Изучение CD4+ лимфоцитов разной стадии дифференцировки у женщин с привычным невынашиванием беременности

2017, Т. 19, Специальный выпуск 2017, Vol. 19, Special Issue

Иммунология репродукции Immunology of reproduction

ходили контроль. Стимулированный НСТ-тест выявляет резервные возможности перитонеальных макрофагов. При стимуляции наблюдалось незначительное, недостоверное, повышение фагоцитарной активности по сравнению с контролем при легком и умеренном течении НГЭ и достоверное снижение активности у больных с тяжелым течением. В целом достоверных различий между контрольной и основной группой не было. При этом достоверно низкие относительно контроля индексы стимуляции в подгруппах основной группы — 2,41, 2,2 и 1,81 соответственно, говорили о склонности к гипореактив-ности и снижении резерва микробицидности по мере утяжеления НГЭ. Выявленная прямая зависимость между показателями метаболической активности макрофагов перитонеальной жидкости и степенью активности НГЭ позволяет использовать спонтанный и стимулированный НСТ-тест как один из диагностических критериев в комплексном обследовании больных с эндометриозом.

Макрофаги составляют более 90 % от всех клеток, находящихся в перитонеальной полости, как у здоровых фертильных женщин, так и при эндометриозе. В норме перитонеальные макрофаги заканчивают жизненный цикл менее зрелыми. У больных НГЭ по сравнению со здоровым контролем выявлено резкое увеличение популяции крупных и активных макрофагов, в которых по сравнению с контрольной группой регистрируется повышенная спонтанная кислородзависимая метаболическая активность (по результатам НСТ-теста), обратно коррелирующая со степенью тяжести заболевания. Уровень же стимулированного фагоцитоза у них достоверно не отличался от контроля. Эти данные свидетельствуют о хронической стимуляции макрофагов в перитонеаль-ной полости при эндометриозе, что приводить к избыточному образованию свободно-радикальных молекул, а это в свою очередь является дополнительным стимулом к накоплению и активации моноцитов крови в перитоне-альной полости.

АНАЛИЗ ДИФФЕРЕНЦИРОВКИ ^-ЛИМФОЦИТОВ ПРИ ПРИВЫЧНОМ НЕВЫНАШИВАНИИ БЕРЕМЕННОСТИ

Батурина И.Л., Абрамовских О.С., Логинова Ю.В., Никушкина К.В., Зотова М.А., Никонова Т.И., Емельянов И.В., Новоженина В.С., Кох Е.В.

НИИ иммунологии ФГБОУВПО «Южно-уральский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения РФ, Челябинск, Россия

Репродуктивная дисфункция является одной из актуальных проблем практического акушерства и гинекологии. Случаи самопроизвольного прерывания беременности составляют в нашей стране около 20% от общего числа зарегистрированных беременностей — 15% приходится на самопроизвольные выкидыши и 5% — на преждевременные роды. В настоящее время установлено, что иммунные механизмы играют значимую роль при беременности, с одной стороны, защищая мать и плод от инфекционных патогенов, а с другой стороны, обеспечивая толерантность иммунной системы матери в отношении эмбриона и плода. Дисбаланс иммунорегуляторных механизмов приводит к недостаточности репродуктивной функции, в том числе нарушениям имплантации, спорадическому или привычному невынашиванию беременности, неразвивающейся беременности (Михалевич С.И. и соавт., 2012). Исследование данных механизмов в последнее

время активно изучается и имеет противоречивые и разрозненные данные, что требует дальнейшего изучения.

Цель. Изучение Tcyt-лимфоцитов разной стадии диф-ференцировки в периферической крови у пациенток с привычным невынашиванием беременности (ПНБ).

Материалы и методы. На базе НИИ иммунологии ЮУГМУ г. Челябинска в 2015-2017 гг. было проведено комплексное обследование 30 женщин в возрасте от 20 до 36 лет, с диагнозом ПНБ. Диагноз был подтвержден врачами — гинекологами с помощью клинических и инструментальных и молекулярно-генетических методов исследования. Группу контроля составили 30 условно здоровых женщин, имеющих 2-х и более детей от одного мужчины. Все пациентки были разделены на две группы: 1- контроль (А) и 2- женщины с привычным невынашиванием беременности (В) Всем обследуемым было проведено иммунологическое исследование периферической крови методом проточной цитофлюориметрии на аппарате Navios™ (Beckman Coulter, США) с использованием коньюгатов антител: CD45+-PerCP-Cy7 (ВС,США); CD8+-PerCP-Cy5.5 (eBioscience, США), CD45RA АРС (eBioscience, США), CD62L FITC (еВ^шепсе,США). Статистический анализ осуществляли с применением пакета прикладных программ Statistica 9.0. Для сравнения групп использовали непараметрический критерий Манна—Уитни, различия считали достоверными при уровне значимости p < 0,05.

