ПРОИЗВОДНЫЕ АЗОЛА В КАЧЕСТВЕ ИНГИБИТОРОВ ЛИПАЗ И ФОСФОЛИПАЗ
AZOLE DERIVATIVES AS LIPASE AND PHOSPHOLIPASE INHBITORS

Настоящее изобретение касается производных азола общей формулы I, их фармацевтически применимых солей и их применения в качестве лекарственных веществ.
В WO 2003/0051842 A2 описаны соединения для ингибирования гормончувствительной липазы. Эти соединения включают производные бензизоксазола и производные бензизотиазола. В WO 2004/058749 описаны производные бензизоксазола для ингибирования киназы-3 гликогенсинтетазы.
Целью настоящего изобретения является обеспечение альтернативных соединений, которые обладают ингибирующим действием на гормончувствительную липазу или эндотелиальную липазу.
Настоящее изобретение относится к производным азола общей формулы I,
где
А представляет S, О;
2
W является -(C=O)-, -(S=O)-, -(SO)-;
X являются идентичными или различными и представляют =C(-R)- или =N-;
Y представляет -O- или -NR1-;
1
6
1
3
1
3
1
6
1
6
2
12
1
6
2
8
1
6
1
6
6
10
1
6
1
6
1
6
1
6
1
6
R представляет водород, галоген, (C-C)-алкил, (C-C)-алкокси-(C-C)-алкилен, гидрокси, (C-C)-алкилмеркапто, амино, (C-C)-алкиламино, ди-(C-C)-алкиламино, моно-(C-C)-алкиламинокарбонил, ди-(C-C)-алкиламинокарбонил, COOR4, трифторметил, (C-C)-алкилсульфонил, (C-C)-алкилсульфинил, аминосульфонил, нитро, пентафторсульфанил, (C-C)-арил, CO-NR2R3, O-CO-NR2R3, О-СО-(C-C)-алкилен-CO-O-(C-C)-алкил, О-СО-(C-C)-алкилен-CO-OH, О-СО-(C-C)-алкилен-CO-NR2R3 или незамещенный или моно- или поли-F-замещенный (C-C)-алкокси;
1
6
R1 представляет водород, (C-C)-алкил, бензил;
5
16
1
4
6
10
1
6
1
3
1
6
1
6
2
12
1
6
2
8
1
6
1
6
R2 представляет (C-C)-алкил, (C-C)-алкил-(C-C)-арил, где арил может быть необязательно монозамещен или полизамещен галогеном, (C-C)-алкилом, (C-C)-алкокси, гидрокси, (C-C)-алкилмеркапто, амино, (C-C)-алкиламино, ди-(C-C)-алкиламино, моно-(C-C)-алкиламинокарбонилом, ди-(C-C)-алкиламинокарбонилом, (C-C)-алкоксикарбонилом, циано, трифторметилом, трифторметилокси, (C-C)-алкилсульфонилом, аминосульфонилом, нитро;
1
6
R3 представляет водород, (C-C)-алкил; или
2
2
R2 и R3 вместе с несущим их атомом азота могут образовывать моноциклическую насыщенную или частично ненасыщенную 4-7-членную кольцевую систему, или бициклическую насыщенную или частично ненасыщенную 8-14-членную кольцевую систему, и отдельные члены этих кольцевых систем могут быть заменены на 1-3 атома или атомные группы из следующих рядов: -CHR5-, -CR5R5-, -(C=R5)-, -NR5-, -C(=O)-, -O-, -S-, -SO-, -SO-, при условии, что 2 звена из ряда -О-, -S-, -SO-, -SO- не могут быть соседними;
1
6
R4 представляет водород, (C-C)-алкил, бензил;
1
6
R5 представляет (C-C)-алкил, галоген, трифторметил, COOR4, циклопропил, циклопропилен;
таутомерным формам этих соединений, а также их физиологически приемлемым солям.
Предпочтительными являются соединения формулы I, в которых
W представляет -(C=O)-.
Дополнительно предпочтительными являются соединения формулы I, в которых
W представляет -(C=O)-;
X являются идентичными или различными и представляют =C(-R)- или =N-;
Y представляет -O-, -NR1-;
1
6
1
6
6
10
1
6
1
6
R представляет водород, галоген, (C-C)-алкил, гидрокси, амино, COOR4, трифторметил, (C-C)-алкилсульфонил, нитро, пентафторсульфанил, (C-C)-арил, CO-NR2R3, O-CO-NR2R3 или О-СО- (C-C)-алкилен-CO-O-(C-C)-алкил;
1
6
R1 представляет водород, (C-C)-алкил;
6
10
1
3
6
10
1
6
1
3
1
6
R2 представляет (C-C)-алкил, (C-C)-алкил-(C-C)-арил, причем арил необязательно может быть монозамещен или полизамещен галогеном, (C-C)-алкилом, (C-C)-алкокси, гидрокси, амино, (C-C)-алкиламино, трифторметилом, нитро;
1
6
R3 является водородом, (C-C)-алкилом; или
R2 и R3 вместе с несущим их атомом азота могут образовывать моноциклическую насыщенную 5-6-членную кольцевую систему или бициклическую насыщенную или частично ненасыщенную 9-10-членную кольцевую систему, и отдельные члены этих кольцевых систем могут быть заменены на 1-3 атома или атомные группы из следующих рядов -CHR5-, -CR5R5-, -(C=R5)-, -NR5-, -O-, -S-, при условии, что 2 звена из ряда -O-, -S- не могут быть соседними;
1
6
R4 является водородом, (C-C)-алкилом, бензилом;
1
6
R5 представляет (C-C)-алкил, галоген, трифторметил, COOR4, циклопропил, циклопропилен.
Также предпочтительными являются соединения формулы I, в которых
W представляет -(C=O)-;
X являются идентичными или различными и представляют =C(-R)- или =N-;
Y представляет -O-, -NR1-;
1
6
1
6
6
10
1
6
1
6
1
6
R представляет водород, галоген, (C-C)-алкил, гидрокси, амино, COOR4, трифторметил, (C-C)-алкилсульфонил, нитро, пентафторсульфанил, (C-C)-арил, CO-NR2R3, O-CO-NR2R3 или О-СО-(C-C)-алкилен-CO-O-(C-C)-алкил, (C-C)-алкокси;
1
6
R1 является водородом, (C-C)-алкилом;
6
10
1
3
6
10
1
6
1
3
1
6
R2 представляет (C-C)-алкил, (C-C)-алкил-(C-C)-арил, причем арил необязательно может быть монозамещен или полизамещен галогеном, (C-C)-алкилом, (C-C)-алкокси, гидрокси, амино, (C-C)-алкиламино, трифторметилом, нитро;
1
6
R3 является водородом, (C-C)-алкилом; или
R2 и R3 вместе с несущим их атомом азота могут образовывать моноциклическую насыщенную 5-6-членную кольцевую систему или бициклическую насыщенную или частично ненасыщенную 9-10-членную кольцевую систему, и отдельные члены этих кольцевых систем могут быть заменены на 1-3 атома или атомные группы из следующих рядов -CHR5-, -CR5R5-, -(C=R5)-, -NR5-, -O-, -S-, при условии, что 2 звена из ряда -O-, -S- не могут быть соседними;
1
6
R4 является водородом, (C-C)-алкилом, бензилом;
1
6
R5 представляет (C-C)-алкил, галоген, трифторметил, COOR4, циклопропил, циклопропилен.
