СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЛЕКАРСТВЕННОГО ПРЕПАРАТА ИММУНОМОДУЛЯТОРА ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ТЯЖЕЛЫХ ФОРМ ГНОЙНО-СЕПТИЧЕСКИХ И АУТОИММУННЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ
METHOD FOR PREPARING DRUG PREPARATION OF IMMUNOMODULATOR FOR TREATING SEVERE PURULENT-SEPTIC AND AUTOIMMUNE DISEASES

Настоящее изобретение относится к медицине, а именно к препаративной биохимии, фармацевтической промышленности и биотехнологии и касается способа получения лекарственного препарата на основе пептидной фракции, выделенной из ткани или клеток селезенки млекопитающих (в частности, селезенки свиней или крупного рогатого скота), обладающего иммуностимулирующей активностью.
Известен способ получения лекарственного препарата на основе пептидной фракции, выделенной из ткани или клеток селезенки млекопитающих, обладающего иммуностимулирующей активностью.
(RU 2152219 C1, А61К 35/28, А61К 38/02, 2000 г.)
В известном способе предпринималась попытка сохранения растворимости препарата (предотвращения коагуляции белковых молекул) с помощью препарата желатиноль, представляющего собой гидролизат желатина, и антибиотик.
Задачей настоящего изобретения является разработка лекарственного препарата, обладающего повышенным иммуностимулирующим действием с активированием клеточного и гуморального иммунитета, обеспечивающего повышение специфической и неспецифической резистентности организма при профилактике и лечении тяжелых форм гнойно-септических и аутоиммунных заболеваний.
Технический результат, получаемый при использовании заявленного изобретения, выражается в высоком терапевтическим эффекте при проведении профилактики и лечения тяжелых форм гнойно-септических и аутоиммунных заболеваний.
Для достижения указанного технического результата, в способе получения лекарственного препарата, обладающего иммуностимулирующей активностью, для лечения тяжелых форм гнойно-септических и аутоиммунных заболеваний, включающем смешивание биологически активного вещества - пептидной фракции, выделенной из ткани или клеток селезенки млекопитающих, с веществом, предотвращающим коагуляцию белковых молекул, и антибиотиком, отличающийся тем, что в качестве вещества, предотвращающего коагуляцию белковых молекул, используют гелофузин.
Гелофузин смешивают с раствором пептидной фракции селезенки в процессе изготовления лекарственного средства. Неотъемлемой частью способа получения является методика сохранения высокой растворимости препарата и, как следствие, биологически активных пептидов, включая цитокины.
Гелофузин представляет собой 4% р-р сукцинилированного желатина (известного также как модифицированный жидкий желатин) в 0,9% растворе натрия хлорида с усредненной молекулярной массой 30000 Да. Относительная вязкость р-ра 1,9 при температуре 37°С, коллоидно-осмотическое давление 34 мм рт. ст. Вследствие сукцинилирования молекулы желатина становятся более отрицательно заряженными и поэтому более извлеченными. За счет формы молекул желатин производит больший объемный эффект, чем несукцинилированные белковые цепочки с такой же молекулярной массой.
Гелофузин значительно отличается от желатиноля (в прототипе) по составу. Терапевтические свойства гелофузина имеют существенные преимущества (см табл.1).
Таблица 1
Сравнительная характеристика Гелофузина и Желатиноля
Основные характеристики
Гелофузин
Желатин оль
Плазма крови
Состав
4%-ный р-р модифицированного жидкого желатина
8%-ный р-р частично гидролизированного пищевого желатина
Осмолярность, мОсм/л
274
371
280-290
Ср.мол. масса
30000
15000-20000
Коллоидно-осматическое давление (КОД), мм. рт. ст.
34
16-21
16-24
Волемнческий эффект
Объемный эффект %
100
60
продолжительность (час)
3-4
1-2
Na ммоль/л
154
162
136-143
Са ммоль/л
<0,4
9,38
2,4-2,6
К ммоль/л
<0,4
0,4
3,5-5,0
С1 ммоль/л
120
162
96-105
Желатиноль имеет широкий диапазон молекулярно-массового распределения (ММР) - от 5 до 100 кД. Это объясняет:
- его низкий непосредственный волемический эффект (около 0,5) и опасность "утечки" активного вещества в интерстициальное пространство;
- слабое влияние желатиноля на КОД плазмы крови больного;
- короткий период полувыведения (всего 1-2 ч);
- рецидив исходных гемореологических расстройств (аггрегация тромбоцитов, секвестрация эритроцитов) после короткого улучшения циркуляторного гомеостаза;
- нередкие анафилактоидные реакции;
- избыток кальция в желатиноле (более 8 мэкв/л), что исключает применение данного препарата в сочетании с цитратными трансфузионными средами, некоторыми лекарственными средствами.
