НОВЫЕ СОЕДИНЕНИЯ И ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЙ СОСТАВ, СОДЕРЖАЩИЙ ИХ
NEW COMPOUNDS AND PHARMACEUTICAL COMPOSITION CONTAINING THEM

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ
Настоящее раскрытие относится к новому соединению и фармацевтической композиции, содержащей его. Соединение согласно настоящему раскрытию обладает эффектами для активации аутофагии и, таким образом, может быть полезно использовано для профилактики или лечения различных заболеваний, в частности заболеваний печени.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Аутофагия представляет собой процесс, посредством которого эукариотические клетки переваривают свои собственные клеточные органы и давно живущие белки в качестве своего рода метаболического процесса. Этот процесс тесно связан с клеточным ростом, дифференциацией и гомеостазом и является протеолитическим процессом, который необходим для поддержания клеточного гомеостаза и генетической стабильности путем деградации старых или дисфункциональных органелл и поврежденных белков, не обладающих своими нативными трехмерными структурами. Кроме того, этот процесс является единственным способом переваривания "долгоживущих" или "разрушенных" клеточных органов, как указано выше, и он проявляется во всех эукариотических клетках, от дрожжей до млекопитающих. ((1) Science, 290, 1717-1721, 2000, (2) Developmental cell, 6, 463-477,2004).
in vivo
in vivo
В большинстве тканей  аутофагия происходит на соответствующем уровне для непрерывного метаболического обмена внутриклеточных компонентов, и при определенных условиях аутофагия активируется, давая энергию, необходимую для выживания клеток и рециркуляции питательных веществ. Следовательно, регуляция аутофагии является очень важным процессом . Кроме того, тот факт, что аутофагия может активироваться определенными лекарственными средствами, предполагает, что процесс аутофагии может быть потенциальной терапевтической мишенью для различных заболеваний (Nat Rev Drug Discov, 11(9), 709-730, 2012).
Когда происходит нарушение регуляции аутофагии, это приводит к накоплению белков, которые подлежат удалению, что вызывает различные заболевания. Что касается этих заболеваний, в основном известны заболевания печени ((1) J Hepatol, 59, 389-391, 2013), (2) J Hepatol, 53, 1123-1134, 2010, (3) Autophagy, 9, 1131-1158, 2013), метаболические заболевания, такие как ожирение, диабет, атеросклероз ((1) J Pathol, 226, 255-273, 2012, (2) N Engl J Med, 368, 651-662, 2013, (3) Cell Res, 24, 69-79, 2014), возрастная дегенерация желтого пятна (PLOS One, 4, e4160, 2009), дегенеративное заболевание головного мозга (Cell, 7, 1146-1158, 2010), фиброз легких, болезни сердца, воспалительные заболевания кишечника и т.д. Кроме того, сообщалось, что дефицит связанных с аутофагией генов (Atg) системных или специфических тканей различных организмов, включая мышей, вызывает серьезные расстройства (Exp Anim, 60, 329-345, 2011). Это также демонстрирует важность регуляторной функции аутофагии.
Таким образом, поскольку аутофагия связана с различными заболеваниями, разработка веществ, способных регулировать активность аутофагии, является клинически важным вопросом.
2+
Среди различных заболеваний, связанных с аутофагией, печень, которая также является репрезентативной моделью исследования аутофагии, характеризуется: 1) очень высокой репродуктивностью, 2) является важным метаболическим органом и 3) является органом, который подвергается инфицированию печеночным трофическим вирусом. Таким образом, ключевые функции органа, такие как регенерация, обмен веществ и иммунитет, тесно связаны с аутофагией (Autophagy, 9(8), 1131-1158, 2013). Ишемия-реперфузия печени происходит клинически при трансплантации печени, травме, закупоривании и плановой резекции печени. Во время ишемии-реоксигенации уровни ROS (активных форм кислорода) и Ca внутри митохондрий повышаются, что вызывает переход проницаемости митохондрий, и окислительное фосфорилирование разобщается, в конечном итоге вызывая апоптоз наряду с расходованием энергии и АТФ. Поскольку белки аутофагии ингибируются в процессе аноксии/реоксигенации, поврежденные митохондрии не удаляются. Поэтому в доклинических моделях была предпринята стратегия активизации толерантности к ишемии-реперфузии путем активации аутофагии. Между тем, в модели острого поражения печени, аутофагия активируется для увеличения выживаемости клеток в стрессовых ситуациях.
Фиброз печени является распространенным ответом заживления на хроническое поражение печени от всех причин. Чтобы залечить поврежденные ткани, ткани печени помещают новый коллаген в рану, но со временем такой процесс приводит к циррозу печени. Фиброз печени обычно связан с хроническими заболеваниями печени, вызванными инфекциями, лекарственными средствами, нарушениями обмена веществ или аутоиммунным дисбалансом. Фиброз печени, вызванный гибелью паренхимных клеток и некрозом в течение длительного периода времени, связан с воспалительным ответом, который вызывает иммунные клетки, активирует и накапливает фиброгенные клетки и вызывает накопление внеклеточного матрикса. Прогрессирование фиброза вследствие постоянного повреждения печени связано с ростом фиброзной перегородки и в конечном итоге вызывает цирроз печени.
Фиброз печени может развиться в цирроз печени в течение следующих одного-десяти лет и увеличить смертность, связанную с печенью, с 12% до 25% через семь-десять лет (Farrell, G. C. & Larter, C. Z. Nonalcoholic fatty liver disease: from steatosis to cirrhosis. Hepatology, 43, S99-S112, 2006). К сожалению, однако, эффективные клинические методы лечения все еще отсутствуют. Следовательно, эффективные антифиброзные методы лечения являются хорошими мишенями для лечения заболеваний печени. В настоящее время признаны антифиброзные стратегии, нацеленные на различные стадии, ведущие к фиброзу печени. То есть существуют способы ингибирования апоптоза клеток печени или ингибирования воспаления печени, или стимулирования апоптоза фиброгенных клеток, или возврата фенотипических фиброгенных клеток в состояние покоя. Тем не менее, конкретные лекарственные средства, используемые для лечения фиброза печени, до сих пор ограничены.
Неалкогольная жировая болезнь печени (НАЖБП) и неалкогольный стеатогепатит (НАСГ) известны в качестве основной причины наиболее распространенного хронического заболевания печени во всем мире наряду с увеличением ожирения населения, и также известны как заболевания, связанные с регуляцией аутофагии. НАЖБП можно разделить на простой стеатоз и НАСГ. Простой стеатоз считается доброкачественным заболеванием с клинически благоприятным прогнозом с чрезмерным отложением жира, но НАСГ сопровождается гепатоцеллюлярным повреждением и воспалением наряду с отложением жира и может вызывать фиброз печени, цирроз печени и гепатоцеллюлярную карциному. Таким образом, когда возникает НАСГ, 5-летняя выживаемость снижается до 67%, а 10-летняя выживаемость - до 59% (Hepatology, 37, 1202-1219, 2003).
Прогрессирование до неалкогольного стеатогепатита (НАСГ) в нормальной печени обычно описывается развитием посредством "модели 2-ух ударов". Стадия, соответствующая 1-му удару, представляет собой накопление жира в печени, а 2-й удар включает окислительный стресс, воспалительный ответ, стресс со стороны эндоплазматического ретикулума (ЭР-стресс) и тому подобное (Gastroenterology, 114, 842-845).
Недавние исследования показали, что липиды также могут быть удалены с помощью аутофагии, и многие исследования показали, что аутофагия играет важную роль в метаболизме липидов (Nature, 458, 1131-1135, 2009). Однако, несмотря на недавнее увеличение показателя распространенности НАЖБП, до сих пор нет лекарственных средств, одобренных в качестве терапевтического агента НАСГ, и, таким образом, доступные лекарственные средства ограничены.
Следовательно, авторы настоящего изобретения узнали из вышеупомянутых предыдущих исследований, что аутофагия играет решающую роль при различных заболеваниях, и на основании полученных данных авторы провели интенсивные исследования для разработки соединения, которое может индуцировать активность аутофагии. В результате авторы изобретения обнаружили, что новые соединения, как описано ниже, имеют превосходные эффекты для активации аутофагии и, таким образом, могут использоваться в качестве терапевтического агента при различных заболеваниях, в частности, соединения обладают активностью для ингибирования прогрессирования заболеваний печени, тем самым осуществляя настоящее раскрытие.
РАСКРЫТИЕ
[Техническая задача]
Целью настоящего изобретения является предоставление нового соединения и фармацевтической композиции, содержащей его. Другой целью настоящего изобретения является предоставление способа получения вышеуказанного соединения.
[Техническое решение]
Для достижения вышеуказанных целей предоставлено соединение, представленное ниже химической формулой 1, или его фармацевтически приемлемая соль:
[Химическая формула 1]
в химической формуле 1,
X представляет собой O или S,
Y представляет собой O или NH,
Ar представляет собой фенил, пиридин-3-ил, индолил, 2-оксоиндолил, хинолинил, изохинолинил или пирроло[2,3-b]пиридинил,
1
2
Ar замещен R и R,
1
1-4
1-4
1-4
1-4
R представляет собой водород, C алкил, C алкокси, гидрокси, галоген, амино, циано, карбокси, -COO-(C алкил), -CONH-(C алкил) или -CONH-(фенил),
2
1-4
1-4
R представляет собой водород, C алкил, C алкокси, гидрокси или галоген,
3
1-4
6-10
6-10
R представляет собой C алкил, Cарил или C гетероарил, содержащий любой один или несколько гетероатомов, выбранных из группы, состоящей из N, O и S,
1
2
1-4
при условии, что когда X представляет собой S, а Ar представляет собой фенил, как R, так и R не представляют собой C алкокси.
Предпочтительно Y представляет собой NH.
1
2
Предпочтительно Ar представляет собой фенил, пиридин-3-ил, индолил, хинолинил или изохинолинил, где Ar замещен R и R.
1
Предпочтительно R представляет собой водород, метил, этил, изопропил, метокси, этокси, гидрокси, фтор, амино, циано, карбокси, -COO-(метил), -CONH-(этил), -CONH-(изопропил) или -CONH-(фенил).
2
Предпочтительно R представляет собой водород, метил, метокси, гидрокси или фтор.
3
Предпочтительно R представляет собой этил, изопропил, фенил или пиридинил.
Предпочтительно
Ar представляет собой фенил,
1
1-4
1-4
1-4
1-4
R представляет собой C алкил, C алкокси, гидрокси, галоген, амино, циано, карбокси, -COO-(C алкил), -CONH-(C алкил) или -CONH-(фенил), и
2
1-4
1-4
R представляет собой водород, C алкил, C алкокси, гидрокси или галоген.
Предпочтительно
Ar представляет собой пиридин-3-ил,
1
1-4
R представляет собой водород, C алкокси, амино или циано, и
2
1-4
R представляет собой водород или C алкокси.
Предпочтительно
Ar представляет собой индолин, хинолинил или изохинолинил, и
1
2
R и R представляют собой водород.
Предпочтительно X представляет собой S, и Y представляет собой NH.
Предпочтительно
Ar представляет собой фенил, пиридин-3-ил, индолил, хинолинил или изохинолинил,
1
1-4
1-4
1-4
R представляет собой водород, C алкил, C алкокси, гидрокси, галоген, амино или -COO-(C алкил), и
2
1-4
1-4
R представляет собой водород, C алкил, C алкокси или галоген.
Предпочтительно
Ar представляет собой фенил или пиридин-3-ил,
1
R представляет собой водород или гидрокси,
2
1-4
R представляет собой водород или C алкокси, и
3
1-4
R представляет собой C алкил.
Предпочтительно
X представляет собой O,
Y представляет собой O или NH,
Ar представляет собой фенил, пиридин-3-ил, хинолинил или изохинолинил,
1
1-4
1-4
R представляет собой водород, C алкил, гидрокси, циано или -COO-(C алкил),
2
1-4
R представляет собой водород или C алкил, и
3
1-4
6-10
R представляет собой C алкил или C гетероарил, содержащий один или несколько гетероатомов, выбранных из группы, состоящей из N, O и S.
