СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОДУКТА, ОБЛАДАЮЩЕГО БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫМИ СВОЙСТВАМИ, ИЗ ГОЛОТУРИЙ
PRODUCTION OF PRODUCT WITH BIOLOGICALLY ACTIVE PROPERTIES FROM HOLOTHURIANS

Изобретение относится к пищевой промышленности и может быть использовано как общеукрепляющая, питательная добавка, предназначенная для активации иммунной системы и профилактики заболеваний костно-мышечной системы и соединительной ткани, а также для введения в пищевые продукты, применяемые при заболеваниях опорно-двигательного аппарата, и улучшения физической и умственной работоспособности и касается способа получения биологически активного продукта из дальневосточных промысловых голотурий кукумарии Cucumaria japonica и дальневосточного трепанга Apostichopus japonicus.
Известно широкое использование хондроитинсульфатов, гексозаминов и коллагена для профилактики и комплексной терапии заболеваний суставов. Установлено, что биополимеры, содержащие глюкозамин, повышают естественную резистентность организма, оказывают стимулирующее влияние на процессы кроветворения, их профилактическое введение благоприятно отражается на больных лучевой болезнью и получающих полихимиотерапию. Производные гексозаминов оказывают положительное влияние на содержание сахара в крови. В исследованиях in vivo показано, что хондроитин-сульфаты обладают противовоспалительной активностью, стимулируют синтез гиалуроновой кислоты и протеогликанов и ингибируют действие протеолитических ферментов - инициаторов воспаления. Хондроитинсульфаты, гексозамины и фрагментированный коллаген являются предшественниками макромолекул суставного хряща, и их введение вызывает стимулирующее действие и облегчает регенерацию хрящевой ткани за счет использования готового строительного материала и способности накапливаться в очагах воспаления [Boonen S., Aerssens J., Mbuyi-Muamba J.M., Dequeker J. Generalized osteoarthritis protecting against osteoporetic fractures: review of the evidence. J Orthopaedic Rheumatol. 1996. V.9. P.69-73; Маршалл В.Дж., Клиническая биохимия / В.Д. Маршалл; под ред. Н. Новикова. - М.: БИНОМ; СПб.: Невский диалект, 1999. - 367 с.].
Известен способ получения солей гликозаминогликанов [пат РФ 2139715], включающий ферментативный гидролиз хрящевой ткани крупного рогатого скота, кипячение с добавлением трихлоруксусной кислоты и диализ. Измельченную ткань последовательно гидролизуют раствором коллагеназы и смесью химотрипсина и папаина, после кипячения центрифугируют, диализуют в течение 5-6 дней, центрифугируют, обрабатывают ионообменными смолами, осаждают гликозаминогликаны этанолом, насыщенным ацетатом металлов, промывают 80 и 96,6% этанолом и высушивают эфиром.
Недостатком данного метода является сложность технологического процесса с использованием дорогостоящих ферментных препаратов, ограниченный спектр биологически активных компонентов.
Известен способ получения гликозаминогликанов [Патент РФ 2129871], включающий обработку ультразвуком измельченной ткани в кавитационном режиме, гидролиз смесью ферментов, кипячение в течение 5-30 мин, центрифугирование, диализ в течение 5-6 дней, повторное центрифугирование и осаждение гликозаминогликанов растворами этилацетатов щелочных и/или щелочноземельных металлов. Недостатком данного метода является сложность технологического процесса с использованием дорогостоящих ферментных препаратов, ограниченный спектр биологически активных компонентов.
Известен способ получения препарата из хрящевой и частично минерализованной ткани акул, осетров, лососей, кальмаров, скатов, заключающийся в следующем: сырье - свежую хрящевую ткань - дважды измельчают и экстрагируют 1,0-2,0% раствором хлористого натрия в течение 24 часов при 5-10°C, ферментативный гидролиз осуществляют с помощью протеолитических ферментов при 37°C в течение 7-8 ч, инактивацию ферментов проводили нагреванием до 70-80°C в течение 15-20 мин, последующее осаждение жиров осуществляли 2-3% раствором хитозана в уксусной кислоте в течение 12 ч при 5-10°C, выделение целевого продукта проводят путем фильтрации, сушку проводят сублимационным способом или распылительным способом. Ферментативный гидролиз проводят с использованием протеолитического ферментного препарата, выделенного из пилорических придатков дальневосточных лососей (пилорин) с активностью 100-200 Е/г в коичестве 1-4% от массы измельченного сырья, или протеолитического ферментного препарата, выделенного из гепатопанкреаса камчатского краба с активностью 150-250 Е/г в колличестве 0,5-3% от массы измельченного сырья [Пат. РФ №2250047].
