Влияние различий донора и реципиента по тромбоцитспецифическим антигенам на длительность нейтропении и тромбоцитопении у больных после алломиелотрансплантации

ВЛИЯНИЕ РАЗЛИЧИЙ ДОНОРА И РЕЦИПИЕНТА ПО ТРОМБОЦИТСПЕЦИФИЧЕСКИМ АНТИГЕНАМ НА ДЛИТЕЛЬНОСТЬ НЕЙТРОПЕНИИ И ТРОМБОЦИТОПЕНИИ ______У БОЛЬНЫХ ПОСЛЕ АЛЛОМИЕЛОТРАНСПЛАНТАЦИИ_________________

Л.Л. Головкина, P.M. Кутьина

ГУ Гематологический научный центр PAMH, Москва

Цель исследования — изучить влияние различий реципиента и донора по тромбоцитспецифическим антигенам системы HPA (Human Platelet Antigens) на длительность нейтропении и тромбоцитопении после трансплантации гемопоэтических стволовых клеток (ГСК).

Материалы и методы. В исследование включены 40 пациентов в возрасте от 19 до 55 лет (медиана — 28,5) после алломиелотранспланта-ции от Human Leucocyte Antigens (HLA) идентичных сибсов (соотношение мужчины — женщины 1:1). Для большинства больных (94%) источником ГСК был костный мозг. Кондиционирование проводили в миелоаблативном (n=28 больньа) режиме и режиме пониженной интенсивности (n=12 больных). О начале выхода больных из агранулоцитоза после трансплантации ГСК судили по достижению значения числа нейтрофилов >0,5х10’/л. Счалом восстановления количества тромбоцитов периферической крови считали достижение значения 50х109/л после прекращения трансфузий тромбоцитсодержащих сред. Идентификацию 8аллельных генов «а» и «b» локусов HPA-1, -2, -3 и -5выполняли методом полимеразной цепной реакции с использованием аллельспецифических праймеров. Серологическое HLA-типирование проводили в микролимфоцитотоксическом тесте с применением панелей специфических сывороток.

Результаты. Основным критерием распределения больных на группы — HPA-идентичные (1-я группа), HPA-совместимые (2-я группа) и HPA-несовместимые (3-я группа) — являлась идентичность или качественная характеристика различия их с донором ГСК по HPA-генам с точки зрения непривнесения нового антигена системы HPA c трансплантированными ГСК. Показано, что у больных, которым трансплантировали стволовые клетки от HPA-идентичного/совместимого донора, восстановление числа нейтрофилов и тромбоцитов происходило быстрее по сравнению с пациентами, которым алломиелотрансплантация выполнена от HPA-несовместимого донора. У реципиентов первых двух групп длительность агранулоцитоза составила 13,45 и 14,3 дня; у реципиентов 3-й группы — 19 дней. Эта закономерность проявлялась независимо от режима кондиционирования и формы лейкоза. Восстановление количества тромбоцитов происходило в более короткие сроки у больных 1-й (16,22 дня) и 2-й (18,2 дня) групп по сравнению с пациентами 3-й группы (24,2 дня).

Заключение: несовместимость по HPA может влиять на длительность восстановления нейтрофилов и тромбоцитов после алломиело-трансплантации.

Ключевые слова: алломиелотрансплантация, тромбоцитспецифические антигены, агранулоцитоз, тромбоцитопения, трансфузии тромбоцитов

INFLUENCE OF PLATELET ANTIGENS DIFFERENCES BETWEEN DONOR AND RECIPIENT ON NEUTROPENIA AND THROMBOCYTOPENIA DURATION AFTER ALLOGENEIC STEM CELL TRANSPLANTATION

L.L. Golovkina, R.M. Kutyina

Hematological Research Center of RAMS, Moscow

Purpose: to study influence of platelet antigens system (HPA — Human Platelet Antigens) differences between donor and recipient on neutropenia and trombocytopenia duration after hematopoietic stem cells transplantation (HSCT).