В особенности предпочтительные соединения формулы I представляет соединения, в которых
W представляет -(C=O)-;
X являются идентичными или различными и представляют =C(-R)- или =N-;
Y представляет -O-;
1
6
R представляет водород, галоген, нитро, гидрокси или (C-С)-алкил;
6
10
1
6
R2 представляет (C-C)-алкил или бензил, причем бензил необязательно может быть заменен галогеном, (C-C)-алкилом или трифторметилом;
1
6
R3 является водородом, (C-C)-алкилом; или
R2 и R3 вместе с несущим их атомом азота могут образовывать моноциклическую насыщенную 5-6-членную кольцевую систему, и отдельные члены этой кольцевой системы могут быть заменены на 1-2 атома или атомные группы из рядов -CHR5-, -NR5-; и
1
6
R5 представляет (C-C)-алкил или циклопропил.
Дополнительно особенно предпочтительным вариантом осуществления являются соединения формулы I, в которых
W является -(C=O)-;
X являются идентичными или различными и представляют =C(-R)- или =N-;
Y является -O-;
1
3
1
6
R представляет водород, галоген, нитро, гидрокси, (C-C)-алкокси или (C-C)-алкил;
6
10
1
6
R2 представляет (C-C)-алкил или бензил, причем бензил необязательно может быть замещен галогеном, (C-C)-алкилом или трифторметилом;
R3 является водородом; или
R2 и R3 вместе с несущим их атомом азота могут образовывать моноциклическую насыщенную 5-6-членную кольцевую систему, и отдельные члены этой кольцевой системы могут быть заменены на 1-2 атома или атомные группы из рядов -CHR5-, -NR5-; и
1
6
R5 представляет (C-C)-алкил, трифторметил или циклопропил.
Еще одним особенно предпочтительным вариантом осуществления являются соединения формулы I, в которых
W является -(C=O)-;
X являются идентичными или различными и представляют =C(-R)- или =N-;
Y является -NR1-;
1
6
R представляет водород, галоген, нитро, гидрокси или (C-C)-алкил;
1
6
R1 является водородом, (C-C)-алкилом;
6
10
1
6
R2 представляет (C-C)-алкил или бензил, при этом бензил необязательно может быть замещен галогеном, (C-C)-алкилом или трифторметилом;
1
6
R3 является водородом, (C-C)-алкилом; или
R2 и R3 вместе с несущим их атомом азота могут образовывать моноциклическую насыщенную 5-6-членную кольцевую систему, и отдельные члены этой кольцевой системы могут быть заменены на 1-2 атома или атомные группы из рядов -CHR5-, -NR5-; и
1
6
R5 представляет (C-C)-алкил или циклопропил.
Дополнительно особенно предпочтительным вариантом осуществления являются соединения формулы I, в которых
W является -(C=O)-;
X являются идентичными или различными и представляют =C(-R)- или =N-;
Y представляет -NR1-;
1
3
1
6
R представляет водород, галоген, нитро, гидрокси, (C-C)-алкокси или (C-C)-алкил;
1
6
R1 является водородом, (C-C)-алкилом;
6
10
1
6
R2 представляет (C-C)-алкил или бензил, при этом бензил необязательно может быть замещен галогеном, (C-C)-алкилом или трифторметилом;
R3 является водородом; или
R2 и R3 вместе с несущим их атомом азота могут образовывать моноциклическую насыщенную 5-6-членную кольцевую систему, и отдельные члены этой кольцевой системы могут быть заменены на 1-2 атома или атомные группы из рядов -CHR5-,-NR5-; и
1
6
R5 представляет (C-C)-алкил, трифторметил или циклопропил.
В одном варианте осуществления настоящего изобретения A в соединениях формулы I означает О.
В другом варианте осуществления настоящего изобретения A в соединениях формулы I означает S.
В дополнительном варианте осуществления настоящего изобретения Y в соединениях формулы I означает О.
В дополнительном варианте осуществления настоящего изобретения Y в соединениях формулы I означает NR1, причем R1 может иметь вышеуказанные значения.
Особенно высоко предпочтительными являются соединения формулы I, в которых
NR2R3 представляет пиперидин, который в 4-ом положении содержит атомную группу CHR5.
Дополнительно предпочтительными являются соединения формулы I, в которых X являются идентичными или различными и представляют от =C(-R)-.
Дополнительно предпочтительными являются соединения формулы I, в которых X являются идентичными или различными и представляют =C(-R)- или =N- при условии, что один X обязательно представляет =N-.
Также предпочтительными являются соединения формулы I, в которых X в положении 4, 5 и 6 являются идентичными или различными и представляют =C(-R)- и в положении 7 представляют =N-.
Дополнительно предпочтительными являются соединения формулы I, в которых X в положении 4, 5 и 7 является =C(-R)-, причем R является водородом, и в положении 6 R не является водородом.
Дополнительно предпочтительными являются соединения формулы I, в которых
X в положении 4 и 5 является =C(-R)-, причем R является водородом, и в положении 6 R не является водородом.
Настоящее изобретение относится к соединениям формулы I в форме их солей, к рацематам, рацемическим смесям и чистым энантиомерам, а также к их диастереомерам и их смесям.
Алкильные радикалы в заместителях R, R1, R2, R3, R4, R5 могут иметь прямую или разветвленную цепь. Галоген представляет фтор, хлор, бром или йод, в частности фтор или хлор.
Под арилом подразумевается ароматическая карбоциклическая моно- или бициклическая кольцевая система, содержащая в кольце или в кольцах от 6 до 10 атомов.
Гетероарил является моно- или бициклической ароматической 5-12-членной кольцевой системой, при этом по меньшей мере один атом в кольцевой системе представляет гетероатом из ряда N, О и S.
Для применения в медицине особенно подходят фармацевтически приемлемые соли в силу их более высокой растворимости в воде по сравнению с исходными соединениями или основными соединениями. Эти соли должны содержать фармацевтически приемлемый анион или катион. Подходящие фармацевтически приемлемые кислотно-аддитивные соли соединений настоящего изобретения представляют соли неорганических кислот, таких как хлористоводородная кислота, бромистоводородная кислота, фосфорная кислота, метафосфорная кислота, азотная кислота и серная кислота, а также соли органических кислот, таких как, например, уксусная кислота, бензолсульфоновая кислота, бензойная кислота, лимонная, этансульфоновая, фумаровая, глюконовая, гликолевая, изэтионовая, молочная, лактобионовая, малеиновая, яблочная, метансульфоновая, янтарная, p-толуолсульфоновая кислота и винная кислота. Подходящие фармацевтически приемлемые основные соли представляют соли аммония, соли щелочных металлов (такие как соли натрия и калия) и соли щелочноземельных металлов (такие как соли магния и кальция) и соли трометамола (2-амино-2-гидроксиметил-1,3-пропандиол), диэтаноламин, лизин или этилендиамин.
Соли с фармацевтически неприемлемым анионом, например трифторацетатом, также входят в объем настоящего изобретения в качестве полезных промежуточных продуктов для получения или очистки фармацевтически приемлемых солей, и/или для использования в нетерапевтических целях, например, для применения in vitro.
Используемое в настоящем изобретении понятие "физиологически функциональное производное" обозначает любое физиологически приемлемое производное соединения формулы I настоящего изобретения, например сложный эфир, способное при введении млекопитающему, например человеку, образовывать (прямым или опосредованным путем) соединение формулы I или его активный метаболит.
К физиологически функциональным производным относятся также пролекарства соединений настоящего изобретения, например, описанные в публикации H. Okada et al., Chem. Pharm. Bull. 1994, 42, 57-61. Такие пролекарства способны метаболизироваться in vivo в соединения настоящего изобретения. Эти пролекарства сами по себе могут быть активными или неактивными.