Недостатком способа является многоступенчатость и длительность процесса, ограниченный спектр биологической активности за счет отсутствия тритерпеновых гликозидов, низкое содержание коллагена, отсутствие жировой составляющей, обеспечивающей усвоения БАВ и усиление противовоспалительного действия.
По противовоспалительной активности биоактивные компоненты из трепанга сопоставимы с синтетическими противовоспалительными препаратами, но при этом не имеют побочных эффектов, свойственных лекарственным препаратам. Препараты на основе трепанга в настоящее время широко применяются с целью уменьшения дозировки таких лекарств или их полной отмены. БАВ трепанга уменьшают боль и ригидность (тугоподвижность) суставов. Считается, что наиболее целесообразно сочетать БАВ подобного типа в составе комплексной терапии, включающей полиненасыщенные жирные кислоты, как это показано для БАД «Инолтра», являющейся синтетическим средством, сочетающим в себе составляющие хрящевой ткани - глюкозамин и хондроитинсульфат и болеутоляющие и противовоспалительные ингредиенты - незаменимые полинасыщенные кислоты и антиоксиданты [Патент US 5840715; Номер заявки: 952272; Дата подачи: 6.01.98; Правопреемник: Инолтра].
Известен способ комплексной переработки голотурий, при котором сырье (трепанг или кукумария) разделывают, удаляют внутренности, венчики и внутрибрюшную пленку и варят в морской, пресной или подсоленной воде. Сушку термически обработанной кукумарии производят при температуре от 10 до 65°C до содержания воды в продукте, равного 5-12%, минеральных веществ 4-8% с получением полуфабриката для производства пищевого продукта. Внутренности голотурии подвергают стечке, легкой подпрессовке, подмораживанию, измельчению и сушке.
Полученную кормовую биологически активную добавку используют как средство, повышающее устойчивость животных к инфекционным заболеваниям, в виде добавки к корму. Варочные среды собирают и высушивают до содержания воды 5-12% с получением биологически активной добавки к пище «Акмар». Полученный продукт используют как адаптогенное средство в виде порошка, таблеток, а также в капсулированной форме. Биологически активная добавка «Акмар» представляет собой порошок серого с различными оттенками коричневого цвета, полученный из высушенных вод при комплексной переработке голотурии, и состоит из белка - 32,0-42,0%, воды - 5,0-12,0%, минеральных веществ - 50,0-55,0% (преобладающими элементами являются кальций, калий, натрий, магний), липидов - 0,05-0,2%, сумма тритерпеновых гликозидов находится в пределах 5000-7000 мкг/г, аминосахаров - 0,5-2,0% [RU 2236155 C2, 20.09.2004].
К недостаткам БАД, получаемой путем высушивания варочных сред голотурий, относится низкое содержание хондроитинсульфатов и гексозаминов, отсутствие в варочной воде и, соответственно, в готовом продукте коллагена.
Известен способ получения суммы тритерпеновых гликозидов из выварочных вод - промышленных отходов переработки дальневосточной голотурии, согласно которому гликозиды либо осаждают совместно с полисахарид-белковым комплексом при подкислении выварочных вод до pH 2,8 или при добавлении 1%-ного хитозана в качестве флокулянта, либо выварочные воды подвергают высушиванию до порошка, экстрагируют сумму гликозидов из осадка или порошка этиловым спиртом или смесью средне-полярных растворителей и очищают их путем обращенно-фазовой хроматографии на колонках с гидрофобным сорбентом, а затем с силикагелем [Патент РФ №2110522].
Недостатком этого способа является многостадийность процесса, низкий выход биологически активных составляющих и ограниченная направленность применения.
