ПЕРГИДРОХИНОКСАЛИНОВЫЕ ПРОИЗВОДНЫЕ
PERHYDROQUINOXALINE DERIVATIVES

Настоящее изобретение относится к производным пергидрохиноксалина и лекарственным средствам, включающим производные пергидрохиноксалина.
Боль представляет собой неприятное, относящееся к восприятию или сенсорное явление, которое имеет жизненно важную защитную и сигнальную функцию и может сопровождаться фактическим или вероятным повреждением ткани. В зависимости от своего развития восприятие боли дифференцировано, например, в периферийную или центральную боль.
Организм воспринимает болевые сигналы посредством рецепторов в нервной системе, восприятие боли у пациента является субъективным.
Лечение боли имеет большое значение в медицине. Анальгетики обычно оказывают блокирующее опиоидные рецепторы действие. Обычные опиоиды, такие как морфин, представляют собой соответственно опиоидные анальгетики, которые, благодаря их мощному анальгетическому действию, часто используют в клинической терапии боли. Они избирательно активируют рецепторы типа μ. Однако, нежелательные побочные эффекты такой терапии боли представляют собой иногда значительные центрально-опосредованные побочные эффекты, такие как угнетение дыхания, рвота и брадикардия. Возможная психическая зависимость является дополнительным нежелательным фактором.
Принимая во внимание большое количество типов боли и заболеваний, связанных с болью, существует большая потребность в активных анальгетиках.
Целью настоящего изобретения было обеспечение средства, которое устраняет по меньшей мере один из вышеуказанных нежелательных факторов предшествующего уровня техники. В частности, целью настоящего изобретения было обеспечить новые соединения, которые могут быть использованы в качестве фармацевтических активных соединений, в частности, для борьбы с болью.
Эта цель достигается соединениями общей формулы (I), как показано ниже, и/или их рацематами, энантиомерами, диастереомерами, сольватами, гидратами и их фармацевтически приемлемыми солями и/или сложными эфирами:
где
R
выбран из группы, включающей H; C
-C
-алкил; C
-C
-циклоалкил; COO(C
-C
-алкил); C
-C
-алкоксикарбонил; C
-C
-оксокарбонил;
1
1
10
3
10
1
10
1
6
1
6
фенилC
-C
алкил, где фенильный радикал может быть замещен одной или несколькими одинаковыми или различными группами, выбранными из группы, включающей галоген, C
-C
-алкилокси, NH
, NH(C
-C
-алкил), N(C
-C
-алкил)
, OH, SO
(C
-C
-алкил), SO(C
-C
-алкил), CF
, CN, NO
, SO
N(C
-C
-алкил)
, SO
NH
, SO
NH(C
-C
-алкил), SO
NH(арил), SO
NH(фенил) и/или SO
NH(гетероарил);
1
6
1
6
2
1
5
1
5
2
2
1
5
1
5
3
2
2
1
5
2
2
2
2
1
5
2
2
2
C
-C
-ацил; C
-C
-циклоацил; фенилацил, где ацильный радикал представляет собой C
-C
-ацильный радикал, и фенильный радикал может быть замещен одной или несколькими одинаковыми или различными группами, выбранными из группы, включающей галоген, C
-C
-алкилокси, NH
, NH(C
-C
-алкил), N(C
-C
-алкил)
, OH, SO
(C
-C
-алкил), SO(C
-C
-алкил), CF
, CN, NO
, SO
N(C
-C
-алкил)
, SO
NH
, SO
NH(C
-C
-алкил), SO
NH(арил), SO
NH(фенил) и/или SO
NH(гетероарил);
1
10
3
10
1
6
1
6
2
1
5
1
5
2
2
1
5
1
5
3
2
2
1
5
2
2
2
2
1
5
2
2
2
моно-, би- или трициклический гетероарил, включающий один, два, три или четыре гетероатома, выбранных из группы, включающей N, O и/или S;
моно-, би- или трициклический гетероарилалкил, включающий один, два, три или четыре гетероатома, выбранных из группы, включающей N, O и/или S, где алкильный радикал представляет собой C
-C
алкильный радикал;
1
6
моно-, би- или трициклический гетероарилацил, включающий один, два, три или четыре гетероатома, выбранных из группы, включающей N, O и/или S, где ацильный радикал представляет собой C
-C
-ацильный радикал;
1
6
C(O)(C
-C
-алкил); C(O)N(C
-C
-алкил)
; C(O)(C
-C
-циклоалкил); COO(C
-C
-алкил); COO(арил); COO(C
-C
-циклоалкил);
1
10
1
10
2
3
10
1
10
3
10
C(O)COO(C
-C
-алкил); C(O)-(CH
)
-COOH, где q равно 0, 1, 2, 3 или 4; C(O)-(CH
)
-COO(C
-C
-алкил), где r равно 0, 1, 2, 3 или 4; C(O)-CH(NH
)-(CH
)
-COOH, где s равно 0, 1, 2, 3 или 4; C(O)-CH(NH
)-(CH
)
-COO(C
-C
-алкил), где t равно 0, 1, 2, 3 или 4; C(O)-(CH
)
-CH(NH
)-COOH, где u равно 0, 1, 2, 3 или 4 и/или C(O)-(CH
)
-CH(NH
)-COO(C
-C
-алкил), где v равно 0, 1, 2, 3 или 4;
1
10
2
q
2
r
1
10
2
2
s
2
2
t
1
10
2
u
2
2
v
2
1
10
R
, R
являются в каждом случае одинаковыми или независимыми друг от друга и выбраны из группы, включающей H; C
-C
-алкил; C
-C
-циклоалкил; фенилC
-C
алкил, и где фенильный радикал может быть замещен одной или несколькими одинаковыми или различными группами, выбранными из группы, включающей галоген, C
-C
-алкил, C
-C
-алкилокси, NH
, NH(C
-C
-алкил), N(C
-C
-алкил)
, OH, COOH, COO(C
-C
-алкил), CONH
, CONH(C
-C
-алкил), CON(C
-C
-алкил)
, SO
(C
-C
-алкил), SO
HN(C
-C
-алкил), CF
, CN и/или NO
,
2
3
1
10
3
10
1
6
1
5
1
4
2
1
5
1
5
2
1
10
2
1
10
1
10
2
2
1
5
2
1
5
3
2
или
R
и R
образуют, вместе с атомом азота, к которому они присоединены, насыщенный 3-8-членный N-гетероцикл, который может быть замещен одной или несколькими одинаковыми или различными группами, выбранными из группы, включающей OH, C
-C
-алкилокси, карбонильный атом кислорода, NH
, NH(C
-C
-алкил), N(C
-C
-алкил)
, COOH, COO(C
-C
-алкил), CONH
, CONH(C
-C
-алкил), CON(C
-C
-алкил)
, OPO
H
, OSO
H, SO
(C
-C
-алкил), SO
HN(C
-C
-алкил), CN, O-арилацетил, O-фенилацетил, арилацетокси и/или ацетилбензил, который может быть замещен двумя Cl группами;
2
3
1
4
2
1
5
1
5
2
1
10
2
1
10
1
10
2
3
2
3
2
1
5
2
1
5
A выбран из группы, включающей (CH
)
, где n равно 0, 1, 2, 3, 4, 5 или 6; C
-C
-алкилен, который может быть замещен по меньшей мере одним C
-C
-алкильным радикалом; O; S; NH и/или арил;
2
n
2
5
1
3
Z выбран из группы, включающей H; NH
; COOH; COO(C
-C
-алкил); CH(NH
)COOH; C
-C
-ацил; C
-C
-алкоксикарбонил; C
-C
-оксокарбонил;
2
1
5
2
1
6
1
6
1
6
фенил, который может быть замещен одной или несколькими одинаковыми или различными группами, выбранными из группы, включающей галоген, C
-C
-алкил, C
-C
-алкилокси, NH
, NH(C
-C
-алкил), N(C
-C
-алкил)
, OH, SO
(C
-C
-алкил), SO(C
-C
-алкил), CF
, CN, NO
, SO
N(C
-C
-алкил)
, SO
NH
, SO
NH(C
-C
-алкил), SO
NH(арил), SO
NH(фенил) и/или SO
NH(гетероарил);
1
5
1
5
2
1
5
1
5
2
2
1
5
1
5
3
2
2
1
5
2
2
2
2
1
5
2
2
2
моно-, би- или трициклический арил или гетероарил, включающий один, два, три или четыре гетероатома, выбранных из группы, включающей N, O и/или S, где арильная или гетероарильная группа может быть замещена одной или несколькими одинаковыми или различными группами, выбранными из группы, включающей галоген, C
-C
-алкилокси, NH
, NH(C
-C
-алкил), N(C
-C
-алкил)
, OH, SO
(C
-C
-алкил), SO(C
-C
-алкил), CF
, CN, NO
, SO
N(C
-C
-алкил)
, SO
NH
, SO
NH(C
-C
-алкил), SO
NH(арил), SO
NH(фенил) и/или SO
NH(гетероарил).
1
4
2
1
5
1
5
2
2
1
5
1
5
3
2
2
1
5
2
2
2
2
1
5
2
2
2
Неожиданно было обнаружено, что соединения по изобретению могут обладать анальгетическим действием. Конкретным преимуществом соединений по изобретению является то, что соединения могут обладать анальгетическим действием главным образом в периферийной системе.
Не будучи связанными с конкретной теорией, предполагается, что структура пергидрохиноксалинового кольца в соединениях по изобретению оказывает значительное влияние на полезные свойства соединений.
В контексте настоящего изобретения, если не указано иное, термин “гетероарил” обозначает моно-, би- или трициклический гетероарил, включающий один, два, три или четыре гетероатома, выбранных из группы, включающей N, O и/или S.
Предпочтительные гетероарильные радикалы выбраны из группы, включающей пиридинил, пиримидинил, пиразинил, триазолил, пиридазинил, 1,3,5-триазинил, хинолил, изохинолил, хинолинил, изохинолинил, хиноксалинил, имидазолил, пиразолил, бензимидазолил, бензооксазолил, бензотиазолил, тиазолил, оксазолил, изоксазолил, оксазолидинил, пирролил, карбазолил, индолил, изоиндолил, фурил, бензофурил, бензофуранил, 1,3-бензодиоксолил, тиенил и/или бензотиенил.
Особенно предпочтительные гетероарильные радикалы выбраны из группы, включающей пиридинил, тиазолил, оксазолил, изоксазолил, имидазолил, индолил, хинолил, изохинолил, бензофуранил, 1,3-бензодиоксолил, бензотиенил, бензимидазолил, бензооксазолил, бензотиазолил, фурил и/или тиенил.
Предпочтительными гетероарильными радикалами являются одноядерные гетероарильные радикалы. Особенно предпочтительными гетероарильными радикалами являются одноядерные гетероарильные радикалы, имеющие 4, 5 или 6 атомов углерода.
Другими предпочтительными гетероарильными радикалами являются одноядерные гетероарильные радикалы, в частности, выбранные из группы, содержащей 2-пиридил, 3-пиридил, 4-пиридил, фурил, тиенил, имидазолил, пиримидинил и/или оксазолил.
В контексте настоящего изобретения, для замещающего пиридина обозначение “пиридинил”, а также более употребляемая сокращенная форма “пиридил”, используются синонимично.
В предпочтительных вариантах осуществления радикала R
, гетероарилалкильная группа представляет собой -(CH
)
-гетероарил, где m равно 0, 1, 2, 3 или 4.
1
2
m
В дополнительных предпочтительных вариантах осуществления радикала R
, гетероарилацильная группа представляет собой -CO-(CH
)
-гетероарил, где p равно 0, 1, 2, 3 или 4.
1
2
p
В вариантах осуществления радикал R
, который, кроме того, является предпочтительным, C(O)-(CH
)
-COOH, где q равно 0, 1, 2, 3 или 4, выбран из группы, включающей C(O)COOH, C(O)-CH
-COOH и/или C(O)-(CH
)
-COOH.
1
2
q
2
2
2
В дополнительных предпочтительных вариантах осуществления радикал R
, C(O)-(CH
)
-COO(C
-C
-алкил), где r равно 0, 1, 2, 3 или 4, выбран из группы, включающей C(O)-CH
-COO-CH
, C(O)-CH
-COO-C
H
, C(O)-(CH
)
-COO-CH
и/или C(O)-(CH
)
-COO-C
H
.
1
2
r
1
10
2
3
2
2
5
2
2
3
2
2
2
5
В дополнительных предпочтительных вариантах осуществления радикал R
, C(O)-CH(NH
)-(CH
)
-COOH, где s равно 0, 1, 2, 3 или 4, представляет собой C(O)-CH(NH
)-CH
-COOH.
1
2
2
s
2
2
В дополнительных предпочтительных вариантах осуществления радикал R
, C(O)-CH(NH
)-(CH
)
-COO(C
-C
-алкил), где t равно 0, 1, 2, 3 или 4, выбран из группы, включающей C(O)-CH(NH
)-CH
-COO-CH
и/или C(O)-(CH
)
-COO-C
H
.
1
2
2
t
1
10
2
2
3
2
2
2
5
В других дополнительных предпочтительных вариантах осуществления радикал R
, C(O)-(CH
)
-CH(NH
)-COOH, где u равно 0, 1, 2, 3 или 4, представляет собой C(O)-CH
-CH(NH
)-COOH.
1
2
u
2
2
2
В других дополнительных предпочтительных вариантах осуществления радикал R
, C(O)-(CH
)
-CH(NH
)-COO(C
-C
-алкил), где v равно 0, 1, 2, 3 или 4, выбран из группы, включающей C(O)-CH
-CH(NH
)-COO-CH
и/или C(O)-(CH
)
-COO-C
H
.
1
2
v
2
1
10
2
2
3
2
2
2
5
Термин “C
-C
-алкил” включает, если не указано иное, с неразветвленной цепью, разветвленные или циклические алкильные группы, предпочтительно выбранные из группы, включающей метил, этил, пропил, бутил, пентил, неопентил, ундецил, додецил, пентадецил, гексадецил, гептадецил, октадецил и/или циклогексил. Термин “C
-C
-алкил” предпочтительно включает с неразветвленной цепью, разветвленные или циклические алкильные группы, предпочтительно выбранные из группы, включающей метил, этил, пропил, бутил, пентил, неопентил, гексил, гептил, октил, нонил и/или децил.
1
10
1
10
C
-C
-алкильные группы являются предпочтительными. C
-C
-алкильные группы предпочтительно выбраны из группы, включающей метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, трет-бутил и/или н-пентил. C
-C
-алкильные группы особенно предпочтительно выбраны из группы, включающей метил, этил, н-пропил и/или изопропил.
1
5
1
5
1
5
В отношении моноалкил- и диалкиламино заместителей NH(C
-C
-алкил) и/или N(C
-C
-алкил)
, C
-C
-алкильные группы предпочтительно выбраны из группы, включающей метил и/или этил.
1
5
1
5
2
1
5
C
-C
-алкилоксигруппы предпочтительно выбраны из группы, содержающей метокси, этокси, линейный или разветвленный пропокси и/или бутокси.
1
6
Термин “галоген” включает фтор, хлор, бром и йод, фтор или хлор, и предпочтительным является в частности хлор.
Термин “арил” предпочтительно обозначает ароматические радикалы, содержащие 6-20 атомов углерода, предпочтительно фенил, нафтил, инденил, бифенил и 5- или 6-членные гетероциклические кольца, которые содержат 1-3 гетероатома, выбранные из O, N или S, и необязательно конденсированные с бензольным кольцом, таким как индолил. Фенил и индолил являются предпочтительными, в частности фенил. Термин “арил” предпочтительно включает карбоциклы. Другие предпочтительные арильные группы выбраны из группы, включающей фенил, нафтил и/или инденил.
В контексте настоящего изобретения, термин “фенилалкил” включает группу -алкилфенил, где фенилалкил включает, например, фенилэтил и бензил.
Одно из преимуществ соединений по изобретению заключается в том, что они могут иметь высокое сродство к рецептору. Другое конкретное преимущество в предпочтительных вариантах осуществления заключается в том, что соединения по изобретению имеют высокую селективность связывания с рецептором относительно связывания с μ, δ, σ
и σ
рецепторами и относительно фенциклидинового (PCP) участка связывания NMDA рецептора (NMDA: н-метил D-аспартат).
1
2
Преимущество высокой селективности связывания с рецептором заключается в том, что отсутствуют или имеют место быть только незначительные центрально-опосредованные побочные эффекты. Конкретное преимущество высокой селективности связывания с рецептором заключается в том, что можно снизить риск психической зависимости.
В предпочтительных вариантах осуществления радикалы R
и R
, образуют, вместе с атомом азота, к которому они присоединены, насыщенный 3-8-членный N-гетероцикл. Насыщенный 3-8-членный N-гетероцикл предпочтительно выбран из группы, включающей пирролидинил, пиперазинил, пиперидинил, морфолинил и/или азепанил. Предпочтительными насыщенными N-гетероциклами являются 5- или 6-членные гетероциклические кольца, выбранные из группы, включающей пирролидинил, пиперазинил, пиперидинил и/или морфолинил.
2
3
В предпочтительных вариантах осуществления, радикалы R
и R
образуют, вместе с атомом азота, к которому они присоединены, пирролидиниловый радикал, где пирролидиниловый радикал может быть замещен одной или несколькими одинаковыми или различными группами, выбранными из группы, включающей C
-C
-алкил, C
-C
-алкилокси и/или OH. Предпочтительно, пирролидиниловый радикал замещен одной или двумя OH группами. Особенно предпочтительно, радикалы R
и R
образуют, вместе с атомом азота, к которому они присоединены, пирролидин или 3-гидроксипирролидиновое кольцо.
2
3
2
3
1
5
1
5
Структурный элемент A представляет собой предпочтительно группу (CH
)
, где n равно предпочтительно 0 или 1. Предпочтительно n равно 1.
2
n
Структурный элемент Z представляет собой предпочтительно фенильный радикал, который может быть замещен одной или несколькими одинаковыми или различными группами, выбранными из группы, включающей C
-C
-алкил, C
-C
-алкилокси, OH, галоген, предпочтительно выбранный из F, Cl, Br и/или I, CF
, CN, SO
(C
-C
-алкил), NO
, NH
, NH(C
-C
-алкил) и/или N(C
-C
-алкил)
. Предпочтительно, фенильный радикал замещен одним или двумя атомами галогена, предпочтительно выбранными из F, Cl, Br и/или I, предпочтительно Cl.
1
5
1
5
3
2
1
5
2
2
1
5
1
5
2
Замещение фенильного радикала одним, предпочтительно двумя атомами хлора может в результате привести к значительному повышению активности соединения.
В предпочтительных вариантах осуществления структурный элемент C(O)AZ образует фенилацетильную или дихлорфенилацетильную группу.
Предпочтительные соединения и/или их рацематы, энантиомеры, диастереомеры, сольваты, гидраты и их фармацевтически приемлемые соли и/или сложные эфиры имеют следующую общую формулу (2):
где
R
выбран из группы, включающей H; C
-C
-алкил; C
-C
-циклоалкил; COO(C
-C
-алкил); C
-C
-алкоксикарбонил; C
-C
-оксокарбонил;
1
1
10
3
10
1
10
1
6
1
6
фенилC
-C
алкил, где фенильный радикал может быть замещен одной или несколькими одинаковыми или различными группами, выбранными из группы, включающей галоген, C
-C
-алкилокси, NH
, NH(C
-C
-алкил), N(C
-C
-алкил)
, OH, SO
(C
-C
-алкил), SO(C
-C
-алкил), CF
, CN, NO
, SO
N(C
-C
-алкил)
, SO
NH
, SO
NH(C
-C
-алкил), SO
NH(арил), SO
NH(фенил) и/или SO
NH(гетероарил);
1
6
1
6
2
1
5
1
5
2
2
1
5
1
5
3
2
2
1
5
2
2
2
2
1
5
2
2
2
C
-C
-ацил; C
-C
-циклоацил; фенилацил, где ацильный радикал представляет собой C
-C
-ацильный радикал и фенильный радикал может быть замещен одной или несколькими одинаковыми или различными группами, выбранными из группы, включающей галоген, C
-C
-алкилокси, NH
, NH(C
-C
-алкил), N(C
-C
-алкил)
, OH, SO
(C
-C
-алкил), SO(C
-C
-алкил), CF
, CN, NO
, SO
N(C
-C
-алкил)
, SO
NH
, SO
NH(C
-C
-алкил), SO
NH(арил), SO
NH(фенил) и/или SO
NH(гетероарил);
1
10
3
10
1
6
1
6
2
1
5
1
5
2
2
1
5
1
5
3
2
2
1
5
2
2
2
2
1
5
2
2
2
моно-, би- или трициклический гетероарил, содержащий один, два, три или четыре гетероатома, выбранных из группы, включающей N, O и/или S;
моно-, би- или трициклический гетероарилалкил, содержащий один, два, три или четыре гетероатома, выбранных из группы, включающей N, O и/или S, и алкильный радикал представляет собой C
-C
-алкильный радикал;
1
6
моно-, би- или трициклический гетероарилацил, содержащий один, два, три или четыре гетероатома, выбранных из группы, включающей N, O и/или S, и ацильный радикал представляет собой C
-C
-ацильный радикал;
1
6
C(O)(C
-C
-алкил; C(O)N(C
-C
-алкил)
; C(O)(C
-C
-циклоалкил); COO(C
-C
-алкил); COO(арил); COO(C
-C
-циклоалкил);
1
10
1
10
2
3
10
1
10
3
10
C(O)COO(C
-C
-алкил), C(O)-(CH
)
-COOH, где q равно 0, 1, 2, 3 или 4, C(O)-(CH
)
-COO(C
-C
-алкил), где r равно 0, 1, 2, 3 или 4, C(O)-CH(NH
)-(CH
)
-COOH, где s равно 0, 1, 2, 3 или 4, C(O)-CH(NH
)-(CH
)
-COO(C
-C
-алкил), где t равно 0, 1, 2, 3 или 4, C(O)-(CH
)
-CH(NH
)-COOH, где u равно 0, 1, 2, 3 или 4, и/или C(O)-(CH
)
-CH(NH
)-COO(C
-C
-алкил), где v равно 0, 1, 2, 3 или 4;
1
10
2
q
2
r
1
10
2
2
s
2
2
t
1
10
2
u
2
2
v
2
1
10
X
, X
являются в каждом случае одинаковыми или независимыми друг от друга и выбраны из группы, включающей H, OH, карбонильный атом кислорода, NH
, NH(C
-C
-алкил), N(C
-C
-алкил)
, COOH, COO(C
-C
-алкил), CONH
, CONH(C
-C
-алкил), CON(C
-C
-алкил)
, OPO
H
, OSO
H, SO
(C
-C
-алкил), SO
HN(C
-C
-алкил), C
-C
-алкилокси, O-арилацетил, O-фенилацетил, арилацетокси и/или ацетилбензил, который может быть замещен двумя Cl группами;
1
2
2
1
5
1
5
2
1
10
2
1
10
1
10
2
3
2
3
2
1
5
2
1
5
1
4
Y
, Y
являются в каждом случае одинаковыми или независимыми друг от друга и выбраны из группы, включающей H, галоген, C
-C
-алкил, C
-C
-алкилокси, NH
, NH(C
-C
-алкил), NH(арил), NH(фенил), NH(гетероарил), N(C
-C
-алкил)
, OH, SO
(C
-C
-алкил), SO(C
-C
-алкил), CF
, CN, NO
, SO
N(C
-C
-алкил)
, SO
NH
, SO
NH(C
-C
-алкил).
