flight mass spectrometry detector

• V. G. Unchikova, M. V. Kovalskaya, N. A. Krupina Abstract: The report focuses on methods for the detection of drugs of abuse in blood, urine by Q-TOF LC/MS. The method developed by German experts

S. Broecker, S. Herre, F. Pragst was the basis for our method.

Keywords: Q-TOF LC/MS, screening for unknown, forensic toxicology

Метод высокоэффективной жидкостной хроматографии с времяпролетным масс-спектрометрическим детектором (Q-TOF LC/MS) открывает новые возможности в химико-токсикологическом анализе. При использовании Q-TOF LC/MS метода в скрининге биологических жидкостей на неизвестное токсикологически значимое вещество обеспечивается достоверность полученных результатов.

Согласно внедренному методу для Q-TOF LC/MS используются мобильные фазы особой чистоты: элюент А -10mM аммония ацетат в воде (рН 6,8), элюент В - 100% карбинол в соотношении 9:1. Время анализа 23 минуты. Объем вводимой пробы 5 мкл.

Пробоподготовка мочи: к 100 мкл мочи добавляют 400 мкл 10mM аммония ацетата в воде. Центрифугируют при 13500 об/мин. Отбирают 400 мкл пробы, которую исследуют методом Q-TOF LC/MS.

Пробоподготовка крови предусматривает осаждение белков ацетонитрилом. Последний выпаривают досуха. Сухой остаток растворяют в 80 мкл смеси элюентов. Подготовленный образец исследуют методом Q-TOF LC/MS.

Идентификацию наблюдаемых на хроматограмме пиков проводят по масс-спектрам электронного удара, ионным масс-спектрам библиотеки «Forensic Tox AM PCDL», собранной при трех энергиях соударения (10, 20, 40 еУ).

Предварительно было проведено исследование контрольных смесей (Medichem Drug U-Conformation cut-off -25% / cut-off + 25%) для исследования веществ, вызывающих интоксикацию и наркотическое опьянение. Это лиофилизированный референсный материал, изготовленный на матрице человеческой мочи и содержащий наркотические и лекарственные вещества в двухуровневой концентрации. Концентрации добавленных веществ

лежат в диапазоне -25% и +25% от пороговых значений (cut-off), рекомендованных EWDTS (European Workplace Drug Testing Society).

В контрольном материале методом Q-TOF LC/MS были обнаружены следующие вещества с соответствующими значениями величин пороговых концентраций: амфетамин, метамфетамин, МДА, МДЕА, мДмА, МБДБ -200нг/мл; 7-аминофлунитразепам, нордиазепам - 100 нг/ мл; морфин, кодеин, дигидрокодеин - 300 нг/мл; метадон, ЭДДП (2-этилиден-1,5-диметил-3,3-дифенилпирроли-дин) - 250 нг/мл; метаквалон, пропоксифен - 300 нг/мл; фенциклидин - 25 нг/мл; золпидем - 100 нг/мл.

ВЫВОДЫ

Благодаря высокой чувствительности и селективности метода Q-TOF LC/MS, исследование проб мочи после подготовки с разведением и проб крови после процедуры осаждения белков позволяет использовать его для скрининга на неизвестные токсикологически значимые вещества и их метаболиты, в том числе II фазы метаболизма в концентрациях на уровне величин пороговых значений.

АВТОРЫ:_

Аксенова Галина Юрьевна — Заведующая Можайским судебно-химическим отделом государственного бюджетного учреждения здравоохранения Московской области «Бюро судебно-медицинской экспертизы» (ГБУЗ МО «Бюро СМЭ»). Адрес: 111401, г. Москва, ул. 1-я Владимирская, д. 33, корп. 1, ГБУЗ МО «Бюро СМЭ»

• E-mail: aksenova@sudmedmo.ru

Артамонова Зоя Николаевна — врач - судебно-медицинский эксперт судебно-химического отдела государственного бюджетного учреждения здравоохранения Московской области «Бюро судебно-медицинской экспертизы» (ГБУЗ МО «Бюро СМЭ»). Адрес: 111401, г. Москва, ул. 1-я Владимирская, д. 33, корп. 1, ГБУЗ МО «Бюро СМЭ» • E-mail: 6888761@gmail.com Бантыш Илья Борисович — врач - судебно-медицинский эксперт судебно-химического отдела государственного бюджетного учреждения здравоохранения Московской области «Бюро судебно-медицинской экспертизы» (ГБУЗ МО «Бюро СМЭ»). Адрес: 111401, г. Москва, ул. 1-я Владимирская, д. 33, корп. 1, ГБУЗ МО «Бюро СМЭ» • E-mail: bantysh@sudmedmo.ru Баринская Татьяна Оскаровна — врач клинической лабораторной диагностики химико-токсикологической лаборатории государственного бюджетного учреждения здравоохранения «Московский научно-практический центр наркологии ДЗМ» (ГБУЗ «МНПЦ наркологии ДЗМ»), к.фарм.н. Адрес: 109390, г. Москва, Симферопольский бульвар 6/1 • E-mail: barto1605@

