Влияние L-лизина на развитие гуморального иммунного ответа и активность нейтрофилов в исходном состоянии и в условиях эмоционально-болевого стресса

ОВП (выше цифр контроля на 16,8% (р<0,05)), начиная с 3-х суток наблюдения. С этого же времени зафиксированы снижение проницаемости тканевых структур кишечника для воды на 24,928,3% (р<0,05), для белка - на 23,0-23,6% (р<0,05) и увеличение КДК на 21,6-28,9% (р<0,05) относительно данных группы контроля (рис.1). Такие изменения функционального состояния сопровождались снижением интенсивности процессовПОЛ, что проявлялось снижением содержания ДК, ТК, МДА в ткани кишечника на 19,6-23,7, 20,8-21,9, 13,6-17,7% (р<0,05) соответственно и активности ФА2 - на 16,1-19,6% (р<0,05) по отношению к контрольным данным. Активность СОД была выше контроля на 21,5% (р<0,05). Тенденция к нормализации этих показателей наблюдалась и в плазме крови. На фоне терапии острого гнойнофибринозного перитонита нарушения функциональных параметров кишечника были менее выраженными в сравнении с контролем уже на начальных этапах лечения. Отмечалось увеличение КДК на 30,9-74,7%, ОВП - на 17,7-22,9% (р<0,05). Кровенаполнение тканей тонкой кишки уменьшалось на 16,3-21,5%, проницаемость мембран для белка - на 18,5-32,0%, для воды - на 17,434,3% (р<0,05) относительно контрольной группы.

Также с первых дней наблюдения зафиксировано меньшее содержание продуктов ПОЛ в плазме крови и в ткани кишечника. По сравнению с контрольными данными в опытной группе уровень ДК понижался на 23,0-30,4% и 23,9-26,3% (р<0,05), ТК - на 27,1-34,6% и 25,0-28,3% (р<0,05), МДА - на 19, -32,6% и 11,427,1% (р<0,05) соответственно (р<0,05) для плазмы крови и ткани кишечника. Изменения динамики рассматриваемых ферментов: отмечалось снижение активности ФА2 на 29,2-40,4% (р<0,05) и 17,0-23,9% (р<0,05) при повышении активности СОД на 46,367,6% (р<0,05) и 19,8-36,5% (р<0,05) соответственно относительно контрольных цифр при определении этих показателей в плазме крови и ткани кишечника (рис .2).__________________________

-Фосфолипаза А2

Фосфолипаз а А2

СОД

.СОД

Рис. 2. Динамика активности ФА2 и СОД в ткани кишечника при остром перитоните на фоне комбинированной терапии. Примечание: К - контрольная группа, О - опытная группа

Включение в комплексную терапию острого перитонита внутрисосудистого лазерного облучения крови или эмоксипина позволяет улучшить функциональные и метаболические показатели кишечника, тем самым снизить негативное воздействие на организм энтеральной недостаточности. Но добиться этого удается только на поздних этапах послеоперационного наблюдения, что значительно снижает практическую ценность подобной терапии. Положительный ранний эффект достигается при использовании лазерной и антиоксидантной терапии. Это проявилось в восстановлении транскапиллярного обмена, биоэнергетики, снижении ПОЛ и ФА2, повышении антиоксидантного потенциала кишечника. Применение терапии сопровождается достаточно высоким энтеропротективным эффектом, что выражается в уменьшении мембранодестабилизирующих процессов, улучшении трофики и биоэнергетики тканевых структур органа.

Литература

1. Алиев С. и др. // Вест. интенсив. тер.- 2003.- № 2.- С. 20.

2. ВладимировЮ.и др// Биофиз.-2003.- Т.48, Вып.5- С. 950.

3. Власов А.П. и др. Роль нарушений липидного гомеостаза в патогенезе перитонита.- Саранск: Мордов. ун-т, 2000.- 208 с.

4. Ерюхин И.А., Шашков Б.В. Эндотоксикоз в хирургической практике.- СПб.: Логос, 1995.- 304 с.

5. Рябов Г.и др. // Вестн. интенсив. тер.- 2002.- № 4.- С. 4.

6. ТеплийВ.В. // Украинский мед. ж.- 2004.- № 5.- С.84-92.

