МОНОКЛОНАЛЬНЫЕ АНТИТЕЛА, СВЯЗЫВАЮЩИЕСЯ С ВИРУСОМ ПТИЧЬЕГО ГРИППА

1. Моноклональное антитело, которое специфически связывается с гемагглютинином вируса гриппа птиц подтипа Н5, отличающееся тем, что оно содержит вариабельную область тяжелой цепи, выбранную из группы, состоящей из:
(i) вариабельной области тяжелой цепи, содержащей одну или более областей CDR, имеющих аминокислотные последовательности, представленные в SEQ ID NO: 28-30;
(ii) вариабельной области тяжелой цепи, содержащей одну или более областей CDR, имеющих аминокислотные последовательности, представленные в SEQ ID NO: 34-36;
(iii) вариабельной области тяжелой цепи, содержащей одну или более областей CDR, имеющих аминокислотные последовательности, представленные в SEQ ID NO: 40-42;
(iv) вариабельной области тяжелой цепи, содержащей одну или более областей CDR, имеющих аминокислотные последовательности, представленные в SEQ ID NO: 46-48;
(v) вариабельной области тяжелой цепи, содержащей одну или более областей CDR, имеющих аминокислотные последовательности, представленные в SEQ ID NO: 52-54; и
(vi) вариабельной области тяжелой цепи, содержащей одну или более областей CDR, имеющих аминокислотные последовательности, представленные в SEQ ID NO: 58-60.
2. Моноклональное антитело по п.1, отличающееся тем, что вариабельная область тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 21 и SEQ ID NO: 25.
3. Моноклональное антитело по п.1, дополнительно содержащее вариабельную область легкой цепи, выбранную из группы, состоящей из:
(i) вариабельной области легкой цепи, содержащей одну или более областей CDR, имеющих аминокислотные последовательности, представленные в SEQ ID NO: 31-33;
(ii) вариабельной области легкой цепи, содержащей одну или более областей CDR, имеющих аминокислотные последовательности, представленные в SEQ ID NO: 37-39;
(iii) вариабельной области легкой цепи, содержащей одну или более областей CDR, имеющих аминокислотные последовательности, представленные в SEQ ID NO: 43-45;
(iv) вариабельной области легкой цепи, содержащей одну или более областей CDR, имеющих аминокислотные последовательности, представленные в SEQ ID NO: 49-51; и
(v) вариабельной области легкой цепи, содержащей одну или более областей CDR, имеющих аминокислотные последовательности, представленные в SEQ ID NO: 61-63.
4. Моноклональное антитело по п.3, отличающееся тем, что указанная вариабельная область легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 19 и SEQ ID NO: 27.
5. Моноклональное антитело по п.2, дополнительно содержащее вариабельную область легкой цепи, выбранную из группы, состоящей из:
(i) вариабельной области легкой цепи, содержащей одну или более областей CDR, имеющих аминокислотные последовательности, представленные в SEQ ID NO: 31-33;
(ii) вариабельной области легкой цепи, содержащей одну или более областей CDR, имеющих аминокислотные последовательности, представленные в SEQ ID NO: 37-39;
(iii) вариабельной области легкой цепи, содержащей одну или более областей CDR, имеющих аминокислотные последовательности, представленные в SEQ ID NO: 43-45;
(iv) вариабельной области легкой цепи, содержащей одну или более областей CDR, имеющих аминокислотные последовательности, представленные в SEQ ID NO: 49-51; и
(v) вариабельной области легкой цепи, содержащей одну или более областей CDR, имеющих аминокислотные последовательности, представленные в SEQ ID NO: 61-63.
6. Моноклональное антитело по п.5, отличающееся тем, что указанная вариабельная область легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 19 и SEQ ID NO: 27.
2
7. Моноклональное антитело по п.6, отличающееся тем, что оно представляет собой Fab, Fab', F(ab') или Fv.
