АНТИГЕНСВЯЗЫВАЮЩАЯ МОЛЕКУЛА, СПОСОБНАЯ МНОГОКРАТНО СВЯЗЫВАТЬСЯ С МНОЖЕСТВОМ АНТИГЕННЫХ МОЛЕКУЛ

1. Антигенсвязывающая молекула, содержащая антигенсвязывающий домен и домен, связывающий FcRn человека, активность связывания антигена которой отличается в условиях двух различных концентраций кальция и является более низкой в условиях низкой концентрации кальция, чем в условиях высокой концентрации кальция, и которая обладает активностью связывания с FcRn человека в условиях нейтрального значения pH.
2. Антигенсвязывающая молекула по п.1, где низкая концентрация кальция представляет собой концентрацию ионизированного кальция от 0,1 до 30 мкМ.
3. Антигенсвязывающая молекула по п.1, где высокая концентрация кальция представляет собой концентрацию ионизированного кальция от 100 мкМ до 10 мМ.
4. Антигенсвязывающая молекула по п.1 или 2, где низкая концентрация кальция представляет собой внутриэндосомальную концентрацию ионизированного кальция.
5. Антигенсвязывающая молекула по п.1 или 3, где высокая концентрация кальция представляет собой концентрацию ионизированного кальция в плазме.
6. Антигенсвязывающая молекула по любому из пп.1-5, где FcRn-связывающий домен представляет собой Fc-область.
7. Антигенсвязывающая молекула по любому из пп.1-6, где, дополнительно, антигенсвязывающая активность является более низкой в условиях кислого значения pH, чем в условиях нейтрального значения pH.
8. Антигенсвязывающая молекула по п.7, где по меньшей мере одна аминокислота заменена гистидином или по меньшей мере один гистидин встроен в антигенсвязывающую молекулу.
9. Антигенсвязывающая молекула по любому из пп.1-8, которая связывается с мембранным антигеном или растворимым антигеном.
10. Антигенсвязывающая молекула по любому из пп.1-9, где антиген представляет собой антиген, выбранный из группы, состоящей из IL-6R, IL-6, IgA, глипикана 3 человека и IgE.
11. Антигенсвязывающая молекула, содержащая антигенсвязывающий домен и FcRn-связывающий домен человека, активность связывания антигена которой отличается в двух различных условиях концентрации кальция и является более низкой в условиях низкой концентрации кальция, чем в условиях высокой концентрации кальция, и где легкая цепь или тяжелая цепь антигенсвязывающего домена содержит кальций-связывающий мотив, происходящий из антитела человека.
12. Антигенсвязывающая молекула по п.11, где кальций-связывающий мотив содержится в CDR1, CDR2 и/или CDR3 легкой цепи антигенсвязывающего домена.
13. Антигенсвязывающая молекула по п.12, где кальций-связывающий мотив содержится в положениях 30, 31 и/или 32 в соответствии с нумерацией по Kabat в CDR1 легкой цепи.
14. Антигенсвязывающая молекула по п.12 или 13, где кальций-связывающий мотив содержится в положении 50 в соответствии с нумерацией по Kabat в CDR2 легкой цепи.
15. Антигенсвязывающая молекула по любому из пп.12-14, где кальций-связывающий мотив содержится в положении 92 в соответствии с нумерацией по Kabat в CDR3 легкой цепи.
16. Антигенсвязывающая молекула по любому из пп.12-15, которая представляет собой либо IgA, либо глипикан 3 человека.
17. Антигенсвязывающая молекула по п.11, где кальций-связывающий мотив содержится в CDR1, CDR2 и/или CDR3 тяжелой цепи антигенсвязывающего домена.
18. Антигенсвязывающая молекула по п.16, где кальций-связывающий мотив содержится в положениях 95, 96, 100a и/или 101 в соответствии с нумерацией по Kabat в CDR3 тяжелой цепи.
19. Антигенсвязывающая молекула по п.17 или 18, которая представляет собой либо IL-6R, либо IL-6.
20. Антигенсвязывающая молекула по любому из пп.11-19, которая содержит FcRn-связывающий домен, который обладает активностью связывания FcRn в нейтральном диапазоне значений pH.
21. Антигенсвязывающая молекула по п.20, где FcRn-связывающий домен представляет собой Fc-область.
