КОНЪЮГАТЫ МЕЧЕННЫХ РАДИОАКТИВНЫМ ЦИРКОНИЕМ СКОНСТРУИРОВАННЫХ АНТИТЕЛ С ЦИСТЕИНОВЫМИ ЗАМЕНАМИ

1. Меченное цирконием, сконструированное антитело с цистеиновыми заменами, содержащее сконструированное антитело с цистеиновыми заменами (Ab), конъюгированное через свободную аминокислоту цистеин с линкером (L) и комплексом циркония (Z), обладающему формулой I:
где p представляет собой 1-4.
2. Меченное цирконием, сконструированное антитело с цистеиновыми заменами по п.1, где p представляет собой 2.
3. Меченное цирконием, сконструированное антитело с цистеиновыми заменами по п.1, где сконструированное антитело с цистеиновыми заменами в тяжелой цепи содержит последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 11, 12, 13 и 15:
где цистеин в SEQ ID NO: 11, 12, 13 и 15 представляет собой свободную аминокислоту цистеин.
4. Меченное цирконием, сконструированное антитело с цистеиновыми заменами по п.1, где сконструированное антитело с цистеиновыми заменами в легкой цепи содержит последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 45 и 46:
где цистеин в SEQ ID NO: 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 45 и 46 представляет собой свободную аминокислоту цистеин.
5. Меченное цирконием, сконструированное антитело с цистеиновыми заменами по п.1, где сконструированное антитело с цистеиновыми заменами получают способом, включающим:
(i) мутагенез последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей сконструированное антитело с цистеиновыми заменами;
(ii) экспрессию сконструированного антитела с цистеиновыми заменами; и
(iii) выделение и очистку сконструированного антитела с цистеиновыми заменами.
6. Меченное цирконием, сконструированное антитело с цистеиновыми заменами по п.1, где сконструированное антитело с цистеиновыми заменами выбрано из моноклонального антитела, биспецифического антитела, химерного антитела, человеческого антитела, гуманизированного антитела и Fab-фрагмента.
7. Меченное цирконием, сконструированное антитело с цистеиновыми заменами по п.1, где сконструированное антитело с цистеиновыми заменами представляет собой A121C тио-трастузумаб.
8. Меченное цирконием, сконструированное антитело с цистеиновыми заменами по п.1, где сконструированное антитело с цистеиновыми заменами получают способом, включающим замену одного или нескольких аминокислотных остатков исходного антитела на одну или несколько свободных цистеиновых аминокислот, где исходное антитело избирательно связывается с антигеном, и сконструированное антитело с цистеиновыми заменами избирательно связывается с тем же антигеном, что и исходное антитело.
9. Меченное цирконием, сконструированное антитело с цистеиновыми заменами по п.1, где сконструированное антитело с цистеиновыми заменами или исходное антитело связывается с одним или несколькими из рецепторов (1)-(51):
(1) BMPR1B (рецептор костного морфогенного белка типа IB);
(2) E16 (LAT1, SLC7A5);
(3) STEAP1 (эпителиальный антиген простаты, содержащий шесть трансмембранных доменов);
(4) 0772P (CA125, MUC16);
(5) MPF (MPF, MSLN, SMR, фактор активации мегакариоцитов, мезотелин);
(6) Napi3b (NAPI-3B, NPTIIb, SLC34A2, семейство переносчиков растворенных веществ 34 (фосфат натрия), член 2, натрий-зависимый переносчик фосфата 3b, типа II);
(7) Sema 5b (FLJ10372, KIAA1445, Mm.42015, SEMA5B, SEMAG, Семафорин 5b Hlog, домен sema, семь повторов тромбоспондина (типа 1 и подобный типу 1), трансмембранный домен (TM) и короткий цитоплазматический домен, (семафорин) 5B);
(8) PSCA hlg (2700050C12Rik, C530008O16Rik, кДНК RIKEN 2700050C12, кДНК RIKEN гена 2700050C12);
(9) ETBR (Рецептор эндотелина типа B);
(10) MSG783 (RNF124, гипотетический белок FLJ20315);
(11) STEAP2 (HGNC_8639, IPCA-1, PCANAP1, STAMP1, STEAP2, STMP, ассоциированный с раком предстательной железы ген 1, ассоциированный с раком предстательной железы белок 1, эпителиальный антиген простаты 2, содержащий шесть трансмембранных доменов, белок простаты, содержащий шесть трансмембранных доменов);
