Количественный анализ некоторых лекарственных препаратов методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

УДК 543.544

КОЛИЧЕСТВЕННЫЙ АНАЛИЗ НЕКОТОРЫХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ПРЕПАРАТОВ МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

Г.Б. Голубицкий*, В.М. Иванов

Разработана методика количественного анализа нового многокомпонентного лекарственного препарата "Пенталгин с пропифеназоном и дротаверином" методом ВЭЖХ. При анализе модельных смесей, содержащих все действующие и все вспомогательные вещества таблеток, подтверждена достоверность получаемых результатов. Проанализированы опытно-экспериментальные образцы таблеток, полученные результаты соответствуют требованиям нормативно-технической документации и технологическим загрузкам. Методика предложена для включения в фармакопейную статью предприятия на данный препарат.

Ключевые слова: лекарственные препараты, пенталгин, пропифеназон, дротаверин, ВЭЖХ.

Таблетки "Пенталгин с пропифеназоном и дротаверином" - оригинальный многокомпонентный лекарственный препарат, разработанный и подготовленный к выпуску на ОАО "Фармстандарт-Лексредства". В состав препарата входят парацетамол (I), пропифеназон (II), кофеин (III), фенобарбитал (IV), дротавери-на гидрохлорид (V) и ряд вспомогательных веществ и наполнителей. Структурные формулы компонентов приведены на рис. 1.

Разработка методики количественного определения пяти действующих компонентов - достаточно сложная, но необходимая задача для обеспечения качества, эффективности и безопасности препарата. Решение этой проблемы нашло отражение в настоящей публикации.

Экспериментальная часть

Реагенты. Для приготовления подвижных фаз (ПФ), а также для растворения стандартных и испытуемых препаратов использовали ацетонитрил для градиентной хроматографии ("Sigma", США) и сверхчистую воду с удельным сопротивлением 18,2 МОм/см, полученную на установке "Direct Q" ("Millipore"). В качестве стандартов определяемых лекарственных веществ использовали фармацевтические субстанции, проверенные отделом контроля качества предприятия и соответствующие всем требованиям нормативно-технической документации (НД).

Все остальные использованные реактивы имели квалификацию не ниже "ч.д.а."

Аппаратура. Хроматографический анализ проводили на хроматографе "Waters Alliance 2695" с диод-но-матричным детектором "Waters 2996". "Мертвый" объем хроматографа (по паспорту) составлял менее 0,650 мл. Использовали колонку размером 150x4,6 мм с защитной предколонкой размером 12,5x4,6 мм. Обе колонки заполняли обращенно-фазо-вым сорбентом "Zorbax SB C8" с размером частиц 3,5 мкм ("Agilent Technologies", США) и термоста-тировали их при 40°С.

Приготовление растворов. Для выполнения анализа около 0,160 г (точная навеска) тщательно растертых анализируемых таблеток помещали в мерную колбу вместимостью 100 мл, добавляли 40 мл смеси CH3CN (10 об. %) - вода, перемешивали 3 мин, доводили до метки этой же смесью растворителей и снова перемешивали. Для приготовления раствора стандартных образцов (РСО) около 0,060 г парацетамола и около 0,050 г пропифеназона (точные навески) помещали в мерную колбу вместимостью 100 мл, добавляли 40 мл смеси CH3CN (10 об.%) - вода, перемешивали до растворения веществ, добавляли 5,0 мл раствора (А), доводили до метки этой же смесью растворителей и перемешивали. Для приготовления раствора А в мерную колбу вместимостью 100 мл помещали около 0,200 г кофеина, около 0,160 г

* ОАО "Фармстандарт-Лексредства", г. Курск.

Рис. 1. Структурные формулы изученных компонентов

дротаверина и около 0,040 г фенобарбитала (точные навески), добавляли 40 мл смеси CH3CN (10 об.%) - вода, перемешивали до растворения веществ, доводили до метки этой же смесью растворителей и перемешивали. Модельные растворы для подтверждения достоверности получаемых результатов готовили аналогично раствору РСО, но с добавлением соответствующего количества плацебо - смеси всех компонентов препарата, за исключением определяемых веществ. Кроме того, содержание действующих веществ в модельных растворах различалось (±20% от заявленных значений).

Все растворы фильтровали через гидрофильный мембранный фильтр с размером пор 0,45 мкм (предпочтительны фторопластовые фильтры, устойчивые в водно-ацетонитрильных растворах).

Проеедение анализа, расчет результатов. Хро-матографировали испытуемый раствор и раствор РСО. Состав ПФ изменяли в соответствии с программой, представленной в табл. 1.

Расход ПФ составил 1,0 мл/мин, объем инжектируемых проб 20,0 мкл, детектирование проводили при

Т а б л и ц а 1

Состав подвижной фазы

Время, мин Состав подвижной фазы

ra3CN : 0,025 М КН2РО4 = 7 : 3 0,025 М КН2РО4

0 20 80

4 30 70

10 100 0

11 100 0

12 20 80

15 20 80

Рис. 2. Нормализованные спектры поглощения парацетамола (1), пропифеназона (2), кофеина (3),

фенобарбитала

X = 210 нм. Рассчитывали площади пиков определяемых компонентов и находили количество каждого компонента в анализируемых таблетках по формуле:

где £и и £ст - средние значения площадей пиков определяемых компонентов на хроматограммах растворов испытуемого и РСО соответственно; тст, тс и тн - масса стандарта определяемого вещества в растворе РСО, средняя масса таблетки и масса навески растертых таблеток (г), взятых для приготовления испытуемого раствора.