Известен способ получения иммуномодулирующего средства «кумазид», имеющего хорошую иммуностимулирующую активность. Согласно одному из вариантов выполнения способа кумазид получают из кожно-мышечных мешков (филе) кукумарии японской. Для этого потрошенную кукумарию измельчают и экстрагируют спиртом, экстракт отделяют декантацией, а осадок повторно экстрагируют спиртом. Объединенный экстракт центрифугируют, супернатант отделяют, упаривают до воды и экстрагируют бутанолом. Верхнюю фазу отделяют, профильтровывают и добавляют к ней раствор стерина. Реакционный раствор концентрируют и центрифугируют. Образующийся осадок отделяют от надосадочной жидкости и трижды промывают комплекс равными объемами охлажденного растворителя с последующим центрифугированием. Затем осадок отмытого комплекса несколько раз промывают равными объемами серного эфира с последующим центрифугированием и высушиванием до постоянного веса [Патент РФ №2271820].
Недостатком такой переработки промысловой голотурии является то, что используется ценное пищевое сырье - филе дальневосточной кукумарии, которое после экстракции гликозидов далее не используется и является промышленным отходом, использование большого количества растворителей и отсутствие в конечном продукте углеводных и белковых составляющих.
Наиболее близким является способ переработки дальневосточной кукумарии Cucumaria japonica (голотурии) для получения продукта, обладающего биологически активными свойствами из голотурий, включающий измельчение кожно-мускульного мешка его до однородной массы, выделение из нее биологически активных компонентов, высушивание. Для выделения биологически активного продукта применяют двукратную экстракцию спиртом с удалением экстракта центрифугированием, высушивание осадка, являющегося целевым продуктом [Патент РФ №2426453].
Недостатком этого способа является многостадийность процесса, использование большого количества органических растворителей, что предъявляет повышенные требования к пожаро- и взрывобезопасности производства. Кроме того, получаемый препарат имеет узкую направленность применения, т.к. при обработке теряется значительное количество биологически активных компонентов, таких как тритерпеновые гликозиды.
Задача изобретения - разработка нового эффективного способа получения пищевого продукта, обладающего биологически активными свойствами с более широким спектром физиологического воздействия - хондропротекторными и иммуномодулирующими.
Для решения поставленной задачи в способе получения продукта, обладающего биолгически активными свойствами, из голотурий, включающем освобождение голотурий от внутренних органов, промывание кожно-мускульного мешка, измельчение его до однородной массы, выделение из нее биологически активных компонентов, согласно изобретению, выделение биологически активных компонентов проводят в два этапа, на первом этапе измельченную кожно-мускульного массу смешивают с водой в соотношении 1:0,5-1:1 соответственно, проводят обработку ультразвуком мощностью 250-300 Вт/см с частотой 20-30 Гц в течение 5-10 минут, затем проводят щелочной гидролиз при pH 11,0 в течение 20-40 минут при комнатной температуре, далее нейтрализуют до pH 7,0, полученный гидролизат сушат до остаточной влажности не более 12%, сухой продукт измельчают до порошкообразного состояния, а на втором этапе порошок смешивают с подсолнечным или рапсовым маслом в соотношении 1:5 и выдерживают при постоянном перемешивании в течение 3-4 часов, полученную жировую суспензию стабилизируют с помощью диспергатора.
Технический результат, обеспечиваемый изобретением, заключается в том, что разработан новый эффективный способ получения пищевого продукта, обладающего биологически активными свойствами с более широким спектром физиологического воздействия - хондропротекторными и иммуномодулирующими. Продукт по изобретению может использоваться самостоятельно в качестве пищевой биологически активной добавки, а также в качестве ингредиента в производстве других пищевых добавок.
Заявляемое техническое решение соответствует критерию «новизна», поскольку вся совокупность существенных признаков изобретения, содержащихся в независимом пункте формулы, не известна из уровня техники.
Заявляемое техническое решение, по мнению заявителя, соответствует критерию «изобретательский уровень», поскольку оно явным образом не следует из уровня техники, так как по результатам анализа технических решений того же назначения не выявлены решения, имеющие признаки, совпадающие с его отличительными признаками для достижения технического результата указанного заявителем.
Заявляемое техническое решение соответствует критерию «промышленное применение», поскольку заявленный способ соответствует указанному назначению и может использоваться в рыбной промышленности для производства нового пищевого продукта из голотурий, обладающего биологически активными свойствами, может быть использовано как общеукрепляющая добавка для активации иммунной системы и профилактики заболеваний костно-мышечной системы.
