Способы и средства для диагностики гриппа

1. Способ обнаружения вируса гриппа, включающий
а) контакт образца с иммунологическим буфером, предназначенным для иммуноанализа с целью обнаружения вируса гриппа типа «А» или типа «В», для получения образца для иммунологического исследования;
б) контакт первой порции образца для иммунологического исследования с тест-системой, включающей иммуноанализ для обнаружения вируса гриппа типа «А» или типа «В», посредством которого происходит определение наличия или отсутствия в образце вируса гриппа типа «А» или типа «В»;
в) контакт второй порции образца для иммунологического исследования с матрицей, включающей буфер для анализа активности нейраминидазы, посредством чего получают исследуемый образец нейраминидазы; и
г) контакт исследуемого образца нейраминидазы с тест-системой для определения активности нейраминидазы, посредством чего определяют наличие в образце нейраминидазы.
2. Способ по п. 1, причем буфер для иммунологического анализа несовместим с анализом активности нейраминидазы.
3. Способ по любому из пп. 1 и 2, причем буфер для иммунологического анализа угнетает активность нейраминидазы.
4. Способ по п. 3, причем стадии (в) и (г) проводятся в одном резервуаре.
5. Способ по п. 4, причем резервуар включает несколько отсеков.
6. Способ по любому из пп. 4 и 5, причем резервуар включает отсек с матрицей и отсек с реагентами для анализа активности нейраминидазы.
7. Способ по п. 6, причем матрица включает поперечно сшитый полисахарид.
8. Способ по п. 6, причем матрицу выбирают из следующей группы: сефадекс и сефароза.
9. Способ по п. 8, причем образец для иммунологического исследования и исследуемый образец нейраминидазы перемещаются внутри резервуара посредством одной или нескольких указанных сил: гравитация, капиллярный эффект и диффузия.
10. Способ по п. 9, причем резервуар включает картридж.
11. Способ по п. 10, причем резервуар включает многолуночный картридж, адаптированные для чтения фотоумножителем.
12. Способ по п. 11, причем фотоумножитель выбирают из следующей группы: фотоу множительная трубка и микрофотоумножительная трубка.
13. Способ по любому из пп. 11 и 12, причем фотоумножитель является портативным.
14. Способ по п. 13, фотоумножитель находится в портативном считывающем устройстве, подходящем для работы в кабинете лечащего врача.
15. Способ по п. 14, причем фотоумножительная трубка имеет круглую форму и диаметр от 6 до 9 мм, или микрофотоумножительная трубка имеет прямоугольную поверхность и размеры от 1 до 3 мм.
16. Способ по п. 15, причем анализ активности нейраминидазы включает определение чувствительности нейраминидазы к исследуемому соединению.
17. Способ по п. 16, причем анализ активности нейраминидазы включает:
а) получение соотношения величин ингибирования, причем соотношение включает уровень активности нейраминидазы в присутствии исследуемого соединения, отнесенный к уровню активности нейраминидазы в отсутствие исследуемого соединения; и
б) сравнение соотношения величин ингибирования с порогом ингибирования, посредством чего происходит определение чувствительности активности нейраминидазы к исследуемому соединению.
18. Способ по п. 17, причем порог ингибирования устанавливают посредством обнаружения вируса гриппа типа «А» или типа «В».
19. Способ по п. 18, причем первый порог ингибирования применяют в случае обнаружения вируса типа «А», а второй порог ингибирования применяют в случае обнаружения вируса типа «В».
20. Способ по п. 19, причем первый порог ниже, чем второй.
21. Способ по п. 17, причем порог ингибирования определятся исследуемым соединением.
22. Способ по п. 17, включающий дальнейший выбор исследуемого соединения для лечения гриппа.
23. Способ по п. 22, причем анализ активности нейраминидазы включает двойной иммуноферментный анализ, включающий сигнальный фермент.
24. Способ по п. 23, причем результатом проявления активности нейраминидазы является образование субстрата для сигнального фермента.
