Использование моноклональных антител в судебно-медицинской экспертизе при исследовании вещественных доказательств

от трупов, проходящих исследование в ГУЗ Бюро судебно-медицинской экспертизы МЗ УР.

В ходе проведения замеров, были получены ряды значений, соответственно частотам, на которых проводились исследования.

В качестве примера, представляем значения электрического сопротивления нативной крови, ее сыворотки и гемолизированной крови, полученные на частоте 100 Гц.

Значения электрического сопротивления выражены в кОм и отражают суммарное сопротивление цепи (емкостное + резистивное), заключенной между электродами датчика.

Как следует из графика на рисунке 2, средние значения электрического сопротивления изучаемых объектов, в достаточной степени различаются между собой. Данный вывод был подтвержден в ходе сравнения средних значений полученных величин по Ньюмену-Кейлсу.

При этом достоверные значимые отличия выявлены во всех примененных нами частотных интервалах.

В дальнейшем производилось изучение электрического сопротивления крови, полученной от живого лица и от трупа.

Литература

1. Ботезату Г.А. использование лабораторных методов исследования в диагностике давности смерти // Актуальные вопросы судебной медицины и экспертной практики. Ростов-на-Дону, 1985. С.44-46.

2. Ботезату Г.А. Экспертиза давности смерти по данным ректальной температуры, биохимическим показателям крови и перикардиальной жидкости//Судебно-медицинская экспертиза. 1977. №1. С. 39-43.

3. Наубатов Т.Х. Некоторые новые физикальные методы судебно-медицинского определения давности наступления смерти.// Материалы научн. Конф. Молодых ученых ТОДНГМИ. - Ашхабад, 1982. - С. 14-15.

4. Неделько Н.Ф., Бутуханов В.В. Медленноволновая электрическая активность органов и тканей в зависимости от давности наступления смерти (экспериментальное исследования). //Вопросы судебно-медицинской танатологии. Сб. научн. тр. - Харьков, 1983. - С. 101-107.

5. Новиков П.И., Попов В.Г. Адаптивные системы в диагностике давности смерти // Суд.-мед. экспертиза. 1983. № 3. С.6-9.

6. Пиголкин Ю.И., Богомолов Д.В., Самоходская О.В., КоровинА.А, Баркар А.А. Определение давности наступления смерти методом импедансной плетизмографии. // Методические рекомендации. Утв. М3 РФ. № 2000/117 от 01.09.00. - М., 2001. - С. 17.

7. Соловьева И.И. Посмертные изменения параметров кислотно-щелочного состояния крови, жидких сред глаза и их судебно-медицинское значение // Механизмы и давность происхождения процессов и объектов судебно-медицинской экспертизы. Под ред. В.Н.Крюко-ва. М., 1988. С.106-110.

8. Шабашова И.И. Судебно-медицинское установление давности наступления смерти по параметрам кислотно-щелочного состояния крови и жидких сред глаза: Автореф. дис.... канд. мед. наук. М., 1986.

9. Шорохов А.Е., Столяров А.В., Каркин В.Я. Обоснование применения микротерморезисторов для установления времени наступления смерти. // Современная диагностика в судебной медицине. - Кишинев, 1981. - С. 69-70.

© О.Л. Горбунова, Л.Г. Зорина, 2004

УДК 340.624

О.Л. Горбунова, Л.Г. Зорина ИСПОЛЬЗОВАНИЕ МОНОКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ В СУДЕБНО- МЕДИЦИНСКОЙ ЭКСПЕРТИЗЕ ПРИ ИССЛЕДОВАНИИ ВЕЩЕСТВЕННЫХДОКАЗАТЕЛЬСГВ

ГУЗ «Бюро судебно-медицинской экспертизы» (начальник - В.И. Жихорев), Ижевск

На практическом судебно-медицинском материале изучены особенности использования моноклональных антител в судебно- медицинской экспертизе при исследовании следов выделений человека на вещественных доказательствах.

Изучены следы слюны, спермы, влагалищных выделений, различных размеров и концентраций. Отмечена высокая эффективность данной методики при исследовании незначительных, но хорошо насыщенных следов. Использование данного метода незаменимо при производстве срочных экспертиз, связанных с исследований выделений человека.

Ключевые слова: моноклональные антитела, иммуноферментный анализ, антигены, цоликлоны.