Materials and methods: 40 patients at the age from 19 till 55 years (a median age ~ 28.5) after allogeneic HSCT from HLA-identical sibling are included in the study. For the majority of patients (94%) a source of haematopoetic stem cells (HSC) were a bone marrow. 28patients received myeloablative conditioning regimens and 12 patients — a lowered intensity conditioning. Achievement of 0.5x109/l or more considered as beginning of neutrophil count recovery. As the beginning of platelet count recovery considered achievement value of 50x109/l after platelet transfusions stopping. Identification of eight allele «a» and «b» genes HPA-1,-2,-3 and-5 locuses performed by polymerase chain reaction (PCR) with use allele-specific primers. Serological HlA-typing performed by microlymphocytotoxic test with use of specific serum panels.

Results: the basic criterion of patient groups distribution (HPA-identical — 1sgroup; HPA-compatible — 2nd group; HPA-incompatible — 3rd group) was identity or qualitative characteristic of their differences with donor for HPA-genes. Earlier neutrophils and platelet counts recovery in patients transplanted from HPA-identical/compatible donor in comparison with patients with HPA-incompatible transplant, it is shown. In first two groups neutropenia duration was 13.45 and 14.3 days, respectively; in 3 groups — 19.0 days. This pattern of recovery was shown irrespective of conditioning regimens and leukemia type. Platelet recovery occurred earlier in patients of 1s (16.22 days) and 2nd groups (18.2 days) in comparison with patients of 3rd groups (24.2 days). Conclusion: HPA-incompatibility can influence neutrophils and platelet recovery duration after allogeneic HSCT.

Key words: allogeneic hematopoietic stem cells transplantation (allo-HSCT), HPA, neutropenia, thrombocytopenia, platelet transfusions

Изучение факторов, влияющих на восстановление показателей периферической крови, особенно числа нейтрофилов и тромбоцитов, у больных после трансплантации гемопоэтических стволовых клеток (ГСК) имеет большое значение. Это связано с тем, что одной из причин ранней летальности больных в посттрансплантационном периоде явля-

ются инфекционные осложнения, развивающиеся в период агранулоцитоза, а риск появления геморрагических осложнений тем выше, чем длительнее период тромбоцитопении.

Восстановление показателей периферической крови напрямую зависит от приживления трансплантированных ГСК, что в свою очередь определи-

ОНКОГЕМАТОЛОГИЯ 1 ’2 0 0 9

ОНКОГЕМАТОЛОГИЯ 1 ’2 0 0 9

ется степенью совместимости донора и реципиента по антигенам главного комплекса гистосовместимости — HLA (Human Leucocyte Antigens) [1, 2]. При этом, как правило, не учитывают соответствие антигенной структуры эритроцитов и тромбоцитов. Особенности приживления эритроцитов при трансплантации ГСК от донора, имеющего иную, чем у реципиента, группу крови, подробно изложены в работе Л.П. Порешиной [3]. Влияние расхождений донора и реципиента по Human Platelet Antigens (НРА) генам на результаты алломиелотранспланта-ции изучали 2 группы исследователей [4, 5], которые оценивали частоту развития реакции трансплантат против хозяина, сроки приживления мегакариоци-тарного ростка кроветворения (по числу дней со значением тромбоцитов <20х109/л), количество выполненных в период тромбоцитопении трансфузий тромбоцитов и не выявили каких-либо отличий между изучаемыми группами больных, так как в исследование были включены пациенты с поражением костного мозга цитомегаловирусной инфекцией.

Известно, что для пролиферации стволовых клеток и некоммитированных клеток-предшествен-ниц гемопоэза необходим контакт с клетками микроокружения и внеклеточным матриксом костного мозга, осуществляемый за счет большого числа адгезивных молекул [6, 7]. Пролиферативный потенциал клеток зависит от плотности этого контакта. К адгезивным молекулам относят гликопротеины (ГП) тромбоцитов [8, 9], являющиеся интегринами и экспрессированные на CD34+-клетках и клетках-пред-шественницах гемопоэза [1, 10—13]. В связи с этим правомочным является вопрос о значении для процессов восстановления показателей периферической крови такого несоответствия локализованных на гликопротеидах антигенов системы НРА, когда происходит привнесение с трансплантированными клетками тромбоцитарных антигенов, отсутствующих у реципиента. Мы исходили из предположения, что различия реципиента и донора по аллотипиче-ским вариантам НРА могут оказывать влияние на длительность нейтропении и тромбоцитопении у больных после алломиелотрансплантации. Материалы и методы