22. Антигенсвязывающая молекула по любому из пп.1-10, 20 или 21, где одна или несколько аминокислот в положениях 248, 250, 252, 254, 255, 256, 257, 258, 265, 286, 289, 297, 303, 305, 307, 308, 309, 311, 312, 314, 315, 317, 332, 334, 360, 376, 380, 382, 384, 385, 386, 387, 389, 424, 428, 433, 434 и 436 (нумерация EU) в аминокислотной последовательности Fc-области отличаются от аминокислот в природной Fc-области.
23. Антигенсвязывающая молекула по п.22, которая содержит любую или комбинацию из
Met в положении аминокислоты 237;
Ile в положении аминокислоты 248;
Ala, Phe, Ile, Met, Gln, Ser, Val, Trp или Tyr в положении аминокислоты 250;
Phe, Trp или Tyr в положении аминокислоты 252;
Thr в положении аминокислоты 254;
Glu в положении аминокислоты 255;
Asp, Glu или Gln в положении аминокислоты 256;
Ala, Gly, Ile, Leu, Met, Asn, Ser, Thr или Val в положении аминокислоты 257;
His в положении аминокислоты 258;
Ala в положении аминокислоты 265;
Ala или Glu в положении аминокислоты 286;
His в положении аминокислоты 289;
Ala в положении аминокислоты 297;
Ala в положении аминокислоты 303;
Ala в положении аминокислоты 305;
Ala, Asp, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Val, Trp или Tyr в положении аминокислоты 307;
Ala, Phe, Ile, Leu, Met, Pro, Gln или Thr в положении аминокислоты 308;
Ala, Asp, Glu, Pro или Arg в положении аминокислоты 309;
Ala, His или Ile в положении аминокислоты 311;
Ala или His в положении аминокислоты 312;
Lys или Arg в положении аминокислоты 314;
Ala, Asp или His в положении аминокислоты 315;
Ala в положении аминокислоты 317;
Val в положении аминокислоты 332;
Leu в положении аминокислоты 334;
His в положении аминокислоты 360;
Ala в положении аминокислоты 376;
Ala в положении аминокислоты 380;
Ala в положении аминокислоты 382;
Ala в положении аминокислоты 384;
Asp или His в положении аминокислоты 385;
Pro в положении аминокислоты 386;
Glu в положении аминокислоты 387;
Ala или Ser в положении аминокислоты 389;
Ala в положении аминокислоты 424;
Ala, Asp, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Asn, Pro, Gln, Ser, Thr, Val, Trp или Tyr в положении аминокислоты 428;
Lys в положении аминокислоты 433;
Ala, Phe, His, Ser, Trp или Tyr в положении аминокислоты 434; или
His, Ile, Leu или Val в положении аминокислоты 436;
в соответствии с нумерацией EU в Fc-области.
24. Антигенсвязывающая молекула по любому из пп.1-23, где антигенсвязывающая молекула представляет собой антитело.
25. Способ получения антигенсвязывающей молекулы, имеющей по меньшей мере одну функцию, выбранную из следующего
(i) функция ускорения захвата антигена в клетки,
(ii) функция связывания антигена два или более раз,
(iii) функция ускорения снижения концентрации антигена в плазме, и
(iv) функция улучшения удержания в плазме,
где способ включает стадии (a)-(e), указанные ниже
(a) определение антигенсвязывающей активности антигенсвязывающей молекулы в условиях низкой концентрации кальция;
(b) определение антигенсвязывающей активности антигенсвязывающей молекулы в условиях высокой концентрации кальция;
(c) отбор антигенсвязывающей молекулы, которая имеет более низкую антигенсвязывающую активность в условиях низкой концентрации кальция, чем в условиях высокой концентрации кальция;
(d) получение гена, кодирующего антигенсвязывающую молекулу, отобранную на стадии (c); и
(e) продуцирование антигенсвязывающей молекулы с использованием гена, полученного на стадии (d).
