Способ выявления предрасположенности к развитию метаболического синдрома в виде ожирения у школьников 7-10 лет
METHOD FOR DETECTING PREDISPOSITION TO THE DEVELOPMENT OF METABOLIC SYNDROME IN THE FORM OF OBESITY IN SCHOOLCHILDREN AGED 7-10 YEARS

Изобретение относится к области медицины, а именно к педиатрии, детской эндокринологии, медицинской генетики, и связано с разработкой способа прогнозирования риска развития метаболического синдрома в виде ожирения.
Изобретение может быть использовано для постановки предварительного диагноза как в специализированных клиниках при обследовании пациентов, так и в обычных учреждениях здравоохранения.
К школьникам в возрасте 7-10 лет обычно относят детей допубертатного периода, т.е. тех, для которых этап полового созревания еще не наступил.
Метаболический синдром (МС) относится к группе многофакторных заболеваний, в развитии которых важную роль играет наследственная предрасположенность. Ранняя диагностика, выявление групп риска и профилактика метаболического синдрома являются социально значимой проблемой современной медицины, так как заболевание может приводить к ухудшению качества жизни, ранней инвалидизации и преждевременной смертности. Заболеваемость метаболическим синдромом демонстрирует неуклонный рост во многих развитых странах, в том числе и России. По результатам эпидемиологических исследований, в Российской Федерации распространенность избыточной массы тела у детей в разных регионах России колеблется от 5,5 до 11,8%, а ожирением страдают около 5,5% детей, проживающих в сельской местности, и 8,5% детей - в городской. Ожирение и избыток массы тела (согласно Международной классификации болезней МКБ-10: Е66.0-Е67.8) в последние годы впервые вышли на первое место и составили 10,98%.
Высокая вариабельность распространенности метаболического синдрома в виде ожирения в первую очередь связана с неоднозначностью диагностических критериев. Несмотря на многочисленные исследования, до сих пор нет четкого представления о причинах возникновения метаболического синдрома в виде ожирения, отсутствуют точные сведения о патогенезе заболевания, и как следствие, не разработаны общепризнанные диагностические критерии, нет единого мнения о способах прогнозирования развития и оценки риска возникновения синдрома.
В настоящее время существуют клинико-лабораторные способы оценки предрасположенности к развитию метаболического синдрома в виде ожирения, а также способы с использованием генетических прогностических критериев.
Клинико-лабораторные способы оценки предрасположенности к развитию метаболического синдрома следующие:
- «Критерии метаболического синдрома у детей и подростков» (Международная Диабетическая Федерация) (Zimmet P., Alberti G., Kaufman F. et al. The metabolic syndrome in children and adolescents // Diabetes Voice. 2007. Vol. 52, №4. P. 29-32), согласно которому метаболический синдром диагностируется у детей с 10 лет при наличии абдоминального ожирения и двух и более из следующих признаков: повышения уровня триглицеридов ≥1,7 ммоль/л, глюкозы ≥5,6 ммоль/л или диагностированный СД 2 типа, нарушение толерантности к глюкозе, повышение уровня артериального давления (АД) ≥130/85 мм рт.ст., снижение холестерина липопротеидов высокой плотности (ХС ЛПВП) <1,03 ммоль/л.
- известен (Синицын П.А., Щербакова М.Ю., Ларионова В.И. и др. Метаболический синдром у детей // Педиатрия. 2008. Т. 87, №5. С. 124-126) способ диагностики метаболического синдрома с применением центильного метода: окружность живота >75-го центиля, АД >90-го центиля по полу возрасту и росту, а также триглицеридемия >1,1 ммоль/л, снижения уровня ХС ЛПВП <1,3 ммоль/л, повышения уровня глюкозы натощак >6,1 ммоль/л.
- известен способ прогнозирования прогрессирования абдоминального ожирения у больных метаболическим синдромом, при котором в крови определяется уровень С-пептида (Патент РФ №2297002). При его значении более 3,5 нг/мл прогнозируют прогрессирование абдоминального ожирения. Однако данный известный способ учитывает риск прогрессирования ожирения только в случаях метаболического синдрома и не рассматривает таковую вероятность задолго до метаболических нарушений, что снижает его прогностическую ценность и возможность использования в доклинический период.