УДК: 577.112.385.4:612.017.1-092.9

ВЛИЯНИЕ Ь-ЛИЗИНА НА РАЗВИТИЕ ГУМОРАЛЬНОГО ИММУННОГО ОТВЕТА И АКТИВНОСТЬ НЕЙТРОФИЛОВ В ИСХОДНОМ СОСТОЯНИИ И В УСЛОВИЯХ ЭМОЦИОНАЛЬНОБОЛЕВОГО СТРЕССА

И.И. БОБЫНЦЕВ, М.Е. ДОЛГИНЦЕВ, А.А. КРЮКОВ,

Л.А. СЕВЕРЬЯНОВА*

Введение. В настоящее время достаточно широко исследовано влияние целого ряда природных пептидных препаратов и их синтетических аналогов на специфические показатели иммунитета и неспецифические механизмы защиты. Большое значение в реализации функции этих пептидов имеет их первичная структура, обусловленная составом и последовательностью аминокислотных остатков. Некоторые аминокислоты, входящие в состав регуляторных пептидов, способны оказывать влияние на показатели специфической и неспецифической резистентности организма [1—3]. Однако малоизученным остается вопрос о влиянии ключевых аминокислотных остатков в условиях стрессорных воздействий. Отсутствуют данные об эффектах аминокислоты L-лизина, являющейся важным компонентом белков мозга [9-10], на реактивность иммунной системы в условиях стресса.

Цель исследования - изучение влияния аминокислоты L-лизина на эффекторные звенья иммунного ответа исходно и в состоянии вызванного эмоционально-болевого стресса.

Материалы и методы исследования. Эксперименты выполнены на 320 половозрелых крысах-самцах Вис-тар массой 180-280 г, полученных из питомника РАМН «Столбовая». Животные были разделены на подопытные группы по 10 особей каждая. Забой крыс производили путем передозировки эфирного наркоза.

L-лизин (фирма «ICN») растворяли в изотоническом растворе хлорида натрия и вводили внутрибрюшинно в дозах 0,15; 0,5; 1,5; 5; 15; 50; 150 и 450 мкг/кг при оценке гуморального иммунного ответа и в дозах 0,5; 5; 50 и 500 мкг/кг при исследовании активности нейтрофилов. Аминокислоту вводили 1 раз в сутки на протяжении 4-х дней после иммунизации крыс. Контрольные животные получали физиологический раствор из расчета 1 мл на 1 кг массы тела животного. Развитие гуморального иммунного ответа оценивали на 5-й день после иммунизации стандартным Т-зависимым антигеном (эритроциты барана) по количеству антителообразующих клеток (АОК) в селезенке и по количеству лимфоцитов в органе (клеточность). АОК определяли методом прямого локального гемолиза в камерах Каннигэма [7] в расчете на 106 кариоцитов и на селезенку. Активность кислородзависи-мых бактерицидных механизмов нейтрофилов оценивали в спонтанном и стимулированном зимозаном тесте восстановления нитросинего тетразолия (НСТ-тест) [5]. Определяли уровни спонтанной активности нейтрофилов (сНСТ), а также активности нейтрофилов, индуцированной опсонизированным зимозаном (о/зНСТ), и индуцированной неопсонизированным зимозаном (н/зНСТ). Показатели регистрировали фотометрически при помощи аппарата Multiskan MCC/340 (Labsystems, Финляндия). Результаты тестов отражали в mOD. На основании этих показателей определяли резервы функциональной активности клеток, которые оценивали по коэффициентам активации (КАо - отношение о/зНСТ к сНСТ и КАн - отношение н/зНСТ к сНСТ). Степень дискретности клеточной активности на стимулы отражал коэффициент опсонизации (КО - отношение о/зНСТ к н/зНСТ).