25. Способ по п. 23, причем анализ активности нейраминидазы включает конъюгат N-ацетилнейраминовой кислоты с люциферином или его производным.
26. Способ по п. 23, причем результатом проявления активности нейраминидазы является образование ингибитора сигнального фермента.
27. Способ по п. 23, причем анализ активности нейраминидазы включает конъюгат N-ацетилнейраминовой кислоты с трифторметилкетоном или его производным.
28. Способ по любому из пп. 23-27, причем сигнальный фермент включает люциферазу.
29. Способ по п. 28, причем буфер для иммунологического анализа подавляет активность люциферазы.
30. Способ по п. 29, причем уровень активности нейраминидазы измеряют с помощью фотоумножительной трубки.
31. Способ по п. 30, причем исследуемое соединение представляет собой противовирусный препарат.
32. Способ по п. 31, причем исследуемое соединение представляет собой противовирусный препарат, выбираемый из указанной группы: Осельтамивир (Oseltamivir), Занамивир (Zanamivir), Ланамивир (Lanamivir) и Перамивир (Peramivir).
33. Способ по п. 32, причем иммуноанализ включает «сэндвич»-метод.
34. Способ по п. 33, причем образец получают от субъекта.
35. Способ по п. 34, причем субъект предположительно болен гриппом.
36. Способ по п. 35, причем субъект является человеком.
37. Способ обнаружения вируса гриппа включает:
а) контакт образца с буфером для анализа активности нейраминидазы, адаптированным для анализа активности нейраминидазы, посредством чего получают исследуемый образец нейраминидазы;
б) контакт первой порции исследуемого образца нейраминидазы с тест-системой, включающей иммуноанализ для обнаружения вируса гриппа типа «А» или типа «В», причем исследуемый образец нейраминидазы контактирует с матрицей, включающей иммунологический буфер, посредством чего получают образец для иммунологического исследования и определяют наличие или отсутствие в образце вируса гриппа типа «А» или типа «В»; и
в) контакт второй порции исследуемого образца нейраминидазы с анализом активности нейраминидазы, посредством чего определяют наличие нейраминидазы в образце.
38. Способ по п. 37, причем буфер для определения активности нейраминидазы несовместим с иммуноанализом для обнаружения вируса гриппа типа «А» или типа «В».
39. Способ по любому из пп. 37 и 38, причем буфер для анализа активности нейраминидазы ингибирует специфическое связывание антитела и антигена, выбираемого из следующей группы: вируса гриппа типа «А» и вирус гриппа типа «В».
40. Способ по п. 39, причем матрица включает лиофилизованный или полностью высушенный буфер для иммунологического анализа.
41. Способ по п. 40, причем стадию в) проводят в резервуаре, включающем несколько отсеков.
42. Способ по п. 41, причем резервуар включает многолуночный картридж или тест-полоску, приспособленные для считывания посредством фотоумножительной трубки или микрофотоумножительной трубки.
43. Способ по п. 42, причем фотоумножительная трубка или микрофотоумножительная трубка являются портативными.
44. Способ по любому из пп. 42 и 43, причем фотоумножительная трубка находится в портативном считывающем устройстве, подходящем для работы в кабинете лечащего врача.
45. Способ по п. 44, причем фотоумножительная трубка имеет круглую поверхность и диаметр от 6 до 9 мм, или микрофотоумножительная трубка имеет прямоугольную поверхность и размеры от 1 до 3 мм.
46. Способ по п. 45, причем анализ активности нейраминидазы включает определение чувствительности нейраминидазы к тестируемому соединению.
47. Способ по п. 46, причем анализ активности нейраминидазы включает:
а) получение соотношения величин ингибирования, причем соотношение включает уровень активности нейраминидазы в присутствии исследуемого соединения, отнесенный к уровню активности нейраминидазы в отсутствие исследуемого соединения; и
б) сравнение соотношения величин ингибирования с порогом ингибирования, посредством чего происходит определение чувствительности активности нейраминидазы к исследуемому соединению.
48. Способ по п. 47, причем порог ингибирования определяют посредством обнаружения вируса гриппа типа «А» или типа «В».
