НОВАЯ МОЛЕКУЛА БИСПЕЦИФИЧЕСКОГО АНТИТЕЛА И БИСПЕЦИФИЧЕСКОЕ АНТИТЕЛО, ОДНОВРЕМЕННО СВЯЗЫВАЮЩЕЕСЯ С PD-L1 И LAG-3

1. Молекула антитела или ее антиген-связывающий фрагмент, содержащие или состоящие из:
(i) полипептидной цепи формулы (I):
VH-CH1-Fc-X-VHH; и
(ii) полипептидной цепи формулы (II):
VL-CL;
где:
VH представляет собой вариабельную область тяжелой цепи;
CH представляет собой константную область тяжелой цепи;
Fc содержит CH2, CH3 и необязательно CH4;
CH1, CH2, CH3 и CH4 представляют собой домены 1, 2, 3 и 4, соответственно, константной области тяжелой цепи;
X может отсутствовать или, если присутствует, представляет собой линкер;
VHH представляет собой однодоменный антиген-связывающий участок;
VL представляет собой вариабельную область легкой цепи;
CL представляет собой константную область легкой цепи;
необязательно между CH1 и Fc присутствует шарнирный участок.
2. Молекула антитела или ее антиген-связывающий фрагмент по п. 1, содержащие или состоящие из 1 или 2 полипептидных цепей формулы (I) и 1 или 2 полипептидных цепей формулы (II).
4
3. Молекула антитела или ее антиген-связывающий фрагмент по п. 1 или 2, в которых линкер является гибким линкером и, предпочтительно линкер содержит аминокислотную последовательность (GlySer)n, где n является положительным целым числом, равным или большим 1, например, n является положительным целым числом от 1 до 7, таким как 1, 2, 3, 4, 5 или 6.
4. Молекула антитела или ее антиген-связывающий фрагмент по любому из пп. 1-3, где антитело или его фрагмент являются человеческим антителом, гуманизированным антителом или химерным антителом.
5. Молекула антитела или ее антиген-связывающий фрагмент по любому из пп. 1-4, в которых однодоменный антиген-связывающий участок (VHH) является вариабельным доменом тяжелой цепи антитела, в котором естественным образом отсутствуют легкие цепи, например вариабельным доменом тяжелой цепи тяжелоцепочечного антитела, существующего в природе у видов семейства Camelidae, или VH-подобным одиночным доменом в иммуноглобулине рыб, обозначаемый как новый антигенный рецептор (NAR) (например, IgNAR, существующий в природе в сыворотке акулы), или полученный из них рекомбинантный однодоменный антиген-связывающий участок (например, камелизированный человеческий домен VH или вариабельный домен тяжелой цепи гуманизированного антитела семейства Camelidae); предпочтительно однодоменный антиген-связывающий участок выбран из вариабельного домена тяжелой цепи тяжелоцепочечного антитела, существующего в природе у видов семейства Camelidae, камелизированного человеческого домена VH и вариабельного домена тяжелой цепи гуманизированного антитела семейства Camelidae.
6. Молекула антитела или ее антиген-связывающий фрагмент по любому из пп. 1-5, в которых «CH1-Fc» формулы (I) находится в форме IgG, например IgG1, IgG2 или IgG4, и/или CL формулы (II) происходит из (или λ.
7. Молекула антитела или ее антиген-связывающий фрагмент по любому из пп. 1-6, в которых антиген-связывающий участок, образованный VH и VL, специфичен для первого антигена, и антиген-связывающий участок, образованный VHH, специфичен для второго антигена; предпочтительно первый антиген идентичен второму антигену или отличается от него.
8. Молекула антитела или ее антиген-связывающий фрагмент по п. 7, в которых первый антиген и второй антиген выбраны из цитокина, фактора роста, гормона, сигнального белка, медиатора воспаления, лиганда, поверхностного клеточного рецептора или его фрагмента, опухоль-ассоциированного антигена, молекулы иммунной контрольной точки, ангиогенного фактора, представителя суперсемейства рецепторов фактора некроза опухоли, ко-стимуляторной молекулы иммунной системы, и их лигандов и/или рецепторов, таких как OX40, CD47, PD1, PD-L1, PD-L2, LAG-3, 4-1BB (CD137), VEGF и GITR.