Недостатками известных способов является то, что данные способы не учитывают генетическую предрасположенность к развитию метаболического синдрома и не включают идентификацию генов-кандидатов, полиморфизм которых лежит в основе формирования избыточного веса при этом синдроме.
Известен способ оценки риска метаболического синдрома, основанный на выявлении генотипа 4G/4G (вариант - 675 4G/5G) по гену РА1. Он нацелен на формирование группы риска, но не позволяет проводить дифференциальную диагностику (Berberoglu) М. et al. Plasminogen activator inhibitor (PAI-1) gene polymorphism (-675 4G/5G) associated with obesity and vascular risk in children. J/ Pediatr. Endocrinol Metab. 2006 May; 19(5):741-8).
Также из уровня техники известны генетические способы выявления предрасположенности к ожирению в условиях воздействия различных вредных химических веществ. Например, из патента РФ №2700565 известен «Способ определения предрасположенности к развитию ожирения у детей в условиях избыточной контаминации алюминием», в котором в качестве генетических критериев используют полиморфизм гена MTNR1B (rs 10830963) и гена SIRT1 (rs 7069102). А из патента РФ №2619872 известен способ оценки индивидуального риска формирования избыточной массы тела и ожирения у детей, потребляющих питьевую воду с повышенным содержанием хлороформа и тетрахлорметана, согласно которому риск формирования у ребенка избыточной массы тела прогнозируют в случае повышения уровня общего холестерина выше 3,9 ммоль/л и уровня ЛПНП выше 1,8 ммоль/л, наличия у ребенка 6 и более баллов при анамнестическом обследовании, наличия гетерозиготного генотипа гена HTR2A rs7997012, повышения концентрации тетрахлорметана в крови выше референтной и концентрации хлороформа в пределах 5,17-5,59 мкг/л.
Однако указанные известные способы, во-первых, устанавливают состоявшееся ожирение ребенка, т.е. не на ранних стадиях метаболических нарушений, а во-вторых, применимы только при ассоциации этого ожирения с наличием вредных токсикантов в воздухе или в воде.
Наиболее близким к предлагаемому изобретению является способ оценки риска развития метаболического синдрома (МС) у детей на основе генетических и биохимических маркеров (Патент РФ №2492485). Согласно этому способу, после исследования биохимических показателей HOMA-IR проводят исследование коэффициента атерогенности (КА). По коэффициенту 3хКА+HOMA-IR делают вывод о развитии метаболического синдрома (МС) и выявлении группы риска развития заболевания среди детей. Диапазон значений коэффициента до 10 соответствует здоровым детям; от 10 до 14,5 - дети с отдельными метаболическими нарушениями и ожирением; выше 14,5 - диагностируют МС. В группе детей со значениями, посчитанными по формуле больше 10, но меньше 14,5, дополнительно определяют риск МС с помощью метода ПЦР участков гена метилентетрагидрофолатредуктазы (MTHFR) с дальнейшей обработкой эндонуклеазами рестрикции и при выявлении генотипа С/Т полиморфного варианта 677С/Т гена MTHFR таких детей относят к группе риска по развитию МС. При этом известный способ может быть использован и для детей - школьников допубертатного периода.
Недостатком указанного способа является то, что в основе диагностического блока данного методического подхода к идентификации метаболического синдрома лежит определение индекса HOMA-IR и коэффициента атерогенности (КА), которые характеризуют уже наличие (факт) биохимических изменений углеводного и жирового обменов, то есть отнести данные нарушения к ранним нельзя - показатели энергетического обмена авторами не учитываются, а определение полиморфности гена MTHFR будет характеризовать только предрасположенность к гипергомоцистеинемии и фолиевой анемии, т.е. к состояниям, не имеющим прямого отношения к ожирению (в перечень ассоциаций с заболеваниями полиморфных вариантов 677С/Т гена MTHFR ожирение и метаболический синдром не входят).
Кроме того, используемые биохимические и генетические маркеры развития болезней, ассоциированных с ожирением, не характеризуют как функциональную, так и пролиферативную активность самих адипоцитов - клеток жировой ткани, без реализации которых формирование метаболического синдрома не состоится.