O.L. Gorbunova, L.G. Zorina

FORENSIC-LEGAL MONOCLONAL ANTIBODY METHOD USAGE IN EVIDENCE MATERIAL INVESTIGATION

Izhevsk

Pecid iarities of monoclonal antibody usage of human egest traces on the evidence material in the practice of forensic medicine investigations were studied. The trace of saliva,sperm,vaginal egests of different sizes and concentrations were investigated. The high effectiveness of this method was marked. This method usage is indispensable during expressing examination devoted with men egests traces.

Keywords: monoclonal antibody,immunofermental analysis,antigens,coliclons.

Одной из задач судебно- биологической экспертизы На данном этапе экспертизы зачастую возникают

является определение групповой принадлежности объек- трудности, связанные с низким титром сывороток, а тактов биологического происхождения. же с различного рода факторами, имевшими воздействие

Средние значения электрического сопротивления данных объектов представлены на рисунке 3.

Сравнение значений электрического сопротивления трупной крови и крови от живого лица, проведенное путем парного их сравнения по 1-критерию Стьюдента, показало существование значимых различий между средними значениями трупной крови и крови, полученной от живого лица, что определяет значимость предлагаемого метода исследования.

Полученные в ходе настоящего исследования предварительные результаты позволили сделать следующие выводы:

1. Электрическое сопротивление нативной крови, ее сыворотки и гемолизированной крови достоверно отличаются.

2. Между электрическим сопротивлением трупной крови и крови, взятой от живого лица, существуют достоверные значимые различия.

3. При проведении экспертизы жидкой крови, по поводу определения принадлежности ее живому лицу либо трупу, возможно применение метода измерения электрического сопротивления переменным током различной частоты.

на биологический объект (микробное обсеменение, загрязнение, воздействие физических и химических факторов, процессы гниения и т. д.). Кроме того, исследуемые следы, не всегда имеют достаточные размеры и степень насыщенности, а с получением высокоактивных изогемагглю-тинирующих сывороток возникают определённые трудности. Все это значительно затрудняет определение групповой принадлежности следов.

Большую помощь в данном вопросе оказывают моноклональные антитела (МКА), которые обладают более высокой специфичностью и биологической активностью. МКА используются в работе сотрудниками Института криминалистики УНТО ФСБ России и в лаборатории физиологии кроветворения ГУ Гематологического Научного Центра Российской Академии Медицинских Наук (в данной лаборатории производят цоликлоны, меченные перок-сидазой хрена).

В нашей лаборатории накоплен некоторый опыт по применению МКА для определения групповых АВН- антигенов системы АВО и антигенов системы Льюис в следах слюны и спермы методом иммуноферментного анализа. В работе нами были использованы МКА анти - А А 27, анти - В В 8, анти - Н Н 8, полученные из предприятия (ООО) "Гематолог".

Методика исследования.

Принцип метода заключается в одно- или двухстадийном выявлении антигена в образце, нанесенном на нитро-целлюлозную мембрану (НЦМ), способную связывать белки и некоторые другие высокомолекулярные соединения. Детекеция антигена проводится с помощью антител, меченных пероксидазой хрена.

Материалы:

1. Боратный буфер (рН 9,0).

2. Нитроцеллюлозная мембрана (НЦМ), размер пор по 45 мкм.

3. Моноклональные антитела (МКА) анти-А, анти-В, анти-Н, анти- Ье-а, анти- Ье-в, меченые пероксидазой хрена.

4. Фосфатно-солевой буфер (ФСБ).

5. ФСБ с 0,3% твином-20.

6. Субстратный раствор (0,25% раствор перекиси водорода в ФСБ с 0,5 мг/мл 4-хлор- 1-нафтола).