Методом исследования служила полимеразная цепная реакция (ПЦР), для постановки которой использовали ДНК, выделенную на специальных фильтрах и по методике фирмы «Protrans» (Германия) из лейкоцитов периферической крови доноров и ядросодержащих клеток костного мозга больных после селективного лизиса эритроцитов. ПЦР с ал-лельспецифическими праймерами для идентификации 8 аллельных генов «а» и «Ь» локусов НРА-1, -2, -3 и -5 (фирма «Protrans», Германия) выполняли по методике, предложенной производителем. Интерпретацию результатов осуществляли в ультрафиолетовых лучах с длиной волны 312 нм после прокрашивания ДНК 1% бромистым этидием и проведения

электрофореза в 2% агарозном горизонтальном геле в течение 20 мин при 200 В. Постановку реакции считали корректной при получении 2 полос — продуктов амплификации внутреннего контроля и испытуемого образца ДНК. Серологическое Н^-типиро-вание проводили в микролимфоцитотоксическом тесте с использованием панелей специфических сывороток фирмы «Гисанс» (Санкт-Петербург) и республиканской станции переливания крови МЗ Республики Беларусь (Минск). Сравнение 2 количественных выборок (число доз перелитых тромбоцитов, количество трансфузий тромбоцитов, длительность нейтропении после трансплантации ГСК, сроки восстановления тромбоцитов) проводили при помощи непараметрического Т-критерия Манна — Уитни. Результаты

Обследовали 100 HLA-идентичных сибсов. Трансплантация ГСК была выполнена 50 больным с разными формами лейкозов от HLA-идентичных братьев или сестер, лимфоциты которых были аре-активны в смешанной культуре с лимфоцитами больного. Возраст больных колебался от 19 до 55 лет (медиана — 28,5), соотношение мужчины — женщины 1:1. Для большинства больных (94%) источником ГСК был костный мозг. Кондиционирование перед трансплантацией ГСК проводили в миелоаблативном (п=34) режиме и режиме пониженной интенсивности (п=16).

Основным критерием распределения больных на группы — НРА-идентичные (1-я группа, п=11), НРА-совместимые (2-я группа, п=12) и НРА-несов-местимые (3-я группа, п=17) — являлись идентичность или качественные различия с донором по НРА-генам с точки зрения непривнесения нового антигена системы НРА трансплантированными ГСК. НРА-совместимыми считали реципиентов с гетерозиготными вариантами аллелей НРА, получивших ГСК от доноров с различающимися аллельными генами в гомозиготном состоянии. В группу больных, НРА-несовместимых с донором, вошли гомозиготные реципиенты с трансплантированными ГСК от гетерозиготных доноров и реципиенты, отличающиеся от доноров по аллелям целого локуса.

О начале выхода больных из агранулоцитоза после трансплантации ГСК судили по достижению значения числа нейтрофилов >0,5х109/л. Началом восстановления количества тромбоцитов периферической крови считали достижение значения 50х 109/л после прекращения трансфузий тромбоцитсодержащих сред. Из подсчета были исключены больные (п=10) с ранним рецидивом после трансплантации ГСК, с фиброзом стромы костного мозга, несостоятельностью трансплантата, а также пациенты, получавшие противовирусные препараты в лечебных дозах из-за их миелотоксического эффекта.

Полученные результаты представлены в табл. 1, из которой следует, что длительность ней-тропении у больных 1-й и 2-й групп была достовер-

Таблица 1.

Среднее значение Диапазон Достоверность, р

Таблица 2.

но короче, чем у пациентов 3-й группы. У реципиентов первых двух групп этот срок составлял 13,45 и 14,3 дня; у реципиентов 3-й группы — 19 дней (^=0,000 и ^=0,003 соответственно). Эта закономерность проявлялась независимо от режима кондиционирования и формы лейкоза (табл. 2).