1
2
1
5
1
5
2
1
5
1
5
2
2
1
5
1
5
3
2
2
1
5
2
2
2
2
1
5
Радикал R
предпочтительно выбран из группы, включающей H, C
-C
-алкил, фенилC
-C
алкил, и где фенильный радикал может быть замещен одной или несколькими одинаковыми или различными группами, выбранными из группы, включающей Cl, OH и/или C
-C
-алкилокси, и/или н-гетероарилалкил, где н-гетероарильный радикал выбран из пиридинил, пиримидинил, пиразинил и/или пирролил, и алкильный радикал представляет собой C
-C
-алкильный радикал.
1
1
5
1
3
1
4
1
3
Радикал R
далее предпочтительно выбран из группы, включающей C
-C
-ацил, бензоил, COO(C
-C
-алкил), C(O)COOH, C(O)-CH
-COOH, C(O)-CH
-COO-CH
и/или C(O)-CH
-COO-C
H
.
1
1
3
1
3
2
2
3
2
2
5
Структурные элементы X
и X
предпочтительно выбраны из группы, включающей H, OH и/или O-ацетилфенил, который замещен двумя Cl группами.
1
2
Предпочтительно, по меньшей мере один структурный элемент X
или X
представляет собой H. Далее предпочтительно, один структурный элемент X
или X
представляет собой OH. В предпочтительных вариантах осуществления соединения формулы (2), структурный элемент X
представляет собой H и структурный элемент X
представляет собой OH.
1
2
1
2
1
2
Структурные элементы Y
и Y
предпочтительно выбраны из группы, включающей OH, F и/или Cl. В предпочтительных вариантах осуществления соединения формулы (2), структурные элементы Y
и Y
представляют собой Cl. Замещение двумя группами Cl может в результате привести к значительному повышению активности соединения. Значительное преимущество, которое может быть обеспечено с помощью структурных элементов Y
и Y
, представляющих собой хлор, заключается в том, что соединения могут иметь весьма высокое сродство к рецептору типа κ (капа).
1
2
1
2
1
2
Особенно предпочтительные соединения и/или их рацематы, энантиомеры, диастереомеры, сольваты, гидраты и их фармацевтически приемлемые соли и/или сложные эфиры имеют следующую общую формулу (3):
где
R
выбран из группы, включающей H; C
-C
-алкил;
1
1
5
фенилC
-C
-алкил, и где фенильный радикал может быть замещен одной или несколькими одинаковыми или различными группами, выбранными из группы, включающей Cl, OH и/или C
-C
-алкилокси;
1
4
1
4
N-гетероарилалкил, где н-гетероарильный радикал выбран из пиридинила, имидазолила, пиримидинила, пиразинила и/или пирролила, и алкильный радикал представляет собой C
-C
-алкильный радикал;
1
4
C
-C
-ацил; бензоил; COO(C
-C
-алкил); COO(арил); C(O)-(CH
)
-COOH, где q равно 0, 1, 2, 3 или 4 и/или C(O)-(CH
)
-COO(C
-C
-алкил), где r равно 0, 1, 2, 3 или 4;
1
5
1
5
2
q
2
r
1
5
X
выбран из группы, включающей H, OH, бензил и/или O-арилацетил, который может быть замещен двумя Cl группами.
3
Структурный элемент X
особенно предпочтително выбран из группы, включающей H и/или OH.
3
Радикал R
особенно предпочтително выбран из группы, включающей H, метил, бутил, пентил, бензил, п-метоксибензил, пиридинилметил, в частности 2-пиридинилметил, 3-пиридинилметил и/или имидазолилметил. Радикал R
представляет собой наиболее предпочтительно H.
1
1
Радикал R
далее предпочтительно выбран из группы, включающей бензоил, ацетил, пропионил, COOCH
, COOC
H
, C(O)COOH, C(O)-CH
-COOH, C(O)-(CH
)
-COOH, C(O)-CH
-COO-CH
, C(O)-CH
-COO-C
H
, C(O)-(CH
)
-COO-CH
и/или C(O)-(CH
)
-COO-C
H
.
1
3
2
5
2
2
2
2
3
2
2
5
2
2
3
2
2
2
5
В предпочтительных вариантах осуществления радикал R
представляет собой ацильный радикал, выбранный из группы, включающей бензоил, ацетил, пропионил, COOCH
, COOC
H
, C(O)COOH, C(O)-CH
-COOH и/или C(O)-CH
-COO-CH
и структурный элемент X
выбран из группы, включающей H и/или OH.
1
3
3
2
5
2
2
3
Не будучи связанными с какой-либо конкретной теорией, предполагается, что действие соединений по изобретению в частности основано на стерическом действии пергидрохиноксалиновой группы, особенно в сочетании с радикалом R
. В частности, сочетание пергидрохиноксалиновой группы с радикалом R
, который представляет собой ацильный радикал или алкильный радикал, может обеспечить эффективное анальгетическое действие.
1
1
Преимущество вариантов осуществления, в которых радикал R
представляет собой ацильный радикал, выбранный из группы, включающей бензоил, ацетил, пропионил, COOCH
, COOC
H
, C(O)COOH, C(O)-CH
-COOH и/или C(O)-CH
-COO-CH
и структурный элемент X
выбран из группы, включающей H и/или OH, заключается в том, что они могут иметь высокое сродство к рецептору типа κ. Например, величина K
, как показатель сродства к рецептору типа κ, может быть в пределах от ≥1 нМ до ≤800 нМ, предпочтительно в пределах от ≥5 нМ до ≤600 нМ, предпочтительно в пределах от ≥9 нМ до ≤500 нМ.
1
3
3
2
5
2
2
3
i
Величину K
определяли способом в соответствии с Hunter et al., Br. J. Pharmacol. 1990, 1001. 183-189 и Smith et al., J. Neuoch. 1989, 53, 27-36, в котором использовали препарат из целого головного мозга морской свинки, а в качестве радиолиганда использовали [
H]-U-69,593 (Amersham), как описано в примере 30.
i
3
Конкретное преимущество вариантов осуществления, в которых радикал R
представляет собой ацильный радикал, выбранный из группы, включающей бензоил, ацетил, пропионил, COOCH
, COOC
H
, C(O)COOH, C(O)-CH
-COOH и/или C(O)-CH
-COO-CH
и структурный элемент X
выбран из группы, включающей H и/или OH, заключается в том, что они могут обладать хорошей селективностью связывания с рецептором типа κ, относительно связывания с рецептором типа μ.
1
3
3
2
5
2
2
3
В дополнительных предпочтительных вариантах осуществления радикал R
представляет собой фенилалкил, алкил, гетероарил или гетероарилалкильный радикал, выбранный из группы, включающей H, метил, бутил, пентил, бензил, п-метоксибензил, 2-пиридинилметил, 3-пиридинилметил и/или имидазолилметил, и структурный элемент X
представляет собой H.
1
3
Одно из преимуществ этих вариантов заключается в том, что они могут обладать весьма высоким сродством к рецептору типа κ. Например, величина K
, как показатель сродства к рецептору типа κ, может быть в пределах от ≥0,01 нМ до ≤50 нМ, предпочтительно в пределах от ≥0,5 нМ до ≤20 нМ, предпочтительно в пределах от ≥1 нМ до ≤10 нМ.
i
В дополнительных предпочтительных вариантах осуществления, радикал R
представляет собой H.
1
Соединения и/или их рацематы, энантиомеры, диастереомеры, сольваты, гидраты и их фармацевтически приемлемые соли и/или сложные эфиры, которые являются предпочтительными, в частности, имеют следующую общую формулу (4):
Соединения формулы (4) могут обеспечить эффект весьма сильного анальгетического действия, в частности периферического анальгетического действия.
Соединения по изобретению формулы (1), в частности соединения формулы (4), могут быть в форме рацематов, диастереомеров или энантиомерных пар. Рацематы, диастереомеры или энантиомеры каждой пары могут быть разделены обычными способами, предпочтительно с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ).
В предпочтительных вариантах осуществления соединение (1) включает смесь, содержащую энантиомеры в соответствии со следующей формулой (1a) и/или (1b):
Предпочтительно, энантиомеры (1a) и (1b) соединения (1) находятся в форме рацемата.
Для соединений по изобретению предпочтительно находиться в форме энантиомера, выбранного из формулы (1a) и/или (1b).
В предпочтительных вариантах осуществления соединение (4) может содержать следующие диастереомеры в соответствии со следующей формулой (4a) и/или (4b).
Если иное прямо не указано, подразумевается, что если структура только одного стереоизомера, в частности энантиомер, показана в контексте настоящего изобретения, то в каждом случае другой(ие) стереоизомер(ы), в частности энантиомеры, включены.
Другие предпочтительные соединения и/или их рацематы, энантиомеры, диастереомеры, сольваты, гидраты и их фармацевтически приемлемые соли и/или сложные эфиры имеют следующую формулу (6):
Было обнаружено, что соединения формулы (6) могут обеспечить весьма сильное анальгетическое действие, в частности периферическое анальгетическое действие.
Соединения по изобретению могут быть использованы в форме своих рацематов, своих чистых стереоизомеров, в частности энантиомеров или диастереомеров, или в форме смесей стереоизомеров, в частности энантиомеров или диастереомеров.
Предпочтительные соединения выбраны из группы, включающей 2-(3,4-дихлорфенил)-1-[(4aRS,8SR,8aRS)-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-1-ил]этан-1-он и/или диастереомеры 2-(3,4-дихлорфенил)-1-{(4aRS,8SR,8aSR)-8-[(3SR)-3-гидроксипирролидин-1-ил]пергидрохиноксалин-1-ил}этан-1-он и 2-(3,4-дихлорфенил)-1-{(4aRS,8SR,8aSR)-8-[(3RS)-3-гидроксипирролидин-1-ил]пергидрохиноксалин-1-ил}этан-1-он и их диастереомерную смесь.
Другие предпочтительные соединения выбраны из группы, включающей 1-[(4aRS,8SR,8aRS)-4-бензоил-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-1-ил]-2-(3,4-дихлорфенил)этан-1-он, 1-[(4aRS,8SR,8aRS)-4-ацетил-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-1-ил]-2-(3,4-дихлорфенил)этан-1-он, 1-{(4aRS,8SR,8aRS)-1-[2-(3,4-дихлорфенил)ацетил]-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-4-ил}пропан-1-он, метил {(4aRS,8SR,8aRS)-1-[2-(3,4-дихлорфенил)ацетил]-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-4-ил}карбоксилат, этил {(4aRS,8SR,8aRS)-1-[2-(3,4-дихлорфенил)ацетил]-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-4-ил}карбоксилат, 3-{(4aRS,8SR,8aRS)-1-[2-(3,4-дихлорфенил)ацетил]-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-4-ил}-3-оксопропионовую кислоту, 4-{(4aRS,8SR,8aRS)-1-[2-(3,4-дихлорфенил)ацетил]-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-4-ил}-4-оксомасляную кислоту, метил 3-{(4aRS,8SR,8aRS)-1-[2-(3,4-дихлорфенил)ацетил]-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-4-ил}-3-оксопропионат, 1-{(4aRS,8SR,8aRS)-4-бензоил-8-[(3SR)- и (3RS)-3-гидроксипирролидин-1-ил]пергидрохиноксалин-1-ил}-2-(3,4-дихлорфенил)этан-1-он, метил {(4aRS,8SR,8aRS)-1-[2-(3,4-дихлорфенил)ацетил]-8-[(3SR)- и (3RS)-3-гидроксипирролидин-1-ил]пергидрохиноксалин-4-ил}карбоксилат, 3-{(4aRS,8SR,8aRS)-1-[2-(3,4-дихлорфенил)ацетил]-8-[(3SR)- и (3RS)-3-гидроксипирролидин-1-ил]пергидрохиноксалин-4-ил}-3-оксопропионовую кислоту, метил 3-{(4aRS,8SR,8aRS)-1-[2-(3,4-дихлорфенил)ацетил]-8-[(3SR)- и (3RS)-3-гидроксипирролидин-1-ил]пергидрохиноксалин-4-ил}-3-оксопропионат, 2-(3,4-дихлорфенил)-1-[(4aRS,8SR,8aRS)-4-метил-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-1-ил]этан-1-он, 1-[(4aRS,8SR,8aRS)-4-бутил-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-1-ил]-2-(3,4-дихлорфенил)этан-1-он, 1-[(4aRS,8SR,8aRS)-4-бензил-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-1-ил]-2-(3,4-дихлорфенил)этан-1-он, 2-(3,4-дихлорфенил)-1-[(4aRS,8SR,8aRS)-4-(4-метоксибензил)-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-1-ил]этан-1-он, 2-(3,4-дихлорфенил)-1-{(4aRS,8SR,8aRS)-4-[(пиридин-2-ил)метил]-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-1-ил}этан-1-он, 2-(3,4-дихлорфенил)-1-{(4aRS,8SR,8aRS)-4-[(пиридин-3-ил)метил]-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-1-ил}этан-1-он, 2-(3,4-дихлорфенил)-1-{(4aRS,8SR,8aRS)-4-[(1H-имидазол-5-ил)метил]-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-1-ил}этан-1-он, 2-(3,4-дихлорфенил)-1-{(4aRS,8SR,8aRS)-4-метил-8-[(3SR)- и (3RS)-3-гидроксипирролидин-1-ил]пергидрохиноксалин-1-ил}этан-1-он, 1-{(4aRS,8SR,8aSR)-4-бензил-8-[(3SR)- и (3RS)-3-гидроксипирролидин-1-ил]пергидрохиноксалин-1-ил}-2-(3,4-дихлорфенил)этан-1-он и/или 2-(3,4-дихлорфенил)-1-{(4aRS,8SR,8aSR)-4-[(пиридин-3-ил)метил]-8-[(3SR)- и (3RS)-3-гидроксипирролидин-1-ил]пергидрохиноксалин-1-ил}этан-1-он.
Соединения по изобретению также могут быть использованы в форме своих кислот или своих оснований или в форме своих солей или сложных эфиров, в частности физиологически приемлемых солей или сложных эфиров, или в форме своих сольватов, в частности гидратов.
В частности, могут быть эффективно использованы фармацевтически приемлемые аддитивные соли соединений по изобретению.
Фармацевтически приемлемые соли могут представлять собой основно-аддитивные соли. Они включают соли соединений по изобретению, полученные с помощью неорганических оснований, таких как гидроксиды щелочных металлов, гидроксиды щелочноземельных металлов, или полученные с помощью органических оснований, таких как моно-, ди- или триэтаноламин.
Также могут быть эффективно использованы кислотно-аддитивные соли, в частности неорганических кислот, таких как хлористоводородная кислота, серная кислота или фосфорная кислота, или подходящих органических карбоновых или сульфоновых кислот, или аминокислот.
В предпочтительных вариантах осуществления фармацевтически приемлемые соли включают нетоксичные аддитивные соли соединений по изобретению, например в форме свободного основания, полученные путем добавления органических или неорганических кислот. Примеры неорганических включают включают HCl, HBr, серную кислоту и фосфорную кислоту. Органические кислоты предпочтительно выбраны из группы, включающей уксусную кислоту, пропионовую кислот, пировиноградную кислоту, масляную кислоту, альфа-, бета- или гамма-гидроксимасляную кислоту, валериановую кислоту, гидроксивалериановую кислоту, капроновую кислоту, гидроксикапроновую кислоту, каприловую кислоту, каприновую кислоту, лауриновую кислоту, миристиловую кислоту, пальмитиновую кислоту, стеариновую кислоту, гликолевую кислоту, молочную кислоту, D-глюкуроновую кислоту, L-глюкуроновую кислоту, D-галактуроновую кислоту, глицин, бензойную кислоту, гидроксибензойную кислоту, галловую кислоту, салициловую кислоту, ванилиновую кислоту, кумаровую кислоту, кофеиновую кислоту, гиппуровую кислоту, оротовую кислоту, L-винную кислоту, D-винную кислоту, D,L-винную кислоту, мезовинную кислоту, фумаровую кислоту, L-яблочную кислоту, D-яблочную кислоту, D,L-яблочную кислоту, щавелевую кислоту, малоновую кислоту, щавелевую кислоту, малеиновую кислоту, оксалоуксусную кислоту, глутаровую кислоту, гидроксиглутаровую кислоту, кетоглутаровую кислоту, адипиновую кислоту, кетоадипиновую кислоту, пимелиновую кислоту, глутаминовую кислоту, аспарагиновую кислоту, фталевую кислоту, пропантрикарбоновую кислоту, лимонную кислоту, изолимонную кислоту, метансульфоновую кислоту, толуолсульфоновую кислоту, бензолсульфоновую кислоту, камфорсульфоновую кислоту, эмбоновую кислоту и/или трифторметансульфоновую кислоту.
Фармацевтически приемлемые соли соединений по изобретению выбраны, например, из группы, включающей хлориды, бромиды, йодиды, гидрохлориды, гидробромиды, сульфонаты, метансульфонаты, сульфаты, гидросульфаты, сульфиты, гидросульфиты, фосфаты, нитраты, метаноаты, ацетаты, приоионаты, лактаты, цитраты, глютараты, малеаты, малонаты, малаты, сукцинаты, тартраты, оксалаты, фумараты, бензоаты, п-толуолсульфонаты и/или соли аминокислот, предпочтительно протеиногенные аминокислоты.
Фармацевтически приемлемыми сложными эфирами соединений, которые могут быть использованы, являются, в частности, физиологически легко гидролизуемые сложные эфиры, например выбранные из группы, включающей алкил, пиалоилоксиметил, ацетоксиметил, фталидил, инданил и/или метоксиметилен сложные эфиры.
В вариантах осуществления, которые являются еще более предпочтительными, соединения по изобретению могут быть преобразованы, например фосфорилированы, гликозилированы, ацетилированы, убиквитинилированы, фарнезилированы, пальмитоилированы, геранилгеранилированы и/или биотинилированы.
Радикал R
является особенно предпочтительно дериватизированным. В особенно предпочтительных вариантах осуществления радикал R
является биотинилированным.
1
1
Не будучи связанными с конкретной теорией, предполагается, что соединения по изобретению могут обладать анальгетическим, жаропонижающим, противовоспалительным, противозудным и/или спазмолитическим действием.
В предпочтительных вариантах осуществления одно из преимуществ соединений заключается в том, что эти соединения преодолевают гематоэнцефалический барьер лишь в незначительной степени. Это дает возможность использовать соединения по изобретению в частности в качестве анальгетиков периферического действия.
На основании их полезных свойств соединения по изобретению являются пригодными для использования в качестве лекарственных средств.
Соединения по изобретению являются предпочтительно токсикологически приемлемыми и соответственно пригодными в качестве фармацевтически активных соединений и/или лекарственных средств.
Изобретение также относится к использованию соединений по изобретению, в частности соединений формулы (4) и (6), для получения лекарственного средства.
В предпочтительных вариантах осуществления соединения по изобретению могут быть использованы, в частности, для терапии и/или профилактики, диагностики и/или терапии заболеваний, выбранных из группы, включающей связанные с болью заболевания, воспалительные заболевания и/или желудочно-кишечные заболевания.
Соединения по изобретению могут оказывать положительное воздействие, в частности, в отношении периферической боли. В частности, было неожиданно обнаружено, что предпочтительные варианты осуществления соединений по изобретению обладают анальгетической активностью.
Например, опытным путем на in vivo модели было обнаружено, что соединения формулы (4) и (6) обладают анальгетической активностью. Соединение формулы (6) показало даже лучшее анальгетическое действие здесь, чем соединение формулы (4).
Изобретение также относится к применению соединений по изобретению, в частности соединений формулы (4) и (6), для получения лекарственного средства для терапии и/или профилактики заболеваний, выбранных из группы, включающей связанные с болью заболевания, воспалительные заболевания и/или желудочно-кишечные заболевания.
Соединения по изобретению могут быть использованы самостоятельно или в сочетании с известными веществами для лечения заболеваний, выбранных из группы, включающей связанные с болью заболевания, воспалительные заболевания и/или желудочно-кишечные заболевания.
Связанные с болью заболевания включают острую и хроническую боль.
Связанные с болью заболевания могут быть выбраны, в частности, из группы, включающей боль в пояснице, лицевую боль, головные боли, боль в суставах, синдромы мышечной боли, связанные с болью воспалительные заболевания, нейропатическую боль, периферическую боль, повреждения периферического нерва, висцеральную боль, боль в области живота, симптомы при менструации, боли в области почек и желчного пузыря, зуд, боль при опухоли и злокачественной опухоли, симпатическую боль, послеоперационную боль, посттравматическую боль, гипералгезию и/или воспалительную боль.
Лицевая боль предпочтительно выбрана из группы, включающей тригеминальную невралгию, зубную боль, оталгию, краниомандибулярную дисфункцию и/или хроническую идиопатическую лицевую боль.
Головные боли предпочтительно выбраны из боли органов головы, таких как череп, мозговые оболочки, кровеносные сосуды головного мозга, черепные нервы и верхние спинномозговые нервы. Предпочтительные формы головной боли выбраны из группы включающей головную боль при гемикрании, стрессовую головную боль, кластерную головную боль (синдром Хортона) и головные боли, вызванные воздействие веществ, например, вследствие приема лекарственных средств.
Боль в спине предпочтительно выбрана из группы, включающей синдром в шейном отделе позвоночника, грудном или поясничном отделе позвоночника, боль в копчике и/или седалищная боль.
