СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СРЕДСТВА, ОБЛАДАЮЩЕГО ГАСТРОЗАЩИТНОЙ АКТИВНОСТЬЮ
METHOD OF OBTAINING MEDICATION, POSSESSING GASTROPROTECTIVE ACTIVITY

Изобретение относится к области фармации и касается способа получения средства, обладающего гастрозащитным действием.
Одной из важнейших проблем медицинской науки и практики здравоохранения является профилактика и лечение заболеваний органов пищеварительной системы, имеющих большой удельный вес среди заболеваний внутренних органов. Язвенная болезнь желудка и двенадцатиперстной кишки встречается у 3-13% лиц с заболеваниями органов пищеварения и поражает людей наиболее активного трудоспособного возраста, обусловливая временную, а иногда и стойкую утрату трудоспособности. Язвенная болезнь характеризуется образованием язвы желудка или двенадцатиперстной кишки вследствие расстройства общих и местных механизмов нервной и гуморальной регуляции основных функций гастродуоденальной системы [4, 8, 12, 14, 19, 20].
В настоящее время определены основные и предрасполагающие факторы заболевания. К основным факторам относятся: 1) нарушения гуморальных и нейрогуморальных механизмов, регулирующих пищеварение и регенерацию тканей; 2) расстройства местных механизмов пищеварения; 3) изменения структуры слизистой оболочки желудка и двенадцатиперстной кишки.
Несмотря на значительные успехи в изучении патогенеза язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки, разработки новых лекарственных средств для ее профилактики и лечения, уровень заболеваемости среди населения остается достаточно высоким. Это обуславливает большое социальное и медицинское значение создания и применения новых лекарственных средств для профилактики и лечения заболеваний органов пищеварительной системы, среди которых особого внимания заслуживают лекарственные средства природного происхождения, обладающие антиульцерогенным и гастрозащитным действием [2].
Дисбиотические состояния, связанные с микроэкологическими изменениями кишечника, в настоящее время стали интересовать практически всех клиницистов, а пробиотические препараты, корригирующие нарушенную нормальную микрофлору, широко используются при комплексной терапии как энтеральных, так и парентеральных инфекционных процессов [7]. Дисбактериозы кишечника различной этиологии остаются важной медико-социальной и экологической проблемой и выявляются практически у всех больных с гастроэнтерологической патологией. Так, 90% россиян страдают заболеваниями органов системы пищеварения, которые характеризуются хроническим и рецидивирующим течением. Известно, что желудочно-кишечная экосистема человека и животных рассматривается как одна из важных систем защиты организма. В физиологических условиях микрофлора, главным образом анаэробные представители индигенной микрофлоры, обеспечивают колонизационную резистентность пищеварительного тракта, антитоксическое действие, поддержание оптимального уровня метаболических и ферментативных процессов, иммунный статус, антимутагенную и антиканцерогенную активности [32]. Природные, техногенные и другие экстремальные факторы негативно воздействуют на организм, его микрофлору и приводят к синдрому нарушений микроэкологии пищеварительного тракта - дисбактериозам. Кишечную микрофлору можно характеризовать как индикаторный показатель благополучия организма, который реагирует на все агенты, вызывающие нарушения гомеостаза [31, 33]. Кишечная микрофлора - один из дезинтоксикационных факторов, осуществляющих защиту организма от токсических соединений посредством восстановительных процессов в кишечнике. В условиях чрезмерного экзогенного и эндогенного «загрязнения» кишечная микрофлора не может выполнять присущие ей функции [5, 10, 13, 15, 25, 35, 36].
Известно, что в фармакотерапии заболеваний органов пищеварительной системы определенное место занимают лекарственные средства растительного происхождения, которые являются биогенетически сложившимися комплексами и обладают большим сродством к живым системам, в частности сок подорожника (Succus Plantaginis), плантаглюцид (Plantaglucidum), представляющие собой смесь полисахаридов из листьев подорожника большого (Plantago major L.), семейства (Plantaginaceae), произрастающего по всей территории России [21], недостатком которых является то, что при их использовании не учитывается состояние микробиоценоза кишечника, которое также претерпевает патологические изменения.
Следовательно, среди наиболее актуальных проблем современной медицины и практического здравоохранения остаются изучение вопросов профилактики и разработка методов лечения дисбактериозов кишечника.
Таким образом, актуальным является создание комплексного средства, которое положительно влияло бы на функциональное состояние органов пищеварительной системы, а также нормализовало нарушения микробиоценоза кишечника.
Наиболее близким способом к предлагаемому решению является способ производства кисломолочного продукта (Патент РФ №2092064, МПК А23С 9/12, опубл. 10.10.1997 г.) [34].
Недостатком данного способа является то, что данный продукт готовится в домашних условиях. Совместное культивирование суточных культур лакто- и бифидобактерий или термофильных стрептококков в гидролизатно-молочной среде приводит, как правило, к подавлению роста бифидобактерий, поскольку они обладают слабой кислотообразующей способностью.