49. Способ по п. 48, причем первый порог ингибирования применяют в случае обнаружения вируса типа «А», а второй порог ингибирования применяют в случае обнаружения вируса типа «В».
50. Способ по п. 49, причем первый порог ниже, чем второй.
51. Способ по любому из пп. 47-50, причем порог ингибирования определяется исследуемым соединением.
52. Способ по любому из пп. 47-50, включает выбор исследуемого соединения для лечения гриппа.
53. Способ по п. 52, причем анализ активности нейраминидазы включает двойной иммуноферментный анализ, включающий сигнальный фермент.
54. Способ по п. 53, причем результатом проявления активности нейраминидазы является образование ингибитора сигнального фермента.
55. Способ по п. 54, причем анализ активности нейраминидазы включает конъюгат N-ацетилнейраминовой кислоты с люциферином или его производным.
56. Способ по п. 47, причем результатом проявления активности нейраминидазы является образование ингибитора для сигнального фермента.
57. Способ по п. 47, причем анализ активности нейраминидазы включает конъюгат N-ацетилнейраминовой кислоты с трифторметилкетоном или его производным.
58. Способ по п. 57, причем сигнальный фермент включает люциферазу.
59. Способ по п. 58, причем уровень активности нейраминидазы измеряют с помощью фотоумножительной трубки.
60. Способ по п. 59, причем исследуемое соединение является противовирусным препаратом.
61. Способ по п. 60, причем исследуемое соединение является противовирусным препаратом, выбираемым из указанной группы: Осельтамивир (Oseltamivir), Занамивир (Zanamivir), Ланамивир (Lanamivir) и Перамивир (Peramivir).
62. Способ по п. 61, причем иммуноанализ включает «сэндвич»-метод.
63. Способ по п. 62, причем образец получают от субъекта.
64. Способ по п. 63, причем субъект предположительно болен гриппом.
65. Способ по п. 64, причем субъект является человеком.
66. Способ выбора лечения вируса гриппа включает
а) контакт образца с иммунологическим буфером, предназначенным для иммуноанализа с целью обнаружения вируса гриппа типа «А» или типа «В», для получения образца для иммунологического исследования;
б) контакт первой порции образца для иммунологического исследования с тест-системой, включающей иммуноанализ для обнаружения вируса гриппа типа «А» или типа «В», посредством которого происходит определение наличия или отсутствия в образце вируса гриппа типа «А» или типа «В»;
в) контакт второй порции образца для иммунологического исследования с матрицей, включающей буфер для анализа активности нейраминидазы, посредством чего получают исследуемый образец нейраминидазы;
г) контакт исследуемого образца нейраминидазы с тест-системой для анализа активности нейраминидазы, посредством чего определяют чувствительность нейраминидазы в исследуемом образце нейраминидазы к исследуемому соединению, определение включает:
i. получение соотношения величин ингибирования, причем соотношение включает уровень активности нейраминидазы в присутствии одного или нескольких исследуемых соединений, отнесенный к уровню активности нейраминидазы в отсутствии одного или нескольких исследуемых соединений, и
ii. сравнение соотношения величин ингибирования с порогом ингибирования, посредством чего определяют чувствительность активности нейраминидазы к исследуемому соединению; и
д) выбор исследуемого соединения из одного или нескольких исследуемых соединений, подавляющих активность нейраминидазы.
67. Способ по п. 66, причем порог ингибирования определяют посредством обнаружения вируса гриппа типа «А» или типа «В».
68. Способ по п. 66, причем первый порог ингибирования применяют в случае обнаружения вируса типа «А», а второй порог ингибирования применяют в случае обнаружения вируса типа «В».
69. Способ по п. 68, причем первый порог ниже, чем второй.
70. Способ по любому из пп. 66-69, причем буфер для иммунологического анализа несовместим с анализом для определения активности нейраминидазы.
71. Способ по п. 70, причем буфер для иммунологического анализа подавляет активность нейраминидазы.