Воспалительные заболевания, сопровождаемые болью, предпочтительно выбраны из группы, включающей полиартрит и/или ревматоидный артрит.
Повреждения периферического нерва предпочтительно выбраны из группы, включающей боль в культе и фантомную боль, нейропатическую боль, полинейропатию, невралгию после опоясывающего лишая и/или межреберную невралгию.
Боль в области живота предпочтительно включает синдром раздраженного кишечника (IBS).
Симптомы при менструации включают боль и судороги.
Под гипералгезией понимается повышенная болевая чувствительность.
В лечении, в частности хронической периферической боли у человека, благоприятный эффект при заболевании может быть достигнут применением соединений по изобретению. Другой благоприятный эффект соединений по изобретению может выражаться в отсутствии или присутствии в легкой форме центрально-опосредованных побочных эффектов, таких как угнетение дыхания, рвота, брадикардия или констипация.
В частности, в предпочтительных вариантах осуществления соединения по изобретению могут быть использованы в качестве периферических анальгетиков.
Конкретный благоприятный эффект выражается в том, что соединения по изобретению предпочтительно не обладают эйфорическим действием. Это может обеспечить преимущество, выражающееся в том, что введение соединений по изобретению не приводит или приводит к относительно мягкой психической зависимости. Это позволяет вводить соединения по изобретению в течение продолжительного периода времени. Например, возможно долговременное введение, например суточное введение. Возможно, например, введение для лечения связанных с болью заболеваний, для которых, при определенных условиях лечения, введение должно продолжаться в течение нескольких месяцев или лет.
Соединения по изобретению, предпочтительно, могут использоваться для лечения хронической боли.
Анализы показали, что, например, в “исследовании конвульсий” на мышах, соединения по изобретению могут обладать анальгетической активностью, как описано в примере 28. Исследования выполняли на мышах, как описано в работе L. C. Hendershot, J. Forsaith, J. Pharmacol. Exp. Ther. 125, 237-240 (1959), которая включена здесь в качестве ссылки полностью.
Соединения по изобретению также могут использоваться в качестве местного анестетика. Например, соединения по изобретению могут использоваться для ослабления боли при укусах насекомых, таких как комары. В частности, соединения по изобретению могут использоваться для ослабления боли при болезненных укусах насекомых, таких как осы или пчелы.
Соединения по изобретению также могут быть использованы для лечения болевого раздражителя, такого как зуд.
Соединения по изобретению, в частности соединения формулы (4) и (6), могут обеспечить эффект, в частности, они подходят для лечения зуда.
Зуд, также называемый пруриго, представляет собой часто встречающийся симптом в кожной терапии и также является большой проблемой в других областях медицины. Обычно зуд проявляется в виде болевого раздражения. Зуд вызывает желание чесать пораженную область. Однако чесание усиливает зуд. Пораженная расчесыванием кожа дополнительно обеспечивает хорошую питательную среду для инфекционных патогенов, и часто встречаются воспаления открытых расчесанных участков кожи. Таким образом, например, диализные пациенты часто страдают от зуда и его последующих поражений. Хронический зуд, в частности, трудно поддается лечению и является тяжелой физической и психологической нагрузкой.
Изобретение, таким образом, особенно предпочтительно относится к применению соединений по изобретению для получения лекарственного средства для терапии и/или профилактики зуда.
В частности, профилактическое введение соединений по изобретению может быть эффективным, если ожидается появление зуда, например, после диализа.
Соединения по изобретению или композиции, содержащие эти соединения, могут быть введены системно или местно. Предпочтительно, соединения или композиции по изобретению вводят местно, в частности, в форме крема, мази, пластыря или настойки.
Воспалительные заболевания могут быть выбраны, в частности, из группы, включающей воспалительные заболевания желудочно-кишечного тракта, воспалительные интестинальные заболевания, такие как болезнь Крона и/или язвенный колит, острые или хронические воспалительные альтерации с воспалением желчного пузыря, воспалительные псевдополипы, глубокий кистозный полип, интестинальный кистозный пневматоз, панкреатит, аппендицит, воспалительные заболевания суставов, такие как ревматоидный артрит, и/или кожные и глазные воспалительные заболевания.
Применение соединений по изобретению целесообразно, в частности, при хронических воспалительных интестинальных заболеваниях, таких как болезнь Крона или язвенный колит.
Конкретный благоприятный эффект соединений по изобретению может быть обеспечен теми соединениями, которые пригодны, в частности, для лечения и/или профилактики воспалительных желудочно-кишечных заболеваний.
Желудочно-кишечные заболевания могут быть выбраны, в частности, из группы, включающей синдром раздраженного кишечника, патологические изменения желудка, желудочно-кишечные язвы, экзогенное и эндогенное поражение слизистой желудка и кишечника, дисфункции желудочно-кишечного тракта, аденомы, в частности в кишечнике, и/или ювенильные полипы.
В контексте настоящего изобретения, дисфункции желудочно-кишечного тракта также включают нарушение проходимости и колики, такие как желчная колика.
Кроме того, соединения по изобретению могут быть особенно подходящими для применения в лечении воспалительных желудочно-кишечных заболеваний. Например, помимо анальгетического и противовоспалительного действия соединения по изобретению могут использоваться для нормализации нарушений моторной функции желудочно-кишечного тракта и/или дисфункции желудочно-кишечного тракта, вызванных заболеванием.
Например, синдром раздраженного кишечника является наиболее частой причиной болевых синдромов в области живота. Благоприятный эффект соединений по изобретению может быть обеспечен в том смысле, что соединения по изобретению способны ослаблять боль, связанную с синдромом раздраженного кишечника и/или лечить заболевание. Благоприятный эффект, в частности, выражается в том, что соединения по изобретению предпочтительно не оказывают отрицательного воздействия в отношении нормальной перистальтики желудочно-кишечного тракта.
Предпочтительные симптомы выбраны из группы, включающей болевые состояния, воспаления, гипералгезию, нейропатическую боль, висцеральную боль, периферическую боль, воспалительную боль, ревматоидный артрит, симптомы при менструации, включая боль и/или спазмы, боли в области почек и желчного пузыря, послеоперационную боль, пруриго, желудочно-кишечные симптомы, такие как синдром раздраженного кишечника, и/или воспалительные интестинальные заболевания, такие как болезнь Крона и язвенный колит.
Изобретение также относится к лекарственным средствам, включающим, по меньшей мере, одно соединение по изобретению и/или его рацематы, энантиомеры, диастереомеры, сольваты, гидраты и его фармацевтически приемлемые соли и/или сложные эфиры. Лекарственные средства, содержащие соединения формулы (4) или (6) и/или их рацематы, энантиомеры, диастереомеры, сольваты, гидраты и их фармацевтически приемлемые соли и/или сложные эфиры, являются предпочтительными. Лекарственные средства по изобретению могут, кроме того, также содержать смеси двух или более соединений по изобретению.
Предпочтительными лекарственными средствами являются анальгетики. Особенно предпочтительными являются лекарственные средства для лечения хронической боли.
Предпочтительные лекарственные средства, в частности, представляют собой лекарственные средства для лечения зуда, например хронического зуда.
Предпочтительное применение лекарственных средств, содержащих соединения по изобретению, включает терапевтическое и/или профилактическое лечение заболеваний, выбранных из группы, включающей связанные с болью заболевания, воспалительные заболевания и/или желудочно-кишечные заболевания. Лекарственные средства по изобретению, предпочтительно, могут использоваться для лечения боли. Кроме того, лекарственные средства по изобретению являются предпочтительно подходящими для лечения зуда.
В контексте настоящего изобретения под термином “профилактическое лечение” следует понимать, что, в частности, соединения по изобретению могут вводиться профилактически, до того, как проявятся симптомы заболевания, или когда существует риск заболевания. В частности, под термином “профилактическое лечение” следует понимать предупреждение заболевания с помощью лекарственных средств.
Лекарственные средства, которые являются более предпочтительными, включают, по меньшей мере, одно соединение по изобретению и/или его рацематы, энантиомеры, диастереомеры, сольваты, гидраты и его фармацевтически приемлемые соли и/или сложные эфиры и, по меньшей мере, один антагонист опиоидного рецептора, предпочтительно выбранный из группы, включающей налоксон, налтрексон, ципродим, налтриндол, норбиналторфимин налмефен, налорфин, налбуфин, налоксоназин, метилналтрексон и/или кетилциклазоцин, предпочтительно выбранные из группы, включающей налоксон, налтрексон, ципродим, налтриндол и/или норбиналторфимин. Более предпочтительным является использование лекарственного средства, включающего, по меньшей мере, одно соединение по изобретению и/или его рацематы, энантиомеры, диастереомеры, сольваты, гидраты и его фармацевтически приемлемые соли и/или сложные эфиры, и, по меньшей мере, один антагонист опиоидного рецептора, предпочтительно выбранный из группы, включающей налоксон, налтрексон, ципродим, налтриндол, норбиналторфимин налмефен, налорфин, налбуфин, налоксоназин, метилналтрексон и/или кетилциклазоцин. В частности, предпочтительным является применение лекарственного средства, включающего, по меньшей мере, одно соединение по изобретению и/или его рацематы, энантиомеры, диастереомеры, сольваты, гидраты и его фармацевтически приемлемые соли и/или сложные эфиры, и, по меньшей мере, один антагонист опиоидного рецептора, предпочтительно выбранный из группы, включающей налоксон, налтрексон, ципродим, налтриндол, норбиналторфимин налмефен, налорфин, налбуфин, налоксоназин, метилналтрексон и/или кетилциклазоцин, для терапии и/или профилактики заболеваний, выбранных из группы, включающей связанные с болью заболевания, воспалительные заболевания и/или желудочно-кишечные заболевания, в частности зуд.
Соединения по изобретению могут быть введены обычными способами, например, перорально, дермально, интраназально, трансмукозально, пульмонально, энтерально, буккально, ректально, ингаляцией, с помощью инъекции, например, внутривенно, парентерально, интраперитонеально, интрадермально, подкожно и/или внутримышечно и/или местно, например, на болевые участки организма. Пероральное введение является особенно предпочтительным.
Соединения по изобретению и/или их рацематы, энантиомеры, диастереомеры, сольваты, гидраты и их фармацевтически приемлемые соли и/или сложные эфиры могут быть использованы, в частности, при получении лекарственных средств путем включения в подходящую дозированную форму вместе по меньшей мере с одним веществом носителя или вспомогательного вещества.
Лекарственные средства могут быть в виде и/или введены в виде жидких, полутвердых или твердых лекарственных форм, например в виде инъекционных растворов, капель, соков, сиропов, спреев, суспензий, таблеток, повязок, капсул, пластырей, суппозиториев, мазей, кремов, лосьонов, гелей, эмульсий, аэрозолей или в виде мелких частиц, например в виде крупинок или гранул.
Препараты в виде таблеток, покрытых таблеток, капсул, гранул, крупинок, капель, соков и сиропов, предпочтительно, могут использоваться для перорального введения.
Растворы, предпочтительно масляные или водные растворы, суспензии, эмульсии, импланты и спреи, предпочтительно, могут использоваться для парентерального, местного или ингаляторного введения. Соединения по изобретению также могут быть использованы в качестве легко реконструируемых сухих препаратов, например лиофилизованных, полученные лиофилизаты используются, например, при получении инъекционных препаратов.
Препараты, которые являются подходящими для чрескожного введения, могут быть введены в растворенном виде, например, в депо или в гипсовую повязку, необязательно, с добавлением средств, которые способствуют проникновению через кожу. Формы препаратов, которые могут быть использованы перорально или чрескожно, также могут высвобождать соответствующие соединения пролонгированным образом.
Фармацевтические дозированные формы с пролонгированным высвобождением (препарат длительного высвобождения) являются более предпочтительными для перорального введения соединений по изобретению. Препараты, которые являются устойчивыми к воздействию желудочного сока, могут быть предпочтительными. Примеры препаратов с пролонгированным высвобождением, представляют собой матриксные таблетки с длительным высвобождением, многослойные таблетки, покрытие которых может быть, например, устойчивым к воздействию желудочного сока, такие как покрытия, основанные на шеллаке, капсулы с длительным высвобождением или препараты, в которых используются биоразлагаемые полимеры, например полимеры поли(молочной кислоты).
Соединения по изобретению могут быть представлены в виде препаратов для внутривенного введения. Предпочтительными являются стерильные суспензии для парентерального введения, в частности, для внутривенных инъекций. Вспомогательные вещества и/или растворители, которые являются подходящими, в частности для инъекционных растворов, предпочтительно выбраны из группы, включающей диметилсульфоксид (ДМСО), спирты, предпочтительно полифункциоальные спирты, предпочтительно, выбранные из группы, включающей глицерин и/или пропиленгликоль и/или растительные масла.
Композиции для местного применения могут быть в виде, например, фармацевтически приемлемых порошков, лосьонов, мазей, кремов, гелей или терапевтических систем, которые содержат терапевтически активное количество соединений по изобретению. Соединения по изобретению могут вводиться в виде индивидуального терапевтически активного соединения или в виде смесей с другими терапевтически активными соединениями. Они могут вводиться самостоятельно, но, предпочтительно, вводятся в виде лекарственных средств, в частности в виде смесей с подходящими фармацевтическими носителями.
При получении лекарственного средства могут быть использованы обычные физиологически приемлемые фармацевтические вспомогательные вещества, предпочтительно выбранные из группы, включающей материалы носителя, волокна, растворители, разбавители, увлажняющие агенты, эмульсификаторы, красители, консерванты, разрыхлители, смазывающие вещества, соли для регулирования осмотического давления, буферирующие вещества, ароматизаторы и/или связующие.
Материалы носителя, которые могут быть использованы, представляют собой органические или неорганические вещества, которые являются подходящими для энтерального, например перорального или ректального, или парентерального введения и не взаимодействуют с соединениями, например вода, растительные масла, бензиловые спирты, полиэтиленгликоли, триацетаты глицерина и другие глицериды жирных кислот, желатин, лецитин сои, карбогидраты, такие как лактоза или крахмал, стеарат магния, тальк или целлюлоза.
Указанные лекарственные средства могут быть стерилизованы.
Соединения могут быть получены обычными методами синтеза.
Соединения по изобретению, особенно предпочтительно, могут быть получены способом получения соединений по изобретению, включающему следующие стадии:
a) циклизация нитрометана и глутаральдегида с получением 2-нитроциклогексан-1,3-диола;
b) аминирование нитродиола, полученного на стадии a), с первичными или вторичными аминами;
c) восстановление нитрогруппы нитродиамина с получением первичного амина;
d) взаимодействие циклогексантриамина, полученного на стадии c), с диалкилоксалатом;
e) отщепление аминового радикала соединения, полученного на стадии d);
f) алкилирование соединения, полученного на стадии e), с введением групп R
и R
;
2
3
g) восстановление пергидрохиноксалиндионового кольца соединения, полученного на стадии f), с получением пергидрохиноксалина;
h) ацилирование вторичного амина, полученного на стадии g), с введением группы C(O)-A-Z;
i) введение радикала R
, предпочтительно алкилированием, ацилированием или восстановительное введение H.
1
Значения групп A, Z, R
, R
и R
в полном объеме раскрыты в описании выше.
1
2
3
Циклизацию нитрометана и глутаральдегида с получением 2-нитроциклогексан-1,3-диола в соответствии со стадией a) способа по изобретению предпочтительно проводят в присутствии основного катализатора, предпочтительно, используя в качестве основания раствор гидроксида натрия. Предпочтительно, взаимодействие проводят в протонном растворителе, предпочтительно в метаноле.
Для аминирования нитродиола, полученного на стадии a), предпочтительно могут быть использованы первичные амины, предпочтительно выбранные из группы, включающей пирролидин, бензиламин, п-метоксибензиламин, п-хлорбензиламин и/или 3,4-дихлорбензиламин. Предпочтительно может быть использован бензиламин. Предпочтительно, взаимодействие проводят в протонном растворителе, предпочтительно в воде.
В предпочтительных вариантах осуществления восстановление нитрогруппы нитродиамина до первичного амина на стадии c) способа по изобретению проводят с метанолом над никелем Ренея или с водородом в присутствии катализатора никеля Ренея. Предпочтительно может быть использован свежий активированный никель Ренея. Предпочтительно, для осуществления реакции используют газообразный водород. Предпочтительное давление водорода составляет в пределах от 0,2 бар до 100 бар, предпочтительно, в пределах от 0,5 бар до 8 бар, особенно предпочтительно 1 бар.
Восстановление может быть осуществлено в протонном растворителе. Предпочтительно, восстановление проводят в протонном растворителе. Восстановление предпочтительно проводят в растворителе, выбранном из группы, включающей метанол, этилацетат, воду и/или тетрагидрофуран, предпочтительно в метаноле. Предпочтительная температура реакции находится в области от 20°C до 40°C.
Взаимодействие циклогексантриамина, полученного на стадии c), с диалкилоксалатом, предпочтительно, проводят в растворителе, выбранном из группы, включающей метанол и/или этилацетат. Предпочтительно могут быть использованы диметил и диэтилоксалаты, и особенно предпочтительно может быть использован диметилоксалат. Путем указанного взаимодействия циклогексантриамина с диалкилоксалатом может быть осуществлено замыкание кольца с получением производного пергидрохиноксалиндиона.
Аминовые радикалы, имеющиеся благодаря аминированию нитродиола, полученного на стадии a), с первичными или вторичными аминами, отщепляют на стадии e). Соединение, которое предпочтительно используют при аминировании, представляет собой бензиламин, и, таким образом, предпочтительно, имеет место дебензилирование бензиламиновых заместителей. Дебензилирование предпочтительно проводят с водородом под давлением 1 бар, используя в качестве катализатора палладий-на-активированном угле. Водород также может быть получен in situ из химических источников водорода, таких как формиат аммония, гидразин или муравьиная кислота. Отщепление бензилового радикала предпочтительно осуществляют заместительным восстановлением с формиатом аммония и палладием-на-активированном угле. Взаимодействие предпочтительно осуществляют при кипячении с обратным холодильником. Предпочтительным растворителем является метанол. Предпочтительно осуществляют получение первичного амина.
На следующей стадии f) проводят алкилирование соединения, полученного на стадии e), с введением группы R
и R
. Предпочтительным является восстановительное алкилирование первичного амина. Например, может быть осуществлено взаимодействие с формалином и цианборгидридом натрия (NaBH
CN) в протонном растворителе, предпочтительно в метаноле.
2
3
3
Предпочтительно осуществляют алкилирование амина с галогеналканами. Предпочтительно осуществляют взаимодействие с йод- или бромалканами и NaHCO
в ацетонитриле при кипячении с обратным холодильником.
3
Предпочтительными являются йодалканы, предпочтительно выбранные из группы, включающей йодметан, йодэтан, 1,4-дийодбутан, 1,5-дийодпентан. Бромалканы также являются предпочтительными, в частности 1,4-дибромбутан-2-ол. Предпочтительно могут быть использованы йодметан или йодэтан.
Для образования включающего азот кольца предпочтительно могут быть использованы галогенированные по концам дигалогеналканы. Дигалогеналканы, содержащие от двух до шести атомов C, являются особенно предпочтительными. Это могут быть моно- или дизамещенные OH и/или карбонильные группы. Дигалогеналканы, содержащие четыре атома C, являются исключительно предпочтительными. Дигалогеналканы предпочтительно выбраны из группы, включающей 1,4-дийодбутан, 1,4-дибромбутан-2-ол и/или 1,5-дийодпентан.
Алкилирование может быть осущетвлено, используя вспомогательные основания. Предпочтительные вспомогательные основания выбраны из группы, включающей карбонат калия, карбонат натрия, бикарбонат калия и/или бикарбонат натрия. Алкилирование может быть осуществлено в апротонном растворителе. Предпочтительно, алкилирование осуществляют в протонном растворителе. Растворители, которые могут быть использованы, предпочтительно выбраны из группы, включающей ацетон, ацетонитрил и/или метанол, в частности ацетонитрил.
Предпочтительно осуществляют восстановление пергидрохиноксалиндионового кольца соединения, полученного на стадии f), с получением пергидрохиноксалина, используя восстановитель литийалюминийгидрид (LiAlH
). Кроме того, предпочтительным является сочетание с кислотами Льюиса, например хлоридом алюминия. Предпочтительной является смесь 3:1 литийалюминийгидрида (LiAlH
) и хлорида алюминия. Восстановление может быть осуществлено в апротонном растворителе. Предпочтительно, восстановление осуществляют в протонном растворителе. Предпочтительным растворителем является тетрагидрофуран (ТГФ). Восстановление предпочтительно осуществляют в атмосфере газообразного инертного азота.
4
4
На следующей стадии осуществляют ацилирование вторичного амина, полученного на стадии g), с введением группы C(O)-A-Z.
Ацилирование может быть осуществлено с ацилирующим агентом, таким как хлорангидриды кислот или соответствующие свободные карбоновые кислоты. Ацилирование предпочтительно осуществляют с хлорангидридами кислот. Особенно предпочтительно могут быть использованы производные фенилацетилхлорида. Особенно предпочтительными являются 2-(3,4-дихлорфенил)ацетилхлорид и 2-фенилацетилхлорид. Ацилирование с карбоновыми кислотами предпочтительно осуществляют с катализаторами. Они особенно предпочтительно выбраны из группы, включающей дициклогексилкарбодиимид (DCC) и N'-(3-диметиламинопропил)-N-этилкарбодиимид (EDC).
Ацилирование гидроксипирролидинпроизводных ацилирующими агентами предпочтительно осуществляют при соотношении 1:1.
На следующей стадии процесса осуществляют введение радикала R
, предпочтительно алкилированием, ацилированием или гидролитическим введением H.
1
В предпочтительных вариантах осуществления имеющийся радикал может быть отщеплен гидролитически, в результате чего происходит гидролитическое введение H как радикала R
. Затем на стадии могут быть введены другие радикалы R
.
1
1
Для гидролитического отщепления предпочтительно используют элементарный водород, используя в качестве катализатора палладий-на-углероде. Предпочтительным является добавление в смесь хлористоводородной кислоты. Гидролитическое отщепление может быть осуществлено в апротонном растворителе. Предпочтительно, гидролитическое отщепление осуществляют в протонном растворителе. Предпочтительные растворители выбраны из группы, включающей воду и/или тетрагидрофуран (ТГФ). Предпочтительными являются смеси 1:1 воды и тетрагидрофурана. Предпочтительное давление водорода находится в пределах от 0,5 бар до 8 бар, предпочтительно 1 бар.
