СПОСОБ ОЦЕНКИ НАРУШЕНИЯ ОКСИГЕНАЦИИ ГЕМОГЛОБИНА ПРИ СНИЖЕНИИ МИКРОВЯЗКОСТИ МЕМБРАН ЭРИТРОЦИТОВ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ БЕРЕМЕННЫХ НА ТРЕТЬЕМ ТРИМЕСТРЕ ГЕСТАЦИИ И ОБОСТРЕНИИ ЦИТОМЕГАЛОВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИИ
METHOD FOR ASSESSING DISTURBED HAEMOGLOBIN OXYGENATION WITH REDUCED MICROVISCOSITY OF PERIPHERAL ERYTHROCYTE MEMBRANE OF PREGNANT WOMEN IN THIRD TRIMESTER OF GESTATION AND AGGRAVATED CYTOMEGALOVIRUS INFECTION

Мембраны эритроцитов при нарушении метаболизма в организме подвергаются воздействию перекисного окисления [2, 4, 6]. При воздействии на мембраны эритроцитов факторов иммунного нарушения происходит перестройка белково-липидного строения мембран, приводящая к изменению внутриклеточного обмена [10].
Воздействия инфекционных факторов при различных заболеваниях приводят к перестройке фосфолипидов в мембранах эритроцитов и повышению их микровязкости [1, 3, 4, 5]. Эти изменения в мембранах эритроцитов отражаются на функциональных процессах, проявляющихся в нарушении кислородтранспортной функции эритроцитов [7, 9].
Целью настоящего исследования является разработка способа оценки изменения оксигенации гемоглобина эритроцитов при обострении у беременных на третьем триместре гестации цитомегаловирусной инфекции, которая приводит к снижению микровязкости мембран эритроцитов, создавая формирование гипоксического состояния. В доступной литературе не обнаружено описания действия цитомегаловирусной инфекции на микровязкость мембран эритроцитов и его опосредованного влияния на оксигенацию гемоглобина.
Заявленный способ имеет следующие приемы:
1. Обследовано 45 беременных на сроке гестации 20-22 недели в возрасте 18-25 лет с хронической цитомегаловирусной инфекцией (ЦМВИ) в стадии обострения (основная группа) и 15 беременных на тех же сроках гестации без патологии (контрольная группа). У беременных симптоматически ЦМВИ проявлялась в виде острого респираторного заболевания, сопровождающегося ринофарингитом. Клинический диагноз - обострение ЦМВИ - устанавливался при комплексном исследовании периферической крови на наличие IgM или четырехкратного и более нарастания титра антител IgG в парных сыворотках в динамике через 10 дней, индекса авидности - более 65%, а также ДНК ЦМВ. Исследования проводились с учетом требований Хельсинкской декларации Всемирной медицинской ассоциации «Этические принципы проведения научных исследований с учетом человека» с поправками 2000 г. и правилами клинической практики в Российской Федерации, утвержденными приказом Министерства РФ №266 от 19.06.2003 г.
Верификация ЦМВ, определение типоспецифических антител, индекса авидности осуществлялись методами ИФА на спектрофотометре «Stat Fax 2100» (USA) с использованием тест-систем ЗАО «Вектор-Бест» (Новосибирск); выявление ДНК ЦМВ методами ПЦР на аппарате ДТ-96 с использованием наборов НПО «ДНК-технология» (Москва).
2. Содержание оксигемоглобина определяли по методу Эвелина и Мэллой [8].
3. Состав эритроцитов в периферической крови определяли с помощью автоматизированной цитофотометрической установки «Mekos» (Москва).
ЭКС
470
395
Э
М
4. Измерение микровязкости мембран эритроцитов проводили методом латеральной диффузии гидрофобного флюоресцентного зонда пирена. Определение микровязкости основано на образовании эксимеров (активных димеров) пирена в липидном окружении [2, 3]. Флюоресценцию пирена измеряли спектрофлюорометрически на спектрофлюориметре «Hitachi» (Япония). Для определения микровязкости липидного бислоя находили интенсивность флюоресценции или свечение пирена при длине волны возбуждения 334 нм, длина волны мономеров - 395 нм, длина волны эксимеров - 470 нм. Для определения микровязкости зоны липид-белковых контактов длина волны возбуждения - 286 нм, длина волны мономеров - 395 нм, длина волны эксимеров - 470 нм. Оценка микровязкости основывается на вычислении коэффициента эксимеризации пирена (K=F/F), который равен отношению интенсивности флюоресценции эксимеров к интенсивности флюоресценции мономеров. Коэффициент эксимеризации находится в обратной зависимости от микровязкости и обозначается как F/F.
