КОМПОЗИЦИЯ И СПОСОБЫ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОГО ПЕРЕНОСА ГЕНОВ С ПОМОЩЬЮ ВАРИАНТОВ КАПСИДА AAV

1. Улучшенный вектор на основе аденоассоциированного вируса (AAV), содержащий капсидный белок VP1, который содержит одну или несколько замен лизина, при этом упомянутый вектор дополнительно содержит миниген, содержащий инвертированные концевые повторы AAV и гетерологичную последовательность нуклеиновой кислоты, функционально связанную с регуляторными последовательностями, которые направляют экспрессию продукта из гетерологичной последовательности нуклеиновой кислоты в клетку-хозяин, и упомянутая замена лизина является эффективной для ингибирования убиквитинирования упомянутого капсидного белка, и тем самым увеличивается трансдукция упомянутого вектора AAV в клетке-мишени.
2. Вектор AAV по п. 1, имеющий серотип, выбираемый из группы, состоящей из AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV-rh74, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8 и AAV9.
3. Вектор AAV по п. 1, содержащий капсидный белок VP1, который несет по меньшей мере одну замену лизина в остатке лизина, что показано в таблицах, при этом по меньшей мере одна упомянутая замена увеличивает эффективность трансдукции.
4. Вектор AAV по п. 2, содержащий измененный AAV8 капсидный белок VP1, выбираемый из группы, состоящей из AAV8 K137R, AAV8 K333R и AAV8 K530R.
5. Вектор AAV согласно любому из предыдущих пунктов, при этом продукт экспрессии гетерологичной последовательности нуклеиновой кислоты представляет собой терапевтический пептид или нуклеиновую кислоту.
6. Вектор AAV по п. 5, при этом терапевтический пептид представляет собой фактор свертывания крови, выбираемый из группы, состоящей из фактора VIII, фактора IX или их функционального фрагмента.
7. Вектор AAV по п. 4, при этом продукт экспрессии гетерологичной последовательности нуклеиновой кислоты представляет собой IgG, IgM, IgA, IgD, IgE, химерный иммуноглобулин, гуманизированное антитело или одноцепочечное антитело.
8. Вектор AAV8 по п. 7, при этом продукт экспрессии гетерологичной последовательности нуклеиновой кислоты представляет собой химерный иммуноглобулин.
9. Вектор AAV8 по п. 4, при этом продукт экспрессии гетерологичной последовательности нуклеиновой кислоты представляет собой одноцепочечное антитело.
10. Вектор AAV по п. 5, при этом продукт экспрессии представляет собой противовирусную РНКи.
11. Вектор AAV по п. 10, при этом ингибирующая РНК является эффективной для ингибирования инфекции и репликации HCV.
12. Вектор AAV по п. 10, при этом ингибирующая РНК является эффективной для ингибирования экспрессии эукариотического гена-мишени.
13. Вектор AAV по п. 4, при этом трансген кодирует цитокин, модифицирующий заболевание.
14. Вектор AAV по п. 4, при этом трансген кодирует пару нуклеаз цинковых пальцев.
15. Вектор AAV по п. 1, содержащий 2, 3 или 4 замены лизина.
16. Вектор AAV по п. 3, дополнительно содержащий второй вектор AAV, который содержит капсидный белок VP1, имеющий по меньшей мере одну замену лизина в остатке лизина, что показано в таблицах, при этом упомянутая замена уменьшает эффективность трансдукции, и доставка упомянутого второго вектора AAV является эффективной для нейтрализации ответа антитела на первый вектор AAV.
17. Фармацевтическая композиция, содержащая вектор AAV по п. 3 и физиологически совместимый с ним носитель.
18. Культура клеток, содержащая вектор AAV по п. 1.
19. Способ доставки трансгена в клетки субъекта, при этом упомянутый способ содержит стадию приведения клетки в контакт с фармацевтической композицией по п. 17, в которой упомянутый вектор AAV содержит трансген, при этом присутствие упомянутой замены лизина в упомянутом капсидном белке VP1 связано со снижением убиквитинирования упомянутого капсида, тем самым увеличивая эффективность трансдукции клеток-мишеней с упомянутым вектором.
20. Способ по п. 19, в котором упомянутым трансгеном является фактор IX.
21. Фармацевтическая композиция, содержащая векторы AAV по п. 16 и физиологически совместимый с ними носитель.
22. Способ доставки трансгена в клетки субъекта, при этом упомянутый способ содержит стадию приведения клетки в контакт с фармацевтической композицией по п. 21, в которой упомянутый первый вектор AAV содержит трансген, при этом присутствие упомянутой замены лизина в упомянутом капсидном белке VP1 связано со снижением убиквитинирования упомянутого капсида, тем самым увеличивая эффективность трансдукции клеток-мишеней с упомянутым вектором, и упомянутый второй вектор проявляет уменьшенную эффективность трансдукции по сравнению с вектором дикого типа и является эффективным для нейтрализации нежелательного ответа антитела на упомянутый первый вектор AAV.
23. Способ по п. 22, в котором упомянутым трансгеном является фактор IX.