Радикал R
особенно предпочтительно может быть введен алкилированием или ацилированием вторичного амина.
1
Алкилирование с помощью альдегидов предпочтительно осуществляют в виде восстановительного алкилирования. Предпочтительным является использование в качестве катализатора цианоборгидрида натрия или триацетоксиборгидрида натрия. Альдегиды особенно предпочтительно выбраны из группы, включающей формальдегид, бутиральдегид, анисальдегид, пиридин-2-карбальдегид, никотинальдегид и/или 1H-имидазол-5-карбальдегид.
Ацилирование предпочтительно осуществляют с помощью ацилирующих агентов, таких как хлорангидриды кислот или соответствующие свободные карбоновые кислоты. Ацилирование с помощью хлорангидридов кислот является особенно предпочтительным. Хлорангидриды кислот выбраны из группы, включающей бензоилхлорид, ацетилхлорид, пропионилхлорид, метилхлорформиат, этилхлорформиат, монометиловый эфир хлорангидрид малоновой кислоты и/или ангидрид щавелевой кислоты являются исключительно предпочтительными.
Радикалы сложных эфиров могут быть преобразованы в свободные кислоты путем отщепления сложных эфиров.
Взаимодействие, которое может быть осуществлено при кипячении с обратным холодильником, также может быть осуществлено в микроволновой печи для синтеза.
Путем взаимодействия циклогексантриамина с диметил оксалатом с получением производного хиноксалина на стадии d) способа по изобретению образуется рацемат, включающий два энантиомера.
В предпочтительных вариантах осуществления способа таким образом можно осуществить разделение рацематов. В дополнительных предпочтительных вариантах осуществления способа можно осуществить разделение диастереомерной смеси.
Разделение рацематов, диастереомеров или энантиомеров может быть осуществлено известными методами, в частности хроматографическими методами, предпочтительно с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) или колоночной хроматографии или флэш-хроматографии (ФХ).
Разделение рацематов, диастереомеров или энантиомеров предпочтительно осуществляют посредством методов хиральной хроматографии, в частности хиральной жидкостной хроматографии высокого разрешения. Материал для хиральной колонки является коммерчески доступным.
Разделение рацематов также может быть осуществлено путем взаимодействия рацемической смеси органической кислоты с чистым энантиомером кислоты. Образующиеся диастереомерные соли могут быть разделены путем фракционной кристаллизации. Расщепление рацемата предпочтительно осуществляют путем взаимодействия рацемата с энантиомерно чистой кислотой. Разделение затем осуществляют путем фракционной перекристаллизации или методами хроматографии, возможно объединение методов и повторение их несколько раз.
В контексте настоящего изобретения заданную последовательность стадий от a) до i) не следует рассматривать как фиксированную последовательность. В зависимости от выбранного способа последовательность стадий способа можно изменять соответствующим образом. Предпочтительным является проведение стадий способа в заданной последовательности.
В предпочтительных вариантах осуществления полученные соединения могут быть очищены, например, посредством хроматографических методов, предпочтительно, например, с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии или колоночной хроматографии.
Примеры, которые служат для иллюстрации настоящего изобретения, представлены далее.
Для осуществления химических реакций использовали круглодонные колбы. Если использовались вещества, чувствительные к гидролизу и/или окислению, или если восстановление осуществляют с использованием элементарного водорода, используют колбы Шленка (Schlenk). В качестве инертного газа использовали азот от фирмы Air Liquide, Дюссельдорф. При работе с инертным газом вещества добавляли либо в противоток, либо через мембрану.
Взаимодействие при 0°C осуществляли при охлаждении смесью лед/вода.
Процесс взаимодействия и завершение взаимодействия контролировали с помощью тонкослойной хроматографии.
Выделенные вещества хранили при температуре +5°C.
Используемые растворители получали аналитической степени чистоты p.A. (p.A., для анализа) и использовали без дополнительной очистки. Безводные абсолютные растворители готовили перегонкой над осущителем в атмосфере инертного газа. Используемая вода была в деминерализованном виде.
Очистку соединений проводили посредством флэш-хроматографии, вариантом колоночной хроматографии. В качестве стационарной фазы использовали силикагель 60 (40-63 мкм) от фирмы Мерк (Merck). Подвижная фаза, диаметр колонки (Ø), степень набивки силикагеля и фракционный объем были адаптированы для условий эксперимента и описаны в конкретных инструкциях получения.
Пример 1
Получение 2-(3,4-дихлорфенил)-1-[(4aRS,8SR,8aRS)-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-1-ил]этан-1-она
1.1 Получение (2r)-2-нитроциклогексан-1,3-диола
25%-й водный раствор глутаральдегида (182 мл, 460 ммоль), нитрометан (38 мл, 0,71 моль) и CH
OH (600 мл) помещали в 1-л круглодонную колбу. При температуре от 0 до 5°C добавляли по каплям 2 M NaOH (12 мл). Ледяную баню отставляли и смесь перемешивали при комнатной температуре (20-23°C) в течение 4 часов. Образующийся раствор желтого цвета нейтрализовали добавлением кислотного катионообменника (Мерк) (16,8 г) и смесь перемешивали в течение 20 минут. Ионообменную смолу фильтровали и промывали небольшим количеством CH
OH. Фильтрат упаривали до состояния полутвердого продукта в вакууме. Остаток обрабатывали EtOH (100 мл) и толуолом (250 мл). Образовавшуюся двухфазную смесь опять упаривали в вакууме. Образовавшийся твердый продукт растворяли в горячем (от 65°C до 70°C) EtOH (100 мл) и добавляли толуол (250 мл). Образовавшиеся бесцветные кристаллы отфильтровывали и сушили в высоком вакууме.
3
3
1.2 Получение (2r)-N
,N
-дибензил-2-нитроциклогексан-1,3-диамина
1
3
В 250-мл круглодонной колбе в H
O (60 мл) растворяли бензиламин (26,4 мл, 0,24 моль) и добавляли (2r)-2-нитроциклогексан-1,3-диол (19,3 г, 0,12 моль). Раствор желтого цвета перемешивали при комнатной температуре в течение 16 часов. Образовавшийся желтый осадок фильтровали и затем перекристаллизовывали из CH
OH. Получали бесцветный твердый продукт.
2
3
1.3 Получение (2r)-N
,N
-дибензилциклогексан-1,2,3-триамина
1
3
В CH
OH (2,5 мл) растворяли (2r)-N
,N
-дибензил-2-нитроциклогексан-1,3-диамин (0,34 г, 1,0 ммоль) и добавляли никель Ренея (Acros Organics, Geel, Belgium) (0,96 г; 1 мл устойчивая суспензия, содержащая около 0,6 г никеля Ренея; cf. Gattermann, L; Wieland, H.; Wieland, T.; Sucrow, W. Die Praxis des organischen Chemikers, 43
edition; Walter de Gryter: Berlin 1982; 555). Суспензию перемешивали под давлением 1 бар H
при комнатной температуре в течение 3 часов. Затем катализатор отфильтровывали и раствор упаривали в вакууме. Получали бледно-желтое масло.
3
2
1
3
rd
1.4 Получение (4aRS,5SR,8aRS)-1-бензил-5-(бензиламино)пергидрохиноксалин-2,3-диона
(2r)-N
,N
-Дибензилциклогексан-1,2,3-триамин (100 мг, 0,32 ммоль) растворяли в CH
OH (2,0 мл) и добавляли диметилоксалат (38 мг, 0,32 ммоль). Смесь нагревали при кипячении с обратным холодильником в течение 24 часов. Затем смесь упаривали в вакууме. Остаток перекристаллизовывали из этилацетата. Продукт получали в виде бесцветного твердого вещества.
1
3
3
1.5 Получение (4aRS,5SR,8aRS)-5-амино-1-бензилпергидрохиноксалин-2,3-диона
(4aRS,5SR,8aRS)-1-Бензил-5-(бензиламино)пергидрохиноксалин-2,3-дион (1,19 г, 3,28 ммоль) растворяли в метаноле (40 мл) и добавляли NH
HCO
(2,07 г, 32,8 ммоль). Дополнительно добавляли 120 мг палладия-на-угле (Merck). Смесь нагревали при кипячении с обратным холодильником в течение 2 часов. Затем катализатор отфильтровывали и смесь упаривали в вакууме. Остаток обрабатывали CH
Cl
и смесь промывали три раза 0,1 н. NaOH. Органическую фазу сушили над Na
SO
и упаривали в вакууме. Получали бесцветный твердый продукт.
4
2
2
2
2
4
1.6 Получение (4aRS,5SR,8aRS)-1-бензил-5-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-2,3-диона
(4aRS,5SR,8aRS)-5-Амино-1-бензилпергидрохиноксалин-2,3-дион (3,06 г, 11,2 ммоль) растворяли в CH
CN (300 мл). NaHCO
(6,4 г, 76,2 ммоль) и добавляли 1,4-дийодбутан (13,9 г, 44,8 ммоль, 5,9 мл) и смесь нагревали при кипячении с обратным холодильником в течение 18 часов. NaHCO
отделяли с помощью фильтра с голубой глиной (Schleicher&Schuell) и раствор желтого цвета концентрировали в вакууме. Твердый продукт обрабатывали CH
Cl
и смесь экстрагировали путем трехкратного встряхивания с HCl (1 н.). Затем водную фазу доводили до pH 8 с помощью NaOH (2 н) и экстрагировали путем трехкратного встряхивания с CH
Cl
. Органические фазы сушили над Na
SO
и упаривали в вакууме. Получали твердый продукт бледно-желтого цвета.
3
3
3
2
2
2
2
2
4
1.7 Получение (4aRS,5SR,8aRS)-1-бензил-5-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалина
Получение Al(AlH
)
:
4
3
Сухой AlCl
(45 мг, 0,33 ммоль) помещали в сосуд Шленка при 0°C в атмосфере азота и добавляли абсолютный ТГФ (2,5 мл). Образованный чистый бесцветный раствор перемешивали при 0°C в течение 5 минут. Затем по каплям добавляли 1,0 M раствор LiAlH
(1,0 мл, 1,0 ммоль). Суспензию нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 20 минут. Образовывалась суспензия с 1,33 ммоль Al(AlH
)
.
3
4
4
3
Восстановление:
(4aRS,5SR,8aRS)-1-Бензил-5-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-2,3-дион (59 мг, 0,18 ммоль) растворяли в абсолютном ТГФ (3 мл) и раствор добавляли к суспензии Al(AlH
)
, охлажденной до 0°C. Суспензию перемешивали при 0°C в течение 45 минут, нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение еще 20 минут. Затем осторожно по каплям добавляли 2 н. NaOH (2 мл) при охлаждении льдом. Суспензию экстрагировали путем пятикратного встряхивания с CH
Cl
(15 мл). Объединенные органические фазы сушили над Na
SO
и упаривали в вакууме. Продукт получали в виде твердого продукта бледно-желтого цвета.
4
3
2
2
2
4
1.8 Получение 1-[(4aRS,8SR,8aRS)-4-бензил-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-1-ил]-2-(3,4-дихлорфенил)этан-1-она
(4aRS,5SR,8aRS)-1-Бензил-5-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин (325 мг, 1,09 ммоль) растворяли в абсолютном CH
Cl
(35 мл). Добавляли по каплям 2-(3,4-дихлорфенил)ацетилхлорид (291 мг, 1,3 ммоль) и смесь перемешивали при комнатной температуре. Через 30 минут добавляли 2 н. NaOH (35 мл) и смесь энергично перемешивали в течение 2 часов. Водную фазу отделяли. Органическую фазу экстрагировали путем трехкратного встряхивания с HCl (1 н.). Затем водную фазу доводили до pH 8 с помощью NaOH (2 н.) и экстрагировали путем трехкратного встряхивания с CH
Cl
. Органические фазы сушили над Na
SO
и упаривали в вакууме. Получали твердый продукт бледно-желтого цвета.
2
2
2
2
2
4
1.9 Получение 2-(3,4-дихлорфенил)-1-[(4aRS,8SR,8aRS)-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-1-ил]этан-1-она
1-[(4aRS,8SR,8aRS)-4-Бензил-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-1-ил]-2-(3,4-дихлорфенил)этан-1-он (244 мг, 0,50 ммоль) растворяли в смеси ТГФ/H
O (1:1, 50 мл), и добавляли концентрированный HCl (50 мл) и палладий-на-угле (Pd/C) (Merck) (98,4 мг). Смесь перемешивали в атмосфере H
при давлении 1 бар в течение 30 минут при комнатной температуре. Катализатор фильтровали и ТГФ упаривали в вакууме. Водную фазу доводили до pH 8 с помощью NaOH (2 н.) и экстрагировали пятикратным встряхиванием с CH
Cl
. Объединенные органические фазы сушили над Na
SO
и упаривали. Желтоватый остаток очищали хроматографией на колонке с силикагелем 60 (40-63 мкм, (Merck) колонка Ø 3 см, CH
Cl
/MeOH/NH
9:1:0,1, l=17 см, V=10 мл) и получали смолистое вещество желтого цвета.
2
2
2
2
2
4
2
2
3
Пример 2
Получение диастереомерной смеси 2-(3,4-дихлорфенил)-1-{(4aRS,8SR,8aSR)-8-[(3SR)-3-гидроксипирролидин-1-ил]пергидрохиноксалин-1-ил}этан-1-она и 2-(3,4-дихлорфенил)-1-{(4aRS,8SR,8aSR)-8-[(3RS)-3-гидроксипирролидин-1-ил]пергидрохиноксалин-1-ил}этан-1-она
Получение осуществляли исходя из (4aRS,5SR,8aRS)-5-амино-1-бензилпергидрохиноксалин-2,3-диона, который получали способом, описанным в примере 1.1-1.5.
2.1 Получение (4aRS,5SR,8aRS)-1-бензил-5-(3-гидроксипирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-2,3-диона
(4aRS,5SR,8aRS)-5-Амино-1-бензилпергидрохиноксалин-2,3-дион (144 мг, 0,53 ммоль) растворяли в ацетонитриле (16 мл) и добавляли NaHCO
(300 мг, 3,57 ммоль) и рацемический 1,4-дибромбутан-2-ол (чистота 85%, 1,15 г, 4,20 ммоль, 0,57 мл). Через 24 часа NaHCO
отделяли и смесь упаривали в вакууме. Твердый продукт обрабатывали CH
Cl
и смесь экстрагировали путем трехкратного встряхивания с HCl (1 н.). Затем pH водной фазы доводили до 8 с помощью NaOH (2 н.) и экстрагировали путем трехкратного встряхивания с CH
Cl
. Органические фазы сушили над Na
SO
и упаривали в вакууме. Сырой продукт очищали путем флэш-хроматографии с силикагелем 60 (40-63 мкм, (Merck) Ø 2 см, ацетон/MeOH/Et
NH 9,5:0,5:0,1, l=17 см, V=5 мл). Выделяли твердый продукт бледно-желтого цвета.
3
3
2
2
2
2
2
4
2
2.2 Получение (4aRS,5SR,8aRS)-1-бензил-5-(3SR)- и (3RS)-гидроксипирролидин-1-ил)пергидрохиноксалина
Получение Al(AlH
)
:
4
3
Сухой AlCl
(940 мг, 6,8 ммоль) помещали в сосуд Шленка при 0°C в атмосфере азота и добавляли абсолютный ТГФ (52 мл). Полученный чистый бесцветный раствор перемешивали при 0°C в течение 5 минут. Затем добавляли по каплям 1,0 M раствор LiAlH
(21 мл, 21 ммоль). Суспензию нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 20 минут. Получали суспензию 27,8 ммоль Al(AlH
)
.
3
4
4
3
Восстановление:
(4aRS,5SR,8aRS)-1-Бензил-5-(3-гидроксипирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-2,3-дион (1,29 г, 3,8 ммоль) растворяли в абсолютном ТГФ (65 мл) и раствор добавляли к суспензии Al(AlH
)
, охлажденной до 0°C. Суспензию перемешивали при 0°C в течение 45 минут, нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение еще 20 минут. Затем при охлаждении льдом осторожно добавляли по каплям 2 н. NaOH (13 мл). Суспензию экстрагировали путем пятикратного встряхивания с CH
Cl
(50 мл). Объединенные органические фазы сушили над Na
SO
и упаривали в вакууме. Продукт получали в виде твердого продукта бледно-желтого цвета.
4
3
2
2
2
4
2.3 Получение 1-{(4aRS,8SR,8aSR)-4-бензил-8-[(3SR)- и (3RS)-3-гидроксипирролидин-1-ил]пергидрохиноксалин-1-ил}-2-(3,4-дихлорфенил)этан-1-она
(4aRS,5SR,8aRS)-1-Бензил-5-((3SR)- и (3RS)-гидроксипирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин (2,6 г, 8,1 ммоль) растворяли в абсолютном CH
Cl
(200 мл), добавляли по каплям 2-(3,4-дихлорфенил)ацетилхлорид (1,8 г, 8,1 ммоль) и смесь перемешивали при комнатной температуре. Через 30 минут добавляли NaOH (2 н., 200 мл) и реакционную смесь энергично перемешивали в течение ночи. Водную фазу отделяли. Органическую фазу экстрагировали путем трехкратного встряхивания с HCl (1 н.). Затем pH водной фазы доводили до 8 с помощью NaOH (2 н.) и экстрагировали путем трехкратного встряхивания с CH
Cl
. Органические фазы сушили над Na
SO
и упаривали в вакууме. Выделяли твердый продукт бледно-желтого цвета.
2
2
2
2
2
4
2.4 Получение 2-(3,4-дихлорфенил)-1-{(4aRS,8SR,8aSR)-8-[(3SR)- и (3RS)-3-гидроксипирролидин-1-ил]пергидрохиноксалин-1-ил}этан-1-она
1-{(4aRS,8SR,8aSR)-4-Бензил-8-[(3SR)- и (3RS)-3-гидроксипирролидин-1-ил]пергидрохиноксалин-1-ил}-2-(3,4-дихлорфенил)этан-1-он (373 мг, 0,74 ммоль) растворяли в смеси ТГФ/H
O (1:1, 74 мл) и добавляли концентрированную HCl (7,4 мл) и 158 мг палладия-на-угле (Merck). Смесь перемешивали в атмосфере H
при давлении 1 бар в течение 30 минут при комнатной температуре. Катализатор фильтровали и ТГФ упаривали в вакууме. pH водной фазы доводили 8 с помощью NaOH (2 н.) и экстрагировали пятикратным встряхиванием с CH
Cl
. Объединенные органические фазы сушили над Na
SO
и упаривали. Желтоватый остаток очищали путем хроматографии на колонке с силикагелем 60 (40-63 мкм, (Merck) Ø 3 см, CH
Cl
/MeOH/NH
9:1:0,1, l=18 см, V=10 мл) и получали смолистое вещество светло-желтого цвета.
2
2
2
2
2
4
2
2
3
Пример 3
Получение 1-[(4aRS,8SR,8aRR)-4-бензил-8-(пирролидин-1-ил]пергидрохиноксалин-1-ил}-2-(3,4-дихлорфенил)этан-1-она
Получение осуществляли исходя из (4aRS,5SR,8aRS)-1-бензил-5-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-2,3-диона, который получали способом, описанным в примере 1.1-1.6.
3.1 Получение (4aRS,5SR,8aRS)-1-бензил-5-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалина
Получение Al(AlH
)
:
4
3
Сухой AlCl
(45 мг, 0,33 ммоль) помещали в сосуд Шленка при 0°C в атмосфере азота и добавляли абсолютный ТГФ (2,5 мл). Образовавшийся бесцветный раствор перемешивали при 0°C в течение 5 минут. Затем по каплям добавляли 1,0 M раствор LiAlH
(1,0 мл, 1,00 ммоль). Суспензию нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 20 минут. Образовывалась суспензия 1,33 ммоль Al(AlH
)
.
3
4
4
3
Восстановление:
(4aRS,5SR,8aRS)-1-Бензил-5-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-2,3-дион (59 мг, 0,18 ммоль) растворяли в абсолютном ТГФ (3 мл) и раствор добавляли к суспензии Al(AlH
)
, охлажденной до 0°C. Суспензию перемешивали при 0°C в течение 45 минут, нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение еще 20 минут. Затем при охлаждении льдом осторожно по каплям добавляли 2 н NaOH (2 мл). Суспензию экстрагировали путем пятикратного встряхивания с CH
Cl
(15 мл). Объединенные органические фазы сушили над Na
SO
и упаривали в вакууме. Продукт получали в виде твердого продукта бледно-желтого цвета.
4
3
2
2
2
4
3.2 Получение 1-[(4aRS,8SR,8aRS)-4-бензил-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-1-ил]-2-(3,4-дихлорфенил)этан-1-она
(4aRS,5SR,8aRS)-1-Бензил-5-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин (325 мг, 1,09 ммоль) растворяли в абсолютном CH
Cl
(35 мл). По каплям добавляли 2-(3,4-дихлорфенил)ацетилхлорид (291 мг, 1,3 ммоль) и смесь перемешивали при комнатной температуре. Через 30 минут добавляли 2 н NaOH(35 мл) и смесь энергично перемешивали в течение 2 часов. Водную фазу отделяли. Органическую фазу экстрагировали путем трехкратного встряхивания с HCl (1 н.). Затем pH водной фазы доводили до 8 с помощью NaOH (2 н.) и экстрагировали путем трехкратного встряхивания с CH
Cl
. Органические фазы сушили над Na
SO
и упаривали в вакууме. Продукт получали в виде твердого продукта бледно-желтого цвета.
2
2
2
2
2
4
Пример 4
Получение <(3SR)- и (3RS)-1-{(4aRS,5RS,8aSR)-4-[2-(3,4-дихлорфенил)ацетил]пергидрохиноксалин-5-ил}пирролидин-3-ил>-2-(3,4-дихлорфенил)ацетата
Получение осуществляли исходя из (4aRS,5SR,8aRS)-1-бензил-5-((3SR)- и (3RS)- гидроксипирролидин-1-ил)пергидрохиноксалина, который получали способом, описанным в примере 2.1-2.2.