26. Способ получения антигенсвязывающей молекулы, имеющей по меньшей мере одну функцию, выбранную из следующего
(i) функция ускорения захвата антигена в клетки,
(ii) функция связывания антигена два или более раз,
(iii) функция ускорения снижения концентрации антигена в плазме, и
(iv) функция улучшения удержания в плазме,
где способ включает стадии (a)-(e), указанные ниже
(a) приведение антигена в контакт с антигенсвязывающей молекулой или библиотекой антигенсвязывающих молекул в условиях высокой концентрации кальция;
(b) помещение антигенсвязывающей молекулы, которая связывает антиген на стадии (a), в условия низкой концентрации кальция;
(c) получение антигенсвязывающей молекулы, которая диссоциирует на стадии (b);
(d) получение гена, кодирующего антигенсвязывающую молекулу, полученную на стадии (c); и
(e) получение антигенсвязывающей молекулы с использованием гена, полученного на стадии (d).
27. Способ получения антигенсвязывающей молекулы, имеющей по меньшей мере одну функцию, выбранную из следующего
(i) функция ускорения захвата антигена в клетки,
(ii) функция связывания антигена два или более раз,
(iii) функция ускорения снижения концентрации антигена в плазме, и
(iv) функция улучшения удержания в плазме,
где способ включает стадии (a)-(f), указанные ниже
(a) приведение антигена в контакт с антигенсвязывающей молекулой или библиотекой антигенсвязывающих молекул в условиях низкой концентрации кальция;
(b) отбор антигенсвязывающей молекулы, которая не связывается с антигеном на стадии (a);
(c) обеспечение связывания антигенсвязывающей молекулы, отобранной на стадии (b), с антигеном в условиях высокой концентрации кальция;
(d) получение антигенсвязывающей молекулы, которая связалась с антигеном на стадии (c);
(e) получение гена, кодирующего антигенсвязывающую молекулу, полученную на стадии (d); и
(f) продуцирование антигенсвязывающей молекулы с использованием гена, полученного на стадии (e).
28. Способ получения по любому из пп.25-27, который дополнительно включает стадию обеспечения или увеличения активности связывания FcRn человека в условиях нейтрального значения pH путем модификации аминокислоты в антигенсвязывающей молекуле.
29. Способ получения по любому из пп.25-27, который дополнительно включает стадию снижения активности связывания в условиях кислого значения pH, чтобы она была более низкой, чем в условиях нейтрального значения pH, путем модификации аминокислоты в антигенсвязывающей молекуле.
30. Способ получения по любому из пп.25-27, где низкая концентрация кальция представляет собой концентрацию ионизированного кальция от 0,1 до 30 мкМ.
31. Способ получения по любому из пп.25-27, где высокая концентрация кальция представляет собой концентрацию ионизированного кальция от 100 мкМ до 10 мМ.
32. Способ получения по любому из пп.25-27, где низкая концентрация кальция представляет собой внутриэндосомальную концентрацию ионизированного кальция.
33. Способ получения по любому из пп.25-27, где высокая концентрация кальция представляет собой концентрацию ионизированного кальция в плазме.
34. Способ получения по п.29, где модификация аминокислоты в антигенсвязывающей молекуле представляет собой модификацию путем замены по меньшей мере одной аминокислоты гистидином или встраивания по меньшей мере одного гистидина в антигенсвязывающую молекулу.
35. Способ получения по любому из пп.25-34, где антиген, связываемый антигенсвязывающей молекулой, представляет собой антиген, выбранный из группы, состоящей из IL-6R, IL-6, IgA, глипикана 3 человека и IgE.
36. Способ получения по любому из пп.25-35, где антигенсвязывающая молекула представляет собой антитело.
37. Фармацевтическая композиция, содержащая
антигенсвязывающую молекулу по любому из пп.1-24 или антигенсвязывающую молекулу, полученную способом получения по любому из пп.25-36, и фармацевтически приемлемый носитель.
38. Фармацевтическая композиция по п.37 для применения для ускорения интернализации антигена в клетки.
39. Фармацевтическая композиция по п.37 для применения для ускорения снижения концентрации антигена в плазме.
40. Фармацевтическая композиция для применения для ускорения захвата антигена в клетки или снижения концентрации антигена в плазме, которая содержит антигенсвязывающую молекулу, содержащую антигенсвязывающий домен и FcRn-связывающий домен человека, активность связывания антигена которой отличается при двух различных концентрациях кальция и является более низкой в условиях низкой концентрации кальция, чем в условиях высокой концентрации кальция.
41. Фармацевтическая композиция по п.40, где низкая концентрация кальция представляет собой концентрацию ионизированного кальция от 0,1 до 30 мкМ.
