РЕКОМБИНАНТНАЯ ПЛАЗМИДНАЯ ДНК PHBMD 1, СОДЕРЖАЩАЯ МОДИФИЦИРОВАННЫЙ ГЕН СРЕДНЕГО ПОВЕРХНОСТНОГО БЕЛКА ВИРУСА ГЕПАТИТА В ЧЕЛОВЕКА, - ПРОМЕЖУТОЧНАЯ ПЛАЗМИДА ДЛЯ КОНСТРУИРОВАНИЯ РЕКОМБИНАНТНОЙ ПЛАЗМИДНОЙ ДНК YEP 63/AB, РЕКОМБИНАНТНАЯ ПЛАЗМИДНАЯ ДНК YEP 63/AB, КОДИРУЮЩАЯ СИНТЕЗ ПРОИЗВОДНОГО СРЕДНЕГО ПОВЕРХНОСТНОГО БЕЛКА ВИРУСА ГЕПАТИТА В И ШТАММ ДРОЖЖЕЙ SACCHAROMYCES CEREVISIAE - ПРОДУЦЕНТ ПРОИЗВОДНОГО СРЕДНЕГО ПОВЕРХНОСТНОГО БЕЛКА ВИРУСА ГЕПАТИТА В
RECOMBINANT PLASMID DNA PHBMD1 CONTAINING THE MODIFIED GENE OF MEDIAN SURFACE PROTEIN OF HUMAN HEPATITIS VIRUS B, - INTERMEDIATE PLASMID FOR RECOMBINANT PLASMID DNA YEP 63/AB CONSTRUCTING, RECOMBINANT PLASMID DNA YEP 63/AB ENCODING SYNTHESIS OF MEDIAN SURFACE DERIVATIVE PROTEIN OF HEPATITIS B VIRUS AND STRAIN OF YEAST SACCHAROMYCES CEREVISIAE - A PRODUCER OF MEDIAN SURFACE DERIVATIVE PROTEIN OF HEPATITIS B VIRUS

FIELD: molecular biology, genetic engineering, medicine. SUBSTANCE: recombinant plasmid pHBmd1 that is inherited in E. coli cells and carrying the modified gene of median surface protein of human hepatitis B virus (M-protein HBV) and containing deletion in specific site of region preS2 that determines sensitivity of M-protein HBV to trypsin-like proteases is obtained on the basis of the cloned gene encoding M-protein HBV. On the basis of plasmid pHBmd1 recombinant plasmid YEp63/AB is constructed. This plasmid provides synthesis of M-protein HBV derivative in the transformed cells of yeast S. cerevisiae, strain 20B12. The presence of intact promoter of yeast gene encoding glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase in plasmid YEp63/AB located before initiating codon AUG ensures to get high expression level without induction. Synthesized protein assembles particle normally as the natural 22 nm particle HBsAg. Synthesis level of M-protein derivative is 0.5-1% of total protein level in cell. New strain-producer can be used for industrial production of M-protein HBV derivative and used for diagnostic and immunoprophylaxis aims, for development of antihepatitis vaccines of new generation showing the enhanced protective properties. EFFECT: increased proteolytic stability of M-protein HBV derivative, new strain indicated above.
ъ'
На основе клонированного гена среднего поверхностного белка вируса гепатита В человека (М-белка HBV) получена рекомбинантна  плазмида pHBmd1, наследующа с  в клетках E.coli и несуща  модифицированный ген данного белка с делецией в специфическом районе области preS2, определ ющей чувствительность М-белка HBV к трипсиноподобным протеазам. На основе плазмиды pHBmd1 сконструирована рекомбинантна  плазмида YEp63/AB, обеспечивающа  синтез производного М-белка HBV в трансформированных клетках S.cerevisiae штамма 20В12. Наличие в плазмиде YEp63/AB интактного промотора дрожжевого гена глицеральдегид-3-фосфат дегидрогеназы с оптимизированной 5-нетранслируемой областью перед инициаторным кодоном AUG позвол ет достичь высокого уровн  экспрессии, не прибега  к индукции. Синтезируемый белок нормально собираетс  в частицу подобно природной 22 нм частице HBsAg. Уровень синтеза производного М-белка составл ет 0,5-1% от суммарного белка клетки. Новый штамм-продуцент перспективен дл  промышленного получени  производного М-белка HBV, отличающегос  повышенной протеолитической стабильностью по сравнению с природным аналогом. Полученные препараты рекомбинантного М-белка HBV могут примен тьс  дл  диагностических и иммунопрофилактических целей, дл  разработки противогепатитных вакцин нового поколени  с повышенными протективными свойствами.