Поэтому препаратами выбора в настоящее время считают инфузионные среды на основе модифицированного (сукцинилированного) жидкого желатина (modified liquid - MLG) например доступный для отечественного клинициста Гелофузин B. Braun. Такие плазмозаменители имеют:
- низкий диапазон молекулярномассового распределения при средней ММ до 40 кД.
- высокое КОД, которое может превышать КОД плазмы крови.
- высокий непосредственный волемический эффект (до 1,0) при малой возможности "утечки" активного вещества в интерстиций из-за формы его молекулы.
- большая часть активного вещества препаратов MLG (75%) выделяется через почки, меньшая часть - через кишку;
- 10% активного вещества MLG может метаболизироваться;
- растворы MLG безопасны в отношении их влияния на гемостаз, поэтому широко применяются для восполнения операционной кровопотери и для возмещения эксфузированных объемов плазмы при больших лечебных плазмаферезах;
- анафилактоидные реакции на гелофузин практически отсутствуют.
Проведенное исследование (описанное ниже), основанное на сравнительном анализе образующегося осадка, доказывает, что гелофузин обладает более выраженным свойством предотвращать коагуляцию молекул пептидов в приготовленном лекарственном препарате и, следовательно, повышать терапевтический эффект при проведении профилактики и лечения тяжелых форм гнойно-септических и аутоиммунных заболеваний.
Проведенный заявителями анализ уровня техники, включающий поиск по патентным и научно-техническим источникам информации, и выявление источников, содержащих сведения об аналогах заявляемого способа получения лекарственного препарата позволил установить, что заявители не обнаружили аналог, характеризующийся признаками, тождественными (идентичными) всем существенным признакам заявленного способа.
Следовательно, заявленный способ получения лекарственного препарата соответствует критерию "новизна".
Для проверки соответствия заявленного способа уровню техники заявители провели дополнительный поиск известных решений, чтобы выявить признаки, совпадающие с отличительными от прототипа признаками заявленного изобретения.
Результаты поиска показали, что заявленное изобретение не вытекает для специалиста явным образом из известного уровня техники, определенного заявителями, не выявлено влияние предусматриваемых существенными признаками заявленного лекарственного препарата преобразований на достижение технического результата.
Следовательно, заявленное изобретение соответствует критерию "изобретательский уровень".
Критерий изобретения "промышленная применимость" подтверждается тем, что предлагаемый способ получения лекарственного препарата обеспечивает высокий терапевтический эффект при проведении лечения тяжелых форм гнойно-септических и аутоиммунных заболеваний путем купирования воспалительных процессов в тканях и сокращения сроков выздоровления в 2-3 раза по сравнению с известным способом и может быть успешно использован для лечения тяжелых форм гнойно-септических и аутоиммунных заболеваний.
Пример
Готовят две партии лекарственного препарата с желатинолем (по прототипу) и с гелофузином. Препарат это лиофилизированный порошок в пенициллиновых флаконах для приготовления раствора для инъекций, представляющий собой пептидную фракцию, выделенную из ткани или клеток селезенки млекопитающих путем измельчения ткани селезенки, экстракции и ультрафильтрации экстракта с использованием фильтра с размером пор 45000 дальтон (0,1 микрон). Препарат имеет в своем составе пептиды селезенки, гентамицина сульфат, вспомогательное вещество, предотвращающее коагуляцию белковых молекул - желатиноль (первая партия), и гелофузин (вторая партия) в определенном соотношении (см. табл.2)
Таблица 2
Лекарственный препарат, изготовленный из селезенки (сухое вещество в пенициллиновых флаконах)
1 партия препарата
2 партия препарата
пептиды селезёнки
16±1,6 мг (по белку)
пептиды селезёнки
16±1,6 мг (по белку)
желатиноль
94±9,4мг
гелофузин
94±9,4мг
гентамицина сульфат
0,35±0,035мг
гентамицина сульфата
0,35±0,035мг
От каждой партии берут по три флакона. В каждый флакон вводят по 4 миллилитра 0,9% раствора хлорида натрия. Растворяют в течение 10 минут, периодически осторожно перемешивая, не допуская сильного вспенивания. После чего раствор из флаконов переносят в стерильные шестилуночные плоскодонные планшеты, предназначенные для культивирования клеток (типа Costar 3506 или аналогичные). Дают раствору отстояться в течение 30 минут. Далее просматривают осадок при помощи инвертированного микроскопа при увеличении ×400. При микроскопии осадка в препарате с желатинолем количество частиц в поле зрения 215±50 частицы размером 0,5-9 мкм, которые образуют скопления, в виде гроздьев насчитывающие от нескольких штук частиц до нескольких десятков штук. При микроскопии осадка в препарате с гелофузином количество частиц в поле зрения 34±18, размер частиц 0,3-1 мкм. Скопления частиц наблюдаются не в каждом поле зрения, количество в скоплениях не превышает 4-5.