Целью предлагаемого технического решения является расширение ассортимента средств, применяемых при лечении и профилактике заболеваний органов пищеварительной системы, путем применения комплексного средства, в состав которого входят пробиотик на молочной основе с бифидобактериями, экстракт растительного происхождения и минеральная добавка природного цеолита - клиноптилолита.
Сочетанное применение пробиотика из одного доминантного представителя нормальной микрофлоры кишечника - бифидобактерий с растительным экстрактом корней солодки голой и минеральной добавки - природного цеолита позволит потенцировать эффективность каждого компонента воздействием на различные звенья патологического процесса.
Для достижения поставленной цели в способе получения средства, обладающего гастрозащитной активностью, в качестве растительного материала используют сухой экстракт корней солодки голой Glycyrrhiza Glabra L. (ГФ X ст.260 Extraction Glycyrrhizae siccum) [11], пробиотика - чистую культуру бифидобактерий - шт. B.longum В 379 М, а минеральной добавки - цеолит природный (клиноптилолит) фракцией 0-1 мм (ТУ 2163-002-12763074-97). В сухом экстракте корней солодки голой содержание глицирризиновой кислоты не менее 17%.
По классификации К.К.Сидорова [28] экстракт корней солодки голой относится к относительно безвредным веществам.
Предлагаемый способ получения гастрозащитного средства осуществляется следующим образом.
3
Коровье молоко очищают, обезжиривают, автоклавируют при 120°С в течение 15 мин. Охлаждают до 37°С, вносят 2% активизированной жидкой чистой культуры бифидобактерий шт. B.longum В 379 М для культивирования бифидобактерий в молоке, сухой водорастворимый экстракт корней солодки голой в количестве 0,3-0,5% к массе молока и 0,5-1% цеолита природного - клиноптилолита к массе молока, смесь тщательно перемешивают и термостатируют при 37°С в течение 16-18 ч до образования сгустка кислотностью 55-65°Т с титром 9 lg КОЕ/см. Затем смесь охлаждают до 4-6°С и хранят в холодильнике в течение 72 часов.
Примеры конкретного выполнения.
Пример 1.
3
Коровье молоко очищают, вносят сухой водорастворимый экстракт корней солодки голой в количестве 0,3% и природный цеолит - клиноптилолит в количестве 1% к массе молока. Смесь тщательно перемешивают, автоклавируют при 120°С в течение 15 мин, охлаждают до 37°С и вносят 1% активизированной жидкой чистой культуры бифидобактерий шт. B.longum В 379 М для культивирования бифидобактерий в молоке, затем термостатируют при 37°С в течение 16-18 ч до образования сгустка кислотностью 55-65°Т с титром 9 lg КОЕ/см. Готовую смесь охлаждают до 6°С и хранят в холодильнике в течение 72 ч. Смесь применяют по 50-100 мл 2-3 раза в день в течение 1 месяца при патологических состояниях органов пищеварительной системы, сопровождающихся дисбактериозом кишечника различной степени выраженности.
Пример 2.
3
Коровье молоко очищают, автоклавируют при 120°С в течение 15 мин, охлаждают до 37°С, вносят сухой водорастворимый экстракт корней солодки голой в количестве 0,3% и природный цеолит - клиноптилолит в количестве 1% к массе молока, затем смесь тщательно перемешивают и вносят 1% активизированной жидкой чистой культуры бифидобактерий шт. B.longum В 379 М для культивирования бифидобактерий в молоке, затем термостатируют при 37°С в течение 16-18 ч до образования сгустка кислотностью 55-65°Т с титром 9 lg КОЕ/см. Готовую смесь охлаждают до 6°С и хранят в холодильнике в течение 72 ч. Смесь применяют по 50-100 мл 2-3 раза в день в течение 1 месяца при патологических состояниях органов пищеварительной системы, сопровождающихся дисбактериозом кишечника различной степени выраженности.
Пример 3.
3
Коровье молоко очищают, автоклавируют при 120°С в течение 15 мин, охлаждают до 37°С, вносят 1% активизированной жидкой чистой культуры бифидобактерий шт. B.longum В 379 М для культивирования бифидобактерий в молоке, сухой водорастворимый экстракт корней солодки голой в количестве 0,5% и природный цеолит - клиноптилолит в количестве 0,5% к массе молока, затем смесь тщательно перемешивают и термостатируют при 37°С в течение 16-18 ч до образования сгустка кислотностью 55-65°Т с титром 9 lg КОЕ/см. Готовую смесь охлаждают до 6°С и хранят в холодильнике в течение 72 ч. Смесь применяют по 50-100 мл 2-3 раза в день в течение 1 месяца при патологических состояниях органов пищеварительной системы, сопровождающихся дисбактериозом кишечника различной степени выраженности.
