БИОЧИПОВЫЕ (microarray) ТЕХНОЛОГИИ РАСПОЗНАВАНИЯ ГЕНЕТИЧЕСКИХ АНОМАЛИЙ У БОЛЬНЫХ ГЕМОБЛАСТОЗАМИ

ГЕНЕТИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ ГЕМОБЛАСТОЗОВ

Тарновский Р. В., Ковынев И. Б., Поспелова Т. И., Тамкович Н. В., Мишенин А. В.

Государственное бюджетное учреждение высшего профессионального образования

«Новосибирский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации, Институт химической биологии и фундаментальной медицины СО РАН, г. Новосибирск.

БИОЧИПОВЫЕ (microarray) ТЕХНОЛОГИИ РАСПОЗНАВАНИЯ ГЕНЕТИЧЕСКИХ АНОМАЛИЙ У БОЛЬНЫХ ГЕМОБЛАСТОЗАМИ

Актуальность. В основе развития гемобласто-зов (ГБ) лежат генетические изменения в клетке — предшественнице гемопоэза, что, в свою очередь, приводит к торможению процессов дифференци-ровки, нарушению механизмов регуляции клеточного цикла, блоку апоптоза и неконтролируемой пролиферации клеток. Эти изменения чаще всего связаны с различными хромосомными повреждениями. Наиболее перспективными методами молекулярно-генетической диагностики сегодня являются биочиповые (microarray)-технологии. В онкогематологии их использование позволяет одномоментно выявлять широкий спектр клинически значимых генетических аномалий для определения прогноза и тактики лечения пациентов с гемобластозами (ГБ).

Цель исследования. С помощью молекулярно-генетического метода геночипирования определить наиболее характерные профили экспрессии химерных генов у больных бластными формами гемобластозов.

Материал и методы. На базе Городского гематологического центра г. Новосибирска обследовано 47 пациентов с бластными формами (ГБ): 38 больных с острым миелобластным лейкозом (ОМЛ), 9 пациентов с острым лимфобластным лейкозом (ОЛЛ). Средний возраст больных составил 48 ± 26,3 лет. Все пациенты с впервые выявленным заболеванием были разделены на две прогностические группы. Критериями включения в группу неблагоприятного прогноза были: возраст (для ОМЛ старше 60, для ОЛЛ старше 15 лет), наличие множественных хромосомных аберраций (в том числе Ph-позитивный ОЛЛ), наличие нейролейкемии (для ОЛЛ), гиперлейкоцитоз (более 30*109/л). Таким образом, в группу с благоприятным прогнозом вошли 18 человек (38,3 %), с неблагоприятным прогнозом — 29 человек (61,7 %). В обеих группах с помощью метода геночипирования проведен анализ 96 образцов РНК костного мозга и периферической крови. Использовались тест-системы (матричные молекулярные биочипы) «ЛК-БИОЧИП» разработанные в институте молекулярной биологии им. В. А. Энгельгардта Российской Академии

Наук (Москва). На поверхности биочипов были иммобилизированы олигонуклеотиды, комплементарные участкам последовательностей матричной РНК, экспрессирующих химерные гены AML/ETO, E2A/PBX, BCR/ABL, PML/RARA, CBFB/MYH11, TEL/AML, MLL (общий), появляющиеся как результат хромосомных аберраций t(8;21), t( 1; 19), t(9;22), t(15; 17), inv16, t(12;21). Полученные данные об экспрессии указанных генов сопоставляли с эффективностью программной полихимиотерапии и прогнозом заболевания.

Результаты исследования. Генетические мутации в клетках костного мозга и периферической крови были выявлены в обеих группах больных. В группе с благоприятным прогнозом мутации выявлены у 9 пациентов (19,1 %), в группе неблагоприятного прогноза у 20 больных, что составило 42,5 %. В группе благоприятного прогноза наиболее часто встречались одиночные хромосомные аберрации, приводящие к повышенной экспрессии химерных генов — AML/ETO (у 8 пациентов с ОМЛ) и MLL (у 1 пациента с ОЛЛ). В группе пациентов с неблагоприятным прогнозом заболевания, в отличие от предыдущей группы, с частотой 22,5 % отмечено наличие множественных генетических аберраций с наиболее характерным профилем аномальных генов: MLL, AML/ETO, BCR/ABL и MLL, AML/ETO и TEL/AML (в 2 случаях наблюдалась одновременная экспрессия MLL, TEL/ AML, в 3-х случаях — CBFB/MYH11, AML/ ETO, у 2 пациентов наблюдалась одновременная экспрессия 3-х химерных генов MLL, AML/ETO и BCR/ABL; MLL, AML/ETO и TEL/AML, соответственно). Одиночные хромосомные аберрации (наиболее часто ген AML/ETO) отмечены у 10 больных (34 %) с ОМЛ.

Выводы. У больных бластными формами ГБ с неблагоприятным течением заболевания и рефрактерностью к проводимой терапии достоверно чаще встречаются множественные генетические аберрации с наиболее частым профилем аномальных генов: MLL, AML/ETO, BCR/ ABL и MLL, AML/ETO и TEL/AML, в отличие

от пациентов группы с благоприятным прогнозом заболевания, у которых преимущественно отмечаются одиночные генетические аберрации. Изучение генетического профиля опухоли ме-

ВЕСТНИКГЕМАТОЛОГИИ, том IX, №2, 2013

тодом геночипирования позволяет более точно прогнозировать течение бластных формам гемо-бластозов и индивидуализировать тактику лечения пациентов.