Общими с прототипом известными признаками являются освобождение голотурий от внутренних органов, промывание кожно-мускульного мешка, измельчение его до однородной массы, выделение из нее биологически активных компонентов.
Отличительные существенные признаки заявляемого технического решения: выделение биологически активных компонентов проводят в два этапа, на первом этапе измельченную кожно-мускульного массу смешивают с водой в соотношении 1:0,5-1:1 соответственно, проводят обработку ультразвуком мощностью 250-300 Вт/см с частотой 20-30 Гц в течение 5-10 минут, затем проводят щелочной гидролиз при pH 11,0 в течение 20-40 минут при комнатной температуре, далее нейтрализуют до pH 7,0, полученный гидролизат сушат до остаточной влажности не более 12%, сухой продукт измельчают до порошкообразного состояния, а на втором этапе порошок смешивают с подсолнечным или рапсовым маслом в соотношении 1:5 и выдерживают при постоянном перемешивании в течение 3-4 часов, полученную жировую суспензию стабилизируют с помощью диспергатора.
Признаки изобретения, касающиеся параметров обработки сырья, являются существенными и вытекают из исследований, выполненных авторами настоящей заявки. Исследовались зависимость степени дезинтегрирования сырья от мощности и времени ультразвуковой обработки, а также влияние условий щелочной обработки на степень гидролиза протеогликанов, обеспечивающей переход биологически активных компонентов в растворимое состояние.
Результаты исследований приведены в таблицах 1 и 2.
Мощность ультразвукового воздействия влияет на температуру обрабатываемого сырья, что влияет на сохранение нативной структуры белков и может вызывать их денатурацию. Как известно из литературных источников увеличение денатурированный коллаген менее подвержен гидролизу. Поэтому при исследовании влияния ультразвукового воздействия на температуру обрабатываемого сырья подбирали мощность и продолжительность, не вызывающие значительного повышения температуры. Ультразвуковая обработка экстрактов проводилась с помощью прибора IKASONIC U 50 control.
Определение соотношения фаз определяли после 12-частвого отстаивания продукта, содержание сухих веществ определяли с помощью рефрактометра. Разжижение мышечной ткани голотурий при ультразвуковой обработке связано с разрушением белков соединительной ткани и гидролиза межуточного вещества, содержащего протеогликаны. Как видно из данных таблицы, снижение мощности ультразвукового воздействия, увеличение интенсивности не позволяет получить желаемой степени разрушения биополимеров и увеличения содержания в жидкой части сухих веществ, повышение мощности выше заданных пределов приводит к увеличению количества жидкой фракции, но при этом одновременно часть белковых компонентов денатурирует, переходит в нерастворимое состояние, а количество растворенных сухих веществ падает.
О степени гидролиза протеоликанов кожно-мускульного мешка и переходе коллагена и хондроитинсульфатов в растворимое состояние при щелочном гидролизе судили по соотношению аминного и общего азота в гомогенате, накоплению оксипролина и гексозаминов в жидкой фракции гидролизата [Телишевская Л.Я. Белковые гидролизаты. М.: Аграрная наука, 2000, 290 с.; Woessner J. Determination of hydroxyproline in connective tissues. The methodology of connective tissues research. (Hall D A. ed.) Oxford. England: Johnson-Bruvvers Ltd. 1976, p. 235-45; Elson L.A., and Morgan W.J.. 1933. A colorimetric method for the determination of glucosamine and chondrosamine. Biochem. J. 27: 1824-1828].
При щелочном гидролизе ткани голотурий, проводимой после обработки ультразвуком, также происходит частичный гидролиз протеогликанов и коллагена, в результате в жидкую фракцию переходят фрагменты коллагена, определяемые по суммарному содержанию оксипролина - маркерной аминокислоты этого белка. Также в жидкой фракции накапливаются углеводные компоненты, определяемые по содержанию гексозаминов. При pH 10 накопление обоих компонентов не достигает максимального уровня, при pH 11 величины содержания обоих компонентов имеют максимальные величины, а при pH 12 происходит некоторое их снижение. Способ осуществляют следующим образом.
