МОЛЕКУЛЫ ПОЛИСПЕЦИФИЧНЫХ АНТИТЕЛ, ИМЕЮЩИЕ СПЕЦИФИЧНОСТЬ К TNF-АЛЬФА, IL-17A И IL-17F

1. Молекула полиспецифичного антитела, содержащая связывающий домен, специфичный к TNF-альфа человека, и связывающий домен, специфичный к IL-17A человека и IL-17F человека, где молекула антитела способна нейтрализовать биологическую активность TNF-альфа человека, IL-17A человека и IL-17F человека.
2. Молекула полиспецифичного антитела по п.1, где указанное антитело имеет аффинность связывания с TNF-альфа человека 200 пМ или выше.
3. Молекула полиспецифичного антитела по п.1 или 2, где указанное антитело имеет аффинность связывания с IL-17А человека 100 пМ или выше.
4. Молекула полиспецифичного антитела по п.3, где указанное антитело имеет аффинность связывания с IL-17А человека 20 пМ или выше.
5. Молекула полиспецифичного антитела по любому одному из пп.1-4, где антитело имеет аффинность связывания с IL-17F 100 пМ или выше.
6. Молекула полиспецифичного антитела по п.5, где указанное антитело имеет аффинность связывания с IL-17F 20 пМ или выше.
7. Молекула полиспецифичного антитела по любому одному из пп.1-6, где связывающий домен, специфичный к IL-17A человека и IL-17F человека, также связывает гетеродимер IL-17A/IL-17F.
8. Молекула полиспецифичного антитела по любому одному из пп.1-7, где каждый связывающий домен содержит два вариабельных домена антитела.
9. Молекула полиспецифичного антитела по п.8, где два вариабельных домена антитела представляют собой пару VH/VL.
2
10. Молекула полиспецифичного антитела по любому одному из пп.1-9, где формат молекула выбирают из дитела, одноцепочечного дитела, тритела, тандемного scFv, FabFv, Fab'Fv, FabdsFv, Fab-scFv, Fab-dsscFv, Fab-(dsscFv), diFab, diFab', тритела, тандемного scFv-Fc, scFv-Fc-scFv, одноцепочечного дитела-Fc, одноцепочечного дитела-CH3, Ig-scFv, scFv-Ig, V-Ig, Ig-V, Дуотела и DVD-Ig.
11. Молекула полиспецифичного антитела по любому одному из пп.1-9, где связывающий домен, который является специфичным к TNF-альфа человека, и связывающий домен, который является специфичным к IL-17A и IL-17F человека, независимо друг от друга выбирают из Fab, scFv, Fv, dsFv и dsscFv.
12. Молекула полиспецифичного антитела по любому одному из пп.1-9, содержащая или состоящая из:
c) полипептидной цепи по формуле (I):
V
-CH
-X-V
H
1
1
1
; и
d) полипептидной цепи по формуле (II)
V
-C
-Y-V
L
1
L
2
;
где:
H1
V представляет собой вариабельный домен тяжелой цепи;
1
CH представляет собой домен константной области тяжелой цепи, например ее домен 1;
Х представляет собой связь или линкер;
Y представляет собой связь или линкер;
1
V представляет собой dsFv, sdAb, scFv или dsscFv;
L1
V представляет собой вариабельный домен легкой цепи;
L
C представляет собой домен из константной области легкой цепи, такой как C-каппа;
2
V представляет собой dsFv, sdAb, scFv или dsscFv.
1
2
13. Молекула полиспецифичного антитела по п.12, где по меньшей мере один из V и V является scFv или dsscFv.
1
2
14. Молекула полиспецифичного антитела по п.13, где V является scFv или dsscFv, и V является scFv или dsscFv.
1
2
15. Молекула полиспецифичного антитела по п.14, где V является dsscFv, и V является dsscFv.
1
1
16. Молекула полиспецифичного антитела по любому одному из пп.12-15, где V является scFv или dsscFv, и V содержит полипептидную цепь:
а. по формуле (III): VH2-Z1-VL2, и VH2 присоединен к X, например, через пептидную связь; или
b. по формуле (IV): VL2-Z1-VH2, и VL2 присоединен к X, например, через пептидную связь;
где VH2 представляет собой вариабельный домен тяжелой цепи, Z1 представляет собой пептидный линкер, и VL2 представляет собой вариабельный домен легкой цепи.