Таким образом, анализ осадка образцов препарата демонстрирует значительные преимущества использования гелофузина в качестве вспомогательного вещества предотвращающего коагуляцию белковых молекул.
Патогенетическое обоснование применения препарата для лечения больных с вторичными иммунодефицитами
При разработке препарата нами учитывались ранее установленные данные отечественных и зарубежных исследователей.
Селезенка имеет большую мощность захвата микроорганизмов на единицу массы по сравнению с печенью и является доминирующей зоной выведения из кровотока пневмококковой инфекции (Schulkind et al., 1967). В связи с интенсивной перфузией органа (до 4% объема циркулирующей крови в минуту) макрофаги селезенки обеспечивают до 15% общего клиренса антигенных частиц, бактерий и других патогенов (Lynch, Kapila, 1996).
Селезенка содержит 25% ретикулоэндотелия всего организма, 30% ее объема занимает лимфоидная ткань, она является основным органом по продукции антител (Фонталин Л.Н., 1967; Якименко Л.Б., Уманский А.А., 1972; Барта П., 1976). Основными проявлениями защитной функции селезенки являются: фильтрация крови (Corazza et al., 1990), фагоцитарная активность, участие в первичном иммунном ответе, выработка специфических антител и неспецифических иммуноглобулинов, образование биологически активных веществ, влияющих на различные звенья иммунного гомеостаза (Tischendorf F., 1988).
Селезенка считается важнейшим местом продукции лимфоцитов и фагоцитирующих мононуклеарных клеток. В ней содержится 25% Т- и 60% В-лимфоцитов от общего пула лимфоцитов в организме. Количество антител, вырабатываемых лимфоидной системой селезенки, значительно превышает их синтез в других лимфоидных органах (Staniza А., 1988; Yosafet N. et.al., 1989).
К важным следует отнести также и такую функцию селезенки, как продукция тафцина, пропердина и фибронектина. Эти неспецифические опсонины, вырабатываемые большей частью в селезенке (Lockwood, 1983), обеспечивают неспецифическую (прежде всего, антимикробную) резистентность организма.
Стромальные клетки селезенки являются продуцентами фактора роста гепатоцитов или рассеивающего фактора (HGF/SF - hepatocyte growth factor / scatter factor) (Kono et al., 1992; Matsumoto, Nakamura,1992; Skibinski et al., 2001). Этот пептид является паракринным регулятором мезенхимально-эпителиальных взаимодействий, стимулирует рост и подвижность эпителиоцитов (Takahashi et al., 1993; Yamada et al., 1994; Kermorgant et al., 1997; Weimar et al., 1998; Wormstone et al., 2000). Кроме того, селезенка принимает участие в синтезе инсулиноподобных факторов роста (IGF-I и -II - insulin-like growth factor I и II) (Hoeflich et al., 2001), хотя основным их источником является печень (Lee et al., 2001), а также специфического селезеночно-производного фактора роста (SDGF-spleen-derived growth factor) (Suzuki et al., 1988). Все названные цитокины обладают выраженным митогенным действием на гепатоциты (Kato et al., 1997; Sato et al., 1997; Gao et al., 2001; и др.), следовательно, стимулируют регенерацию печени (Galimi et al., 2001).
Механизм действия препарата
Механизм действия препарата связан с наличием в нем цитокинов - полипептидных медиаторов, участвующих в формировании и регуляции защитных реакций организма.
В препарате выявлены следующие основные цитокины:
1. Провоспалительные цитокины: IL1β, TNFα, IL6.
2. Противовоспалительные цитокины: IL1-RA, IL10, IL4.
3. Хемоаттрактанты: IL8.
4. Регуляторные цитокины: IL4, IL2.