4.1 Получение <(3SR)- и (3RS)-1-{(4aRS,5RS,8aSR)-1-бензил-4-[2-(3,4-дихлорфенил)ацетил]пергидрохиноксалин-5-ил}пирролидин-3-ил)-2-(3,4-дихлорфенил)ацетата
(4aRS,5SR,8aRS)-1-Бензил-5-((3SR)- и (3RS)-гидроксипирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин (0,70 г, 2,2 ммоль) растворяли в абсолютном CH
Cl
(100 мл). Добавляли по каплям 2-(3,4-дихлорфенил)ацетилхлорид (1,1 г, 4,9 ммоль) и смесь перемешивали при комнатной температуре. Через 4 часа добавляли 2 н. NaOH(4,5 мл) и смесь энергично перемешивали в течение ночи. Органическую фазу отделяли и остаток промывали дважды с помощью 2 н. NaOH. Затем органическую фазу сушили над Na
SO
и упаривали в вакууме. Остаток очищали дважды с помощью флэш-хроматографии с силикагелем 60 (40-63 мкм, (Merck) колонка Ø 2 см, EA/Et
NH 10:0,1; l=15 см, V=5 мл). Получали смолистое вещество светло-желтого цвета.
2
2
2
4
2
4.2 Получение <(3SR)- и (3RS)-1-{(4aRS,5RS,8aSR)-4-[2-(3,4-дихлорфенил)ацетил]пергидрохиноксалин-5-ил}пирролидин-3-ил>-2-(3,4-дихлорфенил)ацетата
<(3SR)- и (3RS)-1-{(4aRS,5RS,8aSR)-1-бензил-4-[2-(3,4-дихлорфенил)ацетил]пергидрохиноксалин-5-ил}пирролидин-3-ил>-2-(3,4-дихлорфенил)ацетат (299 мг, 0,43 ммоль) растворяли в смеси ТГФ/H
O (1:1, 59 мл) и добавляли концентрированную HCl (5,9 мл) и Pd/C (81 мг). Смесь перемешивали в атмосфере H
при давлении 1 бар при комнатной температуре в течение 35 минут. Катализатор отфильтровывали и метанол из фильтрата упаривали в вакууме. Водную фазу доводили до pH 8 с помощью NaOH (2 н.) и экстрагировали пятикратным встряхиванием с CH
Cl
. Органическую фазу сушили над Na
SO
и упаривали. Желтоватый остаток очищали колоночной хроматографией (Ø 2 см, CH
Cl
/MeOH/NH
9,5:0,5:0,05, l=16 см, V=5 мл). Фракции, содержащие продукт, упаривали, остаток обрабатывали CH
Cl
и раствор экстрагировали путем трехкратного встряхивания с HCl (1 н.). Затем pH водной фазы доводили до 8 с помощью NaOH (2 н.) и экстрагировали путем трехкратного встряхивания с CH
Cl
. Органические фазы сушили над Na
SO
и упаривали в вакууме. Желтоватый остаток очищали с помощью колоночной хроматографии (Ø 2 см, CH
Cl
/MeOH/NH
9:1:0,05, l=15 см, V=5 мл) и получали твердый продукт желтоватого цвета.
2
2
2
2
2
4
2
2
3
2
2
2
2
2
4
2
2
3
Пример 5
Получение 1-{(4aRS,8SR,8aSR)-4-бензил-8-[(3SR)- и (3RS)-3-гидроксипирролидин-1-ил]пергидрохиноксалин-1-ил}-2-(3,4-дихлорфенил)этан-1-она
Получение осуществляли исходя из (4aRS,5SR,8aRS)-1-бензил-5-((3SR)- и (3RS)- гидроксипирролидин-1-ил)пергидрохиноксалина, который получали способом, описанным в примере 2.1-2.2.
(4aRS,5SR,8aRS)-1-Бензил-5-((3SR)- и (3RS)-гидроксипирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин (2,6 г, 8,1 ммоль) растворяли в абсолютном CH
Cl
(200 мл), добавляли по каплям 2-(3,4-дихлорфенил)ацетилхлорид (1,8 г, 8,1 ммоль) и смесь перемешивали при комнатной температуре. Спустя 30 минут добавляли NaOH (2 н, 200 мл) и реакционную смесь энергично перемешивали в течение ночи. Водную фазу отделяли. Органическую фазу экстрагировали путем трехкратного встряхивания с HCl (1 н.). Затем pH водной фазы доводили до 8 с помощью NaOH (2 н.) и экстрагировали путем трехкратного встряхивания с CH
Cl
. Органические фазы сушили над Na
SO
и упаривали в вакууме. Получали твердый продукт бледно-желтого цвета.
2
2
2
2
2
4
Пример 6
Получение 1-[(4aRS,8SR,8aRS)-4-бензоил-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-1-ил]-2-(3,4-дихлорфенил)этан-1-она
Получение осуществляли исходя из 2-(3,4-дихлорфенил)-1-[(4aRS,8SR,8aRS)-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-1-ил]этан-1-она, который получали способом, описанным в примере 1.1-1.9.
В атмосфере N
2-(3,4-дихлорфенил)-1-[(4aRS,8SR,8aRS)-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-1-ил]этан-1-он (111 мг, 0,28 ммоль) растворяли в абсолютном CH
Cl
(14 мл) и добавляли по каплям бензоилхлорид (47 мг, 0,35 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи и затем упаривали в вакууме. Остаток очищали с помощью флэш-хроматографии (Ø 2 см, CH
Cl
/MeOH/NH
9,5:0,5:0,05, l=15 см, V=5 мл) и получали продукт в виде смолы желтоватого цвета.
2
2
2
2
2
3
Пример 7
Получение 1-[(4aRS,8SR,8aRS)-4-ацетил-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-1-ил]-2-(3,4-дихлорфенил)этан-1-она
Получение осуществляли исходя из 2-(3,4-дихлорфенил)-1-[(4aRS,8SR,8aRS)-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-1-ил]этан-1-она, который получали способом, описанным в примере 1.1-1.9.
В атмосфере N
2-(3,4-дихлорфенил)-1-[(4aRS,8SR,8aRS)-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-1-ил]этан-1-он (113 мг, 0,29 ммоль) растворяли в абсолютном CH
Cl
(14 мл) и добавляли по каплям ацетилхлорид (27 мг, 0,34 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи и затем упаривали в вакууме. Остаток очищали путем флэш-хроматографии (Ø 2 см, CH
Cl
/MeOH/NH
9,5:0,5:0,05, l=15 см, V=5 мл). Получали смолу желтоватого цвета.
2
2
2
2
2
3
Пример 8
Получение 1-{(4aRS,8SR,8aRS)-1-[2-(3,4-дихлорфенил)ацетил]-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-4-ил}пропан-1-она
Получение осуществляли исходя из 2-(3,4-дихлорфенил)-1-[(4aRS,8SR,8aRS)-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-1-ил]этан-1-она, который получали способом, описанным в примере 1.1-1.9.
В атмосфере N
2-(3,4-дихлорфенил)-1-[(4aRS,8SR,8aRS)-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-1-ил]этан-1-он (40,7 мг, 0,10 ммоль) растворяли в абсолютном CH
Cl
(5 мл) и добавляли по каплям пропионилхлорид (11,4 мг, 0,12 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2,5 часов и затем упаривали в вакууме. Остаток очищали с помощью флэш-хроматографии (Ø 2 см, CH
Cl
/MeOH/NH
9:1:0,1, l=16 см, V=3 мл). Получали смолу желтого цвета.
2
2
2
2
2
3
Пример 9
Получение метил {(4aRS,8SR,8aRS)-1-[2-(3,4-дихлорфенил)ацетил]-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-4-ил}карбоксилата
Для большей ясности, в этом и последующих соединениях принята нумерация хиноксалинового кольца 2-(3,4-дихлорфенил)-1-[(4aRS,8SR,8aRS)-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-1-ил]этан-1-она.
Получение осуществляли исходя из 2-(3,4-дихлорфенил)-1-[(4aRS,8SR,8aRS)-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-1-ил]этан-1-она, который получали способом, описанным в примере 1.1-1.9.
2-(3,4-Дихлорфенил)-1-[(4aRS,8SR,8aRS)-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-1-ил]этан-1-он (100,9 мг, 0,25 ммоль) растворяли в абсолютном CH
Cl
(13 мл) в атмосфере азота и добавляли по каплям метилхлорформиат (28,9 мг, 0,31 ммоль). Раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов. Затем смесь упаривали в вакууме и остаток очищали путем флэш-хроматографии (Ø 2 см, CH
Cl
/MeOH/NH
9,5:0,5:0,05, l=16 см, V=5 мл) и получали в виде смолы желтого цвета.
2
2
2
2
3
Пример 10
Получение этил {(4aRS,8SR,8aRS)-1-[2-(3,4-дихлорфенил)ацетил]-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-4-ил}карбоксилата
Получение осуществляли исходя из 2-(3,4-дихлорфенил)-1-[(4aRS,8SR,8aRS)-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-1-ил]этан-1-она, который получали способом, описанным в примере 1.1-1.9.
2-(3,4-Дихлорфенил)-1-[(4aRS,8SR,8aRS)-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-1-ил]этан-1-он (104,9 мг, 0,26 ммоль) растворяли в абсолютном CH
Cl
(13 мл) в атмосфере N
и добавляли по каплям этилхлорформиат (34,5 мг, 0,32 ммоль). Раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи и затем упаривали в вакууме. Остаток очищали путем флэш-хроматографии (Ø 2 см, CH
Cl
/MeOH/NH
9,5:0,5:0,05, l=18 см, V=5 мл). Получали смолу желтого цвета.
2
2
2
2
2
3
Пример 11
Получение 3-{(4aRS,8SR,8aRS)-1-[2-(3,4-дихлорфенил)ацетил]-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-4-ил}-3-оксопропионовой кислоты
Получение осуществляли исходя из 2-(3,4-дихлорфенил)-1-[(4aRS,8SR,8aRS)-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-1-ил]этан-1-она, который получали способом, описанным в примере 1.1-1.9.
В атмосфере N
2-(3,4-дихлорфенил)-1-[(4aRS,8SR,8aRS)-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-1-ил]этан-1-он (103 мг, 0,26 ммоль) растворяли в абсолютном CH
Cl
(13 мл) и добавляли по каплям монометиловый эфир хлорангидрида малоновой кислоты (42 мг, 0,31 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи и затем упаривали в вакууме. Остаток обрабатывали 20 мл и добавляли 2 н. NaOH (2 мл). Раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Затем смесь упаривали в вакууме и остаток очищали путем флэш-хроматографии (Ø 2 см, CH
Cl
/MeOH/NH
8:2:0,1, l=15 см, V=5 мл). Сырой продукт вновь обрабатывали CH
Cl
, смесь фильтровали через стеклофильтр марки G4 и Celite (кизельгур от фирмы CELITE Corp., Lompoc, USA) и фильтрат упаривали в вакууме. Получали бесцветный твердый продукт.
2
2
2
2
2
3
2
2
Пример 12
Получение 4-{(4aRS,8SR,8aRS)-1-[2-(3,4-дихлорфенил)ацетил]-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-4-ил}-4-оксомасляной кислоты
Получение осуществляли исходя из 2-(3,4-дихлорфенил)-1-[(4aRS,8SR,8aRS)-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-1-ил]этан-1-она, который получали способом, описанным в примере 1.1-1.9.
2-(3,4-Дихлорфенил)-1-[(4aRS,8SR,8aRS)-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-1-ил]этан-1-он (108,6 мг, 0,27 ммоль) растворяли в абсолютном CH
Cl
(14 мл) в атмосфере N
в 50-мл колбе Шленка (Schlenk). К раствору добавляли ангидрид янтарной кислоты (33 мг, 0,33 ммоль) и на кончике шпателя 4-(диметиламино)пиридин (DMAP). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Смесь затем упаривали в вакууме почти досуха и остаток очищали путем флэш-хроматографии (⌀2 см, CH
Cl
/MeOH/NH
8:2:0,1, l=17 см, V=5 мл). Фракции, содержащие продукт, упаривали в вакууме, и остаток вновь обрабатывали CH
Cl
. Смесь фильтровали через стеклофильтр марки G4 и целит и фильтрат упаривали в вакууме. Получали твердый продукт желтоватого цвета.
2
2
2
2
2
3
2
2
Пример 13
Получение метил 3-{(4aRS,8SR,8aRS)-1-[2-(3,4-дихлорфенил)ацетил]-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-4-ил}-3-оксопропионата
Получение осуществляли исходя из 2-(3,4-дихлорфенил)-1-[(4aRS,8SR,8aRS)-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-1-ил]этан-1-она, который получали способом, описанным в примере 1.1-1.9.
В атмосфере N
2-(3,4-дихлорфенил)-1-[(4aRS,8SR,8aRS)-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-1-ил]этан-1-он (101 мг, 0,26 ммоль) растворяли в абсолютном CH
Cl
(13 мл) и добавляли по каплям монометиловый эфир хлорангидрида малоновой кислоты (42 мг, 0,31 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи и затем упаривали в вакууме. Остаток очищали путем флэш-хроматографии (⌀2 см, CH
Cl
/MeOH/NH
9,5:0,5:0,05, l=15 см, V=5 мл). Получали смолу желтоватого цвета.
2
2
2
2
2
3
Пример 14
Получение 1-{(4aRS,8SR,8aSR)-4-бензоил-8-[(3SR)- и (3RS)-3-гидроксипирролидин-1-ил]пергидрохиноксалин-1-ил}-2-(3,4-дихлорфенил)этан-1-она
Получение осуществляли исходя из диастереомерной смеси 2-(3,4-дихлорфенил)-1-{(4aRS,8SR,8aSR)-8-[(3SR)-3-гидроксипирролидин-1-ил]пергидрохиноксалин-1-ил}этан-1-она и 2-(3,4-дихлорфенил)-1-{(4aRS,8SR,8aSR)-8-[(3RS)-3-гидроксипирролидин-1-ил]пергидрохиноксалин-1-ил}этан-1-она, которые получали способом, описанным в примере 2.1-2.4.
В атмосфере N
диастереомерную смесь 2-(3,4-дихлорфенил)-1-{(4aRS,8SR,8aSR)-8-[(3SR)-3-гидроксипирролидин-1-ил]пергидрохиноксалин-1-ил}этан-1-она и 2-(3,4-дихлорфенил)-1-{(4aRS,8SR,8aSR)-8-[(3RS)-3-гидроксипирролидин-1-ил]пергидрохиноксалин-1-ил}этан-1-она (120 мг, 0,29 ммоль) растворяли в абсолютном CH
Cl
(18 мл) и добавляли по каплям бензоилхлорид (23 мг, 0,29 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 часов и затем упаривали в вакууме. Остаток очищали путем флэш-хроматографии (Ø 2 см, CH
Cl
/MeOH/NH
9:1:0,05, l=15 см, V=5 мл). Фракции, содержащие продукт, упаривали и остаток обрабатывали CH
Cl
. Органическую фазу экстрагировали путем трехкратного встряхивания с HCl (1 н.). pH водной фазы доводили до 8 с помощью NaOH (2 н.) и экстрагировали путем трехкратного встряхивания с CH
Cl
. Органические фазы сушили над Na
SO
и упаривали в вакууме. Остаток очищали путем флэш-хроматографии (Ø 2 см, CH
Cl
/MeOH/NH
9,5:0,5:0,05, l=15 см, V=5 мл). Фракции, содержащие продукт, упаривали. Остаток очищали путем препаративной ВЭЖХ (MeOH/H
O/Et
NH 70:30:0,1), как описано далее.
2
2
2
2
2
3
2
2
2
2
2
4
2
2
3
2
2
Для этого использовали насос L-7150, автосэмплер L-7200, УФ детектор L-7400, согласующее устройство D-7000 и программное обеспечение HSM (все от фирмы Merck Hitachi). Растворы готовили отдельно или использовали смесь метанол/вода с 0,1% диэтиламина. Скорость потока была 9,000 мл/мин. Использовали колонку Phenomenex Gemini 5 мкм C18 110A. Способ осуществляли при комнатной температуре. Инъекционный раствор составлял 400 мкл. Определение проводили при 225 нМ. Остаток растворяли в MeOH (500 мкл). Вводили 400 мкл (80% от полного количества вещества), и оставшиеся 100 мкл доливали до 500 мкл с MeOH. 400 мкл указанного раствора вводили вновь вторым приемом, таким образом 96% от всего образца очищали путем хроматографии в два приема.
Из фракции, включающей продукт, упаривали MeOH, водную фазу экстрагировали путем трехкратного встряхивания с CH
Cl
и объединенные органические фазы сушили над Na
SO
и упаривали. Выделяли бесцветный твердый продукт.
2
2
2
4
Пример 15
Получение метил {(4aRS,8SR,8aRS)-1-[2-(3,4-дихлорфенил)ацетил]-8-[(3SR)- и (3RS)-3-гидроксипирролидин-1-ил]пергидрохиноксалин-4-ил}карбоксилата
Получение осуществляли исходя из диастереомерной смеси 2-(3,4-дихлорфенил)-1-{(4aRS,8SR,8aSR)-8-[(3SR)-3-гидроксипирролидин-1-ил]пергидрохиноксалин-1-ил}этан-1-она и 2-(3,4-дихлорфенил)-1-{(4aRS,8SR,8aSR)-8-[(3RS)-3-гидроксипирролидин-1-ил]пергидрохиноксалин-1-ил}этан-1-она, которые получали способом, описанным в примере 2.1-2.4.
В атмосфере N
диастереомерную смесь 2-(3,4-дихлорфенил)-1-{(4aRS,8SR,8aSR)-8-[(3SR)-3-гидроксипирролидин-1-ил]пергидрохиноксалин-1-ил}этан-1-она и 2-(3,4-дихлорфенил)-1-{(4aRS,8SR,8aSR)-8-[(3RS)-3-гидроксипирролидин-1-ил]пергидрохиноксалин-1-ил}этан-1-она (132 мг, 0,32 ммоль) растворяли в абсолютном CH
Cl
(20 мл) и добавляли по каплям метилхлорформиат (30 мг, 0,32 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 часов и затем упаривали в вакууме. Остаток очищали путем флэш-хроматографии (Ø 2 см, CH
Cl
/MeOH/NH
9:1:0,05, l=15 см, V=5 мл). Фракции, содержащие продукт, упаривали и остаток очищали путем препаративной ВЭЖХ (как описано в примере 14, в смеси MeOH/H
O/Et
NH 70:30:0,1). Из фракции, включающей продукт, в вакууме упаривали MeOH, водную фазу экстрагировали путем трехкратного встряхивания с CH
Cl
и объединенные органические фазы сушили над Na
SO
и упаривали. Получали смолистое вещество бледно-желтого цвета.
2
2
2
2
2
3
2
2
2
2
2
4
Пример 16
Получение 3-{(4aRS,8SR,8aRS)-1-[2-(3,4-дихлорфенил)ацетил]-8-[(3SR)- и (3RS)-3-гидроксипирролидин-1-ил]пергидрохиноксалин-4-ил}-3-оксопропионовой кислоты
Получение осуществляли исходя из диастереомерной смеси 2-(3,4-дихлорфенил)-1-{(4aRS,8SR,8aSR)-8-[(3SR)-3-гидроксипирролидин-1-ил]пергидрохиноксалин-1-ил}этан-1-она и 2-(3,4-дихлорфенил)-1-{(4aRS,8SR,8aSR)-8-[(3RS)-3-гидроксипирролидин-1-ил]пергидрохиноксалин-1-ил}этан-1-она, которые получали способом, описанным в примере 2.1-2.4.
В атмосфере N
диастереомерную смесь 2-(3,4-дихлорфенил)-1-{(4aRS,8SR,8aSR)-8-[(3SR)-3-гидроксипирролидин-1-ил]пергидрохиноксалин-1-ил}этан-1-она и 2-(3,4-дихлорфенил)-1-{(4aRS,8SR,8aSR)-8-[(3RS)-3-гидроксипирролидин-1-ил]пергидрохиноксалин-1-ил}этан-1-она (104 мг, 0,25 ммоль) растворяли в абсолютном CH
Cl
(15 мл) и добавляли по каплям монометиловый эфир хлорангидрида малоновой кислоты (34 мг, 0,25 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3,5 часов и затем упаривали в вакууме. Остаток обрабатывали MeOH (20 мл) и добавляли 2 н. NaOH (2 мл). Раствор перемешивали в течение ночи и затем упаривали в вакууме. Остаток дважды очищали с помощью флэш-хроматографии (1. Ø 2 см, CH
Cl
/MeOH/NH
8:2:0,1, l=15 см, V=5 мл; 2. Ø 1 см, CH
Cl
/MeOH/NH
8:2:0,2, l=14 см, V=3 мл). Остаток очищали с помощью препаративной ВЭЖХ (как описано в примере 14, в смеси MeOH/H
O/Et
NH 40:60:0,1). Из фракции, включающей продукт, упаривали MeOH, водную фазу экстрагировали путем трехкратного встряхивания с CH
Cl
и объединенные органические фазы сушили над Na
SO
и упаривали. Выделяли бесцветное масло.
2
2
2
2
2
3
2
2
3
2
2
2
2
2
4
Пример 17
Получение метил 3-{(4aRS,8SR,8aRS)-1-[2-(3,4-дихлорфенил)ацетил]-8-[(3SR)- и (3RS)-3-гидроксипирролидин-1-ил]пергидрохиноксалин-4-ил}-3-оксопропионата
Получение осуществляли исходя из диастереомерной смеси 2-(3,4-дихлорфенил)-1-{(4aRS,8SR,8aSR)-8-[(3SR)-3-гидроксипирролидин-1-ил]пергидрохиноксалин-1-ил}этан-1-она и 2-(3,4-дихлорфенил)-1-{(4aRS,8SR,8aSR)-8-[(3RS)-3-гидроксипирролидин-1-ил]пергидрохиноксалин-1-ил}этан-1-она, которые получали способом, описанным в примере 2.1-2.4.
В атмосфере N
диастереомерную смесь 2-(3,4-дихлорфенил)-1-{(4aRS,8SR,8aSR)-8-[(3SR)-3-гидроксипирролидин-1-ил]пергидрохиноксалин-1-ил}этан-1-она и 2-(3,4-дихлорфенил)-1-{(4aRS,8SR,8aSR)-8-[(3RS)-3-гидроксипирролидин-1-ил]пергидрохиноксалин-1-ил}этан-1-она (204 мг, 0,49 ммоль) растворяли в абсолютном CH
Cl
(30 мл) и добавляли по каплям монометиловый эфир хлорангидрида малоновой кислоты (67 мг, 0,49 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 часов и затем упаривали в вакууме. Остаток очищали путем флэш-хроматографии (Ø 2 см, CH
Cl
/MeOH/NH
9:1:0,05, l=15 см, V=5 мл). Получали смолу желтоватого цвета.