17. Молекула полиспецифичного антитела по любому одному из пп.12-16, где V2 является scFv или dsscFv, и V2 содержит полипептидную цепь:
а. по формуле (V): VH3-Z2-VL3, и VH3 присоединен к Y, например, через пептидную связь; или
b. по формуле (VI) VL3-Z2-VH3, и VL3 присоединен к Y, например, через пептидную связь;
где VH3 представляет собой вариабельный домен тяжелой цепи, Z2 представляет собой пептидный линкер, и VL3 представляет собой вариабельный домен легкой цепи.
18. Полиспецифичное антитело по п.16 или 17, где Z1 и/или Z2 представляет собой пептидный линкер от 12 до 25 аминокислот в длину, например, последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 68.
19. Молекула полиспецифичного антитела по любому одному из пп.12-18, где Х представляет собой пептидный линкер, например, последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 1 или 2.
20. Молекула полиспецифичного антитела по любому одному из пп.12-19, где Y представляет собой пептидный линкер, например, последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 1 или 2.
21. Молекула полиспецифичного антитела по п.19 или 20, где Х представляет собой последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 2, и Y представляет собой последовательность приведенную в SEQ ID NO: 2.
22. Молекула полиспецифичного антитела по п.19 или 20, где Х представляет собой последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 1, и Y представляет собой последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 2.
1
2
1
2
23. Молекула полиспецифичного антитела по любому одному из пп.12-22, где по меньшей мере один из V и V является dsscFv или dsFv; и вариабельные домены легкой цепи и тяжелой цепи V и/или вариабельные домены легкой цепи и тяжелой цепи V связаны дисульфидной связью между двумя остатками генно-инженерно введенного цистеина.
1
2
1
2
H
L
H
L
H
L
H
L
H
L
H
L
H
L
H
L
H
L
H
L
H
L
1
2
24. Молекула полиспецифичного антитела по любому одному из пп.12-23, где по меньшей мере один из V и V является dsscFv или dsFv; и вариабельные домены тяжелой цепи и легкой цепи V и/или V связаны дисульфидной связью между двумя остатками цистеина, где положение пары цистеиновых остатков выбирают из группы, содержащей или состоящей из: V37 и V95, V44 и V100, V44 и V105, V45 и V87, V100 и V50, V100b и V49, V98 и V46, V101 и V46, V105 и V43 и V106 и V57, где значения V и V независимо выбирают в данных V или V.
H
L
25. Молекула полиспецифичного антитела по п.24, где положение пары генно-инженерных остатков цистеина представляет собой V44 и V100.
26. Молекула полиспецифичного антитела по любому одному из пп.12-25, где VH1 и VL1 содержат связывающий домен, специфичный к IL-17A человека и IL-17F человека, а V1 и/или V2 содержат связывающий домен, специфичный к TNF-альфа человека.
27. Молекула полиспецифичного антитела по любому одному из пп.1-26, которая содержит три связывающих домена.
28. Молекула полиспецифичного антитела по п.27, где каждый из трех связывающих доменов связывает разные антигены.
29. Молекула полиспецифичного антитела по п.28, где молекула антитела содержит связывающий домен, специфичный к белку-носителю из сыворотки крови человека.
30. Молекула полиспецифичного антитела по п.29, где белок-носитель из сыворотки крови человека выбран из группы, состоящей из тироксин-связывающего белка, транстиретина, α1-кислотного гликопротеина, трансферрина, альбумина и фибриногена, или фрагмента любого из них.
31. Молекула полиспецифичного антитела по любому одному из пп.12-30, где:
а. VH1 и VL1 содержат связывающий домен, специфичный к IL-17A человека и IL-17F человека; и
b. V1 содержит связывающий домен, специфичный к TNF-альфа человека, и V2 содержит связывающий домен, специфичный к белку-носителю из сыворотки крови человека, например, сывороточному альбумину человека; или V2 содержит связывающий домен, специфичный к TNF-альфа человека, и V1 содержит связывающий домен, специфичный к белку-носителю из сыворотки крови человека, например, сывороточному альбумину человека.
32. Молекула полиспецифичного антитела по любому одному из пп.1-31, где молекула антитела содержит не более одного связывающего домена, который является специфичным к TNF-альфа человека, и не более одного связывающего домена, который является специфичным к IL-17A человека и IL-17F человека.
33. Молекула полиспецифичного антитела по любому одному из пп.1-32, где молекула антитела не содержит домен СН2 и/или домен СН3.