Фагоцитарную активность нейтрофилов исследовали после их инкубации в течение 30 мин при 37оС с латексом [7]. При этом фагоцитарное число (количество частиц латекса, захваченных одним нейтрофилом, ФЧ) и фагоцитарный индекс (процент нейтрофилов, участвующих в фагоцитозе, ФИ) определяли в

305041, г. Курск, ул. К. Маркса, 3, Курский государственный медицинский университет, кафедра патофизиологии. Тел.: (4712) 56-54-58

мазках, окрашенных по Романовскому - Гимзе. Опыты поставлены на животных, находившихся в исходном состоянии и в условиях эмоционально-болевого стресса, который создавали градуально нарастающим раздражением попарно сгруппированных крыс в камере с электрифицированным полом. Максимальное напряжение на решетке составляло 60 В. Проводили 2 воздействия подряд с интервалом 1 мин в одно и то же время 1 раз в сутки на протяжении 4-х дней после иммунизации животных через 15 мин после введения Ь-лизина или физиологического раствора [4]. Достоверность полученных результатов определяли по параметрическому ґ-критерию Стьюдента [8].

Результаты исследования. ¿-лизин в большинстве использованных доз оказывал существенное влияние на развитие гуморального иммунного ответа (рис. 1). Применение аминокислоты в дозах 15 мкг/кг и 50 мкг/кг вызывало наибольшее и достоверное увеличение количества АОК, как в расчете на 106 ядерных клеток селезенки (на 118-169%, р<0,01-0,001), так и в расчете на весь орган (на 176-182%, р<0,05-0,01). Подобные изменения наблюдались также в подопытной группе животных, получавших Ь-лизин в дозе 5 мкг/кг (на 71-91%, р<0,05-0,01) и при расчете на 106 кариоцитов, и в расчете на орган. Однако значительного изменения числа лимфоцитов в селезенке не отмечалось: оно или незначительно повышалось при введении Ь-лизина в дозах 15 и 50 мкг/кг (на 7-10%, р>0,05), или снижалось при дозе 5 мкг/кг (на 11%, р>0,05). Достоверное увеличение количества АОК в расчете на 106 кариоцитов селезенки было выявлено также при использовании препарата в дозах 5, 150 и 450 мкг/кг (на 74-147%, р<0,01-0,001). При этом статистически значимого изменения числа АОК в расчете на орган и клеточности селезенки не наблюдалось.

мкг/кг мкг/кг мкг/кг мкг/кг мкг/кг мкг/кг мкг/кг мкг/кг

Рис. 1. Изменения показателей гуморального иммунного ответа после введения Ь-лизина. Условные обозначения: столбики - изменение количества АОК из расчета на орган (заштрихованные), АОК на 106 (белые) и количества лимфоцитов в селезенке (темные) в процентах по отношению к их величинам в контрольных условиях, *- р<0,05—0,001

При использовании Ь-лизина в минимальных дозах - 0,5 и 1,5 мкг/кг, напротив, отмечалось достоверное снижение показателей интенсивности гуморального иммунного ответа -числа АОК на 106 кариоцитов селезенки (на 44%, р<0,01), а также в расчете на орган (на 39-40%, р<0,05). Подобная тенденция наблюдалась и у животных, получавших аминокислоту в дозе 0,15 мкг/кг. Статистически значимых изменений кле-точности селезенки не было выявлено. Сравнение показателей гуморального иммунного ответа контрольных групп интакт-ных животных и животных, подвергавшихся воздействию эмоционально-болевого стресса (рис. 2), показало уменьшение количества АОК в расчете на орган и на 106 кариоцитов (на 65%, р<0,01-0,001). При этом клеточность селезенки достоверно возрастала (на 57%, р<0,01). Полученные результаты согласуются с данными литературы о развитии иммуносупрессии под влиянием стресса [6].

Введение Ь-лизина во всех дозах в условиях эмоциональноболевого стресса вызывало статистически достоверное повышение показателей гуморального иммунного ответа по сравнению с их величинами в контрольной группе, и, таким образом, выраженность эффектов аминокислоты возрастала (рис. 2). При этом увеличение числа АОК в расчете на 106 ядерных клеток селезенки достигало 131-458% (р<0,01-0,001) и сочеталось с возрастанием этого показателя в расчете на орган - на 83-457%, (р<0,05-

0,001). Наибольший прирост количества АОК наблюдался при введении Ь-лизина в дозе 450 мкг/кг, превысивший контрольные величины почти в 4,5 раза. Что же касается изменений числа кариоцитов селезенки под влиянием препарата в условиях стрес-

са, то они были преимущественно однонаправленными (сниженными) и статистически достоверными при дозах аминокислоты 5, 50 и 150 мкг/кг. Степень снижения этого показателя достигала 25^8% (р<0,05-0,001). Использование Ь-лизина в дозах 0,15; 0,5 и 1,5 мкг/кг в условиях стресса вызывало противоположный по направленности эффект в сравнении с применением этих же доз аминокислоты у интактных животных.