5. Факторы роста: G-CSF, TGFβ.
6. Интерфероны: интерферон-α (IFNα), интерферон-γ (IFNγ).
Для определения спектра основных цитокинов и количественного их содержания в препарате использован метод «сэндвич» - вариант твердофазного иммуноферментного анализа с использованием иммуноферментных тест-систем для определения цитокинов человека (ООО «Цитокин» С-Пб.) (см табл.3).
Таблица 3
Количественное содержание основных цитокинов в препарате (пг/мл).
Цитокины
Концентрация цитокинов Me (min-max)
Доноры (сыворотка пг/мл)
Биологическое действие и биомишени
I. Провоспалительные цитокины.
Интерлейкин 1β (IL1β)
67 (48-87)
23-37
Наиболее чувствительный маркер воспаления, опосредует общевоспалительные реакции: лихорадку, лейкоцитоз, синтез ОФБ, повышает сосудистую проницаемость.
Интерлейкин 6 (IL6)
95 (80-124)
26-32
Действие аналогично IL1β. Центральная роль в острой фазе иммунного ответа и регулировке баланса про- и противовоспалительных цитокинов
Фактор некроза опухоли (TNFα)
42 (36-49)
26-41
Ключевой в процессе воспаления. Цитотоксическое действие против опухолей и инфицированных клеток
II. Противовоспалительные цитокины.
Антагонист рецептора IL1β-(IL1RA)
205 (196-215)
до 200
Блокирует рецепторы для ИЛ1β.
Интерлейкин 10 (IL10)
120 (70-170)
до 50
Супрессорный фактор для клеточного и гуморального иммунитета, стимулирующего секрецию Ig (с IgM на IgA). Потенцирует противовоспалительный эффект, уменьшая синтез провоспалительных цитокинов, хемокинов.
IL4 - см. регуляторные цитокины
III. Хемоаттрактанты.
Интерлейкин 8 (IL8)
79 (63-144)
29-58
Обеспечивает миграцию моноцитов, лимфоцитов, нейтрофилов в очаг воспаления.
IV. Регуляторные цитокины.
Интерлейкин 4 (IL4)
35 (45-65)
19-28
Фактор активации и дифференцировки В-лф., костномозговых предшественников и тучных клеток. Стимулирует продукцию IgE.
Интерлейкин 2 (IL2)
2,3 (1,8-2,8)
2,1-4,5
Формирует цитотоксические Т-лф. Стимулирует рост и дифференцировку Т-лф. по Тh1-типу иммунного ответа.
V. Факторы роста.
Гранулоцитарный колониестимули-рующий фактор (G-CSF)
75 (57-91)
до 50
Фактор активации и дифференцировки костномозговых предшественников моноцитов и нейтрофилов.
Трансформирующий фактор роста (TGF (3)
120 (70-170)
27-60
Передача внутриклеточных регуляторных сигналов. Регуляция процессов пролифераци, дифференцировки, миграции и апоптоза.
VI. Интерфероны.
Интерферон α(IFNct)
54 (22-56)
Оказывает наиболее выраженное антивирусное и антипролиферативное действие.
Интерферон γ(IFNγ)
60 (41-79)
16-32
Регуляция кооперации клеток в иммунном ответе. Созревание и дифференцировка Т-лф. в тимусе. Осуществляет взаимодействие между Т-лф. и нейтрофилами.
Примечания: Me - медиана, min-max - дисперсия концентраций цитокинов в разных сериях препарата.
Как известно, цитокины в первую очередь регулируют развитие местных защитных реакций в тканях с участием различных типов клеток крови. Они также вызывают активацию эндотелия, приводящую к увеличению проницаемости сосудов, повышению экспрессии адгезионных молекул и усилению прокоагулянтной активности за счет гистамина, простагландинов и др., опосредующих развитие воспалительной реакции. Хемокины, в свою очередь, усиливают направленную миграцию нейтрофилов и лимфоцитов в очаг воспаления, активируют фагоцитоз и продукцию кислородных радикалов, опосредующих противоинфекционный эффект. Одновременно провоспалительные цитокины активируют метаболизм соединительной ткани, стимулируют пролиферацию фибробластов и клеток эпителия, обеспечивающих регенеративные процессы в поврежденных тканях.
Влияние цитокинов на кроветворные клетки связано с существенной активацией гемопоэза, проявляющейся увеличением числа лейкоцитов, лимфоцитов и их цитотоксических субпопуляций, естественных клеток-киллеров и восполнением потерь нейтрофилов в очаге гнойного воспаления.