Результаты и обсуждение. При обследовании было установлено достоверное повышение абсолютного количества CD45RA+CD62L+ (Tn) наивных CD8+лимфоцитов при одновременном повышении абсолютного количества CD45RA-CD62L- (Tem) эффекторных клеток памяти CD8+ у пациенток с ПНБ по сравнению с группой контроля. Доказано, что при нормальном течении беременности наивные CD8+ лимфоциты должны увеличиваться, на фоне снижения количества Tem и Temra (Кудряшо-ва А.В., 2014). Однако при ПНБ нами установлено повышение (Tem) эффекторных клеток памяти, которые обладают прямой цитолитической активностью и имеют набор адгезивных и хемотаксических рецепторов, за счет чего эти клетки очень быстро мигрируют, в место имплантации эмбриона, возможно, оказывая негативное действие на аллотрансплантант, вызывая прерывание беременности. Полученные данные требуют дальнейшего изучения и доказывают перспективность данного исследования для более глубокого понимания иммунорегуля-торных механизмов ПНБ.

ИЗУЧЕНИЕ CD4+ ЛИМФОЦИТОВ РАЗНОЙ СТАДИИ ДИФФЕРЕНЦИРОВКИ У ЖЕНЩИН С ПРИВЫЧНЫМ НЕВЫНАШИВАНИЕМ БЕРЕМЕННОСТИ

Батурина И.Л., Логинова Ю.В., Новоженина В.С., Никушкина К.В., Зотова М.А., Никонова Т.И., Емельянов И.В., Кох Е.В.

НИИ иммунологии ФГБОУВПО «Южно-уральский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения РФ, Челябинск, Россия

В настоящее время известно, что реакции иммунной системы играют важную роль в процессах оплодотворения, имплантации и развития беременности. Установлено, что изменение функциональной активности и дифференцировки клеток иммунной системы уже на ранних сроках беременности могут определять ее тече-

«Дни иммунологии в СПб 2017» Immunology Days in St. Petersburg 2017

Медицинская Иммунология Medical Immunology (Russia)/Meditsinskaya Immunologiya

ние. В последние годы было показано, что уровень функциональной активности CD4+ лимфоцитов определяется стадией их дифференцировки, Однако роль их в регуляции иммунного ответа при беременности остается мало изученной. Имеются лишь единичные данные об общем содержании Т-лимфоцитов в крови и в плаценте при не-осложненном течении беременности, а также при акушерской патологии, в частности, при гестозе и угрозе прерывания беременности (Кадырова Л.В. и соавт., 2014; Кудрявцев И.В., 2014).

Цель. Определение CD4+ лимфоцитов разной стадии дифференцировки в периферической крови, у женщин с привычным невынашиванием беременности (ПНБ).

Материалы и методы. На базе НИИ иммунологии ЮУГМУ г. Челябинска в 2016-2017 гг. было проведено комплексное обследование 30 женщин в возрасте от 20 до 36 лет, с диагнозом ПНБ. Диагноз был подтвержден врачами — гинекологами с помощью клинических и инструментальных и молекулярно-генетических методов исследования. Группу контроля составили 30 условно здоровых женщин, имеющих 2-х и более детей от одного мужчины. Все пациентки были разделены на две группы: 1- контроль (А) и 2- женщины с привычным невынашиванием беременности (В) Всем обследуемым было проведено иммунологическое исследование периферической крови методом проточной цитоф-люориметрии на аппарате Navios™ (Beckman Coulter, США) с использованием коньюгатов антител: CD45+-PerCP-Cy7 (ВС,США), CD4+- PerCP-Cy5.5 (eBioscience, США), CD8+ PerCP-Cy5.5 (eBioscience, США), CD45RA АРС (eBioscience, США), CD62L FITC (eBioscience, США). Статистический анализ осуществляли с применением пакета прикладных программ Statistica 9.0. Для сравнения групп использовали непараметрический критерий Манна—Уитни, различия считали достоверными при уровне значимости p < 0,05.

Результаты и обсуждение. При обследовании было установлено достоверное повышение абсолютного количества CD45RA+CD62L+ (Tn) наивных CD4+ лимфоцитов при одновременном снижении абсолютного и относительного количества CD45RA-CD62L- (Tem) эффектор-ных клеток памяти CD4+ у пациенток с ПНБ по сравнению с группой контроля. В настоящее время доказано, что наступление нормальной беременности сопровождается доминированием в крови пула CD4+ Tn на фоне снижения количества Tem и Temra (Сотникова Н.Ю., 2010), что соотносится с нашими данными. Возможно, что при ПНБ имеются другие нарушения иммунной системы, что требует дальнейшего более детального и расширенного изучения.

