Анализ иммунного статуса при тяжелых формах демиелинизирующих и смешанных полинейропатий

C.Deng и соавт. (1996) сообщили о лечении экспериментальной миастении альфа ИФН. У 7 из 16 мышей, что составило 44%, была полная клиническая ремиссия, в отлимче от группы, которой вводилось плаце-бо(0 из 14 мышей, р=0,006). Частота случаев смерти и тяжелой формы миастении оказалась выше в группе мышей, полкчавшей плацебо(7 из 14) по сравнению с группой, получавшей ИФН альфа(4 из 16). Однако, Т. Konishi(1996) сообщил об ухудшении состояния у больного миастенией, которому назначали ИФН альфа по поводу хронического гепатита С.Е. Lensch и др.(1999),1. Gurtubay и др. (1999), H. Harado и др. (1999) сообщили о развитии миастении после лечения ИНФ альфа. Таким образом, данные о клиническом состоянии больных миастенией при повышении уровня ИФН альфа в крови противоречивы, хотя этот препарат эффективен при рассеянном склерозе, патогенез которого имеет много общего с миастенией.

Цель работы - изучение интерферонового статуса у больных миастенией.

Всего обследовано 5 больных в возрасте от 23 до 43 лет, из них 4 женщины и 1 мужчина. У всех исследуемых больных была генерализованная форма миастении, У 4 больных отмечалась средняя степень тяжести заболевания, у 1 - легкая и у 1- тяжелая.

Показатели ИФН-статуса определяли микрметодом в цельной гепатинизированной крови по методике, описаннойС.С. Григорян и др.(1988).ИФН-статус включал определение следующих параметров: -циркулирующий(сывороточный) ИФН в крови;

-уровень продукции альфа ИФН лейкоцитами при стимуляции их вирусом болезни Ньюкасла(штамм Канзас) с известным режимом и последующей инактивацией вируса-индуктора in vitro;

-уровень продукции гамма ИФН лейкоцитами при индукции их митогеном-фитогемагглютинином (ФГА Р, "Difco") в дозе 10 мкг/мл in vitro;

уровень продукции спонтанного ИФН in vitro.

Постановку рекции ИФН-статуса осуществляли в стерильных 96 -луночных круглодонных планшетах в трех повторах(9 лунок на каждую пробу). В каждую лунку, содержащуюО мкл Среды RPMI-1640( с глютами-ном и гентамицином), вносили в первые три - по 20 мкл ВБН, во вторые- по 2о мкл ФГА, в третьи - по 20 мкл RPMI-1640. Затем во все 9 лунок добавляли по 20 мкл цельной гепаринизированной крови. Содержимое каждой лунки хорошо перемешивали. Затем планшеты закрывали крышками и инкубировали при 37 градусах по Цельсию 24 часа в атмосфере 5% С02. Общий расход крови на одно тестирование - 180 мкл. Оставшуюся кровь центрифугировали для получения сывороточного ИФН.

Титрование ИФГ проводили в 96 луночных плоскодонных планшетах с диплоидной культурой фиб-робластов человека(М-19) в среде Игла с 2% бычьей сывороткой, глютамином, гентамицином. Предварительно культуру клеток М-19 выращивали на среде RPMI-1640(производство Института полиомиелита и вирусных энцефалитов, Москва), обогащенной глютамином, 10% бычьей сыворотки и гентамицином, в объеме 200 мкл на 1 лунку 24-48 часов до образования сплошного монослоя при 37 градусах по Цельсию в атмосфере 5% С02. В качестве тест-вируса использовали вирус везикулярного стоматита человека(ВВС), штамм Индиана. За титр ИФН принимали величину, обратную его разведения., и обеспечивющую защиту 50% клеток монослоя от цитопатического действия тест-вируса.