Типичными примерами соединения, представленного химической формулой 1, являются следующие:
1) 5-(4-гидрокси-3-метоксифенил)-N-изопропилтиофен-2-карбоксамид,
2) 5-(3-гидрокси-4-метоксифенил)-N-изопропилтиофен-2-карбоксамид,
3) 5-(3,4-дигидроксифенил)-N-изопропилтиофен-2-карбоксамид,
4) 5-(3-гидроксифенил)-N-изопропилтиофен-2-карбоксамид,
5) 5-(4-гидроксифенил)-N-изопропилтиофен-2-карбоксамид,
6) N-изопропил-5-(2-метоксипиридин-3-ил)тиофен-2-карбоксамид,
7) N-изопропил-5-(пиридин-3-ил)тиофен-2-карбоксамид,
8) N-изопропил-5-(6-метоксипиридин-3-ил)тиофен-2-карбоксамид,
9) 5-(6-этоксипиридин-3-ил)-N-изопропилтиофен-2-карбоксамид,
10) N-изопропил-5-(5-метоксипиридин-3-ил)тиофен-2-карбоксамид,
11) 5-(1H-индол-5-ил)-N-изопропилтиофен-2-карбоксамид,
12) 5-(2,6-диметоксипиридин-3-ил)-N-изопропилтиофен-2-карбоксамид,
13) 5-(6-аминопиридин-3-ил)-N-изопропилтиофен-2-карбоксамид,
14) 5-(6-амино-5-метоксипиридин-3-ил)-N-изопропилтиофен-2-карбоксамид,
15) N-изопропил-5-(изохинолин-4-ил)тиофен-2-карбоксамид,
16) 5-(6-цианопиридин-3-ил)-N-изопропилтиофен-2-карбоксамид,
17) N-изопропил-5-(хинолин-3-ил)тиофен-2-карбоксамид,
18) 5-(3-аминофенил)-N-изопропилтиофен-2-карбоксамид,
19) метил 4-(5-(изопропилкарбамоил)тиофен-2-ил)бензоат,
20) 4-(5-(изопропилкарбамоил)тиофен-2-ил)бензойная кислота,
21) 5-(2-аминофенил)-N-изопропилтиофен-2-карбоксамид,
22) метил 3-(5-(изопропилкарбамоил)тиофен-2-ил)бензоат,
23) 3-(5-(изопропилкарбамоил)тиофен-2-ил)бензойная кислота,
24) N-изопропил-5-п-толилтиофен-2-карбоксамид,
25) 5-(4-этилфенил)-N-изопропилтиофен-2-карбоксамид,
26) N-изопропил-5-(4-изопропилфенил)тиофен-2-карбоксамид,
27) 5-(3,4-дифторфенил)-N-изопропилтиофен-2-карбоксамид,
28) 5-(3,5-диметилфенил)-N-изопропилтиофен-2-карбоксамид,
29) 5-(4-фторфенил)-N-изопропилтиофен-2-карбоксамид,
30) N-изопропил-5-м-толилтиофен-2-карбоксамид,
31) 5-(2,4-диметилфенил)-N-изопропилтиофен-2-карбоксамид,
32) 5-(4-цианофенил)-N-изопропилтиофен-2-карбоксамид,
33) N-изопропил-5-(4-(изопропилкарбамоил)фенил)тиофен-2-карбоксамид,
34) 5-(3,5-дифторфенил)-N-изопропилтиофен-2-карбоксамид,
35) 5-(4-этоксифенил)-N-изопропилтиофен-2-карбоксамид,
36) 5-(4-(этилкарбамоил)фенил)-N-изопропилтиофен-2-карбоксамид,
37) N-изопропил-5-(4-(фенилкарбамоил)фенил)тиофен-2-карбоксамид,
38) 5-(2,4-диметилфенил)-N-изопропилфуран-2-карбоксамид,
39) 5-(3,4-дифторфенил)-N-изопропилфуран-2-карбоксамид,
40) 5-(4-этилфенил)-N-изопропилфуран-2-карбоксамид,
41) N-изопропил-5-м-толилфуран-2-карбоксамид,
42) 5-(4-этоксифенил)-N-изопропилфуран-2-карбоксамид,
43) N-изопропил-5-п-толилфуран-2-карбоксамид,
44) N-изопропил-5-фенилфуран-2-карбоксамид,
45) N-изопропил-5-(4-изопропилфенил)фуран-2-карбоксамид,
46) 5-(4-цианофенил)-N-изопропилфуран-2-карбоксамид,
47) 5-(3,5-диметилфенил)-N-фенилфуран-2-карбоксамид,
48) 5-(3,5-диметилфенил)-N-фенилтиофен-2-карбоксамид,
49) N-фенил-5-(пиридин-3-ил)тиофен-2-карбоксамид,
50) N-этил-5-(пиридин-3-ил)тиофен-2-карбоксамид,
51) 5-(3,4-дифторфенил)-N-фенилфуран-2-карбоксамид,
52) N-фенил-5-п-толилфуран-2-карбоксамид,
53) N-фенил-5-(пиридин-3-ил)фуран-2-карбоксамид,
54) 5-(4-гидрокси-3-метоксифенил)-N-изопропилфуран-2-карбоксамид,
55) N,5-ди(пиридин-3-ил)тиофен-2-карбоксамид,
56) 5-(4-гидрокси-3-метоксифенил)-N-фенилфуран-2-карбоксамид,
57) 5-(3,4-диметоксифенил)-N-(пиридин-3-ил)фуран-2-карбоксамид,
58) N,5-ди(пиридин-3-ил)фуран-2-карбоксамид,
59) 5-(4-гидрокси-3-метоксифенил)-N-(пиридин-3-ил)фуран-2-карбоксамид,
60) 5-(4-гидрокси-3-метоксифенил)-N-(пиридин-3-ил)тиофен-2-карбоксамид,
61) 5-(2-аминофенил)-N-изопропилфуран-2-карбоксамид,
62) N-изопропил-5-(хинолин-3-ил)фуран-2-карбоксамид,
63) N-изопропил-5-(2-оксоиндолин-5-ил)фуран-2-карбоксамид,
64) 5-(1H-индол-5-ил)-N-изопропилфуран-2-карбоксамид,
65) N-изопропил-5-(изохинолин-4-ил)фуран-2-карбоксамид,
66) N-изопропил-5-(пиридин-3-ил)фуран-2-карбоксамид,
67) изопропил 5-(пиридин-3-ил)фуран-2-карбоксилат,
68) этил 5-(пиридин-3-ил)фуран-2-карбоксилат,
69) фенил 5-(пиридин-3-ил)фуран-2-карбоксилат,
70) пиридин-3-ил 5-(пиридин-3-ил)фуран-2-карбоксилат,
71) этил 5-(пиридин-3-ил)тиофен-2-карбоксилат,
72) изопропил 5-(пиридин-3-ил)тиофен-2-карбоксилат,
73) фенил 5-(пиридин-3-ил)тиофен-2-карбоксилат,
74) пиридин-3-ил 5-(пиридин-3-ил)тиофен-2-карбоксилат,
75) 5-(3-гидроксифенил)-N-изопропилфуран-2-карбоксамид,
76) 5-(3,4-диметоксифенил)-N-изопропилфуран-2-карбоксамид,
77) этил 5-(3,4-диметоксифенил)фуран-2-карбоксилат,
78) 5-(3,5-дифторфенил)-N-изопропилфуран-2-карбоксамид,
79) этил 5-(2-аминофенил)фуран-2-карбоксилат,
80) этил 5-(изохинолин-4-ил)фуран-2-карбоксилат,
81) этил 5-(4-(метоксикарбонил)фенил)фуран-2-карбоксилат,
82) этил 5-(3,5-дифторфенил)фуран-2-карбоксилат,
83) 5-(3,5-диметилфенил)-N-(пиридин-3-ил)фуран-2-карбоксамид,
84) 5-(2,4-диметилфенил)-N-(пиридин-3-ил)фуран-2-карбоксамид,
85) 5-(3,5-диметилфенил)-N-изопропилфуран-2-карбоксамид,
86) этил 5-(3,5-диметилфенил)фуран-2-карбоксилат,
87) этил 5-(3-гидроксифенил)фуран-2-карбоксилат,
88) этил 5-(хинолин-3-ил)фуран-2-карбоксилат,
89) этил 5-(4-цианофенил)фуран-2-карбоксилат,
90) этил 5-(1H-индол-5-ил)фуран-2-карбоксилат,
91) 5-(3-гидроксифенил)-N-(пиридин-3-ил)фуран-2-карбоксамид,
92) 5-(3-(этилкарбамоил)фенил)-N-изопропилфуран-2-карбоксамид,
93) 5-(4-(этилкарбамоил)фенил)-N-изопропилфуран-2-карбоксамид и
94) N-изопропил-5-(4-(изопропилкарбамоил)фенил)фуран-2-карбоксамид.
Кроме того, если необходимо, соединение, представленное химической формулой 1, может быть получено в форме фармацевтически приемлемой соли с использованием традиционных способов в области техники, к которой относится настоящее раскрытие. В одном примере фармацевтически приемлемая соль металла может быть получена с использованием основания обычным способом, и примеры соли металла включают соль натрия, соль калия или соль кальция. В другом примере полезной является соль присоединения кислоты, образованная фармацевтически приемлемой свободной кислотой. В качестве свободной кислоты может быть использована неорганическая кислота и органическая кислота. В качестве неорганической кислоты может быть использована хлористоводородная кислота, бромноватая кислота, серная кислота, фосфорная кислота и тому подобное. В качестве органической кислоты может быть использована лимонная кислота, уксусная кислота, молочная кислота, малеиновая кислота, глюконовая кислота, метансульфоновая кислота, янтарная кислота, 4-толуолсульфоновая кислота, глутаминовая кислота, аспарагиновая кислота или тому подобное.
Соединение, представленное химической формулой 1 согласно настоящему раскрытию, включает не только его фармацевтически приемлемые соли, но также энантиомеры, сольваты и гидраты, которые могут быть получены из него. Энантиомеры, сольваты и гидраты соединения, представленного химической формулой 1, могут быть получены из соединения, представленного химической формулой 1, с использованием обычного способа в области техники, к которой относится настоящее раскрытие.
Кроме того, соединение, представленное химической формулой 1 согласно настоящему раскрытию, может быть получено либо в кристаллической форме, либо в некристаллической форме, и когда соединение химической формулы 1 получают в кристаллической форме, оно может быть необязательно гидратированным или сольватированным. В настоящем раскрытии соединение химической формулы 1 может не только включать стехиометрический гидрат, но также включать соединение, содержащее различные количества воды. Сольват соединения химической формулы 1 согласно настоящему раскрытию включает как стехиометрические сольваты, так и нестехиометрические сольваты.
Кроме того, согласно настоящему раскрытию соединение, представленное химической формулой 1, может быть получено способом, как показано на схеме реакций 1 ниже:
[Схема реакции 1]
1
2
3
на схеме реакции 1, X, Y, Ar, R, R и R являются такими, как определено выше, и X' представляет собой галоген, более предпочтительно, бром или хлор.
Вышеуказанная реакция представляет собой реакцию сочетания Сузуки, и реакционноспособная группа для реакции сочетания Сузуки может быть заменена. Также реакцию предпочтительно проводят в присутствии палладиевого катализатора. Кроме того, реакционное молярное соотношение соединения, представленного химической формулой 2, и соединения, представленного химической формулой 3, предпочтительно составляет от 10:1 до 1:10. Кроме того, реакцию предпочтительно проводят при температуре от 20 до 200°C, и реакцию предпочтительно проводят в течение от 10 минут до 10 часов. После реакции может быть включен процесс очистки, если это необходимо. Вышеуказанный способ получения может быть более нагляден в примерах, которые будут описаны ниже.
Кроме того, настоящее раскрытие предоставляет фармацевтическую композицию для профилактики или лечения заболеваний, связанных с аутофагией, содержащую соединение, представленное химической формулой 1, или его фармацевтически приемлемую соль.
Соединение, представленное химической формулой 1 согласно настоящему раскрытию, или его фармацевтически приемлемая соль могут увеличивать активность аутофагии и, таким образом, могут быть полезно использованы для профилактики или лечения заболеваний, связанных с регуляцией аутофагии. Примеры заболеваний, связанных с регуляцией аутофагии, включают метаболические заболевания, такие как заболевания печени, ожирение, диабет и атеросклероз, дегенеративные заболевания головного мозга, такие как возрастная дегенерация желтого пятна, деменция и болезнь Паркинсона, фиброз легких и воспалительные заболевания кишечника и т.д. Кроме того, примеры заболеваний печени включают фиброз печени, цирроз печени, гепатит, алкогольную болезнь печени, неалкогольную жировую болезнь печени или неалкогольный стеатогепатит (НАСГ).
В контексте настоящего описания термин "профилактика" относится к любому действию, направленному на задержку или ингибирование возникновения, распространения или повторного проявления заболеваний, связанных с аутофагией, путем введения композиции согласно настоящему раскрытию, а термин "лечение" относится к любому действию, направленному на смягчение тяжести или изменение симптомов вышеуказанных заболеваний в лучшую сторону путем введения композиции согласно настоящему раскрытию.