34. Молекула полиспецифичного антитела по любому одному из пп.1-33, где связывающий домен, специфичный к TNF-альфа человека, содержит по меньшей мере одну CDR, имеющую последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 85 для CDRH1, CDR, имеющую последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 86 для CDRH2, и CDR, имеющую последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 87 для CDRH3.
35. Молекула полиспецифичного антитела по п.34, где связывающий домен, специфичный к TNF-альфа человека, содержит 3 CDR тяжелой цепи, имеющие последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 85 для CDRH1, SEQ ID NO: 86 для CDRH2 и SEQ ID NO: 87 для CDRH3.
36. Молекула полиспецифичного антитела по любому одному из пп.1-35, где связывающий домен, специфичный к TNF-альфа человека, содержит по меньшей мере одну CDR, имеющую последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 88 для CDRL1, CDR имеющую последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 89 для CDRL2, и CDR, имеющую последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 90 для CDRL3.
37. Молекула полиспецифичного антитела по п.36, где связывающий домен, специфичный к TNF-альфа человека, содержит 3 CDR легкой цепи, имеющие последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 88 для CDRL1, SEQ ID NO: 89 для CDRL2 и SEQ ID NO: 90 для CDRL3.
38. Молекула полиспецифичного антитела по любому одному из пп.1-37, где связывающий домен, специфичный к TNF-альфа человека, содержит вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 92 или SEQ ID NO: 96; последовательность, имеющую по меньшей мере 80% идентичности или сходства с последовательностью, приведенной в SEQ ID NO: 92 или SEQ ID NO: 96; или последовательность, имеющую по меньшей мере 80% идентичности или сходства с последовательностью, приведенной в SEQ ID NO: 92 или SEQ ID NO: 96, где CDRH1, CDRH2 и CDRH2 имеют последовательности по п.35.
39. Молекула полиспецифичного антитела по любому одному из пп.1-38, где связывающий домен, специфичный к TNF-альфа человека, содержит вариабельный домен легкой цепи, содержащий последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 91 или SEQ ID NO: 95; последовательность, имеющую по меньшей мере 80% идентичности или сходства с последовательностью, приведенной в SEQ ID NO: 91 или SEQ ID NO: 95; или последовательность, имеющую по меньшей мере 80% идентичности или сходства с последовательностью, приведенной в SEQ ID NO: 91 или SEQ ID NO: 95, где CDRL1, CDRL2 и CDRL3 имеют последовательности по п.37.
40. Полиспецифичное антитело по любому одному из пп.1-39, где антитело содержит dsscFv, специфичный к TNF-альфа человека, и dsscFv содержит последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 101; последовательность, имеющую по меньшей мере 80% идентичности или сходства с последовательностью, приведенной в SEQ ID NO: 101; или последовательность, имеющую по меньшей мере 80% идентичности или сходства с последовательностью, приведенной в SEQ ID NO: 101, где CDRH1, CDRH2 и CDRH3 имеют последовательности по п.35, и CDRL1, CDRL2 и CDRL3 имеют последовательности по в п.37.
41. Полиспецифичное антитело по любому одному из пп.1-39, где антитело содержит scFv, специфичный к TNF-альфа человека, и scFv содержит последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 99; последовательность, имеющую по меньшей мере 80% идентичности или сходства с последовательностью, приведенной в SEQ ID NO: 99; или последовательность, имеющую по меньшей мере 80% идентичности или сходства с последовательностью, приведенной в SEQ ID NO: 99, где CDRH1, CDRH2 и CDRH3 имеют последовательности по п.35, и CDRL1, CDRL2 и CDRL3 имеют последовательности по п.37.
42. Молекула полиспецифичного антитела по любому одному из пп.1-41, где связывающий домен, специфичный к IL-17А человека и IL-17F человека, содержит 3 CDR тяжелой цепи, имеющие последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 71 для CDRH1, SEQ ID NO: 72 для CDRH2 и SEQ ID NO: 73 для CDRH3.
43. Молекула полиспецифичного антитела по любому одному из пп.1-42, где связывающий домен, специфичный к IL-17А человека и IL-17F человека, содержит 3 CDR легкой цепи, имеющие последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 74 для CDRL1, SEQ ID NO: 75 для CDRL2 и SEQ ID NO: 76 для CDRL3.