Гастрозащитное действие комплексного средства разработанного состава оценивали согласно общепринятым методам [22]. При определении гастрозащитного действия ведущее значение имели изменения показателей функционального состояния желудочно-кишечного тракта, биохимических показателей сыворотки крови, данных состава микробиоценоза толстого отдела кишечника, а также морфологические изменения тонкого отдела кишечника. Были использованы общепринятые методы исследования крови. Морфологическое исследование проводили по методам, изложенным в руководствах [3, 9, 27].
Эксперименты были проведены на 60 белых беспородных крысах с исходной массой 180-200 г. С целью определения фармакотерапевтической эффективности гастрозащитного средства при повреждениях желудка была использована общепринятая модель ацетатной язвы по Okabe [37], повреждения слизистой оболочки желудка вызывали введением ацетилсалициловой кислоты [26]. Также для объективной оценки фармакотерапевтической эффективности гастрозащитного средства на молочной основе были проведены исследования при хроническом повреждении желудка в условиях экспериментального «рефлюкс»-гастрита [1].
Биохимический анализ сыворотки крови - общий белок, глюкоза, гемоглобин, мочевина, мочевая кислота, общий билирубин, креатинин, холестерин, триглицериды, липопротеиды высокой плотности проводили на биохимическом анализаторе «Сапфир», Япония [16, 17].
С целью установления видовой принадлежности выделенных из фекалий белых крыс микроорганизмов их изолировали в чистой культуре, отбирая колонии, лежащие отдельно друг от друга. Все типы колоний микроскопировали [23].
Интенсивность процессов ПОЛ оценивали в экспериментах in vitro по методу Р.А.Темирбулатова и Е.И.Селезнева (1981) [29, 30]. В основе метода лежит свойство малонового диальдегида реагировать с 2-тиобарбитуровой кислотой (ТБК) при высокой температуре и кислой среде. Определение осуществляли спектрофотометрически по изменению концентрации ТБК-активных продуктов в сыворотке крови, выражаемой в единицах концентрации МДА, определяемых по разнице поглощения исследуемых проб при длинах волн 532 нм и 580 нм.
Определение нуклеиновых кислот проводили по модифицированному методу Г.А.Критского и С.В.Александрова (1980) [18]. Метод основан на определении изменений содержания и спектра нуклеиновых кислот, экстрагируемых из лейкоцитарной массы крови.
Бифидосодержащую смесь на молочной основе с экстрактом корней солодки голой и природного цеолита вводили крысам per os по 1 мл на 100 г массы животных через сутки после индуцирования язвы ежедневно в течение всего эксперимента. Препарат сравнения - плантаглюцид в дозе 10 мл/кг массы применяли по аналогичной схеме. Животным контрольной группы с моделью язвы желудка вводили дистиллированную воду в эквиобъемном количестве. Исследования проводили на 7-е, 14-е и 21-е сутки наблюдения.
Полученные результаты исследований обрабатывали с применением критериев Стьюдента [24].
Результаты опытов представлены в табл. 1, 2, 3, 4.
Таблица 1
Влияние гастрозащитного средства на функциональное состояние слизистой оболочки желудка у белых крыс при язве желудка по Okabe
Показатели
Группы животных
Интактная, n=10
Контрольная (язва), n=10
Опытная (язва + гастрозащитное средство), n=10
Опытная (язва + плантаглюцид), n=10
1
2
3
4
5
7-е сутки
МДА в гомогенате желудка, ммоль/г
0,013±0,003
0,069±0,009*
0,044±0,004**
0,057±0,008
Темп желудочной секреции, мл/100
0,65±0,04
0,23±0,01*
0,38±0,02**
0,29±0,02**
Общая кислотность, ед.титра
140,3*3,58
40,1±2,67*
65,5±3,31**
50,28±2,73**
Свободная соляная кислота, ед.титра
47,62±2,63
14,35±0,95*
23,46±1,49**
19,21±1,31**
Дебит-час соляной кислоты, мкг/100 г
80,3±6,39
33,1±1,42*
46,53±2,07**
41,83±2,12**
% животных с точечными кровоизлияниями
-
100
60
70
Индекс Паулса для точечных кровоизлияний
-
3,38±0,13
2,85±0,11
2,97±0,12
% животных с эрозиями
-
80
50
60
Индекс Паулса для эрозий
-
4,36±0,17
3,42±0,15
3,83±0,16
14-е сутки
МДА в гомогенате желудка, ммоль/г
0,013±0,003
0,058±0,008*
0,035±0,009**
0,039±0,004**
Темп желудочной секреции, мл/100
0,65±0,04
0,28±0,02*
0,42±0,02**
0,34±0,03**
Общая кислотность, ед.титра
140,3±3,58
46,1±1,62*
78,7±2,03**
63,6±1,81**
Свободная соляная кислота, ед.титра
47,62±2,63