Фармацевтическая композиция согласно настоящему раскрытию может быть составлена в формах для перорального или парентерального введения в соответствии со стандартной фармацевтической практикой. Эти составы могут содержать добавки, такие как фармацевтически приемлемый носитель, адъювант или разбавитель, в дополнение к активному ингредиенту. Подходящие носители включают, например, физиологический раствор, полиэтиленгликоль, этанол, растительное масло, изопропилмиристат и тому подобное. Разбавители включают, например, лактозу, декстрозу, сахарозу, маннит, сорбит, целлюлозу и/или глицин и тому подобное, но не ограничиваются ими. Кроме того, соединения согласно настоящему раскрытию могут быть растворены в маслах, пропиленгликоле или других растворителях, обычно используемых в получении растворов для инъекции. Кроме того, соединения согласно настоящему раскрытию могут быть в составе мазей или кремов для местного применения.
Предпочтительная доза соединения, представленного химической формулой 1 согласно настоящему раскрытию, может варьироваться в зависимости от состояния и массы пациента, степени тяжести заболевания, типа лекарственного средства, а также пути и продолжительности введения, но она может быть соответствующим образом выбрана специалистами в данной области техники. Однако для достижения желаемых эффектов соединение, представленное химической формулой 1 согласно настоящему раскрытию, может быть введено ежедневно в дозе от 0,0001 до 100 мг/кг (массы тела) и предпочтительно от 0,001 до 100 мг/кг (массы тела). Введение может быть выполнено один раз в день или раздельными дозами каждый день пероральным или парентеральным путем.
В зависимости от способа введения фармацевтическая композиция согласно настоящему раскрытию может содержать соединение, представленное химической формулой 1 согласно настоящему раскрытию, или его фармацевтически приемлемую соль в количестве от 0,001 до 99% по массе, предпочтительно от 0,01 до 60% по массе.
Фармацевтическая композиция согласно настоящему раскрытию может быть введена млекопитающим, таким как крыса, мышь, домашнее животное и человек, различными путями. Введение может осуществляться всеми возможными способами, например, пероральным, ректальным, внутривенным, внутримышечным, подкожным, интраэндометриальным, интрацеребровентрикулярной инъекцией.
[Преимущественные эффекты]
Соединение согласно настоящему раскрытию или его фармацевтически приемлемая соль проявляют эффекты для активации аутофагии и, таким образом, могут быть использованы для профилактики или лечения заболеваний, связанных с регуляцией аутофагии, включая метаболические заболевания, такие как заболевания печени, ожирение, диабет и атеросклероз, дегенеративные заболевания головного мозга, такие как возрастная дегенерация желтого пятна, деменция и болезнь Паркинсона, фиброз легких и воспалительные заболевания кишечника и т.д.
[Описание чертежей]
Фиг. 1 представляет собой график, демонстрирующий оценку активности неалкогольной жировой болезни печени (НАЖБП), рассчитанную на основе комбинированной оценки стеатоза, воспаления и баллонирования в печени экспериментальных животных.
Фиг. 2 представляет собой график, который демонстрирует площадь фиброза путем окрашивания уровня фиброза для печени экспериментальных животных.
[Подробное описание вариантов осуществления]
Ниже настоящее раскрытие будет описано более подробно с помощью примеров. Однако эти примеры приведены только для иллюстративных целей и не должны рассматриваться как ограничивающие объем настоящего раскрытия до этих примеров.
[ПРИМЕР ПОЛУЧЕНИЯ]
Пример получения 1: Получение промежуточного соединения 1
Изопропиламин (29,0 ммоль), 5-бротиофен-2-карбоновую кислоту (9,66 ммоль), ЭДК (14,5 ммоль), HOBT (14,5 ммоль) и диизопропиламин (29,0 ммоль) добавляли к дихлорметану (20 мл), и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 10 часов. Органический растворитель концентрировали при пониженном давлении, очищали колоночной флэш-хроматографией (н-гексан:EtOAc=5:1) и затем перекристаллизовывали с использованием дихлорметана и гексана. Продукт сушили с помощью вакуумного насоса с получением промежуточного соединения 1 в виде белого твердого вещества (выход: 59,70%).
Пример получения 2: Получение промежуточного соединения 2
4-Бром-2-метоксифенол (1,0 г, 4,93 ммоль), 4,4,4',4',5,5,5',5'-октаметил-2,2'-би(1,3,2-диоксаборолан) (1,376 г, 5,42 ммоль), комплекс [1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]дихлорпалладия (II) с дихлорметаном (241,0 мг, 0,296 ммоль) и карбонат кальция (2,042 г, 14,8 ммоль) добавляли к 1,4-диоксану (40,0 мл), и смесь перемешивали при 90°C в течение 16 часов. Органический растворитель концентрировали при пониженном давлении и очищали колоночной флэш-хроматографией (н-гексан:EtOAc=7:1), а затем сушили с помощью вакуумного насоса с получением промежуточного соединения 2 в виде масла (выход: 66,70%).
Пример получения 3: Получение промежуточного соединения 3
5-Бром-N-изопропилтиофен-2-карбоксамид (промежуточное соединение 1, 2,015 ммоль), 2М водный раствор карбоната натрия (0,64 мл, 1,29 ммоль) и дихлорбис(трифенилфосфин)палладий (II) (22,6 мг, 0,032 ммоль) добавляли к 1,2-диметоксиэтану (3 мл), и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 30 минут. (3,4-Диметоксифенил)бороновую кислоту (3,022 ммоль) растворяли в этаноле (3 мл) и затем добавляли к вышеуказанному раствору. Смесь перемешивали при 80°C в течение 6 часов и дважды экстрагировали дихлорметаном. Экстрагированный раствор обезвоживали безводным сульфатом магния, и органический растворитель концентрировали при пониженном давлении, очищали колоночной флэш-хроматографией (н-гексан:EtOAc=3:1) и затем сушили с помощью вакуумного насоса с получением промежуточного соединения 3 в виде белого твердого вещества (выход: 66,70%).
Пример получения 4: получение промежуточного соединения 4
Тионилхлорид (1,14 мл, 15,7 ммоль) и 5-бромфуран-2-карбоновую кислоту (5,24 ммоль) добавляли к хлороформу (30 мл), и смесь перемешивали при 100°C в течение 4 часов. Органический растворитель концентрировали при пониженном давлении, и этиловый спирт (15 мл) добавляли к дихлорметану (15 мл), и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов. Органический растворитель концентрировали при пониженном давлении, очищали колоночной флэш-хроматографией (н-гексан:EtOAc=5:1) и затем сушили с помощью вакуумного насоса с получением промежуточного соединения 4 в виде масла (выход: 95,1%).
[ПРИМЕР]
Пример 1: Получение 5-(4-гидрокси-3-метоксифенил)-N-изопропилтиофен-2-карбоксамида
Указанное в заголовке соединение (выход: 72,83%) получали в виде белого твердого вещества таким же образом, как в примере получения 3, за исключением того, что промежуточное соединение 2 использовали вместо (3,4-диметоксифенил)бороновой кислоты.
1
6
H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d) δ 9,34 (с, 1H), 8,17 (д, 1H, J=8,0 Гц), 7,72 (д, 1H, J=3,6 Гц), 7,37 (д, 1H, J=4,0 Гц), 7,20 (с, 1H), 7,11-7,10 (м, 1H), 6,82-6,80 (м, 1H), 4,09-4,02 (м, 1H), 3,84 (с, 3H), 1,16 (д, 6H, J=6,8 Гц).
Пример 2: Получение 5-(3-гидрокси-4-метоксифенил)-N-изопропилтиофен-2-карбоксамида
Указанное в заголовке соединение (выход: 36,96%) получали в виде белого твердого вещества таким же образом, как в примерах получения 2 и 3, за исключением того, что 5-бром-2-метоксифенол использовали вместо 4-бром-2-метоксифенола.
1
6
H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d) δ 9,26 (с, 1H), 8,19 (д, 1H, J=7,6 Гц), 7,71 (д, 1H, J=4,0 Гц), 7,31 (д, 1H, J=4,0 Гц), 7,12-7,09 (м, 2H), 6,98-6,96 (м, 1H), 4,09-4,00 (м, 1H), 3,80 (с, 3H), 1,16 (д, 6H, J=6,8 Гц).
Пример 3: Получение 5-(3,4-дигидроксифенил)-N-изопропилтиофен-2-карбоксамида
5-(3,4-Диметоксифенил)-N-изопропилтиофен-2-карбоксамид (100 мг, 0,327 ммоль) помещали в круглодонную колбу объемом 50,0 мл и после аргонного замещения добавляли к нему дихлорметан (3,46 мл) и 1М раствор трибромида бора в гептане (3,93 мл) при 0°C. После перемешивания в течение 30 часов добавляли метанол для прекращения реакции, и реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении. Затем ее очищали колоночной флэш-хроматографией (10% МеОН в ДХМ) и затем сушили посредством вакуумного насоса с получением указанного в заголовке соединения в виде белого твердого вещества (выход: 20,05%).
1
6
H ЯМР (300 МГц, ДМСО-d) δ 9,23 (с, 2H), 8,16 (д, 1H, J=7,8 Гц), 7,69 (д, 1H, J=3,9 Гц), 7,24 (д, 1H, J=3,9 Гц), 7,04 (д, 1H, J=2,4 Гц), 7,00-6,97 (м, 1H), 6,79-6,76 (м, 1H), 4,10-3,99 (м, 1H) 1,16 (д, 6H, J=6,6 Гц).
Пример 4: Получение 5-(3-гидроксифенил)-N-изопропилтиофен-2-карбоксамида
Указанное в заголовке соединение (выход: 57,90%) получали в виде белого твердого вещества таким же образом, как в примере получения 3, за исключением того, что (3-гидроксифенил)бороновую кислоту использовали вместо (3,4-диметоксифенил)бороновой кислоты.
1
6
H ЯМР (300 МГц, ДМСО-d) δ 9,66 (с, 1H), 8,25 (д, 1H, J=7,8 Гц), 7,75 (д, 1H, J=3,9 Гц), 7,43 (д, 1H, J=3,9 Гц), 7,26-7,21 (м, 1H), 7,14-7,11 (м, 1H), 7,06-7,04 (м, 1H), 6,78-6,75 (м, 1H), 4,11-4,00 (м, 1H), 1,17 (д, 6H, J=6,6 Гц).
Пример 5: Получение 5-(4-гидроксифенил)-N-изопропилтиофен-2-карбоксамида
Указанное в заголовке соединение (выход: 11,80%) получали в виде белого твердого вещества таким же образом, как в примере получения 3, за исключением того, что (4-гидроксифенил)бороновую кислоту использовали вместо (3,4-диметоксифенил)бороновой кислоты.
1
6
H ЯМР (300 МГц, ДМСО-d) δ 9,80 (с, 1H), 8,19 (д, 1H, J=7,8 Гц), 7,71 (д, 1H, J=3,9 Гц), 7,52 (д, 2H, J=8,7 Гц), 7,32 (д, 1H, J=3,9 Гц), 6,82 (д, 2H, J=8,7 Гц), 4,08-4,01 (м, 1H), 1,16 (д, 6H, J=6,6 Гц).
Пример 6: Получение N-изопропил-5-(2-метоксипиридин-3-ил)тиофен-2-карбоксамида
Указанное в заголовке соединение (выход 46,30%) получали в виде белого твердого вещества таким же образом, как в примере получения 3, за исключением того, что (2-метоксипиридин-3-ил)бороновую кислоту использовали вместо (3,4-диметоксифенил)бороновой кислоты.
1
6
H ЯМР (300 МГц, ДМСО-d) δ 8,27 (д, 1H, J=10,4 Гц), 8,23-8,17 (м, 2H), 7,78 (д, 1H, J=5,2 Гц), 7,71 (д, 1H, J=5,6 Гц), 7,14-7,10 (м, 1H), 4,10-4,03 (м, 4H) 1,17 (д, 6H, J=9,2 Гц).
Пример 7: Получение N-изопропил-5-(пиридин-3-ил)тиофен-2-карбоксамида
Указанное в заголовке соединение (выход: 64,52%) получали в виде белого твердого вещества таким же образом, как в примере получения 3, за исключением того, что пиридин-3-илбороновую кислоту использовали вместо (3,4-диметоксифенил)бороновой кислоты.
1
6
H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d) δ 8,95 (д, 1H, J=2,0 Гц), 8,56 (д, 1H, J=4,4 Гц), 8,10 (д, 1H, J=8,0 Гц), 7,66 (д, 1H, J=4,0 Гц), 7,48 (кв, 1H, J=4,8 Гц), 4,12-4,03 (м, 1H), 1,19 (д, 6H, J=6,4 Гц).