После трансплантации ГСК происходит снижение показателей тромбоцитов периферической крови. Восстановление числа тромбоцитов до значения 50х109/л происходило в более короткие сроки у больных 1-й (16,22 дня) и 2-й (18,2 дня) групп по сравнению с пациентами 3-й группы (24,2 дня), р=0,012 и р=0,037 соответственно (табл. 3).

Нами проанализировано влияние совместимости НРА-ге-нов реципиента и донора на число выполненных трансфузий и количество доз перелитых тромбоцитов во время тромбоцитопении у 12 больных без геморрагических осложнений. В указанный период пациентам было проведено 55 трансфузий и перелито 246 доз тромбоцитов. Изучаемые параметры не имели достоверных различий у больных 1-й и 2-й групп, в среднем им потребовалось 14 доз (диапазон 12—27) и 3,4 трансфузии тромбоцитов (диапазон 2—7).

Больные 3-й группы нуждались в больших дозах тромбоцитов — в среднем 29,4 (диапазон 20—40) и большем количестве трансфузий — 6 (диапазон 3—9). Количество доз перелитых тромбоцитов достоверно отличалось в сравниваемых группах больных, число трансфузий тромбоцитов достоверных отличий не имело (табл. 4).

Таким образом, полученные данные свидетельствуют о том, что совместимость по НРА-генам между реципиентом и донором ГСК влияет на сроки восстановления нейтрофилов до значения 0,5х109/л и тромбоцитов до значения 50х109/л, количество доз переливаемых тромбоцитов в период тромбоцитопении. Совместимость по НРА-генам может служить прогностическим фактором определения сроков восстановления нейтрофилов и тромбоцитов периферической крови, что в свою очередь позволит планировать число доз тромбоцитов, необходимых для трансфузий.

Выводы нашей работы частично согласуются с данными группы испанских исследователей [4], давших аналогичную трактовку понятия НРА-сов-местимости реципиента и донора. Авторы показали, что у больных с гетерозиготными аллелями НРА, которым трансплантировали ГСК от гомозиготных доноров, т.е. совместимых с реципиентом (авторы назвали такое сочетание НРА-генов совместимостью в направлении донор против реципиента), число тромбоцитов до значения 20х109/л восстанавливалось на 9 дней быстрее, чем у больных, которым

Длительность восстановления числа нейтрофилов до значения 0,5х109/л у больных после алломиелотрансплантации в зависимости от совместимости по НРА-генам с донором

Группа больных

Показатель НРА-идентичные НРА-совместимые НРА-несовместимые

13,45

10—19

0,302

*<0,001

14,3

10—18

0,003

19,0

14—26

*Здесь и в табл. 3 — различия в длительности восстановления нейтрофилов у реципиентов, имеющих НРА-идентичного и НРА-несовместимого донора.

Длительность восстановления числа нейтрофилов до значения 0,5х109/л у больных после алломиелотрансплантации в зависимости от диагноза и режимов кондиционирования

Режим кондиционирования

миелоаблативный 13,8

пониженной интенсивности 13,4

19,14

17,33

<0,001

0,036

Диагноз

ХМЛ 13,9 20,6 0,026

ОЛ 14,0 18,5 <0,001

Примечание. ХМЛ ^

хронический миелоидный лейкоз. ОЛ — острый лейкоз.

I

Таблица 3.

Длительность восстановления числа тромбоцитов до значения 50х109/л у больных после алломиелотрансплантации в зависимости от совместимости по НРА-генам с донором

Группа больных

Показатель НРА-идентичные НРА-совместимые НРА-несовместимые

Среднее значение Диапазон Достоверность, р

16,22

10—21

0,539

0,012

18,2

12—30

0,037

24,2

12—38

ОНКОГЕМАТОЛОГИЯ 1 ’2 0 0 9

ОНКОГЕМАТОЛОГИЯ 1 ’2 0 0 9

Таблица 4. Число доз и трансфузий тромбоцитов, потребовавшихся больным в период агранулоцитоза