Технический результат, достигаемый предлагаемым изобретением, заключается в обеспечении достоверности выявления предрасположенности к развитию метаболического синдрома в виде ожирения у школьников 7-10 лет, т.е. в возрасте допубертатного периода, с обеспечением возможности в последующем судить о развитии таких состояний у детей уже на ранних стадиях их формирования.
3
Указанный технический результат достигается предлагаемым способом выявления предрасположенности к развитию метаболического синдрома в виде ожирения у школьников 7-10 лет, включающий использование в качестве диагностического критерия наличие полиморфизма генов, при этом новым является то, что отбирают у пациента пробу буккального эпителия и осуществляют выделение из указанной пробы дезоксирибонуклеиновой кислоты ДНК, затем на детектирующем амплификаторе с использованием полимеразной цепной реакции ПНР проводят генотипирование полиморфизма генов ТР53 и IL1β, используя в качестве праймера участок ДНК путем исследования генотипов гена ТР53 (rs 1042522) и гена IL1β (rs1143634), в пробе крови ребенка определяют содержание транскрипционного фактора р53 и уровень интерлейкина 1β и при одновременном выполнении следующих условий: наличия комбинации GG генотипа гена ТР53 (rs1042522), а также генотипа СС гена IL1β (rs1143634), понижения уровня транскрипционного фактора р53 в крови по сравнению с нижней границей физиологической нормы, равной 12-18%, в 1,4 и более раз, и повышения уровня интерлейкина 1β по сравнению с верхней границей физиологической нормы, равной 0-5 пг/см, в 1,4 и более раз, оценивают предрасположенность к развитию метаболического синдрома в виде ожирения у школьников 7-10 лет как высокую.
Предлагаемый технический результат достигается благодаря следующему.
В качестве критериев реализации предрасположенности к развитию метаболического синдрома в виде ожирения у школьников 7-10 лет допубертатного периода рекомендуется использовать генотипы генов-кандидатов: генотип GG (вариантная гомозигота) гена транскрипционного фактора ТР53 (rs1042522), генотип СС (дикая гомозигота) гена интерлейкина 1 бета - IL1β (rs1143634), а также - сами протеины, экспрессируемые генами-кандидатами, а именно: транскрипционный фактор р53, отвечающий за контроль за избыточной клеточной пролиферацией, и основной провоспалительный цитокин интерлейкина 1 бета, ответственный за все фазы воспалительного процесса, в том числе, пролиферацию, характеризующие сам феномен развития негативных обменных событий формирования избыточного количества адипоцитов, жировой ткани, веса тела у пациентов, ассоциированных с превышением нормальных значений величины стандартных отклонений индекса массы тела (ИМТ) больше 1.
Ген ТР53 кодирует белок, участвующий в процессах ареста клеточного деления, апоптоза, физиологического старения клеток и репарации ДНК. Изменение структуры белка-продукта гена, а также изменение уровня экспрессии ТР53 приводит к нарушению выполнения белком вышеперечисленных функций, что и сопровождается значительным увеличением риска злокачественного роста количества клеток, как дифференцированных, так и недифференцированных. Аллельное состояние гена предусматривает следующие его состояния: гетерозиготное - GC, или дикое гомозиготное - СС, или вариантное гомозиготное - GG.
Ген интерлейкина 1 бета - IL1β (rs1143634) кодирует цитокин IL-1-бета семейства интерлейкина 1 (IL-1), участвующий в регуляции иммунных реакций, воспалительных процессов. Его возможные генотипы: СС - дикий гомозиготный генотип, СТ - гетерозиготный генотип, ТТ - вариантный гомозиготный генотип.
Результаты генетического анализа у школьников группы наблюдения (SDS ИМТ>1) (SDS - Standard Deviation Score - коэффициент стандартного отклонения; ИМТ - индекс массы тела) и группы сравнения (SDS ИМТ<1) позволили выявить ключевые гены, распространенность полиморфизмов которых достоверно отличалась между группами (р<0,05).