В рамках иммунной системы цитокины осуществляют взаимосвязь между неспецифическими защитными реакциями и специфическим иммунитетом в обоих направлениях. Большое значение придается морфогенетической функции иммунной системы и ее ответственности за регуляцию регенерации органов, за процессы адаптации и компенсации. Снижение общей популяции лимфоцитов и их субпопуляций, а также дисбаланс регуляторных медиаторов иммунитета является предрасполагающим фактором для формирования органных дисфункций, так как именно Т-лф. являются основным эффектором передачи репарационной информации клеткам пареинхиматозных органов.
Под действием препарата происходят глубокие сдвиги в состоянии иммунных эффекторов. Вследствие стимуляции кроветворения количество их увеличивается, растет число дифференцированных субпопуляций, стимулируется их функциональная активность. В первую очередь эти процессы происходят в иммунорегуляторной системе Т-лимфоцитов, преимущественно в субпопуляции Тh1.
Препарат как комплекс цитокинов первой фазы иммунного ответа способен модулировать активность иммунных эффекторов этой фазы (макрофагов, Тh1-лимфоцитов и нейтрофильных гранулоцитов).
При заболеваниях, сопровождающихся развитием вторичных иммунодефицитов клеточного звена и макрофагальной системы, отмечается дисбаланс цитокинового статуса, требующий проведения иммунокоррекции иммуномодуляторами цитокиновой природы. В зависимости от характера этого дисбаланса, в первую очередь, соотношения про- и противовоспалительных цитокинов и медиаторов опосредующих Тh1 (клеточный) и Th2 (гуморальный) тип иммунного ответа, цитокинотерапия должна быть направлена на усиление действия эндогенных цитокиновых медиаторов, путем введения в организм природных и рекомбинантных цитокиновых препаратов или заместительной терапии (при угнетении их продукции). При гиперпродукции цитокинов, приводящей к развитию системной воспалительной реакции и септического шока, следует проводить антицитокиновую терапию для снижения их продукции с использованием специфических ингибиторов цитокинов и их продукции, в том числе препаратами противовоспалительных цитокинов.
Проведенные исследования подтвердили, что широкий спектр и оптимальная концентрация основных цитокинов в препарате соответствует принципам цитокинотерапии.
Список литературы
Глушнев И.В., Даратина, Т.М., Иванова, и др. Возможность применения конъюгатов гидролизатов желатины и декстрана в качестве плазмозаменителей и дезинтоксикантов.// В кн.: Актуальные проблемы улучшения качества кровезаменителей, консервантов крови, гормональных и органотерапевтических препаратов. М.,1991. с.98.
Кочетыгов Н.И. Кровезаменители при кровопотере и шоке. "Медицина", Л.,1984.
Малышев В.Д. Интенсивная терапия. М.,1997.
Франке Р. Восполнение объема циркулирующей крови с использованием коллоидных растворов.// Анест. и реан. 1999. №3 с.70-76.
Хлябич Г.Н. Основные направления исследований по созданию перспективных технологий производства кровезаменителей.// В кн.: Актуальные проблемы улучшения качества кровезаменителей, консервантов крови, гормональных и органотерапевтических препаратов. М.,1991. с.3-9.
Laubenthal Н. Dextrananaphylaxie, Pathomechanismus und Prophylaxe.1986. Springer-Verlag, S. 51-83.
Lutz H. Plasmaersatzmittel. 4 Auflage. S. 87-154. Thieme-Verlag. 1986.
Singl S., Schaeffer R.C., Valdes S. Cardiorespira-tory effects of volume overload with colloidal fluids in dogs.// Crit. Care Med. 1983. V.33 p.585-590.
Козлов A.K. Сепсис: этиология, иммунопатогенез, концепции современной иммунотерапии. - Санкт-Петербург. Изд-во Диалект, 2006.-304 с.
Ковальчук Л.В., Ганковская Л.В. "Иммуноцитокины и локальная иммунокоррекция." Иммунология 1:4-7, 1995.
Барта И. Селезенка. Анатомия, физиология, патология и клиника. - Будапешт: Изд-во
АН Венгрии, 1971. - 264 с.
Schulkind M.K., Ellis E.F., Smith R.T. Effect of antibdody upon clearance of I 125-labelled pneumococci by the spleen and liver // Pediatr. J. Res. - 1967. - Ne 1. - P.178-184.