Соединения настоящего изобретения также могут существовать в различных полиморфных формах, например, таких как аморфные и кристаллические полиморфные формы. Все полиморфные формы соединений настоящего изобретения входят в объем настоящего изобретения и являются дополнительным аспектом настоящего изобретения.
Далее и везде в настоящем документе согласно приведенному описанию все ссылки на вышеописанное "соединение (соединения) формулы I" относятся к соединению (соединениям) формулы I, а также к его солям, сольватам и физиологически функциональным производным.
Применение
Соединения настоящего изобретения общей формулы I обладают чрезвычайно сильным ингибирующим действием на гормончувствительную липазу HSL (ГЧЛ), аллостерический фермент в адипоцитах, который ингибируется инсулином и отвечает за расщепление жиров в жировых клетках и, таким образом, за перенос жировых компонентов в кровеносное русло. Ингибирование этого фермента, таким образом, эквивалентно инсулиноподобному действию соединений настоящего изобретения, которое, в конечном счете, ведет к снижению содержания свободных жирных кислот в крови и глюкозы крови. В этой связи они могут применяться при метаболических расстройствах, например, таких как инсулиннезависимый сахарный диабет, диабетический синдром, и при прямом повреждении поджелудочной железы.
Соединения настоящего изобретения общей формулы I дополнительно могут обладать ингибирующим действием на эндотелиальную липазу EL (ЭЛ). Предпочтительным субстратом для ЭЛ являются липопротеины высокой плотности HDL (ЛВП), обладающие противоатеросклеротической активностью. Снижение уровня ЛВП приводит к развитию атеросклероза и его осложнений, таких как метаболический синдром и коронарная болезнь сердца. Таким образом, ингибирование ЭЛ должно привести к профилактике атеросклеротических нарушений.
Соединения настоящего изобретения формулы I также могут оказывать ингибирующее действие на триглицеридлипазу.
Дополнительно было выявлено, что ингибирующее действие соединений настоящего изобретения общей формулы I по сравнению с другими липазами является селективным.
Соединения такого типа являются особенно подходящими для лечения и/или профилактики нижеуказанных нарушений.
1. Нарушения метаболизма жирных кислот и нарушений утилизации глюкозы.
2. Нарушения чувствительности к инсулину миоцитов, адипоцитов и гепатоцитов (инсулин-резистентный) - метаболический синдром.
3. Сахарный диабет, в частности диабет 2 типа, включая профилактику его осложнений.
В этой связи конкретными аспектами являются:
- гипергликемия,
- улучшение резистентности к инсулину,
- улучшение толерантности к глюкозе,
- защита β-клеток поджелудочной железы,
- предотвращение макро- и микроваскулярных нарушений.
4. Дислипидемии и их осложнения, такие как, например, атеросклероз, коронарная болезнь сердца, цереброваскулярные нарушения и т.д., в частности, отличающиеся одним или более следующими факторами (вместе с тем, не ограниченные указанными факторами):
- высокие концентрации в плазме триглицеридов, высокие концентрации в плазме триглицеридов после приема пищи
- низкие концентрации холестерина ЛВП
- низкие концентрации ApoA липопротеина
- высокие концентрации холестерина липопротеинов низкой плотности LDL (ЛНП)
- частицы холестерина липопротеинов низкой плотности (ЛНП)
- высокие концентрации ApoB липопротеина
5. Другие различные состояния, которые могут быть связаны с метаболическим синдромом, например:
- ожирение (избыточный вес), включающее ожирение центрального типа
- тромбозы, стадии гиперкоагуляции и протромбоза (артериальные и венозные)
- высокое кровяное давление
- сердечная недостаточность, например, при состоянии после инфаркта миокарда, гипертензивной болезни сердца или кардиомиопатии (но не ограниченные вышеперечисленным)
6. Другие нарушения или состояния, например, в которые могут вовлекаться воспалительные реакции или клеточная дифференциация, охватывают:
- атеросклероз, например коронарный склероз, включающий стенокардию или инфаркт миокарда, удар (но не ограниченные вышеперечисленным)
- васкулярный рестеноз или реокклюзию
- хронические воспалительные заболевания кишечника, например болезнь Крона и язвенный колит
- панкреатит
- другие воспалительные состояния
- ретинопатию
- опухоли адипоцитов
- карциномы адипоцитов, например липосаркомы
- солидные опухоли и неоплазмы, например карциномы желудочно-кишечного тракта, печени, желчных путей и поджелудочной железы, эндокринные опухоли, карциномы легких, почек и мочевыводящих органов, генитального тракта, карциномы простаты и т. д. (но не ограниченные вышеперечисленным)
- острые и хронические миелопролиферативные заболевания и лимфомы
- ангиогенез
- нейродегенеративные заболевания
- болезнь Альцгеймера
- рассеянный склероз
- болезнь Паркинсона
- эритематозно-сквамозные дерматозы, например псориаз
- обыкновенные угри
- другие кожные заболевания и дерматологические состояния, которые модулируются PPAR
- экземы и нейродерматиты
- дерматит, например себоррейный дерматит или фотодерматит
- кератит и кератозы, например себоррейные кератозы, старческие кератозы, актинический кератоз, фото-индуцированные кератозы или фолликулярный кератоз
- келоиды и профилактику келоидов
- бородавки, включающие кондиломы или остроконечные кондиломы
- инфекции, вызываемые вирусом папилломы человека (ВПЧ), например венерические папилломы, вирусные бородавки, такие как контагиозный моллюск, лейкоплакия
- папулезные дерматозы, такие как красный плоский лишай
- рак кожи, например базально-клеточные карциномы, меланомы или кожные T-клеточные лимфомы
- локальные доброкачественные эпидермальные опухоли, например кератодермия, эпидермальный невус
- обморожения
- высокое кровяное давление
- синдром X
- синдром поликистоза яичников (PCOS)
- астму
- остеоартрит
- системную красную волчанку (СКВ) или воспалительные ревматические заболевания, такие как ревматоидный артрит
- васкулиты
- истощение (кахексию)
- подагру
- ишемию/синдром реперфузии
- острый респираторный дистресс синдром (ОРДС)
Препараты
Количество соединения настоящего изобретения, необходимое для достижения желаемого биологического эффекта, зависит от ряда факторов, например от выбранного конкретного соединения, предполагаемого применения, способа введения и от клинического состояния больного. Обычно дневная доза находится в диапазоне от 0,3 мг до 100 мг (обычно от 3 мг до 50 мг) в день на килограмм веса тела, например от 3 до 10 мг/кг/в день. Внутривенная доза может, например, находиться в диапазоне от 0,3 мг до 1,0 мг/кг, которую можно вводить подходящим способом в виде инфузий от 10 нг до 100 нг на килограмм в минуту. Подходящие для этих целей инфузионные растворы могут содержать, например, от 0,1 нг до 10 мг, обычно от 1 нг до 10 мг на миллилитр. Однократные дозы могут содержать, например, от 1 мг до 10 г активного вещества. Таким образом, ампулы для инъекций могут содержать, например, от 1 мг до 100 мг, и препарат однократной дозы, которую можно вводить орально, такая как, например, таблетки или капсулы, может содержать, например, от 0,05 до 1000 мг, обычно от 0,5 до 600 мг. Для лечения вышеуказанных состояний соединения формулы I можно использовать в виде соединения как есть, тем не менее, предпочтительно они находятся в форме фармацевтической композиции с подходящим носителем. Носитель должен быть обязательно приемлемым, в плане совместимости с другими ингредиентами композиции и отсутствия вредности для здоровья пациента. Носитель может быть твердым или жидким, или иметь и те и другие свойства, и с соединением составляться предпочтительно в виде препарата однократной дозы, например, в виде таблетки, которая может содержать от 0,05% до 95% веса активного вещества. Также в нем могут присутствовать другие фармацевтически активные вещества, включающие другие соединения настоящего изобретения. Фармацевтические композиции настоящего изобретения можно получить одним из известных фармацевтических способов, по существу состоящих в смешивании ингредиентов с фармакологически приемлемыми носителями и/или эксципиентами.