72. Способ по п. 71, причем стадии (в) и (г) проводятся в одном резервуаре.
73. Способ по п. 72, причем резервуар включает несколько отсеков.
74. Способ по любому из пп. 72 и 73, причем резервуар включает отсек, включающий матрицу, и отсек, включающий реагенты для анализа активности нейраминидазы.
75. Способ по п. 74, причем матрица включает поперечно сшитый полисахарид.
76. Способ по п. 75, причем матрицу выбирают из следующей группы: сефадекс и сефароза.
77. Способ по п. 76, причем образец для иммунологического исследования и исследуемый образец нейраминидазы перемещаются внутри резервуара посредством одной или нескольких указанных сил: гравитация, капиллярный эффект и диффузия.
78. Способ по п. 77, причем резервуар включает картридж.
79. Способ по п. 78, причем резервуар включает многолуночный картридж, адаптированный для считывания посредством фотоумножительной трубки.
80. Способ по п. 79, причем фотоумножительная трубка является портативной.
81. Способ по любому из пп. 79 и 80, причем анализ активности нейраминидазы включает двойной иммуноферментный анализ, включающий сигнальный фермент.
82. Способ по п. 81, причем результатом проявления активности нейраминидазы является образование субстрата для сигнального фермента.
83. Способ по п. 82, причем анализ активности нейраминидазы включает конъюгат N-ацетилнейраминовой кислоты с люциферином или его производным.
84. Способ по п. 81, причем результатом проявления активности нейраминидазы является образование ингибитора для сигнального фермента.
85. Способ по п. 84, причем анализ активности нейраминидазы включает конъюгат N-ацетилнейраминовой кислоты с трифторметилкетоном или его производным.
86. Способ по п. 85, причем сигнальный фермент включает люциферазу.
87. Способ по п. 86, причем буфер для иммунологического анализа подавляет активность люциферазы.
88. Способ по п. 87, причем уровень активности нейраминидазы измеряют с помощью фотоумножительной трубки.
89. Способ по п. 88, причем исследуемое соединение представляет собой противовирусный препарат.
90. Способ по п. 89, причем исследуемое соединение представляет собой противовирусный препарат, выбранный из указанной группы: Осельтамивир (Oseltamivir), Занамивир (Zanamivir), Ланамивир (Lanamivir) и Перамивир (Peramivir).
91. Способ по п. 89, причем иммуноанализ включает «сэндвич»-метод.
92. Способ по п. 91, причем образец получают от субъекта.
93. Способ по п. 92, причем субъект предположительно болен гриппом.
94. Способ по п. 92, причем субъект является человеком.
95. Способ по п. 92, причем образец получали от субъекта и рекомендовали субъекту принимать выбранное исследуемое соединение для лечения гриппа.
96. Способ по п. 92, причем образец получали от субъекта и обеспечивали субъекта выбранным исследуемым соединением для лечения гриппа.
97. Способ выбора лечения вируса гриппа включает
а) контакт образца с буфером для анализа активности нейраминидазы, адаптированным для анализа активности нейраминидазы, посредством чего получают исследуемый образец нейраминидазы;
б) контакт первой порции исследуемого образца нейраминидазы с тест-системой, включающей иммуноанализ для обнаружения вируса гриппа типа «А» или типа «В», причем исследуемый образец нейраминидазы контактирует с матрицей, включающей иммунологический буфер, посредством чего получают образец для иммунологического исследования и определяют наличие или отсутствие в образце вируса гриппа типа «А» или типа «В»; и
в) контакт второй порции исследуемого образца нейраминидазы с тест-системой для определения активности нейраминидазы, посредством чего определяют чувствительность нейраминидазы в исследуемом образце нейраминидазы к исследуемому соединению, определение включает
i. получение соотношения величин ингибирования, причем соотношение включает уровень активности нейраминидазы в присутствии одного или нескольких исследуемых соединений, отнесенный к уровню активности нейраминидазы в отсутствии одного или нескольких исследуемых соединений, и
ii. сравнение соотношения величин ингибирования с порогом ингибирования, посредством чего определяют чувствительность активности нейраминидазы к исследуемому соединению; и
г) выбор исследуемого соединения из одного или нескольких исследуемых соединений, подавляющих активность нейраминидазы.