(12) TrpM4 (BR22450, FLJ20041, TRPM4, TRPM4B, катионный канал транзиторного рецепторного потенциала, подсемейство M, член 4);
(13) CRIPTO (CR, CR1, CRGF, CRIPTO, TDGF1, полученный из тератокарциномы фактор роста);
(14) CD21 (CR2 (рецептор комплемента 2) или C3DR (рецептор C3d/вируса Эпштейна-Барр) или Hs.73792);
(15) CD79b (CD79B, CD79β, IGb (иммуноглобулин-ассоциированная молекула бета), B29);
(16) FcRH2 (IFGP4, IRTA4, SPAP1A (содержащий SH2 домен фосфатазный якорный белок 1a), SPAP1B, SPAP1C);
(17) HER2;
(18) NCA;
(19) MDP;
(20) IL20Rα;
(21) Бревикан;
(22) EphB2R;
(23) ASLG659;
(24) PSCA;
(25) GEDA;
(26) BAFF-R (рецептор фактора активации B-клеток, BLyS рецептор 3, BR3;
(27) CD22 (изоформа B-клеточного рецептора CD22-B);
(28) CD79a (CD79A, CD79α, иммуноглобулин-ассоциированная молекула альфа, специфический для B-клеток белок, ковалентно взаимодействующий с Ig бета (CD79B) и формирующий комплекс на поверхности с молекулами IgM, передает сигнал, вовлеченный в дифференцировку B-клеток);
(29) CXCR5 (Рецептор лимфомы Беркитта 1, связанный с G белком рецептор, активируемый хемокином CXCL13, функционирует в миграции лимфоцитов и гуморальной защите, играет роль в инфекции HIV-2 и, возможно, развитии СПИД, лимфомы, миеломы и лейкоза);
(30) HLA-DOB (Бета-субъединица молекулы MHC класса II (Ia антиген), связывающая пептиды и представляющая их CD4+ T-лимфоцитам);
(31) P2X5 (Управляемый лигандом пуринергического рецептора P2X ионный канал 5, ионный канал, управляемый внеклеточным ATP, может быть вовлечен в передачу возбуждения по синапсам и нейрогенез, недостаточность может вносить вклад в патофизиологию идиопатической нестабильности детрузора);
(32) CD72 (антиген дифференцировки B-клеток CD72, Lyb-2);
(33) LY64 (Лимфоцитарный антиген 64 (RP105), мембранный белок типа I семейства богатых лейцином повторов (LRR), регулирует активацию и апоптоз B-клеток, потеря функции ассоциирована с увеличенной активностью заболевания у пациентов с системной красной волчанкой);
(34) FcRH1 (подобный Fc-рецептору белок 1, предположительный рецептор для Fc-домена иммуноглобулинов, содержащий Ig-подобный домен типа C2 и домен ITAM, может играть роль в дифференцировке B-лимфоцитов);
(35) IRTA2 (ассоциированный с транслокацией рецептор 2 суперсемейства иммуноглобулинов, предположительный иммунорецептор с возможной ролью в развитии B-клеток и лимфомагенезе; нарушение регуляции гена посредством транслокации происходит при некоторых злокачественных новообразованиях B-клеток);
(36) TENB2 (предположительный трансмембранный протеогликан, родственный семейству факторов роста EGF/херегулина и фоллистатину);
(37) PMEL17 (гомолог silver; SILV; D12S53E; PMEL17; (SI); (SIL); ME20; gp100);
(38) TMEFF1 (трансмембранный белок с EGF-подобным доменом и двумя фоллистатин-подобными доменами 1; Томорегулин-1; H7365; C9orf2; C9ORF2; U19878; X83961;
(39) GDNF-Ra1 (рецептор альфа 1 семейства GDNF; GFRA1; GDNFR; GDNFRA; RETL1; TRNR1; RET1L; GDNFR-alpha1; GFR-ALPHA-1; U95847; BC014962);
(40) Ly6E (комплекс лимфоцитарного антигена 6, локус E; Ly67,RIG-E,SCA-2,TSA-1);
(41) TMEM46 (гомолог shisa 2 (Xenopus laevis); SHISA2);
(42) Ly6G6D (комплекс лимфоцитарного антигена 6, локус G6D; Ly6-D, MEGT1);
(43) LGR5 (содержащий богатые лейцином повторы связанный с белком G рецептор 5; GPR49, GPR67);
(44) RET (протоонкоген ret; MEN2A; HSCR1; MEN2B; MTC1; (PTC); CDHF12; Hs.168114; RET51; RET-ELE1);
(45) LY6K (комплекс лимфоцитарного антигена 6, локус K; LY6K; HSJ001348; FLJ35226);
(46) GPR19 (связанный с белком G рецептор 19; Mm.4787);
(47) GPR54 (рецептор KISS1; KISS1R; GPR54; HOT7T175; AXOR12);
(48) ASPHD1 (содержащий домен аспартат-бета-гидроксилазы белок 1; LOC253982);
(49) Тирозиназа (TYR; OCAIA; OCA1A; тирозиназа; SHEP3);
(50) TMEM118 (белок с «безымянным пальцем», трансмембранный белок 2; RNFT2; FLJ14627); и
(51) GPR172A (связанный с белком G рецептор 172A; GPCR41; FLJ11856; D15Ertd747e).