Пример 8: Получение N-изопропил-5-(6-метоксипиридин-3-ил)тиофен-2-карбоксамида
Указанное в заголовке соединение (выход: 72,83%) получали в виде белого твердого вещества таким же образом, как в примере получения 3, за исключением того, что (6-метоксипиридин-3-ил)бороновую кислоту использовали вместо (3,4-диметоксифенил)бороновой кислоты.
1
6
H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d) δ 8,54 (д, 1H, J=2,4 Гц), 8,27 (д, 1H, J=7,6 Гц), 8,03 (дд, 1H, Ja=8,8 Гц Jb=2,4 Гц), 7,79 (д, 1H, J=4,0 Гц), 7,49 (д, 1H, J=4,0 Гц), 6,91 (д, 1H, J=8,8 Гц), 4,11-4,03 (м, 1H), 3,90 (с, 3H), 1,19 (д, 6H, J=6,4 Гц).
Пример 9: Получение 5-(6-этоксипиридин-3-ил)-N-изопропилтиофен-2-карбоксамида
Указанное в заголовке соединение (выход 51,23%) получали в виде белого твердого вещества таким же образом, как в примере получения 3, за исключением того, что (6-этоксипиридин-3-ил)бороновую кислоту использовали вместо (3,4-диметоксифенил)бороновой кислоты.
1
6
H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d) δ 8,51 (д, 1H, J=2,4 Гц), 8,27 (д, 1H, J=8,0 Гц), 8,01 (дд, 1H, Ja=8,4 Гц, Jb=2,4 Гц), 7,78 (д, 1H, J=4,0 Гц), 7,48 (д, 1H, J=4,0 Гц), 6,87 (д, 1H, J=8,8 Гц), 4,34 (кв, 2H, J=7,2 Гц), 4,11-4,03 (м, 1H), 1,34 (т, 3H, J=7,0 Гц), 1,18 (д, 6H, J=6,8 Гц).
Пример 10: Получение N-изопропил-5-(5-метоксипиридин-3-ил)тиофен-2-карбоксамида
Указанное в заголовке соединение (выход: 75,10%) получали в виде белого твердого вещества таким же образом, как в примере получения 3, за исключением того, что (5-метоксипиридин-3-ил)бороновую кислоту использовали вместо (3,4-диметоксифенил)бороновой кислоты.
1
6
H ЯМР (300 МГц, ДМСО-d) δ 8,52 (с, 1H), 8,33-8,27 (м, 2H), 7,82 (д, 1H, J=3,6 Гц), 7,69 (д, 1H, J=4,0 Гц), 7,65 (с, 1H), 4,09-4,04 (м, 1H), 3,91 (с, 3H), 1,18 (д, 6H, J=6,8 Гц).
Пример 11: Получение 5-(1H-индол-5-ил)-N-изопропилтиофен-2-карбоксамида
Указанное в заголовке соединение (выход: 44,40%) получали в виде белого твердого вещества таким же образом, как в примере получения 3, за исключением того, что (1H-индол-5-ил)бороновую кислоту использовали вместо (3,4-диметоксифенил)бороновой кислоты.
1
6
H ЯМР (300 МГц, ДМСО-d) δ 11,24 (с, 1H), 8,20 (д, 1H, J=7,8 Гц), 7,76 (д, 1H, J=3,9 Гц), 7,69-7,68 (м, 1H), 7,59 (д, 1H, J=8,1 Гц), 7,45-7,41 (м, 2H), 7,37-7,34 (м, 1H), 6,46-6,45 (м, 1H), 4,10-4,03 (м, 1H), 1,18 (д, 6H, J=6,6 Гц).
Пример 12: Получение 5-(2,6-диметоксипиридин-3-ил)-N-изопропилтиофен-2-карбоксамида
Указанное в заголовке соединение (выход 50,30%) получали в виде белого твердого вещества таким же образом, как в примере получения 3, за исключением того, что (2,6-диметоксипиридин-3-ил)бороновую кислоту вместо использовали (3,4-диметоксифенил)бороновой кислоты.
1
6
H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d) δ 8,12 (д, 1H, J=11,2 Гц), 7,73 (д, 1H, J=5,2 Гц), 7,53 (д, 1H, J=5,2 Гц), 6,51 (д, 1H, J=11,2 Гц), 4,09-4,00 (м, 4H), 3,92 (с, 3H), 1,17 (д, 6H, J=8,8 Гц).
Пример 13: Получение 5-(6-аминопиридин-3-ил)-N-изопропилтиофен-2-карбоксамида
Указанное в заголовке соединение (выход 52,80%) получали в виде белого твердого вещества таким же образом, как в примере получения 3, за исключением того, что (6-аминопиридин-3-ил)бороновую кислоту использовали вместо (3,4-диметоксифенил)бороновой кислоты.
1
6
H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d) δ 8,27 (дд, 1H, Ja=3,6 Гц, Jb=0,8 Гц), 8,16 (д, 1H, J=10,8 Гц), 7,71-7,66 (м, 2H), 7,29 (д, 1H, J=5,2 Гц), 6,51-6,48 (м, 1H), 6,28 (с, 2H), 4,08-4,01 (м, 1H), 1,16 (д, 6H, J=8,0 Гц).
Пример 14: Получение 5-(6-амино-5-метоксипиридин-3-ил)-N-изопропилтиофен-2-карбоксамида
Указанное в заголовке соединение (выход: 64,30%) получали в виде белого твердого вещества таким же образом, как в примере получения 3, за исключением того, что (6-амино-5-метоксипиридин-3-ил)бороновую кислоту использовали вместо (3,4-диметоксифенил)бороновой кислоты.
1
6
H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d) δ 8,161 (д, 1H, J=10,4 Гц), 7,88 (д, 1H, J=2,4 Гц), 7,72 (д, 1H, J=5,6 Гц), 7,37 (д, 1H, J=5,2 Гц), 7,27 (д, 1H, J=2,4 Гц), 6,08 (с, 2H), 4,11-3,99 (м, 1H), 3,87 (с, 3H), 1,164 (д, 6H, J=8,8 Гц).
Пример 15: Получение N-изопропил-5-(изохинолин-4-ил)тиофен-2-карбоксамида
Указанное в заголовке соединение (выход: 54,80%) получали в виде белого твердого вещества таким же образом, как в примере получения 3, за исключением того, что изохинолин-4-илбороновую кислоту использовали вместо (3,4-диметоксифенил)бороновой кислоты.
1
6
H ЯМР (300 МГц, ДМСО-d) δ 9,38 (д, 1H, J=0,9 Гц), 8,60 (с, 1H), 8,40 (д, 1H, J=7,5 Гц), 8,27-8,20 (м, 2H), 7,94-7,87 (м, 2H), 7,82-7,77 (м, 1H), 7,46 (д, 1H, J=3,9 Гц), 4,16-4,05 (м, 1H), 1,21 (д, 6H, J=6,6 Гц).
Пример 16: Получение 5-(6-цианопиридин-3-ил)-N-изопропилтиофен-2-карбоксамида
Указанное в заголовке соединение получали в виде белого твердого вещества таким же образом, как в примере получения 3, за исключением того, что 6-цианопиридин-3-илбороновую кислоту использовали вместо (3,4-диметоксифенил)бороновой кислоты.
1
6
H ЯМР (300 МГц, ДМСО-d) δ 9,14-9,13 (м, 1H), 8,40 (д, 1H, J=7,8 Гц), 8,36-8,31 (м, 1H), 8,11-8,08 (м, 1H), 7,86 (с, 2H), 4,12-4,01 (м, 1H), 1,18 (д, 6H, J=6,6 Гц).
Пример 17: Получение N-изопропил-5-(хинолин-3-ил)тиофен-2-карбоксамида
Указанное в заголовке соединение (выход 62,40%) получали в виде белого твердого вещества таким же образом, как в примере получения 3, за исключением того, что хинолин-3-илбороновую кислоту использовали вместо (3,4-диметоксифенил)бороновой кислоты.
1
6
H ЯМР (300 МГц, ДМСО-d) δ 9,30 (д, 1H, J=2,4 Гц), 8,67 (д, 1H, J=2,1 Гц), 8,38-8,32 (м, 1H), 8,07-8,03 (м, 2H), 7,87 (д, 1H, J=3,9 Гц), 7,82-7,74 (м, 2H), 7,69-7,63 (м, 1H), 4,12-4,03 (м, 1H), 1,19 (д, 6H, J=6,6 Гц).
Пример 18: Получение 5-(3-аминофенил)-N-изопропилтиофен-2-карбоксамида
Указанное в заголовке соединение (выход: 24,20%) получали в виде белого твердого вещества таким же образом, как в примере получения 3, за исключением того, что (3-аминофенил)бороновую кислоту использовали вместо (3,4-диметоксифенил)бороновой кислоты.
1
6
H ЯМР (300 МГц, ДМСО-d) δ 8,22 (д, 1H, J=7,8 Гц), 7,73 (д, 1H, J=3,9 Гц), 7,34 (д, 1H, J=4,2 Гц), 7,07 (т, 1H, J=7,7 Гц), 6,87-6,82 (м, 2H), 6,57-6,54 (м, 1H), 5,25 (с, 2H), 4,11-3,99 (м, 1H), 1,17 (д, 6H, J=6,6 Гц).
Пример 19: Получение метил 4-(5-(изопропилкарбамоил)тиофен-2-ил)бензоата
Указанное в заголовке соединение (выход: 11,90%) получали в виде белого твердого вещества таким же образом, как в примере получения 3, за исключением того, что (4-(метоксикарбонил)фенил)бороновую кислоту использовали вместо (3,4-диметоксифенил)бороновой кислоты.
1
6
H ЯМР (300 МГц, ДМСО-d) δ 8,33 (д, 1H, J=7,8 Гц), 8,03-7,99 (м, 2H), 7,88-7,84 (м, 2H), 7,82 (д, 1H, J=3,9 Гц), 7,69 (д, 1H, J=3,9 Гц), 4,10-4,03 (м, 1H), 3,87 (с, 3H), 1,18 (д, 6H, J=6,6 Гц).
Пример 20: Получение 4-(5-(изопропилкарбамоил)тиофен-2-ил)бензойной кислоты
Метил 4-(5-(изопропилкарбамоил)тиофен-2-ил)бензоат (100,0 мг, 0,342 ммоль) добавляли к 1М водному раствору гидроксида натрия (3,0 мл) и этанолу (3,0 мл), и смесь перемешивали при 80°C в течение 2 часов. Температуру реакции снижали до комнатной температуры и добавляли 5%-ный раствор соляной кислоты до достижения pH 2. Образовавшуюся суспензию фильтровали с использованием фильтра, очищали колоночной флэш-хроматографией (н-гексан:EtOAc=3:1) и затем сушили с помощью вакуумного насоса с получением указанного в заголовке соединения в виде белого твердого вещества (выход 29,40%).
1
6
H ЯМР (300 МГц, ДМСО-d) δ 8,33 (д, 1H, J=7,8 Гц), 7,99 (д, 2H, J=8,4 Гц), 7,84-7,81 (м, 3H), 7,67 (д, 1H, J=3,9 Гц), 4,12-4,01 (м, 1H), 1,18 (д, 6H, J=6,6 Гц).
Пример 21: Получение 5-(2-аминофенил)-N-изопропилтиофен-2-карбоксамида
Указанное в заголовке соединение (выход: 3,73%) получали в виде белого твердого вещества таким же образом, как в примере получения 3, за исключением того, что (2-аминофенил)бороновую кислоту использовали вместо (3,4-диметоксифенил)бороновой кислоты.
1
6
H ЯМР (300 МГц, ДМСО-d) δ 8,22 (д, 1H, J=7,8 Гц), 7,77 (д, 1H, J=3,9 Гц), 7,24 (д, 1H, J=3,9 Гц), 7,20-7,17 (м, 1H), 7,10-7,05 (м, 1H), 6,82-6,79 (м, 1H), 6,65-6,60 (м, 1H), 5,16 (с, 2H), 4,12-4,01 (м, 1H), 1,17 (д, 6H, J=6,6 Гц).
Пример 22: Получение метил 3-(5-(изопропилкарбамоил)тиофен-2-ил)бензоата
Указанное в заголовке соединение (выход 22,30%) получали в виде белого твердого вещества таким же образом, как в примере получения 3, за исключением того, что (3-(метоксикарбонил)фенил)бороновую кислоту использовали вместо (3,4-диметоксифенил)бороновой кислоты.
