СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СПЕЦИФИЧНОСТИ АНТИТЕЛ

1. Способ in vitro определения того, содержит ли образец двухвалентного антитела какое-либо биспецифическое антитело, которое имеет вариабельную область 1 (VR1) и вариабельную область 2 (VR2), включающий:
а) добавление антигена, специфически связывающегося с VR1, в котором половина антигена несет первый обнаруживаемый маркер (M1), а другая половина несет второй обнаруживаемый маркер (М2); и
б) определение, содержит ли образец антитело, с которым специфически связываются и M1, и М2;
при этом считается, что образец содержит биспецифическое антитело, если обнаруживают антитело, с которым связаны и M1, и М2.
2. Способ in vitro количественного определения содержания биспецифического двухвалентного антитела, которое имеет вариабельную область 1 (VR1) и вариабельную область 2 (VR2), в образце, включающий:
а) получение референс-образца, в котором антитело является моноспецифическим и имеет только VR1, и тестируемый образец, в котором содержание биспецифического антитела неизвестно;
б) добавление к каждому из образцов специфически связывающегося с VR1 антигена, в котором половина антигена несет первый обнаруживаемый маркер (M1), а вторая половина несет второй обнаруживаемый маркер (М2); и
в) определение в каждом из образцов количества антитела, с которым специфически связаны и M1, и М2, и
г) сравнение количество M1 или М2 в референс-образце и в тестируемом образце.
3. Способ in vitro количественной оценки обмена Fab-плеча двухвалентного моноспецифического антитела (Ab1), включающий:
а) инкубацию антитела (Ab1) по меньшей мере со вторым антителом в условиях, в которых может происходить указанный обмен Fab-плечей; и
б) количественная оценка содержания образовавшегося двухвалентного антитела согласно способу по п. 2.
4. Способ по п. 1, в котором подлежащее анализу двухвалентное антитело представляет собой IgG4.
5. Способ по п. 2, в котором подлежащее анализу двухвалентное антитело представляет собой IgG4.
6. Способ по п. 3, в котором подлежащее анализу двухвалентное антитело представляет собой IgG4.
7. Способ по п. 2, в котором определение содержания антитела, с которым связаны и M1, и М2, осуществляют, давая возможность M1 связываться с матрицей и измеряя количество М2, связанного с антителом и захваченного матрицей.
8. Способ по п. 7, в котором М2 представляет собой электрохемилюминесцентный маркер.
9. Способ по п. 3, в котором стадию а) осуществляют в плазме крови.
10. Способ по п. 9, в котором в плазме крови истощают эндогенные IgG4 и в котором добавляют антитело (Ab1) и второе антитело.
11. Способ по п. 3, в котором стадию а) осуществляют в присутствии восстановителя, выбранного из глутатиона, меркаптоэтанола, дитиотреитола или трис(2-карбоксиэтил)фосфина и их комбинаций.
12. Способ по одному из пп. 3, 4 и 6-9, включающий предупреждение обмена Fab-плечей после осуществления стадии а) путем инактивации тиольных групп.
13. Способ по п. 12, в котором указанную инактивацию осуществляют путем добавления алкилирующего агента.
14. Способ по п. 13, в котором указанный алкилирующий агент выбирают из N-этилмалеимида, йодацетамида, йодуксусной кислоты и их комбинаций.
15. Способ по п. 3, дополнительно включающий осуществление другую количественную оценку, включающий:
а2) инкубацию антитела (Ab1) со вторым антителом (Ab2) в условиях, в которых может происходить указанный обмен Fab-плечей;
б2) получение референс-образца, в котором антитело является моноспецифическим и имеет только VR1, и тестируемый образец, полученный при осуществлении стадии а2);
в2) добавление смеси молекул антигенов, в которой 50% представляют собой антиген 1 (Ag1), специфический в отношении Ab1 и связанный с M1, а 50% представляют собой антиген 2 (Ag2), специфический в отношении Ab2 и связанный с М2; и
г2) определение количества антитела, специфически связанного и с M1, и с М2.
16. Способ по п. 15, в котором увеличение М2-сигнала по сравнению с сигналом в референс-образце на стадии в2) коррелирует с уменьшением М2-сигнала, измеренного согласно п. 5.
17. Способ по п. 3 или 13, в котором референс-образец получают путем осуществления способа, в котором стадию а) осуществляют в условиях, в которых обмен Fab-плечей не может происходить.