10. Меченное цирконием, сконструированное антитело с цистеиновыми заменами по п.1, где Z содержит цирконий в комплексе с десферриоксамином B.
89
11. Меченное цирконием, сконструированное антитело с цистеиновыми заменами по п.10, где цирконий присутствует в комплексе со структурой:
где волнистая линия обозначает присоединение к линкеру (L).
12. Меченное цирконием, сконструированное антитело с цистеиновыми заменами по п.1, выбранное из структур:
где X выбран из:
Y выбран из:
1
6
R независимо представляет собой H или C-C алкил; и n представляет собой 1-12.
13. Меченное десферриоксамином, сконструированное антитело с цистеиновыми заменами, содержащее сконструированное антитело с цистеиновыми заменами (Ab), конъюгированное через свободную аминокислоту цистеин с линкером (L) и группой десферриоксамина (Df), обладающее формулой II:
где L-Df выбран из:
где волнистая линия обозначает присоединение к антителу (Ab); и
p представляет собой 1-4.
14. Реагент для мечения десферриоксамином, выбранный из структур:
где R выбран из:
15. Способ получения меченного десферриоксамином, сконструированного антитела с цистеиновыми заменами, содержащего сконструированное антитело с цистеиновыми заменами (Ab), конъюгированное через свободную аминокислоту цистеин с линкером (L) и группой десферриоксамина (Df), обладающего формулой II:
где L-Df выбран из:
где волнистая линия обозначает присоединение к антителу (Ab); и
p представляет собой 1-4;
где способ включает реакцию композиции, выбранной из структур:
где R выбран из:
со сконструированным антителом с цистеиновыми заменами, имеющим одну или несколько свободных цистеиновых аминокислот, посредством чего получают меченное десферриоксамином, сконструированное антитело с цистеиновыми заменами.
16. Способ получения меченного цирконием, сконструированного антитела с цистеиновыми заменами, содержащего сконструированное антитело с цистеиновыми заменами (Ab), конъюгированное через свободную аминокислоту цистеин с линкером (L) и комплексом циркония (Z), обладающего формулой I:
где p представляет собой 1-4;
где способ включает образование комплекса циркониевого реагента с меченным десферриоксамином, сконструированным антителом с цистеиновыми заменами, содержащим сконструированное антитело с цистеиновыми заменами (Ab), конъюгированное через свободную аминокислоту цистеин с линкером (L) и группой десферриоксамина (Df), обладающим формулой II:
где L-Df выбран из:
где волнистая линия обозначает присоединение к антителу (Ab); и
p представляет собой 1-4;
посредством чего получают меченное десферриоксамином, сконструированное антитело с цистеиновыми заменами.
89
17. Способ по п.16, где циркониевый реагент представляет собой оксалат циркония.
18. Способ получения изображений, включающий:
введение меченного цирконием, сконструированного антитела с цистеиновыми заменами животному; и
in vivo
детекцию  присутствия меченного цирконием, сконструированного антитела с цистеиновыми заменами посредством получения изображений,
где меченное цирконием, сконструированное антитело с цистеиновыми заменами содержит сконструированное антитело с цистеиновыми заменами (Ab), имеющее одну или несколько свободных цистеиновых аминокислот, конъюгированных с одним или несколькими комплексами циркония (Z) через линкер (L), и обладающее формулой I:
где p представляет собой 1-4.
19. Способ по п.18, где Z содержит цирконий в комплексе с десферриоксамином B.
20. Способ по п.18, где меченное цирконием, сконструированное антитело с цистеиновыми заменами связывается с антигеном.
21. Способ по п.18, где животное представляет собой модель ксенотрансплантата опухоли на мышах.