1
6
H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d) δ 8,32 (д, 1H, J=7,6 Гц), 8,20 (с, 1H), 8,00 (д, 1H, J=7,6 Гц), 7,94 (д, 1H, J=7,6 Гц), 7,81 (д, 1H, J=4,0 Гц), 7,65-7,60 (м, 2H), 4,09-4,04 (м, 1H), 3,90 (с, 3H), 1,18 (д, 6H, J=6,4 Гц).
Пример 23: Получение 3-(5-(изопропилкарбамоил)тиофен-2-ил)бензойной кислоты
Указанное в заголовке соединение (выход: 14,30%) получали в виде белого твердого вещества таким же образом, как в примере 20, за исключением того, что метил 3-(5-(изопропилкарбамоил)тиофен-2-ил)бензоат использовали вместо метил 4-(5-(изопропилкарбамоил)тиофен-2-ил)бензоата.
1
6
H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d) δ 8,33 (д, 1H, J=7,6 Гц), 8,20 (с, 1H), 7,93 (т, 2H, J=8,8 Гц), 7,82 (д, 1H, J=4,0 Гц), 7,63-7,55 (м, 2H), 4,09-4,04 (м, 1H), 1,18 (д, 6H, J=6,8 Гц).
Пример 24: Получение N-изопропил-5-п-толилтиофен-2-карбоксамида
Указанное в заголовке соединение (выход: 64,90%) получали в виде белого твердого вещества таким же образом, как в примере получения 3, за исключением того, что п-толилбороновую кислоту использовали вместо (3,4-диметоксифенил)бороновой кислоты.
1
6
H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d) δ 8,24 (д, 1H, J=7,6 Гц), 7,75 (д, 1H, J=4,0 Гц), 7,59 (д, 2H, J=8,4 Гц), 7,46 (д, 1H, J=3,6 Гц), 7,24 (д, 2H, J=8,0 Гц), 4,10-4,01 (м, 1H), 2,33 (с, 3H), 1,17 (д, 6H, J=6,4 Гц).
Пример 25: Получение 5-(4-этилфенил)-N-изопропилтиофен-2-карбоксамида
Указанное в заголовке соединение (выход: 24,20%) получали в виде белого твердого вещества таким же образом, как в примере получения 3, за исключением того, что (4-этилфенил)бороновую кислоту использовали вместо (3,4-диметоксифенил)бороновой кислоты.
1
6
H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d) δ 8,22 (д, 1H, J=7,6 Гц), 7,74 (д, 1H, J=2,0 Гц), 7,59 (д, 2H, J=8,0 Гц), 7,45 (д, 1H, J=3,9 Гц), 7,26 (д, 2H, J=8,4 Гц), 4,08-3,99 (м, 1H), 2,63-2,58 (м, 2H), 1,19-1,14 (м, 9H).
Пример 26: Получение N-изопропил-5-(4-изопропилфенил)тиофен-2-карбоксамида
Указанное в заголовке соединение (выход: 25,30%) получали в виде белого твердого вещества таким же образом, как в примере получения 3, за исключением того, что (4-изопропилфенил)бороновую кислоту использовали вместо (3,4-диметоксифенил)бороновой кислоты.
1
6
H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d) δ 8,25 (д, 1H, J=7,6 Гц), 7,77 (д, 1H, J=4,0 Гц), 7,63 (д, 2H, J=8,0 Гц), 7,48 (д, 1H, J=4,0 Гц), 7,32 (д, 2H, J=8,0 Гц), 4,11-4,03 (м, 1H), 2,98-2,87 (м, 1H), 1,21 (м, 12H).
Пример 27: Получение 5-(3,4-дифторфенил)-N-изопропилтиофен-2-карбоксамида
Указанное в заголовке соединение (выход: 36,40%) получали в виде белого твердого вещества таким же образом, как в примере получения 3, за исключением того, что (3,4-дифторфенил)бороновую кислота использовали вместо (3,4-диметоксифенил)бороновой кислоты.
1
6
H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d) δ 8,31 (д, 1H, J=7,6 Гц), 7,78-7,83 (м, 1H), 7,79 (д, 1H, J=4,0 Гц), 7,59 (д, 1H, J=3,6 Гц), 7,55-7,48 (м, 2H), 4,11-4,03 (м, 1H), 1,19 (д, 6H, J=6,4 Гц).
Пример 28: Получение 5-(3,5-диметилфенил)-N-изопропилтиофен-2-карбоксамида
Указанное в заголовке соединение (выход: 21,90%) получали в виде белого твердого вещества таким же образом, как в примере получения 3, за исключением того, что (3,5-диметилфенил)бороновую кислоту использовали вместо (3,4-диметоксифенил)бороновой кислоты.
1
6
H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d) δ 8,23 (д, 1H, J=8,0 Гц), 7,75 (д, 1H, J=4,0 Гц), 7,47 (д, 1H, J=4,0 Гц), 7,31 (с, 2H), 6,99 (с, 1H), 4,10-4,01 (м, 1H), 2,31 (с, 6H), 1,17 (д, 6H, J=6,8 Гц).
Пример 29: Получение 5-(4-фторфенил)-N-изопропилтиофен-2-карбоксамида
Указанное в заголовке соединение (выход: 48,20%) получали в виде белого твердого вещества таким же образом, как в примере получения 3, за исключением того, что (4-фторфенил)бороновую кислоту использовали вместо (3,4-диметоксифенил)бороновой кислоты.
1
6
H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d) δ 8,28 (д, 1H, J=8,0 Гц), 7,79-7,75 (м, 3H), 7,51 (д, 1H, J=4,0 Гц), 7,30 (т, 2H, J=8,8 Гц), 4,11-4,03 (м, 1H), 1,19 (д, 6H, J=6,8 Гц).
Пример 30: Получение N-изопропил-5-м-толилтиофен-2-карбоксамида
Указанное в заголовке соединение (выход: 77,10%) получали в виде белого твердого вещества таким же образом, как в примере получения 3, за исключением того, что м-толилбороновую кислоту использовали вместо (3,4-диметоксифенил)бороновой кислоты.
1
6
H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d) δ 8,26 (д, 1H, J=7,6 Гц), 7,77 (д, 1H, J=3,6 Гц), 7,489-7,532 (м, 3H), 7,33 (т, 1H, J=7,6 Гц), 7,18 (д, 1H, J=7,6 Гц), 4,024-4,109 (м, 1H), 2,36 (с, 3H), 1,17 (д, 6H, J=6,4 Гц).
Пример 31: Получение 5-(2,4-диметилфенил)-N-изопропилтиофен-2-карбоксамида
Указанное в заголовке соединение (выход: 45,90%) получали в виде белого твердого вещества таким же образом, как в примере получения 3, за исключением того, что (2,4-диметилфенил)бороновую кислоту использовали вместо (3,4-диметоксифенил)бороновой кислоты.
1
6
H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d) δ 8,24 (д, 1H, J=7,6 Гц), 7,76 (д, 1H, J=3,6 Гц), 7,29 (д, 1H, J=7,6 Гц), 7,15 (д, 2H, J=4,0 Гц), 7,08 (д, 1H, J=8,0 Гц), 4,10-4,02 (м, 1H), 2,36 (с, 3H), 2,30 (с, 3H), 1,17 (д, 6H, J=6,4 Гц).
Пример 32: Получение 5-(4-цианофенил)-N-изопропилтиофен-2-карбоксамида
Указанное в заголовке соединение (выход: 39,70%) получали в виде белого твердого вещества таким же образом, как в примере получения 3, за исключением того, что (2,4-диметилфенил)бороновую кислоту использовали вместо (3,4-диметоксифенил)бороновой кислоты.
1
6
H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d) δ 8,36 (д, 1H, J=8,0 Гц), 7,90 (с, 4H), 7,83 (д, 1H, J=4,0 Гц), 7,74 (д, 1H, J=4,0 Гц), 4,10-4,02 (м, 1H), 1,18 (д, 6H, J=6,8 Гц).
Пример 33: Получение N-изопропил-5-(4-(изопропилкарбамоил)фенил)тиофен-2-карбоксамида
Изопропиламин (5,5 ммоль), 4-(5-(изопропилкарбамоил)тиофен-2-ил)бензойную кислоту (пример 20, 1,1 ммоль), ЭДК (1,43 ммоль), ДМАП (1,43 ммоль) и N, N-диизопропилэтиламин (ДИПЭА; 5,5 ммоль) добавляли к дихлорметану (20 мл), и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 10 часов. Органический растворитель концентрировали при пониженном давлении и очищали колоночной флэш-хроматографией (н-гексан:EtOAc=5:1), а затем перекристаллизовывали, используя дихлорметан и гексан. Продукт сушили с помощью вакуумного насоса с получением указанного в заголовке соединения в виде белого твердого вещества (выход: 4,12%).
1
6
H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d) δ 8,31-8,27 (м, 2H), 7,91 (д, 2H, J=8,4 Гц), 7,81-7,78 (м, 3H), 7,64 (д, 1H, J=4,0 Гц), 4,13-4,04 (м, 2H), 1,17 (д, 12H, J=6,4 Гц).
Пример 34: Получение 5-(3,5-дифторфенил)-N-изопропилтиофен-2-карбоксамида
Указанное в заголовке соединение (выход: 30,00%) получали в виде белого твердого вещества таким же образом, как в примере получения 3, за исключением того, что (3,5-дифторфенил)бороновую кислоту использовали вместо (3,4-диметоксифенил)бороновой кислоты.
1
6
H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d) δ 8,34 (д, 1H, J=7,6 Гц), 7,80 (д, 1H, J=3,6 Гц), 7,70 (д, 1H, J=4,0 Гц), 7,48 (д, 2H, J=6,8 Гц), 7,27-7,23 (м, 1H), 4,10-4,02 (м, 1H), 1,18 (д, 6H, J=6,4 Гц).
Пример 35: Получение 5-(4-этоксифенил)-N-изопропилтиофен-2-карбоксамида
Указанное в заголовке соединение получали в виде белого твердого вещества таким же образом, как в примере получения 3, за исключением того, что (4-этоксифенил)бороновую кислоту использовали вместо (3,4-диметоксифенил)бороновой кислоты.
1
6
H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d) δ 8,20 (д, 1H, J=10,4 Гц), 7,74 (д, 1H, J=5,2 Гц), 7,62 (д, 2H, J=12,0 Гц), 7,39 (д, 1H, J=5,2 Гц), 7,00 (д, 2H, J=22,0 Гц), 4,10-4,02 (м, 3H), 1,35 (т, 3H, J=9,2 Гц), 1,17 (д, 6H, J=8,8 Гц).
Пример 36: Получение 5-(4-(этилкарбамоил)фенил)-N-изопропилтиофен-2-карбоксамида
Указанное в заголовке соединение (выход: 11,5%) получали в виде белого твердого вещества таким же образом, как в примере 33, за исключением того, что этиламина гидрохлорид использовали вместо изопропиламина.
1
6
H ЯМР (300 МГц, ДМСО-d) δ 8,49 (т, 1H, J=5,45 Гц), 8,27 (д, 1H, J=7,71 Гц), 7,89-7,86 (м, 2H), 7,78-7,74 (м, 3H), 7,61 (д, 1H, J=3,94 Гц), 4,03 (дкв, 1H J=6,50, 13,09 Гц), 3,32-3,23 (м, 2H), 1,15 (д, 6H, J=6,60 Гц), 1,11 (т, 3H, J=7,21 Гц).
Пример 37: Получение N-изопропил-5-(4-(фенилкарбамоил)фенил)тиофен-2-карбоксамида
Указанное в заголовке соединение (выход: 38,7%) получали в виде коричневато-желтого твердого вещества таким же образом, как в примере 33, за исключением того, что анилин использовали вместо изопропиламина.
1
6
H ЯМР (300 МГц, ДМСО-d) δ 10,30 (с, 1H), 8,33 (д, 1H, J=7,71 Гц), 8,04 (д, 2H, J=8,52 Гц), 7,89-7,79 (м, 5H), 7,69 (д, 1H, J=3,95 Гц), 7,40-7,35 (м, 2H), 7,15-7,10 (м, 1H), 4,14-4,04 (м, 1H), 1,19 (д, 6H, J=6,61 Гц).
В следующих примерах 38-91 соответствующие соединения получали таким же образом, как в примере получения 3, за исключением того, что исходные вещества изменяли в соответствии со структурами соответствующих соединений, которые должны были быть получены.
Пример 38: Получение 5-(2,4-диметилфенил)-N-изопропилфуран-2-карбоксамида
1
6
H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d) δ 8,12 (д, 1H, J=10,4 Гц), 7,79 (т, 1H, J=5,6 Гц), 7,18-7,12 (м, 3H), 6,76 (д, 1H, J=4,8 Гц), 4,16-4,04 (м, 1H), 2,44 (с, 3H), 2,31 (с, 3H), 1,18 (д, 6H, J=8,8 Гц).