2
8. Моноклональное антитело по п.1, отличающееся тем, что оно представляет собой Fab, Fab', F(ab') или Fv.
D
-5
9. Моноклональное антитело по п.1, отличающееся тем, что оно связывается с гемагглютинином вируса гриппа птиц подтипа Н5 с K менее 1×10 М.
D
-6
10. Моноклональное антитело по п.1, отличающееся тем, что оно связывается с гемагглютинином вируса гриппа птиц подтипа Н5 с K менее 1×10 М.
11. Моноклональное антитело по п.1, отличающееся тем, что оно содержит не-CDR области антитела отличного от мыши вида.
12. Моноклональное антитело по п.11, отличающееся тем, что указанные не-CDR области являются областями человеческого антитела.
13. Моноклональное антитело по п.12, отличающееся тем, что указанные не-CDR области содержат одну или более аминокислотных замен из мышиного антитела.
14. Моноклональное антитело, которое специфически связывается с гемагглютинином вируса гриппа птиц подтипа Н5, отличающееся тем, что его выбирают из группы, состоящей из:
(i) моноклонального антитела, продуцируемого гибридомной клеточной линией 8Н5 (депонированной под No. ССТСС-С200607);
(ii) моноклонального антитела, продуцируемого гибридомной клеточной линией 3С8 (депонированной под No. CCTCC-C200605);
(iii) моноклонального антитела, продуцируемого гибридомной клеточной линией 10F7 (депонированной под No. CCTCC-C200608);
(iv) моноклонального антитела, продуцируемого гибридомной клеточной линией 4D1 (депонированной под No. CCTCC-C200606);
(v) моноклонального антитела, продуцируемого гибридомной клеточной линией 3G4 (депонированной под No. CCTCC-C200604); и
(vi) моноклонального антитела, продуцируемого гибридомной клеточной линией 2F2 (депонированной под No. CCTCC-C200424).
15. Гибридомная клеточная линия, выбранная из группы, состоящей из:
(i) гибридомной клеточной линии 8Н5 (депонированной под No. ССТСС-С200607);
(ii) гибридомной клеточной линии ЗС8 (депонированной под No. CCTCC-С200605);
(iii) гибридомной клеточной линии 10F7 (депонированной под No. CCTCC-C200608);
(iv) гибридомной клеточной линии 4D1 (депонированной под No. CCTCC-C200606);
(v) гибридомной клеточной линии 3G4 (депонированной под No. CCTCC-C200604); и
(vi) гибридомной клеточной линии 2F2 (депонированной под No. CCTCC-C200424).
16. Моноклональное антитело, которое специфически связывается с гемагглютинином вируса гриппа птиц подтипа Н5, отличающееся тем, что оно способно блокировать, по меньшей мере, на 50% гемагглютинин-связывающую активность моноклонального антитела, выбранного из группы, состоящей из:
(i) моноклонального антитела, продуцируемого гибридомной клеточной линией 8Н5 (депонированной под No. ССТСС- С200607);
(ii) моноклонального антитела, продуцируемого гибридомной клеточной линией 3С8 (депонированной под No. CCTCC-C200605);
(iii) моноклонального антитела, продуцируемого гибридомной клеточной линией 10F7 (депонированной под No. CCTCC-C200608);
(iv) моноклонального антитела, продуцируемого гибридомной клеточной линией 4D1 (депонированной под No. CCTCC-C200606);
(v) моноклонального антитела, продуцируемого гибридомной клеточной линией 3G4 (депонированной под No. CCTCC-C200604); и
(vi) моноклонального антитела, продуцируемого гибридомной клеточной линией 2F2 (депонированной под No. CCTCC-C200424)/
17. Моноклональное антитело по п.16, отличающееся тем, что оно способно блокировать гемагглютинин-связывающую активность, по меньшей мере, на 70%.
18. Моноклональное антитело по п.17, отличающееся тем, что оно способно блокировать гемагглютинин-связывающую активность, по меньшей мере, на 90%.