Для подготовки материала кусочки марли (фильтры от сигарет и т.п.) измельчали, помещали в пробирки и за-

Результаты исследования заведомых образцов слюны, относящихся к категории выделителей

Группа

крови Ап В s Н8 Le a Le b

А '

В

АВ

Оав

Результаты исследования заведомых образцов слюны, относящихся к категории невыделителей

Группа

крови Ап В 8 Н8 Lе а Lе Ь

А

В

АВ

Oaß

ливали небольшим избытком дистиллированной воды. После экстракции при 4°С от нескольких часов (для свежих образцов) до суток удаляли предмет- носитель, экстракт центрифугировали. Надосадочную жидкость разводили 1:1 боратным буфером и наносили по 2 мкл на 5 полосок НМЦ. Каждую полоску инкубировали в растворе МКА анти-А, анти-В, анти-Н, анти-Ье-а, анти-Ье-в, меченных пероксидазой хрена, в течение 30 минут при комнатной температуре на ротационном шейкере. После инкубации полоски НЦМ отмывали 2 раза по 10 минут в ФСБ с 0,3%-ым TWEEN-20 и 2 минуты в ФСБ. Пероксидазную активность выявляли в субстратном растворе в течение 30 минут. В зонах локализации ферментативной активности образуется нерастворимый темно-синий осадок. Проявленные, таким образом, отмытые в дистиллированной воде и высушенные НЦМ могут храниться в течение длительного времени.

Для исследования данным методом образцов спермы необходимо предварительное кипячение надосадочной жидкости в водяной бане в течение 5 минут. В остальном реакция проводится аналогично.

Данная методика на наш взгляд очень полезна в тех случаях, когда исследуемые следы имеют небольшие размеры, слабо насыщенны и материала недостаточно для проведения КРА. Кроме того, данная методика оказалась полезной при установлении категории выделительства трупа. При проведении одной из экспертиз мы столкнулись со следующей ситуацией: женщину изнасиловали и задушили, на экспертизу был доставлен тампон с ее влагалищным содержимым, на котором были обнаружены единичные сперматозоиды. В КРА был выявлен лишь антиген присущий обвиняемому и установлено, что он относится к категории выделителей. Методикой ИФА также было установлено, что он выделитель, однако с вытяжкой с тампона с содержимым влагалища было получено синие окрашивание на полосках, инкубированных в растворе моноклональных антител, соответствующих группе обвиняемого, Leb, (что возможно было получено за счет спермы обвиняемого), а также синие окрашивание получено на полоске, обработанной цоликлоном Le а, что навело нас на мысль о том, что потерпевшая относится к категории не-выделителей.

В последующем мы столкнулись с подобной ситуацией: потерпевшая относилась к категории выделителей, насильник неизвестен. При исследовании тампона с содержимым влагалища потерпевшей и ее трусов обнаружены следы спермы. При исследовании методом ИФА наблюдалось посинение на полосках обработанных в растворе моноклональных антител, соответствующих группе потерпевшей, а также Le а и Le b, что навело нас на мысль о том, что насильник относится к категории невыделителей. В последующем данный вывод подтвердился, когда личность насильника была установлена.

Выводы:

1). Данная методика удобна и проста в производстве и может оказаться самой необходимой при производстве срочных экспертиз. Со свежими следами и образцами ответ можно дать в течение нескольких часов.

2). Методика дает хорошие результаты анализа хорошо насыщенных микроследов объектов судебно- медицинской экспертизы вещественных доказательств. Если же следы слабо насыщенны, то они должны быть достаточных размеров, чтобы получить концентрированные вытяжки.

3). Вскрытые ампулы моноклональных антител в хо- тельном хранении получаются неспецифические ре-

лодильнике хранятся не более месяца, при более дли- зультаты.

Литература

1. Дерюгина Е.И., Савельев Ю.И., НосыровА.Е., Лапенков М.И., Николаева Т.Л. Применение иммуноферментного анализа для определения АВН антигенов в следах слюны и спермы. Суд.-мед. экспертиза. 1992. №2 С.23-26.

2.Лапенков М.И., Николаева Т.Л., Аборина Е.А. Получение, определение специфичности и применение моноклональных анти- Ье антител. Суд.- мед. экспертиза. 2000. №4. С.25-29

3. Лапенков М.И. Анти-АВН-ЬБУ18 моноклональные антитела получение, определение эптоной специфичности и применение в судебной медицине. Автореф. дисс... докт. мед. наук. - М. - 2002.

© Ю.А. Хомов, Н.В. Кокшарова, М.Дайех, В.П. Гаранин, 2004 УДК 340.67.615.212.7.074

Ю.А. Хомов, Н.В. Кокшарова, М.Дайех, В.П. Гаранин ХИМИКО-ТОКСИКОЛОГИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ ИМОВАНА

Пермская государственная фармацевтическая академия (ректор - проф. Г.И. Олешко),

ГУЗОТ "Пермское областное бюро судебно-медицинской экспертизы"

Предложены методики определения имована на основе хроматографии в тонких слоях сорбента, ИК-, УФ-, ГХ/МС спектроскопии, ВЭЖХ/УФ, применимые в химико-токсикологическом анализе.