20,35±0,91*
32,74±1,44**
29,76±1,49**
Дебит-час соляной кислоты, мкг/100 г
80,3±6,39
40,2±1,51*
53,8±2,47**
48,8±2,12**
% животных с точечными кровоизлияниями
-
80
60
60
Индекс Паулса для точечных кровоизлияний
-
3,04±0,11
2,17±0,14
2,25±0,20
% животных с эрозиями
-
70
40
50
Индекс Паулса для эрозий
-
3,74±0,15
2,15±0,21
2,42±0,24
21-е сутки
МДА в гомогенате желудка, ммоль/г
0,013±0,003
0,049±0,007*
0,021±0,005**
0,024±0,004**
Темп желудочной секреции, мл/100
0,65±0,04
0,31±0,01*
0,44±0,020**
0,37±0,013**
Общая кислотность, ед.титра
140,3±3,58
50,5±1,77*
113,2±2,65**
98,1±2,52**
Свободная соляная кислота, ед.титра
47,62±2,63
25,43±0,89*
41,84±1,42**
33,38±1,51**
Дебит-час соляной кислоты, мкг/100 г
80,3±6,39
46,6±1,65*
67,2±2,56**
56,2±2,43**
% животных с точечными кровоизлияниями
-
70
20
30
Индекс Паулса для точечных кровоизлияний
-
2,72±0,21
0,83±0,15
1,16±0,14
% животных с эрозиями
-
50
20
Индекс Паулса для эрозий
-
3,08±0,15
1,32±0,18
Примечание: * - различия достоверны относительно интактной группы при Р≤0,05;
** - данные достоверны относительно контрольной группы при Р≤0,05.
Через 2-3-е суток после индуцирования ацетатной язвы и в последующие сроки у животных отмечались заторможенность, гиподинамия, потеря массы тела в среднем на 8%, вялое заживление операционного шва, гибель животных составила 30%. На 7-е сутки при макроскопическом осмотре слизистой оболочки желудка отмечались снижение тонуса желудка, отечность слизистой, сглаженность ее рельефа, гиперемия с очагами цианоза и анемии, пылевидные кровоизлияния, единичные эрозии.
Гистологические исследования показали, что все животные имели поражение слизистой оболочки желудка, включая подслизистый и мышечный слои.
Как следует из данных табл. 1, в контрольной группе животных на 7-е сутки после индуцирования язвы желудка в 100% случаев на слизистой оболочке желудка белых крыс отмечали точечные кровоизлияния, эрозии наблюдали у 80% животных.
Развитие деструктивных процессов в слизистой оболочке желудка сопровождалось интенсификацией процессов перекисного окисления липидов в тканях желудка. Содержание МДА в гомогенате желудка контрольных животных увеличивалось в 5,31 раз по сравнению с интактной группой животных. При курсовом введении гастрозащитного средства на молочной основе содержание МДА на 7 сутки эксперимента снижалось в 1,57 раз до 0,044±0,004 ммоль/г по сравнению с контрольной группой животных (0,069±0,009 ммоль/г) и к концу эксперимента содержание малонового диальдегида в гомогенате желудка белых крыс составляло 0,021±0,005 ммоль/г.
У животных контрольной группы достоверно резко снизился темп желудочной секреции - в 2,83 раз с одновременным снижением общей кислотности с 140,3±3,58 до 40,1±2,67 ед. титра, а также снизилось содержание свободной соляной кислоты с 47,62±2,63 до 14,35±0,95 ед. титра и снизился дебит-час соляной кислоты в 2,43 раз.
Гастрозащитное средство на молочной основе обладает фармакотерапевтической активностью. Так, уменьшился процент животных с точечными кровоизлияниями до 60% и 70% в группе животных, получавших гастрозащитное средство и плантаглюцид соответственно, а процент животных с эрозиями в группе животных, получавших гастрозащитное средство, уменьшился до 50%, а в группе животных, получавших плантаглюцид, до 60% по сравнению с контрольной группой животных. Соответственно снизился и индекс Паулса для точечных кровоизлияний с 3,38±0,13 в контрольной группе и до 2,85±0,11 и 2,97±0,12 в опытных группах соответственно и индекс Паулса для эрозий с 4,36±0,17 до 3,42±0,15 и 3,83±0,16. Положительная динамика сохранялась и на 14-е сутки. А к 21-м суткам процент животных с точечными кровоизлияниями в группе животных, получавших гастрозащитное средство, составлял 20%, а в группе сравнения - 30%. В контрольной группе животных процент животных с точечными кровоизлияниями составил 70%.
Темп желудочной секреции у животных, получавших гастрозащитное средство, повысился в 1,63 раза по сравнению с контрольной группой животных с одновременным увеличением количества свободной соляной кислоты в желудочном соке до 23,46±1,49 ед. титра. Общая кислотность содержимого желудка у животных, получавших гастрозащитное средство, повысилась на 25,4±2,99 ед. титра.