Рис. 2. Изменения показателей гуморального иммунного ответа под действием эмоционально-болевого стресса и после введения L-лизина. Условные обозначения: до перерыва на линии абсцисс столбики - изменение показателей гуморального иммунного ответа при стрессе в процентах по отношению к контрольным величинам; после перерыва - изменение тех же показателей после введения L-лизина в условиях стресса в процентах по отношению к их величинам при стрессе без введения аминокислоты, * -p<0,05-0,001

Результаты исследования влияния L-лизина на показатели активности нейтрофилов представлены в табл. 1. Введение аминокислоты в минимальной использованной дозе 0,5 мкг/кг приводило к снижению всех показателей активности кислородзави-симых бактерицидных механизмов полиморфно-ядерных лейкоцитов, с достижением достоверных различий для н/зНСТ (на 15%, p<0,05). При этом отмечено снижение фагоцитарного индекса на 14% (p<0,05) и фагоцитарного числа на 25% (p<0,01). Применение L-лизина в дозе 5 мкг/кг вызывало статистически достоверное уменьшение фагоцитарного числа на 22% (p<0,05).

Таблица 1

Показатели (M±m) активности нейтрофилов после введения L-лизина в исходном состоянии

Группа Показатель Контроль 0,5 мкг/кг 5 мкг/кг 50 мкг/кг 500 мкг/кг

НСТ-спонтанный (шОБ) 1,19±0,13 0,92±0,09 1,14±0,09 1,76±0,08* 1,80±0,15*

НСТ- стимулированный опсонизирован- ным зимозаном (шОБ) 1,20±0,07 1,20±0,06 1,45±0,16 1,75±0,14* 1,75±0,16*

НСТ- стимулированный неопсонизирован- ным зимозаном (шОБ) 1,47±0,09 1,25±0,04* 1,38±0,10 1,72±0,12 1,97±0,12*

Коэффициент активации опсонизированный 1,10±0,11 1,47±0,21 1,35±0,17 1,04±0,11 1,01±0,09

Коэффициент активации неопсонизирован- ный 1,32±0,11 1,52±0,18 1,26±0,11 0,99±0,08* 1,15±0,09

Коэффициент опсонизации 0,83±0,05 0,98±0,07 1,08±0,13 1,10±0,15 0,92±0,11

Фагоцитарный индекс(%) 59,27±2,75 51,20±2,91* 57,60±2,0 57,80±2,22 66,0±4,47

Фагоцитарное число 1,23±0,08 0,92±0,08* 0,97±0,08* 1,15±0,08 1,38±0,11

Примечание: * - р<0,05-0,01 по сравнению с показателями контроля

С увеличением дозы препарата, напротив, отмечалось повышение активности нейтрофилов, которое проявилось в увеличении показателей сНСТ на 47% (p<0,01) и о/зНСТ на 47% (p<0,01) у подопытных животных, получавших L-лизин в дозе 50 мкг/кг. КАн при этом достоверно снижался (на 25%, p<0,05), что свидетельствует об уменьшении функционального резерва. Использование препарата в максимальной дозе 500 мкг/кг также вызывало стимуляцию активности кислородзависимых бактерии-цидных механизмов нейтрофилов: увеличение сНСТ на 51% (p<0,05), о/зНСТ на 46% (p<0,05) и н/зНСТ на 34% (p<0,05). Статистически достоверных изменений функционального резерва, фагоцитарного индекса и фагоцитарного числа не отмечалось.