Результаты и их обсуждение

Оптимальные условия анализа. Длину волны детектирования определяли исходя из спектров поглощения компонентов препарата, полученных в режиме на потоке с помощью диодно-матричного детектора (рис. 2). Условия детектирования определяет спектр фенобарбитала, имеющего достаточное для надежного детектирования поглощение только в коротковолновой области. По этой причине длина волны детектирования в данной методике составляет 210 нм.

Большое различие хроматографических свойств компонентов исследуемого препарата не позволило найти условия их изократического разделения в об-ращенно-фазовой системе. Оптимальные условия разделения смеси действующих веществ в градиентном режиме определяются в основном двумя факторами - разрешение "критической" пары пиков и время удерживания последнего выходящего пика*. В первом случае это пики парацетамола и кофеина, для разделения которых концентрация органического модификатора ПФ не должна превышать 30 об.%, во втором - пик дротаверина, для элюирования которого содержание СН3СК должно быть не менее 60 об.%. Для обеспечения выполнения этих условий и сокращения времени анализа градиентная программа, предусмотренная методикой, включает два участка с разными наклонами: до выхода пика кофеина и более крутой до выхода пика дротавери-на. Такие условия позволили установить время одной инжекции 15 мин, включая время уравновешивания колонки (рис. 3).

Анализ модельных смесей. Всего было приготовлено 17 растворов, содержание определяемых ве-

*Схунмакерс П. Оптимизация селективности в хроматографии. М., 1989. С. 321.

Рис. 3. Хроматограмма испытуемого раствора для анализа таблеток "Пенталгин с пропифеназоном и дротаверином" в

двух масштабах

Т а б л и ц а 2

Метрологические характеристики методики количественного анализа таблеток "Пенталгин с пропифеназоном и дротаверином"

Условия Общий вид Сорбция Десорбция

t = 0 а

X = 0 да — = 0 дх

х = 1

Т а б л и ц а 3

Результаты анализа трех опытных образцов таблеток "Пенталгин с пропифеназоном и дротаверином"

Компоненты Содержание в одной таблетке, г

Норма по НД хср 5 5д:ср ¿ЛЛ-ср е,%

0,294 0,002 0,00067 0,00158 0,54

Парацетамол 0,285-0,315 0,302 0,004 0,00133 0,00316 1,05

0,296 0,003 0,00100 0,00237 0,80

0,0489 0,0007 0,00023 0,00055 1,13

Кофеин 0,04625-0,05375 0,0504 0,0005 0,00017 0,00040 0,78

0,0495 0,0009 0,00030 0,00071 1,44

0,255 0,003 0,00100 0,00237 0,93

Пропифеназон 0,237-0,262 0,248 0,006 0,00200 0,00474 1,91

0,244 0,002 0,00067 0,00158 0,65

0,0097 0,0003 0,00010 0,00024 2,44

Фенобарбитал 0,009-0,011 0,0102 0,0003 0,00010 0,00024 2,32

0,0098 0,0004 0,00013 0,00032 3,22

0,0403 0,0006 0,00020 0,00047 1,18

Дротаверина г/х 0,0370-0,0430 0,0387 0,0005 0,00017 0,00040 1,02

0,0396 0,0006 0,00020 0,00047 1,20

ществ в которых колебалось в интервале ±20% от значений, заявленный по рецептуре. Полученные растворы анализировали по вышеприведенной методике и рассчитывали результаты по методу "введено-найдено" с помощью электронных таблиц Excel. Полученные результаты представлены в табл. 2. Сравнение величин средних относительных погрешностей определения компонентов егср с соответствующими доверительными интервалами Aer показывает, что сис-

тематическая погрешность отсутствует (егср < Лег). Площади пиков определяемый веществ линейно зависят от их концентраций в указанном интервале (коэффициент корреляции ^корр > 0,99.

Анализ образцов таблеток. По предлагаемой методике проанализированы опытные образцы препарата. Полученные резулытаты представлены в табл. 3. Резулытаты соответствуют требованиям НД и технологическим загрузкам.

THE QUANTITATIVE ANALYSIS OF ANY FARMACEUTICAL BY A METHOD HPLC

G.B. Golubitsky, V.M. Ivanov

The technique of the quantitative analysis of a new multicomponent medicinal preparation "Pentalgin with propiphenazon and drotaverin" by a method HPLC is developed. At the analysis of modelling mixes containing all working and all auxiliary substances of tablets, the reliability of received results is confirmed. Skilled - experimental samples of tablets are analysed the received results correspond(meet) to the requirements of the normative-engineering specifications and technological loadings. The technique is offered for inclusion in pharmacopoeia clause of the enterprise on the given preparation.

Key words: medicinal preparations, pentalgin, propiphenazon, drotaverin, HPLC.

Сведения об авторах: Иванов Вадим Михайлович - профессор кафедры аналитической химии химического факулытета МГУ, докт. хим. наук (mvonavi@mail.ru); Голубицкий Григорий Борисович - зав. лаб. ОАО "Фармстандарт-Лексредства" (г. Курск), канд. хим. наук.