Ученики начальной школы с повышенным индексом массы тела SDS ИМТ>1 характеризуются наличием достоверного риска развития метаболического синдрома, связанного с полиморфизмом:
- гена транскрипционного фактора ТР53 rs1042522 (вариантная гомозигота, мультипликативная модель: OR (отношение шансов)=1,41; CI95 (доверительный интервал с уровнем доверия 95%)=0,83-2,39, р (уровень значимости или достоверность различий)=0,0363), полиморфизм отменяет супрессию клеточного роста;
- гена IL1β rs1143634 (дикая гомозигота, общая модель наследования: OR=1,81; CI95=0,82-3,54, р=0,049), кодирует экспрессию одноименного цитокина, ассоциация с жировой массой тела - носители аллеля Т (генотипы ТТ и СТ) имеют меньшую жировую массу тела по сравнению с носителями генотипа СС.
В настоящее время показано, что нуклеотидные замены в генах IL1A и IL1B могут приводить к изменению характера их экспрессии.
Выявлен ряд точечных маркеров высокопродуцирующего варианта гена IL1B. У лиц, несущих два или один аллель Т (т.е. гомо- или гетерозиготных по высокопродуцирующему аллелю IL1β C (rs1143634)Т), синтезируется, соответственно, в 4 и 2 раза большее количество этого цитокина, чем у лиц, гомозиготных по основному С-аллелю. Влияние полиморфизма гена на характер воспаления можно описать в виде следующих тенденций: носительство неизмененных вариантов гена определяет адекватную продукцию соответствующих белков и регуляцию воспалительного процесса; у носителей аллеля Т воспаление протекает намного активнее.
Благодаря использованию в качестве исследуемого материала проб крови, а также стандартных методик изучения генетических параметров, обеспечивается простота, надежность и доступность исследований, а также получение результатов нужной информативности.
Благодаря использованию в качестве исследуемого материала буккального эпителия (пробы биологического материала со слизистой щеки), обеспечивается простота и надежность исследований, а также получение нужной информативности в плане выделения из указанной пробы дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК) и посредством полимеразной цепной реакции (ПЦР) проведения генотипирования полиморфизма указанных генов TP53 и гена IL1β. При этом предлагается использовать в качестве праймера участок ДНК гена TP53 (rs1042522) и гена IL1β (rs1143634), устанавливая при этом для каждого гена одно из следующих его состояний: гетерозиготное, или дикое гомозиготное, или вариантное гомозиготное.
Причем из уровня техники неизвестны методы выявления предрасположенности к развитию метаболического синдрома в виде ожирения у детей - школьников возраста 7-10 лет (допубертатного периода) с использованием одновременно именно полиморфизмов этих генов.
Таким образом, при оценке высокой степени предрасположенности к развитию болезней ассоциированных с ожирением у школьников 7-10 лет допубертатного периода в предлагаемом способе рекомендуется использовать следующие критерии:
- одновременное наличие комбинации GG генотипа гена ТР53 (rs1042522), а также генотипа СС гена IL1β (rs1143634),
- понижение уровня транскрипционного фактора р53 в крови по сравнению с нижней границей физиологической нормы, равной 12-18%, в 1,4 и более раз,
3
- повышение уровня интерлейкина 1β по сравнению с верхней границей физиологической нормы, равной 0-5 пг/см, в 1,4 и более раз.
Именно благодаря расширению информационных показателей, связанных с полиморфными вариантами указанных генов, ассоциированных с генетическим дефектом экспрессии транскрипционных и иммунных факторов продукции жировых клеток (адипоцитов), будет обеспечена точность потенциального появления болезней ассоциированных с ожирением у ребенка.
Исходя из вышеизложенного, можно сделать вывод, что поставленный технический результат обеспечивается за счет совокупности операций предлагаемого способа, их последовательности и режимов его реализации.
Предлагаемый способ реализуется следующим образом.
1. Проводят отбор группы школьников допубертатного возраста (7-10 лет) одной этнической популяции. Затем проводят отбор пробы крови у обследуемого ребенка - для определения содержания уровня транскрипционного фактора р53 в крови и уровня интерлейкина 1β. Содержание указанных показателей определяют: 1) транскрипционный внутриклеточный фактор р53 - методом Проточной цитометрии по Методике, изложенной в материалах статьи Francis С., Connelly M.C. Rapid single-step method for flow cytometric detection of surface and intracellular antigens using whole blood. Cytometry. 1996 Sep 1;25(1):58-70. doi: 10.1002/(SICI) 1097-0320(19960901)25: 1<58:: AID-C YT07>3.0.CO;2-A.