СОДЕРЖАНИЕ ИММУНОГЛОБУЛИНОВ РАЗНЫХ КЛАССОВ В СПЕРМОПЛАЗМЕ ПРИ БЕССИМПТОМНОЙ БАКТЕРИОСПЕРМИИ

Вавилов Н.В., Мальцев H.A., Годовалов А.П.

ФГБОУ ВО «Пермский государственный медицинский университет им. акад. Е.А. Вагнера» Министерства здравоохранения РФ, Пермь, Россия

C 1980 г. отмечается неуклонное снижение встречаемости значений «нормы» среди показателей спермограм-мы. Также удельный вклад мужского фактора в структуру бесплодия составляет 20-45%. Показано, что у мужчин, состоящих в бесплодных браках, зачастую обнаружива-

ется бессимптомная бактериоспермия. Описано как прямое негативное влияние микроорганизмов на качество эякулята, так и опосредованное — через реакции макроорганизма. Как известно, одним из звеньев защиты от инфекции являются гуморальные факторы приобретённого иммунитета, поэтому интерес представляет оценка содержания иммуноглобулинов в зависимости от микробного спектра эякулята при бессимптомной бактериоспермии.

Цель. Оценить содержание иммуноглобулинов классов М, G, А и Е в спермоплазме мужчин с бессимптомной бактериоспермией.

Материалы и методы. Проведено исследование эякулята 51 мужчины, обратившихся в клинику по поводу бесплодного брака. Для бактериологического анализа исследуемых образцов готовили десятикратные разведения исходного материала. Бактериологическое исследование выполнено по общепринятой методике(Godovalov А.Р., Кагришпа Т.1., 2016). Для установления концентрации иммуноглобулинов (ВД класса М (^М), G (IgG), А (IgA) и Е (^Е) использовали иммуноферментный метод (Вектор-Бест, Россия). Общее микробное число выражали в ^ КОЕ/мл. Концентрацию ^ и альбумина выражали в мг/г общего белка. Статистический анализ результатов проводили с использованием методов описательной статистики и ^критерия Стьюдента для непарных данных.

Результаты. Установлено, что у 94% мужчин в эякуляте присутствуют микроорганизмы. Из них у 63% мужчин были обнаружены грамположительные кокки (1-я группа; 4,53±0,24 ^ КОЕ/мл), в трети случаев (31%) — грамо-трицательные палочки (2-я группа; 5,38±0,30 ^ КОЕ/мл, р < 0,05 к 1-й группе) и только у 6% мужчин рост микрофлоры отсутствовал (3-я группа). Показано, что у мужчин 3-й группы концентрация белка в спермоплазме составила 89,0±5,1 мг/мл, что существенно выше, чем в 1-й (58,9±2,7 мг/мл; р < 0,05) и 2-й группах (57,3±3,9 мг/мл; р < 0,05). Доля альбумина в общей белковой фракции во 2-й группе статистически значимо выше, чем в 1-й, однако обе группы не отличались по уровню этого белка от показателей 3-й группы. Наибольший уровень IgG и ^М наблюдался при высеве представителей семейства Enterobacteriaceae (табл.). В противоположность этому максимальный уровень IgA обнаружен в 3-й группе, где в образцах спермоплазмы отсутствовал рост условно патогенной микрофлоры (табл.). Иммуноглобулины класса Е не обнаружены ни в одной пробе.

ТАБЛИЦА. СОДЕРЖАНИЕ ИММУНОГЛОБУЛИНОВ В СПЕРМОПЛАЗМЕ МУЖЧИН С БЕССИМПТОМНОЙ БАКТЕРИОСПЕРМИЕЙ

Группы Концентрация иммуноглобулинов, мг/г белка

IgG IgM igA

1 206,6±13,5*# 3,7±0,5* 35,8±3,2*#

2 261,9±23,0# 5,6±0,7# 27,3±2,6#

3 154,5±24,6 2,4±0,7 72,8±10,7

Примечание. * — р < 0,05 при сравнении с данными 2-й группы, # — р < 0,05 при сравнении с данными 3-й группы.

Повышение концентраций ^М и альбумина во 2-й группе можно объяснить более выраженным действием грамотрицательной флоры на микроциркуляторное русло, в результате чего усиливается транссудация таких «тя-