Фармацевтические композиции настоящего изобретения представляет композиции, подходящие для орального, ректального, местного, перорального (например, сублингвального) и парентерального (например, подкожного, внутримышечного, внутрикожного или внутривенного) введения, вместе с тем наиболее подходящий способ введения в каждом отдельном случае зависит от характера и тяжести состояния, которое лечат, и от природы соединения формулы I, используемого в каждом случае. В объем настоящего изобретения также входят препараты с покрытием и препараты с замедленным высвобождением. Предпочтительными являются препараты с устойчивостью к кислотам и желудочному соку. Подходящие покрытия, устойчивые к желудочному соку, содержат ацетатфталат целлюлозы, поливинилацетатфталат, фталат гидроксипропилметилцелюлозы и анионные полимеры метакриловой кислоты и метилметакрилата.
Подходящие фармацевтические препараты для орального введения могут быть в виде отдельных единиц, например, таких как капсулы, саше, таблетки для рассасывания или таблетки, каждая из которых содержит определенное количество соединения формулы I; в виде порошков или гранул; в виде раствора или суспензии в водной или неводной жидкости; или в виде эмульсии масло-в-воде или вода-в-масле. Как выше упомянуто, эти композиции можно изготавливать любым подходящим фармацевтическим способом, включающим стадию, на которой контактируют активное вещество и носитель (который может состоять из одного или больше дополнительных ингредиентов). Обычно композиции получают путем однородного и гомогенного смешивания активного вещества с жидким и/или тонкоизмельченным твердым носителем, после чего, при необходимости, продукту придают форму. Таким образом, например, можно изготовить таблетку путем прессования или формования порошка или гранул соединения настоящего изобретения при необходимости с одним или больше дополнительными ингредиентами. Прессованные таблетки можно изготовить путем таблетирования на подходящей машине сыпучей формы соединения, например порошка или гранул, при необходимости смешивая его со связующим веществом, глидантом, инертным разбавителем и/или одним или больше поверхностно-активным/диспергирующим веществом (веществами). Формованные таблетки можно изготовить путем формования на подходящей машине порошкообразного соединения, увлажненного инертным жидким разбавителем.
Фармацевтические композиции, подходящие для перорального (сублингвального) введения, охватывают таблетки для рассасывания, содержащие соединение формулы I с вкусовым веществом, обычно сахарозу и гуммиарабик или трагакант, и пастилки, которые содержат соединение в инертной основе, такой как желатин и глицерин или сахароза и гуммиарабик.
Фармацевтические композиции, подходящие для парентерального введения, предпочтительно охватывают стерильные водные препараты соединения формулы I, предпочтительно являющиеся изотоническими для крови предполагаемого реципиента. Эти препараты вводят предпочтительно внутривенно, вместе с тем введение также может осуществляться путем подкожной, внутримышечной или внутрикожной инъекции. Эти препараты предпочтительно можно изготовить путем смешивания соединения с водой и создания стерильного раствора, изотонического для крови. Композиции для инъекций настоящего изобретения обычно содержат от 0,1 до 5% веса активного соединения.
Фармацевтические композиции, подходящие для ректального введения, предпочтительно имеют форму суппозиториев с единичной дозой. Их можно изготовить путем смешивания соединения формулы I с одним или больше общепринятыми твердыми носителями, например масло какао, и придания формы полученной смеси.
Фармацевтические композиции, подходящие для местного нанесения на кожу, предпочтительно бывают в виде мази, крема, лосьона, пасты, распыляемого раствора, аэрозоля или масла. В качестве носителя можно использовать вазелин, ланолин, полиэтиленгликоли, спирты и комбинации двух или более указанных веществ. Активное вещество присутствует в концентрации от 0,1 до 15% веса композиции, например от 0,5 до 2%.
Чрескожное введение также возможно. Фармацевтические композиции, подходящие для чрескожных применений, могут быть в виде индивидуальных пластырей, подходящих для продолжительного тесного контакта с эпидермисом больного. Такие пластыри содержат, соответственно, активное вещество в водном растворе, который при необходимости забуферен, растворен и/или диспергирован в адгезиве или диспергирован в полимере. Подходящая концентрация активного вещества составляет примерно от 1% до 35%, предпочтительно примерно от 3% до 15%. В частности, активное вещество может высвобождаться путем электропередачи или ионофореза, например, как описано в Pharmaceutical Research, 2 (6): 318 (1986).
Соединения формулы I отличаются благоприятным эффектом на метаболические нарушения. Они положительно влияют на метаболизм липидов и глюкозы, в частности снижают уровень триглицеридов, и подходят для предупреждения и лечения диабета II типа и артериосклероза, а также их различных осложнений.
Комбинации с другими лекарственными средствами
Соединения настоящего изобретения можно вводить как таковые или в комбинации с одним или больше следующими фармакологически активными веществами, обладающими, например, благоприятным эффектом на метаболические нарушения или заболевания, часто связанные с ними. Такими лекарственными средствами, например, являются:
1) лекарственные средства, снижающие уровень глюкозы крови, противодиабетические,
2) активные ингредиенты для лечения дислипидемий,
3) противоатеросклеротические лекарственные средства,
4) средства против ожирения,
5) противовоспалительные активные ингредиенты,
6) активные ингредиенты для лечения злокачественных опухолей,
7) противотромботические активные ингредиенты,
8) активные ингредиенты для лечения повышенного кровяного давления,
9) активные ингредиенты для лечения сердечной недостаточности и
10) активные ингредиенты для лечения и/или профилактики осложнений, вызванных диабетом или связанных с диабетом.
Указанные средства можно объединять с соединениями формулы I настоящего изобретения, в частности, для синергического улучшения эффекта. Введение комбинации активного вещества можно осуществлять как путем раздельного введения больному активных ингредиентов, так и в виде комбинированных продуктов, в которых в одном фармацевтическом препарате присутствуют несколько активных ингредиентов.
Можно упомянуть следующие примеры.
Противодиабетические средства
Подходящие противодиабетические средства раскрыты, например, в Rote Liste 2001, глава 12 или в USP Dictionary of USAN and International Drug Names, US Pharmacopeia, Rockville, 2003. Противодиабетические средства включают все инсулины и производные инсулина, такие как, например, Lantus (см. www.lantus.com) или Apidra, а также другие быстро действующие инсулины (см. патент США 6221633), модуляторы GLP-1 рецепторов, такие, как описанные в WO 01/04146, или также, например, противодиабетические средства, раскрытые в WO 98/08871 (Novo Nordisk A/S). Эффективные при оральном приеме гипогликемические активные ингредиенты предпочтительно включают сульфонилмочевину, действующую на ATФ-зависимый калиевый канал бета-клеток (например, раскрытые в WO 97/26265 и WO 99/03861), бигуаниды, меглитиниды, антагонисты глюкагона, оральные агонисты GLP-1, ингибиторы DPP-IV, сенсибилизаторы к инсулину, например, модуляторы PPAR и PXR, и активные ингредиенты, например, оксадиазолидиндионы, тиазолидиндионы, ингибиторы ферментов печени, участвующие в стимуляции глюконеогенеза и/или гликогенолиза, модуляторы поглощения глюкозы, например, ингибиторы глюкозидазы, соединения, влияющие на метаболизм липидов и приводящие к изменению состава липидов крови, соединения, которые снижают потребление пищи или усвоение пищи.
