Способ коррекции нарушений микроциркуляции в почке пептидом, имитирующим альфа-спираль В эритропоэтина, при ишемически-реперфузионном повреждении
METHOD FOR CORRECTING MICROCIRCULATION DISORDERS IN KIDNEY WITH PEPTIDE THAT MIMICS ALPHA-HELIX B OF ERYTHROPOIETIN IN ISCHEMIA-REPERFUSION INJURY

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной фармакологии и урологии.
На сегодняшний день заболеваемость населения онко-урологической патологией остается крайне высокой: согласно данным Росстата в период с 2010г по 2018г отмечен рост частоты случаев рака почек с 18,7 до 24,3 тысяч в год [И.Н. Шаповал, С.Ю. Никитина. Здравоохранение в России. 2019: Стат.сб./Росстат. - М., З-46 2019. – с 39]. Согласно современным тенденциям, при выявлении болезни на начальных этапах оптимальным считается выполнение органосохранной операции (резекции почки)[М.А, Газимиев, ООО«Медконгресс», Клинические рекомендации Европейской ассоциации урологов 2020, - Москва, 2020г, с.71], наиболее часто проводимой в условиях тепловой ишемии. Учитывая данный факт, одной из главных задач, поставленных перед врачами и учеными всего мира, является профилактика развития острого почечного повреждения (ОПП), обусловленного окклюзией почечных сосудов [Basile, D. P. Renal endothelial dysfunction in acute kidney ischemia reperfusion injury / D. P. Basile, M. C. Yoder // Cardiovasc. Hematol. Disord. Drug Targets. – 2014. – Vol. 14, Iss. 1. – P. 3–14.].
Наиболее близким к заявленному решению является способ профилактики микроциркуляторных нарушений в почках в эксперименте [Елагин В.В., Костина Д.А., Братчиков О.И., Покровский М.И., Покровская Т.Г. Исследование ренопротективных свойств производных эритропоэтина на модели ишемии-реперфузии почек. Кубанский научный медицинский вестник. 2018; 25(6): 73-77. DOI: 10.25207 / 1608-6228-2018-25-6-73-77.], модель которого включает наложение атравматичных зажимов на обе почечные ножки на 40 минут. С целью профилактики нарушения микроциркуляции в почках однократно внутрибрюшинно за 30 минут до ишемии вводили эритропоэтин в дозе 50 МЕ/кг. В результате отмечено улучшение показателей микроциркуляции в тканях почек.
Однако, эритропоэтин оказывает эритропоэтический эффект, что является не желательным явлением и ведет к увеличению риска тромботических событий в первый год после трансплантации (эритропоэтин 24,4% по сравнению с плацебо 6,4%) [Aydin Z, Mallat MJ, Schaapherder AF. et al.Randomized trial of short-course high-dose erythropoietin in donation after cardiac death kidney transplant recipients. Am J Transplant. 2012;12(7):1793–1800]. Поэтому результаты коррекции микроциркуляции в почке при моделировании ишемически-реперфузионного повреждений почек у животных с использованием эритропоэтина неудовлетворительны.
Задачей изобретения является создание эффективного способа коррекции микроциркуляции в почке при моделировании ишемически-реперфузионных повреждений почек.
Техническим результатом изобретения является эффективный способ коррекция нарушений микроциркуляции в почке при моделировании ишемически-реперфузионных повреждений внутрибрюшинным введением пептида, имитирующего α-спираль B эритропоэтина (pHBSP), в дозировке 25 мкг/кг за 30 минут до начала ишемии.