Пример 39: Получение 5-(3,4-дифторфенил)-N-изопропилфуран-2-карбоксамида
1
6
H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d) δ 8,25 (д, 1H, J=10,4 Гц), 8,12-8,04 (м, 1H), 7,81-7,76 (м, 1H), 7,60-7,51 (м, 1H), 7,16-7,13 (м, 2H), 4,17-4,06 (м, 1H), 1,12 (д, 6H, J=8,8 Гц).
Пример 40: Получение 5-(4-этилфенил)-N-изопропилфуран-2-карбоксамида
1
6
H ЯМР (300 МГц, ДМСО-d) δ 8,16 (д, J=7,9 Гц, 1H), 7,84-7,83 (м, 1H), 7,82-7,80 (м, 1H), 7,31 (д, J=8,6 Гц, 2H), 7,13 (д, J=3,6 Гц, 1H), 7,00 (д, J=3,5 Гц, 1H), 4,14-4,07 (м, 1H), 2,64 (кв, J=7,5 Гц, 2H), 1,23-1,18 (м, 9H).
Пример 41: Получение N-изопропил-5-м-толилфуран-2-карбоксамида
1
6
H ЯМР (300 МГц, ДМСО-d) δ 8,17 (д, 1H, J=8,1 Гц), 7,73-7,70 (м, 2H), 7,35 (т, 1H, J=7,9 Гц), 7,18 (д, 1H, J=7,5 Гц), 7,15 (д, 1H, J=3,6 Гц), 7,04 (д, 1H, J=3,3 Гц), 4,17-4,05 (м, 1H), 2,38 (с, 3H), 1,19 (д, 6H, J=6,6 Гц).
Пример 42: Получение 5-(4-этоксифенил)-N-изопропилфуран-2-карбоксамида
1
6
H ЯМР (300 МГц, ДМСО-d) δ 8,13 (д, 1H, J=13,5 Гц), 7,86-7,81 (м, 2H), 7,11 (д, 1H, J=3,6 Гц), 7,04-6,99 (м, 2H), 6,90 (д, 2H, J=3,6 Гц), 4,14-4,05 (м, 3H), 1,35 (т, 3H, J=3,6 Гц), 1,19 (д, 6H, J=6,6 Гц).
Пример 43: Получение N-изопропил-5-п-толилфуран-2-карбоксамида
1
6
H ЯМР (300 МГц, ДМСО-d) δ 8,16 (д, 1H, J=7,8 Гц), 7,80 (д, 2H, J=5,4 Гц), 7,28 (д, 2H, J=8,1 Гц), 7,13 (д, 1H, J=3,6 Гц), 7,00 (д, 1H, J=3,6 Гц), 4,16-4,05 (м, 1H), 2,34 (с, 1H), 1,19 (д, 6H, J=6,6 Гц).
Пример 44: Получение N-изопропил-5-фенилфуран-2-карбоксамида
1
6
H ЯМР (300 МГц, ДМСО-d) δ 8,20 (д, 1H, J=8,1 Гц), 7,94-7,91 (м, 2H), 7,50-7,45 (м, 2H), 7,40-7,35 (м, 1H), 7,16-7,15 (м, 1H), 7,09-7,07 (м, 1H), 4,17-4,06 (м, 1H), 1,20 (д, 6H, J=6,6 Гц).
Пример 45: Получение N-изопропил-5-(4-изопропилфенил)фуран-2-карбоксамида
1
6
H ЯМР (300 МГц, ДМСО-d) δ 8,16 (д, 1H, J=8,1 Гц), 7,82 (д, 2H, J=8,4 Гц), 7,34 (д, 2H, J=8,1 Гц), 7,14 (д, 1H, J=3,6 Гц), 6,99 (д, 1H, J=3,6 Гц), 4,16-4,05 (м, 1H), 3,00-2,86 (м, 1H), 1,23 (д, 6H, J=6,9 Гц), 1,19 (д, 6H, J=6,6 Гц).
Пример 46: Получение 5-(4-цианофенил)-N-изопропилфуран-2-карбоксамида
1
6
H ЯМР (300 МГц, ДМСО-d) δ 8,34 (д, 1H, J=7,8 Гц), 8,13 (д, 2H, J=8,7 Гц), 7,95 (д, 2H, J=8,7 Гц), 7,34 (д, 1H, J=3,6 Гц), 7,20 (д, 1H, J=3,6 Гц), 4,18-4,06 (м, 1H), 1,20 (д, 6H, J=6,6 Гц).
Пример 47: Получение 5-(3,5-диметилфенил)-N-фенилфуран-2-карбоксамида
1
6
H ЯМР (300 МГц, ДМСО-d) δ 10,14 (с, 1H), 7,79-7,75 (м, 2H), 7,59-7,58 (м, 2H), 7,41-7,35 (м, 3H), 7,15-7,10 (м, 2H), 7,04-7,03 (м, 1H), 2,35 (д, J=0,5 Гц, 6H).
Пример 48: Получение 5-(3,5-диметилфенил)-N-фенилтиофен-2-карбоксамида
1
6
H ЯМР (300 МГц, ДМСО-d) δ 10,24 (с, 1H), 8,03 (д, 2H, J=4,2 Гц), 7,75 (д, 2H, J=7,5 Гц), 7,60 (д, 1H, J=3,9 Гц), 7,37 (т, 4H, J=7,8 Гц), 7,12 (т, 1H, J=7,3 Гц), 7,036 (с, 1H), 2,33 (с, 6H).
Пример 49: Получение N-фенил-5-(пиридин-3-ил)тиофен-2-карбоксамида
1
6
H ЯМР (300 МГц, ДМСО-d) δ 10,32 (с, 1H), 7,73 (дд, 1H, J=0,6 Гц), 7,73 (дд, 1H, J=1,5 Гц), 8,18-8,08 (м, 2H), 7,76 (т, 3H, J=6,0 Гц), 7,53-7,49 (м, 1H), 7,38 (т, 2H, J=7,9 Гц), 7,13 (т, 1H, J=7,4 Гц).
Пример 50: Получение N-этил-5-(пиридин-3-ил)тиофен-2-карбоксамида
1
6
H ЯМР (300 МГц, ДМСО-d) δ 8,95 (дд, 1H, J=0,6 Гц), 8,57-8,54 (м, 2H), 8,12-8,08 (м, 1H), 7,77 (д, 1H, J=3,9 Гц), 7,66 (д, 1H, J=3,9 Гц), 7,50-7,45 (м, 1H), 3,31-3,24 (м, 2H), 1,14 (т, 3H, J=7,2 Гц).
Пример 51: Получение 5-(3,4-дифторфенил)-N-фенилфуран-2-карбоксамида
1
6
H ЯМР (300 МГц, ДМСО-d) δ 10,20 (с, 1H), 8,15 (ддд, J=11,8, 8,0, 2,1 Гц, 1H), 7,88-7,84 (м, 1H), 7,75 (дд, J=8,6, 1,1 Гц, 2H), 7,60 (дт, J=10,5, 8,6 Гц, 1H), 7,41-7,36 (м, 3H), 7,26 (д, J=3,6 Гц, 1H), 7,17-7,12 (м, 1H).
Пример 52: Получение N-фенил-5-п-толилфуран-2-карбоксамида
1
6
H ЯМР (300 МГц, ДМСО-d) δ 10,14 (с, 1H), 7,87 (д, J=8,2 Гц, 2H), 7,78-7,75 (м, 2H), 7,40-7,30 (м, 5H), 7,15-7,10 (м, 2H), 2,36 (с, 3H).
Пример 53: Получение N-фенил-5-(пиридин-3-ил)фуран-2-карбоксамида
1
6
H ЯМР (300 МГц, ДМСО-d) δ 10,22 (с, 1H), 9,25 (дд, J=2,3, 0,8 Гц, 1H), 8,59 (дд, J=4,8, 1,6 Гц, 1H), 8,35 (ддд, J=8,0, 2,3, 1,6 Гц, 1H), 7,78-7,75 (м, 2H), 7,54 (ддд, J=8,0, 4,8, 0,9 Гц, 1H), 7,44 (д, J=3,7 Гц, 1H), 7,42-7,36 (м, 2H), 7,34 (д, J=3,6 Гц, 1H), 7,17-7,11 (м, 1H).
Пример 54: Получение 5-(4-гидрокси-3-метоксифенил)-N-изопропилфуран-2-карбоксамида
1
6
H ЯМР (300 МГц, ДМСО-d) δ 9,37 (с, 1H), 8,09 (д, J=8,1 Гц, 1H), 7,39-7,36 (м, 2H), 7,12 (д, J=3,6 Гц, 1H), 6,90-6,84 (м, 2H), 4,16-4,04 (м, 1H), 3,86 (с, 3H), 1,19 (д, J=6,6 Гц, 6H).
Пример 55: Получение N,5-ди(пиридин-3-ил)тиофен-2-карбоксамида
1
6
H ЯМР (300 МГц, ДМСО-d) δ 10,56 (с, 1H), 9,00 (д, 1H, J=1,8 Гц), 8,92 (д, 1H, J=2,1 Гц), 8,58 (дд, 1H, J=1,5 Гц), 8,33 (дд, 1H, J=1,3 Гц), 8,19-8,12 (м, 3H), 7,77 (д, 1H, J=3,9 Гц), 7,52-7,48 (м, 1H), 7,41 (кв, 1H, J=4,8 Гц).
Пример 56: Получение 5-(4-гидрокси-3-метоксифенил)-N-фенилфуран-2-карбоксамида
1
6
H ЯМР (300 МГц, ДМСО-d) δ 10,08 (с, 1H), 9,43 (с, 1H), 7,76 (дд, J=8,7, 1,1 Гц, 2H), 7,47-7,34 (м, 5H), 7,14-7,09 (м, 1H), 7,00 (д, J=3,6 Гц, 1H), 6,88 (д, J=8,2 Гц, 1H), 3,88 (с, 3H).
Пример 57: Получение 5-(3,4-диметоксифенил)-N-(пиридин-3-ил)фуран-2-карбоксамида
1
6
H ЯМР (300 МГц, ДМСО-d) δ 10,33 (с, 1H), 8,94 (д, 1H, J=2,1 Гц), 8,34-8,32 (м, 1H), 8,18-8,15 (м, 1H), 7,56-7,43 (м, 4H), 7,11-7,07 (м, 2H), 3,85 (д, 6H, J=15,0 Гц).
Пример 58: Получение N,5-ди(пиридин-3-ил)фуран-2-карбоксамида
1
6
H ЯМР (300 МГц, ДМСО-d) δ 10,43 (с, 1H), 9,25 (т, 1H, J=1,2 Гц), 8,94 (д, 1H, J=2,1 Гц), 8,62-8,59 (м, 1H), 8,37-8,34 (м, 2H), 8,20-8,16 (м, 1H), 7,58-7,36 (м, 4H).
Пример 59: Получение 5-(4-гидрокси-3-метоксифенил)-N-(пиридин-3-ил)фуран-2-карбоксамида
1
6
H ЯМР (300 МГц, ДМСО-d) δ 10,29 (с, 1H), 9,46 (с, 1H), 8,94 (д, 1H, J=2,4 Гц), 8,34-8,32 (м, 1H), 8,16-8,15 (м, 1H), 7,46-7,41 (м, 4H), 7,02 (д, 1H, J=3,6 Гц), 6,89 (д, 1H, J=8,1 Гц), 3,89 (с, 3H).
Пример 60: Получение 5-(4-гидрокси-3-метоксифенил)-N-(пиридин-3-ил)тиофен-2-карбоксамида
1
6
H ЯМР (300 МГц, ДМСО-d) δ 10,38 (с, 1H), 9,44 (с, 1H), 8,90 (д, J=2,3 Гц, 1H), 8,31 (дд, J=4,7, 1,4 Гц, 1H), 8,17-8,14 (м, 1H), 8,00 (д, J=4,0 Гц, 1H), 7,51 (д, J=4,0 Гц, 1H), 7,40 (дд, J=8,3, 4,7 Гц, 1H), 7,27 (д, J=2,1 Гц, 1H), 7,17 (дд, J=8,2, 2,1 Гц, 1H), 6,85 (д, J=8,2 Гц, 1H), 3,87 (с, 3H).
Пример 61: Получение 5-(2-аминофенил)-N-изопропилфуран-2-карбоксамида
1
6
H ЯМР (300 МГц, ДМСО-d) δ 8,15 (д, J=8,0 Гц, 1H), 7,62 (дд, J=7,9, 1,5 Гц, 1H), 7,18 (д, J=3,6 Гц, 1H), 7,09 (ддд, J=8,5, 7,2, 1,6 Гц, 1H), 6,85-6,81 (м, 2H), 6,66 (ддд, J=8,2, 7,2, 1,2 Гц, 1H), 5,46 (с, 2H), 4,21-3,99 (м, 1H), 1,18 (д, J=6,6 Гц, 6H).