98. Способ по п. 97, причем порог ингибирования определяют посредством обнаружения вируса гриппа типа «А» или типа «В».
99. Способ по п. 98, причем первый порог ингибирования применяют в случае обнаружения вируса типа «А», а второй порог ингибирования применяют в случае обнаружения вируса типа «В».
100. Способ по п. 99, причем первый порог ниже, чем второй.
101. Способ по любому из пп. 97-100, причем матрица включает лиофилизированный или иными словами полностью высушенный иммунологический буфер.
102. Способ по п. 101, причем стадию (в) проводят в том же самом резервуаре.
103. Способ по п. 102, причем стадию (в) проводят в резервуаре, включающем несколько отсеков.
104. Способ по любому из пп. 102 и 103, причем резервуар включает многолуночную тест-полоску или картридж, приспособленные для считывания при помощи фотоумножительной трубки или микроотоумножительной трубки.
105. Способ по п. 104, причем фотоумножительная трубка и микрофотоумножительная трубка являются портативными.
106. Способ по п. 105, причем фотоумножительная трубка находится в портативном считывающем устройстве, подходящем для работы в кабинете лечащего врача.
107. Способ по п. 106, причем фотоумножительная трубка имеет круглую поверхность и диаметр от 6 до 9 мм, или микрофотоумножительная трубка имеет прямоугольную поверхность и размеры от 1 до 3 мм.
108. Способ по п. 107, дальнейшие действия включают выбор исследуемого соединения для лечения гриппа.
109. Способ по п. 108, причем анализ активности нейраминидазы включает двойной иммуноферментный анализ, включающий сигнальный фермент.
110. Способ по п. 109, причем результатом проявления активности нейраминидазы является образование субстрата для сигнального фермента.
111. Способ по п. 110, причем анализ активности нейраминидазы включает конъюгат N-ацетилнейраминовой кислоты с люциферином или его производным.
112. Способ по п. 109, причем результатом проявления активности нейраминидазы является образование ингибитора для сигнального фермента.
113. Способ по п. 112, причем анализ активности нейраминидазы включает конъюгат N-ацетилнейраминовой кислоты с трифторметилкетоном или его производным
114. Способ по любому из п.п. 109-113, причем сигнальный фермент включает люциферазу.
115. Способ по п. 114, причем уровень активности нейраминидазы измеряют с помощью фотоумножительной трубки.
116. Способ по п. 115, причем исследуемое соединение представляет собой противовирусный препарат.
117. Способ по п. 116, причем исследуемое соединение представляет собой противовирусный препарат, выбранный из указанной группы: Осельтамивир (Oseltamivir), Занамивир (Zanamivir), Ланамивир (Lanamivir) и Перамивир (Peramivir).
118. Способ по п. 117, причем иммуноанализ включает «сэндвич»-метод.
119. Способ по п. 118, причем образец получают от субъекта.
120. Способ по п. 119, причем субъект предположительно болен гриппом.
121. Способ по п. 119, причем субъект является человеком.
122. Способ по п. 119, причем образец получали от субъекта и рекомендовали субъекту принимать выбранное исследуемое соединение для лечения гриппа.
123. Способ по п. 119, причем образец получали от субъекта и обеспечивали субъекта выбранным исследуемым соединением для лечения гриппа.
124. Диагностическая тест-система для обнаружения вируса гриппа включает
а) картридж для определения активности нейраминидазы в образце, причем картридж приспособлен для обработки образца, включающего несовместимый буфер для определения, и образца, включающего совместимый буфер для определения;
б) тест-систему для обнаружения в образце вируса гриппа типа «А» или типа «В», причем тест-система приспособлена для обработки образца, включающего несовместимый буфер для обнаружения, и образца, включающего совместимый буфер для обнаружения;
в) первый детектор для измерения сигнала от тест-системы; и
г) второй детектор для измерения сигнала от картриджа.