2
2
2
2
2
3
Пример 18
Получение 2-(3,4-дихлорфенил)-1-[(4aRS,8SR,8aRS)-4-метил-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-1-ил]этан-1-она
Получение осуществляли исходя из 2-(3,4-дихлорфенил)-1-[(4aRS,8SR,8aRS)-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-1-ил]этан-1-она, который получали способом, описанным в примере 1.1-1.9.
В 5 мл MeOH растворяли формалин (37%, 223 мг, 2,7 ммоль) и добавляли NaBH
CN (17,2 мг, 0,27 ммоль). Устанавливали pH, равный 5, с помощью концентрированной уксусной кислоты. В MeOH (15 мл) растворяли 2-(3,4-дихлорфенил)-1-[(4aRS,8SR,8aRS)-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-1-ил]этан-1-он (109 мг, 0,27 ммоль), затем добавляли к смеси и смесь перемешивали в течение 1,5 часов. После добавления насыщенного раствора Na
CO
(12 мл) смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 минут. Образовавшийся осадок фильтровали и из фильтрата при давлении 100 мбар упаривали MeOH. Водную фазу экстрагировали путем пятикратного встряхивания с CH
Cl
и объединенные органические фазы сушили над Na
SO
и упаривали в вакууме. Остаток очищали путем флэш-хроматографии (Ø 2 см, CH
Cl
/MeOH/NH
9,5:0,5:0,05, l=16 см, V=5 мл). Выделяли смолу желтоватого цвета.
3
2
3
2
2
2
4
2
2
3
Пример 19
Получение 1-[(4aRS,8SR,8aRS)-4-бутил-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-1-ил]-2-(3,4-дихлорфенил)этан-1-она
Получение осуществляли исходя из 2-(3,4-дихлорфенил)-1-[(4aRS,8SR,8aRS)-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-1-ил]этан-1-она, который получали способом, описанным в примере 1.1-1.9.
Бутиральдегид (93 мг, 1,3 ммоль) растворяли в 5 мл MeOH и добавляли NaBH
CN (82 мг, 1,3 ммоль). Устанавливали pH, равный 5, с помощью концентрированной уксусной кислоты. В MeOH (15 мл) растворяли 2-(3,4-дихлорфенил)-1-[(4aRS,8SR,8aRS)-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-1-ил]этан-1-он (101 мг, 0,25 ммоль), затем добавляли к смеси и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После добавления насыщенного раствора Na
CO
(15 мл) смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 минут. Образовавшийся осадок фильтровали. Водную фазу фильтрата экстрагировали три раза с CH
Cl
и объединенные органические фазы сушили над Na
SO
и упаривали в вакууме. Остаток очищали путем флэш-хроматографии (Ø 2 см, CH
Cl
/MeOH/NH
9,5:0,5:0,1, l=15 см, V=5 мл). Получали бесцветную смолу.
3
2
3
2
2
2
4
2
2
3
Пример 20
Получение 2-(3,4-дихлорфенил)-1-[(4aRS,8SR,8aRS)-4-(4-метоксибензил)-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-1-ил]этан-1-она
Получение осуществляли исходя из 2-(3,4-дихлорфенил)-1-[(4aRS,8SR,8aRS)-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-1-ил]этан-1-она, который получали способом, описанным в примере 1.1-1.9.
Анисальдегид (361 мг, 2,6 ммоль) растворяли в 5 мл MeOH и добавляли NaBH
CN (170 мг, 2,6 ммоль). Устанавливали pH, равный 5, с помощью концентрированной уксусной кислоты. В MeOH (15 мл) растворяли 2-(3,4-дихлорфенил)-1-[(4aRS,8SR,8aRS)-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-1-ил]этан-1-он (105 мг, 0,26 ммоль), затем добавляли к смеси и смесь перемешивали в течение ночи. После добавления насыщенного раствора Na
CO
(15 мл) смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 минут. Образовавшийся осадок фильтровали. Водную фазу фильтрата промывали три раза с помощью CH
Cl
и объединенные органические фазы сушили над Na
SO
и упаривали в вакууме. Остаток очищали путем флэш-хроматографии (Ø 2 см, CH
Cl
/MeOH/NH
9,5:0,5:0,1, l=15 см, V=5 мл). Фракции, содержащие продукт, упаривали, остаток обрабатывали CH
Cl
и раствор экстрагировали путем трехкратного встряхивания с HCl (1 н.). Затем pH водной фазы доводили до 8 с помощью NaOH (2 н.) и экстрагировали путем трехкратного встряхивания с CH
Cl
. Органические фазы сушили над Na
SO
и упаривали в вакууме. Выделяли смолу желтоватого цвета.
3
2
3
2
2
2
4
2
2
3
2
2
2
2
2
4
Пример 21
Получение 2-(3,4-дихлорфенил)-1-{(4aRS,8SR,8aRS)-4-[(пиридин-2-ил)метил]-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-1-ил}этан-1-она
Получение осуществляли исходя из 2-(3,4-дихлорфенил)-1-[(4aRS,8SR,8aRS)-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-1-ил]этан-1-она, который получали способом, описанным в примере 1.1-1.9.
Пиридин-2-карбальдегид (268 мг, 2,5 ммоль) растворяли в MeOH (5 мл) и добавляли NaBH
CN (157 мг, 2,5 ммоль). Устанавливали pH, равный 5, с помощью концентрированной уксусной кислоты. В MeOH (15 мл) растворяли 2-(3,4-дихлорфенил)-1-[(4aRS,8SR,8aRS)-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-1-ил]этан-1-он (98 мг, 0,25 ммоль), затем добавляли к смеси и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После добавления насыщенного раствора Na
CO
(15 мл) смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 минут. Образовавшийся осадок фильтровали. Водную фазу фильтрата экстрагировали пять раз с помощью CH
Cl
и объединенные органические фазы сушили над Na
SO
и упаривали в вакууме. Остаток четыре раза очищали с помощью флэш-хроматографии (в каждом случае Ø 2 см, l=15 см, V=5 мл; 1. CH
Cl
/MeOH/NH
9,5:0,5:0,1, 2. CH
Cl
/MeOH/NH
9,5:0,5:0,1, 3. CH
Cl
/MeOH/NH
9,75:0,25:0,15, 4. CH
Cl
/MeOH/NH
9,5:0,5:0,15). Сырой продукт затем очищали путем препаративной ВЭЖХ (как описано в примере 14, в смеси MeOH/H
O/Et
NH 80:20:0,1). Из фракции, включающей продукт, упаривали MeOH, водную фазу экстрагировали путем трехкратного встряхивания с CH
Cl
и объединенные органические фазы сушили над Na
SO
и упаривали. Выделяли смолу желтоватого цвета.
3
2
3
2
2
2
4
2
2
3
2
2
3
2
2
3
2
2
3
2
2
2
2
2
4
Пример 22
Получение 2-(3,4-дихлорфенил)-1-{(4aRS,8SR,8aRS)-4-[(пиридин-3-ил)метил]-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-1-ил}этан-1-она
Получение осуществляли исходя из 2-(3,4-дихлорфенил)-1-[(4aRS,8SR,8aRS)-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-1-ил]этан-1-она, который получали способом, описанным в примере 1.1-1.9.
2-(3,4-Дихлорфенил)-1-[(4aRS,8SR,8aRS)-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-1-ил]этан-1-он (120 мг, 0,30 ммоль) растворяли в абсолютном CH
Cl
(10 мл) и добавляли никотинальдегид (65 мг, 0,61 ммоль), NaBH(OAc)
(128 мг, 0,61 ммоль) и ледяную уксусную кислоту (36 мг, 0,61 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре. Спустя 21 час вновь добавляли те же количества никотинальдегида, NaBH(OAc)
и ледяной уксусной кислоты и смесь перемешивали в течение 3,5 часов. Смесь затем фильтровали и органическую фазу экстрагировали путем трехкратного встряхивания с HCl (1 н.). Водную фазу доводили до pH 8 с помощью NaOH (2 н.) и экстрагировали путем трехкратного встряхивания с CH
Cl
. Органические фазы сушили над Na
SO
и упаривали в вакууме. Остаток очищали путем препаративной ВЭЖХ (как описано в примере 14, в смеси MeOH/H
O/Et
NH 80:20:0,1). Из фракции, включающей продукт, упаривали MeOH, водную фазу экстрагировали путем трехкратного встряхивания с CH
Cl
и объединенные органические фазы сушили над Na
SO
и упаривали. Выделяли смолу желтоватого цвета.
2
2
3
3
2
2
2
4
2
2
2
2
2
4
Пример 23
Получение 2-(3,4-дихлорфенил)-1-{(4aRS,8SR,8aRS)-4-[(lH-имидазол-5-ил)метил]-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-1-ил}этан-1-она
Получение осуществляли исходя из 2-(3,4-дихлорфенил)-1-[(4aRS,8SR,8aRS)-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-1-ил]этан-1-она, который получали способом, описанным в примере 1.1-1.9.
2-(3,4-Дихлорфенил)-1-[(4aRS,8SR,8aRS)-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-1-ил]этан-1-он (134 мг, 0,34 ммоль) растворяли в абсолютном CH
Cl
(10 мл) и добавляли 1H-имидазол-5-карбальдегид (65 мг, 0,67 ммоль), NaBH(OAc)
(143 мг, 0,67 ммоль) и ледяную уксусную кислоту (41 мг, 0,67 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2,5 часов. Смесь затем фильтровали и органическую фазу экстрагировали путем трехкратного встряхивания с HCl (1 н.). pH водной фазы доводили до 8 с помощью NaOH (2 н.) и экстрагировали путем трехкратного встряхивания с CH
Cl
. Органические фазы сушили над Na
SO
и упаривали в вакууме. Остаток очищали путем препаративной ВЭЖХ (как описано в примере 14, в смеси MeOH/H
O/Et
NH 80:20:0,1). Из фракции, включающей продукт, упаривали MeOH, водную фазу экстрагировали путем трехкратного встряхивания с CH
Cl
и объединенные органические фазы сушили над Na
SO
и упаривали. Выделяли бесцветный твердый продукт.
2
2
3
2
2
2
4
2
2
2
2
2
4
Пример 24
Получение 2-(3,4-дихлорфенил)-1-{(4aRS,8SR,8aRS)-4-метил-8-[(3SR)- и (3RS)-3- гидроксипирролидин-1-ил]пергидрохиноксалин-1-ил}этан-1-она
Получение осуществляли исходя из диастереомерной смеси 2-(3,4-дихлорфенил)-1-{(4aRS,8SR,8aSR)-8-[(3SR)-3-гидроксипирролидин-1-ил]пергидрохиноксалин-1-ил}этан-1-она и 2-(3,4-дихлорфенил)-1-{(4aRS,8SR,8aSR)-8-[(3RS)-3-гидроксипирролидин-1-ил]пергидрохиноксалин-1-ил}этан-1-она, которые получали способом, описанным в примере 2.1-2.4.
В 5 мл MeOH растворяли формалин (37%, 170 мг, 2,1 ммоль) и добавляли NaBH
CN (132 мг, 2,1 ммоль). Устанавливали pH, равный 5, с помощью концентрированной уксусной кислоты. В MeOH (15 мл) растворяли диастереомерную смесь 2-(3,4-дихлорфенил)-1-{(4aRS,8SR,8aSR)-8-[(3SR)-3-гидроксипирролидин-1-ил]пергидрохиноксалин-1-ил}этан-1-она и 2-(3,4-дихлорфенил)-1-{(4aRS,8SR,8aSR)-8-[(3RS)-3-гидроксипирролидин-1-ил]пергидрохиноксалин-1-ил}этан-1-она (86 мг, 0,21 ммоль), и затем добавляли к смеси и смесь перемешивали в течение 2 часов. После добавления насыщенного раствора Na
CO
(15 мл) смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 минут. Образовавшийся осадок фильтровали. Из фильтрата под давлением 100 мбар упаривали MeOH. Водную фазу экстрагировали путем пятикратного встряхивания с CH
Cl
и объединенные органические фазы сушили над Na
SO
и упаривали в вакууме. Остаток очищали путем флэш-хроматографии (Ø 2 см, CH
Cl
/MeOH/NH
9:1:0,1, l=16 см, V=5 мл). Выделяли смолу желтоватого цвета.
3
2
3
2
2
2
4
2
2
3
Пример 25
Получение 2-(3,4-дихлорфенил)-1-{(4aRS,8SR,8aSR)-4-[(пиридин-3-ил)метил]-8-[(3SR)- и (3RS)-3-гидроксипирролидин-1-ил]пергидрохиноксалин-1-ил}этан-1-она
Получение осуществляли исходя из диастереомерной смеси 2-(3,4-дихлорфенил)-1-{(4aRS,8SR,8aSR)-8-[(3SR)-3-гидроксипирролидин-1-ил]пергидрохиноксалин-1-ил}этан-1-она и 2-(3,4-дихлорфенил)-1-{(4aRS,8SR,8aSR)-8-[(3RS)-3-гидроксипирролидин-1-ил]пергидрохиноксалин-1-ил}этан-1-она, которые получали способом, описанным в примере 2.1-2.4.
Раствор диастереомерной смеси 2-(3,4-дихлорфенил)-1-{(4aRS,8SR,8aSR)-8-[(3SR)-3-гидроксипирролидин-1-ил]пергидрохиноксалин-1-ил}этан-1-она и 2-(3,4-дихлорфенил)-1-{(4aRS,8SR,8aSR)-8-[(3RS)-3-гидроксипирролидин-1-ил]пергидрохиноксалин-1-ил}этан-1-она (103 мг, 0,25 ммоль) в MeOH (15 мл) добавляли по каплям к раствору никотинальдегида (53 мг, 0,49 ммоль) и NaBH
CN (157 мг, 2,5 ммоль) в MeOH (5 мл). Устанавливали pH, равный 5, с помощью концентрированной уксусной кислоты. Смесь перемешивали в течение 2 часов. После добавления насыщенного раствора Na
CO
(15 мл) смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 минут. Образовавшийся осадок фильтровали и фильтрат упаривали в вакууме. Остаток очищали путем флэш-хроматографии (Ø 2 см, CH
Cl
/MeOH/NH
9,5:0,5:1, l=16 см, V=3 мл). Фракции, содержащие продукт, упаривали. Остаток очищали путем препаративной ВЭЖХ (как описано в примере 14, в смеси MeOH/H
O/Et
NH 70:30:0,1). Из фракции, включающей продукт, упаривали MeOH, водную фазу экстрагировали путем трехкратного встряхивания с CH
Cl
и объединенные органические фазы сушили над Na
SO
и упаривали. Выделяли смолу желтоватого цвета.
3
2
3
2
2
3
2
2
2
2
2
4
Пример 26
Получение 2-(3,4-дихлорфенил)-1-{(4aRS,8SR,8aSR)-4-[(1H-имидазол-5-ил)метил]-8-[(3SR)- и (3RS)-3-гидроксипирролидин-1-ил]пергидрохиноксалин-1-ил}этан-1-она
Получение осуществляли исходя из диастереомерной смеси 2-(3,4-дихлорфенил)-1-{(4aRS,8SR,8aSR)-8-[(3SR)-3-гидроксипирролидин-1-ил]пергидрохиноксалин-1-ил}этан-1-она и 2-(3,4-дихлорфенил)-1-{(4aRS,8SR,8aSR)-8-[(3RS)-3-гидроксипирролидин-1-ил]пергидрохиноксалин-1-ил}этан-1-она, которые получали способом, описанным в примере 2.1-2.4.
1H-Имидазол-5-карбальдегид (262 мг, 2,7 ммоль) растворяли в MeOH (5 мл) и добавляли NaBH
CN (172 мг, 2,7 ммоль). Устанавливали pH, равный 5, с помощью концентрированной уксусной кислоты. В MeOH (15 мл) растворяли диастереомерную смесь 2-(3,4-дихлорфенил)-1-{(4aRS,8SR,8aSR)-8-[(3SR)-3-гидроксипирролидин-1-ил]пергидрохиноксалин-1-ил}этан-1-она и 2-(3,4-дихлорфенил)-1-{(4aRS,8SR,8aSR)-8-[(3RS)-3-гидроксипирролидин-1-ил]пергидрохиноксалин-1-ил}этан-1-она (113 мг, 0,27 ммоль), затем добавляли к смеси и смесь перемешивали в течение 5 часов. После добавления насыщенного раствора Na
CO
(15 мл) смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 минут. Образовавшийся осадок фильтровали. Фильтрат промывали три раза с помощью CH
Cl
и объединенные органические фазы сушили над Na
SO
и упаривали в вакууме. Остаток дважды очищали флэш-хроматографией (Ø 2 см, CH
Cl
/MeOH/NH
9:1:0,1, l=15 см, V=5 мл). Фракции, содержащие продукт, упаривали. Остаток обрабатывали CH
Cl
и смесь экстрагировали путем трехкратного встряхивания с HCl (1 н.). pH водной фазы доводили до 8 с помощью NaOH (2 н.) и экстрагировали путем трехкратного встряхивания с CH
Cl
. Органические фазы сушили над Na
SO
и упаривали в вакууме. Выделяли смолу желтоватого цвета.
3
2
3
2
2
2
4
2
2
3
2
2
2
2
2
4
Пример 27
Получение <(3SR)- и (3RS)-1-{(4aRS,5RS,8aSR)-1-бензил-4-[2-(3,4-дихлорфенил)ацетил]пергидрохиноксалин-5-ил}пирролидин-3-ил>-2-(3,4-дихлорфенил)ацетата
Получение осуществляли исходя из (4aRS,5SR,8aRS)-1-бензил-5-((3SR)- и (3RS)- гидроксипирролидин-1-ил)пергидрохиноксалина, который получали способом, описанным в примере 2.1-2.2.
(4aRS,5SR,8aRS)-1-Бензил-5-((3SR)- и (3RS)-гидроксипирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин (0,70 г, 2,2 ммоль) растворяли в абсолютном CH
Cl
(100 мл). Добавляли по каплям 2-(3,4-дихлорфенил)ацетилхлорид (1,1 г, 4,9 ммоль) и смесь перемешивали при комнатной температуре. Спустя 4 часа добавляли 2 н. NaOH (4,5 мл) и смесь энергично перемешивали в течение ночи. Органическую фазу отделяли и остаток дважды промывали 2 н. NaOH. Затем органическую фазу сушили над Na
SO
и упаривали в вакууме. Остаток дважды очищали с помощью флэш-хроматографии (Ø 2 см, EA/Et
NH 10:0,1, l=15 см, V=5 мл). Получали смолистое вещество светло-желтого цвета.
2
2
2
4
2
Пример 28
Исследование ингибирования боли in vivo на мышах
Антиноцицепцическую активность изучали в исследовании фенилхинон-индуцированных конвульсий на мышах, как описано в работе Hendershot, L. C; Forsaith, J. J. Pharmacol. Exp. Ther. 1959, 125, 237-240.
Для этого исследования были использованы самцы мышей линии NMRI (Charles River, Germany) с массой тела от 25 г до 30 г. Диастереомерную смесь 2-(3,4-дихлорфенил)-1-{(4aRS,8SR,8aSR)-8-[(3SR)-3-гидроксипирролидин-1-ил]пергидрохиноксалин-1-ил}этан-1-она и 2-(3,4-дихлорфенил)-1-{(4aRS,8SR,8aSR)-8-[(3RS)-3-гидроксипирролидин-1-ил]пергидрохиноксалин-1-ил}этан-1-она в концентрации 3,16 мг/кг, 10 мг/кг или 21,5 мг/кг, растворенные в PEG 200 (полиэтиленгликоль, Merck Schuhardt OHG), или соединение 2-(3,4-дихлорфенил)-1-[(4aRS,8SR,8aRS)-8-пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-1-ил]этан-1-он в концентрации 10 мг/кг, растворенное в PEG 200, в каждом случае вводили внутривенно группам из 10 животных. Спустя 10 минут интраперитонеально вводили 0,3 мл 0,02%-й концентрации водный раствор фенилхинона (фенил-п-бензохинон, Sigma, Deisenhofen). Раствор фенилхинона готовили с добавлением 5% этанола и выдерживали на водяной бане при температуре 45°C.
Затем в течение 10 минут подсчитывали количество вызываемых болью потягивающих движений, так называемые судорожные реакции (число n). Выпрямление тела с потягиванием задних конечностей называется так называемыми реакциями потягивания. Если вещество обладает анальгетическим действием, количество потягивающих движений уменьшается по сравнению с контрольной группой, которая не получала исследуемое вещество.
Для этого животных помещали индивидуально в клетки наблюдения. Затем спустя 5-20 минут после введения дозы фенилхинона количество вызываемых болью потягивающих движениий подсчитывали в течение 15 минут с помощью счетчика с нажимной кнопкой. Животных, которые получали раствор PEG 200 носителя (внутривенно, i.v.) и фенилхинон (внутрибрюшинно, i.p.), также испытывали в качестве контрольных.
Выраженное в процентах ингибирование реакций потягивания посредством диастереомерной смеси 2-(3,4-дихлорфенил)-1-{(4aRS,8SR,8aSR)-8-[(3SR)-3-гидроксипирролидин-1-ил]пергидрохиноксалин-1-ил}этан-1-она и 2-(3,4-дихлорфенил)-1-{(4aRS,8SR,8aSR)-8-[(3RS)-3-гидроксипирролидин-1-ил]пергидрохиноксалин-1-ил}этан-1-она или 2-(3,4-дихлорфенил)-1-[(4aRS,8SR,8aRS)-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-1-ил]этан-1-она подсчитывали в соответствии со следующей формулой (d):
Было обнаружено, что при дозе 10 мг/кг соединения 2-(3,4-дихлорфенил)-1-[(4aRS,8SR,8aRS)-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-1-ил]этан-1-она, получали около 9% ингибирования. Ощутимых побочных эффектов обнаружено не было.
Кроме того, было обнаружено, что диастереомерная смесь 2-(3,4-дихлорфенил)-1-{(4aRS,8SR,8aSR)-8-[(3SR)-3-гидроксипирролидин-1-ил]пергидрохиноксалин-1-ил}этан-1-она и 2-(3,4-дихлорфенил)-1-{(4aRS,8SR,8aSR)-8-[(3RS)-3-гидроксипирролидин-1-ил]пергидрохиноксалин-1-ил}этан-1-она ингибирует 5% потягивающих движений при концентрации 3,16 мг/кг, 40% при концентрации 10 мг/кг и 97% при концентрации 21,5 мг/кг.
