ОСОБЕННОСТИ КАТАЛИТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ РЕКОМБИНАНТНОЙ ЭНДО-1,3-β-D-ГЛЮКАНАЗЫ ИЗ МОРСКОЙ БАКТЕРИИ FORMOSA ALGAE

Биологически активные вещества из морских гидробионтов в биотехнологии и медицине

ЛИТЕРАТУРА

1. Бакунина И.Ю. и соавт. Разнообразие гликози-дазных активностей бактерий филума Bacteroidetes, изолированных из морских водорослей // Микробиология. 2012. Т. 81, № 6. С. 745-753.

2. Бакунина И.Ю. и соавт. а-Галактозидаза морской бактерии Pseudoalteromonas sp. КММ 701 // Биохимия. 1998. Т. 63, № 10. С.1420-1427.

3. Иванова Е.П. и соавт. Распространение морских микроорганизмов, продуцирующих р-К ацетилглюкозаминидазы, а-галактозидазы, а-К ацетилгалактозаминидазы // Биология моря. 1998. Т. 24, № 6. С. 351-358.

4. Balabanova L.A. et al. Molecular characterization and therapeutic potential of a marine bacterium Pseudoalteromonas sp. KMM 701 a-galactosidase. Mar. Biotechnol., 2010; 12(1): 111-120.

5. Breunig F., Knoll A., Wanner C. Enzyme replacement therapy in Fabry disease: clinical implications. Curr. Opin. Nephrol. Hypertens., 2003; 12(5): 491-495.

6. Ezzelarab M., Cooper D.K.C. Reducing Gal expression on the pig organ - a retrospective review. Xenotransplantation, 2005; 12(3): 278-285.

7. Olsson M.L. et al. Universal red blood cells-enzymatic conversion of blood group A and B antigens. Transf. Clin. Biol., 2004; 11(1): 33-39.

Bakunina I.Yu., Lihatskaya G.N., Balabanova L.A., Golotin V.A., Slepchenko L.V., Rasskasov V.A. EVOLLUTION, STRUCTURE AND ENZYME MECHANISM OF GLYCOSIDASES OF MARINE BACTERIA

G.B. Elyakov Pacific Institute of Bioorganic Chemistry, Far Eastern Branch, Russian Academy of Sciences, Vladivostok

Analysis of the structure of a-galactosidase of marine y-proteobacteria Pseudoalteromonas spp. KMM 701 was performed by bioinformatics methods. Evolution, particular qualities of the structure.

Key words: a-galactosidase, Pseudoalteromonas spp., marine bacteria, 3D- structure.

Citation: Bakunina I.Yu., Lihatskaya G.N., Balabanova L.A., Golotin VA., Slepchenko L.V, Rasskasov V.A. Evollution, structure and enzyme mechanism of glycosidases of marine bacteria. Health. Medical ecology. Science. 2014; 3(57): 15-16. URL: https://yadi.sk/d/1d01WE3pUSALW

Сведения об авторах

Бакунина Ирина Юрьевна, д.х.н., ведущий научный сотрудник лаборатории химии ферментов ФГБУН «Тихоокеанский институт биоорганической химии им. Елякова» ДВО РАН, г. Владивосток, тел.: 8(423) 2310705; e-mail: bakun@list.ru;

Лихацкая Галина Николаевна, к.ф.-м.н., старший научный сотрудник лаборатории биоиспытаний ФГБУН «Тихоокеанский институт биоорганической химии им. Елякова» ДВО РАН, г. Владивосток, тел.: 8(423) 2319932; e-mail: galinlink@pibok.dvo.ru;

Балабанова Лариса Анатольевна, к.б.н., старший научный сотрудник лаборатории морской биохимии ФГБУН «Тихоокеанский институт биоорганической химии им. Елякова» ДВО РАН, г. Владивосток, тел.: 8(423) 2310703; e-mail: balaban@piboc.dvo.ru;

Голитин Василий Анатольевич, аспирант лаборатории морской биохимии ФГБУН «Тихоокеанский институт биоорганической химии им. Елякова» ДВО РАН, г. Владивосток, тел.: 8(423) 2310703; e-mail: golotin@bk.ru;

Слепченко Любовь Васильевна, аспирант лаборатории морской биохимии ФГБУН «Тихоокеанский институт биоорганической химии им. Елякова» ДВО РАН, г. Владивосток, тел.: 8(423) 2310703; e-mail: lubov99d@mail.ru;

Рассказов Валерий Александрович, к.б.н., заведующий лабораторией морской биохимии ФГБУН «Тихоокеанский институт биоорганической химии им. Елякова» ДВО РАН, г. Владивосток, тел.: 8(423) 2310703; e-mail: raskaz@pibok.dvo.ru.

© Коллектив авторов, 2014 г. УДК 577.152.321

А.А. Белик, А.М. Захаренко, М.И. Кусайкин, Л.А. Балабанова, В.А. Рассказов ОСОБЕННОСТИ КАТАЛИТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ РЕКОМБИНАНТНОЙ ЭНДО-1,3-В^-ГЛЮКАНАЗЫ1 ИЗ МОРСКОЙ БАКТЕРИИ FORMOSA ALGAE

ФГБУН «Тихоокеанский институт биоорганической химии им. Г.Б. Елякова» Дальневосточного отделения Российской академии наук, г. Владивосток

Была экспрессирована и выделена рекомбинантная эндо-1,3-бета-0-глюканаза из морской бактерии Formosa algae KMM 3553. Данный фермент обладает трансгликозилирующей активностью и катализирует образование олигосахаридов со степенью полимеризации 2-6.