44. Молекула полиспецифичного антитела по любому одному из пп.1-43, где связывающий домен, специфичный к IL-17А человека и IL-17F человека, содержит вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 78; последовательность, имеющую по меньшей мере 80% идентичности или сходства с последовательностью, приведенной в SEQ ID NO: 78; или последовательность, имеющую по меньшей мере 80% идентичности или сходства с последовательностью, приведенной в SEQ ID NO: 78, где CDRH1, CDRH2 и CDRH3 имеют последовательности по п.42.
45. Молекула полиспецифичного антитела по любому одному из пп.1-44, где связывающий домен, специфичный к IL-17А человека и IL-17F человека, содержит вариабельный домен легкой цепи, содержащий последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 77; последовательность, имеющую по меньшей мере 80% идентичности или сходства с последовательностью, приведенной в SEQ ID NO: 77; или последовательность, имеющую по меньшей мере 80% идентичности или сходства с последовательностью, приведенной в SEQ ID NO: 77, где CDRL1, CDRL2 и CDRL3 имеют последовательности по п.43.
46. Молекула полиспецифичного антитела по любому одному из пп.1-45, где антитело содержит тяжелую цепь, содержащую последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 82; последовательность, имеющую по меньшей мере 80% идентичности или сходства с последовательностью, приведенной в SEQ ID NO: 82; или последовательность, имеющую по меньшей мере 80% идентичности или сходства с последовательностью, приведенной в SEQ ID NO: 82, где CDRH1, CDRH2 и CDRH3 имеют последовательности по п.42.
47. Молекула полиспецифичного антитела по любому одному из пп.1-46, где антитело содержит легкую цепь, содержащую последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 81; последовательность, имеющую по меньшей мере 80% идентичности или сходства с последовательностью, приведенной в SEQ ID NO: 81; или последовательность, имеющую по меньшей мере 80% идентичности или сходства с последовательностью, приведенной в SEQ ID NO: 81, где CDRL1, CDRL2 и CDRL3 имеют последовательности по п.43.
48. Молекула полиспецифичного антитела по любому одному из пп.1-47, где молекула антитела содержит связывающий домен, специфичный к сывороточному альбумину человека, который содержит 3 CDR тяжелой цепи, имеющие последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 103 для CDRH1, SEQ ID NO: 104 для CDRH2 и SEQ ID NO: 105 для CDRH3.
49. Молекула полиспецифичного антитела по любому одному из пп.1-48, где молекула антитела содержит связывающий домен, специфичный к сывороточному альбумину человека, который содержит 3 CDR легкой цепи, имеющие последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 106 для CDRL1, SEQ ID NO: 107 для CDRL2 и SEQ ID NO: 108 для CDRL3.
50. Молекула полиспецифичного антитела по любому одному из пп.1-49, где связывающий домен, специфичный к сывороточному альбумину человека, содержит вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 110 или SEQ ID NO: 114; последовательность, имеющую по меньшей мере 80% идентичности или сходства с последовательностью, приведенной в SEQ ID NO: 110 или SEQ ID NO: 114; или имеющую по меньшей мере 80% идентичности или сходства с последовательностью, приведенной в SEQ ID NO: 110 или SEQ ID NO: 114, где CDRH1, CDRH2 и CDRH3 имеют последовательности по п.48.
51. Молекула полиспецифичного антитела по любому одному из пп.1-50, где связывающий домен, специфичный к сывороточному альбумину человека, содержит вариабельный домен легкой цепи, содержащий последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 109 или SEQ ID NO: 113; последовательность, имеющую по меньшей мере 80% идентичности или сходства с последовательностью, приведенной в SEQ ID NO: 109 или SEQ ID NO: 113; или последовательность, имеющую по меньшей мере 80% идентичности или сходства с последовательностью, приведенной в SEQ ID NO: 109 или SEQ ID NO: 113, где CDRL1, CDRL2 и CDRL3 имеют последовательности по п.49.
52. Полиспецифичное антитело по любому одному из пп.1-51, где антитело содержит dsscFv, специфичный к сывороточному альбумину человека, и dsscFv содержит последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 119; последовательность, имеющую по меньшей мере 80% идентичности или сходства с последовательностью, приведенной в SEQ ID NO: 119; или последовательность, имеющую по меньшей мере 80% идентичности или сходства с последовательностью SEQ ID NO: 119, где CDRH1, CDRH2 и CDRH3 имеют последовательности по п.48, и CDRL1, CDRL2 и CDRL3 имеют последовательности по п.49.