после алломиелотрансплантации, в зависимости от совместимости по НРА-генам с донорами

_ , Среднее число _ Достоверность, Среднее число _ Достоверность,

Группы больных доз тромбоцитов Диапазон р трансфузий тромбоцитов Диапазон р

НРА-идентичные/совместимые 14,14 12—27 <0,05 3,4 2—7 >0,05

НРА-несовместимые 29,4 20—40 6,0 3—9

трансплантировали НРА-несовместимые гемопоэ-тические клетки (реципиент имел гомозиготные, а донор — гетерозиготные аллели НРА). Что касается количества доз перелитых тромбоцитов, то в указанной работе не были выявлены различия у обследованных групп больных. Причина наших расхождений заключается в том, что авторы анализировали параметры проводимой трансфузионной терапии без учета геморрагических осложнений у больных в период тромбоцитопении. Число доз перелитых тромбоцитов будет находиться в прямой зависимости от тяжести геморрагических проявлений.

Причины влияния совместимости по НРА на сроки выхода больных из нейтропении и тромбоци-топении после алломиелотрансплантации не ясны и требуют изучения. Возможны следующие объяснения. Для пролиферации стволовых клеток и их потомков необходима адгезия к клеткам микроокружения. Адгезия происходит за счет большого числа молекул, присутствующих на стромальных клетках, остеобластах [6]. После трансплантации ГСК стромаль-ные клетки костного мозга восстанавливаются из сохранившихся предшественниц и по своей природе принадлежат реципиенту (хозяину), а не донору, т.е. не происходит переноса клеток микроокружения костного мозга донора при их внутривенном введении (нетрансплантабельность костномозговой стромы) [14]. В работе Н.И. Дризе [14] доказано, что «в основе локальной регуляции кроветворения лежат кооперативные взаимодействия стромальных и кроветворных клеток, носящие двусторонний характер. Стро-мальные клетки влияют на гемопоэз, а от качества кроветворения зависит функционирование стро-мального микроокружения». Кроме того, пролиферация клеток-предшественниц зависит от плотности контакта между ними и клетками микроокружения костного мозга. Степень сродства зависит от конфор-мационного соответствия антигенов адгезивных молекул, присутствующих на стромальных и пролиферирующих клетках. Неполное соответствие пространственной конфигурации адгезивных молекул вследствие аллельных различий их антигенов приведет к неполному контакту стволовых и частично детерминированных клеток с лигандами стромы, что повлияет на пролиферативную активность клеток ге-мопоэза и, следовательно, на сроки его восстановления после алломиелотрансплантации.

И.Л. Чертков и О.А. Гуревич [15] показали существование 2 типов регуляции кроветворения — дис-

танционного и локального. Дистанционная регуляция осуществляется ростовыми факторами со стимулирующим или ингибирующим действием. В настоящее время выявлено более 20 цитокинов и 18 интерлейкинов (ИЛ), участвующих в гемопоэзе [8]. Локальный тип регуляции, осуществляемый за счет контактного взаимодействия между стволовыми клетками, клетками-предшественницами с лигандами клеток микроокружения, является ответственным за «хоминг» и удержание гемопоэтических клеток в нишах костного мозга [7]. На клетках-предшествен-ницах идентифицировано более 20 различных адгезивных рецепторов, относящихся к семейству интег-ринов и ответственных за контакт с лигандами внеклеточного матрикса (фибронектин, коллаген, лами-нин или тромбоспондин) или с клетками микроокружения стромы костного мозга [8]. К семейству адгезивных молекул относят и ГП тромбоцитов [9].

В самых первых работах M.V. Berridge и соавт. [16] и J.K. Fraser и соавт. [17] были представлены доказательства присутствия GPIIb на полипотентных клетках-предшественницах миелоидного ряда. N.R. Emambokus и J. Frampton [2] также представили доказательства присутствия GPIIb на некоммитиро-ванных клетках-предшественницах. Затем по мере усовершенствования методических приемов в многочисленных исследованиях было установлено, что клетки-предшественницы гемопоэза вместе с антигеном CD34 экспрессируют на своей мембране специфические тромбоцитарные ГП [12, 14]: GPIIb/IIIa (CD61/CD41) [1,13], GPIb (CD 42) [11, 18].