Свежевыловленное или замороженное сырье - промысловые голотурии освобождают от внутренних органов. Кожно-мускульный мешок измельчают до однородной массы на волчке или мясорубке с диаметром отверстий решетки 2,0 мм, которую смешивают с водой в соотношении сырье:вода 1:0,5-1:1, проводят дезинтегрирование (диспергирование) сырья обработкой ультразвуком при частоте 20-30 Гц и мощности 250-300 Вт/см в течение 5-10 мин, при этом происходит подавление микробиологических процессов и увеличение степени измельчения сырья и разрушения структур тканевого уровня. Для частичного гидролиза белков доводят pH смеси до 11,0 с помощью 1 М раствора едкого натра, выдерживают 20-40 мин при комнатной температуре во избежание денатурации белков, после чего нейтрализуют до pH 7,0 с помощью 1 М уксусной кислоты. Полученный гидролизат сушат на сублимационной установке или сушках иного типа при температуре конечного продукта не выше 45°C и остаточной влажности сухого продукта не более 12%. Сухой продукт измельчают до порошкообразного состояния. Затем в полученный порошок вносят растительное масло в соотношении 1:5 соответственно при постоянном перемешивании смеси в течение 3-4 час с получением жировой суспензии. Эта суспензия неустойчива и может расслоиться через непродолжительное врем, например в течение суток. Поэтому по окончании процесса суспензию стабилизируют с помощью диспергатора, полученный продукт тарируют. В качестве растительных масел используют подсолнечное или рапсовое масла, имеющие высокое содержание полиненасыщенных жирных кислот и витамина Е.
Конечный продукт, полученный предлагаемым способом, представляет собой темно-зеленую эмульсию с вкраплениями твердых частиц, содержащую в качестве основных биологически активных компонентов голотурий, хондроитинсульфаты (не менее 0,45 мас. %), гексозамины (не менее 1,0 мас. %), коллаген (не менее 7 мас. %), тритерпеновые гликозиды (не менее 0,05 мас. %) в сочетании с полиненасыщенными жирными кислотами (не менее 20 мас. %) и витамином Е (0.05 мг/мл), входящими в состав растительных масел. Такое сочетание биологически активных компонентов определяет хондропротекторные и иммуномоделирующие свойства и хорошую усвояемость продукта по заявляемому способу. Состав биологически активного продукта (мас. %) представлен в таблице 3
Результаты анализа химического состава продукта, представленные в таблице, выполнены авторами известными методами: *Количество жира, белка и воды определяли по ГОСТ 7636-85 [Рыба, морские млекопитающие, морские беспозвоночные и продукты их переработки. Методы анализа]. *Содержание сульфат-ионов определяли турбо-димитрическим методом [Фармакопейная статья №42-1286-99 "Хонсурид"]. *Количество полиненасыщенных жирных кислот определяли методом газожидкостной хроматографии на хроматомасс-спектрометре HP 6890GC/MSD5973 (США). *Содержание тритерпеновых гликозидов определяли с помощью метода высокоэффективной жидкостной хроматографии [Чумак А.Д., Павель К.Г., Тимчишина Г.Н. Определение тритерпеновых гликозидов в голотуриях. Известия ТИНРО-центра, 1995. - Т. 118, С. 36-40].
Выбор показателей для установления хондропротекторых и имуномодулирующих свойств продукта выполнен на основе известных научных данных.
Имеются многочисленные сведения о влиянии гексозаминов и коллагена на метаболизм и регенерацию хрящевой ткани не только за счет использования их как «готового строительного материала», но и благодаря установленной способности накапливаться в очагах воспаления и снижать его [Pool R. Proteoglycans in health and disease: structure and function. Biochemistry journal. - 1986. - Vol. 236. - P. 1-14; Abdel Fattah W., Hammad T. Chondroitin Sulfate and Giucosamine: a review of the Safety Profile. JANA. - 2001. - Vol. 3, №4. - P. 16-23].
В настоящее время доказана ведущая роль иммунной системы при хроническом воспалении хрящевой ткани.