9. Молекула антитела или ее антиген-связывающий фрагмент по п. 7, в которых первым антигеном является LAG-3, например человеческий LAG-3; и/или в которых вторым антигеном является PD-L1, например человеческий PD-L1.
10. Молекула антитела или ее антиген-связывающий фрагмент по любому из пп. 1-9, в которых VHH в формуле (I):
(i) содержит три, определяющих комплементарность участка (VHH CDR), в SEQ ID NO: 6; или
(ii) содержит определяющие комплементарность участки (CDR) VHH CDR1, VHH CDR2 и VHH CDR3, причем VHH CDR1 содержит или состоит из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 10, VHH CDR2 содержит или состоит из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 11, и VHH CDR3 содержит или состоит из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 12; или
(iii) содержит или состоит из последовательности, представленной в SEQ ID NO: 6; или
(iv) содержит или состоит из аминокислотной последовательности, имеющей по меньшей мере 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичности с аминокислотной последовательностью, представленной в SEQ ID NO: 6.
11. Молекула антитела или ее антиген-связывающий фрагмент по любому из пп. 1-10, в которых
VH в формуле (I):
(i) содержит три определяющих комплементарность участка HCDR из вариабельной области тяжелой цепи VH, представленной в SEQ ID NO: 2; или
(ii) содержит определяющие комплементарность участки (CDR) HCDR1, HCDR2 и HCDR3, причем HCDR1 содержит или состоит из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 13, HCDR2 содержит или состоит из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 14, и HCDR3 содержит или состоит из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 15; или
(iii) содержит или состоит из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 2; или
(iv) содержит или состоит из аминокислотной последовательности, имеющей по меньшей мере 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичности с аминокислотной последовательностью, представленной в SEQ ID NO: 2;
и/или
VL:
(i) содержит три определяющих комплементарность участка LCDR из вариабельного участка тяжелой цепи VL, представленного в SEQ ID NO: 8; или
(ii) содержит определяющие комплементарность участки (CDR) LCDR1, LCDR2 и LCDR3, причем LCDR1 содержит или состоит из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 16, LCDR2 содержит или состоит из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 17, и LCDR3 содержит или состоит из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 18; или
(iii) содержит или состоит из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 8; или
(iv) содержит или состоит из аминокислотной последовательности, имеющей по меньшей мере 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичности с аминокислотной последовательностью, представленной в SEQ ID NO: 8.
12. Молекула антитела или ее антиген-связывающий фрагмент по любому из пп. 1-11, в которых
(a) VH-CH1-Fc в формуле (I):
(i) содержит или состоит из аминокислотной последовательности, имеющей по меньшей мере 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичности с аминокислотной последовательностью, представленной в SEQ ID NO: 19; или
(ii) содержит или состоит из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 19;
и/или
(b) VL-CL формулы (II):
(i) содержит или состоит из аминокислотной последовательности, имеющей по меньшей мере 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичности с аминокислотной последовательностью, представленной в SEQ ID NO: 7; или
(ii) содержит или состоит из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 7.
13. Молекула антитела или ее антиген-связывающий фрагмент по любому из пп. 1-12, в которых полипептидная цепь формулы (I) содержит или состоит из последовательности, представленной в SEQ ID NO: 1, или аминокислотной последовательности, имеющей с ней по меньшей мере 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичности; и/или в которых полипептидная цепь формулы (II) содержит или состоит из последовательности, представленной в SEQ ID NO: 7, или аминокислотной последовательности, имеющей с ней по меньшей мере 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичности.
14. Выделенная нуклеиновая кислота, кодирующая одну или более полипептидных цепей молекулы антитела или ее антиген-связывающего фрагмента по любому из пп. 1-13.
15. Вектор, содержащий нуклеиновую кислоту по п. 14, причем вектор предпочтительно является экспрессионным вектором, например вектором pTT5.
16. Клетка-хозяин, содержащая нуклеиновую кислоту по п. 14 или вектор по п. 15, причем клетка-хозяин предпочтительно является прокариотической или эукариотической; более предпочтительно клетка-хозяин выбрана из клетки E.coli, клетки дрожжей, клетки млекопитающего и других клеток, подходящих для получения антитела или его антиген-связывающего фрагмента; наиболее предпочтительно клетка-хозяин является клеткой 293 или клеткой CHO.