Влияние Ь-лизина на активность нейтрофилов сохранялось и в условиях эмоционально-болевого стресса (табл. 2). При сравнении показателей контрольных групп нестрессированных и стрессированных животных отмечалось повышение у последних фагоцитарного индекса (на 21%, р<0,05). Применение Ь-лизина в дозе 5 мкг/кг вызывало статистически достоверное понижение сНСТ (на 32%, р<0,01). При этом отмечался существенный рост функционального резерва: КАо увеличился на 30% (р<0,05), а КАн - на 45% (р<0,01). Показатели фагоцитарного индекса и фагоцитарного числа у животных данной подопытной группы снижались на 23% и 41% (р<0,01) соответственно.

Показатели активности нейтрофилов после введения L-лизина при эмоциональноболевого стрессе

Группа Показатель Контроль без стресса Контроль 0,5 мкг/кг 5 мкг/кг 50 мкг/кг 500 мкг/кг

НСТ-спонтанный (шОБ) 1,19±0,13 1,07±0,08 0,96±0,11 0,72±0,05* 1,18±0,09 1,28±0,06*

НСТ- стимулированный опсонизирован- ным зимозаном (шОБ) 1,20±0,08 1,21±0,10 1,06±0,06 1,04±0,08 1,28±0,10 1,19±0,05

НСТ- стимулированный неопсонизиро- ванным зимозаном (шОБ) 1,47±0,09 1,34±0,09 1,32±0,07 1,31±0,06 1,40±0,14 1,34±0,06

Коэффициент активации опсонизирован- ный 1,10±0,11 1,15±0,08 1,25±0,17 1,49±0,13* 1,12±0,08 0,95±0,07

Коэффициент активации неопсонизиро- ванный 1,32±0,11 1,30±0,12 1,55±0,20 1,89±0,14* 1,23±0,12 1,07±0,07

Коэффициент опсонизации 0,83±0,05 0,90±0,04 0,82±0,06 0,80±0,05 0,96±0,09 0,90±0,04

Фагоцитарный индекс (%) 59,27±2,75 71,60±3,51+ 60,40±2,60* 55,20±2,98* 53,0±1,69* 59,55±3,18*

Фагоцитарное число 1,23±0,08 1,51±0,20 0,99±0,06* 0,89±0,07* 0,77±0,04* 0,96±0,06*

Ввыделяясь из состава белков и пептидов в естественных условиях, Ь-лизин может играть роль самостоятельного регулятора гуморального иммунного ответа.

Литература

1. Белокрылов Г.А. и др. // Бюл. эксперим. биол. и медицины.- 1991.- Т. 111, № 1.- С. 53-55.

2. Белокрылов Г А. и др. // Бюл. эксперим. биол. и медицины.- 1996.- Т. 121, № 5.- С. 509-512.

3. Белокрылов Г. А. и др. // Бюл. эксперим. биол. и медицины.- 1999.- Т. 127, № 6.- С. 674-676.

4. Бобынцев И.И., Северьянова Л А. // Бюл. эксперим. биол. и мед-ны.- 2002.- Т. 133, № 5.- С. 504-506.

5. Зинкин В.Ю., Годков М.А. // Клиническая лабораторная диагностика.- 2004.- № 8.- С. 26.

6. Кириллина ЕА. и др. // Иммунология.-1990.- № 3.- С. 68-70.

7. Иммунологические методы / Под ред. Г. Фримеля; Пер. с нем.- М., 1987.

8. Плохинский НА. Биометрия.- М.: МГУ,

1970.

9. Худоерков РМ. // Вестн. РАМН.- 2001.-№ 4.- С. 43-48.

10. Murthy S.N., Janardanasarma M.K. // Mol. Cell Biochem.- 1999.- Vol. 197.- № 1-2.- P. 13-23.

Таблица 2

УДК 616.3-008.1:616-053-058

ФАКТОРЫ РИСКА, ВЛИЯЮЩИЕ НА РАЗВИТИЕ ГАСТРОЭНТЕРОЛОГИЧЕСКОЙ ПАТОЛОГИИ В ГОРОДЕ КУРСКЕ

А.Е. АНТОНОВ, В.А. ЛАЗАРЕНКО,

Ю.П. НОВОМЛИНЕЦ, Б.С. СУКОВАТЫХ

Примечание:

- р<0,05 в сравнении со значениями нестрессированных животных, * - р<0,05 0,01 в сравнении с показателями контрольной группы.