Более того, было выявлено прямое участие GPIIb в регуляции гемопоэза эмбриона мыши [2]. При отсутствии этого ГП происходило увеличение числа клеток-предшественниц гемопоэза, особенно миелоидного ростка кроветворения, не обладающих способностью к дифференцировке, в 1,5—2 раза.

GPIIb может оказывать и опосредованное влияние на гемопоэз через изменение функциональной активности адгезивных молекул VLA-4 (CD49d) и VLA-5 (CD49e), экспрессированных на CD34+-клетках костного мозга и ответственных за соединение клеток-предшественниц гемопоэза с фибронектином стро-мальных клеток и внеклеточного матрикса. Утрата данного ГП приводила к снижению адгезивной способности CD34+-клеток и как следствие — куменьше-нию пролиферативной активности, способности к дифференцировке и снижению жизнеспособности в костномозговых «нишах» эмбриона мыши [2].

Являясь интегринами, ГП тромбоцитов ^Р1а/11а и GPIIb/IIIa) проводят сигналы в 2 направлениях: извне в клетку и наоборот [9]. При связывании лиганда с внеклеточной частью интегри-нов осуществляется трансформация лигандсвязы-вающего центра интегринов в активную форму. В процессе активации происходит изменение его конформационной структуры, повышается сродство к лиганду, что обеспечивает их более эффективное взаимодействие [19].

Различные клетки-предшественницы мегака-риоцитопоэза могут синтезировать такие цитоки-ны, как ИЛ-6, ИЛ-1 и гранулоцитарно-макрофа-гальный колониестимулирующий фактор (ГМ-КСФ), оказывающие влияние на пролиферацию и функционирование стромальных клеток костного мозга [20]. Регуляция пролиферации и дифферен-цировки миелоидного ряда осуществляется теми же цитокинами [21]. Мы полагаем, что совместимость стромальных клеток хозяина и трансплантированных стволовых клеток донора по гликопротеидным комплексам тромбоцитов, индикатором которой могут быть НРА, может способствовать более быстрому восстановлению лейкоцитов после трансплантации ГСК за счет синтеза ГМ-КСФ клетками-предшественницами мегакариоцитопоэза вследствие их активации после более плотной адгезии к клеткам микроокружения костного мозга. Кроме

того, установлено, что ростовые факторы ГМ-КСФ, ИЛ-3 и ЫТ-лиганд являются физиологическими активаторами антигенов УЬА-4 и \LA-5. Стимуляция этих антигенов приводит к повышению адгезии кроветворных клеток к фибронектину [13, 22].

Из этого следует, что совместимость по ГП тромбоцитов может оказывать прямое или опосредованное влияние на локальный и/или дистанционный тип регуляции гемопоэза. Возможно, есть иные механизмы, требующие изучения.

Приживление ГСК, рассматриваемое как кульминационный эффект комплекса событий, при которых циркулирующие клетки приобретают статус оседлых тканевых клеток костного мозга, представляет собой сложный, динамичный, многоступенчатый процесс, регулирующийся совокупностью взаимодействия адгезивных молекул различных клеток с их лигандами, ростовых факторов, белков внеклеточного матрикса [23]. Нарушение в любом звене этой кооперации может вызвать изменение последующих событий, вплоть до их полной блокировки. Полагаем, что несовместимость по НРА способна привести к изменению адгезивного профиля трансплантированных клеток-предшественниц гемопоэ-за, снижению их пролиферативной активности и увеличению времени приживления, что в совокупности с другими факторами отражается на длительности восстановления нейтрофилов и тромбоцитов.

Литература

1. Debili N., Robin C., Schiavon V. et al. Different expression of CD41 on human lymphoid and myeloid progenitors from adults and neonates. Blood 2001;97:2023—30.

2. Emambokus N.R., Frampton J. The glycoprotein IIb molecule is expressed on early murine hematopoietic progenitors and regulates their numbers in sites of hematopoiesis. Immunity 2003;19(1):33—45.