125. Система по п. 124, причем картридж включает отсек для матрицы, включающий совместимый буфер для определения, и отсек для реагентов, включающий реагенты для определения активности нейраминидазы.
126. Система по п. 125, причем матрица включает поперечно сшитый полисахарид.
127. Система по п. 126, причем матрицу выбирают из следующей группы: сефадекс и сефароза.
128. Система по любому из пп. 125-127, причем отсек для матрицы и отсек для реагентов гидравлически сообщаются таким образом, что образец, помещенный в отсек для матрицы, перемещается из отсека для матрицы в отсек для реагентов.
129. Система по п. 128, причем образец перемещается внутри картриджа посредством одной или нескольких указанных сил: гравитация, капиллярный эффект и диффузия.
130. Система по п. 129, причем картридж включает многолуночный картридж, приспособленный для считывания посредством фотоумножительной трубкой или микро-фотоумножительной трубкой.
131. Система по п. 130, причем тест-система включает иммуноанализ.
132. Система по п. 131, причем иммуноанализ проводится по «сэндвич»-методу.
133. Система по п. 132, причем тест-система включает матрицу, включающую совместимый буфер для определения.
134. Система по п. 133, причем матрица включает нитроцеллюлозу.
135. Система по п. 134, причем совместимый буфер для определения лиофилизирован или полностью высушен.
136. Система по п. 135, причем первый детектор включает люминометр.
137. Система по п. 136, причем второй детектор включает фотоумножительную трубку или микрофотоумножительную трубку.
138. Система по п. 137, причем устройство включает первый и второй детекторы.
139. Система по п. 138, причем первый и второй детекторы есть одно и то же.
140. Система по п. 139, причем устройство является портативным.
141. Система по п. 140, причем устройство является карманным.
142. Набор для определения вируса гриппа включает
а) картридж для определения активности нейраминидазы в образце, причем картридж приспособлен для обработки образца, включающего несовместимый буфер для определения, и образца, включающего совместимый буфер для определения; и
б) тест-систему для обнаружения в образце вируса гриппа типа «А» или типа «В», причем тест-система приспособлена для обработки образца, включающего несовместимый буфер для обнаружения, и образца, включающего совместимый буфер для обнаружения.
143. Набор по п. 142, также включает:
а) первый детектор, предназначенный для измерения сигнала от картриджа; и
б) второй детектор, предназначенный измерения сигнала от картриджа.
144. Набор по любому из пп. 142 и 143, включает реагенты для анализа активности нейраминидазы.
145. Набор по п. 144, причем реагенты для анализа активности нейраминидазы выбирают из указанной группы: люцифераза, конъюгат N-ацетилнейраминовой кислоты с люциферином или его производным, конъюгат N-ацетилнейраминовой кислоты с трифторметилкетоном или его производным и противовирусный препарат.
146. Набор по п. 145, причем противовирусный препарат выбирают из указанной группы: Осельтамивир (Oseltamivir), Занамивир (Zanamivir), Ланамивир (Lanamivir) и Перамивир (Peramivir).
147. Набор по п. 146, включает реагенты для иммуноанализа.
148. Набор по п. 147, причем реагенты для иммуноанализа выбирают из указанной группы: антитело, специфичное к антигену вируса гриппа типа «А», и антитело, специфичное к антигену вируса гриппа типа «В».
149. Маскированный ингибитор, используемый для двойного иммуноферментного анализа чувствительности нейраминидазы вируса гриппа, имеет структуру согласно формуле (I)
,
причем
1
2
3
1-5
R, R и R независимо представляют собой водород или C алкил; n равно 0, 1, 2 или 3;
4
2
m
3
R представляет собой -(CH)C(=0)CF; m равно 0 или 1;
x
5
X представляет собой -S(0)- или -CH(R)-;
5
z
3
R представляет собой -S(0)CH; и z равно 0, 1 или 2.
150. Соединение формулы (I) выбирают из указанной группы
,
,
,
,
,
,
,
,
.