19. Выделенная нуклеотидная молекула, которая содержит нуклеотидную последовательность, кодирующую вариабельную область тяжелой цепи антитела, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из:
(j) SEQ ID NO: 28-30;
(ii) SEQ ID NO: 34-36;
(iii) SEQ ID NO: 40-42;
(iv) SEQ ID NO: 46-48;
(v) SEQ ID NO: 52-54; и
(vi) SEQ ID NO: 58-60.
20. Выделенная нуклеотидная молекула по п.19, отличающаяся тем, что вариабельная область тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из: SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 21 и SEQ ID NO: 25.
21. Выделенная нуклеотидная молекула по п.20, которая содержит нуклеотидную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 20 и SEQ ID NO: 24.
22. Вектор экспрессии, содержащий нуклеотидную молекулу по п.19.
23. Клетка-хозяин, содержащая вектор экспрессии по п.22.
24. Выделенная нуклеотидная молекула, которая содержит нуклеотидную последовательность, кодирующую вариабельную область легкой цепи антитела, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из:
(i) SEQ ID NO: 31-33;
(ii) SEQ ID NO: 37-39;
(iii) SEQ ID NO: 43-45;
(iv) SEQ ID NO: 49-51; и
(v) SEQ ID NO: 61-63.
25. Выделенная нуклеотидная молекула по п.24, отличающаяся тем, что вариабельная область легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из: SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 19 и SEQ ID NO: 27.
26. Выделенная нуклеотидная молекула по п.25, которая содержит нуклеотидную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 18 и SEQ ID NO: 26.
27. Вектор экспрессии, содержащий нуклеотидную молекулу по п.26.
28. Клетка-хозяин, содержащая вектор экспрессии по п.27.
29. Способ обнаружения вируса гриппа птиц подтипа Н5 в образце, включающий стадии:
а) контактирование образца с моноклональным антителом по п.1; и
б) детектирование реакции моноклонального антитела с вирусом.
30. Способ по п.29, отличающийся тем, что моноклональное антитело связано с твердой фазой.
31. Способ по п.30, отличающийся тем, что твердую фазу выбирают из группы, состоящей из микротитационных планшетов, магнитных частиц, латексных частиц и нитроцеллюлозных мембран.
32. Способ по п.30, отличающийся тем, что моноклональное антитело связывается с твердой фазой в такой ориентации, которая повышает эффективность связывания моноклонального антитела с образцом.
33. Способ по п.32, отличающийся тем, что моноклональное антитело связывается с твердой фазой через константную область.
34. Способ по п.29, отличающийся тем, что реакцию детектируют с помощью цветного ферментного теста.
35. Способ по п.29, отличающийся тем, что реакцию детектируют флуоресцентным анализом.
36. Способ по п.29, отличающийся тем, что реакцию детектируют хемилюминесцентным анализом.
2
37. Способ по п.29, отличающийся тем, что моноклональное антитело представляет собой Fab, Fab', F(ab') или Fv.
38. Способ по п.29, отличающийся тем, что образец представляет собой биологический образец, взятый у птицы или человека.
39. Фармацевтическая композиция, содержащая фармацевтически приемлемую соль моноклонального антитела по п.1.
40. Фармацевтическая композиция, содержащая фармацевтически приемлемую соль одного или более моноклональных антител, выбранных из группы, состоящей из:
(i) моноклонального антитела, продуцируемого гибридомной клеточной линией 8Н5 (депонированной под No. ССТСС-С200607);
(ii) моноклонального антитела, продуцируемого гибридомной клеточной линией 3С8 (депонированной под No. CCTCC-C200605);
(iii) моноклонального антитела, продуцируемого гибридомной клеточной линией 10F7 (депонированной под No. CCTCC-C200608);
(iv) моноклонального антитела, продуцируемого гибридомной клеточной линией 4D1 (депонированной под No. CCTCC-C200606);
(v) моноклонального антитела, продуцируемого гибридомной клеточной линией 3G4 (депонированной под No. CCTCC-C200604); и
(vi) моноклонального антитела, продуцируемого гибридомной клеточной линией 2F2 (депонированной под No. ССТСС-С200424).