В одном варианте осуществления настоящего изобретения соединения формулы I вводят в комбинации с инсулином.
В одном варианте осуществления настоящего изобретения соединения формулы I вводят в комбинации с веществами, влияющими на продукцию глюкозы в печени, например, с ингибиторами гликогенфосфорилазы (см.: WO 01/94300, WO 02/096864, WO 03/084923, WO 03/084922, WO 03/104188).
В одном варианте осуществления соединения формулы I вводят в комбинации с активным ингредиентом, действующим на АТФ-зависимый калиевый канал бета-клеток, такие как сульфонилмочевины (например, толбутамид, глибенкламид, глипизид, глимепирид) или глиниды (например, репаглинид).
В одном варианте осуществления соединения формулы I вводят в комбинации с бигуанидом, например метформином.
В одном варианте осуществления соединения формулы I вводят в комбинации с агонистом PPAR-гамма или тиазолидиндионом, например циглитазоном, пиоглитазоном, розиглитазоном, или с соединениями, раскрытыми в WO 97/41097 (Dr.Reddy`s Research Foundation), в частности, с 5-[[4-[(3,4-дигидро-3-метил-4-оксо-2-хиназолинилметокси]фенил]метил]-2,4-тиазолидиндионом.
В одном варианте осуществления соединения формулы I вводят в комбинации с ингибитором DPPIV, как, например, описано в WO98/19998, WO99/61431, WO99/67278, WO99/67279, WO01/72290, WO02/38541, WO03/040174, в частности, в комбинации с P 93/01 (1-циклопентил-3-метил-1-оксо-2-пентаммония хлорид), P-31/98, LAF237 (1-[2-[3-гидроксиадамант-1-иламино)ацетил]пирролидин-2(S)-карбонитрил), TS021 ((2S,4S)-4-фтор-1-[[(2-гидрокси-1,1-диметилэтил)амино]ацетил]пирролидин-2-карбонитрил монобензолсульфонат).
В одном варианте осуществления соединения формулы I вводят в комбинации с соединениями, обладающими ингибирующим действием на SGLT-1 и/или SGLT-2, например, как раскрыто прямо или косвенно в WO2004/007517, WO2004/052902, WO2004/052903 и WO2005/121161.
В одном варианте осуществления соединения формулы I вводят в комбинации с ингибитором α-глюкозидазы, например с миглитолом или акарбозой.
В одном варианте осуществления соединения формулы I вводят в комбинации с более чем одним из вышеупомянутых соединений, например, в комбинации с сульфонилмочевиной и метформином, сульфонилмочевиной и акарбозой, репаглинидом и метформином, инсулином и сульфонилмочевиной, инсулином и метформином, инсулином и троглитазоном, инсулином и ловастатином и т. д.
Липидные модуляторы
В одном варианте осуществления настоящего изобретения соединения формулы I вводят в комбинации с ингибиторами HMG CoA-редуктазы, такими как ловастатин, флувастатин, правастатин, симвастатин, ивастатин, итавастатин, аторвастатин, росувастатин.
В одном варианте осуществления настоящего изобретения соединения формулы I вводят в комбинации с ингибитором абсорбции желчных кислот (см., например, патенты US 6245744, US 6221897, US 6277831, ЕP 0683 773, EP 0683 774).
В одном варианте осуществления настоящего изобретения соединения формулы I вводят в комбинации с полимерным адсорбентом желчных кислот, например с холестирамином, колесевеламом.
В одном варианте осуществления настоящего изобретения соединения формулы I вводят в комбинации с ингибитором ресорбции холестерина, как, например, описано в WO 02/50027, или с эзетимибом, тиквесидом, памаксвесидом.
В одном варианте осуществления соединения формулы I настоящего изобретения вводят в комбинации с индуктором рецепторов ЛНП (см., например, патент US 6342512).
В одном варианте осуществления соединения формулы I вводят в комбинации с наполнителями, предпочтительно нерастворимыми наполнителями (см., например, кароб/Caromax (Zunft H J; et al., Carob pulp preparation for treatment of hypercholesterolemia, ADVANCES IN THERAPY (2001 Sep-Oct), 18(5), 230-6)); Каромакс представляет кароб-содержащий продукт фирмы Nutrinova, Nutrition Specialties & Food Ingredients GmbH, Industriepark Hoechst, 65926 Frankfurt/Main)). Комбинация с Caromax возможна в одном препарате или путем раздельного введения соединений формулы I и Caromax. При этом Caromax можно вводить также в виде продуктов питания, например в хлебобулочных изделиях или в батончиках мюсли.
В одном варианте осуществления соединения формулы I настоящего изобретения вводят в комбинации с агонистом PPAR-альфа.
В одном варианте осуществления настоящего изобретения соединения формулы I вводят в комбинации со смесью агонистов PPAR альфа/гамма, такими как AZ 242 (тесаглитазар, (S)-3-(4-[2-(4-метансульфонилоксифенил)этокси]фенил)-2-этоксипропионовая кислота), BMS 298585 (N-[(4-метоксифенокси)карбонил]-N-[[4-[2-(5-метил-2-фенил-4-оксазолил)этокси]фенил]метил]глицин), или как описано в WO 99/62872, WO 99/62871, WO 01/40171, WO 01/40169, WO 96/38428, WO 01/81327, WO 01/21602, WO 03/020269, WO 00/64888 или WO 00/64876.
В одном варианте осуществления настоящего изобретения соединения формулы I вводят в комбинации с фибратами, например с фенофибратом, гемфиброзилом, клофибратом, безафибратом.
В одном варианте осуществления настоящего изобретения соединения формулы I вводят в комбинации с никотиновой кислотой или ниацином.
В одном варианте осуществления настоящего изобретения соединения формулы I вводят в комбинации с ингибитором CETP, например с CP-529, 414 (торцетрапиб).
В одном варианте осуществления настоящего изобретения соединения формулы I вводят в комбинации с ингибитором ACAT.
В одном варианте осуществления настоящего изобретения соединения формулы I вводят в комбинации с ингибитором MTP, например с имплитапидом.
В одном варианте осуществления настоящего изобретения соединения формулы I вводят в комбинации с антиоксидантом.
В одном варианте осуществления настоящего изобретения соединения формулы I вводят в комбинации с ингибитором липазы липопротеинов.
В одном варианте осуществления настоящего изобретения соединения формулы I вводят в комбинации с ингибитором ATФ-цитрат-лиазы.
В одном варианте осуществления настоящего изобретения соединения формулы I вводят в комбинации с ингибитором сквален-синтетазы.
В одном варианте осуществления настоящего изобретения соединения формулы I вводят в комбинации с антагонистом липопротеина (a).
Средства против ожирения
В одном варианте осуществления настоящего изобретения соединения формулы I вводят в комбинации с ингибитором липазы, например, таким как орлистат.
В одном варианте осуществления дополнительным активным ингредиентом является фенфлурамин или дексфенфлурамин. Еще в одном варианте осуществления дополнительным активным ингредиентом является сибутрамин.