В разработанном авторами настоящей заявки продукте функцию иммуномодуляции обеспечивают тритерпеновые гликозиды. Незаменимые полинасыщенные кислоты и антиоксиданты способствуют уменьшению боли и вовоспаления [Гусев Е.Ю., Черешнев В.А., Юрченко Л.Н. Системное воспаление с позиции теории типового патологического процесса Цитокины и воспаление. 2007. - Т. 6, №4. - С. 9-21].
Ведущая роль в развитии воспаления принадлежит процессам активации лимфоцитов. Активированные лимфоциты, макрофаги, фибробласты и синовиоциты способны вырабатывать определенный набор провоспалительных цитокинов, играющих существенную роль в развитии системных проявлений и в поддержании хронического воспаления в суставах.
Высокие уровни исследованных маркеров лимфоцитов в синовиальной жидкости и синовиальной мембране пациентов с ревматоидным артритом коррелируют с активностью заболевания [Laffon A, Garcia-Vicuña R, Humbria A, Postigo AA, Corbi AL, de Landazuri MO, Sanchez-Madrid F: Upregulated expression and function of VLA-4 fibronectin receptors on human activated T cells in rheumatoid arthritis. J Clin Invest 1991, 88: 546-552]. Установлена важная роль CD69 и CD25+ в патогенезе артрита и ее использовании в качестве возможной терапевтической мишени [Murata К, Inami М, Hasegawa A, Kubo S, Kimura М, Yamashita М, Hosokawa Н, Nagao Т, Suzuki К, Hashimoto К, et al.: CD69-null mice protected from arthritis induced with anti-type II collagen antibodies. Int Immunol 2003, 15: 987-992].
По мнению авторов настоящей заявки, исследование влияния масляных экстрактов из трепанга на экспрессию активационных мембранных молекул лимфоцитов периферической крови позволяет одновременно определять иммуностимулирующую и хондропротекторную активность полученных препаратов.
Модулируя выраженность на клеточной поверхности активационных антигенов, можно достичь направленного изменения состояния активации иммунокомпетентных клеток, опосредующих развитие воспаления суставов.
Биологически активные свойства продукта из голотурий, полученного предлагаемым способом, изучали в условиях ФГБУ «Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Г.П. Сомова» во Владивостоке.
2
Для определения уровня экспрессии активационных антигенов лимфоциты периферической крови здоровых доноров выделяли на градиенте плотности фиколл-верографина (d=1,077), отмывали забуференным фосфатно-солевым буфером и доводили до концентрации 2×106/мл средой RPMI-1640, содержащей 10% эмбриональной телячьей сыворотки. Жизнеспособность выделенных клеток, по данным теста на окрашиваемость трипановым синим, составляла 95-98%. Взвесь лимфоцитов помещали в силиконированные пробирки, экстракт трепанга вносили в конечной концентрации 10 мкг/мл и инкубировали в течение 24 часа в CO-инкубаторе при температуре 37°C. Экспрессию мембранных молекул определяли методом проточной цитометрии с использованием моноклональных антител, меченных флюоресцеин-изотиоционатом и фикоэритрином к антигенам CD25, CD38, CD71, CD69.
Относительное содержание лимфоцитов периферической крови здоровых доноров, экспрессирующих ранние активационные маркеры (CD25, CD71, CD38, CD69), составляло 10,7±1,2%, 6,7±0,8%, 36,0±2,4%, 10,5±1,4% соответственно.
Внесение в культуру лимфоцитов периферической крови препарата в конечной концентрации 10 мкг/мл приводило к уменьшению экспрессии ранних активационных антигенов.
Снижение экспрессии активационных антигенов определяет изменение функциональной активности иммунокомпетентных клеток, а способность к их модуляции лежит в основе механизма противовоспалительного действия экстракта трепанга.
Таким образом, исследованный препарат обладает умеренной противовоспалительной активностью, снижает уровень экспрессии ранних активационных антигенов лимфоцитов периферической крови человека и обеспечивает иммуностимулирующее и хондропротекторное действие.
Полученный по изобретению продукт, который может быть использован для приготовления биологически активной добавки к пище, являющейся источником гексозаминов, тритерпеновых гликозидов и коллагена, а также полиненасыщенных жирных кислот и витамина Е, применяемой в качестве хондропротектора и иммуномодулятора.
Примеры конкретного выполнения.