3
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/8875055/; 2). содержание интерлейкина 1β методом ИФА, согласно инструкции к набору реагентов для иммуноферментного определения концентрации интерлейкина-1 бета в сыворотке крови А-8766 «Интерлейкин-1 бета-ИФА-БЕСТ». Устанавливают, имеется ли превышение концентрации транскрипционного фактора р53 в крови и уровня интерлейкина 1β в пробе крови над их физиологической нормой (физиологическая норма р53 равна 12-18%; физиологическая норма интерлейкина 1β равна 0-5 пг/см).
2. Также у указанного ребенка отбирают пробу буккального эпителия (в виде мазка со слизистой оболочки щеки). После забора материала тампон (рабочую часть зонда с ватным тампоном) помещают в стерильную пробирку типа «Эппендорф» с 500 мкл транспортной среды (стерильный 0,9%-ный раствор NaCl). Пробирку с раствором и рабочей частью зонда закрывают.
Далее производят выделение ДНК из пробы. Для этого пробы в количестве 100 мкл лизируют 300 мкл лизирующего раствора, представляющего собой 0,5%-ный раствор саркозила и протеиназы К (20 мг/мл) в ацетатном буфере (рН 7,5). Затем добавляют сорбент (каолин) и последовательными процедурами промывки отмывают фосфатно-солевым буфером (рН 7,2) пробы от белков и смесью изопропиловый спирт: ацетон от липидов. Нуклеиновые кислоты остаются при этом на сорбенте. Далее адсорбированные на сорбенте ДНК из пробы экстрагируют ТЕ-буфером, представляющим собой смесь 10 мМ трис-HCl и 1 мМ ЭДТА (рН 8,0). Экстракт подвергают центрифугированию. После центрифугирования пробирки надосадочная жидкость содержит очищенную ДНК.
Полученный материал готов к постановке полимеразной цепной реакции (ПЦР). ПЦР проводят на детектирующем амплификаторе с гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме «реального времени» с использованием готовых наборов праймеров и зондов производства ЗАО «Синтол», Россия, в котором в качестве праймеров использовались участки ДНК гена ТР53 (rs1042522) и гена IL1β (rs1143634).
2
Проводят реакцию амплификации, это достигается тем, что для исследования аллельного состояния каждого гена у отдельного ребенка готовят свою реакционную смесь. В каждую пробирку вносят 0,1 мкл готовой смеси праймеров (принятый в генетике термин, обозначающий конечные нуклеотиды с меткой, ограничивающие (отрезающие) амплифицируемую цепочку нуклеотидов гена) и зондов для выбранных генов TP53 (rs1042522) и гена IL1β (rs1143634) (использованы Наборы реагентов для определения полиморфизма ТР53 (rs1042522) и гена IL1β (rs1143634) ЗАО «Синтол», Россия). В каждую пробирку добавляют остальные компоненты необходимые для осуществления ПЦР: нуклеотиды (дезоксинуклеозидтрифосфаты: по 10 мМ дАТФ, дТТФ, дГТФ, дЦТФ), буфера (100 мМ трис-HCl-буфера, 500 мМ KCl, 40 мМ MgCl) и Tag F-полимеразы. Вносят пробу в количестве 10 мкл. Таким образом, общий объем реакционной смеси составляет 25 мкл. Каждая пробирка плотно закрывается пробкой и устанавливается в амплификатор.
При проведении ПЦР амплификацию и детекцию проводят на детектирующем амплификаторе CFX96 фирмы Bio-Rad.
Используется универсальная программа амплификации, подобранная производителем реактивов. Она включает в себя несколько этапов: 1 этап - активация TaqF-полимеразы (режим «горячего старта») продолжается 15 мин при 95°С; 2 этап - установочные циклы амплификации без измерения флуоресценции (5 циклов); 3 этап - рабочие циклы амплификации с измерением флюоресценции (40 циклов).