Fahoo.com

айдичук Владимир Васильевич — заместитель начальника по ГО и МР государственного бюджетного учреждения здравоохранения Московской области «Бюро судебно-медицинской экспертизы» (ГБУЗ МО «Бюро СМЭ»). Адрес: 111401, г. Москва, ул. 1-я Владимирская, д. 33, корп. 1, ГБУЗ МО «Бюро СМЭ» • E-mail: gaidichuk@sudmedmo.ru

Григорьев Андрей Михайлович — химик-эксперт судебно-химического отдела государственного бюджетного учреждения здравоохранения Московской области «Бюро судебно-медицинской экспертизы» (ГБУЗ МО «Бюро СМЭ»). Адрес: 111401, г. Москва, ул. 1-я Владимирская, д. 33, корп. 1, ГБУЗ МО «Бюро СМЭ»

• E-mail: chrzond4250@yandex.ru

Егоров Александр Петрович — врач - судебно-медицинский эксперт судебно-химического отдела государственного бюджетного учреждения здравоохране-

ния Московской области «Бюро судебно-медицинской экспертизы» (ГБУЗ МО «Бюро СМЭ»). Адрес: 111401, г. Москва, ул. 1-я Владимирская, д. 33, корп. 1, ГБУЗ МО «Бюро СМЭ» • E-mail: 6888761@gmail.com Ерощенко Николай Николаевич — аспирант кафедры аналитической токсикологии, фармацевтической химии и фармакогнозии ГБОУ ВПО Первый МГМУ им. И. М. Сеченова Минздрава России. Адрес: 119991, Москва, ул. Трубецкая, д. 8, стр. 2 • E-mail: le1premier@gmail.com Заикина Ольга Леонидовна — и.о. заведующей ХТЛ ГКУЗ Ленинградский областной наркологический диспансер. • Адрес: Ленинградская область, д. Новое Девяткино, 19/1

Заторкина Ольга Григорьевна — врач-судебно-медицинский эксперт судебно-химического отдела Государственного бюджетного учреждения здравоохранения Московской области «Бюро судебно-медицинской экспертизы» (ГБУЗ МО «Бюро СМЭ»). Адрес: 111401, г. Москва, ул. 1-я Владимирская, д. 33, корп. 1, ГБУЗ МО «Бюро СМЭ» • E-mail: zatorkina@sudmedmo.ru Изотова Валентина Ивановна — судебный эксперт (эксперт-химик) — судебно-химического отдела государственного бюджетного учреждения здравоохранения Московской области «Бюро судебно-медицинской экспертизы» (ГБУЗ МО «Бюро СМЭ»), Адрес: 111401, г. Москва, ул. 1-я Владимирская, д. 33, корп. 1, ГБУЗ МО «Бюро СМЭ» • E-mail: 6888761@gmail.com Кириченко, Елена Павловна — врач — судебно-медицинский эксперт судебно-химического отдела государственного бюджетного учреждения здравоохранения Московской области «Бюро судебно-медицинской экспертизы» (ГБУЗ МО «Бюро СМЭ»). Адрес: 111401, г. Москва, ул. 1-я Владимирская, д. 33, корп. 1, ГБУЗ МО «Бюро СМЭ» • E-mail: 6888761@gmail.com Кирюшин Алексей Николаевич — лаборант-исследователь Центральной химико-токсикологической лаборатории НИИ Фармации ГБОУ ВПО Первый МГМУ им. И. М. Сеченова Минздрава России. Адрес: 119991, Москва, ул. Трубецкая, д. 8, стр. 2 • E-mail: alkmeon413@gmail.com

Коблова Наталья Викторовна — врач - судебно-медицинский эксперт судебно-химического отдела государственного бюджетного учреждения здравоохранения Московской области «Бюро судебно-медицинской экспертизы» (ГБУЗ МО «Бюро СМЭ»). Адрес: 111401, г. Москва, ул. 1-я Владимирская, д. 33, корп. 1, ГБУЗ МО «Бюро СМЭ» • E-mail: 6888761@gmail.com Ковальская Мария Владимировна — врач - судебно-медицинский эксперт судебно-химического отдела государственного бюджетного учреждения здравоохранения Московской области «Бюро судебно-медицинской экспертизы» (ГБУЗ МО «Бюро СМЭ»). Адрес: 111401, г. Москва, ул. 1-я Владимирская, д. 33, корп. 1, ГБУЗ МО «Бюро СМЭ» • E-mail: kovalskaya@sudmedmo.ru Краснова Раиса Романовна — врач-судебно-медицинский эксперт судебно-химического отдела государственного бюджетного учреждения здравоохранения Московской области «Бюро судебно-медицинской экспертизы» (ГБУЗ МО «Бюро СМЭ»). Адрес: 111401, г. Москва, ул. 1-я Владимирская, д. 33, корп. 1, ГБУЗ МО «Бюро СМЭ» • E-mail: krasnova@sudmedmo.ru Крупина Наталья Анатольевна — заведующая судебно-химических отделом государственного бюджетного учреждения здравоохранения Московской области «Бюро судебно-медицинской экспертизы» (ГБУЗ МО «Бюро СМЭ»). Адрес: 111401, г. Москва, ул. 1-я Владимирская, д. 33, корп. 1, ГБУЗ МО «Бюро СМЭ» • E-mail: krupina@sudmedmo.ru