В дополнительном варианте осуществления соединения формулы I вводят в комбинации с модуляторами CART (см. "Cocaine-amphetamine-regulated transcript influences energy metabolism, anxiety and gastric emptying in mice, Asakawa A, et al., M.: Hormones and Metabolie Research (2001), 33(9), 554-558), антагонистами NPY, например, гидрохлорид {4-[(4-аминохиназолин-2-иламино)метил]циклогексилметил}амид нафтален-1-сульфоновой кислоты (CGP 71 683A)), агонисты MC4 (например, [2-(3a-бензил-2-метил-3-оксо-2,3,3a,4,6,7-гексагидропиразоло[4,3-c]пиридин-5-ил)-1-(4-хлорфенил)-2-оксоэтил]амид]-1-амино-1,2,3,4-тетрагидронафтален-2-карбоновой кислоты; (WO 01/91752)), антагонистами орексина (например, 1-(2-метилбензоксазол-6-ил)-3-[1,5]нафтиридин-4-ил-мочевина; гидрохлорид (SB-334867-A)), с H3-агонистами (соль щавелевой кислоты 3-циклогексил-1-(4,4-диметил-1,4,6,7-тетрагидроимидазо[4,5-c]пиридин-5-ил)пропан-1-она (WO 00/63208)); с агонистом TNF, с антагонистами CRF (например, [2-метил-9-(2,4,6-триметилфенил)-9H-1,3,9-триазафлуорен-4-ил]дипропиламин (WO 00/66585)), с антагонистами CRF BP (например, урокортин), с агонистами урокортина, с β3-агонистами (например, 1-(4-хлор-3-метансульфонилметилфенил)-2-[2-(2,3-диметил-1H-индол-6-илокси)этиламино]этанол; гидрохлорид (WO 01/83451)), с агонистом MSH (меланоцит-стимулирующий гормон), с агонистами CCK-A (например, трифторацетат {2-[4-(4-хлор-2,5-диметоксифенил)-5-(2-циклогексилэтил)тиазол-2-илкарбамоил]-5,7-диметилиндол-1-ил}уксусной кислоты (WO 99/15525)); с ингибиторами обратного захвата серотонина (например, дексфенфлурамин), со смешанными серотонинэргическими и норадренэргическими соединениями (например, WO 00/71549), с 5HT-агонистами, например, соль щавелевой кислоты 1-(3-этилбензoфуран-7-ил)пиперазина (WO 01/09111), с агонистами бомбезина, антагонистами галанина, с гормоном роста (например, человеческий гормон роста), с соединениями, высвобождающими гормон роста (трет-бутиловый сложный эфир 6-бензилокси-1-(2-диизопропиламиноэтилкарбамоил)-3,4-дигидро-1H-изохинолин-2-карбоновой кислоты (WO 01/85695)), с агонистами TRH (см., например, ЕР 0462 884), с модулятором разобщающего белка 2 или 3, с агонистами лептина (см., например, Lee, Daniel W.; Leinung, Matthew C.; Rozhavskaya-Arena, Marina; Grasso, Patricia. Leptin agonists as a potential approach to the treatment of obesity. Drugs of the Future (2001), 26(9), 873-881), c агонистами DA (бромкриптин, допрексин), с ингибиторами липазы/амилазы (например, WO 00/40569), с модулятами PPAR (например, WO 00/78312), RXR-модуляторами и агонистами TR-β.
В одном варианте осуществления настоящего изобретения дополнительным активным ингредиентом является лептин.
В одном варианте осуществления дополнительным активным ингредиентом является дексамфетамин, амфетамин, мазиндол или фентермин.
В одном варианте осуществления дополнительный активный ингредиент представляет один или более противодиабетических, гипогликемических активных ингредиентов, ингибиторов HMGCoA-редуктазы, ингибиторов абсорбции холестерина, агонистов PPAR-гамма, агонистов PPAR-альфа, агонистов PPAR-альфа/гамма, фибраты, ингибиторов MTP, ингибиторов абсорбции желчных кислот, ингибиторов CETP, полимерных адсорбентов желчных кислот, индукторов ЛНП-рецепторов, ингибиторов ACAT, антиоксидантов, ингибиторов липазы липопротеина, ингибиторов АТФ-цитрат-лиазы, ингибиторов сквален-синтетазы, антагонистов липопротеина(a), ингибиторов липазы, инсулинов, сульфонилмочевин, бигуанидов, меглитинидов, тиазолидиндионов, ингибиторов α-глюкозидазы, активных ингредиентов, действующих на АТФ-зависимый калиевый канал β-клеток, агонистов CART, агонистов NPY, агонистов MC4, агонистов орексина, агонистов H3, агонистов TNF, антагонистов CRF, антагонистов CRF BP, агонистов урокортина, β3-агонистов, агонистов MSH (меланоцит-стимулирующего гормона), агонистов CCK, ингибиторов обратного захвата серотонина, смешанных серотонинэргических и норадренэргических соединений, 5HT-агонистов, агонистов бомбезина, антагонистов галанина, гормонов роста, соединений, высвобождающих гормон роста, агонистов TRH, модуляторов разобщающего белка 2 или 3, агонистов лептина, агонистов DA (бромкриптин, допрексин), ингибиторов липазы/амилазы, модуляторов PPAR, модуляторов RXR или TR-β- агонистов или амфетаминов.
В одном варианте осуществления соединения формулы I вводят в комбинации с лекарственными средствами, действующими на коронарную циркуляцию и сосудистую систему, такими как ингибиторы ACE (например, рамиприл), с лекарственными средствами, действующими на ренин-ангиотензинную систему, с антагонистами кальция, бета-блокаторами и т. д.
В одном варианте осуществления соединения формулы I вводят в комбинации с лекарственными средствами, имеющими противовоспалительное действие.
В одном варианте осуществления соединения формулы I вводят в комбинации с лекарственными средствами, которые применяются для лечения рака и предотвращения рака.
Подразумевается, что каждая подходящая комбинация соединений настоящего изобретения с одним или больше из вышеупомянутых соединений и необязательно с одним или больше другими фармакологически эффективными веществами находится в области охраны настоящего изобретения.
Эффективность соединений формулы I настоящего изобретения тестировали в следующих системах ферментного анализа:
1. Исследование ингибирования ГЧЛ
1.1. Приготовление частично очищенных ГЧЛ.
Изолированные жировые клетки крыс получали из жировой ткани придатков яичка самцов крыс (породы Wistar, 220-250 г), не получавших лечение, путем обработки коллагеназой согласно опубликованным способам (например, S Nilsson et al., Anal. Biochem. 158, 1986, 399-407; G. Fredrikson et al., J. Biol. Chem. 256, 1981, 6311-6320; H. Tornquist et al., J. Biol. Chem. 251, 1976, 813-819). Жировые клетки от 10 крыс промывали три раза флотацией, каждый раз с 50 мл буфера гомогенизации (25 мл Tris/HCl, pH 7,4, 0,25 М сахарозы, 1 мМ этилендиаминтетрауксусной кислоты ЭДТА, 1 мМ дитиотреитола (ДТТ), 10 мкг/мл лейпептина, 10 мкг/мл обезболивающего средства, 20 мкг/мл пепстатина) и в итоге помещали в 10 мл буфера гомогенизации. Жировые клетки гомогенизировали в гомогенизаторе тефлон-в-стекле (Braun-Melsungen) в 10 приемов при 1500 об. в мин и 15°C. Гомогенизат центрифугировали (в пробирках Sorvall SM24, при 5000 об. в мин, в течение 10 минут при 4°C). Удаляли супернатант между слоем жира сверху и осадком, и повторяли центрифугирование. Затем получаемый супернатант снова центрифугировали (в пробирках Sorvall SM24, при 20000 об. в мин, в течение 45 минут при 4°C). Супернатант удаляли и добавляли 1 г гепарин-сефарозы (Pharmacia-Biotech, CL-6B, промывали 5 раз 25 мМ Tris/HCl, pH 7,4, 150 мМ NaCl). После инкубации при 4°C в течение 60 минут (с встряхиванием с интервалами в 15 минут) смесь центрифугировали (в пробирках Sorvall SM24, при 3000 об. в мин, в течение 10 минут при 4°C). pH супернатанта доводили до 5,2 путем добавления ледяной уксусной кислоты и инкубировали в течение 30 минут при 4°C. Осадки собирали посредством центрифугирования (Sorvall SS34, при 12000 об. в мин, в течение 10 минут при 4°C) и суспендировали в 2,5 мл 20 мМ Tris/HCl, pH 7,0, 1 мМ ЭДТА, 65 мМ NaCl, 13% сахарозы, 1 мМ ДТТ, 10 мкг/мл лейпептина/пепстатина/обезболивающего вещества. Суспензию подвергали диализу в течение ночи при температуре 4°C против 25 мМ Tris/HCl, pH 7,4, 50% глицерина, 1 мМ ДТТ, 10 мкг/мл лейпептина, пепстатина, обезболивающего вещества и затем загружали в гидроксиаппатитную колонку (0,1 г на 1 мл суспензии, уравновешенной фосфатом калия, 10 мМ, pH 7,0, 30% глицерина, 1 мМ ДТТ). Колонку промывали 4 объемами уравновешивающего буфера при скорости потока от 20 до 30 мл/ч. ГЧЛ элюировали одним объемом уравновешивающего буфера, содержащего 0,5 М фосфата калия, затем подвергали диализу (см. выше) и путем ультрафильтрации осуществляли 5-10-кратное концентрирование (фильтр Amicon Diaflo PM 10) при 4°C. Частично очищенный ГЧЛ можно было сохранять от 4 до 6 недель при температуре -70°C.