17. Способ получения молекулы антитела или ее антиген-связывающего фрагмента по любому из пп. 1-13, включающий культивирование клетки-хозяина по п. 16 в условиях, подходящих для экспрессии нуклеиновой кислоты по п. 14, и необязательно выделение антитела или его антиген-связывающего фрагмента, причем необязательно указанный способ дополнительно включает выделение антитела или его антиген-связывающего фрагмента из клетки-хозяина.
18. Иммуноконъюгат, содержащий молекулу антитела или ее антиген-связывающий фрагмент по любому из пп. 1-13 и дополнительное вещество, например терапевтический агент или метку, например цитотоксический агент.
19. Фармацевтическая композиция, содержащая молекулу антитела или ее антиген-связывающий фрагмент по любому из пп. 1-13 или иммуноконъюгат по п. 18 и необязательно фармацевтическое вспомогательное вещество.
20. Фармацевтическая композиция, содержащая молекулу антитела или ее антиген-связывающий фрагмент по любому из пп. 1-13 или иммуноконъюгат по п. 18 и дополнительный терапевтический агент и необязательно фармацевтическое вспомогательное вещество, причем предпочтительно дополнительный терапевтический агент выбран из химиотерапевтического агента, дополнительного антитела, цитотоксического агента, вакцины, антиинфекционного активного агента, низкомолекулярного лекарственного средства или иммуномодулирующего агента.
21. Комбинированный продукт, содержащий молекулу антитела или ее антиген-связывающий фрагмент по любому из пп. 1-13 или иммуноконъюгат по п. 18 и один или более дополнительных терапевтических агентов, таких как химиотерапевтический агент, цитотоксический агент, вакцина, дополнительное антитело, антиинфекционный активный агент, низкомолекулярное лекарственное средство или иммуномодулирующий агент.
22. Способ профилактики или лечения заболевания у субъекта, включающий введение субъекту эффективного количества молекулы антитела или ее антиген-связывающего фрагмента по любому из пп. 1-13, иммуноконъюгата по п. 18, фармацевтической композиции по п. 19 или 20 или комбинированного продукта по п. 21, причем заболевание представляет собой, например, аутоиммунное заболевание, воспалительное заболевание, инфекцию или опухоль; например опухоль является раком, например раком с повышенными уровнями экспрессии PD-1, PD-L1 или PD-L2 и/или LAG-3, например раком толстой кишки, раком прямой и толстой кишок или раком прямой кишки.
23. Способ по п. 22, дополнительно включающий совместное применение для субъекта одного или более дополнительных видов терапии, причем терапия включает, например, терапевтическое воздействие и/или дополнительный терапевтический агент; предпочтительно терапевтическое воздействие включает хирургическое лечение и/или лучевую терапию, или терапевтический агент выбран из химиотерапевтического агента, цитотоксического агента, вакцины, дополнительного антитела, антиинфекционного активного агента, низкомолекулярного лекарственного средства или иммуномодулирующего агента.
24. Способ обнаружения антигена в образце, включающий
(a) приведение образца в контакт с антителом или его антиген-связывающим фрагментом по любому из пп. 1-13; и
(b) обнаружение комплекса, образованного антителом или его антиген-связывающим фрагментом и антигеном, причем необязательно антитело является выявляемо меченым.
25. Способ по п. 24, в котором антиген выбран из цитокина, фактора роста, гормона, сигнального белка, медиатора воспаления, лиганда, поверхностного клеточного рецептора или его фрагмента, опухоль-ассоциированного антигена, молекулы иммунной контрольной точки, ангиогенного фактора, представителя суперсемейства рецепторов фактора некроза опухоли, ко-стимуляторной молекулы иммунной системы, и их лигандов и/или рецепторов, таких как OX40, CD47, PD1, PD-L1, PD-L2, LAG-3, 4-1BB (CD137), VEGF и GITR; предпочтительно антигеном является PD-L1 и/или LAG-3, например человеческий PD-L1 и/или человеческий LAG-3.