Марченко Марина Владимировна — врач - судебно-медицинский эксперт судебно-химического отдела государственного бюджетного учреждения здравоохранения Московской области «Бюро судебно-медицинской экспертизы» (ГБУЗ МО «Бюро СМЭ»). Адрес: 111401, г. Москва, ул. 1-я Владимирская, д. 33, корп. 1, ГБУЗ МО «Бюро СМЭ» • E-mail: marchenko@ sudmedmo.ru

Николаева Эльвира Георгиевна — к.ф.н. врач -судебно-медицинский эксперт судебно-химического отдела государственного бюджетного учреждения здравоохранения Московской области «Бюро судебно-медицинской экспертизы» (ГБУЗ МО «Бюро СМЭ»). Адрес: 111401, г. Москва, ул. 1-я Владимирская, д. 33, корп. 1, ГБУЗ МО «Бюро СМЭ» • E-mail: 6888761@gmail.com Орлова Мария Германовна — врач - судебно-медицинский эксперт судебно-химического отдела государственного бюджетного учреждения здравоохранения Московской области «Бюро судебно-медицинской экспертизы» (ГБУЗ МО «Бюро СМЭ»). Адрес: 111401, г. Москва, ул. 1-я Владимирская, д. 33, корп. 1, ГБУЗ МО «Бюро СМЭ» • E-mail: 6888761@gmail.com Орлова Татьяна Николаевна — врач - судебно-медицинский эксперт судебно-химического отдела государственного бюджетного учреждения здравоохранения Московской области «Бюро судебно-медицинской экспертизы» (ГБУЗ МО «Бюро СМЭ»). Адрес: 111401, г. Москва, ул. 1-я Владимирская, д. 33, корп. 1, ГБУЗ МО «Бюро СМЭ» • E-mail: 6888761@gmail.com Павлова Наталья Евгеньевна — врач - судебно-медицинский эксперт судебно-химического отдела государственного бюджетного учреждения здравоохранения Московской области «Бюро судебно-медицинской экспертизы» (ГБУЗ МО «Бюро СМЭ»). Адрес: 111401, г. Москва, ул. 1-я Владимирская, д. 33, корп. 1, ГБУЗ МО «Бюро СМЭ» • E-mail: pavlova@sudmedmo.ru Пашовкина Раиса Николаевна — врач - судебно-медицинский эксперт судебно-химического отдела государственного бюджетного учреждения здравоохранения Московской области «Бюро судебно-медицинской экспертизы» (ГБУЗ МО «Бюро СМЭ»). Адрес: 111401, г. Москва, ул. 1-я Владимирская, д. 33, корп. 1, ГБУЗ МО «Бюро СМЭ» • E-mail: 6888761@gmail.com Путиева Галина Михайловна — врач - судебно-медицинский эксперт судебно-химического отдела государственного бюджетного учреждения здравоохранения Московской области «Бюро судебно-медицинской экспертизы» (ГБУЗ МО «Бюро СМЭ»). Адрес: 111401, г. Москва, ул. 1-я Владимирская, д. 33, корп. 1, ГБУЗ МО «Бюро СМЭ» • E-mail: 6888761@gmail.com Реброва Светлана Игоревна — врач - судебно-медицинский эксперт судебно-химического отдела государственного бюджетного учреждения здравоохранения Московской области «Бюро судебно-медицинской экспертизы» (ГБУЗ МО «Бюро СМЭ»), Адрес: 111401, г. Москва, ул. 1-я Владимирская, д. 33, корп. 1, ГБУЗ МО «Бюро СМЭ». • E-mail: rebrova@sudmedmo.ru Смирнов Алексей Витальевич — заведующий химико-токсикологической лабораторией ГБУЗ «МНПЦ наркологии ДЗМ», к.фарм.н. Адрес: 109390, г. Москва, Симферопольский бульвар 6/1 • E-mail: smirnov17nb@ mail.ru

Унчикова Валерия Геннадьевна — врач - судебно-медицинский эксперт судебно-химического отдела государственного бюджетного учреждения здравоохранения Московской области «Бюро судебно-медицинской экспертизы» (ГБУЗ МО «Бюро СМЭ»). Адрес: 111401, г. Москва, ул. 1-я Владимирская, д. 33, корп. 1, ГБУЗ МО «Бюро СМЭ» • E-mail: unchikova@sudmedmo.ru