1.2. Исследование активности ГЧЛ.
2
2
3
Для получения субстрата смешивали 25-50 мкCi [3Н]триолеоилглицерина (в толуоле), 6,8 мкмоль немеченного триолеоилглицерина и 0,6 мг фосфолипидов (фосфатидилхолин/фосфатидилинозитол в соотношении веса к объему (в/о) 3:1), высушивали с N и затем помещали в 2 мл 0,1 М KPi (pH 7,0) путем обработки ультразвуком (Branson 250, microtip, установка 1-2, 2 раза × 1 минуту, с интервалом в 1 минуту). После добавления 1 мл KPi и повторной обработки ультразвуком (4 раза по 30 секунд на льду с интервалом 30 секунд) добавляли 1 мл 20% бычьего сывороточного альбумина БСА (в KPi) (конечная концентрация триолеоилглицерина 1,7 мМ). Для реакции 100 мкл раствора субстрата накапывали в 100 мкл раствора ГЧЛ (ГЧЛ готовили, как указано выше, разбавляли в 20 мМ Kpi, pH 7,0, 1 мМ ЭДТА, 1 м ДТТ, 0,02% бычьего сывороточного альбумина БСА, 20 мкг/мл пепстатина, 10 мкг/мл лейпептина) и инкубировали в течение 30 минут при 37°C. После добавления 3,25 мл метанола/хлороформа/гептана (10:9:7) и 1,05 мл 0,1 М KCO, 0,1 М борной кислоты (pH 10,5) осуществляли тщательное смешивание и конечное центрифугирование (800 × g, в течение 20 минут). После разделения фаз удаляли один эквивалент верхней фазы (1 мл) и определяли радиоактивность путем измерения сцинтилляционной жидкости.
1.3. Оценка ингибирующего действия ГЧЛ.
50
Обычно вещества тестируют в 4 независимых смесях. Ингибирование ферментативной активности ГЧЛ тестируемым веществом определяли путем сравнения с контрольной реакцией без ингибирования. Значения 50% ингибирующей концентрации IC расчитывали по кривой ингибирования, учитывая по меньшей мере 10 концентраций тестируемого вещества. Для анализа данных использовали программный пакет GRAPHIT, Elsevier-BIOSOFT.
2. Исследование ингибирования ЭЛ.
2.1. Получение ЭЛ.
Рекомбинантные клеточные линии (CHO, HEK293) в клеточной культуральной среде (в кондиционированной среде) высвобождают ЭЛ в качестве секреторного белка при высокой концентрации. После концентрирования его применяют в качестве раствора фермента.
2.2. Исследование активности ЭЛ.
sn
Фосфолипаза-специфический субстрат 1,2-бис(4,4-дифтор-5,7-диметил-4-бора-3a,4a-диаза-s-индацен-3-ундеканоил)--глицеро-3-фосфохолин (производства Molecular Probes) применяют для характеристики ферментативной активности эндотелиальной липазы и действия ингибиторов. Гидролиз A1-сложноэфирной связи этого фосфолипида с помощью фермента высвобождает флуоресцентный краситель Bodipy, который можно детектировать после разделения тонкослойной хроматографией на пластине HPTLC (силикагель 60, Merck) или непосредственно путем измерения флуоресценции в реакционном сосуде.
sn
Готовят раствор субстрата, взяв 100 мкг 1,2-бис(4,4-дифтор-5,7-диметил-4-бора-3a,4a-диаза-s-индацен-3-ундеканоил)--глицеро-3-фосфохолина (производства Molecular Probes), 2,4 мг трипалмитина (Sigma) и 7,9 мг DOP-холина (1,2-диолеоил-sn-глицеро-3-фосфохолин) в 393 мкл хлороформа, и последующего переноса 157 мкл в чистый реакционный сосуд. После выпаривания растворителя жидкую смесь растворяют в 4 мл 200 мм TRIS-HCl, 150 мМ хлорида натрия, pH 7,4, путем двукратной обработки ультразвуком. Последующая ферментативная реакция происходит в течение 60 минут при температуре 37°C. Для этого 45 мкл раствора субстрата инкубируют с 1 мкл ингибитора подходящей концентрации (растворенного в ДМСО, для контроля используют чистый раствор ДМСО) и 5 мкл ферментного раствора (кондиционированная среда). Затем 3 мкл тестируемой смеси помещают на пластину HPTLC (силикагель 60, Merck) и высвобождаемый флуоресцентный краситель выделяют для определения с помощью элюента (диэтиловый эфир: петролейный эфир: уксусная кислота [78:22:1]). После выпаривания элюента пластину считывают в сканере для детекции флуоресценции. Повышенное высвобождение флуоресцентного красителя в реакции ингибирования нужно считать мерой ферментативной активности.
2.3. Оценка ингибирующего действия ЭЛ.
50
В зависимости от применяемой концентрации ингибитора происходит снижение ферментативной активности, при этом ICобозначает концентрацию ингибитора, при которой наблюдается половина от максимальной ферментативной активности.
50
В этих исследованиях соединения указанных примеров показали следующие значения IC:
Пример
IC<sub>50</sub> [мкМ] ГЧЛ
IC<sub>50 </sub>[мкМ] ЭЛ
1
0,12
2
0,12
3
0,1
4
0,1
5
0,1
7
14,6
8
14,6
10
0,67
11
0,26
Способы получения
Получение соединений общей формулы I настоящего изобретения осуществляли, по существу, известными способами, например, ацилированием замещенных или незамещенных азолов II с карбамоилхлоридами III (способ A), или путем 2-стадийного взаимодействия азола II с фосгеном или эквивалентами, такими как трихлорметил хлоркарбонатом, дихлорметил карбонатом или 4-нитрофенил хлорформиатом и дополнительной реакции полученного производного азолкарбоновой кислоты с аминами IV (способ B). Для соединений, в которых R3 является водородом (формула Ia), азолы II также могут реагировать с подходящими изоцианатами V R2-N=C=O (способ C).