Поставленная задача решается с помощью предлагаемого способа коррекции нарушений микроциркуляции в почке, включающего моделирование ишемически-реперфузионных повреждений почек путем наложения атравматичных сосудистых зажимов на левую почечную ножку на 40 минут, а коррекцию проводят использованием 11-членного пептида, имитирующего α-спираль B эритропоэтина, не обладающего эритропоэтической активностью (pHBSP (QEQLERALNSS (Pyr-Glu-Gln-Leu-Glu-Arg-Ala-Leu-Asn-Ser-Ser))) [Brines M., Patel N.S., Villa P., Brines C., Mennini T., De Paola M., Erbayraktar Z., Erbayraktar S., Sepodes B., Thiemermann C., Ghezzi P., Yamin M., Carla C. Hand, Qiao-wen Xie, Coleman T., Cerami F. Nonerythropoietic, tissue-protective peptides derived from the tertiary structure of erythropoietin // Proc Natl Acad Sci USA. 2008. №105(31). Р. 10925-10930.], который вводился внутрибрюшинно за 30 минут до моделирования ишемии в дозе 25 мкг\кг.
СПОСОБ ОСУЩЕСТВЛЯЕТСЯ СЛЕДУЮЩИМ ОБРАЗОМ
Опыт проводился на белых лабораторных крысах-самцах линии Wistar массой 280-320г. Моделирование ишемически-реперфузионных повреждений почек производили путем наложения атравматичных сосудистых зажимов на левую почечную ножку на 40 минут. Пептид имитирующий α-спираль B эритропоэтина (pHBSP) вводился внутрибрюшинно за 30 минут до моделирования ишемии в дозе 25 мкг\кг.
Микроциркуляцию в корковом слое почек измеряли через 5 минут и 24 часа после ишемии с помощью аппаратно-программного комплекса MP100 (Biopac System, Inc., США) с модулем лазерной допплеровской флоуметрии (ЛДФ) LDF100C и поверхностного датчика TSD143, который прикладывался к средней части почки, не затрагивая область ворот. Регистрация и обработка результатов производилась с помощью программного обеспечения AcqKnowledge версии 3.8.1. Значения показателей выражались в перфузионных единицах (ПЕд).
Статистическая обработка результатов исследования.
Статистическую обработку проводили с использованием программной среды вычислений R. Характер распределения признаков в статистической выборке определяли с помощью критерия Шапиро-Уилка и критерия Шпигельхальтера (библиотека normtest), оценку равенства дисперсий – с помощью критерия Левене (библиотека lawstat). В зависимости от типа распределения признаков и равенства дисперсий значимость полученных результатов оценивали с применением параметрического (ANOVA) или непараметрического (критерий Краскела-Уоллиса) однофакторного дисперсионного анализа, а в качестве post-hoc анализа для выявления различий при межгрупповых сравнениях использовали непарный t-критерий Стьюдента или критерий Манна-Уитни, соответственно, с поправкой Бенджамини-Хохберга на множественную проверку гипотез. Результаты считали достоверными при p≤0,05.
ПРИМЕР КОНКРЕТНОГО ВЫПОЛНЕНИЯ.
Развитие острого повреждения почек, вызванного наложением атравматичного зажима на почечные сосуды, приводило к нарушению микроциркуляции в почке, о чем свидетельствует снижение ее величины с 900±42ПЕд до 219±12 ПЕд (р<0,05) через 5 минут после ишемии, через 24 часа после ишемии с 881±38 ПЕд (у ложнооперированных) до 430±20ПЕд (в группе ишемии\реперфузии). Внутрибрюшинное введение пептида имитирующего α-спираль B эритропоэтина (pHBSP) в дозировке 25 мкг/кг за 30 минут до ишемии на фоне моделирования ишемически-реперфузионного повреждения почки крыс приводило к достоверному повышению уровня микроциркуляции в почке через 5 минут после ишемии до 693±28 ПЕд, через 24 часа после ишемии до 771±27 ПЕд соответственно, что статистически выше (р<0,05), чем в группе «не леченных» животных.
Таким образом, полученные результаты убедительно свидетельствуют о выраженной коррекции нарушения микроциркуляции в почке в условиях воспроизводимой модели ишемически-реперфузионных повреждений почек крыс с использованием пептида имитирующего α-спираль B эритропоэтина (pHBSP), не обладающего эритропоэтическим эффектом.
Влияние пептида, имитирующего α-спираль B эритропоэтина, на микроциркуляцию при моделировании ишемически-реперфузионных повреждений почек крыс представлено в таблице 1.
Таблица 1