НЕИНВАЗИВНОЕ УСТРОЙСТВО НА БУМАЖНОЙ ОСНОВЕ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ БЕРЕМЕННОСТИ У КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА И БУЙВОЛОВ

1. Микрожидкостное устройство (100/200), содержащее:
а. по меньшей мере один структурированный, пористый и гидрофильный слой, на котором сформированы восковые очерчивающие паттерны для создания гидрофобных барьеров;
b. по меньшей мере одну зону нанесения для приема биологического образца и реагента; и
c. необязательно по меньшей мере один микрожидкостной канал для доставки биологического образца и реагента в зону реакции,
при этом указанное устройство выполнено с возможностью обнаружения антигена 5б-прегнан-3б-ол-20-она при концентрации более 400 нанограмм на грамм в биологическом образце.
2. Микрожидкостное устройство по п. 1, где указанное устройство представляет собой однослойное бумажное устройство (100), имеющее три круглые зоны, выполненные с возможностью приема биологического образца и реагента, содержащее:
а. зону тестирования (101), содержащую иммобилизованный антиген 5б-прегнан-3б-ол-20-она для колориметрического обнаружения 5б-прегнан-3б-ол-20-она;
b. зону положительного контроля (102), содержащую иммобилизованный антиген 5б-прегнан-3б-ол-20-она для колориметрического обнаружения 5б-прегнан-3б-ол-20-она;
c. зону отрицательного контроля (103); и
d. восковой паттерн (104) на слое бумаги, при этом восковой паттерн очерчивает зону тестирования, зону положительного контроля и зону отрицательного контроля для создания гидрофобного барьера.
3. Микрожидкостное устройство по п. 1, где указанное устройство представляет собой многослойное устройство (200), содержащее:
а. первый слой (300), выполненный с возможностью приема биологического образца и реагентов;
b. второй слой (400), выполненный с возможностью доставки биологического образца и реагентов в зону реакции;
c. третий слой (500), выполненный с возможностью доставки биологического образца в зону реакции; и
d. четвертый слой (600), выполненный с возможностью колориметрического обнаружения 5б-прегнан-3б-ол-20-она.
4. Микрожидкостное устройство по п. 3, где первый слой (300) многослойного устройства (200) содержит:
а. впускное отверстие для образца (301) для приема биологического образца; и
b. впускное отверстие для реагентов (302) для приема реагентов.
5. Микрожидкостное устройство по п. 3, в котором второй слой (400) многослойного устройства (200) содержит:
а. первую круглую зону (401) для доставки биологического образца из впускного отверстия для образца (301) в круглую зону (501) для доставки в зону хранения комплекса антитело-фермент (502);
b. вторую круглую зону (402) для доставки реагентов из впускного отверстия для реагентов (302) в зону хранения комплекса антитело-фермент (502);
c. третью круглую зону (403) для доставки реагентов из впускного отверстия для реагентов (302) в круглую зону (503) для доставки в зону положительного контроля (602);
d. четвертую круглую зону (404) для доставки реагентов из впускного отверстия для реагентов (302) в круглую зону (504) для доставки в зону отрицательного контроля (603);
е. перевернутый Y-образный микрожидкостной канал (405) для доставки реагентов из впускного отверстия для реагентов (302) в зоны реакции в четвертом слое (600).
6. Микрожидкостное устройство по п. 3, где третий слой (500) многослойного устройства (200) содержит:
а. первую круглую зону (501) для доставки биологического образца из первой круглой зоны (401) в зону хранения комплекса антитело-фермент (502);
b. зону хранения комплекса антитело-фермент (502);
c. вторую круглую зону (503) для доставки реагентов из третьей круглой зоны (403) в зону положительного контроля (602); и
d. третью круглую зону (504) для доставки реагентов из четвертой круглой зоны (404) в зону отрицательного контроля (603).
7. Микрожидкостное устройство по п. 3, где четвертый слой (600) многослойного устройства (200) содержит:
а. зону тестирования (601), содержащую иммобилизованный антиген 5б-прегнан-3б-ол-20-она для колориметрического обнаружения 5б-прегнан-3б-ол-20-она;
b. зону положительного контроля (602), содержащую иммобилизованный антиген 5б-прегнан-3б-ол-20-она, для генерации положительного контрольного сигнала, подтверждающего перенос по меньшей мере части реагента из впускного отверстия для образца (301) в зону тестирования (601); и
c. зону отрицательного контроля (603) для генерации отрицательного контроля, подтверждающего перенос по меньшей мере части реагента из впускного отверстия для образца (301) в зону тестирования (601).
8. Микрожидкостное устройство по п. 1, где слой имеет толщину менее 220 мкм и удерживание частиц более 10 мкм.
9. Микрожидкостное устройство по п. 1, где биологический образец получают из навоза крупного рогатого скота или буйволов.
10. Способ колориметрического обнаружения 5б-прегнан-3б-ол-20-она в биологическом образце с использованием микрожидкостного устройства по п. 2, при этом указанный способ включает следующие стадии:
а. внесение биологического образца в зону тестирования (101);
b. внесение раствора комплекса антитело-фермент в зону тестирования (101), зону положительного контроля (102) и зону отрицательного контроля (103);
c. внесение промывочного буфера в зону тестирования (101), зону положительного контроля (102) и зону отрицательного контроля (103);
d. внесение субстрата TMB в зону тестирования (101), зону положительного контроля (102) и зону отрицательного контроля (103); и
е. определение цвета зоны тестирования (101), зоны положительного контроля (102) и зоны отрицательного контроля (103),
при этом появление слабого цвета или отсутствие цвета в зоне тестирования подтверждает присутствие 5б-прегнан-3б-ол-20-она в биологическом образце.
11. Способ колориметрического обнаружения 5б-прегнан-3б-ол-20-она в биологическом образце с использованием устройства по п. 3, при этом указанный способ включает следующие стадии:
а. внесение биологического образца во впускное отверстие для образца (301);
b. внесение промывочного буфера во впускное отверстие для реагентов (302);
c. внесение субстрата TMB во впускное отверстие для реагента (302); и
d. определение цвета зоны тестирования (601), зоны положительного контроля (602) и зоны отрицательного контроля (603),
при этом появление слабого цвета или отсутствие цвета в зоне тестирования подтверждает присутствие 5б-прегнан-3б-ол-20-она в биологическом образце.
12. Способ по п. 10 или 11, в котором биологический образец получают из навоза крупного рогатого скота или буйволов.
13. Способ получения биологического образца, включающий следующие стадии:
i. смешивание помета с 2-гидроксипропил-циклодекстрином с последующим встряхиванием в течение 3 минут;
ii. позволение дебрису и другим частицам осесть с получением прозрачного супернатанта, при этом супернатант, содержащий 5б-прегнан-3б-ол-20-он, представляет собой биологический образец.
14. Набор для раннего обнаружения беременности крупного рогатого скота и буйволов, включающий:
I. микрожидкостное устройство по п.1,
II. по меньшей мере три реагента;
III. флакон; и
IV. инструкцию по эксплуатации.
15. Набор по п. 14, в котором реагенты представляют собой промывочный буфер, субстрат TMB и 2-гидроксипропил-циклодекстрин.
16. Набор по п. 15, в котором реагент дополнительно содержит раствор комплекса антитело-фермент.