Уровень сывороточного ИФН оказался в норме увсех больных (<2-8), только в одном случае- 8-16. Уровень ИФН-альфа был снижен у всех больных в 3-4-12 раз по сранению с контрольными данными. В среднем у больных уровень ИФН-альфа составил 240,0_+56,6:t=2,2; р>0,05). Уровень ИФН- гамма у больных миастенией оказался сниженным во всех случая-х в 3-6 раз по сравнению с контрольными данными. В среднем у больных уровень ИФН-гамма составил 25,6_+8,8;t=2,l; р>0,05) Спонтанный ИФН был выявлен в 2 случаях ( 2 -4 ед/мл). У остальных больных показатель был меньше 2, также как и в контрольной группе. В норме спонтанный ИФН отсутствует.

Таким образом, у взрослых больных генерализованной миастенией снижены показатели альфа и гамма ИФН.

ЛИТЕРАТУРА

1.Григорян С.С., Майоров М.А. Оценка интерферонового статуса людей по пробам цельной крови . Вопр. вирусологии,- 1988,-N 4. -С. 433-436.

2. Ершов Ф.И. Система интерферона в норме и при патологии. - М, Мед. 1996.- 240 С.

3. Deng C.Goluszko Е., Baron S.,We В., Christadoss F. IFN-alpha therapy is effective in supressing the clinical experimrntal myasthenia gravis.//J. Immunol.1996.-Vol. 157.-N12.-P.5675-5685.

4. Gurtubay I., Morales G., Arechaga 0., Galleso J. Development of myasthenia gravis after interferon alpha therapy//Oncol. Rep-1999.-Vol.6.-N3.-P.665-668.

5. Harabo H , Tamaoko A., Kohno Y., Mochiziki A., Shoji S. Exacerbation of myasthenia gravis in a patients after interferon-beta treatment for chronic active hepatitis С.// Immunol.Rev.-1999.-Vol. 169.-P.67-79.

6. Konoshi T.A case of myasthenia gravis wich developed myasthenia crisis after alpha-interferon therapy for chronic hepatitis C//Rinsho-Shinkeigaku.-1996-Vol.36.-N8.-P.980-985.

7. Lensch E., Faust J., Nix W., Wandel E. Myasthenia gravis after interferon-alfa treatment//Muscle/ Nerve.-1996.-Vol.129.-N7,-P.927-930.

АНАЛИЗ ИММУННОГО СТАТУСА ПРИ ТЯЖЕЛЫХ ФОРМАХ ДЕМИЕЛИНИЗИРУЮЩИХ И СМЕШАННЫХ ПОЛИНЕЙРОПАТИЙ

И.Г. Жирнова, Л.В. Комелькова, М.И. Царева, М.А. Пирадов, И.А. Авдюнина, Э.В Павлов, В.Н. Пирогов, И.В. Ганнушкина

НИИ неврологии РАМН, Москва

Представление о существенной роли иммунных механизмов в развитии острых воспалительных де-миелинизирующих полинейропатий (ОВДП), остается доминирующим Однако, механизмы действия пусковых факторов и реализация самоограничения его течения до сих пор остаются мало изученными. Наряду с ОВДП, известны и другие формы воспалительных и токсических ПНП, в частности, дифтерийная (ДП), в лечении которых используются иммуноактивные воздействия (плазмаферез - ПФ, стероидная терапия, введение иммуноглобулинов - Ig), что делает актуальным изучение иммунного статуса у этих больных. Обследованы показатели клеточного и гуморального иммунитета 10 больных с ОВДП и 23 больных с тяжелыми формами ДП, требующими проведения дыхательной реанимации. Большинство больных этой группы обследованы в динамике до и после проведения различных способов лечения. В первую подгруппу вошли 8 больных, которым вводили Ig; во вторую - 5 больных, получавших стероидные препараты, в третью- 4 больных, которые палучали поддерживающую терапию, но без иммуноактивных воздействий. Группу контроля составили 38 доноров. При изучении клеточного иммунитета использовали моноклональные антитела (МКА), выявляющие Лф с фенотипами: СДЗ+,СД4+, СД8+, СД 20+ и СД16+, соответствующие субпопуляциям Тлф, Т хелперам-индукторам (Тх), су-прессорам-цитотоксическим лф (Тс), Влф и нормальным киллерам. Для выявления клеточной гиперчувствительности использовали реакцию подавления прилипания лейкоцитов (P111IJI) с набором антигенов, включающим основной белок миелина (ОБМ), ганглиозиды мозга (ГМ) и туберкулопротеин (ТП). В реакции учитывали и влияние аутосывороток на адгезию клеток. Оценку гуморального иммунитета проводили посредством определения уровеня Ig и иммунных комплексов (ИК).