На 14-е сутки уменьшился процент животных с точечными кровоизлияниями до 60% в группе животных, получавших гастрозащитное средство и плантаглюцид, а процент животных с эрозиями в первой группе уменьшился до 40%, а во второй - до 50% по сравнению с контрольной группой животных. Соответственно, снизился и индекс Паулса для точечных кровоизлияний с 3,04±0,11 в контрольной группе и до 2,17±0,14 и 2,25±0,20 в опытных группах соответственно и индекс Паулса для эрозий с 3,74±0,15 до 2,15±0,21 и 2,42±0,24.
На 21-е сутки эксперимента процент животных с точечными кровоизлияниями, получавших гастрозащитное средство и плантаглюцид, составлял соответственно 20% и 30%, а в группе животных, получавших гастрозащитное средство, животных с эрозиями не выявлено; в группе животных, получавших плантаглюцид, процент животных с эрозиями составил 20%.
Результаты биохимических исследований сыворотки крови белых крыс представлены в табл.2 и показывают, что у животных контрольной группы отмечено достоверное снижение уровня белка с 78,3±1,82 г/л до 60,6±1,47 г/л; железа - в 1,67 раз, мочевой кислоты - в 1,75 раз, что свидетельствует о нарушении функции желудочно-кишечного тракта, вызванном травмами и сопутствующим воспалительным процессом.
Отмечено также достоверное повышение уровня холестерина и малонового диальдегида до 1,8±0,13 ммоль/л и 0,073±0,0017 нмоль/л соответственно.
При курсовом введении гастрозащитного средства на 7-е сутки отмечено статистически достоверное повышение содержания общего белка до 66,6±1,63 г/л, мочевой кислоты до 148,0±6,73 мкмоль/л, железа до 31,3±0,63 мкмоль/л и достоверное снижение общего билирубина и МДА у животных, получавших гастрозащитное средство, по сравнению с контрольной группой животных (табл.2). Подобная динамика наблюдалась и в остальные сроки исследования.
2
2
На 7-е сутки исследования площадь язвенных дефектов достоверно уменьшалась со 105,38±2,42 мм до 19,37±1,54 мм (табл.3.).
Таблица 2
Влияние гастрозащитного средства на биохимические показатели крови белых крыс при язве желудка по Okabe (M±m, n=10)
Показатели
Группы животных
Интактная
Контроль
Опытная (гастрозащитное средство)
Опытная (плантаглюцид)
1
2
3
4
5
7-е сутки
Общий белок, г/л
78,3±1,82
60,6±1,47*
66,6±1,63**
61,5±1,36
Общий билирубин, мкмоль/л
7,8±0,20
12,6±0,32*
10,6±0,28**
11,5±0,26
Холестерин, ммоль/л
1,4±0,12
1,8±0,13*
1,6±0,04
1,7±0,05
Железо, мкмоль/л
44,1±0,88
26,4±0,56*
31,3±0,63**
28,3±0,49**
Триглицериды, ммоль/л
0,7±0,05
0,4±0,03*
0,5±0,04
0,5±0,03
Мочевая кислота, мкмоль/л
184,1±12,36
105,1±8,34*
148,0±6,73**
135,6±5,51**
Нуклеиновые кислоты, мг/100 мл
6,34±0,31
6,20±0,29
6,23±0,25
6,20±0,27
МДА, нмоль/л
0,047±0,0016
0,073±0,0017*
0,064±0,0016**
0,069±0,0017
14-е сутки
Общий белок, г/л
78,3±1,82
62,3±1,21*
67,3±1,74**
63,8±1,42
Общий билирубин, мкмоль/л
7,8±0,20
11,7±0,29*
9,8±0,29**
10,9±0,30**
Холестерин, ммоль/л
1,4±0,12
1,7±0,11*
1,5±0,12
1,6±0,11
Железо, мкмоль/л
44,1±0,88
29,5±0,53*
37,6±0,61**
33,8±0,57**
Триглицериды, ммоль/л
0,7±0,05
0,4±0,03*
0,5±0,02**
0,5±0,01**
Мочевая кислота, мкмоль/л
184,1±12,36
124,3±9,22*
157,3±10,87**
148,4±9,74**
Нуклеиновые кислоты, мг/100 мл
6,34±0,31
6,20±0,29
6,30±0,24
6,20±0,25
МДА, нмоль/л
0,047±0,0016
0,070±0,0017*
0,061±0,0016**
0,067±0,0017**
21-е сутки
Общий белок, г/л
78,3±1,82
65,9±1,62*
73,2±1,84**
69,8±1,79**
Общий билирубин, мкмоль/л
7,8±0,20
10,5±0,31*
9,1±0,20**
10,1±0,27**
Холестерин, ммоль/л
1,4±0,12
1,7±0,13*
1,6±0,12
1,6±0,14
Железо, мкмоль/л
44,1±0,88
30,3±0,61*
40,7±0,74**
39,4±0,68**
Триглицериды, ммоль/л
0,7±0,05
0,5±0,03*
0,6±0,02
0,5±0,03
Мочевая кислота, мкмоль/л
184,1±12,36
130,7±6,23*
170,8±10,36**
162,3±9,19**
Нуклеиновые кислоты, мг/100 мл
6,34±0,31
6,20±0,29
6,3710,30
6,28±0,26
МДА, нмоль/л
0,047±0,0016
0,06810,0015*
0,05310,0016**
0,061±0,0018**
Примечание: * - различия достоверны относительно интактной группы при P≤0,05;