Ключевые слова: имован, химико-токсикологический анализ.

Y.A. Chomov, N.V. Kokscharova, M. Dayeh, V.P. Garanin CHEMICAL AND TOXICOLOGICAL ANALYSIS OF IMOVANE

Perm

Methods for measuring imovane are suggested: thin-layer chromatography,high-pressure l iquid chromatographyultrtaviolet spectrophotometry, gas chromatography with mass selective detector can be used for identification imovane in chemical toxicological anal isys.

Keywords: imovane, chemical and toxicological analysis.

Общеизвестно, что сон обеспечивает продолжение жизни и, что очень важно, ее качество. Проблема имеет не только медицинские, но и социальные аспекты, важность которых трудно переоценить. Бичом человечества является так называемая инсомния, которая определяется как состояние затрудненного начала сна и его поддержания [1,2].

Инсомния - одна из главных составляющих нарушений цикла "сон - бодрствование" и встречается по данным одних авторов [5] у 28 - 45% популяции, являясь для них клинической проблемой, требующей лечения. Другие авторы считают, что нарушения сна отмечаются почти у половины населения мира [1].

Инсомния многопричинна и всегда является синдромом, "маской" других заболеваний. Причиной могут быть неврозы, психические заболевания, органические заболевания мозга, интоксикации (в том числе психотропными препаратами и алкоголем) и др. [6].

В большинстве случаев фармакотерапия инсомний направлена на "усыпление" больного и носит синдромологический характер. Существует значительное количество снотворных препаратов разных групп. Появление нового класса препаратов, производных циклопирролона стало значительным шагом в лечении инсомний [5, 6]. Первым представителем этого нового класса является имо-ван, который обладает выраженным снотворным, седативным, противосудорожным действием [7]. Показан для применения при инсомнии и вторичных нарушениях сна, особенно при психических расстройствах. Имован широко используется в медицинской практике и в настоящее время постепенно (совместно с производными бензодиазе-пина) вытесняет барбитураты. Однако любое некорректное, а порой неоправданное назначение этих лекарств может создавать значительные проблемы для больных [2,17]. Так имован в связи с побочными явлениями (спутанность сознания, антероградная амнезия, галлюцинации, кошмар-

ные сновидения) может быть использован в немедицинских целях. Побочное действие проявляется особенно сильно при превышении дозы. При совместном применении с препаратами с угнетающим действием на ЦНС (другие снотворные, седативные, наркотические, этанол и этанолсодержащие препараты) происходит взаимное усиление действия [9,10,11], что является причиной интоксикаций различной степени тяжести.

В соответствии с решением Постоянного комитета по контролю наркотиков Минздрава Российской Федерации зопиклон

По данным зарубежных авторов имован неоднократно был причиной острых и смертельных отравлений [15, 16]. Случай отравления имованом был доложен на Всероссийском совещании судебно-медицинских экспертов судебно-химических отделений БСМЭ (Д.Э.Бодрина, Р.Р.Краснова, Э.Н.Николаева и др.; сентябрь 2002 г., г. Владимир). Таким образом имован имеет токсикологическое значение.

В связи с необходимостью разработки методик химико-токсикологического анализа имована нами проведено комплексное аналитическое изучение его с использованием традиционных реакций осаждения, окрашивания в сочетании с современными физико-химическими методами (ВЭТСХ, ВЭЖХ, ГХ/МС, ИК-, УФ-спектроскопии).

По химической структуре имован является 6-(5-Хлор-2-пиридинил)-6,7-дигидро-7-оксо-5Н-пирроло [3,4в]пи-разин-5-иловый эфир 4-метил-1-пиперазинкарбоновой кислоты. Синонимы: Зопиклон, Zopiclone, 2тоуапе. Выпускается в виде таблеток. Каждая таблетка имована, покрытая пленочной оболочкой, содержит по 7,5 мг зопик-лона. В блистере 5 или 20 таблеток [8]. Страна изготовитель - Франция. Зарегистрированы в России также таб-