Таким образом было подтверждено анальгетическое действие диастереомерной смеси 2-(3,4-дихлорфенил)-1-{(4aRS,8SR,8aSR)-8-[(3SR)-3-гидроксипирролидин-1-ил]пергидрохиноксалин-1-ил}этан-1-она и 2-(3,4-дихлорфенил)-1-{(4aRS,8SR,8aSR)-8-[(3RS)-3-гидроксипирролидин-1-ил]пергидрохиноксалин-1-ил}этан-1-она и соединения 2-(3,4-дихлорфенил)-1-[(4aRS,8SR,8aRS)-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-1-ил]этан-1-она.
Пример 29
Исследования подавления боли на модели висцеральной воспалительной боли
В этом исследовании на животном у мыши с помощью горчичного масла вызывали ненейрогенный колит (воспаление). Различные испытуемые группы в процессе экспериментов демонстрировали резкое снижение периферического и центрального происхождения аналгезии в результате введения исследуемого соединения, 2-(3,4-дихлорфенил)-1-[(4aRS,8SR,8aRS)-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-1-ил]этан-1-она и диастереомерной смеси 2-(3,4-дихлорфенил)-1-{(4aRS,8SR,8aSR)-8-[(3SR)-3-гидроксипирролидин-1-ил]пергидрохиноксалин-1-ил}этан-1-она и 2-(3,4-дихлорфенил)-1-{(4aRS,8SR,8aSR)-8-[(3RS)-3-гидроксипирролидин-1-ил]пергидрохиноксалин-1-ил}этан-1-она. Если не указано иное, исследования проводили способом, описанным в работе Christoph, T.; Kögel, B.; Schiene, K.; Meen, M.; De Vry, J.; Friedrichs, E. Eur. J. Pharmacol. 2005, 507, 87-98.
Через две - двенадцать минут после ректального введения горчичного масла спонтанную висцеральную боль регистрировали количественно в виде болевого показателя, наблюдая поведение животных, например подпрыгивание, подергивание или издавание звуков. Через 20-40 минут, брюшинную стенку животных стимулировали механически. Центрального происхождения аллодинию и гипералгезию устанавливали с помощью нитей фон Фрея (1 нМ и 16 нМ, соответственно).
Численность исследуемой группы составляла n=7 мышей. Полиэтиленгликоль, PEG200 (Merck Schuhardt OHG), вводили ректально контрольной группе животных, и во второй группе колит вызывали ректальным введением горчичного масла. Следующим группам горчичное масло (ректально) и диастереомерную смесь 2-(3,4-дихлорфенил)-1-{(4aRS,8SR,8aSR)-8-[(3SR)-3-гидроксипирролидин-1-ил]пергидрохиноксалин-1-ил}этан-1-она и 2-(3,4-дихлорфенил)-1-{(4aRS,8SR,8aSR)-8-[(3RS)-3-гидроксипирролидин-1-ил]пергидрохиноксалин-1-ил}этан-1-она или 2-(3,4-дихлорфенил)-1-[(4aRS,8SR,8aRS)-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-1-ил]этан-1-он, растворенный в PEG 200, вводили внутривенно. Одной испытуемой группе вводили соединение 2-(3,4-дихлорфенил)-1-[(4aRS,8SR,8aRS)-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-1-ил]этан-1-она в концентрации 21,5 мг/кг. Другим испытуемым группам вводили диастереомерную смесь 2-(3,4-дихлорфенил)-1-{(4aRS,8SR,8aSR)-8-[(3SR)-3-гидроксипирролидин-1-ил]пергидрохиноксалин-1-ил}этан-1-она и 2-(3,4-дихлорфенил)-1-{(4aRS,8SR,8aSR)-8-[(3RS)-3-гидроксипирролидин-1-ил]пергидрохиноксалин-1-ил}этан-1-она в концентрациях 1,0 мг/кг, 3,16 мг/кг и 10 мг/кг. Концентрацию 10 мл/кг использовали в качестве объема введения.
Ослабленное действие в группе, которой вводили горчичное масло и диастереомерую смесь или 2-(3,4-дихлорфенил)-1-[(4aRS,8SR,8aRS)-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-1-ил]этан-1-он, является индикатором анальгетического действия соединения.
Подробная процедура исследования:
Самца мыши линии NMRI (Charles River, Germany) с весом тела, равным от 20 г до 35 г, в течение около 30 минут адаптировали к условиям содержания в клетках из органического стекла (площадь основания 14,5×14,5 см, высота 10 см).
Поведение мыши в ответ на десять механических стимуляций с помощью нитей фон Фрея (Grünenthal GmbH) с усилием 1 мН, 4 мН, 8 мН, 16 мН и 32 мН на брюшинную стенку регистрировали в качестве предварительной величины. Поведение анализировали или посредством суммы количества защитных реакций или посредством свойств этих защитных реакций и их обработки путем умножения количества реакций на соответствующий фактор и затем получали сумму. Факторами в данном контексте были следующие: Фактор 1: незначительное увеличение брюшной полости, облизывание участка стимуляции, отодвигание; Фактор 2: вытягивание задних лап, легкое подпрыгивание, подергивание задних лап, судороги, заметное облизывание стимулируемого участка; Фактор 3: подпрыгивание, издавание звуков.
Затем испытуемым группам вводили внутривенно диастереомерную смесь 2-(3,4-дихлорфенил)-1-{(4aRS,8SR,8aSR)-8-[(3SR)-3-гидроксипирролидин-1-ил]пергидрохиноксалин-1-ил}этан-1-она и 2-(3,4-дихлорфенил)-1-{(4aRS,8SR,8aSR)-8-[(3RS)-3-гидроксипирролидин-1-ил]пергидрохиноксалин-1-ил}этан-1-она, соединение 2-(3,4-дихлорфенил)-1-[(4aRS,8SR,8aRS)-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-1-ил]этан-1-он или 10 мл/кг растворителя, PEG 200.
Через 5 минут вводили ректальную дозу 50 мкл 3,5% насыщенного раствора горчичного масла в PEG 200.
Контрольной группе животных вводили ректально 50 мкл PEG200.
Через 2-12 минут после введения дозы горчичного масла наблюдали демонстрируемое животными спонтанное поведение связанное с висцеральной болью. Количество реакций умножали на связанный фактор - Фактор 1: незначительное увеличение брюшной полости, облизывание участка стимуляции, отодвигание; Фактор 2: вытягивание задних лап, легкое подпрыгивание, подергивание задних лап, судороги, заметное облизывание стимулируемого участка; Фактор 3: подпрыгивание - и затем получали сумму, которая представляет собой показатель спонтанной висцеральной боли.
Через 20-40 минут после введения дозы горчичного масла поведение животных в ответ на десять механических стимуляций с помощью нитей фон Фрея с усилием 1 мН, 4 мН, 8 мН, 16 мН и 32 мН на брюшинную стенку вновь наблюдали и оценивали количественно, способом, описанным выше.
Механическую аллодинию оценивали исходя из суммы реакций на стимуляцию с помощью нитей фон Фрея с усилием 1 мН. Механическую гипералгезию оценивали исходя из суммы оценки реакций на стимуляцию с помощью нитей фон Фрея с усилием 16 мН.
Действие диастереомерной смеси 2-(3,4-дихлорфенил)-1-{(4aRS,8SR,8aSR)-8-[(3SR)-3-гидроксипирролидин-1-ил]пергидрохиноксалин-1-ил}этан-1-она и 2-(3,4-дихлорфенил)-1-{(4aRS,8SR,8aSR)-8-[(3RS)-3-гидроксипирролидин-1-ил]пергидрохиноксалин-1-ил}этан-1-она и соединения 2-(3,4-дихлорфенил)-1-[(4aRS,8SR,8aRS)-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-1-ил]этан-1-он оценивали в сравнении с контрольной группой по 1. ингибированию поведения, связанного со спонтанной висцеральной болью, 2. ингибированию механической аллодинии и 3. ингибированию механической гипералгезии.
Статистические оценки выполняли с помощью программного обеспечения SYSTAT, version 11 для Windows.
Было обнаружено, что соединение 2-(3,4-дихлорфенил)-1-[(4aRS,8SR,8aRS)-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-1-ил]этан-1-он показывает очень хорошее действие в исследовании спонтанной боли. Болевой показатель соответствовал показателю контрольной группы. Это указывает на хорошее ингибированием периферической боли.
На моделях видов боли центрального происхождения, аллодиния и гипералгезия, не было обнаружено действия соединения 2-(3,4-дихлорфенил)-1-[(4aRS,8SR,8aRS)-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-1-ил]этан-1-он.
Кроме того, было обнаружено, что диастереомерная смесь 2-(3,4-дихлорфенил)-1-{(4aRS,8SR,8aSR)-8-[(3SR)-3-гидроксипирролидин-1-ил]пергидрохиноксалин-1-ил}этан-1-она и 2-(3,4-дихлорфенил)-1-{(4aRS,8SR,8aSR)-8-[(3RS)-3-гидроксипирролидин-1-ил]пергидрохиноксалин-1-ил}этан-1-она демонстрирует анальгетический эффект в исследовании спонтанной боли с формами введения с повышением дозы. При 10 мг/кг было почти достигнуто отсутствие боли.
На моделях видов боли центрального происхождения не было обнаружено заметного уменьшения боли.
Это показывает, что диастереомерная смесь 2-(3,4-дихлорфенил)-1-{(4aRS,8SR,8aSR)-8-[(3SR)-3-гидроксипирролидин-1-ил]пергидрохиноксалин-1-ил}этан-1-она и 2-(3,4-дихлорфенил)-1-{(4aRS,8SR,8aSR)-8-[(3RS)-3-гидроксипирролидин-1-ил]пергидрохиноксалин-1-ил}этан-1-она и соединение 2-(3,4-дихлорфенил)-1-[(4aRS,8SR,8aRS)-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-1-ил]этан-1-он обладают хорошим периферическим анальгетическим действием.
Пример 30
κ
Анализ сродства к рецептору типа
Сродство к рецепторам может быть определено in vitro путем исследований связывания рецептора. Здесь используют препараты мембран, радиоактивно меченный радиолиганд, который имеет высокое сродство и селективность в отношении рецептора, и исследуемое вещество, сродство которого необходимо определить.
Инкубирование препарата рецептора с лигандом L приводит к установлению равновесия между незанятым рецептором R и свободным лигандом L с одной стороны и комплекса рецептор-лиганд RL с другой стороны.
Исходя из этого получают константу диссоциации K
в соответствии со следующим уравнением (a):
d
Для определения сродства исследуемого вещества проводят сравнительные эксперименты. В этом контексте радиолиганд и исследуемое вещество, которое изучают, добавляли к материалу рецептора. Два лиганда вводят теперь для конкуренции за сайты связывания на рецепторе. После установления равновесия несвязанный радиолиганд отделяли и измеряли радиоактивность комплекса рецептор-лиганд. Исходя из этого может быть сделано заключение относительно соотношения связанного радиолиганда и связанного исследуемого вещества, и таким образом может быть сделано заключение относительно сродства исследуемого вещества к рецептору. Радиоактивность измеряли непрямым способом с помощью сцинтилляционного счетчика с помощью сцинтилляционного коктейля, который испускает фотоны через меченный тритием лиганд.
Измерение осуществляли при постоянной концентрации рецептора и радиолиганда, а концентрацию исследуемого соединения, которую необходимо определить, изменяли. Кроме того, определяли значения для неспецифического и максимального связывания. Неспецифическое связывание радиолиганда определяли путем инкубирования препарата рецептора с радиолигандом и большого избытка селективного лиганда, который не был радиоактивно меченным, в результате чего специфически связанные участки рецептора насыщены немеченым лигандом. Затем измеряли радиоактивность, полученную от неспецифического связывания радиолиганда с мембраной, фильтром и т.д. Максимум связывания определяли путем инкубирования материала рецептора с радиолигандом без исследуемого вещества. Процент остаточного связывания радиолиганда может быть рассчитан в соответствии с уравнением (b):
Если остаточное связывание изобразить на схеме относительно логарифма основной десятки концентрации вещества, получают сигмоидальную кривую. Из этого определяли указанную концентрацию исследуемого вещества, при которой связывание радиолиганда с рецептором уменьшалось на 50%. Это называется значением IC
.
50
Из определенного значения IC
, с известной константой диссоциации K
радиолиганда может быть рассчитана константа равновесия K
в соответствии со следующим уравнением Cheng-Prusoff (c) (Cheng, Y. C; Prusoff, W. H. Biochem. Pharmacol. 1973, 22, 3099-3108):
50
d
i
где
K
- константа ингибирования исследуемого вещества;
i
IC
- концентрация исследуемого вещества, при которой заменяется 50% радиолиганда;
50
[L] - концентрация радиолиганда;
K
- константа диссоциации радиолиганда.
d
Величину K
определяли методом в соответствии с Hunter et al., Br. J. Pharmacol. 1990, 1001. 183-189 и Smith et al., J. Neuoch. 1989, 53, 27-36, где использовали препарат из целого головного мозга морской свинки и [
H]-U-69,593 (Amersham) использовали в качестве радиолиганда.
i
3
Величины K
подсчитывали из величин IC
, которые определяли из кривых конкурирования с шестью различными концентрациями. В случае соединений с высоким сродством величины K
определяли два или три раза и подсчитывали средние величины и стандартное отклонение (SEM, стандартная погрешность средней величины).
i
50
i
Испытуемые растворы
Соединение 2-(3,4-дихлорфенил)-1-[(4aRS,8SR,8aRS)-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-1-ил]этан-1-она и диастереомерной смеси 2-(3,4-дихлорфенил)-1-{(4aRS,8SR,8aSR)-8-[(3SR)-3-гидроксипирролидин-1-ил]пергидрохиноксалин-1-ил}этан-1-она и 2-(3,4-дихлорфенил)-1-{(4aRS,8SR,8aSR)-8-[(3RS)-3-гидроксипирролидин-1-ил]пергидрохиноксалин-1-ил}этан-1-он были в каждом случае растворены в диметилсульфоксиде (ДМСО) без добавления воды, с получением 10 мМ раствора. Потом этот исходный раствор замораживали при -80°C. Образец при необходимости размораживали и разбавляли с инкубационным буфером до необходимой концентрации.
Общий способ
Сначала выполняли скрининг с шестью различными концентрациями (концентрация c = 10
моль/л, 10
моль/л, 10
моль/л, 10
моль/л, 10
моль/л, 10
моль/л). Растворы в каждом случае измеряли дважды. Затем исследования выполняли аналогичным образом в шести различных концентрациях. Их выбирали таким образом, чтобы предполагаемое значение IC
находилось в средней области интервала концентрации.
-5
-6
-7
-8
-9
-10
50
Эксперименты с замещением оценивали путем вычисления нелинейной регрессии с помощью программного пакета GraphPad Prism 3,0 (GraphPad software). Полученные значения IC
преобразовывали в значения K
с помощью уравнения Cheng-Prusoff (Cheng, Y. C; Prusoff, W. H. Biochem. Pharmacol. 1973, 22, 3099-3108).
50
i
Исследования выполняли три раза и подсчитывали средние величины, и стандартное отклонение (SEM, “стандартная погрешность средней величины”) получали из тройной величины. Конкретные значения констант равновесия диссоциации для радиолиганд получали из литературы.
Стандартизация исследований
Для стандартизации способа измерения рецепторные препараты разбавляли в различных концентрациях конкретным буфером и измеряли как неспецифическое, так и суммарное связывание. Затем разбавители рецепторных препаратов выбирали с тем, чтобы неспецифическое связывание составляло около 10% суммарного связывания (приблизительно 30 от 300 cpm). Таким образом обеспечивали минимальную концентрацию желаемого рецептора в белковой суспензии. Далее следует анализ белковой концентрации в соответствии с Bradford (приблизительно 1,5-4,0 мг/мл).
Получение κ рецепторного препарата
Все полученные растворы охлаждали с помощью льда. Приблизительно 5-6 раз раствор сахарозы (0,32 M) добавляли к тканям головного мозга морской свинки, в количестве пяти, и смесь гомогенизировали (приблизительно 800-1000 цикл/мин) в гомогенизаторе Поттера (Elvehjem-Potter, Braun) при охлаждении льдом. Гомогенат помещали в сосуд для центрифугирования (40 мл) и центрифугировали (2900 цикл/мин, 4°C, 10 мин) в высокопроизводительной охлаждаемой центрифуге (Sorvall RC-5, Thermo Fisher Scientific). Супернатант помещали в сосуды для ультрацентрифугирования (40 мл) и центрифугировали вновь (23500 г, 4°C, 20 мин, Sorvall RC-5, Thermo Fisher Scientific).
Супернатант ультрацентрифугирования удаляли и осадок центрифугирования с небольшим количеством охлажденного льдом Трис-буфера (50 мМ, pH 8,0, 1,66 г Трис-основание, 5,72 г Трис-HCl, до 1 л с водой). Осадок центрифугирования ресуспендировали интенсивным встряхиванием (vortexer) и суспензию инкубировали при комнатной температуре (22°C) в течение 30 минут при непрерывном встряхивании. Затем суспензию центрифугировали вновь (23,500 г, 4°C, 20 мин). Супернатант удаляли и осадок центрифугирования обрабатывали небольшим количеством холодного Трис-буфера. После гомогенизации в гомогенезаторе Поттера определяли неспецифическое и суммарное связывание. Потом белковую суспензию разбавляли Трис-буфером таким образом, чтобы неспецифическое связывание составляло около 10% от суммарного связывания и выполняли анализ белка в соответствии с Bradford (белковый стандарт: бычий сывороточный альбумин, Sigma-Aldrich). Содержание белка в препарате составляло, как правило, приблизительно 1,5 мг/мл. Гомогенат помещали 2 мл в сосуды Эппендорфа и замораживали при -81°C.
Анализ сродства к рецептору типа κ
Начиная с 10 мМ базового раствора диастереомерной смеси 2-(3,4-дихлорфенил)-1-{(4aRS,8SR,8aSR)-8-[(3SR)-3-гидроксипирролидин-1-ил]пергидрохиноксалин-1-ил}этан-1-она и 2-(3,4-дихлорфенил)-1-{(4aRS,8SR,8aSR)-8-[(3RS)-3-гидроксипирролидин-1-ил]пергидрохиноксалин-1-ил}этан-1-она и соединения 2-(3,4-дихлорфенил)-1-[(4aRS,8SR,8aRS)-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-1-ил]этан-1-она, растворы диастереомерной смеси и соединение 2-(3,4-дихлорфенил)-1-[(4aRS,8SR,8aRS)-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-1-ил]этан-1-он в различных концентрациях получали путем разбавления буфером. [
H]-U69,593 (Amersham) в Трис-буфере (50 мМ, pH 7,4) использовали в качестве радиолиганда. Перед проведением исследований связывания для ослабления неспецифического связывания циновки фильтра (Filtermat A, Perkin-Elmer) содержали в полиэтилениминовом растворе (0,2%) в течение 2,5 часов. Суммарное связывание и неспецифическое связывание также определяли в каждом тесте. Для определения неспецифического связывания исследование проводили в присутствии большого избыточного количества немеченого U69,593 (10 мкм). Для измерения суммарного связывания иследование проводили без аналитического вещества и недостающий объем замещали буфером. В суммарном объеме 200 мкл, 50 мкл ТРИС-MgCl
буфера, 50 мкл раствора аналитического вещества, 50 мкл раствора радиолиганда (4 нМ; соответствует 1 нМ в исследовании) и наконец 50 мкл белкового раствора (приблизительно 1,5 мг/мл) пипетировали в лунку титрационного микропланшета (стандартные 96-луночные титрационные микропланшеты, Diagonal). После заполнения всех лунок планшет накрывали крышкой и встряхивали на шейкере (собственной конструкции) при 37°C и приблизительно 500 цикл/мин в течение 2,5 часов. После инкубирования крышку удаляли и планшет отсасывали через циновку фильтра с помощью клеточного коллектора Unifilter 96 Harvester (Perkin-Elmer). Лунки промывали водой пять раз при пониженном давлении. После промывки циновку фильтра сначала предварительно сушили в открытом клеточном коллекторе Unifilter 96 Harvester при пониженном давлении, а затем окончательно сушили в предварительно нагретой сушильной камере при 95°C в течение 5 минут. Потом Meltilex melt-on scintillator (Meltilex A, Perkin-Elmer) накладывали на циновку фильтра и циновку фильтра нагревали в сушильной камере при 95°C в течение приблизительно 2-3 минут, до тех пор, пока melt-on scintillator не проник в циновку полностью. При комнатной температуре сцинтиллятор вновь затвердевал полностью в течение 1 минуты, для того чтобы циновку фильтра можно было оценить с помощью сцинтилляционного счетчика (Microbeta TRILUX, Perkin-Elmer) ([
H] протокол измерения; 5 минут - время измерений на лунку). Величину K
радиолиганда [
H]-U69,593 (K
=0,67 нМ) получали из литературы.
3
3
3
2
d
d
Было обнаружено, что диастереомерная смесь 2-(3,4-дихлорфенил)-1-{(4aRS,8SR,8aSR)-8-[(3SR)-3-гидроксипирролидин-1-ил]пергидрохиноксалин-1-ил}этан-1-она и 2-(3,4-дихлорфенил)-1-{(4aRS,8SR,8aSR)-8-[(3RS)-3-гидроксипирролидин-1-ил]пергидрохиноксалин-1-ил}этан-1-она и соединение 2-(3,4-дихлорфенил)-1-[(4aRS,8SR,8aRS)-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-1-ил]этан-1-он в каждом случае обладает высоким сродством в отношении рецептора типа κ, равным 8,7±1,1 нМ и 2,1±0,4 нм.
Пример 31
Анализ сродства к рецептору типа κ
Анализ сродства к рецептору типа κ для соединений, перечисленных в таблицах 1 и 2, проводили, используя указанные соединения, как описано в примере 30. Были получены значения сродства соединений для рецептора типа κ, приведенные в следующих таблицах 1 и 2.