Пример 62: Получение N-изопропил-5-(хинолин-3-ил)фуран-2-карбоксамида
1
6
H ЯМР (300 МГц, ДМСО-d) δ 9,49 (д, J=2,2 Гц, 1H), 8,81 (д, J=2,0 Гц, 1H), 8,33 (д, J=8,0 Гц, 1H), 8,08-8,05 (м, 2H), 7,79 (ддд, J=8,4, 6,9, 1,5 Гц, 1H), 7,68 (ддд, J=1,13, 6,99, 8,11 Гц, 1H), 7,39 (д, J=3,6 Гц, 1H), 7,26 (д, J=3,6 Гц, 1H), 4,21-4,10 (м, 1H), 1,23 (д, J=6,6 Гц, 6H).
Пример 63: Получение N-изопропил-5-(2-оксоиндолин-5-ил)фуран-2-карбоксамида
1
6
H ЯМР (300 МГц, ДМСО-d) δ 10,55 (с, 1H), 8,13 (д, J=8,1 Гц, 1H), 7,78-7,74 (м, 2H), 7,11 (д, J=3,6 Гц, 1H), 6,91-6,87 (м, 2H), 4,19-4,03 (м, 1H), 3,56 (с, 2H), 1,19 (д, J=6,6 Гц, 6H).
Пример 64: Получение 5-(1H-индол-5-ил)-N-изопропилфуран-2-карбоксамида
1
6
H ЯМР (300 МГц, ДМСО-d) δ 11,26 (с, 1H), 8,15-8,12 (м, 2H), 7,64 (дд, J=8,5, 1,6 Гц, 1H), 7,47-7,40 (м, 2H), 7,13 (д, J=3,5 Гц, 1H), 6,90 (д, J=3,5 Гц, 1H), 6,52-6,51 (м, 1H), 4,17-4,10 (м, 1H), 1,21 (д, J=6,6 Гц, 6H).
Пример 65: Получение N-изопропил-5-(изохинолин-4-ил)фуран-2-карбоксамида
1
6
H ЯМР (300 МГц, ДМСО-d) δ 9,37 (с, 1H), 9,01 (с, 1H), 8,43 (д, J=8,5 Гц, 1H), 8,33-8,24 (м, 2H), 7,96-7,90 (м, 1H), 7,80 (т, J=7,2 Гц, 1H), 7,34 (д, J=3,6 Гц, 1H), 7,24 (д, J=3,6 Гц, 1H), 4,22-4,06 (м, 1H), 1,21 (д, J=6,6 Гц, 6H).
Пример 66: Получение N-изопропил-5-(пиридин-3-ил)фуран-2-карбоксамида
1
6
H ЯМР (300 МГц, ДМСО-d) δ 9,20-9,19 (м, 1H), 8,57-8,55 (м, 1H), 8,31-8,27 (м, 2H), 7,53-7,48 (м, 1H), 7,24-7,18 (м, 2H), 4,20-4,04 (м, 1H), 1,20 (д, 6H, J=6,6 Гц).
Пример 67: Получение изопропил 5-(пиридин-3-ил)фуран-2-карбоксилата
1
6
H ЯМР (300 МГц, ДМСО-d) δ 9,05 (с, 1H), 8,62-8,61 (м, 1H), 8,18-8,17 (м, 1H), 7,55-7,33 (м, 3H), 5,20-5,10 (м, 1H), 1,34 (д, 6H, J=6,3Гц).
Пример 68: Получение этил 5-(пиридин-3-ил)фуран-2-карбоксилата
1
H ЯМР (300 МГц, ДМСО) δ 9,05 (дд, J=2,3, 0,8 Гц, 1H), 8,60 (дд, J=4,8, 1,6 Гц, 1H), 8,20-8,16 (м, 1H), 7,55-7,51 (м, 1H), 7,45 (д, J=3,7 Гц, 1H), 7,34 (д, J=3,7 Гц, 1H), 4,33 (кв, J=7,1 Гц, 2H), 1,32 (т, J=7,1 Гц, 3H).
Пример 69: Получение фенил 5-(пиридин-3-ил)фуран-2-карбоксилата
1
3
H ЯМР (300 МГц, CDCl) δ 9,06 (с, 1H), 8,62-8,61 (м, 1H), 8,16-8,12 (м, 1H), 7,49-7,37 (м, 4H), 7,31-7,28 (м, 1H), 7,25-7,23 (м, 2H), 6,93 (д, 1H, J=3,9 Гц).
Пример 70: Получение пиридин-3-ил 5-(пиридин-3-ил)фуран-2-карбоксилата
1
3
H ЯМР (300 МГц, CDCl) δ 9,07-9,06 (м, 1H), 8,60-8,54 (м, 3H), 8,16-8,13 (м, 1H), 7,67-7,63 (м, 1H), 7,53 (д, J=3,7 Гц, 1H), 7,43-7,38 (м, 2H), 6,95 (д, J=3,7 Гц, 1H).
Пример 71: Получение этил 5-(пиридин-3-ил)тиофен-2-карбоксилата
1
6
H ЯМР (300 МГц, ДМСО-d) δ 9,01-9,00 (м, 1H), 8,61-8,59 (м, 1H), 8,19-8,15 (м, 1H), 7,85-7,84 (м, 1H), 7,77-7,74 (м, 1H), 7,52-7,48 (м, 1H), 4,32 (кв, 2H, J=7,2 Гц), 1,32 (т, 3H, J=7,2 Гц).
Пример 72: Получение изопропил 5-(пиридин-3-ил)тиофен-2-карбоксилата
1
6
H ЯМР (300 МГц, ДМСО-d) δ 9,00-8,99 (м, 1H), 8,60-8,58 (м, 1H), 8,19-8,15 (м, 1H), 7,83-7,81 (м, 1H), 7,74-7,73 (м, 1H), 7,52-7,47 (м, 1H), 1,32 (д, 6H, J=6,3 Гц).
Пример 73: Получение фенил 5-(пиридин-3-ил)тиофен-2-карбоксилата
1
3
H ЯМР (300 МГц, CDCl) δ 8,96-8,95 (м, 1H), 8,63-8,61 (м, 1H), 7,99-7,92 (м, 2H), 7,47-7,39 (м, 4H), 7,31-7,26 (м, 1H), 7,25-7,22 (м, 2H).
Пример 74: Получение пиридин-3-ил 5-(пиридин-3-ил)тиофен-2-карбоксилата
1
6
H ЯМР (300 МГц, ДМСО-d) δ 9,08-9,07 (м, 1H), 8,65-8,61 (м, 2H), 8,56-8,54 (м, 1H), 8,26-8,22 (м, 1H), 8,13-8,12 (м, 1H), 7,88-7,83 (м, 2H), 7,58-7,51 (м, 2H).
Пример 75: Получение 5-(3-гидроксифенил)-N-изопропилфуран-2-карбоксамида
1
6
H ЯМР (300 МГц, ДМСО-d) δ 9,67 (с, 1H), 8,22 (д, 1H, J=8,1 Гц), 7,34-7,22 (м, 3H), 7,14-7,13 (м, 1H), 6,99-6,98 (м, 1H), 6,79-6,76 (м, 1H), 4,16-4,04 (м, 1H), 1,18 (д, 6H, J=6,6 Гц).
Пример 76: Получение 5-(3,4-диметоксифенил)-N-изопропилфуран-2-карбоксамида
1
6
H ЯМР (300 МГц, ДМСО-d) δ 8,11 (д, 1H, J=7,8 Гц), 7,48 (кв, 1H, J=2,1 Гц), 7,39 (д, 1H, J=2,1 Гц), 7,13 (д, 1H, J=3,6 Гц), 7,04 (д, 1H, J=8,4 Гц), 6,97 (д, 1H, J=3,6 Гц), 4,13-4,06 (м, 1H), 3,83 (д, 6H, J=12,6 Гц), 1,19 (д, 6H, J=6,6 Гц).
Пример 77: Получение этил 5-(3,4-диметоксифенил)фуран-2-карбоксилата
Указанное в заголовке соединение (выход: 48,3%) получали в виде коричневато-желтого масла таким же образом, как в примере получения 3, за исключением того, что промежуточное соединение 4 использовали вместо 5-бром-N-изопропилтиофен-2-карбоксамида.
1
6
H ЯМР (300 МГц, ДМСО-d) δ 7,40-7,36 (м, 2H), 7,34 (д, 1H, J=2,1 Гц), 7,09-7,05 (м, 2H), 4,31 (кв, 2H, J=7,2 Гц), 3,83 (д, 6H, J=10,5 Гц), 1,31 (т, 3H, J=10,5 Гц).
Пример 78: Получение 5-(3,5-дифторфенил)-N-изопропилфуран-2-карбоксамида
1
6
H ЯМР (300 МГц, ДМСО-d) δ 8,30 (д, 1H, J=7,8 Гц), 7,79-7,70 (м, 2H), 7,29-7,16 (м, 3H), 4,18-4,07 (м, 1H), 1,20 (д, 6H, J=6,9 Гц).
Пример 79: Получение этил 5-(2-аминофенил)фуран-2-карбоксилата
1
6
H ЯМР (300 МГц, ДМСО-d) δ 7,51 (кв, 1H, J=0 Гц), 7,40 (д, 1H, J=6 Гц), 7,14-7,09 (м, 1H), 6,5 (д, 1H, J=6 Гц), 6,83 (кв, 1H, J=0 Гц), 6,69-6,64 (м, 1H), 5,54 (с, 2H), 4,31 (кв, 2H, J=6 Гц), 1,31 (т, 3H, J=7,5 Гц).
Пример 80: Получение этил 5-(изохинолин-4-ил)фуран-2-карбоксилата
1
6
H ЯМР (300 МГц, ДМСО-d) δ 9,40 (д, 1H, J=0 Гц), 8,87 (с, 1H), 8,44 (кв, 1H, J=0 Гц), 8,27 (д, 1H, J=9 Гц), 7,97-7,92 (м, 1H), 7,83-7,78 (м, 1H), 7,54 (д, 1H, J=3 Гц), 7,32 (д, 1H, J=3 Гц), 4,36 (кв, 2H, J=6 Гц), 1,34 (т, 3H, J=7,5 Гц).
Пример 81: Получение этил 5-(4-(метоксикарбонил)фенил)фуран-2-карбоксилата
1
6
H ЯМР (300 МГц, ДМСО-d) δ 8,08-7,95 (м, 4H), 7,45 (д, 1H, J=6 Гц), 7,37 (д, 1H, J=3 Гц), 4,34 (кв, 2H, J=6 Гц), 3,89 (д, 3H, J=3 Гц), 1,33 (т, 3H, J=7,5 Гц).
Пример 82: Получение этил 5-(3,5-дифторфенил)фуран-2-карбоксилата
1
6
H ЯМР (300 МГц, ДМСО-d) δ 7,55-7,52 (м, 2H), 7,45 (д, 1H, J=3Гц), 7,38 (д, 1H, J=3 Гц), 7,35-7,28 (м, 1H), 4,33 (кв, 2H, J=6 Гц), 1,33 (т, 3H, J=7,5 Гц).
Пример 83: Получение 5-(3,5-диметилфенил)-N-(пиридин-3-ил)фуран-2-карбоксамида
1
6
H ЯМР (300 МГц, ДМСО-d) δ 10,35 (с, 1H), 8,95 (д, 1H, J=3 Гц), 8,34 (кв, 1H, J=0 Гц), 8,19-8,15 (м, 1H), 7,59 (т, 2H, J=0 Гц), 7,45-7,40 (м, 2H), 7,15 (д, 1H, J=3 Гц), 7,05 (с, 1H), 2,36 (д, 6H, J=0 Гц).
Пример 84: Получение 5-(2,4-диметилфенил)-N-(пиридин-3-ил)фуран-2-карбоксамида
1
6
H ЯМР (300 МГц, ДМСО-d) δ 10,34 (с, 1H), 8,93 (д, 1H, J=0 Гц), 8,33 (кв, 1H, J=3 Гц), 8,19-8,15 (м, 1H), 7,84 (д, 1H, J=9 Гц), 7,48 (д, 1H, J=6 Гц), 7,43-7,39 (м, 1H), 7,18-7,17 (м, 2H), 6,90 (д, 1H, J=3 Гц), 2,48 (с, 3H), 2,33 (с, 3H).