42. Фармацевтическая композиция по п.40, где высокая концентрация кальция представляет собой концентрацию ионизированного кальция от 100 мкМ до 10 мМ.
43. Фармацевтическая композиция по п.40 или 41, где низкая концентрация кальция представляет собой внутриэндосомальную концентрацию ионизированного кальция.
44. Фармацевтическая композиция по п.40 или 42, где высокая концентрация кальция представляет собой плазменную концентрацию ионизированного кальция.
45. Фармацевтическая композиция по любому из пп.40-44, где FcRn-связывающий домен, содержащийся в антигенсвязывающей молекуле, представляет собой Fc-область.
46. Фармацевтическая композиция по любому из пп.40-45, где антигенсвязывающая активность антигенсвязывающей молекулы является более низкой в условиях кислого значения pH, чем в условиях нейтрального значения pH.
47. Фармацевтическая композиция по п.46, где модификация аминокислоты в антигенсвязывающей молекуле представляет собой модификацию путем замены по меньшей мере одной аминокислоты гистидином или встраивания по меньшей мере одного гистидина в антигенсвязывающую молекулу.
48. Фармацевтическая композиция по любому из пп.40-47, где антиген, с которым связывается антигенсвязывающая молекула, представляет собой антиген, выбранный из группы, состоящей из IL-6R, IL-6, IgA, глипикана 3 человека и IgE.
49. Способ скрининга антигенсвязывающей молекулы, которая имеет по меньшей мере одну функцию, выбранную из следующего
(i) функция ускорения захвата антигена в клетки,
(ii) функция связывания антигена два или более раз,
(iii) функция ускорения снижения концентрации антигена в плазме, и
(iv) функция улучшения удержания в плазме,
где способ включает стадии (a)-(c), указанные ниже
(a) определение антигенсвязывающей активности антигенсвязывающей молекулы в условиях низкой концентрации кальция;
(b) определение антигенсвязывающей активности антигенсвязывающей молекулы в условиях высокой концентрации кальция; и
(c) отбор антигенсвязывающей молекулы, антигенсвязывающая активность которой является более низкой в условиях низкой концентрации кальция, чем в условиях высокой концентрации кальция.
50. Способ скрининга антигенсвязывающей молекулы, которая имеет по меньшей мере одну функцию, выбранную из следующего
(i) функция ускорения захвата антигена в клетки,
(ii) функция связывания антигена два или более раз,
(iii) функция ускорения снижения концентрации антигена в плазме, и
(iv) функция улучшения удержания в плазме,
где способ включает стадии (a)-(c), указанные ниже
(a) приведение антигена в контакт с антигенсвязывающей молекулой или библиотекой антигенсвязывающих молекул в условиях высокой концентрации кальция;
(b) помещение антигенсвязывающей молекулы, которая связывает антиген на стадии (a), в условия низкой концентрации кальция; и
(c) получение антигенсвязывающей молекулы, которая диссоциирует на стадии (b).
51. Способ скрининга антигенсвязывающей молекулы, которая имеет по меньшей мере одну функцию, выбранную из следующего
(i) функция ускорения захвата антигена в клетки,
(ii) функция связывания антигена два или более раз,
(iii) функция ускорения снижения концентрации антигена в плазме, и
(iv) функция улучшения удержания в плазме,
где способ включает стадии (a)-(d), указанные ниже
(a) приведение антигена в контакт с антигенсвязывающей молекулой или библиотекой антигенсвязывающих молекул в условиях низкой концентрации кальция;
(b) отбор антигенсвязывающей молекулы, которая не связывает антиген на стадии (a);
(c) обеспечение связывания антигенсвязывающей молекулы, отобранной на стадии (b), с антигеном в условиях высокой концентрации кальция; и
(d) получение антигенсвязывающей молекулы, связавшейся с антигеном на стадии (c).
52. Способ скрининга по любому из пп.49-51, где низкая концентрация кальция представляет собой концентрацию ионизированного кальция от 0,1 до 30 мкМ.
53. Способ скрининга по любому из пп.49-51, где высокая концентрация кальция представляет собой концентрацию ионизированного кальция от 100 мкМ до 10 мМ.
54. Способ скрининга по любому из пп.49-52, где низкая концентрация кальция представляет собой внутриэндосомальную концентрацию ионизированного кальция.