В результате исследований были получены следующие данные:
Э
М
Э
М
Э
М
Э
М
1. Произошли изменения микровязкости мембран эритроцитов. При обострении цитомегаловирусной инфекции в третьем триместре гестации до титра антител к цитомегаловирусу 1:1600 коэффициент эксимеризации пирена, определяющий микровязкость, составил в липидном бислое мембран эритроцитов 0,59±0,006 F/F (контроль - 0,86±0,003 F/F), а в белок-липидном слое - до 0,70±0,004 F/F (контроль - 1,1±0,005 F/F).
2. Повышение микровязкости в мембранах эритроцитов отражалось на их строении. С помощью автоматизированной цитофотометрической установки «Mekos» было получено, что у беременных, перенесших обострение цитомегаловирусной инфекции число дискоцитов в периферической крови снижалось до 70,0±1,3% (контроль - 91,3±1,7%); Содержание эхиноцитов увеличивается до 8,0±0,5% (контроль - 2,7±0,09%); мишеневидных эритроцитов - до 11,5±0,9% (контроль - 2,0±0,05%), а число дегенеративных форм составило 10,5±0,3% (контроль - 4,0±0,03%). Содержание оксигемоглобина в крови беременных, перенесших обострение цитомегаловирусной инфекции в третьем триместре гестации с титром антител к цитомегаловирусу 1:1600 снизилось до 89,8±1,5% (контроль - 97,8±2,1%). Таким образом, обострение цитомегаловирусной инфекции в третьем триместре гестации с титром антител 1:1600 приводит к повышению микровязкости мембран эритроцитов, снижая содержание оксигемоглобина до 89,8±1,5% при контроле - 97,8±2,1%, создавая угрозу формирования гипоксии.
Литература
1. Горшинская И.А., Глотина Л.Ю., Горло Е.И., Рова Т.А., Бордюшков Ю.Н. Изменение микровязкости мембран лимфоцитов и эритроцитов крови у онкологических больных // Вопросы мед. химии. - 1999. - Т.45. - №1. - С.53-57.
2. Дзучкоев С.Г., Карсанова З.О., Турина А.Е. Перекисное окисление липидов и антиокислительная защита мембран клеток при сахарном диабете // НИИ медико-биологических проблем ВНЦ РАН и Правительства Алания. - 2017. - Т.20, №36 - С.7-12.
3. Добрецов Г.Е. Флуоресцентные зонды в исследовании клеток, мембран и липопротеинов // М.: Наука, 1989. - С.206.
4. Дубинина Е.Е, Пустыгина А.В. Окислительная модификация протеинов, ее роль при патологических состояниях // Укр. биохим. журн. - 2008. - Т. 80, №6 - С.8-10.
5. Ишутина Н.А., Дорофиенко Н.Н., Андриевская И.А., Довжикова И.В., Болелова С.М. Изменение микровязкости мембран эритроцитов крови у беременных, инфицированных вирусом герпеса // Бюл. Физиол. и патол. Дыхания СО РАМН, Благовещенск, 2006. - Вып.23 (приложение). - С.16-18.
6. Копытова Т.В., Химкина Л.Н., Суздальцева И.В. Окислительный стресс, эндоксемия у больных тяжелыми распространенными дерматозами // Современные проблемы дерматовенерологии, иммунологии и врачебной косметологии. - 2009. - №2. - С.10-13.
7. Луценко М.Т., Андриевская И.А. Способ прогнозирования устойчивости мембран эритроцитов при обострении герпес-вирусной инфекции у беременных // Медицинская информатика. - 2009. - №1(19). - С.27-30.
8. Покровский А.А. Биохимические методы исследования // справочник М.: «Медицина», 1969. - С.337.
9. Рябов Г.А., Палечник И.Н., Азизов Ю.М. Активированные формы кислорода и их роль в некоторых патологических состояниях // Анестезиология и реанимация. - 1991. - №1. - С.63-69.
10. Bishop Ch. Overall red cell metabolism. In: The red blood cell. Ed. Bishop Ch. and Surgenor D. New York, 1964, P.147.