41. Фармацевтическая композиция по п.40, дополнительно содержащая фармацевтически приемлемую соль другого антивирусного агента.
2
42. Фармацевтическая композиция по п.41, отличающаяся тем, что моноклональное антитело представляет собой Fab, Fab', F(ab') или Fv.
43. Способ предупреждения или лечения заболевания, обусловленного инфицированием субъекта вирусом гриппа птиц, заключающийся во введении субъекту фармацевтически эффективного количества фармацевтической композиции по п.39.
44. Композиция для детектирования вируса гриппа птиц в образце, содержащая моноклональное антитело по п.1, связанное с твердофазным субстратом (подложкой).
2
45. Композиция по п.44, отличающаяся тем, что моноклональное антитело представляет собой Fab, Fab', F(ab') или Fv.
46. Композиция по п.44, отличающаяся тем, что моноклональное антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи, имеющую последовательность, выбранную из группы, состоящей из: SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 17. SEQ ID NO: 21 и SEQ ID NO: 25.
47. Композиция по п.46, отличающаяся тем, что моноклональное антитело дополнительно содержит вариабельную область легкой цепи, имеющую последовательность, выбранную из группы, состоящей из: SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO; 12, SEQ ID NO: 19 и SEQ ID NO: 27.
48. Композиция по п.44, отличающаяся тем, что твердофазный субстрат выбирают из группы, состоящей из микротитационных планшетов, магнитных частиц, латексных частиц и нитроцеллюлозных мембран.
49. Композиция по п.44, отличающаяся тем, что твердофазный субстрат представляет собой тест-стрип.
50. Композиция по п.49, отличающаяся тем, что тест-стрип имеет, по меньшей мере, одну область тестирования и одну область контроля.
51. Композиция по п.44, отличающаяся тем, что моноклональное антитело связывается с твердофазным субстратом в такой ориентации, которая повышает эффективность связывания моноклонального антитела с образцом.
52. Устройство для детектирования вируса гриппа птиц в образце, содержащее твердофазный субстрат, включающий ряд компартментов, отличающийся тем, что на один или более указанных компартментов нанесено моноклональное антитело по п.1.
53. Устройство по п.52, отличающееся тем, что на один или более компартментов нанесен связывающий агент, отличный от моноклонального антитела, который специфически связывается с гемагглютинином вируса гриппа птиц подтипа Н5.
54. Устройство по п.53, отличающееся тем, что связывающий агент представляет собой антитело, которое специфически связывается с вирусом гриппа птиц подтипа H1, Н3, Н7 или Н9.
55. Устройство по п.52, дополнительно включающее автоматический детектор, который может обнаруживать связывание моноклонального антитела с гемагглютинином вируса гриппа птиц подтипа Н5.
56. Набор для обнаружения вируса гриппа птиц в образце, содержащий моноклональное антитело по п.1, связанное с твердофазным субстратом, и меченное детектируемой меткой вторичное моноклональное антитело.
57. Набор по п.56, отличающийся тем, что вторичное моноклональное антитело может специфически связывать вирус гриппа птиц.
58. Набор по п.56, отличающийся тем, что вторичное моноклональное антитело может специфически связываться с гемагглютинином вируса гриппа птиц.
59. Набор по п.56, дополнительно содержащий эталоны для контроля.
60. Пептид, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 64-68, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94 и 96.
61. Пептид, имеющий аминокислотную последовательность, кодируемую нуклеотидной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 75, 77, 79, 81, 83, 85, 87, 89, 91, 93, 95 и 97.
62. Пептид по п.60 или 61, отличающийся тем, что он специфически связывается с 8Н5 mAb.
63. Пептид, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 70-73.
64. Пептид по п.63, отличающийся тем, что он специфически связывается с 3С8 mAb.