При ОВДП наиболее характерным было снижение Тх лф при повышении количества Тс ( средние величины у больных 31% и 29%, в контр, группе, соответственно- 39,5 +-1,6 и 20,6+ 1,2), что не подтверждает более ранние публикации о снижении Тс у больных ОВДП. Наши данные свидетельствуют о сохранности и даже повышении этой субпопуляции клеток, что в сочетании со снижением Тх клеток приводило к снижению величины регуляторного индекса (РИ). Среднее значение РИ при ОВДП было равно 1,2, что достоверно ниже, чемв контр.группе- 2,1. Кол-во Влф имело тенденцию к повышению, но различие не было значимым. Выявлено повышение клеточной реактивности, наиболее частое к ГМ, несколько реже к ОБМ и ТП (соответственно у 77%, 66% и 44% больных ). Эти данные согласуются с сообщениями многих исследователей о выявлении иммунного ответа , в частности, антител к ГМ, ОБМ и отдельным белкам миелина при ОВДП. Повышение ИК обнаружено у 85% больных и часто сочеталось с повышением IgM. Изменения уровней IgG и IgA носили разнонаправленный характер, причем снижение IgG выявлялось несколько чаще, (у 64 и 47% больных). Сочетан-ное снижение двух этих классов обнаружено у 40% лиц. Таким образом, в большинстве случаев ОВДП отмечалась дисгаммаглобулинемия.

У больных ДП было выявлено достоверное снижение относительного количества Тлф, Тх, тенденция к снижению Тс и В лф. РИ также был изменен у большинства больных, однако, его изменения при ДП носили разнонаправленный характер, что позволяет говорить о нарушениях иммунорегуляторных процессов. Повышение клеточной реактивности, хотя и выявлялось у больных ДП, однако, значительно реже, чем при ОВДП. Сенсибилизация к ГМ и ТП отмечена у трети больных (37%), к ОБМ у 20 %. Двукратное повышение ИК обнаруживалось у каждого второго больного. Уровни IgA и IgM были достоверно повышены, как у большинства больных (65% ), так и по группе в целом. Изменения IgG были разнонаправленными. Его снижение отмечалось у 47% больных, а повышение- в 37% случаев. Таким образом, изменения иммунитета у больных ДП выражались в нарушениях иммунорегуляции, дисгаммаглобулинемии, у части больных,- в повышении клеточной реактивности. Наиболее значимыми у больных ДП следует считать иммунодефицитные проявления, которые, вероятно, носят вторичный характер.

У 5 из 8 больных ДП, получавших Ig, отмечена положительная динамика показателей иммунного статуса: у 4 больных выявлено повышение исходно сниженного уровня IgG; в некоторых случаях наблюдали снижение исходно повышенного уровня IgA и ИК. Эти положительные изменения сочетались с повышением общего числа лф, Тлф, Тх и нормализацией РИ. У больных, получавших стероидные препараты, нарастала лим-фопения, снижалось количество Тлф и Тх, в некоторых случаях и Тс. У отдельных больных изменения носили волнообразный характер. Исходно низкий уровень Ig всех классов у большинства больных усугублялся на фоне проводимого лечения. Динамика иммунного статуса при проведении стероидной терапии еще раз подтверждает иммунодефицитный характер изменений иммунитета у больных ДП. В связи со сказанным, следует избегать назначения стероидов, особенно у больных с нарастающим снижением показателей гуморального и клеточного иммунитета..