Пример 1
3
1 кг свежезамороженной мышечной ткани трепанга измельчают на волчке или мясорубке, добавляют 1 л воды. Смесь перемешивают и подвергают обработке ультразвуком при 25 Гц 250 Вт/см в течение 10 мин. К смеси добавляют 1 М раствора едкого натра до pH 11,0. Смесь выдерживают 30 мин при температуре 20°C и нейтрализуют до pH 7.0 добавлением 1 М уксусной кислоты. Смесь сушат на сублимационной установке до остаточной влажности 10%. Сухой порошок смешивают с подсолнечным маслом в соотношении на 100 г порошка - 500 мл масла. Смесь выдерживают в течение 3 часов при комнатной температуре при постоянном перемешивании. Масляную смесь эмульгируют с помощью насоса-диспергатора и направляют на упаковывание.
Конечный продукт содержит жир/в том числе, ПНЖК 82/44; белок/в том числе коллаген 15/7, гексозамины 1,2; сульфат-ионы 0,5; тритерпеновые гликозиды 0,05; α-токоферола ацетата 0,6 мг/мл.
Пример 2
3
Трепанг-сырец разделывают, удаляя окологлоточные венчики и внутренности. 2 кг кожно-мышечной ткани промытого трепанга измельчают на мясорубке, добавляют 1.5 л воды. Смесь перемешивают и подвергают обработке ультразвуком при 30 Гц 300 Вт/см в течение 5 мин. К смеси добавляют 1 М раствор едкого натра до pH 11,0. Смесь выдерживают 30 мин при комнатной температуре и нейтрализуют до pH 7.0 добавлением 1 М раствора уксусной кислоты. Смесь сушат до остаточной влажности 12%. Сухой порошок смешивают с рапсовым маслом в соотношении на 100 г порошка - 500 мл масла. Смесь выдерживают в течение 4 часов. Масляную смесь эмульгируют и направляют на упаковывание.
Конечный продукт содержит жир/в том числе, ПНЖК 82/22; белок/в том числе коллаген 18/8, гексозамины 1,6; сульфат-ионы 0,7; тритерпеновые гликозиды 0,11; α-токоферола ацетата 0,6 мг/мл.
Пример 3
3
1 кг свежезамороженой мышечной ткани кукумарии измельчают на мясорубке и добавляют 0,5 л воды. Смесь перемешивают и подвергают обработке ультразвуком при 30 Гц 300 Вт/см в течение 8 мин. К смеси добавляют 1 М раствор едкого натра, доводят до pH 11,0. Смесь выдерживают 20 мин при температуре 20°C и нейтрализуют до pH 7,0 добавлением 1 М уксусной кислоты. Смесь сушат до остаточной влажности 12%. Сухой порошок кукумарии перемешивают с подсолнечным маслом в соотношении на 100 г порошка - 500 г масла. Смесь выдерживают в течение 4 часов. Масляную смесь эмульгируют и направляют на упаковывание. Конечный продукт содержит жир/в том числе ПНЖК 82/44; белок/в том числе коллаген 20/12, гексозамины 2,1; сульфат-ионы 0,9; тритерпеновые гликозиды 0,09; α-токоферола ацетата 0,6 мг/мл.
Пример 4
3
2 кг кукумарии-сырца разделывают, отделяя мускульный мешок от внутренностей, измельчают его на мясорубке. К измельченной массе добавляют 1,5 л воды, тщательно перемешивают и подвергают обработке ультразвуком при 25 Гц 300 Вт/см в течение 10 мин. К смеси добавляют 1 М раствор едкого натра, доводя до pH 11,0. Смесь выдерживают 30 мин при температуре 25°C и нейтрализуют до pH 7,0 добавлением уксусной кислоты. Смесь сушат до остаточной влажности 12%. Сухой порошок смешивают с рапсовым маслом в соотношении на 100 г порошка - 500 г масла. Смесь выдерживают в течение 3 часов при постоянном перемешивании. Масляную смесь эмульгируют и направляют на упаковывание.
Конечный продукт содержит мас. % - жир/в том числе ПНЖК 80/20; белок/в том числе коллаген 19/10, гексозамины 1,6; сульфат-ионы 0,6; тритерпеновые гликозиды 0,07; α-токоферола ацетат 0,6 мг/мл.