** - данные достоверны относительно контрольной группы при Р≤0,05.
Таблица 3
Влияние гастрозащитного средства на течение язвы желудка по Okabe у белых крыс
Группы животных
Сроки исследования, сут
Площадь язвенных дефектов, мм<sup>2</sup>
Контрольная (вода)
7
105,38±2,42
14
55,41±1,53
21
32,16±1,27
Опытная (гастрозащитное средство)
7
19,37±1,54*
14
8,14±0,020*
21
-
Опытная (плантаглюцид)
7
28,87±1,23*
14
17,31±0,76*
21
3,49±0,08*
Примечание: * - данные достоверны соответственно срокам исследования относительно контрольной группы животных при Р≤0,05.
2
2
На 14-е сутки наблюдения как следует из данных таблицы 1, в контрольной группе животных в 100% случаев отмечали точечные кровоизлияния, эрозии наблюдали у 80% животных с площадью язвенных дефектов 55,41±1,53 мм. У животных, получавших гастрозащитное средство, на 14-е сутки исследований площадь язвенных дефектов уменьшалась до 8,14±0,02 мм. Подобная динамика наблюдалась и в группе животных, получавших плантаглюцид, но площадь язвенных дефектов была больше во все сроки наблюдения, чем в группе животных, получавших гастрозащитное средство на молочной основе.
2
2
2
В группе животных, получавших гастрозащитное средство, на 21-е сутки наблюдения язв уже не наблюдалось, а в группе контрольных животных площадь язвенных дефектов составляла 32,16±1,27 мм. В группе животных, получавших препарат сравнения плантаглюцид, площадь язвенных дефектов достоверно уменьшалась с 32,16±1,27 мм до 3,49±0,08 мм.
При микробиологическом исследовании толстого отдела кишечника отмечается, что гастрозащитное средство с экстрактом корней солодки голой и природного цеолита оказывает положительное влияние на состав микрофлоры толстого отдела кишечника (табл. 4).
Так, повышается титр бифидобактерий и лактобацилл, снижается количество энтерококков, стафилококков, клостридий, грибов рода Кандида, возрастает по сравнению с данными у животных контрольной группы количество полноценной формы кишечной палочки, и соответственно, снижается число бактерий с ослабленными свойствами.
Таблица 4
Влияние гастрозащитного средства на состав микрофлоры кишечника белых крыс при язве по Okabe (M±m, n=6) lg КОЕ/см<sup>3</sup>
Группы бактерий
Интактная группа (Н<sub>2</sub>О)
Контрольная группа
Опытные группы, получавшие гастрозащитное средство
7 суток
14 суток
21 сутки
Bifidobacterium sp.
7,26±0,39
4,71±0,32*
5,84±0,22
6,08±0,31**
6,63±0,26**
Lactobacillus sp.
6,07±0,29
4,30±0,18*
4,39±0,26
4,92±0,17
5,53±0,24**
Clostridium sp.
1,48±0,13
3,62±0,19*
2,83±0,20**
2,53±0,14**
2,00±0,16**
E.coli
5,31±0,23
5,58±0,26
5,44±0,16
5,53±0,18
5,64±0,14
Enterococcus sp.
4,35±0,20
6,63±0,25*
6,21±0,23
4,93±0,22**
4,09±0,21**
Staphylococcus
3,16±0,15
5,00±0,18*
4,77±0,21
4,58±0,17
4,31±0,18 **
Candida sp.
1,29±0,10
3,64±0,18*
3,23±0,14
3,08±0,22
2,63±0,18**
Примечание: * - данные достоверны по сравнению с интактной группой при Р≤0,05;
** - данные достоверны по сравнению с контрольной группой при Р≤0,05.
Положительный эффект гастрозащитного средства на организм проявляется через нормализацию микробной экологии кишечника за счет стимуляции роста представителей индигенной микрофлоры, в результате продукции витаминов и других ростстимулирующих факторов, нормализации рН, нейтрализации токсинов, изменения микробного метаболизма.
Гастрозащитное средство реализует свое положительное влияние на физиологическую функцию и биохимические реакции либо непосредственно вмешиваясь в метаболическую активность клеток соответствующих органов и тканей, либо опосредовано через регуляцию функционирования биопленок на слизистых организма.