Каждый цикл амплификации включает в себя денатурацию ДНК (5 с при 95°С), отжиг праймеров (20 с при 60°С) и саму реакцию полимеризации ДНК (15 с при 72°С).
Регистрация сигнала флюоресценции, возникающего при накоплении продуктов амплификации участков ДНК проводится в режиме «реального времени» после стадии отжига праймеров для выбранных генов по каналу VIC - для детекции одного из аллельных вариантов генов, и по каналу FAM - для альтернативного варианта.
Результаты интерпретируются на основании наличия (или отсутствия) пересечения кривой флюоресценции с установленной на заданном уровне пороговой линией, что соответствует наличию (или отсутствию) значения порогового цикла (N) в соответствующей графе в таблице результатов, отображаемой в программном обеспечении для амплификатора CFX96.
По соотношению пороговых циклов, полученных по двум каналам детекции, определяют состояние гена ТР53 в исследуемом участке ДНК rs1042522, а также гена IL1β в исследуемом участке ДНК rs1143634 (метод аллельной дискриминации). Возможных вариантов состояния гена было два: гомозиготное - в случае, когда одно из значений порогового цикла не определяется (ниже пороговой линии) и гетерозиготное - в случае, когда получено два значения пороговых циклов и по этим каналам получены параболические кривые флюоресценции. В зависимости от того, накопление какого продукта амплификации происходит в реакции, устанавливается гетерозиготное, или дикое гомозиготное, или вариантное гомозиготное состояние гена ТР53 (rs1042522) и гена IL1β (rs1143634).
3
3. И при выполнении следующих условий: при одновременном наличии комбинации GG генотипа гена ТР53 (rs1042522), а также генотипа СС гена IL1β (rs1143634), понижении уровня транскрипционного фактора р53 в крови по сравнению с нижней границей физиологической нормы, равной 12-18%, в 1,4 и более раз, и повышении уровня интерлейкина 1β по сравнению с верхней границей физиологической нормы, равной 0-5 пг/см, в 1,4 и более раз, делают вывод о высокой предрасположенности к развитию метаболического синдрома в виде ожирения у школьников 7-10 лет допубертатного периода.
При проведении испытаний по реализации предлагаемого способа были сформированы две группы: группа наблюдения: школьники начальных классов возраста 7-10 лет, у которых установлено превышение нормальных значений величины стандартных отклонений индекса массы тела (SDS ИМТ>1), и группа сравнения также из детей - школьников начальных классов, с нормальной массой тела (SDS ИМТ<1). В группу наблюдения вошли 52 ребенка (средний возраст 8,3±1,1 года; 27 мальчиков и 25 девочек). В группу сравнения вошел 78 ребенок (средний возраст 8,5±1,0 года; 36 мальчиков и 42 девочек). Группы исследования были сопоставимы по возрасту, полу, этническому составу, сопутствующей патологии, социально-экономическому уровню семьи, качеству и составу питания.
У всех обследуемых детей была взята проба венозной крови, исследование которых проводилось по вышеуказанной схеме. Также была взята проба буккального эпителия для установления по реакции ПЦР полиморфизма исследуемых генов.
Данные, полученные в результате исследований для детей из группы наблюдения и группы сравнения, приведены в таблице 1.
Для иллюстрации реализации предлагаемого способа приведены два примера по конкретным пациентам одного возраста и этнической принадлежности из группы детей с превышением допустимой величины стандартных отклонений индекса массы тела (SDS ИМТ>1).
