АНАЛОГИ ОЛИГОНУКЛЕОТИДОВ КАК СРЕДСТВА КОРРЕКЦИИ СПЛАЙСИНГА ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ МЫШЕЧНОЙ ДИСТРОФИИ ДЮШЕНА

1. Производное олигонуклеотида, содержащее одну или более фосфорамидных групп, соответствующих общей формуле (I):
(I)
1
где заместители R и R независимо являются остатками нуклеозидов или модифицированных нуклеозидов, входящих в состав олигонуклеотида, либо один из них является остатком нуклеозида или олигонуклеотида, а другой является линкером к полимерному носителю, опционально замещенным органическим радикалом, атомом водорода либо представляет собой соль соответствующей амидофосфорной кислоты;
2
R может быть атомом водорода Н или опционально замещенным органическим радикалом.
2
3
3
3
4
3
4
2. Производное олигонуклеотида по п. 1, отличающееся тем, что органический радикал R выбирается из группы, содержащей в том числе алкилазидную группу, соответствующие защитные группы, ацильную группу –СОR, алкоксикарбонильную группу –СООR, опционально 9-флуоренилметоксикарбонильную группу (Fmoc), и карбамоильную группу –СОNRR, где R и R могут быть независимо атомом водорода или опционально замещенным органическим радикалом, в том числе защитной группой.
2
3
3. Способ получения производных олигонуклеотидов по п. 1 , включающий взаимодействие азида RN, с защищенным фосфитом (II),
(II)
3
где R является защитной группой, опционально 2-цианэтильной группой,
о
3
при котором способе фосфит (II) иммобилизован на соответствующем полимерном носителе, используемом для твердофазного синтеза олигонуклеотидов, при температуре от 15 до 80С в течение от 1 мин до 24 ч до превращения указанного фосфита (II) в соответствующее защищенное производное олигонуклеотида по п. 1, и последующее удаление одной или более защитных групп, включая R, с получением незащищенного модифицированного олигонуклеотида, содержащего одну или более фосфорамидных групп (I).
4. Способ по п. 3, отличающийся тем, что проводится выделение и очистка полученного модифицированного олигонуклеотида при помощи обычных хроматографических или электрофоретических методов выделения и очистки олигонуклеотидов.
5. Способ по п. 3, отличающийся тем, что используется метод твердофазного синтеза олигонуклеотидов с использованием автоматического синтезатора.
2
3
6. Способ по п. 3, отличающийся тем, что реакция указанного фосфита (II) с азидом RN проводится в соответствующем органическом растворителе или смеси двух или более растворителей.
7. Способ по п. 6, отличающийся тем, что органический растворитель для реакции выбирается из группы, содержащей следующие растворители: ацетонитрил, ацетон, тетрагидрофуран (ТГФ), 1,4-диоксан, 1,2-диметоксиэтан, диметиловый эфир диэтиленгликоля (диглим), ДМФА, N,N-диметилацетамид (ДМА), N-метилпирролидон (NMP), тетраметилмочевина, гексаметилфосфорамид, сульфолан, этилацетат, 1,3-диметил-2-имидазолидинон, этиловый эфир, бензол или толуол.
8. Способ по п. 6, отличающийся тем, что концентрация указанного азида находится в пределах от 0,001 М до 3 М.
9. Способ по пп. 3, отличающийся тем, что при реакции фосфита с азидом дополнительно прибавляется силилирующий агент или смесь двух или более силилирующих агентов.
10. Способ по п. 9, отличающийся тем, что силилирующий агент выбирается из группы, содержащей следующие силилирующие агенты: N,O-бис(триметилсилил)ацетамид (BSA), N,O-бис(триметилсилил)трифторацетамид (BSTFA), триметилхлорсилан, триметилбромсилан, триметилиодсилан, гексаметилдисилазан, триметилсилилтрифторметансульфонат (TMSOTf), триэтилхлорсилан, трет-бутилдиметилхлорсилан, диметилдихлорсилан, дифенилдихлорсилан.
11. Способ по п. 9, отличающийся тем, что концентрация силилирующего агента или суммарная концентрация смеси двух или более силилирующих агентов находится в интервале от 0,1% до 30% по объему.
12. Способ по п. 3, отличающийся тем, что при реакции фосфита с азидом дополнительно прибавляется органическое основание.
13. Способ по п. 12, отличающийся тем, что указанное основание выбирается из группы, содержащей триэтиламин, N,N-диизопропилэтиламин (DIEA), N-метилморфолин, N-этилморфолин, N-метилпирролидин, N-метилпиперидин, трибутиламин, 2,6-лутидин, 2,4,6-коллидин, 1,4-диазабицикло[2.2.2]октан (DABCO), N-метилимидазол (NMI), 4-диметиламинопиридин (DMAP), 1,8-диазабицикло[5.4.0]ундецен-7 (DBU), 1,5-диазабицикло[4.3.0]нонен-5 (DBN), 1,8-бис-диметиламинонафталин, 1,5,7-триазабицикло[4.4.0]децен-5 (TBD), 7-метил-1,5,7-триазабицикло[4.4.0]децен-5 (MTBD), 1,1,3,3-тетраметилгуанидин (TMG), 2-трет-бутил-1,1,3,3-тетраметилгуанидин, фосфазеновое основание.
14. Способ по п. 12, отличающийся тем, что концентрация указанного основания находится в интервале от 0,1% до 30% по объему.