53. Полиспецифичное антитело по любому одному из пп.1-51, где антитело содержит scFv, специфичный к сывороточному альбумину человека, и scFv содержит последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 117; последовательность, имеющую по меньшей мере 80% идентичности или сходства с последовательностью, приведенной в SEQ ID NO: 117; или последовательность, имеющую по меньшей мере 80% идентичности или сходства с последовательностью, приведенной в SEQ ID NO: 117, где CDRH1, CDRH2 и CDRH3 имеют последовательности по п.48, и CDRL1, CDRL2 и CDRL3 имеют последовательности по п.49.
54. Молекула триспецифичного антитела, содержащая связывающий домен, специфичный к TNF-альфа человека, связывающий домен, специфичный к IL-17А человека и IL-17F человека, и связывающий домен, специфичный к сывороточному альбумину человека, где молекула антитела содержит или состоит из:
а. первого полипептида, содержащего или состоящего из последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 125; последовательности, имеющей по меньшей мере 80% идентичности или сходства с последовательностью, приведенной в SEQ ID NO: 125; или последовательности, имеющей по меньшей мере 80% идентичности или сходства с последовательностью, приведенной в SEQ ID NO: 125, где CDR имеют последовательности по пп.35, 37 и 42; и
b. второго полипептида, содержащего или состоящего из последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 131; последовательности, имеющей по меньшей мере 80% идентичности или сходства с последовательностью, приведенной в SEQ ID NO: 131; или последовательности, имеющей по меньшей мере 80% идентичности или сходства с последовательностью, приведенной в SEQ ID NO: 131, где CDR имеют последовательности по пп.43, 48 и 49.
55. Молекула триспецифичного антитела, содержащая связывающий домен, специфичный к TNF-альфа человека, связывающий домен, специфичный к IL-17А человека и IL-17F человека, и связывающий домен, специфичный к сывороточному альбумину человека, и содержит или состоит из:
а. первого полипептида, содержащего или состоящего из последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 127; последовательности, имеющей по меньшей мере 80% идентичности или сходства с последовательностью, приведенной в SEQ ID NO: 127; или последовательности, имеющей по меньшей мере 80% идентичности или сходства с последовательностью, приведенной в SEQ ID NO: 127, где CDR имеют последовательности по пп.35, 37 и 42; и
b. второго полипептида, содержащего или состоящего из последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 131; последовательности, имеющей по меньшей мере 80% идентичности или сходства с последовательностью, приведенной в SEQ ID NO: 131; или последовательности, имеющей по меньшей мере 80% идентичности или сходства с последовательностью, приведенной в SEQ ID NO: 131, где CDR имеют последовательности по пп.43, 48 и 49.
56. Молекула триспецифичного антитела по п.54 или 55, где молекула антитела способна нейтрализовать биологическую активность TNF-альфа человека, IL-17A человека и IL-17F человека.
57. Полинуклеотид, кодирующий полиспецифичную молекулу антитела или ее полипептидную цепь по любому одному из пп.1-56.
58. Вектор, содержащий полинуклеотид или полинуклеотиды по п.57.
59. Клетка-хозяин, содержащая один или несколько полинуклеотидов или векторов по п.57 или 58, соответственно.
60. Клетка-хозяин, содержащая два вектора, причем каждый вектор содержит полинуклеотид, кодирующий отличающуюся полипептидную цепь молекулы полиспецифичного антитела по любому одному из пп.1-56.
61. Способ, включающий экспрессию молекулы полиспецифичного антитела в клетке-хозяине по п.59 или 60.
62. Фармацевтическая композиция, содержащая молекулу полиспецифичного антитела по любому одному из пп.1-56 и по меньшей мере одно вспомогательное вещество.
63. Молекула полиспецифичного антитела по любому одному из пп.1-56 или фармацевтическая композиция по п.62 для применения в терапии.
64. Способ лечения пациента, нуждающегося в этом, включающий введение терапевтически эффективного количества полиспецифичной молекулы антитела по любому одному из пп.1-56, или фармацевтической композиции по п.62.
65. Молекула триспецифичного антитела, содержащая связывающий домен, специфичный к TNF-альфа человека, связывающий домен, специфичный к IL-17А человека и IL-17F человека, и связывающий домен, специфичный к сывороточному альбумину человека, и содержит или состоит из первого полипептида, кодируемого полинуклеотидной последовательностью, приведенной в SEQ ID NO: 126, и второго полипептида, кодируемого полинуклеотидной последовательностью, приведенной в SEQ ID NO: 132.