Поскольку в этих реакциях обычно освобождаются кислоты, рекомендуется добавлять основания, такие как пиридин, триэтиламин, раствор гидроокиси натрия или карбонаты щелочных металлов. Реакции можно проводить в широких температурных диапазонах. Показано, что обычно предпочтительно работать при температуре используемого растворителя в диапазоне от 0°C до точки кипения. Примерами используемых растворителей являются метиленхлорид, тетрагидрофуран ТГФ, диметилфталат ДМФ, толуол, этилацетат, n-гептан, диоксан, диэтиловый эфир или пиридин. При применении безводных условий также доказана пригодность сильных оснований, таких как гидрид лития, гидрид натрия или третичный бутоксид калия, в подходящих растворителях, таких как ТГФ или ДМФ.
Азолы, используемые в качестве исходных соединений II или соответствующие аза-замещенные производные, являются коммерчески доступными или возможными для изготовления посредством известных в литературе способов (например, K. Bowden, G. Crank, W, J. Roos, J.Chem.Soc. 1968, 172-185; T. Chiyoda, K. Iida, K. Takatori, M. Kajiwara, Synlett 2000, 10, 1427-1428; M.A. Khan, F.K. Rafla, J.Chem.Soc. 1975, 693-694).
Представленные ниже подробные примеры служат для иллюстрации настоящего изобретения, не ограничивая при этом его объем.
ПРИМЕРЫ
Пример 1:
6-хлорбензo[d]изоксазол-3-ил 4-метилпиперидин-1-карбоксилат
200 мг (1,18 ммоль) 6-хлорбензo[d]изоксазол-3-ола, 228,7 мг (1,41 ммоль) 4-метилпиперидин-1-карбонилхлорида и 164 мкл (2,36 ммоль) триэтиламина растворяли в 10 мл пиридина и перемешивали при комнатной температуре в течение 24 часов. Реакционную смесь концентрировали, остаток растворяли в воде и экстрагировали этилацетатом. Органическую фракцию концентрировали и очищали препаративной ВЭЖХ (PR18, ацетонитрил/вода, 0,1% трифторуксусной кислоты (ТФК). Выход составлял: 147 мг (42%), M+H+: 295,2.
Пример 2:
Изоксазолo[5,4-b]пиридин-3-ил 4-метилпиперидин-1-карбоксилат
125 мг (0,918 ммоль) изоксазоло[5,4-b]пиридин-3-ола, 178 мг (1,1 ммоль) 4-метилпиперидин-1-карбонилхлорида и 255 мкл (1,84 ммоль) триэтиламина растворяли в 10 мл пиридина и перемешивали в течение 4 часов при комнатной температуре. Дополнительно добавлялт 89 мг (0,55 ммоль) 4-метилпиперидин-1-карбонилхлорида и 128 мкл (0,92 ммоль) триэтиламина и продолжали перемешивание в течение 6 часов при комнатной температуре. Реакционную смесь концентировали, остаток растворяли в воде и экстрагировали этилацетатом. Органическую фракцию концентировали и очищали препаративной ВЭЖХ (PR18, ацетонитрил/вода 0,1% ТФК). Выход составлял: 101 мг (42%), M+H+: 262,1.
Пример 3:
6-хлорбензo[d]изоксазол-3-ил 4-трифторметилпиперидин-1-карбоксилат
Проводили реакцию, аналогичную примеру 1, в которой 200 мг (1,18 ммоль) 6-хлорбензo[d]изоксазол-3-ола подвергали взаимодействию с 305 мг (1,41 ммоль) 4-трифторметилпиперидин-1-карбонилхлорида. Выход: 229 мг (56%), M+H+: 349,05.
Пример 4:
Изотиазол[5,4-b]пиридин-3-ил 4-метилпиперидин-1-карбоксилат
Проводили реакцию, аналогичную примеру 1, в которой 60 мг (0,4 ммоль) изотиазол[5,4-b]пиридин-3-она подвергали взаимодействию с 76 мг (0,47 ммоль) 4-метилпиперидин-1-карбонилхлорида. Выход: 29 мг (27%), M+H+: 278,13.
Пример 5:
Бензo[d]изотиазол-3- ил 4-метилпиперидин-1-карбоксилат
Проводили реакцию, аналогичную примеру 1, в которой 45 мг (0,3 ммоль) бензo[d]изотиазол-3-она подвергали взаимодействию с 58 мг (0,36 ммоль) 4-метилпиперидин-1-карбонилхлорида. Выход: 26 мг (32%), M+H +: 277,14.
Пример 6:
1-гексил-3-(5-нитробензo[d]изотиазол-3-ил)мочевина
100 мг (0,513 ммоль) 5-нитробензo[d]изотиазол-3-иламина суспендировали в 5 мл ТГФ. После добавления 78,1 мг (0,61 ммоль) 1-изоцианатгексана смесь перемешивали при комнатной температуре (КТ) в течение 2 часов и при 70°C в течение 2 часов. Затем добавляли дополнительно 0,3 ммоль раствора 1-изоцианатгексана и перемешивание продолжали в течение 6 часов при 70°C. Реакционную смесь концентировали, остаток растворяли в воде и экстрагировали этилацетатом. Органическую фракцию концентировали и очищали препаративной ВЭЖХ (PR18, ацетонитрил/вода 0,1% ТФК). Выход: 18 мг (11%), M+H+: 323,15.
Пример 7:
1-(2-метилбензил)-3-(5-нитробензo[d]изотиазол-3-ил)мочевина
Проводили реакцию, аналогичную примеру 6, в которой 100 мг (0,51 ммоль) 5-нитробензo[d]изотиазол-3-иламина подвергали взаимодействию с 90,4 мг (0,61 ммоль) 1-изоцианатметил-2-метилбензолом. Выход: 11 мг (6%), M+H+: 343,16.
Пример 8:
1-бензo[d]изоксазол-3-ил-3-гексилмочевина
Проводили реакцию, аналогичную примеру 6, в которой 100 мг (0,75 ммоль) бензo[d]изоксазол-3-иламина подвергали взаимодействию с 114 мг (0,89 ммоль) 1-изоцианатгексана. Выход: 27 мг (14%), M+H+: 262,15.
Пример 9:
Изотиазоло[5,4-b]пиридин-3-ил 4-трифторметилпиперидин-1-карбоксилат
Проводили реакцию, аналогичную примеру 1, в которой 2,99 г (9,82 ммоль) изотиазоло[5,4-b]пиридин-3-ола подвергали взаимодействию с 2,33 г (10,81 ммоль) 4-трифторметилпиперидин-1-карбонилхлорида. Выход: 1,3 г (40%), M+H+: 332,09.
Пример 10:
6-хлоризоксазолo[5,4-b]пиридин-3-ил 4-метилпиперидин-1-карбоксилат
Проводили реакцию, аналогичную примеру 1, в которой 55 мг (0,32 ммоль) 6-хлоризоксазолo[5,4-b]пиридин-3-ола подвергали взаимодействию с 62,7 мг (0,39 ммоль) 4-метилпиперидин-1-карбонилхлорида. Выход: 22 мг (24%), M+H+: 296,04.
Пример 11:
6-метилизоксазолo[5,4-b]пиридин-3-ил 4-метилпиперидин-1-карбоксилат
Проводили реакцию, аналогичную примеру 1, в которой 140 мг (0,93 ммоль) 6-метилизоксазолo[5,4-b]пиридин-3-ола подвергали взаимодействию с 181 мг (1,12 ммоль) 4-метилпиперидин-1-карбонилхлорида. Выход: 135 мг (53%), M+H+: 276,10.