<i>Таблица 1</i>
<b><i>Соединение</i></b>
<i>κ<b>: K</b></i><sub>i</sub><b><i>±SEM/нМ</i></b>
<i>1-[(4aRS,8SR,8aRS)-4-Бензоил-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-1-ил]-2-(3,4-дихлорфенил)этан-1-он</i>
<i>15±3,4</i>
<i>1-[(4aRS,8SR,8aRS)-4-Ацетил-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-1-ил]-2-(3,4-дихлорфенил)этан-1-он</i>
<i>24±2,8</i>
<i>1-{(4aRS,8SR,8aRS)-1-[2-(3,4-дихлорфенил)ацетил]-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-4-ил}пропан-1-он</i>
<i>26±1,3</i>
<i>Метил {(4aRS,8SR,8aRS)-1-[2-(3,4-дихлорфенил)ацетил]-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-4-ил}карбоксилат</i>
<i>9,7±1,8</i>
<i>Этил {(4aRS,8SR,8aRS)-1-[2-(3,4-дихлорфенил)ацетил]-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-4-ил}карбоксилат</i>
<i>15±3,0</i>
<i>3-{(4aRS,8SR,8aRS)-1-[2-(3,4-Дихлорфенил)ацетил]-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-4-ил}-3-оксопропионовая кислота</i>
<i>169±63</i>
<i>4-{(4aRS,8SR,8aRS)-1-[2-(3,4-Дихлорфенил)ацетил]-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-4-ил}-4-оксомасляная кислота</i>
<i>136±31</i>
<i>Метил 3-{(4aRS,8SR,8aRS)-1-[2-(3,4-дихлорфенил)ацетил]-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-4-ил}-3-оксопропионат</i>
<i>11±5,6</i>
<i>1-{(4aRS,8SR,8aRS)-4-Бензоил-8-[(3SR)- и (3RS)-3-гидроксипирролидин-1-ил]пергидрохиноксалин-1-ил}-2-(3,4-дихлорфенил)этан-1-он</i>
<i>22±5,6</i>
<i>Метил {(4aRS,8SR,8aRS)-1-[2-(3,4-дихлорфенил)ацетил]-8-[(3SR)- и (3RS)-3-гидроксипирролидин-1-ил]пергидрохиноксалин-4-ил}карбоксилат</i>
<i>11±2,8</i>
<i>3-{(4aRS,8SR,8aRS)-1-[2-(3,4-Дихлорфенил)ацетил]-8-[(3SR)- и (3RS)-3-гидроксипирролидин-1-ил]пергидрохиноксалин-4-ил}-3-оксопропионовая кислота</i>
<i>482±113</i>
<i>Метил 3-{(4aRS,8SR,8aRS)-1-[2-(3,4-дихлорфенил)ацетил]-8-[(3SR)- и (3RS)-3-гидроксипирролидин-1-ил]пергидрохиноксалин-4-ил}-3-оксопропионат</i>
<i>18±2,2</i>
<i>Таблица 2</i>
<i>Соединение</i>
<i>κ<b>: K</b></i><sub>i</sub><b><i>±SEM/</i></b><i>нМ</i>
<i>2-(3,4-Дихлорфенил)-1-[(4aRS,8SR,8aRS)-4-метил-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-1-ил]этан-1-он</i>
<i>2,7±0,6</i>
<i>1-[(4aRS,8SR,8aRS)-4-Бутил-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-1-ил]-2-(3,4-дихлорфенил)этан-1-он</i>
<i>3,1±1,8</i>
<i>1-[(4aRS,8SR,8aRS)-4-Бензил-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-1-ил]-2-(3,4-дихлорфенил)этан-1-он</i>
<i>9,4±1,6</i>
<i>2-(3,4-Дихлорфенил)-1-[(4aRS,8SR,8aRS)-4-(4-метоксибензил)-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-1-ил]этан-1-он</i>
<i>6,8±2,0</i>
<i>2-(3,4-Дихлорфенил)-1-{(4aRS,8SR,8aRS)-4-[(пиридин-2-ил)метил]-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-1-ил]этан-1-он</i>
<i>4,2±2,6</i>
<i>2-(3,4-Дихлорфенил)-1-{(4aRS,8SR,8aRS)-4-[(пиридин-3-ил)метил]-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-1-ил}этан-1-он</i>
<i>0,13±0,02</i>
<i>2-(3,4-Дихлорфенил)-1-{(4aRS,8SR,8aRS)-4-[(1H-имидазол-5-ил)метил]-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-1-ил}этан-1-он</i>
<i>4,3±2,0</i>
<i>2-(3,4-Дихлорфенил)-1-{(4aRS,8SR,8aRS)-4-метил-8-[(3SR)- и (3RS)-3-гидроксипирролидин-1-ил]пергидрохиноксалин-1-ил}этан-1-он</i>
<i>5,4±0,8</i>
<i>1-{(4aRS,8SR,8aRS)-4-Бензил-8-[(3SR)- и (3RS)-3-гидроксипирролидин-1-ил]пергидрохиноксалин-1-ил}-2-(3,4-дихлорфенил)этан-1-он</i>
<i>6,6±1,4</i>
<i>2-(3,4-Дихлорфенил)-1-{(4aRS,8SR,8aRS)-4-[(пиридин-3-ил)метил]-8-[(3SR)- и (3RS)-3-гидроксипирролидин-1-ил]пергидрохиноксалин-1-ил}этан-1-он</i>
<i>3,8±0,7</i>
Было обнаружено, что соединения в каждом случае обладают высоким сродством в отношении рецептора типа κ.
Пример 32
Анализ селективности связывания с рецептором типа κ
Анализ сродства к рецептору в контексте исследований селективности проводили на рецепторном материале человека. В нем использовали [
H]-CI-977 (TRK945, Amersham, specific activity приблизительно 48 Ci/ммоль) в качестве радиолиганда для рецептора типа κ и [
H]-налоксон (N-аллил-2,3) (NET719, NEN, специфическая активность приблизительно 60 Ci/ммоль) для рецептора типа μ.
3
3
Общий способ (связывание опиатного рецептора типа κ и μ мембран клеток человека)
В отличие от метода исследования, описанного в примере 30 для связывания опиатного рецептора типа κ гомогенатов головного мозга морской свинки, для оценки связывания с опиатными рецепторами типа κ и μ мембран клеток человека в каждом случае выполняли рецепторный скрининг с пятью различными концентрациями (концентрация c = 10
, 10
, 10
, 10
, 10
моль/л в каждом случае в качестве дублирующих величин) в 2 исследованиях, независимых друг от друга.
-5
-6
-7
-8
-9
Оценку и определение конкретных величин IC
выполняли аналогично путем вычисления нелинейной регрессии с помощью программного обеспечения для анализа данных XLfit version 4, включенной в программное обеспечение для оценки ActivityBase version 5,3,4,26. K
величины вычисляли из конкретных IC
величин с помощью уравнения Cheng-Prussof, приведенного в примере 30. Для используемых препаратов рецепторов мембран конкретные величины констант диссоциации для подсчета величин K
по уравнению Cheng-Prussof определяли заблаговременно посредством экспериментов лиганд-рецепторного насыщения в аналогичных условиях рецепторного связывания.
50
i
50
i
Определение сродства в отношении κ рецептора
Рецепторные мембраны κ опиоидных рецепторов человека из HEK-293 клеток (PerkinElmer Life Sciences (порядковый номер 6110558 #370-960-A) размораживали в теплой (приблизительно 37°C) воде незадолго (2 минуты) перед применением, разбавляли аналитическим буфером (50 ммоль/л Трис-HCl, pH 7,4) с добавлением 0,02% бычьего сывороточного альбумина (Serva) в пропорции 1:34 и гомогенизировали в гомогенизаторе Поттера. Аналитический буфер (50 ммоль/л ТРИС-HCl pH 7,4) добавляли к гранулам агглютинина проростков пшеницы SPA ("scintillation proximity assay") (Amersham (порядковый номер RPNQ0001)) (70 мл/500 мг гранул) и гранулы суспендировали на магнитной мешалке в течение 1 часа. В каждом случае 5 мкл раствора диастереомерной смеси 2-(3,4-дихлорфенил)-1-{(4aRS,8SR,8aSR)-8-[(3SR)-3-гидроксипирролидин-1-ил]пергидрохиноксалин-1-ил}этан-1-она и 2-(3,4-дихлорфенил)-1-{(4aRS,8SR,8aSR)-8-[(3RS)-3-гидроксипирролидин-1-ил]пергидрохиноксалин-1-ил}этан-1-она или соединение 2-(3,4-дихлорфенил)-1-[(4aRS,8SR,8aRS)-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-1-ил]этан-1-он, каждый из которых был растворен в 50 раз выше концентрации (в 25% концентрированном водном диметилсульфоксиде (ДМСО)), чем определенная аналитическая концентрация в реакционной смеси, 20 мкл радиолиганда [
H]-CI-977 (TRK945, Amersham, специфическая активность приблизительно 48 Ci/ммоль) (12,5 нмоль/л аналитического буфера) и 225 мкл предварительно инкубированной смеси 88 мкл разбавленной рецепторной мембраны и 137 мкл суспензии гранул были сразу пипетированы в лунки люминесцентного планшета (SPA plates, Costar). Для определения неспецифического связывания вместо раствора диастереомерной смеси 2-(3,4-дихлорфенил)-1-{(4aRS,8SR,8aSR)-8-[(3SR)-3-гидроксипирролидин-1-ил]пергидрохиноксалин-1-ил}этан-1-она и 2-(3,4-дихлорфенил)-1-{(4aRS,8SR,8aSR)-8-[(3RS)-3-гидроксипирролидин-1-ил]пергидрохиноксалин-1-ил}этан-1-она или соединения 2-(3,4-дихлорфенил)-1-[(4aRS,8SR,8aRS)-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-1-ил]этан-1-он, 5 мкл налоксона HCl (500 мкмоль/л водного 25% концентрированного раствора ДМСО), и для определения суммарного связывания добавляли 5 мкл водного 25% раствора ДМСО. Все реакционные смеси с различными концентрациями диастереомерной смеси или соединения 2-(3,4-дихлорфенил)-1-[(4aRS,8SR,8aRS)-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-1-ил]этан-1-он и смеси для определения неспецифического связывания и максимального связывания, таким образом, содержали 0,5% концентрированный ДМСО растворитель в конечной смеси. Смеси тщательно смешивали в минишейкере и инкубировали при комнатной температуре в течение 90 минут. Затем образцы центрифугировали при 500
(60 г) в течение 20 минут (Omnifuge 2,0 RS, Heraeus) и радиоактивность, связанную с SPA гранулами, измеряли с помощью сцинтилляционного счетчика (1450 Microbeta Trilux, Wallac/PerkinElmer Life Sciences).
3
-1
Было обнаружено, что диастереомерная смесь 2-(3,4-дихлорфенил)-1-{(4aRS,8SR,8aSR)-8-[(3SR)-3-гидроксипирролидин-1-ил]пергидрохиноксалин-1-ил}этан-1-она и 2-(3,4-дихлорфенил)-1-{(4aRS,8SR,8aSR)-8-[(3RS)-3-гидроксипирролидин-1-ил]пергидрохиноксалин-1-ил}этан-1-она и соединение 2-(3,4-дихлорфенил)-1-[(4aRS,8SR,8aRS)-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-1-ил]этан-1-он в каждом случае обладают высоким сродством к рецептору типа κ, равным 19 нМ и 28 нМ.
Анализ сродства к рецептору типа μ
Рецепторные мембраны μ опиоидных рецепторов человека из CHO-K1 клеток (RBHOMM) (PerkinElmer Life Sciences) размораживали в теплой (приблизительно 37°C) воде незадолго (2 минут) перед применением, разбавляли аналитическим буфером (50 ммоль/л Трис-HCl, pH 7,4) с добавлением 0,06% бычьего сывороточного альбумина (Serva) и гомогенизировали в гомогенизаторе Поттера. Аналитический буфер (50 ммоль/л ТРИС-HCl pH 7,4) добавляли к гранулам агглютинина проростков пшеницы SPA ("scintillation proximity assay") (Amersham (порядковый номер RPNQ0001)) (100 мл/500 мг гранул) и гранулы суспендировали на магнитной мешалке в течение 1 часа. В каждом случае 5 мкл раствора диастереомерной смеси 2-(3,4-дихлорфенил)-1-{(4aRS,8SR,8aSR)-8-[(3SR)-3-гидроксипирролидин-1-ил]пергидрохиноксалин-1-ил}этан-1-она и 2-(3,4-дихлорфенил)-1-{(4aRS,8SR,8aSR)-8-[(3RS)-3-гидроксипирролидин-1-ил]пергидрохиноксалин-1-ил}этан-1-она или соединения 2-(3,4-дихлорфенил)-1-[(4aRS,8SR,8aRS)-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-1-ил]этан-1-он, каждый из которых был растворен в 50 раз выше концентрации (в 25% концентрированном водном диметилсульфоксиде (ДМСО)), чем определенная аналитическая концентрация в реакционной смеси, 20 мкл радиолиганда [
H]-налоксон (N-аллил-2,3) (NET719, NEN, специфическая активность приблизительно 60 Ci/ммоль) (10 нмоль/л аналитического буфера) и 220 мкл предварительно инкубированной смеси 20 мкл рецепторной мембраны и 200 мкл суспензии гранул были сразу пипетированы в лунки люминесцентного планшета (SPA планшеты, Costar). Для определения неспецифического связывания вместо раствора диастереомерной смеси 2-(3,4-дихлорфенил)-1-{(4aRS,8SR,8aSR)-8-[(3SR)-3-гидроксипирролидин-1-ил]пергидрохиноксалин-1-ил}этан-1-она и 2-(3,4-дихлорфенил)-1-{(4aRS,8SR,8aSR)-8-[(3RS)-3-гидроксипирролидин-1-ил]пергидрохиноксалин-1-ил}этан-1-она или соединения 2-(3,4-дихлорфенил)-1-[(4aRS,8SR,8aRS)-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-1-ил]этан-1-он, добавляли 5 мкл налоксона HCl (500 мкмоль/л водного 25% насыщенного раствора ДМСО), и для определения суммарного связывания добавляли 5 мкл водного 25% раствора ДМСО. Все реакционные смеси с различными концентрациями диастереомерной смеси или соединения 2-(3,4-дихлорфенил)-1-[(4aRS,8SR,8aRS)-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-1-ил]этан-1-она и смеси для определение неспецифического связывания и максимального связывания, таким образом, содержали 0,5% концентрированный ДМСО растворитель в конечной смеси. Смеси тщательно смешивали в минишейкере и инкубировали при комнатной температуре в течение 90 минут. Затем образцы центрифугировали при 500
(60 г) в течение 20 минут (Omnifuge 2,0 RS, Heraeus) и и радиоактивность, связанную с SPA гранулами, измеряли с помощью сцинтилляционного счетчика (1450 Microbeta Trilux, Wallac/PerkinElmer Life Sciences).
3
-1
Было обнаружено, что диастереомерная смесь 2-(3,4-дихлорфенил)-1-{(4aRS,8SR,8aSR)-8-[(3SR)-3-гидроксипирролидин-1-ил]пергидрохиноксалин-1-ил}этан-1-она и 2-(3,4-дихлорфенил)-1-{(4aRS,8SR,8aSR)-8-[(3RS)-3-гидроксипирролидин-1-ил]пергидрохиноксалин-1-ил}этан-1-она и соединение 2-(3,4-дихлорфенил)-1-[(4aRS,8SR,8aRS)-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-1-ил]этан-1-он в каждом случае имеет сродство к рецептору типа μ, равное 4900 нМ и 2800 нМ.
Для сравнения отметим, что селективность сродства связывания в отношении рецептора типа κ по сравнению с рецептором типа μ составляет таким образом 258:1 для диастереомерной смеси 2-(3,4-дихлорфенил)-1-{(4aRS,8SR,8aSR)-8-[(3SR)-3-гидроксипирролидин-1-ил]пергидрохиноксалин-1-ил}этан-1-она и 2-(3,4-дихлорфенил)-1-{(4aRS,8SR,8aSR)-8-[(3RS)-3-гидроксипирролидин-1-ил]пергидрохиноксалин-1-ил}этан-1-она и 99:1 для соединения 2-(3,4-дихлорфенил)-1-[(4aRS,8SR,8aRS)-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-1-ил]этан-1-он. Это показывает, что диастереомерная смесь 2-(3,4-дихлорфенил)-1-{(4aRS,8SR,8aSR)-8-[(3SR)-3-гидроксипирролидин-1-ил]пергидрохиноксалин-1-ил}этан-1-она и 2-(3,4-дихлорфенил)-1-{(4aRS,8SR,8aSR)-8-[(3RS)-3-гидроксипирролидин-1-ил]пергидрохиноксалин-1-ил}этан-1-она и соединение 2-(3,4-дихлорфенил)-1-[(4aRS,8SR,8aRS)-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-1-ил]этан-1-он отличаются по селективности связывания в отношении рецептора типа κ по сравнению со связыванием в отношении рецептора типа μ.
Пример 33
Анализ селективности связывания с рецептором типа κ
Анализ селективности связывания с рецептором типа κ для соединений, перечисленных в таблицах 3 и 4, проводили, используя указанные соединения, как описано в примере 32. Получали значения для селективности связывания соединений в отношении рецептора типа κ по сравнению со связыванием в отношении рецептора типа μ, представленные в следующих таблицах 3 и 4.
<i>Таблица 3</i>
<b><i>Соединение</i></b>
<b><i>Селективность </i></b><i>κ/μ</i>
<i>1-[(4aRS,8SR,8aRS)-4-Бензоил-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-1-ил]-2-(3,4-дихлорфенил)этан-1-он</i>
<i>14:1</i>
<i>1-[(4aRS,8SR,8aRS)-4-Ацетил-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-1-ил]-2-(3,4-дихлорфенил)этан-1-он</i>
<i>14:1</i>
<i>1-{(4aRS,8SR,8aRS)-1-[2-(3,4-дихлорфенил)ацетил]-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-4-ил}пропан-1-он</i>
<i>8:1</i>
<i>Метил {(4aRS,8SR,8aRS)-1-[2-(3,4-дихлорфенил)ацетил]-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-4-ил}-карбоксилат</i>
<i>15:1</i>
<i>Этил {(4aRS,8SR,8aRS)-1-[2-(3,4-дихлорфенил)ацетил]-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-4-ил}карбоксилат</i>
<i>10:1</i>
<i>Метил 3-{(4aRS,8SR,8aRS)-1-[2-(3,4-дихлорфенил)ацетил]-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-4-ил}-3-оксопропионат</i>
<i>22:1</i>
<i>1-{(4aRS,8SR,8aRS)-4-Бензоил-8-[(3SR)- и (3RS)-3-гидроксипирролидин-1-ил]пергидрохиноксалин-1-ил}-2-(3,4-дихлорфенил)этан-1-он</i>
<i>21:1</i>
<i>Метил {(4aRS,8SR,8aRS)-1-[2-(3,4-дихлорфенил)ацетил]-8-[(3SR)- и (3RS)-3-гидроксипирролидин-1-ил]пергидрохиноксалин-4-ил}карбоксилат</i>
<i>43:1</i>
<i>Метил 3-{(4aRS,8SR,8aRS)-1-[2-(3,4-дихлорфенил)ацетил]-8-[(3SR)- и (3RS)-3-гидроксипирролидин-1-ил]пергидрохиноксалин-4-ил}-3-оксопропионат</i>
<i>33:1</i>
<i>Таблица 4</i>
<b><i>Соединение</i></b>
<b><i>Селективность </i></b><i>κ/μ</i>
<i>2-(3,4-Дихлорфенил)-1-[(4aRS,8SR,8aRS)-4-метил-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-1-ил]этан-1-он</i>
<i>131:1</i>
<i>1-[(4aRS,8SR,8aRS)-4-Бутил-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-1-ил]-2-(3,4-дихлорфенил)этан-1-он</i>
<i>177:1</i>
<i>1-[(4aRS,8SR,8aRS)-4-Бензил-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-1-ил]-2-(3,4-дихлорфенил)этан-1-он</i>
<i>153:1</i>
<i>2-(3,4-Дихлорфенил)-1-[(4aRS,8SR,8aRS)-4-(4-метоксибензил)-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-1-ил]этан-1-он</i>
<i>16:1</i>
<i>2-(3,4-Дихлорфенил)-1-{(4aRS,8SR,8aRS)-4-[(пиридин-2-ил)метил]-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-1-ил}этан-1-он</i>
<i>96:1</i>
<i>2-(3,4-Дихлорфенил)-1-{(4aRS,8SR,8aRS)-4-[(пиридин-3-ил)метил]-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-1-ил}этан-1-он</i>
<i>112:1</i>
<i>2-(3,4-Дихлорфенил)-1-{(4aRS,8SR,8aRS)-4-[(1H-имидазол-5-ил)метил]-8-(пирролидин-1-ил)пергидрохиноксалин-1-ил]этан-1-он</i>
<i>108:1</i>
<i>2-(3,4-Дихлорфенил)-1-{(4aRS,8SR,8aRS)-4-метил-8-[(3SR)- и (3RS)-3-гидроксипирролидин-1-ил]пергидрохиноксалин-1-ил}этан-1-он</i>
<i>122:1</i>
<i>1-{(4aRS,8SR,8aRS)-4-Бензил-8-[(3SR)- и (3RS)-3-гидроксипирролидин-1-ил]пергидрохиноксалин-1-ил}-2-(3,4-дихлорфенил)этан-1-он</i>
<i>112:1</i>
<i>2-(3,4-Дихлорфенил)-1-{(4aRS,8SR,8aSR)-4-[(пиридин-3-ил)метил]-8-[(3SR)- и (3RS)-3-гидроксипирролидин-1-ил]пергидрохиноксалин-1-ил}этан-1-он</i>
<i>112:1</i>
<i>2-(3,4-Дихлорфенил)-1-{(4aRS,8SR,8aSR)-4-[(1H-имидазол-5-ил)метил]-8-[(3SR)- и (3RS)-3-гидроксипирролидин-1-ил]пергидрохиноксалин-1-ил}этан-1-он</i>
<i>90:1</i>
<i><(3SR)- и (3RS)-1-{(4aRS,5RS,8aSR)-4-[2-(3,4-дихлорфенил)ацетил]пергидрохиноксалин-5-ил}пирролидин-3-ил)-2-(3,4-дихлорфенил)ацетат</i>
<i>138:1</i>
Было обнаружено, что соединения в каждом случае обладают высокой селективностью связывания в отношении рецептора типа κ по сравнению со связыванием в отношении рецептора типа μ.