Биологически активные вещества из морских гидробионтов в биотехнологии и медицине •

Ключевые слова: эндо-1,3-Р-0-глюканаза, трансгликозилирование, рекомбинантные ферменты, ламина-ран, ламинариолигосахариды, Formosa algae.

Цитировать: Белик А.А., Захаренко А.М., Кусайкин М.И., Балабанова Л.А., Рассказов В.А. Особенности каталитической активности рекомбинантной эндо-1,3-р^-глюканазы из морской бактерии Formosa algae // Здоровье. Медицинская экология. Наука. 2014. №3(57). С. 16-17. URL: https://yadi.sk/d/1xZfOVTdUSAQ8

Морская грамотрицательная бактерия Formosa algae KMM 3553 обитает на талломах бурой водоросли Fucus evanescens. Эндо-1,3^^-глюканаза этой бактерии является неизученным ранее объектом.

целью нашей работы явилось получение реком-бинантного фермента, способного катализировать образование ламинариолигосахаридов.

Материалы и методы. Генетическая конструкция была получена с использованием кДНК эндо-^З-ß-D-глюканазы Formosa algae и плазмиды pET40b(+). Экспрессия белка проводилась в системе E. coli при добавлении в инкубационную среду 0,2 мМ ИПТГ и 25 мкг/мл канамицина при 16°С в течение 16 ч. Фермент был выделен и очищен методами ионообменной, аффинной хроматографии и гель-фильтрации.

результаты. Выделенная глюканаза проявляла максимальную активность при pH 5,5, температуре 45°С и концентрации NaCl до 0,5 моль/л. Время

полуинактивации фермента при 45°С составило 20 минут.

Исследуемый фермент эффективно катализировал образование ламинариолигосахаридов со степенью полимеризации 2-6. Ранее было показано [1], что такие олигосахариды способны проявлять иммуностимулирующий, антиопухолевый и антибактериальный эффект.

Выводы. Рекомбинантная эндо-1,3-бета-0-глюканаза из морской бактерии Formosa algae KMM 3553обладает трансгликозилирующей активностью и катализирует образование олигосахаридов со степенью полимеризации 2-6.

ЛИТЕРАТУРА

1. Zviagintseva T.N., Eliakova L.A., Isakov V.V. Enzymatic conversion of laminaranes into 1,3;1,6-beta-D-glucans, possessing immunostimulating activity. Bioorg Khim., 1995; 121(3): 218-225.

Belik A.A., zakharenko A.M., Kusaykin M.I., Balabnova L.A., Rasskazov V.A. CHARACTERISTICS OF CATALYTIC ACTIVITY OF ENDO-1,3-B-D-GLUCANASE FROM MARINE BACTERIUM FORMOSA ALGAE

G.B. Elyakov Pacific Institute of Bioorganic Chemistry, Far Eastern Branch, Russian Academy of Sciences, Vladivostok

The recombinant endo-1,3-P-D-glucanase from marine bacterium Formosa algae KMM 3553 was expressed in E. coli system. It shows transglycosylating activity and catalyses synthesis of oligosaccharides with polymerization degree 2-6.

Keywords: endo-1,3-p-D-glucanase, transglycosylation, recombinant enzymes, laminarin, laminarin oligosaccharides.

Citation: Belik A.A., Zakharenko A.M., Kusaykin M.I., Balabnova L.A., Rasskazov V.A. Characteristics of catalytic activity of endo-1,3-p-d-glucanase from marine bacterium Formosa algae. Health. Medical ecology. Science. 2014; 3(57): 16-17. URL: https://yadi.sk/d/1xZfOVTdUSAQ8

сведения об авторах

Белик Алексей Анатольевич, аспирант ФГБУН «Тихоокеанский институт биоорганической химии им. Г.Б. Елякова» ДВО РАН, г. Владивосток, тел.: 89146640272, e-mail: belik_a_a@mail.ru;

Захаренко Александр Михайлович, к.х.н., научный сотрудник ФГБУН «Тихоокеанский институт биоорганической химии им. Г.Б. Елякова» ДВО РАН, г. Владивосток, тел.: 8(423) 2310705, e-mail: cys.piboc@ yandex.ru;

Кусайкин Михаил Игоревич, к.б.н., доцент, заместиитель директора ФГБУН «Тихоокеанский институт биоорганической химии им. Г.Б. Елякова» ДВО РАН, г. Владивосток, тел.: 8(423) 2310705, e-mail: mik@ piboc.dvo.ru;

Балабанова Лариса Анатольевна, к.б.н., старший научный сотрудник ФГБУН «Тихоокеанский институт биоорганической химии им. Г.Б. Елякова» ДВО РАН, г. Владивосток, тел.: 8(423) 2310705, e-mail: balaban@ piboc.dvo.ru;

Рассказов Валерий Александрович, к.б.н., заведующий лабораторией морской биохимии ФГБУН «Тихоокеанский институт биоорганической химии им. Г.Б. Елякова» ДВО РАН, г. Владивосток, тел.: 8(423) 2310705, e-mail: rasskaz@piboc.dvo.ru.