55. Способ скрининга по любому из пп.49-51 или 53, где высокая концентрация кальция представляет собой концентрацию ионизированного кальция в плазме.
56. Способ скрининга по любому из пп.49-55, где антиген, с которым связывается антигенсвязывающая молекула, представляет собой антиген, выбранный из группы, состоящей из IL-6R, IL-6, IgA, глипикана 3 человека и IgE.
57. Способ скрининга по любому из пп.49-56, где антигенсвязывающая молекула представляет собой антитело.
58. Способ ускорения антигенсвязывающей молекулой захвата антигена в клетку путем введения антигенсвязывающей молекулы по любому из пп.1-24 или антигенсвязывающей молекулы, полученной способом получения по любому из пп.25-36.
59. Способ ускорения снижения концентрации антигена в плазме путем введения антигенсвязывающей молекулы по любому из пп.1-24 или антигенсвязывающей молекулы, полученной способом получения по любому из пп.25-36.
60. Способ увеличения количества раз связывания антигена одной антигенсвязывающей молекулой с использованием антигенсвязывающей молекулы по любому из пп.1-24 или антигенсвязывающей молекулы, полученной способом получения по любому из пп.25-36.
61. Способ увеличения удержания в плазме антигенсвязывающей молекулы с использованием антигенсвязывающей молекулы по любому из пп.1-24 или антигенсвязывающей молекулы, полученной способом получения по любому из пп.25-36.
62. Способ ускорения захвата антигена в клетку антигенсвязывающей молекулой путем введения антигенсвязывающей молекулы, содержащей антигенсвязывающий домен и FcRn-связывающий домен человека, антигенсвязывающая активность которой отличается при двух различных концентрациях кальция и является более низкой в условиях низкой концентрации кальция, чем в условиях высокой концентрации кальция.
63. Способ ускорения снижения концентрации антигена в плазме путем введения антигенсвязывающей молекулы, содержащей антигенсвязывающий домен и FcRn-связывающий домен человека, антигенсвязывающая активность которой отличается при двух различных концентрациях кальция и является более низкой в условиях низкой концентрации кальция, чем в условиях высокой концентрации кальция.
64. Способ увеличения количества раз связывания антигена одной антигенсвязывающей молекулой с использованием антигенсвязывающей молекулы, содержащей антигенсвязывающий домен и FcRn-связывающий домен человека, антигенсвязывающая активность которой отличается при двух различных концентрациях кальция и является более низкой в условиях низкой концентрации кальция, чем в условиях высокой концентрации кальция.
65. Способ увеличения удержания в плазме антигенсвязывающей молекулы с использованием антигенсвязывающей молекулы, содержащей антигенсвязывающий домен и FcRn-связывающий домен человека, антигенсвязывающая активность которой отличается при двух различных концентрациях кальция и является более низкой в условиях низкой концентрации кальция, чем в условиях высокой концентрации кальция.
66. Способ по любому из пп.62-65, где низкая концентрация кальция представляет собой концентрацию ионизированного кальция от 0,1 до 30 мкМ.
67. Способ по любому из пп.62-65, где высокая концентрация кальция представляет собой концентрацию ионизированного кальция от 100 мкМ до 10 мМ.
68. Способ по любому из пп.62-66, где низкая концентрация кальция представляет собой внутриэндосомальную концентрацию ионизированного кальция.
69. Способ по любому из пп.62-65 или 67, где высокая концентрация кальция представляет собой концентрацию ионизированного кальция в плазме.
70. Способ по любому из пп.62-69, где FcRn-связывающий домен антигенсвязывающей молекулы представляет собой Fc-область.
71. Способ по любому из пп.62-70, где, дополнительно, антигенсвязывающая активность антигенсвязывающей молекулы является более низкой в условиях кислого значения pH, чем в условиях нейтрального значения pH.
72. Способ по п.71, где модификация аминокислот в антигенсвязывающей молекуле представляет собой модификацию путем замены по меньшей мере одной аминокислоты гистидином или встраивания по меньшей мере одного гистидина в антигенсвязывающую молекулу.
73. Способ по любому из пп.62-72, где антиген, с которым связывается антигенсвязывающая молекула, представляет собой антиген, выбранный из группы, состоящей из IL-6R, IL-6, IgA, глипикана 3 человека и IgE.
74. Способ по любому из пп.62-73, где антигенсвязывающая молекула представляет собой антитело.