Пример 85: Получение 5-(3,5-диметилфенил)-N-изопропилфуран-2-карбоксамида
1
6
H ЯМР (300 МГц, ДМСО-d) δ 8,15 (д, J=8,1 Гц, 1H), 7,53-7,49 (м, 2H), 7,14 (д, J=3,6 Гц, 1H), 7,02-7,00 (м, 2H), 4,20-3,99 (м, 1H), 2,33 (д, J=0,5 Гц, 6H), 1,20 (д, J=6,6 Гц, 6H).
Пример 86: Получение этил 5-(3,5-диметилфенил)фуран-2-карбоксилата
1
6
H ЯМР (300 МГц, ДМСО-d) δ 7,46-7,42 (м, 2H), 7,38 (д, J=3,7 Гц, 1H), 7,12 (д, J=3,6 Гц, 1H), 7,06-7,03 (м, 1H), 4,32 (кв, J=7,1 Гц, 2H), 2,35-2,32 (м, 6H), 1,31 (т, J=7,1 Гц, 3H).
Пример 87: Получение этил 5-(3-гидроксифенил)фуран-2-карбоксилата
1
6
H ЯМР (300 МГц, ДМСО-d) δ 9,71 (с, 1H), 7,38 (д, J=3,7 Гц, 1H), 7,29-7,21 (м, 3H), 7,10 (д, J=3,6 Гц, 1H), 6,83-6,79 (м, 1H), 4,31 (кв, J=7,1 Гц, 2H), 1,31 (т, J=7,1 Гц, 3H).
Пример 88: Получение этил 5-(хинолин-3-ил)фуран-2-карбоксилата
1
6
H ЯМР (300 МГц, ДМСО-d) δ 9,38 (д, J=2,3 Гц, 1H), 8,74 (д, J=2,2 Гц, 1H), 8,16-8,13 (м, 1H), 8,08-8,05 (м, 1H), 7,81 (ддд, J=8,4, 6,9, 1,5 Гц, 1H), 7,68 (ддд, J=8,1, 6,9, 1,2 Гц, 1H), 7,51-7,48 (м, 2H), 4,36 (кв, J=7,1 Гц, 2H), 1,34 (т, J=7,1 Гц, 3H).
Пример 89: Получение этил 5-(4-цианофенил)фуран-2-карбоксилата
1
6
H ЯМР (300 МГц, ДМСО-d) δ 8,02-7,94 (м, 4H), 7,45 (дд, J=9,2, 3,7 Гц, 2H), 4,33 (кв, J=7,1 Гц, 2H), 1,32 (т, J=7,1 Гц, 3H).
Пример 90: Получение этил 5-(1H-индол-5-ил)фуран-2-карбоксилата
1
6
H ЯМР (300 МГц, ДМСО-d) δ 11,31 (с, 1H), 8,06-8,01 (м, 1H), 7,58-7,55 (м, 1H), 7,51-7,46 (м, 1H), 7,44-7,40 (м, 1H), 7,38 (д, J=3,6 Гц, 1H), 7,02 (д, J=3,6 Гц, 1H), 6,56-6,52 (м, 1H), 4,31 (кв, J=7,1 Гц, 2H), 1,32 (т, J=7,1 Гц, 3H).
Пример 91: Получение 5-(3-гидроксифенил)-N-(пиридин-3-ил)фуран-2-карбоксамида
1
H ЯМР (400 МГц, ДМСО) δ 10,41 (с, 1H), 9,72 (с, 1H), 8,94 (д, J=2,3 Гц, 1H), 8,34 (дд, J=4,7, 1,4 Гц, 1H), 8,19-8,16 (м, 1H), 7,48-7,35 (м, 4H), 7,29 (т, J=7,8 Гц, 1H), 7,13 (д, J=3,6 Гц, 1H), 6,84-6,81 (м, 1H).
В следующих примерах 92-94 соответствующие соединения получали таким же образом, как в примере 33, за исключением того, что исходные вещества изменяли в соответствии со структурами соответствующих соединений, которые должны были быть получены.
Пример 92: Получение 5-(3-(этилкарбамоил)фенил)-N-изопропилфуран-2-карбоксамида
1
H ЯМР (300 МГц, ДМСО) δ 8,57 (т, J=5,4 Гц, 1H), 8,27-8,23 (м, 2H), 8,07-8,05 (м, 1H), 7,81-7,78 (м, 1H), 7,56 (т, J=7,7 Гц, 1H), 7,19 (д, J=3,6 Гц, 1H), 7,13 (д, J=3,6 Гц, 1H), 4,17-4,05 (м, 1H), 3,37-3,28 (м, 2H), 1,21-1,13 (м, 9H).
Пример 93: Получение 5-(4-(этилкарбамоил)фенил)-N-изопропилфуран-2-карбоксамида
1
H ЯМР (300 МГц, ДМСО) δ 8,55 (т, J=5,4 Гц, 1H), 8,28 (д, J=8,1 Гц, 1H), 8,06-7,89 (м, 4H), 7,20 (кв, J=3,6 Гц, 2H), 4,18-4,06 (м, 1H), 3,36-3,27 (м, 2H), 1,22-1,12 (м, 9H).
Пример 94: Получение N-изопропил-5-(4-(изопропилкарбамоил)фенил)фуран-2-карбоксамида
1
H ЯМР (300 МГц, ДМСО) δ 8,29-8,26 (м, 2H), 8,02-7,88 (м, 4H), 7,21-7,17 (м, 2H), 4,17-4,06 (м, 2H), 1,21-1,17 (м, 12H).
Сравнительный пример
В качестве сравнительного примера использовали соединение (5-(3,4-диметоксифенил)-N-изопропилтиофен-2-карбоксамид), раскрытое в примере 1 корейской патентной публикации № 10-2017-0022790.
Экспериментальный пример 1: Эффект активации аутофагии
1) Метод активации аутофагии
Степень активации аутофагии каждого соединения оценивали путем измерения степени продукции LC3-II в клетках Hep3B.
2
2
3
4
5
В частности, гепатоциты человека Hep3B культивировали в среде DMEM (модифицированная по способу Дульбекко среда Игла) при 37°C в атмосфере 5% CO. Соответствующие клетки распределяли в 6-луночные планшеты при плотности 5 × 10 клеток/лунка. Эти клетки обрабатывали ДМСО, соединением, полученным в примерах, описанных выше, и соединением сравнительного примера, соответственно, а затем обрабатывали в среде DMEM при 37°C в атмосфере 5% CO в течение 12 часов для индукции аутофагии. Затем клетки Hep3B лизировали буфером для экстракции, содержащим коктейль ингибиторов протеаз (раствор ФСБ, содержащий 0,5% Тритон X-100, 1 мМ NaVO и т.д.), а затем проводили фрагментацию ДНК ультразвуком. Количество белка измеряли с использованием бычьего сывороточного альбумина в качестве стандарта белка с помощью набора для анализа содержания белка с использованием бицинхониновой кислоты (BCA) SMART™ от iNtRON Biotechnology. После электрофореза 10~50 мкг общего клеточного белка в 8~12% (масс./об.) полиакриламидном геле, содержащем 0,1% додецилсульфата натрия (SDS), белки, присутствующие в геле, переносили на ПВДФ-мембрану методом электроблоттинга. Затем, чтобы заблокировать неспецифическое связывание, ПВДФ-мембрану помещали в раствор TBS-твин (ТРИС-буферизированный физраствор-твин, Sigma Co.), содержащий 5% обезжиренного сухого молока, и проводили реакцию при комнатной температуре в течение 1 часа. Фильтр помещали в раствор TBS-твин, содержащий специфические антитела против белка LC3 (Cell Signaling), выдерживали при 4°C в течение 12 часов, а затем метили вторичным антителом, меченным HRP (пероксидаза из хрена, Sigma Co., № по каталогу P0889). Затем полосы измеряли с использованием ECL (усиленная хемилюминесценция, Thermo Scientific, № по каталогу 34080).
2) Результаты измерения активации аутофагии
Индукция аутофагии может быть подтверждена увеличением специфических молекул LC3-II. Предшественники LC3 обычно разбросаны в цитоплазме, протеолитически расщеплены и представлены в форме LC3-I. Когда аутофагия активируется, C-концевой глицин модифицируется с образованием LC3-II, которая мигрирует в аутофагосому и распределяется в форме точек.
Результаты измерений представлены в таблице 1 ниже. Количество LC3-II, увеличившееся при обработке соединением, определяли количественно путем измерения плотности полос, а затем сравнивали с количеством LC3-II, увеличенным при обработке соединением сравнительного примера, и значения для сравнения показаны в таблице 1. То есть случай, обладающий такой же способностью индуцировать аутофагию, что и соединение сравнительного примера, представлен значением 1; случай, обладающий большей способностью индуцировать аутофагию по сравнению с соединением сравнительного примера, представлен значением больше 1; и случай, имеющий более слабую способность индуцировать аутофагию, чем у соединения сравнительного примера, представлен значением меньше 1.
[Таблица 1]
№ Примера
Способность индуцировать аутофагию
№ Примера
Способность индуцировать аутофагию
Пример 1
1,48
Пример 31
1,49
Пример 2
1,38
Пример 48
1,46
Пример 4
1,16
Пример 49
1,51
Пример 5
1,80
Пример 58
1,10
Пример 7
1,24
Пример 65
1,66
Пример 11
2,13
Пример 72
1,08
Пример 12
1,19
Пример 85
1,09
Пример 14
1,13
Пример 88
1,02
Пример 15
1,50
Пример 89
1,64
Пример 17
1,99
Пример 91
1,33
Пример 18
1,13
Пример 92
1,41
Пример 27
1,01
Пример 93
1,19
Пример 28
1,60
Пример 94
1,17
Пример 30
1,02
Сравнительный пример
1,00
Как показано в Таблице 1 выше, по увеличению LC3-II можно подтвердить, что клетки Hep3B индуцируют аутофагию при обработке соединением сравнительного примера, используемым в качестве контрольного вещества. Кроме того, соединение согласно настоящему раскрытию показало увеличение LC3-II по сравнению с соединением сравнительного примера. Следовательно, можно видеть, что соединения согласно настоящему описанию обладают превосходной способностью индуцировать аутофагию.
Экспериментальный пример 2: Подтверждение эффективности против неалкогольного стеатогепатита, фиброза и цирроза печени
.
Для подтверждения эффективности соединений согласно настоящему раскрытию в отношении неалкогольного стеатогепатита и фиброза печени проводили эксперименты на животных.
В частности, 48 мышам в возрасте от 6 до 9 недель, имеющим индуцированный неалкогольный стеатогепатит (8 мышей для каждого экспериментального примера ниже), соединение примера 1 разделяли на группы с низкой, средней и высокой дозой в сочетании с носителем (10% ГП-β-ЦД в 0,5% растворе КМК), как показано в таблице 2 ниже, и вводили перорально два раза в день.
В качестве сравнительной группы 4 нормальных мышей не лечили до 9-недельного возраста. В качестве положительного контроля 8 мышам в возрасте от 6 до 9 недель, имеющим индуцированный неалкогольный стеатогепатит, телмисартан, который является терапевтическим средством от гипертонии, и обетихолевую кислоту (OCA), разрабатываемую в настоящее время в качестве терапевтического агента НАСГ, вводили перорально один раз в день в дозе 10 мг/кг, 30 мг/кг, соответственно. В качестве отрицательного контроля 8 мышам в возрасте от 6 до 9 недель, имеющим индуцированный неалкогольный стеатогепатит, перорально дважды в день вводили только 10 мл/кг 10% ГП-β-ЦД в 0,5% растворе КМК, который является носителем.
Впоследствии степень стеатоза, воспаления и баллонирования измеряли для печени 9-недельных экспериментальных животных с использованием окрашивания ГЭ, и устанавливали и измеряли площадь фиброза с помощью окрашивания сириусом красным. Результаты оцениваются с использованием критерия множественного сравнения Бонферрони и показаны на фиг. 1 и 2.
Фиг. 1 представляет собой график, демонстрирующий оценку активности неалкогольной жировой болезни печени (НАЖБП), рассчитанную на основе комбинированной оценки стеатоза, воспаления и баллонирования в печени экспериментальных животных. Как показано на фиг. 1, можно подтвердить, что соединение согласно настоящему раскрытию обладает значительной активностью в отношении облегчения неалкогольного стеатогепатита дозозависимым образом. Фиг. 2 представляет собой график, который демонстрирует площадь фиброза путем окрашивания уровня фиброза для печени экспериментальных животных. Было подтверждено, что мыши, которым вводили соединение согласно настоящему раскрытию, доказывали подавляющую фиброз активность в зависимости от дозы вышеупомянутого производного.