3
3
Пример 1. Пациент, 9 лет, русский, избыточная масса тела, SDS ИМТ=3,12. Установлено наличие вариантного гомозиготного генотипа гена ТР53 rs1042522 - GG и дикого гомозиготного генотипа гена IL1β rs1143634 - СС. Значение содержания транскрипционного фактора р53: 6,0%, т.е. в 2,0 раза ниже нижней границы нормы (12-18%). Содержание интерлейкин-1 бета в сыворотке крови - маркера интенсивности и активации клеточных пролиферативных сценариев, 9,9 пг/см, т.е. выше почти в 2 раза верхней границы диапазона нормы (0-5 пг/см). Таким образом, установлены высокие значения уровня провоспалительного цитокина интерлейкин-1 бета и дефицит транскрипционного фактора р53 на фоне полиморфизма кандидатных генов - наличие дикого гомозиготного генотипа гена IL1β rs1143634 - СС, кодирующего протеины, ответственные за клеточную пролиферацию и экспрессию эволюционно активационных белков, таких как интерлейкин-1 бета, который сопряжен с избыточной клеточной активностью, в том числе, адипоцитов и избыточным весом, а также наличием вариантного гомозиготного генотипа гена ТР53 rs1042522 - GG, ассоциированного с недостаточным контроллингом клеточной пролиферации, в том числе, адипоцитов и избыточностью роста жировой ткани, что в совокупности указывает на наличие генетической предрасположенности к избытку веса и ее реализацию на ранних этапах формирования болезней ассоциированных с ожирением.
Это говорит о том, что, согласно предлагаемому способу, у данного ребенка состояние в условиях полиморфизма кандидатных генов ТР53 rs1042522 и IL1β rs1143634 оценивается, как формирование ранних нарушений и вероятность развития болезней ассоциированных с ожирением, имеющих генетическую предрасположенность.
3
3
3
3
Для доказательства данного вывода, были установлены следующие показатели метаболизма у данного ребенка, которые имели следующие значения: уровень глюкозы - 5,9 ммоль/дм (физиологическая норма 3,3-5,5 ммоль/дм); уровень ЛПНП - 4,6 ммоль/дм (норма 1,5-3,9 ммоль/дм).
Анализируя представленные данные, можно сделать вывод, что у пациента имеются изменения в углеводном и жировом обменах, в частности, наличие избыточного содержания глюкозы и липопротеидов низкой плотности (ЛПНП), которое характеризует наличие ранних нарушений в виде накопления клеточного материала жировой ткани, повышения функциональной активности адипоцитов и отсутствия генетических ограничений и контроллинга клеточного роста со стороны специализированных транскрипционных факторов, что запускает процессы ведущие к формированию избыточной массы тела и ожирению.
3
3
Пример 2. Пациент, 10 лет, русский, избыточной массы тела не наблюдается, SDS ИМТ<1,0. Установлено наличие дикого гомозиготного генотипа гена ТР53 rs1042522 - СС и вариантного гомозиготного генотипа гена IL1β rs1143634 - ТТ. Значение содержания транскрипционного фактора р53: 12,9%, т.е. в пределах границы нормы (12-18%). Содержание интерлейкин-1 бета в сыворотке крови -3,1 пг/см, т.е. в пределах границ диапазона нормы (0-5 пг/см). Таким образом, отсутствие полиморфизма гена ТР53 rs1042522 и редкий генотип гена IL1β rs1143634 ТТ, связанный с минимальным уровнем жировой ткани, на фоне соответствия границам нормы уровня активационного провоспалительного цитокина интерлейкина-1 бета и адекватного уровня супрессора клеточного роста транскрипционного протеина р53, не приводит к развитию негативных эффектов в виде превышения уровня SDS ИМТ>1, то есть в отсутствии негативной генетической программы не происходит избыточного роста массы тела и жировой ткани и не формируются признаки ожирения у данного пациента.
3
3
3
3
Таким образом, Для доказательства точности данного вывода - отсутствия нарушений углеводного и жирового обменов, были установлены следующие показатели метаболизма у данного ребенка, которые имели следующие значения: уровень глюкозы - 4,9 ммоль/дм (физиологическая норма 3,3-5,5 ммоль/дм); уровень ЛПНП - 3,0 ммоль/дм (норма 1,5-3,9 ммоль/дм).
Анализируя представленные данные, можно сделать вывод, что у обследуемого пациента отсутствуют нарушения жирового обменов. Таким образом, при анализе генетических маркеров и их эффектов, метаболизма изменений показателей, способствующих избыточному росту клеток жировой ткани, а также увеличение индекса, характеризующего наличие ранних признаков ожирения, выявлено не было.
Таким образом, приведенные данные показывают, что при реализации предлагаемого способа с использованием предлагаемых критериев обеспечивается его назначение.