Флавоноидные соединения, входящие в состав гастрозащитного средства, оказывают антиоксидантное действие, выражающееся в способности ингибировать процессы перекисного окисления липидов и стабилизировать биологические мембраны клеток стенки желудка. Гастрозащитное средство способствует снижению накопления одного из конечных продуктов перекисного окисления липидов - малонового диальдегида.
Природный цеолит в желудочно-кишечном тракте не всасывается, не попадает в кровь сам, как кристалл, а проходит транзитом, взаимодействуя только на уровне селективного ионного обмена и избирательной сорбции при контакте с кровеносными и лимфатическими сосудами кишечной стенки, отдавая или забирая микро-, макроэлементы, катализируя биохимические реакции.
Результаты проведенных исследований при различных повреждениях слизистой оболочки желудка (при введении уксусной, ацетилсалициловой кислоты) показали, что гастрозащитное средство на молочной основе в экспериментально-терапевтической дозе обладает фармакотерапевтическим действием. Показано, что у белых крыс с ацетатной язвой желудка в меньшей степени проявляются признаки воспаления: отечность и гиперемия стромы, стаз форменных элементов, дистрофия и десквамация покровного эпителия, а также нарушение рельефа слизистой оболочки желудка.
При проведении морфологического исследования выявлено, что в тонком отделе кишечника животных, получавших гастрозащитное средство с экстрактом корней солодки голой и природного цеолита, в отличие от контроля слабее выражены гемодинамические нарушения, клеточная инфильтрация.
Таким образом, исследование фармакотерапевтической эффективности гастрозащитного средства на молочной основе показало, что курсовое введение его в экспериментально-терапевтических дозах на фоне язвенного дефекта слизистой оболочки желудка белых крыс оказывало гастрозащитное действие, которое характеризовалось нормализацией структурно-функционального состояния слизистой оболочки желудка на более ранних стадиях патологического процесса.
Список литературы
1. Акимов Н.П. О дуоденогастральном рефлюксе. / Н.П.Акимов, С.С.Бацков // Терапевтический архив. - 1982. - Т.54, №2. - С.137-139.
2. Амосова Е.Н. Поиск новых противоязвенных средств из растений Сибири и Дальнего Востока. / Е.Н.Амосова, Е.П.Зуева, Т.Г.Разина и др. // Экспериментальная и клиническая фармакология. - 1998. - №6. - С.31-35.
3. Аруин Л.И. Морфологическая диагностика болезней желудка и кишечника. / Аруин Л.И., Капуллер Л.Л., Исаков В.А. - М.: Триада-Х. - 1998. - 496 с.
4. Баранская Е.К. Патогенез язвенной болезни. / Е.К.Баранская // Русский медицинский журнал. - 2000. - Т.2.
5. Белобородова Н.В. О микрофлоре хозяина и ее участии в ответе на инфекцию. / Н.В.Белобородова // Антибиотики и химиотерапия. - М., 1998. - Т.43, №9. - С.44-49.
6. Белоусов А.С. Диагностика, дифференциальная диагностика и лечение болезней органов пищеварения. / А.С.Белоусов, В.Д.Водолагин, В.П.Жаков / М., Медицина. - 2002. - 424 с.
7. Бондаренко В.М. Дисбиотические состояния и лечебные мероприятия при них. / В.М.Бондаренко, Н.М.Грачева // Вестник РАМН. - 2005. - №12. - С.24-29.
8. Булгаков С.А. Расширение возможностей лечения язвенной болезни при использовании современных антацидных препаратов. / С.А.Булгаков // Клиническая фармакология и терапия. - 1998. - Т.7. - С.34-37.
9. Волкова О.В. Основы гистологии с гистологической техникой. / О.В.Волкова, Ю.К.Елецкий. - М.: Медицина. - 1982. - 303 с.
10. Воробьев А.А. Микроэкологические нарушения при клинической патологии и их коррекция бифидосодержащими пробиотиками. / А.А.Воробьев, В.М.Бондаренко, Е.А.Лыкова и др. // Вестник РАМН. - 2004. - №2. - С.13-17.
11. Государственная фармакопея XI издание. - Вып.2. - М.: Медицина. - 1990.
12. Григорьев П.Я. Современные направления в фармакотерапии болезней органов пищеварения. / П.Я.Григорьев, Э.П.Яковенко, А.В.Яковенко // Клиническая медицина. - 1999. - №10. - С.7-10.
13. Златкина А.Р. Современные подходы к коррекции дисбиоза кишечника. / А.Р.Златкина // Росс. журнал гастроэнтерологии, гепатологии и колопроктологии. - 1999. - №3. - С.64-67.
14. Ивашкин В.Т. Место антацидов в современной терапии язвенной болезни. / В.Т.Ивашкин, Е.К.Баранская, О.С.Шифрин и др. // Российский медицинский журнал. - 2002. - Т.4, №2. - С.42-46.