Однако увеличение вводимой дозы аминокислоты приводило, как и у интактных крыс, к повышению активности кисло-родзависимых бактерицидных механизмов нейтрофилов. Возрастали значения сНСТ при использовании L-лизина в дозе 500 мкг/кг (на 20%, p<0,05). Фагоцитарный индекс и фагоцитарное число при этом снижались на 17-36% (p<0,05). Использование препарата в дозах 0,5 мкг/кг и 50 мкг/кг не вызывало достоверных изменений активности нейтрофилов в НСТ-тесте, однако приводило к уменьшению фагоцитарного индекса (на 16-26%, p<0,05-0,001) и фагоцитарного числа (на 34-49%, p<0,05-0,01). Полученные результаты свидетельствуют о стимулирующем влиянии L-лизина на развитие гуморального иммунного ответа как в исходных условиях - преимущественно, так и при эмоционально-болевом стрессе - особенно.

Наиболее выраженное действие препарата наблюдалось в подопытных группах стрессированных животных, у которых в достаточно широком диапазоне сравнительно малых доз L-лизин эффективно препятствовал развитию вызываемой стрессом иммуносупрессии, проявляя тем самым устойчивое стресслими-тирующее действие. Тот факт, что иммунотропное действие L-лизина не только сохранялось, но значительно усиливалось при стрессе, также позволяет сделать вывод об иммуностимулирующем эффекте препарата. Действие же аминокислоты на активность полиморфно-ядерных лейкоцитов оказалось не столь однозначным. Установлено дозозависимое влияние L-лизина на активность кислородзависимых бактерицидных механизмов ней-трофилов, а именно: ее ослабление при малых и усиление при использовании больших доз аминокислоты. В условиях эмоционально-болевого стресса это активирующее влияние L-лизина значительно уменьшалось, но возросло угнетающее действие на фагоцитарную активность нейтрофилов. Активирующее влияние L-лизина на развитие гуморального иммунного ответа является более выраженным и устойчивым к стрессу, чем его действие на эволюционно более ранние врожденные механизмы защиты.

Одним из актуальных вопросов хирургической и терапевтической гастроэнтерологии является изучение роли факторов риска в формировании патологии верхнего этажа брюшной полости. Важность этого вопроса определяется высокой заболеваемостью: в РФ за год впервые регистрируют 35,3 больных гастроэнтерологическими заболеваниями на 1000 населения [4], а в Курской области - 59,7. человек на тыс. населения в год [5]. Гастроэнтерологическая патология сопровождается значимыми показателями нетрудоспособности и инвалидизации в трудоспособном возрасте, ведет к снижению качества жизни [1-3].

Цель — изучение роли факторов риска в развитии гастроэнтерологической патологии на базе социально-гигиенического исследования. Задачи: изучение влияния отдельных факторов риска на развитие гастроэнтерологических заболеваний и присоединение сопутствующей патологии, тяжести течения гастроэнтерологических заболеваний у пациентов, объединенных по возрасту и полу; разработка рекомендаций по формированию здорового образа жизни при гастроэнтерологической патологии.

Объект исследования: 94 больных патологией верхнего этажа брюшной полости, находившихся на стационарном лечении за период с мая по сентябрь 2002 г. Из обследованных 94 больных с гастроэнтерологическими заболеваниями, женщин было 48, мужчин - 46, что составило соответственно 51,1 и 48,9%. Из этих пациентов в железнодорожной больнице находилось 27 человек, в гастроэнтерологическом отделении городской больницы № 6 - 51 человек, в гастроэнтерологическом отделении больницы скорой медицинской помощи - 16 человек. В процентном соотношении соответственно 28,7%, 54,3% и 17,0%. Сбор данных происходил путем выкопировки из карты стационарного больного и анкетирования пациентов. Для обработки данных была использована программа Microsoft Office Excel 1997.

Результаты. Средний возраст больных составил 52,13 лет, для мужчин - 43,06 лет, для женщин - 55,44 лет. Из этих пациентов терапевтическая помощь была проведена 77 больным (81,9%), хирургическая в сочетании с терапевтической - 17 (18,1%). По состоянию при поступлении больные были разделены следующим образом: поступили в удовлетворительном состоянии 77 (81,9%), в состоянии средней тяжести - 14 (14,9%), в

+