3. Порешина Л.П. Эритроцитарный химеризм при близкородственной ал-логенной трансплантации костного мозга (особенности проявления, классификация). Автореф. дис. ... докт. биол. наук. М., 2004.

4. Garcia-Malo M.D., Corral J., Gonzalez M. et al. Human platelet antigen systems in allogeneic peripheral blood progenitor cell transplantation: effect of human platelet antigen mismatch on platelet engraftment and graft-versus-host disease. Transfusion 2004;44:771—6.

5. Rozman P., Karas M., Kosir A. et al. Are human platelet alloantigens (HPA) minor transplantation antigens in clinical bone marrow transplantation? Bone mar transplant 2003;31(6):497—506.

6. Taichman R.S. Blood and bone: two tissues whose fates are intertwined to create the hematopoietic stem-cell niche. Blood 2005;105(7):2631—9.

7. Verfaillie C.M. Adhesion receptors as

regulators of the hematopoietic process. Blood 1998;92(8):2609—12.

8. Calvete J.J. Platelet integrin GPIIb/IIIa: structure-function correlation an update and lessons from other integrins. Proc Soc Exp Biol Med 1995;208(1):346—60.

9. Shattil S., Newman PJ. Integrins: dynamic scaffolds for adhesion and signaling in platelets. Blood 2004;104(6):1606—15.

10. Debili N., Issaad C., Masse J.M. et al. Expression of CD34 and platelet glycoproteins during human megakaryocytic differentiation. Blood 1992;80(12):3022—35.

11. Gomez-Espuch J., Corral J., Gonzalez-Conejero R. et al. Glycoprotein IIb/IIIa expression on hematopoietic stem cells: constitutive expression or platelet adhesion? Blood 1999;94(9):3271—3.

12. Kanaji T., Russel S., Cunningham J. et al. Megakaryocyte proliferation and ploidy regulated by the cytoplasmic tail of glycoprotein Ьр. Blood 2004;104(10):3161—8.

13. Lepage A., Leboeuf M., Cazenave J.-P. et al. The anbP3 integrin and GPIb-V-IX complex identify distinct stages in the maturation of CD34+ cord blood cells to megakaryocytes. Blood 2000;96(13):4169—77. "

14. Дризе Н.И. Кроветворные и стро-мальные клетки-предшественники в длительной культуре костного мозга. Автореф. дис. ... докт. биол. наук. М., 1990.

15. Чертков И.Л., Гуревич О.А. Стволовая кроветворная клетка и ее микроок-

ружение. М.: Медицина, 1984. с. бЗ—87. ^.Berridge M.V., Ralph S.J., Tan A.S. Cell-lineage antigens of stem cell-megakary-ocyte-platelet lineage are associated with the platelet IIb—IIIa glycoprotein complex. Blood 1985;бб:7б—85.

17. Fraser J.K., Leahy M.F., Berridge M.V Expression of antigens of the platelet glycoprotein IIb—IIIa complex on human hematopoietic stem cells. Blood 198б;б8:7б2—9.

18. Ravid K. A tail with a leading role in megakaryocytes: the glycoprotein Ib.

Blood 2004;104(10):3004—5.

19. Ярилин A.A. Основы иммунологии. М.: Медицина, 1999.

20. Wickenhauser C., Lorenzen J., Thiele J. et al. Secretion of cytokines (Imterleukins-Ір, -3, and -б and Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor) by normal human bone marrow megakaryocytes. Blood 1995;85(3):б85—91.

21. Ковальчук Л.В., Ганковская Л.В., Хорева М.В., Соколова Е.В. Система цитокинов, комплемента и современные методы иммунного анализа. М.: Медицина, 2001. с. 57—б0.

22. Фаллер Д.М., Шилдс Д. Молекулярная биология клетки. Пер. с англ. М.: Бином-Пресс, 200б.

23. Nilson S.K., Simmons PJ.,

Bertoncello I. Hemopoietic stem cell engraft-ment. Exper Hematol 200б;З4:12З—9.

ОНКОГЕМАТОЛОГИЯ 1 ’2 0 0 9