15. Калмыкова А.И. Пробиотики: Терапия и профилактика заболеваний. Укрепление здоровья. / А.И.Калмыкова. - Новосибирск. 2001. - 203 с.
16. Камышников B.C. Клинико-биохимическая лабораторная диагностика. Справочник. / В.С.Камышников. - Минск. - Т.1. - 2003. - 495 с.
17. Камышников B.C. Клинико-биохимическая лабораторная диагностика. Справочник. / В.С.Камышников. - Минск. - Т.2. - 2003. - 463 с.
18. Критский Г.А. Нуклеиновые кислоты и биологическое действие ионизирующей радиации. / Г.А.Критский. - М. - 1967. - С.44-56.
19. Лапина Т.Л. Современные подходы к лечению язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки. / Т.Л.Лапина, В.Т.Ивашкин // Российский медицинский журнал. - 2001. Т.3, №1. - С.10-15.
20. Маев И.В. Эрозивные поражения слизистой оболочки желудка и двенадцатиперстной кишки (этиология, патогенез, клиника и лечение) / И.В.Маев, Л.Л.Орлов, Ю.В.Нефедова // Клиническая медицина. - 1997. - №6. - С.57-61.
21. Машковский М.Д. Лекарственные средства. / М.Д.Машковский в двух частях, Ч.1. - М.: Медицина. - 1993. - 763 с.
22. Меньшиков В.В. Лабораторные методы исследования в клинике. / В.В.Меньшиков, Л.Н.Делекторская, Р.П.Золотницкая и др. - М.: Медицина. - 1987. - 367 с.
23. Методы общей бактериологии. / Под ред. Герхардта Ф. - М.: Мир. - 1983. Т.1. - С.536.
24. Монцевичюте-Эрингене Е.В. Упрощенные математико-статистические методы в медицинской исследовательской работе. / Е.В.Моцевичюте-Эрингене // Патологическая физиология и экспериментальная терапия. - 1964. - №4. - С.71-78.
25. Наумова О.В. Микрофлора кишечника и желчи у больных с воспалительными заболеваниями гепатобилиарной системы. / О.В.Наумова, Е.Е.Белова, Т.И.Хабазова // Тез. докл. научно-практ. конф. «Дисбиотические состояния человека, пути профилактики и лечения». - Пермь, 1993. - С.36-40.
26. Оболенцева Г.В. Влияние некоторых природных веществ на язвенное поражение желудка крыс, вызванное ацетилсалициловой кислотой. / Г.В.Оболенцева, Я.И.Хаджай // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 1984. - №3. - С.39-41.
27. Пирс Э. Гистохимия теоретическая и прикладная. / Э.Пирс. - М.: Ин. лит. - 1962. - 962 с.
28. Сидоров К.К. О классификации токсических ядов при парентеральных способах введения. / К.К.Сидоров / В кн.: Токсикология новых промышленных химических веществ. - М., 1973. - С.47-51.
29. Стальная И.Д. Метод определения малонового диальдегида с помощью тиобарбитуровой кислоты. / И.Д.Стальная, Т.Г.Гаришвили // Современные методы в биохимии. - М., 1977. - С.66-68.
30. Темирбулатов Р.А. Метод повышения интенсивности свободнорадикального окисления липидсодержащих компонентов крови и его диагностическое значение. Р.А.Темирбулатов, Е.И.Селезнев // Лабораторное дело. - 1981. - №4. - С.209-211.
31. Феклисова Л.В. Становление пробиотикотерапии в России. / Л.В.Феклисова, Ю.В.Несвижский, А.М.Амерханова и др. // Вестник РАМН. - 2005. - №12. - С.24-29.
32. Шендеров Б.А. Медицинская микробная экология и функциональное питание. Т.1: Микрофлора человека и животных и ее функции. / В.А.Шендеров. - 1998. - 288 с.
33. Шендеров Б.А. Нормальная микрофлора и ее роль в поддержании здоровья человека. / Б.А.Шендеров // Росс. журнал гастроэнтерологии, гепатологии и колопроктологии. - 1998. - №1. - С.61-65.
34. Патент РФ №2092064, МПК А23С 9/12, 10.10.1997.
35. Collins M.D. Probiotics, prebiotics and synbiotics; approaches for modulating the microbial ecology of the gut. / M.D.Collins, G.R.Gibson // Am. J. Clin. Nutr. - 1999. - V.69. - P.1052-1057.
36. Folwaczny C. Probiotics for prevention of uncreative colitis recurrence: alternative medicine added to standard treatment. / C.Folwaczny // J.Gastroenterol. - 2000. - V.38, №6. - P.547-550.
37. Okabe S. The acetic ulcer model - a procedure for chronic duodenal of gastric ulcer. / S.Okabe, С.J.Pfeiffer // Peptic ulcer / С.J.Ed.Pfeiffer. - Copenhagen. - 1971. - P.13-20.