Lynch A.M., Kapila R. Overwhelming postsplenectomy infection // Infect. Dis. Clin. N. Amer. _ 1996. - Vol.10, Ne 4. - P.693-707.
Corazza G.R., Ginaldi L., Zoli G. et al. Howell-Jolly body counting as a measure of splenic
function. A reassessment // Clin. Lab. Haematol. - 1990. - Vol.12, Ne 3. - P. 269-275.
Kono S., Nagaike M., Matsumoto K. et al. Marked induction of hepatocyte growth factor mRNA in intact kidney and spleen in response to injury of distant organs // Biochem. Biophys. Res.
Commun. - 1992. - Vol.186, No 2. - P.991-998.
Matsumoto K., Nakamura T. Hepatocyte growth factor: molecular structure, roles in liver regeneration, and other biological functions // Crit. Rev. Oncol. -- 1992. - Vol.3, № 1-2. - P.27-54.
Skibinski G., Skibinska A., James K. The role of hepatocyte growth factor and its receptor c-Met in interactions between lymphocytes and stromal cells in secondary human lymphoid organs//
Immunology. - 2001. - Vol.102, Ne 4. - P.506-514.
Kermorgant S., Walker F., Hormi K. et al. Developmental expression and functionality of hepatocyte growth factor and c-Met in human fetal digestive tissues // Gastroenterology. - 1997. -Vol.112, Ne 5. - P.1635-1647.
Hoeflich A., Nedbal S., Blum W.F. et al. Growth inhibition in giant growth hormone transgenic
mice by overexpression of insulin-like growth factor-binding protein-2 // Endocrinology. - 2001. - Vol.142, No 5. - P.1889-1898.
Lee C.Y., Kwak I., Chung C.S. et al. Molecular cloning of the porcine acid-labile subunit (ALS) of the insulin-like growth factor-binding protein complex and detection of ALS gene expression in hepatic and non-hepatic tissues//J. Mol. Endocrinol - 2001. -Vol.26, №2. - P.135-144.
Suzuki Т., Koga N., Imamura T. et al. A novel growth factor in rat spleen which promotes j proliferation of hepatocytes in primary culture // Biochem. Biophys. Res. Commun. - 1988. - Vol.153, No 3. - P.1123-1128.
Kato Y., Yu D., Lukish JR. et al. Hepatocyte growth factor enhances intestinal mucosal cell function and mass in vivo // J. Pediatr. Surg. - 1997. - Vol.32, Ne 1. - P.991-994.
Gao С, Kennedy S., Ponder K.P. Lipopolysaccharide potentiates the effect of hepatocyte growth factor upon replication in lung, thyroid, spleen, and colon in rats in vivo // Mol. Ther. - 2001. - Vol.3, No 4. - P.462-475.
Sato N., Takahashi H. Hepatocyte growth factor promotes growth and lumen formation of fetal
lung epithelian cells in primary culture // Respirology. - 1997. - Vol.2, N" 3. -P. 185-191.
Bone R.C. The pathogenesis of sepsis.// Ann. Intern. Med. - 1991. - Vol.115, N 2. - P.457-469
Bone R.C. Sepsis, sepsis syndrome and the systemic inflammatory response syndrome. JAMA, 1995,273(2) 155-156
Bone R.C, Grodzin C.J., Balk R.A. Sepsis: a new hypothesis for pathogenesis of the disease process. Chest 1997; 112: 235-243
Galimi F., Cottone E., Vigna E. Hepatocyte growth factor is a regulator of monocyte-macrophage function // J. Immunol. - 2002. - Vol.166, Ne 2. - P.1241-1247.
Sprung C.L., Finch R.G., Thijs L.G., Glauser M.P. International sepsis trial (INTERSEPT): Role and impact of a Clinical Evaluation Committee. Crit Care Med 1996; 24: 1441-1447
Marshall J.C. The failure of clinical trials in sepsis: challenges of clinical trial design. In: Redl H., Shlag G. (eds.) Cytokines in severe sepsis and septic shock. Basel: Birkhauser; 1999; p.349-362
Никонов С.Д., Черных E.P., Останин A.A., Байбиков В.Е., Леплина О.Ю., Шевела Е.Я., Верещагин И.П.. Теоретические и экспериментальные предпосылки использования перфузатов ксеноселезенки в клинической практике. / В кн.: «Экспериментальные и клинические аспекты ксеноспленотерапии» под ред. проф. Ситникова В.А. и проф. Стяжкиной С.Н., Ижевск 1997, с.17-24